Nach dem Transfer der Proteine vom Elektrophoresegel auf die Blotting-Membran wird die Membran mit einem Blotting-Puffer inkubiert, der Proteine wie BSA oder Milchpulver enthält. Diese Proteine beschichten die Membran homogen und blockieren die unspezifische Bindung der Nachweisantikörper. Durch die Blockierung der Membran wird die unspezifische Bindung verhindert und das Hintergrundsignal reduziert.