Einerseits unterliegt der Prolaktinspiegel einem Tag-Nacht-Rhythmus. In der zweiten Nachthälfte kommt es zur höchsten Ausschüttung des Prolaktins. Außerdem ist die Höhe der Ausschüttung vom Alter und damit dem Reproduktionsstatus der Frau abhängig. Vor der Pubertät ist der Spiegel recht niedrig. Nacht dem Eisprung und damit in der zweiten Hälfte des Menstruationszyklus ist die höher und am Ende der Schwangerschaft sowie nach der Geburt ist sie am höchsten. Nach der Geburt führt das Säugen des Kindes zu vermehrter Ausschüttung.  Auch Stress kann die Ausschüttung erhöhen.