Le nombre initial de cellules sélectionné dépend du type de cellule/lignée cellulaire et de la taille souhaitée des sphéroïdes. L’expérience a démontré que des nombres de cellules compris entre 1 000 et 6 000 cellules/puits sont appropriés. Pour adapter ce nombre à l’expérience en question, il est conseillé d’effectuer une série de dilutions afin d’établir la concentration optimale de cellules en fonction des paramètres souhaités.