கேள்வி: புரதங்களுக்கு இடையேயான இணைவாக்கம் - நான்கு முறைகள் குறித்து விரிவாக சொல்லுங்கள்.
பதில்: புரதங்களுக்கு இடையேயான இணைவாக்கத்தை அறிய பல முறைகள் இருந்தாலும், பின்வரும் நான்கு முறைகள் பரவலாக நடைமுறையில் உள்ளன. : ௧. ஒத்ததிர்வு ஒளிர்வின் (மினுப்பின்) ஆற்றல் கடத்தல் முறை (Fluorescence Resonance Energy Transfer) : ௨. ஒளிரின் (மினுப்பின்) மருயிணைவு முறை (Bi-molecular florescent complementation assay) : ௩. ஈசிட்டு இரு-கலப்பின முறை (yeast two-hybrid system) : ௪. உள்- இழுத்தல் முறை ( pull-down assay) இந்நான்கு முறைகளுக்கும் பக்டிரியல் படிவாக்கம் (bacterial cloning) என்ற நுட்பமும் மிக முக்கியமானது. முதல் இருமுறைகளில் மூலக்கூறு இணைவதை அறிவதோடு, புரதங்களின் இருப்பிடத்தையும் அறிய முடியும் என்பது தனிச்சிறப்பு. முதல் மூன்று முறைகளுக்கும் இருவாழ் வெக்டர் (binary vector) என்ற பிளாசுமிட் பயன்படுத்த படும். மேலும் இவ்மூன்று முறைகளும் நேரடியாக வாழும் உயரணுவில் (living cells) ஆய்வுகள் செய்யப்படுவது ஒரு தனிப்பட்ட சிறப்பாகும். நான்காவது முறையான உள்- இழுத்தல் முறைக்கு புரத உற்பத்தியை செயற்கையாக மிகைபடுத்த ஒரு பிளாசுமிட் (expression vectors) பயன்படுத்த படும். மேலும் மூலக்கூறுகள் இணைந்து உள்ளனவா என அறிய வெசுட்டர்ன் பிளாட் (western blot) என்ற ஒரு முறையைக் கூடுதலகாக செய்ய வேண்டி இருக்கும்.
கேள்வி: புரதங்களுக்கு இடையேயான இணைவாக்கம் - ஒத்ததிர்வு ஒளிர்வின் (மினுப்பின்) ஆற்றல் கடத்தல் முறை பற்றி தகவல் சொல்.
பதில்: காணும் முறைகள்: படிமம்:FRET.PNG‎ : ௧. படியெடுப்பு : ௨. உள்செலுத்துதல் முறை (transfection in animal, infiltration in plant) : ௩. ஒருதள நுண்ணோக்கி (கான்ஃபோக்கல் நுண்ணோக்கி) (confocal microscope) இம்முறை அறிவதற்கு உயிர்-இயற்பியல் சிறிது அறிந்து இருக்க வேண்டும். இரு மூலக்கூறுகள் இணையும் போது , மூலக்கூறு இடையே ஆற்றல் கடத்தப்படும். இந்த தத்துவமே இம்முறையில் அமுல்படுத்த படுகிறது. இணைவுகள் இருக்கிறதா? இல்லையா என ஆய்வுக்கு எடுத்து கொள்ளப்படும் இரு புரதத்தின் மரபணுப் பகுதிகள் இரு வெவ்வேறு வெக்டாரில் ஒரு ஒ(மி)ளிரும் புரதத்தோடு பிணைத்து (fusion) வடிவாக்கம் செய்யப்படுகின்றன ( எ.கா. பச்சை அல்லது மஞ்சள் மிளிரும் புரதம் மற்றும் நீல மிளிரும் புரதம். இவை நேரடியாக கலத்தில் உள்செலுத்துதல் (transfection in animal, infiltration in plant) என்னும் முறையில் உள்-தள்ளப்படுகின்றன. பின் நுண்நோக்கியில் புரத இணைவுகளை காணலாம்.
கேள்வி: புரதங்களுக்கு இடையேயான இணைவாக்கம் - ஒளிர்வின் (மினுப்பின்) மருயிணைவு முறை (Bi-molecular florescent complementation assay) பற்றி தகவல் சொல்.
பதில்: : ௧. படியெடுப்பு : ௨. உள்செலுத்துதல் முறை (transfection in animal, infiltration in plant) : ௩. ஒருதள நுண்ணோக்கி (கான்ஃபோக்கல் நுண்ணோக்கி) (confocal microscope) இம்முறையில் ஒரே மிளிரும் ( எ.கா. நீல மிளிரும் புரதம்) புரதத்தின் இரு முனைகள் (N and C-terminal end) இரு வெவ்வேறு வெக்டரில் வடிவாக்கம் செய்யப்பட்டு இருக்கும். நாம் விரும்பும் மூலக்கூறின் மரபணு பகுதியெய் இம்முனைகளோடு பிணைந்து வடிவாக்கம் செய்ய வேண்டும். இவ்விரு மூலக்கூறுகள் இணையும் பொழுது, பிரிந்த ஒளிரும் புரதத்தின் இரு முனைகள் இணைக்கப்பட்டு மிளிரும் தன்மையெய் அடையும். மிளிரும் தன்மை இல்லையெனில் இரு மூலக்கூறு இடையில் இணைவாக்கம் இல்லை என பொருள். ---- '
கேள்வி: புரதங்களுக்கு இடையேயான இணைவாக்கம் - உள்- இழுத்தல் முறை ( pull-down assay) பற்றி நீங்கள் என்ன அறிந்துள்ளீர்கள்?
பதில்: படிமம்:pull.jpg தேவையான முறைகள்: ௧. பக்டிரியல் படிவாக்கம் அல்லது வடிவாக்கம் ௨. புரத மிகைப்படுத்துதல் (Protein expression) ௩. கூம்பு குழாய் பிரித்தல் (column separator) இம்முறையில் இணைவாக்கம் காண விரும்பும் புரதங்களை புரத மிகைப்படுத்துதல் முறைக்கு உட்படுத்தப்படும். ஒரு புரதத்தை கூம்பு குழாயில் வைக்கப்பட்டு ஒரு வடிகட்டியாக மாற்றப்படும். இக்குழாயின் வழியாக புரத கலவையெய் (crude protein) கடத்தும் போது, இணையும் புரதம் வடிகட்டியாக செயல்படும் மூலக்கூருவோடு பிணைந்து குழாயில் தங்கிவிடும். இணையாத மற்ற புரதம் எல்லாம் வழித்தோடும் நீருடன் வெளியேற்றப்படும், அதனால்தான் இம்முறைக்கு உள்-இழுக்கும் முறை. இந்நான்கு முறைகளிலும், ஆய்வாளர்களின் பார்வையில் முதல் இரு முறையும், மற்றும் நான்காவது முறையும் நம்பதகுந்தாகும். ஈசுட்-இரு கலப்பின முறையில் கசியும் வெளிப்பாடு (leaky expression) இருப்பதால் தவறுகள் நடைபெற வாய்ப்புகள் மிகுந்ததாக உள்ளன.
கேள்வி: புரதங்களுக்கு இடையேயான இணைவாக்கம் - கலைச்சொற்கள் பற்றி விளக்கவும்.
பதில்: புரதங்களுக்கு இடையேயான இணைவாக்கம்- protein-protein interaction கல குறியீடுகள் - cell signaling ஊக்கம் /மட்டுப்படுத்துதல்- on/off mechanism ஒத்ததிர்வு ஒளிர்வின் (மினுப்பின்) ஆற்றல் கடத்தல் முறை- Fluorescence Resonance Energy Transfer ஒளிரின் (மினுப்பின்) மருயிணைவு முறை-Bi-molecular florescent complementation assay ஈச்ட் இரு- கலப்பின முறை-yeast two-hybrid system உள்- இழுத்தல் முறை- pull-down assay இருவாழ் பரப்பி- binary vector வடிவாக்கம் அல்லது படிவாக்கம்-cloning உள்செலுத்துதல் முறை- transfection, infiltration செயலூக்கியின் முனை-Activation domain பிணைவு முனை-Binding domain கசியும் வெளிப்பாடு-leaky expression புரத மிகைப்படுத்துதல்-Protein expression