mwirth-epo/epo-nmt-datasets huggingface dataset:
En el caso de las diversas realizaciones, ellaspuedan ser modificadas para situar la superficie arqueadade obturación en el miembro macho o ser modificadas, además, de manera que ambas superficies sean arqueadas.
In the case of the various embodiments they may be modified to locate the arcuate sealing surface on the male member or to be further modified such that both surfaces are arcuate.
La presente invención se refiere a ensayos paradeterminar y/o detectar hormonas en fluidos corporales demamíferos y en particular a ensayos para determinar y/odetectar la variación brusca de la hormona luteinizante queprovoca la ruptura del folículo preovulatorio y la liberacióndel óvulo en la ovulación.
The present invention relates to assays for determining and/or detecting hormones in mammalian body fluids and in particular to assays for determining and/or detecting the luteinizing hormone surge which results in rupture of the preovulatory follicle and release of the ovum at ovulation.
Más particularmente, la invenciónse refiere al uso del contenido total de cadena alfapeptídica gonadotrópica en orina como un indicador mejoradodel contenido de hormona luteinizante.
More particularly, the invention relates to the use of total gonadotropal alpha peptide chain content in urine as an enhanced indicator of luteinizing hormone content.
Aún incluso másparticularmente, la invención se refiere a un inmunoensayoadecuado para someter a ensayo unos constituyentes en laorina humana para determinar el periodo fértil humano, estoes, el periodo en el que esperma viable y un óvulo viablepueden estar presentes simultáneamente en el tractoreproductor femenino.
Even more particularly, the invention relates to an immunoassay suitable for testing for constituents in human urine to determine the human fertile period, that is, the period in which viable sperm and a viable ovum may be present simultaneously in the female reproductive tract.
Por ciertas razones puede ser deseable determinar clínicay/o diagnósticamente la presencia y/o concentración de unosconstituyentes de los fluidos corporales de mamíferos talescomo suero sanguíneo u orina.
For a number of reasons it may be clinically and/or diagnostically desirable to determine the presence and/or concentration of constituents in mammalian body fluids such as blood serum or urine.
En muchos casos, la actividady/o el metabolismo hormonal de mamíferos crea situaciones enlas que las variaciones bruscas de las concentraciones dehormonas o metabolitos en los fluidos corporales pueden estarrelacionadas cronológicamente con otros acontecimientos.
In some instances, mammalian hormonal activity and/or metabolism create situations where surges in concentrations of hormones or metabolites in body fluids may be chronologically related to other events.
Enparticular, una variación brusca de la concentración de lashormonas luteinizantes (LH) en la orina humana se puedeutilizar para determinar el periodo fértil del ciclomenstrual.
In particular, a surge in the concentration of luteinizing hormones (LH) in human urine may be used to ascertain the fertile period of the menstrual cycle.
Para parejas que experimentan dificultad en laprocreación, existe una necesidad de identificar el periodoóptimo para la relación sexual o inseminación artificial.
For couples experiencing difficulty in conceiving there is a need for identifying the optimum period for intercourse or artificial insemination.
El ciclo menstrual humano está regulado por la liberacióncíclica de hormonas procedentes de glándulas y órganosfemeninos.
The human menstrual cycle is governed by the cyclical release of hormones from the female glands and organs.
Dicha liberación es predecible y está relacionadaespecíficamente con la ovulación mediante la cual los óvulosse desprenden de los ovarios y el forro interno del útero seprepara para el embarazo.
Such release is predictable and specifically related to ovulation by which ova are released from the ovaries and the lining of the uterus is made ready for pregnancy.
Finalmente, las hormonas liberadasy/o sus metabolitos llegan a la orina.
Eventually, the released hormones and/or metabolites thereof find their way into the urine.
Los fenómenosbiológicos específicos se describen con detalle en unaconferencia publicada de Kevin J. Catt y John G. Piercetitulada "Gonadotropic Hormones of the Adenohypophysis", queaparece como capítulo 3 (págs. 75-114) de un tratado de Yen,S.S.C. y Jaffee, R.B., REPRODUCTIVE ENDOCRINOLOGY, 2 Ed.,W.B. Saunders, Philadelphia (1978).
The specific biological phenomena are described in detail in a published dissertation of Kevin J. Catt and John G. Pierce entitled "Gonadotropic Hormones of the Adenohypophysis", which appears as Chapter 3 (pp 75-114) of a treatise of Yen, S.S.C. and Jaffee, R.B., REPRODUCTIVE ENDOCRINOLOGY, 2d ed., W.B. Saunders, Philadelphia (1978).
Basta con decir, quedurante un ciclo menstrual normal, el nivel de LH en el suerofemenino varía bruscamente para provocar que el folículopreovulatorio se rompa y se libere el óvulo.
And suffice it to say, that during a normal menstrual cycle, the level of LH in female serum surges to cause the preovulatory follicle to rupture and release the ovum.
La variación brusca de LH se puededetectar en la orina femenina aproximadamente 8 a 24 horasdespués de que tenga lugar la variación brusca en la sangre.Esta variación brusca de LH en la orina humana se hautilizado, por tanto, como una indicación de que el periodofértil está en marcha o a punto de ocurrir y una cantidad deensayos comerciales para detectar el periodo fértil se hanbasado en la medición de las concentraciones de LH en laorina humana.
The surge of LH in human urine has thus been used as an indication that the fertile period is ongoing or about to occur and a number of commercial assays for detecting the fertile period have been based on the measurement of LH concentrations in human urine.
Las gonadotropinas tales como LH, hormona estimuladoradel folículo (FSH), gonadotropina coriónica humana (hCG) yhormona estimuladora del tiroides (TSH) son todas hormonasbien conocidas, tal y como exponen Catt et al., en laconferencia identificada anteriormente.
Gonadotropins such as LH, follicle-stimulating hormone (FSH), human chorionic gonadotropin (hCG) and thyroidstimulating hormone (TSH) are all well known hormones as discussed in the Catt et al. dissertation identified above.
Estas hormonas estántodas formadas por dos cadenas peptídicas (una cadena alfa yuna cadena beta) que están unidas no covalentemente parapresentar la hormona intacta.
These hormones are all formed from two peptide chains (an alpha chain and a beta chain) which are non-covalently joined to present the intact hormone.
Las cadenas son capaces deexistir separadamente; sin embargo, se tienen que unir entresí para crear una hormona biológicamente activa.
The chains are capable of existing separately; however, they must be joined together to create a biologically active hormone.
Las cadenasalfa de LH, FSH, hCG y TSH son esencialmente idénticas perolas cadenas beta son todas diferentes.
The alpha chains of LH, FSH, hCG and TSH are essentially identical but the beta chains are all different.
Tal y como se conoce en la técnica, las hormonas intactas(holo) y las cadenas alfa y beta libres se puede distinguiry someter a ensayo separadamente utilizando distintascombinaciones de anticuerpos para los epítopes privados,públicos y/o conformacionales.
As is known in the art, the intact (holo) hormones and the free alpha and beta chains may be distinguished and assayed separately using various combinations of antibodies to private, public and/or conformational epitopes.
En relación con ésto, unepítope público es uno que es accesible sin importar si lacadena está libre o combinada, un epítope privado es uno quees accesible sólo en cadenas libres y un epítopeconformacional es uno que no está disponible en ningunacadena aislada pero sólo en la hormona intacta.
In this regard, a public epitope is one that is accessible without regard to whether the chain is free or combined, a private epitope is one that is accessible only on free chains and a conformational epitope is one that is not available on either chain alone but only on an intact hormone.
Y, como seindicaba anteriormente, los ensayos comerciales para elperiodo fértil se han configurado previamente para determinarla variación brusca de LH sometiendo a ensayo la hormonaintacta.
And, as indicated above, commercial fertile period assays have previously been configured to determine the LH surge by assaying for the intact hormone.
También se ha reconocido que los ensayos de LH podíandirigirse potencialmente a la cadena beta total o libre deLH.
It has also been recognized that LH assays could potentially be directed to either total or free LH beta chain.
Sin embargo, no se ha observado ningún indicio en latécnica anterior de que pueda haber una correlaciónsuficiente entre el contenido de cadena alfa totalpreovulatorio y las variaciones bruscas de LH intacta en laorina para basar un ensayo del periodo fértil en la cadenaalfa total.
However, there has been no suggestion in the prior art that there might be a sufficient correlation between preovulatory total alpha chain content and intact LH surges in urine to base a fertile period assay on total alpha chain.
Aún incluso de este modo, no ha habido ningúnindicio en la técnica anterior de que la cadena alfa total nosólo varía bruscamente al mismo tiempo que LH sino que varíabruscamente a un nivel muy superior, de modo que el ensayo esmucho más sensible y preciso.
Even more so there has been no suggestion in the prior art that total alpha chain not only surges contemporaneously with LH but surges to a much greater level so that the assay is much more sensitive and precise.
Balin, M.S. et al., (J. Endocrinol.
Balin, M.S. et al (J. Endocrinol.
12(6): 373-382(1989)) tratan el ensayo de la subunidad alfa perodescriben sólo la determinación de subunidades alfa libres dela hormona gonadotrófica humana en el plasma de mujeres conovulación normal que se han estimulado mediante la hormonaliberadora de hormona gonadotropina (GnRH) en diferentesmomentos durante el ciclo ovulatorio.
12(6) : 373-382 (1989)) concerns the assay of the alpha subunit but discloses only the determination of free alpha-subunits of human gonadotrophal hormone in the plasma of normal ovulating women who have been stimulated by gonadotropin hormone releasing hormone (GnRH) at various times during the ovulatory cycle.
De acuerdo con la invención, se ha descubierto que en laorina de mujeres con un ciclo normal el contenido total decadenas peptídicas alfa gonadotróficas en orina esconsiderablemente superior al contenido de cadena beta totalde LH o de hormona LH intacta.
In accordance with the invention it has been discovered that in the urine of normal cycling women the total content of gonadotropal alpha peptide chains in urine is considerably greater than the total LH beta chain or intact LH hormone content.
También se ha descubierto quelos niveles de cadena alfa, cadena beta y holohormona seincrementan todos de modo coordinado en la mitad del ciclo.Por ello, se ha observado, de acuerdo con la invención, quela variación brusca preovulatoria de la holohormona seacompaña de una variación brusca simultánea y aumentada en lacadena alfa total.
It has also been discovered that the levels of alpha chain, beta chain and holohormone all increase in a coordinated fashion at mid cycle.
Esto facilita la construcción de un ensayoque tiene una relación de señal a ruido mejorada comparadacon otros ensayos basados en la holohormona o en la cadenabeta libre o total.
This facilitates construction of an assay having an enhanced signal to noise ratio compared to other assays based on the holohormone or on free or total beta chain.
Las mediciones han mostrado que laconcentración molar equivalente de cadena alfa gonadotróficaen la variación brusca de la mitad del ciclo esaproximadamente de cinco a diez veces superior que lasconcentraciones molares equivalentes de la holohormona o lacadena beta.
Measurements have shown that the molar equivalent concentration of gonadotropal alpha chain at the mid cycle surge is approximately five to ten times greater than the molar equivalent concentrations of the holohormone or the beta chain.
La presente invención proporciona un procedimiento deensayo para determinar la variación brusca preovulatoria dehormona luteinizante que incluye las etapas de obtener unapluralidad de muestras de orina procedente de un mamífero ycomparar el contenido total de cadena alfa peptídicagonadotrófica de dichas muestras.
The present invention provides an assay procedure for determining preovulatory surging of luteinizing hormone which includes the steps of obtaining a plurality of samples of urine from a mammal and comparing the total gonadotrophal alpha peptide chain content of said samples.
En un aspecto adicional dela invención, se crea un procedimiento de ensayo parapredecir el comienzo de la ovulación en un ser humano quecomprende obtener una muestra de orina del sujeto durantecada uno de una pluralidad de periodos de tiempoconsecutivos, analizar cada una de dichas muestras paradeterminar el contenido total de cadena alfa peptídicagonadotrófica de las mismas, y observar si tiene lugar unavariación brusca del contenido total de cadena alfa peptídicagonadotrófica, siendo ésto indicativo del comienzo de laovulación.
In a further aspect of the invention, an assay procedure is provided for predicting the onset of ovulation in a human subject which comprises obtaining a urine sample from the subject on each of a plurality of consecutive time periods, analyzing each of said samples to determine total gonadotrophal alpha peptide chain content thereof, and observing whether a surge in said total gonadotrophal alpha peptide chain content occurs, this being indicative of the onset of ovulation.
La invención incluye, por tanto, un procedimientode ensayo que comprende las etapas de obtener una muestra deorina procedente de un mamífero y analizar dicha muestra paradeterminar o detectar cadenas alfa peptídicas gonadotróficassin tener en cuenta si estas últimas están libres o formanparte de una hormona intacta.
The invention therefore includes an assay procedure comprising the steps of obtaining a sample of urine from a mammal and analyzing said sample to determine or detect gonadotrophal alpha peptide chains without regard to whether the latter are free or part of an intact hormone.
En los aspectos más específicos de la invención se creaun procedimiento de ensayo en el que las muestras se analizanutilizando un procedimiento inmunológico.
In the more specific aspects of the invention an assay procedure is provided wherein the samples are analyzed using an immunological procedure.
El procedimientoinmunológico puede incluir la etapa de construir un sándwichusando dos anticuerpos diferentes, teniendo cada uno dedichos anticuerpos la capacidad de unión específica a unsitio de unión diferente respectivo en la cadena alfa.
The immunological procedure may include the step of forming a sandwich using two different antibodies, each of said antibodies being specifically bindable to a respective different binding site on the alpha chain.
En una forma preferida de la invención, el procedimientode ensayo puede incluir un procedimiento de ELISA tiposándwich.
In a preferred form of the invention, the assay procedure may include a sandwich ELISA procedure.
Y en una forma particularmente preferida de lainvención, las muestras se obtienen en días consecutivos ycomprenden muestras de orina tomadas a primera hora de lamañana.
And in a particularly preferred form of the invention, the samples are obtained on consecutive days and comprise first morning urine samples.
La Figura 1 es un diagrama que compara las variacionesbruscas preovulatorias en la mitad del ciclo de LH intacta yde cadena alfa total en días consecutivos de 7 ciclos;
Figure 1 is a chart which compares the mid cycle preovulatory surges of intact LH and total alpha chain on consecutive days of 7 cycles; Figure 2 is a standard curve relating total alpha chain content to spectrophotometric absorbance values; and Figure 3 illustrates the total alpha content of urine during essentially an entire menstrual cycle.
Como se ha expueto anteriormente, la presente invenciónse basa en el descubrimiento del acontecimiento de dosfenómenos inesperados durante el ciclo menstrual de mujerescon ciclos normales.
As set forth above, the present invention is based on the discovery of the occurrence of two unexpected phenomena during the menstrual cycle of normally cycling women.
Primero se descubrió que la tradicionalvariación brusca de LH intacta en la mitad de ciclo en elsistema que dispara la ovulación, se acompaña de unavariación brusca al mismo tiempo del nivel total de cadenaspeptídicas alfa gonadotróficas en el sistema.
First it was discovered that the traditional mid cycle surge of intact LH in the system that triggers ovulation is accompanied by a contemporaneous surge in the total level of gonadotropal alpha peptide chains in the system.
Adicionalmente,se ha descubierto que la variación brusca de cadena alfa estámuy aumentada en relación con la variación brusca de laholohormona.
Additionally it has been discovered that the alpha chain surge is greatly magnified relative to the surge of the holohormone.
Estos fenómenos se descubrieron realizando análisis portransferencia de manchas para determinar la especificidad deepítope de ciertos anticuerpos de LH.
These phenomena were discovered by conducting dot blot analyses to determine the epitope specificity of certain LH antibodies.
Los anticuerposinvestigados eran HK1 2G9, LH25 2B10, INN-132, INN-72, LH26-2G9,WSP-2G5 y WSP-2B6.
The antibodies investigated were HK1 2G9, LH25 2B10, INN-132, INN-72, LH26-2G9, WSP-2G5 and WSP-2B6.
Los anticuerpos INN están disponiblescomercialmente en I.D.C. (A-6080 Innsbruck/IGLS, Gsturnsteig10, Austria) y los anticuerpos WSP están disponiblescomercialmente en Western States Plasma (3887 Alta VistaDrive, Fallbrook, CA).
The INN antibodies are commercially available from I.D.C. (A-6080 Innsbruck/IGLS, Gsturnsteig 10, AUSTRIA) and the WSP antibodies are available commercially from Western States Plasma (3887 Alta Vista Drive, Fallbrook, CA).
Los otros anticuerpos estándisponibles en esta casa, Hygeia Sciences, Inc.
The other antibodies are available in-house at Hygeia Sciences, Inc.
Los antígenos de LH (cadena beta libre, cadena alfa librey holohormona intacta; obtenidos de Scripps) se unieron anitrocelulosa con una concentración de 5 m g/ml en tampón decarbonato 0,2 M (pH 8,0) mediante un dispositivo de 96pocillos (Bio-Rad, Richmond, CA) por filtración por gravedad.La nitrocelulosa se expuso después a una solución de BSA 2%en carbonato 0,2 M, pH 9,0 para bloquear los sitios de uniónrestantes.
LH antigens (free beta chain, free alpha chain and intact holohormone; obtained from Scripps) were bound to nitrocellulose at a concentration of 5 µg/ml in 0.2 M carbonate buffer (pH 8.0) via a 96-well device (Bio-Rad, Richmond, CA) by gravity filtration.
Los anticuerpos monoclonales de LH con unaconcentración de 25 m l/pocillo se filtraron porgravedad a través de una membrana.
The monoclonal LH antibodies at a concentration of 25 µg/ml, 100 µL/well were gravity filtered through a membrane.
El anticuerpo no unido seseparó lavando los pocillos tres veces con 300 m l decarbonato 0,2 M con TweenTM 20 0,1% utilizando filtración envacío.
Unbound antibody was removed by washing the wells three times with 300 µL of 0.2 M Carbonate with 0.1% Tween™ 20 using vacuum filtration.
La IgG anti-ratón marcada con fosfatasa alcalina(Sigma Chemical, St. Louis, MO) se diluyó 1:1200 en tampónbloqueador, 100 m l/pocillo, se filtró por gravedad, seguidode tres lavados que empleaban el tampón de lavado mencionadoanteriormente y filtración en vacío.
Antimouse IgG labelled with Alkaline Phosphatase (Sigma Chemical, St. Louis, MO) diluted 1:1200 in blocking buffer, 100 µL/well, was gravity filtered, followed by three washes using the above mentioned wash buffer and vacuum filtration.
Se utilizó un lavadofinal con agua destilada para separar todo el Tween residual.La membrana se separó del dispositivo y se expuso a unsustrato que constaba de 0,01% azul nitro tetrazolio, CaCl20,004 M y 0,5 mg/ml de fosfato de indoxilo en tampón veronal-acetato,pH 9,6.
The membrane was removed from the device and exposed to substrate consisting of.01% Nitro Blue Tetrazolium,.004 M CaCl2, and 0.5 mg/mL Indoxyl Phosphate in Veronal-Acetate Buffer, pH 9.6.
Los resultados obtenidos fueron directos con muy pocaseñal de fondo y se determinó que el anticuerpo HK1 2G9 esespecífico de un epítope público en la cadena beta de LH, elanticuerpo LH25 2B10 es específico para un epítope público enla cadena beta de LH, el anticuerpo INN-132 es específicopara un epítope público en la cadena alfa, el anticuerpo INN-72es específico para un epítope privado en la cadena alfa,el anticuerpo LH26-2G9 es específico para un epítope privadoen la cadena beta, el anticuerpo WSP-2G5 es específico paraun epítope público en la cadena alfa y el anticuerpo WSP-2B6es específico para un epítope conformacional en laholohormona.
The results obtained were straight forward with very little background and it was determined that HKl 2G9 antibody is specific for a public epitope on the LH beta chain, LH25 2B10 antibody is specific for a public epitope on the LH beta chain, INN-132 antibody is specific for a public epitope on the alpha chain, INN-72 antibody is specific for a private epitope on the alpha chain, LH26-2G9 antibody is specific for a private epitope on the beta chain, WSP-2G5 antibody is specific for a public epitope on the alpha chain, and WSP-2B6 antibody is specific for a conformational epitope on the holohormone.
Las parejas de estos anticuerpos se utilizaron de estemodo para desarrollar ensayos ELISA de tipo sándwich paraanalitos específicos.
Pairs of these antibodies were thus used to develop sandwich ELISA assays for specific analytes.
Por ejemplo, WSP-2B6 (holohormona) yWSP-2G5 (alfa) se podían utilizar para someter a ensayo lahormona intacta; INN-132 (alfa) y WSP-2G5 (alfa) se podíanutilizar para someter a ensayo la cadena alfa total; y LH252B10 (beta) y HK1 2G9 (beta) se podían utilizar para sometera ensayo la cadena beta total.
For example, WSP-2B6 (holohormone) and WSP-2G5 (alpha) could be used to assay for the intact hormone; INN-132 (alpha) and WSP-2G5 (alpha) could be used to assay for total alpha chain; and LH25 2B10 (beta) and HK1 2G9 (beta) could be used to assay for total beta chain.
Los inmunoensayos se llevaron a cabo utilizando lasanteriores parejas de anticuerpos y una placa de 96 pocillosde Immulon.
Immunoassays were conducted using the foregoing pairs of antibodies and a 96 well Immulon plate.
Los anticuerpos WSP-2B6, INN-132 y LH25 2B10 seutilizaron como anticuerpos de captura respectivos y el otroanticuerpo de cada pareja se marcó con peroxidasa de rábanopicante (HRP).
WSP-2B6, INN-132 and LH25 2B10 antibodies were used as the respective capture antibodies and the other antibody of each pair was labelled with horse radish peroxidase (HRP).
Los anticuerpos de captura se dispersaron enPBS 0,05 M (pH 7,35) con diferentes concentraciones.
The capture antibodies were dispersed in 0.05 M PBS (pH 7.35) at different concentrations.
Laconcentración del anticuerpo WSP 2B6 fue de 10 m g/ml; laconcentración del anticuerpo INN-132 fue de 5 m g/ml; y laconcentración del anticuerpo LH25 2B10 fue de 1 m g/ml.
The concentration of the WSP 2B6 antibody was 10 µg/ml; the concentration of the INN-132 antibody was 5 µg/ml; and the concentration of the LH25 2B10 antibody was 1 µg/ml.
Cadauna de estas dispersiones fue revestida (100 m l) en unapluralidad de pocillos y se incubó durante una noche atemperatura ambiente.
Each of these dispersions was coated (100 µl) in a plurality of wells and incubated overnight at room temperature.