mwirth-epo/epo-nmt-datasets huggingface dataset:
Macchina imballatrice secondo la rivendicazione 1 o 2, in cui ciascuna spalla mobile (4) comprende: un telaio rigido (8) con struttura sostanzialmente a portale, che è fissato sulla intelaiatura portante (2) con la possibilità di muoversi in una direzione orizzontale perpendicolare a detto percorso (p), e si erge a sbalzo al disopra del convogliatore lineare (3); ed un longherone longitudinale (9) che è fissato saldamente su detto telaio rigido (8) in posizione sostanzialmente orizzontale ed al disopra del convogliatore lineare (3), in modo tale da essere sostanzialmente parallelo a detto percorso (p), ed è atto a disporsi in appoggio sul fianco laterale del prodotto da imballare (101) fermo tra le due spalle mobili (4).
The packaging machine according to Claim 1 or 2, wherein each movable shoulder (4) comprises: a rigid frame (8) with a substantially gantry structure, which is fixed on the supporting framework (2) with the capability of moving in a horizontal direction perpendicular to said path (p), and stands in a cantilever manner above the linear conveyor (3); a longitudinal beam (9) which is firmly fixed on said rigid frame (8) in a substantially horizontal position and above the linear conveyor (3), so as to be substantially parallel to said path (p), and is adapted to be arranged in abutment against the lateral side of the product to be packaged (101) stationary between the two movable shoulders (4).
Macchina imballatrice secondo la rivendicazione 3, in cui detto primo gruppo piegatore (10) è fissato sul telaio rigido (8) della spalla mobile (4) al disotto del longherone longitudinale (9) ed all’altezza del piano di avanzamento del convogliatore lineare (3), ed è mobile verticalmente in modo tale da poter sollevare e piegare ad L verso l’alto l’antistante/prospiciente lembo laterale sporgente (102a) della falda piana (102).
The packaging machine according to Claim 3, wherein said first folding assembly (10) is fixed to the rigid frame (8) of the movable shoulder (4) beneath the longitudinal beam (9) and at the height of the feeding plane of the linear conveyor (3), and vertically movable so as to be able to lift and L-bend upwards the facing/adjacent protruding lateral flap (102a) of the flat sheet (102).
Macchina imballatrice secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, in cui detto secondo gruppo piegatore (15) è posizionato al disotto del piano di avanzamento del convogliatore lineare (3), ed è atto a sporgere a sbalzo al disopra del piano di avanzamento del convogliatore lineare (3) in modo tale da poter sollevare e piegare ad L verso l’alto il lembo sporgente anteriore (102b) della falda piana (102).
The packaging machine according to any one of the preceding claims, wherein said second folding assembly (15) is located beneath the feeding plane of the linear conveyor (3), and is adapted to protrude in cantilever manner above the feeding plane of the linear conveyor (3) so as to be able to lift and L-bend upwards the protruding front flap (102b) of the flat sheet (102).
Macchina imballatrice secondo la rivendicazione 5, in cui detto secondo gruppo piegatore (15) è solidale al telaio rigido (8) della spalla mobile (4).
The packaging machine according to Claim 5, wherein said second folding assembly (15) is fixed to the rigid frame (8) of the movable shoulder (4).
Macchina imballatrice secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, in cui detto terzo gruppo piegatore (16) è posizionato al disotto del piano di avanzamento del convogliatore lineare (3), ed è atto a sporgere a sbalzo al disopra del piano di avanzamento del convogliatore lineare (3) in modo tale da poter sollevare e piegare ad L verso l’alto il lembo sporgente posteriore (102c) della falda piana (102).
The packaging machine according to any one of the preceding claims, wherein said third folding assembly (16) is located beneath the feeding plane of the linear conveyor (3), and is adapted to protrude in cantilever manner above the feeding plane of the linear conveyor (3) so as to be able to lift and L-bend upwards the protruding rear flap (102c) of the flat sheet (102).
Macchina imballatrice secondo la rivendicazione 7, in cui detto terzo gruppo piegatore (16) è solidale al telaio rigido (8) della spalla mobile (4).
The packaging machine according to claim 7, wherein said third folding assembly (16) is fixed to the rigid frame (8) of the movable shoulder (4).
Macchina imballatrice secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, in cui ciascuna spalla mobile (4) comprende anche: un quarto gruppo piegatore (26), che è posizionato in corrispondenza dell’uscita del corridoio longitudinale (7), ed è atto a piegare la aletta terminale anteriore (102e) del prospiciente/antistante lembo sporgente laterale (102a) della falda piana (102) ad L verso il fianco anteriore del prodotto da imballare (101); e/o un quinto gruppo piegatore (27), che è posizionato in corrispondenza dell’ingresso del corridoio longitudinale (7), ed è atto a piegare la aletta terminale posteriore (102e) del prospiciente/antistante lembo sporgente laterale (102a) della falda piana (102) ad L verso il fianco posteriore del prodotto da imballare (101).
The packaging machine according to any one of the preceding claims, wherein each movable shoulder (4) additionally comprises: a fourth folding assembly (26) which is located at the outlet of the longitudinal aisle (7) and is adapted to L-bend the front end tab (102e) of the facing/ adjacent protruding lateral flap (102a) of the flat sheet (102) towards the front side of the product to be packaged (101); and/or a fifth folding assembly (27) which is located at the inlet of the longitudinal aisle (7) and is adapted to L-bend the rear end tab (102e) of the facing/adjacent protruding lateral flap (102a) of the flat sheet (102) towards the rear side of the product to be packaged (101).
Macchina imballatrice secondo la rivendicazione 9, in cui detto quarto gruppo piegatore (26) è anche atto ad incollare la aletta terminale anteriore (102e) all’adiacente lembo sporgente anteriore (102b) della falda piana (102); e/o in cui detto quinto gruppo piegatore (27) è anche atto ad incollare la aletta terminale posteriore (102e) all’ adiacente lembo sporgente posteriore (102c) della falda piana (102).
The packaging machine according to Claim 9, wherein said fourth folding assembly (26) is additionally adapted to glue the front end tab (102e) to the adjacent protruding front flap (102b) of the flat sheet (102); and/or wherein said fifth folding assembly (27) is additionally adapted to glue the rear end tab (102e) to the adjacent protruding rear flap (102c) of the flat sheet (102).
Macchina imballatrice secondo la rivendicazione 9 o 10, in cui detto quarto (26) e/o detto quinto (27) gruppo piegatore è/sono solidali al telaio rigido (8) della spalla mobile (4).
The packaging machine according to Claim 9 or 10, wherein said fourth (26) and/or said fifth (27) folding assembly/s is/are fixed to the rigid frame (8) of the movable shoulder (4).
Macchina imballatrice secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, in cui il convogliatore lineare (3) è un convogliatore a rulli motorizzato.
The packaging machine according to any one of the preceding claims, wherein the linear conveyor (3) is a motorised roller conveyor.
Metodo di funzionamento di una macchina imballatrice secondo la rivendicazione 13, in cui il metodo include, dopo la fase di piegare ad L verso l’alto i due lembi sporgenti laterali (102a) della falda piana (102), anche la fase di piegare le alette terminali anteriori (102e) dei due lembi sporgenti laterali (102a) della falda piana (102) ad L verso il fianco anteriore del prodotto da imballare (101), preferibilmente incollando le medesime alette terminali anteriori (102e) sul lembo sporgente anteriore (102b) della falda piana (102); e la fase di piegare le alette terminali posteriori (102e) dei due lembi sporgenti laterali (102a) della falda piana (102) ad L verso il fianco posteriore del prodotto da imballare (101), preferibilmente incollando le medesime alette terminali posteriori (102e) sul lembo sporgente posteriore (102b) della falda piana (102).
The operating method of a packaging machine according to Claim 13, wherein the method additionally includes, after the step of L-bending upwards the two protruding lateral flaps (102a) of the flat sheet (102), the step of L-bending the front end tabs (102e) of the two protruding lateral flaps (102a) of the flat sheet (102) towards the front side of the product to be packaged (101), preferably gluing the same front end tabs (102e) on the protruding front flap (102b) of the flat sheet (102); and the step of L-bending the rear end tabs (102e) of the two protruding lateral flaps (102a) of the flat sheet (102) towards the rear side of the product to be packaged (101), preferably gluing the same rear end tabs (102e) on the protruding rear flap (102b) of the flat sheet (102).
Metodo di funzionamento di una macchina imballatrice secondo la rivendicazione 13 o 14, in cui la falda piana (102) con al disopra il prodotto da imballare (101) viene prima avanzata lungo il corridoio longitudinale (7), fino ad allineare il fianco posteriore del prodotto da imballare (101) con l’ingresso del corridoio longitudinale (7), e poi avanzata lungo il corridoio longitudinale (7) fino ad allineare il fianco anteriore del prodotto da imballare (101) con l’uscita del corridoio longitudinale (7).
The operating method of a packaging machine according to Claim 13 or 14, wherein the flat sheet (102) having on top the product to be packaged (101) is first fed along the longitudinal aisle (7) up to align the rear side of the product to be packaged (101) with the inlet of the longitudinal aisle (7), and is then fed along the longitudinal aisle (7) up to align the front side of the product to be packaged (101) is aligned with the outlet of the longitudinal aisle (7).
In anni recenti sono stati compiuti grossi sforzi per adattare i metodi isotermici, come la LAMP, all'esecuzione di saggi diagnostici molecolari, onde trarre vantaggio dalla disponibilità di apparecchiature di saggio molto semplificate che non richiedono la variazione ciclica della temperatura e che consentono di produrre modelli per 1'impiego in strutture sanitarie estremamente elementari.
In recent years, large efforts have been directed toward adapting isothermal methods such as LAMP into molecular diagnostic assays, taking advantage of the simplified testing equipment which does not require temperature cycling and allows versions to be produced for use in quite elementary health care settings.
Dato l'impiego di tecniche isotermiche come strumenti diagnostici, un requisito essenziale di tali tecniche è la loro capacità di generare un risultato in un tempo molto breve, al fine di fornire assistenza rapida e affidabile in decisioni cliniche per ogni fase della cura del paziente, vale a dire la diagnosi precoce, la valutazione del rischio, lo screening, la stadiazione e la prognosi, la selezione e il monitoraggio della terapia.
As isothermal techniques are being adopted as diagnostic tools, an essential requirement for such techniques is their ability to generate a patient result in a very short time, in order to provide reliable and rapid assistance in clinical decision making for every stage in patient care, i.e. early diagnosis, risk assessment, screening, staging and prognosis, therapy selection and monitoring.
Ad esempio, la diagnosi precoce di neoplasie ematologiche come la leucemia acuta è fondamentale per garantire una buona prognosi per i pazienti, dal momento che un trattamento tempestivo può essere cruciale e decisivo nella gestione della malattia.
For instance, early diagnosis of hematological malignancies such as acute leukemia is crucial to ensure a good prognosis for patients, since a timely, treatment may be crucial and decisive in the disease management.
Pertanto, esiste la necessità di sviluppare metodi di amplificazione isotermica mediati da loop in grado di realizzare una rapida rivelazione delle sequenze di acido nucleico bersaglio senza influire negativamente sui parametri critici del saggio, quali la specificità, la sensibilità e la precisione.
Thus, there exists a need in the art to develop loop-mediated isothermal amplification methods capable of accomplishing a rapid detection of target nucleic acid sequences without affecting critical assay parameters such as specificity, sensitivity and accuracy.
Questa e altre necessità sono soddisfatte dal procedimento, dal set di oligonucleotidi e dal kit come definiti nelle annesse rivendicazioni, che formano parte integrante della descrizione.
This and other needs are met by the method, set of oligonucleotides and kit as defined in the appended claims, which form an integral part of the description.
Come sarà illustrato nella sezione sperimentale che segue, la presente invenzione fornisce un pròcedimento di rivelazione dell'amplificazione LAMP di sequenze di acido nucleico bersaglio, che fa uso del principio del trasferimento di energia per risonanza.
As further illustrated in the experimental section below, the present invention provides a method for the detection of LAMP amplification of target nucleic acid sequences, which makes use of the principle of fluorescence energy transfer.
Il procedimento della presente invenzione impiega una DNA polimerasi avente attività di spiazzamento del filamento e un set di primer oligonucleotidici LAMP consistente in due primer esterni, segnatamente F3 e B3, due primer interni, segnatamente FIP e BIP, uno o due loop primers, segnatamente LF e/o LB, e una sonda di acido nucleico.
The method of the present invention employs a DNA polymerase having strand displacement activity and a set of oligonucleotide LAMP primers consisting of two outer primers, namely F3 and B3, two inner primers, namely FIP and BIP, one or two loop primers, namely LF and/or LB, and one nucleic acid probe.
Una descrizione delle caratteristiche e della funzione dei primer LAMP e dei loop primers si trova ad esempio nel sito Eiken (loopamp.eiken,co.jp/e/lamp/primer.html; loopamp.eiken.co.jp/e/lamp/loop.html).
A description of the features and function of the LAMP primers and loop primers is found e.g. at the Eiken website (loopamp.eiken.co.jp/e/lamp/primer.html; loopamp.eiken.co.jp/e/lamp/loop.html).
Secondo la presente invenzione, il primo primer interno FIP consiste di una sequenza di acido nucleico 3' chiamata F2, che è complementare a una regione F2c della sequenza di acido nucleico bersaglio, e di una sequenza di acido nucleico 5' chiamata Flc.
According to the present invention, the first inner primer FIP consists of a 3′ nucleic acid sequence designated as F2, which is complementary to a F2c region of the target nucleic acid sequence, and a 5′ nucleic acid sequence designated as F1c.
Il secondo primer interno BIP consiste di una sequenza di acido nucleico 3' chiamata B2, che è complementare a una regione B2c della sequenza di acido nucleico bersaglio, e di una sequenza di acido nucleico 5' chiamata Blc, Le regioni F2c e B2c sono regioni non sovrapposte che si trovano su filamenti opposti della sequenza di acido nucleico bersaglio.
The second inner primer BIP consists of a 3′ nucleic acid sequence designated as B2, which is complementary to a B2c region of the target nucleic acid sequence, and a 5′ nucleic acid sequence designated as Blc.
Il primer esterno F3 consiste della regione F3 che è complementare alla regione F3c; il primer esterno B3 consiste della regione B3 che è complementare alla regione B3c, Come menzionato in precedenza, il procedimento della presente invenzione fa altresì uso di uno o due loop primer, LF e/o LB.
The external primer F3 consists in the F3 region that is complementary to the F3c region; the external primer B3 consists in the B3 region that is complementary to the B3c region.
Tipicamente, quando usati in una reazione LAMP, i loop primers si ibridano alla regione loop a singolo filamento presente nei prodotti LAMP intermedi e forniscono un numero incrementato di punti di partenza per la sintesi del DNA.
Typically, when used in a LAMP reaction, loop-primers hybridize to the single-stranded loop region present in the intermediate LAMP products and provide an increased number of starting points for DNA synthesis.
Secondo 1'invenzione, il loop primer LF o il loop primer LB, se presente, è marcato alla propria estremità 5' con almeno una molecola fluorescente.
According to the invention, either the LF loop primer or the LB loop-primer, if present, is labeled at its 5′-end with at least one fluorescent moiety.
Rispetto alla tecnologia LAMP standard, il procedimento della presente invenzione implica l'uso di un oligonucleotide aggiuntivo, più in particolare di una sonda di acido nucleico, che è marcata alla propria estremità 3' con almeno un cromoforo.
Compared with standard LAMP technology, the method of the invention involves the use of an additional oligonucleotide, more particularly a nucleic acid probe, which is labeled at its 3′-end with at least one chromophore moiety.
Detta sonda di acido nucleico è atta ad ibridarsi alla sequenza di acido nucleico bersaglio in 5' rispetto al primer LF o LB marcato, cosicché quando la sonda è ibridata alla sequenza di acido nucleico bersaglio, la sua estremità 3' è in stretta prossimità con l'estremità 5' del loop primer LF o LB marcato.
Said nucleic acid probe is capable of hybridizing to the target nucleic acid sequence 5′ to the labeled LF or LB primer so that, when hybridized to the target nucleic acid sequence, the 3′-end of the nucleic acid probe is in close proximity to the 5′-end of the labeled LF or LB primer.
Nella presente descrizione, una sequenza di acido nucleico (primer o sonda) che è atta ad ibridarsi con una data sequenza di acido nucleico bersaglio è ad esempio complementare a detta sequenza di acido nucleico bersaglio.
In the present description, a nucleic acid sequene (either a primer or a probe) that is capable of hybridizing to a given target nucleic acid sequence is for example complementary to said nucleic acid sequence.
Si noti che un ''stretta vicinanza" fra detto loop primer marcato e detta sonda di acido nucleico si verifica solo durante la fase di amplificazione della reazione LAME, quando il loop primer viene incorporato ed esteso nel prodotto di amplificazione LAME» Secondo una prima forma di realizzazione mostrata in Figura 1B, il procedimento secondo 1'invenzione impiega un loop primer marcato alla propria estremità 5' con almeno un accettore di fluorescenza in combinazione con una sonda di acido nucleico marcata alla propria estremità 3' con almeno un donatore di fluorescenza.
In a first embodiment shown in FIG. 1B, the method according to the invention employs a loop-primer labeled at its 5′-end with at least one acceptor fluorescent moiety in combination with a nucleic acid probe labeled at its 3′-end with at least one donor fluorescent moiety.
Nella Figura 1B, è illustrato un prodotto LAME intermedio in cui un'estremità loop è stata ingrandita per mostrare in dettaglio l'ibridazione degli oligonucleotidi impiegati nella fase di rivelazione FRET del saggio.
FIG. 1Billustrates a LAMP intermediate product, wherein one loop end has been enlarged to show in detail the hybridization of the oligonucleotides employed in the FRET assay detection step.
Il loop primer marcato può essere LF o LB (se LB è presente).
The labeled loop-primer may be either LF or LB (when LB is present).
Secondo l'invenzione, a seguito dell'ibridazione di detti oligonucleotidi alla sequenza di acido nucleico bersaglio durante la reazione LAME, il donatore di fluorescenza all'estremità 3' della sonda di acido nucleico è portato in stretta vicinanza con l'accettore di fluorescenza all'estremità 5' del loop primer LF o LB.
According to the invention, upon hybridization of said oligonucleotides to the target' nucleic acid sequence during the LAMP reaction, the donor fluorescent moiety at the 3′-end of the nucleic acid probe is brought in close proximity to the acceptor fluorescent moiety at the 5′-end of the LF or LB primer.
Fra queste molecole si verifica un trasferimento di energia di fluorescenza e, come risultato, viene generata e rilevata una variazione in un parametro di fluorescenza.
Fluorescence energy transfer occurs between such moieties and, as a result, a change in a fluorescent parameter is generated and detected.
Tale variazione indica 1'avvenuta amplificazione del DNA, poiché la variazione si genera a seguito dell'incorporazione del loop primer marcato nel prodotto di amplificazione LAMP e della successiva estensione del primer.
Such a change is an indication of DNA amplification in that it is generated upon incorporation of the labeled loop-primer in the LAMP amplification product and subsequent primer extension.
In un'altra forma di realizzazione mostrata in Figura 1C, il procedimento della presente invenzione utilizza il loop primer LF o LB marcato alla propria estremità 5' con almeno un donatore di fluorescenza in combinazione con una sonda di acido nucleico marcata alla propria estremità 3' con almeno un quencher.
In another embodiment shown in FIG. 10, the method of the present invention uses either the LF or LB loop-primer labeled at its 5′-end with at least one donor fluorescent moiety in combination with a nucleic acid probe labeled at its 3′-end with at least one quenching moiety.
Secondo l'invenzione, quando l'estremità 3' della sonda di acido nucleico marcata e l'estremità 5' del loop primer marcato sono portati in stretta prossimità sulla sequenza di acido nucleico bersaglio durante l'amplificazione LAMP, il quencher fa da accettore assorbendo l'energia emessa dal donatore e dissipandola come calore.
According to the invention, when the 3′-end of the labeled nucleic acid probe and the 5′-end of the labeled loop-primer are brought in close proximity on the target nucleic acid sequence during LAMP amplification, the quenching moiety functions as an acceptor by absorbing the energy emitted by the donor moiety and dissipating such energy as heat.
Una variazione associata di un parametro di fluorescenza può quindi essere rilevata come indicatore dell'amplificazione durante la reazione LAMP.
An associated change in a fluorescence parameter may therefore be detected as an indication of DNA amplification during the LAMP reaction.
Nella Figura 1C, è illustrato un prodotto LAMP intermedio in cui un'estremità loop è stata ingrandita per mostrare in dettaglio l'ibridazione degli oligonucleotidi impiegati nella fase di rivelazione FRET del saggio.
FIG. 1Cillustrates a LAMP intermediate product, wherein one loop end has been enlarged to show in detail the hybridization of the oligonucleotides employed in the FRET assay detection step.
Le prestazioni del procedimento dell'invenzione secondo la prima forma di realizzazione sono state valutate in confronto con saggi LAMP fluorescenti secondo la tecnica nota, più specificamente il saggio LAMP basato sulla fluorescenza descritto da Chou et al. e il sistema LAMP facente uso di coloranti intercalanti.
The performance of the method of the invention according to the first embodiment as above defined was evaluated by the present inventors in comparison with prior art fluorescence-based LAMP assays, more specifically the FRET-based LAMP assay described by Chou et al. and the LAMP system making use of intercalating dyes.
Al fine di confrontare le prestazioni del procedimento LAMP dell'invenzione con il saggio di Chou et al., è stato utilizzato uno schema di diluizioni, ed una serie di titolazioni, variabili da 2x1ο1copie/pL a 2xl06copie/pL, di un plasmide denaturato contenente un frammento genomico di WSSV è stata sottoposta ad amplificazione LAMP su uno strumento Rotor-Gene Q (Qiagen).
In order to compare the performance of the LAMP method of the invention with the assay by Chou et al., a dilution design was used and titration series ranging from 2×101 copies/μL to 2×106 copies/μL of a denatured plasmid containing a WSSV genomic fragment were subjected to LAMP amplification on a Rotor-Gene Q instrument (Qiagen).