Spitzwegerich enthält 2–3 % Iridoide (bitter schmeckende sekundäre Pflanzenstoffe), darunter den Wirkstoff Aucubin, der antibiotische Eigenschaften hat: Spitzwegerichsaft bildet keinen Schimmel. Die Substanz wirkt antibakteriell und entzündungshemmend. Zudem wurde nachgewiesen, dass der Stoff leberschützende Wirkung hat. Aucubin ist bis zu 180°C hitzestabil und gut wasserlöslich. Allerdings muss Spitzwegerich sorgfältig getrocknet werden und wässrige Auszüge sollten nicht zu lange offen stehen. Bei zu langsamen trocknen oder falscher Lagerung wird Aucubin durch Hydratation in Aucubingenin umgewandelt, was durch eine Grau- oder Schwarzfärbung des Pflanzenmaterials oder des Auszugs erkennbar ist. Weiters sind in der Pflanze ca. 2 % Schleimstoffe enthalten, die reizmildernde Wirkung auf die Schleimhäute zeigen. Vor allem bei Entzündungen der oberen Atemwege wirken die Schleimstoffe des Spitzwegerichs einhüllend, schützen die Schleimhäute und lindern Hustenreiz. Die Gerbstoffe des Spitzwegerichs, die mit 6,5 % die größte Gruppe an Inhaltsstoffen bilden, haben zusammenziehende und blutstillende Wirkung. Sie können die Wundheilung fördern und angegriffene Schleimhäute stabilisieren und kräftigen. Die im Spitzwegerich enthaltenen Flavonoide wirken antioxidativ und stimulieren das Immunsystem. Die jungen Blätter sind reich an Vitamin C. Außerdem enthält der Spitzwegerich viel Kieselsäure und Zink, die das Hautgewebe stärken können und sich positiv auf die Gewebestruktur der Lunge auswirken.