O número de células inicial escolhido depende do tipo de célula/linha de células e do tamanho desejado dos esferoides. Valores experimentais mostram que são adequadas contagens de células entre 1.000 e 6.000 células/poço. Para ajustar o número de células por poço ao respectivo experimento, é aconselhável realizar uma série de diluições e, em seguida, determinar a concentração ideal de células com base nos parâmetros desejados.