Pacjent musi przejść badania przesiewowe w celu potwierdzenia nadmiaru kortyzolu we krwi. Jednak diagnostyka zespołu Cushinga jest bardziej zaawansowana. Konieczne jest wykonanie dodatkowych testów laboratoryjnych, które umożliwią ustalenie, czy źródło zaburzeń znajduje się w nadnerczach, czy w przysadce.