Patienten skal normalt ligge på sin side med knæene trukket op til brystet og hovedet bøjet fremad for at skabe plads mellem ryghvirvlerne. Lægen vil rense injektionsstedet og bedøve området med lokalbedøvelse. Derefter indsættes en nål mellem ryghvirvlerne og ind i rygmarvskanalen for at opsamle cerebrospinalvæske eller injicere medicin.