De stof botulinumtoxine werd in 1946 ontdekt en in 1970 begon met met het gebruik ervan in de geneeskunde. Zo werd het in de oogheelkundig gebruikt om strabisme, blefarospasme en hemifaciale spasmen te behandelen. De cosmetische toepassing van botulinumtoxine werd eind jaren 80 van de vorige eeuw bij toeval ontdekt.
Uit oogheelkundig onderzoek bleek later dat patiënten die met Botox voor blefarospasme werden behandeld vrijwel geen expressielijnen, of fronsrimpels, tussen de wenkbrauwen hadden.
Botox wordt al meer dan 25 jaar in de esthetische geneeskunde gebruikt. De veiligheid van het gebruik werd door tal van onderzoeken aangetoond en werd tevens wetenschappelijk bewezen (en veel studies over de veiligheid ervan).