Les deux héros vont avoir du pain sur la planche dans Marvel’s Spider-Man 2. Ils vont en effet devoir se débarrasser des nouvelles menaces qui pèsent sur New York et ses habitants. Parmi elles, on retrouve Kraven le chasseur et ses sbires, Venom dans une nouvelle version du symbiote, Grizzly, M. Négatif, ou encore Lézard et l’Homme Sable.