En vanlig måte å diagnostisere B12-mangel på er ved å ta blodprøver for å undersøke nivået av B12 i kroppen. Et lavt nivå av B12 i blodet, vanligvis under 200 picomol/L, kan indikere mangel. Noen ganger kan det også være nødvendig med en homocystein- eller metylmalonsyretest for å bekrefte diagnosen.