Die gewählte initiale Zellzahl hängt vom Zelltyp/von der Zelllinie und der gewünschten Größe der Sphäroide ab. Erfahrungswerte zeigen, dass sich Zellzahlen zwischen 1.000 und 6.000 Zellen/Well eignen. Um die Zellzahl pro Well auf das jeweilige Experiment einzustellen, empfiehlt es sich eine Verdünnungsreihe durchzuführen und anschließend anhand der gewünschten Parameter die optimale Zellkonzentration zu ermitteln.