Bei der Flüssigchromatographie fließt eine Flüssigkeit (die mobile Phase/das Elutionsmittel) unter hohem Druck durch ein inertes Rohr (Trennsäule), die mit einer stationären Phase gefüllt ist. Eine Probe wird vor der Säule in das Elutionsmittel eingespritzt. Auf ihrem Weg durch die Säule benötigt jede Verbindung der Probe aufgrund ihrer Wechselwirkung mit dem Elutionsmittel und der stationären Phase eine bestimmte Zeit, um das Ende der Säule zu erreichen. Dies hängt von den Eigenschaften der Verbindung ab und kann zur Trennung von Mischungen sehr ähnlicher Verbindungen verwendet werden. Nach der Trennung können die Verbindungen beim Austritt aus der Säule mit einer Reihe von Detektoren gemessen werden - sowohl nicht-selektiven als auch selektiven.Verschiedene Säulenmaterialien unterstützen unterschiedliche Trennmechanismen - Normalphasen-, Umkehrphasen-, Größenausschluss-, Ionenaustausch-, Affinitäts-, chirale oder hydrophile Interaktions-HPLC. Bei der Normalphasen-HPLC wird eine polare stationäre Phase und ein weniger polares oder unpolares Elutionsmittel verwendet. Bei der Reversed-Phase-LC werden diese Polaritäten umgedreht.