mwirth-epo/epo-nmt-datasets huggingface dataset:
Ces données indiquent que des PGN extraits de la même espèce bactérienne risquent de présenter des différences de réactivité, même si les lots proviennent du même fournisseur et ont été à priori extraits par la même procédure.
These data indicate that there is a risk that PGNs extracted from the same bacterial species might show differences in reactivity, even if the batches were obtained from the same supplier and were extracted beforehand by the same procedure.
Il apparaît donc nécessaire d'introduire un étalon interne pour la courbe étalon, de façon à éviter des erreurs relatives à la variabilité des PGN et à exprimer les résultats en quantité de PGN « actif ».
It therefore seems necessary to introduce an internal standard for the calibration curve, so as to avoid errors relating to the variability of the PGNs and to express the results as amount of “active” PGN.
Le PAM3Cys-Ser-(Lys)4 trihydrochloride (PAM3(cys) ; Figure 5) est un lipopeptide de synthèse triacylé qui mime la structure des lipopeptides bactériens et agit comme un agoniste fort de TLR2.
PAM3Cys-Ser-(Lys)4 trihydrochloride (PAM3(cys); FIG. 5) is a triacylated synthetic lipopeptide that mimics the structure of the bacterial lipopeptides and acts as a strong agonist of TLR2.
Etant de structure homogène, il est souvent utilisé comme témoin positif pour calibrer les réponses des cellules exprimant le récepteur TLR2.
Being of homogeneous structure, it is often used as positive control for calibrating the responses of the cells expressing the TLR2 receptor.
Les expériences ont donc été reproduites en remplaçant le PGN par le PAM3(cys) dans nos essais.
The experiments were therefore reproduced replacing PGN with PAM3(cys) in our tests.
Comme attendu, les cellules HEK-TLR2 montrent une forte réactivité vis-à- vis de ce composé.
As expected, the HEK-TLR2 cells show strong reactivity with respect to this compound.
De plus, l'allure de la courbe dose-réponse est similaire à celles obtenues en présence de PGN, avec une EC50 estimée à 10 ng/mL (Figure 6).
Moreover, the shape of the dose-response curve is similar to those obtained in the presence of PGN, with EC50 estimated at 10 ng/mL (FIG. 6).
Ces résultats indiquent que le PAM3(cys) induit des réponses équivalentes à celles des PGN les plus réactifs, mais contrairement à ces derniers, il ne présente pas de variabilité structurale.
These results indicate that PAM3(cys) induces responses equivalent to those of the most reactive PGNs, but in contrast to the latter, it does not display structural variability.
Par conséquent, ce lipopeptide de synthèse peut être utilisé pour calibrer les lots de PGN et établir une courbe étalon standardisée, ce qui permettra de formuler les résultats en quantités de PGN « actif », c'est-à dire en quantités de PGN donnant des réponses TLR2 identiques à celles obtenues avec les mêmes quantités de PAM3(cys).
Consequently, this synthetic lipopeptide can be used for calibrating the batches of PGN and for establishing a standardized calibration curve, which will allow the results to be formulated in amounts of “active” PGN, i.e. in amounts of PGN giving TLR2 responses identical to those obtained with the same amounts of PAM3(cys).
La calibration de chaque lot de PGN par rapport au PAM3(cys) est réalisée en comparant les pentes des parties linéaires de chaque courbe dose-réponse, et en calculant un facteur de correction pour superposer les courbes des PGN à celle du PAM3(cys).
Each batch of PGN is calibrated relative to PAM3(cys) by comparing the slopes of the linear portions of each dose-response curve, and calculating a correction factor for superimposing the curves of the PGNs on that of PAM3(cys).
Dans l'exemple présenté en Figure 6, les facteurs de corrections ont été estimés à 0,4, 2 et 40 respectivement pour les lots 1, 2 et 3.
In the example presented in FIG. 6, the correction factors were estimated at 0.4, 2 and 40 for batches 1, 2 and 3, respectively.
Cela signifie qu'il faut 2,5 fois moins de PGN du lot 1 pour obtenir des réponses identiques à celles induites par le PAM3(cys), mais 2 fois plus de PGN du lot 2 et 40 fois plus de PGN du lot 3.
This means that 2.5 times less PGN from batch 1 is required for obtaining responses identical to those induced by PAM3(cys), but 2 times more PGN from batch 2 and 40 times more PGN from batch 3.
Après avoir corrigé les quantités brutes de PGN, on peut voir que tous les points s'alignent sur une même courbe qui se superpose à celle obtenue avec le PAM3(cys) (Figure 7).
After correcting the raw quantities of PGN, it can be seen that all the points are aligned on one and the same curve, which can be superimposed on that obtained with PAM3(cys) (FIG. 7).
Par conséquent, l'utilisation de l'étalon interne permet d'obtenir des concentrations corrigées pour tous les lots de PGN et d'établir une courbe dose- réponse calibrée en PGN actif.
Consequently, using the internal standard makes it possible to obtain corrected concentrations for all the batches of PGN and establish a dose-response curve calibrated for active PGN.
En appliquant cette méthode, la courbe standard de réponse des cellules HEK-TLR2 présente une zone de linéarité pour des concentrations de PGN actif comprises entre 0,5 et 200 ng/mL (Figure 8), soit entre 13 et 5400 ng/g de polymères de glucose.
By applying this method, the standard curve of response of the HEK-TLR2 cells has a zone of linearity for concentrations of active PGN between 0.5 and 200 ng/mL (FIG. 8), or between 13 and 5400 ng/g of glucose polymers.
2- Procédé selon la revendication 1, dans lequel le traitement de l'échantillon par sonication, chauffage, et/ou alcalinisation permet de fragmenter et désagréger les PGN contenus dans l'échantillon, en particulier de manière à les rendre capable d'activer le récepteur TLR2.
The method of claim 15, wherein the sample is treated by sonication, heating, and/or alkalization to fragment and disintegrate the PGNs contained in the sample that activate the TLR2 receptor.
3- Procédé selon la revendication 1 ou 2, dans lequel le traitement de l'échantillon permet de générer des PGN présentant majoritairement une taille d'environ 120 kDa.
The method of claim 16, wherein said treatment generates PGNs predominantly having a size of about 120 kDa.
4- Procédé selon l'une quelconque des revendications 1-3, dans lequel le gène rapporteur est une phosphatase alcaline sécrétée.
The method of claim 15, wherein said reporter gene is a secreted alkaline phosphatase.
5- Procédé selon l'une quelconque des revendications 1-4, dans lequel la cellule est une cellule de la lignée HEK-Blue™ hTLR2.
The method of claim 15, wherein the cell is a cell of the HEK-Blue™ hTLR2 line.
6- Procédé selon l'une quelconque des revendications 1-5, dans lequel la courbe étalon de correspondance entre la quantité de PGN et l'intensité du signal de gène rapporteur a été préparée avec des PGN provenant d'une bactérie choisie parmi Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus, Bacillus subtilis et Alicyclobacillus acidocaldarius, de préférence parmi Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus, et Alicyclobacillus acidocaldarius.
The method of claim 15, wherein a calibration curve of the correspondence between the amount of PGN and the intensity of the reporter gene signal is prepared with PGNs derived from a bacterium selected from Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus, Bacillus subtilis and Alicyclobacillus acidocaldarius.
7- Procédé selon l'une quelconque des revendications 1-6, dans lequel le procédé comprend une étape préalable de préparation de la courbe étalon en utilisant des PGN provenant d'une bactérie choisie parmi Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus, Bacillus subtilis et Alicyclobacillus acidocaldarius.
The method of claim 20, wherein the method comprises a preliminary step of preparation of the calibration curve using PGNs derived from a bacterium selected from Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus, Bacillus subtilis and Alicyclobacillus acidocaldarius.
8- Procédé selon la revendication 6 ou 7, caractérisé en ce que la courbe étalon de correspondance entre la quantité de PGN et l'intensité du signal de gène rapporteur est standardisée ou calibrée avec un étalon interne agoniste de TLR2, de préférence un lipopeptide, en particulier le PAM3Cys-Ser-(Lys)4 trihydrochloride.
The method of claim 20, wherein the calibration curve of the correspondence between the amount of PGN and the intensity of the reporter gene signal is standardized or calibrated with an internal standard that is an agonist of TLR2.
9- Procédé selon l'une quelconque des revendications 1-5, dans lequel la courbe étalon de correspondance entre la quantité de PGN et l'intensité du signal de gène rapporteur a été préparée avec un étalon interne agoniste de TLR2, de préférence un lipopeptide, en particulier le PAM3Cys-Ser-(Lys)4 trihydrochloride.
The method of claim 15, wherein the calibration curve of the correspondence between the amount of PGN and the intensity of the reporter gene signal is prepared with an internal standard that is an agonist of TLR2.
10- Procédé selon la revendication 9, dans lequel le procédé comprend une étape préalable de préparation de la courbe étalon en utilisant un étalon interne agoniste de TLR2, de préférence un lipopeptide, en particulier le PAM3Cys-Ser-(Lys)4 trihydrochloride.
The method of claim 24, wherein said lipopeptide is PAM3Cys-Ser-(Lys)4 trihydrochloride.
11- Procédé selon l'une quelconque des revendications 1-10, dans lequel l'échantillon est dilué, si nécessaire, de manière à générer un signal du gène rapporteur correspondant à la partie linéaire de la courbe étalon.
The method of claim 15, wherein the sample is diluted, if necessary, so as to generate a signal of the reporter gene corresponding to the linear portion of the calibration curve.
12- Procédé selon l'une quelconque des revendications 1-11, dans lequel l'échantillon est un échantillon d'une solution d'icodextrine.
The method of claim 15, wherein the sample is a solution of icodextrin.
13- Kit permettant le dosage de peptidoglycanes (PGN) dans un échantillon de polymères de glucose comprenant : une cellule recombinante exprimant un récepteur TLR2 (Toll-like Receptor 2) exogène et un gène rapporteur sous la dépendance directe de la voie de signalisation associée au récepteur TLR2, le gène rapporteur codant pour une protéine colorée ou fluorescente ou pour une protéine dont l'activité peut être mesurée avec ou sans substrat ; et soit une courbe étalon de correspondance entre la quantité de PGN et l'intensité du signal de gène rapporteur, soit un standard de PGN, provenant de préférence d'une bactérie choisie parmi Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus, Bacillus subtilis et Alicyclobacillus acidocaldarius, de préférence parmi Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus, et Alicyclobacillus acidocaldarius, soit un étalon interne agoniste de TLR2, de préférence un lipopeptide, en particulier le PAM3Cys-Ser-(Lys)4 trihydrochloride ; facultativement une notice d'utilisation, une solution de pré-traitement de l'échantillon.
The kit of claim 29, wherein said agonist of TLR2 is a lipopeptide.
14- Kit selon la revendication 13, comprenant en outre un étalon interne agoniste de TLR2, de préférence un lipopeptide, en particulier le PAM3Cys-Ser-(Lys)4 trihydrochloride.
The kit of claim 30, wherein said lipopeptide is PAM3Cys-Ser-(Lys)4 trihydrochloride.
Une partie d'extrémité de base de la pièce de verrou initial 15 est située à proximité de l'entrée de la rainure de came 11.
A base end part of the initial lock piece 15is located near the entrance of the cam groove 11.
Une partie de verrouillage 16 destinée à être verrouillée sur la partie de réception de verrou 26 est agencée sur 25 une partie de pointe de la pièce de verrou initial 15.
A locking portion 16to be locked to the lock receiving portion 26is provided on a tip part of the initial lock piece 15.
La partie de réception de verrou 26 s'étend vers l'arrière du second trajet de réception 25 à une position proche de l'extrémité arrière de la partie de réception de verrou 22.
The lock receiving portion 26projects into the back of the second receiving path 25at a position near the rear end of the lever accommodating portion 22.
Lorsque le levier 10 est à la position initiale, la partie de verrouillage 16 de la pièce de verrou initial 15 est située sur le second trajet de 30 réception 25 et est verrouillée sur la surface avant de la partie de réception de verrou 26 afm de réguler la rotation du levier 10 vers la position de fin de 3032833 raccordement.
When the lever 10is at the initial position, the locking portion 16of the initial lock piece 15is located in the second receiving path 25and is locked to the front surface of the lock receiving portion 26to regulate rotation of the lever 10toward the connection end position.
Le connecteur C comporte, de manière séparée du verrou initial L, des parties de régulation de rotation S afm de réguler la rotation du levier 10 en étant maintenues raccordées au levier 10 dans le sens de rotation du levier 10 lorsque le 5 levier 10 est à la position initiale (voir figures 6 et 7).
The connector C is provided, separately from the initial lock L, with rotation regulating portions S for regulating the rotation of the lever 10by being held in connect with the lever 10in the rotating direction of the lever 10when the lever 10is at the initial position (see FIGS. 6 and 7).
Les parties de régulation de rotation S comportent une partie de régulation du côté levier 18 sur le levier 10 et une partie de régulation du côté boîtier 27 sur le boîtier 20.
The rotation regulating portions S include a lever-side regulating portion 18on the lever 10and a housing-side regulating portion 27on the housing 20.
La partie de régulation du côté levier 18 est agencée à une position sur la plaque de came 12 du levier 10 opposée à la pièce de verrou initial 15 à travers 10 l'orifice de palier 14.
The lever-side regulating portion 18is provided at a position on the cam plate 12of the lever 10opposite to the initial lock piece 15across the bearing hole 14.
La partie de régulation du côté levier 18 s'étend sur la surface périphérique externe de la partie de plaque de came 12.
The lever-side regulating portion 18projects on the outer peripheral surface of the cam plate portion 12.
Une surface avant de la partie de régulation du côté levier 18 dans le sens de rotation du levier 10 à partir de la position initiale vers la position de fm de raccordement est sensiblement verticale par rapport à la surface périphérique externe de la plaque 15 de came 12.
A front surface of the lever-side regulating portion 18in the rotating direction of the lever 10from the initial position to the connection end position is substantially vertical to the outer peripheral surface of the cam plate 12.
En outre, une surface arrière de la partie de régulation du côté levier 18 est inclinée afm d'augmenter progressivement une distance de saillie à partir de l'arrière vers l'avant dans le sens de rotation.
Further, a rear surface of the lever-side regulating portion 18is inclined to gradually increase a projecting distance from the rear toward the front in the rotating direction.
La partie de régulation du côté boîtier 27 s'étend sur une paroi latérale de la partie de réception de levier 22.
The housing-side regulating portion 27projects in on a side wall of the lever accommodating portion 22.
La partie de régulation du côté boîtier 27 est 20 située sur une course de la partie de régulation du côté levier 18 lorsque le levier 10 est tourné.
The housing-side regulating portion 27is located on a course of the lever-side regulating portion 18when the lever 10is rotated.
La surface arrière de la partie de régulation du côté boîtier 27 est sensiblement perpendiculaire à la direction longitudinale.
The rear surface of the housing-side regulating portion 27is substantially perpendicular to the front-back direction.
Une partie de la paroi latérale du boîtier 20 dans laquelle la partie de régulation du côté boîtier 27 s'étend définit une partie de déplacement élastique 28 25 qui peut être déplacée de manière élastique dans la direction latérale sur la figure 6.
A part of the side wall of the housing 20where the housing-side regulating portion 27projects defines a resilient displacing portion 28that is resiliently displaceable in the lateral direction in FIG. 6.
La partie de déplacement élastique 28 est séparée de l'autre partie de la paroi latérale du boîtier 20 par des fentes 29 formées au-dessus et au-déssous, comme cela est montré sur la figure 2, et est en porte-à-faux de l'avant vers l'arrière.
The resilient displacing portion 28is separated from the other part of the side wall of the housing 20by slits 29formed above and below, as shown in FIG. 2, and is cantilevered from front to back.
La partie de régulation du côté boîtier 27 est agencée sur une partie d'extrémité 30 arrière de la partie de déplacement élastique 28, comme cela est montré sur la figure 6.
The housing-side regulating portion 27is provided on a rear end part of the resilient displacing portion 28, as shown in FIG. 6.
La partie de déplacement élastique 28 est agencée de manière à venir en 3032833 saillie à partir de la surface latérale du boîtier 20 dans un état naturel.
The resilient displacing portion 28is arranged so as not to project from the side surface of the housing 20in a natural state.
Le connecteur C est raccordé au connecteur conjugué 30 en premier en plaçant le levier 10 à la position initiale (voir figure 6).
The connector C is connected to the mating connector 30by first setting the lever 10at the initial position (see FIG. 6).
Lorsque le levier 10 est à la position initiale, le verrou initial L est dans un état opérationnel.
When the lever 10is at the initial position, the initial lock L is in a functioning state.
A cet instant, 5 la partie de régulation du côté levier 18 et la partie de régulation du côté boîtier 27 sont l'une face à l'autre (séparée) dans le sens de rotation du levier 10.
At this time, the lever-side regulating portion 18and the housing-side regulating portion 27are facing each other (separated) in the rotating direction of the lever 10.
Ensuite, le connecteur C est assemblé dans le réceptacle 33 du connecteur conjugué 30 (voir figure 7).
Subsequently, the connector C is fit into the receptacle 33of the mating connector 30(see FIG. 7).
Ainsi, la broche de came 34 entre par l'entrée de la rainure de came 11 à partir du premier trajet de réception 24 et la partie de butée 10 19 de la rainure de came 11 et la broche de came 34 viennent en butée l'une contre l'autre dans la direction longitudinale.
Thus, the cam pin 34enters the entrance of the cam groove 11from the first receiving path 24and the abutting portion 19of the cam groove 11and the cam pin 34abut against each other in the front-back direction.
En outre, la partie de libération de verrou 35 entre à partir du second trajet de réception 25 et presse la pièce de verrou initial 15 dans une direction de déverrouillage afm de déplacer de manière élastique la pièce de verrou initial 15.
Further, the lock releasing portion 35enters from the second receiving path 25and presses the initial lock piece 15in an unlocking direction to resiliently displace the initial lock piece 15.
De cette manière, la partie de verrouillage 16 est 15 découplée de la partie de libération de verrou 35 afm de libérer un état verrouillé et une opération de rotation du levier 10 à la position initiale est autorisée.
In this way, the locking portion 16is disengaged from the lock releasing portion 35to release a locked state and a rotating operation of the lever 10at the initial position is allowed.
Le levier 10 tourne faiblement au cours de cette libération du verrou initial L. Ensuite, la partie de régulation du côté levier 18 et la partie de régulation du côté boîtier 27 sont mises en contact l'une avec l'autre.
The lever 10slightly rotates during this release of the initial lock L. Thereafter, the lever-side regulating portion 18and the housing-side regulating portion 27are brought into contact with each other.
20 Un opérateur peut pousser fortement sur la surface arrière du boîtier 20 dans un effort destiné à pousser le connecteur C dans le réceptacle 33 du connecteur conjugué 30 sans faire tourner le levier 10.
An operator may strongly push the rear surface of the housing 20in an effort to push the connector C into the receptacle 33of the mating connector 30without rotating the lever 10.
Toutefois, la broche de came 34 vient en butée contre la partie de butée 19 de la rainure de came 11 dans la direction longitudinale afm d'empêcher un mouvement de poussée du boîtier 20.
However, the cam pin 34abuts against the abutting portion 19of the cam groove 11in the front-back direction to preventing a pushing movement of the housing 20.
En outre, 25 la partie de régulation du côté levier 18 et la partie de régulation du côté boîtier 27 sont en contact l'une avec l'autre dans le sens de rotation afin de réguler la rotation du levier 10.
Further, the lever-side regulating portion 18and the housing-side regulating portion 27contact each other in the rotating direction to regulate rotation of the lever 10.
Le raccordement ne se produit pas et le levier 10 aussi ne tourne pas même si la surface arrière du boîtier 20 est poussée Ainsi, un opérateur ne va pas considérer de manière erronée que l'opération de raccordement a été achevée, et 30 réalise que le connecteur C ne peut pas être raccordé au connecteur conjugué 30 sauf si le levier 10 est tourné.
Thus, an operator will not mistakenly assume that the connecting operation has been completed, and realizes that the connector C cannot be connected to the mating connector 30unless the lever 10is rotated.
3032833 Si l'opérateur essaye de tourner le levier 10 vers la position de fin de raccordement en pressant la partie de commande 13 du levier 10, un effort de contact entre la partie de régulation du côté levier 18 et la partie de régulation du côté boîtier 27 augmente et la partie de déplacement élastique 28 du boîtier 20 est 5 déplacée de manière élastique vers l'extérieur, la partie de régulation du côté boîtier 27 est rétractée vers l'extérieur et un état de régulation de rotation des parties de régulation de rotation S est libéré comme cela est montré sur la figure 8.
If the operator tries to rotate the lever 10toward the connection end position by pressing the operating portion 13of the lever 10, a contact force between the lever-side regulating portion 18and the housing-side regulating portion 27increases and the resilient displacing portion 28of the housing 20is displaced resiliently out, the housing-side regulating portion 27is retracted outward and a rotation regulating state of the rotation regulating portions S is released as shown in FIG. 8.
Lorsque l'opérateur tourne le levier 10, la partie de régulation du côté levier 18 passe à travers le côté interne de la partie de régulation du côté boîtier 27 et la 10 partie de déplacement élastique 28 revient de manière élastique à une position initiale.
When the operator rotates the lever 10, the lever-side regulating portion 18passes through the inner side of the housing-side regulating portion 27and the resilient displacing portion 28resiliently returns to an initial posture.
En outre, la broche de came 34 se découple de la partie de butée 19 et le connecteur C est entraîné vers un côté conjugué par une action de came par le couplage de la broche de came 34 et de la rainure de came 11.
Further, the cam pin 34disengages from the abutting portion 19and the connector C is pulled toward a mating side by a cam action by the engagement of the cam pin 34and the cam groove 11.
Ainsi, le connecteur C est assemblé davantage dans le réceptacle 33.
Thus, the connector C is fit further into the receptacle 33.