Um mit einem Ophthalmoskop eine Augenspiegelung durchzuführen, ist ein bestimmtes Verfahren anzuwenden. Die Handhabung des Gerätes und die Durchführung einer Funduskopie bedürfen einiger Übung, denn im Prinzip muss der untersuchende Arzt das Auge austricksen. Ein Ophthalmoskop besitzt eine integrierte Beleuchtung. Trifft der Lichtstrahl auf die Pupille, verengt sich diese und der Einblick auf die Netzhaut wird verwehrt. Deshalb geht der Arzt wie folgt vor:
Mit dem Ophthalmoskop am eigenen Auge, bei eingeschalteter Beleuchtung, nähert er sich von der Seite dem Auge des Patienten, sodass das Licht indirekt einfällt.
So schliesst die Pupille nicht, wie es beim direkten Lichteinfall der Fall wäre.
Ist der Augenhintergrund im Ophthalmoskop sichtbar, nutzt der Arzt die Lupen dieser Instrumente, um Details der Retina genauer zu untersuchen.
Dabei wird vor allem auf pathologische Veränderungen geachtet, beispielsweise auf verdickte Blutgefässe und Verfärbungen. Derartige Veränderungen sind bei der Diagnose ein wichtiger Hinweis auf verschiedenste Erkrankungen.