いいえ、「vacation」は時間に関することではあっても中に入れるものではないので、「in vacation」とは言わないのですね。
例：In June, while I was on vacation, I stayed at a hotel in the city for a couple of nights. （6月の休暇中に、市内のホテルに何日か宿泊しました。）
例：For my vacation this year, I would like to go to Spain. （今年の休暇は、スペインに行きたいと思っています。）