Campur reagen Trinder baru dengan 4-AAP, oksidase dan peroksidase terkait dengan item yang dapat diuji. 2. Tambahkan buffer pilihan ke campuran yang didapat dalam langkah satu. 3. Tambahkan zat untuk diuji (serum) ke dua langkah pertama untuk dicampur, dan setelah reaksi warna terjadi, menghitung nilai barang harus diuji dengan mengukur absorpsi.