# (국립수산물품질관리원) 소독제 효력시험지침
(행정규칙구분=고시, 공포일자=20210224, 시행일자=20210301, 소관부처=국립수산물품질관리원)
행정규칙번호: 2021-2
출처: 국가법령정보센터

행정규칙명: (국립수산물품질관리원) 소독제 효력시험지침
행정규칙종류: 고시
발령일자: 20210224
발령번호: 2021-2
시행일자: 20210301
소관부처: 국립수산물품질관리원
담당부서기관: 국립수산물품질관리원(수산방역과)
현행여부: Y

조문내용:
['제1조(목적) 이 지침은 「약사법」 제31조, 제42조 및 제85조제1항, 「동물용의약품등 취급규칙」 제7조제1항ㆍ제2항,「수산용 동물용의약품등 안전성ㆍ유효성 심사에 관한 규정」제7조제1항제6호다목에 따라 제출되는 수산용 동물용의약외품인 소독약품의 효력시험에 관한 세부사항을 정함을 목적으로 한다.', '제2조(정의) 이 지침에서 사용하는 용어의 뜻은 다음 각 호와 같다.1. "소독제"란 수산동물질병 방역의 목적으로 양식장, 수산동물 사체(이하 "사체"라 한다) 등 소독대상에 적용하여 병원미생물을 사멸 또는 증식억제토록 작용하는 제제를 말한다.2. "소독대상"이란 병원체에 오염되었거나 오염되었을 우려가 있는 사체, 사육수조, 양식장 바닥 및 배관, 차량 및 운반용구, 유입수, 배출수, 오물, 기구 등을 말하며, "소독대상의 분류"는 소독 대상의 유기물 함량에 따라서 분류하되, 일반적으로 사체, 사육수조, 차량 및 운반용구, 배출수, 오물 등은 유기물이 많이 함유된 대상으로, 양식장 바닥 및 배관, 유입수, 기구, 일반차량 등은 유기물이 적게 함유된 대상으로 분류한다.3. "유기물"이란 소독의 효력에 영향을 주는 것으로 탄수화물, 지방 또는 단백질 등이 들어 있는 수산동물(이하 "동물"이라 한다)의 분비물, 배설물, 장내용물, 혈액, 동물의 조직, 사료찌꺼기 등을 말한다.4. "소독대상 병원체"란 동물의 건강한 사육을 위하여 사멸 또는 증식억제의 대상이 되는 병원성을 갖고 있는 병원체들을 의미하며, 다음 각 목과 같이 구분한다.가. "특정 병원체"란 허가항목의 소독대상 병원체에 특정 병원체명 (또는 특정 질병명)을 기재하는 경우를 의미하고,나. "일반 병원체"란 허가항목의 소독대상 병원체에 대표균주에 대한 시험의 결과에 따라 포괄적으로 사용되는 것으로 특정 병원체명이 아닌 ‘세균, 아포 또는 곰팡이’등의 용어로 기재하는 경우를 말한다.5. "경수"란 증류수 1 리터(liter)에 CaCl2 0.305g과 MgCl2.ㆍ6H2O 0.139g(w/v)을 함유한 것을 의미한다.6. "유기물희석액"이란 소독제의 희석을 위해 사용되는 유기물을 함유한 경수를 의미하며, 세균용 및 곰팡이의 유기물희석액은 5%(w/v) 효모추출물(yeast extract)을, 바이러스용의 유기물희석액은 5% 소태아혈청(fetal bovine serum)을 함유한 액체를 의미한다. 이 중 세균용 및 곰팡이의 유기물희석액의 조제방법은 효모추출물 20%(w/v)가 함유되도록 경수에 용해한 다음 고압멸균(121℃ 15분)하여 4℃에 보관하면서, 사용 시에는 경수로 4배 희석하여 5% 함량의 유기물희석액으로 만들되, 1N 수산화나트륨액으로 pH7.0이 되도록 조정한 것이다. 이때 소독제의 성분이 요오드포류(iodophors)인 경우는 6주 이상 보관 후 사용한다.', '제3조(표준시험법) 표준시험법에 관한 구체적인 사항은 별지 1의 "세균 등의 소독제 효력시험", 별지 2의 "바이러스의 소독제 효력시험", 별지 3의 "곰팡이의 소독제 효력시험"규정에 따른다. 다만, 아포세균, 결핵균, 곰팡이 및 특정 병원체에 관한 세부시험과 기타 이 지침에서 규정하지 않은 세부사항은 국립수산물품질관리원장의 승인을 받아 시험을 실시하는 것을 원칙으로 한다. ① "표준시험조건"이란 소독대상 병원체를 함유한 증류수희석액, 경수희석액 또는 유기물희석액을 각각 소독제를 함유한 증류수, 경수 및 유기물 희석액과 동량 혼합 후 4℃에서 30분간(결핵균 또는 아포는 60분) 처리하는 조건을 의미한다.② "선택시험조건"이란 표준시험조건 외에 제제 특성과 소독대상 등에 따라 반응시간(1분, 5분, 15분 등)과 반응온도(-10℃, -5℃, 4℃, 10℃ 등)를 추가로 선택하여 처리하는 조건을 의미한다.③ "소독제 유효희석배수 결정시험 설계 시 처리구"란 다음 표의 내용과 같다. 이때 표시 +와 -는 각 처리구의 성분구성 여부를 의미하며, 유기물의 무ㆍ저ㆍ고는 결과활용 시 소독대상의 유기물 함유 정도를 의미한다.④ "유효희석배수"란 시험조건에서 효력이 인정되는 최소량의 유효성분에 대한 희석액의 배수로 표기한다.⑤ "유효희석배수의 판정"은 증류수희석액, 경수희석액, 유기물희석액의 3가지 조건에서 실시한 각각의 시험결과에 대한 것이며, 제3조제2항의 시험설계에 따른 처리구 2와 3은 처리구 4를, 처리구 1은 처리구 5를 대조로 하여 다음 각 호와 같이 판정한다.1. 세균의 경우는 별지 1과 같이 시험하여, 5개의 동일 소독제 희석배수의 영양배지에서 2개 이상 증식이 인정되지 않는 최종 소독희석 단계를 유효농도로 한다.2. 바이러스의 경우는 원칙적으로 표준시험조건에서 병원체 대조군과 비교하여 병원체가 104 PFU(또는 TCID50, EID50, LD50 등)(대수차이로 1)의 사멸 또는 불활화가 확인된 희석배수를 유효농도로 한다.3. 시험제품에 대한 최종 희석배수는 20%의 오차범위 내의 3반복 시험결과의 중위수(median)로 한다.⑥ 제1항부터 제4항까지의 규정에도 불구하고 곰팡이용 소독제에 대한 시험조건, 처리구, 유효희석 배수의 판정 등은 별지 3 곰팡이의 소독제 효력시험 기준에 따른다.', '제4조(효력시험결과 활용) 권장희석배수는 유효희석배수의 80%값에 해당되는 희석배수로 정하며, 제2조의 소독대상 분류에 따라 병원체명(질병명)별로 희석배수를 구분하여 표기한다.', '제4조의2(시험제품의 관리 등) ① 효력시험 실시 전 시험제품은 해양수산부장관이 지정한 검사기관(이하 "검사기관"이라 한다)에서 함량검사를 받아야 하며, 함량검사 결과는 유효성분 함량기준(95~105%)에 적합하여야 한다.② 효력시험 의뢰자(이하 "의뢰자"라 한다)는 동일한 제조단위(롯트)의 시험제품 최소 3개 이상을 검사기관에 제공하여야 한다.③ 제①항에 따른 함량검사 결과가 적합할 경우 검사기관은 시험제품 2개 이상을 봉인하여 의뢰자에게 송부하여야 하며, 이 경우 의뢰자는 1개 이상은 효력시험기관에 제공하여야 하며, 1개는 유효기간에 1년을 더하여 보관하여야 한다.④ 효력시험기관은 제공받은 시험제품의 봉인 상태 및 함량시험 결과를 확인하여 이상이 없는 경우 시험을 실시하여야 한다.⑤ 기타 소독제 효력시험기관 및 의뢰자의 임무 등 관리사항은 국립수산물품질관리원장이 정한 "수산용 동물용의약품등 임상시험 관리지침"의 제12조, 제15조 및 제19조를 준용한다.', '제5조(효력시험결과 제출) 효력시험결과 제출에 적용하는 시험방법 및 보고서 내용은 다음 각 호와 같다.1. 세균 등의 제2조제4호나목의 일반병원체를 소독대상으로 할 경우에는 별지 1의 대표균주에 대한 성적을 제출하여야 한다.2. 세균, 바이러스 또는 곰팡이의 특정 병원체를 소독대상으로 할 경우에는 별지 1부터 별지 3까지 제시된 해당 시험방법에 따라 실시한 성적을 제출한다. 다만, 소독제의 성분특성과 시험세균, 바이러스 및 곰팡이의 생물학적 특성에 따라 소독제 효능을 검사하는 과학적 공인방법이 있는 경우에는 제3조에 의거하여 시험방법을 적절히 변경할 수 있다.3. 안전성 유효성 심사를 위해 실시하는 소독제의 효력시험결과 보고서는 다음 각 목의 사항을 포함하여야 한다.가. 시험제목, 시험목적 및 시험성적요약나. 시험의뢰자 성명 및 소속기관다. 시험기관의 명칭, 소재지, 시험기관장 성명라. 시험책임자 및 담당자의 성명, 소속 및 직책마. 시험제품의 제품명, 제조번호, 제조일자 및 원료약품분량바. 시험기간, 시험방법, 시험성적 및 평가기준사. 시험세균, 바이러스 및 곰팡이의 성상 및 출처아. 시험제품의 동물, 취급자, 사물, 기구 및 환경 등에 미치는 영향 및 주의사항자. 시험결과에 대한 시험책임자의 종합의견', '제6조(시험제한) 해외악성전염병의 소독제 시험은 국내시험을 제한하며, 수산생물전염병 병원체로서 전염성의 우려가 있거나 공중위생상 특별한 주의를 요하는 시험은 국립수산물품질관리원장의 사전허가를 받아야 한다.', '제7조(보칙) 이 지침에서 규정하지 아니한 소독제의 효력에 관한 사항은 외국의 사례 및 과학적 근거 등을 제시하여 국립수산물품질관리원장의 승인을 받아 시험을 실시할 수 있다.', '제8조(재검토기한) 국립수산물품질관리원장은「훈령ㆍ예규 등의 발령 및 관리에 관한 규정」에 따라 이 고시에 대하여 2021년 1월 1일 기준으로 매3년이 되는 시점(매 3년째의 12월 31일까지를 말한다)마다 그 타당성을 검토하여 개선 등의 조치를 하여야 한다.']


개정문

⊙국립수산물품질관리원 고시 제2021-2호

  (국립수산과학원) 소독제 효력시험지침 일부를 다음과 같이 개정한다.

    2021년 2월 24일

          국립수산물품질관리원장

(국립수산과학원) 소독제 효력시험 지침 일부개정고시

(국립수산과학원) 소독제 효력시험지침 일부를 다음과 같이 개정한다.

제명 "(국립수산과학원) 소독제 효력시험 지침"을 "(국립수산물품질관리원) 소독제 효력시험 지침"으로 한다.

제3조 각 항 외의 부분 중  "국립수산과학원장"을 "국립수산물품질관리원장"으로 한다.

제4조의2제5항 중 "국립수산과학원장"을 "국립수산물품질관리원장"으로 한다.

제6조 중 "국립수산과학원장"을 "국립수산물품질관리원장"으로 한다.

제7조 중 "국립수산과학원장"을 "국립수산물품질관리원장"으로 한다.

제8조 중 "국립수산과학원장"을 "국립수산물품질관리원장"으로, "6월 30일"을 "12월 31일"로 한다.

          부칙

이 고시는 2021년 3월 1일부터 시행한다.


별표

별표 0001: 세균 등의 소독제 유효희석배수 결정시험

[별지 1]

세균 등의 소독제 유효희석배수 결정시험

1. 시험 세균

  효력시험에 사용하는 일반 병원체의 시험 균주는 다음 각 호의 대표균주를 사용함을 원칙으로 하고, 특정균주를 포함하여 시험에 사용된 균주의 성상 및 출처를 입증할 수 있어야 한다. 

 ①(세균의 대표균주) Salmonella typhimurium으로 한다.

 ②(아포세균의 대표균주) Clostridium perfringens로 한다.

 ③(항산성세균의 대표균주) Mycobacterium fortuitum으로 한다.

2. 배지시약 등

 ①(일반세균배지) 고압 멸균된 영양배지(nutrient broth)를 사용한다.

 ②(아포세균배지) 아포세균배지(cooked meat medium 또는 thioglycollate medium)를 사용한다.

 ③(항산성세균배지) 항산성배지(middlebrook 7H9 broth 또는 middlebrook 7H11 agar)를 사용하며 배지에 0.05%(v/v) Tween80을 추가한다.

 ④(약품성분 중화배지) 영양배지에 비동화(56℃에 30분 처리)한 말혈청 5%를 함유한 배지를 의미한다.

 ⑤(기타재료) 시험관(5 X 150mm), 교반기, 항온수조(4℃), 항온기(37℃), 배양기 등

 ⑥(보관용 유기물희석액) 20%(w/v)가 되도록 효모추출물(yeast extract)을 증류수에 녹인 다음 고압멸균한다.

3. 세균 소독제 효력시험

 ①(세균 배양) 계대 중의 세균을 배지에 심어 활력이 인정되는 22-26시간(결핵균은 7일) 동안 배양한 세균을 사용하되 사용직전까지 37℃를 유지시켜야 하며, 사용 세균의 농도는 ml당 108이상이어야 한다.

 ②(세균 시험균주 및 소독제 희석액) 제2조의 경수나 유기물희석액을 이용하며, 경수처리구는 경수로, 유기물처리구는 유기물희석액으로 실시함을 원칙으로 하되, 제3조제1항의 단서규정에 따라야 한다.

 ③(소독제의 희석법) 소독제의 유효 희석배수의 대강의 범위를 알고 있는 경우는 제품해당 농도의 123%를 경수로 100ml가 되도록 용해한 다음, 이를 10%씩의 농도차이를 두어 5개의 시험관에 2.5ml씩 단계희석한 것을 넣는다. 이때 원하는 희석농도가 5개의 시험관 중 가운데가 되도록 배치하고, 이렇게 소독제 희석액 처리가 완성된 시험관을 4℃가 되도록 한다.  

   *예시(200배의 소독액의 효력을 측정할 경우): 200배로 희석할 해당제품 0.5g을 100으로 볼 때 123%로 해당되는 양에 해당되는 0.615g을 취하여 경수로 100ml가 되도록 용해한 다음 잘 혼합한 후 10ml를 꺼내어, 이중 2.5ml는 시험관-1에 넣고 나머지 7.5ml는 버린다. 남은 90ml의 소독액에 경수 10ml를 넣어 잘 혼합한 후 10ml를 꺼내어 2.5ml를 시험관-2에 넣고 나머지 7.5ml는 버린다. 이와 동일한 방법으로 시험관-3, -4, -5를 계속하며, 이의 결과 시험관내의 유효성분은 시험관 순서대로 123, 111, 100, 90, 80%가 되어 이들의 시험관의 희석농도는 차례로 10%의 차이가 있게 되므로 이 결과는 순서대로 약 1/160, 1/180, 1/200, 1/220, 1/240 의 희석농도가 되며, 이렇게 만든 소독액 시험관을 4℃에 보관한다. 

 ④(소독제 반응조건) 37℃의 세균 4ml를 4℃의 5% 유기물희석액 96ml에 섞은 후에, 혼합액 2.5ml를 꺼내어 4℃에 보관된 시험관에 넣고 혼합한 다음, 4℃에서 정확히 30분간(아포세균과 결핵균은 60분간) 반응을 시킨다. 이 때 각 시험관 처리는 차례대로 1분의 간격으로 실시하며, 도중에 10분마다 혼합하여 준다.

 ⑤(중화반응 및 증식) 정확히 30분간의 반응이 끝나면 소독제의 효능을 중화하기 위하여 즉시 1.0ml를 꺼내어 37℃의  9.0 ml의 중화배지에 넣고 혼합한 다음, 각 소독제 희석별로 0.1ml씩 5개의 시험관의 영양배지가 들어있는 시험관에 넣어 혼합한 후에 37℃항온실에서 48시간(결핵균은 5 ~ 7일) 증식한다.

 ⑥(세균증식여부의 판정) 5개의 동일 소독제 희석배수의 영양배지에서 2개 이상 증식이 인정되지 않는 최종 소독희석 단계를 희석배수로 한다.

별표 0002: 바이러스의 소독제 유효희석배수 결정시험

[별지 2]

바이러스의 소독제 유효희석배수 결정시험

1. 시험 바이러스

 효력시험에 사용하는 시험 바이러스주는 성상 및 출처를 입증할 수 있어야 한다.

2. 세포주 등

 바이러스 종류의 생물학적 특성에 따라 적합한 세포, 발육란 또는 실험동물 등을 시험에 사용한다. 

3. 배지시약 등

 ①선정된 세포증식에 적합한 배지와 관련시약을 사용하며, 증류수희석액, 경수희석액 및 유기물 희석액은 세균의 시험법에 준한다. 단, 유기물 희석액에는 효모추출액 대신에 5% 소태아혈청을 사용한다.

 ②소독제의 약품성분 중화배지는 사용세포에 적합한 배지에 비동화된 10% 소태아혈청을 함유한 배지를 사용한다. 

4.바이러스 소독제 효력시험 

 ①(바이러스 배양) 계대배양 중의 활력있는 바이러스를 사용하되 바이러스의 증식이 최대인 시점에서 채독하여 사용직전까지 단시간 동안 얼음물에서 보관한다.

 ②(바이러스 시험균주 및 소독제 희석액) 제2조의 증류수, 경수 및 유기물희석액을 이용하며, 증류수처리구는 증류수로, 경수처리구는 경수로, 유기물처리구는 유기물희석액으로 실시함을 원칙하되, 제3조제1항의 단서규정에 따라야 한다.

 ③(소독제의 희석법) 소독제의 유효 예상 희석배수가 500배 이하일 경우는 50, 100, 150, 200, 250, 300, 400, 500 등으로 희석하되, 그 이상의 예상 희석배수 농도에서는 달리할 수 있다. 단, 정밀한 희석배수가 요구되는 경우는 “세균 등의 소독제 효력시험”3의②항의 방법에 따른다. 

 ④(소독제 반응) 위의 ①항에서 증식된 4℃의 바이러스액 1.0 ml를 위의 ②항의 4℃희석액 19.0 ml에 각각 섞은 후에, 1분 간격으로 혼합액 2.5ml를 꺼내어 4℃에 있는 동량의 소독제 희석액이 들어 있는 시험관에 넣고 혼합한 다음, 4℃에서 정확히 30분간 반응을 시키며 도중에 10분마다 혼합하여 준다. 이 경우 대조구(처리구-4, 5)를 반드시 포함시켜 처리한다.

 ⑤(중화반응) 소독제의 반응이 끝나면 소독제의 효능을 중화하기 위하여 즉시 1.0ml를 꺼내어 37℃의 동량의 중화배지에 넣고 혼합한 다음, 중화반응액을 희석한 후 적합한 양을 세포 또는 발육란에 접종하여 바이러스 함량을 측정한다.

 ⑥(바이러스 증식여부 판정) 반응액 중 바이러스의 증식은 세포를 사용할 경우 단층을 이룬 microplate를 사용하되, 한 소독배수 희석당 4 공이상으로 접종한 다음, 30분의 흡착을 한 후 배지를 갈아준 후에  37℃의 CO2 배양기에서 5일간 배양한 후 판독한다. 발육란을 이용한 시험에서는 희석배수당 5개 이상의 발육란을 사용하여 0.2ml를 요막강(allantoic cavity)에 접종하고 37℃ 배양기에서 5일간 배양하고 매일 검란하며 바이러스의 증식유무를 검사한다.

 ⑦(바이러스 함유량 계산) Kaerber method로 한다.

 ⑧(유효배수 평가) 병원체 대조군의 바이러스함량에서 소독제 처리군의 바이러스함량을 대조로 하여 104 PFU(또는 TCID50, EID50, LD50 등)(대수차이로 1) 이상의 불활화가 인정되는 희석농도를 유효농도로 한다.

 ⑨(세균 대표균주의 시험결과 동시제출) 바이러스의 소독제시험은 [별지 1]에서 정의한 “세균의 대표균주”의 시험결과를 동시에 제출하여야 한다.

 ⑩(결과활용) 경수 또는 유기물처리구의 시험결과는 각각 바이러스와 세균의 소독제 시험결과 희석배수와 비교하여 높은 소독제 농도를 최대 권장희석배수로 정한다.

5. 산성/알칼리제제

 산성/알칼리제제는 다음과 같은 조건과 방법으로 효력시험과 수소이온농도(pH) 측정을 실시한다.

 ⓛ(소독제 효력시험) 산성/알칼리제제의 효력시험은 본시험 4의 ① ~ ⑦항과 동일하게 하되, 유기물희석액은 5% 소태아혈청 대신에 1% 소태아혈청을 사용한다.

 ②(소독제의 수소이온농도 측정) 산성/알칼리제제의 소독제의 수소이온농도(pH)는 이글배지액 (Eagle's medium) 10, 소독제 부유 경수액 40, 소태아혈청 50의  비율로 혼합한 권장희석배수에서 측정한다.

별표 0003: 곰팡이의 소독제 유효희석배수 결정시험

[별지 3]

곰팡이의 소독제 유효희석배수 결정시험

1. 시험 곰팡이균

 효력시험에 사용하는 시험 곰팡이균은 다음 대표균주를 사용함을 원칙으로 하고, 특정균주를 포함하여 시험에 사용된 균주의 성상 및 출처를 입증할 수 있어야 한다. 

- (곰팡이의 대표균주) Tricophyton mentagrophytes로 한다.

2. 배지시약 등

 ①(곰팡이균배양배지) Saboraud dextrose agar (Glucose 2%, Neopeptone 1%, agar 2%, pH6.1-6.3)의 사면배지와 평판배지를 사용한다.

 ②(기타재료) 시험관(25 X 150mm), 교반기, 항온수조(4℃), 항온기(37℃), 배양기 등

3. 곰팡이균 소독제 효력시험

 ①(곰팡이시험균주 배양) 계대 중의 곰팡이를 배지에 심어 활력이 인정되는 10일 미만 동안 상온(25℃~30℃)에서 배양한 곰팡이를 사용하되 사용직전까지 상온을 유지시켜야 한다.

 ②(곰팡이시험균주 포자부유액준비) 고체평판배지의 중심부에 곰팡이균을 심은 다음 25℃~30℃에서 10일 이상 15일 이하 배양 한다. 배지표면에 배양된 균사체를 모아서 25ml의 0.85% NaCl 용액에 넣은 후 분해시킨다. 부유액을 여과시킨 후에 혈구계산판에 놓고 농도를 측정하여 보존용 부유액(125 ~ 155×106 conidia/ml을 2℃ ~ 10℃에서 4주 이하 보관하며 사용한다. 시험 시에는 부유액의 농도가 5×106 conidia/ml이 되도록 희석하여 사용한다.

 ③(소독제 희석액) 제2조의 증류수, 경수 및 유기물희석액을 이용하며, 증류수처리구는 증류수로, 경수처리구는 경수로, 유기물처리구는 유기물희석액으로 실시함을 원칙하되, 제3조의 단서규정에 따라야 한다.

 ④(소독제의 희석법) 소독제의 유효 희석배수의 대강의 범위를 알고 있는 경우는 제품 해당 농도의 123%를 경수로 100ml가 되도록 용해한 다음, 이를 10%씩의 농도차이를 두어 5개의 시험관에 2.5ml씩 단계 희석한 것을 넣는다. 이때 원하는 희석농도가 5개의 시험관 중 가운데가 되도록 배치하고, 이렇게 소독제 희석액 처리가 완성된 시험관을 4℃가 되도록 한다.

   *예시(200배의 소독액의 효력을 측정할 경우): 200배로 희석할 해당제품 0.5g을 100으로 볼 때 123%로 해당되는 양에 해당되는 0.615g을 취하여 경수로 100ml가 되도록 용해한 다음 잘 혼합한 후 10ml를 꺼내어, 이중 2.5ml는 시험관-1에 넣고 나머지 7.5ml는 버린다. 남은 90ml의 소독액에 경수 10ml를 넣어 잘 혼합한 후 10ml를 꺼내어 2.5ml를 시험관-2에 넣고 나머지 7.5ml는 버린다. 이와 동일한 방법으로 시험관-3, -4, -5를 계속하며, 이의 결과 시험관내의 유효성분은 시험관 순서대로 123, 111, 100, 90, 80%가 되어 이들의 시험관의 희석농도는 차례로 10%의 차이가 있게 되므로 이 결과는 순서대로 약 1/160, 1/180, 1/200, 1/220, 1/240 의 희석농도가 되며, 이렇게 만든 소독액 시험관을 4℃에 보관한다.

  ⑤(소독제 반응조건) 5ml의 소독제 희석 용액과 phenol 대조군 용액을 단계희석배열로 시험관에 넣은 다음 4℃의 항온수조에 넣어둔다. 준비된 포자부유액 0.5ml을 소독제 희석 용액의 첫 번째 시험관에 넣은 후 잘 섞어주고 다시 항온수조에 넣는다. 30초 후 0.5ml의 포자부유액을 다음 소독제 희석액이 들어있는 시험관에 넣어준 후 섞어주고 항온수조에 넣어둔다. 위를 반복한다.

  ⑥(중화반응 및 증식) 30분간 반응후 반응액을 4mm 고리(10㎕)로 채취한 후 10ml의 곰팡이균 배양배지와 동일한 조성의(한천 제외)의 Glucose broth에 접종한다. 각 희석 시료당 3개의 시험관을 사용한다. 접종한 시험관을 25℃ ~ 30℃에서 배양한다. 

  ⑦(곰팡이증식여부의 판정) 10일후 곰팡이의 증식여부를 판정한다. 3개의 시험관 중 2개 이상의 시험관에서 곰팡이의 증식이 관찰될 경우 소독제 효력이 없는 것으로 판정한다. (참고 : 10분 내에 포자를 죽일 경우 소독제의 가장 높은 희석배율로 사료된다.)


부칙

['부칙 이 고시는 고시한 날부터 시행한다.', '부칙 이 고시는 고시한 날부터 시행한다.', '부칙 이 고시는 발령한 날부터 시행한다.', '부칙 이 고시는 2021년 3월 1일부터 시행한다.']

부칙 공포정보: ['20130520', '20160525', '20201105', '20210224'] (공포번호: ['2013-13', '2016-12', '2020-13', '2021-2'])