# 사료 등의 기준 및 규격
(행정규칙구분=고시, 공포일자=20240401, 시행일자=20240401, 소관부처=농림축산식품부)
행정규칙번호: 2024-27
출처: 국가법령정보센터

행정규칙명: 사료 등의 기준 및 규격
행정규칙종류: 고시
발령일자: 20240401
발령번호: 2024-27
시행일자: 20240401
소관부처: 농림축산식품부
담당부서기관: 농림축산식품부(축산환경자원과)
현행여부: Y

조문내용:
['제1조(목적) 이 고시는 「사료관리법」 제2조, 제8조, 제11조부터 제15조, 같은 법 시행규칙 제5조, 제11조, 제12조, 제14조, 제30조에서 위임한 사료의 품질관리와 안전성 확보 등에 필요한 동물등의 범위 및 사료의 범위와 명칭, 사료공정(사료의 제조ㆍ사용ㆍ운반 및 보존방법에 관한 기준과 사료의 성분에 관한 규격), 성분등록 및 표시사항, 유해물질 등의 범위와 기준, 함량ㆍ혼합제한, 표준분석방법 등에 관한 사항을 규정함을 목적으로 한다.', '제2조(정의) 이 고시에서 사용되는 용어의 뜻은 다음과 같다.1. "식품등"이란 「식품위생법」, 「건강기능식품에 관한 법률」 및 「먹는물관리법」에 따른 식품ㆍ식품첨가물ㆍ건강기능식품 및 먹는물을 말한다.2. "특정 동물성사료"란 소 등 반추동물의 소해면상뇌증 등이 우려되어 사료로 사용하는 것을 금지한 동물등의 부산물ㆍ남은음식물 등이 포함된 사료를 말한다.3. "확인받은 동물성사료"란 반추동물사료를 제조하는 공정에서 반추동물 이외의 사료를 제조하기 위해 사용할 수 있도록 시ㆍ도지사에게 확인받은 사료를 말한다.4. "등록성분"란 사료의 품질관리에 필요한 성분등록 사항으로 일반 조성분ㆍ광물질ㆍ아미노산ㆍ비타민ㆍ에너지가 또는 유효성분 등을 말한다.5. "부형제"란 단미사료 또는 보조사료 중에서 미량으로 사용되는 사료를 균일하게 혼합하기 위하여 예비 배합하는데 사용되는 희석물질을 말한다.6. "메탄저감제"란 단미사료, 보조사료로 기준 및 규격이 설정된 물질 중 가축 장내발효로 발생하는 메탄을 일정 수준 이상 감축시킬 수 있다고 인정된 것을 말한다.7. "저메탄사료"란 메탄저감제를 가축의 성장단계에 따른 급여량(용법)에 맞게 첨가하여 제조된 사료를 말한다. 다만, 과학적인 검증을 통해 사육기간 단축 등 메탄저감 효과가 있다고 농림축산식품부장관이 인정한 사료는 저메탄사료에 포함할 수 있다.8. "질소저감사료"란 배합사료 중에서 잉여 질소 배출 저감 등 환경개선에 기여하는 사료를 말한다.', '제3조(그 밖에 동물의 범위) 「사료관리법」(이하 "법"이라 한다) 제2조제1호에서 "그 밖에 농림축산식품부장관이 정하여 고시하는 동물ㆍ어류 등"이라 함은 다음 각 호의 동물을 말한다.1. 실험용 동물 : 「실험동물에 관한 법률」 제2조제2호에 따른 동물(마우스(mouse)ㆍ랫드(rat)ㆍ햄스터(hamster)ㆍ저빌(gerbil)ㆍ기니피그(guinea pig)ㆍ토끼ㆍ개ㆍ돼지 및 원숭이 등)2. 애완용 동물(반려동물) : 「동물보호법 시행규칙 」 제1조의2에 따른 반려의 목적으로 사육하는 동물(개ㆍ고양이ㆍ토끼ㆍ페럿ㆍ기니피그ㆍ햄스터) 등 애완용(반려)으로 사육하는 동물3. 사육하는 동물 : 원앙새ㆍ청둥오리ㆍ곤충(누에 등)ㆍ멧돼지ㆍ곰ㆍ호랑이ㆍ사자ㆍ표범(재규어ㆍ퓨마 및 치타를 포함한다)ㆍ늑대ㆍ원숭이, 기타 동물원 등에서 사육하는 동물4. 수산동물 : 양식용 수산동물 및 관상용 수산동물', '제4조(단미사료의 범위) 법 제2조제2호에 따른 단미사료의 범위는 다음 각 호와 같다.1. 별표 1에 따른 물질2. 3. 「사료관리법 시행규칙」(이하 "규칙"이라 한다) 제11조제1항에 따라 국립축산과학원장이 단미사료로 사용이 가능하다고 인정하는 물질', '제5조(보조사료의 범위) 법 제2조제4호에 따른 보조사료의 범위는 다음 각 호와 같다.1. 별표 2에 따른 물질2. 3. 규칙 제11조제1항에 따라 국립축산과학원장이 보조사료로 사용이 가능하다고 인정하는 물질', '제5조의2(제조ㆍ수입ㆍ판매ㆍ공급 또는 사용 등의 금지) ① 법 제14조에 따라 제4조 및 제5조에 해당하지 않는 물질은 사료로 제조ㆍ수입 또는 판매ㆍ공급하거나 사료의 원료로 사용하여서는 아니 된다. 다만, 식품등으로서 별표 3의2에 해당하는 물질은 사료의 원료로 사용할 수 있다.② 식품등으로서 별표 3의2에 해당하는 물질을 단미사료 또는 보조사료로 제조ㆍ수입 또는 판매ㆍ공급하기 위해서는 단미사료 또는 보조사료의 범위에 추가되어야 한다.③ 식품등으로서 별표 3의2에 해당하는 물질을 단미사료 또는 보조사료의 범위에 추가하려는 자는 별표 5와 별표 6에 따른 품목별 기준 및 규격을 작성하여 매월 말일까지 시ㆍ도지사를 통해 농림축산식품부장관에게 신청하여야 한다.', '제6조(배합사료의 용도 및 범위) ① 법 제2조제3호에 따른 배합사료의 용도는 다음 각 호와 같다.1. 양축용 배합사료2. 프리믹스용 배합사료3. 대용유용 배합사료4. 반추동물용 섬유질배합사료5. 그 밖의 동물ㆍ어류용 배합사료② 법 제2조제3호에 따른 배합사료의 범위는 별표 3과 같다.', '제6조의2(부산물의 범위) 규칙 제5조제3항에서 "농림축산식품부장관이 정하여 고시한 부산물"은 다음 각 호와 같다.1. [별표 1] 단미사료의 범위 중 곡류(곡물), 강피류(곡물부산물류), 박류(단백질류), 서류, 식품가공부산물류, 섬유질류, 제약부산물류, 콩류, 견과ㆍ종실류, 과실류, 채소류, 버섯류, 기타 식물류2. [별표 2] 보조사료의 범위 향미제 중 감미료, 조미료', '제7조(사료의 명칭) ① 제조업자 또는 수입업자가 사료를 성분등록 및 표시할 때에는 별표 1부터 별표 3에서 규정하는 명칭을 사용하여야 한다.② 단미ㆍ보조사료 중 별표 3의2에 해당되어 별표 1과 별표 2에 사료 명칭이 정하여지지 않은 경우에는 「식품의 기준 및 규격」, 「식품첨가물의 기준 및 규격」, 「건강기능식품의 기준 및 규격」 등의 명칭을 사용하여야 한다.③ 사료 중 별표 1부터 별표 3에서 규정한 명칭을 세분화하는 기준은 별표 3의3와 같다.', '제8조(사료공정의 설정 등) ① 법 제11조제1항에 따라 사료의 품질보장 및 안전성확보를 위한 사료의 일반적 기준 및 규격은 별표 4, 단미사료의 품목별 기준 및 규격은 별표 5, 보조사료의 품목별 기준 및 규격은 별표 6과 같고 메탄저감제의 기준은 별표 26과 같다.②  삭제③ 배합사료 제조업자가 동물용의약품을 첨가한 사료를 제조할 때에는 동물용의약품의 오ㆍ남용이나 사료별로 필요하지 아니한 동물용의약품이 교차전이 되지 않도록 자체 제조기준을 설정하여 생산설비를 관리하여야 하며, 동물용의약품첨가사료의 품목별 생산량을 기록ㆍ보관하여야 한다. 또한 동물용의약품의 입고ㆍ사용ㆍ보관 등에 관한 일체의 사항을 기록ㆍ보관하여야 한다.④ 소 등 반추동물의 소해면상뇌증 등 예방을 위하여 제조업자ㆍ수입업자 및 판매업자는 별표 19의 제1호 가목부터 아목까지에 따른 특정 동물성사료를 반추동물사료에 교차 오염되지 않도록 별표 7의 세부기준을 준수하여야 한다.⑤ 반추동물사료를 제조하는 공정에서 반추동물 이외의 사료를 제조하기 위해 사용할 수 있는 확인받은 동물성사료에 대한 세부기준은 별표 8과 같다.⑥ 인체 또는 동물등의 질병예방 등을 위한 사료의 멸균 및 살균 기준은 별표 9와 같다.⑦ 유기사료의 공정 및 기준은 「친환경농어업 육성 및 유기식품 등의 관리ㆍ지원에 관한 법률」에 따른다.⑧ 사료의 수분에 대한 기준은 다음 각 호와 같다.1. 단미사료는 별표 11에서 정하는 기준2. 보조사료는 별표 6 및 별표 12에서 정하는 기준3. 배합사료 중 양축용ㆍ프리믹스용ㆍ수산동물용 배합사료는 14% 이하(다만, 별표 13에서 별도로 기준이 설정된 경우에는 제외), 대용유용배합사료는 10% 이하, 반추동물용 섬유질 배합사료와 그 밖의 동물ㆍ어류용 배합사료(수산동물용은 제외)는 별표 13에서 정하는 기준4. 제1호부터 제3호에도 불구하고 제12조제6항에 따라 광물성 단미사료, 보조사료 및 배합사료(광물성단미사료와 보조사료만으로 제조된 것에 한 함, 프리믹스용은 제외)에 정제수를 부형제로 사용한 경우에는 수분에 대한 기준을 제외할 수 있다.⑨ 제조업자 및 수입업자는 별표 10의2에서 정하는 기준에 따라 포장재질, 보존조건, 제조방법, 원료배합비율 등 제품의 특성과 냉장 또는 냉동보존 등 기타 유통실정을 고려하여 위해방지와 품질을 보장할 수 있도록 합리적인 유통기간을 설정하여야 하며, 제조업자ㆍ수입업자 및 판매업자는 유통기간이 지난 사료를 판매ㆍ공급하거나 판매의 목적으로 진열ㆍ보관하여서는 아니된다.⑩ 규칙 제11조제1항에 따른 사료공정의 설정ㆍ변경 또는 폐지는 특별한 사유가 없는 한 매년 2회 이상(6월, 12월 등) 실시할 수 있으며, 농림축산식품부장관의 공고로 고시 개정 전에도 시행할 수 있다.⑪ 규칙 제11조제2항에 따른 사료공정의 설정ㆍ변경 또는 폐지를 요청하려는 자는 별지 제1호서식의 사료공정 설정ㆍ변경 또는 폐지 신청서를 국립축산과학원장에게 제출하여야 하며, 국립축산과학원장은 특별한 사유가 없는 한 접수 후 3개월 이내에 사료공정심의위원회의 검토를 완료하고 농림축산식품부장관에게 검토결과를 보고하여야 한다.', '제9조(사료의 성분등록) ① 법 제12조제1항에 따른 사료의 성분등록 사항은 별표 11부터 별표 13과 같다. 다만, ‘질소저감사료’의 명칭을 사용하기 위해서는 별표 13의4를 충족해야 한다.② 법 제12조제1항에 따라 등록해야 하는 "그 밖에 농림축산식품부장관이 정하는 사항"은 별표 11부터 별표 13의 기타란에 수록된 사항과 같다.③ 규칙 제12조제2항제2호에 따라 성분등록을 하지 않아도 되는 사료의 종류는 별표 14와 같다.④ 제3항에도 불구하고 법 제12조제1항 단서에 따라 제조업 등록을 하지 아니하는 자가 제조하는 사료는 제12조제1항 본문에 따른 성분등록을 하여야 한다.⑤  사료를 성분등록할 경우에는 사료시험검사기관 등에서 분석한 검정증명서상의 성분함량을 기준으로 등록(분석이 불가능한 성분인 경우 배합(또는 혼합)설계합량과 같은 수준으로 등록 가능)하여야 하며, 실제 제품의 성분함량은 별표 13의2와 「사료검사기준」별표 4의 허용오차 이내여야 한다. 다만, 수입사료의 경우에는 수입관계서류, 용기 또는 포장 등에 표시된 등록성분별 함량을 기준으로도 등록할 수 있다.⑥ 제4항의 규정에도 불구하고 주로 식품등 및 먹는물로 사용되어 사료시험검사기관에서 분석할 수 없는 경우에는 「식품ㆍ의약품분야 시험ㆍ검사 등에 관한 법률」 제6조에 따른 자가품질위탁 시험ㆍ검사기관 및 「먹는물관리법」 제43조에 따른 검사기관에서 분석한 검사성적서상의 성분함량을 기준으로 등록할 수 있다.⑦ 사료의 등록성분 함량에 대한 기준은 별표 13의2와 같다.⑧ 제12조제3항에도 불구하고 당해 단미사료(혼합성 단미사료 제외)의 수분조절 등 품질관리를 위하여 다른 단미ㆍ보조사료를 혼합하는 경우에는 혼합성 단미사료가 아닌 당해 단미사료로 성분등록하여야 한다.⑨ 제12조제6항에 따라 광물성 단미사료 또는 보조사료에 부형제를 첨가한 경우에는 혼합성 단미사료 또는 혼합성 보조사료가 아닌 당해 단미사료 또는 당해 보조사료로 성분등록하여야 한다.⑩  ⑪ 성분등록 시 제조업자 및 수입업자 등이 자체점검해야 할 기본요건점검표는 별표 13의3과 같다.⑫ 사료관련 단체에서는 성분등록에 대한 자문위원회를 구성하여 운영할 수 있다.', '제10조(사료의 기타 표시사항) ① 규칙 별표 4의 제1호가목12) 및 제2호가목11)의 사료공정에서 정하는 사항, 사료의 절감ㆍ품질관리 및 유통개선을 위하여 농림축산식품부장관이 정하는 사항은 별표 15와 같다.② 사료관련 단체에서는 표시 및 광고에 대한 자문위원회를 구성하여 운영할 수 있다.③ 농림축산식품부장관 및 시ㆍ도지사는 표시 및 광고에 대한 표시광고심의위원회를 구성하여 운영할 수 있다.④ 또는 농림축산식품부장관 및 시ㆍ도지사는 표시 및 광고에 대한 위반행위를 판단할 때 제2항에 의거 구성된 자문위원회의 의견을 참고할 수 있다.', '제11조(유해물질 등의 범위와 기준) ① 법 제14조제1항제1호에 따른 사료내 주요 유해물질의 범위 및 허용기준은 별표 16과 같다.② 법 제14조제1항제2호에 따른 사료내 사용 가능 동물용의약품의 종류 및 허용기준은 별표 17과 같다.③ 법 제14조제1항제4호에 따른 동물등의 건강유지와 성장에 지장을 초래하여 축산물의 생산을 현저하게 저해하는 물질은 별표 18과 같다.④ 법 제14조제1항제7호의 전단 규정에서 "농림축산식품부장관이 정하여 고시한 동물등"은 다음 각 호의 동물을 말한다.1. 소해면상뇌증 등 과 관련이 되는 소ㆍ사슴ㆍ양(면양ㆍ염소) 등 반추동물2. 조류인플루엔자(AI)와 관련이 되는 닭ㆍ오리ㆍ꿩ㆍ거위ㆍ메추리ㆍ칠면조ㆍ타조 등 가금류⑤ 법 제14조제1항제7호의 후단의 규정에서 제4항의 동물등에 "질병원인이 우려되어 사료로 사용하는 것을 금지한 동물등의 부산물ㆍ남은음식물 등 농림축산식품부장관이 정하여 고시한 것"이라 함은 별표 19와 같다.⑥ 누구든지 제4항의 동물등에게 제5항의 물질을 사료 및 사료원료로 사용하여서는 아니 된다.⑦ 제9조제3항에 따른 성분등록제외 대상사료 중 볏짚의 잔류농약 허용기준은 별표 20과 같다.⑧ 농림축산식품부장관은 법 제14조에 따른 유해물질 등의 범위와 기준을 설정ㆍ변경 또는 폐지하려면 국립축산과학원장에게 시험의 실시 및 관련 자료의 연구ㆍ검토, 관계 전문가의 의견 수렴 등 유해물질 등의 범위와 기준 설정 등에 필요한 사항을 검토하게 하여야 한다.', '제12조(사료의 함량ㆍ혼합제한 등) ① 법 제15조제1항에 따른 사료 중 특정성분 및 그 특정성분 함량의 제한기준은 별표 21과 같다.② 법 제15조제2항에 따라 혼합을 제한하는 물질 또는 사료의 범위와 그 제한기준은 별표 22와 같다.③ 단일 단미사료에는 당해 단미사료 이외의 다른 물질이나 유사한 사료를 인위적으로 혼합하여서는 아니 되며, 혼합광물질류와 혼합성 단미사료에는 제4조의 단미사료 이외에는 혼합하여서는 아니 된다. 다만, 제품의 특성상 자연적으로 혼입되는 경우에는 예외로 한다.④ 제9조제8항에 따라 단미사료에 혼합 가능한 사료의 종류는 별표 23과 같다.⑤ 단일 보조사료에는 당해 보조사료 이외의 다른 물질이나 유사한 사료를 인위적으로 혼합하여서는 아니 되며, 합제류 보조사료와 혼합성 보조사료에는 제5조의 보조사료 이외에는 혼합하여서는 아니 된다. 다만, 제품의 특성상 자연적으로 혼입되는 경우에는 예외로 한다.⑥ 광물성 단미사료, 보조사료 및 배합사료(광물성단미사료와 보조사료만으로 제조된 배합사료, 프리믹스용 배합사료)를 균일하게 혼합하기 위하여 3종류 이내에서 부형제를 첨가할 수 있고, 첨가 가능한 부형제의 범위 등은 별표 24와 같다.⑦ 제3항 및 제5항에도 불구하고 주성분의 안정을 위해 사용하는 최소한의 항산화제 등 보존제는 첨가 할 수 있다.⑧ 농림축산식품부장관은 법 제15조에 따른 사료의 함량ㆍ혼합 제한 등을 설정ㆍ변경 또는 폐지하려면 국립축산과학원장에게 시험의 실시 및 관련 자료의 연구ㆍ검토, 관계 전문가의 의견 수렴 등 사료의 함량ㆍ혼합 제한 등의 설정 등에 필요한 사항을 검토하게 하여야 한다.', '제13조(사료표준분석방법) ① 규칙 제30조제1항에 따른 사료검정기관의 사료표준분석방법은 별표 25와 같다.② 농림축산식품부장관은 제1항에 따른 사료표준분석방법을 설정ㆍ변경 또는 폐지하려면 국립농산물품질관리원장에게 시험의 실시 및 관련 자료의 연구ㆍ검토, 관계 전문가의 의견 수렴 등 사료표준분석방법 설정 등에 필요한 사항을 검토하게 하여야 한다. 이 경우 국립농산물품질관리원장은 소속 시험연구소장에게 검토하도록 하고 그 결과를 보고하게 하여야 한다.③ 국립농산물품질관리원장은 제2항에 따른 사료표준분석방법을 농림축산식품부장관에게 보고하여 고시 개정을 요청할 수 있으며, 농림축산식품부장관은 고시 개정 전에도 사료표준분석방법을 별도로 공고할 수 있다.', '제14조(사료성분표 발간 및 정보제공 등) ① 농림축산식품부장관은 사료의 기준 및 규격에 필요한 기술ㆍ정보 제공을 위하여 국립축산과학원장에게 사료성분표의 발간 및 사료영양학적 품질 특성, 축종별 사양표준 등에 대한 조사ㆍ연구를 하게 하여야 한다.② 국립축산과학원장은 제1항에 따른 사료영양분석 및 사료영양학적 품질 특성 등에 대한 조사ㆍ연구결과를 5년 주기로 사료성분표와 사료영양정보총람, 축종별 사양표준 등으로 각각 작성ㆍ공표하여야 하며, 이를 다양한 형태로 제공하거나 교육 및 홍보를 할 수 있다.', '제15조(재검토기한) 농림축산식품부장관은 이 고시에 대하여 「훈령ㆍ예규 등의 발령 및 관리에 관한 규정」에 따라 2024년 7월 1일 기준으로 매 3년이 되는 시점(매 3년째의 6월 30일까지를 말한다)마다 그 타당성을 검토하여 개선하여 개선 등의 조치를 하여야 한다.']


별표

별표 0001: 단미사료의 범위(제4조 관련)

  [별표 1] <신설 2014.12.8., 개정 2016.7.1., 개정 2016.12.01., 개정 2017.4.1., 개정 2019.10.24., 개정                   

  2021.5.24., 개정 2021.12.29, 개정 2022.7.22., 개정 2023.10.04., 개정 2024.04.01.>                                     

  단미사료의 범위(제4조 관련)                                                                                           

  ┏━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┓  

  ┃구  분    │사료종류                  │명          칭                                                          ┃  

  ┠─────┼─────────────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃1. 식물성 │가. 곡류(곡물)            │1) 귀리(연맥), 메밀(교맥), 밀(소맥), 보리(대맥), 수수, 쌀, 옥수수,      ┃  

  ┃          │                          │조, 트리티케일, 피, 호밀(호맥),                                         ┃  

  ┃          │                          │2) 1)의 곡류 1차 가공품 또는 싸라기[예 : 귀리 1차 가공품, 귀리          ┃  

  ┃          │                          │싸라기]                                                                 ┃  

  ┃          │                          │3) 혼합곡물, 혼합곡물 1차 가공품, 혼합곡물 싸라기                       ┃  

  ┃          ├─────────────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │나. 강피류                │기장피, 귀리겨, 당밀흡착강피류, 대두피, 땅콩피, 루핀피, 말분, 면        ┃  

  ┃          │   (곡물부산물류)         │실피, 밀기울(소맥피), 보릿겨(맥강), 수수겨, 쌀겨(미강[탈지 포           ┃  

  ┃          │                          │함]), 아몬드피, 옥수수단백피(옥수수글루텐피드), 옥수수피, 율무          ┃  

  ┃          │                          │피, 조겨, 커피원두피, 케슈너트피, 해바라기피, 혼합강피류                ┃  

  ┃          ├─────────────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │다. 박류(단백질류)        │겨자박, 고추씨박, 구아박, 귀리박, 농축단백질, 대두박[전지대두 가        ┃  

  ┃          │                          │공품을 포함], 들깨박(임자박), 땅콩박, 맥주박, 면실박, 밀글루텐,         ┃  

  ┃          │                          │밀배아박, 아마인박, 아몬드박, 야자박(코코넛박), 양구슬냉이박, 앵        ┃  

  ┃          │                          │속실박, 옥수수글루텐, 옥수수배아박, 올리브박, 장유박, 전분박, 주        ┃  

  ┃          │                          │정박[DDGS, 포도주박, 자두주박, 전통주박 등 포함], 참깨박(호마           ┃  

  ┃          │                          │박), 채종박(카놀라박), 케슈너트박, 케이폭박, 팜유박(팜박), 포도씨       ┃  

  ┃          │                          │박, 피마자박, 해바라기씨박, 호두씨박, 혼합박류                          ┃  

  ┃          ├─────────────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │라. 서류                  │감자, 고구마, 돼지감자, 카사바(매니옥), 혼합서류                        ┃  

  ┃          ├─────────────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │마. 식품가공부산물류      │감자가공부산물, 과실류가공부산물, 당밀, 도토리부산물, 밤가공부          ┃  

  ┃          │                          │산물, 비타민류가공부산물, 쌀농후침지액, 아미노산발효부산물, 엿          ┃  

  ┃          │                          │류부산물, 옥수수농후침지액, 음료가공부산물, 제과ㆍ제빵ㆍ제면부          ┃  

  ┃          │                          │산물[초콜릿부산물 포함], 조미료부산물, 채소가공부산물, 콩류가공         ┃  

  ┃          │                          │부산물[비지 포함, 대두박은 제외], 파당[폐당 포함], 혼합식품가공         ┃  

  ┃          │                          │부산물                                                                  ┃  

  ┃          ├──────┬──────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │바. 조류    │1) 거대조류 │갈래곰보, 갈파래, 감태, 곰피, 김, 꼬시래기, 다시마, 돌가사리, 둥        ┃  

  ┃          │            │            │근돌김, 뜸부기, 매생이, 모자반, 미역, 불등가사리, 석묵, 우뭇가사리,     ┃  

  ┃          │            │            │지충이, 진두발, 청각, 톳, 파래, 피마톨리톤 칼카륨                       ┃  

  ┃          │            ├──────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │            │2) 미세조류 │난노클로롭시스, 두나리엘라, 스피루리나(스피룰리나), 스키조키트리        ┃  

  ┃          │            │            │움, 아이소크라이시스, 클로렐라, 키토세로스, 탈라시오시라, 테트라        ┃  

  ┃          │            │            │셀미스, 파블로바, 해마토코쿠스 플루비알리스                             ┃  

  ┃          │            ├──────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │            │3) 기타     │해조분, 혼합조류                                                        ┃  

  ┃          ├──────┼──────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │사. 섬유질류│1) 목초     │네이피어그라스, 달리스그라스, 라디노클로버, 레드톱, 로즈그라스,         ┃  

  ┃          │            │            │리드카나리그라스, 밀건초, 바히아그라스, 버뮤다그라스, 버즈푸트          ┃  

  ┃          │            │            │레포일, 벤트그라스, 붉은토끼풀(레드클로버), 브라키아리아그라스,         ┃  

  ┃          │            │            │브롬그라스, 블루그라스, 쉬프그라스(양초), 알팔파[베일, 펠릿, 큐         ┃  

  ┃          │            │            │브 포함], 앨사이크클로버, 연맥건초, 에뉴얼라이그라스, 오차드그          ┃  

  ┃          │            │            │라스, 이탈리안라이그라스, 켄터키블루그라스, 클라인그라스, 테프          ┃  

  ┃          │            │            │그라스, 토끼풀(화이트클로버), 톨페스큐, 티모시, 파인 페스큐, 페         ┃  

  ┃          │            │            │레니얼라이그라스, 페스큐                                                ┃  

  ┃          │            ├──────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │            │2) 풋베기   │새싹귀리, 새싹밀, 새싹보리, 수단그라스, 자운영, 청예갈대, 청예귀리,     ┃  

  ┃          │            │사료작물    │청예밀, 청예보리, 청예벼, 청예수수, 청예옥수수, 청예유채, 청예피,       ┃  

  ┃          │            │            │청예호밀                                                                ┃  

  ┃          │            ├──────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │            │3) 고간류   │귀리짚, 밀짚, 볏짚, 보릿짚, 수수대, 옥수수대                            ┃  

  ┃          │            ├──────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │            │4) 가공ㆍ발 │섬유질가공사료, 섬유질발효사료                                          ┃  

  ┃          │            │효사료      │                                                                        ┃  

  ┃          │            ├──────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │            │5) 기타     │감귤박, 곡류정선부산물(GSP), 버섯재배부산물, 병풀 잎 분말, 사과         ┃  

  ┃          │            │            │박, 사탕무박(비트펄프), 사탕수수박(버개스), 인동(잎, 줄기), 양잠부      ┃  

  ┃          │            │            │산물, 어성초, 옥수수속대, 이질풀(잎), 커피박, 코코아박(카카오박),       ┃  

  ┃          │            │            │케나프, 톱밥[곤충류에 한 함], 파인애플박, 혼합섬유질                    ┃  

  ┃          ├──────┴──────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │아. 제약부산물류          │이노시톨박, 인삼박                                                      ┃  

  ┃          ├─────────────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │자. 유지류                │대두유, 대마씨유, 면실유, 미강유, 식물성혼합유, 식물성식용잔유          ┃  

  ┃          │                          │[정제된 것에 한 함], 아마인유, 야자유, 옥수수유, 채종유(카놀라유),      ┃  

  ┃          │                          │팜유, 해바라기유                                                        ┃  

  ┃          ├─────────────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │차. 전분류                │곡류전분[α-화 전분 포함], 서류전분[α-화 전분 포함], 혼합전분          ┃  

  ┃          ├─────────────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │카. 콩류                  │녹두, 누에콩, 대두, 렌즈콩(렌틸콩), 루핀, 완두, 이집트콩, 혼합콩        ┃  

  ┃          │                          │류                                                                      ┃  

  ┃          ├─────────────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │타. 견과ㆍ종실류          │면실, 아마인, 유채씨(평지씨), 참깨, 카나리아씨드, 케슈너트, 케이폭,     ┃  

  ┃          │                          │피스타치오, 해바라기씨, 홍화씨, 혼합견과, 혼합견과종실류, 혼합종실      ┃  

  ┃          ├─────────────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │파. 과실류                │딸기, 로즈힙, 망고, 바나나, 배, 블루베리, 사과, 산사자, 용안육, 코      ┃  

  ┃          │                          │코넛(야자), 키위, 파인애플, 파파야, 혼합과실                            ┃  

  ┃          ├─────────────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │하. 채소류                │가지, 당근, 무, 마카 뿌리, 비트, 사탕무, 삼채(잎), 삼채(뿌리), 시       ┃  

  ┃          │                          │금치, 양배추, 오이, 치커리(뿌리), 케일, 토마토, 호박, 혼합채소          ┃  

  ┃          ├─────────────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │거. 버섯류                │노루궁뎅이버섯(자실체), 느타리버섯(자실체), 신령버섯(자실체), 영지      ┃  

  ┃          │                          │버섯(자실체), 잎새버섯(자실체), 큰느타리버섯(자실체), 표고버섯(자       ┃  

  ┃          │                          │실체), 혼합버섯                                                         ┃  

  ┃          ├─────────────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │너. 기타 식물류           │마리골드 분말, 모링가 잎 분말, 뽕잎, 쑥, 인동(꽃봉오리), 질경이,        ┃  

  ┃          │                          │차, 화분(꽃가루)                                                        ┃  

  ┠─────┼─────────────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃2. 동물성 │가. 단백질류              │가금부산물건조분[도축 및 가금도축부산물, 계육분 포함], 가죽, 감         ┃  

  ┃          │                          │마루스, 건어포, 게분, 계란분말[난황 및 난백분말 등 가공품을 포함],      ┃  

  ┃          │                          │골뱅이분, 동물성단백질혼합분, 모발분, 부화장부산물건조분, 새우          ┃  

  ┃          │                          │분, 수지박[우지박, 돈지박을 포함], 어분[어류의 가공품 및 부산물         ┃  

  ┃          │                          │포함], 어즙, 어즙흡착사료, 연어, 오징어분, 우모분, 유도단백질[가수      ┃  

  ┃          │                          │분해, 효소처리 등을 한 것을 포함], 육골분, 육골포, 육분, 육즙흡착사     ┃  

  ┃          │                          │료, 육어포, 육포, 제각분, 초유, 혈액가공품[혈장단백 및 혈분을 제        ┃  

  ┃          │                          │외], 혈분, 혈장단백                                                     ┃  

  ┃          ├─────────────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │나. 무기물류              │골분, 골회, 난각분, 어골분, 어골회, 패분, 혼합무기물, 가공뼈다귀,       ┃  

  ┃          │                          │녹각                                                                    ┃  

  ┃          ├─────────────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │다. 유지류                │곤충유, 닭기름(계유), 동물성식용잔유[정제된 것에 한함], 동물성          ┃  

  ┃          │                          │혼합유지, 돼지기름(돈지), 소기름(우지), 양기름(양지), 어류기름          ┃  

  ┃          │                          │(어유), 오리기름, 초록입홍합추출오일                                    ┃  

  ┃          ├─────────────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │라. 곤충류                │거저리유충(밀웜ㆍ슈퍼밀웜), 건조귀뚜라미, 건조메뚜기, 동애등에          ┃  

  ┃          │                          │유충, 번데기[번데기박을 포함], 장구벌레, 파리유충, 혼합곤충             ┃  

  ┃          ├─────────────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │마. 플랑크톤류            │로티퍼, 마이시스슈림프, 물벼룩, 알테미아(브라인슈림프), 코페포다,       ┃  

  ┃          │                          │크릴, 혼합플랑크톤                                                      ┃  

  ┃          ├─────────────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │바. 낙농가공부산물류      │유당, 유장, 유조제품, 전지분유, 치즈[치즈밀 포함], 탈지분유, 혼합       ┃  

  ┃          │                          │낙농가공부산물                                                          ┃  

  ┠─────┼─────────────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃3. 광물성 │가. 식염류                │가공소금, 정제소금[소금산업진흥법 제2조의 규정에 의한 화학              ┃  

  ┃          │                          │부산물소금을 제외], 천일염,                                             ┃  

  ┃          ├───────┬─────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │나. 인산염류  │1) 인산   │소성인산석회, 제일인산나트륨(인산일나트륨)[구. 인산이수소나트륨],       ┃  

  ┃          │및 칼슘       │염류      │제이인산나트륨(인산이나트륨, 인산수소이나트륨)[구. 인산일수소           ┃  

  ┃          │염류          │          │나트륨], 제삼인산나트륨(인산삼나트륨)[구. 인산나크륨], 제일인산         ┃  

  ┃          │              │          │칼륨(산성인산칼륨)[구. 인산이수소칼륨], 제이인산칼륨(인산이칼륨)        ┃  

  ┃          │              │          │[구. 인산일수소칼륨], 제삼인산칼륨(인산삼칼륨)[구. 인산칼륨], 제        ┃  

  ┃          │              │          │일인산칼슘(MCP, 인산1칼슘, 산성인산칼슘), 제이인산칼슘(DCP,             ┃  

  ┃          │              │          │인산2칼슘, 인산수소칼슘), 제삼인산칼슘(TCP, 인산3칼슘), 혼합인산        ┃  

  ┃          │              │          │칼슘(MDCP)                                                              ┃  

  ┃          │              ├─────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │              │2) 칼슘   │마그네슘석회석분말, 석고, 석회석분말, 탄산칼슘, 황산칼슘                ┃  

  ┃          │              │염류      │                                                                        ┃  

  ┃          ├───────┴─────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │다. 다량광물질류          │다량광물질-단백질화합물, 다량광물질-아미노산복합물, 다량광물질          ┃  

  ┃          │                          │-아미노산킬레이트,, 염화칼륨, 유황(법제유황, 제독유황), 엠에스엠        ┃  

  ┃          │                          │(디메틸설폰), 탄산마그네슘, 탄산칼륨(무수), 황산나트륨, 황산마그        ┃  

  ┃          │                          │네슘, 황산칼륨                                                          ┃  

  ┃          ├─────────────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │라. 미량광물질류          │구연산철, 몰리브덴산나트륨, 몰리브덴산암모늄, 미량광물질-단백           ┃  

  ┃          │                          │질화합물, 미량광물질-아미노산복합물, 미량광물질-아미노산킬레            ┃  

  ┃          │                          │이트, 산화아연, 삼염기염화동, 셀렌산나트륨, 아셀렌산나트륨, 아          ┃  

  ┃          │                          │연하이드록시염화물, 염화크롬, 요오드산칼륨, 요오드산칼슘, 요오          ┃  

  ┃          │                          │드화칼륨, 크롬프로피온산, 초산아연, 탄산망간, 탄산아연, 탄산코          ┃  

  ┃          │                          │발트, 펩타이드구리(펩타이드동), 펩타이드망간, 펩타이드아연, 펩          ┃  

  ┃          │                          │타이드철, 푸말산제1철, 호박산구연산소다제1철, 황산제1철, 황산구         ┃  

  ┃          │                          │리(황산동), 황산망간, 황산아연, 황산아연메치오닌, 황산코발트            ┃  

  ┃          ├─────────────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │마. 혼합광물질류          │인산염류 합제, 칼슘염류 합제, 다량광물질류 합제, 미량광물질류           ┃  

  ┃          │                          │합제, 혼합광물질류 합제[인산염류부터 미량광물질류의 합제를 말함]        ┃  

  ┠─────┼─────────────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃4. 기타   │가. 유지류                │글리세린, 분말유지, 불해성지방(보호지방), 혼합성유지                    ┃  

  ┃          ├─────────────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │나. 단세포단백질          │불활성박테리아[보조사료-미생물제-유익균에 한 함], 불활성효모            ┃  

  ┃          │                          │[보조사료-미생물제-유익효모에 한 함], 혼합단세포단백질                  ┃  

  ┃          ├─────────────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │다. 남은음식물            │남은음식물사료(축종명)                                                  ┃  

  ┃          ├─────────────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │라. 반려동물음용수        │반려동물음용수                                                          ┃  

  ┃          ├─────────────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃          │마. 기타                  │밀리타리스 동충하초                                                     ┃  

  ┠─────┼─────────────┼────────────────────────────────────┨  

  ┃5. 혼합성 │가. 혼합제                │혼합성 단미사료[둘 이상의 단미사료를 혼합한 것으로 각각의 단미사료는    ┃  

  ┃          │                          │혼합 전에 개별 단미사료의 기준 및 규격 등(열처리, 수분 등)을 충족하     ┃  

  ┃          │                          │여야 함]                                                                ┃  

  ┃          │                          │※ 애완용 동물의 간식용, 영양보충용은 소량의 보조사료(보존제와 향미제에 ┃  

  ┃          │                          │한함)를 첨가 가능                                                       ┃  

  ┃          │                          │※ 1. 식물성 ～ 4. 기타의 합제류 및 혼합류 사료를 제외한 것을 말한다.   ┃  

  ┃          │                          │※ 보조사료 중 규산염제와 완충제는 광물성사료에 혼합시 단미사료로 인    ┃  

  ┃          │                          │정하여 혼합광물질로 분류 가능                                           ┃  

  ┗━━━━━┷━━━━━━━━━━━━━┷━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┛  

   * (  ) 안의 명칭은 병행하여 표기할 수 있으며, [  ] 안의 내용은 해당 물질에 대한 규격 및 기준 등을 의                 

  미함                                                                                                                  

별표 0002: 보조사료의 범위(제5조 관련)

  [별표 2] <신설 2014.12.8., 개정 2015.8.21. 개정 2016.7.1., 개정 2016.12.01., 개정 2017.4.1., 개정 2019.10.24.,                                

  개정 2021.5.24., 개정 2021.12.29., 개정 2022.7.22., 개정 2023.10.04.>                                                                         

  보조사료의 범위(제5조 관련)┏━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┓   

                             ┃사료종류                │명 칭                                                                             ┃   

                             ┠──┬─────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃1.  │가. 천연결착제    │구아검, 리그닌술폰산염(리그닌설폰산염), 셀룰로오스, 송진, 젤라틴, 천연검, 카제인, ┃   

                             ┃결  │                  │콜라겐                                                                            ┃   

                             ┃착  ├─────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃제  │나. 합성결착제    │알긴산나트륨, 알긴산암모늄, 알긴산칼륨, 카르복시메틸셀룰로오스나트륨, 카제인      ┃   

                             ┃    │                  │나트륨, 폴리메틸로카바마이드, 폴리아크릴산나트륨, 히드록시프로필메틸 셀룰로       ┃   

                             ┃    │                  │오스                                                                              ┃   

                             ┃    ├─────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃    │다. 합제          │천연결착제 합제, 합성결착제 합제, 결착제 합제[천연결착제와 합성결착제의 합제를    ┃   

                             ┃    │                  │말함]                                                                             ┃   

                             ┠──┴─────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃2. 유화제               │글리세린 지방산 에스테르, 레시틴, 메타인산나트륨, 소르비탄 지방산 에스테르,       ┃   

                             ┃                        │스테아릴젖산나트륨, 스테아릴젖산칼슘, 자당 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌        ┃   

                             ┃                        │글리세롤 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르, 폴리인산       ┃   

                             ┃                        │나트륨, 프로필렌글리콜, 유화제 합제, 스테아릴젖산나트륨                           ┃   

                             ┠──┬─────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃3.  │가. 산미제        │DL-사과산, DL-주석산, L-주석산, 개미산, 개미산수소칼륨, 개미산칼슘, 구연산, 글    ┃   

                             ┃보  │                  │루콘산, 글루콘산칼슘, 낙산(부티르산), 낙산나트륨, 낙산칼슘, 소르빈산, 소르빈산    ┃   

                             ┃존  │                  │칼륨, 안식향산, 안식향산나트륨, 인산, 젖산, 초산, 푸말산(푸마르산), 호박산        ┃   

                             ┃제  ├─────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃    │나. 항응고제      │실리카(이산화규소), 스테아린산칼슘, 염화주석, 탤크, 화이트카본, 활성탄            ┃   

                             ┃    ├─────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃    │다. 항산화제      │레스베라트롤, 메타중아황산나트륨, 몰식자산, 몰식자산프로필, 부틸하이드록시아      ┃   

                             ┃    │                  │니솔, 부틸하이드록시톨루엔, 비타민 E(dl-α-토코페롤), 에톡시킨, 케르세틴, 페      ┃   

                             ┃    │                  │룰린산                                                                            ┃   

                             ┃    ├─────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃    │라.항곰팡이제     │프로피온산, 프로피온산나트륨, 프로피온산칼슘                                      ┃   

                             ┃    ├─────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃    │마 합제           │산미제 합제, 항응고제 합제, 항산화제 합제, 항곰팡이제 합제, 보존제 합제[산미      ┃   

                             ┃    │                  │제부터 항곰팡이제의 합제를 말함]                                                  ┃   

                             ┠──┴─────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃4. 아미노산제           │DL-메치오닌(DL-메티오닌), DL-메치오닌수산화유도체(MHA), DL-메치오닌               ┃   

                             ┃                        │수산화유도체이소프로필에스테르, DL-메치오닌수산화유도체 칼슘염, DL-알             ┃   

                             ┃                        │라닌, DL-트레오닌철, DL-트립토판, L-글루타민산, L-라이신, L-라이신염산            ┃   

                             ┃                        │염, L-라이신황산염, L-메치오닌(L-메티오닌), L-발린, L-시스틴, L-알기닌            ┃   

                             ┃                        │(L-아지닌, L-아르기닌), L-이소로이신, L-트레오닌, L-트립토판, L-히스티            ┃   

                             ┃                        │딘, L-히스티딘염산염, L??시스테인염산염, 아미노초산(글라이신), 타우린, 아미     ┃   

                             ┃                        │노산제 합제, L-로이신                                                             ┃   

                             ┠────────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃5. 비타민제             │L-카르니틴, 나이아신(니아신ㆍ니코틴산), 니코틴산아미드, 비오틴(비타민H), 비       ┃   

                             ┃(프로비타민제 포함)     │타민A분말(레티놀분말), 비타민A유(레티놀오일), 비타민B1, 비타민B1나프탈린          ┃   

                             ┃                        │-1,5-디설폰산염(치아민나프탈린-1,5-디설폰산염), 비타민B1라우릴황산염(치           ┃   

                             ┃                        │아민 라우릴황산염), 비타민B1로단산염(치아민 티오시안산염), 비타민B1염산           ┃   

                             ┃                        │염(치아민 염산염), 비타민B1질산염(치아민 질산염), 비타민B2(리보플라빈),           ┃   

                             ┃                        │비타민B2인산에스테르나트륨(리보플라빈 5’-인산에스테르나트륨), 비타민B6           ┃   

                             ┃                        │염산염(피리독신 염산염), 비타민B12(시아노코발라민), 비타민C(L-아스콜빈            ┃   

                             ┃                        │산), 비타민C칼슘염(L-아스콜빈산 칼슘염), 비타민C-2인산마그네슘염(L-아             ┃   

                             ┃                        │스콜빈산-2-인산에스테르 마그네슘), L-아스콜빈산-2-폴리에틸렌 글리콜 에            ┃   

                             ┃                        │테르, 비타민C나트륨염(L-아스콜빈산 나트륨염), 비타민D분말(칼시페롤분              ┃   

                             ┃                        │말), 비타민D2(칼시페롤), 비타민D3(콜레칼시페롤), 비타민E(dl-α-토코페롤),         ┃   

                             ┃                        │비타민E아세테이트(dl-α-토코페릴아세테이트), d-α-비타민E아세테이트, 비           ┃   

                             ┃                        │타민K1(파일로퀴논) 비타민K3(메나디온), 비타민K3아황산나트륨염(메나디온            ┃   

                             ┃                        │아황산나트륨염), 비타민K3아황산니코틴아마이드(메나디온 아황산 니코틴아            ┃   

                             ┃                        │마이드), 비타민K4(아세토메나프톤), 염화콜린, 엽산, 이노시톨, 주석산수소콜         ┃   

                             ┃                        │린, 판토텐산, 프로비타민A(β-카로틴), 비타민제 합제                               ┃   

                             ┠──┬─────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃6.  │가. 당분해효소    │글루코아밀라아제, 락타아제, 리소짐, 말토게닉아밀라아제, 셀룰라아제, 엑소글루      ┃   

                             ┃효  │                  │카나아제, 엔도글루카나아제, 키시라나제, 키토사나아제, 펙티나아제, 헤미셀룰        ┃   

                             ┃소  │                  │라아제, α-갈락토시다아제, α-아밀라아제, β-글루카나아제, β-만난아제, β-아밀   ┃   

                             ┃제  │                  │라아제                                                                            ┃   

                             ┃    ├─────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃    │나. 지방분해효소  │리파아제                                                                          ┃   

                             ┃    ├─────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃    │다. 인분해효소    │피타아제                                                                          ┃   

                             ┃    ├─────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃    │라. 단백질분해효소│산성(곰팡이성)프로테아제, 식물성프로테아제[브로멜라인 포함], 알칼리성(세균성)프   ┃   

                             ┃    │                  │로테아제, 중성프로테아제                                                          ┃   

                             ┃    ├─────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃    │라의2. 산화환원효 │글루코오스산화효소                                                                ┃   

                             ┃    │소                │                                                                                  ┃   

                             ┃    ├─────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃    │마.  합제         │당분해효소 합제, 지방분해효소 합제, 인분해효소 합제, 단백질분해효소 합제, 효      ┃   

                             ┃    │                  │소제 합제[당분해효소부터 단백질분해효소의 합제를 말함]                            ┃   

                             ┠──┼─────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃7.  │가. 유익균        │락토바실러스 락티스, 락토바실러스 람노서스,  락토바실러스 루테리, 락토바실러      ┃   

                             ┃미  │                  │스 뮤코세, 락토바실러스 불가리쿠스, 락토바실러스 브레비스, 락토바실러스 사        ┃   

                             ┃생  │                  │케이, 락토바실러스 살리바리우스, 락토바실러스 애시도필러스, 락토바실러스 카제     ┃   

                             ┃물  │                  │이, 락토바실러스 커바투스, 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 파라카제       ┃   

                             ┃제  │                  │이, 락토바실러스 퍼멘텀, 락토바실러스 페롤렌스, 락토바실러스 플란타럼, 락토       ┃   

                             ┃    │                  │바실러스 헬베티쿠스, 락토코쿠스 락티스, 락토코쿠스 락티스 크레모리스, 로돕슈      ┃   

                             ┃    │                  │도모나스 캡슐레이타, 바실러스 렌투스, 바실러스 리체니포미스, 바실러스 서브틸      ┃   

                             ┃    │                  │리스, 바실러스 세레우스[도요이에 한함], 바실러스 코아글란스, 바실러스 폴리퍼      ┃   

                             ┃    │                  │멘티쿠스, 바실러스 푸밀러스, 비피도박테리움 애니멀리스 락티스, 비피도박테리       ┃   

                             ┃    │                  │움 롱검, 비피도박테리움 비피덤, 비피도박테리움 서모필럼, 비피도박테리움 슈도      ┃   

                             ┃    │                  │롱검, 비피도박테리움 인판티스, 엔테로코커스 락티스, 스트렙토코커스 써모필러       ┃   

                             ┃    │                  │스, 엔테로코커스 훼시엄, 웨이셀라 시바리아, 클로스트리디움 부티리컴, 페디오       ┃   

                             ┃    │                  │코커스 세레비시에, 페디오코커스 애시디락티시, 페디오코커스 펜토사세우스, 유       ┃   

                             ┃    │                  │익균 배양물                                                                       ┃   

                             ┃    ├─────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃    │나. 유익곰팡이    │모나스커스 퍼퓨리어스, 아스퍼질러스 나이거, 아스퍼질러스 오리제                   ┃   

                             ┃    ├─────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃    │다. 유익효모      │맥주효모[사카로마이세스 세르비시에에 한 함], 양조효모[사카로마이세스 세르         ┃   

                             ┃    │                  │비시에에 한 함], 잔토필로마이세스 덴드로하우스, 제빵효모[사카로마이세스 세르      ┃   

                             ┃    │                  │비시에에 한 함], 조사건조효모, 토룰라효모, 피키아 파리노사, 효모배양물[유익효모   ┃   

                             ┃    │                  │의 배양물에 한 함]                                                                ┃   

                             ┃    ├─────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃    │라. 박테리오파지  │대장균 박테리오파지, 살모넬라 갈리나룸 박테리오파지, 살모넬라 엔테라이티디        ┃   

                             ┃    │                  │스 박테리오파지, 살모넬라 티피뮤리움 박테리오파지, 클로스트리디움 퍼프린젠스      ┃   

                             ┃    │                  │박테리오파지                                                                      ┃   

                             ┃    ├─────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃    │마. 합제          │유익균 합제, 유익곰팡이 합제, 유익효모 합제, 박테리오파지 합제, 미생물제 합       ┃   

                             ┃    │                  │제[유익균부터 박테리오파지의 합제를 말함]                                         ┃   

                             ┠──┼─────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃8.  │가. 착향료        │천연착향료[별표 6에서 허용하는 천연착향료에 한 한다], 합성착향료[별표 6에서       ┃   

                             ┃향  │                  │허용하는 합성착향료에 한 한다]                                                    ┃   

                             ┃미  ├─────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃제  │나. 감미료        │감초, 과당, 네오탐, 네오헤스페리딘디하이드로칼콘, D-소르비톨, 맥아당(말토오스,    ┃   

                             ┃    │                  │엿당), 사카린나트륨, 설탕(자당ㆍ백당ㆍ수크로오스), 수크랄로스, 스테비아, 스테비올 ┃   

                             ┃    │                  │배당체, 아니스, 원당, 엿류(물엿, 기타엿, 덱스트린), 캐러멜(카라멜), 캐롭, 포도당  ┃   

                             ┃    │                  │(글루코오스), 효소처리스테비아                                                    ┃   

                             ┃    ├─────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃    │다. 조미료        │강황(울금, 심황), 계피, L-글루타민산나트륨, 마늘, 생강, 안젤리카,                 ┃   

                             ┃    │                  │5’-리보뉴클레오티드이나트륨, 5‘-구아닐산이나트륨, 5’-이노신산이나트륨, 카레,   ┃   

                             ┃    │                  │캐러웨이, 향신료올레오레진                                                        ┃   

                             ┃    ├─────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃    │라. 합제          │착향료 합제, 감미료 합제, 조미료 합제, 향미제 합제(착향료부터 조미료 합제를 말함) ┃   

                             ┠──┴─────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃9. 비단백태질소         │당밀요소, 디우레이드이소부탄, 비우렛, 요소, 인산암모늄, 인산요소, 전분요소, 황산  ┃   

                             ┃   화합물               │암모늄, 비단백태질소화합물 합제, 염화암모늄                                       ┃   

                             ┠────────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃10. 규산염제            │견운모, 고령토(카올린), 규조토, 맥반석, 몬모릴로나이트, 버미큘라이트, 벤토나이트, ┃   

                             ┃                        │세피올라이트, 에타폴자이트, 일라이트, 제올라이트, 흑운모, 규산염제 합제           ┃   

                             ┠────────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃11. 완충제              │산화마그네슘, 세스퀴탄산나트륨, 탄산나트륨(소다회), 중조(탄산수소나트륨ㆍ중탄산   ┃   

                             ┃                        │나트륨), 완충제 합제                                                              ┃   

                             ┠───┬────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃12.   │가. 천연        │천연착색제[식품첨가물공전에서 허용하는 색소에 한한다]                             ┃   

                             ┃착색제├────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃      │나. 합성        │아스타키산틴(아스타잔틴), 아포카로텐산 에스테르, 칸탄산틴(칸타잔틴)               ┃   

                             ┃      ├────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃      │다. 합제        │천연착색제 합제, 합성착색제 합제, 착색제 합제                                     ┃   

                             ┠───┼────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃13.   │가. 초목(草木)  │가시오갈피추출물, 감초추출물, 금잔화추출물(루테인, 마리골드 색소 포함),           ┃   

                             ┃추출제│   추출물       │도라지추출물, 라즈베리추출물, 목초액, 밀크씨슬추출물, 사철쑥추출물, 아티초        ┃   

                             ┃      │                │크추출물, 우엉추출물, 유카추출물, 차추출물, 천연비테인(베타인), 치커리추          ┃   

                             ┃      │                │출물,  칡뿌리추출물, 퀼라야(퀼레아), 타히보추출물, 황금뿌리추출물                 ┃   

                             ┃      ├────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃      │나. 종자        │달맞이꽃씨추출물, 자몽종자추출물, 포도종자추출물, 해바라기씨추출물, 호로파        ┃   

                             ┃      │   추출물       │추출물, 참깨유추출물                                                              ┃   

                             ┃      ├────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃      │다. 세포벽      │글루칸, 만난                                                                      ┃   

                             ┃      │   추출물       │                                                                                  ┃   

                             ┃      ├────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃      │라. 동물        │누에추출물, 키토산, 키틴                                                          ┃   

                             ┃      │   추출물       │                                                                                  ┃   

                             ┃      ├────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃      │마. 기타        │과실 및 과채추출물, 노간주열매추출물, 마늘추출물, 반추위추출물, 생강추출물,       ┃   

                             ┃      │                │콜라너트추출물, 타우마틴(토마틴), 프로폴리스추출물, 케슈너트쉘추출물, 해초,       ┃   

                             ┃      │                │해조추출물, 효모추출물                                                            ┃   

                             ┃      ├────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃      │바. 합제        │추출제 합제                                                                       ┃   

                             ┠───┴────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃14. 올리고당            │갈락토올리고당[대두올리고당을 포함], 겐티오올리고당, 말토올리고당, 이소말토올     ┃   

                             ┃                        │리고당, 자일로올리고당, 키토올리고당, 프락토올리고당, 올리고당 합제               ┃   

                             ┠────────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃15. 기  타              │글루코사민, 글루콘산나트륨, 라우린산, 락툴로즈, 라우린산, 시스테아민염산염,       ┃   

                             ┃                        │식물스테롤[식물스테롤에스테르 포함], 비테인염산염(베타인염산염), 팔미트산, 코     ┃   

                             ┃                        │엔자임Q10, 식이섬유, 차전자피식이섬유                                             ┃   

                             ┠────────────┼─────────────────────────────────────────┨   

                             ┃16. 혼합제              │혼합성 보조사료[둘 이상의 보조사료를 혼합한 것으로 각각의 보조사료는 혼합         ┃   

                             ┃                        │전에 개별 보조사료의 기준 및 규격 등을 충족하여야 한다.]                          ┃   

                             ┗━━━━━━━━━━━━┷━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┛   

   * (  ) 안의 명칭은 병행하여 표기할 수 있으며, [  ] 안의 내용은 해당 물질에 대한 규격 및 기준 등을 의미함                                     

별표 0003: 배합사료의 범위(제6조제2항 관련)

  [별표 3] <신설 2014.12.8., 개정 2015.8.21., 개정 2016.12.01., 개정 2021.5.24., 개정 2021.12.29., 개정         

  2022.3.11., 개정 2023.10.04.>                                                                                 

  배합사료의 범위(제6조제2항 관련)                                                                              

  ┏━━━━━━━━━┯━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┓  

  ┃사료종류          │축종            │명칭                                                              ┃  

  ┠─────────┼────────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃1. 양축용         │가. 고기소      │어린송아지, 육성우, 번식우, 종모우, 임신우, 포유우, 큰소전기,     ┃  

  ┃   배합사료       │                │큰소후기                                                          ┃  

  ┃                  ├────────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃                  │나. 젖소        │젖소어린송아지, 젖소중송아지, 젖소큰송아지, 젖소임신우, 젖소      ┃  

  ┃                  │                │종모우, 비유초기, 비유중기, 비유말기, 건유기, 고능력우            ┃  

  ┃                  ├────────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃                  │다. 돼지        │포유자돈, 이유돈, 육성돈, 비육돈, 번식용 모돈, 임신돈, 포유돈     ┃  

  ┃                  ├────────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃                  │라. 닭          │산란용어린병아리, 산란용중병아리, 산란용큰병아리, 산란전, 산란초  ┃  

  ┃                  │                │기, 산란중기, 산란말기, 산란종계, 육용종계, 육용어린병아리, 육    ┃  

  ┃                  │                │용중병아리, 육계초기, 육계전기, 육계후기                          ┃  

  ┃                  ├────────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃                  │마. 오리        │육용오리전기, 육용오리후기, 종오리용어린오리, 종오리용육성        ┃  

  ┃                  │                │오리, 종오리용산란오리                                            ┃  

  ┃                  ├────────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃                  │바. 개          │어린개, 육성개, 큰개                                              ┃  

  ┃                  ├────────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃                  │사. 꿩          │어린꿩, 육성꿩, 큰꿩                                              ┃  

  ┃                  ├────────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃                  │아. 말          │어린말, 육성말, 큰말                                              ┃  

  ┃                  ├────────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃                  │자. 메추리      │어린메추리, 육성메추리, 큰메추리, 산란메추리                      ┃  

  ┃                  ├────────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃                  │차. 사슴        │어린사슴, 육성사슴, 큰사슴                                        ┃  

  ┃                  ├────────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃                  │카. 양          │어린면양, 육성면양, 큰면양, 어린염소(산양), 육성염소(산양), 큰염소┃  

  ┃                  │                │(산양)                                                            ┃  

  ┃                  ├────────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃                  │타. 오소리      │어린오소리, 육성오소리, 큰오소리                                  ┃  

  ┃                  ├────────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃                  │파. 칠면조      │어린칠면조, 육성칠면조, 큰칠면조                                  ┃  

  ┃                  ├────────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃                  │하. 타조        │어린타조, 육성타조, 큰타조, 산란타조                              ┃  

  ┃                  ├────────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃                  │거. 토끼        │어린토끼, 육성토끼, 큰토끼                                        ┃  

  ┃                  ├────────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃                  │너. 거위        │어린거위, 육성거위, 큰거위, 산란거위                              ┃  

  ┃                  ├────────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃                  │더. 노새        │어린노새, 육성노새, 큰노새                                        ┃  

  ┃                  ├────────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃                  │러. 당나귀      │어린당나귀, 육성당나귀, 큰당나귀                                  ┃  

  ┃                  ├────────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃                  │머. 꿀벌        │꿀벌                                                              ┃  

  ┃                  ├────────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃                  │버. 지렁이      │지렁이                                                            ┃  

  ┃                  ├────────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃                  │버의2, 곤충     │「축산법」에 따른 곤충의 명칭에 따라 제조업자가 정함              ┃  

  ┃                  ├────────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃                  │서. 배합사료원료│농가 자가배합사료 원료, 기초배합사료                              ┃  

  ┃                  ├────────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃                  │어. 특수배합사료│광물성배합사료(미네랄블럭), 양축용 영양보충제, 양축용 건강        ┃  

  ┃                  │                │보조제                                                            ┃  

  ┠─────────┼────────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃2. 프리믹스용     │가. 전체        │축종별로 구분                                                     ┃  

  ┃   배합사료       │                │* “프리믹스용 배합사료“라 함은 주로 배합사료를 제조할 때 사용   ┃  

  ┃                  │                │하는 사료로서 비타민제와 미량광물질류를 주 원료로 하고 여기에     ┃  

  ┃                  │                │필요에 따라 아미노산제 등의 보조사료와 부형제를 혼합하여 균질     ┃  

  ┃                  │                │화한 것을 말함                                                    ┃  

  ┠─────────┼────────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃3. 대용유용       │가. 전체        │축우용대용유, 양돈용대용유, 주문용대용유                          ┃  

  ┃   배합사료       │                │* “대용유용배합사료“라 함은 주로 어린(갓난)가축에게 급여하기    ┃  

  ┃                  │                │위하여 제조하는 사료로서 교차오염방지를 위하여 반드시 대용        ┃  

  ┃                  │                │유용배합사료 제조시설(규칙 별표 1)에서 주로 유당, 유장, 유        ┃  

  ┃                  │                │조제품을 혼합하고 필요에 따라 비타민제 등의 보조ㆍ단미사료        ┃  

  ┃                  │                │를 첨가하여 제조한 배합사료를 말함                                ┃  

  ┠─────────┼────────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃4. 섬유질 배합사료│가. 고기소      │어린송아지, 육성우, 큰소전기, 큰소후기, 번식우                    ┃  

  ┃                  │                │* "섬유질 배합사료"라 함은 섬유질사료를 분쇄, 가열 등의 물리      ┃  

  ┃                  │                │적 또는 화학적으로 처리하거나, 수분조절 또는 기호성 증진을        ┃  

  ┃                  │                │위하여 곡류, 강피류, 박류, 식품가공부산물류, 광물질류 또는 보조   ┃  

  ┃                  │                │사료를 첨가한 후 균체, 효모 등을 이용하여 인공 또는 자연적        ┃  

  ┃                  │                │으로 발효시킨 것으로서 조섬유의 함량이 건물기준으로 15%           ┃  

  ┃                  │                │이상인 것(다만, 큰소비육 단계의 경우 10% 이상)                    ┃  

  ┃                  ├────────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃                  │나. 젖소        │젖소어린송아지, 젖소큰송아지, 비유기, 건유기                      ┃  

  ┃                  ├────────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃                  │나의2. 말       │양축용 배합사료의 명칭에 준하여 성장단계별로 제조업자가 정        ┃  

  ┃                  ├────────┤함                                                                ┃  

  ┃                  │다. 기타        │                                                                  ┃  

  ┃                  │   반추동물     │                                                                  ┃  

  ┠─────────┼────────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃5. 그 밖의        │가. 실험용동물  │실험용 동물별 사료명칭 및 사용범위는 제3조의 규정에 의한 동       ┃  

  ┃   동물ㆍ어류용   │                │물명에 의거 성장단계별로 구분하여 제조업자가 정함                 ┃  

  ┃   배합사료       ├────────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃                  │나. 애완용동물  │애완용 동물(반려동물)별 사료명칭 및 사용범위는 제3조의 규정       ┃  

  ┃                  │(반려동물)      │에 의한 동물명에 의거 성장단계별로 구분하여 제조업자가 정         ┃  

  ┃                  │                │하며, 품종·체중·급여목적(주식·간식)으로 세분할 수 있음         ┃  

  ┃                  │                │(예 : 반려고양이-랙돌, 4~7kg, 간식)                               ┃  

  ┃                  ├────────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃                  │다. 사육하는    │사육하는 동물별 사료명칭 및 사용범위는 제3조의 규정에 의한 동     ┃  

  ┃                  │   동물         │물명에 의거 성장단계별로 구분하여 제조업자가 정함                 ┃  

  ┃                  ├────────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃                  │라. 수산동물    │어종별 사료명칭 및 사용범위는 어종별 및 성장단계별 등으로 구      ┃  

  ┃                  │                │분하여 제조업자가 정함                                            ┃  

  ┃                  │                │* 반건조배합사료(SEP, Soft Extrude Pellet 혹은 Semi-moist         ┃  

  ┃                  │                │pellet)라 함은 수분함량이 25% 내외로 70℃에서           ┃  

  ┃                  │                │사료제조과정을 거친 다음 건조과정을 거치지 않고 바로 냉           ┃  

  ┃                  │                │각처리 후 포장되어 냉동 유통되는 양식수산동물용 배합사            ┃  

  ┃                  │                │료로서 높은 수분함량으로 인해 운반시 뭉게지기 쉽고, 특            ┃  

  ┃                  │                │히 여름철에는 운반 및 보관시 산패?변패가 생길 가능성이           ┃  

  ┃                  │                │높아 저온 보관이 필요함                                           ┃  

  ┗━━━━━━━━━┷━━━━━━━━┷━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┛  

별표 0003: 식품등으로서 사료의 원료로 사용 가능한 물질의 범위(제5조의2 제1항 관련)

  [별표 3의2]                

  식품등으로서 사료의 원료로 사용 가능한 물질의 범위(제5조의2 제1항 관련)                                         

  1. 「식품의 기준 및 규격」[식품공전]의 식물성 원료                                                              

  2. 「식품의 기준 및 규격」[식품공전]의 동물성 원료                                                              

  3.                                                                                                        

  4.                                                                                                        

  5. 「식품의 기준 및 규격」[식품공전]의 기타 원료                                                                

  6. 「식품의 기준 및 규격」[식품공전]의 제한적으로 사용할 수 있는 식물성 원료                                    

  7. 「식품의 기준 및 규격」[식품공전]의 제한적으로 사용할 수 있는 동물성 원료                                    

  8. 「식품 등의 기준 및 규격」[식품공전]의 제한적으로 사용할 수 있는 기타 원료                                   

  9. 「식품첨가물의 기준 및 규격」[첨가물공전]의 식품첨가물                                                       

  10.                                                                                                       

  11. 「식품첨가물의 기준 및 규격」[첨가물공전]의 혼합제제류(붙임 11 참고)                                        

  12. 「건강기능식품의 기준 및 규격」[건강기능식품공전]의 기능성 원료(붙임 12 참고)                               

  13. 「식품등의 한시적 기준 및 규격 인정 기준」에 따라 인정된 식품원료 및 천연첨가물(단, 인정받은                

  업체에 한함)                                                                                                    

  14. (삭제)                                                                                                      

  15. 「먹는물관리법」에 따른 먹는물(먹는 데에 통상 사용하는 자연 상태의 물, 자연 상태의 물을 먹기에              

  적합하도록 처리한 수돗물, 먹는샘물, 먹는염지하수(鹽地下水), 먹는해양심층수(海洋深層水) 등)                      

  16. 주의사항                                                                                                    

   가.                                                                                                      

   나. 「식품첨가물의 기준 및 규격」(식품첨가물공전)에서 지정이 취소된 품목은 사용할 수 없음(다만, 별             

  표 1과 별표 2에 해당하는 것은 사용 가능)                                                                        

   다. 「건강기능식품의 기준 및 규격」(건강기능식품공전) 별표 5의 건강기능식품 제조에 사용할 수 없는              

  원료는 사용할 수 없음(다만, 별표 1과 별표2에 해당하는 것은 사용 가능)                                           

   라. 동물성 원료는 「사료 등의 기준 및 규격」 별표 9의 멸균 및 살균처리 기준에 따라 열처리 등을 하              

  여야 함. 다만, 우유류는 식품등의 기준에 따라 살균처리하여야 함                                                  

   마. 식품등은 「식품위생법」, 「건강기능식품에 관한 법률」, 「먹는물관리법」으로 관리되는 것이어야 하며,        

  「화학물질관리법」, 「비료관리법」 등으로 관리되는 것은 해당되지 않으므로 사료로 사용할 수 없음                 

   바. 식품등은 배합사료 및 혼합성단미사료, 혼합성보조사료, 각종 합제류 등의 사료를 제조하는데 성분등록           

  없이 사용하는 것은 가능(「사료 등의 기준 및 규격」 제9조제3항 참고). 다만, 개별 단미ㆍ보조사료                  

  로 제조 또는 수입 후 판매 및 공급하고자 하는 경우에는 사료공정 설정 후 성분등록을 하여야 함.                    

    * (예시 1) 사과를 배합사료 등을 제조하는데 성분등록 없이 사용하는 것은 가능하나, 사과 자체를                  

  사료로 판매ㆍ공급하기 위해서는 사료공정을 설정 후 성분등록하여야 함                                             

    * (예시 2) 까나리를 어분을 제조하는데 성분등록 없이 사용하는 것은 가능하나, 까나리 자체를 사료로              

  판매ㆍ공급하기 위해서는 사료공정 설정 후 성분등록하여야 함                                                      

   사. 사료공정 설정 등은 아래 기준을 참고하여 매월 말일까지 관계기관으로 요청                                    

    1) 식품등에 해당하는 물질은 품목별 기준 및 규격을 설정하여 해당 시ㆍ도를 경유하여 농림축산식품부              

  장관에게 요청                                                                                                   

    2) 「사료 등의 기준 및 규격」 별표 1, 별표 2, 식품등에 해당되지 않는 물질(예 : 삼지구엽초, 카테킨,            

  진세노사이드)은 「사료 등의 기준 및 규격」 별지 제1호서식에 의거 사료공정 설정 등을 국립축산                    

  과학원(동물영양생리과)으로 요청                                                                                 

     ※ 품목별 기준 및 규격 서식 예시                                                                             

  ┌─────┬───────────────────────────────────────────────┐  

  │물질명    │성분등록 기준                                                                                 │  

  │          ├──────────┬─────────┬──────────────────────────┤  

  │          │사료의 명칭 및 분류 │등록성분          │품목별 기준 및 규격(별표 5, 별표 6)                 │  

  │          │(별표 1, 별표 2)    │(별표 11, 별표 12)│                                                    │  

  ├─────┼──────────┼─────────┼──────────────────────────┤  

  │당밀      │단미사료-식물성-    │[최소량] 총당     │? 당밀(molasses; 폐당밀)                           │  

  │(molasses)│식품가공부산물류-   │[최대량] -        │  1) 정의 : 제당과정에서 발생한 부산물로 사탕수수,  │  

  │          │당밀                │[기타] 20℃에서의 │사탕무에서 유래한 것과 추가 가공과정에서 생         │  

  │          │                    │브릭스(Brix) 계수 │산된 부산물을 말한다.                               │  

  │          │                    │                  │  2) 영양정보 : 수분이 약 20～30% 들어 있고 주성    │  

  │          │                    │                  │분은 자당(sucrose)이다. 에너지 함량이 높아 가       │  

  │          │                    │                  │소화영양소총량은 고형물상태로 75%, 액상상태         │  

  │          │                    │                  │로 53% 정도이고 옥수수 열량의 2/3 정도의 열         │  

  │          │                    │                  │량가치를 가지고 있다. 조단백질은 5% 내외며          │  

  │          │                    │                  │회분은 8% 정도로 특히 칼륨이 3% 이상으로            │  

  │          │                    │                  │높다.                                               │  

  │          │                    │                  │  3) 고려사항 : 풍미가 좋아 기호성이 좋고 사료 제조 │  

  │          │                    │                  │시 먼지의 확산을 방지하며 기계의 마모를 줄일        │  

  │          │                    │                  │수 있다. 다량 급여 시 연변을 일으킬 수 있다.        │  

  │          │                    │                  │당밀은 20℃에서의 브릭스(Brix) 계수를 등록하        │  

  │          │                    │                  │여야 하며 파당 또는 폐당을 혼합할 수 있으며,        │  

  │          │                    │                  │혼합물질이 있는 경우 원료명 및 혼합비율을 확        │  

  │          │                    │                  │인하여야 한다.                                      │  

  ├─────┼──────────┼─────────┼──────────────────────────┤  

  │아니스    │보조사료-향미제-    │[최소량] 아니스   │? 아니스(Anise)                                    │  

  │(Anise)   │감미료-아니스       │[최대량]  -       │ - 정의 : 미나리과에 속하는 한해살이풀의 열매를     │  

  │          │                    │[기타]  -         │말린 것으로 분말로 가공하여 사용한다.               │  

  │          │                    │                  │ - 성상/순도/함량 : 회향과 비슷한 레몬향을 풍기며   │  

  │          │                    │                  │시고 단맛이 난다.                                   │  

  │          │                    │                  │ - 검정성분(또는 물질명) : 아니스분말               │  

  │          │                    │                  │ - 기타 : 독특한 향과 단맛을 내는 아네톨이 들어있음 │  

  └─────┴──────────┴─────────┴──────────────────────────┘  

   ※ 식품첨가물공전에 등록된 품목은 첨가물 공전에 있는 품목별 기준 및 규격 서식 활용                             

   아. 식품등에 해당하는 물질을 사용하여 제조한 사료의 분류는 각 물질명에 따라 분류한 사료종류를                  

  기준으로 분류한다.                                                                                              

   자. 식품등에 해당하는 물질의 사용기준(사용가능부위 및 대상 등)은 식품공전 및 식품첨가물공전, 건강              

  기능식품공전의 사용기준을 준용한다.                                                                             

   차. 2014.12.31까지 사료의 범위에서 삭제된 명칭으로 등록된 성분등록증의 유효기간 등은 아래 기준을               

  참고해서 판단                                                                                                   

    1) 식품공전이나 첨가물공전 등에서 사용하는 명칭으로 등록된 것은 계속 유효                                     

    2) 식품공전 등에서 사용하는 명칭이 아닌 명칭으로 등록된 경우(단순 오탈자, 외국어를 한글로 옮기는              

  과정에서의 오류 등)에는 2016.12.31일까지만 유효(「사료 등의 기준 및 규격」 부칙 제4조제4항 참고)                

    3) 다만, 사료의 범위에 해당되지 않는 물질을 신규등록 또는 변경등록하려는 경우, 시도 및 새올행정               

  시스템에 등재되어 있지 않아서 사료범위 추가 필요(사료공정설정 기준 참조)                                        

    4) 식품등에 해당되지 않는 물질(생약 등)을 등록한 것은 명칭의 삭제여부와 관계없이 관련 규정 위반               

  이기 때문에 이미 효력이 없었던 것이고, 행정처분 등의 대상이므로 즉시 취소 등의 조치 필요                        

  17. 제1호부터 제12호까지 규정된 사료의 원료로 사용 가능한 물질은 국립축산과학원 홈페이지에 게시                 

  한다.                                                                                                           

별표 0003: 사료명칭을 세분화하는 기준(제7조제3항 관련)

  [별표 3의3]                                                  

  사료명칭을 세분화하는 기준(제7조제3항 관련)                                                                       

  1. 제조업자 및 수입업자 당 동일한 사료명칭의 사용(성분등록)은 1개를 원칙으로 한다. 다만, 배합사료의 명            

  칭을 성장단계는 동일하나 동물의 생산능력 또는 계절 등에 따라 등록성분을 달리하여 세분할 필요가 있                 

  을 경우에는 그 명칭 다음에 아라비아 숫자를 순서대로 부여(예 : 비육돈1, 비육돈2) 하거나, 주 제품명으               

  로 구분(주 제품명을 괄호로 표시, 예 : 비육돈(제품A), 비육돈(제품B)) 또는 아라비아 숫자와 주 제품명                

  을 혼용하여 구분(예 : 비육돈1(제품A), 비육돈2(제품B)) 할 수 있으며, 세부 기준은 아래와 같다.                      

   가. 동물에 필요한 영양상 근거ㆍ원료사용비율ㆍ명칭의 세분 필요성(축종, 용도, 수출 등) 등이 분명하여야             

  하며, 단순히 등록성분의 함량을 달리하여 명칭을 세분할 수 없다.                                                    

   나. 주 제품명은 1개 사료명칭에 1개 주 제품명 사용을 원칙으로 한다. 다만, 필요한 경우 주 제품명은 여러            

  개를 등록하여 사용할 수 있으나 주요 원료의 함량비율이 90% 이상 동일한 경우(육포 등 등록성분을                     

  제외되는 경우에는 제외)에만 적용한다.                                                                             

   다. 주 제품명을 등록한 경우 보조 제품명은 등록없이 자율적으로 사용 가능(동일 사료로 간주)                        

   라. 보조 제품명은 성분등록증에 등록하는 것이 아닌 포장재나 수입신고 서류 등에 표시하여 사용하는 것임             

   마. 필요한 경우 동일 주 제품명을 여러 사료명칭에 등록하여 사용하는 것도 가능                                     

   바. 주 제품명을 등록한 경우 등록되지 않은 제품명을 표시?광고하는 것은 표시사항 위반 등에 해당됨                 

   사. 주 제품명을 등록하지 않은 경우 포장재 등에 표시된 제품명별로 자가품질검사 및 수입신고 등을 각각 적용함       

   아. 애완동물용은 가급적 아라비아 숫자 대신 주 제품명으로 구분을 권장함                                           

  2. 실수요자의 주문에 의하여 제조하는 경우에는 성분량에 한하여 주문자의 요구에 따라 달리하여 그 명칭               

  앞에 "주문"을 표시하여야 한다(예 : 주문큰소비육후기).                                                             

  3. 제8조제7항에 따른 유기배합사료를 제조하는 경우에는 그 명칭 앞에 "유기"를 표시하여야 한다(예 : 유기             

  큰소비육후기).                                                                                                    

  4. 그 밖의 동물·어류용 배합사료는 그 명칭 앞에 “실험”·“애완(반려)”·“사육” 또는 “관상”을 표시하여야 한  

  다(예 : 실험어린개, 애완어린개, 반려어린개, 사육육성원앙새, 관상어린금붕어)                                       

  5. 사료명칭은 “성장단계 + 동물명”으로 작명하여야 한다. 다만, 전체 성장단계에 모두 사용할 수 있는 경우           

  “성장단계”는 생략하고 “동물명” 또는 “동물종류”로만 작명할 수 있으며(예 : 실험마우스, 애완고양이, 반         

  려고양이, 사육청둥오리, 관상어류), 애완(반려)동물용 사료의 경우 품종·체중·급여목적(주식·간식)으로 세           

  분할 수 있다.(예 : 반려육성고양이-랙돌, 4~7kg, 간식)                                                              

  6. 미생물제를 이용해서 발효한 사료는 그 명칭 앞에 “발효”를 표시할 수 있으며(예 : 발효대두박) 균주를             

  함께 표시하여야 한다(별표 15 제3호자목 참조).                                                                     

  7. 단미사료 및 보조사료는 제1호부터 제6호를 준용할 수 있으며, 세부 사용기준은 아래와 같다.                        

   가. 비타민제 중 명칭에 아라비아 숫자가 있는 경우 등은 아라비아 숫자로 구분은 곤란하고 주 제품명을                

  괄호로 표시해서 구분 가능                                                                                         

   나. “주문”, “유기”, “발효”, “실험”, “애완(반려)”, “사육” 또는 “관상”이라는 표시 가능               

별표 0004: 사료의 일반적 기준 및 규격(제8조제1항 관련)

  [별표 4]                                                               

  사료의 일반적 기준 및 규격(제8조제1항 관련)                                                               

  1. 단미사료의 품목별 기준 및 규격에 수록된 정의 및 영양정보 등은 대략적인 기준 및 규격을 제시한           

  것이며, 적합 여부의 판정기준을 표시하는 것은 아니다. 다만, 특별히 기준 등을 제시한 경우에는 적            

  합 여부의 판정기준이다. 또한 광물성 단미사료는 제2호를 따르며, 유해물질 등의 허용기준은 별표              

  16을 참고한다.                                                                                            

  2.보조사료의 품목별 기준 및 규격에 기재되어 있는 사료의 적합여부는 그 사료의 성분규격·제조방법·         

  확인시험·순도시험·건조감량 및 정량법 등의 규격 및 기준, 표준분석방법 등의 규정에 의하여 판정한          

  다. 다만, 결정형·용해성·액성·안전성·흡광도·응고점·굴절률·선광도·점도·비중 또는 융점은 참고로 제  

  공한 것이며, 적합 여부의 판정기준을 표시하는 것은 아니다.                                                 

  3.물질명의 전후에 「 」을 붙인 것은 각 조의 사료에 수록된 제조용 원제가 되는 사료임을 표시한다.           

  4.원자량은 1993년 국제 원자량표에 따른다. 분자량은 소수점 제2자리까지로 하고 제3자리에서 반올림           

  한다.                                                                                                     

  [중량, 용적 및 온도]                                                                                      

  5. 주요 계량의 단위에 대하여는 다음 기호를 사용한다.                                                      

        미터m           센티미터㎝      밀리리터㎖                                                          

        마이크로미터㎛  나노미터㎚      평방센티미터㎠                                                      

        리터ℓ          밀리리터㎖      마이크로리터㎕                                                      

        톤t(1000kg)     킬로그람㎏      그람g                                                               

        밀리그람㎎      마이크로그람㎍  수은주밀리미터㎜Hg                                                  

  6. 중량백분율을 나타낼 때는 %의 기호를 쓴다. 다만, 용액 100㎖중의 물질함량(g)을 표시할 때에는             

  w/v%, 용액 100㎖중의 물질함량(㎖)을 표시할 때에는 v/v%, 용액 100g중의 물질함량(㎖)을 나타낼               

  때에는 v/w%의 기호를 쓴다. 중량 백만분율을 표시할 때는 ppm의 약호를 쓴다.                                 

  7. 효소의 양은 당해 효소의 효소력 단위로 표시한다.                                                        

  8. 온도의 표시는 셀시우스(Celsius)법을 사용하고, 아라비아 숫자의 오른편 위에 ℃를 붙여 표시한다.          

  9.표준온도는 20℃, 상온은 15～25℃, 실온은 1～30℃, 미온은 30～40℃으로 한다. 냉소는 별도의 규정          

  이 없는 한 15℃이하의 장소를 말한다. 냉수는 10℃이하, 미온탕은 30～40℃, 온탕은 60～70℃, 열탕            

  은 약 100℃의 물을 말한다. “수욕상 또는 수욕중에서 가열한다”란 별도의 규정이 없는 한 끓고 있는          

  수욕 또는 약 100℃의 증기욕을 사용하여 가열함을 말한다.                                                   

  10. “찬곳”이라 함은 별도의 규정이 없는 한 0～15℃의 장소를 말한다.                                      

  [시험]                                                                                                    

  11. 각 조의 사료의 시험에 사용하는 물은 별도의 규정이 없는 한 증류수 또는 정제수로 한다.                  

  12. 떨어지는 방울 수를 측정할 때에는 20℃에서 정제수 20방울을 떨어뜨릴 때, 그 중량이 0.90～1.10g          

  정도 되는 기구를 사용한다.                                                                                

  13. 수치를 정리하여 소수점이하를 n 자리까지 할 때에는 (n+1) 자리까지 수치를 구하고 (n+1) 자리의           

  수치를 사사오입한다.                                                                                      

  14. “이상”, “이하” 또는 “미만”이라고 기재한 것은 시험에서 얻은 수치를 끊어 올리거나 또는 버리지 아  

  니하고 이상, 이하 또는 미만임을 표시하는 것이며 “a～b”라고 기재한 것은 a이상 b이하임을 표시하           

  는 것이다.                                                                                                

  15. 중량을 “정밀히 칭량한다”라고 함은 칭량하여야 할 최소단위(最小單位)를 고려하여 0.1㎎, 0.01㎎ 까      

  지 칭량한다는 것을 말한다. 또, 중량을 “정확하게 칭량한다”라 함은 지시된 수치의 중량을 0.01㎎까          

  지 칭량한다는 것을 말한다.                                                                                

  16. “감압”은 별도의 규정이 없는 한 15mmHg이하로 한다.                                                   

  17. “액성”을 산성, 알카리성, 또는 중성으로 나타낸 것은 별도의 규정이 없는 한, 리트머스시험지(청색       

  또는 적색)를 사용하여 검사한다. 액성을 구체적으로 표시할 때에는 pH값을 쓴다. 또 “미산성”, “약          

  산성”, “강산성”, “미알칼리성”, “약알칼리성”, “강알칼리성” 등으로 기재한 것은 산성 또는 알칼리성  

  의 정도의 개략을 표시한 것으로서 그 pH값의 범위는 다음과 같다.                                            

         미산성 약 5 ～ 약 6.5미알칼리성 약 7.5 ～ 약 9                                                     

         약산성 약 3 ～ 약 5약알칼리성 약 9 ～ 약 11                                                        

         강산성 약 3이하강알칼리성 약 11이상                                                                

  18. 용질명 다음에 용액을 기재하고, 특히 그 용제를 표시하지 않은 것은 수용액을 말한다.                     

  19.용액의 농도를 (1→3), (1→10), (1→100) 등으로 기재한 것은 고체상 1g 또는 액체상 1㎖를 용매에          

  녹여 전량을 각각 3㎖, 10㎖, 100㎖ 등으로 하는 것으로서 비율을 나타낸 것이다. 또한 혼합액을 (1 :           

  10) 또는 (5 : 3 : 1)로 나타낸 것은, 액체 1용량과 10용량의 혼합액 또는 5용량과 3용량과 1용량의             

  혼합액을 나타낸 것이다.                                                                                   

  20. 각 조의 사료의 시험은 별도의 규정이 없는 한, 상온에서 실시하고, 조작 직후(30초 이내)에 관찰하         

  는 것으로 한다. 다만, 온도의 영향이 있는 것의 판정은 표준온도에서의 상태를 기준으로 한다.                 

  21. 성상에 있어서, “백색”이라고 기재되어 있는 것은 백색 또는 거의 백색, “무색”이라고 기재되어 있는    

  것은 무색, 또는 거의 무색을 나타낸 것이다. 색조를 시험하는 데는 따로 규정이 없는 한 고형 시료             

  1g을 백지 위 또는 백지 위에 놓은 시계접시에 취하여 관찰한다. 액상의 시료는 내경 15mm의 무색               

  시험관에 넣고, 백색의 배경을 이용하여 액층을 30mm로 하여 관찰한다. 액상의 시료의 투명성을 시              

  험할 때에는 흑색 또는 백색의 배경을 사용하여, 앞서 기술한 방법을 준용한다. 액상의 시료의 형광             

  을 관찰할 때에는 흑색의 배경을 사용하고, 백색의 배경은 사용하지 않는다.                                   

  22. 성상 항에서, “무취” 또는 “냄새가 없다”고 기재한 것은 냄새가 없던가 또는 거의 냄새가 없는 것을     

  말한다. 냄새를 시험하기 위한 별도의 규정이 없는 경우에는 고형 또는 액상의 시료 1g을 100㎖의               

  비이커에 취하여 실시한다.                                                                                 

  23. 성상 항에서 “용해성”을 나타내는 용어는 다음과 같다. 용해성은 별도의 규정이 없는 한, 고형의 시       

  료는 분말로 한 다음 용매 중에 넣고 20±5℃에서 5분 간격으로 30초씩 강하게 휘저었을 때 30분 이             

  내에 녹는 것을 말한다.                                                                                    

  ┌────────┬─────────────────────┐                                          

  │용어            │용질 1g 또는 1㎖을 녹이는데 필요한 용매량 │                                          

  ├────────┼─────────────────────┤                                          

  │매우 잘 녹는다  │1㎖ 미만                                  │                                          

  │잘 녹는다       │1㎖이상 ～ 10㎖ 미만                      │                                          

  │녹는다          │10㎖이상 ～ 30㎖ 미만                     │                                          

  │조금 녹는다     │30㎖이상 ～ 100㎖ 미만                    │                                          

  │녹기 어렵다     │100㎖이상 ～ 1,000㎖ 미만                 │                                          

  │매우 녹기 어렵다│1,000㎖이상 ～ 10,000㎖ 미만              │                                          

  │거의 녹지 않는다│10,000㎖이상                              │                                          

  └────────┴─────────────────────┘                                          

  24. 시료의 역가를 표시할 때에는 해당 품목에 관하여 규정된 단위를 쓴다.                                    

  25. 네슬러관은 안지름 20mm, 바깥지름 24mm, 밑에서부터 마개의 하면까지의 거리 20cm의 무색유리로            

  만든 공전평저시험관으로서 50㎖의 것을 쓴다. 각 관의 눈금 높이의 차이는 2mm 이하로 한다.                   

  26. 시험에서 시료가 “용매에 녹고, 또는 혼화하는 것”이라 함은 투명하게 녹거나 또는 임의의 비율로         

  투명하게 혼화하는 것을 나타낸다. 다만, 약간의 섬유 또는 잔류물이 인정되어도 상관이 없다.                  

  27. “확인시험”은 시료 또는 시료 중에 함유되어 있는 주성분 등을 그 특성에 따라 확인하는데 필요한         

  시험이다. 별도의 규정이 없는 한, 그 액 2～5㎖를 취하여 안지름 1～1.5cm 시험관으로 한다.                   

  28. “순도시험”은 시료중의 혼재물을 시험하기 위하여 실시하는 것으로서, 각 조의 다른 시험항목과 같        

  이 시료의 순도를 측정하는 시험이며, 보통은 그 잔류물의 종류 및 그 양의 한도를 규정한다. 이 시             

  험의 대상이 되는 혼재물은 시료를 제조하는 과정 또는 보존하는 동안에 혼합이 예상되는 것 또는               

  유해한 잔류물, 예를 들면, 중금속, 비소 등이다. 또한 이물을 썼거나 넣었을 것으로 예상되는 경우             

  에도 이 시험을 행한다.                                                                                    

  29. “투명”, “거의 투명”, “약간 미탁”, “미탁” 및 “혼탁”이라 기재한 것은 다음의 기준에 의한다.    

     탁도 표준원액 : 0.1N 염산 14.1㎖에 물을 가하여 50㎖로 한다. 이 액 1㎖는 Cl 1㎎을 함유한다.             

     탁도 표준용액 : 탁도 표준원액 10㎖에 물을 가하여 1000㎖를 만든다. 이 액 1㎖는 Cl 0.01㎎을 함유         

  한다.                                                                                                     

   가. “투명”이라 함은 탁도 표준용액 0.2㎖에 물을 넣어 20㎖로 하고, 여기에 묽은 질산(1→3) 1㎖, 2w/v%     

  덱스트린용액 0.2㎖ 및 2w/v% 질산은용액 1㎖을 넣어, 15분간 방치한 때의 탁도 이하로 한다. 다만, 부          

  유물 등의 이물질 혼입이 거의 없어야 한다.                                                                 

   나. “거의 투명”이라 함은 탁도 표준용액 0.5㎖에 물을 넣어 20㎖로 하고, 여기에 묽은 질산(1→3) 1㎖,      

  2w/v% 덱스트린용액 0.2㎖ 및 2w/v% 질산은용액 1㎖을 넣고, 15분간 방치한 때의 탁도를 말한다. 다             

  만, 부유물 등의 이물의 혼입이 거의 없어야 한다.                                                           

   다. “약간 미탁”이라 함은 탁도 표준용액 1.2㎖에 물을 넣어 20㎖로 하고, 여기에 묽은 질산(1→3) 1㎖,      

  2w/v% 덱스트린 용액 0.2㎖ 및 2w/v% 질산은용액 1㎖을 넣고, 15분간 방치한 때의 탁도로 한다.                 

   라. “미탁”이라 함은 탁도 표준용액 6㎖에 물을 넣어 20㎖로 하고, 여기에 묽은 질산(1→3) 1㎖, 2w/v% 덱    

  스트린용액 0.2㎖ 및 2w/v% 질산은용액 1㎖을 넣어, 15분간 방치한 때의 탁도로 한다.                          

   마. “혼탁”이라 함은 탁도 표준용액 0.3㎖에 물을 넣어 20㎖로 하고, 여기에 묽은 질산(1→3) 1㎖, 2w/v%     

  덱스트린용액 0.2㎖ 및 2w/v% 질산은용액 1㎖을 넣어, 15분간 방치한 때의 탁도로 한다.                        

  30. “용액상”을 볼 때에는 따로 규정이 없는 한, 시료를 용제에 넣고 30초～5분간 흔들어 섞은 다음에         

  관찰한다.                                                                                                 

  31. 건조 또는 가열할 때에 “항량”이라 함은, 별도의 규정이 없는 한 계속 1시간 정도 건조 또는 강열할       

  때에 전후의 칭량차가 전회에 측정한 건조물 또는 강열한 잔류물 질량의 0.10% 이하일 때를 말한다.             

  다만, 화학천칭을 쓴 때는 칭량차가 0.5 ㎎이하, 세미마이크로 화학천칭을 쓴 때는 0.05㎎이하, 마이크          

  로 화학천칭을 쓴 때는 0.005㎎이하의 경우에는 무시할 수 있는 양으로 보고 항량으로 간주한다.                

  32. “정량법”은 시료의 조성, 성분함량, 함유단위 등을 물리적, 화학적 또는 생물학적 방법으로 측정하는      

  시험법이다.                                                                                               

  33. 정량에 사용되는 시료 채취량의 경우 “약”이라고 붙인 것은, 기재된 양의 ±10%의 범위를 말한다. 또      

  한 시료 또는 표준품에 대하여 간단히 “건조했음”이라고 기재되어 있을 경우는 각 조 또는 표준품             

  의 건조감량의 항과 같은 조건에서 건조한 것을 나타내고, 시료에 대해 간단히 “강열하여”라고 기재           

  되어 있을 경우는 각 조의 강열감량의 항과 같은 조건에서 강열한 것을 나타낸다.                              

  34. 각 조의 사료의 정량법에서 얻은 성분함량의 값에 대하여, 단지 어떤 % 이상을 표시하고, 그 상한을         

  나타내지 않았을 경우는 101.0%를 상한으로 한다. 또한 함량의 항에 있어, 예를 들면, 「표시량의               

  90-110%에 대응하는 순품을 포함한다」라고 규정한 것은 화학적 순물질 또는 여기에 대응하는 물                

  질을 100% 함유하도록 제조하여, 이것을 정량할 때 상기의 범위 내에 있다는 것을 나타낸다. 또한,              

  「표시 역가의 85-125%를 포함한다」라고 규정한 것은 유효기간 중 표시 역가를 유지하도록 제조                

  하여 이것을 정량 할 때 상기의 범위 내에 있다는 것을 말한다.                                               

  35.단미사료·보조사료의 품목별 기준 및 규격에서 규정하는 시험법 이외의 방법으로서 그 시험방법이           

  보다 더 정확도와 정밀도가 클 때에는 그 방법을 사용할 수 있다. 다만, 그 결과가 의심스럽거나 판             

  정에 영향을 미칠 수 있다고 인정할 때에는 규정한 방법에 의하여 시험하고 판정한다.                          

  36.단미사료·보조사료의 품목별 기준 및 규격에서 기준·규격이 정하여지지 아니하였거나 기준·규격이         

  정하여져 있어도 시험방법이 수록되어 있지 아니한 경우, 별표 25에 표준분석방법이 제시되지 아니              

  한 경우에는 잠정적으로 「식품 등의 기준 및 규격」, 「식품첨가물의 기준 및 규격」, 「건강기능식            

  품의 기준 및 규격」, 「먹는물관리법」, 국제식품규격위원회(CAC?Codex Alimentarius                         

  Commission) 규정과 AOAC(Association of Official Analytical Chemists)의 시험방법을 준용할 수               

  있으며, 국제적 규정이 없는 경우에는 농림축산식품부장관이 해당물질별 관련 자료와 선진외국의 엄             

  격한 기준 등을 종합적으로 검토하여 판정할 수 있다.                                                        

  [용기]                                                                                                    

  37. “용기”라 함은 각 조의 사료를 넣어두는 물건이며 마개, 뚜껑 등 용기의 구성의 일부로서 이용하는        

  물질을 포함한다.                                                                                          

  38. “밀폐용기”라 함은 일상의 취급 또는 보통의 보존상태에서 액상 또는 고형의 이물이 들어가는 것을        

  방지하고 내용물인 미량첨가사료가 손실되지 않도록 보호할 수 있는 용기를 말한다. 밀폐용기 규정              

  이 있는 경우는 기밀용기 또는 밀봉용기도 쓸 수 있다.                                                       

  39. “기밀용기”라 함은 일상의 취급 또는 보통의 보존상태에서 액상 또는 고형의 이물 또는 수분이 침투       

  하지 않고 내용물인 미량첨가사료가 손실, 풍건, 조해, 또는 증발하지 않도록 보호할 수 있는 용기를            

  말한다. 기밀용기 규정이 있는 경우에는 밀봉용기도 쓸 수 있다.                                              

  40. “밀봉용기”라 함은 일상의 취급 또는 보통의 보존상태에서 기체 또는 미생물의 침투 염려가 없는 용       

  기를 말한다.                                                                                              

  41. “차광한 용기”라 함은 광선의 투과를 방지하는 용기 또는 광선의 투과를 방지하는 포장을 갖춘 용기       

  를 말한다.                                                                                                

  [일반 제조방법 기준]                                                                                      

  42. 단미사료·보조사료는 품목별 기준 및 규격(별표 5, 6)에 적합하여야 한다.                                

  43. 단미사료·보조사료의 품목별 기준 및 규격에 수록된 2개 이상의 사료를 혼합하여 제조하는 경우에는        

  각각 당해 사료의 정량시험·확인시험 그 외의 시험이 곤란하지 않도록 하여야 한다.                           

  44. 액상의 사료는 단미사료·보조사료의 품목별 기준 및 규격에 수록되어 있는 것만 제조하여야 한다.          

  45.단미사료·보조사료의 품목별 기준 및 규격에 수록된 사료를 제조하는데 사용되는 부형물질·희석물질        

  은 다음 각 호의 요건에 모두 만족하여야 한다.                                                              

   가. 유해한 물질이 들어있지 않아야 하고, 병원미생물에 의하여 오염되지 않았거나 이와 같은 염려가 없는      

  물질일 것                                                                                                 

   나. 당해 사료의 효과를 저해하지 않을 것                                                                  

   다.당해 사료의 성분의 정량시험·확인시험 그 외의 시험이 곤란하지 않을 것                                 

   라. 단미사료·보조사료의 품목별 기준 및 규격에 수록된 사료를 사용하여 혼합 또는 제조할 것                

   마. 단미사료·보조사료의 품목별 기준 및 규격에 수록된 사료와 부형물질은 균일하게 혼합할 것               

   바. 원제를 희석하여 제조한 사료의 경우에는 성분함량·희석비율·부형제의 명칭 등의 사항을 반드시 표시할   

  것                                                                                                        

  46. 반추동물유래단백질을 포함한 육골분은 소해면상뇌증(일명 : 광우병)의 매개로 불활성화하기 위하여 육      

  골분사료의 원료를 가열처리 전에 최대 50㎜ 입자로 절단한 후 제조하여야 한다.                               

  [보존방법 기준]                                                                                           

  47.유해한 물질이 들어있거나 혹은 병원미생물에 의해 오염되었거나 또는 이와 같은 염려가 있는 장소 또        

  는 용기 및 포장재료에 보관 또는 보존하여서는 아니 된다.                                                   

  48. 보존방법이 정하여져 있는 사료는 그 기준을 준수하여 보존하여야 한다.                                   

별표 0005: 단미사료의 품목별 기준 및 규격(제8조제1항 관련)

  [별표 5] <신설 2014.12.8., 개정 2015.8.21., 개정 2016.7.1., 개정 2016.12.01., 개정 2017.4.1., 개정 2019.10.24.,   

  개정 2021.5.24., 개정 2021.12.29, 개정 2022.7.22., 2023.10.04., 개정 2024.04.01.>                                 

  단미사료의 품목별 기준 및 규격(제8조제1항 관련)                                                                   

1. 식물성

 가. 곡류

┌─────────────────────────────────────────────────┐

│곡류는 사료 성분등록 시 (최소량) 조단백질, (최대량) 수분, 조섬유 및 조회분을 등록하도록 되어 있다.│

└─────────────────────────────────────────────────┘

 ? 귀리(oat; 연맥)

  1) 정의 : 귀리는 화본과에 속하는 식물의 종실이다.

  2) 영양정보 : 조단백질 함량은 생산지역에 따라 다르지만 약 10～13%이고 조지방 함량은 약 4.8～5.5% 정도로 옥수수보다 높으나 겉껍질이 두꺼워 조섬유 함량이 약 10～11%에 이른다.

  3) 고려사항 : 베타글루칸 함량이 약 3～7%로 다른 곡류에 비해 상당히 높아, 다량 급여 시 소화물의 점도를 높여 소화장애를 일으킬 수 있다. 온도가 높을 때 산패가 빨리 진행되므로 가능한 서늘하고 통풍이 잘 되는 곳에서 보관하는 것이 좋다. 다른 곡류보다 높은 조섬유 함량으로 인해 단위동물에서의 가소화 에너지가가 낮은 편이므로 반추동물 또는 말의 사료로 더 적합하다. 

 ? 메밀(buckwheat; 교맥)

  1) 정의 : 메밀은 여귀과에 속하는 식물의 종실이다. 엄밀한 의미에서 곡류에 속하지 않지만 영양적 특성은 곡류와 상당히 유사하다.

  2) 영양정보 : 메밀의 껍질은 목질화된 과피로 알곡 중량의 약 18～20% 또는 그 이상을 차지하며 통메밀의 경우 조단백질 약 10～11%, 조섬유 약 7～11% 및 조지방 약 2.4～2.8% 정도를 함유하고 있다. 메밀은 귀리에 비해 가소화영양소총량이 낮은 편이다.

  3) 고려사항 : 다른 곡류에 비해 기호성이 낮으므로, 기호성이 높은 다른 곡류와 섞어서 급여하는 것이 좋다. 

 ? 밀(wheat; 소맥)

  1) 정의 : 밀은 화본과에 속하는 한해살이 식물의 종실이다. 전통적으로 겨울종 또는 봄종으로 분류되고 기후 및 토양의 질에 따라 수확량이 다르므로 지역별로 밀의 종이 구분되는 것이 일반적이다. 

  2) 영양정보 : 조단백질 함량은 약 11～13%로 보리나 옥수수보다 높은 편이며, 가용무질소물 함량은 약 68～72%이다. 조섬유 함량은 약 2.1～3.0%이고 조지방 함량은 약 1.3～1.9% 정도이다.

  3) 고려사항 : 급여 전에 분쇄하는 것이 소화율 향상을 위해 좋으며 곱게 분쇄할수록 소화율 및 사료 이용률이 좋아지고 펠렛팅 시에도 품질이 향상된다. 하지만 입자도가 너무 낮을 경우에는 돼지에서 위궤양을 일으킬 수 있다. 

 ? 보리(barley; 대맥)

  1) 정의 : 보리는 화본과에 속하는 한해살이 또는 두해살이 식물의 종실이다. 보리의 품종은 6조종, 2조종 및 부제조종으로 나누어진다.

  2) 영양정보 : 조단백질 약 9.5～13%, 조섬유 약 3.9～5.5%, 조지방 약 1.8～2.2% 및 가용무질소물 약 67～69%를 함유하고 있다. 좋은 에너지사료이며 옥수수에 비해 단백질 함량이 높다. 

  3) 고려사항 : 옥수수에 비해 섬유질이 함량이 높아 이용 가능한 에너지 함량이 낮기 때문에 사료적 가치가 옥수수보다 낮다. 6조종은 수량이 많아 식량 및 사료용으로 주로 이용되며, 2조종 및 부제조종의 경우 수량은 적으나 알이 굵고 발아력이 강해서 맥주용에 주로 이용된다. 

 ? 수수(sorghum, milo; 고량)

  1) 정의 : 수수는 화본과에 속하는 한해살이 식물의 종실이다. 원산지는 열대 아프리카이며 덥고 건조한 지역에서 많이 재배된다. 재배 목적에 따라 키가 작고 종실 수량이 많은 알곡용 수수(grain sorghum), 키가 크고 대가 굵으며 지상부 수량이 높아 주로 사일리지로 이용되는 사료용 수수(forage sorghum) 및 줄기에 감미로운 즙액이 들어 있는 단수수(sweet sorghum)로 나눌 수 있다. 

  2) 영양정보 : 수수의 영양소 함량과 사료적 가치는 옥수수와 비슷하다. 조단백질 약 10～11%, 가용무질소물 약 68～73%, 조섬유 약 1.0～3.0% 및 조지방 약 2.0～4.0%를 함유하고 있다.

  3) 고려사항 : 사료로 이용할 때 주요 고려 사항은 항영양인자인 탄닌의 함량이다. 탄닌 함량이 0.5% 이하인 경우 저탄닌종, 0.5% 이상인 경우 고탄닌종으로 분류한다.  

 ? 쌀(rice; 현미) 

  1) 정의 : 벼에서 왕겨를 벗겨낸 부분이 쌀(현미)이 된다.

  2) 영양정보 : 쌀은 조섬유 약 1.0～1.4%, 조단백질 약 6.2～9.1% 및 조지방 약 2.3～3.5%를 함유하고 있으며, 가용무질소물 함량은 옥수수보다 낮은 약 67%이다. 사료적 가치는 다른 곡류와 비슷하며 옥수수나 밀과 같은 곡류에 일반적으로 부족한 영양소들은 쌀도 마찬가지로 적은 함량을 가지고 있다. 비타민 A, D, K 및 캐로틴은 거의 들어 있지 않다. 비타민 E, 티아민, 리보플라빈 및 엽산의 함량은 다른 곡류들에 비해 상대적으로 낮으나, 콜린의 함량은 높은 편이다.

  3) 고려사항 : 사료로는 널리 쓰이지 않으며, 소량의 등외품 및 백쇄미 등이 사료로 사용되고 있다.  

 ? 옥수수(corn, maize)

  1) 정의 : 옥수수는 화본과에 속하는 한해살이 식물의 알곡이며, 원산지는 남아메리카 북부로 추정된다. 단위면적당 가소화영양소총량과 에너지의 생산량이 높은 편이기 때문에 상당히 많이 사용된다.

  2) 영양정보 : 가소화영양소총량이 약 75～82%이고 가용무질소물의 함량이 약 71～78%로 높은 반면 조섬유의 함량은 약 1.7～2.3%로 낮다. 조단백질 함량은 약 7.0～8.3%로 타 곡류에 비하여 낮은 편이다. 미량광물질과 일부 비타민들은 매우 부족하며, 칼슘 함량이 약 0.01～0.04%이고, 인의 함량은 약 0.23～0.35%이다. 특히 인의 이용성은 상당히 낮다. 황색 옥수수는 프로비타민 A인 베타캐로틴을 상당히 많이 함유하고 있으나, 백색 옥수수는 거의 함유하고 있지 않다. 비타민 D는 거의 함유하고 있지 않으나 티아민의 함량은 높은 편이다. 밀이나 보리에 비하여 니코틴산의 함량이 낮고, 다른 곡류와 마찬가지로 리보플라빈의 함량도 낮은 편이다.

  3) 고려사항 : 일부 영양소의 불균형 문제만 없다면 거의 모든 가축에게 아무런 제한 조건 없이 먹일 수 있는 우수한 곡류사료이다. 

 ? 조(millet)

  1) 정의 : 식용과 가축사료로 사용되는 단단한 종실을 생산하는 작물이며 뚜렷한 분류학적 그룹을 형성하지 못하고 비슷한 특성과 용도에 기초하여 분류된다. 가장 널리 재배되는 조는 진주조(pearl millet) 품종으로 중국과 인도에서 널리 재배되고 있다.

  2) 영양정보 : 전형적인 조의 조단백질 함량은 약 11～12%이고 가용무질소물은 약 60～71%이다. 기장의 경우 피가 붙어 있어서 조지방 약 3.3～4.0%, 조섬유 약 4.2～7.5%를 함유한다. 필수아미노산 중에서 라이신 약 0.18～0.23%, 메티오닌 약 0.28～0.31%, 트레오닌 약 0.40～0.45%, 트립토판 약 0.16～0.17% 정도를 함유하고 있다. 칼슘 약 0.03% 및 인 약 0.31%를 함유하고 있으며 비타민 B군이 상대적으로 풍부하다.

  3) 고려사항 : 트립토판 함량이 높아서 니코틴산 결핍증을 완화시키는데 효과가 있다. 하지만 라이신이 부족하기 때문에 아미노산 조성을 고려하여 사용해야 한다.  

 ? 트리티케일(triticale; 라이밀)

  1) 정의 : 트리티케일은 밀과 호밀을 혼파 재배하여 만든 식물의 알곡이다. 재배적 특성(내한성 및 그 밖의 저항성)은 호밀에 가까우며 알곡의 품질은 호밀보다 우수하다.

  2) 영양정보 : 조단백질 함량이 약 12～20%이고, 아미노산 조성은 밀과 대등하나 호밀보다는 우수한 편이다. 조섬유 약 2.3～2.8%, 조지방 약 1.3～2.2%를 함유하고 있고 가용무질소물 함량은 약 68～70%이다. 밀과 유사하게 파이테이즈를 함유하고 있어서 옥수수나 수수와 같은 곡류에 비해 인의 이용성이 높다.

  3) 고려사항 : 트립신 억제인자와 알칼로이드를 포함하기도 한다. 급여수준이 높은 경우 다량의 알칼로이드는 모돈에서 무유증을 유발하기도 하며, 자돈의 생시체중 및 생존율을 저하시키는 것으로 알려져 있다. 

 ? 피(barnyard grass, barnyard millet)

  1) 정의 : 피는 벼과에 속하는 1년생 잡초의 알곡으로 생태 및 형태적인 여러 특성이 다른 변이를 나타내는 것들이 많다.

  2) 영양정보 : 영양성분은 조와 비슷하며 조단백질 약 7.2～11%, 조섬유 약 3.6～12%, 조지방 약 4.0～6.0% 및 가용무질소물 약 57～67%를 함유하고 있다. 광물질 중에서 칼슘의 함량은 약 0.02%, 인의 함량은 약 0.40%이다. 조단백질, 조지방 및 비타민 B1 등이 많이 함유되어 있다.

  3) 고려사항 : 피는 벼보다 배수나 비옥도에 대한 적응성이 강하고 농사를 지을 수 없는 저습 한계지역이나 홍수 다발지역, 간척지 등에서도 토양을 가리지 않고 잘 자라며, 수량, 기호성 및 품질도 높기 때문에 벼 대체 사료작물로 매우 적합하다. 관상 조류 사료로 많이 사용된다. 

 ? 호밀(rye; 호맥)

  1) 정의 : 호밀은 화본과에 속하는 곡물이다. 뿌리가 잘 발달하고 내건성과 내한성이 강해서 밀의 재배가 곤란한 북부지대, 건조 척박지 혹은 하천부지와 같이 다른 작물의 재배가 거의 불가능한 토양에서도 재배할 수 있는 작물이다.

  2) 영양정보 : 호밀은 조지방 함량이 약 1.1～1.9%로 낮음에도 불구하고 조섬유 함량이 약 1.8～3.7%로 낮기 때문에 가소화에너지가 상당히 높은 편이다. 조단백질 함량은 약 9.2～13%이며, 라이신 등 필수아미노산이 풍부하다.

  3) 고려사항 : 호밀은 곰팡이의 오염에 민감하다. 특히 맥각병(ergot)을 일으키는 맥각균(claviceps purpurea)에 가장 취약하다. 맥각균은 가축에서 높은 독성을 보이므로 호밀을 사료로 사용할 시에는 맥각균 함량이 0.1% 미만인 것을 사용해야 한다. 

 나. 강피류(곡물부산물류)

┌────────────────────────────────────────────────┐

│강피류(곡물부산물류)는 사료 성분등록 시 (최대량) 수분, 조섬유 및 조회분을 등록하도록 되어 있다. │

└────────────────────────────────────────────────┘

 ? 기장피(proso millet hull, common millet hull)

 1) 정의 : 기장을 도정할 때 생기는 부산물을 총칭한다

 2) 영양정보 : 조단백질 약6%, 조지방 약1.69%, 조섬유 약 33.92%, 조회분10.17% 정도를 함유하고 있다. 

 3) 고려사항 : 반추동물의 경우 높은 섬유소를 가지고 있지만 반추동물 이용시 큰 문제는 없다. 돼지의 경우 낮은 가소화에너지가로 사료에 20%정도 이용하면 사료효율이 감소하여 사료로 이용시 고려해야 한다. 가금의 경우 사료 원료로 20% 정도 이용하면 일당증체율이 5%정도 감소하여 사료 원료로 이용시 고려해야한다.

 ? 귀리겨(oat bran; 연맥강)

  1) 정의 : 연맥(귀리)의 알곡으로부터 오트밀 등의 식품을 제조할 때 부산물로 분리되는 연맥의 과피로 약간의 전분 및 미세한 껍질이 혼입되어 있다.

  2) 영양정보 : 조섬유 약 26%, 중성세제불용성섬유소 약 19% 정도를 함유하고 있다. 

  3) 고려사항 : 육성돈 사료에서 귀리겨를 10% 이상 사용할 경우 귀리겨를 사용하지 않은 사료에 비해 건물 소화율이 감소하고 분 중 인의 함량이 증가하는 것으로 알려져 있다. 

 ? 당밀흡착강피류(당밀흡착사료)

  1) 정의 : 강피류를 주원료로 하며, 혼합물질로 당밀을 사용한다.

  2) 영양정보 : 

  3) 고려사항 : 사용된 원료명과 혼합비율을 확인하여야 한다. 

 ? 대두피(soybean hull)

  1) 정의 : 대두껍질을 벗겨내는 공정에서 생산되며, 대두 중량의 약 12% 정도가 대두피로 생산된다.

  2) 영양정보 : 조단백질 함량이 약 10% 정도이고, 섬유질 함량(NDF 67%, ADF 49%)이 높고 소화율(TDN 77%)이 높다.

  3) 고려사항 : 반추동물의 에너지원 또는 조사료로 이용되고 있다.  

 ? 땅콩피(peanut hulls; 낙화생피)

  1) 정의 : 땅콩 수확 후 가공하는 과정에서 발생하는 깍지를 말하며, 땅콩 중량의 약 33% 정도가 땅콩피로 생산된다.

  2) 영양정보 : 조섬유 함량이 약 57% 정도이다.

  3) 고려사항 : 조섬유 함량이 매우 높아 주로 양계장의 깔짚 또는 반추동물사료로 이용되고 있다.  

 ? 루핀피(lupin hulls)

  1) 정의 : 루핀 종실의 바깥껍질을 말한다.

  2) 영양정보 : 조섬유 함량이 약 35% 이상으로 높은 편이다.

  3) 고려사항 : 루핀 종실은 섬유소 함량이 높기 때문에 껍질은 반추동물사료에, 알맹이는 단위동물사료에 주로 사용한다. 

 ? 말분(wheat red dog, wheat shorts)

  1) 정의 : 제분과정에서 밀가루를 빼내고 체에 남은 부산물을 다시 분쇄하여 입자도에 따라 다시 분리하는데, 여기서 밀기울과 등외밀가루의 중간 크기를 가진 것을 말분이라 한다.

  2) 영양정보 : 조단백질 함량은 약 14～15%이며, 조섬유 함량은 약 4.0～6.5% 정도이다.

  3) 고려사항 : 말분은 밀기울에 비해 기호성이 낮지만 단백질 함량이나 에너지가가 높으므로 밀기울 대신 사용할 수도 있다. 닭에서는 사료내 약 10～20% 이하로 사용하는 것이 유리하다. 

 ? 면실피(cottonseed hulls)

  1) 정의 : 면실 종실의 바깥껍질을 말한다.

  2) 영양정보 : 조섬유 약 41～48%를 함유하고 있다.

  3) 고려사항 : 주로 완전배합사료(total mixed ration, TMR) 배합 시 섬유소 공급원으로 이용한다. 

 ? 밀기울(wheat bran; 소맥피)

  1) 정의 : 제분과정에서 밀가루를 빼내고 체에 남은 부산물을 다시 분쇄하여 입자도에 따라 다시 분리하는데, 여기서 입자도가 가장 큰 것을 밀기울이라 한다.

  2) 영양정보 : 조섬유 성분은 약 8.6～9.9% 정도이다. 인의 함량은 약 1.2%로 비교적 높은데 반해 칼슘 함량은 약 0.14%로 낮은 편이며, 인의 이용성은 약 30% 미만으로 상당히 낮다. 미량광물질 중 망간이 풍부한데 대두박의 망간 함량이 약 30～40mg/kg인데 비하여 밀기울은 약 115～160mg/kg 정도를 함유하고 있다. 비타민 A와 D의 함량은 낮지만 비타민 E의 경우 약 10～14mg/kg으로 상당량 함유되어 있다. 또한 티아민 및 니코틴산 등이 풍부하고, 리보플라빈의 경우 밀보다 약 2배 정도 많이 함유하고 있으나 높은 수준은 아니다.

  3) 고려사항 : 기호성이 높고 용적중이 낮다. 

 ? 보릿겨(barley bran; 맥강)

  1) 정의 : 겉보리(대맥) 또는 쌀보리(나맥)를 도정할 때 생기는 부산물을 총칭한다.

  2) 영양정보 : 조섬유 함량은 약 10～11% 정도이다.

  3) 고려사항 : 사료적 가치는 도정도 및 거친 외피의 함유도에 따라 다르다. 보릿겨는 주로 돼지와 육우의 사료로 이용되며, 닭의 경우 고운 보릿겨를 약 5% 정도까지만 사용하는 것이 좋다. 

 ? 수수겨(milo bran, sorghum bran)

  1) 정의 : 수수이삭을 탈곡한 다음 알곡을 도정하는 과정에서 생기는 부산물로, 과피가 주종을 이루고 있으며 약간의 수수쌀과 수수껍질이 혼입되어 있다.

  2) 영양정보 : 조섬유 함량은 약 5.0～6.7% 정도이다.

  3) 고려사항 : 젖소, 육우 및 닭 등의 사료에 밀기울 또는 쌀겨의 대용으로 일부 사용할 수 있다. 

 ? 쌀겨(rice bran; 미강, 탈지 포함)

  1) 정의 : 현미를 백미로 도정하는 공정에서 분리되는 것으로 과피 및 중피가 혼합된 것이다.

  2) 영양정보 : 생쌀겨의 경우 조섬유 함량은 약 5.2～7.7%이고, 탈지쌀겨의 조섬유 함량은 약 8.3～11% 정도이다. 광물질 중에서는 칼슘 함량이 적고 인 및 망간 등이 상대적으로 많이 함유되어 있다. 조지방 함량은 생쌀겨의 경우 약 14.8%, 탈지쌀겨의 경우 약 1.8% 정도이다.

  3) 고려사항 : 보통 현미의 약 5～8% 정도가 쌀겨로 생산되며, 쌀겨의 사료적 가치나 생산량은 도정률에 따라 다르다. 불포화지방산의 함량이 높아 산패 위험성이 있어 저장이 어려우며, 산가(AV)는 70 이하이어야 한다. 

 ? 아몬드피(almond hulls)

  1) 정의 : 아몬드(단백질과 기름함량이 많고 땅콩처럼 생긴 편도나무 열매로서 간식용으로 쓰임)의 겉껍질을 말한다.

  2) 영양정보 : 아몬드피의 중성세제불용성섬유소 함량은 약 21～54% 정도로 변이가 매우 크고, 조단백질 함량은 약 5.9～6.1% 정도이다.

  3) 고려사항 : 영양적 가치는 상당히 낮으나 반추동물사료의 섬유소 공급원으로 이용될 수 있다. 

 ? 옥수수단백피(corn gluten feed; 옥수수글루텐피드) 

  1) 정의 : 옥수수에서 전분과 시럽을 제조하기 위한 습식가공 공정에서 대부분의 전분, 글루텐 및 배아를 뽑아내고 남은 찌꺼기를 건조시킨 것. 옥수수피에 옥수수농후침지액(corn steep liquor, CSL)을 첨가하여 조단백질 함량을 높인 것을 포함한다.

  2) 영양정보 : 단백질 함량이 약 23% 정도이다.

  3) 고려사항 : 미국에서는 옥수수에서 호미니(hominy)를 제조할 때 생산되는 부산물인 호미니피드(hominy feed)가 유사하다.  

 ? 옥수수피(corn bran; 옥수수겨, 옥피) 

  1) 정의 : 옥수수를 도정하여 옥수수분을 만들 때 생산되는 부산물이다. 종피, 배아 및 약간의 전분층 등으로 구성되어 있는 옥수수겨를 함유한 옥수수부산물을 말한다. 

  2) 영양정보 : 조섬유의 함량은 다른 강피류보다 낮은 약 6.3～11% 정도이다.

  3) 고려사항 : 

 ? 율무피(adlay hull, Job‘s tears hull)

  1) 정의 : 율무를 도정할 때 생기는 부산물을 총칭한다. 

  2) 영양정보 : 조단백질 약3%, 조지방 약2%, 조섬유 약 39.25%, 조회분 10% 정도를 함유하고 있다. 

  3) 고려사항 : 영양적 가치는 상당히 낮으나 반추동물사료의 섬유소 공급원으로 이용될 수 있다.

 ? 조겨(millet bran)

  1) 정의 : 조를 찧을 때 나오는 껍질을 말한다.

  2) 영양정보 : 조섬유 함량은 약 27～34% 정도이며, 다량광물질 중 칼슘은 약 0.04%, 인은 약 0.14% 함유하고 있다.

  3) 고려사항 :  

 ? 케슈너트피(cashew nut testa)

  1) 정의 : 캐슈너트 알맹이(kernel)를 감싸고 있는 얇은 속껍질(내피, testa)을 말한다.

  2) 영양정보 : 수분 8∼10%, 조단백질 10.5∼11.5%, 조지방 9.0∼10.5%, 조회분 1.5∼2.5%, 조섬유 11.5∼13.0% 정도이다.

  3) 고려사항 : 항영양인자인 탄닌의 영향으로 사료 내 배합수준이 높아질수록 기호성이 떨어질 수 있으며, 캐슈너트피 내 카테킨(catechin)에 의한 티아민(thiamine) 함량 감소 효과가 있을 수 있어 배합비 설계 시 주의가 필요하다.

 ? 커피원두피(coffee husk)

  1) 정의 : 커피원두(coffee bean)를 둘러싸고 있는 껍질 부분을 건조 및 가공 처리한 것

  2) 영양정보 : 조단백질 함량은 약 4.1∼14.0%, 조섬유 함량은 16.2∼51.8% 내외로 탈피방법에 따라 차이가 있다.

  3) 고려사항 : 항영양인자로서 탄닌과 카페인을 함유하고 있어 기호성이 떨어질 수 있으며, 특히 젖소와 말의 경우에는 독성을 띠기도 하므로 사료 배합량 및 급여량 조절에 주의하여야 한다.

 ? 해바라기피(sunflower seed hulls)

  1) 정의 : 해바라기씨의 껍질 부분으로 외피 제거 과정에서 발생하는 부산물을 말한다. 

  2) 영양정보 : 조섬유 약 44% 정도를 함유하고 있다.

  3) 고려사항 : 용적중이 낮은 편이다.  

 다. 박류(단백질류)

┌──────────────────────────────────────────────────┐

│박류는 사료 성분등록 시 (최소량) 조단백질, (최대량) 수분 (13% 이하), 조섬유 및 조회분을 등록하도록  │

│되어 있다. 기름 또는 수분 등의 액상분획을 추출하고 남은 부분을 분말화한 것을 말한다.                │

└──────────────────────────────────────────────────┘

 ? 겨자박(mustard seed meal)

  1) 정의 : 겨자종실(Brassica sp.)에서 기름을 짠 깻묵을 말한다. 겨자유박. 겨자종실박.

  2) 영양정보 : 수분 10∼12%, 조단백질 26∼39%, 조지방 2∼11%, 조섬유 3∼18%, 조회분 6∼10% 정도이다.

  3) 고려사항 : 가축 사료에서 단백질원의 일부로 이용할 수 있다. 황색겨자는 hydroxybenzylglucosinolates를 그리고 갈색겨자는 allylglucosinolate를 함유하고 있기 때문에 사용량을 제한해야 한다.

 ? 고추씨박(red pepper seed oil meal)

  1) 정의 : 고추씨에서 기름을 짜고 남은 부산물이다.

  2) 영양정보 : 조단백질 함량이 약 21～23% 정도로 낮으며, 조섬유 함량은 약 27～32%에 이르므로 에너지 함량도 매우 낮은 사료이다.

  3) 고려사항 : 조섬유 함량이 높아 축우사료에 사용함이 바람직하나 매운 맛 때문에 급여량에 한계가 있다.

 ? 구아박(guava seed oil meal)

  1) 정의 : 구아바씨에서 기름 및 검(결착제)을 짜고 남은 부산물이다.

  2) 영양정보 : 조단백질 약 46%, 조섬유를 약 10%, 조지방 5% 정도를 함유하고 있다.

  3) 고려사항 : 단백질함량이 우수하여 단백질공급원으로 이용이 가능하다.

 ? 귀리박(oat oil meal)

  1) 정의 : 귀리알곡에서 기름을 짜고 남은 부산물이다. 

  2) 영양정보 : 조단백질 약 14% 정도를 함유하고 있다.

  3) 고려사항 :  

 ? 농축단백(protein concentrates) 

  1) 정의 : 농축단백은 여러 가지 형태로 많이 이용되는데, 주로 농축대두단백(soyprotein concentrates; SPC)과 농축감자단백, 농축쌀단백, 농축완두단백이 있다. 농축대두단백은 정선된 탈피 대두로부터 대부분의 기름과 수용성 비단백태 성분(주로 수용성탄수화물)을 제거한 농축형태이다. 농축감자단백 및 농축쌀단백은 감자전분 또는 쌀전분 제조공정에서 생기는 단백질을 분리시켜 농축 건조한 형태이다.

  2) 영양정보 : 조단백질 함량은 농축대두단백이 약 50～70%, 농축감자단백이 약 75～84%, 농축쌀단백이 60～80% 정도이다. 

  3) 고려사항 : 대두박의 단백질분해효소 저해인자가 있어 어린 가축, 특히 자돈에서 설사 등의 문제가 생기기 때문에 대두박을 추가로 가공한 분리대두단백(isolated soy protein; ISP) 및 농축대두단백 등을 사용하기도 한다.  

 ? 대두박(soybean meal, soybean oil meal, 전지대두가공품을 포함)

  1) 정의 : 두과 작물인 대두로부터 기름을 짜고 남은 부산물이다.

  2) 영양정보 : 식물성 단백질사료의 왕으로 불릴 만큼 모든 박류 중에서 가장 우수한 식물성 단백질 공급원이다. 대두박의 영양소 함량은 탈피 여부에 따라 차이가 있는데 탈피대두박은 조단백질 함량이 약 48～50%이고, 대두피를 혼입한 대두박은 약 43～45% 정도이다. 식물성 단백질사료 중 아미노산의 조성이 가장 우수하지만 어분에 비하여 메티오닌과 라이신이 부족하다.

  3) 고려사항 : 대두박은 가공 방법에 따라 영양가가 크게 달라지는데, 특히 생대두나 저온처리된 대두 속에는 성장저해인자가 함유되어 있다. 성장을 저해하는 항영양인자로는 트립신의 활성을 억제하는 인자, 헤마글루티닌 및 대두알러젠 등이 있다. 주요 항영양인자들은 열처리에 의해 대부분 불활성이 되는 것으로 알려져 있다. 적정 열처리 정도를 평가하는 방법으로는 우레아제역가(U.A., 최대량) 및 수산화칼륨용액 단백질 용해도(최소량)의 측정이 주로 사용되고 있다.  

 ? 들깨박(perilla meal, perilla oil-cake; 임자박)

  1) 정의 : 들깨의 종실로부터 기름을 짜고 남은 부산물이다.

  2) 영양정보 : 들깨박의 조단백질 함량은 약 35～40% 정도이며, 아미노산 조성은 채종박과 비슷하다. 조섬유의 함량은 약 17～19% 정도이다.

  3) 고려사항 : 단백질 함량이나 기호성은 양호한 편이나 조섬유의 함량이 다른 주요 박류사료들 보다 상대적으로 높아 단위동물에 있어 에너지 이용률이 낮을 가능성이 있다.  

 ? 땅콩박(peanut oil meal, peanut meal; 낙화생박)

  1) 정의 : 땅콩 깍지를 벗긴 뒤 기름을 짜고 남은 부산물이다.

  2) 영양정보 : 땅콩 깍지, 속껍질 및 잔류지방 함량에 따라 조단백질 함량이 약 36～50%로 변이가 크다. 땅콩박은 기호성이 높으며 아미노산의 중 메티오닌 및 라이신 함량은 낮은 편이나 아지닌 및 히스티딘의 함량은 높다.

  3) 고려사항 : 장기간 보관 시 산패의 염려가 있으므로 서늘한 때에는 2～3개월, 더울 때는 6주 내에 사용해야 한다.  

 ? 맥주박(brewers grain, brewers dried grain)

  1) 정의 : 대맥의 전분을 당화하여 맥주를 만드는 과정에서 생산되는 부산물이다. 대맥의 껍질 등과 같은 불용해성 물질의 혼합물로 수분 함량이 약 75%나 된다. 생맥주박을 건조한 것이 건조맥주박이다.

  2) 영양정보 : 조단백질 함량은 생맥주박이 약 5.6～7.3%, 건조맥주박이 약 8.1～29% 정도이다. 건조맥주박의 에너지함량은 옥수수의 약 75% 정도이다.

  3) 고려사항 : 생맥주박은 일반적으로 반추동물에서 기호성이 높으며, 완전배합사료와 같은 반추동물사료에 단백질 및 에너지 공급원으로 사용되지만 높은 수분함량 때문에 여름철에는 산패에 주의하여야 한다.  

 ? 면실박(cottonseed meal)

  1) 정의 : 목화의 씨로부터 기름을 짜고 남은 부산물이다.

  2) 영양정보 : 면실박의 조단백질 함량은 탈피의 정도에 따라 약 30～40%로 변이가 크다. 면실박은 아미노산 중 라이신과 트립토판의 함량이 낮은 편이다. 탈피하지 않은 면실로부터 제조된 면실박은 조섬유 함량이 특히 높다.

  3) 고려사항 : 탈피의 정도와 탈고시폴의 정도에 따라 사료적 가치가 다르다. 미국 거래규정은 저고시폴 면실박의 등급을 매길 때, A등급은 총 고시폴 함량이 400 mg/kg 이하, AA등급은 100 mg/kg 이하 그리고 AAA등급은 10 mg/kg 이하로 정하고 있다. 유리고시폴 함량을 1,200 mg/kg 이하로 정하고 있다.  

 ? 밀글루텐(wheat gluten)

  1) 정의 : 밀에서 전분을 생산할 때 분리되는 부산물이다. 

  2) 영양정보 : 밀속에 들어 있는 단백질을 대표하는 성분으로 조단백질 함량이 약 70～80% 정도로 상당히 높다.

  3) 고려사항 : 가금에서 약 10%까지 사용할 수 있으며, 칼슘, 인 및 시아노코발라민을 충분히 첨가하면 육분의 약 50% 정도를 대체할 수 있는 것으로 알려져 있다.  

 ? 밀배아박(defatted wheat germ meal; 소맥배아박)

  1) 정의 : 제분과정에서 나오는 밀배아로부터 기름을 짜고 남은 부산물이다.

  2) 영양정보 : 조단백질이 약 28%이나, 밀가루나 밀기울이 섞이는 경우가 있으므로 영양소 조성은 매우 다양하다. 토코페롤 함량이 매우 높고 일반 타 박류사료와 마찬가지로 비타민 B군도 많이 함유하고 있다.

  3) 고려사항 : 열처리하지 않은 밀배아박에는 단백질과 지방의 이용을 억제하는 인자가 있다고 보고된바 있으나 적절히 열처리하면 충분히 제거할 수 있다.  

 ? 아마인박(linseed meal, linseed oil meal; 아마박)

  1) 정의 : 아마의 종실로부터 기름을 짜고 남은 부산물이다.

  2) 영양정보 : 조단백질 함량은 약 33～38%이며, 지방성분 중 알파리놀렌산 함량이 높고 껍질에는 리그닌 함량이 높으며 식물성 에스트로겐의 함량 또한 높다.

  3) 고려사항 : 반추동물에서 기호성이 뛰어나 배합사료 내 약 10～20% 정도 사용할 수 있다. 미숙한 아마종실 내 유독성분인 리나마린은 특정 온도(40～50℃), pH 및 수분에서 청산을 생성하여 맹독을 생성할 수 있으므로 건조한 상태로 보관하여 가축에게 급여해야 한다. 건조한 상태에서는 다량 급여해도 청산에 의한 중독 염려가 거의 없다.  

 ? 아몬드박(almond meal)

  1) 정의 : 아몬드의 종실로부터 기름을 짜고 남은 부산물이다.

  2) 영양정보 : 조단백질 함량은 약 38～48%이며, 조지방 약 5%, 조섬유 약 5.5%정도를 함유하고 있다.

  3) 고려사항 : 젖소 및 육우등의 사료로서 이용. 아몬드의 곡피(almond hull)는 섬유가 많고 영양가치가 극히 낮지만 반추사료로 이용된다. 아몬드의 종실은 보통 그대로 식용으로 사용한다.

 ? 야자박(coconut meal, copra meal, copra expellers; 코코넛박)

  1) 정의 : 건조시킨 성숙한 야자의 핵에서 기름을 짜고 남은 부산물로 열대지방에서 생산된다.

  2) 영양정보 : 착유 후 야자박의 조단백질 함량은 약 21～24% 정도로 다른 박류들에 비해 낮은 편이다. 라이신이 제한아미노산이고 함유 황 아미노산의 함량이 낮다. 야자박의 조지방 함량은 착유공정 및 시설 규모 등에 따라 차이가 있는데 추출박의 경우는 약 2.5%, 압착박은 약 8～12% 정도이다. 조섬유 함량은 약 12% 정도이다. 

  3) 고려사항 : 야자박은 단쇄 및 중쇄 포화지방산 함량이 높아 가축의 도체 내 백색 경지방 형성에 도움이 된다. 중독물질은 함유하고 있지 않으나 주요 생산지가 열대지방이기 때문에 잔류지방의 변질 및 아플라톡신의 오염에 주의하여야 한다.  

 ? 양구슬냉이박(Camelina meal, extracted)

   1) 정의 : 식품으로서 승인된 양구슬냉이(Camelina sativa) 종(種)의 씨앗에서 기름을 제거하고 남은 유박(油粕) 제품에 한한다. 가열 또는 압착 채유 과정에서 부산물로 생산된다.

   2) 영양정보 : 원물 기준 조단백질 함량 30% 이상이며, 조지방 및 조섬유 함량은 각각 15% 및 12% 전후로 함유하고 있다.

   3) 고려사항 : 항영양인자로서 글루코시놀레이트(glucosinolate)류를 함유하고 있으므로 배합사료 제조 시 첨가수준에 주의하여야 한다. 

     * 총 글루코시놀레이트 권고 수준 : 건물기준 30mmol/kg 이하 

     * 총 글루코시놀레이트 = 9-메틸설피닐노닐 글루코시놀레이트(9-MethyIsulfinylnonyl glucosinolate) + 10-메틸설피닐데실 글루코시놀레이트(10-MethyIsuIfinyIdecyl glucosinolate) + 11-메틸설피닐운데실 글루코시놀레이트(11-Methylsulfinylundecyl glucosinolate)

     * "식품으로서 승인된 양구슬냉이 종(Camelina sativa)"은 ‘유전자변형생물체의 국가간 이동 등에 관한 법률(이하 LMO법)’에 따라 식품으로 승인되지 않은 유전자변형 양구슬냉이(씨앗)에서 유래하지 않은 것으로 한한다

 ? 앵속실박(poppy seed meal)

  1) 정의 : 앵속(일명 양귀비)의 종실에서 기름을 짜고 남은 부산물로 인도, 중국, 러시아, 호주 등지에서 생산된다.

  2) 영양정보 : 조단백질이 약 26%, 조지방 약 25%, 조섬유 약 13%, 조회분 약 8% 정도이다.

  3) 고려사항 : 양귀비과(科)의 파파베르 솜니페룸 엘(Papaver somniferum L) 또는 파파베르 세티게름 디ㆍ시(Papaver setigerum DㆍC)를 제외한 앵속에는 아편이 함유되어 있지 않다.

 ? 옥수수글루텐(corn gluten; corn gluten meal; 옥글루텐)

  1) 정의 : 옥수수로부터 전분과 시럽을 제조하는 공정 중 원심분리 과정에서 나오는 부산물이다. 옥수수 낱알의 글루텐이 주성분이고 약간의 옥수수, 배아, 전분, 껍질 및 corn soluble 등의 이물질이 혼합되어 있다.

  2) 영양정보 : 단백질 함량은 옥수수 전분의 제조방법 및 전분 수율에 따라 다를 수 있으나 약 45～65% 정도이다.

  3) 고려사항 : 일반적으로 가소화영양소총량과 조단백질 함량이 높은 반면 필수아미노산, 특히 라이신 함량이 낮아 옥수수 글루텐만으로는 단위동물에게 좋은 단백질 공급원이 되지 못한다. 하지만 반추동물에 있어 반추위 내 비분해단백질의 함량이 높아 고능력우의 단백질 공급원으로 이상적이다. 상당량의 크산토필을 함유하고 있어 육계나 산란계에 사용할 때 착색제로써 좋은 사료가 될 수 있다.  

 ? 옥수수배아박(corn germ meal, corn oil meal; 옥배아박)

  1) 정의 : 옥수수로부터 전분이나 시럽을 만들기 위한 습식분쇄나 옥분을 만들기 위한 건식분쇄 과정에서 옥수수 배아가 분리되는데, 배아에서 기름을 짜고 남는 것이 옥수수배아박이다.

  2) 영양정보 : 조단백질 함량이 약 20～25%, 조회분 함량이 약 1.2～3.8%이며 조회분의 약 50%가 인이다.

  3) 고려사항 : 옥수수배아박은 단백질의 조성이 좋지 않으므로 탱키지(tankage), 어분 또는 육분 등과 함께 사용하는 것이 좋다.  

 ? 올리브박(olive pulp)

  1) 정의 : 올리브의 과실에서 유지를 착유할 때 생기는 부산물

  2) 영양정보 : 핵이 붙은 올리브박은 조섬유가 36% 정도이며, 핵을 제거한 것은 조섬유가 19% 정도임

  3) 고려사항 : 핵이 붙은 올리브박은 사료가치는 극히 낮고 핵을 제거한 것은 사료가치가 다소 높으나 양질의 사료원료는 아님.

 ? 장유박(soy sauce cake)

  1) 정의 : 대두, 탈지대두, 밀 및 밀기울 등을 이용하여 간장 제조 시에 얻어지는 해당 원료 유래의 부산물을 말한다.

  2) 영양정보 : 조단백질 함량은 약 25%, 조섬유 함량은 약 18% 정도이다.

  3) 고려사항 : 생박 형태로는 수분 함량이 약 25～50% 정도로 곰팡이에 의해 썩기 쉽고 악취가 나므로 건조해서 사용하는 것이 좋다. 염분 함량이 높으므로 사용 시 주의해야 한다.  

 ? 전분박(starch pulp)

  1) 정의 : 감자, 고구마, 옥수수 및 밀, 카사바(매니옥) 등으로부터 전분을 빼내고 남은 부분을 말한다.

  2) 영양정보 : 주성분인 가용무질소물 함량은 약 60～70%이다. 조단백질 함량은 약 7～8%로 상당히 낮으며 이용률도 좋지 않다. 칼슘 및 인 등의 광물질 함량도 낮으며, 비타민 A 및 D를 비롯하여 B군도 거의 함유하고 있지 않다. 

  3) 고려사항 : 건조하지 않은 전분박은 그 용적에 비해 영양소 함량이 상당히 낮아 사용량이 제한되어 있으며 많은 양을 급여할 경우 영양소 부족에 유의하여야 한다.

 ? 주정박(distillers dried grains; 맥주박을 제외한 DDGS, 자두주박, 포도주박, 전통주박 등을 포함)

  1) 정의 : 알코올 생산 후 잔류하는 곡물찌꺼기를 분리하여 말린 것을 말한다. 주정 후 남은 부산물을 원심분리기로 미립자를 분리한 후 건조시킨 것은 주정잔액박(distillers dried solubles)이라고 한다. 주정박과 주정잔액박을 적당한 비율로 혼합한 것은 주정혼합박(distillers dried grains with solubles; DDGS)이다. 최근에는 곡물의 겉껍질을 제거하고 남은 부분으로만 발효시켜 만든 고단백주정박(high protein distillers dried grains; HPDDG)도 생산된다. 국내에 도입되는 주정박의 약 90% 이상이 옥수수 주정박이기 때문에 국내에서 일반적으로 주정박은 옥수수 주정혼합박을 지칭한다.

  2) 영양정보 : 옥수수 주정박의 조단백질 함량은 약 28%이며, 고단백주정박의 조단백질 함량은 약 40% 이상이다. 중성세제불용성섬유소 함량은 약 35% 정도이다.

  3) 고려사항 : 반추위 내 비분해단백질 함량이 높아 주로 젖소의 단백질 및 에너지원으로 사용하며, 육우나 면양의 단백질원으로도 사용한다. 주정 생산 공정에 따라 함유하는 영양소와 이용률이 달라지기 때문에 영양소 분석치를 기준으로 사용해야 한다.  

 ? 참깨박(sesame oil meal; 호마박, 참깻묵)

  1) 정의 : 참깨 종실로부터 기름을 짜고 남은 갈색의 부산물이다.

  2) 영양정보 : 조단백질 함량이 약 42～45% 정도로 채종박이나 들깨박보다 높으나, 기호성이 낮고 아미노산의 함량 및 이용률이 낮다. 

  3) 고려사항 : 착유 공정 중에 가해지는 열로 인해 가용성 라이신이 파괴 내지 불용성으로 변하기 때문에 착유 시 가열온도는 110℃를 넘지 않는 것이 좋다. 필수아미노산 중 메티오닌과 트립토판이 높은 반면 라이신 함량이 낮기 때문에 대두박이나 효모단백질과 같이 쓰면 상보작용을 기대할 수 있다.  

 ? 채종박(rapeseed meal, canola meal; 유채박, 카놀라박)

  1) 정의 : 유채씨로부터 기름을 짜고 남은 부산물을 채종박이라 하고, 유채를 개량한 품종인 카놀라씨로부터 기름을 짜고 남은 부산물을 카놀라박이라고 한다. 

  2) 영양정보 : 채종박의 조단백질 함량은 약 34～38%이다. 채종의 껍질은 종실 중량의 약 16%를 차지하며 조단백질 함량은 약 12～16%이고, 조섬유 함량이 약 44% 정도이다. 탈피 채종박의 조단백질 함량이 약 50%로 탈피대두박과 유사하다.

  3) 고려사항 : 채종에서 가장 문제가 되는 항영양인자로는 글루코시놀레이트(glucosinolate)와 에루스산(erucic acid)이 있다. 글루코시놀레이트 분해산물은 항갑상선 물질로 가축에서 갑상선비대증을 일으킨다. 에루스산이 다량 함유된 채종유를 쥐에게 다량 급여하면 심장에서 심근괴저와 지방침윤이 유발된다.  

 ? 케슈너트박(cashew kernel meal)

  1) 정의 : 캐슈나무(Cashewnut tree)에서 열리는 열매인 케슈너트에서 껍질을 분리하고, 안쪽 알맹이 부분에서 식용 기름을 짜고 남은 부분을 말한다.

  2) 영양정보 : 수분 8∼10%, 조단백질 25∼38%, 조지방 15∼17%, 조섬유 1∼9%, 조회분 4∼6% 정도이다.

  3) 고려사항 : -

 ? 케이폭박(kapok meal)

  1) 정의 : 판야(panja)과에 속한 열대식물인 케이폭 나무(일명 ceiba)의 열매로부터 기름을 짜고 남은 부산물이다.

  2) 영양정보 : 약 31%의 조단백질을 함유하고 있다. 

  3) 고려사항 : 돼지에서 단백질 사료의 약 30% 정도가 케이폭박으로 사용될 수 있으나 체지방이 단단해지기 쉽다. 닭에서는 배합사료 내 약 5% 이하로 사용하는 것이 좋다.  

 ? 팜유박(palm kernel meal, palm kernel expellers; 팜박)

  1) 정의 : 핵을 제외한 열매로부터 팜유를 짜고 남은 고형물을 건조시킨 것을 말한다.

  2) 영양정보 : 약 14～16%의 조단백질 및 약 14～20%의 조섬유를 함유하고 있다. 

  3) 고려사항 : 반추동물의 사료로 많이 사용되어 왔으며, 단위동물사료에 약 10%까지 사용해도 문제가 없는 것으로 알려져 있다.  

 ? 포도씨박(grape seed meal)

  1) 정의 : 포도씨에서 기름을 짜고 남은 부산물을 말하며 DGSM(Defatted Grape Seed Meal)이라고도 불린다. 

  2) 영양정보 : 조단백질이 약 11%, 조지방 7%, 조섬유 약 36%를 함유하고 있다. 

  3) 고려사항 : 주로 축우용사료에 많이 이용되고 있으며 다른 축종에도 이용가능하다. 

 ? 피마자박(castor meal)

  1) 정의 : 온난한 지역에서 잘 자라는 피마자의 열매에서 기름을 짜고 남은 부산물을 말한다.

  2) 영양정보 : 약 36% 내외의 조단백질을 함유하고 있다. 

  3) 고려사항 :  피마자에는 리신 등의 독성물질이 함유되어 있어 섭취시 구토, 설사, 조직 출혈, 신부전 및 폐사를 유발할 수 있기 때문에 사료로는 열처리 등의 공정을 통해 독성물질이 제거되거나 불활화된 것만 이용하여야 한다. 열처리는 습열기준 121℃에서 60분 이상 또는 동등 이상의 효력으로 하여야 한다. (별표 4 제1호를 적용하지 않는다).

 ? 해바라기씨박(sunflower seed meal, sunflower seed oil meal)

  1) 정의 : 해바라기씨로부터 기름을 짜고 남은 부산물이다.

  2) 영양정보 : 해바라기씨박의 사료적 가치는 탈각 및 착유방법 등에 따라 크게 달라진다. 탈각되지 않은 해바라기씨박은 조단백질 함량이 약 20% 이하이고, 조섬유 함량은 약 26%이다. 탈각해바라기씨박의 조단백질 함량은 약 39～44% 정도이다.

  3) 고려사항 : 해바라기씨박의 경우 라이신이 제한아미노산이므로 단위동물에 사용할 때는 라이신을 첨가하거나 육분, 어분 또는 대두박과 함께 사용하는 것이 바람직하다.   

 ? 호두씨박(walnet seed meal)

  1) 정의 : 호두의 핵(씨)으로부터 기름을 짜고 남은 부산물이다.

  2) 영양정보 : 껍질이 들어가 있는 것과 없는 것에 따라 영양성분의 차이가 큼

  3) 고려사항 : 주로 축우용사료에 많이 이용되며 일부 단백질공급원으로써의 역할을 한다

 라. 서류(potatoes)

┌─────────────────────────────────────────────────┐

│서류는 사료 성분등록 시 (최대량) 수분, 조섬유 및 조회분을 등록하도록 되어 있다. 염산불용물질(토사 │

│등)은 3% 미만으로 규정되어 있다.                                                                  │

└─────────────────────────────────────────────────┘

 ? 감자(potato)

  1) 정의 : 가지과의 여러해살이풀. 높이는 60～100cm이며, 땅속에 있는 줄기마디로부터 기는줄기가 나와 그 끝이 비대해져 덩이줄기를 형성한다. 

  2) 영양정보 : 수분 75%, 녹말 13∼20%, 단백질 1.5∼2.6%, 무기질 0.6∼1%, 환원당 0.03mg, 비타민 C 10～30mg이 들어 있다. 질소화합물의 절반을 차지하는 아미노산 중에는 밀가루보다 더 많은 필수 아미노산이 함유되어 있다. 그리고 날감자 100g은 열량 80cal에 해당한다.

  3) 고려사항 : 덩이줄기의 싹이 돋는 부분은 알칼로이드의 일종인 솔라닌(solanine:C45H73O15N)이 들어 있다. 이것에 독성이 있으므로 싹이 나거나 빛이 푸르게 변한 감자는 많이 사용하지 않도록 주의해야 한다.  

 ? 고구마(sweet potato)

  1) 정의 : 메꽃과에 속하는 여러해살이식물로 뿌리가 영양소를 저장하는 괴근(塊根)을 형성한 것을 말한다.

  2) 영양정보 : 수분이 60% 이상이 되고 전분은 품종별로 차이가 있으나 약 20% 내외로 고형분의 80～90%를 차지한다.  조단백질 함량이 1～2%로 매우 낮고 메티오닌, 라이신, 트레오닌 같은 아미노산이 특히 부족하다. 광물질 중에서 칼슘과 인의 함량은 극히 적으나 고구마의 품종에 따라서 차이가 있다. 카로틴의 함량은 상당히 높은 편이며 특히 고구마 속의 색이 진한 것은 흰색인 것에 비해 카로틴 함량이 높다.

  3) 고려사항 : 수분 함량이 높기 때문에 저장성이 나쁘다.  

 ? 돼지감자(Jerusalem artichoke, girsol)

  1) 정의 : 국화과에 속하는 여러해살이식물로 뚱딴지 또는 뚝감자라고도 부른다. 가을에 해바라기 비슷한 노란 꽃이 피며 관상용이고 지하괴경은 이눌린과 폴리페놀이 풍부해 식용 및 사료용으로 사용한다.

  2) 영양정보 : 조단백질 1.9%, 회분 1.2%, 칼슘 0.63%, 이눌린 2.55%, 프롤린 0.065% 내외를 함유한다.

  3) 고려사항 :  

 ? 카사바(cassava, mandioca; 매니옥)

  1) 정의 : 열대지방의 근괴식물로 단위면적당 건물 생산량이 매우 많은 에너지사료의 일종이다. 옥수수와 같은 곡류사료와 비교했을 때 값싼 에너지사료 자원으로 각광받고 있다. 

  2) 영양정보 : 가용무질소물(NFE) 함량이 약 70～80%를 차지하고, 전분(타피오카)은 약 55～70% 정도이다. 조단백질 함량은 건물 당 2.1～3.6%이고 아미노산 조성도 좋지 않다. 조지방은 0.2%, 조회분은 3.5% 내외이다. 

  3) 고려사항 : 기호성이 좋은 편이 아니며 토사나 청산의 함량이 높아 성장 중인 동물의 성장 억제 현상이 발생할 수 있다. 청산은 50ppm이하이어야 한다.  

 마. 식품가공부산물류(Food Processing by-products)

┌───────────────────────────────────────────────────┐

│식품가공부산물류는 사료 성분등록 시 명칭별로 최소량과 최대량 등록성분이 조금씩 다르다. 제과ㆍ제빵     │

│ㆍ제면부산물의 경우에는 (최대량) 수분, 조회분; 당밀, 파당의 경우에는 (최소량) 총당; 원당의 경우에는   │

│(최소량) 당도, (최대량) 수분, 전화당, 조회분; 기타 명칭의 경우에는 (최소량) 조단백질, (최대량) 수분,  │

│조섬유, 조회분을 등록하도록 되어 있다.                                                                │

└───────────────────────────────────────────────────┘

 ? 감자가공부산물(dried potato products, potato processing by-products, potato slurry)

  1) 정의 : 감자를 식용으로 처리하는 과정에서 생기는 등외품, 감자껍질, 감자 부스러기 등을 모은 것이다.

  2) 영양정보 : 건물함량은 10～30%로 변이가 심하며, 감자껍질과 파쇄 감자의 영양소 함량은 보리와 비슷하고, 조단백질 함량은 감자칩부산물의 경우 6.6% 내외, 감자펄프는 4.6% 정도이다. 반추동물용 사료로 많이 사용되고 있는 감자껍질은 전분함량이 건물기준으로 61～67%로 생감자나 소맥과 유사하다.

  3) 고려사항 : 풍건 상태 또는 말려서 분쇄하여 이용한다. 사료로 사용 시 아크릴아마이드, 침전물, 농약 등 품질 저해 인자에 대한 고려가 필요하다.  

 ? 과실류가공부산물(fruits by-products)

  1) 정의 : 사과, 배, 포도, 단감, 복숭아, 유자, 떫은 감, 복분자, 매실, 오디, 오미자, 망고, 키위, 파인애플, 무화과, 살구 및 기타 과실류를 가공(압착, 분쇄 등을 통하여 주스, 음료, 통조림, 쨈, 술, 식초, 조미, 분말차, 즙청 등의 제품 생산)하는 과정에서 나오는 부산물을 말한다.

  2) 영양정보 : 과일 종류에 따라 수분, 수용성당분과 조섬유 등 영양성분이 차이가 있다.

  3) 고려사항 : 산성이 강하므로 사용 시 주의해야 한다. 강피류ㆍ박류(수분조절용에 한함)를 혼합할 수 있으며, 혼합물질이 있는 경우 원료명 및 혼합비율을 확인하여야 한다.

 ? 당밀(molasses; 폐당밀)

  1) 정의 : 제당과정에서 발생한 부산물로 사탕수수, 사탕무에서 유래한 것과 추가 가공과정에서 생산된 부산물을 말한다.

  2) 영양정보 : 수분이 약 20～30% 들어 있고 주성분은 자당(sucrose)이다. 에너지 함량이 높아 가소화영양소총량은 고형물상태로 75%, 액상상태로 53% 정도이고 옥수수 열량의 2/3 정도의 열량가치를 가지고 있다. 조단백질은 5% 내외며 회분은 8% 정도로 특히 칼륨이 3% 이상으로 높다.

  3) 고려사항 : 풍미가 좋아 기호성이 좋고 사료 제조 시 먼지의 확산을 방지하며 기계의 마모를 줄일 수 있다. 다량 급여 시 연변을 일으킬 수 있다. 당밀은 20℃에서의 브릭스(Brix) 계수를 등록하여야 하며 파당 또는 폐당을 혼합할 수 있으며, 혼합물질이 있는 경우 원료명 및 혼합비율을 확인하여야 한다.

 ? 도토리부산물(acorn by-products)

  1) 정의 : 도토리를 가공(묵 제조 등)하는 과정에서 나오는 부산물을 말한다.

  2) 영양정보 : 도토리부산물의 성분은 조단백질 약 18%, 조지방 약 5%, 조섬유 약 2%, 조회분 15% 정도이다.

  3) 고려사항 : 도토리에는 떫은맛을 주는 탄닌이 3～9% 정도 함유되어 있으므로 지나치게 많이 사용하는 것(5% 이상)은 좋지 않다.  

? 밤가공부산물분(chestnut processing powder)

  1) 정의 : 밤 가공식품 생산과정에서 발생하는 외피(hull), 내피(endodermis) 등 알맹이를 제외한 부분을 건조 분쇄한 것.

  2) 영양정보 : 조단백질 2.6～9.7%, 조지방 0.6～1.1%, 조회분 0.8～2.9%

  3) 고려사항 : 내피의 경우, 탄닌(tannin) 함량이 높아 사료 첨가 시 기호성이 떨어질 수 있음.

 ? 비타민류가공부산물(vitamin by-products)

  1) 정의 : 과실 및 채소류 등에서 비타민류를 추출하고 남은 부산물이다.

  2) 영양정보 : 사용한 원료에 따라 영양성분의 변이가 심하다.

  3) 고려사항 : -

 ? 쌀농후침지액(rice steep liquor)

  1) 정의 : 쌀을 씻을 때 나오는 뿌연 물(쌀뜨물)의 수분함량을 50% 이하로 농축한 것을 말한다. 주로 사료를 발효시킬 때 원료로 이용된다.

  2) 영양정보 : 영양성분은 100g 기준으로 비타민 B1이 110.00mg, 식이섬유는 20.00g, 칼륨은 6.00mg 내외를 함유한다. 

  3) 고려사항 : 쌀뜨물 그 자체로는 영양적 가치가 낮아 사료로 사용하는 것은 곤란하다.  

 ? 아미노산 발효부산물(amino acid by-products)

  1) 정의 : 당밀을 주원료로 사용하여 발효공법을 이용한 라이신과 글루타메이트 생산과정에서 부수적으로 발생하는 암갈색의 액상물질을 말하며, CMS(Condensed Molasses Solubles)라고도 불린다.

  2) 영양정보 : 조단백질 43% 내외, 조회분 6%이하, 수분 35% 이하이다.

  3) 고려사항 : 비단백태 질소원으로 단위동물보다는 반추가축에게 좋은 원료로 사용할 수 있으며 발효산물로서 비타민B 군이 풍부하다. 비단백태질소(NPN) 최대함량을 등록하도록 되어 있다.

? 엿류부산물(Taffies by-products)

  1) 정의 : 엿류 제조과정에서 얻어지는 식품원료 유래의 부산물이다. 대표적인 엿밥(malt meal)은 엿을 만들 때에 엿감주를 자루에 넣어 엿물을 짜낸 밥 찌꺼기를 말하는 것으로 이박(飴粕)이라고도 한다. 쌀을 물에 불려서 찐 밥에 엿기름물을 부어서 삭히면 엿감주가 되는데, 이것을 자루에 넣어 엿물을 짜낸 것을 ‘엿물’이라고 하며, 그 찌꺼기를 ‘엿밥’이라고 한다. 엿밥은 당분이 다 빠졌기 때문에 점성이 전혀 없다. 

  2) 영양정보 : 쌀 엿밥은 조단백질 40% 내외, 조지방 12% 내외, 조회분 5% 내외, pH 5～6 정도이다. 옥수수 엿밥은 조단백질 45% 내외, 조지방 8% 내외, 조회분 2% 내외, NDF 30% 내외, ADF 10% 내외이다.

  3) 고려사항 :   

 ? 옥수수농후침지액(corn steep liquor, CSL)

  1) 정의 : 옥수수를 아황산용액에 침지한 액을 농축한 것으로서 고형물의 농도가 6%인 침지액을 수분함량이 50% 내외로 농축한 것을 말한다. 이것을 옥수수피와 혼합하여 사용한다.

  2) 영양정보 : 건물 52% 내외, 조단백질 20.5% 정도, pH 4.5 내외이다.

  3) 고려사항 :   

 ? 음료가공부산물(by-products from the beverage industry)

  1) 정의 : 과실음료 외의 음료 제조과정에서 얻어지는 식품원료 유래의 부산물이다.

  2) 영양정보 : 

  3) 고려사항 :   

 ? 제과ㆍ제빵ㆍ제면부산물(dried bakery product)

  1) 정의 : 빵, 과자(초콜릿 포함) 또는 국수의 제조과정에서 얻어지는 동일원료 유래의 부산물과 제과점 등의 소매점에서 판매종료 후 회수되는 빵, 과자(초콜릿 포함) 또는 국수 등을 가공한 것을 말한다.

  2) 영양정보 : 사용된 원료명 및 혼합비율에 따라 다양할 수 있다. 제과부산물의 경우 조단백질 함량이 약 10～11%, 조지방 5% 내외, 조섬유 2% 내외, 조회분 약 3～4% 정도 함유되어 있다.

  3) 고려사항 : 반추동물에게 사용이 금지된 동물성사료가 포함되었을 경우에는 남은음식물과 동일하게 반추동물에게는 사용할 수 없다.

 ? 조미료부산물(seasoning by-products)

  1) 정의 : monosodium glutamate(MSG)를 생산하는 과정에서 부수적으로 생기는 부산물이다.

  2) 영양정보 : 수분 45% 내외, 조단백질 45% 내외, NPN(질소) 7～8%, 조회분 4% 내외, pH 6～7 정도이다.

  3) 고려사항 : 반추가축 사료에 주로 이용되어진다. 비단백태질소(NPN) 최대함량을 등록하도록 되어 있다.

 ? 채소가공부산물(vegetable processing by-products)

  1) 정의 : 농산물산지유통센터 등에서 정선되고 남은 식물성 잔재물과 식품가공(김치제조 등) 업체의 채소가공 과정에서 위생적으로 처리되고 남은 부산물을 말한다.

  2) 영양정보 : 

  3) 고려사항 : 김치제조공장 등에서 배출되는 것은 사료로 사용 시 염분에 대한 고려가 필요하다.

 ? 콩류가공부산물(비지를 포함하며 대두박은 제외)

  1) 정의 : 대두, 팥, 녹두, 강낭콩, 땅콩 및 동부 등과 같은 콩과 식물의 종실을 식품으로 가공하는 과정에서 나오는 해당원료 유래의 부산물을 말하며 비지(두부박, soybean curd cake)가 대표적이며, 두유 생산과정에서 발생하는 부산물이 포함된다.

  2) 영양정보 : 비지(두부박)의 경우 생것은 수분이 83～85% 정도이며 조단백질 5%, 조섬유 2.5% 정도가 함유되어 있다. 기호성이 좋고 소화도 잘 되는 훌륭한 사료자원이다.

  3) 고려사항 : 비지는 공장으로부터 배출된 후 단시간에 호기성균이 증식하여 발열, 변패가 진행되기 때문에 밀봉 보존하고 여름철에는 빠른 시간 내에 사용해야 한다. TMR 보급이 증가하면서 두부박의 사용도 증가했지만 거리가 멀거나 주변에 TMR 제조공장이 없는 곳에서는 활용이 잘 안 되고 있다.  

 ? 파당(폐당을 포함)

  1) 정의 : 사탕 또는 엿 등의 부스러기를 말한다.

  2) 영양정보 : 

  3) 고려사항 : 주로 당밀 등과 혼합하여 이용되며, 사료의 기호성 증진에 도움이 된다. 혼합한 사료의 원료명 및 혼합비율을 표시하여야 한다.

 바. 조류(algae)

┌────────────────────────────────────────────────┐

│조류는 사료 성분등록 시 (최대량) 조단백질, (최대량) 수분, 조섬유, 조회분을 등록하도록 되어 있다.│

└────────────────────────────────────────────────┘

 ? 거대조류(macroalgae, 미역 등)

  1) 정의 : 육상식물이 아니면서 물, 이산화탄소 및 태양광으로 광합성하는 생물인 조류 중 눈에 보이는 크기의 조류를 말하며, 주로 미역, 다시마 등의 해조류가 해당된다.

  2) 영양정보 : 말린 미역의 경우 단백질 함량이 약 20%로 많고 지방 약 1%, 탄수화물이 약 35% 함유되어 있다. 

  3) 고려사항 : 갈래곰보, 갈파래, 감태, 곰피, 김, 꼬시래기, 다시마, 돌가사리, 둥근돌김, 뜸부기, 매생이, 모자반, 미역, 불등가사리, 석묵, 우뭇가사리, 지충이, 진두발, 청각, 톳, 파래, 피마톨리톤 칼카륨(리토탐니움 칼카륨) 등이 있다.

 ? 미세조류(microalgae, 클로렐라, 스피룰리나 등)

  1) 정의 : 바다에서 생육하는 조류 중 현미경으로만 관찰할 수 있는 조류의 총칭으로, 어류의 먹이생물인 대부분의 식물성 플랑크톤이 해당된다. 사료용으로 많이 사용되는 미세조류로는 두나리엘라, 클로렐라, 스피룰리나 등이 있다.

  2) 영양정보 : 클로렐라의 주요 성분에는 단백질 40～50%, 지방질 10～30%, 탄수화물 10～25%, 회분 6～10%, 열량 550kcal, 비타민A(1,000～3,000IU/100g), B1 4～24mg, B2 1.3～9.0mg, 니아신 120～240mg, 비타민 C 2,000～5,000mg이며 클로렐라 특유의 성장촉진인자가 있다.

  3) 고려사항 :   

 ? 난노클로롭시스(Nannochloropsis)

  1) 정의 : 조개류 치패 등의 먹이가 되는 해양 식물성플랑크톤 중 하나로 편모를 갖지 않은 황녹색의 1∼2㎛의 소형 녹조류(Chlorophyceae) 계통을 말한다.

  2) 영양정보 : 건 중량 기준으로 조단백질 50.2%, 조지방 2.6%, 조섬유 0.3%, 조회분 20.4% 정도이다.

  3) 고려사항 : 주로 고농축 액상의 형태이며, 냉장 또는 냉동 상태로 이동 및 보관하여야 한다.

 ? 두나리엘라(Dunaliella, Dunalialla)

  1) 정의 : 두나리엘라과(Dunaliellaceae)의 단세포 내염성 녹색 해조류을 말한다.

  2) 영양정보 : Dunaliella salina와 D. bardawil에서 베타-카로틴을 얻는다.

  3) 고려사항 : 

 ? 스키조키트리움(Schizochytrium sp.)

  1) 정의 : 트라우스토키트리드과에 속하는 종속 영양생활을 하는 단세포 진핵 생물로 스키조키트리움 속(Schizochytrium sp.)을 말한다.

  2) 영양정보 : DHA(Docosa Hexaenoic Acid) 함유량이 높다.

  3) 고려사항 :

 ? 아이소크라이시스(Isochrysis)

  1) 정의 : 해산 및 담수산 새우류 유생, 조개류 유생 및 치패 등의 먹이가 되는 해양 식물성플랑크톤 중 하나로 편모를 갖지 않은 황갈색의 5∼6㎛의 소형 착편모조류(Haptophyceae) 계통을 말한다.

  2) 영양정보 : 건 중량 기준으로 조단백질 42.0%, 조지방 20.0%, 조섬유 0.2%, 조회분 11.1% 정도이다.

  3) 고려사항 : 주로 고농축 액상의 형태이며, 냉장 상태로 이동 및 보관하여야 한다.

? 키토세로스(Chaetoceros)

  1) 정의 : 해산새우류 유생 등의 먹이가 되는 해양 식물성플랑크톤 중 하나로 3∼7㎛의 규조류(Bacillariophyceae) 계통을 말한다.

  2) 영양정보 : 건 중량 기준으로 조단백질 36.8%, 조지방 9.1%, 조섬유 0.1%, 조회분 38.5% 정도이다.

  3) 고려사항 : 주로 고농축 액상의 형태이며, 냉장 상태로 이동 및 보관하여야 한다.

? 탈라시오시라(Thalassiosira)

  1) 정의 : 해산새우류 유생, 조개류 유생 및 치패 등의 먹이가 되는 해양 식물성플랑크톤 중 하나로 14∼26㎛의 규조류(Bacillariophyceae) 계통을 말한다.

  2) 영양정보 : 건 중량 기준으로 조단백질 41.0%, 조지방 10.3%, 조섬유 1.1%, 조회분 30.9% 정도이다.

  3) 고려사항 : 주로 고농축 액상의 형태이며, 냉장 상태로 이동 및 보관하여야 한다.

? 테트라셀미스(Tetraselmis)

  1) 정의 : 해산새우류 유생, 조개류 유생 및 치패, 전복 유생 등의 먹이가 되는 해양 식물성플랑크톤 중 하나로 5∼15㎛의 담녹조류(Prasinophyceae) 계통을 말한다.

  2) 영양정보 : 건 중량 기준으로 조단백질 57.2%, 조지방 5.1%, 조섬유 3.8%, 조회분 17.0% 정도이다.

  3) 고려사항 : 주로 고농축 액상의 형태이며, 냉장 또는 냉동 상태로 이동 및 보관하여야 한다.

? 파블로바(Pavlova)

  1) 정의 : 조개류 유생 및 치패 등의 먹이가 되는 해양 식물성플랑크톤 중 하나로 3∼6㎛의 황갈녹조류(Chrysophyceae) 계통을 말한다.

  2) 영양정보 : 건 중량 기준으로 조단백질 40.5%, 조지방 16.6%, 조섬유 0.6%, 조회분 7.8% 정도이다.

  3) 고려사항 : 주로 고농축 액상의 형태이며, 냉장 상태로 이동 및 보관하여야 한다.

? 헤마토코쿠스 플루비알리스(Haematococcus pluvialis)

 1) 정의 : 헤마토코쿠스 플루비알리스(Haematococcus pluvialis)에 속하는 단세포 녹색 해조류이다.

 2) 영양정보 : 헤마토코쿠스 플루비알리스(Haematococcus pluvialis)에서 아스타잔틴을 얻는다.

 3) 고려사항 : 서늘하고 그늘진 곳에 보관하여야 한다.

 ? 해조분(kelp meal, seaweed meal; 켈프밀)

  1) 정의 : 해조(algae)를 수집 후 토사와 염분을 제거하고 건조, 분쇄 과정을 거쳐 얻은 분말형태의 것을 말한다. 가축 사료 원으로 사용되는 것은 주로 대형 해조류(seaweed)에 속하는 갈조류(brown algae)이나 홍조류, 녹조류도 포함한다.

  2) 영양정보 : 탄수화물과 광물질함량이 높고(약 20∼25%) 특히 요오드가 약 0.15∼0.20% 정도이며, 단백질 함량은 약 10∼30% 정도이다.

  3) 고려사항 : 반추가축에게는 10% 정도, 단위동물에게는 10% 이하로 사용하는 것이 좋다.   

 사. 섬유질류(forages, fibrous feed)

┌─────────────────────────────────────────────────┐

│? 섬유질사료(fibrous feeds)는 조섬유 함량이 높은 사료를 총칭한다. 섬유질 사료라 하나, 에너지 함량│

│에 비하여 수분 함량이 너무 높은 근채류 등은 여기에서 제외된다. 섬유질사료를 첨가하면 반추가축     │

│에 있어 반추위 내 발효를 증진시킨다.                                                              │

│? 섬유질류는 사료 성분등록 시 명칭별로 최소량과 최대량 등록성분이 조금씩 다르다. 섬유질가공사료  │

│의 경우에는 (최소량) 조단백질, 조섬유, ADF, NDF, (최대량) 수분, 조회분 / 섬유질발효사료의 경우    │

│에는 (최소량) 조단백질, 조섬유, (최대량) 수분, 조회분 / 알팔파의 경우에는 (최소량) 조단백질, 조섬 │

│유, (최대량) 수분(15%이하), 조회분 / 기타 명칭의 경우에는 (최소량) 조섬유, (최대량) 수분, 조회분  │

│을 등록하도록 되어 있다.                                                                          │

└─────────────────────────────────────────────────┘

 ? 목초(pasture plants, pasture crop, 알팔파, 티모시 등)

  1) 정의 : 잎과 줄기를 초식가축의 사료로 이용하기 위하여 재배되는 양질의 풀을 말한다. 잎이 많고 키가 크고 이삭이나 꽃피는 시기가 늦어서 빨리 억세게 되지 않는 종류의 목초를 이용한다. 화본과에서는 오차드그라스, 페레니얼라이그라스, 이탈리안라이그라스가 이상적이며 두과에서는 레드클로버, 알팔파, 라디노클로버를 들 수 있다. 기타 초종으로 브롬그라스 등이 있다. 

  2) 영양정보 : 건조하지 않은 생초의 수분함량은 60～90%로 매우 높다. 일반적으로 보존기간을 연장하기 위해 건조하여 많이 사용하다. 건조한 목초의 경우는 수확시기에 따라 영양소 변이가 심하며 조단백질 함량은 건물 기준 10～23%로 화본과 목초 대비 두과 목초의 단백질함량이 높은 경향이 있다.

  3) 고려사항 : 초식가축에 급여 할 경우 목초의 품종과 생육단계 등에 따라 영양소 분해율 및 분해속도에 차이가 있다. 두과 목초를 초식가축에게 과다급여 할 경우 고창증 등의 질병 발생우려가 있다. 수분 15%이하여야 한다.  

 ? 브라키아리아그라스(Brachiaria grass)

   1) 정의 : 아시아, 아프리카, 호주, 남유럽 및 미주 등 열대ㆍ아열대 지역의 자생식물로 Brachiaria ruziziensis (congo grass) × B. decumbens (signal grass) × B. brizantha (bread grass) 3원 교잡종에 한하여 건초 또는 사일리지로 가공 처리한 것.

   2) 영양정보 : 브라키아리아의 영양소 함량은 품종 간 차이가 있으며, 조단백질 약 8.9～16.5%, 조섬유 약 22.5～33.5%, NDF 53.5～68.1% 및 ADF 31.2～39.4%를 함유한다.

   3) 고려사항 : 농림축산식품부고시 ‘조사료 수입위생조건’에 부합한 것에 한한다.

 ? 풋베기사료작물(soiling crop, 옥수수, 수수, 보리, 밀, 귀리, 피, 호밀, 수단그라스, 유채, 자운영 등; 청예작물)

  1) 정의 : 곡식의 줄기나 잎을 사료로 사용할 목적으로 재배하고 곡식이 익기 전에 베어서 생초를 그대로 이용하는 사료용 작물을 말한다. 옥수수, 수수, 보리, 밀, 귀리, 피, 호밀, 수단그라스, 유채 및 자운영 등이 있으며, 주로 곡류가 해당된다.

  2) 영양정보 : 수분함량이 80% 이상이며 소화율이 높다.

  3) 고려사항 : 소화율이 매우 높으므로 갑작스런 다량급여로 인한 고창증에 유의해야 하며, 너무 어린 것이나 심한 한발에서 자란 것을 풋베기로 급여하면 청산중독이 발생할 우려가 있다.  

 ? 새싹귀리(Sprout oat, baby oat)

  1) 정의 : 귀리의 종자를 파종하여 얻어진 어린 잎, 줄기, 뿌리 등을 수확하여 사료화한 것을 총칭한다.

  2) 영양정보 : 수분함량이 높다.

  3) 고려사항 : 작물보호제를 처리한 것은 사용할 수 없다.

 ? 새싹밀(sprout wheat, baby wheat)

  1) 정의 : 밀의 종자를 파종하여 얻어진 어린 잎, 줄기, 뿌리 등을 수확하여 사료화한 것을 총칭한다.

  2) 영양정보 : 수분함량이 높다.

  3) 고려사항 : 작물보호제를 처리한 것은 사용할 수 없다.

 ? 새싹보리(sprout barley, baby barley)

  1) 정의 : 보리의 종자를 파종하여 얻어진 어린 잎, 줄기, 뿌리 등을 수확하여 신선한 상태로 사료화한 것을 총칭한다.

  2) 영양정보 : 종자에서 싹이 트는 시기에 자신의 성장을 위하여 영양소 등을 생합성하므로, 새싹보리의 비타민ㆍ미네랄 함량은 다 자란 보리의 3～4배에 이른다.

  3) 고려사항 : 재배하는 데 흙이 필요 없고 깨끗한 물을 이용하며, 주변의 명암은 상관 없으나 어둡게 하면 더 빨리 자란다. 상자 안의 온도는 25℃ 이하로 유지한다. 기르기 시작한 지 7～10일이 지나면 수확할 수 있다. 작물보호제를 처리한 것은 사용할 수 없다.

? 고간류(straws; stalks)

  1) 정의 : 밀, 벼, 수수, 옥수수 등과 같은 곡류의 수확 후 남은 잎과 줄기를 말한다.

  2) 영양정보 : 조단백질 함량이 3～4%이며, 조섬유 40% 내외이다.

  3) 고려사항 : 소화율이 낮아서 송아지와 고능력 젖소에게는 급여량을 제한하여야 한다.  

 ? 귀리짚(oaten straw)

  1) 정의 : 귀리를 탈곡하고 남는 줄기와 잎 부분을 말한다. 

  2) 영양정보 : 

  3) 고려사항 : 

 ? 밀짚(wheat straw)

  1) 정의 : 밀을 탈곡하고 남는 줄기와 잎 부분을 말한다. 

  2) 영양정보 : 

  3) 고려사항 : 

 ? 볏짚(rice straw)

  1) 정의 : 벼를 탈곡하고 남는 줄기와 잎 부분을 말한다. 

  2) 영양정보 : 조단백질 함량이 4～5%로 낮고 조섬유 함량이 25% 이상으로 조사료가가 매우 높은 조사료이다.

  3) 고려사항 : 고간류 중 국내에서 가장 많이 사용되는 조사료로서 다른 짚류보다 사료가치는 높으나 건초보다는 낮다. 소화율을 높이기 위해 종종 가성소다 또는 암모니아 처리를 하거나 발효시켜 사용하기도 한다. 영양소함량 및 소화율이 낮아서 고능력 젖소와 송아지에게는 제한급여하고, 알팔파 등의 소화율이 높은 양질의 조사료와 함께 급여하는 것이 바람직하다. 별표 20의 잔류농약 허용기준 이내이어야 한다. 

 ? 보릿짚(barley straw)

  1) 정의 : 보리 알곡을 수확하고 남는 줄기와 잎 부분을 말한다. 

  2) 영양정보 : 조단백질 함량이 5%이며, 조섬유 38%로 조사료가가 매우 높은 조사료이다.

  3) 고려사항 : 볏짚과 거의 유사한 영양적ㆍ물리적 특성을 가지고 있어, 송아지 및 고능력 젖소에게는 급여량을 제한하여야 한다.  

 ? 수수대(milo stover)

  1) 정의 : 수수의 종실을 따고 남은 수수 줄기와 잎 부분을 말한다. 

  2) 영양정보 : 

  3) 고려사항 : 

 ? 옥수수대(corn stover)

  1) 정의 : 옥수수의 종실을 따고 남은 옥수수 줄기와 잎 부분을 말한다. 

  2) 영양정보 : 

  3) 고려사항 : 

 ? 섬유질가공사료(fibrous mixed feed, partial mixed ration)

  1) 정의 : 섬유질사료를 분쇄, 가열 등의 물리적 또는 화학적으로 처리한 후, 수분조절 또는 기호성 증진을 위하여 곡류, 강피류, 박류 또는 식품가공부산물류를 첨가한 것이다.

  2) 영양정보 : 조섬유의 함량이 건물기준으로 15% 이상(단, 큰소비육 단계의 경우 10% 이상)인 것을 말한다. (별표 4 제1호를 적용하지 않는다.)

  3) 고려사항 : 사료 성분등록 시 혼합된 원료명 및 비율을 확인하도록 되어 있다. 광물질류와 보조사료는 첨가할 수 없다.  

 ? 섬유질발효사료(fibrous fermented feed)

  1) 정의 : 섬유질사료에 곡류, 강피류, 박류 또는 식품가공부산물류를 혼합하고 균체, 효모 등을 이용하여 인공 또는 자연적으로 발효시킨 것이다.

  2) 영양정보 : 조섬유의 함량이 건물기준으로 15% 이상(단, 큰소비육 단계의 경우 10% 이상)인 것을 말한다. (별표 4 제1호를 적용하지 않는다.)

  3) 고려사항 : 사료 성분등록 시 발효균주를 등록하도록 되어 있고, 원료 및 발효처리방법을 확인하도록 되어 있다.

 ? 감귤박(citrus pulp, citrus by-products)

  1) 정의 : 감귤의 가공과정에서 발생되는 껍질을 비롯한 부산물의 총칭이다.

  2) 영양정보 : 조단백질이 5～8%로 낮은 편이며 조섬유가 13～20%로 다소 높고, 가용무질소물(당, 펙틴, 유기산)함량이 높다. 캐로틴과 크산토필 등의 색소 및 비타민B군 일부가 소량 함유되어 있다. 펙틴 및 항산화 작용과 항균 작용의 기능을 가진 플라보노이드류가 함유되어 있고 기호성이 우수하다.

  3) 고려사항 : 제조공정 중에 많은 양의 석회수가 사용되기도 하므로 칼슘의 함량이 높아 가축 급여 시 칼슘과 인의 적정비율을 맞춰 주어야 한다.  

 ? 곡물정선부산물(grain‘s screening pellet, GSP)

  1) 정의 : 곡물의 종류에 상관없이 건조 알곡 상태의 원료사료를 운반 과정에서 생기는 부서진 곡류 또는 곡물사일로에서 곡물을 정선하는 공정에서 얻어지는 물질로, 쇄곡, 미숙곡 및 잡초씨 등을 펠릿 처리를 한 것을 말한다.

  2) 영양정보 : 영양소 함량은 변이가 심하고 사료적 가치는 일정치 않으나 일반적인 강피류보다 높지 않다.

  3) 고려사항 : 각 곡류의 비율 및 같은 곡류에서도 다른 부위의 혼합에 따라 영양소 변이가 심하므로 사용 전에 영양소 분석을 하여 사용하여야 하며, 이때 각 곡류에 잔류된 농약의 농도에 유의해야 한다. 

 ? 버섯재배부산물(mushroom by-products)

  1) 정의 : 버섯의 폐배지 또는 재배잔사를 말하며 버섯의 종류, 배지원료, 배합비 및 재배방식에 따라 다양하게 배출된다. 주요 원료로는 톱밥, 볏짚, 옥공이, 미강, 옥수수, 비트펄프, 면실박 등이 있다. 

  2) 영양정보 : 버섯 폐배지는 재료의 혼합비율에 따라 영양소 함량에 많은 차이가 발생한다. 조단백질 함량은 4～10%로 다양하며 중성세제불용성 섬유(NDF), 산성세제불용성 섬유(ADF) 및 리그닌 등의 세포벽 구조물질의 함량이 높은 편이다.

  3) 고려사항 : 부패속도가 빠르기 때문에 보관에 주의해야 한다.  

 ? 병풀 잎 분말(Centella asiatica. (L.) Urb. leaf powder)

  1) 정의 : 병풀(Centella asiatica (L.) Urb. / Hydrocotyle asiatica / Centella boninensis Nakai ex Tuyama)의 잎과 그 잎을 가공한 것으로 추출물 형태의 것은 제외한다. 

    ※ 이명 : 고투콜라(Gotu Kola), 아시안 페니워트(Asian pennywort).

  2) 영양정보 : -

  3) 고려사항 : 식품원료로도 사용되며, 잔류농약 등 허용기준은 ‘식품의 기준 및 규격(식품의약품안전처 고시)를 따른다.

 ? 사과박(apple pomace)

  1) 정의 : 사과에서 사과즙을 짜내고 남은 잔유물로 보통 건조시켜 사료로 사용한다. 

  2) 영양정보 : 펙틴이 함유되어 있으며 건조상태에 따라 조섬유함량이 약 15～30% 수준이다. 

  3) 고려사항 : 축우용의 섬유질공급원으로 많이 이용되며 육계사료에서 면역강화 물질로도 관심을 받고 있음. (육계의 증체량의 개선효과 있다고 보고됨)

 ? 사탕무박(beet pulp; 비트펄프)

  1) 정의 : 사탕무에서 당을 추출하고 남은 잔유물로 보통 분쇄되거나 펠렛 형태로 유통된다. 

  2) 영양정보 : 조단백질 8%, 조섬유 21%, 조지방 0.5% 정도이다. 일반적으로 젖소에게 기호성이 좋으며, 물리적 성상은 조사료와 같으나 소화가 더 잘되고 맛이 좋다고 알려져 있다. 조섬유의 함량이 높은 편이나 리그닌 함량이 낮으므로 소화가 잘 되며, 비육우와 면양에서 전체 사료의 70%를 사탕무박으로 급여했을 때도 옥수수와 같은 에너지 공급이 가능하다.

  3) 고려사항 : 갑자기 다량으로 급여하면 소화속도가 빨라 연변 등의 소화장애가 발생 할 수 있고, 다른 사료의 섭취량을 제한 할 수 있다.  

 ? 사탕수수박(sugarcane bagasse, sugarcane pulp; 버게스)

  1) 정의 : 사탕수수로부터 설탕을 만들 때 분쇄된 재료의 압착을 통하여 당즙을 분리시키고 남은 찌꺼기를 말한다.

  2) 영양정보 : 조단백질 약 2%, 조섬유 약 47%를 함유하고 있다.

  3) 고려사항 :   

 ? 양잠부산물(silkworm feed residue) 

  1) 정의 : 고치를 얻을 목적으로 누에를 치는 과정에서 발생하는 부산물로 오디, 뽕잎 등을 말한다.

  2) 영양정보 : 오디, 뽕잎 등의 함유비율에 따라 영양소함량 변이가 심하다.

  3) 고려사항 :

 ? 어성초(Houttuyniae Herba)

  1) 정의 : 식품으로 사용 가능한 삼백초과의 여러해살이풀인 어성초(Houttuynia cordata Thunb.)의 지상부를 말한다.

  2) 영양정보 : 잎의 경우 수분 12.5%, 조지방 2.2%, 조단백질 19.7%, 조섬유 17.0%, 조회분 18.8%정도 된다.

  3) 고려사항 : 식품 원료로 사용되는 것으로서 약모밀의 납, 비소 등 개별 중금속 허용기준은 식품의 기준 및 규격에 적합하여야 한다.

 ? 옥수수속대(corn cob, maize cob; 옥수수속)

  1) 정의 : 옥수수자루(ear corn)로부터 알곡을 제거한 나머지 부분을 말한다.

  2) 영양정보:  조단백질이 3%로 매우 낮으나 가용무질소물의 함량이 50%, 조섬유 함량이 34%로 반추가축의 양질의 섬유소 공급원으로 사용된다. 

  3) 고려사항 :   

 ? 이질풀(잎)(Leaf of Geranium Thunbergii)

  1) 정의 : 식품으로 사용 가능한 쥐손이풀과의 여러해살이풀인 이질풀의 잎을 말한다.

  2) 영양정보 : -

  3) 고려사항 : 식품 원료로 사용되는 것으로서 납, 비소 등 개별 중금속 허용기준은 식품의 기준 및 규격에 적합하여야 한다.

 ? 커피박(coffee by-products, coffee meal) 

  1) 정의 : 커피 제조 시 커피콩(coffee bean)을 열탕한 후, 커피 액을 추출하고 남은 부분이다. 커피 판매점에서 즉석 추출 후 남은 것을 회수한 것을 포함한다.

  2) 영양정보 : 조단백질이 12% 내외로 강피류와 유사하다. 조섬유의 함량이 30% 내외, 지방 함량이 17% 정도로 상당히 높은 편이나, 가공 과정 중에 변이가 크다.

  3) 고려사항 : 수분 함량이 약 70% 이상으로 취급이 불편하지만 건조하면 섬유소 공급용 사료로 이용이 가능하다. 가축에 대한 기호성이 낮아 많은 양을 사용할 수 없다.  

 ? 코코아박(Cocoa, beverage residue; cocoa extraction meal, 카카오박) 

  1) 정의 : 코코아의 가공과정에서 발생되는 껍질을 비롯한 부산물을 총칭한다. 

  2) 영양정보 : 조단백질 13%, 조지방 11%, 중성세제불용성 섬유(NDF) 46%, 산성세제불용성 섬유(ADF) 38% 및 가용무질소물 35%를 함유하고 있다.

  3) 고려사항 :  

 ? 파인애플박(pineapple meal) 

  1) 정의 : 파인애플에서 파인애플즙을 짜내고 남은 잔유물로 보통 건조시켜 사료로 사용한다. 

  2) 영양정보 : 약 17% 이상의 품부한 섬유질을 함유하고 있다 

  3) 고려사항 : 파인에플박에서 추출한 "브로멜라인" 이라는 효소물질이 체내의 면역기능 개선을 통하여 우유내 체세포수를 감소시키는 원리로 일반적으로 낙농가에서 유질 개선을 위해 많이 이용됨

 ? 톱밥(sawdust)

  1) 정의 : 나무를 절단, 연마, 사포질 따위 목재를 가공하는 과정에서 발생하는 부산물로서 고운 목재 입자로 구성되어 있다.

  2) 영양정보 : 사료로서의 영양적 가치가 거의 없어서 곤충류를 제외한 동물의 사료로는 사용할 수 없다.

  3) 고려사항 : 목재보호제(약품)를 처리한 나무에서 유래한 톱밥은 사용할 수 없다.

 ? 케나프(kenaf)

  1) 정의 : 잎, 줄기 및 대를 초식가축의 사료로 이용하기 위해 재배하는 아욱과의 한해살이풀(양마, Hibiscus cannabinus)을 말한다.

  2) 영양정보 :  건조하지 않은 생초의 수분함량은 70~80%로 높다. 일반적으로 보존 기간을 연장하기 위해 건조하여 사용할 수 있으며, 건조한 것은 수확시기에 따라 조단백 함량이 8～23%로 어린시기에 수확한 것이 단백질 함량이 높다.

  3) 고려사항 : 

 ? 인동(잎, 줄기)(lonicerae folium)

  1) 정의 : 인동(Lonicera japonica Thunberg)의 잎과 줄기를 말한다.

  2) 영양정보 : 잎과 줄기(lonicera leaf and stem)에는 5∼8%의 탄닌(tannin)이 있으며, 잎에는 로가닌(loganin), 함질소화합물(19%), loniceline이 들어 있다.

  3) 고려사항 : 식품 원료로도 사용되는 것으로서 납, 비소 등 개별 중금속 허용기준은「대한민국약전」(식품의약품안전처 고시) 또는 「대한민국약전외한약(생약)규격집」(식품의약품안전처 고시)에 따른다.

 ? 인동(꽃봉오리; 금은화)(lonicerae flos)

  1) 정의 : 인동(Lonicera japonica Thunberg)의 꽃봉오리를 말한다.

  2) 영양정보 : 꽃(금은화)은 luteolin, inositol, 납질을 함유한다.

  3) 고려사항 : 식품 원료로도 사용되는 것으로서 납, 비소 등 개별 중금속 허용기준은「대한민국약전」(식품의약품안전처 고시) 또는 「대한민국약전외한약(생약)규격집」(식품의약품안전처 고시)에 따른다.

 아. 제약부산물류(pharmaceutical by-products)

┌──────────────────────────────────────────────────┐

│제약부산물류는 사료 성분등록 시 명칭별로 최소량과 최대량 등록성분이 조금씩 다르다. 이노시톨박의     │

│경우에는 (최대량) 수분, 조회분 / 인삼박의 경우에는 (최소량) 조단백질, (최대량) 수분, 조섬유, 조회분 │

│을 등록하도록 되어 있다.                                                                            │

└──────────────────────────────────────────────────┘

 ? 이노시톨박(inositol meal)

  1) 정의 : 쌀겨 자원 등을 활용해 비타민제로 분류되어 있는 이노시톨(inositol)을 생산하고 남은 찌꺼기이다.

  2) 영양정보 : 

  3) 고려사항 : 사료 성분등록 시 이노시톨을 생산하기 위해 사용한 원료명을 확인하도록 되어 있다.  

 ? 인삼박(ginseng meal)

  1) 정의 : 가용성 인삼 성분을 추출하고 남은 찌꺼기이다.

  2) 영양정보 : 조단백질 함량은 13% 내외이며, 수분은 8% 내외, 조섬유는 7～8% 내외, 조회분은 5% 내외이다.

  3) 고려사항 :   

 자. 유지류(fats and oils)

┌──────────────────────────────────────────────────┐

│식물성유지류는 사료 성분등록 시 (최소량) 조지방, 열량(kcal/kg), (최대량) 산가(AV) 30이하, 수분, 협잡│

│물(MIU)을 등록하도록 되어 있다.                                                                     │

└──────────────────────────────────────────────────┘

 ? 대두유(soybean oil)

  1) 정의 : 국내에서 가장 많이 생산되고 있는 식물성 기름의 일종으로 대두에서 얻어진 기름을 말한다.

  2) 영양정보 : 지방산 조성을 보면 리놀레산 함량이 48∼58%이며 팔미트산은 7∼12%, 올레산은 19∼30% 정도이다.

  3) 고려사항 : 대두유의 사료적 가치는 옥수수기름과는 비슷하고 채종유보다는 우수하다고 보고된 바 있다.  

 ? 대마씨유(hemp oil)

  1) 정의 : 껍질(포엽과 외종피)이 완전히 제거된 대마씨(삼씨)에서 얻어진 기름을 말한다.

  2) 영양정보 : 지방산 조성을 보면 리놀레산 함량이 55%이며 알파 리놀레산 22%, 감마 리놀레산 1∼4%, 스테아리돈산 0∼2%정도이다.

  3) 고려사항 : 식품용 기름으로 주로 사용되고 있으며, 도정 공정(껍질 제거)을 거친 씨앗에서 짜낸다. 유해물질인 테트라하이드로칸나비놀 함량이 10mg/kg 이하이어야 한다. (별표 4 제1호를 적용하지 않는다.)

 ? 면실유(cottonseed oil)

  1) 정의 : 목화씨에서 얻어진 기름으로 황갈색이고 끈적끈적하다. 

  2) 영양정보 : 지방산 조성을 보면 리놀렌산 함량이 50% 이상이며 팔미트산은 16∼25%, 올레산은 16∼26%로 상당히 높은 편이다.

  3) 고려사항 : 면실유를 에너지사료로 사용할 경우에는 고시폴 및 사이클로프로펜지방산의 함량이 제한요인으로 작용할 수 있다. 고시폴을 제거하지 않는 한 에너지사료로 사용하기에는 적합하지 않다.  

 ? 미강유(rice bran oil; 쌀겨기름)

  1) 정의 : 쌀겨와 배아에서 얻어진 기름을 말한다. 정제미강유는 쌀겨에서 짜낸 기름에서 중성지방이 아닌 물질을 제거한 기름을 말한다.

  2) 영양정보 : 지방 중 올레산이 38% 내외, 리놀레산이 34% 내외 함유되어 있다. 포화지방산 함량이 25%, 불포화지방산 함량이 75% 정도로 함유되어 있으며, 지방산 조성은 땅콩기름과 유사하다.

  3) 고려사항 :   

 ? 식물성혼합유(mixed oil)

  1) 정의 : 대두유, 카놀라유 등 식물성유지류를 혼합한 것이다.

  2) 영양정보 : 혼합한 종류에 따라서 지방산 조성에 차이가 있다.

  3) 고려사항 :   

 ? 식물성식용잔유(restaurant oil, 정제된 것)

  1) 정의 : 조리 후 남는 식물성 폐식용유를 수집하여 정제한 것이다. 

  2) 영양정보 : 

  3) 고려사항 : 식용유의 종류 및 조리 방법 등에 따라 지방의 함량, 지방산 조성, 산패도의 변이가 크다.  

 ? 아마인유(linseed oil, Leinol)

  1) 정의 : 아마의 종자에서 얻게 되는 건성 지방유를 말한다. 건조 종자에 대해 38∼45% 포함되어 있다.

  2) 영양정보 : 생아마인유는 리놀레산과 리놀렌산 등의 불포화산을 다량으로 함유하기 때문에 불포화성이 풍부하며, 지방산 중 포화산은 10∼16%, 불포화산은 올레산 18∼42%, 리놀레산 17∼22%, 리놀렌산 20∼65% 등이다.

  3) 고려사항 : 공기 중에 두면 산소를 흡수해서 축중합하여, 탄력성 있는 내수성(耐水性) 반투명의 고분자 물질인 리녹신을 발생한다. 산소 흡수에 의한 중량 증가는 1주일 동안에 약 20%이다. 아마인유 피막(皮膜)의 건조일수는 여름철에 6∼7일, 겨울철에는 8∼10일이다.

 ? 야자유(coconut oil, 코코넛기름)

  1) 정의 : 코코넛 열매의 배유에서 얻어진 기름을 말한다.

  2) 영양정보 : 포화지방산 함량이 90% 내외, 불포화지방산 10% 내외이며, 그 중 야자유의 특징적인 지방산으로서 라우르산(C12:0)이 45% 내외, 미리스트산(C14:0)이 20% 내외 함유되어 있다.

  3) 고려사항 : 녹는점이 20∼28℃로 높은 것이 특징이다.  

 ? 옥수수유(corn oil, corn germ oil)

  1) 정의 : 옥수수 배아에서 얻어진 기름을 말한다.

  2) 영양정보 : 가장 많이 함유된 지방산은 리놀레산으로써 총지방산 함량의 50%이상을 차지하고 있으며, 올레산이 그 다음으로 많이 들어 있어서 약 30%에 이르고 있다. 즉, 대부분이 불포화지방산이고 포화지방산으로는 팔미트산이 약 10% 함유되어 있을 뿐이다.

  3) 고려사항 : 옥수수유는 사료용으로는 거의 쓰이지 않고 주로 식용으로만 쓰이고 있는 실정이다. 사료적 가치에 관한 국내 연구는 거의 이루어진 것이 없으나 돼지에 대한 에너지사료로써는 적당하지 않다.  

 ? 채종유(rapeseed oil; canola oil, 카놀라유)

  1) 정의 : 유채 종자에서 얻어진 기름을 말하며 카놀라를 원료로 한 카놀라유도 포함된다.

  2) 영양정보 : 지방산 조성은 다른 식물성 기름과 달리 리놀레산 함량이 20% 미만이고 이와는 반대로 올레산 함량은 23∼31%로 품종에 따라 차이는 있으나 다른 식물성보다 훨씬 높은 편이다.

  3) 고려사항 : 생산되는 대부분의 채종유는 주로 식용으로만 사용되고 사료용으로는 거의 사용되지 않고 있으며, 외국에서도 주로 양계사료에만 소량 사용되고 있다.  

 ? 팜유(palm oil)

  1) 정의 : 기름야자 과육에서 얻어진 기름이다.

  2) 영양정보 : 포화지방산 함량이 많아 상온에서 고체이며 산화안정성이 있다. 포화지방산과 불포화지방산 함량이 대략 50:50 비율로 함유되어 있으며, 그 중 팔미트산(C16:0)이 44% 내외, 올레산(C18:1)이 40% 내외 함유되어 있다.

  3) 고려사항 :  

 ? 해바라기유(sunflower seed oil; 해바라기씨기름)

  1) 정의 : 해바라기 씨에서 얻어진 기름을 말한다.

  2) 영양정보 : 씨에는 22∼36%의 기름이 들어 있고 포화지방산이 10% 내외, 불포화지방산 함량이 90% 내외 함유되어 있으며, 지방산 조성은 올레산(C18:1)이 16% 내외, 리놀레산(C18:2)이 76% 내외 함유되어 있다.

  3) 고려사항 : 주로 식용으로만 사용되며 식품에서는 산가 0.6이하, 요오드가 120∼142를 규격으로 한다.  

 차. 전분류(starches)

┌────────────────────────────────────────┐

│전분류는 사료 성분등록 시 (최대량) 수분, 조회분; 원료명을 등록하도록 되어 있다. │

└────────────────────────────────────────┘

 ? 곡류전분(starch derived from grains, α-화 전분을 포함)

  1) 정의 : 옥수수, 밀, 쌀 등 곡류에서 유래한 전분을 말한다. 옥수수전분의 경우에는 옥수수를 아황산용액에 침지하여 습식도정으로 배아, 피, 글루텐을 제거하고 전분을 분리한다.

  2) 영양정보 : 옥수수전분 원물로서 수분 13% 내외, 조회분 1.7%내외, 가용무질소물(NFE) 84% 내외이다.

  3) 고려사항 :   

 ? 서류전분(potatoes starch, α-화 전분을 포함)

  1) 정의 : 감자, 고구마, 카사바 등 서류에서 유래한 전분을 말한다. 전분유액을 호화(α-화)시켜 건조한 전분을 포함한다. 알파전분은 전분을 물에 분산시킨 후 가열하여 호화시킨 후 노화할 여유를 주지 않고 탈수, 건조 분말화한 것이다.

  2) 영양정보 : 감자전분의 경우 원물로서 수분 18% 내외, 조회분 0.2% 내외, 가용무질소물(NFE) 82% 내외이다.

  3) 고려사항 : 고구마전분의 점성은 동일 농도의 감자전분보다 낮지만 곡류전분보다 높다. 또한 전분호화도의 안정성은 곡류전분보다 낮지만 감자전분보다 안정하다. 알파화 전분을 생산하기 위해서는 전분유액을 알파화시킬 수 있는 건조기설비와 이를 순간적으로 건조할 수 있는 스팀공급설비를 갖추어야 한다.  

 카. 콩류(legumes)

┌────────────────────────────────────────────────────┐

│콩류는 사료 성분등록 시 (최소량) 조지방, 조단백질 (최대량) 수분, 조섬유, 조회분을 등록하도록 되어 있다. │

└────────────────────────────────────────────────────┘

 ? 녹두(Green gram, mung/moong bean)

  1) 정의 : 쌍떡잎 식물 장미목 콩과의 녹두(Vigna radiata L.)의 씨앗, 싹이며 이를 단순 가공처리한 것(건조, 분쇄)을 포함한다. 

  2) 영양정보 : 수분 6∼11%, 조지방 1.0∼3.1%, 조단백질 21∼30%, 조회분 3.2∼4.8% 조섬유 12∼23%정도이다.

  3) 고려사항 : 항영양인자인 trypsin inhibitor를 함유하고 있으므로 과량 섭취에는 주의하여야 한다.

 ? 누에콩(fava bean)

  1) 정의 : 쌍떡잎식물 장미목 콩과의 누에콩(Vicia faba L.)의 씨앗과 이를 가공처리한 것. Horse bean, field bean, bell bean 등의 영문명으로도 불리운다.

  2) 영양정보 : 건물기준 조단백질 25.2～33.3%, 조섬유 7.1～11.2, 조지방 0.9～2.1%, 조회분 3.3～4.6%, 칼슘 0.8～2.7%, 

  3) 고려사항 : 품종에 따라 항영양인자인 탄닌, 비신(vicine), 단백질분해효소 저해인자, 피틴산 등을 많이 함유할 수 있으므로 급여수준에 주의하여야 한다.

 ? 대두(soybean; 콩)

  1) 정의 : 두과 작물인 콩의 종실을 말한다.

  2) 영양정보 : 수분 5.7∼11%, 조지방 18∼22%, 조단백질 35∼40%, 조섬유 5.0∼7.0%, 조회분 5.0∼7.0%정도 된다.

  3) 고려사항 : 대두유와 대두박은 가축의 사료로 널리 그리고 많이 쓰이고 있으나 대두 그 자체는 사료로 흔하게 쓰이고 있지 않다. 대두에는 항영양인자가 많이 포함되어 있어서 가축에게 급여 시에는 반드시 가열처리 후 급여하는 것이 좋다. 대두를 분쇄하거나 쪼개서 급여하면 젖소나 비육우에게는 좋은 단백질 및 에너지사료가 된다. 그러나 사료 중 50% 이상은 배합하지 않는 것이 좋다.  

 ? 루핀(lupin, lupin seed; 루핀종실)

  1) 정의 : 북아메리카가 원산지인 여러해살이 콩과식물의 열매이다.

  2) 영양정보 : 수분 10∼13%, 조지방 4∼5%, 조단백질 27∼30%, 조섬유 8∼15%, 조회분 2.5∼3.1% 정도이다.

  3) 고려사항 : 많은 품종이 있고 그 대부분은 유독성분인 알칼로이드를 함유하고 있으나, 사료로는 호주산의 Lupinus angustifolius와 같이 저알칼로이드 루핀(sweet lupin)이 많이 이용된다.  

  ? 완두(Pea seeds)

  1) 정의 : 콩과에 속하는 한해살이 또는 두해살이 덩굴풀의 종자를 말한다.

  2) 영양정보 : 수분 9.3∼18.0%, 조단백질 19∼28.5%, 조지방 0.7∼2.2%, 조섬유 3.7∼8.5%, 조회분 2.7∼4.9% 정도이다. 껍질을 제거한 완두는 제시된 영양정보와 다를 수 있다.

  3) 고려사항 : 중급 단백질 공급 원료로는 매우 훌륭하다. 탄수화물이 주성분(54%정도)이다.

 ? 렌즈콩(lentils, lentil bean; 렌틸콩)

  1) 정의 : 납작하고 긴 꼬투리 안에 볼록렌즈 모양의 씨앗이 2개씩 들어있는 일년생 콩과 식물이다.

  2) 영양정보 : 단백질ㆍ식이섬유ㆍ칼륨ㆍ엽산ㆍ철분ㆍ비타민 B 등 다양한 영양소들이 풍부하게 함유되어 있다.

  3) 고려사항 : 

 ? 이집트콩(chickpeas)

  1) 정의 : 병아리콩, 벵골 녹두라고도 불리우며, 콩과에 속하는 일년생 식물의 씨를 말한다.

  2) 영양정보 : 성숙한 씨앗, 생것은 수분 11.5%, 조단백질 19.3%, 식이섬유 17.4%, 조회분 2.5% 정도이다.

  3) 고려사항 : 콩은 노란빛을 띠는 갈색으로 한 꼬투리에 1~2대가 들어 있다. 콩은 식용으로 잎, 줄기, 꼬투리는 약용으로 쓴다.

 타. 견과ㆍ종실류(nuts and seeds)

┌──────────────────────────────────────────────────┐

│견과ㆍ종실류는 콩류와 같이 사료 성분등록 시 (최소량) 조지방, 조단백질 (최대량) 수분, 조섬유, 조회분 │

│을 등록하도록 되어 있다.                                                                            │

└──────────────────────────────────────────────────┘

 ? 면실(cotton seed; 목화씨, 면화씨)

  1) 정의 : 목화의 종자(씨앗)를 말한다.

  2) 영양정보 : 수분 11%, 조지방 16%, 조단백질 19%, 조섬유 26%, 조회분 3.4%정도이다.

  3) 고려사항 : 가을에 둥근 열매가 익으면 갈라져 하얀 솜털이 나오는데 솜털은 무명실의 원료가 되고 남는 씨는 기름을 짠다.  

 ? 아마인(linseed, flaxseed; 아마종실)

  1) 정의 : 중앙아시아 및 아라비아원산으로 린네르 섬유를 생산하는 아마(양삼이라고도 함)의 열매(flaxseed)를 말한다.

  2) 영양정보 : 수분 8%, 조지방 39∼40%, 조단백질 19%, 조섬유 14%, 조회분 3.7%정도이다.

  3) 고려사항 : 아마유를 짜는데 사용된다. 미숙한 종실에는 가수분해하면 청산을 생산하는 리나마린(linamarin)이 들어 있기 때문에 일반적으로 아마인을 그대로 사료로 사용하지 않는다.  

 ? 유채씨(rapeseed; 유채종실, 채종, 평지)

  1) 정의 : 일명 rape, colza, raps 등으로 불리며 십자화과(Crucifera) Brassica속의 B. napus 와 B. campestris 종의 함유 종실을 말한다.

  2) 영양정보 : 수분 7%, 조지방 33∼34%, 조단백질 21%, 조섬유 18∼19%, 조회분 3.2%정도이다.

  3) 고려사항 : 종실에는 항영양인자로 글루코시놀레이트(glucosinolates)와 에루스산(erucic acid)이 있는데 글루코시놀레이트(glucosinolates) 분해산물은 항갑상선 물질로써 가축에게 투여하면 갑상선이 종대되며 가축의 생산성이 저하된다.  

 ? 참깨(sesame)

  1) 정의 : 참깨과에 속하는 한해살이풀의 씨를 말하며, 호마(胡麻)ㆍ지마(芝麻)ㆍ향마(香麻)라고도 한다.

  2) 영양정보 : 약 45∼55%의 조지방을 함유하고 있고, 조단백질이 약 36% 내외이다.

  3) 고려사항 :    

 ? 카나리아씨드(canary grass seed)

  1) 정의 : 카나리아 제도가 원산지인 카나리아 갈풀의 종자를 말 한다.

  2) 영양정보 : 

  3) 고려사항 : 카나리아의 먹이로 이용된다.

 ? 케슈너트(cashew nut)

  1) 정의 : 중남미 원산의 옻나무과에 속하는 열대성 상록수의 종자. 캐슈나무는 12~15m나 되고 그 작은 가지에 백색 담홍색의 꽃이 군집하여 핀다. 개화 후 화락 부분이 크게 부풀어 8~9cm 정도가 된다. 이것이 "캐슈애플"이고 끝에 길이 3~4cm의 갈색 구옥상의 과실이 달려 있고 이 속에 껍데기에 둘러싸인 견과가 있다.

  2) 영양정보 : 조단백질 20%, 조지방 47%, 조회분 4%, 조섬유 3% 정도이다.

  3) 고려사항 : 껍질과 견과 사이에는 독성이 있는 액이 있어 피부에 닿으면 염증을 일으키거나 수포가 생기기 때문에 입이나 손으로 깨뜨려서는 안 된다. 독성은 가열하면 소실된다.

 ? 케이폭(kapok seeds)

  1) 정의 : 판야과에 딸린 열대식물인 케이폭 나무(일명 ceiba)의 종실을 말한다.

  2) 영양정보 : 수분 10∼13%, 조지방 21∼26%, 조단백질 27∼30%, 조섬유 12∼26%, 조회분 5.3∼8.2%정도이다.

  3) 고려사항 :   

 ?  피스타치오(Pistachio nuts)  

  1) 정의 : 옻나무과에 속하는 교목의 열매로서 갈색의 껍질로 쌓여 있는 녹색의 알맹이를 말한다.

  2) 영양정보 : 수분 3.9∼5.4%, 조단백질 19.2∼20.3%, 조지방 45.4∼53.4%, 조회분 2.9∼3.2% 정도이다.

  3) 고려사항 : 주로 애완용 동물의 사료로 사용된다.

 ?  홍화씨(Safflower seeds)

  1) 정의 : 홍화(Carthamus tinctorius, 잇꽃)의 씨앗을 말한다.

  2) 영양정보 : 수분 5.3%, 조단백질 14.1∼16.9%, 조지방 29.0∼36.3%, 조섬유 31.1%, 조회분 2.4% 정도이다.

  3) 고려사항 : 주로 애완용 동물의 사료로 사용된다.

 ? 해바라기씨(sunflower seed)

  1) 정의 : 해바라기의 종자(씨앗)를 말한다.

  2) 영양정보 : 조단백질 20%, 조섬유 10%, 조지방 15%, 조회분 3% 정도이다.

  3) 고려사항 : 잘 밀봉하여 서늘하고 건조한 곳에 보관한다.

 파. 과실류(fruits)

┌─────────────────────────────────────────────────┐

│과실류는 사료 성분등록 시 (최소량) 조단백질 (최대량) 수분, 조섬유, 조회분을 등록하도록 되어 있다. │

└─────────────────────────────────────────────────┘

 ? 딸기(strawberry)

  1) 정의 : 딸기를 단순 가공(건조, 분쇄 등)한 것으로 ‘식품의 기준 및 규격(식품의약품안전처 고시)’을 충족하는 것에 한한다. 그 외의 것은 과실류가공부산물로 분류한다.

  2) 영양정보 : -

  3) 고려사항 : 잔류농약 등 허용기준은 ‘식품의 기준 및 규격(식품의약품안전처 고시)를 따른다.

? 로즈힙(Rosa hip)

  1) 정의 : 로즈힙(Rosa canina L.)이라는 장미과나무의 열매를 수확하여 세정 및 불순물(털 등)을 제거한 후 건조 또는 분말화한 것을 말한다.

  2) 영양정보 : 수분 5.8%, 조단백질 4.5%, 식이섬유 43%, 조회분 5.2% 정도이다.

  3) 고려사항 : 건조, 분말 형태로 착향료 용도이외의 것을 말함.

? 망고(Mango; 인디카망기페라)

  1) 정의 : 옻나뭇과에 속하는 상록교목의 열매를 말하며, 인디카망기페라(Mangifera indica L.)라고도 한다.

  2) 영양정보 : 수분 82.9%, 조단백질 0.72%, 조지방 0.10%, 조회분 0.31% 정도이다.

  3) 고려사항 : -

? 바나나(Banana)

  1) 정의 : 외떡잎식품 생강목 파초과 바나나속에 속하는 열매를 말한다.

  2) 영양정보 : 조단백질 2~7%, 수분 15~25%, 조섬유 0.5~4%, 조회분 1~6% 정도이다.

  3) 고려사항 : 열매는 탄수화물이 25%이고 비타민 A와 C가 풍부하며, 100g당 92kcal의 열량을 갖는다.

? 배(Pear)

  1) 정의 : 쌍떡잎식물 장미목 장미과 배나무속 배나무의 열매를 말한다.

  2) 영양정보 : 수분이 약 80%이며, 다량의 수분으로 인해 건조시 영양성분 차이가 큼

  3) 고려사항 : 주성분은 탄수화물이고 당분(과당 및 자당) 10∼13%, 사과산ㆍ주석산ㆍ시트르산 등의 유기산, 비타민 B와 C, 섬유소가 풍부하다.

 ○ 블루베리(blueberry)

  1) 정의 : 블루베리를 단순 가공(건조, 분쇄 등)한 것으로 ‘식품의 기준 및 규격(식품의약품안전처 고시)’을  충족하는 것에 한한다. 그 외의 것은 과실류가공부산물로 분류한다.

  2) 영양정보 : 수분85∼90%, 조단백질 0.5∼1.65%, 조지방 0.1%, 조회분 0.14∼0.2% 정도이다.

  3) 고려사항 : 잔류농약 등 허용기준은 ‘식품의 기준 및 규격(식품의약품안전처 고시)를 따른다.

? 사과(Apple)

  1) 정의 : 쌍떡잎식물 장미목 장미과 낙엽교목 식물인 사과나무의 열매를 말한다.

  2) 영양정보 : 조단백질 0.5~3%, 수분 5~15%, 조섬유 3~10%, 조회분 3~12% 정도이다.

  3) 고려사항 : 

? 산사자(hawthorn berry)

  1) 정의 : 장미과에 속하는 작은 낙엽 활엽 교목인 산사나무의 열매를 건조하여 분말화한 것을 말한다.

  2) 영양정보 : 수분 14%, 조단백질 2.5%, 조섬유 16∼18%, 조회분 2.5~4% 정도이다.

  3) 고려사항 : 비타민C, 칼슘, 구연산 등의 성분이 함유되어 있다. 열매 특유의 신맛이 있다.

? 용안육(Longan)

  1) 정의 : 무환자나무과에 속하는 용안(龍眼, Dimocarpus longan Loureiro)의 헛씨껍질을 말한다.

  2) 영양정보 : 생것은 수분 82.7%, 조단백질 1.31%, 조지방 0.10%, 조회분 0.70% 정도이며, 말린 것은 수분 17.6%, 조단백질 4.90%, 조지방 0.40%, 조회분 3.10% 정도이다.

  3) 고려사항 : -

? 코코넛(coconut palm ; 야자)

  1) 정의 : 야자과(Arecaceae)의 상록 교목인 코코팜의 열매를 말하며, 코코넛야자라고도 한다.

  2) 영양정보 : 주지방산은 라우릭(lauric(45%)), 미리스틱(myristic(18%)), 팔미틱(palmitic(9.5%)), 올레익(oleic(8.2%)), 카프릴릭(caprylic(7.8%)), 카푸릭(capric(7.6%)), 스테아릭(stearic acid (5%))이다. 다른 유지에 비해서 저급 지방산이 비교적 많고, 특유의 향미물질인 락톤류를 약 150ppm 함유한다.

  3) 고려사항 : 

? 키위(kiwi Fruit)

  1) 정의 : 서양과실의 일종, 참다래라고도 한다.

  2) 영양정보 : 조단백질 0.5~5%, 수분 15~30%, 조섬유 5~12%, 조회분 2~7% 정도이다.

  3) 고려사항 : 비타민 C, E와 식이섬유가 풍부함

 ? 파파야(papaya)

  1) 정의 : 쌍떡잎식물 측막태좌목 파파야과의 파파야(Carica papaya L.)의 열매, 잎 및 관련 부산물을 가공처리한 것. 

  2) 영양정보 : (열매) 건물 7.2~9.1%, 조단백질 11.1~11.4%, 조섬유 11.7~12.5%, 조지방 0.8~1.2%, 조회분 7.4~9.4%, (잎, 생) 건물 19.3~24.6%, 조단백질 20.9~32.6%, 조섬유 7.3~14.8%, 조지방 0.4~10.7%, 조회분 7.6~16.1%

  3) 고려사항 : 식품으로서 인정되는 품종의 것에 한함.

? 파인애플(Pineapple)

  1) 정의 : 파인애플과의 상록 여러해살이풀인 아나나스(Ananas comosus (L.) Merr.)의 열매를 말한다.

  2) 영양정보 : 수분 84.9%, 조단백질 0.46%, 조지방 0.04%, 조회분 0.28% 정도이다.

  3) 고려사항 : -

 하. 채소류(vegetables)

┌─────────────────────────────────────────────────┐

│채소류는 과실류와 같이 사료 성분등록 시 (최소량) 조단백질 (최대량) 수분, 조섬유, 조회분을 등록하도│

│록 되어 있다.                                                                                     │

└─────────────────────────────────────────────────┘

? 채소류에는 결구 엽채류(배추, 브로콜리 등), 엽채류(상추, 시금치 등), 엽경채류(파, 미나리 등), 근채류(무, 양파 등), 박과 과채류(오이, 호박 등), 박과 이외 과채류(토마토, 고추 등)가 있다.

? 마카 뿌리(Maca root)

  1) 정의 : 식품으로 사용 가능한 배추과의 두해살이 풀에 해당하는 마카(Lepidium meyenii, Maca)의 뿌리를 말한다.

  2) 영양정보 : 생것은 수분함량이 80%이상이며, 건조시 조단백질 8.87~11.6%, 조지방 1.09~2.2%, 조회분 4.9~5.0%, 탄수화물 54.6~60.0%, 식이섬유 8.23~9.08% 내외이다.

  3) 고려사항 :

? 비트(Beet root)

 1) 정의 : 빨간 무라고도 불리며 채소류 중 근채류에 속한다.

 2) 영양정보 : 100g 당 약 43kacl로, 비타민과 철분 함량이 높다.

 3) 고려사항 : 

? 사탕무(sugar beet)

  1) 정의 : 설탕의 원료로 두 번째로 많이 쓰이는 식물로서 뿌리 부분을 말한다.

  2) 영양정보 : 생것은 수분 78.5%, 단백질 1.8%, 지방 0%, 탄수화물 18.7%, 회분 1%정도이다.

  3) 고려사항 : 뿌리의 자당 함량은 15∼20%로 10∼20%인 사탕수수보다 조금 높은 편이다.

? 삼채(잎) (Leaf of Allium hookeri)

  1) 정의 : 뿌리 부추라고도 부르는 삼채(알리움 후커리)의 잎을 말한다.

  2) 영양정보 : 생것은 수분 86.0∼90.0%, 조단백질 0.6∼1.5%, 조지방 0.5∼0.8%, 조회분 1.1∼1.9% 정도이다.

  3) 고려사항 : 파, 마늘, 양파 등과 같이 Allium속 식물이다. 식이유황 성분이 많이 들어 있으며, 가금류 사료에 활용될 수 있다.

? 삼채(뿌리) (Root of Allium hookeri)

  1) 정의 : 뿌리 부추라고도 부르는 삼채(알리움 후커리)의 알뿌리를 말한다.

  2) 영양정보 : 생것은 수분 79.0∼85.2%, 조단백질 1.1∼1.7%, 조지방 0.1∼0.3%, 조회분 0.8∼1.3% 정도이다.

  3) 고려사항 : 파, 마늘, 양파 등과 같이 Allium속 식물이다. 식이유황 성분이 많이 들어 있으며, 가금류 사료에 활용될 수 있다.

? 양배추(Cabbage)

 1) 정의 : 채소류 중 결구 엽채류에 속한다.

 2) 영양정보 : 100g 당 약 24kacl로 식이섬유가 풍부하다.

 3) 고려사항 : 

? 치커리(뿌리)(chicory root)

  1) 정의 : 식품으로 사용 가능한 국화과의 여러해살이 쌍떡잎식물인 치커리의 뿌리를 말한다.

  2) 영양정보 : 생것은 수분 80.0%, 조단백질 1.4%, 조지방 0.2%, 총식이섬유 1.5%, 조회분 0.9%정도 된다.

  3) 고려사항 : 식품 원료로 사용되는 것으로서 납, 비소 등 개별 중금속 및 잔류농약 허용기준은 식품의 기준 및 규격에 적합하여야 한다.

? 케일(Kale, Leaf cabbage)

 1) 정의 : 채소류 중 엽채류에 속한다.

 2) 영양정보 : 100g 당 약 49kacl로 베타카로틴 성분 함량이 높다

 3) 고려사항 : 

? 토마토(tomato)

  1) 정의 : 가짓과(Solanaceae)의 한해살이풀. 높이는 1~1.5미터이고 열매는 장과로 여름에 붉게 익는다.

  2) 영양정보 : 열매는 90% 정도가 수분이며 카로틴과 비타민C가 많이 들어 있다. 

  3) 고려사항 : 

 거. 버섯류(mushrooms)

┌─────────────────────────────────────────────────┐

│버섯는 과실류ㆍ채소류와 같이 사료 성분등록 시 (최소량) 조단백질 (최대량) 수분, 조섬유, 조회분을 등│

│록하도록 되어 있다.                                                                               │

└─────────────────────────────────────────────────┘

○ 버섯류에는 느타리버섯, 송이버섯, 표고버섯, 양송이, 팽이버섯, 영지버섯, 새송이버섯 등이 있다.

○ 노루궁뎅이버섯(자실체) (Fruiting body of Hericium erinaceum)

  1) 정의 : 노루궁뎅이버섯의 갓과 줄기부분인 자실체를 말한다.

  2) 영양정보 : 수분 3.9%, 조단백질 24.5%, 조지방 3.2%, 조회분 10.6% 정도이다.

  3) 고려사항 : 균사체(mycelia)와 혼동되어서는 아니 된다.

○ 느타리버섯(자실체) (Fruiting body of Pleurotus ostreatus)

  1) 정의 : 느타리버섯(Oyster mushroom)의 갓과 줄기부분인 자실체를 말한다.

  2) 영양정보 : 생것은 수분 90.9%, 조단백질 2.6%, 조지방 0.1%, 식이섬유 1.7%, 조회분 0.6% 정도이다.

  3) 고려사항 : 균사체(mycelia)와 혼동되어서는 아니 된다.

 ? 신령버섯(자실체)(Fruiting body of Agaricus Blazei Murill)

  1) 정의 : 신령버섯의 갓과 줄기부분인 자실체를 말한다

  2) 영양정보 : 수분 6.5%, 조단백질 36.9%, 조섬유 4.3%, 조회분 7.3% 정도이다.

  3) 고려사항 : 균사체(mycelia)와 혼동되어서는 아니된다.

○ 영지버섯(자실체) (Fruiting body of Ganoderma lucidum)

  1) 정의 : 영지버섯의 갓과 줄기부분인 자실체를 말한다.

  2) 영양정보 : 수분 15.4%, 조단백질 10.6%, 조지방 1.5%, 식이섬유 77.4%, 조회분 1.1% 정도이다.

  3) 고려사항 : 균사체(mycelia)와 혼동되어서는 아니 된다.

○ 잎새버섯(자실체) (Fruiting body of Grifola frondosa)

  1) 정의 : 잎새버섯의 갓과 줄기부분인 자실체를 말한다.

  2) 영양정보 : 생것은 수분 88.2%, 조단백질 3.6%, 조지방 0.5%, 조회분 1.1% 정도이다.

  3) 고려사항 : 균사체(mycelia)와 혼동되어서는 아니 된다.

○ 큰느타리버섯(자실체) (Fruiting body of Pleurotus eryngii)

  1) 정의 : 큰느타리버섯(새송이버섯)의 갓과 줄기부분인 자실체를 말한다.

  2) 영양정보 : 수분 7.1%, 조단백질 37.7%, 조지방 1.1%, 조회분 7.2% 정도이다.

  3) 고려사항 : 균사체(mycelia)와 혼동되어서는 아니 된다.

○ 표고버섯(자실체) (Fruiting body of Oak mushroom)

  1) 정의 : 표고버섯의 갓과 줄기부분인 자실체를 말한다.

  2) 영양정보 : 수분 6.5%, 조단백질 14.8%, 조지방 1.1%, 조회분 3.8% 정도이다.

  3) 고려사항 : 균사체(mycelia)와 혼동되어서는 아니 된다. 학명은 Lentinus edodes (Berk.) Sing. / Cortinellus edodes (Berk.) S. Ito & S. Imai이다.

 너. 기타 식물류(miscellaneous)

┌──────────────────────────────────────┐

│기타 식물류는 사료 성분등록 시 (최대량) 수분, 조회분을 등록하도록 되어 있다.│

└──────────────────────────────────────┘

 ? 마리골드 분말(Marigold powder)

  1) 정의 : ‘식품의 기준 및 규격(식품의약품안전처 고시)’을 충족하는 마리골드(Marigold)를 건조 후 분쇄한  것을 말한다. 다만 추출물 형태의 것은 제외한다.

  2) 영양정보 : -

  3) 고려사항 : 잔류농약 등 허용기준은 ‘식품의 기준 및 규격(식품의약품안전처 고시)를 따른다.

 ? 모링가 잎 분말(Moringa oleifera leaf powder)

  1) 정의 : ‘식품의 기준 및 규격(식품의약품안전처 고시)’을 충족하는 모링가 올레이페라(Moringa oleifera Lam.)의 잎을 건조 후 분쇄한 것을 말한다. 다만 추출물 형태의 것은 제외한다.

    ※ 이명 : 드럼스틱(drumstick-tree)

  2) 영양정보 : -

  3) 고려사항 : 잔류농약 등 허용기준은 ‘식품의 기준 및 규격(식품의약품안전처 고시)를 따른다.

 ? 뽕잎(mulberry leaves)

  1) 정의 : 뽕나무과 (Moraceae)의 뽕나무속(Morus)에 속하는 낙엽성 교목의 잎을 말한다. 원산지는 온대ㆍ아열대 지방이며 세계에 30여 종이 있는데 한국에는 산상(山桑:M. bombycis)ㆍ백상(白桑:M. alba)ㆍ노상(魯桑:M. lhou)의 3종이 재배되고 그 중에서 백상이 가장 많이 재배된다.

  2) 영양정보 : 

  3) 고려사항 : 잎은 누에를 기르는 데 이용된다.

 ? 질경이(Plantago)

  1) 정의 : 질경이과에 속하는 여러살이풀에 해당하며 사용부위는 질경이의 잎과 씨앗껍질이다. 

  2) 영양정보 : 탄수화물 63.71% , 조단백질 18.75% , 조지방 1.67% , 조회분 6.48%, 식이섬유 22.68%를 포함한다.

  3) 고려사항 : 

 ? 쑥(mugwort, wormwood)

  1) 정의 : 식품으로 사용 가능한 쑥속(Artemisia)의 여러해살이풀에 한한다.

  2) 영양정보 : 건조된 쑥은 수분 5.2%, 단백질 25.8%, 지방 2.05%, 회분 13.15% 정도이다.

  3) 고려사항 : 식품 원료로 사용되는 것으로서 납, 비소 등 개별 중금속 허용기준은 식품의 기준 및 규격에 적합하여야 한다.

 ? 차(tea)

  1) 정의 : 차나뭇과(Theaceae)의 상록 활엽 관목의 잎을 말한다. 한국, 일본, 중국, 인도 등지에 분포한다.

  2) 영양정보 : 

  3) 고려사항 : 소량의 카페인이 들어있어서 임신중이거나 수유중인 동물용으로는 삼가는 것이 좋다. 고량 복용하면 독성이 나타난다는 기록이 있으므로 복용량에 주의한다.

 ? 화분(pollen; 꽃가루)

  1) 정의 : 수꽃술의 꽃 밥 속에 있는 노란 가루 같은 물질을 말한다.

  2) 영양정보 : 단백질 23∼25%, 탄수화물 25∼27%, 미네랄 2.5∼3.0%, 아미노산 18종, 비타민 10여종, 기타 20∼25%이다.

  3) 고려사항 : 꿀벌이 꽃에서 채취하며 생후 2∼3일된 어린 유충을 키우는데 필수적이다. 꿀벌의 체력 유지 및 수명에도 직접적인 영향을 미치는 매우 중요한 영양원이다. 양봉농가에서 봄, 여름(장마)에 어린 벌에게 화분을 급여하고 있다. 대부분 수입 화분은 중국산을 사용하고 있다.  

2. 동물성

 가. 단백질류(protein products)

┌────────────────────────────────────────────────────────┐

│단백질류는 사료 성분등록 시 명칭별로 최소량과 최대량 등록성분이 조금씩 다르다.                                  │

│1. 가금부산물건조분, 계란분말, 골뱅이분, 모발분, 수지박, 우모분, 육골분, 육분, 제각분, 기타 별표 1의 사료명칭에 │

│해당하는 사료는 (최소량) 조단백질, (최대량) 수분(12%이하), 조지방, 조회분; 추가적으로 모발분, 우모분, 제각분은  │

│펩신소화율(최소량) 등록                                                                                         │

│2. 게분, 새우분의 경우에는 (최소량) 조단백질, 칼슘, 인, (최대량) 수분(12%이하), 조회분                          │

│3. 감마루스, 건어포, 육골포, 육어포, 육포는 (최소량) 조단백질, (최대량) 수분, 조지방, 조회분                    │

│4. 동물성단백질혼합분의 경우에는 (최소량) 조단백질, (최대량) 수분(12%이하), 조지방, 조회분                      │

│5. 어분(어류의 가공품 및 부산물 포함)의 경우에는 (최소량) 조단백질, (최대량) 수분(12%이하), 염분, 조            │

│지방, 조회분; 추가적으로 카드뮴(최대량, ppm) 등록                                                               │

│6. 어즙흡착사료, 육즙흡착사료의 경우에는 (최소량) 조단백질, (최대량) 수분(12%이하), 염분(어즙흡착사료           │

│에 한 함), 조섬유, 조회분                                                                                       │

│7. 유도단백질의 경우에는 (최소량) 조단백질, (최대량) 수분, 조회분; 추가적으로 펩신소화율(최소량)등록            │

│8. 혈장단백, 혈분, 혈액가공품의 경우에는 (최소량) 조단백질, (최대량) 나트륨(Na), 수분(12%이하), 조지방,         │

│조회분; 추가적으로 펩신소화율(최소량) 등록                                                                      │

└────────────────────────────────────────────────────────┘

? 가금부산물건조분(poultry by-product meal)

  1) 정의 : 가금의 도축 과정에서 생산되는 머리, 발 및 내장 등의 부산물을 탈지한 후 건조하여 분쇄한 것을 말하며, 계육분을 포함한다.

  2) 영양정보 : 에너지가 높고 조단백질 약 63 ～ 67%로 양질의 단백질사료로 사용되며, 칼슘 및 인 등의 광물질 함량이 높다. 

  3) 고려사항 : 저장기간 동안 항산화제를 첨가하지 않으면 산패되기 쉽다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다. 습열기준 121℃에서 15분 이상 또는 115℃에서 35분 이상 열처리하거나 동등 이상의 효력(건열기준 160∼170℃에서 1∼2시간 등)으로 열처리하여야 한다. 수분함량은 12% 이하이어야 한다.

 ? 가죽(leather)

  1) 정의 : 축산물 위생관리법 시행규칙에 의거한 용도전환 방법과 기준을 충족한 ‘가죽’을 이용한 것으로 가죽제조공정 중 크롬을 사용하는 태닝(tanning) 단계를 거치지 않은 것에 한한다. 애완동물용 제품 제조의 목적으로만 사용할 수 있다.

  2) 영양정보 : 조단백질 79.4～85.1%, 조지방 1.3～9.6%, 조회분 5.3～11.8%로 가공 조건에 따라 변이가 클 수 있다.

  3) 고려사항 : ‘[별표 16] 사료 내 유해물질의 범위 및 허용기준’의 단미사료 중 ‘(동물성)단백질류’의 잔류허용기준을 적용한다.  

? 감마루스(gammarus)

  1) 정의 : 단각목(端脚目)에 속하는 감마루스속(屬)의 새우의 총칭으로 민물에서 서식하는 옆새우를 건조시킨 것이다.

  2) 영양정보 : 수분 8～13%, 조단백질 43～49%, 조지방 3～9%, 조회분 21～25% 칼슘 6～8%, 인 1%내외로 새우분과 유사하다. 민물 옆새우이므로 염분은 거의 포함되어 있지 않다.

  3) 고려사항 : 애완용 청거북(붉은 귀 거북, red eared slide)을 사육하는데 가장 일반화된 사료중 하나이다. 부상성 사료이며 대부분 밥알정도의 크기이다. 1급수에서 살 수 있으나 대부분 옆새우농장에서 채취한 개체들을 건조시켜 출하한다. 살균공정을 확인하여야 한다. 동물성단백질류의 열처리공정은 제외할 수 있으나, 식품에서 사용이 허용된 살균소독제 및 식초 등을 이용한 적절한 살균처리는 하여야 한다.

? 건어포(Dried fish)

  1) 정의 : 어류, 연체류 등의 수산물에 소량의 보조사료(보존제와 향미제)를 도포, 침지시켜 단순 건조방식으로 생산한 것으로 어포, 건포라고도 한다.

  2) 영양정보 : 

  3) 고려사항 : 동물성단백질류의 열처리공정은 제외할 수 있으나, 식품에서 사용이 허용된 살균소독제 및 식초 등을 이용한 적절한 살균처리는 하여야 한다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다. 원료는 동물에 해로운 수준의 자연독이 함유된 것을 사용해서는 아니 된다. 

? 게분(crab meal)

  1) 정의 : 게 가공 시 생산되는 게 껍질 등의 부산물을 건조 분쇄한 것이다. 

  2) 영양정보 : 단백질 함량은 약 28～32% 내외이며, 탄산칼슘을 약 30～50% 함유하여 칼슘 함량이 약 15% 정도로 매우 높다. 아미노산 조성이 불량하여 다량 급여하면 아미노산 부족을 유발할 수 있다.

  3) 고려사항 : 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다. 습열기준 121℃에서 15분 이상 또는 115℃에서 35분 이상 열처리하거나 동등 이상의 효력(건열기준 160∼170℃에서 1∼2시간 등)으로 열처리하여야 한다. 수분함량은 12% 이하이어야 한다.

? 계란분말(egg powder, 난황 및 난백분말 등 가공품을 포함)

  1) 정의 : 파란이나 불량 전란의 난각을 제거 후 건조 분쇄한 것이다. 전란분말, 난황분말, 난백분말로 구분할 수 있다

  2) 영양정보 : 조단백질 함량이 46 ～ 50% 내외로 높아 단백질 공급원으로 이용할 수 있다. 

  3) 고려사항 : 어린 돼지 사료에 사용이 가능하며, 육성돈과 모돈에서도 사용이 가능하나 경제성을 고려하면 실용이 어렵다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다. 습열기준 121℃에서 15분 이상 또는 115℃에서 35분 이상 열처리하거나 동등 이상의 효력(건열기준 160∼170℃에서 1∼2시간 등)으로 열처리하여야 한다. 수분함량은 12% 이하이어야 한다. 

? 골뱅이분(golbaengi meal, golbaengi powder)

  1) 정의 : 다슬기, 우렁이 등의 연체동물(복족류)을 건조 분쇄한 것이다.

  2) 영양정보 : 

  3) 고려사항 : 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다. 습열기준 121℃에서 15분 이상 또는 115℃에서 35분 이상 열처리하거나 동등 이상의 효력(건열기준 160∼170℃에서 1∼2시간 등)으로 열처리하여야 한다. 수분함량은 12% 이하이어야 한다. 

? 동물성단백질혼합분(animal protein mixture)

  1) 정의 : 어분과 육분 등 여러 가지 동물성단백질류만을 혼합한 것을 말한다.

  2) 영양정보 : 혼합하는 동물성단백질에 따라 영양소 함량이 다르다.

  3) 고려사항 : 식물성단백질류 및 전분 등을 혼합하여서는 안 된다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다. 습열기준 121℃에서 15분 이상 또는 115℃에서 35분 이상 열처리하거나 동등 이상의 효력(건열기준 160∼170℃에서 1∼2시간 등)으로 열처리하여야 한다. 수분함량은 12% 이하이어야 한다. 원료명 및 혼합비율을 확인하여야 한다.

? 모발분(hair meal)

  1) 정의 : 이발소에서 나온 인모발이나 도축장에서 폐기되는 돈모발 및 우모발을 수집하여 가공 처리한 것이다.

  2) 영양정보 : 조단백질함량은 85% 이상으로 매우 높으나 비필수아미노산인 시스틴의 함량이 높은데 비해 필수아미노산 함량이 매우 낮아 사료 가치가 낮다. 

  3) 고려사항 : 단위동물에서는 아미노산 균형에 문제가 생길 수 있으므로 5%이상 사용하지 않는 것이 좋다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다. 습열기준 121℃에서 15분 이상 또는 115℃에서 35분 이상 열처리하거나 동등 이상의 효력(건열기준 160∼170℃에서 1∼2시간 등)으로 열처리하여야 한다. 수분함량은 12% 이하이어야 한다. 

? 부화장부산물건조분(hatchery by-product meal)

  1) 정의 : 부화장에서 유래한 가금 유래의 조직 등(발육중지란, 수컷초생추 등)을 사료의 멸균 살균 기준에 따라 열처리한 후 건조 분쇄한 것

  2) 영양정보 : 조단백질 함량이 22~68%로 단백질 공급원료로 이용할 수 있다.

  3) 고려사항 : 사료의 멸균 및 살균처리 기준에 따라 처리한 것에 한한다.

? 새우분(shrimp meal; 새우박)

  1) 정의 : 새우 가공 시 부산물로 생기는 머리와 껍질 등의 불가식 부위들을 건조 분쇄한 것이다.

  2) 영양정보 : 조단백질함량은 52 ～ 55% 이며, 아미노산 조성은 어분보다는 낮으나 양호하다. 조회분 함량이 16 ～ 22% 로 높으며, 칼슘, 인, 요오드 등의 광물질 함량이 높다. 새우 껍질의 포함 정도에 따라 영양소 함량의 변이가 크다. 

  3) 고려사항 : 일광 건조한 것보다는 인공 건조한 새우분이 더 좋으며, AAFCO(Association of American Feed Control Officials)의 규정에 의하면 염분의 함량이 7% 이하이어야 하고, 3% 이상일 때는 그 염분의 함량을 표시하도록 되어있다. 사용금지 동물용의약품인 말라카이트-그린 함유여부를 확인하여야 한다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.3% 미만이어야 한다. 습열기준 121℃에서 15분 이상 또는 115℃에서 35분 이상 열처리하거나 동등 이상의 효력(건열기준 160∼170℃에서 1∼2시간 등)으로 열처리하여야 한다. 수분함량은 12% 이하이어야 한다. 

? 수지박(greaves, 우지박, 돈지박을 포함)

  1) 정의 : 우지와 돈지 등의 동물성 유지를 생산 후 남는 잔류물질을 말한다.

  2) 영양정보 : 조단백질 59 ～ 73%, 조지방 10 ～ 14%, 조회분 13 ～ 24%이다. 에너지가가 높고 아미노산 조성이 우수하여 단위동물에게 이용성이 높다. 

  3) 고려사항 : 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다. 습열기준 121℃에서 15분 이상 또는 115℃에서 35분 이상 열처리하거나 동등 이상의 효력(건열기준 160∼170℃에서 1∼2시간 등)으로 열처리하여야 한다. 수분함량은 12% 이하이어야 한다.  

? 어분(fish meal, 어류의 가공품 및 부산물을 포함)

  1) 정의 : 어류 및 어류부산물을 탈지한 후 건조하여 분쇄한 것을 말한다.

  2) 영양정보 : 조단백질 함량이 50% 이상으로 매우 높으며 라이신과 메치오닌 등의 필수아미노산, 비타민 B군, 칼슘, 인의 함량이 높다. 기호성이 우수하며 미지성장인자를 포함하여 어린 동물의 성장을 촉진한다. 하지만, 어종 및 제조공정에 따라 사료의 영양소 변이가 매우 크다.

  3) 고려사항 : 양계사료에 있어서 지나치게 많은 양의 어분을 사용할 경우 계육 및 계란에 어취가 나타날 수 있기 때문에 5.0% 이하로 사용하는 것이 좋다. 사용금지 동물용의약품인 말라카이트-그린 함유여부를 확인하여야 한다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.3% 미만이어야 한다. 습열기준 121℃에서 15분 이상 또는 115℃에서 35분 이상 열처리하거나 동등 이상의 효력(건열기준 160∼170℃에서 1∼2시간 등)으로 열처리하여야 한다. 수분함량은 12% 이하이어야 한다. 

 ? 어즙(fish solubles)

   1) 정의 : 식용 가능한 어류를 가공한 액상의 것을 말한다. 탈지(脫脂) 여부를 불문하며, 사료명에 어종을 병기할 수 있다. 예) 어즙(뱀장어)

   2) 영양정보 : 

   3) 고려사항 : ‘사료의 멸균 및 살균 처리기준’에 따른 열처리 조건을 충족하여야 한다.

? 어즙흡착사료(fish soluble from fish processing offal)

  1) 정의 : 어즙 및 어류내장의 부산물을 곡류부산물류(강피류) 또는 식물성 박류에 흡착시켜 건조 분쇄한 것이다.

  2) 영양정보 :  조단백질 함량은 28 ～ 32%이며, 비타민 B군, 칼슘, 인, 소금의 함량이 높다. 

  3) 고려사항 : 비육돈 사료에 5%이상 사용 시 기호성이 떨어지고 설사를 일으킬 우려가 있다. 송아지의 단백질 공급원으로 사용될 시 소화율 감소, 아미노산 흡수율 저해, 중독, 비타민 E 부족 등의 문제를 유발할 수 있다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다. 습열기준 121℃에서 15분 이상 또는 115℃에서 35분 이상 열처리하거나 동등 이상의 효력(건열기준 160∼170℃에서 1∼2시간 등)으로 열처리하여야 한다. 수분함량은 12% 이하이어야 한다. 원료명 및 혼합 비율을 확인하여야 한다.

? 연어(Salmon)

  1) 정의 : 연어과(Salmonidae)에 속하는 여러 종의 조기류 물고기이다.

  2) 영양정보 : 수분 75.8%, 조단백질 20.6%, 지질 1.9%, 회분 1.5%이다.

  3) 고려사항 : 사료의 멸균 및 살균처리 기준에 따라 처리한 것에 한한다.

? 오징어분(squid meal, squid powder)

  1) 정의 : 오징어, 문어 등 연체동물(두족류)을 건조 분쇄한 것이다. 

  2) 영양정보 : 조단백질 함량이 50%이상으로 높다.

  3) 고려사항 : 사용금지 동물용의약품인 말라카이트-그린 함유여부를 확인하여야 한다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다. 수분함량은 12% 이하이어야 한다. 「사료 등의 기준 및 규격」 [별표 9] 사료의 멸균 및 살균 처리 기준을 따른다.

? 우모분(feather meal)

  1) 정의 : 도계장에서 부산물로 생산되는 가금의 깃털을 고압 상태에서 가열처리하여 건조, 분쇄한 것이다.

  2) 영양정보 : 조단백질 함량은 77～87% 내외로 매우 높으나, 대부분 케라틴으로 구성되어있어 시스틴은 풍부하나 다른 아미노산의 함량은 낮다. 우모분내 단백질과 아미노산은 소화 이용성이 매우 낮아 사료적 가치가 낮다. 

  3) 고려사항 : 많은 양의 우모분을 사용할 경우 메티오닌, 라이신, 트립토판 등의 제한 아미노산의 추가적인 공급을 고려해주어야 한다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다. 습열기준 121℃에서 15분 이상 또는 115℃에서 35분 이상 열처리하거나 동등 이상의 효력(건열기준 160∼170℃에서 1∼2시간 등)으로 열처리하여야 한다. 수분함량은 12% 이하이어야 한다. 

? 유도단백질(derived protein, 가수분해, 효소처리 등을 한 것을 포함)

  1) 정의 : 천연단백질을 물리적, 화학적으로 또는 효소 처리에 의해 변성 혹은 분해시켜 생성된 인공 고분자 화합물이다. 젤라틴이 대표적이며, 단백질의 1차 구조가 크게 변화되지 않은 응고단백질과 산, 알칼리 작용으로 형성되는 메타단백질 등이 있다. 

  2) 영양정보 : 천연단백질의 종류에 따라 영양소 성분의 변이가 크다. 젤라틴의 경우 88 ～ 90%의 조단백질 함량을 나타내며, 라이신은 약 3.6%를 포함한다. 

  3) 고려사항 : 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다. 습열기준 121℃에서 15분 이상 또는 115℃에서 35분 이상 열처리하거나 동등 이상의 효력(건열기준 160∼170℃에서 1∼2시간 등)으로 열처리하여야 한다.  

? 육골분(meat and bone meal)

  1) 정의 : 도축장이나 육가공 공장에서 제품 가공 후 생성되는 뼈와 뼈에 붙은 육편 등을 가압증기 처리한 후 압착해서 기름을 제거하고 고형분을 건조 분쇄한 것이다.  

  2) 영양정보 : 조단백질 49～53%, 조지방  9～13%, 조회분 25～30% 이다. 육분에 비해 조단백질함량과 아미노산 조성은 낮으나 광물질, 특히 칼슘과 인의 함량은 높다. 동물의 종류, 고기 및 뼈의 포함정도에 따라 영양소 변이가 심하다.  

  3) 고려사항 : 미국 사료공정규격(AAFCO)에서 육골분은 인의 함량 4.0% 이상이어야 하고, 칼슘의 함량은 인의 함량의 2.2배를 초과하지 않을 것을 권고하고 있다. 육분과 마찬가지로 장기보존 시 지방산화물의 생성이 증가하여 사료 가치가 저하되며, 세균 오염 가능성이 증가될 수 있다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다. 습열기준 121℃에서 15분 이상 또는 115℃에서 35분 이상 열처리하거나 동등 이상의 효력(건열기준 160∼170℃에서 1∼2시간 등)으로 열처리하여야 한다. 수분함량은 12% 이하이어야 한다. 

? 육골포(Jerked meat and bone)

  1) 정의 : 도축장이나 육가공 공장에서 제품 가공 후 생성되는 뼈와 뼈에 붙은 육편, 오리목뼈, 닭발, 닭목뼈, 꼬리 등을 소량의 보조사료(보존제와 향미제)를 도포, 침지시켜 건조한 것이다. 

  2) 영양정보 : 

  3) 고려사항 : 동물성단백질류의 열처리공정은 제외할 수 있으나, 식품에서 사용이 허용된 살균소독제 및 식초 등을 이용한 적절한 살균처리는 하여야 한다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다.  

? 육분(meat meal)

  1) 정의 : 도축장이나 육가공공장에서 부산물로 생성되는 육조직(육편 등)을 가압증기 처리한 후 압착해서 기름을 짜내고 건조 분쇄한 것이다.  

  2) 영양정보 : 조단백질 60 ～ 70% 정도로 높은 수준이며, 아미노산 조성 및 함량도 우수하다. 비타민 B군, 특히 비타민 B12와 콜린이 많이 들어있고, 칼슘, 인 등의 광물질함량이 높다. 

  3) 고려사항 : 육골분과 마찬가지로 장기보존 시 지방산화물의 생성이 증가하여 사료 가치가 저하되며, 세균 오염 가능성이 증가될 수 있다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.3% 미만이어야 한다. 습열기준 121℃에서 15분 이상 또는 115℃에서 35분 이상 열처리하거나 동등 이상의 효력(건열기준 160∼170℃에서 1∼2시간 등)으로 열처리하여야 한다. 수분함량은 12% 이하이어야 한다. 

? 육즙흡착사료(meat soluble from meat processing offal)

  1) 정의 : 가축을 도축한 후 도체와 장기를 증기나 뜨거운 물로 탈지시키고 이때 생기는 액체에서 지방을 분리하고 남은 액상물질인 육즙(meat solubles)에 곡류부산물류를 흡착시킨 것이다. 

  2) 영양정보 : 

  3) 고려사항 : 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다. 습열기준 121℃에서 15분 이상 또는 115℃에서 35분 이상 열처리하거나 동등 이상의 효력(건열기준 160∼170℃에서 1∼2시간 등)으로 열처리하여야 한다. 수분함량은 12% 이하이어야 한다. 원료명 및 혼합 비율을 확인하여야 한다.

? 육어포(Jerked meat and fish)

  1) 정의 : 주로 쇠고기나 닭고기 등의 육편과 어류, 연체류 등의 수산물을 세절 후 소량의 보조사료(보존제와 향미제)를 도포, 침지시켜 건조한 것이다. 

  2) 영양정보 : 

  3) 고려사항 : 동물성단백질류의 열처리공정은 제외할 수 있으나, 식품에서 사용이 허용된 살균소독제 및 식초 등을 이용한 적절한 살균처리는 하여야 한다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다. 수산물의 경우 원료는 동물에 해로운 수준의 자연독이 함유된 것을 사용해서는 아니 된다. 

? 육포(sliced dry meat)

  1) 정의 : 주로 쇠고기나 닭고기 등의 육편을 세절 후 소량의 보조사료(보존제와 향미제)를 도포, 침지시켜 건조한 것이다. 

  2) 영양정보 : 

  3) 고려사항 : 동물성단백질류의 열처리공정은 제외할 수 있으나, 식품에서 사용이 허용된 살균소독제 및 식초 등을 이용한 적절한 살균처리는 하여야 한다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다.

? 제각분(hoof and horn meal)

  1) 정의 : 가축의 발굽과 뿔을 가수분해 처리시킨 다음 건조 분쇄한 것이다.

  2) 영양정보 : 조단백질 77 ～ 85%, 칼슘 6%, 인 2%로 함량은 높으나 이용성이 낮으며, 동물의 종류와 입자의 크기 등에 따라 이용성에 변이가 크다. 

  3) 고려사항 : 단백질 함량은 높으나 소화율이나 아미노산 균형이 불량하다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다. 습열기준 121℃에서 15분 이상 또는 115℃에서 35분 이상 열처리하거나 동등 이상의 효력(건열기준 160∼170℃에서 1∼2시간 등)으로 열처리하여야 한다. 수분함량은 12% 이하이어야 한다.

? 초유(Colostrum)

  1) 정의: 분만 후 3일 이내 분비된 것으로 63℃ 30분간 또는 사료의 멸균ㆍ살균처리 기준에 따라 열처리한 것(분말제외)

  2) 영양정보: 유단백질 4% 이상, 총 면역글로부린 함량 20mg/ml 이상

  3) 고려사항 : 

? 혈액가공품[혈장단백 및 혈분을 제외]

  1) 정의 : 도축 및 도계 과정에서 발생하는 부산물인 가축혈액에 규산염제를 추가한 제품이다.

  2) 영양정보 : 

  3) 고려사항 : 혈액 이외의 이물질은 포함되지 않아야 하며 고온의 증기로 가공하여 멸균시켜야 한다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다. 습열기준 121℃에서 15분 이상 또는 115℃에서 35분 이상 열처리하거나 동등 이상의 효력(건열기준 160∼170℃에서 1∼2시간 등)으로 열처리하여야 한다. 수분함량은 12% 이하이어야 한다.

? 혈분(blood meal)

  1) 정의 : 도축 및 도계 과정에서 발생하는 부산물인 가축혈액을 건조시켜 분쇄한 것이다.

  2) 영양정보 : 조단백질 함량이 75 ～ 90% 로 매우 높으며 아미노산 조성도 우수하다. 하지만, 가공방법에 따라 영양소 함량 변이가 크고, 미생물 오염이 문제가 될 수 있다. 아미노산 이용률을 높일 수 있는 가공방법으로는 분무건조방법(spray drying method)이 있다.

  3) 고려사항 : 혈분을 많이 사용하면 사료의 기호성이 떨어지고 단백질의 소화율, 특히 라이신의 이용성이 저하된다. 혈액 이외의 이물질은 포함되지 않아야 하며 고온의 증기로 가공하여 멸균시켜야 한다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다. 습열기준 121℃에서 15분 이상 또는 115℃에서 35분 이상 열처리하거나 동등 이상의 효력(건열기준 160∼170℃에서 1∼2시간 등)으로 열처리하여야 한다. 수분함량은 12% 이하이어야 한다.

 ? 혈장단백(blood plasma protein)

  1) 정의 : 가축의 혈액을 사용하여 혈장과 혈구로 원심 분리한 다음 혈장(plasma)을 분무건조(spray dried)시켜 만든 것.

  2) 영양정보 : 조단백질 함량은 약 75~80%내외, 조회분은 8%정도이다. 혈분보다 단백질이 15%~20% 낮은 반면 조회분은 5%정도 높다.

  3) 고려사항 : 분무건조한 돼지혈장단백(spray dried porcine plasma)를 어린가축사료(creep feed)에 사용하면 장내(腸內)국소면역을 제공하고, 효소 및 아미노산을 공급하여 자돈(仔豚)의 성장률을 향상시킴. 수분함량은 12% 이하이어야 한다.

 나. 무기물류(inorganic materials)

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│? 무기물류는 사료 성분등록 시 가공뼈다귀, 녹각은 (최소량) 칼슘, 인, (최대량) 조회분을 등록하고, 살균   │

│공정을 확인하여야 한다.                                                                                 │

│? 골분, 골회, 난각분, 어골분, 어골회의 경우 (최소량) 칼슘, 인, (최대량) 조회분을 등록하고, 추가적으로  │

│혼합물질이 있는 경우 원료명 및 혼합비율을 확인하여야 하며, 난각분은 열처리 여부를 확인하여 한다.        │

│? 패분의 경우에는 (최소량) 칼슘, (최대량) 조회분을 등록하도록 되어 있다.                               │

└────────────────────────────────────────────────────┘

 ? 가공뼈다귀(processing bone)

  1) 정의 : 애완동물 개의 장난감 겸 간식 등으로 이용되는 일명 뼈다귀 껌을 말하며, 뼈다귀 겉면에 약간의 고기가 붙어 있거나 내장 등의 부산물이 덮여 있는 것도 있다.

  2) 영양정보 : 

  3) 고려사항 : 약간의 치석제거 기능이 있어 치아건강에 도움이 될 수 있으며, 개의 무료함이나 스트레스를 풀어주는데 도움이 되기도 한다. 특히 개는 대체로 생후 4개월령부터 이갈이를 시작하게 되어 잇몸이 무척 가렵게 되는데 이때 다른 물건을 파손하는 것을 막을 수 있다. 다만, 뼈를 먹을 경우 목에 걸릴 수도 있기 때문에 조심해야 한다. 살균공정을 확인하여야 한다.

 ? 골분(bone meal)

  1) 정의 : 도축장이나 대규모 식당 등지에서 나오는 가축의 뼈를 가압증기에 삶아서 단백질이나 지방을 제거한 후 건조 분쇄한 것이다.

  2) 영양정보 : 주성분은 인산 제3칼슘이며 약간의 탄산칼슘도 함유되어 있다. 골분 내 칼슘과 인의 비율이 약 2:1로 동물에게 가장 이상적인 칼슘과 인의 공급제로 사용할 수 있다. 가공처리방식에 따라서 생골분(raw bone meal)과 증제골분(steamed bone meal)으로 나눌 수 있다. 생골분의 칼슘함량은 22% 내외, 인함량 10% 내외이며 증제골분의 칼슘함량은 17～30%, 인 6～13%이다. 

  3) 고려사항 : 인광석과 달리 불소의 함량이 극히 미량이다. 강피류와 전분류를 혼합할 수 있으며, 원료명 및 혼합비율을 확인하여야 한다.

 ? 골회(bone ash)

  1) 정의 : 동물의 뼈를 공기 중에서 태워 만든 것이다. 

  2) 영양정보 : 칼슘과 인이 많이 함유되어 있다.

  3) 고려사항 : 미국 사료공정규격(AAFCO)에는 인의 함량이 15.3% 이상이어야 한다고 규정하고 있다.  

 ? 난각분(eggshell meal)

  1) 정의 : 난 가공공장에서 알을 깨어 난백과 난황을 이용하고 남은 알껍질, 난각막 그리고 난각막에 묻어 있는 내용물을 섞어 말린 후 분쇄한 것이다.

  2) 영양정보 : 주성분은 탄산칼슘이고 칼슘함량은 약 37%이다.

  3) 고려사항 : 병원성 미생물에 오염되었을 가능성이 있어서 건열기준 90～95℃에서 5～6시간 정도 열처리하거나 동등 이상의 효력으로 열처리하여야 한다. 입자의 크기는 80～100 메쉬 정도가 적당하다.  

 ? 녹각(antler, deer horn)

  1) 정의 : 사슴과에 속하는 마녹 또는 매화녹 등 각종 사슴의 각질화(角質化)된 뿔을 말하며, 녹용과는 다른 것이다.

  2) 영양정보 : 교질 약 25%, 인산칼슘 약 50 ～ 60%, 탄산칼슘, 염화칼슘 등을 함유하고 있다.

  3) 고려사항 : 

 ? 어골분(fish bone meal)

  1) 정의 : 어류의 가공 부산물로서 얻어지는 생어골을 삶아서 압착 건조 분쇄한 것이다. 

  2) 영양정보 : 칼슘과 인이 많이 함유되어 있다. 

  3) 고려사항 : 휘발성 염기태질소 함량이 0.3% 미만이어야 한다.  

 ? 어골회(fish bone ash)

  1) 정의 : 어류의 뼈를 공기 중에서 태워 만든 것이다. 

  2) 영양정보 : 칼슘과 인이 많이 함유되어 있다.

  3) 고려사항 :  

 ? 패분(oyster shell)

  1) 정의 : 굴, 조개, 산호 및 자개부산물 등의 껍질을 건조 분쇄한 것이다.

  2) 영양정보 : 주성분은 탄산칼슘(CaCO3)이다. 평균적으로 35% 내외의 칼슘을 함유하고 있다. 

  3) 고려사항 : 석회석에 비해 산란계에서 칼슘 이용성이 높아 석회석 일부를 대체하여 사용할 수 있다. 흙, 모래 등의 이물질 혼입도에 따라 칼슘 함량의 변이가 크다.  

다. 유지류(fats and oils)

┌──────────────────────────────────────────────────┐

│동물성유지류는 사료 성분등록 시 (최소량) 조지방, 열량(kcal/kg), (최대량) 산가(A.V) 30이하, 수분, 불 │

│용성불순물 함량(반추동물대용유용 0.02%이하, 기타 0.15%이하)을 등록하도록 되어 있다. 불용성불순물    │

│함량이 0.15%이상은 사료 또는 사료원료로 사용을 금지(최종 판매용에 한함)하고 있다.                   │

└──────────────────────────────────────────────────┘

 ? 곤충유(insect oil)

  1) 정의 : ‘곤충산업의 육성 및 지원에 관한 법률 시행령’에 근거하여 유통 또는 판매 가능한 식용 또는 사료용 곤충으로부터 추출한 지방

  2) 영양정보 : 곤충 종과 먹이원에 따라 지방산 조성의 차이가 크다.

  3) 고려사항 : 없음.

 ? 닭기름(chicken fat; 계유)

  1) 정의 : 닭의 지방조직에서 지방을 녹여 내어 얻어진 기름이다.

  2) 영양정보 : 가금의 지방은 다른 포유동물의 지방에 비해 불포화지방산이 함량이 높아 상온에서 액체 상태이며, 이용성도 상대적으로 우수하다. 리놀레산(C18:2) 함량이 16～23% 정도로서 다른 동물성 지방에 비해 특징적으로 높게 함유되어 있다.

  3) 고려사항 : 지방 조직의 용출 방법에 따라 품질 변이가 크며 오염이 쉽고 다른 동물성 지방에 비해 산패되기 쉽다.  

 ? 동물성식용잔유(restaurant oil, 정제된 것)

  1) 정의 : 조리 후 남는 동물성 폐식용유를 수집하여 정제된 것이다. 

  2) 영양정보 : 에너지가는 동물성 유지와 비슷하나 식용유의 종류 및 조리 방법 등에 따라 지방의 함량, 지방산 조성, 산패도의 변이가 크다. 

  3) 고려사항 :   

 ? 동물성혼합유지(mixed animal fat)

  1) 정의 : 돈지, 우지 등 동물성유지류를 혼합한 것이다.

  2) 영양정보 : 혼합한 종류에 따라서 지방산 조성에 차이가 있다.

  3) 고려사항 :   

 ? 돼지기름(lard; 돈지)

  1) 정의 : 돼지의 지방조직에서 지방을 녹여 내어 얻어진 기름이다.

  2) 영양정보 : 불포화지방산 함량이 우지보다 높아 융점이 낮고 동물에서의 이용성은 우지에 비해 상대적으로 높다. 

  3) 고려사항 :   

 ? 소기름(beef tallow; 우지)

  1) 정의 : 소의 지방조직에서 얻어진 기름이다. 

  2) 영양정보 : 상온에서 백색에서 담황색을 띄는 고체지방으로 양질의 것은 약간의 향기가 있고 융점은 40～46℃, 요오드가는 35～46이다. 포화지방산과 단가불포화지방산인 올레익산 함량이 높아 지방의 이용률이 다른 불포화지방산 함량이 높은 지방 공급원에 비해 상대적으로 낮다. 

  3) 고려사항 :   

 ? 양기름(mutton tallow; 양지)

  1) 정의 : 양의 지방조직에 열을 가하여 녹여내어 얻는 담황백색의 고체지방이다.

  2) 영양정보 : 우지보다 포화지방산의 함량이 다소 높아 융점이 우지보다 3～4℃ 높으며 이용성은 상대적으로 낮다.

  3) 고려사항 : 냄새가 강하고 포화지방산 함량이 높아 기호성이 떨어진다.  

 ? 어류기름(fish oil; 어유)

  1) 정의 : 어류, 갑각류 및 연체류로부터 채취하여 사료용으로 적합하게 가공한 유지다. 전체 어류에서 채취한 어체유(fish body oil)와 간장에서 채취한 간유(liver oil)로 구분할 수 있다. 최근에 생산되는 어유는 대부분 어분 제조시의 부산물인 자숙액 및 압착액으로부터 분리, 정제되는 것이다. 

  2) 영양정보 : 포화지방산의 함량은 낮으나 다가불포화지방산 함량이 높다. 동물에게 이용성은 높으나 산패되기 쉬운 단점이 있다. 어유의 지방함량과 지방산 조성은 포획 시기, 어종, 비만도, 산란 등에 따라 변이가 크며, 육상동물 유지에 비해 EPA(eicosapentaenoic acid) 및 DHA(docosahexaenoic acid)가 다량 함유되어 있다.

  3) 고려사항 : 고기나 계란의 어취문제가 나타날 수 있으며, 산패에 유의해야한다.  

 ? 오리기름(duck tallow; 압지)

  1) 정의 : 오리의 지방조직에서 얻어진 기름이다. 

  2) 영양정보 : 가금의 지방은 다른 포유동물의 지방에 비해 불포화지방산이 함량이 높아 상온에서 액체 상태이며, 이용성도 상대적으로 우수하다. 리놀레산(C18:2) 함량이 16～23% 정도로서 다른 동물성 지방에 비해 특징적으로 높게 함유되어 있다.

  3) 고려사항 : 지방 조직의 용출 방법에 따라 품질 변이가 크며 오염이 쉽고 다른 동물성 지방에 비해 산패되기 쉽다

 ? 초록입홍합추출오일(Green lipped mussel oil)

  1) 정의 : 초록입홍합(green lipped mussel)으로부터 고압처리, 슬러리 처리, 동결건조, 분쇄 및 초임계 추출 후 비타민E를 혼합하여 만든 오일.

  2) 영양정보 : Docosahexanoic acid(DHA), eicosapentaenoic(EPA), docosapentaenoic(DPA) 및 α-linolenic acid의 전체 합이 290∼440 ㎍/g 이상 함유하고 있음.

  3) 고려사항 : 납, 카드뮴 및 총 수은의 함량이 1.0㎎/㎏ 이어야 하며, 총 비소의 함량은 10㎎/㎏ 이어야 한다. 대장균군은 음성이어야 한다.

라. 곤충류(insects)

┌───────────────────────────────────────────────────┐

│곤충류는 사료 성분등록 시 (최소량) 조단백질, (최대량) 수분, 조지방, 조회분을 등록하도록 되어 있으며,  │

│사료의 형태에 따라 생물, 냉동, 냉장 또는 건조 분말 등으로 표시하여야 한다.                            │

│ * 「곤충산업의 육성 및 지원에 관한 법률」 제11조제2항 및 동법 시행령 제6조제1항에 따른 유통 또는     │

│판매 가능한 곤충의 종류(별표 2)에 속하는 식용 또는 사료용 곤충으로 위생적으로 사육된 것에 한한다.     │

└───────────────────────────────────────────────────┘

 ? 거저리 유충(mealworm, superworm; 밀웜, 슈퍼밀웜)

  1) 정의 : ‘갈색거저리(밀웜, Tenebrio molitor)’와 ‘아메리카왕거저리(슈퍼밀웜, Zophobas atratus 또는 Z. morio)’ 유충 또는 번데기를 가공 처리한 것으로 건조원물 또는 박류(粕類) 형태의 것을 포함한다.

  2) 영양정보 : 건조제품의 경우 조단백질 46∼57%, 조지방 24∼37%, 섬유질 4∼7%, 조회분 3∼4%, 수분 5∼8%정도이다.

  3) 고려사항 : 주로 관상어ㆍ조류, 애완용 파충류 등의 동물성 단백질 공급원으로 건조밀웜, 건조슈퍼웜 등의 제품명으로 시중에 유통되고 있다. 건조방법으로는 동결건조, 열풍건조 등이 있다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다.  

 ? 건조귀뚜라미(dried cricket)

  1) 정의 : ‘쌍별귀뚜라미(Gryllus bimaculatus)’와 ‘왕귀뚜라미(Teleogryllus emma)’의 유충(약충) 또는 성충을 가공 처리한 것.

  2) 영양정보 : 조단백질 58∼60%, 조지방 14∼16%, 조섬유 6∼7%, 조회분 6%, 수분 5∼7% 정도이다.

  3) 고려사항 : 주로 관상어, 조류 및 애완용 파충류 등의 동물성 단백질 공급원으로 유통되고 있다. 동결건조 귀뚜라미는 반건조 귀뚜라미보다 보관이 손쉽다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다.  

 ? 건조메뚜기(dried grasshopper)

  1) 정의 : ‘우리벼메뚜기(Oxya chinensis sinuosa)’와 ‘풀무치(Locusta migratoria migratoria)’의 유충(약충) 또는 성충을 가공 처리한 것.

  2) 영양정보 : 조단백질 64∼66%, 조지방 6∼11%, 조섬유 8∼9%, 조회분 4∼5%, 수분 6∼9%정도이다.

  3) 고려사항 : 주로 파충류와 조류의 먹이로 사용되어 왔으며 기타 애완동물의 먹이로도 활용되고 있다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다.  

 ? 동애등에 유충(black soldier fly larva)

  1) 정의 : ‘아메리카동애등에(Black soldier fly, Hermetia illucens)’ 유충 또는 번데기를 가공 처리한 것.

  2) 영양정보 : 조단백질 40∼43%, 조지방 28∼30%, 조섬유 7∼8%, 조회분 9∼15%, 수분 7%정도이다.

  3) 고려사항 : 미국을 비롯한 국내에서는 피닉스웜(Phoenix Worm)이라는 상품명으로 유통되고 있다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다.  

 ? 번데기(pupa, silkworm pupa)

  1) 정의 : 누에(Silkworm, Bombyx mori)‘ 유충 또는 번데기를 가공 처리한 것

  2) 영양정보 : 건조 번데기(누에)의 경우 조단백질 52%, 조지방 28%, 조섬유 5%, 조회분 5%, 수분 7∼8%정도이다. 번데기박은 조단백질 71∼72%, 조지방 3∼4%, 조섬유 5%, 조회분 5%, 수분 9∼10%정도이다.

  3) 고려사항 : 주로 관상어, 조류 및 애완용 파충류 등의 동물성 단백질 공급원으로 유통되고 있다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다.  

 ? 장구벌레(blood worm)

  1) 정의 : 모기의 애벌레(유충)로 건조, 동결 등 가공처리한 것에 한한다.

  2) 영양정보 : 건조제품의 경우 조단백질 57%, 조지방 6∼7%, 조섬유 3%, 조회분 9%, 수분 7%정도이다.

  3) 고려사항 : 주로 열대어 등 관상어종, 파충류의 사료로 활용하고 있는 것으로서 냉동 또는 건조 형태로 유통되고 있다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다.  

 ? 파리 유충(fly larva, maggot)

  1) 정의 : 집파리(house fly, Musca domstica) 유충 또는 번데기를 건조, 동결 등 가공 처리한 것에 한한다.

  2) 영양정보 : 조단백질 57∼63%, 조지방 9.3∼25%, 조섬유 6∼7%, 조회분 5.3∼12%정도이다. 아지닌(arginine), 메티오닌(methionine), 라이신(lysine) 등과 같은 필수아미노산의 좋은 공급원으로 알려져 있으며 이러한 아미노산 함량은 대두박보다 높고 어분과 같은 수준이다. (Teotia and Miller 1974)

  3) 고려사항 : 주로 관상어종, 조류 등의 사료로 활용이 가능하다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다.  

 마. 플랑크톤류(plankton)

┌──────────────────────────────────────────────────┐

│? 동물성 플랑크톤(Zooplankton)은 스스로 에너지를 합성하지 못하는 수생 갑각류를 총칭하는 말이다.    │

│이들의 서식지는 해양, 호수, 강 등 다양하다. 광합성으로 에너지를 합성할 수 있는 식물성 플랑크톤      │

│과는 구별되며, 대부분은 육안으로 보기에는 너무 작다. 여러 수생생물에게 유용한 식량원이 되며, 일     │

│부는 식품으로 소비되기도 한다.                                                                      │

│? 플랑크톤류는 사료 성분으로서 (최소량) 조단백질, 조지방, (최대량) 수분, 조회분을 등록하도록 되어  │

│있으며, 사료의 형태에 따라 생물, 냉동, 냉장 또는 건조 분말 등으로 표시하여야 한다.                  │

└──────────────────────────────────────────────────┘

? 로티퍼(rotifer)

  1) 정의 :  로티퍼는 100-2500micron정도 크기의 아주 작은 유기체인데 수중이나 습지에서 흔히 발견된다. 바다에 사는 종도 있지만 대부분은 담수에서 발견되었으며 대략 2000종정도가 보고되었다. 로티퍼는 담수 동물성 플랑크톤의 약 50%정도를 차지한다. 생식력이 아주 뛰어나서 L당 1000마리 이상이 존재하는 경우가 많다. 대략 1g정도의 로티퍼 알은 200,000개의 알을 포함하고 있으며 28℃정도의 온도에서 36시간 정도에 80%가 부화한다.

  2) 영양정보 : 건조제품의 경우 조단백질 60%, 조지방 11%, 조섬유 5%, 조회분 11%, 수분 7∼8%정도이다.

  3) 고려사항 : 동결건조 로티퍼(freeze dried rotifer) 제품은 치어를 위한 건조사료로서 브라인슈림프보다 작은 크기를 가지고 있다. 치어의 생존율과 성장에 도움을 줄 수 있는 로티퍼는 크기 약 100∼300㎛의 윤형동물에 속하는 동물군을 지칭한다. 해수어 혹은 담수 열대어의 초기 치어먹이로 적당하다. 냉동 또는 건조 형태로 유통되고 있다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다.  

 ? 마이시스슈림프(mysis shrimp; 곤쟁이)

  1) 정의 : 민물호수에서 채집된 새우와 유사한 것을 말한다.

  2) 영양정보 : 건조제품은 조단백질 65%, 조지방 8%, 조섬유 2.5%, 조회분 13%, 수분 7%정도이다.

  3) 고려사항 : 주로 해수어 및 열대어의 먹이로 널리 사용되며 동물성 단백질의 공급원이며 냉동 또는 건조 형태로 유통되고 있다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다.  

 ? 물벼룩(daphnia)

  1) 정의 :  물벼룩과에 속하는 생물이다. 민물에 사는 아주 작은 갑각류로, 몸길이는 1.2 ～ 2.5㎜이다. 

  2) 영양정보 : 건조제품의 경우 조단백질 49%이상, 조지방 5.6%이하, 조회분 13%이하, 조섬유 3%이하, 수분 6∼8%이하이다.

  3) 고려사항 : 물벼룩은 고단백이며 소형 어종에는 가장 이상적인 먹이중 하나이다. 주로 열대어용 먹이로 사용되고 있다. 치어를 위한 모이나(1mm 내외)와 준성어(구피기준)를 위한 다프니아(3mm 내외)를 주로 배양하여 냉동 또는 건조 형태로 유통되고 있다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다.  

 ? 알테미아(artemia, brine shrimp; 브라인슈림프)

  1) 정의 : 알테미아는 영어로는 브라인슈림프(brine shrimp)라고 알려진 수생 갑각류 중 원시적인 형태의 새우 종을 말한다. 전형적인 여과섭식형의 동물성 플랑크톤이다.

  2) 영양정보 : 건조제품의 경우 조단백질 52∼71%, 조지방 3∼7%, 조섬유 3%, 조회분 5∼9%, 수분 7∼15%정도이다.

  3) 고려사항 : 주로 고급 관상어종 등의 사료로 활용하고 있는 것으로서 냉동 또는 건조 형태로 유통되고 있다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다.  

 ? 코페포다(Copepoda, Copepod; 검물벼룩, 요각류)

  1) 정의 : 로티퍼보다 크기가 큰 검물벼룩류(Cyclopoida)의 일종이다. 인공 배양이 가능한 것으로 밝혀진 대표적인 종은 Apocyclops sp., T. japonicus 이다.

  2) 영양정보 :  건조제품의 경우 조단백질 57∼62%, 조지방 7%, 조회분 12%, 조섬유 4.9%, 수분 7∼8%정도이다.

  3) 고려사항 : 소화가 잘 되며 영양이 풍부하여 야생에서 다양한 열대어 치어들의 먹이가 된다. 주로 해수어 및 담수 열대어 등의 치어용 사료로서 냉동 또는 건조 형태로 유통되고 있다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다.  

 ? 크릴(krill)

  1) 정의 : 난바다곤쟁이목(Euphausiacea)에 속하는 갑각류로 새우와 비슷하게 생긴 해양 무척추 동물이다. 크릴은 새우가 아니라 동물성 플랑크톤으로 평형기가 없고 아가미가 나와 있다. 몸길이는 3∼5cm이다.

  2) 영양정보 : 건조제품은 조단백질 50∼65%, 조지방 8∼18%, 조섬유 2∼6%, 조회분 9∼16%, 수분 7∼8%정도이다.

  3) 고려사항 : 주로 관상어ㆍ조류, 애완용 파충류 등의 동물성 단백질 공급원으로 유통되고 있다. 냉동 또는 건조 형태로 유통되고 있다. 분말 형태의 것은 크릴밀(krill meal, 크릴분말)이라고 한다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다.  

 바. 낙농가공부산물류(dairy products)

┌──────────────────────────────────────────────────┐

│낙농가공부산물류는 사료 성분으로서 (최소량) 조단백질, (최대량) 수분, 조지방, 조회분을 등록하도록 되 │

│어 있다.                                                                                            │

└──────────────────────────────────────────────────┘

 ? 유당(lactose; 젖당)

  1) 정의 : 포도당과 갈락토오스가 β-1,4 결합하고 있는 이당류이며, 우유 중에 4.4 ～ 5.2% 함유된 주요 탄수화물이다. 

  2) 영양정보 : 어린 포유동물에게 이용성이 높은 에너지 공급원이다. 

  3) 고려사항 : 물에 대한 용해도가 낮아 과포화용액은 쉽게 결정화 된다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.3% 미만이어야 한다. 강피류, 박류, 생균제(균체, 효모)를 혼합할 수 있으며, 혼합물질이 있는 경우 원료명 및 혼합비율을 확인하여야 한다.

 ? 유장(whey, milk serum; 유청)

  1) 정의 : 우유 또는 탈지유에 응유효소(rennet)를 작용시키거나 산을 처리하여 형성된 커드(응고물)를 제거하고 남은 황록색의 투명한 액체 또는 이를 농축 건조하여 만든 유제품이다. 건조 후 사용하는 것은 유장분말 혹은 건조유청(whey powder, dried whey)이라고도 한다. 

  2) 영양정보 : 신선한 유장은 수분 93 ～ 96%, 건물 4 ～ 8%, 조단백질 0.7 ～ 0.9%, 유당 5.0%, 회분을 0.7～1.0% 함유하고 있다. 농축하거나 건조시키면 9 ～ 12%의 조단백질, 60 ～ 70%의 유당을 함유하여 어린동물 사료의 원료로 이용할 수 있다.

  3) 고려사항 : 주로 유장분말의 형태로 사용된다. 고온에 노출된 유청의 경우 라이신과 유당이 결합하는 화학적 반응(메일라드 반응)이 일어나서 영양소 소화율이 저하된다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.3% 미만이어야 한다. 강피류, 박류, 생균제(균체, 효모)를 혼합할 수 있으며, 혼합물질이 있는 경우 원료명 및 혼합비율을 확인하여야 한다.

 ? 유조제품(milk products) 

  1) 정의 : 탈지분유 50%, 유장분말 30%, 식물성유지 20%로 만든 제품이다. 

  2) 영양정보 : 조단백질 함량이 약 35 ～ 40%로 우수한 동물성 단백질사료이며, 기호성이 좋을 뿐만 아니라 소화율도 뛰어나다.

  3) 고려사항 : 휘발성 염기태질소 함량이 0.3% 미만이어야 한다. 강피류, 박류, 생균제(균체, 효모)를 혼합할 수 있으며, 혼합물질이 있는 경우 원료명 및 혼합비율을 확인하여야 한다.

 ? 전지분유(whole milk powder)

  1) 정의 : 우유의 지방 함량을 표준화한 후 열처리하고 45～50%의 총고형분이 되도록 농축한 후 균질화하고 분무건조한 유제품이다.

  2) 영양정보 : 조단백질 21 ～ 24% , 조지방 20 ～ 30%를 함유하고 있으며, 유지방, 유당, 칼슘 함량이 높고 이용성도 우수하다. 

  3) 고려사항 : 지방 함량이 높아 산패되기 쉽다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.3% 미만이어야 한다. 강피류, 박류, 생균제(균체, 효모)를 혼합할 수 있으며, 혼합물질이 있는 경우 원료명 및 혼합비율을 확인하여야 한다.

 ? 치즈(cheese; 치즈밀 포함)

  1) 정의 : 우유나 다른 동물의 젖에 응유효소(rennet)나 유산균 등을 작용시켜 카제인을 지질과 함께 응고시켜 커드로 만든 후, 그 커드를 열처리, 가압성형 또는 미생물을 접종시켜 숙성, 발효시킨 유제품이다.

  2) 영양정보 : 조단백질 20 ～ 30%, 조지방 45 ～ 55% 이며 칼슘, 인, 철의 함량이 높다. 

  3) 고려사항 : 휘발성 염기태질소 함량이 0.3% 미만이어야 한다. 강피류, 박류, 생균제(균체, 효모)를 혼합할 수 있으며, 혼합물질이 있는 경우 원료명 및 혼합비율을 확인하여야 한다.

 ? 탈지분유(skim milk powder, non-fat dry milk)

  1) 정의 : 우유에서 대부분의 유지방을 제거하고 남는 탈지유를 열처리하고 농축 건조시킨 유제품이다.

  2) 영양정보 : 가격은 비싸나 영양가와 기호성이 높고, 어린 동물의 대용유 또는 입붙임 사료에 많이 쓰인다. 조단백질 함량이 33% 내외로 훌륭한 단백질 공급원이며 필수아미노산 함량이 높고, 이용성도 우수하다. 비타민과 광물질, 특히 칼슘함량이 높아 칼슘 공급원으로 이용할 수 있다. 가용무질소물의 함량은 47% 정도이며 대부분 유당이다. 

  3) 고려사항 : 휘발성 염기태질소 함량이 0.3% 미만이어야 한다. 강피류, 박류, 생균제(균체, 효모)를 혼합할 수 있으며, 혼합물질이 있는 경우 원료명 및 혼합비율을 확인하여야 한다.

3. 광물성(mineral feeds)

 가. 식염류(table salts, kitchen salts)

┌───────────────────────────────────────────────────┐

│식염류는 사료 성분으로서 (최소량) 염화나트륨, 총 염소, (최대량) 수분, 불용물질을 등록하도록 되어 있다.│

└───────────────────────────────────────────────────┘

 ? 가공소금(processed salt)

  1) 정의 : 천일염, 재제소금(재제조소금), 태음ㆍ용융소금, 정제소금, 기타 소금(암염이나 호수염 등을 식용에 적합하도록 가공하여 분말, 결정형 등으로 제조한 소금)을 50% 이상 사용하여 식품 또는 식품첨가물을 가하여 가공한 소금을 말한다.

  2) 영양정보 : 염화나트륨 35% 이상, 총 염소 20% 이상, 수분 5.5% 이하이며 기타사항은 식품공전 기준 및 규격에 적합하여야 한다.

  3) 고려사항 :   

 ? 정제소금(refined salt, 소금산업진흥법 제2조의 규정에 의한 화학부산물소금을 제외)

  1) 정의 : 해수(해양심층수 포함)를 이온교환막 등의 방법으로 정제한 농축함수 또는 원료소금(100%)을 용해한 물을 진공증발관 등에 넣어 제조한 소금을 말한다. 화학물질의 제조ㆍ생산ㆍ분해 등의 과정에서 발생한 부산물로 제조한 소금인 화학부산물소금은 정제소금으로 보지 않는다.

  2) 영양정보 : 염화나트륨 95% 이상(해양심층수염은 70% 이상), 총염소 58% 이상(해양심층수염은 40%이상), 수분 4.0% 이하(해양심층수염은 10% 이하)이며 기타사항은 식품공전 기준 및 규격에 적합하여야 한다.

  3) 고려사항 :   

 ? 천일염(sun dried salt)

  1) 정의 : 염전에서 해수를 자연 증발시켜 얻은 염화나트륨이 주성분인 결정체와 이를 분쇄, 세척, 탈수 또는 건조한 염을 말한다.

  2) 영양정보 : 염화나트륨 70% 이상, 총염소 40% 이상, 수분 15% 이하이며 기타사항은 식품공전 기준 및 규격에 적합하여야 한다.

  3) 고려사항 :   

 나-1) 인산염류(phosphates products)

┌────────────────────────────────────────────────────┐

│인산염류는 공통적으로 (최소량) 인을 등록하며, 명칭별로 인산칼슘은 (최소량) 칼슘, 인산칼륨은 (최소량)    │

│칼륨, 인산나트륨은 (최소량) 나트륨을 등록하고 공급제의 명칭, 분자식, 순도, 공급제의 함유율을 확인하여야 │

│한다.                                                                                                   │

└────────────────────────────────────────────────────┘

 ? 소성인산석회(disintegrated calcium phosphates, calcined calcium phosphates)

  1) 정의 : 칼슘 25% 이상, 인 18% 이상을 함유하는 백색분말 또는 입상물질(분자식 Ca3(PO4)2)이다.

  2) 영양정보 : 

  3) 고려사항 : 가축의 인ㆍ칼슘 공급제로 배합사료에 1% 내외로 혼합 사용되고 있다.  

 ? 제일인산나트륨(인산일나트륨, Sodium Phosphate, Monobasic)

  NaH2PO4ㆍnH2O(n = 0, 1, 2)  분자량 2수염  159.01  

                                1수염  138.00       

                              무수물  119.98        

정    의  이 품목에는 결정물(1수염, 2수염)) 및 무수물이 있고, 각각을 제일인산나트륨(결정) 및 제일인산나트륨(무수)이라 칭한다.

함    량  이 품목은 건조한 다음 정량할 때, 제일인산나트륨(NaH2PO4＝119.98) 97.0% 이상을 함유한다.

성    상  이 품목의 결정물은 무백색의 결정 또는 백색의 결정성분말이고, 무수물은 백색의 분말 또는 입상이다.

확인시험  이 품목의 수용액(1→20)은 확인시험법 중 나트륨염 및 인산염의 반응을 나타낸다.

순도시험  결정물은 40℃에서 16시간 건조한 다음 120℃에서 4시간 건조한 후 시험한다.

  (1) 액  성 : 이 품목의 수용액(1→100)의 pH는 4.2～4.6이어야 한다.

  (2) 비  소 : 이 품목은 0.25g을 물 5mL에 녹이고 이를 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다.

  (3) 납 : 「메타인산나트륨」의 순도시험 (2)에 따라 시험한다.

  (4) 카드뮴 : 「메타인산나트륨」의 순도시험 (3)에 따라 시험한다.

  (5) 수  은 : 이 품목을 수은시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  (6) 불소화물 : 이 품목 1g을 정밀히 달아 「구연산칼슘」의 순도시험 (8)에 따라 시험한다(10ppm 이하).

  (7) 유리산 및 제이인산나트륨 : 이 품목 2g을 물 40mL에 녹이고 1N 수산화나트륨용액 또는 1N 황산으로 중화할 때 소비되는 양은 0.3mL 이하이어야 한다(지시약 : 메틸오렌지시액).

건조감량  이 품목을 60℃에서 1시간 건조한 후, 105℃에서 4시간 건조할 때 무수물은 2.0%, 1수염은 15.0%, 2수염은 25.0% 이하이어야 한다.

정 량 법  이 품목을 건조한 다음 약 3g을 정밀히 달아 물 30mL에 녹이고 염화나트륨 5g을 가하여 잘 흔들어 섞어 녹이고 약 15℃로 유지하면서 1N 수산화나트륨용액으로 적정한다(지시약 : 치몰블루시액 3～4방울).

1N 수산화나트륨용액 1mL ＝ 119.98mg NaH2PO4

 ? 제이인산나트륨(인산이나트륨, 인산수소이나트륨, Sodium Phosphate, Dibasic)

  Na2HPO4   분자량 141.96   

정    의  이 품목에는 결정물(2～12수염) 및 무수물이 있고, 각각을 제이인산나트륨(결정) 및 제이인산나트륨(무수)이라 칭한다.

함    량  이 품목은 건조한 다음 정량할 때, 제이인산나트륨(Na2HPO4 ＝ 141.96) 98.0% 이상을 함유한다.

성    상  이 품목의 결정물은 무～백색의 결정 또는 결정성 덩어리이며 무수물은 백색의 분말이다.

확인시험  이 품목의 수용액(1→20)은 확인시험법 중 나트륨염의 (가), (나)의 반응 및 인산염의 반응을 나타낸다.

순도시험  결정물은 40℃에서 3시간 건조한 다음 120℃에서 4시간 건조한 후 시험한다.

  (1) 물불용물 : 「제삼인산나트륨」의 순도시험 (1)에 따라 시험할 때, 그 양은 0.2% 이하이어야 한다.

  (2) 액  성 : 이 품목 수용액(1→100)의 pH는 9.0～9.6이어야 한다.

  (3) 비  소 : 이 품목 0.25g을 물 5mL에 녹여 이를 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다.

  (4) 납 : 「메타인산나트륨」의 순도시험 (2)에 따라 시험한다.

  (5) 카드뮴 : 「메타인산나트륨」의 순도시험 (3)에 따라 시험한다.

  (6) 수  은 : 이 품목을 수은시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  (7) 불소화물 : 이 품목 1g을 정밀히 달아 「구연산칼슘」의 순도시험 (8)에 따라 시험한다(10ppm 이하).

건조감량  이 품목의 결정물은 40℃에서 3시간 건조한 다음 120℃에서 4시간 건조할 때 61% 이하, 무수물은 120℃에서 4시간 건조할 때 2% 이하이어야 한다.

정 량 법  이 품목을 건조한 다음 약 3g을 정밀히 달아 물 50mL에 녹여 약 15℃로 유지하면서 1N 염산으로 적정한다(지시약 : 메틸오렌지ㆍ자일렌시아놀 FF시액 3～4방울).

1N 염산 1mL ＝ 141.96mg Na2HPO4

 ? 제삼인산나트륨(인산삼나트륨, Sodium Phosphate, Tribasic)

  Na3PO4  분자량 163.94   

정    의  이 품목에는 결정물 및 무수물이 있고, 각각을 제삼인산나트륨(결정) 및 제삼인산나트륨(무수)이라 칭한다.

함    량  이 품목은 건조한 다음 정량할 때, 제삼인산나트륨(Na3PO4＝163.94) 97.0～103.0%를 함유한다.

성    상  이 품목의 결정물은 무～백색의 결정 또는 결정성분말이고 무수물은 백색의 분말 또는 입상이다.

확인시험  이 품목의 수용액(1→20)은 확인시험법 중 나트륨염 (가), (나)의 반응 및 인산염의 반응을 나타낸다.

순도시험  결정물은 120℃에서 2시간 건조한 다음 200℃에서 5시간 건조한 다음 시험한다.

  (1) 물불용물 : 이 품목 10g을 「산성피로인산나트륨」의 순도시험 (1)에 따라 시험할 때, 그 양은 0.2% 이하이어야 한다.

  (2) 액  성 : 이 품목 수용액(1→100)의 pH는 11.5～12.5이어야 한다.

  (3) 비  소 : 이 품목 0.25g을 물 5mL에 녹여 이를 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다.

  (4) 납 : 「메타인산나트륨」의 순도시험 (2)에 따라 시험한다.

  (5) 카드뮴 : 「메타인산나트륨」의 순도시험 (3)에 따라 시험한다.

  (6) 수  은 : 이 품목을 수은시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  (7) 불소화물 : 이 품목 1g을 정밀히 달아 「구연산칼슘」의 순도시험 (8)에 따라 시험한다(10ppm 이하).

건조감량  이 품목의 결정물은 120℃에서 2시간 건조한 다음 200℃에서 5시간 건조할 때 58.0% 이하, 무수물은 200℃에서 5시간 건조할 때 5% 이하이어야 한다.

정 량 법  이 품목을 건조한 다음 약 2g을 정밀히 달아 물 50mL에 녹여 약 15℃로 유지하면서 1N 염산으로 적정한다(지시약 : 메틸오렌지ㆍ자일렌시아놀 FF시액 3～4방울).

1N 염산 1mL ＝ 81.97mg Na3PO4

 ? 제일인산칼륨(산성인산칼륨, Potassium Phosphate, Monobasic)

  KH2PO4  분자량 136.09   

함    량  이 품목은 건조한 다음 정량할 때, 제일인산칼륨(KH2PO4) 98.0% 이상을 함유한다.

성    상  이 품목은 무색의 결정 또는 백색의 입상 또는 결정성분말이다.

확인시험  (1) 이 품목의 수용액(1→20)은 산성이다.(2) 이 품목의 수용액(1→20)은 확인시험법 중 칼륨염 및 인산염의 반응을 나타낸다.

순도시험  (1) 물불용물 : 이 품목 10g을 「산성피로인산나트륨」순도시험 (1)에 따라 시험할 때, 그 양은 0.2% 이하이어야 한다.

  (2) 액  성 : 이 품목의 수용액(1→100)의 pH는 4.2～4.7이어야 한다.

  (3) 비  소 : 이 품목 0.25g을 물 5mL에 녹여 이를 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다.

  (4) 납 : 「메타인산나트륨」의 순도시험 (2)에 따라 시험한다.

  (5) 카드뮴 : 「메타인산나트륨」의 순도시험 (3)에 따라 시험한다.

  (6) 수  은 : 이 품목을 수은시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  (7) 불소화물 : 이 품목 1g을 정밀히 달아 「구연산칼슘」의 순도시험 (8)에 따라 시험한다(10ppm 이하).

건조감량  이 품목을 105℃에서 4시간 건조할 때, 그 감량은 2.0% 이하이어야 한다.

정 량 법  이 품목을 건조한 다음 약 3g을 정밀히 달아 물 30mL에 녹이고 염화나트륨 5g을 가하여 잘 흔들어 섞어 녹여 약 15℃로 유지하면서 1N 수산화나트륨용액으로 적정한다(지시약 : 치몰블루시액 3～4방울).

1N 수산화나트륨용액 1mL ＝ 136.1mg KH2PO4

 ? 제이인산칼륨(Potassium Phosphate, Dibasic, 인산이칼륨)

  K2HPO4  분자량 174.18   

함    량  이 품목은 건조한 다음 정량할 때, 제이인산칼륨(K2HPO4) 98.0% 이상을 함유한다.

성    상  이 품목은 백색의 분말, 결정 또는 덩어리이다.

확인시험  (1) 이 품목의 수용액(1→20)에 페놀프탈레인시액 한 방울을 가하면 홍색을 나타낸다.(2) 이 품목의 수용액(1→20)은 확인시험법 중 칼륨염 및 인산염의 반응을 나타낸다.

순도시험  (1) 물불용물 : 이 품목 10g을「산성피로인산나트륨」의 순도시험 (1)에 따라 시험할 때, 그 양은 0.2% 이하이어야 한다.

  (2) 액  성 : 이 품목의 수용액(1→100)의 pH는 8.7～9.3이어야 한다.

  (3) 비  소 : 이 품목 0.25g을 물 5mL에 녹여 이를 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다.

  (4) 납 : 「메타인산나트륨」의 순도시험 (2)에 따라 시험한다.

  (5) 카드뮴 : 「메타인산나트륨」의 순도시험 (3)에 따라 시험한다.

  (6) 수  은 : 이 품목을 수은시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  (7) 불소화물 : 이 품목 1g을 정밀히 달아 「구연산칼슘」의 순도시험 (8)에 따라 시험한다(10ppm 이하).

건조감량  이 품목을 105℃에서 4시간 건조할 때, 그 감량은 2.0% 이하이어야 한다.

정 량 법  이 품목을 건조한 다음 약 3g을 정밀히 달아 물 50mL에 녹여 약 15℃로 유지하면서 1N 염산으로 적정한다(지시약 : 메틸오렌지ㆍ자일렌시아놀 FF시액 3～4방울).

1N 염산 1mL ＝ 174.2mg K2HPO4

 ? 제삼인산칼륨(Potassium Phosphate, Tribasic, 인산삼칼륨)

  K3PO4ㆍnH2O(n=0 또는 3)   분자량 3수염 266.31   

                            무수물 212.27         

함    량  이 품목은 강열한 다음 정량할 때, 제삼인산칼륨(K3PO4 ＝ 212.27) 97.0% 이상을 함유한다. 

성    상  이 품목은 무～백색의 결정, 덩어리 또는 백색의 분말이다.

확인시험  (1) 이 품목의 수용액(1→20)은 알칼리성이다.(2) 이 품목의 수용액(1→20)은 확인시험법 중 칼륨염 및 인산염의 반응을 나타낸다.

순도시험  (1) 물불용물 :「제삼인산나트륨」의 순도시험 (1)에 따라 시험할 때, 그 양은 0.2% 이하이어야 한다.

  (2) 액  성 : 이 품목 1g을 물 100mL를 가해서 녹인 액의 pH는 11.5～12.5이어야 한다.

  (3) 비  소 : 이 품목 0.25g을 물 5mL에 녹이고 이를 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다.

  (4) 납 : 「메타인산나트륨」의 순도시험 (2)에 따라 시험한다.

  (5) 카드뮴 : 「메타인산나트륨」의 순도시험 (3)에 따라 시험한다.

  (6) 수  은 : 이 품목을 수은시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  (7) 불소화물 : 이 품목 1g을 정밀히 달아 「구연산칼슘」의 순도시험 (8)에 따라 시험한다(10ppm 이하).

강열감량  이 품목을 처음 120℃에서 건조하고 이어 300～400℃에서 1시간 강열할 때, 그 감량은 23% 이하이어야 한다.

정 량 법  이 품목을 강열한 다음 약 2g을 정밀히 달아 물 50mL를 가하여 녹이고 약 15℃로 유지하면서 1N 염산으로 적정한다(지시약 : 메틸오렌지ㆍ자일렌시아놀 FF시액 3～4방울).

1N 염산 1mL ＝ 106.13mg K3PO4

? 제일인산칼슘(Calcium Phosphate, Monobasic, 인산1칼슘 또는 산성인산칼슘)

  Ca(H2PO4)2ㆍnH2O (n= 0 또는 1)  분자량 무수물 234.05      

                                             1수염 252.07   

함    량  이 품목은 건조 또는 강열한 다음 무수물은 칼슘으로서 16.8～18.3%, 1수염은 칼슘으로서 15.9～17.7%를 함유한다.

성    상  이 품목은 무～백색의 결정 또는 백색의 분말이다. 

고려사항 : 인광석은 대개의 경우 불소가 많이 함유되어 있기 때문에 인광석으로부터 인산칼슘제를 제조할 때는 불소의 함량을 감소시키기 위한 탈불소화 과정이 반드시 필요하다.

확인시험  (1) 이 품목을 질산은시액으로 적시면 황색을 나타낸다.(2) 이 품목 0.1g에 물 20mL를 가하여 흔들어 섞은 다음 여과하여 수산암모늄시액 5mL를 가할 때, 백색의 침전이 생긴다.

순도시험  (1) 비  소 : 이 품목 0.25g을 묽은염산 5mL에 녹여 이를 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다.

  (2) 납 : 「메타인산나트륨」의 순도시험 (2)에 따라 시험한다.

  (3) 카드뮴 : 「메타인산나트륨」의 순도시험 (3)에 따라 시험한다.

  (4) 수  은 : 이 품목을 수은시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  (5) 불소화물 : 이 품목 1g을 정밀히 달아 「구연산칼슘」의 순도시험 (8)에 따라 시험한다(10ppm 이하).

건조감량  이 품목 1수염은 60℃에서 3시간 건조할 때, 그 감량은 1% 이하이어야 한다.

강열감량  이 품목 무수물은 800℃에서 30분간 강열할 때, 그 감량은 14.0～15.5% 이어야 한다.

정 량 법  이 품목을 건조 또는 강열한 다음 약 475mg을 정밀히 달아 염산 10mL에 녹인다. 메틸오렌지 몇 방울을 넣고 5분간 끓이고 필요하다면, 끓는동안 염산 또는 물을 약간 가하여 pH를 조정한다. 메틸레드 2방울 및 수산암모늄시액 30mL를 가하여 흔들어 섞고 6N 암모니아수와 물을 핑크색이 사라질 때까지 가한다. 30분간 수욕조에 열탕 시키고 실온에서 방냉하여 침전물을 가라앉히고 유리여과기를 이용하여 상등액을 여과하고 이를 3회 반복한다. 세척용액을 여과하고, 비이커를 차가운 물(20℃이하) 10mL로 두번 세척하여 여과하고 물 100mL와 차가운 묽은황산(1→6) 50mL를 가하여 0.1N 과망간산칼륨용액으로 적정한다.

0.1N 과망간산칼륨용액 1mL = 2.004mg Ca

? 제이인산칼슘(Calcium Phosphate, Dibasic, 인산2칼슘 또는 인산수소칼슘)

  CaHPO4ㆍ0∼2H2O     

함    량  이 품목은 건조한 다음 정량할 때, 제이인산칼슘(CaHPO4 ＝ 136.06) 98.0～103.0%를 함유한다.

성    상  이 품목은 백색의 결정성분말 또는 분말이다.

고려사항 : 인광석은 대개의 경우 불소가 많이 함유되어 있기 때문에 인광석으로부터 인산칼슘제를 제조할 때는 불소의 함량을 감소시키기 위한 탈불소화 과정이 반드시 필요하다.

확인시험  (1) 이 품목을 질산은시액으로 적시면 황색을 나타낸다.(2) 이 품목 0.1g에 초산 5mL를 가하여 끓이고 식힌 다음 여과하여 여액에 수산암모늄시액 5mL를 가할 때, 백색의 침전이 생긴다.

순도시험  (1) 비  소 : 이 품목 0.25g을 묽은염산 5mL에 녹여 이를 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다.

  (2) 납 : 「메타인산나트륨」의 순도시험 (2)에 따라 시험한다.

  (3) 카드뮴 : 「메타인산나트륨」의 순도시험 (3)에 따라 시험한다.

  (4) 수  은 : 이 품목을 수은시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  (5) 불소화물 : 이 품목 1g을 정밀히 달아 「구연산칼슘」의 순도시험 (8)에 따라 시험한다(50ppm 이하).

건조감량  이 품목을 200℃에서 3시간 건조할 때, 그 감량은 22% 이하이어야 한다.

정 량 법  이 품목을 건조한 다음 약 0.3g을 정밀히 달아 묽은염산 10mL에 녹여 물을 가하여 120mL로 한다. 이하「제일인산칼슘」의 정량법에 따라 정량한다.

0.1N 과망간산칼륨용액 1mL = 6.803mg CaHPO4

? 제삼인산칼슘(인산3칼슘, Calcium Phosphate, Tribasic, Calcium Hydroxyapatite)

  Ca3(PO4)2   분자량 310.18   

함    량  이 품목은 건조한 다음 정량할 때, 제삼인산칼슘[Ca3(PO4)2] 90.0% 이상을 함유한다.

성    상  이 품목은 백색의 분말이다.

고려사항 : 인광석은 대개의 경우 불소가 많이 함유되어 있기 때문에 인광석으로부터 인산칼슘제를 제조할 때는 불소의 함량을 감소시키기 위한 탈불소화 과정이 반드시 필요하다.

확인시험  (1) 이 품목을 질산은시액으로 적시면 황색을 나타낸다.(2) 이 품목 0.1g에 초산 5mL를 가하여 끓이고 식힌 다음 여과하여 여액에 수산암모늄시액 5mL를 가하면 백색의 침전이 생긴다.

순도시험  (1) 비  소 : 이 품목 0.25g을 묽은염산 5mL에 녹이고 이를 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다.

  (2) 납 : 「메타인산나트륨」의 순도시험 (2)에 따라 시험한다.

  (3) 카드뮴 : 「메타인산나트륨」의 순도시험 (3)에 따라 시험한다.

  (4) 수  은 : 이 품목을 수은시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  (5) 불소화물 : 이 품목 1g을 정밀히 달아 「구연산칼슘」의 순도시험 (8)에 따라 시험한다(50ppm 이하).

건조감량  이 품목을 200℃에서 3시간 건조할 때, 그 감량은 10% 이하이어야 한다.

정 량 법  이 품목 200mg을 정밀히 달아 물 25mL 및 묽은염산 10mL 혼합액을 가하여 녹인다. 필요하면 여과하고 침전물을 묽은염산 1mL를 가하여 녹인다. 이어 50℃로 유지하면서 몰리브덴산암모늄 시액 75mL를 가한 다음 때때로 저어 주면서 30분간 가온한다. 물 30～40mL로 침전물을 1～2회 세척한다. 침전물을 여과지에 옮기고 최종 세척액이 리트머스시험지로 산성이 나타나지 않을 때까지 질산칼륨용액(1→1,000)으로 씻어낸다. 침전물과 여과지를 용기에 옮기고 1N 수산화나트륨용액 40mL을 가하여 침전물이 녹을 때까지 저어준 다음 과량의 알칼리를 1N 황산으로 적정한다. 

1N 수산화나트륨용액 1mL=6.743mg Ca3(PO4)2

 ? 혼합인산칼슘(monodicalcium phosphate, MDCP)

  1) 정의 : 인산1칼슘(MCP)와 인산2칼슘(DCP)이 혼합된 형태의 인산칼슘을 말한다.

  2) 영양정보 : 

  3) 고려사항 :   

 나-2) 칼슘염류(calcium products)

┌──────────────────────────────────────────────────┐

│칼슘염류는 공통적으로 (최소량) 칼슘을 등록한다. 석고는 (최소량) 황을 추가로 등록해야 하며, 석회석분 │

│말은 칼슘 34% 이상이어야 한다. 마그네슘 석회석은 칼슘 20% 이상, 마그네슘 10% 이상이어야 한다. 공    │

│급제의 명칭, 분자식, 순도, 공급제의 함유율을 확인하여야 한다.                                       │

└──────────────────────────────────────────────────┘

? 마그네슘석회석분말(ground magnesium limestone)

  1) 정의 : 탄산마그네슘과 탄산칼슘이 자연적으로 혼합된 형태의 마그네슘석회석을 분쇄한 것을 말한다. 백운석계 석회석(dolomitic limestone)이라고도 한다.

  2) 영양정보 : 칼슘 함량은 20% 이상, 마그네슘 함량은 10% 이상을 함유하고 있다.

  3) 고려사항 : 칼슘뿐만 아니라 마그네슘의 공급원이 되기도 한다.

 ? 석고(gypsum)

  1) 정의 : 황산칼슘(calcium sulfate, CaSO4)을 주성분으로 하는 매우 부드러운 황산염 광물을 말한다.

  2) 영양정보 : 일반적으로 석고의 칼슘 함량은 23%정도로 칼슘 함량이 38% 정도인 석회석이나 패분보다 낮다.

  3) 고려사항 : 따라서 한 번에 많은 칼슘을 필요로 하는 산란계에게는 탄산칼슘에 비해 사료적 가치가 다소 낮다고 할 수 있다. 칼슘 함량이 3%인 산란계사료에 석고로 칼슘 함량의 1.1% 까지 대치해도 난 생산이나 난각질에 아무런 차이가 없었다고 알려져 있다.  

 ? 석회석분말(ground limestone; 방해석)

  1) 정의 : 탄산칼슘이 주성분인 석회석을 분쇄한 것이다. 국내외에서 제일 많이 사용되고 있는 칼슘 공급제이다.

  2) 영양정보 : 생산지별로 칼슘의 함량에 차이가 있다. 유통되고 있는 국산 석회석분말(ground limestone)의 칼슘 함량은 36～41%이며, 석회석의 칼슘 함량은 34% 이상으로 규정되어 있다.

  3) 고려사항 : 방해석(calcitic limestone)은 석회석의 일종으로 칼슘 함량은 38.5%로 매우 높다. 

 ? 탄산칼슘(calcium carbonate)

  1) 정의 : 석회석을 분쇄하거나 태워서 재침전시킨 것으로써 사료용으로 제조할 때는 비료용보다 불순물이 적고 양질이어야 한다. 

  2) 영양정보 : 탄산칼슘의 칼슘 함량은 33～38% 정도이다.

  3) 고려사항 :   

 ? 황산칼슘(Calcium Sulfate)

  CaSO4ㆍ2H2O   분자량 172.27   

함    량  이 품목은 황산칼슘(CaSO4ㆍ2H2O) 98.0～105.0%를 함유한다.

성    상  이 품목은 백～엷은 황백색의 분말 또는 결정성분말이다.

확인시험  이 품목 1g에 물 100mL를 가하여 잘 흔들어 섞은 다음 여과한 액은 확인시험법 중 칼슘염 및 황산염의 반응을 나타낸다.

순도시험  (1) 용  상 : 이 품목 0.2g에 묽은염산 10mL를 가하여 가열하여 녹일 때, 그 탁도는 거의 징명 이하이어야 한다.

  (2) 유리알칼리 : 이 품목 0.5g에 물 100mL를 가하여 흔들어 섞은 다음 여과하고 여액 10mL에 페놀프탈레인시액 1방울을 가할 때, 홍색을 나타내어서는 아니 된다.

  (3) 염화물 : 이 품목 0.2g에 물 20mL를 가하여 잘 흔들어 섞은 다음 여과하고 여액 5mL에 묽은질산 6mL를 가하여 이를 시험용액으로 하여 염화물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.01N 염산 0.3mL에 대응하는 양 이하이어야 한다.

  (4) 탄산염 : 이 품목 0.5g에 묽은염산 5mL를 가할 때, 거품이 일어나서는 아니 된다.

  (5) 비  소 : 이  품목 1g에 염산 6mL 및 물 30mL를 가하여 수욕상에서 가열하여 녹이고 식힌 다음 물을 가하여 40mL로 하고 그 중 10mL를 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하).

  (6) 납 : 「메타인산나트륨」의 순도시험 (2)에 따라 시험한다(2.0ppm 이하).

  (7) 수  은 : 이 품목을 수은시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  (8) 셀레늄 : 이 품목 0.2g을 정밀히 달아 「황산」의 순도시험 (6)에 따라 시험한다(30ppm 이하).

  (9) 불소화물 : 이 품목 1g을 정밀히 달아 「구연산칼슘」의 순도시험 (8)에 따라 시험한다(30ppm 이하).

강열감량  이 품목의 강열감량은 18～24%이어야 한다.

정 량 법  이 품목 약 1g을 정밀히 달아 묽은염산 40mL를 가하여 수욕상에서 가열하여 녹이고 식힌 다음 물을 가하여 100mL로 한다. 그 중 10mL를 취하여 이하 「수산화칼슘」의 정량법에 따라 정량한다.

0.05M 이.디.티.에이.용액 1mL ＝ 8.609mg CaSO4ㆍ2H2O

 다. 다량광물질류(macro-minerals, 다량무기질류)

┌─────────────────────────────────────────────────┐

│? 다량광물질류는 공통적으로 (최소량) 해당광물질의 주성분을 등록해야 하며 공급제의 명칭, 분자식,  │

│순도, 공급제의 함유율을 확인하여야 한다. 다량광물질의 합제는 혼합광물질별 명칭, 분자식, 순도, 혼합│

│비율을 확인하여야 한다.                                                                           │

│? 고려사항 :                                                                                     │

└─────────────────────────────────────────────────┘

? 다량광물질-단백질화합물(metal proteinate)

  1) 정의 : 복수의 아미노산이나 부분 가수분해 단백질이 또는 복수의 아미노산과 부분 가수분해 단백질이 하나의 가용성 다량광물질염과 착염화되어 만들어지는 것을 말한다.

  2) 영양정보 : 특정 다량광물질 공급을 목적으로 한다.

  3) 고려사항 : 다량광물질의 종류에 따라 칼슘-단백질화합물, 마그네슘-단백질화합물 등으로 표시하거나 다량광물질-단백질화합물(칼슘), 다량광물질-단백질화합물(마그네슘) 등으로 표시할 수 있다.

 ? 다량광물질-아미노산복합물(metal amino acid complex)

  1) 정의 : 가용성 다량광물질의 염과 아미노산이 1:1로 결합하여 복합물을 형성한 것을 말한다.

  2) 영양정보 : 특정 다량광물질 공급을 목적으로 한다.

  3) 고려사항 : 특정 아미노산이 사용된 경우에는 해당 아미노산을 명시하여야 한다.

 ? 다량광물질-아미노산킬레이트(metal amino acid chelate)

  1) 정의 : 가용성 다량광물질의 염에서 유래한 광물질 이온이 아미노산과 1:1 ~ 1:3으로 배위 공유결합을 한 형태의 것을 말한다.

  2) 영양정보 : 특정 다량광물질 공급을 목적으로 한다.

  3) 고려사항 : 킬레이트의 분자량은 800을 초과해서는 안 된다.

 ? 염화칼륨(Potassium Chloride, KCl, 분자량74.6)

  1) 함량 : 본 품은 건조 후 정량할 때, 염화칼륨(KC1) 99.0%이상을 함유한다.

  2) 성상

   ① 본 품은 무색 또는 백색의 결정 또는 결정성의 분말로서 냄새는 없고 맛은 짜다.

   ② 본 품은 물에 녹기 쉽고, 에탄올에 거의 녹지 않는다.

   ③ 본 품의 수용액(1→50)은 중성이다.

  3) 확인시험 : 본 품의 수용액(1→50)은 칼륨염 및 염화물의 정성반응을 나타낸다.

  4) 순도시험

   ① 용액상 : 본 품 1.0g에 물 5㎖를 넣어 녹일 때, 그 액은 무색이며, 투명하여야 한다.

   ② 산 및 알카리 : 본 품 5.0g을 취하여, 새로 끓여 냉각한 물 50㎖를 넣어 녹이고, 페놀프타레인시액 3방울을 넣을 때 액이 적색을 나타내서는 안 된다.

   ③ 취하물 : 본 품 1.0g을 취하여, 물을 넣고 녹여 100㎖로 한다. 이 액 5㎖를 취하여 묽은염산 3방울 및 클로르포름 1㎖을 넣고 흔들어 섞으면서 클로라민시액 3방울을 적가할 때, 클로르포름층은 황색～황적색을 나타내서는 안 된다.

   ④ 요오드화물 : 본 품 0.5g을 취하여 물 10㎖를 넣어 녹인 염화제2철시액 3방울 및 클로르포름 1㎖를 넣어 흔들어 섞고 30분간 방치하여 다시 흔들어 섞을 때 클로르포름층이 적자색～자색을 나타내서는 안 된다.

   ⑤ 중금속 : 본 품 4.0g을 취하여 중금속 시험법 제 1법에 의해 시험할 때 그 양은 납 표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.

   ⑥ 칼슘 및 마그네슘 : 본 품 0.20g을 취하여 물 20㎖를 넣어 녹이고 암모니아시액 2㎖, 수산암모늄시액 2㎖ 및 인산-수소나트륨시액 2㎖를 가해 5분간 방치할 때 액이 혼탁해서는 안 된다.

   ⑦ 나트륨 :  본 품 1.0g을 취하여 물 20㎖를 가해 녹이고 불꽃반응 시험할 때 계속 황색을 나타내서는 안 된다.

   ⑧ 비소 : 본 품 1.0g을 취하여 비소시험법 제 1법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다.

  5) 건조감량 : 0.5%이하(1g, 130℃, 2시간)

  6) 정량법 : 본 품을 건조 후 약 0.2g을 정밀히 칭량하여 물 50㎖를 가하여 녹이고 강하게 흔들어 섞으면서 0.1N 초산은액으로 적정한다.(지시약 크롬산칼륨시액 1㎖) 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다.

     0.1N 초산은액 1㎖ = 7.455㎎ KCl

  7) 제조방법의 기준 : 본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

  8) 보존방법의 기준 : 밀폐용기에 보존할 것.

 ? 유황(detoxified sulfur ; 법제 또는 제독유황)

  1) 정의 : 광물성 유황을 가열, 숙성과정 등을 통해 법제 또는 제독하여 생산한 것을 말한다.

  2) 영양정보 :  -

  3) 고려사항 : 법제 또는 제독유황은 오래전부터 사료의 0.2%이하 수준으로 사용되어 왔다. 사료 내 유황이 건물 당 0.4%이상이 되면 PEM(polioencephalomalacia)이 발생할 수 있어 사료에 유황 함량을 표시하도록 규정해야 한다.

 ? 엠에스엠(MSM, Methyl sulfonylmethane, 디메틸설폰)

 1) 제조기준

    (가) 원재료 및 제조방법 : DMSO(Dimethyl sulfoxide)를 산화한 후 증류, 정제, 여과, 농축한 후 결정화하여 제조하여야 함

    (나) 기능성분(또는 지표성분)의 함량 : 엠에스엠(MSM)이 980 mg/g 이상 함유되어 있어야 함

  2) 규격

    (가) 성상 : 고유의 색택과 향미를 가지며 이미ㆍ이취가 없어야 함

    (나) 엠에스엠(MSM)

       (1) 원료성 제품 : 표시량 이상

       (2) 최종제품 : 표시량의 80～120%

    (다) 중금속

       (1) 납(mg/kg) : 0.1 이하

       (2) 카드뮴(mg/kg) : 0.1 이하

       (3) 총수은(mg/kg) : 0.5 이하

       (4) 총비소(mg/kg) : 0.1 이하

    (라) 대장균군 : 음성

  3) 최종제품의 요건

    (가) 기능성 내용 : 관절 및 연골건강에 도움을 줄 수 있음

    (나) 일일섭취량엠에스엠(MSM)으로서 1.5～2.0 g

  4) 시험법

    (가) 엠에스엠(MSM) : 제 4. 3-72 엠에스엠(MSM)

    (나) 납, 카드뮴, 총수은, 총비소 : 건강기능식품의 기준 및 규격 [별표 4] 참조

    (다) 대장균군 : 건강기능식품의 기준 및 규격 [별표 4] 참조

 ? 탄산마그네슘(Magnesium Carbonate, (MgCO3)4Mg(OH)2ㆍ5H2O 분자량485.5)

  1) 함량 : 본 품은 함수염기성탄산마그네슘 또는 함수성탄산마그네슘이며 정량할 때 산화마그네슘(MgO) 40.0～43.5%를 함유한다.

  2) 성상

① 본 품은 백색의 분말로서 냄새는 없다.

② 본 품은 물 또는 에탄올에 거의 녹지 않는다.

③ 본 품은 묽은 염산에 거품을 내며 녹는다.

④ 본 품의 포화수용액은 알칼리성이다.

  3) 확인시험

① 본 품 1g에 묽은 염산 10㎖를 가하여 녹이고, 새로 끓여 냉각 후 수산화나트륨 시액을 가하여 중화시킨 액(필요한 경우 여과한다)은 마그네슘염의 정성반응을 나타낸다.

② 본 품은 탄산염의 정성반응 ①을 나타낸다.

  4) 순도시험

① 액상 : 본 품 1.0g을 묽은 염산(2→3) 10㎖에 녹이고, 이것에 물 10㎖를 가할 때, 그 액은 거의 투명하여야 한다.

② 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 물 4㎖로 적시고 묽은 염산 10㎖를 가하여 녹이고, 수욕상에서 증발 건고한다. 잔류물에 물 35㎖, 묽은 초산 2㎖ 및 암모니아 시액 1방울을 가하여 녹이고 여기에 물을 가해 50㎖로 한다. 이것을 검액으로서 중금속시험법 제 1법에 의해 시험할 때 이 액에서 나타나는 색은, 묽은 염산 10㎖를 수욕상에서 증발건고한 다음 묽은 초산 2㎖, 납표준액 3.0㎖ 및 물을 가해 50㎖로 하여 이하 시료액의 경우와 같은 방법으로 조작할 때 나타나는 색보다 짙어서는 안 된다.

③ 비소 : 본 품 0.40g을 취하여 물 1.5㎖로 적시고 묽은 염산 3.5㎖를 가하여 녹이고, 이것을 검액으로서 비소시험법 제 1법에 의해 시험할 때, 이것에 적합하여야 한다.

  5) 건조감량 : 3.0%이하(1g, 105℃, 2시간)

  6) 정량법 : 본 품 약 1g을 정밀하게 칭량하여 1N 황산 30㎖를 넣어 녹이고, 과량의 황산을 1N 수산화나트륨액으로 적정한다.(지시약 브롬페놀블루시액 2-3방울) 같은 방법으로 공시험한다.

     1N 황산 1㎖ = 20.152㎎ MgO

  7) 보존방법의 기준 : 밀폐용기에 보존할 것.

 ? 탄산칼륨(무수)(Potassium Carbonate, Anhydrous, K2CO3, 분자량 138.21)

  1) 함량 : 이 품목은 건조한 다음 정량할 때, 탄산칼륨(K2CO3) 99.0% 이상을 함유한다.

  2) 성상 : 이 품목은 백색의 알맹이 또는 분말이다.

  3) 확인시험 : 이 품목의 수용액(1→10)은 확인시험법 중 칼륨염 및 탄산염의 반응을 나타낸다.

  4) 순도시험

   ① 용상 : 이 품목 1g을 물 20mL에 녹일 때, 그 액은 무색으로서 그 탁도는 거의 징명 이하이어야 한다.

   ② 염화물 : 이 품목 0.2g을 취하여 묽은질산 6mL를 가하여 끓이고 식힌 다음 묽은질산 6mL를 가하여 이를 시험용액으로 하여 염화물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.01N 염산 0.3mL에 대응하는 양 이하이어야 한다.

   ③ 비소 : 이 품목을 비소시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 4.0ppm 이하이어야 한다.

   ④ 납 : 이 품목 5.0g을 정밀히 달아 150mL 비이커에 넣고 물 30mL를 가하고 염산을 소량씩 검체가 충분히 녹을 때까지 가해 준 다음 다시 염산 1mL를 추가한다. 이를 약 5분 동안 끓이고 식힌 다음 물을 가하여 약 100mL가 되도록 하고 수산화나트륨용액(1→4) 또는 염산(1→4)을 사용하여 pH 2～4로 조정한다. 이 액을 250mL 분액깔대기에 옮긴 후 물을 가하여 약 200mL로 한 다음 2% 피롤리딘디티오카바민산암모늄(ammonium pyrolidine dithiocarbamate)용액(2→100) 2mL를 가하여 흔들어 섞어 준다. 이에 클로로포름 20mL씩으로 2회 추출하고 추출액을 수욕상에서 증발건고한 다음 잔류물에 질산 3mL를 가하고 거의 건고될 때까지 가열한다. 이에 질산 0.5mL 및 물 10mL를 가한 다음 최종액이 3～5mL가 될 때까지 농축한 후 물을 가하여 10mL로 한 액을 시험용액으로 하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.0ppm 이하이어야 한다.

   ⑤ 수은 : 이 품목을 수은시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  5) 건조감량 : 이 품목 3g을 180℃에서 4시간 건조할 때, 그 감량은 1% 이하이어야 한다.

  6) 정량법 : 이 품목을 건조한 다음 1g을 정밀히 달아 물 약 25mL에 녹이고 0.5N 황산으로 적정한다(지시약 : 브로모페놀블루시액 3방울). 다만, 종말점 부근에서 끓여 이산화탄소를 날려 보낸 다음 식혀서 적정을 계속한다.

0.5N 황산 1mL ＝ 34.55mg K2CO3

  7) 보존방법의 기준 : 밀폐용기에 보존할 것.

 ? 황산마그네슘(건조)(Magnesium Sulfate, Exsiccated, MgSO4ㆍnH2O)

  1) 함량 : 본 품은 가열한 후 정량할 때 황산마그네슘(MgSO4) 99.0%이상을 함유한다.

  2) 성상

① 본 품은 백색의 분말 또는 결정성의 분말로서 짜고 쓴맛을 가진다.

② 본 품은 물에 녹기 쉽고 글리세린에 녹기 어려우며 에탄올에 거의 녹지 않는다.

  3) 확인시험 : 본 품의 수용액(1→20)은 마그네슘염 및 황산염의 정성반응을 나타낸다.

  4) 순도시험

① 용액상 : 본 품 1.0g을 물 10㎖로 녹일 때 그 액은 무색으로 탁도는 약간의 미탁 이하이어야 한다.

② 염화물 : 본 품 1.0g을 취하여 염화물의 시험할 때 그 양은 0.01N 염산 0.4㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(0.014%이하)

③ 중금속 : 본 품 2.0g을 취하여 중금속시험법 제 1법에 의해 시험할 때 그 양은 납 표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.

④ 비소 : 본 품 0.5g을 취하여 비소시험법 제 1법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다.

  5) 강열감량 : 35.0%이하(1g, 450℃, 3시간)

  6) 정량법 : 본 품을 강열한 후 그 중 약 0.6g을 정밀하게 칭량하여 묽은 염산 2㎖ 및 물을 가하여 녹이고 정확히 100㎖로 한다. 이 액 25㎖를 정확히 취하여 물 50㎖ 및 pH 10.7의 암모니아ㆍ염화암모늄 완충액 5㎖를 가하고 0.05M 에틸렌디아민4초산2나트륨액으로 적정한다.(지시약 에리오크롬브랙Tㆍ염화나트륨지시약 0.04g) 이 경우에 적정의 종점은 액의 적자색이 청색으로 변하는 점으로 한다. 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다.

     0.05M 에틸렌디아민4초산2나트륨액 1㎖ = 6.018㎎ MgSO4

  7) 보존방법의 기준 : 밀폐용기에 보존할 것.

 ? 황산마그네슘(결정)(Magnesium Sulfate, Heptahydrate, MgSO4ㆍ7H2O, 분자량246.5)

  1) 함량 : 본 품은 강열한 후 정량할 때 황산마그네슘(MgSO4) 99.0%이상을 함유한다. 

  2) 성상

① 본 품은 무색의 기둥형태 또는 바늘모양의 결정으로서 짠맛 및 쓴맛을 가진다.

② 본 품은 물 또는 글리세린에 녹기 쉽고 에탄올에 조금 녹기 어렵다.

  3) 확인시험 : 본 품의 수용액(1→20)은 마그네슘염 및 황산염의 정성반응을 나타낸다.

  4) 순도시험

① 용액상 : 본 품 1.0g을 물 10㎖에 녹일 때 그 액은 무색으로 탁도는 거의 투명하여야 한다.

② 염화물 : 본 품 1.0g을 취하여 염화물의 시험할 때 그 양은 0.01N염산 0.4㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(0.014%이하)

③ 비소 : 본 품 0.5g을 취하여 비소시험법 제 1법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다.

  5) 강열감량 : 40.0～52.0%(1g, 105℃에서 2시간 건조 후 450℃에서 3시간 강열)

  6) 정량법 : 「황산마그네슘(건조)」의 정량법을 준용한다.

  7) 보존방법의 기준 : 밀폐용기에 보존할 것.

 ? 황산나트륨(Sodium Sulfate, Na2SO4, 분자량142.0)

  1) 함량 : 본 품은 건조 후 정량할 때 황산나트륨(Na2SO4) 99.0%이상을 함유한다.

  2) 성상

① 본 품은 백색의 분말로서 냄새는 없다.

② 본 품은 물에 녹기 쉽고 에탄올에 거의 녹지 않는다.

  3) 확인시험 : 본 품의 수용액(1→20)은 나트륨염 및 황산염의 정성반응을 나타낸다.

  4) 순도시험

① 용액상 : 본 품 1.0g에 새로 끓여 식힌 물 10㎖를 가한 후 녹일 때 그 액은 무색으로 탁도는 투명하여야 한다.

② 중금속 : 본 품 2.0g을 취하여 중금속 시험법 제 1법에 의해 시험할 때 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.

③ 비소 : 본 품 1.0g을 취하여 비소시험법 제 1법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다.

  5) 건조감량 : 11.4%이하(2g, 105℃, 4시간)

  6) 정량법 : 본 품을 건조 후 약 0.4g을 정밀하게 칭량하여 물 200㎖를 가하여 녹이고 염산 1㎖를 가하여 끓이고 열시염화바륨시액 8㎖를 서서히 가한다. 이 액을 수욕상에서 1시간 가열하고 냉각 후 침전을 여과하여 제거한다. 여과액에 초산은 시액을 가하여도 혼탁이 생기지 않을 때까지 강열하고 중량을 측정하여 황산바륨(BaSO4)의 양으로 한다

     황산나트륨(NaSO4)의 양(㎎) = 황산바륨(BaSO4)의 양(㎎) × 0.6086

  7) 보존방법의 기준 : 밀폐용기에 보존할 것.

 ? 황산칼륨(Potassium Sulfate, K2SO4, 분자량174.26)

  1) 함량 : 본 품은 황산칼륨(K2SO4) 99.0～100.5%를 함유한다.

  2) 성상 : 본 품은 무～백색의 결정 또는 결정성 분말로서 쓴맛을 가지고 있다.

  3) 확인시험 : 본 품의 수용액(1→10)은 확인시험법 중 칼륨염의 반응을 나타낸다.

  4) 순도시험

① 중금속 : 본 품 2g을 물 25㎖에 녹이고 묽은 초산 2㎖ 및 물을 가하여 50㎖로 한 것을 시험용액으로 하여 중금속 시험을 할 때, 그 양은 10ppm 이하이어야 한다.

② 셀레늄 : 본 품 1g을 물 100㎖에 녹인 것을 시험용액으로 하여 원자흡광분광광도법의 무염방식에 따라 측정할 때의 흡광도는 셀레늄표준용액 3㎖에 물을 가한 다음 100㎖로 한 액을 시험용액과 같은 조작을 하여 얻은 흡광도보다 높아서는 안 된다.(30ppm 이하)

  5) 정량법 : 본 품 약 0.5g을 정밀히 칭량하여 물 200㎖에 녹이고 이에 염산 1㎖를 가하여 끓인다. 계속 저어주면서 뜨거운 염화바륨시액 8～9㎖를 천천히 가한 후 수욕상에서 1시간 가열하고 식힌 다음 회분이 없는 여과지로 여과하고 씻은 액이 염화물의 반응을 나타내지 않을 때까지 씻은 다음 그 침전물을 조심스럽게 탄화하고 다음 항량이 될 때까지 800±25℃에서 강열하여 황산바륨으로서 평량한다.

  6) 보존방법의 기준 : 밀폐용기에 보존할 것.

 라. 미량광물질류(micro-minerals, 미량무기질류)

┌─────────────────────────────────────────────────┐

│? 미량광물질류는 공통적으로 (최소량) 해당광물질의 주성분을 등록해야 하며 공급제의 명칭, 분자식,  │

│순도, 공급제의 함유율을 확인하여야 한다. 미량광물질의 합제는 혼합광물질별 명칭, 분자식, 순도, 혼  │

│합비율을 확인하여야 한다.                                                                         │

│? 고려사항 :                                                                                     │

└─────────────────────────────────────────────────┘

 ? 구연산철(Ferric Citrate)

  1) 함량 : 본 품은 정량할 때 철(Fe) 16.5-18.5%를 함유한다.

  2) 성상

① 본 품은 적갈색의 투명한 소엽편 또는 갈색의 분말이다.

② 본 품은 냉수에 조금 녹기 어렵고, 뜨거운 물에 조금 녹기 쉬우며 에탄올에 거의 녹지 않는다.

③ 본 품의 수용액(1→20)의 pH는 1.0～2.0이다.

④ 본 품의 수용액은 빛에 의해 영향 받고 차례로 환원되어 구연산 제 1철이 된다.

  3) 확인시험

① 본 품의 수용액(1→20) 10㎖는 제2철염의 정성반응 ①을 나타낸다.

② 본 품의 수용액(1→20) 10㎖에 수산화나트륨 시액 15㎖를 넣고 잘 휘저으면서 10분간 수욕상에서 가열한다. 냉각 후 여과하여, 여과액 10㎖를 취하여, 초산으로 중화한 액은 구연산염의 정성반응 ③을 나타낸다.

  4) 순도시험

① 용액상 : 본 품 1g에 물 20㎖를 넣고 수욕상에서 가열하여 녹일 때, 그 액은 거의 투명하여야 한다.

② 납 : 본 품 1.5g을 취하여 물 30㎖를 넣고, 끓인 후 녹여, 냉각 후 묽은 초산(1→2) 5㎖를 넣고 5분간 조용히 끓여 냉각 후 물을 넣어 50㎖로 한다. 이 액 20㎖를 정확히 취하여 이것을 검액으로 하여 납을 시험한다.

③ 비소 : 본 품 0.5g을 취하여 비소시험법 제 2법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다.

  5) 정량법 : 본 품 약 1.0g을 정밀하게 칭량하여 공전 플라스크에 넣어 염산 5㎖ 및 물 30㎖를 넣고 가열하여 녹인다. 냉각 후 요오드화칼륨 4.0g을 넣고 밀봉하여 어두운 곳에서 15분간 방치한 후, 물 100㎖를 넣고 0.1N 티오황산나트륨액으로 적정한다.(지시약 전분시액 1㎖) 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다.

     0.1N 티오황산나트륨액 1㎖ = 5.585㎎ Fe

  6) 보존방법의 기준 : 차광한 밀폐용기에 보존할 것.

 ? 몰리브덴산나트륨(Sodium Molybdate, Na2MnO4ㆍ2H2O, 분자량 241.95)

  1) 함량 : 이 품목은 몰리브덴산나트륨(Na2MnO4ㆍ2H2O) 99.0% 이상을 함유하여야 한다. 

  2) 성상 : 이 품목은 무～흰색의 결정 또는 결정성 분말이다.

  3) 확인시험 

① 이 품목은 염색반응시험법에 따라 시험할 때, 황색을 나타낸다.

② 이 품목의 질산산성용액에 인산이나트륨시액을 가하면 황색 침전물이 생성되고 이에 암모니아수를 가해주면 녹는다.

  4) 순도시험

① 액  성 : 이 품목의 수용액(1→20)의 pH는 10.0 이하이어야 한다.

② 용  상 : 이 품목 1.0g에 물 20mL를 가하여 녹일 때, 그 탁도는 거의 징명 이하이어야 한다.

③ 암모늄 : 이 품목 1.0g을 정밀히 달아 증류플라스크에 넣고 물 140mL 및 산화마그네슘 2g을 가하여 증류장치에 연결한다. 100mL 플라스크에 흡수액으로 붕산용액(1→200) 20mL를 넣고 증류장치 냉각기의 끝을 흡수액에 담그고 분당 5～7mL가 유출되도록 가열온도를 조절하여 증류액 60mL를 받는다. 냉각기의 아래 끝은 소량의 물로 세척하여 넣고 물을 가하여 100mL로 한 액을 시험용액으로 한다. 따로, 대조액은 암모늄표준용액(이 액 1mL는 암모늄 0.01mg 함유) 1.0mL를 증류플라스크에 넣은 다음 이하 시험용액과 동일하게 조작하여 증류액 60mL를 받는다. 냉각기의 아래 끝은 소량의 물로 세척하여 넣고 물을 가하여 100mL로 한 액을 대조액으로 한다. 시험용액 30mL와 대조액 30mL를 각각 네슬러관에 넣고 페놀니트로프루시드나트륨시액 6mL씩을 가하여 흔들어 섞은 다음 차아염소산나트륨ㆍ수산화나트륨시액 4mL 및 물을 가하여 50mL씩으로 하고 섞어준 후 60분간 방치한 다음 색을 비교하였을 때, 시험용액의 색은 대조액의 색보다 진하여서는 아니 된다(0.001% 이하).

   시액 : 페놀니트로프루시드나트륨시액 : 페놀 5g 및 펜타시아노니트로실철(III)나트륨이수화물 25mg에 물을 가하여 500mL로 한다. 이 액은 냉암소에 보존한다.

   차아염소산나트륨ㆍ수산화나트륨시액 : 차아염소산나트륨 1.05g 및 수산화나트륨 15g에 물을 가하여 1,000mL로 한다. 이 액은 사용 시 조제한다.

④ 염화물 : 이 품목 1.0g에 묽은질산 10mL를 가해주고 가열하여 녹여주고 식힌 액을 시험용액으로 하여 염화물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.01N 염산 0.14mL에 대응하는 양 이하이어야 한다.

⑤ 질산염 : 이 품목 1.0g을 취하여 물 10mL를 가하여 녹이고 인디고카르민시액 0.05mL와 황산 10mL를 가하였을 때, 나타난 청색은 5분이내에 완전히 사라져서는 아니 된다(0.003% 이하).

⑥ 황산염 : 이 품목 1.0g에 뜨거운 물 5mL를 가해주고 녹인 다음 질산 5mL를 가하여 수욕상에서 증발 건고한 다음 염산(1→4) 1mL 및 물 10mL를 가하여 침전시킨 다음 물을 가하여 50mL로 하고 여과한 액을 시험용액으로 하여 황산염시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.01N 황산 0.1mL에 대응하는 양 이하이어야 한다. 

⑦ 인산염 : 이 품목 2.5g을 폴리에틸렌(PE) 재질의 비이커에 취하고 물 70mL를 가하여 녹여주고 염산(1→10)을 가하여 pH 4～5로 조절한 다음 브롬시액 2mL를 넣고 다시 염산(1→10)으로 pH 1.7～1.9로 조절한다. 이 액을 유리비이커에 옮겨 끓기 시작할 때까지 가열하고 약 20℃로 식힌 다음 물을 가하여 90mL로 하고 200mL 분액깔때기에 옮겨준다. 이에 염산 10mL와 에테르 20mL를 넣어 3분간 세게 흔들어 섞고 물층을 취하여 A액으로 한다. 에테르층은 염산(1→10) 10mL씩 4회 세척하고 에테르층에 염화제1주석시액(염화제1주석 2g에 염산을 가하여 100mL로 한 액) 0.2mL를 가하여 30초간 흔들어 섞은 다음 에테르를 넣어 25mL로 한 액의 색은 다음의 대조액의 색보다 진하여서는 아니 된다. 따로, 이 품목 0.5g을 폴리에틸렌(PE) 재질의 비이커에 취하고 인산염표준용액(0.01mg/mL) 1mL, 규산염표준용액(0.01mg/mL) 10mL 및 물 60mL를 가하여 녹여주고 염산(1→10)을 가하여 pH 4～5로 조절한 다음 브롬시액 2mL를 넣고 다시 염산(1→10)으로 pH 1.7～1.9로 조절한다. 이 액을 유리 비이커에 옮겨 끓기 시작할 때까지 가열하고 약 20℃로 식힌 다음 물을 가하여 90mL로 하고 200mL 분액깔때기에 옮겨준다. 이에 염산 10mL와 에테르 20mL를 넣어 3분간 세게 흔들어 섞고 물층을 취하여 B액으로 한다. 에테르층을 염산(1→10) 10mL씩 4회 세척하고 에테르층에 상기 염화제1주석시액 0.2mL를 가하여 30초간 흔들어 섞은 다음 에테르를 넣어 25mL로 한 청색의 액을 대조액으로 한다(0.0005% 이하).

⑧ 규산염 : 순도시험 (7)의 A액에 물을 가하여 100mL로 하고 200mL 분액깔때기에 옮겨주고 이에 염산 10mL 및 n-부탄올 50mL를 넣고 5분간 세게 흔들어 섞은 다음 물층은 버리고 n-부탄올층은 염산(1→10) 10mL씩 4회 세척한 다음 n-부탄올층에 (7)항의 염화제1주석시액 0.5mL를 넣어 30분간 흔들어 섞어주고 n-부탄올을 가하여 50mL로 한 액의 색은 다음의 대조액의 색보다 진하여서는 아니 된다. 따로, 순도시험 (7)의 B액에 물을 가하여 100mL로 하고 200mL 분액깔때기에 옮겨주고 이에 염산 10mL 및 n-부탄올 50mL를 넣고 5분간 세게 흔들어 섞은 다음 물층은 버리고 n-부탄올층은 염산(1→10) 10mL씩 4회 세척한 다음 n-부탄올층에 (7)항의 염화제1주석시액 0.5mL를 넣어 30분간 흔들어 섞어주고 n-부탄올을 가하여 50mL로 한 청색의 액을 대조액으로 한다(0.005% 이하).

⑨ 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험한다.

⑩ 철 : 이 품목 0.4g에 물을 가하여 40mL로 하고 10% 수산화나트륨용액 5mL를 넣어 5분간 끓여주고 식힌 다음 10% 주석산용액 30mL를 넣고 200mL 분액깔때기에 옮겨준다. 이에 염산히드록실아민ㆍ과염소산암모늄시액 20mL 및 암모니아수(2→5) 3mL를 넣고 pH 4로 조절한 후 0.2% ο-페난트로린용액 2mL를 넣은 다음 20～35℃에서 15분간 방치하고 클로로포름 10mL씩 2회 30초간 세게 흔들어 추출한다. 클로로포름층을 합해주고 이에 클로로포름을 가하여 25mL로 한 액의 색은 다음의 대조액의 색보다 진해서는 아니 된다. 따로, 철표준용액(0.01mg/mL) 0.8mL에 물을 가하여 40mL로 하고 10% 수산화나트륨용액 5mL를 넣어 5분간 끓여주고 식힌 다음 10% 주석산용액 30mL를 넣고 200mL 분액깔때기에 옮겨준다. 이에 염산히드록실아민ㆍ과염소산암모늄시액 20mL 및 암모니아수(2→5) 3mL를 넣고 pH 4로 조절한 후 0.2% ο-페난트로린용액 2mL를 넣은 다음 20～35℃에서 15분간 방치하고 클로로포름 10mL씩 2회 30초간 세게 흔들어 추출한다. 클로로포름층을 합해주고 이에 클로로포름을 가하여 25mL로 한 등적색의 액을 대조액으로 한다(0.002% 이하).

   시액 : 염산히드록실아민ㆍ과염소산암모늄용액 : 염산히드록실아민 25g에 60% 과염소산시액 4.3mL, 물 200mL 및 암모니아수 46mL를 가하여 pH4로 조절한 후 물을 가하여 500mL로 한다.

  5) 정량법 : 이 품목 0.6g을 정밀히 달아 물 50mL를 가하여 녹인 후 초산(1→3) 2mL 및 물을 가하여 200mL로 하여 끓을 때까지 열을 가한 다음 초산납시액을 가하여 5분간 끓인 다음 방치하여 침전을 가라앉힌다. 이를 여과한 후 납이온의 반응이 없어질 때까지 따뜻한 물로 씻어 주고 침전을 건조한 다음 560～625℃에서 회화하여 몰리브덴산납의 무게를 측정한다. 

     몰리브덴산납 1mg = 0.6590mg Na2MnO4ㆍ2H2O

     시  액 : 초산납시액 : 초산납 1.5g에 물을 가하여 20mL로 하고 이 액에 초산 5방울을 가한다.

 ? 몰리브덴산암모늄(Ammonium Molybdate, (NH4)6Mo7O24ㆍ4H2O, 분자량 1235.86)

  1) 함량 : 이 품목은 몰리브덴산암모늄((NH4)6Mo7O24ㆍ4H2O) 99.3～101.8%를 함유한다.  

  2) 성상 : 이 품목은 흰～밝은 녹색을 띄며, 약간의 암모니아 냄새가 나는 결정성분말이다.

  3) 확인시험 : 이 품목 0.6g을 물 1.4mL과 암모니아수 1.45mL의 혼합액에 녹인다. 이 혼합물을 식힌 다음, 질산 3.2mL와 물 4mL를 혼합하여 잘 식힌 용액 7.2mL를 천천히 섞으며 가한다. 24～48시간 정치한 후 여과한 다음 여과액 5mL에 인산이나트륨시액 2mL를 가하면 노란색 침전물이 생성되고 이 침전물은 과량의 암모니아시액에 녹는다.

  4) 순도시험

① 염화물 : 이 품목 0.5g을 취하여 염화물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.001N 염산 0.30mL에 대응하는 양 이하이어야 한다. 

② 황산염 : 이 품목 0.25g을 취하여 황산염시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.001N 황산 1.0mL에 대응하는 양 이하이어야 한다. 

③ 인산염 : 이 품목 20g을 정밀히 달아 3N 암모니아용액에 녹여 100mL로 하여 질산제이철용액(1→10) 3.5mL을 가하고 15분간 정치한다. 서서히 가열하여 침전물이 응집하면 여과하고 잔류물을 1.5N 암모니아용액으로 여러 번 씻는다. 따뜻한 4N 질산 60mL로 잔류물을 녹여낸 다음 암모니아수 13mL을 가하고 40℃로 한다. 몰리브덴산암모늄시액 50mL을 가하고 5분간 흔든 다음 40℃에서 2시간 동안 정치하였을 때 생긴 침전물이 표준액의 침전물보다 많지 않아야 한다(5ppm 이하). 다만, 표준액은 건조한 인산일칼륨 143.3mg을 물에 녹여 1,000mL로 한 다음, 이 용액 1.0mL을 3N 암모니아용액으로 녹여 100mL로 한 것을 사용한다.

④ 마그네슘염 및 알칼리염 : 이 품목 5g을 정밀히 달아 물에 녹여 50mL로 하여 여과한다. 여과액에 탄산나트륨 0.5g과 2.5N 수산화나트륨 25mL을 가하여 5분간 끓인 후 식히고 여과지로 여과한 다음 잔류물을 1N 암모니아용액으로 씻는다. 잔류물을 800±25℃에서 30분간 회화한 후 측정할 때 잔류물의 중량은 1mg 이하이어야 한다(0.02% 이하).

⑤ 납 : 「메타인산나트륨」의 순도시험(2)에 따라 시험한다.

⑥ 물불용물 : 이 품목 20g에 물을 가하여 200mL로 하여 수욕상에서 1시간동안 가열한 후 여과하고 잔류물을 뜨거운 물로 씻어내고 105℃에서 2시간 건조할 때, 그 양은 1mg 이하이어야 한다(0.005% 이하).

⑦ 질산염 : 이 품목 1g을 정밀히 달아 0.05% 염화나트륨용액에 녹여 10mL로 한 다음 3.6N 황산에 녹인 인디고 카르민용액(1→1,000) 0.1mL를 가할 때, 5분 안에 파란색이 완전히 없어지지 않는다.

  5) 정량법 : 이 품목 1g을 정밀히 달아 물 10mL과 암모니아수 1mL의 혼합액에 녹인 후 물로 희석하여 250mL로 한다. 이 용액의 여과액 50mL에 물 250mL, 염화암모늄 20g, 염산 15mL, 메틸오렌지시액 0.15mL을 가한 후 끓기 전까지 열을 가한 다음 초산납용액(9.5 →100) 18mL을 가한다. 이 용액을 저으면서 노란색이 될 때까지 포화초산암모늄용액을 가한 후 초산납용액(9.5→100) 15mL를 더 가하여 끓는 점 아래 온도에서 침전물이 생성될 때까지 가열한다. 여과한 후 잔류물을 물ㆍ포화초산암모늄용액ㆍ질산의 혼액(890 : 100 : 10)으로 7～8회 씻고 마지막으로 뜨거운 물로 3번 씻은 다음 560～625℃에서 회화하여 몰리브덴산납의 무게를 측정한다.

     몰리브덴산납 1mg = 0.4809mg (NH4)6Mo7O24ㆍ4H2O

? 미량광물질-단백질화합물(metal proteinate)

  1) 정의 : 복수의 아미노산이나 부분 가수분해 단백질이 또는 복수의 아미노산과 부분 가수분해 단백질이 하나의 가용성 미량광물질염과 착염화되어 만들어지는 것을 말한다.

  2) 영양정보 : 특정 미량광물질 공급을 목적으로 한다.

  3) 고려사항 : 미량광물질의 종류에 따라 구리-단백질화합물, 아연-단백질화합물, 셀레늄-단백질화합물 등으로 표시하거나 미량광물질-단백질화합물(구리), 미량광물질-단백질화합물(아연), 미량광물질-단백질화합물(셀레늄) 등으로 표시할 수 있다.

 ? 미량광물질-아미노산복합물(metal amino acid complex)

  1) 정의 : 가용성 미량광물질의 염과 아미노산이 1:1로 결합하여 복합물을 형성한 것을 말한다.

  2) 영양정보 : 특정 미량광물질 공급을 목적으로 한다.

  3) 고려사항 : 특정 아미노산이 사용된 경우에는 해당 아미노산을 명시하여야 한다.

 ? 미량광물질-아미노산킬레이트(metal amino acid chelate)

  1) 정의 : 가용성 미량광물질의 염에서 유래한 광물질 이온이 아미노산과 1:1 ~ 1:3으로 배위 공유결합을 한 형태의 것을 말한다.

  2) 영양정보 : 특정 미량광물질 공급을 목적으로 한다.

  3) 고려사항 : 킬레이트의 분자량은 800을 초과해서는 안 된다.

 ? 산화아연(Zinc Oxide, ZnO, 분자량81.4)

  1) 함량 : 본 품은 강열 후 정량할 때, 산화아연(ZnO) 99.0% 이상을 함유한다.

  2) 성상 : 본 품은 백색의 미세한 분말로서 냄새가 없다.

  3) 확인시험

① 본 품을 강하게 가열하면 황색을 나타내고 냉각하면 그 색은 없어진다.

② 본 품을 3N 염산에 녹인 액은 확인시험법 중 아연염 반응을 나타낸다.

  4) 순도시험

① 알칼리도 : 본 품 2g을 20㎖의 물에 현탁시켜 1분 동안 끓이고 여과한 다음 여액에 페놀프탈레인시액 0.1㎖를 가할 때, 적색을 나타내어서는 안 된다.

② 비소 : 본 품 0.25g을 묽은 염산 5㎖에 녹여 이를 시험용액으로 하여 비소시험을 할 때, 이에 적합하여야 한다.

③ 납 : 본 품 2g을 물 5㎖에 현탁시키고 충분한 양의 염산을 넣어 용해한 다음 질산 몇 방울을 가한다. 여기에 수산화암모늄시액을 희미한 침전물이 소실되지 않을 때까지 1방울씩 떨어뜨린 다음 묽은 질산 몇 방울을 떨어뜨려 혼탁액을 맑게 하고 물을 가하여 40㎖로 한다. 이 액 20㎖에 10% 시안화나트륨용액 25㎖를 계속 교반하면서 넣는다. 만약 침전이 생성되어 녹지 않으면 용액이 맑아질 때까지 고체 시안화나트륨을 첨가한다. 10% 시안화나트륨용액으로 전량이 50㎖가 되도록 희석한 다음 10% 황산나트륨용액 0.2㎖를 넣고 혼합하여 네스러관에 옮겨 흔들어 섞고 5분간 방치한다. 액의 색은 따로 물 19㎖에 납표준용액(Pb 10μg/㎖ 함유) 1㎖를 넣은 용액에 10% 시안화나트륨 용액 25㎖를 넣어 이하는 시험용액과 동일하게 처리한 액의 색보다 진하여서는 아니된다.

④ 카드뮴 : 본 품 5g을 정밀히 칭량하여 희석한 염산(2→3)에 녹이고 물을 가하여 50㎖로 하고 이 액 5㎖씩을 25㎖ A, B, C, D 및 E의 정량용 플라스크에 각각 넣고 A 플라스크에는 물을 가해 25㎖로 하여 시험용액으로 하고 따로 카드뮴 표준용액 1, 2, 3 및 4㎖를 B, C, D 및 E의 플라스크에 각각 취하고 물을 가해 25㎖로 한 다음 원자흡광분광광도법에 따라 각각의 흡광도를 측정하여 검량선을 작성한다. 이 검량선과 시험용액의 흡광도에서 카드뮴 함량을 구한다.

      사용가스 : 가연성가스  아세틸렌 또는 수소 

                조연성가스  공기

      램프 : 카드뮴 속빈음극램프

      파장 : 228.8nm 부근

⑤ 황화물에 의해 침전되지 아니하는 물질 : 본 품 약 2g을 정밀히 칭량하여 희석한 초산(1→4) 20㎖에 녹이고 물을 가해 200㎖로 하고 황화암모늄시액을 넣어 아연을 완전히 침전시킨다. 이를 여과하여 맨 처음 여액을 버리고 나중의 여액 100㎖를 미리 항량시킨 백금접시에 옮기어 황산 몇 방울을 넣어 증발건고한 다음 암모늄염이 휘산될 때까지 조심스럽게 800±25℃에서 항량이 될 때까지 강열할 때 그 양은 5㎎ 이하이어야 한다.

  5) 강열잔분 : 본 품 약 2g을 정밀히 칭량하여 800±25℃에서 항량이 될 때까지 강열할 때, 그 감량은 1%이하이어야 한다.

  6) 정량법 : 본 품을 강열한 다음 약 1.4g을 정밀히 칭량하여 염화암모늄 25g을 넣은 1N 황산 50㎖(필요하면 서서히 가열)에 용해시킨 다음 과량의 황산을 1N 수산화나트륨용액으로 적정한다.(지시약 : 메틸오렌지시액)

    1N 황산 1㎖ = 40.69㎎ ZnO

  7) 보존방법의 기준 : 밀폐용기에 보존할 것.

 ? 삼염기염화동(Tribasic Copper Chloride(TBCC), Cu2(OH)3Cl, 분자량 213.56)

  1) 함량 : 본 품은 정량하였을 때, 구리(Cu) 58% 이상 및 염소(Cl) 16% 이상을 함유한다. 

  2) 성상

① 본 품은 녹색의 고운 분말로서 냄새 없다.

② 본 품은 흐름성이 좋다. 

③ 본 제품은 물에 거의 녹지 않으며 산성에서 용해성이 좋다. 

  3) 확인실험 : 본 품을 염산산성용액(1-->10)에 담가 방치하면 그 표면에 적색의 금속이 석출된다. 

  4) 순도실험

① 납: 본 품 0.1～0.5g을 취하여 납을 시험한다.

② 비소: 본 품 0.1～0.5g을 취하여 비소의 시험을 한다.

  5) 정량법

  구리(%) =   시료액흡광도 /1 ppm기준흡광도 × 희석배수     × 100    

            ───────────────────────            

              시료무게(g) × 106                                      

① 구리 : 본 품 0.1～0.5g을 취하여 칼슘분석법의 시료액의 제조와 동일하게 준비하여 구리(Cu)의 정량법의 원자흡광분광광도법을 준용한다.

② 염소 : 염소(Cl) 정량법을 준수 한다. 단, 시료액의 조제는 본 품 1.0g을 250ml 메스플라스크에 넣고, 약 20℃의 증류수 150ml과 질산(Nitric acid) 5ml를 넣고 30분간 믹서에서 혼합한다. 그리고 Carrez 용액Ⅱ 5ml을 넣고 잘 혼합하고 다시 Carrez용액 Ⅱ 5ml을 넣고 잘 혼합한 후 250ml까지 증류수를 채워 5분간 믹서에서 혼합하여 여과한다.

          * W : 3.545x(V1xFAg-V2xFscn) 

            W : 염소(Cl) mg

            V1 : 0.1N-질산은 용액 ml

            V2 : 0.1N-치오시안산 암모니늄용액 또 0.1N-치오시안산 칼슘 용액 ml      

            FAg : 0.1N-질산은 용액의 역가 

            Fscn : 0.1N-치오시안산 칼슘 용액의 역가

  6) 제조방법의 기준 : 본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

  7) 보존방법의 기준 : 밀폐용기에 보존할 것 

 ? 셀렌산나트륨(Sodium Selenate, Na2SeO4, 분자량188.94)

  1) 함량 : 이 품목은 셀렌산나트륨(Na2SeO4) 98.0% 이상을 함유하여야 한다.

  2) 성상 : 본 품은 백～연분홍색의 결정형 분말이고 냄새가 없다. 매우 흡습성이 높고 물에는 잘 녹지만 알콜에는 녹지 않는다.

  3) 확인시험

① 이 품목은 확인시험법 중 나트륨염의 반응을 나타낸다.

② 이 품목을 정량법에 따라 시험할 때, 표준용액과 같은 파장에 극대흡수부를 나타낸다.

  4) 순도시험

① 용  상 : 이 품목 10g에 물 100mL를 가하여 녹일 때, 그 액은 징명하여야 한다.

② 미립자 : 순도시험(1)의 용액을 밝은 불빛 아래에서 관찰할 때, 유색의 입자는 없거나 있더라도 조금 있다. 

  5) 정량법 : 이 품목을 셀레늄으로서 약 100mg에 대응하는 양을 정밀히 달아 분해플라스크에 넣고 질산 약 12mL를 넣어 흔들어 섞어 완전히 녹여준다. 계속하여 약 15분간 서서히 끓이고 실온으로 식힌 다음 과염소산 80mL를 넣고 연기가 없어질 때까지 가열한다. 이 조작을 연기가 완전히 없어질 때까지 되풀이하여 실온으로 식혀주고 나서 50mL 플라스크에 옮겨준 다음 분해플라스크를 염화암모늄용액(4→200)으로 씻어주고 씻은 액 및 염화암모늄용액(4→200)을 가하여 50mL로 한 액을 시험용액으로 한다. 시험용액 및 각 표준용액을 염화암모늄용액(4→200)ㆍ과염소산의 혼액(20 : 1)을 대조액으로 하여 다음의 조작조건으로 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 셀레늄의 농도 C(mg/mL)를 구하여 다음 계산식에 따라 셀렌산나트륨의 함량(%)을 구한다.

  셀렌산나트륨의 함량(%) =    C × 2.3929       ×  100     

                            ──────────  ─────

                              검체의채취량(g)       1,000   

    표준용액 : 셀레늄 약 1.0g을 정밀히 달아 질산 최소량을 가하여 녹여주고 날려보낸 다음 물 2mL를 가하여 증발건고한다. 이 조작을 3회 되풀이하고 3N 염산을 가하여 1L로 한 액을 표준원액으로 한다. 다시 이 액 10mL를 정확하게 취하여 물을 가하여 100mL로 하고, 이 액 5, 10 및 25mL를 100mL 플라스크에 각각 취하여 넣고 과염소산 5mL씩을 넣어 15분간 가볍게 끓이고 실온으로 식힌 다음 염화암모늄용액(4→200)을 가하여 100mL로 한다. 각 액 1mL는 5.0, 10.0 및 25.0mg의 셀레늄을 함유한다. 

    조작조건

     광원램프     셀레늄중공음극램프

     분석선파장      196nm

     조연성가스      공 기

     가연성가스      아세칠렌

 ? 아셀렌산나트륨(Sodium Selenite, Na2SeO3, 분자량172.9)

  1) 함량 : 본 품은 아셀렌산나트륨(Na2SeO3) 99.0～100.5%를 함유한다.

  2) 성상 : 본 품은 백～연분홍색의 결정형 분말이고 냄새가 없다. 매우 흡습성이 높고 물에는 잘 녹지만 알콜에는 녹지 않는다.

  3) 확인시험 : 이 품목 50mg에 0.1N 염산 5mL를 가하여 녹인 후 이에 염화제일주석 50mg을 가하면 황갈색～오렌지색의 침전이 생성된다.

  4) 순도시험

① 탄산염 : 이 품목 0.5g을 취하여 물 1mL를 가한 후 묽은염산 2mL를 가했을 때, 거품이 발생되지 않아야 한다.

② 염화물 : 이 품목 0.5g을 염화물시험법에 따라 시험할 때, 염소 0.05mg 이하이어야 한다(0.01% 이하).

③ 질산염 : 이 품목 0.2g을 물 3mL에 녹이고 브루신황산염시액을 가하여 50mL로 한 액을 시험용액으로 한다. 따로, 질산염표준용액 2mL 와 이 품목 0.2g에 브루신황산염시액을 가하여 50mL로 한 액을 대조액으로 하고, 브루신황산염시액 50mL를 공시험용액으로 한다. 시험용액, 대조액 및 공시험용액을 10분간 수욕 중에서 가열하고 재빨리 상온으로 식힌 다음 공시험용액으로 분광광도계의 영점을 조절하고 파장 410nm에서 흡광도를 측정하였을 때 시험용액의 흡광도는 대조액의 흡광도보다 높아서는 아니 된다(0.01% 이하).

     시액 : 브루신황산염시액 : 브루신황산염 600mg을 미리 식힌 황산(2→3) 600mL에 녹인 후 황산(2→3)을 가하여 1,000mL로 한다. 

     질산염표준용액 : 질산칼륨 163mg을 물에 녹여 100mL로 하고, 이액 10mL를 취해 물을 가하여 1,000mL로 한다(이 액 1mL는 질산염(NO3) 0.01mg 함유).

④ 셀렌산염 및 황산염 : 이 품목 0.5g에 탄산나트륨 20mg과 염산 10mL을 가한 후 혼합한 다음 후드 안에서 천천히 증발시킨다. 잔류물을 염산 1mL로 씻은 후 다시 증발시켜 건조한다. 건조된 잔류물에 뜨거운 물 15mL과 염산 1mL을 가하여 황산염시험법에 따라 시험할 때, 황산 0.15mg으로 생성된 탁도 이하이어야 한다(0.03% 이하).

  5) 정량법 : 이 품목을 셀레늄으로서 약 100mg에 대응하는 양을 정밀히 달아 분해플라스크에 넣고 질산 약 12mL를 넣어 흔들어 섞어 완전히 녹여준다. 계속하여 약 15분간 서서히 끓이고 실온으로 식힌 다음 과염소산 80mL를 넣고 연기가 없어질 때까지 가열한다. 이 조작을 연기가 완전히 없어질 때까지 되풀이하여 실온으로 식혀주고 나서 50mL 플라스크에 옮겨준 다음 분해플라스크를 염화암모늄용액(4→200)으로 씻어주고 씻은 액 및 염화암모늄용액(4→200)을 가하여 50mL로 한 액을 시험용액으로 한다. 시험용액 및 각 표준용액을 염화암모늄용액(4→200)ㆍ과염소산의 혼액(20 : 1)을 대조액으로 하여 다음의 조작조건으로 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 셀레늄의 농도 C(mg/mL)를 구하여 다음 계산식에 따라 아셀렌산나트륨의 함량(%)을 구한다.

  아셀렌산나트륨의 함량(%) =    C × 2.1902       ×  100     

                              ──────────  ─────

                                검체의 채취량(g)      1,000   

    표준용액 : 셀레늄 약 1.0g을 정밀히 달아 질산 최소량을 가하여 녹여주고 날려보낸 다음 물 2mL를 가하여 증발건고한다. 이 조작을 3회 되풀이하고 3N 염산을 가하여 1L로 한 액을 표준원액으로 한다. 다시 이 액 10mL를 정확하게 취하여 물을 가하여 100mL로 하고, 이 액 5, 10 및 25mL를 100mL 플라스크에 각각 취하여 넣고 과염소산 5mL씩을 넣어 15분간 가볍게 끓이고 실온으로 식힌 다음 염화암모늄용액(4→200)을 가하여 100mL로 한다. 각 액 1mL는 5.0, 10.0 및 25.0mg의 셀레늄을 함유한다. 

    조작조건

    광원램프     셀레늄중공음극램프

    분석선파장     196nm

    조연성가스     공  기

    가연성가스     아세칠렌

? 아연 하이드록시염화물(Zinc Hydroxychloride, Zn5(OH)8Cl2ㆍ(H2O), 분자량 551.88)

  1) 함량 : 본 품은 정량하였을 때, 아연(Zn) 54% 이상 및 염소(Cl) 20% 이하를 함유한다. 

  2) 성상

① 본 품은 흰색(미색)의 고운 분말로서 냄새가 없다.

② 본 품은 흐름성이 좋다. 

③ 본 제품은 물에 거의 녹지 않으며 산성에서 용해성이 좋다. 

  3) 확인실험 : 본 품을 묽은 염산용액(1→10)은 아연염의 정성반응을 나타낸다.

  4) 순도실험

① 납 : 본 품 0.1～0.5g을 취하여 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 납을 시험할 때 그 양은 90ppm 이하이어야 한다.

② 비소 : 본 품 0.1～0.5g을 취하여 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 비소를 시험할 때 그 양은 10ppm 이하이어야 한다.

③ 크롬 : 본 품 0.1～0.5g을 취하여 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 크롬을 시험할 때 그 양은 15ppm 이하이어야 한다.

④ 카드뮴: 본 품 0.1～0.5g을 취하여 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 카드뮴을 시험할 때 그 양은 10ppm 이하이어야 한다.

⑤ 수은: 본 품 0.05～0.2g을 취하여 금아말감법(수은전용분석기)에 따라 수은을 시험할 때 그 양은 0.2ppm 이하이어야 한다.

  5) 정량법

① 아연 : 본 품 0.1～0.5g을 취하여 원자흡광분광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험한다.

② 염소 : 염소(Cl) 정량법을 준수한다. 단, 시료액의 조제는 다음과 같다. 본 품 1.0g을 250ml 메스플라스크에 넣고, 약 20℃의 증류수 150ml과 질산(Nitric acid) 5ml를 넣고 흔들어 용해시킨다. 그 다음 Carrez 용액Ⅱ(황혈염용액) 5ml을 넣고 잘 혼합하고 다시 Carrez용액Ⅰ(초산아연용액) 5ml을 넣고 잘 혼합한 후 250ml까지 증류수를 채우고 흔들어 혼합하고 여과하여 그 여액을 시료액으로 사용한다.

염소(%) = W/시료무게(g) × 1/ 1000 ×100

W : 3.545 × (V1 × FAg ? V2 × Fscn)

W : 염소(Cl) ㎎

V1 : 0.1N-질산은 용액 첨가량(㎖)

V2 : 0.1N-치오시안산 칼륨용액 또는 0.1N-치오시안산 암모늄용액의 소비량(㎖)

FAg : 0.1N-질산은 용액의 역가

Fscn : 0.1N-치오시안산 용액의 역가

  6) 제조방법의 기준 : 본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

  7) 보존방법의 기준 : 밀폐용기에 보존할 것

 ? 염화크롬(Chromic Chloride, CrCl3ㆍ6H2O, 분자량 6수염 266.45)

  1) 함량 : 이 품목은 염화크롬(CrCl3ㆍ6H2O) 98.0～101.0%를 함유한다.

  2) 성상 : 이 품목은 자주색 또는 녹색의 결정성 고체이다.

  3) 확인시험

① 이 품목의 수용액(1→250) 5mL에 5N 수산화나트륨 1mL와 30% 과산화수소 10방울을 가한 후 약 2분간 천천히 가열하면 황색을 나타낸다.

② 이 품목의 수용액(1→250) 5mL에 질산은시액 5방울을 가하면 흰색의 침전물이 형성되며, 질산에 녹지 않는다.

  4) 순도시험

① 물불용물 : 이 품목 10g을 정밀히 달아 물 100mL를 가한 다음 그 용액을 30분간 수욕상에서 분해시킨 후 유리여과기(1G4)에 여취한다. 뜨거운 물로 비커를 씻은 용액을 유리여과기로 여과한 후 마지막 씻은 용액의 색이 없어질 때까지 잔류물을 씻는다. 유리여과기를 105o에서 2시간 건조할 때, 그 양은 1mg 이하이어야 한다(0.01% 이하).

② 수산화암모늄가용물 : 이 품목 2g을 물 80mL에 가하여 가열한 후 암모니아수 10mL 넣은 후 수욕상에서 30분간 때때로 흔들어주면서 중탕한 다음 식혀서 물을 100mL까지 가하여 혼합한 다음 여과한다. 여액 50mL을 취하여 황산 0.5mL을 가한 후, 수욕상에서 여과액을 증발건고한 다음, 항량이 될 때까지 강열할 때, 그 잔류물은 2mg이하이어야 한다(SO42-로서 0.20% 이하).

③ 황산염 : 이 품목의 수용액(2→10) 10mL에 3N 염산 1mL을 첨가한 후 여과한 다음 그 여과지를 물 5mL로 두 번 씻은 후 물로 40mL까지 희석하여 시험용액으로 한다. 따로, 1g을 물 10mL에 녹인 후 여과과정을 거친 다음 0.02N 황산 0.1mL을 가하여 대조액으로 한다. 두 용액에 염화바륨용액(12→100) 3mL을 가한 후 잘 섞고 밤새 상온에 정치한다. 상층액을 버리면서 시험용액보다 2배 많은 용액을 대조액에 남도록 한다. 두 용액을 물로 25mL까지 희석한 후 1분간 초음파를 처리할 때, 시험용액의 탁도가 대조액의 탁도 이하이어야 한다(0.01% 이하).  

④ 철 : 이 품목 1g을 물 100mL에 가하여 녹인 후 10mL을 취하여 물로 45mL이 되게 한 다음, 염산 2mL을 가하여 혼합한 것을 시험용액으로 한다. 시험용액과 철표준용액에 각각 n-부탄올 15mL을 가하고 치오시안산암모늄용액(30→100) 15mL을 가하여 잘 섞어서 층 분리할 때, 시험용액의 상층부 색은 표준용액의 색보다 진하여서는 아니 된다(0.01% 이하).

  5) 정량법 : 이 품목 0.4g을 정밀히 달아 물 100mL에 녹인 후 5N 수산화나트륨 5mL을 가하여 섞는다. 여기에 30% 과산화수소 4mL을 천천히 가한 후 5분간 가열하여 끓인 다음 약간 식히고 황산니켈용액(1→20) 5mL을 가한다. 산소가 더 이상 발생하지 않을 때까지 끓이고 식힌 다음 용액의 색이 노란색에서 오렌지색으로 바뀔 때까지 2N 황산을 가한다. 이 액에 요오드칼륨 4g과 탄산수소나트륨 2g을 물 100mL에 녹여 가하고 염산 6mL를 가하고 섞는다. 플라스크의 마개를 막고 10분 동안 암소에 방치한 다음 유리된 요오드를 0.1N 치오황산나트륨표준용액으로 적정한다(지시약 : 전분시액).

0.1N 치오황산나트륨 1mL = 8.882mg CrCl3ㆍ6H2O

 ? 요오드산칼륨(Potassium Iodate, KIO3, 분자량214.0)

  1) 함량 : 본 품은 정량할 때 요오드산칼륨(KIO3) 99.0%이상을 함유한다.

  2) 성상

① 본 품은 백색의 결정 또는 결정성의 분말로서 냄새는 없다.

② 본 품은 물에 녹기 쉽고 에탄올에 녹기 어렵다.

③ 본 품의 수용액(1→20)의 pH는 7.0～9.0이다.

  3) 확인시험

① 본 품의 수용액(1→20) 1㎖에 전분시액 1방울 및 차아인산용액(1→5) 2방울을 떨어뜨릴 때 액은 청색을 나타낸다.

② 본 품의 수용액(1→20)은 칼륨염의 정성반응 ①을 나타낸다.

  4) 순도시험

① 용액상 : 본 품 1.0g에 물 20㎖를 가하여 녹일 때 그 액은 무색으로 투명하여야 한다.

② 염소산염 : 본 품 1.0g을 자제접시에 취하여 황산 2㎖를 가하고 10분간 방치할 때 염소냄새 또는 가스가 발생해서는 안 된다.

③ 중금속 : 본 품 2.0g을 자제 도가니에 취하여 묽은 염산(1→2) 3㎖를 가하고 수욕상에서 증발건고하여 여기에 묽은 염산(1→2) 3㎖를 가하고 다시 수욕상에서 증발건고한다. 여기에 묽은 염산(1→2) 3㎖씩으로 3회 같은 방법으로 조작한다. 잔류물에 물 10㎖를 가하여 녹이고 폐놀프타레인시액 한방울을 가하여 액이 미적색으로 될 때까지 암모니아 시액을 떨어뜨리고 묽은 초산 2㎖를 가하고 물을 가해 50㎖로 한다. 이것을 검액으로 하여 중금속의 시험을 할 때 이 액에서 나타나는 색은 납표준액 2.0㎖에 묽은 염산(1→2) 3㎖를 가하여 수욕상에서 증발건고하여 시료와 같은 방법으로 조작할 때 나타나는 색보다 짙어서는 안 된다.

④ 비소 : 본 품 0.40g을 취하여 비소시험법 제 2법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다.

  5) 정량법 : 본 품 약 1.0g을 정밀하게 칭량하여 물 50㎖를 가하여 녹이고 여기에 물을 가하여 정확하게 100㎖로 한다. 이 액 10㎖를 정확하게 칭량하여 공전 플라스크에 넣고 물 30㎖, 요오드화칼륨 3g 및 묽은 황산(1→5) 5㎖를 가하고 즉시 밀봉하여 어두운 곳에서 5분간 방치하고 0.1N 티오황산나트륨액으로 적정한다.(지시약 전분시액 1㎖) 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다.

      0.1N 티오황산나트륨액 1㎖ = 3.5667㎎ KIO3

  6) 보존방법의 기준 : 밀폐용기에 보존할 것.

 ? 요오드산칼슘(Calcium Iodate, Ca(IO3)2, 분자량390.0)

  1) 함량 : 본 품은 정량할 때 요오드산칼슘[Ca(IO3)2] 95.0%이상을 함유한다.

  2) 성상

① 본 품은 백색의 결정 또는 결정성의 분말로서 냄새는 없거나 또는 약간의 특이한 냄새가 난다.

② 본 품은 물 또는 에탄올에 녹기 어렵다.

  3) 확인시험

① 본 품의 포화수용액 5㎖에 전분시액 1방울 및 차아인산용액(1→5) 2방울을 가할 때 액은 청색을 나타낸다.

② 본 품을 염산으로 적시고 불꽃반응을 실시할 때, 적색을 나타낸다.

  4) 순도시험

① 용액상 : 본 품 1.0g에 1N 염산시액 50㎖를 가하고 수욕상에서 가온하여 녹일 때 그 액은 무색～담황색으로 투명하여야 한다.

② 염소산염 : 「요오드산칼륨」의 순도시험 ②를 준용한다.

③ 중금속 : 「요오드산칼륨」의 순도시험 ③을 준용한다.(10ppm이하)

④ 비소 : 본 품 0.40g을 취하여 묽은 염산(2→3) 5㎖를 가하고 다시 수욕상에서 증발건고한다. 요오드색이 없어질 때까지 이 조작을 되풀이한 후, 물 5㎖를 가하고 수욕상에서 가열하여 녹여 이것을 검액으로 한다. 이 검액으로 비소의 시험할 때 나타나는 색은 본 품을 사용하지 않고 같은 방법으로 조작한 후 비소표준액 2.0㎖를 가하고 이하 검액의 경우와 같은 방법으로 조작할 때 나타나는 색보다 짙어서는 안 된다.

  5) 정량법 : 본 품 0.1g을 정밀하게 칭량하여 물 30㎖, 요오드화칼륨 3g 및 묽은 염산(1→9) 5㎖를 가하여 녹이고 0.1N 티오황산나트륨액으로 적정한다.(지시약 전분시액 1㎖) 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다.

     0.1N 티오황산나트륨액 1㎖ = 3.2490㎎ Ca(IO3)2

  6) 보존방법의 기준 : 밀폐용기에 보존할 것.

 ? 요오드화칼륨(Potassium Iodide, KI, 분자량166.0)

  1) 함량 : 본 품은 건조 후 정량할 때 요오드화칼륨(KI) 99.0%이상을 함유한다.

  2) 성상

① 본 품은 무색 또는 백색의 결정 또는 백색의 결정성의 분말로서 냄새는 없다.

② 본 품은 물에 매우 녹기 쉬우며 글리세린에 녹기 쉽고 에탄올에 조금 녹기 쉽다.

③ 본 품의 수용액(1→10)의 pH는 7.0～9.0이다.

④ 본 품은 습한 공기 중에서 조금 녹는다.

  3) 확인시험 : 본 품의 수용액(1→20)은 칼륨염 및 요오드화물의 정성반응을 나타낸다.

  4) 순도시험

① 용액상 : 본 품 1.0g에 물 2㎖를 가하여 녹일 때 그 액은 무색으로 투명하여야 한다.

② 중금속 : 본 품 2.0g을 취하여 중금속시험법 제 1법에 의해 시험할 때, 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.

③ 비소 : 본 품 0.4g을 취하여 비소시험법 제 1법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다.

  5) 건조감량 : 1.0%이하(2g, 105℃, 4시간)

  6) 정량법 : 본 품을 건조 후 약 0.5g을 정밀하게 칭량하여 공전플라스크에 넣고 물 10㎖를 가하여 녹인다. 이에 염산 35㎖ 및 클로르포름 5㎖를 가해 흔들어 섞으면서 0.05M 요오드산칼륨으로 클로르포름층의 적자색이 없어질 때까지 적정한다. 이 경우에 적정의 종점은 클로르포름층이 탈색한 후, 5분간 이내에 다시 적자색이 나타나지 않을 때로 한다.

     0.05M 요오드산칼륨액 1㎖ = 16.600㎎ KI

  8) 제조방법의 기준 : 본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

  9) 보존방법의 기준 : 차광한 밀폐용기에 보존할 것.

 ? 크롬프로피온산(Chromium propionate, C9H15CrO6, 분자량 271.21)

  1) 함량 : 이 품목은 크롬과 프로피온산을 반응시켜 얻은 염으로 8～10%의 크롬을 함유한다. 비소와 카드뮴은 각각 1ppm 이하, 납과 수은은 각각 0.5ppm 이하이어야 한다.

  2) 성상 : 이 품목은 진녹색에서 검은색의 액상 형태이다.

  3) 확인시험

① 이 품목의 수용액(1→250) 5mL에 5N 수산화나트륨 1mL와 30% 과산화수소 10방울을 가한 후 약 2분간 천천히 가열하면 황색을 나타낸다.

② 이 품목의 수용액(1→250) 5mL에 질산은시액 5방울을 가하면 흰색의 침전물이 형성되며, 질산에 녹지 않는다.

  4) 순도시험

① 물불용물 : 이 품목 10g을 정밀히 달아 물 100mL를 가한 다음 그 용액을 30분간 수욕상에서 분해시킨 후 유리여과기(1G4)에 여취한다. 뜨거운 물로 비커를 씻은 용액을 유리여과기로 여과한 후 마지막 씻은 용액의 색이 없어질 때까지 잔류물을 씻는다. 유리여과기를 105o에서 2시간 건조할 때, 그 양은 1mg 이하이어야 한다(0.01% 이하).

② 수산화암모늄가용물 : 이 품목 2g을 물 80mL에 가하여 가열한 후 암모니아수 10mL 넣은 후 수욕상에서 30분간 때때로 흔들어주면서 중탕한 다음 식혀서 물을 100mL까지 가하여 혼합한 다음 여과한다. 여액 50mL을 취하여 황산 0.5mL을 가한 후, 수욕상에서 여과액을 증발건고한 다음, 항량이 될 때까지 강열할 때, 그 잔류물은 2mg이하이어야 한다(SO42-로서 0.20% 이하).

③ 황산염 : 이 품목의 수용액(2→10) 10mL에 3N 염산 1mL을 첨가한 후 여과한 다음 그 여과지를 물 5mL로 두 번 씻은 후 물로 40mL까지 희석하여 시험용액으로 한다. 따로, 1g을 물 10mL에 녹인 후 여과과정을 거친 다음 0.02N 황산 0.1mL을 가하여 대조액으로 한다. 두 용액에 염화바륨용액(12→100) 3mL을 가한 후 잘 섞고 밤새 상온에 정치한다. 상층액을 버리면서 시험용액보다 2배 많은 용액을 대조액에 남도록 한다. 두 용액을 물로 25mL까지 희석한 후 1분간 초음파를 처리할 때, 시험용액의 탁도가 대조액의 탁도 이하이어야 한다(0.01% 이하).  

④ 철 : 이 품목 1g을 물 100mL에 가하여 녹인 후 10mL을 취하여 물로 45mL이 되게 한 다음, 염산 2mL을 가하여 혼합한 것을 시험용액으로 한다. 시험용액과 철표준용액에 각각 n-부탄올 15mL을 가하고 치오시안산암모늄용액(30→100) 15mL을 가하여 잘 섞어서 층 분리할 때, 시험용액의 상층부 색은 표준용액의 색보다 진하여서는 아니 된다(0.01% 이하).

  5) 정량법 : 이 품목 0.4g을 정밀히 달아 물 100mL에 녹인 후 5N 수산화나트륨 5mL을 가하여 섞는다. 여기에 30% 과산화수소 4mL을 천천히 가한 후 5분간 가열하여 끓인 다음 약간 식히고 황산니켈용액(1→20) 5mL을 가한다. 산소가 더 이상 발생하지 않을 때까지 끓이고 식힌 다음 용액의 색이 노란색에서 오렌지색으로 바뀔 때까지 2N 황산을 가한다. 이 액에 요오드칼륨 4g과 탄산수소나트륨 2g을 물 100mL에 녹여 가하고 염산 6mL를 가하고 섞는다. 플라스크의 마개를 막고 10분 동안 암소에 방치한 다음 유리된 요오드를 0.1N 치오황산나트륨표준용액으로 적정한다(지시약 : 전분시액).

0.1N 치오황산나트륨 1mL = 8.882mg CrCl3ㆍ6H2O

  6) 주의사항: 육계용과 양돈용 배합사료에는 크롬프로피온산 유래의 크롬이 0.2㎎/㎏을 초과하지 않도록 첨가하여야 하며, 소 배합사료에 첨가시에는 0.5㎎/㎏을 초과하지 않아야 한다. 고수분 원료와 배합할 때에는 건조된 상태의 원료사료와 충분히 사전 배합하여 첨가하도록 한다. 

 ? 초산아연(Zinc Acetate, C4H6O4Znㆍ2H2O, 분자량 219.51)

  1) 함량 : 본 품은 정량하였을 때, 아연(Zn) 29.6% 이상을 함유한다. 

  2) 성상

    ① 본 품은 흰색(미색)의 분말로서 약한 초산 냄새가 난다.

    ② 본 품은 흐름성이 좋다. 

    ③ 본 제품은 물에 잘 녹는다. [43 g/100 mL (20℃, dihydrate)]

  3) 확인실험 : 이 용액(1 → 20)은 아연염과 아세트산염의 정성반응을 나타낸다.

                 pH : 6.0 ~ 8.0

  4) 순도실험

   ① 불용물 : 본 품 약 20 g을 아세트산(100) 1 mL를 함유한 물 150 mL에 녹일 때 불용물은 1.0 mg 이하이다(0.005 % 이하).

   ② 비소 : 본 품 0.1∼0.5g을 취하여 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 비소를 시험할 때 그 양은 3 ppm 이하이어야 한다.

   ③ 납 : 본 품 0.1∼0.5g을 취하여 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 납을 시험할 때 그 양은 20 ppm 이하이어야 한다.

   ④ 염화물 : 본 품 약 1.5 g 양의 검체를 네슬러관에 넣고 물 적당량을 넣어 녹여 40 mL로 한다. 여기에 묽은질산 6 mL 및 물을 넣어 50 mL로 하여 검액으로 한다. 0.020 mol/L 염산 0.10 mL를 취하여 묽은질산 6 mL 및 물을 넣어 50 mL로 하여 비교액으로 한다. 이 경우 검액이 맑지 않을 때는 두 액을 같은 조건으로 여과한다. 검액 및 비교액에 질산은시액 1 mL씩을 넣어 섞고 직사광선을 피하여 5분간 방치한 다음 검정색의 배경을 써서 네슬러관의 위 또는 옆에서 관찰하여 혼탁을 비교한다. 검액이 나타나는 혼탁은 비교액이 나타내는 혼탁보다 진하지 않다(0.005 % 이하). 

   ⑤ 황산염 : 본 품 약 1.0 g  양의 검체를 네슬러관에 넣고 물 적당량으로 녹여 40 mL로 한 다음 묽은염산 1 mL 및 물을 넣어 50 mL로 하여 검액으로 한다. 따로 0.010 mol/L 황산 0.10 mL를 취하여 묽은염산 1 mL 및 물을 넣어 50 mL로 하여 비교액으로 한다. 이 때 검액이 맑지 않을 때는 두 액을 같은 조건으로 여과한다. 검액 및 비교액에 염화바륨시액 2 mL씩을 넣어 섞고 10 분간 방치한 다음 검정색의 배경을 써서 네슬러관의 위 또는 옆에서 관찰하여 혼탁을 비교한다. 검액이 나타내는 혼탁은 비교액이 나타내는 혼탁보다 진하지 않다(0.010 % 이하). 

   ⑥ 알칼리성물질 및 알칼리토금속 : 본 품 약 2.0 g을 물 약 150 mL에 녹이고 200 mL 용량플라스크에 넣고 황화암모늄시액을 충분히 넣어 아연을 침전시키고 물을 넣어 200 mL로 한다. 건조 여과지로 여과하여 최초의 여액은 버리고 여액 100 mL를 취하여 황산 5 방울을 넣어 증발시켜 건조하고 강열한다. 잔류물의 질량은 2 mg 이하이다(0.2 % 이하).

  5) 정량법

   ○ 본 품 약 400 mg을 정확하게 달아 물 100 mL에 녹이고 암모니아-염화암모늄완충액 5 mL와 에리오크롬블랙T시액 0.1 mL를 넣어 파란색이 될 때 까지 0.05 mol/L 에틸렌디아민테트라아세트산이나트륨액으로 적정한다. 

0.05 mol/L 에틸렌디아민테트라아세트산이나트륨액 

1 mL = 10.98 mg C4H6O4Zn ㆍ2H2O

 ? 탄산망간(Manganese Carbonate, MnCO3, 분자량114.9)

  1) 함량 : 본 품은 염기성 탄산망간이며 정량할 때 망간(Mn) 42.8～44.7%를 함유한다.

  2) 성상

① 본 품 1.0g에 소량의 묽은 염산을 가하여 녹이고 수산화나트륨시액을 가하여 중성으로 한 액은 망간염의 정성반응을 나타낸다.

② 본 품은 탄산염의 정성반응 ①을 나타낸다.

  3) 순도시험

① 용액상 : 본 품 1.0g에 물 20㎖, 농염산 2㎖ 및 묽은 과산화수소수(3→100) 1방울을 가하여 녹일 때, 그 액은 투명하여야 한다.

② 납 : 본 품 2.0g을 취하여 묽은 염산 40㎖를 가하여 녹이고 물을 넣어 정확히 100㎖로 한다. 이 액 25㎖를 정확히 칭량하여 이것을 검액으로서 납을 시험한다.

③ 비소 : 본 품 0.40g을 취하여 묽은 염산 5㎖를 넣어 녹이고 이것을 검액으로서 비소시험법 제 1법에 의해 시험할 때, 이것에 적합하여야 한다.

  4) 건조감량 : 3.0%이하(1g, 70℃, 2시간)

  5) 정량법 : 본 품 약 0.1g을 정밀하게 칭량하여 묽은 염산 10㎖를 가하여 가온하여 녹이고, 냉각 후 물을 넣어 정확히 100㎖로 한다. 이 액 20㎖를 정확히 칭량하여 물 80㎖, 0.1M 마그네슘ㆍ에틸렌디아민4초산2나트륨액 5㎖ 및 염산하이드록실아민 0.1g을 가해 잘 흔들어 섞으면서 묽은 수산화나트륨시액으로 pH를 6.0-8.0에 맞춘다. 여기에 시안화칼륨용액(1→20) 1㎖ 및 pH 10.7의 암모니아ㆍ염화암모늄 완충액 2㎖를 넣어 0.01M 에틸렌디아민4초산2나트륨액으로 적정한다.(지시약 에리오크롬브랙 Tㆍ염화나트륨 지시약 0.04g) 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다. 

    0.01M 에틸렌디아민4초산2나트륨액 1㎖ = 0.5494㎖ Mn

  6) 보존방법의 기준 : 밀폐용기에 보존할 것.

 ? 탄산아연(Zinc Carbonate, ZnCO3, 분자량125.4)

  1) 함량 : 본 품은 염기성 탄산아연이며, 정량할 때 아연(Zn) 57.0～60.0%를 함유한다.

  2) 성상

① 본 품은 백색의 분말로서 냄새는 없다.

② 본 품은 묽은 염산 또는 암모니아 시액에 녹고, 물 또는 에탄올에는 거의 녹지 않는다.

  3) 확인시험 : 

① 본 품의 묽은 염산용액(1→10)은 아연염의 정성반응을 나타낸다.

② 본 품은 탄산염의 정성반응 ①을 나타낸다.

  4) 순도시험

① 액상 : 본 품 2.0g에 물 10㎖ 및 묽은 황산 30㎖를 가해 녹일 때, 그 액은 무색이고 투명하여야 한다.

② 중금속 : 본 품 2.0g에 물 10㎖ 및 묽은 염산(47→100) 10㎖를 가하여 가온하면서 녹이고, 냉각 후 묽게 한 암모니아수(4→5) 3㎖를 가한다. 여기에 묽은 염산(47→100)을 가하여 침전을 녹이고 물을 가하여 40㎖로 하고, 시료용액으로 한다. 이 시료용액 15㎖를 취하여 시안화칼륨시액 30㎖ 및 물을 가하여 50㎖로 하고, 황화나트륨시액 0.5㎖를 가하여 5분간 방치한다. 이 때 이 액에서 나타나는 색은 시료용액 5㎖를 취하여, 납표준액 15㎖, 시안화칼륨시액 30㎖ 및 물을 가하여 50㎖로 하고 황화나트륨시액 0.5㎖를 가하여 5분간 방치했을 때 나타나는 색보다 짙어서는 안 된다.

③ 비소 : 본 품 0.40g을 취하여 묽은 염산 5㎖를 가하여 녹이고 이것을 검액으로 하여 비소시험법 제 1법에 의해 시험할 때, 여기에 적합하여야 한다.

  5) 건조감량 : 3.0%이하(1g, 105℃, 2시간)

  6) 정량법 : 본 품 약 1.5g을 정밀히 칭량하여, 물 10㎖ 및 희석한 염산(1→2) 10㎖를 가한 후 녹이고 물을 넣어 정확히 100㎖로 한다. 이 액 10㎖를 정확하게 칭량하여 물 80㎖를 가해 수산화나트륨용액(1→50)을 약간의 침전이 생길 때까지 넣고, 이어 pH 10.7의 암모니아ㆍ염화암모늄완충액 5㎖를 가한 후 0.05M 에틸렌디아민4초산2나트륨액으로 적정한다.(지시약 에리오크롬브랙Tㆍ염화나트륨지시약 0.04g)

    0.05M 에틸렌디아민4초산2나트륨액 1㎖ = 3.269㎎ Zn

  7) 보존방법의 기준 : 밀폐용기에 보존할 것.

 ? 탄산코발트(Cobaltous Carbonate, CoCO3, 분자량118.9)

  1) 함량 : 본 품은 염기성 탄산코발트이며, 정량할 때 코발트(Co) 47.0～52.0%를 함유한다.

  2) 성상

① 본 품은 담적색 또는 암자색의 분말로 냄새는 없다.

② 본 품은 묽은 염산에 녹으며, 물 및 에탄올에 거의 녹지 않는다.

  3) 확인시험

① 본 품 1.0g에 묽은 염산 10㎖를 가하여 녹이고, α-니트로소-β-나프톨 시액 1㎖를 가할 때 적갈색의 침전이 생긴다.

② 본 품은 탄산염의 정성반응 ①을 나타낸다.

  4) 순도시험

① 용액상 : 본 품 2.0g에 물 10㎖ 및 묽은 염산 30㎖를 가하여 녹일 때 그 액은 적자색으로 맑아야 한다.

② 납 : 본 품 2.0g을 취하여 물 10㎖ 및 희석한 염산(47→100) 10㎖를 가하여 녹이고, 물을 가해 정확히 100㎖로 한다. 이 액 10㎖를 정확히 칭량하여 이것을 검액으로서 납을 시험한다.

③ 비소 : 본 품 0.40g을 취하여, 묽은염산 5㎖를 가하여 녹이고 이것을 검액으로서 비소시험법 제 1법에 의해 시험할 때, 여기에 적합하여야 한다.

  5) 건조감량 : 3.0%이하(1g, 70℃, 2시간)

  6) 정량법 : 본 품 약 1.0g을 정밀하게 칭량하여 물 10㎖ 및 희석한 염산(1→2) 5㎖를 가하여 녹이고, 물을 가해 정확히 250㎖로 한다. 이 액 10㎖를 정확히 칭량하고 물 100㎖를 가해 암모니아 시액으로 pH를 8.0에 맞추면서 0.01M 에틸렌디아민4초산2나트륨액으로 적정한다.(지시약 뮤렉사이드지시약 0.20g)

     0.01M 에틸렌디아민4초산2나트륨액 1㎖ = 0.5893㎎ Co

  7) 보존방법의 기준 : 밀폐용기에 보존할 것.

 ? 펩타이드구리(Copper Peptide)

  1) 함량 : 본 품은 정량할 때 환산한 건조물에 대하여 질소(N) 5.5-8.5% 및 동(Cu) 10.0-13.0%를 함유한다.

  2) 성상

① 본 품은 청록색의 분말이며 특이한 냄새가 난다.

② 본 품은 물 또는 에탄올에 거의 녹지 않는다.

  3) 확인시험

① 「펩타이드아연」의 확인시험 ①을 준용한다.

② ①에서 얻은 시료용액 1㎖를 취하여 페르시안화칼륨시액 1㎖를 가할 때 액에는 적갈색의 침전이 생긴다.

③ 본 품에 대하여 적외흡수스펙트럼 측정법의 취화칼륨정제법에 의해 적외흡수스펙트럼을 측정할 때 파수 3300-3600cm-1 및 1630-1650cm-1 부근의 흡수를 인정한다.

  4) 순도시험

① 납 : 「펩타이드아연」의 순도시험 ①을 준용한다.

② 비소 : 본 품 1.0g을 취하여 비소시험법 제 3법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다.

  5) 건조감량 : 12.0%이하(0.5g, 110℃, 1시간)

  6) 가수분해율 : 「펩타이드아연」의 가수분해율을 준용한다.

  7) 정량법

① 총질소 : 본 품 약 0.03g을 켈달플라스크에 정밀하게 칭량하여 이하 질소정량법(세미미크로켈달법)에 의해 시험한다.

    0.01N황산 1㎖ = 0.14007㎎ N

② 동 : 본 품 약 0.02g을 켈달플라스크에 정밀하게 칭량하여 초산 5㎖ 및 과염소산 10㎖를 가하고 잔류액이 2㎖가 될 때까지 가열한다. 냉각 후 염산 2㎖를 가하고 수욕상에서 가열분해한다. 냉각 후 물을 넣어 정확히 10㎖로 하고 이 액을 여과지로 여과하여 최초의 여과액 10㎖를 버리고 다음의 여과액 10㎖를 정확하게 취하여 물을 가하여 정확하게 100㎖로 한다. 여기에 이 액 5㎖를 정확하게 취하여 물을 넣어 정확히 100㎖로 하고 시료용액으로 한다. 별도로 초산 5㎖ 및 과염소산 10㎖를 켈달플라스크에 취하여 잔류액이 약 2㎖가 될 때까지 가열한다. 냉각 후 2㎖를 가한 후 물을 가해 정확히 100㎖로 한다. 이 액 10㎖를 정확히 취하여 물을 가해 정확히 100㎖로 하고 공시험원액으로 한다. 여기에 이 액 5㎖를 정확히 취하여 물을 가해 정확하게 100㎖로 하고 공시험용액으로 한다. 별도로 동 표준액 2㎖, 4㎖, 6㎖ 및 8㎖를 각각 정확하게 칭량하여 각각에 공시험원액 5㎖를 정확하게 가한 후 물을 가하여 정확하게 100㎖로 하고 표준용액 1, 표준용액 2, 표준용액 3 및 표준용액 4로 한다. 시료용액, 표준용액 1, 표준용액 2, 표준용액 3 및 표준용액 4의 공시험용액에 대해 다음 조건으로 원자흡광광도법에 의해 측정한다. 표준용액 1, 표준용액 2, 표준용액 3 및 표준용액 4에 공시험용액의 흡광도로부터 검량선을 작성하여 시료중의 동함량을 구한다.

   사용가스 : 가연성가스 아세틸렌

              조연성가스 공기

   램프 : 동속빈음극 램프

   파장 : 324.7㎚

 8) 보존방법의 기준 : 밀폐용기에 보존할 것.

 ? 펩타이드망간(Manganese Peptide)

  1) 함량 : 본 품은 정량할 때 환산한 건조물에 대하여 질소(N) 5.5～8.5% 및 망간(Mn) 10.0～13.0%을 함유한다.

  2) 성상

① 본 품은 담황색～갈색의 분말이며 특이한 냄새가 난다.

② 본 품은 물 또는 에탄올에 거의 녹지 않는다.

  3) 확인시험

①「펩타이드아연」의 확인시험 ①을 준용한다.

② ①에서 얻은 시료용액 1㎖를 취하여 암모니아시액 5㎖ 및 초산은시액 5㎖를 가할 때 액에는 백색의 침전이 생기고 생긴 침전은 서서히 흑색으로 된다.

③ 본 품에 대해 적외흡수스펙트럼 측정법의 취화칼륨정제법에 의해 자외흡수스펙트럼을 측정할 때 파수 3300～3600cm-1 및 1630～1650cm-1부근의 흡수를 인정한다.

  4) 순도시험

① 납 : 「펩타이드아연」의 순도시험 ①을 준용한다.

② 비소 : 본 품 1.0g을 취하여 비소시험법 제 3법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다.

  5) 건조감량 : 12.0%이하(0.5g, 110℃, 1시간)

  6) 가수분해율 : 「펩타이드아연」의 가수분해율을 준용한다.

  7) 정량법

① 총질소 : 본 품 약 0.03g을 켈달플라스크에 정밀하게 칭량하여 이하 질소감량법(세미마이크로켈달법)에 의해 시험한다. 

    0.01N 황산 1㎖ = 0.14007㎎ N

② 망간 : 본 품 약 0.2g을 켈달플라스크에 정밀하게 칭량하여 황산 5㎖ 및 과염소산 10㎖를 가하고 잔류액이 약 2㎖가 될 때까지 가열한다. 냉각 후 염산 2㎖를 가하고 수욕상에서 가열용해한다. 냉각 후 물을 넣어 정확하게 100㎖로 하고 이 액을 여과지로 여과하고 최초의 여과액 10㎖를 버리고 다음의 여과액 10㎖를 정확하게 취하고 물을 가하여 정확히 100㎖로 한다. 여기에 이 액 5㎖를 정확하게 취하고 물을 가하여 정확히 100㎖로 하여 시료용액으로 한다. 별도로 초산 5㎖ 및 과염소산 10㎖를 켈달플라스크에 취하여 잔류액이 약 2㎖가 될 때까지 가열한다. 냉각 후 염산 2㎖를 가한 후 물을 넣어 정확히 100㎖로 한다. 이 액 10㎖를 정확하게 취하여 물을 넣어 정확하게 100㎖로 하여 공시험원액으로 한다. 여기에 이 액 5㎖를 정확하게 취하여 물을 가하여 정확히 100㎖로 하고 공시험용액으로 한다. 별도로 망간표준액 5㎖, 10㎖, 15㎖ 및 20㎖를 각각 정확하게 칭량하여 각각 공시험원액 5㎖를 정확하게 가한 후 물을 넣어 정확하게 100㎖로 하고 표준용액 1, 표준용액 2, 표준용액 3 및 표준용액 4 등에 공시험용액에 대해 다음 조건으로 원자흡광광도법에 의해 측정한다. 표준용액 1, 표준용액 2, 표준용액 3 및 표준용액 4 등에 공시험용액의 흡광도에서 검량선을 작성하여 사료중의 망간함량을 구한다.

      사용가스 : 가연성가스 아세틸렌

                조연성가스 공기 

    램프 : 망간 속빈음극 램프

    파장 : 279.5㎚

    망간함량(%)  = 

  8) 보존방법의 기준 : 밀폐용기에 보존할 것.

 ? 펩타이드아연(Zinc Peptide)

  1) 함량 : 본 품은 정량할 때 환산한 건조물에 대하여, 질소(N) 5.5～8.5% 및 아연(Zn)10.0～13.0%를 함유한다.

  2) 성상

① 본 품은 담황색～갈색의 분말이며 특이한 냄새가 난다.

② 본 품은 물 또는 에탄올에 거의 녹지 않는다.

  3) 확인시험

① 본 품 0.5g을 취하여 0.5N 염산시액 25㎖를 가하고 60℃의 수욕상에서 가볍게 흔들어 섞으면서 3분간 가온한다. 냉각 후 여기에 0.5N 염산시액 25㎖ 가하며 흔들어 섞는다. 이 액 10㎖를 취하여, 트리클로르초산용액(1→10) 10㎖를 가하여 흔들어 섞은 후 10분간 방치한다. 이 액을 여과지로 여과하여 여과액을 시료용액으로 한다. 시료용액 1㎖를 취하여 피리딘1㎖, 아스코르빈산용액(1→2000) 1㎖ 및 닌하이드린용액(1→100) 1㎖를 가하여, 수욕상에서 2분간 가열할 때, 액은 청자색을 나타낸다.

② ①에서 얻은 시료용액 1㎖를 취하여 피리딘 1～2방울 및 티오시안산 칼륨시액 1㎖를 가할 때 액은 백색의 침전을 생성한다.

③ 본 품에 대하여 적외흡수스펙트럼 측정법의 취하칼륨 정제법에 의해 적외흡수스펙트럼을 측정할 때, 파수 3300-3600㎝-1  및 1640～1660㎝-1  부근의 흡수를 인정한다.

  4) 순도시험

① 납 : 본 품 1.0g을 취하여 초산 3㎖ 및 과소염소산 5㎖를 가하여 증발건고하고, 냉각 후 묽은 염산 5㎖을 가하고 수욕상에서 가온하여 용해한다. 냉각 후 물 5㎖를 가하고 혼합하여, 여과지로 여과한다. 잔류물을 물 5㎖로 씻고, 세척액을 앞의 여과액에 합쳐, 물을 넣어 25㎖로 하고 시료용액으로 한다. 별도로 납표준액 4㎖를 정확히 칭량하여 물을 넣고 50㎖로 한다. 이 액 10㎖ 정확히 칭량하고 묽은 염산 50㎖로 한다. 이 액 10㎖를 정확히 칭량하고 묽은염산 5㎖ 및 물을 가하여 25㎖로 하고, 표준용액으로 한다. 시료용액 및 표준용액에 대하여, 다음 조건으로 원자흡광 광도법에 의해 측정할 때 시료용액의 흡광도는 표준용액의 흡광도보다 작아서는 안 된다.

       사용가스 : 가연성가스 아세틸렌

                 조연성가스 공기

       램    프 : 아연 속빈음극 램프

       파    장 : 217.0㎚

② 비소 : 본 품 1.0g을 칭량하여, 비소시험법 제 3법에 의해 시험할 때, 여기에 적합하여야 한다.

  5) 건조감량 : 12.0%이하(0.5g, 110℃, 1시간)

  6) 가수분해율 : 본 품 약 1g을 정밀하게 칭량하여 여기에 0.5N 염산시액 30㎖를 가하고, 60℃의 수욕상에서 때때로 흔들어 섞으면서 30분간 가온한다. 냉각 후 트리클로르 초산용액(1→10) 10㎖를 가하고, 격렬하게 흔들어 섞은 후, 0.5N 염산시액을 가하여 정확히 50㎖로 한다. 이 액 약 20㎖를 취하여 플라스크의 내벽을 따라 황산 10㎖를 가한다. 이하 질소정량법(세미미크로켈달법)에 의해 시험한다. 여기서 얻어진 가수분해 질소(A%) 및 정량법의 항에서 얻어진 총 질소(B%)에 의해 다음 식에 의해 가수분해율을 구할 때 30%이상이어야 한다.

  7) 정량법

① 총 질소 : 본 품 약 0.03g을 켈달플라스크에 정밀하게 칭량하여 이하 질소정량법(세미마이크로켈달법)에 의해 시험한다. 

      0.01N 황산 1㎖ = 0.14007㎎ N

② 아연 : 본 품 약 0.2g을 켈달플라스크에 정밀하게 칭량하고, 초산 5㎖ 및 과염소산 10㎖를 가하여, 잔류액이 약 2㎖가 될 때까지 가열한다. 냉각 후 염산 2㎖를 가하고, 수욕상에서 가수분해한다. 냉각 후 물을 넣어 정확히 100㎖로 하고 이 액을 여과지에서 여과하여, 최초의 여과액 10㎖를 버리고 다음 여과액 10㎖를 정확히 취하고, 물을 넣어 100㎖로 한다. 여기에 이 액 5㎖를 정확히 취하여, 물을 넣어 100㎖로 하고 시료용액으로 한다. 별도로 5㎖ 및 과염소산 10㎖를 켈달플라스크에 취하여, 잔류액이 약 2㎖가 될 때까지 가열한다. 냉각 후 염산 2㎖를 가한 후 물을 넣어 100㎖로 한다. 이 액 10㎖를 정확히 취하여 물을 가하여 100㎖로 하고, 공시험원액으로 한다. 여기에 이액 5㎖를 정확히 취하여 물을 넣어 100㎖로 하고 공시험원액으로 한다. 별도로 아연표준액 5㎖, 10㎖, 15㎖ 및 20㎖를 각각 정확히 칭량하여, 각각에 공시험원액 5㎖를 가한 후, 물을 넣어 100㎖로 하고 표준용액 1, 표준용액 2, 표준용액 3 및 표준용액 4로 한다. 시료용액, 표준용액 1, 표준용액 2, 표준용액 3 및 표준용액 4액 등 공시험용액에 대해 다음 조건으로 원자흡광광도법에 의해 측정한다. 표준용액 1, 표준용액 2, 표준용액 3 및 표준용액 4 등의 공시험용액의 흡광도에서 검량선을 작성하여 시료중의 아연 함량을 구한다.

    사용가스 : 가연성가스 아세틸렌 

               조연성가스 공기

    램    프 : 아연 속이 빈 음극 램프

    파    장 : 213.9㎚

  8) 보존방법의 기준 : 밀폐용기에 보존할 것.

 ? 펩타이드철(Iron Peptide)

  1) 함량 : 본 품은 정량할 때 환산한 건조물에 대하여, 질소(N) 7.0～10.5 및 철(Fe) 10.0～13.0%를 함유한다.

  2) 성상

① 본 품은 갈색～녹갈색의 분자～입자로서 특이한 냄새가 난다.

② 본 품은 물 또는 에탄올에 거의 녹지 않는다.

  3) 확인시험

① 본 품을 필요에 의해 분말로 하고 그 중 0.05g을 취하여 0.5N 염산시액 25㎖를 가하고, 60℃의 수욕상에서 가볍게 흔들어 섞으면서 3분간 가온한다. 냉각 후 0.5N 염산시액 25㎖를 가하여 흔들어 섞는다. 이 액 10㎖를 취하여 트리클로르초산용액(1→10) 10㎖를 가하여 흔들어 섞은 후 10분간 방치한다. 이 액을 여과지에서 여과하여 여과액을 시료용액으로 한다. 시료용액 1㎖를 취하여 피리딘 1㎖, 아스코르빈산용액(1→2,000) 1㎖ 및 닌하이드린용액(1→100) 1㎖를 가하고, 수욕상에서 2분간 가열할 때, 액은 청자색을 나타낸다.

② ①에서 얻은 시료용액 1㎖를 취하여, 염산하이드록실아민용액(1→50) 1㎖를 가하여 10분간 방치한 후, o-페난트로린 0.25g에 pH 5.0의 초산ㆍ초산나트륨 완충액을 가하여 녹여 100㎖로 한 액 2㎖를 가할 때 액은 적～적등색을 나타낸다.

  4) 순도시험

① 납 : 본 품을 필요에 의해 분말로 하고, 그 중 1.0g을 취하여 초산 3㎖ 및 과염소산 5㎖를 가하여 증발건고하여 냉각 후 묽은 염산 5㎖를 가하고 수욕상에서 가온하여 녹인다. 냉각 후 물 5㎖를 넣어 혼합하고 여과지에서 여과한다. 잔류물을 물 5㎖로 씻고 세척액을 앞의 여과액에 합쳐, 이것을 검액으로서 납을 시험한다.

② 비소 : 본 품 1.0g을 취하여, 비소시험법 제 3법에 의해 시험할 때, 여기에 적합하여야 한다.

  5) 건조감량 ; 13.0%이하(0.5g, 110℃, 8시간)

  6) 가수분해율 ; 본 품을 필요에 따라 분말로 하고 그 중 약 1g을 정밀하게 칭량하여 여기에 0.5N 염산 30㎖를 가하고, 60℃의 수욕상에서 때때로 흔들어 섞으면서 30분간 가열한다. 냉각 후 트리클로르초산용액(1→10) 10㎖를 가하고 격렬하게 흔들어 섞은 후, 0.5N 염산을 가하여 정확히 50㎖로 한다. 이 액 약 20㎖를 취하여, 분당 4,000회로 5분간 원심분리하여 얻어진 상등액 5㎖를 정확히 취한 후 물을 가해 25㎖로 한다. 이 액 4㎖를 정확히 취하여 켈달플라스크에 넣고 플라스크의 내벽을 따라 황산 7㎖를 가한다. 이하 질소정량법에 의해 시험한다. 여기서 얻어진 건조물에 대한 가수분해질소(A%) 및 정량법의 항에서 얻어진 총질소(B%)보다 다음 식에 의해 가수분해율을 구할 때 30%이상이어야 한다. 

  7) 정량법

① 총 질소 : 본 품을 필요에 의해 분말로 하고 그 중 약 0.03g을 켈달플라스크에 정밀하게 칭량하여, 이하 질소정량법에 의해 시험한다. 

     0.01N 황산 1㎖ = 0.14007㎎ N

② 철 : 본 품을 필요에 의해 분말로 하고 그 중 약 0.2g을 켈달플라스크에 정밀하게 측정하여 초산 3㎖ 및 과염소산 5㎖를 가해 잔류물이 약 1㎖가 될 때까지 가열한다.(약 2시간) 냉각 후 잔류액에 염산 2㎖를 가하고 수욕상에서 가열분해한다. 냉각 후 물을 가해 정확히 100㎖로 하고 이 액을 여과지로 여과하여 최초의 여과액 10㎖를 버리고 다음의 여과액 10㎖를 정확히 취하여 물을 가해 정확히 100㎖로 한다. 여기에 이 액 5㎖를 정확히 취하여 물을 가해 정확히 100㎖로 하여 시료 용액으로 한다. 별도로 초산 3㎖ 및 과염소산 5㎖를 켈달플라스크에 취하여 잔류액이 약 1㎖가 될 때까지 가열한다. 냉각 후 잔류물에 염산 2㎖를 가한 후, 물을 넣어 정확히 100㎖로 한다. 이 액 10㎖를 정확히 취하여 물을 가해 100㎖로 하고 공시험원액으로 한다. 여기에 이 액 5㎖를 정확히 취하여 물을 넣어 100㎖로 하고 공시험용액으로 한다. 별도로 철표준액 5, 10, 15 및 20㎖를 각각 정확히 칭량하여 각각에 공시험원액 5㎖를 정확하게 가한후 물을 넣어  100㎖로 하고 표준용액 1, 2, 3 및 4로 한다. 시료용액, 표준용액 1, 2, 3, 4 및 공시험용액에 대해 다음 조건으로 원자흡광분광도법에 의해 측정한다. 표준용액 1, 2, 3 및 4의 흡광도에서 검량선을 작성하고 사료중의 철함량(ppm)을 구한다.

      사용가스 : 가연성가스  에세틸렌

                조연성가스  공기

      램프 : 철 속빈음극 램프

      파장 : 248.3㎚

  8) 보존방법의 기준 : 밀폐용기에 보존할 것.

 ? 푸말산제1철(Ferrous Fumarate, C4H2FeO4 분자량169.9)

  1) 함량 : 본 품은 정량할 때, 푸말산 제1철(C4H2FeO4) 96.5%이상을 함유한다.

  2) 성상

① 본 품은 적황색 또는 적갈색의 분말로서 냄새는 없다.

② 본 품은 물에 녹기 어려우며, 에탄올에는 거의 녹지 않는다.

③ 본 품은 염산에 의해 분해되어 푸말산을 석출한다.

  3) 확인시험

① 본 품 0.5g에 0.1N 염산시액 100㎖를 가하여 가온하여 녹이고 여과한다. 여과액은 제1철염의 정성반응 ①을 나타낸다.

② 본 품 2.0g에 묽은 염산 25㎖를 가하고, 수욕상에서 15분간 가열하고 냉각 후 여과한다. 잔류물은 묽은 염산(1→100)으로 수회 씻고, 100℃에서 30분간 건조하고, 그중 0.05g을 취하여 레죠루신 3㎎ 및 황산 1㎖를 가하여 흔들어 섞고 120～130℃에서 5분간 가열한다. 냉각 후 물을 넣어 5㎖로 하여 냉각하면서 수산화나트륨용액(2→5)을 서서히 적가하여 알카리성으로 하고, 물을 넣어 10㎖로 한다.  이 액에 자외선(365㎚)을 조사할 때, 녹색형광을 발한다.

  4) 순도시험

① 납 : 본 품 1.0g을 취하여 초산 3㎖ 및 과염소산 5㎖를 가하고 증발건고하여 냉각 후 묽은 염산 10㎖를 가하고 수욕상에서 가온하여 녹이고 이것을 검액으로서 납을 시험한다.

② 비소 : 본 품 0.40g을 취하여 묽은 황산 15㎖를 가하고 필요하다면 가온하여 녹여 이것을 검액으로서 비소시험법 제 2법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다.

  5) 건조감량 : 1.0%이하(1g, 105℃, 2시간)

  6) 정량법 : 본 품 0.5g을 정밀하게 칭량하여 300㎖ 공전플라스크에 넣어, 묽은염산(2→5) 25㎖를 가하여 끓인다. 이에 염화제1주석 5.6g을 희석한 염산(3→10) 50㎖에 녹인 용액을 황색이 없어질 때까지 적가하고, 여기에 2방울을 더 넣는다. 이 용액을 실온까지 급냉하고 염화제2수은용액(1→20) 10㎖를 가하여 5분간 방치한 후 물 200㎖, 묽은황산(1→2) 25㎖ 및 인산 4㎖를 가해 0.1N 황산제2세륨암모늄액으로 적정한다.(지시약 o-페난트로린시액 2방울)

     0.1N 황산제2세륨암모늄액 1㎖ = 16.990㎎ C4H2FeO4

  7) 보존방법의 기준 : 차광한 밀폐용기에 보존할 것.

 ? 호박산구연산소다 제1철(Iron and Sodium Succinate Citrate)

  1) 함량 : 본 품은 정량할 때, 철(Fe) 10.0～11.0%를 함유한다.

  2) 성상

① 본 품은 청백색～녹백색의 분말로서 냄새가 없다.

② 본 품은 물에 조금 녹기 쉬우며 에탄올에는 거의 녹지 않는다.

③ 본 품은 열에 안정하지만 빛에 의해 서서히 산화되어 갈색으로 된다.

  3) 확인시험

① 본 품의 수용액(1→100)은 제1철염의 정성반응을 나타낸다.

② 본 품의 수용액(1→100) 5㎖에 강암모니아수 2㎖를 넣을 때 액은 적갈색을 띠고 침전은 생기지 않는다.

③ 본 품 3.0g을 회화하여 얻은 잔류물은 나트륨염의 정성반응을 나타낸다.

④ 본 품 0.5g에 물 5㎖ 및 수산화칼륨시액 10㎖를 넣어 잘 휘저으면서 10분간 수욕상에서 가열한다. 냉각 후 여과하여 여과액 10㎖를 취하여, 초산으로 중화한 액은 구연산염의 정성반응 ③을 나타낸다.

⑤ ④의 초산으로 중화한 액 0.2㎖를 자제 도가니에 취하여 묽은 염산 1방울을 가하여 산성으로 한 후 증발 건고한다. 잔류물에 염화티오닐 5방울을 넣고 거의 건고할 때까지 가열한다. 이어서 염산하이드록시아민포화에탄올 용액 5방울을 가하고 여기에 묽은 수산화칼륨ㆍ에탄올시액을 넣어 알칼리성으로 한다. 이것을 약 30초간 끓인 후 묽은 염산 1방울을 넣어 산성으로 하여 염화제2철시액 한방울을 넣을 때 액은 암자색을 나타낸다.

  4) 순도시험

① 용액상 : 본 품 1.0g에 물 10㎖를 넣고, 가온하여 녹일 때 그 액은 짙은 녹갈색으로 투명하여야 한다.

② 납 : 본 품 2.0g을 취하여 초산 4㎖ 및 물 30㎖를 넣어 10분간 끓이고, 냉각 후 물을 넣어 정확히 50㎖로 한다. 이 액 25㎖를 정확히 칭량하여 이것을 검액으로서 납을 시험한다.

③ 비소 : 본 품 1.0g을 취하여 비소시험법 제 2법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다.

④ 제 2철염 : 본 품 2.0g을 공전플라스크에 취하여 염산 5㎖ 및 물 30㎖를 넣어 녹이고, 요오드화칼륨 4.0g을 넣고 뚜껑을 하여 어두운 곳에 15분간 방치한다. 이어서 전분시액 2㎖를 넣고 잘 흔들어 섞으면, 색이 나타나는데 여기에 0.1N 티오황산 나트륨액 1㎖를 넣으면 그 색이 사라져야 한다.

  5) 정량법 : 본 품 약 1.0g을 정밀하게 칭량하여 요오드병에 넣고, 묽은 황산 25㎖ 및 초산 2㎖를 가해 10분간 끓인다. 냉각 후 물 20㎖ 및 요오드화칼륨 4.0g을 넣고 뚜껑을 하여 어두운 곳에 15분간 방치한 후 물 100㎖를 넣고 0.1N 티오황산나트륨액으로 적정한다.(지시약 전분시액 3㎖) 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다.

     0.1N 티오황산나트륨액 1㎖ = 5.585㎎ Fe

  6) 보존방법의 기준 : 차광한 밀폐용기에 보존할 것.

 ? 황산제1철(건조)(Ferrous Sulfate, Exsiccated, FeSO4ㆍnH2O)

  1) 함량 : 본 품은 정량할 때 황산철(FeSO4) 80.0%이상을 함유한다.

  2) 성상

① 본 품은 회백색의 분말로서 냄새는 없다.

② 본 품은 새로 끓여 냉각한 물에 쉽게 녹으며 에탄올에는 거의 녹지 않는다.

③ 본 품은 흡습성이다.

  3) 확인시험 : 본 품의 수용액(1→50)은 제1철염 및 황산염의 정성반응을 나타낸다.

  4) 순도시험

① 중금속 : 본 품 1.0g을 자제접시에 취하여 왕수 5㎖를 가하여 녹이고 수욕상에서 증발건고한다. 잔류물에 6N 염산시액 5㎖를 가하여 녹이고 분액깔때기로 옮긴다. 자제접시를 6N염산시액 5㎖씩으로 2회 씻고 세척액을 분액깔때기에 합쳐 에터 40㎖씩으로 2회, 다음에 에터 20㎖로 흔들어 섞은 후 정치하여 분리한 에터층을 제거한다. 수층에 염산하이드록실아민 0.08g을 가하여 녹이고 수욕상에서 10분간 가열하고 냉각 후 강암모니아수를 적가하여 액의 pH를 3.4로 조정한 후 물을 가하여 50㎖로 한다. 이것을 검액으로서 중금속의 시험할 때 검액에 나타나는 색은 자제접시에 납표준액 4.0㎖를 넣고 왕수 5㎖를 가하여 이하시료의 경우와 같은 방법으로 조작했을 때 나타나는 색보다 짙어서는 안 된다. 단, 검액의 pH를 3～4로 했을 때 침전이 생기는 경우에는 pH를 1.8-2.0으로 조정하여 이하 같은 방법으로 시험한다.

② 비소 : 본 품 0.6g을 취하여 비소시험법 제 1법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다.

  5) 건조감량 : 2.0%이하(5g, 105℃, 2시간)

  6) 정량법 : 본 품 약 0.4g을 정밀하게 칭량하여 물 20㎖ 및 묽은 황산 20㎖를 가하여 녹이고 인산 2㎖를 가하여 즉시 0.1N 과망간산칼륨액으로 적정한다.

    0.1N 과망간산칼륨액 1㎖ = 15.190㎎ FeSO4

  7) 제조방법의 기준 : 본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

  8) 보존방법의 기준 : 차광한 밀폐용기에 보존할 것.

 ? 황산제1철(결정)(Ferrous Sulfate, Heptahydrate, FeSO4ㆍ7H2O, 분자량278.02)

  1) 함량 : 본 품의 결정물은 황산제1철(FeSO4ㆍ7H2O) 99.5～104.5%를 함유한다.

  2) 성상 : 본 품의 결정물은 흰색을 띤 연녹색의 결정 또는 결정성분말이다.

  3) 확인시험 : 본 품의 수용액(1→100)은 확인시험법 중 제1철염 및 황산염의 반응을 나타낸다.

  4) 순도시험

① 액성 : 결정물 1g에 물 10㎖를 가하여 녹일 때, 액의 pH는 3.7이상이어야 한다.

② 비소 : 본 품 0.25g을 물 5㎖에 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험을 할 때 이에 적합하여야 한다.

③ 중금속 : 결정물 0.5g을 취하여 자제도가니에 넣고 왕수 3㎖를 가하여 녹여 수욕중에서 증발건조한다. 잔류물에 희석한 염산(1→2) 5㎖를 가하여 녹여서 분액깔때기에 옮기고 자제도가니를 희석한 염산(1→2) 5㎖로 2회 씻어주어 세액을 분액깔때기에 합한 다음 에터 40㎖씩으로 2회 이어서 에터 20㎖로 흔들어 섞은 후 정치하고 분리된 에터층은 버린다. 물층에 염산하이드록실아민 0.05g을 가하여 녹이고 수욕상에서 10분간 가열시킨 후 페놀프탈레인시액 1방울을 가하여 홍색을 나타낼 때까지 암모니아시액을 가한다. 식힌 다음 거의 무색이 될 때까지 희석한 염산(1→2)을 가하고 희석한 초산(1→20) 2㎖ 및 물을 가하여 50㎖로 한 것을 시험용액으로 하여 중금속 시험을 할 때 그 양이 40ppm이하이어야 한다. 다만, 표준색은 납 표준용액 2㎖를 자제도가니에 취하여 왕수 3㎖를 가하여 이하 시험용액과 같은 방법으로 처리하여 만든다. 

  5) 정량법 : 본 품 0.5g을 정밀히 칭량하여 묽은 황산(1→25) 25㎖ 및 새로 끓여서 식힌 물 25㎖의 혼합액에 녹여 0.1N 과망간산칼륨용액으로 적정한다.

     결정물 0.1N 과망간산칼륨용액 1㎖ = 27.802㎎ FeSO4ㆍ7H2O

 ? 황산구리(건조)(Copper Sulfate, Exsiccated, CuSO4ㆍnH2O)

  1) 함량 : 본 품은 정량할 때 황산동(CuSO4) 85.0%이상을 함유한다.

  2) 성상

① 본 품은 청백색의 결정성의 분말로서 냄새는 없다.

② 본 품은 물에 녹기 쉽고 글리세린에 조금 녹기 어려우며, 에탄올에 거의 녹지 않는다.

③ 본 품의 수용액(1→20)의 pH는 3.0～4.5이다.

④ 본 품은 흡습성이 있다.

  3) 확인시험 : 본 품의 수용액(1→10)은 동염 및 황산염의 정성반응을 나타낸다.

  4) 순도시험

① 용액상 : 본 품 1.0g에 물 20㎖를 가하고 녹일 때 그 액은 청색으로서 투명하여야 한다.

② 납 : 본 품 0.50g을 취하여 물 50㎖를 가하여 녹이고 여기에 물을 가하여 정확하게 100㎖로 한다. 이 액 40㎖를 정확하게 칭량하여 이것을 검액으로서 납을 시험한다.

③ 비소 : 본 품 0.5g을 취하여 물 20㎖를 가하여 녹이고 빙초산 4㎖ 및 요오드화칼륨 3g을 가하고 여기에 물 20㎖를 가하여 흔들어 섞고 5분간 방치한다 이를 여과하여 물 5㎖로 씻고 여과액 및 세척액을 합쳐 약 10㎖가 될 때까지 가열하여 농축하고 냉각 후 아스코르빈산 0.4g을 가하여 녹인다. 이것을 검액으로서 비소시험할 때 나타나는 색은 물 30㎖에 빙초산 4㎖, 요오드화칼륨 3g 및 비소표준액 5.0㎖를 가하고 5분간 방치한 후 이하 검액과 같은 방법으로 조작했을 때 나타나는 색보다 짙어서는 안 된다.

  5) 정량법 : 본 품 약 0.4g을 정밀하게 측정하여 물 50㎖를 가하여 녹이고 초산 4㎖ 및 요오드화칼륨 3g을 가하여 유리한 요오드를 0.1N 티오황산나트륨액으로 적정한다.(지시약ㆍ전분시액 1㎖) 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다.

     0.1N 티오황산나트륨액 1㎖ = 15.960㎎ CuSO4

  6) 제조방법의 기준 : 본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

  7) 보존방법의 기준 : 밀폐용기에 보존할 것.

 ? 황산구리(결정)(Copper Sulfate, Pentahydrate, CuSO4ㆍ5H2O, 분자량249.68)

  1) 함량 : 본 품은 정량할 때, 황산동(CuSO4ㆍ5H2O) 98.5%이상을 함유한다.

  2) 성상

① 본 품은 청색의 결정, 덩어리 또는 분말로서 냄새는 없다.

② 본 품은 물 또는 글리세린에 녹기 쉬우며 에탄올에 녹기 어렵다.

③ 본 품의 수용액(1→20)의 pH는 2.5-4.0이다.

④ 본 품은 풍해성이다.

  3) 확인시험 : 본 품의 수용액(1→10)은 동염 및 황산염의 정성반응을 나타낸다.

  4) 순도시험

① 용액상 : 본 품 1.0g에 물 20㎖를 가하여 녹일 때 그 액은 청색으로 투명하여야 한다.

② 납 : 본 품 0.50g을 취하여 물 50㎖를 가하고 녹여 물을 가해 정확하게 100㎖로 한다. 이 액 50㎖를 정확하게 칭량하여 이것을 검액으로서 납을 시험한다.

③ 비소 : 본 품 1.0g을 취하여 물 25㎖를 가하여 녹이고 이하 「황산동(건조)」의 순도시험 ③을 준용한다.

  5) 정량법 : 본 품 약 0.5g을 정밀하게 칭량하여, 이하 「황산동(건조)」의 정량법을 준용한다.

    0.1N 티오황산나트륨액 1㎖ = 24.968㎎ CuSO4ㆍ5H2O

  6) 제조방법의 기준 : 본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

  7) 보존방법의 기준 : 밀폐용기에 보존할 것.

 ? 황산망간(Manganese Sulfate, MnSO4ㆍnH2O)

  1) 함량 : 본 품은 가열한 후 정량할 때, 황산망간(MnSO4) 95.0%이상을 함유한다.

  2) 성상

① 본 품은 담홍색의 결정 또는 홍백색의 분말로서 냄새는 없다.

② 본 품은 물에 녹기 쉽고 에탄올에 거의 녹지 않는다.

③ 본 품의 수용액(1→20)의 pH는 4.5-6.5이다.

  3) 확인시험 : 본 품의 수용액(1→20)은 망간염 및 황산염의 정성반응을 나타낸다.

  4) 순도시험

① 용액상 : 본 품 2.0g에 물 20㎖ 및 묽은 염산 0.5㎖를 가하여 녹였을 때  그 액은 투명하여야 한다.

② 납 : 본 품 2.0g을 취하여 물 50㎖ 및 묽은 염산 2㎖를 가하여 녹이고 물에 가하여 정확히 100㎖로 한다. 이 액 50㎖를 정확하게 칭량하여, 이것을 검액으로하여 납을 시험한다.

③ 비소 : 본 품 0.40g을 취하여 비소시험법 제 1법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다.

  5) 강열감량 : 42.0%이하(1g, 450℃, 2시간)

  6) 정량법 : 본 품을 450℃로 2시간 강열하고 그 중 약 0.1g을 정밀하게 칭량하여 물 20㎖를 가하여 녹이고 여기에 물에 가하여 정확히 100㎖로 한다. 이 액 30㎖를 정확하게 칭량하여 물 70㎖, 0.1M 마그네슘ㆍ에틸렌디아민4초산2나트륨액 5㎖ 및 염산히드록실아민 0.1g을 가하고 이하 탄산망간의 정량법을 준용한다.

 0.01M 에틸렌디아민4초산2나트륨액 1㎖ = 1.5100㎎ MnSO4

  7) 보존방법의 기준 : 밀폐용기에 보존할 것.

 ? 황산아연(건조)(Zinc Sulfate, Exsiccated, ZnSO4ㆍnH2O)

  1) 함량 : 본 품은 정량할 때, 황산아연(ZnSO4) 80.0%이상을 함유한다.

  2) 성상

① 본 품은 백색의 분말로서 냄새는 없다.

② 본 품은 물에 녹기 쉽고, 글리세린에 조금 녹기 쉬우며 에탄올에 거의 녹지 않는다.

③ 본 품의 수용액(1→20)의 pH는 4.5～6.5이다.

④ 본 품은 흡습성이다.

  3) 확인시험 : 본 품의 수용액(1→20)은 아연염 및 황산염의 정성반응을 나타낸다.

  4) 순도시험

① 용액상 : 본 품 0.25g에 물 5㎖ 및 묽은 황산(1→20) 1㎖를 가하여 녹일 때 그 액은 투명하여야 한다.

② 중금속 : 본 품 1.0g을 네슬러관에 취하여 물 10㎖를 가하여 녹이고 시안화칼륨시액 20㎖를 가하여 잘 흔들어 섞고 황화나트륨 시액 2방울을 가한 다음 5분 후 백지를 배경으로하여 윗쪽에서 관찰할 때 이 액에서 나타나는 색은, 납표준액 2.0㎖에 물 8.0㎖ 및 시안화칼륨 시액 20㎖를 가하여 잘 흔들어 섞고 이하 시료의 경우와 같은 방법으로 조작할 때 나타나는 색보다 짙어서는 안 된다.

③ 비소 : 본 품 0.20g을 취하여 비소시험법 제 1법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다.

  5) 정량법 : 본 품 약 0.2g을 정밀하게 칭량하여 물을 가하여 녹이고 정확히 100㎖로 한다. 이 액 25㎖를 정확하게 칭량하여 물 100㎖ 및 pH 10.7의 암모니아ㆍ염화암모늄액 1㎖를 가하고 0.01M 에틸렌디아민4초산2나트륨으로 적정한다.(지시약 에리오크로브랙 Tㆍ염화나트륨 지시약 0.04g)

    0.01M 에틸렌디아민4초산2나트륨액 1㎖ = 1.6144㎎ ZnSO4

  6) 보존방법의 기준 : 밀폐용기에 보존할 것.

 ? 황산아연(결정)(Zinc Sulfate, ZnSO4ㆍ7H2O, 분자량287.5)

  1) 함량 : 본 품은 정량할 때 황산아연(ZnSO4ㆍ7H2O) 99.0～102.0%를 함유한다.

  2) 성상

① 본 품은 무색의 결정 또는 백색의 결정성의 분말로서 냄새는 없다.

② 본 품은 물에 매우 녹기 쉽고, 글리세린에 녹기 쉬우며 에탄올에 거의 녹지 않는다.

③ 본 품의 수용액(1→20)의 pH는 3.5～6.0이다.

④ 본 품은 건조한 공기중에서 풍건한다.

  3) 확인시험 : 본 품의 수용액(1→20)은 아연염 및 황산염의 정성반응을 나타낸다.

  4) 순도시험

① 용액상 : 본 품 0.25g에 물 5㎖를 가하여 녹일 때 그 액은 투명하여야 한다.

②중금속 : 「황산아연(건조)」의 순도시험 ②를 준용한다. 이 경우에 「2.0㎖」로 된 것은 「1.0㎖」라고 「8.0㎖」로 되어있는 것은 「9.0㎖」로 한다.(10ppm이하)

③ 비소 : 본 품 0.40g을 취하여 비소시험법 제 1법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다.

  5) 정량법 : 본 품 약 0.4g을 정밀하게 칭량하여 물을 가하여 녹이고 정확히 100㎖로 한다. 이 액 25㎖를 정확하게 칭량하여 물 100㎖ 및 pH 10.7의 암모니아ㆍ염화암모늄완충액 2㎖를 가하고 0.01M 에틸렌디아민4초산2나트륨 액으로 적정한다.(지시약 에리오클롬부랙Tㆍ염화나트륨 지시약 0.04g)

     0.01M 에틸렌디아민4초산2나트륨액 1㎖ = 2.8754㎎ ZnSO4ㆍ7H2O

  6) 보존방법의 기준 : 밀폐용기에 보존할 것.

 ? 황산아연메치오닌(Zinc Methionine Sulfate)

  1) 함량 : 본 품은 건조 후 정량할 때 아연(Zn) 20.0～23.5% 및 메치오닌(C5H11NO2S) 38.0～44.0%를 함유한다.

  2) 성상

① 본 품은 담자색의 분말로서 특이한 냄새가 난다.

② 본 품은 물에 녹기 어렵고 에탄올 및 메탄올에 거의 녹지 않는다.

③ 본 품의 수용액(1→100)의 pH는 4.2～4.7이다.

  3) 확인시험

① 본 품의 묽은 염산용액(1→10) 10㎖에 황화암모늄 시액 또는 황화나트륨 시액을 몇 방울 넣을 때 회갈색의 침전이 생긴다. 침전을 분취하여 여기에 묽은 초산을 가하여도 녹지 않는데 묽은 염산을 추가하면 녹는다. 

② 본 품의 묽은 염산용액(1→10) 10㎖에 페로시안화칼륨시액을 몇방울 넣으면 청백색의 침전이 생기고 이 일부에 묽은 염산을 추가하여도 침전은 녹지 않는다. 또한 다른 일부에 수산화나트륨 시액을 추가하면 녹는다. 

③ 본 품의 수용액(1→100)은 황산염의 정성반응 ①을 나타낸다.

④ 본 품 0.5g 및 「DL-메치오닌」 0.1g을 취하여 각각에 물 10㎖를 가하여 녹이고, 시료용액 및 표준용액으로 한다. 각각 5㎕씩을 박층크로마토그라피용 실리카겔을 이용하여 조제한 박층판에 점적 한다. 다음에 에탄올ㆍ물 혼합액(63 : 37)을 전개용매로서 약 10-15cm 전개한 후 박층판을 105℃에서 30분간 건조한다. 여기에 닌하이드린의 에탄올용액(1→200)을 균등하게 분무한 후 105℃에서 약 5분간 가열할 때 시료용액 및 표준용액에서 얻은 점적은 자색을 나타내고 이들의 Rf치는 같다.

⑤ 본 품 1㎎을 취하여 적외흡수스펙트럼 측정법의 취화칼륨 정제법에 의해 적외흡수 스펙트럼을 측정할 때 1640cm-1, 1490cm-1, 1420cm-1, 1340cm-1, 1120cm-1, 1060cm-1, 980cm-1 및 610cm-1 부근의 흡수를 인정하고 2100cm-1 부근의 흡수는 인정하지 않는다.

  4) 순도시험

① 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 500-600℃에서 강열하여 회화한다. 냉각 후 묽은 염산(1→2) 5㎖를 가하고 수욕상에서 증발건고하고, 잔류물에 물 15㎖ 및 묽은 염산(1→2) 2방울을 가하여 수욕상에서 30분간 가열한다. 다음에 페놀프탈레인 시액 한 방울을 가하고 암모니아 시액을 액이 미적색이 될 때까지 적하하여 초산 2㎖를 가한다. 시안화칼륨 30㎖를 가하여 휘저어 섞어 여과한다. 여과액 및 세척액을 네슬러관에 넣고 물을 넣어 50㎖로 한다. 황화나트륨 시액 2방울을 가하여 5분간 방치할 때 이 액에서 나타나는 색은 납표준액 3.0㎖에 물 15㎖ 및 시안화칼륨시액 30㎖를 가하여 잘 흔들어 섞고 황화나트륨 시액 2방울을 가하여 5분간 방치할 때 나타나는 색보다 짙어서는 안 된다.

② 비소 : 본 품 0.67g을 취하여 비소시험법 제 1법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다.

  5) 건조감량 : 15.0%이하(1g, 110℃, 2시간)

  6) 정량법

① 아연 : 본 품을 건조 후 약 0.2g을 정밀하게 칭량하고 물을 가하여 녹여 정확하게 100㎖로 한다. 이 액 25㎖를 정확하게 칭량하여 물 100㎖ 및 pH 10.7의 암모니아ㆍ염화암모늄 완충액 2㎖를 가해 0.05M 에틸렌디아민4초산2나트륨액으로 적정한다.(지시약 에리오크롬브랙Tㆍ염화나트륨 지시약 0.04g) 

   0.05M 에틸렌디아민4초산2나트륨액 1㎖ = 3.2690㎎ Zn

② 메치오닌 : 본 품을 건조 후 약 0.6g을 정밀하게 칭량하여 이하「DL-메치오닌」의 정량법을 준용한다.

  7) 제조방법의 기준 : 본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

  8) 보존방법의 기준 : 밀폐용기에 보존할 것.

 ? 황산코발트(건조)(Cobaltous Sulfate, Exsiccated, CoSO4ㆍㆍH2O, 분자량173.0)

  1) 함량 : 본 품은 정량할 때 황산코발트(CoSO4) 87.0% 이상을 함유한다.

  2) 성상

① 본 품은 담도색의 분말로서 냄새는 없다.

② 본 품은 물에 서서히 녹고, 에탄올에는 조금 녹기 어렵다.

  3) 확인시험

① 본 품의 수용액(1→200) 5㎖에 수산화나트륨 시액 0.5㎖를 가할 때 청색침전이 생기고 가열할 때 갈색으로 변한다.

② 본 품의 수용액(1→20)은 황산염의 정성반응을 나타낸다.

  4) 순도시험

① 용액상 : 본 품 1.0g에 묽은염산 20㎖를 가하여 녹일 때 그 액은 적색으로서 투명하여야 한다.

② 납 : 본 품 2.5g을 취하여 물 50㎖ 및 묽은 염산 5㎖를 가하여 녹이고 물을 가해 정확히 100㎖로 한다. 이 액 20㎖를 정확하게 칭량하여 이것을 검액으로서 납을 시험한다.

③ 비소 : 본 품 2.0g을 취하여 물 50㎖ 및 묽은 염산 5㎖를 가하여 녹이고 물을 가하여 정확하게 이것을 검액으로 비소시험법 제 1법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다.

  5) 정량법 : 본 품 약 0.4g을 정밀하게 칭량하여 묽은 염산 5㎖ 및 물 20㎖를 가하여 녹이고 여기에 물을 가하여 정확하게 100㎖로 한다. 이 액 10㎖를 정확하게 칭량하여 물 100㎖를 가하고 암모니아 시액으로 pH를 8에 맞추면서 0.01M 에틸렌디아민4초산2나트륨액으로 적정한다.(지시액 뮤렉사이드 지시약 0.2g)

     0.01M 에틸렌디아민4초산2나트륨액 1㎖ = 1.5499㎎ CoSO4ㆍ

  6) 보존방법의 기준 : 밀폐용기에 보존할 것.

 ? 황산코발트(결정)(Cobaltous Sulfate, Heptahydrate, CoSO4ㆍ7H2O, 분자량281.1)

  1) 함량 : 본 품은 정량할 때 황산코발트(CoSO4ㆍ7H2O) 98.0-103.0%를 함유한다.

  2) 성상

①본 품은 광택이 있는 암적색 투명의 결정 또는 도백색의 모래형태의 결정으로서 냄새는 없다. 

② 본 품은 물에 녹기 쉽고 에탄올에 거의 녹지 않는다.

  3) 확인시험

① 본 품의 수용액(1→100) 5㎖에 수산화나트륨시액 0.5㎖를 가할 때 청색침전이 생기고 가열하면 갈색으로 변한다.

② 본 품의 수용액(1→10)은 황산염의 정성반응을 나타낸다.

  4) 순도시험

① 용액상 : 본 품 1.0g에 물 20㎖를 가하고 녹일 때 그 액은 적색으로 투명하여야 한다.

② 납 : 본 품 2.0g을 취하여 물 50㎖ 및 묽은 염산 5㎖를 가하여 녹이고 물을 가해 정확하게 100㎖로 한다. 이 액 50㎖를 정확하게 칭량하여 이것을 검액으로서 납을 시험한다.

③ 비소 : 본 품 4.0g을 취하여 물 50㎖ 및 묽은 염산 5㎖를 가하여 녹이고 물을 가하여 정확하게 100㎖로 한다. 이 액 10㎖를 정확하게 칭량하고 이것을 검액으로서 비소시험법 제 1법에 의해 시험할 때 이것에 적합하여야 한다.

  5) 정량법 : 본 품 약 0.5g을 정밀하게 칭량하여 물 50㎖를 가하여 녹이고 물을 가하여 정확하게 100㎖로 한다. 이 액 10㎖를 정확하게 칭량하여 물 100㎖를 가하고 암모니아 시액으로 pH를 8에 맞추면서 0.01M 에틸렌디아민4초산2나트륨액으로 적정한다.(지시약 뮤렉사이드지시약 0.2g)

     0.01M 에틸렌디아민4초산2나트륨액 1㎖ = 2.8110㎎ CoSO4ㆍ7H2O

  6) 제조방법의 기준 : 본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

  7) 보존방법의 기준 : 밀폐용기에 보존할 것.

마. 혼합광물질류(mixed mineral products)

 ? 정의 : 다량광물질류에 미량광물질류를 혼합한 것을 말하며, 인산염류 및 칼슘염류, 다량광물질류, 미량광물질류, 혼합광물질류의 합제가 있다.

  2) 영양정보 : 합제의 종류에 따라 영양소 함량이 다르다.

 ? 고려사항 : 혼합광물질별 명칭, 분자식, 순도 및 혼합비율 확인하여야 한다. 

4. 기타

 가. 유지류(油脂類, fats and oils)

┌─────────────────────────────────────────────────┐

│유지류는 사료 성분등록 시 (최소량) 조지방, 열량(kcal/kg) (최대량) 수분을 등록하도록 되어 있으며 불│

│용성불순물 함량을 등록ㆍ표시하도록 되어 있다. 혼합성유지의 경우 산가(AV) 30 이하이어야 한다.      │

└─────────────────────────────────────────────────┘

 ? 글리세린(glycerin; 글리세롤)

  C3H8O3    분자량 92.09  

  1) 함량 : 이 품목을 무수물로 환산한 것은 글리세린(C3H8O3) 99.0% 이상을 함유한다.

  2) 성상 : 이 품목은 무색의 액체로서 냄새가 없고 단맛이 있다.

  3) 확인시험 : 이 품목 2～3방울에 황산수소칼륨 0.5g을 가하고 가열하면 아크롤레인의 자극적인 냄새를 발생한다.

  4) 순도시험

① 염화물 : 이 품목 3.5g을 취하여 염화물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.01N 염산 0.1mL에 대응하는 양 이하이어야 한다.

② 비  소 : 이 품목 0.25g을 물 5mL에 녹여 이를 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하).

③ 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험한다.

④ 카드뮴 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

⑤ 수은 : 이 품목을 수은시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  5) 수    분 : 이 품목의 수분은 수분정량법(칼-피셔법)에 따라 시험할 때, 그 양은 5.0% 이하이어야 한다.

  6) 강열잔류물 : 이 품목 10g에 황산 1～2방울을 가하고 조용히 가열하며 점화하여 태워서 그 잔류물에 대하여 강열잔류물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.01% 이하이어야 한다.

  7) 정 량 법 : 이 품목 약 0.5g을 신속히 정밀하게 달아 물을 가해 500mL로 한다. 이 액 50mL를 취하여 물 약 200mL를 가하고 황산(3→1,000) 또는 수산화나트륨용액(1→250)을 사용하여 pH 7.9±0.1로 조정한다. 이에 글리세린용 과요오드산나트륨시액 50mL를 가해 잘 혼합한 후 시계접시로 덮어 어두운 곳에 30분간 방치한 다음 에틸렌글리콜ㆍ물의 혼액(1 : 1) 10mL를 가해 흔들어 혼합한 후 다시 20분간 어두운 곳에 방치한다. 이에 개미산나트륨용액(1→15) 5mL를 가하고 pH 7.9±0.2가 될 때까지 0.1N 수산화나트륨용액으로 적정한다. 별도로 공시험을 한다. 물은 새로 끓여 식힌 것을 사용한다.

0.1N 수산화나트륨용액 1mL ＝ 9.209mg C3H8O3

 ? 분말유지(粉末油脂, fat powder)

  1) 정의 : 액상 또는 고체형태의 지방을 가루로 만든 유지를 말한다.

  2) 영양정보 : 일반적으로 순수 분말유지의 조지방 함량은 95～99%이며, 젖소나 모돈 사료에 열량보충 사료로 사용된다.

  3) 고려사항 : 분말유지에 강피류, 낙농가공부산물(유당, 유장), 박류, 유화제를 혼합물질로 사용 가능하도록 규정되어 있으며, 혼합물질이 있는 경우 원료명 및 혼합비율을 확인하여야 하며, 원료용 동물성유지의 불용성불순물함량을 표시(불용성불순물 함량이 0.15% 이상은 원료로 사용금지)하여야한다. 또한 융점(℃)은 확인하여야 한다.

 ? 불해성지방(不解性脂肪, protected fat, by-pass fat; 보호지방)

  1) 정의 : 야자유, 우지 등을 다양한 방법으로 가공 처리하여 반추위를 통과한 다음 소장에서 직접 소화, 흡수 되도록 만든 지방을 말한다. 팜유나 우지 등의 원료를 수소첨가(hydrogenation)하거나 포화지방산을 추출하여 경화시킨 분말제품, 칼슘이온과 결합시켜 칼슘염의 형태로 제조된 지방 등이 있다. 

  2) 영양정보 : 비유초기 착유우의 경우 사료로 섭취한 것보다 더 많은 양의 에너지가 필요하게 되고 부족한 부분을 충족시키기 위해 에너지가 높은 조지방을 공급하기 위해서 사용된다, 칼슘염 불해성지방은 칼슘함량이 12%, 조지방 함량은 85% 정도이며, 포화경화 불해성지방의 조지방 함량은 95～99% 이다. 

  3) 고려사항 : 불해성지방에 강피류, 낙농가공부산물(유당, 유장), 박류, 유화제를 혼합물질로 사용 가능하도록 규정되어 있으며, 혼합물질이 있는 경우 원료명 및 혼합비율을 확인하여야 하며, 원료용 동물성유지의 불용성불순물함량을 표시(불용성불순물 함량이 0.15% 이상은 원료로 사용금지)하여야한다. 또한 융점(℃)은 확인하여야 한다.

 ? 혼합성유지(混合性油脂, mixed fat and oil)

  1) 정의 : 식물성유지류와 동물성유지류를 혼합한 유지류를 말한다.

  2) 영양정보 : 혼합 대상 유지의 종류에 따라 혼합성유지의 지방산 조성이 달라지며 조지방 함량은 95～99%이다.

  3) 고려사항 : 혼합성유지는 사용된 동식물성유지류의 혼합 원료명을 표시하여야 하고 화학 분해하여 생산되는 다크유(Dark oil)는 혼합할 수 없으며, 불용성불순물함량이 0.15%이상은 원료로 사용을 금지하고 있다.  

 나. 단세포 단백질(單細胞 蛋白質, single cell protein)

┌───────────────────────────────────────────────────┐

│? 단세포단백질(single cell protein)은 하나의 세포를 가지고 있는 효모(yeast), 박테리아(bacteria), 해조│

│류(algae), 곰팡이(fungi 또는 molds) 등을 이용하여 값싼 탄소나 폐자원을 에너지원으로 활용하여 대       │

│량 증식 배양 후 건조하여 얻어지는 단백질을 말한다. 단세포단백질은 원유, 폐자원 등에서 짧은 시간       │

│에 소중한 단백질을 대량 생산할 수 있다는 이점이 있지만 생산효율성, 기호성, 안전성, 경제성 등에        │

│많은 과제들이 실용화에 제약요인으로 작용하고 있다.                                                    │

│? 단세포단백질은 사료 성분등록 시 (최소량) 조단백질, (최대량) 수분(13%이하), 조회분을 등록하도록     │

│되어 있고 추가적으로 펩신소화율(최소량), 발효균주를 등록하여야 한다.                                  │

└───────────────────────────────────────────────────┘

 ? 불활성박테리아(不活性細菌, inactivated bacteria)

  1) 정의 : 박테리아가 증식할 수 있는 기질을 이용하여 발효 배양시설에서 증식한 이후 박테리아를 분리, 정제, 건조하여 얻어지는 단세포단백질이다. 사용할 수 있는 균주는 보조사료-미생물제-유익균에 한 한다.

  2) 영양정보 : 박테리아단세포단백질의 영양조성은 조단백질 50～65%, 조지방 1～3%, 조회분 3～7%, 헥산(nucleic acid) 8～12% 이며, 아미노산 조성 또한 사료용으로 부적합하지는 않다. 세균 종별 사용되는 기질의 예는 다음과 같다.

────────────────────────────────────────────

  세균(Bacteria)                기질(Substrate)                                         

────────────────────────────────────────────

  Aeromonas hydrophylla         Lactose                                                 

  Acromobacter devacuate        n-Alkanes                                               

  Acromobacter calcoacenticus   Ethanol                                                 

  Bacillus megaterium           Cellulosa, Hemicellulose                                

  Lactobacillus sp.             Glucose Amylose, Maltose                                

  Pseudomonas fluorescens       Uric acid and other non-protein nitrogenous compounds   

────────────────────────────────────────────

  Rhodopseudomonas capsulata    Glucose                                                 

────────────────────────────────────────────

  3) 고려사항 : 단백질을 짧은 시간 안에 대량 생산할 수 있다는 이점이 있으며, 효모가 이용하지 못하는 기질을 이용하여 단백질을 생산할 수 있다. 불활성박테리아는 생산성, 기호성, 독성, 경제성 등이 아직 명확하게 밝혀지지 않았고, 기술적 측면에서의 어려움 등으로 인해 사료자원화에 한계가 있으며 지속적인 연구가 더 필요하다. 사료에서 사용 시 고려해야 될 필수사항은 기질에서 유래되는 독소나 발암성 물질의 함유여부에 대한 확인이다.  

 ? 불활성효모(不活性酵母, inactivated yeast)

  1) 정의 : 효모가 증식할 수 있는 기질을 이용하여 발효 배양시설에서 증식한 이후 효모를 분리, 정제, 건조하여 얻어지는 단세포단백질이다. 사용할 수 있는 효모는 보조사료-미생물제-유익효모에 한 한다.

  2) 영양정보 : 효모단세포단백질의 영양조성은 조단백질 45～55%, 조지방 2～6%, 조회분 5～10%, 헥산(nucleic acid) 6～12% 이다. 특히 아미노산 중 라이신의 함량이 높으며, 박테리아 단세포단백질에 비해서 단백질과 메치오닌 함량은 낮은 편이다. 콜린과 이노시톨 등의 비타민이 많이 함유되어 있으며 효모(yeast) 종별 사용되는 기질의 예는 다음과 같다.

────────────────────────────

  효모(Yeast)               기질(Substrate)             

────────────────────────────

  Amoco torula              Ethanol                     

  Candida tropicalis        Moltose, Glucose            

  Candida utilis            Glucose                     

  Candida novellas          n-alkanes                   

  Candida intermedia        Lactose                     

  Saccharomyces cereviciae  Lactose, Pentose, Maltose   

────────────────────────────

  3) 고려사항 : 제빵효모나 맥주효모가 단백질 효율에 있어서 토룰라효모에 비해 우수한 편이고 토룰라효모에 메티오닌이나 라이신을 첨가하게 되면 단백질 이용성이 향상되어 거의 대두박 수준의 생물학적 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 사료에서 사용 시 고려해야 될 필수사항은 기질에서 유래되는 독소나 발암성 물질의 함유여부에 대한 확인이다.  

 다. 남은음식물(edible food waste, restaurant food waste)

┌──────────────────────────────────────────────────┐

│남은음식물사료는 사료 성분등록 시 (최소량) 조단백질, 조지방, (최대량) 수분, 염분, 조섬유, 조회분을  │

│등록하여야 한다.                                                                                    │

└──────────────────────────────────────────────────┘

 ? 남은음식물사료(edible food waste, restaurant food waste)

  1) 정의 : 대형요식업소, 기업체 부설 식당 등에서 배출되는 남은 음식물(「폐기물관리법」에 따른 음식물류 폐기물) 중 사료화 가능부분을 분리수거하여 이물질제거시설을 갖춘 남은음식물사료 제조시설에서 살균 열처리 공정을 거쳐 위생적으로 처리된 사료를 말하며, 최종제품에서 살모넬라(D그룹)가 검출되면 안 된다. 식품가공부산물류와는 별도로 분류하여 규정되어 있다.

  2) 영양정보 : 남은 음식물 수거 지역, 수거 시기, 발생 형태 등에 따라 영양소 함량이 일정하지 않다. 원물상태의 대략적인 영양조성을 보면 수분 77%, 조단백질 5.0%, 조지방 1.9%, 조섬유 1.6%, 조회분 2.4% 이다.

  3) 고려사항 :

    ① 남은음식물사료는 누구든지 반추동물에 사용을 하면 안 된다.

    ② 반추동물 이외의 동물의 사료 또는 사료원료로 사용하는 경우에는 100℃에서 30분 이상 가열ㆍ처리하여야 하며, 가열ㆍ처리 후 즉시 냉각하여 공기가 잘 통하도록 처리ㆍ관리하여야 한다.

    ③ 사료의 원료 또는 가금의 사료로 사용할 경우에는 수분 14% 이하로 제조하여야 한다, 

    ④ 제2항에도 불구하고 돼지의 사료 또는 사료원료로 사용할 경우에는 80℃(심부온도기준)에서 30분 이상 가열ㆍ처리하여야 한다.

    ⑤ 남은음식물사료는 반드시 발효 등 가공 전에 가열ㆍ처리하여야 하며, 강피류, 박류, 보존제, 생균제, 식품가공부산물류 또는 향미제를 혼합물질로 사용할 수 있으며, 이 경우 혼합된 원료명을 표시하여야 한다.

    ⑥ 남은음식물사료는 구리 함량이 29ppm(건물기준) 이하, 아연함량이 87ppm(건물기준) 이하, 휘발성 염기태질소 0.5% 미만, 셀레늄 함량이 2ppm 이하이어야 한다.

 라. 반려동물음용수(companion animal water)

┌──────────────────────────────────────────────────┐

│반려동물음용수는 사료 성분등록 시 나트륨, 마그네슘, 불소, 칼륨, 칼슘을 등록하도록 되어 있고, 「먹는 │

│물관리법」 제43조에 따른 검사기관에서 분석한 검사성적서상의 성분함량을 기준으로 등록하여야 한다.    │

└──────────────────────────────────────────────────┘

 ? 반려동물음용수(companion animal water)

  1) 정의 : 반려동물용에 한하며, 동물이 통상 음용하는 자연 상태의 물, 자연 상태의 물을 먹기에 적합하도록 처리한 수돗물, 먹는샘물, 먹는염지하수(鹽地下水), 먹는해양심층수(海洋深層水) 등을 말한다.

  2) 영양정보 : 특별한 영양성분은 없으나 나트륨, 마그네슘, 불소, 칼륨, 칼슘을 등록하여 관리하도록 되어 있다.

  3) 고려사항 : 「먹는물관리법」의 수질기준을 충족하여야 한다.  

마. 밀리타리스 동충하초(Cordyceps Militaris)

 1) 정의 : 자낭균류 맥각균목 동충하초과의 소형 버섯류로, 나비목 곤충의 번데기에 기생하는 버섯을 말한다. 번데기버섯이라고도 한다.

 2) 영양정보 : 수분 10.8%, 조지방 8.4%, 조단백질 25.3%, 탄수화물 28.9%, 조회분 4.1% 정도이다.

 3) 고려사항 : 여름에서 가을에 걸쳐 잡목림의 땅속에 있는 곤충체에서 발생한다. 자실체는 번데기 시체의 머리부분에서 발생하고 곤봉 모양이다.

5. 혼합성(혼합제(混合製))

┌─────────────────────────────────────────────────┐

│? 혼합성 단미사료는 사료 성분등록 시 (최소량) 각 단미사료에서 규정한 성분, (최대량) 각 단미사료에│

│서 규정한 성분과 각 단미사료에서 규정한 기타성분을 등록하도록 되어 있다. 단, 애완용 동물의 간     │

│식용, 영양보충용은 주요 원료 2가지에 해당하는 단미사료에서 규정한 최소량 및 최대량을 등록하여     │

│야 하고, 비고란의 표시사항을 표시하여야 한다.                                                     │

│? 애완용 동물사료의 경우 원료를 균질하게 혼합할 수 없는 제품의 경우  등록성분 등록 및 표시 제외  │

│가능. 다만, 2가지 이상의 원재료명과 그 함량(백분율 또는 중량)을 표시하여야 함                     │

└─────────────────────────────────────────────────┘

 ? 혼합성 단미사료(混合性 單味飼料)

  1) 정의 : 혼합성 단미사료는 별표 1에서 정한 둘 이상의 단미사료를 혼합한 사료를 말한다. 단미사료가 아닌 사료(보조사료)를 혼합하면 안 되며, 각각의 단미사료는 혼합 전에 개별 단미사료의 기준 및 규격 등(열처리, 수분 등)을 충족하여야 한다.

  2) 영양정보 : 혼합한 원료에 따라 성분함량은 매우 다양해 질 수 있다. 

  3) 고려사항 : 혼합한 물질의 명칭ㆍ혼합비율 등을 확인하여야 하고 보관성이 약하거나 사용상 주의를 요하는 사료에 대하여는 이를 용기 및 포장에 표시하여야 한다. 다만, 애완용 동물의 간식용, 영양보충용은 단미사료이외에 소량의 보조사료(보존제와 향미제에 한함)를 첨가할 수 있다. 휘발성 염기태질소 함량이 0.5% 미만이어야 한다. 셀레늄 함량이 2ppm 이하이어야 한다.  

별표 0006: 보조사료의 품목별 기준 및 규격(제8조제1항 관련)

  [별표 6] <신설 2014.12.8., 개정 2015.8.21.. 개정 2016.7.1., 개정 2016.12.01., 개정 2017.4.1., 개정 2019.10.24.,   

  개정 2021. 5. 24., 개정 2021.12.29., 개정 2022.7.22., 개정 2023.10.04.>                                           

  보조사료의 품목별 기준 및 규격(제8조제1항 관련)                                                                   

1. 결착제(binders and coagulants)

┌─────────────────────────────────────────────────┐

│결착력(binding strength)이 약한 사료원료들의 결착력을 강화하기 위한 목적으로 사료에 첨가하는 물질 │

└─────────────────────────────────────────────────┘

 가. 천연결착제

■ 구아검(Guar Gum)

정    의

  이 품목은 콩과 구아(Cyamopsis tetragonolobus TAUB)의 종자 배유부분을 분쇄하여 얻어지는 것이나 또는 이를 온수나 열수 또는 이소프로필알콜로 추출하여 얻어지는 것으로서 주성분은 다당류이다.

성    상

  이 품목은 백～엷은 황갈색의 분말 또는 입자로서 거의 냄새가 없거나 약간 냄새가 있다.

확인시험

  ① 이 품목 2g을 400mL 비이커에 넣고 이소프로필알콜 4mL를 가하여 완전히 적신 다음 격렬하게 저으면서 물 200mL를 넣어 계속 저어서 용액을 균일하게 할 때, 유백색의 점조한 액이 된다.

  ② 확인시험 ①의 시험용액 100mL를 취하여 수욕상에서 10분간 끓인 후 냉각하여도 점도는 증가하지 않는다.

  ③ 확인시험 ①의 시험용액 100mL를 취하여 붕사 소량을 넣을 때 겔이 형성된다.

순도시험

  ① 비  소 : 이 품목 0.25g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에탄올용액(1→50) 10mL를 넣고 에탄올에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3mL를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하).

  ② 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.0ppm 이하이어야 한다.

  ③ 카드뮴 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  ④ 수  은 : 이 품목 0.1g을 취하여 수은시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  ⑤ 전  분 : 이 품목 0.1g을 물 10mL에 녹여 1분간 끓여 식힌 액에 요오드시액 2방울을 넣을 때, 청색을 나타내어서는 아니 된다.

  ⑥ 이소프로필알콜 : 이 품목 0.2g을 정밀히 달아 300mL 환저플라스크에 넣고, 물 200mL를 가해 주고, 비등석 및 실리콘수지 1mL를 넣고 잘 섞어준다. 이에 증류장치를 장착한 다음 100mL용량의 플라스크 수기에 내부표준용액 4mL를 정확히 취하여 가해 주고 기포가 넘치지 않도록 조정하면서 1분에 2～3mL의 증류속도로 유액이 약 90mL가 될 때까지 증류한 다음 물을 가하여 100mL로 한 액을 시험용액으로 한다. 다만, 내부표준용액은 tert-부틸알콜(1→1,000)을 사용한다. 따로, 이소프로필알콜 0.5g을 정밀히 달아 물을 가하여 500mL로 하고, 다시 이액 2mL 및 내부표준용액 4mL를 취한 다음 물을 가하여 100mL로 한 액을 표준용액으로 한다. 시험용액 및 표준용액을 각각 2μL씩 취하여 다음의 조작조건으로 가스크로마토그래피에 주입한다. 이어서 시험용액 및 표준용액 중의 tert-부틸알콜피크면적에 대한 이소프로필알콜의 피크면적비 QT 및 QS를 각각 구하여 다음 계산식에 따라 이소프로필알콜의 양을 구할 때, 그 양은 1.0% 이하이어야 한다.

   이소프로필알콜의 양(%) =   이소프로필알콜의 채취량(g)  ×  QT  ×  2 × 100    ×100   

                            ───────────────  ───  ───────        

                              검체의 채취량(g)                QS      500 × 100          

    QT : 시험용액의 tert-부틸알콜에 대한 이소프로필알콜의 피크면적비  

    QS : 표준용액의 tert-부틸알콜에 대한 이소프로필알콜의 피크면적비  

조작조건

칼      럼 : PLOT Q 또는 이와 동등한 것

검  출  기 : 수소염이온화검출기(FID)

주입구온도 : 200℃

칼럼온도 : 120℃

검출기온도 : 300℃

캐리어가스 : 질소 또는 헬륨

  ⑦ 붕산염 : 이 품목 1g을 정밀히 달아 물을 가하여 100mL로 한 다음(겔을 형성해서는 아니 된다), 묽은염산 10mL를 가하고 혼합한 액을 강황지(Advantec 07810074 또는 이와 동등한 것)에 한 방울 가할 때, 적갈색을 나타내어서는 아니 된다.

  ⑧ 세균수 : 이 품목은 「식품 등의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 세균수(일반세균수)에 따라 시험할 때, 1g당 5,000이하이어야 한다.

  ⑨ 대장균 : 이 품목은 「식품 등의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 대장균에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

  ⑩ 살모넬라 : 이 품목은 「식품 등의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 살모넬라에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

  ⑪ 진균수 : 이 품목은 「식품 등의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 진균수에 따라 시험할 때, 제품 1g 당 500 이하이어야 한다.

산불용물

  이 품목 1.5g을 정밀히 달아 물 150mL 및 황산 1.5mL를 함유하는 비이커에 넣어 녹인 다음 시계접시로 덮고 수욕상에서 6시간 가열한다. 이 때 유리봉으로 때때로 저어주며 손실된 물은 보충해 준다. 가열을 끝낸 다음 정밀히 평량한 적당한 여과보조제 500mg을 넣고 미리 항량시킨 유리여과기로 여과한다. 잔류물을 뜨거운 물로 충분히 씻어준 다음 105℃에서 3시간 건조하고 잔류물 중량에서 여과보조제의 양을 빼줄 때, 그 양은 7.0% 이하이어야 한다.

총 회 분

  이 품목 3g을 정밀히 달아 600℃에서 회화시킬 때, 그 양은 1.5% 이하이어야 한다.

건조감량

  이 품목 3g을 105℃에서 5시간 건조할 때, 그 감량은 15% 이하이어야 한다.

단 백 질

  질소정량법 중 킬달법에 따라 시험할 때, 그 양은 10% 이하이어야 한다

          (단백질 계수 : 6.25).

■ 리그닌술폰산염(리그닌설폰산염, Lignin sulfonate)

정    의 

목재, 아바카(Musa textilis) 또는 용설란 사이잘삼(Agave sisalana)의 아황산염 분해(sulfite digestion)로부터 유래하는 리그닌술폰산의 칼슘염, 마그네슘염, 암모늄염 또는 나트륨염을 말한다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 리그닌술폰산염(리그닌설폰산염)

기    타

대표적으로 리그닌술폰산칼슘(calcium lignosulfonate)이 있다. 펠릿 보조제(pelleting aid) 등으로 사용될 수 있다.

■ 결정셀룰로오스(Cellulose, Microcrystalline, Cellulose Gel)

정    의

  이 품목은 펄프로부터 얻어진 것으로서 주성분은 결정셀룰로오스이다.

함    량

  이 품목을 건조물로 환산한 것은 셀룰로오스로 계산하여 탄수화물 97.0～102.0%를 함유한다.

성    상

  이 품목은 백～회백색의 유동성이 있는 결정성분말로서 냄새가 없다.

확인시험

  ① 이 품목 30g을 취하여 물 270mL를 가하여 약 3,000rpm에서 5분간 혼합하여 이 액을 100mL 메스실린더에 넣고 3시간 방치할 때, 백색의 불투명한 기포가 없는 분산상을 나타내고 액의 분리가 확인되지 않는다.

  ② 이 품목 1mg에 인산 1mL를 가하고 수욕에서 30분간 가열한다. 여기에 카테콜인산용액(1→500) 4mL를 가하여 30분간 가열할 때, 액은 적색을 나타낸다.

순도시험

  ① 비  소 : 이 품목 0.25g을 취하여 「구아검」의 순도시험 ①에 따라 시험한다(4ppm 이하).

  ② 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.0ppm 이하이어야 한다.

  ③ 카드뮴 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  ④ 수  은 : 이 품목 0.1g을 취하여 수은시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  ⑤ 전  분 : 확인시험①의 시험용액 30mL에 요오드시액 2방울을 가할 때, 청자～청색을 나타내어서는 아니 된다.

  ⑥ 액  성 : 이 품목 5g을 취하여 새로 끓여서 식힌 물 40mL를 가하여 20분간 잘 혼합한 후 원심분리하여 얻은 상징액을 측정할 때, pH는 5.5～7.0이어야 한다.

  ⑦ 수용성물질 : 이 품목 5g에 물 80mL를 가하고 10분간 진탕한다. 이를 왓트만여지 No. 42 또는 이와 동등한 것을 사용하여 항량시킨 비이커에 여과한 후 여액을 증발시켜 105℃에서 1시간 건조할 때, 그 양은 0.16% 이하이어야 한다.

건조감량

  이 품목 1g을 취하여 105℃에서 3시간 건조할 때, 그 감량은 5% 이하이어야 한다.

강열잔류물

  이 품목 2g을 취하여 강열잔류물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.05% 이하이어야 한다.

정 량 법

  이 품목 125mg을 정밀히 달아 물 25mL를 사용하여 300mL 삼각플라스크에 넣는다. 0.5N 중크롬산칼륨용액 50mL를 가하고 잘 혼합한 후 황산 100mL를 조심하여 가하고 가열하여 끓인다. 가열을 중지하고 상온에서 15분간 방치한 후 수욕에서 식힌 다음 250mL 메스플라스크에 옮기고 물로 채운다. 이 용액 50mL를 취하여 ο-페난트로린시액 2～3방울을 지시약으로 사용하여 0.1N 황산제일철암모늄용액으로 적정하여 이의 소비 mL를 S로 한다. 별도로 공시험을 하여 그 소비 mL를 B로 한다.

      다음 계산식에 따라 검체의 셀룰로오스 함량을 계산한다.

  셀룰로오스 함량(%) ＝   (B?S) × 338   

                        ─────────

                          W               

          W : 건조물로서의 검체 무게(mg)  

■ 분말셀룰로오스(Cellulose, Powdered, 분말섬유소)

정    의

  이 품목은 펄프를 분해하여 얻어지는 것으로서 주성분은 셀룰로오스이다.

함    량

  이 품목을 건조물로 환산한 것은 셀룰로오스로 계산하여 탄수화물 97.0～102.0%를 함유한다.

성    상

  이 품목은 백색의 분말로서 냄새가 없다. 

확인시험

  ① 이 품목 10g을 물 90mL에 넣고 5분간 끓이고 회분이 없는 여과지를 사용하여 뜨거울 때 여과한다. 여액에 요오드시액 2방울을 넣을 때, 요오드액은 변하지 않는다.

  ② 75% 황산의 안트론용액(0.1%) 20mL에 이 품목 2～5mg을 넣어 수욕 중에서 가열하면 용액은 5분내에 청록색으로 변한다.

  ③ 이 품목 30g을 물 270mL에 넣고 고속교반기로 8,000～8,500rpm에서 5분간 교반하면 혼합물은 유동성이 큰 현탁액 또는 걸죽한 덩어리상의 현탁액이 되는데 후자의 경우 침전은 조금 이루어지며 분산이 불량한 기포를 함유한다. 유동성의 현탁액이 얻어지지 않으면 이 액 100mL를 100mL 실린더에 옮겨 1시간 방치하면 고형분은 밑에 가라앉고 상등액은 셀룰로오스층위에 나타난다.

  ④ ③의 액 몇 방울을 100배 확대현미경검사를 할 때, 미세도에 상관없이 섬유편을 볼 수 있다.

순도시험

  ① 비  소 : 이 품목 0.5g을 취하여 「구아검」의 순도시험 ①에 따라 시험한다(2ppm 이하).

  ② 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.0ppm 이하이어야 한다.

  ③ 카드뮴 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  ④ 수  은 : 이 품목 0.1g을 취하여 수은시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  ⑤ 염화물 : 이 품목 약 5g을 정밀히 달아 500mL 삼각플라스크에 취하고 물 250mL를 넣어 1시간 역류시키고 여과한다. 여과물에 물 200mL를 넣은 다음 30분간 역류시키고 여과한다. 이 여액을 앞의 여액 및 잔류물을 더운 물로 씻어준 여액에 합해준다. 여기에 질산 1mL를 넣고 가열하여 끓이고 5% 질산은용액 5mL를 천천히 넣어서 침전이 응고된 후 유리여과기로 여과한다. 이를 질산은이 검출되지 않을 때까지 질산(1→100)으로 세척하고 물로 씻은 다음 130℃에서 건조하여 무게를 단다. 침전물의 정확한 값을 구하기 위하여 따로 공시험을 하여 보정한다. 침전물 1mg을 0.247mg Cl로 환산할 때, 그 양은 0.05% 이하이어야 한다.

  ⑥ 액  성 : 이 품목 10g을 물 90mL에 녹인 것을 때때로 저어주며 1시간 방치한 다음 상등액의 pH는 5.0～7.5이어야 한다.

  ⑦ 수용성물질 : 이 품목 6g을 끓여 식힌 물 90mL에 넣고 때때로 저어주며 10분간 방치한다. 여과하여 맨처음 여액 10mL는 버리고 필요하면 동일여지를 사용하여 다시 한번 더 여과한다. 이 여액 15mL를 취하여 증발건고시킨 다음 105℃에서 1시간 건조시킬 때, 잔류물의 양은 1.5% 이하이어야 한다.

회    분  이 품목 약 3g을 정밀히 달아 550±50℃에서 완전히 탄화시킨 후 800±25℃에서 회화시켜 회분의 양을 구할 때, 0.3% 이하이어야 한다.

건조감량

  이 품목 3g을 105℃에서 건조시킬 때, 그 감량은 7% 이하이어야 한다.

정 량 법

  이 품목 약 125mg을 정밀히 달아 300mL 삼각플라스크에 취한다. 검체채취 용기는 물 25mL로 씻어 넣고 여기에 0.5N 중크롬산칼륨용액 50mL를 넣어 혼합하고 황산 100mL를 조심하여 넣는다. 가열한 다음 15분간 상온에 방치하여 식힌 후 수욕상에서 냉각시키고 이 용액에 물을 넣어 250mL로 한다. 이 액 50mL를 취하여 0.1N 황산제일철암모늄용액으로 적정한다(지시약 : o-페난트로린시액 3방울). 따로 공시험을 하여 여기서 소비된 0.1N 황산제일철암모늄용액을 B(mL)로 하여 다음 계산식에 따라 0.1N 황산제일철암모늄용액의 규정도(N)를 구한다.

  규정도(N) ＝ 0.1 × 50/B  

      다음 계산식에 따라 검체중의 섬유소함량을 구한다.

  섬유소함량(%)＝   6.75(B-S)   ×  N   

                                  ───

                                    2W  

  S : 0.1N 황산제일철암모늄용액 소비량(mL)  

  W : 건조물로 환산한 검체의 양(g)          

■ 송진(Rosin)

정    의

  소나무ㆍ잣나무 등의 줄기에서 내솟는, 누른빛 또는 갈색을 띤 누른빛의 몹시 끈끈한 액체를 말한다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 송진

기    타-

■ 젤라틴(Gelatin)

정    의

  이 품목은 동물의 뼈, 피부 등으로부터 얻은 교원질을 일부 가수분해하여 만든 것이다. 교원질을 산으로 처리하여 얻은 것의 등전점은 pH 7.0～9.0이며, 알칼리로 처리하여 얻은 것의 등전점은 pH 4.6～5.2 범위이며, 산 및 알칼리처리된 것의 혼합물과 처리방법을 병행하여 얻어진 것의 등전점은 상기범위를 벗어날 수 있다.

성    상  이 품목은 엷은 황～갈색의 박판, 세편 또는 거칠거나 미세한 분말이다.

확인시험

  ① 이 품목의 수용액(1→100) 5mL는 삼산화크롬시액 또는 피크린산시액에 의하여 침전이 생긴다.

  ② 이 품목의 수용액(1→5,000) 5mL는 탄닌산시액에 의하여 흐려진다.

순도시험

  ① 다른 냄새 및 불용물 : 이 품목의 뜨거운 수용액(1→40)은 불쾌한 냄새가 있어서는 아니 된다. 또 이 액의 2cm액층은 무색투명하든가 흐리더라도 0.01N 염산 0.3mL와 질산 1mL에 0.1N 질산은용액 1mL 및 물을 넣어 50mL로 한 액이 5분 후에 나타내는 색보다 진하여서는 아니 된다.

  ② 아황산염 : 이 품목 20g을 환저플라스크에 넣고 끓는 물 150mL를 넣어 녹인 다음 인산 5mL 및 중탄산나트륨 1g을 넣고 곧 냉각기를 붙여서 받는 그릇에는 0.1N 요오드용액 50mL를 넣고 냉각기의 끝을 그 액면밑에 넣고 증류하여 유액 약 50mL를 받는다.

    유액에 염산 2～3방울을 넣어 산성으로 하고 염화바륨시액 2mL를 넣어 수욕상에서 가열하여 액이 거의 무색으로 되었을 때, 황산바륨의 침전을 여취하고 물로 씻어서 강열할 때, 그 잔류물은 3mg 이하이어야 한다. 따로 같은 방법으로 공시험을 한다.

  ③ 비  소 : 이 품목 10g을 플라스크에 넣고 염산(1→4) 60mL를 넣어 마개를 막아 가열하여 녹이고 브롬시액 약 15mL를 섞어 가열하여 과량의 브롬을 날려보낸 다음 암모니아시액으로 중화하고 인산나트륨 1.5g을 넣어 식히고 마그네시아시액 약 30mL를 가하여 약 1시간 방치한 다음 석출한 침전을 여취한다. 이를 암모니아시액 1용량 및 물 3용량의 혼액 각 10mL를 가지고 5회 씻고 침전을 염산(1→4)으로 녹여 정확하게 50mL로 한다. 이 액 5mL를 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(1ppm 이하).

  ④ 크  롬 : 이 품목 5g을 분해플라스크에 취해 물 50mL, 질산 10mL를 넣고 혼합하여 방치한 다음 조용히 가열하여 격렬한 반응이 그치면 식힌 다음 황산 5mL를 넣고 다시 조용히 가열한다. 내용물이 암색이 되기 시작하면 질산 2～3mL씩을 추가하면서 가열을 계속하여 내용물이 미황색～무색이 되었을 때 분해가 끝난 것으로 한다. 분해액을 식힌 후 물을 가하여 50mL로 한 액을 시험용액으로 한다. 따로 같은 조작을 반복하여 공시험용액을 조제한다. 따로 크롬표준원액 (1,000ppm) 20mL를 취하여 0.2% 질산으로 200mL로 한 후 다시 이 액 20mL를 취하여 200mL로 한 액(10μg/mL)과 각각 1, 5mL를 정확히 취하여 0.2% 질산용액을 가하여 10mL씩으로 한 액을 각각의 표준용액으로 한다(1, 5, 10ppm). 시험용액 및 각 표준용액을 원자흡광광도법의 무염방식에 따라 시험할 때, 그 양은 10ppm 이하이어야 한다.

  ⑤ 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.5ppm 이하이어야 한다.

  ⑥ 세균수 : 이 품목은 「식품 등의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 세균수(일반세균수)에 따라 시험할 때, 1g당 1,000 이하이어야 한다.

  ⑦ 살모넬라 : 이 품목은 「식품 등의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 살모넬라균 시험법에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

  ⑧ 대장균 : 이 품목은 「식품 등의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 대장균에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

강열잔류물

  이 품목 1g을 취하여 강열잔류물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 2% 이하이어야 한다.

■ 천연검(Masticatory Substances, Natural)

정    의  

  이 품목에는 소르바(Sorva : Couma macrocarpa BARB. RODR.), 소르빈하(Sorvinha : Couma utilis MUELL.), 젤루통(Jelutong : Dyera costulata Hook. F. and Dyera lowiil Hook. F.), 치클(Chicle : Manikara zapotilla Gilly 및 Manikara chicle Gilly) 및 천연고무(Natural rubber : Hevea brasiliensis)가 있다.

성    상

  이 품목은 백～회색, 엷은 갈～암갈색의 덩어리 또는 점탄성이 있는 고체로서 약간 특이한 냄새가 있다.

순도시험

  ① 비  소 : 이 품목 0.25g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에탄올용액(1→50) 10mL를 넣고 에탄올에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3mL를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 4ppm 이하이어야 한다.

  ② 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 3.0ppm 이하이어야 한다.

■ 카제인(Casein)

정    의

  이 품목에는 카제인, 렌넷카제인이 있다. 각각의 정의는 다음과 같다.

카제인 : 우유 또는 탈지유의 단백질을 산으로 처리하여 얻어진 것이다.

렌넷카제인 : 우유 또는 탈지유의 단백질을 렌넷으로 처리하여 얻어진 것이다.

▷ 카제인(Casein)

함    량

  이 품목은 건조한 다음 정량할 때, 질소(N ＝ 14.01) 13.8～16.0%를 함유한다.

성    상

  이 품목은 백～엷은 황백색의 분말, 알맹이 또는 조각으로서 냄새와 맛이 없거나 또는 약간 특이한 향기와 맛이 있다.

확인시험

  ① 이 품목 0.1g을 수산화나트륨시액 10mL에 녹이고 초산을 가하여 약산성으로 하면 백색의 솜모양의 침전이 생긴다.

  ② 이 품목 0.1g을 수산화나트륨시액 10mL에 녹이고 황산동시액 1방울을 가하여 흔들어 섞으면 청색의 침전이 생기고 액은 자색을 나타낸다.

  ③ 이 품목 0.1g을 강열할 때, 연기가 나고 특이한 냄새가 난다. 연기가 나지 않게 된 다음 가열을 그치고 방냉한 다음 흑색의 잔류물에 묽은질산 5mL를 가하고 가온하여 여과한 다음 여액에 몰리브덴산암모늄시액 1mL를 가하여 가온하면 황색의 침전이 생긴다.

순도시험

  ① 용  상 : 이 품목을 감압데시케이타(황산)에서 4시간 건조한 다음 미세한 분말로 하여 그 0.1g에 물 30mL를 가하여 흔들어 섞어 약 10분간 방치한 다음 0.1N 수산화나트륨용액 2mL를 가하여 60℃로 가온하여 흔들어 녹인다. 식힌 다음 물을 가하여 100mL로 할 때, 무색으로서 그 탁도는 미탁 이하이어야 한다.

  ② 액  성 : 이 품목 1g에 물 50mL를 가하여 10분간 흔들어 섞은 다음 여과하고 그 여액의 pH는 3.7～6.5이어야 한다.

  ③ 물가용물 : 이 품목 1.5g에 물 30mL를 가하여 10분간 흔들어 섞은 다음 여과하고 여액 20mL를 수욕상에서 증발건고하고 100℃에서 항량이 될 때까지 건조할 때, 그 양은 10mg 이하이어야 한다.

  ④ 지  방 : 이 품목 약 2.5g을 정밀히 달아 염산(27→40) 15mL를 가하고 직화에서 조용히 가열하여 녹인 다음 수욕 중에서 20분간 가열한다. 식힌 다음 에탄올 10mL를 가하고 레리히관에 옮기고 에테르 25mL를 가하여 1분간 세게 흔들어 섞고 이에 석유에테르 25mL를 가하여 30초간 세게 흔들어 섞은 다음 방치한다. 다음에 측지관 (A)에서 받은 상층액을 건조여과지로 여과하고 여액을 미리 무게를 달아 놓은 플라스크에 취한다. 다시 에테르 15mL 및 석유에테르 15mL를 써서 2회 같은 방법으로 추출한다. 상층액을 앞의 플라스크에 합쳐 수욕상에서 에테르 및 석유에테르를 유거하여 그 잔류물을 98～100℃에서 4시간 건조할 때, 그 양은 1.5% 이하이어야 한다.

  레리히관 (규격 : mm)  

  ⑤ 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 1ppm 이하이어야 한다.

건조감량

  이 품목을 100℃에서 3시간 건조할 때, 그 감량은 12% 이하이어야 한다.

강열잔류물

  이 품목을 건조한 다음 약 1g을 정밀히 달아 강열잔류물시험법에 따라 시험할 때, 그 잔류물은 2.5% 이하이어야 한다.

정 량 법

  이 품목을 건조한 다음 약 0.15g을 정밀히 달아 질소정량법 중 킬달법에 따라 정량한다.

0.1N 황산 1mL ＝ 1.401mg N

▷ 렌넷카제인(Rennet Casein)

함    량

  이 품목을 건조한 다음 정량할 때, 질소(N ＝ 14.01) 13.5% 이상을 함유한다.

성    상

  이 품목은 백～엷은 황색의 분말, 조각 또는 알맹이로서 냄새와 맛이 없거나 약간 특유의 냄새와 맛이 있다.

확인시험

  ① 이 품목 0.2g을 수산화나트륨용액(1→100) 10mL에 녹이고(필요하면 가온한다) 초산(1→11) 4mL를 가할 때, 백색 솜모양의 침전이 생긴다.

  ② 이 품목 0.2g을 수산화나트륨용액(1→100) 10mL에 녹이고(필요하면 가온한다) 황산동시액 1방울을 가하여 흔들어 섞을 때, 청색의 침전이 생기고 액은 자색을 나타낸다.

  ③ 이 품목 0.1g을 450～550℃에서 강열할 때 연기가 나고 특유의 냄새가 난다. 연기가 발생하지 않게 된 후 가열을 그치고 식힌 다음 흑색의 잔류물에 묽은질산 5mL를 가하여 가온하고 녹인 다음 여과하고 여액에 몰리브덴산암모늄시액 1mL를 가하여 가온할 때, 황색의 침전이 생긴다.

순도시험

  ① 액  성 : 이 품목 1g에 물 50mL를 가해주고 10분간 흔들어 섞은 다음 여과한 액의 pH는 6.0～7.8 이어야 한다.

  ② 물가용물 : 이 품목을 「가. 카제인」의 순도시험 ③에 따라 시험할 때, 그 양은 10mg 이하이어야 한다.

  ③ 지  방 : 이 품목을 미리 100℃에서 30분간 건고하고 식힌 다음 약 2.5g을 정밀히 달아 「가. 카제인」의 순도시험 ④에 따라 시험할 때, 그 양은 1.5% 이하이어야 한다.

  ④ 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 1ppm 이하이어야 한다.

건조감량

  이 품목을 105℃에서 5시간 건조할 때, 그 감량은 13.0% 이하이어야 한다.

정 량 법

  이 품목을 건조한 다음 약 0.15g을 정밀히 달아 질소정량법 중 킬달법에 따라 정량한다.

0.1N 황산 1mL ＝ 1.401mg N

■ 콜라겐(Collagen)

정    의

  동물의 결합조직, 뼈, 힘줄, 피부, 연골, 혈관 등을 구성하는 섬유상 구조단백질이다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 콜라겐, 조단백질

기    타

 나. 합성결착제

■ 알긴산 나트륨(Sodium Alginate)

성분규격

성상

본 품은 백～황백색의 분말로서, 거의 냄새가 없다. 규격품은 황산염 0.96%이하, 납 20ppm이하, 비소 4ppm이하로 규정되어 있다.

확인시험

① 본 품 0.5g을 물 50㎖에 넣어 휘저으면서 조금씩 넣은 후, 60-70℃에서 때때로 휘저으며 20분간 가온하여, 균등한 액을 만들어 냉각 후 이것을 시료용액으로 한다. 이 시료용액 5㎖에 염화칼슘 시액 1㎖를 넣으면 즉시 젤리 형태의 침전이 생성된다. 

② ①의 시료용액 10㎖에 묽은 황산 1㎖를 넣으면, 즉시 젤리형태의 침전이 생성된다.

③ ①의 시료용액 1㎖에 후로로글라이신 염산시액 2㎖를 넣고 30초간 끓이면, 액은 적자색을 띠게 된다. 

④ 본 품을 회화하여 얻은 잔류물은 나트륨염의 정성반응을 나타낸다.

순도시험

① pH : 본 품의 수용액 (1→100)의 pH는 6.0-8.0이어야 한다.

②황산염 : 본 품 0.1g에 물 20㎖을 넣어 풀 상태로 하여, 염산 1㎖를 넣어 잘 흔들어 혼합하여 수욕상에서 수분간 가열하여, 냉각 후 여과한다. 용기를 물 10㎖로 씻고, 이 세척액도 동일 여과지로 여과한다. 그리고 물 10㎖씩으로 2회 같은 방법으로 조작하여 이들 여과액을 합치고 여기에 물을 더 넣어 50㎖로 한다. 이 액 10㎖를 취하여 황산염의 시험할 때 그 양은 0.01N 황산 0.4㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(0.96% 이하)

③ 중금속 : 본 품 2.0g을 서서히 가열하여 회화시킨 후, 450-500℃의 온도에서 회화하고 염산 2㎖를 추가하여, 수욕상에서 증발건고한다. 잔류물을 묽은 초산 4㎖ 및 물 20㎖에 녹인 후 여과하여 여과지위의 잔류물을 물 5㎖씩으로 3회 씻고, 이들 여과액을 합쳐 물을 넣어 50㎖로 한다. 이 액 25㎖를 취하여 이것을 검액으로서 중금속의 시험할 때, 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(20ppm이하)

④비소 : 본 품 2.5g을 취하여 초산 20㎖를 넣고, 내용물이 유동형태가 될 때까지 약하게 가열한다. 냉각 후 황산 5㎖를 넣고, 흰 연기가 발생할 때까지 가열한다. 액이 갈색을 나타낼 때는 냉각 후, 초산 5㎖를 추가하여 가열한다. 이 조작을 무색-담황색이 될 때까지 되풀이한다. 냉각 후 물 10㎖ 및 수산암모늄 0.5g을 넣고, 다시 흰 연기가 발행할 때까지 가열한다. 냉각 후 물을 넣어 25㎖로 한다. 이 액 5㎖를 검액으로하여 비소의 시험할 때, 여기에 적합하여야 한다. 단 표준색은 비소표준액 10㎖를 취하여, 초산 20㎖를 넣고 이하 검액의 경우와 같은 방법으로 조작하여 만든다.(4ppm이하)

⑤전분 : 본 품의 수용액(1→100) 5㎖에 요오드시액 2방울을 넣고 휘저을 때 청～적자색을 나타내서는 안 된다.

⑥제라틴 : 본 품의 수용액 (1→100) 5㎖에 몰리브덴산 암모늄용액(1→20) 1㎖ 넣고 휘저을 때 5분이내에 침전이 생겨서는 안 된다.

건조감량

15%이하 (1g, 105℃, 4시간)

강열잔류물

33-37% (1g)

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

밀폐용기에 보존할 것.

■ 알긴산 암모늄(Ammonium Alginate)

(C6H7O6NH4)n

성분규격

함량  

이 품목을 건조물로 환산한 것은 이산화탄소(CO2) 18～21%를 함유한다. 이것은 알긴산암모늄으로서 88.7～103.6%에 상당한다.

성상 

이 품목은 백～엷은 황색의 입자 또는 섬유상의 분말로서 거의 냄새가 없고 맛이 없다.

확인시험  

① 이 품목의 수용액(1→100) 5㎖에 염화칼슘시액 1㎖를 가할 때, 용적있는 젤리상의 침전이 생긴다.

② ①의 시험용액 10㎖에 묽은황산 1㎖를 가할 때, 무거운 젤리상의 침전이 생긴다.

③이 품목 5㎎을 시험관에 넣고 5㎖의 물을 가한 것에 알콜 100㎖에나프토레소르신 1g을 새로 녹여 만든액 1㎖와 염산 5㎖를 가한다. 이것을 3분간 끓이고 15℃로 식힌다. 내용물을 30㎖의 분액여두에 옮기고 물 5㎖로 씻어 옮긴 후 이소푸로필에터 15㎖로 추출한다. 별도로 공시험을 한다. 검체에서 추출한 이소프로필에터추출용액은 공시험의 것보다 짙은 자색을 나타낸다.

④이 품목 약 1g을 시험관에 넣고 수산화나트륨시액 5㎖를 가하여 흔들어 섞을 대, 암모니아 냄새가 난다.

순도시험 

① 비  소 : 이 품목 0.25g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에틸알코올(1→50) 10㎖를 넣고 에틸알콜에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신다음  다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌다음 잔류물에 염산 3㎖를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험을 할 때, 이에 적하여야 한다.(4ppm 이하)

②중금속 : 이 품목 1g을 취하여 석영제 또는 자제도가니에 넣고 조용히 약하게 가열하여 탄화시킨다. 식힌다음 질산 2㎖ 및 황산 5방울을 가하여 흰연기가 발생하지 않을 때까지 가열한 후 450～550℃에서 회화가 될 때까지 강열한다. 식힌 다음 염산 2㎖를 가하여 수욕상에서 증발건고하고 잔류물에 염산 3방울을 가하여 주고 열탕 10㎖를 가하여 2분간 가온하고 식힌 후 페놀프탈레인시액 1방울을 가하고 암모니아시액을 액이 엷은 홍색이 될 때까지 가해주고 나서 물을 사용하여 네슬러관에 옮겨주고 다시 희석한 초산(1→20) 2㎖l 및 물을 가하여 50㎖로 한 것을 시험용액으로 하여 중금속시험을 할 때, 그 양은 40ppm 이하이어야 한다. 다만, 표준색은 시료와 재질이 같은 도가니에 질산 2㎖, 황산 5방울 및 염산 2㎖를 넣고 가열하여 증발건고하고 잔류물에 염산3방울을 가하여 이하 시험용액의 경우와 같이 조작하여 정략적으로 다른 네슬러관을 옮겨주고 이에 납표준용액 2㎖, 희석한 초산(1→20) 2㎖ 및 물을 가하여 50㎖로 한 것을 사용한다.

③납 : 이 품목 0.8g을 취하여 조용히 가열하여 탄화시키고 500℃를 넘지 않는 온도에서 회화하고 묽은 질산 20㎖를 주의하여 가하고 5분간 조용히 끓인 다음 식히고 필요하면 여과한다. 잔류물은 물로 씻고 씻은 액은 여액과 합치고 물을 가하여 50㎖로 한 것을 시험용액으로 하여 납시험을 할 때, 그 양은 10ppm 이하이어야 한다.

회분

이 품목 3g을 미리 항량시켜 무게를 달은 자제도가니를 취하여 검은 탄소가 없어질때까지 650℃에서 회화시켜 데시케이타(실리카겔)에서 방냉하여 회분의 무게를 구할 때, 그 양은 4% 이하이어야 한다. 

건조감량  

이 품목 3g을 취하여 105℃에서 4시간 건조할 때, 그 감량은 15% 이하이어야 한다.

정량법  

이 품목 약 0.25g을 정밀히 달아 식품첨가물공전「산탄검」의 함량시험에 따라 시험한다.

0.25N 수산화나트륨 1㎖ = 27.12㎎ 알긴산암모늄(당량치 : 217.00)

제조방법의 기준

본 품은 원제자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다. 

■ 알긴산 칼륨(Potassium Alginate)

(C6H7O6K)n

성분규격

함량

이 품목을 건조물로 환산한 것은 이산화탄소(CO2) 16.5～19.5%를 함유한다.  이것은 알긴산 칼륨으로서 89.2～105.5%에 상당한다. 

성상

이 품목은 백～엷은 황색의 입자 또는 섬유상의 분말로서 거의 냄새가 없고  맛이 없다. 

확인시험

① 「알긴산 암모늄」의 확인시험 ①에 따라 시험한다.

② 「알긴산 암모늄」의 확인시험 ②에 따라 시험한다.

③ 이 품목 5㎎을 시험관에 넣고 5㎖의 물을 가한 것에 알콜 100㎖에나프토레소르신 1g을 새로 녹여 만든액 1㎖와 염산 5㎖를 가한다. 이것을 3분간 끓이고 15°로 식힌다. 내용물을 30㎖의 분액여두에 옮기고 물 5㎖로 씻어 옮긴후 이소푸로필에터 15㎖로 추출한다. 별도로 공시험을 한다. 검체에서 추출한 이소프로필에터추출용액은 공시험의 것보다 짙은 자색을 나타낸다.

순도시험

① 비  소 : 이 품목 0.25g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에틸알코올(1→50) 10㎖를 넣고 에틸알콜에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신다음  다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌다음 잔류물에 염산 3㎖를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험을 할 때, 이에 적하여야 한다.(4ppm 이하)

② 중금속 : 이 품목 1g을 취하여 석영제 또는 자제도가니에 넣고 조용히 약하게 가열하여 탄화시킨다. 식힌다음 질산 2㎖ 및 황산 5방울을 가하여 흰연기가 발생하지 않을 때까지 가열한 후 450～550℃에서 회화가 될 때까지 강열한다. 식힌 다음 염산 2㎖를 가하여 수욕상에서 증발건고하고 잔류물에 염산 3방울을 가하여 주고 열탕 10㎖를 가하여 2분간 가온하고 식힌후 페놀프탈레인시액 1방울을 가하고 암모니아시액을 액이 엷은 홍색이 될 때까지 가해주고 나서 물을 사용하여 네슬러관에 옮겨주고 다시 희석한 초산(1→20) 2㎖l 및 물을 가하여 50㎖로 한 것을 시험용액으로 하여 중금속시험을 할 때, 그 양은 40ppm 이하이어야 한다. 다만, 표준색은 시료와 재질이 같은 도가니에 질산 2㎖, 황산 5방울 및 염산 2㎖를 넣고 가열하여 증발건고하고 잔류물에 염산3방울을 가하여 이하 시험용액의 경우와 같이 조작하여 정략적으로 다른 네슬러관을 옮겨주고 이에 납표준용액 2㎖, 희석한 초산(1→20) 2㎖ 및 물을 가하여 50㎖로 한 것을 사용한다.

③ 납 : 이 품목 0.8g을 취하여 조용히 가열하여 탄화시키고 500℃를 넘지 않는 온도에서 회화하고 묽은 질산 20㎖를 주의하여 가하고 5분간 조용히 끓인 다음 식히고 필요하면 여과한다. 잔류물은 물로 씻고 씻은 액은 여액과 합치고 물을 가하여 50㎖로 한 것을 시험용액으로 하여 납시험을 할 때, 그 양은 10ppm 이하이어야 한다.

건조감량

이 품목 3g을 취하여 105℃에서 4시간 건조할 때, 그 감량은 15.0% 이하이어야 한다. 

정량법

이 품목 약 0.25g을 정밀히 달아 「산탄검」의 함량시험에 따라 시험한다. 

제조방법의 기준

본 품은 원제자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부혈물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다. 

■ 카르복시메틸셀룰로오스나트륨(Sodium Carboxylmethyl Cellulose)

성분규격

성상 

본 품은 백색～유백색의 분말, 입자 또는 섬유모양으로서 냄새는 없다.

확인시험

① 본 품 0.5g을 물 50㎖에 휘저으면서 조금씩 넣은 후, 60-70℃에서 이따끔 휘저으면서 20분간 가열하고 냉각 후 이것을 시료용액으로 한다. 이 시료용액의 적당량을 취하여 물을 넣어 5배로 희석하고, 그 한방울에 크로모토로프산 시액 0.5㎖를 넣고, 수욕중에서 10분간 가열할 때 홍자색을 나타낸다.

② ①의 시료용액 5㎖에 아세톤 10㎖를 넣고 흔들어 섞을 때 백색의 면모양의 침전이 생긴다.

③ ①의 시료용액 5㎖에 황산동시액 1㎖를 넣고 흔들어 섞을 때 담청색의 면모양의 침전이 생긴다.

④ 본 품을 회화하여 얻은 잔류물은 나트륨염의 정성반응을 나타낸다.

순도시험

① pH : 본 품의 수용액(1→100)의 pH는 6.0-8.5가 되어야 한다.

② 염화물 : 본 품 0.1g에 물 20㎖ 및 과산화수수소 0.5㎖를 넣고, 수욕중에서 30분간 가열한다. 냉각 후 물을 넣어 10㎖로 하고, 여과지로 여과한다. 이 여과액 25㎖를 취하여 묽은 초산 6㎖를 넣고 이것을 검액으로서 염화물의 시험할 때, 그 양은 0.01N 염산 0.45㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다. (0.64%이하)

③황산염 : ②에서 얻은 여과액 20㎖를 취하여, 묽은 초산 1㎖를 넣고 이것을 검액으로서 황산염의 시험할 때, 그 양은 0.01N 황산 0.4㎖에 대응하는 양 이하가 되어야 한다. (0.96% 이하)

④중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속 시험법 제 2법에 의해 시험할 때, 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다. (20ppm 이하)

⑤비소 : 본 품 2.5g을 취하여 초산 20㎖를 넣고 내용물이 유동상이 될 때까지 약하게 가열한다. 냉각 후 황산 5㎖를 넣고, 흰연기가 발생할 때까지 가열한다. 액이 갈색을 나타낼 때는 냉각 후 초산 5㎖를 추가하여 가열한다. 이 조작을 액이 무색～담황색이 될 때까지 되풀이한다. 냉각 후 포화수산암모늄 용액 15㎖를 넣고, 다시 흰 연기가 발생할 때까지 가열한다. 냉각 후 물을 넣어 25㎖로 한다. 이 액 10㎖를 검액으로서 비소의 시험할 때 여기에 적합하여야 한다. 단, 표준색은 비소표준액 10㎖를 취하여 초산 20㎖를 넣고 이하 시료의 경우와 같은 방법으로 조작하여 만든다. (4ppm이하)

건조감량

12%이하(1g, 105℃, 4시간)

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

밀폐용기에 보존할 것.

■ 카제인나트륨(Sodium Caseinate)

성분규격

함량

본 품은 건조 후 정량할 때, 질소(N) 14.5 - 15.8%를 함유한다.

성상

본 품은 백색～담황색의 입자, 분말 또는 조각으로서 냄새는 없거나 또는 약간의 특이한 냄새가 난다.

확인시험

① 본 품 0.1g에 수산화나트륨 시액 10㎖를 넣고 녹이고, 여기에 초산을 넣어 약산성을 띌 때, 백색의 면모양의 침전이 생긴다.

② 본 품 0.1g에 수산화나트륨 시액 10㎖를 넣고 녹이고, 여기에 황산동 한방울을 넣어 휘저을 때, 청색의 침전이 생기고 색은 자색을 나타낸다.

③ 본 품 0.1g에 물 5㎖를 넣고 휘저은 후, 초산 제 2수은시액 10방울 및 아초산나트륨 시액 1방울을 넣어, 수욕상에서 3시간 가열할 때, 팽윤한 본 품의 표면은 적갈색-적자색을 나타낸다.

④ 본 품 0.1g을 강열할 때, 발연하고, 특이한 취기가 난다. 연기가 발생하지 않으면, 가열을 중지하고 방냉후 흑색의 잔류물에 약초산 5㎖를 넣고 가온하여 여과하고, 여과액에 몰리브덴산 암모늄 시액 1㎖를 넣어 가온할 때, 황색의 침전이 생긴다.

⑤ 본 품의 강열잔류물은, 나트륨염의 불꽃 반응을 나타낸다.

순도시험

① 용액상 : 본 품을 감압 데시케터(황산)로 4시간 건조 후, 미세분말로 한 다음 0.1g을 취하여 물 30㎖를 넣고 휘저은 후 약 10분간 방치하고, 0.1N 수산화나트륨 용액 2㎖를 넣은 후 이따끔 잘 흔들면서 60℃에서 1시간 가온하여 녹인다. 냉각 후 물을 넣어 100㎖로 하였을 때, 무색으로서 그 탁도는 미탁 이하이어야 한다.

② pH : 본 품 약 2.5g을 정밀히 칭량하여 묽은 염산(27→40) 15㎖를 넣고 직화로 조용히 가열하여 녹인 후, 수욕중에서 20분간 가열한다. 냉각 후 에탄올 10㎖를 넣고, 료릿히 관으로 옮겨, 에터 25㎖를 넣고 1분간 격렬하게 흔들어 섞는다. 다음으로 석유 에터 25㎖를 넣고 30초간 격렬하게 흔들어 섞은 후, 방치한다. 측지관 (A)에서 취한 상층액을 여과하고 여과액을 중량을 미리 알고 있는 플라스크에 취한다. 여기에 에터 15㎖ 및 석유에터 15㎖를 이용하여 2회 같은 방법으로 추출한다. 이 잔류물을 98-100℃에서 4시간 건조할 때, 그 양은 1.5%이하이어야 한다.

④중금속 : 본 품 2.0g을 조용히 가열하여 탄화한 후 500℃를 넘지 않는 온도에서 회화하고, 염산 2㎖를 넣어 수욕상에서 증발건고한다. 잔류물을 물 5㎖씩으로 3회 씻고 이들 여과액을 합쳐 물을 넣어 50㎖로 한다. 이 중 25㎖를 취하여, 이것을 검액으로서 중금속 시험할 때, 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양이하이어야 한다. (20ppm이하)

⑤ 비소 : 본 품 2.5g을 취하여 초산 10㎖를 넣고, 내용물이 유동상이 될 때 까지 약하게 가열한다. 냉각 후 황산 5㎖를 넣고 다시 가열하여 액이 갈색이 될 때 냉각 후, 과산화수소수 5㎖를 추가하여 가열한다. 이 조작을 액이 무색～담황색이 될 때까지 반복한 후, 흰 연기가 날 때까지 가열한다. 냉각 후 포화수산암모늄용액 15㎖를 넣고 다시 흰 연기가 날 때까지 가열한다. 냉각 후 물을 넣어 25㎖로 한다. 이 액 10㎖를 검액으로서 비소시험을 할 때, 여기에 적합하여야 한다. 단 표준색은 비소표준액 5㎖를 취하여 초산 10㎖를 넣어 이하 시료의 경우와 같은 방법으로 조작하여 만든다. (2ppm이하)

건조감량

15%이하 (1g, 100℃, 3시간)

강열잔류물

6%이하 (1g)

정량법

본 품을 100℃에서 3시간 건조 후, 이중 0.15g을 정밀히 칭량하여 질소정량법(켈달)에 의해 정량한다.

0.1N 황산 1㎖ = 1.401㎖ N

보존방법의 기준

밀폐용기에 보존할 것.

■ 폴리메틸로카바마이드(Polymethylolcarbamide, PMC)

정    의

  분무건조 요소-포름알데히드 수지(spray-dried urea-formaldehyde resin)로서 펠릿 가공에 사용되는 물질이다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 질소(25% 이상)

기    타

펠릿 가공 과정에서 다이(die) 내의 마찰을 감소시키고 사료의 굳기를 단단하게 해주며 사료 제조 공정상의 에너지를 절약할 수 있다. 또한 사료의 부스러기들이 먼지로 손실되는 것을 방지해준다.

■ 폴리아크릴산나트륨(Sodium Polyacrylate)

성분규격

성분

본 품은 백색의 분말로서 냄새는 없다.

확인시험

①본 품 0.2g에 물 100㎖를 넣어 휘저어 녹이고 이것을 시료용액으로 한다. 이 시료용액 10㎖에 염화칼슘 시액 1㎖를 넣어 흔들어 섞을 때 즉시 백색의 침전이 생긴다.

②본 품을 회화하여 얻은 잔류물은 나트륨염의 정성반응을 나타낸다.

순도시험

① 유리알카리 : 본 품 0.2g에 물 60㎖를 넣고  휘저어 섞어 녹인 후 여기에 염화칼슘 시액 3㎖를 넣고, 수욕상에서 약 20분간 가열하여, 냉각 후 여과한다. 여과지 위의 잔류물을 물로 씻고, 세척액을 여과액에 합쳐 물을 넣어 100㎖로 하고 이것을 시료용액으로 한다. 시료용액 50㎖를 취하여 페놀프타레인시액 2방울을 넣을 때 홍색이 나타나서는 안 된다.

②황산염 : ①의 시료용액 20㎖를 취하여 희석염산 1㎖를 넣고 황산염의 시험할 때, 그 양은 0.01N 황산 0.4㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다. (0.49% 이하)

③중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 2법에 의해 시험할 때 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다. (20ppm 이하)

④비소 : 본 품 0.5g을 취하여 비소시험법 제 3법에 의해 시험할 때 이것에 적합하여야 한다.(4ppm 이하)

⑤ 잔존 모노마 : 본 품 약 1g을 300㎖의 요오드병에 정밀히 칭량하여 물 100㎖를 넣고, 때때로 흔들어 섞어, 약 24시간 방치하여 녹인다. 취소산칼륨, 취화칼륨시액 10㎖를 정확히 넣어 잘 흔들어 섞고, 여기에 염소 약 10㎖를 재빨리 넣고, 즉시 밀봉을 하여 잘 흔들어 섞은 후, 요오드병의 상부에 요오드화칼륨 시약 약 20㎖를 넣어 어두운 곳에 20분간 방치한다. 다음에 뚜껑을 하여 잘 흔들어 섞은 후 0.1N 티오황산나트륨액으로 적정한다. (지시약 전분시액 2㎖) 별도로 같은 방법으로 공시험을 실시하여 다음 식에 의해 잔존 모노마의 양을 구할 때 그 양은 1% 이하이어야 한다.

단,  a : 공시험의 0.1N 티오황산나트륨액의 소비량(㎖)

    b : 본시험의 0.1N 티오황산나트륨액의 소비량(㎖)

⑥ 저 중합물 : 본 품 2g에 물 200㎖에 넣어, 때때로 흔들어 섞어 약 24시간 방치하여 녹인다. 이것을 휘저으면서 10N 염산 50㎖를 넣고, 약 40℃의 수욕상에서 휘저으면서 30분간 가온한 후, 24시간 방치한다. 생긴 침전을 여과하여 여과액에 페놀프탈레인 시액 1방울을 넣고 수산화나트륨 용액(2→5)을 여과액이 약간의 홍색이 나타날 때까지 가열한 후, 희석한 염산(1→30)을 홍색이 없어질 때까지 주입한다. 계속하여 물 200㎖를 넣고, 휘저으면서 염화칼슘시액 25㎖를 적가한 후, 약 40℃의 수욕중에서 휘저으면서 30분간 가온한다. 발생한 침전을 중량을 미리 알고 있는 유리 여과기(G4)로 흡인 여과하여, 잔류물을 물 약 10㎖씩으로 3회 씻고 105℃에서 4시간 건조하여 다음 식에 의해 저중합물의 함량을 구할 때 그 양은 5% 이하이어야 한다.

건조감량

10% 이하(1.5g, 105℃, 4시간)

강열잔류물

건조 후 76% 이하 (1g)

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

밀폐용기에 습기를 피해 보존할 것.

■ 히드록시프로필메틸 셀룰로오스(Hydroxypropylmethyl Cellulose)

정    의

  이 품목은 식품첨가물로 사용되고 있는 히드록시프로필메틸 셀룰로오스이다.

함    량

  이 품목은 건조한 다음 정량할 때, 메톡실기(-OCH3 : 31.04) 19.0∼30.0% 및 히드록시프로폭실기(-OCH2CHOHCH2 : 75.09) 3.0∼12.0%를 함유한다.

성    상

  이 품목은 백～황색을 띤 백색의 분말 또는 알갱이로서 냄새가 없거나 또는 약간 특이한 냄새가 있다.

검정성분(또는 물질명) : 메톡실기 및 히드록시프로폭실기의 함량

확인시험

  ① 이 품목의 수용액(0.1→100)을 심하게 흔들면 거품층이 생긴다. 

  ② 이 품목의 수용액(0.5→100) 5ml에 5% 황산동용액 또는 5% 황산알루미늄용액 5ml를 가하면, 침전이 생기지 않는다.

순도시험

  ① 액  성 : 이 품목 1g을 물 100ml에 녹인 액의 pH는 5.0∼8.0이어야 한다.

  ② 프로필렌클로로히드린 : 이 품목 1g을 정밀히 달아 디에틸에테르 5ml를 가해 주고 마개를 한 후 10분간 초음파 추출한다. 이 액을 원심분리하여 상등액을 시험용액으로 한다. 따로, 프로필렌클로로히드린[Aldrich 292087(1-Chloro-2- propanol 70%와 2-Chloro-1- propanol 25%의 혼합물) 또는 이와 동등한 것] 0.1g을 정밀히 달아 디에틸에테르를 가하여 100ml로 하고, 이 액 일정량을 취해 디에틸에테르로 희석하여 1ml당 6～25ng의 프로필렌클로로히드린을 함유하도록 조제한 액을 각 표준용액으로 한다. 시험용액 및 각 표준용액 1μl씩을 다음의 조작조건으로 가스크로마토그라프에 주입한다. 이어서 각 표준용액의 농도(ng/ml)에 대한 표준용액의 피크면적을 측정하여 검량선을 작성한다. 시험용액 중의 프로필렌클로로히드린의 피크면적을 측정하여 미리 작성한 검량선으로부터 시험용액 중의 프로필렌클로로히드린 함량을 구할 때, 그 양은 0.1ppm 이하이어야 한다. 

  조작조건 

    캐필러리칼럼 : DB-WAX(30m×0.53mm, 1μm) 또는 이와 동등한 것 

    검출기 : 전자포획검출기(ECD) 

    주입구온도 : 200° 

    칼럼온도 : 35°에서 7분간 머무른 후 8°/분의 비율로 온도를 상승시켜 200°에서 5분간 유지한다. 

    검출기온도 : 230° 

    캐리어가스 : 질소 또는 헬륨

    유량 : 1-클로로-2-프로판올의 유지시간은 약 11.7분, 2-클로로-1-프로판올의 유지시간은 약 12.5분이 되도록 조정한다. 

  ③ 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.0ppm 이하이어야 한다. 

  ④ 카드뮴 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다. 

  ⑤ 수  은 : 이 품목을 수은시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

건조감량

  이 품목을 105°, 3시간 건조할 때, 그 감량은 10.0% 이하이어야 한다.

강열잔류물

  이 품목의 강열잔류물은 점도가 50cps이상일 경우에는 1.5% 이하, 50cps미만일 경우에는 3.0% 이하이어야 한다. 점도는「메틸셀룰로오스」의 순도시험 (1)에 따라 시험한다.

정 량 법

  이 품목 약 65mg을 정밀히 달아 분해병(5ml 내압마개 유리병)에 넣고 아디핀산 65mg, 내부표준용액 2.0ml 및 요오드화수소산(취급시 주의할 것) 2.0ml를 넣고 마개를 하고 그 무게를 정밀히 단다. 분해병을 30초간 흔들어 섞고 가열기를 사용하여 150°, 20분간 가열한 다음 조심스럽게 흔들어 섞고 다시 40분간 가열한다. 45분간 식힌 다음 그 무게를 정밀히 달고 감량이 10mg 이하의 것의 상층을 시험용액으로 한다. 

따로 아디핀산 65mg, 내부표준용액 2.0ml, 요오드화수소산 2.0ml를 분해병에 취하여 마개를 하고 그 무게를 정밀히 달고 요오드화이소프로필 15μl를 넣고 무게를 정밀히 달아 같은 방법으로 요오드화메틸 45μl를 넣고 무게를 정밀히 단다. 분해병을 30초간 흔들어 섞은 다음 상층을 표준용액으로 한다. 시험용액과 표준용액 1μl를 각각 가스크로마토그라프에 주입하고 다음식에 따라 메톡실기와 히드록시프로폭실기의 함량(%)을 구한다. 

  메톡실기의 양(%) ＝   QTa   x     WSa       x   21.86   

                      ────  ───────            

                        QSa       검체의                  

                                  채취량(mg)              

  히드록시프로폭실기의 양(%) ＝   QTb   x      WSb      x   44.17   

                                ────  ───────            

                                  QSb       검체의                  

                                            채취량(mg)              

  WSa : 표준용액중의 요오드화메틸의 양(mg)                        

  WSb : 표준용액중의 요오드화이소프로필의 양(mg)                  

  QSa, QSb : 표준용액중 내부표준물질의 피크면적에 대한 요오드화   

  메틸 및 요오드화이소프로필의 피크면적비                         

  QTa, QTb : 시험용액중 내부표준물질의 피크면적에 대한 요오드화   

  메틸 및 요오드화이소프로필의 피크면적비                         

 조작조건 

  칼  럼 : 가스크로마토그라피용 규조토(Chromosorb WHP 또는 이와 

  동등한 것)에 10% 메틸실리콘오일를 입힌 것 또는 이와 동등한 것 

  검출기 : 열전도도검출기(TCD) 또는 수소염이온화검출기(FID) 

  주입구온도 : 200° 

  칼럼온도 : 50° 

  검출기온도 : 200° 

  캐리어가스 : 헬륨 또는 질소   

  유지시간 : 요오드화메틸, 요오드화이소프로필, 톨루엔 순이다. 

 내부표준용액 : 톨루엔 0.25g을 정밀히 취하여 ο-크실렌으로 50ml로 한다.

2. 유화제(Emulsifiers)

┌──────────────────────────────────────────────┐

│서로 섞이지 않는 두 개의 액체를 안정한 에멀션(emulsion)으로 만들기 위해 사료에 첨가하는 물질│

└──────────────────────────────────────────────┘

■ 글리세린 지방산 에스테르(Glycerin Fatty Acid Ester)

성분규격

본 품은 지방산과 글리세린 또는 폴리글리세린의 에스테르 및 그 유도체이다. 본 품에는 글리세린 지방산에스테르, 글리세린 황산 지방산에스테르, 글리세린 구연산지방산에스테르, 글리세린코하크지방산에스테르, 글리세린구연산디아세틸 주석산 지방산에스테르, 폴리글리세린 지방산에스테르 및 폴리글리세린 축합리시노레인산에스테르가 있다.

성상

본 품은 무색～갈색의 분말, 박편, 조말, 입상 또는 납 형태의 덩어리, 반유동체 또는 액체로서 냄새는 없거나 또는 특이한 냄새가 난다.

확인시험

① 본 품 약 5g에 희석수산칼륨ㆍ에탄올 시액 50㎖를 넣고 환류냉각기를 장치하여, 수욕상에서 1시간 가열한 후 건고상태가 될 때까지 에탄올을 유거(留去)한다.  다음에 희석염산(1→10) 50㎖를 넣고 잘 흔들어 섞은 후 생성된 지방산을 석유에터ㆍ메틸 에칠케톤 혼합액(7:1) 40㎖씩으로 3회 추출하여 분리한다. 이 수층을 잘 휘저은 후, 수산화나트륨용액(1→9)을 넣어 거의 중성을 만든 후 수욕상에서 감압 하에 농축한다. 여기에 약 40℃의 메탄올 20㎖를 넣고 잘 흔들어 섞은 후, 냉각하여 여과하고, 여과액의 메탄올을 수욕상에서 유거한다.  이 잔류물의 메탄올용액(1→10)을 시료용액으로 한다. 별도로 메탄올 9㎖에 글리세린 1㎖를 넣어 대조액으로 한다. 시료용액 및 대조액 5㎖씩을 박층크로마트그라피용 실리카겔을 사용하여 제조한 박층판에 점적한다.  다음으로 n-부탄올ㆍ메탄올ㆍ클로르포름 혼합액(5 : 3 : 2)을 전개용매로서 원선보다 약 15cm 전개한 후, 박층판을 풍건하여 110℃에서 10분간 가열하여 용매를 제거하고, 냉각 후 티몰ㆍ황산시액을 분무한 후, 110℃에서 20분간 가열하여 색깔을 띠게 했을 때, 글리세린에스테르의 경우는 대조액과 동위치의 백색의 반점을 인정하고, 또한 폴리글리세린에스테르의 경우는 대조액과 동위치 이하에 백색의 반점 또는 백색의 띠모양의 반점을 인정한다.

② ①으로 분리하여 얻은 석유 에스테르ㆍ메틸에칠케톤 층을 합쳐, 용매를 유거할 때, 유상물(油狀物) 또는 백색～황백색의 고체가 남는다. 이 잔류물 0.1g에 에터 5㎖를 넣어 흔들어 섞으면 녹는다.

③ 글리세린지방산에스테르 및 폴리글리세린에스테르의 경우를 제외하고, ①의시료용액 5㎖에 물 50㎖를 넣어 흔들어 섞은 액은, 글리세린황산지방산에스테르의 경우는 황산염의 반응, 글리세린 구연산 지방산 에스테르의 경우는 구연산염 ②의 반응, 글리세린 코하크산 지방산 에스테르의 경우는 코하크산염의 반응, 글리세린디 아세틸주석 지방산 에스테르의 경우는 초산염 및 주석산염의 반응을 나타낸다.

④ 폴리글리세린 축합 리시노레인산에스테르의 경우, ①에서 분리하여 얻은 석유에터ㆍ메틸에틸케톤층을 합쳐, 이 액을 물 50㎖씩으로 2회 세정하고, 무수황산나트륨으로 탈수하고 여과하여 감압하에서 가온하여 용매를 제거한다. 잔류물 약 1g을 그림의 둥근 바닥 플라스크에 정확히 취하여 무수초산ㆍ피리딘 시액 5㎖를 정확히 넣어 둥근바닥 플라스크의 입구에 작은 깔때기를 넣고, 95-100℃의 유욕안에 밑바닥을 약 1cm 넣어 1시간 가열한다. 냉각 후 물 1㎖을 넣고 잘 흔들어 섞고, 10분간 더 가열하여 냉각 후 깔때기 및 플라스크의 머리부분을 에탄올 5㎖로 씻어 넣고, 과량의 초산을 0.5N 수산화칼륨ㆍ에탄올액으로 적정한다.(지시약 : 페놀후탈인 시액 1㎖)  별도로 공시험을 실시하여, 다음식에 의해 수산기가를 구할 때 그 값은 150-170이다. 단 산가의 측정에는 잔류물 약 0.5g을 사용한다.

a : 공시험할 때 0.5N 수산화칼륨ㆍ에탄올액의 소비량(㎖)

b : 본시험할 때 0.5N 수산화칼륨ㆍ에탄올액의 소비량(㎖)

순도시험

①산가 : 시료의 산가에 따라 다음 표와 같이 시료의 채취량을 정밀하게 취하여, 에탄올ㆍ에터 혼합액(1:1) 50㎖를 넣고, 필요하다면 가온하여 녹여, 시료용액으로 한다. 냉각후 페놀프타레인 시액을 지시약으로서 30초간 지속되는 홍색을 나타낼 때까지 0.1N 수산화칼륨ㆍ에탄올액을 넣는다. 다음 식에 의해 산가를 구할 때, 그 값은 글리세린 황산 지방산 에스테르의 경우는 6.0이하, 폴리글리세린 지방산 에스테르 및 폴리글리세린 축합 리시노레인산 에스테르의 경우는 12 이하, 글리세린 구연산 지방산 에스테르의 경우는 100이하, 글리세린 코하크산 지방산 에스테르 및 글리세린 디아세틸 주석산 지방산 에스테르의 경우는 60-120 이어야 한다. 단, 사용하는 용매는 미리 사용전에 페놀후타레인 시액을 지시약으로 30초간 지속하는 홍색을 나타낼 때까지 0.1N수산화칼륨ㆍ에탄올액을 넣는다.

┌───────┬───────┐

│산가          │시료의 채취량 │

├───────┼───────┤

│5미만         │10g           │

├───────┼───────┤

│5이상 15미만  │5g            │

├───────┼───────┤

│15이상 50미만 │3g            │

├───────┼───────┤

│50이상 120미만│1g            │

├───────┼───────┤

│120이상       │0.5g          │

└───────┴───────┘

② 중금속 : 본 품 2.0g을 취하고, 중금속시험법 제 2법에 의해 시험할 때, 그양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(10ppm이하)

③ 비소 : 본 품 0.5g을 취하여, 비소시험법 제 3법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다.(4ppm이하)

④ 폴리옥시에틸렌 : 본 품 1.0g을 200㎖의 플라스크에 취하여, 묽은수산화칼륨ㆍ에탄올 시액 25㎖를 넣고, 미리 맞춰 놓은 환류 냉각기를 장치하고, 수욕중에서 이따끔씩 흔들어 섞으면서 1시간 끓인다. 이어서 수욕상 또는 감압하에서 거의 건고 상태가 될 때까지 에탄올을 유거하여, 묽은황산(3→100) 20㎖를 넣고 가온하면서 잘 흔들어 섞고 여기에 티오시안산 암모늄ㆍ초산코발트 시액 15㎖를 넣어 잘 흔들어 섞은 후 클로르포름 10㎖를 넣어 다시 흔들어 섞어 방치할 때, 클로르포름 층은 청색을 띠지 않는다.

강열잔류물

1.5%이하(1g)

보존방법의 기준

차광한 기밀용기에 보존할 것.

■ 레시틴(Lecithin)

성분규격

  성상

   이 품목은 유량종자 또는 동물원료에서 얻어진 것으로 주성분은 인지질로서 엷은 황～암갈색의 투명 또는 반투명의 점조한 액상의 물질, 분말 또는 입상으로 약간 특이한 냄새와 맛을 가지고 있다.

확인시험

   ①이 품목 1g을 석유에테르 5ml에 녹이고 아세톤 15ml를 가하면 백～엷은 황색의 불용물이 생긴다.

   ②이 품목 1g을 분해플라스크에 넣고 이에 분말로 한 황산칼륨 5g, 황산동 0.5g 및 황산 20ml를 가한 다음 플라스크를 약 45°도로 기울여서 거품이 거의 생기지 않을 때가지 조용히 가열하고 온도를 높여서 끓여 내용물이 청색의 투명한 액이 된 다음 다시 1～2시간 가열하고 식힌 다음 같은 양의 물을 가하고 그중 5ml에 몰리브덴산암모늄용액(1→5) 10ml를 가하여 가열하면 황색의 침전이 생긴다.

   ③이 품목 0.5g에 희석한 염산(1→2) 5ml를 가하여 수욕중에서 2시간 가열한 다음 여과하고 그 중 0.01ml를 시험용액으로 하여 n­부틸알콜, 초산 및 물의 혼액(4:1:2)을 전개용용매로 하여 여지크로마토그라피 제1법에 따라 시험할 때, 검체와 같은 방법으로 처리하여 대조액에서 얻은 반점에 대응하는 등적색의 반점을 볼 수 있다.  다만, 여지는 크로마토그라피용 2호를 사용하고 전개용용매가 약 25cm 올라갔을 때, 전개를 그치고 바람에 말린 다음 드라겐돌프시액을 분무하여 정색시키고 자연광선 아래서 관찰한다.  대조액은 염화콜린 0.1g을 물에 녹여 20ml로 한 것 0.01ml를 사용한다.

순도시험 

   ①산가 : 이 품목 약 2g을 정밀히 달아 석유에테르 50ml를 가하여 녹이고 알콜 50ml 및 페놀프탈레인시액 1ml를 가하여 0.1N 알콜성수산화칼륨용액으로 엷은 홍색이 30초간 지속될 때가지 적정하고 다음 식에 따라 산가를 구할 때, 그 값은 36 이하이어야 한다.  따로 같은 방법으로 공시험을 한다.

산가 = 

   ②벤젠불용물 : 이 품목 약 10g을 정밀히 달아 벤젠 100ml에 녹이고 불용물을 무게를 미리 단 도가니형 유리여과기(1G4)로 여과하여 벤젠 25ml로 여러번 씻고 유리여과기와 함께 105°에서 1시간 건조한 다음 데시케이타중에서 방냉하고 평량할 때, 그 양은 0.3% 이하이어야 한다.

   ③아세톤가용물 : 이 품목 약 2g을 50ml의 눈금이 있는 공전원심관에 정밀히 달아 석유에테르 3ml에 녹이고 아세톤 15ml를 가하여 잘 저어 섞은 다음 얼음물에 15분간 방치한다.

      이에 미리 0～5°로 식힌 아세톤을 가하여 50ml로 하고 잘 저어 섞어 얼음물에 15분간 방치한 다음 약 3,000rpm으로 10분간 원심분리하고 상층액을 미리 무게를 단 플라스크에 취한다.  또 공전원심관의 침전물에 0～5°의 아세톤을 가하여 50ml로 하고 얼음물에 식히면서 잘 저어 섞은 다음 같은 방법으로 원심분리한다.

      이 상층액을 먼저의 플라스크에 넣고 수욕상에서 증류하여 잔류물에 105°에서 1시간 건조할 때, 그 양은 40% 이하이어야 한다.

   ④과산화물가 : 이 품목 5g을 정밀히 달아 250ml 공전삼각플라스크에 넣고 초산ㆍ클로로포름혼액(3:2) 35ml를 가하고 조용히 흔들어 투명하게 용해시킨다.  이에 깨끗한 질소를 통과시켜 용기내의 공기를 충분히 치환시키고 질소를 통과시키면서 요오드칼륨시액 1ml를 정확히 취하여 넣고 질소를 그치고 즉시 마개를 하여 1분간 진탕혼입한 후 어두운 곳에 5분간 방치한다.  이 액에 물 75ml를 가하고 다시 마개를 한 후 격렬히 흔들어 혼합한 후 0.01N 치오황산나트륨용액으로 적정하고(지시약:전분시액) 다음 식에 따라 과산화물가를 구할 때, 그 값은 10 이하이어야 한다.  별도로 공시험을 하여 보장한다.

과산화물가 = ×10

  ⑤ 비소 : 이 품목 0.25g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에틸알코올(1→5) 10㎖를 넣고 에틸알콜에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550°로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신다음  다시 강열하고 450～550°로 회화한다. 식힌다음 잔류물에 염산 3㎖를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험을 할 때, 이에 적하여야 한다.(4ppm 이하)

  ⑥ 중금속 : 이 품목 1g을 취하여 석영제 또는 자제도가니에 넣고 조용히 약하게 가열하여 탄화시킨다. 식힌다음 질산 2㎖ 및 황산 5방울을 가하여 흰연기가 발생하지 않을 때까지 가열한 후 450～550°에서 회화가 될 때까지 강열한다. 식힌 다음 염산 2㎖를 가하여 수욕상에서 증발건고하고 잔류물에 염산 3방울을 가하여 주고 열탕 10㎖를 가하여 2분간 가온하고 식힌후 페놀프탈레인시액 1방울을 가하고 암모니아시액을 액이 엷은 홍색이 될 때까지 가해주고 나서 물을 사용하여 네슬러관에 옮겨주고 다시 희석한 초산(1→20) 2㎖l 및 물을 가하여 50㎖로 한 것을 시험용액으로 하여 중금속시험을 할 때, 그 양은 20ppm 이하이어야 한다. 다만, 표준색은 시료와 재질이 같은 도가니에 질산 2㎖, 황산 5방울 및 염산 2㎖를 넣고 가열하여 증발건고하고 잔류물에 염산3방울을 가하여 이하 시험용액의 경우와 같이 조작하여 정략적으로 다른 네슬러관을 옮겨주고 이에 납표준용액 2㎖, 희석한 초산(1→20) 2㎖ 및 물을 가하여 50㎖로 한 것을 사용한다. 

  ⑦ 수분 : 이 품목의 수분은 수분정량법(칼-피셔법)의 직접 적정법에 따라 시험할 때, 1.5% 이하이어야 한다.  다만, 칼-피셔용 메틸알콜 대신 클로로포롬 메틸알콜혼액(4:1)을 사용한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

   차광한 밀폐용기에 보관할 것.

■ 메타인산나트륨(Sodium Metaphosphate)

정    의  

   메타인산소다, 핵사메타인산나트륨. 품질개량제. 이온 붕쇄력, 분산력, 해교성, 완충성, 이온강도, 증대력, 세정작용 등 뛰어난 점을 많이 갖고 있기 때문에 식품 일반에 단독 또는 제제로서 널리 이용되고 있다. 무색∼백색의 초자상의 덩어리~조각 또는 백색의 섬유상의 결정 또는 분말. 시판되고 있는 것은 분쇄하여 분말화 한 것이 있고, 흡습성이 커서 습기찬 공기 중에서 습기를 빨아 서서히 점조한 액상으로 변화한다. 단백질을 응고시키는 성질이 있고 전분 등의 분산성도 강하다. 물에는 녹는다.

함    량  이 품목은 건조한 다음 정량할 때, 오산화인(P2O5 ＝ 141.95)으로서 60.0%∼83.0%를 함유한다.

성    상  이 품목은 무∼백색의 유리모양의 덩어리, 편 또는 백색의 섬유상의 결정 또는 분말이다.

확인시험  

  (1) 이 품목의 수용액(1→40)을 묽은초산 또는 수산화나트륨시액으로 약산성으로 하고 난백시액 5ml를 가하면 백색의 침전이 생긴다.

  (2) 이 품목의 수용액(1→20)은 확인시험법중 나트륨염의 반응을 나타낸다.

순도시험  

  (1) 비  소 : 이 품목 0.25g에 물 5mL를 가하여 이를 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하).

  (2) 납 : 이 품목 5.0g을 정밀히 달아 150mL 비이커에 넣고 물 30mL를 가하고 염산을 소량씩 검체가 충분히 녹을 때까지 가해 준 다음 다시 염산 1mL를 추가한다. 이를 약 5분 동안 끓이고 식힌 다음 물을 가하여 약 100mL가 되도록 하고 수산화나트륨용액(1→4) 또는 염산(1→4)을 사용하여 pH 2～4로 조정한다. 이 액을 250mL 분액깔대기에 옮긴 후 물을 가하여 약 200mL로 한 다음 2% 피롤리딘디티오카바민산암모늄(ammonium pyrolidine dithiocarbamate)용액(2→100) 2mL를 가하여 흔들어 섞어 준다. 이에 클로로포름 20mL씩으로 2회 추출하고 추출액을 수욕상에서 증발건고한 다음 잔류물에 질산 3mL를 가하고 거의 건고될 때까지 가열한다. 이에 질산 0.5mL 및 물 10mL를 가한 다음 최종액이 3～5mL가 될 때까지 농축한 후 물을 가하여 10mL로 한 액을 시험용액으로 하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 4.0ppm 이하이어야 한다.

      2% APDC용액 : 피롤리딘디티오카바민산암모늄(ammonium pyrolidine dithiocarbamate) 2.0g을 물에 녹여 100ml로 한다. 사용시 여과한다.

  (3) 카드뮴 : 순도시험 (2)의 시험용액을 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  (4) 수  은 : 이 품목을 수은시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  (5) 불소화물 : 이 품목 10.0g을 정밀히 달아「구연산칼슘」의 순도시험 (8)에 따라 시험한다(10ppm 이하).

건조감량

  이 품목을 110℃에서 4시간 건조할 때, 그 감량은 5% 이하이어야 한다.

정 량 법

  이 품목을 건조한 다음 약 0.2g을 정밀히 달아 질산 5mL 및 물 25mL를 가하고 증발하는 물을 보충하며 30분간 조용히 끓이고 식힌 다음 물을 가하여 500mL로 하여 필요하면 건조여과지로 여과하여 시험용액으로 한다. 시험용액 5mL를 취해 바나딘산ㆍ몰리브덴산시액 20mL 및 물을 가해 100mL로 하여 잘 흔들어 섞고 30분간 방치한 다음 액층 1cm에서 파장 400nm에 있어서의 흡광도를 측정한다. 대조액은 시험용액 대신 물 5mL로 같이 조작한 액을 쓴다. 따로 인산일칼륨표준용액 10mL를 취해 질산(1→25) 20mL를 가한 다음 다시 물을 가하여 250mL로 한다. 이 액은 10mL, 15mL 및 20mL를 각각 취해 시험용액과 같이 조작하여 각각 흡광도를 측정하여 검량선을 만든다. 이 검량선과 시험용액의 흡광도에서 시험용액 5mL중의 인의 중량(g)을 구하여 다음 계산식에 따라 P2O5함량을 산출한다.

  P2O5의 함량(%)    시험용액 5mL중의 인의 중량(g) × 2.291 × 100   ×    

  ＝              ─────────────────────────100   

                    검체의 채취량(g)                                      

■ 소르비탄 지방산 에스테르(Sorbitan Fatty Acid Ester)

성분규격

본 품은 동물성 유지에서 유래하는 지방산과 소르비탄의 에스테르이다.

성상

본 품은 백색～황갈색의 액체, 분말, 박편, 입자 또는 납 형태의 덩어리이다.

확인시험

① 본 품 0.5g에 무수에탄올 5㎖를 넣고 가열하여 녹이고, 묽은 황산 5㎖를 넣고 수욕중에서 30분간 가열한 후 냉각할 때, 기름방울 또는 백-황백색의 고체를 석출한다. 이 기름방울 또는 고체를 분리하여 여기에 에스테르 5㎖를 넣어 흔들어 섞으면 녹는다.

② ①에서 유지 또는 고체를 분리한 잔액 2㎖를 취하여 새롭게 제조한 카테콜 용액(1→10) 2㎖를 넣고 흔들어 섞고 여기에 황산 5㎖를 넣고 흔들어 섞으면 홍-적갈색을 나타낸다.

순도시험

① 산가 : 본 품 약 5g을 정확히 칭량하여 에탄올ㆍ에터 혼합액 (1:1)100㎖를 넣고 가온하여 녹이고, 냉각 후 페놀프타레인 시약 1㎖를 넣어, 0.1N 수산화칼륨.에탄올액으로 적정한다. 별도로 같은 방법으로 공시험을 실시하여 다음식에 의해 산가를 구할 때, 그 값은 15이하이어야 한다. 

② 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 2법에 의해 시험할 때 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양이하이어야 한다.(20ppm이하)

③ 비소 : 본 품 0.5g을 취하여 비소시험법 제 3법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다.(4ppm이하)

강열잔류물

1.5% 이하(1g)

보존방법의 기준

차광한 기밀용기에 보존할 것.

■ 스테아릴젖산나트륨(Sodium Stearoyl Lactylate)

정    의  

 이 품목은 스테아릴젖산류의 나트륨염을 주성분으로 하여 이것과 그 관련 산류 및 그들의 나트륨염과의 혼합물이다.

성    상  

 이 품목은 백∼황색을 띤 분말, 박편 또는 덩어리로서 특이한 냄새를 가지고 있다.

확인시험

(1) 이 품목 2g에 묽은염산 10ml를 가하여 잘 섞고 수욕상에서 5분간 가열하여 뜨거울 때, 여과하고 여액을 암모니아시액으로 중화한 액은 확인 시험법 중 나트륨염의 반응을 나타낸다.

(2) (1)에서 얻은 여액은 확인 시험법 중 젖산염의 반응을 나타낸다. 

(3) (1)에서 여과하고 남은 잔사에 수산화나트륨시액 30ml를 가하여 잘 섞고 수욕상에서 30분간 가열한다. 이를 식힌 다음 묽은염산 20ml를 가하고 에테르 30ml씩으로 2회 추출하여 에테르추출액을 합하고 물 20ml로 씻은 다음 무수황산나트륨으로 탈수하고 수욕상에서 에테르를 증발시켜 제거하고 잔류물의 융점을 측정할 때, 그 융점은 54∼69°이다.

(4) 이 품목 1g은 벤젠 20ml에 즉시 녹는다.

순도시험

(1) 산  가 : 이 품목 약 0.5g을 정밀히 달아 이에 알코올 ㆍ 에테르혼액(1:1) 20ml를 가하고 필요하면 가온하여 녹인 액을 시험용액으로 하여 유지류시험법 중 산가에 따라 시험 하였을 때, 그 값은 60~80이어야 한다. 

(2) 에스테르가 : 이 품목 약 1g을 정밀히 달아 이에 0.5N 알콜성수산화칼륨용액 25ml 및 톨루엔 40ml를 가한 액을 시험용액으로 하여 유지류시험법 중 검화가에 따라 시험하고 유지류시험법 중 에스테르가에 따라 시험할 때, 그 값은 150~190이어야 한다.

(3) 비  소 : 이 품목 0.25g을 취하여 [구아검]의 순도시험 (1)에 따라 시험한다(4ppm).

(4) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.0ppm 이하이어야 한다.

(5) 카드뮴 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

(6) 수  은 : 이 품목을 수은시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

(7) 총젖산 

시험용액 : 이 품목 약 200mg을 정밀히 달아 이에 0.5N 알콜성수산화칼륨용액 10ml와 물 10ml를 가하고 공기냉각기를 달아 수욕상에서 45분간 조용히 끓인다. 냉각기와 용기벽을 물 약 40ml로 씻고 수욕상에서 알콜냄새가 없어질 때까지 가열하여 희석한 황산(1→2) 6ml를 가하고 지방산이 녹을 때까지 가열한 다음 약 60°로 식히고 석유에테르 25ml를 가하여 잘 흔들어 섞고 분액여두에 주의하여 옮겨 물층이 분리되면 100ml 메스플라스크에 분취하고 석유에테르층은 물 20ml씩으로 수 회 씻어 그 씻은 액은 메스플라스크에 합치고 물을 눈금까지 채운 다음 잘 혼합한다. 여액 1ml를 취하여 물을 가하여 100ml로 하고 잘 혼합 하여 시험용액으로 한다.

시험조작 : 시험용액 1ml와 대조액으로서 물 1ml를 시험관에 각각 취하여 황산동 시액 1방울씩을 가하고 조용히 흔들어 섞은 다음 황산 9ml를 뷰렛을 사용하여 신속히 가하고 마개를 느슨하게 막은 다음 수욕상에서 90°로 정확히 5분간 가열한다. 즉시 얼음욕조중에서 20°이하로 정확히 5분간 냉각한 다음 p-페닐페놀 시액 3방울을 가하여 즉시 흔들고 수욕상에서 때때로 흔들어 주면서 30°로 30분간 가온한 다음 90°로 정확히 90초간 더 가온하고 즉시 얼음물로 실온으로 냉각시켜 액층의 길이를 1cm로 하고 파장 570nm에서 흡광도를 측정한다. 대조액은 물을 사용하여 시험용액과 같이 조작한 것을 사용한다. 따로 작성한 검량선에 의하여 시험용액중의 젖산의 양(mg)을 얻어 이로부터 이 품목의 총젖산의 양을 산출할 때, 31∼34%이어야 한다.

검량선의 작성: 젖산리티움을 105℃에서 4시간 건조시킨 다음 1.067g을 정밀히 달아 물에 녹여 1,000mL로 하고 그 액 10mL를 취하여 물로 희석하여 100mL로 한다. 이 용액을 각각 1, 2, 4, 6 및 8mL를 취하여 물로 희석하여 각각 100mL로 한다(각 액 1mL는 젖산 1, 2, 4, 6 및 8μg 함유). 이 용액을 각각 1mL씩 시험관에 취하여 이하는 시험조작란의 황산동시액 1방울씩을 가하고 이하에 따라 조작하여 흡광도를 측정하며 검량선을 작성한다.

(8) 나트륨 : 이 품목 250mg을 정밀히 달아 비이커에 넣고 알콜 10ml를 가하여 가온하면서 녹인다. 이 용액을 25ml 메스플라스크에 옮기고 비이커는 알콜 5ml씩으로 2회 씻고 그 씻은 액은 메스플라스크에 합친 다음 알콜을 가하여 25ml로 한다. 이 액 0.25ml를 정밀히 취하여 다른 25ml 메스플라스크에 넣고 이에 란타늄표준원액 2.5ml 및 물을 가하여 25ml로 한 액을 시험용액으로 하여 다음의 조작조건에 따라 원자흡광광도를 측정한다. 따로 나트륨표준용액의 원자흡광광도를 측정하여 검량선을 작성한다. 시험용액의 원자흡광광도를 검량선에 대입하여 나트륨 농도 C(μg/ml)를 구하고 다음 식에 따라 나트륨의 양을 구할 때, 그 양은 3.5～5.0% 이어야 한다.

     표준용액 : 나트륨표준원액 0.2, 0.4, 0.5ml를 각각 취하여 100ml 메스플라스크에 넣고 이에 란탄용액 10ml씩을 가해준 다음 물을 가하여 100ml로 한다(이 액 1ml는 나트륨 2.0, 4.0 및 5.0μg을 각각 함유한다).

조작조건             

       사용가스 : 가연성가스(아세틸렌 또는 수소) 

                 조연성가스(공기) 

       램    프 : 나트륨중공음극램프 

       파    장 : 589nm

? 스테아릴젖산칼슘(Calcium Stearoyl Lactylate)

정    의

 이 품목은 스테아릴젖산류의 칼슘을 주성분으로 하여 이것과 그 관련 산류 및 그들의 칼슘염과의 혼합물이다.

성    상  

 이 품목은 백～황색을 띤 분말 또는 고체로서 냄새가 없거나 특이한 냄새를 가지고 있다.

확인시험

(1) 이 품목 1g을 500℃에서 1시간 강열하여 얻은 잔류물에 염산(1→3) 5mL를 가하여 녹인 액은 칼슘염의 반응을 나타낸다.

(2) 이 품목 2g에 묽은염산 10mL를 가하여 잘 섞고 수욕 중에서 5분간 가열하여 뜨거울 때 여과하고 여과지상의 잔류물에 수산화나트륨시액 30mL를 가하고 흔들어 섞으면서 95℃이상의 수욕 중에서 30분간 가열한다. 식힌 다음 묽은염산 20mL를 가하고 에테르 30mL씩으로 2회 추출하여 에테르추출액을 합치고 물 20mL로 씻은 다음 무수황산나트륨으로 탈수하고 수욕상에서 에테르를 증발시켜 제거하고 잔류물의 융점을 측정할 때, 그 융점은 54～69℃이다.

(3) 이 품목은 확인시험법 중 젖산염의 반응을 나타낸다.

순도시험

(1) 산가 : 이 품목 약 0.5g을 정밀히 달아 이에 에탄올ㆍ에테르의 혼액(1 : 1) 20mL를 가하고 필요하면 가온하여 녹인 액을 시험용액으로 하여 유지류시험법 중 산가에 따라 시험하였을 때, 그 값은 50～86이어야 한다. 

(2) 에스테르가 : 이 품목 약 1g을 정밀히 달아 이에 0.5N 알콜성수산화칼륨용액 25mL 및 톨루엔 40mL를 가한 액을 시험용액으로 하여 유지류시험법 중 검화가에 따라 시험하고 유지류시험법 중 에스테르가를 구할 때, 그 값은 125∼164 이어야 한다.

(3) 비소 : 이 품목을 비소시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 4.0ppm 이하이어야 한다.

(4) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.0ppm 이하이어야 한다.

(5) 카드뮴 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

(6) 수은 : 이 품목을 수은시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

(7) 총젖산 : 「스테아릴젖산나트륨」의 순도시험 (7)에 따라 시험할 때, 총젖산의 양은 32～38%이어야 한다.

(8) 칼슘 : 이 품목 250mg을 정밀히 달아 비이커에 넣고 에탄올 10mL를 가하여 가온하면서 녹인다. 이 용액을 25mL 메스플라스크에 옮기고 비이커는 에탄올 5mL씩으로 2회 씻고 그 씻은 액은 메스플라스크에 합친 다음 에탄올을 가하여 25mL로 한다. 이 액 0.25mL를 정밀히 취하여 다른 25mL 메스플라스크에 넣고 이에 란타늄표준원액 2.5mL 및 물을 가하여 25mL로 한 액을 시험용액으로 하여 다음의 조작조건에 따라 원자흡광광도를 측정한다. 따로 칼슘표준용액의 원자흡광광도를 측정하여 검량선을 작성한다. 시험용액의 원자흡광광도를 검량선에 대입하여 칼슘 농도 C(μg/mL)를 구하고 다음 계산식에 따라 칼슘의 양을 구할 때, 그 양은 1.0～5.2% 이어야 한다.

  칼 슘(%)=   2.5 × C            × 100  

            ───────────        

              검체의 채취량(mg)           

   조작조건

       사용가스 : 가연성가스(아세틸렌 또는 수소)                  조연성가스(공기)

       램    프 : 칼슘중공음극램프

       파    장 : 422.7nm

       표준용액 : 탄산칼슘 250mg에 염산(1→10) 100mL를 가하여 끓지 않을 정도로 가열하고 식힌 후 물을 가하여 1,000mL로 한다. 이 액 0.2, 0.4, 0.5mL를 각각 취하여 100mL 메스플라스크에 넣고 이에 란타늄표준원액 10mL씩을 가해준 다음 물을 가하여 100mL로 한다(각 액 1mL는 칼슘 2.0, 4.0 및 5.0μg 함유).

강열잔류물  이 품목을 800℃에서 강열잔류물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 14.3～17.7%이어야 한다.

■ 자당 지방산 에스테르(Sucrose Fatty Acid Ester)

성분규격

본 품은 동식물 유지에서 유래하는 지방산과 자당의 에스테르이다.

성상

본 품은 백～황갈색의 분말상, 덩어리 형태 또는 무색～미황색의 점성의 수지상물질로서 냄새는 없거나 또는 약간의 특이한 냄새가 난다.

확인시험

① 본 품 1g에 수산화칼륨ㆍ에탄올 시액 25㎖를 넣고, 환류 냉각기를 장치하여 수욕상에서 1시간 가열한다.  이 액에 물 50㎖를 넣고 잔류액이 30㎖가 될 때까지 증류한다. 냉각 후 잔류액에 묽은염산 10㎖를 넣고 잘 흔들어 섞은 후 염화나트륨을 넣어 포화하고 에터 30㎖씩으로 2회 추출한다. 에터층을 모아 포화염화나트륨 용액 20㎖로 씻은 후, 무수황산나트륨 2g을 사용하여 탈수하고 나서 에터를 완전히 제거한 후, 건조시켜 에터를 충분히 제거하고 잔류물을 10℃에서 냉각시킬 때 기름방울 또는 무색～담황갈색의 고체를 석출한다.

② ①의 시험에서 에터층을 분리한 수층 2㎖를 시험관에 취하여, 수욕중에서 에터의 냄새가 없어질 때까지 가온하여, 냉각 후 안트론시액 1㎖를 관벽을 따라 조용히 첨가하여 층적할 때 접계면은 청～녹색을 나타낸다

순도시험

① 산가 : 본 품 약 3g을 정밀하게 칭량하여 이소프로판올ㆍ물 혼합액(2:1) 60㎖에 녹여 0.1N 수산화칼륨액으로 적정한다.(지시약 페놀후타레인 시액 1㎖) 별도로 같은 방법으로 공시험을 실시하여 다음식에 의해 산가를 구할 때 그 값은 6이하이어야 한다

② 디메틸포름아미드 : 본 품 약 10g을 정밀하게 칭량하여, 200㎖의 플라스크에 넣고 여기에 메탄올제 5% 수산화나트륨 시액 100㎖를 넣어 환류냉각기를 붙이고 이어서 냉각기를 환류냉각기에 연결한다. 냉각기의 앞쪽은 미리 수기에 넣은 염산의 메탄올용액(1→100) 10㎖중에 적셔 놓는다. 수욕중에서 플라스크를 30분간 가열한다. 환류냉각기의 물을 제거하고 증류하여 남은액 50㎖를 모은다. 남은 액은 수욕중에서 거의 건고될때까지 농축한 후 잔류물에 물 10㎖를 넣고 녹인 후 분액깔때기로 옮긴다. 수기는 물 10㎖씩으로 3회 씻고, 씻은 액은 분액깔때기 속의 액에 합친다. 이 액에 이산화탄소ㆍ클로르포름 혼합액(1:20) 10㎖ 및 암모니아수의 용액(1→3) 5㎖를 넣어 20분간 격렬하게 흔들어 섞는다. 여기에 황산동ㆍ암모니아시액 1㎖를 넣어 1분간 격렬하게 흔들어 섞고, 이어서 초산용액(1→3) 5㎖를 넣고 다시 1분간 격렬하게 흔들어 섞은 후, 하층을 취하고 무수황산나트륨으로 탈수한 액을 시료용액으로 한다. 이 액의 색은 별도로 염산디메틸아민 표준액 10㎖을 분액깔때기에 취해 여기에 물 30㎖를 넣고 이어서 이황화탄소, 클로르포름 혼합액(1:20) 10㎖를 넣어 같은 방법으로 조작했을 때의 액의 색보다 진해서는 안 된다.(1ppm이하)

③ 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 2법에 의해 시험할 때 그 양은 납 표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(20ppm이하)

④ 비소 : 본 품 0.5g을 취하여, 비소시헙법 제 3법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다. (4ppm)

⑤유리자당 : 본 품 약 2g을 정밀하게 칭량하여 n-부탄올 40㎖을 넣어 수욕상에서 가온하여 녹이고 이것을 염화나트륨 용액(1→20) 20㎖씩으로 2회 추출하여 추출액을 합쳐 묽은염산 2㎖을 가하여 수욕상에서 30분간 가열한다. 냉각 후 페놀프타레인 시액 2-3방울을 넣고, 수산화나트륨 시액으로 중화하여, 물을 넣고 100㎖로 하여 시료용액으로 한다. 이 시료용액 20㎖를 취하여 베트랑시액 A 20㎖ 및 베트랑 시액 B 20㎖를 넣어 3분간 조용히 끓인 후, 방치하여 아산화동을 침전시킨다.(이때 상등액은 남색을 띠어서는 안 된다) 계속하여 상등액을 유리 여과기로 여과하고 플라스크내의 침전에 베트랑 시액 C 20㎖를 가하여 녹이고, 이것을 유리여과기로 여과하여 물로 씻고, 세척액을 여과액에 합쳐 베트랑시액 D로서 적정하여, 그 적정량에서 동량(銅量)을 산정하여 베트랑 당류 정량표에 의해 전화당의 양을 구하고, 다음식에 의해 유리자당의 함량을 구할 때 그 양은 10% 이하이어야 한다. 

수분

본 품 약 500㎎을 정밀히 칭량하고, 수분정량법(칼피셔법)의 역적정법에 의해 시험할 때 그 양은 4%이하이어야 한다. 단, 시액을 건조 적정 플라스크에 취하여 칼피셔용 메탄올 10㎖를 넣고 여기에 칼피셔시액을 약 10㎖ 가 되도록 일정량 추가하고, 뚜껑을 닫아 20분간 휘저어 섞은 후, 격렬하게 휘저으면서 물ㆍ메탄올 표준액으로 적정한다. 별도로 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다.

강열잔류물

1.5%이하(1g)

보존방법의 기준

차광한 기밀용기에 보존할 것.

■ 폴리옥시에틸렌 글리세롤 지방산 에스테르(Polyoxyethelene Glycerol Fatty Acid Ester)

성분규격

본 품은 동식물 유지에서 유래하는 글리세린의 에스테르의 폴리옥시에틸렌 부가물이다.

성상

본 품은 백색～황갈색의 액체, 반유동체 또는 납형태의 덩어리로서 냄새는 없거나 또는 약간의 특이한 냄새가 난다.

확인시험

① 본 품 0.5g에 무수에탄올 5㎖를 넣고 가열하여 녹이고 묽은 황산 5㎖를 가해 수욕중에서 30분간 가열한 후 냉각할 때 기름방울 또는 백색～황백색의 고체를 추출한다. 이 기름방울 또는 고체를 분리하여, 여기에 에터 5㎖를 넣어 흔들어 섞을 때 녹는다.

② 본 품 1g에 물 20㎖를 넣고 가온하여 잘 흔들어 섞고, 티오시안산 암모늄ㆍ초산코발트 시액 10㎖를 넣고 잘 흔들어 섞은 후, 클로르포름 10㎖를 넣어 다시 흔들어 섞은 후 방치할 때 클로르포름 층은 청색을 나타낸다.

③ 본 품 0.2g에 황산수소칼륨 0.5g을 넣고, 거의 탄화할 때까지 가열할 때 아크로레인의 자극취를 발생한다.

순도시험

① 산가 : 본 품 약 5g을 정밀하게 칭량하여 에탄올ㆍ에터 혼합액(1:1) 100㎖를 넣고 가온하여 녹이고 , 냉각 후 페놀프타레인 시액 1㎖를 넣어, 0.1N 수산화칼륨ㆍ에탄올액으로 적정한다. 별도로 같은 방법으로 공시험을 실시하여 다음 식에 의해 산가를 구할 때, 그 값은 6 이하이어야 한다.

② 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 2법에 의해 시험할 때 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다. (20ppm)이하

③ 비소 : 본 품 0.5g을 취하여 비소시험법 제 3법에 의해 시험할 때, 여기에 적합하여야 한다.(4ppm이하)

④ 1,4-디옥산 : 1,4-디옥산시험법에 의해 시험할 때 본 품에 의해 피크의 높이는 1,4-디옥산 측정용 표준용액 0.2㎖에 의해 생기는 피크의 높이를 넘어서는 안 된다.(10ppm 이하)

강열잔류물

1.5% 이하(1g)

보존방법의 기준

차광한 밀폐용기에 보존할 것.

■ 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르(Polyoxyethylene Sorbitan Fatty Acid Ester)

성분규격

본 품은 동식물 유지에서 유래하는 지방산과 소르비탄의 에스테르의 폴리옥시에틸렌 부가물이다.

성상

본 품은 황색～갈색의 액체, 반유동체 혹은 납형태의 덩어리이다.

확인시험

① 본 품 0.5g에 무수에탄올 5㎖를 넣고 가열하여 녹인 후, 묽은 황산 5㎖를 넣어 수욕상에서 30분간 가열한 후 냉각할 때 기름방울 또는 백～황백색의 고체를 석출한다. 이 기름방울 또는 고체를 분리하여 여기에 에터 5㎖를 넣어 흔들어 섞으면 녹는다.

②본 품 1g을 물 20㎖에 넣어 가온하여 잘 흔들어 섞고, 냉각 후 티오시안산 암모늄ㆍ초산 코발트시액 10㎖를 넣고, 잘 흔들어 섞은 후 클로르포름 10㎖를 넣어 다시 흔들어 섞은 후 방치할 때 클로르포름층은 청색을 나타낸다.

③본 품 0.2g에 황산수소칼륨 0.5g을 넣고 거의 탄화할 때까지 가열할 때, 아크로레인의 자극취를 발생하지 않는다.

순도시험

①산가 : 본 품 약 5g을 정밀하게 칭량하여 에탄올ㆍ에터 혼합액(1:1) 100㎖를 넣어 가온하여 녹이고, 냉각 후 페놀후타레인 시액 1㎖를 넣고 0.1N 수산화칼륨ㆍ에탄올액으로 적정한다. 별도로 같은 방법으로 공시험을 실시하여 다음식에 의해 산가를 구할 때, 그 값은 6이하이어야 한다.

② 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 2법에 의해 시험할 때 그 양은 납 표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(20ppm 이하)

③ 비소 : 본 품 0.5g을 취하여 비소시험법 제 3법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다.(4ppm 이하)

④ 1,4-디옥산 : 본 품 약 20g을 취하여 1,4-디옥산 시험법에 의해 시험할 때, 생기는 피크의 높이는 1,4-디옥산 측정용 표준액 0.2㎖에 의해 생기는 피크의 높이를 넘어서는 안 된다.(10ppm 이하)

강열잔류물

1.5% 이하(1g)

보존방법의 기준

차광한 밀폐용기에 보존할 것.

? 폴리인산나트륨(Sodium Polyphosphate)

함    량

  이 품목을 건조한 다음 정량할 때, 오산화인(P2O5＝141.95)으로서 53.0～80.0%를 함유한다.

성    상

  이 품목은 무～백색의 유리모양의 덩어리, 조각 또는 백색의 분말이다.

확인시험

  ① 이 품목 0.1g을 물 10mL에 녹여 묽은 초산으로 약산성으로 하고 질산은시액 1mL를 가하면 백색의 침전이 생긴다.

  ② 이 품목의 수용액(1→20)은 확인시험법 중 나트륨염의 반응을 나타낸다.

순도시험

  ① 용상 : 이 품목의 분말 1g에 물 20mL를 가하여 가열하여 녹일 때, 그 액은 무색으로서 탁도는 약간 미탁 이하이어야 한다.

  ② 염화물 : 이 품목 0.1g을 취하여 염화물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.01N 염산 0.6mL에 대응하는 양 이하이어야 한다.

  ③ 황산염 : 이 품목 0.5g에 물 30mL 및 묽은염산 2mL를 가하여 1분간 끓여 녹이고 식힌 다음 이를 시험용액으로 하여 황산염시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.01N 황산 0.5mL에 대응하는 양 이하이어야 한다.

  ④ 정인산염 : 이 품목의 분말 1g에 질산은시액 2～3방울을 가할 때, 진한 황색을 나타내어서는 아니 된다.

  ⑤ 비소 : 이 품목을 비소시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.0ppm 이하이어야 한다.

  ⑥ 납 : 이 품목 5.0g을 정밀히 달아 150mL 비커에 넣고 물 30mL를 가하고 염산을 소량씩 검체가 충분히 녹을 때까지 가해 준 다음 다시 염산 1mL를 추가한다. 이를 약 5분 동안 끓이고 식힌 다음 물을 가하여 약 100mL가 되도록 하고 수산화나트륨용액(1→4) 또는 염산(1→4)을 사용하여 pH 2～4로 조정한다. 이 액을 250mL 분액깔대기에 옮긴 후 물을 가하여 약 200mL로 한 다음 2% 피롤리딘디티오카바민산암모늄(ammonium pyrolidine dithiocarbamate)용액(2→100) 2mL를 가하여 흔들어 섞어 준다. 이에 클로로포름 20mL씩으로 2회 추출하고 추출액을 수욕상에서 증발 건고한 다음 잔류물에 질산 3mL를 가하고 거의 건고될 때까지 가열한다. 이에 질산 0.5mL 및 물 10mL를 가한 다음 최종액이 3～5mL가 될 때까지 농축한 후 물을 가하여 10mL로 한 액을 시험용액으로 하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 4.0ppm 이하이어야 한다.

  ⑦ 카드뮴 : 순도시험 ⑥의 시험용액을 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  ⑧ 수은 : 이 품목을 수은시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  ⑨ 불소화물 : 이 품목 1g을 정밀히 달아 비커에 넣고 염산(1→10) 10mL를 가하여 용해시킨다. 이 액을 가열하여 1분간 끓여준 다음 폴리에틸렌(PE) 재질의 비커에 옮겨 주고 즉시 방냉시킨다. 구연산나트륨용액(1→4) 15mL, 에틸렌디아민사초산이나트륨용액(1→40) 10mL를 가하여 흔들어 섞어 준다. 염산(1→10) 또는 수산화나트륨용액(2→5)을 사용하여 pH 5.4～5.6으로 조정하고 물을 가하여 100mL로 한 액을 시험용액으로 한다. 시험용액 50mL를 PE 재질의 비커에 취하여 불소전극을 이용하여 전위를 측정하고 검량선으로부터 불소의 양을 구할 때, 그 양은 10ppm 이하이어야 한다.

       검량선의 작성 : 미리 200℃에서 4시간 건조한 불화나트륨 2.210g을 정밀히 달아 PE 재질의 비커에 넣고 물 200mL를 가하여 용해시킨 다음 물을 가하여 1,000mL로 하고 PE 재질의 용기에 보관한다. 이 액 5mL를 정확히 취하여 메스플라스크에 넣고 물을 가하여1,000mL로 한다(이 액 1mL는 불소 5μg을 함유). 이 액을 1, 2, 3, 5, 10 및 15mL를 각각 취하여 PE 재질의 비커에 넣고 이에 구연산나트륨용액(1→4) 15mL및 에틸렌디아민사초산이나트륨(1→40)10mL씩을 가하여 혼합한다. 이에 염산(1→10) 또는 수산화나트륨용액(2→5)을 사용하여 pH 5.4～5.6으로 조정한 다음 물을 가하여 각각 100mL로 한 액을 각 표준용액으로 한다. 각 표준용액 50mL를 취하여 PE 재질의 비커에 넣고 불소전극으로 전위를 측정하여 불소농도의 상용대수(log)값으로 검량선을 작성한다.

건조감량

  이 품목을 110℃에서 4시간 건조할 때, 그 감량은 5% 이하이어야 한다.

정 량 법

  이 품목을 건조한 다음 약 0.2g을 정밀히 달아 질산 5mL 및 물 25mL를 가하고 증발하는 물을 보충하며 30분간 조용히 끓이고 식힌 다음 물을 가하여 500mL로 하여 필요하면 건조여과지로 여과하여 시험용액으로 한다. 시험용액 5mL를 취해 바나딘산ㆍ몰리브덴산시액 20mL 및 물을 가해 100mL로 하여 잘 흔들어 섞고 30분간 방치한 다음 액층 1cm에서 파장 400nm에 있어서의 흡광도를 측정한다. 대조액은 시험용액 대신 물 5mL로 같이 조작한 액을 쓴다. 따로 인산일칼륨표준용액 10mL를 취해 질산(1→25) 20mL를 가한 다음 다시 물을 가하여 250mL로 한다. 이 액은 10mL, 15mL 및 20mL를 각각 취해 시험용액과 같이 조작하여 각각 흡광도를 측정하여 검량선을 만든다. 이 검량선과 시험용액의 흡광도에서 시험용액 5mL중의 인의 중량(g)을 구하여 다음 계산식에 따라 P2O5함량을 산출한다.

  P2O5의 함량(%) ＝   시험용액 5mL중의 인의 중량(g) × 2.291 × 100   × 100  

                    ─────────────────────────        

                      검체의 채취량(g)                                        

■ 프로피렌 글리콜(Propylene Glycol)

C3H8O2 분자량76.10

성분규격

함량

본 품은 정량할 때 프로피렌글리콜(C3H8O2) 97.5% 이상을 함유한다.

성상

①본 품은 무색 투명한 시럽형태의 액체로서 냄새는 없거나 또는 약간의 특이한 냄새가 나며, 맛은 약간 시다.

② 본 품은 물, 아세톤, 에탄올 또는 글로르포름과 혼화한다.

③ 본 품은 에터에 녹기 쉽다.

④ 본 품은 흡습성이다.

확인시험

① 본 품 0.5g에 피리딘 5㎖ 및 트리페닐클로르메탄 3.6g을 넣고 환류 냉각기를 붙여 수욕상에서 1시간 가열하고 냉각 후 따뜻한 아세톤 100㎖를 넣어 녹이고, 활성탄 0.1g을 넣어 잘 흔들어 섞는다. 이것을 여과하여 여과액을 수욕상에서 50㎖가 될 때까지 증발 농축한 후, 냉장고안에 하룻밤 방치하여 생긴 결정을 여과하고 피리딘 냄새가 없어질 때까지 극소량의 아세톤으로 3회 재결정하여, 105℃에서 30분간 건조할 때 그 융점은 173-179℃이다.

② 본 품 1㎖에 황산수소칼륨 0.5g을 넣고, 조용히 가열할 때 과실과 같은 향기를 발생한다.

순도시험

① 비중 : 본 품의 비중은 1.036～1.040이어야 한다.

② 산 : 본 품 10㎖에 새로 끓여 냉각한 물 50㎖를 넣고 혼합하여 페놀프타레인 시액 5방울 및 0.1N 수산화나트륨액 0.3㎖를 넣을 때, 액은 적색이어야 한다.

③ 염화물 : 본 품 2.0g을 취하여 염화물의 시험할 때 그 양은 0.01N염산 0.4㎖에 대응하는 양이하이어야 한다.(0.007% 이하)

④ 중금속 : 본 품 5.0g을 취하여 중금속시험법 제 1법에 의한 시험을 할 때, 그 양은 납표준액 2.5㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(5ppm 이하)

⑤ 비소 : 본 품 0.7g을 취하여 비소시험법 제 1법에 의해 시험할 때, 여기에 적합하여야 한다.(3ppm 이하)

⑥ 글리세린 및 에칠렌글리콜 : 본 품 약 1g을 정밀히 칭량하여 물을 넣고 1000㎖로 만들며, 그 중 18㎖를 취하여 과요오드산칼륨 0.2g 및 황산 1㎖를 넣고, 여기에 물 50㎖를 넣은 후 매분 3-5㎖의 속도로서 증류하여 잔류물이 약 1㎖가 될 때까지 증류를 계속한다. 남은 액은 얼음물 속에 냉각한 수기에 모은다. 이 남은 액에 물을 넣어 500㎖로 하여 시료용액으로 한다. 시료용액 1㎖를 취하여 크로모트로프산 0.1g 및 황산 5㎖를 넣어 수욕상에서 30분간 가열한 후 냉각하여 물을 넣어 250㎖로 할 때 그 액의 색은 포름알데히드 표준액 1㎖를 시료용액의 경우와 같은 방법으로 얻은 액의 색보다 짙어서는 안 된다.

수분

0.20% 이하 (직접 적정)

강열잔류물

본 품 약 20g을 정밀하게 칭량하여 서서히 가열하여 끓인 다음 가열을 멈추고 즉시 점화하여 연소시켜 냉각 후 잔류물을 황산 0.2㎖로 적시고 강열잔류물 시험법에 의해 시험할 때, 그 양은 0.05%이하이어야 한다.

증류시험

184-189℃ 95v/v% 이상

정량법

본 품 약 1g을 정밀히 칭량하여, 물을 넣어 정확히 250㎖로 하고 그 중 10㎖를 취하여 공전 플라스크에 넣는다. 여기에 과요오드산나트륨 시액 10㎖를 정확히 넣고 이어 황산(1→2) 4㎖를 넣고 잘 흔들어 섞어 40분간 방치한다. 여기에 요오드화칼륨 5g을 넣고 즉시 밀봉하여 잘 흔들어 섞은 후, 어두운 곳에 5분간 방치하여 0.1N 티오황산나트륨액으로 적정한다.(지시약 전분시약 1㎖) 별도로 같은 방법으로 공시험한다.

 0.1N 티오황산나트륨액 1㎖ = 3.805㎎ C3H8O2

보존방법의 기준

밀폐용기에 보존할 것.

3. 보존제

┌──────────────────────────────┐

│사료의 저장 및 유통기간을 늘리기 위하여 사료에 첨가하는 물질│

└──────────────────────────────┘

 가. 산미제(acidity regulators; 유기산제) : 산성을 띠는 유기화합물로서 기본구조는 수소기(H+)와 카복실기(COO-)가 결합된 형태의 물질

■ DL-사과산(DL-Malic Acid)

HOCH(CH2COOH)COOH

C4H6O5 분자량134.09

성분규격

함량  

이 품목은 DL-사과산(C4H6O5) 99.0% 이상을 함유한다.

성상  

이 품목은 백색의 결정 또는 결정성분말로서 냄새가 없으며 특이한 신맛을 가지고 있다.

확인시험 

① 이 품목의 수용액(1→20) 1㎖를 시험관에 취하고 레소르신 2～3g 및 황산 1㎖를 가하여 흔들어 섞고 120～130℃로 5분간 가열하여 식힌 다음 물을 가하여 5㎖로 한다.  이에 식히면서 수산화나트륨용액(2→5)을 가하여 알칼리성으로 하고 다시 물을 가하여 10㎖로 하면 이 액은 자외선 아래에서 엷은 청색의 형광을 나타낸다.

② 이 품목의 수용액(1→20)을 자제접시에 취하고 암모니아시액으로 중화한 다음 설파닐산 10㎎을 가하여 수욕상에서 수분간 가열하고 다시 아질산나트륨용액(1→5) 5㎖를 가하여 조금 가온한 다음 수산화나트륨시액으로 알칼리성으로 하면 적색을 나타낸다.

순도시험 

① 융  점 : 이 품목의 융점은 127～132℃이어야 한다.

② 용  상 : 이 품목 1g을 물 20㎖에 녹일 때, 그 액은 투명하여야 한다.

③ 염화물 : 이 품목 1g을 취하여 염화물시험을 할 때, 그 양은 0.01N 염산 0.1㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.

④ 비  소 : 이 품목 0.25g을 취하여 비소시험을 할 때, 그 양은 4ppm 이하이어야 한다.

⑤ 중금속 : 이 품목 2g을 물 약 40㎖에 녹이고 페놀프탈레인시액 1방울을 가하여 액이 엷은 홍색을 나타낼 때까지 암모니아시액을 가한 다음, 묽은초산 2㎖를 가하여 이를 시험용액으로하여 중금속시험을 할 때, 그 양은 20ppm 이하이어야 한다.

⑥ 산화되기 쉬운 물질 : 이 품목 0.1g을 취하여 물 25㎖ 및 희석한 황산(1→20) 25㎖를 가하여 녹인 다음 이를 20℃로 유지하고 0.1N 과망간산칼륨용액 1㎖를 가할 때, 액의 홍색은 3분 이내에 없어져서는 아니된다.

강열잔물  

이 품목의 강열잔물은 0.05% 이하이어야 한다.

정량법   

이 품목 1.5g을 정밀히 달아 물에 녹여 250㎖로 하고 그 중 25㎖를 취하여 0.1N 수산화나트륨용액으로 적정한다.(지시약 : 페놀프탈레인시액 2방울)

※ 0.1N 수산화나트륨용액 1㎖ = 6.704㎎ C4H6O5

제조방법의 기준

본 품은 원제자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다. 

■ DL-주석산(DL-Tartaric Acid)

HOOC(CHOH)2COOH

C4H6O6 분자량150.09

성분규격

함량

본 품은 건조한 후 정량할 때, DL-주석산(C4H6O6) 99.5% 이상을 함유한다. 

성상

본 품은 무색의 결정 또는 백색의 결정성분말로서, 냄새가 없고 신맛이 있다. 

확인시험

① 본 품의 수용액(1→10)은 선광성을 가지고 있지 않다. 

②「L-주석산」의 확인시험 ②, ③ 및 ④에 따라 시험한다. 

순도시험

① 융 점 : 본 품의 응점은 200～206℃이어야 한다. 

② 황산염 : 「L-주석산」의 순도시험 ①에 따라 시험한다. 

③ 비 소 : 「L-주석산」의 순도시험 ④에 따라 시험한다. 

④ 중금속 : 「L-주석산」의 순도시험 ⑤에 따라 시험한다. 

⑤ 산화되기 쉬운 물질 : 본 품 1g에 물 25㎖ 및 묽은황산 25㎖를 가하여 녹이고 이를 20℃로 유지하면서 0.1N 과망간산칼륨용액 4㎖를 가할 때, 시액의 색이 3분이내에 없어져서는 안 된다. 

건조감량

본 품을 데시케이타(실리카겔)에서 3시간 건조할 때, 그 감량은 0.5% 이하이어야 한다. 

강열잔류물

「L-주석산」의 강열잔류물시험법에 따라 시험한다. 

정량법

「L-주석산」의 정량법에 따라 정량한다. 

■ L-주석산(L-Tartaric Acid)

C4H6O6 분자량150.09

성분규격

함량

본 품을 건조한 후 정량할 때, L-주석산(C4H6O6) 99.7% 이상을 함유한다.

성상

본 품은 무색 투명한 결정 또는 백색의 미세한 결정성분말로 냄새가 없고 신맛이 있다. 

확인시험

① 본 품의 수용액(1→10)은 우선성이다. 

② 본 품을 천천히 가열하면 자당을 태울 때와 같은 냄새가 난다. 

③ 본 품의 수용액(1→10)은 산성이다. 

④ 본 품은 확인시험법 중 주석산염의 반웅을 나타낸다. 

순도시험

① 선광도 : 본 품을 건조한 다음 약 2g을 정밀히 달아 물에 녹여 10㎖로 하여 이 액의 선광도를 측정할 때,  = +12.0 ～ +13.0°이어야 한다. 

② 황산염 : 본 품 0.5g을 취하여 황산염시험을 할 때, 그 양은 0.01N 황산 0.5㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다. 

③ 수산염 : 본 품 1g을 물 10㎖에 녹이고 염화칼슘시액 2㎖를 가할 때, 탁해져서는 아니된다. 

④ 비 소 : 본 품 0.25g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산 마그네슘의 에틸알콜용액(1→50) 10㎖를 넣고 에틸알콜에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다.  만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다.  식힌 다음 잔류물에 염산 3㎖를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험을 할 때, 이에 적합하여야 한다.(4ppm 이하)

③ 중금속 : 강열잔류물 시험에서 얻은 잔류물에 염산 1㎖ 및 질산 0.2㎖를 가하고 수욕상에서 증발건고한다. 이에 묽은 염산 1㎖ 및 물 15㎖를 가하고 가열하여 녹이고 식힌 다음 페놀프탈레인시액 1방울을 가하여 액이 거의 홍색을 나타낼 때까지 암모니아시액을 가한 다음 묽은 초산 2㎖를 가하고 필요하면 여과한다. 이에 물을 가하여 50㎖로 하고 황화나트륨시액 2방울을 가하고 5분간 방치할 때, 그 액의 색은 납 표준용액 2㎖에 묽은 초산 2㎖ 및 물을 가하여 50㎖로 하여 황화나트륨시액 2방울을 가하고 5분간 방치한 액의 색보다 진하여서는 아니된다.(10ppm 이하)

건조감량

본 품을 데시케이터(실리카겔)에서 3시간 건조할 때, 그 감량은 0.5% 이하이어야 한다. 

강열잔류물

본 품 2g을 취하여 강열잔류물 시험을 할 때, 그 양은 0.1% 이하이어야 한다. 

정량법

본 품을 건조한 다음 약 1.5g을 정밀히 칭량하여 물에 녹여 250㎖로 하고 그 중 25㎖를 취하여 0.1N 수산화나트륨용액으로 적정한다.(지시약 : 페놀프탈레인시액 2～3방울)

0.1N 수산화나트륨용액 1㎖ = 7.504㎎ C4H6O6

■ 개미산(Formic Acid)

HCOOH

CH2O2 분자량46.03

성분규격

함량

본 품은 정량할 때 개미산(CH2O2) 98.0%이상을 함유한다.

성상 

① 본 품은 맑은 액체로서 특이한 산취가 난다.

② 본 품은 물, 에탄올, 아세톤 또는 에터와 혼화한다.

확인시험

① 본 품의 수용액(1→100)의 pH은 2.0-2.3이다.

② 본 품 1㎖에 에탄올 1㎖ 및 황산 3방울을 넣고 수욕상에서 가온할 때, 개미산 에틸의 향기를 발생한다. 

③ 본 품에 초산연용액을 가할 때 흰 결정성의 침전이 생성된다. 또한 초산은 용액을 넣어 가열하면 즉시 탁해진다.

순도시험

① 증발잔분 : 본 품 50g을 수욕상에서 증발한 후, 105-110℃에서 함량이 될 때까지 건조했을 때, 그 잔류물은 5㎎이하이어야 한다.(0.01%이하)

②중금속 : 본 품 2.0g을 취하여 중금속시험법 제 1법에 의해 시험할 때, 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다. (10ppm이하)

③비소 : 본 품 1.0g을 취하여 비소시험법 제 1법에 의해 시험할 때, 여기에 적합하여야 한다. (2ppm이하)

④염화물 : 본 품 20g을 취하여 염화물시험할 때 그 양은 0.01N 염산 0.3㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(5ppm이하)

정량법

본 품 약 2.0g을 정밀히 칭량하여, 새로 끓여 냉각한 물 100㎖를 넣고 녹여, 1N 수산화나트륨액으로 적정한다.(지시약 : 페놀프타레인시액 3방울) 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다.

1N 수산화난트륨 1㎖ = 46.03㎎ CH2O2

보존방법의 기준

내산성의 기밀용기에 보존할 것.

■ 개미산 칼슘(Calcium Formate)

(HCOO)2Ca 분자량130.11

성분규격

함량

본 품은 정량할 때 개미산칼슘(C2H2CaO4) 98.0%이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 백색의 결정 또는 분말로서 냄새가 없거나 또는 약간의 특이한 산취가 난다.

② 본 품은 알콜에는 녹기 어려우나 묽은 산에는 녹기 쉽다. 본 품은 무색투명한 시럽상의 액체로서 냄새가 없다. 

확인시험

① 본 품 1g을 물 10㎖에 녹이고 에탄올 1㎖ 및 황산 3방울을 넣고 수욕 상에서 가온할 때, 개미산 에틸의 향기를 발생한다. 

②본 품의 수용액(1g→10㎖)에 초산연용액을 가할 때 흰 결정성의 침전이 생성된다. 또한 초산은 용액을 넣어 가열하면 즉시 탁해진다.

순도시험

① 물 불용물 : 본 품 10.0g을 취하여, 물 100㎖를 넣고 때때로 흔들어 섞으면서 1시간 방치한 후 유리여과기(G4)를 이용하여 여과하고, 잔류물을 물 30㎖로 씻은 후, 135℃에서 2시간 전조할 때 그 양은 0.015g이하이어야 한다.

②산 및 알카리 : 본 품 2.0g를 취하여 새로 끓여 냉각한 물 20㎖를 넣어 녹이고, 페놀프탈레인시액 2방울을 넣어 시료용액으로 한다. 시료용액이 무색인 때는 0.1N 수산화나트륨액 0.3㎖를 넣었을 때, 홍색을 띠지 않으면 안된다. 또한 시료용액이 홍색인 때는 0.1N염산 0.3㎖를 넣었을 때 그 색이 사라져야 한다.

③중금속 : 본 품 2.0g를 취하여 중금속시험법 제 1법에 의해 시험할 때, 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다. (10ppm이하)

④비소 : 본 품 1.0g을 취하여 비소시험법 제 1법에 의해 시험할 때, 여기에 적합하여야한다. (2ppm이하)

⑤염화물 : 본 품 2.0g를 취하여 염화물시험을 할 때 그 양은 0.01N 염산 0.3 ㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다. (5ppm이하)

건조감량

   2%이하(2g, 105℃/3시간)

정량법

 1) 개미산 정량 (68%이상, HPLC방법)

본 품 약 0.05～0.1g을 칭량하여 50ml 용량병에 취하고 0.4% 염산용액 20ml를 가한 후 20분간 초음파 수조에서 용해시킨다. 0.4% 염산용액으로 정용하고 균질하게 혼합한 후 상등액을 원심분리(3000rpm, 10분)하거나 또는 여과한 후 0.45um membrane filter로 여과하여 시험용액으로 사용한다. 개미산 표준물질을 위와 동일하게 처리하여 표준용액으로 한다.

    1) LC Pump : Isocratic pump

    2) Mobile Phase : 20mM H2SO4

    3) Column : Organic acid analysis colum (유기분석용 칼럼 또는 이와 동등한 것)

        예) 1) Aminex HPX-87H Ion Exclusion colum

                            (300mm x 738mm, Bio-Rad)

            또는 2) RSpak KC-811(300mmx 7.8mm, Shodex)

    4) 검출조건 : UV 210nm (또는 RI detector)

    5) 유속 : 0.7～1.0ml/min

    6) 주입량 : 20ul

    7) Colum Oven : Ambient 또는 40℃

 계산방법 :

 개미산(%)= (본 품의 피크면적/표준물질의 피크면적) x 표준물질의 농도(g/50ml)/ 취량(g) x 100

 2) 칼슘의 정량(30%이상)

   사료공정서의 AAS방법 또는 ICP방법에 따른다.

 3) 개미산칼슘의 함량은 개미산의 분석결과로부터 다음과 같이 계산한다.

   개미산칼슘(%) = 개미산(%) x 130.11/(46.03 x 2)

보존방법의 기준

   내산성의 기밀용기에 보존할 것.

■ 개미산수소칼륨(Potassium diformate)

KH(COOH)2        분자량 130.14

성분규격

함량

본 품은 정량할 때 개미산수소칼륨(C2H3O4K) 95.0%이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 유동성의 백색 과립 또는 분말로서 냄새가 없거나 또는 약간의 특이한 산취가 난다.

② 본 품은 물에는 잘 녹으나 헥산, 아세톤에는 거의 녹지 않고, 에탄올에는 일정 수준 녹는다.

확인시험

① 본 품 1g을 물 10㎖에 녹이고 에탄올 1㎖ 및 황산 3방울을 넣고 수욕 상에서 가온할 때, 개미산 에틸의 향기를 발생한다. 

② 본 품의 수용액(1g→10㎖)에 초산연용액을 가할 때 흰 결정성의 침전이 생성된다. 또한 초산은 용액을 넣어 가열하면 즉시 탁해진다.

순도시험

① 비소 : 본 품 1.0g을 취하여 비소시험법에 의해 시험할 때, 그 양은 3.0ppm이하이어야 한다.

② 카드뮴 : 본 품 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm이하이어야 한다.

③ 납 : 본 품 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 5.0ppm이하이어야 한다.

④ 수은 : 본 품을 수은시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm이하이어야 한다.

⑤ 불소 : 본 품을 불소시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 150.0ppm이하이어야 한다.

건조감량

   6%이하(2g, 105℃/3시간)

정량법

 1) 개미산 정량 (68%이상, HPLC방법)

본 품 약 0.05～0.1g을 칭량하여 50ml 용량병에 취하고 0.4% 염산용액 20ml를 가한 후 20분간 초음파 수조에서 용해시킨다. 0.4% 염산용액으로 정용하고 균질하게 혼합한 후 상등액을 원심분리(3000rpm, 10분)하거나 또는 여과한 후 0.45um membrane filter로 여과하여 시험용액으로 사용한다. 개미산 표준물질을 위와 동일하게 처리하여 표준용액으로 한다.

    1) LC Pump : Isocratic pump

    2) Mobile Phase : 20mM H2SO4

    3) Column : Organic acid analysis colum (유기분석용 칼럼 또는 이와 동등한 것)

    4) 검출조건 : UV 210nm (또는 RI detector)

    5) 유속 : 0.7～1.0ml/min

    6) 주입량 : 20ul

    7) Colum Oven : Ambient 또는 40℃

 계산방법 :

 개미산(%)= (본 품의 피크면적/표준물질의 피크면적) x 표준물질의 농도(g/50ml)/ 취량(g) x 100

 2) 칼륨의 정량(22%이상)

   사료공정서의 AAS방법 또는 ICP방법에 따른다.

 3) 개미산수소칼륨의 함량은 개미산의 분석결과로부터 다음과 같이 계산한다.

   개미산수소칼륨(%) = 개미산(%) x 130.14/92.05

보존방법의 기준

   내산성의 기밀용기에 보존할 것. 고형화 방지를 위하여 소량의 실리카와 식물성유를 첨가하여 제조할 수 있다.

■ 구연산(Citric Acid)

C6H8O7 분자량192.13

정 의

본 품에는 결정물(일수염) 및 무수물이 있고, 이를 각각 구연산(결정) 및 구연산(무수)라 칭한다. 

성분규격

함량

본 품을 무수건조물로 환산할 때 구연산(C6H8O7 = 192.13) 99.5% 이상을 함유한다. 

성상

본 품은 무색 투명한 결정, 입상, 덩어리 또는 결정성분말, 분말로서 냄새가 없으며 강한 신맛을 가진다. 

확인시험

① 본 품의 수용액(1→10)은 산성이다. 

② 본 품은 확인시험법 중 구연산염의 반응을 나타낸다

순도시험

①황산염 : 본 품 0.5g을 취하여 황산염시험을 할 때, 그 양은 0.01N 황산 0.5㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다

②수산염 : 본 품 1g을 물 10㎖에 녹여 염화칼슘시액 1㎖를 가할 때, 탁하여서는 아니된다. 

③ 비소 : 본 품 0.25g을 물 5㎖에 녹이고 이를 시험용액으로 하여 비소시험을 할 때, 이에 적합하여야 한다.(4ppm 이하)

④ 중금속 : 본 품 2g을 취하여 「구아검」의 순도시험 ②에 따라 시험한다.(10ppm 이하)

⑤ 칼 슘 : 본 품 1g을 물 10㎖에 녹이고 암모니아시액으로 중화한 다음 수산암모늄시액 1㎖를 가할 때, 탁하여서는 아니된다. 

⑥ 황산정색물 : 본 품 0.5g에 황산 5㎖를 가하고 약 90℃로 1시간 가열하여 녹일 때, 그 액의 색은 비색표준용액 K보다 진하여서는 아니된다. 

⑦ 다핵방향족탄화수소 : 본 품 25g에 물 30㎖를 가하여 약 50℃로 가온하여 녹여서 식힌 다음 n-헥산(자외부흡수스펙트럼측정용) 20㎖씩 되풀이하여 3회 추출한다. 각각 2,500～3,000rpm에서 약 10분간 원심분리하여 n-헥산층을 합친 다음 n-헥산을 증발시켜 1～2㎖가 되게 농축하고 식힌 다음 n-헥산(자외부흡수스펙트럼측정용)을 가하여 10㎖로 하여 이를 시험용액으로 한다. 시험용액을 액층 1cm에서 흡광도를 측정할 때, 260～350nm의 파장범위 내에 있어서는 대조액과의 차가 0.05 이하이어야 한다. 다만, 대조액은 물 30㎖에 n-헥산(자외부흡수스펙트럼측정용) 20㎖씩 되풀이하여 3회 추출하고 이하 검액과 같이 처리한 액을 쓴다. 

⑧ 이소구연산 : 본 품 0.5g을 105℃에서 3시간 가열하고 식힌 다음 아세톤 10㎖에 녹이고 그 중 0.005㎖를 시험용액으로 하여 여지크로마토그라피 제 1법에 따라 시험할 때, 한 개의 반점 이외의 다른 반점이 있어서는 아니된다. 다만, 여지는 크로마토그라피용 2호를 쓴다.  전개용용매가 약 25cm 상승하면 전개를 그치고 풍건한 다음 브롬페놀블루시액(구연산용)을 분무한다. 대조액은 쓰지 아니한다. 또한, 전개용 용매로는 n-부틸알콜, 개미산 및 물의 혼액(8:3:2)을 방치한 다음 그 상층을 쓴다

강열잔류물

본 품 2g을 취하여 강열잔류물 시험을 할 때, 그 양은 0.1% 이하이어야 한다.

수분

본 품의 수분은 수분정량법(칼피셔법)의 직접 적정법에 따라 시험할 때, 구연산

(무수)는 0.5% 이하, 구연산(결정)은 8.8% 이하이어야 한다. 

정량법

본 품 약 1.5g을 정밀히 달아 물에 녹여 250㎖로 하고 그 중 25㎖를 취하여 0.1N 수산화나트륨용액으로 적정한다.(지시약 : 페놀프탈레인시액 2～3방울)

0.1N 수산화나트륨용액 1㎖ = 6.404㎎ C6H8O7

■ 글루콘산(Gluconic Acid, 글루콘산액)

정    의  이 품목은 글루콘산 및 글루코노-δ-락톤의 수용액이다.

함    량  이 품목은 글루콘산(C6H12O7＝196.16)으로서 50.0～52.0%를 함유한다.

성    상  이 품목은 무～엷은 황색의 징명한 시럽상 액체로서 냄새가 없거나 약간 냄새가 있고 산미가 있다.

확인시험  (1) 이 품목의 수용액(1→25) 1mL에 염화제이철시액 1방울을 가할 때, 진한 황색을 나타낸다.

  (2) 이 품목 1mL에 물 4mL를 가하여 「글루코노델타락톤」의 확인시험 (3)에 따라 시험한다.

순도시험  (1) 염화물 : 이 품목 0.5g을 취하여 염화물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.01N 염산 0.5mL에 대응하는 양 이하이어야 한다.

  (2) 황산염 : 이 품목 1g을 취하여 황산염시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.01N 황산 0.5mL에 대응하는 양 이하이어야 한다.

  (3) 비  소 : 이 품목 0.25g을 물에 녹여 10mL로 하고 이를 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하).

  (4) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 5.0ppm 이하이어야 한다.

  (5) 수  은 : 이 품목을 수은시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  (6) 자당 또는 환원당 : 이 품목 1g에 물 10mL 및 묽은염산 2mL를 가하여 2분간 끓이고 식힌 다음 탄산나트륨시액 5mL를 가하여 4분간 방치한 다음 물을 가하여 20mL로 하고 이 액 5mL에 펠링시액 2mL를 가하여 1분간 끓일 때, 즉시 등황～적색의 침전이 생겨서는 아니 된다.

강열잔류물  이 품목 5g을 취하여 강열잔류물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.10% 이하이어야 한다.

정 량 법  이 품목 1g을 정밀히 달아 물 30mL 및 0.1N 수산화나트륨용액 40mL를 가하여 흔들어 섞고 20분간 방치한 다음 과잉의 알칼리를 0.1N 황산으로 적정한다(지시약 : 페놀프탈레인시액 3방울). 따로 같은 방법으로 공시험을 한다.

0.1N 수산화나트륨용액 1mL ＝ 19.616mg C6H12O7

■ 글루콘산칼슘(Calcium Gluconate)

  (C6H11O7)2CaㆍH2O   분자량 448.40   

함    량  이 품목은 건조한 다음 정량할 때, 글루콘산칼슘 [(C6H11O7)2CaㆍH2O] 98.0～104.0%를 함유한다.

성    상  이 품목은 백색결정성 또는 입상의 분말로서 냄새가 없고 맛이 없다.

확인시험  (1) 이 품목의 수용액(1→40)은 확인시험법 중 칼슘염의 반응을 나타낸다.

  (2) 이 품목의 수용액(1→40) 1mL에 염화제이철시액 1방울을 가하면 진한황색을 나타낸다.

  (3) 이 품목의 따뜻한 수용액(1→10) 5mL에 빙초산 0.7mL 및 새로 증류한 페닐히드라진 1mL를 가하고 수욕상에서 30분간 가열하고 식힌 다음 유리봉으로 내벽을 긁을 때 결정을 석출한다. 결정을 취하여 끓는 물 10mL를 가하여 녹이고 활성탄 소량을 가하여 여과한다. 식힌 다음 유리봉으로 내벽을 긁어 석출하는 결정을 건조하여 융점을 측정할 때, 그 융점은 약 196～202℃(분해)이어야 한다.

순도시험  (1) 용  상 : 이 품목 1g에 물 20mL를 가하고 60℃로 가온하여 녹일 때, 그 액은 거의 징명 이하이어야 한다.

  (2) 염화물 : 이 품목 0.3g을 취하여 염화물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.01N 염산 0.6mL에 대응하는 양 이하이어야 한다.

  (3) 황산염 : 이 품목 0.5g을 취하여 황산염시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.01N 황산 0.5mL에 대응하는 양 이하이어야 한다.

  (4) 비  소 : 이 품목 0.25g을 온탕 20mL에 녹여 이를 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하).

  (5) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.0ppm 이하이어야 한다.

  (6) 자당 또는 환원당 : 이 품목 0.5g에 물 10mL 및 묽은염산 2mL를 가하여 약 2분간 끓이고 식힌 다음 탄산나트륨시액 5mL를 가하여 5분간 방치하고 물을 가하여 20mL로 하고 여과한다. 여액 5mL에 펠링시액 2mL를 가하고 1분간 끓일 때, 즉시 등황～적색의 침전이 생겨서는 아니 된다.

건조감량  이 품목을 80℃에서 2시간 건조할 때, 그 감량은 0.5% 이하이어야 한다.

정 량 법  이 품목을 건조한 다음 약 0.5g을 정밀히 달아 묽은염산 5mL를 가하여 녹이고, 이에 물 50mL, 수산화나트륨시액 25mL 및 2-옥시-1-(2‘-옥시-4’-설포-1‘-나프틸아조)-3-나프토에 산시약 약 0.1g을 가하여 즉시 0.05M 이.디.티.에이.용액으로 적정한다. 종말점은 적색이 완전히 소실되어 청색으로 된 점으로 한다.

0.05M 이.디.티.에이.용액 1mL ＝ 22.42mg (C6H11O7)2CaㆍH2O

■ 낙산(부티르산, Butyric Acid)

CH3CH2CH2COOH

C4H8O2 분자량88.11

성분규격

함량 

이 품목은 낙산(C4H8O2 ) 99.0% 이상을  함유한다.

성상

이 품목은 무색투명한 액체로서 특이한 자극적인 냄새가 있다.

확인시험 

① 이 품목 1㎖에 물 2㎖를 넣으면 투명하게 녹는데 그 액은 강산성이다.

② 이 품목 1㎖에 알콜 1㎖ 및 황산 3방울을 넣어 온탕중에서 가온하면 낙산에틸 향기가 발생된다.

순도시험 

① 비  중 : 이 품목의 비중은 0.952～0.956이어야 한다.

② 굴절률 : 이 품목의 굴절률 n은 1.397～1.399이어야 한다.

③ 황산염 : 이 품목 10g을 취해 황산염시험을 할 때, 그 양은 0.01N 황산 0.4㎖ 에 대응하는 양 이하이어야 한다.

정량법  

이 품목 약 1.5g을 정밀히 달아 물 75㎖를 넣어 0.5N 수산화나트륨용액으로 적정한다.(지시약 : 페놀프탈레인시액 2방울)

0.5N 수산화나트륨 용액 1㎖ = 44.06㎎ C4H8O2 

제조방법의 기준

본 품은 원제자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다. 

■ 낙산나트륨(Sodium butyrate)

정    의

낙산의 나트륨염이다.

성상/순도/함량 : 이 품목은 낙산나트륨(C4H7NaO2) 98.0% 이상을 함유한다.

검정성분(또는 물질명) : 낙산나트륨

기    타-

■ 낙산칼슘(Calcium Butyrate)

C8H14CaO4 분자량214.27

성분규격

함량 

본 품은 정량할 때 표시량의 95.0～105.0%에 대응하는 낙산칼슘을 함유한다.

성상

① 본 품은 백색 또는 엷은 황갈색의 결정 또는 결정성 분말로서 약간의 특이한 냄새가 있다.

② 본 품은 묽은 산에 녹기 쉽다.

확인시험 

① 이 품목의 수용액은 알칼리성이다.

② 이 품목 1g에 알콜 1㎖ 및 황산 3방울을 넣어 온탕 중에서 가온하면 낙산에틸 향기가 발생된다.

순도시험 

① 칼슘 : 본 품을 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때 그 양은  낙산칼슘 표시량의 18.7% 이상을 함유하여야 한다.

② 납 : 본 품을 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 10.0ppm 이하이어야 한다.

건조감량 

    10% 이하 (2g, 105℃/3시간)

정 량 법  

  1) 낙산의 정량

    본 품 약 0.05∼0.1g을 칭량하여 50ml 용량병에 취하고 0.4% 염산용액 20ml를 가한 후 20분간 초음파수조에서 용해시킨다. 0.4% 염산용액으로 정용하고 균질혼합 후 상등액을 LC용 실린지 필터로 여과하여 시험용액으로 사용한다. 낙산 표준물질을 위와 동일하게 처리하여 표준용액으로 한다.

  (1) LC Pump : Isocratic pump

  (2) Mobile Phase : 20mM H2SO4 

  (3) Column : Organic acid analysis column(유기분석용 칼럼 또는 이와 동등한 것)

            예)  1) Aminex HPX-87H Ion Exclusion column 

                     (300mm x 7.8mm, Bio-Rad )

                 2) RSpak KC-811 (300mm x 7.8mm, Shodex)

  (4) Column Oven : Ambient 또는 40 ℃ 

  (5) Detection : UV 210nm (또는 RI detector)

  (6) Flow rate : 0.7~1.0ml/min 

  (7) Injection : 20㎕

계산방법 : 

  (1) 낙산(%) = (본 품의 피크면적/표준물질의 피크면적) x 표준물질의 농도(g/50ml) / 검체의 채취량(g) x 100

  (2) 낙산칼슘(%) = 낙산(%) x 214.27/(88.11 x 2)

제조방법의 기준

   본 품은 원제자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질을 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다. 

보존방법의 기준

내알칼리성의 기밀용기에 보존할 것.

■ 소르빈산(Sorbic Acid)

CH3CH=CHCH=CHCOOH

C6H8O2 분자량112.13

성분규격

함량 

본 품을 건조한 후 정량할 때, 소르빈산(C6H8O2) 99.0～101.0%를 함유한다

성상

본 품은 무색의 침상 결정 또는 백색의 결정성분말로서 냄새가 없거나 또는 자극적인 냄새가 다소 있다. 

확인시험

① 이 품목 0.1g을 물 10㎖에 현탁시킨 액은 산성이다

② 이 품목의 아세톤용액(1-100) 1㎖에 물 1㎖를 가하고 이에 브롬시액 2방울을 가하여 흔들어 섞으면 시액의 색은 곧 없어진다

순도시험

① 융 점 : 본 품의 융점은 132～135℃이어야 한다

② 용액상 : 본 품 0.2g을 아세톤 5㎖에 녹일 때, 그 액의 색은 비색표준용액 C 보다 진하여서는 아니 된다.

③ 염화물 : 본 품 1.5g에 물을 가하여 120㎖로 하고 끓여서 녹이고 식힌 다음 물을 가하여 120㎖로 하여 여과하고 여액 40㎖에 묽은질산 6㎖를 가하여 이를 시험용액으로 염화물시험을 할 때, 그 양은 0.01N 염산 0.2㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.

④황산염 : 위 ③의 여액 40㎖에 묽은염산 1㎖를 가하여 이를 시험용액으로 황산염 시험을 할 때, 그 양은 0.01N 황산 0.5㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다. 

⑤비 소 : 본 품 0.25g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘알콜용액(1→50) 10㎖를 넣고 알콜에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3㎖를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험을 할 때, 이에 적합하여야 한다.(4ppm 이하)

⑥중금속 : 강열잔물 시험에서 얻은 잔류물에 염산 1㎖ 및 질산 0.2㎖를 가하여 수욕상에서 증발건고한다. 이에 묽은염산 1㎖ 및 물 15㎖를 가하여 가열하여 녹이고 식힌 다음 페놀프탈레인시액 1방을을 가하여 액이 엷은 홍색을 나타낼 때까지 암모니아시액을 적가하고 묽은초산 2㎖를 가하여 필요하면 여과한다. 이에 물을 가하여 50㎖로 하고 황화나트륨시액 2방울을 가하여 5분간 방치할 때, 그 액의 색은 납표준용액 2㎖에 물을 가하여 50㎖로 하고 황화나트륨시액 2방울을 가하여 5분간 방치한 액의 색보다 진하여서는 안 된다.(10ppm 이하)

수분

본 품 2g을 취하여 수분정량법(칼피셔법)에 따라 시험할 때, 그 양은 0.5% 이하이어야 한다. 

강열잔류물

본 품 2g을 취하여 강열잔류물시험을 할 때, 그 양은 0.2% 이하이어야 한다. 

정량법

본 품 약 1g을 정밀히 칭량하여 중화알콜에 녹여 100㎖로 하고 그 중 25㎖를 취하여 0.1N 수산화바륨용액으로 적정한다.(지시약 : 페놀프탈레인시액 2～3방울)

0.1N 수산화나트륨용액 1㎖ = 11.21㎎ C6H8O2

■ 소르빈산칼륨(Potassium Sorbate)

CH3CH=CHCH=CHCOOK

C6H7O2K                                               

   분자량 150.22

성분규격

  함량 

   이 품목은 건조한 다음 정량할 때, 소르빈산칼륨(C6H7O2K) 98.0～101.0 %를 함유한다.

  성상 

   이 품목은 백～엷은 황갈색의 인편상결정 또는 결정성분말로서 냄새가 없거나 또는 조금 냄새가 있다.

확인시험 

  ① 이 품목의 수용액(1→100)1㎖에 아세톤 1㎖를 가하고 이에 묽은염산을 적가하여 약산성으로 한 다음 브롬시액 2방울을 가하여 흔들어 섞으면 시액의 색은 곧 없어진다.

  ② 이 품목은 확인시험법중 칼륨염의 반응을 나타낸다.

순도시험 

  ① 용상 : 이 품목 0.2g을 물 5㎖에 녹일 때, 이 액의 색은 비색표준용액 F보다 진하여서는 아니된다.

  ② 유리알칼리 : 이 품목 1g을 새로 끓여서 식힌 물 20㎖에 녹이고 페놀프탈레인시액 2방울을 가할 때 홍색을 나타내어도 그 색은 0.1N 황산 0.4㎖를 가할 때 없어져야 한다.

  ③ 염화물 : 이 품목 1g을 물 약 30㎖에 녹이고 잘 흔들어 섞으면서 묽은 질산 11㎖를 가하여 여과하고 물로 씻은 다음 그 씻은 액을 여액에 합쳐 이를 시험용액으로 하여 염화물시험을 할 때, 그 양은 0.01N 염산 0.5㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.

  ④황산염 : 이 품목 0.5g을 물 약 30㎖에 녹이고 잘 흔들어 섞으면서 묽은 염산 3㎖를 가하여 여과하고 물로 씻은 다음 그 씻은 액을 여액에 합쳐 이를 시험용액으로 하여 황산염시험을 할 때, 그 양은 0.01N 황산 0.4㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.

  ⑤비소 : 이 품목 0.25g을 물 5㎖에 녹이고, 이를 시험용액으로 하여 비소시험을 할 때, 이에 적합하여야 한다.(4ppm 이하)

  ⑥중금속 : 이 품목 2g을 석영제 또는 자제도가니에 넣고 조용히 약하게 가열하여 탄화시킨다.  식힌 다음 질산 2㎖ 및 황산 5방울을 가하여 흰 연기가 발생하지 않을 때에는 가열한후 450～550°에서 회화가 될 때까지 강열한다.  식힌 다음 염산 2㎖를 가하여 수욕상에서 증발건고하고 잔류물에 염산 3방울을 가하여 주고 열탕 10㎖를 가하여 2분간 가온하고 식힌 후 페놀프탈레인시액 1방을을 가하고 암모니아시액을 액이 엷은 홍색이 될 때까지 가해주고 나서 물을 사용하여 네슬러관에 옮겨주고 다시 희석한 초산(1→20) 2㎖ 및 물을 가하여 50㎖로 한 것을 시험용액으로 하여 중금속시험을 할 때 , 그 양은 10ppm 이하이어야 한다.  다만, 표준색은 시료와 재질이 같은 도가니에 질산 2㎖, 황산 5방울 및 염산 2㎖를 넣고 가열하여 증발건고하고 잔류물에 염산 3방울을 가하여 이하 시험용액의 경우과 같이 조작하여 정량적으로 다른 네슬러관에 옮겨주고, 이에 납표준용액 2㎖, 희석한 초산(1→20) 2㎖ 및 물을 가하여 50㎖로 한 것을 사용한다.

건조감량 

   이 품목은 105°에서 3시간 건조할 때, 그 감량은 1% 이하이어야 한다.

정량법 

   이 품목을 건조한 다음 약 0.3g을 정밀히 달아 빙초산(비수적정용) 50㎖를 가하고 0.1N 과염소산용액으로 적정한다.(지시약 : α-나프톨벤제인시액 10방울) 종말점은 액의 갈색이 녹색으로 변하는 점으로 한다.

         0.1N 과염소산용액 1㎖ = 15.02㎎ C6H7O2K

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

   차광한 밀폐용기에 보관할 것.

■ 안식향산(Benzoic Acid)

C7H6O2 분자량122.12

성분규격

함량

본 품은 건조 후 정량할 때 안식향산(C7H6O2) 99.5% 이상을 함유한다. 

성상

본 품은 백색의 작은 잎 모양 또는 바늘 모양의 결정으로서 냄새가 없거나 또는 벤즈알데히드 같은 냄새가 조금 있다. 

확인시험

본 품을 수산화나트륨시액에 녹인액(1→20)은 확인시험법중 안식향산염의 반응을 나타낸다. 

순도시험

① 융 점 : 본 품의 융점은 121～123℃이어야 한다. 

② 염소화합물 : 본 품 0.5g 및 탄산칼슘 0.7g을 자제도가니에 넣고 소량의 물을 가하여 섞어 100℃에서 건조한 다음 10분간 약 600℃로 가열한다. 식힌 다음 잔류물을 묽은 질산 20㎖에 녹여 여과하고 불용물을 물 약 15㎖로 씻고 그 씻은 액을 여액에 합쳐 물을 가하여 50㎖로 하여 이를 시험용액으로 한다. 따로, 탄산칼슘 0.7g을 묽은 질산 20㎖로 녹이고 필요하면 여과하여 0.01N 염산 0.2㎖ 및 물을 가하여 잘 흔들어 섞어 5분간 방치할 때, 시험용액이 나타내는 탁도는 대조액이 나타내는 탁도 이하이어야 한다. 

③ 프탈산 : 본 품 0.1g을 시험관에 넣고 새로 승화정제한 레소르신 2～3㎎ 및 황산 1㎖를 가하여 흔들어 섞고 125～130℃에서 5분간 가열한 다음 식히고 물을 가하여 5㎖로 한다. 이를 식히면서 수산화나트륨용액(2→5)을 적가하여 알칼리성으로 하고 다시 물을 가하여 10㎖로 할 때, 이 액은 자외선 아래에서 녹색의 형광을 나타내어서는 아니된다. 

④비 소 : 이 품목 0.25g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에틸알콜용액(1→50) 10㎖를 넣고 에틸알콜에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다.  식힌 다음 잔류물에 염산 3㎖를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험을 할 때, 이에 적합하여야 한다.(4ppm 이하)

⑤중금속 : 이 품목 2g을 아세톤 25㎖에 녹이고 묽은 초산 2㎖ 및 물을 가하여 50㎖로 한 것을 시험용액으로 하여 중금속시험을 할 때, 그 양은 10ppm 이하이어야 한다. 다만, 표준색은 납표준용액 2㎖에 아세톤 25㎖, 묽은 초산 2㎖ 및 물을 가하여 50㎖로 한다.

⑥산화되기 쉬운 물질 : 물 100㎖에 황산 1.5㎖를 가하고 끓이면서 0.1N 과망간산칼륨용액을 홍색이 30초간 지속할 때까지 적가하고 뜨거울 때 이 액에 이 품목 1g을 녹이고 약 70℃에서 0.1N 과망간산칼륨용액으로 홍색이 15초간 지속할 때까지 적정할 때 그 양은 0.5㎖ 이하이어야 한다.

건조감량

본 품을 데시케이타(실리카겔)에서 3시간 건조할 때, 그 감량은 0.5% 이하이어야 한다. 

정량법

본 품을 건조한 후 약 0.25g을 정밀히 칭량하여 페놀레드시액 3방울을 지시약으로 하여 0.1N 수산화나트륨용액으로 중화한 50% 알콜 25㎖에 녹이고 0.1N 수산화나트륨용액으로 적정 한다. 

0.1N 수산화나트륨용액 1㎖ = 12.21㎎ C7H6O2

■ 안식향산나트륨(Sodium Benzoate)

C7H5NaO2                                         분자량 144.11

성분규격

  함량 

   이 품목은 건조한 다음 정량할 때, 안식향산나트륨(C7H5NaO2) 99.0% 이상을 함유한다.

  성상 

   이 품목은 백색의 알맹이 또는 결정성분말로서 냄새가 없다.

확인시험 

   이 품목은 확인시험법중 안식향산염 및 나트륨염의 반응을 나타낸다.

순도시험

   ① 용상 : 이 품목 1g을 물 5㎖에 녹일 때, 그 액은 무색징명하여야 한다.

   ② 유리산 및 유리알칼리 : 이 품목 2g을 열탕 20㎖에 녹이고 페놀프탈레인시액 2방울 및 0.1N 황산0.2㎖를 가할 때, 무색이어야 한다. 또 다시 0.1N 수한화나트륨용액 0.4㎖를 가할 때, 적색을 나타내어야 한다.

   ③염소화합물 : 이 품목 0.5g 및 탄산칼슘 0.8g을 자제도가니에 넣고 묽은 질산 2.5㎖를 가하여 잘 섞어 100°에서 건조한 다음, 이하「안식향산」의 순도시험 ②에 따라 시험한다. 다만, 대조액을 만드는데 쓰이는 탄산칼슘의 양은 0.8g, 묽은질산의 양은 22.5㎖로 한다.

   ④황산염 : 이 품목은 0.2g을 물에 녹여 100㎖로 하고 그 40㎖에 잘 흔들어 섞으면서 묽은염산2.5㎖를 적가하여 여과하고 씻은 액을 여액에 합쳐 이를 시험용액으로 하여 황산염시험을 할 때, 그 양은 0.01N 황산 0.5㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.

   ⑤프탈산염 :「안식향산」의 순도시험에 따라 시험한다.

   ⑥비소 : 이 품목 0.25g을 물 5㎖에 녹이고 이를 시험용액으로 하여 비소시험을 할 때, 이에 적합하여야 한다.(4ppm 이하)

   ⑦중금속 : 이 품목 2g을 물 약3㎖에 녹이고 잘 흔들어 섞으면서 묽은 염산3㎖를 적가하고 페놀프탈레인시액 1방울을 가하여 액이 엷은 홍색을 나타낼 때까지 암모니아시액을 적가한 다음 묽은 초산 2㎖를 가하여 이를 시험용액으로 하여 중금속시험을 할때, 그 양은 10ppm 이하이어야 한다.

   ⑧ 산화되기 쉬운 물질 :「안식향산」의 순도시험에 따라 시험한다.

건조감량 

   이 품목을 110°에서 4시간 건조할 때, 그 감량은 1% 이하이어야 한다. 

정량법

   이 품목을 건조한 다음 약 1.5g을 정밀히 달아 300㎖ 플라스크에 넣어 에테르 75㎖ 및 메틸오렌지시액 5방울을 가하여 0.5N 염산으로 적정한다. 적정은 물층과 에테르층을 잘 흔들어 섞으면서 하고 물층에 등적색이 지속할 때를 종말점으로 한다.

              0.5N 염산 1㎖ = 72.06㎎ C7H5NaO2

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

   차광한 밀폐용기에 보관할 것.

■ 인산(Phosphoric Acid)

  H3PO4   분자량 98.00  

함    량

  이 품목은 인산(H3PO4) 75.0% 이상을 함유한다.

성    상

  이 품목은 무색투명한 시럽상의 액체로서 냄새가 없다.

확인시험

  ① 이 품목의 수용액(1→20)은 산성이다.

  ② 이 품목의 수용액(1→20)에 페놀프탈레인시액 2～3방울을 가하여 수산화나트륨시액으로 중화한 액은 확인시험법 중 인산염의 반응을 나타낸다.

순도시험

  ① 염화물 : 이 품목 1.78g을 취하여 염화물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 200ppm 이하이어야 한다.

  ② 황산염 : 이 품목 0.2g을 취하여 물에 녹여 50mL로 하여 황산염시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.01N 황산 0.6mL에 대응하는 양 이하이어야 한다. 

  ③ 질산염 : 이 품목 3.48g을 물 10mL에 녹이고 염화나트륨 5mg을 가한 다음, 인디고카르민시액 0.1mL 및 황산 10mL를 가하였을 때 나타난 청색은 5분 이내에 완전히 사라져서는 아니 된다(5ppm 이하).

    인디고카르민시액 : 인디고카르민 0.18g을 물에 녹여 100mL로 한다.

  ④ 비  소 : 이 품목 0.38g을 물 20mL에 녹이고 이를 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(2.6ppm 이하).

  ⑤ 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 4.0ppm 이하이어야 한다. 

  ⑥ 카드뮴 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  ⑦ 수  은 : 이 품목을 수은시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  ⑧ 휘발성산 : 이 품목 60.05g을 새로 끓여 식힌 물 75mL에 녹이고 증류하여 50mL로 한다. 이를 0.1N 수산화나트륨용액으로 적정할 때 중화에 소비되는 양이 0.1mL를 초과하여서는 아니 된다.

    지시약 : 페놀프탈레인시액(초산으로서 10ppm 이하)

  ⑨ 불소화물 : 이 품목 1g을 정밀히 달아 「구연산칼슘」의 순도시험 ⑧에 따라 시험한다(10ppm 이하).

정 량 법

  이 품목 1.5g을 정밀히 달아 물 25mL에 녹이고 약 15℃로 유지하면서 1N 수산화나트륨용액으로 적정한다. 지시약 : 치몰프탈레인시액 5방울). 단, 종말점은 액의 색이 엷은 청색으로 변하는 점으로 한다.

1N 수산화나트륨용액 1mL ＝ 49.00mg H3PO4

■ 젖산(Lactic Acid)

CH3CH(OH)COOH

C3H6O3 분자량90.08

성분규격

함량  

이 품목은 젖산(C3H6O3 = 90.08)으로서 40.0% 이상이고, 그 표시량의 95.0～105.0%를 함유한다.

  성상  

이 품목은 엷은 황색 또는 흑갈색의 시럽상의 액체로서 신맛이 있다.

확인시험 

① 이 품목의 수용액(1→10)은 산성이다.

② 이 품목은 확인시험법중 젖산염의 반응을 나타낸다.

순도시험  

① 구연산, 수산, 주석산 및 인산 : 이 품목을 젖산 0.8g에 대응하는 양을 취하여 물 10㎖를 가하여 녹이고 수산화칼슘시액 40㎖를 가하여 2분간 끊일 때, 탁하여서는 아니된다.

②시안화물 : 이 품목을 젖산으로서 0.8g에 대응하는 양을 취하여 물 100㎖를 가하여 녹이고 이 액 10㎖를 취하여 네슬러관에 넣고 페놀프탈레인시액 1방울을 가한 다음 수산화나트륨용액(1→10)을 액이 홍색을 나타낼 때까지 가한다.  다시 수산화나트륨용액(1→10) 1.5㎖ 및 물을 가하여 20㎖로 하고 수욕중에서 10분간 가열한다.  식힌 다음 희석한 초산(1→20)으로 중화하고 액의 홍색이 없어진 다음 다시 1방울을 가한다. 이어서 인산완충액(pH 6.8) 10㎖ 및 크로라민T시액 0.25㎖를 가하고 밀전하여 조용히 흔들어 섞고 3→5분간 방치한 다음 피리딘ㆍ피라솔론시액 15㎖ 및 물을 가하여 50㎖로 하여 약 25℃에서 30분간 방치할 때, 액은 청색을 나타내서는 아니 된다.

③비  소 : 이 품목을 젖산으로서 0.4g에 대응하는 양을 취하여 물 5㎖를 가해서 섞고 다시 물을 가해서 10㎖로 하고 이 액 5㎖를 취하여 시험용액으로 하여 비소시험을 할 때, 이에 적합하여야 한다.(4ppm 이하)

④중금속 : 이 품목을 젖산으로서 1.6g에 대응하는 양을 취하여 물 10㎖를 가하여 녹이고 페놀프탈레인시액 1방울을 가하여 액이 엷은 홍색을 나타낼 때까지 암모니아시액을 적가한 다음 묽은 초산 2㎖ 및 물을 가하여 50㎖로 한 것을 시험용액으로 하여 중금속시험을 할 때, 그 양은 10ppm 이하이어야 한다. 다만, 표준색은 납표준용액 20㎖에 묽은초산 2㎖ 및 물을 가하여 50㎖로 한 것을 사용한다.

⑤ 휘발성지방산 : 이 품목을 젖산으로서 2g에 대응하는 양을 취하여 필요하면 물을 가해서 5㎖로 한 다음 수욕상에서 가열할 때, 낙산과 같은 냄새를 발생하여서는 아니된다.

⑥ 메틸알콜 : 이 품목을 젖산으로서 4g에 대응하는 양을 취하여 물 8㎖ 및 탄산칼슘 5g을 가하고 증류하여 초류액 5㎖를 취하고 물을 가하여 100㎖로 하여 시험용액으로 한다. 시험용액 1㎖를 취하여 희석한 인산(1→20) 0.1㎖ 및 과망간산칼륨용액(1→300) 0.2㎖를 가하고 10분간 방치한 다음 무수아황산나트륨용액(1→5) 0.4㎖ 및 황산 3㎖를 가하고 다시 크로모트로프산시액 0.2㎖를 가할 때 나타나는 색은 따로 메틸알콜 1㎖에 물을 가하여 100㎖로 하고 그 중 1㎖에 물을 가하여 100㎖로 한 액 1㎖를 취하여 시험용액과 같이 처리할 때 나타나는 색보다 진하여서는 아니 된다.

강열잔물  

이 품목의 강열잔물은 1% 이하이어야 한다.

정량법    

이 품목은 약 3g을 정밀히 달아 1N 수산화나트륨용액 40㎖를 가하여 10분간 수욕상에서 가열하고 뜨거울 때 1N 황산으로 과잉의 알칼리를 적정한다(지시약 : 페놀프탈레인시액 1～2방울).  따로 같은 방법으로 공시험을 한다.

1N 수산화나트륨용액 1㎖ = 90.08mg G3H6O3

제조방법의 기준

본 품은 원제자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다. 

■ 초산(Acetic Acid)

CH3COOH

C2H4O2 분자량60.05

성분규격

함량

본 품은 초산(C2H4O2) 29.0～31.0%를 함유한다. 

성상

이 품목은 무색투명한 액체로서 특이한 자극적인 냄새와 신맛이 있다. 

확인시험

① 이 품목은 강산성이다. 

② 이 품목은 확인시험법 중 초산염의 반응을 나타낸다. 

순도시험

①비 소 : 이 품목 0.25g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에틸알콜용액(1→50) 10㎖를 넣고 에틸알콜에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다.  만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다.  식힌 다음 잔류물에 염산 3㎖를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험을 할 때, 이에 적합하여야 한다.(4ppm 이하)

②중금속 : 이 품목 3㎖를 시험용액으로 하여 중금속시험을 할 때, 그 양은 10ppm 이하이어야 한다. 다만, 표준색은 납표준용액 3㎖를 사용한다. 

③ 산화되기 쉬운 물질 : 이 품목 20㎖에 0.1N 과망간산칼륨용액 0.3㎖를 가할 때, 시액의 색은 30분 이내에 없어져서는 안 된다. 

④ 증발잔류물 : 「빙초산」의 순도시험 ⑤에 따라 시험한다. 

정량법

본 품 약 3g을 정밀히 칭량하여 물 15㎖를 가하여 1N 수산화나트륨용액으로 적정한다.(지시약 : 페놀프탈레인시액 2방울)

1N 수산화나트륨용액 1㎖ = 60.05㎎ C2H4O

■ 푸말산(Fumaric Acid)

C4H4O4 분자량116.08

성분규격

함량

본 품은 정량할 경우, 푸말산(C4H4O4) 99.0% 이상을 포함한다.

성상

본 품은 백색의 결정성 분말로, 냄새는 없고 특이한 신맛이 난다.

확인시험

① 본 품은 가열할 경우, 승화한다.

② 본 품은 105℃에서 3시간 건조한 후 측정할 경우, 융점이 287～302℃(분해)이다. 

③본 품 0.5g에 물 10㎖를 첨가, 끓여서 녹이고, 뜨거울 때 브롬시액 2～3 방울을 첨가하면 용액의 색이 사라진다.

④본 품 50mg을 시험관에 넣고 레조르신 2～3mg 및 황산 1㎖를 첨가하여 흔들어 섞고 120～130℃에서 5분간 가열하여 냉각시킨 후 물을 첨가하여 5㎖로 만든다. 냉각하면서 이 용액에 수산화나트륨용액(2→7)을 몇 방울 더 첨가하여 알카리성으로 만들고, 다시 물을 첨가하여 10㎖로 만들면 자외선하에서 녹청색의 형광색을 발한다.

순도시험

①용액상태 : 본 품 0.5g을 취해 수산화나트륨용액(1→25) 10㎖를 첨가하여 녹인 용액은 무색이고 투명해야 한다.

②황산염 : 본 품 1.0g을 취해 물 30㎖를 첨가하여 흔들어 섞고 페놀프탈레인시액 1방울을 첨가하고 용액이 약간 홍색을 띨 때까지 암모니아시액을 몇 방울 더 첨가한다. 이것을 검사액으로 하여 황산염 시험을 할 경우, 그 양은 0.01N 황산 0.2㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(0.01% 이하)

③중금속 : 본 품 2.0g을 취해 물 30㎖를 첨가하여 흔들어 섞고 페놀프탈레인시액 1방울을 첨가하고 액이 약간 홍색을 띨 때까지 암모니아시액을 몇 방울 더 첨가한다. 여기에 묽은 초산(1→20) 2㎖ 및 물을 첨가하여 50㎖로 만든다. 이것을 검사액으로 하여 중금속 시험을 할 경우, 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(10ppm 이하)

④비소 : 본 품 0.25g을 취해 물 10㎖를 첨가, 가열하여 녹이고 냉각한 후, 이것을 검사액으로 하여 비소 시험을 할 경우, 이에 적합해야 한다. 단, 산성염화제일주석시액은 10㎖, 비소분석용 아연은 3g을 이용한다.(4 ppm 이하)

강열잔물 

0.05% 이하(5g)

정량법

본 품 약 1g을 정밀하게 측량, 물을 첨가하고 녹여서 정확하게 250㎖로 만든다. 이 용액 25㎖를 정확하게 측량하여 0.1N 수산화나트륨액으로 적정한다.(지시약 페놀프탈레인시액 2방울)

  0.1N 수산화나트륨액 1㎖ = 5.804mg C4H4O4

보존방법의 기준

밀폐용기에 보존할 것.

■ 호박산(Succinic Acid)

CH2-COOH

｜

CH2-COOH

C4H6O4 분자량118.09

성분규격

함량  

이 품목은 호박산(C4H6O4) 99.0% 이상을 함유한다.

성상  

이 품목은 무～백색의 결정성분말로서 냄새가 없으나 특이한 신맛을 가지고 있다.

확인시험  

이 품목의 수용액(1→20) 5㎖를 암모니아시액으로 pH를 약 7.0으로 하고 이에 염화제이철시액 2～3방울을 가하면 갈색의 침전이 생긴다.

순도시험  

① 융  점 : 이 품목의 융점은 185～190℃이어야 한다.

② 중금속 : 이 품목은 2g을 물 40㎖에 녹여 페놀프탈레인시액 1방울을 가하여 액이 엷은 홍색을 나타낼 때까지 암모니아시액을 적가한 다음 묽은초산 2㎖를 가하여 이를 시험용액으로하여 중금속시험을 할 때, 그 양은 20ppm 이하이어야 한다.

③ 산화되기 쉬운 물질 : 이 품목 1g에 물 25㎖ 및 묽은 황산 25㎖를 가하여 녹이고 이를 20℃로 유지하면서 0.1N 과망간산칼륨용액 4㎖를 가할 때, 시액의 색은 3분이내에 없어져서는 아니된다.

④비  소 : 이 품목 0.25g에 물 5㎖를 가하여 이를 시험용액으로 하여 비소시험을 할 때, 이에 적합하여야 한다.(4ppm 이하)

강열잔물 

이 품목의 강열잔물은 0.025% 이하이어야 한다.

정량법

이 품목 약 1g을 정밀히 달아 물에 녹여 250㎖로 하고 그 중 25㎖를 취하여 0.1N 수산화나트륨용액으로 적정한다.(지시약 : 페놀프탈레인시액 2～3방울)

0.1N 수산화나트륨용액 1㎖ = 5.904mg C4H6O4

제조방법의 기준

본 품은 원제자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다. 

 나. 항응고제(anti-caking agent; 고결방지제) : 흡습성 사료의 저장 중에 단단한 고체 덩어리가 생기는 것을 막기 위하여 쓰는 물질

■ 실리카(Silica flour; silicon dioxide, 이산화규소)

  SiO2    분자량 60.08  

정    의  이산화규소는 X?ray회절법으로 관찰할 때 비결정성 양상을 띠는 무정형물질로서 증기상 가수분해공정에 의해 제조되는 연소(콜로이달)실리카와 습식방법에 의한 침강실리카, 실리카겔 또는 수화실리카이다.

함    량  이 품목은 105℃에서 2시간 건조한 후 이를 900～1,000℃에서 1시간 강열한 다음 정량할 때, 이산화규소(SiO2 ＝ 60.08)가 연소실리카는 99.0% 이상, 침강실리카, 실리카겔 및 수화실리카는 94.0% 이상을 함유한다.

성    상  이 품목은 백색의 분말, 입자 또는 콜로이드상 액체로서 냄새가 없다.

확인시험  (1) 이 품목 5mg을 백금도가니에 취하고 무수탄산칼륨 200mg을 가하고 버너의 붉은 불꽃상에서 10분간 작열시키고 식힌 다음 새로 증류한 물 2mL에 녹이고 필요하면 가온한 액에 암모늄몰리브덴산시액 2mL를 서서히 가할 때, 진한 황색을 나타낸다.

  (2) 확인시험 (1)의 용액 1방울을 여지 위에 떨어뜨리고 용매를 유거시킨 다음 이에 ｏ-톨리딘포화빙초산용액 1방울을 암모니아가스를 쪼이면 녹청색의 반점이 생긴다.

순도시험  (1) 비  소 : 순도시험 (2)의 시험용액 2.5mL를 취하고, 이를 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 4ppm 이하이어야 한다.

  (2) 납 : 이 품목을 건조한 다음 10.0g을 정밀히 달아 비이커에 넣고 0.5N 염산 50mL를 가해 주고 시계접시를 덮은 후 15분간 끓여준다. 식힌 다음 100～150mL 원심분리튜브에 옮기고 불용성물질이 가라앉을 때까지 10～15분 원심분리한 다음 상등액을 여과지(Whatman No. 4 또는 이와 동등한 것)로 여과한 후 여액을 100mL 플라스크에 옮긴다. 잔류물에 뜨거운 물 10～15mL로 가하고 섞어준 다음 원심분리하고 상등액을 여과하여 여액에 합한다. 이 조작을 2번 더 반복한 다음 여액에 합하고 물을 가하여 100mL로 한 액을 시험용액으로 하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 5.0ppm 이하이어야 한다.

  (3) 수  은 : 이 품목을 건조한 다음 수은시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  (4) 가용성이온화염류 : 이 품목의 분말은 105℃에서 2시간 건조한 후 5g을 정밀히 달아 물 150mL를 가하고 고속 혼합기로 5분간 혼합한다. 이를 흡인여과하고 물 100mL로 여과기와 잔류물을 씻어 이를 먼저의 여액과 합치고 물을 가하여 전량을 250mL로 한다. 이를 시험용액으로 하여 적당한 전도율 연결장치를 사용하여 전도율을 측정할 때, 이의 전도율은 물 250mL에 무수아황산나트륨 250mg을 녹인 액의 전도율보다 높아서는 아니 된다.

건조감량  이 품목을 105℃에서 2시간 건조할 때, 그 감량은 연소실리카는 2.5% 이하, 침강실리카 및 실리카겔은 7% 이하, 수화실리카는 70% 이하이어야 한다.

강열감량  이 품목은 105℃에서 2시간 건조한 후 1g을 정밀히 달아 900～1,000℃에서 1시간 강열할 때, 그 감량은 연소실리카는 2% 이하, 침강실리카, 실리카겔 및 수화실리카는 8.5% 이하이어야 한다.

정 량 법  이 품목 약 1g을 미리 무게를 달은 백금도가니에 취하고 105℃에서 2시간 건조하고 900～1,000℃에서 1시간 강열한 후 데시케이타에서 냉각시켜 무게를 달아 검체의 무게(W1)를 구한다. 잔류물을 에탄올 3～4방울로 적시고 황산 2방울을 가한 다음 잔류물이 잠길 정도로 불화수소산을 가한다. 95～105℃의 열판에서 증발시키고 다시 불화수소산 5mL를 가하여 기벽을 씻고 다시 증발시킨다. 잔류물을 550℃에서 1시간 가열하고 서서히 온도를 올려 1,000℃에서 30분 강열한 후 데시케이타에서 냉각시켜 무게를 달아 잔류물의 양(W2)을 구한 후 다음 계산식에 따라 이산화규소의 양을 구한다.

  이산화규소의 양(%) =  W1 - W2   × 100  

                      ──────        

                        W1                

■ 스테아린산칼슘(Calcium Stearate)

정    의  이 품목은 스테아린산 및 팔미틴산의 칼슘염의 혼합물이다.

함    량  이 품목을 건조물로 환산한 것은 산화칼슘(CaO)으로서 9.0～10.5%를 함유한다.

성    상  이 품목은 백색의 가벼운 분말로서 냄새가 없거나, 약간 특이한 냄새가 있다.

확인시험  이 품목 1g에 물 25mL 및 염산 5mL 혼합물을 가하여 가열하고 식힐 때, 상층에는 지방산층이 뜬다. 하층의 수용액을 증발건고한 다음 이를 물에 녹인 것은 확인시험법 중 칼슘염의 반응을 나타낸다.

순도시험  (1) 유리지방산 : 이 품목 약 7g을 정밀히 취하여 250mL 삼각플라스크에 넣고 따뜻한 중화알콜 75mL 및 페놀프탈레인시액 2mL를 가한 다음 0.25N 수산화나트륨용액으로 30초간 지속하는 홍색을 나타낼 때까지 적정하여 다음 계산식에 따라 스테아린산으로서 유리지방산을 구할 때, 그 양은 3.0% 이하이어야 한다.

   유리지방산 =   V × 0.25 × 28.45  

                ───────────

                  검체의 채취량(g)    

               V : 0.25N 수산화나트륨용액의 소비량(mL)       

  (2) 비  소 : 이 품목 0.25g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에탄올용액(1→50) 10mL를 넣고 에탄올에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3mL를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 4ppm 이하이어야 한다.

  (3) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  (4) 불검화물 : 이 품목 5g을 정밀히 달아 250mL 환저플라스크에 취하고 0.5N 수산화칼륨용액 50mL을 가해주고 환류냉각기를 부착한 다음 조용히 1시간 끓인다. 가열을 멈춘 다음 물 100mL를 냉각기를 통해 가하고 흔든다. 식힌 다음 플라스크의 내용물을 분액여두에 옮기고 플라스크는 여러번(전부 100mL가량) 에테르로 씻어 분액여두에 합하여 1분간 격렬히 진탕한 후 방치하여 두 층으로 완전히 분리시킨다. 상층액인 에테르층을 500mL 분액여두에 모은 다음 물층을 에테르 100mL씩으로 2번 더 추출한 다음 추출액을 처음의 추출액과 합치고 이를 10% 에탄올 25mL로 씻어 주고 물층이 페놀프탈레인시액으로 정색하지 않을 때까지 이 조작을 반복한 후 물층을 완전히 제거한다. 에테르추출액은 미리 무게를 달아둔 비이커에 옮기고 에테르 10mL를 사용하여 분액여두를 씻은 다음 비이커에 합한다. 증기욕상에서 비이커의 에테르를 증발건고한 다음 103℃, 15분단위로 항량이 될 때까지 건조(3번 평량후에도 항량이 되지 않으면 오염된 것일 수 있음)하고 데시케이터에서 방냉하여 잔류물량을 평량한다. 이어서 잔류물을 에테르 4mL로 녹이고 미리 수산화나트륨으로 중화(지시약 : 페놀프탈레인시액을)시킨 에탄올 20mL를 가하여 0.1N 알콜성수산화칼륨용액으로 엷은 홍색이 지속될 때까지 적정하고 다음 계산식에 따라 불검화물 값을 구할 때, 그 양은 2.0% 이하이어야 한다.

   불검화물(%) =   [ 잔류물량(g) - 0.281 × V × 0.1]    × 100   

                ────────────────────          

                           검체의 채취량(g)                       

       V : 0.1N 수산화칼륨용액의 소비량(mL)    

건조감량  이 품목을 105℃에서 3시간 건조할 때, 그 감량은 4.0% 이하이어야 한다.

정 량 법  이 품목 약 1.2g을 정밀히 달아 0.1N 염산 50mL를 가하고 때때로 물을 보충하면서 30분간 끓인다. 이를 식힌 후 여과하여 여액이 산성이 나타나지 않을 때까지 씻고 씻은 액을 여액과 합하여 1N 수산화나트륨용액으로 중화한 다음 이를 시험용액으로 하여 0.05M 이.디.티이.에이.용액 30mL, 1N 수산화나트륨용액 15mL 및 히드록시나프톨블루(C20H12N2O11S3Na2)지시약 0.3g을 가하고 액의 색이 청색이 될 때까지 0.05M 이.디.티이.에이.용액으로 적정한다.

0.05M 이.디.티이.에이.용액 1mL = 2.804mg CaO

■ 염화주석(Tin chloride)

정    의

염소와 주석의 화합물로서 염화제일주석(stannous chloride)을 말한다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 염화제일주석(SnCl2)

기    타국내는 세부 기준이 설정되어 있지 않다. 미국 AAFCO 규정에서는 주석(tin)으로서 0.0015%를 초과해서는 안 된다.

■ 탤크(Talc)

정    의  이 품목은 천연의 함수규산마그네슘을 정선한 것이며, 때로는 소량의 규산알루미늄을 함유한다.

성    상  이 품목은 백～회백색의 미세한 결정성분말로서, 미끄러운 촉감을 가지며 냄새는 없다.

확인시험  이 품목 0.2g에 무수탄산나트륨 0.9g 및 무수탄산칼륨 1.3g을 섞어 백금도가니 또는 니켈도가니에 넣고 가열하여 완전히 녹힌다. 식힌 다음 열탕 약 5mL로 비이커에 옮겨 거품이 발생하지 아니할 때까지 염산을 가한 다음 다시 염산 10mL를 더 넣고 수욕상에서 증발건고한다. 식힌 다음 물 20mL를 가하여 끓이고 여과하면 겔상의 물질이 남는다. 또 여액은 확인시험법 중 마그네슘염의 반응을 나타낸다.

순도시험  (1) 물가용물 및 액성 : 이 품목 10g에 물 100mL를 가하여 증발하는 물은 보충하면서 때때로 흔들어 섞으면서 2시간 가열하고 식힌 다음 밀리포아여과기를 사용하여 여과한다. 여액이 탁할 때는 동일여과기를 사용하여 여과하고 비이커 및 여과기위의 잔류물은 물로 씻어주고 세액을 여액에 합한 다음 물을 가하여 100mL로 한 액을 시험용액으로 할 때, 이 액의 pH는 7.5～9.5이어야 한다. 시험용액 50mL를 취하여 증발건고시킨 다음 잔류물을 105℃에서 2시간 건조할 때, 그 양은 10mg 이하이어야 한다.

  (2) 염산가용물 : 이 품목 1g에 묽은염산 20mL를 가하여 약 50℃에서 15분간 저어 섞으면서 가온하고 식힌 다음 여과한다. 비이커 및 여과지위의 잔류물은 소량의 물로 씻어 주고 세액은 여액에 합한 다음 물을 가하여 20mL로 한다. 이 액 10mL를 취하여 묽은황산 1mL를 가하여 증발건고하고 다시 항량이 될 때까지 550℃에서 강열할 때, 그 잔류물은 10mg 이하이어야 한다.

  (3) 비소 : 이 품목을 비소시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 4.0ppm 이하이어야 한다.

  (4) 수용성 철 : (1)의 시험용액 20mL를 취하여 염산으로 약산성으로 하고, 페로시안화칼륨시액 1방울을 가할 때, 청색을 나타내어서는 아니 된다.

  (5) 납 : 이 품목 약 5g을 정밀히 달아 묽은염산 40mL 및 물 50mL를 가하여 잘 흔들어 섞은 다음 조용히 끓여 주고 식힌 다음 여과한다. 잔류물은 물로 씻어주고 세액은 여액에 합한 다음 물을 가하여 250mL로 한다. 다시 이액 125mL를 취하여 수욕상에서 증발건고하고 잔류물에 염산(1→10)을 가하여 10mL로 한 액을 시험용액으로 하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.0ppm 이하이어야 한다.

  (6) 석면 : 다음의 (가) 또는 (나)의 방법으로 시험할 때, 석면이 확인되어서는 아니 된다. 만일 (가) 또는 (나)에서 석면이 확인되는 경우에는 추가로 (다)의 방법에 따라 시험할 때, 석면이 검출되어서는 아니 된다.

    (가) 이 품목을 적외부흡수스펙트럼측정법의 브롬화칼륨정제법에 따라 측정할 때, 파수 600～650cm-1(사문석계 석면) 또는 757～759cm-1(각섬석계 석면)에서 흡수를 확인한다. 만일 파수 757～759cm-1에서 흡수피크가 있을 경우에는 검체 일정량을 850℃에서 30분 이상 강열하고 식힌 다음 다시 적외선흡수스펙트럼을 측정하여 각섬석계 석면 중 트레몰라이트를 나타내는 파수 757～759cm-1에서 흡수피크를 확인한다.

    (나) 이 품목을 분말 X-선 회절장치를 사용하여 다음의 조작조건으로 분말회절을 측정할 때, 회절각 2θ가 10.4～10.6°(각섬석계 석면) 및 24.2～24.4°와 12.0～12.2°(사문석계 백석면)의 회절피크를 확인한다.

       조작조건

          X선광원 : Cu Kα 모노크로미터

          관전류 및 관전압 : 24～30mA, 40kV 

          입 사 각 : 1°

          측 정 각 : 0.2°

          주사속도 : 0.1°/min 

          주사범위(회절각 2θ) : 10～13°, 24～26°

    (다) 이 품목을 광학현미경을 사용하여 석면의 형태와 색상 등을 관찰하고, 다음의 특성을 나타내는 경우 석면이 검출된 것으로 한다.

       ① 섬유 길이와 폭의 비율은 20 : 1～100 : 1 범위 내에 있거나 또는 섬유 길이가 5μm 보다 긴 경우에는 길이와 폭의 비율이 100 : 1 이상이다.

       ② 매우 가는 세(細)섬유로 갈라질 수 있다.

       ③ 아래의 4개 특징 중 2개 또는 그 이상을 나타낸다.

        ㉠ 섬유묶음 안에 평행한 섬유들이 있을 경우

        ㉡ 닳거나 끝이 해진 섬유묶음이 있을 경우

        ㉢ 가는 바늘 형태의 섬유들이 있을 경우

        ㉣ 각각의 섬유들이 헝클어진 덩어리이거나 곡선형으로 굽은 형태를 나타낼 경우

건조감량  이 품목을 105℃에서 1시간 건조할 때, 그 감량은 0.5% 이하이어야 한다.

강열감량  이 품목의 강열감량은 6% 이하이어야 한다.

■ 화이트카본(White carbon; white carbon black)

정    의

규산나트륨(sodium silicate) 수용액에 강산을 가하여 생기는 침전을 건조하거나 사염화규소(SiCl4)를 태워서 얻은 백색 분말이다. 화이트 카본블랙이라고도 한다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 실리카(SiO2)

기    타CAS No. 10279-57-9

■ 활성탄(Active Carbon)

정    의

  이 품목은 톱밥, 목편, 야자나무껍질의 식물성섬유질이나 아탄 또는 석유 등의 함탄소물질을 탄화시킨 다음 활성화 시킨 것이다.

성    상

  이 품목은 흑색의 분말 또는 알맹이로 냄새와 맛이 없다.

확인시험

  ① 이 품목을 분말은 그대로, 알맹이는 잘 분쇄하여 0.5g을 시험관에 넣고 시험관구로 송풍하면서 직화로 가열하면 불이 발생하지 않고 연소하여 발생하는 가스를 수산화칼륨시액중에 통하면 백탁이 생긴다.

  ② 이 품목을 분말은 그대로, 알맹이는 잘 분쇄하여 0.1g에 묽은메틸렌블루시액 10mL 및 묽은염산 2방울을 가하고 잘 흔들어 섞은 다음 정량용 여과지(5종C)로 여과한 액은 무색이어야 한다.

순도시험  

  시험용액의 조제 : 이 품목을 분말은 그대로, 알맹이는 잘 분쇄하여 110～120℃에서 3시간 건조한 다음 4g을 취하여 여기에 질산(1→100) 0.1mL를 가한 물 180mL를 가하고 약하게 끓을 정도로 약 10분간 가열한다. 식힌 다음 물을 가하여 200mL로 하고 정량용여과지(5종C)로 여과한다. 처음 여액 약 30mL는 버리고 나머지 여액을 시험용액으로 하여 다음 ①～⑤의 시험을 한다.

  ① 염화물 : 시험용액 1mL를 취하여 염화물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.01N 염산 0.3mL에 대응하는 양 이하이어야 한다.

  ② 황산염 : 시험용액 2.5mL를 취하여 황산염시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.01N 황산 0.5mL에 대응하는 양 이하이어야 한다.

  ③ 비  소 : 시험용액 12.5mL를 취하여 수욕상에서 증발건고하고 물 5mL, 황산 1mL 및 아황산 10mL를 가하여 다시 수욕상에서 약 2mL로 될 때까지 증발농축한다. 이에 물을 가하여 5mL로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하).

  ④ 납 : 시험용액을 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 5.0ppm 이하이어야 한다.

  ⑤ 아  연 : 시험용액을 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 25ppm 이하이어야 한다.

  ⑥ 시안화합물 : 이 품목 5g을 정밀히 달아 플라스크에 넣고 물 50mL와 주석산 2g을 가한 다음 증류장치를 연결한다. 수기에는 1N 수산화나트륨용액 2mL와 물 10mL를 가해주고 냉각기 끝이 이 액에 잠기도록 한 다음 수기를 얼음으로 식히면서 증류시켜 유액 25mL를 받는다. 유액에 물을 가하여 50mL로 하고 이 액 25mL에 황산제일철용액(1→20) 1mL를 가하여 끓을 때까지 가열하고 식힌 다음 여과하고 여액에 염산 1mL 및 묽은염화제이철시액 0.5mL를 가할 때, 청색이 나타나서는 아니 된다.

  ⑦ 방향족탄화수소 : 이 품목 1g에 시클로헥산 12mL를 가해주고 환류냉각기를 부착한 다음 수욕상에서 2시간 가열하고 식힌 액을 시험용액으로 한다. 시험용액을 네슬러관에 취하여 자외선을 조사하여 관찰할 때, 이 액은 황산퀴닌 0.1mg을 0.1N 황산 1,000mL에 녹인 액 12mL를 시험용액과 동일하게 처리하여 얻어진 액의 색보다 진하여서는 아니 된다.

 다. 항산화제(Antioxidants) : 사료의 저장기간 중 영양소의 산화를 방지하고 나아가서 사료의 기호성을 높이기 위해 산화방지용으로 사료에 첨가하는 물질

■ 레스베라트롤(Resveratrol)

정    의

식물이 만들어내는 파이토알렉신(phytoalexin)으로서 폴리페놀계 항산화물질이다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 레스베라트롤

기    타 : 포도, 오디, 땅콩 종자와 뿌리 등에 많이 있다고 알려져 있다.

■ 메타중아황산나트륨(sodium metabisulfite, sodium pyrosulfite)

Na2S2O5분자량: 190.11

성분규격

 함량  

  이 품목은 메타중아황산나트륨(Na2S2O5) 95.0% 이상을 함유한다.

 성상  

  이 품목은 백색의 결정 또는 결정성분말로서 이산화황의 냄새를 가지고 있다.

확인시험, 순도시험, 정량법  

  「식품첨가물의 기준 및 규격」 내 4. 품목별 성분 규격의 ‘메타중아황산나트륨’ 확인시험, 순도시험, 정량법을 따른다. 

■ 몰식자산(Gallic Acid)

정   의  이 품목은 옻나무과 옻나무(Rhus javanica L.)에 발생하는 오배자, 참나무과(Quercus infectoria oliv)에 발생하는 몰식자를 물, 에탄올 또는 유기용제로 추출한 탄닌을 알칼리 또는 효소(탄나아제)로 가수분해하여 얻어지는 것으로서 성분은 몰식자산이다.

성    상  이 품목은 백～미황색의 바늘모양 결정 또는 결정성 분말로서 냄새가 없고 맛은 수렴성으로 약간의 산미가 있다.

확인시험  이 품목 1g에 물 20mL를 가하여 약 1분간 진탕하여 섞은 후 여과한 여액에 염화제이철용액(1→10) 2～3방울을 가할 때, 청흑색의 침전이 생긴다.

순도시험  (1) 용  상 : 이 품목 1g을 20mL에 녹일 때, 그 액은 미황색으로서 탁도는 거의 징명 이하이어야 한다.

  (2) 탄닌산 : 이 품목 1g에 물 20mL를 가하여 진탕 혼합한 후 여과하여 여액에 따뜻한 젤라틴 용액(1%) 5～6방울을 가할 때, 탁하여서는 아니 된다.

  (3) 비  소 : 이 품목 0.25g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에탄올용액(1→50) 10mL를 넣고 에탄올에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3mL를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하).

  (4) 납：이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.0ppm 이하이어야 한다.

건조감량  이 품목을 105℃에서 2시간 건조할 때, 그 감량은 10% 이하이어야 한다.

강열잔류물  이 품목의 강열잔류물은 0.1% 이하이어야 한다.

■ 몰식자산프로필(프로필갈레이트, n-Propyl Gallate, Gallic Acid Propyl Ester)

C10H12O5 분자량212.21

성분규격

함량  

이 품목은 건조한 다음 정량할 때, 몰식자산프로필(C10H12O5) 98.0～102.0%를 함유한다.

성상  

이 품목은 백～엷은 황갈색의 결정성분말로서 냄새가 없으며 조금 쓴맛을 가지고 있다.

확인시험

① 이 품목 0.5ｇ을 수산화나트륨시액 10㎖에 녹이고 이를 증류하여 초류액 약 4㎖를 취하면 이액은 징명하며 이를 가열하면 프로필알콜냄새가 난다.

② 이 품목 0.1ｇ을 알콜 5㎖에 녹이고 묽은염화제이철시액 1방울을 가하면 자색을 나타낸다.

순도시험

① 융 점 : 이 품목을 105℃에서 2시간 건조할 때, 그 융점은 146～150℃이여야 한다.

② 용 상 : 이 품목은 0.5ｇ에 알콜 10㎖에 녹일 때, 그 액의 색은 비색표준용액 C보다 진하여서는 아니된다.

③염화물 : 이 품목 1.5ｇ에 물 75㎖를 가하여 약 70℃에서 5분간 가온한 다음 약 20℃로 식히고 여과하여 여액 25㎖에 묽은질산 6㎖를 가하고 이를 시험용액으로하여 염화물시험을 할 때, 이 양은 0.01N 염산 0.4㎖에 대응하는 양 이하이여야 한다.

④황산염 : 위 ⑶의 여액 25㎖에 묽은염산 1㎖를 가하여 이를 시험용액으로 하여 황산염시험을 할 때, 그 양은 0.01N 황산 0.4㎖에 대응하는 양 이하이여야 한다.

⑤중금속 : 강열잔물 시험에서 얻은 잔류물에 염산 1㎖ 및 질산 0.2㎖를 가하여 수욕상에서 증발건고하고 이에 묽은염산 1㎖ 및 물15㎖를 가하여 가열하여 녹이고 식힌 다음 페놀프탈레인시액 1방울을 가하여 액이 엷으 홍색을 나타낼 때까지 암모니아시액을 적가한 다음 묽은초산 2㎖를 가하여 필요하면 여과하고 다시 물을 가하여 50㎖로 하고 황화나트륨시액 3방울을 가하여 5분간 방치할 때, 그 액의 색은 납표준용액 4㎖에 묽은초산 2㎖ 및 물을 가하여 50㎖로 하고 황화나트륨시액 3방울을 가하여 5분간 방치한 액의 색보다 진하여서는 아니된다.(10ppm 이하)

건조감량 

이 품목을 105℃에서 2시간 건조할 때, 그 감량은 1.5% 이하이어야 한다.

강열잔물 

이 품목1ｇ을 취하여 강열잔물 시험을 할 때, 그 양은 0.1% 이하이어야 한다.

정량법 

미리 유리여과기(1G4)를 110℃에서 30분간 건조하고 데시케이타중에서 방냉한 후 무게를 정밀히 달아 둔다. 이 품목을 건조한 다음 약 0.2ｇ을 정밀히 달아 물 150㎖를 가하여 끓인다. 이를 강하게 흔들어 섞어주면서 질산비스마스시액 50㎖를 가하고 다시 수분간 흔들어 섞고 침전을 앞의 유리여과기로 여과하고 얼음물로 식힌 희석한 질산(1→300) 5㎖씩으로 2회 씻는다. 이어서 청색 리트머스지가 적색을 나타내지 않을 때까지 얼음물로 씻은 후 110℃에서 3시간 건조하고 데시케이터 중에서 방냉한 후 다음 식에 따라 함량을 구한다.

몰식자산프로필(C10H12O5)의 함량(%) = ×100

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

■ 부틸하이드록시아니솔(Butylhydroxyanisol(BHA))

C11H16O2 분자량180.25

성분규격

본 품은 정량할 때, 부틸하이드록시아니솔(C11H16O2) 99.0%이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 백색 또는 약간의 황갈색을 띤 과립, 덩어리 혹은 분말으로서 약간의 특이한 냄새가 나고, 자극성의 맛을 갖고 있다.

확인시험

①본 품의 에탄올 용액(1→100) 2～3㎖에 붕사용액(1→50) 2～3방울 및 2,6-디브롬키논클로르이미드의 소결정을 넣어 흔들어 섞을 때, 액은 청남색을 나타낸다.

②본 품의 에탄올용액(1→30) 1㎖에 희석염화제2철 시액 3～4방울을 넣으면 색깔이 나타나지 않지만, 여기에 α-α`-디피리딜의 소결정을 넣으면 액은 적색을 나타낸다. 단 희석염과 제 2철 시액은 공시험에서 등색하지 않는 것을 사용한다.

순도시험

① 융점 : 본 품의 융점은 62-65℃이어야 한다.

②용액상 : 본 품 0.5g에 에탄올 10㎖를 넣어 녹일 때, 그 액은 무색으로서 투명하여야 한다. 

③황산염 : 본 품 0.5g을 취하여 아세톤 35㎖를 넣어 녹이고, 묽은 염산 1㎖ 및 물을 넣어 50㎖로 한다. 이것을 검액으로 하여 황산염의 시험할 때, 그 탁도는 0.01N 황산 0.2㎖에 아세톤 35㎖, 묽은염산 1㎖ 및 물을 넣어 50㎖로 하고 이하 시료의 경우와 같은 방법으로 조작할 때 나타나는 탁도 이하이어야 한다.(0.019% 이하)

④중금속 : 본 품 0.5g을 취하여 아세톤 35㎖를 넣고 녹여, 묽은 초산 2㎖ 및 물을 넣어 50㎖로 한다. 이것을 검액으로 하여 중금속의 시험할 때, 이 액에서 나타나는 색은 납표준액 2.0㎖에 아세톤 35㎖, 묽은 초산 2㎖ 및 물을 넣어 50㎖로 하여 이하 시료의 경우와 같은 방법으로 조작할 때 나타나는 색보다 짙어서는 안 된다.(40ppm 이하)

⑤비소 : 본 품 1.0g을 취하여 비소시험법 제 3법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다.(2pppm 이하)

⑥파라하이드록시아니솔 : 본 품 1.0g을 취하여, 에터ㆍ석유벤젠 혼합액(1:1) 20㎖를 넣어 녹인다. 여기에 물 10㎖ 및 수산화나트륨 시액 1㎖를 넣고, 잘 흔들어 섞은 후, 정치하고 상하 두 층 중 하층을 취한다. 여기에 에터ㆍ석유 벤젠혼합액(1:1) 20㎖를 넣고 잘 흔들어 섞은 후 정치하고, 하층을 취하여 물을 넣어 500㎖로 한다. 이 액 1㎖를 네슬러관에 취하여 수산화나트륨 시액 2㎖, 붕산용액(3→100) 5㎖ 및 물을 가하여 30㎖로 한다. 여기에 4-아미노안티피린용액(1→1,000) 5㎖을 가하여 흔들어 섞은 후, 페리시안화 칼륨 용액(1→100) 1㎖을 가하여 흔들어 섞고, 여기에 물을 넣어 50㎖로 하고 15분간 방치할 때 그 액의 색은 염화코발트색의 비교원액 0.6㎖에 물을 넣어 50㎖로 한 액의 색보다 짙어서는 안 된다.(약 0.5%이하)

수분

0.30%이하 (직접 적정)

강열잔류물

0.05%이하 (2g)

정량법

본 품 약 0.3g을 정밀하게 칭량하여 아세톤 50㎖를 가하여 녹이고, 물 50㎖ 및 묽은 황산 20㎖를 넣고, 0.1N 황산제2세륨암모늄액으로 적정한다.(지시약 o-페난토로린 시액 0.2㎖) 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다.

0.1N 황산제2세리움암모늄액 1㎖ = 9.012㎎ C11H16O2

보존방법의 기준

차광한 밀폐용기에 보존할 것.

■ 부틸하이드록시톨루엔(Butylhydroxytoluene(BHT))

C15H24O 분자량220.36

성분규격

함량

본 품은 정량할 때 부틸하이드록시톨루엔(2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol = C15H24O) 98.5%이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 무색의 결정 또는 백색의 결정성분말 또는 덩어리로서 냄새는 없거나 또는 약간의 특이한 냄새를 가지며 맛은 없다.

② 본 품은 아세톤에 매우 녹기 쉽고, 에탄올에 녹기 쉬우며, 물에는 거의 녹지 않는다.

확인시험

① 본 품 5㎎에 5-니트로소-8-옥시키노린의 황산용액(1→100) 1～2방울을 넣을 때, 녹으면서 황색을 나타내고 다음에는 적갈색으로 변한다.

②본 품의 에탄올 용액(1→30) 1㎖에 희석염화 제2철 시액 3-4방울을 넣을 때 액은 색깔을 띠지 않지만, 여기에 α, α`-디피리딜의 소결정을 넣으면 액은 적색을 띤다. 단 묽은 염화제2철 시액은 공시험에서 등색하지 않는 것을 이용한다.

순도시험

① 융점 : 본 품의 융점은 69.5-71.5℃이어야 한다.

② 응고점 : 본 품의 응고점은 69.0℃이상이어야 한다.

③ 용액상 : 본 품 1.0g에 에탄올 10㎖를 넣어 녹일 때, 그 액은 무색으로서 투명하여야 한다.

④ 황산염 : 본 품 0.5g을 취하여 물 30㎖를 넣고 때때로 흔들어 섞으며서 수욕중에서 5분간 가열하여 냉각 후 여과하여 희석염산 1㎖ 및 물을 넣어 50㎖로 하고 이것을 검액으로서 황산염의 시험할 때 그 양은 0.01N 황산의 0.2㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다. (0.019%이하)

⑤ 중금속 : 본 품 0.5g을 취하여 아세톤 35㎖를 넣어 녹이고 희석초산 2㎖ 및 물을 넣어 50㎖로 하고, 황화나트륨 시액 2방울을 넣을 때, 그 액이 띠는 색은 아세톤 35㎖에 납표준액 2㎖, 묽은 초산 2㎖ 및 물을 넣어 50㎖로 하여 황화나트륨시액 2방울을 넣은 액의 색보다 진해서는 안 된다.(40ppm 이하)

⑥비소 : 본 품 1.0g을 취하여 비소시험법 제 3법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다.(2ppm 이하)

⑦파라클레졸 : 본 품 1.0g을 취하여 물 10㎖ 및 강한 암모니아수 1㎖을 넣고, 때때로 흔들어 섞으면서 수욕중에서 3분간 가열하여 냉각한다. 이를 여과하여 여과지상의 잔류물을 소량의 물로 씻고 세액 및 여과액을 합친 물을 넣어 100㎖로 하여 이것을 시료용액으로 한다. 시료용액 3㎖를 네슬러관에 취하여, 인몰리부덴산의 에탄올용액(1 →20) 1㎖ 및 암모니아 시액 0.2㎖를 넣고 흔들어 섞고, 여기에 물을 첨가해 50㎖로 하여 10분간 방치할 때, 그 액의 색은 파라클레졸 용액(1→100,000) 3㎖를 취하여 시료용액과 같은 방법으로 조작하여 얻은 액의 색보다 진해서는 안 된다.

수분

0.20%이하(직접 적정)

강열잔류물

0.05%이하(2g)

정량법

본 품 적량을 취하여, 응고점 측정법에 의해 시험한다.

부틸하이드록시톨루엔(C15H24O)의 양(%) = 1.6976T-18.5822

T : 응고점

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

차광한 밀폐용기에 보존할 것.

■ 비타민 E(dl-α-토코페롤)

※ 비타민제(프로비타민제 포함)의 비타민 E(dl-a-토코페롤)과 동일.

■ 에톡시킨(Ethoxyquin; 에톡시퀸)

C14H19NO 분자량217.31

성분규격

함량

본 품은 정량할 때, 에톡시킨(C14H19NO) 90%이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 황갈색-갈색의 점성의 액으로서, 약간의 특이한 냄새가 난다.

② 본 품은 아세톤, 이소프로판올, 에탄올, 에터, 클로르포름, 석유 에터 또는 n-헥산에 매우 녹기 쉬우며, 물에는 거의 녹지 않는다.

③ 본 품은 공기 또는 빛에 의해 서서히 착색한다.

확인시험

① 본 품의 n-헥산용액 (1→10,000)에 자외선(주파장365㎚)을 조사할 때, 청백색의 형광을 발한다.

② 본 품의 이소프로판올용액 (1→20,000)의 흡수스텍트럼을 측정할 때, 파장 356-362㎚에서 최대의 흡수를 나타낸다.

순도시험

① 용액상 : 본 품 1.0g에 n-헥산 20㎖를 넣어 녹일 때, 액은 등명으로서 액의 색은 염화코발트색의 비교원액 10㎖, 황산동의 색의 비교원액 5㎖ 및 염화 제 2철의 색의 비교원액 5㎖을 혼화한 액의 색보다 짙어서는 안 된다.

② 황산염 : 본 품 2.0g을 취하여 물 30㎖를 넣고, 2분간 진동 후 여과하여 여과액 15㎖를 취하고 묽은염산 1㎖ 및 물을 넣어 50㎖로 한다. 이것을 검액으로하여 황산염의 시험할 때, 그 양은 0.01N 황산 0.25㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다. (0.012% 이하)

③ 중금속 : 본 품 2.0g을 취하여 중금속 시험법 제 2법에 의해 시험을 실시 할 때, 그 양은 납표준액 1.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다. (5ppm이하)

④ 비소 : 본 품 1.0g을 취하여 비소시험법 제 3법에 의해 시험할 때, 여기에 적합하여야 한다. (2ppm이하)

강열잔류물

0.2%이하 (1g)

정량법

본 품 약 0.1g을 정밀히 칭량하여 무수초산 1㎖ 및 과염소산적정용 빙초산 50㎖을 가하여 녹이고, 0.1N 과염소산. 디옥산액으로 적정한다. (전위차법) 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다.

0.1N 과염소산디옥산액 1㎖ = 21.731㎎ C14H19N0 

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

차광한 밀폐용기에 보존할 것

■ 케르세틴(Quercetin; 퀘르세틴)

정    의  

  이 품목은 루틴을 산성수용액 또는 효소로 가수분해하여 얻어지는 것으로서 주성분은 케르세틴(quercetin)이다.

함    량  

  이 품목을 건조물로 환산한 것은 케르세틴(C15H10O7) 95.0% 이상을 함유한다.

성    상  

  이 품목은 황색의 분말로 약간 특유의 냄새가 있다.

확인시험  

  ① 이 품목 5mg에 에탄올 10mL를 가하여 녹여주고 염화제이철용액(1→50) 1～2방울을 가할 때, 액은 녹갈색의 띠를 나타낸다.

  ② 이 품목 5mg에 수산화나트륨용액(1→100) 5mL를 가하여 녹일 때, 액은 황～등색을 나타낸다.

  ③ 이 품목 5mg에 에탄올 5mL를 가하여 가온하여 녹여주고 염산 2mL 및 마그네슘 0.05g을 가해줄 때, 액은 서서히 적색을 나타낸다.

  ④ 이 품목 10mg에 에탄올 500mL를 가하여 녹인 액은 파장 255nm 부근 및 370nm 부근에 극대흡수부가 있다.

순도시험

  ① 비  소 : 이 품목 0.25g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에탄올용액(1→50) 10mL를 넣고 에탄올에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3mL를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하).

  ② 납：이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.0ppm 이하이어야 한다.

건조감량

  이 품목은 135℃에서 2시간 건조할 때, 그 감량은 13.0% 이하이어야 한다.

정 량 법

  이 품목 약 50mg을 정밀히 달아 메탄올을 가하여 50mL로 한 다음 0.5㎛ 밀리포아여과기로 여과한 액을 시험용액으로 한다. 따로, 케르세틴표준품(C15H10O7ㆍ2H2O)을 케르세틴으로서 50mg 함유하도록 정밀히 달아 메탄올을 가하여 50mL로 한 다음 0.5㎛ 밀리포아여과기로 여과한 액을 표준용액으로 한다. 표준용액 및 시험용액 각각 10μL씩을 다음의 조작조건으로 고속액체크로마토그래피에 주입하고 다음 계산식에 따라 케르세틴의 함량을 구한다.

  함  량(%) =   표준품(케르세틴으로서)의 채취량(mg)   ×  시험용액의 피크면적   × 100  

              ────────────────────  ────────────        

                건조물로 환산한 검체의 채취량(mg)         표준용액의 피크면적           

   조작조건

      검 출 기 : UV 375nm

      칼    럼 : μ-Bondapak C18 (3.9mm × 300mm) 또는 이와 동등한 것

      칼럼온도 : 실온

      이 동 상 : 메탄올ㆍ물ㆍ초산의 혼액 (15 : 3 : 1)

      유    속 : 1.0mL/min

■ 페룰린산(Ferulic Acid)

C10H10O4분자량: 194.18

정의

  이 품목은 벼과 벼(Oryza sativa LINNE)에서 얻어진 미강유를 실온의 약알칼리성하 에서 함수에탄올 및 헥산으로 분배시킨 다음 함수에탄올 획분에 얻어진 γ-오리자놀을가압하의 뜨거운 황산으로 가수분해한 다음 이를 정제하여 얻어지는 것으로서 그 주성분은 페룰린산이다.

함량

  이 품목을 건조물로 환산한 것은 페룰린산(C10H10O4ㆍ194.18) 95.0% 이상을 함유한다.

성상

  이 품목은 백～엷은 황갈색의 결정성 분말로서 냄새가 없거나 또는 약간 특이한 냄새가 있다.

확인시험

  ① 이 품목의 에탄올 용액(1→100,000)은 파장 234～238nm 및 320～324nm에 극대 흡수부가 있다.

  ② 이 품목 0.01g에 알콜성 10% 수산화칼륨시액 10mL을 가하여 가온하여 녹일 때,액은 황색을 나타낸다.

  ③ 이 품목 0.01g에 아세톤 2mL을 가하여 녹이고 염화제이철에탄올용액(1→50) 0.1mL을가할 때 액은 적갈색을 나타낸다.

순도시험

  ① 비소 : 이 품목을 비소시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 4.0ppm 이하이어야 한다.

  ② 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마 발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.0ppm 이하이어야 한다.

건조감량

  이 품목 1g을 취하여 105℃에서 3시간 건조할 때 그 감량은 0.5% 이하 이어야 한다

  강열잔루율 이 품목 5g을 취하여 강열잔류물 시험법을 할 때, 그 양은 0.1% 이하이어야 한다.

정량법

  이 품목을 건조한 다음 약 0.5g을 정밀히 달아 50v/v% 에탄올용액 50mL을 가해 주고 수욕상에서 가열 용해시키고 냉각시킨 다음 0.1N 수산화나트륨용액으로 적정한다. 따로 같은 방법으로 공시험을 한다.

  0.1N 수산화나트륨용액 1mL = 19.418mg C10H10O4

■ 기타 천연 항산화제(Other antioxidant)

정    의

기타 천연 유래의 산화방지제를 말한다.

 라. 항곰팡이제(Preservatives) : 사료저장 중에 곰팡이의 증식에 의하여 일어나는 사료의 변패를 방지하기 위하여 사용하는 물질

■ 프로피온산(Propionic Acid)

CH3CH2COOH

C3H6O2 분자량74.08

성분규격

함량

본 품은 정량할 때 프로피온산(C3H6O2) 99.0% 이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 투명한 액체로서 특이한 냄새가 난다.

② 본 품은 물에 매우 녹기 쉽고 알콜, 에터, 클로르포름 또는 산에 녹기 쉽다.

③ 본 품의 수용액(1→100)의 pH는 2.0-2.5이다.

확인시험

① 본 품의 수용액(1→10)은 산성이다.

② 본 품 1㎖에 에탄올 1㎖ 및 황산 3방울을 넣고, 수욕중에서 가열할 때 프로피온산에터의 향기를 발생한다.

순도시험

① 증발잔류물 : 본 품 50㎖를 수욕상에서 증발한 후 105-110℃에서 항량이 되었을 때 그 잔류물을 5㎎이하이어야 한다.(0.01%이하)

② 비소 : 본 품 1㎖를 취하여, 비소시험법 제 2법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다.(2ppm이하)

③ 중금속 : 본 품 2㎖를 취하여 중금속시험법 제 1법에 의해 시험할 때, 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(10ppm이하)

정량법

본 품 약 3g을 정밀하게 칭량하여, 새로 끓여 냉각한 물 100㎖를 넣고 녹여, 1N 수산화나트륨액으로 적정한다.(지시약 페놀프타레인시액 3방울) 같은 방법으로 공시험은 실시하여 보정한다.

1N 수산화나트륨액 1㎖ = 74.08㎎ C3H6O2

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

기밀용기에 보존할 것.

■ 프로피온산나트륨(Sodium Propionate)

CH3CH2COONa

C3H5O2Na 분자량96.06

성분규격

함량

본 품은 건조 후 정량할 때 프로피온산나트륨(C3H5NaO2) 99.0%이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 백색의 결정, 과립 또는 결정성의 분말로서 냄새는 없거나 또는 약간의 특이한 냄새가 난다.

② 본 품은 물에 녹기 쉽고 에탄올에 조금 녹기 쉽다.

③ 본 품은 흡습성이다.

확인시험

① 「프로피온산칼슘」의 확인시험 ①을 준용한다.

② 본 품의 수용액(1→10)은 나트륨염의 정성반응 ①을 나타낸다.

순도시험

① 용액상 : 본 품 1.0g에 물 20㎖를 넣어 녹일 때, 그 액은 무색으로서 탁도는 약간의 미탁 이하이어야 한다.

② 산 및 알카리 : 본 품 2.0g을 취하여, 새로 끓여 냉각한 물 20㎖를 넣어 녹이고, 페놀프타레인시액 2방울을 넣어 시료용액으로 한다. 시료용액이 무색일때는 0.1N 수산화나트륨액 0.3㎖를 넣었을 때 홍색을 띠지 않으면 안 된다. 또한 시료용액이 홍색인 때는 0.1N 염산 0.3㎖를 넣었을 때 그 색이 사라져야 한다.

③ 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 1법에 의해 시험할 때, 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(20ppm이하)

④ 비소 : 본 품 1.0g을 취하여 비소시험법 제 1법에 의해 시험할 때, 여기에 적합하여야 한다. (2ppm 이하)

건조감량

5.0%이하 (1g, 105℃, 1시간)

정량법

본 품을 건조 후 약 0.2g을 정밀히 칭량하여 과염소산적정용 빙초산 40㎖를 넣고 가열하여 녹이고 냉각 후 0.1N 과염소산으로 적정한다. (지시약 염화 메틸로다니닌 시액 3방울) 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다.

0.1N 과염소산 1㎖ = 9.606㎎ C3H5NaO2

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

밀폐용기에 보존할 것.

■ 프로피온산칼슘(Calcium Propionate)

(CH3CH2COO)2Ca

C6H10O4Ca 분자량186.22

성분규격

함량

본 품은 건조 후 정량할 때 프로피온산칼슘(C6H10CaO4) 98.0%이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 백색의 결정, 과립 또는 분말로서 냄새가 없거나 또는 약간의 특이한 냄새가 난다.

② 본 품은 물에 녹기 쉽다.

확인시험

① 본 품 0.5g에 물 5㎖를 넣어 녹이고, 여기에 묽은 황산 5㎖를 넣어 가열할 때 특이한 냄새가 난다.

② 본 품의 수용액(1→10)은 칼슘염의 정성반응 ①, ② 및 ③을 나타낸다.

순도시험

① 물 불용물 : 본 품 10.0g을 취하여, 물 100㎖를 넣고 때때로 흔들어 섞으면서 1시간 방치한 후 유리여과기(G4)를 이용하여 여과하고, 잔류물을 물 30㎖로 씻은 후, 180℃에서 4시간 건조할 때 그 양은 0.015g이하이어야 한다.

② 산 및 알카리 : 본 품 2.0g를 취하여 새로 끓여 냉각한 물 20㎖를 넣어 녹이고, 페놀프탈레인시액 2방울을 넣어 시료용액으로 한다. 시료용액이 무색인 때는 0.1N 수산화나트륨액 0.3㎖를 넣었을 때, 홍색을 띠지 않으면 안 된다. 또한 시료용액이 홍색인 때는 0.1N염산 0.3㎖를 넣었을 때 그 색이 사라져야 한다.

③ 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 1법에 의해 시험할 때 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(20ppm 이하)

④ 비소 : 본 품 1.0g을 취하여, 비소시험법 제 1법에 의해 시험할 때, 여기에 적합하여야 한다.(2ppm이하)

건조감량

 9.5%이하(1g, 120℃, 2시간)

정량법

본 품을 건조 후 약 1g을 정밀히 칭량하여, 물을 넣어 녹여 정확히 100㎖로 한다. 이 액 25㎖를 정확히 칭량하여 물 75㎖ 및 수산화칼륨용액(1→10) 15㎖를 넣고 약 1분간 방치하여, 여기에 NN지시약 0.1g을 넣어, 즉시 0.05M에틸렌디아민4초산2나트륨액으로 적정한다. 이 경우에서 적정의 종점은 액의 적자색이 청색으로 변할 때로 한다.  같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다.

0.05M 에틸렌디아민4초산2나트륨액 1㎖ = 9.311㎎ C6H10CaO4

보존방법의 기준

밀폐용기에 보존할 것.

4. 아미노산제(Amino Acids and Analogue)

┌──────────────────────────────────────────────────┐

│사료 비용 절감 및 단백질 절약 효과, 단백질 및 에너지 이용률 향상, 공해성 질소 배출 감소를 목적으로  │

│사료에 첨가하는 물질                                                                                │

└──────────────────────────────────────────────────┘

■ DL-메치오닌(DL-메티오닌, DL-Methionine)

C5H11NO2S 분자량149.21

성분규격

함량

본 품은 건조 후 정량 할 때 DL-메치오닌(C5H11NO2S) 98.5%이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 백색～담황색의 결정 또는 결정성의 분말로서 특이한 냄새를 가지며 약간의 단맛을 가진다.

② 본 품은 물에 조금 녹기 어렵고 에탄올에 매우 녹기 어려우며 에터에 거의 녹지 않는다.

③ 본 품은 묽은 염산 또는 수산화나트륨시액에 녹는다.

④ 본 품의 수용액(1→100)의 pH는 5.2～6.1이다.

⑤ 본 품의 수용액(1→100)은 선광성이 없다.

확인시험

① 본 품 25㎎에 무수황산동을 포화시킨 황산 1㎖를 가할 때 액상은 황색을 나타낸다.

② 본 품 5㎎에 물 5㎖를 가하여 녹이고 수산화나트륨시액 2㎖를 가하여 잘 흔들어 섞고 니트로페로시드나트륨시액 0.3㎖를 가하고 다시 잘 흔들어 섞어 35～40℃에서 10분간 방치한 후 2분간 방냉하고 묽은 염산 2㎖를 가하여 흔들어 섞으면 액상은 적색을 나타낸다.

순도시험

① 용액상 : 본 품 0.5g에 물 20㎖를 가해 녹일 경우 용액은 무색으로 거의 투명하여야 한다.

② 염화물 : 본 품 0.09g을 취하여 염화물의 시험할 때 그 양은 0.01N염산 0.5㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(0.20%이하)

③ 황산염 : 본 품 0.08g을 취하여 황산염의 시험할 때 그 양은 0.01N황산 0.5㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(0.30%이하)

④ 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 1법에 의해 시험할 때 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(20ppm이하)

⑤ 비소 : 본 품 1.0g을 100㎖의 분해플라스크에 넣고 초산 5㎖ 및 황산 2㎖를 가하고 플라스크입구에 작은 깔때기를 얹고 흰 연기가 발생할 때까지 주의하여 가열한다. 냉각 후 초산 2㎖씩을 2회 가하여 가열하고 여기에 강과산화수소수 2㎖씩을 수회 가하여 액이 무색～미황색이 될 때까지 가열한다. 냉각 후 포화수산암모늄 용액 2㎖를 가하여 다시 흰 연기가 발생할 때까지 가열한다. 냉각 후 물을 가하여 5㎖로 하고 이것을 검액으로서 비소의 시험할 때 이것에 적합하여야 한다.(2ppm이하)

건조감량

0.5%이하(1g, 105℃, 4시간)

강열잔류물

0.5%이하(1g)

정량법

본 품을 건조 후 약 0.3g을 정밀하게 칭량하여 공전플라스크에 넣고 물 100㎖, 인산1수소칼륨 5g, 인산이수소칼륨 2g 및 요오드화칼륨 2g을 넣고 흔들어 섞은 후 녹인다. 여기에 정확히 0.1N 요오드액 50㎖를 가하고 뚜껑을 하여 잘 흔들어 섞고 30분간 방치한 후 과량의 요오드를 0.1N 치오황산나트륨액으로 적정한다.(지시약 전분시액 1㎖) 같은 방법으로 공시험한다.

0.1N 요소액 1㎖ = 7.460㎎ C5H11NO2S

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

밀폐용기에 보존할 것.

■ DL-메치오닌수산화유도체(DL-methionine hydroxy analogue, MHA)

정    의

메치오닌의 유도체이다.

성상/순도/함량 : 갈색의 약간 점성이 있는 액체로서 특이한 냄새가 난다. 물, 에터 또는 클로르포름과 혼화하며, 에탄올에 매우 녹기 쉽다. pH는 1.0 이하이다. 본 품은 정량할 때 2-디아미노-2-하이드록시메치오닌(2-하이드록시-4-메틸치오낙산, C5H10O3S)으로서 88.0% 이상을 함유한다.

검정성분(또는 물질명) : DL-메치오닌수산화유도체

기    타규격품은 황산염 0.96% 이하, 중금속(납) 20ppm 이하, 비소 2ppm 이하로 규정되어 있다.

■ DL-메치오닌수산화유도체이소프로필에스테르(DL-Methionine Hydroxy Analogue isopropyl ester: MHA-isopropyl ester: 2-hydroxy-4-(methylthio) butanoic acid isopropyl ester ; HMBi)

CH3-S-(CH2)2-CH(OH)-COO-CH-(CH3)2                                            분자량 : 192.28

성분규격

함량

본 품은 정량할 때 2-하이드록시-4메틸치오뷰틸산 이소프로필에스테르(HMBi)로서 액상은 HMBi 95% 이상을 함유하고 있고 분말을 57% 이상을 함유한다.

성상

 ① 액상의 본품은 투명색에 가까운 엶은 갈색이며, 분말 제품은 백색과 엶은 황색의 분말로서 특이한 유황냄새가 난다.

 ② 액상품은 물에 녹는다. (용해도20g/1 (30℃))

 ③ 본 품의 pH는 3.6이고 1% H₂O 수용액에서는 4.5 정도이다.

확인시험

 본 품의 확인시험은 HMBi 정량 분석법을 통한 HPLC 분석법을 이용한다.

순도시험

 ① 황산염 : 본 품 0.0025g을 취하여 황산염 시험을 할 때 그 양은 0.01N 황산 0.5㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다. (0.96%이하)

 ② 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속 시험법 제 2법에 의해 시험할 때, 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다. (20ppm이하)

 ③ 비소 : 본 품 1g을 취하여 비소시험법 제 1법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다. (2ppm 이하)

수분

 - 수분 정량법(Karl Fisher 분석방법)

액상품과 분말품의 수분분석은 수분정량을 분석하는 칼피셔 분석방법을 이용한다.

 - 액상품 : 0.5% 이하

 - 분말품 : 4% 이하

정량법

○ HMBi의 정량분석 (HPLC 분석방법)

HMBi 정량분석 및 확인시험은 HPLC 분석법을 이용하여 확인한다.

1) 시약 및 샘플준비

 A. 시약

 ① 표준 시약

   HMBi, 2-Hydroxy-4-MethylthioButanoic acide Isopropyl ester 

   (CAS No. [57296-04-5])

 ② 완충용액 (pH 7)

  완충용액(pH 7)은 2g 인산칼륨(KH₂PO₄)에 증류수 600ml와 Acetonitrile 400ml 넣어 녹인 후 NaOH N 용액으로 pH 7이 되게 준비한다.

 ③ 표준용액 준비

 Calibration 곡선에 필요한 HMBi 표준용액은 20mg, 30mg, 40mg, 50mg, 60mg으로 각각 청량하여 pH 7 buffer 용액으로 각각 50ml 부피플라스크를 이용하여 희석한다. 각각의 표준용액을 초음파 분쇄기를 통해 2분간 혼합한 후 10분간 방치시킨 후 측정한다.

B. 시험샘플 준비

 ① 액상 제품

  액상 제품 30mg을 정밀하게 청량하여 50ml 부피플라스크를 이용하여 완충용액으로 희석하여 준다. 

 ② 분말제품

  분말제품 100mg을 정밀하게 청량하여 100ml 부피플라스크에 담아 완충용액으로 희석한 후 30분간 마그네틱 바를 통해 잘 혼합하여 모든 미립자들이 바닥에 가라앉을 때까지 10분간 방치한다. 이것을 0.45㎛ membrane filter로 여과하여 시험용액으로 사용한다. HPLC 주입전에 시험용액은 0.2㎛ PTEE 여과과정을 거친 후 사용한다.

2) HPLC 분석조건

 - LC Pump : Isocratic pump

 - 이동상 용매

  산성화증류수(pH 2, 85% H₃PO₄ 용액 적정) + Acetonitrile (80:20 % V/V))

 - 컬럼 : HYPERSIL 150 x 4.6 mm ? HyPurity Elite C 18 (5㎛) Column

 - 검출조건 : UV 210nm

 - 유속 : 0.9ml/min

3) HMBi 계산방법 :

 - HMBi(%) = [ (시료의 HMBi 피크면적 x 시료 희석볼륨(ml))/ 시료 청량(mg) ] x 100

제조방법의 기준

  본 품은 원제자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

  밀폐용기에 보존할 것

■ DL-메치오닌수산화유도체 칼슘염(DL-Methionine Hydroxy Analogue Calcium: MHA-Calcium,

2-hydroxy-4-(methylthio) butanoic acid, calcium salt)

[CH3S(CH2)2CHOHCOO]2Ca

C10H18O6S2Ca 분자량338.45

성분규격

함량

본 품은 정량할 때 2-하이드록시-4-메틸치오낙산칼슘(C10H18O6S2Ca)로서 95.0%이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 엷은 갈색의 입상분말로서 특이한 유황냄새가 난다.

② 본 품은 물에 녹는다.(용해도 7.4g./100ml)

③ 본 품 5% 수용액의 pH는 11정도이다.

확인시험

①본 품 5%수용액 1㎖에 무수황산동을 포화시킨 황산 1㎖를 넣을 때 그 액상은 황색을 나타낸다.

②본 품 0.005g에 물 5㎖를 넣어 녹이고, 수산화나트륨시액 2㎖를 가해 잘 흔들어 섞은 후 니트로페로시드나트륨시액 0.3㎖를 가하고 다시 잘 흔들어 섞고 34-40℃에서 10분간 방치한 후, 2분간 방냉하고, 묽은염산 2㎖를 가해 섞을 때 그 액상은 적색을 나타낸다.

순도시험

①황산염 : 본 품 0.0025g을 취하여 황산염 시험을 할 때 그 양은 0.01N 황산 0.5㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다. (0.96%이하)

②중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속 시험법 제 2법에 의해 시험할 때, 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다. (20ppm이하)

③비소 : 본 품 1g을 취하여 비소시험법 제 1법에 의해 시험할 때 여기에 적합  하여야 한다. (2ppm이하)

수분

1.0%이하 (1g, 105℃, 3시간)

정량법

○ 적정법 (95%이상)

  본 품 약 0.20g을 정밀하게 칭량하여 빙초산, 물, 염산 혼합액 (50 : 10 : 3) 50㎖를 가하여 녹이고 0.1N 브롬산칼륨/브롬칼륨시액으로 전위차 적정한다. 또한 지시전극으로서는 백금전극, 참조전극으로서 더블 정크션 전극을 이용한다.

0.1N 브롬산칼륨/브롬칼륨시액 1㎖ = 8.46㎎ C10H18O6S2Ca

○ MHA의 정량 (84%이상, HPLC 분석방법)

  본 품을 마쇄하고 약 1.0g을 정밀하게 칭량하여 20ml의 10% 아세토니트릴 용액을 가한다음 5분간 추출시킨다. 원심분리 후 상등액 5.0㎖를 취하여 100㎕의 인산시약을 가하고 흔들어 준다. 이것을 0.45um membrane filter로 여과하여 시험용액으로 사용한다. 함량이 알려진 MHA Reference standard를 위와 동일하게 처리하여 표준용액으로 하되 100㎕의 인산시약을 가하기 전에 100㎕의 50% KOH용액을 가하고 흔들어 준다.

   1) LC Pump : Isocratic pump

   2) Mobile Phase : 0.01M 인산용액(pH 3.2) + Acetonitrile (800 : 200)

   3) Column : NH2 Column

   4) 검출조건 : UV 210nm 

   5) 유속 : 1.0ml/min 

   6) 주입량 : 20ul

   7) Column Oven : Ambient 또는 35 ℃ 

   계산방법 : 

     MHA(%) = (본 품의 피크면적/표준물질의 피크면적) x 표준믈질의 취량(g) / 시료취량(g) x 100

  ○ 칼슘의 정량 (12%이상)

     사료공정서의 AAS방법 또는 ICP방법에 따른다

  ○ MHA-Ca 함량은 MHA의 HPLC분석결과로부터 다음과 같이 계산한다.

     MHA-Ca(%) = MHA(%) x 338.45/(150.19 x 2)

보존방법의 기준

밀폐용기에 보존할 것.

■ DL-알라닌(DL-Alanine)

C3H7NO2 분자량89.09

성분규격

함량

본 품은 건조 후 정량할 때 DL-알라닌(C3H7NO2) 98.5%이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 무색-백색의 결정성 분말로서 감미를 가진다.

② 본 품은 물에 녹기 쉽고 유기용매에 녹기 어렵다.

③ 본 품의 수용액 (1→10)의 pH는 5.5-7.0이다.

확인시험

① 본 품 0.2g을 묽은황산 10㎖에 녹여 과망간산칼륨 0.1g을 넣어 끓일 때, 아세트알데히드의 냄새가 난다.

② 본 품의 수용액 (1→1,000) 5㎖에 닌하이드린시액 1㎖를 넣어 3분간 가열할 때, 자색을 나타낸다.

순도시험

① 용액상 : 본 품 1.0g을 물 10㎖에 녹일 때 그 액은 무색으로서 맑아야 한다.

② 염화물 : 본 품 0.5g을 취하여 염화물의 시험할 때, 그 양은 0.01N 염산 0.3㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(0.021% 이하)

③ 암모늄염 :「아미노초산」의 순도시험 ③을 준용한다. 이 경우에 「암모늄 표준액 2㎖」로 된 것은「암모늄 표준액 3㎖」으로 한다.(0.03% 이하)

④ 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 1법에 의해 시험할 때, 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(20ppm 이하)

⑤ 비소 : 본 품 1.0g을 취하여, 비소시험법 제 1법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다. (2ppm 이하)

건조감량

0.3%이하 (1g, 105℃, 3시간)

강열잔류물

0.20%이하 (1g)

정량법

본 품을 건조 후 약 0.2g을 정밀히 칭량하여 개미산 3㎖에 녹이고, 과염소산적정용 빙초산 50㎖를 넣어, 0.1N 과염소산으로 적정한다.(지시약 α-나프톨벤젠시액 10방울) 이 경우에 적정의 종점은 액의 갈색이 녹색으로 변하는 시점으로 한다. 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다.

0.1N 과염소산 1㎖ = 8.909㎎ C3H7NO2

보존방법의 기준

밀폐용기에 보존할 것.

■ DL-트레오닌철(Ferrous DL-Threonate)

성분규격

함량

본 품은 건조 후 정량할 때, DL-트레오닌(C4H9NO3) 58.0～67.0% 및 제 1철[Fe(Ⅱ)] 13.6～15.7%를 함유한다.

성상

① 본 품은 담황색～담갈색의 분말로서, 약간 특이한 냄새가 난다.

② 본 품은 묽은 염산에 녹고, 물, 에탄올 또는 아세톤에 거의 녹지 않는다.

확인시험

① 본 품 0.1g에 묽은 염산 10㎖를 가하여 녹인 액은 제 1철염의 정성반응을 나타낸다.

②본 품 0.1g에 1N 염산시액 5㎖를 가하고, 알데하이드의 냄새가 없어질 때까지 끓인다. 냉각 후 암모니아시액을 가해 알칼리성으로 하여 여과한다. 여과액에 여과지를 적신 후 풍건한다. 여기에 닌하이드린의 수포화 n-부탄올용액(1→500)을 균등하게 분무시킨 후, 100℃에서 10분간 가열할 때 자색을 나타낸다.

순도시험

①납 : 본 품 1.0g을 취하여 물 20㎖ 및 묽은초산(1→3) 5㎖를 가하고, 조용히 5분간 끓인다. 냉각 후 물을 넣어 정확히 50㎖로 한다. 이 액 25㎖를 정확히 칭량하여, 이것을 검액으로 하여 납을 시험할 때 그 양은 20ppm이하이어야 한다. 

②비소 : 본 품 0.40g을 취하여 묽은염산 2㎖ 및 물 3㎖를 넣어 녹이고, 이것을 검액으로서 비소시험법 제 1법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다.(5ppm이하)

건조감량

1.0%이하 (0.5g, 감압, 실리카겔, 4시간)

정량법

DL-트레오닌

본 품을 건조 후 약 0.3g을 정밀하게 칭량하고 물 50㎖를 가하여 특이한 냄새가 없어질 때까지 수욕상에서 약 3시간 가열한다. 냉각 후 이 액에 미리 페놀프탈레인시액을 이용하여 0.1N 수산화나트륨액으로 중화한 포르말린 10㎖를 정확히 가하여, 0.1N 수산화나트륨액으로 전위차 적정을 한다. 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다.

0.1N 수산화나트륨액 1㎖ = 11.912㎎ C4H9NO3

제1철

본 품을 건조 후 약 0.6g을 정밀하게 칭량하고, 1N 황산 10㎖를 가하여 녹이고, 0.1N 황산제2세륨암모늄액으로 적정한다.(지시약 o-페난트로린시액 3방울) 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다.

0.1N 황산제2세륨암모늄액 1㎖ = 5.585㎎ Fe

보존방법의 기준

밀폐용기에 보존할 것.

■ DL-트립토판(DL-Tryptophan)

C11H12N2O2 분자량204.23

성분규격

함량

본 품은 건조 후 정량할 때 DL-트립토판(C11H12N2O2) 98.5%이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 백색～담황색의 분말로서 냄새는 없거나 또는 약간의 특이한 냄새가 난다.

②본 품은 물에 녹기 어렵고, 에탄올에 매우 녹기 어려우며, 에터에는 거의 녹지 않는다.

③ 본 품은 묽은염산 또는 수산화나트륨시액에 녹는다.

④ 본 품의 수용액 (1→500)의 pH는 5.5～7.0이다.

확인시험

① 본 품의 수용액 (1→500)은 선광성을 나타내지 않는다.

②본 품 0.1g에 물 50㎖를 넣고, 가열하여 녹인 후 냉각하고, 그 중 10㎖를 취하여 p-디메틸아미노벤즈알데하이드ㆍ염화제2철시액 5㎖ 및 묽은염산 2㎖를 가하여, 수욕상에서 5분간 가열할 때 적자～청자색을 나타낸다.

순도시험

①염화물 : 본 품 0.09g을 취하여 염화물의 시험할 때, 그 양은 0.01N염산 0.5㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(0.20%이하)

②암모늄염 : 「아미노초산」의 순도시험 ③을 준용한다. 이 경우에 「0.1g」으로 된 것은「0.05g」으로 한다.(0.04%이하)

③중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 2법에 의해 시험할 때, 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(20ppm이하)

④비소 : 본 품 1.0g을 취하여, 비소시험법 제 3법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다.(2ppm이하)

건조감량

1.0%이하 (1g, 105℃, 3시간)

강열잔류물

0.5%이하 (1g)

정량법

본 품을 건조 후 약 0.3g을 정밀히 칭량하여 개미산 3㎖에 녹이고, 과염소산적정용 빙초산 50㎖를 가하여, 0.1N 과염소산으로 적정한다.(지시약 α-나프톨벤젠시액 10방울) 이 경우에 적정의 종점은 갈색의 액이 녹색으로 변하는 시점으로 한다. 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다.

0.1N 과염소산 1㎖ = 20.423㎎ C11H12N2O2

보존방법의 기준

차광한 밀폐용기에 보존할 것.

■ L-글루타민산(L-Glutamic Acid)

HOOCCH2CH2CH(NH2)COOH

C5H9NO4 분자량147.13

성분규격

함량 

이 품목을 건조물로 환산한 것은 L-글루타민산(C5H9NO4) 98.5～101.5%를 함유한다.

성상 

이 품목은 백색의 결정성분말로서 냄새가 없다.

확인시험  

①이 품목 0.15g을 물 4㎖ 및 수산화나트륨시액 1㎖ 혼액에 녹이고 닌히드린시액(0.2→100) 1㎖ 및 초산나트륨 0.1g을 가하고 수욕조에서 10분간 가열할 때, 진한 청자색을 나타낸다.

②이 품목 1g을 물 9㎖에 녹인 현탁액에 1N 염산 5.6㎖ 또는 1N 수산화나트륨 용액 6.8㎖를 가하여 이 액을 저으면 완전히 녹는다.

순도시험  

① 비선광도 : 이 품목을 미리 건조한 다음 10g을 정밀히 달아 2N 염산에 녹여 100㎖로 하여 이 액의 선광도를 측정할 때, [α]  = +31.5 ～ +32.5。이어야한다. 

② 중금속 : 이 품목 1g을 석영제 또는 자제도가니에 넣고 조용히 약하게 가열하여 탄화시킨다. 식힌 다음 질산 2㎖ 및 황산 5방울을 가하여 흰 연기가 발생하지 않을 때까지 가열한 후 450～550℃에서 회화가 될 때까지 강열한다. 식힌 다음 염산 2㎖를 가하여 수욕상에서 증발건고하고 잔류물에 염산 3방울을 가한 다음 열탕 10㎖를 가하여 2분간 가온하고 식힌 후 페놀프탈레인시액 1방울을 가하고 암모니아시액을 액이 엷은 홍색이 될 때까지 가해주고 나서 물을 사용하여 네슬러관에 옮겨주고 다시 희석한 초산(1→20) 2㎖ 및 물을 가하여 50㎖로 한 것을 시험용액으로 하여 중금속시험을 할 때, 그 양은 20ppm 이하이어야 한다. 다만, 표준액은 시료와 재질이 같은 도가니에 질산  2㎖, 황산 5방울 및 염산 2㎖를 넣고 가열하여 증발건고하고 잔류물에 염산 3방울을 가하여 이하 시험용액의 경우와 같이 조작하여 정량적으로 다른 네슬러관에 옮겨주고, 이에 납표준용액 2㎖, 희석한 초산(1→20) 2㎖ 및 물을 가하여 50㎖로 한 것을 사용한다. 

③ 납 : 이 품목 0.8g을 취하여 조용히 가열하여 탄화시킨 다음 500℃를 넘지 않는 온도에서 회화하고 묽은 질산 20㎖를 주의하여 가하고 5분간 조용히 끓인 다음 식히고 필요하면 여과한다. 잔류물은 물로 씻고 씻은 액은 여액과 합치고 물을 가하여 50㎖로 한 액을 시험용액으로 하여 납시험을 할 때, 그 양은 10ppm 이하이어야 한다. 

건조감량  

이 품목을 105℃에서 3시간 건조할 때, 그 감량은 0.1% 이하이어야 한다.

강열잔류물 

이 품목의 강열잔물은 0.3% 이하이어야 한다. 

정량법  

「L-글루타민산나트륨」의 정량법에 따라 정량한다.

0.1N 과염소산용액 1㎖ = 14.71㎎ C5H9NO4

보존방법의 기준

밀폐용기에 보존할 것.

제조방법의 기준

본 품은 원제자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다. 

■ L-라이신 액상(L-Lysine Liquid)

C6H14N2O2                                         

        분자량 146.2

성분규격

함량

본품은 정량할 때 표시량의 90～110%에 대응하는 L-라이신(C6H14N2O2)을 함유한다.

성상

  ① 본 품은 약간의 점도를 가진 어두운 갈색의 액체로서, 특이한 냄새가 있다.

② 본 품은 물과 잘 혼합하고, 유기용매와 혼합되지 않는다.

③ 본 품의 pH는 9.0～11.0 이다.

확인시험

본 품을 희석한 수용액(1→100) 5㎖에 초산 닌하이드린시액 1㎖를 가하고 수욕상태에서 15분간 가열하였을 때 적자색을 나타낸다.

수분

50.0% 이하 (사료표준분석방법의 수분의 정량법에 따른다)

중금속

20ppm 이하 (사료표준분석방법의 중금속의 정량법에 따른다)

정량법

본 품의 함량 표시량에 따라 L-라이신(C6H14N2O2)으로 약0.36g에 해당하는 양을 정확하게 취하여 0.1M-염산 용액을 넣어 정확하게 1000㎖로 하여 충분히 교반한 후 0.2㎛ 필터로 여과한다. 이 액 5㎖를 정확하게 취하여 내부표준액 5ml, 희석완충액 40㎖를 넣어 정확하게 50㎖로 하여 섞어 검액으로 한다.

따로 미리 105℃에서 3시간 건조한 라이신염산염 표준품을 약 0.45g을 정밀하게 달아 0.1M-염산 용액을 넣어 정확하게 1000㎖로 한다. 이 액 5㎖를 정확하게 취하여 내부표준액 5㎖, 희석완충액 40㎖를 넣어 정확하게 50㎖로 하여 섞어 표준액으로 한다.

검액 및 표준액을 가지고 다음의 조건으로 액체크로마토그래피법에 따라 시험하여 내부표준물질의 피크면적에 대한 라이신염산염의 피크면적의 비를 구하여 함량을 정량한다.

L-라이신(g/100g) = { (A×D×E×100×F)÷(B×C×W) } × G

A : 검액 크로마토그램에서 라이신염산염 피크 면적

B : 표준용액 크로마토그램에서 라이신염산염 피크 면적

C : 검액 크로마토그램에서 내부표준물질의 피크 면적

D : 표준용액 크로마토그램에서 내부표준물질의 피크 면적

E : 표준용액 라이신 농도(g/l)

W : 시료무게(g)

F : 희석배수( F=1, 희석 조작이 다를 경우 희석배수 계산)

G : 환산계수(G=0.800)

 L-라이신의 분자량(146.2)÷라이신 염산염의 분자량(182.65)

사용방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

가온 및 교반 설비가 되어 있는 내부식성 재질의 탱크에서 보존

■ L-라이신염산염 액상(L-Lysine Monohydrochloride Liquid)

C6H14N2O2HCl 분자량182.65

성분규격

함량

본 품은 정량할 때 표시량의 90～110%에 대응하는 염산라이신(C6H14N2O2HCl) 을 함유한다.

성상

① 본 품은 검은 갈색의 점조성 액체로서, 약산의 특이한 냄새가 있다.

② 본 품은 물과 잘 혼합하고, 유기용매와 혼합되지 않는다.

③ 본 품의 pH는 5.0～6.0 이다.

확인시험

본 품을 희석한 수용액(0.05→100) 2㎖에 초산 닌하이드린시액 2㎖를 가하고 수욕상태에서 15분간 가열하였을 때 적자색을 나타낸다.

수분

60.0% 이하(사료표준분석방법의 수분의 정량법에 따른다)

조회분

3.0% 이하(사료표준분석방법의 조회분의 정량법에 따른다)

염화물

8.0% 이하(사료표준분석방법의 염소의 정량법에 따른다)

정량법

본 품의 함량표시량에 따라 라이신염산염(C6H14N2O2HCl)으로 약0.45g에 해당하는 양을 정확하게 취하여 0.1M염산 용액을 넣어 정확하게 1000㎖로 하여 충분히 교반한 후 0.2㎛ 필터로 여과한다. 이 액 5㎖를 정확하게 취하여 내부표준액 5㎖, 희석완충액 40㎖를 넣어 정확하게 50㎖로 하여 섞어 검액으로 한다. 미리 105℃에서 3시간 건조한 라이신염산염 표준품을 약 0.45g을 정밀하게 달아 0.1M-염산 용액을 넣어 정확하게 1000㎖로 한다. 이 액 5㎖를 정확하게 취하여 내부표준액 5㎖, 희석완충액 40㎖를 넣어 50㎖로 하여 섞어 표준액으로 한다. 검액 및 표준액을 가지고 다음의 조건으로 액체크로마토그래피법에 따라 시험하여 내부표준물질의 피크면적에 대한 라이시염산염의 피크면적의 비를 구하여 함량을 정량한다.

  라이신염산염(g/100g) = (A×D×E×100×F)÷(B×C×W)

    A : 검액 크로마토그램에서 라이신염산염 피크면적

    B : 표준용액 크로마토그램에서 라이신염산염 피크면적

    C : 검액 크로마토그램에서 내부표준물질의 피크면적

    D : 표준용액 크로마토그램에서 내부표준물질의 피크면적

    E : 표준용액 라이신 농도(g/l)

    W : 시료무게(g)

    F : 희석배수(F=1, 희석조작이 다를 경우 희석배수 계산)

사용방법의 기준

본 품은 원제자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제재로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

가온 및 교반설비가 되어있는 내부식성 재질의 탱크에서 보존

■ L-라이신염산염(L-Lysine Monohydrochloride)

C6H14N2O2ㆍHCl 분자량182.65

성분규격

함량

본 품은 건조 후 정량 할 때 라이신염산염(C6H14N2O2ㆍHCl) 98.5%이상을 함유한다. 

성상

① 본 품은 백색～담갈색의 분말로서, 냄새는 없거나 또는 약간의 특이한 냄새가 난다. 

② 본 품은 물에 녹기 쉽고, 에탄올에 매우 녹기 어렵다.

③ 본 품의 수용액(1→10) pH는 5.0～6.0이다. 

확인시험

① 본 품의 수용액(1→1000) 5㎖에 닌하이드린시액 1㎖를 넣고 3분간 가열한 후, 물 20㎖를 가하여 15분간 방치하였을 때, 액상은 적자색을 나타낸다.

② 본 품의 수용액(1→10)은 염화물의 정성반응을 나타낸다.

순도시험

① 선광도 : 본 품을 건조하여, 그 중 약 4g을 정밀히 칭량하여, 묽은 염산(13→25)에 녹여 50㎖로 하고, 이 액 200㎜를 두께로 선광도를 측정할 때  = +18.0 ～ +21.5°이어야 한다.

②암모늄염 : 「아미노초산」의 순도시험 ③을 준용한다. 이 경우에 「0.1g」으로 된 것은 「0.05g」으로, 「1㎖」로 된 것은 「0.5㎖」로 바꿔 읽기로 한다.(0.04%이하)

③중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 2법에 의해 시험할 때, 그 양은 납표준액 3.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(30ppm이하)

④ 비소 : 본 품 1.0g을 취하여 비소시험법 제 1법에 의해 시험할 때, 여기에 적합하여야 한다.(2ppm이하)

건조감량

1.0%이하(1g, 105℃, 3시간)

강열잔류물

0.3%이하(1g)

정량법 

본 품을 건조한 다음 약 0.2g을 정밀하게 칭량하여 과염소산적정용초산 제2수은시액 10㎖을 넣어 가열하여 녹이고, 냉각 후 과염소산적정용 빙초산 50㎖를 넣어 0.1N과염소산으로 적정한다.(지시약 α-나프톨벤젠시액 10방울) 이 경우에 적정의 종점은 액의 오렌지색이 황녹색으로 변할 때로 한다. 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다.

0.1N 과염소산 1㎖ = 9.132㎎ C6H14N2O2ㆍHCl

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

밀폐용기에 보존할 것.

■ L-라이신황산염(L-Lysine Sulfate)

C12H28N4O4ㆍH2SO4 분자량390

성분규격

함량

본 품은 정량할 때 황산라이신(C12H28N4O4ㆍH2SO4) 형태로 62.5% 이상을 함유하고 있으며 황산염을 제외한 순수 라이신 함량은 46.8% 이다. 나머지는 라이신 황산염 제조시 원료로 사용했던 발효부산물이며 그 안에 단백질 형태로 0.5%의 라이신을 추가로 함유하고 있다.

성상

① 본 품은 담갈색의 과립상 분말로서 먼지발생이 없고 독특한 냄새가 있다.

② 본 품은 물에 쉽게 녹거나 분산되며 비중은 720kg/㎥이다

확인시험

하이드린 정색반응에 기초한 이온교환 크로마토그라피에 의한 정량시 파장 570nm 에서 최대흡수를 보인다

순도시험

① 순도 : 정량법을 준용한다

② 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속 시험법 제 2법에 의해  시험 할 때  그 양은 납 표준액 3.0㎖ 에 대응하는 양 이하여야 한다.(20ppm 이하)

③ 비소 : 본 품 1.0g을 취하여  비소시험법 제 1법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다.(2ppm 이하)

강열잔류물

1.5% 이하 (1g)

정량법

본 품 450mg을 칭량하여 230㎖의 1N 염산을 가하여 약한 가열조건 또는 초음파  탕조에 넣고 30분간 휘저어 현탁액을 만든다. 이 현탁액 1g정도를 정확히 칭량하여 50㎖ volumetric flask에 넣고 여기에 2.5g정도의 norleucine용액을 정확히 칭량하여 가한 다음 sodium citrate 완충액으로 50㎖를 맞추어 희석시킨 다음 정량시에는 이 현탁액을 membrane filter(0.22㎛)에 여과시켜 아미노산 분석기의 종류에 따라 30㎕ 또는 50㎕를 이온교환 칼럼에 넣어 이온교환크로마토그래피 측정을 하여 570nm에서 얻어진 피크면적을 계산한다

보존방법

밀폐용기에 넣어 서늘하고 건조한 곳에 보관

■ L-메치오닌(L-메티오닌, L-Methionine)

C5H11NO2S 분자량149.21

성분규격

함량

본 품은 건조 후 정량 할 때 L-메치오닌(C5H11NO2S) 98.5%이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 백색～담황색의 결정 또는 결정성의 분말로서 특이한 냄새를 가지며 약간의 단맛을 가진다.

② 본 품은 물에 조금 녹기 어렵고 에탄올에 매우 녹기 어려우며 에터에 거의 녹지 않는다.

③ 본 품은 묽은 염산 또는 수산화나트륨시액에 녹는다.

④ 본 품의 수용액(1→100)의 pH는 5.2～6.1이다.

⑤ 본 품의 수용액(1→100)은 좌선성이나 이를 염산으로 산성으로 하면 우선성으로 변한다.

확인시험

① 본 품 25㎎에 무수황산동을 포화시킨 황산 1㎖를 가할 때 액상은 황색을 나타낸다.

② 본 품 5㎎에 물 5㎖를 가하여 녹이고 수산화나트륨시액 2㎖를 가하여 잘 흔들어 섞고 니트로페로시드나트륨시액 0.3㎖를 가하고 다시 잘 흔들어 섞어 35～40℃에서 10분간 방치한 후 2분간 방냉하고 묽은 염산 2㎖를 가하여 흔들어 섞으면 액상은 적색을 나타낸다.

순도시험

① 용액상: 본 품 0.5g에 물 20㎖를 가해 녹일 경우 용액은 무색으로 거의 투명하여야 한다.

② 염화물: 본 품 0.09g을 취하여 염화물의 시험할 때 그 양은 0.01N염산 0.5㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다 (0.20%이하).

③ 황산염: 본 품 0.08g을 취하여 황산염의 시험할 때 그 양은 0.01N황산 0.5㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다 (0.30%이하).

④ 중금속: 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 1법에 의해 시험할 때 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다 (20ppm이하).

⑤ 비소: 본 품 1.0g을 100㎖의 분해플라스크에 넣고 초산 5㎖ 및 황산 2㎖를 가하고 플라스크입구에 작은 깔때기를 얹고 흰 연기가 발생할 때까지 주의하여 가열한다. 냉각 후 초산 2㎖씩을 2회 가하여 가열하고 여기에 강과산화수소수 2㎖씩을 수회 가하여 액이 무색～미황색이 될 때까지 가열한다. 냉각 후 포화수산암모늄 용액 2㎖를 가하여 다시 흰 연기가 발생할 때까지 가열한다. 냉각 후 물을 가하여 5㎖로 하고 이것을 검액으로서 비소의 시험할 때 이것에 적합하여야 한다 (2ppm이하).

건조감량

   0.5%이하(1g, 105℃, 4시간)

강열잔류물

   0.5%이하(1g)

정량법

본 품을 건조 후 약 0.3g을 정밀하게 칭량하여 공전플라스크에 넣고 물 100㎖, 인산1수소칼륨 5g, 인산이수소칼륨 2g 및 요오드화칼륨 2g을 넣고 흔들어 섞은 후 녹인다. 여기에 정확히 0.1N 요오드액 50㎖를 가하고 뚜껑을 하여 잘 흔들어 섞고 30분간 방치한 후 과량의 요오드를 0.1N 치오황산나트륨액으로 적정한다 (지시약 전분시액 1㎖). 같은 방법으로 공시험 한다.

0.1N 요소액 1㎖ = 7.460㎎ C5H11NO2S

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

밀폐용기에 보존할 것.

■ L-발린(L-Valine)

C5H11NO2                                                    분자량 117.15

성분규격

  함량

본 품은 건조 후 정량 할 때 L-발린(C5H11NO2) 98%이상(풍건상태로 96.5% 이상)을 함유한다.

  성상

본 품은 백색의 결정으로서 냄새가 없으며 조금 특이한 맛을 가지고 있다.

확인시험

① 본 품 6N 염산용액(1→25)은 우선성이다.

② 본 품 수용액(1→1,000) 5㎖에 닌히드린시액 1㎖를 가하여 3분간 가열하면 적자～청자색을 나타낸다.

순도시험

① 용상 : 본 품 0.5g에 물 20㎖를 녹일 때, 그 액은 무색이며 투명하여야 한다.

② 액상 : 본 품 수용액(1→30)의 pH는 유리전극법으로 측정할 때, 5.0～7.0이어야 한다.

③ 비선광도 : 본 품 105℃에서 3시간 건조한 다음 약 4g을 정밀히 달아 6N 염산에 녹여 50㎖로 하여 이 액의 선광도를 측정할 때, α(20, D) = +26.5～ +29.0? 이하 이어야 한다.

④ 비소 : 본 품 0.25g을 물 10㎖에 녹이고 이를 시험용액으로 하여 비소시험을 할 때, 이에 적합하여야 한다.(4ppm 이하)

⑤ 중금속 : 본 품 1g에 묽은초산 2㎖ 및 물 30㎖를 가하여 녹이고 이를 시험용액으로 하여 중금속 시험을 할 때, 그 양은 20ppm 이하이어야 한다.

⑥ 염화물 : 본 품 0.5g을 취하여 염화물시험을 할 때, 그 양은 0.01N 염산 0.3㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.

건조감량

1.5%이하(1g, 105℃, 4시간)

강열잔류물

0.5%이하(1g)

정량법

본 품을 약 0.15g을 정밀히 달아 개미산 3㎖에 녹이고 빙초한 50㎖를 가하여 0.1N 과염소산용액으로 적정한다.(지시약 : α-나프톨벤제인시약 0.5㎖). 종말점은 액의 갈색이 녹색으로 변하는 점이다. 따로 같은 방법으로 공시험을 한다.

0.1N 과염소산용액 1㎖ = 11.71mg C5H11NO2

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법

밀폐용기에 본존할 것

■ L-알기닌(L-아지닌, L-Arginine)

C6H14N4O2 분자량174.20

성분규격

함량

본 품을 건조물로 환산한 것은 L-알기닌(C6H14N4O2) 98.0～102.0%를 함유한다.

성상

본 품은 백색의 결정 또는 결정성 분말로서 특이한 냄새와 맛을 가지고 있다.

확인시험

① 본 품의 수용액(1→1,000) 5㎖에 닌하이드린용액(1→50) 1㎖를 가하고 수욕중에서 3분간 가열할 때 청자색을 나타낸다

② 본 품의 수용액은 알칼리성이다.

순도시험

① 용액상 : 본 품 1g에 물 20㎖를 가하여 녹인 액은 무색이며 투명하여야 한다.

② 액성 : 본 품의 수용액 (1→20)의 pH는 10.5～12.5 이어야 한다.

③ 선광도 : 본 품 약 8g을 정밀하게 칭량하여 6N 염산에 녹여 100㎖로 하여 이 액의 선광도를 측정하고 다시 건조물로 환산할 때 = +25.0 ～ +27.9°이어야 한다.

④ 염화물 : 본 품 0.07g을 취하여 염화물 시험을 할 때 그 양은 0.01N 염산 0.2㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.

⑤ 비소 : 본 품 0.25g을 물 5㎖에 녹이고 이를 시험용액으로 하여 비소시험을 할 때 이에 적합하여야 한다.(4ppm 이하)

⑥ 중금속 : 본 품 1g에 물 30㎖를 가하여 녹이고 페놀프탈레인시액 1방울을 가하여 묽은 염산으로 중화한 후, 다시 묽은초산 (1→20) 2㎖ 및 물을 가하여 50㎖로 한다. 이것을 시험용액으로 하여 중금속 실험을 할 때 그 양은 20ppm 이하이어야 한다.

건조감량

본 품을 105℃에서 3시간 건조할 때, 그 감량은 1.0% 이하이어야 한다.

강열잔류물

본 품의 강열잔류물은 0.2% 이하이어야 한다.

정량법

본 품 약 0.2g을 정밀하게 칭량하여 개미산 3㎖에 녹이고 빙초산(과염소산적정용) 50㎖를 가하여 0.1N 과염소산용액으로 적정한다.(지시약:크리스탈바이올렛ㆍ빙초산시액 1㎖) 종말점은 액의 자색이 청색을 지나 녹색으로 변하는 시점이다. 따로 같은 방법으로 공시험을 한다.

0.1N 과염소산용액 1㎖ = 8.710㎎ C6H14N4O2

■ L-이소로이신

L-Isoleucine

  C6H13O2N  분자량 131.18   

함    량  이 품목을 건조물로 환산한 것은 L-이소로이신(C6H13O2N) 98.0～102.0%를 함유한다.

성    상  이 품목은 백색의 결정 또는 결정성분말로서 냄새가 없거나 약간 특이한 냄새가 있으며 조금 쓴맛을 가지고 있다.

확인시험  (1) 이 품목의 6N 염산(1→25)은 우선성이다.

  (2) 이 품목의 수용액(1→1,000) 5mL에 닌히드린시액 1mL를 가하고 3분간 가열하면 적자～청자색을 나타낸다.

순도시험  (1) 용  상 : 이 품목 0.5g을 물 20mL에 녹일 때 무색으로서 그 탁도는 거의 징명 이하이어야 한다.

  (2) 액  성 : 이 품목의 수용액(1→100)의 pH는 5.5～7.0이어야 한다.

  (3) 비선광도 : 이 품목을 건조한 다음, 약 2g을 정밀히 달아 6N 염산 50mL에 녹이고 이 액의 선광도를 측정할 때, ＝+39.5～+41.5°이어야 한다.

  (4) 비  소 : 이 품목 0.25g을 1N 염산 10mL에 녹이고 이를 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하).

  (5) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 5.0ppm 이하이어야 한다.

  (6) 염화물 : 이 품목 0.5g을 취하여 염화물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.01N 염산 0.3mL에 대응하는 양 이하이어야 한다. 

건조감량  이 품목을 105℃에서 3시간 건조할 때, 그 감량은 0.3% 이하이어야 한다.

강열잔류물  이 품목의 강열잔류물은 0.1% 이하이어야 한다.

정 량 법  이 품목 약 0.3g을 정밀히 달아 빙초산 50mL에 가열하여 녹이고 식힌 다음 0.1N 과염소산용액으로 적정한다(지시약 : α-나프톨벤제인시액 10방울). 종말점은 액의 갈색이 녹색으로 변하는 점으로 한다.

0.1N 과염소산용액 1mL ＝ 13.12mg C6H13O2N

■ L-트레오닌(L-Threonine)

C4H9O3N 분자량119.12

성분규격

함량

본 품은 건조 후 정량할 때, L-트레오닌 (C4H9O3N) 98.5% 이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 백색～담황갈색의 결정 또는 결정성분말로서 냄새는 없거나 또는 약간의 특이한 냄새가 나며 조금 단맛을 가지고 있다.

② 본 품의 수용액 (1→20)의 pH는 5.0～6.5이다.

확인시험

①본 품의 수용액 (1→1000) 5㎖에 닌하이드린시액 1㎖를 넣고, 3분간 가열할 때 그 액상은 적자색～자색을 나타낸다.

②본 품의 수용액 (1→10) 5㎖에 포화 과요오드산칼륨용액 5㎖를 넣고 가열할 때, 암모니아 냄새가 나는 가스를 발생하고, 이 가스는 물에 적신 적색 리트머스종이를 청색으로 변하게 한다.

순도시험

① 선광도 : 본 품을 건조 후 약 3g을 정밀하게 칭량하고 물에 녹여 50㎖로 하고 필요하다면 여과한다. 이 액의 선광도를 측정할 때  = -26.0 ～ -29.0°이어야 한다.

② 염화물 : 본 품 0.09g을 취하여, 염화물의 시험할 때, 그 양은 0.01N염산 0.5㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다. (0.20%이하)

③암모늄염 : 「아미노초산」의 순도시험 ③을 준용한다. 이 경우에 「0.1g」이라고 된 것은 「0.02g」으로 한다. (0.10%이하)

④중금속 : 본 품 1.0g을 취하여, 중금속시험법 제 2법에 의해 시험할 때, 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(20ppm이하)

⑤비소 : 본 품 1.0g을 취하여, 비소시험법 제 1법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다.(2ppm이하)

건조감량

0.5% 이하 (1g, 105℃, 3시간)

강열잔류물

0.5% 이하 (1g)

정량법

본 품을 건조 후 약 0.2g을 정밀하게 칭량하여 개미산 3㎖를 가하여 녹인다. 다시 과염소산적정용빙초산 50㎖를 가하여, 0.1N 과염소산으로 적정한다. 종점의 확인은 통상적으로 전위차계를 이용한다. 지시약(크리스탈 바이오레드ㆍ빙초산시액 1㎖)를 이용하는 경우의 종점은 액의 자색이 청색을 거쳐 녹색으로 변하는 시점으로 한다. 별도로 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다.

0.1N 과염소산 1㎖ = 11.912㎎ C4H9NO3

보존방법의 기준

밀폐용기에 보존할 것.

■ L-트립토판(Ⅰ)(L-Tryptophan(Ⅰ))

C11H12N2O2 분자량204.23

성분규격

함량

본 품은 건조 후 정량할 때 L-트립토판(C11H12N2O2) 98.5%이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 백색～담황색의 분말로서, 냄새는 없거나 또는 약간의 특이한 냄새가 난다.

② 본 품은 물에 녹기 어렵고, 에탄올에 매우 녹기 어려우며, 에터에 거의 녹지 않는다.

③ 본 품은 묽은 염산 또는 수산화나트륨용액에 녹는다.

④ 본 품의 수용액 (1→500)의 pH는 5.5-7.0이다.

확인시험

① 본 품의 수용액 (1→100)은 좌선성인데, 여기에 수산화나트륨용액(1→5)를 가하여 알칼리성으로 하면 우선성으로 변한다.

② 「DL-트립토판」의 확인시험 ②를 준용한다.

순도시험

① 선광도 : 본 품을 건조 후 약 0.5g을 정밀하게 칭량하여 물 40㎖를 넣어 가열하여 녹이고, 냉각 후 물을 넣어 50㎖로 한 용액의 선광도를 측정할 때  = -28.4 ～ -33.0°이어야 한다.

② 염화물 : 「DL-트립토판」의 순도시험 ①을 준용한다.(0.20%이하)

③ 암모늄염 : 「DL-트립토판」의 순도시험 ②를 준용한다.(0.04%이하)

④ 중금속 : 「DL-트립토판」의 순도시험 ③을 준용한다.(20ppm이하)

⑤ 비소 : 「DL-트립토판」의 순도시험 ④를 준용한다.(2ppm이하)

건조감량

1.0%이하 (1g, 105℃, 3시간)

강열잔류물

0.5%이하 (1g)

정량법

「DL-트립토판」의 정량법을 준용한다.

보존방법의 기준

차광한 밀폐용기에 보존할 것.

■ L-트립토판(Ⅱ)(L-Tryptophan(Ⅱ))

C11H12N2O2 분자량204.23

성분규격

함량

본 품은 건조 후 정량할 때 L-트립토판 (C11H12N2O2) 75.0%이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 담회갈색～다갈색의 분말로서, 약간의 특이한 냄새가 난다.

② 본 품은 물에는 조금 녹기 어렵고, 에탄올에 매우 녹기 어려우며 에터에 거의 녹지 않는다.

③ 본 품의 수용액 (1→500)의 pH는 6.0～8.0이다.

확인시험

① 본 품의 수용액 (1→100)은 좌선성인데, 여기에 수산화나트륨 용액(1→5)을 가하여 강알카리성으로 하면 우선성으로 변한다.

② 「DL-트립토판」의 확인시험 ②를 준용한다.

순도시험

① 선광도 : 본 품을 건조 후 약 0.5g을 정밀하게 칭량하여 물 약 40㎖를 넣고 가열하여 녹인다. 냉각 후 물을 넣어 50㎖로 한 시험액의 선광도는 = -22.0 ～ -33.0°이어야 한다.

② 염화물 : 본 품 0.045g을 취하여 염화물 시험할 때 그 양은 0.01N 염산 0.5㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다. (0.40%이하)

③ 암모늄염 : 본 품 0.05g을 증류플라스크에 넣어 물 70㎖를 가하여 녹이고, 산화마그네슘 1g을 넣어 유액(留液) 40㎖를 얻을 때까지 증류한다. 수기에는 0.1N 염산 2㎖를 넣은 네슬러관을 이용하여 냉각기의 하단에 이 액을 적신다. 이 유액에 물을 넣어 50㎖로 하고 그 중 7㎖를 네슬러관에 취하여 수산화나트륨시액 5㎖ 및 물을 가하여 50㎖로 한다. 네슬러시액 1㎖를 넣을 때 나타나는 색은 암모늄 표준액 2㎖를 네슬러관에 취하여, 물을 넣고 40㎖로 하여, 이하 시료의 경우와 같은 방법으로 조작하였을 때 나타나는 색보다 짙어서는 안 된다.(0.3%이하)

④ 중금속 : 「DL-트립토판」의 순도시험 ③을 준용한다.(20ppm이하)

⑤ 비소 : 「DL-트립토판」의 순도시험 ④를 준용한다.(2ppm이하)

⑥ 그 외의 전 질소 : 본 품을 건조 후 약 0.2g을 정밀하게 칭량하고 이하 질소정량법(켈달법)에 의해 시험을 실시하고 아래 식에 의해 그 외의 전 질소를 구할 때 그 값이 3.5%이하이어야 한다.

그 외의 전 질소(%) = 질소 정량치(%) - L-트립토판함량(%) × 0.1372

⑦ 환원당 : 본 품 1.0g을 시험관에 넣고, 1N 황산시액 10㎖를 가하여 시험관 입구에 유리구슬을 얹고, 수욕상에서 1시간 가열한다. 냉각 후 수산화나트륨시액으로 중화하고 물을 가하여 25㎖로 한다. 이 액을 건조 여과지를 사용하여 여과하고, 여과액 2.5㎖를 시험관에 취하여 등량의 페링시액을 넣어 15분간 수욕상에서 가열한다. 이 액을 방냉 정치 시켰을 때, 생성되는 적색 침전물의 생성량은 0.01g의 포도당을 상기 방법과 같은 조작을 행할 때 대응하는 양 이하이어야 한다. (1.0%이하)

건조감량

7.0%이하 (1g, 105℃, 3시간)

강열잔류물

4.0%이하 (1g)

정량법

본 품을 건조 후 약 0.2g을 정밀하게 칭량하고 물에 녹여 1000㎖로 한 후 0.45㎛ 필터로 여과하여 시료용액으로 한다. 이 액 20㎕에 대하여 다음 조건으로 액체크로마토그라피법에 의해 시험한다. 획득한 크로마토그라피에서 L-트립토판의 피크면적을 측정하고, 별도로 구하는 검량선에 의해 L-트립토판 농도를 구하여 함량을 산출한다.

조작조건 예

검출기 : 자외흡광광도계 (측정파장 : 278㎚)

칼람 : 내경 4-6㎜, 길이 250㎜의 스텐레스관에 충전제로서 폴리에스테르계 포라스포리마겔을 충전한다.

칼람온도 : 30℃

이동상 : 0.15M 인산-수소칼륨시액ㆍ메탄올 혼합액 (9:1)

유량 : 매분 1.0㎖

검량선의 작성

「L-트립토판」을 건조하여, 그 중 0.10, 0.15 및 0.20g씩을 정확히 칭량하여 물에 녹여 1000㎖로 한다. 이 액을 0.45㎛ 멤브렌필터로 여과하여 표준용액으로 한다. 표준용액 20㎕씩에 대해 이하 시료용액의 경우와 같은 방법으로 액체 크로마토그라피법에 의해 시험한다. 획득한 크로마토그람에서 L-트립토판의 피크면적을 측정하여 검사량을 작성한다.

제조방법의 기준

Bacillus amyloliquefaciens의 L-트립토판 생산균주를 호기적으로 배양한 후, 배양액중의 균체를 제거하여 L-트립토판을 분리ㆍ건조하여 제조한다.

보존방법의 기준

차광한 밀폐용기에 보존할 것.

표시기준

본 품의 직접용기 또는 포대에 다음 문자를 기재할 것.

L-트립토판(사료용)

■ L??시스테인염산염(L-Cysteine Monohydrochloride)

  C3H7NO2SㆍHClㆍH2O  분자량 175.63   

함    량  

  이 품목은 건조한 다음 정량할 때, L-시스테인염산염(C3H7NO2SㆍHCl＝157.62) 98.0～102.0%를 함유한다.

성    상  

  이 품목은 무～백색의 결정 또는 백색의 결정성분말로서 특이한 냄새와 맛이 있다.

확인시험  

  (1) 이 품목의 수용액(1→1,000) 5mL에 피리딘 0.5mL와 닌히드린용액(1→100) 1mL룰 가하여 5분간 가열하면 자～자갈색을 나타낸다.

  (2) 이 품목의 수용액(1→1,000) 10mL에 수산화나트륨시액 2mL와 니트로프루시드나트륨시액 2방울을 가할 때, 적자색을 나타낸다.

  (3) 이 품목의 수용액(1→50) 10mL에 과산화수소 1mL를 가하여 수욕 중에서 10분간 가열한 액은 확인시험법 중 염화물 (나)의 반응을 나타낸다.

순도시험  

  (1) 용  상 : 이 품목 1g을 물 20mL에 녹일 때, 그 액은 무색으로서 탁도는 거의 징명 이하이어야 한다.

  (2) 비선광도 : 이 품목 4g을 정밀히 달아 1N 염산에 녹여 50mL로 하고 이 액의 선광도를 측정할 때, ＝+5.0～+8.0°이어야 한다.

  (3) 비  소 : 이 품목 1g을 100mL 분해플라스크에 넣고 황산 5mL 및 질산 5mL를 가하여 가열한다. 때때로 질산 2～3mL를 추가하여 액이 무～엷은 황색이 될 때까지 가열을 계속한다. 식힌 다음 포화수산암모늄용액 15mL를 가하여 흰 연기가 발생할 때까지 가열농축하여 2～3mL되게 한다. 식힌 다음 물을 가하여 10mL로 하고 그 중 5mL를 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 2ppm 이하이어야 한다.

  (4) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 5.0ppm 이하이어야 한다.

  (5) 시스틴 : 이 품목 100mg에 에틸말레이미드용액(1→50) 50mL를 가하여 녹이고 2시간 방치한 다음 5μL를 시험용액으로 하여 n-부탄올ㆍ빙초산ㆍ물의 혼액(5 : 1 : 2)을 전개용용매로 하여 여지크로마토그래피 제1법으로 시험할 때, 한개의 반점 이외의 반점이 있어서는 아니 된다. 다만 여지는 크로마토그래피용 2호를 사용한다. 전개용용매가 약 30cm 상승하면 전개를 끝내고 풍건하여 100℃에서 20분간 건조한 다음 닌히드린물포화 n-부탄올용액(1→500)을 분무하고 100℃에서 5분간 건조한 다음 자연광선 밑에서 관찰한다. 대조액은 따로 쓰지 아니한다.

건조감량  

  이 품목을 감압데시케이타(실리카겔)에서 24시간 건조할 때, 그 감량은 8～12%이어야 한다.

강열잔류물  

  이 품목 1g을 석영제 또는 자제도가니에 취하여 강열잔류물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.1% 이하이어야 한다.

정 량 법  

  이 품목을 건조한 다음 약 0.25g을 정밀히 달아 물 20mL와 요오드칼륨 4g을 가하여 녹인다. 묽은염산 5mL와 0.1N요오드용액 25mL를 가하여 얼음물 중에서 20분간 암소에 방치한 후 과량의 요오드를 0.1N 치오황산나트륨용액으로 적정한다(지시약 : 전분시액). 같은 방법으로 공시험을 한다.

0.1N 요오드용액 1mL ＝ 15.76mg C3H7NO2SㆍHCl

■ L-시스틴(L-Cystine)

  C6H12N2O4S2   분자량 240.30   

함량

  이 품목은 건조한 다음 정량할 때, L-시스틴(C6H12N2O4S2) 98.5～101.5%를 함유한다.

성상

  이 품목은 백색의 결정 또는 결정성분말로서 약간 특이한 냄새가 있고, 맛이 없거나 약간 특이한 맛이 있다.

확인시험

  ① 이 품목의 포화용액 5mL에 닌히드린용액(1→50) 1mL를 가하여 수욕상에서 3분간 가열할 때, 자색을 나타낸다.

  ② 이 품목의 2N 염산(1→30) 3mL에 아연분말 0.04g을 가하여 수욕상에서 10분간 가열하고 식힌 후 필요하면 여과하고 수산화나트륨용액(1→20) 10mL을 가하여 흔들어 섞은 다음 니트로프루시드나트륨 시액 한방울을 가할 때, 적자색을 나타낸다.

순도시험

  ① 용  상 : 이 품목 1g을 1N 염산 20mL에 녹일 때, 그 액은 무색으로서 탁도는 징명하여야 한다.

  ② 액  성 : 이 품목의 포화수용액의 pH는 5.0～6.5이어야 한다.

  ③ 비선광도 : 미리 건조시킨 이 품목 2g을 1N 염산에 녹여 100mL로 한 용액의 선광도를 측정할 때, ＝-215～-225°이어야 한다.

  ④ 염화물 : 이 품목 0.07g을 취하여 염화물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.01N 염산 0.2mL에 대응하는 양 이하이어야 한다(0.1% 이하).

  ⑤ 비  소 : 이 품목 0.25g을 취하여「구아검」의 순도시험 ①에 따라 시험한다(4ppm 이하).

  ⑥ 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 5.0ppm 이하이어야 한다.

건조감량

  이 품목을 105℃에서 3시간 건조할 때, 그 감량은 0.2% 이하이어야 한다.

강열잔물

  이 품목 2g을 취하여 강열잔류물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.1% 이하이어야 한다.

정량법

  이 품목을 건조한 다음 300mg을 정밀히 달아 질소정량법중 킬달법에 따라 시험하여 질소의 함량(N)을 구하고 다음 계산식에 따라 L-시스틴의 함량을 구한다.

  L-시스틴의 함량(%) =    N × 8.58   

■ L-히스티딘(L-Histidine)

  C6H9N3O2  분자량 155.16   

함    량

  이 품목을 건조한 다음 정량할 때, L-히스티딘(C6H9N3O2) 98.5～101.5%를 함유한다.

성    상

  이 품목은 백색의 결정 또는 결정성분말로서 냄새가 없으며 약간 쓴맛이 있다.

확인시험

  이 품목의 수용액(1→100) 5mL에 브롬시액 2mL를 가하면 황색을 나타내며, 이 용액을 조용히 가열하면 처음에는 무색으로 된 다음 적갈색을 지나 진한 회색의 침전물이 생성된다.

순도시험

  (1) 비선광도 : 이 품목을 미리 건조한 다음 11g을 정밀히 달아 6N 염산을 가하여 녹인 다음 100mL로 하여 이 액의 선광도를 측정할 때, ＝+12.0～+14.0°이어야한다.

  (2) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 5.0ppm 이하이어야 한다.

  (3) 비  소 : 이 품목 0.25g을 물 5mL에 녹여 이를 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 4ppm 이하이어야 한다.

  (4) 염화물 : 이 품목 0.07g을 취하여 염화물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.01N 염산 0.2mL에 대응하는 양 이하이어야 한다(0.1% 이하).

건조감량

  이 품목을 105℃에서 3시간 건조할 때, 그 감량은 0.2% 이하이어야 한다.

강열잔류물

  이 품목의 강열잔류물은 0.2% 이하이어야 한다.

정 량 법

  이 품목을 건조한 다음 약 0.15g을 정밀히 달아 개미산 3mL 및 빙초산 50mL를 가하여 녹인 다음 0.1N 과염소산용액으로 적정한다(지시약 : 크리스탈바이올렛ㆍ빙초산시액 2방울). 종말점은 액의 갈색이 녹색으로 변하는 점으로 한다. 따로 같은 방법으로 공시험을 한다.

0.1N 과염소산용액 1mL ＝ 15.52mg C6H9N3O2

■ L-히스티딘염산염(L-Histidine Monohydrochloride)

  C6H9O2N3ㆍHClㆍH2O  분자량 209.64   

함    량  

이 품목은 건조한 다음 정량할 때, L-히스티딘염산염(C6H9O2N3ㆍHCIㆍH2O) 98.0～101.0%를 함유한다.

성    상  

이 품목은 백색의 결정 또는 결정성분말로서 냄새가 없으며 조금 신맛과 쓴맛을 가지고 있다.

확인시험

  (1) 이 품목의 수용액(1→10)에 수산화나트륨용액(1→4)을 가하여 알칼리성으로 하면 좌선성이나 이를 염산으로 산성으로 하면 우선성으로 변한다.

  (2) 이 품목의 수용액(1→1,000) 5mL에 닌히드린시액 1mL를 가하여 3분간 가열하면 자색을 나타낸다.

  (3) 이 품목은 확인시험법 중 염화물 (나)의 반응을 나타낸다.

  (4) 이 품목의 수용액(1→100) 5mL에 브롬시액 2mL를 가하면 액은 황색을 나타내고 조용히 가열하면 무색으로 되었다가 적갈색을 거쳐 흑색 비슷한 색의 침전이 생긴다.

순도시험

  (1) 용  상 : 이 품목 1g을 물 10mL에 녹일 때, 무색으로서 그 탁도는 거의 징명 이하이어야 한다.

  (2) 액  성 : 이 품목의 수용액(1→10)의 pH는 3.5～4.5이어야 한다.

  (3) 비선광도 : 이 품목을 98～100℃에서 3시간 건조한 다음 약 5.5g을 정밀히 달아 6N 염산에 녹여 50mL로 하여 이 액의 선광도를 측정할 때, ＝+8.5～+10.5°이어야 한다.

  (4) 비  소 : 이 품목 0.25g을 물 5mL에 녹여 이를 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하).

  (5) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 5.0ppm 이하이어야 한다.

건조감량

  이 품목을 98～100℃에서 3시간 건조할 때, 그 감량은 0.3% 이하이어야 한다.

강열잔류물

  이 품목의 강열잔류물은 0.1% 이하이어야 한다.

정 량 법

  이 품목을 건조한 다음 약 0.2g을 취하여 이하 「L-라이신염산염」의 정량법에 따라 정량한다.

0.1N 과염소산용액 1mL ＝ 10.48mg C6H9O2N3ㆍHClㆍH2O

■ 아미노초산(글라이신, Aminoacetic Acid = Glycine)

C2H5NO2 분자량75.07

성분규격

함량

본 품은 건조 후 정량할 때, 아미노초산(C2H5NO2) 98.5%이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 백색의 결정 또는 결정성의 분말로서, 감미를 가진다.

② 본 품은 물에 녹기 쉽고, 에탄올 및 에터에 거의 녹지 않는다.

③ 본 품의 수용액 (1→10)의 pH는 5.5-7.0이다.

확인시험

① 본 품의 수용액(1→10) 5㎖에 묽은염산 5방울 및 아초산나트륨시액 1㎖를 넣으면 무색가스가 발생한다.

② ①의 반응이 끝난 액 5방울을 소시험관에 취하여, 잠시 끊인 후 이어서 120℃의 건조기 중에서 증발건고한다. 냉각 후 잔류물에 크로모토로프산 시액 5-6방울을 넣고, 수욕상에서 10분간 가열할 때, 색은 녹자색을 띤다.

③본 품의 수용액 (1→1000) 5㎖에 닌하이드린시액 1㎖를 넣어 3분간 가열할 때 액상은 자색을 나타낸다.

순도시험

① 용액상 : 본 품 1.0g에 물 10㎖를 넣어 녹일 때 그 액은 무색으로서 맑아야 한다.

② 염화물 : 본 품 0.5g을 취하여 염화물시험을 할 때, 그 양은 0.01N 염산 0.30㎖에 대응하는 양이하이어야 한다. (0.021%)

③ 암모늄염 : 본 품 0.1g을 증류 플라스크에 넣어, 물 70㎖를 넣어 녹이고 산화마그네슘 1g을 넣어 유액(留液)40㎖를 얻을 때까지 증류한다. 수기에는 0.1N 염산 2㎖를 넣은 네슬러관을 사용하여 냉각기의 하단을 이 액에 적신다. 유액에 수산화나트륨 시액 5㎖ 및 물을 넣어 50㎖로 하여 네슬러시액 1㎖를 가했을 때 나타나는 색은 암모늄 표준액 2㎖를 네슬러관에 취해 물을 넣어 40㎖로 하여, 이하 시료의 경우와 같은 방법으로 조작할 때 나타나는 색보다 짙어서는 안 된다.(0.02%이하)

④중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 1법에 의해 시험할 때, 이 양은 납 표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(20ppm 이하)

⑤비소 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 1법에 의해 시험할 때, 여기에 적합하여야 한다.(2ppm이하)

건조감량

0.3%이하 (1g, 105℃, 3시간)

강열잔류물

0.1%이하 (1g)

정량법

본 품을 건조 후 약 0.5g을 정밀하게 칭량하여, 개미산 3㎖에 녹여 과염소산적정용 빙초산 50㎖를 넣어, 0.1N 과염소산으로 적정한다.(지시약 α-나프톨벤젠시액 0.5㎖) 이 경우에 적정의 종점은 액의 갈색이 녹색으로 변하는 시점으로 한다. 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다.

0.1N 과염소산 1㎖ = 7.507㎎ C2H5NO2

보존방법의 기준

밀폐용기에 보존할 것.

■ 타우린(Taurine)

  C2H7NO3S  분자량 125.14   

함    량

  이 품목을 건조한 다음 정량할 때, 타우린(C2H7NO3S ＝ 125.14) 99.0% 이상을 함유한다.

성    상

  이 품목은 백색의 결정성분말로서 냄새가 없다.

확인시험

  ① 이 품목의 수용액(1→20) 5mL에 묽은염산 5방울과 아질산나트륨시액 5방울을 가할 때, 거품이 나고 무색의 가스가 생성된다.

  ② 이 품목 0.5g에 수산화나트륨시액 7.5mL를 가하고 천천히 가열하여 증발건고한 다음 500℃에서 2시간 강열분해하고 그 잔류물에 물 5mL를 가해주고 혼합한 후 니트로프루시드나트륨시액 1방울을 가할 때, 그 액은 적자색을 나타낸다.

순도시험

  ① 용  상 : 이 품목 0.5g을 물 20mL에 녹일 때, 그 액은 무색이다.

  ② 염화물 : 이 품목 1.0g을 취하여 염화물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.01N 염산 0.3mL에 대응하는 양 이하이어야 한다.

  ③ 황산염 : 이 품목 1.5g을 취하여 황산염시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.01N 황산 0.45mL에 대응하는 양 이하이어야 한다.

  ④ 암모니아 : 이 품목 0.1g을 플라스크에 취하여 물 70mL에 녹인 다음 산화마그네슘 1g을 가해주고 증류장치를 연결한다. 수기에는 0.1N 염산 2mL를 넣어주고 냉각기 끝을 이 액에 잠기도록 하고 유액 40mL가 얻어질 때까지 증류한다. 유액에 수산화나트륨시액 5mL 및 물을 가하여 50mL로 하고 네슬러시액 0.5mL를 가할 때 액의 색은 암모니아표준용액 2mL에 수산화나트륨시액 5mL와 물을 가하여 50mL로 하고 네슬러시액 0.5mL를 가해준 액보다 진하여서는 아니 된다.

  ⑤ 비  소 : 이 품목 1g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에탄올용액(1→50) 10mL를 넣고 에탄올에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3mL를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(1ppm 이하).

  ⑥ 납：이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.0ppm 이하이어야 한다.

  ⑦ 황산정색물 : 이 품목 0.1g을 취하여 황산정색물시험법에 따라 시험할 때, 그 액은 비색표준용액 S보다 진하여서는 아니 된다.

  ⑧ 대장균군 : 이 품목은 「식품 등의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 대장균군에 따라 시험할 때, 제품 1g당 30 이하이어야 한다.

  ⑨ 일반세균수 : 이 품목은 「식품 등의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 세균수(일반세균수)에 따라 시험할 때, 1g당 1,000 이하이어야 한다.

건조감량

  이 품목을 105℃에서 2시간 건조할 때, 그 감량은 0.2% 이하이어야 한다.

강열잔류물

  이 품목 1g을 취하여 강열잔류물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.1% 이하이어야 한다.

정 량 법

  이 품목을 건조한 다음 약 0.2g을 정밀히 달아 물 50mL를 가하여 녹인 후 포르말린 5mL를 가하고 0.1N 수산화나트륨용액으로 적정한다(지시약 : 페놀프탈레인시액 3방울). 따로, 같은 방법으로 공시험을 한다.

  함 량(%) =  12.514 × (a-b)     × 100  

            ───────────        

              검체의 채취량(mg)           

a : 본시험의 0.1N 수산화나트륨용액의 소비량(mL)

b : 공시험의 0.1N 수산화나트륨용액의 소비량(mL)

■ L-로이신

L-Leucine

  C6H13NO2  분자량 131.17   

함    량  이 품목은 건조한 다음 정량할 때, L-로이신(C6H13NO2) 98.5∼101.5%를 함유한다.

성    상  이 품목은 백색의 결정 또는 결정성 분말로서, 냄새가 없거나 약간 특이한 냄새가 있으며, 맛은 약간 쓰다.

확인시험  이 품목은 약 150°에서 승화한다.

순도시험  (1) 비선광도：이 품목 4g을 정밀히 달아 6N 염산을 가하여 녹인 다음 100ml로 하여 이 액의 선광도를 측정하고 다시 건조물로 환산할 때, [α](20, D) ＝ +14.5 ∼ +16.5°이어야 한다.

(2) 납：이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 5.0ppm 이하이어야 한다.

(3) 비소：이 품목 0.25g을 물 5ml에 녹여 이를 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 4ppm 이하이어야 한다.

건조감량  이 품목을 105°에서 3시간 건조할 때, 그 감량은 0.2% 이하이어야 한다.

강열잔류물  이 품목의 강열잔류물은 0.1% 이하이어야 한다.

정 량 법  이 품목을 건조한 다음 약 0.4g을 정밀히 달아 개미산 3ml 및 빙초산 50ml를 가하여 녹인 다음 0.1N 과염소산용액으로 적정한다(지시약 : 크리스탈바이올렛 빙초산시액 2방울). 종말점은 액의 색이 청녹색으로 변하는 점이다. 따로 같은 방법으로 공시험을 한다.

 0.1N 과염소산용액 1ml ＝ 13.12mg C6H13NO2

5. 비타민제(Vitamins)

┌───────────────────────────────────────────────┐

│지용성과 수용성 비타민으로 분류되며 가축의 정상적인 대사 작용을 돕기 위해 사료에 첨가하는 물질│

└───────────────────────────────────────────────┘

■ L-카르니틴

L-Carnitine

  (CH3)3N+CH2CH(OH)CH2COO-  

  C7H15NO3  분자량 161.20   

함    량  이 품목을 무수건조물로 환산한 것은 L-카르니틴(C7H15NO3) 97.0～103.0%을 함유한다.

성    상  이 품목은 백색 또는 엷은황색의 결정성분말로서 특이한 냄새가 있다.

확인시험  이 품목을 적외부흡수스펙트럼측정법 나. (1) 브롬화칼륨정제법에 따라 시험할 때, 표준품과 동일한 스펙트럼을 나타낸다.

순도시험  (1) 나트륨 : 이 품목 2g을 100mL 메스플라스크에 취하고 질산 5mL를 가한 다음 잘 흔들어 섞고 물을 가하여 100mL로 한 액을 시험용액으로 한다. 나트륨표준용액과 시험용액을 사용하여 원자흡광도법에 따라 시험하고 검체 중의 나트륨양을 구할 때, 그 양은 0.1% 이하이어야 한다. 

  (2) 비선광도 : 이 품목 약 10g을 정밀히 달아 물에 녹여 100mL로 하여 이 액의 선광도를 측정하고 다시 건조물로 환산할 때, =-29～-32°이어야 한다. 

  (3) 액  성 : 이 품목의 수용액(1→20)의 pH는 5.5～9.5이어야 한다. 

  (4) 염화물 : 이 품목 0.13g에 물 100mL를 가하여 녹이고 이 액 20mL를 취하여 묽은질산 6mL를 가하고 이를 시험용액으로 하여 염화물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.01N 염산 0.3mL에 대응하는 양 이하이어야 한다.

  (5) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  (6) 칼  륨 : 이 품목 2g을 100mL 메스플라스크에 취하고 질산 5mL를 가한 다음 잘 흔들어 섞고 물을 가하여 100mL로 한 액을 시험용액으로 한다. 칼륨표준용액과 시험용액을 사용하여 원자흡광도법에 따라 시험하고 검체 중의 칼륨양을 구할 때, 그 양은 0.2% 이하이어야 한다.  

수    분  이 품목의 수분은 수분정량법(칼-피셔법)에 따라 시험할 때, 그 양은 4.0% 이하이어야 한다. 

강열잔류물  이 품목 약 2g을 정밀히 달아 강열잔류물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.5% 이하이어야 한다.

정 량 법  이 품목 약 0.1g을 정밀히 달아 개미산 3mL 및 빙초산(비수적정용) 50mL를 가하여 0.1N 과염소산으로 적정한다(지시약 : 크리스탈바이올렛ㆍ빙초산시액). 종말점은 액의 자색이 청색을 지나 녹색으로 변하는 점이다. 따로 같은 방법으로 공시험을 한다.

0.1N 과염소산용액 1mL = 16.12mg C7H15NO3

■ 나이아신(니아신ㆍ니코틴산, Niacin(Nicotinic Acid))

C6H5NO2 분자량123.11

성분규격

함량

본 품은 건조 후 정량할 때 나이아신(니코틴산, C6H5NO2) 99.0%이상을 함유한다. 

성상

① 본 품은 백색～미황백색의 결정 또는 결정성의 분말로서 냄새는 없거나 또는 약간의 특이한 냄새를 가지며 조금 쓴맛을 가진다. 

② 본 품은 물에 조금 녹기 어려우며 에탄올에 녹기 어렵고 에터에 매우 녹기 어렵다.

③ 본 품은 수산화나트륨 시액 또는 탄산나트륨시액에 녹는다.

④ 본 품은 수용액(1→100)의 pH는 3.0～4.0이다

확인시험

① 본 품 5㎎에 2,4-디니트로클로르벤젠 0.01g을 섞고 5-6초간 조용히 가열하여 용해하고 냉각 후 수산화칼륨ㆍ에탄올시액 4㎖를 가할 때, 액은 암갈색을 나타낸다.

②본 품의 수용액 (1→1,000) 2㎖에 취화시안시액 1㎖ 및 아닐린용액(1→40) 1㎖를 가할 때 액은 황색을 나타낸다.

③본 품 0.02g에 물을 가하고 녹여 1,000㎖로 한다. 이 액으로 흡수 스펙트럼을 측정할 때 파장 261-263nm에서 최대흡수치를 나타내고, 파장 235-239nm에서 최소흡수치를 나타낸다. 여기에서 얻은 최대파장에서의 흡광도를 A1, 최소파장에서의 흡광도를 A2로 할 때 A2/A1은 0.35～0.39이다.

순도시험

① 융점 : 본 품의 융점은 234～238℃이어야 한다.

② 염화물 : 본 품 0.5g을 취하여 염화물의 시험할 때 그 양은 0.01N 염산 0.30㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(0.021% 이하)

③ 황산염 : 본 품 1.0g을 취하여 희석염산 3㎖ 및 물을 가하여 녹여 50㎖로 한다. 이것을 검액으로하여 황산염의 시험할 때 그 탁도는 0.01N 황산 0.40㎖에 묽은 염산 3㎖ 및 물을 가하여 50㎖로 하고 이하 시료의 경우와 같은 방법으로 조작하였을 때 나타나는 탁도 이하이어야 한다.(0.019% 이하)

④ 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속 시험법 제 2법에 의해  시험할 때 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(20ppm 이하)

⑤ 건조감량 : 0.5%이하 (1g, 105℃, 1시간)

강열잔류물

0.10% 이하 (1g)

정량법

본 품을 건조 후 약 0.3g을 정밀하게 칭량하고 물 50㎖를 가하여 녹이고 0.1N 수산화나트륨액으로 적정한다.(지시약 페놀프탈레인 시액 5방울)

0.1N 수산화나트륨액 1㎖ = 12.311㎎ C6H5NO2

보존방법의 기준

밀폐용기에 보존할 것.

■ 니코틴산아미드(Nicotinamide = Niacinamide)

C6H5N2O 분자량122.13

성분규격

함량

본 품은 건조 후 정량할 때 니코틴산아미드(C6H5N2O) 98.5%이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 백색～미황백색의 결정 또는 결정성의 분말로서 냄새는 없거나 또는 약간의 특이한 냄새가 나며 쓴맛을 가진다.

② 본 품은 물, 에탄올 또는 글리세린에 녹기 쉬우며 에터에 녹기 어렵다.

③ 본 품의 융점은 124～131℃이다.

확인시험

① 본 품 5㎎에 2,4-디니트로클로르벤젠 0.01g을 섞고 5-6초간 조용히 가열하여 용해하고 냉각 후 수산화칼륨ㆍ에탄올 시액 4㎖를 가했을 때 액은 적색을 나타낸다.

② 본 품 1㎎에 pH 7.0의 인산염 완충액 100㎖를 가하여 녹이고 이 액 2㎖에 취화시안시액 1㎖를 가하고 80℃에서 7분간 가열하여 급냉하고 수산화나트륨시액 5㎖를 가하여 30분간 방치하였을 때 파장 약 365nm의 자외선하에서 관찰하면 청색의 형광을 발한다.

③ 본 품 0.02g에 수산화나트륨 시액 5㎖를 가하고 주의하여 끓였을 때 발생하는 가스는 적색 리트머스지를 청색으로 변하게 한다.

④ 본 품 0.02g에 물을 가하여 녹여 1,000㎖로 한다. 이 액으로 흡수 스펙트럼을 측정할 때 파장  261-263nm에서 최대흡수치를 나타내고 파장 243-247nm에서 최소흡수치를 나타낸다. 여기에서 얻은 최대파장에서의 흡광도를 A1, 최소파장에서의 흡광도를 A2로 할 때 A2/A1은 0.63-0.67이다.

순도시험

① pH : 본 품의 수용액(1→10)의 pH는 5.0～7.5이어야 한다.

② 염화물 : 본 품 0.5g을 취하여 염화물의 시험할 때 그 양은 0.01N 염산 0.30㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(0.021% 이하)

③ 황산염 : 본 품 1.0g을 취하여 황산염의 시험할 때 그 양은 0.01N 황산 0.40㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(0.019% 이하)

④ 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속 시험법 제 1법에 의해 시험할 때 그 양은 납표준액 3.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(30ppm 이하)

⑤ 황산정색물 : 본 품 0.2g을 취하여 황산정색물의 시험할 때 그 색은 비교액 색 A보다 짙어서는 안 된다.

건조감량

0.5%이하 (1g, 감압, 실리카겔, 4시간)

강열잔류물

0.80% 이하 (1g)

정량법

본 품을 건조 후 약 0.3g을 정밀하게 칭량하고 과염소산적정용 빙초산 20㎖를 가하여 필요하다면 가온하여 녹이고 냉각 후 벤젠 100㎖를 가하고 0.1N 과염소산으로 적정한다.(지시약 염화 메틸로더리닌 시액 2방울) 이 경우에 적정의 종점은 자색의 액이 청색을 거쳐 청녹색으로 변할 때로 한다. 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다.

0.1N 과염소산 1㎖ = 12.213㎎ C6H6N2O

보존방법의 기준

기밀용기에 보존할 것

■ 비오틴(d-Biotin, 비타민H)

C10H16N2O3S 분자량224.31

성분규격

함량

본 품은 건조 후 정량하였을 때 d-비오틴(C10H16N2O3S) 98.0%이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 백색～미황색의 분말로서 냄새는 없다.

② 본 품은 물에 녹기 어렵고, 에탄올에 매우 녹기 어려우며 아세톤, 에터 또는 클로르포름에 거의 녹지 않는다.

③ 융점 : 228～232℃(분해)

확인시험

① 본 품 5㎎에 묽은 수산화나트륨 시액 5㎖를 가하고 과망간산칼륨 시액 3방울을 가할 때, 액은 적자색에서 청색을 거쳐 녹청색으로 변한다.

② 본 품의 에탄올 용액(1→10,000) 5㎖에 황산 에탄올 용액(2→100) 1㎖를 가하고 여기에 p-메틸아미노신남알데히드 시액 1㎖를 넣어 1시간 방치하면, 액은 오렌지적색을 나타낸다.

순도시험

① 선광도 : 본 품 0.5g을 정밀하게 칭량하여 묽은 수산화나트륨 시액으로 녹여 50㎖로 하고 이 액을 200mm 두께로 선광도를 측정할 때,  = +90 ～ +94°이어야 한다.

② 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 2법에 의해 시험을 실시할 때, 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(20ppm이하)

③ 비소 :  본 품 0.5g을 취하여, 비소시험법 제 3법에 의해 시험을 실시 할 때, 여기에 적합하여야 한다.(4ppm이하)

건조감량

0.5%이하(0.5g, 105℃, 4시간)

강열잔류물

0.1%이하(0.5g)

정량법

본 품을 건조하여, 그 중 약 0.4g을 정밀하게 칭량하고 디메틸포름아미드 10㎖를 넣고 수욕상에서 가열하여 녹이고, 상온까지 냉각한 후 무수에탄올 30㎖를 가해 잘 흔들어 섞은 후, 0.1N 나트륨메토키시드액으로 적정한다.(지시약 티몰블루시액 0.4㎖) 이 경우에 적정의 종점은 액의 황색이 녹청색으로 변할 때로 한다. 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다. 

0.1N 나트륨메토키시드액 1㎖ = 24.431㎎ C10H16N2O3S

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

차광한 기밀용기에 보존할 것.

■ 비타민 A 분말(Vitamin A Powder, 레티놀분말)

C20H30O 분자량286.46

성분규격

함량

본 품은 정량할 때, 1g에 대해 200,000 비타민A 국제단위이상이며 표시단위의 90-130%에 대응하는 비타민A(레티놀)를 함유한다.

성상

① 본 품은 담황～적갈색의 분말로서 냄새는 없거나, 또는 특이한 냄새가 난다.

② 본 품은 공기 또는 빛에 의해 분해가 촉진된다.

확인시험

정량법의 항에서 얻은 이소프로판올 용액 2㎖를 취하여 감압으로 이소프로판올을 유거하고, 잔류물에 클로르포름 1㎖를 가하여 녹이고, 삼염화안티몬 시액 3㎖를 가할 때, 액은 즉시 청색을 나타내는데, 이 액은 빠르게 퇴색한다.

순도시험

① 변패 : 본 품은 불쾌한 냄새가 나서는 안 된다.

② 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 강열잔류물 시험법에 준하여 실시하여 얻은 잔류물에 염산 1㎖ 및 초산 0.2㎖를 가하여, 수욕상에서 증발 건고하고, 여기에 묽은 염산 1㎖ 및 물 15㎖를 가하여 가열하여 녹인다. 냉각 후 페놀프타레인시액 1방울을 가하고, 암모니아시액을 액이 미적색이 될 때까지 적가한다. 묽은 초산 2㎖를 가하고 필요하다면 여과하여 물 10㎖로 씻고 여과액 및 세척액을 네슬러관에 넣고, 물을 가하여 50㎖로 하여 검액으로 한다. 이 검액에 황화나트륨 시액 2방울을 가하여 5분간 방치할 때, 이 액의 색이 납표준액 5.0㎖에 묽은 초산 2㎖ 및 물을 가하여 50㎖로 하고 이어 황화나트륨 시액 2방울을 가하여 5분간 방치한 액의 색보다 짙어서는 안 된다.(50ppm이하)

③ 비소 : 본 품 1.0g을 분해 플라스크에 취하여 초산 20㎖를 가하여 내용물이 유동상이 될 때까지 약하게 가열한다. 냉각 후 황산 5㎖를 가하여 흰 연기가 발생할 때까지 가열한다. 액이 여전히 갈색을 띠면 초산 5㎖를 추가하여 가열한다. 이 조작을 액이 무색～담황색이 될 때까지 되풀이한다. 냉각 후 포화수산암모늄용액 15㎖를 가하여 다시 흰 연기가 날 때까지 가열한다. 냉각 후 물을 가하여 25㎖로 하고, 그 중 5㎖를 취하여 이것을 시험용액으로 하여 비소의 시험할 때, 여기에 적합하여야 한다. 이 경우 표준색은 비소표준용액 4.0㎖를 분해 플라스크에 취하여 초산 20㎖를 가하고 이하 시료의 경우와 같은 방법으로 조작하여 만든다.(4ppm이하)

건조감량

5.0%이하(1g, 감압, 실리카겔, 4시간)

정량법

본 품 0.1g을 정밀하게 칭량하여 플라스크에 취하여 물 2㎖를 넣고, 흔들어 움직이면서 잠시 가온한 후, 비타민A 정량법 제 2법에 의해 시험한다.

제조방법의 기준

①「비타민A 유」, 초산 레티놀 또는 팔미틴산 레티놀을 적당한 기재로서 분말화하거나, 또는 피복ㆍ입상화하여 제조할 것.

② 본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

차광한 밀폐용기에 보존할 것.

■ 비타민 A 유(Vitamin A Oil, 레티놀오일)

성분규격

함량

본 품은 정량할 때 1g에 대해 30,000 비타민A 국제단위 이상이며 표시단위의 90-120%에 대응하는 비타민A(레티놀)를 함유한다.

성상

① 본 품은 황색～황갈색의 투명 또는 약간의 혼탁한 유액으로 냄새는 없거나 또는 약간의 특이한 냄새가 난다.

② 본 품은 공기 또는 빛에 의해 분해가 촉진된다.

확인시험

본 품을 클로르포름에 녹여 표시단위에 따라 1㎖ 중 30 비타민A 국제단위를 함유한 액을 만들어 이 액 1㎖를 취하여 3염화안티몬시액 3㎖를 가할 때 액은 즉시 청색으로 되나 곧 퇴색한다.

순도시험

① 자외흡수스펙트럼 : 본 품은 비타민A 정량법 제 1법으로 측정 가능한 조건에 적합하고 또한 제 2법으로 측정할 때의 f의 값이 0.85이상이어야 한다. 

②산 : 본 품 1.2g을 취하여 중화에탄올ㆍ에터 혼합액(1:1) 30㎖를 가하여 환류냉각기를 붙여, 10분간 조용히 끓여 녹이고, 냉각 후 페놀프타레인시액 5방울 및 0.1N 수산화나트륨액 0.60㎖를 가할 때, 액은 적색이어야 한다.

③ 변패 : 본 품을 가온할 때 불쾌한 패유성의 냄새가 나서는 안 된다.

정량법

비타민A 정량법에 의해 시험한다.

제조방법의 기준

①본 품은 수산동물의 신선한 간장 또는 유문수에서 얻은 지방유에서 제조하든가 또는 그 지방유, 농축물 또는 비타민A의 지방산 에스테르에 간유류 또는 식물유를 가하여 제조한다.

②본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

차광한 기밀용기에 넣어 거의 채우든지, 또한 공기를 질소로 치환하여 보존할 것.

■ 비타민B1(치아민)

  1) 정의 : 비타민B1나프탈린-1,5-디설폰산염(치아민나프탈린-1,5-디설폰산염), 비타민B1라우릴황산염(치아민 라우릴황산염), 비타민B1로단산염(치아민 티오시안산염), 비타민B1염산염(치아민 염산염), 비타민B1질산염(치아민 질산염)을 일반적으로 부르는 명칭이다.

  2) 영양정보 : 

  3) 고려사항 : 

■ 비타민B1나프탈린-1,5-디설폰산염(치아민나프탈린-1,5-디설폰산염, Thiamine Naphthalene-1,5-Disulfonate)

  C22H24O7N4S3ㆍH2O   분자량 570.68   

함    량  이 품목은 건조한 다음 정량할 때, 비타민B1나프탈린-1,5-디설폰산염(C22H24O7N4S3 ＝ 552.66) 98.0～102.0%를 함유한다.

성    상  이 품목은 백색의 미세한 결정성분말로서 냄새가 없거나 또는 약간 특이한 냄새가 있다.

확인시험  (1) 이 품목 10mg을 0.001N 염산 100mL에 녹여 그 중 5mL를 취하여 0.001N 염산을 가하여 100mL로 한 액은 파장 226±1nm에서 극대흡수부를 나타낸다.

  (2) 「비타민B1염산염」의 확인시험 (1) 및 (2)에 따라 시험한다.

순도시험  (1) 염화물 : 이 품목 0.25g에 물 30mL를 가하여 잘 흔들어 섞고 10분간 방치한 다음 묽은질산 6mL를 가하여 여과하고 이를 시험용액으로 하여 염화물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.01N 염산 0.4mL에 대응하는 양 이하이어야 한다.

  (2) 납：이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.0ppm 이하이어야 한다.

건조감량  이 품목을 105℃에서 2시간 건조할 때, 그 감량은 5% 이하이어야 한다.

강열잔류물  이 품목의 강열잔류물은 0.2% 이하이어야 한다.

정 량 법  이 품목을 건조한 다음 약 0.16g을 정밀히 달아 묽은염산 25mL를 가하여 수욕 중에서 가열하여 녹이고 식힌 다음 물을 가하여 1,000mL로 한다. 그 중 2mL를 취하여 이하「비타민B1염산염」의 정량법에 따라 정량한다.

  함 량(%) =  AT?AT’  ×  무수물로 환산한                 ×  1.6386  ×  100   

                            치아민염산염표준품의 채취량(g)                        

            ──────  ─────────────────                      

              AS?AS’      검체의 채취량(g)                                      

■ 비타민B1라우릴황산염(치아민 라우릴황산염, Thiamine Dilaurylsulfate)

  C36H68O9N4S3ㆍH2O   분자량 815.19   

함    량  이 품목은 건조한 다음 정량할 때, 비타민B1라우릴황산염(C36H68O9N4S3ㆍH2O) 98.0～102.0%를 함유한다.

성    상  이 품목은 무～백색의 결정 또는 백색의 결정성분말로서 냄새가 없거나 또는 약간 특이한 냄새가 있다.

확인시험  (1) 이 품목 1g에 물 30mL 및 염산 15mL를 가하여 환류냉각기를 연결하여 약 4시간 끓이고 식힌 다음 에테르 15mL씩으로 2회 추출하고 에테르추출액을 합쳐 물로 씻은 다음 수욕상에서 에테르를 증발시켜 제거하고 잔류물을 100℃에서 15분간 건조한 다음 식히고 융점을 측정할 때, 그 융점은 20～28℃이다.

  (2) 이 품목 0.1g에 염화칼륨ㆍ염산시액 20mL를 가하여 약 30분간 조용히 끓여 식힌 다음 여과하여 여액 1mL를 취하여 초산납시액 1mL 및 수산화나트륨용액(1→10) 1mL를 가하면 액은 황색이 되고 수욕상에서 가온하여 갈색으로 변하고 이어 방치하면 흑갈색의 침전이 생긴다.

  (3) 위 (2)의 여액 1mL를 취하여 0.5N 수산화나트륨용액 5mL 및 페리시안화칼륨시액 0.5mL의 혼액을 가하고 n-부탄올 5mL를 가하여「비타민B1염산염」의 확인시험 (1)에 따라 시험한다.

순도시험  (1) 염화물 : 이 품목 0.25g에 물 30mL를 가하여 잘 흔들어 섞고 10분간 방치한 다음 묽은질산 6mL를 가하고 여과하여 물로 씻고 씻은 액을 여액에 합쳐 시험용액으로 하여 염화물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.01N 염산 0.4mL에 대응하는 양 이하이어야 한다.

  (2) 납：이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.0ppm 이하이어야 한다.

건조감량  이 품목을 데시케이타(실리카겔)에서 24시간 건조할 때, 그 감량은 2% 이하이어야 한다.

강열잔류물  이 품목의 강열잔류물은 0.3% 이하이어야 한다.

정 량 법  이 품목을 건조한 다음 약 0.12g을 정밀히 달아 염화칼륨ㆍ염산시액 40mL를 가하여 흔들어 섞으면서 수욕상에서 30분간 가열하고 식힌 다음 여과하고 물 50mL로 씻어주고 세액을 여액에 합한 다음 물을 가하여 100mL로 하고 이 액 2mL를 정확히 취한 다음 물을 가하여 50mL로 한 것을 시험용액으로 한다. 따로 비타민B1염산염표준품(미리 「비타민B1염산염」과 같은 방법으로 수분을 측정하여 둔다) 약 0.1g을 정밀히 달아 염화칼륨ㆍ염산시액 40mL를 가하여 녹인 다음 물을 가하여 200mL로 하고 이 액 2mL를 정확히 취한 다음 물을 가하여 50mL로 한 것을 표준용액으로 한다. 시험용액 및 표준용액을 사용하여 이하 「비타민B1염산염」 정량법에 따라 정량한다.

  함 량(%) =  AT?AT’  ×  무수물로 환산한                 ×  2.417   ×  100   

                            치아민염산염표준품의 채취량(g)                        

            ──────  ─────────────────                      

              AS?AS’      검체의 채취량(g)                                      

■ 비타민B1로단산염(치아민 티오시안산염, Thiamine Thiocyanate)

  C13H17ON5S2ㆍH2O  분자량 341.17   

함    량  이 품목은 건조한 다음 정량할 때, 비타민B1로단산염(C13H17ON5S2 ＝ 323.45) 98.0～102.0%를 함유한다.

성    상  이 품목은 백색의 결정 또는 결정성분말로서 냄새가 없거나 또는 약간 특이한 냄새가 있다.

확인시험  (1) 「비타민B1염산염」의 확인시험 (1) 및 (2)에 따라 시험한다.

  (2) 이 품목의 포화용액은 확인시험법 중 치오시안산염의 반응을 나타낸다.

순도시험  (1) 염화물 : 이 품목 0.3g을 취하여 물 1.5mL, 질산암모늄 0.3g 및 수산화나트륨용액(2→5) 0.9mL를 가한 다음 흔들어 섞으면서 과산화수소 3mL를 천천히 적가한다. 다음에 때때로 흔들어 섞으면서 30분간 수욕상에서 가열하여 식힌 다음 질산(2→3) 3mL 및 물을 가하여 50mL로 하고 이에 덱스트린용액(1→50) 0.1mL 및 질산은시액 0.5mL를 가하여 5분간 방치할 때, 그 탁도는 0.01N 염산 0.5mL를 취하여 같은 조작을 할 때 생기는 탁도 이하이어야 한다.

  (2) 납：이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.0ppm 이하이어야 한다.

건조감량  이 품목을 105℃에서 2시간 건조할 때, 그 감량은 6% 이하이어야 한다.

강열잔류물  이 품목의 강열잔류물은 0.2% 이하이어야 한다.

정 량 법  「비타민B1염산염」의 정량법에 따라 정량한다.

  함 량(%) =  AT?AT’  ×  무수물로 환산한                 ×  0.959   ×  100   

                            치아민염산염표준품의 채취량(g)                        

            ──────  ─────────────────                      

              AS?AS’      검체의 채취량(g)                                      

■ 비타민 B1 염산염(Thiamine Hydrochloride, 치아민 염산염)

C12H17ON4ClSㆍHCl 분자량337.27

성분규격

함량

본 품은 건조 후 정량할 때 비타민 B1 염산염(C12H17ClN4OSㆍHCl) 98.0～102.0%를 함유한다.

성상

① 본 품은 백색의 결정 또는 결정성의 분말로서 냄새는 없거나 또는 약간의 특이한 냄새가 난다.

② 본 품은 물에 녹기 쉽고, 에탄올 또는 글리세린에 녹기 어려우며 에터 또는 벤젠에 거의 녹지 않는다.

③ 융점 : 약 245℃(분해)

확인시험

① 본 품의 수용액(1→500) 2㎖씩에 요오드시액 2-3방울을 가할 때, 마이야 시액 2-3방울을 넣을 때, 피크린산 시액 1㎖를 가할 때는 각각 적갈색, 황백색 및 황색의 침전 또는 혼탁이 생긴다.

② 본 품의 수용액(1→500) 1㎖에 초산납시액 1㎖ 및 수산화나트륨용액(1→10) 1㎖를 넣어 가온하면 액은 황색을 거쳐 갈색으로 변하고, 방치하면 흑갈색의 침전이 생긴다.

③ 본 품의 수용액(1→500) 5㎖에 수산화나트륨시액 2.5㎖ 및 페리시안화칼륨시액 0.5㎖를 넣고 이어서 이소부탄올 5㎖를 넣어 2분간 격렬하게 흔들어 섞어 방치하여 자외선하에서 관찰할 때, 이소부탄올 층은 청자색의 형광을 발한다. 이 형광은 산성으로 하면 사라지고 알칼리성으로 돌아가면 다시 나타난다. 

④ 본 품의 수용액(1→500)은 염화물의 정성반응을 나타낸다.

순도시험

① pH : 본 품 1.0g에 물을 넣어 녹여 10㎖로 한 액의 pH는 2.7～3.4이어야 한다.

②용액상 : 본 품 1.0g에 물을 넣어 녹여 10㎖로 한 때 그 액의 색은 0.1N 중크롬산칼륨액 1.5㎖에 물을 넣어 1000㎖로 한 액의 색보다 짙어서는 안 된다.

③황산염 : 본 품 1.5g을 취하여, 황산염의 시험할 때, 그 양은 0.01N 황산 0.35㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(0.011%이하)

④초산염 : 본 품 0.5g에 물 250㎎을 넣어 녹이고, 이 액 2㎖에 황산 2㎖를 넣어 흔들어 섞어 냉각 후 황산제1철시액을 넣을 때 접한 면에 암갈색의 둥근띠가 생겨서는 안 된다. 

⑤중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 1법에 의해 시험할 때 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(20ppm이하)

건조감량

5.0%이하(0.5g, 105℃, 2시간)

강열잔류물

0.20%이하(1g)

정량법

본 품 및 염산티아민 표준품을 각각 105℃에서 2시간 건조하여 각각 0.1g을 정밀하게 측정하고, 0.001N 염산용액을 가하여 정확히 200㎖로 한다. 이들 액 2㎖를 정확히 칭량하여 0.001N 염산용액을 가해 정확히 50㎖로 하여 각각 시료용액 및 표준용액으로 한다. 시료용액 5㎖씩을 공전시험관 T 및 T‘에 정확히 측정하여 T에는 취화시안시액 3.0㎖를 가하여 흔들어 섞고 수산화나트륨용액(1→10) 5.0㎖를 재빨리 가하여 흔들어 섞는다. T’에는 수산화나트륨용액(1→10) 5.0㎖를 가하여 흔들어 섞고, 취화시안시액 3.0㎖를 가해 흔들어 섞는다. 별도로 표준용액 5㎖씩을 공전시험관 S 및 S‘에 정확히 칭량하여 시료용액과 같은 방법으로 조작한다. 각각의 액에 대해 물을 대조액으로 하여 파장 368nm에 있어 흡광도 AT, AT’, As 및 As‘를 측정한다.

 비타민 B1 염산염(C12H17ClN4OSㆍHCl)의 양(㎎)

= 비타민 B1 염산염 표준품의 양(㎎) × 

보존방법의 기준

차광한 기밀용기에 보존할 것.

■ 비타민 B1 질산염(Thiamine Mononitrate, 치아민 질산염)

C12H17N5O4S 분자량327.37

성분규격

함량

본 품은 건조 후 정량할 때, 비타민 B1 질산염(C12H17N5O4S) 98.0～102.0%를 함유한다.

성상

① 본 품은 백색～미황백색의 결정 또는 결정성의 분말로서 냄새는 없거나 약간의 특이한 냄새가 난다. 

② 본 품은 물에 조금 녹기 어려우며, 에탄올에 매우 녹기 어렵고, 클로르포롬에는 거의 녹지 않는다.

③ 융점 : 약 193℃(분해)

확인시험

① 「염산티아민」의 확인시험 ①, ② 및 ③을 준용한다.

② 본 품의 수용액(1→50)은 질산염의 정성반응 ① 및 ②를 나타낸다.

순도시험

① pH  : 본 품 1.0g에 물을 넣어 녹여 100㎖로 한 액의 pH는 6.5～8.0이어야 한다.

②염화물 : 본 품 0.20g을 취하여, 염화물의 시험할 때, 그 양은 0.01N 염산 0.30㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(0.053%이하)

③황산염 : 본 품 1.5g에 물 30㎖ 및 묽은 염산 2㎖를 가하여 녹이고, 물을 가하여 50㎖로 한다. 이것을 검액으로 하여 황산염의 시험할 때, 그 탁도는 0.01N황산 0.35㎖에 묽은 염산 2㎖ 및 물을 넣어 50㎖로 하고, 이하 시료의 경우와 같은 방법으로 조작할 때 나타나는 탁도 이하이어야 한다.(0.011%이하)

④중금속：본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 1법에 의해 시험할 때, 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다. 단, 시료는 가온하여 녹인다.(20ppm이하)

건조감량

1.0%이하(0.5g, 105℃, 2시간)

강열잔류물

0.20%이하(1g)

정량법

본 품 및 염산티아민 표준품을 각각 105℃에서 2시간 건조하고, 이하 「염산티아민」의 정량법을 준용한다.

비타민 B1 질산염(C12H17N5O4S)의 양(㎎)

= 염산티아민표준품의 양(㎎) × 

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

차광한 기밀용기에 보존할 것.

■ 비타민 B2(Vitamin B2, Riboflavin)

C17H20N4O6 분자량376.38

성분규격

함량

본 품은 건조 후 정량할 때 비타민 B2(C17H20N4O6) 96.0%이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 황색～오렌지황색의 결정으로 약간의 냄새가 난다.

② 본 품은 물에 매우 녹기 어렵고, 에탄올, 에터 또는 클로르포름에 거의 녹지 않는다.

③ 본 품은 수산화나트륨 시액에 녹는다.

④ 본 품의 포화수용액은 중성이다.

⑤ 본 품은 빛에 의해 분해된다.

⑥ 융점 : 약 280℃(분해)

확인시험

① 본 품의 수용액(1→100,000)은 담황녹색으로 강한 황록색의 형광을 발한다. 이 액 5㎖에 하이드로설파이드나트륨 0.02g을 가할 때 액의 색 및 형광은 사라지지만 공기 중에서 흔들어 섞을 때 서서히 다시 나타난다. 또한 액의 형광은 희석염산 또는 수산나트륨시액을 떨어뜨리면 사라진다.

②본 품의 수용액(1→100,000) 10㎖를 공전시험관에 취하여 수산화나트륨 시액 1㎖를 가하고, 20～40℃에서 10～30왓트의 형광등을 20cm의 거리에서 30분간 조사한다. 이어 초산 0.5㎖를 가하여 산성으로 하고 클로르포름 5㎖를 가하여 잘 흔들어 섞을 때 클로르포름층은 황록색의 형광을 발한다.

③ 본 품에 pH 7.0의 인산염완충액을 가하여 녹인 용액(1→100,000)에 대해 흡수 스펙트럼을 측정할 때 파장 265-267㎚, 372-374㎚ 및 444-446㎚에서 최대 흡수치를 나타낸다. 또한 각각의 최대파장에서 흡광도를 A1, A2 및 A3로 할 때, A2/A1은 0.314～0.333, A3/A1은 0.364～0.388이다.

순도시험

① 선광도 : 본 품을 건조 후 약 0.1g을 정밀하게 칭량하여 묽은 수산화나트륨 시액 4㎖를 정확하게 가하여 녹이고 새로 끓여 냉각시킨 물 10㎖를 가한 후, 잘 흔들어 섞으면서 무알데하이드에탄올 4㎖를 정확하게 가한다. 다시 새로 끓여 냉각시킨 물을 가하여 정확하게 20㎖로 하고 이 액에 대해 30분 이내에 선광도를 측정할 때 = -120 ～ -140°이어야 한다.

② 비타민 B2 : 본 품 0.025g에 에탄올 불함유 클로르포름 10㎖를 가하여 5분간 흔들어 섞어 여과한다. 이 여과액에서 나타나는 색은 0.1N 중크롬칼륨 액 4.0㎖에 물을 가해 1000㎖로 한 액에서 나타나는 색보다 짙어서는 안 된다.

건조감량

1.5%이하 (0.5g, 105℃, 2시간)

강열잔류물

0.30%이하(1g)

정량법

조작은 직사일광을 피하고, 차광한 용기를 이용하여 실시한다. 본 품을 건조 후 약 0.015g을 정밀하게 칭량하고, 묽은 빙초산(1→400) 800㎖를 가하여 가온하여 녹인다. 냉각 후 물을 가하여 정확하게 1000㎖로 하고 시료용액으로 한다. 별도로 리보플라빈 표준품을 105℃에서 2시간 건조하고 그 중 약 0.015g을 정밀하게 칭량한다. 여기에 묽은 빙초산(1→400) 800㎖를 가하고, 가온하여 녹여 냉각 후 물을 가해 정확하게 1000㎖로 하고 표준용액으로 한다. 시료용액 및 표준용액에 대해 물을 대조액으로 파장 445㎚에서의 흡광도 AT 및 AS를 측정한 후 각각의 액 5㎖에 대해 하이드로설파이드나트륨 0.02g을 가해 흔들어 섞어 탈색하고 즉시 이 액의 흡광도 AT‘ 및 AS’를 측정한다.

비타민 B2(C17H20N4O6)의 양(㎎) = 비타민 B2 표준품의 양(㎎) ×

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

차광한 밀폐용기에 보존할 것.

■ 비타민 B2 인산에스테르 나트륨(Riboflabin 5‘-Phosphate Sodium)

C17H20N4NaO9Pㆍ0～2H2O 분자량514.38

성분규격

함량

본 품을 무수건조물로 환산한 것은 비타민 B2 인산에스테르나트륨(C17H20N4NaO9P = 478.33) 95.0% 이상을 함유한다.

성상

본 품은 황～등색의 결정 또는 결정분말로서, 거의 냄새가 없고 쓴맛이 있다. 

확인시험

① 「비타민 B2」의 확인시험법에 따라 시험한다.

②본 품 50㎎을 질소정량중 나. 세미마이크로킬달법과 같은 방법으로 분해한 액은 확인시험법 중 나트륨염 및 인산염의 반응을 나타낸다. 

순도시험

① 용액상 : 본 품 0.2g을 물 10㎖에 녹일 때, 그 액은 투명하여야 한다.

② 선광도 : 본 품 약 0.3g을 정밀히 칭량하여 5N 염산에 녹여 20㎖로 하고 이 액의 선광도를 측정할 때,  = +38 ～ +43°이어야 한다.

③ 리보플라빈 : 본 품 35㎎에 알콜을 함유하지 않은 클로르포름 10㎖를 가하여 5분간 흔들어 섞은 다음 여과할 때, 여과액의 색은 0.1N 중크롬산칼륨용액 3㎖에 물을 가하여 1,000㎖로 한 액의 색보다 진하여서는 안 된다.

④ 비소 : 본 품 0.25g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에틸알콜용액(1→50) 10㎖에 넣고 에틸알콜에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3㎖를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시액으로 하여 비소시험을 할 때, 이에 적합하여야 한다.(4ppm 이하)

수분

칼피셔용 메틸알콜 : 칼피셔용 에틸렌글리콜용액(1 : 1) 25㎖를 건조한 적정용 플라스크에 취하여 칼피셔시액으로 종말점까지 적정한다. 다음에 본 품 0.1g을 정밀히 칭량하여 즉시 적정용 플라스크에 넣고 수분 정량법(칼피셔법)의 역적정법에 따라 시험할 때, 그 양은 10% 이하이어야 한다.

정량법

본 품 약 20㎎을 정밀히 칭량하여 이하 「비타민 B2」의 정량법에 따라 시험하고 다음 식에 따라 비타민 B2 인산에스테르나트륨(C17H20N4NaO9P)의 함량을 구한다. 다만, 모든 조작은 직사광선을 피하고 차광한 용기를 사용하여야 한다.

■ 비타민 B6 염산염(염산피리독신, Pyridoxine Hydrochloride)

C8H11NO3ㆍHCl 분자량205.64

성분규격

함량

본 품은 건조 후 정량할 때, 염산피리독신(C8H11NO3ㆍHC1) 98.0% 이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 백색-미황색의 결정성 분말로서, 냄새는 없고 쓴맛 또는 산미를 가진다.

② 본 품은 물에 녹기 쉽고, 에탄올에 녹기 어려우며, 아세톤, 에터 또는 클로르포름에 거의 녹지 않는다.

③ 본 품의 수용액 (1→50)의 pH는 2.5～3.5이다.

④ 본 품은 빛에 의해 서서히 변화한다.

⑤ 융점 : 약 206℃(분해)

확인시험

① 본 품의 수용액(1→1,000) 1㎖에 염화제2철시액 1방울을 가할 때 액은 오렌지갈색을 띠고, 이어 염산 1방울을 가하면 황색으로 변한다.

② 본 품의 수용액(1→10,000)1㎖에 새로 제조한 2,6-디브롬퀴논클로르이미드의 에탄올용액(1→4,000) 2㎖ 및 암모니아시액 1방울을 가할 때, 액은 청색을 나타낸다. 또한 본 품의 수용액(1→10,000) 1㎖에 붕산 포화용액 1㎖를 가한 후, 같은 조작을 실시할 때 액은 청색을 띠어서는 안 된다.

③ 본 품 0.5g에 물 1㎖를 넣어, 가온하고 녹여, 냉각 후 피크린산시액 6㎖를 가하여 2～3시간 방치한다. 석출한 결정을 여과 채취하여, 소량의 얼음물로 씻고, 105℃에서 2시간 건조했을 때, 그 융점은 156-159℃(분해)이다.

④ 본 품의 수용액(1→10)은 염화물의 정성반응을 나타낸다.

순도시험 

중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 1법에 의해 시험할 때, 그 양은 납표준액 3.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다. (30ppm 이하)

건조감량

0.30%이하 (1g, 감압, 실리카겔, 4시간)

강열잔류물

0.10%이하 (1g)

정량법

본 품을 건조하여 그 중 약 0.4g을 정밀하게 칭량하여 과염소산적정용 초산제2수은시액 10㎖를 가하여 흔들어 섞어 녹인 후, 과염소산적정용 빙초산 60㎖를 가하여, 0.1N 과염소산으로 적정한다.(지시약 염화 메틸로자니린시액 2방울) 이 경우에 적정의 종점은 액의 자색이 청색으로 변할 때로 한다. 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다.

0.1N 과염소산 1㎖ = 20.564㎖ C8H11NO3ㆍHC1

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

차광한 기밀용기에 보존할 것.

■ 비타민 B12(시아노코발라민, Vitamin B12, Cyanocobalamin)

C63H88CoN14O14P 분자량1,355.40

성분규격

함량

본 품은 정량할 때 환산한 건조물에 대해 시아노코발라민(C63H88CoN14O14P) 95.0% 이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 암적색의 결정 또는 분말이다.

② 본 품은 물에 조금 녹기 어려우며, 에탄올에 녹기 어렵고, 아세톤, 에터 또는 클로르포름에 거의 녹지 않는다.

③ 본 품은 흡습성이다.

확인시험

① 정량법의 시료용액에 대해 흡수 스펙트럼을 측정할 때, 파장 277-279㎚, 360-362㎚ 및 548-552㎚에 최대흡수치를 나타내고, 각각의 최대파장에서 흡광도를 A1, A2 및 A3로 할 때 A1/A2는 0.53～0.59, A3/A2는 0.29～0.32이다.

②본 품 1㎎에 황산수소칼륨 0.05g을 넣어 혼합하고, 강열하여 용해한다. 냉각 후 용해물을 유리봉으로 부수고, 물 3㎖를 넣어 끓이고 녹여 페놀프타레인시액 1방울을 가한 후, 액이 담적색을 나타낼 때까지 수산화나트륨시액을 떨어뜨려 초산나트륨 0.5g, 묽은 초산 0.5㎖ 및 1-니트로소-2-나프톨-3,6-디설폰산2나트륨용액(1→500) 0.5㎖를 가했을 때, 액은 즉시 적색～오렌지적색을 나타내고 염산 0.5㎖를 추가하여 1분간 끓여도 액의 적색은 사라지지 않는다.

③ 본 품 5㎎을 50㎖의 증류플라스크에 취하여 물 5㎖를 넣고 녹여, 차아인산 2.5㎖를 가한 후, 짧은 냉각기를 붙이고, 냉각기의 앞쪽은 시험관에 넣은 수산화나트륨 용액(1→50) 1㎖중에 적신다. 이어서 10분간 조용히 끓이고 잔액 1㎖를 얻을 때까지 증류한다. 시험관중의 액에 황산제1철암모늄의 포화용액 4방울을 가해 조용히 흔들어 섞고, 불화나트륨 0.03g을 가하여 끓을 때까지 가열한다. 즉시 묽게 한 황산(1→7)을 액이 맑아질 때까지 떨어뜨리고 여기에 묽게 한 황산(1→7) 3-5방울을 떨어뜨릴 때 액은 청색～청녹색을 나타낸다.

순도시험

시아노코발라민 : 본 품 1.0㎎에 물 20㎖를 넣어 녹이고, 분액깔때기에 넣어 m-크레졸 : 사염화탄소혼합액(1:1) 5㎖를 넣고, 1분간 격렬하게 흔든 후, 방치하여 밑의 층을 별도의 분액깔때기로 이동하여 묽게 한 황산(1→7) 5㎖를 넣어, 격렬하게 흔들어 섞는다. 필요하다면 원심분리할 때 상등액의 색은 무색이든가, 또는 0.1N 과망간산칼륨액 0.6㎖에 물을 넣어 1,000㎖로 한 액보다 짙어서는 안 된다.

건조감량

12%이하 (0.05g, 감압, 5mmHg이하, 오산화인, 100℃, 4시간)

정량법

본 품 및 시아노코발라민 표준품(미리 본 품과 같은 방법으로 건조감량을 측정하여 놓는다) 약 0.02g씩을 정밀하게 칭량하여 각각 물을 넣어 녹여 정확히 1,000㎖로 하고, 시료용액 및 표준용액으로 한다. 각각에 대해 파장 361㎚에서의 흡광도 AT 및  AS를 측정한다.

시아노코바라민(C63H88CoN14O14P)의 양(㎎)

= 건조물으로 환산한 시아노코발라민 표준품의 양(㎎)×

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

차광한 기밀용기에 보존할 것.

■ 비타민 C(L-아스코르빈산, L-Ascorbic Acid)

C6H8O6 분자량176.13

성분규격

함량

본 품은 건조 후 정량할 때, L-아스코르빈산(C6H8O6) 99.0% 이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 백색의 결정 또는 결정성의 분말로서, 냄새가 없고 산미를 가진다. 

② 본 품은 물에 녹기 쉽고 에탄올에 조금 녹기 어려우며 에터, 클로르포름, 벤젠 또는 에터에 거의 녹지 않는다.

③ 본 품의 수용액 (1→50)의 pH는 2.4～2.8이다.

④ 융점 : 약 190℃(분해)

확인시험

① 본 품의 수용액 (1→50) 5㎖씩을 취하여 과망간산칼륨 시액 1방울을 넣을 때 그리고 2,6-디클로르페놀 인도페놀나트륨 시액 1～2방울을 넣을 때 어느 것이나 시액의 색은 즉시 사라진다.

② 본 품 0.1g을 메타린산용액 (1→50) 100㎖에 녹이고 그 중 5㎖를 취하여 여기에 액이 약간의 황색을 띌 때까지 요오드시액을 몇 방울 넣은 후, 황산동 용액(1→1,000) 1방울 및 피롤 한 방울을 넣어 수욕상에서 50℃로 5분간 가온할 때 액은 청색을 나타낸다.

순도시험

① 선광도 : 본 품 약 2.5g을 정밀하게 칭량하여 물에 녹여 25㎖로 하고, 이 액으로 선광도를 측정할 때  = +20.5 ～ +21.5°이어야 한다.

② 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속 시험법 제 1법에 의해 시험할 때, 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(20ppm 이하)

건조감량

0.20% 이하 (1g, 실리카겔, 24시간)

강열잔류물

0.10% 이하 (1g)

정량법

본 품을 건조 후 약 0.2g을 정밀히 칭량하여 메타린산용액 (1→50) 50㎖를 넣어 녹이고, 0.1N 요오드액으로 적정한다.(지시약 전분시액 1㎖)

0.1N 요오드액 1㎖ = 8.806㎎ C6H8O6

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

차광한 기밀용기에 보존할 것.

■ 비타민 C 칼슘염(L-아스코르빈산칼슘, L-Calcium Ascorbate)

C12H14CaO12ㆍ2H2O 분자량426.34

성분규격

함량

본 품은 정량할 때 L-아스코르빈산칼슘(C12H14CaO12ㆍ2H2O) 98.0% 이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 백색～황백색의 결정성의 분말로서 냄새는 없다.

② 본 품은 물에 녹기 쉽고, 아세톤, 에터 및 메탄올에 거의 녹지 않는다.

확인시험

① 본 품의 수용액(1→100) 2㎖를 취하여, 0.1N염산 4㎖, 니트로풀시드나트륨 시액 5-6방울 및 수산화나트륨 시액 2방울을 넣을 때 액은 즉시 청색을 나타낸다.

② 본 품 0.1g에 메타린산용액(1→50) 100㎖를 넣어 녹이고 이 액 5㎖에 액이 약간의 황색을 나타낼 때까지 요오드시액을 적가한 후, 황산동 용액(1→1,000) 한 방울 및 피롤 한 방울을 넣어 50℃에서 5분간 가온하면, 액은 청색～청녹색을 띤다.

③ 본 품의 수용액(1→10)은 칼슘염의 정성반응을 나타낸다.

순도시험

① 선광도 : 본 품 약 2.5g을 정밀하게 칭량하여 물에 녹여 100㎖로 하여 이 액으로 선광도를 측정하면  = +95°～ +97°이어야 한다.

② 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속 시험법 제 1법에 의해 시험할 때, 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(20ppm이하)

③ 비소 : 본 품 0.5g을 취하여 비소시험법 제 1법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다.(4ppm이하)

강열잔류물

30.0-33.0% (1g)

정량법

본 품 약 0.2g을 정밀히 칭량하여 메타린산용액(1→50) 50㎖를 넣어 녹이고, 0.1N 요오드액으로 적정한다.(지시약 전분시액 1㎖)

0.1N 요오드액 1㎖ = 10.659㎎ C12H14CaO12ㆍ2H2O

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

차광한 기밀용기에 보존할 것.

■ 비타민 C 2인산 마그네슘염(L-Ascorbic acid-2-Phosphorus ester magnesium)

(C6H6O9P)2Mg3ㆍ10H2O 분자량615.24

성분규격

함량

본 품은 정량할 때, l-아스코르빈산-2-인산에스테르마그네슘((C6H6O9P)2 Mg3ㆍ10H2O) 93.0%이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 백색～미황색의 분말로서, 약간의 특이한 냄새가 난다.

② 본 품은 물에 녹기 쉬우며, 아세톤 및 메탄올에는 거의 녹지 않는다.

③ 본 품의 수용액(1→50)의 pH는 7.5～8.5이다.

확인시험

① 본 품 2㎎에 0.1N 염산시액을 넣어 100㎖로 하고 이 액으로 흡수스펙트럼을 측정할 때, 파장 235～239nm에서 최대흡수치를 나타낸다.

② 본 품의 수용액(1→50) 5㎖에 염화제2철시액 한방울을 넣을 때 그 액은 적갈색을 나타낸다.

③ 본 품 0.1g에 황산 2㎖ 및 과산화수소 15㎖를 넣어 액이 약 5㎖가 될 때까지 가열하여 냉각 후 물을 넣어 50㎖로 한다. 이 액 1㎖에 6N 황산1㎖, 몰리브덴산암모늄시액 1㎖ 및 아미돌ㆍ아황산수소나트륨 시액 1㎖를 넣을 때 그 액은 청색을 나타낸다.

④ 본 품 0.5g에 황산 2㎖ 및 과산화수소수 30㎖를 넣어 액이 약 5㎖가 될 때까지 가열한다. 냉각 후 물을 넣어 20㎖로 하여 수산화나트륨시액으로 중화한 액은 마그네슘염의 정성반응을 나타낸다.

순도시험

① 용액상 : 본 품 1.0g에 물 10㎖를 넣어 녹일 때, 그 액은 색의 비교액 보다 진하지 않고 매우 투명하여야 한다.

② 선광도 : 본 품 약 1.0g을 정밀하게 칭량하여 물에 녹여 50㎖로 하고 이 액의 선광도를 측정할 때  = +44 ～ +50°이어야 한다.

③ 염화물 : 본 품 0.05g을 취하여 염화물 시험을 할 때, 그 양은 0.01N 염산 0.5㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(0.35%이하)

④ 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 2법에 의해 시험할 때 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(20ppm 이하)

⑤ 비소 : 본 품 0.2g을 취하여 비소시험법 제 1법에 의해 시험할 때, 여기에 적합하여야 한다.(4ppm이하)

수분

본 품 약 1.6g을 정밀히 칭량하여 50㎖의 메스플라스크에 넣어, 메탄올ㆍ황산혼합액 (70:1)을 넣어 녹인다. 이것을 정확히 50㎖로 하여 시료용액으로 하고 중량을 정밀하게 측정한다. 시료용액 1㎖를 정확히 취하여 칼피셔법의 직접 적정법에 의해 수분을 측정한다. 별도로 정밀하게 중량을 측정한 약 1㎖의 메탄올ㆍ황산혼합액 (70:1)에 대해 같은 방법으로 수분을 측정한다. 다음 식에 의해 본 품의 수분을 구할 때, 그 양은 22.0～28.0%이어야 한다.

S : 1㎖의 시료용액중의 수분(㎎)

B : 정밀하게 중량을 측정한 약 1㎖의 메탄올ㆍ황산혼합액(70:1) 중의 수분(㎎)

W1 : 본 품의 채취량 (g)

W2 : 시료용액 50㎖의 중량(g)

W3 : B의 측정에 사용한 약 1㎖의 메탄올ㆍ황산혼합액(70:1)의 중량(g)

정량법

본 품 약 0.3g 및 내부 표준물질로서 마레인산 약 0.50g을 각각 정밀하게 칭량하고 물을 넣어 녹여 100㎖로 하고 이를 시료용액으로 한다. 이 액 20㎕으로 다음 조건에서 액체 크로마토그라피법에 의해 시험한다. 얻어진 크로마토그람에서 l-아스코르빈산-2-인산에스테르마그네슘 및 마레인산의 피크면적 SA1 및 S㎖을 구한다. 별도로 l-아스코르빈산-2-인산 에스테르마그네슘 표준품과 마레인산을 사용하여 같은 방법으로 조작을 실시하여 피크면적 SA2 및 SM2를 구한다.

마그네슘(C6H6O9P)2Mg3ㆍ10H2O의 함량(%)

마그네슘(C6H6O9P)2Mg3ㆍ10H2O)의 함량(%)

WA1 : 본 품의 채취량(g)

W㎖ : 본 품에 관계하는 마레인산의 채취량(g)

WA2 : l-아스코르빈산-2-인산 에스테르마그네슘 표준품의 채취량(g)

WM2 : l-아스코르빈산-2-인산에스테르마그네슘 표준품에 관계하는 마레인산의 채취량(g)

조작조건(예)

검출기 : 자외흡광광도계 (측정파장 : 257㎚)

칼럼 : 내경 8㎜, 길이 250㎜의 스텐레스관에 충전제로서 폴리비닐알콜을 에피크롤하이드린으로 가교한 겔 (비제한계 분자량(플란)은 1.8×10³)을 충전한다.

칼람온도 : 40℃

이동상 : 무수황산나트륨 7.10g 및 인산 5.76g에 물을 넣어 녹여 1,000㎖로 한 용액

유량 : 매분 0.7㎖

보존방법의 기준

차광한 기밀용기에 보존할 것.

■ L-아스콜빈산-2-폴리에틸렌 글리콜 에테르(Polyethoxylated ascorbic acid)

  C10H16O7(CH2O)n n=6.386     분자량(평균) 508.16

성상

    본 품은 진한 노란색 ∼ 갈색의 액체이다.

확인시험

    순도시험의 HPLC상의 표준품 피크와 검체의 피크 머무름시간(RT) 차가 ±1분 이내이다.

순도시험    

① 희석액 : 1L 메스실린더에 아세토니트릴 50mL 및 정제수 950mL를 혼합한 후 음파 처리하여 가스를 제거한다. 0.45㎛ 멤브레인 필터로 여과한다(블랭크(Blank)로 사용한다). 

② 표준액 : 100mL vol㎛etric flask에 L-아스콜빈산-2-폴리에틸렌 글리콜 에테르 표준품 200 mg와 3-Ethyl Ascorbic Acid 표준품 20 mg을 정밀하게(0.1mg까지) 달아 넣은 후 희석액으로 녹이고 표선하여 완전히 섞은 다음 즉시 주입한다(1개 준비).

③ 검액 : 100mL 메스플라스크에 검체 200mg을 정밀하게(0.1mg까지) 달아 넣은 후 희석액으로 녹이고 표선하여 완전히 섞은 다음 즉시 주입한다(3개 준비).

④ 시스템 적합성 : 분석 조건에 따라 표준액을 3회 연속 주입한다.

표에 해당하는 RRT값을 갖는 12개의 피크들을 L-아스콜빈산-2-폴리에틸렌 글리콜 에테르로 한다.

┌──┬──┰──┬──┐

│ No.│RRT ┃ No.│RRT │

┝━━┿━━╋━━┿━━┥

│1   │1.67┃7   │2.75│

├──┼──╂──┼──┤

│2   │1.93┃8   │2.86│

├──┼──╂──┼──┤

│3   │2.14┃9   │2.96│

├──┼──╂──┼──┤

│4   │2.33┃10  │3.05│

├──┼──╂──┼──┤

│5   │2.48┃11  │3.13│

├──┼──╂──┼──┤

│6   │2.62┃12  │3.21│

└──┴──┸──┴──┘

RRT= L-아스콜빈산-2-폴리에틸렌 글리콜 에테르의 Retention Time/ 3-Ethyl Ascorbic Acid Retention Time

3회 반복 주입에 의한 L-아스콜빈산-2-폴리에틸렌 글리콜 에테르의 머무름 시간(RT)과 피크 면적값의 상대표준편차가 2.0 % 이하면 검액분석을 시작한다. 주입은 블랭크, 시스템 적합성 표준액 3회, 검액 1, 검액2, 검액3 순으로 한다.

⑤ 분석 조건: 액체 크로마토그라피법

컬럼: C18 Column, 4.6 x 250mm, 5㎛

컬럼온도: 30℃

이동상:  A : 아세토니트릴 / TFA = 100 : 0.1 (vol %)

B : H2O /TFA =100 : 0.1(vol %)

UV 검출기 파장 : 244nm

유량(Flow rate) : 1.0 mL/min

주입 부피(Injection Vol㎛e) : 10㎕

실행 시간:  62 min

경사 용리법 (Gradient Table)

┌─────┬──┬──┐

│시간(min) │A(%)│B(%)│

├─────┼──┼──┤

│초기      │5   │95  │

├─────┼──┼──┤

│5         │5   │95  │

├─────┼──┼──┤

│25        │25  │75  │

├─────┼──┼──┤

│30        │25  │75  │

├─────┼──┼──┤

│32        │30  │70  │

├─────┼──┼──┤

│45        │80  │20  │

├─────┼──┼──┤

│47        │5   │95  │

├─────┼──┼──┤

│62        │5   │95  │

└─────┴──┴──┘

⑥ 순도계산: 시스템적합에 머무름 시간에 해당하는 L-아스콜빈산-2-폴리에틸렌 글리콜 에테르 피크의 개수는 12로 분석 값의 평균값을 최종 결과로 하고 90.0% 이상이어야 한다.

순도(%) = A × 100 / B

 A: L-아스콜빈산-2-폴리에틸렌 글리콜 에테르의 피크면적 (12개 피크면적의 합)

 B: L-아스콜빈산-2-폴리에틸렌 글리콜 에테르와 모든 불순물의 피크면적의 합*

*Blank에서 확인된 피크는 피크면적의 합에서 제외됨

함량

① 희석액 : 1L 메스실린더에 아세토니트릴 50mL 및 정제수 950mL를 혼합한 후 음파 처리하여 가스를 제거한다. 0.45㎛ 멤브레인 필터로 여과한다(블랭크로 사용).

② 표준 용액 : 100 mL 메스플라스크에 3-에틸 아스콜빈산(3-Ethyl Ascorbic Acid) 표준품을 각각 35 mg, 45 mg, 55 mg, 65 mg을 0.1 mg까지 정확하게 칭량하여 넣고 희석액으로 완전히 녹인 후 표선한다. 제조한 용액 2 mL를 각각 피펫으로 취해 100 mL 메스플라스크에 옮기고 희석액으로 표선한 다음 표준 용액으로 한다.

③ 검액 : 100 mL 메스 플라스크에 검체 약60 mg을 칭량하여 넣고 희석액으로 완전히 녹인 후 표선한다. 제조한 용액 5 mL를 피펫으로 취해 100 mL 메스 플라스크에 옮기고 희석액으로 표선한다. 1개의 검체 당 3개의 검액을 조제한다.

④ UV/VIS 분광광도계(Spectrophotometer) 분석

UV 분광광도계(spectrophotometer)에서 정량분석(Quantitative Analysis)을 선택하고 244nm에서 안정화시킨다. 

블랭크로 희석액을 셀에 충분히 넣고 자동 영점(Auto zero)으로 설정한다.

표준용액 1, 2, 3, 4를 셀에 넣고 흡광도를 측정한다. 

검액 1, 2, 3을 셀에 넣고 흡광도를 측정한다.

표준용액 및 검액이 바뀔 때마다 셀을 희석액으로 충분히 씻어낸다.

⑤ 계산

표준품의 농도는 수분함량을 빼 준 무게로 계산하고 검체의 농도는 수분함량과 잔류 용매량을 빼 준 무게로 계산하여 사용한다.

표준품의 흡광도를 Y축, 농도를 X축으로 하여 최소자승법에 의하여 검량선을 구한다. 이때 상관계수는 0.990이상이어야 한다. (Y= aX + b)--------------- 식1)

함량 계산은 다음과 같고 78.0%이상이어야 한다.

함량 (%) = (Wcal/Wsam) × P × HPLC 순도 (PAR%) ---------------- 식 2)

Wcal: 시료의 흡광도를 식 1)의 Y항에 대입하여 얻은 무게(3-에틸 아스콜빈산 분자량: 204.18)

Wsam: 칭량한 시료의 무게 (L-아스콜빈산-2-폴리에틸렌 글리콜 에테르의 평균 분자량: 508)

P: 표준품의 순도(Assay)

비타민C로서 함량(%) = 함량(%) x 176.12(아스콜빈산 분자량)/508(L-아스콜빈산-2-폴리에틸렌 글리콜 에테르의 평균분자량)

수분

검체 1.0g을 칼-피셔(Karl-Fischer)법으로 측정할 시 5.0% 이하여야 한다.

중금속

검체 1.0g을 취하여 중금속 시험법 제 2법에 의해 시험할 때 그 양은 납 표준액 2.0mL에 대응하는 양 이하이어야 한다.(20ppm이하)

잔류용매

① 내부 표준액 : 50 mL 메스플라스크에 디메틸포름아미트를 1/3가량 채우고 노말 부탄올(n-propanol) 약 50mg을 넣은 후 디메틸포름아미드로 표선한다(내부표준 원액). 제조한 용액 5 mL를 피펫으로 취해 50 mL 메스플라스크에 옮기고 디메틸포름아미드용액으로 표선한다(내부표준 희석액).

② 표준액

50 mL 메스 플라스크에 디메틸포름아미드를 1/3가량 채우고 메탄올 약 50 mg을 0.1 mg까지 정확하게 잰 후 디메틸포름아미드용액으로 표선한다.

50 mL 메스 플라스크에 디메틸포름아미드를 1/3가량 채우고 디클로로메탄 약 50mg을 0.1 mg까지 정확하게 잰 후 디메틸포름아미드로 표선한다.

50 mL 메스 플라스크에 디메틸포름아미드를 1/3가량 채우고 톨루엔 약 50 mg을0.1 mg까지 정확하게 잰 후 디메틸포름아미드로 표선한다.

50 mL 메스 플라스크에 디메틸포름아미드를 1/3가량 채우고 메탄올, 디클로로메탄, 톨루엔을 넣어 제조한 용액 5mL와 내부표준 원액 5mL를 넣고 디메틸포름아미드로 표선한다.

③ 검액 : 20mL vial에 약 80 mg의 L-아스콜빈산-2-폴리에틸렌 글리콜 에테르를 0.1 mg까지 정밀이 달아 넣고 내부표준 희석액 1 mL을 가하여 완전히 녹인다. 검체 하나 당 2개의 검액을 준비한다.

④ 시스템 적합성 : 표준용액을 2회 연속적으로 주입하여 얻은 크로마토그램에서 메탄올, 디클로로메탄, 톨루엔 및 n-프로판올 각각의 유지시간 차이가 0.2분 이내로 일정하고 메탄올, 디클로로메탄 및 톨루엔과 내부 표준물질 (n-Propanol)의 면적비 차이가 5 % 이내로 일정하면 시험을 한다.

⑤ 유지 시간(Retention time, RT)

메탄올                                 RT   약  4  분

디클로로메탄                           RT   약  5  분

노말 프로판올                          RT   약  9  분

톨루엔                          RT   약  10  분

⑥ 분석조건 : 가스크로마토그라피법에 의해 분석하여 0.2%이내여야 한다.

컬럼 : Polyethylene Glycol, 0.53mm I.D. × 30m, df: 2.5 ㎛

주입기/검출기 형태: 모세관 분리모드(Capillary split mode)/ 불꽃이온화검출기(FID)

설정온도 :  

주입기                        180℃

검출기                        200℃

컬럼 초기 온도                 65℃

시작 유지 시간                 15분

오븐 승온 속도               20℃/분

오븐 최고 온도                 180℃

오븐 최고 온도 유지시간        5min

유량 :

운반 가스(질소)               4.0mL/분

보조 가스(질소)               30mL/분

총 유량                      300mL/분

분리 비                       40 : 1

주입 부피                   1.0 ㎕

⑦ 계 산

  메탄올 함량(%) =  시료의 면적비 × 표준품 농도(mg/mL) × 표준품 순도(%)   

                  ─────────────────────────────

                    표준품 면적비 × 시료의 농도(mg/mL)                     

시료의 면적비: 시료 크로마토그램의 메탄올의 면적 / 노말-프로판올의 면적

표준품의 면적비: 표준품 크로마토그램의 메탄올의 면적 / 노말-프로판올의 면적

  디클로로메탄 함량(%) =  시료의 면적비 × 표준품 농도(mg/mL) × 표준품 순도(%)   

                        ─────────────────────────────

                          표준품 면적비 × 시료의 농도(mg/mL)                     

시료의 면적비: 시료 크로마토그램의 디클로로메탄의 면적 / 노말-프로판올의 면적

표준품의 면적비: 표준품 크로마토그램의 디클로로메탄의 면적 / 노말-프로판올의 면적

  톨루엔 함량(%) =  시료의 면적비 × 표준품 농도(mg/mL) × 표준품 순도(%)   

                  ─────────────────────────────

                    표준품 면적비 × 시료의 농도(mg/mL)                     

시료의 면적비: 시료 크로마토그램의 톨루엔의 면적 / 노말-프로판올의 면적

표준품의 면적비: 표준품 크로마토그램의 톨루엔의 면적 / 노말-프로판올의 면적

■ 비타민 C 나트륨염(L-아스코르빈산나트륨, L-Sodium Ascorbate)

C6H7NaO6 분자량198.11

성분규격

함량

본 품을 건조한 후 정량할 때 L-아스코르빈산나트륨(C6H7NaO6) 99.0% 이상을 함유한다.

성상

본 품은 백～황색을 띤 백색의 알맹이 또는 결정 분말로서 냄새가 없고 약간 염미가 있다.

확인시험

① 본 품 0.1g을 메타인산용액(1→50) 100㎖에 녹이고 이 액 5㎖에 액이 엷은 황색을 나타낼 때까지 요오드시액을 적가한 다음 황산동용액(1→1,000) 1방울 및 피롤 1방울을 가하여 50～60℃에서 5분간 가온하면 청～청록색을 나타낸다.

② 본 품의 수용액(1→100) 10㎖에 2,6-디클로르페놀인도페놀나트륨시액(0.1→100) 1～2방울을 가할 때 액의 청색은 곧 없어진다.

③ 본 품은 나트륨염의 반응을 나타낸다.

순도시험

① 선광도 : 본 품 1g을 정밀히 칭량하여 새로 끓여 식힌 물을 가하여 녹인 다음 정확히 10㎖로 한 액의 선광도를 측정하고 다시 건조물로 환산할 때  = +103.0 ～ +108.0°이어야 한다.

②액 성 : 본 품의 수용액(1→50)의 pH는 유리전극법으로 측정할 때 6.5～8.0이어야 한다.

③비소 :  본 품 0.25g을 물 5㎖에 녹여 이를 시험용액으로 하여 비소시험을 할 때 이에 적합하여야 한다.(4ppm 이하)

④중금속 : 본 품을 감압데시케이타(실리카겔)에서 24시간 건조할 때 그 감량은 0.5% 이하이어야 한다.

건조감량

본 품을 감압 데시케이타(실리카겔)에서 24시간 건조할 때, 그 감량은 5% 이하이어야 한다. 

정량법

본 품을 건조한 다음 약 0.2g을 정밀히 달아 메타인산용액(1→50) 50㎖에 녹이고 0.1N 요오드용액으로 적정한다.(지시약 : 전분시액)

0.1N 요오드 용액 1㎖ = 9.906㎎ C6H7NaO6

■ 비타민 D 분말(Vitamin D powder)

성분규격

함량

본 품은 정량할 때 1g에 대해 100,000 비타민D 국제단위이상이며 표시단위의 90-130%에 대응하는 콜레칼시페롤(C27H44O) 또는 칼시페롤(C27H44O)을 함유한다.

성상

① 본 품은 회백색～적갈색의 분말로서 냄새는 거의 없다.

② 본 품은 공기 또는 빛에 의해 분해가 촉진된다.

확인시험

① 비타민D 정량법으로 얻은 박층크로마토그라피용 시료용액 10㎕를 취하여, 비타민D 프로비타민D를 함유하는 용액과 병행하여 동일 박층판에 점적하여 전개시킨 후 자외선(주파장 254㎚)을 조사할 때 비타민 D 및 프로비타민D의 점적은 암자색을 나타내며 이들의 Rf치는 같다.

②비타민D 정량법으로 얻은 시료용액 및 표준용액의 가스크로마토그라피의 크로마토그람에서 머무름시간(RT : Retention Time)이 작은 프로비타민D, 머무름시간이 큰 이소피로비타민D 및 초산스티그마스테롤의 피크 머무름시간을 구할 때 이들 초산 스티그마스테롤에 대한 비는 같다.

순도시험

① 변패 : 본 품은 불쾌한 냄새가 나서는 안 된다.

② 중금속 : 「비타민A 분말」의 순도시험 ②를 준용한다.(50ppm이하)

③ 비소 : 「비타민A 분말」의 순도시험 ③을 준용한다.(4ppm이하)

건조감량

7.0% 이하(1g, 감압, 실리카겔, 4시간)

정량법

비타민D 정량법에 의해 시험한다.

제조방법의 기준

①본 품은 「콜레칼시페롤」「칼시페롤」 또는 이들 식용식물유 용액 또는 비타민D3 유를 적당한 기재로 분말화하거나 또는 피복ㆍ입상화하여 제조할 것.

②본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

차광한 밀폐용기에 보존할 것.

■ 비타민 D2(Vitamin D2, Calciferol)

C28H44O 분자량396.66

성분규격

성상

① 본 품은 백색의 결정으로서 냄새는 없다.

② 본 품은 에탄올, 아세톤, 에터 또는 클로르포름에 녹기 쉬우며, 지방유에 조금 녹기 쉽고, 물에는 거의 녹지 않는다.

③ 본 품은 공기 또는 빛에 의해 변화한다.

확인시험

①본 품 0.5㎎에 클로르포름 5㎖를 넣고 녹여, 무수초산 0.3㎖ 및 황산 0.1㎖를 넣어 흔들어 섞을 때, 액은 적색을 나타내고 즉시 자색 및 청색을 거쳐 녹색으로 변한다.

②본 품 0.05g에 무수 피리딘 1㎖를 넣어 녹이고, 3,5-디니트로염화벤조일 0.05g을 무수피리딘 1㎖를 녹인 액을 넣고, 환류용 유리관을 붙여 수욕상에서 10분간 가열한다. 냉각 후 물 5㎖를 넣고, 생성된 침전을 제거하고 물로 씻는다. 아세톤 용매로서 2회 재결정하고, 데시케이터(감압, 실리카겔)에서 2시간 건조할 때, 그 융점은 147-149℃이다.

순도시험

① 흡광도 : 본 품 0.01g을 정밀히 칭량하여, 에탄올에 녹여 1,000㎖로 하고, 이 액으로 파장 265㎚로 흡광도를 측정할 때  = 445～485이어야 한다.

② 선광도 : 본 품 0.3g을 정밀히 칭량하여, 30분 이내에 에탄올에 녹여 20㎖로 하고 이 액으로 30분 이내에 선광도를 측정할 때  = +102 ～ +107°이어야 한다.

③ 융점 : 본 품을 모세관에 넣고 데시케이터 (감압, 20㎜Hg이하)로 3시간 건조 후, 모세관을 즉시 밀봉한다. 예상한 융점의 약 10℃이하의 온도에서 가열한 통속에 넣고 1분간에 3℃ 상승하도록 가열할 때 그 융점은 115～118℃이어야 한다.

④ 에르고스테롤 : 본 품 0.010g을 희석한 에탄올(9→10) 2.0㎖를 넣어 녹인 후, 지기토닌 0.020g을 희석한 에탄올(9→10) 2.0㎖에 녹인 액을 가하여, 18시간 방치하였을 때, 침전이 생겨서는 안 된다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

차광한 밀폐용기에 넣어, 공기를 질소로 치환하여 서늘한 곳에 보존할 것.

■ 비타민 D3(Vitamin D3, Cholecalciferol)

C27H44O 분자량384.65

성분규격

성상

① 본 품은 백색의 결정으로서 냄새는 없다.

② 본 품은 에탄올 또는 클로르포름에 녹기 쉬우며, 지방유에 조금 녹기 쉽고 물에 거의 녹지 않는다.

③ 본 품은 공기 또는 빛에 의해 변화한다.

확인시험

「칼시페롤」의 확인시험을 준용한다. 이 경우에 「147-149℃」로 된것은 「133-135℃」로 한다.

순도시험

① 흡광도 : 「칼시페롤」의 순도시험 ①을 준용한다. 이 경우에 「445-485」로 된 것은 「450- 490」으로 한다.

②선광도 :「칼시페롤」의 순도시험 ②를 준용한다. 이 경우에「0.3g」로 된 것은 「0.1g」으로 「+102 ～ +107°」인 것은 「+103 ～ +112°」으로 한다.

③융점 : 「칼시페롤」의 순도시험 ③을 준용한다. 이 경우에 「115～118℃」로 된 것은 「84-88℃」으로 한다.

④ 7-디하이드로콜레스테롤(7-Dehydrocholesterol) : 본 품 0.010g에 묽은 에탄올(9→10) 2.0㎖를 넣어 녹이고, 지기토닌 0.020g을 묽은 에탄올(9→10) 2.0㎖에 녹인 액을 가하여 18시간 방치했을 때 침전이 생겨서는 안 된다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

차광한 밀폐용기에 넣어 공기를 질소로 치환하여 냉장소에 보관할 것.

■ 비타민 D3 유(Vitamin D3 Oil)

성분규격

함량

본 품은 정량할 때 1g당 200,000 비타민D 국제단위이상이며 표시단위의 90-130%에 대응하는 콜레칼시페롤(C27H44O)을 함유한다.

성상

①본 품은 담황～적갈색의 투명 또는 조금의 혼탁한 점성의 유액 또는 납형태의 덩어리로서 냄새는 없거나 또는 약간의 특이한 냄새가 난다.

② 본 품은 공기 또는 빛에 의해 분해가 촉진된다.

확인시험

「비타민D 분말」의 확인시험을 준용한다.

순도시험

① 산 : 「비타민A 유」의 순도시험 ②를 준용한다.

② 변패 : 본 품을 가온할 때, 불쾌한 패유성의 냄새가 나서는 안 된다.

정량법

비타민D 정량법에 의해 시험한다.

제조방법의 기준

① 본 품은 비타민D₃에 식용식물유를 가하여 제조할 것.

② 본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

차광한 기밀용기에 넣어 거의 채우던지 또는 공기를 질소로 치환하여 보존할 것.

■ 비타민E(dl-α-Tocopherol)

  C29H50O2  분자량 430.72   

함    량  이 품목은 비타민E(C29H50O2) 96.0% 이상을 함유한다.

성    상  이 품목은 엷은 황～갈색의 점조한 액체로서 냄새가 없다.

확인시험  이 품목 10mg에 무수에탄올 10mL를 가하여 녹이고 질산 2mL를 가하여 75℃에서 15분간 가열하면 액은 적～등색을 나타낸다.

순도시험  (1) 굴절률 : 이 품목의 굴절률 은 1.503～1.507이어야 한다.

  (2) 용  상 : 이 품목 0.1g을 무수알콜 10mL에 녹일 때, 그 액은 징명하여야 한다.

  (3) 비흡광도 : 이 품목 10mg을 무수알콜에 녹여 200mL로 하고 액층의 길이 1cm의 측정셀로 파장 292nm에서 흡광도를 측정할 때, ＝71～76이어야 한다.

  (4) 비  소 : 이 품목 0.25g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에탄올용액(1→50) 10mL를 넣고 에탄올에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3mL를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하).

  (5) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.0ppm 이하이어야 한다.

강열잔류물  이 품목의 강열잔류물은 0.1% 이하이어야 한다.

정 량 법  이 품목 50mg을 정밀히 달아 황산에탄올용액(3→200) 100mL를 가하여 녹이고, 물 20mL를 가하여 0.01N 황산제이세륨암모늄용액으로 잘 흔들어 섞으면서 적정한다(지시약 : 디페닐아민시액 2방울). 다만, 조작은 직사광선을 피하여 될 수 있는대로 어두운 곳에서 행하고, 적정속도는 10초간에 25방울로 한다. 종말점은 액의 청자색이 10초간 지속할 때로 한다. 따로 같은 방법으로 공시험을 하여 보정한다.

0.01N 황산제이세륨암모늄용액 1mL ＝ 2.154mg C29H50O2

■ 비타민 E 초산에스테르 액상(DL-α-Tocopheryl Acetate liquid)

C31H52O3 분자량472.75

성분규격

함량

본 품은 정량할 때 DL-α-비타민E 초산에스테르(DL-α-토코페릴아세테이트) (C31H52O3) 96.0%이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 무색～황색의 맑은 점성의 액으로 냄새는 없다.

② 본 품은 아세톤, 에터, 클로르포름 또는 식물유와 혼화한다.

③ 본 품은 에탄올에 녹기 쉽고, 물에 거의 녹지 않는다.

④ 본 품은 선광성이 없다.

⑤ 본 품은 공기 및 빛에 의해 변화한다.

확인시험

정량법으로 얻은 시료용액 10㎖에 초산 2㎖를 넣고 75℃에서 15분간 가열할 때 액은 적색～오렌지색을 나타낸다.

순도시험

① 용액상 : 본 품 0.1g에 무수 에탄올을 넣고 녹여 10㎖로 할 때, 그 액은 투명하며 액의 색은 염화 제2철의 색의 비교원액 0.5㎖에 0.5N 염산시액을 넣어 100㎖로 한 액보다 짙어서는 안 된다.

② 흡광도 : 본 품 0.01g을 정밀히 칭량하여 무수에탄올에 녹여 100㎖로 하고, 이 액으로 파장 284㎚에서 흡광도를 측정할 때  = 41.0～45.0이어야 한다.

③ 굴절율 : 본 품의 굴절율은  = 1.494～1.499 이어야 한다.

④ 비중 : 본 품의 비중은  = 0.952～0.966이어야 한다.

⑤ 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 2법에 의해 시험할 때, 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(20ppm이하)

⑥ 유리 α-토코페롤 : 본 품 약 1g을 정밀하게 칭량하여 황산에탄올 용액(3→200) 100㎖를 넣어 녹이고, 물 20㎖를 가해 잘 휘저으면서 0.01N 황산제2세륨암모늄액으로 적정한다.(지시약 디페닐아민시액 2방울) 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정하고 유리 α-토코페롤의 양을 구할 때 그 양은 0.5이하이어야 한다. 이 경우에 조작상의 주의사항은 정량법을 준용한다.

0.01N 황산제2세륨암모늄액 1㎖ = 2.1536㎎ C29H50O2

정량법

본 품 약 0.25g을 정밀하게 칭량하여 1,000㎖의 갈색 둥근바닥 플라스크에 취하여, 무수에탄올 25 ㎖를 가하여 녹이고, 황산에탄올용액(3→20) 20㎖를 가해, 환류 냉각기를 붙이고, 3시간 끓인다. 냉각 후 200㎖의 갈색 메스플라스크에 넣고, 무수에탄올을 넣어 200㎖로 하여 시료용액으로 한다. 시료용액 50㎖를 정확히 칭량하여, 황산에탄올용액(3→200) 50㎖ 및 물 20㎖를 넣어, 잘 휘저으면서 0.01N 황산제2세륨암모늄액으로 적정한다.(지시약 디페닐아민시액 2방울) 이 경우에 조작은 직사일광을 피하고, 가능한 한 어두운 곳에서 실시하며 적가속도는 10초간에 25방울로 한다. 적정 종점은 액의 청자색이 10초간 지속할 때로 한다. 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다.

0.01N 황산제2세륨암모늄액 1㎖ = 2.3638㎎ C31H52O3

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

차광한 기밀 용기에 보존할 것.

■ 비타민 E 초산에스테르 분말(Vitamin E acetate powder)

C31H52O3 분자량472.75

성분규격 

함량

본 품은 정량할 때 1g당 비타민 E 초산에스테르 100㎎이상이며, 표시량의 95-120%에 대응하는  비타민 E 초산에스테르(C31H52O3)을 함유한다.

성상

① 본 품은 황백색～갈색의 분말로서 냄새는 거의 없다.

② 본 품은 공기 또는 빛에 의해 분해가 촉진된다.

확인시험

정량법으로 얻은 시료용액 10㎖를 취하여 초산 2㎖를 가하고, 75℃에서 15분간 가열할 때 액은 적색～오렌지색을 나타낸다.

순도시험

① 변패  : 본 품은 불쾌한 냄새가 나서는 안 된다.

②중금속(제 1) :「비타민A 분말」의 순도시험 ②를 준용한다. 단, 본 품의 강열잔류물에 염산 1㎖ 및 초산 0.2㎖를 가하고 수욕상에서 증발건고한다. 여기에 묽은 염산 1㎖ 및 물 15㎖를 가하고, 가열하여 녹일 때 불용물이 있으면 제 2에 의한다.(50ppm이하)

   (제 2) : 본 품 1.0g을 백금제의 도가니에 취하여 살짝 뚜껑을 하고, 약하게 가열하여 탄화한다. 냉각 후 초산 2㎖ 및 황산 5방울을 가하여, 흰 연기가 생길때까지 주의하여 가열한 후, 500～600℃에서 강열하여 회화한다. 냉각 후 잔류물을 물에 적시고, 불화수소산 6㎖ 및 황산 3방울을 가하고, 증발건고 시킨 후, 5분간 강열한다. 냉각 후 염산 2㎖를 가하여 수욕상에서 증발건고하고, 이것을 염산 3방울로 적시고, 뜨거운 물 10㎖를 가하고 2분간 가열하여 녹인다. 냉각 후 페놀프타레인시액 1방울을 가하고, 암모니아시액을 액이 미적색이 될 때까지 적하하고, 묽은 초산 2㎖를 가한다. 필요하다면 여과하고 물 10㎖로 씻어 여과액 및 세척액을 네슬러관에 넣고 물을 넣어 50㎖로 하고 검액으로 한다. 이 검액에 염화나트륨시액 2방울을 가하여 5분간 방치하였을 때 나타나는 색은 다음 방법에 의해 나타나는 색보다 짙어서는 안 된다.(50ppm이하) (초산 2㎖, 황산 8방울, 염산 2㎖, 불화수소산 6㎖ 및 묽은 초산 2㎖를 수욕상에서 증발 건고하여 잔류물을 염산 3방울로 적신다. 여기에 뜨거운 물 10㎖를 가하여 이하 검액의 조제법과 같은 방법으로 조작하여 납 표준액 5.0㎖ 및 물을 가해 50㎖로 하고 황화나트륨시액 2방울을 가하여 5분간 방치했을 때 나타나는 색)

③ 비소 : 「비타민A 분말」의 순도시험 ③을 준용한다.(4ppm이하)

건조감량

7.0%이하 (1g, 감압, 실리카겔, 4시간)

정량법

본 품의 DL-α-비타민 E 초산에스테르 약 0.02g에 대응하는 양을 정밀하게 칭량하여, 비타민A 정량법에 의해 검화, 추출, 탈수한다. 이어 에터 추출액을 45℃의 수중에서 아스피레이터를 이용하여 흔들어 움직이면서 증발하고, 잔류물은 재빨리 에탄올에 녹여 정확히 100㎖로 한다. 이 액 5㎖를 정확히 칭량하여 에탄올을 가해 정확히 50㎖로 하고 시료용액으로 한다. 별도로 정량용 초산 DL-α-토코페롤 약 0.02g을 정밀하게 칭량하여, 시료와 같은 방법으로 조작하여 표준용액으로 한다. 시료용액 및 표준용액 10㎖씩을 정확히 칭량하여 각각에 묽은 염화제2철시액 1㎖ 및 α,α’-디피리딜시액 1㎖를 가하고 에탄올을 가하여 정확히 25㎖로 한다. 별도로 에탄올 10㎖를 정확히 칭량하여 같은 방법으로 조작하여 얻은 용액을 대조액으로 하여, 파장 520㎚에서의 흡광도 AT 및 AS를 측정한다.

제조방법의 기준

① 본 품은 DL-α-비타민 E 초산에스테르를 적당한 기재로서 분말화하거나, 또는 피복ㆍ입상화하여 제조할 것.

② 본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

차광한 밀폐용기에 보존할 것.

■ D-α-비타민 E 초산에스테르 액상(D-α-Tocopheryl Acetate liquid)

C31H52O3 분자량472.75

성분규격

함량

본 품은 정량할 때 D-α-비타민 E 초산에스테르(C31H52O3) 74%이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 채유식물에서 추출한 천연 비타민E로서 무색-황색의 맑은 점성액이다.

② 본 품은 아세톤, 에터, 클로르포름 또는 식물유와 혼화한다.

③ 본 품은 순수한 에탄올에 녹기 쉽고, 물에 거의 녹지 않는다.

④ 본 품은 산에는 안정하고, 알칼리나 산화제에 의해 변한다.

확인시험

선광도 시액 10㎖에 질산 2㎖를 넣고 75℃에서 15분간 가열할 때 액은 적색～오렌지색을 나타낸다.

순도시험

① 선광도 : 본 품은 다음 방법으로 측정할 때  = +24°이상이어야 한다.

ㆍ시액 : 본 품 200mg을 유리마개가 있는 150㎖의 둥근바닥플라스크에 정확히 칭량하여 25㎖의 순수한 알코올로 녹인다. 여기에 2N 황산과 알코올을 1대7로 섞은 용액 20㎖를 첨가하고 차광한 상태에서 3시간동안 초자증류장치로 증류한다.(reflux) 식힌 후 200㎖ 정량플라스크에 옮겨 2N 황산과 알코올이 1대72로 섞은 용액으로 정용하여 섞는다.

ㆍ시험 : 100mg의 D-α-비타민E초산에스테르에 상당하는 시액을 정확히 취하여 여기에 200㎖의 증류수를 첨가한다. 이 용액을 처음엔 75㎖ 다음 두 번은 25㎖의 에터(총 3회)로 추출하여 추출한 에터 용액을 합한다. 여기에 10% potassium ferricyanide와 수산화나트륨을 1대 125로 섞은 용액 20㎖를 첨가한다. 에터 용액을 물 50㎖로 4번 추출하여 버리고 무수 황산나트륨으로 탈수한다. 감압상태나 질소가스로 충진된 상태에서 에터가 7-8㎖가 될 때까지 수욕상에서 건고하고, 열을 가하지 않은 상태에서 남은 에터를 제거한다. 건고된 잔류물에 isooctane 5㎖를 넣어 녹인 후 선광도를 측정한다.

② 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 2법에 의해 시험할 때, 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(20ppm이하)

정량법

본 품 약 0.25g을 정밀하게 칭량하여 1,000㎖의 갈색 둥근바닥 플라스크에 취하여, 무수에탄올 25 ㎖를 가하여 녹이고, 황산에탄올용액(3→20) 20㎖를 가해, 환류 냉각기를 붙이고, 3시간 끓인다. 냉각 후 200㎖의 갈색 메스플라스크에 넣고, 무수에탄올을 넣어 200㎖로 하여 시료용액으로 한다. 시료용액 50㎖를 정확히 칭량하여, 황산에탄올용액(3→200) 50㎖ 및 물 20㎖를 넣어, 잘 휘저으면서 0.01N 황산제2세륨암모늄액으로 적정한다.(지시약 디페닐아민시액 2방울) 이 경우에 조작은 직사일광을 피하고, 가능한 한 어두운 곳에서 실시하며 적가속도는 10초간에 25방울로 한다. 적정 종점은 액의 청자색이 10초간 지속할 때로 한다. 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다.

0.01N 황산제2세륨암모늄액 1㎖ = 2.3638㎎ C31H52O3

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

차광한 기밀 용기에 보존할 것.

■ 비타민 K1(Phylloquinone, Phytonadione, 파일로퀴논)

  C31H46O2  분자량 450.71   

함    량

  이 품목은 정량할 때, 비타민K1(C31H46O2) 97.0～102.0%를 함유한다.

성    상

  이 품목은 황～등황색의 투명한 점조성 액체이다.

확인시험

  ① 이 품목의 이소옥탄용액(1→100,000)은 흡광도측정법에 따라 시험할 때, 따로 비타민K1 표준품을 같은 방법으로 측정하였을 때와 동일한 자외부흡수스펙트럼을 나타내어야 한다.

  ② 이 품목 50mg을 에탄올 10mL에 녹인 다음 알콜성10%수산화칼륨시액 1mL를 가할 때, 액의 색은 청색을 나타내며 방치하면 자색을 거쳐 갈색으로 변한다.

  ③ 이 품목 50mg을 메탄올ㆍ에탄올의 혼액(1 : 1) 10mL에 녹이고, 쓸 때 히드로설파이트나트륨 0.75g을 따뜻한 물 2mL에 녹인 액을 가하여 세게 흔들어 섞을 때 액의 황색이 없어진다.

순도시험

  ① 굴절률 : 이 품목의 굴절률 은 1.525～1.529이어야 한다.

  ② 용  상 : 이 품목 1.0g을 이소옥탄 10mL에 녹일 때, 그 액은 황색이며 맑아야 한다 .

  ③ 흡광비 : 이 품목의 이소옥탄용액(1→100,000)의 파장 248.5nm, 253.5nm 및 269.5nm에 있어서의 흡광도 A1, A2 및 A3를 측정할 때, A2/A1은 0.69～0.73, A2/A3는 0.74～0.78이어야 한다. 또한 이 품목의 이소옥탄용액(1→10,000)의 파장 284.5nm 및 326.0nm에서의 흡광도 A4 및 A5를 측정할 때, A4/A5는 0.28～0.34이어야 한다.

  ④ 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.0ppm 이하이어야 한다.

  ⑤ 메나디온 : 이 품목 20mg에 에탄올ㆍ물의 혼액(1 : 1) 0.5mL를 가하여 섞은 다음 1-페닐-3-메칠-5-피라졸론의 알콜용액(1→20) 1방울 및 암모니아수 1방울을 가한 다음 2시간 방치할 때, 청자색을 나타내어서는 아니 된다.

정 량 법

  이 품목 약 0.1g을 정밀히 달아 100mL 메스플라스크에 넣고 이소옥탄을 가하여 녹인 다음 이소옥탄을 가하여 100mL로 한 후 이 액 10mL를 취하여 이소옥탄으로 100mL로 희석하고 다시 이 액 10mL를 취하여 이소옥탄으로 100mL로 한 것을 시험용액으로 한다. 따로, 비타민K1 표준품 약 0.1g을 정밀히 달아 시험용액과 동일조작 한 것을 표준용액으로 한다. 이소옥탄을 대조액으로 하여 액층 1cm, 파장 248.5nm부근의 극대흡수파장에서 시험용액 및 표준용액의 흡광도를 측정하여 다음 계산식에 따라 함량을 구한다.

  함  량(%) =   AU  ×  WS  × 100  

              ───  ───        

                AS      WU          

               AU : 시험용액의 흡광도

               AS : 표준용액의 흡광도

               WS : 표준품의 채취량(g)

               WU : 검체의 채취량(g)

보존기준

  차광한 밀봉용기에 넣고 보존하여야 한다.

■ 비타민 K3 유도ㆍ혼합물(Menadione Dimethylpyrimidinol Bisulfite)

C17H18N2O6S 분자량378.40

성분규격

함량

본 품은 정량할 때 환산한 탈수물에 대하여 메나디온 아황산수소디메틸피리미디놀(C17H18N2O6S) 94.0%이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 백색～담황갈색의 결정성의 분말로서 냄새는 없고 약간의 쓴맛을 가진다.

② 본 품은 물에 거의 녹지 않고 에탄올, 아세톤 또는 에터에 매우 녹기 어렵다.

확인시험

① 본 품의 수용액(1→500) 1㎖에 암모니아시액 10㎖ 및 이소프로판올 1㎖를 가하여 잘 흔들어 섞은 후 시안초산에틸 1방울을 가하여 흔들어 섞을 때 액은 청자색을 나타낸다.

②본 품의 수용액(1→500) 5㎖에 에탄올 5㎖ 및 스루파닐산의 0.4N 황산용액(1.6→100) 5㎖를 가하여 흔들어 섞는다. 여기에 아초산나트륨용액(5→100) 2㎖를 가하여 흔들어 섞은 후 수욕상에서 5분간 가열할 때 액은 적자색을 나타낸다.

순도시험

① 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 3법에 의해 시험할 때 이 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(20ppm이하)

② 비소 : 본 품 1.0g을 취하여 비소시험법 제 3법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다.(2ppm이하)

③ 2-메틸-1,4-나프트하이드로키논-3-설폰산염 : 본 품 0.10g에 물 5㎖를 가하여 녹이고 o-페난트로린시액 2방울을 가할 때, 침전이 생겨서는 안 된다.

수분

1.0%이하(1g)

강열잔류물

0.20%이하(1g)

정량법

본 품 약 0.3g을 정밀하게 칭량하여 물 30㎖를 가하여 녹이고 클로르포름 30㎖를 가한 후 수산화나트륨 시액 2㎖를 가하고 즉시 15초간 격렬하게 흔들어 섞는다. 여기에 수산화나트륨 시액 2㎖를 가하고, 즉시 15초간 격렬하게 흔들어 섞은 후 한번 더 수산화나트륨시액 2㎖를 가하고 즉시 90초간 격렬하게 흔들어 섞어 방치하여 클로르포름층을 분취한다. 수층을 클로르포름 30㎖씩으로 2회 추출하여 전 클로르포름 추출물을 합쳐 물 20㎖로 씻고 미리 클로르포름으로 적신 여과지를 이용하여 여과한다. 클로르포름 5㎖로 씻고 여과액 및 세척액을 합쳐 200㎖의 플라스크에 넣고 수욕상에서 클로르포름을 증발하여 계속해서 상온에서 질소를 보내면서 증발건고한다. 잔류물에 빙초산 20㎖ 및 묽은염산 15㎖를 가하여 녹이고 아연분말 3g을 가해 분젠 밸브 마개를 장치하여, 자주 흔들어 섞으면서 어두운 곳에서 1시간 방치한다. 이어 면으로 된 마개를 이용하여 여과하고 새로 끓여 냉각한 물 20㎖씩으로 플라스크를 5회 씻고 여과액 및 세척액을 합쳐 즉시 0.1N 황산제2세륨암모늄액으로 적정한다.(지시약 o-페난트로린 시액 2방울) 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다.

0.1N 황산제2세륨암모늄액 1㎖ = 18.920㎎ C17H18N2O6S

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

차광한 기밀용기에 보존할 것.

■ 비타민 K3 아황산나트륨염(Menadione Sodium Bisulfite)

C11H9NaO5S 분자량276.24

성분규격

함량

본 품은 정량할 때, 환산한 탈수물에 대해 메나디온아황산수소나트륨(C11H9NaO5S) 93.0%이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 백색～약간의 갈색 결정성의 분말로서 냄새는 없다.

② 본 품은 물에 녹기 쉽고 에탄올에 녹기 어려우며 에터 또는 벤젠에 거의 녹지 않는다.

확인시험

① 본 품 0.1g을 분액깔때기에 넣어, 물 10㎖를 가하여 녹이고 수산화나트륨시액 3㎖를 넣어 클로르포름 5㎖씩으로 2회 추출한다. 클로르포름 추출액을 합쳐 클로르포름으로 적신 여과지를 사용하여 여과하고, 상온에서 공기를 보내면서 여과액을 증발건고한다. 잔류물에 에탄올 2㎖를 가하여 녹이고 다시 증발건고할 때 그 융점은 104-107℃이다.

② 본 품의 수용액(1→1,000) 2㎖에 에탄올 1㎖ 및 암모니아 시액 1㎖를 가하여 흔들어 섞은 후, 시안초산에틸 3방울을 떨어뜨릴 때 액은 자청색을 나타낸다. 여기에 수산화나트륨용액(1→3) 1㎖를 가하면 액은 녹색으로 변하고 점차 갈황색으로 된다.

③ 본 품의 수용액(1→25) 2㎖에 묽은 염산 2-3방울을 가하고 가열하면, 이산화유황의 자극취가 난다.

순도시험

① 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 2법에 의해 시험할 때, 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(20ppm이하)

② 비소 : 본 품 0.5g을 취하여 비소시험법 제 3법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다.(4ppm이하)

③ 2-메틸-1,4-나프토하이드로퀴논-3-설폰산염 : 본 품 0.10g에 물 5㎖를 가하여 녹이고 o-페난트로린 시액 2방울을 가할 때 침전이 생겨서는 안 된다.

수분

10.0～16.5%(0.2g)

정량법

본 품 약 0.3g을 정밀하게 칭량하여 물 20㎖를 가하여 녹이고, 클로르포름 20㎖를 가하고 묽은 탄산나트륨용액(1→2) 5㎖를 소량씩 가하면서 흔들어 섞는다. 이것을 격렬하게 흔들어 섞은 후, 클로르포름층을 분취하여 수층은 클로르포름 20㎖씩으로 2회 추출하고 전 클로르포름추출액을 합쳐 물 10㎖로 씻는다. 미리 클로르포름으로 적신 여과지를 이용하여 여과하여 클로르포름으로 씻고 여과액 및 세척액을 합쳐 150㎖의 플라스크에 넣는다. 수욕상에서 클로르포름을 증발하고, 이어서 상온에서 질소를 보내면서 증발건고하고 잔류물에 빙초산 20㎖ 및 묽은염산 15㎖를 가하여 녹인다. 여기에 아연분말 3g을 가하여 분젠 밸브마개를 하고 자주 흔들어 섞고 어두운 곳에서 1시간 방치한 후 면 마개를 이용하여 여과하고 새로 끓여 냉각한 물 20㎖씩으로 플라스크를 3회 씻고 여과액 및 세척액을 합쳐 즉시 0.1N 황산제2세륨암모늄액으로 적정한다.(지시약 o-페난트로린시액 2방울) 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다.

0.1N 황산제2세륨암모늄액 1㎖ = 13.812㎎ C11H9NaO5S

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

차광한 기밀용기에 보존할 것.

■ 비타민 K3 아황산 니코틴아마이드(Menadione Nicotinamide Bisulfite)

C17H16N2O6S 분자량376.42

성분규격

함량

본 품은 정량할 때 표시량의 90～110%에 대응하는 메나디온 아황산 니코틴아마이드(C17H16N2O6S)을 함유한다.

성상

① 본 품은 백색～약간의 갈색 결정성의 분말로서 냄새는 없다.

② 본 품은 물에 약간 녹으며 헥산 또는 클로르포름에 녹인다.

확인시험

① 본 품 0.1g을 분액 깔대기에 넣어, 물 10㎖를 가하여 녹이고 수산화 나트륨 시액 3㎖를 넣어 클로르포름으로 적신 여과지를 사용하여 여과하고, 상온에서 공기를 보내면서 여과액을 증발 건고한다. 잔류물에 에탄올 2㎖를 가하여 녹이고 다시 증발 건고할 때 그 융점은 104～107℃이다.

② 본 품의 수용액(1→1,000) 2㎖에 에탄올 1㎖ 및 암모니아 시액 1㎖를 가하여 흔들어 섞은 후, 시안초산에틸 3방울을 떨어뜨릴 때 액은 자청색을 나타낸다. 여기에 수산화 나트륨용액 (1→3) 1㎖를 가하면 액은 녹색으로 변하고 점차 갈황색으로 된다.

③ 본 품의 수용액(1→25) 2㎖에 묽은 염산 2～3방울을 가하고 가열하면, 이산화유황의 자극취가 난다.

순도시험

① 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속 시험법 제 2법에 의해 시험할 때, 그 양은 납 표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(20ppm 이하)

② 비소 : 본 품 0.5g을 취하여 비소 시험법 제 3법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다.(4 ppm 이하)

수분

1.5 % 이하

정량법

① 메나디온 표준품 80㎎을 정밀하게 칭량하여 클로르포름에 녹여 250㎖ 되게 희석한다. 이 용액 2㎖을 취하여 메탄올로 100㎖되도록 희석한 뒤 섞는다. 이때의 메나디온 농도는 약 6.4g/㎖이다.

② 본 품 약 1.5g을 정밀하게 칭량하여 증류수로 녹이고 30분간 흔들어 준 뒤 1,000 ㎖되게 한다. 50㎖을 취하여 여기에 클로르포름 40㎖, 증류수 40㎖, 1M 탄산나트륨 15㎖를 가한 뒤 격렬하게 흔들어 주고 난 뒤에 클로르포름 층을 분리하여 따라낸다. 그리고 따라낸 용액을 거즈로 여과한다. 물 층은 클로르포름 40㎖로 두차례 추출하고 클로르포름 20㎖로 거즈를 씻어 모든 여과액을 모아 클로르포름으로 250㎖되게 한 뒤 잘 섞는다. 용액 5㎖을 취하여 메탄올로 100㎖되도록 한 뒤 잘 섞고 클로르포름 용액(1→50)을 대조액으로 250㎚에서 흡광도를 측정한다

메나디온 함량(㎎) = 8 × Au / As × Ws

Au: 시료액 흡광도

As 표준액 흡광도

Ws:표준품 중량(㎎)

사용방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원재로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제재로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

차광한 기밀 용기에 보존할 것.

■ 비타민 K4 (아세토메나프톤, Acetomenaphthone = Menadiol Diacetate)

C15H14O4 분자량258.26

정    의

메나디올(menadiol)의 초산에스테르(acetate ester)로서 비타민K 활성을 가진 합성품이다.

성분규격

함량

본 품은 건조 후 정량할 때 아세토메나프톤(C15H14O4) 98.0%이상을 함유한다.

성상

본 품은 백색의 결정성의 분말로서 냄새 없거나 약한 초산 냄새가 난다.

확인시험

①본 품 0.03g에 빙초산 2㎖를 넣어 녹이고, 묽은염산 2㎖를 넣어 수욕중에서 5분간 가열한다. 냉각 후 강과산화수소수 1방울을 넣고 잠시 가온하여 흔들어 섞고 물 2㎖ 및 클로르포름 3㎖를 넣어 흔들어 섞을 때 클로르포름층은 황색을 나타낸다.

② ①의 클로르로름층 1㎖를 취하여, 가온한 클로르포름을 증발시켜 얻은 잔류물에 에탄올 1㎖를 넣어 녹인다. 암모니아시액 1㎖를 넣어 흔들어 섞은 후, 시안초산에틸 3방울을 넣을 때, 액은 자청색을 나타낸다. 이 액에 수산화나트륨 용액(1→3) 1㎖를 넣을 때 녹색으로 변하고 그후 갈색으로 된다.

③본 품 0.2g에 수산화나트륨시액 3㎖를 넣고, 수분간 가열하여 냉각 후 묽은황산으로 중화하여 생긴 침전을 여과한다. 여과액은 초산염의 정성반응을 나타낸다.

순도시험

① 융점 : 본 품의 융점은 112-115℃이어야 한다.

②아연 : 본 품 1.0g을 취하여, 묽은염산 10㎖를 넣어 아세토메나프톤이 유상(油狀)이 될 때까지 가열하여 즉시 냉각하고 여과한다. 여과지는 뜨거운 물 30㎖로 씻고 여과액 및 세척액을 합쳐, 여기에 물을 넣어 50㎖로 한 다음 페로시안화 칼륨 시액1.0㎖를 넣어 흔들어 섞고 5분간 방치한다. 이 액에서 생기는 탁도는 아연표준액 5.0㎖를 취하고 묽은염산 10㎖를 넣어, 이하는 시료의 경우와 같은 방법으로 조작할 때 나타나는 탁도 이하이어야 한다.(50ppm이하)

건조감량

0.5%이하 (1g, 80℃, 3시간)

강열잔류물

0.10%이하(1g)

정량법

본 품을 건조 후 약 0.25g을 정밀하게 칭량하여, 150㎖의 켈달플라스크에 넣는다. 여기에 빙초산 20㎖를 넣어 녹이고, 희석염산 15㎖를 넣어 환류냉각기를 붙여 15분간 끊인 후 수냉한다. 냉각 후 즉시 0.1N 황산제2세륨암모늄액으로 적정한다. (지시약 o-페난트로린시액 3방울) 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다.

0.1N 황산제2세륨암모늄액 1㎖ = 12.914㎎ C15H14O4

보존방법의 기준

차광한 기밀용기에 보존할 것.

■ 염화콜린(Choline Chloride)

(CH3)3N+(Cl-)CH2CH2OH

C5H14ClNO 분자량139.63

정    의

콜린의 염화물이다.

성분규격 

함량

본 품은 정량할 때 환산한 건조물에 대하여 염화콜린(C5H14ClNO) 96.0%이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 무색으로, 매우 맑은 점성의 액으로 약간의 특이한 냄새가 난다.

② 본 품은 에탄올과 혼화하고 에터, 클로르포름 또는 벤젠에 거의 녹지 않는다.

③ 본 품의 pH는 6.5～8.0이다.

④ 본 품은 흡수성으로 이산화탄소를 흡수하여 아민취를 발한다.

확인시험

① 본 품의 수용액(1→100) 5㎖에 라이넷케염시액 3㎖를 가하면 홍색의 침전이 생긴다.

② 본 품의 수용액(1→10) 5㎖에 수산화칼륨 2g을 넣어 가온하면 아민취를 발하고 그 가스는 적색 리트머스지를 청색으로 변하게 한다.

③ 본 품의 수용성(1→10)은 염화물의 정성반응을 나타낸다.

순도시험 

①에틸렌글리콜 : 본 품 10.0g을 공전플라스크에 취하고, 과요오드산시액 25㎖를 넣고 어두운 곳에서 30분간 방치한 후 요오드화칼륨 20㎖를 넣어 흔들어 섞고 0.1N 티오황산나트륨액으로 적정한다.(지시약 전분시액 1㎖) 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정하고 에틸렌글리콜의 양을 구할 때 그 양은 1.0%이하이어야 한다.

0.1N 티오황산나트륨액 1㎖ = 6.207㎎ C2H6O2

② 트리메틸아민 : 본 품 1.0g을 취하여 물을 넣어 녹이고 정확히 100㎖로 하여 시료용액으로 한다. 시료용액 5㎖를 취하여 분액깔때기에 넣고 포르마린, 탄산마그네슘 시액 1㎖, 톨루엔 10㎖ 및 포화탄산칼륨용액 3㎖를 넣어 격렬하게 1분간 흔들어 섞고 5분간 방치한다. 이어 톨루엔 층을 무수황산나트륨 0.5g을 넣은 공전시험관으로 옮겨 톨루엔을 탈수한다. 이 톨루엔용액 5㎖에 피크린산ㆍ톨루엔 시액 5㎖를 가했을 때 이 액에서 나타나는 색은 트리메틸아민 표준액 5㎖를 취하여 시료용액의 경우와 같은 방법으로 조작할 때 나타나는 색보다 짙어서는 안 된다.

③ 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 1법에 의해 시험할 때 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(20ppm이하)

④ TMA-HCl : 표준품 및 본 품 1.0g을 취하여 물을 넣어 녹이고 정확히 100㎖로  하여 상온에서 30분간 Shaking한 후 10분간 정치하여 표준용액과 시료용액으로  사용한다. 일정량의 표준 용액과 시료용액을 취하여 이온크로마토그라피 분석법에 따라 분석할 때 그 양은 1.0%이하이어야 한다.

분석조건

       Column : IonPac CS12A Analytical column

                IonPac CG12A Guard column

       Eluent : 18mM - Sulfuric acid

       Injection volume : 25㎕

       Flow rate : 1.0㎖/min

       Detection : Suppressed conductivity 50mA

건조감량

30%이하(0.5g, 감압, 오산화인, 5시간)

강열잔류물

0.20%이하(1g)

정량법

① 염화콜린 함량 96.0% 이상인 경우 : 과염소산 적정법으로 시행

본 품 약 0.3g을 정밀하게 칭량하여 과염소산적정용 빙초산 50㎖를 가해 완전히 녹이고 과염소산적정용초산제2수은시액 10㎖를 가해 0.1N과염소산으로 적정한다.(지시약 염화메틸로자니린 시액 2방울) 이 경우 적정의 종점은 액의 자색이 청색을 거쳐 녹색으로 변할 때로 한다. 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다.

0.1N 과염소산 1㎖ = 13.962㎎ C5H14ClNO

② 염화콜린 함량이 50%이하인 경우 : 효소분석법 또는 HPLC 분석법으로 시행

  ㆍ 효소분석법

 *시료중의 염화콜린 정량 : 표준품 및 본 품 콜린으로서 약 150～200ppm에 해당하는 양을 정밀하게 칭량하여 정제수로 1ℓ가 되도록 표정하여 녹인 후 여과하  여 측정한다.

    - 사용조건

       1. YSI 2700 효소분석기

       2. 표준용액(콜린) : 175ppm(mg/l)

    - 계산방법

  염화콜린의 함량(ppm)  =   측정치  ×  235ppm  ×  희석배수  

                                      ─────              

                                        175ppm                

      235ppm : 표준용액 175ppm을 염화콜린으로 환산한 량(ppm)

      175ppm : 표준용액

  ㆍ HPLC 분석방법

   전처리 : 1.0g에 해당하는 표준품 및 본 품을 정확히 칭량하여 125㎖ 둥근 플라  스크에 넣고 25㎖ H2O + 25㎖ CH3CN을 가하여 10～15분간 Sonication 한 후  여과하여 20㎕ 주입한다.

    - 사용조건

      장비 : HPLC

      컬럼 : C18 역상컬럼

      Injection Volume : 20㎕

      Flow rate : 0.8 ～ 1.0 ㎖/min

      검출체 : RI detector

      이동상 : H2O 500㎖ + CH3CN 500㎖ + Sodium Lauryl Sulfate 2.88g + Acetic acid 10㎖

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다. 

공기 중의 수분을 흡수하는 성질이 강해서 식물성 박류를 부형물질로 첨가할 경우 1.5% 이내로 제한하지 않으면 제품이 액상형태로 변할 가능성이 높음

보존방법의 기준

기밀용기에 보존할 것.

■ 엽산(Folic Acid)

C19H19N7O6 분자량441.42

정    의

비타민 B군에 속하는 수용성 비타민의 하나로서 폴라신(folacin)이라고도 한다.

성분규격

함량

본 품은 정량할 때 환산한 탈수물에 대해 엽산(C19H19N7O6) 98.0～102.0%를 함유한다.

성상

① 본 품은 황색～오렌지황색의 결정성의 분말로서 냄새는 없다.

② 본 품은 물, 에탄올 또는 그 외의 유기용매에 거의 녹지 않는다.

③ 본 품은 묽은 수산화나트륨 시액, 탄산나트륨용액(1→100), 염산 또는 황산에 녹고 액은 황색으로 된다.

④ 본 품은 빛에 의해 서서히 변화한다.

확인시험

① 본 품 1.5㎎에 묽은 수산화나트륨 시액을 가하여 녹이고 100㎖로 하여 이것을 시료용액으로 한다. 이 액에 대해 흡수스펙트럼을 측정할 때 파장 255～257㎚, 281～285㎚ 및 361～369㎚에 최대흡수치를 나타내고 255～257㎚ 및 361～369㎚의 최대파장에서 흡광도를 A1 및 A2로 할 때 A1/A2는 2.80～3.00이다.

② ①의 시료용액 10㎖에 과망간산칼륨시액 1방울을 가하여 액이 청색으로 될 때까지 흔들어 섞고 즉시 자외선하에서 관찰할 때 청색형광을 발한다.

순도시험

①용액상 : 본 품 0.10g에 묽은 수산화나트륨 시액 10㎖를 가하여 녹일 때 그 액은 황색으로 투명하여야 한다.

②유리아민 : 파라아미노벤졸글루타민산 표준품을 데시케터(감압, 실리카겔)에서 4시간 건조하고 그 중 약 0.05g을 정밀하게 칭량하여 묽은 에탄올(2→5)를 가하여 녹이고 정확하게 100㎖로 한다. 이 액 3㎖를 정확하게 칭량하여 물을 가하여 정확하게 1000㎖로 한 액 4㎖를 정확하게 칭량하여 이 액에 대해 정량법의 S2액과 같은 방법으로 조작하여 흡광도 ‘|를 측정한다. AS’와 정량법으로 얻은 AC에서 다음 식에 의해 계산할 때 유리아민의 양은 1.0%이하이어야 한다.

W : 정량법으로 채취한 시료를 탈수물로 환산한 양(㎎)

W‘ : 파라아미노벤졸글루타민산표준품의 양(㎎)

수분

칼피셔용 피리딘 5㎖ 및 칼피셔시액으로 종점까지 적정한다. 다음에 본 품 0.2g을 정밀하게 칭량하여 신속히 적정플라스크에 넣어 과량의 칼피셔시액 일정량을 가하여 30분간 휘저어 섞은 후, 시험할 때 수분은 8.5% 이하이어야 한다.

강열잔류물

0.5%이하(1g)

정량법

본 품 및 엽산표준품(미리 본 품과 같은 방법으로 수분을 측정하여 놓는다) 약 0.05g을 정밀하게 칭량하여 각각 묽은 수산화나트륨 시액 50㎖를 가하여 잘 흔들어 섞고 녹여 여기에 묽은 수산화나트룸 시액을 가하여 정확히 100㎖로 하여 T1액 및 S1액으로 한다. T1액 및 S1액 30㎖씩을 정확하게 칭량하여 각각 묽은 염산 20㎖ 및 물을 가하여 정확하게 100㎖로 하고 각각의 60㎖씩에 아연분말 0.5g을 가하고 자주 흔들어 섞어 20분간 방치한다. 다음에 이들 각 액을 건조여과지를 이용하여 여과하여 최초의 여과액 10㎖를 제거하고 다음 여과액 10㎖를 정확하게 칭량하여 물을 가하여 정확하게 100㎖로 하고 T2액 및 S2액으로 한다. T2액 및 S2액 4㎖씩을 정확하게 칭량하여 각각에 물 1㎖ 묽은 염산 1㎖ 및 아초산나트륨용액(1→1,000) 1㎖를 가하여 혼화한 후 2분간 방치하고 다음에 스르파민산 암모늄 용액(1→200) 1㎖를 가해 잘 흔들어 섞은 후 2분간 방치한다. 각 액에 수산 N-(1-나프틸)-N‘-디에틸에틸렌디아민용액(1→1,000) 1㎖를 가하고 흔들어 섞은 후 10분간 방치하고 물을 가해 정확하게 20㎖로 하고 T3액 및 S3액으로 한다. 별도로 T1액 30㎖를 정확하게 칭량하여 묽은 염산 20㎖ 및 물을 가하여 정확하게 100㎖로 하고 이 액 4㎖를 정확하게 칭량하여 T2액 에서 T3액을 만드는 조작과 같은 방법으로 얻은 액을 C액으로 한다. 별도로 물 4㎖를 칭량하여 T2액에서 T3액을 만드는 조작과 같은 방법으로 하여 얻은 액을 대조액으로 하여 T3액, S3액 및 C액에 대해 파장 550㎚에서의 흡광도 AT, AS 및 AC를 측정하여 AT에서 AC의 1/10을 감하여 AT’로 한다.

엽산(C19H19N7O6)의 양(㎎) = 탈수물로 환산한 엽산표준품의 양(㎎) ×

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

차광한 기밀용기에 보존할 것.

■ 이노시톨(Inositol)

C6H12O6 분자량180.1

정    의

비타민 B군의 하나로서 시클로헥산의 6가 알코올이다.

성분규격

함량

본 품은 건조 후 정량할 때 이노시톨(C6H12O6) 97.0%이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 백색의 결정 또는 결정성의 분말로서 냄새는 없고 감미를 가진다.

② 본 품은 물에 녹기 쉽고 에탄올, 에터 또는 클로르포름에 거의 녹지 않는다.

③ 본 품의 수용액 (1→10)은 중성이다.

④ 본 품은 선광성이 없다.

확인시험

① 본 품은 수용액 (1→50) 1㎖에 초산 6㎖를 넣고 수욕상에서 증발건고하고 잔류물에 초산 스트론티움용액 (1→10) 0.5㎖를 넣고, 다시 수욕상에서 증발건고 시킬 때, 잔류물은 적자색을 띠다가 오렌지색을 나타낸다.

② 본 품의 수용액(1→100) 4㎖에 차초산납시액 1㎖를 넣고 흔들어 섞어, 수욕중에서 5분간 가열할 때, 액은 반투명의 겔이 된다.

③ 정량법으로 얻은 헥사아세틸이노시톨의 융점은 212-216℃이다

순도시험

① 용액상 : 본 품 1.0g에 물 10㎖을 넣고 녹일 때, 그 액은 무색으로 맑아야 한다.

② 융점 : 본 품의 융점은 223 - 227℃이어야 한다.

③ 염화물 : 본 품 2.0g을 취하여 염화물의 시험할 때, 그 양은 0.01N 염산 0.30㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다. (0.005% 이하)

④ 황산염 : 본 품 4.0g을 취하여 황산염의 시험할 때, 그 양은 0.01N 황산 0.50㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다. (0.006% 이하)

⑤ 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 1법에 의해 시험할 때 그 양은 납표준액 2.5㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다. (25ppm 이하)

⑥ 철 : 본 품 2.0g을 취하여 물 40㎖를 넣어 녹이고 염산 2㎖, 과황산암모늄 0.04g 및 티오시안산 암모늄시액 2㎖를 넣을 때 나타나는 색은, 철 표준액 1.0㎖를 취하여 물 40㎖를 넣어 이하 시료의 경우와 같은 방법으로 조작할 때 나타나는 색보다 진해서는 안 된다. (5ppm 이하)

⑦ 칼슘 : 본 품 1.0g에 물 10㎖를 넣어 녹이고 수산암모늄시액 1㎖를 넣어 1분간 방치할 때, 액은 투명하여야 한다.

⑧ 페린시액 환원성물질 : 본 품 0.5g에 물 10㎖를 넣어 녹이고, 페린시액 5㎖를 넣어 3분간 끊인 후 30분간 방치할 때 오렌지 황색 ～ 적색의 침전이 생겨서는 안 된다.

건조감량

0.5%이하 (1g, 105℃, 4시간)

강열잔류물

0.10%이하 (1g)

정량법

본 품을 건조 후 약 0.2g을 정밀하게 칭량하여 250㎖의 비이커에 넣고 묽은 황산 1㎖ 및 무수초산 50㎖의 혼합액 5㎖를 넣고, 비이커를 시계접시로 덮은 다음 수욕상에서 20분간 가열한 후 얼음으로 냉각시킨다. 다음에 물 100㎖를 넣고 20분간 끊인 후 냉각하고 비이커의 내용물을 250㎖의 분액깔때기에 넣어 소량의 물로 씻어 넣는다. 다음에 클로르포름 30㎖, 25㎖, 20㎖, 15㎖, 10㎖ 및 5㎖로 비이커를 씻은 후 순차적으로 추출하고 모든 클로르포름 추출액을 합쳐 물 10㎖로 씻고, 클로르포름층을 탈지면을 사용하여 여과한다. 다음에 클로르포름 10㎖로 수층 및 탈지면을 씻고 여과액 및 세제액을 합쳐, 수욕상에서 증발건고하여 105℃에서 2시간 건조하고 냉각 후 중량을 측정하여 헥사아세틸이노시톨 (C18H24O12)의 양으로 한다. 

이노시톨(C6H12O6)의 양 (㎎) 

= 헥사아세틸이노시톨(C18H24O12)의 양 (㎎) × 0.4167

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

기밀용기에 보존할 것.

■ 주석산수소콜린

Choline Bitartrate

(2-Hydroxyethyl)trimethylammonium Bitartrate

  [HOCH2CH2N＋(CH3)3]HC4H4O6-   

  C9H19NO7  분자량 253.25   

함    량  이 품목을 무수물로 환산한 것은 주석산수소콜린(C9H19NO7) 98.0% 이상을 함유한다.

성    상  이 품목은 백색의 흡습성이 있는 결정성분말이다. 

확인시험  「염화콜린」의 확인시험에 따라 시험한다.

순도시험  (1) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.0ppm 이하이어야 한다.

  (2) 1, 4-디옥산 :  이 품목 0.5g과 소포제(규소수지 함유) 0.1g을 물 10mL  가하고 10분간 초음파로 분산시킨 것을 시험용액으로 하여 25mL 퍼지앤트랩용 용기(Frit sparger)에 넣어 용기의 온도를 50℃를 유지하면서 퍼지앤트랩 및 기체크로마토그래프로 분석한다. 따로, 물 10mL에 1,4-디옥산 5μg이 함유되도록 한 용액에 소포제 0.1g을 가한 것을 표준용액으로 하여 이후 검체와 동일하게 분석한다(10ppm 이하).

  조작조건 

    퍼지앤트랩 

      트    랩 : Vorcarb 3000 또는 이와 동등한 것

      퍼지시간 : 11분

      탈착온도 및 시간 : 250℃, 4분  

      냉각장치 온도(Cryo focus temp.) : -150℃

      베이크 온도(Bake temp.) 및 시간 : 260℃, 10분

    기체크로마토그래피

      칼    럼 : HP-FFAP(60m × 0.32μm) 또는 이와 동등한 것

      검 출 기 : 수소이온화검출기(FID)

      칼럼온도 : 70℃에서 5분간 유지시킨 후 5℃/min의 비율로 180℃까지 승온시킨다.

      주입구 온도 : 220℃

      검출기 온도 : 250℃

      이동상기체 및 유량 : 질소, 0.9mL/min 

(3) 비선광도 : 이 품목 약 20g을 정밀히 달아 물에 녹여 50mL로 하여서 이 액의 선광도를 측정할 때, ＝+17.5～+18.5°이어야 한다.

수    분  이 품목을 감압데시케이타(오산화인)에서 4시간 건조할 때, 그 양은 0.5% 이하이어야 한다.

강열잔류물  이 품목 2g을 취하여 강열잔류물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.1% 이하이어야 한다.

정 량 법  이 품목 약 0.5g을 정밀히 달아 250mL 삼각플라스크에 넣고 빙초산 50mL를 가하여 수욕상에서 가온하여 완전히 녹인다. 식힌 다음 0.1N 과염소산용액으로 적정한다(지시약 : 크리스탈바이올렛ㆍ빙초산시액 2방울). 종말점은 녹색으로 변하는 점으로 한다. 따로 같은 방법으로 공시험을 한다.

0.1N 과염소산용액 1mL ＝ 25.36mg C9H19NO7

■ D-판토텐산 칼슘(Calcium D-Pantothenate)

C18H32O10N2Ca 분자량476.55

성분규격

함량

본 품은 건조 후 정량할 때 질소(N) 5.7～6.0 및 칼슘(Ca) 8.2-8.6%를 함유한다.

성상

① 본 품은 백색의 분말로서 냄새가 없고 쓴 맛을 가진다.

② 본 품은 물에 녹기 쉽고 글리세린에 조금 녹기 어려우며, 에탄올에 매우 녹지 않고 에터 및 클로르포름에는 거의 녹지 않는다.

③ 본 품의 수용액(1→20)의 pH는 7.0～9.0이다.

④ 본 품의 수용액(1→20)은 선광성이 있다.

⑤ 본 품은 흡습성이다.

확인시험

① 본 품 0.05g에 수산화나트륨시액 5㎖를 가하여 녹이고 여과한다. 여과액에 황산동시액 1방울을 넣을 때, 액은 짙은 청색을 나타낸다.

② 본 품 0.05g에 수산화나트륨 시액 5㎖를 가하여 1분간 끓이고 냉각 후 묽은 염산(1→10)을 가하여 액의 pH를 3-4로 하고, 염화제2철시액 2방울을 넣을 때 액은 황색을 나타낸다.

③ 본 품의 수용액(1→10)은 칼슘염의 정성반응을 나타낸다.

순도시험

① 선광도 : 본 품을 건조 후 약 1g을 정밀하게 칭량하여 물에 녹여 20㎖로 하고, 이 액으로 선광도를 측정할 때  = +25.0 ～ +28.5℃이어야 한다.

② 용액상 : 본 품 1.0g에 물 20㎖를 넣어 녹일 때, 그 액은 무색으로 투명하여야 한다.

③ 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 1법에 의해 시험할 때  그 양은 납표준액 2.0㎎에 대응하는 양 이하이어야 한다.(20ppm이하)

④ 알카로이드 : 본 품 0.05g에 물 5㎖를 넣어 녹이고 묽은 염산 1㎖ 및 마이야시액 2방울을 넣어 1시간 방치했을 때, 액이 혼탁해서는 안 된다.

건조감량

5.0%이하(1g, 105℃, 4시간)

정량법

질소

본 품을 건조 후 약 0.05g을 정밀하게 칭량하여 질소정량법(세미미크로켈달법)에 의해 시험한다.

칼슘

본 품을 건조 후 약 0.4g을 정밀하게 칭량하여 물 30㎖를 넣고 가온하여 녹인다. 냉각 후 0.05M 에틸렌디아민4초산2나트륨액 25㎖를 정확히 가하여 여기에 pH 10.7의 암모니아ㆍ염화암모늄 완충액 10㎖ 및 에리오크롬 브랙 Tㆍ염화나트륨 지시약 0.04g을 가하여, 과량의 에틸렌디아민4초산2나트륨을 0.05M 염화마그네슘액으로 적정한다. 이 경우에 적정의 종점은 청자색의 액이 적자색으로 변하는 때로 한다. 같은 방법으로 공시험한다.

0.05M 에틸렌디아민4초산2나트륨액 1㎖ = 2.0040㎎ Ca

보존방법의 기준

기밀용기에 보존할 것.

■ DL-판토텐산 칼슘(Calcium DL-Pantothenate)

C18H32O10N2Ca 분자량476.55

성분규격

함량

본 품은 건조 후 정량할 때, 질소(N) 5.7～6.0 및 칼슘(Ca) 8.2～8.6%를 함유한다.

성상

① 본 품은 백색의 분말로서 냄새는 없고 쓴맛을 가진다. 

② 본 품은 물에 녹기 쉽고 글리세린에 조금 녹기 어려우며, 에탄올에 매우 녹기 어렵고, 에터 또는 클로르포름에 거의 녹지 않는다.

③ 본 품의 수용액(1→20)의 pH는 7.0～9.0이다.

④ 본 품의 수용액(1→20)은 선광성이 없다.

⑤ 본 품은 흡습성이다. 

확인시험

「D-판토텐산칼슘」의 확인시험을 준용한다.

순도시험

① 용액상 : 「D-판토텐산칼슘」의 순도시험 ②를 준용한다.

② 중금속 : 「D-판토텐산칼슘」의 순도시험 ③을 준용한다.(20ppm이하)

건조감량

5.0%이하 (1g, 105℃, 4시간)

정량법

「D-판토텐산칼슘」의 정량법을 준용한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

기밀용기에 보존할 것.

■ 프로비타민 A(β-카로틴, Provitamin A(β-Carotene))

C40H56 분자량536.89

정    의

동물체에서 비타민 A로 변하는 물질로서 β-카로틴을 말한다.

성분규격

함량

본 품은 건조 후 정량할 때, β-카로틴(C40H56) 98.0%이상을 함유한다.

성상

본 품은 적색～암적색의 결정 또는 결정성의 분말로 약간의 특이한 냄새와 맛을 가진다.

확인시험

① 본 품의 클로르포름 용액(1→1000) 10㎖는 오렌지색을 띠며, 이 액에 3염화안티몬시액 1㎖를 가할 때 녹청색을 띤다.

② 정량법으로 얻은 시료용액으로, 싸이클로헥산을 대조로 하여 흡수스펙트럼을 측정할 때, 파장 454-457㎚ 및 481-484nm에 최대 흡수치를 나타낸다.

순도시험

① 융점 : 176-183℃(분해)

② 용액상 : 본 품 1.0g에 클로르포름 10㎖를 가해 녹였을 때 그 액은 암적색으로 투명하여야 한다.

③ 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 2법에 의해 시험할 때, 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(20ppm이하)

④ 비소 : 본 품 0.5g을 취하여 비소시험법 제3법에 의해 시험할 때 여기에 적합하여야 한다.(4ppm이하)

⑤ 흡광비 : 정량법으로 얻은 시료원액 및 시료용액에 대해, 싸이클로헥산을 대조로 하여 시료원액의 파장 340㎚ 및 362㎚에서 흡광도 A1 및 A2 및 시료용액의 파장 434㎚, 455㎚ 및 483㎚에서 흡광도 A3, A4 및 A5를 측정할 때, A2/A1은 1.00이상, (A4×10)/A1은 15.0이상, A4/A3는 1.30～1.60, A4/A5는 1.05～1.25이어야 한다. 

건조감량

1.0%이하(1g, 실리카겔, 감압, 4시간)

강열잔류물

0.10%이하(1g)

정량법

본 품을 건조 후 약 0.04g을 정밀하게 칭량하여 클로르포름 10㎖를 가해 녹이고, 싸이클로헥산을 가해 정확히 100㎖로 한다. 이 중 5㎖를 정확히 취해, 싸이클로헥산을 가해 정확히 100㎖로 하여 시료원액으로 한다. 시료원액 10㎖를 정확히 취하여, 싸이클로헥산을 넣어 정확히 100㎖로 하여 시료용액으로 한다. 이 액으로 싸이클로헥산을 대조로 하여 파장 455㎚부근의 최대 파장에서 흡광도 A를 측정한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

차광한 밀봉용기에 넣어, 공기를 불활성가스로 치환하여 보존할 것.

■ 비타민 AD 혼합제 액상(Vitamin A and D Mixture Liquid)

성분규격

본 품은 비타민 A 유, 비타민 A 분말 또는 이들 제제 및 콜레칼시페롤, 칼시페롤, 비타민 D3 유, 비타민 D 분말 또는 이들 제제에 식물기름, 동물기름을 혼합한 유액 또는 수용성 액상물이다.

함량

본 품은 정량할 때, 표시단위의 90～130%에 대응하는 비타민 A(레티놀) 및 표시단위의 90～130%에 대응하는 콜레칼시페롤(C27H44O) 또는 칼시페롤(C28H44O)을 함유한다.

확인시험

① 비타민 A :  비타민 A 분말의 확인시험을 준용한다.

② 콜레칼시페롤 또는 칼시페롤 : 비타민 D 분말의 확인시험을 준용한다.

정량법

비타민 A :  비타민 A 정량법 제 2법으로 시험한다.

콜레칼시페롤 또는 칼시페롤 : 비타민 D 정량법으로 시험한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

① 원제는 빛이 차단된 기밀용기에 넣어 거의 채우거나, 또는 공기를 질소로 바꾸어서 보존할 것.

② 액상의 제제는 빛이 차단된 밀폐용기에 보존할 것.

■ 비타민 ADE 혼합제 액상(Vitamin A, D and E Mixture Liquid)

성분규격

본 품은 비타민 A 유, 비타민 A 분말 또는 이들 제제 콜레칼시페롤, 칼시페롤, 비타민 D3 유, 비타민 D 분말 또는 이들 제제 및 비타민 E 초산에스테르, 비타민 E 분말 또는 이들 제제에 식물기름, 동물기름 등을 혼합한 유액 또는 수용성 액상물이다.

함량

본 품은 정량할 때, 표시단위의 90～130%에 대응하는 비타민 A(레티놀) 및 표시단위의 90～130%에 대응하는 콜레칼시페롤(C27H44O) 또는 칼시페롤(C28H44O) 및 표시량의 90～120%에 대응하는 비타민 E 초산에스테르(C31H52O3)을 포함한다.

확인시험

① 비타민 A : 「비타민 A 분말」의 확인시험을 준용한다.

② 콜레칼시페롤 또는 칼시페롤 : 「비타민 D 분말」의 확인시험을 준용한다.

③비타민 E 초산에스테르 : 정량법에서 얻은 박층크로마토그라피용 시료용액 5㎕을 취해 박층크로마토그라피용 표준용액 5㎕과 평행하게 동일 박층판에 점적한다. 다음으로 n-헥산ㆍ초산에틸혼합액(4 : 1)을 전개용매로 하여 약 10cm 전개한 후, 묽은 염화제이철시액을 분무하고 이어서 α,‘|-디피리딜시액을 분무할 때, 시료용액으로부터 얻어지는 토코페롤의 점 및 표준용액에서 얻어지는 점이 적색을 띠며 그들의 Rf값은 같다.

정량법

비타민 A : 비타민 A 정량법 제 2법으로 시험한다.

콜레칼시페롤 또는 칼시페롤 : 비타민 D 정량법으로 시험한다.

비타민 E 초산에스테르 : 본 품의 비타민 E 초산에스테르(C31H52O3) 약 0.02g에 대응하는 양을 정밀하게 측량, 비타민 A 정량법으로 비누화, 유출, 탈수하고, 에터 추출액을 45℃의 수중에서 감압제거하며 잔유물에 아세톤 2㎖를 정확하게 첨가하고 녹여서 박층크로마토그라피용 시료용액으로 한다. 별도로 정량용 비타민 E 초산에스테르 약 0.02g을 정밀하게 측량, 시료와 마찬가지로 조작하여 박층크로마토그라피용 표준용액으로 한다. 박층크로마토그라피용 시료용액 및 박층크로마토그라피용 표준용액 각각 0.2㎖를 정확하게 칭량, 박층크로마토그라피용 실리카겔(형광제 첨가)을 이용하여 조제한 박층판에 점적한다. 그런 다음, n-헥산ㆍ초산에틸혼합액(4 : 1)을 전개용매로 하여 약 15cm 전개한 후, 박층판을 풍건하고 자외선(주파장 254nm)을 쬐게 하며, 시료용액 및 표준용액에서 얻은 토코페롤 부분을 스테인레스제 미크로 스파툴라로 벗겨내어 50㎖의 비이커에 넣는다. 소량의 에탄올을 첨가하여 뒤섞은 후 가만히 두었다가 위에 뜨는 액체를 글라스 필터를 이용하여 걸러낸다. 이와 같은 조작을 반복하여 추출한다. 추출액을 에탄올로 정확하게 100㎖로 만들어 시료용액 및 표준용액으로 한다. 시료용액 및 표준용액 10㎖씩을 정확하게 칭량, 각각에 묽은 염화제이철시액 1㎖ 및 α,α‘-디피리딜시액 1㎖를 첨가, 에탄올을 첨가하여 정확하게 25㎖로 만든다. 별도로 에탄올 10㎖를 정확하게 측량하여 마찬가지로 조작하여 얻은 용액을 대조액으로 사용하여, 파장 520nm에서의 흡광도 AT 및 AS를 측정한다.

비타민 E 초산에스테르(C31H52O3)의 양(㎎) 

= 정량용 비타민 E 초산에스테르의 양(㎎) 

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

① 액상의 제제는 빛이 차단된 기밀용기에 넣어 거의 채우거나, 또는 공기를 질소로 바꿔서 보존할 것.

② 분상의 제제는 빛이 차단된 밀폐용기에 보존할 것.

■ 비타민 AD 혼합제 분말(Vitamin A and D Mixture Powder)

성분규격

본 품은 비타민 A 또는 이들 제제 및 콜레칼시페롤, 칼시페롤, 비타민 D3, 비타민 D 분말 또는 이들 제제에 소맥분, 탈지강, 식물유, 대두박, 동물유, 포도당, 무수규산 또는 그 염류 등을 혼합한 분말 내지 입자이다.

함량

본 품은 정량할 때, 표시단위의 90～130%에 대응하는 비타민 A(레티놀) 및 표시단위의 90～130%에 대응하는 콜레칼시페롤(C27H44O) 또는 칼시페롤(C28H44O)을 함유한다.

확인시험

① 비타민 A : 비타민 A의 확인시험을 준용한다.

② 콜레칼시페롤 또는 칼시페롤 : 비타민 D 분말의 확인시험을 준용한다.

정량법

비타민 A :  본 품의 비타민 A 500 단위 이상에 상당하며,  본품 1g 이하를 정밀하게 칭량하여 플라스크에 넣어 물 2㎖를 가하여 진탕하면서 한참 가온한 뒤 무알데하이드 에탄올 30㎖ 및 피로가롤의 에탄올 용액(1→10) 1ml를 가하여 이하 비타민 A 정량법 제2법에 의거 시험한다.

콜레칼시페롤 또는 칼시페롤 : 비타민 D 정량법으로 시험한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

빛이 차단된 밀폐용기에 보존할 것.

■ 비타민 ADE 혼합제 분말(Vitamin A, D and E Mixture Powder)

성분규격

본 품은 비타민 A 유, 비타민 A 분말  또는 이들 제제 콜레칼시페롤, 칼시페롤, 비타민 D3 유, 비타민 D 분말 또는 이들 제제 및 비타민 E 초산에스테르, 비타민 E 분말 또는 이들 제제에 소맥분, 탈지강, 식물유, 대두박, 동물유, 포도당, 무수규산, 또는 그 염류등을 혼합한 분말내지 입자이다.

함량

본 품은 정량할 때, 표시단위의 90～130%에 대응하는 비타민 A(레티놀) 및 표시단위의 90～130%에 대응하는 콜레칼시페롤(C27H44O) 또는 칼시페롤(C28H44O) 및 표시량의 90～120%에 대응하는 비타민 E 초산에스테르(C31H52O3)을 포함한다.

확인시험

① 비타민 A : 「비타민 A 분말」의 확인시험을 준용한다.

② 콜레칼시페롤 또는 칼시페롤 : 「비타민 D 분말」의 확인시험을 준용한다.

③ 비타민 E 초산에스테르 : 비타민 ADE 혼합제 액상의 확인시험 ③을 준용한다.

정량법

비타민 A :  본 품의 비타민 A 500 단위 이상에 상당하며,  본품 1g 이하를 정밀하게 칭량하여 플라스크에 넣어 물 2㎖를 가하여 진탕하면서 한참 가온한 뒤 무알데하이드 에탄올 30㎖ 및 피로가롤의 에탄올 용액(1→10) 1ml를 가하여 이하 비타민 A 정량법 제2법에 의거 시험한다.

콜레칼시페롤 또는 칼시페롤 : 비타민 D 정량법으로 시험한다.

비타민 E 초산에스테르 : 비타민 ADE제제(액상)의 정량법에 준용한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

빛이 차단된 밀폐용기에 보존할 것.

6. 효소제(Enzymes)

┌──────────────────────────────────────────────────┐

│가축의 내인성 효소에 의하여 쉽게 소화되지 않고, 소화를 방해하는 항영양인자의 제거, 섬유소가 많은 세 │

│포벽 내에 존재하는 전분, 단백질 및 미네랄 등 소화에 이용할 수 없는 물질의 이용성 증가, 가축의 내인  │

│성 효소에 분해되지 않는 원료의 결합을 분해하여 원료의 이용성 증가, 어린 가축의 불충분한 효소의 보충 │

│등을 목적으로 사료에 첨가하는 물질                                                                  │

└──────────────────────────────────────────────────┘

 가. 당분해효소

■ 글루코아밀라아제(아밀로글루코시다아제, Glucoamylase(Amyloglucosidase))

정    의

Aspergillus niger 및 그 변종 또는 Aspergillus oryzae, Rhizopus oryzae 등에서 얻어진 효소제이다.

성분규격

함량 

이 품목은 정량할 때 글루코아밀라아제로서 표시역가의 90～130％를 함유한다.

성상 

이 품목은 백～엷은 황～진한 갈색의 분말 또는 투명～진한 갈색의 액체이다.

순도시험 

① 비소 : 이 품목은 0.25g을 배금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에틸알콜용액(1→50) 10㎖를 넣고 에틸알콜에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하고 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3㎖를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험을 할 때, 이에 적합하여야 한다.(4ppm 이하)

② 중금속 : 이 품목 0.5g을 석영제 또는 자제도가니에 넣고 조용히 약하게 가열하여 탄화시킨다. 식힌 다음 질산 2㎖및 황산 5방울을 가하여 흰연기가 발생하지 않을 때까지 가열한 후 450～550℃에서 회화가 될 때까지 강열한다. 식힌 다음 염산 2㎖를 가하여 수욕상에서 증발건고하고 잔류물에 염산 3방울을 가하여 주고 열탕 10㎖를 가하여 2분간 가온하고 식힌 후 페놀프탈레인시액 1방울을 가하고 암모니아시액을 액이 엷은 홍색이 될 때까지 가해주고 나서 물을 사용하여 네슬러관에 옮겨주고 다시 희석한 초산(1→20) 2㎖ 및 물을 가하여 50㎖로 한 것을 시험용액으로 하여 중금속시험을 할 때, 그양은 40ppm이하이어야 한다. 다만, 표준색은 시료와 재질이 같은 도가니에 질산 2㎖, 황산 5방울 및 염산 2㎖를 넣고 가열하여 증발건고하고 잔류물에 염산 3방울을 가하여 이하 시험용액의 조제와 같이 처리하여 네슬러관에 옮겨주고 이에 납표준용액 2㎖, 희석한 초산(1→20) 2㎖ 및 물을 가하여 50㎖로 한 것을 사용한다.

③ 납 : 이 품목 0.8g을 취하여(액체의 경우는 수욕상에서 증발 농축한다)조용히 가열하여 탄화시킨 다음 500℃를 넘지 않는 온도에서 회화하고 묽은 질산 20㎖를 주의하여 가하고 5분간 조용히 끓인 다음 식히고 필요하면 여과한다. 잔류물은 씻고 씻은 액은 여액과 합치고 물을 가하여 50㎖로 한 것을 시험용액으로 하여 납시험을 할 때, 그 양은 10ppm이하이어야 한다.

④ 대장균군 : 이 품목은 식품공전, 일반시험법의 미생물시험법중 대장균군에 따라 시험할 때, 제품 1g당 30이하이어야 한다.

⑤ 살모넬라 : 이 품목은 식품공전, 일반시험법의 미생물시험법중 살모넬라균시험법에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

정량법(역가)

적용 및 원리:

본 시험방법은 Aspergillus niger 및 그 변종에서 얻어진 효소제의 글루코아밀라아제 역가를 측정하는 방법이다. Aspergillus oryzae 및 그 변종에서 얻어진 효소제의 역가측정에서도 변형되어 사용될 수 있다. 역가시험은 일정시간, 온도, pH 및 농도 조건하에서 옥수수전분 가수분해용액이 분해되어 생성된 환원당으로서 측정한다. 

시험용액조제:

하기 실험은 글루코아밀라아제 역가 0.1～0.2unit를 함유하는 검체의 사용에 기초를 두고 있다. 이 검체의 양은 동 시험조건하에서 환원당 0.2 ～ 0.4g을 생성하는 양이 되며 이 범위에서 가장 적합한 값이 얻어진다. 액체검체, 고체검체 및 액체농축물은 다음 도표에 따라 조제되고 표시된 일정량이 사용되어야 한다.

액체검체

┏━━━━━━━━━━━┯━━━━━━┯━━━━━━━┯━━━━━━┓

┃검체중의 효소(단위/㎖)│희석배율(㎖)│취하는 양(㎖) │희석배수(F) ┃

┣━━━━━━━━━━━┿━━━━━━┿━━━━━━━┿━━━━━━┫

┃0.05이하              │-           │5.0           │0.2         ┃

┃                      │            │              │            ┃

┃0.06～0.1             │-           │2.0           │0.5         ┃

┃                      │            │              │            ┃

┃0.11～0.25            │-           │0.80          │1.25        ┃

┃                      │            │              │            ┃

┃0.3～0.5              │-           │0.40          │2.5         ┃

┃                      │            │              │            ┃

┃0.6～1.0              │-           │0.20          │5           ┃

┃                      │            │              │            ┃

┃1.1～2.0              │-           │0.10          │10          ┃

┃                      │            │              │            ┃

┃2.1～4.0              │5.0→100    │1.00          │20          ┃

┃                      │            │              │            ┃

┃4.1～5.0              │4.0→100    │1.00          │25          ┃

┃                      │            │              │            ┃

┃5.1～7.0              │3.0→100    │1.00          │33.3        ┃

┃                      │            │              │            ┃

┃7.1～10.0             │2.0→100    │1.00          │50          ┃

┗━━━━━━━━━━━┷━━━━━━┷━━━━━━━┷━━━━━━┛

고체검체 및 액체농축액

┏━━━━━━━━━━━┯━━━━━━┯━━━━━━━━┯━━━━━━━┓

┃검체중의 효소(단위/㎖)│검체무게(g)*│희석되는 양(㎖) │취하는 양(㎖) ┃

┣━━━━━━━━━━━┿━━━━━━┿━━━━━━━━┿━━━━━━━┫

┃4이하                 │10          │1,000           │5.0           ┃

┃                      │            │                │              ┃

┃5～10                 │4           │1,000           │5.0           ┃

┃                      │            │                │              ┃

┃11～25                │1.6         │1,000           │5.0           ┃

┃                      │            │                │              ┃

┃26～50                │1.4         │1,000           │3.0           ┃

┃                      │            │                │              ┃

┃51～75                │1.25        │1,000           │2.0           ┃

┃                      │            │                │              ┃

┃76～100               │1.00        │1,000           │2.0           ┃

┃                      │            │                │              ┃

┃101～150              │1.25        │1,000           │1.0           ┃

┃                      │            │                │              ┃

┃151～200              │1.00        │1,000           │1.0           ┃

┃                      │            │                │              ┃

┃201～250              │1.50        │2,000           │1.0           ┃

┃                      │            │                │              ┃

┃251～300              │1.00        │2,000           │1.0           ┃

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※ 검체를 정밀히 달아 1,000㎖ 메스플라스크에 넣고 물로 2/3정도 채우고 상온에서 30분간 방치한다. 방치하는 동안 격렬히 흔들어 주는 조작을 5회 이상 실시한 다음 물로 채운다. 이 용액을 왓트만 No.12 또는 동종의 여지를 사용하여 여과한 여액을 시험용액으로 하여 지시된 일정량을 취한다. 

시험조작:

①환원당의 생성 : 전분가수분해물의용액 50㎖와 초산염완충액 5㎖를 100㎖ 메스플라스크에 넣어 시험용액용 플라스크로 한다. 대조용으로 다른 메스플라스크를 준비하여 시험용액 대신 물을 취하여 시험용액의 경우와 동일하게 취급한다. 플라스크를 60℃수욕조에 넣어 10분간 방치한다.(Aspergillus oryzae와 Rhizopus oryzae에 의해 생산된 효소는 55℃에서 실시한다) 해당량의 시험용액용 플라스크에 가하고 동시에 시간을 측정한다.(여러개의 검체를 분석할 경우는 120분간의 반응시간 후 각각 중화시키는 시간을 고려하여 시험용액을 취하는 시간에 간격을 둔다) 내용물을 흔들어 완벽하게 혼합하고 수욕조에서  120분간 방치한다. 반응 시간이 115～118분 지났을 경우 페놀프탈레인시액 3방울을 가하고 정확히 120분이 되면 플라스크를 수욕조에서 꺼내어 빨리 뷰렛을 사용하여 2％ 수산화나트륨용액으로 중화(약 3～7㎖가 소요됨)한 다음 흐르는 물로 상온으로 식히고 물을 가하여 100㎖로 한다. 이 액 10㎖와 대조액 10㎖를 취하여 다음과 같이 환원당량을 측정한다.

②환원당의 측정(Schoorl Method) : (주: 본 시험방법은 단백질을 함유하지 않는 용해성물질에서 환원당을 측정하는데 적합한 방법이다. 다만 상당량의 단백질을 함유하는 검체는 단백질 침전제로 처리한 후 실험한다) 펠링시액 A, B 각 10㎖씩을 취하여 250㎖ 삼각플라스크에 넣고 위의 환원당 생성에 따라 얻은 용액 10㎖를 정확히 가한다. 대조액도 동일하게 처리한다.(주: 여러개의 검체를 분석 할 경우 시험용액을 일련의 플라스크에 취하여 물을 가하여 30㎖로 희석하여 펠링시액 A를 가하고 펠링시액 B는 가열하기 직전에 가한다) 물을 가하여 50㎖로 하고 조용히 흔들어 내용물을 혼합한다. 유리구 2개를 넣고 조그만 깔때기로 마개를 하고 가열하여 3분이내에 끓도록 하여 2분간 계속 가열한다. 이어 얼음욕이나 흐르는 냉수에 빨리 식힌 다음 소량의 물로 깔때기를 씻어내린다. 이에 30％ 요오드칼륨 10㎖, 28％ 황산 10㎖를 가하고 요오드의 색이 거의 없어질 때까지 0.1N 치오황산나트륨용액으로 재빨리 적정한 다음, 다시 전분시액 1㎖를 가하여 0.1N 치오황산나트륨용액의 소비 ㎖수를 S로 하고 대조액에 소비된 ㎖수를 C로 한다. 검체에 대해 물 30㎖로 대체하여 시약공시험을 두 개 행한다. 그 소비 ㎖수의 평균치를 B로 한다. B에서 S를 빼서 검체에 대해 0.1N 치오황산나트륨용액 소비㎖수로서 표시하여 적정차값을 구하여 Ts로 한다. B에서 C를 빼서 대조액에 대한 적정값을 구하고 이를 Tc로 한다. 

적정차값의 환원당량 환산표ⓐ

───────────────────────────────────

  적정차  0.0                                                         

  (㎖)          0.1   0.2   0.3   0.4   0.5   0.6   0.7   0.8   0.9   

───────────────────────────────────

          환원당량(포도당으로) (㎎)                                   

        ───────────────────────────────

  0.0     0.0   0.3   0.7   1.0   1.3   1.6   1.9   2.2   2.5   2.8   

  1.0     3.2   3.5   3.8   4.1   4.4   4.7   5.0   5.3   5.6   5.9   

  2.0     6.4   6.66  6.9   7.2   7.5   7.8   8.1   8.5   8.8   9.1   

  3.0     9.4   9.8   10.1  10.4  10.7  11.0  11.4  11.7  12.0  12.3  

  4.0     12.6  13.0  13.3  13.6  10.0  14.3  14.6  15.0  15.3  15.6  

  5.0     15.9  16.3  16.6  16.9  17.2  17.6  17.9  18.2  18.5  18.9  

  6.0     19.2  19.5  19.8  20.1  20.5  20.8  21.1  21.4  21.8  22.1  

  7.0     22.4  22.7  23.0  23.3  23.7  24.0  24.3  24.6  24.9  25.2  

  8.0     25.6  25.9  26.2  26.6  26.9  27.3  27.6  28.0  28.3  28.6  

  9.0     28.9  29.3  19.6  30.0  30.3  30.6  31.0  31.3  31.6  31.9  

  10.0    32.3  32.7  33.0  33.3  33.7  34.0  34.3  34.6  35.0  35.3  

  11.0    35.7  36.0  36.3  36.7  37.0  37.3  37.6  38.0  38.3  38.7  

  12.0    39.0  39.3  39.6  40.0  40.3  40.6  41.0  41.3  41.7  42.0  

  13.0    42.4  42.8  43.1  43.4  43.7  44.1  44.4  44.8  45.2  45.5  

  14.0    45.8  46.2  46.5  46.9  47.2  47.6  47.3  48.3  48.6  48.9  

  15.0    49.3  49.6  49.9  50.3  50.7  51.1  51.4  51.7  52.1  52.4  

  16.0    52.8  53.2  53.5  53.9  54.2  54.5  54.9  55.3  55.6  56.0  

  17.0    56.3  56.7  57.0  57.3  57.7  58.1  58.4  58.8  59.1  59.5  

  18.0    59.8  60.1  60.5  60.9  61.2  61.5  61.9  62.3  62.6  63.0  

  19.0    63.3  63.6  64.0  64.3  64.7  65.0  65.4  65.8  66.1  66.5  

  20.0    66.9  67.2  67.6  68.0  68.4  68.8  69.1  69.5  69.9  70.3  

  21.0    70.7  71.1  71.5  71.9  72.2  72.6  73.0  73.4  73.7  74.1  

  22.0    74.5  74.9  75.3  75.7  76.1  76.5  76.9  77.3  77.7  78.1  

  23.0    78.5  78.9  79.3  79.7  80.1  80.5  80.9  81.3  81.7  82.1  

  24.0    82.6  83.0  83.4  83.8  84.2  84.6  85.0  85.4  85.8  86.2  

  25.0    86.6  87.0  87.4  87.8  88.2  88.6  89.0  89.4  89.8  90.2  

  26.0    90.7  91.1  91.5  91.9  92.3  92.7  93.1  93.5  93.9  94.3  

  27.0    94.8                                                        

※ 위의 도표의 사용은 분석자가 자료가 얻어지는 조건하에 2회의 실험값이 동일하여야 함을 전제로 한다. 오차의 위험은 이미 알고 있는 순수한 포도당의 양(10～70mg범위의 5개 검체)으로 세심한 중복의 표준화에 의해 피할 수 있다. 포도당mg에 대한 적정차값의 검량선은 원점을 통과하여 약간 굽은 일직선이 된다. 만약 표준화 곡선이 채택될 경우 치오황산나트륨용액은 표정을 구하지 않아도 된다. 0.065N 치오황산나트륨용액을 사용하므로 공시험적정값을 44～45㎖로 증가시켜 더 정확한 결과를 얻을 수 있다. 

③ 환원당 함량 : 적정값의 환원당량 환산표를 참고로 하여 검체에 대한 적정차값(Ts)에 해당하는 환원당량(mg)을 찾아 그 값을 Ws라 한다. 동일한 방법으로 대조액에 대한 적정차값(Tc)에 대한 환원당량(mg)을 찾아 그 값을 Wc라 한다. 시험용액 취한 량에 의해 생성된 총환원당(포도당)량은 다음 계산식에 따라 구한다. 

대조액에 의해 생성된 총환원당(포도당)량은 다음 식에 따라 구한다.

ㆍ액체효소역가의 계산 

다음 계산식에서 따라 분석한 액체효소제의 역가를 구한다.

F: 희석배수

다음 계산식에 따라 분석한 액체효소제의 역가를 구한다. 

           =

V:  희 석 용 량 (㎖)

A:  시험에 사용된 시험용액의 양

                 (시험용액조제에서 고체검체에 및 액체농축물에 대한 표를 참조할 것)

G:  검체의 채취량(g)

역가의 정의

1 Glucoamylase unit(GAU)는 상기시험조건하에서 1시간에 환원당으로서 포도당 1g을 생성하는 효소의 양이다. 

시  액

전분가수분해물용액(4%) : 포도당 당량(Dextrose equivalent, DE)이 15～20인 옥수수시럽 고형물을 건조물로 40g에 상당하는 양을 달아 녹여 1000㎖로 한다. 이 용액은 매일 새로 조제하여 사용한다. 

초산염완충액 : 빙초산 60g을 달아 물을 가하여 1,000㎖로 한 다음, 초산나트륨(NaC2H3O2ㆍ3H2O) 136g을 녹여 1,000㎖로 한 액으로 pH 4.2로 조절한다. (Aspergillus oryzae, Rhizopus oryzae에 의해 생산된 효소제는 pH 5.0으로 한다)

펠링시액 A : 황산동(CuSO4ㆍ5H2O) 34.66g을 달아 물을 가하여 500㎖로 한다. 이 용액은 적은 용기에 보관하고 마개를 꼭하여 보존한다. 

펠링시액 B : 주석산칼륨나트륨(KNaC4H4O6ㆍ4H2O) 173g을 물 일정량에 녹이고 수산화나트륨 50g을 가하여 녹인 후 물을 가하여 500㎖로 한다. 이 용액은 적은 용기에 보관하고 마개를 꼭하여 보존한다. 사용시에는 A액과 B액 동량을 혼합한다. 이론적 공시험적정치는 27.8㎖이나 적정치가 27.5～29.5㎖이면 적당하다. 

보존방법의 기준

흡습성이 강하므로 냉암소에서 밀봉 보존하여야 한다. 

제조방법의 기준

본 품은 원제자체를 사용할 수 있고, 본품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부혈물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할수 있다. 

■ 락타아제(Lactase)

정    의

Aspergillus oryzae의 락타아제 생산균주에서 얻어진 효소제이다.

성분규격

효소력 단위 

본 품은 효소력시험을 할 때, 1g 중에 25,000 락타아제단위 이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 담황색～갈색의 분말로, 약간 특이한 냄새가 난다.

② 본 품의 수용액 또는 물현탁액(1→100)의 pH는 5.5～7.5이다.

③ 본 품은 pH 4.0～5.5에서 최대의 효소활성을 갖는다.

순도시험

① 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 2법으로 시험할 때, 그 양은 납표준액 5.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(50ppm 이하)

② 비소 : 본 품 1.0g을 취하여 비소시험법 제 3법으로 시험할 때, 이에 적합해야 한다.(2 ppm 이하)

③ 항균활성 : 항균활성을 나타내서는 안 된다.

건조감량

10.0% 이하(1g, 105℃, 3시간)

강열잔류물

30.0% 이하(1g)

효소력 시험

락타아제시험법으로 시험한다.

제조방법의 기준

① Aspergillus oryzae의 락타아제 생산균주를 배양하고 배양종료 후, 배양물을 여과하거나 또는 추출 후 여과하여 균체를 제거하고, 다시 여과액을 건조하거나 또는 여과액에 용매를 첨가하여 생긴 침전물을 건조하여 제조할 것.

② 본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

빛이 차단된 밀폐용기에 보존할 것.  

표시기준

본 품의 직접용기 또는 포대에 최대의 효소활성을 나타내는 pH값(소수점 이하 첫째자리까지)을 기재할 것.

■ 리소짐(Lysozyme)

정    의  이 품목은 ① 난백을 알칼리성 수용액 및 식염수로 처리하고, 수지정제하여 얻어진 것, 또는 수지처리 또는 가염처리한 후 칼럼정제 또는 재결정에 의해 얻거나, ② 식품 또는 사료로서 인정된 원료를 배지를 미생물(Tricoderma reseei DSM 32338)로 발효시켜 정제분리한 효소이다. 다만, 역가조정, 품질보존 등을 위하여 희석제, 안정제 등을 첨가할 수 있다. 본 품목은 이명인 ‘뮤라미다아제’로 표시할 수 있다.

성    상  이 품목은 백～진한 갈색의 분말, 입상, 페이스트상 또는 무～진한 갈색의 액상이다.

확인시험  (1) 이 품목 50mg에 pH 6.2의 인산염완충액 100mL를 가하여 녹인 다음 이 액 2mL를 취하여 pH 6.2의 인삼염완충액을 가하여 100mL로 하고, 다시 이 액 2mL를 취하여 pH 6.2의 인산염완충액을 가하여 50mL로 한 것을 시험용액으로 한다. 기질용액 3mL씩을 2개의 시험관에 취하고 35℃에서 3분간 가온시킨다. 따로, 시험용액 및 인산염완충액(pH 6.2)을 35℃에서 3분간 가온하고 3mL씩을 취한 다음 앞의 시험관에 각각 가해주고 35℃에서 10분간 방치할 때 시험용액을 가한 액의 탁함은 기질용액에 인산염완충액(pH 6.2)을 가한 액의 탁함보다는 적어야 한다.

  (2) 이 품목을 초산ㆍ초산나트륨완충액(pH 5.4)에 녹인 액(1→10,000)은 파장 279～281nm에 극대흡수부가 있다.

  (3) 이 품목의 활성시험법에 따라 시험할 때 활성을 나타내어야 한다.

순도시험  (1) 용  상 : 이 품목의 수용액(1→100) 5mL에 필요하면 묽은염산을 가하여 pH 3.0으로 조정할 때, 파장 660nm에서의 투과율은 80.0% 이상이어야 한다.

  (2) 비  소 : 이 품목 0.77g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에탄올용액(1→50) 10mL를 넣고 에탄올에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3mL를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.3ppm 이하이어야 한다. 

  (3) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.0ppm 이하이어야 한다.

  (4) 수  은 : 이 품목 0.1g을 취하여 수은시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  (5) 염화물 : 이 품목 약 0.5g을 정밀히 달아 물 50mL를 가하여 용해한 다음 이에 10% 크롬산칼륨용액 0.1mL를 가하고 담적갈색을 나타낼 때까지 0.1N 질산은용액으로 적정할 때, 염소로서 3.0% 이하이어야 한다.

0.1N 질산은용액 1mL ＝ 3.545mg C1

  (6) 질  소 : 이 품목은 질소정량법 중 킬달법에 따라 시험할 때, 그 양은 16.8～17.8% 이어야 한다.

  (7) 세균수 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 세균수(일반세균수)에 따라 시험할 때, 제품 1g 당 50,000 이하이어야 한다.

  (8) 대장균 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 대장균에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

  (9) 살모넬라 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 살모넬라에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

  (10) 황색포도상구균 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 황색포도상구균에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

수    분  이  품목은 수분정량법(칼-피셔법)의 직접적정법에 따라 시험할 때, 그 양은 6.0% 이하이어야 한다.

강열잔류물  이 품목은 강열잔류물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.5% 이하이어야 한다.

활성시험법(역가)

  시험용액의 조제 : 이 품목 50mg(역가)에 해당하는 양을 정밀히 달아 pH 6.2의 인산염완충액을 가하여 100mL로 한 다음 이 액 2mL를 취하여 pH 6.2의 인산염완충액을 가하여 100mL로 하고, 다시 이 액 2mL를 정확히 취하여 pH 6.2의 인산염완충액을 가하여 50mL로 한다.

  표준용액의 조제 : 리소짐표준품(미리 검체와 동일한 방법으로 건조감량을 측정하여 둔다) 50mg(역가)에 해당하는 양을 정밀히 달아 pH 6.2의 인산염완충액을 가하여 100mL로 한 다음 이 액 2mL를 취하여 pH 6.2의 인산염완충액을 가하여 100mL로 하고, 다시 이 액 2mL를 정확히 취하여 pH 6.2의 인산염완충액을 가하여 50mL로 한다.

  시험조작 : 기질용액 3mL씩을 정확히 취하여 3개의 시험관에 넣고 35℃에서 3분간 가온한다. 별도로 표준용액, 시험용액 및 인산염완충액을 35℃에서 3분간 가온하여 이 액 3mL씩을 앞의 시험관에 각각 가하여 35℃에서 10±0.1분간 반응시킨 다음 즉시 물을 대조액으로 하여 파장 640nm에서 표준용액, 시험용액 및 인산염완충액의 흡광도인 AS, AT 및 AO을 측정한다. 3회 반복실험을 하여 평균값을 구한다. 다음 계산식에 따라 역가를 구한다.

  역가[mg(역가)/mg, 건조물로서]   ＝  표준품의 양[건조물, mg(역가)]   ×  Ao?AT  

                                    ─────────────────  ─────

                                      검체의 채취량[건조물(mg)]           Ao?As  

  시   액

    인산염완충액(pH 6.2)

     제 1 액 : 인산일나트륨 10.4g에 물을 가하여 1,000mL로 한다.

     제 2 액 : 인산이나트륨(무수) 9.465g에 물을 가하여 1,000mL로 한다.

     제 1 액 815용량과 제 2 액 185용량을 잘 혼합하여 pH 6.2로 조절한다.

    초산ㆍ초산나트륨완충액(pH 5.4)

     제 1 액 : 초산나트륨 13.6g에 물을 가하여 1,000mL로 한다.

     제 2 액 : 빙초산 6mL에 물을 가하여 1,000mL로 한다.

       제 1 액 800용량과 제 2 액 100용량을 잘 혼화하여 pH 5.4로 조절한다.

    기질용액 : Micrococcus luteus(Micrococcus lysodeikticus) 건조균체 적당량에 pH 6.2의 인산염완충액을 가하여 균질기로 현탁시킨 다음 파장 640nm에서의 투과율이 10%가 되도록 pH 6.2의 인산염완충액을 가하여 조절한다. 다만, 기질의 Lot가 바뀔 때는 표준품에 대해서 검량선을 작성하여 직선부분의 최적농도를 사용한다. 보통 0.2～0.6μg(역가)/mL에서 직선부분을 나타낸다.

보존기준

  냉암소에서 밀봉 보존하여야 한다.

■ 말토게닉아밀라아제(Maltogenic Amylase)

정    의

Bacillus subtilis 및 그 변종에서 얻어진 효소제이다.

성분규격

  함량 

   이 품목은 정량할 때, 말토게닉아밀라아제로서 표시역가의 90～130%를 함유한다.

  성상 

   이 품목은 백～엷은 황～갈색의 분말 또는 투명～갈색의 액체이다.

순도시험 

   ① 비소 : 이 품목 0.25ｇ을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에틸알콜용액(1→50) 10㎖를 넣고 에틸알콜에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550°로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550°로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3㎖를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험을 할 때, 이에 적합하여야 한다.(4ppm 이하)

   ② 중금속 : 이 품목 0.5g을 석영제 또는 자제도가니에 넣고 조용히 약하게 가열하여 탄화시킨다. 식힌 다음 질산 2㎖ 및 황산 5방울을 가하여 흰 연기가 발생하지 않을 때까지 가열한 후 450～550°에서 회화가 될 때까지 강열한다. 식힌 다음 염산 2㎖를 가하여 수욕상에서 증발건고하고 잔류물에 염산 3방울을 가하여 주고 열탕 10㎖를 가하여 2분간 가온하고 식힌 후 페놀프탈레인시액 1방울을 가하고 암모니아시액을 액이 엷은 홍색이 될 때까지 가해주고 나서 물을 사용하여 네슬러관에 옮겨 주고 다시 희석한 초산(1→20)2㎖ 및 물을 가하여 50㎖로 한 것을 시험용액으로 하여 중금속시험을 할 때, 그 양은 40ppm이하이어야 한다. 다만, 표준색은 시료와 재질이 같은 도가니에 질산 2㎖, 황산 5방울 및 염산 2㎖를 넣고 가열하여 증발건고 하고 잔류물에 염산 3방울을 가하여 이하 시험용액의 조제와 같이 처리하여 네슬러관에 옮겨주고 이에 납표준용액 2㎖, 희석한 초산(1→20)2㎖ 및 물을 가하여 50㎖로 한 것을 사용한다.

   ③ 납 : 이 품목 0.8g을 취하여(액체의 경우는 수욕상에서 증발농축한다)조용히 가열하여 탄화시킨 다음 500°를 넘지 않는 온도에서 회화하고 묽은 질산 20㎖를 주의하여 가하고 5분간 조용히 끓인 다음 식히고 필요하면 여과한다. 잔류물은 물로 씻고 씻은 액은 여액과 합치고 물을 가하여 50㎖로 한 것을 시험용액으로 하여 납시험을 할 때, 그 양은 10ppm이하이어야 한다.

   ④ 살모넬라: 이 품목은 사료공정서, 유해미생물확인방법중 살모넬라균 검사법에 따라 검사할 때, 음성(-)이어야 한다.

정량법(역가)

   ① 적용 및 원리 : 본 시험방법은 Bacillus subtilis 및 그 변종에서 얻어진 효소제의 말토게닉아밀라아제 역가를 측정하는 방법이다. 역가시험은 온도 37°에서 말토트리오스기질의 가수분해에 근거를 두고 있다. 생성된 포도당은 Glucose dehydrogenase 및 NAD가 함유된 혼합액을 사용하여 측정한다.

   ② 시험용액의 조제 : 검체 일정량을 취하여 1㎖당 0.015～0.075 MANU를 함유하도록 물로 희석한다. 다만, 최종희석액은 1%의 1M 염화나트륨용액을 함유하도록 조제한다.

   ③ 시험조작 : 기질용액 0.5㎖를 시험관에 넣고 37±1°의 수욕조에서 항온시킨다. 시험용액 0.5㎖를 정확히 가하고 흔들어 혼합한 후 수욕조에 방치한다. 정확히 30분후 시험관을 수욕조에서 꺼내어 0.06N 수산화나트륨용액 1㎖를 가하여 반응을 중지시킨 다음 이액에 GluDH용액 3㎖를 가하여 잘 혼합하고 상온에서 정확히 30분간 유지시킨다. 기질용액 0.5㎖, 0.06N, 수산화나트륨용액 1㎖, 시험용액 0.5㎖의 순으로 가해주고 GluDH용액 3㎖를 가해준 다음 상온에서 30분간 유지시킨 액을 효소공시험용으로 한다. 효소공시험용액을 대조액으로 하여 액층 1cm, 파장 340nm에서 흡광도를 측정하여 표준곡선에서 포도당표준용액의 농도(μ㏖/l)를 구한다.

   ④ 표준곡선 : 포도당 1.6g을 정밀히 달아 물을 가하여 1,000㎖로 한다. 이 액을 사용하여 각각 88.8μmol/l, 177.6μmol/l, 266.4μmol/l, 355.2μmol/l, 444.0μmol/l, 532.9μmol/l의 포도당을 함유하도록 포도당 표준용액을 조제한다. 각 표준용액 2㎖를 각각의 시험관에 넣고 GluDH용액 3㎖를 가해준 다음 상온에서 30분간 방치한다. 이들 용액에 대해 물을 대조액으로 하여 액층 1cm, 파장 340nm에서 흡광도를 각각 측정하고 포도당표준용액의 농도(μmol/l)에 대한 표준곡선을 작성한다. 

             다음의 계산식에 따라 효소제의 역가를 구한다.

            A : 표준곡선에서 얻은 시험용액의 포도당표준용액의 농도(μ㏖/l)

            F : 희석배수

            4 : 시험에 사용된 시험용액의 약 0.5㎖와 포도당표준용액의 양 2㎖의 비

           30 : 반응시간(분)

           W : 검체의 채취량(g)

         1,000 : l를 ㎖로 전화시키는 계수

 역가의 정의

   1 Maltogenic Amylase Nove Unit(MANU)는 상기시험조건하에서 분당 1μ㏖/l의 말토트리오스를 분해하는 효소의 양이다.

 시액

      ㆍ구연산완충액 : 구연산 0.225g에 물 20㎖를 가하여 녹인 다음 4N 또는 1N 수산화나트륨용액을 가하여 pH 5.0으로 조절한 다음 물을 가하여 250㎖로 한다.

      ㆍ기질용액 ; 말토트리오스(Maltotriose)1g을 구연산완충액에 녹여 50㎖로 한다.

      ㆍ1M 염화나트륨용액 : 염화나트륨 29.22g에 물을 가하여 500㎖로 한다.

      ㆍ0.06N 수한화나트륨용액 : 1N 수산화나트륨용액 30㎖를 취한 다음 물을 가하여 500㎖로 한다.

      ㆍGluDH용액 : 글루코오스디하이드로게나아제(Glucose dehydrogenase)를 함유한 혼합시액(Merck No. 14853)을 사용한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

   흡습성이 강하므로 냉암소에서 밀봉 보존할 것.

■ 셀룰라아제(Ⅰ)(Cellulase(Ⅰ))

정    의

셀룰로오스의 가수분해 반응을 촉진하는 효소로서 사료공정(飼料公定)에 따르면 셀룰라아제에는 셀룰라아제(Ⅰ)과 셀룰라아제(Ⅱ)가 있다. 셀룰라아제(Ⅰ)은 Trichoderma reesei 또는 Trichoderma viride의 셀룰라아제 생산균주에서 얻어진 효소제이며 셀룰라아제(Ⅱ)는 Acremonium cellulolyticus, Aspergillus aculeatus, Humicola insolens 또는 Trichoderma viride의 셀룰라아제 생산균주에서 얻어진 효소제이다.

성분규격

효소력 단위

본 품은 효소력시험을 할 때, 1g 중에 1,500 섬유붕괴력단위 이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 담황색～갈색의 분말로, 약간 특이한 냄새가 난다.

② 본 품의 수용액 또는 물현탁액(1→100)의 pH는 4.0～7.5이다.

③ 본 품은 pH 4.0～5.0에서 최대의 효소활성을 갖는다.

순도시험

① 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 2법으로 시험할 때, 그 양은 납표준액 5.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(50ppm 이하)

② 비소 : 본 품 1.0g을 추출하여 비소시험법 제 3법으로 시험할 때, 이에 적합해야 한다.(2ppm 이하)

③ 항균활성 : 항균활성을 나타내서는 안 된다.

건조감량

10.0% 이하(1g, 105℃, 3시간)

강열잔류물

25.0% 이하(1g)

효소력 시험

섬유붕괴력시험법으로 시험한다.

제조방법의 기준

① Trichoderma reesei 또는 Trichoderma viride의 셀룰라아제 생산균주를 배양하고 배양종료 후, 배양물을 여과하거나 또는 추출 후 여과하여 균체를 제거하고 다시 여과액을 건조, 또는 용매를 첨가하여 생긴 침전물을 건조하여 제조할 것.

② 본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

빛이 차단된 밀폐용기에 보존할 것.  

표시기준

본 품의 직접용기 또는 포대에 최대의 효소활성을 나타내는 pH값(소수점 이하 첫째자리까지)을 기재할 것.

■ 셀룰라아제(Ⅱ)(Cellulase(Ⅱ))

성분규격

효소력 단위

본 품은 효소력시험을 할 때, 1g 중에 250 섬유당화력단위 이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 담황색～갈색의 분말로, 냄새는 없거나 약간 특이한 냄새가 난다.

② 본 품의 수용액 또는 물현탁액(1 →100)의 pH는 4.0～7.5이다.

③ 본 품은 pH 4.0～5.5에서 최대의 효소활성을 갖는다.

순도시험

① 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 2법으로 시험할 때, 그 양은 납표준액 5.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(50ppm 이하)

② 비소 : 본 품 1.0g을 취하여 비소시험법 제 3법으로 시험할 때, 이에 적합해야 한다.(2 ppm 이하)

③ 항균활성 : 항균활성을 나타내서는 안 된다.

건조감량

10.0% 이하(1g, 105℃, 3시간)

강열잔류물

25.0% 이하(1g)

효소력 시험

섬유당화력시험법으로 시험한다.

제조방법의 기준

①Acremonium cellulolyticus, Aspergillus aculeatus, Humicola insolens 또는 Trichoderma viride의 셀룰라아제 생산균주를 배양하고 배양종료 후, 배양물을 여과하거나 또는 물로 추출 후 여과하여 균체를 제거하고 다시 여과액을 건조하거나 또는 여과액에 용매를 첨가하여 생긴 침전물을 건조하여 제조할 것.

② 본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

빛이 차단된 밀폐용기에 보존할 것.  

표시기준

본 품의 직접용기 또는 포대에 최대의 효소활성을 나타내는 pH값(소수점 이하 첫째자리까지)을 기재할 것.

■ 엑소글루카나아제(exoglucanase)

정    의

셀룰로오스의 가수분해 효소인 셀룰라아제의 일종으로서 엔도글루카나아제에 의해 무작위로 절단되어 생성된 올리고셀룰로오스의 비환원말단에서 글루코오스의 이당체인 셀로비오스(cellobiose) 단위로 절단해 나가는 효소이다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 엑소글루카나아제

기    타-

■ 엔도글루카나아제(endo-β-1,4-glucanase)

정    의

셀룰라아제의 가장 대표적인 효소로서 셀룰로오스의 β-1,4-글루코시드(β-1,4-glucoside) 결합을 내부에서 절단(endolytic)하는 효소이다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 엔도글루카나아제

기    타결정성의 천연 셀룰로오스에 대한 활성은 약하기 때문에 보통 가용성의 CMC(carboxyl methyl cellulose, 카복시메틸셀룰로오스)를 기질로 사용한다. 이 때문에 CMCase라고도 불린다. 셀룰라아제(셀룰로오스 가수분해효소) 종류의 다양성은 셀룰라아제 유전자의 다중성에 유래된다는 것이 밝혀졌다. 셀룰로오스의 당화나 셀로올리고당의 생산에 이용이 시도되고 있다.

■ 키시라나제(Xylanase)

정    의

Aspergillus usamii mut. shiro-usamii의 키시라나제(자일라나아제) 생산균주에서 얻어진 효소제이다.

성분규격

효소력단위

본 품은 효소력시험을 할 때, 1g 중에 400 키시란당화력단위 이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 pH 3.0～5.0에서 최대의 효소활성을 갖는다.

순도시험

① 중금속 : 본 품 1.0g을 석영제 또는 자제도가니에 넣고 느슨하게 뚜껑을 닫은 다음 약하게 가열하여 탄화한다. 냉각 후 질산 2㎖ 및 황산 5방울을 첨가하여 흰색의 연기가 발생할 때까지 주의해서 가열한 후, 500～600℃로 열을 강하게 하여 탄화한다. 냉각 후 염산 2㎖를 첨가, 수욕상에서 증발건조하며 잔유물을 염산 3방울로 적셔 열탕 10㎖를 첨가하여 2분간 온도를 가한다. 다음으로 암모니아 시액으로 pH를 5.0～6.0으로 조정하고 묽은 초산 2㎖를 첨가, 필요하면 여과하여 물 10㎖로 씻고 여과액 및 세액을 네슬러관에 넣어 물을 첨가하여 50㎖로 만든다. 이것을 검사액으로 하여 중금속시험법 제 2법으로 시험할 때, 그 양은 납표준액 5.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(50ppm 이하)

② 비소 : 본 품 1.0을 취하여 비소시험법 제 3법으로 시험할 때, 이에 적합해야 한다.(2 ppm 이하)

③ 항균활성 : 항균활성을 나타내서는 안 된다.

건조감량

10.0% 이하(1 g, 105℃, 3시간)

강열잔류물

30.0%(1 g)

효소력 시험

키시란당화력시험법으로 시험한다.

제조방법의 기준

① Aspergillus usamii mut. shiro-usamii의 키시라나제 생산균주를 배양하고 배양종료 후, 배양물을 물로 추출 후 여과하여 균체를 제거하고 다시 여과액에 용매를 첨가하여 생긴 침전물을 건조하여 제조한 것.

② 본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

빛이 차단된 밀폐용기에 보존할 것.

표시기준

본 품의 직접용기 또는 포대에 키시라나제에 대해서 최대의 효소활성을 나타내는 pH값(소수점 이하 첫째자리까지)을 기재할 것.

■ 키토사나아제(Chitosanase)

정    의

이 품목은 Aeromonas속 및 Bacillus속의 배양물에서 얻어진 효소제이다. 다만, 역가조정, 품질보존 들을 위하여 희석제, 안정제 등을 첨가할 수 있다.

성분규격

함량 

이 품목은 정량할 때, 키토시나아제로서 표시역가의 90～130％를 함유한다. 

성상

이 품목은 백～엷은 황～진한 갈색의 분말 투명～ 갈색의 액체이다. 

순도시험

① 비소 : 이 품목은 0.25g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에틸알콜용액(1→50) 10㎖를 넣고 에틸알콜에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3㎖를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험을 할 때, 이에 적합하여야 한다.(4ppm 이하)

② 중금속 : 이 품목 0.5g을 석영제 또는 자제도가니에 넣고 조용히 약하게 가열하여 탄화시킨다. 식힌 다음 질산 2㎖및 황산 5방울을 가하여 흰연기가 발생하지 않을 때까지 가열한 후 450～550℃에서 회화가 될 때까지 강열한다. 식힌 다음 염산 2㎖를 가하여 수욕상에서 증발건고하고 잔류물에 염산 3방울을 가하여 주고 열탕 10㎖를 가하여 2분간 가온하고 식힌 후 페놀프탈레인시액 1방울을 가하고 암모니아시액을 액이 엷은 홍색이 될 때까지 가해주고 나서 물을 사용하여 네슬러관에 옮겨주고 다시 희석한 초산(1→20) 2㎖ 및 물을 가하여 50㎖로 한 것을 시험용액으로 하여 중금속시험을 할 때, 그 양은 40ppm 이하이어야 한다. 다만, 표준색은 시료와 재질이 같은 도가니에 질산 2㎖, 황산 5방울 및 염산 2㎖를 넣고 가열하여 증발건고하고 잔류물에 염산 3방울을 가하여 이하 시험용액의 조제와 같이 처리하여 네슬러관에 옮겨주고 이에 납표준용액 2㎖, 희석한 초산(1→20) 2㎖ 및 물을 가하여 50㎖로 한 것을 사용한다.

③ 납 : 이 품목 0.8g을 취하여 (액체의 경우는 수욕상에서 증발 농축한다)조용히 가열하여 탄화시킨 다음 500℃를 넘지 않는 온도에서 회화하고 묽은 질산 20㎖를 주의하여 가하고 5분간 조용히 끓인 다음 식히고 필요하면 여과한다. 잔류물은 씻고 씻은 액은 여액과 합치고 물을 가하여 50㎖로 한 것을 시험용액으로 하여 납시험을 할 때, 그 양은 10ppm 이하이어야 한다. 

④ 대장균군 : 이 품목은 식품공전, 일반시험법의 미생물 시험법중 대장균군에 따라 시험할 때, 제품 1g당 30 이하이어야 한다. 

⑤ 살모넬라 : 이 품목은 식품공전, 일반시험법의 미생물시험법중 살모넬라균 시험법에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

정량법(역가)

① 적용 및 원리 : 본 시험 방법은 Aeromonas속 및 Bacillus 속의 배양물에서 얻어진 효소제의 키토사나아제 역가를 측정하는 방법이다. 역가시험은 pH 5.0 온도 48℃에서 Chitosan 기질의 가수분해에 근거를 두고 있다. 가수분해에 의하여 생성된 환원당인 글루코사민을 알칼리성 페리시아나이드 시액과 반응시켜 흡광도측정법으로 측정한다.

②시험용액조제 : 시험조건하에서 최종희석액 1㎖가 효소공시험용액과 흡광도차이가 0.1～0.5의 범위가 되도록 일정량을 취한 다음 0.05M 초산염완충용액에 녹여 시험용액을 조제한다. 

③ 시험조작 : 기질용액 2㎖를 시험관에 넣고 이에 미리 48℃의 수욕조에서 5분간 항온시킨시험용액 1㎖를 정확히 가해주고 흔들어 혼합한 후 수욕조에 방치한다. 정확히 5분후 시험관을 끓는 수욕조에서 3분간 가열하여 효소반응을 중지시킨 다음 상온으로 식혀준다. 따로 효소공시험용으로 시험용액대신 미리 수욕조에서 3분간 가열실활시킨 시험용액 1㎖를 사용한다. 별도로 2개의 시험관에 물 1.4㎖를 각각 넣고 이에 위의 효소반응액 0.1㎖와 효소공시험반응액 0.1㎖를 각각 가해준 다음 알칼리성페리시아나이드시액 2㎖씩을 가해 주고 끓는 수욕조에서 15분간 가열하고 상온으로 식힌 다음 액층 1cm, 파장 420nm에서 효소시험용액과 효소공시험용액의 흡광도를 각각 측정하여 표준곡선에서 D-글루코사민의 농도(μ㏖/㎖)를 구한다. 

④ 표준곡선 : 미리 건조 항량시킨 D-글루코사민 염산염 215.6mg을 정밀히 달아 물을 가하여 100㎖로 한다. 이 액을 사용하여 1㎖당 D-글루코사민을 2.0, 4.0, 6.0, 10.0μ㏖/㎖을 함유하도록 글루코사민표준용액을 각각 조제한다. 각 표준용액 1㎖와 물 2㎖를 각 시험관에 넣고 시험관 모두를 끓는 수욕조에서 3분간 끓여주고 상온으로 식힌 다음 시험조작의 「별도로 2개의 시험관에」이하와 동일조작을 행한다. 따로, 표준용액 1㎖ 대신에 물 1㎖를 사용하여 시험한 것을 대조액으로 하여 액층 1cm, 파장 420nm에서 각각의 흡광도를 측정하고 글루코사민표준용액의 농도(μ㏖/㎖)에 대한 표준곡선을 작성한다. 

다음의 계산식에 따라 효소제의 역가를 구한다.

 A : 표준곡선에서 얻은 시험용액의 D-글루코사민 표준용액의 농도(μ㏖/㎖)

 5 : 반응시간(분)

 W : 시험용액 1㎖에 함유된 검체의 양(㎖)

⑤ 역가의 정의

1 Chitosanase Unit(CU)는 상기시험조건하에서 분당 1μ㏖의  D-글루코사민에 상당하는 환원당을 유리시키는 효소의 양이다.

⑥ 시  액

0.05M 초산염완충액 : 0.1M 초산 14.8㎖와 0.1M 초산나트륨용액 35.2㎖를 혼합하고 물을 가하여 100㎖로 한다. 이 용액의 pH는 5.0이어야 한다.

⑦ 기질용액

키토산(Sigma Co.) 0.2g을 물 40㎖에 현탁시키고 1.0M 초산 10㎖를 가하여 교반 용해시킨 후 1.0M 초산나트륨용액을 가하여 pH를 5.0으로 조절한 다음 0.05M 초산염완충액을 가하여 100㎖로 한다. 이 용액은 냉장고에 보관한다. 

알칼리성페리시아나이드시액 : 페리시안화칼륨(K3Fe(CN)6) 0.5g을 0.5M 탄산나트륨용액 1,000㎖에 녹인다. 이 액은 갈색병에 넣어 밀봉하여 보존한다.

보존방법의 기준

흡습성이 강하므로 밀봉 보존하여야 한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다. 

■ 펙티나아제(Pectinase)

정    의

Aspergillus niger에서 얻어진 효소제이다.

성분규격

함량

이 품목은 정량할 때 펙티나아제로서 표시역가의 90～130％를 함유한다.

성상

이 품목은 백～엷은 황～갈색의 분말 또는 투명～갈색의 액체이다.

순도시험

    ① 비소: 이 품목은 0.25g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산 마그네슘의 에틸알콜용액(1→50) 10㎖를 넣고 에틸알콜에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하고 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3㎖를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험을 할때, 이에 적합하여야 한다.(4ppm이하)

    ② 중금속: 이 품목 0.5g을 석영제 또는 자제도가니에 넣고 조용히 약하게 가열하여 탄화시킨다. 식힌 다음 질산 2㎖및 황산 5방울을 가하여 흰연기가 발생하지 않을 때까지 가열한 후 450～550℃에서 회화가 될 때까지 강열한다. 식힌 다음 염산 2㎖를 가하여 수욕상에서 증발건고하고 잔류물에 염산 3방울을 가하여 주고 열탕 10㎖를 가하여 2분간 가온하고 식힌 후 페놀프탈레인시액 1방울을 가하고 암모니아시액을 액이 엷은 홍색이 될 때까지 가해주고 나서 물을 사용하여 네슬러관에 옮겨주고 다시 희석한 초산(1→20) 2㎖ 및 물을 가하여 50㎖로 한 것을 시험용액으로 하여 중금속시험을 할 때, 그양은 40ppm 이하이어야 한다. 다만, 표준색은 시료와 재질이 같은 도가니에 질산 2㎖, 황산 5방울 및 염산 2㎖를 넣고 가열하여 증발건고하고 잔류물에 염산 3방울을 가하여 이하 시험용액의 조제와 같이 처리하여 네슬러관에 옮겨주고 이에 납표준용액 2㎖, 희석한 초산(1→20) 2㎖ 및 물을 가하여 50㎖로 한 것을 사용한다.

    ③ 납: 이 품목 0.8g을 취하여 (액체의 경우는 수욕상에서 증발 농축한다) 조용히 가열하여 탄화시킨 다음 500℃를 넘지 않는 온도에서 회화하고 묽은 질산 20㎖를 주의하여 가하고 5분간 조용히 끓인 다음 식히고 필요하면 여과한다. 잔류물은 씻고 씻은 액은 여액과 합치고 물을 가하여 50㎖로 한 것을 시험용액으로 하여 납시험을 할 때, 그 양은 10ppm 이하이어야 한다. 

    ④ 살모넬라: 이 품목은 사료공정서, 유해미생물확인방법중 살모넬라균 검사법에 따라 검사할 때, 음성(-)이어야 한다.

정량법(역가)

  적용 및 원리 

본 시험 방법은 Aspergillus niger에서 얻어진 효소제의 펙티나아제 역가를 측정하는 방법이다. 역가시험은 pH 5.0 온도 40℃에서 얻어진 Pecticacid의 가수분해로 생성된 Galacturonic acid의 환원당을 측정하는데 근거를 두고 있다.

  시험용액의 조제

최종 희석액 1㎖가 20～40 Pectinase units를 함유하도록 물로 희석하여 시험용액을 조제한다.

  시험조작

기질용액 20㎖를 100㎖ 삼각플라스크에 넣고 40℃의 수욕조에서 미리 10분간 항온시킨다. 항온시킨 기질용액에 시험용액 2㎖를 넣고 60분간 작용시킨다. 별도의 삼각플라스크에 1M 탄산나트륨용액 2.5㎖를 가해주고, 이에 위의 반응액 10㎖를 가하여 반응을 중지시킨 다음 0.1N 요오드용액 5㎖를 가해주고 밀전하여 암소에 20분간 방치한 후 2M 황산 5㎖, 전분시액 4～5방울을 가하여 0.01N 치오황산나트륨용액으로 적정한다. 여기에 소비된 양(㎖)을 S라 한다. 따로 공시험용으로 시험용액 대신 10분간 수욕조에서 가열실활시킨 시험용액 2㎖를 사용하여 위의 시험조작에 따라 시험하여 0.01N 치오황산나트륨의 소비 ㎖수를 B라 한다.

다음 계산식에 따라 효소제의 역가를 구한다.

3.35 : 0.01N 치오황산나트륨용액 1㎖에 상당하는 galacturonic acid의 μ㏖수

   f : 0.01N 치오황산나트륨용액의 factor

  22 : 최종반응액의 양(㎖)

   2 : 사용된 시험용액의 양(㎖)

  10 : 사용된 반응액의 양(㎖)

        W : 시험용액 1㎖에 함유된 검체의 양(g)

  역가의 정의

1 Pectinase units는 상기시험조건 하에서 1μ㏖의 galacturonic acid를 생성하는 효소의 양이다.

   시 액

기질용액: 펙틴산(Fluka Co.)을 무수물로서 1g에 상당하는 양을 취한 다음 이에 0.5M 초산완충액 40～50㎖를 가하여 가열용해하고 0.5N 초산완충액을 가하여 100㎖로 한다.

       0.50M 초산완충용액(pH 5.0)

A액 : 초산 60g을 물에 녹여 1000㎖로 한다.

B액 : 무수초산나트륨 82g을 물에 녹여 1000㎖로 한다.

      A액 148㎖와 B액 352㎖를 혼합하고 A액 또는 B액을 사용하여 pH 5.0으로 조절하여 물을 가하여 전량을 1000㎖로 한다. 

보존방법의 기준

흡습성이 강하므로 냉암소에서 밀봉 보존하여야 한다.

■ 헤미셀룰라아제(Hemicellulase)

정    의

검은곰팡이(Aspergillus niger) 및 그 변종의 배양물에서 얻어진 효소제이다.

성분규격

함량

이 품목은 정량할 때, 헤미셀룰라아제로서 표시역가의 90～130％를 함유한다.

성상

이 품목은 백～엷은 황～암갈색의 분말 또는 투명～암갈색의 액체이다. 

순도시험

① 비소 : 이 품목 0.25g을 배금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에틸알콜용액(1→50) 10㎖를 넣고 에틸알콜에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하고 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3㎖를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험을 할 때, 이에 적합하여야 한다.(4ppm 이하) 

② 중금속 : 이 품목 0.5g을 석영제 또는 자제도가니에 넣고 조용히 약하게 가열하여 탄화시킨다. 식힌 다음 질산 2㎖및 황산 5방울을 가하여 흰연기가 발생하지 않을 때까지 가열한 후 450～550℃에서 회화가 될 때까지 강열한다 식힌 다음 염산 2㎖를 가하여 수욕상에서 증발건고하고 잔류물에 염산 3방울을 가하여 주고 열탕 10㎖를 가하여 2분간 가온하고 식힌 후 페놀프탈레인시액 1방울을 가하고 암모니아시액을 액이 엷은 홍색이 될 때까지 가해주고 나서 물을 사용하여 네슬러관에 옮겨주고 다시 희석한 초산(1→20) 2㎖및 물을 가하여 50㎖로 한 것을 시험용액으로 하여 중금속시험을 할 때, 그양은 40ppm 이하이어야 한다. 다만, 표준색은 시료와 재질이 같은 도가니에 질산 2㎖, 황산 5방울 및 염산 2㎖를 넣고 가열하여 증발건고하고 잔류물에 염산 3방울을 가하여 이하 시험용액의 조제와 같이 처리하여 네슬러관에 옮겨주고 이에 납표준용액 2㎖, 희석한 초산(1→20) 2㎖ 및 물을 가하여 50㎖로 한 것을 사용한다.

③ 납 : 이 품목 0.8g을 취하여 (액체의 경우는 수욕상에서 증발 농축한다) 조용히 가열하여 탄화시킨 다음 500℃를 넘지 않는 온도에서 회화하고 묽은 질산 20㎖를 주의하여 가하고 5분간 조용히 끓인 다음 식히고 필요하면 여과한다. 잔류물은 씻고 씻은 액은 여액과 합치고 물을 가하여 50㎖로 한 것을 시험용액으로 하여 납시험을 할 때, 그 양은 10ppm 이하이어야 한다. 

정량법(역가)

① 적용 및 원리 : 본 시험방법은 Aspergillus niger 그 변종에서 얻어진 효소제의 헤미셀룰라아제역가를 측정하는 방법이다. 역가시험은 pH 4.5, 온도 40℃에서 로커스트콩검기질의 내부 Glycosidic결합의 효소적 가수분해에 근거를 두고 있다. 기질의 점도에 있어서 해당되는 감소는 눈금보정이 된 점도계를 사용하여 측정한다.

②시험용액조제 : 최종희석액 1㎖가 본 시험방법의 제시된 조건하에 5분안에 0.18～0.22사이의 상대유동성 변화를 생성하도록 물로 희석하여 시험용액을 조제한다. 검체 일정량을 유리분쇄기에 취하고 물을 넣어 둔다. 이를 적당한 용량의 메스플라스크에 옮겨 물로 일정량으로 희석하고 사용전에 왓트만 No.1 또는 동종의 여지로 여과한다.

③ 시험조작 : 눈금보정된 점도계를 미리 충분한 양의 세제에 담근 다음 물을 사용하여 깨끗이 닦은 다음 40±0.1℃의 유리 수욕조에 정확하게 수직으로 장치한다. 기질용액 20㎖와 초산염완충액 4㎖를 50㎖ 공전삼각플라스크에 취하고 1 검체당효소시험용 2개, 기질공시험용 1개를 준비한다. 효소시험용 플라스크에 마개를 하고 수욕조에서 15분간 방치하여 온도를 평형시킨 다음 이에 시험용액 1㎖를 정확히 취하여 가해주고 시간을 측정하기 시작하며 용액을 잘 혼합한다. 즉시 이 혼액 10㎖를 취하여 점도계의 큰가지에 가하고 반응용액을 점도계의 가느다란 가지입구에 고무관을 부착하여 상부눈금위까지 빨아올린다. 용액이 상부눈금에 도달할 때까지의 시간(분)을 측정하고 이를 TR이라고 하고, 다시 상부눈금을 통과하여 하부눈금을 통과하는 시간(초)을 측정하여 이를 TT라 한다. 다시 반응용액을 상부눈금위로 빨아 올리고 액의 표면이 상부의 눈금에 도달 할때까지의 시간(분)을 즉시 측정하여 반응시간 TR로 하고 상부눈금에서 하부눈금까지 도달하는 시간(초)을 측정하여 이를 TT로 한다. 15분 이내에서 반응시간(TR)에 대하여 "다시 반응용액을 상부눈금위로 빨아"이하의 조작을 총 4회 반복한다. 기질공시험용에는 기질용액 20㎖와 초산염완충액 4㎖의 혼액에 물 1㎖를 가하여 혼합하고 이 혼액 10㎖를 즉시 취하여 점도계의 큰가지에 넣은 다음 액을 상부눈금에서 하부눈금까지 도달하는 시간 TS(초)를 5회 반복하여 평균한 값을 TS로 한다. 물공시험용에는 미리 40±0.1℃로 평형시킨 물 10㎖를 취하여 점도계의 큰 가지에 넣고 두 눈금사이에 도달하는 시간 TW(초)를 5회 반복 측정하여 평균 한 값을 TW로 한다. 

④ 다음 식에 따라 4회의 유출시간(TT)과 반응시간(TR) 각각에 대하여 상대유동성(FR)과 TN값을 구한다. 

FR: 각 반응시간에 대한 상대유동성

TS: 기질공시험에 대한 평균 유출시간(초)

TW: 물공시험에 대한 평균 유출시간(초)

TT: 효소반응용액의 유출시간(초)

TR: 반응의 경과시간(분) (시험용액을 가한 시간에서 유출시간(TT) 측정시작 시간까지)

TN: 반응시간(TR)(분)+ 시험용액 유출시간(TT)(분)의 1/2

4개의 반응시간(TN)에 대한 4개의 상대유동성(FR)을 사용하여 표준곡선을 작성한다. 이때 하나의 직선이 그려져야 한다. 선의 기울기는 분당 상대유동성변화에 대응하며 효소의 양에 비례한다. 일련의 시험점을 통과하는 최선의 선의 기울기는 단독의 상대유동성 값보다는 좋은 효소역가의 기준이 된다. 표준곡선으로부터 10분과 5분에서 FR값을 측정한다. 유동성의 차이는 0.18～0.22이어야 한다. 

⑤ 다음 계산식에 따라 효소제의 역가를 구한다.

FR10 : 반응시간 10분에서 상대유동성

FR5 : 반응시간 5분에서 상대유동성

1,000 : g을 mg으로 환산

W : 시험용액 1㎖에 함유된 검체의 양(mg)

⑥ 역가의 정의 : 1 Hemicellulase unit(HCU)는 상기시험조건하에서 로커스트콩검기질에서 5분동안에 1 상대유동성변화를 생성하는 역가이다.

장  치

①점도계: 싸이즈-100의 눈금보정이 된 캐논-펜스케형 점도계(Cannon- Fenske Type Viscometer)를 사용하거나 이와 동등한 것을 사용하다.

② 유리수욕조: 40±0.1℃의 유리항온수욕조를 사용한다.

시약 및 시액

① 초산염완충액(pH 4.5) : 0.2N 초산나트륨용액을 0.2N 초산 400㎖에 계속 저으며 가하며 pH를 4.5±0.05로 조절한다.

② 로커스트콩검 : 분말형 로커스트콩검이 기질성분 Lot에 따라 품질이 다르기 때문에 Lot가 바뀔 때는 서로 동질의 것인가를 확인하여야 한다. 서로간의 점도차이가 ±5% 이상이면 동일시험에 적용할 수 없다.

③ 기질용액 : 혼합기그릇에 0.2N염산 12.5㎖와 더운 물(70～75℃) 250㎖를 가하고 혼합기를 저속에 맞춘다. 건조물로서 2g의 로커스트콩검을 용액용기내에서 튀어 나오지 않게 하여 천천히 그릇내에서 분산시킨다. 고무폴리스만을 사용하여 더운물로 그릇기벽을 씻어 내린 다음 그릇에 뚜껑을 하고 고속에서 5분간 혼합한다. 이를 1,000㎖ 비이커에 옮겨 상온으로 냉각시킨 후 0.2N 수산화나트륨용액으로 pH 6.0으로 조절한다. 이를 1,000㎖ 메스플라스크에 옮겨 물을 가하며 1,000㎖로 하고 사용전에 거즈로 여과하여 사용한다.

보존방법의 기준

흡습성이 강하므로 냉암소에서 밀봉 보존하여야한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제자체를 사용할 수 있고, 본품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다. 

■ α-갈락토시다아제(α-Galactosidase)

정    의  

이 품목은 Aspergillus niger의 배양물에서 얻어진 효소이다. 다만, 역가조정, 품질보존 등을 위하여 희석제, 안정제 등을 첨가할 수 있다.

  이 품목은 당류의 비환원 말단의 α-D-갈락토시드 결합을 가수분해한다.

성    상  

이 품목은 백～진한 갈색의 분말, 입상, 페이스트상 또는 무～진한 갈색의 액상이다.

확인시험, 순도시험,  활성시험법(역가) 

「식품첨가물의 기준 및 규격」 내 4. 품목별 성분 규격의 ‘α-갈락토시다아제’ 확인시험, 순도시험, 활성시험법(역가)을 따른다. 

보존기준

  냉암소에서 밀봉 보존하여야 한다.

■ α-아밀라아제(α-Amylase)

정    의

Aspergillus oryzae 또는 Rizopus delemar의 아밀라아제 생산균주에서 얻어진 효소제이다.

성분규격

효소력단위

본 품은 효소력시험을 할 때, 1g 중에 3,500 전분당화력단위 이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 담황색～갈색분말로, 약간 특이한 냄새가 난다.

② 본 품의 수용액 또는 물현탁액(1 →100)의 pH는 5.0～7.5이다.

③ 본 품은 pH4.5～5.5에서 최대의 효소활성을 갖는다.

순도시험

① 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 2법으로 시험할 때, 그 양은 납표준액 5.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(50ppm 이하)

② 비소 : 본 품 1.0g을 취하여 비소시험법 제 3법으로 시험할 때, 이에 적합해야 한다.(2 ppm 이하)

③ 항균활성 : 항균활성을 나타내서는 안 된다.

건조감량

10.0% 이하(1g, 105℃, 3시간)

강열잔류물

25.0% 이하(1 g)

효소력시험

전분당화력시험법으로 시험한다.

제조방법의 기준

① Aspergillus oryzae 또는 Rizopus delemar의 아밀라아제 생산균주를 배양하고 배양종료 후, 배양물을 여과 또는 물로 추출한 후 여과하여 균체를 제거하고 다시 여과액을 건조하거나 또는 여과액에 용매를 첨가하여 발생한 침전물을 건조하여 제조할 것.

② 본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

빛이 차단된 밀폐용기에 보존할 것.

표시기준

본 품의 직접용기 또는 포대에 최대의 효소활성을 나타내는 pH값(소수점 이하 첫째자리까지)을 기재

■ β-글루카나아제(β-Glucanase)

정    의

Aspergillus niger 및 그 변종 또는 Bacillus subtilis 및 그 변종에서 얻어진 효소제이다.

성분규격

함량 

이 품목은 정량할 때 β-글루카나아제로서 표시역가의 90～130％를 함유한다.

성상 

이 품목은 백～엷은 황～갈색의 분말 또는 투명～갈색의 액제이다.

순도시험

① 비소 : 이 품목은 0.25g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에틸알콜용액(1→50) 10㎖를 넣고 에틸알콜에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3㎖를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험을 할 때 이에 적합하여야 한다.(4ppm이하)

② 중금속 : 이 품목 0.5g을 석영제 또는 자제도가니에 넣고 조용히 약하게 가열하여 탄화시킨다. 식힌 다음 질산 2㎖ 및 황산 5방울을 가하여 흰 연기가 발생하지 않을 때까지 가열한 후 450～550℃에서 회화가 될 때까지 강열한다. 식힌 다음 염산 2㎖를 가하여 수욕상에서 증발건고하고 잔류물에 염산 3방울을 가하여 주고 열탕 10㎖를 가하여 2분간 가온하고 식힌 후 페놀프탈레인시액 1방울을 가하여 암모니아시액을 액이 엷은 홍색이 될 때까지 가해주고 나서 물을 사용하여 네슬러관에 옮겨주고 다시 희석한 초산(1→20) 2㎖ 및 물을 가하여 50㎖로 한 것을 시험용액으로 하여 중금속시험을 할 때 그 양은 40ppm 이하이어야 한다. 다만 표준색은 시료와 재질이 같은 도가니에 질산 2㎖, 황산 5방울 및 염산 2㎖를 넣고 가열하여 증발 건고하고 잔류물에 염산 3방울을 가하여 이하 시험용액의 조제와 같이 처리하여 네슬러관에 옮겨주고 이에 납표준용액 2㎖, 희석한 초산(1→20) 2㎖ 및 물을 가하여 50㎖로 한 것을 사용한다.

③ 납 : 이 품목 0.8g을 취하여 (액체의 경우는 수욕상에서 증발농축한다) 조용히 가열하고 탄화시킨 다음 500℃를 넘지 않은 온도에서 회화하고 묽은 질산 20㎖를 주의하여 가하고 5분간 조용히 끓인 다음 필요하면 식히고 여과한다. 잔류물은 물로 씻고 씻은 액은 여액과 합치고 물을 가하여 50㎖로 한 것을 시험용액으로 하여 납시험을 할 때 그 양은 10ppm  이하이어야 한다.

④ 대장균군 : 이 품목은 일반시험법의 미생물시험법중 대장균군에 따라 시험할 때, 제품 1g당 30 이하이어야 한다.

⑤ 살모넬라 : 이 품목은 일반시험법의 미생물시험법중 살모넬라균시험법에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

정량법(역가)

①적용 및 원리 : 본 시험 방법은 Aspergillus niger 및 그 변종, Bacillus subtilis 및 그 변종에서 얻어진 효소제의 β-글루카나아제 역가를 측정하는 방법이다. 역가시험은 pH 6.5, 온도 40℃에서 리케닌(Lichenin)기질의 15분간 가수분해에 근거를 두고 있다. 발생된 환원물질에 따른 환원력의 증가는 Neocuproine법으로 측정된다.

② 시험용액조제 : 최종희석액 1㎖가 0.01～0.02 β-Glucanase units를 함유하도록 시험  용액을 조제한다. 검체 일정량을 취하여 적당한 메스플라스크에 취하여 인산염완충액으로 녹이고 인산염완충액으로 채운다.

③ 시험조작 : 25㎖ 메스플라스크 4개에 기질용액 2㎖씩을 넣고 40℃ 수욕조에서 10～15  분간항온시킨다. 시험관 1에는 인산염완충액 1㎖, 시험관 2(포도당표준품용)에는 포도당표준용액 1㎖, 시험관 3(효소공시험용)에는 네오쿠프로인용액A 4㎖와 시험용액 1㎖를 가하고 시험관 4(효소시험용)에는 시험용액 1㎖를 넣는다. 인산염완충액공시험용으로 제5의 시험관을 준비하여 인산완충액 3㎖를 넣는다. 40℃에서 정확히 15분간 항온시키고 시험관 1, 2, 4, 5에 네오쿠프로인용액A 4㎖씩을 가하고 시험관 모두에 네오쿠푸로인용액 B 4㎖씩을 가하여 유리마개를 한다.(고무마개는 사용하지 말 것) 수욕조에서 12분 동안 격렬히 가열시켜 발색시키고 냉수에서 상온으로 식힌 다음 물을 가하여 전량을 25㎖로 한다. 파라필름으로 마개를 하던가 또는 적당한 마개를 하여 수회 거꾸로 하여 내용물을 혼합한 후 시험관 5의 인산염완충액공시험관을 대조액으로 하여 액층 1cm, 파장 450nm에서 각 용액의 흡광도를 측정한다.

A4  : 효소시험용(시험관 4)의 흡광도

A3  : 효소공시험용(시험관 3)의 흡광도

A2  : 포도당표준품용(시험관 2)의 흡광도

A1  : 기질공시험용(시험관 1)의 흡광도

F   : 시험용액의 희석배수

S   : 검체의 채취량(㎍)

36  : 포도당표준용액에 함유된 포도당의 ㎍수

106  : ㎍을 g으로 환산하는 변환계수

180 : 포도당 1μ㏖의 무게

15  : 반응시간(분)

④ 역가의 정의 : 1 β-Glucanase unit(BGU)는 상기시험조건하에서 1분간에 환원당으로서 포도당 1μ㏖을 생성하는 효소의 양이다.

⑤ 시  액

인산염완충액 : 인산칼륨 13.6g을 물 1,900㎖에 녹이고 70% 수산화나트륨용액을 가하여 pH를 6.5±0.05로 조절하고 전량을 물로 채워 2000㎖로 한다.

네오쿠프로인(Neocuproine)용액 A : 탄산나트륨(무수) 40g, 글리신 16g 및 황산동(5수화물) 450mg를 물 약 600㎖에 녹여 물을 가하여 1,000㎖로 한다.

네오쿠프로인(Neocuproine)용액 B : 네오쿠프로인염산염(Neocuproine  hydro -chloride) 600㎎을 물 400㎖에 녹여 물을 가하여 500㎖로 한다. 황색이 나타나면 버린다. 

기질용액 : 리케닌(Lichenin) 150mg을 유발에 갈아 미세분말로 하여 약 85℃의  물 50㎖에 녹인다. 완전히 녹으면(20～30분 걸림) 수소화붕산나트륨(Sodium borohydride) 90㎎을 넣고 비점하에서 1시간 계속 가열한다. Amberlite MB-8 (또는 이와 동등한 이온 교환수지) 15g을 가하고 30분간 계속 저어준다. Buchner 깔때기와 왓트만 No.1 또는 동종의 여지를 사용하여 진공여과하고 물 20㎖로 씻는다. 여액에 인산일칼륨 680mg을 가하고 0.22㎛ 밀리포아여과기(또는 이와 동등한 것)를 사용하여 다시 여과한다. 여과기를 물 10㎖로 씻고 1N 수산화나트륨용액 또는 1N 염산으로 pH를 6.5±0.05로 조절한 다음 물을 가하여 100㎖로 한다. 2～4℃에서 보관하고 3일이내에 사용하여야 한다.

포도당표준용액 : 포도당(무수) 36.0mg을 인산염완충액 50㎖에 녹여 물을 가하여 1.000㎖로 한다.

보존방법의 기준

흡습성이 강하므로 냉암소에서 밀봉 보존하여야 한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제자체를 사용할 수 있고, 본품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할수 있다. 

■ β-만난아제(β-mannanase)

정    의

베타만난(β-mannans)을 가수분해하는 효소이다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : β-만난아제

기    타주로 바실러스 종에서 생산할 수 있는 endo-hydrolyase이며 갈락토만난 및 만난의 1,4-β-D-mannan 결합을 무작위로 분해한다. 모든 만난계열의 다당류 분해를 개선시키고 콩 껍질이 만난의 주요원이기 때문에 탈지대두박이 사용된 사료를 급여하였을 때 그 효과가 크게 나타날 수 있다.

■ β-아밀라아제(β-Amylase)

정    의

Bacillus subtilis의 아밀라아제 생산균주에서 얻어진 효소제이다.

성분규격

효소력단위

본 품은 효소력시험을 할 때, 1g 중에 2,000 전분당화력단위 이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 암갈색의 액체로, 특이한 냄새가 난다.

② 본 품의 pH는 5.0～7.5이다.

③ 본 품은 pH5.0～7.0에서 최대의 효소활성을 갖는다.

순도시험

① 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 2법으로 시험할 때, 그 양은 납표준액 5.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(50ppm 이하)

② 비소 : 본 품 1.0g을 취하여 비소시험법 제 3법으로 시험할 때, 이에 적합해야 한다.(2 ppm 이하)

③ 항균활성 : 항균활성을 나타내서는 안 된다.

강열잔류물

20.0% 이하(1g)

효소력시험

전분당화력시험법으로 시험한다.

제조방법의 기준

Bacillus subtilis의 아밀라아제 생산균주를 배양하고 배양종료 후, 배양물을 여과하거나 또는 물로 추출 후 여과하여 균체를 제거하고 다시 여과액을 농축하여 제조할 것.

보존방법의 기준

밀폐용기에 냉동 보존할 것.

표시기준

「아밀라아제Ⅰ」의 표시기준을 준용할 것.

 나. 지방분해효소

■ 리파아제(Lipase)

정    의

지방을 분해하는 효소로서 Alcaligenes eutrophus, Candida cylindracea 또는 Rhizopus japonicus의 리파아제 생산균주에서 얻어진 효소제이다.

성분규격

효소력 단위

본 품은 효소력시험을 할 때, 1g 중에 5,000 지방소화력단위 이상을 포함한다.

성상

① 본 품은 담황색～담갈색의 분말로, 약간 특이한 냄새가 난다.

② 본 품의 수용액 또는 물현탁액(1→100)의 pH는 5.0～6.5이다.

③ 본 품은 pH 6.0～7.5에서 최대의 효소활성을 갖는다.

순도시험

① 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 2법으로 시험할 때, 그 양은 납표준액 5.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(50ppm 이하)

② 비소 : 본 품 1.0g을 취하여 비소시험법 제 3법으로 시험할 때, 이에 적합해야 한다.(2 ppm 이하)

③ 항균활성 : 항균활성을 나타내서는 안 된다.

건조감량

10.0% 이하(1g, 105℃, 3시간)

강열잔류물

25.0% 이하(1g)

효소력 시험

지방소화력시험법으로 시험한다.

제조방법의 기준

①Alcaligenes eutrophus, Candida cylindracea 또는 Rhizopus japonicus의 리파아제 생산균주를 배양하고 배양종료 후, 배양물을 약 알칼리 용액으로 추출 후 여과하여 균체를 제거하고, 다시 여과액을 건조하거나 또는 여과액에 용매 또는 염류를 첨가하여 생긴 침전물을 건조하여 제조할 것.

② 본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

빛이 차단된 밀폐용기에 보존할 것.  

표시기준

본 품의 직접용기 또는 포대에 최대의 효소활성을 나타내는 pH값(소수점 이하 첫째자리까지)을 기재할 것.

 다. 인분해효소

■ 피타아제(Phytase)

정    의

Aspergillus niger의 피타아제 생산균주에서 얻어진 효소제이다.

성분규격

효소력 단위

본 품은 효소력시험을 할 때, 1g 중에 1,500 피틴산분해력단위 이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 백색～담갈색의 분말로, 약간 특이한 냄새가 난다.

② 본 품의 수용액 또는 물현탁액(1→100)의 pH는 4.5～7.5이다.

③ 본 품은 pH 5.0～6.0에서 최대의 효소활성을 갖는다.

순도시험

① 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 2법으로 시험할 때, 그 양은 납표준액 5.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(50ppm 이하)

② 비소 : 「노시헵타이드(그의 2)」의 순도시험 ④를 준용한다.

③ 항균활성 : 항균활성을 나타내서는 안 된다.

건조감량

12.0% 이하(1g, 105℃, 3시간)

강열잔류물

25.0% 이하(1g)

효소력 시험

피틴산분해력시험법으로 시험한다.

제조방법의 기준

① Aspergillus niger의 피타아제 생산균주를 배양하고 배양종료 후, 배양물을 여과하거나 또는 추출 후 여과하여 균체를 제거하고, 다시 여과액을 건조하거나 또는 여과액에 용매를 첨가하여 생긴 침전물을 건조하여 제조할 것.

② 본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

빛이 차단된 밀폐용기에 보존할 것.  

표시기준

본 품의 직접용기 또는 포대에 최대의 효소활성을 나타내는 pH값(소수점 이하 첫째자리까지)을 기재할 것.

 라. 단백질분해효소

■ 브로멜라인(Bromelain)

정 의

이 품목은 파인애플의 과즙 또는 엽경을 압착하여 만든 단백분해력이 있는 효소제로서 정량할 때 1mg에 대하여 500 브로멜라인 단위 이상을 함유한다.

성분규격

성상

이 품목은 엷은 황색～엷은 회갈색의 가루로 약간 특이한 냄새가 있다.

확인시험

이 품목 약 10mg을 묽은 초산에 넣어 pH 5.5로 맞춘 탈지분유의 20% 유액 10ml 에 넣고 37℃로 가온할 때 이 유액은 응고한다.

순도시험 :

① 납 : 이 품목 1.6g을 도가니에 취하여 약하게 가열하여 탄화한다. 식힌 다음 질산 2ml 및 황산 5방울을 넣고 흰 연기가 날 때까지 가열한 다음 500～600℃로 강열하여 회화한다. 식힌 다음 염산 2ml 및 물 5ml를 넣어 가온하여 녹이고 필요하면 여과한다. 잔류물을 물로  씻고 씻은 액을 여액에 합쳐 구연산암모늄용액(9→20) 15ml 및 물을 넣어 정확하게 50ml로 한다. 이 액 25ml를 정확하게 취하여 분액깔때기에 넣고 황산암모늄용액(2→5)10ml 및 치몰블루시액 5방울을 넣고 암모니아시액으로 중화하고 다시 암모니아시액 2.5ml를 넣는다. 이 액에 디티존의 초산 n-부틸용액(1→500)20ml를 정확하게 넣고 10분간 흔들어 섞어 얻은 초산n-부틸층을 검액으로 한다. 따로 납표준액 10ml를 정확하게 취하여 희석시킨 질산(1→100)을 넣어 정확하게 50ml 로 한다. 검액 및 표준액을 가지고 다음 조건으로 원자흡광광도법에 따라 시험할 때 검액의 흡광도는 표준액의 흡광도 이하이다.(10ppm 이하)

   사용가스 : 가연성가스 : 아세틸렌 또는 수소

             지연성가스  : 공기

   램프 : 납 중공음곡 램프

   파장 : 283.3 nm

② 비소 : 이 품목 1.0g을 도가니에 취하여 질산마그네슘의 에탄올용액(1→10)10ml를 넣고 에탄올에 점화하여 연소시킨 다음 천천히 가열하여 회화한다. 식힌다음 잔류물에 염산 3ml를 넣고 수욕상에서 가온하여 녹여 검액으로 하고 장치 B를 써서 조작하여 시험한다.(2ppm 이하)

③ 시안화물 : 이 품목 5.0g을 증류플라스크에 넣고 주석산 2g, 물 50ml 및 필요하면 실리콘수지 1방울을 넣고 증류장치에 연결한다. 수기에는 수산화나트륨시액 2ml 및 물 10ml를 넣고 냉각기의 하단을 이액에 담그고 물로 식혀 유액 25ml를 얻을 때까지 증류한 다음 유액에 물을 넣어 50ml로 한다. 이 액 25ml에 황산제일철시액 0.5ml, 묽은염화제이철시액 0.5ml 및 묽은황산 1ml를 넣을 때 액은 청색을 나타내지 않는다.

건조감량

5.0% 이하(1g, 감압, 오산화인, 5시간)

강열잔류물

25.0% 이하(1g)

정량법

이 품목 약 0.1g을 정밀하게 달아 유발에 넣고 효소희석액 적당량을 넣어 저어 섞은 다음 100ml 용량플라스크에 옮긴다. 유발은 효소희석액 약 50ml를 써서 잘 씻고, 씻은 액은 용량플라스크에 합치고 다시 효소희석액을 넣어 100ml 로 한다. 이 액을 원심분리하여 얻은 상징액을 다시 효소희석액으로 희석하여 1ml중에 30～50브로멜라인 단위를 함유하는 액을 만들어 검액으로 한다. 검액 1ml를 정확하게 취하여 시험관에 넣고 37±0.5℃로 5분간 유지한다. 따로 37±0.5℃로 미리 가온한 기질액 5ml를 시험관중의 검액에 빨리 넣고 효소반응을 시킨다. 정확하게 10분후에 침전시약 5ml를 넣어 잘 흔들어 섞고 37±1℃에서 40분간 방치한 다음 정량용여지를 써서 여과한다. 처음 여액 3ml를 버리고 다음 여액을 가지고 2시간 이내에 물을 대조로 하여 파장 275nm에서 흡광도 A를 측정한다. 따로 검액 1ml를 정확하게 취하여 침전시약 5ml를 넣어 잘 흔들어 섞은 다음 기질액 5ml를 넣고 이하 같은 방법으로 조작하여 흡광도 A0를 구한다. 따로 티로신 표준품을 정밀하게 달아 0.1mol/L 염산시액에 녹여 그 1ml 중에 티로신 50.0㎍을 함유하는 액을 만들어 이 액을 가지고 물을 대조로 하여 파장 275nm에서 흡광도 As를 측정한다.

역가의 정의

1 브로멜라인 단위는 위의 반응조건에서 1분간에 티로신 1㎍에 해당하는 반응물을 생성시키는 효소량으로 한다. 

보존방법의 기준

기밀용기에 보관하여야 한다.

■ 산성(곰팡이성)프로테아제(Acid Protease, Fungal Protease)

정    의

Aspergillus niger 및 그 변종, Aspergillus oryzae 및 그 변종, Aspergillus saitoi, Rhizopus delemar 또는 Rhizopus niveus에서 얻어진 효소제이다. 다만, 역가조정, 품질보존 등을 위하여 희석제, 안정제 등을 첨가할 수 있다.

성    상  이 품목은 백～진한 갈색의 분말, 입상, 페이스트상 또는 무～진한 갈색의 액상이다.

확인시험  이 품목의 활성시험법에 따라 시험할 때 활성을 나타내어야 한다.

순도시험  (1) 비  소 : 이 품목 0.25g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에탄올용액(1→50) 10mL를 넣고 에탄올에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3mL를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하).

  (2) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 5ppm 이하이어야 한다.

  (3) 대장균군 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 대장균군에 따라 시험할 때, 제품 1g당 30 이하이어야 한다.

  (4) 살모넬라 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」일반시험법의 미생물시험법 중 살모넬라에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

  (5) 대장균 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」일반시험법의 미생물시험법 중 대장균에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

활성시험법(역가)

  프로테아제(곰팡이성)의 함량을 측정하는 방법으로 제 1 법인 SAP(Spectrometric acid protease units)법 또는 제 2 법인 HUT(Hemoglobin units on the tyrosine basis)법에 따라 시험한다.

 제 1 법 SAP(Spectrometric acid protease units)법

  분석원리 : 본 시험방법은 SAP(Spectrophotometric acid protease units) 단위로 표시된 프로테아제 역가를 측정하는 방법이다. 역가시험은 pH 3.0, 온도 37℃에서 카제인기질의 30분간 가수분해에 근거를 두고 있다. 가수분해 되지 않은 기질은 삼염화초산으로 침전시켜 여과에 의해 제거되고 여액에 있는 용해된 카제인의 양을 흡광도측정법으로 측정한다.

  시험용액의 조제 : 검체 일정량을 취하여 글리신ㆍ염산완충액으로 희석한 최종희석액 2mL를 사용하여 275nm에서 효소항온여액의 보정된 흡광치(본 시험방법에서는 ΔA로 정의)가 0.200～0.500의 범위가 되도록 시험용액을 조제한다. 검체를 정밀히 달아 유리유발에 취하고 글리신ㆍ염산완충액을 가하여 분쇄한 다음 이를 일정량의 메스플라스크에 옮겨 글리신ㆍ염산완충액으로 채운다.

  시험조작 : 25×150mm 시험관을 1 검체당 효소시험용 2개 이상, 효소공시험용 1개, 기질공시험용 1개로 하여 기질용액 10mL씩을 가한다. 시험관에 마개를 하고 37±0.1℃의 수욕조에서 15분간 항온 시킨다. 시험용액 2mL를 정확히 가하고 흔들어 혼합한 후 수욕조에 방치한다(※주 : 항온 시키는 동안 시험관은 마개를 한다). 기질공시험용은 시험용액 대신에 글리신ㆍ염산완충액 2mL를 가한다. 정확히 30분후 각각에 삼염화초산용액 10mL를 가하여 효소의 작용을 정지시킨다. 기질용액 10mL, 삼염화초산용액 10mL, 시험용액 2mL의 순으로 가하여 효소공시험용으로 한다. 시험관 모두를 37±0.1℃의 수욕조에서 30분간 가온하여 단백질을 완전히 응고시킨 다음 시험관을 얼음수욕조에서 5분간 냉각시키고 왓트만 No.42 또는 동종의 여지를 사용하여 여과한다. 여액은 완전히 투명하여야 한다. 기질공시험여액을 대조액으로 하여 액층 1cm, 파장 275nm에서 여액의 흡광도를 측정한다. 효소시험용액의 흡광도에서 효소공시험용액의 흡광도 값을 빼어 효소시험용액의 흡광도 값을 보정한다.

  검량선의 작성 : 미리 건조항량 시킨 L-티로신 181.2mg을 정밀히 달아 0.1N 염산 60mL에 완전히 녹이고 물을 가하여 1,000mL로 한다. 이 용액 1mL는 1μmol 티로신을 함유한다. 이 용액을 사용하여 1mL당 0.10, 0.20, 0.30, 0.40과 0.50μmol 함유하는 희석용액을 만든다. 물을 대조액으로 하여 액층 1cm, 파장 275nm에서 각각의 흡광도를 측정한다. mL당 티로신의 μmol수에 대하여 흡광도검량선을 작성하여 직선이 얻어져야 한다. 다음의 계산을 위해 기울기와 절편을 구해둔다. 그 값은 1.38에 근사치이어야 한다. 기울기와 절편은 다음 계산식에 따라 최소자승법(least squares method)에 의해 구한다.

  기울기(S) ＝  n∑(MA)-∑(M)∑(A)  

              ───────────

                n∑(M2)-(∑M)2      

  절 편(I) ＝   ∑(A)∑(M2)-∑(M)∑(MA)   

              ──────────────

                n∑(M2)-(∑M)2            

  n   : 검량선상의 점의 갯수                            

  M   : 검량선상의 각 점에 대한 mL당 티로신의 μmol수   

  A   : 표준용액 각 농도에 대한 흡광도                  

      다음 계산식에 따라 효소제의 역가를 구한다.

  역가(SAP/g)  ＝   (ΔA-Ⅰ)  ×  22            

                                ────────

                                  S × 30 × W  

  ΔA   : 효소 항온여액의 보정된 흡광도       

    I   : 검량선의 절편                       

  22    : 최종 반응액의 양(mL)                

   S    : 검량선의 기울기                     

  30    : 반응시간(분)                        

  W     : 시험용액 2mL에 함유된 검체의 양(g)  

  역가의 정의 : 1 Spectrophotometric acid protease unit(SAP)는 상기시험조건 하에서 분당 티로신 1μmol을 유리시키는 효소의 양이다.

  시   액

    카제인 : 카제인(Hammarsten)을 사용한다.

    글리신ㆍ염산완충액(0.05M) : 글리신 3.75g을 약 800mL의 물에 녹이고 1N 염산을 가하여 pH 3.0으로 맞춘다. 물을 가하여 1,000mL로 한다.

    삼염화초산용액 : 삼염화초산 18.0g과 초산나트륨 11.45g을 800mL의 물에 녹이고 빙초산 21.0mL를 가하고 물을 가하여 1,000mL로 한다.

    기질용액 : 1N 염산 8mL를 취하여 물 500mL에 가하고 카제인 7.0g(건조물로)을 계속 저어주며 분산시킨다. 때때로 저어주면서 끓는 수욕조 중에서 30분간 가열하고 꺼내어 상온으로 냉각한다. 이 용액에 글리신 3.75g을 달아 넣고 0.1N 염산으로 pH 3.0으로 조절한 다음 이에 물을 가하여 1,000mL로 한다.

 제 2 법 HUT(Hemoglobin units on the tyrosine basis)법

  분석원리 : 본 시험방법은 HUT (Hemoglobin units on the tyrosine basis) 단위로 표시된 프로테아제 역가를 티로신을 기준물질로 하여 측정하는 방법이다. 역가시험은 pH 4.7, 온도 40℃에서 헤모글로빈기질의 30분간 가수분해에 근거를 두고 있다. 가수분해되지 않은 기질은 삼염화초산으로 침전시켜 여과에 의해 제거되고 여액에 있는 용해된 헤모글로빈의 양을 흡광도측정법으로 측정한다.

  시험용액의 조제 : 검체를 초산염완충액에 녹여 최종희석액 1mL가 9～22HUT를 함유하도록 시험용액을 조제한다(이 농도는 다음의 시험방법에 따라 읽은 흡광도 값이 0.2～0.5범위에 든다).

  시험조작 : 25×150mm 시험관을 효소시험용과 기질공시험용으로 하여 이들 각각에 기질용액 10mL씩을 넣는다. 이를 40℃의 수욕조에서 5분간 가온한다. 효소시험용 시험관에 시험용액 2mL를 가하고 기질공시험용에는 초산염완충액 2mL를 가한다. 고무마개로 막고 손바닥에 가볍게 30초간 두드려 희석하고 40℃의 수욕조에서 정확히 30분간 가열한 후 삼염화초산용액 10mL씩을 각 시험관에 가한다. 마개를 하여 10～12분 간격으로 40초 동안 격렬히 흔들어 주며 이 조작을 1시간동안 계속하여 상온으로 식힌다. 효소공시험용으로 기질용액 10mL와 시험용액 약 5mL를 별도의 시험관에 취하여 수욕조에서 30분동안 각각 가온한 다음 기질용액 10mL에 삼염화초산용액 10mL를 가해주고 40초간 흔들어 섞고 이에 미리 가온한 시험용액 2mL를 정확히 가한 후 10～12분 간격으로 40초간 흔들어 주는 조작을 1시간동안 계속하여 상온에서 식힌다. 위의 3개 시험관을 격렬히 흔들어주고 왓트만 No.42 또는 동종의 여지를 사용하여 여과한다. 초류액 3mL는 버린다. 기질공시험용액을 대조액으로 하여 액층 1cm, 파장 275nm에서 흡광도를 측정한다. 효소시험용액의 흡광도에서 효소공시험용액의 흡광도를 뺀 값을 Au라 한다(만약 흡광치가 0.2～0.5범위에 들지 않으면 검체채취량을 조절하여 다시 시험한다).

  검량선의 작성 : 미리 건조항량 시킨 L-티로신 100.0mg을 정밀히 달아 0.1N 염산 60mL에 완전히 녹이고 물을 가하여 1,000mL로 한다. 이 용액은 1mL당 100μg의 티로신을 함유한다. 이 용액을 사용하여 1mL당 75.0, 50.0, 25.0μg의 티로신을 함유하도록 희석한다. 4개의 용액을 0.006N 염산을 대조액으로 하여 액층 1cm, 파장 275nm에서 흡광도를 측정한다. 티로신 1μg당 흡광도의 표시로서 곡선의 기울기를 측정한다. 이 값에 1.10을 곱하고 이를 As라 한다. 이 값은 약 0.0084가 되어야 한다.

      다음 계산식에 따라 효소제의 역가를 구한다.

  역가(HUT/g)   =   Au  ×  22    

                  ───  ────

                    As      30W   

  22 : 최종반응액의 양(mL)                

  30 : 반응시간(분)                       

  W : 시험용액 2mL에 함유된 검체의 양(g)  

    (※ 주 : As값은 표준화된 조건하에서 0.0084가 얻어지며 보통의 시험에서는 검량선에서 얻어지는 값 대신에 이 값을 사용할 수 있다. 그러나 정확을 요하거나 의심이 가는 경우는 검량선에서 정확히 계산된 값을 사용하여야 한다)

  역가의 정의 : 1 HUT unit는 상기시험조건 하에서 1분간에 파장 275nm에서 0.006N 염산에 1mL당 티로신 1.10μg을 함유하는 용액과 동일한 흡광도 값을 갖는 효소분해물을 생성하는 효소의 양이다.

  시   액

    헤모글로빈 : 헤모글로빈 기질분말을 사용하거나, 또는 동질의 것으로 물에 완전히 녹는 것을 사용한다.

    초산염완충액 : 초산나트륨(NaC2H3O2ㆍ3H2O) 136g을 충분한 양의 물에 녹여 500mL로 한다. 이 용액 25mL를 1M 초산 50mL와 혼합하여 물을 가하여 1,000mL로 한다. 이 용액의 pH는 4.7±0.02이어야 한다.

    기질용액 : 헤모글로빈 4.0g을 250mL 비이커에 취하고 물 100mL를 가해주고 10분간 저어주면서 녹인다. pH 메타의 전극을 용액에 담그고 계속 저어주면서 0.3N 염산으로 pH를 1.7로 맞춘다. 10분후에 0.5M 초산나트륨용액으로 pH를 4.7로 조절하고 이에 물을 가하여 200mL로 한다. 이 용액은 냉장고에 보관하면 약 5일간 유효하다.

    삼염화초산용액 : 삼염화초산 140g을 75mL의 물에 녹이고 이에 물을 가하여 1,000mL로 한다.

보존기준

  냉암소에서 밀봉 보존하여야 한다.

■ 식물성 프로테아제(Plant Protease(PU))

정    의

파파인, 피신, 브로멜라인 등 식물에서 얻어진 효소제이다. 다만, 역가조정, 품질보존 등을 위하여 희석제, 안정제 등을 첨가할 수 있다.

성    상  이 품목은 백～진한 갈색의 분말, 입상, 페이스트상 또는 무～진한 갈색의 액상이다.

확인시험  이 품목의 활성시험법에 따라 시험할 때 활성을 나타내어야 한다.

순도시험  (1) 비  소 : 이 품목 0.25g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에탄올용액(1→50) 10mL를 넣고 에탄올에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3mL를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하).

  (2) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 5ppm 이하이어야 한다.

  (3) 대장균군 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」일반시험법의 미생물시험법 중 대장균군에 따라 시험할 때, 제품 1g당 30 이하이어야 한다.

  (4) 살모넬라 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」일반시험법의 미생물시험법 중 살모넬라에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

  (5) 대장균 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」일반시험법의 미생물시험법 중 대장균에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

활성시험법(역가)

  분석원리 : 본 역가시험은 pH 6.0, 온도 40℃에서 60분간 카제인 기질의 단백질가수분해에 근거를 두고 있다. 가수분해 되지 않은 기질은 삼염화초산으로 침전하여 여과에 의해 제거되고 용해된 카제인을 흡광도 측정법으로 측정한다.

  시험용액의 조제 : 최종희석액 2mL의  흡광도가 0.2～0.5의 범위가 되도록 검체를 정밀히 달아 유발에 취하고 인산염-시스테인-이.디.티.에이.완충액을 가하여 분쇄시킨 다음 이를 메스플라스크에 옮겨 인산염-시스테인-이.디.티.에이.완충액으로 채운다.

  시험조작 : 25×150mm 시험관 3개는 효소시험용으로, 6개는 파파인검량선용으로 하여 이들 각각에 카제인기질용액 5mL씩을 넣는다. 이를 40±0.1℃의 수욕조에서 15분간 항온 시킨 후 시험용액 2mL, 표준용액 2mL를 각각 가하여 흔들어 섞고 마개를 하여 다시 수욕조에서 60분간 항온시킨 후 각각의 시험관에 삼염화초산용액 3mL씩을 가하여 흔들어 섞는다. 별도로 효소공시험용 시험관 9개에는 기질용액 5mL, 삼염화초산용액 3mL를 가하여 흔들어 섞고, 이에 시험용액, 해당 표준용액 2mL를 정확히 취하여 각각 가한다. 시험관 모두를 다시 수욕조에서 30분간 항온하여 침전된 단백질을 완전히 응고시킨 다음 왓트만 No. 42 또는 동종의 여지를 사용하여 여과한다. 초류액 3mL는 버리고 완전히 투명한 여액을 사용하여 각각의 공시험용액을 대조액으로 하여 액층 1cm, 파장 280nm에서 흡광도를 측정한다. 표준용액농도(mg/mL)에 대하여 여액의 흡광도로 검량선을 작성한다. 검량선으로부터 시험용액에서 얻은 여액의 농도를 구한다.

    다음 계산식에 따라 효소제의 역가를 구한다.

  역가(PU/mg)   =   A × C ×   10  

                              ───

                                W   

             A : USP 파파인표준품의 역가(PU/mg)                                 

             C : 검량선에서 구한 효소시험용액에 대응하는 표준품의 농도(mg/mL)   

             W : 시험용액 2mL에 함유된 검체의 양(mg)                            

  역가의 정의 : 1 Papain unit(PU)는 상기시험조건 하에서 1시간 동안에 Tyrosine 1μg 상당량을 유리시키는 효소의 양이다.

  시   액

    인산나트륨용액(0.05M) : 인산이나트륨(무수) 7.1g을 500mL의 물에 녹이고 물을 가하여 1,000mL로 한다. 이에 보존료로서 톨루엔 한방울을 가한다.

    구연산용액(0.05M) : 구연산(1수화물) 10.5g을 500mL의 물에 녹이고 물을 가하여 1,000mL로 한다. 이에 보존료로서 톨루엔 한방울을 가한다.

    인산염-시스테인-이.디.티.에이.완충액 : 인산이나트륨 7.1g을 약 800mL의 물에 녹이고 이에 이.디.티.에이.이나트륨(2수화물) 14.0g과 시스테인염산염(1수화물) 6.1g을 녹인다. 1N 염산 또는 1N 수산화나트륨용액으로 pH 6.0±0.1로 맞추고 물을 가하여 1,000mL로 한다.

    삼염화초산용액 : 삼염화초산 30g을 물에 녹여 100mL로 한다.

    기질용액 : 카제인(Hammarsten) 1g(건조물로서)을 인산나트륨용액 50mL에 녹이고 끓는 수욕조에서 30분간 때때로 흔들어 주면서 가열시킨다. 이를 냉각시켜 계속 흔들어 주며 구연산용액으로 pH 6.0±0.1로 맞춘다(※주 : 계속 빨리 흔들어주면 침전이 생기지 않는다). 이에 물을 가하여 정확히 100mL로 한다.

    표준원액 : USP파파인표준품 100.0mg을 인산염-시스테인-이.디.티.에이.완충액에 녹여 100mL로 한다.

    표준용액 : 표준원액 2, 3, 4, 5, 6 및 7mL를 100mL 메스플라스크에 각각 취하고 이에 인산염-시스테인-이.디.티.에이.완충액으로 용량을 맞춘다.

보존기준

  냉암소에서 밀봉 보존하여야 한다.

■ 알카리성(세균성) 프로테아제(Alkaline Protease, Bacterial Protease)

정    의

Aspergillus melleus, Bacillus subtilis 및 그 변종, Bacillus licheniformis 및 그 변종, Bacillus stearothermophilus 및 그 변종, Bacillus amyloliquefaciens 및 그 변종, Streptomyces caespitosus 또는 Serratia proteamaculans subsp. proteamaculans에서 얻어진 효소제이다.

성    상  이 품목은 백～진한 갈색의 분말, 입상, 페이스트상 또는 무～진한 갈색의 액상이다.

확인시험  이 품목의 활성시험법에 따라 시험할 때 활성을 나타내어야 한다.

순도시험  (1) 비  소 : 이 품목 0.25g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에탄올용액(1→50) 10mL를 넣고 에탄올에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3mL를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하).

  (2) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 5ppm 이하이어야 한다.

  (3) 대장균군 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」일반시험법의 미생물시험법 중 대장균군에 따라 시험할 때, 제품 1g당 30 이하이어야 한다.

  (4) 살모넬라 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」일반시험법의 미생물시험법 중 살모넬라에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

  (5) 대장균 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」일반시험법의 미생물시험법 중 대장균에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

활성시험법(역가)

  분석원리 : 본 PC(Bacterial protease unit)로 표시된 프로테아제 역가를 측정하는 방법이다. 역가시험은 pH 7.0, 온도 37℃에서 카제인기질의 30분간 단백질가수분해에 근거를 두고 있다. 가수분해 되지 않은 카제인은 여과에 의해 제거되고 용해된 카제인을 흡광도측정법으로 측정한다.

  시험용액의 조제 : 트리스완충액을 사용하여 최종희석액 2mL가 10～44 PC단위를 함유하도록 시험용액을 조제한다.

  시험조작 : 25×150mm 시험관을 효소시험용, 효소공시험용 및 기질공시험용으로 하여 각각에 기질용액 10mL씩을 넣는다. 이들은 37±0.1℃의 수욕조에서 15분간 항온시킨다. 효소시험용에는 시험용액 2mL를 정확히 취하여 재빨리 가하고 흔들어 수욕조에 다시 방치한다. 기질공시험용에는 시험용액 대신 트리스완충액 2mL를 가한다. 정확히 30분 후에 각각의 시험관에 삼염화초산용액 10mL씩을 가하여 효소의 작용을 정지시킨다. 공시험용에는 기질용액 10mL에 삼염화초산용액 10mL를 가하고 40초간 흔든 다음 시험용액 2mL를 가한다(주 : 삼염화초산용액은 입으로 빨지 않는다). 다시 수욕조에서 30분간 가온하여 단백질을 완전히 응고 시킨다. 2차 가온의 종말점에서 시험관을 심하게 흔들어 왓트만 No. 42를 사용하여 여과한다. 초류액 3mL는 버리고 완전히 투명한 여액을 사용하여 기질공시험용액을 대조액으로 하여 액층 1cm, 파장 275nm에서 흡광도를 측정하여 효소시험용액의 흡광도에서 효소공시험용액의 흡광도를 뺀 값을 Au라 한다.

  검량선의 작성 : 미리 건조항량시킨 L-티로신 100.0mg을 정밀히 달아 0.1N 염산 60mL에 완전히 녹이고 물을 가하여 1,000mL로 한다. 이 용액은 1mL당 100μg의 티로신을 함유한다. 이 용액을 사용하여 1mL당 75.0, 50.0, 25.0μg을 함유하도록 0.006N 염산으로 희석한다. 4개의 용액을 0.006N 염산을 대조액으로 액층 1cm, 파장 275nm에서 흡광도를 측정한다. 티로신농도에 대한 흡광도로 검량선을 작성한다. 검량선으로부터 1mL당 60μg의 티로신농도를 가지는 용액의 흡광도를 구한다. 이 값을 40으로 나누어 1mL당 1.5μg의 티로신농도를 함유하는 용액에 상당하는 흡광도를 구한 값을 As라 한다(이 때 이 값은 0.0115에 가까운 수치가 얻어진다).

     다음 계산식에 따라 효소제의 역가를 구한다.

  역가(PC/g)  =   Au  ×  22    

                ───  ────

                  As      30W   

  22 : 최종반응액의 양(mL)                

  30 : 반응시간(분)                       

  W : 시험용액 2mL에 함유된 검체의 양(g)  

  역가의 정의 : 1 Bacterial protease unit(PC)는 상기시험조건 하에서 분당 1.5μg/mL의 L-티로신을 생성하는 효소의 양이다.

  시   액

    카제인 : 카제인(Hammarsten)을 사용한다.

    트리스완충액(pH 7.0) : 효소시험용 트리스(히드록시메틸)아미노메탄[Tris(Hydroxymethyl) amino-methane] 12.1g을 800mL의 물에 녹이고 1N 염산을 사용하여 pH 7.0으로 하고 물을 가하여 전량을 1,000mL로 한다.

    삼염화초산용액 : 삼염화초산 18g과 초산나트륨(3수화물) 19g을 800mL의 물에 녹이고, 빙초산 20mL 및 물을 가하여 1,000mL로 한다.

    기질용액 : 효소시험용 트리스(히드록시메틸)아미노메탄 6.05g을 500mL의 물에 녹이고 1N 염산 8mL를 가하고 혼합한다. 이 용액에서 카제인 7g을 가하여 녹이고 때때로 흔들어 주며 끓는 수욕에서 30분간 가열한다. 실온으로 냉각하고 격렬히 흔들며 침전이 생기지 않게 0.2N 염산을 천천히 가하여 pH 7.0으로 한다. 이에 물을 가하여 1,000mL로 한다.

보존기준

  냉암소에서 밀봉 보존하여야 한다.

■ 중성 프로테아제(Neutral Protease)

정    의

Aspergillus oryzae의 중성 프로테아제 생산균주에서 얻어진 효소제이다.

성분규격

효소력 단위

본 품은 효소력시험을 할 때, 1g 중에 60,000 단백질소화력단위 이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 담갈색～갈색의 분말로, 약간 특이한 냄새가 난다.

② 본 품의 수용액 또는 물현탁액(1→100)의 pH는 5.5～7.5이다.

③ 본 품은 pH 6.0～7.0에서 최대의 효소활성을 갖는다.

순도시험

① 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 2법으로 시험할 때, 그 양은 납표준액 5.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(50ppm 이하)

② 비소 : 본 품 1.0g을 취하여 비소시험법 제 3법으로 시험할 때, 이에 적합해야 한다.(2 ppm 이하)

③ 항균활성 : 항균활성을 나타내서는 안 된다.

건조감량

10.0% 이하(1g, 105℃, 3시간)

강열잔류물

25.0% 이하(1g)

효소력 시험

단백질소화력시험법 제 3법으로 시험한다.

제조방법의 기준

① Aspergillus oryzae의 중성 프로테아제 생산균주를 배양하고 배양종료 후, 배양물을 여과하거나 또는 추출 후 여과하여 균체를 제거하고, 다시 여과액을 건조하거나 또는 여과액에 용매를 첨가하여 생긴 침전물을 건조하여 제조할 것.

② 본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

빛이 차단된 밀폐용기에 보존할 것.  

표시기준

본 품의 직접용기 또는 포대에 최대의 효소활성을 나타내는 pH값(소수점 이하 첫째자리까지)을 기재할 것.

 라의2. 산화환원효소

■ 글루코오스산화효소(Glucose Oxidase)

정의

이 품목은 Aspergillus niger 및 그 변종, Penicillium chrysogenum 및 그 변종의 배양물에서 얻어진 효소제이다. 다만, 역가조정, 품질보존 등을 위하여 희석제, 안정제 등을 첨가할 수 있다. 이 품목은 β-D-포도당을 산화하여 D-글루코노-δ-락톤을 생성한다.

성상

이 품목은 백～진한 갈색의 분말, 입상, 페이스트상 또는 무～진한 갈색의 액상이다.

확인시험, 순도시험, 활성시험법(역가)

「식품첨가물의 기준 및 규격」 내 4. 품목별 성분 규격의 ‘글루코오스산화효소’ 확인시험, 순도시험, 활성시험법(역가)을 따른다. 

보존기준

냉암소에서 밀봉 보존하여야 한다.

 마. 효소제 합제

■ 셀룰라아제ㆍ프로테아제ㆍ펙티나아제 복합효소(Cellulase, Protease and Pectinase Complex)

성분규격

효소력 단위

본 품은 효소력시험을 할 때, 1g 중에 800 섬유붕괴력단위 이상, 300 단백질소화력단위 이상 및 200 펙틴액화력단위 이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 담갈색～황갈색의 분말로, 특이한 냄새가 난다.

② 본 품의 수용액 또는 물현탁액(1 →100)의 pH는 4.0～7.0이다.

③ 본 품은 셀룰라아제에서는 pH 3.5～5.0에서 최대의 효소활성을 갖고 프로테아제에서는 pH 3.0～4.0에서 최대의 효소활성을 가지며, 펙티나아제에서는 pH 4.5～5.5에서 최대의 효소활성을 갖는다.

순도시험

① 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 2법으로 시험할 때, 그 양은 납표준액 5.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(50ppm 이하)

② 비소 : 본 품 1.0g을 취하여 비소시험법 제 3법으로 시험할 때, 이에 적합해야 한다.(2 ppm 이하)

③ 항균활성 : 항균활성을 나타내서는 안 된다.

건조감량

10.0% 이하(1g, 105℃, 3시간)

강열잔류물

25.0% 이하(1g)

효소력 시험

섬유붕괴력시험법, 단백질소화력시험법 제 2법 및 펙틴액화력시험법으로 시험한다.

제조방법의 기준

① Irpex lacteus의 셀룰라아제ㆍ프로테아제ㆍ펙티나아제 복합효소 생산균주를 배양하고 배양종료 후 배양물을 여과하거나 또는 추출 후 여과하여 균체를 제거하고, 다시 여과액을 건조하거나 또는 여과액에 용매를 첨가하여 생긴 침전물을 건조하여 제조할 것.

② 본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

빛이 차단된 밀폐용기에 보존할 것.  

표시기준

본 품의 직접용기 또는 포대에 프로테아제 및 펙티나아제에 대해서 각각 최대의 효소활성을 나타내는 pH값(소수점 이하 첫째자리까지)을 기재할 것.

■ 키시라나제ㆍ펙티나아제 복합효소(Xylanase and Pectinase Complex)

성분규격

효소력 단위

본 품은 효소력시험을 할 때, 1g 중에 400 키시란당화력단위 이상 및 12,000 펙틴당화력단위 이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 담황색～담갈색의 분말로, 약간 특이한 냄새가 난다.

② 본 품의 수용액 또는 물현탁액(1 →100)의 pH는 5.0～7.0이다.

③ 본 품 중 키시라나제는 pH 3.0～5.0에서 최대의 효소활성을 갖고, 펙티나아제는 pH 3.5～4.0에서 최대의 효소활성을 갖는다.

순도시험

① 중금속 : 본 품 1.0g을 석영제 또는 자제도가니에 넣고 느슨하게 뚜껑을 닫은 다음 약하게 가열하여 탄화한다. 냉각 후 질산 2㎖ 및 황산 5방울을 첨가하여 흰색의 연기가 발생할 때까지 주의해서 가열한 후, 500～600℃로 열을 강하게 하여 탄화한다. 냉각 후 염산 2㎖를 첨가, 수욕상에서 증발건조하며 잔유물을 염산 3방울로 적셔 열탕 10㎖를 첨가하여 2분간 온도를 가한다. 다음으로 암모니아 시액으로 pH를 5.0～6.0으로 조정하고 묽은 초산 2㎖를 첨가, 필요하면 여과하여 물 10㎖로 씻고 여과액 및 세액을 네슬러관에 넣어 물을 첨가하여 50㎖로 만든다. 이것을 검사액으로 하여 중금속시험법 제 2법으로 시험할 때, 그 양은 납표준액 5.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(50ppm 이하)

② 비소 : 본 품 1.0을 취하여 비소시험법 제 3법으로 시험할 때, 이에 적합해야 한다.(2 ppm 이하)

③ 항균활성 : 항균활성을 나타내서는 안 된다.

건조감량

10.0% 이하(1 g, 105℃, 3시간)

강열잔류물

30.0%(1 g)

효소력 시험

키시란당화력시험법 및 펙틴당화시험법으로 시험한다.

제조방법의 기준

① Aspergillus usamii mut. shiro-usamii의 키시라나제ㆍ펙티나아제 복합효소 생산균주를 배양하고 배양종료 후, 배양물을 물로 추출 후 여과하여 균체를 제거하고 다시 여과액에 용매를 첨가하여 생긴 침전물을 건조하여 제조할 것.

② 본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

빛이 차단된 밀폐용기에 보존할 것.

표시기준

본 품의 직접용기 또는 포대에 키시라나제 및 펙티나아제에 대해서 각각 최대의 효소활성을 나타내는 pH값(소수점 이하 첫째자리까지)을 기재할 것.

7. 미생물제

┌─────────────────────────────────────────────────┐

│가축의 장내미생물의 균형을 유지ㆍ개선함으로써 숙주동물에게 유익한 효과를 유도하고자 사료에 첨가하 │

│는 미생물(단일균종 또는 혼합균종)                                                                 │

└─────────────────────────────────────────────────┘

 가. 유익균

■ 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus)

정 의

본 품은 식품원료로 사용가능한 균주로서 해당 종으로 확인된 균을 증식시킨 제조용 종균을 말한다. 그람양성, 통성혐기성 젖산생성 간균이다.

확인시험

① MRS 배지에 본 품을 도포하고 36∼38℃에서 2일간 혐기배양할 때, 배지에 발육된 집락은 약간 불규칙∼완전한 원에서 반구형상을 띤다.

② MRS 배지에 본 품을 도포하고 36∼38℃에서 2일간 혐기배양한다. 슬라이드 글라스 위에 1백금이 양의 물을 떨어뜨리고, 여기에 백금선을 이용하여 배지에 생성된 집락을 채집하여 뒤섞어서 현탁하고 적당한 크기로 펴서 실온 또는 불기가 거의 없는 곳에서 건조시킨다. 그런 다음, 2∼3회 화염 속을 통과시켜 고정된 것을 시료로 한다. 이 시료에 그램 염색법으로 시험할 때, 청자색∼흑자색으로 물든 간균을 인지할 수 있다.

③ 시험용 한천배지로서 MRS 배지를 이용, 배지에 본 품을 도포하고 36∼38℃에서 2일간 배양할 때, 균의 발육을 인지할 수 있다.

④ 당분해 시험을 실시하였을 때 arbinose, ribose, galactose, fructose, mannose, ramnose, mannitol, sorbitol은 양성을 나타내고, erythritol, xylose, maltose, xylitol은 음성을 나타낸다.

균주검증방법(16S rRNA 염기서열에 의한 동정)

① 시료를 MRS배지에 접종한 후, 36∼38℃에서 2일간 혐기배양한다.

② 적당량의 집락을 취하여 Genomic DNA Prep Kit를 이용함으로써 미생물 내에 존재하는 genomic DNA를 추출하여 동정에 이용이 되는 16s rRNA를 PCR 방법을 이용하여 증폭한 뒤 정제 과정을 거친 PCR product의 염기서열을 분석한다.

③ 염기서열 분석을 통해 얻은 균주의 염기서열은 GeneBank 에 있는 표준균주의 염기서열과 비교분석함으로써 99% 이상 상동성을 나타내는 것을 Lactobacillus rhamnosus로 인정한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

원주는 MRS 배지에서 계대되어 ?80℃에서 동결보존하거나 동결건조 후 4℃에서 보존된다. 본 품은 원주를 동 배지에서 증식하고 세분화하여 ?80℃에서 동결보존하거나 동결건조 후 4℃에서 보존할 것. 원주의 계대는 3대 이내로 하고 본 품은 계대해서는 안 된다. 제제는 밀폐용기에 보존할 것

■ 락토바실러스 락티스(Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis, Latobacillus lactis)

정    의

우유, 치즈 등에서 유래한 균주로서 해당 종으로 확인된 균을 증식시킨 제조용 종균을 말한다. 그람양성, 동종발효(homofermentative), 통성혐기성 젖산생성 간균이다.

성상/순도/함량 : 40℃, pH 9.2, 4% NaCl 및 40% 담즙한천 상에서 발육이 가능하다.

검정성분(또는 물질명) : 락토바실러스 락티스

기    타-

■ 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri)

성상

그람양성 간구균으로 Lactose를 분해하고, Mannose는 분해하지 않는다.

확인시험

① 1호 배지에 본품을 도포하고 45℃에서 2～3일간 혐기상태로 배양할 때 균의 발육을 인지할 수 있다.

② 1호 배지에 본품을 도포하고 45℃에서 2～3일간 배양한다. 슬라이드 그라스 위에 1백금이 양의 물을 떨어뜨리고, 여기에 백금선을 이용하여 배지에 생성된 집락을 취하여 뒤섞어서 현탁하고 적당한 크기로 펴서 실온 또는 불기가 거의 없는 곳에서 건조시킨다. 그런 다음 2～3회 화염속을 통과시켜 고정된 것을 시료로 한다. 이 시료에 그람염색법으로 시험할 때 청자색 또는 흑자색을 인지할 수 있다.

③ 시험용 한천배지로서 9호 배지를 이용, 배지에 본품을 도포하고 15℃에서 2～3일간 혐기상태로 배양할 때 균의 발육은 불량하다. 

③당분해 시험을 실시하였을 때 Lactose, Raffinose, Fructose, Galactose, Glucose, Maltose, Melibiose, Sucrose, Ribose는 양성을 나타내고, Mannose, Rhamnose, Xylose, Arabinose, Melezitose, Mannitol, Sorbitol은 음성을 나타낸다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

원주는 효모엑기스, 포도당, 펩톤 등을 포함한 배지에서 계대되어 동결건조 후 4℃에서 보존된다.  본 품은 원주를 동 배지에서 증식하고 세분화하여 동결건조 후 4℃에서 보존할 것. 원주의 계대는 5대 이내로 하고 본 품은 계대해서는 안된다. 제제는 밀폐용기에 보존할 것.

■ 락토바실러스 뮤코세(Lactobacillus mucosae)

정 의

본 품은 그람양성, 통성혐기성 젖산생성 간균이다.

확인시험

(1) MRS 배지에 본 품을 도포하고 32∼37℃에서 2일간 혐기배양할 때, 배지에 발육된 집락은 약간 불규 칙한, 작은 완전한 원에서 반구형상을 띤다

(2) MRS 배지에 본 품을 도포하고 32∼37℃에서 1일간 혐기배양한다. 슬라이드 글라스 위에

1백금이 양의 물을 떨어뜨리고, 여기에 백금선을 이용하여 배지에 생성된 집락을 채집하여

뒤섞어서 현탁하고 적당한 크기로 펴서 실온 또는 불기가 없는 곳에서 건조시킨다.

(3) 그런 다음, 2∼3회 화염 속을 통과시켜 고정된 것을 시료로 한다. 이 시료에 그램 염색법으로

시험할 때, 청자색∼흑자색으로 물든 간균을 인지할 수 있다.

(4) 시험용 한천배지로서 MRS 배지를 이용, 배지에 본 품을 도포하고 32∼37℃에서 1일간 배양할 때,균의 발육을 인지할 수 있다.

(5) 당분해 시험을 실시하였을 때 arbinose, ribose, galactose, fructose, mannose, ramnose,

mannitol, sorbitol은 양성을 나타내고, erythritol, xylose, maltose, xylitol은 음성을나타낸다.

(6) 균주 검증방법(16S rRNA 염기서열에 의한 동정)

① 시료를 MRS배지에 접종한 후, 32∼37℃에서 1일간 혐기배양한다.

② 적당량의 집락을 취하여 Genomic DNA Prep Kit를 이용함으로써 미생물 내에 존재하는

genomic DNA를 추출하여 동정에 이용이 되는 16s rRNA를 PCR 방법을 이용하여 증폭한뒤 정제

과정을 거친 PCR product의 염기서열을 분석한다.

③ 염기서열 분석을 통해 얻은 균주의 염기서열은 GeneBank에 있는 표준균주의 염기서열과 비교

분석함으로써 99% 이상 상동성을 나타내는 것을 Lactobacillus mucosae로 인정한다.

  제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

  보존방법 및 계대의 기준

원주는 MRS 배지에서 계대되어 ?80℃에서 동결보존하거나 동결건조 후 4℃에서 보존된다. 본 품은 원주를 동 배지에서 증식하고 세분화하여 ?80℃에서 동결보존하거나 동결건조 후 4℃에서 보존할 것. 원주의 계대는 3대 이내로 하고 본 품은 계대해서는 안 된다. 제제는 밀폐용기에 보존할 것

■ 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus)

정    의

요구르트, 치즈 등에서 유래한 균주로서 해당 종으로 확인된 균을 증식시킨 제조용 종균을 말한다. 그람양성, 동종발효(homofermentative), 통성혐기성 젖산생성 간균이다.

성상/순도/함량 : pH 4.6∼5.4에서 잘 성장하며, 유당 이외의 다른 당은 발효할 수 없다.

검정성분(또는 물질명) : 락토바실러스 불가리쿠스

기    타-

■ 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis)

정    의

사람 장관 등에서 유래한 균주로서 해당 종으로 확인된 균을 증식시킨 제조용 종균을 말한다. 그람양성, 호기성 젖산생성 간균이다.

성상/순도/함량 : 운동성이 있다.

검정성분(또는 물질명) : 락토바실러스 브레비스

기    타 -

■ 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius)

성분규격

본 품은 Lactobacillus salivarius chN-426 주를 증식시켜 동결건조한 제조용종균이다.

유래

원주는 1966년에 닭의 장내로부터 분리된 Lactobacillus salivarius chN-426 주이다.

성상

본 품은 통성혐기성의 그램 양성간균으로, 유당을 분해하여 황산을 생성하고 아미그다린 및 셀레비오스를 분해하지 않는다.

확인시험

① 1호 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 2일간 혐기배양할 때, 배지에 발육된 집락은 약간 불규칙～완전한 원, 반구형상으로 융기 또는 약간 융기해 있고, 표면 및 가장자리 모두 평활하거나 거칠며 유갈색～다갈색을 띤다.

② 1호 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 2일간 혐기배양한다. 슬라이드 글라스 위에 1백금이 양의 물을 떨어뜨리고, 여기에 백금선을 이용하여 배지에 생성된 집락을 채집하여 뒤섞어서 현탁하고 적당한 크기로 펴서 실온 또는 불기가 거의 없는 곳에서 건조시킨다. 그런 다음, 2～3회 화염 속을 통과시켜 고정된 것을 시료로 한다. 이 시료에 그램 염색법으로 시험할 때, 청자색～흑자색으로 물든 간균 또는 장간균을 인지할 수 있다.

③ 시험용 한천배지로서 9호 배지를 이용, 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 2일간 배양할 때, 균의 발육은 불량하다.

④ 시험용 한천배지로서 1호 배지를 이용, 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 2일간 배양할 때, 균의 발육을 인지할 수 있다.

⑤ 시험용 한천배지로서 1호 배지를 이용, 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 2일간 혐기배양한다. 배지에 생성된 집락을 이용, 황산생성능력시험으로 시험할 때, 황산 생성을 인지할 수 있다.

⑥ 시험용 한천배지로서 1호 배지를 이용, 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 2일간 혐기배양한다. 배지에 생성된 집락을 이용, 아미그다린 및 셀레비오스에 대해서 당분해능력시험법 제 1법으로 시험할 때, 시험결과는 모두 음성으로 나타난다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

「비피도박테리아 서모필럼(Ⅰ)」의 보존방법 및 계대의 기준을 준용한다.

■ 락토바실러스 애시도필러스(Ⅰ)(Lactobacillus acidophilus(Ⅰ))

성분규격

본 품은 Lactobacillus acidophilus ATCC 33199 주를 증식시켜 동결건조한 제조용 종균이다.

유래

원주는 1980년에 닭의 모래주머니로부터 분리된 Lactobacillus acidophilus ATCC 33199 주이다.

성상

본 품은 통성혐기성의 그램 양성구균으로, 유당을 분해하여 황산을 생성하고 아미그다린 및 셀레비오스를 분해한다.

확인시험

① 1호 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 2일간 혐기배양할 때, 배지에 발육된 집락은 약간 불규칙～완전한 원, 반구형상으로 융기 또는 약간 융기해 있고, 표면 및 가장자리 모두 평활하거나 거칠며 유갈색～다갈색을 띤다.

② 1호 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 2일간 혐기배양한다. 슬라이드 글라스 위에 1백금이 양의 물을 떨어뜨리고, 여기에 백금선을 이용하여 배지에 생성된 집락을 채집하여 뒤섞어서 현탁하고 적당한 크기로 펴서 실온 또는 불기가 거의 없는 곳에서 건조시킨다. 그런 다음, 2～3회 화염 속을 통과시켜 고정된 것을 시료로 한다. 이 시료에 그램 염색법으로 시험할 때, 청자색～흑자색으로 물든 간균 또는 장간균을 인지할 수 있다.

③ 시험용 한천배지로서 9호 배지를 이용, 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 2일간 배양할 때, 균의 발육은 불량하다.

④ 시험용 한천배지로서 1호 배지를 이용, 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 2일간 배양할 때, 균의 발육을 인지할 수 있다.

⑤ 시험용 한천배지로서 1호 배지를 이용, 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 2일간 혐기배양한다. 배지에 생성된 집락을 이용, 황산생성능력시험으로 시험할 때, 황산 생성을 인지할 수 있다.

⑥ 시험용 한천배지로서 1호 배지를 이용, 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 2일간 혐기배양한다. 배지에 생성된 집락을 이용, 아미그다린 및 셀레비오스에 대해서 당분해능력시험법 제 1법으로 시험할 때, 시험결과는 모두 양성으로 나타난다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

「엔테로코커스 훼시엄(Ⅰ)」의 보존방법 및 계대의 기준을 준용한다. 제제는 밀폐용기에 보존할 것.

■ 락토바실러스 애시도필러스(Ⅱ)(Lactobacillus acidophilus(Ⅱ))

성분규격

본 품은 Lactobacillus acidophilus GAL-2 주를 증식시켜 동결 또는 동결건조한 제조용 종균이다.

유래

원주는 1979년에 닭의 분으로부터 분리된 Lactobacillus acidophilus GAL-2 주이다.

성상

「락토바실러스 애시도필러스(Ⅰ)」의 성상과 동일.

확인시험

「락토바칠루스 애시도피루스(Ⅰ)」의 확인시험을 준용한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

「비피도박테리아 서모필럼(Ⅳ)」의 보존방법 및 계대의 기준을 준용한다. 제제는 밀폐용기에 보존할 것.

■ 락토바실러스 애시도필러스(Ⅲ)(Lactobacillus acidophilus(Ⅲ))

성분규격

본 품은 Lactobacillus acidophilus GBL-2 주를 증식시켜 동결 또는 동결건조한 제조용 종균이다.

유래

원주는 1979년에 소의 분으로부터 분리된 Lactobacillus acidophilus GBL-2 주이다.

성상

「락토바실러스 애시도필러스(Ⅰ)」의 성상과 동일.

확인시험

「락토바실러스 애시도필러스(Ⅰ)」의 확인시험을 준용한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

「비피도박테리아 서모필럼(Ⅳ)」의 보존방법 및 계대의 기준을 준용한다.

■ 락토바실러스 애시도필러스(Ⅳ)(Lactobacillus acidophilus(Ⅳ))

성분규격

본 품은 Lactobacillus acidophilus GSL-2 주를 증식시켜 동결 또는 동결건조한 제조용종균이다.

유래

원주는 1979년에 돼지의 대변으로부터 분리된 Lactobacillus acidophilus GSL-2 주이다.

성상

「락토바실러스 애시도필러스(Ⅰ)」의 성상과 동일.

확인시험

「락토바실러스 애시도필러스(Ⅰ)」의 확인시험을 준용한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

「비피도박테리아 서모필럼(Ⅳ)」의 보존방법 및 계대의 기준을 준용한다.

■ 락토바실러스 애시도필러스(Ⅴ)(Lactobacillus acidophilus(Ⅴ))

성분규격

본 품은 Lactobacillus acidophilus LAC-300 주를 증식시켜 동결한 제조용종균이다.

유래

원주는 1977년에 인간의 대변으로부터 분리된 Lactobacillus acidophilus LAC-300 주이다.

성상

「락토바실러스 애시도필러스(Ⅰ)」의 성상과 동일.

확인시험

「락토바실러스 애시도필러스(Ⅰ)」의 확인시험을 준용한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

「엔테로코커스 훼시엄(Ⅳ)」의 보존방법 및 계대의 기준을 준용한다.

■ 락토바실러스 애시도필러스(Ⅵ)(Lactobacillus acidophilus(Ⅵ))

성분규격

본 품은 Lactobacillus acidophilus M-13 주를 증식시켜 동결 또는 동결건조한 제조용종균이다.

유래

원주는 1970년에 돼지의 대변으로부터 분리된 Lactobacillus acidophilus M-13 주이다.

성상

「락토바실러스 애시도필러스(Ⅰ)」의 성상과 동일.

확인시험

「락토바실러스 애시도필러스(Ⅰ)」의 확인시험을 준용한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

「엔테로코커스 훼시엄(Ⅱ)」의 보존방법 및 계대의 기준을 준용한다.

■ 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei)

정    의

우유, 발효유, 사람 장관 등에서 유래한 균주로서 해당 종으로 확인된 균을 증식시킨 제조용 종균을 말한다. 그람양성, 동종발효(homofermentative), 통성혐기성 젖산생성 간균이다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 락토바실러스 카제이

기    타-

■ 락토바실러스 커바투스(Lactobacillus curvatus)

정    의

포유류 장관에서 유래한 내염성 균주로서 해당 종으로 확인된 균을 증식시킨 제조용 종균을 말한다. 그람양성, 호기성 젖산생성 간균이다.

성상/순도/함량 : 8%의 NaCl 농도에서 성장이 가능하다.

검정성분(또는 물질명) : 락토바실러스 커바투스

기    타-

■ 락토바실러스 크리스파투스(Lactobacillus crispatus)

정    의

사람, 닭 장관 등에서 유래한 균주로서 해당 종으로 확인된 균을 증식시킨 제조용 종균을 말한다. 그람양성, 통성혐기성 젖산생성 간균이다.

성상/순도/함량 : 갈락토오스, 포도당, 맥아당(엿당) 등 많은 당의 분해가 가능하다.

검정성분(또는 물질명) : 락토바실러스 크리스파투스

기    타-

■ 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei)

정    의

유제품, 사람 장관 등에서 유래한 균주로서 해당 종으로 확인된 균을 증식시킨 제조용 종균을 말한다. 그람양성, 통성혐기성 젖산생성 간균이다.

성상/순도/함량 : 내산성과 내담즙성을 가진다.

검정성분(또는 물질명) : 락토바실러스 파라카제이

기    타장관 내 유해미생물의 성장을 억제한다.

■ 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum)

정    의

발효식품 등에서 유래한 균주로서 해당 종으로 확인된 균을 증식시킨 제조용 종균을 말한다. 그람양성, 이종발효(heterofermentative), 통성혐기성 젖산생성 간균이다.

성상/순도/함량 : 내산성과 내담즙성을 가진다.

검정성분(또는 물질명) : 락토바실러스 퍼멘텀

기    타-

■ 락토바실러스 페롤렌스(Lactobacillus perolens)

정    의

음료류, 주류제조환경 등에서 유래한 균주로서 해당 종으로 확인된 균을 증식시킨 제조용 종균을 말한다. 그람양성, 이종발효(heterofermentative), 통성혐기성 젖산생성 간균이다.

성상/순도/함량 : 생육 최적온도는 28∼32℃이며, 최적 pH는 5.5∼6.5이다.

검정성분(또는 물질명) : 락토바실러스 페롤렌스

기    타-

■ 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus Plantarum)

성상

그람음성 간구균으로 Lactose를 분해하고, Rhamnose는 분해하지 않는다.

확인시험

① 24호 배지에 본품을 도포하고 36～38℃에서 2～3일간 혐기상태로 배양할 때 균의 발육을 인지할 수 있다.

② 24호 배지에 본품을 도포하고 36～38℃에서 2～3일간 배양한다. 슬라이드 그라스 위에 1백금이 양의 물을 떨어뜨리고, 여기에 백금선을 이용하여 배지에 생성된 집락을 취하여 뒤섞어서 현탁하고 적당한 크기로 펴서 실온 또는 불기가 거의 없는 곳에서 건조시킨다. 그런 다음 2～3회 화염속을 통과시켜 고정된 것을 시료로 한다. 이 시료에 그람염색법으로 시험할 때 청자색 또는 흑자색을 인지할 수 있다.

③당분해 시험을 실시하였을 때 Fructose, Galactose, Glucose, Lactose, Mannose, Ribose, Sucrose, Raffinose는 양성을 나타내고, Rhamnose는 음성을 나타낸다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

차광된 밀폐용기에 보존할 것

■ 락토바실러스 헬베티쿠스(Lactobacillus helveticus)

정    의

발효유, 치즈 등에서 유래한 균주로서 해당 종으로 확인된 균을 증식시킨 제조용 종균을 말한다. 그람양성, 동종발효(homofermentative), 미호기성 또는 통성혐기성 젖산생성 간균이다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 락토바실러스 헬베티쿠스

기    타치즈의 쓴 맛을 감소시켜 풍미를 증진시킨다.

■ 락토코쿠스 락티스(Lactococcus lactis)

정    의

해당 종으로 확인된 균을 증식시킨 제조용 종균을 말한다. 그람양성, 통성혐기성, 젖산생성 연쇄상구균이다.

성상/순도/함량 : -

확인시험

① MRS 배지에 본품을 도포하고 37℃에서 2일간 혐기상태로 배양할 때 균의 발육을 인지할 수 있다.

② MRS 배지에 본품을 도포하고 37℃에서 2일간 배양한다. 슬라이드 그라스 위에 1백금이 양의 물을 떨어뜨리고, 여기에 백금선을 이용하여 배지에 생성된 집락을 취하여 뒤섞어서 현탁하고 적당한 크기로 펴서 실온 또는 불기가 거의 없는 곳에서 건조시킨다. 그런 다음 2～3회 화염 속을 통과시켜 고정된 것을 시료로 한다. 이 시료에 그람 염색법으로 시험할 때 청자색 또는 흑자색을 인지할 수 있다.

③ 시험용 한천배지로서 MRS 배지를 이용, 배지에 본품을 도포하고 37℃에서 2일간 혐기상태로 배양할 때 균의 발육을 인지할 수 있다. 

④당분해 시험을 실시하였을 때 Galactose, Glucose, Fructose, Mannose, Esculin, Salicin, Cellobiose는 양성을 나타내고, Melezitose, Amygdalin, Dulcitol, Inositol, Mannitol, Sorbitol은 음성을 나타낸다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

원주는 MRS 배지에서 계대되어 ?80℃에서 동결보존하거나 동결건조 후 4℃에서 보존된다. 본 품은 원주를 동 배지에서 증식하고 세분화하여 ?80℃에서 동결보존하거나 동결건조 후 4℃에서 보존할 것. 원주의 계대는 3대 이내로 하고 본 품은 계대해서는 안 된다. 제제는 밀폐용기에 보존할 것.

■ 락토코쿠스 락티스 크레모리스(Lactococcus lactis subsp. cremoris)

정의

본 품은 락토코쿠스 락티스 크레모리스(Lactococcus lactis subsp. cremoris)를 증식시킨 제조용 종균을 말한다.

성분규격

  성상

본 품은 통성혐기성의 그램 양성구균으로, 당을 분해하여 젖산을 생성한다.

  확인시험

① TSB배지에 본 품을 도포하고 26℃에서 2일간 혐기배양 할 때, 배지에 발육된 집락은 약간 불규칙∼완전한 원에서 반구형상을 띤다.

② TSB배지에 본 품을 도포하고 26℃에서 2일간 혐기배양 한다. 슬라이드 글라스 위에 1백금이 양의 물을 떨어뜨리고, 여기에 백금선을 이용하여 배지에 생성된 집락을 채집하여 뒤섞어서 현탁하고 적당한 크기로 펴서 실온 또는 불기가 거의 없는 곳에서 건조시킨다. 그런 다음, 2∼3회 화염 속을 통과시켜 고정된 것을 시료로 한다. 이 시료에 그램 염색법으로 시험할 때, 청자색∼흑자색으로 물든 구균을 인지 할 수 있다.

③ TSB배지를 이용, 배지에 본 품을 도포하고 26℃에서 2일간 배양 할 때, 균의 발육을 인지할 수 있다.

  균주검증방법(16S rRNA 염기서열에 의한 동정)

① 시료를 TSB배지에 접종한 후, 26℃에서 2일간 혐기배양 한다.

② 적당량의 집락을 취하여 Genomic DNA Prep Kit를 이용함으로써 미생물 내에 존재하는 genomic DNA를 추출하여 동정에 이용이 되는 16s rRNA를 PCR 방법을 이용하여 증폭한 뒤 정제 과정을 거친 PCR product의 염기서열을 분석한다.

③ 염기서열 분석을 통해 얻은 균주의 염기서열은 GeneBank에 있는 표준균주의 염기서열과 비교분석함으로써 99% 이상 상동성을 나타내는 것을 Lactococcus lactis subsp. cremoris로 인정한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

원주는 TSB배지에서 계대되어 ?80℃에서 동결보존되거나 또는 동결건조 후 4℃에서 보존된다. 본 품은 원주를 동 배지에서 증식하고 세분화하여 동결건조 후 4℃에서 보존할 것. 원주의 계대는 3대 이내로 하고 본 품은 계대해서는 안 된다. 제제는 밀폐용기에 보존할 것.

■ 로돕슈도모나스 캡슐레이타(Rhodopseudomonas capusulata)

정    의

수산양식용 사료에 활용되는 광합성세균으로서 DS-EBN-7주를 증식시킨 제조용 종균을 말한다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 로돕슈도모나스 캡슐레이타 (DS-EBN-7)

기    타-

■ 바실러스 렌투스(Bacillus lentus)

정    의

호알칼리세균(alkalophilic bacteria)으로서 해당 종으로 확인된 균을 증식시킨 제조용 종균을 말한다. 그람양성균으로서 중온성(mesophilic, 20∼45℃), 호기성 간균이다.

성상/순도/함량 : 알칼리 환경에서 사는 세균으로서 생육 최적 pH는 9～10이다. 산업적으로 중요한 alkaline protease를 생산한다.

검정성분(또는 물질명) : 생산 효소, 바실러스 렌투스

기    타-

■ 바실러스 리체니포미스(Bacillus licheniformis)

정    의

효소를 생산하기 위하여 주로 사용되는 균주로서 해당 종으로 확인된 균을 증식시킨 제조용 종균을 말한다. 그람양성균으로서 중온성(mesophilic, 20∼45℃), 통성혐기성 간균이다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 생산 효소, 바실러스 리체니포미스

기    타-

■ 바실러스 서브틸리스(고초균, Ⅰ)(Bacillus subtilis(Ⅰ))

성분규격

본 품은 Bacillus subtilis BN 주를 증식시켜 동결한 제조용 종균이다.

유래

원주는 1928년에 삶은 콩을 발효한 식품으로부터 분리된 Bacillus subtilis BN 주이다.

성상

본 품은 그램 양성간균으로, 아포를 형성하며 혐기조건하에서 발육하지 않는다.

확인시험

① 4호 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 1～2일간 배양한다. 슬라이드 글라스 위에 1백금이 양의 물을 떨어뜨리고, 여기에 백금선을 이용하여 배지에 생성된 집락을 채집하여 뒤섞어서 현탁하고 적당한 크기로 펴서 실온 또는 불기가 거의 없는 곳에서 건조시킨다. 그런 다음, 2～3회 화염 속을 통과시켜 고정된 것을 시료로 한다. 이 시료에 그램 염색법으로 시험할 때, 청자색～흑자색으로 물든 간균을 인지할 수 있다.

② 4호 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 3～7일간 배양한다. 슬라이드 글라스 위에 1백금이 양의 물을 떨어뜨리고, 여기에 백금선을 이용하여 배지에 생성된 집락을 채집하여 뒤섞어서 현탁하고 적당한 크기로 펴서 실온 또는 불기가 거의 없는 곳에서 건조시킨다. 그런 다음, 2～3회 화염 속을 통과시켜 고정된 것을 시료로 한다. 이 시료에 아포염색법으로 시험할 때, 담녹색～녹색으로 물든 아포를 인지할 수 있다.

③ 4호 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 1～2일간 배양한다. 배지에 생성된 집락을 채집해 7호 배지 10㎖에 접종하고, 36～38℃에서 2～3일간 혐기배양할 때, 균의 발육을 인지할 수 없다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

원주는 가열처리를 시행한 누룩 및 대두박, 젤라틴 등을 포함한 배지에서 계대되어 -80℃에서 동결 보존된다. 본 품은 원주를 같은 배지에서 증식하고 세분화하여 -80℃에서 동결 보존할 것. 원주의 계대는 10대 이내로 하고 본 품은 계대해서는 안 된다. 제제는 밀폐용기에 보존할 것. 

■ 바실러스 서브틸리스(Ⅱ)(Bacillus subtilis(Ⅱ))

성분규격

본 품은 Bacillus subtilis C-3102 株를 증식시켜 동결한 제조용 종균이다.

유래

원주는 1984년에 돼지의 대변으로부터 분리된 Bacillus subtilis C-3102 주이다.

성상

「바실러스 서브틸리스(Ⅰ)」의 성상과 동일.

확인시험

① 4호 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 1～2일간 배양한다. 슬라이드 글라스 위에 1백금이 양의 물을 떨어뜨리고, 여기에 백금선을 이용하여 배지에 생성된 집락을 채집하여 뒤섞어서 현탁하고 적당한 크기로 펴서 실온 또는 불기가 거의 없는 곳에서 건조시킨다. 그런 다음, 2～3회 화염 속을 통과시켜 고정된 것을 시료로 한다. 이 시료에 그램 염색법으로 시험할 때, 청자색～흑자색으로 물든 간균을 인지할 수 있다.

② 4호 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 3～7일간 배양한다. 슬라이드 글라스 위에 1백금이 양의 물을 떨어뜨리고, 여기에 백금선을 이용하여 배지에 생성된 집락을 채집하여 뒤섞어서 현탁하고 적당한 크기로 펴서 실온 또는 불기가 거의 없는 곳에서 건조시킨다. 그런 다음, 2～3회 화염 속을 통과시켜 고정된 것을 시료로 한다. 이 시료에 아포염색법으로 시험할 때, 담녹색～녹색으로 물든 아포를 인지할 수 있다.

③ 4호 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 1～2일간 배양한다. 배지에 생성된 집락을 채집해 7호배지 10㎖에 접종하고, 36～38℃에서 2～3일간 혐기배양할 때, 균의 발육을 인지할 수 없다.

④ 6호 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 1일 배양할 때, 회백색, 원추형상의 특유의 집락을 80% 이상 검출할 수 있다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

원주는 6호 배지에서 계대되어 -80℃에서 동결 보존된다. 본 품은 원주를 동 배지에서 증식하고 세분화하여 -80℃에서 동결 보존할 것. 본 품은 계대해서는 안 된다. 제제는 밀폐용기에 보존할 것. 

■ 바실러스 서브틸리스(Ⅲ)(Bacillus subtilis(Ⅲ))

성분규격

본 품은 Bacillus subtilis DB9011 주를 증식시켜 동결한 제조용종균이다.

유래

원주는 1990년에 토양으로부터 분리된 Bacillus subtilis DB9011 주이다.

성상

「바실러스 서브틸리스(Ⅰ)」의 성상과 동일.

확인시험

「바실러스 서브틸리스(Ⅰ)」의 확인시험을 준용한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

원주는 4호 배지에서 계대되어 동결건조 후 -80℃에서 보존된다. 본 품은 원주를 4호 배지에서 증식하고 세분화하여 -80℃에서 동결보존할 것. 본 품은 계대해서는 안 된다. 제제는 밀폐용기에 보존할 것. 

■ 바실러스 서브틸리스(Ⅳ)(Bacillus subtilis(Ⅳ))

성분규격

본 품은 Bacillus subtilis NT 주를 증식시켜 동결건조한 제조용종균이다.

유래

원주는 1985년에 삶은 콩을 발효한 식품으로부터 분리된 Bacillus subtilis NT 주이다.

성상

「바실러스 서브틸리스(Ⅰ)」의 성상과 동일.

확인시험

「바실러스 서브틸리스(Ⅰ)」의 확인시험을 준용한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

원주는 4호 배지에서 계대되어 동결 건조 후 4℃에서 보존된다. 본 품은 원주를 동 배지에서 증식하고 세분화하여 동결 건조 후 4℃에서 보존할 것. 원주의 계대는 1대로 한정하기로 하고 본 품은 계대해서는 안 된다. 제제는 밀폐용기에 보존할 것. 

■ 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)

성분규격

본 품은 Bacillus cereus Toyoi 주를 증식시켜 동결한 제조용 종균이다.

유래

원주는 1968년에 토양으로부터 분리된 Bacillus cereus Toyoi 주이다.

성상

「바실러스  세레우스(Ⅰ)」의 성상과 동일.

확인시험

「바실러스 세레우스(Ⅰ)」의 확인시험을 준용한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

원주는 칸텐, 펩톤, 고기엑기스 등을 포함한 배지에서 계대되어 동결건조 후 4℃에서 보존된다. 본 품은 동 배지에서 증식하고 세분화하여 -80℃에서 동결 보존할 것. 본 품은 계대해서는 안 된다. 제제는 빛이 차단된 밀폐용기에 보존할 것. 

■ 바실러스 코아글란스(Bacillus coagulans)

성분규격

본 품은 Bacillus coagulans P-22 주를 증식시킨 제조용 종균이다.

유래

원주는 1949년에 녹맥아로부터 분리된 Bacillus coagulans P-22 주이다.

성상

본 품은 통성혐기성의 그램 양성간균으로, 아포를 형성하고 유당을 분해하며 황산을 생성한다.

확인시험

① 5호 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 2～3일간 배양한다. 슬라이드 글라스 위에 1백금이 양의 물을 떨어뜨리고, 여기에 백금선을 이용하여 배지에 생성된 집락을 취하여 뒤섞어서 현탁하고 적당한 크기로 펴서 실온 또는 불기가 거의 없는 곳에서 건조시킨다. 그런 다음, 2～3회 화염 속을 통과시켜 고정된 것을 시료로 한다. 이 시료에 그램 염색법으로 시험할 때, 청자색～흑자색으로 물든 간균을 인지할 수 있다.

② 5호배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 3～7일간 배양한다. 슬라이드 글라스 위에 1백금이 양의 물을 떨어뜨리고, 여기에 백금선을 이용하여 배지에 생성된 집락을 채집하여 뒤섞어서 현탁하고 적당한 크기로 펴서 실온 또는 불기가 거의 없는 곳에서 건조시킨다. 그런 다음, 2～3회 화염 속을 통과시켜 고정된 것을 시료로 한다. 이 시료에 아포염색법으로 시험할 때, 담녹색～녹색으로 물든 아포를 인지할 수 있다.

③ 시험용 한천배지로서 5호 배지를 이용, 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서  2～3일간 배양한다. 배지에 생성된 집락을 이용, 황산생성능력시험법으로 시험할 때, 황산 생성을 인지할 수 있다. 또한, 황산생성능력시험법에서의 배양은 3일간 이루어진다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

원주는 칸텐, 효모액기스, 카제인제 펩톤 등을 포함한 배지에서 계대되어 동결건조후 4℃에서 보존된다. 본 품은 동 배지에서 증식하고 세분화하여 4℃에서 보존할 것. 원주의 계대는 1대로 한정하고 본 품은 계대해서는 안 된다. 제제는 기밀용기에 보존할 것.

■ 바실러스 폴리퍼멘티쿠스(Bacillus polyfermenticus)

정    의

메주에서 유래하고, 해당 종으로 확인된 균을 증식시킨 제조용 종균을 말한다. 그람양성, 호기성 간균이다.

성상/순도/함량 : 아포를 형성한다. 집락의 색상은 옅은 황색이다. 분류학상 B. subtilis와 상당히 유사하지만 다른 점은 B. polyfermenticus는 유당을 분해하는 능력이 있고 포도당과 유당에서 초산과 젖산을 더욱 많이 생산한다.

검정성분(또는 물질명) : 바실러스 폴리퍼멘티쿠스

기    타-

■ 바실러스 푸밀러스(Bacillus pumilus)

정    의

전통 발효식품 제조를 위한 발효균주로서 해당 종으로 확인된 균을 증식시킨 제조용 종균을 말한다. 그람양성, 호기성 간균이다.

성상/순도/함량 : 아포를 형성한다.

검정성분(또는 물질명) : 바실러스 푸밀러스

기    타-

■ 비피도박테리움 애니멀리스 락티스(Bifidobacterium animalis ssp. lactis)

정의

   해당 종으로 확인된 균을 증식시킨 제조용 종균을 말한다. 그람양성, 편성혐기성, 젖산생성 간균이다.

성분규격

유래

원주는 2019년에 고양이의 장내로부터 분리된 Bifidobacterium animalis ssp. lactis AF주이다.

성상

본 품은 편성혐기성의 그램 양성간균으로 라피노오스(Raffinose)를 분해하지만, 키시로오스(Xylose)는 분해하지 않는다.

확인시험

   ① MRS 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 2～3일간 혐기배양 할 때, 배지에 발육된 집락은 완전한 원, 반구형상으로 융기해 있고 표면 및 가장자리 모두 평탄하고 매끄러우며 유갈색~갈색을 띤다.

   ② MRS 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 2～3일간 배양한다. 슬라이드 글라스 위에 1백금이 양의 물을 떨어뜨리고, 여기에 백금선을 이용하여 배지에 생성된 집락을 채집하여 뒤섞어서 현탁하고 적당한 크기로 펴서 실온 또는 불기가 거의 없는 곳에서 건조시킨다. 그런 다음 2～3회 화염 속을 통과시켜 고정된 것을 시료로 한다. 이 시료에 그램 염색법으로 시험할 때, 청자색～흑자색으로 물든 곤봉형상을 띠는 간균을 인지할 수 있다.

   ③ 시험용 한천배지로서 MRS 배지를 이용, 배지에 본 품을 도포하고, 36～38℃에서2～3일간 혐기배양 한다. 키시로오스 및 라피노오스에 대해서 API 키트를 이용한 당분해능력시험법으로 시험할 때, 시험결과는 키시로오스는 음성, 라피노오스는 양성으로 나타난다.

   ④ 시험용 한천배지로서 MRS 배지를 이용, 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 2～3일간 호기배양할 때, 균의 발육을 인지할 수 없다.

균주검증방법(API 키트를 활용한 당분해능력측정 및 16s rRNA 염기서열에 의한 동정)

   ① 시료를 MRS배지에 접종한 후, 36∼38℃에서 2일간 혐기배양 한다.

   ② 적당량의 균주 배양액을 취하여 API 키트를 이용한 당분해능력을 측정하여, 키시로오스는 음성, 라피노오스는 양성으로 나타나는 것을 확인한다.

   ③ 당분해능력측정 후 적당량의 균주를 취하여 Genomic DNA Prep Kit를 이용함으로써 미생물 내에 존재하는 genomic DNA를 추출하여 미생물 동정에 이용이 되는 16s rRNA부분의 범용 프라이머를 사용하여 일반적인 PCR 방법으로 증폭한 뒤 정제 과정을 거친 PCR product의 염기서열을 분석한다.

   ④ 염기서열 분석을 통해 얻은 균주의 염기서열은 BlastN을 이용하여 NCBI GeneBank상의 표준균주의 염기서열과 비교분석함으로써 99% 이상 상동성을 나타내는 것을 Bifidobacterium animalis ssp. lactis로 인정한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

원주는 MRS 배지에서 계대되어 -80℃에서 동결보존 하거나 동결건조 후 4℃에서 보존한다. 본 품은 원주를 MRS 배지에서 증식하고 세분화하여 -80℃에서 동결보존하거나 동결건조 후 4℃에서 보존한다. 원주의 계대는 3대 이내로 하고 본 품을 계대해서는 안 된다. 제제는 밀폐용기에 보존한다.

■ 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum)

정    의

사람에서 유래한 균주로서 해당 종으로 확인된 균을 증식시킨 제조용 종균을 말한다. 그람양성, 편성혐기성, 젖산생성 간균이다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 비피도박테리움 롱검

기    타-

■ 비피도박테리움 비피덤(Bifidobacterium bifidum)

정    의

사람에서 유래한 균주로서 해당 종으로 확인된 균을 증식시킨 제조용 종균을 말한다. 그람양성, 편성혐기성, 젖산생성 간균이다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 비피도박테리움 비피덤

기    타-

■ 비피도박테리움 서모필럼(Ⅰ)(Bifidobacterium thermophilum(Ⅰ))

성분규격

본 품은 Bifidobacterium thermophilum chN-118 주를 증식시켜 동결건조한 제조용종균이다.

유래

원주는 1966년에 닭의 장내로부터 분리된 Bifidobacterium thermophilum chN-118 주이다.

성상

본 품은 편성혐기성의 그램 양성간균으로 라피노오스를 분해하지만, 키시로오스는 분해하지 않는다.

확인시험

① 1호 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 2～3일간 혐기배양할 때, 배지에 발육된 집락은 완전한 원, 반구형상으로 융기해 있고 표면 및 가장자리 모두 평탄하고 매끄러우며 유갈색～다갈색을 띤다.

② 1호 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 2～3일간 배양한다. 슬라이드 글라스 위에 1백금이 양의 물을 떨어뜨리고, 여기에 백금선을 이용하여 배지에 생성된 집락을 채집하여 뒤섞어서 현탁하고 적당한 크기로 펴서 실온 또는 불기가 거의 없는 곳에서 건조시킨다. 그런 다음 2～3회 화염 속을 통과시켜 고정된 것을 시료로 한다. 이 시료에 그램 염색법으로 시험할 때, 청자색～흑자색으로 물든 곤봉형상, 활형상, V자형상 및 Y자형상을 띠는 간균을 인지할 수 있다.

③ 시험용 한천배지로서 1호 배지를 이용, 배지에 본 품을 도포하고, 36～38℃에서 2～3일간 혐기배양한다. 키시로오스 및 라피노오스에 대해서 당분해능력시험법 제 1법으로 시험할 때, 시험결과는 키시로오스는 음성, 라피노오스는 양성으로 나타난다.

④ 시험용 한천배지로서 1호 배지를 이용, 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 2～3일간 배양할 때, 균의 발육을 인지할 수 없다. 

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

원주는 1호 배지에서 계대되어 -80℃에서 동결보존되거나 또는 동결건조 후 4℃에서 보존된다. 본 품은 원주를 동 배지에서 증식하고 세분화하여 동결건조 후 4℃에서 보존할 것. 원주의 계대는 3대 이내로 하고 본 품은 계대해서는 안 된다. 제제는 밀폐용기에 보존할 것. 

■ 비피도박테리움 서모필럼(Ⅱ) (Bifidobacterium thermophilum(Ⅱ))

성분규격

본 품은 Bifidobacterium thermophilum S-501 주를 증식시켜 동결한 제조용종균이다.

유래

원주는 1985년에 돼지의 대변으로부터 분리된 Bifidobacterium thermophilum S-501 주이다.

성상

「비피도박테리움  서모필럼(Ⅰ)」의 성상과 동일.

확인시험

「비피도박테리움  서모필럼(Ⅰ)」의 확인시험을 준용한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

「엔테로코커스 훼시엄(Ⅳ)」의 보존방법 및 계대의 기준을 준용한다. 제제는 밀폐용기에 보존할 것. 

■ 비피도박테리움 서모필럼(Ⅲ) (Bifidobacterium thermophilum(Ⅲ))

성분규격

본 품은 Bifidobacterium thermophilum SS-4 주를 증식시켜 동결건조한 제조용종균이다.

유래

원주는 1966년에 돼지의 장내로부터 분리된 Bifidobacterium thermophilum SS-4 주이다.

성상

「비피도박테리움 서모필럼(Ⅰ)」의 성상과 동일.

확인시험

「비피도박테리움 서모필럼(Ⅰ)」의 확인시험을 준용한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

「비피도박테리아 서모필럼(Ⅰ)」의 보존방법 및 계대의 기준을 준용한다.

■ 비피도박테리움 서모필럼(Ⅳ) (Bifidobacterium thermophilum(Ⅳ))

성분규격

본 품은 Bifidobacterium thermophilum WBL-4R 주를 증식시켜 동결 또는 동결건조한 제조용 종균이다.

유래

원주는 1979년에 소의 대변으로부터 분리된 Bifidobacterium thermophilum WBL-4R 주이다.

성상

「비피도박테리움  서모필럼(Ⅰ)」의 성상과 동일.

확인시험

「비피도박테리움  서모필럼(Ⅰ)」의 확인시험을 준용한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

원주는 1호 배지에서 계대되어 -80℃에서 동결보존 하거나 동결건조 후 4℃에서 보존한다. 본 품은 원주를 동 배지에서 증식하고 세분화하여 -80℃에서 동결보존하거나 동결건조 후 4℃에서 보존할 것. 원주의 계대는 3대 이내로 하고 본 품은 계대해서는 안 된다. 제제는 밀폐용기에 보존할 것.

■ 비피도박테리움 슈도롱검(Ⅰ) (Bifidobacterium pseudolongum(Ⅰ))

성분규격

본 품은 Bifidobacterium pseudolongum GSL-3 주를 증식시켜 동결 또는 동결건조한 제조용종균이다.

유래

원주는 1979년에 돼지의 대변으로부터 분리된 Bifidobacterium pseudolongum GSL-3 주이다.

성상

본 품은 편성혐기성의 그램 양성간균으로, 키시로오스 및 라피노오스를 분해한다.

확인시험

① 1호 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 2～3일간 혐기배양할 때, 배지에 발육된 집락은 완전한 원, 반구형상으로 융기해 있고 표면 및 가장자리 모두 평탄하고 매끄러우며 유갈색～다갈색을 띤다.  

② 1호 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 2～3일간 배양한다. 슬라이드 글라스 위에 1백금이 양의 물을 떨어뜨리고, 여기에 백금선을 이용하여 배지에 생성된 집락을 채집하여 뒤섞어서 현탁하고 적당한 크기로 펴서 실온 또는 불기가 거의 없는 곳에서 건조시킨다. 그런 다음, 2～3회 화염 속을 통과시켜 고정된 것을 시료로 한다. 이 시료에 그램 염색법으로 시험할 때, 청자색～흑자색으로 물든 곤봉형상의 간균을 인지할 수 있다.

③ 시험용 한천배지로서 1호 배지를 이용, 배지에 본 품을 도포하고, 36～38℃에서 2～3일간 혐기배양한다. 키시로오스 및 라피노오스에 대해서 당분해능력시험법 제 1법으로 시험할 때, 시험결과는 모두 양성으로 나타난다.

④ 시험용 한천배지로서 1호 배지를 이용, 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 2～3일간 호기배양할 때, 균의 발육을 인지할 수 없다. 

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

「비피도박테리움 서모필럼(Ⅳ)」의 보존방법 및 계대의 기준을 준용한다. 제제는 밀폐용기에 보존할 것.

■ 비피도박테리움 슈도롱검(Ⅱ) (Bifidobacterium pseudolongum(Ⅱ))

성분규격

본 품은 Bifidobacterium pseudolongum M-602 주를 증식시켜 동결한 제조용종균이다.

유래

원주는 1985년에 닭의 분으로부터 분리된 Bifidobacterium pseudolongum M-602 주이다.

성상

「비피도박테리움 슈도롱검(Ⅰ)」의 성상과 동일.

확인시험

「비피도박테리움 슈도롱검(Ⅰ)」의 확인시험을 준용한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

「엔테로코커스 훼시엄(Ⅳ)」의 보존방법 및 계대의 기준을 준용한다. 제제는 밀폐용기에 보존할 것

■ 비피도박테리움 인판티스(Bifidobacterium infantis)

정    의

사람에서 유래한 균주로서 해당 종으로 확인된 균을 증식시킨 제조용 종균을 말한다. 그람양성, 편성혐기성, 젖산생성 간균이다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 비피도박테리움 인판티스

기    타그람양성, 혐기성 간균으로 운동성이 없고 포자를 생성하지 않음. 주로 영유아의 장관에서 발견, 장관 내 유해미생물의 성장 억제

■ 엔테로코커스 락티스(Enterococcus lactis)

정    의

해당 종으로 확인된 균을 증식시킨 제조용 종균을 말한다. 그람양성, 통성혐기성, 젖산생성 구균이다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 엔테로코커스 락티스

기    타-

■ 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus)

정    의

해당 종으로 확인된 균을 증식시킨 제조용 종균을 말한다. 그람양성, 통성혐기성, 젖산생성 구균이다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 엔테로코커스 써모필러스

기    타-

■ 엔테로코커스 훼시엄(Ⅰ)(Enterococcus faecium(Ⅰ))

성분규격

본 품은 Enterococcus faecium ATCC 19434 주를 증식시켜 동결건조한 제조용종균이다.

유래

원주는 1979년에 소의 장내에서 분리된 Enterococcus faecium ATCC 19434 주이다.

성상

본 품은 통성혐기성의 그램 양성구균으로, 유당을 분해하여 황산을 생성하고 아라비노오스 및 멜리비오스를 분해하며 멜티토오스를 분해하지 않는다.

확인시험

① 3호 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 2일간 배양할 때, 배지에 발육된 집락은 원형으로서 융기하며 표면이 평탄하고 매끄러우며 유백색을 띤다.

② 3호 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 2일간 배양한다. 슬라이드 글라스 위에 1 백금이 양의 물을 떨어뜨리고, 여기에 백금선을 이용하여 배지에 생성된 집락을 채집하여 뒤섞어서 현탁하고 적당한 크기로 펴서 실온 또는 불기가 거의 없는 곳에서 건조시킨다. 그런 다음, 2～3회 화염 속을 통과시켜 고정된 것을 시료로 한다. 이 시료를 그램 염색법으로 시험할 때, 청자색～흑자색으로 물든 구균을 인지할 수 있다.

③ 시험용 한천배지로서 3호 배지를 이용, 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 2일간 배양한다. 배지에 생성된 집락을 이용, 황산생성능력시험법으로 시험할 때, 황산 생성을 인지할 수 있다.

④ 시험용 한천배지로서 9호 배지를 이용, 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 2일간 혐기배양 또는 호기배양할 때, 어느 경우에서나 균의 발육을 인지할 수 있다.

⑤ 시험용 한천배지로서 3호 배지를 이용, 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 2일간 배양한다. 배지에 생성된 집락을 이용, 아라비노오스, 멜리비오스 및 멜티토오스에 대해서 당분해능력시험법 제 2법으로 시험할 때, 시험결과는 아리비노오스 및 멜리비오스는 양성, 멜티토오스는 음성으로 나타난다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

원주는 칸텐, 포도당, 쇠고기엑기스, 펩톤 등을 함유한 배지에서 계대되어 동결건조 후 4℃에서 보존된다. 본 품은 포도당, 쇠고기엑기스, 펩톤 등을 함유한 배지에서 증식하고 세분화하여 동결건조 후 4℃에서 보존할 것. 원주의 계대는 5대 이내로 하고 본 품은 계대해서는 안 된다. 제제는 밀폐용기에 보존할 것

■ 엔테로코커스 훼시엄(Ⅱ) (Enterococcus faecium(Ⅱ))

성분규격

본 품은 Enterococcus faecium 129 BIO 3B 주를 증식시켜 동결한 제조용종균이다.

유래

원주는 1949년에 요구르트로부터 분리된 Enterococcus faecium 129 BIO 3B 주이다.

성상

「엔테로코커스 훼시엄(Ⅰ)」의 성상과 동일.

확인시험

「엔테로코커스 훼시엄(Ⅰ)」의 확인시험을 준용한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

원주는 쇠고기, 소의 간, 포도당 등을 포함한 배지에서 계대되어 -80℃에서 동결 보존된다. 본 품은 원주를 같은 배지에서 증식하고 세분화하여 -20℃에서 동결 보존할 것. 원주의 계대는 2대 이내로 하고 본 품은 계대해서는 안 된다.

■ 엔테로코커스 훼시엄(Ⅲ) (Enterococcus faecium(Ⅲ))

성분규격

본 품은 Enterococcus faecium BIO-4R 주를 증식시킨 제조용종균이다.

유래

원주는 1929년에 사람의 장내로부터 분리된 Enterococcus faecium BIO 주에 항균성물질에 대한 내성화를 시행한 Enterococcus faecium BIO-4R 주이다.

성상

「엔테로코커스 훼시엄(Ⅰ)」의 성상과 동일.

확인시험

① 3호 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 5일간 배양할 때, 배지에 발육된 집락은 원형으로서 융기하며 표면이 평탄하고 매끄러우며 유백색을 띤다.

② 3호 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 5일간 배양한다. 슬라이드 글라스 위에 1 백금이 양의 물을 떨어뜨리고, 여기에 백금선을 이용하여 배지에 생성된 집락을 채집하여 뒤섞어서 현탁하고 적당한 크기로 펴서 실온 또는 불기가 거의 없는 곳에서 건조시킨다. 그런 다음, 2～3회 화염 속을 통과시켜 고정된 것을 시료로 한다. 이 시료에 그램 염색법으로 시험할 때, 청자색～흑자색으로 물든 구균을 인지할 수 있다.

③ 시험용 한천배지로서 3호 배지를 이용, 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 5일간 배양한다. 배지에 생성된 집락을 이용, 유산생성능력시험법으로 시험할 때, 유산 생성을 인지할 수 있다.

④ 시험용 한천배지로서 9호 배지를 이용, 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 5일간 혐기배양 또는 호기배양할 때, 어느 경우에서나 균의 발육을 인지할 수 있다.

⑤ 시험용 한천배지로서 3호 배지를 이용, 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 5일간 배양한다. 배지에 생성된 집락을 이용, 아라비노오스, 멜리비오스 및 멜티토오스에 대해서 당분해능력시험법 제 2법으로 시험할 때, 시험결과는 아라비노오스 및 멜리비오스는 양성, 멜티토오스는 음성으로 나타난다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

원주는 침강제탄산칼슘, 유당, 펩톤 등을 포함한 배지에서 계대되어 동결건조 후 -80℃에서 보존된다. 본 품은 같은 배지에서 증식하고 세분화하여 4℃에서 보존할 것.  원주의 계대는 2대 이내로 하고 본 품은 계대해서는 안 된다.

제제는 밀폐용기에 보존할 것

■ 엔테로코커스 훼시엄(Ⅳ) (Enterococcus faecium(Ⅳ))

성분규격

본 품은 Enterococcus faecium FA-5 주를 증식시켜 동결한 제조용종균이다.

유래

원주는 1975년에 사람의 대변으로부터 분리된 Enterococcus faecium FA-5 주이다.

성상

「엔테로코커스 훼시엄(Ⅰ)」의 성상과 동일.

확인시험

「엔테로코커스 훼시엄(Ⅰ)」의 확인시험을 준용한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

원주는 효모엑기스, 포도당, 펩톤 등을 포함한 배지에서 계대되어 -80℃에서 동결 보존된다. 본 품은 원주를 같은 배지에서 증식하고 세분화하여 -80℃에서 동결 보존할 것. 원주의 계대는 2대 이내로 하고 본 품은 계대해서는 안 된다.

제제는 밀폐용기에 보존할 것.

■ 클로스트리듐 브티리컴(Ⅰ) (Clostridium butyricum(Ⅰ))

성분규격

본 품은 Clostridium butyricum MIYAIRI 주를 증식시켜 동결 또는 동결건조한 제조용종균이다.

유래

원주는 1933년에 사람의 장내로부터 분리된 Clostridium butyricum MIYAIRI 주이다.

성상

본 품은 편성혐기성의 그램 양성간균으로, 아포를 형성하고 포도당을 분해하여 낙산을 생성한다.

확인시험

① 1호 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 1～2일간 혐기배양한다. 슬라이드 글라스 위에 1백금이 양의 물을 떨어뜨리고, 여기에 백금선을 이용하여 배지에 생성된 집락을 취하여 뒤섞어서 현탁하고 적당한 크기로 펴서 실온 또는 불기가 거의 없는 곳에서 건조시킨다. 그런 다음, 2～3회 화염 속을 통과시켜 고정한 것을 시료로 한다. 이 시료를 그램 염색법으로 시험할 때, 청자색～흑자색으로 물든 간균을 인지할 수 있다.

② 1호 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 2～7일간 혐기배양한다. 슬라이드 글라스 위에 1백금이 양의 물을 떨어뜨리고, 여기에 백금선을 이용하여 배지에 생성된 집락을 취하여 뒤섞어서 현탁하고 적당한 크기로 펴서 실온 또는 불기가 거의 없는 곳에서 건조시킨다. 그런 다음, 2～3회 화염 속을 통과시켜 고정한 것을 시료로 한다. 이 시료를 아포염색법으로 시험할 때, 담녹색～녹색으로 물든 아포를 인지할 수 있다.

③ 시험용 한천배지로서 1호배지를 이용, 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 1～2일간 혐기배양한다. 배지에 생성된 집락을 이용, 낙산생성능력시험법으로 시험할 때, 낙산생성을 인지할 수 있다.

④ 시험용 한천배지로서 1호배지를 이용, 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 1～2일간 호기배양할 때, 균의 발육을 인지할 수 있다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

원주는 칸텐, 고기 엑기스, 포도당 등을 포함한 배지에서 계대되어 -80℃에서 동결 보존되거나 또는 동결 건조 후 4℃에서 보존된다. 본 품은 동 배지에서 증식하고 세분화하여 -80℃에서 동결 보존하거나 또는 동결 건조 후 4℃에서 보존할 것. 원주는 5년마다 계대되고 본 품은 계대해서는 안 된다. 제제는 밀폐용기에 보관한다.

■ 클로스트리듐  브티리컴(Ⅱ) (Clostridium butyricum(Ⅱ))

성분규격

본 품은 Clostridium butyricum NT 주를 증식시켜 동결건조한 제조용종균이다.

유래

원주는 1955년에 사람의 대변으로부터 분리된 Clostridium butyricum NT 주이다.

성상

「클로스트리듐  브티리컴(그의 1)」의 성상과 동일.

확인시험

「클로스트리듐  브티리컴(그의 1)」의 확인시험을 준용한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

원주는 유당, 카제인제 펩톤, 침강제 탄산칼슘 등을 포함한 배지에서 계대되어 동결건조 후 4℃에서 보존된다. 본 품은 원주를 같은 배지에서 증식하고 세분화하여 동결건조 후 4℃에서 보존할 것. 원주의 계대는 1대로 한정하고 본 품은 계대해서는 안 된다. 제제는 밀폐용기에 보존할 것. 

■ 페디오코커스 세레비시에 (Pediococcus cerevisiae)

정    의

해당 종으로 확인된 균을 증식시킨 제조용 종균을 말한다. 그람양성균으로서 동종발효(homofermentative), 통성혐기성, 젖산생성 구균이다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 페디오코커스 세레비시에

기    타-

■ 페디오코커스 애시디락티시(Pediococcus acidilacticii)

성상

그람양성 구균으로 Ribose, Xylose를 분해하고, Maltose, Melezitose, Sucrose, Dextrin,  Starch, Sorbitol은 분해하지 않는다. 

확인시험

① 25호 배지에 본품을 도포하고 36～38℃에서 2～3일간 배양할 때 균의 발육을 인지할 수 있다.

② 25호 배지에 본품을 도포하고 36～38℃에서 2～3일간 배양한다. 슬라이드 그라스 위에 1백금이 양의 물을 떨어뜨리고, 여기에 백금선을 이용하여 배지에 생성된 집락을 취하여 뒤섞어서 현탁하고 적당한 크기로 펴서 실온 또는 불기가 거의 없는 곳에서 건조시킨다. 그런 다음 2～3회 화염속을 통과시켜 고정된 것을 시료로 한다. 이 시료에 그람염색법으로 시험할 때 청자색 또는 흑자색을 인지할 수 있다.

③ 당분해 시험을 실시하였을 때 Ribose, Xylose는 양성을 나타내고, Maltose, Melezitose, Sucrose, Dextrin, Starch, Sorbitol은 음성을 나타낸다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

원주는 포도당, 쇠고기엑기스, 효모엑기스, 펩톤 등을 함유한 배지에서 계대되어 동결건조 후 4℃에서 보존된다.  본 품은 원주를 동 배지에서 증식하고 세분화하여 동결건조 후 4℃에서 보존할 것.  원주의 계대는 5대 이내로 하고 본 품은 계대해서는 안된다.  제제는 밀폐용기에 보존할 것.

■ 페디오코커스 펜토사세우스(Pediococcus pentosaceus)

정    의

해당 종으로 확인된 균을 증식시킨 제조용 종균을 말한다. 그람양성균으로서 동종발효(homofermentative), 통성혐기성, 젖산생성 구균이다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 페디오코커스 펜토사세우스

기    타-

■ 유익균배양물(beneficial bacteria culture)

정    의

유익균과 그 배양기내의 혼합물을 함께 건조시켜 만든 것을 말한다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 보조사료 ? 미생물제 ?유익균에 한 한다.

기    타 유익균 자체와 유익균이 배지에다 배설한 소화효소, 비타민 B군, 킬레이트 광물질, 아미노산, 핵산 등은 가축에게 급여될 경우 유익한 효과가 기대되기 때문에 모든 축종의 사료에 첨가될 수 있다.

■ 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei)

정 의

본 품은 식품원료로 사용가능한 균주로서 해당 종으로 확인된 균을 증식시킨 제조용 종균을 말한다. 그람양성, 통성혐기성 젖산생성 간균이다.

확인시험

① MRS 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 2일간 혐기배양할 때, 배지에 발육된 집락은 약간 불규칙～완전한 원, 반구형상으로 융기 또는 약간 융기해 있고, 표면 및 가장자리 모두 평활하거나 거칠며 유갈색～다갈색을 띤다.

② MRS 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 2일간 혐기배양한다. 슬라이드 글라스 위에 1백금이 양의 물을 떨어뜨리고, 여기에 백금선을 이용하여 배지에 생성된 집락을 채집하여 뒤섞어서 현탁하고 적당한 크기로 펴서 실온 또는 불기가 거의 없는 곳에서 건조시킨다. 그런 다음, 2～3회 화염 속을 통과시켜 고정된 것을 시료로 한다. 이 시료에 그램 염색법으로 시험할 때, 청자색～흑자색으로 물든 간균 또는 장간균을 인지할 수 있다.

③ 시험용 한천배지로서 MRS 배지를 이용, 배지에 본 품을 도포하고 36～38℃에서 2일간 배양할 때, 균의 발육을 인지할 수 있다.

균주검증방법(16S rRNA 염기서열에 의한 동정)

① 시료를 MRS배지에 접종한 후, 36～38℃에서 2일간 혐기배양한다.

② 적당량의 집락을 취하여 Genomic DNA Prep Kit를 이용함으로써 미생물 내에 존재하는 genomic DNA를 추출하여 동정에 이용이 되는 16s rRNA를 PCR 방법을 이용하여 증폭한 뒤 정제 과정을 거친 PCR product의 염기서열을 분석한다.

③ 염기서열 분석을 통해 얻은 균주의 염기서열은 GeneBank 에 있는 표준균주의 염기서열과 비교분석함으로써 99% 이상 상동성을 나타내는 것으로서 Lactobacillus sakei로 인정한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

원주는 포도당, 펩톤, 효모추출물 등을 포함한 배지에서 계대되어 동결건조 후 4℃에서 보존된다. 본 품은 원주를 동 배지에서 증식하고 세분화하여 동결건조 후 4℃에서 보조할 것. 원주의 계대는 5대 이내로 하고 본 품은 계대해서는 안 된다. 제제는 밀폐용기에 보존할 것

 나. 유익곰팡이

■ 모나스커스 퍼퓨리어스(Monascus purpureus; 홍국균)

정    의

자낭균류인 홍국균으로서 해당 종으로 확인된 균을 증식시킨 제조용 종균을 말한다. 유익곰팡이에 해당된다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 홍국적색소(monascus color), 모나스커스 퍼퓨리어스

기    타-

■ 아스퍼질러스 니이거(Aspergillus niger; 흑국균)

성상

본품은 흑국균으로 집락은 흑갈색이며, α-Amylase, glucoamylase, invertase, tannase, protease등의 효소 및 citric acid, gluconic acid, oxolic acid등의 유기산을 생성한다.

확인시험

① 시료 10g을 채취하여 90ml의 멸균 생리 식염수를 넣고 충분히 혼합 희석하여 그 상등액을 취해 10진 희석한다.

② 미리 멸균시킨 PDA배지를 먼저 plate에 분주한다.

③ 배지가 굳은 후 시료 희석액 1ml 씩 접종한후 유리봉으로 희석균액이 잘 섞이도록 도말한다. 

④ 35℃ Incubator에서 72～120 시간 배양하여 배지에 형성된 Colony 수를 Counting 하여 희석배수를 곱한다.

⑤ Colony를 분리 Slide glass 상에서 배양한 다음 집락의 형태와 현미경 검경하에서 균사, 포자, 분절의 격벽 유무, 배열상태를 조사하고 영양요구성 조사를 실시하여 분리동정을 한다.

⑥ niger의 집락의 형태는 흑갈색으로 나타내며 균사체는 백색～흑색이다. 경자는 복열이며, 정낭과 분생자는 구형으로 활면 또는 세립면이다, 

배지의 조성

ㆍPDA(Potato Dextrose Agar): Potato 200.0g, Dextrose 20.0g, Agar 15.0g, Distilled Water: 1.0 L, pH: 3.5, 멸균후 tartaric acid 첨가  

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

차광한 밀폐용기에 보존할 것.

■ 아스퍼질러스 오리제(Aspergillus oryzae; 황국균)

성상

  본품은 황국균으로 집락은 황록색이며, α-Amlylase, glucoamylase, invertase, cellulase, inulase, pectinase, protease, lipase, Catalase등의 효소를 생성한다.

확인시험

① 시료 10g을 채취하여 90ml의 멸균 생리 식염수를 넣고 충분히 혼합 희석하여 그 상등액을 취해 10진 희석한다.

② 미리 멸균시킨 PDA배지를 먼저 plate에 분주한다.

③ 배지가 굳은 후 시료 희석액 1ml 씩 접종한후 유리봉으로 희석균액이 잘 섞이도록 도말한다. 

④ 35℃ Incubator에서 72～120 시간 배양하여 배지에 형성된 Colony 수를 Counting 하여 희석배수를 곱한다.

⑤ Colony를 분리 Slide glass 상에서 배양한 다음 집락의 형태와 현미경 검경하에서 균사, 포자, 분절의 격벽 유무, 배열상태를 조사하고 영양요구성 조사를 실시하여 분리동정을 한다

⑥ oryzae의 집락의 형태는 황록색으로 나타나며 균사체는 황록색～갈색이다. 균사는 격막이 있고 보통 무색이며, 정낭은 구형으로 활면 또는 세립성이다.

배지의 조성

ㆍPDA(Potato Dextrose Agar): Potato 200.0g, Dextrose 20.0g, Agar 15.0g, Distilled Water: 1.0 L, pH: 3.5, 멸균후 tartaric acid 첨가  

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

차광한 밀폐용기에 보존할 것.

 다. 유익효모

■ 맥주효모(Brewers Yeast)

정    의

맥주 제조공정 중에서 맥즙의 발효가 완료되어 맥주를 여과한 후에 얻어지는 사카로마이세스 세르비시에(Saccharomyces cerevisiae) 효모를 말한다. 분리 세척한 맥주액상효모(Brewers Liquid Yeast)와 수분을 제거한 맥주건조효모(Brewers Dried Yeast)가 있다.

성상/순도/함량 : 단백질 효율에 있어서 토룰라효모(Torula Yeast)에 비해 우수한 편이다. 조단백질 함량은 건물기준 35% 이상이다. 비발효성이며 비타민 B군과 인의 함량이 높다.

검정성분(또는 물질명) : 조단백질, 사카로미세스속

기    타-

■ 양조효모(Brewers Yeast)

정    의

술을 제조 시 사용되는 사카로마이세스 세르비시에(Saccharomyces cerevisiae) 효모를 말한다. 풍부한 향을 만들어내는 효모, 맛을 조화롭게 하는 효모, 깨끗한 끝맛을 특징으로 하는 효모 등 여러 가지 효모를 말한다. 

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 조단백질, 사카로미세스속

기    타-

■ 제빵효모(Baker‘s Yeast)

정    의

빵 만들 때 쓰는 사카로마이세스 세르비시에(Saccharomyces cerevisiae) 효모를 말한다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 사카로미세스 세레비시에(Hansen)

기    타청주효모나 맥주효모와 달리 발효생산물이 빵 특유의 풍미를 가지고 있고 호기적으로 배양하여도 발효력이 왕성하다. 보통은 수분 70%를 함유한 압착효모의 형태로 사용된다.

■ 잔토필로마이세스 덴드로하우스(Xanthophyllomyces dendrorhous)

성상

이 품목은 적색～적갈색의 액체 또는 분말의 물질이다.

확인시험

① 시료 약 1g을 칭량하여 희석액을 정확히 50㎖ 넣어 잘 흔들어 섞고 실원액으로 한다. 이 원액 1㎖를 취해 희석액으로 10배 희석한다. 이 조작을 되풀이하여 1㎖ 중에 생균을 30～300개 또는 300～3000개 함유하는 농도로 조제하여 시료용액으로 한다.

② 미리 포테이토 덱스트로즈 한천배지(Potato Dextrose Agar) 20㎖씩 넣어 고체화시킨 멸균 접시에 시료용액 0.1㎖씩을 넣어 도포한다.

③ 페트리디쉬를 거꾸로 뒤집어 22 ± 1.0℃에서 약 72시간 배양할 때 균의 발육을 인지할 수 있으며 붉은색을 띄므로 구별이 쉽다.

  시료 1g중의 생균수 =  평균집락수×희석배율×500   

                      ───────────────

                        시료무게(g)                 

희석배율 : 10배 희석법에 의한 희석 배수

④ 당분해 시험을 실시하였을 때 Glucose, Maltose, cellobiose, trehalose, Melezitose는 양성을 나타내고, D-galactose, Lactose, Melibiose, Ribose, D-Xylose은 음성을 나타낸다.

균주검증방법(18S rRNA 또는 ITS 염기배열에 의한 동정)

① 시료를 PDA한천배지에 접종한 후, 22 ± 1.0℃에서 약 72시간 배양한다.

② 적당량의 집락을 취하여 Genomic DNA Prep Kit를 이용함으로써 효모 DNA를 분리한다.

③ 상기 시료에 대하여 PCR를 수행한다. 이때 사용하는 primers로는 ITS 1(5‘ - TCC GTA GGT GAA CCT GCG G - 3’). ITS 2(5‘ - TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC - 3’)이며, PCR 수행조건으로는 95℃에서 15분간 처리하고, 95℃ 20초, 50℃ 40초, 72℃ 1분 30초를 30회 반복수행하며, 마지막으로 72℃에서 5분간 실시한다.

④ PCR 수행후, PCR Purification kit를 이용하여 product를 순수분리한다.

⑤ PCR product의 염기배열을 결정하기 위하여, terminator ready reaction mix(4ul), PCR product(20-40ng, 1ul), primer(5pmol, 1ul), DW(4ul)를 넣고, 96℃ 10초, 50℃ 5초, 60℃ 4분을 30회 수행한다.

⑥ 반응 종료 후, 에탄올로 침전시킴으로써 생성물을 회수한다.

⑦ 상기시료를 loading buffer(Hi-Di formamide, 15ul)에 넣은 다음, 염기배열분석기(ABI PRISM 3730XL DNA analyzer)에서 염기배열을 결정한다.

⑧ 결정된 염기배열을 Genebank에 있는 표준균주의 염기서열과 비교분석함으로써 99% 이상 상동성을 나타내는 것으로서 Xanthophyllymyces dendrorhous로 인정한다.

배지의 조성

PDA(Potato Dextrose Agar) : Potato 200.0g, Dextrose 20.0g, Agar 15.0g, Distilled Water : 1.0L, pH : 3.5, 멸균후 tartaric acid 첨가

제조방법의 기준

색가조정, 품질보존 등을 위하여 희석제, 안정제 및 용제 등을 첨가할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

원주는 포도당, 펩톤, 효모추출물 등을 포함한 배지에서 계대되어 동결건조 후 4℃에서 보존된다. 본 품은 원주를 동 배지에서 증식하고 세분화하여 동결건조 후 4℃에서 보조할 것. 원주의 계대는 10대 이내로 하고 본 품은 계대해서는 안된다. 제제는 밀폐용기에 보존할 것

■ 조사건조효모(Irradiated Dried Yeast)

정    의

구루병의 예방효과를 나타내기 위하여 자외선을 조사한 비발효성의 건조효모이다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 사카로미세스속

기    타-

■ 토룰라효모(Torula Dry Yeast; Candida Dry Yeast)

정    의

일명 목재효모(wood yeast)라고 하며 Candida(Torulopsis) utilis를 증식시킨 후 배지와 분리 건조한 것이다.

성상/순도/함량 : 조단백질 40% 이상

검정성분(또는 물질명) : 토룰라효모

기    타

토룰라건조효모라고도 하며 증식에 사용되는 배지는 펄프제조 시에 생기는 아황산 펄프 폐액을 암모니아로 중화시키고 당밀과 여러 가지 무기물을 첨가하여 만든다.

■ 피키아 파리노사(Pichia farinosa)

정    의

본 품은 된장에서 분리된 Pichia farinosa KACC93160P주를 증식시켜 동결 또는 동결건조한 제조용 종균이다.

성상

본 품은 호기성의 효모로, YM 한천 배지에서 발육된다.

확인시험

① 시료 10g을 채취하여 90㎖의 멸균 생리 식염수를 넣고 충분히 혼합 희석하여 그 상등액을 취해 10배씩 단계적으로 희석한다.

② 미리 멸균시킨 YM 한천 배지를 먼전 plate에 분주한다.

③ 배지가 굳은 후 시료 희석액 0.1㎖씩 접종한 후 유리봉으로 희석 균액이 잘 섞이도록 도말한다.

④ 28～30℃ Incubator에서 48±4 시간 배양하여 배지에 형성된 colony 수를 Counting하여 희석배수를 곱한다.

⑤ Colony를 슬라이드 글라스 위에 1 백금이 양의 물을 떨어뜨리고, 여기에 백금선을 이용하여 배지에 생성된 집락을 채집하여 뒤섞어서 현탁하고 적당한 크기로 펴서 실온 또는 불기가 거의 없는 곳에서 건조시킨다. 그런 다음, 2～3회 화염 속을 통과시켜 고정된 것을 시료로 한다. 이 시료를 현미경으로 검경 할 때 구형 또는 난형의 균체 모양을 인지할 수 있고, 26S ribosomal RNA sequencing을 실시하여 분리 동정을 한다.

배지의 조성

YM(Yeast & Mold) 한천 배지 : Yeast extract 3.0g, Malt extract 3.0g, Peptone 5.0g, Dextrose 10.0g, Agar 20.0g, Distilled Water 1.0L(121℃ 15분 멸균)

보존방법의 기준

본 품은 차광한 밀봉용기에 넣어 보존하여야 한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

■ 효모배양물(Yeast Culture)

정    의

효모와 그 배양기내의 혼합물을 함께 건조시켜 만든 것을 말한다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 사카로미세스 세레비시에(Saccharomyces cerevisiae)

기    타 효모자체와 효모가 배지에다 배설한 소화효소, 비타민 B군, 킬레이트 광물질, 아미노산, 핵산 등은 가축에게 급여될 경우 유익한 효과가 기대되기 때문에 모든 축종의 사료에 첨가될 수 있다.

■ 효모(Yeast)

정    의

효모라 함은 사카로마이세스속(Saccharomyces sp.)에 속하는 효모를 배양하여 분리세척한 액상효모, 이것을 탈수하여 성형한 생효모와 수분을 제거한 건조효모를 말한다.

▷ 건조효모

성상  

이 품목은 황～갈색의 과립, 분말 또는 덩어리로서 특이한 냄새를 가지고 있다.

순도시험  

① 활  성 : 이 품목 5ｇ을 10% 설탕용액 50㎖에 가하여 35～40℃로 가온할 때, 2시간 30분 이내에 가스가 발생하여야 한다.

②비  소 : 검체 1ｇ 취하여「혼합제제」의 순도시험에서 시험용액의 조제중 1법에 따라 만든액 100㎖중 20㎖를 가지고 만든다.(5ppm 이하)

③ 중금속 : 검체 2g을 취하여「혼합제제」의 순도시험에서 시험용액의 조제중 1법에 E라 만든 액 100㎖중 20㎖를 취하여 중금속시험을 할 때, 이에 적합하여야 한다. 다만, 표준색은 납표준용액 10㎖를 취하여 위의 시험용액과 같이 처리하여 만든 액 100㎖중 20㎖를 가지고 만든다.(50ppm 이하)

▷ 생효모

성상  

이 품목은 유백～황갈색의 덩어리로서 특이한 냄새를 가지고 있다.

순도시험  

① 활 성 : 이 품목 5ｇ을 10% 설탕용액 50㎖에 가하여 30～35。로 가온할 때, 1시간 이내에 가스가 발생하여야 한다.

② 비 소 : 검체 2ｇ을 취하여 위의 가. 건조효모의 순도시험 ⑵에 따라 시험한다. 다만, 표준색은 비소표준용액 6㎖을 취하여 같은 방법으로 만든다.(3ppm 이하)

③ 중금속 : 검체 3.33ｇ을 취하여 위의 가. 건조효모의 순도시험 ⑶에 따라 시험한다. 다만, 표준색은 납표준용액 10㎖를 취하여 같은 방법으로 만든다.(30ppm 이하)

▷ 액상효모

성상  

이 품목은 유백～황갈색의 액체로서 특이한 냄새를 가지고 있다.

순도시험 

① 활 성 : 이 품목 10ｇ을 10% 설탕용액 50㎖에 가하여 30～35。로 가온할 때, 1시간이내에 가스가 발생하여야 한다.

② 비 소 : 검체 2ｇ을 취하여 위의 가. 건조효모의 순도시험 ⑵에 따라 시험한다. 다만, 표준색은 비소표준용액 3㎖를 취하여 같은 방법으로 만든다.(1.5ppm 이하)

③ 중금속 : 검체 3.33ｇ을 취하여 위의 가. 건조효모의 순도시험 ⑶에 따라 시험한다. 다만, 표준색은 납표준용액 5㎖를 취하여 같은 방법으로 만든다.(15ppm 이하)

보존방법의 기준

건조효모는 차광한 밀봉용기에 넣어 보존하여야 한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다. 

 바. 박테리오파지

■ 대장균 박테리오파지(Escherichia coli bacteriophage)

성분규격

   본 품은 대장균(Escherichia coli)을 숙주 미생물로 삼는 Myoviridae 과에 속하는 Bacteriophage φCJ10 (KCCM 11150P)이다. 유래 원주는 2009년 하천수에서 분리된 Myoviridae 과에 속하는 Bacteriophage(KCCM 11150P) 주이다.

특성

   본 품은 Escherichia coli를 특이적으로 용균하는 박테리오파지이다.

확인시험

    (1) 본 품을 희석 완충액(20mM Tris-HCl, 2mM MgCl2, pH 7.0)으로 용해시키고 Escherichia coli가 포함된 0.7% 연한천에 혼합한다. 이를 평판 배지에 도포하고 고체화시킨 후 35℃에서 24시간 배양하면 용균반이 나타난다.

    (2) Escherichia coli에 대해 용균반을 형성한다.

정량법

   시료 약 1g 을 칭량하여 희석 완충액을 정확히 50 ㎖ 넣어 잘 흔들어 녹인 것을 시료원액으로 한다. 이 원액 1 ㎖를 취해 희석 완충액 (20mM Tris HCl, 2mM MgCl2, pH 으로 10 배 희석한다 . 이 조작을 되풀이하여 1 ㎖ 중에 박테리오파지를 1000 3000 개 함유하는 농도로 조제하여 시료용액으로 이용한다. 상기된 바와 같이 준비된 시료 용액 100 ㎕와 Escherichia coli 150 ㎕를 45℃로 유지된 연한천 4 ㎖에 넣어 혼합한다 . 이를 준비된 한천배지에 즉시 부어 고체화시키고 30～38℃에 서 각 조에서 규정하는 기간 동안 배양하여 출현한 용균반을 세어 평균 용균반수를 구한다.

제조방법의 기준

   본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법

   차광된 밀폐용기에 냉장 보존할 것

■ 살모넬라 갈리나룸 박테리오파지(Salmonella galinarum bacteriophage)

성분규격

본 품은 살모넬라 갈리나룸을 숙주 미생물로 삼는 Siphoviridae 과에 속하는 Bacteriophage(KCCM 10969P)이다.유래

원주는 2008년 하천수에서 분리된 Siphoviridae 과에 속하는 Bacteriophage(KCCM 10969P) 주이다. 

특성

본 품은 Salmonella galinarum과 Salmonella pullorum을 특이적으로 용균하는 박테리오파지이다.

확인시험

① 본 품을 희석 완충액(20mM Tris-HCl, 2mM MgCl2, pH 7.0)으로 용해시키고 Salmonella galinarum이 포함된 0.7% 연한천에 혼합한다. 이를 0호 배지에   도포하고 고체화시킨 후 35℃에서 24시간 배양하면 용균반이 나타난다.

② Salmonella galinarum과 Salmonella pullorum에 대해 용균반을 형성되고, Salmonella typhimurium, Salmonella enteridis 및 E. coli에 대해 용균반을  형성하지 않는다.

정량법

시료 약 1g을 칭량하여 희석 완충액을 정확히 50㎖ 넣어 잘 흔들어 섞고 시료원액으로 한다. 이 원액 1㎖를 취해 희석 완충액(20mM Tris-HCl, 2mM MgCl2, pH 7.0)으로 10배 희석한다. 이 조작을 되풀이하여 1㎖ 중에 박테리오파지를 100～300개 함유하는 농도로 조제하여 시료용액으로 이용한다. 상기된 바와 같이 준비된 시료 용액 100㎕와 Salmonella galinarum 을 45℃로 유지된 연한천 4㎖에 넣어 혼합한다. 이를 준비된 한천배지에 부어 고체화시키고 35℃에서 각 조에서 규정하는 기간동안 배양하여 출현한 용균반을 세어 평균 용균반수를 구한다. 

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법

차광된 밀폐용기에 냉장 보존할 것

■ 살모넬라 엔테라이티디스 박테리오파지(Salmonella enteritidis bacteriophage)

성분규격

본 품은 살모넬라 엔테리티디스를 숙주 미생물로 삼는 Siphoviridae 과에 속하는 Bacteriophage (KCCM11030P)이다. 유래

원주는 2009년 하천수에서 분리된 Siphoviridae 과에 속하는 Bacteriophage(KCCM11030P)주이다.

특성

본 품은 Salmonella enteritidis를 특이적으로 용균하는 박테리오파지이다.

확인시험

① 확인시험 전날 지시균으로 사용 할 Salmonella (dP. SGSC2293) 1개 콜로니를 LB(Tryptone 10g, Yeast Extract 5g, NaCl 10g, 멸균수 1L)액상배지 3～5㎖에 접종 후 30～37℃에서 200rpm 속도로 교반시키며 약 16시간 배양한다.

② 완충액(20mM Tris-HCl, 2mM MgCl2, pH 7.0)에 10배씩 단계별(1/10, 1/100, 1/1000 등)로 희석 시킨 본 품 희석액 100㎕를 전날 접종하여 16시간 배양된 Salmonella 지시균 배양액(①) 150～200㎕와 함께 연한천액(멸균수나 액상배지에 0.7～1.0% 한천을 녹이고 살균 후 55～60℃로 냉각시킴) 4～5㎖에 혼합한다.

   ③ 상기 혼합액(본 품, 지시균액, 연한천액)을 LB 평판 배지(1.5% 한천포함)에 도포하고 고체화시킨 후 30～37℃에서 24시간 배양하면 용균반이 나타난다. 

정량법

① 시료 약 1g을 칭량한 후 완충액(20mM Tris-HCl, 2mM MgCl2, pH7.0) 49㎖에 넣어 잘 흔들어 녹인 것을 시료원액으로 한다. 이원액 1㎖를 취해 완충액에 10배씩 단계별로(1/10, 1/100, 1/1000 등) 희석액 100㎕와 전날 접종하여 16시간 배양된 Salmonella 지시균 배양액 150～200㎕를 55～60℃ 연한천액 4～5㎖에 혼합한다.

② 상기 혼합액(본 품, 지시균액, 연한천액)을 LB 평판 배지(1.5% 한천포함)에 도포하고 고체화시킨 후 30～37℃에서 24시간 배양하면 용균반이 나타난다. 이 중 용균반이 30～300개를 함유하는 평판배지를 유효 배지로 계산한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법

차광된 밀폐용기에 상온 또는 건냉 보관할 것

■ 살모넬라 티피뮤리움 박테리오파지(Salmonella typhimurium bacteriophage)

성분규격

본 품은 살모넬라 티피뮤리움을 숙주 미생물로 삼는 Siphoviridae 과에 속하는 Bacteriophage (KCCM10976P)이다. 유래

원주는 2007년 하천수에서 분리된 Siphoviridae 과에 속하는 Bacteriophage(KCCM10976P)주이다.

특성

본 품은 Salmonella typhimurium을 용균하는박테리오파지이다.

확인시험

본 품을 희석 완충액(20mM Tris-HCl, 2mM MgCl2,pH7.0)으로 용해시키고 Salmonella typhimurium이포함된 0.7% 연한천에 혼합한다. 이를 0호 배지에 도포하고 고체화시킨 후 37℃에서 24시간 배양하면 용균반이 나타난다.

정량법

시료 약 1g을 칭량하여 희석 완충액을 정확히 50㎖ 넣어 잘 흔들어 녹인 것을 시료원액으로 한다. 이 원액 1㎖를 취해 희석 완충액(20mM Tris-HCl, 2mM MgCl2,pH7.0)으로 10배 희석한다. 이 조작을 되풀이하여 1㎖ 중에 박테리오파지를 1000～3000개 함유하는 농도로 조제하여 시료용액으로 이용한다. 상기된 바와 같이 준비된 시료 용액 100㎕와Salmonella typhimurium 150㎕를 45℃로 유지된 연한천 4㎖에 넣어 혼합한다. 이를 준비된 한천배지에 즉시 부어 고체화시키고 30～38℃에서 각 조에서 규정하는 기간 동안 배양하여 출현한 용균반을 세어 평균 용균반수를 구한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법

차광된 밀폐용기에 건냉 보관할 것

■ 웨이셀라 시바리아(Weissella cibaria)

정 의

본 품은 식품원료로 사용가능한 균주로서 웨이셀라 시바리아(Weissella cibaria) JW15 유산균을 증식시켜 동결 건조한 제조용 종균으로 그람양성이며, 통성혐기성, 젖산생성 단간균 형태를 띤다.

확인시험

① MRS 배지에 본 품을 도포하고 36∼38℃에서 2∼3일간 혐기배양할 때, 배지에 발육된 집락은 약간 불규칙적으로 완전한 원에서 반구형상을 띤다.

② MRS 배지에 본 품을 도포하고 36∼38℃에서 2∼3일간 혐기배양한다. 슬라이드 글라스 위에 1백금이 양의 물을 떨어뜨리고, 여기에 백금선을 이용하여 배지에 생성된 집락을 채집하여 뒤섞어서 현탁하고 적당한 크기로 펴서 실온 또는 불기가 거의 없는 곳에서 건조시킨다. 그런 다음, 2∼3회 화염 속을 통과시켜 고정된 것을 시료로 한다. 이 시료에 그램 염색법으로 시험할 때, 청자색∼흑자색으로 물든 간균을 인지할 수 있다.

③ 시험용 한천배지로서 MRS 배지를 이용, 배지에 본 품을 도포하고 36∼38℃에서 2일간 배양할 때, 균의 발육을 인지할 수 있다.

④ 당분해 시험을 실시하였을 때 arbinose, ribose, galactose, fructose, mannose, ramnose, mannitol, sorbitol은 양성을 나타내고, erythritol, xylose, maltose, xylitol은 음성을 나타낸다.

균주검증방법(16S rRNA 염기서열에 의한 동정)

① 시료를 MRS배지에 접종한 후, 36∼38℃에서 2일간 혐기배양한다.

② 적당량의 집락을 취하여 Genomic DNA Prep Kit를 이용함으로써 미생물 내에 존재하는 genomic DNA를 추출하여 동정에 이용이 되는 16s rRNA를 PCR 방법을 이용하여 증폭한 뒤 정제 과정을 거친 PCR product의 염기서열을 분석한다.

③ 염기서열 분석을 통해 얻은 균주의 염기서열은 GeneBank 에 있는 표준균주의 염기서열과 비교분석함으로써 99% 이상 상동성을 나타내는 것을 웨이셀라 시바리아(Weissella cibaria) JW15로 인정한다.

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법 및 계대의 기준

원주는 MRS 배지에서 계대되어 ?80℃에서 동결보존하거나 동결건조 후 4℃에서 보존된다. 본 품은 원주를 동 배지에서 증식하고 세분화하여 ?80℃에서 동결보존하거나 동결건조 후 4℃에서 보존할 것. 원주의 계대는 3대 이내로 하고 본 품은 계대해서는 안 된다. 제제는 밀폐용기에 보존할 것.

■ 클로스트리디움 퍼프린젠스 박테리오파지(Clostridium perfringens bacteriophage)

성분규격

본 품은 클로스트리디움 퍼프린젠스를 숙주 미생물로 삼는 Siphoviridae 과에 속하는 Bacteriophage (KCTC 12334BP)이다. 유래

원주는 환경시료(하천수)에서 분리된 Siphoviridae 과에 속하는 Bacteriophage(KCTC 12334BP)주이다.

특성

본 품은 Clostridium perfringens Type A, C, E를 특이적으로 용균하는 박테리오파지이다.

확인시험

① 시양 및 배지 조제

   (a) 희석 완충액 조제(pH 7.5)

   Tris base 1.21g 및 황산마그네슘 1.20g을 증류수로 녹이고 염산을 넣어 pH를 7.2～7.5로 조정한 후 여기에 3차 증류수를 넣어 1,000㎖로  만듦

   (b) 연한천 조제

   한천 7g, Tryptic Soy Broth 30g을 증류수 1,000㎖에 녹여 121℃에서 15분간 멸균함. 멸균 후 50℃ 오븐에 보관하며 사용

   (c) 한천배지 조제

   Tryptic Soy Agar 40g을 증류수 1,000㎖에 녹여 121℃에서 15분간 멸균함. 이와 같이 멸균된 시험용 한천배지를 50℃로 유지한 후 멸균 접시에 15㎖ 씩을 넣어 즉시 고체화시킴 

② 시험법

   하기 작업은 혐기성 멸균 작업대에서 실시

   (a) 본 품을 희석 완충액으로 용해시키고 숙주 박테리아(Clostridium perfringens)가 포함된 0.7% 연한천에 혼합

   (b) 이를 한천배지에 붓고 고체화시킨 다음에 37℃에서 12시간 이상 혐기성 미생물 배양 장치 내에서 배양하면 용균반이 나타남

정량법

① 시약 및 배지 조제

   (a) 희석 완충액 조제(pH 7.5)

   Tris base 1.21g 및 황산마그네슘 1.20g을 증류수로 녹이고 염산을 넣어 pH를 7.2～7.5로 조정한 후 여기에 3차 증류수를 넣어 1,000㎖로  만듦

   (b) 연한천 조제

   한천 7g, Tryptic Soy Broth 30g을 증류수 1,000㎖에 녹여 121℃에서 15분간 멸균함. 멸균 후 50℃ 오븐에 보관하며 사용

   (c) 한천배지 조제

   Tryptic Soy Agar 40g을 증류수 1,000㎖에 녹여 121℃에서 15분간 멸균함. 이와 같이 멸균된 시험용 한천배지를 50℃로 유지한 후 멸균 접시에 15㎖ 씩을 넣어 즉시 고체화시킴 

② 시험법

   하기 작업은 혐기성 멸균 작업대에서 실시

   (a) 본 품 1g을 칭량하여 희석 완충액 50㎖ 넣어 잘 흔들어 녹임(이를 시료원액이라 함)

   (b) 이 시료원액 1㎖을 취해 희석 완룽액을 사용하여 10진 희석함. 이 조작을 되풀이하여 1㎖ 중에 박테리오파지를 100～300개 함유하는 농도로 시료용액을 조제

   (c) 상기과 같이 준비된 시료용액 100㎕와 숙주 박테리아(Clostridium perfringens) 배양액 150㎕를 45℃로 유지된 연한천 4㎖에 넣어 혼합

   (d) 이를 준비된 한천배지에 즉시 붓고 고체화시킨 다음에 37℃에서 12시간 이상 혐기성 미생물 배양 장치 내에서 배양한 후 출현한 용균반을 세어 평균 용균반수를 구함

   (c) 다음의 식을 이용하여 함량을 결정

   본 품 1g 중의 박테리오파지수 = (평균 용균반수×희석배율 ×50×10) 

   ※ 희석배율 : 십진 희석법에 의한 희석 배수

제조방법의 기준

본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법

차광된 밀폐용기에 냉장 보존 또는 차광된 장소에 상온 보존할 것

8. 향미제(Aromatics and Appetising substances)

┌────────────────────────┐

│향기와 맛을 향상시키기 위해 사료에 첨가하는 물질│

└────────────────────────┘

 가. 착향료(flavoring agent) : 기호를 증진할 목적으로 냄새를 강화 또는 변화시키거나, 좋지 않은 냄새를 없애기 위하여 사용되는 물질

■ 천연착향료(Natural flavoring substance)

정    의  이 품목은 아래의 기원에서 추출, 증류 등의 제법으로 얻어지는 것으로서 향기를 부여 또는 증강하기 위하여 사용되는 물질로 정유, 추출물, 올레오레진(다만, 따로 규격이 정하여진 향신료올레오레진류는 제외) 등을 말한다. 다만, 아래의 착향료를 화학적 변화를 주지 않는 방법으로 2종 이상 단순 혼합한 것이 포함되며, 품질보존 등을 위하여 물, 주정, 식물성기름을 첨가할 수 있다.

  (1) 천연향료를 제조 또는 가공하는 경우에는 적합한 용매(에탄올, 헥산, 이소프로필알콜)를 단독 또는 병용하여 각 원료로부터 추출 등으로 얻어지며 사용된 용매들은 잔류용매의 규격에 적합하도록 제거하여야 한다.

순도시험

  잔류용매(올레오레진형태에 한함) :「파프리카 추출색소」의 순도시험 (5)에 따라 시험할 때, 

               이소프로필알콜       50ppm 이하

               헥         산        25ppm 이하이어야 한다.

┌──┬─────────────────┬─────────────────────────────────┐

│순번│일       반       명              │기   원   물   질   명                                            │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│1   │Alfalfa                           │콩과 개자리(Medicago sativa L.)                                   │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│2   │Almond, bitter(free from prussic  │장미과 벚나무(Prunus amygdalus Batsch. Prunusarmeniaca L.,        │

│    │acid)                             │or Prunus persica(L.)Batsch.)                                     │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│3   │(Bitter almond)                   │Physeter macrocephalus L.                                         │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│4   │Ambergris                         │아욱과 무궁화(Hibiscus moschatus Moench.)                         │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│5   │Ambrette(seed)                    │운향과 아미리스(Amyris balsamifera L.)                            │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│6   │Amyris(West Indian                │산형과 당귀(Angelica archangelica L.)                             │

│    │sandalwood)                       │                                                                  │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│7   │Angelica root                     │산형과 당귀(Angelica archangelica L.)                             │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│8   │Angelica seed                     │산형과 당귀(Angelica archangelica L.)                             │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│9   │Angelica stem                     │Roccella fuciformis Ach                                           │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│10  │Angola weed                       │운향과 갈리페아(Galipea officinalis Hancock.)                     │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│11  │Angostura(Cusparia bark)          │산형과 참나물(Pimpinella anisum L.)                               │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│12  │Anise                             │장미과 벚나무(Prunus armeniaca L.)                                │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│13  │Apricot kernel (Persic oil)       │국화과 아르니카(Arnica montana L., A. fulgens Pursh, A. sororia   │

│    │Arnica flowers                    │Greene, or A. cordifolia Hooker.)                                 │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│14  │Artemisia(Wormwood)               │국화과 쑥(Artemisia spp.)                                         │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│15  │Artichoke leaves                  │국화과 키나라(Cynara scolymus L.)                                 │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│16  │Asafetida                         │산형과 페룰라(Ferula assa-foetida L. and related spp. of          │

│    │                                  │Ferula.)                                                          │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│17  │Balm(Lemon balm, Melissa)         │Melissa officinalis L.                                            │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│18  │Balsam of Peru                    │Myroxylon pereirae Klotzsch.                                      │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│19  │Basil                             │꿀풀과 오키뭄(Ocimum basilicum L.)                                │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│20  │Bay leaves                        │녹나무과 월계수(Laurus nobilis L.)                                │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│21  │Bay(Myrcia oil)                   │Pimenta racemosa(Mill.) J. W. Moore.                              │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│22  │Benzoin resin                     │때죽나무과(Styrax benzoin Dryander, S. paralleloneurus            │

│    │                                  │ Pekins, S. tonkinensis(Pierre)  Craib ex Hartwich, or other spp. │

│    │                                  │ of the Section  Anthostyrax of the genus Styrax.)                │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│23  │Bergamot(Bergamot orange)         │운향과 귤(Citrus aurantium L. subsp. beramia                      │

│    │                                  │Wright et Arn.)                                                   │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│24  │Blackberry bark                   │장미과 딸기(Rubus, Section Eubatus.)                              │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│25  │Bois de rose                      │Aniba rosaeodora Ducke.                                           │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│26  │Boldus(Boldo) leaves              │모니미아과 페우무스(Peumus boldus Mol.)                           │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│27  │Boronia flowers                   │운향과 보로니아(Boronia megastigma Nees.)                         │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│28  │Bryonia root                      │박과 브리오니아(Bryonia alba L., or B. diocia Jacq)               │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│29  │Buchu leaves                      │운향과 바로스마(Barosma betulina Bartl. et Wendl.,                │

│    │                                  │B. crenulata(L.) Hook. or B. serratifolia Willd.)                 │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│30  │Buckbean leaves                   │용담과 조름나물(Menyanthes trifoliata L.)                         │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│31  │Cacao                             │벽오동과 테오브로마(Theobroma cacao L.)                           │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│32  │Cajeput                           │Melaleuca leucadendron L. and other Melaleuca spp.                │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│33  │Camomile(Chamomile) flowers,      │국화과 개꽃(Matricaria chamomilla L.)                             │

│    │Hungarian                         │                                                                  │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│34  │Camomile(Chamomile) flowers,      │국화과 안테미스(Anthemis nobilis L.)                              │

│    │Roman 또는 English                │                                                                  │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│35  │Camphor tree                      │녹나무과 녹나무(Cinnamomum camphora (L.) Nees                     │

│    │                                  │et Eberm)                                                         │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│36  │Cananga                           │포포나무과 카난가(Cananga odorata Hook. f. and                    │

│    │                                  │Thoms.)                                                           │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│37  │Capsicum                          │가지과 고추(Capsicum frutescens L. and Capsicum                   │

│    │                                  │annuum L.)                                                        │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│38  │Caraway                           │Carum carvi L.                                                    │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│39  │Cardamom seed(Cardamon)           │Elettaria cardamomum Maton.                                       │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│40  │Carrot                            │산형과 당귀(Daucus carota L.)                                     │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│41  │Cascara sagrada                   │갈매나무과 갈매나무속(Rhamnus purshiana DC.)                      │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│42  │Cascarilla bark                   │대극과 크로톤(Croton eluteria Benn.)                              │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│43  │Cassia bark, Chinese              │녹나무과 녹나무(Cinnamomum cassia Blume.)                         │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│44  │Cassia bark, Padang 또는          │녹나무과 녹나무(Cinnamomum burmanni Blume.)                       │

│    │Batavia                           │                                                                  │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│45  │Cassia bark, Saigon               │녹나무과 녹나무(Cinnamomum loureirii Nees.)                       │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│46  │Cassie flowers                    │콩과 아카시아(Acacia farnesiana(L.) Willd.)                       │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│47  │Castoreum                         │Castor fiber L. and C. canadensis Kuhl.                           │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│48  │Catechu, black                    │콩과 아카시아(Acacia catechu Willd.)                              │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│49  │Cedar, white(Aborvitae), leaves   │측백나무과 측백나무(Thuja occidentalis L.)                        │

│    │및 twigs                          │                                                                  │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│50  │Celery seed                       │산형과 아피움(Apium graveolens L.)                                │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│51  │Centuary                          │용담과 센타우리움(Centaurium umbellatum Gilib)                    │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│52  │Cherry pits                       │장미과 벚나무(Prunus avium L. or P. cerasus L.)                   │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│53  │Cherry-laurel leaves              │장미과 벚나무(Prunus laurocerasus L.)                             │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│54  │Cherry, wild, bark                │장미과 벚나무(Prunus serotina Ehrh.)                              │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│55  │Chervil                           │산형과 전호(Anthriscus cerefolium (L.) Hoffm.)                    │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│56  │Chest nut leaves                  │참나무과 밤나무(Castanea dentata (Marsh.) Borkh)                  │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│57  │Chicory                           │국화과 꽃상치(Cichorium intybus L.)                               │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│58  │Chirata                           │용담과 자주쓴풀(Swertia chirata Buch.-Ham)                        │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│59  │Cinchona, red, bark               │꼭두서니과 킨코나(Cinchona succirubra Pav. or its hybrids)        │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│60  │Cinchona, yellow, bark            │꼭두서니과 킨코나(Cinchona ledgeriana Moens, C.                   │

│    │                                  │calisaya Wedd., or hybrids of these with other spp.               │

│    │                                  │of Cinchona.)                                                     │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│61  │Cinnamon bark, Ceylon             │녹나무과 녹나무(Cinnamomum zeylanicum Nees.)                      │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│62  │Cinnamon bark, Chinese            │녹나무과 녹나무(Cinnamomum cassia Blume.)                         │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│63  │Cinnamon bark, Saigon             │녹나무과 녹나무(Cinnamomum loureirii Nees.)                       │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│64  │Cinnamon leaf, Ceylon             │녹나무과 녹나무(Cinnamomum zeylanicum Nees.)                      │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│65  │Cinnamon leaf, Chinese            │녹나무과 녹나무(Cinnamomym cassia Blume.)                         │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│66  │Cinnamon leaf, Saigon             │녹나무과 녹나무(Cinnamomum loureirii Nees.)                       │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│67  │Citronella                        │화본과 개솔새(Cymbopogon nardus Rendle.)                          │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│68  │Citrus peels                      │운향과 귤(Citrus spp.)                                            │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│69  │Civet(Zibeth, Zibet, Zibetum)     │Civet cats, Viverra civetta Schreber and Viverra zibetha          │

│    │                                  │Schreber.                                                         │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│70  │Clary(Clary sage)                 │꿀풀과 단삼(Salvia sclarea L.)                                    │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│71  │Clover                            │콩과 토끼풀(Trifolium spp.)                                       │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│72  │Coca(decocainized)                │에리트록실룸과 에리트록실룸(Erythroxylum coca                     │

│    │                                  │Lam. and other spp. of Erythroxylum.)                             │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│73  │Coffee                            │꼭두서니과 코페아(Coffea spp.)                                    │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│74  │Cognac oil, white 및 green        │Ethyl oenanthata, so-called.                                      │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│75  │Cola nut(Cola nut)                │벽오동과 콜라(Cola acuminata Schott and Endl.and other spp.       │

│    │                                  │of Cola.)                                                         │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│76  │Copaiba                           │South American spp. of Copaifera L.                               │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│77  │Coriander                         │산형과 고수(Coriandrum sativum L.)                                │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│78  │Cork, oak                         │참나무과 참나무(Quercus suber L., Q.occidentalis F.Gay,           │

│    │                                  │Q.acutissima, Q.mongolica, Q.serrata)                             │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│79  │Costmary                          │국화과 산국(Chrysanthemum balsamita L.)                           │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│80  │Costus root                       │국화과 수리취(Saussurea lappa Clarke.)                            │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│81  │Cumin(Cummin)                     │Cuminum cyminum L.                                                │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│82  │Curacao orange peel(Orange,       │운향과 귤(Citrus aurantium L.)                                    │

│    │bitter peel)                      │                                                                  │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│83  │Currant, black, buds 및 leaves    │범의귀과 까마귀밥나무(Ribes nigrum L.)                            │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│84  │Cusparia bark                     │운향과 갈리페아(Galipea officinalis Hancock.)                     │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│85  │Damiana leaves                    │툴네라과 투르네라(Turnera diffusa Willd.)                         │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│86  │Dandelion                         │국화과 민들레(Taraxacum officinale Weber and T.                   │

│    │                                  │laevigatum DC.)                                                   │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│87  │Dandelion root                    │국화과 민들레(Taraxacum officinale Weber and T.laevigatum         │

│    │                                  │DC.)                                                              │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│88  │Davana                            │국화과 쑥(Artemisia pallens Wall.)                                │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│89  │Dill, Indian                      │미나리과 [Anethum sowa Roxb., (Pucedanum graveolens               │

│    │                                  │Benth et Hook., Anethum graveolens L.)]                           │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│90  │Dittany(Fraxinella) roots         │운향과 백선(Dictamnus albus L.)                                   │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│91  │Dittany of Crete                  │꿀풀과 오리가눔(Origanum dictamnus L.)                            │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│92  │Dog grass(Quackgrass, Triticum)   │화본과 개밀(Agropyron repens(L.) Beauv.)                          │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│93  │Dragon’s blood(Dracorubin)       │종려과 다에모노롭스(Daemonorops spp.)                             │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│94  │Elder tree leaves                 │인동과 딱총나무(Sambucus nigra L.)                                │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│95  │Elder flowers                     │인동과 딱총나무(Sambucus canadensis L. and S.nigra I.)            │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│96  │Elecampane rhizome 및 roots       │국화과 금불초(Inula helenium L.)                                  │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│97  │Elemi                             │부르세라과 카나리움(Canarium commune L. or C. luzonicum           │

│    │                                  │Miq.)                                                             │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│98  │Erigeron                          │국화과 망초(Erigeron canadensis L.)                               │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│99  │Estragole(Estragon, Esdragol,     │국화과 쑥(Artemisia dracunculus L.)                               │

│    │Esdragon, Tarragon)               │                                                                  │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│100 │Eucalyptus globulus leaves        │도금양과 유칼립투스(Eucalyptus globulus Labill.)                  │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│101 │Fennel, sweet                     │산형과 회향(Foeniculum vulgare Mill.)                             │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│102 │Fenugreek                         │Trigonella foenum-graecum L.                                      │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│103 │Fir(“pine”)needles 및 twigs     │소나무과 전나무(Abies sibirica Ledeb., A. alba Mill., A.          │

│    │                                  │sachalinesis Masters or A. mayriana Miyabe et Kudo.)              │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│104 │Fir, balsam, needles 및 twigs     │소나무과 전나무(Abies balsamea(L.) Mill.)                         │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│105 │Galanga(Galangal)                 │생강과 알피니아(Alpinia officinarum Hance.)                       │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│106 │Galanga, greater                  │생강과 알피니아(Alpinia galanga Willd.)                           │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│107 │Galbanum                          │산형과 페룰라(Ferula galbaniflua Boiss. et Buhse and other        │

│    │                                  │Ferula spp.)                                                      │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│108 │Gambir(Catechu, Pale)             │꼭두서니과 운카리아(Uncaria gambir Roxb.)                         │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│109 │Genet flowers                     │Spartium junceum L.                                               │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│110 │Gentian, stemLess                 │용담과 용담(Gentiana acaulis L.)                                  │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│111 │Gentian rhizome 및 roots          │용담과 용담(Gentiana lutea L.)                                    │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│112 │Geranium                          │쥐손이풀과 펠라르고니움(Pelargonium spp.)                         │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│113 │Geranium, East Indian             │화본과 개솔새(Cymbopogon martini Stapf.)                          │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│114 │Geranium, rose                    │쥐손이풀과 펠라르고니움(Pelargonium graveolens L’Her.)           │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│115 │Germander, chamaedrys             │꿀풀과 개곽향(Teucrium chamaedrys L.)                             │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│116 │Germander, golden                 │꿀풀과 개곽향(Teucrium polium L.)                                 │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│117 │Ginger                            │생강과 생강(Zingiber officinale Rosc.)                            │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│118 │Grapefruit                        │운향과 귤(Citrus paradisi Macf.)                                  │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│119 │Guaiac                            │남가새과 구아이아쿰(Guaiacum officinale L., G. santum L.,         │

│    │                                  │Bulnesia sarmienti Lor.)                                          │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│120 │Guarana                           │무환자나무과 파울리니아(Paullinia cupana HBK.)                    │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│121 │Guava                             │도금양과 (Psidium spp.)                                           │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│122 │Haw, black, bark                  │인동과 가막살나무(Viburnum prunifolium L.)                        │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│123 │Hemlock needles 및 twigs          │Tsuga canadensis(L.) Carr. or T. heterophylla(Raf.) Sarg          │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│124 │Hickory bark                      │호두나무과 카리아(Carya spp.)                                     │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│125 │Horehound(Hoarhound)              │꿀풀과(Marrubium vulgare L.)                                      │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│126 │Hops                              │뽕나무과 환삼덩굴(Humulus lupulus L.)                             │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│127 │Horsemint                         │꿀풀과 모나르다(Monarda punctata L.)                              │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│128 │Hyacinth flowers                  │백합과 히아신스(Hyacinthus orientalis L.)                         │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│129 │Hyssop                            │Hyssopus officinalis L.                                           │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│130 │Iceland moss                      │Cetraria islandica Ach                                            │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│131 │Immortelle                        │국화과 밀짚꽃(Helichrysum augustifolium DC.)                      │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│132 │Imperatoria                       │산형과(Peucedanum ostruthium(L.). Koch(Imperatoria                │

│    │                                  │ostruthium L.).)                                                  │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│133 │Jasmine                           │물푸레나무과 자스민(Jasminum officinale L. and other spp. of      │

│    │                                  │Jasminum.)                                                        │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│134 │Juniper(berries)                  │측백나무과 노간주나무(Juniperus communis L.)                      │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│135 │Labdanum                          │운향과 귤(Citrus spp.)                                            │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│136 │Laurel berries                    │녹나무과 월계수(Laurus nobilis L.)                                │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│137 │Laurel leaves                     │녹나무과 월계수(Laurus spp.)                                      │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│138 │Lavender                          │꿀풀과 라반둘라(Lavandula officinalis Chaix.)                     │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│139 │Laverder, spike                   │꿀풀과 라반둘라(Lavandula latifolia Vill.)                        │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│140 │Lavandin                          │꿀풀과 라반둘라(Hybrids between Lavandula                         │

│    │                                  │officinalis Chaix and Lavandula latifolin Vill.)                  │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│141 │Lemon                             │운향과 귤(Citrus limon(L.) Burm. f.)                              │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│142 │Lemon grass                       │화본과 개솔새(Cymbopogon citratus DC. and Cymbopogon              │

│    │                                  │lexuosus Stapf.)                                                  │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│143 │Lemon peel                        │운향과 귤(Citrus limon (L.) Burm. f.)                             │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│144 │Lime                              │운향과 귤(Citrus aurantifolia Swingle.)                           │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│145 │Linaloe wood                      │부르세라과 부르세라(Bursera delpechiana Poiss.                    │

│    │                                  │and other Bursera spp.)                                           │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│146 │Linden flowers                    │피나무과 피나무(Tilia spp.)                                       │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│147 │Linden leaves                     │피나무과 피나무(Tillia spp.)                                      │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│148 │Locust bean(Carob bean)           │Ceratonia siliqua L.                                              │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│149 │Lovage                            │Levisticum officinale Koch                                        │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│150 │Lungmoss(Lungwort)                │Sticta pulmonacea Ach.                                            │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│151 │Lupulin                           │뽕나무과 환삼덩굴(Humulus lupulus L.)                             │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│152 │Mace                              │미리스티카과 미리스티카(Myristica fragrans Houtt.)                │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│153 │Maidenhair fern                   │고사리과(Adiantum capillus-veneris L.)                            │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│154 │Mandarin                          │운향과 귤(Citrus reticulata Blanco.)                              │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│155 │Maple, mountain                   │단풍나무과 단풍나무(Acer spicatum Lam.)                           │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│156 │Marjoram, sweet                   │Majorana hortensis Moench.                                        │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│157 │Mate                              │감탕나무과 감탕나무(Ilex paraguariensis St. Hil.)                 │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│158 │Menthol                           │꿀풀과 박하(Mentha spp.)                                          │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│159 │Menthyl acetate                   │꿀풀과 박하(Mentha spp.)                                          │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│160 │Mimosa(Black wattle) flowers      │콩과 아카시아(Acadia decurrens Willd. var. dealbata)              │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│161 │Molasses(extract)                 │Saccarum officinarum L.                                           │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│162 │Mullein flowers                   │현삼과 베르바스쿰(Verbascum phlomoides L. or V.                   │

│    │                                  │thapsiforme Schrad.)                                              │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│163 │Musk(Tonquin musk)                │Musk deer, Moschus moschiferus L.                                 │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│164 │Mustard                           │십자화과 배추(Brassica spp.)                                      │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│165 │Myrrh                             │부르세라과 콤미포라(Commiphora molmol Engl., C.abyssinica         │

│    │                                  │(Berg) Engl., or other Commiphora spp.)                           │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│166 │Myrtle leaves                     │Myrtus communis L.                                                │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│167 │Naringin                          │운향과 귤(Citrus paradisi Macf.)                                  │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│168 │Neroli, bigarade                  │운향과 귤(Citrus aurantium L.)                                    │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│169 │Nutmeg                            │미리스티카과 미리스티(Myristica fragrans Houtt.)                  │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│170 │Olibanu                           │Boswellia carteri Birdw. and other Boswellia spp.                 │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│171 │Onion                             │백합과 부추(Allium cepa L.)                                       │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│172 │Opopanax(Bisabolmyrrh)            │Opopanax chironium Koch (true opopanax) of Commiphora             │

│    │                                  │erythraea Engl. var. Llabrescens.                                 │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│173 │Orange, bitter, flowers           │운향과 귤(Citrus aurantium L.)                                    │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│174 │Orange, bitter, peel              │운향과 귤(Citrus aurantium L.)                                    │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│175 │Orange, sweet                     │운향과 귤(Citrus sinensis (L.) Osbeck.)                           │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│176 │Orange, sweet, flowers            │운향과 귤(Citrus sinensis (L.) Osbeck.)                           │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│177 │Orange, sweet, peel               │운향과 귤(Citrus sinensis (L.) Osbeck.)                           │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│178 │Orange leaf                       │운향과 귤(Citrus sinensis (L.) Osbeck.)                           │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│179 │Origanum                          │꿀풀과 오리가눔(Origanum spp.)                                    │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│180 │Orris root                        │붓꽃과 붓꽃(Iris germanica L.(including its variety florentina    │

│    │                                  │Dykes) and I. pallida Lam.)                                       │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│181 │Palmarosa                         │화본과 개솔새(Cymbopogon martini Stapf.)                          │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│182 │Paprika                           │가지과 고추(Capsicum annuum L.)                                   │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│183 │Parsley                           │Petroselinum crispum(Mill.) Mansf.                                │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│184 │Passion flower                    │시계꽃과 시계꽃석(Passiflora incarnata L.)                        │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│185 │Patchouly                         │꿀풀과 포고스테몬(Pogostemon cablin Benth. and                    │

│    │                                  │P. heyneanus Benth.)                                              │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│186 │Peach leaves                      │장미과 벚나무(Prunus persica (L.) Batsch)                         │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│187 │Peach kernel(Persic oil)          │장미과 벚나무(Prunus persica Sieb. et Zucc.)                      │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│188 │Peanut stearine                   │콩과(Arachis hypogaea L.)                                         │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│189 │Pennyroyal, American              │Hedeoma pulegioides(L.) Pers                                      │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│190 │Pennyroyal, European              │꿀풀과 박하(Mentha pulegium L.)                                   │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│191 │Pepper, black                     │후추과 후추(Piper nigrum L.)                                      │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│192 │Pepper, white                     │후추과 후추(Piper nigrum L.)                                      │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│193 │Peppermint                        │꿀풀과 박하(Mentha piperita L.)                                   │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│194 │Peruvian balsam                   │Myroxylon pereirae klotzsch.                                      │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│195 │Petitgrain                        │운향과 귤(Citrus aurantium L.)                                    │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│196 │Petitgrain lemon                  │운향과 귤(Citrus limon(L.) Burm .f.)                              │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│197 │Petitgrain mandarin 또는          │운향과 귤(Citrus reticulata Blanco.)                              │

│    │tangerine                         │                                                                  │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│198 │Pimenta(Allspice)                 │Pimenta officinalis Lindl.                                        │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│199 │Pimenta leaf                      │Pimenta officinalis Lindl.                                        │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│200 │Pine, dwarf, needles 및 twigs     │소나무과 소나무(Pinus mugo Turra var. pumilio                     │

│    │                                  │(Haenke) Zenari)                                                  │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│201 │Pine, Scotch, needles 및 twigs    │소나무과 소나무(Pinus sylvestris L.)                              │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│202 │Pine, white, bark                 │소나무과 소나무(Pinus strobus L.)                                 │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│203 │Pine, white oil                   │소나무과 소나무(Pinus palustris Mill., and other                  │

│    │                                  │Pinus spp.)                                                       │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│204 │Pipsissewa leaves                 │노루발과 매화노루발(Chimaphila umbellata Nutt.)                   │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│205 │Pomegranate                       │석류과 석류(Punica granatum L.)                                   │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│206 │Poplar buds                       │버드나무과 사시나무(Populus balsamifera L.(P.taca-mahacca         │

│    │                                  │Mill.), P. candicans Ait., or P. nigra L.)                        │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│207 │Prickly ash bark                  │운향과 산초나무(Xanthoxylum(or Zanthoxylum) Americanum            │

│    │                                  │Mill. or Xanthoxylum clavaherculis L.)                            │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│208 │Quassia                           │소태나무과(Picrasma excelsa (Sw.) Planch), or 소태나무과 쿠       │

│    │                                  │아시아(Quassia amara L.)                                          │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│209 │Quebracho bark                    │Aspidosperma quebracho-blanco Schlecht, or (Que-brachia           │

│    │                                  │lorentzii(Griseb)).                                               │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│210 │Quillaia(Soapbark)                │장미과 퀴라자(Quillaja saponaria Mol)                             │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│211 │Quince seed                       │장미과 키도니아(Cydonia oblonga Miller.)                          │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│212 │Red saunders(Red sandalwood)      │Pterocarpus san alinus L.                                         │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│213 │Rhatany root                      │크라메리아과 크라메리아(Krameria triandra Ruiz et Pav. or         │

│    │                                  │K. argentea Mart.)                                                │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│214 │Rhubarb, garden root              │마디풀과 대황(Rheum rhaponticum L.)                               │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│215 │Rhubarb root                      │마디풀과 대황(Rheum officinale Baill., R. palmatum L., or         │

│    │                                  │other spp.(excepting R. rhaponticum L.) or hybrids of Rheum       │

│    │                                  │grown in China.)                                                  │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│216 │Rose absolute                     │장미과 장미(Rosa alba L., Rosa centifolia L., Rosa                │

│    │                                  │damascena Mill., Rosa gallica L., and vars. of these spp.)        │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│217 │Rose(otto of roses, attar of      │장미과 장미(Rosa alba L., Rosa centifolia L., Rosa                │

│    │roses)                            │damascena Mill., Rosa gallica L., and vars. of                    │

│    │                                  │these spp.)                                                       │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│218 │Rose buds                         │장미과 장미(Rosa alba L., Rosa centifolia L., Rosa                │

│    │                                  │damascena Mill., Rosa gallica L., and vars. of these spp.)        │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│219 │Rose flowers                      │장미과 장미(Rosa alba L., Rosa centifolia L., Rosa                │

│    │                                  │damascena Mill., Rosa gallica L., and vars. of these spp.)        │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│220 │Rose fruits(hips)                 │장미과 장미(Rosa alba L., Rosa centifolia L., Rosa                │

│    │                                  │damascena Mill., Rosa gallica L., and vars. of these spp.)        │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│221 │Rose geranium                     │쥐손이풀과 펠르고니움(Pelargonium graveolens L’Hdr.)             │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│222 │Rose leaves                       │장미과 장미(Rosa spp.)                                            │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│223 │Rosemary                          │꿀풀과 로스마리누스(Rosmarinus officinalis L.)                    │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│224 │Saffron                           │붓꽃과 사프란(Crocus sativus L.)                                  │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│225 │Sage                              │꿀풀과 단삼(Salvia officinalis L.)                                │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│226 │Sage, Greek                       │꿀풀과 단삼(Salvia triloba L.)                                    │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│227 │Sage, Spanish                     │꿀풀과 단삼(Salvia lavandulaefolia Vahl.)                         │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│228 │St. John’s bread                 │Ceratonia siliqua L.                                              │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│229 │St. Johnswort leaves, flowers, 및 │물레나물과 물레나물(Hypericum perforatum L.)                      │

│    │caulis                            │                                                                  │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│230 │Sandalwood, white(yellow, 또는    │단향과 산탈룸(Santalum album L.)                                  │

│    │East Indian)                      │                                                                  │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│231 │Sandarac                          │Tetraclinis articulata(Vahl.), Mast                               │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│232 │Sarsaparilla                      │청미래덩굴과 청미래덩굴(Smilax aristolochiaefolia Mill.,          │

│    │                                  │(Mexican sarsaparilla), S. regelii Killip et Morton(Honduras      │

│    │                                  │sarsaparilla), S. febrifuga Kunth (Ecuadorean sarsaparilla), or   │

│    │                                  │undetermined Smilax spp.(Ecuadorean or Central Americal           │

│    │                                  │sarsaparilla).)                                                   │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│233 │Sassafras leaves                  │녹나무과 사프라스(Sassafras albidum (Nutt.) Nees)                 │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│234 │Savory, summer                    │꿀풀과 층층이꽃(Satureia hortensis L.)                            │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│235 │Savory, winter                    │꿀풀과 층층이꽃(Satureia Montana L.)                              │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│236 │Schinus molle                     │옻나무과 스키누스(Schinus molle L.)                               │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│237 │Senna, Alexandria                 │콩과 차풀(Cassia acutifolia Delile)                               │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│238 │Simaruba bark                     │Simaruba amara Aubl                                               │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│239 │Sloe berries(Blackthorn berries)  │장미과 벚나무(Prunus spinosa L.)                                  │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│240 │Snakeroot, Canadian(Wild ginger)  │쥐방울덩굴과 족도리풀(Asarum canadense L.)                        │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│241 │Spearmint                         │꿀풀과 박하(Mentha spicata L.)                                    │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│242 │Spike lavender                    │꿀풀과 라반둘라(Lavandula latifolia Vill.)                        │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│243 │Spruce needles 및 twigs           │소나무과 가문비나무(Picea glauca(Moench) Voss or P.               │

│    │                                  │mariana(Mill.) BSP.)                                              │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│244 │Storax(Styrax)                    │조록나무과 풍나무(Liquidambar orientalis Mill. or L.              │

│    │                                  │styraciflua L.)                                                   │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│245 │Tamarind                          │Tamarindus indica L.                                              │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│246 │Tangerine                         │운향과 귤(Citrus reticulata Blanco.)                              │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│247 │Tansy                             │국화과 쑥국화(Tanacetum vulgare L.)                               │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│248 │Tea                               │차나무과 차나무(Thea sinensis L.)                                 │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│249 │Thistle, blessed(Holy thistle)    │Onicus benedictus L.                                              │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│250 │Thyme                             │꿀풀과 백리향(Thymus vulgaris L. and Thymus zygis var.            │

│    │                                  │gracils Boiss.)                                                   │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│251 │Thyme, white                      │꿀풀과 백리향(Thymus vulgaris L. and Thymus zygis var.            │

│    │                                  │gracils Boiss.)                                                   │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│252 │Thyme, wild 또는 creeping         │꿀풀과 백리향(Thymus serpyllum L.)                                │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│253 │Tuberose                          │Polianthes tuberosa L.                                            │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│254 │Tolu                              │Myroxylon balsamum (L.) Harms                                     │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│255 │Turmeric                          │생강과 쿠르쿠마(Curcuma longa L.)                                 │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│256 │Valerian rhizome 및 roots         │마타리과 쥐오줌풀(Valeriana officinalis L.)                       │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│257 │Vanilla                           │난초과 바닐라(Vanilla planifolia andr. or Vanilla tahitensis. J.  │

│    │                                  │W. Moore.)                                                        │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│258 │Veronica                          │테트라콘드라과 꼬리풀(Veronica officinalis L.)                    │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│259 │Vervain, European                 │마편초과 마편초(Verbena officinalis L.)                           │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│260 │Vetiver                           │화본과 베티베리아(Vetiveria zizanioides Stapf.)                   │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│261 │Violet, Swiss                     │제비꽃과(Viola calcarata L.)                                      │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│262 │Violet, flowers                   │제비꽃과(Viola odorata L.)                                        │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│263 │Violet, leaves                    │제비꽃과(Viola odorata L.)                                        │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│264 │Violet, leaves absolute           │제비꽃과(Viola odorata L.)                                        │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│265 │Walnut husks (hulls), leaves 및   │호두나무과 호두나무(Juglans nigra L. or J. regia L.)              │

│    │green nuts                        │                                                                  │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│266 │Wild cherry bark                  │장미과 벚나무(Prunus serotina Ehrh.)                              │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│267 │Woodruff, sweet                   │꼭두서니과 선갈퀴속(Asperula odorata L.)                          │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│268 │Yucca, Joshua-tree                │용설란과 유카(Youcca brevifolia Engelm)                           │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│269 │Ylang-ylang                       │포포나무과 카난가(Cananga odorata Hook. f. and                    │

│    │                                  │Thoms.)                                                           │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│270 │Yucca, Mohave                     │용설란과 유카[Yucca schidigera Roezl ex Ortgies                   │

│    │                                  │(Y. Mohavensis Sarg)]                                             │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│271 │Zedoary bark                      │생강과 쿠르쿠마(Curcuma zedoaria Rosc.)                           │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│272 │Mastic                            │Pistacia lentiscus LINNE                                          │

├──┼─────────────────┼─────────────────────────────────┤

│273 │Para cress                        │Spilanthes acnella Linne                                         │

├──┼─────────────────┴─────────────────────────────────┤

│274 │기타 천연착향료: 식품공전 제2.식품일반에 대한 공통기준 및 규격 2. 식품원료 기준에 적합한              │

│    │식품원료를 제조ㆍ가공하여 얻은 착향 성분                                                              │

└──┴───────────────────────────────────────────────────┘

■ 합성착향료(Synthetic flavoring substance)

정    의  사료에 착향의 목적으로 사용할 수 있는 합성착향료는 식품첨가물공전(424. 합성착향료)과 같다. 다만, 이 품목에는 식품첨가물공전의 합성착향료를 화학적 변화를 주지 않는 방법으로 2종 이상 단순 혼합한 것이 포함된다.

 나. 감미료 : 사료에 감미를 부여할 목적으로 첨가하는 물질

■ D-소르비톨(D-Sorbitol, D-Glucitol)

  C6H11O6   분자량 182.18   

함    량  이 품목은 건조한 다음 정량할 때, D-소르비톨(C6H11O6)을 97.0～101.0%를 함유한다.

성    상  이 품목은 백색의 알맹이, 분말 또는 결정성분말로서 냄새가 없고 청량한 단맛이 있다.

확인시험  (1) 액  성 : 이 품목의 수용액(7→10) 1mL에 황산제일철시액 2mL 및 수산화나트륨용액(1→5) 1mL를 가하면 액은 청록색을 나타내며 탁하게 되지 아니한다.

  (2) 이 품목의 수용액(1→100) 1mL에 새로 만든 카테콜용액(1→10) 1mL를 가하여 잘 흔들어 섞은 다음 황산 2mL를 가하여 흔들어 섞으면 곧 적색을 나타낸다.

순도시험  (1) 유리산 : 이 품목 5g을 새로 끓여서 식힌 물 50mL에 녹이고 페놀프탈레인시액 1방울 및 0.01N 수산화나트륨용액 0.5mL를 가하여 흔들어 섞어줄 때, 30초이상 지속하는 홍색을 나타내어야 한다.

  (2) 비  소 : 이 품목 0.25g을 물 5mL에 녹이고 이를 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하).

  (3) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  (4) 니  켈 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.0ppm 이하이어야 한다.

  (5) 염화물 : 이 품목 10g을 취하여 염화물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.01N 염산 1.5mL에 대응하는 양 이하이어야 한다(0.005% 이하).

  (6) 황산염 : 이 품목 10g을 취하여 황산염시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.01N 황산 2.0mL에 대응하는 양 이하이어야 한다(0.01% 이하).

  (7) 당  류 : 이 품목 10g을 물 25mL에 녹이고 묽은염산 8mL를 가하여 환류냉각기를 연결하여 수욕 중에서 3시간 가열하고 식힌 다음 메틸오렌지시액을 지시약으로 하여 수산화나트륨시액으로 중화한다. 다음에 물을 가하여 100mL로 하고 그 중 10mL에 물 10 mL 및 펠링시액 40mL를 가하여 3분간 조용히 끓인 다음 방치하여 아산화동을 침전시킨다. 다음에 상징액을 유리여과기로 여과하여 플라스크내의 침전은 씻은 액이 알칼리성을 나타내지 않을 때까지 온탕으로 씻고 씻은 액은 유리여과기로 여과한다. 플라스크내의 침전에 황산제이철시액 20mL를 가하여 녹이고 이를 위의 유리여과기로 여과하여 물로 씻고 그 씻은 액을 합쳐 80℃로 가열하고 0.1N 과망간산칼륨용액 20mL를 가할 때, 시액의 색이 곧 없어져서는 아니 된다.

  (8) 환원당 : 이 품목 1g을 물 25mL에 녹이고 펠링시액 40mL를 가하여 3분간 조용히 끓인 다음 이하 순도시험 (7)에 따라 시험한다. 다만, 0.1N 과망간산칼륨용액은 2mL를 사용한다.

건조감량  이 품목을 80℃에서 3시간 감압건조할 때, 그 감량은 3% 이하이어야 한다.

강열잔류물  이 품목 약 5g을 정밀히 달아 강열잔류물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.02% 이하이어야 한다.

정 량 법  이 품목을 건조한 다음 약 1g을 정밀히 달아 물에 녹여 500mL로 하고 그 중 10mL에 0.3% 과요오드산칼륨용액 50mL와 황산 1mL를 가한 다음 수욕상에서 15분간 가열한다. 식힌 다음 요오드칼륨 2.5g을 가하고 잘 흔들어 섞은 다음 차고 어두운 곳에 5분간 방치하고 유리된 요오드를 0.1N 치오황산나트륨용액으로 적정한다(지시약 : 전분시액). 따로 같은 방법으로 공시험을 한다.

0.1N 치오황산나트륨용액 1mL ＝ 1.822mg C6H11O6

■ 감초(Licorice)

정    의

콩과의 다년생 초본으로 키는 30~80cm로 직립하며, 기부는 목질화하며 가지가 많이 생긴다. 어린 줄기에는 털이 있다. 뿌리는 직근으로 깊게 뻗으며 포복경이 옆으로 뻗으며 부정아에서 새로운 줄기가 발생한다. 잎은 다수우상복엽으로 엽장은 5~20cm, 소엽은 5~17매이며, 엽병에는 섬모가 밀생한다. 꽃은 총상화서로 액생하며 길이 2~10cm이다. 꽃 색은 자색, 백색 또는 황색이고 꽃은 길이 10~24mm이다.

영양정보

글리시리진(glycyrrhizin 6~10%), 플라보노이드와 아이소(iso), 그리시리진산 (glycyrrhizic /glycyrrhizic acid), 사포닌(saponins), 쿠마린, 정유, 전분, 파이토스테롤(phytostrol), 탄닌 및 효소, beturic acid, oleanolic acid, liquiritigenin, isoliquiritigenin, liquiritin, licuraside, rhamnoliquiritin 등이 있다.

고려사항

감초를 다량으로 복용하게 되면 두통, 혈압 상승 등의 부작용이 나타날 수 있으므로 주의한다.

■ 과당(fructose)

정    의

과당이라 함은 전분을 주원료로 하여 당화시켜 얻은 포도당액을 이성화한 것이거나, 설탕을 가수분해하여 얻은 당액을 가공한 것으로 액상과당, 결정과당 등을 말한다. 

원료 등의 구비요건

제조ㆍ가공기준

유형

(1) 액상과당

   전분을 당화, 여과, 정제, 농축하여 얻은 포도당액이나 포도당을 이성화한 것 또는 설탕을 가수분해하여 얻은 것을 농축한 액상의 것을 말한다.

(2) 결정과당

   농축한 액상과당을 결정화하여 건조시킨 결정 또는 분말상의 것을 말한다. 

(3) 기타과당

   유형 (1)～(2)에 첨가물을 혼합한 것을 말한다. 

┏━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━┓

┃           유 형    │액상과당                │결정과당                │기타과당                ┃

┃항 목               │                        │                        │                        ┃

┠──────────┼────────────┼────────────┼────────────┨

┃(1)과당(%)          │35.0 이상               │?                      │35.0 이상               ┃

┃                    │(무수물기준)            │                        │(무수물기준)            ┃

┠──────────┼────────────┼────────────┼────────────┨

┃(2)인공감미료       │검출되어서는 아니 된다. │검출되어서는 아니 된다. │검출되어서는 아니 된다. ┃

┠──────────┼────────────┼────────────┼────────────┨

┃(3) 비선광도[α]D20 │-                       │-89.0 ～ -93.5          │-                       ┃

┠──────────┼────────────┼────────────┼────────────┨

┃(4)납(mg/kg)        │0.5 이하                │0.5 이하                │0.5 이하                ┃

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규격

시험방법

(1) 과당

   검체 약 1 g을 정밀히 달아 1 mL 중에 과당을 약 40 μg 함유하도록 물로 희석하여 일정량으로 한 후 이 액 1 mL를 시험관에 취하여 얼음물 중에서 시스테인 황산시액 4 mL와 카바졸황산시액 2 mL를 순서대로 혼합하고 40℃ 항온조 중에서 30 분간 반응시킨 후 얼음물 중에서 옮겨 반응을 정지시키고 다시 실온의 물중에서 약 30 초간 조용히 흔들어 준다. 이 액을 560 nm에서 흡광도를 측정한다. 동시에 따로 작성한 과당표준액의 검량선으로부터 과당함량을 구한다.

      ㆍ 시스테인황산시액

         L-시스테인염산염(C3H7NO2SㆍHCIㆍH2O) 150 mg을 물 10 mL에 녹이고 70% 황산 200 mL를 가한다.

      ㆍ 카바졸황산시액

         카바졸 12 mg을 에탄올 10 mL에 녹이고 70% 황산 100 mL를 가한다.

(2) 인공감미료 

   식품공전 제 9. 일반시험법 2.2.1 삭카린나트륨에 따라 시험한다. 

(3) 비선광도

   무수물로서의 검체 10 g(검체의 수분함량에 따라 환산함)을 정확히 달아 물에 녹여 암모니아시액 0.2 mL 및 물을 가하여 100 mL로 하고 200 mm 관측관으로 20℃에서 선광도를 측정하여 이에 5를 곱하여 비선광도로 한다.

(4) 납

   식품공전 제 9. 일반시험법 7.1 중금속시험에 따라 시험한다.

■ 네오탐(Neotame)

  C20H30N2O5  분자량 378.47   

함    량

  이 품목은 무수물로 환산할 때, 네오탐(C20H30N2O5) 97.0∼102.0%를 함유한다.

성    상

  이 품목은 백∼회백색의 분말이다.

확인시험

(1) 이 품목은 물에 잘 녹지 않으나, 에탄올에는 매우 잘 녹는다.

(2) 이 품목을 적외부흡수스펙트럼 측정법의 (1)브롬화칼륨정제법에 따라 측정할 때, 아래와 같은 스펙트럼을 나타내어야 한다.

순도시험

(1) 액성 : 이 품목의 수용액(1→200)의 pH는 유리전극법으로 측정할 때, 5.0∼7.0이다.

(2) 융점 : 이 품목의 융점은 81～84℃이어야 한다.

(3) 비선광도 : 이 품목은 0.25g을 정밀히 달아 물에 녹여 50mL로 하고 이 액의 선광도를 측정할 때, 무수물로 환산하여 ＝ -40.0～-43.3° 이어야 한다.

(4) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

(5) 비소 : 이 품목을 비소시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 4.0ppm 이하이어야 한다.

(6) 탈메틸알콜체(N-(3,3-디메틸부틸)-L-α-아스파틸-L-페닐알라닌) :  정량법의 시험용액을 시험용액으로 한다. 따로, 탈메틸알콜체(미리 수분함량 측정을 한다) 0.03g을 정밀히 달아 이동상에 녹여 50mL로 하고, 이액 10mL를 취하고 이동상에 녹여 100mL로 한 액을 표준원액으로 한다. 표준원액 2, 10, 25 및 50mL를 취하고 각각에 이동상을 가하여 정확히 100mL로 하여 표준용액으로 한다. 시험용액, 표준용액 및 표준원액을 각각 25μL를 취하여 정량법의 조작조건(다만, 탈메틸알콜체의 유지시간이 약 4분이 되도록 한다)에 따라 액체크로마토그래피를 행하여, 다음 식으로부터 탈메틸알콜체의 양 구할 때, 그 양은 1.5% 이하이어야 한다.

  탈메틸알콜체의 양(%)  =   W                                 ×  100   

                          ──────────────────          

                            무수물로 환산한 검체의 채취량(g)            

W : 검량선으로부터 구한 시험용액 중에 탈메틸알콜체(g)

(7) 기타불순물 : 정량법의 시험용액을 정량법의 조작조건에 따라 액체크로마토그래피를 행한 후(분석시간은 네오탐 유지시간의 1.5배로 한다), 다음 계산식에 따라 기타불순물의 양을 구할 때, 그 양은 2.0% 이하이어야 한다.

  기타불순물 양(%)  =   A     ×  100   

                      ────          

                        A+B             

A : 시험용액의 네오탐, 탈메틸알콜체, 용매 이외 피크 면적의 합계

B : 네오탐, 탈메틸알콜체 피크 면적의 합계

수    분

  이 품목 약 0.25g을 정밀히 달아 수분정량법(칼?피셔법)의 직접 적정법에 따라 시험할 때, 그 양은 5.0% 이하이어야 한다.

강열잔류물

  이 품목 1g을 정밀히 달아 800±25°에서 1시간 강열할 때, 그 양은 0.2% 이하이어야 한다.

정 량 법

  이 품목 0.2g을 정밀히 달아 이동상에 녹여 100mL로 한 액을 시험용액으로 하고, 따로 네오탐 표준품(미리 수분함량 측정을 한다) 약 0.1g을 정밀히 달아 이동상에 녹여 100mL로 한 액을 표준용액으로 한다. 시험용액 및 표준용액을 다음의 조작조건에 따라 액체크로마토그래피를 행하고, 다음 식에 따라 함량을 구한다.

  네오탐 함량(%)  =   무수물로 환산한 네오탐 표준품의 채취량(g)   ×  AT  ×  100   

                    ───────────────────────  ───          

                      무수물로 환산한 검체의 채취량(g)                AS            

AT : 시험용액의 네오탐 피크 면적

AS : 표준용액의 네오탐 피크 면적

   조작조건

검출기 : 자외부흡수검출기(측정파장 210nm)

컬  럼 :  C18(4.6mm×100mm, 3∼5μm) 또는 이와 동등한 것

칼럼온도 : 45° 부근의 일정온도

주입량 : 25μL

이동상 : 1-헵탄설폰산나트륨 3.0g을 물 740mL에 녹이고, 트리에틸아민 3.8mL을 가한 다음, 인산으로 pH를 3.5로 조정한 후, 물을 가하여 750mL로 한다. 여기에 아세토니트릴 250mL를 가하고 인산으로 pH를 3.7로 조정한다.

유  속 : 1.5mL/min(네오탐의 유지시간이 약 12분이 되도록 조정)

■ 네오헤스페리딘 디하이드로칼콘(Neohesperidine Dihydrochalcone, NHDC)

C28H36O15 분자량612.6

성분규격

함량

본 품은 건조 후 정량할 때 네오헤스페리딘 디하이드로칼콘(C28H36O15) 96%이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 밝은 회백색의 결정형 분말로서 강한 단맛을 낸다.

② 본 품은 뜨거운 물에는 잘 용해되나 차가운 물에는 잘 용해되지 않는다.

③ 에터와 벤젠에는 불용성이다. 단맛은 설탕의 1,000∼1,500배이다.

확인시험

① 흡광도 : 본 품 2mg을 100㎖의 메탄올에 녹인 용액의 쵀대 자외선 흡광도는 282～283nm이다.

② 정색반응 : 본 품 약 10mg을 1㎖의 메탄올에 녹인 후 1㎖의 1% 아미노에칠 디메틸보레이트 메탄올 용액을 가하면 밝은 노란색을 나타낸다.

순도시험

① 중금속 : 본 품은 2.0g을 취하여 중금속 시험법에 따라 시험할 때 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(10ppm이하)

② 비소 : 본 품 1.0g을 취하여 비소 시험법에 따라 시험할 때 여기에 적합하여야 한다. (3ppm이하)

건조감량

    11%이하(105℃, 3시간)

정량법

아래와 같은 조건을 이용하여 액체크로마토그래피법을 이용하여 적량한다.

① 기구 및 실험조건

   Nova Pack RP C18 4㎛처리된 3.9mm ID × 150mm 길이의 컬럼을 사용하며 이동상으로 아세토니트릴/초산 0.5%(20:80 V/V)을 이용하여 분당 1㎖의 속도로 실험한다. 컬럼의 온도는 30℃를 유지하여 282nm의 자외선에서 측정한다.

② 실험과정

   50㎖의 DMSO에 네오헤스페리딘 디하이드로칼콘 표준품을 40㎎, 45㎎, 50㎎, 60㎎씩 각각 녹여 플라스크에 담고 위의 실험조건 하에서 실험하여 표준곡선을 얻는다. 본 품 50㎎을 50㎖의 DMSO에 녹여 플라스크에 담고 위의 실험조건 하에서 3차례 실험한 뒤 그 결과를 표준곡선과 비교한다.

   실험결과로 산출된 네오헤스페리딘 디하이드로칼콘의 양을 건조감량된 수분의 양을 고려하여 최종의 함량으로 산출하여 준다.

제조방법의 기준

본 품은 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

차광한 기밀 용기에 보존할 것.

■ 맥아당(Maltose; 말토오스, 엿당)

정    의

두 분자의 포도당이 알파-1,4 결합한 이당류로서 엿기름에 많기 때문에 맥아당이라고 한다.

성상/순도/함량 : 식품 수준

검정성분(또는 물질명) : 맥아당(말토오스)

기    타-

■ 사카린나트륨(Saccharine Sodium)

C7H4NNaO3S 분자량205.19

성분규격

함량

본 품은 120℃에서 4시간 건조 후 정량할 때, 사카린나트륨(C7H4NNaO3S) 99.0% 이상을 포함한다.

성상

본 품은 무색～백색의 결정, 백색의 결정성분말 또는 백색의 분말로, 맛은 매우 달아 10,000배의 수용액에서도 단맛이 난다.

확인시험

① 본 품 0.5g을 물 10㎖에 용해하고 묽은 염산 1㎖를 첨가하여 1시간 방치해 둔다. 이후 생긴 백색결정성의 침전을 여과추출하여 잘 물로 씻어서 105℃에서 2시간 건조할 때, 그 융점은 226～230℃이다.

② 본 품 20㎎을 레조르신 40㎎과 혼화하여 황산 10방울을 넣고 조용히 가열하여 혼합물이 암녹색이 되었을 때 냉각시킨다. 이것에 물 10㎖ 및 수산화나트륨 시액 10㎖를 첨가하여 용해할 때, 용액은 녹색의 형광색을 발한다. 

③본 품 0.1g을 수산화나트륨 시액 5㎖에 녹인 다음 조용히 가열하여 증발건조시키고 다시 탄화하지 않도록 주의하면서 용해하여 암모니아 냄새가 발생하지 않게 되었을 때 냉각한다. 잔유물을 물 약 20㎖에 녹여서 묽은 염산으로 중화한 후 여과하고, 여과액에 염화제이철 시액 1방울을 첨가할 때, 자색～적자색을 띤다.

④ 본 품을 회화하여 얻은 잔유물은 나트륨염의 정성반응을 띤다.

순도시험

①용액상 : 본 품을 분말로 만든 후, 그 중 1g씩을 물 1.5㎖ 및 에탄올 70㎖에 각각 녹일 경우, 용액은 무색으로 투명해야 한다.

②유리산 및 유리알카리 : 본 품 1g을 새로 끓여서 냉각한 물 10㎖에 녹이고 페놀후탈레인 시액 1방울을 첨가할 때, 홍색을 띠어서는 안 된다. 다시 0.1N 수산화나트륨액 1방울을 첨가할 때 홍색을 띠어야 한다.

③안식향산염 및 사르칠산염 : 본 품 0.5g을 물 10㎖에 녹이고 초산 5방울 및 염화제이철시액 3방울을 첨가할 때, 침전이 생성되서는 안 된다. 또한 자색～적자색을 띠어서는 안 된다.

④중금속 : 본 품 1.0g을 물 45㎖에 녹이고 묽은 초산 2㎖를 첨가한 것을 검사액으로 하여 중금속 시험을 할 때, 그 양은 10ppm 이하이어야 한다.

⑤비소 : 본 품 2.5g을 분해 플라스크에 넣고 초산 10㎖ 및 황산 5㎖를 첨가하여 가열한다. 액체가 다시 갈색을 띨 때는 냉각 후 초산 1㎖를 추가하여 가열한다. 이 조작을 액체가 무색～담황색이 될 때까지 반복한 후, 흰 연기가 발생할 때까지 가열한다. 냉각 후, 물 10㎖ 및 포화수산암모늄액 15㎖를 첨가하여 다시 흰 연기가 발생할 때까지 가열한다. 냉각 후, 물을 첨가하여 25㎖로 만들고 이중 5㎖를 검사액으로 하여 비소시험을 할 때, 이에 적합해야 한다. 단, 표준색은 비소표준액 10㎖를 분해 플라스크에 넣고 질산 10㎖ 및 황산 5㎖를 첨가, 이하 시료의 경우와 마찬가지로 조작해 만든다.(4ppm 이하)

⑥o-톨루엔설폰아미드 : 본 품 10g을 물 50㎖에 녹이고 초산에틸 30㎖씩 3회 추출을 시행, 초산에틸층을 모아서 25w/v% 염화나트륨액 30㎖를 이용하여 씻고 무수황산나트륨으로 탈수한 후 초산에틸을 제거, 잔유물에 내부 표준물질용액 5㎖를 첨가하여 녹인 것을 시료용액으로 한다. 별도로 o-톨루엔설폰아미드의 초산에틸용액(1 →1,000) 1㎖를 취하여 수용액상에서 가열, 초산에틸을 제거한 후, 잔유물에 내부 표준물질 5㎖를 첨가하여 녹인 것을 표준용액으로 한다. 시료용액 및 표준용액에 있어서 다음의 조작조건에서 가스크로마트그래프법으로 시험할 때, 시료용액의 카페인 최고높이(Hs)와 o-톨루엔설폰아미드의 최고높이(H)의 비율 H/Hs는 표준용액의 카페인 최고높이(‘|s)와 o-톨루엔설폰아미드의 최고높이(‘|)의 비율 ‘|/H’s를 초과해서는 안 된다.(100ppm 이하) 단, 내부표준물질용액은 카페인 초산에틸용액(1→5,000)을 이용한다.

조작조건

칼럼충전제 : 177～250μm의 가스크로마트그래프용 규조토 담체. 담체에 대해서 23%가 되는 양의 코하크산 죠틸렌글리콜폴리에스테르를 포함한 클로르포름 용액을 첨가하여 클로르포름을 증발 건조한 것.(혹은 이와 동등한 것)

칼럼관 : 내직경 3～4mm, 길이 1m인 유리관 또는 스테인레스관

칼럼온도 : 195～205℃의 일정온도

검출기 : 불꽃이온화검출기

캐리어 가스 : 질소가스를 이용한다. 카페인이 약 6분 후에 나타나도록 칼럼온도 및 캐리어 가스의 유속을 조정한다.

건조감량

15% 이하(1g, 120℃, 4시간)

정량법

본 품을 120℃에서 4시간 건조 후, 그중 약 0.3g을 정밀하게 칭량하여 과염소산적정용 빙초산 20㎖를 첨가하여 녹이고 0.1N 과염소산으로 적정한다.(지시약 크리스탈 바이올렛ㆍ빙초산시액 2방울) 종점은 용액의 자색이 청색을 거쳐 녹색으로 바뀌는 점으로 한다. 별도로 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다.

0.1N 과염소산 1㎖ = 20.52㎎ C7H4NNaO3S

보존방법의 기준

차광된 밀폐용기에 보존할 것.

■ 설탕(자당ㆍ백당ㆍ수크로오스 포함))

정    의

   설탕이라 함은 사탕수수 또는 사탕무 등에서 추출한 당액 또는 원당을 정제한 백설탕, 갈색설탕 등을 말한다.

원료 등의 구비요건 : -

제조ㆍ가공기준

   ① 설탕 제조시에는 용해, 여과, 결정공정을 거쳐야 한다.

제품유형

   ① 백설탕

      당액 또는 원당을 정제 가공한 백색의 설탕을 말한다.

   ② 갈색설탕

      당액 또는 원당을 정제 가공한 갈색의 설탕을 말한다.

   ③ 기타설탕

      당액 또는 원당을 정제가공한 것에 식품 또는 식품첨가물을 혼합한 것을 말한다. 

규  격

┏━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━┓

┃구 분             │백설탕                    │갈색설탕                  │기타설탕                ┃

┃항 목             │                          │                          │                        ┃

┠─────────┼─────────────┼─────────────┼────────────┨

┃①성상            │무색 또는 백색의 단맛을 가│갈색의 단맛을 가진 결정,  │-                       ┃

┃                  │진 결정, 결정성 분말 또는 │결정성 분말 또는 덩어리   │                        ┃

┃                  │덩어리 형태이어야 한다.   │형태이어야 한다.          │                        ┃

┠─────────┼─────────────┼─────────────┼────────────┨

┃②당도(%)         │99.7 이상                 │97.0 이상                 │86.0 이상               ┃

┠─────────┼─────────────┼─────────────┼────────────┨

┃③인공감미료      │검출되어서는 아니 된다.   │검출되어서는 아니 된다.   │검출되어서는 아니 된다. ┃

┠─────────┼─────────────┼─────────────┼────────────┨

┃④납(mg/kg)       │0.5 이하                  │1.0 이하                  │1.0 이하                ┃

┠─────────┼─────────────┼─────────────┼────────────┨

┃⑤ 이산화황(mg/kg)│20.0 미만                 │20.0 미만                 │20.0 미만               ┃

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시험방법

   ① 당도(설탕)

      검체 26 g을 정확히 달아 100 mL의 메스플라스크에 옮기고 물 80 mL를 가하여 완전히 녹인 후 1 mL의 염기성초산납용액을 천천히 가하고 물을 표선까지 채운다. 이때 액면에 거품이 일면 에탄올 한방울을 가하여 거품을 가라앉힌 다음 심하게 흔들어 섞은 후 필요하면 규조토를 약간 가하고 건조여과지로 여과한다. 처음의 여액 25 mL를 버리고 그 다음의 여액을 검액으로 하여 식품공전 제 9. 일반시험법 1. 식품성분시험법 1.1.4.1.3 자당 다. 선광도 측정에 의한 법에 따라 시험한다.

   ② 인공감미료 

    식품공전 제 9. 일반시험법 2.2.1 삭카린나트륨에 따라 시험한다.

   ③ 납

      식품공전 제 9. 일반시험법 7.1 중금속시험에 따라 시험한다.

   ④ 이산화황 

      식품공전 제 9. 일반시험법 2.5 아황산, 차아황산 및 그 염류에 따라 시험한다.

■ 스테비아(잎) (Stevia leaf)

정    의

   이 품목은 스테비아(Stevia rebaudiana Bertoni)의 건조 잎을 말한다.

성상/순도/함량 :

    이 품목은 건조한 다음 정량할 때, 총 스테비올배당체(Steviol glycoside)로서 표시량 이상이어야 한다.

검정성분(또는 물질명) : 스테비올배당체

기    타

     스테비아(잎)은 자당(sucrose)의 15∼45배의 단맛이 있다. 영양성분은 조단백질 14.2%, 조지방 2.0%, 총식이섬유 63.0%, 조회분 7.7%, 수분 5.6% 정도이다.

■ 수크랄로스(Sucralose)

C12H19Cl3O8                                                        분자량: 397.64

성분규격

함    량  이 품목을 무수물로 환산한 것은 수크랄로스(C12H19Cl3O8) 98.0～102.0%를 함유한다.

성    상  이 품목은 백～엷은 회백색의 결정성 분말로서 냄새가 없고 단맛이 있다.

확인시험, 순도시험, 수분, 강열잔류물, 정량법

「식품첨가물의 기준 및 규격」 내 4. 품목별 성분 규격의 ‘수크랄로스’ 확인시험, 순도시험, 수준, 강열잔류물, 정량법을 따른다. 

■ 아니스(Anise)

정    의

미나리과에 속하는 한해살이풀의 열매를 말린 것으로 분말로 가공하여 사용한다.

성상/순도/함량

회향과 비슷한 레몬향을 풍기며 시고 단맛이 난다.

검정성분(또는 물질명)

아네톨

기타

독특한 향과 단맛을 내는 아네톨이 들어있음

■ 원당(raw sugar)

정    의

사탕수수나 사탕무우에서 최소한의 가공을 통해 추출한 갈색을 띠는 설탕, 즉 정제되지 않은 당을 말한다.

영양정보

수분 1.3% 내외, 자당(sucrose) 함량은 95% 내외이다.

고려사항

중금속인 납 함량은 1.0ppm 이하로 규정되어 있다.  

■ 캐러멜(카라멜, Caramel)

정    의

  이 품목에는 카라멜색소 Ⅰ, 카라멜색소 Ⅱ, 카라멜색소 Ⅲ, 카라멜색소 Ⅳ가 있다. 각각의 정의는 다음과 같다.

  카라멜색소 I : 전분가수분해물, 당밀 또는 당류의 식용탄수화물을 열처리하거나 또는 암모니아화합물과 아황산화합물을 제거한 산 또는 알칼리를 가해주고 열처리하여 얻어지는 것으로서 아황산화합물 및 암모늄화합물을 사용하지 않은 것이다.

 카라멜색소 Ⅱ : 전분가수분해물, 당밀 또는 당류의 식용탄수화물에 아황산화합물을 가해주고, 암모늄화합물을 제거한 산 또는 알칼리를 가해주거나 가해주지 않고 열처리하여 얻어지는 것으로서 암모늄화합물을 사용하지 않은 것이다.

 카라멜색소 Ⅲ : 전분가수분해물, 당밀 또는 당류의 식용탄수화물에 암모늄화합물을 가해주고, 아황산화합물을 제거한 산 또는 알칼리를 가해주거나 가해주지 않고 열처리하여 얻어지는 것으로서 아황산화합물을 사용하지 않은 것이다.

 카라멜색소 Ⅳ : 전분가수분해물, 당밀 또는 당류의 식용탄수화물에 아황산화합물과 암모늄화합물을 가해주고, 산 또는 알칼리를 가해주거나 가해주지 않고 열처리하여 얻어지는 것이다.

성    상

  이 품목은 암갈～흑색의 분말, 덩어리, 페이스트 또는 액체로 냄새가 없거나 또는 약간 특이한 냄새가 있고, 맛은 없거나 약간 특이한 맛이 있다.

확인시험

  ① 이 품목의 수용액(1→100)은 엷은 갈～흑갈색을 나타낸다.

  ② 미리 측정한 흡광도가 약 0.5가 되도록 이 품목을 달아 0.025N 염산을 가하여 100mL로 하고 필요하면 원심분리를 하여 상등액을 A액으로 한다. A액 20mL를 취한 다음 디에틸아미노에틸셀룰로오스 음이온교환수지(DEAE cellulose) 0.2g을 가하여 잘 흔들어 섞은 후 원심분리하고 상등액을 취하여 B액으로 한다. A액 및 B액은 0.025N 염산을 대조액으로 하여 액층길이 1cm, 파장 560nm에서 흡광도 AA 및 AB를 측정할 때, (AA-AB)/AA의 값은, 카라멜색소 I은 0.75 이하, 카라멜색소 II 및 카라멜색소 IV는 0.5 이상, 카라멜색소 III는 0.5 이하이어야 한다.

  ③ (카라멜색소 I, 카라멜색소 Ⅲ의 경우에만 적용한다) 이 품목 0.2～0.3g을 달아 0.025N 염산을 가하여 100mL로 하고 필요하면 원심분리를 하여 상등액을 C액으로 한다. C액 40mL를 취한 다음 인산화셀룰로오스 양이온교환수지(phosphryl cellulose) 2.0g을 가하여 잘 흔들어 섞은 후 원심분리하고 상등액을 취하여 D액으로 한다. C액 및 D액은 0.025N 염산을 대조액으로 하여 액층길이 1cm, 파장 560nm에서 흡광도 AC 및 AD 를 측정할 때 (AC-AD)/AC의 값은, 카라멜색소 I은 0.5 이하, 카라멜색소 III은 0.5 이상이어야 한다.

  ④ (카라멜색소 Ⅱ, 카라멜색소 Ⅳ의 경우에만 적용한다) 이 품목 0.1g을 달아 물을 가하여 100mL로 하고 필요하면 원심분리를 하여 상등액을 A액으로 한다. A액 5mL를 정확히 취한 다음 물을 가하여 100mL로 하고 B액으로 한다. A액은 물을 대조액으로 하여 액층길이 1cm, 파장 560nm에서 흡광도 AA를, 또는 B액은 물을 대조액으로 하여 액층길이 1cm, 파장 280nm에서 흡광도 AB를 각각 측정할 때, AB × 20/AA값은, 카라멜색소 II는 50 이상, 카라멜색소 Ⅳ는 50 이하이어야 한다.

순도시험

  ① 비  소 : 이 품목 0.77g을 취하여 「구아검」의 순도시험 ①에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(1.3ppm 이하).

  ② 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.0ppm 이하이어야 한다.

  ③ 카드뮴 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  ④ 수  은 : 이 품목 5g을 수은분해플라스크에 취하고 물 10mL 및 질산 20mL를 넣어 잠시 방치한 다음 황산 10mL를 천천히 가한다. 환류냉각기를 연결하여 주의하면서 NO2의 발생이 끝날 때까지 수은분해장치에서 가열한다. 분해액이 담황색으로 되지 않을 때에는 식힌 다음 질산 5mL를 가해서 다시 가열한다. 필요하면 이 조작을 반복하여 분해액이 무～담황색으로 투명하게 될 때까지 계속한다. 이 조작이 끝난 후 액을 식힌 다음 이에 물 50mL 및 10% 요소용액 10mL를 가해서 10분간 끓이고 식힌 다음 과망간산칼륨 1g을 넣고 10분간 때때로 흔들어 섞는다. 자홍색이 없어지면 다시 과망간산칼륨 소량씩을 추가하여 20분간 가열하여 자홍색이 남을 때까지 반복한다. 이를 식힌 다음 용액이 무색투명하게 될 때까지 10% 과산화수소를 주의하여 적가한다. 이를 시험용액으로 하여 원자흡광광도법의 환원기화법에 따라 시험할 때, 시험용액의 흡광도는 수은표준용액 5mL를 사용하였을 때의 흡광도보다 높아서는 아니 된다(0.1ppm 이하).

  ⑤ 색  가 : 이 품목 100mg을 정밀히 달아 물을 가하여 100mL로 한 것을 시험용액으로 한다. 필요하면 원심분리하여 그 상등액을 사용한다. 물을 대조액으로 하여 액층 1cm, 파장 610nm에서 시험용액의 흡광도 A를 측정하여 다음 계산식에 따라 고형분으로 환산하여 색가를 구할 때, 그 양은 0.01～0.6 이어야한다.

  색 가 =   A610 × 100     

          ─────────

            고형분함량(%)   

※ 고형분함량

  ① 검체가 액체인 경우 : 칭량병에 정제석영사 30g과 유리봉을 넣고 50mmHg 감압하에서 60℃로 항량이 될 때까지 건조한 다음 검체 1.5～2.0g을 정밀히 달아 앞의 칭량병에 넣고 잘 섞은 후 항량이 될 때까지 건조하고 다음 계산식에 따라 고형분 함량(%)을 구한다. 다만, 정제석영사(fine quartzsand)는 No. 40의 체는 통과되나, No. 60의 체는 통과되지 않는 크기의 석영사에 염산을 가하여 분해시킨 후 산성을 나타내지 않을 때까지 씻어주고 건조시킨 다음 강열한 것을 사용한다.

  (건조 후 석영사와 검체의 무게(g) - 석영사 무게) × 100  

─────────────────────────────

  검체의 채취량(g)                                        

  ② 검체가 분말 또는 과립인 경우 : 강열감량시험법에 따라 시험하고 50mmHg 감압하에서 60℃로 항량이 될 때까지 건조한 후 다음 계산식에 따라 고형분 함량(%)을 구한다.

  (건조 후 자제도가니와 검체의 무게(g) - 자제도가니 무게(g))  × 100  

───────────────────────────────        

  (건조 전 자제도가니와 검체의 무게(g) - 자제도가니 무게(g))          

※ 색가 0.1인 제품 기준 불순물계산

  각 성분규격에 따라 시험하여 구한 각 불순물(총질소, 총황, 암모니아성질소, 이산화황, 4-메틸이미다졸, 2-아세틸-4-테트라히드록시부틸이미다졸)은 고형분으로 환산한 Cs를 구하고 다시 색가 0.1인 제품을 기준으로 하기 위해 다음 계산식에 따라 각 불순물의 양을 구한다.

  Cs × 0.1   

───────

  색가        

  Cs :    각 불순물의 양 × 100   

        ─────────────

          고형분함량(%)           

  ⑥ 총질소 : 이 품목을 질소정량법 중 킬달법에 따라 시험할 때, 그 양은 3.3% 이하이어야 한다(색가 0.1인 제품을 기준으로 함). 

  ⑦ 총  황 : 산화마그네슘 1～3g 또는 초산마그네슘 6.4～19.2g, 설탕 1g 및 질산 50mL를 증발접시에 취한 다음 이 품목 5～10g을 정밀히 달아 가해 주고 수욕상에서 페이스트상이 될 때까지 농축한다. 회화로에 증발접시를 넣고 서서히 가열(525℃이하)하여 이산화질소 연기가 발생되지 않을 때까지 가열하고, 증발접시를 식힌 후 이에 염산(1→2.5)을 가해 용해하고, 중화시킨 후 다시 5mL를 더 가해주고, 여과한 다음 끓을 때까지 가열한다. 이어서 10% 염화바륨용액 5mL를 한 방울씩 떨어뜨리면서 가해주고, 100mL가 될 때 까지 농축한 다음 하룻밤 방치한다. 이를 여과지(5C 또는 이와 동등한 것)를 이용하여 여과하고, 여지 및 잔류물을 미리 무게를 달아 둔 도가니에 넣고 항량이 될 때까지 강열하여 황산바륨으로서 무게를 측정한다. 다음 계산식에 따라 총황의 양을 구할 때, 그 양은 3.5% 이하이어야 한다(색가 0.1인 제품을 기준으로 함). 따로 공시험을 행한다.

  총황(%)=  황산바륨의 양(g) × 0.1374  × 100  

          ───────────────        

            검체의 채취량(g)                    

  ⑧ 암모니아성질소(카라멜색소 III, 카라멜색소 IV의 경우에만 적용한다) : 0.1N 황산 25mL를 500mL 포집용플라스크에 넣고 킬달증류장치를 연결하여 냉각관 끝이 포집용플라스크의 황산에 잠기게 한다. 따로, 이 품목 약 2g을 정밀히 달아 800mL 킬달분해플라스크에 넣고 산화마그네슘 2g, 물 200mL 및  비등석을 가해준 분해플라스크를 잘 흔들어 내용물을 혼합한 후 빠르게 증류장치에 접속한다. 분해플라스크를 액이 비등할 때까지 가열하고 포집용플라스크에 유출액 약 100mL를 받고 냉각관의 끝은 물 2～3mL로 씻어 이를 합해 주고 메틸레드시액 4～5방울을 가하고 0.1N 수산화나트륨용액으로 적정하여 이의 소비량을 S라 한다. 별도의 공시험을 하여 이의 소비량을 B로 한다. 다음 계산식에 따라 계산할 때, 그 양은 0.6% 이하이어야 한다(색가 0.1인 제품을 기준으로 함).

  암모니아성질소의 함량(%) ＝   (B - S) × 0.0014 × 100  

                              ──────────────

                                검체의 채취량(g)          

 ⑨ 이산화황 (카라멜색소 II, 카라멜색소 IV의 경우에만 적용한다) : 다음 그림의 장치를 사용한다.

A : 3구 환저플라스크 (1L)

B : 알린식 환류냉각관 (300mm)

C : 흡수관

D : 분액여두 (125mL)

E : 접속관

F : 질소통에 연결된 가스세정병 (250mL)

   조그만 유발에 피로갈롤(pyrogallic acid) 4.5g과 물 5mL를 넣고 갈아 준 다음 가스세정병 (F)에 옮겨주고 잔류물은 다시 갈아 물 5mL씩으로 2회 넣어주고 이에 질소를 통하여 안의 공기를 치환시킨다. 이어서 물 85mL에 수산화칼륨 65g을 녹여 식힌 액을 깔대기를 사용하여 가스세정병 (F)에 가해준 후 다시 질소를 통과시켜 가스세정병 (F)의 상부 공기를 내보낸다. 가스세정병 (F)의 접속관을 플라스크 (A)의 접속관과 연결하고 가스세정액 (F)은 시험할 때 조제한다. 흡수관 (C) 각각에는 직경 8mm, 길이 25mm의 유리막대 두개, 출구 쪽에 3mm 유리구 10mL, 3% 과산화수소 10mL 및 메틸레드시액 한 방울을 가한다. 장치를 모두 연결한 후 분액여두 (D)의 콕크를 잠근 후 분액여두 (D) 상부의 연결관에 가스를 소량 통과시켜 몇 분간 정치한 후 증류장치가 새는지를 흡수관의 액의 평형으로 확인한다.

   시험조작:이 품목 25g을 취하여 새로 끓여 식힌 물 300mL에 녹이고 깔대기를 사용하여 플라스크 (A)에 넣은 다음 물을 가하여 전량을 약 400mL로 한다. 분액여두 (D)에는 4N 염산 90mL를 가한 후 분액여두 (D) 연결관을 통해 불어 넣어 서서히 플라스크 (A)에 넣고 분액여두 (D)의 콕크를 잠근다. 가스세정병 (F)의 양쪽에 연결된 관을 열어 주어 질소가스를 통과시켜 환류되도록 하고 약 20분간 플라스크 (A)를 서서히 가열한다. 환류를 안정시킨 다음 1시간 45분간 환류시키고 냉각관 (B)의 물을 잠근 후 잠시 가열을 계속하여 냉각수의 공급을 중단한 후 잠시 가열을 계속하여 접속관 (E)의 물방울이 생기고 냉각관 (B)의 위쪽부분이 60～70℃가 될 때 냉각관 (B)을 분리한다. 냉각관 (B)은 세정하여 제2흡수관에 넣고 제1흡수관의 배출구 쪽의 연결관은 남겨두고 제2흡수관을 분리한 후 제1흡수관의 연결관 끝을 제1흡수관의 입구쪽 가까이 돌린 후 제1흡수관에 메틸레드시액 1방울을 가하고 0.1N 수산화나트륨용액으로 포집액의 색이 황색이 될 때까지 적정한다. 다시 제1흡수관의 연결관을 제2흡수관의 배출구쪽에 연결시킨 후 제1흡수관과 동일하게 적정한다. 소비량(S)을 구하고 공시험을 하여 그 소비량(B)을 구한다. 다음 계산식에 따라 이산화황의 양을 구할 때, 그 양은 0.2% 이하이어야 한다(색가 0.1인 제품을 기준으로 함).

  이산화황의 함량(%) ＝   (S - B) × 0.0032 × 100  

                        ──────────────

                          검체의 채취량(g)          

  ⑩ 4-메틸이미다졸(카라멜색소 Ⅲ, 카라멜색소 Ⅳ의 경우에만 적용한다) : 이 품목 10g을 취하여 150mL 폴리프로필렌 비이커에 넣고 3N 수산화나트륨용액 5mL를 가해주고 균일하게 혼합하여 pH 12이상으로 한다. 비이커에 크로마토그래피용 규조토(Johns-Manville Celite 545 또는 이와 동등한 것) 20g을 넣어 내용물이 반건조의 혼합물이 될 때까지 혼합하고 이를 유리섬유를 바닥에 막은 내경 약 2cm의 크로마토그래피용 유리관(테프론제 콕크 포함)에 넣어 내용물이 약 25cm의 높이가 되도록 충전한다. 초산에틸로 이전 시료 비이커를 세정하면서 초산에틸을 유리관에 흘려준다. 용매가 유리관의 바닥에 도달할 때, 콕크를 잠그고 5분간 방치한다. 콕크를 열어 유리관에 초산에틸을 주입하고 유출액의 총량이 약 200mL가 될 때까지 유출액을 모은다. 유출액에 내부표준용액 1mL를 정확하게 가해준 후 플라스크에 옮겨주고 초산에틸을 35℃이하에서 농축한다. 잔류물에 아세톤을 가하여 녹이고 정확히 5mL로 한 액을 시험용액으로 한다. 따로, 4-메틸이미다졸을 0.02g, 0.06g, 0.1g, 0.2g을 각각 정밀하게 달고 이에 내부표준용액 20mL씩 정확하게 가해주고 아세톤을 가하여 100mL씩으로 한 액을 각 표준용액으로 한다. 다만, 내부표준용액은 2-메틸이미다졸 0.05g에 초산에틸을 가하여 정확히 50mL로 한 액을 사용한다. 시험용액 및 각 표준용액을 5μL씩 취하여 다음의 조작조건으로 기체크로마토그래피를 행하고 각 표준용액의 피크면적을 측정하여 검량선을 작성한다. 시험용액의 피크면적을 측정하고 검량선을 이용하여 그 양을 구할 때, 250mg/kg 이하이어야 한다(색가 0.1인 제품을 기준으로 함).

    조작조건

    검  출  기 : 수소염이온화검출기(FID)

    칼      럼 : HP-FFAP(25m×320μm×0.25μm) 또는 이와 동등한 것

    칼럼온도 : 150℃에서 2분간 유지한 후 분당 10℃의 비율로 200℃까지 승온시킨다.

    주입구온도 : 200℃

    검출기온도 : 250℃

    캐리어가스 : 질소 또는 헬륨

  ⑪ 2-아세틸-4-테트라히드록시부틸이미다졸(카라멜색소 III의 경우에만 적용한다) : 장치는                                                      

  A :   분액여두 (100mL)                              

  B :   테프론제 콕크                                 

  C :   유리칼럼 내경 12.5mm, 길이 150mm (접속부분    

        포함) 또는 내경 10mm, 길이 200mm (접속부분    

        포함)                                         

  D :   약산성양이온 교환수지 (미립)                  

  E :   솜                                            

  F :   유리칼럼 내경 10mm, 길이 175mm (접속부분      

        포함)                                         

  G :   강산성양이온 교환수지 (미립)                  

 다음 그림의 장치를 사용한다.

    이 품목 0.20∼0.25g을 정밀히 달아 물 3mL를 가해 녹인 액을 칼럼 C와 칼럼 F의 조합칼럼의 윗쪽칼럼인 C에 옮겨주고 물 약 100mL로 세정한다. 이어서 칼럼 C를 분리하고 분액여두 A를 아랫쪽칼럼인 F에 접속한 다음 칼럼 F를 0.5N 염산으로 용출한다. 최초의 용출액 10mL는 버리고 그 이후의 용출액 35mL를 모아 40℃, 15mmHg에서 건조상태가 될 때까지 농축한다. 이 시럽상의 잔류물을 카르보닐기를 제거한 메탄올 250μL로 용해시키고 2,4-디니트로페닐히드라진염산염시액 250μL를 가해주고, 이 반응혼합물은 마개가 있는 유리병에 옮겨주고 실온에서 5시간 보관한 다음 시험용액으로 한다. 따로 2,4-디니트로페닐히드라진 0.5g에 염산 1mL를 가하여 교반시킨 후 에탄올 10mL를 가해주고 수욕상에서 용액이 될 때까지 가열하고, 뜨거운 용액에 2-아세틸-4-테트라히드록시부틸이미다졸(THI) 0.1g을 가해준다. 수 분 내에 2-아세틸-4-테트라히드록시부틸이미다졸-2,4-디니트로페닐히드라존(THI-DNPH)의 결정화가 시작되어 실온이 될 때까지 냉각하여 결정화가 완전하게 되면 소량의 에탄올을 가하여 현탁시킨 후 여과분리한다. 결정화된 THI-DNPH는 에탄올 5mL당 염산 1방울을 넣은 에탄올로 재결정화하여 정제하고, 정제한 결정은 다시 소량의 에탄올을 가하여 현탁시킨 후 여과분리하여 데시케이터 중에서 건조한다. 이를 약 0.01g을 정밀히 달아 카르보닐기를 제거한 메탄올을 가하여 100mL로 하고, 다시 이액을 카르보닐기를 제거한 메탄올로 희석하여 표준용액(각 액 1mL는 0, 20, 40, 60, 80, 100μg 함유)을 조제한다. 시험용액 및 각 표준용액을 5μL씩 취하여 다음의 조작조건으로 액체크로마토그래피를 행하고 각 표준용액의 피크면적을 측정하여 검량선을 작성한다. 시험용액의 피크면적을 측정하고 검량선을 이용하여 그 양을 구할 때, 25mg/kg 이하이어야 한다(색가 0.1인 제품을 기준으로 함). 다만, THI-DNPH 100μg/mL은 THI 47.58μg/mL에 상당한다.

   검  출  기   : UV 385nm                                                    

   칼      럼   : Capcell pak C18(5μm, 4.6 mm × 250mm) 또는 이와 동등한 것  

   칼럼온도     : 상온                                                        

   이  동  상   : 메탄올 : 0.1M 인산(H3PO4) (50 : 50)                         

   유      속   : 1.0mL/min                                                   

조작조건

시    액

  2,4-디니트로페닐히드라진염산염시액 : 100mL의 삼각플라스크에 염산 10mL를 넣고 이에 2,4-디니트로페닐히드라진(2,4-dinitrophenylhydrazine) 5g을 가해주고 유리염기(적색)가 염산염(황색)으로 변환할 때까지 조용히 흔들어 섞고 에탄올 100mL를 가해주고 수욕상에서 가열용해한다. 방냉하고 실온에서 결정화된 후 여과하여 염산염을 제거하고, 에테르로 세정한다. 실온에서 건조시킨 후 데시케이터 중에서 보관하고, 이를 2,4-디니트로페닐히드라진염산염시약(2,4-dinitrophenyl hydrazine hydrochloride)으로 한다. 보관 중에 염산염이 서서히 유리염기로 변환하나, 유리염기는 1,2-디메톡시에탄(1,2-dimethoxyethane)으로 세정에 의해 제거할 수 있다. 5% 메탄올을 함유한 1,2-디메톡시에탄 15mL에 2,4-디니트로페닐히드라진염산염시약 0.5g을 가하여 녹여주고 냉장고에서 보관한다.

    카르보닐기를 제거한 메탄올 : 메탄올 500mL에 지라드시약 P(Girard P reagent) 5g과 염산 0.2mL를 가해주고 환류냉각기를 부착한 다음 2시간 증류한 액을 유리병에 밀봉하여 보관한다.

■ 캐롭(Carob)

정    의 

지중해 지역이 원산지인 콩과(Fabaceae)의 상록 관목. 높이는 10미터이고 암수 딴몸이다. 열매는 꼬투리로서 발생하여 완전히 익을 때까지는 1년이 걸린다.

성상/순도/함량 :  -

검정성분(또는 물질명) : sugars, tannins 

기타 : 과육에는 50%의 당분이 들어 있어 그대로 사용하거나 시럽ㆍ설탕 대용품 등으로 사용된다. 초콜릿 비슷한 맛이 있어 초콜릿 대용으로 사용되기도 한다.

■ 포도당((glucose; 글루코오스) 

정    의 

   포도당이라 함은 전분을 주원료로 하여 당화시켜 얻은 단당류를 가공한 것으로 액상포도당, 분말ㆍ결정포도당을 말한다.

원료 등의 구비요건

제조ㆍ가공기준

제품유형

   ① 액상포도당

      전분을 당화, 여과, 농축, 정제하여 얻은 포도당액을 가공한 액상의 것을 말한다.

   ② 분말ㆍ결정포도당

      농축한 포도당액을 결정화 또는 건조 등의 공정을 거친 것을 말한다.

규    격

┏━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━┓

┃           유 형  │액상포도당              │분말ㆍ결정포도당        ┃

┃항 목             │                        │                        ┃

┠─────────┼────────────┼────────────┨

┃①포도당당량(D.E) │80.0 이상               │?                      ┃

┠─────────┼────────────┼────────────┨

┃② 인공감미료     │검출되어서는 아니 된다. │검출되어서는 아니 된다. ┃

┠─────────┼────────────┼────────────┨

┃③덱스트린분(%)   │?                      │4.0 이하                ┃

┠─────────┼────────────┼────────────┨

┃④납(mg/kg)       │0.5 이하                │0.5 이하                ┃

┗━━━━━━━━━┷━━━━━━━━━━━━┷━━━━━━━━━━━━┛

시험방법

    ① 포도당당량(D.E)

       식품공전 제 9. 일반시험법 1. 식품성분시험법 1.1.4.1.2 환원당에 따라 시험하여 환원당(포도당으로서)을 산출한 후 포도당 당량을 계산한다.

  포도당당량    환원당(포도당으로서%)    × 100   

  ＝          ─────────────          

                시료중의 당고형분(%)              

     ② 인공감미료 

      식품공전 제 9. 일반시험법 2.2.1 삭카린나트륨에 따라 시험한다. 

   ③ 덱스트린분

     수분ㆍ회분 및 월스뎃타ㆍ슈델법에 따라 측정한 포도당의 함량을 100으로 부터 감한 수치를 덱스트린분으로 한다. 필요하다면 여지크로마토그래피에 의하여 표준의 결정포도당의 스포트의 발색강도와 검체의 스포트의 발색강도를 비교하여 판정한다.

   ＊ 윌스뎃타ㆍ슈델법

      검체 약 1.5 g ～ 2 g(포도당으로서)을 취하고 물을 가하여 100 mL로 한 다음 10 mL를 공전삼각플라스크에 넣고 0.1 N 요오드액 25 mL를 가하고 실온에서 잘 흔들어 준다. 여기에 0.1 N 수산화나트륨액 35 mL를 소량씩 가하고 15분(당분이 미량일 때는 20분)동안 방치한 후 묽은 황산으로 산성이 되도록 한다. 이때 유리된 요오드를 0.1 N 치오황산나트륨액으로 적정한다. 종말점 가까이에서 전분시액 1 mL를 가하고 다시 적정한다. 

      검체(당액)를 가하지 않은 대조시험에서 소비된 치오황산나트륨액의 소비량에서 적정량을 감하고 그 수치로부터 당의 양을 구한다.

      0.1 N 요오드액 1 mL는 포도당 9.005 mg에 상당한다.

    ④ 납

      식품공전 제 9. 일반시험법 7.1 중금속시험에 따라 시험한다.

■ 효소처리스테비아(Enzymatically Modified Stevia, Glucosyl Stevia)

정    의  이 품목은 스테비아추출물에 α-글루코실전이효소 등을 이용하여 글루코오스를 부가시켜 얻어지는 것으로서 그 성분은 α-글루코실스테비오사이드 등이다.

함    량  이 품목을 건조물로 환산한 것은 스테비올배당체 80.0% 이상을 함유하고 미반응스테비올배당체 15.0% 이하를 함유한다.

성    상  이 품목은 백～엷은 황색의 분말, 박편 또는 과립으로서 냄새가 없거나 또는 약간 특유한 냄새를 가지며 청량한 감미를 갖는다.

확인시험  (1) 이 품목 1.2g에 물 100mL를 가해주고 용해시킨 다음 이에 n-부탄올 100mL를 가해주고 잘 진탕시킨 후 정치하여 두 액층으로 분리시킨다. n-부탄올 층을 취하여 필요하면 여과하고 여액 5mL에 안트론시액 5mL를 벽면을 따라 서서히 가할 때, 경계면은 청～녹색을 나타낸다.

  (2) 이 품목 2.4g에 황산(1→5) 40mL를 가해주고 환류냉각기를 부착한 다음 수욕상에서 2시간 가열한 후 냉각시킨 다음 에테르 50mL씩으로 2회 추출하고 추출액을 합한 다음 소량의 물로 2회 씻어주고 무수황산나트륨으로 탈수시킨 후 증발건고한다. 잔류물은 메탄올 10mL에 녹인 다음 물 10mL를 가해주고 생성된 침전물을 여과한다. 여과지 위의 잔류물은 50%(v/v) 메탄올 소량으로 씻어주고 105℃에서 2시간 건조한 후 그 융점을 측정할 때, 226～230℃이어야 한다.

  (3) 이 품목 2.4g에 물 100mL를 가해주고 용해시킨 다음 액을 반으로 나눈다. 한쪽은 그대로 정량법(2)의 미반응스테비올배당체 정량법에 따라 시험할 때, 리바우디오사이드A (RebaudiosideA)피크 뒤쪽에 피크군이 있는 것이 확인되어야 한다. 또한, 다른 한쪽의 용액에는 이 품목 1g에 대하여 글루코아밀라아제 500GUN을 첨가하고 55℃에서 24시간 반응시킨 다음 이 액을 0.45㎛ 밀리포아여과기로 여과한 액을 미반응스테비올배당체 정량법에 따라 시험할 때, 리바우디오사이드A의 피크보다 뒤쪽에 나타나는 피크군은 거의 소실되고 또한 리바우디오사이드A 및 그보다 앞쪽에 나타나는 피크군의 피크면적은 증가되어야 한다.

순도시험  (1) 비  소 : 이 품목 0.5g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에탄올용액(1→50) 10mL를 넣고 에탄올에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3mL를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(2ppm 이하).

  (2) 납：이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

건조감량  이 품목 1g을 105℃에서 4시간 건조할 때, 그 감량은 6% 이하이어야 한다.

강열잔류물  이 품목 1g을 취하여 강열잔류물시험법에 따라 시험할 때 그 양은 1% 이하이어야 한다.

정 량 법  (1) 스테비올배당체 : ① 스테비올의 함량과 ② 배당체 중의 당 함량을 합한 값을 스테비올배당체 함량으로 한다.

    ① 스테비올 정량법 : 이 품목 약 100mg을 정밀히 달아 30mL의 삼각플라스크에 넣고 20% 황산 10mL를 가해주고 환류냉각기를 부착한 다음 수욕상에서 2시간 가열한 후 흐르는 물에 식힌 다음 내용물을 물 10mL를 사용하여 분액깔대기에 옮겨주고 다시 플라스크를 에테르 30mL씩으로 3회 씻어주고 세액을 분액깔대기에 합쳐서 잘 흔들어 섞어준 다음 정치시킨다. 물층을 제거한 에테르층은 물 20mL씩으로 2회 씻어준 다음 물층을 완전히 제거하고 에테르층은 별도의 플라스크에 옮겨주고 분액깔대기는 에테르 10mL씩으로 2회 씻어주고 세액은 플라스크에 합한 다음 이에 무수황산나트륨 15g을 가하여 잘 흔들어 섞어준 후 경사되게 하여 에테르층을 다시 별도의 플라스크에 옮겨준다. 남은 무수황산나트륨은 에테르 10mL씩으로 2회 씻어준 다음 세액을 플라스크에 합한 후 에테르를 유거시키고 잔류물에 초산에틸 10mL를 가하여 용해하고 4%(v/v) 디아조메탄ㆍ에테르용액 3mL를 가하여 마개를 잘 막고 가끔 교반시키면서 20분간 방치한다. 이 액에 초산 0.5mL를 넣어 잘 흔들어 섞은 다음 내부표준용액인 스쿠알렌의 n-부탄올용액(12.5mg/mL) 2mL를 가하여 시험용액으로 한다. 따로, 105℃에서 2시간 건조한 스테비오사이드표준품 50mg을 정밀히 달아 시험용액의 경우와 동일하게 조작한 것을 표준용액으로 한다. 시험용액 및 표준용액 각각을 다음의 조작조건으로 가스크로마토그래피에 주입하고 다음 계산식에 따라 스테비올의 함량을 구한다.

  스테비올의함량(%) =   A   ×  스테비오사이드표준품의 채취량(mg)   × 100  × K  

                      ───  ───────────────────              

                        AS      건조물로 환산한 검체의 채취량(mg)                 

  A  : 시험용액의 이소스테비올메틸에스테르의 스쿠알렌에 대한 피크면적비   

  As : 표준용액의 이소스테비올메틸에스테르의 스쿠알렌에 대한 피크면적비   

  K  : 스테비올로의 환산계수 318.46/804.88=0.3957                         

    조작조건

      칼      럼 : DB-17(30m×250μm×0.25mm) 또는 이와 동등한 것

      검  출  기 : 수소이온화검출기(FID)

      주입구온도 : 260℃

      칼럼온도 : 235℃

      검출기온도 : 260℃

      캐리어가스 및 유량 : 질소 또는 헬륨, 이소스테비올메틸에스테르가 7～15분 후에  나타날 수 있도록 칼럼온도 및 캐리어가스의 유량을 조정한다.

    ② 배당체 중의 당정량법

      시험용액 조제 : 이 품목 약 1.0g을 정밀히 달아 물 50mL에 녹인 다음 이 액을 효소처리 스테비아용흡착수지(Amberlite XAD-7) 50mL를 사용하여 만든 직경 2.5cm의 수지칼럼에 주입하고 1분간 3mL이하의 속도로 유출시킨 다음 물 250mL를 사용하여 칼럼을 씻어준다. 이어서 50%(v/v) 에탄올 또는 90%(v/v) 메탄올 250mL를 1분간 3mL이하의 유속으로 통과시켜 흡착된 성분을 용출시킨 다음 이 액을 감압농축기로 농축건고하고 잔류물에 물을 가하여 녹여주고 전량을 500mL로 한 후 다시 1mL를 취하여 물을 가하여 50mL로 한 것을 시험용액으로 한다.

      시험조작 : 시험용액 2mL를 정확히 공전시험관에 취한 다음 이를 얼음물 중에서 냉각시키면서 안트론시액 6mL를 정확히 가해주고 양 액이 완전히 혼합될 때 까지 잘 흔들어 섞어준다. 이어서 끓는 수욕 중에서 정확하게 16분간 가열하고 얼음물에 냉각한 다음 물을 대조액으로 하여 파장 620nm에서 흡광도를 측정하고 미리 작성한 포도당 검량선으로 부터 시험용액의 포도당농도(μg/mL)를 구한다. 포도당검량선은 미리 105℃에서 2시간 건조한 포도당을 사용하여 1mL당 10μg, 30μg, 50μg의 포도당을 함유하는 포도당표준용액에 대하여 시험용액과 동일조작 하여 얻어진 각각의 흡광도의 농도로부터 작성한다. 

       다음의 계산식에 따라 스테비올배당체를 구성하는 당 함량을 구한다.

  스테비올배당체를 구성하는 당 함량(%) =  b × 0.9 × 50 × 500   × 100  =   2.25b   

                                        ─────────────                    

                                          Y × 1,000 × 1,000               ─────

                                                                              Y       

  b : 검량선에서 얻은 시험용액의 포도당 농도(㎍/mL)   

  Y : 건조물로 환산한 검체의 채취량(g)                

  (2) 미반응스테비올배당체 정량법 : 이 품목을 105℃에서 2시간 건조한 다음 약 60～120mg을 정밀히 달아 이동상에 용해하여 100mL로 한 액을 시험용액으로 한다. 따로 스테비오사이드 및 리바우디오사이드 A 표준품을 105℃에서 2시간 건조한 다음 각각 50mg을 정밀히 달아 이동상에 용해하여 100mL로 한 액을 표준용액으로 한다. 시험용액 및 표준용액을 각각 다음의 조작조건으로 액체크로마토그래피에 주입하여 총 스테비올배당체의 함량을 구한다. 시험용액의 둘코사이드 A, 루부소사이드, 리바우디오사이드 A, 리바우디오사이드 B, 리바우디오사이드 C, 스테비올비오사이드, 스테비오사이드의 피크면적과 표준용액의 둘코사이드 A, 루부소사이드, 리바우디오사이드 A, 리바우디오사이드 B, 리바우디오사이드 C, 스테비올비오사이드, 스테비오사이드의 피크면적을 각각 구하고 다음 계산식에 따라 7가지 성분의 함량을 구한 다음 그 합계를 스테비올배당체의 함량으로 한다. 다만, 리바우디오사이드 A의 피크가 완료되면 이동상의 조성을 50 : 50으로 변화시켜 칼럼 중에 잔존하는 성분을 씻어낸다.

  X % =   Ws  ×  Ax × fx  × 100  

        ───  ──────        

          W       As                

  Ws : 표준용액의 스테비오사이드 함량(mg)       

  W  : 시험용액의 검체 함량(mg)                 

  As : 표준용액의 스테비오사이드 피크면적       

  Ax : 시험용액 중 X의 피크면적                 

  fx : 스테비오사이드에 대한 X의 분자량 비      

  율                                            

       (스테비오사이드 1.00, 둘코사이드 A       

  0.98, 리바우디오사이드 A 1.20,                

       리바우디오사이드 C 1.18, 루부소사이드    

  0.80, 스테비올비오사이드 0.80,                

       리바우디오사이드 B 1.00)                 

  다음의 조작조건에 의하여 시험할 때, 유지시간은 리바우디오사이드A(1.00)에 대하여 루부소사이드 0.12～0.16, 둘코사이드 A 0.25～0.30, 스테비올비오사이드 0.35～0.41, 스테비오사이드 0.45～0.48, 리바우디오사이드 C 0.63～0.69, 리바우디오사이드 B 0.73～0.79이다.

   조작조건

    검출기 : UV 210 nm

    칼럼 : Supelcosil LC-NH2 또는 이와 동등한 것(4.6mm×250mm, 5μm)

    칼럼 온도 : 40℃

    이동상 : 아세토니트릴 : 물 (80:20)

    유량 : 리바우디오사이드A가 약 21분에 검출되도록 조정한다.

   시   액

    안트론시액 : 안트론 200mg을 정밀히 달아 황산 100mL에 녹인 다음 이를 냉각시키면서 물 20mL 중에 주의 깊게 가하여 혼합한다.

■ 스테비올배당체(Steviol glycoside)

정    의  

  이 품목은 스테비아(Stevia rebaudiana Bertoni)의 건조잎을 열수로 추출하여 얻어진 수용성추출물을 흡착수지로 처리하여 농축한 다음, 메탄올 또는 에탄올을 사용하여 재결정 등의 정제를 거친 후 건조하여 얻어지는 것으로서 주성분은 스테비올배당체(steviol glycoside)이다.

함    량  

  이 품목은 건조한 다음 정량할 때, 총 스테비올배당체(Steviol glycoside)로서 95.0% 이상을 함유한다.

성    상  

  이 품목은 백∼엷은 황색의 분말, 박편 또는 과립으로서 냄새가 없거나 또는 약간 특유한 냄새를 가지며 강한 단맛이 있다.

확인시험  

  이 품목 0.5g을 물 100ml에 녹인 액을 시험용액으로 하고, 정량용 스테비오사이드 및 리바우디오사이드 A를 각각 5mg씩을 취하여 물 10ml에 녹인 액을 표준용액으로 한다. 시험용액 및 표준용액을 정량법의 조작조건에 따라 액체크로마토그라프를 행할 때, 시험용액의 주피크의 유지시간은 표준용액의 스테비오사이드 및 리바우디오사이드 A의 양쪽 피크의 유지시간 또는 한쪽 피크의 유지시간과 일치한다.

순도시험

(1) 액  성 : 이 품목의 수용액(1→100)의 pH는 유리전극법으로 측정할 때, 4.5～7.0이어야 한다. 

(2) 비  소:이 품목 0.77g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에틸알콜용액(1→50) 10ml를 넣고 에틸알콜에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550°로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550°로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3ml를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험을 할 때, 이에 적합하여야 한다(1.3ppm 이하).

(3) 납 : 이 품목 약 10g을 정밀히 달아 백금제 또는 석영제 도가니에 넣고 황산 소량을 가하여 적신 다음 서서히 가열하여 가능한 한 저온에서 예비회화한 후, 다시 황산 1ml를 가하고 천천히 가열하여 450～550°에서 회화될 때까지 강열한다. 회화가 끝나면 잔류물에 소량의 질산(1→150)을 가하여 녹이고, 다시 질산(1→150)을 가하여 10ml로 한 액을 시험용액으로 한다. 따로, 납표준용액 1ml를 취하여 질산(1→150)을 가하여 10ml로 한 액을 대조액으로 한다. 시험용액 및 대조액을 다음의 조작조건에 따라 원자흡광광도법의 화염방식에 따라 시험할 때, 시험용액의 흡광도는 대조액의 흡광도 이하이어야 한다(1ppm 이하).

       조작조건 

       광원램프 납중공음극램프 

       분석선파장 283.3nm 

       조연성가스 공기 

       가연성가스 아세틸렌 

(4) 잔류용매 : 이 품목 2g을 정밀히 달아 300ml 환저플라스크에 넣고, 물 200ml를 가해 주고, 비등석 및 실리콘수지 1ml를 넣고 잘 섞어준다. 이에 증류장치를 장착한 다음 100ml용량의 플라스크 수기에 내부표준용액 4ml를 정확히 취하여 가해 주고 기포가 넘치지 않도록 조정하면서 1분에 2～3ml의 증류속도로 유액이 약 90ml가 될 때까지 증류한 다음 물을 가하여 100ml로 한 액을 시험용액으로 한다. 다만, 내부표준용액은  tert-부틸알콜(1→1,000)을 사용한다. 따로, 메틸알콜 0.5g을 정밀히 달아 물을 가하여 500ml로 하고, 다시 이액 2ml 및 내부표준용액 4ml를 취한 다음 물을 가하여 100ml로 한 액을 혼합표준용액으로 한다. 시험용액 및 혼합표준용액을 각각 2μl씩 취하여 다음의 조작조건으로 가스크로마토그라프에 주입한다. 이어서 시험용액 및 혼합표준용액 중의 tert-부틸알콜피크면적에 대한 메틸알콜의 피크면적비 QT 및 QS을 각각 구하여 다음 계산식에 따라 메틸알콜의 양을 구할 때, 그 양은 200ppm 이하이어야 한다.

  QT : 시험용액의 tert-부틸알콜에 대한 메틸알콜의 피크면적비 

  QS : 혼합표준용액의 tert-부틸알콜에 대한 메틸알콜의 피크면적비 

   조작조건 

    칼럼 : PLOT Q 또는 이와 동등한 것 

    검출기 : 수소염이온화검출기(FID) 

    주입구온도 : 200° 

    칼럼온도 : 120° 

    검출기온도 : 300° 

    캐리어가스 : 질소 또는 헬륨

회분

  이 품목 1g을 취하여 회분시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1% 이하이어야 한다.

건조감량

  이 품목 2g을 105°에서 2시간 건조할 때, 그 감량은 6% 이하이어야 한다.

정 량 법

  이 품목을 105°에서 2시간 건조한 다음 약 60～120mg을 정밀히 달아 이동상에 용해하여 100ml로 한 액을 시험용액으로 한다. 따로 스테비오사이드 및 리바우디오사이드 A 표준품을 105°에서 2시간 건조한 다음 각각 50mg을 정밀히 달아 이동상에 용해하여 100ml로 한 액을 표준용액으로 한다. 시험용액 및 표준용액을 각각 다음의 조작조건으로 액체크로마토그라프에 주입하여 총 스테비올배당체의 함량을 구한다. 시험용액의 둘코사이드 A, 루부소사이드, 리바우디오사이드 A, 리바우디오사이드 B, 리바우디오사이드 C, 스테비올비오사이드, 스테비오사이드의 피크면적과 표준용액의 둘코사이드 A, 루부소사이드, 리바우디오사이드 A, 리바우디오사이드 B, 리바우디오사이드 C, 스테비올비오사이드, 스테비오사이드의 피크면적을 각각 구하고 다음 식에 따라 7가지 성분의 함량을 구한 다음 그 합계를 스테비올배당체의 함량으로 한다. 다만, 리바우디오사이드 A의 피크가 완료되면 이동상의 조성을 50 : 50으로 변화시켜 칼럼 중에 잔존하는 성분을 씻어낸다.

   Ws : 표준용액의 스테비오사이드 함량(mg) 

   W : 시험용액의 검체 함량(mg) 

   As : 표준용액의 스테비오사이드 피크면적 

   Ax : 시험용액 중 X의 피크면적 

   fx : 스테비오사이드에 대한 X의 분자량 비율(스테비오사이드 1.00, 둘코사이드 A 0.98, 리바우디오사이드 A 1.20, 리바우디오사이드 C 1.18, 루부소사이드 0.80, 스테비올비오사이드 0.80, 리바우디오사이드 B 1.00)

   다음의 조작조건에 의하여 시험할 때 유지시간은 리바우디오사이드A(1.00)에 대하여 루부소사이드 0.12～0.16, 둘코사이드 A 0.25～0.30, 스테비올비오사이드 0.35～0.41, 스테비오사이드 0.45～0.48, 리바우디오사이드 C 0.63～0.69, 리바우디오사이드 B 0.73～0.79이다.

   조작조건 

    검출기 : UV 210nm 

    칼럼 : Supelcosil LC-NH2 또는 이와 동등한 것 

    칼럼온도 : 40° 

    이동상 : 아세토니트릴 : 물 (80:20) 

    유량 : 리바우디오사이드A가 약 21분에 검출되도록 조정한다.

■ 엿류(Glutinous rice jellies; 물엿, 기타엿, 덱스트린)

정    의

 엿류라 함은 전분 또는 전분질 원료를 주원료로 하여 효소 또는 산으로 가수분해시킨 후 그 당액을 가공한 물엿, 덱스트린 등을 말한다. 

원료 등의 구비요건

제조ㆍ가공기준

유형

 (1) 물엿

    전분 또는 전분질원료를 산 또는 전분분해효소로 가수분해시켜 여과, 농축한 점조상의 것을 말한다.

 (2) 기타엿

     물엿을 가공하거나 이에 식품 또는 식품첨가물을 가한 것을 말한다. 

 (3) 덱스트린 

    전분 또는 곡분을 산이나 효소로 가수분해시켜 얻은 생성물을 가공한 것을 말한다.

규격

┏━━━━━━━━━━┯━━━━━━━┯━━━━━━━┯━━━━━━━┓

┃       구 분        │물엿          │기타엿        │덱스트린      ┃

┃항 목               │              │              │              ┃

┠──────────┼───────┼───────┼───────┨

┃(1) 포도당당량(D.E) │20.0 이상     │10.0 이상     │20.0 미만     ┃

┠──────────┼───────┼───────┼───────┨

┃(2) 인공감미료      │검출되어서는  │검출되어서는  │검출되어서는  ┃

┃                    │아니 된다.    │아니 된다.    │아니 된다.    ┃

┠──────────┼───────┼───────┼───────┨

┃(3) 납(mg/kg)       │1.0 이하      │1.0 이하      │1.0 이하      ┃

┗━━━━━━━━━━┷━━━━━━━┷━━━━━━━┷━━━━━━━┛

시험방법

  (1) 포도당당량(D.E)

    「식품의 기준 및 규격」6. 포도당 6) 시험방법 (1) 포도당당량(D.E)에 따라 시험한다.

  (2) 인공감미료 

    「식품의 기준 및 규격」제9. 일반시험법 2.2.1 삭카린나트륨에 따라 시험한다. 

  (3) 납

    「식품의 기준 및 규격」제9. 일반시험법 7.1 중금속시험에 따라 시험한다.

 다. 조미료(seasonings, condiments) : 감칠맛, 매운맛 등 사료의 맛을 조절하는 작용을 하는 물질

■ 강황(Turmeric, Curry ; 울금, 심황)

정    의 

강황과 울금은 같은 생강과의 뿌리식물로서 이 품목은 강황 또는 울금을 건조 후 분말화한 것이다.

성상/순도/함량 : 이 품목의 함량은 성분표시량의 95% 이상이어야 한다.

검정성분(또는 물질명) : 커큐민(curcumin) 및 나노커큐민(nanocurcumin)

기타 : 

■ 계피(Cinnamon)

정    의

계수나무 줄기의 껍질을 건조 후 분말화한 것(계피가루)이다.

성상/순도/함량 : 이 품목의 함량은 성분 표시량의 95% 이상이어야 한다.

검정성분(또는 물질명) : 신남알데히드(Cinnamic aldehyde), 캄펜(Camphene), 시네올(Cineol), 리날로올(Linalool), 유게놀(또는 유제놀, Eugenol) 등

기타 : 

■ L-글루타민산나트륨(L-Monosodium Glutamate, MSG)

C5H8NNaO4ㆍH2O 분자량187.13

성분규격

함량

본 품은 건조 후 정량할 때 L-글루타민산나트륨(C5H8NNaO4ㆍH2O) 99.0% 이상을 함유한다.

성상

① 본 품은 무색-백색의 기둥형 결정 또는 백색의 결정성의 분말로서 특이한 맛이 있다.

② 본 품의 수용액(1→10)의 pH는 6.7-7.2이다.

확인시험

① 본 품의 수용액(1→1000) 5㎖에 닌하이드린 시액 1㎖를 넣고, 3분간 가열할 때 색은 자색을 나타낸다.

② 본 품의 수용액(1→10)은 나트륨염의 정성반응을 나타낸다.

순도시험

① 선광도 : 본 품 약 5g을 정밀하게 칭량하여, 2.5N염산시액에 녹여 50㎖로 하고 이 액으로 층장 200㎜에서 선광도를 측정할 때,  = +24.8 ～ +25.3°이어야 한다.

② 용액상 : 본 품 1.0g을 물 10㎖에 넣어 녹일 때, 그 액은 무색으로 투명하여야 한다.

③ 염화물 : 본 품 0.10g을 취하여 염화물의 시험할 때, 그 양은 0.01N 염산 0.2㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(0.071%이하)

④ 암모늄염 : 「아미노초산」의 순도시험 ③을 준용한다.(0.02%이하)

⑤중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 1법에 의해 시험할 때, 그 양은 납표준액 1.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(10ppm이하)

⑥비소 : 본 품 1.0g을 취하여 비소시험법 제 1법에 의해 시험할 때, 여기에 적합하여야 한다.(2ppm이하)

건조감량

0.5%이하(1g, 100℃, 5시간)

정량법

본 품을 건조 후 약 0.15g을 정밀하게 칭량하여, 개미산 3㎖에 녹이고 과염소산적정용 빙초산 50㎖를 가해 0.1N 과염소산으로 적정한다.(지시약 α-나프톨벤젠시액 0.5㎖) 이 경우에 적정의 종점은 액의 갈색이 녹색으로 변하는 시점으로 한다. 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다.

0.1N 과염소산 1㎖ = 9.356㎎ C5H8NNaO4ㆍH2O

보존방법의 기준

밀폐용기에 보존할 것.

■ 마늘(Garlic)

정    의

백합과(Liliaceae)의 여러해살이풀(Allium sativum)로서 잎, 꽃줄기, 비늘줄기에 알리신이라는 독특한 냄새가 있다.

영양성분

주성분으로는 대략 탄수화물 20%, 단백질 3.3%, 지방 0.4%, 섬유 0.92%, 회분 13.4%, 비타민 C 5.5 mg% 함유되어 있고 glutamic acid를 포함하여 l5종의 아미노산이 확인되었다.

검정성분(또는 물질명) : 알리인(alliin), 알리신(allicin)

고려사항

마늘을 국부적으로 응용하면 자극성을 가진다. 마늘의 정유는 위액분비를 억제하고 빈혈을 일으킬 수 있으므로 사용에 주의한다.

■ 생강(ginger)

정    의

생강과(Zingiberaceae)의 여러해살이풀. 생강의 뿌리줄기. 생 또는 새앙이라고도 한다. 

성상/순도/함량 :

검정성분(또는 물질명)

생강추출물 또는 진저올

기타

향신료로 널리 쓰고 한방에서는 건위제로 쓴다. 매운맛 성분은 진저올이다. 임신한 동물은 복용을 금한다. 항응고제를 복용하는 동물이나 담석을 가진 동물은 수의사와 상의 후 신중히 사용한다. 독성은 약하나 장기간 복용은 피한다. 많은 양을 복용하면 위장 장애를 일으킬 수 있다. 혈액 응고를 방해하는 약을 복용하는 동물은 생강을 포함한 약물을 복용하기 앞서 수의사와 상의해야 한다.

■ 안젤리카(Angelica)

정    의 

산형과(Umbelliferae)의 두해살이풀. 높이는 50센티미터 정도이며 전체에서 독특한 향내가 나는 허브이다. 잎, 뿌리, 씨를 향미료로 쓴다. 주로 남부 유럽에서 많이 재배한다.

성상/순도/함량 :  -

검정성분(또는 물질명) : d-phellandrene, osthenole, osthole, angelicin, camphene, oil, coumarins

기타 : 

■  5‘-리보뉴클레오티드이나트륨(Disodium 5’-Ribonucleotide)

정    의

  이 품목은 5‘-이노신산이나트륨, 5’-구아닐산이나트륨, 5‘-시틸딜산이나트륨 및 5’-우리딜산이나트륨의 혼합물 또는 5‘-이노신산이나트륨 및 5’-구아닐산이나트륨의 혼합물이다.

함    량

  이 품목을 무수건조물로 환산한 것은 5‘-리보뉴클레오티드이나트륨 97.0～102.0% 함유하며 5’-리보뉴클레오티드이나트륨의 95.0% 이상은 5‘-이노신산이나트륨 및 5’-구아닐산이나트륨이다.

성    상

  이 품목은 백∼유백색의 결정 또는 분말로서 냄새가 없고 특이한 맛을 가지고 있다.

확인시험

  ① 이 품목의 수용액(1→2,000) 1mL에 오르신알콜용액(1→10) 0.2mL를 가하고 이어 황산제이철암모늄염산용액(1→1,000) 3mL를 가하고 수욕 중에서 10분간 가열하면 녹색을 나타낸다. 

  ② 이 품목의 수용액(1→20) 5mL에 마그네시아시액 2mL를 가하면 침전이 생기지 않으나 이에 질산 7mL를 가하여 10분간 끓인 다음 수산화나트륨시액을 가하여 중화한 액은 확인시험법 중 인산염 (나)의 반응을 나타낸다. 

  ③ 이 품목의 수용액(1→1,000) 1mL에 묽은염산 2mL 및 아연가루 0.1g을 가하여 수욕 중에서 10분간 가열한 다음 여과하고 여액을 얼음물에서 식히고, 이에 아질산나트륨용액(3→1,000) 1mL를 가하여 흔들어 섞어서 10분간 방치한 다음 설파민산암모늄용액(1→200) 1mL를 가하고 잘 흔들어 섞어서 5분간 방치한다. 이어 N-1-나프틸에틸렌디아민이염산염용액(1→500) 1mL를 가하면 적자색을 나타낸다.

  ④ 이 품목의 수용액(1→5,000) 1mL에 묽은염산 1mL를 가하여 수욕 중에서 10분간 가열하고 식힌 다음 포린시액 0.5mL 및 탄산나트륨포화용액 2mL를 가하면 청색을 나타낸다.

  ⑤ 이 품목 0.5g을 염산히드록실아민용액(7→50) 50mL에 수산화나트륨시액을 가하여 pH 약 6.5로 한 액 10mL에 녹이고 수욕 중에서 2시간 가열한 다음 이 액 1mL를 취하여 수욕상에서 증발건고한다. 그 잔류물을 물 10mL에 녹여 얼음으로 식히고 설파닐산의 염산(1→100) 2mL를 가하여 잘 흔들어 섞으면서 아질산나트륨용액(1→4) 1mL를 천천히 적가하고 10분간 방치한 다음 수산화나트륨용액(2→5) 2mL를 가하면 등적색을 나타낸다.

  ⑥ 이 품목의 수용액(1→10)은 확인시험법 중 나트륨염의 반응을 나타낸다.

순도시험

  ① 액  성 : 이 품목의 수용액(1→20)의 pH는 7.0～8.5이어야 한다.

  ② 비  소 : 이 품목 0.25g을 물 5mL에 녹이고 이를 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하).

  ③ 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

수    분

  이 품목 약 150mg을 정밀히 달아 수분정량법(칼?피셔법)의 역적정법에 따라 시험 할 때, 그 양은 27% 이하이어야 한다. 다만, 검체를 건조한 적정플라스크에 취하여 수분측정용메탄올 10mL를 가하고 다시 수분측정시액을 약 10mL 과량이 되도록 일정량을 가하고 밀전하여 20분간 저어 섞은 다음 심하게 저어 섞으면서 물ㆍ메탄올표준용액으로 적정한다. 따로 같은 방법으로 공시험을 한다.

정 량 법

다음의 ①, ② 및 ③에서 얻은 I, G 및 P의 값으로부터 다음 계산식에 따라 5‘-리보뉴클레오티드이나트륨의 함량과  5’-이노신산이나트륨(C10H11N4Na2O8P) 및 5‘-구아닐산이나트륨(C10H12N5Na2O8P)의 함량을 구한다.

  5’-리보뉴클레오티드이나트륨의 함량(%) =  I + G + P       x   100   

                                          ─────────          

                                            100 - 수분(%)             

  5’-이노신산이나트륨(C10H11N4Na2O8P) 및         =   I + G           x   100   

  5’-구아닐산이나트륨(C10H12N5Na2O8P)의 함량(%)    ─────────          

                                                      100 - 수분(%)             

① 5‘-이노신산이나트륨 : 이 품목 약 650mg을 정밀히 달아 물에 녹여 500mL로 하여 A액으로 한다. A액 1mL에 6N 염산 4mL 및 물을 가하여 10mL로 하고 수욕 중에서 40분간 가열하고 식힌 다음 아연가루 0.4g을 가하고 때때로 심하게 흔들어 섞으면서 50분간 방치하고 물을 가하여 20mL로 하여 여과지로 여과한다. 여액 10mL에 6N 염산 1mL를 가하고 얼음으로 식히면서 아질산나트륨용액(3→1,000) 1mL를 가하여 잘 흔들어 섞어서 10분간 방치하고 설파민산암모늄용액(1→200) 1mL를 가하여 잘 흔들어 섞은 다음 5분간 방치한다. 이에 Ｎ-1-나프틸에틸렌디아민이염산용액(1→500) 1mL를 가하여 잘 흔들어 섞은 다음 상온에서 15분간 방치하고 물을 가하여 20mL로 하여 시험용액으로 한다. 따로 A액 대신 물 1mL를 취하여 이하 A액으로부터 시험용액을 만드는 조작과 같이 처리하여 대조액을 만들고 이를 대조로 하여 파장 515nm에서의 시험용액의 흡광도를 구한다. 따로 5’-이노신산이나트륨표준품 및 5‘-구아닐산이나트륨표준품 3mg을 각각 0.01N 염산 100mL에 녹이고 0.01N 염산을 대조액으로 하여 각각 흡광도를 측정한다.

다만, 이 경우 5‘-이노신산이나트륨에 대하여 250nm, 5’-구아닐산이나트륨에 대하여 260nm의 파장을 사용한다. 여기서 얻은 흡광도로부터 분자흡광계수 EI 및 EG를 구하고 다음 계산식에 따라 각각의 함량을 구한다. 

  5’-이노신산이나트륨(C10H11N4Na2O8P)의 함량(%) =  EI      x   100   

                                                  ─────          

                                                    12,160            

  5’-구아닐산이나트륨(C10H12N5Na2O8P)의 함량(%) =  EG      x   100   

                                                  ─────          

                                                    11,800            

이들 함량의 약 50mg에 대응하는 양을 각각 정밀히 달아 이를 합하여 물에 녹여 200ml로 하여 B액으로 한다. B액 1ml, 2ml 및 3ml를 각각 취하여 6N 염산 4ml 및 물을 가하여 각각 10ml로 하고, 이들을 사용하여 A액으로부터 시험용액을 만드는 조작과 같이 처리하여 표준용액을 만들고, 시험용액과 동일한 대조액을 사용하여 파장 515nm에서의 각각의 흡광도를 측정하여 검량선을 작성한다.  여기서 얻은 검량선과 시험용액의 흡광도에 따라 시험용액 중에 함유된 5‘-이노신산이나트륨의 함량 I(%)를 구한다. 

② 5‘-구아닐산이나트륨 : (1)의 A액 1mL를 취하여 2N 염산 4mL 및 물을 가하여 10mL로 하고 수욕 중에서 30분간 가열하여 식힌 다음 포린시액 2mL 및 탄산나트륨용액(4→5) 5mL를 가하고 15분간 방치한 다음 물을 가하여 50mL로 하고 필요하면 원심분리하여 이 상징액을 시험용액으로 한다.

따로 A액 대신에 물 1mL를 취하여 A액으로부터 시험용액을 만드는 조작과 같이 처리하여 대조액을 만들고 이를 대조로 하여 파장 750nm에서의 시험용액의 흡광도를 구한다. (1)의 B액 1mL, 2mL 및 3mL를 각각 취하여 2N 염산 4mL 및 물을 가하여 각각 10mL로 하고 이들을 사용하여 A액으로부터 시험용액을 만드는 조작과 같이 처리하여 표준용액을 만들고 시험용액과 동일한 대조액을 사용하여 파장 750nm에서의 각각의 흡광도를 측정하여 검량선을 작성한다. 여기서 얻은 검량선과 시험용액의 흡광도에 따라 시험용액중에 함유된 5‘-구아닐산이나트륨의 함량 G(%)를 구한다.

③ 5‘-시티딜산이나트륨 및 5’-우리딜산이나트륨 : 이 품목 약 1.5g을 정밀히 달아 물에 녹여 50mL로 하여 C액으로 한다. C액 1mL를 취하여 히드라진(포수) 2mL를 가하고 수욕 중에서 1시간 가열하여 식힌 다음 1N 염산을 가하여 약산성으로 하고 0.01N 염산을 가하여 100mL로 한다. 그 액 10mL를 취하여 0.01N 염산을 가하여 100mL로 하여 시험용액으로 한다.

따로 C액 대신 물 1mL를 취하여 C액으로부터 시험용액을 만드는 조작과 같이 처리하여 만든 액을 대조액으로 하여 파장 260nm 및 280nm에서의 시험용액의 흡광도 A260 및 A280을 구한다. 또한 C액 1mL에 0.01N 염산을 가하여 100mL로 하고 이 액 10mL에 0.01N 염산을 가하여 100mL로 한 액에 대하여 0.01N 염산을 대조로 하여 파장 260nm 및 280nm에서의 흡광도 A‘260 및 A’280을 구하고 다음 계산식에 따라 5‘-시티딜산이나트륨(C9H12N3Na2O8P) 및 5’-우리딜산이나트륨(C9H11N2O8P)의 함량 P(%)를 구한다.

  P(%) =  170.5 × (A’260 - A260) + 68.6 × (A’280 - A280)  

        ───────────────────────────

          검체의 채취량(g)                                    

■ 5‘-구아닐산이나트륨(disodium 5’-guanylate)

  C10H12O8N5PNa2  분자량 407.20   

정    의

  이 품목은 식품첨가물로 사용되고 있는 5‘-구아닐산이나트륨(disodium 5’-guanylate)이다.

함    량

  이 품목을 건조물로 환산한 것은 5‘-구아닐산이나트륨 97.0～102.0%를 함유한다.

성    상

  이 품목은 무∼백색의 결정 또는 백색의 결정성 분말 또는 분말로 특이한 맛을 가지고 있다.

확인시험

 (1) 이 품목 20mg을 0.01N 염산 100mL에 녹이고 그 10mL에 0.01N 염산을 가하여 100mL로 한 액은 파장 256±2nm에 극대흡수부가 있다.

 (2) 이 품목의 수용액(3→10,000) 3mL에 오르신알콜용액(1→10) 0.2mL를 가하고 황산제이철암모늄염산용액(1→1,000) 3mL를 가하여 수욕 중에서 10분간 가열하면 녹색을 나타낸다.

 (3) 이 품목의 수용액(1→100) 5mL에 마그네시아시액 2mL를 가할 때, 침전이 생기지 아니한다. 이어 질산 7mL를 가하여 10분간 끊인 다음 수산화나트륨시액을 가하여 중화한 액은 확인시험법 중 인산염 (나)의 반응을 나타낸다.

 (4) 이 품목은 확인시험법 중 나트륨염의 반응을 나타낸다.

순도시험

 (1) 용상 : 이 품목 0.1g을 물 10mL에 녹일 때, 무색으로서 그 탁도는 거의 징명 이하이어야 한다.

 (2) 액성 : 이 품목의 수용액(1→20)의  pH는 7.0～8.5이어야 한다.

 (3) 비소 : 이 품목을 비소시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 4.0ppm 이하이어야 한다.

 (4) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

 (5) 흡광비 : 이 품목의 0.01N 염산(1→50,000)의 파장 250nm, 260nm 및 280nm에서의 흡광도 A1, A2 및 A3를 측정할 때, A1/A2은 0.95～1.03, A3/A2는 0.63～0.71이어야 한다.

 (6) 다른 핵산분해물 : 이 품목의 수용액(1→200) 1μL 를 시험용액으로 하고 아세톤ㆍ암모니아시액ㆍn-프로판올의 혼액(2 : 5 : 6)을 전개용 용매로 해서 박층크로마토그래피를 행할 때, 한개의 반점 이외에는 반점을 나타내어서는 아니 된다. 다만, 박층판의 담체는 박층크로마토그래피용 실리카겔(형광제첨가)을 이용해서 110℃에서 1시간 건조시킨 것을 사용하고 전개용용매가 원선보다 약 10cm 높이로 전개했을 때 전개를 그치고 바람에 말린 다음 암소에서 자외선(파장 약 250nm)하에서 관찰한다. 다만, 대조액은 사용하지 아니한다.

건조감량

 이 품목을 120℃에서 4시간 건조할 때, 그 감량은 25% 이하이어야 한다.

정 량 법 

 이 품목 약 500mg을 정밀히 달아 0.01N 염산에 녹여 1,000mL로 하고 이 액 10mL에 0.01N 염산을 가하여 250mL로 하여 시험용액으로 한다. 0.01N 염산을 대조액으로 하여 액층의 길이 1cm로 파장 260nm에 있어서의 흡광도 A를 측정하고 다음 계산식에 따라 5‘-구아닐산이나트륨의 함량을 구한다.

  함량(%) =   A       ×  250,000             ×  100               ×  100   

            ─────  ───────────  ──────────          

              289.8       검체의 채취량(mg)       100-건조감량(%)             

■ 5‘-이노신산이나트륨(Disodium 5’-inosinate)

  C10H11O8N4PNa2ㆍnH2O    분자량 392.17   

정    의

  이 품목은 식품첨가물로 사용되고 있는 5‘-이노신산이나트륨(5’-이노신산나트륨)이다.

함    량

  이 품목을 무수물로 환산한 것은 5‘-이노신산이나트륨(C10H11O8N4PNa2) 97.0∼102.0%를 함유한다.

성    상

  이 품목은 무∼백색의 결정 또는 백색의 결정성분말로서 특이한 맛을 가지고 있다.

확인시험

  ① 이 품목 20mg을 0.01N 염산 100ml에 녹이고 그 액 10ml에 0.01N 염산을 가하여 100ml로 한 액은 파장 250±2nm에서 극대흡수부가 나타난다. 

  ② 이 품목의 수용액(3→10,000) 3ml에 오르신알콜용액(1→10) 0.2ml를 가하고 황산제이철암모늄염산용액(1→1,000) 3ml를 가하여 수욕중에서 10분간 가열하면 녹색을 나타낸다. 

  ③ 이 품목의 수용액(1→20) 5ml에 마그네시아시액 2ml를 가하여 침전이 생기지 아니하면 이에 질산 7ml를 가하여 10분간 끓인 다음 수산화나트륨시액을 가하여 중화한 액은 확인시험법중 인산염 (나)의 반응을 나타낸다. 

  ④ 이 품목은 확인시험법중 나트륨염의 반응을 나타낸다.

순도시험

  ① 용  상 : 이 품목 0.5g을 물 10ml에 녹일 때, 그 액은 무색으로서 탁도는 거의 징명이하이어야 한다. 

  ② 액  성 : 이 품목의 수용액(1→20)의 pH는 7.0～8.5이어야 한다. 

  ③ 비  소 : 이 품목 0.25g을 물 5ml에 녹이고 이를 시험용액으로 하여 비소시험을 할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하). 

  ④ 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다. 

  ⑤ 흡광비 : 이 품목의 0.01N 염산(1→50,000)의 파장 250nm, 260nm 및 280nm에 있어서의 흡광도 A1, A2 및 A3를 측정할 때, A1/A2는 1.55∼1.65, A3/A2는 0.20∼0.30 이어야 한다. 

  ⑥ 기타의 헥산분해물 : 이 품목의 수용액(0.1→20) 1μl 를 시험용액으로 하여 n-프로판올, 암모니아시액 및 아세톤의 혼액(6 : 5 : 2)을 전개용용매로 하여 박층크로마토그라피를 행할 때, 하나의 반점이 생긴다. 다만, 박층판은 담체로서 박층크로마토그라피용 실리카겔(형광제를 입힌 것)을 110°에서 1시간 건조한 다음의 것을 쓰며 전개용용매의 선단이 원선으로부터 10cm 상승했을 때, 전개를 그치고 바람에 말린 다음 어두운 곳에서 자외선(파장 약 250nm) 투과에 의하여 관찰한다. 대조액은 쓰지 아니한다.

수    분

  이 품목 약 500mg을 정밀히 달아 수분을 정량할 때, 그 양은 28.5% 이하이어야 한다. 다만, 검체를 건조적정플라스크에 취하고 수분측정용메탄올 10mL를 가하고 다시 수분측정시액을 약 10mL 과잉되도록 일정량을 가하여 마개를 막고 20분간 흔들어 섞은 다음 물ㆍ에탄올표준용액으로 적정한다. 따로 같은 방법으로 공시험을 한다.

정 량 법

 이 품목 약 500mg을 정밀히 달아 0.01N 염산에 녹여 1,000ml로 하고 이 액 10ml에 0.01N 염산을 가하여 250ml로 하여 시험용액으로 한다. 0.01N 염산을 대조액으로 하여 액층의 길이 1cm에서 파장 250nm에 있어서 흡광도 A를 측정하고, 다음 식에 따라 함량을 구한다. 

  함량(%) ＝  A x 250,000 x 100                           x   100   

            ───────────────────────          

              310 x 검체의 채취량(mg) x (100 - 수분(%))             

■ 카레(curry)

정    의 

향신료를 원료로 한 카레분 또는 이에 식품이나 식품첨가물 등을 가하여 만든 것을 말한다. 인도가 원산지로서, 세계에서 널리 보급된 대표적인 혼합향신료이며, 카레라는 말은 국물이라는 뜻의 인도 말에서 유래된 것이다.

성상/순도/함량 : 천연향신원료 식물(100%)을 10종 이상 혼합하여 건조, 분말로 한 카레분에 식품이나 식품첨가물 등을 가하여 만든 것

검정성분(또는 물질명) : 

기타 : 

■ 캐러웨이(Caraway)

정    의 

산형과(Umbelliferae)의 한해살이풀 또는 두해살이풀. 씨는 상당히 쓰고 단맛이 없다. 향신료로 쓰며, 방향유는 향미 목적으로 널리 쓴다.

성상/순도/함량 :  -

검정성분(또는 물질명) : carvone, d-limonene

기타 : 정유의 주성분은 carvone이고, 그밖에 d-limonene등이 들어 있다. 알레르기를 일으키는 psychotroph라는 myristicine가 함유되어 있다. 조단백질 19.8% 내외, 조지방 14.6% 내외, 조섬유 12.6% 내외, 조회분 5.9% 내외이다.

■ 향신료올레오레진류(Spice Oleoresins)

정    의  향신료 올레오레진류는 다음 공정 중의 하나에 의해서 제조된다.

  (1) 적합한 용매(에탄올, 메탄올, 삼염화에틸렌, 아세톤, 이소프로필알콜, 염화메틸렌, 헥산)를 단독 또는 병용하여 각 원료 향신료로부터 추출하여 얻어지며 사용된 용매들은 잔류용매의 규격에 적합하도록 제거시켜야 한다.

  (2) 각 원료 향신료의 휘발성성분을 분별증류하고, 따로 비휘발성성분을 (1)항의 용매로 추출하고 용매를 제거한 후 분별증류한 휘발성성분과 혼합하여 얻어진다.

    올레오레진류에는 올레오레진 다임(Oleoresin Thyme, 기원 : Thymus vulgaris L.의 건조전초), 올레오레진 딜씨드(Oleoresin Dillseed, 기원 : Anethum graveolems L.의 건조종자), 올레오레진 로렐리프(Oleoresin Laurel Leaf, 기원 : Laurus nobilis L.의 건조잎), 올레오레진 마조람(Oleoresin Marjoram, 기원 : Majorana hortensis Moench의 건조전초), 올레오레진 바씰(Oleoresin Basil, 기원 : Ocimum basilicum L.의 건조전초), 올레오레진 블랙페퍼 및 올레오레진 화이트페퍼(Oleoresin Black and Oleoresin White Pepper, 기원 : Piper nigrum L.의 건조열매), 올레오레진 셀러리(Oleoresin Celery, 기원 : Apium graveolens L.의 건조종자), 올레오레진 아니스(Oleoresin Anise, 기원 : Pimpinella anisum L.의 건조열매), 올레오레진 안젤리카씨드(Oleoresin Angelica Seed, 기원 : Angelica archangelica L.의 건조종자), 올레오레진 오리가늄(Oleoresin Origanum, 기원 : Origanum속의 건조엽), 올레오레진 진저(Oleoresin Ginger, 기원 : Zingiber officinale L.의 건조근경), 올레오레진 카다몸(Oleoresin Cardamom, 기원 : Elettaria cardamomum Maton의 건조종자), 올레오레진 카라웨이(Oleoresin Caraway, 기원 : Carum carvi L.의 건조종자), 올레오레진 코리엔더(Oleoresin Coriander, 기원 : Coriandrum sativum L.의 건조종자), 올레오레진 쿠민(Oleoresin Cumin, 기원 : Cuminum cyminum L.의 건조종자), 올레오레진 쿠벱(Oleoresin Cubeb, 기원 : Piper cubeba L.의 건조종자), 올레오레진 파슬리리프(Oleoresin Parsley Leaf, 기원 : Petroselinum crispum L.의 건조전초), 올레오레진 파슬리씨드(Oleoresin Parsley Seed, 기원 : Petroselinum crispum L.의 건조종자), 올레오레진 펜넬(Oleoresin Fennel, 기원 : Foeniculum vulgare P. Miller의 건조잎), 올레오레진 피멘타베리스(Oleoresin Pimenta Berries, 기원 : Pimenta officinalis Lindl의 건조과실), 올레오레진 갈릭(Oleoresin Garlic, 기원 : Allium sativum L.의 인경 또는 잎), 올레오레진 너트메그(Oleoresin Nutmeg, 기원 : Myristica fragrangs Houttuyn의 성숙한 씨의 건조 종인), 올레오레진 로즈메리(Oleoresin Rosemary, 기원 : Rosmarinus officinalis L.의 어린잎), 올레오레진 메이스(Oleoresin Mace, 기원 : Myristica fragrans Houtt.의 성숙한 씨의 건조가종피), 올레오레진 세이지(Oleoresin Sage, 기원 : Salvia officinalis L.의 건조잎), 올레오레진 시나몬(Oleoresin Cinnamon, 기원 : Cinnamomum zeylanicum nees의 건조내부 껍질), 올레오레진 오니온(Oleoresin Onion, 기원 : Allium cepa L.의 인경), 올레오레진 카시아(Oleoresin Cassia, 기원 : Cinnamomum cassia Blume의 건조껍질), 올레오레진 캪시컴(Oleoresin Capsicum, 기원 : Capsicum annum L., 또는 Capsicum frutescens L.의 건조열매), 올레오레진 클로브(Oleoresin Clove, 기원 : Eugenia caryophyllata Thunberg의 건조꽃눈), 올레오레진 타라곤(Oleoresin Tarragon, 기원 : Artemisia dracunculus L.의 잎, 줄기 및 꽃)이 있다. 다만, 품질보존 등을 위하여 희석제, 산화방지제 및 기타 식품첨가물(유화제 등)을 첨가 할 수 있다.

성    상  이 품목은 액체, 점조한 액체 또는 반고형상으로서 원료, 향신료, 특유의 맛과 향을 가진다.

확인시험  (1) 이 품목은 50mg을 취하여 에탄올 10mL에 녹인 후 필요하면 원심분리하여 이를 시험용액으로 한다. 별도로 캪사이신 1mg을 에탄올 10mL에 녹여 표준용액으로 한다. 시험용액 및 표준용액 10μL씩을 박층크로마토그래피용 실리카겔을 사용하여 조제한 박층판에 점적한다. 이를 에테르ㆍ에탄올의 혼액(19 : 1)을 전개용용매로 하여 약 12cm 전개시킨 후 풍건한다. 이에 2,6-디브로모퀴논클로라이드시액을 균등히 분무하고 암모니아가스 중에서 방치할 때, 시험용액에서 얻은 반점은 표준용액에서 얻은 청색의 반점과 색조, 전개거리가 같아야 한다(다만, 올레오레진캪시컴의 경우에만 적용한다).  

  (2) 순도시험 (5) 휘발성오일 시험조작에 따라 시험하여 얻은 정유성분을 적외부흡수스펙트럼측정법 나. (2) 용액법에 따라 시험할 때 다음 개별정유성분에 대한 스펙트럼의 특성(식품첨가물공전 참고)을 나타낸다(다만, 올레오레진캪시컴의 경우는 제외한다).

순도시험  (1) 비  소 : 이 품목 0.25g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에탄올용액(1→50) 10mL를 넣고 에탄올에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3mL를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하).

  (2) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 5.0ppm 이하이어야 한다.

  (3) 잔류용매 : 이 품목을 「파프리카추출색소」의 순도시험 (5)에 따라 시험할 때,

  염화메틸렌, 삼염화에틸    30ppm 이하(단독 또는 병용시 합계)   

  아  세  톤                30ppm 이하                          

  이소프로필알콜            30ppm 이하                          

  메  탄  올                50ppm 이하                          

  헥      산                25ppm 이하이어야 한다.              

  (4) 휘발성 오일 : 아래의 시험조작에 따라 휘발성 오일량을 측정할 때, 다음의 향신료 올레오레진류의 경우에는 개별규격에 적합하여야 한다(다만, 다음규격에 적합한 향신료 올레오레진류의 유화제 등을 사용하여 희석시킨 제품인 경우에는 다음 휘발성 오일 개별규격에 향신료 올레오레진류의 배합비율을 환산 적용한다).

  올레오레진 다임              : 5～12(v/w)%    

  올레오레진 딜씨드            : 10～20(v/w)%   

  올레오레진 로렐리프          : 5～25(v/w)%    

  올레오레진 마조람            : 10～20(v/w)%   

  올레오레진 바씰              : 4～17(v/w)%    

  올레오레진 블랙페퍼          : 15～35(v/w)%   

   및 올레오레진 화이트페퍼    : 7～20(v/w)%    

  올레오레진 셀러리            : 9～22(v/w)%    

  올레오레진 아니스            : 2～7(v/w)%     

  올레오레진 안젤리카씨드      : 20～45(v/w)%   

  올레오레진 오리가늄          : 18～35(v/w)%   

  올레오레진 진저              : 50～80(v/w)%   

  올레오레진 카다몸            : 10～20(v/w)%   

  올레오레진 카라웨이          : 2～12(v/w)%    

  올레오레진 코리엔더          : 10～30(v/w)%   

  올레오레진 쿠민              : 50～80(v/w)%   

  올레오레진 쿠벱              : 2～10(v/w)%    

  올레오레진 파슬리리프        : 2～7(v/w)%     

  올레오레진 파슬리씨드        : 3～20(v/w)%    

  올레오레진 펜넬              : 20～50(v/w)%   

  올레오레진 피멘타베리스                       

 시험조작 : 휘발성 오일량이 2～5mL가 되도록 충분한 양의 검체를 정밀히 달아 목의 크기가 24/40의 1,000～2,000mL 환저플라스크에 취한 다음 이에 마그네틱바, 물 500mL 및 그림과 같은 증류두를 부착하고 환류냉각기를 연결한 후 저어 주면서 플라스크를 가열한다. 이 때 오일량이 더이상 변하지 않을 때까지 가열한 다음 실온으로 방냉하고 오일층이 맑게 될 때까지 정치시킨 후 포집된 오일량을 거의 0.02mL 까지 읽고 다음 계산식에 따라 휘발성 오일량을 계산한다.

  휘발성 오일(V/W)% ＝  포집된 오일량(mL)   ×  100   

                      ───────────          

                        검체의 채취량(g)              

    (a) 물보다 비중이 큰 기름용             (b) 물보다 비중이 작은 기름용   

  증류두 : Clevenger Traps(단위 : mm)                                       

  (5) 피페린(올레오레진 블랙페퍼 및 올레오레진 화이트페퍼의 경우에만 적용된다)

    표준원액조제 : 융점이 129～130℃범위가 되도록 이소프로필알콜을 사용하여 결정화를 반복하여 정제된 결정상태의 피페린 100mg을 정밀히 달아 100mL 플라스크에 넣고 이염화에틸렌을 가하여 용해시킨 다음 이염화에틸렌을 가하여 100mL로 한 다음 다시 이 액 10mL를 취하여 이염화에틸렌을 가하여 100mL로 한 것을 표준원액으로 한다.

    표준용액의 조제 : 표준원액 1.0, 3.0, 5.0 및 10.0mL(피페린 0.1, 0.3, 0.5 및 1.0mg함유)를 100mL 플라스크에 각각 취한 다음 이염화에틸렌을 가하여 100mL씩으로 한 것을 각각의 표준용액으로 한다.

    시험용액의 조제 : 이 품목을 100℃의 증기수욕조나 오븐(가열판상위는 안됨)내에서 가열하고 유리교반막대로 혼합한 다음 약 100mg을 정밀히 달아 100mL 플라스크에 넣고 이염화에틸렌을 가하여 녹여준 다음 이염화에틸렌을 가하여 100mL로 하고, 다시 이 액 1mL를 취한 다음 이염화에틸렌을 가하여 100mL로 한 것을 시험용액으로 한다.

    시험조작 : 시험용액과 각 표준용액에 대하여 이염화에틸렌을 대조액으로 하여 액층 1cm, 파장 342nm에서 각각의 흡광도를 측정한다. 각 표준용액농도(mg/100mL)에 대한 4개의 표준용액 흡광도의 검량선을 구한다. 검량선으로부터 검체 중의 피페린농도(mg/100mL) C를 구한 다음 다음 계산식에 따라 올레오레진 블랙페퍼 및 올레오레진 화이트페퍼의 피페린양을 구할 때, 36% 이상이어야 한다.

  피페린(%) ＝  100 ×  100C                

                      ───────────

                        검체의 채취량(mg)   

  (6) 매운맛(올레오레진캪시컴의 경우에만 적용된다)

    이 품목의 매운맛은 다음의 시험방법에 따라 시험할 때, 100,000～2,000,000 범위에서 표시량 이상이어야 한다.

    시험방법 : 이 품목 200mg을 50mL의 메스플라스크에 취하고 에탄올을 가해 눈금을 맞춘 후 잘 흔들어 방치하여 검액으로 한다. 검액 0.15mL를 140mL의 설탕용액(10w/v%)에 가해 잘 혼합한 후 이를 시험용액으로 하여 다음에 따라 시험한다. 스코빌매운맛단위(Scoville Heat Units) 240,000은 시험용액 5mL씩을 5명에게 섭취하게 할 때, 3명 이상이 매운맛을 느낀다. 이 보다 높은 경우 다음 표에 의해 시험용액으로 희석하여 시험한다.

┌─────┬──────┬──────┐

│스코빌    │시험용액(mL)│설탕용액(mL)│

│매운맛단위│            │            │

┝━━━━━┿━━━━━━┿━━━━━━┥

│  360,000 │ 20         │  10        │

│  480,000 │ 20         │  20        │

│  600,000 │ 20         │  30        │

│  720,000 │ 20         │  40        │

│  840,000 │ 20         │  50        │

│  960,000 │ 20         │  60        │

│ 1,080,000│ 20         │  70        │

│ 1,200,000│ 20         │  80        │

│ 1,320,000│ 20         │  90        │

│ 1,440,000│ 20         │ 100        │

│ 1,560,000│ 20         │ 110        │

│ 1,680,000│ 20         │ 120        │

│ 1,800,000│ 20         │ 130        │

│ 1,920,000│ 20         │ 140        │

│ 2,040,000│ 20         │ 150        │

└─────┴──────┴──────┘

  매운맛의 단위가 240,000이하인 경우 다음 표에 의해 검액을 취해 시험용액을 만든다.

┌─────┬────┬──────┐

│스코빌    │검액(mL)│설탕용액(mL)│

│매운맛단위│        │            │

┝━━━━━┿━━━━┿━━━━━━┥

│100,000   │0.15    │ 60         │

│117,500   │0.15    │ 70         │

│170,000   │0.15    │100         │

│205,000   │0.15    │120         │

└─────┴────┴──────┘

9. 비단백태질소화합물

┌─────────────────────────────────────────────────┐

│반추가축에서 반추위 내에 공생하는 미생물의 작용으로 단백질과 아미노산 요구량의 일부를 충당할 목적 │

│(질소 공급원)으로 사료에 첨가하는 물질                                                            │

└─────────────────────────────────────────────────┘

■ 당밀요소(Molasses urea mixture)

정    의

당밀과 요소를 혼합한 사료를 말한다.

성상/순도/함량

당밀과 요소의 혼합비율에 따라 다양할 수 있다.

검정성분(또는 물질명) : 질소

기    타

수분 12% 이하이어야 한다.

■ 디우레이드이소부탄(diureidisobutane)

정    의

요소와 이소부틸알데히드를 황산으로 반응시켜 제조한 것을 말한다.

성상/순도/함량

입자 크기는 840㎛의 체를 통과한다.(통과하는 것이어야 한다.)

검정성분(또는 물질명) : 질소

기    타

수분 12% 이하이어야 한다.

■ 비우렛(biuret, 뷰렛)

정    의

두 분자의 요소가 축합된 형태의 것을 말한다.

성상/순도/함량

질소(N) 함량이 35% 이상(조단백질로 환산 시 218.7%)을 함유한다.

검정성분(또는 물질명) : 질소

기    타

반추가축에 급여 시에 요소보다 분해율이 낮아 중독성이 적고 안정성이 높다. 수분 12% 이하이어야 한다.

■ 요소(尿素, urea)

정    의

암모니아와 이산화탄소를 고온, 고압에서 반응시켜 제조한 것을 말한다.

성상/순도/함량

무색의 결정성 물질로서 질소(N) 함량이 45.0% 이상(조단백질로 환산 시 281.25%)을 함유한 것이어야 한다.

검정성분(또는 물질명) : 질소

기    타

■ 제일인산암모늄(Ammonium Phosphate, Monobasic, 산성인산암모늄)

  NH4H2PO4  분자량 115.03   

함    량

  이 품목은 제일인산암모늄(NH4H2PO4) 96.0～102.0%를 함유한다.

성    상

  이 품목은 무～백색의 결정 또는 백색의 결정성분말이다.

확인시험

  이 품목은 확인시험법 중 암모늄염 및 인산염의 반응을 나타낸다.

순도시험

  ① 액  성 : 이 품목의 수용액(1→100)의 pH는 4.3～5.0이어야 한다.

  ② 비  소 : 이 품목 0.25g을 물 5mL에 녹여 이를 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하).

  ③ 납 : 「메타인산나트륨」의 순도시험 ②에 따라 시험한다(4.0ppm 이하).

  ④ 불소화물 : 이 품목 1g을 정밀히 달아 「구연산칼슘」의 순도시험 ⑧에 따라 시험한다(10ppm 이하).

정 량 법

  이 품목 약 3g을 정밀히 달아 물 30mL에 녹이고 염화나트륨 5g을 가하여 잘 흔들어 섞고 약 15℃로 유지하면서 1N 수산화나트륨용액으로 적정한다(지시약 : 치몰블루시액 3～4방울).

1N 수산화나트륨용액 1mL ＝ 115.0mg NH4H2PO4

■ 제이인산암모늄(Ammonium Phosphate, Dibasic, 인산이암모늄)

  (NH4)2HPO4  분자량 132.06   

함    량

  이 품목은 제이인산암모늄[(NH4)2HPO4] 96.0～102.0%를 함유한다.

성    상

  이 품목은 무～백색의 결정 또는 결정성분말로서 암모니아 냄새가 있다.

확인시험

  이 품목은 확인시험법 중 암모늄염 및 인산염의 반응을 나타낸다.

순도시험

  ① 액  성 : 이 품목의 수용액(1→100)의 pH는 7.6～8.4이어야 한다.

  ② 비  소 : 이 품목 0.25g을 물 5mL에 녹여 이를 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하).

  ③ 납 : 「메타인산나트륨」의 순도시험 ②에 따라 시험한다(4.0ppm 이하).

  ④ 불소화물 : 이 품목 1g을 정밀히 달아 「구연산칼슘」의 순도시험 ⑧에 따라 시험한다(10ppm 이하).

정 량 법

  이 품목 약 2g을 정밀히 달아 물 50mL에 녹여 약 15℃로 유지하면서 1N 염산으로 적정한다(지시약 : 메틸오렌지ㆍ자일렌시아놀 FF시액 3～4방울).

1N 염산 1mL ＝ 132.1mg(NH4)2HPO4

■ 인산요소(Urea phosphate)

정    의

요소를 인산에 첨가하여 만든 염(요인산)을 말한다.

성상/순도/함량

17%의 질소(N)와 20%의 인(P)을 함유한다.

검정성분(또는 물질명) : 질소

기    타

인의 공급원으로도 쓰여 질 수 있으며 인산 제2칼슘과 인의 이용성이 동일하다. 수분 12% 이하이어야 한다.

■ 전분요소(starch-urea product, starea)

정    의

전분류와 요소를 혼합한 사료를 말한다.

성상/순도/함량

전분류와 요소의 혼합비율에 따라 다양할 수 있다.

검정성분(또는 물질명) : 질소

기    타

수분 12% 이하이어야 한다.

■ 황산암모늄(Ammonium Sulfate)

  (NH4)2SO4   분자량 132.15   

정    의  

황산의 암모늄염을 말한다.

함    량

  이 품목은 건조한 다음 정량할 때, 황산암모늄[(NH4)2SO4] 99.0% 이상을 함유한다.

성    상

  이 품목은 무색의 결정 또는 백색의 덩어리이다.

확인시험

  이 품목은 확인시험법 중 암모늄염 및 황산염의 반응을 나타낸다.

순도시험

  ① 용  상 : 이 품목 1g을 물 20mL에 녹일 때, 그 액은 무색으로서 탁도는 거의 징명 이하이어야 한다.

  ② 비  소 : 이 품목 0.25g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에탄올용액(1→50) 10mL를 넣고 에탄올에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3mL를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하).

  ③ 납 : 「메타인산나트륨」의 순도시험 ②에 따라 시험한다(5.0ppm 이하).

  ④ 셀레늄 : 이 품목 0.2g을 정밀히 달아 「황산」의 순도시험 ⑥에 따라 시험한다(30ppm 이하).

건조감량

  이 품목을 130℃에서 3시간 건조할 때, 그 감량은 1% 이하이어야 한다.

강열잔류물

  이 품목의 강열잔류물은 0.25% 이하이어야 한다.

정 량 법

  이 품목을 건조한 다음, 약 3g을 정밀히 달아 물에 녹여 250mL로 하고 그 중 25mL에 수산화나트륨용액(2→5) 10mL를 가하여 즉시 0.2N 황산 40mL를 넣은 수기를 접속한 증류장치에 연결하고 가열하여 암모니아를 황산 중에 유출시킨 다음 과잉의 황산을 0.2N 수산화나트륨용액으로 적정한다(지시약 : 메틸레드시액 3방울).

0.2N 황산 1mL ＝ 13.22mg (NH4)2SO4

기   타  반추동물 사료에 비단백태 질소공급원으로 사용된다. 수분 12% 이하이어야 한다.

■ 염화암모늄

Ammonium Chloride

  NH4Cl   분자량 53.50  

함    량  이 품목은 건조한 다음 정량할 때, 염화암모늄(NH4Cl) 99.0% 이상을 함유한다.

성    상  이 품목은 백색의 결정성분말 또는 결정성덩어리로서 염미 및 청량미를 가지고 있다.

확인시험  이 품목은 확인시험법중 암모늄염 및 염화물의 반응을 나타낸다.

순도시험  (1) 용  상 : 이 품목 2g을 물 20ml에 녹일 때, 그 탁도는 거의 징명 이하이어야 한다. 

(2) 비  소 : 이 품목 0.25g을 물 5mL에 녹이고 이를 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(3ppm 이하).

(3) 납 : 이 품목 5.0g을 정밀히 달아 150mL 비이커에 넣고 물 30mL를 가하고 염산을 소량씩 검체가 충분히 녹을 때까지 가해 준 다음 다시 염산 1mL를 추가한다. 이를 약 5분 동안 끓이고 식힌 다음 물을 가하여 약 100mL가 되도록 하고 수산화나트륨용액(1→4) 또는 염산(1→4)을 사용하여 pH 2～4로 조정한다. 이 액을 250mL 분액깔대기에 옮긴 후 물을 가하여 약 200mL로 한 다음 2% 피롤리딘디티오카바민산암모늄(ammonium pyrolidine dithiocarbamate)용액(2→100) 2mL를 가하여 흔들어 섞어 준다. 이에 클로로포름 20mL씩으로 2회 추출하고 추출액을 수욕상에서 증발건고한 다음 잔류물에 질산 3mL를 가하고 거의 건고될 때까지 가열한다. 이에 질산 0.5mL 및 물 10mL를 가한 다음 최종액이 3～5mL가 될 때까지 농축한 후 물을 가하여 10mL로 한 액을 시험용액으로 하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 10.0ppm 이하이어야 한다.

2% APDC용액 : 피롤리딘디티오카바민산암모늄(ammonium pyrolidine dithiocarbamate) 2.0g을 물에 녹여 100ml로 한다. 사용시 여과한다.

건조감량  이 품목을 감압데시케이타(실리카겔)에서 4시간 건조할 때, 그 감량은 2% 이하이어야 한다.

강열잔류물  이 품목의 강열잔류물은 0.5% 이하이어야 한다.

정 량 법  이 품목을 건조한 다음 약 3g을 정밀히 달아 [황산암모늄]의 정량법에 따라 정량한다. 

      0.2N 황산 1ml ＝ 10.70mg NH4Cl

10. 규산염제

┌───────────────────────────────────────────────────┐

│광물질사료로 분류되며 병아리, 산란계, 육성돈 등 가축의 사료에 소량 사용하면 증체율, 산란율, 사료효율  │

│등의 개선 효과가 있고 아울러 연변 방지 등의 효과가 입증되어 광물질사료로서의 가치가 인정되는 물질     │

└───────────────────────────────────────────────────┘

■ 견운모(sericite; 운모류)

정    의

미립질의 운모류의 통칭으로서 암석학적으로 편의상 사용하는 용어이며 국제광물학회연합회(IMA, International Mineralogical Association)가 공인하는 광물명은 아니다. 이는 단지 굴절율이 높아서 비단처럼 반짝이는 미립질의 운모류라는 의미이다.

성상/순도/함량

주요 광물질 및 이의 함량에 따라 다양할 수 있다.

검정성분(또는 물질명) : 칼륨

기    타

수분 12% 이하이어야 하고, 염기치환용량(Cation Exchange Capacity(CEC), 양이온교환능력)과 주성분의 최소량을 등록하도록 되어 있다.

■ 고령토(kaolin; 카올린)

정    의

벤토나이트와 마찬가지로 층상(엽상) 규산염(phyllosilicate)에 속하는 비금속 광물을 말한다.

성상/순도/함량

백색 내지 황백색을 띤다.

검정성분(또는 물질명) : 캐올리나이트(kaolinite), 할로이사이트(halloysite), 수산화규산, 알루미늄 등

기    타

응고방지제(항응고제, anti-caking agent) 등으로 사용될 수 있다. 가금류의 사료로 사용하는 경우 에너지 이용률을 증진시키는 효과도 있다고 한다. 수분 12% 이하, 염기치환용량(CEC, 양이온교환능력)과 주성분의 최소량을 등록하여야 한다. 불순물로 운모, 석영, 장석, 스멕타이트(smectite), 산화철광물, 산화티탄광물, 산화망간광물 등이 소량 함유되어 있다.

■ 규조토(Diatomaceous Earth)

정    의

  이 품목은 규조에서 유래하는 이산화규소로서 건조품, 소성품 및 융제소성품이 있고 이들 각각을 규조토(건조품), 규조토(소성품) 및 규조토(융제소성품)라 칭한다. 소성품은 800～1,200℃에서 소성한 것이고, 융제소성품은 소량의 탄산알칼리염을 첨가하여 800～1,200℃에서 소성한 것이다. 융제소성품 중 산세척품에 대해서는 소성품의 규격(성상은 제외)을 준용한다.

성    상

  이 품목의 건조품은 유백～엷은 회색의 분말이고, 소성품은 엷은 황～엷은 등색 또는 홍～엷은 갈색의 분말이며, 융제소성품은 백～엷은 적갈색의 분말이다.

확인시험

  ① 이 품목 0.2g을 백금도가니에 취해 불화수소산 5mL를 가해 녹이고 가열할 때, 거의 증발한다.

  ② 이 품목을 100～200배율의 현미경으로 관찰할 때, 특유한 다공질의 규소골격이 확인된다.

순도시험

  ① 물가용물 및 액성 : 이 품목 10g에 물 100mL를 가해 증발하는 물을 보충하면서 수욕상에서 때때로 흔들어주면서 2시간 가열하고 식힌 다음 직경 47mm의 멤브레인필터(기공 0.45μm)를 장치한 여과장치를 사용하여 흡인여과 한다. 여액이 탁한 경우에는 동일필터로 재여과 한다. 잔류물을 물로 씻고 세척액은 앞의 여액과 합하여 물을 가하여 100mL로 한다. 이 여액의 액성은 건조품 및 소성품의 pH는 5.0～10.0, 융제소성품의 pH는 8.0～11.0이어야 한다. 또 이 여액 50mL를 취하여 증발건고 시키고 잔류물을 105℃에서 2시간 건조시킬 때, 건조품은 15mg 이하, 소성품은 10mg 이하, 융제소성품은 25mg 이하이어야 한다(건조품 0.3% 이하, 소성품 0.2% 이하, 융제소성품 0.5% 이하).

  ② 염산가용물 : 이 품목 5g에 묽은염산 50mL를 가하여 약 50℃에서 15분간 흔들어 섞으면서 증발하는 물을 보충하여 수욕중에서 때때로 진탕하면서 한 시간 가열하고 식힌 다음 여과한다. 여지상의 잔류물은 물로 씻고 세액은 여액과 합하고 물을 가해 100mL로 하고 이 액을 A액으로 한다. A액 10mL를 취해 황산(1→20) 1mL를 가해 증발건고 시키고 항량이 될 때까지 550℃에서 강열시킬 때, 이의 잔류물은 15mg 이하이어야 한다(3% 이하).

  ③ 비  소 : 순도시험 ②의 A액 2mL를 취해 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(10ppm 이하).

  ④ 납 :  순도시험 ②의 A액을 시험용액으로 하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 10ppm 이하이어야 한다.

강열감량

  이 품목을 105℃에서 2시간 건조한 후 이를 시료로 하여 1,000℃에서 30분간 강열시킬 때, 그 감량은 건조품은 7.0% 이하, 소성품 및 융제소성품은 2.0% 이하이어야 한다.

불화수소산잔류물

  미리 백금도가니를 1,000℃에서 30분간 강열시킨 다음 이 품목 0.2g을 정밀히 달아 여기에 불화수소산 5mL 및 황산(1→2) 2방울을 가해 수욕상에서 거의 증발건고 시킨 후 550℃에서 1시간 강열하고 다시 온도를 서서히 가열하여 1,000℃에서 30분 강열하고 데시케이타중에서 방냉한 다음 정밀히 무게를 달 때, 이의 잔류물은 50mg 이하이어야 한다(25% 이하).

■ 맥반석(barley stone)

정    의

반암에 속하는 암석으로 석영과 장석이 섞여 외관이 마치 암석에 맥반이 붙어있는 형상을 하고 있다.

성상/순도/함량 

   누런 백색, 연한 누런 갈색, 옅은 회색, 짙은 녹색 또는 옅은 녹색 암석에 빨간 점 또는 하얀 점이 고르게 섞여 있는 모양.

검정성분(또는 물질명) : 무수규산, 산화알루미늄, 산화제2철 등

기    타

   1㎤ 당 3～15만 개의 구멍으로 이루어져 있어 흡착성이 강하고, 약 2만5000종의 무기염류를 함유하고 있다.

   중금속과 이온을 교환하는 작용을 하기 때문에 유해금속 제거제(톡신바인더 등)로도 사용되며 열을 가하면 원적외선을 방출하는 것으로 알려져 찜질방, 의료기 등 여러 산업부분에 이용되고 있다.

■ 몬모릴로나이트(Montmorillonite)

정    의

단사정계의 광물로 점토광물의 일종으로 알루미늄이 풍부한 광물이나 암석의 변질로 생성된다.

성상/순도/함량

화학성분은 (AI, Mg)₂Si₄O₁■ (OH)₂4H₂O로 점토 광물의 일종이다.

규산층과 알미늄층이 2:1로 구성되어 결정단위 사이에 물이 자유로 드나들수 있어 물의 함량에 따라 팽창, 수축이 일어날 수 있으며 표면적이 넓고 양이온치환능력이 높다.

검정성분(또는 물질명) : 알루미늄, 마그네슘

기    타

   화산재나 응회암(凝灰岩)에서 변질된 벤토나이트(bentonite)는 불순한 몬모릴로나이트이다. 프랑스의 몽모리용 지방에서 발견되었지만 세계에 널리 분포되어 있다. 벤토나이트와 산성백토(酸性白土)는 다양한 용도로 사용된다.

■ 버미큘라이트(Vermiculite)

정    의

   질석을 약 1,000℃로 구운 것으로 배합토의 재료임.

성상/순도/함량

   무게는 모래의 1/15정도로 가볍고 통기성과 보수성이 우수하며 무균상태이므로 파종, 삽목, 분실용토로서 많이 쓰임. 규산층과 알미늄층이 2:1로 형성된 팽창판자형 제 2차 토양광물.

   색깔은 회백색 또는 갈색이며 진주광택이 난다. 산에 쉽게 분해되고, 양이온 교환능력이 크며 가열하면 팽창한다.

검정성분(또는 물질명) : 알루미늄, 마그네슘 

기    타

   산(酸)에 쉽게 분해되고, 양이온 교환능력이 크다. 가열하면 팽창한다. 사문암 지대에서 산출된다. 다공질(多孔質)이며, 흡수능력이 좋다.

■ 벤토나이트(Bentonite)

정    의

  이 품목은 천연에서 산출되는 콜로이드성 함수규산알루미늄이다.

성    상

  이 품목은 백～엷은 황갈색의 분말 또는 조각으로서, 물에 적실 경우 흙 또는 점토의 냄새가 있다.

확인시험

  ① 이 품목 0.2g을 무수탄산나트륨 및 무수탄산칼륨의 같은 양의 혼합물 1.5g과 혼합하여 백금도가니 또는 니켈도가니에 넣고 완전히 융해할 때까지 가열한다. 식힌 다음 물 5mL를 가하여 약 3분간 방치한 다음 도가니의 바닥을 약하게 가열하여 떨어진 응고물을 물과 함께 비이커에 옮기고 거품이 발생하지 아니할 때까지 염산을 조금씩 가한 다음 염산 10mL를 더 가하고 수욕상에서 증발건고한다. 이에 물 200mL를 가하여 끓이고 여과한다. 겔상의 잔류물을 백금접시에 옮겨 불화수소산 5mL를 가하면 녹고 가열하면 거의 휘산한다.

  ② 위 ①의 여액은 확인시험법 중 알루미늄염의 반응을 나타낸다.

  ③ 이 품목을 물에 담가두면 팽윤하여 약 5배의 용적이 된다.

순도시험

  ① 이  물 : 이 품목 2g을 유발에 넣고 물 20mL를 가하여 팽윤시키고 유리봉으로 균등하게 분산시킨 다음 물을 가하여 100mL로 한다. 이 분산액을 7호체를 통하여 물로 씻고 체눈위를 손끝으로 비빌 때, 모래가 없어야 한다.

  ② 비  소 : 이 품목 0.77g에 묽은염산 10mL를 가하여 15분간 흔들어 섞으면서 70℃로 가열하고 급히 냉각시킨 다음 여과한다. 잔류물을 묽은염산 10mL, 물 20mL로 차례로 씻고 씻은 액을 여액에 합쳐 물을 가하여 40mL로 한다. 그 중 20mL를 시험용액으로하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.6ppm 이하이어야 한다.

  ③ 납 : 이 품목을 건조한 다음 5.0g을 취하여 염산(1→25) 100mL를 미리 가해 둔 250mL 비이커에 넣고 저어준 다음 시계접시를 덮고 15분간 끓여준다. 실온으로 식힌 다음 불용성물질을 가라앉히기 위해 정치시키고 나서 상층액은 여지를 사용하여 여과시킨다. 여지는 열수 25mL씩으로 4번 씻어준 다음 여액을 모두 합하여 약 20mL가 될 때까지 은근하게 가열농축한다. 만일 침전물이 생기면 질산 2～3방울을 가하여 다시 끓여주고 실온으로 식힌 다음 농축물은 여지를 사용하여 빠른 유속으로 여과한다. 비이커와 여지는 물로 씻어준 다음 여액에 물을 가하여 50mL로 한 액을 시험용액으로 하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 20ppm 이하이어야 한다.

  ④ 세균수 : 이 품목은 「식품 등의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 세균수(일반세균수)에 따라 시험할 때, 제품 1g 당 1,000 이하이어야 한다.

  ⑤ 대장균 : 이 품목은 「식품 등의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 대장균에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

건조감량

  이 품목 2g을 취하여 110℃에서 항량이 될 때까지 건조할 때, 그 감량은 5～10% 이어야 한다.

팽윤력시험

  이 품목 2g을 물 100mL를 넣은 100mL 공전실린더에 여러 번 나누어 넣는다. 이 때 먼저 넣은 것이 일단 침착한 다음에 다음 것을 넣는다. 24시간 방치할 때, 그릇 바닥의 덩어리가 팽윤한 용적은 10mL의 눈금 이상이어야 한다.

■ 세피올라이트(Sepiolite) 

정    의

해포석(海泡石)이라고도 하며 단사정계(單斜晶系)에 속하는 광물로서 미국 염호 바닥에 다량이 있다., 

성상/순도/함량

백색, 회색, 녹색, 황색을 띄며 화학성분은 Mg4Si6O15(OH)2 ㆍ6H2O이다. 굳기 2∼2.5, 비중 2정도이다. 섬유상의 결정도 있으나 보통은 토상(土狀)의 미소한 결정의 집합체로 전자현미경으로만 관찰할 수 있다. 건조한 덩어리로 된 것은 물에 뜰 만큼 가볍다. 

검정성분(또는 물질명) : 마그네슘 등

기    타

   토양의 A층과 B층에는 흔하지 않은 광물이다. 다만 토양의 pH가 높고 산성풍화가 무시될 정도인 토양에 나타난다. 마그네슘 규산염광물(Mg silicate minerals)이며 약간의 A1을 함유하고 있다. 

■ 에타폴자이트(Attapulgite) 

정    의

에타폴자이트는 점토 광물로서 팰리고르스카이트(palygorskite)라고도 불리며, 호수의 퇴적물, 염 퇴적층, 사막의 토양, 석회질 물질 내에서 산출된다. 

성상/순도/함량

긴 규소-산소 판을 이루고 있어 층상규산염 광물에 포함되지만, 판을 구성하는 SiO4 4면체들이 긴 욋가지와 같은 양상으로 배열되어 섬유 모양을 이룬다.

검정성분(또는 물질명) : 마그네슘, 알루미늄

기    타

   침상으로 산출되는 2 : 1형 점토광물이다.

■ 일라이트(illite; 백운모)

정    의

이질퇴적암, 열수변질대 및 중성-산성암의 풍화물에서 매우 흔한 2차 광물로서 K+가 풍부한 환경에서 잘 형성된다. 백운모에서 버미큘라이트(vermiculite) 또는 스멕타이트(smectite)로 가는 중간단계의 점토광물이다. 그러나 운모류(mica group)에 속하는 백운모(muscovite, white mica)의 점토광물로 간주되기도 한다. 학계에서는 과거에 견운모(sericite)라고 불리었던 미립질 백운모를 포괄하는 광물명으로 사용하고 있다.

성상/순도/함량

입자의 크기가 2∼4㎛ 이하로서 운모와 비슷하며, 저면간격(d-spacing)은 10Å이고, 화학적으로는 백운모에 비하여 Si4+, Mg2+ 및 H2O가 더 풍부하나 사면체자리의 Al3+과 층간 K+의 함량은 더 낮다.

검정성분(또는 물질명) : 칼륨

기    타

수분 12% 이하이어야 한다. 일라이트의 염기치환용량(CEC, 양이온교환능력)은 10∼40meq/100g 범위이고 pH에 따라 약간 변화를 보인다. 국내에서 순수한 일라이트의 생산량은 매우 적으며 대개는 약간의 석영이 불순물로 들어간 견운모 광석상태로 이용되고 있다. 산업광물로서 운모는 오래 전부터 사용되어 왔지만, 일라이트는 근래에 들어 그 효용성이 부각되었던 관계로 아직 그 용도, 수급관계 및 품질규격 면에서 체계가 잡혀있지 않은 실정이다. 따라서 일라이트는 국내에서는 물론 국외에서도 아직 독립된 산업광물 품목으로 인정되지 못한 채, 소위‘견운모질 납석(sericitic pyrophyllite)’또는‘도석(porcellanite)’의 일종으로 개발 및 유통되고 있다.

■ 제올라이트(zeolite)

정    의

낮은 온도 및 압력을 이루는 천연의 조건에서 흔히 산출되며 망상 규산염 광물(tectosilicate)에 속하는 함수규산염 광물을 말한다.

성상/순도/함량

조회분 84∼85% 정도이며 그 중에서도 실리카(58∼69%)와 알루미늄 (11∼13%)이 많이 들어 있다.

검정성분(또는 물질명) : 조회분, 실리카(이산화규소), 알루미늄

기    타

광물질을 공급하거나 수분 흡수력에 의한 연변 방지, 장내 가스흡착 등의 효과가 있다. 수분 12% 이하, 염기치환용량(CEC, 양이온교환능력) 80meq/100g 이상이어야 한다.

■ 흑운모(biotite, black mica)

정    의

화성암, 변성암의 주요 조암광물이며 흑색 철고토질 운모(black ferromagnesian micas)류에 속하는 층상 규산염(phyllosilicate) 광물이다.

성상/순도/함량

암갈색 내지 암녹색을 띤다.

검정성분(또는 물질명) : 실리카(이산화규소), 알루미늄

기    타

수분 12% 이하이어야 하고, 염기치환용량(Cation Exchange Capacity(CEC), 양이온교환능력)과 주성분의 최소량을 등록하도록 되어 있다.

11. 완충제

┌────────────────────┐

│pH를 조절하기 위해 사료에 첨가하는 물질 │

└────────────────────┘

■ 산화마그네슘(Magnesium Oxide)

  MgO   분자량 40.30  

함    량

  이 품목을 강열한 다음 정량할 때, 산화마그네슘(MgO) 96.0% 이상을 함유한다.

성    상

  이 품목은 백～유백색의 분말 또는 알맹이다.

확인시험

  이 품목 1g에 염산(1→3) 25mL를 가하여 녹인 액은 확인시험법 중 마그네슘염의 반응을 나타낸다.

순도시험

  ① 물가용물 : 이 품목 2.0g에 물 100mL를 가하여 수욕 중에서 5분간 가열한 다음 즉시 여과하고 식힌 후에 여액 25mL를 취하여 수욕 중에서 증발건고한 다음 잔류물을 105℃에서 1시간 건조할 때, 그 양은 2.0% 이하이어야 한다.

  ② 유리알칼리 : ①의 여액 50mL를 취한 다음 메틸레드시액 2방울을 가해주고 0.1N 황산 2.0mL를 가할 때, 액은 적색을 나타낸다.

  ③ 비  소 : 이 품목 0.25g에 염산(1→4) 5mL를 가하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하).

  ④ 납 : 「메타인산나트륨」의 순도시험 ②에 따라 시험한다(2.0ppm 이하).

  ⑤ 산화칼슘 : 정량법의 A액 50mL를 정확히 취한 다음 물을 가하여 300mL로 하고 주석산용액(1→5) 0.6mL를 가해주고 이에 트리에타놀아민용액(3→10) 10mL, 수산화칼륨용액(1→2) 10mL를 가하여 5분간 방치한 다음 2-옥시-1-(2‘-옥시-4’-설포-1‘-나프틸아조)-3-나프토에산시약 0.1g을 지시약으로 하여 0.01M 이.디.티.에이.용액으로 적정하고 그 소비량을 BmL로 한다. 종말점은 액의 적색이 완전히 소실되고 청색으로 된 때로 한다(1.5% 이하).

  산화칼슘(CaO)의 함량(%) =   B(mL) × 0.5608   

                            ──────────

                              검체의 채취량(g)  

강열감량

  이 품목을 800～825℃에서 항량이 될 때까지 강열할 때, 그 감량은 5% 이하이어야 한다.

정 량 법

  이 품목을 강열한 다음 약 0.5g을 정밀히 달아 물 5mL로 적셔주고 염산 10mL와 과염소산 10mL를 가해주고 시계접시로 뚜껑을 하여 서서히 가열하여 짙은 흰 연기가 나오기 시작하면 10분간 더 가열한다. 식힌 후 온수 약 50mL와 염산(1→2) 5mL를 가하여 약간 가열하고 여과지로 여과하여 그 여액에 물을 가하여 정확히 500mL로 한 것을 A액으로 한다. A액 10mL를 취하여 물을 가하여 100mL로 한 다음 암모니아ㆍ염화암모늄완충액 5mL와 에리오크롬블랙T시액 2방울을 가해주고 즉시 0.01M 이.디.티.에이.용액으로 적정하고 그 소비량을 AmL로 한다. 종말점은 액의 적색이 청색으로 된 때로 한다. 순도시험 ⑥에서 얻은 소비량 BmL를 사용하여 다음 계산식에 따라 함량을 구한다.

  산화마그네슘(MgO)의 함량(%) =   (A - 0.2B) × 2.0152  

                                ────────────

                                  검체의 채취량(g)      

■ 세스퀴탄산나트륨(sodium sesquicarbonate)

   Na2CO3ㆍNaHCO3ㆍ2H2O   분자량 226.03   

정    의

  탄산의 혼합 나트륨염으로 Na2CO3ㆍNaHCO3ㆍ2H2O으로 표현된다.

함    량

  이 품목은 탄산나트륨 42% 이상, 탄산수소나트륨 33% 이상 및 나트륨 27.5% 이상이어야 한다.

성    상

  이 품목은 백색의 결정, 조각 또는 결정성 분말이다.

확인시험: -

순도시험: -

정 량 법: -

■ 탄산나트륨(소다회, Sodium Carbonate)

결정물 : 탄산소오다

무수물 : 소오다회

  Na2CO3ㆍnH2O(n=0, 1 혹은 10)     분자량 10수염 286.14   

                                  1수염 124.00            

                                  무수물 105.99           

정    의

  이 품목에는 결정물(1수염, 10수염) 및 무수물이 있고, 각각을 탄산나트륨(결정) 및 탄산나트륨(무수)이라 칭한다.

함    량

  이 품목은 건조한 다음 정량할 때, 탄산나트륨(Na2CO3＝105.99) 99.0% 이상을 함유한다.

성    상

  이 품목의 결정물은 백색의 결정성분말 또는 무～백색의 결정성 덩어리이며 무수물은 백색의 분말 또는 입상이다.

확인시험

  이 품목은 확인시험법 중 탄산염 및 나트륨염의 반응을 나타낸다.

순도시험

  이 품목을 70℃에서 건조한 다음 온도를 천천히 250～300℃까지 올리고 항량이 될 때까지 건조한 후 시험한다. 

  ① 용  상 : 이 품목 1g을 물 20mL에 녹일 때, 그 액은 무색으로서 탁도는 약간 미탁 이하이어야 한다.

  ② 비  소 : 이 품목 0.25g을 달아 물 5mL에 녹이고. 염산 1mL를 천천히 가하여 이를 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하).

  ③ 납 : 「메타인산나트륨」의 순도시험 ②에 따라 시험한다(2.0ppm 이하).

  ④ 수  은 : 이 품목을 수은시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  ⑤ 염화물 : 이 품목 0.5g을 취해 묽은질산 6mL를 가하여 끓이고 식힌 다음 물을 가하여 100mL로 하고 그 중 10mL를 취하여 묽은질산 6mL를 가하여 이를 시험용액으로 하여 염화물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.01N 염산 0.5mL에 대응하는 양 이하이어야 한다 .

건조감량

  이 품목을 70℃에서 건조한 다음 온도를 천천히 250～300℃까지 올리고 항량이 될 때까지 건조할 때, 그 감량이 무수물은 2.0% 이하, 1수염은 15% 이하, 10수염은 55～65%이어야 한다.

정 량 법

  이 품목을 건조한 다음 약 0.6g을 정밀히 달아 물 50mL에 녹여 0.5N 염산으로 적정한다(지시약 : 브로모페놀블루시액 3방울). 다만, 종말점 부근에서 끓여 이산화탄소를 날려 보낸 다음 식혀 적정을 계속한다.

0.5N 염산 1mL ＝ 26.497mg Na2CO3

■ 중조(탄산수소나트륨, 중탄산나트륨, Sodium Bicarbonate)

  NaHCO3  분자량 84.01  

함    량

  이 품목은 건조한 다음 정량할 때, 탄산수소나트륨(NaHCO3) 99.0% 이상을 함유하여야 하며, 비단백태질소화합물이 15ppm 이하이어야 한다.

성    상

  이 품목은 백색의 결정덩어리 또는 결정성분말이다.

확인시험

  이 품목은 확인시험법 중 탄산수소염 및 나트륨염의 반응을 나타낸다.

순도시험

  ① 용  상 : 이 품목 1g을 물 20mL에 녹일 때, 그 액은 징명하여야 한다.

  ② 탄산염 : 이 품목 1g을 새로 끓여서 식힌 물 20mL에 15℃이하의 온도에서 수평으로 흔들어 녹이고 0.1N 염산 2mL를 가하여 이어 페놀프탈레인시액 2방울을 가할 때, 홍색을 나타내어서는 아니 된다.

  ③ 암모늄염 : 이 품목 1g을 가열할 때, 암모니아냄새를 발생하여서는 아니 된다.

  ④ 비  소 : 이 품목 0.25g을 물 5mL에 녹이고 염산 2mL를 천천히 가하여 이를 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하).

  ⑤ 납 : 「메타인산나트륨」의 순도시험 ②에 따라 시험한다(2.0ppm 이하).

  ⑥ 수  은 : 이 품목을 수은시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  ⑦ 염화물 : 이 품목 0.5g을 취하여 묽은질산 5mL를 가하여 끓이고 식힌 다음 묽은질산 6mL를 가하고 이를 시험용액으로 하여 염화물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.01N 염산 0.3mL에 대응하는 양 이하이어야 한다.

건조감량

  이 품목을 데시케이타(실리카겔)에서 4시간 건조할 때, 그 감량은 0.25% 이하이어야 한다.

정 량 법

  이 품목을 건조한 다음, 약 3g을 정밀히 달아 물 25mL에 녹여 1N 황산으로 적정한다(지시약 : 브로모페놀블루시액 3방울). 다만, 종말점 부근에서 끓여 이산화탄소를 날려 보낸 다음 식혀서 적정을 계속한다.

1N 황산 1mL ＝ 84.01mg NaHCO3

12. 착색제(Coloring agent; Colorant)

┌─────────────────────────────────────────────────┐

│동물이 생산하는 산물의 영양 가치를 높이는 요소는 아니지만 시각적인 효과를 높이기 위해 사료에 첨가 │

│하는 물질                                                                                         │

└─────────────────────────────────────────────────┘

 가. 천연착색제(natural color additive, natural coloring agent) : 자연 상태에서 존재하며 색깔을 낼 수 있는 능력을 갖는 천연색소로서 그 예는 다음과 같다.

┌───────────────────────────────────────────────────────┐

│가재색소, 감색소, 고량색소, 김색소, 락색소, 마리골드색소, 무궁화색소, 베리류색소, 비트레드색소, 사프란색소,   │

│스피룰리나색소, 시아너트색소, 심황색소, 안나토색소, 알팔파추출색소, 양파색소, 오징어먹물색소, 자단향색소, 자  │

│주색고구마색소, 자주색옥수수색소, 자주색참마색소, 적무색소, 적양배추색소, 차즈기색소, 치자적색소, 치자청색    │

│소, 치자황색소, 카라멜색소, 카카오색소, 코치닐추출색소, 크릴색소, 타마린드색소, 토마토색소, 파프리카추출색소, │

│파피아색소, 포도과즙색소, 포도과피색소, 피칸너트색소, 홍국색소, 홍국황색소, 홍화적색소, 홍화황색소            │

│※ 품목별 기준 및 규격은 식품첨가물 공전을 준용                                                               │

└───────────────────────────────────────────────────────┘

■ 아스타키산틴(astaxanthin; 아스타잔틴)

정    의

잔토필계의 붉은 색소로서 새우나 게 등의 갑각류의 껍질 등에서 발견되는 천연색소이다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 아스타키산틴(아스타잔틴)

■ 아포카로텐산 에스테르(apocarotenoic ester, apoester)

정    의

주로 난황색과 육계의 피부색에 노란 착색 효과를 나타내기 위해 사용되는 황색계 카로티노이드(yellow carotenoid)이다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 아포카로텐산 에스테르

■ 칸타산틴(canthaxanthin; 칸타잔틴)

정    의

자연계에 널리 분포하는 잔토필 색소의 하나로서 케토형 화합물이다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 칸타산틴(칸타잔틴)

 나. 합성착색제(artificial pigments) : 화학적 방법에 의해서 합성된 색소로서 아스타키산틴, 아포카르텐산 에스테르, 칸탄산틴에 한한다.

■ 아스타키산틴(Astaxanthin; 아스타잔틴)

C40H52O4 분자량596.82

성분규격

함량

본 품은 정량할 때, 아스타키산틴(C40H52O4) 97.0～102.0%를 함유한다.

성상

본 품은 적자～암자색의 결정성 분말로서, 조금 특이한 냄새가 난다.

확인시험

①본 품의 클로르포름용액(1→10,000) 0.5㎖에 삼염화안티몬시액 1㎖를 가하면, 그 액은 즉시 청자색을 나타낸다.

②정량법으로 얻은 시료용액으로 클로르포름을 대조로 하여 흡수 스펙트럼을 측정하면, 파장 487～491nm에서 최대흡수를 나타낸다.

순도시험

①용액상 : 본 품 0.01g에 클로르포름 10㎖를 가하여 녹이면, 그 액은 적색으로 투명하여야 한다.

②중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속 시험법 제 2법에 의해 시험을 실시하면 그 양은 납표준액 2.0㎖에 대응하여야 한다.(20ppm 이하)

③비소 : 본 품 1.0g을 취하여, 비소시험법 제 3법에 의해 시험을 실시하면 여기에 적합하여야 한다.(2ppm 이하)

건조감량

0.5% 이하(0.5g, 105℃, 4시간)

강열잔류물

0.1% 이하(0.5g)

정량법

본 품 약 0.035g을 정밀하게 칭량하여 클로르포름을 가하고 녹여 정확히 200㎖로 한다. 이 액 5㎖를 정확하게 취하여 클로르포름을 가하여 정확하게 50㎖로 한다. 여기에 이 액 5㎖를 정확히 취하여 클로르포름을 가하여 정확히 50㎖로 하여 시료용액으로 한다. 이 액으로 클로르포름을 대조로 하여 파장 489nm 부근의 최대파장에서의 흡광도 A를 측정한다.

아스타키산틴(C40H52O4)의 양(㎎) = 

보존방법의 기준

차광한 밀폐용기에 넣고, 공기를 불활성 가스로 치환하여 보존할 것.

■ 아포카로텐산 에스테르(Apocarotenoic Ester)

C32H44O2 분자량460.7

성분규격

함량

본 품은 정량할 때 베타-아포-8‘-케로테노익 엑시드 에틸 에스테르(Apocaroten -oicester:β-apo-8’-carotenoic acid ethyl ester, C32H14O2)를 10% 이상 함유한다.

성상

적갈색의 유동성 분말

확인시험

정량법에서 얻은 시료용액에 대하여 사이클로헥산 용액을 대조로 하여 흡수스펙트럼을 측정할 때 파장 447～449nm에서 흡수가 최대를 보인다.

순도시험

① 순도 : 정량법에 준한다.

② 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 2법에 의한 시험을 행할 때 납표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(20ppm 이하)

③ 비소 : 본 품 1.0g을 취하여 비소시험법 제 3법에 의한 시험을 행할 때 여기에 적합하여야 한다.(3ppm 이하)

건조감량

최대 8%(0.5g, 105℃, 4시간)

정량법

본 품 약 1.0g을 증류수 80㎖, 암모니아수(20～30%) 1㎖, 트립신/펩신(1 : 1) 100mg을 가하여 50℃ 초음파 수욕상에서 30분간 방치 한 후, 상온으로 냉각하고 증류수를 가하여 100㎖ 되도록 한다. 혼합액 10g에 에탄올 100㎖를 가하여 흔든 뒤 에칠에터로 250㎖가 되게 한다. n-헥산에 담겨있는 비활성 산화알루미늄을 채운 컬럼에 추출액 25㎖를 넣고  n-헥산 : 에터(1 : 1) 50～100㎖로 흘려 용리액을 수집하여 용매를 날린 뒤, 건조된 잔류물을 n-헥산 : 아세톤(95 : 5) 5㎖로 용해하여  시료액으로 하고 아래의 조건에서 분석한다. 아포카로텐산 에스테르의 함량은 그것과 이성체 피크들의 합으로 계산한다.

고속액체크로마토그라피 분석조건 (예)

컬럼 : 실리카겔 충진 컬럼

이동상 : n-헥산 : 아세톤 (93 : 7)

유속 : 1.5㎖/min

시료주입량 : 10～50㎕

검출기 : 가시광선자외선 검출기, 466nm

보존방법

15℃이하의 실온에서 밀봉된 상태로 공기, 열, 빛과 습기의 접촉을 피해 보관

■ 칸타산틴(Canthaxanthin; 칸타잔틴)

C40H52O2 분자량564.85

성분규격

본 품은 칸타산틴에 전분, 젤라틴, 탄수화물이 혼합된 입자이다.

함량

본 품은 정량할 때 칸타잔틴(C40H52O2)을 10%이상 함유한다.

성상

적자색의 유동성 분말

확인시험

정량법에서 얻은 시료욕액에 대하여 n-헥산 용액을 대조로 하여 흡수스펙트럼을 측정할 때, 파장 464-468nm에서 흡수가 최대를 보인다.

순도시험

① 순도 : 정량법에 준용한다.

② 중금속 : 본 품 1.0g을 취하여 중금속시험법 제 2법에 의한 시험을 행할 때 납 표준액 2.0㎖에 대응하는 양 이하이어야 한다.(20ppm 이하)

③ 비소 : 본 품 1.0g을 취하여 비소시험법 제 3법에 의한 시험을 행할 때 이에 적합하여야 한다.(3ppm 이하)

건조감량

최대 8%(0.5g, 105℃, 4시간)

정량법

본 품 약 1.0g을 증류수 80㎖, 암모니아수(20～30%) 1㎖, 트립신/펩신(1 : 1) 100mg을 가하여 50℃ 초음파 수욕상에서 30분간 방치 한 후, 상온으로 냉각하고 증류수를 가하여 100㎖ 되도록 한다. 혼합액 10g에 에탄올 100㎖를 가하여 흔든 뒤 에칠에터로 250㎖가 되게 한다. n-헥산에 담겨있는 비활성 산화알루미늄을 채운 컬럼에 추출액 25㎖를 넣고 n-헥산 : 에터(1 : 1) 50～100㎖로 흘려 용리액을 수집하여 용매를 날린 뒤, 건조된 잔류물을 n-헥산 : 아세톤(95 : 5) 5㎖로 용해하여  시료액으로 하고 아래의 조건에서 분석한다. 칸타산틴 함량은 그것과 이성체 피크들의 합으로 계산한다.

고속액체크로마토그라피 분석조건 (예)

컬럼 : 실리카겔 충진 컬럼

이동상 : n-헥산 : 아세톤 (93 : 7)

유속 : 1.5㎖/min

시료주입량 : 10～50㎕

검출기 : 가시광선자외선 검출기, 466nm

보존방법

15℃이하의 실온에서 밀봉된 상태로 공기, 열, 빛과 습기의 접촉을 피해 보관

13. 추출제(Extracts; 추출물)

┌──────────────────────────────────────────────────┐

│물 또는 유기용매 등을 사용하여 고체 또는 액체의 혼합물로부터 어떤 유효물질을 뽑아내거나 열ㆍ압력을  │

│가하여 분리해 낸 물질 또는 건조시켜 분말화한 물질, 농축은 가능하나 특정성분을 정제하는 것은 곤란    │

└──────────────────────────────────────────────────┘

 가. 초목(草木)추출물

■ 가시오갈피추출물(Acanthopanax senticosus extract)

정    의 

식품으로 사용 가능한 가시오갈피(가시오가피)의 뿌리, 줄기, 잎 또는 열매를 물리적으로 또는 용매(물, 주정, 이산화탄소에 한함)를 사용하여 추출한 것으로 특정한 성분이 제거되거나 분리되지 않은 추출물(착즙 포함)을 말한다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 가시오갈피추출물

기    타 : -

■ 감초추출물(Licorice Extract)

정    의  이 품목은 콩과 감초(Glycyrrhiza inflata BATALIN, Glycyrrhiza uralensis FISCHER, Glycyrrhiza glabra LINNE), 또는 그 밖의 동속식물의 뿌리 및 근경을 열수로 추출하여 얻어지거나 실온이나 약간 미온상태의 알칼리성 수용액으로 추출하고 정제하여 얻어지는 것으로서 주성분은 글리실리진산이다. 이 품목에는 감초정제물과 감초조제물이 있다.

함    량  이 품목은 글리실리진산으로서 감초정제물은 50.0% 이상, 감초조제물은 50.0% 미만을 함유한다.

성    상  이 품목의 감초정제물은 백～황색의 결정 또는 분말이고, 감초조제물은 황～갈색의 분말, 박편, 알맹이, 덩어리, 액체 또는 페이스트상의 물질이다.

확인시험  이 품목 5～10mg을 취하여 50% 에탄올 10mL에 녹인 액을 시험용액으로 하고, 따로 글리실리진산표준품 5mg을 50% 에탄올 10mL에 녹인 액을 표준용액으로 한다. 이들 각 액에 대해 박층크로마토그래피법에 따라 시험한다. 시험용액 및 표준용액 2μL씩을 박층크로마토그래피용 실리카겔(형광제 넣은 것)을 사용하여 조제한 박층판에 점적한 후 n-부탄올ㆍ물ㆍ초산의 혼액(7 : 2 : 1)을 전개용매로 하여 약 10cm 전개하고 박층판을 풍건시킨다. 이에 자외선(주파장 254nm)을 쪼일 때, 시험용액에서 얻어진 수개의 반점 중 1개의 반점은 표준용액에서 얻어진 암자색의 반점(글리실리진산)과 색조 및 Rf치가 같아야 한다.

순도시험  (1) 비  소 : 이 품목 0.38g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에탄올용액(1→50) 10mL를 넣고 에탄올에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3mL를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.6ppm 이하이어야 한다.

  (2) 납：이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.0ppm 이하이어야 한다.

강열잔류물  이 품목 1g을 취하여 필요하면 수욕상에서 건고한 다음 강열잔류물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 15.0% 이하이어야 한다.

정 량 법  이 품목을 글리실리진산으로서 약 20mg에 상당하는 양을 정밀히 달아 50% 에탄올을 가하여 100mL로 한 액을 시험용액으로 한다. 따로, 글리실리진산표준품 약 20mg을 정밀히 달아 50% 에탄올을 가하여 100mL로 한 액을 표준용액으로 한다. 표준용액 및 시험용액 각각 20μL씩을 다음의 조작조건으로 액체크로마토그래피에 주입하고, 다음 계산식에 따라 감초추출물의 함량을 구한다.

  함  량(%)  ＝    TG × Ws   ×  100   

                ───────          

                   SG × W              

  SG : 표준용액의 피크면적                  

  TG : 시험용액의 피크면적                  

  Ws : 표준품의 채취량(mg)(무수물로 환산)   

  W : 검체의 채취량(mg)(무수물로 환산)      

    조작조건

      검 출 기 : UV 254nm

      칼    럼 : μ-Bondapak C18(내경 4～6mm, 길이 15～30cm) 또는 이와 동등한 것

      칼럼온도 : 40℃

      이 동 상 : 2% 초산ㆍ아세토니트릴의 혼액 (20 : 11)

      유    속 : 글리실리진산의 유지시간이 약 10분이 되도록 조정한다.

■ 금잔화추출물(Calendula extract)

 - 정의 : 금송화라고도 불리는 금잔화 꽃에서 추출한 것이다.

 - 성상/순도/함량 : -

 - 검정성분(또는 물질명) : 크산토필

 - 기타 : 일부 향료로도 사용된다.

■ 도라지추출물(Platycodon grandiflorum extract)

정    의  

   초롱꽃과 식물로 생도라지 및 건조된 도라지를 극성이 적은 정제수, 에탄올, 메탄올 또는 혼합용매 등을 이용하여 열수로 추출하여 농축한 것을 말한다.

성상/순도/함량  

   흑갈색 추출물이나 추출공정에 따라 달라질 수 있음

검정성분(또는 물질명) : 조사포닌

기    타  

   명시되지 않은 사항에 대해서는 ‘건강기능식품의 기준 및 규격’에 따름.

■ 루테인(Lutein)

  제조기준

    (1) 원재료 : 마리골드(Tagetes erecta)의 꽃

    (2) 제조방법 : 상기 (1)의 원재료를 헥산 또는 이산화탄소(초임계추출)로 추출, 검화한 후 결정화시켜 제조하여야 함. 결정화 과정 중 초산에틸 사용 가능함

    (3) 기능성분(또는 지표성분)의 함량 : 루테인(Lutein)을 700 mg/g 이상 함유하고 있어야 함

  규    격

    (1) 성상 : 고유의 색택과 향미를 가지며 이미ㆍ이취가 없어야 함

    (2) 루테인

       (가) 원료성 제품 : 표시량 이상

       (나) 최종제품 : 표시량의 80～120%

    (3) 잔류용매 (해당 용매를 사용한 경우에 한함)

       (가) 헥산(mg/kg) : 5.0 이하

       (나) 초산에틸(mg/kg) : 50.0 이하

    (4) 중금속

       (가) 납(mg/kg) : 1.0 이하

       (나) 카드뮴(mg/kg) : 1.0 이하

       (다) 총수은(mg/kg) : 1.0 이하

       (라) 총비소(mg/kg) : 1.0 이하

    (5) 대장균군 : 음성

  시 험 법

    (1) 루테인 : 제 4. 3-45 루테인

    (2) 잔류용매 : 제 4. 2-5-5 초산에틸, 건강기능식품의 기준 및 규격 [별표 4] 참조

    (3) 납, 카드뮴, 총수은, 총비소 : 건강기능식품의 기준 및 규격 [별표 4] 참조

    (4) 대장균군 : 건강기능식품의 기준 및 규격 [별표 4] 참조

■ 마리골드색소(Tagetes Extract)

정    의  

  이 품목은 마리골드(Tagetes erecta WILLD.)의 꽃을 유기용제인 헥산으로 추출하여 얻어진 색소로서 카로티노이드계의 루테인(lutein) 및 그 디팔미테이트(lutein dipalmitate)를 주성분으로 하는 것이다. 다만, 색가조정, 품질보존 등을 위하여 희석제, 안정제 및 용제 등을 첨가할 수 있다.

함    량  

  이 품목의 색가(E 10%, 1cm)는 표시량 이상이어야 한다.

성    상  

  이 품목은 등황∼황갈색의 액체, 덩어리 또는 페이스트상의 물질로서 특유의 냄새가 있다.

확인시험

  (1) 이 품목에 메틸알콜 : n-헥산(1:1)을 가하여 녹인 액은 파장 469~475nm 및 441~447nm에 극대흡수부가 있으며 이와 더불어 420~426nm에 극대흡수부가 나타나는 경우도 있다.

  (2) 이 품목을 아세톤에 녹인 액은 5% 아질산나트륨과 0.5M 황산용액을 순차적으로 첨가하면 색깔이 없어진다.

순도시험

  (1) 비  소：이 품목 0.25g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에틸알콜용액(1→50) 10ml를 넣고 에틸알콜에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450∼550°로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450∼550°로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3ml를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험을 할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하).

  (2) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.0ppm 이하이어야 한다.

  (3) 잔류용매：파프리카추출색소의 순도시험 (4)에 따라 시험할 때, 헥산의 잔류량은 25ppm 이하이어야 한다.

정 량 법

  이 품목을 측정하는 흡광도가 0.3∼0.7의 범위가 되도록 정밀히 달아 에틸알콜:n-헥산(1:1)에 녹여 100ml로 하고 이 액 1ml를 취하여 헥산을 가하여 100ml로 한 것을 시험용액으로 한다. 필요하면 원심분리하여 그 상등액을 사용한다. 에틸알콜:n-헥산(1:1)을 대조액으로 하여 액층 1cm, 파장 441～447nm부근의 극대흡수파장에서 시험용액의 흡광도 A를 측정하여 다음 식에 따라 색가를 구한다.

■ 라즈베리추출물(Rubus Idaeus extract, Raspberry extrct)

정    의

  멍덕딸기(Rubus Idaeus) 잎에서 추출한 것이다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 라즈베리추출물

기    타 

  주로 추출성분에 의한 기능성성분으로 이용되며 독특한 향이 있어 향료도 이용되고 있다.

■ 목초액(Pyroligneous liquor)

정    의

  목재를 열분해할 때 생성되는 수성 액체이다. 

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : -

기    타 

  나무로 숯을 만드는 과정에서 나오는 연기를 액화시켜 채취한 뒤, 6개월 이상 숙성시켜 독성과 유해물질을 제거하는 것이 일반적이다.

■ 밀크씨슬추출물(Milk thistle extract)

정    의

  밀크씨슬(Silybum marianum, 흰무늬엉겅퀴)을 그대로 주정(물ㆍ주정 혼합물 포함) 추출하거나 압착 또는 헥산으로 탈지하여 주정(물ㆍ주정 혼합물 포함) 추출한 후 여과, 농축, 정제하여 제조하여야 함. 정제과정 중 헥산 또는 초산에틸 사용 가능함

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 밀크씨슬추출물

기    타 

  건강기능식품은 실리마린이 320～660 mg/g 함유되어 있어야 함

■ 사철쑥추출물(Artemisiae capillaris extract)

정    의

   건조된 사철쑥(Artemisiae capillaris)의  잎, 줄기로부터 물과 주정을 혼합한 용매로 추출하여 얻은 가용성 성분을 농축하여 건조한 분말을 말한다

성    상  

   황갈색 내지 갈색의 분말로 이미, 이취가 없어야 한다.

검정성분(또는 물질명) : 스코파론(Scoparone, dimethylescuretin)

기    타 

  수분, 중금속, 세균수 등은 ‘식품의 기준 및 규격’의 일반시험법에 근거하여 분석한다. 

■ 아티초크추출물(Artichoke extract) 

정    의

  아티초크 꽃에서 추출한 것이다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 아티초크추출물

기    타 

  성분자체에 비타민A, 비타민C, 철, 인, 당류, 이눌린 등을 함유하고 있다.

■ 우엉추출물 (Burdock extract)

정    의

  우엉의 뿌리에서 추출한 것이다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 우엉추출물

기    타 

  이눌린 27~45%, 프로테인 12%, 정유 0.17%, 기름과 비슷한 물질 0.8%, 아르크티인, 카페인산, 탄닌질, 점액, 수지, 팔미트산, 스테아르산, 리놀산, 탄화수소 C20 H54, 시토스테롤, 스티그마스테레롤, 알칼로이드 등의 성분이 들어 있음

■ 유카추출물(Yucca Extract)

정    의

  이 품목은 용설란과 유카(Yucca brevifolia Engelm, Yucca schidigera)의 뿌리를 물로 추출하여 얻어지는 것이다. 다만, 품질보존 등을 위하여 희석제 및 기타 식품첨가물을 첨가할 수 있다.

성    상

  이 품목은 암갈색의 액체로서 특이한 냄새가 있다.

확인시험

  이 품목의 1g에 물을 가하여 1,000mL로 한 액의 흡광도를 측정할 때, 파장 250～300nm에 극대흡수부가 있다.

순도시험

  ① 액  성 : 이 품목의 pH는 3.8～4.0이어야 한다.

  ② 대장균군 : 이 품목은 「식품 등의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 대장균군에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

  ③ 기포도 : 물 1.9L를 3.8L 유리병(지름 16.3cm)에 넣고 85% 인산 6방울을 가한 다음 이 품목의 수용액(1.1→1,000) 60mL를 가하여 100번 세게 흔들 때, 거품의 높이가 1.2cm 이상으로 30초간 유지되어야 한다.

  ④ 비  소 : 이 품목 0.5g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에탄올용액(1→50) 10mL를 넣고 에탄올에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3mL를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 2ppm 이하이어야 한다.

  ⑤ 납：이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.0ppm 이하이어야 한다.

강열잔류물

  이 품목은 강열잔류물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 5.0% 이하이어야 한다.

■ 차추출물(Tea Extract)

정    의  이 품목은 차나무과 차나무(Camellia sinensis O. KZE.)의 잎을 물 또는 에탄올로 추출하여 얻어지는 것으로 주성분은 카테킨류이다.

함    량  이 품목은 무수물로 환산한 것은 카테킨류로서 20% 이상이고 표시량의 90～120%를 함유한다.

성    상  이 품목은 엷은 황～흑갈색의 분말, 페이스트 또는 액체로서 특이한 냄새가 있다.

확인시험  (1) 이 품목 0.1g을 50% 에탄올 10mL에 녹인 다음 염화제이철용액(1→50) 2～3방울을 가할 때, 그 액은 녹자～흑자색을 나타낸다.

  (2) 이 품목의 수용액은 265～280nm에 극대 흡수부가 있다.

순도시험  (1) 비  소 : 이 품목 0.25g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에탄올용액(1→50) 10mL를 넣고 에탄올에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3mL를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하).

  (2) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 10ppm 이하이어야 한다.

건조감량  이 품목을 100℃에서 2시간 건조할 때, 그 감량은 5% 이하이어야 한다(다만, 분말제품에 한한다).

정 량 법  미리 시료 0.5g을 달아 수분(W%)을 측정하여 놓는다.

  (1) 녹차추출물 : 이 품목의 카테킨 약 30mg에 대응하는 양을 정밀히 달아 물을 가하고, 필요하면 가온하여 녹이고, 물을 가하여 정확히 100mL로 한다. 이 용액 5mL에 주석산철시액 5mL를 가하고 인산완충액 (pH 7.5)을 가하여 정확히 25mL로 하여 시험용액으로 한다. 물을 대조액으로 하여 파장 540nm에서 흡광도를 측정한다. 별도로 몰식자산에틸(표준품)을 물 100mL당 각각 5, 10, 15, 20, 25mg씩 함유하도록 한 액 5mL씩을 사용하여 시험용액과 동일하게 조작하여 발색시킨 후 파장 540nm에서 흡광도를 측정하여 검량선을 구한다. 시험용액의 흡광도와 검량선으로부터 시험용액 100mL 중의 카테킨류 함량(mg)을 구한다. 다음 계산식에 따라 카테킨류의 함량을 구한다. 

  카테킨류의 함량(%) ＝   C × 1.5 × 100               × 100  

                        ────────────────        

                          검체 채취량(mg) × (100 - W)          

  C  : 검량선에서 얻어진 시험용액중의 몰식자산에틸농도(mg/100mL)              

  1.5 : 몰식자산에틸 1mg이 나타내는 흡광도는 차카테킨 1.5mg의 흡광도에 상당   

  W : 수분함량(%)                                                             

  (2) 우롱차 및 홍차추출물 : 이 품목의 카테킨 약 10mg에 대응하는 양을 정밀히 달아 50% 에탄올 1mL로 녹이고 물을 가하여 정확히 100mL로하여 시험용액으로 한다. 별도로 100℃에서 1시간 건조한 (+)카테킨(정량용) 약 25mg을 정밀히 달아 50%에탄올 1mL로 녹이고 물을 가하여 정확히 100mL로 한다. 이 용액 5, 7.5, 10, 12.5, 15mL를 각각 취하여 물로 정확히 25mL로 희석한 용액을 액을 표준용액으로 한다. 각각의 표준용액 및 시험용액 0.15mL에 물 1.35mL 및 포린-데니스시액(또는 포린시액) 0.5mL씩을 각각 가하여 혼합한다. 시험용액의 대조액으로는 물 0.5mL를 사용한다. 3분 후에 탄산나트륨용액(1→10)을 1mL씩 가하여 혼합한다. 30℃의 항온수조에서 1시간 방치한 후 700nm에서 흡광도를 측정한다. (+)카테킨표준용액의 측정치로부터 검량선을 작성하여 시험용액 100mL중의 카테킨 함량을 구한다. 다음 계산식에 따라 카테킨류의 함량을 구한다.

  카테킨류의 함량(%) ＝   C × 100                      × 100  

                        ────────────────        

                          검체 채취량(mg) × (100 - W)          

  C : 검량선에서 얻어진 시험용액 중의 몰식자산에틸농도(mg/100mL)  

  W : 수분함량(%)                                                 

  시   액 

    포린-데니스시액 : 텅스텐산나트륨 25g, 인몰리브덴산 5g 및 인산 15.5mL에 물 180mL를 가하여 환류냉각기를 달고 2시간 조용히 끓인 후 식힌 다음 물을 가하여 1,000mL로 한다. 

■ 천연 비테인(베타인, Betaine (trimethylglycine))

(CH3)3N+CH2COO-

C5H11NO2                                                 분자량 117.15

성분규격

  함량

  본 품은 베타인(C5H11NO2) 98.0∼102.0%를 함유한다.

  성상

  ① 이 품목은 백색의 결정으로서 약간의 냄새와 감미가 있다.

확인시험

  ① 이 품목의 수용액(1→100)과 베타인표준품의 수용액(1→100) 각각 10㎕씩을 사용하여 다음의 조작조건으로 액체크로마토그라피법에 따라 시험할 때 시험용액의 유지시간은 표준용액의 유지시간과 일치하여야 한다. 

    조작조건 

     검 출 기：시차굴절계(RI Detector) 

     칼    럼：Carbohydrate(8mm×300mm) 또는 이와 동등한 것 

     칼럼온도：80° 

     이 동 상：물 

     유    속：1ml/min

순도시험

  ① 용상：이 품목 1g을 물 10ml에 녹일 때, 그 액은 무색 징명하여야 한다. 

  ② 액성：이 품목의 수용액(1→20)의 pH는 5.0∼7.0이어야 한다. 

  ③ 염화물：이 품목 1g을 취하여 염화물시험을 할 때, 그 양은 0.01N 염산 0.15ml에 대응하는 양 이하이어야 한다. 

  ④ 황산염：이 품목 1g을 취하여 황산염시험을 할 때, 그 양은 0.01N 황산 0.2ml에 대응하는 양 이하이어야 한다. 

  ⑤ 비소：이 품목 0.25g에 물 5ml를 가하여 이를 시험용액으로 하여 비소시험을 할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하). 

  ⑥ 중금속：이 품목 4g을 물 40ml에 녹이고 묽은초산 2ml를 가하여 이를 시험용액으로 하여 중금속시험을 할 때, 그 양은 5ppm 이하이어야 한다.

건조함량

    2% 이하(105℃에서 3시간 건조할 때)

강열잔류물

    0.1%이하(1g)

정량법

  ① 이 품목을 건조한 다음 약 1g을 정밀히 달아 물에 녹여 100ml로 하고 이 액 10ml를 취하여 이온교환수지[약산성이온교환수지(H형)와 강염기성이온교환수지(OH형)를 용적비로 1：4 혼합한 것] 10ml를 충전시킨 칼럼에 유출시킨 후 칼럼을 물로 세정하고 유출액과 세정액을 합하여 염산으로 pH 1.0으로 한 다음 물을 가하여 100ml로 한다. 

  ② 이 액 5ml를 취한 다음 미리 냉각한 라이네케염시액 5ml를 가해주고 3시간 동안 냉장고에서 냉각시킨다. 

   ※ 라이네케염시액 : 라이네케염 1.5g을 물에 녹이고 염산을 가하여 pH 1.0으로 조정한 후 물을 가하여 100ml로 한다.

  ③ 이 때 생성된 침전을 유리여과기(3G4)로 여과하고 잔류물을 에테르로 세정한 후 풍건한다. 이 침전물을 70% 아세톤으로 녹여 25ml로 한 것을 시험용액으로 하여 액층 1cm, 파장 525nm에서 흡광도를 측정한다. 

  ④ 별도로 베타인표준품을 105°에서 3시간 건조한 후 약 1g을 정밀히 달아 물에 녹여 100ml로 한 것을 표준원액으로 한다. 

  ⑤ 이 표준원액 10ml 및 20ml를 각각 취한 다음 염산을 가해 pH 1.0으로 하고 물을 가하여 100ml씩으로 한 액을 각각 표준용액으로 한다. 

  ⑥ 각 표준용액을 5ml씩 취하여 검체와 동일하게 침전조작을 행하여 70% 아세톤으로 녹이고 시험용액과 동일하게 흡광도를 측정하여 검량선을 작성한다. 

  ⑦ 이 검량선과 시험용액의 흡광도로부터 다음 식에 따라 베타인의 함량을 구한다. 

제조방법의 기준

  본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

  기밀용기에 보존할 것

■ 치커리추출물

정의 : 치커리는 국화과(Asteraceae)의 여러해살이 쌍떡잎식물로 줄기는 높이 50~150cm이고 능각이 있으며 드물게 털이 나 있는데 잎 또는 뿌리를 열수 등으로 추출한 것이다.

성상/순도/함량 : 고유의 색택ㆍ향미를 가지고 이미ㆍ이취가 없어야 함

검정성분(또는 물질명) : 치커리추출물

기타 : 이눌린 58% 정도가 포함되어 있으며, 그 이외에도 고미질, 탄닌, 과당, 페쿠틴, 불휘발성 기름, 알카로이드, 에스쿨레틴, 에스쿨린, 치코린, 락투신, 카로틴이나 비타민 B2, 비타민 C, 칼륨, 철분, 식이섬유소가 풍부하여 배변활동 원활에 도움을 줄 수 있으며, 특히 치커리에는 쓴맛이 나는 ‘인티빈’이라는 성분이 들어 있어 혈중 콜레스테롤 개선에 도움을 주거나 식후 혈당상승 억제에 도움을 줄 수 있음. 섭취 시 반드시 충분한 물과 함께 섭취할 것 (액상제외)

■ 칡뿌리추출물(Pueraria thunbergiana Extract)

정    의 

식품으로 사용 가능한 칡뿌리를 물리적으로 또는 용매(물, 주정, 이산화탄소에 한함)를 사용하여 추출한 것으로 특정한 성분이 제거되거나 분리되지 않은 추출물(착즙 포함)을 말한다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 칡뿌리추출물

기    타 : -

■ 퀼라야추출물(Quillaia Extract)

정    의

  이 품목은 장미과 퀼라야(Quillaia saponaria MOLINA)의 수피를 물로 추출, 정제하여 얻어진 것으로 성분은 사포닌이다. 다만, 품질보존 등을 위하여 희석제 및 기타 식품첨가물을 첨가할 수 있다.

함    량

  이 품목은 정량할 때, 부분가수분해사포닌으로서 표시량 이상이어야 한다.

성    상

  이 품목은 엷은 황～갈색의 분말 또는 액상으로 특유한 맛이 있다.

확인시험

  ① 이 품목 0.5g을 물 10mL에 용해하여 그 2μL를 실리카겔60(Kiesel gel 60, Merck사)의 박층판의 하단 2cm 위치에 점적하여 건조 후 클로로포름ㆍ메탄올ㆍ물ㆍ초산의 혼액(15 : 10 : 3 : 1)을 전개용 용매로 상단 약 3cm 위치까지 전개한다. 풍건 후 아니스알데히드황산시액을 분무하여 110℃에서 10분간 가열하면 Rf치는 0.22, 0.26, 0.29, 0.30부근에 자색을 띤 갈색의 반점이 검출된다. 한편, 최대반점은 Rf치 0.29부근이다.

  시   액

    아니스알데히드황산시액 : 에탄올 9mL에 ρ-아니스알데히드 0.5mL 및 황산 0.5mL를 가하여 잘 섞는다.

  ② 이 품목 2g을 100mL 플라스크에 넣고 1% 수산화칼륨시액 25mL를 가하여 수욕 중에서 환류냉각기를 부착하여 2시간 가열한다. 식힌 다음 내용물을 비이커에 옮겨 염산(1→4)으로 pH 5로 중화하고 물을 가하여 50mL로 하여 시험용액으로 한다. 따로, 정량법에서 사용하는 부분 가수분해사포닌 10mg을 물 5mL에 녹인 것을 표준용액으로 한다. 시험용액 및 표준용액 2μL씩을 확인시험 ①의 조건으로 박층크로마토그래피를 행할 때 시험용액에서 얻어진 수개의 반점 중 1개의 반점은 표준용액에서 얻어진 청회색의 반점과 색소 및 Rf치가 같다.

순도시험

  ① 액  성 : 이 품목의 수용액(1→100)의 pH는 4.5～5.5이어야 한다. 다만, 분말의 경우에 한한다.

  ② 비  소 : 이 품목 0.5g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에탄올용액(1→50) 10mL를 넣고 에탄올에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3mL를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(2ppm 이하).

  ③ 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.0ppm 이하이어야 한다.

  ④ 수  은 : 이 품목을 수은시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

건조감량

  이 품목 1g을 취하여 물 105℃에서 2시간 건조할 때, 그 감량은 6.0% 이하이어야 한다. 다만, 분말의 경우에 한한다.

강열잔류물

  이 품목의 강열잔류물은 10% 이하이어야 한다.

정 량 법

  이 품목 약 2g(액상의 경우는 약 5g)을 100mL 메스플라스크에 취하여 물을 가하여 정확히 100mL로 한다. 이 액 10mL를 100mL 플라스크에 정확히 취하고 이에 2% 수산화칼륨시액 10mL를 가하여 환류냉각기가 부착된 수욕 중에서 2시간 가열하여 식힌 다음 에탄올 25mL를 사용하여 50mL 메스플라스크에 옮기고 인산 0.5mL를 가한 후 물을 가하여 50mL로 한 액을 시험용액으로 한다. 따로, 부분가수분해 사포닌표준품 20mg을 50mL 메스플라스크에 정확히 취한 다음 50v/v% 에탄올을 가하여 녹이고 50mL로 한 액을 표준용액으로 한다. 시험용액 및 표준용액 20μL를 다음의 조작조건에 따라 고속액체크로마토그래피에 주입하여 다음식에 따라 부분가수분해사포닌 함량을 구한다.

  함 량(%) ＝   B   ×  (S1 + S2) × 10   × 100  

              ───  ──────────        

                A       St                        

  A : 검체의 채취량(mg)                                                     

  B : 표준품의 채취량(mg)                                                   

  St : 표준용액의 부분가수분해사포닌 피크면적                               

  S1 : 시험용액의 부분가수분해사포닌 피크면적                               

  S2 : 시험용액의 부분가수분해사포닌 피크앞에 나타난 유연체사포닌피크면적   

  조작조건

    검 출 기 : UV 210nm

    칼    럼 : 내경 4～6mm, 길이 15～30cm의 스테인레스관에 5～10μm의 액체크로마토그래피용 옥타데실실리화 실리카겔을 충전

    칼럼온도 : 40℃

    이 동 상 : 0.1% 인산ㆍ아세토니트릴의 혼액 (65 : 35)

    유    속 : 부분가수분해사포닌의 유지시간이 약 10분 되도록 조정

■ 타히보추출물(Taheebo extract) 

정    의 :  타히보 나무껍질에서 추출한 것이다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 타히보추출물

기    타 : 식품에서는 차로도 많이 이용되고 있다.

■ 황금뿌리추출물(Scutellaria Root Extract)

정    의

식품으로 사용 가능한 황금(속썩은풀, Scutellaria baicalensis Georgi)의 뿌리를 물리적으로 또는 용매(물, 주정, 이산화탄소에 한함)를 사용하여 추출한 것으로 특정한 성분이 제거되거나 분리되지 않은 추출물(착즙 포함)을 말한다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 황금뿌리추출물(바이칼린, 바이칼레인 및 우고닌으로 주요성분을 설정할 수 있음)

기    타 

기원 원재료인 황금 뿌리의 납, 비소 등 개별 중금속 허용기준은 식품의 기준 및 규격에 적합하여야 한다.

 나. 종자추출물

■ 달맞이꽃씨추출물(Evening primerose seed extrct) 

 - 정의 : 달맞이꽃 씨에서 추출한 것이다.

 - 성상/순도/함량 : -

 - 검정성분(또는 물질명) : 달맞이꽃씨추출물

 - 기타 : 

■ 자몽종자추출물(Grapefruit Seed Extract)

정    의

  이 품목은 운향과 자몽(Citrus paradisi MACF.)의 종자를 물, 에탄올 또는 글리세린으로 추출하여 얻어지는 것으로 주성분은 지방산, 플라보노이드 등이다.

함    량

  이 품목은 나린진으로서 표시량의 90～130%를 함유한다.

성    상

  이 품목은 무∼황색의 분말 또는 점성이 있는 액체로서 약간 특이한 냄새가 있고 약간 쓴맛이 있다.

확인시험

  ① 이 품목을 정량법에 따라 시험할 때, 파장 254nm에서 비타민C 피크가 확인된다.

  ② 이 품목을 정량법에 따라 시험할 때, 파장 280nm에서 나린진 피크가 확인된다.

순도시험

  ① 비  소 : 이 품목 0.5g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에탄올용액(1→50) 10mL를 넣고 에탄올에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3mL를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(2ppm 이하).

  ② 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 5.0ppm 이하이어야 한다.

정 량 법

  이 품목 약 15g을 정밀히 달아 0.1N 염산 40mL를 가하여 녹인 다음 에테르 50mL를 가하여 진탕추출한다. 염산층을 취하여 0.1N 염산을 가하여 50mL로 한 것을 시험용액으로 한다. 따로, 나린진표준품은 약 25mg을 정밀히 달아 0.1N 염산을 가하여 50mL로 한 것을 표준용액으로 한다. 표준용액 및 시험용액 각각 3μL씩을 다음의 조작조건으로 액체크로마토그래피에 주입하고 다음 계산식에 따라 나린진의 함량을 구한다.

  함량(%) ＝    A × 나린진표준품의 채취량(g)   × 100  

              ─────────────────        

                As × 검체의 채취량(g)                  

  A  : 시험용액의 피크면적  

  As : 표준용액의 피크면적  

 조작조건

    검 출 기 : UV 280nm

    칼    럼 : μ-Bondapak C18 또는 이와 동등한 것

    칼럼온도 : 실  온

    이 동 상 : 아세토니트릴ㆍ물의 혼액 (30 : 70)

    유    속 : 1.0mL/min

■ 포도종자추출물(Grape Seed Extract)

정    의

  이 품목은 포도과 포도(Vitis labrusca LINNE, Vitis vinifera LINNE)의 종자로부터 얻어지는 것으로서 주성분은 프로안토시아니딘이다.

함    량

  이 품목은 프로안토시아니딘으로서 표시량의 90～130%이어야 한다.

성    상

  이 품목은 엷은 황～진한 갈색의 분말로서 떫은 맛이 있으며, 약간 특이한 냄새가 있다.

확인시험

  ① 이 품목 0.01g을 에탄올용액(10→100) 10mL에 녹인 다음 염화제이철시액 1～2방울을 가할 때, 액은 진한 녹색～녹갈색을 나타낸다.

  ② 이 품목 0.1g을 취하여 에탄올용액(10→100) 10mL에 녹인 다음 염산 1mL를 가하여 수욕상에서 가열할 때, 액은 적색을 나타낸다.

순도시험

  ① 비  소 : 이 품목 0.25g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에탄올용액(1→50) 10mL를 넣고 에탄올에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3mL를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하).

  ② 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 10ppm 이하이어야 한다.

  ③ 대장균군 : 이 품목은 「식품 등의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 대장균군에 따라 시험할 때, 음성이어야 한다.

건조감량

  이 품목 3g을 정밀히 달아 105℃에서 3시간 건조할 때, 그 감량은 10% 이하이어야 한다.

정 량 법

  이 품목을 프로안토시아니딘으로서 농도가 10～50mg 되도록 정밀히 달아 메탄올을 가하여 100mL로 한 것을 시험용액으로 한다. 시험용액 0.5mL를 갈색시험관에 취하고 바닐린-메탄올용액(4→100) 3.0mL를 가해준 다음 뚜껑을 덮고 10초간 교반한 후 염산 1.5mL를 정확하게 가해주고 즉시 뚜껑을 덮고 18～22℃에서 15분간 방치한 다음 물을 대조액으로 하여 500nm에서 흡광도를 측정하고 검량선으로 부터 시험용액의 (＋)카테킨 상당량을 구한 다음 이를 프로안토시아니딘으로 한다. 따로, 검체 중에 존재하는 안토시아니딘을 보정하기 위한 보정시험으로 바닐린-메탄올용액 3mL 대신에 메탄올 3mL를 사용하여 이하 시험용액의 시험조작과 동일하게 조작하여 물을 대조액으로 하여 500nm에서 흡광도를 측정한다. 따로, 검체 중에 존재하는 안토시아니딘을 보정하기 위한 보정시험으로 바닐린-메탄올용액 3mL 대신에 메탄올 3mL를 사용하여 이하 시험용액의 시험조작과 동일하게 조작하여 물을 대조액으로 하여 500nm에서 흡광도를 측정한 값을 시험용액의 흡광도에서 빼준다. 이 때 얻은 흡광도에서 검량선으로 부터 시험용액의 (＋)카테킨 상당량을 구한 다음 이를 프로안토시아니딘으로 한다.

  검량선의 작성 : (＋)카테킨표준품 100mg을 정밀히 달아 메탄올을 가하여 100mL로 하고 이 액 1, 2, 3, 5mL를 각각 취한 다음 이에 메탄올을 가하여 10mL씩으로 한 것을 각 표준용액으로 한다. 각 표준용액 0.5mL를 갈색시험관에 각각 취하고 바닐린ㆍ메탄올 용액(4→100) 3mL를 가해준 다음 뚜껑을 덮고 10초간 교반한 후 염산 1.5mL를 정확하게 가해주고 즉시 뚜껑을 덮고 18～22℃에서 15분간 방치한 다음 물을 대조액으로 하여 500nm에서 각각의 흡광도를 측정하여 표준용액의 농도(mg/mL)에 대한 흡광도로 검량선을 작성한다. 따로, 공시험은 카테킨표준용액 대신에 물 0.5mL를 갈색시험관에 취하고 이하 표준용액의 시험방법과 동일하게 조작한다.

      다음의 계산식에 따라 프로안토시아니딘의 함량을 구한다.

  함  량(%) =   A                    ×   희석배수  × 100  

              ───────────                        

                검체의 채취량(mg)                           

           A : 검량선에서 얻어진 시험용액의 (＋)카테킨의 상당량(mg)   

■ 해바라기씨추출물(Sunflower seed extract)

 - 정의 : 해바라기 씨에서 추출한 것이다.

 - 성상/순도/함량 : -

 - 검정성분(또는 물질명) : 해바라기씨추출물

 - 기타 : 해바라기씨에는 풍부한 불포화지방산, 피토스테롤, 마그네슘을 함유하고 있음

■ 호로파씨추출물(Fenugreek seed extract)

 - 정의 : 호로파는 장미목 콩과의 한해살이풀로 높이는 0.7~1미터이며 열매는 꼬투리 모양이며, 호로파 종자에서 추출한것이다.

 - 성상/순도/함량 : -

 - 검정성분(또는 물질명) : 디오스신(dioscin) 등

 - 기타 : 잎은 견과류향이 나며 카로틴이 풍부하다. 호로파 씨에는 매우 적은 양의 정유가 들어 있으며, 씨에 향기로운 기름 6-10%, 알카로이드인 트리노넬린 0.13%, 콜린 0.05%, 스테로이드 사포게닌인 기토게닌, 디오스게닌이 있다. 또한 28%의 만노갈락탄이 있어 물에 적시면 점액성을 띤다. 단백질 22%, 비타민이 있다. 그외 베타-카로텐, 베타-시토스테롤, 쿠마린, 디오스제닌, 캠페롤, 루테올린, 파라쿠마릭산, 케르세틴, 루틴, 사포닌, 트라이고넬린, 바이텍신, 아미노산, 칼슘, 필수지방산, 엽산, 철, 마그네슘, 망간, 인, 칼륨, 셀렌, 아연, 비타민 B1, B2, B3, C 가 있다.

■ 참깨유불검화물(Sesame Seed Oil Unsaponified Matter; 참깨유추출물)

정    의  

  이 품목은 참깨과 참깨(Sesamum indicum LINNE)의 종자 또는 참깨박에서 에탄올로 추출하여 얻어지는 것으로서 그 성분은 세사민, 세사몰린, 세사몰 등이다.

함    량  

  이 품목은 세사민으로서 표시량 이상이어야 한다.

성    상  

  이 품목은 암적갈색의 점조한 액체로 약간 특이한 냄새가 있다.

확인시험

(1) 이 품목은 정량법에 따라 시험할 때, 파장 285nm에서 세사민의 피크가 확인된다. 

(2) 이 품목 5mg에 메틸알콜 10ml를 가하여 녹인 액은 파장 237nm 및 287nm에서 극대흡수부가 있다. 

(3) 이 품목 5mg에 메틸알콜 10ml를 가하여 녹인 액을 시험용액으로 한다. 별도로 세사민표준품 1mg을 메틸알콜 10ml에 녹인 것을 표준용액으로 한다. 시험용액 및 표준용액 10μl씩을 박층크로마토그라피용 실리카박층 60F(60F254 Silica plate)에 점적한다. 이를 클로로포름：에틸에테르(9：1)을 전개용용매로 하여 전개시킨 후 풍건한다. UV lamp조사시 시험용액에서 얻은 반점은 표준용액에서 얻은 반점과 전개거리가 같아야 한다.

순도시험

(1) 비  소：이 품목 0.25g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에틸알콜용액(1→50) 10ml를 넣고 에틸알콜에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450∼550°로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450∼550°로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3ml를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험을 할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하).

(2) 납：이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.0ppm 이하이어야 한다.

건조감량

이 품목 1g을 105°에서 3시간 건조할 때, 그 감량은 10.0% 이하이어야 한다.

정 량 법

 이 품목 약 5mg을 정밀히 달아 클로로포름 소량을 가하여 녹인 후 메틸알콜을 가하여 10ml로 한 다음 0.45μm 밀리포아여과기로 여과한 액을 시험용액으로 한다. 따로, 세사민표준품 약 5mg을 정밀히 달아 클로로포름 소량을 가하여 녹인 후 메틸알콜을 가하여 10ml로 한 다음 0.45μm 밀리포아여과기로 여과한 액을 표준용액으로 한다. 표준용액 및 시험용액 각각 10μl씩을 다음의 조작조건으로 액체크로마토그라프에 주입하고, 다음 식에 따라 세사민의 함량을 구한다.

o 조작조건 

     검 출 기：자외부검출기(UV), 285nm 

     칼    럼：ODS Hypersil (4.6 × 200mm, 5μm) 또는 이와 동등한 것 

     칼럼온도：실  온 

     이 동 상：메틸알콜：물(80：20) 

     유    속：0.7 ml/min

 다. 세포벽 추출물

■ 글루칸(Glucan)

정    의

D-글루코오스만을 구성 당으로 하는 다당류이다. α-D-글루코오스로 이루어지는 것을 α-글루칸, β-D-글루코오스로 이루어지는 것을 β-글루칸이라고 한다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 글루칸

기    타-

■  만난(Mannan)

정    의

만노오스(mannose)를 주된 성분으로 하는 다당류이다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 만난

기    타-

 라. 동물추출물

■ 누에추출물(Silkworm extract)

정    의

   누에나방의 유충인 누에를 5령(5일째 또는 6일째)까지 사육 및 수거하여 동결 또는 열풍 건조(60∼70℃)하거나 마이크로웨이브를 이용하여 건조하고 이를 분쇄한 후 용매를 이용하여 추출 및 건조시켜 분말화한 것을 말한다.

성상/순도/함량 : 

   이 품목은 정량할 때, 1-Deoxynojirimycin을 0.24% 이상 함유한다.

검정성분(또는 물질명) : 1-Deoxynojirimycin

기    타

   60℃ 저압 조건(100mHg)에서 추출 용매를 완전히 증발시킨다. 누에추출물은 조단백질 67.9%, 조지방 15.9%, 조섬유 4.0%, 조회분 4.5%, 수분 6.1% 정도이다.

■ 키토산(Chitosan)

정    의

  이 품목은 키틴을 알칼리처리하여 얻어지는 것으로서 그 성분은 폴리글루코사민(polyglucosamine)이다.

성    상

  이 품목은 백～엷은 황색 또는 적색을 띠는 분말 혹은 인편상으로 약간 특유의 냄새가 있다.

확인시험

  이 품목 0.2g에 안트론시액 5mL 및 물 1mL를 가하여 수욕상에서 가열할 때, 액은 청～녹색을 나타낸다.

순도시험

  ① 비  소 : 이 품목 0.25g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에탄올용액(1→50) 10mL를 넣고 에탄올에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3mL를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하).

  ② 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 10ppm 이하이어야 한다.

  ③ 탈아세틸화도 : 이 품목을 건조한 다음 0.5g을 정밀히 달아 5v/v% 초산에 녹여 정확히 100mL로 하여 시험용액으로 한다. 이 키토산초산 시험용액 1mL를 200mL 삼각플라스크에 취하고 이에 물 30mL를 가하여 교반혼합한 다음 지시약으로서 0.1% 톨루이딘블루용액 2～3방울을 가해주고 0.0025N 폴리비닐황산칼륨용액으로 적정하여 다음 계산식에 따라 탈아세틸화도를 구할 때, 그 양은 70.0% 이상이어야 한다.

  탈아세틸화도(%) ＝  X/161           ×  100   

                    ─────────          

                      X/161 ＋ Y/203            

  X =   1     ×  1       ×  f   ×  161   ×  v   

      ────  ─────                          

        400       1,000                             

  Y =   0.5   ×  1      - X  

                ────      

                  100         

  v : 0.0025N 폴리비닐황산칼륨용액 소비량(mL)   

  f : 0.0025N 폴리비닐황산칼륨용액 규정도계수   

건조감량

  이 품목을 105℃에서 4시간 건조할 때, 그 감량은 15% 이하이어야 한다.

강열잔류물

  이 품목을 건조물로 환산하여 강열잔류물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 5% 이하이어야 한다.

■ 키틴(Chitin)

정    의

  이 품목은 게, 새우 등의 갑각류 껍질 또는 오징어의 뼈를 산성수용액에서 탄산칼슘을 제거한 후 약알칼리성수용액으로 단백질을 제거한 것으로서 주성분은 Ｎ-아세틸글루코사민(Ｎ-acetyl-glucosamine) 다량체이다.

성    상

  이 품목은 백～엷은 황색 또는 적색을 띠는 분말 혹은 비늘모양 고체로서 약간 특유의 냄새가 있다.

확인시험

  이 품목 0.2g에 안트론시액 5mL 및 물 1mL를 가하여 수욕상에서 가열할 때, 액은 청～녹색을 나타낸다.

순도시험

  ① 비  소 : 이 품목 0.25g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에탄올용액(1→50) 10mL를 넣고 에탄올에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3mL를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하).

  ② 납：이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.0ppm 이하이어야 한다.

건조감량

  이 품목을 105℃에서 4시간 건조할 때, 그 감량은 15% 이하이어야 한다.

강열잔류물

  이 품목을 건조물로 환산하여 강열잔류물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 5% 이하이어야 한다.

 마. 기타

■ 과실 및 과채추출물(fruit and fruit vegetables extracts)

정    의

사료로 사용가능한 과실류와 과채류로부터 얻은 추출물을 말하며, 식품으로 사용가능한 과일류와 박과과채류, 박과 이외 과채류에서 추출한 것을 포함한다.

┌────────────────────────────────────────────────────┐

│◇ 과실류 및 과채류(근거 : 식품공전)                                                                    │

├────────────────────────────────────────────────────┤

│ㆍ 과실류 : 과수에서 여는 열매로서 인과류, 감귤류, 핵과류, 장과류, 열대과일류가 있다.                   │

│ - 인과류 : 사과, 배, 모과, 감, 석류 등                                                                 │

│ - 감귤류 : 감귤, 오렌지, 자몽, 레몬, 유자, 라임, 금귤, 탱자, 시트론 등                                 │

│ - 핵과류 : 복숭아, 대추, 살구, 자두, 매실, 체리, 넥타린, 앵두, 산수유, 오미자 등                       │

│ - 장과류 : 포도, 딸기, 무화과, 오디, 월귤, 커런트, 베리, 구기자, 머루, 복분자(산딸기, 나무딸기 포함),  │

│으름 등                                                                                                 │

│ - 열대과일류 : 바나나, 파인애플, 키위(참다래), 아보카도, 파파야, 대추야자, 망고, 구아바, 코코넛, 리치, │

│패션 프루트, 두리안, 망고스틴 등                                                                        │

│ㆍ과채류 : 열매를 먹는 채소로서 박과 과채류와 박과 이외 과채류가 있다.                                  │

│ - 박과 과채류 : 오이, 호박, 참외, 수박, 멜론, 서양호박(단호박) 등                                      │

│ - 박과 이외 과채류 : 토마토, 방울토마토, 고추, 피망(파프리카 포함), 가지, 오크라, 풋콩 등              │

└────────────────────────────────────────────────────┘

■ 노간주열매추출물(Juniperberry extract)

 - 정의 : 노가주 또는 두송이라고도 한다. 측백나뭇과(Cupressaceae)의 상록 교목인 두송(Juniperus communis)이 생산하는 달걀 모양의 둥그런 열매. 두송실이라고도 한다. 익은 것은 향신료로 쓴다. 열매를 으깨면 살짝 쏘는 향과 쓴맛이 생긴다. 때로는 향을 내기 위해서도 쓴다. 

 - 성상/순도/함량 : -

 - 검정성분(또는 물질명) : 노간주열매추출물

 - 기타 : 철의 흡수를 막을 수도 있다. 임신 중이거나 신장병이 있는 동물에게는 주의한다. 알파-피넨, 베타-카로텐, 베타-피넨, 베툴린, 보르네올, 캠퍼, 카리오필렌, 카테친, 파르네솔, 에피카테친, 글리콜산, 리모넨, 리날로올, 멘톨, 루틴, 타닌, 움벨리페론, 칼슘, 크롬, 철, 마그네슘, 망간, 인, 칼륨, 셀렌, 아연, 비타민 B1, B2, B3, C 등의 성분이 들어 있음

■ 마늘추출물(garlic extract)

정    의

백합과(Liliaceae)의 여러해살이풀(Allium sativum)인 마늘의 비늘줄기에서 추출한 것이다.

영양성분

주성분으로는 대략 탄수화물 20%, 단백질 3.3%, 지방 0.4%, 섬유 0.92%, 회분 13.4%, 비타민 C 5.5 mg% 함유되어 있고 glutamic acid를 포함하여 l5종의 아미노산이 확인되었다.

검정성분(또는 물질명) : 마늘추출물 또는 알리인(S-allyl cysteine sulfoxide), 알리신(diallyl disulfide)

고려사항

마늘을 국부적으로 응용하면 자극성을 가진다. 마늘의 정유는 위액분비를 억제하고 빈혈을 일으킬 수 있으므로 사용에 주의한다.

■ 반추위추출물(Rumen extract)

정    의

도축장에서 수거되는 도축부산물 중 반추위액을 말한다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : -

기    타 섬유소분해 등에 효과적이며 한우의 습식발효 TMR 사료원료 등 축우의 사료로 이용이 가능하다.

■ 생강추출물(ginger extracts, zingiber extract)

정의 : 생강과(Zingiberaceae)의 여러해살이풀인 생강의 뿌리줄기에서 추출한 것이다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 생강추출물 또는 진저올

기타 : 향신료로 널리 쓰고 한방에서는 건위제로 쓴다. 매운맛 성분은 진저올이다. 임신한 동물은 복용을 금한다. 항응고제를 복용하는 동물이나 담석을 가진 동물은 수의사와 상의 후 신중히 사용한다. 2. 독성은 약하나 장기간 복용은 피한다. 많은 양을 복용하면 위장 장애를 일으킬 수 있다. 혈액 응고를 방해하는 약을 복용하는 동물은 생강을 포함한 약물을 복용하기 앞서 수의사와 상의해야 한다.

■ 콜라너트추출물(Kola nut extract)

 - 정의 : 콜라나무의 열매(너트)에서 추출한 것이다.

 - 성상/순도/함량 : -

 - 검정성분(또는 물질명) : 콜라너트추출물

 - 기타 : 콜라나무 열매에는 커피의 2～3배에 해당하는 카페인(caffeine)과 콜라닌(kolanin)이 들어 있음. 고혈압, 심계이상자, 위궤양, 임신 중인 동물에게는 주의한다.

■ 타우마틴(토마틴, Thaumatin)

정    의

  이 품목은 Thaumatococcus daniellii Benth의 종자를 물로 추출한 후 정제하여 얻어지는 것으로서 성분은 토마틴이다.

함    량

  이 품목은 정량할 때, 토마틴으로서 표시량 이상이어야 한다.

성    상

  이 품목은 유백～회갈색의 분말, 박편 또는 덩어리로서 냄새가 없고 청량한 강한 감미가 있다.

확인시험

  ① 이 품목 0.1g에 수산화나트륨시액 10mL를 가하여 가열하여 녹인 다음 냉각 후 황산동용액(1→100) 0.5mL를 가할 때, 적자～청록색을 나타낸다.

  ② 이 품목의 수용액(1→100) 2mL에 닌히드린ㆍ초산완충액 2mL 및 황산히드라진용액(0.26→500) 2mL를 가하여 수욕 중에서 가열할 때, 청자색을 나타낸다.

  시   액

    닌히드린ㆍ초산완충액 : 닌히드린 2g에 물 50mL를 가하여 녹이고 초산완충액 25mL 및 물을 가하여 정확히 100mL로 한다.

    초산완충액 : 무수초산나트륨 82g에 물 140mL를 가하여 녹이고 초산 25mL 및 물을 가하여 250mL로 한 후 초산 또는 초산나트륨용액(2→15)으로 pH 5.51±0.03으로 조정한다.

  ③ 정량법에서 얻어진 시험용액은 파장 277nm 부근에 극대흡수부가 있다.

순도시험

  ① 비  소 : 이 품목 0.5g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에탄올용액(1→50) 10mL를 넣고 에탄올에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3mL를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(2ppm 이하).

  ② 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 3.0ppm 이하이어야 한다.

  ③ 알루미늄 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 100ppm 이하이어야 한다.

  ④ 탄수화물 : 이 품목 0.2g을 정밀히 달아 물에 녹여 100mL로 한 액을 시험용액으로 한다. 시험용액 0.2mL를 유리제 시험관에 취하고 얼음 수욕조에서 냉각한 후, 이에 미리 얼음 수욕조에서 냉각시킨 시스테인ㆍ황산용액 1.2mL를 가해주고 마개를 하여 심하게 흔들어 섞는다. 시험관을 얼음 수욕조에서 2분간, 다시 상온에서 3분간 방치한 후 끓는 물에서 3분간 가열한 후 즉시 얼음 수욕조에 담구어 5분간 방치한 다음 액층 1cm,  파장 412nm에서 흡광도를 측정한 후, 검량선으로부터 시험용액 중 탄수화물의 농도(포도당으로서)를 구하고, 다음 계산식에 따라 탄수화물의 양을 구할 때, 그 양은 3.0% 이하이어야 한다.

  탄수화물의 양(%)＝    시험용액 중 탄수화물의 농도(포도당으로서, μg/mL)   ×  100   × 100  

                      ───────────────────────────  ────        

                        검체의 채취량(g) × [1-(건조감량(%)/100)]               106           

    검량선의 작성 : 포도당 표준품을 물에 녹여 10～100 μg/mL 농도로 조제한 후 시험용액과 동일하게 처리하여 측정된 흡광도로부터 검량선을 작성한다. 

  시   액 

      L-시스테인용액 : 염산시스테인일수화물 3g을 물에 녹여 100mL로 한다. 

      시스테인ㆍ황산용액 : L-시스테인용액 0.5mL와 86% 황산 25mL를 섞는다. 사용 시 조제한다.

  ⑤ 세균수 : 이 품목은 「식품 등의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 세균수(일반세균수)에 따라 시험할 때, 1g당 1,000이하이어야 한다.

  ⑥ 대장균 : 이 품목은 「식품 등의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 대장균에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

건조감량

  이 품목을 105℃에서 5시간 건조할 때, 그 감량은 9% 이하이어야 한다.

회    분

  이 품목을 탄화 후 500℃에서 회분시험법에 따라 시험할 때, 1.0% 이하이어야 한다.

강열잔류물

  이 품목은 강열잔류물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.0% 이하이어야 한다.

정 량 법

  이 품목 약 1g을 정밀히 달아 물에 녹여 100mL로 하고 여지로 여과한 다음 이 액 5mL에 물을 가하여 100mL로 한 것을 시험용액으로 한다. 물을 대조액으로 하여 액층 1cm, 파장 277nm 부근의 극대흡수파장에서 시험용액의 흡광도 A를 측정하여 다음 계산식에 따라 함량을 구한다.

  함 량(%) ＝   A × 100    

              ───────

                0.567 × S  

        S : 검체의 채취량(g)  

■ 프로폴리스추출물(Propolis Extract)

정    의

꿀벌이 식물에서 채취한 수지에 자신의 분비물을 혼합하여 만든 프로폴리스에서 왁스를 제거하고, 물이나 주정으로 추출하거나 이산화탄소를 이용하여 추출하여 얻어지는 것이다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 플라보노이드

기    타-

 ■ 케슈너트쉘추출물(cashew nut shell extract)

  1) 정의 : 캐슈나무 열매의 바깥껍질에서 추출된 액체 형태의 것 또는 이를 분말화 한 것을 말한다.

  2) 성상/순도/함량 : -

  3) 검정성분(또는 물질명) : 아나카딕산, 카다놀 또는 카돌 등

  4) 기  타 : 아나카딕산(anacardic acid), 카다놀(cardanol), 카돌(cardol)로 대표되는 페놀계 화합물을 함유하고 있다. 반추동물에 급여 시 메탄 생성은 저감되고, 프로피온산 생성은 증가하였다는 보고가 있다. 메탄 방출은 사료 에너지의 손실 및 지구온난화와 관련이 있는 것으로 고려되고 있다.

■ 해초 및 해조추출물(Seaweed extract)

정    의

사료로 사용가능한 바다에서 나는 조류로부터 얻은 추출물을 말하며, 식품으로 사용가능한 조류에서 추출한 것을 포함한다.

성상/순도/함량 : -

검정성분(또는 물질명) : 알긴산 등

■ 효모추출물(Yeast Extract)

정    의  

  이 품목은 효모세포의 성분인 amino acids, peptides, carbohydrates 및 염류인 수용성성분들로 이루어져 있고, 식용효모내에 원래 존재하는 효소 또는 식품용 효소류의 첨가에 의해 폴리펩타이드결합이 가수분해되어 만들어지며, 제조공정 중에 염류를 첨가할 수 있다.

함    량  

  이 품목을 건조물로 환산한 다음 정량할 때, 단백질 42% 이상을 함유한다.

성    상  

  이 품목은 액체, 분말, 과립 또는 페이스트상의 물질이다.

확인시험  

순도시험

(1) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.0ppm 이하이어야 한다.

(2) 나트륨 : 이 품목 약 1.5g(건조물로 환산한 양)을 정밀히 달아 자제도가니에 넣고 246～260°로 2～4시간 회화한 다음 20% 염산 5ml를 가하여 용해한다. 만일 잔류물을 완전히 녹일 필요가 있을 때에는 용액을 가온시키고 산으로 세척된 여지를 사용하여 500ml 플라스크에 여과하고, 따뜻한 물로 여지를 수세한 다음 물을 가하여 500ml로 하고, 다시 이 액 1ml를 취한 다음 물을 가하여 100ml로 한 액을 시험용액으로 한다. 따로, 나트륨표준용액은 나트륨표준원액 0.5ml를 취한 다음 물을 가하여 100ml로 한 것을 사용한다. 나트륨표준용액과 시험용액을 사용하여 원자흡광도법에 따라 시험하고 검체 중의 나트륨 양을 구할 때, 그 양은 20.0% 이하이어야 한다.

(3) 칼  륨 : 이 품목 약 1g(건조물로 환산한 양)을 정밀히 달아 자제도가니에 넣고 246～260°로 2～4시간 회화한 다음 20% 염산 5ml를 가하여 용해한다. 만일 잔류물을 완전히 녹일 필요가 있을 때에는 용액을 가온시키고 산으로 세척된 여지를 사용하여 500ml 플라스크에 여과하고 따뜻한 물로 여지를 수세한 다음 물을 가하여 500ml로 하고, 다시 이 액 0.8ml를 취한 다음 물을 가하여 100ml로 한 액을 시험용액으로 한다. 칼륨표준용액과 시험용액을 사용하여 원자흡광도법에 따라 시험하고 검체중의 칼륨양을 구할 때, 그 양은 13.0% 이하이어야 한다.

   칼륨표준용액:염화칼륨을 130°에서 2시간 건조한 다음 9.534g을 정밀히 달아 물을 가하여 녹인 후 전량을 1,000ml로 하고 그 중 0.4ml를 취하여 물을 가하여 1,000ml로 한 것을 표준용액으로 한다. 이 액 1ml는 K 2μg을 함유한다.

(4) 수 은 : 이 품목을 수은시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 3.0ppm 이하이어야 한다. 

(5) 불용물 : 이 품목 약 5g(건조물로 환산한 양)을 정밀히 달아 250ml 공전플라스크에 넣고 물 75ml를 가해주고 시계접시를 덮은 다음 2분간 조용히 가열하고, 미리 무게를 단 도가니형 유리여과기로 여과하고 105°에서 1시간 건조한 다음 데시케이타에서 식히고 평량할 때, 그 양은 2% 이하이어야 한다.

(6) α-아미노산질소/총질소의 비율：이 품목 7～25g(나트륨을 제외한 건조물로 환산한 양)을 정밀히 달아 암모니아를 함유하지 않는 따뜻한 물 50ml를 여러번 사용하여 500ml 메스플라스크에 옮겨주고 물을 가하여 500ml로 한 것을 시험용액으로 한다. 시험용액 20ml를 취하여 0.2N 수산화바륨용액 또는 0.2N 수산화나트륨용액으로 중화(지시약：페놀프탈레인시액)하고 새로 조제한 페놀프탈레인：포르말린시액 10ml를 가해주고 0.2N 수산화바륨용액으로 선명한 적색을 나타낼 때까지 적정하고, 정확한 양의 0.2N 수산화바륨용액을 과잉으로 소량 가해주고 다시 0.2N 염산으로 역적정한다. 따로, 같은 방법으로 시험용액 대신에 물 20ml를 사용하여 공시험을 하고, 검체중의 α??아미노질소 양을 다음 식에 따라 구한 다음, 총질소(TN)에 대한 α??아미노질소(AN)의 비(AN/TN)를 구할 때 15%～55%이어야 한다.

 0.2N 수산화바륨용액 1ml ＝ 2.8mg α??아미노질소 

  페놀프탈레인??포르말린시액：50% 알콜(0.2N 수산화바륨용액 또는 0.2N 수산화나트륨용액으로 pH 7.0으로 중화한 액)로 조제한 0.05% 페놀프탈레인시액 1ml를 함유하는 40% 포르말린 50ml를 사용한다.

(7) 글루탐산 : 이 품목 5mg(건조물로 환산한 양)을 정밀히 달아 0.2N 구연산나트륨완충액(pH 2.2)을 가하여 5ml로 한 것을 시험용액으로 한다. 불용물이 있으면 원심분리나 여과하여 그 상등액을 사용한다. 시험용액 2ml와 글루탐산표준용액 2ml를 사용하여 이온교환아미노산 분석기에 주입해서 얻어진 크로마토그람으로부터 시험용액중의 글루탐산농도(mg/ml)인 CA를 구한 다음 검체중 글루탐산의 함량을 구할 때, 그 양은 12.0% 이하이어야 하며, 총아미노산중 글루탐산의 함량을 구할 때, 그 양은 총아미노산의 28.0% 이하이어야 한다. 

o 이온교환아미노산 분석기 : 설포네이티드 폴리스틸렌 칼럼이 부착되어 있으며 시료가 닌히드린시액과 반응하여 방출되며 이 결과 발색된 흡광도가 440nm와 570nm에서 광도계 기록에 의해 자동적으로 측정되는 분석장치이다.

o 글루탐산표준용액 : 글루탐산을 1,250±2mg 정밀히 달아 500ml 메스플라스크에 넣고 물을 가해 250ml로 하고 이에 염산 5ml를 가하여 덜 용해된 아미노산을 용해시킨 다음 물을 가하여 500ml로 한다. 이 액 1ml를 정확히 취한 다음 이에 0.2N 구연산나트륨완충액(pH 2.2) 4ml를 가하여 5ml로 한 것을 글루탐산표준용액으로 한다. 이 액 2ml는 글루탐산 1.0mg을 함유한다.

o 0.2N 구연산나트륨완충액(pH 2.2) 구연산나트륨 10.52g을 취하여 물 150ml에 녹인 다음 염산으로 pH 2.2로 조절하고 이 액을 200ml로 한다.

닌히드린 시액 : 닌히드린(ninhydrin) 18g과 히드린단틴(hydrindantin) 0.7g을 정밀히 달아 디메틸설폭시드 675mL에 녹인다. 이 액에 초산리티움시액(pH 5.2) 225mL을 가한다.

(8) 세균수 : 이 품목(건조물로 환산한 양)을 「식품의 기준 및 규격」일반시험법 중 미생물시험법의 세균수(일반세균수)에 따라 시험할 때, 1g당 50,000 이하이어야 한다.

(9) 진균수 : 이 품목(건조물로 환산한 양)을 「식품의 기준 및 규격」일반시험법 중 미생물시험법의 진균수(효모 및 사상균수)에 따라 시험할 때, 1g당 50 이하이어야 한다.

(10) 대장균군 : 이 품목(건조물로 환산한 양)을 「식품의 기준 및 규격」 일반시험법 중 미생물시험법의 대장균군에 따라 시험할 때, 1g당 10 이하이어야 한다.

(11) 살모넬라 : 이 품목(건조물로 환산한 양)을 「식품의 기준 및 규격」 일반시험법 중 미생물시험법의 살모넬라 시험법에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

정 량 법

 이 품목 약 0.3g(나트륨을 제외한 건조물로 환산한 양)을 정밀히 달아 질소정량법중 킬달법에 따라 시험한다. 

           0.1N 황산 1ml ＝ 1.401mg N

기    타

해조(seaweed) : 바다에서 나는 조류의 총칭으로서 해초라고도 한다. 빛에 따라 녹조류(파래, 청각 등), 갈조류(미역, 다시마 등), 홍조류(김, 가사리 등) 등이 있다. 녹조류는 비교적 얕은 곳에, 갈조류는 조금 깊은 곳에, 홍조류는 깊은 곳에서 난다.

14. 올리고당(Oligosaccharide)

┌────────────────────────────────────────────────────┐

│세 개 이상(보통 3∼10)의 단당류가 글라이코사이드 결합하여 이루는 당으로서 정장작용 등을 기대하고 사용되 │

│는 물질                                                                                                 │

└────────────────────────────────────────────────────┘

■ 갈락토올리고당[대두올리고당을 포함], 겐티오올리고당, 말토올리고당, 이소말토올리고당, 자일로올리고당, 프락토올리고당

정    의

당질원료에서 얻은 당액을 가공한 것으로 프락토올리고당, 이소말토올리고당, 갈락토올리고당, 말토올리고당, 자일로올리고당, 겐티오올리고당 등을 말한다.

원료 등의 구비요건

제조ㆍ가공기준

유형

   (1) 프락토올리고당

      당질원료를 이용하여 1개 이상의 과당분자가 결합되도록 효소를 작용시켜 얻은 당액이나 당질원료를 효소를 이용하여 얻은 당액을 여과, 정제, 농축한 액상 또는 분말상의 것을 말한다.

   (2) 이소말토올리고당

      당질원료를 포도당분자가 분지결합의 기본구조를 갖도록 효소를 작용시켜 얻은 당액을 여과, 정제, 농축한 액상 또는 분말상의 것을 말한다.

   (3) 갈락토올리고당

      당질원료를 이용하여 효소를 작용시켜 얻은 전이갈락토올리고당액 또는 사탕무, 대두 등에서 추출한 라피노스, 스타치오스의 당액을 여과, 정제, 농축한 액상 또는 분말상의 것을 말한다.

   (4)말토올리고당

      당질원료를 이용하여 3～10개의 포도당분자가 직쇄 결합되도록 효소를 작용시켜 얻은 당액을 가공한 액상 또는 분말상의 것을 말한다.

   (5) 자일로올리고당

      자일란 또는 자일란원료에 효소를 작용시켜 얻은 당액을 여과, 정제, 농축한 액상 또는 분말상의 것을 말한다.

   (6) 겐티오올리고당

      당질원료에 포도당 분자가 베타 결합되도록 효소처리하여 얻어진 당액을 여과, 정제, 농축한 것을 말한다.

   (7) 기타올리고당

      식품유형 (1)～(6)의 올리고당에 식품 또는 식품첨가물을 혼합한 것을 말한다. 

규격

   (1) 올리고당 함량(%)

     ① 프락토올리고당, 이소말토올리고당, 갈락토올리고당, 자일로올리고당, 겐티오올리고당은 각각 해당 올리고당 10 이상

     ② 말토올리고당 : 40 이상

     ③ 기타올리고당 : 개별올리고당 함량 이상이어야 한다.

   (2) 납(mg/kg) : 1.0 이하

시험방법

   (1) 올리고당

     ① 프락토올리고당

       ㉮ 장치

          고속액체크로마토그래프

       ㉯ 시약

          ⓐ 아세토니트릴?HPLC용

          ⓑ 글리세롤?특급

          ⓒ 에탄올?특급(99.5%)

          ⓓ 규조토?여과조제용(정제품)

          ⓔ 80% 에탄올?99.5% 에탄올과 물을 80?20(v/v)으로 혼합한다.

          ⓕ 5% 글리세롤?글리세롤 5 g을 취하여 100 mL 메스플라스크에 넣고 에탄올 50 mL를 넣어 용해시킨 후 물로 표선까지 채워 내부표준물질로 사용한다(글리세롤외에 아라비노스도 내부표준물질로서 사용할 수 있다).

       ㉰ 표준용액의 조제

          1-케스토즈(GF2), 니스토즈(GF3), 1-F 프락토퓨라노실니스토즈(GF4)를 0.4 g씩 달아 각각 20 mL의 메스플라스크에 넣고 약 10 mL의 물을 넣어 용해시킨 후 증류수로 표선까지 채운 것을 표준원액으로 한다. 표준원액 1, 2, 3, 4, 및 5 mL를 정확히 취하여 각각 10 mL용 메스플라스크에 옮겨 넣고, 이에 5% 글리세롤 1 mL를 넣은 뒤 물로 표선까지 채운 것을 표준용액으로 한다.

       ㉱ 시험용액 조제

         ⓐ 유지를 거의 함유하지 않은 시료의 경우

            프락토올리고당으로서 0.2～2 g이 함유되도록 적당량의 검체를 정확히 달아 100 mL용 메스플라스크에 넣고 이에 물 20 mL를 가하여 용해 또는 추출한다(가열하면서 혼합하던지 초음파처리를 한다). 용해되지 않는 물질이 거의 없을 때에는 5% 글리세롤용액 20 mL를 가한 후 증류수로 표선까지 채운다. 필요하면 여과(No.5B)하여 사용한다. 얻어진 액체 25 mL를 정확히 취하여 50 mL용 메스플라스크에 옮겨 넣고 표선까지 에탄올로 채워 희석한다. 침전 또는 탁한 것이 생겼을 경우에는 여과(No. 5B)하고 여과액을 시험용액으로 한다.

            주1.용해되지 않는 물질이 많을 때에는 추출액을 여과(No. 5B)하면서 100 mL 메스플라스크에 전가용물을 옮겨 넣고 이하 똑같이 처리한다.

         ⓑ 유지를 많이 함유한 시료의 경우

            검체가 액체인 경우에는 프락토올리고당으로서 0.2～2 g 함유되도록 적당량의 검체를 비이커에 정확히 달아 필요하다면 중화한다(산성인 채로 가열조작하면 프락토올리고당류가 가수분해 되어버릴 염려가 있다).

            여기에 규조토를 넣어 잘 혼합한다(규조토의 양은 혼합한 후의 상태가 바슬바슬한 정도). 이것은 60±2℃에서 2～4시간 감압 건조한다. 건조한 뒤 전량을 원통여과지에 옮겨놓고, 석유에테르를 사용하여 속시렛 지방추출기로 8～16시간 탈지한다. 탈지 후 원통여과지 안의 전량을 꺼내서 이하는 위의 ⓐ와 같이 물로 추출한다. 시료가 분말상태인 경우에는 규조토를 넣지 않고 직접여과지에 넣고 이하 똑같이 조작한다.

      ㉲ 시험조작

         ⓐ 고속액체크로마토그래피 조건

           -칼럼?μ-Bondapak CH. PNH2-10 상당품(Biosil Amino 5S, Shodex RSpak DC-613, Nueleosil NH2, Lichrosorb NH2 등)

           - 이동상?아세토니트릴?물(65?35)

                    (칼럼의 종류나 상태에 따라 조성을 달리 할 수 있다. 아세토니트릴과 물의 비율을 65?35에서 70?30정도의 차이로 조정한다. 소량의 에틸알코올을 넣어 조정할 수도 있다)

           - 유속?1.0 mL/min

           - 검출기?시차굴절계(RI)

         ⓑ 정량시험

            프락토올리고당 표준용액을 각각 10 μL씩 주입하여 각 프락토올리고당과 내부표준물질의 크로마토그램을 얻어 각 프락토올리고당과 내부표준물질의 피크 면적 또는 높이를 구하고 검량선을 작성한다. 시험용액 10 μL를 주입하여 프락토올리고당과 내부표준물질의 크로마토그램을 얻은 후 각 피크 면적 또는 높이를 구하고 다음 식에 의하여 검체중 총프락토올리고당(GF2＋GF3＋GF4)의 함량을 구한다.

       총프락토올리고당 함량(%)＝(A＋B＋C)×D××

  A?검량선에서 구해진 시험용액중의 GF2의 농도(mg/mL)

  B?검량선에서 구해진 시험용액중의 GF3의 농도(mg/mL)

  C?검량선에서 구해진 시험용액중의 GF4의 농도(mg/mL)

  D?희석배수

  E?시료채취량(g)

     ② 이소말토올리고당

       ㉮ 장치

          고속액체크로마토그래프

       ㉯ 시약

         ⓐ 50% 알코올

         ⓑ 활성탄?청주용 또는 당액 탈색용

         ⓒ 이온교환수지?강 산성형(H형) 및 강 알칼리형(OH형)

         ⓓ 퍼라이트(Perlite)

         ⓔ 아세토니트릴?HPLC용

         ⓕ 표준당

   단당류?Glucose, Fructose

   이당류?Maltose, *Isomaltose, Sucrose, *Kojibiose, *Nigerose

   삼당류?Maltotriose, *Pannose, *Isomaltotriose

   사당류?Maltotetraose, *Isomaltotetraose

   오당류?Maltopentaose, *Isomaltopentaose

   육당류 ― Maltohexaose, *Isomaltohexaose

   칠당류 ― Maltoheptaose, *Isomaltoheptaose 

           (*는 이소말토올리고당의 분기당성분)

       ㉰ 표준용제의 조제

         ⓐ 배제형 이온교환계?각 중합도의 직쇄당을 정확하게 50 mg씩 달아 탈기한 증류수 50 mL에 녹이고, 용해되기 어려울 때는 가온하여 녹이고 냉각 후 증류수 100 mL로 채워 표준용액으로 한다.

         ⓑ 역상분배계?각 분기당의 표준액 100 mg을 증류수 1 mL에 용해한 것을 표준용액으로 한다. 

       ㉱ 시험용액 조제

         ⓐ 유지를 거의 함유하지 않은 검체인 경우 이소말토올리고당이 약 500 mg이 되도록 시료를 적당량(0.5～5 g)을 정확히 달아 여기에 물 또는 50% 알코올(단백질을 함유한 경우)을 30 mL 넣어서 가열하여 용해, 혹은 추출한다. 추출액은 약 0.5 g의 활성탄과 이온교환수지(양이온 및 음이온을 1?2로 혼합한 것 약 1.5 g)을 사용하여 정제하고, 전량을 500 mL로 하여 시험용액으로 한다.

         ⓑ 유지를 많이 함유한 검체인 경우

            이소말토올리고당 적당량(0.5～5 g)을 정확히 달아 분말인 경우에는 그대로 추출기에 넣고, 시료가 액체인 경우에는 필요하다면(pH 4～10 이외) 중화한 후 퍼라이트를 부석부석하게 될 때까지 넣어서 잘 분산시켜 8～16시간 탈지한다. 탈지 후 원통여과지 안의 전량을 꺼내어 위의 ⓐ와 같이 추출 이후의 조작을 한다.

            주1.중합도 2～5와 거의 같은 분자량인 설탕, 유당, 프락토올리고당, Coupling sugar 및 갈락토올리고당이 혼재할 경우에는 각각의 측정법으로 따로 분석한다. 그러나 이성화당, 포도당, 물엿 등의 전분당이 혼재할 경우에는 이소말토올리고당의 분석을 방해하지 않는다.

       ㉲ 시험조작

         ⓐ 고속액체크로마토그래피 조건

           ⓐ 배제형 이온교환계

              ? 칼럼?∮8 mm × 200 mm MCI GEL CKO  4S 상당품

              ? 가드칼럼?∮8 mm × 50 mm MCI GEL CKO 8S 상당품

              ? 칼럼온도?65℃

              ? 이동상?물

              ? 유속?0.4 mL/min

              ?검출기?시차굴절계(RI)

           ⓑ 역상분배계

              ? 칼럼?∮4.6 mm×250 mm TSK GEL NH2 -60 상당품

              ? 칼럼온도?35℃

              ? 이동상?아세토니트릴?물(63?37)

              ? 유속?0.8 mL/min

              ? 검출기?시차굴절(Refractive Index)계

         ⓑ 정량시험

           ⓐ 검량선의 작성?표준용액을 5, 10, 15, 20, 25 mL씩을 넣고 증류수로 각각 50 mL로(이 농도는 25, 50, 75, 100, 125 mg/50mL가 된다) 한 다음 10 μL씩 주입한 후 상당하는 직쇄상의 피크에 따라서 면적 또는 높이를 읽어내어 검량선을 작성한다. 

           ⓑ 계산

             ㉠ 배제형 이온교환계에서 분석한 피크의 면적 또는 높이에 의해 구해진 각 중합도의 검량선에서 각각의 중합도의 함량이 구해지며 그 결과는 다음과 같다.

                  중합도 DP1(단당류)?A

                  중합도 DP2(이당류)?B

                  중합도 DP3(삼당류)?C

                  중합도 DP4(사당류)?D

                  중합도 DP5(오당류)?E

                  중합도 DP6(오당류)?F

                  중합도 DP7(오당류)?G

           ⓒ 역상분배계에서 시료를 분석한 Data의 각 당분함유율(%)은 다음과 같다.

              DP1 Fructose   A1

     DP1 Glucose   A2

     DP2 Maltose   B1

     DP2 Sucrose     B2

     DP2 Isomaltose       B3

     DP2 Nigerose    B4

     DP2 Gojibiose        B5

     DP3 Maltotriose      C1

     DP3 Pannose    C2

     DP3 Isomaltotriose    C3

     DP3 불명(분기당)     C4

     DP4 Maltotetraose    D1

     DP4 Isomaltotetraose  D2

     DP5 Maltopentaose    E1

     DP5 Isomaltopentaose      E2

     DP6 이상       F

     DP6 Isomaltohexaose      F2

     DP7 Maltoheptaose    G1

     DP7 Isomaltoheptaose      G2

     DP8 이상       H

               (주?이소말토올리고당에는 DP4이상의 직쇄당 및 DP8 이상의 성분을 포함하지 않는다)

         DP1 Fructose       A mg× ＝ a1 mg

         DP1 Glucose       A mg× ＝ a2 mg

         DP2 Maltose       B mg×＝  b1 mg

         DP2 Sucrose       B mg× ＝ b2 mg

         DP2 Isomaltose      B mg× ＝ b3 mg※

         DP2 Negerose       B mg× ＝ b4 mg※

         DP2 Kojibiose       B mg× ＝ b5 mg※

         DP3 Maltotriose     C mg × ＝ c1 mg

         DP3 Pannose        C mg × ＝ c2 mg※

         DP3 Isomaltotriose   C mg × ＝ c3 mg※

         DP3 불명(분기당)    C mg × ＝ c4 mg※

         DP4 Maltotetraose    D mg ×＝ d1 mg

         DP4 Isomaltotetraose  D mg × ＝ d2 mg※

         DP5 Maltopentaose    E mg × ＝ e1 mg

         DP5 Isomaltopentaose  E mg × ＝ e2 mg※

         DP6이상        F mg ＝ f mg

         DP6 Maltohexaose      F mg ×＝ f1 mg

         DP6 Isomaltohexaose    F mg × ＝ f2 mg※

         DP7 Maltoheptaose     G mg × ＝ g1 mg

         DP7 Isomaltoheptaose   G mg × ＝ g2 mg※

         DP8 이상          H mg ＝ h mg

         결국 시료채취량을 I mg으로 하고 희석배수를 Ｌ로 하면, 위의 ※은 모두 분기당이므로 분기당함량(%) ＝ (b3＋b4＋b5＋c2＋c3＋c4＋d2＋e2＋f2＋g2) ×L÷I×100 으로 한다.

     ③ 갈락토올리고당(전이갈락토올리고당)

       ㉮ 장치

          고속액체크로마토그래프

       ㉯ 시약

         ⓐ 20%(w/v) 설포살리실린산용액(Sulfosalicylic acid)?시약특급의 설포살리실린산 20 g에 물을 넣어 용해시켜 100 mL로 한다.

         ⓑ Ribose?시약특급

         ⓒ Arabinose?시약특급

       ㉰ 표준용액의 조제

          갈락토올리고당 2 g을 정확히 달아 물에 녹여 50 mL로 한다.

       ㉱ 시험용액 조제

          갈락토올리고당이 약 0.1～1 g 포함되도록 검체 적당량을 정확히 달아 물을 가해 용해시킨 후 50 mL로 한다. 이 용액을 0.45 μm의 필터로 여과시켜 이를 시험용액으로 한다.

          주1.단백질 제거 조작이 필요한 시료에 대해서는 설포살리실린산을 여러 방울 첨가하여 생긴 불용성 단백질을 원심분리로 제거하든가 Sep pak C18 cartridge를 통과시키든가 한다. 이들의 제작을 요하는 경우에는 내부표준으로서 Ribose 또는 Arabinose를 사용한다.

          주2.유지를 많이 함유한 시료의 경우 시료의 전처리는 프락토올리고당의 분석법의 전처리방법에 준한다.

          주3.시료중에 갈락토올리고당 이외의 3 ～ 6당류인 올리고당이 존재할 경우에는 해당하는 올리고당 분해효소에 의해 단당류, 2당류로 분해하고 나서 분석한다. 그러나 이성화당, 설탕이나 다당류의 존재는 갈락토올리고당의 분석을 방해하지 않는다.

       ㉲ 시험조작

         ⓐ 고속액체크로마토그래프 조건

           ? 칼럼?Shodex Ionpak KS-802 상당품 및 역상 amino column

           ? 칼럼온도?80℃

           ?이동상?물

           ?유  속?0.4 mL/min

           ?검출기?시차굴절계(RI)

         ⓑ 정량시험

            갈락토올리고당 표준용액을 2, 4, 6, 8 및 10 mL를 20 mL용 메스플라스크에 정확하게 취하여 물로 눈금을 맞춘 다음, 각각 10 μL씩 고속액체크로마토그래프에 주입시켜 피크의 면적 또는 높이를 읽어내어 검량선을 작성한다. 검체중의 갈락토올리고당의 함량(%)은 다음 식으로 구한다.

            갈락토올리고당(%) ＝B mg/mL ××

            A?시료채취량(g)

    B?검량선에서 구한 갈락토올리고당의 농도(mg/mL)

     ④ 갈락토올리고당(라피노스, 스타치오스) 

       ㉮ 시약

         ⓐ 설포살리실린산(Sulfosalicylic acid)

         ⓑ 갈락토올리고당(Raffinose, Stachyose) 표준용액

            각 갈락토올리고당을 각각 0.6 g씩 정확하게 취하여 물에 넣고 용해시켜 20 mL로 한다.

       ㉯ 시험용액 조제

         ⓐ 유지를 거의 함유하지 않은 시료인 경우

            검체 적당량(각 갈락토올리고당 0.07～0.7 g 함유한 양)을 정확히 달아 물을 가하여 용해 혹은 추출하여 50 mL로 한다. 이 용액을 0.45 μm의 필터로 여과한다.

         ⓑ 유지를 많이 함유한 시료인 경우

            검체가 액체인 경우에는 그 적당량(위의 ⓐ와 같음)을 정확히 재고, 필요하다면 중화한다. 여기에 규조토를 넣고 잘 혼합한다. 60±2℃에서 2～4시간 감압 건조한다. 건조후 전량을 원통여과지에 옮겨 넣고 석유에테르를 사용하여 속시렛 지방 추출기로 8～16시간 탈지한다. 탈지 후 원통여과지안의 전량을 꺼내서 이하 상기 ⓐ와 같이 조작한다. 시료가 분말상태인 경우에는 규조토를 넣지 않고 직접 원통여과지에 넣어 이하 똑같이 조작한다.

            주1.시료에 단백질이 함유된 경우 0.2 g/mL 설포살리실린산 수용액을 수방울 가해 단백질을 제거한다. 또한 덱스트린이 검체중에 혼재하는 경우는 글루코아밀라제(Glucoamylase)로 분해한다.

       ㉰ 시험조작

         ⓐ 고속액체크로마토그래피 조건

           ? 칼럼?Shodex Ionpak KS-802 상당품

           ? 칼럼온도?70℃

           ? 이동상?물

           ? 유속?1.0 mL/min

           ? 검출기?시차굴절계(RI)

         ⓑ 정량시험

            갈락토올리고당 표준용액을 1, 2, 3, 4 및 5 mL를 10 mL용 메스플라스크에 정확하게 취하여 물로 눈금을 맞춘 다음, 각각 10 μL씩 고속액체크로마토그래프에 주입시켜 피크의 높이 또는 면적을 읽어내어 검량선을 작성한다. 검체중의 갈락토올리고당의 함량(%)은 다음 식으로 구한다.

            갈락토올리고당(%) ＝ (A＋B)××

             A?검량선에서 구한 갈락토올리고당의 농도(mg/mL)  

             B?검량선에서 구한 시험용액중의 갈락토올리고당의 농도(mg/mL) 

             C?시료 채취량(g)

     ⑤ 말토올리고당

       ㉮ 장치

          고속액체크로마토그래프

       ㉯ 시약

         ⓐ 50% 알코올

         ⓑ 활성탄?청주용 또는 당액 탈색용

         ⓒ 이온교환수지?강 산성형(H형) 및 강 알칼리형(OH형) 

         ⓓ 퍼라이트(Perlite)

         ⓔ 물?HPLC용

         ⓕ 표준당

            삼당류(DP3)?Maltotriose

    사당류(DP4)?Maltotetraose

   오당류(DP5)?Maltopentaose

   육당류(DP6)?Maltohexaose

   칠당류(DP7)?Maltoheptaose

       ㉰ 표준용액의 제조

          각 중합도의 직쇄당을 정확하게 50 mg씩 달아 탈기한 증류수 50 mL에 녹이고, 용해되기 어려울 때는 가온하여 녹이고 냉각후 증류수로 100 mL로 채워 표준용액으로 한다. 

       ㉱ 시험용액 조제

         ⓐ 유지를 거의 함유하지 않은 검체의 경우

            시료 4 g을 정확히 달아 여기에 물 또는 50% 알코올(단백질을 함유한 경우)을 30 mL 넣어서 가열하여 용해, 혹은 추출한다. 추출액은 약 0.5 g의 활성탄과 이온교환수지(양이온 및 음이온을 1?2로 혼합한 것 약 1.5 g)을 사용하여 정제하고, 전량을 100 mL로 하여 시험용액으로 한다. 

         ⓑ 유지를 많이 함유한 검체인 경우

          시료 4 g을 정확히 달아 분말인 경우에는 그대로 추출기에 넣고, 시료가 액체인 경우에는 필요하다면(pH 4～10이외) 중화하고 나서 퍼라이트를 부석부석하게 될 때까지 넣어서 잘 분산시켜 8～16시간 탈지한다. 탈지후 원통여과지 안의 전량을 꺼내어 위의 ⓐ와 같이 추출이후의 조작을 한다.

           주1.중합도 2～5와 거의 같은 분자량인 설탕, 유당, 프락토올리고당, Coupling sugar 및 갈락토올리고당이 혼재할 경우에는 각각의 측정법으로 따로 분석한다. 그러나 이성화당, 포도당, 물엿 등의 전분당이 혼재할 경우에는 말토올리고당의 분석을 방해하지 않는다.

       ㉲ 시험조작

         ⓐ 고속액체크로마토그래피 조건

           ? 칼럼?Aminex HP×42A(Bio Rad) 또는 이에 상응하는 배제형 이온교환계

           ? 칼럼온도?85℃

           ? 이동상?물

           ? 유속?0.6 mL/min

           ? 검출기?시차굴절계(RI) 

         ⓑ 검량선 작성

            각 농도의 표준용액을 10 μL씩 주입하여 분석한 뒤 횡축이 말토올리고당량(mg), 종축에 크로마토그램의 면적을 취하여 검량선을 작성한다.

         ⓒ 계산 

            시료의 말토올리고당의 면적을 읽어 검량선으로부터 시료의 말토올리고당 함량을 구한다. 

          말토올리고당 함량(%) ＝× 희석배수

           DP3    Maltotriose      A mg

   DP4    Maltotetraose    B mg

   DP5    Maltopentaose   C mg

   DP6    Maltohexaose    D mg

   DP7    Maltoheptaose   E mg

     ⑥ 자일로올리고당

       ㉮ 장치

          고속액체크로마토그래프

       ㉯ 시약

         ⓐ 물 : HPLC용

         ⓑ 아세토니트릴 : HPLC용

         ⓒ 퍼라이트(Perlite)

         ⓓ 표준당

            이당류 - xylobiose

            삼당류 - xylotriose

            사당류 - xylotetraose

            오당류 - xylopentaose

            육당류 - xylohexaose

       ㉰ 표준용액의 제조

          각 중합도의 자일로올리고당이 약 50～100 mg 포함되도록 검체 적당량을 정확히 달아 탈기한 물 50 mL에 녹이고 이 용액을 0.45 μm의 필터로 여과시켜 이를 표준용액으로 한다.

       ㉱ 시험용액의 제조

         ⓐ 유지를 거의 함유하지 않은 시료의 경우

            시료 3 g을 정확히 담아 물을 가해 용해하여 30 mL가 되게 한다. 이 용액을 0.45 μm의 필터로 여과시켜 이를 시험용액으로 한다.

         ⓑ 유지를 많이 함유한 시료의 경우

            시료 3 g을 정확히 달아 분말인 경우에는 그대로 추출기에 넣고, 시료가 액체인 경우에는 필요하다면 중화 후 퍼라이트를 부석부석할 때까지 넣고 분산시켜 8～16 시간동안 탈지한다. 탈지 후 원통여과지 내의 전량을 회수하여 ⓐ와 같이 이하 똑같이 조작한다.

       ㉲ 시험조작

         ⓐ 고속액체크로마토그래피 조건

           ? 칼럼 : Carbohydrate column 4.6×250 mm 또는 이에 상응하는 칼럼

           ? 칼럼온도 : 상온

           ? 이동상 : 아세토니트릴 : 물 (75：25)

                       (칼럼의 종류나 상태에 따라 조성을 달리 할 수 있다)

           ? 유속 : 1.2 mL/min

           ? 검출기 : 시차굴절계 (RI detector)

        ⓑ 정량시험

           각 농도의 표준용액을 10 μL씩 주입하여 분석한 후 검량선의 횡축은 자일로올리고당(mg), 종축은 크로마토그램 피크의 면적을 읽어 검량선을 작성한다. 시료중의 자일로올리고당의 함량(%)은 다음 식으로 구한다.

           자일로올리고당 함량(%) =× 희석배수 × 100

                xylobiose      A mg

                xylotriose      B mg

                xylotetraose    C mg

                xylopentaose   D mg

                xylohexaose    E mg

     ⑦ 겐티오올리고당 

       ㉮ 장치

         고속액체크로마토그래프

       ㉯ 시약

         ⓐ 물 : HPLC용

         ⓑ  Sodium Hydroxide

         ⓒ Sodium acetate

         ⓓ 퍼라이트(Perlite)

         ⓔ 표준당

            이당류  Gentiobiose, Cellobiose   

       ㉰ 표준용액의 조제

           Gentiobiose와 Cellobiose가 약 50～100 mg 포함되도록 검체 적당량을 정확히 달아 탈기한 물 1 L에 녹이고 이용액을 0.45 ㎛의 필터로 여과시켜 이를 표준용액으로 한다.

       ㉱ 시험용액의 조제

         ⓐ 유지를 거의 함유하지 않은 검체인 경우 

            시료 100 mg을 정확히 담아 물을 가해 용해하여 1 L가 되게 한다. 이 용액을 0.45 ㎛의 필터로 여과시켜 이를 시험용액으로 한다.

         ⓑ 유지를 많이 함유한 검체인 경우 

           시료 100 mg을 정확히 달아 분말인 경우에는 그대로 추출기에 넣고 시료가 액체인 경우에는 필요하다면 중화 후 퍼라이트를 부석부석할 때까지 넣고 8～16시간 동안 탈지한다. 탈지 후 원통여과지 내의 전량을 회수하여 ⓐ와 같이 이하 똑같이 조작한다. 

      ㉲ 시험조작

        ⓐ 고속액체크로마토그래피 조건(1)

           ? 칼럼 : PA-1 Column 4.6 × 250 mm 또는 이에 상응하는 칼럼 

           ? 칼럼온도 : 상온

           ? 이동상 :

               A : 150 mM Sodium Hydroxide

               B : 150 mM Sodium Hydroxise + 600 mM  Sodium Acetate

           ? 유속 : 1.0 mL/min 

           ? 검출기 : Pulsed Amperometric Detecter

        ⓑ 고속액체크로마토그래피 조건(2)

           ? 칼럼 : Aminex HPX-42A Column 7.8 × 300 mm 또는 이에 상응하는 배제형 이온교환계

           ? 칼럼온도 : 85℃

           ? 이동상 : 물

           ? 유속 : 0.6 mL/min 

           ? 검출기 : 시차굴절계(RI)

        ⓒ 정량시험

           ⓐ 검량선 작성

              각 농도의 표준용액을 10 μL씩 주입하여 분석한 후 검량선의 횡축은 겐티오올리고당 (mg), 종축은 크로마토그램 피크의 면적을 읽어 검량선을 작성한다.

           ⓑ 계산 

              배제형 이온교환계에서 분석한 피크의 면적 또는 높이에 의해 구해진 각 중합도의 검량선에서 각각의 중합도의 함량이 구해지며 그 결과는 다음과 같다.

                중합도 DP1(단당류) : A

                중합도 DP2(이당류) : B

                중합도 DP3 이상(3당류 이상) : C

              PA-1 칼럼에서 시료를 분석한 Data의 각 당분함유율(%) 은 다음과 같다.

                DP1 FructoseA₁

                DP1 GlucoseA₂

                DP2 MaltoseB₁

                DP2 GentiobioseB₂

                DP2 CellobioseB₃

                DP3 이상C

                DP1 Fructose     A mg  ×  =  a₁mg

                DP1 Glucose     A mg  ×     =  a₂mg

                DP2 Maltose     B mg  ×   =  b₁mg

                DP2 Gentiobiose  B mg  × =  b₂mg

                DP2 Cellobiose   B mg  × =  b₃mg     

      겐티오올리고당의 함량(%) = (b₂+ b₃) mg  ÷ 시료채취량 mg × 희석배수× 100

   (2) 납

    식품공전 제 9. 일반시험법 7.1 중금속시험에 따라 시험한다.

■ 키토올리고당(Chitooligosaccharide)

정    의

엔-아세틸글루코사민(N-Acetylglucosamine)이 베타-1,4 결합으로 2～9개 결합한 올리고당을 말하며 키틴(키토산)을 산 또는 효소로 가수분해하여 얻을 수 있다.

성상/순도/함량 : 

이미, 이취가 없고 미색이며 물에 잘 녹는다. 키토올리고당을 200 mg/g 이상 함유하고 있어야 함

검정성분(또는 물질명) : 올리고당

기    타 : 납(mg/kg) 3.0 이하, 카드뮴(mg/kg) 1.0 이하, 총수은(mg/kg) 1.0 이하

15. 기타(Miscellaneous)

┌─────────────────────────┐

│기타 사료의 효용 증대를 위해 사료에 첨가하는 물질 │

└─────────────────────────┘

■ 글루코사민(Glucosamine)

정    의  이 품목은 ① 갑각류(게, 새우 등)의 껍질 및 연체류(오징어, 갑오징어 등)의 뼈에서 추출한 키틴 또는 키토산을 염산으로 가수분해하거나 또는 키토산을 염산에 용해시켜 키토사나아제로 가수분해한 다음 이를 분리, 정제하여 얻어지는 물질 또는 ② 옥수수에서 추출한 포도당을 미생물(E. coli AT-29)로 발효시켜 얻은 N-아세틸-D-글루코사민(N-acetyl-D-glucosamine)을 염산으로 가수분해하여 분리, 정제하여 얻어지는 물질이다.

함    량  이 품목은 정량할 때, 글루코사민(C6H13NO5=179.17)을 ①과 ②의 경우 각각 80.0% 이상과 98%이상 함유한다.

성    상  이 품목은 백～유백색의 결정성분말 또는 분말로서 냄새가 없다.

확인시험  이 품목 0.2g에 안트론시액 5mL 및 물 1mL를 가하여 수욕상에서 가열할 때, 액은 청～녹색을 나타낸다.

순도시험  (1) 비  소 : 이 품목 0.25g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에탄올용액(1→50) 10mL를 넣고 에탄올에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3mL를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm이하).

  (2) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 10ppm 이하이어야 한다.

  (3) 용  상 : 이 품목 1g을 물 20mL에 녹일 때, 그 액은 무색 징명하여야 한다.

  (4) 액  성 : 이 품목의 수용액(10→100)의 pH는 3.0～5.0이어야한다.

  (5) 염화물 : 이 품목 0.1g을 정밀히 달아 물 30mL에 녹이고, 크롬산칼륨용액(1→20)을 5방울 가한 다음, 액의 황색이 적갈색으로 변화는 점을 종말점으로 하여, 0.1N 질산은용액으로 적정할 때, 그 양은 16～18% 이어야 한다. 

0.1N 질산은용액 1mL = 3.545mg Cl

  (6) 세균수 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」일반시험법의 미생물시험법 중 세균수(일반세균수)에 따라 시험할 때, 1g당 300 이하이어야 한다.

  (7) 대장균군 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」일반시험법의 미생물시험법 중 대장균군에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

건조감량  이 품목을 105℃에서 4시간 건조할 때, 그 감량은 1.0% 이하이어야 한다.

강열잔류물  이 품목의 강열잔류물은 1.0% 이하이어야 한다. 

정 량 법  이 품목 0.02g을 정밀히 달아 물 20mL에 충분히 용해한 후 물을 가하여 100mL로 한 액을 시험용액으로 한다. 시험용액 1mL를 취하여 마개가 있는 시험관에 넣고 아세틸아세톤시액 2mL를 가해주고 혼합한 다음 96℃에서 1시간 가열하고 흐르는 물에서 냉각시킨 후 96% 에탄올 20mL를 가해주고 다시 ρ-디메틸아미노벤즈알데히드시액 2mL를 가해주고 혼합한 다음 실온에서 1시간 방치하고 파장 535nm에서 흡광도(AT)를 측정한다. 따로, D-글루코사민표준품을 100～500μg/mL 함유하도록 물을 가하여 조제한 것을 표준용액으로 한다. 이 표준용액을 1mL를 취하여 이하 시험용액과 동일 조작하여 흡광도(As)를 측정한다.

     다음 계산식에 따라 글루코사민 함량(%)을 구한다. 

  함  량(%) =   C × 100          ×  AT  ×  100   

              ──────────  ───  ────

                검체의 채취량(g)      AS      106   

  C : 글루코사민으로 환산한 표준용액의 농도(μg/mL)   

  시   액

    아세틸아세톤시액 : 증류정제한 무색의 아세틸아세톤(비점 : 138～140℃) 1.5mL에 1.2N 탄산나트륨용액을 가하여 50mL로 한다.

    ρ-디메틸아미노벤즈알데히드시액 : ρ-디메틸아미노벤즈알데히드 1.6g을 염산 30mL에 용해하고 이에 96% 에탄올 30mL를 가하여 혼합한다.

■ 글루콘산나트륨(Sodium Gluconate)

  CH2OH(CHOH)4COONa   

  C6H11NaO7   분자량 218.14   

함    량  이 품목은 글루콘산나트륨(C6H11NaO7) 98.0～102.0%를 함유한다.

성    상  이 품목은 백～황갈색의 입상 또는 결정성분말이다.

확인시험  (1) 이 품목의 수용액(1→20)은 확인시험법 중 나트륨염의 반응을 나타낸다.

  (2) 이 품목의 따뜻한 수용액(1→10) 5mL에 빙초산 0.7mL 및 새로 증류한 페닐히드라진 1mL를 가하고 수욕상에서 30분간 가열하고 식힌 다음, 유리봉으로 내벽을 긁을 때 결정을 석출한다.

순도시험  (1) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.0ppm 이하이어야 한다.

  (2) 환원물질 : 이 품목 약 1g을 정밀히 달아 250mL 삼각플라스크에 취하고 물 10mL를 가하여 녹인다. 이 액에 알칼리구연산동시액 25mL를 가하고 작은 비이커로 마개를 한 후 정확히 5분간 조용히 가열하고 실온으로 급냉한다. 이 액에 초산(1→10) 25mL, 0.1N 요오드용액 10mL, 묽은염산 10mL 및 전분시액 3mL를 가하여 청색이 없어질 때까지 0.1N 치오황산나트륨용액으로 적정할 때, 그 양은 0.5% 이하이어야 한다 .

  환원물질(포도당으로서) 함량(%) =  (V1N1 - V2N2) × 27   × 100  

                                  ────────────        

                                    검체의 채취량(mg)             

V1 : 0.1N 요오드용액의 소비량(mL)

N1 : 0.1N 요오드용액의 규정농도

V2 : 0.1N 치오황산나트륨용액의 소비량(mL)

N2 : 0.1N 치오황산나트륨용액의 규정농도

27 : D-글루코오스에 대한 실험적 대응량

정 량 법  이 품목 약 150mg을 정밀히 달아 빙초산 75mL를 가하고 가열하여 녹인다. 식힌 다음 퀴날딘레드시액을 넣고 0.1N 과염소산용액으로 적정한다. 종말점은 액의 색이 없어지는 때이다.

0.1N 과염소산용액 1mL ＝ 21.81mg C6H11NaO7

퀴날딘레드(Quinaldine red)시액 : 퀴날딘레드(C21H23IN2 : 430.33) 100mg을 빙초산에 녹여 100mL로 한다.

■ 락툴로즈(Lactulose, Galactofructose)

  C12H22O11   분자량 342.30   

정    의

 이 품목은 유당을 알칼리 존재 하에서 이성화하여 이온교환수지를 써서 정제하여 얻은 수용액이다.

함    량

  이 품목은 정량할 때 락툴로즈(C12H22O11) 50.0 ∼ 56.0 %를 함유한다.

성    상

  이 품목은 무색 ∼ 연한 노란색의 맑은 점성의 액으로 냄새는 없고 맛은 달다. 물 또는 포름아미드와 섞인다.

확인시험

(1) 이 품목은 0.7 g에 물 10 mL, 칠몰리브덴산육암모늄사수화물용액(1 → 25) 10 mL 및 아세트산(100) 0.2 mL를 넣고 5 ∼ 10 분간 수욕에서 가열할 때 액은 파란색을 나타낸다.

(2) 이 품목은 0.3 g과 물 30 mL를 섞어 0.5 mol/L 요오드시액 16 mL를 넣고 곧 8 mol/L 수산화나트륨시액 2.5 mL를 넣어 7 분간 방치한 다음 희석시킨 황산(3 → 20) 2.5 mL를 넣는다. 이 액에 액의 색이 연한 노란색이 될 때까지 포화아황산나트륨용액을 넣고 다음에 메틸오렌지시액 3 방울을 넣어 수산화나트륨용액(4 → 25)으로 중화하고 물을 넣어 100 mL로 한다. 이 액 10 mL를 취하여 페링시액 5 mL를 넣어 5분간 끓일 때 빨간색의 침전이 생긴다.

비    중   : 1.320 ∼ 1.360

pH

  이 품목은 2.0 g을 물 15 mL에 녹인 액의 pH는 3.5 ∼ 5.5이다.

순도시험

(1) 중금속 : 이 품목 5.0 g을 달아 납 시험법에 따라 조작하여 시험한다. 비교액에는 납표준액 2.5 mL를 넣는다 (5 ppm 이하).

(2) 비소 : 이 품목 1.0 g을 달아 비소 시험법에 따라 조작하여 시험한다 (2 ppm 이하). 

(3) 기타 당류 : 정량법에서 얻은 검액 및 표준액의 크로마토그램의 갈락토오스 및 유당에 해당하는 피크높이를 측정하여 검액의 내부표준물질의 피크높이에 대한 갈락토오스 및 유당의 피크높이비 QTa 및 QTb와 표준액의 내부표준물질의 피크높이에 대한 갈락토오스 및 유당의 피크높이비 QSa 및 QSb를 구할 때 갈락토오스의 양은 11 % 이하이고 유당의 양은 6 % 이하이다.

갈락토오스(C6H12O6)의 양 (mg)

= D-갈락토오스의 양 (mg)

유당(C12H22O11ㆍH2O)의 양 (mg)

= 유당수화물의 양 (mg)

건조감량

35.0 % 이하 (0.5 g, 감압, 80 ℃, 5 시간).

강열잔분

0.1 % 이하 (1 g).

정 량 법

  이 품목 1 g을 정밀하게 달아 내부표준액 10 mL를 정확하게 넣고 물을 넣어 50 mL로 하여 검액으로 한다. 따로 락툴로즈표준품 약 0.5 g,  D-갈락토오스 약 80 mg 및 유당 약 40 mg을 정밀하게 달아 내부표준액 10 mL를 정확하게 넣고 물을 넣어 50 mL로 하여 표준액으로 한다. 검액 및 표준액 20 μL씩을 가지고 다음의 조건으로 액체크로마토그래프법에 따라 시험하여 내부표준물질의 피크높이에 대한 락툴로즈의 피크높이비 QT 및 QS를 구한다.

락툴로즈(C12H22O11)의 양 (mg)

= 락툴로즈표준품의 양 (mg)

 내부표준액  D-만니톨용액(1 → 20)

   조작조건

검출기 : 시차굴절계

칼  럼 : 안지름 약 8 mm, 길이 약 50 cm인 스테인레스강관에 11 μm의 액체크로마토그래프용겔형 강산성이온교환수지 (가교도 6 %)를 충전한다.

칼럼온도 : 75 ℃ 부근의 일정 온도

이동상 : 물

유  량 : 락툴로즈의 유지시간이 약 18 분이 되도록 조정한다.

시스템적합성

 시스템의 성능 : 표준액 20 μL를 가지고 위의 조건으로 조작할 때 락툴로즈, 내부표준물질의 순서로 유출하고 분리도는 8 이상이다.

 시스템의 재현성 : 표준액 20 μL씩을 가지고 위의 조건으로 시험을 6 회 반복할 때 내부물질의 피크높이에 대한 락툴로즈, 갈락토오스 및 유당의 각각의 피크높이비의 상대표준편차는 2.0 % 이하이다.

보존방법의 기준

기밀용기에 보존할 것.

■ 라우린산(Lauric Acid)

  C12H24O2  분자량 200.32   

정    의  이 품목은 코코넛오일 및 기타 식물성지방 등에서 얻어지는 고형지방산인 식품첨가물로서 그 주성분은 라우린산(C12H24O2)이다.

성    상 이 품목은 백～엷은 황색의 결정성덩어리 또는 분말이다.

순도시험

  (1) 산가 : 이 품목 0.5g을 정밀히 달아 유지류시험법 중 산가에 따라 시험할 때, 252～287이어야 한다.

  (2) 응고점 : 이 품목의 응고점은 26.0～44.0℃이어야 한다.

  (3) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  (4) 비소 : 이 품목을 비소시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 4.0ppm 이하이어야 한다.

  (5) 수은 : 이 품목을 수은시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  (6) 요오드가 : 이 품목 약 8.3g을 정밀히 달은 다음 미리 빙초산ㆍ시클로헥산의 혼액(1 : 1) 20mL 및 위이스시액 25mL를 넣어 둔 500mL 공전삼각플라스크에 가해주고 마개를 하고 격렬히 흔들어 준 다음 1시간 어두운 곳에 방치시킨 후 요오드칼륨시액 20mL, 끓여서 식힌 물 100mL를 가하여 과량의 요오드를 0.1N 치오황산나트륨용액으로 적정한다. 이때, 황색이 거의 없어질 때까지 계속 흔들어 주면서 일정하게 0.1N 치오황산나트륨용액을 적가한 다음 다시 전분시액을 가하여 청색이 완전히 없어질 때까지 적정을 계속한다. 종말점 가까이에서는 마개를 하여 격렬히 흔들어 준다. 따로 같은 방법으로 공시험을 행하고 다음 계산식에 따라 요오드가를 구할 때, 그 양은 3.0 이하이어야 한다.

  요오드가 =  (B-S) × 1.269    

            ──────────

              검체의 채취량(g)  

  B : 공시험의 0.1N 치오황산나트륨용액의 소비량(mL)   

  S : 본시험의 0.1N 치오황산나트륨용액의 소비량(mL)   

  (7) 검화가 : 이 품목 3g을 정밀히 달아 250mL 플라스크에 넣고 0.5N 알콜성수산화칼륨용액 50mL를 가한 액을 시험용액으로 하여 유지류시험법 중 검화가에 따라 시험하였을 때, 그 값은 253～287이어야 한다.

  (8) 불검화물 : 이 품목 5g을 정밀히 달아 250mL 플라스크에 취하고 수산화칼륨 2g 및 에탄올 40mL를 가해주고 환류냉각기를 부착한 다음 조용히 1시간 가열한다. 플라스크의 내용물을 40mL, 80mL, 130mL 눈금이 표시되어 있는 분액여두(길이 30cm, 직경 3.5cm)에 옮기고 플라스크는 충분한 양의 에탄올로 씻어 분액여두에 합하여 40mL로 하고, 다시 더운물과 찬물을 사용하여 플라스크를 씻어 옮겨주고 전량을 80mL로 한다. 마지막으로 석유에테르 수 mL로 플라스크를 씻어 분액여두에 옮겨주고 식힌 다음 석유에테르 50mL를 가해주고 실온이 되도록 내용물을 식힌 후 마개를 하고 최소한 1분간 격렬히 진탕한 후 방치하여 두 층으로 분리시킨다. 가능한 한 완전히 분리하고 상층액인 에테르층을 500mL 분액여두에 모은 다음 석유에테르 50mL씩으로 6번 추출한 후 추출액을 처음의 추출액과 합치고 이를 10% 에탄올 25mL로 씻어 주고 물층이 페놀프탈레인시액으로 정색하지 않을 때까지 이 조작을 반복한 후 물층을 완전히 제거한다. 에테르추출액은 미리 무게를 달아둔 비이커에 옮기고 에테르 10mL를 사용하여 분액여두를 씻은 다음 비이커에 합한다. 증기욕상에서 비이커의 에테르를 증발건고 한 다음 100℃에서 30분간 항량이 될 때까지 건조하고, 데시케이터내에서 방냉하여 잔류량을 평량한다. 이어서 잔류물을 미리 페놀프탈레인시액을 지시약으로 하여 수산화나트륨시액으로 중화시킨 따뜻한 알콜 50mL에 녹이고 0.02N 수산화나트륨용액으로 엷은 홍색이 지속될 때까지 적정하고 그 소비 mL수에 5.659(mg)를 곱하여 올레인산으로서의 양을 구하고 다음 계산식에 따라 불검화물 값을 구할 때, 그 양은 0.3% 이하이어야 한다.

  불검화물(%) =   잔류물의 양(mg) - 올레인산으로서의 양(mg)   ×  100     

                ───────────────────────  ─────

                   검체의 채취량(g)                               1,000   

수    분  이 품목의 수분은 수분정량법(칼-피셔법)에 따라 시험할 때, 그 양은 0.2% 이하이어야 한다.

강열잔류물  이 품목 10g을 취하여 강열잔류물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.1% 이하이어야 한다.

■ 시스테아민염산염(Cysteamine Hydrochloride)

           H H        

           ｜｜       

  HS-C-C-NH2     HCL  

           ｜｜       

          H H         

    C2H7NSㆍHCL                                        분자량 113.61

성분규격

함량 

   본 품은 건조 후 정량시 Cysteamine Hydrochloride(C2H7NS.HCL)를 98% 이상 함유한다

성상

   ① 본 품은 백색의 결정구조로 독특한 냄새가 있다.

   ② 본 품은 물과 알콜에 용해된다.

   ③ 본 품의 융점은 67℃ 이다.

확인시험

   본 품은 증류수에 용해하여, 0.5%의 전분용액을 첨가한 후, 0.1M의 요오드 용액을 첨가하면 푸른색을 나타낸다.

순도시험

    ① 시약 

  0.1M 요오드 용액/0.5% 전분 용액

   ② 분석

      본 품 1g을 정확히(0.0002g 단위까지 정확히) 취해, 250ml의 요오드 적정이 가능한 플라스크에 넣고, 증류수 100ml를 첨가한다. 본 품이 완전히 용해될 때까지 플라스크를 잘 흔든 뒤, 20분가량 어두운 곳에 보관한다. 신선도가 유지되는 1ml의 0.5% 전분 용액을 첨가하고, 푸른색이 나타나고 30초정도 그 푸른색이 유지될 때까지 요오드 용액으로 적정한다. 1ml의 요오드 용액(0.1mol/L)은 본 품(Cysteamine HCl) 11.362mg에 해당한다.

   ③ 계산

       Cysteamine HCl 의 함량 = (Vs-Vb)× 0.011362× F÷ m× 100%

F ?  0.1M 요오드 용액의 보정계수

       m ?  본 품의 중량 (g)

       Vb ? 공 시료에 사용된 0.1M 요오드 용액의 소비량 (ml)

       Vs ? 본 품 적정에 사용된 0.1M 요오드 용액의 소비량 (ml)

정량법

   ① HPLC 분석방법 

    - 표준용액 : 표준품 약 0.2g을 정밀하게 칭량하여 용량 플라스크에 넣고 80% 메탄올 용액으로 0.5ℓ가 되도록 표정하여 녹인 후 측정한다. 

    - 전처리 : 0.5g에 해당하는 본 품을 정확하게 칭량하여 둥근 플라스크에 넣고  80% 메탄올 용액으로 0.5ℓ가 되도록 표정하여 Sonication 한 후 0.45㎛ 여과지로 여과하여 20㎕ 주입한다. 

    - 사용 조건 

        장비 : HPLC

        컬럼 : VP-ODS (150mm× 4.6mm I.d.)

        Injection Volume : 20㎕

        Flow rate : 1㎖/min

        이동상 : Methanol 80㎖ + Water 20㎖

        UV detector : 230nm

제조방법의 기준

   본 품은 대기 중에서 매우 불안정하므로 사료에 첨가 시에는 보통 부형물질로 코팅, 20～50%로 희석하여 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

   개봉 후 잔량은 다시 밀봉하여 4℃ 정도의 직사광선을 피해 서늘한 곳에 보관한다.

■ 식물스테롤/식물스테롤에스테르

(Phytosterol, Plant sterol; Plant sterol ester)

제조기준

  (1) 원재료 및 제조방법

   (가) 대두유, 옥수수유, 채종유를 생산하는 공정 중 탈취공정 중에 생긴 증류물인 베타-시토스테롤(β-sitosterol), 브라시카스테롤(brassicasterol), 스티그마스테롤(stigmasterol), 캄페스테롤(campesterol)의 혼합물을 추출 및 정제하여 제조하여야 함

   (나) 상기 (가)의 추출 및 정제물을 식용유지 유래 지방산으로 에스테르화하여 제조하여야 함

  (2) 기능성분(또는 지표성분)의 함량 : 식물스테롤 함량이 900 mg/g 이상이어야 함. 다만, 식물스테롤에스테르를 원료로 사용한 경우에는 식물스테롤에스테르와 유리식물스테롤의 합이 800 mg/g 이상, 유리식물스테롤 함량이 100 mg/g 이하이어야 함

  (3) 제조 시 유의사항 : 식물스테롤 분석 시 베타-시토스테롤(β-sitosterol), 브라시카스테롤(brassicasterol), 스티그마스테롤(stigmasterol), 캄페스테롤(campesterol)이 모두 검출되어야 함

규격

  (1) 성상 : 고유의 색택과 향미를 가지며 이미ㆍ이취가 없어야함

  (2) 식물스테롤에스테르(식물스테롤에스테르를 원료로 사용한 경우)

   (가) 원료성 제품 : 표시량 이상

   (나) 최종제품 : 표시량의 80～120%

  (3) 식물스테롤에스테르 함량(식물스테롤에스테르를 원료로 사용한 경우)

    (가) 원료성 제품 : 표시량 이상

    (나) 최종제품 : 표시량의 80～120%

  (4) 대장균군 : 음성

시험법

  (1) 식물스테롤 : 제 4. 3-38 식물스테롤

  (2) 식물스테롤에스테르 :

    (가) 총 식물스테롤 함량 : 제 4. 3-38 식물스테롤

    (나) 유리식물스테롤 : 제 4. 3-39 유리식물스테롤

    (다) 식물스테롤에스테르 함량 = (총식물스테롤 함량 - 유리식물스테롤함량) × 1.6

  (3) 대장균군 : 건강기능식품의 기준 및 규격 [별표 4] 참조

■ 비테인염산염(베타인염산염, Betaine Hydrochloride)

(CH3)3N+CH2COOHCl

C5H11NO2HCl                                               분자량 153.61

성분규격

  본 품은 2가지 주원료인 Sodium Carbonate와 Chloroacetic acid의 합성으로 만들어지며, 이후 중화 과정, 암모니화 과정, 정제 과정 등을 거쳐서 얻어지는 물질로 주성분은 비테인염산염(Betaine HCl)이다.

  함량

  본 품은 비테인염산염(C5H11NO2HCl) 95.0% 이상을 함유한다.

  성상

  ① 이 품목은 백색의 결정으로서 약간의 냄새와 감미가 있다.

  ② 이 품목은 용해도 64.7g/물100ml (25℃) 이다.

  ③ 이 품목은 pH 0.8∼1.2 (25g/물100ml, 25℃) 이다.

확인시험

  ① 이 품목의 수용액(1→100)과 비테인 또는 비테인염산염 표준품의 수용액(1→100) 각각 10㎕씩을 사용하여 정량법의 액체크로마토그래프 분석조건에 따라 시험할 때 시험용액에서 검출된 봉우리의 머무름시간(Retention time)은 표준용액에서 검출된 봉우리의 머무름시간과 일치하여야 한다. 

  ② 본 품의 수용액(1→10)은 염화물의 정성반응을 나타낸다.

순도시험

  ① 용상：이 품목 1g을 물 10ml에 녹일 때, 그 액은 무색투명하여야 한다.  

  ② 비소：이 품목 0.25g에 물 5ml를 가하여 이를 시험용액으로 하여 비소시험을 할 때, 그 양은 4ppm 이하이어야 한다. 

  ③ 납：이 품목 5g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 2ppm 이하이어야 한다.

  ④ 트리메틸아민 : 본 품 1.0g을 취하여 물을 넣어 녹이고 정확히 100㎖로 하여 시험용액으로 한다. 시험용액 5㎖를 취하여 분액깔때기에 넣고 포르말린, 탄산마그네슘 시액 1㎖, 톨루엔 10㎖ 및 포화탄산칼륨용액 3㎖를 넣어 격렬하게 1분간 흔들어 섞고 5분간 방치한다. 이어 톨루엔 층을 무수황산나트륨 0.5g을 넣은 공전시험관으로 옮겨 톨루엔을 탈수한다. 이 톨루엔용액 5㎖에 피크린산ㆍ톨루엔 시액 5㎖를 가했을 때 이 액에서 나타나는 색은 트리메틸아민 표준용액 5㎖를 취하여 시료용액의 경우와 같은 방법으로 조작할 때 나타나는 색보다 짙어서는 안 된다.

건조감량

  2% 이하(105℃에서 3∼4시간 건조할 때)

강열잔류물

  0.1%이하(1g)

정량법

  ① 시험용액의 조제 : 시료를 예상함량에 따라 (0.1g ～ 1g) 적당량을 칭량하여 100mL 정량플라스크(Vol. flask)에 취하고 80mL 정도의 물을 가한다. 완전히 용해하면서 30분간 초음파(Sonication in ultra sonic bath) 처리하고 물로 정용한다. 0.45μm 필터로 여과한 액을 액체크로마토그래피 시험용액으로 사용한다.

  ② 표준용액의 조제 : Betaine-HCl(분자량 153.61) 또는 Betaine(분자량 117.15)을 일정량 칭량하여 100mL 정량플라스크(Vol. flask)에 취하고 용해하여 사용한다.

  ③ 액체크로마토그래프 분석조건

      ○ 역상분배계

         칼럼 : 친수성상호작용(HILIC) 칼럼 또는 이와 동등한 것

         이동상 : acetonitrile + ammonium acetate (8:2, 사용 시 제조)

         검출기 : 증기화 광산란 검출기(ELSD) 또는 시차굴절계(RID)

         칼럼온도 : 실온

         유속 : 0.8 mL/min

      ○ 배제형 이온교환계

         칼럼 : Sugar-pak 칼럼 또는 이와 동등한 것

         이동상 : 0.004M Ca(NO3)2-4H2O (사용 시 제조)

         검출기 : 시차굴절계(RID)

         칼럼온도 : 80 ℃

         유속 : 0.6 mL/min

제조방법의 기준

  본 품은 원제 자체를 사용할 수 있고, 본 품을 제조용 원제로 하여 기타 필요한 물질 또는 부형물질에 첨가하여 제조한 제제로도 사용할 수 있다.

보존방법의 기준

  본 품은 서늘하고 건조한 곳에서 기밀용기에 보존할 것

■ 팔미트산(Palmitic Acid)

Hexadecanoic Acid

  C16H32O2  분자량 256.43   

정    의  이 품목은 지방에서 얻어지는 고형지방산으로서 팔미트산(C16H32O2) 및 스테아린산(C18H36O2)의 혼합물로 이루어져 있으며, 그 주성분은 팔미트산(C16H32O2)이다.

성    상  이 품목은 백～엷은 황색의 결정성덩어리 또는 분말이다.

순도시험  (1) 산  가 : 이 품목 0.5g을 정밀히 달아 유지류시험법 중 산가에 따라 시험할 때, 204～220이어야 한다.

  (2) 응고점 : 이 품목의 응고점은 53.3～62.0℃이어야 한다.

  (3) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  (4) 비  소 : 이 품목 0.25g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에탄올용액(1→50) 10mL를 넣고 에탄올에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550℃로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550℃로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3mL를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 4ppm 이하이어야 한다.

  (5) 수  은 : 이 품목을 수은시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.

  (6) 요오드가 : 이 품목 약 12.5g을 정밀히 달은 다음 미리 빙초산ㆍ시클로헥산의 혼액(1 : 1) 20mL 및 위이스시액 25mL를 넣어 둔 500mL 공전삼각플라스크에 가해주고 마개를 하고 격렬히 흔들어 준 다음 1시간 어두운 곳에 방치시킨 후 요오드칼륨시액 20mL, 끓여서 식힌 물 100mL를 가하여 과량의 요오드를 0.1N 치오황산나트륨용액으로 적정한다. 이때, 황색이 거의 없어질 때까지 계속 흔들어 주면서 일정하게 0.1N 치오황산나트륨용액을 적가한 다음 다시 전분시액을 가하여 청색이 완전히 없어질 때까지 적정을 계속한다. 종말점 가까이에서는 마개를 하여 격렬히 흔들어 준다. 따로 같은 방법으로 공시험을 행하고 다음 계산식에 따라 요오드가를 구할 때, 그 양은 2.0 이하이어야 한다.

  요오드가 =  (B-S) × 1.269    

            ──────────

              검체의 채취량(g)  

  B : 공시험의 0.1N 치오황산나트륨용액의 소비량(mL)   

  S : 본시험의 0.1N 치오황산나트륨용액의 소비량(mL)   

  (7) 검화가 : 이 품목 3g을 정밀히 달아 250mL 플라스크에 넣고 0.5N 알콜성수산화칼륨용액 50mL를 가해주고 환류냉각기를 부착한 다음 약 30분 내지 1시간 조용히 검화시킨다. 이 액을 시험용액으로 하여 유지류시험법 중 검화가에 따라 시험하고, 다시 플라스크의 내용물이 끓을 때까지 가열하고 나타난 홍색이 없어질 때까지 적정하여 검화가를 구할 때, 그 값은 205～221이어야 한다.

  (8) 불검화물 : 이 품목 5g을 정밀히 달아 250mL 플라스크에 취하고 수산화칼륨 2g 및 에탄올 40mL를 가해주고 환류냉각기를 부착한 다음 조용히 1시간 가열한다. 플라스크의 내용물을 40mL, 80mL, 130mL 눈금이 표시되어 있는 분액여두(길이 30cm, 직경 3.5cm)에 옮기고 플라스크는 충분한 양의 에탄올로 씻어 분액여두에 합하여 40mL로 하고, 다시 더운물과 찬물을 사용하여 플라스크를 씻어 옮겨주고 전량을 80mL로 한다. 마지막으로 석유에테르 수 mL로 플라스크를 씻어 분액여두에 옮겨주고 식힌 다음 석유에테르 50mL를 가해주고 실온이 되도록 내용물을 식힌 후 마개를 하고 최소한 1분간 격렬히 진탕한 후 방치하여 두 층으로 분리시킨다. 가능한 한 완전히 분리하고 상층액인 에테르층을 500mL 분액여두에 모은 다음 석유에테르 50mL씩으로 6번 추출한 후 추출액을 처음의 추출액과 합치고 이를 10% 에탄올 25mL로 씻어 주고 물층이 페놀프탈레인시액으로 정색하지 않을 때까지 이 조작을 반복한 후 물층을 완전히 제거한다. 에테르추출액은 미리 무게를 달아둔 비이커에 옮기고 에테르 10mL를 사용하여 분액여두를 씻은 다음 비이커에 합한다. 증기욕상에서 비이커의 에테르를 증발건고 한 다음 100℃에서 30분간 항량이 될 때까지 건조하고, 데시케이터내에서 방냉하여 잔류물량을 평량한다. 이어서 잔류물을 미리 페놀프탈레인시액을 지시약으로 하여 수산화나트륨시액으로 중화시킨 따뜻한 알콜 50mL에 녹이고 0.02N 수산화나트륨용액으로 엷은 홍색이 지속될 때까지 적정하고 그 소비 mL수에 5.659(mg)를 곱하여 올레인산으로서의 양을 구하고 다음 계산식에 따라 불검화물 값을 구할 때, 그 양은 1.5% 이하이어야 한다.

  불검화물(%) =   잔류물의 양(mg) - 올레인산으로서의 양(mg)   ×  100     

                ───────────────────────  ─────

                   검체의 채취량(g)                               1,000   

수    분  이 품목의 수분은 수분정량법(칼-피셔법)에 따라 시험할 때, 그 양은 0.2% 이하이어야 한다.

강열잔류물  이 품목 2g을 취하여 강열잔류물시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 0.1% 이하이어야 한다.

■ 코엔자임Q10(CoenzymeQ10)

  제조기준

    (1) 원재료 : 아그로박테륨 투메파시엔스(Agrobacterium tumefaciens), 파라콕커스 데니트리피칸스(Paracoccus denitrificans), 슈도모나스 에루지노사(Pseudomonas aeruginosa) 등

    (2) 제조방법 : 상기 (1)의 배양산물을 헥산, 아세톤, 이소프로필알코올, 초산에틸로 추출하고 이를 농축 또는 정제하여 제조하여야 함

    (3) 기능성분(또는 지표성분)의 함량 : 코엔자임Q10(CoenzymeQ10)이 980 mg/g 이상 함유되어 있어야 함

  규격

    (1) 성상 : 고유의 색택과 향미를 가지며 이미ㆍ이취가 없어야 함

    (2) 코엔자임Q10

       (가) 원료성 제품 : 표시량 이상

       (나) 최종제품 : 표시량의 80～120%

    (3) 잔류용매 (해당 용매를 사용한 경우에 한함)

       (가) 헥산(mg/kg) : 5.0 이하

       (나) 아세톤(mg/kg) : 30.0 이하

       (다) 이소프로필알콜(mg/kg) : 50.0 이하

       (라) 초산에틸(mg/kg) : 50.0 이하

    (4) 중금속

       (가) 납(mg/kg) : 1.0 이하

       (나) 카드뮴(mg/kg) : 1.0 이하

       (다) 총수은(mg/kg) : 1.0 이하

       (라) 총비소(mg/kg) : 1.0 이하

    (5) 대장균군 : 음성

  시험법

    (1) 코엔자임Q10 : 제 4. 3-53 코엔자임Q10

    (2) 잔류용매 : 제 4. 2-5-5 초산에틸, 건강기능식품의 기준 및 규격 [별표 4] 참조

    (3) 납, 카드뮴, 총수은, 총비소 : 건강기능식품의 기준 및 규격 [별표 4] 참조

    (4) 대장균군 : 건강기능식품의 기준 및 규격 [별표 4] 참조

■ 식이섬유(Dietary fiber)

정    의 

사람과 동물의 소화 효소로 분해하기 어려운 난소화성 고분자 섬유성분인 식이섬유를 함유하고 있는 식품원료를 사용하여 제조한 것을 말한다.

성상/순도/함량 : 고유의 색택과 향미를 가지며 이미ㆍ이취가 없어야 함

검정성분(또는 물질명) : 식이섬유

기    타 : 식품의 기준 및 규격(식품공전)의 대장균군 시험법 적용 시 대장균군 음성일 것

■ 차전자피식이섬유

제조기준

  (1) 원재료 : 차전자(Plantago ovata 또는 Plantago spp.) 껍질

  (2) 제조방법 : 상기 (1) 원재료를 분쇄하여 제조하여야 함

  (3) 기능성분(또는 지표성분)의 함량 : 식이섬유를 790 mg/g이상 함유하고 있어야 함

규격

  (1) 성상 : 고유의 색택ㆍ향미를 가지고 이미ㆍ이취가 없어야 함

  (2) 식이섬유

      (가) 원료성 제품 : 표시량 이상

      (나) 최종제품 : 표시량의 80% 이상

  (3) 대장균군 : 음성

시험법

  (1) 식이섬유 : 제 4. 3-26 식이섬유

  (2) 대장균군 : 건강기능식품의 기준 및 규격 [별표 4] 참조

별표 0007: 특정 동물성사료의 교차오염방지(제8조제4항 관련)

  [별표 7]                                                           

  특정 동물성사료의 교차오염방지 (제8조제4항 관련)                                                      

   1. 반추동물용사료를 제조하는 공정(원료투입 단계부터 최종 완제품 포장단계까지의 공정을 말함)에서는    

  특정 동물성사료 사용 금지. 다만, 동일 공정에서 반추동물용 이외의 사료를 제조하는 경우에는 별표 8      

  에서 규정한 확인받은 동물성사료를 사용하여야 하고, 반추동물용사료에 교차오염이 발생되지 않도록        

  세척 등의 조치를 취하여야 한다.                                                                       

   1-1. 1.의 단서와 관련하여, 돼지 장의 점막 가수분해물 중 분자량이 10,000Da 미만이고, 90℃에서 3시간   

  이상 열처리된 제품(또는 이와 동등 수준의 열처리를 거친 제품)은 세척 등의 조치를 하지 않을 수 있       

  다.                                                                                                   

   2. 제조업자ㆍ수입업자 및 판매업자는 반추동물용사료를 벌크형태로 운반하는 경우에는 별지 그림 1에서    

  규정한 전용차량만을 이용하여 운반하여야 하며, 당해 벌크차량의 번호를 기록ㆍ관리하여야 한다.           

   3. 제조업자ㆍ수입업자 및 판매업자는 반추동물용사료 또는 특정 동물성사료를 톤백 또는 지대형태로 포장  

  하는 경우에는 별지 그림 2에서 규정한 것을 사용하여야 한다.                                            

   4. 반추동물유래단백질을 포함한 육골분은 소해면상뇌증(BSE)의 매개로 불활성화하기 위하여 육골분사료    

  의 원료를 가열처리 전에 최대 50㎜ 입자로 절단한 후 제조하여야 한다.                                   

   5. 축우용(생후 약 3개월령 이내의 소를 말함) 대용유용 배합사료는 동물성 유지(식용의 고기에서 채취한   

  지방만을 원료로 한 것)의 불용성 불순물의 함량이 0.02% 미만이어야 한다.                                

   6. 불용성 불순물 함량이 0.15% 이상인 동물성 유지는 반추동물용 사료 또는 반추동물용 사료원료로 사용   

  할 수 없다.                                                                                           

   7. 동물성유지가 포함된 분말유지 및 불해성지방은 원료로 사용한 동물성유지에 대한 불용성 불순물 함량   

  을 표시하여야 한다. 또한, 동물성유지만을 원료로 하여 카제인 등으로 코팅한 분말유지 및 불해성지방      

  의 경우에도 원료로 사용한 동물성 유지의 불용성 불순물의 함량을 표시하여야 한다.(별표 15 참조)         

   8. 불용성 불순물의 함량이 0.02% 이상인 동물성 유지를 제조 또는 수입하는 자는 지대 또는 포장지 등에   

  “축우용대용유용 배합사료로 사용금지”를 표시하여야 한다.(별표 15 참조)                               

별표 0008: 확인받은 동물성사료에 대한 세부기준(제8조제5항 관련)

  [별표 8]                                                                                

  확인받은 동물성사료에 대한 세부기준(제8조제5항 관련)                                                    

   1. 순수한 비반추동물유래동물성사료 또는 제2호부터 제4호에 따른 사료를 제조하는 제조업자는 제조공정     

  분리, 다른 단백질 및 반추동물유래단백질 혼입여부, 원료의 수집선 등에 대하여 시ㆍ도지사에게 확인         

  (이하 "확인받은 동물성사료"라 한다)을 받아야 한다. 다만, 수입사료에 대하여는 수출국 정부에서 발행       

  하는 서류로 대체할 수 있다.                                                                             

   2. 가금부산물건조분(계육분 포함)ㆍ우모분 또는 계란분말 등 가금유래단백질을 제조하는 제조업자는 이들    

  이외의 단백질의 제조공정과 완전히 분리된 공정으로 제조하여야 하며, 이들 이외의 단백질 원료가 포         

  함되지 않도록 원료의 수집선 등을 관리ㆍ기록하여야 한다.                                                 

   3. 어분 또는 어분흡착사료 등 어류유래단백질을 제조하는 제조업자는 이들 이외의 단백질의 제조공정과      

  완전히 분리된 공정으로 제조하여야 하며, 이들 이외의 단백질 원료가 포함되지 않도록 원료의 수집선         

  등을 관리ㆍ기록하여야 한다.                                                                             

   4. 돼지ㆍ닭 또는 오리 등 비반추동물에서 유래한 혈분(혈액을 이용한 가공품 포함)을 제조하는 제조업자     

  는 이들 이외의 단백질 제조공정과 완전히 분리된 공정에서 제조하여야 하며, 이들 이외의 단백질 원료        

  가 포함되지 않도록 원료의 수집선 등을 관리ㆍ기록하여야 한다.                                            

   5. 제1호에 따라 확인받은 동물성사료를 제조 또는 수입하는 자는 지대 등 포장지에 "확인받은 동물성 사     

  료"를 표시하여야 하며, 제1호에 따라 확인받지 않은 사료를 제조 또는 수입한 자는 지대 또는 포장지         

  등에 "소 등 반추동물에 급여금지" 또는 “소 등 반추동물 사료로 사용금지”를 표시하여야 한다.(별표 15     

  참조)                                                                                                   

별표 0009: 사료의 멸균 및 살균처리 기준(제8조제6항 관련)

  [별표 9]                             

  사료의 멸균 및 살균처리 기준(제8조제6항 관련)                                                           

   1. 제4조에 따른 단미사료 중 동물성단백질류 사료와 배합?단미사료에 포함된 동물성단백질류 사료는        

  다음 각 목의 기준에 따라 열처리하거나 동등 이상의 효력으로 열처리 하여야 한다.                          

    가. 입자크기가 30mm 미만인 경우에는 습열기준 70℃에서 60분 이상 열처리                                

    나. 입자크기가 30mm 이상 ～ 50mm 미만인 경우에는 습열기준 90℃에서 60분 이상 열처리                   

    다. 입자크기가 50mm 이상인 경우에는 아래의 기준 중 하나를 선택하여 열처리                             

     1) 습열기준 121℃에서 15분 이상 열처리                                                               

     2) 습열기준 115℃에서 35분 이상 열처리                                                               

     3) 건열기준 160∼170℃에서 1∼2시간 열처리                                                           

   1의2. 제1호에도 불구하고 다음 각 목의 경우에는 열처리 대신 다음 각 목의 기준을 적용할 수 있다.         

    가. 애완용 동물사료 중 단순 건조의 방법으로 생산 가능한 건어포?육골포?육포?육어포 등과 육포 형태   

  의 배합사료?혼합성단미사료는 식용이 가능한 수준의 축산물(「축산물 위생관리법」 제2조제2호에 의한       

  축산물 중 같은 법 제7조에 의해 허가를 받은 작업장에서 생산한 축산물(같은 법 제4조의 기준과 규           

  격을 충족하는 것에 한함)) 또는 이에 준하는 축산물(부패 및 변질되지 않은 것에 한함)을 아래의 기          

  준 중 하나를 선택하여 살균처리하거나 이와 동등 이상의 효력을 갖는 방법으로 열처리해서 살균한 경         

  우에는 예외로 할 수 있다.                                                                               

     1) 제품의 중심온도가 63℃ 이상에서 30분 이상 열처리                                                  

     2) 식초 등 소독제를 이용하여 살균처리 후 제품의 중심온도가 50℃ 이상에서 60분 이상 열처리            

     3) 식초 등 소독제를 이용하여 살균처리 후 동결건조                                                    

    나. 제3조제1호(실험용동물)·제2호(애완용동물)에 해당하는 사료에 한해 「축산물 위생관리법」 제2조제2   

  호에 의한 축산물 중 같은 법 제7조에 의해 허가를 받은 작업장에서 생산한 축산물(같은 법 제4조의           

  기준과 규격을 충족하는 것에 한함)로 만든 제품은 제4호에 따른 조사처리를 하되 다음 각 호의 사항          

  이 확인되는 경우에는 예외로 할 수 있다.                                                                 

     1) 사료제조업체의 식용축산물 사용여부를 확인할 수 있는 원료수불대장(시행규칙 별표 9)                 

     2) 방사선 조사처리 증명서(사료 검사기준 [별지 4호의 2 서식])                                         

     3) 방사선 조사처리 표시                                                                              

    다. 수산동물을 주원료로 하여 제조한 게분?골뱅이분?새우분?어분?어즙흡착사료의 경우에는 90℃에서    

  60분이상 열처리하거나 동등 이상의 효력으로 열처리 할 수 있다.                                           

    라. 애완동물용 배합사료 중 익스투루젼(팽화) 형태의 사료는 예외로 할 수 있다.                          

    마. 수산 동물용 사료 중 냉동처리된 어린 뱀장어용 입붙임 사료는 예외로 할 수 있다.                     

   2. 누구든지 남은음식물(「폐기물관리법」에 따른 음식물류 폐기물)을 반추동물 이외의 사료 또는 사료원     

  료로 사용하는 경우에는 100℃에서 30분 이상 가열ㆍ처리하여야 하며, 가열ㆍ처리 후 즉시 냉각하여 공        

  기가 잘 통하도록 처리ㆍ관리하여야 한다. 다만, 돼지사료 또는 돼지사료의 원료로 사용할 경우에는 80℃(심   

  부온도기준)에서 30분 이상 가열ㆍ처리하여야 한다.                                                        

   3. 동물성 무기물류 중 난각분은 건열기준 90～95℃에서 5～6시간 정도 열처리하거나 동등 이상의 효력으로   

  열처리하여야 한다.                                                                                      

   4. 사료조사처리와 그 기준은 다음 각 호의 요건을 모두 만족하여야 한다.                                  

    가. 「가축으로 정하는 기타 동물」 제2호 관상용 조류(15종), 「사료 등의 기준 및 규격」 제3조제1호(실   

  험용동물)·제2호(애완용동물)의 사료, 화분에만 한 한다.                                                  

    나. 조사처리에 이용할 수 있는 선종은 감마선 또는 전자선으로 한다                                      

    다. 감마선을 방출하는 선원으로는 60Co을 사용할 수 있고, 전자선을 방출하는 선원으로는 전자선 가속기    

  를 이용할 수 있다.                                                                                      

    라. 60Co에서 방출되는 감마선 에너지를 사용할 경우 흡수선량은 10kGy 이하이어야 한다. 다만, 실험용동    

  물 사료는 50kGy 이하이어야 한다.                                                                        

    마. 전자선가속기를 이용하여 조사처리를 할 경우 10MeV이하에서 조사처리 하여야 하며, 흡수선량은         

  10kGy(실험용동물 사료는 50kGy) 이하이어야 한다.                                                         

    바. 조사처리는 가목의 동물용 사료에 한하여 위생적으로 취급·보관된 경우에만 실시할 수 있으며, 발아억  

  제, 살균, 살충 또는 숙도조절 이외의 목적으로는 조사처리 기술을 사용하여서는 아니 된다.                  

    사. 한번 조사처리한 사료는 다시 조사하여서는 아니되며 조사사료(Irradiated feed)을 원료로 사용하여 제  

  조한 사료도 다시 조사하여서는 아니 된다.                                                                

    아. 외국에서 조사처리한 사료는 수출국 제조업자가 발행하는 조사처리에 관한 증명서(「사료검사기준」     

  별지 제4호의2서식)를 수입사료검정기관에 제출하여야 하고, 검토결과 국내 조사처리기준에 충족할 경         

  우에만 수입 및 판매·공급 등이 가능하다.                                                                

    자. 조사사료는 용기에 넣거나 또는 포장한 후 판매·공급하여야 하며, 포장재 및 용기 등에 조사여부를 반  

  드시 표시하여야 한다.(별표 15 참조)                                                                     

별표 0010: 사료의 유통기간 설정 기준(제8조제9항 관련)

  [별표 10의2]                                         

  사료의 유통기간 설정 기준(제8조제9항 관련)                                                                

  1. 통?병조림 사료                                                                                        

   “통?병조림 사료”라 함은 사료를 통 또는 병에 넣어 탈기와 밀봉(진공포장) 후 살균 또는 멸균한 것을 말    

  한다.                                                                                                     

   가.제조기준                                                                                              

    1) pH 4.6을 초과하는 저산성(low acid) 사료는 제품의 중심온도가 120℃ 4분간 또는 이와 동등 이상의        

  효력을 갖는 방법으로 열처리해서 멸균하여야 하며, 제품의 내용물, 제조장소, 제조일자를 확인할 수            

  있는 기호를 표시하고 멸균공정 작업에 대한 기록을 보관하여야 한다.                                         

    2) pH가 4.6 이하인 산성 사료는 저장성을 가질 수 있도록 그 특성에 따라 적절한 가열 등의 방법으로         

  살균처리하여야 한다.                                                                                      

    3) 제품은 내용물의 변색이 방지되고 호열성 세균의 증식이 억제될 수 있도록 적절한 방법으로 냉각하         

  여야 한다.                                                                                                

    4) 동물성단백질류는 배합(또는 혼합) 전에 반드시 별표 9에 따라 멸균 및 살균을 한 후 사용하여야 한        

  다.                                                                                                       

   나.규격                                                                                                  

    1) 성상?관 또는 병 뚜껑이 팽창 또는 변형되지 아니하고, 내용물은 고유의 향미, 색택, 물성을 가지고       

  이미?이취가 없어야 한다.                                                                                 

    2) 주석(mg/kg)?150 이하(알루미늄 캔을 제외한 캔제품에 한하며, 산성 통조림은 200 이하 이어야 한         

  다.)                                                                                                      

    3) 세균?세균발육이 음성이어야 한다.                                                                    

   다. 권장 유통기간 : 36개월                                                                               

  2. 레토르트 사료                                                                                          

    “레토르트(retort) 사료”라 함은 단층 플라스틱필름이나 금속박 또는 이를 여러 층으로 접착하여, 파우      

  치와 기타 모양으로 성형한 용기에 제조한 사료를 충전하고 탈기와 밀봉(진공포장) 후 살균 또는 멸균한         

  것을 말한다.                                                                                              

   가.제조기준 : 통?병조림 사료의 제조기준과 같다.                                                         

   나.규격                                                                                                  

    1) 성상?외형이 팽창, 변형되지 아니하고, 내용물은 고유의 향미, 색택, 물성을 가지고 이미?이취가 없      

  어야 한다.                                                                                                

    2) 세균?세균발육이 음성이어야 한다.                                                                    

   다. 권장 유통기간 : 24개월                                                                               

  3. 냉동 사료                                                                                              

    “냉동 사료”라 함은 제조한 사료를 장기보존 할 목적으로 냉동처리, 냉동보관하는 것으로서 용기?포장      

  에 넣은 사료를 말한다.                                                                                    

   가. 동물성단백질류를 포함한 냉동 사료                                                                    

    1)제조기준 : 통?병조림 사료의 제조기준과 같다.                                                         

    2)규격                                                                                                  

     가) 성상?내용물은 기밀포장해서 외부 오염이 방지되어야 하며, 내용물은 고유의 향미, 색택, 물성을        

  가지고 이미?이취가 없어야 한다.                                                                          

     나) 세균?세균발육이 음성이어야 한다.                                                                  

    3) 권장 유통기간 : 24개월                                                                               

   나. 동물성단백질류를 포함하지 않은 냉동 사료                                                             

    1)제조기준                                                                                              

     가) 제품의 중심온도가 63℃ 이상에서 30분 또는 이와 동등 이상의 효력을 갖는 방법으로 열처리해서         

  살균하여야 한다.                                                                                          

     나) 제품은 내용물의 변색이 방지되고 호열성 세균의 증식이 억제될 수 있도록 적절한 방법으로 냉각         

  하여야 한다.                                                                                              

    2)규격                                                                                                  

     가) 성상?내용물은 기밀포장해서 외부 오염이 방지되어야 하며, 내용물은 고유의 향미, 색택, 물성을        

  가지고 이미?이취가 없어야 한다.                                                                          

     나) 세균수 : n=5, c=2, m=100,000, M=500,000(다만, 발효제품, 발효제품 첨가 또는 유산균 첨가제품은 제외  

  한다)                                                                                                     

     다) 대장균군 : n=5, c=2 m=10, M=100                                                                    

    ※ 위 규격에서 사용하는 용어(n, c, m, M)는 다음과 같다,                                                 

     (1) n : 검사하기 위한 시료의 수                                                                        

     (2) c : 최대허용시료수, 허용기준치(m)를 초과하고 최대허용한계치(M) 이하인 시료의 수로서 결과가         

  m을 초과하고 M 이하인 시료의 수가 c 이하일 경우에는 적합으로 판정                                         

     (3) m : 미생물 허용기준치로서 결과가 모두 m 이하인 경우 적합으로 판정                                  

     (4) M : 미생물 최대허용한계치로서 결과가 하나라도 M을 초과하는 경우는 부적합으로 판정                  

    ※ m, M에 특별한 언급이 없는 한 1g 또는 1mL 당의 집락수(CFU)이다.                                       

    3) 권장 유통기간 : 12개월                                                                               

  4. 수분 14% 초과, 60% 이하 사료(애완동물용 사료에 한함)                                                   

    수분 14% 초과, 60% 이하 사료는 pH, 보존제, 수분활성도, 살균 및 멸균 등에 대한 제조 기준 및 규격         

  을 충족한 사료를 말한다.                                                                                  

   가.제조기준                                                                                              

    1) 수분 14% 초과, 60% 이하 사료는 조류인플루엔자 바이러스 사멸조건에 준한 열처리 [제품의 중심온         

  도가 63℃ 30분간] 또는 이와 동등 이상의 효력을 갖는 방법으로 열처리(애완동물용 배합사료 중 익             

  스트루젼(팽화) 형태의 사료는 예외)해서 살균하여야 하며, 제품의 내용물, 제조장소, 제조일자를 확            

  인할 수 있는 기호를 표시하고 살균공정 작업에 대한 기록을 보관하여야 한다.                                 

    2) 제품의 미생물 발생이 방지되도록 배합(또는 혼합) 시 적절한 보존제 사용, pH 조정, 포장재 내에 탈       

  산소제 사용, 탈기 포장, 질소 충진, 수분활성도 조정(0.75 이하) 등의 조치가 되어야 함.                      

    3) 동물성단백질류는 배합(또는 혼합) 전에 반드시 별표 9에 따라 멸균 및 살균을 한 후 사용하여야 한        

  다.                                                                                                       

   나.규격                                                                                                  

    1) 성상?내용물은 기밀포장해서 외부 오염이 방지되어야 하며, 고유의 향미, 색택, 물성을 가지고 이         

  미?이취가 없어야 한다.                                                                                   

    2) 세균수 : n=5, c=2, m=100,000, M=500,000(다만, 발효제품, 발효제품 첨가 또는 유산균 첨가제품은 제외    

  한다)                                                                                                     

    3) 대장균군 : n=5, c=2 m=10, M=100                                                                      

   다. 권장 유통기간 : 18개월                                                                               

  5. 수분 60% 초과 사료는 제1호부터 제3호에 따른 사료로 제조되어야 한다.                                    

  6. 단순 건조방식의 육포 등                                                                                

   가.제조기준 : 제품의 중심온도가 63℃ 이상에서 30분 또는 이와 동등 이상의 효력을 갖는 방법으로 열         

  처리해서 살균하여야 한다.                                                                                 

   나.규격(성상)?내용물은 기밀포장해서 외부 오염이 방지되어야 하며, 고유의 향미, 색택, 물성을 가지         

  고 이미?이취가 없어야 한다.                                                                              

   다. 권장 유통기간 : 18개월(수분 14% 초과), 36개월(수분 14% 이하)                                         

  7. 조사처리한 경우 : 제4호의 나목과 다목을 준용                                                           

  8. 기타                                                                                                   

   가. 제1호부터 제6호 이외의 사료에 대한 권장 유통기간은 아래와 같다.                                      

     1) 양축용 배합사료(수분함량 14% 이하) : 6개월                                                          

      * 미생물제를 포함하지 않은 광물성배합사료(미네랄블럭) : 36개월                                        

     2) 프리믹스용 배합사료(수분함량 14% 이하) : 24개월                                                     

     3) 대용유용 배합사료(수분함량 10% 이하) : 12개월                                                       

     4) 반추동물용 섬유질 배합사료, 섬유질가공사료, 섬유질발효사료 : 3개월                                  

     5) 그 밖의 동물?어류용 배합사료(수분함량 14% 이하, 양식용 수산동물용 제외) : 24개월                   

     6) 그 밖의 동물?어류용 배합사료(수분함량 14% 초과, 양식용 수산동물용 제외) : 제1호부터 제4호에        

  따른다.                                                                                                   

     7) 양식용 수산동물용 배합사료(수분함량 14% 이하) : 12개월                                              

     8) 양식용 수산동물용 반건조배합사료(수분함량 25% 이내) : 7일                                           

     9) 식물성 단미사료(유지류, 섬유질가공사료, 섬유질발효사료 제외) : 제조업자 또는 수입업자가 정한        

  다.                                                                                                       

     10) 동물성 단백질류 단미사료 : 12개월(다만, 수분함량 12%를 초과하는 유도단백질은 6개월)                

     11) 동물성 무기물류 단미사료 : 제조·수입업자가 정한다.                                                

     12) 동물성 곤충류, 플랑크톤류 단미사료 : 생물-7일, 냉장-1개월, 냉동-냉동 사료 준용, 건조분말(수분      

  12% 이하)-6개월, 건조분말(수분 12% 초과)-1개월                                                            

     13) 동물성 낙농가공부산물류 : 12개월                                                                   

     14) 광물성 단미사료 : 제조·수입업자가 정한다.                                                         

     15) 유지류 단미사료 : 12개월                                                                           

     16) 단세포단백질 단미사료 : 12개월                                                                     

     17) 남은음식물사료 : 수분함량 14% 초과-3개월, 14% 이하-6개월                                           

     18) 반려동물음용수 : 24개월                                                                            

     19) 혼합성단미사료 : (수분함량 14% 이하) 24개월, (수분함량 14% 초과) 제4호를 준용한다.                 

     20) 보조사료 : 36개월(다만, 미생물제의 경우 12개월)                                                    

   나. 제조업자 및 수입업자는 유통기간을 설정하는 경우에는 「식품, 식품첨가물 및 건강기능식품의 유통        

  기한 설정기준」(식품의약품안전처 고시 2014-206호, 2014.12.31.)을 준용하여 포장재질, 보존조건,             

  제조방법, 원료배합비율 등 제품의 특성과 냉장 또는 냉동보존 등 기타 유통실정을 고려하여 위해방             

  지와 품질을 보장할 수 있도록 유통기간 설정을 위한 실험을 통하여 유통기간을 설정하고 그 근거서             

  류를 제출하여야 한다.                                                                                     

   다. 권장 유통기간 이내로 유통기간을 설정하는 경우에는 유통기간 설정실험을 생략할 수 있으나, 권장         

  유통기간은 포장재질, 보존조건, 제조방법, 원료배합비율 등 제품의 특성과 냉장 또는 냉동보존 등              

  기타 유통실정 등에 따라 달라지므로 절대적인 기준이 아님을 유념해서 설정하여야 한다.                       

     * 권장 유통기간을 근거로 유통기간을 설정하였더라도 제품에 하자 등이 발생할 경우 제조업자 및 수         

  입업자에게 행정처분 및 환불 등의 책임이 있음                                                              

별표 0011: 단미사료의 성분등록 사항(제9조제1항 관련)

  [별표 11] <신설 2014.12.8., 개정 2015.8.21., 개정 2016.7.1., 개정 2017.4.1., 개정 2021.5.24., 개정                            

  2023.10.04., 개정 2024.04.01.>                                                                                                

  단미사료의 성분등록 사항(제9조제1항 관련)                                                                                     

  ┏━━┯━━━━━━━━┯━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━┓  

  ┃구분│사료종류        │명  칭            │등  록  성  분                                          │비고              ┃  

  ┃    │                │                  ├────────┬─────────┬─────────┤(확인사항)        ┃  

  ┃    │                │                  │최소량(%)       │최대량(%)         │기타              │                  ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │(제10조 관련)     │                  ┃  

  ┠──┼────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │가. 곡류        │별표 1의 사료명   │조단백질        │수분              │                  │                  ┃  

  ┃    │                │칭                │                │조섬유, 조회분    │                  │                  ┃  

  ┃1.  ├────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │나. 곡물부산물  │별표 1의 사료명   │                │수분              │                  │쌀겨는 산가       ┃  

  ┃식  │류              │칭                │                │조섬유, 조회분    │                  │(AV) 70 이하      ┃  

  ┃    │  (강피류)      │                  │                │                  │                  │여부 확인         ┃  

  ┃물  │                │                  │                │                  │                  │당밀흡착강피      ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │류는 원료명       ┃  

  ┃성  │                │                  │                │                  │                  │및 혼합비율       ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │확인              ┃  

  ┃    ├────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │다. 박류        │대두박            │조단백질        │수분 13% 이하     │우레아제 역가     │                  ┃  

  ┃    │ (단백질류)     │                  │                │조섬유, 조회분    │(U.A.)[최대량]    │                  ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │수산화칼륨용액 단 │                  ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │백질 용해도[최소  │                  ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │량]               │                  ┃  

  ┃    │                ├─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │                │면실박            │조단백질        │수분 13% 이하     │                  │유리고시폴        ┃  

  ┃    │                │                  │                │조섬유, 조회분    │                  │1,200ppm 이하     ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │여부 확인         ┃  

  ┃    │                ├─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │                │양구슬냉이박      │조단백          │수분 13% 이하     │                  │                  ┃  

  ┃    │                │                  │                │조섬유, 조회분    │                  │                  ┃  

  ┃    │                ├─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │                │기타 별표 1의     │조단백질        │수분              │                  │피마자박은        ┃  

  ┃    │                │사료명칭          │                │조섬유, 조회분    │                  │열처리 공정       ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │확인              ┃  

  ┃    ├────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │라. 서류        │별표 1의 사료명   │                │수분, 조섬유      │                  │타피오카는 청     ┃  

  ┃    │                │칭                │                │조회분            │                  │산 50ppm 이하     ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │여부 확인         ┃  

  ┃    ├────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │마. 식품가공    │제과·제빵·제면  │                │수분, 조회분      │                  │                  ┃  

  ┃    │   부산물류     │부산물            │                │                  │                  │                  ┃  

  ┃    │                ├─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │                │당밀              │총당            │                  │20℃에서의 브릭   │혼합물질이 있     ┃  

  ┃    │                │파당              │                │                  │스(Brix)계수      │는 경우 원료명    ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │및 혼합비율 확    ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │인                ┃  

  ┃    │                ├─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │                │아미노산발효부산  │조단백질        │수분              │비단백태질소      │                  ┃  

  ┃    │                │물                │                │조섬유, 조회분    │(NPN)함량[최대량] │                  ┃  

  ┃    │                │조미료 부산물     │                │                  │                  │                  ┃  

  ┃    │                ├─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │                │기타 별표 1의     │조단백질        │수분              │                  │과실류가공부      ┃  

  ┃    │                │사료명칭          │                │조섬유, 조회분    │                  │산물은 혼합물     ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │질이 있는 경우    ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │원료명 및 혼합    ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │비율 확인         ┃  

  ┃    ├────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │바. 조류        │별표 1의 사료명   │조단백질        │수분              │                  │                  ┃  

  ┃    │                │칭                │                │조섬유, 조회분    │                  │                  ┃  

  ┃    ├────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │사. 섬유질류    │섬유질가공사료    │조단백질, 조섬  │수분, 조회분      │                  │혼합된 원료명     ┃  

  ┃    │                │                  │유              │                  │                  │및 혼합비율 확    ┃  

  ┃    │                │                  │ADF, NDF        │                  │                  │인                ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │조섬유의 함량     ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │이 건물기준으     ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │로 15% 이상       ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │(다만, 큰소비     ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │육 단계의 경우    ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │10% 이상) 여      ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │부 확인           ┃  

  ┃    │                ├─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │                │섬유질발효사료    │조단백질        │수분, 조회분      │발효균주          │원료 및 발효      ┃  

  ┃    │                │                  │조섬유          │                  │                  │처리방법 확인     ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │조섬유의 함량     ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │이 건물기준으     ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │로 15% 이상       ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │(다만, 큰소비     ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │육 단계의 경우    ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │10% 이상) 여      ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │부 확인           ┃  

  ┃    │                ├─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │                │알팔파            │조단백질        │수분 15% 이하     │                  │                  ┃  

  ┃    │                │                  │조섬유          │조회분            │                  │                  ┃  

  ┃    │                ├─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │                │인동(꽃봉오리)    │                │수분, 조회분      │                  │                  ┃  

  ┃    │                ├─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │                │병풀 잎 분말      │조단백질        │수분, 조섬유,     │                  │                  ┃  

  ┃    │                │                  │                │조회분            │                  │                  ┃  

  ┃    │                ├─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │                │기타 별표 1의     │조섬유          │수분, 조회분      │                  │새싹귀리, 새싹    ┃  

  ┃    │                │사료명칭          │                │                  │                  │밀, 새싹보리는    ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │작물보호제 처리   ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │여부 확인         ┃  

  ┃    ├────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │아. 제약        │이노시톨박        │                │수분, 조회분      │                  │원료명 확인       ┃  

  ┃    │   부산물류     ├─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │                │인삼박            │조단백질        │수분, 조섬유      │                  │                  ┃  

  ┃    │                │                  │                │조회분            │                  │                  ┃  

  ┃    ├────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │자. 유지류      │별표 1의 사료명   │조지방          │수분              │열량(kcal/kg)     │식물성혼합유      ┃  

  ┃    │                │칭                │                │산가(A.V) 30 이하 │[최소량]          │는 원료명 및      ┃  

  ┃    │                │                  │                │협잡물(MIU)       │                  │혼합 비율 확      ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │인                ┃  

  ┃    ├────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │차. 전분류      │별표 1의 사료명   │                │수분, 조회분      │                  │원료명 확인       ┃  

  ┃    │                │칭                │                │                  │                  │                  ┃  

  ┃    ├────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │카. 콩류        │별표 1의 사료명   │조지방, 조단백  │수분, 조섬유, 조회│                  │                  ┃  

  ┃    │                │칭                │질              │분                │                  │                  ┃  

  ┃    ├────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │타. 견과종실류  │별표 1의 사료명   │조지방, 조단백  │수분, 조섬유, 조회│                  │                  ┃  

  ┃    │                │칭                │질              │분                │                  │                  ┃  

  ┃    ├────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │파. 과실류      │별표 1의 사료명   │조단백질        │수분, 조섬유, 조회│                  │                  ┃  

  ┃    │                │칭                │                │분                │                  │                  ┃  

  ┃    ├────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │하. 채소류      │별표 1의 사료명   │조단백질        │수분, 조섬유, 조회│                  │                  ┃  

  ┃    │                │칭                │                │분                │                  │                  ┃  

  ┃    ├────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │거. 버섯류      │별표 1의 사료명   │조단백질        │수분, 조섬유, 조회│                  │                  ┃  

  ┃    │                │칭                │                │분                │                  │                  ┃  

  ┃    ├────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │너. 기타 식물류 │모링가 잎 분말    │조단백질        │수분, 조섬유,     │                  │                  ┃  

  ┃    │                │                  │                │조회분            │                  │                  ┃  

  ┃    │                ├─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │                │별표 1의 사료명   │                │수분, 조회분      │                  │                  ┃  

  ┃    │                │칭                │                │                  │                  │                  ┃  

  ┠──┼────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │가. 단백질류    │가금부산물건조    │조단백질        │수분 12% 이하     │펩신소화율[최소   │열처리 공정 확    ┃  

  ┃    │                │분                │                │조지방, 조회분    │량]               │인                ┃  

  ┃2.  │                │계란분말, 골뱅이  │                │                  │(모발분, 우모분,  │                  ┃  

  ┃    │                │분, 모발분, 수지  │                │                  │제각분에 한 함)   │                  ┃  

  ┃동  │                │박, 우모분, 육골  │                │                  │                  │                  ┃  

  ┃    │                │분, 육분, 제각분  │                │                  │                  │                  ┃  

  ┃물  │                │기타 별표 1의     │                │                  │                  │                  ┃  

  ┃    │                │사료명칭          │                │                  │                  │                  ┃  

  ┃성  │                ├─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │                │가죽              │조단백질        │수분, 조섬유,     │                  │                  ┃  

  ┃    │                │                  │                │조회분            │                  │                  ┃  

  ┃    │                ├─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │                │게분, 새우분      │인, 조단백질, 칼│수분 12% 이하     │                  │열처리 공정 확    ┃  

  ┃    │                │                  │슘              │조회분            │                  │인                ┃  

  ┃    │                ├─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │                │감마루스,         │조단백질        │수분, 조지방,     │                  │열처리공정        ┃  

  ┃    │                │건어포, 육골포    │                │조회분            │                  │제외, 살균공정    ┃  

  ┃    │                │육어포, 육포      │                │                  │                  │확인              ┃  

  ┃    │                │                  ├────────┴─────────┴─────────┴─────────┨  

  ┃    │                │                  │애완용 동물사료의 경우 성분등록은 하되 등록성분량 등록 및 제품              ┃  

  ┃    │                │                  │표시는 제외 가능. 다만, 식육 및 어육의 종류 또는 부위명의                   ┃  

  ┃    │                │                  │함량(백분율 또는 중량)을 표시                                               ┃  

  ┃    │                ├─────────┼────────┬─────────┬─────────┬─────────┨  

  ┃    │                │동물성단백질혼합분│조단백질        │수분 12% 이하,    │펩신소화율        │열처리 공정 확    ┃  

  ┃    │                │                  │                │조지방            │[최소량]          │인                ┃  

  ┃    │                │                  │                │조회분            │                  │원료명과 혼합     ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │비율 확인         ┃  

  ┃    │                ├─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │                │어분              │조단백질        │수분 12% 이하,    │카드뮴(ppm)       │열처리 공정 확    ┃  

  ┃    │                │                  │                │염분, 조지방, 조회│[최대량]          │인                ┃  

  ┃    │                │                  │                │분                │                  │                  ┃  

  ┃    │                ├─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │                │어즙              │건물            │조단백질, 조지    │                  │열처리공정 확     ┃  

  ┃    │                │                  │                │방                │                  │인                ┃  

  ┃    │                ├─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │                │어즙흡착사료      │조단백질        │수분 12% 이하,    │염분은 어즙흡착   │열처리 공정 확    ┃  

  ┃    │                │육즙흡착사료      │                │염분, 조섬유, 조회│사료에 한 함      │인                ┃  

  ┃    │                │                  │                │분                │                  │원료명 및 혼합    ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │비율 확인         ┃  

  ┃    │                ├─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │                │유도단백질        │조단백질        │수분, 조회분      │펩신소화율[최소   │열처리 공정 확    ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │량]               │인                ┃  

  ┃    │                ├─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │                │혈장단백, 혈분,   │조단백질        │수분 12% 이하     │나트륨(Na)[최대   │열처리 공정 확    ┃  

  ┃    │                │혈액가공품        │                │조지방, 조회분    │량]               │인                ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │펩신소화율[최소   │혼합물질이 있     ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │량]               │는 경우 원료명    ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │및 혼합 비율      ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │확인              ┃  

  ┃    ├────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │나. 무기물류    │가공뼈다귀, 녹각  │인, 칼슘        │조회분            │                  │살균공정          ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │확인              ┃  

  ┃    │                ├─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │                │골분, 골회, 난각  │인, 칼슘        │조회분            │                  │혼합물질이 있     ┃  

  ┃    │                │분, 어골분, 어골  │                │                  │                  │는 경우 원료명    ┃  

  ┃    │                │회                │                │                  │                  │및 혼합비율 확    ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │인                ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │난각분은 열처     ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │리 여부 확인      ┃  

  ┃    │                ├─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │                │패분              │칼슘            │조회분            │                  │                  ┃  

  ┃    ├────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │다. 유지류      │별표 1의 사료명   │조지방,         │수분              │열량(kcal/kg)     │불용성 불순물     ┃  

  ┃    │                │칭                │                │산가(A.V) 30 이   │[최소량]          │함량이 0.15%      ┃  

  ┃    │                │                  │                │하                │                  │이상은 사료 또    ┃  

  ┃    │                │                  │                │불용성 불순물     │                  │는 사료원료로     ┃  

  ┃    │                │                  │                │함량(0.02%이하    │                  │사용금지(최종     ┃  

  ┃    │                │                  │                │또는 0.15%이하)   │                  │판매용에 한함)    ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │동물성혼합유      ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │지는 원료명 및    ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │혼합 비율 확      ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │인                ┃  

  ┃    ├────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │라. 곤충류      │별표 1의 사료명   │조단백질        │수분              │                  │사료의 형태에 따  ┃  

  ┃    │                │칭                │                │조지방, 조회분    │                  │라 생물, 냉동, 냉 ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │장 또는 건조 분   ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │말 등으로 표시    ┃  

  ┃    ├────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │마. 플랑크톤류  │별표 1의 사료명   │조단백질        │수분              │                  │사료의 형태에 따  ┃  

  ┃    │                │칭                │조지방          │조회분            │                  │라 생물, 냉동, 냉 ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │장 또는 건조 분   ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │말 등으로 표시    ┃  

  ┃    ├────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │바. 낙농가공    │별표 1의 사료명   │조단백질        │수분              │                  │혼합물질이 있     ┃  

  ┃    │   부산물류     │칭                │                │조지방, 조회분    │                  │는 경우 원료명    ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │및 혼합비율 확    ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │인                ┃  

  ┠──┼────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │가. 식염류      │별표 1의 사료명   │염화나트륨      │수분, 불용물질    │                  │광물성사료는      ┃  

  ┃    │                │칭                │총 염소         │                  │                  │부형제를 사용     ┃  

  ┃3.  │                │                  │                │                  │                  │한 경우 명칭      ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │표시              ┃  

  ┃광  ├────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │나-1) 인산염류  │인산나트륨        │인, 나트륨      │수분              │                  │공급제의 명칭,    ┃  

  ┃물  │                ├─────────┼────────┼─────────┼─────────┤분자식, 순도,     ┃  

  ┃    │                │인산칼륨          │인, 칼륨        │수분              │                  │공급제의 함유     ┃  

  ┃성  │                ├─────────┼────────┼─────────┼─────────┤율 확인           ┃  

  ┃    │                │기타 별표 1의     │인, 칼슘        │수분              │                  │                  ┃  

  ┃    │                │사료명칭          │                │                  │                  │                  ┃  

  ┃    ├────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┤                  ┃  

  ┃    │나-2) 칼슘염류  │마그네슘석회석분  │칼슘 20% 이상,  │수분              │                  │                  ┃  

  ┃    │                │말                │마그네슘 10% 이 │                  │                  │                  ┃  

  ┃    │                │                  │상              │                  │                  │                  ┃  

  ┃    │                ├─────────┼────────┼─────────┼─────────┤                  ┃  

  ┃    │                │석고              │칼슘, 황        │수분              │                  │                  ┃  

  ┃    │                ├─────────┼────────┼─────────┼─────────┤                  ┃  

  ┃    │                │석회석분말        │칼슘 34% 이상   │수분, 철(Fe)      │                  │                  ┃  

  ┃    │                ├─────────┼────────┼─────────┼─────────┤                  ┃  

  ┃    │                │기타 별표 1의     │칼슘            │수분              │                  │                  ┃  

  ┃    │                │사료명칭          │                │                  │                  │                  ┃  

  ┃    ├────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┤                  ┃  

  ┃    │다. 다량        │기타 별표 1의     │해당 광물질의   │수분              │                  │                  ┃  

  ┃    │   광물질류     │사료명칭          │주요성분        │                  │                  │                  ┃  

  ┃    ├────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┤                  ┃  

  ┃    │라. 미량        │기타 별표 1의     │해당 광물질의   │수분              │                  │                  ┃  

  ┃    │   광물질류     │사료명칭          │주요성분        │                  │                  │                  ┃  

  ┃    ├────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │마. 혼합        │인산염류 합제     │해당 광물질의   │수분              │                  │혼합광물질별      ┃  

  ┃    │   광물질류     │칼슘염류 합제     │주요성분        │                  │                  │명칭, 분자식,     ┃  

  ┃    │                │다량광물질류 합제 │                │                  │                  │순도 및 혼합      ┃  

  ┃    │                │미량광물질류 합제 │                │                  │                  │비율 확인         ┃  

  ┃    │                │혼합광물질류 합제 │                │                  │                  │                  ┃  

  ┠──┼────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │가. 유지류      │글리세린          │글리세린        │수분              │                  │                  ┃  

  ┃    │                ├─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃4.  │                │분말유지          │조지방          │수분              │                  │혼합물질이 있     ┃  

  ┃    │                │불해성지방        │열량(kcal/kg)   │                  │                  │는 경우 원료명    ┃  

  ┃기  │                │                  │                │                  │                  │및 혼합비율 확    ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │인,  동물성유     ┃  

  ┃타  │                │                  │                │                  │                  │지를 원료로 사    ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │용한 경우에는     ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │동물성유지의      ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │불용성 불순물     ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │함량 표시(불용    ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │성 불순물 함량    ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │이 0.15% 이상     ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │은 사료원료로     ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │사용금지)         ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │융점(℃) 확인     ┃  

  ┃    │                ├─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │                │혼합성유지        │조지방          │수분              │                  │원료명 및 혼합    ┃  

  ┃    │                │                  │열량(kcal/kg)   │산가(A.V) 30 이   │                  │비율 확인, 화     ┃  

  ┃    │                │                  │                │하                │                  │학분해하여 생     ┃  

  ┃    │                │                  │                │불용성 불순물 함  │                  │산되는 다크유     ┃  

  ┃    │                │                  │                │량                │                  │(Dark Oil)는 혼   ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │입할 수 없음.     ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │동물성유지를      ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │원료로 사용한     ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │경우에는 동물     ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │성유지의 불용     ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │성 불순물 함량    ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │표시(불용성 불    ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │순물 함량이       ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │0.15% 이상은      ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │사료원료로 사     ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │용금지)           ┃  

  ┃    ├────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │나.단세포단백   │별표 1의 사료명   │조단백질        │수분 13% 이하     │발효균주(균주명   │                  ┃  

  ┃    │질              │칭                │                │조회분            │만 표시)          │                  ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │펩신소화율[최소   │                  ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │량]               │                  ┃  

  ┃    ├────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │다. 남은음식물  │남은음식물사료    │조단백질        │수분, 조섬유,     │                  │원료명 및 혼합    ┃  

  ┃    │                │                  │조지방          │조회분, 염분      │                  │비율 확인         ┃  

  ┃    │                │                  │                │(Nacl)            │                  │열처리공정        ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │확인              ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │                  ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │사료의 원료       ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │및 가금의 사      ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │료인 경우 수      ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │분 14% 이하       ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │확인              ┃  

  ┃    ├────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │라. 반려동물    │반려동물음용수    │                │                  │나트륨, 마그네    │「먹는물관리      ┃  

  ┃    │   음용수       │                  │                │                  │슘, 불소, 칼륨,   │법」의 수질기     ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │칼슘              │준을 충족하여     ┃  

  ┃    │                │                  │                │                  │                  │야 함             ┃  

  ┃    ├────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃    │마. 기타        │별표 1의 사료명   │조단백질        │수분              │                  │                  ┃  

  ┃    │                │칭                │                │조섬유, 조회분    │                  │                  ┃  

  ┠──┼────────┼─────────┼────────┼─────────┼─────────┼─────────┨  

  ┃5.  │가. 혼합제      │혼합성 단미사료   │각 단미사료에서 │각 단미사료에서   │각 단미사료에서   │원료명 및 혼합비  ┃  

  ┃혼  │                │                  │규정한 주요     │규정한 주요       │규정한 주요       │율 확인           ┃  

  ┃합  │                │                  │최소량 성분     │최대량 성분       │기타 성분         │원료명은 혼합한   ┃  

  ┃성  │                │                  │다만, 애완용 동 │(식물성 유지      │                  │사료의 명칭(예.   ┃  

  ┃    │                │                  │물의 간식용?영 │가 원료인 경      │                  │어분, 대두박 등)  ┃  

  ┃    │                │                  │양보충용은 주요 │우 협잡물         │                  │을 표시           ┃  

  ┃    │                │                  │원료 2가지에 해 │(MU) 중 불        │                  │각각의 단미사료   ┃  

  ┃    │                │                  │당하는 단미사료 │용성불순물,       │                  │는 혼합 전에 개   ┃  

  ┃    │                │                  │에서 규정한 최  │불검화물 제       │                  │별 단미사료의     ┃  

  ┃    │                │                  │소량 성분       │외)               │                  │기준 및 규격 등   ┃  

  ┃    │                │                  │                │다만, 애완용 동   │                  │(열처리, 수분 등) ┃  

  ┃    │                │                  │                │물의 간식용?영   │                  │을 충족하여야     ┃  

  ┃    │                │                  │                │양보충용은 주요   │                  │함                ┃  

  ┃    │                │                  │                │원료 2가지에 해   │                  │각 단미사료       ┃  

  ┃    │                │                  │                │당하는 단미사료   │                  │에서 규정한       ┃  

  ┃    │                │                  │                │에서 규정한 최    │                  │사항 표시         ┃  

  ┃    │                │                  │                │대량 성분         │                  │                  ┃  

  ┃    │                │                  ├────────┴─────────┴─────────┴─────────┨  

  ┃    │                │                  │애완용 동물사료의 경우 원료를 균질하게 혼합할 수 없는 제품의 경             ┃  

  ┃    │                │                  │우   성분등록은 하되 등록성분량 등록 및 제품 표시는 제외 가능.              ┃  

  ┃    │                │                  │다만, 2가지 이상의 원재료명과 그 함량(백분율 또는 중량)을 표시              ┃  

  ┗━━┷━━━━━━━━┷━━━━━━━━━┷━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┛  

별표 0012: 보조사료의 성분등록 사항(제9조제1항 관련)

  [별표 12]                                      

  보조사료의 성분등록 사항(제9조제1항 관련)                                                                               

  ┏━━━━━┯━━━━━━┯━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━┓  

  ┃구  분    │사료종류    │명  칭            │등록성분                                              │비고        ┃  

  ┃          │            │                  ├───────┬─────────┬─────────┤(확인사항)  ┃  

  ┃          │            │                  │최소량(%)     │최대량(%)         │기타              │            ┃  

  ┃          │            │                  │              │                  │(제10조 관련)     │            ┃  

  ┠─────┼──────┼─────────┼───────┼─────────┼─────────┼──────┨  

  ┃1.품질의  │가. 결착제  │별표 2의 사료명칭 │주요성분      │                  │                  │주요성분을  ┃  

  ┃저하를    │            │                  │또는 물질명   │                  │                  │표시할 수   ┃  

  ┃방지하    ├──────┼─────────┼───────┼─────────┼─────────┤없는 경우는 ┃  

  ┃기 위하   │나. 유화제  │별표 2의 사료명칭 │주요성분      │                  │                  │주요물질의  ┃  

  ┃여 사료   │            │                  │또는 물질명   │                  │                  │함량으로 표 ┃  

  ┃에 첨가   ├──────┼─────────┼───────┼─────────┼─────────┤시          ┃  

  ┃하는 것   │다. 보존제  │별표 2의 사료명칭 │주요성분      │                  │                  │        ┃  

  ┃          │            │                  │또는 물질명   │                  │                  │OOO추출     ┃  

  ┠─────┼──────┼─────────┼───────┼─────────┼─────────┤물%         ┃  

  ┃2.효용의  │가. 아미노산│별표 2의 사료명칭 │주요성분      │                  │                  │[최소량]    ┃  

  ┃증대를    │제          │                  │또는 물질명   │                  │                  │            ┃  

  ┃위하여    ├──────┼─────────┼───────┼─────────┼─────────┤합제의 경우 ┃  

  ┃사료에    │나. 비타민  │염화콜린          │염화콜린      │TMA(Trimet        │염화콜린 함량은   │는 주요 원  ┃  

  ┃첨가하    │제          │                  │              │hylamine)         │50%를 초과할 수   │료명과 혼합 ┃  

  ┃는 것     │            │                  │              │500ppm 이하       │없으며,수분함량은 │비율 확인,  ┃  

  ┃          │            │                  │              │                  │부형제가 식물성   │원료명은 혼 ┃  

  ┃          │            │                  │              │                  │물질이 포함된 경  │합한 사료의 ┃  

  ┃          │            │                  │              │                  │우 1.5% 이하, 실  │명칭(예. 비 ┃  

  ┃          │            │                  │              │                  │리카인 경우 14%   │타민A, 비타 ┃  

  ┃          │            │                  │              │                  │이하이어야 한다.  │민D, 비타민 ┃  

  ┃          │            ├─────────┼───────┼─────────┼─────────┤E 등)을 표  ┃  

  ┃          │            │기타 별표 2의 사  │주요성분      │                  │                  │시          ┃  

  ┃          │            │료명칭            │              │                  │                  │            ┃  

  ┃          ├──────┼─────────┼───────┼─────────┼─────────┤부형제의 명 ┃  

  ┃          │다. 효소제  │별표 2의 사료명칭 │주요성분      │                  │                  │칭  표시    ┃  

  ┃          │            │                  │또는 물질명   │                  │                  │            ┃  

  ┃          ├──────┼─────────┼───────┼─────────┼─────────┤            ┃  

  ┃          │라. 미생물  │유익균배양물      │주요성분      │                  │                  │미생물제는  ┃  

  ┃          │제          │효모배양물        │또는 물질명   │                  │                  │주요 균주명 ┃  

  ┃          │            ├─────────┼───────┼─────────┼─────────┤및 생균수   ┃  

  ┃          │            │기타 별표 2의 사  │주요성분      │                  │                  │최소량을 표 ┃  

  ┃          │            │료명칭            │또는 물질명   │                  │                  │시하되, 생  ┃  

  ┃          ├──────┼─────────┼───────┼─────────┼─────────┤균수는 106  ┃  

  ┃          │마. 향미제  │원당              │자당          │조회분            │                  │이상(유익균 ┃  

  ┃          │            ├─────────┼───────┼─────────┼─────────┤배양물 및   ┃  

  ┃          │            │별표 2의 사료명칭 │주요성분      │                  │                  │효모배양물  ┃  

  ┃          │            │                  │또는 물질명   │                  │                  │은 제외) 이 ┃  

  ┃          ├──────┼─────────┼───────┼─────────┼─────────┤어야 하며   ┃  

  ┃          │바. 비단백  │요소              │질소          │                  │요소의 질소함량   │미생물제 단 ┃  

  ┃          │태질소화합  │                  │              │                  │은 45% 이상이어   │위는 cfu/g, ┃  

  ┃          │물          │                  │              │                  │야 한다. 다만 코  │박테리오파  ┃  

  ┃          │            │                  │              │                  │팅제품의 경우 함  │지는 pfu/g  ┃  

  ┃          │            │                  │              │                  │량적용을 제외한   │으로 표시   ┃  

  ┃          │            │                  │              │                  │다.               │            ┃  

  ┃          │            ├─────────┼───────┼─────────┼─────────┤            ┃  

  ┃          │            │기타 별표 2의 사료│질소          │수분 12% 이하     │                  │            ┃  

  ┃          │            │명칭              │              │                  │                  │            ┃  

  ┃          ├──────┼─────────┼───────┼─────────┼─────────┤            ┃  

  ┃          │사. 규산염  │벤토나이트        │염기치환용    │수분 12% 이하     │Na벤토나이트의    │            ┃  

  ┃          │제          │제올라이트        │량(CEC)       │                  │경우는 팽윤도     │            ┃  

  ┃          │            │                  │80meq/100g    │                  │                  │            ┃  

  ┃          │            │                  │이상          │                  │                  │            ┃  

  ┃          │            ├─────────┼───────┼─────────┼─────────┤Na벤토나이  ┃  

  ┃          │            │기타 별표 2의 사  │염기치환용    │수분 12% 이하     │주요 광물질명 및  │트의 경우는 ┃  

  ┃          │            │료명칭            │량(CEC), 주   │                  │그 함량 확인      │팽윤도 표시 ┃  

  ┃          │            │                  │요성분        │                  │                  │(팽윤도는   ┃  

  ┃          ├──────┼─────────┼───────┼─────────┼─────────┤메스실린더  ┃  

  ┃          │아. 완충제  │별표 2의 사료명칭 │주요성분      │                  │                  │에 물100ml  ┃  

  ┃          │            │                  │또는 물질명   │                  │                  │와 시료2g을 ┃  

  ┃          ├──────┼─────────┼───────┼─────────┼─────────┤넣어 측정)  ┃  

  ┃          │자. 착색제  │천연착색제        │주요성분      │                  │                  │            ┃  

  ┃          │            │                  │또는 물질명   │                  │                  │규산염제는  ┃  

  ┃          │            ├─────────┼───────┼─────────┼─────────┤주요 광물   ┃  

  ┃          │            │별표 2의 사료명칭 │주요성분      │                  │                  │질명 표시   ┃  

  ┃          │            │                  │또는 물질명   │                  │                  │            ┃  

  ┃          ├──────┼─────────┼───────┼─────────┼─────────┤            ┃  

  ┃          │차. 추출제  │별표 2의 사료명칭 │주요성분      │                  │                  │            ┃  

  ┃          │            │                  │또는 물질명   │                  │                  │            ┃  

  ┃          ├──────┼─────────┼───────┼─────────┼─────────┤            ┃  

  ┃          │카. 올리고  │별표 2의 사료명칭 │주요성분      │수분              │                  │            ┃  

  ┃          │당          │                  │또는 물질명   │                  │                  │            ┃  

  ┃          ├──────┼─────────┼───────┼─────────┼─────────┤            ┃  

  ┃          │타. 기타    │비테인염산염(베타 │주요성분      │TMA               │                  │            ┃  

  ┃          │            │인염산염)         │또는 물질명   │(Trimethylamine)  │                  │            ┃  

  ┃          │            │                  │              │500ppm 이하       │                  │            ┃  

  ┃          │            ├─────────┼───────┼─────────┼─────────┤            ┃  

  ┃          │            │기타 별표 2의 사료│주요성분 또는 │                  │                  │            ┃  

  ┃          │            │명칭              │물질명        │                  │                  │            ┃  

  ┠─────┼──────┼─────────┼───────┼─────────┼─────────┼──────┨  

  ┃3. 제1    │가. 혼합제  │혼합성 보조사료   │각 보조사료   │각 보조사료에     │                  │혼합된 원   ┃  

  ┃호 및     │            │                  │에서 규정한   │서 규정한 주      │                  │료 및 혼합  ┃  

  ┃제2호     │            │                  │주요 최소량   │요 최대량 성      │                  │비율 확인   ┃  

  ┃의규정    │            │                  │성분. 다만,   │분                │                  │원료명은 혼 ┃  

  ┃에 의     │            │                  │보존제의 경   │                  │                  │합한 사료의 ┃  

  ┃한 사     │            │                  │우 주성분의   │                  │                  │명칭(예. 비 ┃  

  ┃료를      │            │                  │안정(부패 및  │                  │                  │타민A, L-메 ┃  

  ┃혼합한    │            │                  │변질 방지     │                  │                  │치오닌 등)  ┃  

  ┃것        │            │                  │등)을 위해    │                  │                  │을 표시     ┃  

  ┃          │            │                  │최소한의 항   │                  │                  │각각의 보조 ┃  

  ┃          │            │                  │산화제 등을   │                  │                  │사료는 혼합 ┃  

  ┃          │            │                  │사용하는 경   │                  │                  │전에 개별 보┃  

  ┃          │            │                  │우에는 등록   │                  │                  │조사료의 기 ┃  

  ┃          │            │                  │에서 제외     │                  │                  │준 및 규격  ┃  

  ┃          │            │                  │가능          │                  │                  │등을 충족하 ┃  

  ┃          │            │                  │              │                  │                  │여야 하며,  ┃  

  ┃          │            │                  │              │                  │                  │각 보조사료 ┃  

  ┃          │            │                  │              │                  │                  │에서 규정한 ┃  

  ┃          │            │                  │              │                  │                  │표시사항 표 ┃  

  ┃          │            │                  │              │                  │                  │시          ┃  

  ┗━━━━━┷━━━━━━┷━━━━━━━━━┷━━━━━━━┷━━━━━━━━━┷━━━━━━━━━┷━━━━━━┛  

별표 0013: 배합사료의 성분등록 사항(제9조제1항 관련)

  [별표 13] <신설 2014.12.8., 개정 2015.8.21., 개정 2016.7.1., 개정 2016.12.01., 개정 2021.12.29., 개정               

  2021.12.29., 개정 2022.3.11., 개정 2023.10.04.>                                                                     

  배합사료의 성분등록 사항(제9조제1항 관련)                                                                           

  1. 양축용 배합사료                                                                                                  

  ┏━━━━┯━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━┯━━━━┓    

  ┃축종    │명 칭               │사용범위 및 용도            │등 록 성 분                         │비고    ┃    

  ┃        │                    │(참고사항)                  ├──────┬────┬──────┤(확인   ┃    

  ┃        │                    │                            │최소량      │최대량  │기타        │사항)   ┃    

  ┃        │                    │                            │(%)         │(%)     │(제10조     │        ┃    

  ┃        │                    │                            │            │        │관련)       │        ┃    

  ┠────┼──────────┼──────────────┼──────┼────┼──────┼────┨    

  ┃가.     │어린송아지          │생후 3개월령 이전           │조지방      │조회분  │가소화영양소│        ┃    

  ┃고기소  │육성우              │3개월령~12개월령 또는 250㎏ │칼슘        │조섬유  │총량(TDN)   │        ┃    

  ┃        │번식우              │6개월령 이상 번식용 암소    │            │인      │계산치      │        ┃    

  ┃        ├──────────┼──────────────┤            │        │            │        ┃    

  ┃        │종모우              │13개월령 이후 수소          │            │        │            │        ┃    

  ┃        │임신우              │13개월령~분만               │            │        │            │        ┃    

  ┃        │포유우              │분만~분만 후 3개월          │            │        │            │        ┃    

  ┃        ├──────────┼──────────────┤            │        │            │        ┃    

  ┃        │큰소전기            │체중 250~500㎏              │            │        │            │        ┃    

  ┃        │큰소후기            │체중 500㎏ 이상             │            │        │            │        ┃    

  ┠────┼──────────┼──────────────┤            │        │            │        ┃    

  ┃나.     │젖소어린송아지      │생후 3개월령 이전           │            │        │            │        ┃    

  ┃젖소    │젖소중송아지        │3개월령～6개월령            │            │        │            │        ┃    

  ┃        │젖소큰송아지        │6개월령～임신 이전          │            │        │            │        ┃    

  ┃        │젖소임신우          │임신～분만 2개월령          │            │        │            │        ┃    

  ┃        │젖소종모우          │13개월령 이후의 수소        │            │        │            │        ┃    

  ┃        ├──────────┼──────────────┤            │        │            │        ┃    

  ┃        │비유초기            │분만이후～비유 3개월령      │            │        │            │        ┃    

  ┃        │                    │(산유량 31～40㎏)           │            │        │            │        ┃    

  ┃        │비유중기            │비유 3개월령～6개월령       │            │        │            │        ┃    

  ┃        │                    │(산유량 21～30㎏)           │            │        │            │        ┃    

  ┃        │비유말기            │비유 6개월령～건유기 이전   │            │        │            │        ┃    

  ┃        │                    │(산유량 11～20㎏)           │            │        │            │        ┃    

  ┃        │건유기              │건유기(산유량 10㎏이하)     │            │        │            │        ┃    

  ┃        │고능력우            │산유량 40㎏이상             │            │        │            │        ┃    

  ┠────┼──────────┼──────────────┼──────┼────┼──────┼────┨    

  ┃다.     │포유자돈            │∼이유 초기                 │조지방      │조회분  │가소화에너지│        ┃    

  ┃돼지    │이유돈              │이유 초기~25㎏              │칼슘        │조섬유  │(DE)        │        ┃    

  ┃        │육성돈              │25~65㎏                     │라이신      │인      │            │        ┃    

  ┃        │비육돈              │65㎏~출하                   │            │        │            │        ┃    

  ┃        │번식용모돈          │25㎏이상                    │            │        │            │        ┃    

  ┃        │임신돈              │임신중                      │            │        │            │        ┃    

  ┃        │포유돈              │포유중                      │            │        │            │        ┃    

  ┠────┼──────────┼──────────────┼──────┼────┼──────┼────┨    

  ┃라.     │산란용어린병아리    │6주령 이전                  │조지방      │조회분  │대사에너지  │        ┃    

  ┃닭      │산란용중병아리      │6~12주령                    │칼슘        │조섬유  │(MEn)       │        ┃    

  ┃        │산란용큰병아리      │12주령~산란개시 2주전       │메치오닌 +  │인      │계산치      │        ┃    

  ┃        │산란전              │산란개시 2주전~산란개시     │시스틴      │        │(메치오닌수 │        ┃    

  ┃        │산란초기            │산란개시~40주령             │            │        │산화유도체  │        ┃    

  ┃        │산란중기            │40~65주령                   │            │        │(MHA)를 첨  │        ┃    

  ┃        │산란말기            │65주령 이후                 │            │        │가한 경우에 │        ┃    

  ┃        │산란종계            │산란종계                    │            │        │는 첨가사실 │        ┃    

  ┃        ├──────────┼──────────────┤            │        │표기)       │        ┃    

  ┃        │육용어린병아리      │3주령 이전                  │            │        │            │        ┃    

  ┃        │육용중병아리        │3주령~산란개시이전          │            │        │            │        ┃    

  ┃        │육용종계            │육용종계                    │            │        │            │        ┃    

  ┃        │육계초기            │1주령 이전                  │            │        │            │        ┃    

  ┃        │육계전기            │1~3주령                     │            │        │            │        ┃    

  ┃        │육계후기            │3주령~출하                  │            │        │            │        ┃    

  ┠────┼──────────┼──────────────┼──────┼────┼──────┼────┨    

  ┃마.     │육용오리전기        │3주령 이전                  │조지방      │조회분  │대사에너지  │        ┃    

  ┃오리    │육용오리후기        │3주령～출하                 │칼슘        │조섬유  │(MEn)       │        ┃    

  ┃        │종오리용어린오리    │3주령 이전                  │메치오닌    │인      │계산치      │        ┃    

  ┃        │종오리용육성오리    │3주령～산란 개시            │+시스틴     │        │(메치오닌수 │        ┃    

  ┃        │종오리용산란오리    │산란개시～                  │            │        │산화유도체  │        ┃    

  ┃        │                    │                            │            │        │(MHA)를 첨  │        ┃    

  ┃        │                    │                            │            │        │가한 경우에 │        ┃    

  ┃        │                    │                            │            │        │는 첨가사실 │        ┃    

  ┃        │                    │                            │            │        │표기)       │        ┃    

  ┠────┼──────────┼──────────────┼──────┼────┼──────┼────┨    

  ┃바.     │어린개              │제조업자가 정하는 바에 의함 │조단백질    │조회분  │            │        ┃    

  ┃개      │육성개              │                            │조지방      │조섬유  │            │        ┃    

  ┃        │큰개                │                            │칼슘        │인      │            │        ┃    

  ┠────┼──────────┤                            │            │        │            │        ┃    

  ┃사.     │어린꿩              │                            │            │        │            │        ┃    

  ┃꿩      │육성꿩              │                            │            │        │            │        ┃    

  ┃        │큰꿩                │                            │            │        │            │        ┃    

  ┠────┼──────────┤                            │            │        │            │        ┃    

  ┃아.     │어린말              │                            │            │        │            │        ┃    

  ┃말      │육성말              │                            │            │        │            │        ┃    

  ┃        │큰말                │                            │            │        │            │        ┃    

  ┠────┼──────────┤                            │            │        │            │        ┃    

  ┃자.     │어린메추리          │                            │            │        │            │        ┃    

  ┃메추리  │육성메추리          │                            │            │        │            │        ┃    

  ┃        │큰메추리            │                            │            │        │            │        ┃    

  ┃        │산란메추리          │                            │            │        │            │        ┃    

  ┠────┼──────────┤                            │            │        │            │        ┃    

  ┃차.     │어린사슴            │                            │            │        │            │        ┃    

  ┃사슴    │육성사슴            │                            │            │        │            │        ┃    

  ┃        │큰사슴              │                            │            │        │            │        ┃    

  ┠────┼──────────┤                            │            │        │            │        ┃    

  ┃카.     │어린면양            │                            │            │        │            │        ┃    

  ┃양      │육성면양            │                            │            │        │            │        ┃    

  ┃        │큰면양              │                            │            │        │            │        ┃    

  ┃        │어린염소(산양)      │                            │            │        │            │        ┃    

  ┃        │육성염소(산양)      │                            │            │        │            │        ┃    

  ┃        │큰염소(산양)        │                            │            │        │            │        ┃    

  ┠────┼──────────┤                            │            │        │            │        ┃    

  ┃타.     │어린오소리          │                            │            │        │            │        ┃    

  ┃오소리  │육성오소리          │                            │            │        │            │        ┃    

  ┃        │큰오소리            │                            │            │        │            │        ┃    

  ┠────┼──────────┤                            │            │        │            │        ┃    

  ┃파.     │어린칠면조          │                            │            │        │            │        ┃    

  ┃칠면조  │육성칠면조          │                            │            │        │            │        ┃    

  ┃        │큰칠면조            │                            │            │        │            │        ┃    

  ┠────┼──────────┤                            │            │        │            │        ┃    

  ┃하.     │어린타조            │                            │            │        │            │        ┃    

  ┃타조    │육성타조            │                            │            │        │            │        ┃    

  ┃        │큰타조              │                            │            │        │            │        ┃    

  ┃        │산란타조            │                            │            │        │            │        ┃    

  ┠────┼──────────┤                            │            │        │            │        ┃    

  ┃거.     │어린토끼            │                            │            │        │            │        ┃    

  ┃토끼    │육성토끼            │                            │            │        │            │        ┃    

  ┃        │큰토끼              │                            │            │        │            │        ┃    

  ┠────┼──────────┤                            │            │        │            │        ┃    

  ┃너.     │어린거위            │                            │            │        │            │        ┃    

  ┃거위    │육성거위            │                            │            │        │            │        ┃    

  ┃        │큰거위              │                            │            │        │            │        ┃    

  ┃        │산란거위            │                            │            │        │            │        ┃    

  ┠────┼──────────┤                            │            │        │            │        ┃    

  ┃더.     │어린노새            │                            │            │        │            │        ┃    

  ┃노새    │육성노새            │                            │            │        │            │        ┃    

  ┃        │큰노새              │                            │            │        │            │        ┃    

  ┠────┼──────────┤                            │            │        │            │        ┃    

  ┃러.     │어린당나귀          │                            │            │        │            │        ┃    

  ┃당나귀  │육성당나귀          │                            │            │        │            │        ┃    

  ┃        │큰당나귀            │                            │            │        │            │        ┃    

  ┠────┼──────────┼──────────────┼──────┼────┼──────┼────┨    

  ┃머.     │꿀벌                │제조업자가 정하는 바에 의함 │조단백질    │조회분  │            │수분적용┃    

  ┃꿀벌    │                    │                            │조지방      │조섬유  │            │제외    ┃    

  ┃        │                    │                            │칼슘        │인      │            │        ┃    

  ┠────┼──────────┼──────────────┼──────┼────┼──────┼────┨    

  ┃버.     │지렁이              │제조업자가 정하는 바에 의함 │조단백질    │조회분  │            │수분적용┃    

  ┃지렁이  │                    │                            │조지방      │조섬유  │            │제외    ┃    

  ┃        │                    │                            │칼슘        │인      │            │        ┃    

  ┠────┼──────────┼──────────────┼──────┼────┼──────┼────┨    

  ┃버의2.  │「가축으로 정하는   │제조업자가 정하는 바에 의함 │조단백질    │조회분  │            │수분적용┃    

  ┃곤충    │기타 동물」(농림축산│                            │조지방      │조섬유  │            │제외    ┃    

  ┃        │식품부 고시) 제3호  │                            │칼슘        │인      │            │        ┃    

  ┃        │에서 정하는 곤충명  │                            │            │        │            │        ┃    

  ┠────┼──────────┼──────────────┼──────┼────┼──────┼────┨    

  ┃서.     │농가 자가배합사료   │제조업자가 정하는 바에 의함 │조단백질    │조회분  │            │수분적용┃    

  ┃배합    │원료                │                            │조지방      │조섬유  │            │제외    ┃    

  ┃사료    ├──────────┼──────────────┼──────┼────┼──────┼────┨    

  ┃원료    │기초배합사료        │제조업자가 정하는 바에 의함 │주요성분    │조회분  │            │수분적용┃    

  ┃        │                    │                            │또는 물질명 │조섬유  │            │제외,   ┃    

  ┃        │                    │                            │            │        │            │혼합된  ┃    

  ┃        │                    │                            │            │        │            │원료명  ┃    

  ┃        │                    │                            │            │        │            │및 비율 ┃    

  ┠────┼──────────┼──────────────┼──────┼────┼──────┼────┨    

  ┃어.     │광물성배합사료      │제조업자가 정하는 바에 의함 │주요성분    │수분    │            │혼합된  ┃    

  ┃특수    │(미네랄블럭)        │                            │또는 물질명 │        │            │원료명  ┃    

  ┃배합    │                    │                            │            │        │            │및 비율 ┃    

  ┃사료    ├──────────┼──────────────┼──────┼────┼──────┼────┨    

  ┃        │양축용 영양보충제   │제조업자가 정하는 바에 의함 │주요성분    │수분    │            │        ┃    

  ┃        │양축용 건강보조제   │                            │또는 물질명 │        │            │        ┃    

  ┗━━━━┷━━━━━━━━━━┷━━━━━━━━━━━━━━┷━━━━━━┷━━━━┷━━━━━━┷━━━━┛    

  2. 프리믹스용 배합사료                                                                                              

  ┏━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━┓            

  ┃명 칭         │사용범위 및 용도                  │등 록 성 분                 │비고              ┃            

  ┃              │(참고사항)                        ├─────┬─────┬──┤(확인사항)        ┃            

  ┃              │                                  │최소량(%) │최대량(%) │기타│                  ┃            

  ┠───────┼─────────────────┼─────┼─────┼──┼─────────┨            

  ┃가. 축종별로  │ 양축용 배합사료의 사용범위와 같음│주요성분  │          │    │혼합된 원료 및    ┃            

  ┃구분          │                                  │          │          │    │혼합비율          ┃            

  ┃              │                                  │          │          │    │원료명은 혼합한   ┃            

  ┃              │                                  │          │          │    │사료의 명칭(예. 비┃            

  ┃              │                                  │          │          │    │타민A, L-메치오닌 ┃            

  ┃              │                                  │          │          │    │등)을 표시        ┃            

  ┗━━━━━━━┷━━━━━━━━━━━━━━━━━┷━━━━━┷━━━━━┷━━┷━━━━━━━━━┛            

  3. 대용유용 배합사료                                                                                                

  ┏━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┓              

  ┃명 칭           │등 록 성 분                   │비고                                            ┃              

  ┃                ├──────┬─────┬──┤(확인사항)                                      ┃              

  ┃                │최소량(%)   │최대량(%) │기타│                                                ┃              

  ┠────────┼──────┼─────┼──┼────────────────────────┨              

  ┃가. 축우용대용유│조단백질    │조섬유    │    │1) 분유(전지 또는 탈지분유) 및 유장분말, 유당,  ┃              

  ┃                │조지방      │조회분    │    │유조제품을 40% 이상 배합하여야 함.              ┃              

  ┃                │칼슘        │인        │    │2)비타민제(A와 D3복합체)와 건강보조제를 혼합    ┃              

  ┃                │비타민A(IU) │          │    │한 경우 등록성분 등록을 제외할 수 있으나 포     ┃              

  ┃                │            │          │    │장재나 용기 등에 등록성분에 대한 표시는 하      ┃              

  ┃                │            │          │    │여야 함                                         ┃              

  ┃                │            │          │    │3) 사용방법 및 주의사항                         ┃              

  ┃                │            │          │    │* 건강보조제 : 어린동물의 건전한 성장 및 발달과 ┃              

  ┃                │            │          │    │건강한 활동을 유지할 수 있는 각종 영양소 공     ┃              

  ┃                │            │          │    │급물질(Lecithin Powder, Whey Protein            ┃              

  ┃                │            │          │    │Concentrate, Prime Corn, Calcium Propionate,    ┃              

  ┃                │            │          │    │Multi Orgnic Acid, Butter Flavor, Vegetable     ┃              

  ┃                │            │          │    │Fat Powder 등)                                  ┃              

  ┠────────┼──────┼─────┼──┼────────────────────────┨              

  ┃나. 양돈용대용유│조단백질    │조섬유    │    │1) 분유(전지 또는 탈지분유) 및 유장분말, 유당,  ┃              

  ┃                │조지방      │조회분    │    │유조제품을 30% 이상 배합하여야 함.              ┃              

  ┃                │칼슘        │인        │    │2)비타민제(A와 D3복합체)와 건강보조제를 혼합    ┃              

  ┃                │비타민A(IU) │          │    │한 경우 등록성분 등록을 제외할 수 있으나 포     ┃              

  ┃                │            │          │    │장재나 용기 등에 등록성분에 대한 표시는 하      ┃              

  ┃                │            │          │    │여야 함                                         ┃              

  ┃                │            │          │    │3) 사용방법 및 주의사항                         ┃              

  ┠────────┼──────┼─────┼──┼────────────────────────┨              

  ┃다. 주문용대용유│조단백질    │조섬유    │    │1) 분유(전지 또는 탈지분유) 및 유장분말, 유당,  ┃              

  ┃                │조지방      │조회분    │    │유조제품을 10% 이상 배합하여야 함.              ┃              

  ┃                │칼슘        │인        │    │2)비타민제(A와 D3복합체)와 건강보조제를 혼합    ┃              

  ┃                │비타민A(IU) │          │    │한 경우 등록성분 등록을 제외할 수 있으나 포     ┃              

  ┃                │            │          │    │장재나 용기 등에 등록성분에 대한 표시는 하      ┃              

  ┃                │            │          │    │여야 함                                         ┃              

  ┃                │            │          │    │3) 사용방법 및 주의사항                         ┃              

  ┃                │            │          │    │※ 양축용 이외의 대용유는 그 밖의 동물ㆍ어류    ┃              

  ┃                │            │          │    │용 배합사료 또는 단미사료(낙농가공부산물류      ┃              

  ┃                │            │          │    │또는 혼합성단미사료 등)로 분류                  ┃              

  ┗━━━━━━━━┷━━━━━━┷━━━━━┷━━┷━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┛              

  4. 섬유질 배합사료                                                                                                  

  ┏━━━━┯━━━━━━━┯━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━┓      

  ┃축종    │명칭          │사용범위 및         │등 록 성 분                 │비고                        ┃      

  ┃        │              │용도                ├─────┬─────┬──┤(확인사항)                  ┃      

  ┃        │              │                    │최소량(%) │최대량(%) │기타│                            ┃      

  ┠────┼───────┼──────────┼─────┼─────┼──┼──────────────┨      

  ┃가.     │어린송아지    │생후~6개월령        │조섬유    │수분      │    │1) 조섬유 함량은 건물기     ┃      

  ┃고기소  │육성우        │7개월령~13개월령    │ADF       │조회분    │    │준 15% 이상이어야 한        ┃      

  ┃        │              │또는 250kg          │NDF       │          │    │다, 다만, 큰소전기 및       ┃      

  ┃        │큰소전기      │체중 250~500㎏      │          │          │    │큰소후기의 경우 10%         ┃      

  ┃        │큰소후기      │체중 500㎏ 이상     │          │          │    │이상으로 한다.              ┃      

  ┃        │번식우        │6개월령 이상 번식용 │          │          │    │2) 원료명은 섬유질류, 곡    ┃      

  ┃        │              │암소                │          │          │    │류, 박류, 강피류, 식품      ┃      

  ┠────┼───────┼──────────┼─────┼─────┼──┤가공부산물류, 기타원료      ┃      

  ┃나.     │젖소어린송아지│생후 3개월령 이전   │조섬유    │수분      │    │로 분류하여 표시하여        ┃      

  ┃젖소    │젖소큰송아지  │3개월령~임신이전    │ADF       │조회분    │    │야 한다.                    ┃      

  ┃        │비유기        │분만이후~건유기     │NDF       │          │    │3) 용어설명                 ┃      

  ┃        │              │이전                │          │          │    │ (가) ADF(Acid detergent    ┃      

  ┃        │건유기        │건유기              │          │          │    │fiber): 산성세제 불용       ┃      

  ┠────┼───────┴──────────┼─────┼─────┼──┤성 섬유                     ┃      

  ┃나의2.  │양축용 배합사료의 명칭에 준하여 성  │조단백질  │수분      │    │ (나) NDF(Neutral detergent ┃      

  ┃말      │장단계별로 제조업자가 정함          │조섬유    │조회분    │    │fiber): 중성세제 불용성     ┃      

  ┃        │                                    │ADF       │          │    │섬유                        ┃      

  ┃        │                                    │NDF       │          │    │                            ┃      

  ┠────┼──────────────────┼─────┼─────┼──┤                            ┃      

  ┃다.     │양축용 배합사료의 명칭에 준하여     │조단백질  │수분      │    │                            ┃      

  ┃기타    │성장단계별로 제조업자가 정함        │조섬유    │조회분    │    │                            ┃      

  ┃반추    │                                    │ADF       │          │    │                            ┃      

  ┃동물    │                                    │NDF       │          │    │                            ┃      

  ┗━━━━┷━━━━━━━━━━━━━━━━━━┷━━━━━┷━━━━━┷━━┷━━━━━━━━━━━━━━┛      

  5. 그 밖의 동물ㆍ어류용 배합사료                                                                                    

  ┏━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━┓    

  ┃구   분 │명칭ㆍ사용범위ㆍ용도            │등 록 성 분                     │비고                          ┃    

  ┃        │                                ├─────┬───────┬──┤(확인사항)                    ┃    

  ┃        │                                │최소량(%) │최대량(%)     │기타│                              ┃    

  ┠────┼────────────────┼─────┼───────┼──┼───────────────┨    

  ┃가.     │실험용동물별 사료명칭 및 사     │조단백질  │조섬유        │    │* 사료공정(사용원료, 제       ┃    

  ┃실험용  │용범위는 제3조의 규정에 의한    │조지방    │조회분        │    │조공정, 수분함량 등)을        ┃    

  ┃동물    │동물명에 의거 성장단계별로      │칼슘      │인            │    │달리하여 성분등록 및          ┃    

  ┃        │구분하여 제조업자가 정함        │          │수분 14% 이하 │    │제조를 할 수 있으며, 이       ┃    

  ┃        │                                │          │              │    │경우 그 사유 및 관련자        ┃    

  ┃        │                                │          │              │    │료를 시ㆍ도지사에게 제        ┃    

  ┃        │                                │          │              │    │출하여야 하고, 반드시         ┃    

  ┃        │                                │          │              │    │포장재 및 용기 등에 관        ┃    

  ┃        │                                │          │              │    │련 사항을 표시하여야          ┃    

  ┃        │                                │          │              │    │한다.                         ┃    

  ┠────┼────────────────┼─────┼───────┼──┼───────────────┨    

  ┃나.     │동물별 사료명칭 및 사용범위     │조단백질  │조섬유        │    │* 수분함량 기준을 초과        ┃    

  ┃애완용  │는 제3조의 규정에 의한 동물     │조지방    │조회분        │    │하여 성분등록을 하는          ┃    

  ┃동물    │명에 의거 성장단계별로 구분     │칼슘      │수분 14% 이하 │    │경우에는 그 사유 및 관        ┃    

  ┃        │하여 제조업자가 정하며, 품종·  │인        │              │    │련자료를 시ㆍ 도지사에        ┃    

  ┃        │체중·목적(주식·간식)으로 세분 │          │              │    │게 제출하여야 하며, 별        ┃    

  ┃        │할 수 있음                      │          │              │    │표 10의2의 기준을 충족        ┃    

  ┃        │                                │          │              │    │하여야 한다.                  ┃    

  ┃        │                                ├─────┴───────┴──┴───────────────┨    

  ┃        │                                │원료를 균질하게 배합할 수 없는 제품의 경우 성분등록은 하되 등록 ┃    

  ┃        │                                │성분량 등록 및 제품 표시는 제외 가능. 다만, 5가지 이상의 원재료 ┃    

  ┃        │                                │명과 그 함량(백분율 또는 중량)을 표시                           ┃    

  ┠────┼────────────────┼─────┬───────┬──┬───────────────┨    

  ┃다.     │동물별 사료명칭 및 사용범위     │조단백질  │조섬유        │    │* 수분함량 기준을 초과        ┃    

  ┃사육하는│는 제3조의 규정에 의한 동물     │조지방    │조회분        │    │하여 성분등록을 하는          ┃    

  ┃동물    │명에 의거 성장단계별로 구분     │칼슘      │인            │    │경우에는 그 사유 및 관        ┃    

  ┃        │하여 제조업자가 정함            │          │수분 14% 이하 │    │련자료를 시ㆍ 도지사에        ┃    

  ┃        │                                │          │              │    │게 제출하여야 하며, 별        ┃    

  ┃        │                                │          │              │    │표 10의2의 기준을 충족        ┃    

  ┃        │                                │          │              │    │하여야 한다.                  ┃    

  ┠────┼────────────────┼─────┼───────┼──┼───────────────┨    

  ┃라.     │어종별 사료명칭 및 사용범위     │조단백질  │조섬유        │    │* 다만, 반건조배합사료        ┃    

  ┃수산동물│는 어종별 및 성장단계별 등으    │조지방    │조회분        │    │의 수분함량은 25%까지         ┃    

  ┃        │로 구분하여 제조업자가 정함     │칼슘      │인            │    │가능(양식용 수산동물용에      ┃    

  ┃        │                                │          │수분 14% 이하 │    │한함)                         ┃    

  ┃        │                                │          │              │    │* 양식용 수산동물용은         ┃    

  ┃        │                                │          │              │    │동ㆍ식물성단백질류, 곡        ┃    

  ┃        │                                │          │              │    │류, 유지류 등을 분류하        ┃    

  ┃        │                                │          │              │    │여 표시한다.(별표 15의        ┃    

  ┃        │                                │          │              │    │세부기준 참고)                ┃    

  ┗━━━━┷━━━━━━━━━━━━━━━━┷━━━━━┷━━━━━━━┷━━┷━━━━━━━━━━━━━━━┛    

  6.  (별표 13의2로 이동)                                                                            

  6의2. 등록성분의 등록 및 표시는 당해 성분의 배합(또는 혼합)비 설계치 또는 분석치가 별표13의2 및 별표                

  15 제2호 머목의 오차허용범위 이내이어야 한다.                                                                       

  7. 사료의 에너지가 평가기준 및 방법(제13조제1항 관련)                                                               

   가. 사료의 에너지가 평가기준표                                                                                     

  ┏━━━━━━━━━┯━━┯━━━┯━━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━┓      

  ┃원 료 명          │축종│DM    │에너지가 (원물중)         │소 화 율 (%)              │비  고          ┃      

  ┃                  │    │(%)   ├────┬───┬────┼──┬───┬──┬───┤                ┃      

  ┃                  │    │      │MEn     │대사율│DE      │조단│조지방│NFE │조섬유│                ┃      

  ┃                  │    │      │(M㎈/㎏)│(%)   │(M㎈/㎏)│백질│      │    │      │                ┃      

  ┠─────────┴──┴───┴────┴───┴────┴──┴───┴──┴───┴────────┨      

  ┃ 1) 식물성 원료(곡류, 서류, 콩류, 종실류 및 전분질을 주성분으로 한 것을 말함)                             ┃      

  ┠─────────┬──┬───┬────┬───┬────┬──┬───┬──┬───┬────────┨      

  ┃곡물정선부산      │닭  │88.7  │2.16    │51.0  │-       │75  │70    │53  │ 0    │                ┃      

  ┃물류(GSP)         │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│88.7  │-       │-     │2.13    │64  │66    │58  │12    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │88.7  │-       │-     │-       │73  │78    │71  │41    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃곡물정선부산      │닭  │88.5  │2.82    │-     │-       │-   │-     │-   │-     │                ┃      

  ┃물류              │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃(소맥쇄)          │돼지│88.5  │-       │-     │2.75    │-   │-     │-   │-     │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │88.5  │-       │-     │-       │-   │-     │-   │-     │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃귀리              │닭  │88.0  │2.54    │-     │-       │73  │82    │81  │13    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│88.0  │-       │-     │2.76    │76  │81    │82  │26    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │88.0  │-       │-     │-       │78  │87    │81  │42    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃귀리              │닭  │90.1  │-       │-     │-       │73  │82    │81  │13    │                ┃      

  ┃(야생)            │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│90.1  │-       │-     │-       │76  │81    │82  │26    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │90.1  │-       │-     │-       │78  │87    │81  │42    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃루핀              │닭  │90.0  │2.05    │-     │-       │95  │58    │34  │ 0    │Sweet           ┃      

  ┃(종실)            │    │      │        │      │        │    │      │    │      │Lupin           ┃      

  ┃                  │돼지│90.0  │-       │-     │3.44    │90  │90    │90  │42    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │90.0  │-       │-     │-       │90  │84    │93  │82    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃루핀              │닭  │90.0  │2.39    │-     │-       │92  │66    │34  │0     │Sweet           ┃      

  ┃(종실-탈피)       │    │      │        │      │        │    │      │    │      │Lupin           ┃      

  ┃                  │돼지│90.0  │-       │-     │3.75    │90  │85    │90  │47    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │90.0  │-       │-     │-       │87  │85    │92  │87    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃면실              │닭  │-     │-       │-     │-       │-   │-     │-   │-     │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│91.7  │-       │-     │-       │48  │42    │25  │36    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │91.7  │-       │-     │-       │81  │97    │54  │48    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃밀                │닭  │86.5  │3.10    │-     │-       │82  │79    │84  │ 9    │                ┃      

  ┃(소맥)            │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│86.5  │-       │-     │3.34    │87  │73    │93  │30    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │86.5  │-       │-     │-       │84  │81    │91  │47    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃밀가루            │닭  │86.7  │2.98    │73.3  │-       │82  │79    │84  │ 9    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│86.7  │-       │-     │3.34    │94  │93    │98  │30    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │86.7  │-       │-     │-       │92  │87    │99  │50    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃보리              │닭  │88.2  │2.73    │-     │-       │75  │78    │81  │10    │                ┃      

  ┃(대맥)            │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│88.2  │-       │-     │3.10    │76  │63    │85  │20    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │88.2  │-       │-     │-       │72  │82    │89  │32    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃수수              │닭  │87.0  │3.20    │  83.2│-       │78  │73    │90  │ 8    │탄닌함량        ┃      

  ┃(저탄닌)          │    │      │        │      │        │    │      │    │      │0.5% 이하       ┃      

  ┃                  │돼지│87.0  │-       │-     │3.32    │74  │75    │95  │59    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │87.0  │-       │-     │-       │78  │77    │91  │58    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃수수              │닭  │87.0  │2.84    │-     │-       │51  │-     │-   │-     │탄닌함량        ┃      

  ┃(고탄닌)          │    │      │        │      │        │    │      │    │      │0.5% 이상       ┃      

  ┃                  │돼지│87.0  │-       │-     │3.06    │68  │-     │-   │-     │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │87.0  │-       │-     │-       │66  │-     │-   │-     │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃아마인            │닭  │91.0  │4.35    │-     │-       │70  │94    │24  │0     │                ┃      

  ┃(아마종실)        │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│91.0  │-       │-     │4.51    │66  │85    │80  │20    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │91.0  │-       │-     │-       │80  │84    │72  │50    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃옥수수            │닭  │86.0  │3.25    │83.8  │-       │85  │94    │88  │ 0    │건열처리품은 D  ┃      

  ┃                  ├──┼───┤        │      │        │    │      │    │      │M 90%로 환산    ┃      

  ┃                  │돼지│86.0  │-       │-     │3.40    │76  │84    │93  │45    │할 것           ┃      

  ┃                  ├──┼───┤        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │86.0  │-       │-     │-       │78  │88    │91  │50    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┤                ┃      

  ┃옥수수            │닭  │86.0  │3.41    │-     │-       │-   │-     │-   │-     ├────────┨      

  ┃(고지방)          ├──┼───┤        │      │        │    │      │    │      │고지방은 high   ┃      

  ┃                  │돼지│86.0  │-       │-     │3.56    │-   │-     │-   │-     │oil corn임      ┃      

  ┃                  ├──┼───┤        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │86.0  │-       │-     │-       │-   │-     │-   │-     │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃유채종실          │닭  │90.0  │4.63    │-     │-       │76  │90    │32  │0     │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│90.0  │-       │-     │5.00    │73  │85    │75  │75    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │90.0  │-       │-     │-       │75  │94    │73  │25    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃제과부산물        │닭  │92.2  │-       │-     │-       │81  │96    │90  │0     │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│92.2  │-       │-     │4.59    │83  │96    │95  │85    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │92.2  │-       │-     │-       │83  │96    │95  │50    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃제빵부산물        │닭  │90.0  │3.78    │-     │-       │80  │82    │91  │0     │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│90.0  │-       │-     │3.93    │93  │89    │97  │54    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │90.0  │-       │-     │-       │92  │87    │99  │50    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃콩류              │닭  │88.5  │3.42    │66.3  │-       │85  │87    │60  │13    │증기로 쪄서     ┃      

  ┃(대두-압편)       │    │      │        │      │        │    │      │    │      │압편한 것임     ┃      

  ┃                  │돼지│88.5  │-       │-     │4.20    │92  │90    │89  │57    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │88.5  │-       │-     │-       │92  │84    │94  │74    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃콩류              │닭  │93.0  │3.59    │-     │-       │85  │90    │90  │40    │                ┃      

  ┃(익스투르더       │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃처리 대두)        │돼지│93.0  │-       │-     │4.44    │92  │85    │95  │35    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │93.0  │-       │-     │-       │87  │94    │80  │63    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃콩류              │닭  │88.7  │3.39    │66.0  │-       │85  │87    │60  │13    │전지대두를      ┃      

  ┃(대두종실)        │    │      │        │      │        │    │      │    │      │말함            ┃      

  ┃                  │돼지│88.7  │-       │-     │3.78    │84  │80    │80  │57    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │88.7  │-       │-     │-       │89  │88    │82  │50    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃타피오카          │닭  │87.4  │2.93    │-     │-       │22  │89    │89  │20    │                ┃      

  ┃(매니옥)          │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│87.4  │-       │-     │3.38    │68  │23    │99  │76    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │87.4  │-       │-     │-       │50  │50    │89  │50    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃호밀              │닭  │87.3  │2.66    │-     │-       │67  │68    │80  │10    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│87.3  │-       │-     │3.27    │85  │38    │93  │38    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │87.3  │-       │-     │-       │79  │53    │90  │45    │                ┃      

  ┠─────────┴──┴───┴────┴───┴────┴──┴───┴──┴───┴────────┨      

  ┃ 2) 강피류 (강류 또는 피류로서 전분제조 부산물 또는 발효공업 부산물을 말함)                               ┃      

  ┠─────────┬──┬───┬────┬───┬────┬──┬───┬──┬───┬────────┨      

  ┃루핀피            │닭  │88.1  │0.93    │-     │-       │-   │-     │-   │-     │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│88.1  │-       │-     │2.46    │41  │13    │76  │60    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │88.1  │-       │-     │-       │90  │89    │86  │85    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃말분              │닭  │88.1  │2.86    │68.8  │-       │80  │85    │80  │ 0    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│88.1  │-       │-     │3.17    │81  │84    │89  │27    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │88.1  │-       │-     │-       │84  │85    │85  │60    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃밀기울            │닭  │87.6  │1.92    │-     │-       │74  │81    │53  │0     │                ┃      

  ┃(소맥피)          │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│87.6  │-       │-     │2.65    │76  │74    │72  │21    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │87.6  │-       │-     │-       │76  │74    │76  │42    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃보릿겨            │닭  │88.0  │2.18    │-     │-       │70  │82    │71  │10    │                ┃      

  ┃(맥강-고운것)     │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│88.0  │-       │-     │2.88    │70  │82    │75  │40    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │88.0  │-       │-     │-       │70  │82    │86  │33    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃보릿겨            │닭  │89.9  │1.97    │46.6  │-       │65  │76    │53  │10    │                ┃      

  ┃(맥강-혼합)       │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│89.9  │-       │-     │2.48    │67  │63    │70  │20    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │89.9  │-       │-     │-       │65  │82    │65  │40    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃사탕무박          │닭  │-     │-       │-     │-       │-   │-     │-   │ -    │                ┃      

  ┃(비트펄프)        │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│86.6  │-       │-     │2.75    │41  │ 0    │83  │75    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │86.6  │-       │-     │-       │50  │ 0    │88  │75    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃쌀겨              │닭  │87.5  │1.65    │45.1  │-       │68  │88    │49  │18    │                ┃      

  ┃(탈지강)          │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│87.5  │-       │-     │2.31    │71  │66    │75  │20    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │87.5  │-       │-     │-       │73  │70    │75  │55    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃쌀겨              │닭  │88.0  │2.75    │59.6  │-       │68  │91    │50  │20    │                ┃      

  ┃(미강)            │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│88.0  │-       │-     │3.28    │71  │79    │78  │30    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │88.0  │-       │-     │-       │72  │90    │78  │34    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃옥수수속대        │닭  │92.3  │0.31    │7.3   │-       │0   │15    │14  │ 0    │                ┃      

  ┃(분말)            │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│92.3  │-       │-     │1.09    │0   │15    │36  │14    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │92.3  │-       │-     │-       │0   │34    │52  │55    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃옥수수의 1차      │닭  │87.2  │3.16    │74.2  │-       │80  │80    │80  │30    │                ┃      

  ┃가공품            │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃(호미니피드)      │돼지│87.2  │-       │-     │3.33    │70  │74    │87  │32    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │87.2  │-       │-     │-       │70  │88    │93  │52    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃옥수수피          │닭  │88.0  │1.84    │-     │-       │70  │60    │55  │ 4    │                ┃      

  ┃(단백피)          │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│88.0  │-       │-     │3.13    │76  │63    │68  │48    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │88.0  │-       │-     │-       │86  │74    │88  │70    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃대두피            │닭  │90.0  │0.66    │-     │-       │-   │-     │-   │-     │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│90.0  │-       │-     │2.18    │32  │13    │70  │60    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │90.0  │-       │-     │-       │65  │95    │88  │80    │                ┃      

  ┠─────────┴──┴───┴────┴───┴────┴──┴───┴──┴───┴────────┨      

  ┃ 3) 동물성 원료(동물체에서 유래한 단백질을 주성분으로 한것)                                               ┃      

  ┠─────────┬──┬───┬────┬───┬────┬──┬───┬──┬───┬────────┨      

  ┃가금부산물        │닭  │  94.4│  2.60  │  57.8│   -    │  76│  67  │   0│   0  │                ┃      

  ┃건조분            │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  94.4│   -    │   -  │  2.82  │  80│  67  │   0│   0  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃낙농가공부산      │닭  │   -  │   -    │   -  │   -    │   -│   -  │   -│   -  │                ┃      

  ┃물(유당)          │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  99.8│   -    │   -  │  3.91  │   -│   -  │ 100│   -  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  99.8│   -    │   -  │   -    │   -│   -  │ 100│   -  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃낙농가공부산      │닭  │  93.2│  1.94  │ -    │   -    │  81│  86  │  81│   0  │                ┃      

  ┃물(유장-분말)     │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  93.2│   -    │   -  │  3.20  │  78│  81  │  95│   0  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  93.2│   -    │   -  │   -    │  89│  99  │  96│   0  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃낙농가공부산      │닭  │   -  │   -    │   -  │   -    │   -│   -  │   -│   -  │                ┃      

  ┃물(전지분유)      │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  96.7│   -    │   -  │  5.16  │  94│  96  │  97│   0  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  96.7│   -    │   -  │   -    │  95│  99  │  98│   0  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃낙농가공부산      │닭  │  91.2│  4.10  │ -    │   -    │  93│   0  │   -│   0  │                ┃      

  ┃물(카제인)        │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  91.2│   -    │   -  │  3.66  │  93│   0  │   -│   0  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  91.2│   -    │   -  │   -    │  93│   0  │   -│   0  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃낙농가공부산      │닭  │  94.1│  2.53  │ -    │   -    │  94│  96  │  97│   0  │                ┃      

  ┃물(탈지분유)      │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  94.1│   -    │   -  │  3.85  │  94│  96  │  97│   0  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  94.1│   -    │   -  │   -    │  95│  99  │  98│   0  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃번데기            │닭  │  90.6│  2.79  │  57.9│   -    │  85│  90  │   0│   0  │                ┃      

  ┃(번데기박)        │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  90.6│   -    │   -  │  3.06  │  87│  98  │   0│   0  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃새우분            │닭  │  93.0│ -      │   -  │   -    │  60│  86  │   0│   0  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  93.0│   -    │   -  │  3.58  │  83│  91  │   5│  49  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃어분              │닭  │92.8  │3.19    │-     │-       │91  │89    │0   │ 0    │                ┃      

  ┃(CP 70%)          │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│92.8  │-       │-     │3.45    │91  │91    │0   │ 0    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃어분              │닭  │92.3  │3.12    │67.5  │-       │87  │88    │0   │ 0    │                ┃      

  ┃(CP 65%)          │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│92.3  │-       │-     │3.24    │87  │78    │0   │ 0    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃어분              │닭  │91.5  │2.92    │66.0  │-       │86  │88    │0   │ 0    │                ┃      

  ┃(CP 60%)          │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│91.5  │-       │-     │3.07    │87  │78    │0   │ 0    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃어분              │닭  │92.3  │2.68    │61.4  │-       │82  │72    │0   │ 0    │                ┃      

  ┃(CP 55%)          │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│92.3  │-       │-     │2.91    │84  │73    │0   │ 0    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃어분              │닭  │92.4  │2.53    │57.8  │-       │78  │67    │0   │ 0    │                ┃      

  ┃(CP 50%)          │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│92.4  │-       │-     │2.75    │80  │67    │0   │ 0    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃ 어즙흡착사료     │닭  │  49.0│  1.83  │  71.4│   -    │  91│  92  │   0│   0  │DM 92%로 환     ┃      

  ┃(어즙)            │    │      │        │      │        │    │      │    │      │산한것          ┃      

  ┃                  │돼지│  49.0│   -    │   -  │  1.86  │  89│  80  │   0│   0  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃ 어즙흡착사료     │닭  │   -  │   -    │   -  │   -    │   -│   -  │   -│   -  │쌀겨(탈지강)을  ┃      

  ┃(오징어내장       │    │      │        │      │        │    │      │    │      │흡착제로        ┃      

  ┃흡착-탈지강)      │돼지│   -  │   -    │   -  │  2.88  │  66│   -  │   -│   -  │사용한 것       ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃ 어즙흡착사료     │닭  │   -  │   -    │   -  │   -    │   -│   -  │   -│   -  │밀기울을        ┃      

  ┃(오징어내장       │    │      │        │      │        │    │      │    │      │흡착제로        ┃      

  ┃흡착-밀기울)      │돼지│   -  │   -    │   -  │  3.29  │  70│   -  │   -│   -  │사용한 것       ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃ 어즙흡착사료     │닭  │   -  │   -    │   -  │   -    │   -│   -  │   -│   -  │대두박을        ┃      

  ┃(오징어내장       │    │      │        │      │        │    │      │    │      │흡착제로        ┃      

  ┃흡착-대두박)      │돼지│   -  │   -    │   -  │  3.93  │  80│   -  │   -│   -  │사용한 것       ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃우모분            │닭  │  92.0│  2.30  │ -    │   -    │  65│  65  │   0│   0  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  92.0│   -    │   -  │  2.38  │  77│  67  │   0│   0  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃육골분            │닭  │  94.3│  2.99  │  61.1│   -    │  79│  80  │   0│   0  │                ┃      

  ┃ (50% 이상)       │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  94.3│   -    │   -  │  2.78  │  83│  89  │   0│   0  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃육골분            │닭  │  92.0│  1.91  │   -  │   -    │  79│  80  │   0│   0  │                ┃      

  ┃ (50% 미만)       │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  92.0│   -    │   -  │  2.59  │  83│  89  │   0│   0  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃육분(65%이상)     │닭  │  93.1│  3.53  │  66.5│   -    │  85│  90  │   0│   0  │                ┃      

  ┃(수지박, 돈지박,  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃우지박포함)       │돼지│  93.1│   -    │   -  │  3.38  │  88│  90  │   0│   0  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃육분              │닭  │  93.1│  2.89  │   -  │   -    │  85│  90  │   0│   0  │                ┃      

  ┃(55% 이상)        │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  93.1│   -    │   -  │  2.80  │  88│  90  │   0│   0  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃혈분              │닭  │  90.4│  3.00  │ -    │   -    │  80│  85  │   0│   0  │분사건조        ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │혈분임          ┃      

  ┃                  │돼지│  90.4│   -    │   -  │  3.26  │  84│  33  │   0│   0  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃혈분              │닭  │  89.0│   -    │   -  │   -    │   -│   -  │   -│   -  │분사건조        ┃      

  ┃(혈장단백질)      │    │      │        │      │        │    │      │    │      │혈장임          ┃      

  ┃                  │돼지│  89.0│   -    │   -  │  5.00  │  94│   0  │  76│   -  │                ┃      

  ┠─────────┴──┴───┴────┴───┴────┴──┴───┴──┴───┴────────┨      

  ┃ 4) 식물성 단백질 (식물성 원료로부터 채유한 박류 또는 식물성 단백질을 주성분으로 한 것)                   ┃      

  ┠─────────┬──┬───┬────┬───┬────┬──┬───┬──┬───┬────────┨      

  ┃고추씨박          │닭  │   -  │  2.02  │   -  │   -    │   -│   -  │   -│   -  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│   -  │   -    │   -  │  2.06  │  56│   -  │   -│   -  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │   -  │   -    │   -  │   -    │  60│  97  │  55│  48  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃대두박            │닭  │  87.7│  2.24  │  55.2│   -    │  85│  87  │  60│  13  │                ┃      

  ┃(단백질           │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃44%이상))         │돼지│  87.7│   -    │   -  │  3.45  │  88│  79  │  83│  67  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  87.7│   -    │   -  │   -    │  92│  84  │  94│  74  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃대두박(탈피-      │닭  │  90.2│  2.46  │  58.8│   -    │  85│  87  │  60│  13  │탈피대두박 또   ┃      

  ┃단백질            │    │      │        │      │        │    │      │    │      │는 고단백질 대  ┃      

  ┃48%이상)          │돼지│  90.2│   -    │   -  │  3.68  │  90│  79  │  83│  67  │두품종 포함     ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  90.2│   -    │   -  │   -    │  92│  84  │  94│  74  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃대두박            │닭  │  93.8│ 3.30   │   -  │   -    │  90│  94  │  36│   0  │2축 익스투르더  ┃      

  ┃(익스투르더       │    │      │        │      │        │    │      │    │      │로 생산한 것임  ┃      

  ┃처리)             │돼지│  93.8│   -    │   -  │  3.57  │  92│  56  │  92│   0  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  93.8│   -    │   -  │   -    │  95│  71  │ 100│  86  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃들깨박            │닭  │   -  │  2.82  │   -  │   -    │   -│   -  │   -│   -  │                ┃      

  ┃(압착)            │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│   -  │   -    │   -  │  2.39  │  89│   -  │   -│   -  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │   -  │   -    │   -  │   -    │  89│  92  │  58│  50  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃들깨박            │닭  │   -  │  1.86  │   -  │   -    │   -│   -  │   -│   -  │                ┃      

  ┃(추출)            │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│   -  │   -    │   -  │  2.38  │  87│   -  │   -│   -  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │   -  │   -    │   -  │   -    │  87│  83  │  68│  20  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃땅콩박            │닭  │  91.1│  2.34  │  53.8│   -    │  85│  87  │  55│  10  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  91.1│   -    │   -  │  3.06  │  88│  67  │  83│  49  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  91.1│   -    │   -  │   -    │  81│  92  │  87│  51  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃맥주박            │닭  │   -  │   -    │   -  │   -    │   -│   -  │   -│   -  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  91.5│   -    │   -  │  1.97  │  69│  60  │  34│  15  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  91.5│   -    │   -  │   -    │  73│  84  │  64│  39  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃면실박            │닭  │  89.3│  1.84  │  44.8│   -    │  82│  85  │  44│   4  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  89.3│   -    │   -  │  2.60  │  73│  79  │  50│  43  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  89.3│   -    │   -  │   -    │  81│  92  │  60│  57  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃밀글루텐          │닭  │  90.0│  2.94  │   -  │   -    │   -│   -  │   -│   -  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  90.0│   -    │   -  │  4.50  │  86│   -  │   -│   -  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  90.0│   -    │   -  │   -    │  88│  46  │  92│   -  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃밀배아박          │닭  │  89.0│  2.10  │   -  │   -    │  81│  68  │  88│   0  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  89.0│   -    │   -  │  3.50  │  78│  61  │  92│  32  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  89.0│   -    │   -  │   -    │  90│  90  │  94│  40  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃아마박            │닭  │  88.7│  1.87  │  43.7│   -    │  73│  59  │  41│   9  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  88.7│   -    │   -  │  2.92  │  81│  60  │  79│  55  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  88.7│   -    │   -  │   -    │  88│  89  │  82│  52  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃야자박            │닭  │  88.0│  1.72  │  40.0│   -    │  70│  91  │  32│  10  │                ┃      

  ┃(압착)            │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  88.0│   -    │   -  │  3.73  │  65│  73  │  82│  65  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  88.0│   -    │   -  │   -    │  78│  96  │  78│  63  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃야자박            │닭  │  87.1│  1.35  │  34.4│   -    │  70│  91  │  32│  10  │                ┃      

  ┃(추출)            │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  87.1│   -    │   -  │  2.74  │  65│  73  │  82│  65  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  87.1│   -    │   -  │   -    │  78│  96  │  78│  63  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃옥수수글루텐      │닭  │  89.7│  3.67  │ -    │   -    │  81│  70  │  80│   0  │                ┃      

  ┃(60% 이상)        │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  89.7│   -    │   -  │  4.20  │  87│  56  │  84│  34  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  89.7│   -    │   -  │   -    │  90│  79  │  88│  55  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃옥수수배아박      │닭  │  90.9│  3.30  │ -    │   -    │  80│  85  │  60│   0  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  90.9│   -    │   -  │  3.29  │  86│  67  │  88│  41  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  90.9│   -    │   -  │   -    │  90│  60  │  83│  80  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃장유박            │닭  │   -  │   -    │   -  │   -    │   -│   -  │   -│   -  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│   -  │   -    │   -  │   -    │   -│   -  │   -│   -  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  90.1│   -    │   -  │   -    │  82│  80  │  88│  50  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃주정박            │닭  │   -  │   -    │   -  │   -    │   -│   -  │   -│   -  │                ┃      

  ┃(쌀보리)          │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│   -  │   -    │   -  │   -    │   -│   -  │   -│   -  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │   -  │   -    │   -  │   -    │  91│  80  │  96│  82  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃주정박            │닭  │   -  │   -    │   -  │   -    │   -│   -  │   -│   -  │                ┃      

  ┃(타피오카         │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│   -  │   -    │   -  │  1.70  │  69│   -  │   -│   -  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │   -  │   -    │   -  │   -    │  78│  65  │  63│  41  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃주정박            │닭  │  91.6│  2.15  │  24.1│   -    │  56│  69  │   0│   0  │                ┃      

  ┃(보리)            │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  91.6│   -    │   -  │  2.08  │  66│  70  │  39│   7  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  91.6│   -    │   -  │   -    │  80│  89  │  46│  21  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃참깨박            │닭  │  90.9│  2.82  │   -  │   -    │  75│  88  │  30│  10  │                ┃      

  ┃(압착)            │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  90.9│   -    │   -  │  3.08  │  70│  78  │  71│  45  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  90.9│   -    │   -  │   -    │  81│  94  │  75│  55  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃참깨박            │닭  │  91.5│  1.88  │  45.4│   -    │  75│  88  │  30│  10  │                ┃      

  ┃(추출)            │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  91.5│   -    │   -  │  2.41  │  70│  78  │  71│  45  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  91.5│   -    │   -  │   -    │  81│  94  │  75│  55  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃채종박            │닭  │  89.5│  1.66  │   -  │   -    │  73│  71  │  32│   0  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  89.5│   -    │   -  │  2.69  │  79│  64  │  71│  46  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  89.5│   -    │   -  │   -    │  86│  89  │  72│  51  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃채종박            │닭  │  89.5│  1.90  │   -  │   -    │  76│  70  │  32│   0  │                ┃      

  ┃(카놀라박)        │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  89.5│   -    │   -  │  2.86  │  75│  47  │  75│  75  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  89.5│   -    │   -  │   -    │  83│  79  │  81│  24  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃케이폭박          │닭  │   -  │   -    │   -  │   -    │   -│   -  │   -│   -  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  88.3│   -    │   -  │  1.56  │  41│  51  │  71│  11  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  88.3│   -    │   -  │   -    │  41│  51  │  71│  11  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃팜유박            │닭  │  88.5│  1.50  │   -  │   -    │  60│  75  │  30│   0  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  88.5│   -    │   -  │  2.80  │  65│  52  │  77│  48  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  88.5│   -    │   -  │   -    │  82│  80  │  88│  50  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃해바라기씨박      │닭  │  91.0│  1.60  │  40.0│   -    │80  │80    │20  │ 0    │                ┃      

  ┃(고단백질-추출)   │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  91.0│   -    │   -  │  2.10  │96  │71    │58  │17    │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  91.0│   -    │   -  │   -    │85  │79    │72  │25    │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃해바라기씨박      │닭  │  90.3│  1.58  │  40.0│   -    │  77│  82  │  40│   3  │                ┃      

  ┃(저단백질-추출)   │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  90.3│   -    │   -  │  2.06  │  77│  50  │  41│  20  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  90.3│   -    │   -  │   -    │  83│  86  │  80│  50  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃해바라기씨박      │닭  │  93.0│  2.31  │   -  │   -    │-   │-     │-   │-     │                ┃      

  ┃(압착)            │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  93.0│   -    │   -  │  2.74  │-   │-     │-   │-     │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  93.0│   -    │   -  │   -    │-   │-     │-   │-     │                ┃      

  ┠─────────┴──┴───┴────┴───┴────┴──┴───┴──┴───┴────────┨      

  ┃ 5. 기  타                                                                                                ┃      

  ┠─────────┬──┬───┬────┬───┬────┬──┬───┬──┬───┬────────┨      

  ┃당밀              │닭  │  75.0│  1.93  │ -    │   -    │  24│   0  │  90│   0  │                ┃      

  ┃(cane)            │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  75.0│   -    │   -  │  2.51  │  41│   0  │  95│   0  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  75.0│   -    │   -  │   -    │  30│   0  │  98│   0  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃동물성유지류      │닭  │  99.0│  8.37  │  88.0│   -    │   -│  90  │   -│   -  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  99.0│   -    │   -  │  9.43  │   -│  96  │   -│   -  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  99.0│   -    │   -  │   -    │   -│  98  │   -│   -  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃맥주효모          │닭  │  92.5│  2.52  │  57.5│   -    │  75│  60  │  70│   0  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  92.5│   -    │   -  │  3.20  │  89│  44  │  85│   0  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  92.5│   -    │   -  │   -    │  91│  44  │  88│   0  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃목초              │닭  │  90.6│  0.87  │  21.5│   -    │  65│  41  │  23│   0  │천일            ┃      

  ┃(알팔파 분말)     │    │      │        │      │        │    │      │    │      │건조한 것       ┃      

  ┃                  │돼지│  90.6│   -    │   -  │  1.58  │  48│  40  │  57│  19  │(펠렛 포함)     ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  90.6│   -    │   -  │   -    │  73│  40  │  67│  46  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃목초              │닭  │  90.7│  1.41  │  34.6│   -    │  85│  40  │  40│   5  │기계건조한 것   ┃      

  ┃(알팔파 분말)     │    │      │        │      │        │    │      │    │      │(펠렛 포함)     ┃      

  ┃                  │돼지│  90.7│   -    │   -  │  1.75  │  53│  46  │  58│  23  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  90.7│   -    │   -  │   -    │  78│  61  │  69│  52  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃목초              │닭  │   -  │  0.66  │   -  │   -    │  60│  33  │  32│   0  │헤이큐브로서    ┃      

  ┃(알팔파)          │    │      │        │      │        │    │      │    │      │양질의 것       ┃      

  ┃                  │돼지│   -  │   -    │   -  │  1.70  │  56│  54  │  63│  15  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  87.4│   -    │   -  │   -    │  77│  44  │  74│  50  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃목초              │닭  │   -  │   -    │   -  │   -    │   -│   -  │   -│   -  │헤이큐브로서    ┃      

  ┃(알팔파)          │    │      │        │      │        │    │      │    │      │보통의 것       ┃      

  ┃                  │돼지│   -  │   -    │   -  │   -    │   -│   -  │   -│   -  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  89.2│   -    │   -  │   -    │  71│  44  │  72│  45  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃목초              │닭  │   -  │   -    │   -  │   -    │   -│   -  │   -│   -  │헤이큐브로서    ┃      

  ┃(알팔파)          │    │      │        │      │        │    │      │    │      │품질이 낮은 것  ┃      

  ┃                  │돼지│   -  │   -    │   -  │   -    │   -│   -  │   -│   -  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  89.2│   -    │   -  │   -    │  71│  44  │  67│  43  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃식물성유지류      │닭  │  99.3│  9.06  │  94.4│   -    │   -│  98  │   -│   -  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  99.3│   -    │   -  │  9.56  │   -│  97  │   -│   -  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  99.3│   -    │   -  │   -    │   -│  97  │   -│   -  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃제빵효모          │닭  │  94.5│  2.68  │  56.9│   -    │  75│  60  │  70│   0  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  94.5│   -    │   -  │  3.39  │  89│  44  │  85│   0  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  94.5│   -    │   -  │   -    │  91│  44  │  88│   0  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃토룰라효모        │닭  │  91.6│  2.30  │  53.1│   -    │  78│  59  │  53│   0  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  91.6│   -    │   -  │  2.92  │  83│  25  │  77│   0  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │  91.6│   -    │   -  │   -    │  86│  25  │  73│   0  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃DL-메치오닌       │닭  │  98.5│  4.92  │  86.5│   -    │ 100│   -  │   -│   -  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  98.5│   -    │   -  │  5.66  │ 100│   -  │   -│   -  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │   -  │   -    │   -  │   -    │   -│   -  │   -│   -  │                ┃      

  ┠─────────┼──┼───┼────┼───┼────┼──┼───┼──┼───┼────────┨      

  ┃L-라이신염산염    │닭  │  98.5│  3.81  │  75.9│   -    │ 100│   -  │   -│   -  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │돼지│  98.5│   -    │   -  │  5.00  │ 100│   -  │   -│   -  │                ┃      

  ┃                  │    │      │        │      │        │    │      │    │      │                ┃      

  ┃                  │소  │   -  │   -    │   -  │   -    │   -│   -  │   -│   -  │                ┃      

  ┗━━━━━━━━━┷━━┷━━━┷━━━━┷━━━┷━━━━┷━━┷━━━┷━━┷━━━┷━━━━━━━━┛      

   * 비고 : 에너지가는 ’94～’98 실제 사용한 원료의 수분함량을 기준으로 하였음                                       

   나. 배합사료의 에너지가 및 가소화영양소 평가방법                                                                   

    1) 평가방법                                                                                                       

     (가) 배합사료중 닭의 MEn(질소보정대사에너지)과 돼지의 DE(가소화에너지)는 “1. 사료의 에너지가 평가               

  기준표”에 정해진 에너지가의 수치를 적용하여 각각의 에너지 평가방법으로 산출한 MEn과 DE를                           

  표기하여야 한다.                                                                                                    

     (나) 배합사료중 돼지의 DCP(가소화조단백질)와 소의 TDN(가소화영양소총량)은 각 배합사료 공장의 배                  

  합율표에서 실제로 적용하고 있는 원료별 영양소 함량에 “1. 사료의 에너지가 평가기준표”의 소화율                     

  을 곱하여 산출한 값을 표기하여야 한다.                                                                              

     (다) “1. 사료의 에너지가 평가기준표”에 설정되어 있지 않은 원료를 사용할 경우에는 그 원료의 에너지              

  가 및 소화율에 대해서는 각 배합사료공장에서 사용하고 있는 수치를 그대로 인정하여 적용한다.                          

     (라) 배합사료 제조에 사용하는 원료사료의 수분함량 변동으로 인하여 배합사료 공장의 배합율표에서 실                

  제로 적용하고 있는 원료별 DM(건물) 함량이 “1. 사료의 에너지가 평가기준표”상의 DM수준과 차이                       

  가 있을 경우에는 수분함량의 차이만큼 건물기준으로 원료별 에너지가를 보정하여 산출한 배합사료                        

  의 에너지가로 표기할 수 있다.                                                                                       

        ※ 수분함량이 동일한 사료로 환산하는 방법 :                                                                   

     (마) 사료공정서 제10조제3항의 규정에 의한에너지가 허용오차범위의 적부여부는 “3. 에너지가의 평가 계              

  산 실례”에 따라 산출하여 판정한다.                                                                                 

    2). 산출 공식                                                                                                     

     (가) 가소화조단백질(DCP)                                                                                         

      ① 사료의 DCP                                                                                                   

         DCP (%) = 조단백질함량 × 소화율 ×  0.01                                                                    

      ② 배합사료의 DCP : 각 사료의 DCP 누계                                                                          

        DCP (%) = ∑ (조단백질함량 × 소화율 × 배합율 × 0.0001)                                                     

     (나) 가소화에너지(DE)                                                                                            

      ① 사료의 DE                                                                                                    

        DE (Mcal/kg) = 1. 사료의 에너지가 평가기준표 의 DE                                                            

      ② 배합사료의 가소화에너지(DE) : 각 사료의 DE의 누계                                                            

        DE (Mcal/kg) = ∑ (DE × 배합율 × 0.01)                                                                      

     (다) 가소화영양소총량(TDN)                                                                                       

      ① 사료의 TDN                                                                                                   

          TDN (%) = {(단백질함량 × 소화율) + (조지방함량 × 소화율 ×2.25) +                                         

                    (가용무질소물함량 × 소화율) + (조섬유함량 × 소화율)} × 0.01                                    

      ② 배합사료의 TDN : 각 사료 TDN의 누계                                                                          

         TDN (%) = ∑ {(조단백질함량 × 소화율) + (조지방함량 × 소화율 ×2.25) +                                     

                     (가용무질소물함량 × 소화율) + (조섬유함량 × 소화율)} × 배합율 × 0.0001]                      

     (라) 질소보정대사에너지(MEn)                                                                                     

      ① 사료의 질소보정대사에너지(MEn)                                                                               

        MEn (Mcal/kg) = 총에너지(GE) × 대사율 × 0.01                                                                

      ② 배합사료의 질소보정대사에너지(MEn) : 각 사료 MEn의 누계                                                      

        MEn (Mcal/kg) = ∑ (사료 MEn × 배합율× 0.01)                                                                

    3). 에너지가 평가 지표간 상호 전환공식                                                                            

     (가) 닭사료                                                                                                      

      DE (Mcal/kg) = TDN (%) × 0.0441                                                                                

      MEn (Mcal/kg) = DE (Mcal/kg) × 0.93                                                                            

     (나) 돼지사료                                                                                                    

        DE (Mcal/kg) = TDN(%) × 0.0441                                                                               

        DE (Mcal/kg) = ME (Mcal/kg) ÷ [{96 - (0.202 × CP%)} × 0.01]                                                

          ※ DE : 가소화에너지,    CP : 조단백질                                                                      

     (다) 소사료                                                                                                      

       TDN (%) = DE (Mcal/kg) ÷ 0.0441                                                                               

       DE (Mcal/kg) = ME ÷ 0.82                                                                                      

       1kg TDN = 3.62 Mcal ME                                                                                         

   다. 에너지가의 평가 계산 실례                                                                                      

    1). 산란계 배합사료의 질소보정 대사에너지(MEn) 산출                                                               

     (가) 등록치 : MEn 2.75 M㎈/㎏ 이상                                                                               

  ┏━━━━━━━━┯━━━━━━┯━━━━━━━━┯━━━━━━┓                                                  

  ┃원 료 명        │배합비율(%) │원료MEn(Mcal/kg)│MEn(Mcal/kg)┃                                                  

  ┃                │(A)         │(B)             │(A×B)      ┃                                                  

  ┠────────┼──────┼────────┼──────┨                                                  

  ┃옥수수          │57.0        │3.25            │1.853       ┃                                                  

  ┠────────┼──────┼────────┼──────┨                                                  

  ┃탈피대두박48%   │20.5        │2.46            │0.504       ┃                                                  

  ┠────────┼──────┼────────┼──────┨                                                  

  ┃타피오카        │ 5.0        │2.93            │0.147       ┃                                                  

  ┠────────┼──────┼────────┼──────┨                                                  

  ┃채종박          │ 3.0        │1.66            │0.050       ┃                                                  

  ┠────────┼──────┼────────┼──────┨                                                  

  ┃육분(65%이상)   │ 1.5        │3.53            │0.053       ┃                                                  

  ┠────────┼──────┼────────┼──────┨                                                  

  ┃옥수수글루텐    │ 1.3        │3.67            │0.048       ┃                                                  

  ┠────────┼──────┼────────┼──────┨                                                  

  ┃육골분(50%이상) │ 1.0        │2.99            │0.030       ┃                                                  

  ┠────────┼──────┼────────┼──────┨                                                  

  ┃우지            │ 1.1        │8.37            │0.092       ┃                                                  

  ┠────────┼──────┼────────┼──────┨                                                  

  ┃dl-메치오닌     │  0.27      │4.92            │0.013       ┃                                                  

  ┠────────┼──────┼────────┼──────┨                                                  

  ┃석회석분말      │  7.66      │-               │            ┃                                                  

  ┠────────┼──────┼────────┼──────┨                                                  

  ┃인산칼슘        │ 1.2        │-               │            ┃                                                  

  ┠────────┼──────┼────────┼──────┨                                                  

  ┃소금            │  0.24      │-               │            ┃                                                  

  ┠────────┼──────┼────────┼──────┨                                                  

  ┃보조사료(첨가제)│  0.23      │-               │            ┃                                                  

  ┠────────┼──────┼────────┼──────┨                                                  

  ┃계              │100.0       │                │2.79        ┃                                                  

  ┗━━━━━━━━┷━━━━━━┷━━━━━━━━┷━━━━━━┛                                                  

   ※ (B)는 1. 사료의 에너지가 평가기준표의 수치임                                                                    

     (나) MEn 계산식 : 0.57×3.25 + 0.205 × 2.46 + 0.05 × 2.93 + 0.03 × 1.66 + 0.015 × 3.53 + 0.013 × 3.67       

  + 0.01 × 2.99 + 0.011 × 8.37 + 0.0027 × 4.92 = 2.79 M㎈/㎏                                                       

     (다) MEn 등록치 적부 판정                                                                                        

    ? 등록치 적합범위(등록치의 5% 허용오차 가산범위) : 2.61(2.75×0.95)～2.89(2.75×1.05)M㎈/㎏                      

       ※ 2.61미만이거나 2.89이상일 경우에는 등록치에 위배됨                                                          

    ? MEn 계산치 2.79M㎈/㎏이므로 서류검사 합격                                                                      

    2). 양돈용 배합사료의 가소화에너지(DE), 가소화 조단백질(DCP) 산출                                                 

     (가) 등록치 : DE 3.1 M㎈/㎏,  DCP 12 % 이상                                                                      

  ┏━━━━━━━━┯━━━━┯━━━━━┯━━━━━┯━━━┯━━━┯━━━━━┯━━━┓                          

  ┃원 료 명        │배합비율│원료DE    │DE        │원료CP│CP    │단백질    │DCP   ┃                          

  ┃                │(%)     │(Mcal/kg) │(Mcal/kg) │(%)   │(%)   │소화율(%) │(%)   ┃                          

  ┃                │(A)     │(B)       │(A×B)    │      │(C)   │(D)       │(C×D)┃                          

  ┠────────┼────┼─────┼─────┼───┼───┼─────┼───┨                          

  ┃옥수수          │34.2    │3.4       │1.163     │ 7.9  │2.70  │ 76       │2.05  ┃                          

  ┠────────┼────┼─────┼─────┼───┼───┼─────┼───┨                          

  ┃밀기울(소맥피)  │25.6    │2.65      │0.678     │14.8  │3.79  │ 76       │2.88  ┃                          

  ┠────────┼────┼─────┼─────┼───┼───┼─────┼───┨                          

  ┃대두박          │13.0    │3.45      │0.449     │44.0  │5.72  │ 88       │5.03  ┃                          

  ┠────────┼────┼─────┼─────┼───┼───┼─────┼───┨                          

  ┃타피오카        │12.0    │3.38      │0.406     │ 2.4  │0.29  │ 68       │0.20  ┃                          

  ┠────────┼────┼─────┼─────┼───┼───┼─────┼───┨                          

  ┃채종박          │ 5.0    │2.69      │0.135     │36.0  │1.80  │ 79       │1.42  ┃                          

  ┠────────┼────┼─────┼─────┼───┼───┼─────┼───┨                          

  ┃쌀겨(미강)      │ 3.0    │3.28      │0.098     │13.5  │0.41  │ 71       │0.29  ┃                          

  ┠────────┼────┼─────┼─────┼───┼───┼─────┼───┨                          

  ┃우지            │ 2.5    │9.43      │0.236     │-     │-     │-         │-     ┃                          

  ┠────────┼────┼─────┼─────┼───┼───┼─────┼───┨                          

  ┃당밀            │ 2.0    │2.51      │0.050     │ 4.5  │0.09  │ 41       │0.04  ┃                          

  ┠────────┼────┼─────┼─────┼───┼───┼─────┼───┨                          

  ┃dl-메치오닌     │  0.15  │5.66      │0.008     │50.0  │0.08  │100       │0.08  ┃                          

  ┠────────┼────┼─────┼─────┼───┼───┼─────┼───┨                          

  ┃라이신          │ 0.1    │5.00      │0.005     │80.0  │0.08  │100       │0.08  ┃                          

  ┠────────┼────┼─────┼─────┼───┼───┼─────┼───┨                          

  ┃인산칼슘        │  0.98  │          │          │      │      │          │      ┃                          

  ┠────────┼────┼─────┼─────┼───┼───┼─────┼───┨                          

  ┃석회석분말      │  0.81  │          │          │      │      │          │      ┃                          

  ┠────────┼────┼─────┼─────┼───┼───┼─────┼───┨                          

  ┃소금            │  0.36  │          │          │      │      │          │      ┃                          

  ┠────────┼────┼─────┼─────┼───┼───┼─────┼───┨                          

  ┃보조사료(첨가제)│ 0.3    │          │          │      │      │          │      ┃                          

  ┠────────┼────┼─────┼─────┼───┼───┼─────┼───┨                          

  ┃계              │100.0   │          │3.228     │      │14.96 │          │12.07 ┃                          

  ┗━━━━━━━━┷━━━━┷━━━━━┷━━━━━┷━━━┷━━━┷━━━━━┷━━━┛                          

  ※ (B)와 (D)는 1. 사료의 에너지가 평가기준표의 수치임                                                               

     (나) DE 계산식 : 0.342 × 3.4 + 0.256 × 2.65 + 0.13 × 3.45 + 0.12 × 3.38 + 0.05 × 2.69 + 0.03 × 3.28 +      

  0.025 × 9.43 + 0.02 × 2.51 + 0.0015 × 5.66 + 0.001 × 5 = 3.22 M㎈/㎏                                            

     DCP 계산식 : 2.70 × 0.76 + 3.79 × 0.76 + 5.72 × 0.88 + 0.29 ×.68 + 1.80 × 0.79 + 0.41 × 0.71 + 0.09        

  × 0.41 + 0.08 × 1 + 0.08 × 1 = 12.07%                                                                            

     (다) DE, DCP 등록치 적부 판정                                                                                    

      ? 등록치 적합범위 DE(등록치의 5% 허용오차 가산범위) : 2.95(3.1×0.95)～3.26(3.1×1.05)M㎈/㎏                   

         DCP(등록치이상 적용) : 12% 이상                                                                              

      ※ DE는 2.95M㎈/㎏ 미만이거나 3.26이상일 경우에는 등록치에 위배되며,                                            

         DCP는 12% 미만일 때 등록치에 위배됨                                                                          

      ? DE 계산치 3.22 M㎈/㎏, DCP 계산치 12.07%이므로 서류검사 합격                                                 

    3). 양축용 배합사료(젖소)의 가소화영양소총량(TDN) 산출                                                            

     (가) 등록치 : TDN 67 % 이상                                                                                      

  ┏━━━━━━━┯━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━┯┯━━━━━━━━━━━━━━━┯━━━━┯━━━━━┓  

  ┃원료명        │배합율│원료별 성분 함량(A)           ││소화율(B)                     │(A×B)  │TDN(%)    ┃  

  ┃              │      ├────┬───┬──┬───┤├────┬───┬──┬───┤∑원료TD│(∑원료× ┃  

  ┃              │      │조단백질│조지방│NFE │조섬유││조단백질│조지방│NFE │조섬유│N(%)    │배합비)   ┃  

  ┠───────┼───┼────┼───┼──┼───┤├────┼───┼──┼───┼────┼─────┨  

  ┃옥수수        │50.0  │ 7.9    │3.5   │70.2│ 2.9  ││78      │88    │91  │50    │78.42   │39.2      ┃  

  ┠───────┼───┼────┼───┼──┼───┤├────┼───┼──┼───┼────┼─────┨  

  ┃밀기울(소맥피)│21.5  │14.8    │4.0   │53.8│10.0  ││76      │74    │76  │42    │63.00   │13.6      ┃  

  ┠───────┼───┼────┼───┼──┼───┤├────┼───┼──┼───┼────┼─────┨  

  ┃대두박        │7.0   │44.0    │0.5   │32.1│ 7.0  ││92      │84    │94  │74    │76.78   │ 5.4      ┃  

  ┠───────┼───┼────┼───┼──┼───┤├────┼───┼──┼───┼────┼─────┨  

  ┃채종박        │5.0   │36.0    │2.6   │33.0│13.2  ││86      │89    │72  │51    │66.66   │ 3.3      ┃  

  ┠───────┼───┼────┼───┼──┼───┤├────┼───┼──┼───┼────┼─────┨  

  ┃알팔파        │5.0   │15.9    │2.3   │37.9│24.3  ││71      │44    │72  │45    │51.79   │ 2.6      ┃  

  ┠───────┼───┼────┼───┼──┼───┤├────┼───┼──┼───┼────┼─────┨  

  ┃당밀          │5.0   │ 4.5    │0.0   │64.7│ 0.0  ││30      │0     │98  │0     │64.76   │ 3.2      ┃  

  ┠───────┼───┼────┼───┼──┼───┤├────┼───┼──┼───┼────┼─────┨  

  ┃석회석분말    │3.0   │        │      │    │      ││        │      │    │      │        │          ┃  

  ┠───────┼───┼────┼───┼──┼───┤├────┼───┼──┼───┼────┼─────┨  

  ┃소금          │0.5   │        │      │    │      ││        │      │    │      │        │          ┃  

  ┠───────┼───┼────┼───┼──┼───┤├────┼───┼──┼───┼────┼─────┨  

  ┃보조사료      │3.0   │        │      │    │      ││        │      │    │      │        │          ┃  

  ┃(기타첨가제)  │      │        │      │    │      ││        │      │    │      │        │          ┃  

  ┠───────┼───┼────┼───┼──┼───┤├────┼───┼──┼───┼────┼─────┨  

  ┃계            │100.0 │        │      │    │      ││        │      │    │      │        │67.3      ┃  

  ┗━━━━━━━┷━━━┷━━━━┷━━━┷━━┷━━━┷┷━━━━┷━━━┷━━┷━━━┷━━━━┷━━━━━┛  

   ※ (A)는 각 공장에서 배합설계시 실제로 사용중인 성분함량을 그대로 인정하여 적용함                                  

      (B)는 “1. 사료의 에너지가 평가기준표”의 수치임. (조지방은 성분함량×소화율×2.25)                             

     (나) TDN(%) 계산식 : 옥수수{(7.9×0.78+3.5×0.88×2.25+70.2×0.91+2.9×0.5)×0.5} + 소맥피(〃) + 대두박          

  (〃) + 채종박(〃) + 알팔파(〃) + 당밀(〃) = 67.3%                                                                   

     (다) TDN 등록치 적부 판정                                                                                        

      ? 등록치 적합범위(등록치의 5% 허용오차 가산범위) : 63.65～70.35%                                               

       ※ 63.65% 미만이거나 70.35% 이상일 경우에는 등록치에 위배됨                                                    

      ? TDN 계산치 67.3이므로 서류검사 합격                                                                          

별표 0013: 사료의 등록성분의 함량 수준 등의 기준(제9조제10항 관련)

  [별표 13의2]                                                       

  사료의 등록성분의 함량 수준 등의 기준(제9조제10항 관련)                                               

  1. 배합사료의 등록성분 함량 수준은 한국사양표준이나 국제적으로 널리 이용하고 있는 사양표준의 영       

  양소 요구량 수준에 적합하여야 한다. 다만, 배합사료원료, 특수배합사료, 프리믹스용 배합사료 및          

  그 밖의 동물·어류용(양식용 수산동물용은 제외)의 배합사료의 경우에는 예외로 한다.                     

  2. 반건조배합사료(SEP, Soft Extrudind) 제조시에는 별표 11 및 별표 12에서 정한 각 단미?보조사료       

  의 기준(열처리, 수분함량 등)에 적합한 원료(생물형태의 어류부산물 등 사용금지)를 사용하여야 하         

  며 최종제품 기준 25% 이내에서 수분을 첨가할 수 있다.                                                  

  3. 배합사료의 등록성분은 당해 성분의 배합비 설계치 또는 분석치가 다음 각 호의 허용범위 이내이어       

  야 한다.(권고기준)                                                                                    

   가. 등록성분은 ±20% 이내 최저량(이상 표시 대상)으로 표시하는 등록성분은 가급적 120% 이내, 최대      

  량(이하 표시 대상)으로 표시하는 등록성분은 가급적 80% 까지만 가능)                                    

    예) 조지방이 30%로 설계 또는 분석된 배합사료는 실제 성분등록시 등록성분량은 24.00 ～ 36.00%로       

  등록                                                                                                  

   나. 가목에도 불구하고 반추동물용섬유질배합사료는 가급적 ±30% 이내(최저량(이상 표시 대상)으로 표     

  시하는 등록성분은 가급적 130% 이내, 최대량(이하 표시 대상)으로 표시하는 등록성분은 가급적 70%         

  까지만 가능)                                                                                          

  4. 그 밖의 동물·어류용의 배합사료에서 등록성분(칼슘, 인 제외)이 0.1% 미만으로 함유된 경우에는 0%로   

  등록이 가능하고, 이 경우 해당성분에 대한 자가품질검사(사료검사 및 수입신고시 정밀검정 등 포함)        

  는 제외 가능                                                                                          

  5. 등록성분의 등록은 소수점 제1자리까지로 하고, 제2자리에서 반올림하여 등록하거나 이와 유사한 방      

  식으로 등록한다. 다만, 제품 특성상 필요한 경우에는 소수점 제2자리 이상 또는 ppm 등 다른 단위          

  로도 등록할 수 있다.                                                                                  

  6. 단미사료 및 보조사료는 제3호부터 제5호를 준용한다.                                                 

별표 0013: 사료 성분등록 기본요건 점검표(제9조제11항 관련)

  [별표 13의3]                                                                                       

  사료 성분등록 기본요건 점검표(제9조제11항 관련)                                                                                       

  ┌───────────────────────────────────────────┬──────┐(제조/수입업자명, 사료명칭)   

  │점 검 항 목                                                                           │검토결과    │                              

  ├───────────────────────────────────────────┼─┬────┤                              

  │1. 사용한 원료의 명칭을 제출하였는가?(규칙 제12조제1항)                               │예│아니오  │                              

  ├───────────────────────────────────────────┴─┴────┤                              

  │                                                                                          │                              

  ├───────────────────────────────────────────┬─┬────┤                              

  │2. 원료배합비율표를 제출하였는가?(규칙 제12조제1항, 배합사료만 해당)                  │예│아니오  │                              

  │   다만, 혼합성 단미사료?혼합성 보조사료 및 각종 합제류 사료 등은 혼합비율 제출 필요 │  │        │                              

  ├───────────────────────────────────────────┴─┴────┤                              

  │                                                                                          │                              

  ├───────────────────────────────────────────┬─┬────┤                              

  │3. 사료의 제조공정 설명서를 제출하였는가?(규칙 제12조제1항)                           │예│아니오  │                              

  ├───────────────────────────────────────────┴─┴────┤                              

  │                                                                                          │                              

  ├───────────────────────────────────────────┬─┬────┤                              

  │4. 사료(단미?보조?배합)의 범위에 해당되는가?                                        │예│아니오  │                              

  │  (「사료 등의 기준 및 규격」(이하 “고시”라 한다) 별표 1, 2, 3, 3의2)               │  │        │                              

  ├───────────────────────────────────────────┴─┴────┤                              

  │                                                                                          │                              

  ├───────────────────────────────────────────┬─┬────┤                              

  │5. 사료의 명칭이 적절한가?(고시 별표 1, 2, 3)                                         │예│아니오  │                              

  ├───────────────────────────────────────────┴─┴────┤                              

  │                                                                                          │                              

  ├───────────────────────────────────────────┬─┬────┤                              

  │6. 개별 사료의 기준 및 규격을 충족하는가?(고시 별표 4, 5, 6)                          │예│아니오  │                              

  ├───────────────────────────────────────────┴─┴────┤                              

  │                                                                                          │                              

  ├───────────────────────────────────────────┬─┬────┤                              

  │7. 수분함량 기준은 충족하고 있는가?(고시 제8조제8항)                                  │예│아니오  │                              

  ├───────────────────────────────────────────┴─┴────┤                              

  │                                                                                          │                              

  ├───────────────────────────────────────────┬─┬────┤                              

  │8. 유통기간 설정은 적절한가?(고시 제8조제9항, 별표 10의2)                             │예│아니오  │                              

  ├───────────────────────────────────────────┴─┴────┤                              

  │                                                                                          │                              

  ├───────────────────────────────────────────┬─┬────┤                              

  │9. 성분등록 항목이 정확한가?(고시 제8조8항 및 별표 11, 12, 13, 13의2)                 │예│아니오  │                              

  ├───────────────────────────────────────────┴─┴────┤                              

  │                                                                                          │                              

  ├───────────────────────────────────────────┬─┬────┤                              

  │10. 등록성분의 양을 분석한 근거가 있는가?(고시 제9조제4항)                            │예│아니오  │                              

  │   다만, 수입사료의 경우에는 수입관계서류, 용기 또는 포장 등에 표시된 등록성분별      │  │        │                              

  │함량에 대한 근거가 있으면 가능                                                        │  │        │                              

  ├───────────────────────────────────────────┴─┴────┤                              

  │                                                                                          │                              

  ├───────────────────────────────────────────┬─┬────┤                              

  │11. 등록성분의 양과 분석한 양이 허용오차 이내인가?(고시 제9조제9항)                   │예│아니오  │                              

  ├───────────────────────────────────────────┴─┴────┤                              

  │                                                                                          │                              

  ├───────────────────────────────────────────┬─┬────┤                              

  │12. 사료의 멸균 및 살균처리 기준을 충족하는가?(고시 별표 9)                           │예│아니오  │                              

  ├───────────────────────────────────────────┴─┴────┤                              

  │                                                                                          │                              

  ├───────────────────────────────────────────┬─┬────┤                              

  │13. 감마선 조사 등 허용되지 않은 공정에 따라 생산되었는가?(고시 별표 9)               │예│아니오  │                              

  ├───────────────────────────────────────────┴─┴────┤                              

  │                                                                                          │                              

  ├───────────────────────────────────────────┬─┬────┤                              

  │14. 배합사료의 경우 사양표준에 적합한가?(고시 별표 13 제6호)                          │예│아니오  │                              

  │   다만, 배합사료원료, 특수배합사료, 광물성배합사료, 프리믹스용 배합사료 및 그 밖의   │  │        │                              

  │동물?어류용(관상용 수산동물에 한 함) 배합사료는 제외                                 │  │        │                              

  ├───────────────────────────────────────────┴─┴────┤                              

  │                                                                                          │                              

  ├───────────────────────────────────────────┬─┬────┤                              

  │15. 사료의 표시사항은 관련 규정을 정확히 준수하였는가?(고시 별표 15)                  │예│아니오  │                              

  ├───────────────────────────────────────────┴─┴────┤                              

  │                                                                                          │                              

  ├───────────────────────────────────────────┬─┬────┤                              

  │16. 소비자에게 오해를 불러 일으킬 허위표시 등을 포함하고 있는가?(고시 별표 15)        │예│아니오  │                              

  ├───────────────────────────────────────────┴─┴────┤                              

  │                                                                                          │                              

  ├───────────────────────────────────────────┬─┬────┤                              

  │17. HACCP 적용 사료공장으로 인정받지 않았는데 관련 표시 등이 포함되어 있는가?         │예│아니오  │                              

  │   (법 제16조제8항, 「사료공장 위해요소중점관리기준」 제12조제1항)                    │  │        │                              

  ├───────────────────────────────────────────┴─┴────┤                              

  │                                                                                          │                              

  ├───────────────────────────────────────────┬─┬────┤                              

  │18. 외국의 인증마크 등이 포함되어 있는가?(고시 별표 15)                               │예│아니오  │                              

  │   다만, 국내 법령에 의해 동등성이 인정된 경우는 제외(관련 서류 확인 필요)            │  │        │                              

  ├───────────────────────────────────────────┴─┴────┤                              

  │                                                                                          │                              

  ├───────────────────────────────────────────┬─┬────┤                              

  │19. 중금속 등 유해물질이 허용수준 이내인가?(고시 별표 16)                             │예│아니오  │                              

  ├───────────────────────────────────────────┴─┴────┤                              

  │                                                                                          │                              

  ├───────────────────────────────────────────┬─┬────┤                              

  │20. 사용금지 동물용의약품이 포함되어 있는가?(고시 별표 17)                            │예│아니오  │                              

  ├───────────────────────────────────────────┴─┴────┤                              

  │                                                                                          │                              

  ├───────────────────────────────────────────┬─┬────┤                              

  │21. 사료로서 허용되지 않은 원료가 사용되었는가?(고시 별표 18)                         │예│아니오  │                              

  ├───────────────────────────────────────────┴─┴────┤                              

  │                                                                                          │                              

  ├───────────────────────────────────────────┬─┬────┤                              

  │22. 사료 사용제한 물질이 사용되었거나 허용수준을 초과하였는가?(고시 별표 18)          │예│아니오  │                              

  ├───────────────────────────────────────────┴─┴────┤                              

  │                                                                                          │                              

  ├───────────────────────────────────────────┬─┬────┤                              

  │23. 자가품질검사를 위한 분석실을 갖추었거나 검사대행을 위한 위탁계약을 체결하였는     │예│아니오  │                              

  │가?(시행규칙 별표 8)                                                                  │  │        │                              

  ├───────────────────────────────────────────┴─┴────┤                              

  │                                                                                          │                              

  ├───────────────────────────────────────────┬─┬────┤                              

  │24. 부형제 사용은 적절한가?(고시 별표 24)                                             │예│아니오  │                              

  ├───────────────────────────────────────────┴─┴────┤                              

  │                                                                                          │                              

  ├──────────────────────────────────────────────────┤                              

  │기타 사항                                                                                           │                              

  ├──────────────────────────────────────────────────┤                              

  │25.                                                                                                 │                              

  │                                                                                                    │                              

  └──────────────────────────────────────────────────┘                              

    * 신청자는 “예 / 아니오”에 ? 표시를 하세요(허위로 제출한 것이 확인될 경우 성분등록이 취소                                        

    되거나 행정처분 등이 있을 수 있으니 정확하게 기입해 주시기 바랍니다).                                                               

    * 해당사항이 없을 경우 검토결과에 “해당없음”을 표시해 주시기 바랍니다.                                                            

    * 검정색 음영으로 처리된 답변이 1개라도 있는 경우 민원처리 보완 및 반려 조치될 수 있으니,                                           

    담당 공무원과 협의를 통해 보완 및 재점검 후 신청하십시오.                                                                           

    * 검토결과는 담당 공무원이 검토한 내용을 기재하세요(신청자의 제출내용에 이상이 없을 경우에는 생략이                                 

    가능합니다).                                                                                                                        

    * 담당 공무원은 이 점검표를 확인하기 위해서 추가로 분석증명서 등을 요구하지 마시기 바랍니다.                                        

    20  .   .   .                                                                                                                       

    신청자 (소속)           (직)            (성명)                 (서명)                                                               

    확인자 (소속)           (직)            (성명)                 (서명)                                                               

별표 0013: 질소저감사료의 성분등록 사항(제9조제1항 관련)

[별표 13의4] 

질소저감사료의 성분등록 사항(제9조제1항 관련)

양축용 배합사료

┏━━━┯━━━━┯━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┯━━━┓

┃축종  │명 칭   │사용범위 및 용도        │등 록 성 분                           │비고  ┃

┃      │        │(참고사항)              ├──────┬─────┬──────┤(확인 ┃

┃      │        │                        │최소량      │최대량    │기타        │사항) ┃

┃      │        │                        │(%)         │(%)       │(제10조     │      ┃

┃      │        │                        │            │          │관련)       │      ┃

┠───┼────┼────────────┼──────┼─────┼──────┼───┨

┃가.   │큰소후기│체중 500㎏ 이상         │조단백질    │조단백질  │가소화영양  │      ┃

┃고기소│        │                        │조지방      │13%이하   │소          │      ┃

┃      │        │                        │칼슘        │조회분    │총량(TDN)   │      ┃

┃      │        │                        │            │조섬유    │계산치      │      ┃

┃      │        │                        │            │인        │            │      ┃

┠───┼────┼────────────┼──────┼─────┼──────┼───┨

┃나.   │이유돈  │이유 초기~25㎏          │조단백질    │조단백질  │가소화에너  │      ┃

┃돼지  │        │                        │조지방      │17%이하   │지          │      ┃

┃      │        │                        │칼슘        │조회분    │(DE)        │      ┃

┃      │        │                        │라이신 1.3% │조섬유    │            │      ┃

┃      │        │                        │이상        │인        │            │      ┃

┃      ├────┼────────────┼──────┼─────┤            │      ┃

┃      │육성돈  │25~65㎏                 │조단백질    │조단백질  │            │      ┃

┃      │        │                        │조지방      │15%이하   │            │      ┃

┃      │        │                        │칼슘        │조회분    │            │      ┃

┃      │        │                        │라이신 1.0% │조섬유    │            │      ┃

┃      │        │                        │이상        │인        │            │      ┃

┃      ├────┼────────────┼──────┼─────┤            │      ┃

┃      │비육돈  │65㎏~출하               │조단백질    │조단백질  │            │      ┃

┃      │        │                        │조지방      │13%이하   │            │      ┃

┃      │        │                        │칼슘        │조회분    │            │      ┃

┃      │        │                        │라이신 0.8% │조섬유    │            │      ┃

┃      │        │                        │이상        │인        │            │      ┃

┃      ├────┼────────────┼──────┼─────┤            │      ┃

┃      │임신돈  │임신중                  │조단백질    │조단백질  │            │      ┃

┃      │        │                        │조지방      │12%이하   │            │      ┃

┃      │        │                        │칼슘        │조회분    │            │      ┃

┃      │        │                        │라이신 0.62%│조섬유    │            │      ┃

┃      │        │                        │이상        │인        │            │      ┃

┃      ├────┼────────────┼──────┼─────┤            │      ┃

┃      │포유돈  │포유중                  │조단백질    │조단백질  │            │      ┃

┃      │        │                        │조지방      │18%이하   │            │      ┃

┃      │        │                        │칼슘        │조회분    │            │      ┃

┃      │        │                        │라이신 0.9% │조섬유    │            │      ┃

┃      │        │                        │이상        │인        │            │      ┃

┠───┼────┼────────────┼──────┼─────┼──────┼───┨

┃다.   │산란전  │산란개시 2주전~산란개시 │조단백질    │조단백질  │대사에너지  │      ┃

┃닭    │        │                        │조지방      │16%이하   │(MEn)       │      ┃

┃      │        │                        │칼슘        │조회분    │계산치      │      ┃

┃      │        │                        │메치오닌 +  │조섬유    │(메치오닌수 │      ┃

┃      │        │                        │시스틴      │인        │산화유도체  │      ┃

┃      ├────┼────────────┤            ├─────┤(MHA)를 첨  │      ┃

┃      │산란초기│산란개시~40주령         │            │조단백질  │가한 경우에 │      ┃

┃      │        │                        │            │17%이하   │는 첨가사실 │      ┃

┃      │        │                        │            │조회분    │표기)       │      ┃

┃      │        │                        │            │조섬유    │            │      ┃

┃      │        │                        │            │인        │            │      ┃

┃      ├────┼────────────┤            ├─────┤            │      ┃

┃      │산란중기│40~65주령               │            │조단백질  │            │      ┃

┃      │        │                        │            │16%이하   │            │      ┃

┃      │        │                        │            │조회분    │            │      ┃

┃      │        │                        │            │조섬유    │            │      ┃

┃      │        │                        │            │인        │            │      ┃

┃      ├────┼────────────┤            ├─────┤            │      ┃

┃      │산란말기│65주령 이후             │            │조단백질  │            │      ┃

┃      │        │                        │            │15%이하   │            │      ┃

┃      │        │                        │            │조회분    │            │      ┃

┃      │        │                        │            │조섬유    │            │      ┃

┃      │        │                        │            │인        │            │      ┃

┖───┴────┴────────────┴──────┴─────┴──────┴───┚

별표 0014: 성분등록 제외 대상사료 (제9조제3항 관련)

  [별표 14]                                           

  성분등록 제외 대상사료 (제9조제3항 관련)                                                                

  1. 제조업자                                                                                             

   가. 단미ㆍ보조사료 제조용 사료원료(국내산에 한 한다). 다만, 수입하는 사료원료로서 광물성 단미사료 중   

  다량 광물질류ㆍ미량 광물질류, 보조사료를 제조하는데 사용하는 원료로서 사료로 직접 사용될 수 없는 물질   

   나. 반추동물섬유질배합사료 제조용 사료원료(국내산에 한 한다)                                           

   다. 수입대행업자가 수입을 대행하는 단미ㆍ보조사료 제조용 사료원료                                      

     * 수입대행업자 : 제조업자와 수입대행계약을 체결한 후 사료원료를 수입하여 해당 제조업자에게 판매ㆍ    

  공급하는 자                                                                                             

   라. 식품등의 제조업자 및 수업업자가 제조업체에 사료원료용으로 직접 공급하는 식품등(농식품부산물을 포   

  함한다)                                                                                                 

   마. 제2조제1호에 따른 식품등(별표 3의2에 해당하여 사료의 원료로 사용하는 경우)                         

   바. 동물용의약품등의 제조ㆍ수입업자가 사료제조업체에 사료원료용으로 직접 공급하는 별표 17 제1호의 동   

  물용의약품 단, 동물용의약품등의 제조ㆍ수입업자가 사료제조업체에 별표17 제1호의 동물성의약품 외의        

  동물용의약품이 전혀 혼입되지 않았다는 증명서를 제출하는 경우에 한한다.                                  

  2. 양축농가 및 생산자단체 등 실수요자                                                                   

   가. 보릿겨ㆍ쌀겨ㆍ싸라기ㆍ들깨박ㆍ참깨박(국내산에 한한다) 및 별표 1의 식물성 단미사료 중 곡류, 서류,   

  콩류부터 기타 식물류(국내산으로서 가공되지 않은 경우에 한한다)                                          

   나. 목초ㆍ산야초ㆍ볏짚ㆍ보릿짚ㆍ기타 농산물 고간류ㆍ풋베기 사료작물ㆍ청보리ㆍ버섯재배부산물 등 섬유    

  질류사료(국내산에 한하며 수분조절 또는 발효를 목적으로 물질을 첨가ㆍ혼합하는 경우를 포함한다).          

  다만, 국내산 조사료에 대하여 「사료관리법」에서 정하는 검사기준, 잔류허용기준에 따라 검사결과           

  부적합 조사료는 사용금지, 출하연기, 용도전환 등을 명령 할 수 있다.                                      

   다. 제2조제1호에 따른 식품등                                                                           

별표 0015: 사료의 기타 표시사항(제10조제1호 관련)

  [별표 15] <신설 2014.12.8., 개정 2015.8.21. 개정 2016.7.1., 개정 2017.4.1., 개정 2019.10.24., 개정                            

  2023.10.04., 개정 2024.04.01.>                                                                                                

  사료의 기타 표시사항(제10조제1호 관련)                                                                                        

  1. 용어의 정의                                                                                                                

   가. “제조연월일“이라 함은 포장을 제외한 더 이상의 제조가 필요하지 아니한 시점(포장 후 멸균 및                              

  살균 등과 같이 별도의 제조공정을 거치는 사료는 최종공정을 마친 시점)을 말한다. 다만, 소분판                                   

  매하는 사료는 소분용 원 사료의 제조연월일로, 원 사료의 저장성이 변하지 않는 단순 가공처리만                                   

  을 하는 사료는 원 사료의 포장시점으로 한다.                                                                                   

   나. “유통기간 또는 유통기한“이라 함은 사료의 제조일로부터 소비자에게 판매가 허용되는 기간(예시                             

  : 제조일로부터 3월까지) 및 기한(예시 : 2016.12.31까지)을 말한다.                                                              

   다. “품질유지기한“이라 함은 사료의 특성에 맞는 적절한 보존방법이나 기준에 따라 보관할 경우 해                              

  당 사료 고유의 품질이 유지될 수 있는 기한을 말한다.                                                                           

   라. “주표시면“이라 함은 용기ㆍ포장의 표시면 중 상표, 로고 등이 인쇄되어 있어 소비자가 사료를 구                            

  매할 때 통상적으로 소비자에게 보여지는 면을 말한다.                                                                           

  2. 표시방법                                                                                                                   

   가. 표시는 한글로 하는 것을 원칙으로 하되, 소비자의 이해를 돕기 위하여 한자나 외국어를 함께 표                               

  시할 수 있으며, 이 경우 한자나 외국어는 한글표시의 활자보다 크게 표시하여서는 아니 된다. 다                                   

  만, 수입되는 사료와 상표법에 의하여 등록된 상표, 의무표시대상이 아닌 제품의 상품명(이하 “제                                  

  품명”이라 한다), 사료종류 등은 한자나 외국어를 한글표시활자보다 크게 표시 할 수 있다.                                        

   나. 표시는 소비자에게 판매되는 최소 판매단위별 용기ㆍ포장에 하여야 한다. 다만, 포장된 최소판매                               

  단위 제품의 주표시면 면적이 30㎠ 이하이고 여러 개의 최소판매 단위 제품이 하나의 용기ㆍ포장                                    

  으로 진열ㆍ판매할 수 있도록 포장된 경우에는 그 용기ㆍ포장에 대신 표시 할 수 있다.                                             

   다. 최소 판매단위 포장 안에 내용물을 2개 이상으로 나누어 개별포장(이하 “내포장“이라 한다)한 사                             

  료의 경우에는 소비자에게 올바른 정보를 제공할 수 있도록 내포장별로 사료의 명칭, 등록성분량,                                   

  중량, 유통기간 또는 유통기한 등을 표시할 수 있다.                                                                             

   라. 표시는 지워지지 아니하는 잉크로 인쇄하거나 각인(刻印) 또는 소인(消印) 등을 사용하여야 한다.                              

  다만, 벌크사료 운반차량 및 탱크로리는 사료의 표시사항을 차 내부에 비치할 수 있으며, 다음 각                                   

  세목에 해당하는 경우에는 표시사항이 인쇄 또는 기재된 스티커, 라벨(Label) 또는 꼬리표(Tag)를                                   

  사용할 수 있으나 떨어지지 아니하게 부착하여야 한다.                                                                           

    1) 제품포장의 특성상 인쇄, 각인 또는 소인 등으로 표시하기가 불가능한 경우(톤백포장, 드럼통, 컨테                            

  이너, 합성수지제 용기 등)                                                                                                     

    2) 통ㆍ병조림 및 병제품 등의 경우. 다만, 제조(수입)연월일은 제외한다.                                                       

    3) 소비자에게 직접 판매되지 아니하고 사료 제조업자의 제품원료로 사용될 목적으로 공급되는 원료                               

  용 제품의 경우. 다만, 제조(수입)연월일은 제외한다.                                                                            

    4) 아무런 표시가 없는 포장재의 경우. 다만, 제조(수입)연월일은 제외한다.                                                     

    5) 제조업등록 및 성분등록 한 내용이 변경되어 시ㆍ도지사에 변경등록이 수리된 경우와 단순 표시                                

  오류에 따른 경미한 사항은 표시사항이 인쇄 또는 기재된 스티커 및 라벨 등을 사용하여 변경사                                     

  항만을 변경처리 할 수 있다. 이 경우 경미한 사항이란 표시내용의 오ㆍ탈자, 등록성분의 단위, 사                                  

  료의 용도 및 형태의 누락, 주의사항 및 재포장 내용을 표시하지 아니한 경우, 업소명 및 소재지                                    

  를 표시하는 경우 등을 말한다. 다만, 사료의 성분등록번호, 명칭, 등록성분량, 동물용의약품 첨가                                  

  내용, 중량, 제조(수입)연월일, 유통기간 또는 유통기한, 품질유지기한의 표시는 변경처리 할 수 없                                 

  다.                                                                                                                           

    6) 제3호아목에 따라 조사처리 관련 문구를 표시하고자 하는 경우                                                               

    7) 소량 생산하는 제품 등 특성상 공통된 포장재를 사용하여야 할 경우. 다만, 제조(수입)연월일은                                

  제외한다.                                                                                                                     

   마. 표시는 소비자가 쉽게 알아볼 수 있도록 눈에 띄게 바탕색과 구별되는 색상으로 주표시면, 일괄표                              

  시면(소비자가 쉽게 알아 볼 수 있도록 모아서 표시하는 면을 말한다) 및 기타표시면(주표시면과                                    

  일괄표시면 등을 포함한 모든 표시면을 말한다)으로 구분하여 다음 각 세목과 같이 표시하여야                                      

  한다. 제조(수입)연월일, 유통기간 또는 유통기한 등 일부 표시사항의 변조 등을 방지하기 위하여                                   

  각인 또는 압인(壓印) 등을 사용하여 그 내용을 알아 볼 수 있도록 표시하는 경우에는 그러하지                                     

  아니하다.                                                                                                                     

    1) 표시장소별 표시사항 및 활자크기                                                                                          

  ┌──────┬────────────────────────────┬────────┐                                  

  │표시장소    │표시사항                                                │활자크기(포인트)│                                  

  ├──────┼────────────────────────────┼────────┤                                  

  │주표시면    │① 성분등록번호                                         │8 이상          │                                  

  │또는        │② 사료의 명칭 및 형태                                  │8 이상          │                                  

  │일괄표시면  │③ 등록성분량                                           │7 이상          │                                  

  │            │④ 사용한 원료의 명칭                                   │7 이상          │                                  

  │            │⑤ 동물용의약품 첨가내용(배합사료에 한함, 해당 사항이   │8 이상          │                                  

  │            │    없으면 생략가능)                                    │                │                                  

  │            │⑥ 메탄저감제 첨가내용(해당 사항이 없으면 생략가능)     │8 이상          │                                  

  │            │⑦ 사료의 용도(메탄저감제인 경우 괄호안에 “메탄저감제”│8 이상          │                                  

  │            │로, 메탄저감제가 첨가된 경우 또는 농림축산식품부장관    │                │                                  

  │            │이 저메탄사료로 인정한 경우에는 괄호안에 “저메탄사     │                │                                  

  │            │료”로, 질소저감사료에 해당하는 경우 “질소저감사료”로 │12 이상         │                                  

  │            │표시할 수 있다.)                                        │10 이상         │                                  

  │            │⑧ 실제 중량                                            │                │                                  

  │            │⑨ 제조(수입)연월일 및 유통기간 또는 유통기한           │                │                                  

  ├──────┼────────────────────────────┼────────┤                                  

  │기타 표시면 │① 주의사항                                             │10 이상         │                                  

  │            │② 제조(수입)업자의 상호(공장 명칭)ㆍ주소 및 전화번호   │8 이상          │                                  

  │            │③ 재포장 내용(해당 사항이 없으면 생략가능)             │10 이상         │                                  

  │            │④ 기타사항                                             │6 이상          │                                  

  └──────┴────────────────────────────┴────────┘                                  

    2) 주표시면(또는 일괄표시면)이 200㎠ 이하인 제품의 경우 1)의 표시사항에서 규정한 활자크기보다                               

  2포인트 작게 표시할 수 있다.                                                                                                  

    3) 제2호나목에 해당하는 내포장한 제품의 표시사항 및 활자크기는 1)의 규정을 따르지 아니할 수                                 

  있다.                                                                                                                         

    4) 사료의 명칭과 제품명을 주표시면 또는 일괄표시면에 의무 표시사항과 함께 표시할 경우에는 의무                              

  표시사항은 제품명과 별도로 구분하여 표시하여야 하며, 별도 구분없이 표시할 경우에는 규칙 별                                    

  표 4 제1호나목7)에 따라 제품명을 사료의 명칭에 비하여 크게 표시해서는 안 된다. 다만, 그 밖의                                  

  동물ㆍ어류용 배합사료와 애완(반려)동물용 사료, 소비자에게 직접 판매되지 아니하고 사료 제조                                    

  업자의 제품원료로 사용될 목적으로 공급되는 원료용 제품의 경우에는 그러하지 아니할 수 있다.                                    

    5) 사료의 형태 중 규칙 별표 4 제1호나목2)가)(7)의 그 밖의 형태는 개껌, 겔, 과립, 도넛, 바, 박편, 베일,                      

  생물, 스틱, 시럽, 액상고형, 육포, 젤리, 종실, 칩, 캡슐, 쿠키, 큐브, 페이스트상, 편상, 환 등으로 표시할                        

  수 있다.                                                                                                                      

    6) 사료의 용도는 아래와 같이 표시하여야 한다.                                                                               

     가) 단미ㆍ보조사료는 사료원료용, 양축농가용, 양어농가용, 실험동물용, 애완(반려)동물용, 사육하는                            

  동물용, 관상용수산동물용, 양식용수산동물용으로 표시하여야 하며, 2개 이상을 병행하여 표시                                      

  하는 것이 가능하다. 다만, 단미ㆍ보조사료가 별표 26의 메탄저감제에 해당하고 메탄저감제의                                       

  기능으로 제조ㆍ수입ㆍ판매하는 경우에는 괄호안에 메탄저감제를 표시해야 한다.                                                   

     나) 단미ㆍ보조사료 중 사료원료용 이외의 용도는 “성장단계 + 동물명”, “성장단계”, “동물명”, “동                       

  물종류”로 용도를 표시할 수도 있다.                                                                                           

     다) 배합사료는 별표 13에 따른 사용범위를 용도로 표시하거나, 나)를 준용하여 동물명 및 성장단                                

  계별로 구분하여 표시할 수 있다. 다만, 별표 26의 메탄저감제를 첨가하였거나, 농림축산식품부                                     

  장관에게 인정을 받아 저메탄사료로 제조ㆍ수입ㆍ판매할 경우에는 괄호안에 저메탄사료를 표시                                      

  해야 한다.                                                                                                                    

    7) 메탄저감제의 첨가내용은 별표 26의 메탄저감제(제품명)와 사용량(첨가비율)을 표시하여야 한다.                               

   바. 용기나 포장은 다른 제조업자의 표시 및 다른 제품의 표시가 있는 것을 사용하여서는 아니 된다.                               

  다만, 사료에 유해한 영향을 미치지 아니하는 용기로서 일반시중에 유통 판매할 목적이 아닌 다른                                   

  회사의 사료원료로 제공할 목적으로 사용하는 경우와 「자원의 절약과 재활용촉진에 관한 법률」                                    

  에 따라 재사용되는 유리병(같은 사료유형 또는 유사한 사료명칭으로 사용한 것에 한한다)의 경우                                   

  에는 그러하지 아니할 수 있다.                                                                                                 

   사.  (라목5)로 이동)                                                                                        

   아. 제조업자의 상호(공장 명칭) 및 주소는 사료성분등록증에 기재된 업체명 및 소재지를 표시하여야                               

  한다. 이 경우 제조업자의 상호, 주소 및 전화번호 대신 반품교환업무를 대표하는 소재지 및 전화                                   

  번호를 표시할 수 있다.                                                                                                        

   자. 사료를 소분하여 재포장하는 경우에는 원래 표시 사항을 그대로 표시하여야 하며, 재포장한 자의                               

  상호ㆍ주소ㆍ전화번호도 표시하여야 하여야 한다. 재포장한 자의 소재지 대신 반품교환 업무를 대                                   

  표하는 소재지 및 전화번호를 표시할 수 있다.                                                                                   

   차. 수입사료에 대한 표시방법                                                                                                 

    1) 수출국에서 유통되고 있는 사료의 경우에는 수출국에서 표시한 표시사항이 있어야 하고, 한글이                                

  인쇄된 스티커 등을 사용할 수 있으나 떨어지지 아니하게 부착하여야 하며, 원래의 용기ㆍ포장에                                    

  표시된 제품명, 원료명, 수입연월일(또는 제조연월일), 유통기간 또는 유통기한 등 일자표시에 관                                   

  한 사항 등 주요 표시사항을 가려서는 아니 된다. 다만, 한글로 표시된 용기ㆍ포장으로 포장하여                                    

  수입되는 사료의 경우에는 라목에서 허용하는 경우를 제외하고는 표시사항을 스티커 등으로 부착                                    

  하여서는 아니 된다.                                                                                                           

    2) 수입업자의 상호 및 주소는 사료성분등록증에 기재된 업체명 및 소재지를 표시하고, 수입신고한                                

  해당 사료의 수출국명과 제조회사명을 병행하여 표시하여야 한다. 이 경우 수출국명과 제조회사명                                   

  이 외국어로 표시되어 있으면 한글로 따로 표시하지 아니할 수 있으며, 한글표시 스티커 등에 당해                                  

  제품수출국의 언어로 표시할 수 있다.                                                                                           

    3) 자가제조용으로 수입하는 사료의 원료인 경우에는 제품명, 사료의 명칭, 사용한 원료의 명칭, 제조                             

  회사명과 수입연월일(또는 제조연월일)ㆍ유통기간 또는 품질유지기한만을 표시할 수 있고, 그 사                                    

  료에 영어 또는 수출국의 언어 등으로 표시된 경우 한글표시를 생략할 수 있다.                                                    

    4) 수입되는 사료 중 다음에 해당하는 것은 한글표시를 생략할 수 있다.                                                         

     가) 용기ㆍ포장에 넣어지지 아니한 자연상태의 농ㆍ임ㆍ축ㆍ수산물                                                             

     나) 「대외무역법 시행령」 제26조의 규정에 의하여 외화획득용으로 수입하는 사료 및 사료원료. 다                              

  만, 같은 법 시행령 제26조제1항제3호의 규정에 따라 관광사업용으로 수입되는 것은 제외한다.                                      

    5) 수입연월일은 수출국의 제조연월일이 표시된 경우 생략할 수 있다.                                                           

    6) 외국의 인증마크 중 국내 법령에서 허용하지 않는 것(HACCP 사료공장, 유기농, 친환경 등)은 표시할 수                         

  없다.                                                                                                                         

    7) 수출국의 등록성분 표시사항이 사료성분등록증의 성분량과 비교하여 「사료검사기준」 별표 4의                                

  허용오차를 벗어난 경우에는 스티커 등을 이용하여 가려야 한다.                                                                  

   카. 유통기간 또는 유통기한 및 보관방법                                                                                       

    1) 유통기간 또는 유통기한은 제조일과 함께 표시하여야 하며, 정보표시면에 일괄표시하기가 곤란한                               

  경우에는 해당 위치에 유통기간 또는 유통기한의 표시위치를 명시하여야 한다.                                                     

    2) 수입되는 사료인 경우 수출국의 유통기간 또는 유통기한 표시순서가 위의 1) 표시순서와 다를 때                               

  에는 소비자가 알아보기 쉽도록 년, 월, 일의 표시순서를 예시하여야 하며, “연월”만 표시되었을                                  

  경우에는 “연월일” 중 “일”의 표시는 제품의 표시된 해당 “월”의 1일로 표시하여야 한다.                                     

    3) 유통기간의 표시는 유통기간이 1개월 이내이면 “제조일로부터 ○○일까지“, 유통기간이 12개월 미                            

  만이면 “제조일로부터 ○○개월까지“, 유통기간이 1년 이상이면 “제조일로부터 ○○개월까지 또는                                

  ○○년까지“로 표시하여야 하며, 유통기한의 표시는 “○○년○○월○○일까지“ 또는 “○○.○○.○                              

  ○까지“, “○○○○년○○월○○일까지“ 또는 ○○○○.○○.○○까지“로 표시하여야 한다.                                     

    4) 유통기간 또는 유통기한이 서로 다른 여러 가지 제품을 함께 포장하였을 경우에는 그중 가장 짧                                

  은 유통기간 또는 유통기한 하나만을 표시하여야 한다.                                                                           

    5) 유통기간 또는 유통기한을 표시함에 있어 해당 제품의 사용 또는 보존에 관한 기준이 정하여진                                 

  경우에는 이를 함께 표시하여야 한다. 이 경우 냉동 또는 냉장상태가 계속적으로 유지되어야 하                                     

  는 제품은 「냉동보관」 또는 「냉장보관」이라고 표시하여야 한다.                                                               

   타. 실제 중량(내용량)                                                                                                        

    1) 실제 중량(내용량)은 내용물의 성상에 따라 중량ㆍ용량 또는 개수로 표시하여야 한다. 이 경우 내                              

  용물이 고체 또는 반고체일 경우 중량(톤ㆍkgㆍg 등)으로, 액체일 경우 용량(㎘ㆍℓㆍ㎖ 등)으로,                                   

  고체와 액체의 혼합물일 경우 중량 또는 용량으로 표시하고, 개수로 표시할 때에는 중량 또는 용                                    

  량을 괄호 속에 함께 표시하여야 한다.                                                                                          

    2) 급여 전에 버리게 되는 액체(제품의 특성에 따라 자연적으로 발생하는 액체 제외)와 함께 포장되                               

  는 사료는 액체를 뺀 사료의 중량을 표시하여야 한다.                                                                            

    3) 정제형태로 제조된 제품의 경우에는 판매되는 한 용기ㆍ포장내의 정제수와 총중량을, 캡슐형태로                               

  제조된 제품의 경우에는 캡슐수와 피포제 중량을 제외한 내용량을 표시하여야 한다. 이 경우 피                                     

  포제의 중량은 내용물을 포함한 캡슐 전체 중량의 50%미만이어야 한다.                                                            

   파. 살균제품 또는 멸균제품은 “살균제품“, “멸균제품“으로 각각 표시하여야 한다.(별표 9 사료의 멸균                         

  및 살균처리 기준 참고)                                                                                                        

   하. 시각장애인을 위하여 사료명칭, 유통기간 등의 표시사항을 알기 쉬운 장소에 점자로 표시할 수 있                              

  다. 이 경우 점자표시는 스티커 등을 이용할 수 있다.                                                                            

   거. 품질유지기한                                                                                                             

    1) 소비자의 올바른 사료사용을 위하여 품질유지기한을 표시할 수 있다. 다만, 통조림 형태로 되어                                

  있는 사료는 품질유지기한을 가급적 표시하여야 한다.                                                                            

    2) 품질유지기한은 “○○년○○월○○일”, “○○.○○.○○”, “○○○○년○○월○○일” 또는 “○○○                      

  ○.○○.○○”로 표시하여야 하고, 그 밖의 표시사항은 카. 1)부터 5)까지의 규정을 준용하여 표시                                 

  하여야 한다.                                                                                                                  

    3) 품질유지기한으로 표시하는 사료는 유통기간 또는 유통기한 표시를 생략할 수 있다.                                           

    4) 유통기간 또는 유통기한과 함께 표시하는 품질유지기한 표시는 스티커 등을 이용할 수 있다.                                   

   너. 판매의 목적이 아닌 제품의 선택 등을 위하여 미리 소비자가 사용하도록 제조 또는 수입된 사료                                

  (견본품이나 비매품 등)는 사료의 명칭, 제조(수입)업자의 상호, 유통기간, 주의사항만을 표시할 수                                 

  있다.                                                                                                                         

   더.                                                                                                         

   러. 제조연월일(이하 “제조일”로 표시할 수 있다)                                                                             

    1) 제조일은 “○○년○○월○○일”, “○○.○○.○○”,“○○○○년○○월○○일”, “○○○○.○○.○○”                   

  또는  “유통기한으로부터 ○○월 전 제조“로 표시하여야 하고, 정보표시면에 일괄표시하기가 곤                                   

  란한 경우에는 해당 위치에 제조일의 표시위치를 명시하여야 한다. 단, 동일제품으로서 국내 내수                                   

  용과 수출을 동시목적으로 제조된 사료의 경우에는 ”○○일○○월○○년“으로 표시 할 수 있으                                    

  며, 소비자가 알아보기 쉽도록 표시순서를 예시하여야 한다.                                                                      

    2) 수입되는 사료에 표시된 수출국의 제조일의 “연월일”의 표시순서가 1)의 기준과 다를 경우에는                               

  소비자가 알아보기 쉽도록 “연월일”의 표시순서를 예시하여야 하며, “연월”만 표시되었을 경우에                                

  는 “연월일” 중 “일”의 표시는 제품의 표시된 해당 “월”의 1일로 표시하여야 한다.                                           

    3) 제조일이 서로 다른 여러 가지 제품을 함께 포장하였을 경우에는 그중 가장 빠른 제조일 하나만을 표시하여                     

  야 한다.                                                                                                                      

   머. 등록성분의 표시량과 실제 측정값의 허용오차 범위(별표 13의2 제3호 참조, 권고기준)                                         

    1) 최저량(이상)에 해당하는 등록성분의 실제측정 값은 가급적 표시량의 120% 미만이어야 한다.                                   

    2) 최고량(이하)에 해당하는 등록성분의 실제측정 값은 가급적 표시량의 80% 이상이어야 한다.                                    

    3) 1)과 2)의 규정에도 불구하고 규칙 별표 4의 규정에 의한 등록 성분량은 “최저량 이상”으로 되어                             

  있는 경우에는 실제 측정값은 표시 값 이상이어야 하고, 등록 성분량이 “최대량 이하”로 되어 있                                  

  는 경우에는 표시 값 이하이어야 한다.                                                                                          

    4) 실제 측정값이 3)에서 규정하고 있는 범위를 벗어난다 하더라도 그 양이 「사료검사기준」 별표                                

  4의 허용오차에서 인정하는 범위 이내인 경우에는 표시량을 벗어난 것으로 보지 아니한다.                                          

   버. 사용한 원료의 명칭 및 함량                                                                                               

    1) 사료의 제조 시 사용한 모든 원료의 명칭(최종제품에 남지 않는 정제수는 제외한다. 이하 같다)을                              

  많이 사용한 순서에 따라 표시하여야 한다. 다만, 중량비율로서 2% 미만인 경우에는 함량 순서에                                    

  따르지 아니하고 표시할 수 있다.                                                                                               

    2) 프리믹스배합사료 및 각종 합제류 등의 사료를 사용한 경우에는 사용한 사료의 명칭과 함께 괄호                               

  안에 대표원료 2 ~ 3가지를 표시할 수 있다.                                                                                     

    3) 단미사료(광물성사료에 한한다)ㆍ보조사료ㆍ식품첨가물(이하 “보조사료등”이라 한다)에 대한 표시                            

  는 다음과 같이 할 수 있다.                                                                                                    

     가) 「식품등의 표시기준」 별표 4에 해당하는 용도로 사료를 제조 시에 직접 사용ㆍ첨가하는 보                                 

  조사료등은 그 명칭과 용도(합성감미료, 합성착색제(또는 합성착색료), 합성보존제(또는 합성보                                     

  존료), 산화방지제, 표백제, 합성살균제, 발색제, 향미증진제)를 함께 표시할 수 있다. [예시 : 삭                                  

  카린나트륨(합성감미료) 등]                                                                                                    

     나) 「식품등의 표시기준」 별표 5에 해당하는 보조사료등의 경우에는 「사료 등의 기준 및 규                                   

  격」 또는 「식품첨가물 기준 및 규격」에서 고시한 명칭이나 같은 표에서 규정한 간략명(결                                        

  정섬유소 등)으로 표시할 수 있다.                                                                                              

     다) 「식품등의 표시기준」 별표 6에 해당하는 보조사료등의 경우에는 「사료 등의 기준 및 규                                   

  격」 또는 「식품첨가물 기준 및 규격」에서 고시한 명칭이나 같은 표에서 규정한 간략명 또                                        

  는 주용도(중복된 사용 목적을 가질 경우에는 주요 목적을 주용도로 한다.)로 표시할 수 있다.                                      

  다만, 「식품등의 표시기준」 별표 6에서 규정한 주용도(산도조절제, 영양강화제, 유화제, 증점                                     

  제, 합성착향료, 피막제, 향미증진제, 효소제제 등)가 아닌 다른 용도로 사용한 경우에는 고시한                                    

  명칭 또는 간략명으로 표시할 수 있다.                                                                                          

    4) 다음에 해당하는 경우에는 1)부터 3)의 규정에 불구하고 다음과 같이 표시할 수 있다.                                         

     가) 유지류는 “유지류 명칭” 또는 “동물성 유지, 식물성 유지(올리브유 제외)”로 표시할 수 있다.                            

  다만 수소첨가로 경화한 식용유지에 대하여는 경화유 또는 부분경화유임을 표시하여야 한다.                                        

  [예시 : 식물성유지(부분경화유) 또는 대두부분경화유 등]                                                                        

     나) 전분은 ??전분명(OO전분)?? 또는 ??전분??으로 표시할 수 있다.                                                    

     다) 단미사료(동ㆍ식물성에 한 한다)에 해당하는 원재료 중 개별 원재료의 중량비율이 2%미만인 경                               

  우에는 사료종류 또는 「식품의 기준 및 규격」 제1. 4. 식품원료 분류 1), 2)에서 정한 분류명                                     

  칭으로 표시할 수 있다.                                                                                                        

     라) 당해 제품에 직접 사용하지 않았으나 사료의 원료에서 이행(carry-over)된 보조사료등이 당해                                

  제품에 효과를 발휘할 수 있는 양보다 적게 함유된 경우에는 그 보조사료등의 명칭을 표시하지 아                                   

  니할 수 있다.                                                                                                                 

     마) 사료의 가공과정 중 첨가되어 최종 제품에 제거되는 보조사료등의 경우에는 그 명칭을 표시하                                

  지 아니할 수 있다.                                                                                                            

     바) 주표시면의 면적이 30㎠ 이하인 것은 정제수를 제외한 5가지 이상의 원재료명만을 표시할 수                                 

  있다.                                                                                                                         

     사) 천연착향료를 사용한 경우 “천연착향료” 또는 구체적인 명칭으로, 합성착향료를 사용한 경우                               

  “합성착향료와 그 향의 명칭”으로 표시[예시 : 합성착향료(○○향)]할 수 있다.                                                  

   서. 강조 표시기준                                                                                                            

    1) “천연“의 표시는 「식품첨가물의 기준 및 규격」에 고시된 천연첨가물의 경우에는 표시가 가능                               

  하며, 합성결착제ㆍ인공(조합)향ㆍ합성착색제ㆍ합성보존제 또는 어떠한 인공이나 수확 후 첨가되                                    

  는 합성성분이 제품내에 포함되어 있지 아니하고, 최소한의 물리적 공정 이외의 공정을 거치지                                      

  아니한 경우에는 표시가 가능하다.                                                                                              

    2) “100%“의 표시는 표시대상 원료를 제외하고는 어떠한 물질도 첨가하지 아니한 경우에 한하여 표                              

  시할 수 있다. 다만, 농축액을 희석하여 원상태로 환원하여 사용하는 제품의 경우에는 환원된 표시대                                

  상 원재료의 농도가 100%이상이면 제품내에 보조사료등이 포함되어 있다 하더라도 100%의 표시                                      

  를 할 수 있다.                                                                                                                

    3) 밀, 호밀, 보리를 사용하지 않으면서 글루텐 함량이 20mg/kg 이하인 사료는 무글루텐(Gluten                                   

  Free)의 표시를 할 수 있다.                                                                                                    

    4) “저”, “무”, “고(또는 풍부)” 또는 “함유(또는 급원)” 용어의 강조표시는 「식품등의 표시기준」 제                    

  9조 및 별지 1의 규정을 준용하여 영양소 함량 강조표시 세부기준에 적합하게 제조과정을 통하여                                    

  해당 영양소의 함량을 낮추거나 제거한 경우에만 사용할 수 있다.                                                                 

    5) “덜”, “더”, “감소 또는 라이트”, “강화”, “첨가” 용어 사용                                                       

     가) 영양소 함량의 차이를 다른 제품의 표준 값과 비교하여 백분율 또는 절대 값으로 표시할 수 있                               

  다. 이 경우 다른 제품의 표준 값은 동일한 사료명칭 중 시장점유율이 높은 3개 이상의 사료를                                      

  대상으로 산출하여야 한다.                                                                                                     

     나) 영양소의 함량의 차이가 다른 제품의 표준값과 비교하여 조단백질, 조지방, 조섬유, 조회분, 아                              

  미노산, 열량, 탄수화물, 당류, 포화지방, 트랜스지방, 콜레스테롤, 나트륨의 경우는 최소 25% 이                                   

  상의 차이가 있어야 하고, 나트륨을 제외한 「식품등의 표시기준」 [표 2] 영양소 기준치표에서                                     

  정한 비타민 및 무기질의 경우는 최소 1일 권장량의 10% 이상의 차이가 있어야 한다.                                               

     다) 나)에 해당하는 제품 중 “덜, 라이트, 감소”를 사용하고자 하는 경우에는 해당 영양성분의 함량                            

  차이의 절대 값이 4)의 규정에 의한 “저”의 기준 값보다 커야 하고, “더, 강화, 첨가”를 사용하                                 

  고자 하는 경우에는 해당 영양성분의 함량차이의 절대 값이 4)의 규정에 의한 “함유”의 기준                                      

  값보다 커야 한다.                                                                                                             

    6) “메탄저감제”, “저메탄사료” 용어는 별표 26에 따라 국립축산과학원 홈페이지에 공고한 메탄저감                           

  제와 이를 첨가하여 제조한 사료 또는 농림축산식품부 장관이 저메탄사료로 인정한 경우에만 사                                     

  용할 수 있다.                                                                                                                 

    7) 소비자가 오인ㆍ혼동하는 표시 금지                                                                                        

     가) 영양소의 함량을 낮추거나 제거하는 제조의 과정을 하지 아니한 원래의 사료에 해당 영양소 함                               

  량이 전혀 들어 있지 않은 경우 그 영양소에 대한 강조 표시 금지                                                                 

     나) 합성착향료를 사용하여 원재료의 향 또는 맛을 내는 경우 그 향 또는 맛을 뜻하는 그림, 사진                                

  등의 표시 금지. 다만, 아래 예시 등에 해당하는 경우에는 표시 가능                                                              

         (예시) 원재료로 사과과즙과 착향료를 함께 사용한 경우에는 사과 그림 등을 표시 가능                                      

     다) “이온수”, “생명수”, “약수”, “무 방부제” 등의 용어 표시 금지                                                    

     라) “무 보존제(또는 무 보존료)”, “보존제 무첨가(또는 보존료 무첨가)”, “무 착색제(또는 무 색소)”                      

  등의 표시 금지. 다만, 보존제와 착색제를 직접 첨가하지 않고, 원재료로부터 이행(carry-over)                                     

  된 보존제와 착색제도 존재하지 않는 경우에 한해 표시 가능                                                                      

    8) 특정균 등의 함유사실을 표시하고자 할 때에는 그 균 등의 함유균수 등을 표시하여야 한다.                                    

   어. 수출사료에 대하여는 수입국 표시기준에 따라 표시할 수 있다.                                                               

   저. 제품에 사용되는 합성수지제의 용기 또는 포장지에 대한 포장재질 표시                                                       

    1) 합성수지제의 재질에 따라 염화비닐수지, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리염화비닐리                              

  덴, 폴리에틸렌테레프탈레이트, 페놀수지 등으로 각각 구분하여 표시                                                              

    2) 「자원의 절약과 재활용 촉진에 관한 법률」에 따라 폴리에틸렌(PE), 폴리프로필렌(PP), 폴리에틸                              

  렌테레프탈레이트(PET), 폴리스티렌(PS), 염화비닐수지(PVC)가 표시되어 있으면 별도 재질표시                                      

  생략 가능                                                                                                                     

   처. 냉동 사료의 표시사항                                                                                                     

    1) 냉동 사료는 유형에 따라 가열하지 않고 급여하는 냉동 사료는 “가열하지 않고 급여하는 냉동 사                              

  료”로, 가열하여 급여하는 냉동 사료는 “가열하여 급여하는 냉동 사료”로 구분 표시하여야 한다.                                 

    2) “가열하여 급여하는 냉동 사료”의 경우 살균한 제품은 “살균제품”, 발효제품 또는 미생물제 첨가                           

  제품은 효모 또는 균수 등을 함께 표시하여야 한다.                                                                              

    3) 냉동 사료는 해당 사료의 냉동보관방법 및 조리시의 해동방법을 표시하여야 한다.                                             

    4) 조리 또는 가열처리가 필요한 냉동 사료는 그 조리 또는 가열처리방법을 표시하여야 한다.                                     

    5) 원재료의 전부가 식육 또는 농산물인 것으로 오인되게 하는 표시를 하여서는 아니 된다. 다만, 식                              

  육 또는 농산물의 함량을 제품명과 같은 위치에 표시하는 경우에는 그러하지 아니하다.                                             

    6) 제조업체가 냉동 사료를 해동하여 출고하려는 경우에는 제조연월일, 해동연월일, 냉동 사료로서의                              

  유통기한 또는 품질유지기한 이내로 설정한 해동 후 유통기한 또는 품질유지기한, 해동 후 보관                                     

  방법 및 주의사항을 주표시면에 10포인트 이상으로 표시하여야 한다.                                                              

   커. 기타 표시사항                                                                                                            

    1) pH가 4.6 이하인 산성통조림사료는 “산성통조림”으로 표시하여야 한다.                                                     

    2) 레토르트(retort) 사료는 “레토르트사료”로 표시하여야 한다.                                                              

    3) 식육의 특정부위를 사용하는 제품은 식육의 원료육 명칭 뒤에 괄호로 그 부위명을 표시하여야 한                               

  다.                                                                                                                           

    4) 원재료의 전부가 식육인 것으로 오인되게 하는 표시를 하여서는 아니된다. 다만, 식육의 함량을                                

  해당 표시와 동일한 위치에 표시하는 경우에는 그러 하지 아니할 수 있다.                                                         

    5) 어분, 육분, 육골분, 가금부산물건조분(계육분 포함) 등을 사용한 경우 원재료 명칭에 “OO고기”라                            

  고 표시할 수 없다.                                                                                                            

    6) 희석ㆍ용해하여 급여하는 제품은 그 희석배수 또는 희석량을 표시하여야 한다.                                                

    7) 액상 제품 중 400mL 당 열량이 2㎉이하인 제품은 “다이어트”라는 용어를 표시할 수 있다.                                    

    9) 추출제는 특수용도사료와 혼동될 수 있는 표시를 하여서는 아니된다.                                                         

  3. 세부표시기준 및 방법                                                                                                       

   가. 제6조제2호의 규정에 의한 프리믹스용 배합사료 또는 제8조제1항의 규정에 의한 별표 5 및 별표                                

  6에 기재된 단미ㆍ보조사료는 다음에 열거하는 사항을 표시하여야 한다.(별표 5 및 별표 6, 별표 13                                 

  제2호 참조)                                                                                                                   

    1) 사료의 명칭을 표시할 때에는 별표 5 및 별표 6에서 규정하고 있는 명칭을 먼저 쓰고, 원소 및 화                              

  합물의 화학 명칭을 공정에 기재된 영문명으로 명기.                                                                             

      예) 비타민B12 (Cyanocobalamin), 비타민C (Ascorbic acid)                                                                   

    2) 유효 성분명 및 함량, 부형물질 등의 명칭 및 함량. 다만, 착향료에 있어서는 유효성분명 및 함량                              

  의 표시가 필요 없다. 또한 별표 5 및 별표 6에서 정량법이 정하여 있지 않은 사료(착향료는 제외                                   

  한다)의 함량은 함유율을 중량 퍼센트(%)로 표시한다.                                                                            

    3) 첨가할 수 있는 배합사료의 종류 및 양                                                                                     

    4) 보존상의 주의사항은 별표 5 및 별표 6에서 정하여진 보존방법을 기재한다.                                                   

   나. 삭제                                                                                                                     

   다. 반추동물용 섬유질 배합사료는 혼합된 원료명 은 섬유질류, 곡류, 박류, 강피류, 식품가공부산물류,                            

  기타 원료(구체적 원료 명칭 표시)로 분류하여 표시하여야 한다.(별표 13 제4호 참조)                                              

   라. 실험용동물 배합사료는 사료공정(사용원료, 제조공정, 수분함량 등)을 달리하여 성분등록 및 제조                              

  한 사항을 표시하여야 한다.(별표 13 제5호 참조)                                                                                

   마. 시험연구용의 사료에는 「시험연구용」이라는 문자를 표시하여야 한다.                                                       

   바. 양식용 수산동물용 배합사료에서 추가로 표시하는 성분은 사료종류와 배합비율, 원료의 명칭을 아                              

  래 예시를 기준으로 표시하여야 한다.                                                                                           

  ┏━━━━━━━━┯━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┓                                                

  ┃사료종류        │배합비율  │원료 명칭                                   ┃                                                

  ┠────────┼─────┼──────────────────────┨                                                

  ┃동물성 단백질류 │65％ 이상 │새우분, 어분, 육분                          ┃                                                

  ┠────────┼─────┼──────────────────────┨                                                

  ┃식물성 단백질류 │15％ 이하 │대두박(탈피), 밀글루텐, 옥수수글루텐, 주정박┃                                                

  ┠────────┼─────┼──────────────────────┨                                                

  ┃곡류            │10％ 이하 │소맥분, 옥수수                              ┃                                                

  ┠────────┼─────┼──────────────────────┨                                                

  ┃유지류          │6％ 이상  │어유, 옥수수유                              ┃                                                

  ┠────────┼─────┼──────────────────────┨                                                

  ┃보조사료 등     │4% 이상   │결착제, 비타민혼합제, 인산칼슘              ┃                                                

  ┗━━━━━━━━┷━━━━━┷━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┛                                                

   주1)?사료종류는 배합비율이 큰 순으로 4개 이상의 단미사료와 보조사료를 표시하여야 한다.                                      

   주2) 원료명칭은 배합비율이 큰 순으로 2개 이상을 표시하여야 한다.                                                             

   사. 확인받은 동물성사료를 제조 또는 수입하는 자는 지대 등 포장지에 “확인받은 동물성 사료“를 표                             

  시하여야 하며, 별표 8에 따라 확인받지 않은 사료를 제조 또는 수입한 자는 지대 또는 포장지 등                                   

  에 “소 등 반추동물에 급여금지“ 또는 “소 등 반추동물 사료로 사용금지”를 표시하여야 한다.                                   

   아. 조사처리한 사료는 용기에 넣거나 또는 포장한 후 판매하여야 하며, 포장재 및 용기 등에 조사여                               

  부를 표시하여야 한다.(별표 9 참조)                                                                                            

    1) 활자크기(공통사항) : 7포인트 이상으로 표시                                                                               

    2) 표시장소는 완제품의 경우 소비자가 알아보기 쉬운 장소에 표시사항을 표시하여야 하고, 조사처리                              

  한 원료를 사용한 사료의 경우 “사용한 원료의 명칭”란에 그 조사한 내용을 표시                                                 

    3) 표시사항은 완제품의 경우 조사처리된 사료임을 나타내는 문구 및 조사도안(), 조사처리한 원                                  

  료를 사용한 사료의 경우에는 다음과 같다.                                                                                      

     가) 개별 원료명과 함께 표시 : 원료명 표시란에 해당 원료명에 괄호로 “조사처리”로 표시[예시: “양                          

  파(조사처리)”, “조사처리마늘” 등]                                                                                          

     나) 조사처리한 사료 일괄표시 : 조사처리한 원료를 괄호로 하여 일괄표시                                                      

         [예시 : 조사처리한 원료(감자, 마늘, 양파 등)]                                                                          

     다) 어떤 원료가 조사처리 되었는지 확인하기 어려운 경우에는 “조사처리된 원료 일부 함유” 또는                              

  “일부 원료 조사처리” 등의 내용으로 표시할 수 있다.                                                                          

   자. 별표 11부터 별표 13의 비고란에서 표시하도록 기준이 설정된 사항은 표시하여야 하며, 미생물제                               

  를 이용해서 발효한 사료 중 그 명칭 앞에 “발효”를 표시한 경우(예 : 발효대두박)에는 균주를 함                                 

  께 표시하여야 한다(별표 3의3 참조).                                                                                           

   차. 제12조제4항에 따른 단미사료는 혼합한 사료 또는 물질의 명칭ㆍ혼합비율 등을 반드시 표시하고                                

  보관성이 약하거나 사용상 주의를 요하는 사료에 대하여는 이를 용기 및 포장에 표시하여야 한                                      

  다.(별표 23 참조)                                                                                                             

   카. 제12조제6항에 따라 부형제를 첨가한 경우에는 혼합한 부형제의 명칭 등을 반드시 표시하고 보관                               

  성이 약하거나 사용상 주의를 요하는 사료에 대하여는 이를 용기 및 포장에 표시하여야 한다.(별                                    

  표 24 참조)                                                                                                                   

   타. 법 제15조제2항과 별표 22에 따라 6개월령 이상의 고기소 또는 젖소용 배합사료에 비단백태질소                                

  화합물을 혼합하거나, 양계용 또는 양돈용 배합사료에 염산불용물질을 혼합할 경우에는 그 물질의                                   

  혼입량과 주의사항 등을 용기 및 포장에 정확히 표시하여야 한다.                                                                 

   파. 승인된 유전자변형생물체를 사료에 사용하는 경우에는 소비자가 쉽게 알아볼 수 있도록 “유전자                               

  변형 ○○포함 사료“ 또는 사용한 원료의 명칭 바로 옆에 괄호로 “유전자변형“ 또는 “유전자변형                                

  된 ○○“으로 표시하여야 한다. 다만, 승인된 유전자변형생물체 여부를 확인할 수 없는 경우는                                     

  “유전자변형 ○○포함 가능성 있음“이라고 표시할 수 있다.                                                                     

     * “○○”에는 유전자변형생물체의 명칭(옥수수, 콩, 감자 등)을 적어야 한다.                                                 

   하. 유효성분명 및 함량의 표시방법                                                                                            

    1) 별표 5 및 별표 6에서 규정한 유효성분명은 성분규격에서 정하고 있는 함량의 주성분 명칭으로                                 

  한다.                                                                                                                         

    2) 함량표시                                                                                                                 

     가) 함량은 성분규격의 함량을 화합물 또는 원소의 양 및 단위 또는 역가로 표시되어 있는 양으로                                

  하며 유효성분에 대한 화합물 또는 원소의 양의 표시방법은 표 1과 같이 한다.                                                     

     나) 함량의 내용을 정하여 구분할 필요가 있을 때에는 표  2와 같이 화합물 함량 또는 원소 함량으                               

  로 병기하여야 한다. 또한, 경우에 따라서는 미네랄 함량에 별도로 원소함량으로서 환산량을 병                                     

  기할 수도 있다.                                                                                                               

     다) 성분규격에서 함량이 정하여져 있지 않은 제조용 원물의 함유율은 중량%로 표시한다.                                        

     라) 착향료에 대해서는 유효성분명 및 함량의 표시를 필요로 하지 아니한다.                                                    

     마) 단미ㆍ보조사료의 주성분의 안정을 위해 사용하는 최소한의 항산화제 등 보존제의 사용(필요에                               

  따라 사용량의 폭은 인정함)은 첨가목적에 (보존용)이라고 부기하여 표시                                                          

  [표 1] 유효성분별 함량 표시방법                                                                                               

  ┏━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┯━━━━━┓        

  ┃유효성분명                                │함량(/kg)                                                 │비고      ┃        

  ┠─────────────────────┼─────────────┬───────────────┼─────┨        

  ┃L-라이신 염산염                           │○○g                     │(L-라이신      ○○g)         │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃L-라이신 황산염                           │○○g                     │(L-라이신      ○○g)         │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃DL-메치오닌                               │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃DL-메치오닌 수산화 유도체                 │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃L-트레오닌                                │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃DL-트레오닌철                             │○○g                     │(DL-트레오닌   ○○g)         │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃DL-트립토판                               │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃L-트립토판                                │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃아미노초산(글라이신)                      │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃DL-알라닌                                 │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃L-알기닌                                  │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃L-글루타민산                              │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃L-글루타민산나트륨                        │C5H8NNaO4, H2O  ○○g     │(L-글루타민    ○○g)         │[표 1]-다 ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃프로비타민(β-카로틴)                     │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃비타민A 분말(레티놀분말)                  │○○단위                  │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃비타민A 유(레티놀오일)                    │○○단위                  │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃비타민D2(칼시페롤)                        │○○단위                  │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃비타민D3(콜레칼시페롤)                    │○○단위                  │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃비타민D분말(칼시페롤분말)                 │○○단위                  │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃비타민D3 유(칼시페롤오일)                 │○○단위                  │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃초산 dl-α-토코페롤                       │초산 dl-α-토코페롤 ○○g │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃초산 dl-α-토코페롤                       │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃초산 d-α-토코페롤                        │초산 d-α-토코페롤 ○○g  │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃비타민K4(아세토메나프톤)                  │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃비타민K3(메나디온)아황산수소디메칠피리디놀│○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃비타민K3(메나디온)아황산수소나트륨염      │○○g                     │                              │[표 1]-가 ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃비타민AD 혼합제                           │○○단위                  │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃비타민ADE 혼합제                          │○○단위                  │(치아민        ○○g)         │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃비타민B1(치아민)염산염                    │○○g                     │(치아민        ○○g)         │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃비타민B1(치아민)질산염                    │○○g                     │(리보플라빈    ○○g)         │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃비타민B2(리보플라빈)                      │○○g                     │(리보플라빈    ○○g)         │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃비타민B2 인산에스테르 나트륨              │○○g                     │(피리독신      ○○g)         │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃비타민B6(피리독신) 염산염                 │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃비타민B12(시아노코발라민)                 │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃비타민C(L-아스콜빈산)                     │○○g                     │(L-아스콜빈산  ○○g)         │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃비타민C(L-아스콜빈산 칼슘)                │C12H14CaO12, 2H2O ○○g   │(L-아스콜빈산  ○○g)         │[표 1]-다 ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃비타민C(L-아스콜빈산-2-                   │(C6H6O9P)2Mg3, 10H2O      │                              │[표 1]-다 ┃        

  ┃인산 에스테르 마그네슘)                   │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃비타민C 나트륨염                          │○○g                     │(L-아스콜빈산  ○○g)         │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃비오틴                                    │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃염화콜린                                  │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃엽산                                      │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃니코틴산                                  │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃니코틴산아미드                            │○○g                     │(니코틴산아미드 ○○g)        │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃D-판토텐산 칼슘                           │○○g                     │(D-판토텐산   ○○g)          │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃DL-판토텐산 칼슘                          │○○g                     │(DL-판토텐산   ○○g)         │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃이노시톨                                  │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃염화칼륨                                  │○○g                     │(K            ○○g)          │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃탄산코발트                                │CoCO3 ○○g               │(Co           ○○g)          │[표 1]-나 ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃황산코발트(건조)                          │CoSO4 ○○g               │(Co           ○○g)          │[표 1]-가 ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃황산코발트(결정)                          │CoSO4, 7H2O ○○g         │(Co           ○○g)          │[표 1]-가 ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃황산동(건조)                              │CuSO4, nH2O ○○g         │(Cu           ○○g)          │[표 1]-가 ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃황산동(결정)                              │CuSO4, 5H2O ○○g         │(Cu           ○○g)          │[표 1]-가 ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃펩타이드동                                │○○g                     │(Cu           ○○g)          │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃황산제1철(건조)                           │FeSO4, nH2O ○○g         │(Fe           ○○g)          │[표 1]-가 ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃황산제1철(결정)                           │FeSO4, 7H2O ○○g         │(Fe           ○○g)          │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃푸말산제1철                               │C4H2FeO4          ○○g   │(Fe           ○○g)          │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃펩타이드철                                │○○g                     │(Fe           ○○g)          │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃구연산철                                  │C6H5FeO7, H2O ○○g       │(Fe           ○○g)          │[표 1]-나 ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃호박산구연산소다제1철                     │○○g                     │(Fe           ○○g)          │[표 1]-나 ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃요오드산칼륨                              │KIO3 ○○g                │(I            ○○g)          │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃요오드화칼륨                              │KI ○○g                  │(I            ○○g)          │[표 1]-가 ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃요오드산칼슘                              │Ca(IO3)2 ○○g            │(I            ○○g)          │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃산화마그네슘                              │MgO ○○g                 │(Mg          ○○g)           │주) 5     ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃황산마그네슘(건조)                        │MgSO4, nH2O ○○g         │(Mg          ○○g)           │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃황산마그네슘(결정)                        │MgSO4, 7H2O ○○g         │(Mg          ○○g)           │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃탄산마그네슘                              │(MgCO3)4Mg(OH)2, 5H2O ○  │(Mg          ○○g)           │[표 1]-나 ┃        

  ┃                                          │○g                       │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃탄산망간                                  │MnCO3 ○○g               │(Mn          ○○g)           │[표 1]-나 ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃황산망간                                  │MnSO4, nH2O ○○g         │(Mn          ○○g)           │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃펩타이드망간                              │○○g                     │(Mn          ○○g)           │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃인산일수소칼륨(건조)                      │K2HPO4 ○○g              │(P            ○○g)          │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃인산이수소칼륨(건조)                      │KH2PO4 ○○g              │(P            ○○g)          │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃황산칼륨                                  │K2SO4 ○○g               │(K            ○○g)          │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃아셀렌산나트륨                            │Na2SeO3 ○○g             │(Se           ○○g)          │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃셀렌산나트륨                              │Na2SeO4 ○○g             │(Se           ○○g)          │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃탄산수소나트륨                            │(NaHCO3) ○○g            │(Na           ○○g)          │주) 5     ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃황산나트륨(건조)                          │Na2SO4 ○○g              │(Na           ○○g)          │[표 1]-가 ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃인산일수소나트륨(건조)                    │NaH2PO4 ○○g             │(P            ○○g)          │[표 1]-가 ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃인산이수소나트륨(결정)                    │NaH2PO4, 2H2O ○○g       │(P            ○○g)          │[표 1]-가 ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃탄산아연                                  │ZnCO3 ○○g               │(Zn           ○○g)          │[표 1]-나 ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃산화아연                                  │ZnO ○○g                 │(Zn           ○○g)          │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃황산아연(건조)                            │ZnSO4 ○○g               │(Zn           ○○g)          │[표 1]-가 ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃황산아연(결정)                            │ZnSO4, 7H2O ○○g         │(Zn           ○○g)          │[표 1]-가 ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃황산아연메치오닌                          │○○g                     │(Zn            ○○g          │          ┃        

  ┃                                          │                          │C5H11NO2S    ○○g)           │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃펩타이드아연                              │○○g                     │(Zn           ○○g)          │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃아밀라아제                                │○○전분당화력단위        │최대효소활성을 나타내는 pH값  │          ┃        

  ┃                                          │                          │○○                          │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃알카리성프로테아제                        │○○단백소화력단위        │〃                            │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃키시라나제                                │○○키시란당화력단위      │〃                            │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃펙티나아제                                │○○팩틴액화력단위        │〃                            │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃산성프로테아제                            │○○단백소화력단위        │〃                            │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃셀룰라제(Ⅰ)                              │○○섬유붕괴력단위        │〃                            │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃셀룰라제(Ⅱ)                              │○○섬유당화력단위        │〃                            │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃중성프로테아제                            │○○단백소화력단위        │〃                            │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃피타아제                                  │○○피틴산분해력단위      │〃                            │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃락타아제                                  │○○락타제단위            │〃                            │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃리파아제                                  │○○지방소화력단위        │〃                            │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃에톡시킨                                  │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃부틸하이드록시톨루엔                      │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃부틸하이드록시아니솔                      │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃프로피온산                                │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃프로피온산칼슘                            │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃프로피온산나트륨                          │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃초산                                      │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃안식향산                                  │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃구연산                                    │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃인산                                      │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃소르빈산                                  │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃DL-주석산                                 │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃L-주석산                                  │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃푸말산                                    │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃개미산                                    │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃아르긴산                                  │○○g                     │                              │주) 7     ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃카제인나트륨                              │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃카르복시메틸셀룰로오스나트륨              │○○g                     │                              │주) 7     ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃폴리아크릴산나트륨                        │○○g                     │                              │주) 7     ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃폴리옥시에틸렌글리세린지방산에스테르      │○○g                     │                              │주) 7     ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃글리세린지방산에스테르                    │○○g                     │                              │주) 7     ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃자당지방산에스테르                        │○○g                     │                              │주) 7     ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃소루빈산지방산에스테르                    │○○g                     │                              │주) 7     ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃폴리옥시에틸렌소루빈산지방산에스테르      │○○g                     │                              │주) 7     ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃프로필렌글리콜                            │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃아스타키산틴                              │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃칸타산틴                                  │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃아포카로텐산에스테르                      │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃착향료                                    │○○g                     │                              │주) 8     ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃감미료(화학명칭)                          │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃조미료(화학명칭)                          │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃미생물제(유익균)                          │○○×10n CFU/g           │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃미생물제(유익곰팡이)                      │○○×10n CFU/g           │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃미생물제(유익효모)                        │○○×10n CFU/g           │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃DL-메치오닌수산화유도체 칼슘염            │○○g                     │                              │          ┃        

  ┃                                          │                          │                              │          ┃        

  ┃미생물제(박테리오파지)                    │○○×10n PFU/g           │                              │          ┃        

  ┗━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┷━━━━━━━━━━━━━┷━━━━━━━━━━━━━━━┷━━━━━┛        

  주 1) 함량란 중 g은 백분율(%) 또는 mg 등도 가능                                                                               

     2) 미네랄류의 함량을 원소표시(병기)하는 경우는 상기 함량란의( )의 예에 의할 것                                             

     3) 단일제제에 대해서는 있는 그대로 %로 표시할 수 있음                                                                      

     4) 비고란은 표 1의 구분임                                                                                                  

     5) 함량란에 ( )안의 분자식은 제조업자, 수입업자가 붙일 수 있음                                                             

     6)메나디온아황산수소나트륨제제를 사용하는 경우는 C11H8O2, NaHSO3, 3H2O를 함량에 병기할 것                                  

     7) 단일제제는 원제의 함유율을 중량 %로 표시할 것                                                                           

     8) 착향료의 유효성분명은 착향료로 표시할 수 있음                                                                           

     9) 유효성분명에 나열되지 않은 사료는 해당 사료의 범위와 동일한 품명의 기준을 따른다.                                       

     10) 미생물제(유익균, 유익곰팡이, 유익효모, 박테리오파지)의 함량은 CFU/g 또는 PFU/g으로 표시하여야                          

  한다.                                                                                                                         

     11) 효소제의 함량(역가)는 g 단위로 표시하여야 한다.                                                                        

  [표 2] 함량의 구분 표시방법                                                                                                   

  ┏━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━┓                                  

  ┃구분                                        │유효성분명        │함량                  ┃                                  

  ┠──────────────────────┼─────────┼───────────┨                                  

  ┃가. 광물질중 유효성분명으로 건조 형태와 결정│황산아연(건조)    │ZnSO4( )g    ┃                                  

  ┃형태로 있는 것                              │황산아연(결정)    │ZnSO4, 7H2O( )g <Zn ( ┃                                  

  ┃                                            │                  │)g>                   ┃                                  

  ┠──────────────────────┼─────────┼───────────┨                                  

  ┃나. 함량이 원소의 양인 것                   │탄산아연(건조)    │Zn( )g                ┃                                  

  ┃                                            │탄산마그네슘      │Mg( )g                ┃                                  

  ┠──────────────────────┼─────────┼───────────┨                                  

  ┃다.함량이 수화물의 양인 것                  │L-아스콜빈산칼슘  │C12H14CaO12, 2H2O( )g ┃                                  

  ┃                                            │L-글루타민산나트륨│C5H8NNaO4, H2O( )g    ┃                                  

  ┠──────────────────────┼─────────┼───────────┨                                  

  ┃라. 기타(가부터 다. 이외의 것)              │에톡시킨          │( )g                  ┃                                  

  ┃                                            │비타민A분말       │( )단위               ┃                                  

  ┃                                            │푸말산제1철       │( )g         ┃                                  

  ┃                                            │펩타이드철        │( )g                  ┃                                  

  ┗━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┷━━━━━━━━━┷━━━━━━━━━━━┛                                  

  4. 허위 및 과장 표시ㆍ광고의 범위(외국어로 표시ㆍ광고한 것을 포함한다)                                                        

   가. 법 제8조에 따른 제조업등록과 법 제12조에 따른 성분등록에 따라 등록한 사항과 다른 내용의                                  

  표시ㆍ광고                                                                                                                    

   나. 법 제16조에 따라 위해요소중점관리기준 적용 사료공장으로 지정받지 아니한 자가 표시한 명칭 및                              

  표시ㆍ광고                                                                                                                    

   다. 제19조에 따라 수입신고한 사항과 다른 내용의 표시ㆍ광고                                                                   

   라. 질병의 예방 또는 치료에 효능이 있다는 내용의 표시ㆍ광고                                                                  

    1) “사료”는 동물의 영양이 되거나 건강유지 또는 성장에 필요한 것으로 정의하고 있으므로, 질병을                             

  진단ㆍ치료ㆍ경감ㆍ처치 또는 예방 등의 효과가 있다고 표시ㆍ광고 할 수 없음                                                     

    2)                                                                                                         

    3) 표시ㆍ광고된 상품의 성능이나 효능이 객관적으로 확인될 수 없거나 확인되지 아니하였는데도                                  

  불구하고 확실하게 발휘되는 것처럼 표시ㆍ광고하는 행위는 부당한 표시ㆍ광고에 해당                                              

       <예시 : 정부기관 등 공인기관으로부터 의약품으로 약효를 인정받지 아니하였는데도 불구하고                                  

  각종 질병을 치료 또는 예방하는 효과가 있는 것처럼 표시ㆍ광고하는 경우>                                                        

      * 「표시, 광고의 공정화에 관한 법률」, 「부당한 표시ㆍ광고행위의 유형 및 기준 지정고시」 Ⅱ.                              

  표시ㆍ광고에 관한 일반지침 - 5. 품질, 성능, 효능 등에 관한 표시ㆍ광고 기준 참고                                               

    4) 「약사법」 제2조제4호에서 의약품을 “사람이나 동물의 질병을 진단ㆍ치료ㆍ경감ㆍ처치 또는 예                               

  방을 목적으로 사용하는 물품(기계ㆍ장치 제외)으로 정의하고 있어 빈혈예방, 고혈압예방 등의 표                                   

  현을 사용할 경우 의약품으로 오인될 소지가 있고, 「약사법」 제61조제2항에서 누구든지 의약품                                    

  이 아닌 것을 용기ㆍ포장 또는 첨부문서에 의학적 효능ㆍ효과 등이 있는 것으로 오인될 우려가                                      

  있는 표시를 하거나 광고를 할 수 없도록 규정                                                                                   

   마. 제조방법, 제조 연월일 또는 유통기한을 표시함에 있어서 사실과 다른 내용의 표시ㆍ광고                                      

   바. 제조방법에 관하여 연구하거나 발견한 사실로서 축산학ㆍ사료학 등의 분야에서 공인된 사항 외의                               

  표시ㆍ광고. 다만, 제조방법에 관하여 연구하거나 발견한 사실에 대한 축산학ㆍ사료학 등의 문헌                                    

  을 인용하여 문헌의 내용을 정확히 표시하고, 연구자의 성명, 문헌명, 발표 연월일을 명시하는 표                                   

  시는 제외한다.                                                                                                                

   사. 각종 상장ㆍ감사장 등을 이용하거나 “인증“ㆍ“보증“ 또는 “추천“을 받았다는 내용을 사용하거나                          

  이와 유사한 내용을 표현하는 광고. 다만, 다음 각 목에 해당하는 내용을 사용하는 경우는 제외한다.                                

    1) 「정부표창규정」에 따라 제품과 직접 관련하여 받은 상장                                                                   

    2) 「정부조직법」 제2조부터 제4조까지의 규정에 따른 중앙행정기관ㆍ특별지방행정기관 및 그 부속                               

  기관, 「지방자치법」 제2조에 따른 지방자치단체 또는 「공공기관의 운영에 관한 법률」 제4조에                                   

  따른 공공기관으로부터 받은 인증ㆍ보증                                                                                         

    3) 「산업표준화법」 제15조에 따른 제품인증 등 다른 법령에 따라 받은 인증ㆍ보증                                              

   아. 외국어의 사용 등으로 외국제품으로 혼동할 우려가 있는 표시 또는 외국과 기술제휴한 것으로                                  

  혼동할 우려가 있는 내용의 표시                                                                                                

   자. 다른 업체의 제품을 비방하거나 비방하는 것으로 의심되는 표시나 제품의 제조방법ㆍ품질ㆍ원료                                

  ㆍ등록성분 또는 효과와 직접적인 관련이 적은 내용 또는 사용하지 않은 성분을 강조함으로써                                       

  다른 업체의 제품을 간접적으로 다르게 인식하게 하는 표시ㆍ광고                                                                 

   차. 미풍양속을 해치거나 해칠 우려가 있는 저속한 도안ㆍ사진 등을 사용하는 표시ㆍ광고                                          

   타. 판매사례품 또는 경품 제공ㆍ판매 등 사행심을 조장하는 내용의 표시ㆍ광고(「독점규제 및 공정                                

  거래에 관한 법률」에 따라 허용되는 경우는 제외한다)                                                                           

   파. 소비자가 의약품(동물용의약품을 포함)으로 오인ㆍ혼동할 수 있는 특정 성분의 기능 및 작용에 관한                            

  표시ㆍ광고                                                                                                                    

   파의 2.                                                                                                                

   하. 허위 및 과장 표시로 보지 아니하는 표시ㆍ광고의 범위                                                                      

    1) 동물의 건전한 성장 및 발달과 건강한 활동을 유지하는데 도움을 준다는 표현                                                 

    2) 동물의 건강유지ㆍ건강증진ㆍ체력유지ㆍ체질개선ㆍ식이요법ㆍ영양보급 등에 도움을 준다는 표현                                

    3) 동물의 특정질병을 지칭하지 아니하는 단순한 권장 내용의 표현. 다만, 당뇨병ㆍ변비ㆍ암 등 특정                              

  질병을 지칭하거나 질병(군)의 치료에 효능ㆍ효과가 있다는 내용이나 질병의 특징적인 징후 또는                                    

  증상에 대하여 효과가 있다는 내용 등의 표현을 하여서는 아니 된다.                                                              

    4) 사료학적으로 공인된 사실 또는 사료에 함유된 영양성분(비타민, 칼슘, 철, 아미노산 등)의 기능                               

  및 작용에 관한 다음의 표현 또는 이와 유사한 표현                                                                              

     가) 특수용도사료로 임신수유기 영양보급, 병후 회복시 영양보급, 노령동물의 영양보급, 아픈 동물에                             

  대한 영양보조 등에 도움을 준다는 표현                                                                                         

     나) 비타민 ○는 ○○작용을 하여 동물의 건강에 도움을 줄 수 있다는 표현                                                     

     다) 칼슘은 뼈와 치아의 형성에 필요한 영양소라는 표현                                                                       

    5) 「건강기능식품에 관한 법률」 제14조에 따라 「건강기능식품의 기준 및 규격」에서 정한 영양소                               

  의 기능성분 함량                                                                                                              

    6) 사료의 제조목적이나 주요 용도에 대한 다음의 표현 또는 이와 유사한 표현                                                   

     가) 해당 사료가 어린동물, 아픈동물 등으로 급여하는 특수용도사료라는 표현                                                   

     나) 해당 사료가 발육기, 성장기, 임신수유기, 노령기 등 동물의 특정 성장단계의 영양보급을 목적으                             

  로 개발된 사료라는 것과 이와 유사한 표현                                                                                      

    7) 해당 제품의 사료학적 기준으로 가장 적합하다고 생각되는 급여방법 또는 급여량의 표현 또는 이                               

  와 유사한 표현                                                                                                                

    8)                                                                                                                    

  5. 주의사항 표시                                                                                                              

   가. 사료의 품질관리를 위하여 별도 포장하여 넣은 선도유지제에는 “습기방지제(방습제)“, “습기제거제                          

  (제습제)“ 등 소비자가 그 용도를 쉽게 알 수 있도록 표시하고 “먹어서는 아니 된다“는 등의 주의                                

  문구도 함께 표시하여야 한다.                                                                                                  

   나. 냉동 유통되는 사료에 대하여는 “이미 냉동된 바 있으니 해동 후 재 냉동시키지 마시길 바랍니다                              

  “ 등의 표시. 다만, 제조업자가 냉동된 사료를 해동하여 출고할 때에는 “이 사료는 냉동된 사료를                                 

  해동한 사료이니 재냉동시키지 마시길 바랍니다“ 등의 표시                                                                      

   다. 수분함량이 14%를 초과하는 배합사료와 수분함량이 12%를 초과하는 단미ㆍ보조사료 등 개봉 후                                 

  부패ㆍ변질될 우려가 높은 사료에 대하여는 “개봉 후 냉장보관하거나 빨리 사용하시기 바랍니다“                                  

  등의 표시                                                                                                                     

   라. “원터치캔“ 통조림 제품에 대하여는 “캔 절단 부분이 날카로우므로 개봉, 보관 및 폐기 시 주의하                           

  십시오“ 등의 표시                                                                                                            

   마. 누구든지 사료에는 의약품(동물용의약품을 포함)과 혼동할 우려가 있는 표시를 하거나 광고를 하                               

  여서는 아니 된다.                                                                                                             

   바.  (제2호로 이동)                                                                                         

   사.  (제2호로 이동)                                                                                         

   아. 수산화암모늄, 초산, 빙초산, 염산, 황산, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 차아염소산나트륨, 표백분 등                            

  보조사료에는 “어린이 등의 손에 닿지 않는 곳에 보관하십시오“, “직접 급여하거나 음용시키지 마                                

  십시오“, “눈ㆍ피부에 닿거나 마실 경우 인체에 치명적인 손상을 입힐 수 있습니다“ 등의 취급상                                 

  주의문구 표시                                                                                                                 

   자. 폴리스티렌, 멜라민수지, 페놀수지 및 요소수지 재질의 용기ㆍ포장재는 가열ㆍ조리시 전자레인지                               

  에 넣어 사용하지 않도록 표시                                                                                                  

  6. 표시사항 예시                                                                                                              

   ┌───────────────────────────────────────────────────────────┐   

   │                                                                                                               │   

   │? 사료의 성분등록번호 : ABCD1234                                     ? 실제 중량 : 25kg                             │   

   │? 사료의 명칭 : 혼합성단미사료                                       ? 제조 연월일 : 2015.01.20.                    │   

   │? 사료의 형태 : 가루사료                                             ? 유통기간 : 제조일로부터 6월까지              │   

   │? 등록성분량                                                         ? 제조업자 : 상호(공장 명칭)ㆍ주소 및 전화번호 │   

   │┌───┬───┬────┬───┬───┬───┬───┐          ? 재포장 내용 : 해당없음(또는 생략 가능)       │   

   ││성분명│인    │조단백질│칼슘  │조섬유│조회분│수분  │          ? 기타 : 유전자변형옥수수 포함 가능성 있음     │   

   │├───┼───┼────┼───┼───┼───┼───┤                                                          │   

   ││성분량│2.0%  │11.5%   │5.0%  │6.0%  │18.5% │15.0% │                                                          │   

   ││      │이상  │이상    │이상  │이하  │이하  │이하  │                                                          │   

   │└───┴───┴────┴───┴───┴───┴───┘                                                          │   

   │? 사용한 원료의 명칭 : 밀기울, 쌀겨, 게분                                                                            │   

   │? 사료의 용도 : 배합사료 원료용                                                                                      │   

   │? 주의사항 : 직사광선을 피해 습기가 없고 시원한                                                                      │   

   │곳에 보관하십시오. 개봉 후 빨리 사용하시기 바                                                                         │   

   │랍니다.                                                                                                               │   

   │                                                                                                                      │   

   ├───────────────────────────────────────────────────────────┤   

   │                                                                                                               │   

   │? 사료의 성분등록번호 : EFGH5678                                     ? 실제 중량 : 25kg                             │   

   │? 사료의 명칭 : 효소제합제                                           ? 수입 연월일 : 별도표기                       │   

   │? 사료의 형태 : 가루사료                                             ? 유통기한 : 2016.12.31까지                    │   

   │? 등록성분량                                                         ? 수입업자 : 상호(공장 명칭)ㆍ주소 및 전화번호 │   

   │┌───┬─────┬──────┬───────┐                  ? 재포장 내용 : 해당없음(또는 생략 가능)       │   

   ││성분명│키시라나제│β-만난아제 │산성프로테아제│                  ? 기타 : 해당없음(또는 생략 가능)              │   

   │├───┼─────┼──────┼───────┤                                                                  │   

   ││성분량│750천U    │250천U      │500천U        │                                                                  │   

   │└───┴─────┴──────┴───────┘                                                                  │   

   │? 사용한 원료의 명칭 : 키시라나제, β-만난아제,                                                                      │   

   │산성프로테아제                                                                                                        │   

   │? 사료의 용도 : 배합사료 원료용                                                                                      │   

   │? 주의사항 : 직사광선을 피해 습기가 없고 시원한                                                                      │   

   │곳에 보관하십시오.                                                                                                    │   

   │                                                                                                                      │   

   ├───────────────────────────────────────────────────────────┤   

   │                                                                                                               │   

   │? 사료의 성분등록번호 : IJKL9123                                     ? 제조 연월일 : 제품측면 표시                  │   

   │? 사료의 명칭 : 애완육성개사료1호                                    ? 유통기간 : 제품측면 표시                     │   

   │? 사료의 형태 : 액상고형물사료                                       ? 제조업자 : 상호(공장 명칭)ㆍ주소 및 전화번호 │   

   │? 등록성분량                                                         ? 재포장 내용 : 해당없음(또는 생략 가능)       │   

   │┌───┬────┬───┬───┬───┬───┬───┬───┐  ? 기타 : 유전자변형콩 포함 가능성 있음         │   

   ││성분명│조단백질│조지  │칼슘  │인    │조섬유│조회분│수분  │  ? 주의사항 : 직사광선을 피해 습기가 없고 시    │   

   ││      │        │방    │      │      │      │      │      │  원한 곳에 보관하십시오. 개봉후 빨리 사용        │   

   │├───┼────┼───┼───┼───┼───┼───┼───┤  하시기 바랍니다. 캔 절단 부분이 날카로우        │   

   ││성분량│6.5%    │2.0%  │0.2%  │0.5%  │0.4%  │3.0%  │20.0% │  므로 개봉, 보관 및 폐기 시 주의하십시오.        │   

   ││      │이상    │이상  │이상  │이상  │이하  │이하  │이하  │                                                  │   

   │└───┴────┴───┴───┴───┴───┴───┴───┘                                                  │   

   │? 사용한 원료의 명칭 : 양고기, 대두유, 미량광물                                                                      │   

   │질류 합제(대표 원료 2～3가지 정도 표시), 비타                                                                         │   

   │민합제(대표 원료 2～3가지 정도 표시)                                                                                  │   

   │? 사료의 용도 : 생후 9개월 이상의 성견용                                                                             │   

   │? 실제 중량 : 100g                                                                                                   │   

   │                                                                                                                      │   

   ├───────────────────────────────────────────────────────────┤   

   │                                                                                                               │   

   │? 사료의 성분등록번호 : MNOP4567                                     ? 수입업자 : 상호(공장 명칭)ㆍ주소 및 전화번호 │   

   │? 사료의 명칭 : 혼합성단미사료                                       ? 재포장 내용 : 해당없음(또는 생략 가능)       │   

   │? 사료의 형태 : 육포사료                                             ? 기타 : 해당없음(또는 생략 가능)              │   

   │? 등록성분량                                                         ? 주의사항 : 직사광선을 피해 서능한 곳에 보    │   

   │┌───┬────┬───┬───┬───┬───┐                  관하십시오. 개봉 후 냉장보관하면서 가급적       │   

   ││성분명│조단백질│조지방│조섬유│조회분│수분  │                  빨리 급여하십시오. 어린이의 손에 닿지 않        │   

   │├───┼────┼───┼───┼───┼───┤                  는 곳에 보관하십시오. 소, 사슴 등 반추동        │   

   ││성분량│65.0%   │7.0%  │0.4%  │3.0%  │24.0% │                  물에게는 급여하지 마십시오.                     │   

   ││      │이상    │이하  │이하  │이하  │이하  │                                                                  │   

   │└───┴────┴───┴───┴───┴───┘                                                                  │   

   │? 사용한 원료의 명칭 : 돈피, 치즈, 고구마                                                                            │   

   │? 사료의 용도 : 애완견 간식용                                                                                        │   

   │? 실제 중량 : 100g                                                                                                   │   

   │? 수입 연월일 : 별도표기                                                                                             │   

   │? 유통기한 : 2016.12.31까지                                                                                          │   

   │                                                                                                                      │   

   └───────────────────────────────────────────────────────────┘   

  7. 기타 표시사항에 대한 세부기준은 농림축산식품부장관의 안내에 따라 「식품등의 표시기준」 등을                                

  준용할 수 있다.                                                                                                               

별표 0016: 사료 내 유해물질의 범위 및 허용기준(제11조제1항 관련)

  [별표 16] <신설 2014.12.8., 개정 2015.8.21., 개정 2016.7.1., 개정 2016.12.1., 개정 2017.4.1., 개정                                  

  2018.11.27., 개정 2019.10.24., 개정 2022.3.11., 개정 2023.10.04.>                                                                   

  사료 내 유해물질의 범위 및 허용기준(제11조제1항 관련)                                                                               

  1. 관리대상 주요 중금속                                                                                                             

  ┏━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━┓                                

  ┃유해물질명│사료의 종류                                                           │허용기준    ┃                                

  ┃          │                                                                      │(ppm)       ┃                                

  ┣━━━━━┿━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┿━━━━━━┫                                

  ┃납        │배합사료│양축용, 섬유질, 대용유용, 애완동물용, 사육하는 동물용       │10          ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │실험동물용, 수산동물용                                      │20          ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │프리믹스용                                                  │100         ┃                                

  ┃          ├────┼──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │단미사료│곡류, 강피류, 박류, 서류, 콩류, 섬유질류                    │10          ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │단백질류, 조류, 플랑크톤류, 무기물류, 인산염류 및 칼슘염류, │30          ┃                                

  ┃          │        │다량광물질류, 혼합광물질류(미량광물질류 합제를 제외)        │            ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │미량광물질류, 미량광물질류 합제                             │100         ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │기타 단미사료                                               │20          ┃                                

  ┃          ├────┼──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │보조사료│규산염제                                                    │60          ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │기타 보조사료                                               │별표 6 기준 ┃                                

  ┠─────┼────┼──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃불 소     │배합사료│젖소용                                                      │30          ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │고기소용, 섬유질                                            │50          ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │돼지용                                                      │100         ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │닭ㆍ오리용                                                  │250         ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │양축용(고기소, 젖소, 돼지, 닭, 오리용은 제외), 대용유용, 실 │300         ┃                                

  ┃          │        │험동물용, 애완동물용, 사육하는 동물용                       │            ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │수산동물용                                                  │1,000       ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │프리믹스용                                                  │1,800       ┃                                

  ┃          ├────┼──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │단미사료│칼슘염류, 다량광물질류(칼슘을 포함한 것에 한함), 칼슘염류   │350         ┃                                

  ┃          │        │합제                                                        │            ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │단백질류(새우분 제외), 무기물류                             │500         ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │조류, 플랑크톤류(마이시스슈림프, 알테미아, 크릴 제외)       │1,000       ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │새우분, 마이시스슈림프, 알테미아, 크릴                      │3,000       ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │인산염류, 다량광물질류(인산을 포함한 것에 한함), 인산염류   │인 함량의   ┃                                

  ┃          │        │합제                                                        │1/100 이하  ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │다량광물질류(칼슘과 인산을 포함한 것을 제외), 미량광물질    │1,800       ┃                                

  ┃          │        │류, 혼합광물질류                                            │            ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │기타 단미사료                                               │별표 5 기준 ┃                                

  ┃          ├────┼──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │보조사료│규산염제                                                    │3,000       ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │기타 보조사료                                               │별표 6 기준 ┃                                

  ┠─────┼────┼──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃비 소     │배합사료│양축용, 섬유질, 대용유용                                    │2           ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │실험동물용, 애완동물용, 사육하는 동물용                     │10          ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │프리믹스용 배합사료                                         │12          ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │수산동물용 배합사료                                         │20          ┃                                

  ┃          ├────┼──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │단미사료│무기물류(수산동물 유래를 제외), 인산염류 및 칼슘염류, 다량  │20          ┃                                

  ┃          │        │광물질, 혼합광물질(미량광물질류 합제를 제외)                │            ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │단백질류(수산동물 유래에 한함-골뱅이분, 새우분, 어분, 어즙흡│25          ┃                                

  ┃          │        │착사료 등), 무기물류(수산동물 유래에 한함-어골분, 어골회,   │            ┃                                

  ┃          │        │패분 등)                                                    │            ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │미량광물질류, 미량광물질류 합제                             │30          ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │조류, 플랑크톤류                                            │40          ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │기타 단미사료                                               │별표 5 기준 ┃                                

  ┃          ├────┼──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │보조사료│규산염제                                                    │20          ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │기타 보조사료                                               │별표 6 기준 ┃                                

  ┠─────┼────┼──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃수 은     │배합사료│양축용, 섬유질, 대용유용, 수산동물용                        │0.4         ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │실험동물용, 애완동물용, 사육하는 동물용                     │0.8         ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │프리믹스용 배합사료                                         │1           ┃                                

  ┃          ├────┼──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │단미사료│조류, 단백질류(수산동물 유래에 한함-골뱅이분, 새우분, 어분, │1           ┃                                

  ┃          │        │어즙흡착사료 등), 무기물류, 플랑크톤류, 인산염류 및 칼슘염  │            ┃                                

  ┃          │        │류, 혼합광물질                                              │            ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │기타 단미사료                                               │0.5또는     ┃                                

  ┃          │        │                                                            │별표 5 기준 ┃                                

  ┃          ├────┼──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │보조사료│전체 보조사료                                               │별표 6 기준 ┃                                

  ┠─────┼────┼──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃카드뮴    │배합사료│대용유용                                                    │0.5         ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │양축용, 섬유질                                              │1           ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │실험동물용, 애완동물용, 사육하는 동물용, 수산동물용         │2           ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │프리믹스용 배합사료                                         │15          ┃                                

  ┃          ├────┼──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │단미사료│식물성                                                      │2.5         ┃                                

  ┃          │        ├──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │기타 단미사료                                               │50또는 별표 ┃                                

  ┃          │        │                                                            │5 기준      ┃                                

  ┃          ├────┼──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │보조사료│전체 보조사료                                               │별표 6 기준 ┃                                

  ┠─────┼────┼──────────────────────────────┼──────┨                                

  ┃크 롬     │배합사료│수산동물용                                                  │100         ┃                                

  ┃          ├────┼──┬───────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │단미사료│동물│어분, 어즙흡착사료, 혼합성 단미사료                   │100         ┃                                

  ┃          │        │성  ├───────────────────────────┼──────┨                                

  ┃          │        │단백│동물성단백질혼합분                                    │300         ┃                                

  ┃          │        │질류│                                                      │            ┃                                

  ┠─────┼────┼──┴───────────────────────────┼──────┨                                

  ┃주 석     │배합사료│알루미늄 캔을 제외한 캔 제품에 한하며 산성통조림(pH가 4.6   │150         ┃                                

  ┃          ├────┤이하) 200 ppm이하이여야 한다.                               │            ┃                                

  ┃          │단미사료│                                                            │            ┃                                

  ┗━━━━━┷━━━━┷━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┷━━━━━━┛                                

   * 단미사료와 보조사료는 별표 5 및 별표 6에 중금속 허용기준이 제시된 경우 우선 그 기준을 적용한                                     

  다.                                                                                                                                 

   * 별도로 언급하지 않은 단미ㆍ보조사료는 각각의 해당 사료범위 내 중금속의 최저 허용기준을 초과                                      

  해서 검출되어서는 안 되며, 혼합성 단미·보조사료는 단미사료 및 보조사료의 혼합비율을 적용하여                                       

  허용기준을 산정한다. 다만, 혼합비율을 사전에 표시하거나 확인된 경우에 한하여 혼합된 개별 성분                                       

  의 중금속 허용기준을 혼합비율로 환산한 기준을 적용한다.                                                                             

  2. 관리대상 주요 곰팡이독소                                                                                                         

  ┏━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┯━━━━┓                              

  ┃유해물질명  │사료의 종류                                                               │허용기준┃                              

  ┃            │                                                                          │(ppb)   ┃                              

  ┣━━━━━━┿━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┿━━━━┫                              

  ┃아플라톡신  │배합사료│양축용(어린송아지, 젖소용, 포유자돈ㆍ이유돈, 산란용ㆍ육용       │10      ┃                              

  ┃(B1+B2+     │        │어린병아리, 육계초기, 육계전기, 육용오리전기, 종오리용어린오리  │        ┃                              

  ┃G1+G2)      │        │에 한함), 대용유용, 섬유질(어린송아지, 젖소용에 한함), 기타 어  │        ┃                              

  ┃            │        │린동물 이용 배합사료                                            │        ┃                              

  ┃            │        ├────────────────────────────────┼────┨                              

  ┃            │        │기타 배합사료(프리믹스용 제외)                                  │20      ┃                              

  ┃            ├────┼────────────────────────────────┼────┨                              

  ┃            │단미사료│식물성(조류ㆍ섬유질류 일부ㆍ유지류ㆍ전분류ㆍ과실류ㆍ채소류ㆍ    │50      ┃                              

  ┃            │        │버섯류 제외), 혼합성(식물성이 혼합된 것에 한함), 남은음식물사료 │        ┃                              

  ┠──────┼────┼────────────────────────────────┼────┨                              

  ┃오크라톡신A │배합사료│전체 배합사료(프리믹스용 제외)                                  │200     ┃                              

  ┃            ├────┼────────────────────────────────┼────┨                              

  ┃            │단미사료│식물성(조류ㆍ섬유질류 일부ㆍ유지류ㆍ전분류ㆍ과실류ㆍ채소류ㆍ    │250     ┃                              

  ┃            │        │버섯류 제외), 혼합성(식물성이 혼합된 것에 한함), 남은음식물사료 │        ┃                              

  ┗━━━━━━┷━━━━┷━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┷━━━━┛                              

   * 다만, 배합사료 제조업자가 단미사료 중 규칙 제12조제2항에 따라 자가 제조를 위하여 수입하는 사료                                   

  (성분등록 제외 사료)의 경우에는 곰팡이독소저감제(mycotoxin binder, 가급적 국내외에서 인증 받은                                      

  제품 사용을 권장)를 처리하고, 최종 배합사료가 허용기준을 충족할 수 있는 방법으로 관리가 가능한                                      

  경우에는 단미사료의 허용기준을 2배(아플라톡신 100 ppb, 오크라톡신 500 ppb)까지 허용한다.                                            

   * 별도로 언급하지 않은 사료는 해당 곰팡이 독소의 최저 허용기준을 초과해서 검출되어서는 안 된다.                                    

  2의2. 관리를 추천하는 곰팡이독소                                                                                                    

  ┏━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┯━━━━┓                      

  ┃유해물질명    │사료의 종류                                                                     │관리수준┃                      

  ┃              │                                                                                │(ppb)   ┃                      

  ┣━━━━━━━┿━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┿━━━━┫                      

  ┃데옥시니발레놀│배합사료│양축용(돼지용에 한함), 대용유용(양돈용에 한함)                        │900     ┃                      

  ┃(보미톡신)    │        ├───────────────────────────────────┼────┨                      

  ┃              │        │양축용(어린송아지, 젖소어린송아지, 비유초기, 어린사슴, 어린           │2,000   ┃                      

  ┃              │        │면양, 어린염소 등 어린 반추동물에 한함), 섬유질(어린 반추동           │        ┃                      

  ┃              │        │물에 한함)                                                            │        ┃                      

  ┃              │        ├───────────────────────────────────┼────┨                      

  ┃              │        │기타 배합사료(프리믹스용 제외)                                        │5,000   ┃                      

  ┃              ├────┼───────────────────────────────────┼────┨                      

  ┃              │단미사료│식물성, 혼합성(식물성이 혼합된 것에 한함), 남은음식물사료             │10,000  ┃                      

  ┠───────┼────┼───────────────────────────────────┼────┨                      

  ┃제랄레논      │배합사료│양축용 돼지(포유자돈ㆍ이유돈, 번식용모돈, 임신돈, 포유돈에            │100     ┃                      

  ┃              │        │한함), 대용유용(양돈용에 한함)                                        │        ┃                      

  ┃              │        ├───────────────────────────────────┼────┨                      

  ┃              │        │기타 양축용 돼지(육성돈, 비육돈 등에 한함)                            │250     ┃                      

  ┃              │        ├───────────────────────────────────┼────┨                      

  ┃              │        │반추동물용(양축용ㆍ섬유질, 사육하는 동물 등에 한함)                   │500     ┃                      

  ┃              │        ├───────────────────────────────────┼────┨                      

  ┃              │        │기타 배합사료(양축용 돼지, 양돈용 대용유, 반추동물용, 프리믹스용 제외)│1,000   ┃                      

  ┃              ├────┼───────────────────────────────────┼────┨                      

  ┃              │단미사료│식물성, 혼합성(식물성이 혼합된 것에 한함), 남은음식물사료             │3,000   ┃                      

  ┠───────┼────┼───────────────────────────────────┼────┨                      

  ┃푸모니신      │배합사료│양축용(돼지, 말, 토끼에 한함), 대용유용, 애완동물용                   │5,000   ┃                      

  ┃(B1+B2)       │        ├───────────────────────────────────┼────┨                      

  ┃              │        │수산동물용                                                            │10,000  ┃                      

  ┃              │        ├───────────────────────────────────┼────┨                      

  ┃              │        │가금용, 양축용(어린 반추동물에 한함), 섬유질(어린 반추동물            │20,000  ┃                      

  ┃              │        │에 한함)                                                              │        ┃                      

  ┃              │        ├───────────────────────────────────┼────┨                      

  ┃              │        │반추동물용(양축용ㆍ섬유질의 어린 반추동물용 제외)                     │50,000  ┃                      

  ┃              │        ├───────────────────────────────────┼────┨                      

  ┃              │        │기타 배합사료(프리믹스용 제외)                                        │30,000  ┃                      

  ┃              ├────┼───────────────────────────────────┼────┨                      

  ┃              │단미사료│식물성, 혼합성(식물성이 혼합된 것에 한함), 남은음식물사료             │60,000  ┃                      

  ┠───────┼────┼───────────────────────────────────┼────┨                      

  ┃T-2/HT-2      │배합사료│전체 배합사료                                                         │250     ┃                      

  ┃              ├────┼───────────────────────────────────┼────┨                      

  ┃              │단미사료│귀리, 귀리 가공품 및 싸라기                                           │2,000   ┃                      

  ┃              │        ├───────────────────────────────────┼────┨                      

  ┃              │        │기타 식물성, 혼합성(식물성이 혼합된 것에 한함), 남은음식물사료        │500     ┃                      

  ┗━━━━━━━┷━━━━┷━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┷━━━━┛                      

  * 상기 관리를 권고하는 곰팡이독소의 범위와 권고기준은 사료 내 기준과 규격을 규정하기 위한 것이 아니며,                              

  사료 이용ㆍ구입자 또는 제조ㆍ수입업자가 사료의 품질을 효율적이고 안전하게 관리하기 위한 참고 사항                                   

  이다.                                                                                                                               

  ┏━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┯━━━━━┓3. 관리대상 주요 잔류농약   

  ┃농약명                │적용 대상 사료 종류별 잔류허용 기준(ppm)                        │비고      ┃                            

  ┃                      ├───────────────────────────┬────┤          ┃                            

  ┃                      │단미사료                                              │배합사료│          ┃                            

  ┃                      ├──────────────────┬───┬────┤        │          ┃                            

  ┃                      │곡류                                │콩류  │섬유질류│        │          ┃                            

  ┃                      ├──┬──┬──┬───┬──┬──┤      │        │        │          ┃                            

  ┃                      │밀  │보리│호밀│옥수수│귀리│수수│      │        │        │          ┃                            

  ┣━━━━━━━━━━━┿━━┿━━┿━━┿━━━┿━━┿━━┿━━━┿━━━━┿━━━━┿━━━━━┫                            

  ┃2,4-디                │0.5 │0.5 │0.5 │0.5   │0.5 │0.5 │0.5   │400     │0.5     │          ┃                            

  ┃(2,4-D)               │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃글리포세이트★        │5   │5   │0.2 │5     │5   │5   │200   │500     │5       │글리포세  ┃                            

  ┃(Glyphosate)          │    │    │    │      │    │    │      │        │        │이트      ┃                            

  ┃                      │    │    │    │      │    │    │      │        │        │+설포세이 ┃                            

  ┃                      │    │    │    │      │    │    │      │        │        │트        ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃다이아지논★          │5   │5   │5   │5     │5   │5   │-     │10      │5       │          ┃                            

  ┃(Diazinon)            │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃다이쾃                │2   │5   │0.03│0.05  │2   │2   │-     │100     │-       │          ┃                            

  ┃(Diquat)              │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃델타메트린+           │1   │1   │1   │1     │1   │1   │-     │5       │-       │          ┃                            

  ┃트라로메트린          │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┃(Deltamethrin+Tral    │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┃omethrin)             │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃디디티★              │0.5 │0.5 │0.5 │0.5   │0.5 │0.5 │-     │0.5     │0.5     │pp’-DDT+ ┃                            

  ┃(DDT)                 │    │    │    │      │    │    │      │        │        │op’-DDT+ ┃                            

  ┃                      │    │    │    │      │    │    │      │        │        │pp’-DDE  ┃                            

  ┃                      │    │    │    │      │    │    │      │        │        │+pp’-TDE ┃                            

  ┃                      │    │    │    │      │    │    │      │        │        │(DDD)     ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃디메테나미드-P        │0.01│0.01│0.01│0.01  │0.01│0.01│0.01  │0.01    │-       │          ┃                            

  ┃(Dimethenamid-P)      │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃디메토에이트★        │1   │0.04│0.2 │1     │0.2 │0.2 │-     │2       │1       │          ┃                            

  ┃(Dimethoate)          │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃디치오카바메이트      │25  │25  │25  │2     │-   │-   │5     │-       │-       │          ┃                            

  ┃(Dithiocarbamates)    │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃디설포톤★            │5   │3   │5   │3     │0.05│-   │-     │10      │4       │          ┃                            

  ┃(Disulfoton)          │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃디캄바                │50  │50  │    │0.6   │3   │8   │-     │200     │-       │          ┃                            

  ┃(Dicamba)             │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃디크로보스★          │2   │2   │2   │2     │2   │2   │-     │10      │2       │디크로보  ┃                            

  ┃(Dichlorvos,DDVP)     │    │    │    │      │    │    │      │        │        │스+날레드 ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃디페노코나졸          │3   │-   │-   │-     │-   │-   │-     │-       │-       │          ┃                            

  ┃(Difenoconazole)      │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃디플루벤주론★        │1.5 │1.5 │1.5 │1.5   │1.5 │1.5 │40    │3       │6       │          ┃                            

  ┃(Diflubenzuron)       │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃린단(감마-비에이치시) │-   │-   │-   │-     │-   │-   │-     │0.1     │0.1     │          ┃                            

  ┃(Lindane,τ-BHC)      │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃마이클로부타닐        │0.3 │0.3 │0.3 │0.3   │0.3 │0.3 │0.2   │0.3     │-       │          ┃                            

  ┃(Myclobutanil)        │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃말라티온★            │8   │2   │2   │2     │2   │2   │-     │135     │8       │          ┃                            

  ┃(Malathion)           │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃메토밀★              │5   │10  │10  │10    │10  │10  │0.2   │20      │10      │          ┃                            

  ┃(Methomyl)            │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃메토프렌★            │5   │5   │5   │5     │5   │5   │5     │0.01    │5       │          ┃                            

  ┃(Methoprene)          │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃메톡시페노자이드      │-   │-   │-   │60    │-   │-   │-     │-       │-       │          ┃                            

  ┃(Methoxyfenozide)     │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃메티다티온            │0.02│0.02│0.02│0.1   │0.2 │0.2 │-     │12      │-       │          ┃                            

  ┃(Me6thidathion)       │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃메티오카브★          │0.05│0.05│-   │-     │-   │-   │0.5   │0.05    │0.05    │          ┃                            

  ┃(Methiocarb)          │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃벤타존                │0.2 │0.2 │0.2 │0.2   │0.2 │0.2 │-     │3       │0.2     │벤타존    ┃                            

  ┃(Bentazone)           │    │    │    │      │    │    │      │        │        │+벤타존   ┃                            

  ┃                      │    │    │    │      │    │    │      │        │        │소듐      ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃보스칼리드            │50  │50  │50  │50    │50  │50  │5     │-       │-       │          ┃                            

  ┃(Boscalid)            │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃비에치시              │-   │-   │-   │-     │-   │-   │-     │0.2     │0.2     │α-BHC+β ┃                            

  ┃(BHC)                 │    │    │    │      │    │    │      │        │        │-BHC      ┃                            

  ┃                      │    │    │    │      │    │    │      │        │        │+τ-BHC+  ┃                            

  ┃                      │    │    │    │      │    │    │      │        │        │δ-BHC    ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃비펜트린★            │0.5 │0.5 │0.5 │15    │0.5 │0.5 │0.7   │15      │0.5     │          ┃                            

  ┃(Bifenthrin)          │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃사이클로시딤          │-   │-   │-   │2     │-   │-   │-     │-       │-       │          ┃                            

  ┃(Cycloxydim)          │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃사이퍼메트린★        │10  │10  │10  │10    │10  │10  │-     │30      │10      │          ┃                            

  ┃(Cypermethrin)        │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃사이프로디닐          │10  │10  │10  │10    │10  │10  │-     │10      │-       │          ┃                            

  ┃(Cyprodinil)          │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃사이프로코나졸★      │5   │5   │5   │2     │5   │5   │-     │5       │-       │          ┃                            

  ┃(Cyproconazole)       │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃사이플루트린          │2   │2   │2   │2     │2   │2   │4     │-       │-       │          ┃                            

  ┃(Cyfluthrin)          │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃사이할로트린          │0.2 │0.2 │0.2 │0.2   │0.2 │0.2 │4     │0.6     │-       │          ┃                            

  ┃(Cyhalothrin)         │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃설폭사플로르          │3   │3   │-   │-     │-   │-   │3     │-       │-       │          ┃                            

  ┃(Sulfoxaflor)         │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃스피노사드            │1   │-   │-   │5     │-   │-   │-     │-       │-       │          ┃                            

  ┃(Spinozad/Spinosad)   │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃스피로테트라맷        │-   │-   │-   │-     │-   │-   │30    │-       │-       │          ┃                            

  ┃(Spirotetramat)       │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃시마진                │-   │-   │-   │0.3   │-   │-   │-     │9       │-       │          ┃                            

  ┃(Simazine)            │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃시아니진              │0.1 │0.1 │0.1 │0.1   │0.1 │0.1 │-     │0.1     │-       │          ┃                            

  ┃(Cyanazine)           │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃아미노피라리드        │0.1 │0.1 │0.1 │0.1   │0.1 │0.1 │-     │0.1     │-       │          ┃                            

  ┃(Aminopyralid)        │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃아바멕틴              │-   │-   │-   │-     │-   │-   │0.01  │-       │0.01    │          ┃                            

  ┃(Abamectin)           │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃아세페이트            │-   │-   │-   │0.5   │-   │-   │-     │-       │-       │          ┃                            

  ┃(Acephate)            │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃아이소펜포스          │1   │1   │1   │1     │1   │1   │-     │1       │1       │          ┃                            

  ┃(Isofenphos)          │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃아이소프로카브        │-   │-   │-   │-     │-   │-   │-     │0.5     │0.5     │          ┃                            

  ┃(Isoprocarb)          │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃아족시스트로빈★      │15  │15  │15  │40    │15  │15  │100   │15      │-       │          ┃                            

  ┃(Azoxystrobin)        │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃아진포스메틸          │-   │-   │-   │-     │-   │-   │-     │10      │-       │          ┃                            

  ┃(Azinphos-Methyl)     │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃아트라진              │0.3 │0.2 │0.2 │0.2   │0.2 │0.2 │-     │15      │-       │          ┃                            

  ┃(Atrazine)            │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃알드린+디엘드린★     │-   │-   │-   │-     │-   │-   │0.05  │0.03    │0.03    │알드린+디 ┃                            

  ┃(Aldrin+Dieldrin)     │    │    │    │      │    │    │      │        │        │엘드린    ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃알디카브★            │0.05│0.05│0.02│0.5   │0.2 │0.5 │-     │1       │0.4     │          ┃                            

  ┃(Aldicarb)            │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃알라클로르            │-   │0.05│0.05│0.2   │0.1 │0.1 │0.2   │3       │-       │          ┃                            

  ┃(Alachlor)            │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃에디펜포스            │-   │-   │-   │-     │-   │-   │-     │50      │50      │          ┃                            

  ┃(Edifenphos)          │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃에톡사졸              │0.05│0.05│0.05│0.05  │0.05│0.05│0.05  │0.8     │0.05    │          ┃                            

  ┃(Etoxazole)           │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃에티온                │-   │-   │-   │-     │-   │-   │-     │20      │10      │          ┃                            

  ┃(Ethion)              │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃엔드린                │-   │-   │-   │-     │-   │-   │-     │0.01    │0.01    │          ┃                            

  ┃(Endrin)              │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃엠시피에이            │50  │50  │50  │0.3   │50  │50  │-     │500     │-       │          ┃                            

  ┃(MCPA)                │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃옥시데메톤-메틸       │0.1 │0.1 │0.1 │-     │-   │-   │-     │-       │-       │          ┃                            

  ┃(Oxydemeton-methy     │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┃l)                    │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃이마잘릴              │0.1 │-   │-   │-     │-   │-   │-     │-       │-       │          ┃                            

  ┃(Imazalil)            │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃이미다클로프리드      │1   │1   │1   │0.2   │1   │1   │30    │0.5     │-       │          ┃                            

  ┃(Imidacloprid)        │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃이피엔                │-   │-   │-   │-     │-   │-   │-     │0.5     │0.5     │          ┃                            

  ┃(EPN)                 │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃인독사카브            │-   │-   │-   │25    │-   │-   │50    │60      │-       │          ┃                            

  ┃(Indoxacarb)          │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃카바릴★              │5   │5   │5   │5     │5   │5   │5     │250     │5       │          ┃                            

  ┃(Carbaryl)            │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃카벤다짐★            │20  │20  │20  │20    │20  │20  │20    │20      │20      │베노밀+카 ┃                            

  ┃(Carbendazim)         │    │    │    │      │    │    │      │        │        │벤다짐    ┃                            

  ┃                      │    │    │    │      │    │    │      │        │        │티오파네  ┃                            

  ┃                      │    │    │    │      │    │    │      │        │        │이트+티오 ┃                            

  ┃                      │    │    │    │      │    │    │      │        │        │파네이트  ┃                            

  ┃                      │    │    │    │      │    │    │      │        │        │메틸      ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃카보퓨란★            │0.2 │0.2 │0.2 │0.2   │0.2 │0.2 │-     │13      │0.2     │카보퓨란+ ┃                            

  ┃(Carbofuran)          │    │    │    │      │    │    │      │        │        │3-하이드  ┃                            

  ┃                      │    │    │    │      │    │    │      │        │        │록시카보  ┃                            

  ┃                      │    │    │    │      │    │    │      │        │        │퓨란      ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃카탑                  │0.2 │0.2 │0.2 │0.2   │0.2 │0.2 │-     │5       │-       │벤설탑+카 ┃                            

  ┃(Cartap)              │    │    │    │      │    │    │      │        │        │탑+       ┃                            

  ┃                      │    │    │    │      │    │    │      │        │        │티오사이  ┃                            

  ┃                      │    │    │    │      │    │    │      │        │        │클람      ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃캡탄                  │-   │-   │-   │10    │-   │-   │-     │50      │-       │          ┃                            

  ┃(Captan)              │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃퀸토젠★              │0.03│0.01│-   │0.01  │-   │-   │0.05  │0.03    │0.02    │          ┃                            

  ┃(Quintozene,PCNB)     │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃크레속심-메칠★       │5   │5   │5   │5     │5   │5   │-     │5       │5       │          ┃                            

  ┃(Kresoxim-Methyl)     │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃클레토딤              │0.1 │0.1 │0.1 │0.1   │0.1 │0.1 │-     │10      │-       │          ┃                            

  ┃(Clethodim)           │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃클로란트라닐리프롤    │0.3 │0.3 │0.3 │25    │0.3 │0.3 │-     │50      │-       │          ┃                            

  ┃(Chlorantraniliprole) │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃클로로벤질레이트      │-   │-   │-   │0.02  │-   │-   │-     │-       │-       │          ┃                            

  ┃(Chlorobenzilate)     │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃클로르페나피르        │-   │-   │-   │0.05  │-   │0.5 │-     │-       │-       │          ┃                            

  ┃(Chlorfenapyr)        │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃클로르펜빈포스        │0.05│-   │-   │0.05  │-   │-   │-     │-       │-       │          ┃                            

  ┃(Chlorfenvinphos)     │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃클로르프로팜          │0.05│0.05│0.05│0.05  │-   │-   │-     │-       │-       │          ┃                            

  ┃(Chlorpropham)        │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃클로르피리포스★      │5   │0.5 │10  │0.5   │2   │0.75│-     │13      │2.5     │          ┃                            

  ┃(Chlorpyrifos)        │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃클로르피리포스-메틸★ │10  │6   │7   │7     │10  │10  │-     │6       │6       │          ┃                            

  ┃(Chlorpyrifos-methyl) │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃클로티아니딘          │0.2 │0.2 │0.2 │0.01  │0.01│0.01│0.2   │-       │-       │          ┃                            

  ┃(Clothianidin)        │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃터브포스★            │0.2 │0.2 │0.2 │0.2   │0.2 │0.3 │-     │1       │0.3     │          ┃                            

  ┃(Terbufos)            │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃테부코나졸            │40  │40  │40  │-     │-   │-   │40    │-       │-       │          ┃                            

  ┃(Tebuconazole)        │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃테트라코나졸          │-   │-   │-   │0.01  │-   │-   │0.2   │1.1     │-       │          ┃                            

  ┃(Tetraconazole)       │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃트리사이클라졸★      │0.02│0.02│0.02│0.02  │0.02│0.02│-     │15      │-       │          ┃                            

  ┃(Tricyclazole)        │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃트리아디메놀          │5   │5   │5   │5     │5   │5   │-     │-       │-       │          ┃                            

  ┃(Triadimenol)         │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃트리아디메폰          │5   │5   │5   │5     │5   │5   │-     │-       │-       │          ┃                            

  ┃(Triadimefon)         │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃트리플록시스트로빈    │5   │7   │-   │10    │-   │-   │5     │-       │-       │          ┃                            

  ┃(Trifloxystrobin)     │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃티아벤다졸            │5   │-   │-   │-     │-   │-   │-     │5       │5       │          ┃                            

  ┃(Thiabendazole)       │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃티아크로프리드        │5   │-   │-   │-     │-   │-   │-     │-       │-       │          ┃                            

  ┃(Thiacloprid)         │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃파라티온              │1   │1   │1   │1     │1   │1   │-     │5       │1       │          ┃                            

  ┃(Parathion)           │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃패러쾃                │0.05│0.05│10  │0.1   │0.5 │0.5 │-     │5       │1       │          ┃                            

  ┃(Paraquat)            │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃퍼메트린★            │10  │10  │10  │10    │10  │10  │50    │55      │10      │          ┃                            

  ┃(Permethrin)          │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃페나리몰              │-   │-   │-   │5     │-   │-   │-     │-       │-       │          ┃                            

  ┃(Fenarimol)           │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃페노뷰카브            │0.3 │0.3 │0.3 │0.3   │0.3 │0.3 │-     │10      │1       │          ┃                            

  ┃(Fenobucarb)          │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃페니트로티온★        │6   │6   │6   │6     │6   │6   │-     │10      │6       │          ┃                            

  ┃(Fenitrothion,MEP)    │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃펜디메탈린            │0.2 │0.2 │0.2 │0.2   │0.1 │0.1 │-     │15      │-       │          ┃                            

  ┃(Pendimethalin)       │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃펜발러레이트          │-   │-   │-   │-     │-   │-   │-     │13      │5       │펜발러레  ┃                            

  ┃(Fenvalerate)         │    │    │    │      │    │    │      │        │        │이트      ┃                            

  ┃                      │    │    │    │      │    │    │      │        │        │+에스펜발 ┃                            

  ┃                      │    │    │    │      │    │    │      │        │        │러레이트  ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃펜뷰코나졸            │3   │3   │-   │-     │-   │-   │15    │-       │-       │          ┃                            

  ┃(Fenbuconazole)       │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃펜토에이트★          │1   │1   │1   │1     │1   │1   │-     │10      │1       │          ┃                            

  ┃(Phenthoate)          │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃펜티온★              │-   │-   │-   │5     │-   │-   │-     │5       │1       │          ┃                            

  ┃(Fenthion)            │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃펜프로파스린          │-   │-   │-   │-     │-   │-   │-     │20      │-       │          ┃                            

  ┃(Fenpropathrin)       │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃포레이트              │0.05│0.05│0.05│0.05  │0.05│0.05│-     │1.5     │-       │          ┃                            

  ┃(Phorate)             │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃포스멧                │0.05│0.05│0.05│0.05  │0.05│0.05│-     │40      │-       │          ┃                            

  ┃(Phosmet)             │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃푸루실라졸★          │5   │5   │5   │5     │5   │5   │5     │5       │5       │          ┃                            

  ┃(Flusilazole)         │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃프로클로라즈★        │40  │40  │40  │40    │40  │40  │-     │40      │40      │          ┃                            

  ┃(Prochloraz)          │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃프로티오코나졸        │5   │5   │5   │5     │5   │5   │-     │4       │-       │          ┃                            

  ┃(Prothioconazole)     │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃프로피코나졸★        │2   │2   │2   │-     │-   │-   │5     │18      │2       │          ┃                            

  ┃(Propiconazole)       │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃플루디옥소닐          │0.06│0.06│0.06│0.06  │0.06│0.06│0.06  │0.06    │-       │          ┃                            

  ┃(Fludioxonil)         │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃플루벤디아마이드      │-   │-   │-   │-     │-   │-   │60    │-       │-       │          ┃                            

  ┃(Flubendiamide)       │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃플루오피콜라이드      │0.2 │0.2 │0.2 │0.2   │0.2 │0.2 │0.2   │0.2     │-       │          ┃                            

  ┃(Fluopicolide)        │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃플루트리아폴          │8   │-   │-   │-     │-   │-   │20    │-       │-       │          ┃                            

  ┃(Flutriafol)          │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃플루페녹수론          │-   │-   │-   │0.05  │-   │-   │-     │-       │-       │          ┃                            

  ┃(Flufenoxuron)        │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃플룩사피록사드        │30  │30  │30  │15    │30  │30  │30    │-       │-       │          ┃                            

  ┃(Fluxapyroxad)        │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃피라크로스트로빈      │30  │30  │30  │30    │30  │30  │40    │30      │-       │          ┃                            

  ┃(Pyraclostrobin)      │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃피레트린              │-   │-   │-   │-     │-   │-   │1     │-       │-       │          ┃                            

  ┃(Pyrethrins)          │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃피리다벤              │-   │-   │-   │-     │-   │-   │-     │-       │0.01    │          ┃                            

  ┃(Pyridaben)           │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃피리메타닐            │-   │-   │-   │-     │-   │-   │3     │-       │-       │          ┃                            

  ┃(Pyrimethanil)        │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃피리미카브★          │0.3 │0.3 │0.3 │0.3   │0.3 │0.3 │60    │0.3     │6       │          ┃                            

  ┃(Pirimicarb)          │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃피리미포스-메틸★     │5   │5   │5   │5     │5   │5   │-     │5       │5       │          ┃                            

  ┃(Pirimiphos-methyl)   │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃피페로닐부톡사이드★  │24  │24　│24  │24　  │24　│24　│200　 │-       │-       │          ┃                            

  ┃(Piperonylbutoxide)   │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃피프로닐              │-   │-   │-   │0.1   │-   │-   │-     │0.2     │0.02    │          ┃                            

  ┃(Fipronil)            │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃할록시포프            │-   │-   │-   │-     │-   │-   │5     │-       │-       │          ┃                            

  ┃(Haloxyfop)           │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┠───────────┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼───┼────┼────┼─────┨                            

  ┃헵타클로르★          │-   │-   │-   │-     │-   │-   │-     │0.02    │0.02    │          ┃                            

  ┃(Heptachlor)          │    │    │    │      │    │    │      │        │        │          ┃                            

  ┗━━━━━━━━━━━┷━━┷━━┷━━┷━━━┷━━┷━━┷━━━┷━━━━┷━━━━┷━━━━━┛                            

  * ★ 표시는 상시관리대상 품목이며, 그 외 농약은 필요한 경우 또는 농림축산식품부장관이 정하는 기준에 따                              

  른다.                                                                                                                               

  * 별도로 언급되지 않은 사료(-)는 다음 기준을 순차적으로 적용하여 산정된 잔류농약 허용기준을 초                                      

  과해서 검출되어서는 안 되며, 불검출 기준은 0.01 mg/kg으로 한다.                                                                     

   - 곡류ㆍ콩류(① Codex 기준 ②「식품의 기준 및 규격」별표3의 해당 농산물 또는 유사작물의 허용                                       

  기준)                                                                                                                               

   - 섬유질류(① Codex 기준 ② [별표 20] 사료용 볏짚의 잔류농약 허용기준)                                                             

   - 배합사료(사용한 원료사료의 잔류농약 허용기준에 사료 내 배합비율을 적용하여 산정)                                                 

   - 섬유질류 배합사료는 양축용 배합사료 및 섬유질류 사용비율 또는 사용한 원료사료의 사용비율을 적                                    

  용하여 산정                                                                                                                         

  * 상기 범위에 기준이 없는 잔류농약에 대해서는 농림축산식품부 장관이 해당 농약의 일일섭취허용량                                      

  (ADI), 가축의 해당사료 섭취량 등 관련 자료를 축산과학원장으로 하여금 검토하도록 하여 종합 판정                                      

  할 수 있다.                                                                                                                         

  4. 관리대상 주요 방사능                                                                                                             

  ┏━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━┯━━━━━┓                                          

  ┃구분          │축  종                                  │사 료 의   종 류│허용기준  ┃                                          

  ┃              │                                        │                │(Bq/kg, L)┃                                          

  ┣━━━━━━━┿━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┿━━━━━━━━┿━━━━━┫                                          

  ┃세슘          │고기소, 젖소, 말                        │배합사료        │100.0     ┃                                          

  ┃(Cs134+Cs137) ├────────────────────┤단미사료        ├─────┨                                          

  ┃              │돼지                                    │보조사료        │80.0      ┃                                          

  ┃              ├────────────────────┤                ├─────┨                                          

  ┃              │가금류(닭ㆍ오리ㆍ꿩ㆍ메추리ㆍ칠면조ㆍ타 │                │160.0     ┃                                          

  ┃              │조 등)                                  │                │          ┃                                          

  ┃              ├────────────────────┤                ├─────┨                                          

  ┃              │양식용 수산동물                         │                │40.0      ┃                                          

  ┃              ├────────────────────┤                ├─────┨                                          

  ┃              │기타                                    │                │100.0     ┃                                          

  ┠───────┼────────────────────┤                ├─────┨                                          

  ┃요오드        │전체                                    │                │300.0     ┃                                          

  ┃(I131)        │                                        │                │          ┃                                          

  ┗━━━━━━━┷━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┷━━━━━━━━┷━━━━━┛                                          

  5. 관리대상 주요 기타 성분                                                                                                          

  ┏━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━┓                            

  ┃유해물질명│사료의 종류                                                               │허용기준    ┃                            

  ┣━━━━━┿━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┿━━━━━━┫                            

  ┃유리고시폴│단미사료  │면실박, 혼합성 단미사료                                       │1,200 ppm   ┃                            

  ┠─────┼─────┼───────────────────────────────┼──────┨                            

  ┃청산      │단미사료  │타피오카, 혼합성 단미사료                                     │50 ppm      ┃                            

  ┠─────┼─────┼───────────────────────────────┼──────┨                            

  ┃살모넬라  │배합사료  │닭, 오리, 메추리, 실험용 동물, 애완용 동물, 사육하는 동물     │불검출      ┃                            

  ┃(D그룹)   ├─────┼───────────────────────────────┤            ┃                            

  ┃          │단미사료  │낙농가공부산물류, 남은음식물사료, 동물성단백질류, 동물성무기물│            ┃                            

  ┃          │          │류, 박류(야자박, 채종박), 혼합성 단미사료, 화분               │            ┃                            

  ┠─────┼─────┼───────────────────────────────┼──────┨                            

  ┃세균 및   │단미ㆍ보조│수분 14% 초과 ～ 60% 이하 사료와 동물성단백질류를 포함하      │별표 10의2  ┃                            

  ┃대장균군  │ㆍ배합사료│지 않은 냉동 사료 : 세균 및 대장균군                          │기준        ┃                            

  ┗━━━━━┷━━━━━┷━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┷━━━━━━┛                            

  6. 사용이 금지된 주요 동물용의약품은 동물용 의약품등 취급규칙 하위 고시 「안전성 및 유효성 문제                                     

  성분 함유제제 등에 관한 규정」 제2조에 의해 다음 각 목과 같으며, 사료 내에서 검출되어서는 안                                        

  되며, 불검출 기준은 사료표준분석방법의 정량한계와 0.01 ppm을 순차적으로 적용한다.                                                   

   가. 무기비소제제                                                                                                                   

   나. 피리메타민제제                                                                                                                 

   다. 항갑상선물질                                                                                                                   

   라. 성장촉진홀몬제                                                                                                                 

   마. 니트로후란제제(후라졸리돈, 후랄타돈, 니트로푸라존, 니트로빈 및 니트로푸란토인 등)                                              

   바. 클로람페니콜 제제                                                                                                              

   사. 디메트리다졸                                                                                                                   

   아. 기타 발암성 등 안전성 및 유효성에 문제가 있는 것으로 확인된 당펩타이드계 항생제(아보파신,                                      

  반코마이신 등), 클로르프로마진, 클렌부테롤, 이프로니다졸, 말라카이트그린, 콜치신, 스트리키닌,                                       

  디에칠스틸베스트롤, 유기염소제 및 클로르포름 함유제제.                                                                              

   자. 카바독스, 로니다졸, 올라퀸독스, 답손 및 메트로니다졸 함유제제                                                                  

  7. 「식품위생법」, 「건강기능식품에 관한 법률」, 「약사법」, 「먹는물관리법」등 관련 법령에서 유                                    

  해물질로 분류한 물질은 관련 법령에서 허용하는 최대치를 초과해서 검출되어서는 안 된다.                                               

  8. 이 고시에서 별도로 기준을 정하지 않은 것은 잠정적으로 국제식품규격위원회(CAC?Codex                                              

  Alimentarius Commission) 규정을 준용할 수 있으며, 국제식품규격위원회 규정이 없는 경우에는 농                                        

  림축산식품부장관이 해당물질별 관련 자료와 선진외국의 엄격한 기준 등을 종합적으로 검토하여 판                                        

  정할 수 있다.                                                                                                                       

별표 0017: 사료 내 사용 가능한 동물용의약품의 종류 및 사용기준(제11조제2항)

  [별표 17] <신설 2014.12.8., 개정 2015.8.21. 개정 2016.7.1., 개정 2016.12.01., 개정 2019.10.24., 개정                        

  2022.3.11.>                                                                                                                 

  사료 내 사용 가능한 동물용의약품의 종류 및 사용기준(제11조제2항)                                                            

  1. 사료 내 사용 가능한 동물용의약품의 종류                                                                                  

   가. 항원충제(항콕시듐제) : 나라신, 디클라주릴, 라살로시드나트륨, 마두라마이신암모늄, 모넨신나트륨,                         

  살리노마이신, 샘두라마이신, 크로피돌(총 8종)                                                                                

   나. 구충제 : 펜벤다졸(총 1종)                                                                                              

   다. 동물용의약품등 취급규칙 제2조제1항제6호에 의한 사료첨가제 중 비타민제?프로비타민제?항산화제?                        

      항곰팡이제?효소제?생균제?아미노산제?미량광물질 및 그 합제                                                           

   라. 동물용의약품등 취급규칙 제2조제1항제7호에 의한 주문용 배합사료첨가제                                                   

  2. 사용기준                                                                                                                 

   가. 양축용 고기소 배합사료                                                                                                 

  ┏━━━━━━━━┯━━━┯━━━┯━━━┯━━━┯━━━┯━━━┯━━┯━━┯━━━━━┓                                

  ┃동물용의약품    │어린  │육성우│번식우│종모우│임신우│포유우│큰소│큰소│허용기준  ┃                                

  ┃종류            │송아지│      │      │      │      │      │전기│후기│          ┃                                

  ┠────────┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼──┼──┼─────┨                                

  ┃라살로시드나트륨│33    │33    │33    │-     │-     │-     │33  │-   │단위 : ppm┃                                

  ┠────────┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼──┼──┤          ┃                                

  ┃모넨신나트륨    │33    │33    │33    │-     │-     │-     │33  │-   │          ┃                                

  ┠────────┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼──┼──┤          ┃                                

  ┃살리노마이신    │-     │20    │20    │-     │-     │-     │20  │-   │          ┃                                

  ┗━━━━━━━━┷━━━┷━━━┷━━━┷━━━┷━━━┷━━━┷━━┷━━┷━━━━━┛                                

   나. 양축용 젖소 배합사료                                                                                                   

  ┏━━━━━━━━┯━━━┯━━━┯━━━┯━━━┯━━━┯━━┯━━┯━━┯━━━┯━━━┯━━━━━┓                  

  ┃동물용의약품    │젖소  │젖소  │젖소  │젖소  │젖소  │비유│비유│비유│건유기│고능력│허용기준  ┃                  

  ┃종류            │어린  │중    │큰    │임신우│종모우│초기│중기│말기│      │우    │          ┃                  

  ┃                │송아지│송아지│송아지│      │      │    │    │    │      │      │          ┃                  

  ┠────────┼───┼───┼───┼───┼───┼──┼──┼──┼───┼───┼─────┨                  

  ┃라살로시드나트륨│33    │33    │33    │-     │-     │-   │-   │-   │-     │-     │단위 : ppm┃                  

  ┠────────┼───┼───┼───┼───┼───┼──┼──┼──┼───┼───┤          ┃                  

  ┃모넨신나트륨    │33    │33    │33    │-     │-     │-   │-   │-   │-     │-     │          ┃                  

  ┠────────┼───┼───┼───┼───┼───┼──┼──┼──┼───┼───┤          ┃                  

  ┃살리노마이신    │-     │20    │20    │-     │-     │-   │-   │-   │-     │-     │          ┃                  

  ┗━━━━━━━━┷━━━┷━━━┷━━━┷━━━┷━━━┷━━┷━━┷━━┷━━━┷━━━┷━━━━━┛                  

   다. 양축용 돼지 배합사료                                                                                                   

  ┏━━━━━━┯━━┯━━━┯━━━━┯━━━┯━━━┯━━┯━━┯━━━━━┓                                            

  ┃동물용의약품│포유│이유돈│육성돈  │비육돈│번식용│임신│포유│허용기준  ┃                                            

  ┃종류        │자돈│      │        │      │모돈  │돈  │돈  │          ┃                                            

  ┠──────┼──┼───┼────┼───┼───┼──┼──┼─────┨                                            

  ┃펜벤다졸    │4   │4     │4       │-     │-     │-   │-   │단위 : ppm┃                                            

  ┗━━━━━━┷━━┷━━━┷━━━━┷━━━┷━━━┷━━┷━━┷━━━━━┛                                            

   라. 양축용 닭 배합사료                                                                                                     

  ┏━━━━━━━━━┯━━━┯━━━┯━━━┯━━━┯━━━┯━━━┯━━┯━━┯━━┯━━┯━━┯━━┯━━┯━━━━┓  

  ┃동물용의약품      │산란용│산란용│산란용│육용  │육용  │산란전│산란│산란│산란│종계│육계│육계│육계│허용    ┃  

  ┃종류              │어린  │중    │큰    │어린  │중    │      │초기│중기│말기│용  │초기│전기│후기│기준    ┃  

  ┃                  │병아리│병아리│병아리│병아리│병아리│      │    │    │    │    │    │    │    │        ┃  

  ┠─────────┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼────┨  

  ┃나라신            │80    │80    │80    │80    │80    │-     │-   │-   │-   │-   │80  │80  │-   │단위 :  ┃  

  ┠─────────┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤ppm     ┃  

  ┃디클라주릴        │1     │1     │1     │1     │1     │-     │-   │-   │-   │-   │1   │1   │-   │        ┃  

  ┠─────────┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤        ┃  

  ┃라살로시드나트륨  │125   │125   │125   │125   │125   │-     │-   │-   │-   │-   │125 │125 │-   │        ┃  

  ┠─────────┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤        ┃  

  ┃마두라마이신암모늄│5     │5     │5     │5     │5     │-     │-   │-   │-   │-   │5   │5   │-   │        ┃  

  ┠─────────┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤        ┃  

  ┃모넨신나트륨      │121   │121   │121   │121   │121   │-     │-   │-   │-   │-   │121 │121 │-   │        ┃  

  ┠─────────┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤        ┃  

  ┃살리노마이신      │66    │66    │66    │66    │66    │-     │-   │-   │-   │-   │66  │66  │-   │        ┃  

  ┠─────────┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤        ┃  

  ┃샘두라마이신      │25    │25    │25    │25    │25    │-     │-   │-   │-   │-   │25  │25  │-   │        ┃  

  ┠─────────┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤        ┃  

  ┃크로피돌          │250   │250   │250   │250   │250   │-     │-   │-   │-   │-   │250 │250 │-   │        ┃  

  ┗━━━━━━━━━┷━━━┷━━━┷━━━┷━━━┷━━━┷━━━┷━━┷━━┷━━┷━━┷━━┷━━┷━━┷━━━━┛  

  ※ 별도로 언급되지 않은 동물용의약품(-)의 허용기준은 다음과 같다.                                                           

  ┏━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━┓                                                                              

  ┃동물용의약품명    │허용기준(단위 : mg/kg)┃                                                                              

  ┣━━━━━━━━━┿━━━━━━━━━━━┫                                                                              

  ┃나라신            │불검출(0.7 이하)      ┃                                                                              

  ┠─────────┼───────────┨                                                                              

  ┃디클라주릴        │불검출(0.01 이하)     ┃                                                                              

  ┠─────────┼───────────┨                                                                              

  ┃라살로시드나트륨  │불검출(1.25 이하)     ┃                                                                              

  ┠─────────┼───────────┨                                                                              

  ┃마두라마이신암모늄│불검출(0.05 이하)     ┃                                                                              

  ┠─────────┼───────────┨                                                                              

  ┃모넨신나트륨      │불검출(1.25 이하)     ┃                                                                              

  ┠─────────┼───────────┨                                                                              

  ┃살리노마이신      │불검출(0.7 이하)      ┃                                                                              

  ┠─────────┼───────────┨                                                                              

  ┃샘두라마이신      │불검출(0.25 이하)     ┃                                                                              

  ┠─────────┼───────────┨                                                                              

  ┃크로피돌          │불검출(0.03 이하)     ┃                                                                              

  ┠─────────┼───────────┨                                                                              

  ┃펜벤다졸          │불검출(0.03 이하)     ┃                                                                              

  ┗━━━━━━━━━┷━━━━━━━━━━━┛                                                                              

   마. 양축용 고기소·젖소·돼지·닭 이외의 동물용 배합사료 허용기준은 유사동물을 준용한다.                                   

   바. (삭제)                                                                                                                 

   사. 제1호다목 및 라목의 사료첨가제와 주문용 배합사료첨가제는 품목허가(신고)된 사용기준에 따라                              

  배합사료에 첨가하여 사용한다.                                                                                               

  3. 주의사항                                                                                                                 

   가. 제1호 이외의 동물용의약품은 사용을 금지하며, 사료에서 검출되어서는 안 된다. 다만, 가축 유래                            

  원료를 사용한 사료는 「식품의 기준 및 규격」의 해당 축산물의 동물용의약품 허용기준을 준용한다.                              

   나. 「약사법」 제2조에 의한 일반의약품, 전문의약품, 한약, 한약제재는 사용을 금지하며, 주요 품목은                          

  「의약품 등의 안전에 관한 규칙」 제5조에 의해 아래와 같으며 사료에서 검출되어서는 안 된다.                                  

  다만, 사료의 범위에 포함된 제약부산물류와 식품으로 사용 가능한 품목은 제외한다.                                             

    1) 대한민국약전 또는 식품의약품안전처장이 인정하는 공정서 및 의약품집에 실려 있는 품목                                    

    2) 대한민국약전외한약(생약)규격집에 실려 있는 품목                                                                        

    3) 식품의약품안전처장이 성분의 종류·규격·함량 및 처방 등을 표준화하여 고시한 표준제조기준에 맞는 품목                   

    4) 식품의약품안전처장이 따로 기준 및 시험방법을 고시한 품목                                                               

    5) 식품의약품안전처장이 신고대상품목으로 고시한 의약품등                                                                  

별표 0018: 사료 사용 제한물질(제11조제3항 관련)

  [별표 18]                           

  사료 사용 제한물질(제11조제3항 관련)                                                                    

  1. 제4조부터 제6조에 따른 사료의 범위와 제9조제8항에 따른 부형제에 해당하지 않는 물질로서 주요          

  물질은 다음 각 목과 같다.                                                                               

   가. 생배설물ㆍ소변ㆍ장내용물ㆍ치료(수술)후 적출물(반추위추출물은 제외함)                               

   나. 가죽(사료용으로 적합하게 가공된 것은 제외함)과 피혁가공 부산물                                     

   다. 파종을 목적으로 작물보호제를 처리한 종자 또는 그 부산물                                            

   라. 목재보호제(약품)를 처리한 물질(나무, 톱밥 등)                                                      

   마. 하수 및 하수ㆍ분뇨 찌꺼기(다만, 지렁이의 경우에는 「유기성오니 등을 토지개량제 및 매립시설         

  복토 용도로의 재활용 방법에 관한 규정」(환경부 고시)에 적합한 경우에는 유기성 오니를 사용할             

  수 있다.                                                                                                

   바. 비닐 등 농업용 포장재                                                                              

   사. 가축의 사체(다만, 「가축전염병예방법」 제22조제2항 단서조항 및 같은 법 시행령 제8조에 따라         

  처리된 경우는 제외)                                                                                     

   아. 멜라민과 그 복합체가 함유된 물질(다만, 「식품 등의 기준 및 규격」 고시에 규정된 멜라민의 허        

  용기준을 초과한 경우에 한함)                                                                            

   자. 왕겨(다만, 부형제로서 멸균처리된 가공왕겨는 제외), 톱밥?가축분(다만, 곤충류 용도는 제외)          

  2. 이물                                                                                                 

   가. "이물(異物)"이란 사료 등의 제조·가공·유통 과정에서 정상적으로 사용된 원료 또는 재료가 아닌       

  것으로서 섭취할 때 가축 또는 인체에 위해가 발생할 우려가 있거나 섭취하기에 부적합한 물질을              

  말한다. 다만, 원료사료의 껍질 또는 토사 등과 같이 실제에 있어 정상적인 제조공정에서 완전히              

  제거되지 아니하고 잔존하는 이물은 그 양이 적고 일반적으로 가축의 건강을 해할 우려가 없는                

  정도는 제외한다.                                                                                        

   나. 이물의 범위는 육안으로 식별 가능하고 사료와 직접 접촉하고 있는 다음의 이물을 말한다.               

    1) 섭취과정에서 가축에 직접적인 위해나 손상을 줄 수 있는 재질이나 크기의 이물 : 2밀리미터(㎜)         

  이상 크기의 유리, 플라스틱, 사기 또는 금속성 재질의 물질(금속성 이물로서 쇳가루는 0.05% 이              

  상 검출되어서는 아니된다.)                                                                              

    2) 섭취과정에서 가축 위생을 저해할 수 있는 이물 : 쥐 등 동물의 사체 또는 그 배설물, 기생충 및 그      

  알(제조?가공과정에서 사멸되어 가축의 건강을 해칠 우려가 없는 것은 제외)                                

    3) 그 밖에 가축의 건강을 해칠 우려가 있거나 섭취하기에 부적합한 이물 : 컨베이어벨트 등 고무류,        

  이쑤시개 등 나무류, 돌?모래 등 토사류(제12조제2항 관련 별표 22에서 정한 첨가 가능한 토사 등            

  은 제외)                                                                                                

  3. 「가축전염병예방법」 제32조에 따라 수입이 금지된 물건                                                

  4. 「축산물 위생관리법」 제7조제1항을 위반하여 허가받은 작업장이 아닌 곳에서 도살ㆍ처리 등이 된 축산물  

별표 0019: 사료로 사용하는 것을 금지한 물질(제11조제5항 관련)

  [별표 19]                       

  사료로 사용하는 것을 금지한 물질(제11조제5항 관련)                                                  

  1. 소 등 반추동물에게 사료로 사용하는 것을 금지한 물질                                              

   가. 동물성 단백질류                                                                                

   나. 동물성 무기물 : 모든 동물에서 유래한 단백질이 포함된 골분ㆍ골회(1,000℃ 이상에서 회화처리한    

  것은 제외)ㆍ인산2칼슘(광물에서 유래의 것, 지방 및 단백질을 함유하지 않은 것은 제외)                 

   다. 불용성 불순물 함량이 중량 환산으로 0.15% 이상인 동물성유지(다만, 반추동물대용유용은 0.02%      

  이상)                                                                                               

   라. 젤라틴 및 콜라겐. 다만, 시ㆍ도지사가 다음 각 목에 해당되어 승인한 젤라틴 및 콜라겐과 기타      

  농림축산식품부장관이 지정하는 것은 제외한다.                                                        

    1). 가죽에서 유래한 것으로서 가죽 이외에서 유래한 단백질의 제조공정과 완전히 분리된 공정으로      

  제조된 것일 것                                                                                      

    2). 뼈에서 유래된 것으로서 다음 공정을 전부 걸쳐 처리된 것일 것                                   

     가) 가압 하에서 세정                                                                             

     나) 산에 의한 탈회                                                                               

     다) 장기적인 알카리 처리                                                                         

     라) 여과                                                                                         

     마) 138℃에서 4초간 살균처리                                                                     

   마. 남은음식물(「폐기물관리법」에 따른 음식물류 폐기물) 및 남은음식물사료                          

   바. 제8조제4항의 교차오염방지에 대한 규정을 위반하여 제조ㆍ포장 또는 운송한 사료                   

   사.                                                                               

   아. 가목부터 사목의 규정에 따른 사료가 포함된 단미사료 및 배합사료                                 

   자. 가목부터 아목의 규정에도 불구하고 우유ㆍ산양유 및 낙농가공부산물류는 사용이 가능하다.          

  2. 닭 등 가금류에게 사료로 사용하는 것을 금지한 물질                                                

   가. 남은음식물(「폐기물관리법」에 따른 음식물류 폐기물). 다만, 제4조에 따른 단미사료 중 수분       

  14%이하로 제조된 남은음식물사료는 사용이 가능하다.                                                  

별표 0020: 사료용 볏짚의 잔류농약 허용기준(제11조제7항 관련)

  [별표 20]                                                           

  사료용 볏짚의 잔류농약 허용기준(제11조제7항 관련)                                                     

  ┏━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━┓                                        

  ┃구                 분                     │허용 기준(ppm)┃                                        

  ┣━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┿━━━━━━━┫                                        

  ┃ 벤설탑(Bensultap)                        │5             ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 부푸로페진(Buprofezin)★                 │10            ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 카바릴(Carbaryl)★                       │0.05          ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 카벤다짐(Carbendazim)★                  │7             ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 카보후란(Carbofuran)★                   │1             ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 카프로파미드(Carpropamid)                │20            ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 클로란트라닐리프롤(Chlorantraniliprole)★│7             ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 크로마페노자이드(Chromafenozide)         │10            ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 클로티아니딘(Clothianidin)★             │5             ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 사이안트라닐리프롤(Cyantraniliprole)★   │5             ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 다이아지논((Diazinon)★                  │0.05          ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 디노테퓨란(Dinotefuran)★                │5             ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 에디펜포스(Edifenphos)★                 │10            ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 에폭시코나졸(Epoxiconazole)              │7             ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 에토펜프록스(Etofenprox)★               │20            ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 펜뷰코나졸(Fenbuconazole)★              │10            ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 페노뷰카브(Fenobucarb)★                 │10            ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 페녹사닐(Fenoxanil)                      │10            ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 펜티온(Fenthion)★                       │5             ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 페림존(Ferimzone)                        │5             ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 플루벤디아마이드(Flubendiamide)★        │7             ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 프탈리드(Fthalide)                       │40            ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 헥사코나졸(Hexaconazole)                 │15            ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 인독사카브(Indoxacarb)★                 │10            ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 아이소프로티올레인(Isoprothiolane)★     │10            ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 메타플루미존(Metaflumizone)★            │15            ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 메톡시페노자이드(Methoxyfenozide)★      │15            ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 오리사스트로빈(Orysastrobin              │5             ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 펜사이큐론(Pencycuron)                   │15            ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 펜토에이트(Phenthoate)★                 │10            ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 포레이트(Phorate)★                      │0.05          ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 프로피코나졸(Propiconazole)★            │18            ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 설폭사플로르(Sulfoxaflor)★              │5             ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 테부페노자이드(Tebufenozide)★           │30            ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 테클로프탈람(Tecloftalam)                │10            ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 티아클로프리드(Thiacloprid)★            │5             ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 티플루자마이드(Thifluzamide)             │5             ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 티아디닐(Tiadinil)                       │15            ┃                                        

  ┠─────────────────────┼───────┨                                        

  ┃ 트리싸이클라졸(Tricyclazole)★           │15            ┃                                        

  ┗━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┷━━━━━━━┛                                        

   * 주 1) 별도로 언급하지 않는 농약성분은 국제식품규격위원회(CAC?Codex Alimentarius                   

  Commission) 및 식품 등의 기준 및 규격(식품의약품안전처 고시) 규정을 준용할 수 있으며,                 

  상기 규정에 없는 사항 중 필요시에는 농림축산식품부장관이 해당 농약성분에 대한 국제 기준               

  및 관련 자료 등을 축산과학원장으로 하여금 검토하도록 하여 판정할 수 있다.                             

        2) 농약관리법 및 농약 및 원제의 등록기준(농촌진흥청 고시)에 따라 벼재배용으로 사용이 허용되     

  지 않은 농약은 검출되어서는 아니 된다.                                                                

        3) ★ 표시는 상시관리대상 품목이고, 그 외 농약은 필요한 경우 또는 농림축산식품부장관이 정하는   

  기준에 따른다.                                                                                        

별표 0021: 사료 중 특정성분의 함량 제한기준(제12조제1항 관련)

  [별표 21] <신설 2014.12.8., 개정 2016.12.01., 개정 2017.4.1, 개정 2021.12.29., 개정 2022.7.22., 개정      

  2023.10.04.>                                                                                              

  사료 중 특정성분의 함량 제한기준(제12조제1항 관련)                                                        

  ┏━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┓  

  ┃성   분   명          │사  료  명                        │허  용  기  준                          ┃  

  ┠───────────┼─────────────────┼────────────────────┨  

  ┃가. 구리              │양돈용 배합사료                   │포유자돈 및 이유돈용 : 100ppm 이하      ┃  

  ┃                      │                                  │육성돈용 : 60ppm 이하                   ┃  

  ┃                      │                                  │기타 양돈용 배합사료 : 25ppm 이하       ┃  

  ┃                      ├─────────────────┼────────────────────┨  

  ┃                      │남은음식물사료                    │29ppm 이하(건물기준)                    ┃  

  ┠───────────┼─────────────────┼────────────────────┨  

  ┃나. 아연              │양돈용 배합사료                   │포유자돈 및 이유돈용 : 120ppm 이하      ┃  

  ┃                      │                                  │(다만, ZnO를 첨가하는 경우에는          ┃  

  ┃                      │                                  │2,000ppm 이하)                          ┃  

  ┃                      │                                  │육성돈용 : 90ppm 이하                   ┃  

  ┃                      │                                  │비육돈용 : 75ppm 이하                   ┃  

  ┃                      │                                  │번식돈용 : 150ppm이하                   ┃  

  ┃                      ├─────────────────┼────────────────────┨  

  ┃                      │남은음식물사료                    │87ppm 이하(건물기준)                    ┃  

  ┠───────────┼─────────────────┼────────────────────┨  

  ┃다. 인                │양돈용 배합사료                   │포유자돈용 : 0.8% 이하                  ┃  

  ┃                      │                                  │육성돈용 및 비육돈용 : 0.6% 이하        ┃  

  ┃                      │                                  │기타 양돈용 배합사료 : 0.7% 이하        ┃  

  ┃                      ├─────────────────┼────────────────────┨  

  ┃                      │가금용(닭, 오리) 배합사료         │산란초기, 산란중기, 산란말기 : 0.6% 이하┃  

  ┃                      │                                  │기타 가금용(닭, 오리) 배합사료 : 0.7% 이┃  

  ┃                      │                                  │하                                      ┃  

  ┃                      ├─────────────────┼────────────────────┨  

  ┃                      │수산동물용 배합사료               │어린물고기, 종묘용, 육성용 : 1.8% 이하  ┃  

  ┃                      │(갑각류를 제외)                   │큰물고기용 : 1.5% 이하                  ┃  

  ┃                      │                                  │뱀장어 및 해수어용 : 2.7% 이하          ┃  

  ┠───────────┼─────────────────┼────────────────────┨  

  ┃라. 휘발성 염기태질소 │낙농가공부산물류, 박류, 동물성단  │0.3% 미만                               ┃  

  ┃                      │백질류사료(새우분, 어분, 육분),   │                                        ┃  

  ┃                      │어골분                            │                                        ┃  

  ┃                      ├─────────────────┼────────────────────┨  

  ┃                      │곤충류, 기타 동물성단백질류사료,  │0.5% 미만                               ┃  

  ┃                      │남은음식물사료, 플랑크톤류, 혼합  │                                        ┃  

  ┃                      │성 단미사료                       │                                        ┃  

  ┠───────────┼─────────────────┼────────────────────┨  

  ┃마. 셀레늄            │배합사료, 단미사료                │돼지, 닭 배합사료 : 4ppm 이하           ┃  

  ┃                      │                                  │수산동물용 배합사료 : 10ppm 이하        ┃  

  ┃                      │                                  │기타 배합사료(프리믹스용 배합사료는 제외┃  

  ┃                      │                                  │한다) : 2ppm 이하                       ┃  

  ┃                      │                                  │남은음식물사료, 혼합성 단미사료 : 2ppm  ┃  

  ┃                      │                                  │이하                                    ┃  

  ┠───────────┼─────────────────┼────────────────────┨  

  ┃바. 조단백질          │양돈용 배합사료                   │포유자돈: 20% 이하                      ┃  

  ┃                      │                                  │이유돈: 18% 이하                        ┃  

  ┃                      │                                  │육성돈: 16% 이하                        ┃  

  ┃                      │                                  │비육돈: 14% 이하                        ┃  

  ┃                      │                                  │번식용 모돈: 15% 이하                   ┃  

  ┃                      │                                  │임신돈: 13% 이하                        ┃  

  ┃                      │                                  │포유돈: 19% 이하                        ┃  

  ┃                      ├─────────────────┼────────────────────┨  

  ┃                      │산란계용 배합사료                 │산란어린병아리: 21% 이하                ┃  

  ┃                      │                                  │산란중병아리: 18% 이하                  ┃  

  ┃                      │                                  │산란큰병아리: 16% 이하                  ┃  

  ┃                      │                                  │산란전: 17% 이하                        ┃  

  ┃                      │                                  │산란초기: 19% 이하                      ┃  

  ┃                      │                                  │산란중기: 18% 이하                      ┃  

  ┃                      │                                  │산란말기: 17% 이하                      ┃  

  ┃                      │                                  │산란종계: 19% 이하                      ┃  

  ┃                      ├─────────────────┼────────────────────┨  

  ┃                      │육계용 배합사료                   │육용어린병아리: 20% 이하                ┃  

  ┃                      │                                  │육용중병아리: 17% 이하                  ┃  

  ┃                      │                                  │육용종계: 16% 이하                      ┃  

  ┃                      │                                  │육계초기: 23% 이하                      ┃  

  ┃                      │                                  │육계전기: 22% 이하                      ┃  

  ┃                      │                                  │육계후기: 20% 이하                      ┃  

  ┃                      ├─────────────────┼────────────────────┨  

  ┃                      │오리용 배합사료                   │육용오리전기: 21% 이하                  ┃  

  ┃                      │                                  │육용오리후기: 19% 이하                  ┃  

  ┃                      │                                  │어린오리: 22% 이하                      ┃  

  ┃                      │                                  │육성오리: 18% 이하                      ┃  

  ┃                      │                                  │산란오리: 20% 이하                      ┃  

  ┃                      ├─────────────────┼────────────────────┨  

  ┃                      │고기소용 배합사료                 │어린송아지: 24% 이하                    ┃  

  ┃                      │                                  │육성우: 18% 이하                        ┃  

  ┃                      │                                  │번식우: 16% 이하                        ┃  

  ┃                      │                                  │종모우: 17% 이하                        ┃  

  ┃                      │                                  │임신우: 15% 이하                        ┃  

  ┃                      │                                  │포유우: 18% 이하                        ┃  

  ┃                      │                                  │큰소전기: 17% 이하                      ┃  

  ┃                      │                                  │큰소후기: 15% 이하                      ┃  

  ┃                      ├─────────────────┼────────────────────┨  

  ┃                      │젖소용 배합사료                   │젖소어린송아지: 24% 이하                ┃  

  ┃                      │                                  │젖소중송아지: 19% 이하                  ┃  

  ┃                      │                                  │젖소큰송아지: 18% 이하                  ┃  

  ┃                      │                                  │젖소임신우: 17% 이하                    ┃  

  ┃                      │                                  │젖소종모우: 17% 이하                    ┃  

  ┃                      │                                  │비유초기: 24% 이하                      ┃  

  ┃                      │                                  │비유중기: 19% 이하                      ┃  

  ┃                      │                                  │비유말기: 18% 이하                      ┃  

  ┃                      │                                  │건유기: 17% 이하                        ┃  

  ┃                      │                                  │고능력우: 22% 이하                      ┃  

  ┃                      ├─────────────────┼────────────────────┨  

  ┃                      │고기소용 섬유질 배합사료          │어린송아지: 22% 이하                    ┃  

  ┃                      │                                  │중송아지: 20% 이하                      ┃  

  ┃                      │                                  │큰소전기: 19% 이하                      ┃  

  ┃                      │                                  │큰소후기: 17% 이하                      ┃  

  ┃                      │                                  │번식우: 15% 이하                        ┃  

  ┃                      ├─────────────────┼────────────────────┨  

  ┃                      │젖소용 섬유질 배합사료            │어린송아지: 22% 이하                    ┃  

  ┃                      │                                  │큰송아지: 17% 이하                      ┃  

  ┃                      │                                  │비유기: 20% 이하                        ┃  

  ┃                      │                                  │건유기: 16% 이하                        ┃  

  ┠───────────┼─────────────────┼────────────────────┨  

  ┃사. 산가              │쌀겨                              │70 이하                                 ┃  

  ┠───────────┼─────────────────┼────────────────────┨  

  ┃아. 트리메틸아민(TMA) │염화콜린, 비테인염산염(베타인염   │500ppm 이하                             ┃  

  ┃                      │산염)                             │                                        ┃  

  ┗━━━━━━━━━━━┷━━━━━━━━━━━━━━━━━┷━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┛  

   * 이 고시에서 별도로 기준을 정하지 않은 것은 잠정적으로 국제식품규격위원회(CAC?Codex                    

  Alimentarius Commission) 규정을 준용할 수 있으며, 국제식품규격위원회 규정이 없는 경우에는 농              

  림축산식품부장관이 해당물질별 관련 자료와 선진외국의 엄격한 기준 등을 종합적으로 검토하여 판              

  정할 수 있다.                                                                                             

  ** 남은음식물사료 구리ㆍ아연 건물기준 계산 산식(ppm) : 구리ㆍ아연 측정치(원물),ppm/(100-수분함            

  량,%)×100                                                                                                

    - 예1) 남은 음식물사료 성분 측정결과 수분 40%. 구리 6ppm 인 경우: 6ppm/(100-40)×100=10ppm              

    - 예2) 남은 음식물사료 성분 측정결과 수분 40%, 구리 12ppm 인 경우: 12ppm/(100-40)×100=20ppm            

별표 0022: 첨가, 혼합 제한 사료 및 물질의 기준(제12조제2항 관련)

  [별표 22]                                     

  첨가, 혼합 제한 사료 및 물질의 기준(제12조제2항 관련)                                                               

  ┏━━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┓  

  ┃구      분                │사 료 명      │허 용 기 준                                                       ┃  

  ┠─────────────┼───────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃가. 비단백태질소화합물    │배합, 단미,   │혼합금지. 다만, 6개월령 이상 고기소용·젖소용 배합사료에 요소는   ┃  

  ┃                          │보조사료(비단 │2%, 기타 비단백태질소화합물은 1.5% 이내에서 각각 혼합이 가능함.   ┃  

  ┃                          │백태질소화합  │※ 6개월령 이상 고기소용·젖소용 배합사료 이외의 사료 내 비단     ┃  

  ┃                          │물 제외)      │백태질소화합물의 함량이 0.09% 이내이면 비단백태질소화             ┃  

  ┃                          │              │합물을 인위적으로 첨가하지 않은 것으로 봄                         ┃  

  ┠─────────────┼───────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃나. 염산불용물질          │배합, 단미,   │혼합금지. 다만, 양계용·양돈용·축우용 배합사료에는 특별한        ┃  

  ┃   (토사 등)              │보조사료      │목적으로 첨가 가능함.                                             ┃  

  ┃                          │              │※ 염산불용물질의 함량이 다음의 경우에는 인위적으로 혼합하지      ┃  

  ┃                          │              │않은 것으로 본다.                                                 ┃  

  ┃                          │              │(1) 골분, 골회, 가금부산물건조분, 서류, 수지박, 어즙흡착사료,     ┃  

  ┃                          │              │우모분, 육골분, 육분, 육즙흡착사료 : 3% 미만                      ┃  

  ┃                          │              │(2) 어분 : 2% 미만                                                ┃  

  ┃                          │              │(3) 기타 배합사료, 단미사료 및 보조사료 : 1.5% 미만(다만,         ┃  

  ┃                          │              │광물성사료, 규산염제, 항응고제, 프리믹스용 배합사료 및            ┃  

  ┃                          │              │부형제(광물성과 규산염제, 항응고제에 한함)를 포함하는 사          ┃  

  ┃                          │              │료는 제외한다)                                                    ┃  

  ┠─────────────┼───────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃다. 항산화제              │배합사료      │150g 이하(유효성분량 기준)/배합사료 1톤                           ┃  

  ┃                          │(프리믹스용   │다만, 수산동물용은 300g이내(유효성분량 기준)/배합사료 1톤         ┃  

  ┃                          │배합사료 제외)│  ※ 수산동물용 배합사료는 에톡시퀸 혼입금지. 다만, 함량이        ┃  

  ┃                          │              │0.002%미만이면 인위적으로 혼합하지 않은 것으로 봄.                ┃  

  ┠─────────────┼───────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃라. 항곰팡이제            │배합사료      │3㎏ 이하(유효성분량 기준)/배합사료 1톤                            ┃  

  ┃                          │(프리믹스용   │                                                                  ┃  

  ┃                          │배합사료 제외)│                                                                  ┃  

  ┠─────┬───────┼───────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃마. 착색제│아스타키산틴  │배합사료      │100g 이하(유효성분량 기준)/배합사료 1톤                           ┃  

  ┃          │              │              │다만, 갑각류, 도미, 송어 및 연어용에만 허용기준 이내에서 사용 가능┃  

  ┃          ├───────┼───────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃          │칸타산틴      │배합사료      │8g 이하(유효성분량 기준)/배합사료 1톤. 다만, 닭, 메추리,          ┃  

  ┃          │              │              │오리, 칠면조 등에만 허용기준 이내에서 사용 가능. 또는             ┃  

  ┃          │              │              │25g 이하(유효성분량 기준)/배합사료 1톤. 다만, 송어 및 연어        ┃  

  ┃          │              │              │용에만 허용기준 이내에서 사용 가능                                ┃  

  ┃          ├───────┼───────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃          │아포카로텐산  │배합사료      │80g 이하(유효성분량 기준)/배합사료 1톤. 다만, 닭, 메추리,         ┃  

  ┃          │에스테르      │              │오리, 칠면조 등에만 허용기준 이내에서 사용 가능                   ┃  

  ┠─────┴───────┼───────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃바. 개미산                │배합사료      │0.5% 이하                                                         ┃  

  ┠─────────────┼───────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃사. 포르말린(포름알데히드)│배합, 단미,   │혼합금지. 다만, 「동물용의약품 등 취급규칙」 및 「가축전염병      ┃  

  ┃                          │보조사료      │예방법」에 근거하여 사용이 허용된 경우는 제외.                    ┃  

  ┠─────────────┼───────┼─────────────────────────────────┨  

  ┃아. 식물스테롤[식물스테   │배합, 단미    │0.65% 이하                                                        ┃  

  ┃롤에스테르 포함]          │              │                                                                  ┃  

  ┗━━━━━━━━━━━━━┷━━━━━━━┷━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┛  

   * 이 고시에서 별도로 기준을 정하지 않은 것은 잠정적으로 국제식품규격위원회(CAC?Codex                              

  Alimentarius Commission) 규정을 준용할 수 있으며, 국제식품규격위원회 규정이 없는 경우에는 농림축산                  

  식품부장관이 해당물질별 관련 자료와 선진외국의 엄격한 기준 등을 종합적으로 검토하여 판정할 수 있다.                 

별표 0023: 단미사료에 혼합 가능한 사료의 종류(제12조제4항 관련)

  [별표 23]                                    

  단미사료에 혼합 가능한 사료의 종류(제12조제4항 관련)                                                            

  ┏━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┓  

  ┃사료명칭            │주   원   료                │혼  합  물  질                                        ┃  

  ┠──────────┼──────────────┼───────────────────────────┨  

  ┃골분                │골분                        │강피류, 전분류                                        ┃  

  ┠──────────┼──────────────┼───────────────────────────┨  

  ┃패분                │패분                        │강피류, 전분류                                        ┃  

  ┠──────────┼──────────────┼───────────────────────────┨  

  ┃과실류가공부산물    │과실류가공부산물            │강피류?박류(수분조절용에 한함)                       ┃  

  ┠──────────┼──────────────┼───────────────────────────┨  

  ┃낙농가공부산물류    │낙농가공부산물류            │강피류, 박류, 미생물제(균체, 효모)                    ┃  

  ┠──────────┼──────────────┼───────────────────────────┨  

  ┃남은음식물사료      │남은음식물(「폐기물관리법」 │강피류, 박류, 보존제, 미생물제, 식품가공부산물류, 향미┃  

  ┃                    │에 따른 음식물류 폐기물)    │제                                                    ┃  

  ┠──────────┼──────────────┼───────────────────────────┨  

  ┃당밀                │당밀                        │파당 또는 폐당류                                      ┃  

  ┠──────────┼──────────────┼───────────────────────────┨  

  ┃당밀흡착강피류      │강피류                      │당밀                                                  ┃  

  ┠──────────┼──────────────┼───────────────────────────┨  

  ┃동물성단백질혼합분  │동물성단백질류              │동물성단백질류                                        ┃  

  ┠──────────┼──────────────┼───────────────────────────┨  

  ┃분말유지            │분말유지                    │강피류, 낙농가공부산물류(유당, 유장), 박류, 유화제    ┃  

  ┠──────────┼──────────────┼───────────────────────────┨  

  ┃불해성지방          │불해성지방                  │강피류, 낙농가공부산물류(유당, 유장), 박류, 유화제    ┃  

  ┠──────────┼──────────────┼───────────────────────────┨  

  ┃섬유질가공사료      │섬유질류사료                │곡류, 강피류, 박류, 식품가공부산물류                  ┃  

  ┠──────────┼──────────────┼───────────────────────────┨  

  ┃섬유질발효사료      │섬유질류사료                │곡류, 강피류, 박류 식품가공부산물류, 균체, 효모       ┃  

  ┠──────────┼──────────────┼───────────────────────────┨  

  ┃어즙흡착사료        │어즙 및 어류내장의 부산물   │강피류, 박류                                          ┃  

  ┠──────────┼──────────────┼───────────────────────────┨  

  ┃육즙흡착사료        │육즙                        │강피류                                                ┃  

  ┠──────────┼──────────────┼───────────────────────────┨  

  ┃건어포, 육골포,     │동물성단백질류              │보존제, 향미제                                        ┃  

  ┃육어포, 육포        │                            │                                                      ┃  

  ┃                    │                            │                                                      ┃  

  ┠──────────┼──────────────┼───────────────────────────┨  

  ┃혈액가공품          │혈액                        │규산염제                                              ┃  

  ┠──────────┼──────────────┼───────────────────────────┨  

  ┃혼합광물질          │다량광물질류                │미량광물질류                                          ┃  

  ┠──────────┼──────────────┼───────────────────────────┨  

  ┃혼합성 단미사료(애완│동물성사료                  │식물성?광물성?기타 단미사료, 보존제, 향미제         ┃  

  ┃용 동물의 간식용, 영│                            │                                                      ┃  

  ┃양보충용에 한 함)   │                            │                                                      ┃  

  ┠──────────┼──────────────┼───────────────────────────┨  

  ┃혼합성유지          │동·식물성유지류            │동·식물성유지류                                      ┃  

  ┗━━━━━━━━━━┷━━━━━━━━━━━━━━┷━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┛  

   * 혼합을 허용한 단미사료 이외에는 단미사료에 다른 단미사료를 혼합한 경우에는 혼합성 단미사료로                 

  표시하여야 한다.                                                                                                

별표 0024: 사용 가능한 부형제의 범위(제12조제6항 관련)

  [별표 24]                          

  사용 가능한 부형제의 범위(제12조제6항 관련)                                                           

  1. 부형제의 범위                                                                                      

  ┏━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┓  

  ┃유형            │부 형 물 질                                                                   ┃  

  ┠────────┼───────────────────────────────────────┨  

  ┃곡류 가공품     │밀가루, 옥수수분말, 콩류분말                                                  ┃  

  ┠────────┼───────────────────────────────────────┨  

  ┃강피류          │대두피, 말분, 면실피, 밀기울, 쌀겨(탈지 포함), 옥수수피, 가공왕겨(멸균 가온처 ┃  

  ┃                │리 가공한 것에 한함)                                                          ┃  

  ┠────────┼───────────────────────────────────────┨  

  ┃규산염제        │고령토(카오린), 규조토, 맥반석, 몬모릴로나이트, 버미큘라이트, 벤토나이트,     ┃  

  ┃                │세피올라이트, 에타폴자이트, 제올라이트,                                       ┃  

  ┠────────┼───────────────────────────────────────┨  

  ┃보존제          │실리카(이산화규소)                                                            ┃  

  ┃(항응고제)      │                                                                              ┃  

  ┠────────┼───────────────────────────────────────┨  

  ┃낙농가공부산물류│유당, 유장, 탈지분유                                                          ┃  

  ┠────────┼───────────────────────────────────────┨  

  ┃동물성 단백질류 │어분(탈지, 백색)                                                              ┃  

  ┠────────┼───────────────────────────────────────┨  

  ┃식물성 박류     │대두박, 맥주박, 면실박, 밀글루텐, 옥수수글루텐, 옥수수배아박, 주정박          ┃  

  ┠────────┼───────────────────────────────────────┨  

  ┃섬유질류        │사탕무박(비트펄프), 사탕수수박(버개스), 옥수수대분말, 옥수수속대분말,         ┃  

  ┃                │커피박                                                                        ┃  

  ┠────────┼───────────────────────────────────────┨  

  ┃유지류          │동물성유지류, 분말유지, 불해성지방, 식물성유지류, 글리세린                    ┃  

  ┠────────┼───────────────────────────────────────┨  

  ┃유화제          │글리세린 지방산 에스테르, 레시틴, 소르비탄 지방산 에스테르, 자당 지방산       ┃  

  ┃                │에스테르, 폴리옥시에틸렌 글리세롤 지방산 에스테르와 그 합제, 폴리옥시에       ┃  

  ┃                │틸렌 소르비탄 지방산 에스테르, 프로필렌글리콜                                 ┃  

  ┠────────┼───────────────────────────────────────┨  

  ┃광물성          │마그네슘석회석분말, 석회석분말, 제일인산칼슘, 제이인산칼슘, 제삼인산칼슘,     ┃  

  ┃(인산염류 및    │탄산칼슘, 혼합인산칼슘                                                        ┃  

  ┃칼슘염류)       │                                                                              ┃  

  ┠────────┼───────────────────────────────────────┨  

  ┃미생물제        │맥주효모, 제빵효모, 토룰라효모, 효모배양물                                    ┃  

  ┠────────┼───────────────────────────────────────┨  

  ┃전분류          │곡류전분, 서류전분(α-전분을 포함)                                            ┃  

  ┠────────┼───────────────────────────────────────┨  

  ┃향미제          │맥아당(말토오스), 설탕(백당(수크로오스) 포함), 캐러멜(카레멜), 포도당(글루    ┃  

  ┃(감미료)        │코오스)                                                                       ┃  

  ┠────────┼───────────────────────────────────────┨  

  ┃동물성 무기물류 │패분                                                                          ┃  

  ┠────────┼───────────────────────────────────────┨  

  ┃기타            │감자가공부산물, 정제수, 버섯재배부산물(표고버섯성장목분말), 스테아린산칼슘,   ┃  

  ┃                │불활성효모                                                                    ┃  

  ┗━━━━━━━━┷━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┛  

  2. 부형제의 기준 및 규격                                                                              

   가. 가공왕겨(멸균 가온처리 가공한 것에 한함)                                                         

    1) 정의 : 벼의 겉껍질인 왕겨를 150～400℃에서 고온가열(왕겨 소성장치, 팽연기 등) 처리하여 유해균    

  과 독소를 파괴한 물질을 말한다.                                                                       

    2) 성분정보 : 수분은 약 7%, 조섬유는 약 49%, 조회분은 약 13% 정도를 함유하고 있다.                  

    3) 고려사항 : 사료로서의 영양적 가치는 없음을 고려하여 사용해야 한다.                               

   나. 정제수                                                                                           

    1) 정의 : 상수(수돗물)를 증류하거나 이온교환수지를 통하여 정제하여 불순물을 가능한 한 제거한 물     

    2) 성분정보 : 용존무기물, 용존유기물, 미립자, 미생물 등의 불순물이 제거된 순수한 물                 

    3) 고려사항 : 사료로서의 영양적 가치는 없음을 고려하여 사용해야 한다.                               

   다. 가공왕겨와 정제수를 제외한 부형물질의 기준 및 규격은 별표 5 및 별표 6의 단미·보조사료의 품      

  목별 기준 및 규격을 따른다.                                                                           

  3. 이 고시에서 별도로 기준을 정하지 않은 것은 잠정적으로 국제식품규격위원회(CAC?Codex                

  Alimentarius Commission) 규정을 준용할 수 있으며, 국제식품규격위원회 규정이 없는 경우에는 농          

  림축산식품부장관이 해당물질별 관련 자료와 선진외국의 엄격한 기준 등을 종합적으로 검토하여 판          

  정할 수 있다.                                                                                         

별표 0025: 사료표준분석방법(제13조 관련)

[별표 25] 

사료표준분석방법(제13조 관련)

━━━━━━━━━━━━━

  사료표준 분석방법(안)   

━━━━━━━━━━━━━

2022. 8.

목  차

1장. 일반성분1

1.1. 수분(Moisture)1

1.2. 조단백질(Crude protein)3

1.3. 조섬유(Crude fiber)6

1.4. 조지방(Crude fat, ether extract)8

1.5. 조회분(Crude ash)9

1.6. 가용무질소물(Nitrogen free extract)9

2장. 세포막구성물질(Cell wall constituents)10

2.1. NDF(Neutral detergent fiber)10

2.2. ADF(Acid detergent fiber)10

3장. 아미노산(Amino acid)12

3.1. 역상크로마토그래피법(PITC 유도체화법)12

3.2. 이온교환크로마토그래피법(Ninhydrin 법)13

3.3. MHA(Methionine Hydroxy Analogue)의 정량법15

3.4. 타우린 분석법16

4장. 무기물(Minerals)19

4.1. 칼슘(Ca)19

4.2. 인(P)20

4.3. 유황(S)20

4.4. 마그네슘(Mg)21

4.5. 칼륨(K)22

4.6. 철(Fe)22

4.7. 나트륨(Na)23

4.8. 염분(NaCl)23

4.9. 염소(Cl)25

4.10. 망간(Mn)25

4.11. 아연(Zn)26

4.12. 구리(Cu)27

4.13. 코발트(Co)27

4.14. 몰리브덴(Mo)28

4.15. 요오드(I)29

4.16. 산화알루미늄(Al2O3)29

4.17. 셀레늄(Se)30

4.18. 규산(이산화규소-SiO2), 규소31

4.19. ICP 발광분광분석법33

5장. 중금속35

5.1. 크롬(Cr)35

5.2. 불소(F)35

5.3. 비소(As)36

5.4. 납(Pb)37

5.5. 수은(Hg)38

5.6. 카드뮴(Cd)38

5.7. 주석(Sn)38

6장. 비타민40

6.1. 비타민 A40

6.2. 프로비타민 A(β-카로틴)41

6.3. 비타민 B1(Thiochrome 형광법)42

6.4. 비타민 B244

6.5. 비타민 B645

6.6. 비타민 B1245

6.7. 비타민 C46

6.8. 비타민 D47

6.9. 비타민 E49

6.10. 비타민 K50

6.11. 비타민 K3(Menadione)52

6.12. 비타민 K 화합물(MSB: Menadione Sodium Bisulfite)52

6.13. 판토텐산53

6.14. 이노시톨54

6.15. 염화콜린55

6.16. 나이아신(니코틴산 및 니코틴아미드)56

6.17. 비오틴57

6.18. 엽산58

6.19. L-카르니틴59

6.20. 주석산수소콜린60

6.21. 수용성 비타민 동시분석법62

6.22. 비타민 K462

7장. 곰팡이독소64

7.1. 아플라톡신 (Aflatoxin B1, B2, G1, G2)64

7.2. 제랄레놀과 제랄레논(Zearalenol, Zearalenone)66

7.3. 오크라톡신 A (Ochratoxin A)66

7.4. 푸사리움 곰팡이독소 (Fusarium Mycotoxins)68

7.5. 푸모니신 (Fumonisin B1, B2)  70

7.6. 아플라톡신과 오크라톡신(AO) 동시분석법71

7.7. 아플라톡신, 오크라톡신, 제랄레논(AOZ) 동시분석법72

7.8. 아플라톡신(B1, B2, G1, G2), 오크라톡신 A, 데옥시니발레놀, 푸모니신(B1, B2), T-2 독소, HT-2 독소, 제랄레논 동시분석방법73

8장. 유해미생물77

8.1. 살모넬라(Salmonella) 77

9장. 잔류농약81

9.1. 유기인계 및 유기염소계 다성분 분석81

9.2. 유기인계(Organophosphorus)83

9.2.1. 다이아지논(Diazinon) 83

9.2.2. 파라치온(Parathion)84

9.2.3. 페다트로치온(Fenitrothion)85

9.2.4. 펜토에이트(Phenthoate)86

9.2.5. 펜치온(Fenthion)88

9.2.6. 말라치온(Malathion)89

9.2.7. 클로르피리포스메틸(Chlorpyrifos-methyl) 90

9.2.8. 피리미포스메틸(Pirimiphos-methyl) 91

9.2.9. 디클로르보스(Dichlorvos) 93

9.3. 유기염소계(Organochlorine)94

9.3.1. 비에치씨(BHC) 94

9.3.2. 디디티(DDT) 95

9.3.3. 알드린(Aldrin)96

9.3.4. 디엘드린(Dieldrin)97

9.3.5. 엔드린(Endrin) 98

9.3.6. 헵타크롤(Heptachlor) 99

9.3.7. 헵타크롤에폭사이드(Heptachlor Epoxide) 100

9.4. 카바메이트계(Carbamate)102

9.4.1. 카바릴(Carbaryl)102

9.5. 유기인계, 유기염소계 및 카바메이트계 다성분 분석법103

9.6. 다종농약 다성분 분석법 (Multi class pesticide multiresidue methods)104

9.7. 기타126

9.7.1. 에틸렌디브로마이드(EDB)126

9.7.2. 치아벤다졸(Thiabendazole)127

9.7.3. 프로피코나졸(Propiconazole) 128

9.7.4. 에토펜프록스(Etofenprox) 129

9.7.5. 포레이트(Phorate)130

9.7.6. 피레트린 등 8종(2,4-D, bentazone, dicamba, MCPA, phosmet, pyrethrins I, pyrethrins II, cinerins I, cinerins II, jasmolins I, jasmolins II, prothioconazole, spinosyn A, spinosyn D) 다성분 분석법131

9.7.7. 글리포세이트(Glyphosate), 설포세이트(Sulfosate)135

9.7.8. 다이쾃(Diquat), 패러쾃(Paraquat)137

9.7.9. 디티오카바메이트계 농약(Dithiocarbamates) 139

9.7.10. 캡탄(Captan)141

9.7.11. 아미노피랄리드(Aminopyralid)144

9.7.12. 벤설탑(Bensultap), 카탑(Cartap), 티오사이클람(Thiocyclam)146

10장. 동물용의약품149

10.1. 정성분석149

10.2. 정량분석150

10.2.1. 베타-락탐계열150

10.2.2. 테트라싸이클린 계열151

10.2.3. 설폰아미드계(Sulfonamides)152

10.2.3.1.설파메타진(Sulfamethazine), 설파디메톡신(Sulfadimethoxine), 설파퀴녹사린(Sulfaquinoxaline)152

10.2.3.2. 설파치아졸(Sulfathazole)153

10.2.4. 설폰아미드계(Sulfonamides), 니트로퓨란계(Nitrofuranes), 에토파베이트(Ethopabate) 동시분석153

10.2.4.1. 설폰아미드계(Sulfonamides) : 설파메라진(Sulfamerazine), 설파메타진(Sulfamethazine), 설파치아졸(Sulfathiazole), 설파퀴녹살린(Sulfaquinoxaline), 설파디메톡신(Sulfadimethoxine), 설파다이아진(Sulfadiazine), 니트로퓨란(Nitrofuranes) : 퓨라졸리돈(Furazolidone), 나이카바진(Nicarbagine)153

10.2.5. 마크로라이드 계열154

10.2.5.1. 에리스로마이신(Erythromycin), 스피라마이신(Spiramycin)154

10.2.6. 폴리에텔계열155

10.2.6.1. 라살로시드 나트륨155

10.2.6.2. 나라신, 살리노마이신, 모넨신나트륨, 샘두라마이신156

10.2.7. 기타156

10.2.7.1. 카바독스(Carbadox)156

10.2.7.2. 암프로리움 (Amprolium)157

10.2.7.3. 오라퀸독스(Olaquindox)159

10.2.7.4. 크로피돌(Clopidol)160

10.2.7.5. 데콕퀴네이트(Decoquinate)161

10.2.7.6. 염산로베니딘(Robenidine)162

10.2.7.7. 구연산모란텔(Morantelcitrate)163

10.2.7.8. 할로푸지논 (Halofuginone)164

10.2.7.9. 죠렌(Zoalene), 디니톨마이드(Dinitolmide)166

10.2.7.10. 오르메토프림(Ormethoprim)167

10.3. 미생물평판법167

10.3.1. 아연바시트라신(Bacitracin-Zinc)167

10.3.2. 황산콜리스틴(Colistin-sulfate)168

10.3.3. 버지니아 마이신(Virginiamycin)169

10.3.4. 타이로신(Tylosin) 170

10.3.5. 스피라마이신(Spiramycin)170

10.3.6. 살리노마이신 나트륨(Salinomycin) 171

10.3.7. 모넨신나트륨(Monensin-Na)173

10.3.8. 라살로시드나트륨(Lasalocid-Na)174

10.3.9. 하이그로마이신 B (Hygromycin-B)175

10.3.10. 데스토마이신 A(Destomycin-A)177

10.4. 펜벤다졸(Fenbendazole)178

10.5. 디클라주릴(Diclazuril)179

10.6. 말라카이트 그린(Malachite Green)180

10.7. 마두라마이신(Maduramycin)181

10.8. 설폰아마이드계 다성분 분석183

11장. 생균제(Probiotics)184

제12장 효소제187

12.1. α-아밀라아제(전분호정화력)187

12.1.1. α-아밀라아제(전분호정화력 제1법)187

12.1.2. α-아밀라아제(전분호정화력 제2법)188

12.2. 말토게닉아밀라아제189

12.3. β-아밀라아제(전분당화력시험법)190

12.4. 셀룰라아제(섬유당화력 시험법)190

12.4.1. 섬유당화력 시험법 제1법190

12.4.2. 섬유당화력 시험법 제2법191

12.5. β-글루카나아제192

12.6. 글루코아밀라아제(아밀로글루코시다아제)193

12.7. 헤미셀룰라아제197

12.8. 펙티나아제(pectinase)199

12.9. 락타아제[펩틴당화력(lactase) 시험법]199

12.10. 키시라나제(키시란당화력)200

12.11. 키토사나아제201

12.12. 리파아제(지방소화력)202

12.13. 피타아제(피틴산분해력)202

12.14. 산성프로테아제203

12.15. 중성프로테아제 [단백질소화력(protease) 시험법]204

12.16. 식물성프로테아제205

12.17. 브로멜라인206

12.18. 알카리성프로테아제207

13장 향미제209

13.1. 사카린나트륨209

13.2. 사카린나트륨 및 아스파탐 동시분석법210

13.3. 소르비톨, 자일리톨212

13.4. 멘톨212

13.5. 과당, 설탕, 포도당, 맥아당213

13.6. 네오헤스페리딘 디하이드로칼콘(Neohesperidine Dihydrochalcone)214

13.7. 감초추출물(글리시리진산)214

13.8. 원당(자당)215

13.9. L-글루타민산나트륨216

13.10. 향미제 동시분석법216

13.11. 소르비톨218

13.13. 스테비올배당체220

13.14. 5`-이노신산이나트륨221

14장. 보존제223

14.1. 유기산 다성분 분석법223

14.2. 소르빈산, 안식향산과 그 염류 정량223

14.3. 프로피온산 및 그 염류의 정량227

14.4. 에톡시킨(Ethoxyquin)229

14.5. 부틸히드록시아니졸(BHA), 디부틸히드록시톨루엔(BHT) 및 몰식자산프로필(PG)230

14.6. 케르세틴232

14.7. 레스베라트롤232

14.8. 몰식자산 및 몰식자산프로필 동시분석법233

14.9. 인산(H3PO4)234

15장. 사료중 동물성 유래 단백질 혼입검사법235

15.1. 현미경 검사법235

15.2. ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) : 효소면역측정검사법 233

15.3. PCR(Polymerase Chain Reaction) : 중합효소연쇄반응검사법237

15.4. Multiplex PCR, Multiplex real-time PCR :다중중합효소연쇄반응검사법241

16장. 올리고당247

16.1. 갈락토올리고당247

16.2. 프락토올리고당248

16.3. 이소말토올리고당249

16.4. 키토올리고당252

16.5. 말토올리고당254

16.6. 자일로올리고당255

16.7. 겐티오올리고당256

17장. 유화제258

17.1. 프로피렌글리콜(Propylene glycol)258

18장. 완충제259

18.1. 탄산나트륨(소다회)259

18.2. 탄산수소나트륨(중조)259

18.3. 산화마그네슘259

19장. 착색제260

19.1. 천연착색제(카로틴, 크산토필 및 카로티노이드)260

19.2. 아스타키산틴(Astaxanthin)261

19.3. 칸타산틴(Canthaxanthin)262

19.4. 아포카로텐산 에스테르(Apocarotenoic Ester)262

20장. 추출제263

20.1. 키토산(총글루코사민으로서)263

20.2. 세포벽추출물(글루칸 혹은 베타글루칸)263

20.3. 포도종자추출물(프로안토시아니딘)264

20.4. 천연비테인265

21장. 기타성분267

21.1. 염기성치환용량(Cation Exchange Capacity)267

21.2. 요소267

21.3. 휘발성 염기태질소268

21.4. 염산불용물질(토사)269

21.5. 유사단미사료 혼입여부 판정방법269

21.6. 펩신(Pepsin)소화율269

21.7. 전분269

21.8. 열량(Calorie)272

21.9. 협잡물(이물질시험법)272

21.10. 산가272

21.11. 우레아제 역가(Urease Activity)273

21.12. HCN(청산)274

21.13. 유리고시폴(Free Gossypol)275

21.14. 멜라민276

21.15. 요오드가280

21.16. 팽윤도281

21.17. 브릭스(Brix)282

21.18. 비테인염산염(베타인염산염)282

21.19. 불용성불순물283

21.20. 총당(Total sugar)284

21.21. KOH용해도285

21.22. 이물 시험법286

22장. 동시다성분289

22.1. 잔류농약, 동물용의약품, 곰팡이독소 동시 다성분 분석법289

1장. 일반성분

1.1. 수분(Moisture)

 가. 가열 감량법

  1) 기구 

    건조기(drying oven),  데시케이터(desiccator), 알루미늄 칭량병(crucible), 저울 (balance)

  2) 가루상태의 시료

    미리 건조하여 항량을 구한 알미늄제 칭량병에 시료 2～5 g을 정확히 칭량하여 항온건조기로 135±2℃로 정확히 2시간 또는 105～110℃에서 항량이 될 때까지 건조시켜 데시케이터내에서 30분간 방냉한 다음 무게를 달아 감량을 수분함량으로 한다. 단, 요소제는 75℃에서 4시간 건조한다.(어즙 흡착사료, 당 흡착사료, 글루텐피드는 105±2℃에서 3시간 건조)(다만, 동시험법의 원리를 이용한 기타의 장치 또는 자동ㆍ반자동기기를 사용할 수 있다).

  수분(%) =   건조전 중량(칭량병+시료) - 건조후 중량(칭량병+시료)   × 100  

            ────────────────────────────        

              시료중량                                                      

  3) 수분이 높은 시료

    미리 항량으로 한 대형 칭량병에 일정량의 시료를 달아 60～80℃의 건조기내에서 48시간 예비 건조한 다음 실험실내 상온에서 24시간 방치하여 원물(풍건물)의 수분함량을 구한 후 분쇄하여 다시 이 분쇄된 시료를 상기 2) 가루상태의 시료와 동일한 방법으로 수분을 정량한 후 다음방식에 따라 수분함량을 구한다.

  W =  W1 ＋   (100 ― W1) × W2  

            ───────────

              100                 

W  : 원물의 수분함량(%)

W1 : 예비건조시의 감량(%)

W2 : 풍건물 공시품의 수분함량(%)

┌───┐                        ┌────┐                        ┌──┐  ┌──┐

│칭량병│135±2℃에서 2시간 건조 │정량    │135±2℃에서 2시간 건조 │칭량│→│계산│

│      ├────────────┤(칭량병 ├────────────┤    │  │    │

│      │30분간 방냉             │＋시료) │30분간 방냉             │    │  │    │

└───┘                        └────┘                        └──┘  └──┘

 나. 증류법(톨루엔 증류법)

    휘발성 성분이나 지질이 많고 수분이 많아서 건조하면 피막이 생기는 시료에 대한 수분 정량법이다.

  1) 기구 및 시약

    증류식 수분측정장치, 톨루엔, 해사(건조된 것)

  2) 시약조제

    톨루엔 또는 톨루엔과 자일렌 혼합액(2:1) 일반품도 사용가능 하나 물을 함유하지 않아야 하며 미리 무수황산나트륨 소량과 혼합, 진탕하여 탈수시켜 놓는다.

  3) 장치 

    증류식 수분 정량장치(A.O.A.C.형)

  4) 방법

    일정량의 시료(수분량이 3～4 mL정도 되게 시료를 취함)를 정확하게 달아 증류식 수분 정량장치의 증류 플라스크(세척하여 건조시킨 증류 flask)에 넣고(점성시료일 경우는 유산지나 알미늄박에 싸서 넣어도 좋음), 톨루엔을 시료가 잠길 만큼 부어주고(이때 튀는 것을 막기 위해 해사를 넣어줌), 환류냉각관과 수분측정관을 연결한다. 냉각관 상부로부터 톨루엔을 주입하여 수분측정관을 완전히 채운 다음 냉각수를 흐르게 하고 가열을 시작한다.  

    처음에는 1초당 2방울씩 떨어지게 하다가 4방울 정도 떨어지게 가열온도를 조절한다. 냉각된 유출액은 두 종류의 액으로 분리되며 하층의 물은 눈금관에 모이고 상층의 톨루엔은 측관에서 플라스크로 되넘어 갔다가 다시 물과 함께 유출되어 넘어온다. 물이 거의 다 유출되면 유출액은 투명하게 되는데 이 때 점적병의 스포이드를 써서 냉각관 상부에서부터 톨루엔을 부어넣어 냉각관 내벽에 묻어있는 물방울을 씻어 내린다.  물의 유출이 끝날 때까지 세정과 증류를 계속하여 15분 간격으로 물의 유출 상태를 조사하여 더 이상 눈금의 변화가 없으면 물의 유출이 끝난 것으로 간주한다.(수분이 더 이상 유출되지 않을 때 다시 톨루엔을 냉각관 상부로부터 주입하고 얼마간 더 증류한다)

    가열이 끝난 뒤 냉각관 내부나 수분 측정관에 붙어있는 수분을 수분 측정관(눈금부위)으로 떨어뜨린다. 물의 유출이 끝나면 눈금관 부분이 따뜻하게 되므로 실온까지 냉각시켜 분리된 물의 양을 판독하여 아래의 공식에 의거 수분함량을 구한다. 

  수분(%)  =  눈금관의 물의양(mL)   ×  100   

            ────────────          

              시료채취량(g)                   

 다. 칼피셔법

  1) 기구

    적정장치：자동뷰렛 2개, 적정플라스크, 교반기 및 정전압 전류적정장치로 되어 있다. 칼피셔시액은 흡수성이 매우 강하므로 장치는 외부로부터 흡수되지 않도록 만들어져야 한다. 방습제는 실리카겔 또는 염화칼슘(수분측정용)등을 사용한다.

  2) 시약 및 시액

   가) 칼피셔용 메탄올

      메탄올 1 L에 마그네슘가루 5 g을 넣어 염화칼슘관을 붙인 환류냉각관으로 1시간 동안 환류하고 필요하면 염화제이수은 0.1 g을 넣어 반응을 촉진시킨다. 가스발생이 멈춘 다음 습기를 피하면서 메탄올을 증류하여 습기가 들어가지  않도록 보존한다. 이 액 1 mL중의 수분은 0.5 mg이하이어야 한다.

   나) 칼피셔용 피리딘

      피리딘에 수산화칼륨 또는 산화바륨을 넣고 마개를 꼭 막고 수일간 방치한 후, 그대로 습기를 피하면서 증류하여 습기가 들어가지 않도록 저장한다. 이 액 1 mL중의 수분은 1 mg이하이어야 한다.

   다) 칼피셔시액

    (1) 조제

      요오드 63 g을 칼피셔용 피리딘 100 mL에 녹이고 방냉한다. 다음에 건조 아황산가스를 통하여 증가한 양이 32.3 g에 이르렀을 때 아황산가스를 통하는 것을 멈추고 칼피셔용 메탄올을 넣어 500 mL로 하고 24시간 이상 방치한 다음에 사용한다. 이 시액은 경과함에 따라 변화하므로 쓸 때마다 표정한다. 차광하여 습기를 피하고 찬 곳에 저장한다.

   (2) 표정

      조작법에 따라 칼피셔용 메탄올 25 mL를 적정플라스크에 취하고 미리 칼피셔시액으로 종말점까지 적정하여 플라스크안을 무수상태로 한다. 다음에 물 50 mg을 정밀히 달아 적정 플라스크에 빨리 넣고 세게 흔들어 섞으면서 칼피셔시액으로 종말점까지 적정한다.

      칼피셔시액 1 mL에 해당하는 물(H2O)의  mg수 f를 다음과 같이 구한다.

f＝물(H2O)의 채취량/물(H2O)의 적정에 소비된 칼피셔시액의 양(mL)

   라) 물ㆍ메탄올 표준액

    (1) 조제

      칼피셔용 메탄올 500 mL를 1 L의 건조된 메스플라스크에 취하여 물 2.5 mL를 넣고 칼피셔용 메탄올을 넣어 1 L로 한다. 이 표준액의 표정을 칼피셔시액의 표정이 끝난 다음 곧 한다. 이 용액은 차광하여 습기를 피하여 찬곳에 저장한다.

   (2) 표정

      조작법에 따라 칼피셔용 메탄올 25 mL를 건조적정 플라스크에 취하고 이것을 미리 칼피셔시액으로 종말점까지 적정하여 플라스크안을 무수상태로 한다. 다음에 칼피셔시액 10 mL를 정확하게 넣고 조제한 물ㆍ메탄올표준액으로 종말점까지 적정한다.

f′＝ f×10/적정에 소비된 물ㆍ메탄올표준용액의 양(mL)

  3) 시험조작

    칼피셔시액에 의한 적정은 습기를 피해야 하며 원칙적으로 이것을 표정했을 때의 온도와 같은 온도에서 적정하여야 한다. 적정플라스크중의 용액에 2개의 백금전극을 담그고 가변저항기를 적당히 조절하여 일정한 전류(5～10마이크로암페아)를 통하여 두고 칼피셔시액을 적가하면 적정이 진행됨에 따라 회로중의 마이크로암미터의 바늘이 크게 흔들려 수초내에 다시 원위치로 돌아온다. 적정의 종말점에 이르면 마이크로암미터의 흔들림(50～150마이크로암페아)이 30초간 또는 그 이상 지속된다. 이 상태가 되었을 때를 적정의 종말점으로 한다.

    그러나 역적정일 때에는 칼피셔시액이 과량으로 존재하는 경우 마이크로암미터의 바늘의 흔들림이 끊기고 종말점에 이르면 급히 원위치로 돌아온다. 마이크로암미터 대신 매직 아이(Magic eye)가 달린 전원차계를 쓸 수도 있다.

    칼피셔시액에 의한 적정은 따로 규정이 없는 한 다음의 어느 방법에 따라도 무방하다. 적정의 종말점은 보통 역적정을 할 때 명확하게 판별할 수 있다.

   가) 직접적정

      칼피셔용 메탄올 25 mL를 건조 적정플라스크에 취하여 미리 칼피셔시액으로 종말점까지 적정하여 플라스크 안을 무수상태로 한다. 다음에 수분 10～50 mg에 해당하는 검체를 정밀하게 달아 빨리 적정플라스크에 옮겨 넣고 세게 흔들어 섞으면서 칼피셔시액으로 종말점까지 적정한다.

      검체가 용매에 녹지 않을 경우에는 재빨리 가루로 하여 무게를 정밀하게 달아 신속하게 적정플라스크에 옮겨 습기를 피하면서 30분간 저은 다음 세게 흔들어 섞으면서 적정한다.

  수분(%)＝   검체의 적정에 소비된 칼피셔시액의 양(mL)×f   ×100   

            ────────────────────────        

              검체의 양(mg)                                         

f：시약의 역가

   나) 역적정

      칼피셔용 메탄올 20 mL를 건조적정플라스크에 취하여 미리 칼피셔시액으로 종말점까지 적정하여 플라스크안을 무수상태로 한다. 다음에 수분 10～50 mg에 해당하는 검체(S mg)를 정밀하게 달아 빨리 적정플라스크에 넣고 과량의 칼피셔시액 일정량(d mL)을 넣은 다음 세게 흔들어 섞으면서 물ㆍ메탄올표준액으로 종말점까지 적정한다(소비량 e mL).

      검체가 용매에 녹지 않을 경우에는 재빨리 가루로 하고 무게를 정밀하게 달아 신속하게 적정플라스크에 옮겨 과량의 칼피셔시액 일정량을 넣고 습기를 피하면서 30분간 저은 다음 세게 흔들어 섞으면서 적정한다.

  수분(%)＝   df-ef′   ×100   

            ──────        

              S                 

f, f′: 시약의 역가

1.2. 조단백질(Crude protein)

 가. 켈달(Kjeldahl) 법

  1) 기구

    분해 및 증류장치(Kjeldahl nitrogen digestion & distillation apparatus), 켈달 플라스크(Kjeldahl flask), 메스 실린더, 삼각 플라스크, 저울, 자석 교반기, 피펫

  2) 시약의 조제

   가) 0.1 N 염산용액(HCl) : 농염산(비중 1.18) 8.7 mL를 1000 mL 메스플라스크에 넣고 증류수로 표선까지  채우고 혼합하여 만든다.

    ※ 염산농도가 35.5%, 비중 1.18 인 것으로 1N 염산을 만들려면 아래의 계산식에 의하여 소요량을 구할 수 있다

  1N 염산용액 =   36.465(염산분자량) ×100          = 87.05 mL/1000 mL  

                ──────────────────                    

                  35.5(염산%농도)×1.18(염산비중)                       

    ※ 0.1 N 염산용액의 표정(標定) : 표준 탄산나트륨을 260～270℃에서 약 1시간 가열한 다음 데시케이터내에서 30분간 방냉한다. 이 중에서 1.5 g을 정확히 무게를 단 다음 250 mL 메스플라스크의 표선까지 증류수를 가해 혼합한다. 이 중 25 mL(χ)를 삼각플라스크에 취하여 메틸오렌지 두 방울을 가하고 0.1 N 염산용액으로 적정한다. 황색으로 변하면 담홍색이 될 때까지 일단 2～3분간 끓이고 냉각한 다음 다시 담홍색이 될 때까지 적정하여 이때 소비된 0.1 N 염산용액의 소비 mL(b)로부터 다음과 같이 0.1 N 염산용액의 factor를 구한다.

  Factor(F)  = 188.67 ×  χ  

                        ───

                          b   

χ : 25 mL 중 탄산나트륨의 무게(g)

b : 적정에 사용된 0.1 N 염산 용액 소비량(mL)

   나) 분해촉진제 : 황산칼륨(Potassium sulfate) 9 g에 황산동(Copper sulfate) 1 g의 비율로 유발(乳鉢)에서 완전히 혼합한다

   다) 수산화나트륨(Sodium hydroxide) 혼합액 : 수산화나트륨 500 g과 치오황산나트륨(Sodium thiosulfate) 100 g을 증류수 1000 mL에 녹인다

   라) 지시약 : 브로모크레졸그린(Bromocresol green) 0.5 g과 메틸레드(Methyl red) 0.1 g을 95%이상의 에탄올(Ethanol) 300 mL에 용해하여 만든다.

   마) 4% 붕산(Boric acid)용액 : 붕산 40 g을 증류수에 용해하여 1,000 mL로 만든 후 라)의 지시약 4 mL를 가하여 혼합한다.

  3) 시료액의 조제(분해)

    시료 0.5～1 g을 500 mL 분해 플라스크에 취하고 분해촉진제 7～8 g(10 g)을 가하여 잘 혼합한 후 H2SO4 10 mL를 서서히 가해서 잘 혼합한다. 이를 처음에는 거품이 넘치지 않도록 서서히 가열하다가 거품이 나지 않으면 투명하게 될 때까지 강하게 가열하여 분해시킨다.(분해시간 50～90분)

  4) 증류

    300 mL 삼각플라스크에 4%붕산용액 25～75 mL(21～63% 조단백질에 해당)를 취하고 지시약 2～3방울을 가하여 냉각기의 관 끝이 붕산용액에 잠기도록 받쳐 놓는다. 그 후 냉각된 분해액에 증류수 200 mL와 아연립(亞鉛粒) 2～3개를 넣고 수산화나트륨 혼합액 45 mL를 가한 다음 즉시 증류장치에 연결하고 서서히 가열하여 증류하는데 분해액의 양이 약 2/3로 줄어들거나 증류액이 120～150 mL 될 때까지 증류한다.

  5) 적정

    증류하여 받은 액을 0.1 N-염산용액으로 적정하면 종말점(end point)부근에서 무색으로 변하며 1～2방울 더 가하여 적갈색으로 변할 때의 0.1 N 염산용액 소비 mL수를 읽는다.

   6) 계산

    0.1 N 염산용액 1 mL는 질소(N)0.00140067 g에 상당하므로 조단백질 함량은 다음과 같이 계산한다.

조단백질(%) = 0.00140067 × T × F × 6.25 ×100/W

T : 0.1 N 염산용액 적정치(mL) - Blank 적정치

F : 0.1 N 염산용액의 Factor

W : 시료무게(g)

 나. 자동분석법(Kjeltec Method)

  1) 기구 및 시약

    분해장치, 시료주입 및 증류장치, 화학천평, 자석교반기, 메스플라스크, 메스실린더, 분해병, 분해병스탠드, 시약 분주기,  황산(시약 1급)

  2) 시약의 조제

    0.1 N 염산 : 농염산(비중 1.18) 87 mL를 증류수로 희석 10 L로 하고 factor를 구하였다. 

   * factor 구하는 방법 : 표준탄산나트륨(Sodium carbonate)을 260～270℃에서 약 1시간 동안 가열한 다음 데시케이터 내에서 30분간 방냉하여 이 중에서 1.5 g을 정확히 칭량하고 증류수로 용해 후 250 mL 메스 플라스크의 표선을 맟추고 혼합한 후 이 중 25 mL(χ)를 취하여 메틸 오렌지(Methyl orange) 두 방울을 가하고 0.1 N 염산을 서서히 떨어뜨려 황색에서 담홍색이 될 때 일단 2～3분간 끓이고 냉각 후 다시 담홍색이 될 때까지 적정한다. 이 때 소비된 0.1 N 염산용액의 소비 mL(b)로부터 다음과 같이 0.1 N 염산용액의 factor를 구한다.

  Factor(F) = 188.67 ×   χ  

                        ───

                          b   

χ : 25 mL 중 탄산나트륨의 중량(g)

b : 적정에 사용된 0.1 N HCl 용량(mL)

   가) 분해촉진제 : 황산칼륨(Potassium sulfate : K2SO4) 10 g에 황산동(Copper sulfate : CuSO4ㆍ5H2O) 1 g의 비율로 유발(乳鉢)에서 완전히 혼합하여 사용하거나 Kjeltab을 이용한다.

   나) 40% 수산화나트륨용액 : 수산화나트륨(Sodium hydroxide : NaOH) 4 kg을 증류수에 녹여 10 L로 한다.

   다) 1% 붕산용액 : 붕산(Boric acid : H3BO3) 100 g을 증류수에 용해하여 10 L로 하고 여기에 브로모크레졸 그린과 메틸레드 용액(Bromocresol green 100 mg과 Methyl red 100 mg을 각각 Methanol 100 mL에 용해) 각각 100 mL와 70 mL를 가한다.

  3) 시료액의 조제(분해)

    시료 0.7～1 g을 분해병에 취하고 분해촉진제 7～8 g을 가하여 잘 혼합한 황산(Sulfuric acid, H2SO4) 10 mL를 서서히 가해서 잘 혼합한다. 이를 처음에는 거품이 넘치지 않도록 서서히 가열하다가 거품이 나지 않으면 투명하게 될 때까지 강하게 가열하여 분해시킨다. (시료를 칭량하여 분해튜브에 넣고 여기에 분해촉진제와 농황산 12 mL를 가한 다음 미리 예열시킨 분해장치에서 가열ㆍ분해시킨다.)

  4) 분석방법(기기 작동방법)  

    자동분석기의 작동방법에 따라 측정한다.

 다. 자동분석법(Dumas method)

  1) 기구 및 시약

    고온 연소장치, 질소수집장치(측정장치를 갖추고 있어야 하며 기기 장치에 적합한 악세사리 및 시약), 저울 

  2) 시료의 준비

    30 sieve체를 통과한 시료로서 뚜껑이 있는 시료병에 보관한다.

  3) 방법

   가) 기기의 조작법에 따라서 기기를 가동시킨다.

   나) 연소로가 온도평형을 유지한 다음 시작하여 정상가동 여부를 확인한다. 이때 연소로의 온도는 권장 적정온도 범위(850～1050℃) 이내에 있어야 한다.

   다) 연소로 아래 부분에는 stainless steel screen과 glass wool을 삽입한 다음 연소관을 준비한다.

   라) 적정량의 시료를 시료용기(tin foil 또는 boat)에 취한다.

   마) 무게를 달 때는 무게변화를 방지하기 위해 가급적 1분 이내에 완료한다.

   바) 시료를 취한 시료 용기를 시료 주입장치를 이용하여 기기 분석을 한다.   

   사) 표준시약을 이용하여 표준곡선을 구한 다음 시료의 농도를 구한다.

   아) 질소 함량에 단백질 환산계수를 곱하여 조단백질 함량을 구한다.

1.3. 조섬유(Crude fiber)

 가. 헨네베르크 ㆍ 스토오만 개량법에 의한 정량법

  1) 기구

    정온건조기, 전기로(Muffle furnace), 톨비이커(tall besker, 200 mL눈금), 유리여과기(1G2), 스텐레스금망(0.044 mm), 세척병, 여과대, 진공펌프 또는 수류펌프, 데시케이터

  2) 시약의 제조

   가) 5% 황산액(H2SO4, w/v) : 농황산(비중1.84) 27.2 mL를 증류수에 희석하여 1,000 mL로 한다.

   나) 5% 수산화나트륨액(NaOH, w/v) : 수산화나트륨 50 g을 증류수에 용해하여 1,000 mL로 한다.

  3) 정량법

    시료 1～2 g(지방함량이 많은 것은 탈지하거나 조지방을 정량한 후 남은 찌꺼기 시료 잔사를 사용)을 500 mL 톨비이커에 취하고 5% 황산액 50 mL와 증류수 150 mL를 가하고 거품방지제 2～3방울 떨어뜨린 다음 30분간 끓인 후 스텐레스 금망(0.044 mm)으로 여과하여 잔사(殘渣)를 산성이 완전히 없어질 때까지 뜨거운 증류수로 여러 번 세척한다. 

    산 불용해물은 증류수 130～140 mL로 톨비이커에 씻어 넣고 5% 수산화나트륨용액 50 mL를 가한 다음 200 mL 표선까지 증류수로 채운다. 다시 30분간 끓이고 No.5A 여과지 또는 유리여과기 1G2(135℃에서 2시간 건조하여 항량을 구한 것)로 여과하는데 알카리성이 없어질 때까지 뜨거운 증류수로 세척한 다음 다시 95% 에틸알콜로 3회, 에틸에테르로 2회 세척하고 95～100℃에서 2시간 예비 건조한 다음 135±2℃에서 2시간 건조 후 데시케이터내에서 30분간 방냉한 다음 칭량 후 5A여과지에 사용시에는 자제크루시블(600℃ 전기로에서 2시간 태워 항량을 구한 것)에 넣고, 유리여과기의 경우 직접 전기로에 넣어 600℃에서 2시간 회화하고 40분간 데시케이터내에서 방냉한 후 무게를 측정한다. (다만, 동시험법의 원리를 이용한 기타의 장치 또는 자동ㆍ반자동기기를 사용할 수 있다.)

  4) 계산

  조섬유(%) =   d - a   × 100  

              ─────        

                s               

* d : 분해후 여과한 잔사의 건조중량(g)

  a : 잔사를 회화한후 남은 회분량(g)

  s : 공시료의 중량(g)

 나. 자동분석법(여과포 분석법)

  1) 기구 

    여과포(Filter Bag)를 사용하는 자동 조섬유 분석장치, 건조기(102± 2?C), 전기회화로(600?C± 15?C), 여과포, 열 밀봉기, 방랭파우치

  2) 시약의 제조

   가) 1.25% 황산용액(H2SO4)

   나) 1.25% 수산화나트륨액(NaOH) 

  3) 분석방법

   가) 용제 내에서 내산성인 마커펜을 이용하여 여과포 표면에 식별번호를 표기한다. 저울천칭의 영점을 맞추고 빈 여과포의 무게(W1)를 재어 기록한다. 

    * 주의 : 여과포를 미리 건조시키지 말 것

   나) 각각의 여과포에 0.95-1.00 g의 시료를 넣고 무게(W2)를 측정한다.

   다) 바탕값 보정(C)을 위해 적어도 하나의 빈 여과포를 실험에 같이 진행한다.

   라) 열 밀봉기를 사용하여 여과포의 윗부분을 완벽하게 밀봉한다(윗부분에서 4-5 mm 아래 부분)

    * 주의 : 밀봉한 후 열 밀봉기에서 여과포를 분리하기 전 냉각 시간을 충분히 준다.

   마) 비커(250 mL)에 여과포를 넣고 석유에테르(petroleum ether)를 잠길 정도로 붓고 30분간 탈지한다. 면실, 대두박, 코코넛, 애완동물 사료 같이 지방이 많은 시료는 시료특성에 따라 1~3시간 혹은 24시간 탈지해서 지방을 완전히 제거해야한다.

    * 주의 : 석유에테르는 가연성이 크므로 정전기 발생을 피한다. 탈지가 끝나면 용제를 버린 후 여과포를 가볍게 눌러 용제를 최대한 많이 뺀 후 그물망에 평평하게 겹치지 않게 놓은 후에 용제를 완전히 증발시킨다. 완전히 마르면 여과포를 흔들거나 탁탁 쳐서 여과포 안의 시료가 고르게 분산되고 뭉치지 않도록 한다.

   바) 잘 건조된 여과포를 여과포걸이(suspender tray)에 층층이 쌓아 기계 안에 넣고 기기를 작동한다.

   사) 조섬유 추출과 헹굼 처리가 끝나면 뚜껑을 열고 여과포를 꺼낸다. 여과포에서 과도한 수분을 부드럽게 눌러 짜낸다. 여과포를 비커에 넣은 다음 아세톤(또는 에테르)을 여과포가 잠길 만큼 붓는다.

   아) 아세톤에서 여과포를 꺼내 철망그물 위에 놓고 아세톤을 증발시킨다. 아세톤을 증발시킨 여과포를 102± 2?C 건조기에서 완전히 건조시킨다. 

    * 주의 : 아세톤이 완전히 증발될 때까지 건조기에 여과포를 넣지 않도록 한다.

   자) 건조기에서 여과포를 꺼내어 방랭 파우치에 곧바로 넣은 다음 손으로 눌러 평평하게 하여 공기를 빼낸다. 실온이 될 때까지 냉각하여 여과포의 무게를 측정한다. 여과포를 담을 도가니(crucible)의 무게를 잰 후, 각각의 여과포를 도가니에 넣고 도가니 + 여과포의 무게(Wa)를 계산한다.

   차) 600± 15?C의 회화로에서 2시간 동안 회화시킨다. 회화가 끝나면 도가니를 어느 정도 식힌 후 (150?C정도까지) 데시케이터에 넣고 실온까지 식힌다. 충분히 식으면 데시케이터에서 도가니를 하나씩 빼내어 도가니 + 회화된 여과포의 무게(Wb)를 측정해 손실된 유기물질(loss of organic matter,W3)을 계산한다.

  4) 계산

  조섬유(%) =   (W3 - (W1 × C))  × 100  

              ──────────        

                W2                        

* W1 : 여과포의 자체 무게

   W2 : 시료의 무게

  W3 : 유기물질 무게(여과포와 섬유 연소로 인한 무게 손실)

  W3 = Wa ? Wb

Wa = 도가니 + 건조 후 여과포의 무게 

Wb = 회화 후 도가니 + 여과포의 무게

  C : 빈 여과포의 회분(ASH) 보정 값

  C =   (C2 ? C3)  

      ───────

        C1          

   = 

C1 = 빈 여과포의 무게

C2 = 도가니 + 건조 후 빈 여과포의 무게

C3 = 회화 후 도가니 + 빈 여과포의 무게

1.4. 조지방(Crude fat, ether extract)

 가. 에테르 추출법(Ether extract)

  1) 기구 및 시약

    지방 추출장치(soxhlet extractor), 건조기, 데시케이터, No. 2 여과지, 에틸에테르

  2) 추출

    지방 정량병을 95～100℃에서 2시간정도 건조하고 데시케이터 내에서 30분간 방냉 후 칭량(秤量)하고 시료 2～3 g을 No.2여과지에 싸서 95～100℃ 에서 2시간 건조시킨 다음 지방추출장치에 넣고 에테르를 부어 80℃로 가열하여 8시간 지방을 추출한 다음 에테르를 회수하고 지방 정량병을 95～100℃에서 3시간 건조 후 데시케이터 내에서 40분간 방냉 후 칭량하여 지방 정량병의 중량을 감(減)한 것을 시료량에 대한 백분율을 구하여 조지방 함량으로 한다. (다만, 동시험법의 원리를 이용한 기타의 장치 또는 자동ㆍ반자동기기를 사용할 수 있다.)

   3) 계산

  조지방(%)=  추출후 지방 정량병중량 - 추출전 지방 정량병중량   × 100  

            ──────────────────────────        

              시료 중량                                                 

 나. 산분해 에테르추출법 

  1) 기구 및 시약

    비이커, 수조, 분액깔대기,  데시케이터, 지방추출장치(soxhlet extractor), 에틸알콜, 에틸에테르, 염산

  2) 추출

    분석시료 2 g을 300 mL 비이커에 정확히 취하고 에틸알콜 2 mL가하여 혼합하고 염산용액(4+1) 20 mL를 넣고 시계접시를 덮어 70～80℃ 수욕상(water bath)에서 60분간 가끔 흔들어주면서 가온한다. 방냉 후 내용물을 250 mL 분액깔대기에 옮기고 비이커에 에틸알콜 10 mL, 에틸에테르 25 mL순으로 씻어 분액깔대기에 넣고 다시 에틸에테르 75 mL를 가하여 3분간 진탕한다. 정치 후 하층(수층)의 액을 다른 분액깔대기에 옮기고 상층의 에테르 층은 탈지면으로 여과하여 지방병에 받고 에테르를 회수한다. 이와 같이 에테르 추출은 3회 이상 반복하여 지방을 모은 후 지방병을 95～100℃에서 3시간 동안 건조하고 데시케이터 내에서 40분간 방냉 후 칭량(秤量)하여 지방병의 중량을 감한 것을 시료량에 대한 백분율을 구하여 조지방 함량으로 한다. (다만, 동시험법의 원리를 이용한 기타의 장치 또는 자동ㆍ반자동기기를 사용할 수 있다.)

 다. 황혈염 추출법 

  1) 기구 및 시약

    삼각 플라스크,  수조,  유발, 그 외 에테르 추출법과 동일, 해사(sea sand), 염산용액 (2＋1), 황혈염용액(황혈염(Potassium ferrocyanide) 15 g을 증류수에 녹여 1,000 mL로 한다), 초산아연 용액(초산 아연(Zinc acetate) 320 g 증류수에 녹여 1,000 mL로 한다)

  2) 추출

    시료 5 g을 200 mL 삼각flask 에 취하고 증류수 50 mL를 가한 후 중탕으로 용해 후 염산용액(2:1) 1 mL를 가하고 15분간 서서히 끓인다. 냉각 후 황혈염 용액 5 mL, 초산아연용액 5 mL를 넣어 잘 혼합하고 침전물을 Whatman No 2 여과지로 여과 후 증류수로 2～3회 씻어주고 여과지의 침전물에 해사 5 g을 가하여 잘 혼합시켜 98～100℃에서 건조시키고 유발에 옮겨 균등히 갈아서 분말로 하여 내용물을 원통여과지에 옮기고 유발에 부착된 분말은 에테르로 축여서 탈지면으로 닦아 원통여과지에 넣고 속시렛 장치에 연결하여 에테르 추출법과 동일한 방법으로 추출한다.

 라. 필터백 분석법 

  1) 기구 및 시약

    조지방분석기, 건조기(102± 2℃), 여과포(Filter Bag), 열 밀봉기, 방냉파우치, 마킹펜(용제와 산성에 견딜 것), 석유 에테르(Petroleum Ether) 또는 디에틸에테르(Diethyl Ether)

  2) 방법

   가) 마커펜을 이용하여 여과포 표면에 식별번호를 표기한다.

   나) 각각의 여과포에 0.95-1.00 g의 시료를 넣고 무게(W1)를 측정한다. 

   다) 열 밀봉기를 사용하여 여과포의 윗부분을 완벽하게 밀봉한다.

   라) 봉합된 여과포를 102±2℃ 건조기에서 2-3시간동안 건조시킨 다음 방냉파우치에 넣고 방냉 후 각각의 여과포 무게(W2)를 잰다.

   마) 여과포를 필터백홀더에 꽂은 후 추출용기에 넣고 추출한다.

   바) 여과포를 추출용기에서 꺼내어 102±2℃ 건조기에서 30분 정도 건조한 다음 건조파우치에 넣어 방냉 후 무게(W3)를 잰다.

  3) 계산

  조지방(%)=  W2 - W3   × 100  

            ──────        

              W1                

W1 : 시료무게

W2 : 처음 건조 후 시료무게(시료+필터백), 수분을 제거한 무게

W3 : 추출 후 건조무게(시료+필터백), 지방을 제거한 무게

1.5. 조회분(Crude ash)

 가. 기구

    전기로, 자제 크루시블, 데시케이터, 저울

 나. 정량법

    600℃ 전기로에서 1～2시간 태운 크루시블을 데시케이터내에서 40분간 방냉 후 칭량한 다음 시료 2～3 g을 취하여 전기곤로 또는 가스버너로 열을 가하여 예비 회화시킨 후 600℃ 전기로에 넣어 2시간 태운 다음 데시케이터내에서 40분간 방냉 후 칭량하여 이 중량으로부터 크루시블의 중량을 감(減)한 것을 조회분 함량으로 한다. (다만, 동시험법의 원리를 이용한 기타의 장치 또는 자동ㆍ반자동기기를 사용할 수 있다.)

 다. 계산

  조회분(%) =   회화 후 무게(시료＋크루시블)－크루시블 무게   × 100  

              ────────────────────────        

                시료중량(g)                                           

1.6. 가용무질소물(Nitrogen free extract)

    시료를 100으로 하여 여기에서 수분, 조단백질, 조지방, 조섬유, 조회분 함량(%)을 감해서 구한다. 

NFE = 100－[수분(%)＋조단백질(%)＋조지방(%)＋조섬유(%)＋조회분(%)]

    NFE의 주성분은 가용성 당과 전분이고 일부 cellulose와 hemi cellulose 및 lignin이 포함된다. 특히 조사료 분석시 NFE 중에는 농후사료보다 상당량의 cellulose, hemicellulose 및 lignin이 포함되어 있다.

2장. 세포막구성물질(Cell wall constituents)

2.1. NDF(Neutral detergent fiber)

 가. 기구

    조섬유자비기, 건조기, 전기로, 진탕기, 여과병, 초자여과기(IG2), 진탕배양기

 나. 시약의 조제

  1) 중성 Detergent용액 : Sodium Lauryl Sulfate[CH3(CH2)OSO3Na : 288.38]150 g, EDTA Disodium Salt [{CH2N(CH2COOH)CH2COONa}2ㆍ2H2O : 372.25] 93.05 g, Sodium Borate (Na2B4Oㆍ10H2O : 381.37) 34.05 g, Sodium Phosphate, dibasic (NaHPO4ㆍ12H2O) 22.8 g, Ethylene Glycol Monoethyl Ether (C2H5OCH2CH2OH : 90.12) 50 mL를 H2O 5 L에 용해 후 pH가 6.9～7.1 되게 Sodium Carbonate 용액과 묽은 염산을 사용하여 조정한다. 이 액은 겨울철에는 굳어지므로 가온하여 용해 후 사용한다.

  2) 소포제(消泡劑) : Decalin

  3) 아세톤 : 시약 1급

  4) α-amylase용 인산완충액 : 인산1칼륨(KH2PO4) 60 g과 인산2나트륨(Na2HPO4ㆍ12H2O) 19.9 g을 H2O에 용해하여 5 L로 한다.(pH 5.8)

  5) α-amylase용액 : pH 5.8 인산완충액 20 mL에 α-amylase 1 mg의 비율로 용해한다. 이 용액은 사용직전에 만드는데 현탁액이다.

  6) 무수황산나트륨 : 시약특급

 다. 방법

  1) 조사료

    풍건사료(風乾飼料) 1 g을 500 mL 톨비이커에 취하고 중성 Detergent 용액 100 mL와 Decalin 2 mL, Sodium Sulfite 0.5 g을 가해 조섬유 정량용 자비기에서 1시간 끓인 다음 유리여과기(1G2)를 사용하여 흡인여과하고 뜨거운 물과 아세톤으로 씻어주고 풍건 후 105℃ 건조기내에서 4시간 건조하여 무게를 달고 계산한다. (다만, 동시험법의 원리를 이용한 기타의 장치 또는 자동ㆍ반자동기기를 사용할 수 있다.)

  NDF(%) =  건조 후 무게 - 유리여과기 무게  × 100  

          ─────────────────        

            시료중량                                

  2) 전분을 함유한 시료

    시료 0.5～1 g을 100 mL 삼각 후라스크에 취하고 H2O 20 mL를 가한다. 이것을 가열판 위에 올려놓고 가열하여 전분을 호화(糊化) 시키는데 끓는 상태가 되면 조작을 중지하고 냉각 후 20 mL의 α-amylase 용액을 가하여 40℃ 진탕 배양기에서 16시간 전분을 가수분해한다. 그 후 잔사를 No. 5A 여과지에 여과하고 H2O로 3～4회 세척한 다음에 세척병에 중성 Detergent 용액을 넣어 여지에 남아 있는 잔사를 500 mL 톨비커에 씻어 넣고 전체량을 100 mL로 한 후 Decalin을 3～5방울을 가하고 조섬유 자비기에서 1시간 끓이고 미리 함량을 구한 유리여과기(1G2)로 여과하고 H2O로 6～7회 세척하여 잔존 계면활성제를 씻어 내린 후 Acetone으로 3～4회 세척한다. 그 후 135℃ 건조기에서 2시간 건조하고 냉각 후 칭량하여 세포막 물질(CW)을 구하고 세포내용물(CC)의 함량은 100에서 CW의 건물 중 함량(%)을 제하여 구한다. (다만, 동시험법의 원리를 이용한 기타의 장치 또는 자동ㆍ반자동기기를 사용할 수 있다.)

2.2. ADF(Acid detergent fiber)

 가. 기구

    조섬유자비기, 건조기, 여과병, 유리여과기(1G2)

 나. 시약의 조제

  1) 산성 Detergent 용액 : Cetyltrimethylammonium Bromide (CETAB) 20g을 1ℓ의 1N H2SO4에 가열 녹인다. 겨울철에는 보관중에 시약이 굳어지므로 가온 용해하여 사용한다.

  2) 소포제 : Decalin

  3) Acetone : 시약 1급

 다. 방법

    시료 2 g을 500 mL 톨비커에 취하고 100 mL 산성 Detergent 용액과 2 mL Decalin을 가해 조섬유자비기에서 1시간 끓이고 유리여과기(1G2)로 흡인여과하고 뜨거운 물로 2회 씻어 주고 남은용액이 무색이 될 때까지 Acetone으로 씻어주고 풍건 후 105℃의 건조기내에서 4시간 건조 후 무게를 단다. (다만, 동시험법의 원리를 이용한 기타의 장치 또는 자동ㆍ반자동기기를 사용할 수 있다.)

  ADF(%) =  건조 후 무게 - 유리여과기 무게  × 100  

          ─────────────────        

            시료중량                                

3장. 아미노산(Amino acid)

3.1. 역상크로마토그래피법(PITC 유도체화법)

 가. 시약의 조제

  1) 6N 염산용액

  2) 유도체시약(PITC, Phenylisothiocyanate)

  3) 초산나트륨, 2-프로판올 : 특급품

  4) 트리에틸아민(TEA) : 원액

  5) 아세토니트릴, 에탄올, 증류수 : HPLC용

  6) 인산용액 : 원액사용

  7) 재건조시약 : [에탄올 : 증류수 : TEA(2 : 2 : 1, V/V)]

  8) 유도체시약 : [에탄올 : 증류수 : TEA : PITC(7 : 1 : 1 : 1, V/V)]

  9) 표준용액 : 표준시료 적당량을 취하여 시료액의 조제와 같은 방법으로 처리하여 최종농도가 2～4μ㏖/mL가 되도록 한다. 

 나. 방법

    시료 40～100 mg을 시험관에 취한다. 이 시료를 충분히 가수분해시킬 수 있는 6 N 염산을 가하여 질소가스로 통기시킨 후 마개를 막고 105℃에서 24시간 가수분해시킨다. 가수분해된 시액을 냉각시킨 뒤 No. 6 여과지를 사용하여 50 mL 메스플라스크에 여과한다. 여과액 중 일정량을 0.45 μm 여과막으로 여과한 후 시액 일정량(50～100 μL)을 작은 유리시험관에 취하여 진공 건조시킨다. 건조된 시료를 다시 재 건조 시약 16～20 μL를 넣고 재 건조시킨 후 유도체 시약을 25 μL를 넣고 20～25분간 충분히 반응시킨 뒤 다시 진공건조 시킨 후 액체크로마토그래피의 이동상 A용매로 희석하여 HPLC에 주입 측정한다.

 다. 기기조건(HPLC)

  1) 이동상 A : 20 g 초산나트륨, 600 μL TEA를 HPLC용 증류수로 녹여 1 L로 한다. 이용액 940 mL에 아세토니트릴 60 mL를 혼합한 뒤 인산으로 pH 6.30～6.40으로 맞춘 후 0.45 μm 수용성 여과지로 여과한다.

  2) 이동상 B : 60 mL 아세토니트릴에 증류수를 채워 1 L로 한 후 0.5 μm 지용성 여과지를 메탄올로 적셔 활성화시킨 후 여과한다. 

  3) 파장 : 254 nm

  4) 고정상 : C18 Column

  5) 칼럼온도 : 45～50℃

  6) 이동상의 양 및 조성비(gradient)

┌────┬────────────────────┐

│Time    │ Flow       %A       % B         %C     │

│Initial │  1.0        100        0            0  │

├────┼────────────────────┤

│10.0    │  1.0         54        46           0  │

│10.5    │  1.0          0       100           0  │

│11.0    │  1.5          0       100           0  │

│14.0    │  1.5          0       100           0  │

│14.5    │  1.5        100         0           0  │

│20.5    │  1.5        100         0           0  │

│21.5    │  1.0        100         0           0  │

└────┴────────────────────┘

 라. 계산

시료중의 각 아미노산(%) = A×××희석배수×100

A : 각 아미노산 표준용액의 농도(μmol/mL)

B : 시료용액의 각 아미노산의 피크면적이나 높이

C : 표준용액의 각 아미노산 피크면적이나 높이

D : 각 아미노산의 분자량

W : 시료의 중량(μg)

3.2. 이온교환크로마토그래피법(Ninhydrin 법)

 가. Stable 계열(Lys. 등)

  1) 기구 및 시약

    아미노산분석기, 로타리증발기, 열풍순환식 건조기, 수류펌프, pH메터, oil bath, 분해병, 메스실린더, 자석교반기, 홀피펫, 메스플라스크, 세척병, 질소가스

  2) 시약조제

   가) 6N-염산용액 : 농염산(35%, 비중 1.18)과 증류수를 1:1로 혼합한다

   나) 아미노산 표준액 : pH 2.2 희석완충액을 이용하여 아미노산 표준물질이나 시판 표준원액을 0.01∼0.2 μmol/mL의 농도로 단계별 희석한다.

   다) 시료희석용 완충액(pH 2.2) : 구연산소다(Sodium citrate dihydrate) 19.7 g을 증류수 400 mL에 용해하고 여기에 염산(비중 1.18) 16.5 mL와 caprylic acid 0.1 mL, β-Thiodiglycol 20 mL, Brij35(30% w/v) 2.0 mL 가한 후 증류수로 1 L 되게 한다.

   라) 완충액(Buffer) : 기기조건에 적합한 용액으로 조제하여 사용

   마) 발색제(Ninhydrin 시약) : 기기조건에 적합한 용액으로 조제하여 사용

  3) 시료액의 조제

    시료는 50～300 mg(조단백질로 30 mg 정도)을 취해서 분해병에 넣은 후 6N-HCl 40 mL를 가하고 질소가스를 주입한 후 마개를 막고 110℃에서 24시간 가수분해시킨 후 농축증발 플라스크에 옮기어 로타리 증발기에 연결 50℃에서 염산을 제거시키는데 증발이 다되면 증류수로 분해병을 씻어 증발 플라스크에 옮기어 다시 증발시키는 것을 3회 반복하여 증발 건고시키는 데 최종적으로 증발건고 되어 있는 증발플라스크에 시료희석 완충액(pH 2.2)이나 증류수를 소량씩 가하여 아미노산을 용해시켜 No. 5B 여과지로 여과하여 50 mL로 만든다.

  4) 시험방법

   가) 아미노산 자동분석기 조건

      완충액, 발색시약의 유무, 칼럼오븐의 온도를 점검하고, 자동완충액 전환기구 및 정유량 펌프, 유량을 소정의 조건에 따라 설정하고 측정을 실시한다. 

  5) 정량시험

    미리 구해 놓은 농도의 아미노산표준용액의 피크 면적과 함량으로부터 검량 곡선을 작성한 다음 시험용액으로부터 얻어진 아미노산 농도를 이용하여 아미노산 함량을 계산한다.

  6) 계산

  아미노산 함량(%) =  C ×  SA    × D ×   M   × 100  

                          ────        ───        

                            ST              W           

C   : 표준아미노산의 농도(μmol/mL)

SA : 시료액의 아미노산 Peak 면적

ST  : 표준액의 아미노산 Peak 면적

D   : 희석량(mL)

M  : 아미노산의 분자량

W  : 시료의 중량(μg)

 나. 황함유계열(Met. 등)

  1) 기구 및 시약

    3.2. 이온교환크로마토그래피법(Ninhydrin 법) 가. Stable 계열(Lys. 등) 1) 기구 및 시약에 따른다.

  2) 시약조제

   가) 6N-염산용액 : 농염산(35%, 비중 1.18)과 증류수를 1:1로 혼합한다

   나) 과개미산액 : 85% 개미산(formic acid) 45 mL와 30% 과산화수소(H2O2) 5 mL를 500 mL 삼각플라스크에 취하여 혼합하고 실온에서 1시간 방치하여 과개미산을 생성시킨 다음 얼음속이나 냉동실에 플라스크를 30분 이상 넣어 생성된 과개미산을 고정시킨다.

   다) 아미노산 표준액 : 표준물질 Cysteic acid와 Methionine sulfone으로 3.2. 이온교환크로마토그래피법(Ninhydrin 법) 가. Stable 계열(Lys. 등) 2) 시약조제 나) 아미노산 표준액에 따른다.

   라) 시료희석용 완충액(pH 2.2)

       3.2. 이온교환크로마토그래피법(Ninhydrin 법) 가. Stable 계열(Lys. 등) 2) 시약조제 다) 시료희석용 완충액(pH 2.2)에 따른다.

   마) 완충액(Buffer) : 기기조건에 적합한 용액으로 조제하여 사용

   바) 발색제(Ninhydrin 시약) : 기기조건에 적합한 용액으로 조제하여 사용

  3) 시료액의 조제

    Cystine과 Methionine은 6N-HCl로 가수분해시키면 파괴되므로 산가수분해전에 과개미산 처리로 일단 안정상태인 Cysteic acid와 Methionine sulfone으로 변화시킨 후 6N-HCl로 가수분해시킨다. 분해병에 시료 50～300 mg(조단백질로 30 mg 정도)을 취하고 과개미산 20 mL를 가하고 5℃이하의 냉장고에 넣고 이튿날 아침 분해병을 로타리증발기에 연결시켜 50℃에서 시료 이외의 휘발성물질을 모두 날려보낸 후 6N-HCl(20 mg당 5 mL정도)을 가하고 다른 아미노산 분석시와 같이 110℃에서 24시간 가수분해시킨다.

  4) 시험방법

   가) 아미노산 자동분석기 조건

      완충액, 발색시약의 유무, 칼럼오븐의 온도를 점검하고, 자동완충액 전환기구 및 정유량 펌프, 유량을 소정의 조건에 따라 설정하고 측정을 실시한다. 

  5) 정량시험

    미리 구해 놓은 농도의 아미노산표준용액의 피크 면적과 함량으로부터 검량 곡선을 작성한 다음 시험용액으로부터 얻어진 아미노산 농도를 이용하여 아미노산 함량을 계산한다.

  6) 계산

    3.2. 이온교환크로마토그래피법(Ninhydrin 법) 가. Stable 계열(Lys. 등) 6) 계산에 따른다.

 다. 트립토판(Tryptophan)

  1) 기구

    3.2. 이온교환크로마토그래피법(Ninhydrin 법) 가. Stable 계열(Lys. 등) 1) 기구 및 시약에 따른다.

  2) 시약조제

   가) 농염산

   나) 0.2N-Sodium Citrate buffer (pH 4.2) : 0.2N의 Sodium citrate와 0.2N의 Citric acid를 혼합하여 pH를 4.2가 되게 한다.

   다) 4.2N-NaOH용액 : 4.2N-NaOH 10 mL당 0.1 mL의 n-octyl alcohol을 첨가한다.

   라) 아미노산 표준액 : 표준물질 트립토판으로 3.2. 이온교환크로마토그래피법(Ninhydrin 법) 가. Stable 계열(Lys. 등) 2) 시약조제 나) 아미노산 표준액에 따른다.

   마) 시료희석용 완충액(pH 2.2)

       3.2. 이온교환크로마토그래피법(Ninhydrin 법) 가. Stable 계열(Lys. 등) 2) 시약조제 다) 시료희석용 완충액(pH 2.2)에 따른다.

   바) 완충액(Buffer) : 기기조건에 적합한 용액으로 조제하여 사용

   사) 발색제(Ninhydrin 시약) : 기기조건에 적합한 용액으로 조제하여 사용

  3) 시료액의 조제

   가) 100 mg의 단백질 함량 정도가 되게 시료를 취해서 분해병에 넣은 후 10 mL의 4.2N-NaOH를 가하고 산소를 제거하기 위해 질소가스를 주입한 후 마개를 막고 110℃에서 20시간 가수분해시킨다. 가수분해 후 시료를 충분히 냉각시킨 후 50 mL의 메스플라스크에 가수분해물을 No.5B 여과지로 거르면서 넣고 0.2N- Sodium citrate buffer(pH 4.2)로 채운다. 여기서 다시 1～5 mL을 비이커에 취하여 70℃가 되는 항온수조에서 수분을 증발 시킨다. 건조가 완결된 후 sodium citrate buffer (pH 4.2)와 HCl을 첨가하여 pH를 4.2로 맞추면서 25 mL이 되게 한다. HCl을 첨가 시 찌꺼기가 형성될 수도 있으나 트립토판의 회수율에 영향을 미치지는 않는다. 25 mL의 용액을 분석 전에 여과하여 아미노산 자동 분석기에 200 μL의 시료를 넣어서 분석한다. 

   나) 지방이 많이 함유된 시료의 처리 : 시료내 탄수화물, 섬유소 및 회분은 트립토판의 회수율에 영향을 미치지는 않지만 지방은 회수율을 감소시킨다. 그래서 지방을 많이 함유하고 있는 어분, 육분 이나 골분과 같은 시료는 탈지과정이 가수분해 전에 요구된다. 약 100 mg의 단백질을 포함하고 있는 시료를 5 mL diethyl ether와 혼합시키고 2000rpm에서 15분동안 원심분리 후 ether층을 분리시킨다. 이 과정을 3번 반복한 후 가수분해 과정을 실행한다. 

   다) 가수분해물의 보관 : 가수분해물은 항상 가수분해 과정이 끝난 후 바로 분석을 실행하는 것이 좋으나 그렇지 못할 경우 pH 4.2의 상태에서 5℃에서 보관하는 것이 가장 안전하다. 

  4) 시험방법

   가) 아미노산 자동분석기 조건

      완충액, 발색시약의 유무, 칼럼오븐의 온도를 점검하고, 자동완충액 전환기구 및 정유량 펌프, 유량을 소정의 조건에 따라 설정하고 측정을 실시한다. 

  5) 정량시험

    미리 구해 놓은 농도의 아미노산표준용액의 피크 면적과 함량으로부터 검량 곡선을 작성한 다음 시험용액으로부터 얻어진 아미노산 농도를 이용하여 아미노산 함량을 계산한다.

  6) 계산

    3.2. 이온교환크로마토그래피법(Ninhydrin 법) 가. Stable 계열(Lys. 등) 6) 계산에 따른다.

3.3. MHA(Methionine Hydroxy Analogue)의 정량법

 가. HPLC법

  1) 기구

    HPLC(UV검출기를 부착한 것), NH2 column(reversed - phased column 4.6 × 150 mm, 5 μm), 시료분쇄기, 화학천칭(readability : 0.01 mg), 원심분리기, 시험관교반기, ultrasonicator (온도조절가능), hydropilic sylinge filter(0.22 μm), Mili-Q, RiOs/Elix water purification system(Millipore, Bedford, MA, U.S.A.)

  2) 시약

   가)표준품 : MHA 표준품 Tokyo Kasei Kogro(Japan)사의 2-hydroxy ?4- (methylthio)-butanoicacid(MHA,71.6%), 2-hydroxy-4-(methylthio)  butanoic acid calcium salt(purity 98.4%)

   나) 전처리용 시약 : 85% orthophosphoric acid(analytical reagent grade) (Merck), potassium hydroxide(special grade, 85%), ammonium hydroxide (extrapure reagent, 25～28%), Acetonitrile(HPLC급), 증류수 (Mili-Q, RiOs/ Elix water purification system(Millipore, Bedford, MA, U.S.A.)에 의해 여과하여 사용함)

   다) 추출용매 : 10% acetonitrile (acetonitrile : 증류수 v/v)

  3) 표준액 조제

    MHA 표준품을 전처리시 MHA의 추출용매로 사용되는 10% acetonitrile(90% deionzed water)에 녹여 MHA의 농도가  0.2～10 mg/50 mL가 되도록 희석하여 검량선 작성을 위한 표준액으로 사용한다.

  4) 시료에서의 시험용액 추출

   가) 사료 시료는 잘 혼합하여 시료분쇄기로 입자의 크기가 600 μm 정도가 되도록 분쇄한다.

   나) 삼각플라스크에 정확히 2 g을 칭량한 후 10% acetonitrile (90% deionzed water) 추출용액 50 mL를 넣고 ultrasonicator (45℃)에서 MHA가 추출되도록 20분간 처리한다.

   다) 추출액을 50 mL conical tube로 옮겨 원심분리기에서 3000 rpm으로 20분간 원심분리한 후 상등액 5 mL을 15 mL test tube에 피펫팅한다.

   라) 여기에 추출액에 존재하는 미량의 MHA oligomer를 monomer로 가수분해하기 위해 50% KOH 100 μL를 넣고 시험관 교반기에서 10초간 교반한다.

   마) 기기 분석시 좋은 분리조건을 위해 pH를 4～5로 낮추기 위해 85% phosphoric acid 100 μL를 가하여 시험관 교반기에서 10초간 교반한다.

   바) 전처리액을 0.22 μm hydrophilic syringe filter로 filtering한 후 기기분석을 위한 시료액으로 한다.

  5) 측정

    동시에 측정한 표준품의 머무름 시간과 일치하는 것을 정성시험의 판정기준으로 하며, 표준품의 분석농도와 얻어진 피크 면적에 의한 검량선을 작성하여 정량시험에 사용한다.

  6) HPLC의 조건

   가) Column : NH2 column (reversed-phased column 4 × 150 mm, 5 μm)

   나) Mobile phase : isocratic mode로 acetonitrile과 NH4OH로 pH를 3.2로 맞춘 0.01M H3PO4를 23 : 77(%,v/v)

   다) Injection volume : 10 μL

   라) Flow rate : 1 mL/min

   마) Detector : UV 검출기

   바) Detection wavelength : UV 214 nm

   사) Retention time : 대략 6.7 min

3.4. 타우린 분석법

 가. 적용범위

  본 분석법은 단미사료, 배합사료 및 보조사료에 적용한다.

 나. 분석원리

  균질화한 시료 중에 타우린을 10 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 수용액으로 추출하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

 다. 장치

  액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)를 사용한다.

 라. 시약

  1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

  2) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

  3) 표준원액: 타우린 표준품을 10 mM 아세트산암모늄에 녹여 표준원액으로 사용

  4) 혼합표준용액: 표준원액을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석하여 사용한다.(무처리 시료추출액 90% 이상 포함)

  5) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

 마. 시험용액의 조제(추출)

  1) 0.5 g의 균질화된 시료를 50 mL 원심분리관에 칭량하고, 10 mM 아세트산암모늄 수용액 50 mL을 넣은 후 30분간 초음파 추출한다.

  2) 4,000 G에서 10분간 원심분리한 후 상층액을 취하여 적절한 농도로 희석한 후 멤브레인 필터(0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 사용한다.

  3) 정량 분석용 매질보정 검량법(matrix matched calibration)에 따른 농도별 표준물질과 시료액은 아래의 예를 참고하여 만든다.

     ※ 무처리 시료추출액: 시료구와 동일한 품목이면서 타우린 성분이 검출되지 아니한 시료를 ‘마.’ 에 따라 추출 및 정제한다. 다만 동일 품목이 없는 시료에 대해서는 표준물질 첨가법(standard addition method)을 활용한다.

     ○ LC-MS/MS용 매질보정 검량(matrix matched calibration) 용액의 조제

      ┌────┬─────────────────────────────────────────────────┬─────┐

│구분    │검량선 작성용 표준물질                                                                            │시료액    │

│        ├──────┬──────┬──────┬──────┬──────┬──────┬───────┤          │

│        │수준 1      │수준 2      │수준 3      │수준 4      │수준 5      │수준 6      │수준 7        │          │

├────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼───────┤          │

│목표농도│10 μg/L    │20 μg/L    │50 μg/L    │100 μg/L   │200 μg/L   │500 μg/L   │1000 μg/L    │          │

├────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼───────┼─────┤

│조제방법│STD         │STD         │STD         │STD         │STD         │STD         │STD           │무처리    │

│        │100 μg/L   │200 μg/L   │500 μg/L   │1,000 μg/L │2,000 μg/L │5,000 μg/L │10,000 μg/L  │시료추출액│

│        │100 μL     │100 μL     │100 μL     │100 μL     │100 μL     │100 μL     │100 μL       │1,000 μL │

│        ├──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼───────┤          │

│        │무처리      │무처리      │무처리      │무처리      │무처리      │무처리      │무처리        │          │

│        │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액    │          │

│        │900 μL     │900 μL     │900 μL     │900 μL     │900 μL     │900 μL     │900 μL       │          │

└────┴──────┴──────┴──────┴──────┴──────┴──────┴───────┴─────┘

 바. 시험조작

  1) 액체크로마토그래프ㆍ질량분석기(LC-MS/MS)의 분석 조건

   가) 컬럼: Hypersil Gold C18 (4.6 mm × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

   나) 이동상: A와 B 이동상의 농도 구배

       - A 이동상: 50 mM 아세트산암모늄 함유한 물 

       - B 이동상: 0.1% 포름산 함유한 메탄올

   다) 농도구배조건

           ┌────┬──┬──┐

│시간(분)│A(%)│B(%)│

├────┼──┼──┤

│0.0     │97  │3   │

├────┼──┼──┤

│5.0     │97  │3   │

├────┼──┼──┤

│6.0     │3   │97  │

├────┼──┼──┤

│7.5     │3   │97  │

├────┼──┼──┤

│8.5     │97  │3   │

├────┼──┼──┤

│12.0    │97  │3   │

└────┴──┴──┘

   라) 이동상 유속: 0.5 mL/분

   마) 컬럼 온도: 40℃ 

   바) 주입량: 5 μL

   사) 이온화 방식: Electrospray ionization(Negative)   

     ○ LC-MS/MS의 MRM(Multiple Reaction Monitoring)

┌─┬─────┬──────┬───┬───┬─────┬─────┬──────┐

│번│분석성분  │이온화      │머무름│분자량│선구이온  │생성이온  │충돌에너지  │

│호│(Compound)│(Ionization │시간  │(MW)  │(Precursor│(Product  │(Collision  │

│  │          │mode)       │(분)  │      │ion, m/z) │ion, m/z) │energy,     │

│  │          │            │      │      │          │          │eV)         │

├─┼─────┼──────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│1 │타우린    │negative    │3.55  │125.14│124.2     │80.5      │22.0        │

│  │(Taurine) │            │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │          │            │      │      │          │124.2     │2.0         │

└─┴─────┴──────┴───┴───┴─────┴─────┴──────┘

※ 질량분석기의 분석조건 및 각 생성이온에 대한 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 선구이온 및 생성이온도 유효성이 확인된 경우 적용이 가능

    2) 정량한계 : 10 mg/kg

 사. 정성 및 정량시험

  1) 검량선 작성

   가) 표준용액을 농도별로 분석기기에 각각 주입하여 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

   나) 검량선의 적정성을 평가하는데 결정계수뿐만 아니라 각 농도에서의 잔차가 ± 20% 이하인지 확인하고, 잔차가 ± 20%를 넘는 경우 검량선을 작성할 때   가중치 적용(1/x) 방식을 활용할 수 있다.

  2) 정성 확인

   위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름시간 (retention time)과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precusor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온(Product ion)간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율이 ± 20∼30% 이내에서 일치하여야 한다.※ 생성이온간 반응세기의 비율 허용 범위

    ┌─────────────┬──────┐

│이온간 반응세기의 비율(%) │허용범위(%) │

├─────────────┼──────┤

│〉50                      │±20        │

├─────────────┼──────┤

│〉20, ≤50                │±25        │

├─────────────┼──────┤

│〉10, ≤20                │±30        │

└─────────────┴──────┘

  3) 정량 확인

   정량시험은 단일 표준품으로 표준용액을 일정농도로 제조한 후 매질보정 검량선을 작성하여 정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 정량한다.    

  4) 대표 품목의 매질보정검량법으로 분석 후 검출량이 등록치에 미달한 시료에 대해서는 표준물질 첨가법(standard addition method)을 활용 할 수 있다.

4장. 무기물(Minerals)

4.1. 칼슘(Ca)

 가. 원자 흡광광도법(Atomic absorption spectrophotometry)

  1) 시약의 조제

   가) 5 %란타늄 용액 : 산화 란타늄(Lanthanum oxide) 58.65 g에 소량의 증류수를 가한 후에 농염산 250 mL를 서서히 가하면서 용해시키고 냉각한 다음 증류수로 1 L 표선까지 채운다.

   나) 칼슘표준용액 : 특급 탄산칼슘(CaCO3) 0.25g을 염산용액(1:1) 5 mL에 녹이고 증류수로 100 mL되게 표선까지 채운다.(1,000ppm) 또는 시판 칼슘 표준용액(1,000ppm)을 희석 사용한다.

  2) 시료액의 조제

   가) 유기질시료

      시료 2～5 g를 자제 크루시블에 취하고 열판에서 예비회화시킨 후 전기로 600℃에서 2시간 이상(회백색) 회화시킨 뒤 방냉하고 염산용액(1:1) 10 mL를 가하여 하룻밤 방치 용해시킨 다음 No.6 여과지를 이용 뜨거운 물로 여과하여 일정량으로 맞춰 시료액으로 한다.

   나) 무기질 시료

      시료 0.5～1.0 g를 취하여 100 mL 삼각 플라스크에 넣고 염산용액(1:1)10 mL를 가하여 시계접시로 덮은 후 서서히 가온하여 분해액이 반으로 줄어 들었을 때 상기의 여과방법으로 여과하여 시료액으로 한다.

   다) 마이크로웨이브법

      시료 일정량 (0.1～0.5 g; 수분함량이 높은 시료의 경우 1～2 g)을 Microwave digestion system에 넣고 질산 등으로 처리하여 분해하고 메스플라스크 등에 옮겨 정용(시료채취량에 따라 달라짐)하여 시험용액으로 한다.

  3) 측정

    시료액 일정량을 50 mL 메스플라스크에 취하고 5% 란타늄용액 10 mL를 넣고(용액중 란타늄 함량이 1% 되도록 한다), 다시 염산용액(1:1) 1 mL를 가하고 증류수로 표선을 맞춘다. 미리 30분간 예열한 원자흡광광도계 파장 422.7 nm에서 흡광도를 측정한다. 이때 칼슘표준용액을 0, 2, 4, 6, 8, 10 ppm이 되도록 50 mL 메스플라스크에 취한 다음 여기에 란타늄 용액 10 mL를 각각 넣고 증류수로 표선까지 채운 다음 흡광도를 측정, 표준곡선(검량곡선)을 작성한다.

  4) 계산

  칼슘(%) =   시료액의흡광도/1ppm기준흡광도×희석배수   × 100  

            ──────────────────────        

              시료중량(g) × 106                                

 나. EDTA적정법(Ethylene Diamine TetraAcetic acid, disodium salt)

  1) 시약의 조제

   가) 8N-수산화나트륨액 : 특급 수산화나트륨(NaOH) 320 g을 증류수에 녹여 1,000 mL로한다.

   나) 10%시안화 칼륨용액 : 시안화칼륨(KCN) 10 g을 증류수에 녹여 100 mL로 한다.

   다) 트리에탄놀아민(Triethanolamine) 용액(1:1) : 트리에탄놀아민과 증류수를 동량(同量)희석한다.

   라) N, N 지시약 : 순수 N,N 지시약[2-Hydroxy-1-(2-Hydoxy ?4-Sulfa -1- Naphthy ?lazol)-3-Naphtoic Acid]5 g를 황산칼륨(K2SO4) 50 g과 잘 혼합(유발 이용)한다.

   마) 0.01 M-EDTA 용액 : EDTA-2Na(C10H14N2Na2O8ㆍ2H2O) 3.7226 g 또는 이의 무수물 3.3622 g을 증류수에 용해하여 1,000 mL로 만든 다음 폴리 에틸렌병에 보관 사용한다.

    ※ 표정 : 0.01 M-탄산칼슘 용액을 300 mL 삼각플라스크에 25 mL를 정확히 취한 후 트리에탄올아민용액 (1:1) 1 mL를 가하고 증류수 약 50 mL로 플라스크 내벽을 잘 씻으면서 채우고 N,N지시약 0.1 g를 가하고 8 N-수산화나트륨용액 5 mL와 10% 시안화칼륨(KCN)용액 1 mL를 각각 가한 다음 0.01 M-EDTA용액으로 적정하여 몰농도 계수를 계산한다. 적정의 종점은 미색에서 청색으로 변하는 점인데 이때 EDTA 용액이 떨어지는 순간 그 부위가 무색으로 보인다.

Factor(F) = 25/V (V : 0.01M-EDTA용액 소요 mL수)

   바) 0.01 M-탄산칼슘용액 : 탄산칼슘을 110℃에서 항량이 될 때까지 건조 후 1.0008 g을 칭량하여 염산용액(1:1)으로 탄산가스를 제거하고 가온하여 용해한 후 증류수를 가하여 1,000 mL로 만든다.

  2) 시료액의 조제

    4.1. 칼슘(Ca) 가. 원자 흡광광도법(Atomic absorption spectrophotometry) 2) 시료액의 조제에 따른다.

  3) 측정

    시료액 5 mL를 300 mL비커에 정확히 취하고 증류수 10 mL를 가한 후 8N-수산화나트륨용액 5 mL, 10% KCN용액 1 mL, 트리에탄올아민(1:1) 1 mL를 각각 가한 후 혼합한 다음 0.1g의 N.N지시약을 넣고 0.01 M-EDTA용액으로 푸른색이 될 때까지 적정하는데 이때 EDTA용액이 떨어지는 순간 그 부위가 무색으로 보인다.

  4) 계산

칼슘(%) = (0.01 M-EDTA용액소비량 mL × 0.04008 × 희석배수 × F)/시료의 중량(g)

F : 0.01 M-EDTA 용액의 factor

4.2. 인(P)

 가. 시약의 조제

  1) 몰리브도 바나데이트(Molybdo vanadate)발색제

   가) 암모늄몰리브데이트(Ammonium molybdate) 25g을 증류수에 녹여 400 mL로 한다.

   나) 암모늄메타바나데이트(Ammonium metavanadate) 1.25g을 증류수 300 mL에 용해하고 질산 250 mL를 가한 후 냉각하고 상기 가)와 나)의 두 용액을 합하여 1,000 mL까지 증류수로 채워 발색제를 만든다.

  2) 인(P)표준용액

    105℃에서 1시간 건조 후 데시케이터에서 방냉한 제1인산칼륨(Potassium-phosphate, monobasic) 2.195 g을 1,000 mL의 메스플라스크에 넣고 증류수로 용해하여 이 눈금을 맞춘다. 이 용액은 500 ppm의 표준용액이 된다. 이 표준용액을 10배 희석하여 50 ppm의 표준액을 만든 후 측정시 0, 2, 4, 6, 8, 10 ppm으로 만들어 사용한다.

 나. 시료액의 조제

    4.1. 칼슘(Ca) 가. 원자 흡광광도법(Atomic absorption spectrophotometry) 2) 시료액의 조제에 따른다.

 다. 측정

    25 mL 메스플라스크에 시료액 1～20 mL(인 함량에 따라)를 취하고 발색제 2.5 mL(용기의1/10)를 가한 다음 증류수로 표선을 맞춘 후 혼합하고 15분간 방치 후 파장 470 nm에서 흡광도를 측정한다. 표준액도 같은 방법으로 실시한다.

 라. 계산

  인 (%) =    시료액의흡광도/1ppm기준흡광도 × 희석배수   × 100  

            ───────────────────────        

              시료중량(g) × 106                                  

4.3. 유황(S)

 가. 시약의 조제

  1) 염산용액(1:1) : 염산과 증류수를 동량부피 혼합한다

  2) 10% 염화바륨(Barium chloride)용액 : 염화바륨 10g을 증류수에 용해하여 100 mL로 한다.

 나. 시료액의 조제

   시료 0.5g을 정확히 취하여 삼각 플라스크에 넣고 염산용액(1:1) 20 mL를 가하여 가열분해(액량이 1/2될 때까지) 한 후 뜨거운 증류수로 용해하여 No.6 여과지로 여과한 후 전량을 250 mL로 하여 시료액으로 한다.

 다. 방법

   500 mL 비커에 시료액 100 mL를 취하여 끓을 때까지 가열하면서 10% 염화바륨용액 10 mL를 피펫으로 한 방울씩 가한다. 침전이 생긴 용액이 맑아질 때까지 끓인 후 약 3시간동안 수조에서 가열하고 방치한 후 No.6 여과지로 여과하고 뜨거운 증류수로 8～10회 세척한 뒤 침전물을 여과지와 같이 크루시블에 넣고 건조시킨 다음 800℃ 전기로에서 30분간 회화하여 데시케이터에서 냉각 후 칭량한다.

 라. 계산

  유황(%) =   침전물의중량× 0.1374   ×  250   ×  100   

            ─────────────  ────          

              시료무게(g)                 100             

100 : 시료액중 취한량(mL)

0.1374 : 침전 중 유황의 함량

250 : 시료액의 전량(mL)

4.4. 마그네슘(Mg)

 가. EDTA 적정법(Volumetric법)

  1) 시약의 조제

   가) 8 N-수산화나트륨 용액 : 수산화나트륨 320g을 증류수에 녹여 1 L로 한다.

   나) 10% 시안화칼륨용액 : 시안화칼륨(KCN) 10g을 증류수에 녹여 100 mL로 한다.

   다) 암모니아ㆍ염화암모늄완충액(pH 10.7)：염화암모늄(Ammonium chloride) 67.5 g을 증류수에 용해시킨 후 암모니아수(Ammonium hydroxide) 570 mL를 가한 다음 증류수로 1 L를 만든다.

   라) 에리오크롬 블랙 Tㆍ염화나트륨 지시약 : 에리오크롬 블랙T(Eriochrome black T) 0.5 g과 염화나트륨(Sodium chloride) 100g을 고르게 분말형태로 혼합한다.

   마) 트리에탄올아민(Triethanolamine) : 증류수와 동일한 량(1:1) 부피로 혼합

   바) N, N지시약 : 4.1. 칼슘(Ca) 가. 원자 흡광광도법(Atomic absorption spectrophotometry) 1) 시약의 조제에 따른다.

   사) 0.05 M-EDTA용액 : EDTA-2Na 18.613g을 증류수에 용해하여 1 L로 한 다음 폴리에틸렌병에 보관 사용한다.

   ※ 표정은 0.05 M 탄산칼슘용액으로 4.1. 칼슘(Ca) 가. 원자 흡광광도법(Atomic absorption spectrophotometry) 1) 시약의 조제에 따른다.

  2) 시료액의 조제

     4.1. 칼슘(Ca) 가. 원자 흡광광도법(Atomic absorption spectrophotometry) 2) 시료액의 조제에 따른다.

  3) 측정

    시료액 25 mL를 비커에 취하고 증류수 50 mL, 암모니아ㆍ염화암모니움 완충액(pH 10.7) 5 mL를 넣고 에리오크롬 블랙 T. 염화나트륨지시약 0.04 g을 넣은 후 0.05 M EDTA 용액으로 적정한다. 이때 종말점은 용액의 적자색이 청색으로 변한 때로 한다. 다시 시료액 25 mL를 비커에 취하고 트리에탄올아민(1: 1) 1 mL를 넣고 N.N지시약 0.1 g을 넣은 다음 0.01 M EDTA 용액으로 적정하여 몰농도 계수를 계산한다. 적정의 종점은 미색에서 청색으로 변하는 점인데 이때 EDTA 용액이 떨어지는 순간 그 부위가 무색으로 보인다.

Factor(F) = 25/V

V : 0.01 M-EDTA용액 소요 mL수

  4) 계산

   마그네슘(%) =    (A-B) × 0.0012153 × 희석배수  × 100  

                  ─────────────────        

                    시료중량(g)                             

A : 에리오크롬블랙T 지시약사용시 0.05 M-EDTA 용액소비량(mL)

B : N.N지시약 사용시 0.01 M-EDTA 용액소비량(mL)의 1/5값

 나. 원자흡광분광광도법

  1) 시약 및 시료액의 조제

     4.1. 칼슘(Ca) 가. 원자 흡광광도법(Atomic absorption spectrophotometry) 2) 시료액의 조제에 따른다.

  2) 측정

    시료액 중 란타늄 함량이 1%되게 희석하여 미리 예열된 원자흡광분광광도계 파장 285 nm에서 표준액을 측정 검량선을 작성 후 시료액을 측정하여 계산한다.

  3) 계산

  마그네슘(%) =   시료액의흡광도/1ppm기준흡광도 × 희석배수   × 100  

                ───────────────────────        

                  시료중량(g) × 106                                  

4.5. 칼륨(K)

 가. 시약의 조제

  1) 칼륨(K)표준원액(1,000ppm) : 특급 염화칼륨(Potassium chloride : KCl)를 500～600℃에서 40～50분간 가열하고 데시케이터 내에서 방냉 후 0.1907g을 취하여 100 mL 메스 플라스크에 넣고 증류수로 용해하여 전량을 100 mL로 한다. 시판 표준원액 사용 가능

  2) 1% NaCl 용액

 나. 시료액의 조제

     4.1. 칼슘(Ca) 가. 원자 흡광광도법(Atomic absorption spectrophotometry) 2) 시료액의 조제에 따른다.

 다. 측정

   표준용액과 시료액에 Na 농도가 1000～2000 ppm이 되도록 첨가한 다음 미리 예열한 원자흡광분광광도계 파장 766.5 nm에서 측정하는데 먼저 표준원액을 적당히 희석하여 검량선을 작성 분석한다.

라. 계산

  칼륨(%) =   시료액의흡광도/1ppm기준흡광도×희석배수   × 100  

            ──────────────────────        

              시료중량(g) × 106                                

4.6. 철(Fe)

 가. 유도결합플라즈마법(Inductively Coupled Plasma, ICP)

  1) 시험용액의 조제

   가) 습식분해법

      시료 0.5∼1 g을 분해플라스크에 칭량 후 염산 15～20 mL를 가한 후 혼합하여 열판에서 용해시킨다. 실온으로 방냉 후 증류수로 정용하여 시료액으로 한다.

   나) 건식분해법

      시료 2～5 g를 자제 크루시블에 취하고 열판에서 예비회화 시킨 후 전기로 600℃에서 2시간 이상(회백색) 회화시킨 뒤 방냉하고 염산용액(1:1) 10 mL를 가해 하룻밤 방치 용해시킨 다음 여과 후 정용하여 시료액으로 한다.

   다) 마이크로웨이브법

      시료 일정량 (0.1～0.5 g; 수분함량이 높은 시료의 경우 1～2 g)을 Microwave digestion system에 넣고 질산 등으로 처리하여 분해하고 메스플라스크 등에 옮겨 정용(시료채취량에 따라 달라짐)하여 시험용액으로 한다.

  2) 측정

    이 방법은 아르곤 가스에 고주파를 유도결합방법으로 걸어 방전되어 얻어진 아르곤 플라즈마에 시험용액을 주입하여 목적원소의 원자선 및 이온선의 발광광도 또는 질량값을 측정하여 시험용액 중의 목적원소의 농도를 구하는 방법이다. 표준용액과 시험용액 및 공시험용액을 ICP(유도결합플라즈마)에 주입하여 시험용액의 농도를 구한다.

 나. 원자흡광분광광도법

  1) 시약의 조제

    철(Fe)표준원액(1,000 ppm) : 전해철(99.9%이상) 100 mg을 10 mL 왕수에 가열 용해하여 증발건고(蒸發乾固)직전에 가열을 중지하고 증류수로 녹여 100 mL로 만든다. 시판 표준원액 사용 가능

  2) 시료액의 조제

     4.1. 칼슘(Ca) 가. 원자 흡광광도법(Atomic absorption spectrophotometry) 2) 시료액의 조제에 따른다.

  3) 측정

    미리 예열한 원자흡광광도계 파장 248.3 nm에서 측정하는데 먼저 표준원액을 적당히 희석하여 검량선을 작성 분석한다.

  4) 계산

  철(%) =   시료액의흡광도/1ppm기준흡광도×희석배수   × 100  

          ──────────────────────        

            시료중량(g) × 106                                

4.7. 나트륨(Na)

 가. 시약의 조제

  1) 나트륨(Na) 표준원액(1,000 ppm) : 특급염화나트륨(Sodium chloride: NaCl)을 500～600℃에서 40～50분간 가열하고 데시케이터내에서 방냉한 후 0.254 g을 취하여 증류수로 용해 전량을 100 mL로 하여 폴리에틸렌병에 보관한다. 시판 표준원액 사용가능

  2) 1% 칼륨용액 : 특급 KCl 19.07 g을 증류수에 녹여 1000 mL로 만든다.

 나. 시료액의 조제

     4.1. 칼슘(Ca) 가. 원자 흡광광도법(Atomic absorption spectrophotometry) 2) 시료액의 조제에 따른다.다. 측정

   표준용액과 시료액의 나트륨농도가 1000 ppm이 되도록하여 원자흡광분광광도계 588.9 nm에서 표준용액으로 검량선을 구한 다음 시료액의 흡광도를 구한다.

라. 계산

  나트륨(%) =   시료액의흡광도/1ppm기준흡광도×희석배수   × 100  

              ──────────────────────        

                시료중량(g) × 106                                

4.8. 염분(NaCl)

 가. 적정법

  1) 시약의 조제

   가) 활성탄(Activated charcoal)

   나) 에틸에테르(Diethyl ether)

   다) 질산(Nitric acid)

   라) 황산철 암모늄(Ammonium ferric sulfate) 포화용액

   마) Carrez 용액 Ⅰ : 증류수에 2수염의 초산아연(Zinc acetate dihydrate) 21.9 g을 녹이고 여기에 빙초산(Glacial acetic acid) 3 mL를 가하고 증류수로 100 mL까지 희석하여 만든다.

   바) Carrez 용액Ⅱ : 황혈염(Potassium ferrocyanide) 10.6 g을 증류수에 녹여 100 mL로 만든다.

   사) 0.1 N-치오시안산 암모늄용액(Ammonium thiocyanate) 또는 0.1 N-치오시안산칼륨용액(Potassium thiocyanate) (0.1 N-용액은 순수한 KSCN 약 9.7 g을 증류수에 녹여 1,000 mL로 만든다)

   * 표정: 이미 표정한 0.1 N-질산은 용액 20 mL를 삼각플라스크에 취하고 진한 질산 0.5 mL와 황산철 암모늄(Ammonium ferric sulfate) 포화용액을 1 mL 가한 다음 뷰렛으로부터 치오시안칼륨(KSCN) 표준용액을 적하한다. 액이 백색에서 미홍색으로 되는 점에서 적정을 끝낸다. 적정에 소요된 치오시안산칼륨용액의  mL수가 V mL 이라면 0.1 N-치오시안산 칼륨용액의 FSCN = 20.0 × FAg / V이다.

   아) 0.1 N-질산은 용액 : 특급질산은 17.0 g을 증류수에 녹여 1,000 mL로 만든다.

   * 표정: 특급염화칼륨을 100～120℃에서 2시간 건조하여 데시케이터에서 방냉하여 3.7 g을 정확히 취하여 증류수에 녹여 500 mL로 만든다. 염화칼륨의 양을 a g이라고 하면 0.1N - 염화칼륨 용액의 역가는 FCl = a/3.728 이다.

   삼각플라스크에 0.1 N-염화칼륨 기준용액을 정확히 20 mL 취하여 1% 옥살산칼륨용액 5방울을 가하고 뷰렛에서 질산은 표준용액을 적하하여 염화은의 침전을 함유한 황백색액이 오렌지색으로 되는 점을 종말점으로 한다.

   적정에 소요된 표준용액을 a mL, 사용한 염화칼륨 기준액을 b mL, 그 역가를 FCl로 하면 0.1 N-질산은 표준액의 역가는 FAg = FCl × b/a(여기에서 b = 20이다)

  2) 시료액의 조제

   가) 유기물이 전혀 없는 시료

      10 g미만(Cl 함량이 3 g미만)의 시료를 500 mL 메스플라스크에 넣고 증류수(약 20℃) 400 mL를 가하고 믹서(Mixer)에서 30분간 혼합한 다음 증류수로 표선까지 채우고 혼합한 다음 여과한다.

   나) 유기물이 포함된 시료

    (1) 시료 5g을 250 mL 메스플라스크에 넣고 활성탄(Activated charcoal) 1g을 넣는다.

    (2) 약 20℃의 증류수 200 mL까지 채우고 여과한다.

    (3) Carrez용액 Ⅰ 5 mL를 넣어 잘 혼합하고 다시 Carrez용액 Ⅱ 5 mL를 넣는다.

    (4) 30분간 믹서에서 혼합한 다음 250 mL까지 증류수로 채우고 여과한다.

  3) 방법

   가) 앞에서 얻은 용액 25～100 mL(Cl 함량이 150 mg이하)에 질산 (Nitric acid) 5 mL와 포화 황산철암모늄(Ammonium ferric sulfate)용액 5 mL를 넣는다.

   나) 여기에 과잉의 질산은을 넣는다.

   다) 에테르 5 mL를 넣고 침전물이 응고되도록 강하게 흔들어 준다.

   라) 남아있는 질산은 용액(10 mL)을 0.1 N-치오시안(Thiocyanate) 용액으로 적갈색이 약 1분간 지속될 때까지 적정한다.

  4) 계산

염분(%) = W/시료무게(g)× 1/1000 × 100

W : 5.844 × (V1 × FAg - V2 × Fscn)

W : 염화나트륨 mg 

V1 : 0.1 N-질산은 용액 mL

V2 : 0.1 N-치오시안산 암모늄 용액, 또는 0.1 N-치오시안산 칼륨용액 mL

FAg : 0.1 N-질산은 용액의 역가

Fscn : 0.1 N-치오시안산 칼슘 용액의 역가

 나. 퀀탑법(Quantab chloride Titrator)

  1) 원리

    Quantab chloride titrator의 T자형 모세관 수직부에 충진된 Silver dichormate와 추출액 중의 염소이온이 다음과 같이 반응하여, 흰색의 염화은(AgCl)이 생긴다.

2NaCl + Ag2Cr2O7 (갈색) → 2AgCl (흰색) + Na2Cr2O7

  2) 기구 : 삼각 플라스크, 비커, 깔대기

  3) 시약 : 퀀탑

  4) 시료액의 조제

    시료 5g을 300 mL 삼각플라스크에 취하고 뜨거운 증류수 45 mL를 가하여 잘 흔들면서 염분을 용해시킨 후 비커에 No.5A여과지로 여과하여 시료액으로 한다.

  5) 측정

   가) 여과한 시료액 1 mL를 깨끗한 시험관에 옮겨 혼합한 후 퀀탑 스트립을 담근다. (희석이 필요할 경우 증류수로 희석한다.)

   나) 모세관 현상에 의해 시료액이 상부로 올라가면서 갈색이 흰색으로 변한다.

   다) 상단의 수평 완성 밴드의 색상이 노란색에서 검은색으로 바뀔 때까지 기다린 다음 시험관에서 퀀탑 스트립을 꺼낸다.

   라) 흰색과 갈색의 경계에서 가장 높은 흰색 끝 부분의 위치를 찾아 눈금을 읽는다.

  6) 계산

    눈금을 읽은 수치를 표에서 찾아 그때의 함량에 희석배수를 곱한다.

4.9. 염소(Cl)

 가. 시약, 시료액의 조제 및 측정법 : 4.8. 염분(NaCl) 가. 적정법의 1)시약의 조제, 2) 시료액의 조제 및 3) 방법에 따른다

 나. 계산

염소(%) = W/시료무게(g) × 1/ 1000 ×100

W : 3.545×(V1×FAg-V2 ×Fscn)

W : 염소(Cl)  mg 

V1 : 0.1 N-질산은 용액 mL

V2 : 0.1 N-치오시안산 암모늄용액 또는 0.1 N-치오시안산 칼륨용액 mL

FAg : 0.1 N-질산은 용액의 역가

Fscn : 0.1 N-치오시안산 칼륨 용액의 역가

4.10. 망간(Mn)

 가. 원자흡광분광광도법

  1) 시약의 조제

    망간(Mn)표준원액 : 금속망간(99.9%) 100 mg을 취하여 왕수(염산 3 : 질산 1) 5 mL를 가하여 황색연기가 없어질 때까지 가열 용해한 후 방냉하여 증류수로 100 mL가 되게 한다. 시판표준원액 사용가능

  2) 시료액의 조제

     4.1. 칼슘(Ca) 가. 원자 흡광광도법(Atomic absorption spectrophotometry) 2) 시료액의 조제에 따른다.

  3) 측정

    미리 예열한 원자흡광분광광도계 파장 279.5 nm에서 측정하는데 먼저 표준원액을 적당히 희석하여 검량선을 작성하고 시료액의 흡광도를 구한다.

  4) 계산

  망간(%) =   시료액의흡광도/1ppm기준흡광도×희석배수   × 100  

            ──────────────────────        

              시료중량(g) × 106                                

 나. 분광광도법(과요오드산 칼륨법)

  1) 시료액의 조제 

     4.1. 칼슘(Ca) 가. 원자 흡광광도법(Atomic absorption spectrophotometry) 2) 시료액의 조제에 따른다.

  2) 방법

   가) 전처리한 시료를 100 mL 비커에 넣고 황산용액(1+1) 10 mL 넣어 가열 증발시켜 황산의 흰 연기를 발생시킨다.

   나) 냉각한 다음 물 30 mL와 인산 1 mL를 넣어 가열하면서 녹이고 불용성 물질에 석출되면 여과하고 침전을 씻어 준 다음 여액과 씻은 액을 합하여 가열 농축하여 약 30 mL로 한다. 과요오드산 칼륨 0.5 g을 넣어 끓는 수욕 중에서 30분간 끓인다.

   ※  과요오드산칼륨으로 산화할 때 장시간 끓여 주면 생성된 과망간산이 분해되므로 주의하여야 함

   다) 냉각시킨 다음 50 mL용량 플라스크에 옮겨 증류수를 표선까지 채워 흔들어 섞는다. 이 용액의 일부를 10 mm 흡수셀에 넣어 분광광도계로 525 nm에서 흡광도를 측정하고, 미리 작성한 검량선으로부터 망간의 양을 구하고 농도(mg/L)를 산출한다.

  3) 계산

  망간(%) =    시료액흡광도 / 1ppm 기준흡광도×희석배수   × 100  

            ───────────────────────        

              시료무게(g) ×  106                                 

4.11. 아연(Zn)

 가. 분광광도법(진콘법)

  1) 시약의 조제

   가) 5% 수산화나트륨 용액

   나) 1% 시안화칼륨 용액 : 시안화칼륨 10g을 물에 녹여 1,000 mL로 한다. 이 용액을 강염기성 음이온 교환수지인 R-OH형에 유출시키고 수지가 R-CN형으로 변화한 다음의 유출액을 취한다.

   다) 10% 포수클로랄용액 : 포수클로랄(1수화물) 10 g을 물에 녹여 100 mL로 한다.

   라) 시료액의 조제 : 4.1. 칼슘(Ca) 가. 원자 흡광광도법(Atomic absorption spectrophotometry) 2) 시료액의 조제에 따른다.

  2) 방법 

   가) 시료 적당량을 100 mL 비커에 취하여 5% 수산화나트륨 용액을 한 방울씩 떨어뜨려 약 pH 7로 중화한다.

   나) 아스코르빈산나트륨 0.5 g, 1% 시안화칼륨용액 1 mL를 넣고 잘 흔들어 섞는다. 다음에 염화칼륨ㆍ수산화나트륨 완충액(pH 9.0) 5 mL, 진콘용액 3 mL, 10% 포수클로랄 용액 3 mL를 넣어 흔들어 섞고 2～5분간 방치하여 층장 10㎜ 흡수셀에 옮겨 검액으로 한다. 따로 아연을 함유하지 않은 물을 취하여 대조액으로 한다.

   다) 분광광도계로 620 nm에서 검액의 흡광도를 측정하고 미리 작성한 검량선으로부터 아연의 양을 구하고 농도( mg/ L)를 산출한다.

  3) 계산

  아연(%) =    시료액흡광도 / 1ppm 기준흡광도 × 희석배수   × 100  

            ────────────────────────        

              시료무게(g) ×  106                                   

 나. 원자흡광분광광도법

  1) 시약의 조제

    아연(Zn) 표준원액(1,000ppm) : 금속아연(99.9%이상) 100 mg을 염산용액(1+3) 5 mL로 가열 용해하여 증류수로 100 mL가 되게 한다. 시판 표준액 사용 가능

  2) 시료액의 조제

     4.1. 칼슘(Ca) 가. 원자 흡광광도법(Atomic absorption spectrophotometry) 2) 시료액의 조제에 따른다.

  3) 측정

    미리 예열한 원자흡광분광광도계 파장 213.9 nm에서 측정하는데 먼저 표준 원액을 적당히 희석하여 검량선을 작성하고 시료액의 흡광도를 구한다.

  4) 계산

  아연(%) =    시료액흡광도 / 1ppm 기준흡광도 × 희석배수   × 100  

            ────────────────────────        

              시료무게(g) ×  106                                   

4.12. 구리(Cu)

 가. 분광광도법(디에틸디티오카바민산법)

  1) 시약의조제

   가) 0.1% 메타크레졸퍼플에틸알콜 용액

   나) 구연산 2암모늄 용액, 에틸렌티아민테트라초산나트륨 용액, 초산부틸 : 동시험용

   다) 암모니아수(1:1)

   라) 1% 디에틸디티오카바민산나트륨 용액 : 디에틸디티오카바민산나트륨(3수화물) 1.3g을 물에 녹여 100 mL로 한다. 착색용기에 보관하여 14일 이내에 사용한다.

  2) 시료액의 조제

    4.1. 칼슘(Ca) 가. 원자 흡광광도법(Atomic absorption spectrophotometry) 2) 시료액의 조제에 따른다.

  3) 방법

   가) 전 처리한 시료 적당량을 분액깔대기에 넣어 0.1% 메타크레졸퍼플에틸알콜 용액 2～3방울 넣고 구연산2암모늄 용액 2 mL, 에틸렌티아민테트라초산나트륨 용액 1 mL를 넣고 암모니아수로 엷은 자색을 나타낼 때까지 중화하고 물을 넣어 50 mL로 한다.

   나) 1% 디에틸디티오카르바민산나트륨 용액 2 mL를 넣고 초산부틸 10 mL를 정확히 넣어 약 2분간 세게 흔들어 섞고 정치한다.

   다) 초산부틸층을 분리하고 건조한 여지로 여과하고 용액의 일부를 층장 10 mm흡수셀에 넣어 분광광도계로 440 nm에서 흡광도를 측정하고, 미리 작성한 검량선으로 부터 동의 양을 구하고 농도를 산출한다.

  4) 계산

  구리(%) =    시료액흡광도 / 1ppm 기준흡광도 × 희석배수   × 100  

            ────────────────────────        

              시료무게(g) ×  106                                   

 나. 원자흡광분광광도법

  1) 시약의 조제

    구리(Cu) 표준원액(1,000ppm) : 금속동(99.9%이상) 100 mg을 질산(1+2) 20 mL를 가하여 가열용해하고 증발건고(蒸發乾固)하고 냉각 후 증류수를 가하여 용해 전량을 100 mL로 한다. 시판 표준원액 사용가능

  2) 시료액의 조제

     4.1. 칼슘(Ca) 가. 원자 흡광광도법(Atomic absorption spectrophotometry) 2) 시료액의 조제에 따른다.

  3) 측정

    미리 예열한 원자흡광광도계 파장 324.7 nm에서 측정하는데 먼저 표준원액을 적당히 희석하여 검량선을 작성하고 시료액의 흡광도를 구한다.

  4) 계산

  구리(%) =    시료액흡광도 / 1ppm 기준흡광도 × 희석배수   × 100  

            ────────────────────────        

              시료무게(g) ×  106                                   

4.13. 코발트(Co)

 가. 시약의 조제

  1) Co 표준용액(1000 ppm)을 10 mL를 취하여 100 mL 메스플라스크에 넣고 증류수로 표선까지 채워 100 ppm으로 희석한다.

  2) Spekker acid : 85% H3PO4 150 mL＋H2SO4 150 mL＋D.W. 700 mL

  3) Nitroso-R salt soln. : C10H4OHNO(SO3Na)2 2 g을 증류수 100 mL에 녹인다.

  4) Sodium acetate soln.. : NaOACㆍ3H2O(CHCOONa) 500 g을 증류수 100 mL에 녹인다.

  5) 질산(HNO3) 

 나. 방법

   전 처리한 시료 적당량을 100 mL 메스플라스크에 넣고 1:1 염산 5 mL 정도를 넣어 용해시킨 후 100 mL로 정용하여 이 액을 다시 100 mL 메스플라스크에 1 mL를 뽑아 넣고 코발트 표준용액을 1, 3, 5 ppm 비율로 취하여 Spekker acid를 각각 2 mL씩 뽑아 넣고 Sodium acetate 용액을 각각 10 mL씩 넣는다. Nitroso-R salt 용액을 5 mL 넣은 후 이 액들을 가열교반기에서 끓기 시작하면서 1～2분 사이에 질산 5 mL을 서서히 넣는다. 이 액들을 방냉 시킨 후에 100 mL로 표선을 채운 후 2시간 이내에 비색계에서 측정한다. 이 때 파장은 540 nm이다. 

   단 blank는 Spekker acid 2 mL, Sodium acetate soln.. 10 mL만 넣어 100 mL 메스플라스크에 표선을 채운다. 시료액도 std.와 같이 최종 희석시킨 후 측정한다.

 다. 계산

  코발트(%) =    시료액흡광도 / 1ppm 기준흡광도 × 희석배수   × 100  

              ────────────────────────        

                시료무게(g) × 106                                    

4.14. 몰리브덴(Mo)

 가. 치오시안산나트륨법

  1) 시약의 조제

   가) 표준몰리브덴액 : 특급3산화몰리브덴(MoO3. 황산데시케이터중에서 24시간 이상 건조한 것) 1.5 g을 소량의 물로 적시고, NaOH 5 g을 가하여 녹인 후, 물을 가하여 정확히 1 L로 하여 표준 Mo 원액을 조제하고 착색병에 저장한다. 사용시 이 원액의 일정량을 물로 정확히 100배 희석한다.

   나) 치오시안산나트륨 : NaSCN 10 g을 물에 녹혀 100 mL로 한다.

   다) 황산철(Ⅲ) 액 : 황산철(Ⅲ) 5 g을 물 및 황산(1:1) 약 10 mL에 녹이고 100 mL로 한다.

   라) 염화주석(Ⅱ)액 : 염화주석(Ⅱ) 100 g을 염산(1:1) 400 mL를 가해 가온하여 녹인 후 물을 가하여 1 L로 하고 소량의 입상주석을 가하여 착색병에 저장한다. 

  2) 공시액의 조제

    시료 2～10 g을 자제증발접시에 취하고 처음은 열판상에서 가열하여 탄화시키고, 다음 약 250℃의 전기로에 넣고 1시간 약 50℃ 전후의 승온온도로 가열하여 약 450℃에서 회화시킨다. 방냉후 질산 약 5 mL를 가해 열판상에서 가열하여 분해하고 다시 가열을 계속해 산을 거의 증발시켜 방냉한다. 방냉후 온염산(1 : 5) 약 25 mL를 가해 잠시 가열하여 녹이고 냉각 후 물을 가해 정확히 100 mL로 한 후 즉시 건조 여지로 여과한다.

  3) 방법

    공시액의 일정량을 100 mL의 메스플라스크에 정확히 취하고 황산(1:1) 5 mL(황산으로 분해한 공시액에서는 함유한 황산량 만큼 감한다) 과염소산 5 mL 및 황산철액 2 mL를 가하여 혼합하고, 다시 치오시안산나트륨액 16 mL 및 염화주석(Ⅱ)액 10 mL를 공시액을 진탕하면서 서서히 차례로 가한 후 눈금까지 물을 가한다. 철에 의한 적색이 없어진 후 용액이 혼탁한 경우에는(혼탁이 치오시안산동 (1)에 의한 때는 1시간 방치한 후) 원심분리하여 제거하고 공시험의 액을 대조액으로 파장 460 nm 부근에서 흡광도를 측정한다. 따로 표준 Mo을 몇 단계로 정확히 취하고 공시액의 경우와 동일조건에서 조작하여 작성한 검량선에서 Mo의 량을 구한다.

 나. 원자흡광분광광도법

  1) 시약의 조제

   가) 표준몰리브덴액 : 4.14. 몰리브덴(Mo) 가. 치오시안산나트륨법 1) 시약의 조제 가)표준몰리브덴액에 따른다.

   나) 8-퀴노리놀액 : 8-퀴노리놀(옥신 : C9H6NㆍOH) 20g을 비커에 취하고 빙초산 50 mL를 가하여 수욕상에서 가열하여 녹인 후 물을 가하여 100 mL로 한다.

  2) 공시액의 조제

     4.14. 몰리브덴(Mo) 가. 치오시안산나트륨법 2) 공시액의 조제에 따른다.

  3) 방법

    공시액의 일정량을 100 mL의 메스플라스크에 정확히 취하고, 1M 염산 10 mL 8-퀴노리놀 5 mL 및 물을 가하여 약 80 mL로 하고 잘 진탕한 후 잠깐 방치한다. 2-heptanone 또는 4-methyl -2-pentanone 5～10 mL를 가하고 1～2분간 격렬하게 진탕한 후 정치한다. 여기에 물 약 20 mL를 가하고 상층의 유기용매층에 대해 원자흡광분석기로 파장 313.3 nm에서 흡광도를 측정한다. 동시에 표준 몰리브덴액을 몇단계로 정확히 취하고 공시액의 경우와 동일 조건에서 조작하여 작성한 검량선에서 Mo의 량을 구한다.

4.15. 요오드(I)

 가. 대상시료 : 혼합광물질 사료(유기물이 전혀 포함되지 않은 시료)

 나. 방법

   200～300 mL의 Ni 접시에 시료 적당량을 칭량하고 약 5 g Na2CO3, 1:1 NaOH 5 mL, 알콜 1 mL를 가하여 시료가 축축히 젖도록 한다. 알콜을 날리기 위해 steam bath에서 가열한다. 가열 후, 시료가 튀는 것을 방지하기 위해 약 100℃에서 건조한다. (약 30분 정도)  Ni 접시를 500℃ 전기로에서 15분간 방치한다.(500℃에서 태우는 것은 Br2-H2O에 의해서 산화되는 가용성 유기물을 탄화시키기 위해 필요하다. 필요하다면 500℃ 이상에서 진행하여도 된다) 방냉 후 25 mL 증류수를 가하여 시계접시를 덮고 서서히 10분간 끓인다. 18 cm 여과지에 여과하고 끓는 물로 씻는다. (600 mL 비커에 여과하고 여과액은 약 300 mL가 되어야 한다) 메틸오렌지를 지시약으로 85% H3PO4를 과잉으로 가하고 5분이상 색이 없어질 때까지  서서히 끓인다. 약간의 salicylic acid 결정을 가하고 약 20℃로 방냉한다. 85% H3PO4 1 mL를 가하고 약 0.5 g KI를 가한다. 0.005 N Na2S2O3로 I2를 적정한다. 유리된 I2의 색깔이 거의 없어지면 starch 용액을 가한다.

 다. 계산 : 1 mL 0.005N Na2S2O3 = 0.1058 mg I2

4.16. 산화알루미늄(Al2O3)

 가. EDTA법(Volumetric 정량법)

  1) 기구  

   백금크루시블(자제 크루시블), 전기로, 비커, 수조(Water bath), 세척병

  2) 시약의 조제 

   가) 초산암모늄 완충용액 (pH 4.8) : 초산암모늄(Ammonium acetate) 77 g을 증류수 200 mL에 녹이고 빙초산 57 mL를 넣은 다음 증류수로 1 L가 되게 한다.

   나) 에리오크롬 블랙 T. 염화나트륨지시약 : 에리오크롬블랙 T(Eriochrome black T) 0.5 g과 염화나트륨(Sodium chloride) 100 g을 분말형태로 고르게 혼합한다. 

   다) 0.05M-초산아연 용액 : 초산아연(Zinc acetate) 10.975g을 증류수 1 L에 녹인다. 

   ※ 표정 : 0.05 M-EDTA 용액 20 mL를 정확히 비커에 취하여 증류수 50 mL를 가하고 pH 10.7 암모니아, 염화암모늄 완충액 3 mL 및 에리오크롬 블랙 T. 염화나트륨 지시약 약 40 mg을 넣고 0.05 M-초산아연용액으로 적정하여 Mol 농도 계수를 계산한다.

   라) 0.05 M-EDTA 용액 : EDTA-2Na 18.613 g을 증류수 1 L에 녹인다. 

   마) 암모니아. 염화암모늄 완충액(pH 10.7) : 염화암모늄(Sodium chloride) 67.5 g을 증류수에 용해시킨 후 암모니아수(Ammonium hydroxide) 570 mL를 가한 다음 증류수로 1 L를 만든다. 

  3) 시료액의 조제 

   시료 2 g을 백금 크루시블(또는 자제 크루시블)에 취하고 탄산나트륨(Sodium carbonate) 4 g을 넣어 완전히 혼합하고 다시 탄산나트륨 1 g으로 표면을 덮고 뚜껑을 덮은 후 온도를 서서히 올려 850℃ 이상에서 2시간 용융하고(완전히 용융된 것을 육안으로 점검) 방냉 후 증류수 30 mL로 내용물을 씻어 300 mL 비커에 넣은 후 다시 농염산 30 mL와 과염소산(Perchloric acid) 10 mL로 크로시블을 잘 씻어 비커에 넣고 Water bath에서 백색가루가 될 때까지 증발건고한 후 뜨거운 증류수로 녹여 No.6 여과지로 여과하여 전량을 500 mL로 하여 시료액으로 한다. 이때 여과지에 남아있는 잔사는 0.5% 염산으로 10~12회 씻어주고 다시 증류수로 씻어준 후 중량을 구하여 규산으로 한다. 

  4) 측정

   시료액 20 mL를 300 mL 비커에 정확히 취하고 0.05 M-EDTA 용액 30 mL를 정확히 넣고 초산암모늄완충용액(pH 4.8) 20 mL를 넣은 다음 5분간 끓인 후 실온에서 방냉한다. 이 액에 에탄올 55 mL를 넣고 암모니아. 염호암모늄지시약 40 mg정도 넣고 0.05M-초산아연 용액으로 적정하는데, 종말점은 엷은 녹색에서 엷은 적색으로 변할 때로 하고 같은 방법으로 공시험을 한다. 

  5) 계산

  산화알루미늄(%) =   0.00254908 × f × 희석배수 × (A-B)  × 100  

                    ────────────────────        

                      시료무게(g)                                   

 나. 중량법

  1) 기구

    백금크루시블(자제크루시블), 전기로, 비커, 세척병, Water bath, 건조기, 원자흡광광도계, 분광광도계 

  2) 시약의 조제

   가) 0.5%(v/v)염산 : 농염산 5 mL를 취하여 증류수 1 L 되게 한다. 

   나) 암모니아수 용액 (1:3) : 암모니아수와 증류수를 1:3 비율로 희석

   다) 2% 염화암모늄 용액 : 염화 암모늄(Ammonium chloride) 20 g을 증류수로 용해하여 1 L로 한다.

  3) 시료액의 조제 

     4.16. 산화알루미늄(Al2O3) 가. EDTA법(Volumetric 정량법) 3) 시료액의 조제에 따른다.

  4) 측정

    시료액 중에서 200 mL를 취해서 300 mL 비커에 넣고 메칠레드 지시약 2～3 방울을 떨어뜨린 후 서서히 교반하면서 암모니아수(1:3)를 가하여 연노란색을 띤 은백색의 침전이 생기면 멈추고 가열하여 탄산가스와 암모니아를 날려보낸 후 No.6 여과지로 여과하여 침전을 뜨거운 증류수로 충분히 씻어준 후 2% 염화암모늄 용액으로 3회 씻어주고 뜨거운 증류수로 충분히 씻어준 후 건조하여 크루시블에 넣고 뚜껑을 덮은 후 800℃에서 2시간 태우고 데시케이터에서 40분간 방냉 후 무게를 측정한다. 이때 시료액에 대하여 산화철고 5산화인의 함량을 별도로 구한다. 

  5) 계산

  산화알미늄(%) =   잔사중량 - (산화철 + 5산화인)   × 100  

                  ─────────────────        

                    시료무게(g)                             

시료의 중량(g) : 2 g × 250/500

※ 산화철과 5산화인은 상기 시료중량에 대한 함량임

4.17. 셀레늄(Se)

 가. 시약의 조제

  1) 셀레늄 표준액

    셀레늄 0.5 g을 정확히 칭량하여 톨비이커에 넣는다. 초산 10 mL를 가해 수욕조에서 가열 용해한다. 과연소산 2 mL를 가하고 가열하면서 약 2 mL 정도가 될 때까지 농축하고 염산 5 mL를 가하여 5분간 가열한다. 방냉 후 증류수로 500 mL 메스플라스크에 옮겨 담고, 표선까지 증류수를 가하여 셀레늄 표준원액을 조제한다. 사용시, 표준원액의 일정량을 염산 : 증류수(1:100)으로 정확히 희석하고 1 mL중에 0.02, 0.04, 0.06, 0.08, 0.1 μg을 함유하는 각 셀레늄 표준액을 조제한다.

  2) 디아미노나프탈렌액

    2,3-디아미노나프탈렌 0.1 g을 200 mL 톨비이커에 넣는다. 염산 : 증류수(1:100)을 가하고 50℃ 수욕조에서 가온하면서 용해한다. 방냉 후 이 액을 분액여두 A에 넣고 시클로핵산 40 mL를 가하여 진탕한다. 수층(하층)을 분액여두 B에 넣고 시클로헥산 40 mL를 가하여 진탕하고 수층을 No. 2S여과지로 여과한다.

  3) EDTA 용액

    에틸렌디아민4초산2수소나트륨2수화물 18.6 g을 증류수로 용해하여 500 mL로 한다.

 나. 시료용액 조제

    분석시료 2 g을 정확히 칭량하여 200 mL의 톨비이커에 넣는다. 질산 20 mL 및 과염소산 5 mL를 가하여 시계접시를 덮고 하룻밤 방치한다. 가열교반기에서 서서히 가열하다 거품이 사라지면 온도를 높여 건고 직전까지 농축한다. 방냉 후, 염산 5 mL를 가하고 5분간 가열하여 환원시킨다. 다시 방냉 후 증류수로 100 mL의 메스플라스크에 옮기고 표선까지 증류수를 가하여 시료액으로 한다. 시료를 넣지 않고 조제하여 blank로 한다.

다. 방법

    시료액의 일정량을 100 mL의 톨비이커에 정확히 넣는다. EDTA 용액 5 mL를 가하여 pH를 염산 : 증류수(1:4)로 1.0～1.5로 조정한 다음 염산:증류수(1:100)로 100 mL의 분액여두에 옮겨 담는다. 시클로헥산 10 mL를 정확히 가하고 5분간 진탕한다. 방치한 후 수층(하층)을 버리고 잔류액을 염산 : 증류수(1:100) 25 mL씩 2회 진탕 세정한다. 시클로핵산층(상층)을 시험관에 옮겨담고, 적당량의 무수황산나트륨을 가하여 탈수한 후 No.2S여과지로 여과하여 시료액으로 한다. blank용액 및 각 셀레늄 표준액을 동일하게 조제한다. blank용액을 대조액으로 하고 시료용액에 대하여 여기파장 378 nm 및 형광파장 520 nm로 형광광도를 측정한다.

4.18. 규산(이산화규소-SiO2), 규소

 가. 중량분석법

  1) 정의

    시료를 용융처리하여 수용성으로 만든 것을 증발 건고 한 후 칭량하고 여기에 불산과 황산을 넣어 가열하여 규소를 희산시켜 전후 차이에 의한 규산을 구하는 방법으로 사료 중의 규산(SiO2) 성분을 산출하는 방법에 대하여 기술한다.

  2) 측정기기 및 원리

    규산염에 Na2CO3과 K2CO3을 넣고 가열 용융하면 규산은 Na2SiO3 또는 K2SiO3로 Mg는 KMgO 또는 MgCO3로 되고, Al은 KAlO2, NaAlO2 상태로 되어 수용성이 된다. 규산외의 물질은 용해, 여과 과정을 거쳐 분리되게 하고 규산 잔사를 측정

  3) 시약, 초자기구 및 기기

   가) 시약 

    (1) 용융합제(Na2CO3 : K2CO3 5:7)

    (2) Hydrochloric acid(염산) : 36%의 반도체용

    (3) Water : 3차 증류수

   나) 초자기구

    (1) Tall beaker(톨 비이커) : 300 mL(Pyrex 재질)

    (2) 백금 도가니 : 50 mL(850℃ 이상에서 견딜 수 있어야 한다)

    (3) Filter paper : Ash free 제품(No. 6)으로 한다.

   다) 기 기

    (1) 회화로(Muffle Furnace) : 250℃부터 850 ± 10℃까지 정확하게 조절 가능한 것이어야 한다.

    (2) 화학저울(Chemical Balance) : 정확도는 0.0001 g 정도

  4) 분석방법

   가) 알칼리용융처리

    (1) 백금도가니에 용융합제(Na2CO3과 K2CO3을 5:7로 혼합) 2 g와 시료0.4 g 정도를 넣고 혼합한 후 용융합제 1 g을 덮고 850℃에서 2시간 이상 용융한다. 

    (2) 백금도가니가 식으면 용융상태를 확인하고, tall beaker에 백금도가니를 넣고 염산(1:1)을 백금도가니에 가한 뒤 방치하여 용해시킨다. 백금도가니 바닥에 남은 용융물질을 tall beaker에 여러번 씻어 넣는다.

    (3) tall beaker를 물중탕 97℃에서 완전건고 될 때까지 건고하고, 건고위에 진한염산을 적시고 증발, 건고 시킨다. 이것을 5회 이상 반복한다.

    (4) tall beaker에 1% HCl을 넣어 건고물질을 녹인 다음 No.6 거름종이에 조용히 붓고 tall beaker를 1% HCl로 수차 씻어 넣는다. 1% HCl로 용융물질 거르는 작업을 5회 이상 반복한다. 다시 온수로 5회 이상 씻어 내린다. 여과지에 남아있는 잔사에 0.5%염산으로 10회이상 씻고 다시 증류수로 씻어 건조시킨다.

    (5) 600℃에서 30분간 강열한 후 데시케이터에서 방냉하고 무게를 측정한 백금접시 또는 자기접시에 거름종이를 넣고 온도를 서서히 올려 600℃에서 2시간 회화 후 같은 desiccator에서 방냉한다.

   나) 데이터 분석 및 정리

    (1) 함량을 규산(SiO2)으로 나타낼 경우함량(％)=(5)의 건조전후의 무게차(g)/시료량(g)×100

    (2) 함량을 규소(Si)로 나타낼 경우함량(％)=(5)의 건조전후의 무게차(g)/시료량(g)×0.467×100

 나. 알칼리 용융처리 후 ICP분석법

  1) 측정 및 분석 원리

    규산을 알칼리 용융하면 규산은 수용성이 된다. (SiO2+Na2CO3→1000℃용융→Na2SiO2+CO2) 수용상태의 규소를 고주파유도코일에 의하여 형성된 Ar Plasma에 도입하여 6000～8,000 oK에서 원자가 여기상태(excited state)로 되었다가 기저상태(ground state)돌아갈 때 방출하는 발광선 및 발광광도를 측정하여 규산을 분석하여 농도를 산출한다.

  2) 기 기

    전기로. 백금도가니. ICP-AES. 열판.

  3) 시약

    탄산나트륨(Na2CO3) 

  4) 시료의 전처리

   가) 백금도가니에 시료 0.25 g정도를 채취하여 탄산나트륨 1 g과 충분히 혼합한 다음, 그 위에 탄산나트륨1 g을 덮는다.

   나) 이것을 전기로에 넣고, 1000℃에서 30분간 용융한다.

   다) 식힌 다음, 증류수를 도가니의 80%정도 넣어 열판위에서 열을 서서히 가열 녹인다. 이 과정을 3차례정도 반복하여 flask(PVC)100 mL에 넣고, 물로 make-up한 후 filter paper (No. 6)로 거른다.

   라) 처음 거른 용액은 버리고 거른액 1 mL를 정확히 취하여 flask (PVC)50 mL에 넣고 0.4 N Na2CO3 make-up 한다.

   ※ 화학천칭을 이용하면 정확한 배수 값을 얻을 수 있다.

  5) ICP 기기 분석

   가) 검정파장 251.611 nm에서 분석한다. 기기의 warming-up은 25분 이상 실시한다.

   나) Standard는 분석물질 농도가 검량선 중앙에 올 수 있도록 하고 3～4단계의 표준용액을 조제한다. 표준용액은 실내온도에서 화학천칭을 이용하여 제조하고 matrix는 0.4 N Na2CO3 한다. 시료의 matrix와 일치 시킨다.

   다) 4.19. ICP 발광분광분석법 다. 방법에 따른다.

  6) 데이터 분석 및 정리

   가)함량을 규산(SiO2)로 나타낼 경우

      규산함량(％)=분석치(ppm)×희석량(mL)/시료량(g)×2.139×10,000

   나) 함량을 규소(Si)로 나타낼 경우

      규소함량(％)=분석치(ppm)×희석량( mL)/시료량(g)×10,000

  7) 분석결과 처리

    규산의 측정값은 일반적인 등록치의 1/10의 수치까지 기록하되, Data의 값은 소숫점 이하 2자리까지로 보며, 소숫점 이하 3자리에서 반올림한다.

4.19. ICP 발광분광분석법

 가. 표준용액의 제조

  1) 단일원소표준용액

    표준곡선작성을 위해서 표준용액계열을 만드는 보존용액으로서, 아래와 같이 만들어(1000 μg/mL), 적당히 필요한 농도로 희석하여 사용한다.

ㆍ Na : NaCl 2.542 g을 정밀히 달아 물에 녹여 1 L로 한다.

ㆍ Mg : Mg(NO3)2ㆍ6H2O 10.550 g을 정밀히 달아 물에 녹여 0.1 N 질산으로 1 L로 한다.

ㆍ P : (NH4)2HPO4 4.620 g을 정밀히 달아 물에 녹여 1 L로 한다.

ㆍ K : KCl 1.907 g을 정밀히 달아 물에 녹여 1 L로 한다.

ㆍ Ca :CaCO3 2.497 g을 정밀히 달아 소량의 염산을 가하여 녹이고 0.1 N 염산으로 1 L되게 한다.

ㆍ Cr : K2Cr2O7 2.829 g을 정밀히 달아 물에 녹이고 0.02 N 질산으로 1 L되게 한다.

ㆍ Mn :Mn 1.000 g을 정밀히 달아 물에 녹이고 소량의 8 N 질산을 가하여 가열하여 녹인 다음 0.1 N 질산으로 1 L되게 한다.

ㆍ Fe : Fe 1.000 g을 정밀히 달아 소량의 8 N 질산을 가하여 녹인 다음 0.1 N 질산으로 1 L되게 한다.

ㆍ Co : Co 1.000 g을 정밀히 달아 소량의 8 N 질산을 가하여 녹인 다음 0.1 N 질산으로 1 L되게 한다.

ㆍ Cu : Cu 1.000 g을 정밀히 달아 소량의 8 N 질산을 가하여 녹인 다음 0.1 N 질산으로 1 L되게 한다.

ㆍ Zn : Zn 1.000 g을 정밀히 달아 소량의 8 N 질산을 가하여 녹인 다음 0.1 N 질산으로 1 L되게 한다.

ㆍ As : As2O3 1.320 g을 정밀히 달아 소량의 1 N 질산을 가하여 녹인 다음 0.25 N 염산으로 1 L되게 한다.

ㆍ Se : SeO2 1.405 g을 정밀히 달아 소량의 물로 녹이고 0.5 N 질산으로 1 L 되게 한다.

ㆍ Mo : (NH4)6Mo7O24ㆍH2O 1.841 g을 정밀히 달아 물에 녹이고 0.5 N NH4OH로 1 L 되게 한다.

ㆍ Cd : Cd 1.000 g을 정밀히 달아 소량의 8 N 질산을 가하여 녹인 다음 0.5 N NH4OH로 1 L되게 한다.

ㆍ Hg : HgCl2 1.354 g을 정밀히 달아 물에 녹인 다음 0.5 N 질산으로 1 L되게 한다.

ㆍ Pb : Pb 1.000 g을 정밀히 달아 소량의 8 N 질산을 가하여 가열하여 녹인 다음 0.1 N 질산으로 1 L되게 한다.

ㆍ Al : Al 금속 1 g을 6 N 염산에 녹여 물로 희석하여 1 L 되게 한다

ㆍ Si : SiO2 2.140 g을 백금도가니에 넣고 무수탄산나트륨 2 g을 가하여 용융시킨 다음 물로 녹여 1 L가 되게 한다.

  2) 혼합표준용액 : 단일원소표준용액을 써서 조제한 다원소분석용 표준곡선 작성을 위한 혼합표준액으로 한다.

  3) 단일원소 및 혼합표준용액은 인증표준물질(Certified Reference Material: CRM)을 이용할 수 있다.

 나. 시료액의 조제

  1) 칼슘(Ca), 인(P), 칼륨(K), 유황(S), 마그네슘(Mg), 나트륨(Na), 망간(Mn), 아연(Zn), 구리(Cu), 코발트(Co), 셀레늄(Se), 철(Fe)의 경우 4.1. 칼슘(Ca) 가. 원자 흡광광도법(Atomic absorption spectrophotometry) 2) 시료액의 조제에 따른다.

  2) 염분(NaCl), 염소(Cl), 알루미늄(Al), 몰리브덴(Mo), 규소(Si)의 경우 개별 시험법의 시료액의 조제에 따른다.

 다. 방법

  1) 기기조건

   가) 고주파출력 : 수용액시료의 경우 0.8～1.4kW, 유기용매의 경우에도 1.5～2.5kW로 설정.

   나) 가스유량의 설정 : 냉각가스, 보조가스, 캐리어가스의 3개의 유로를 지닌 플라즈마 토취에서 각각의 가스 유량을 10～18 L/min, 0～2 L/min, 0.5～2 L/min의 범위로 설정. S, P의 진공자외역의 발광측정으로는 진공분광기 혹은 가스 파- 지분광기를 사용하여 다시 플라즈마와 분광기간의 광축을 알곤 또는 질소가스로 치환한다.

   다) 시험용액 도입량 : 캐리어가스 유량은 1～2 L/min일 때 빨아 올리는 양은 1～2 mL/min이 표준

   라) 플라즈마관측높이 : 유도코일상단에서 15～18 mm인 범위로 한다. 다만, 알칼리 원소의 경우에는 20～25 mm 범위로 한다.

   마) 분석선 : 일반적으로 다음의 최고 감도의 분석파장에 설정한다. 다만, 용액중의 분석대상원소농도가 높아 스케일아웃하는 경우에는 저감도 분석선을 쓴다. 최고감도의 분석선 파장에서 분광간섭을 받을 경우에는 분광간섭을 받지 않는 파장을 선택한다.

        ┌──────┬──────┬────────┐

│ As  193.696│ Mo 202.030 │ P 213.618      │

│ I 206.160  │ Fe 259.940 │ Pb 220.353     │

│ K 769.896  │ Na 588.995 │ Zn 213.856     │

│ Se 196.025 │ Cd 228.802 │ Hg 194.227     │

│ Ca 393.366 │ Co 228.616 │ S 180.6        │

│ Mg 279.353 │ Cr 205.552 │ Al      396.052│

│ Mn 257.610 │ Cu 324.754 │ Si      251.611│

└──────┴──────┴────────┘

  2) 표준곡선법

    원소농도가 다른 각 혼합표준용액중의 각 원소의 농도를 미리 데이터 처리장치에 기억시킨 다음 각 혼합표준용액을 플라즈마에 도입하여 각 원소의 스펙트럼선 강도를 측정하여 표준곡선을 작성한다. 그 다음 시험용액을 플라즈마에 도입하여 스펙트럼선 강도를 측정하고 다시 백그라운드 보정을 하여 표준곡선으로부터 각 분석대상원소의 농도를 구한다.

  3) 내부표준법

    혼합표준용액과 시료용액의 양쪽에 내부표준원소로서 Y 또는 Co를 10 ppm 되도록 첨가하여 분석대상원소의 발광광도/내부표준원소의 발광광도의 값을 각각에 대하여 측정한다. 혼합표준용액의 각 분석대상 원소의 발광강도의 값을 써서 내부 표준분석용 표준곡선을 작성하여, 그의 표준곡선으로부터 시험용액의 발광강도의 값에 상당한 각 분석대상원소의 농도를 구한다. 표준곡선법과 동일하게 백그라운드 보정을 한다.

  4) 표준첨가법

    시험용액을 10 mL식 4개의 시험관에 분취하여 그 중의 3개에는 혼합표준용액을 시험용액중의 분석대상 원소량의 약 0.5, 1.0, 1.5배로 되도록 첨가한다. 각 시험관의 용액에 대해서 발광강도를 측정하여 4개의 측정점으로 부터 얻은 직선을 외삽하여 각 분석대상원소의 농도를 산출한다. 표준곡선법과 동일하게 백그라운드 보정을 한다.

5장. 중금속

5.1. 크롬(Cr)

 가. 유도결합플라즈마법(inductively coupled plasma, ICP)

   5.4.납(Pb) 가. 유도결합플라즈마법(inductively coupled plasma, ICP)에 따라 시험한다.

 나. 비색법(Diphenyl Carbazide 법)

  1) 기구

    분광광도계, 자제 크루시블, 전기로, 메스 플라스크

  2) 시약의 조제

   가)크롬 표준용액 : 크롬을 4.1. 칼슘(Ca) 가. 원자 흡광광도법(Atomic absorption spectrophotometry) 1) 시약의 조제에 따른다.

   나) 디페닐 카르바지드(Dipheyl carbazide)용액 : 디페닐 카르바지드 0.5 g을 아세톤 100 mL에 용해한다.

  3)시료액 조제 : 4.1. 칼슘(Ca) 가. 원자 흡광광도법(Atomic absorption spectrophotometry) 2) 시료액의 조제에 따른다.

  4) 측정

    시료액 20～30 mL(크롬으로 50 μg이하)를 50 mL 메스플라스크에 취하고 황산(1:6) 2 mL, 디페닐 카르바지드 용액 1 mL를 가하고 표선까지 증류수로 채우고 혼합하여 30분간 방치한 후 공시험액을 대조액으로 하여 파장 540 nm에서 흡광도를 측정한다. 따로 표준용액을 측정하여 검량선을 작성 계산한다.

  5) 계산

  크롬(ppm) =   시료액의흡광도 / 1ppm 기준 흡광도×희석배수   

              ────────────────────────

                시료중량(g)                                   

5.2. 불소(F)

 가. 용량법

  1) 기구

   삼구플라스크, 리비히냉각관, 전압조절기, 뷰렛, 메스플라스크, 맨틀히터 또는 알콜램프, 삼각 플라스크, 자석교반기, 

  2) 시약의 조제

   가) 0.04 N-질산토리움(Thorium nitrate)용액 : 12수염의 질산토리움 6.9637 g 또는 4수염의 질산토리움 5.5225 g을 증류수에 녹여 1,000 mL로한다.

   나) 0.05% 아리자린레드ㆍ에스(Alizarin redㆍS)지시약 : 아리자린레드ㆍ에스 0.1g을 증류수에 용해시켜 200 mL로 한다.

   다) 염산용액 : 농염산 1 mL를 증류수로 희석하여 250 mL로 한다

   라) 과염소산

   마) 규산

   바) 1% 수산화나트륨 용액 : 수산화나트륨 10 g을 증류수로 녹여 1,000 mL로 만든다.

  3) 증류

    시료 약 2 g(불소로서 2～6 mg정도)를 삼구플라스크에 넣고 규산 0.5 g과 과염소산 20 mL를 가하고 직경 3 mm정도의 초자구(硝子球) 5개를 넣은 다음 리비히(Liebig) 냉각기(90 cm)를 연결하고 135～140℃에서 증류하여 250 mL를 받는다. 단, 유기물이 많은 시료는 10 g 정도를 포화 수산화칼슘 용액으로 충분히 적시고 500℃이하에서 24시간 회화한 후 삼구플라스크에 옮긴다.

  4) 적정

    증류액 중에서 50 mL를 삼각 플라스크에 취하여 아리자린레드ㆍ에스 지시약 5방울을 넣으면 황색이 되는데 이때 1% 가성소다 용액을 가하여 적색이 되게 하고 다시 염산 용액을 가하여 황색으로 변하게 한 후 2 mL를 더 가하고 0.04 N-질산토리움용액으로 적정하여 적색으로 변할 때를 종말점으로 한다. 이때 공시험(Blank test)도 실시한다.

  5) 계산

  불소(ppm) =   (a-b) ×  전체증류액(mL)  × f × 0.00076 ×   1            × 106  

                        ─────────                  ────────        

                          사용증류액(mL)                      시료중량(g)           

* a : 0.04 N-질산토리움용액 적정치(mL)

  b : 공시험시 0.04 N-질산토리움 용액적정치(mL)0.00076 = 0.04 N-질산토리움용액 1 mL에 해당하는 불소의 량(g)(18.9984×0.04×0.001)f : 0.04 N - 질산토륨용액의 역가

 나. 이온메타(Ion meter)법

  1) 기구

    이온메터, 비이커, 자석교반기

  2) 시약의 조제

   가) 3M-초산소다(Sodium acetate)용액 : 3수염의 초산소다 408g을 정확히 취하여 증류수로 1,000 mL되게 한다. 단 용액의 pH가 7이 되도록 초산으로 맞춘다.

   나) 1.32M-구연산 소다 용액(Sodium citrate) : 2수염의 구연산소다 222g을 정확히 취하여 250 mL증류수에 녹인 후 과염소산 28 mL를 첨가한 후 1,000 mL로 만든다.

  3) 시료액의 조제

   가) 200 mL 비이커에 불소농도가 400 μg정도가 되도록 시료를 정확히 취한다

   나) 여기에 1N-염산 20 mL를 넣고 60℃정도로 가온 하면서 자석교반기로 20분간 교반 한다.

   다) 200 mL 메스플라스크에 50 mL 초산소다용액과 구연산소다용액 50 mL를 가한후 증류수로 표선까지 취한 용액을 시료액으로 한다.

  4) 측청

   가) 이온미터에 불소전극과 비교전극을 장치하고 저 농도의 불소용액(100ppm)에 담근 후 실온에서 안정시킨다.

   나) 시료액의 불소농도와 비슷한 농도의 표준용액을 100 mL 비이커에 일정량을 취하여 1N-염산 10 mL, 초산소다용액 25 mL와 구연산소다 용액 25 mL를 첨가하고 증류수로 일정량을 만든 후 교반기에서 최저속도로 서서히 저어주면서 전위차를 읽는다.

   다) 위와 같은 방법으로 표준용액의 전위값으로 표준방정식을 구한다.

   라) 시료액 일정량을 100 mL 비이커에 취하여 교반기로 서서히 저어 주면서 시료액의 전위값을 구한다.

  5) 계산

  불소(ppm) =   기울기값(ppm)×시료액의 전위값 ×희석배수   

              ───────────────────────

                시료중량(g)                                 

5.3. 비소(As)

 가. 유도결합플라즈마법(inductively coupled plasma, ICP)

  1) 시험용액의 조제

   가) 습식분해법 : 5.4.납(Pb) 가. 유도결합플라즈마법(inductively coupled plasma, ICP) 1) 시험용액의 조제 가) 습식분해법에 따른다.

    (1) 황산-질산법

    (2) 마이크로웨이브법

   나) 용매추출법 : 5.4.납(Pb) 가. 유도결합플라즈마법(inductively coupled plasma, ICP) 1) 시험용액의 조제 다) 용매추출법에 따른다.

  2) 측정

    이 방법은 아르곤 가스에 고주파를 유도결합방법으로 걸어 방전되어 얻어진 아르곤 플라즈마에 시험용액을 주입하여 목적원소의 원자선 및 이온선의 발광광도를 또는 질량값을 측정하여 시험용액 중의 목적원소의 농도를 구하는 방법이다. 표준용액과 시험용액 및 공시험용액을 ICP(유도결합플라즈마)에 주입하여 시험용액의 농도를 구한다.

5.4. 납(Pb)

 가. 유도결합플라즈마법(inductively coupled plasma, ICP)

  1) 시험용액의 조제

   가) 습식분해법

    (1) 황산-질산법

       시료(5～20 g)를 분해플라스크에 취해 물 50～70 mL, 질산 10～40 mL를 넣고 혼합하여 방치한다. 다음에 조용히 가열하여 격렬한 반응이 그치면 식힌 다음 황산1)~3) 5～20 mL를 넣고 다시 조용히 가열한다. 내용물이 암색이 되기 시작하면 질산 2～3 mL씩을 추가하면서 가열을 계속하여 내용물이 미황색～무색이 되었을 때 분해가 끝난 것으로 한다. 분해액을 식힌 후 물 30～50 mL, 포화수산암모늄용액 10～25 mL를 가해서 황산의 흰 연기가 발생할 때까지 가열하고 식힌 다음 물로 일정량으로 하여 시험용액으로 한다. 공시험용액에 대해서도 같은 조작을 하여 시험용액을 보정한다.

      주1) 분해가 용이한 시료의 경우 황산의 사용을 제한한다.

      주2) 난분해성 시료의 분석시 황산을 사용하여 유기물 및 휘발성분을 완전분해한다.

      주3) 난분해성 시료 중 납 분석시 황산을 사용하되 포화 수산암모늄을 사용 하여 회수한다.

    (2) 마이크로웨이브법

       시료 일정량 (0.1～0.5 g에 한함; 수분함량이 높은 시료의 경우 1～2 g)을 Microwave digestion system에 넣고 질산 등으로 처리하여 분해하고 메스플라스크 등에 옮겨 일정량(시료채취량에 따라 달라짐)으로 하여 시험용액으로 한다.

   나) 건식회화법

      시료(5～20 g)를 도가니, 백금접시에 취해 건조하여 탄화시킨 다음 450℃에서 회화한다.4) 회화가 잘 되지 않으면 일단 식혀 질산(1+1) 또는 50% 질산마그네슘용액 또는 질산알루미늄 40 g 및 질산칼륨 20 g을 물 100 mL에 녹인 액 2～5 mL로 적시고 건조한 다음 회화를 계속한다. 회화가 불충분할 때는 위의 조작을 1회 되풀이하고 필요하면 마지막으로 질산(1+1) 2～5 mL를 가하여 완전하게 회화를 한다. 회화가 끝나면 회분을 희석된 질산으로 일정량으로 하여 시험용액으로 한다. 

      주4) 회화보조제는 염산, 산화마그네슘, 탄산나트륨등을 사용하나 시험조작에 영향이 없을 때에만 사용하되 공시험용액에 대해서도 같은 조작을 하여 시험용액을 보정한다.

   다) 용매추출법

    (1) 시약 

     (가) MIBK(Methyl Iso-Buthyl Ketone) 또는 클로로포름

     (가) DDTC(Diethyl dithocatbamic acid), silver를 포함하지 않은 것

    (2) 시험조작

       시험용액(습식분해법 또는 건식회화법으로 분해한 시험용액) 및 공시험용액을 분액깔때기에 각각 10～50 mL 취한 후, 각각에 25% 구연산암모늄용액 2～10 mL 및 브롬티몰블루(BTB)시액 2방울을 가한 다음 액의 색이 황색에서 연한 녹색이 될 때까지 암모니아수로 중화하고 이에 40% 황산암모늄시액 2～10 mL 및 물을 가하여 일정량으로 한다. 여기에 10% DDTC 용액 1～5 mL를 넣고 흔들어 준 후 MIBK(또는 클로로포름) 20 mL를 가하여 심하게 진탕하여 정치하고 MIBK(또는 클로로포름)층을 취한다. 다시 MIBK(또는 클로로포름) 20 mL로 위의 과정을 되풀이 한 후 여액을 합한다. 분배액을 열판에서 80℃로 가열하여 용매를 모두 날려버리고 잔류물에 질산 7 mL, 과산화수소 1 mL를 넣고 다시 열판에서 가열하여 완전히 분해ㆍ건조시킨다. 잔류물은 1 N 질산용액으로 재용해하여 시험용액으로 한다5).

      주5) 표준용액에 대해서도 같은 조작을 하여 얻는다.

  2) 측정

    이 방법은 아르곤 가스에 고주파를 유도결합방법으로 걸어 방전되어 얻어진 아르곤 플라즈마에 시험용액을 주입하여 목적원소의 원자선 및 이온선의 발광광도를 또는 질량값을 측정하여 시험용액 중의 목적원소의 농도를 구하는 방법이다. 표준용액과 시험용액 및 공시험용액을 ICP(유도결합플라즈마)에 주입하여 시험용액의 농도를 구한다.

5.5. 수은(Hg)

 가. 기구  

   전기로, 직시천칭, 수은자동분석기, 자제크루시블, 마이크로피펫

 나. 시약의 조제

  1) 산화알루미늄 : 750℃ 전기로에서 2시간이상 가열 처리한 다음 데시케이터내에서 공기 중 수은이 오염되지 않도록 하여 방냉시킨다. 이하 "①시약"이라고 한다.

  2) 수산화칼슘, 탄산나트륨시약(1:1) : 무게비율로 1:1혼합하여 잘 섞고 적당량을 750℃ 전기로에서 2시간이상 가열 처리한 다음 데시케이터내에서 공기중 수은이 오염되지 않도록 방냉한다. 이하 "②시약"이라고 한다.

  3) 완충용액 : 염소(Cl)가 들어가지 않은 pH  6.86 완충용액을 사용한다.

 다. 시료처리

  1) 고체시료 : 750℃ 전기로에서 위 시약과 동일 처리한 보트에  ②시약을 깔고 그 위에 배합사료는 0.1g, 단미사료는 0.05g 취하여 깔고 ②시약으로 덮고 그 위에 ①시약을 깔고 다시 ②시약으로 덮는다.

  2) 액체시료 : 상기와 동일 처리한 보트에 ①시약을 깔고 그 위에 액상시료 100～1000 μL를 정확히 취한 다음 다시 ①시약을 덮고 그 위를 ②시약으로 덮는다.

 라. 방법

   수은전용분석기(Mercury atomizer)의 글라스 캡을 열고, 시료 처리보트를 밀어 넣어 캡을 닫은 다음 작동 스위치를 누르고, 측정량을 ng으로 기록한다. (다만, 동시험법의 원리를 이용한 기타의 장치 또는 자동ㆍ반자동기기를 사용할 수 있다).

 마. 계산

수은량(ppm) = 시료 측정량(ng) / 시료량(mg)

5.6. 카드뮴(Cd)

 가. 유도결합플라즈마법(inductively coupled plasma, ICP)

   5.4.납(Pb) 가. 유도결합플라즈마법(inductively coupled plasma, ICP)에 따라 시험한다.

5.7. 주석(Sn)

 가. 시험용액의 조제

  1) 습식분해법

   가) 황산-질산법시료(건조물로서 5～20 g에 상당하는 양)를 분해플라스크에 취해 물 50～70 mL, 질산 10～40 mL를 넣고 혼합하여 방치한다. 다음에 조용히 가열하여 격렬한 반응이 그치면 식힌 다음 황산 5～20 mL를 넣고 다시 조용히 가열한다. 내용물이 암색이 되기 시작하면 질산 2～3 mL씩을 추가하면서 가열을 계속하여 내용물이 미황색～무색이 되었을 때 분해가 끝난 것으로 한다. 분해액을 식힌 후 물 30～50 mL, 포화수산암모늄용액 10～25 mL를 가해서 황산의 흰 연기가 발생할 때까지 가열하고 식힌 다음 물로 일정량으로 하여 시험용액으로 한다. 공시험용액에 대해서도 같은 조작을 하여 시험용액을 보정한다.

   주1) 분해가 용이한 시료의 경우 황산의 사용을 제한한다.

   주2) 난분해성 시료의 분석시 황산을 사용하여 유기물 및 휘발성분을 완전 분해 한다.

   주3) 난분해성 시료 중 납 분석시 황산을 사용 하되 포화 수산암모늄을 사용하여 회수한다.

   나) 마이크로웨이브법시료 일정량 (0.1～0.5 g에 한함; 수분함량이 높은 시료의 경우 1～2 g)을 Microwave digestion system에 넣고 질산 등으로 처리하여 분해하고 메스플라스크 등에 옮겨 일정량(시료채취량에 따라 달라짐)으로 한다.

  2) 건식회화법

    시료(건조물로서 5～20 g에 상당하는 양)를 도가니, 백금접시에 취해 건조하여 탄화시킨 다음 450℃에서 회화한다. 회화가 잘 되지 않으면 일단 식혀 질산(1+1) 또는 50% 질산마그네슘용액 또는 질산알루미늄 40 g 및 질산칼륨 20 g을 물 100 mL에 녹인 액 2～5 mL로 적시고 건조한 다음 회화를 계속한다. 회화가 불충분할 때는 위의 조작을 1회 되풀이하고 필요하면 마지막으로 질산(1+1) 2～5 mL를 가하여 완전하게 회화를 한다. 회화가 끝나면 회분을 물로 적시고 염산 2～4 mL를 가하여 수욕상 또는 건조장치에서 건조한 다음 염산 1～2 mL를 가하여 가온해서 녹이고 불용물이 있으면 석면 또는 유리여과기로 여과한 다음 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.

   주4) 회화보조제는 염산, 산화마그네슘, 탄산나트륨등을 사용하나 시험조작에 영향이 없을 때에만 사용하되 공시험용액에 대해서도 같은 조작을 하여 시험용액을 보정한다.

  3) 용매추출법

   가) 시약

    (1) MIBK(Methyl Iso-Buthyl Ketone) 또는 클로로포름

    (2) DDTC(Diethyl dithocatbamic acid), silver를 포함하지 않은 것

   나) 시험조작시험용액 및 공시험용액을 분액깔대기에 각각 10～50 mL 취한 후, 각각에 25% 구연산암모늄용액 2～10 mL 및 브롬티몰블루(BTB)시액 2방울을 가한 다음 액의 색이 황색에서 연한 녹색이 될 때까지 암모니아수로 중화하고 이에 40% 황산암모늄시액 2～10 mL 및 물을 가하여 일정량으로 한다. 여기에 10% DDTC 용액 1～5 mL를 넣고 흔들어 준 후 MIBK(또는 클로로포름) 20 mL를 가하여 심하게 진탕하여 정치하고 MIBK(또는 클로로포름)층을 취한다. 다시 MIBK(또는 클로로포름) 20 mL로 위의 과정을 되풀이 한 후 여액을 합한다. 분배액을 열판에서 80℃로 가열하여 용매를 모두 날려버리고 잔류물에 질한 7 mL, 과산화수소 1 mL를 넣고 다시 열판에서 가열하여 완전히 분해ㆍ건조시킨다. 잔류물은 1 N 질산용액으로 재용해하여 시험용액으로 한다.주6) 표준용액에 대해서도 같은 조작을 하여 얻는다.

   주7) 주석 분석시 질산에 의한 침전물이 발생할 수 있으므로, 전처리 마지막 단계에 염산을 수 mL 가하여 침전물 생성을 방지한다.

 나. 측정

  1) 원자흡광광도법

    이 방법은 시험용액중의 금속원소를 적당한 방법으로 해리시켜 원자증기화하여 생성한 기저상태의 원자가 그 원자증기를 통과하는 빛으로부터 측정파장의 빛을 흡수하는 현상을 이용하여 광전측정등에 따라 목적원소의 특정파장에 있어서 흡광도를 측정하고 시험용액중의 목적원소의 농도를 구하는 방법이다. 시료를 원자화하는 일반적인 방법은 화염방식과 무염방식이 있다. 시험용액 및 공시험용액을 그대로, 혹은 희석 또는 농축한 다음 원자흡광광도계에 주입하여 흡광도를 구하고 따로 표준용액 및 이의 공시험용액에 대해서도 각각 시험용액의 경우와 같은 조작을 해서 검량선을 작성하여 시험용액의 농도를 구한다.

  2) 유도결합플라즈마법

    이 방법은 아르곤 가스에 고주파를 유도결합방법으로 걸어 방전되어 얻어진 아르곤 플라즈마에 시험용액을 주입하여 목적원소의 원자선 및 이온선의 발광광도를 또는 질량값을 측정하여 시험용액 중의 목적원소의 농도를 구하는 방법이다. 표준용액과 시험용액 및 공시험용액을 ICP(유도결합플라즈마)에 주입하여 시험용액의 농도를 구한다.

6장. 비타민

6.1. 비타민 A

 가. 분광광도계법(Carr Price)

  1) 기구

    분광광도계, 수조(Water bath), 환류냉각장치, 분액여두, 유리여과기(G3), 메스실린더, Chromatography tube

  2) 시약의 조제

   가) 수산화칼륨 용액 : 특급 수산화칼륨 용액(KOH) 50 g을 증류수 50 mL에 용해

   나) 에틸에테르 : 특급품

   다) 에틸 알콜 : HPLC용

   라) 무수 황산나트륨 : 특급 무수 황산나트륨(Na2SO4)

   마) 석유에테르 : HPLC용

   바) 크로로포름 : HPLC용

   사) 3염화안티몬 용액 : 특급 삼염화안티몬 용액(SbCl3) 20 g을 크로로포름 100 mL에 용해하여 하룻밤 방치 후 무수 초산 2 mL를 가하여 콜크마개 또는 폴리에틸렌 마개로 막고 암소에 보관하는데 이 용액은 흡수성이 강하고 변질되기 쉬우므로 조제 후 1주일 이내에 사용해야 한다.

  3) 시료액의 조제

    시료 2～3 g을 검화 플라스크에 취하고 수산화칼륨용액 4 mL와 에틸알콜 25 mL를 가하고 환류냉각기에 연결하여 30분간 가열하여 검화시킨 후 흐르는 물로 냉각한다. 상등액을 분리하여 분액여두에 넣고 잔사는 유리여과기(G3)로 흡인 여과하고 다시 검화 플라스크에 에틸에테르 40 mL로 씻어 유리여과기에 넣어 흡인여과 하여 여과액을 분액여두에 넣고 초자 여과기에 에틸에테르 10 mL를 넣고 흡인여과 하여 분액여두에 합하고 다시 분액여두에 증류수 45 mL를 가하여 진탕한 후 수층을 분리하여 다른 분액여두에 분리하고 수층은 에틸에테르 30 mL씩 2회 추출하여 제1분액 여두의 에틸에테르에 합한다. 

    에틸에테르가 들어있는 분액여두에 증류수 30 mL를 넣어 서서히 흔들어 섞은 다음 수층은 분리하여  제거하고 다시 증류수 40 mL씩 5～6회 씻어 수층을 제거(페놀프탈레인 지시약의 반응이 없을 때까지)하고 에틸에테르층을 갈색 비커에 옮기고 분액여두는 에틸에테르 10 mL로 2회 씻어 넣는다. 무수 황산나트륨 5 g을 가하여 탈수시키고 가지형 플라스크에 에틸에테르층을 옮기고 무수 황산나트륨은 에틸에테르 10 mL씩 2회 씻어 플라스크에 넣은 다음 에틸에테르층을 50℃의 수조에서 증발시키고 소량이 되면 불활성가스로 완전히 증발시킨 후 석유에테르 2～3 mL에 용해시켜 시료액으로 한다. 크로마토그래피용 알루미나(Alumina)를 수세(水洗) 후 샤레에 넣고 150℃로 항량이 될때까지 건조시켜 보관한다. 

    그 1 g에 대하여 0.15 mL의 증류수를 가해서 잘 흔들어 섞는다. 이 알루미나를 석유에테르로 섞어서 미리 석유 에테르로 세정(洗靜)한 흡착관(chromatography tube)에 따라 넣고 0.5×6.0 cm의 층을 만든 다음 석유에테르 10 mL를 넣고 흘리는데 알루미나층 위에 석유에테르층이 1 cm가 되면 시료액을 천천히 넣는다. 액층이 알루미나층위에 1 cm가 되면 갈색 가지형 플라스크를 받치고 석유에테르 10 mL씩 2회 넣어 카로틴(carotin)을 분리시켜 카로틴 정량용 검액으로 한다.

    다음에 수기를 갈아서 10%(V/V)의 에틸에테르를 포함한 석유에테르를 20～30 mL를 유입하여 비타민 A를 용출시킨다. 비타민 A용액을 감압 감온하여 용액을 완전히 휘발시키고 플라스크에 클로르포름 2～3 mL씩 넣어 비타민 A를 용해시켜 메스 플라스크에 받고 클로르포름으로 표선까지 맞추어 검액으로 한다.

  4) 발색과 측정

    위에서 얻은 검액 0.3 mL를 분광광도계용 cell에 넣고 3염화안티몬용액 3 mL를 신속히 가하고 최대흡광도를 알아낸다. 이 때 파장은 620 nm이며 대조액으로는 증류수를 사용한다. 비타민 A 표준액 5, 10, 15, 20 IU를 만들어 시료와 동일한 방법으로 흡광도를 측정하여 검량선을 작성한다.

  5) 계산

  비타민 A(IU/100 g) =    시료액의 흡광도       ×  V   × 100  

                        ────────────  ───        

                           표준액 1IU당 흡광도      W           

V : 검액의 전량

W : 시료무게(g)

 나. HPLC 법

  1) 시약의 조제

   가) 초산레티놀표준액 : 초산레티놀 100만IU를 100 mL 갈색메스플라스크에 2-프로판올로 정확히 희석하여 초산레티놀표준원액을 조제한다.(공기를 질소로 치환하여 보존한다) 사용시, 표준원액의 일정량을 2-프로판올로 정확히 희석한다. 1 mL중에 5, 10, 15, 20 비타민 A IU를 함유하는 초산레티놀표준액을 조제함과 동시에 보정계수를 산출한다.

   나) 팔미틴산레티놀표준액 : 팔미틴산레티놀 100만 비타민 A IU를 100 mL의 갈색메스플라스크에 2-프로판올로 정확히 희석하고, 1 mL중에 5, 10, 15, 20 비타민 A IU를 함유하는 각 팔미틴산레니놀표준액을 제조함과 동시에 보정계수를 산출한다.

   다) 보정계수 산출 : 1 mL 중에 초산레티놀 또는 팔미틴산레티놀로써 10 비타민 A IU를 함유하는 표준액에 대하여 10 mm셀을 사용하여, 2-프로판올을 대조액으로 326 nm에서의 흡광도를 측정한다. 다음식과 같이 초산레티놀 또는 팔미틴산레티놀표준액의 보정계수를 산출한다.

f = A × 1.9

f : 초산레티놀 또는 팔미틴산레티놀표준액의 보정계수

A : 초산레티놀 또는 팔미틴산레티놀표준액의 326 nm에서의 흡광도

  2) 방법

   가) 추출 : 분석시료 1～2 g을 정확히 칭량하여 50 mL의 갈색공전삼각플라스크에 넣는다. 디메틸설폭시드 20 mL를 가하여 15분간 진탕한 후, 에탄올 180 mL로 300 mL의 갈색공전삼각플라스크에 옮겨 10분간 진탕하여 추출한다. 추출액을 갈색공전원심분리관에 넣고 3000 rpm으로 5분간 원심분리하고, 상등액을 0.5 μm 멤브레인필터로 여과한 다음 기기분석용 시료용액으로 한다.

   나) 기기분석예(HPLC)

      검출기 : 자외선흡광광도검출기

      파장: 326 nm

      컬럼 : C18(4 × 200 mm, 5 μm) 또는 이와 동일한 것

      이동상 : 메탄올

      유속 : 1.0 mL/min

   다) 계산

       측정된 크로마토그램에서 피크의 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시료중의 초산레티놀 또는 팔미틴산레티놀량을 산출하여 초산레티놀 및 팔미틴산레티놀의 함량을 비타민 A 분말 또는 비타민 A류 함량으로 한다.

6.2. 프로비타민 A(β-카로틴)

 가. 분석원리

    시료 중에 포함되어 있는 프로비타민A를 아세톤-헥산 혼합용액으로 추출 후 흡광도를 측정하여 정량하는 방법이다.

 나. 장치 

    속시렛 장치, 분광광도계, 유리칼럼, 메스플라스크, 수조, 환류냉각장치, 분액여두, 초자여과기(G3), 메스실린더

 다. 시약 및 시액

  1) 아세톤

  2) 헥산 : 특급품

  3) 아세톤 - 헥산(1:9) 혼합액

  4) 아세톤 - 헥산(3:7) 혼합액

  5) 무수황산나트륨

  6) Magnesia - 규조토(1:1) 혼합물

  7) 수산화칼륨용액 : 특급수산화칼륨(KOH) 50 g을 증류수 50 mL에 용해

  8) 에틸에테르 : 특급품

  9) 에틸알콜 : HPLC 급

  10) 석유에테르 : HPLC 급

  11) β-카로틴 표준액 : β-카로틴 10 mg을 아세톤-헥산(1:9) 혼합액으로 용해하여 100 mL로 하여 냉암소에 보관한다.

 라. 시험용액의 조제 및 방법

    시료 1 ∼ 4 g을 속시렛 장치에 넣어 아세톤-헥산(1:9)혼합액 200 mL로 3시간 추출하고 실온까지 방냉시킨 후 플라스크에 옮긴다. 유리칼럼(유리여과기가 달린 20 × 400 mm)에 Magnesia-규조토(1:1) 혼합물로 10 cm 채우고 그 위에 무수황산나트륨을 1 cm 채운 다음 추출액을 칼럼에 넣어 흡착시키고 아세톤-헥산(1:9) 혼합액 50 mL를 가하면 색층이 형성되며, 카로틴은 녹고 xanthophyll 과 chlorophyll 등은 칼럼에 남는다. 모든 침출액은 200 mL 메스플라스크에 모아서 아세톤-헥산(1:9) 혼합액으로 200 mL되게 하여 분광광도계 파장 450 nm에서 흡광도를 측정하거나 비타민A 분석시 분리된 카로틴의 흡광도를 측정하는데 먼저 β-카로틴 용액을 0, 1, 2, 5, 10 μg/mL를 측정하여 검량선을 작성 계산한다.

 마. 계산

  β-카로틴(μg/g) =    C × a  × D  

                      ─────      

                        S             

C : 검량선에 의하여 결정된 카로틴의 양(μg/mL)

a : 최종 침출용액의 양(mL)

D : 희석배수

S : 시료량(g)

6.3. 비타민 B1(Thiochrome 형광법)

 1) 원리

    N/10황산으로 시료중의 비타민 B1을 침출하여 Takadiastase 가수분해로 결합태의 비타민 B1을 유리태로 한 후에 permutit 흡착 column 으로 분리하여 적혈염으로 B1을 산화시키면 강한 형광(螢光)을 내는 Thiochrome이 되는데 이것의 형광을 측정하여 B1을 정량한다.

 2) 기구

    형광광도계, 항온기, 흡착 Column, 비이커, 메스실린더, 메스피펫, 메스플라스크, 공전 원침관

 3) 시약

  가) Permutit : 시판품을 체로 쳐서 50～80 mesh의 입도를 골라 100 g을 500 mL삼각플라스크에 넣고 물 400 mL를 가해 약 15분간 교반정치 후에 상층은 버리고 상층액이 투명해질 때까지 반복한 뒤 3% 초산용액 약 400 mL를 넣어 15분간 교반 정치후 상층버림 조작을 2회 한다. 25% KCl 용액 300 mL를 넣고 boiling water bath 중에서 교반 하되 약 25분후 수욕에서 꺼내 정치한다. KCl용액을 제거하고 다시 3% 초산 400 mL를 가하여 먼저와 같이 2회 세정하고 물로 염소 이온 반응이 없을 때까지 세정한다. 대형 샤레에 넣어 100℃이하의 oven에서 건조하여 흡착용으로 한다. Vitachange는 시약 그대로 사용한다.

  나) 25% KCl용액 : 특급 KCl 250 g을 0.1 N HCl로 1L로 한다.

  다) 3% 초산용액 : 빙초산 30 g을 H2O로 1L로 한다.

  라) 1% 적혈염 용액 : K3Fe(CN)6 3H2O 1 g을 H2O로 100 mL로 하여 냉장고 속의 갈색병내에 보관한다.

  마) 30% NaOH용액

  바) Isobutyl alcohol : 무형광의 시약

  사) 무수 황산나트륨 : 무형광의 시약

  아) Diastase용액 : 5% Takadiastase 수용액을 만들어 빙초산 2～3방울을 가하고 다시 산성백토 0.2 g을 넣고 3000 rpm으로 15분간 원심분리하여 그 상등액을 사용한다.

  자) N/10 H2SO4용액

  차) 4M NaOAC용액 : 결정초산나트륨 544 g을 H2O로 1 L로 함

  카) Vit B1 표준액 : B1 염산염의 결정 100 mg을 취하여 물에 녹여 빙초산으로 pH 2로 한 후 1L로 희석한 뒤 용도에 따라 농도를 조절한다.

 4) 조작

  가) 침출 : 시료 1～10 g(B1으로서 5-50 μg)을 달고 분쇄를 요하는 것은 N/10 H2SO4 10 mL를 가하여 유발로 마쇄하고 N/10황산 60 mL 써서 100 mL 메스플라스크에 옮겨 잘 흔들어 섞는다. 4 M 초산나트륨 용액을 적하하여 pH 4～5로 하고 5% Takadiastase용액 5 mL를 가한 다음 Toluene 5～6 방울을 넣고 38～40℃의 incubator 내에 하룻밤 방치한다. 물로 100 mL 표선까지 채워 잘 흔들어 섞고 건여과지 (No.2)로 여과한다.

  나) 흡착 column준비 : 흡착관에 소량의 물을 유입하고 glass wool을 작고 둥글게 하여 유리봉으로 흡착관에 밀어 넣고 permutit 1.3～1.5 g을 비이커에 넣고 물 20 mL를 가해 교반 후 기포를 제거하고 H2O와 같이 흡착관에 유입하고 cock를 열어 H2O를 permutit 상단까지 유출시키고 3% 초산 10 mL를 넣고 3초에 1방울씩 적하시킨다. 액층이 permutit 상단까지 오면 다시 물 20 mL를 붓고 똑같이 세정한다.

  다) 흡착 : 흡착관에 침출량 10～25 mL(Vit B1 0.2～4.0 mcg)를 정확히 취하여 가만히 주입하고 cock를 열어 3초에 1방울씩 적하하여 B1을 permutit층에 흡착시킨다. 침출액이 column 상단까지 달했을 때 pH 4.5의 산성수(H2O 100 mL + 10% HCl 3 방울 정도) 5 mL를 가해 column 내부를 씻는다. 끊는 물을 column 상단 0.5 cm 정도까지 넣고 1초에 1방울씩 적하하되 3회 반복하여 B1 이외의 형광물질을 제거하고 cock를 막는다.

  라) column 아래 수기를 25 mL flask로 바꾸고 column이 아직 뜨거울 때 비등 25% KCl 용액 10 mL를 가해 1초 1방울씩 적하 한다. 비등 KCl 염산용액 8 mL 다시 7 mL를 주입하고 용출액의 전량이 거의 25 mL가 되면 cock를 막고 실온까지 방냉하여 물로 정확히 25 mL로 한다.

  마) 산화 : Vol-flask의 액으로부터 정확히 5 mL씩 마개 있는 시험관에 넣어 각각 A, B, C라 하고 A에는 비타민B1 표준용액(μg/mL) 1 mL, B와 C는 물을 1 mL씩 가하여 혼합하고 A와 B에 1% 적혈염 0.3 mL, C에 물 0.3 mL를 가하고 A, B, C에 30% NaOH 3 mL씩 넣고 30초간 흔들어 섞는다. Isobutanol 10 mL씩 가해 마개를 막고 세차게 100회 진탕한 다음 무수황산나트륨 2 g을 넣고 다시 100회 진탕한 뒤 정치한다.

 5) 측정과 계산

    시험관 내의 액이 투명하게 되면 Isobutanol 층을 형광광도계의 Cell에 옮겨 A(첨가 실험용)를 100%로 하여 B(주검용) C(blank test) 각각의 형광도를 측정한다. (여기파장 365 nm 분석광 파장 455  nm)

  V B1(μ/100 mg) =   FB - FC   ×  25  ×  100   ×  100   

                    ──────  ───  ────  ────

                      FA - FB       5       a         w     

FA : A의 값(보통100)a : 흡착시킨 검액량

FB : B의 값w : 시료채취량(g)

FC : C의 값

6.4. 비타민 B2

 1) 원리

    비타민 B2는 alkali 상태에서 광을 조사하면 비타민 B2 자체의 형광보다 훨씬 강한 형광을 내는 Lumiflavin으로 변한다. 이 광 분해액을 산성으로 하여 Chloroform과 진탕하여 Lumiflavin을 크로로포름층에 이행시켜 형광을 측정하여 B2를 정량한다. 또한 B2는 산성에서는 Chloroform에 불용이므로 미리 산성 Chloroform 처리로서 Chloroform 가용성의 다른 형광 물질을 제거 가능하며 B2와 Lumiflavin은 다같이 산성에 대해 저항성이 강하므로 산성 KMnO4 용액에 의한 산화로서 기타 형광물질을 제거할 수 있는 점을 이용한 방법이다.

 2) 기구

    형광광도계, 항온기, 메스 플라스크, 공전 원침관, 메스 실린더, 메스 피펫, 원심분리기, 광 분해장치

 3) 시약의 조제

  가) 2 N 황산

  나) 1 N NaOH 용액

  다) 빙초산(glacial acetic acid) 

  라) 4% KMnO4 용액

  마) 3% 과산화수소 : 특급품(30%)를 10배 희석

  바) Chlorform(CHCl3) : 무형광 시판품을 재증류

  사) Vit. B2표준용액 : Vit. B2표준품 100 mg을 정취하여 초산성수로 갈색 메스플라스크에 넣고 온수 중에서 서서히 가온하여 녹이고 실온까지 방냉한다 초산산성수(0.02 N)로 1 L로 한다 용도에 따라 농도를 조절한다.

 4) 조작

  가) 침출 : 시료의 일정량을 달아(지질이 많으면 미리 ether로 탈지)소량의 물을 가해(Vit. B2함량이 50-100 μg 100 mL정도) 80～90℃ 수욕 중에서 교반하여 15～20분간 침출하고 2 N H2SO4를 1/6용 가하여 재차 15분간 침출한다.(전분이 많은 것은 Diastase 가해 37～40℃에 하룻밤 방치) 실온까지 방냉하여 물로 일정용량으로 하고 여과하여 침출액으로 한다 침출액 20～50 mL를 공전원침관에 넣어 Chloroform 20 mL가해 강하게 진탕한 뒤 300 rpm 10분간 원심분리하고 하층의 Chloroform 을 제거하되 이 조작을 3회 반복한다.

  나) 광분해 : 원심분리 후 상층용액으로부터 5 mL씩(Vit. B2로 1 mμg정도) 3개의 마개 있는 시험관에 취하고 각각 A, B, C로 한다. A(첨가실험용)에는 Vit. B2 표준용액(1 μg/mL) 1 mL를 넣고, B(주검용), C(blank)에는 H2O 1 mL씩 넣어 혼합한다. 3개의 시험관에 1N NaOH용액 3 mL씩 넣고 A, B는 1시간 광을 조사하고 (백색 형광등 20 cm 상방) C는 암실에 방치한다.

  다) 산화 : A, B, C를 꺼내 빙초산 0.3 mL씩 넣어 산성으로 하고 4% KMNO4용액을 청색이 될 때까지 가하고 다음에 3% H2O2를 가하여 과잉의 KMNO4 환원 탈색한다. 각 시험관에 클로르포름 10 mL씩 넣고 강하게 2분간 흔들어 섞은 후 정치한다. 잘 분리되지 않으면 원심침전 후 위의 수층을 제거한다.

 5) 측정 및 계산

    클로르포름층을 형광광도계 Cell에 옮겨 여기광 365 nm 분석광에서 A, B, C의 형광도를 측정한다.

  시료 중 B2 함량 =   FB - FC   ×  100   ×  100   

                    ──────  ────  ────

                      FA - FC       5         w     

FA = A의 형광 강도 (보통 100으로 한다)

FB = B의 형광 강도 (보통 100으로 한다)  

FC = C의 형광 강도 (보통 100으로 한다)

a = 침출액량 (mL)

w = 시료채취량(g)

6.5. 비타민 B6

 가. 고속액체크로마토그래프에 의한 정량법

  1) 시액조제

    50 mM 인산나트륨용액 : 인산나트륨 6.0 g을 증류수에 녹이고 염산으로 pH 2.5로 조절한 후 전량을 1 L가 되게 한다.

  2) 표준용액의 조제

   가) 피리독신염산염 표준물질 5 mg을 정밀히 취해 50 mL 부피플라스크에 넣는다. 

   나) 표준원액을 증류수로 적당히 희석하여 표준용액을 만든다.

  3) 시험용액의 조제

   가) 시료 적당량을 취하여 마쇄기를 이용하여 잘게 부순 후 적당량을 취한다.

   나) 테스트튜브에 넣고 증류수 25 mL을 넣는다.

   다) 30분 동안 초음파 추출 한다.

   라) 원심분리후 상등액을 50 mL 부피플라스크에 넣는다.

   마) 나)～라)의 방법을 1회 반복한다.

   바) 증류수를 넣어 표선까지 맞춘다.

   사) 이 액을 0.45 μm 멤브레인필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

  4) 시험조작

   가) 고속액체크로마토그래프의 측정 조건(예)

┌──────┬───────────────────┐

│항목        │조건                                  │

├──────┼───────────────────┤

│주입량      │10 μL                                │

├──────┼───────────────────┤

│칼럼온도    │35℃                                  │

├──────┼───────────────────┤

│이동상      │50 mM 인산나트륨용액(pH 2.5)          │

├──────┼───────────────────┤

│검출기 파장 │여기파장 : 290 nm , 측정파장 : 396 nm │

├──────┼───────────────────┤

│유량        │1.0 mL/분                             │

└──────┴───────────────────┘

   나) 계산

  비타민 B6 함량        =   S   ×  a × b          ×  100   

  (피리독신, mg/100 g)            ─────────  ────

                                    시료채취량(g)       1000  

S : 시험용액중의 비타민 B6(피리독신)의 농도(μg/mL)

a : 시험용액의 전량(mL)

b : 시험용액의 희석배수 

6.6. 비타민 B12

 가. 분석원리

    시료 중에 포함되어 있는 비타민 B12(Cyanocobalamin)를 인산완충용액으로 추출 후 액체크로마토그래프를 이용하여 정량 분석하는 방법이다.

 나. 장치

    액체크로마토그래프-자외부검출기(UV photometric detector)를 사용한다.

 다. 시약 및 시액

  1) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

  2) 5 mM 인산완충용액 : 인산이수소칼륨(KH2PO4) 0.68 g을 증류수에 녹이고 전량을 1 L가 되게 한다.

  3) 클로로포름, 아세토니트릴 : HPLC 급

  4) 표준용액의 조제

   가) 표준원액 : 비타민 B12(Cyanocobalamin)을 5 mM 인산완충용액에 녹여 표준원액 (100 μg/mL)을 조제한다.

   나) 표준용액 : 표준원액을 증류수로 적당히 희석하여 표준용액을 만든다.

 라. 시험용액의 조제

  1) 시료 적당량을 취하여 마쇄기를 이용하여 잘게 부순 후 5 mM 인산완충용액을 가하여 10분간 초음파 진탕기로 추출한 후 50 mL로 맞춘다.

  2) 21,000 rpm에서 원심분리한다. 

  3) 분리 후 중간층을 취해서 21,000 rpm에서 다시 원심분리하고, 중간층을 시험관에 옮겨 클로르포름 3 mL을 첨가하여 지방층을 제거(2,000 rpm)한 물층을 다시 21,000 rpm에서 10분간 원심분리한다.

  4) 마지막으로 맑은 액층을 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다. 

 마. 시험조작

    액체크로마토그래프의 측정 조건

┌──────┬───────────────┐

│항목        │조건                          │

├──────┼───────────────┤

│칼럼        │C18 (4.6 × 250 mm, 5 μm)    │

├──────┼───────────────┤

│칼럼온도    │40℃                          │

├──────┼───────────────┤

│이동상      │아세토니트릴 · 증류수 (8 : 2)│

├──────┼───────────────┤

│검출기 파장 │450 nm                        │

├──────┼───────────────┤

│유속        │0.8 mL/분                     │

├──────┼───────────────┤

│주입량      │10 μL                        │

├──────┼───────────────┤

│머무름 시간 │13.31분                       │

└──────┴───────────────┘

 바. 계산

  비타민 B12(μg/100 g) =   C ×    a×D  × 100  

                                  ────        

                                    S             

C : 시험용액중의 비타민 B12의 농도(μg/mL)

a : 추출용매의 양(mL)

D : 희석배수

S : 시료량(g)

6.7. 비타민 C

 가. 액체크로마토그래피에 의한 정량

  1) 장치 액체크로마토그래프 : 자외부검출기를 사용한다.

  2) 시약 및 시액

   가) 10% 메타인산용액：메타인산 10 g을 물에 녹여 100 mL로 한다. 불용물이 생기는 경우 여과하여 사용한다. 냉장고에서 일주일까지 보관할 수 있다.

   나) 5% 메타인산용액：10% 메타인산용액을 물로 2배 희석한다. 사용시 조제한다.

   다) 표준용액의 조제 : 아스코르빈산 10.0 mg을 정밀히 달아, 5% 메타인산용액에 녹여 100 mL로 한 것을 표준원액(100ppm)으로 한다. 필요한 경우 표준원액에 5% 메타인산용액을 넣어 원하는 농도로 희석하여 사용한다. 사용시 조제한다.

  3) 시험용액의 조제

    검체 일정량(비타민 C 함량이 50 mg/100 g 이상인 경우 2 g 정도, 10 mg～50 mg/100 g인 경우 5～10 g 정도를 검체로 한다)을 정확히 달아, 동량의 10% 메탄인산용액을 가하여 10분간 현탁시킨 후 적당량의 5% 메탄인산을 넣어 균질화한다. 균질화된 검체를 100 mL 메스플라스크에 옮기고 소량의 5% 메탄인산용액으로 용기를 씻은 후 메스플라스크에 합하여 100mL로 한다. 그 후 3,000 rpm에서 10～15분간 원심분리를 행하여 상등액을 취하고 5% 메탄인산용액으로 적당히 희석하여 시험용액으로 한다.

  4) 시험조작

   가) 액체크로마토그래프 조건

    (1) 칼럼：역상칼럼(Jascopack Fine Sil-NH2, Lichrosorb NH2, 조건을 달리하며, Zipax SAX, Vydac SAX. Partisil-10SAX, μ-Bondapak C18, μ-Bondapak/ CN, Pormaphase CPS등을 사용할 수 있다)

    (2) 이동상：0.05 M KH2PO4/아세토니트릴(60：40)

    (3) 유속：1.0 mL/분

    (4) 검출기： 자외부(UV) 검출기(254 nm)

  5) 정량시험

    시험용액 및 표준용액을 각각 10 μL씩 주입하여 얻은 피크의 넓이 또는 높이를 구하여 검량선을 작성한 후 시험용액의 비타민C의 농도(μg/mL)를 구하고, 다음 식에 의해 검체중 아스코르빈산의 함량(mg/100 g)을 산출한다. L-아스코르빈산 나트륨으로 환산하는 경우에는 L-아스코르빈산량에 계수 1.125를 곱한다.

  비타민 C 함량(mg/100 g)＝   S ×  a × b          ×  100   

                                  ─────────  ────

                                    검체채취량(g)       1000  

S：시험용액중의 아스코르빈산의 농도(μg/mL)

a：시험용액의 전량(mL)

b：시험용액의 희석배수

6.8. 비타민 D

 가. 분석원리

    시료를 비누화하여 헥산으로 추출하고 그 추출물을 역상칼럼을 이용하여 분취하고 농축하여 액체크로마토그래프를 이용하여 정량 분석하는 방법이다.

 나. 장치

    액체크로마토그래프-자외부검출기(UV photometric detector)를 사용한다.

 다. 시약 및 시액

  1) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

  2) 헥산, 에탄올, 메탄올, 아세토니트릴 : HPLC 급

  3) 수산화칼륨, 페놀프탈레인 : 특급시약 또는 이와 동등한 것

  4) 무알데히드에탄올 : 에탄올 1 L에 50% 수산화칼륨(KOH)용액 5 mL 및 아연분말 5 g을 가해 약 2시간 환류 후 증류한다. 단, 처음 및 마지막 증류액 각각 10%는 버린다.

  5) 피로갈롤-에탄올 용액 : 피로갈롤 100 g을 취하여 에탄올에 녹여 1 L로 조제한다. 사용시 제조하며, 암소에 보관한다.

 6) 표준용액의 조제

    비타민 D2 또는 D3를 무알데히드에탄올에 녹인 후 적절하게 희석하여 표준용액으로 사용한다.

 라. 시험용액의 조제

  1) 시료가 고체인 경우에는 초고속마쇄기로 잘게 마쇄한다.

  2) 비타민 D를 2 IU(0.05 μg) 이상 함유한 시료를 증류플라스크에 정밀히 취한다.

  3) 피로갈롤-에탄올 용액 40 mL를 가하여 약하게 진탕 혼합한다.

  4) 90% 수산화칼륨 10 mL를 가하고주1) 환류냉각기를 부착하여 수욕중에서 30분간 가열 비누화주2)한다.

   ※ 주1) 지질함량에 따라 적당히 증감한다. 대개 지질 1 g이 수산화칼륨 1 g에 상당한다.

      주2) 비타민 D는 가열 검화시 일부분 가역적으로 열 이성화되어 previtamin D로 전환하는 것으로 알려져 있다. 이러한 열 이성화 반응은 습도에만 의존하는 가역반응으로, 습도가 일정하면 거의 대부분 일정한 비율로 진행한다. 따라서 본법에서는 비타민 D 표준용액에 대해서도 시료와 동일한 조건하에서 가열 검화한다. 이것에 따라 시료, 표준품 모두 같은 비율로 previtamin D로 이성화하기 때문에, 피크높이를 비교하는 것만으로 previtamin D로 이성화된 부분이 상쇄된다.

  5) 냉각 후 헥산 100 mL를 가하여 15초간 강하게 진탕 혼합한다. 침전이 생기면 이것이 가라앉을 때까지 방치한다.

  6) 250 mL 분액깔대기에 옮기고 1 N 수산화칼륨 100 mL을 가하여 15초간 강하게 진탕 혼합한다.

  7) 방치하여 층분리를 한 후 혼탁한 물층을 버린다.

  8) 헥산 층에 0.5 N 수산화칼륨 40 mL를 넣어 진탕 혼합한다.

  9) 헥산 층에 적어도 4회 매회 15초씩 물 40 mL로 세척한다. 세척액이 페놀프탈레인시액으로 알칼리반응을 나타내지 않을 때까지 세척한다.

  10) 분액깔대기를 수 분간 방치하여 최후의 물 한방울까지 분리하여 물층을 제거한다.

  11) 헥산 용액 80 mL를 농축플라스크에 취하여 40℃이하에서 용매를 감압농축 한다.

  12) 잔류물에 헥산 5 mL를 가하여 녹이고 이 액 4.5 mL를 환저플라스크에 취하여 감압농축 한다.

  13) 잔류물에 아세토니트릴 : 메탄올(1：1)용액 500 μL를 정확하게 가하여 녹인 것을 시험용액으로 한다.

 마. 시험조작

  1) 1단계-액체크로마토그래프 측정 조건

  ┌──────┬────────────────────┐

│항목        │조건                                    │

├──────┼────────────────────┤

│칼럼        │역상형 칼럼 (7.8 × 300 mm, 15∼20 μm) │

├──────┼────────────────────┤

│칼럼온도    │35℃                                    │

├──────┼────────────────────┤

│이동상      │아세토니트릴 · 메탄올 (1 : 1)          │

├──────┼────────────────────┤

│검출기 파장 │254 nm                                  │

├──────┼────────────────────┤

│유속        │2.0 mL/분                               │

├──────┼────────────────────┤

│머무름 시간 │D2 14.10분, D3 15.03분                  │

└──────┴────────────────────┘

  2) 2단계-액체크로마토그래프 측정 조건

  ┌──────┬─────────────────┐

│항목        │조건                              │

├──────┼─────────────────┤

│칼럼        │순상형 칼럼 (4.6 × 250 mm, 5 μm)│

├──────┼─────────────────┤

│칼럼온도    │35℃                              │

├──────┼─────────────────┤

│이동상      │0.4% 이소프로판올?헥산용액       │

├──────┼─────────────────┤

│검출기 파장 │254 nm                            │

├──────┼─────────────────┤

│유속        │1.6 mL/분                         │

├──────┼─────────────────┤

│머무름 시간 │D2 20.20분, D3 12.97분            │

└──────┴─────────────────┘

 바. 정량시험

  1) 1단계-액체크로마토그래프 : 시험용액 200 μL를 정확히 취해 제1단계 액체크로마토그래프에 주입하여 분획포집기로 비타민 D 획분을 분취한다(비타민 D 표준용액의 크로마토그램으로 비타민D가 검출기에 도달하는 시간을 측정하여 피크가 검출기에 도달하는 전후 30초 동안 분액을 받을 수 있도록 예비실험으로 분석조건을 준비한다).

  2) 2단계-액체크로마토그래프 : 1단계에서 얻은 비타민 D 획분의 용매를 감압농축하여 잔류물에 0.4% 이소프로판올·헥산 200 μL를 정확히 가하여 녹인다. 이 용액 100 μL를 정확히 취하여 2단계 액체크로마토그래프에 주입하여 얻어진 크로마토그램에 나타난 비타민D 피크의 높이 또는 면적을 측정한다.

 사. 계산

  비타민D(IU/100 g) =   As  ×  C   × 100  

                      ───  ───        

                        At      S           

At : 표준용액 피크의 높이 또는 면적

As : 시료에 대한 피크의 높이 또는 면적

C : 표준용액의 농도(IU/mL)

S : 시료량(g)

   ※ 비타민D의 함량은 비타민D2 또는 비타민D3를 구분하여 계산

6.9. 비타민 E

 가. 액체크로마토그래피에 의한 정량

  1) 장치 : 액체크로마토그래프 : 형광검출기를 사용한다.

  2) 시약 및 시액

   가) 에탄올：에탄올(특급) 1 L에 50% 수산화나트륨용액 5mL 및 아연분말 5g을 가해 약 2시간 환류후 증류한다.

   나) 헥산：스펙트로분석용

   다) 무수황산나트륨：무수황산나트륨(시약특급)을 120℃에서 2시간이상 가열시킨 후 데시케이터(실리카겔)에서 방냉하고 밀전하여 보존한다.

   라) α-, β-, γ-, δ-토코페롤：d-α-, d-β-, d-γ-,  d-δ-토코페롤 순품

   마) 표준용액의 조제

    (1) 토코페롤동족체 표준용액토코페롤 동족체(α-, β-, γ-, δ-토코페롤)을 각각 100 mg씩 정밀히 달아 헥산을 가해 녹여 100 mL로 한 후, 각각의 5 mL를 취하여 헥산을 가하여 25.0 mL로 한다. 공전 갈색유리병에 넣어 공기를 질소가스로 치환하여 밀전한 후 냉암소에 보존한다(1개월간 사용할 수 있다).

    (2) 토코페롤표준용액토코페롤 약 100 mg을 정밀히 달아 헥산을 가해 녹인 후 100 mL로 한다. 이 5 mL를 취해 헥산을 가해 25.0 mL로 한다. 공전 갈색유리병에 넣어 공기를 질소가스로 치환하여 밀전한 후 냉암소에 보존한다(1개월간 사용할 수 있다).

  3) 시험용액의 조제

   가) 일반검체의 경우토코페롤로서 약 0.2 mg을 함유하는 검체를 검화플라스크에 정밀히 달아(Wg) 에탄올 30 mL 및 10% 피로갈롤·에탄올 용액 1 mL를 가하고 이에 수산화칼륨용액(9→10) 3 mL를 가해 환류냉각관을 부착하여 비등수욕중에서 30분간 비누화한다. 비누화후 즉시 냉각하여 실온으로 한 후 물 30 mL를 가해 갈색분액여두에 옮긴다. 플라스크는 물 10 mL, 석유에테르 30 mL로 씻어 넣고 잘흔들어 혼합하여 방치한 후 석유에테르층을 분취한다. 물층은 석유에테르 30 mL씩으로 2회 추출하고 석유에테르액을 합하여 물 10 mL로 1회, 이어 물 50 mL로 페놀프탈레인시액이 분홍색이 되지 않을 때까지 씻는다. 분액여두중에서 물을 충분히 분리한 후 무수황산나트륨을 가해 탈수한 후 석유에테르층을 갈색플라스크에 옮긴다. 잔존하는 황산나트륨은 다시 석유에테르 10 mL씩으로 2회 씻고 씻은 액을 플라스크에 모두 합한 다음 전석유에테르추출액을 40～45℃에서 감압건고한 후 잔류물은 헥산 1.0 mL를 가하여 녹여 이를 시험용액으로 한다.

   나) 유지검체의 경우검체가 유지인 경우에는 위의 조작중 비누화조작을 생략하고, 액체크로마토그래프에 직접 주입할 수 있다. 이 경우에는 유지 약 1 g을 정밀히 달아(Wg) n-헥산으로 녹여 50 mL로 한 후, 그 중 일정량(D mL)을 취해 헥산으로 희석한 것을 시험용액으로 한다.

  4) 시험조작

   가) 액체크로마토그래프 조건

    (1) 칼럼：순상형 칼럼

    (2)  이동상：헥산?이소프로판올(98：2)

    (3) 유속：0.5 mL/분

    (4) 검출기：형광검출기(여기파장 298 nm, 측정파장 325 nm)

  5) 정량시험

     시험용액 1.0 mL에 토코페롤표준용액 1.0 mL를 가해(S) 이의 10 μL를 액체크로마토그래프용 칼럼에 주입하여 얻은 토코페롤동족체의 피크 넓이 또는 높이(Ptoc) 및 토코페롤의 피크 넓이 또는 높이(Pint)를 구한다. 또한 토코페롤동족체 각각에 대하여 각 토코페롤 표준용액 1.0 mL를 취해 이에 토코페롤표준용액 1.0 mL를 가해 이의 10 μL를 액체크로마토그래프에 주입하여 얻은 각 토코페롤 동족체의 피크 넓이 또는 높이(Pst-toc)와 토코페롤의 피크 넓이 또는 높이 (Pst-toc)를 구하고, 이들의 중량(mg)에서 토코페롤 동족체의 토코페롤에 대한 환산계수(F)를 구한다. 검체중 토코페롤 동족체의 함량(mg/100 g)은 다음 계산식에서 구한다.

   가) 계산

    (1) 일반검체의 경우

  토코페롤동족체의 양(mg/100 g) ＝   S  ×   Ptoc   ×  F   ×  100   

                                          ─────          ────

                                             Pint               W     

S：시험용액에 함유된 토코페롤의 함량(mg)

S＝V×C

V：검체에 첨가한 토콜표준용액의 양(mL)

C：검체에 첨가한 토콜표준용액의 농도(mg/mL)

Ptoc：시험용액중 토코페롤 동족체 피크의 넓이 또는 높이

Pint：시험용액중 토코페롤 피크의 넓이 또는 높이

F ：환산계수  

  Fα-δ  ＝  Cst-toc   ×  Pst-int   

            ──────  ──────

              Cst-int       Pst-toc   

Cst-toc：표준용액중 토코페롤 동족체의 농도

Pst-toc：표준용액중 토코페롤동족체 피크의 높이 또는 넓이

Cst-int：표준용액중 토코페롤의 농도

Pst-int：표준용액중 토코페롤 피크의 높이 또는 넓이

    (2) 유지검체의 경우

  토코페롤 동족체의 양(mg/100 g)  ＝  S   ×  50    ×  Ptoc    ×  F   ×  100   

                                            ────  ─────          ────

                                              D          Pint                W    

6.10. 비타민 K

 가. 고속액체크로마토그래프에 의한 정량법

  1) 시약

   가) Conditioning용액 : 이소프로판올을 이소옥탄에 녹여 0.01%가 되게 한다.

   나) 용출용매(이동상) : 디클로로메탄과 이소프로판올을 이소옥탄에 녹여 각각 15%, 0.02%가 되게 한다.

   다) 정제칼럼 : 60～200 메쉬 실리카 5.0 g (100℃ 오븐에서 하룻밤 동안 활성화시킴)을 정제 칼럼(1.0 cm id × 30 cm, 유리 칼럼)에 충전하고 그 위에 무수황산나트륨 2.0 g(100℃ 오븐에서 하룻밤 동안 활성화시킴)을 가한다.

  2) 표준용액의 조제

   가) 비타민 K1 표준물질주1) 이소옥탄에 녹여 5 μg/mL이 되게 한다.

   나) 검량선을 작성할 수 있도록 이소옥탄으로 희석하여 사용한다.

  3) 시험용액의 조제

   가) 시료 일정량주2)(비타민 K1으로서 3.5 μg함유)을 정확히 취한다.

   나) 정밀이 취한 시료를 500 mL 분액여두에 넣는다.

   다) 암모니아수 4 mL를 가한 후 60초간 흔들어 혼합한다.

   라) 위의 용액에 메탄올 60 mL을 가하여 혼합한 후 디클로로메탄 100 mL과 이소옥탄 50 mL 혼합액을 가하여 잘 흔들어 추출한다.

   마) 층 분리 후 하층액을 250 mL 증류플라스크에 옮긴다.

   바) 라)의 과정을 반복하여 하층액을 마)의 용액과 합한다.

   사) 위의 용액을 75℃ 이하에서 감압농축한다.

   아) 증류플라스크를 아세톤 20 mL로 씻고 다시 농축시킨다.

   자) 아)의 과정을 3회 반복 후 질소로 충전하여 차광한 채로 밀봉한다.

   차) 정제칼럼에 conditioning 용액 20 mL를 주입하고 천천히 용출 시킨다.

   카) 위의 잔류물에 conditioning 용액 10 mL로 녹인 후 칼럼에 통과시켜 비타민 K1을 흡착시킨다.

   타) conditioning 용매를 5 mL씩 2회에 걸쳐 증류플라스크를 씻어 정제칼럼에 통과시킨다.

   파) 시료의 지방 함량에 따라 용출용매를 칼럼에 통과시킨다. 시료의 지방함량이 0.72～0.80 g이면 100 mL의 용매를, 0.72 g 이하이면 예비실험을 통해 용출액의 양을 결정한다. 

   하) 용출액을 250 mL 증류플라스크에 받아 75℃ 이하로 감압 농축하고, 농축액을 이소옥탄 1～2 mL로 수 회 나누어 씻어 5 mL로 한다.

  4) 시험조작

   가) 고속액체크로마토그래프의 측정 조건주3)(예)

┌──────┬────────────────────────────┐

│항목        │조건                                                    │

├──────┼────────────────────────────┤

│주입량      │20 μL                                                  │

├──────┼────────────────────────────┤

│칼럼온도    │35℃                                                    │

├──────┼────────────────────────────┤

│이동상      │디클로로메탄과 이소프로판올을 이소옥탄에 녹여 각각 30%, │

│            │0.02%가 되게 한다.                                      │

├──────┼────────────────────────────┤

│검출기 파장 │254 nm                                                  │

├──────┼────────────────────────────┤

│유속        │0.5mL/분                                                │

└──────┴────────────────────────────┘

   나) 계산

  비타민 K1 함량(μg/100 g)   ＝  Cstd  × F  Hs    ×  V   ×  100   

                                            ────  ───          

                                              Hstd      S             

Cstd : 표준용액의 농도(μg/mL)

F : 비타민K1 표준용액에서 각각의 이성체의 비율

Hs : 시료의 비타민K1 각각의 이성체의 피크 면적 또는 높이

Hstd : 비타민K1 표준용액 각각의 이성체의 피크 면적 또는 높이

V : 시험용액의 희석배수(mL)

S : 시료 채취량(g)

(비타민 K1표준품은 trans와 cis 이성체를 함유하므로 각각의 이성체들을 분리하여 전체에 대한 cis형과 trans형의 피크 면적 비를 구한다.)

  5) 시험 주의사항

    주1) 비타민 K1 표준품은 trans와 cis 이성체를 함유하므로 각각의 이성체들을 분리하여 전체에 대한 cis형과 trans형의 피크 면적 비를 구한다.(불활성형 cis형을 ≤ 20 %정도 함유함). 암소에서 보관한다.

    주2) 지방함량이 적은 시료일 경우 지방을 검화할 필요는 없지만, 지방함량이 많은 시료는 검화를 하여 검화물질을 제거해야 한다.

    주3) column이 이동상에 평형이 되도록 이동상을 column에 흘려 보낸다(보통 column 부피의 50배). 순상컬럼은 역상에 비해 물질의 머무름시간이 이동상에 함유된 미량의 극성용매에 의해 변동폭이 크다. 특히 물이나 Methanol이 HPLC용 용매에도 적은양 함유하고 있는데 이들이 머무름 시간에 미치는 영향은 크므로 항상 같은 용매를 사용해야 하며, 주기적으로 순상 column은 regeneration 해야 한다. 비슷한 시료를 분획할 때는 시료간에 peak의 모양이 비슷하므로 분획하는데 큰 어려움이 없으나 시료간에 peak의 모양이 다를 때는 매번 표준물질을 사용하여 분획한다. 한 시료의 분획이 끝나면 충분히 이동상으로 column을 세척하여 다음의 시료에 전 시료가 오염되지 않도록 한다.

6.11. 비타민 K3(Menadione)

 가. 적용범위

    본 분석법은 보조사료로 사용하는 비타민제 비타민K3의 정량에 이용한다.

 나. 시약 및 표준용액의 제조

  1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

  2) 표준원액: 비타민 K3 표준물질을 메탄올에 녹인다(1,000 mg/L, 4℃ 이하 암소 보관)

 3) 표준용액: 표준원액을 각각 0.5, 1, 5, 10, 20, 50 ppm이 되도록 메탄올로 희석하고 검량선 작성에 사용한다.

 4) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

 다. 시험용액의 조제

  1) 추출

   가) 균질화한 시료 약 0.5∼1 g을 정밀히 취하여 10 mL 부피플라스크에 넣는다.

   나) Biggs-Szijarto* 용액 1 mL를 넣고, 메탄올로 정용하여 잘 섞은 후, 약 10분 간 정치시킨다.

    * Biggs-Szijarto: 유제품류 공인시험법에서 사용하는 용액

   다) 이 액을 원심분리관에 옮기고 PSA(Primary and Secondary Amine)  0.1 g을 넣고 잘 섞은 뒤 4℃, 14,000 rpm으로 10분 간 원심분리한다. 

   라) 상등액을 syringe filter(0.2 μm)로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

 라. 계산

  비타민 K3 (mg/kg) =   시험용액 중의 비타민 K3 농도 (μg/mL)   ×  총희석량(mL)    

                                                                  ─────────

                                                                    시료채취량(g)   

 마. 기기 분석 조건

  1) 고속액체크로마토그래피 분석 조건 

   (가) Mobile phase A : 0.01 M 인산이수소칼륨용액

   (나) Mobile phase B : 50% 메탄올

   (다) Gradient

        ┌────┬──┬──┐

│시간(분)│A(%)│B(%)│

├────┼──┼──┤

│0.0     │50  │50  │

├────┼──┼──┤

│2.0     │50  │50  │

├────┼──┼──┤

│20.0    │0   │100 │

├────┼──┼──┤

│24.0    │50  │50  │

├────┼──┼──┤

│30.0    │50  │50  │

└────┴──┴──┘

   (라) Flow rate: 1.3 mL/min

   (마) Column: Capcellpak C18 UG120 (4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

   (바) 컬럼온도: 35℃

   (사) Injection volume: 10 μL

   (아) 검출기 파장: UVD, 260 nm

   ※ 기기 분석 조건은 분석실 실정에 맞게 조정할 수 있다.

6.12. 비타민 K 화합물(MSB: Menadione Sodium Bisulfite)

 가. 적용범위

    본 분석법은 보조사료로 사용하는 비타민제 비타민K 화합물(MSB)의 정량에 이용한다.

나. 시약 및 표준용액의 제조

  1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

  2) 표준원액: 비타민 K MSB 표준물질을 0.01 M 인산이수소칼륨 용액에 녹인다(1,000 mg/L, 4℃ 이하 암소 보관)

  3) 표준용액: 표준원액을 각각 0.5, 1, 5, 10, 20, 50 ppm이 되도록 0.01 M 인산이수소칼륨용액으로 희석하고 검량선 작성에 사용한다.

  4) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

 다. 시험용액의 조제

  1) 추출

   가) 균질화한 시료 약 0.1∼1 g을 정밀히 취하여 50 mL 부피플라스크에 넣는다.

   나) 0.01 M 인산이수소칼륨 용액 25 mL를 넣어 잘 섞고 30분 간 초음파 추출한다.

   다) 이 액을 원심분리관에 옮기고 클로로포름 20 mL를 넣고 잘 섞은 후, 4℃, 4,000 rpm으로 10분 간 원심분리한다.

   라) 상등액을 syringe filter(0.2 μm)로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

 라. 계산

  비타민 K MSB (mg/kg) =    시험용액 중의 비타민 K MSB 농도(μg/mL)   ×  총희석량(mL)    

                                                                        ─────────

                                                                          시료채취량(g)   

 마. 기기 분석 조건

  1) 고속액체크로마토그래피 분석 조건 

   가) Mobile phase A: 0.01 M 인산이수소칼륨용액

   나) Mobile phase B: 50% 메탄올

   다) Gradient

        ┌────┬──┬──┐

│시간(분)│A(%)│B(%)│

├────┼──┼──┤

│0.0     │50  │50  │

├────┼──┼──┤

│2.0     │50  │50  │

├────┼──┼──┤

│20.0    │0   │100 │

├────┼──┼──┤

│24.0    │50  │50  │

├────┼──┼──┤

│30.0    │50  │50  │

└────┴──┴──┘

   라)  Flow rate: 1.3 mL/min

   마)  Column: Capcellpak C18 UG120 (4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

   바)  컬럼온도: 35℃

   사)  Injection volume: 10 μL

   아)  검출기 파장: UVD, 230 nm

    ※ 기기 분석 조건은 분석실 실정에 맞게 조정할 수 있다.

6.13. 판토텐산

 가. 액체크로마토그래피에 의한 정량

  1) 장치

     액체크로마토그래프 : 자외부검출기를 사용한다.

  2) 시약 및 시액 

   가) 20 mM KH2PO4：KH2PO4 2.7 g을 증류수에 녹이고 인산으로 pH 2.1로 조절한 후 전량을 1 L가 되게 한다. 

   나) 표준용액의 조제판토텐산((D-pantothenic acid, hemicalcium salt)을 20 mM KH2PO4에 녹여 표준원액(100 μg/mL)을 조제하고, 표준원액을 증류수로 적당량 희석하여 표준용액을 만든다.

  3) 시험용액의 조제 

     검체 적당량을 취하여 분쇄기를 이용하여 잘게 부순후 적당량의 20 mM 인산완충용액을 가하여 30분간 초음파장치로 추출한 후 50 mL로 맞추고, 3,000 rpm에서 원심분리하여 상등액을 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다. 

  4) 시험조작

   가) 액체크로마토그래프의 조건

    (1) 칼럼：역상칼럼 (C18 또는 이와 동등한 것, 1.5 ×250 mm, 5 μm)

    (2) 이동상

A- 20mM potassium phosphate(pH 2.1)

B- 20mM potassium phosphate/ACN(80/20)

A：B(96：4)의 혼합액으로 37분간 흘려보낸 후 B 용액으로 10분간 세척한다.

    (3) 유속：120 μL/분

    (4) 검출기：자외부(UV) 검출기(200 nm)

  5) 정량시험

    시험용액 및 표준용액을 각각 10 μL씩 주입하여 앞의 조건에서 시험한다. 표준용액 피크의 넓이 또는 높이에 의해 구한 검량선을 사용하여 시험용액의 판토텐산의 농도(μg/mL)를 구하고, 다음의 식에 의하여 검체중 판토텐산의 함량(mg/100 g)을 구한다. 

가) 계산

  판토텐산(mg/100 g) =  S ×    a×b        ×  100   

                              ───────  ────

                                검체량(g)       1000  

S：시험용액중의 판토텐산의 농도(μg/mL)

a：시험용액의 전량(mL)

b：시험용액의 희석배수

6.14. 이노시톨

 가. 중량법

    이 품목을 105°에서 4시간 건조한 다음 약 0.2 g을 정밀히 달아 250 mL의 비이커에 넣고 묽은황산 1 mL 및 무수초산 50 mL의 혼액 5 mL를 가하고 비이커를 시계접시로 덮고 수욕상에서 20분간 가열한 다음 얼음으로 식히고 물 100 mL를 가하여 20분간 끓이고 식힌 다음 비이커의 내용물을 250 mL의 분액깔대기에 옮기고 비이커를 소량의 물로 씻고 씻은 액을 분액깔대기에 합친다. 다음에 클로로포름 30, 25, 20, 15, 10 및 5 mL의 순서로 비이커를 씻은 다음 차례로 추출하여 전 클로로포름추출액을 합하여 물 10 mL로 씻고 탈지면으로 여과하여 클로로포름 10 mL로 씻고 여액과 씻은 액을 합하여 수욕상에서 증발건고하고 105°에서 4시간 건조한다. 식힌 다음 무게를 달아 헥사아세틸이노시톨(C18H24O12)의 양을 구하고 다음 식에 따라 이노시톨의 양을 산출한다.

  이노시톨(C6H12O6)의 양(mg) ＝ 헥사아세틸이노시톨(C18H24O12)의 양(mg) × 0.4167  

 나. HPLC법

  1) 적용범위

     본 분석법은 보조사료로 사용하는 비타민제 이노시톨의 정량에 이용한다.

  2) 시약 및 표준용액의 제조

   가) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

   나) 표준원액: 이노시톨 표준품 100 mg을 정밀히 달아 100 mL 부피 플라스크에 넣고 물을 가하여 100 mL로 한 것을 표준원액으로 한다(10,000 mg/L).

   다) 표준용액: 표준원액을 각각 500, 1000, 2000, 5000, 8000 및 10000 ppm이 되도록 물로 희석하고 검량선 작성에 사용한다.

   라) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

  3) 시험용액의 조제

   가) 균질화한 시료 1 g을 정밀히 달아 100 mL volumetric flask에 넣고 약 15 mL의 물을 첨가하여 시료를 용해한 후 잘 혼합한다.

   나) 100 mL volumetric flask의 표시선 까지 물로 정용한 후 잘 혼합하여 여과지 (Whatman, No. 1)를 이용하여 여과한다.

   다) 여과액 10 mL를 50 mL 원심분리관에 옮기고 여기에 클로로포름 10 mL를 넣어 잘 섞고, 4℃에서 4,000 rpm으로 10분 간 원심분리한다. 

   라) 상등액을 syringe filter(0.2 μm)로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

  4) 계산

  이노시톨(mg/Kg) = 시험용액 중의 이노시톨 농도 (ug/mL)   ×  총희석량(mL)    

                                                            ─────────

                                                              시료채취량(g)   

  5) 고속액체크로마토그래피 분석 조건

   가) Mobile phase: 물 : 아세토니트릴(2:8, v/v)

   나) Flow rate: 1.0 mL/min

   다) Column: Carbohydrate (4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

   라) 컬럼온도: 40℃

   마) Injection volume: 10 μL

   바) 검출기: 시차굴절계(RID)

   사) 분석시간: 30분

    ※ 기기 분석 조건은 분석실 실정에 맞게 조정할 수 있다.

6.15. 염화콜린

 가. 효소분석법

  1) 시료중의 염화콜린 정량 : 표준품 및 본 품 콜린으로서 약 150～200 ppm에 해당하는 양을 정밀하게 칭량하여 정제수로 1 L가 되도록 표정하여 녹인 후 여과하여 측정한다.

  2) 사용조건

   가) 효소분석기(생화학분석기)

   나) 표준용액(콜린) : 175ppm(mg/L)

  3) 계산

  염화콜린의 함량(ppm)  =   측정치  ×  235 ppm   ×  희석배수  

                                      ──────              

                                        175 ppm                 

235ppm : 표준용액 175ppm을 염화콜린으로 환산한 량(ppm)

175ppm : 표준용액

 나. HPLC 분석방법

  1) 전처리 : 1.0 g에 해당하는 표준품 및 본 품을 정확히 칭량하여 125 mL 둥근 플라스크에 넣고 25 mL H2O + 25 mL CH3CN을 가하여 10～15분간 Sonication 한 후 여과하여 20 μL 주입한다.

  2) 분석조건

   가) 컬럼 : C18 역상컬럼

   나) Injection Volume : 20 μL

   다) Flow rate : 0.8 ～ 1.0 mL/min

   라) 검출기 : RI detector

   마) 이동상 : H2O 500 mL+CH3CN 500 mL+Sodium Lauryl Sulfate 2.88 g+Acetic acid 10 mL

6.16. 나이아신(니코틴산 및 니코틴아미드)

 가. 분석원리

    시료 중에 포함되어 있는 니코틴산 및 니코틴아미드를 수용액으로 추출 후 액체크로마토그래프를 이용하여 정성 및 정량 분석하는 방법이다.

 나. 장치

    액체크로마토그래프-자외부검출기(UV photometric detector)를 사용한다.

 다. 시약 및 시액

  1) 5 mM 헥산설폰산나트륨 용액 : 헥산설폰산나트륨(sodium hexanesulfonate) 91.11 mg을 증류수에 녹여 100 mL로 한다.

  2) 용매 : 메탄올, 헥산 등은 HPLC 급 또는 이와 동등한 것

  3) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

  4) HLB 카트리지 : N-vinylpyrrolidine과 divinylbenzene이 copolymer의 형태로 결합된 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 3 mL)또는 이와 동등한 것 

 라. 시험용액의 조제

  1) 표준원액 : 니코틴산 및 니코틴아미드를 각각 증류수에 녹여 100 mg/L로 한다.

  2) 표준용액 : 표준원액을 각각 증류수에 녹여 적당한 농도로 희석, 혼합한다.

  3) 추출 : 분쇄한 시료 1 g을 정밀히 달아 100 mL 메스플라스크에 넣고 5 mM hexanesulfonate 용액에 녹여 100 mL가 되도록 한다. 이 용액을 60분간 초음파 추출한 후 추출액을 원심분리기를 사용하여 0℃, 9000 rpm에서 30분간 원심분리한다. 상등액을 취해 0.2 μm 시린지 필터로 여과한다.

   4) 정제 : 여과액의 정제를 위하여 HLB 카트리지를 준비하고 카트리지에 5 mL의 메탄올과 5 mL의 증류수를 연속으로 통과시킨 후 카트리지에 여과액 10 mL를 통과시켜 니코틴산 및 니코틴아미드가 카트리지에 흡착되도록 한다. 카트리지는 5 mL의 n-헥산으로 세척한 후 80% 메탄올용액 5 mL로 용출한다. 용출액은 10 mL 메스플라스크에 모으고 증류수를 가하여 10 mL로 하여 시험용액으로 한다.

 마. 시험조작

  1) 액체크로마토그래프 측정 조건

   가) 칼럼 : 4.6 × 250 mm, 5 μm 또는 이와 동등한 것

   나) 칼럼온도 : 40℃

   다) 이동상

- A : 5 mM hexanesulfonate / 0.1% acetic acid 

- B : 35% 5 mM hexanesulfonate / 0.1% acetic acid / 65% MeOH

┌────┬──────┬──────┐

│시간(분)│이동상 A (%)│이동상 B (%)│

├────┼──────┼──────┤

│0       │95          │5           │

├────┼──────┼──────┤

│3       │95          │5           │

├────┼──────┼──────┤

│13      │65          │35          │

├────┼──────┼──────┤

│20      │65          │35          │

├────┼──────┼──────┤

│21      │95          │5           │

├────┼──────┼──────┤

│25      │95          │5           │

└────┴──────┴──────┘

   라) 검출기 파장 : 자외부(UV) 검출기(260 nm)

   마) 유속 : 1 mL/분

   바) 주입량 : 10 μL

   사) 머무름 시간 : 니코틴산 6.70분, 니코틴아미드 12.90분

 2) 검출한계 : 0.2 mg/kg, 정량한계 : 1.0 mg/kg

 바. 정성시험

    시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하여 얻어진 피크의 머무름 시간(retention time)을 비교해서 니코틴산 및 니코틴아미드의 성분을 확인한다.

 사. 정량시험

    정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 피크의 면적 또는 높이를 측정하여 작성한 검량선으로부터 니코틴산 및 니코틴아미드의 함량을 정량한다.

 아. 계산

  니코틴산 및 니코틴아미드(μg/g) =   C   ×  a × D  

                                            ─────

                                              S       

C : 시험용액의 농도(μg/mL)

a : 추출용매의 양(mL)

D : 희석배수

S : 시료량(g)

6.17. 비오틴

 가. 고속액체크로마토그래피에 의한 정량

  1) 적용범위

     본 분석법은 보조사료로 사용하는 비타민제 비오틴의 정량에 이용한다.

  2) 시약

   가) 0.01 M 인산이수소칼륨 용액 : 인산이수소칼륨 1.35 g을 증류수에 녹여 1 L로 한다.

  3) 표준용액의 조제

   가) 비오틴 표준물질주1)을 0.01 M 인산이수소칼륨용액에 녹여 1,000 mg/L가 되도록 조제한다.(4℃ 이하 암소 보관)

   나) 상기 표준원액을 각각 0.5, 1, 5, 10, 20 및 30 μg/ml이 되도록 0.01 M 인산이수소칼륨용액으로 희석주2)하여 표준용액으로 사용한다.(사용시 제조)

  4) 시험용액의 조제

   가) 균질화한 시료주3) 약 1∼2 g을 정밀히 취한 후,  0.01 M 인산이수소칼륨용액 20 mL를 첨가한다.

   나) 이 용액을 잘 섞고 ?4℃에서 14,000 rpm으로 15분 간 원심분리한다.

   다) 상등액 10 mL를 다른 50 mL 원심분리관에 옮기고 여기에 클로로포름 10 mL를 넣어 잘 섞고, -4℃에서 4,000 rpm으로 10분 간 원심분리한다.

   라) 상등액 5 mL를 취해 또다른 15 mL 원심분리관에 넣고 1 M 염산용액 1 mL를 넣는다.

   마) 60℃ 수욕 상에서 30분 간 가수분해하며 때때로 흔들어 섞어준다. 30분 후, 흐르는 물로 식혀준 후, 1 N 수산화나트륨 용액 약 1 mL를 넣어 pH를 5-7로 맞춘다.

   바) 중화된 시험 용액을 10 mL 부피플라스크에 옮겨 0.01 M 인산이수소칼륨용액으로 정용한다. 이 액을 syringe filter(0.2 μm)로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

  5) 시험조작

   가) 고속액체크로마토그래프의 조건(예)

┌──────┬─────────────────────────────────┐

│항목        │조건                                                              │

├──────┼─────────────────────────────────┤

│주입량      │10 μL                                                            │

├──────┼─────────────────────────────────┤

│Column      │  Capcellpak C18 UG120 (4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것 │

├──────┼─────────────────────────────────┤

│칼럼온도    │40℃                                                              │

├──────┼─────────────────────────────────┤

│이동상      │Mobile phase A : 0.01 M 인산이수소칼륨용액                        │

│            │Mobile phase B: 50% 아세토니트릴                                  │

│            │┌─────┬──┬──┐                                        │

│            ││시간 (분) │A(%)│B(%)│                                        │

│            │├─────┼──┼──┤                                        │

│            ││0.0       │95  │5   │                                        │

│            │├─────┼──┼──┤                                        │

│            ││3.0       │95  │5   │                                        │

│            │├─────┼──┼──┤                                        │

│            ││20.0      │10  │90  │                                        │

│            │├─────┼──┼──┤                                        │

│            ││25.0      │95  │5   │                                        │

│            │├─────┼──┼──┤                                        │

│            ││31.0      │95  │5   │                                        │

│            │└─────┴──┴──┘                                        │

├──────┼─────────────────────────────────┤

│검출기 파장 │  UVD, 200 nm                                                     │

├──────┼─────────────────────────────────┤

│유속        │1.0 mL/min                                                        │

└──────┴─────────────────────────────────┘

     ※ 기기 분석 조건은 분석실 실정에 맞게 조정할 수 있다.

   나) 계산

  비오틴(mg/kg) = 시험용액 중의 비오틴 농도(μg/mL)   ×  총희석량(mL)    

                                                        ─────────

                                                          시료채취량(g)   

  5) 시험 주의사항

   주1) USP의 reference standard 또는 이에 준하는 것

   주2) 표준원액을 희석하여 표준용액 조제 시 조작오차를 방지하기 위하여 반드시 정해진 용량의 피펫과 부피 프라스크를 사용하여야 한다.

   주3) 시료는 대부분 용기?포장 등에 담겨 있으므로 채취시에는 분석결과에 영향을 미치지 않는 적절한 기구 및 용기를 준비?사용해야한다.

6.18. 엽산

 가. 분석원리

     검체에 함유된 엽산을 10 mM 인산완충용액(pH 8.0)으로 추출하고, 역상 분배형 칼럼을 이용하여 액체크로마토그라프에서 분리하고 UV 280 nm에서 측정한다. 

 나. 장치

     액체크로마토그래프/자외부흡광검출기(UV Detector) 

 다. 시약 및 시액

  1) 10 mM 인산완충용액(pH 8.0)：10 mM 인산수소이나트륨 용액에 10 mM 인산이수소나트륨 용액을 가하여 pH 8.0로 조정하여 제조한다.

  2) 표준원액 : 엽산 표준품(99.9%)를 0.1 N NaOH 수용액에 녹여 1000 mg/L이 되도록 조제한다.(4℃이하 암소 보관)

  3) 표준용액 : 표준원액을 이동상A로 희석하여 10 mg/L로 조제한다.(사용 시 제조)

  4) 이동상 A : Tetrabutyl ammonium bromide 1.6120 g (5 mM)을 pH 7.2로 조정한 인산완충용액을 가하여 1 L가 되게 한 뒤 0.22 μm 필터로 여과하여 조제한다.

  5) 검량선표준용액 : 표준용액을 이동상A로 희석하여 정량하기에 적합한 농도로 3개 이상 조제한다.(사용 시 제조)

  6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 HPLC용

 라. 시험용액의 조제

    균질화한 검체(약 2 g)를 50 mL 갈색 플라스크에 정확히 칭량하고, 10 mM 인산완충용액(pH 8.0)을 첨가하여 50 mL로 정용하여 10분간 초음파 추출한 후 원심분리관으로 옮겨 20분간 shaker에서 격렬하게 흔들어 준 다음, 5,000 rpm조건에서 10분간 원심분리를 실시하고, 상징액을 0.22 μm의 membrane filter로 여과한 후 시험용액으로 사용한다.

 마. 시험조작

  1) 고속액체크로마토그래프의 측정조건

   가) 칼럼 : Capcellpak C18 UG120(4.6 ×250 mm, 5 μm) 및 이와 동등한 것

   나) 칼럼온도 : 40℃

   다) 이동상(Isocratic elution)

이동상 A: 아세토니트릴을 8:2로 혼합하여 사용한다.

   라) 이동상 유속 : 1.0 mL/min

   마) 주입량 : 20 μL

  바) 검출기파장 : 280 nm

  2) 검량선 작성

    검량곡선표준용액을 액체크로마토그래프에 20 μL씩 각각 주입하여 얻어진 크로마토그램 상의 각 피크의 넓이를 구하여 검량선을 작성한다.

 바. 정량시험

     정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크면적법에 따라 정량한다.

 사. 계산

  엽산 함량(μg/100 kcal) =   Y' ×   V   ×  100               

                                    ───  ──────────

                                      S       검체 1g 당 kcal   

Y' = 검량곡선에 대입하여 얻은 시험용액의 농도(μg/mL)

V = 시료 추출에 사용된 용액의 부피(mL)

S = 추출시료의 무게(g)

6.19. L-카르니틴

 가. 적정법 

  1) 이 품목 약 0.1 g을 정밀히 달아 개미산 3 mL 및 빙초산(비수적정용) 50 mL를 가하여 0.1 N 과염소산으로 적정한다(지시약 : 크리스탈바이올렛?빙초산시액). 종말점은 액의 자색이 청색을 지나 녹색으로 변하는 점이다. 따로 같은 방법으로 공시험을 한다.

0.1N 과염소산용액 1 mL = 16.12 mg C7H15NO3

 나. HPLC법

  1) 적용범위

     본 분석법은 보조사료로 사용하는 비타민제 L-카르니틴의 정량에 이용한다.

  2) 시약 및 표준용액의 제조

   가) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

   나) 표준원액: L-카르니틴 표준물질을 0.01 M 인산이수소나트륨 용액에 녹인다(10,000 mg/L, 4℃ 이하 암소 보관)

   다) 표준용액: 표준원액을 각각 500, 1000, 2000, 4000, 5000 및 8000 μg/ml이 되도록 추출용매로 희석하고 검량선 작성에 사용한다.

   라) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

  3) 시험용액의 조제

   가) 추출

    (1) 균질화한 시료 약 1∼2 g을 50 mL 원심분리관에 정밀히 취한 후, 추출용매 20 mL를 첨가한다.

    (2) 위 용액을 잘 섞고 ?4℃에서 14,000 rpm으로 15분 간 원심분리한다.

    (3) 상등액 10 mL를 다른 50 mL 원심분리관에 옮기고 여기에 클로로포름 10 mL를 넣어 잘 섞고, -4℃에서 4,000 rpm으로 10분 간 원심분리한다.

    (4) 상등액 5 mL를 취해 또다른 15 mL 원심분리관에 넣고 1 M 염산용액 1 mL를 넣는다. 

    (5) 60℃ 수욕 상에서 30분 간 가수분해하며 때때로 흔들어 섞어준다. 30분 후, 흐르는 물로 식혀주고 1 N 수산화나트륨 용액 약 1 mL를 넣어 pH를 5-7로 맞춘다. 

    (6) 중화된 시험 용액을 10 mL 부피플라스크에 옮겨 추출용매로 정용한다. 이 액을 syringe filter(0.2 μm)로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

  4) 계산

  L-카르니틴 (mg/kg) = 시험용액 중의 L-카르니틴 농도 (μg/mL)   ×  총희석량(mL)    

                                                                  ─────────

                                                                    시료채취량(g)   

  5) 기기 분석 조건

   가) 고속액체크로마토그래피 분석 조건

    (1) Mobile phase: 0.01 M 인산이수소나트륨(pH 6.0) : 아세토니트릴(3:7, v/v)

    (2) Flow rate: 1.0 mL/min

    (3) Column: Kromasil 100-5-NH2 (4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

    (4) 컬럼온도: 35℃

    (5) Injection volume: 10 μL

    (6) 검출기 파장: UVD, 225 nm

    (7) 분석시간: 30분

     ※ 기기 분석 조건은 분석실 실정에 맞게 조정할 수 있다.

6.20. 주석산수소콜린

6.20.1. 효소분석법-제1법

 가. 분석원리

    시료 중에 포함되어 있는 콜린을 증류수로 추출, 여과한 후 YSI 2700 효소분석기(생화학분석기)를 이용하여 정성 및 정량 분석하여 주석산수소콜린으로 환산하는 방법이다.

 나. 장치

    YSI 2700 효소분석기(생화학분석기)를 사용한다.

 다. 시약 및 시액

  1) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

  2) 표준용액(콜린) : 175 ppm(mg/L)

 라. 시험용액의 조제

    표준품 및 시료를 콜린으로서 약 150∼200 ppm에 해당하는 양을 정밀하게 칭량하여 증류수로 녹인 후 여과하여 측정한다.

 마. 계산

  주석산수소콜린(ppm) =    C  ×  253.25  ×  D   

                                ─────        

                                  104.17          

C : 시험용액의 콜린 농도(mg/L)

D : 희석배수

* 253.25 : 주석산수소콜린의 분자량

  104.17 : 콜린의분자량 

6.20.2. 액체크로마토그래프-질량분석기에 의한 정성 및 정량법-제2법

 가. 분석원리

    시료 중에 포함되어 있는 주석산수소콜린을 증류수로 추출, 여과한 후 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)를 이용하여 정성 및 정량 분석하는 방법이다.

 나. 장치

    액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)를 사용한다.

 다. 시약 및 시액

  1) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

  2) 용매 : 아세토니트릴, 10 mM 포름산 암모늄 용액(포름산 용액을 이용하여 pH 3으로 조정)

  3) 표준원액 : 주석산수소콜린을 증류수에 녹여 1000 mg/L로 한다.

  4) 표준용액 : 표준원액을 각각 증류수에 녹여 적당한 농도로 희석, 혼합한다.

  5) 내부표준물질: choline chloride (trimethyl-d9)

 라. 시험용액의 조제

    조제된 사료의 일정량(100 mg)을 정밀히 달아 100 mL 메스플라스크에 넣고 내부표준물질인 choline chloride (trimethyl-d9) 500 ppm 100 μL를 첨가한 뒤 증류수에 녹여 100 mL가 되도록 한다. 이 용액을 60분간 초음파 추출한 후 추출액을 원심분리기를 사용하여 0℃, 9000 rpm에서 30분간 원심분리한다. 이 상등액을 membrane syringe filter(pore size 0.2 μm , 25 mm)로 여과하고 이를 10배 희석하여 측정한다.

 마. 시험조작

  1) 액체크로마토그래프 측정 조건

   (가) 칼럼 :  HILIC (4.6 150 mm, 2.6 μm) 또는 이와 동등한 것

   (나) 칼럼온도 : 30℃

   (다) 이동상(A : B = 14 : 86)

    (1) A : 아세토니트릴

    (2) B : 10 mM 포름산 암모늄 용액, pH 3 

   (라) 유속 : 0.5 mL/분

   (마)주입량 : 10 μL

   (바)머무름 시간 : 4.13분

┌───────┬────┬────┬────┬───┬───┬───┬───┐

│분석물질      │이온모드│Q1 질량 │Q3 질량 │DP(V) │EP(V) │CE(eV)│CXP(V)│

├───────┼────┼────┼────┼───┼───┼───┼───┤

│내부표준물질  │+       │113.100 │69.000  │38.510│6.210 │25.430│6.810 │

│(염화 콜린-d9)│        ├────┼────┼───┼───┼───┼───┤

│              │        │113.100 │66.000  │38.510│6.210 │41.430│7.900 │

├───────┼────┼────┼────┼───┼───┼───┼───┤

│주석산수소콜린│+       │104.100 │60.000  │29.980│11.280│23.460│6.710 │

│              │        ├────┼────┼───┼───┼───┼───┤

│              │        │104.100 │44.900  │29.980│11.280│30.270│7.000 │

└───────┴────┴────┴────┴───┴───┴───┴───┘

* 밑줄 그은 이온은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

** 기기분석 조건은 분석실 실정에 맞게 조정할 수 있다.

 바. 정성시험

    시험용액을 위의 조건에 따라 MRM 모드로 측정하여 얻어진 정량 피크와 정성 피크의 비율로 정성분석한다. 

 사. 정량시험

     정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 표준물질과 내부표준물질의 피크 면적(또는 높이)의 비로부터 검량선을 작성하고 시료의 주석산수소콜린 함량을 정량한다.

 아. 계산

  주석산수소콜린(μg/g) =   C   ×  a × D  

                                  ─────

                                    S       

C : 시험용액의 농도(μg/mL)

a : 추출용매의 양(mL)

D : 희석배수

S : 시료량(g)

6.21. 수용성 비타민 동시분석법

 가. 적용범위

    본 분석법은 보조사료로 사용하는 비타민제 Thiamine(vitamin B1), Riboflavin(vitamin B2), Nicotinic acid(niacin), Nicotinamide, Pyridoxine(vitamin B6), Folic acid의 동시분석에 적용한다.

 나. 시약 및 표준용액의 제조

  1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

  2) 표준원액: 각 비타민의 표준품을 그룹별로 용해하여 표준원액으로 사용한다.

┌────┬──────────────┬────────────────────────┐

│Group   │항목                        │용해 용매                                       │

├────┼──────────────┼────────────────────────┤

│Group 1 │Thiamine, Pyridoxine        │증류수                                          │

├────┼──────────────┼────────────────────────┤

│Group 2 │Riboflavin, Folic acid      │0.01 N NaOH, 증류수                             │

├────┼──────────────┼────────────────────────┤

│Group 3 │Nicotinic acid, Nicotinamide│0.1% acetic acid 함유 5 mM hexane sulfonic acid │

└────┴──────────────┴────────────────────────┘

   * Group 2 표준품을 용해할 경우 0.01 N NaOH을 미량 첨가하여 용해여부 판단.

  3) 표준용액: 표준원액을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석하여 사용한다.

  4) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

 다. 시험용액의 조제

  1) 추출

   가) 고체 시료의 경우: 균질화 된 시료 1.5 g을 원심분리 시험관에 칭량한 후 추출용매(0.1% acetic acid 함유 5 mM hexane sulfonic acid) 10 mL를 첨가한다.

   나) 액체 시료의 경우: 시료 1 g을 25 mL volumetric flask에 칭량한 후 추출용매(0.1% acetic acid 함유 5 mM hexane sulfonic acid)를 첨가한다.

   다) 10분간 진탕 후 10분간 초음파세척기로 추출한다. 

   라) 3000 rpm에서 10분 원심분리한다. 

   마) 원심분리 후 상등액을 여과시킨다. 

 라. 고속액체크로마토그래피 분석 조건 

  1) Column: ODS 또는 이와 동등한 것

  2) Mobile phase: 0.1% acetic acid 함유 5 mM hexane sulfonic acid

    65% MeOH 함유 5 mM hexane sulfonic acid

  3) Injection volume: 10 μL

  4) Flow rate: 0.5 mL/min

  5) 검출기 파장: UVD, 270 nm

  ※ 기기 분석조건은 분석실 실정에 맞게 조정할 수 있다.

 마. 정성시험

    위의 조건에서 시험할 때 시험결과는 어느 측정 조건에서도 표준품과 일치하여야 한다.

 바. 정량시험

    정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 정량한다.

   ※ 정량시험은 단일 표준품으로 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

6.22. 비타민 K4

 가. 분석원리

    시료 중에 포함되어 있는 비타민K4를 에탄올로 추출, 정제한 후 액체크로마토그래프를 이용하여 정성 및 정량 분석하는 방법이다.

 나. 장치

    액체크로마토그래프-자외부검출기(UV photometric detector)를 사용한다.

 다 시약 및 시액

  1) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

  2) 에탄올, 메탄올, 아세토니트릴 : HPLC 급

  3) HLB 카트리지

  4) 표준원액 : 비타민 K4를 에탄올에 녹여 1000 mg/L로 한다. 

  5) 표준용액 : 표준원액을 각각 메탄올에 녹여 적당한 농도로 희석, 혼합한다.

 라. 시험용액의 조제

  1) 추출

    제조된 사료의 일정량 (10 g)을 정밀히 달아 100 mL 메스플라스크에 넣고 에탄올 용액에 녹여 100 mL가 되도록 한다. 이 용액을 60분간 초음파 추출한 후 추출액을 원심분리기를 사용하여 0℃, 9000 rpm에서 30분간 원심분리한다.

  2) 정제

    상등액 2 mL를 질소농축하고 잔여물을 40% 에탄올 2 mL로 완전히 녹여 시료로딩용액을 제조한다. HLB 카트리지를 준비하고 카트리지에 2 mL의 메탄올과 2 mL의 증류수를 연속으로 통과시킨 후 카트리지에 시료로딩용액 2 mL를 통과시켜 비타민 K4를 카트리지에 흡착되도록 한다. 카트리지는 1 mL의 5% 에탄올로 세척한 후 100% 에탄올용액 2 mL로 용출한다.

 마. 시험조작

  1) 액체크로마토그래프 측정 조건

   가) 칼럼 : C18 (4.6 x 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

   나) 칼럼온도 : 40℃

   다) 이동상

    (1) A : 0.1% 포름산 용액

    (2) : 0.1% 포름산 아세토니트릴 용액

┌────┬──────┬──────┐

│시간(분)│이동상 A (%)│이동상 B (%)│

├────┼──────┼──────┤

│0       │98          │2           │

├────┼──────┼──────┤

│3       │98          │2           │

├────┼──────┼──────┤

│12      │2           │98          │

├────┼──────┼──────┤

│15      │2           │98          │

├────┼──────┼──────┤

│16      │98          │2           │

├────┼──────┼──────┤

│20      │98          │2           │

└────┴──────┴──────┘

   라) 검출기 파장 : 자외부(UV) 검출기 230 nm

   마) 유속 : 1 mL/분

   바) 주입량 : 10 μL

   사) 머무름 시간 : 14.08분

 바. 정성시험

    시험용액을 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하여 얻어진 피크의 머무름 시간 (retention time)을 비교해서 비타민K4의 성분을 확인한다.

 사. 정량시험

    정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 피크의 면적 또는 높이를 측정하여 작성한 검량선으로부터 비타민K4의 함량을 정량한다.

 아. 계산

  비타민 K4(μg/g) =  C   ×  a × D  

                            ─────

                              S       

C : 시험용액의 농도(μg/mL),a : 추출용매의 양(mL)

D : 희석배수             S : 시료량(g)

7장. 곰팡이독소

7.1. 아플라톡신 (Aflatoxin B1, B2, G1, G2)

 가. HPLC 법

  1) 기구

     HPLC, 호모게나이저, 진공펌프, 로타리 증발기, 여과병, 깔대기, 분액 여두, Column(22×300 mm), 항온 수조, 바이알(vial), 메스플라스크, 메스 실린더, 홀피펫

  2) 시약의 조제

   가) 메탄올(Methanol) : 특급품 또는 HPLC등급품 원액을 사용

   나) n-핵산(n-Hexane) : 특급품 또는 HPLC등급품 원액을 사용

   다) 세라이트(Celite) : 545 또는 이와 동등품

   라) 클로르포름(Chloroform) : 특급품 또는 HPLC 등급품 원액을 사용

   마) 무수 황산소다(Sodium Sulfate Anhydro, Na2SO4) : 1시간 건조후 사용

   바) 실리카겔(SilicaGel) : Kiesel Gel 60(Merck사제 Art 7734)또는 이와 동등품을 105℃에서 1시간 건조시킨 후 증류수 1%를 첨가하고 1일 이상 경과 후 사용

   사) 클로르포름 메탄올(Chloroform Methanol)액 : 클로르포름과 메탄올(97 : 3)의 비율로 혼합

   아) 아플라톡신 표준품 : 아플라톡신표준품 B1, B2, G1, G2를 벤젠-아세토니트릴(98 : 2)로 용해 희석하여 사용한다.

   자) 3불화 초산(Trifluoro acetic acid) : 특급품 또는 HPLC 등급품 원액을 사용

   차) 증류수(Distilled water) : HPLC 등급품 원액을 사용

   카) 아세토니트릴(Acetonitrile) : HPLC 등급품 원액을 사용

  3) 시료액의 조제

   가) 시료 50 g을 삼각플라스크에 취하고 메탄올 150 mL와 증류수 100 mL 및 n-핵산 100 mL를 가하고 30분간 진탕 추출한다.

   나) No.2여과지에 세라이트 545를 넣은 후 흡인하면서 추출액을 여과하고 메탄올과 증류수가 합쳐진 층(하층) 50 mL를 취하여 250 mL 분액여두(分液濾斗)에 넣고  n-핵산 100 mL를 가하여 5분간 진탕 후, 액층을 분리시켜 하층을 다른 분액여두에 옮기고 클로르포름 50 mL를 가하고 5분간 진탕 후 액을 분리시켜 클로르포름층 (하층)을 취한다.

   다) 메탄올과 증류수가 합쳐진 층에 상기의 조작을 2회 더 반복한 후 클로르포름을 합하여 무수 황산나트륨에 통과시키면서 여과하여 탈수 후 회전식 증발기로 50℃에서 클로르포름을 증발 건조한다.

   라) 칼럼(22×300 mm)의 하부에 그라스울(glass wool)로 막고 클로르포름을 넣어 기포를 제거한 후 무수 황산나트륨 5 g, 실리카겔(Art, 7734) 10 g을 넣은 후 다시 기포를 제거하고 30분간 방치한 다음 무수 황산나트륨 15 g을 넣은 후 클로르포름을 칼럼 상층까지 적하한다.

   마) 증발건고된 증발 플라스크에 클로르포름 10 mL정도 넣어 용해하여 컬럼에 붓는다. 이와 같은 방법을 3회 반복한다. 이때 클로르포름 양이 실리카겔층 높이와 비슷하게 하는 것이 좋다.

   바) 추출액을 적하하고 n-핵산 150 mL 및 에테르 150 mL로 탈지한 후 칼럼 하부에 증발 플라스크를 받치고 칼럼에 흡착된 아플라톡신을 클로르포름+메탄올(97+3) 200 mL로 용출하고 회전식 증발기로 50℃에서 증발 건고한다.

   사) 증발건고된 아플라톡신을 클로르포름에 소량씩 3～4회 용해하여 바이알(vial)에 넣고 50℃ 항온수조에서 N2 gas를 주입시키면서 증발건고 시킨 후 3불화 초산 100 μL를 가하고 마개를 막은 후 1분 후에 증발건고 시킨다.

   아) 바이알에 메탄올 희석량의 1/2정도 넣고 완전히 용해한 후 증류수를 메탄올과 동량 가하고 혼합시킨 후 0.45 μm여과지로 여과하여 시료액으로 한다.

  4) 측정

     고속액체크로마토그래피로 다음 조건에 의하여 측정한다.

   가) Column : Reverse phase C18 Column(4.6 mm×25 cm)

   나) Mobile phase : H2O + Methanol + CH3CN(66+19+25)

   다) Detector : Fluorescence Detector

   라) Excitation Filter 338 nm

   마) Emission Filter 425 nm

   바) Flow rate : 0.96 mL/min 또는 2 mL/min

 나. T.L.C법(Thin Layer Chromatography)

    HPLC방법 과정에서와 같이 증발건고 시킨 후 벤젠+아세토니트릴(CH3CN) (98+2)용액 200 μL로 용해하여 시료액으로 하고 TLC판(Merck Art.5553-7)에 점적하여(이 때 표준품도 점적한다) TLC챔버(Chamber)에 전개용매(展開溶媒)[클로르포름(90) : 아세톤(10)]를 100 mL 가하고 TLC판을 넣어 전개 거리가 10 cm정도 되면 TLC판을 꺼내 암소(暗所)에서 5분간 말린 후 UV램프(UV Lamp) 장파장(365 nm)에서 측정한다.

 다. 효소면역 측정방법

     AOAC에 등재된 분석방법에 따른다.

 라. HPLC 법(Immunoaffinity column 정제)

  1) 기구

     HPLC(형광 분광검출기를 부착한 것), KOBRA CELL 또는 Photochemical reactor, 호모지나이저 vacuum system, 아플라톡신 면역친화칼럼, 갈색 삼각플라스크, 깔대기, 갈색 바이얼, 피펫, 여과지(Whatman No.4), 클램프 스탠드

  2) 시약

   가) 증류수(HPLC급), 메탄올(HPLC급), NaCl

   나) 추출용매 : 60% 메탄올(메탄올:증류수 v/v)

  3) 표준액 조제

     아플라톡신 표준품을 메탄올에 1 μg/mL의 농도로 녹이고 검량선 작성을 위해 5, 10, 20 및 50 ppb로 희석하여 준비한다.

  4) 시료에서의 시험용액 추출

   가) 분쇄용 시료용기에 시료 50 g을 칭량하고 염화나트륨 4 g과 60% 메탄올 250 mL을 첨가한 후 2분간 고속으로 추출한다.

   나) 추출액에 250 mL의 증류수를 넣어 혼합하고 10분간 방치하여 상등액을 Whatman No. 4 여과지를 이용하여 갈색플라스크에 여과한다.

   다) 아플라톡신 면역칼럼은 사용하기 전에 상온이 되도록 하고, vacuum system에 면역칼럼을 장착하여 칼럼에 들어 있는 보존용액을 제거한다.

   라) 상등액 20 mL(시료 1 g에 대응하는 량)을 취하여 면역 칼럼에 주입한 후 칼럼에 있는 공기를 뺀 후 중력하 또는 시료액이 분당 2～3 mL가 칼럼을 통과하도록 압력을 조정한다.

   마) 시료액이 면역칼럼을 통과한 후 증류수 20 mL로 분당 5 mL로 칼럼을 통과시켜 면역 칼럼을 세척하고, 압력을 가하여 가능한 모두 제거한다.

  바) 메탄올 1 mL로 칼럼에 결합된 아플라톡신을 용리시키고, 용출하는 동안 용출용액을 3회 정도 백플러싱을 하여 아플라톡신를 완전히 용출하여 갈색 바이얼에 담는다.

  사) 증류수 1 mL를 가하여 칼럼에 잔존하는 아플라톡신을 용리시키고, 갈색 바이얼에 담아 혼합하여 총 부피가 2 mL이 되게 하여 기기분석을 위한 시료용액으로 한다.

  5) 측정

    동시에 측정한 표준품의 머무름 시간과 일치하는 것을 정성시험의 판정기준으로 하며, 표준품의 분석농도와 얻어진 피크 면적에 의한 검량선을 작성하여 정량시험에 사용한다.

  6) HPLC의 조건

   가) Column : C18(4.6 × 150 mm, 3.5 μm 또는 4.6 × 200 mm, 5 μm)

   나) Mobile phase : methanol :water (50:50 v/v) with KBr 0.119 mg/L, 4 M nitric acid 350 μL또는 water : acetonitrile : methanol(60:15:25 v/v/v)

   다) Injection volumn : 10 μL

   라) Flow rate : 1 mL/min

   마) Detector : 형광검출기

    =바) Detection wavelength : EX =338 nm, EM=425 nm

7.2. 제랄레놀과 제랄레논(Zearalenol, Zearalenone)

 가. HPLC법

  1) 기구

    HPLC, HPLC 칼럼 (역상 C18, 칼럼 4.6 × 250 mm, 10 μm), 검출기(형광검출기), 분쇄기(1/8 inch 스크린 부착)

  2) 시약의 조제

   가) 표준액 : Zearalenol과 Zearalenone 25 μg/mL CH3CN을 함유한 용액 0.1, 0.2, 0.5 및 1.0과 2.0 mL를 바이알에 옮기고, 질소가스로 증발건조 시킨다. 10 mL 이동상 용매를 각 바이알에 넣고 완전하게 밀봉한다. 표준용액의 농도는 0.25, 0.50, 1.25, 2.50 및 5.0  μg/mL 이다.

   나) 이동상 : MeOH, CH3CN과 H2O(1.0+1.6+2.0)를 혼합하여 탈기시킨다.

   다) 염화나트륨 포화 용액

   라) Sodium hydroxide 용액(2%) : 물 1 L에 20 g NaOH를 용해시켜 제조

   마) Citric acid 용액 : 물 1 L에 106g citric acid monohydrate를 용해시킨 것

   바) Diatomaceous earth - Hyflo super-cel

  3) 샘플의 준비

    시료를 분쇄하여 표준체 No. 20을 통과한 것을 사용한다.

  4) 추출

    50 g의 샘플을 500 mL의 추출플라스크에 넣고, 25 g의 규조토와 20 mL의 물을 넣는다. 얼마간 혼합하고 250 mL CHCl3를 넣는다. 완전히 밀봉하고 15분간 교반한다. 필터로 여과하고 100 mL 메스실린더로 50 mL를 채취한다. 250 mL의 분액여두로 옮기고 10 mL NaCl 용액을 넣고 혼합한다. 2%의 NaOH 용액 50 mL를 넣고, 1분간 충분히 섞는다. 정치하여 완전히 층을 분리하고, 아래층을 버린다. 두 번째 50 mL CHCl3를 넣고, 1분 동안 충분히 섞는다. 정치하여 층을 분리하고, 아래 CHCl3층을 버린다. 50 mL citric acid 용액을 분액여두에 넣고, 혼합하며 50 mL CH2Cl2로 Zearalenol / Zearalenone을 추출한다. 1분 동안 충분히 혼합하고 정치하여 층을 분리한다. Glass funnel에 glass wool ball과 2인치(40 g) 정도의 무수 Na2SO4를 넣고 통과시킨다. 두 번째 50 mL CH2Cl2로 재추출한다. 추출액을 Na2SO4에 통과시키고 Na2SO4를 10～15 mL CH2Cl2로 세척한다. CH2Cl2 추출액을 감압 증류장치에서 거의 건조할 정도로 증발시키고 4 mL 테프론 마개가 달린 바이알에 3～4회 CH2Cl2로 세척하면서 옮긴 후에 질소가스로 건조시키고 0.5 mL의 이동상에 용해시킨다.

  5) 측정

    이동상을 2.0 mL/min으로 흐르게 하고, 형광 검출기 파장을 236 nm(여기 파장), 418 nm(형광 파장)로 하여 측정한다.

7.3. 오크라톡신 A (Ochratoxin A)

 가. HPLC법

  1) 기구

   가) HPLC : 형광 분광검출기를 부착한 것

   나) 호모게나이저 : 200 mL 용량

   다) 원심분리기 : 250 mL

   라) 회전 농축기

   마) 진탕기 : 500 mL 용량의 분액여두를 여러개 진탕할 수 있는 것

   바) 칼럼 : C18(내경 10 mm, 길이 200 mm)

  2) 시약

  가) 메틸화용 메탄올 : 무수 황산나트륨을 적당량 가하고 잘 섞은 다음 12시간 이상 방치하여 사용한다.

  나) 메탄올-탄산수소나트륨 혼합액 : 메탄올 1 용량에 1% 탄산수소나트륨 용액 1 용량을 혼합한다.

  다) 칼럼용 실리카겔 : Kieselgel 60을 105℃에서 2시간 활성화시킨 후, 물을 15w/w의 비율로 가하여 잘 혼합한다. 그 밖의 시약류는 전부 특급품을 사용한다.

  3) 표준액 조제

     오크라톡신 A표준품을 아세토니트릴에 1 μg/ mL의 농도로 녹이고 필요시 희석하여 사용한다. 표정은 TLC시험법에 따른다. 

  4) 시료에서의 시험용액 추출

     분쇄한 시료 25g을 칭량하고 메탄올-탄산수소나트륨 혼합액 120 mL을 가하여 5분간 균질화 시킨다. 마개가 달린 메스 실린더에 옮기고 동일 혼합액을 가하여 200 mL로 한다. 잘 혼합한 다음 원심분리하고 상층액 150 mL를 분액 여두에 옮긴다. 인산 2 mL를 가해 산성화시켜 발생한 탄산가스를 잘 빼내고 디에틸에테르 100 mL로 3회 추출한다. 에테르층을 합치고 에테르를 포화한 물 50 mL로 2회 세척한다. 에테르층을 무수 황산나트륨으로 탈수시킨 후 감압하면서 농축한다. 잔류물에 1% 암모니아수로 포화한 클로르포름 5 mL를 가하여 녹이고 클린업 용액으로 한다. 

  5) 클린업(정제)

    미리 칼럼용 실리카겔 1 g을 클로르포름을 사용하여 충전시키고, 클로르포름 추출액을 가한다. 칼럼 윗면까지 액을 빼고 클로르포름 40 mL로 씻어 낸 후 벤젠-초산(9:1) 50 mL로 오크라톡신을 용출한다. 용출액을 물 30 mL로 2회 진동 세척하고 무수 황산나트륨으로 탈수한다. 글라스 울로 여과한 다음 감압하면서 농축한다. 잔류물에 아세토니트릴 500 μL를 가하여 녹이고 HPLC용 시험용액으로 한다.

  6) 측정

    동시에 측정한 표준품의 머무름시간과 일치하는 것을 정성시험의 판정기준으로 하며, 표준품의 분석농도와 얻어진 피크 높이에 의한 검량선을 작성하여 정량시험에 사용한다. 

  7) HPLC의 조건 

   가) 칼 럼 : C18(입경 10 μm, 내경 4.6 mm, 길이 250 mm)

   나) 이동상 : 아세토니트릴-0.1% 인산(1:1)

   다) 유 속 : 0.7 mL/min

   라) 측정 파장 : 여기파장(Ex) 327 nm, 형광파장(Em) 462 nm

   마) 주 입 량 : 10 μL

 나. HPLC법(Immunoaffinity column 정제)

  1) 기구

     HPLC(형광검출기를 부착한 것), 호모게나이저(200 mL 용량), 원심분리기(250 mL), 칼럼 : C18(내경 4.6 mm, 길이 150 mm)

  2) 시약

   가) 증류수, 초산, 메탄올, phosphate buffered  saline(PBS) pH 7.4

   나) 추출용매 : 60% 아세토니트릴(아세토니트릴:증류수 v/v)

   다) 유출용매 : 초산:메탄올(2:98 v/v)

  3) 표준액 조제

    오크라톡신 A 표준품을 아세토니트릴에 1 μg/ mL의 농도로 녹이고 필요시 희석하여 사용한다.

  4) 시료에서의 시험용액 추출

   가) 시료 50 g을 칭량하여 60%아세토니트릴 200 mL를 첨가한 후 2분간 고속으로 혼합 한다 (과열시키지 말 것).

   나) Whatman No. 4 여과지를 이용하여 여과하거나 최소 1,600g에서 원심분리한다.

   다) 상등액 4 mL(시료1 g에 대응하는 량)을취하여 44 mL phosphate buffered saline pH 7.4에 희석한다(아세토니트릴의 최종농도가 5% (v/v)이 되게 한다).

   라) 희석 시료용액에 침전이 생성 되었다면 원심분리를 하거나 재 여과 한다.

   마) 유리주사기를 칼럼에 연결하여 어뎁터로 이용한다.

   바) 희석 시료용액 전량을 칼럼에 적용시키고 분당 2～3 mL로 칼럼을 통과 시킨다.

   사) 20 mL PBS를 분당 약 5 mL로 칼럼을 통과시켜 세척하되 칼럼에서 모든 액체는 제거한다.

   아) 1.5 mL 용출용액을 중력에 의해 칼럼을 통과 시켜 바이알에 담는다. 용출하는 동안 용출용액을 3회 정도 backflushing을 하여 오크라톡신 A를 완전히 용출해 낸다. 공기를 불어넣어 마지막 방울까지 용출한다.

   자) 1.5 mL 증류수를 칼럼에 통과시켜 용출된 시료액에 혼합하고 최종 3 mL을 만든다.

  5) 측정

     동시에 측정한 표준품의 머무름시간과 일치하는 것을 정성시험의 판정기준으로 하며, 표준품의 분석농도와 얻어진 피크 면적에 의한 검량선을 작성하여 정량시험에 사용한다.

  6) HPLC의 조건

   가) Column : C18 (4.6 × 150 mm, 5 μm)

   나) 이동상 : acetonitrile:water: acetic acid(51:47:2, v/v/v)

   다) Flow rate : 1 mL/min 

   라) Detector : 형광검출기

   마) 검출파장 : EX=333 nm, EM=443 nm

7.4. 푸사리움 곰팡이독소 (Fusarium Mycotoxins)

 가. 기구

  1) 분쇄기 : 100 g 정도의 곡류를 분쇄할 수 있는 것

  2) 진탕기 : 300 mL 용량의 분액여두 여러 개를 걸 수 있는 것

  3) 회전 농축기

  4) 분액 여두

  5) 칼럼 : 초자 밸브가 달린 것(내경 22 mm, 길이 300 mm)

  6) 글라스 울

  7) 가지형 플라스크 : 300 mL 용량의 것

  8) 테프론 패킹이 된 5 mL 용량의 병

 나. 시약

  1) 아세토니트릴, n-헥산, 클로르포름, 에탄올, 메탄올, 사이클로 핵산 등의 유기용매 : 증류한 것 또는 잔류농약 분석용 시약 특급품, 그 밖의 시약 특급품을 사용한다. 

  2) 칼럼용 플로리실 : 플로리실 PR(60～80mesh)을 130℃에서 2시간 동안 활성화한 후 데시케이터에서 식힌 것

  3) 추출용매 : 아세토니트릴-증류수(3:1)

  4) 푸사리움 독소 표준액

 다. 표준액 조제

  1) 곰팡이독소 표준원액(100 μg/ mL)

     디옥시니발레놀(deoxynivalenol), 니발레놀(nivalenol) 표준품 각 10 mg을 달아 각각 메탄올 10 mL에 완전히 녹인 다음 클로르포름을 가하여 정확히 100 mL를 만든다. 푸살레논-X(fusalenon-X), 3-아세틸디옥시니발레놀 (3-acetyldeoxy nivalen-ol), 디아세톡시스커페놀(diacetoxyscirpenol), 네오솔라니올(neosolaniol), T-2 독소, 제랄레논(zearalenone) 표준품 각 10 mg을 정확히 달아, 각각 클로르포름으로 완전히 녹인 다음 정확하게 100 mL을 만든다.

 2) GC용 혼합표준용액

    디옥시니발레놀, 니발레놀, 푸살레논-X, 3-아세틸디옥시니발레놀 표준원액 각 1 mL, 디아세톡시스커페놀, 네오솔라니올, T-2 독소, 제랄레논 표준원액 각 20 mL를 메스 플라스크에 넣고 클로르포름을 가하여 정확히 100 mL를 만든다. 

 라. 추출

  1) 분쇄한 시료 20 g를 300 mL 용량의 분액여두에 넣는다. 추출 용제 200 mL를 가하고 30분간 가볍게 진탕 혼합한다. 

  2) 혼합물을 여지로 여과한다. 여과액 125 mL를 300 mL용량의 분액여두에 넣고 n-핵산 100 mL를 가하여 10초간 가볍게 진탕한다.  

   3) 하층의 아세토니트릴-증류수층을 300 mL 용량의 가지형 플스크에 넣고 에탄올 80 mL를 가하여 회전 농축기로 농축 건고한다. 

   4) 잔류물에 메탄올 5 mL를 넣고 독소를 충분히 용해한다. 이어서 클로르포름 45 mL를 가하고 여지로 여과한다. 여과액 40 mL를 약 10 mL까지 농축하고 추출액으로 한다.

 마. 클린업(정제)

  1) 칼럼에 소량의 글라스 울을 채우고 칼럼의 약 1/3까지 클로르포름을 넣은 다음, 가만히 유출시키면서 무수 황산나트륨 약 5 g을 칼럼의 하부로 내려보낸다.  

  2) 이어서 클로르포름층을 서서히 내려보내면서 플로리실 10 g을 기포가 발생하지 않도록 조용히 교반하면서 가한다. 매분당 5～10 mL의 속도로 클로르포름을 플로리실 윗면에서 수 cm 되는 곳까지 흘려보내 윗면이 편편하게 되도록 한다. 재차 클로르포름을 칼럼의 거의 상단까지 주입한다. 

  3) 코크 밸브를 열고 클로르포름을 흘려보내면서 무수 황산나트륨 약 15 g을 플로리실 윗면에 가만히 부어 넣는다. 쌓은 황산나트륨의 상층에 약간 남을 때까지 클로르포름을 흘려보낸다. 

  4) 이 칼럼에 앞의 추출액을 주입하고 계속하여 클로르포름-메탄올 용액(9:1) 100 mL를 주입하고 분당 5～10 mL의 속도로 흘려보낸다. 300 mL 용량의 가지형 플라스크에 이동상을 모은다. 회전 농축기로 농축 건고한다.(45℃)

  5) 메탄올을 정확하게 4 mL 가하고 추출액을 완전히 녹인 다음 시험용액으로 한다. 

 바. GC에 의한 정량

  1) 장치 : ECD나 FID를 부착한 GC 

  2) 시릴화제 : 초산에틸-트리메틸시릴이미다졸-트리메틸클로로실란(9 : 1 : 0.2)을 사용 바로 전에 만든다.

 사. 분석조건

  1) 칼럼 : 1.5% OV-17/Gas Chrom(60～80mesh)을 글라스 칼럼(내경 3 mm, 길이 300 mm)에 충전시킨다.

  2) 칼럼 온도 : 235℃

  3) 주입구 및 검출기 온도 : 250℃ 

  4) 주입량 : 1～1.5 μL 

 아. 시험 방법

    시험용액 1 mL(시료 2.5 g에 상당) 및 곰팡이독소 혼합표준용액 1 mL를 각각 테프론 패킹용기에 넣고, 45℃ 열판에서 질소 가스를 흘려보내면서 건고한다. 시릴화제 0.2 mL 가하고 밀봉한 후, 교반하면서 실온에서 20분간 반응시킨다. 반응 후 3.8 mL 초산에틸을 가하고 GC용 시험용액으로 한다.  시릴화한 표준용액의 GC에서의 피크를 면적법이나 높이법으로 검량선을 작성하고 시험용액의 각 독소 함량을 산출한다. 이 방법의 정량한계는 ECD 및 FID GC를 사용하는 경우에 디옥시니발레놀, 니발레놀, 푸살레논-X, 3-아세틸디옥시니발레놀은 각각 5 ng/g, 100 ng/g이며, 디아세톡시스커페놀, 네오솔라니올, T-2독소, 제랄레논은 각각 100 ng/g, 200 ng/g이다. 

7.5. 푸모니신 (Fumonisin B1, B2)  

 가. 분석원리

    검체 중의 푸모니신을 메탄올?아세토니트릴?물(25:25:50, v/v/v) 혼합용액으로 추출, 여과한 것을 면역친화성컬럼으로 정제시키고 OPA(ο-phthaldialdehyde) 용액으로 유도체화한 후 형광검출기가 부착된 고성능 액체크로마토그래프로 분석한다.

 나. 장치 및 기구

  1) 액체크로마토그래프 : 형광검출기(Fluorescence detector)를 사용한다.

  2) 정제용 컬럼 : 푸모니신용 면역친화성칼럼(Immunoaffinity column) (회수율 및 재현성 등이 검증된 것)

  3) 여과지：Whatman No.2(12.0 cm) 또는 이와 동등한 것

  4) 유리섬유여과지(Glass microfiber filter paper) : Whatman GF/A pore size : 1.6 μm) 또는 이와 동등한 것

 다. 시약 및 용액

  1) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

  2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

  3) 푸모니신 혼합표준원액 : 푸모니신 B1및 B2를 아세토니트릴?물(50:50, v/v) 혼합용액에 녹여 각각 200 μg/mL가 되도록 한다.

  4) 푸모니신 혼합표준용액 : 푸모니신 혼합표준용액 1 mL를 정확히 취하여 아세토니트릴?물(50:50, v/v) 혼합용액으로 정확히 100 mL로 한다.

  5) 추출용액

     메탄올?아세토니트릴?물(25 : 25 : 50, v/v/v)

  6) OPA(ο-phthaldialdehyde) 용액

     ο-phthaldialdehyde 40 mg을 1 mL 메탄올에 녹인 것을 0.1 M Na2B4O7 용액 5 mL로 희석하고 메르캅토에탄올(2-mercaptoethanol) 50 μL를 가하여 혼합한다. 이 용액은 갈색 바이알에 넣어 어두운 곳에서 1주간 실온보관 가능하다. 

  7) PBS(Phosphate-buffered saline) 용액

     염화나트륨(NaCl) 8.0 g, 무수 제이인산나트륨(Na2HPO4) 1.2 g, 제일인산칼륨(KH2PO4) 0.2 g 및 염화칼륨(KCl) 0.2 g을 물 990 mL에 녹인 것을 2 M 염산으로 pH 7.0으로 조정한 후 물로 1 L로 한다.  

  8) 0.1 M 제일인산나트륨(Na2HPO4 ?2H2O) 용액 : 제일인산나트륨(NaH2PO4?2H2O) 15.6 g를 물 990 mL에 녹인 것을 인산(H3PO4)을 사용하여 pH 3.3으로 조정한 후 물로 1 L로 한다.

 라. 시험용액의 조제

  1) 추출

     검체를 분쇄하여 균질화 한 시료 20 g을 정밀히 달아 추출용액 100 mL를 넣어 5분간 고속으로 균질화한 후 이를 여과지로 여과한다. 여액 10 mL를 100 mL 플라스크에 취하고 PBS 용액 40 mL로 희석시킨다. 희석액을 흔들어 섞은 후 유리섬유여과지로 여과한 것을 추출액으로 한다.

  2) 정제

     추출액 10 mL를 인산으로 pH 6.8 ∼ 7.2로 조정한 후 정제용 컬럼에 주입하여 초당 1～2 방울의 속도로 통과시킨다. 이어서 PBS 용액 10 mL을 같은 유속으로 유출하여 버린 후 메탄올?물(80:20, v/v) 혼합용액 4 mL로 용출시킨다.

  3) 유도체화

     용출액을 약 60℃에서 질소로 건고시킨 후 잔류물에 아세토니트릴?물(50:50, v/v) 혼합용액 200 μL을 가하여 녹이고 이 중 50 μL를 취하여 30℃ 항온조건에서 OPA용액 200 μL과 섞고 2 분간 교반한 것을 시험용액으로 한다. 

   [주의사항] OPA-푸모니신 유도체는 반응 후 시간이 경과함에 따라 형광성이 떨어지므로 유도체화한 후 4분 안에 신속하게 액체크로마토그래프에 주입하여야 한다.

 마. 시험조작

  1) 액체크로마토그래프의 측정조건

   가) 칼럼 : C18 (4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

   나) 이동상 : 메탄올?0.1 M 제일인산나트륨(NaH2PO4) 용액(77 : 23, v/v), 인산을 사용하여 pH 3.3 ～ 3.35로 조정한 후 0.45 μm 막 여과기(membrane filter)로 여과하여 사용

   다) 검출파장

    (1) 여기파장 : 335 nm

    (2) 형광파장 : 440 nm

   라) 유속 : 1 mL/분

   마) 주입량 : 5～20 μL

  2) 검량선 작성

     푸모니신 혼합표준용액을 아세토니트릴?물(50:50, v/v) 혼합용액으로 희석하여 0.1, 0.5, 1.0 및 2.0 μg/mL가 되도록 하고 각각 1 mL을 취하여 60℃에서 질소로 건고한 후 앞의 라. 시험용액의 조제 3) 유도체화에 따라 조작하여 검량선을 작성한다.

  3) 정성시험

    위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

  4) 정량시험

    정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험용액의 크로마토그램으로부터 푸모니신의 피크높이 또는 피크면적을 검량선에 대입하여 정량한다. 이 방법의 정량한계는 푸모니신 B1은 50 ng/g, 푸모니신 B2은 70 ng/g이며, 검출한계는 푸모니신 B1은 30 ng/g, 푸모니신 B2은 50 ng/g이다.

 바. 계산

푸모니신의 함량(mg/kg) = (CFB1 + CFB2) × 50/g

CFB1 : 검량선에서 구한 푸모니신 B1의 농도(μg/mL)

CFB2 : 검량선에서 구한 푸모니신 B2의 농도(μg/mL)

50 : 희석배수

g : 시료 채취량(g)

7.6. 아플라톡신과 오크라톡신(AO) 동시분석법

 가. 적용범위 

    본 분석법은 배합사료와 단미사료 중 아플라톡신 (Aflatoxin B1, B2, G1, G2), 오크라톡신 A (Ochratoxin A)의 동시분석에 적용한다.

 나. 시약 및 표준용액의 제조

  1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

  2) 표준원액: 각 곰팡이독소의 표준품을 유기용매에 녹여 표준원액으로 사용한다.

  3) 표준용액: 표준원액을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석하여 사용한다.

  4) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

 다. 시험용액의 조제

 1) 추출

    균질화된 사료 25 g을 tube에 칭량하여 70% 메탄올 100 mL로 30분간 추출하고, 원심 분리한다(3,000 rpm, 4℃, 15 min). Syringe filter(0.2 μm)로 여과하고 여액 10 mL에 0.01∼0.1% Tween PBS(phosphate buffer saline) 40 mL를 첨가한다. 

  2) 정제

   가) 시료용액 20 mL를 면역컬럼에 주입한 후 컬럼에 있는 공기를 뺀 후 중력하 또는 시료액이 분당 2∼3 mL가 컬럼을 통과하도록 압력을 조절한다. 

   나) 시료액이 면역컬럼을 통과한 후 0.01∼0.1% Tween PBS 10 mL와 증류수 10 mL로 컬럼을 통과시켜 면역 컬럼을 세척한다.

   다) 메탄올 1 mL로 결합된 곰팡이독소를 용리시킨 후, 증류수 1 mL로 한번 더 용리시킨다.

    * 정제과정 중에는 모든 카트리지의 충전제가 마르지 않도록 주의한다.

 라. 고속액체크로마토그래피 분석 조건 

  1) Column: UG120 (4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

  2) Mobile phase: 아세토니트릴, 메탄올, 증류수 (1:3:6, v/v)

    아세토니트릴, 0.1% 포스포린산 (1:1, v/v)

  3) Injection volume: 10 μL

  4) Flow rate: 1.2 mL/min

  5) Detector: 형광검출기, 광화학증폭장치

  6) 검출기 파장

      ┌─────┬───┬───┐

│성분      │Ex    │Em    │

├─────┼───┼───┤

│아플라톡신│360 nm│450 nm│

├─────┼───┼───┤

│오크라톡신│330 nm│460 nm│

└─────┴───┴───┘

   ※ 기기 분석조건은 분석실 실정에 맞게 조정할 수 있다.

 마. 정성시험

    위의 조건에서 시험할 때 시험결과는 어느 측정조건에서도 표준품과 일치하여야 한다.

 바. 정량시험

    정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 정량한다.

  ※ 정량시험은 단일 표준품으로 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

7.7. 아플라톡신, 오크라톡신, 제랄레논(AOZ) 동시분석법

 가. 적용범위 

    본 분석법은 배합사료와 단미사료 중 아플라톡신 (Aflatoxin B1, B2, G1, G2), 오크라톡신 A (Ochratoxin A), 제랄레논(Zearalenone)의 동시분석에 적용한다.

 나. 시약 및 표준용액의 제조

  1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

  2) 표준원액: 각 곰팡이독소의 표준품을 유기용매에 녹여 표준원액으로 사용한다.

  3) 표준용액: 표준원액을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석하여 사용한다.

  4) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

 다. 시험용액의 조제

  1) 추출

    균질화된 사료 25 g을 centrifuge tube에 칭량하여 70% 메탄올 100 mL로 30분간 추출하고, 원심 분리한다(3,000 rpm, 4℃, 15 min). 그 상층액 5 mL를 취하여 25 mL 0.01∼0.1% Tween PBS (phosphate buffer saline) buffer로 희석한다.

  2) 정제

   가) 희석액의 상등액 10 mL를 취하여 면역컬럼에 주입한 후 컬럼에 있는 공기를 뺀 후 중력하 또는 시료액이 분당 2∼3 mL가 컬럼을 통과하도록 압력을 조절한다. 

   나) 시료액이 면역컬럼을 통과한 후 0.01∼0.1% Tween PBS buffer 10mL로 컬럼을 통과시켜 면역 컬럼을 세척한다. 

   다) 메탄올 1 mL로 결합된 곰팡이독소를 용리시킨 후, 증류수 1 mL로 한번 더 용리시킨다.

   라) 질소농축기로 완전히 증발시킨 뒤 500 μL의 메탄올과 500 μL의 0.1% acetic acid를 이용해 재용해 시키고 시료액으로 한다.

    * 정제과정 중에는 모든 카트리지의 충전제가 마르지 않도록 주의한다.

    * 질소농축은 필요에 따라 선택적으로 적용할 수 있다.

 라. 고속액체크로마토그래피 분석 조건  

  1) Column: MG3 (4.6 × 100 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

  2) Mobile phase: 0.1% acetic acid, 메탄올 (7:3, v/v) 혼합액과 아세토니트닐

  3) Injection volume: 10 μL

  4) Flow rate: 0.8 mL/min

  5) Detector: 형광검출기, 광화학증폭장치

  6) 검출기 파장: EX = 365 nm, EM = 435 nm

      ┌─────┬──┬──┬────┐

│Time (min)│Ex  │Em  │Base    │

├─────┼──┼──┼────┤

│0         │365 │435 │        │

├─────┼──┼──┼────┤

│12        │276 │460 │2 : Hold│

├─────┼──┼──┼────┤

│16.5      │330 │460 │2 : Hold│

└─────┴──┴──┴────┘

    ※ 기기 분석조건은 분석실 실정에 맞게 조정할 수 있다.

 마. 정성시험

     위의 조건에서 시험할 때 시험결과는 어느 측정조건에서도 표준품과 일치하여야 한다.

 바. 정량시험

    정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 정량한다.

   ※ 정량시험은 단일 표준품으로 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

7.8. 아플라톡신(B1, B2, G1, G2), 오크라톡신 A, 데옥시니발레놀, 푸모니신(B1, B2), T-2 독소, HT-2 독소, 제랄레논 동시분석방법

 가. 시험법 적용범위

    단미사료, 배합사료에 적용한다.

 나. 분석원리

    검체 중 곰팡이독소(아플라톡신, 데옥시니발레놀, 푸모니신, 오크라톡신 A, T-2 toxin, HT-2 toxin, 제랄레논)를 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-solid phase extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

 다. 장치

    액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)를 사용한다.

 라. 시약 및 시액

  1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

  2) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것 

  3) 표준원액: 푸모니신 표준품을 메탄올/물(5/5, v/v)에, 이를 제외한 곰팡이독소 표준품을 아세토니트릴에 녹여 표준원액으로 사용한다.

  4) 혼합표준용액: 혼합표준원액을 아세토니트릴을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석하고 최종 용액에 증류수 50%가 포함되게 한다.

  5) 혼합내부표준용액: 내부표준물질원액을 아세토니트릴을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

  6) d-SPE: PSA(Primary secondary amine),  C18(Octadecyl bonded silica)

  7) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

 마. 시료 준비

    전체 검체 중 4분법 등으로 대표성이 확보된 500 g이상의 검체를 표준체 30 mesh 이상(체눈크기 600 μm 이하)의 체를 통과하도록 분쇄한다. 체를 통과한 검체를 다시 혼합해 균질화한다. 

 바. 시험용액의 조제

  1) 추출

    균질화한 시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고 10% 포름산 함유 수용액 10 mL와 아세토니트릴 10 mL를 가한 뒤 30분간 진탕한다. 진탕 후 추출물에 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g을 추가하여 1분간 강하게 흔들어 섞은 다음 4℃, 4,000 G에서 10분간 원심분리하여 상층액 1 mL를 취한다.

  2) 정제

    d-SPE(PSA 25 mg과 C18 25 mg)가 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 추출로부터 얻은 상층액 1 mL를 가하고 1분간 충분히 혼합한 후 이를 4℃, 4,000 G에서 10분간 원심분리한다. 정제된 상층액 0.4 mL, 3차 증류수 0.5 mL 및 아세토니트릴 0.1 mL를 합하여 교반한 뒤 4℃에서 30분간 방치 후 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

 사. 시험조작

  1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS) 분석조건

   가) 컬럼: C18 (2.1 × 100 mm, 1.7 μm) 또는 이와 동등한 것 

   나) 컬럼 온도: 40℃

   다) 유속: 0.35 mL/분

   라) 주입량: 2 μL

   마) 이동상: A: 5 mM 포름산암모늄 및 0.1% 포름산 수용액

B: 5 mM 포름산암모늄 및 0.1% 포름산 함유 메탄올

┌────┬──┬──┐

│시간(분)│A(%)│B(%)│

├────┼──┼──┤

│0.0     │95  │5   │

├────┼──┼──┤

│1.5     │95  │5   │

├────┼──┼──┤

│2.5     │70  │30  │

├────┼──┼──┤

│4.0     │40  │60  │

├────┼──┼──┤

│5.0     │20  │80  │

├────┼──┼──┤

│6.0     │1   │99  │

├────┼──┼──┤

│8.5     │1   │99  │

├────┼──┼──┤

│8.6     │95  │5   │

├────┼──┼──┤

│13.0    │95  │5   │

└────┴──┴──┘

  2) 질량분석기 분석조건

   가) 이온화 방법: ESI positive-ion 및 negative-ion mode

   나) Capillary voltage: 3.5 kV

   다) Collision gas: 질소(N2)

  3) 내부표준물질의 첨가 방법은 검량선용 표준용액, 공시험용액 및 검체에 내부표준물질의 일정량을 직접 첨가하거나 자동주입기 프로그램 등을 이용하여 주입 전에 용액과 혼합시키는 방법으로 한다.

  - 예시) 내부표준물질 첨가 수준: 13C17 Aflatoxins 5 μg/L, 13C15 Deoxynivalenol 100 μg/L, 13C34 Fumonisins 50 μg/L, 13C24 T-2 toxin 10 μg/L, 13C22 HT-2 toxin 100 μg/L, Ochratoxin A-d5 5 μg/L, 13C18 Zeralenone 30 μg/L

  4) 곰팡이독소 11성분 및 내부표준물질 MRM(Multiple Reaction Monitoring)

┌───────────┬──────┬──────┬────────┬───────┬──────┐

│분석성분              │머무름시간  │이온화      │선구이온        │생성이온      │충돌에너지  │

│(Compound)            │(Retention  │(Ionization)│(Precursor ion, │(Product ion, │(Collision  │

│                      │time, min)  │            │m/z)            │m/z)          │energy, eV) │

├───────────┼──────┼──────┼────────┼───────┼──────┤

│Aflatoxin B1          │4.53        │[M+H]+      │313.0           │285.0         │25          │

│                      │            │            │                ├───────┼──────┤

│                      │            │            │                │241.0         │40          │

├───────────┼──────┼──────┼────────┼───────┼──────┤

│Aflatoxin B2          │4.42        │[M+H]+      │315.0           │259.0         │35          │

│                      │            │            │                ├───────┼──────┤

│                      │            │            │                │287.0         │35          │

├───────────┼──────┼──────┼────────┼───────┼──────┤

│Aflatoxin G1          │4.29        │[M+H]+      │329.0           │243.0         │30          │

│                      │            │            │                ├───────┼──────┤

│                      │            │            │                │311.0         │20          │

├───────────┼──────┼──────┼────────┼───────┼──────┤

│Aflatoxin G2          │4.16        │[M+H]+      │330.9           │313.0         │25          │

│                      │            │            │                ├───────┼──────┤

│                      │            │            │                │245.0         │35          │

├───────────┼──────┼──────┼────────┼───────┼──────┤

│Deoxynivalenol        │3.04        │[M+H]+      │297.3           │249.1         │10          │

│                      │            │            │                ├───────┼──────┤

│                      │            │            │                │191.0         │58          │

├───────────┼──────┼──────┼────────┼───────┼──────┤

│Fumonisin B1          │5.08        │[M+H]+      │722.0           │352.3         │45          │

│                      │            │            │                ├───────┼──────┤

│                      │            │            │                │704.2         │40          │

├───────────┼──────┼──────┼────────┼───────┼──────┤

│Fumonisin B2          │5.53        │[M+H]+      │706.4           │335.9         │35          │

│                      │            │            │                ├───────┼──────┤

│                      │            │            │                │354.3         │30          │

├───────────┼──────┼──────┼────────┼───────┼──────┤

│Ochratoxin A          │5.49        │[M+H]+      │404.1           │238.9         │25          │

│                      │            │            │                ├───────┼──────┤

│                      │            │            │                │192.7         │50          │

├───────────┼──────┼──────┼────────┼───────┼──────┤

│T-2 toxin             │5.31        │[M+NH4]+    │483.8           │215.0         │20          │

│                      │            │            │                ├───────┼──────┤

│                      │            │            │                │263.1         │10          │

├───────────┼──────┼──────┼────────┼───────┼──────┤

│HT-2 toxin            │5.05        │[M+NH4]+    │442.5           │263.1         │10          │

│                      │            │            │                ├───────┼──────┤

│                      │            │            │                │215.1         │10          │

├───────────┼──────┼──────┼────────┼───────┼──────┤

│Zearalenone           │5.55        │[M-H]-      │317.0           │175.1         │25          │

│                      │            │            │                ├───────┼──────┤

│                      │            │            │                │186.9         │15          │

├───────────┼──────┼──────┼────────┼───────┼──────┤

│13C17 Aflatoxin B1    │4.53        │[M+H]+      │330.1           │301.0         │25          │

│                      │            │            │                ├───────┼──────┤

│                      │            │            │                │283.9         │40          │

├───────────┼──────┼──────┼────────┼───────┼──────┤

│13C17 Aflatoxin B2    │4.42        │[M+H]+      │332.0           │273.0         │30          │

│                      │            │            │                ├───────┼──────┤

│                      │            │            │                │257.0         │35          │

├───────────┼──────┼──────┼────────┼───────┼──────┤

│13C17 Aflatoxin G1    │4.29        │[M+H]+      │346.0           │257.0         │30          │

│                      │            │            │                ├───────┼──────┤

│                      │            │            │                │299.0         │30          │

├───────────┼──────┼──────┼────────┼───────┼──────┤

│13C17 Aflatoxin G2    │4.16        │[M+H]+      │348.0           │330.0         │30          │

│                      │            │            │                ├───────┼──────┤

│                      │            │            │                │301.2         │30          │

├───────────┼──────┼──────┼────────┼───────┼──────┤

│13C15 Deoxynivalenol  │3.04        │[M+H]+      │312.0           │215.8         │10          │

│                      │            │            │                ├───────┼──────┤

│                      │            │            │                │198.0         │15          │

├───────────┼──────┼──────┼────────┼───────┼──────┤

│13C34 Fumonisin B1    │5.08        │[M+H]+      │756.1           │374.3         │40          │

│                      │            │            │                ├───────┼──────┤

│                      │            │            │                │356.3         │45          │

├───────────┼──────┼──────┼────────┼───────┼──────┤

│13C34 Fumonisin B2    │5.53        │[M+H]+      │740.0           │374.3         │50          │

│                      │            │            │                ├───────┼──────┤

│                      │            │            │                │356.33        │40          │

├───────────┼──────┼──────┼────────┼───────┼──────┤

│Ochratoxin A-d5       │5.49        │[M+H]+      │409.1           │321.0         │36          │

│                      │            │            │                ├───────┼──────┤

│                      │            │            │                │239.5         │20          │

├───────────┼──────┼──────┼────────┼───────┼──────┤

│13C24 T-2 toxin       │5.31        │[M+NH4]+    │508.0           │322.1         │10          │

│                      │            │            │                ├───────┼──────┤

│                      │            │            │                │260.07        │10          │

├───────────┼──────┼──────┼────────┼───────┼──────┤

│13C22 HT-2 toxin      │5.05        │[M+NH4]+    │464.2           │278.1         │10          │

│                      │            │            │                ├───────┼──────┤

│                      │            │            │                │229.1         │15          │

├───────────┼──────┼──────┼────────┼───────┼──────┤

│13C18 Zearalenone     │5.55        │[M-H]-      │335.1           │185.0         │40          │

│                      │            │            │                ├───────┼──────┤

│                      │            │            │                │140.0         │40          │

└───────────┴──────┴──────┴────────┴───────┴──────┘

 * 밑줄 그은 이온은 정량이온이며, 그 외는 정성이온임.

 ** 각 생성이온에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적 값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함.

 아. 정성 및 정량시험

  1) 정성 및 정량을 위한 시험은 3회 이상 실시한다. 

  2) 검량선 작성

   가) 표준용액을 농도별로 분석기기에 각각 주입하여 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

   나) 검량선의 적정성을 평가하는데 결정계수뿐만 아니라 각 농도에서의 잔차가 ± 20% 이하인지 확인하고, 잔차가 ±20%를 넘는 경우 검량선을 작성할 때 가중치 적용(1/x) 방식을 활용할 수 있다.

  3) 정성시험

    위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간(retention time)과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온(Product ion)간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율이 ± 30% 이내에서 일치하여야 한다.

  4) 정량시험

   가) 정성시험에서 검출된 곰팡이독소는 아래 나)의 방법에 따라 정량한다. 

   나) 내부표준물질을 이용하여 표준물질과 내부표준물질과의 피크 면적(또는 높이)의 비로부터 표준물질 각각의 검량선을 작성하고 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)과 내부표준물질의 정량이온과의 각 피크 면적(또는 높이) 비에 따라 각각 정량한다. 

   다) 정량한계

    (1) Aflatoxin B1, B2, G1, G2: 0.0025 mg/kg

    (2) Deoxynivalenol: 0.05 mg/kg 

    (3) Fumonisin B1, B2: 0.05 mg/kg

    (4) Ochratoxin A: 0.01 mg/kg

    (5) T-2 toxin: 0.05 mg/kg

    (6) HT-2 toxin: 0.05 mg/kg

    (7) Zearalenone: 0.0125 mg/kg

8장. 유해미생물

8.1. 살모넬라(Salmonella) 

 가. 증균 배양에 의한 검사법

  1) 증균 및 분리

   가) 1차증균배양: 시료 25 g을 취하여 225 mL의 펩톤수(Beffered peptone water)에 가한 후 35~37℃ 에서 24±2시간 증균 배양한다. 

   나) 2차증균배양: 1차증균배양액 0.1 mL를 취하여 10 mL의 Rappaport-Vassiliadis broth에 접종하여 42±1℃에서 24±2시간 배양한다. 또한 1차증균배양액 1 mL를 취하여 10 mL의 Tetrathionate Broth에 접종하여 36±1℃에서 24±2시간 배양한다.

   다)분리배양: 각각의 2차증균배양액 1∼2 백금이를 MacConkey agar, SS(Salmonella&Shigella) agar, Desoxycholate Citrate agar, XLD agar, Bismuth Sulfite agar 또는 Brilliant Green Sulfa (BG Sulfa) Agar 중 2개를 선택, 도말하여 35~37℃에서 24±2시간 배양한 후  집락을 관찰한다. 이때 살모넬라 의심 집락은 확인시험을 한다.

  2) 확인시험 

   가) 살모넬라로 의심되는 집락을 보통한천배지에 옮겨 35~37℃에서 18~24시간 배양한 후, TSI 사면배지의 사면과 고층부에 접종하고 35~37℃에서 18~24시간 배양하여 생물학적 성상을 검사한다. 유당, 서당 비분해(사면부 적색), 가스생성(균열 확인) 양성이면 생화학 검사를 실시한다.

   나) 생화학 검사

      생화학검사는 우선 Urea 반응검사와 Phenylalanine 반응검사를 실시하여 음성을 나타내는 균에 대해 진행하며 살모넬라의 일반적인 생화학적 반응은 다음과 같다.

┌─────────┬─────┬─────┐

│균                │Salmonella│S. typhosa│

│성상              │          │          │

├────┬────┼─────┼─────┤

│TSI agar│Glucose │+         │+         │

│(KIA)   │Lactose │-         │-         │

│        │Sucrose │-         │-         │

│        │gas 형성│+         │-         │

│        │H2S 생성│+         │(±)      │

├────┴────┼─────┼─────┤

│Indole            │-         │-         │

│Methyl Red        │+         │+         │

│Voges Proskauer   │-         │-         │

│Citrate           │(±)      │(±)      │

│Urea              │-         │-         │

│KCN               │-         │-         │

│운동성            │+         │+         │

│Phenylalanine     │-         │-         │

│Gelatin 액화      │-         │-         │

└─────────┴─────┴─────┘

    ※ (±)는 양성 이거나 음성

   다) 혈청군(Serogroup)결정 시험

      이상의 생화학 검사결과 살모넬라로 판단되는 균들의 혈청학적 검사를 실시하는데 먼저 O항원 다가(Polyvalent) 항혈청(Difco 社)으로 슬라이드 응집반응을 실시하여 Polygroup을 결정한 후 단일(Single) 항혈청(Difco 社) 슬라이드 응집반응을 통해 혈청군(Serogroup)을 결정하여 D group 여부를 확인한다.

   □ Salmonella D Group의 주요 혈청군

┌──────┬───┬─────────┐

│Serotype    │ Group│Antigenic Formula │

│            │      │ Somatic(O)       │

├──────┼───┼─────────┤

│ typhi      │D1    │9, 12,(Vi)        │

│ enteritidis│D1    │1, 9, 12          │

│ dublin     │D1    │1, 9, 12          │

│ pullorum   │D1    │9, 12             │

│ gallinarum │D1    │1, 9, 12          │

│ ontario    │D2    │9, 46             │

└──────┴───┴─────────┘

 나. 키트(Kit)에 의한 간이 검사법

  1) 시약 및 기구

   가) 고압멸균기, 시험관(10 mL, 20 mL용량), Reader기, 삼각플라스크, 배양기 (2대), 탈지면, 멸균기

   나) Buffered peptone water 용액 : 시약 20 g을 1 L증류수나 비이온수에 녹이고 멸균하여 사용한다.

   다) Selenite broth : Selenite broth 2.3 g을 증류수 100 mL에 용해하여 끓을 때 까지 가열한 후 방냉한다.

   라) Iodine용액 : 5 g KI를 증류수 20 mL로 녹인 용액에 Iodine Crystal 6g을 넣고 녹인다.

   마) M-broth(혹은 GN broth) : 시약 3.62 g을 증류수 100 mL에 넣고 1분간 끓여 멸균 및 용해시킨다.

  2) 시료액의 배양

   가) 시료 25 g을 칭량하여 멸균한 300 mL 삼각플라스크에 넣고 멸균한 225 mL Buffered peptone water를 혼합하여 37℃에서 18∼24시간 배양한다.

   나) 배양액 1 mL씩 분취하여 10 mL의 Selenite cystine broth와 Tetrathionate broth에 각각 혼합하여 Selenite cystine broth 시험관은 37℃에서 Tetrathionate broth 시험관은 42℃±0.5에서 18∼24시간 배양한다.

   다) 각각의 선택배양액 1 mL를 분취하여 멸균한 10 mL의 M-broth와 혼합하여 42℃±0.5에서 4～6시간 배양한다.

   라) 오염이 덜한 시료인 경우에는 상기 나)와 다)의 배양시간을 바꾸어 행한다.

  3) 방법

   가) Salmonella kit를 냉장상태에서 실온으로 방치한다.

   나) M-broth 배양액을 1 mL씩 시험관에 분취하여 옮겨 멸균하고 실온으로 식힌다.

   다) 각각의 Well에 양성음성 기준물 100 μL와 시료 100 μL를 취하여 첨가한 후 시료의 위치를 기록하고 실온에서 30분간 배양한다.

   라) Well buffer로 3회, 증류수로 1회 세척한 후 물기를 제거한다.

   마) 각각의 Well working conjugate 100 μL식 첨가한 후 실온에서 30분간 배양한다.

   바) 각각의 Well에 TMB Substrate 100 μL씩 첨가한 후 실온암실에서 30분간 배양한다.

   사) 1 N H2SO4 50 μL를 각각의 Well에 첨가한 후 10～15분내에 Reader기로 읽는다.

 다. 효소면역기법(Enzyme Immunoassay(EIA) KIT)에 의한 검출법

  1) 분석원리 : 전자동 효소 형광 면역 분석기의 키트(Kit) 이용하여 살모넬라균 음성 또는 양성임을 추정하고 생화학적시험법과 혈청학적시험법으로 최종 salmonella 혈청형(D)을 판정한다.

  2) 실험방법

   가) 추정시험

     (1) 시료 25 g을 칭량하여 225 mL 펩톤수(Buffered peptone water)에 가한 후 1 mL salmonella supplement(green)를 첨가하여 41.5±1℃에서 18～24시간 증균 배양한다.

     (2) EIA 키트에 증균한 배양액 0.5 mL를 넣고 100℃에서 5분간 Heating한 후 키트를 빼서 10분간 방냉한다.

     (3) 전자동 효소 형광 면역 분석기기에 넣고 결과를 측정한다.

     (4) 음성 : <0.25, 양성 :??0.25 

   나) 분리배양

       양성일 경우 증균배양액을 MacConkey 한천배지, Desoxycholate Citrate 한천배지, XLD 한천배지 또는 Bismuth Sulfite 한천배지에 접종하여 35~37℃에서 24±2시간 배양한 후 전형적인 집락이 보이면 보통한천배지에 옮겨 35∼37℃에서 18∼24시간 배양한 후 확인시험을 실시한다.

   다) 확인시험

    (1) 미생물 동정기기를 통한 확인시험

       초미량의 각종 건조 배지 및 생화학적 반응물이 들어 있는 64개의 마이크로웰이 있는 플라스틱 카드를 사용하여 동정한다. 카드의 마이크로웰 내부에서 균의 증식 및 대사가 이루어지고, 이러한 화학반응의 변화를 매 15분마다 Transmittance/Colorimetry Optics으로 측정하여 프로그램 상에서 분석 되어진 후 동정결과가 자동으로 출력된다.

    (2) 혈청군(Serogroup)결정시험

       먼저 O항원 다가(Polyvalent)항혈청으로 슬라이드 응집반응을 실시하여 Polygroup을 결정한 후 단일(Single)혈청 슬라이드 응집반응을 통해 혈청군(Serogroup)을 결정하여 D Group 여부를 확인한다.

 라. 분자생물학적 시험법

 * 본 방법은 신속분석을 위한 스크리닝분석법으로 활용하기 위한 방법이다.

  1) 증균 배양

    8.1. 살모넬라(Salmonella) 가. 증균 배양에 의한 검사법 1) 증균 및 분리 가) 1차 증균배양 방법에 따라 실시한다.

  2) 주형유전자 준비

    증균 배양액(1∼2 mL)을 취한 후 10분간 끓여 원심분리하고, 상등액 10∼20 μL를 취하여 시료로 사용한다.

   ※ 상기의 방법과 동등 이상인 유전자 추출키트 및 장비를 사용할 수 있다.

  3) Real-time PCR 프라이머 및 프로브 염기서열

┌───┬────────┬────────────────────┐

│유전자│프라이머/프로브 │염기서열(5‘→3’)                      │

├───┼────────┼────────────────────┤

│invA  │invA-F          │ 5‘-GAA TCC TCA GTT TTT CAA CGT TTC-3’│

│      │                │                                        │

│      │invA-R          │ 5‘-CGA ATT GCC CGA ACG TGG CGA-3’    │

│      │                │                                        │

│      │invA-P          │ 5‘-FAM - CTC TTT CGT CTG GCA TTA TCG  │

│      │                │ATC AGT ACC AG - BHQ1-3’               │

└───┴────────┴────────────────────┘

  4) Real-time PCR 반응액 조제

┌────────┬──────┬───────┬────┐

│성분            │최종농도    │Stock용액 농도│1회 용량│

├────────┼──────┼───────┼────┤

│Master Mix1)    │1×         │2×           │10 μL  │

├────────┼──────┼───────┼────┤

│invA 프라이머(F)│0.5 pmol/μL│10 pmol/μL   │1 μL   │

├────────┼──────┼───────┼────┤

│invA 프라이머(R)│0.5 pmol/μL│10 pmol/μL   │1 μL   │

├────────┼──────┼───────┼────┤

│invA 프로브(P)  │0.1 pmol/μL│2 pmol/μL    │1 μL   │

├────────┼──────┼───────┼────┤

│주형 DNA        │-           │-             │5 μL   │

├────────┼──────┼───────┼────┤

│증류수          │-           │-             │2 μL   │

├────────┼──────┼───────┼────┤

│총량            │-           │-             │20 μL  │

└────────┴──────┴───────┴────┘

   1) PowerAmpTM Real-time PCR Master Mix와 동등 이상의 시약을 사용할 수 있다

  5) Real-time PCR 반응조건

    PCR 반응조건은 50℃에서 2분간 유지 및 95℃에서 10분간 방치하여 최초 변성이 일어나게 한 후, 95℃에서 15초간 변성시키고, 60℃에서 1분간 유전자 결합 및 신장반응이 일어나는 것을 1회로 하여 총 40회의 증폭반응을 한다.

┌────────────────┬──┬──┬────┐

│구분                            │온도│시간│반응회수│

├────────────────┼──┼──┼────┤

│                                │50℃│2분 │1회     │

├────────────────┼──┼──┼────┤

│초기변성(Initial denaturation)  │95℃│10분│1회     │

├────────────────┼──┼──┼────┤

│변성(denaturation)              │95℃│15초│40회    │

├────────────────┼──┼──┤        │

│결합(annealing)/신장(extension) │60℃│1분 │        │

└────────────────┴──┴──┴────┘

      * 상기 PCR 조건이 최적이 아닌 경우 변형하여 사용할 수 있다.

  6) 결과 확인

   가) PCR 반응에서 증폭곡선이 확인되지 않는 경우 살모넬라 불검출로 판정할 수 있다. 다만, 음성대조군에서 증폭곡선이 확인되거나 양성대조군에서 증폭곡선이 확인되지 않을 경우 재시험하여야 한다.

   나) 증폭곡선이 확인되는 경우 분리배양 후 8.1. 살모넬라(Salmonella) 가. 증균 및 배양에 의한 검사법 2) 확인시험에 따라 살모넬라로 동정되면 검출로 판정한다.

  7) 혈청군(Serogroup) 결정 시험

   (1) 6)의 검사결과 살모넬라로 판단되는 균들의 혈청학적 검사를 실시하는데 먼저 O항원 다가(Polyvalent) 항혈청으로 슬라이드 응집반응을 실시하여 Polygroup을 결정한 후 단일(Single) 항혈청 슬라이드 응집반응을 통해 혈청군(Serogroup)을 결정하여 D group 여부를 확인한다.

9장. 잔류농약

9.1. 유기인계 및 유기염소계 다성분 분석

 가. 유기인계 동시분석

     파라치온(Parathion), 펜치온(Fenthion), 페니트로치온(Fenitrothion), 말라치온(Malathion), 디클로르보스(Dichlorvos = DDVP), 클로르피리포스메틸(Chlorpyri fos-methyl), 피리미포스메틸(Pirimiphos-methyl), 펜토에이트(Phenthoate), 다이아지논(Diazinon)

  1) 표준용액의 제조

    각 표준품을 1000 μg/mL이 되도록 헥산에 녹여 표준원액으로 하고, 적정농도로 희석하여 단일표준용액 또는 혼합표준용액을 조제한다.

  2) 시약 및 초자

   가) 시약

    (1) 아세톤, 디클로르메탄, 헥산, 아세토니트릴(잔류농약분석용 또는 동급), Na2SO4, 무수(잔류농약분석용 또는 동급), NaCl(잔류농약분석용 또는 동급), 에틸에테르(잔류농약분석용 또는 동급) 실리카겔(컬럼크로마토그래피용), 규조토,

    (2) 용출액 A = 아세토니트릴 : 헥산 : 디클로르메탄 = 0.35 : 49.65 : 50B = 아세토니트릴 : 헥산 : 디클로르메탄 = 1.5 : 48.5 : 50C = 헥산 : 에틸에테르 = 50 : 50

   나) 초자

      삼각플라스크(300 mL), 부크너여두, 농축용플라스크(125 mL, 250 mL), 분액여두(1000 mL), 메스실린더(100 mL), 피펫(3 mL, 5 mL), No. 6 여과지, 유리컬럼(테프론 콕 포함, Φ1 cm×50 cm), 탈지면(아세톤으로 추출한 것), Vial(4 mL, 8 mL)

  3) 방법

   가) 추출

      시료 20 g을 삼각플라스크에 칭량하고, 증류수 30～40 mL를 넣어 1시간 방치한 후, 아세톤 100 mL를 첨가하여 2～3시간 진탕 한다. 진탕 후, 부크너여두에 No. 6 여과지와 규조토(celite 545 또는 Hyflosupercel) 를 깔고, 여두 아래 삼각플라스크를 놓고 흡인여과 한다. 소량의 아세톤으로 삼각플라스크와 여두내의 잔사를 세척하여 여과액에 합친다.

   나) 분배

      시료용액을 1000 mL 분액여두로 옮기고, 포화식염수 100 mL, 증류수 400 mL, 디클로르메탄 50 mL를 넣고 약 4분간 진탕시킨다. 진탕 후, 잠시 정치시켜 아래쪽의 디클로르메탄층을 Na2SO4(무수)를 통과시켜 수분을 제거한 후, 250 mL 농축용플라스크에 받는다.(1액) 상층액에 다시 디클로르메탄 50 mL를 넣고 진탕시켜 디클로르메탄층을 1액과 합친다. 이를 실온에서 회전증발농축기로 거의 대부분을 농축시킨 다음 질소 가스로 완전히 농축시킨다. 잔사를 헥산 5 mL로 용해시킨다.

   다) 정제(컬럼크로마토그래피)

      유리컬럼을 아세톤으로 추출한 탈지면으로 막고 실리카겔 5g을 넣은 후, Na2SO4(무수) 1스푼 정도(높이 1～2 cm)를 넣는다. 이때 컬럼내로 균일하게 들어가도록 한다. 헥산 50 mL를 흘려버리고 시료액 3 mL를 loading한다. 다시 헥산 50 mL를 흘려버리고 용출액 A, B, C을 차례로 흘려 각각 125 mL 농축용플라스크로 받는다. 실온에서 회전증발농축기로 거의 대부분을 농축시킨 다음 질소 가스로 완전히 농축시킨다. 잔사를 헥산 3 mL로 용해시켜 기기 분석용 시료액으로 한다.

  4) 측정조건(Gas chromatograph) (예)

   가) 주입부 온도 : 220℃

   나) 오븐온도 : 140℃(1분) - 분당 3℃상승 - 210℃(1분)

   다) 검출기 : 질소인검출기(NPD), 온도 - 250℃, H2 - 3.0 mL, Air - 60 mL

   라) Column : Capillary HP-5 또는 이와 동등한 것(5% phenyl methyl siloxane, 30.0 m×0.32 mm, 0.25 μm)

   마) Carrier gas : N2-2.3 mL/min

   바) 주입량 : 1 μL

  5) 계산

ppm=검량선(ng)×{최종희석량( mL)/주입량(μL)}×{1/시료무게(g)}

 나. 유기염소계 동시분석

    비에치씨(BHC), 디디티(DDT : p,p'-DDT, o,p'-DDT), 헵타크롤(Heptachlor), 헵타크롤에폭사이드(Heptachlor epoxide), 엔드린(Endrin), 알드린(Aldrin), 디엘드린(Dieldrin)

  1) 시약의 조제

   가) 표준원액

      α-비에치씨(BHC), β-비에치씨(BHC), γ-비에치씨(BHC), δ-비에치씨(BHC), 디디티(DDT：p,p'-DDT, o,p'-DDT), 헵타크롤(Heptachlor), 헵타크롤에폭사이드(Heptachlor epoxide), 엔드린(Endrin), 알드린(Aldrin), 디엘드린(Dieldrin)을 각각 20 mg씩을 정확히 칭량하여, 각각 100 mL의 메스플라스크에 넣고 아세톤 20 mL로 용해 후 2,2,4-트리메틸펜탄을 표선까지 채워 표준원액을 만든다. 사용할 때 각각의 표준원액을 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1)로 희석하여 0.1 0.2, 0.3, 0.4ppm 혼합표준액으로 만들어 사용한다.

   나) 규산마그네슘

      합성규산마그네슘[(입경 149～250 μm(100～60mesh) : 플로리실 PR 미국의 Floridin제]을 130℃에서 5시간 이상 건조한다.

  2) 방법

   가) 추출

      시료 20 g을 삼각플라스크에 칭량하고 아세토니트릴+증류수(13+7) 150 mL를 첨가하여 진탕기 250rpm에서 2～3시간 진탕 추출한다. Bell-Jar에 부크너여두를 연결하여 No. 6 여과지를 깔고 그 위에 규조토를 깔고, 여두 아래 300 mL 삼각플라스크를 놓고 흡인여과 한다. 소량의 아세토니트릴로 삼각플라스크와 여두내의 잔사를 세척하여 여과액에 합친다.

   나) 분배

      여과액을 1000 mL 분액여두로 옮기고, 포화식염수 100 mL, 증류수 400 mL, 헥산 50 mL를 넣고 진탕기에서 약 10분간 진탕시킨다. 진탕 후, 잠시 정치시켜 헥산층을 분리하고 하층의 혼합액(증류수+아세토니트릴)을 다른 분액여두에 옮기고 여기에 다시 헥산 50 mL를 가하여 진탕추출한다. 250 mL 농축플라스크에 깔대기를 놓고 여과지로 막은 후 Na2SO4를 넣고 헥산층을 여과한다. 40℃이하의 회전증발농축기로 거의 대부분을 농축시킨 다음 질소 가스로 완전히 농축시킨다. 잔사를 헥산 5 mL로 용해시킨다.

   다) 정제(컬럼크로마토그래피)

      유리컬럼을 아세톤으로 추출한 탈지면으로 막고 규산마그네슘 5 g, 셀룰로스 1 g, Na2SO4 4 g을 각각 헥산으로 현탁시켜 컬럼에 순차적으로 넣고 헥산 40 mL를 가하여 액층이 충진제의 상면에서 3 mm 높이가 될 때까지 유출시키고 시료추출액 3 mL를 가하여 분당 2～3 mL 속도로 유출시킨다. 컬럼 밑에 125 mL 농축플라스크를 놓고 40% 헥산 함유 벤젠 100 mL로 용출 후 용출액을 40℃이하의 회전증발농축기에서 증발시키고 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1) 3 mL로 용해하여 시료분석용 시료로 한다.

  3) 측정조건(Gas chromatograph) (예)

   가) 주입부 온도 : 235℃

   나) 오븐온도 : 150℃(2분) - 분당 5℃상승 - 275℃(5분)

   다) 검출기 : 전자포획검출기(ECD), 온도 - 275℃, Anode purge flow - 6.0 mL/min, makeup flow - 60.0 mL/min

   라) Column : RTX-1701

   마) Carrier gas : He-1.0 mL/min

   바) Make-up gas : N2 250mPa

  4) 계산

ppm = 검량선(ng)×{최종희석량( mL)/주입량( μL)}×{1/시료무게(g)}

9.2. 유기인계(Organophosphorus)

9.2.1. 다이아지논(Diazinon) [C12H21N2O3PS]

 가. 시약의 조제

  1) 다이아지논 표준액

    다이아지논 20 mg을 정확히 칭량하여 100 mL의 갈색메스플라스크에 넣는다. 아세톤 20 mL를 가하여 용해하고 표선까지 2,2,4-트리메틸펜탄(iso-octane)을 가하여 다이아지논 표준원액을 조제한다.(이 액 1 mL는 다이아지논 0.2 mg을 함유한다) 사용시 표준원액의 일정량을 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1)으로 정확히 희석하여 1 mL중에 0.1, 0.2, 0.5, 1 및 2 μg을 함유하는 각 다이아지논 표준액을 조제한다.

  2) 규산마그네슘

    합성규산마그네슘[입경 149～250 μm(100～60mesh) : 플로리실 PR. 미국의 Floridin Co.제]을 130℃에서 16시간 건조한다.

  3) L-시스틴염산용액 : L-시스틴염산염1수화물 4.2 g을 증류수에 용해하여 250 mL로 한다.

 나. 방법

  1) 추출

    시료 10.0～20.0 g을 칭량하여 300 mL의 분액여두에 넣는다. L-시스틴염산염용액 30 mL를 가하여 30분간 방치한 후, 아세톤 70 mL를 가하고 30분간 진탕한 후 추출한다. 200 mL의 메스플라스크를 부크너여두 아래에 놓고 추출액을 No.5B 여과지로 흡인여과 한다. 아세톤+증류수(7+3)를 메스플라스크의 표선까지 가하여, 정제용 시료용액으로 한다. 용기 및 잔사를 아세톤+증류수(7+3) 50 mL로 세정한다.

  2) 분배

    시료용액 100 mL를 미리 염화나트륨용액(5W/V%) 250 mL 및 디클로르메탄 50 mL를 넣은 500 mL의 분액여두에 넣고 5분간 진탕한다. 방치한 후, 디클로르메탄층(하층)을 삼각플라스크에 넣는다. 디클로르메탄 50 mL를 분액여두에 가하여 진탕한 후 방치하고, 디클로메탄층을 위의 삼각플라스크에 가한다. 적당량의 황산나트륨(무수)을 가하여 탈수하고, 300 mL의 플라스크에 분액여과지로 여과한 후, 용기 및 여과지를 소량의 디클로르메탄으로 세정하고, 여액을 합한다. 여액을 40℃ 이하의 수욕조에서 대부분 건고될 때까지 감압농축한 후, 질소가스로 건고한다. 잔류물을 200 mL의 분액여두에 헥산 30 mL로 용해한다. 아세토니트릴+증류수(100+1) 30 mL를 가하고, 5분간 진탕하고 정치한 후, 아세토니트릴(하층)을 300 mL 플라스크에 넣는다. 아세토니트릴+증류수(100+1) 30 mL를 분액여두에 가하고, 동일하게 조작한다. 아세토니트릴층을 40℃이하의 수욕조에서 대부분 건고될때까지 감압농축한 후, 질소가스로 건고한다. 헥산+아세톤(19+1) 5 mL를 가하여 잔류물을 용해하고, 컬럼크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

  3) 정제(컬럼크로마토그래피)

    컬럼관(내경 15 mm)에 황산나트륨(무수) 2 g, 규산마그네슘 5 g 및 황산나트륨(무수) 2 g을 각각 헥산+아세톤(19+1)으로 현탁시킨 것을 순차적으로 주입한다. 액면이 충진제의 상층에서 3 mm의 높이가 될 때까지 주입시켜서 정제용컬럼을 조제한다. 컬럼의 하층에 300 mL의 플라스크에 시료용액을 컬럼에 넣고 용기를 헥산+아세톤(19+1) 5 mL로 5회 세정하여, 세액을 순차적으로 컬럼에 가한다. 액면이 충진제의 상면에서 3 mm의 높이가 될 때까지 유출시켜 다이아지논을 헥산+아세톤(19+1) 70 mL로 유출시킨다. 아세톤+디에틸렌글리콜(99+1) 2～3방울을 가하고, 유출액을 40℃이하의 수욕조에서 대부분 건고될때까지 감압농축한 다음, 질소가스로 건고한다. 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1) 5 mL를 정확히 가하여 잔류물을 용해하고, 가스크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

 다. 측정조건(Gas chromatograph)

  1) 검출기 : 염광광도검출기(인검출용필터)

  2) 칼럼 : 용융석영제 캐필러리컬럼(5% 페닐, 95% 메틸실리콘코팅, 30 m × 0.32 mm, 0.25 μm)

  3) 캐리어가스 : He 1.5 mL/min

  4) 보조가스 : N2 30 mL/min

  5) 수소 : 75 mL/min

  6) 공기 : 100 mL/min

  7) 시료도입부 온도 : 230℃

  8) 칼럼조 온도 : 초기온도 60℃(1분 유지)

  9) 승온 : 10℃/min, 170℃(21분), 10℃/min, 240℃(12분)

  10) 검출기 온도 : 250℃

 라. 계산

    측정된 크로마토그램에서 피크면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시료중의 다이아지논 함량을 산출한다.

9.2.2. 파라치온(Parathion) [C10H14NO5PS]

 가. 시약의 조제

  1) 파라치온 표준액

    파라치온 20 mg을 정확히 칭량하여 100 mL의 갈색메스플라스크에 넣는다. 아세톤 20 mL를 가하여 용해하고 표선까지 2,2,4-트리메틸펜탄을 가하여 파라치온 표준원액을 조제한다.(이 액 1 mL는 파라치온 0.2 mg을 함유한다) 사용시, 표준원액의 일정량을 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1)으로 정확히 희석하여 1 mL중에 0.1, 0.2, 0.5, 1, 2 μg을 함유하는 각 파라치온 표준액을 조제한다.

  2) 규산마그네슘

    합성규산마그네슘[입경 149～250 μm(100～60mesh) : 플로리실 PR. 미국의 Floridin Co.제]을 130℃에서 16시간 건조한다.

  3) L-시스틴염산용액 : L-시스틴염산염1수화물 4.2g을 증류수에 용해하여 250 mL로 한다.

 나. 방법

  1) 추출

    시료 10.0～20.0 g을 칭량하여 300 mL의 분액여두에 넣는다. L-시스틴 염산염용액 30 mL를 가하여 30분간 방치한 후, 아세톤 70 mL를 가하고 30분간 진탕한 후 추출한다. 200 mL의 메스플라스크를 부크너여두 아래에 놓고 추출액을 No.5B 여과지로 흡인여과 한다. 아세톤+증류수(7+3)를 메스플라스크의 표선까지 가하여, 정제용 시료용액으로 한다. 용기 및 잔사를 아세톤+증류수(7+3) 50 mL로 세정한다.

  2) 분배

    시료용액 100 mL를 미리 염화나트륨용액(5W/V%) 250 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 넣은 500 mL의 분액여두에 넣고 5분간 진탕한다. 방치한 후, 디클로로메탄 층(하층)을 삼각플라스크에 넣는다. 디클로로메탄 50 mL를 분액여두에 가하여 가볍게 진탕한 후 방치하고, 디클로로메탄 층을 위의 삼각플라스크에 가한다. 적당량의 황산나트륨(무수)을 가하여 탈수하고, 300 mL의 플라스크에 분액여과지로 여과한 후, 용기 및 여과지를 소량의 디클로로메탄으로 세정하고, 여액을 합한다. 여액을 40℃ 이하의 수욕조에서 대부분 건고될 때까지 감압농축한 후, 질소가스로 건고한다. 잔류물을 200 mL의 분액여두에 헥산 30 mL로 용해한다. 아세토니트릴+증류수(100+1) 30 mL를 가하고, 5분간 진탕하고 정치한 후, 아세토니트릴(하층)을 300 mL 플라스크에 넣는다. 아세토니트릴+증류수(100+1) 30 mL를 분액여두에 가하고, 동일하게 조작한다. 아세토니트릴 층을 40℃이하의 수욕조에서 대부분 건고될 때까지 감압농축한 후, 질소가스로 건고한다. 헥산+아세톤(19+1) 5 mL를 가하여 잔류물을 용해하고, 컬럼크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

  3) 정제(컬럼크로마토그래피)

    컬럼관(내경 15 mm)에 황산나트륨(무수) 2 g, 규산마그네슘 5 g 및 황산나트륨(무수) 2 g을 각각 헥산+아세톤(19+1)으로 현탁시킨 것을 순차적으로 주입하고, 액면이 충진제의 상층에서 3 mm의 높이가 될 때까지 주입시켜서 정제용 컬럼을 조제한다.  시료용액을 컬럼에 넣고 용기를 헥산+아세톤(19+1) 5 mL로 5회 세정하여, 세액을 순차적으로 컬럼에 가한다. 액면이 충진제의 상면에서 3 mm의 높이가 될 때까지 유출시켜 파라치온을 헥산+아세톤(19+1) 70 mL로 유출시킨다. 아세톤+디에틸렌글리콜(99+1) 2～3방울을 가하고, 유출액을 40℃이하의 수욕조에서 대부분 건고될때까지 감압농축한 다음, 질소가스로 건고한다. 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1) 5 mL를 정확히 가하여 잔류물을 용해하고, 가스크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

 다. 측정조건(Gas chromatograph)

  1) 검출기 : 염광광도검출기(인검출용필터)

  2) 칼럼 : 용융석영제 캐필러리컬럼(5% 페닐, 95% 메틸실리콘코팅, 30 m × 0.32 mm, 0.25 μm)

  3) 캐리어가스 : He 1.5 mL/min

  4) 보조가스 : N2 30 mL/min

  5) 수소 : 75 mL/min

  6) 공기 : 100 mL/min

  7) 시료도입부 온도 : 230℃

  8) 칼럼조 온도 : 초기온도 60℃(1분 유지)

  9) 승온 : 10℃/min, 170℃(21분), 10℃/min, 240℃(12분 유지)

  10) 검출기 온도 : 250℃

 라. 계산

      측정된 크로마토그램에서 피크면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시료중의 파라치온 함량을 산출한다.

9.2.3. 페다트로치온(Fenitrothion) [C9H12NO5PS]

 가. 시약의 조제

  1) 페니트로치온 표준액

    페니트로치온 20 mg을 정확히 칭량하여 100 mL의 갈색메스플라스크에 넣는다. 아세톤 20 mL를 가하여 용해하고 표선까지 2,2,4-트리메틸펜탄을 가하여 페니트로치온 표준 원액을 조제한다.(이 액 1 mL는 페니트로치온 0.2 mg을 함유한다) 사용시, 표준원액의 일정량을 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1)으로 정확히 희석하여 1 mL중에 0.1, 0.2, 0.5, 1 및 2 μg을 함유하는 각 페니트로치온표준액을 조제한다.

  2) 규산마그네슘

    합성규산마그네슘[입경 149～250 μm(100～60mesh) : 플로리실 PR. 미국의 Floridin Co.제]을 130℃에서 16시간 건조한다.

  3) L-시스틴염산용액 : L-시스틴염산염1수화물 4.2g을 증류수에 용해하여 250 mL로 한다.

 나. 방법

  1) 추출

    시료 10.0～20.0 g을 칭량하여 300 mL의 분액여두에 넣는다. L-시스틴 염산염용액 30 mL를 가하여 30분간 방치한 후, 아세톤 70 mL를 가하고 30분간 진탕한 후 추출한다. 200 mL의 메스플라스크를 부크너여두 아래에 놓고 추출액을 No.5B 여과지로 흡인여과 한다. 아세톤+증류수(7+3)를 메스플라스크의 표선까지 가하여, 정제용 시료용액으로 한다. 용기 및 잔사를 아세톤+증류수(7+3) 50 mL로 세정한다.

  2) 분배

    시료용액 100 mL를 미리 염화나트륨용액(5W/V%) 250 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 넣은 500 mL의 분액여두에 넣고 5분간 진탕한다. 방치한 후, 디클로로메탄층(하층)을 삼각플라스크에 넣는다. 디클로로메탄 50 mL를 분액여두에 가하여 가볍게 진탕한 후 방치하고, 디클로메탄층을 위의 삼각플라스크에 가한다. 적당량의 황산나트륨(무수)을 가하여 탈수하고, 300 mL의 플라스크에 분액여과지로 여과한 후, 용기 및 여과지를 소량의 디클로로메탄으로 세정하고, 여액을 합한다. 여액을 40℃ 이하의 수욕조에서 대부분 건고될 때까지 감압농축한 후, 질소가스로 건고한다. 잔류물을 200 mL의 분액여두에 헥산 30 mL로 용해한다. 아세토니트릴+증류수(100+1) 30 mL를 가하고, 5분간 진탕하고 정치한 후, 아세토니트릴(하층)을 300 mL 플라스크에 넣는다. 아세토니트릴+증류수(100+1) 30 mL를 분액여두에 가하고, 동일하게 조작한다. 아세토니트릴층을 40℃이하의 수욕조에서 대부분 건고될때까지 감압농축한 후, 질소가스로 건고한다. 헥산+아세톤(19+1) 5 mL를 가하여 잔류물을 용해하고, 컬럼크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

  3) 정제(컬럼크로마토그래피)

    컬럼관(내경 15 mm)에 황산나트륨(무수) 2 g, 규산마그네슘 5 g 및 황산나트륨(무수) 2 g을 각각 헥산+아세톤(19+1)으로 현탁시킨 것을 순차적으로 주입하고, 액면이 충진제의 상층에서 3 mm의 높이가 될 때까지 주입시켜서 정제용컬럼을 조제한다. 컬럼의 하층에 300 mL의 플라스크에 시료용액을 컬럼에 넣고 용기를 헥산+아세톤(19+1) 5 mL로 5회 세정하여, 세액을 순차적으로 컬럼에 가한다. 액면이 충진제의 상면에서 3 mm의 높이가 될 때까지 유출시켜 페니트로치온을 헥산+아세톤(19+1) 70 mL로 유출시킨다. 아세톤+디에틸렌글리콜(99+1) 2～3방울을 가하고, 유출액을 40℃이하의 수욕조에서 대부분 건고될때까지 감압농축한 다음, 질소가스로 건고한다. 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1) 5 mL를 정확히 가하여 잔류물을 용해하고, 가스크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

 다. 측정조건(예)

  1) 검출기 : 염광광도검출기(인검출용필터)

  2) 칼럼 : 용융석영제 캐필러리컬럼(5% 페닐, 95% 메틸실리콘코팅, 30 m × 0.32 mm, 0.25 μm)

  3) 캐리어가스 : He 1.5 mL/min

  4) 보조가스 : N2 30 mL/min

  5) 수소 : 75 mL/min

  6) 건조공기 : 100 mL/min

  7) 시료도입부온도 : 230℃

  8) 칼 럼 조 온 도 : 초기온도 60℃(1분 유지)

  9) 승온 : 10℃/min, 170℃(21분), 10℃/min, 240℃(12분 유지)

  10) 검출기온도 : 250℃

 라. 계산

      측정된 크로마토그램에서 피크면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시료중의 페니트로치온 함량을 산출한다.

9.2.4. 펜토에이트(Phenthoate) [C12H17O4PS2]

 가. 시약의 조제

  1) 펜토에이트 표준액

    펜토에이트 20 mg을 정확히 칭량하여 100 mL의 갈색메스플라스크에 넣는다. 아세톤 20 mL를 가하여 용해하고 표선까지 2,2,4-트리메틸펜탄을 가하여 펜토에이트 표준 원액을 조제한다.(이 액 1 mL는 펜토에이트 0.2 mg을 함유한다) 사용시, 표준원액의 일정량을 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1)으로 정확히 희석하여 1 mL중에 0.1, 0.2, 0.5, 1, 2 μg을 함유하는 각 펜토에이트표준액을 조제한다.

  2) 규산마그네슘

    합성규산마그네슘[입경 149～250 μm(100～60mesh) : 플로리실 PR. 미국의 Floridin Co.제]을 130℃에서 16시간 건조한다.

  3) L-시스틴염산용액 : L-시스틴염산염1수화물 4.2 g을 증류수에 용해하여 250 mL로 한다.

 나. 방법

  1) 추출

    시료 10.0～20.0 g을 칭량하여 300 mL의 분액여두에 넣는다. L-시스틴 염산염용액 30 mL를 가하여 30분간 방치한 후, 아세톤 70 mL를 가하고 30분간 진탕한 후 추출한다. 200 mL의 메스플라스크를 부크너여두 아래에 놓고 추출액을 No.5B 여과지로 흡인여과 한다. 아세톤+증류수(7+3)를 메스플라스크의 표선까지 가하여, 정제용 시료용액으로 한다. 용기 및 잔사를 아세톤+증류수(7+3) 50 mL로 세정한다.

  2) 분배

    시료용액 100 mL를 미리 염화나트륨용액(5%, W/V) 250 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 넣은 500 mL의 분액여두에 넣고 5분간 진탕한다. 방치한 후, 디클로로메탄층(하층)을 삼각플라스크에 넣는다. 디클로로메탄 50 mL를 분액여두에 가하여 가볍게 진탕한 후 방치하고, 디클로메탄층을 위의 삼각플라스크에 가한다. 적당량의 황산나트륨(무수)을 가하여 탈수하고, 300 mL의 플라스크에 분액여과지로 여과한 후, 용기 및 여과지를 소량의 디클로로메탄으로 세정하고, 여액을 합한다. 여액을 40℃ 이하의 수욕조에서 대부분 건고될 때까지 감압농축한 후, 질소가스로 건고한다. 잔류물을 200 mL의 분액여두에 헥산 30 mL로 용해한다. 아세토니트릴+증류수(100+1) 30 mL를 가하고, 5분간 진탕하고 정치한 후, 아세토니트릴(하층)을 300 mL 플라스크에 넣는다. 아세토니트릴+증류수(100+1) 30 mL를 분액여두에 가하고, 동일하게 조작한다. 아세토니트릴층을 40℃이하의 수욕조에서 대부분 건고될때까지 감압 농축한 후, 질소가스로 건고한다. 헥산+아세톤(19+1) 5 mL를 가하여 잔류물을 용해하고, 컬럼크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

  3) 정제(컬럼크로마토그래피)

    컬럼관(내경 15 mm)에 황산나트륨(무수) 2 g, 규산마그네슘 5 g 및 황산나트륨(무수) 2 g을 각각 헥산+아세톤(19+1)으로 현탁시킨 것을 순차적으로 주입하고, 액면이 충진제의 상층에서 3 mm의 높이가 될 때까지 주입시켜서 정제용컬럼을 조제한다. 시료용액을 컬럼에 넣고 용기를 헥산+아세톤(19+1) 5 mL로 5회 세정하여, 세액을 순차적으로 컬럼에 가한다. 액면이 충진제의 상면에서 3 mm의 높이가 될 때까지 유출시켜 펜토에이트를 헥산+아세톤(19+1) 70 mL로 유출시킨다. 아세톤+디에틸렌글리콜(99+1) 2～3방울을 가하고, 유출액을 40℃이하의 수욕조에서 대부분 건고될 때까지 감압농축한 다음, 질소가스로 건고한다. 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1) 5 mL를 정확히 가하여 잔류물을 용해하고, 가스크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

 다. 측정조건(Gas chromatograph)

  1) 검출기 : 염광광도검출기(인검출용필터)

  2) 칼럼 : 용융석영제 캐필러리컬럼(5% 페닐, 95% 메틸실리콘코팅, 30 m × 0.32 mm, 0.25 μm)

  3) 캐리어가스 : He 1.5 mL/min

  4) 보조가스 : N2 30 mL/min

  5) 수소 : 75 mL/min

  6) 건조공기 : 100 mL/min

  7) 시료도입부온도 : 230℃

  8) 칼럼조온도 : 초기온도 60℃(1분 유지)

  9) 승온 : 10℃/min, 170℃(21분), 10℃/min, 240℃(12분)

  10) 검출기온도 : 250℃

 라. 계산

    측정된 크로마토그램에서 피크면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시료중의 펜토에이트 함량을 산출한다.

9.2.5. 펜치온(Fenthion) [C10H15O3PS2]

 가. 시약의 조제

  1) 펜치온 표준액

    펜치온 20 mg을 정확히 칭량하여 100 mL의 갈색메스플라스크에 넣는다. 아세톤 20 mL를 가하여 용해하고 표선까지 2,2,4-트리메틸펜탄을 가하여 펜치온 표준 원액을 조제한다.(이 액 1 mL는 펜치온 0.2 mg을 함유한다) 사용시, 표준원액의 일정량을 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1)으로 정확히 희석하여 1 mL중에 0.1, 0.2, 0.5, 1, 2 μg을 함유하는 각 펜치온표준액을 조제한다.

  2) 규산마그네슘

    합성규산마그네슘[입경 149～250 μm(100～60mesh) : 플로리실 PR. 미국의 Floridin Co.제]을 130℃에서 16시간 건조한다.

  3) L-시스틴염산용액 : L-시스틴염산염1수화물 4.2g을 증류수에 용해하여 250 mL로 한다.

 나. 방법

  1) 추출

    시료 10.0～20.0g을 칭량하여 300 mL의 분액여두에 넣는다. L-시스틴 염산염용액 30 mL를 가하여 30분간 방치한 후, 아세톤 70 mL를 가하고 30분간 진탕한 후 추출한다. 200 mL의 메스플라스크를 부크너여두 아래에 놓고 추출액을 No.5B 여과지로 흡인여과 한다. 아세톤+증류수(7+3)를 메스플라스크의 표선까지 가하여, 정제용 시료용액으로 한다. 용기 및 잔사를 아세톤+증류수(7+3) 50 mL로 세정한다.

  2) 분배

    시료용액 100 mL를 미리 염화나트륨용액(5W/V%) 250 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 넣은 500 mL의 분액여두에 넣고 5분간 진탕한다. 방치한 후, 디클로로메탄층(하층)을 삼각플라스크에 넣는다. 디클로로메탄 50 mL를 분액여두에 가하여 가볍게 진탕한 후 방치하고, 디클로메탄층을 위의 삼각플라스크에 가한다. 적당량의 황산나트륨(무수)을 가하여 탈수하고, 300 mL의 플라스크에 분액여과지로 여과한 후, 용기 및 여과지를 소량의 디클로로메탄으로 세정하고, 여액을 합한다. 여액을 40℃ 이하의 수욕조에서 대부분 건고될 때까지 감압농축한 후, 질소가스로 건고한다. 잔류물을 200 mL의 분액여두에 헥산 30 mL로 용해한다. 아세토니트릴+증류수(100+1) 30 mL를 가하고, 5분간 진탕하고 정치한 후, 아세토니트릴(하층)을 300 mL 플라스크에 넣는다. 아세토니트릴+증류수(100+1) 30 mL를 분액여두에 가하고, 동일하게 조작한다. 아세토니트릴층을 40℃이하의 수욕조에서 대부분 건고될때까지 감압농축한 후, 질소가스로 건고한다. 헥산+아세톤(19+1) 5 mL를 가하여 잔류물을 용해하고, 컬럼크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

  3) 정제(컬럼크로마토그래피)

    컬럼관(내경 15 mm)에 황산나트륨(무수) 2 g, 규산마그네슘 5 g 및 황산나트륨(무수) 2 g을 각각 헥산+아세톤(19+1)으로 현탁시킨 것을 순차적으로 주입하고, 액면이 충진제의 상층에서 3 mm의 높이가 될 때까지 주입시켜서 정제용컬럼을 조제한다.  시료용액을 컬럼에 넣고 용기를 헥산+아세톤(19+1) 5 mL로 5회 세정하여, 세액을 순차적으로 컬럼에 가한다. 액면이 충진제의 상면에서 3 mm의 높이가 될 때까지 유출시켜 펜치온을 헥산+아세톤(19+1) 70 mL로 유출시킨다. 아세톤+디에틸렌글리콜(99+1) 2～3방울을 가하고, 유출액을 40℃이하의 수욕조에서 대부분 건고될때까지 감압농축한 다음, 질소가스로 건고한다. 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1) 5 mL를 정확히 가하여 잔류물을 용해하고, 가스크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

 다. 측정조건(Gas chromatograph)

  1) 검출기 : 염광광도검출기(인검출용필터)

  2) 칼럼 : 용융석영제 캐필러리컬럼(5% 페닐, 95% 메틸실리콘코팅, 30 m × 0.32 mm, 0.25 μm)

  3) 캐리어가스 : He 1.5 mL/min

  4) 보조가스 : N2 30 mL/min

  5) 수소 : 75 mL/min

  6) 건조공기 : 100 mL/min

  7) 시료도입부온도 : 230℃

  8) 칼럼조온도 : 초기온도 60℃(1분 유지)

  9) 승온 : 10℃/min, 170℃(21분), 10℃/min, 240℃(12분 유지)

  1) 검출기온도 : 250℃

 라. 계산

    측정된 크로마토그램에서 피크면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시료중의 펜치온 함량을 산출한다.

9.2.6. 말라치온(Malathion) [C10H19O6PS2]

 가. 시약의 조제

  1) 말라치온 표준액

    말라치온 20 mg을 정확히 칭량하여 100 mL의 갈색메스플라스크에 넣는다. 아세톤 20 mL를 가하여 용해하고 표선까지 2,2,4-트리메틸펜탄을 가하여 말라치온 표준 원액을 조제한다.(이 액 1 mL는 말라치온 0.2 mg을 함유한다) 사용시, 표준원액의 일정량을 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1)으로 정확히 희석하여 1 mL중에 0.1, 0.2, 0.5, 1, 2 μg을 함유하는 각 말라치온 표준액을 조제한다.

  2) 규산마그네슘

    합성규산마그네슘[입경 149～250 μm(100～60mesh) : 플로리실 PR. 미국의 Floridin Co.제]을 130℃에서 16시간 건조한다.

  3) L-시스틴염산용액 : L-시스틴염산염1수화물 4.2g을 증류수에 용해하여 250 mL로 한다.

 나. 방법

  1) 추출

    시료 10.0～20.0g을 칭량하여 300 mL의 분액여두에 넣는다. L-시스틴 염산염용액 30 mL를 가하여 30분간 방치한 후, 아세톤 70 mL를 가하고 30분간 진탕한 후 추출한다. 200 mL의 메스플라스크를 부크너여두 아래에 놓고 추출액을 No.5B 여과지로 흡인여과 한다. 아세톤+증류수(7+3)를 메스플라스크의 표선까지 가하여, 정제용 시료용액으로 한다. 용기 및 잔사를 아세톤+증류수(7+3) 50 mL로 세정한다.

  2) 분배

    시료용액 100 mL를 미리 염화나트륨용액(5W/V%) 250 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 넣은 500 mL의 분액여두에 넣고 5분간 진탕한다. 방치한 후, 디클로로메탄층(하층)을 삼각플라스크에 넣는다. 디클로로메탄 50 mL를 분액여두에 가하여 가볍게 진탕한 후 방치하고, 디클로메탄층을 위의 삼각플라스크에 가한다. 적당량의 황산나트륨(무수)을 가하여 탈수하고, 300 mL의 플라스크에 분액여과지로 여과한 후, 용기 및 여과지를 소량의 디클로로메탄으로 세정하고, 여액을 합한다. 여액을 40℃ 이하의 수욕조에서 대부분 건고될 때까지 감압농축한 후, 질소가스로 건고한다. 잔류물을 200 mL의 분액여두에 헥산 30 mL로 용해한다. 아세토니트릴+증류수(100+1) 30 mL를 가하고, 5분간 진탕하고 정치한 후, 아세토니트릴(하층)을 300 mL 플라스크에 넣는다. 아세토니트릴+증류수(100+1) 30 mL를 분액여두에 가하고, 동일하게 조작한다. 아세토니트릴층을 40℃이하의 수욕조에서 대부분 건고 될 때까지 감압농축한 후, 질소가스로 건고한다. 헥산+아세톤(19+1) 5 mL를 가하여 잔류물을 용해하고, 컬럼크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

  3) 정제(컬럼크로마토그래피)

    컬럼관(내경 15 mm)에 황산나트륨(무수) 2 g, 규산마그네슘 5 g 및 황산나트륨(무수) 2 g을 각각 헥산+아세톤(19+1)으로 현탁시킨 것을 순차적으로 주입하고, 액면이 충진제의 상층에서 3 mm의 높이가 될 때까지 주입시켜서 정제용컬럼을 조제한다.  시료용액을 컬럼에 넣고 용기를 헥산+아세톤(19+1) 5 mL로 5회 세정하여, 세액을 순차적으로 컬럼에 가한다. 액면이 충진제의 상면에서 3 mm의 높이가 될 때까지 유출시켜 말라치온을 헥산+아세톤(19+1) 70 mL로 유출시킨다. 아세톤+디에틸렌글리콜(99+1) 2～3방울을 가하고, 유출액을 40℃이하의 수욕조에서 대부분 건고될때까지 감압농축한 다음, 질소가스로 건고한다. 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1) 5 mL를 정확히 가하여 잔류물을 용해하고, 가스크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

 다. 측정조건(Gas chromatograph)

  1) 검출기 : 염광광도검출기(인검출용필터)

  2) 칼럼 : 용융석영제 캐필러리컬럼(5% 페닐, 95% 메틸실리콘코팅, 30 m × 0.32 mm, 0.25 μm)

  3) 캐리어가스 : He 1.5 mL/min

  4) 보조가스 : N2 30 mL/min

  5) 수소 : 75 mL/min

  6) 건조공기 : 100 mL/min

  7) 시료도입부온도 : 230℃

  8) 칼럼조온도 : 초기온도 60℃(1분 유지)

  9) 승온 : 10℃/min, 170℃(21분), 10℃/min, 240℃(12분 유지)

  10) 검출기온도 : 250℃

 라. 계산

   측정된 크로마토그램에서 피크면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시료 중의 말라치온 함량을 산출한다.

9.2.7. 클로르피리포스메틸(Chlorpyrifos-methyl) [C7H7Cl3NO3PS]

 가. 시약의 조제

  1) 클로르피리포스메틸 표준액

    클로르피리포스메틸 20 mg을 정확히 칭량하여 100 mL의 갈색메스플라스크에 넣는다. 아세톤 20 mL를 가하여 용해하고 표선까지 2,2,4-트리메틸펜탄을 가하여 클로르피리포스메틸표준 원액을 조제한다.(이 액 1 mL는 클로르피리포스메틸 0.2 mg을 함유한다) 사용시, 표준원액의 일정량을 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1)으로 정확히 희석하여 1 mL중에 0.1, 0.2, 0.5, 1, 2, 4 μg을 함유하는 각 클로르피리포스메틸표준액을 조제한다.

  2) 실리카겔

    개봉 후 실리카겔 [입경 63～200 μm (230～70mesh) : Silica Gel 60 (Merck제)]을 데시케이타에 보존한다.

  3) 응고액 : 염산암모니움 1g을 증류수 1 L로 용해하고, 인산 2 mL를 가한다.

  4) 규조토 : 규조토(하이프로슈퍼셀, John-Manville제)를 온수 및 메탄올로 세정한 후 풍건한다.

 나. 방법

  1) 추출

    시료 10.0～20.0 g을 칭량하여 500 mL의 분액여두에 넣는다. 증류수 60 mL를 가하고, 30분간 방치한 후, 아세톤 140 mL를 가하여, 30분간 흔들어 섞은 후 추출한다. 톨비이커는 부크너여두의 아래에 놓고, 추출액을 No.5여과지로 흡인여과한 후, 용기 및 잔사를 아세톤+증류수(7+3) 100 mL로 세정하고, 정제용 시료용액으로 한다.

  2) 정제

    시료용액을 미리 염화나트륨용액(5%,W/V) 400 mL 및 디클로메탄 100 mL를 넣은 1 L의 분액여두에 가한다. 3분간 진탕한 후, 정치하고, 디클로메탄층(하층)을 삼각플라스크에 넣는다. 디클로로메탄 100 mL를 분액여두에 가하여 가볍게 진탕하고 정치한 후, 디클로메탄층을 삼각플라스크에 가한다. 적당량의 황산나트륨(무수)을 가하여 탈수하고, 500 mL의 플라스크에 글라스섬유여과지(GA-100, 동양여과지)로 여과하고 용기 및 여과지를 소량의 디클로로메탈으로 세정하여, 여액을 합한다. 여액을 40℃이하의 수욕조에서 대부분 건고될 때까지 감압농축한 후, 질소가스로 건고한다. 아세톤 30 mL를 가하여 잔류물을 용해하고, 규조토 0.5g 및 응고액 40 mL를 가하여 가볍게 진탕한다. 5분간 방치한 후, 상등액을 300 mL의 분액여두 A에 글라스섬유여과지(GA-100, 동양여과지)로 여과한다. 아세톤 30 mL를 플라스크에 가하여 진탕하고, 응고액 40 mL를 가하여, 동일하게 조작한 후, 용기 및 여과지를 소량의 응고액+아세톤(4+3)으로 세정한다. 헥산 50 mL를 분액여두 A에 가하고, 3분간 진탕한후, 세정한 다음, 수층(하층)을 300 mL의 분액여두 B에 넣고 헥산층(상층)을 삼각플라스크에 넣는다. 헥산 50 mL를 분액여두 B에 가하고, 동일하게 조작하여 헥산층(상층)을 위의 삼각플라스크에 가한다. 적당량의 황산나트륨(무수)을 가하여, 탈수하고 300 mL의 플라스크에 글라스섬유여과지로 여과한다. 용기 및 섬유여과지를 소량의 헥산으로 세정하고, 여액에 합하여, 여액을 40℃ 이하의 수욕조에서 대부분 건고될 때까지 감압농축한 후, 질소가스로 건고한다. 헥산+디에틸에테르(9+1) 5 mL를 가하여 잔류물을 용해하고, 컬럼크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

  3) 정제(컬럼크로마토그래피)

    황산나트륨(무수) 5 g, 실리카겔 5 g 및 황산나트륨9무수) 5 g을 각각 헥산+디에틸에테르(9+1)에 현탁시켜 컬럼관(내경 15 mm)에 순차적으로 주입한다. 액면이 충진제의 상명에서 3 mm의 높이가 될 때까지 유출시켜 정제용 컬럼을 조제한다. 200 mL의 플라스크를 컬럼의 아래에 놓고, 시료용액을 컬럼에 넣는다. 용기를 헥산-디에틸에테르(9+1) 5 mL로 4회 세정하여, 세액을 순차적으로 컬럼에 가한다. 액면이 충진제의 상면으로부터 3 mm의 높이가 될 때까지 유출시킨 후, 클로르피리포스메틸을 헥산+디에틸에테르(9+1) 75 mL로 유출시킨다. 유출액 40℃ 이하의 수욕조에서 대부분 건고될 때까지 감압농축한 후, 질소가스로 건고한다. 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1) 5 mL를 정확히 가하여 잔류물을 용해시키고, 가스크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

 다. 측정조건(Gas chromatograph)

  1) 검출기 : 알카리열이온화검출기

  2) 칼럼 : 용융석영제 캐필러리컬럼(메틸실리콘코팅, 30 m × 0.32 mm, 0.25 μm)

  3) 캐리어가스 : He 4 mL/min

  4) 보조가스 : N2 26 mL/min

  5) 수소 : 4 mL/min

  6) 건조공기 : 100 mL/min

  7) 시료도입부온도 : 200℃

  8) 칼럼조온도 : 50℃(1분 유지)

  9) 승온 : 20℃/min, 180℃(1분), 3℃/min, 200℃

  10) 검출기온도 : 240℃

 라. 계산

   측정된 크로마토그램에서 피크면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시료중의 클로르피리포스메틸량을 산출한다.

9.2.8. 피리미포스메틸(Pirimiphos-methyl) [C11H20N3O3PS]

 가. 시약의 조제

  1) 피리미포스메틸 표준액

    피리미포스메틸 20 mg을 정확히 칭량하여 100 mL의 갈색메스플라스크에 넣는다. 아세톤 20 mL를 가하여 용해하고 표선까지 2,2,4-트리메틸펜탄을 가하여 피리미포스메틸표준 원액을 조제한다.(이 액 1 mL는 피리미포스메틸 0.2 mg을 함유한다) 사용시, 표준원액의 일정량을 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1)으로 정확히 희석하여 1 mL중에 0.1, 0.2, 0.5, 1, 2, 4 μg을 함유하는 각 피리미포스메틸표준액을 조제한다.

  2) 실리카겔

    개봉후 실리카겔 [입경 63～200 μm (230～70mesh) : Silica Gel 60 (Merck제)]을 데시케이타에 보존한다.

  3) 응고액 : 염산암모니움 1g을  1 L로 용해하고, 인산 2 mL를 가한다.

  4) 규조토 : 규조토[하이프로슈퍼셀(John-Manville제)]를 온수 및 메탄올로 세정한 후 풍건한다.

 나. 방법

  1) 추출

    시료 10.0～20.0 g을 칭량하여 500 mL의 분액여두에 넣는다. 증류수 60 mL를 가하고, 30분간 방치한 후, 아세톤 140 mL를 가하여, 30분간 흔들어 섞은 후 추출한다. 톨비이커는 부크너여두의 아래에 놓고, 추출액을 No.5여과지로 흡인여과한 후, 용기 및 잔사를 아세톤+증류수(7+3) 100 mL로 세정하고, 정제용 시료용액으로 한다.

  2) 정제

    시료용액을 미리 염화나트륨용액(5W/V%) 400 mL 및 디클로메탄 100 mL를 넣은 1 L의 분액여두에 가한다. 3분간 진탕한 후, 정치하고, 디클로메탄층(하층)을 삼각플라스크에 넣는다. 디클로로메탄 100 mL를 분액여두에 가하여 가볍게 진탕하고 정치한 후, 디클로메탄층을 삼각플라스크에 가한다. 적당량의 황산나트륨(무수)을 가하여 탈수하고, 500 mL의 플라스크에 글라스섬유여과지(GA-100, 동양여과지)로 여과하고 용기 및 여과지를 소량의 디클로로메탄으로 세정하여, 여액을 합한다. 여액을 40℃이하의 수욕조에서 대부분 건고될때까지 감압농축한 후, 질소가스로 건고한다. 아세톤 30 mL를 가하여 잔류물을 용해하고, 규조토 0.5g 및 응고액 40 mL를 가하여 가볍게 진탕한다. 5분간 방치한 후, 상등액을 300 mL의 분액여두 A에 글라스섬유여과지(GA-100, 동양여과지)로 여과한다. 아세톤 30 mL를 플라스크에 가하여 진탕하고, 응고액 40 mL를 가하여, 동일하게 조작한 후, 용기 및 여과지를 소량의 응고액+아세톤(4+3)으로 세정한다. 헥산 50 mL를 분액여두 A에 가하고, 3분간 진탕한후, 세정한 다음, 수층(하층)을 300 mL의 분액여두 B에 넣고 헥산층(상층)을 삼각플라스크에 넣는다. 헥산 50 mL를 분액여두 B에 넣고 헥산층(상층)을 삼각플라스크에 넣는다.

    헥산 50 mL를 분액여두 B에 가하여 동일하게 조작하고, 헥산층을 삼각플라스크에 가한다. 적당량의 황산나트륨(무수)을 가하여, 탈수하고 300 mL의 플라스크에 글라스섬유여과지(GA-100, 동양여과지)로 여과한다. 용기 및 섬유여과지를 소량의 헥산으로 세정하고, 여액에 합하여, 여액을 40℃ 이하의 수욕조에서 대부분 건고될 때까지 감압농축한 후, 질소가스로 건고한다. 헥산+디에틸에테르(9+1) 5 mL를 가하여 잔류물을 용해하고, 컬럼크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

  3) 컬럼크로마토그래피

    황산나트륨(무수) 5 g, 실리카겔 5 g 및 황산나트륨(무수) 5 g을 각각 헥산+디에틸에테르(9+1)에 현탁시켜 컬럼관(내경 15 mm)에 순차적으로 주입한다. 액면이 충진제의 상명에서 3 mm의 높이가 될 때까지 유출시켜 정제용 컬럼을 조제한다. 200 mL의 플라스크를 컬럼의 아래에 놓고, 시료용액을 컬럼에 넣는다. 용기를 헥산-디에틸에테르(9+1) 5 mL로 4회 세정하여, 세액을 순차적으로 컬럼에 가한다. 액면이 충진제의 상면으로부터 3 mm의 높이가 될 때까지 유출시킨 후, 피리미포스메틸을 헥산+디에틸에테르(9+1) 75 mL로 유출시킨다. 유출액 40℃ 이하의 수욕조에서 대부분 건고될 때까지 감압농축한 후, 질소가스로 건고한다. 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1) 5 mL를 정확히 가하여 잔류물을 용해시키고, 가스크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

 다. 측정조건(Gas chromatograph)

  1) 검출기 : 알카리열이온화검출기

  2) 칼럼 : 용융석영제 캐필러리컬럼(메틸실리콘코팅, 30 m × 0.32 mm, 0.25 μm)

  3) 캐리어가스 : He 4 mL/min

  4) 보조가스 : N2 26 mL/min

  5) 수소 : 4 mL/min

  6) 건조공기 : 100 mL/min

  7) 시료도입부온도 : 200℃

  8) 칼럼조온도 : 50℃(1분 유지)

  9) 승온 : 20℃/min, 180℃(1분), 3℃/min, 200℃

  10) 검출기온도 : 240℃

 라. 계산

   측정된 크로마토그램에서 피크면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시료중의 피리미포스메틸량을 산출한다.

9.2.9. 디클로르보스(Dichlorvos) [C4H7Cl2O4P]

 가. 시약의 조제

  1) 디클로르보스 표준액

    디클로르보스 20 mg을 정확히 칭량하여 100 mL의 갈색메스플라스크에 넣는다. 아세톤 20 mL를 가하여 용해하고 표선까지 2,2,4-트리메틸펜탄을 가하여 디클로르보스 표준 원액을 조제한다.(이 액 1 mL는 디클로르보스 0.2 mg을 함유한다) 사용시, 표준원액의 일정량을 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1)으로 정확히 희석하여 1 mL중에 0.1, 0.2, 0.5, 1, 2 μg을 함유하는 각 디클로르보스표준액을 조제한다.

  2) 활성탄혼합물

    컬럼크로마토그래피용 활성탄 10 g 및 미결정컬럼크로마토그래피용 셀룰로스(Merck제) 90 g을 혼합한다.

  3) L-시스틴염산용액 : L-시스틴염산염1수화물 4.2 g을 증류수에 용해하여 250 mL로 한다.

 나. 방법

  1) 추출

    시료 10.0～20.0 g을 칭량하여 300 mL의 분액여두에 넣는다. L-시스틴 염산염용액 30 mL를 가하여 30분간 방치한 후, 아세톤 70 mL를 가하고 30분간 진탕한 후 추출한다. 200 mL의 메스플라스크를 부크너여두 아래에 놓고 추출액을 No.5B 여과지로 흡인여과한 후, 용기 및 잔사를 아세톤+증류수(7+3) 50 mL로 세정한다. 아세톤+증류수(7+3)를 메스플라스크의 표선까지 가하여, 정제용 시료용액으로 한다.

  2) 정제

    시료용액 100 mL를 미리 염화나트륨용액(5%,W/V) 250 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 넣은 500 mL의 분액여두에 가한다. 5분간 흔들어 혼합하고 정치한 후, 디클로로메탄층(하층)을 삼각플라스크에 넣는다. 디클로로메탄 50 mL를 분액여두에 가하여 가볍게 진탕하고 정치한 후, 디클로메탄층을 위의 삼각플라스크에 가한다. 적당량의 황산나트륨(무수)을 가하여 탈수하고, 300 mL 농축플라스크에 No.2S 분액여과지(동양여과지)로 여과한 후, 용기 및 여과지를 소량의 디클로로메탄으로 세정하고, 여액을 합한다. 여액을 40℃ 이하의 수욕조에서 대부분 건고될 때까지 감압농축한 후, 질소가스로 건고한다. 잔류물을 200 mL의 분액여두에 헥산 30 mL로 용해하고, 아세토니트릴+증류수(100+1) 30 mL를 가하고, 5분간 진탕하고 정치한 후, 아세토니트릴(하층)을 300 mL 농축플라스크에 넣는다. 아세토니트릴+증류수(100+1) 30 mL를 분액여두에 가하고, 동일하게 조작한다. 아세토니트릴층을 40℃이하의 수욕조에서 대부분 건고될때까지 감압농축한 후, 질소가스로 건고한다. 헥산+아세톤(19+1) 5 mL를 가하여 잔류물을 용해하고, 컬럼크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

  3) 컬럼크로마토그래피

    황산나트륨(무수) 2 g, 활성탄혼합물 5 g 및 황산나트륨(무수) 2 g을 각각 아세톤으로 현탁시켜서 컬럼관(내경 15 mm)에 순차적으로 흘리고 액면이 충진제의 상면에서 3 mm의 높이가 될 때까지 유출시켜서 정제용컬럼을 조제한다. 300 mL의 농축플라스크를 컬럼의 아래에 놓고 시료용액을 컬럼에 넣는다. 용기를 아세톤 5 mL로 5회 세정하고, 세액을 순차적으로 컬럼에 가한다. 액면이 충진제의 상면에서 3 mm의 높이가 될 때까지 유출시킨후, 디클로르보스를  아세톤 20 mL로 유출시킨다. 아세톤+디에틸렌글리콜(99+1) 2～3방울을 가하여, 유출액을 40℃이하의 수욕조에서 대부분 건고될때까지 감압농축한 후, 질소가스로 건고한다. 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1) 5 mL를 정확히 가하여 잔류물을 용해하고, 가스크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

 다. 측정조건(Gas chromatograph)

  1) 검출기 : 염광광도검출기(인검출용필터)

  2) 칼럼 : 용융석영제 캐필러리컬럼(5% 페닐, 95% 메틸실리콘코팅, 30 m × 0.32 mm, 0.25 μm)

  3) 캐리어가스 : He 1.5 mL/min

  4) 보조가스 : N2 30 mL/min

  5) 수소 : 75 mL/min

  6) 건조공기 : 100 mL/min

  7) 시료도입부온도 : 230℃

  8) 칼럼조온도 : 초기온도 60℃(1분 유지)

  9) 승온 10℃/min, 170℃(21분), 10℃/min, 240℃(12분 유지)

  10) 검출기온도 : 250℃

 라. 계산

   측정된 크로마토그램에서 피크면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시료중의 디클로르보스량을 산출한다.

9.3. 유기염소계(Organochlorine)

9.3.1. 비에치씨(BHC) [C6H6Cl6]

 가. 시약의 조제

  1) BHC표준액

    α-BHC, β-BHC, γ-BHC 및 δ-BHC 각각 20 mg씩을 정확히 칭량하여, 각각 100 mL의 메스플라스크에 넣는다. 아세톤 20 mL를 가하여 용해하고, 2,2,4-트리메틸펜탄을 표선까지 가하여 α-BHC, β-BHC, γ-BHC 및 δ-BHC 표준원액을 조제한다.(이액 1 mL는 각각의 BHC 0.2 mg을 함유한다) 사용시, 표준원액의 일정량을 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1)으로 정확히 희석하고, 1 mL중에 α-BHC, β-BHC, γ-BHC 및 δ-BHC로써 각각 0.05, 0.1, 0.15, 0.2 μg을 함유하는 각 BHC표준액을 조제한다.

  2) 규산마그네슘

    합성규산마그네슘[(입경 149～250 μm(100～60mesh) : 플로리실PR 미국의 Floridin제]을 130℃에서 5시간 건조한다.

 나. 방법

  1) 추출

    시료 10.0～50.0 g을 칭량하여 500 mL 분액여두에 넣고, 아세토니트릴+증류수(13+7) 300 mL를 가한 다음, 30분간 강하게 진탕하여 추출한다. 비이커를 부크너여두의 아래에 놓고, 추출액을 No.5B 여과지로 흡인 여과하여 추출액으로 한다.

  2) 정제

    추출액 150 mL를 미리 염화나트륨용액(5W/V%) 600 mL 및 헥산 100 mL를 넣은 1 L의 분액여두A에 가하고, 5분간 강하게 진탕한다. 정치한 후, 수층(하층)을 1 L의 분액여두B에 넣고, 헥산 50 mL를 가하여 가볍게 흔들어 혼합하고 정치한다. 수층을 버리고, 헥산층(상층)을 위의 분액여두A에 가하고 증류수 100 mL를 가하여 가볍게 진탕하고 정치한 후, 수층을 500 mL의 분액여두C에 넣는다. 그리고 증류수 100 mL를 헥산층에 가하여 가볍게 진탕하여 정치한 후, 수층을 분액여두C에 가하고, 가볍게 진탕하고 정치한 후, 수층을 버리고, 헥산층을 위의 삼각플라스크에 넣고, 적당량의 황산나트륨(무수)을 가하여 탈수한다. 500 mL의 농축플라스크에 No.2S 분액여과지(동양여과지)로 여과한 후, 용기 및 여과지를 소량의 헥산으로 세정한다. 여액에 합하여 40℃ 이하의 수욕조에서 5 mL정도가 될때까지 감압농축하고, 컬럼크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

  3) 컬럼크로마토그래피

    규산마그네슘 9 g, 황산나트륨(무수) 3 g을 각각 헥산으로 현탁시켜서 컬럼관(내경 15 mm)에 순차적으로 흘려보내고, 헥산 40 mL를 가한다. 액면이 충진제의 상면에서 3 mm의 높이가 될때까지 유출시켜 컬럼을 조제한다. 300 mL의 농축플라스크를 컬럼의 아래에 놓고, 시료용액을 컬럼에 넣어, 용기를 소량의 헥산으로 세정한다. 세액을 컬럼에 가하여 액면이 충진제의 상면에서 3 mm의 높이가 될때까지 유출시킨후, BHC를 헥산+디에틸에테르(17+3) 150 mL로 용출시킨다. 용출액을 40℃ 이하의 수욕조에서 대부분 건고 될때까지 감압 농축하고, 질소가스로 건고한다. 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1) 3 mL를 정확히 가하여 잔류물을 용해하고 가스크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

 다. 측정조건(Gas chromatograph)

  1) 검출기 : 전자포획검출기

  2) 칼럼 : 용융석영제 캐필러리컬럼(시아노프로필메틸실리콘코팅, 30 m × 0.32 mm, 0.25 μm)

  3) 캐리어가스 : He 1.5 mL/min

  4) 보조가스 : N2 60 mL/min

  5) 칼럼조온도 : 초기온도 60℃(1분 유지)

  6) 승온 : 20℃/min, 180℃(1분),  2℃/min, 220℃(1분 유지), 1℃/min, 250℃

  7) 검출기온도 : 250℃

 다. 계산

   측정된 크로마토그램의 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시료중의 각 BHC량을 산출한다.

9.3.2. 디디티(DDT) [C14H9Cl5]

 가. 시약의 조제

  1) DDT표준액

    p,p'-DDT 및 o,p'-DDT 각각 20 mg씩을 정확히 칭량하여, 각각 100 mL의 메스플라스크에 넣는다. 아세톤 20 mL를 가하여 용해하고, 2,2,4-트리메틸펜탄을 표선까지 가하여 p,p'-DDT 및 o,p'-DDT 표준원액을 조제한다.(이액 1 mL는 p,p'-DDT 및 o,p'-DDT 0.2 mg을 함유한다) 사용시, 표준원액의 일정량을 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1)으로 정확히 희석하고, 1 mL중에 p,p'-DDT 및 o,p'-DDT 로써 각각 0.05, 0.1, 0.15, 0.2 μg을 함유하는 각 DDT혼합표준액을 조제한다.

  2) 규산마그네슘

    합성규산마그네슘[(입경 149～250 μm(100～60mesh) : 플로리실PR 미국의 Floridin제]을 130℃에서 5시간 건조한다.

 나. 방법

  1) 추출

    시료 10.0～50.0 g을 칭량하여 500 mL 분액여두에 넣고, 아세토니트릴+증류수(13+7) 300 mL를 가한 다음, 30분간 강하게 진탕하여 추출한다. 비이커를 부크너여두의 아래에 놓고, 추출액을 No. 5B 여과지로 흡인 여과하여 추출액으로 한다.

  2) 정제

    추출액 150 mL를 미리 염화나트륨용액(5%,W/V) 600 mL 및 헥산 100 mL를 넣은 1 L의 분액여두A에 가하고, 5분간 강하게 진탕한다. 정치한 후, 수층(하층)을 1 L의 분액여두B에 넣고, 헥산 50 mL를 가하여 가볍게 흔들어 혼합하고 정치한다. 수층을 버리고, 헥산층(상층)을 위의 분액여두 A에 가하고 증류수 100 mL를 가하여 가볍게 흔들고 정치한 후, 수층을 500 mL의 분액여두 C에 넣는다. 그리고 증류수 100 mL를 헥산층에 가하여 가볍게 흔들어 정치한 후, 수층을 분액여두 C에 가하고, 헥산층은 500 mL의 삼각플라스크에 넣는다. 헥산 100 mL를 분액여두C에 가하고 가볍게 진탕한 후 정치한다. 수층을 버리고, 헥산층을 위의 삼각플라스크에 넣고, 적당량의 황산나트륨(무수)을 가하여 탈수한 다음 500 mL의 농축플라스크에 No.2S 분액여과지(동양여과지)로 여과한 후, 용기 및 여과지를 소량의 헥산으로 세정한다. 여액에 합하여 40℃ 이하의 수욕조에서 5 mL정도가 될때까지 감압 농축하고, 컬럼크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

  3) 컬럼크로마토그래피

    규산마그네슘 9 g, 황산나트륨(무수) 3 g을 각각 헥산으로 현탁시켜서 컬럼관(내경 15 mm)에 순차적으로 흘려보내고, 헥산 40 mL를 가한다. 액면이 충진제의 상면에서 3 mm의 높이가 될때까지 유출시켜 컬럼을 조제한다. 300 mL의 농축플라스크를 컬럼의 아래에 놓고, 시료용액을 컬럼에 넣어, 용기를 소량의 헥산으로 세정한다. 세액을 컬럼에 가하여 액면이 충진제의 상면에서 3 mm의 높이가 될때까지 유출시킨후, DDT를 헥산+디에틸에테르(17+3) 150 mL로 용출시킨다. 용출액을 40℃ 이하의 수욕조에서 대부분 건고될때까지 감압농축하고, 질소가스로 건고한다. 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1) 3 mL를 정확히 가하여 잔류물을 용해하고 가스크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

 다. 측정조건(Gas chromatograph)

  1) 검출기 : 전자포획검출기

  2) 칼럼 : 용융석영제 캐필러리컬럼(시아노프로필메틸실리콘코팅, 30 m × 0.32 mm, 0.25 μm)

  3) 캐리어가스 : He 1.5 mL/min

  4) 보조가스 : N2 60 mL/min

  5) 칼럼조온도 : 초기온도 60℃(1분 유지)

  6) 승온 : 20℃/min, 180℃(1분), 2℃/min, 220℃(1분 유지), 1℃/min, 250℃

  7) 시료도입부온도 : 250℃

  8) 검출기온도 : 280℃

 라. 계산

   측정된 크로마토그램의 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시료중의 각 DDT량을 산출한다.

9.3.3. 알드린(Aldrin) [C12H8Cl6]

 가. 시약의 조제

  1) 알드린표준액

    알드린 20 mg씩을 정확히 칭량하여, 100 mL의 메스플라스크에 넣는다. 아세톤 20 mL를 가하여 용해하고, 2,2,4-트리메틸펜탄을 표선까지 가하여 알드린표준원액을 조제한다.(이액 1 mL는 알드린 0.2 mg을 함유한다) 사용시, 표준원액의 일정량을 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1)으로 정확히 희석하고, 1 mL중에 0.05, 0.1, 0.15, 0.2 μg을 함유하는 각 알드린표준액을 조제한다.

  2) 규산마그네슘

    합성규산마그네슘[(입경 149～250 μm(100～60mesh) : 플로리실PR 미국의 Floridin제]을 130℃에서 5시간 건조한다.

 나. 방법

  1) 추출

    시료 10.0～50.0 g을 칭량하여 500 mL 분액여두에 넣고, 아세토니트릴+증류수(13+7) 300 mL를 가한고, 30분간 강하게 진탕한 다음 추출한다. 비이커를 부크너여두의 아래에 놓고, 추출액을 No.5B 여과지로 흡인 여과하여 추출액으로 한다.

  2) 정제

    추출액 150 mL를 미리 염화나트륨용액(5%,W/V) 600 mL 및 헥산 100 mL를 넣은 1 L의 분액여두 A에 가하고, 5분간 강하게 진탕한다. 정치한 후, 수층(하층)을 1 L의 분액여두 B에 넣고, 헥산 50 mL를 가하여 가볍게 진탕하고 정치한다. 수층을 버리고, 헥산층(상층)을 위의 분액여두 A에 가하고 증류수 100 mL를 가하여 가볍게 진탕하고 정치한 후, 수층을 500 mL의 분액여두 C에 넣는다. 그리고 증류수 100 mL를 헥산층에 가하여 가볍게 진탕하고 정치한 후, 수층을 분액여두 C에 가하고, 헥산층은 500 mL의 삼각플라스크에 넣는다. 헥산 100 mL를 분액여두 C에 가하고 가볍게 흔들어 정치한 후 수층을 버리고, 헥산층을 위의 삼각플라스크에 넣고, 적당량의 황산나트륨(무수)을 가하여 탈수한다. 500 mL의 농축플라스크에 No.2S 분액여과지(동양여과지)로 여과한 후, 용기 및 여과지를 소량의 헥산으로 세정한다. 여액에 합하여 40℃ 이하의 수욕조에서 5 mL정도가 될때까지 감압 농축하고, 컬럼크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

  3) 컬럼크로마토그래피

    규산마그네슘 9 g, 황산나트륨(무수) 3 g을 각각 헥산으로 현탁시켜서 컬럼관(내경 15 mm)에 순차적으로 흘려보낸다. 헥산 40 mL를 가하여 액면이 충진제의 상면에서 3 mm의 높이가 될때까지 유출시켜 컬럼을 조제한다. 300 mL의 농축플라스크를 컬럼의 아래에 놓고, 시료용액을 컬럼에 넣는다. 용기를 소량의 헥산으로 세정하고 세액을 컬럼에 가하여 액면이 충진제의 상면에서 3 mm의 높이가 될때까지 유출시킨후, 알드린을 헥산+디에틸에테르(17+3) 150 mL로 용출시킨다. 용출액을 40℃ 이하의 수욕조에서 대부분 건고될때까지 감압 농축하고, 질소가스로 건고한다. 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1) 3 mL를 정확히 가하여 잔류물을 용해하고 가스크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

 다. 측정조건(Gas chromatograph)

  1) 검출기 : 전자포획검출기

  2) 칼럼 : 용융석영제 캐필러리컬럼(시아노프로필메틸실리콘코팅, 30 m × 0.32 mm, 0.25 μm)

  3) 캐리어가스 : He 1.5 mL/min

  4) 보조가스 : N2 60 mL/min

  5) 칼럼조온도 : 초기온도 60℃(1분 유지), 승온 20℃/min, 180℃(1분 유지), 승온 2℃/min, 220℃(1분 유지), 승온 1℃/min, 250℃

  6) 시료도입부온도 : 250℃

  7) 검출기온도 : 280℃

 라. 계산

   측정된 크로마토그램의 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시료중의 각 알드린량을 산출한다.

9.3.4. 디엘드린(Dieldrin) [C12H8Cl6O]

 가. 시약의 조제

  1) 디엘드린표준액

    디엘드린 20 mg씩을 정확히 칭량하여, 각각 100 mL의 메스플라스크에 넣는다. 아세톤 20 mL를 가하여 용해하고, 2,2,4-트리메틸펜탄을 표선까지 가하여 디엘드린표준원액을 조제한다.(이액 1 mL는 디엘드린 0.2 mg을 함유한다) 사용시, 표준원액의 일정량을 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1)으로 정확히 희석하고, 1 mL중에  0.05, 0.1, 0.15, 0.2 μg을 함유하는 각 디엘드린표준액을 조제한다.

  2) 규산마그네슘

    합성규산마그네슘[(입경 149～250 μm(100～60mesh) : 플로리실PR 미국의 Floridin제]을 130℃에서 5시간 건조한다.

 나. 방법

  1) 추출

    시료 10.0～50.0 g을 칭량하여 500 mL 분액여두에 넣고, 아세토니트릴+증류수(13+7) 300 mL를 가한 다음, 30분간 강하게 진탕하고 추출한다. 비이커를 부크너여두의 아래에 놓고, 추출액을 No.5B 여과지로 흡인 여과하여 추출액으로 한다.

  2) 정제

    추출액 150 mL를 미리 염화나트륨용액(5W/V%) 600 mL 및 헥산 100 mL를 넣은 1 L의 분액여두A에 가하고, 5분간 강하게 진탕한다. 정치한 후, 수층(하층)을 1 L의 분액여두B에 넣고, 헥산 50 mL를 가하여 가볍게 진탕하고 정치한다. 수층을 버리고, 헥산층(상층)을 위의 분액여두A에 가하고 증류수 100 mL를 가하여 가볍게 진탕하고 정치한 후, 수층을 500 mL의 분액여두 C에 넣는다. 그리고 증류수 100 mL를 헥산층에 가하여 가볍게 진탕하고 정치한 후, 수층을 분액여두 C에 가하고, 헥산층은 500 mL의 삼각플라스크에 넣는다. 헥산 100 mL를 분액여두 C에 가하고 가볍게 흔들어 정치한 후 수층을 버리고, 헥산층을 위의 삼각플라스크에 넣는다. 적당량의 황산나트륨(무수)을 가하여 탈수하고 500 mL의 농축플라스크에 No.2S 분액여과지(동양여과지)로 여과한 후, 용기 및 여과지를 소량의 헥산으로 세정한다. 여액에 합하여 40℃ 이하의 수욕조에서 5 mL정도가 될때까지 감압농축하고, 컬럼크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

  3) 컬럼크로마토그래피

    규산마그네슘 9 g, 황산나트륨(무수) 3 g을 각각 헥산으로 현탁시켜서 컬럼관(내경 15 mm)에 순차적으로 흘려보낸다. 헥산 40 mL를 가하여 액면이 충진제의 상면에서 3 mm의 높이가 될때까지 유출시켜 컬럼을 조제한다. 300 mL의 농축플라스크를 컬럼의 아래에 놓고, 시료용액을 컬럼에 넣는다. 용기를 소량의 헥산으로 세정하고 세액을 컬럼에 가하여 액면이 충진제의 상면에서 3 mm의 높이가 될때까지 유출시킨후, 디엘드린을 헥산+디에틸에테르(17+3) 150 mL로 용출시킨다. 용출액을 40℃ 이하의 수욕조에서 대부분 건고될때까지 감압 농축하고, 질소가스로 건고한다. 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1) 3 mL를 정확히 가하여 잔류물을 용해하고 가스크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

 다. 측정조건(Gas chromatograph)

  1) 검출기 : 전자포획검출기

  2) 칼럼 : 용융석영제 캐필러리컬럼(시아노프로필메틸실리콘코팅, 30 m × 0.32 mm, 0.25 μm)

  3) 캐리어가스 : He 1.5 mL/min

  4) 보조가스 : N2 60 mL/min

  5) 칼럼조온도 : 초기온도 60℃(1분 유지), 승온 20℃/min, 180℃(1분 유지), 승온 2℃/min, 220℃(1분 유지), 승온 1℃/min, 250℃

  6) 시료도입부온도 : 250℃

  7) 검출기온도 : 280℃

 라. 계산

   측정된 크로마토그램의 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시료중의 각 디엘드린량을 산출한다.

9.3.5. 엔드린(Endrin) [C12H8Cl6O]

 가. 시약의 조제

  1) 엔드린표준액

    엔드린 20 mg씩을 정확히 칭량하여, 각각 100 mL의 메스플라스크에 넣는다. 아세톤 20 mL를 가하여 용해하고, 2,2,4-트리메틸펜탄을 표선까지 가하여 엔드린표준원액을 조제한다.(이액 1 mL는 엔드린 0.2 mg을 함유한다) 사용시, 표준원액의 일정량을 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1)으로 정확히 희석하고, 1 mL중에  0.05, 0.1, 0.15, 0.2 μg을 함유하는 각 엔드린표준액을 조제한다.

  1) 규산마그네슘

    합성규산마그네슘[(입경 149～250 μm(100～60mesh) : 플로리실PR 미국의 Floridin제]을 130℃에서 5시간 건조한다.

 나. 방법

  1) 추출

    시료 10.0～50.0 g을 칭량하여 500 mL 분액여두에 넣고, 아세토니트릴+증류수(13+7) 300 mL를 가한 다음, 30분간 강하게 진탕하고 추출한다. 비이커를 부크너여두의 아래에 놓고, 추출액을 No.5B 여과지로 흡인 여과하여 추출액으로 한다.

  2) 정제

    추출액 150 mL를 미리 염화나트륨용액(5%, W/V) 600 mL 및 헥산 100 mL를 넣은 1 L의 분액여두 A에 가하고, 5분간 강하게 진탕한다. 정치한 후, 수층(하층)을 1 L의 분액여두 B에 넣고, 헥산 50 mL를 가하여 가볍게 진탕하고 정치한다. 수층을 버리고, 헥산층(상층)을 위의 분액여두 A에 가하고 증류수 100 mL를 가하여 가볍게 진탕하고 정치한 후, 수층을 500 mL의 분액여두 C에 넣는다. 그리고 증류수 100 mL를 헥산층에 가하여 가볍게 진탕하고 정치한 후, 수층을 분액여두C에 가하고, 헥산층은 500 mL의 삼각플라스크에 넣는다. 헥산 100 mL를 분액여두 C에 가하고 가볍게 흔들어 정치한 후 수층을 버리고, 헥산층을 위의 삼각플라스크에 넣는다. 적당량의 황산나트륨(무수)을 가하여 탈수하고 500 mL의 농축플라스크에 No.2S 분액여과지(동양여과지)로 여과한 후, 용기 및 여과지를 소량의 헥산으로 세정한다. 여액에 합하여 40℃ 이하의 수욕조에서 5 mL정도가 될때까지 감압 농축하고, 컬럼크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

  3) 컬럼크로마토그래피

    규산마그네슘 9 g, 황산나트륨(무수) 3 g을 각각 헥산으로 현탁시켜서 컬럼관(내경 15 mm)에 순차적으로 흘려보낸다. 헥산 40 mL를 가하여 액면이 충진제의 상면에서 3 mm의 높이가 될때까지 유출시켜 컬럼을 조제한다. 300 mL의 농축플라스크를 컬럼의 아래에 놓고, 시료용액을 컬럼에 넣는다. 용기를 소량의 헥산으로 세정하고 세액을 컬럼에 가하여 액면이 충진제의 상면에서 3 mm의 높이가 될때까지 유출시킨후, 엔드린을 헥산+디에틸에테르(17+3) 150 mL로 용출시킨다. 용출액을 40℃ 이하의 수욕조에서 대부분 건고될때까지 감압농축하고, 질소가스로 건고한다. 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1) 3 mL를 정확히 가하여 잔류물을 용해하고 가스크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

 다. 측정조건(Gas chromatograph)

  1) 검출기 : 전자포획검출기

  2) 칼럼 : 용융석영제 캐필러리컬럼(시아노프로필메틸실리콘코팅, 30 m × 0.32 mm, 0.25 μm)

  3) 캐리어가스 : He 1.5 mL/min

  4) 보조가스 : N2 60 mL/min

  5) 칼럼조온도 : 초기온도 60℃(1분 유지), 승온 20℃/min, 180℃(1분 유지), 승온 2℃/min, 220℃(1분 유지), 승온 1℃/min, 250℃

  6) 시료도입부온도 : 250℃

  7) 검출기온도 : 280℃

 라. 계산

   측정된 크로마토그램의 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시료중의 각 엔드린량을 산출한다.

9.3.6. 헵타크롤(Heptachlor) [C10H5Cl7]

 가. 시약의 조제

  1) 헵타크롤표준액

    헵타크롤 20 mg씩을 정확히 칭량하여, 각각 100 mL의 메스플라스크에 넣는다. 아세톤 20 mL를 가하여 용해하고, 2,2,4-트리메틸펜탄을 표선까지 가하여 헵타크롤표준원액을 조제한다.(이액 1 mL는 헵타크롤 0.2 mg을 함유한다) 사용시, 표준원액의 일정량을 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1)으로 정확히 희석하고, 1 mL중에  0.05, 0.1, 0.15, 0.2 μg을 함유하는 각 헵타크롤표준액을 조제한다.

  2) 규산마그네슘

    합성규산마그네슘[(입경 149～250 μm(100～60mesh) : 플로리실PR 미국의 Floridin제]을 130℃에서 5시간 건조한다.

 나. 방법

  1) 추출

    시료 10.0～50.0 g을 칭량하여 500 mL 분액여두에 넣고, 아세토니트릴+증류수(13+7) 300 mL를 가한 다음, 30분간 강하게 진탕하고 추출한다. 비이커를 부크너여두의 아래에 놓고, 추출액을 No.5B 여과지로 흡인 여과하여 추출액으로 한다.

  2) 정제

    추출액 150 mL를 미리 염화나트륨용액(5%, W/V) 600 mL 및 헥산 100 mL를 넣은 1 L의 분액여두 A에 가하고, 5분간 강하게 진탕한다. 정치한 후, 수층(하층)을 1 L의 분액여두 B에 넣고, 헥산 50 mL를 가하여 가볍게 진탕하고 정치한다. 수층을 버리고, 헥산층(상층)을 위의 분액여두A에 가하고 증류수 100 mL를 가하여 가볍게 진탕하고 정치한 후, 수층을 500 mL의 분액여두 C에 넣는다. 그리고 증류수 100 mL를 헥산층에 가하여 가볍게 진탕하고 정치한 후, 수층을 분액여두 C에 가하고, 헥산층은 500 mL의 삼각플라스크에 넣는다. 헥산 100 mL를 분액여두 C에 가하고 가볍게 흔들어 정치한 후 수층을 버리고, 헥산층을 위의 삼각플라스크에 넣는다. 적당량의 황산나트륨(무수)을 가하여 탈수하고 500 mL의 농축플라스크에 No.2S 분액여과지(동양여과지)로 여과한 후, 용기 및 여과지를 소량의 헥산으로 세정한다. 여액에 합하여 40℃ 이하의 수욕조에서 5 mL정도가 될때까지 감압 농축하고, 컬럼크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

  3) 컬럼크로마토그래피

    규산마그네슘 9 g, 황산나트륨(무수) 3 g을 각각 헥산으로 현탁시켜서 컬럼관(내경 15 mm)에 순차적으로 흘려보낸다. 헥산 40 mL를 가하여 액면이 충진제의 상면에서 3 mm의 높이가 될때까지 유출시켜 컬럼을 조제한다. 300 mL의 농축플라스크를 컬럼의 아래에 놓고, 시료용액을 컬럼에 넣는다. 용기를 소량의 헥산으로 세정하고 세액을 컬럼에 가하여 액면이 충진제의 상면에서 3 mm의 높이가 될때까지 유출시킨후, 헵타크롤을 헥산+디에틸에테르(17+3) 150 mL로 용출시킨다. 용출액을 40℃ 이하의 수욕조에서 대부분 건고될때까지 감압 농축하고, 질소가스로 건고한다. 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1) 3 mL를 정확히 가하여 잔류물을 용해하고 가스크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

 다. 측정조건(Gas chromatograph)

  1) 검출기 : 전자포획검출기

  2) 칼럼 : 용융석영제 캐필러리컬럼(시아노프로필메틸실리콘코팅, 30 m × 0.32 mm, 0.25 μm)

  3) 캐리어가스 : He 1.5 mL/min

  4) 보조가스 : N2 60 mL/min

  5) 칼럼조온도 : 초기온도 60℃(1분 유지), 승온 20℃/min, 180℃(1분 유지), 승온  2℃/min, 220℃(1분 유지), 승온  1℃/min, 250℃

  6) 시료도입부온도 : 250℃

  7) 검출기온도 : 280℃

 라. 계산

   측정된 크로마토그램의 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시료중의 각 헵타크롤량을 산출한다.

9.3.7. 헵타크롤에폭사이드(Heptachlor Epoxide) [C10H5Cl7O]

 가. 시약의 조제

  1) 헵타크롤에폭사이드표준액

    헵타크롤에폭사이드 20 mg씩을 정확히 칭량하여, 각각 100 mL의 메스플라스크에 넣는다. 아세톤 20 mL를 가하여 용해하고, 2,2,4-트리메틸펜탄을 표선까지 가하여 헵타크롤에폭사이드표준원액을 조제한다.(이액 1 mL는 헵타크롤에폭사이드 0.2 mg을 함유한다) 사용시, 표준원액의 일정량을 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1)으로 정확히 희석하고, 1 mL중에  0.05, 0.1, 0.15, 0.2 μg을 함유하는 각 헵타크롤에폭사이드표준액을 조제한다.

  2) 규산마그네슘

    합성규산마그네슘[(입경 149～250 μm(100～60mesh) : 플로리실PR 미국의 Floridin제]을 130℃에서 5시간 건조한다.

 나. 방법

  1) 추출

    시료 10.0～50.0 g을 칭량하여 500 mL 분액여두에 넣고, 아세토니트릴+증류수(13+7) 300 mL를 가한 다음, 30분간 강하게 진탕하고 추출한다. 비이커를 부크너여두의 아래에 놓고, 추출액을 No.5B 여과지로 흡인 여과하여 추출액으로 한다.

  2) 정제

    추출액 150 mL를 미리 염화나트륨용액(5%, W/V) 600 mL 및 헥산 100 mL를 넣은 1 L의 분액여두 A에 가하고, 5분간 강하게 진탕한다. 정치한 후, 수층(하층)을 1 L의 분액여두 B에 넣고, 헥산 50 mL를 가하여 가볍게 진탕하고 정치한다. 수층을 버리고, 헥산층(상층)을 위의 분액여두 A에 가하고 증류수 100 mL를 가하여 가볍게 진탕하고 정치한 후, 수층을 500 mL의 분액여두 C에 넣는다. 그리고 증류수 100 mL를 헥산층에 가하여 가볍게 진탕하고 정치한 후, 수층을 분액여두 C에 가하고, 헥산층은 500 mL의 삼각플라스크에 넣는다. 헥산 100 mL를 분액여두 C에 가하고 가볍게 흔들어 정치한 후 수층을 버리고, 헥산층을 위의 삼각플라스크에 넣는다. 적당량의 황산나트륨(무수)을 가하여 탈수하고 500 mL의 농축플라스크에 No.2S 분액여과지(동양여과지)로 여과한 후, 용기 및 여과지를 소량의 헥산으로 세정한다. 여액에 합하여 40℃ 이하의 수욕조에서 5 mL정도가 될때까지 감압 농축하고, 컬럼크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

  3) 컬럼크로마토그래피

    규산마그네슘 9 g, 황산나트륨(무수) 3 g을 각각 헥산으로 현탁시켜서 컬럼관(내경 15 mm)에 순차적으로 흘려보낸다. 헥산 40 mL를 가하여 액면이 충진제의 상면에서 3 mm의 높이가 될 때까지 유출시켜 컬럼을 조제한다. 300 mL의 농축플라스크를 컬럼의 아래에 놓고, 시료용액을 컬럼에 넣는다. 용기를 소량의 헥산으로 세정하고 세액을 컬럼에 가하여 액면이 충진제의 상면에서 3 mm의 높이가 될 때까지 유출시킨 후, 헵타크롤에폭사이드을 헥산+디에틸에테르(17+3) 150 mL로 용출시킨다. 용출액을 40℃ 이하의 수욕조에서 대부분 건고될 때까지 감압농축하고, 질소가스로 건고한다. 2,2,4-트리메틸펜탄+아세톤(4+1) 3 mL를 정확히 가하여 잔류물을 용해하고 가스크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

 다. 측정조건(Gas chromatograph)

  1) 검출기 : 전자포획검출기

  2) 칼럼 : 용융석영제 캐필러리컬럼(시아노프로필메틸실리콘코팅, 30 m × 0.32 mm, 0.25 μm)

  3) 캐리어가스 : He 1.5 mL/min

  4) 보조가스 : N2 60 mL/min

  5) 칼럼조온도 : 초기온도 60℃(1분 유지),  승온 20℃/min, 180℃(1분 유지), 승온 2℃/min, 220℃(1분 유지), 승온 1℃/min, 250℃

  6) 시료도입부온도 : 250℃

  7) 검출기온도 : 280℃

 라. 계산

   측정된 크로마토그램의 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시료중의 각 헵타크롤에폭사이드량을 산출한다.

9.4. 카바메이트계(Carbamate)

9.4.1. 카바릴(Carbaryl) [C12H11NO2]

 가. 표준용액의 제조

   표준품을 1000 μg/ mL이 되도록 메탄올에 녹여 표준원액으로 하고, 적정농도로 희석하여 사용한다.

 나. 시약 및 초자

  1) 시약

   가) 메탄올, 아세토니트릴 - HPLC등급

   나) 디클로로메탄, 헥산 - 잔류농약분석용 또는 동급

   다) Na2SO4(,(무수), NaCl, ο-phthaldialdehyde, NaOH, Sodium tetraborate decahydrate,

   라) 2-mercaptoethanol - 특급 이상

   마) Florisil - 60～100mesh, 규조토,

   바) 용출액 - 헥산 : 아세톤 = 60:40

  2) 초자

    삼각플라스크(300 mL), 부크너여두, 농축용플라스크(125 mL, 250 mL), 분액여두(1000 mL), 메스실린더(100 mL), 피펫(3 mL, 5 mL), No. 6 여과지, 유리컬럼(테프론콕 포함, Φ1 cm×50 cm), 탈지면(아세톤으로 추출한 것), vial(4 mL, 8 mL), 멤브레인필터(pore size : 0.45 μm)

 다. 방법

  1) 추출

    시료 20 g을 삼각플라스크에 칭량하고, 증류수 30～40 mL를 넣어 1시간 방치한 후, 메탄올 100 mL를 첨가하여 12～14시간(over night) 진탕한다. 진탕 후, 부크너여두에 No. 6 여과지와 규조토를 깔고, 여두 아래 삼각플라스크를 놓고 흡인여과한다. 소량의 메탄올로 삼각플라스크와 여두내의 잔사를 세척하여 여과액에 합친다.

  2) 분배

    시료용액을 1000 mL 분액여두로 옮기고, 포화식염수 100 mL, 증류수 400 mL, 디클로로메탄 100 mL를 넣고 약 4분간 진탕시킨다. 진탕 후, 잠시 정치시켜 아래쪽의 디클로로메탄층을 Na2SO4를 통과시켜 수분을 제거한 후, 250 mL 농축용플라스크에 받는다.(1액), 상층액에 다시 디클로로메탄 100 mL를 넣고 진탕시켜 디클로로메탄층을 1액과 합친다. 이를 실온에서 회전증발농축기로 거의 대부분을 농축시킨 다음 질소가스로 완전히 농축시킨다. 잔사를 헥산 5 mL로 용해시킨다.

  3) 정제(컬럼크로마토그래피)

    유리컬럼을 아세톤으로 추출한 탈지면으로 막고 Florisil 5g을 넣은 후, Na2SO4((무수) 1스푼 정도 (높이 1～2 cm)를 넣는다. 이때 컬럼내로 균일하게 들어가도록 한다. 헥산 50 mL를 흘려버리고 시료액 3 mL를 loading한다. 다시 헥산 50 mL를 흘려버리고 용출액 50 mL를 흘려 125 mL 농축용플라스크로 받는다. 실온에서 회전증발농축기로 거의 대부분을 농축시킨 다음 질소 가스로 완전히 농축시킨다. 잔사를 메탄올 3 mL로 용해시키고 멤브레인필터(poresize 0.45 μm)로 여과하여 기기분석용 시료액으로 한다.

    ※ 후컬럼 시약

    ① 0.05N NaOH : 1g NaOH를 3차증류수 또는 HPLC용 증류수로 500 mL 정용. 진공 필터법에 의해 여과하고 갈색병에 보관.

    ② OPA/ME

     ㉮ 저장용 버퍼(0.05M sodium borate) : 19.1g sodium tetraborate decahydrate를 1 L의 3차증류수나 HPLC용 증류수로 녹인다. 밀봉하여 보관.

     ㉯ OPA 시약 : 50 mg의 OPA를 500 mL 플라스크에 넣고 5 mL 메탄올을 가하여 녹인 후 0.05M borate 버퍼로 정용한다. 진공필터법으로 여과하고 25 μL 2-mercaptoethanol을 첨가한다. 2-mercaptoethanol 첨가 후 탈기나 degas 단계를 실시하지 않는다. 갈색병에 밀봉 보관.

 라. 측정조건(High Performance liquid chromatograph)

  1) Column - carbarmate analysis column(Waters co.)

  2) 검출기 - 형광검출기

  3) 이동상 : H2O : 메탄올 : 아세토니트릴 = 50 : 45 : 5

  4) Flow rate - 1.0 mL/min

  5) PCRS : OPA - 0.5 mL/min, NaOH - 0.5 mL/min

  6) 주입량 : 10 μL

 마. 계산

ppm = 검량선(ng)×{최종희석량( mL)/주입량( μL)}×{1/시료무게(g)}

9.5. 유기인계, 유기염소계 및 카바메이트계 다성분 분석법

 가. 분석성분

     다이아지논(Diazinon), 파라치온(Parathion), 페니트로치온(Fenitrothion), 펜치온(Fenthion), 카바릴(Carbaryl), 말라치온(Malathion), 펜토에이트(Phenthoate), 클로르피리포스메칠(Chlorphyrifos-methyl), 피리미포스메칠(Pirimiphos-methyl), 비에이치시(BHC), 디디티(DDT), 디엘드린(알드린포함 ; Dieldrin and Aldrin), 엔드린(Endrin), 헵타크롤(헵타크롤에폭사이드포함 ; Heptachlor and Heptachlor epoxide), 치아벤다졸(Thiabendazole), EPN, 베노밀(Benomyl), 퍼메쓰린(Permethrin), 에치온(Ethion), 클로르피리포스(Chlorpyrifos), 페노브카브(Fenobucarb), 이소프로카브(Isoprocarb), 펜발러레이트(Fenvalerate), 에디펜포스(Edifenphos), 이소펜포스(Isofenphos)

  1) 표준용액의 조제

    유기인계 및 유기염소계 20성분은 원제(분말)를 Acetone : Hexane (1 : 9)용액, 카바메이트계등 5성분은 메탄올이나 아세토니트릴를 이용하여 각각 1000ppm으로 만든 후 각각의 성분을 그룹별(유기인계, 유기염소계, 카바메이트계등)로 100 mL mass flask에 1 mL씩 넣고 표선을 맞추어 10ppm의 work solution을 제조하여 아세톤이나 아세토니트릴로 각각 0.1, 0.5, 1.0ppm으로 희석하여 표준물질로 사용한다.

  2) 시약 및 초자

   가) 시약

      아세톤, 디클로로메탄, 헥산, 아세토니트릴, 1,2-프로판디올, NaCl(잔류농약분석용 또는 동급)

   나) 초자

      폴리에틸렌병(250 mL), 메스실린더(100 mL), 피펫(1 mL, 5 mL), vial(2 mL) 또는 Microvolume insert(0.2 mL)

  3) 방법

   가) 추출

      마쇄된 시료 5 g을 폴리에틸렌병에 칭량하고, 증류수 20 mL를 넣어 1시간 방치한 후, 아세토니트릴 50 mL와 NaCl 10g을 첨가하여 1시간 진탕 한다. 진탕 후 3000rpm에서 3분간 원심분리 시킨다.

   나) 정제

      디클로로메탄 7 mL와 아세토니트릴 7 mL로 활성화 된 아민 카트리지(NH2-2g)에 원심분리 된 상층부(아세토니트릴층)에서 3 mL를 취하여 loading하여 버린다. 이어서 아세토니트릴 4 mL로 용출하고 용출액은 질소가스 또는 공기를 사용하여 용매를 날려 버리고 잔류물을 아세톤 일정량에 녹여 시험용액으로 한다(다만, 카바메이트계 등 5성분은 용출액 4 mL에 Keeper제[1,2-프로판디올(20) : 아세토니트릴(80) = 부피비]1 mL첨가한 후 농축한다. 농축 후 Tube에 0.2 mL 1,2-프로판디올이 남아 있으므로 이를 고려하여 아세토니트릴 일정량에 녹여 시험용액으로 한다)

  4) 측정조건

   가) 유기인계(Gas chromatograph/NPD)

    (1) 주입부온도 : 250℃, 1 μL splitless

    (2) 오븐온도 : 130℃(1분) →분당 7℃ →200℃ →분당 2℃ →220℃(4분) →분당 10℃→300℃(6분)

    (3) 검출기 : 질소인검출기(NPD), 온도 - 320℃, H2 : 3.1 mL/min, Air : 60 mL/min

    (4) Column : DB-5 Capillary Column (30 m × 0.32 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

    (5) Make up gas(N2) : 10 mL/min

    (6) 주입량 : 1 μL

  나) 유기염소계(Gas chromatograph/ECD)

    (1) 주입부온도 : 250℃, 1 μL split ratio 60 : 1

    (2) 오븐온도 : 130℃(1분) →분당 7℃ →200℃ →분당 2℃ →220℃(4분) →분당 10℃ →300℃(6분)

    (3) 검출기 : 전자포획검출기(ECD), 온도 - 320℃

    (4) Column : DB-5 Capillary Column (30m x 0.25mm x 0.25 μm)또는 이와 동등한 것

    (5) Make up gas(N2) : 60 mL/min

    (6) 주입량 : 1 μL

   다) 카바메이트계(High Performance liquid chromatograph/UV/FLD)

    (1) 측정기기 : HP-1100 series

    (2) 검출기 : UV : 254, 275nm, 

               FLD : Excitation - 330nm, Emission - 446nm 

    (3) Column : Phenomenox Luna (25 cm, particle size 5 μm, C18)

    (4) Post-Column Derivatizer : OPA - 0.25 mL/min, NaOH - 0.25 mL/min 

    (5) 이동상 : H2O : 아세토니트릴 = 70 : 30, 1.0 mL/min (0-5min)

               H2O : 아세토니트릴 = 15 : 85, 1.2 mL/min (5-25min)

               H2O : 아세토니트릴 = 15 : 85, 1.2 mL/min (25-40min)

    (6) 주입량 : 10 μL

  5) 계산

ppm = 검량선(ng) x[최종희석량( mL)/주입량( μL)]x[1/시료무게(g)]

9.6. 다종농약 다성분 분석법 (Multi class pesticide multiresidue methods)

9.6.1. 다종농약 다성분 동시분석-제1법

○ 기체크로마토그래프 분석 대상

┌──┬──────────┬──┬──────────┬──┬─────────┐

│1   │Acrinathrin         │2   │Aldrin              │3   │Allidochlor       │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│4   │Ametryn             │5   │Anilofos            │6   │Asulam            │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│7   │Atraine             │8   │Azaconazole         │9   │Azinphos-ethyl    │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│10  │Azinphos-methyl     │11  │BHC                 │12  │Bifenthrin        │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│13  │Binapacryl          │14  │Bromacil            │15  │Bromobutide       │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│16  │Bromophos-methyl    │17  │Bromopropylate      │18  │Bromoxynil        │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│19  │Bupirimate          │20  │Butafenacil         │21  │Cadusafos         │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│22  │Captafol            │23  │Captan              │24  │Carbophenothion   │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│25  │Chinomethionat      │26  │Chlordane           │27  │Chlorfenapyr      │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│28  │Chloridazon         │29  │Chlorobenzilate     │30  │Chlorothalonil    │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│31  │Chlorpyrifos        │32  │Chlorpyrifos-methyl │33  │Chlorthal-dimethyl│

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│34  │Cinmethylin         │35  │Clomeprop           │36  │Cyanazine         │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│37  │Cyanophos           │38  │Cycloate            │39  │Cycloprothrin     │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│40  │Cyflufenamid        │41  │Cyfluthrin          │42  │Cyhalothrin       │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│43  │Cypermethrin        │44  │Cyproconazole       │45  │Cyprodinil        │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│46  │DDT                 │47  │Deltamethrin        │48  │Diallate          │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│49  │Diazinon            │50  │Dichlofluanid       │51  │Dichlorvos        │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│52  │Dicloran            │53  │Dicofol             │54  │Dicrotophos       │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│55  │Dieldrin            │56  │Diethofencarb       │57  │Diflufenican      │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│58  │Dimepiperate        │59  │Dimethachlor        │60  │Dimethenamid      │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│61  │Dimethoate          │62  │Dimethylvinphos     │63  │Diniconazole      │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│64  │Diphenamid          │65  │Diphenylamine       │66  │Dithiopyr         │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│67  │Edifenphos          │68  │Endosulfan          │69  │Endrin            │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│70  │EPN                 │71  │Esprocarb           │72  │Ethion            │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│73  │Ethoprophos         │74  │Etoxazole           │75  │Etrimfos          │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│76  │Fenamidone          │77  │Fenarimol           │78  │Fenazaquin        │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│79  │Fenbuconazole       │80  │Fenitrothion        │81  │Fenobucarb        │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│82  │Fenothiocarb        │83  │Fenoxanil           │84  │Fenoxycarb        │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│85  │Fenpropathrin       │86  │Fenthion            │87  │Fenvalerate       │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│88  │Fipronil            │89  │Flonicamid          │90  │Fluazinam         │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│91  │Fludioxonil         │92  │Flumiclorac-pentyl  │93  │Flupyrazofos      │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│94  │Flusilazole         │95  │Flusulfamide        │96  │Fluthiacet-methyl │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│97  │Flutolanil          │98  │Fluvalinate         │99  │Folpet            │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│100 │Fonofos             │101 │Fosthiazate         │102 │Fthalide          │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│103 │Furathiocarb        │104 │Heptachlor  epoxide │105 │Heptachlor        │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│106 │Hexachlorobenzene   │107 │Imazalil            │108 │Indanofan         │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│109 │Indoxacarb          │110 │Iprobenfos          │111 │Iprodione         │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│112 │Iprovalicarb        │113 │Isazofos            │114 │Isazophos         │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│115 │Isofenphos          │116 │Isofenphos-methyl   │117 │Isoprothiolane    │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│118 │Isoxathion          │119 │Kresoxim-methyl     │120 │Lactofen          │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│121 │Malathion           │122 │Mecarbam            │123 │Mefenacet         │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│124 │Mefenpyr-diethyl    │125 │Mepronil            │126 │Metconazole       │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│127 │Methidathion        │128 │Methoxychlor        │129 │Metrafenone       │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│130 │Molinate            │131 │Myclobutanil        │132 │Nitrapyrin        │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│133 │Nitrothal-isopropyl │134 │Nonachlor           │135 │Nuarimol          │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│136 │Ofurace             │137 │Oxadixyl            │138 │Oxydemeton-methyl │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│139 │Paclobutrazol       │140 │Parathion           │141 │Parathion-methyl  │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│142 │Pebulate            │143 │Penconazole         │144 │Pendimethalin     │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│145 │Permethrin          │146 │Phenthoate          │147 │Phosalone         │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│148 │Phosmet             │149 │Phosphamidone       │150 │Picolinafen       │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│151 │Picoxystrobin       │152 │Piperophos          │153 │Pirimicarb        │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│154 │Pirimiphos-ethyl    │155 │Pirimiphos-methyl   │156 │Probenazole       │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│157 │Prochloraz          │158 │Procymidone         │159 │Profenofos        │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│160 │Propachlor          │161 │Propazine           │162 │Propham           │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│163 │Propisochlor        │164 │Propyzamide         │165 │Prothiofos        │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│166 │Pyraclofos          │167 │Pyrazophos          │168 │Pyridaben         │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│169 │Pyridalyl           │170 │Pyrifenox           │171 │Pyrimidifen       │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│172 │Pyriminobac-methyl  │173 │Quinalphos          │174 │Quintozene        │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│175 │Simeconazole        │176 │Sulprofos           │177 │TCMTB             │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│178 │Tebufenpyrad        │179 │Tebupirimfos        │180 │Tefluthrin        │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│181 │Terbufos            │182 │Terbutylazine       │183 │Tetrachlorvinphos │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│184 │Tetradifon          │185 │Thiazopyr           │186 │Thifluzamide      │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│187 │Thiometon           │188 │Tolclofos-methyl    │189 │Tolfenpyrad       │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│190 │Tolylfluanid        │191 │Tralomethrin        │192 │Triadimefon       │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│193 │Triazophos          │194 │Tribuphos           │195 │Triflumizole      │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│196 │Triflumuron         │197 │Triticonazole       │198 │Uniconazole       │

├──┼──────────┼──┼──────────┼──┼─────────┤

│199 │Vernolate           │200 │Vinclozoline        │201 │Zoxamide          │

└──┴──────────┴──┴──────────┴──┴─────────┘

○ 액체크로마토그래프 분석 대상

┌─┬────────┬─┬───────────┬─┬─────────┐

│1 │Acetamiprid     │2 │Aldicarb              │3 │Amisulbrom        │

├─┼────────┼─┼───────────┼─┼─────────┤

│4 │Azafenidin      │5 │Azamethiphos          │6 │Azoxystrobin      │

├─┼────────┼─┼───────────┼─┼─────────┤

│7 │Bendiocarb      │8 │Bensulide             │9 │Benzoximate       │

├─┼────────┼─┼───────────┼─┼─────────┤

│10│Boscalid        │11│Butocarboxim          │12│Carbaryl          │

├─┼────────┼─┼───────────┼─┼─────────┤

│13│Carbofuran      │14│Chlorantraniliprole   │15│Chlorimuron-ethyl │

├─┼────────┼─┼───────────┼─┼─────────┤

│16│Chlorobenzuron  │17│Chlorotoluron         │18│Chromafenozide    │

├─┼────────┼─┼───────────┼─┼─────────┤

│19│Cinosulfuron    │20│Clothianidin          │21│Cyazofamid        │

├─┼────────┼─┼───────────┼─┼─────────┤

│22│Cyhalofop-butyl │23│Cymoxanil             │24│Dimethomorph      │

├─┼────────┼─┼───────────┼─┼─────────┤

│25│Ethaboxam       │26│Ethametsulfuron-methyl│27│Ethiofencarb      │

├─┼────────┼─┼───────────┼─┼─────────┤

│28│Fenhexamid      │29│Fenpyroximate         │30│Ferimzone         │

├─┼────────┼─┼───────────┼─┼─────────┤

│31│Fluacrypyrim    │32│Flubendiamide         │33│Flufenacet        │

├─┼────────┼─┼───────────┼─┼─────────┤

│34│Flufenoxuron    │35│Flumioxazine          │36│Fluquinconazole   │

├─┼────────┼─┼───────────┼─┼─────────┤

│37│Fluridone       │38│Forchlorfenuron       │39│Hexaflumuron      │

├─┼────────┼─┼───────────┼─┼─────────┤

│40│Imazamox        │41│Imazapic              │42│Imazaquin         │

├─┼────────┼─┼───────────┼─┼─────────┤

│43│Imazethapyr     │44│Imibenconazole        │45│Isoprocarb        │

├─┼────────┼─┼───────────┼─┼─────────┤

│46│Isoproturon     │47│Lufenuron             │48│Mepanipyrim       │

├─┼────────┼─┼───────────┼─┼─────────┤

│49│Metamifop       │50│Methabenzthiazuron    │51│Methiocarb        │

├─┼────────┼─┼───────────┼─┼─────────┤

│52│Methomyl        │53│Methoxyfenozide       │54│Metolcarb         │

├─┼────────┼─┼───────────┼─┼─────────┤

│55│Nitenpyram      │56│Novaluron             │57│Oxamyl            │

├─┼────────┼─┼───────────┼─┼─────────┤

│58│Oxaziclomefon   │59│Pentoxazone           │60│Phenmedipham      │

├─┼────────┼─┼───────────┼─┼─────────┤

│61│Promecarb       │62│Propoxur              │63│Pyraclostrobin    │

├─┼────────┼─┼───────────┼─┼─────────┤

│64│Pyrazolate      │65│Pyribenzoxim          │66│Pyributicarb      │

├─┼────────┼─┼───────────┼─┼─────────┤

│67│Pyridate        │68│Pyrimethanil          │69│Pyriproxyfen      │

├─┼────────┼─┼───────────┼─┼─────────┤

│70│Pyroquilon      │71│Quinoclamine          │72│Rimsulfuron       │

├─┼────────┼─┼───────────┼─┼─────────┤

│73│Spirodiclofen   │74│Tebufenozide          │75│Teflubenzuron     │

├─┼────────┼─┼───────────┼─┼─────────┤

│76│Thenychlor      │77│Thiacloprid           │78│Thiamethoxam      │

├─┼────────┼─┼───────────┼─┼─────────┤

│79│Thiodicarb      │80│Tiadinil              │81│Tribenuron-methyl │

├─┼────────┼─┼───────────┼─┼─────────┤

│82│Tricyclazole    │83│Trifloxystrobin       │84│Trimethacarb      │

└─┴────────┴─┴───────────┴─┴─────────┘

  1) 표준용액의 제조

    각 표준품을 1000 μg/ mL이 되도록 유기용매에 녹여 표준원액으로 하고, 적정농도로 희석하여 단일표준용액 또는 혼합표준용액을 조제한다. 

  2) 시약 및 초자

   가) 시약

    (1) 용매：잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

    (2) 일회용 카트리지：플로리실(500 mg) 및 아미노-프로필(1 g) 등의 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지 

    (3) 기타 시약：특급 또는 이와 동등한 것

   나) 초자

      삼각플라스크(300 mL), 부크너여두, 농축용플라스크(125 mL, 250 mL), 분액여두(1000 mL), 메스실린더(100 mL), 피펫(3 mL, 5 mL), No. 6 여과지, 유리컬럼(테프론 콕 포함, Φ1 cm×50 cm), 탈지면(아세톤으로 추출한 것), vial(4 mL, 8 mL)

  3) 방법

   가) 추출 

    (1) 아세토니트릴 추출법

       시료 5 g을 정밀히 달아 혼합추출분쇄기(Omni mixer)병에 넣고(물 30 mL를 넣어 1시간 방치) 아세토니트릴 100 mL를 넣은 후 혼합추출분쇄기로 2～3분간 균질화한다. 이를 여지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압여과한다. 여액을 염화나트륨 10～15 g이 들어있는 500 mL 분액깔때기에 옮기고 마개(Teflon-lined)를 막은 후 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한다. 아세토니트릴층을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수한 후 별도의 아세토니트릴을 가하여 최종 부피가 100 mL가 되게 한다. 아세토니트릴층 20 mL를 각각 취하고 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하여 용매를 날려버린다. ★ 잔류물을 기체크로마토그래프 분석 대상 농약의 경우 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL로 용해하고, 액체크로마토그래프 분석 대상 농약은 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL로 용해한다.

    (2) 아세톤 추출법

       시료 5 g을 정밀히 달아 혼합추출분쇄기(Omni mixer)병에 넣고(물 30 mL를 넣어 1시간 방치) 아세톤 100 mL를 넣은 후 혼합추출분쇄기로 2～3분간 균질화한다. 이를 여지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압여과한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압여과한다. 여과액을 1 L 분액깔때기로 옮기고 포화염화나트륨 용액 50 mL, 물 100 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 가하고 마개(Teflon-lined)를 막은 후 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치하고 디클로로메탄층을 취한다. 다시 디클로로메탄 50 mL로 상기의 과정을 되풀이 하여 여액을 합하고 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수한 후 별도의 디클로로메탄을 가하여 최종 부피가 100 mL가 되게 한다. 디클로로메탄층 20 mL를 각각 취하고 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하여 용매를 날려버린다. ★ 잔류물을 기체크로마토그래프 분석 대상 농약의 경우 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL에 녹이고, 액체크로마토그래프 분석 대상 농약은 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL로 용해한다.

   ※ 추출은 상기 (1) 또는 (2) 중 선택하여 사용함.

   나) 정제

    (1) 기체크로마토그래프 측정 농약

       미리 플로리실 카트리지에 헥산 5 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이 카트리지에 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL를 위와 같은 방법으로 유출하여 버린다. 이어서 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL에 녹인 액을 카트리지 상단에 넣고 초당 1～2방울 정도의 속도로 용출시켜 시험관에 받는다. 다시 카트리지가 용매에 젖어 있는 상태에서 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL를 용출하여 동일 시험관에 모은다. 용출액은 40℃ 이하 수욕상에서 질소 또는 공기를 낮은 유속으로 통과시키면서 용매를 날려 보낸 후 20% 아세톤 함유 헥산에 녹여서 일정량으로 한 후 맴브레인 필터(PTFE 0.45 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

   ※ 정제과정 중에는 모든 카트리지의 충전제가 마르지 않도록 주의한다.

   ※ 기체크로마토그래프 측정 농약을 전처리할 때 항상 감압농축하기 전에 2% 에틸렌글리콜(Diethylene glycol) 함유 아세톤 0.2 mL를 첨가한다.

    (2) 액체크로마토그래프 측정 농약

       미리 아미노-프로필 카트리지에 디클로로메탄 5 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL에 녹인 액을 카트리지 상단에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출시켜 시험관에 받는다. 다시 카트리지가 용매에 젖어 있는 상태에서 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 7 mL를 유출하여 동일 시험관에 합친다. 유출액은 40℃ 이하 수욕상에서 질소 또는 공기를 낮은 유속으로 통과시키면서 용매를 날려 보낸 후 아세토니트릴에 녹여 일정량으로 한 후 맴브레인 필터(PTFE 0.45 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

  4) 시험조작

   가) 기체크로마토그래프의 측정조건

    (1) GC-ECD

     (가) 칼럼：DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 및 DB-17(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

     (나) 캐리어가스 및 유량：N2, 1.0 mL/min

     (다) 칼럼오븐온도：80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 7℃/min의 비율로 250℃까지 온도를 상승시키고 5℃/min의 비율로 280℃까지 상승시켜 20분 이상 유지한다.

     (라) 주입부：split mode(20 : 1)

     (마) 검출기온도：280℃

    (2) GC-NPD

     (가) 칼럼：DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 및 DB-17(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

     (나) 이동상가스 및 유량：N2, 1.0 mL/min

     (다) 오븐 온도：80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 7℃/min의 비율로 250℃까지 온도를 상승시키고 5℃/min의 비율로 280℃까지 상승시켜 20분 이상 유지한다.

     (라) 주입부：splitless mode

     (마) 검출기온도：280℃

    (3) GC-FPD

     (가) 칼럼：DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 및 DB-17(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

     (나) 이동상가스 및 유량：N2, 1.0 mL/min

     (다) 오븐 온도：80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 7℃/min의 비율로 250℃까지 온도를 상승시키고 5℃/min의 비율로 280℃까지 상승시켜 20분 이상 유지한다.

     (라) 주입부：splitless mode

     (마) 검출기온도：230℃

    (4) GC-MS

     (가) 칼럼：DB-5ms(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

     (나) 이동상가스 및 유량：He, 0.8 mL/min

     (다) 오븐 온도：70℃에서 시험용액을 주입하고 3분간 유지한 후 20℃/min의 비율로 180℃까지 온도를 상승시키고 5℃/min의 비율로 300℃까지 상승시켜 7분 이상 유지한다.

     (라) 주입부：splitless mode

     (마) 인터페이스 온도：280℃

     (바) Solvent delay time：4 min

   나) 액체크로마토그래프의 측정조건

    (1) HPLC-FLD(Post-derivatization 포함)

     (가) 칼럼：C18(3.9 mm × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

     (나) 검출기：Excitation 340 nm, Emission 455 nm

     (다) 이동상：물 및 메탄올

         메탄올：물(3：7)의 혼합액에서 메탄올：물(7：3)의 혼합액으로 23분간 농도균배한 후 5분 이상 흘려보낸다.

     (라) 이동상 유량：0.8 mL/min

     (마) Post Reaction Pump 유량：0.5 mL/min(NaOH 0.25 mL/min, OPA 0.25 mL/min) 또는 기타 최적조건

    (2) HPLC-UVD

     (가) 칼럼：C18(4.6 mm × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 등등한 것

     (나) 검출기：자외부흡광검출기(254 nm)

     (다) 이동상：물 및 아세토니트릴

        - 아세토니트릴/물 혼합액(20/80, v/v)에서 (80/20, v/v)의 혼합액으로 40분간 농도 균배한 후 10분 이상 흘려보낸다.

        - 메탄올/물(35/65, v/v)에서 (90/10, v/v)의 혼합액으로 40분간 농도균배한 후 10분 이상 흘려보낸다.

      ※ 이동상의 조건은 상기 두 가지 중 선택하여 사용함

     (라) 이동상 유량：1.0 mL/min

    (4) LC-MS

     (가) 칼럼：C18(2 × 100 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

     (나) 이동상：A(물 + 0.1% 포름산, 2 mM 아세트산암모늄), B(99% 아세토니트릴 + 0.1% 포름산, 2 mM 아세트산암모늄)

        - A/B(90/10, v/v)에서 (10/90, v/v)의 혼합액으로 20분간 농도균배한 후 10분 이상 흘려보낸다.

     (다) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

     (라) 칼럼 온도 : 40℃

     (마) 주입량 : 2 μL

     (바) 이온화 : ESI positive 또는 negative-ion mode

  5) 정성시험

     위의 조건에서 시험할 때 시험결과는 어느 측정조건에서도 표준품과 일치하여야 한다.

   ※ GC-MS 및 LC-MS 상의 머무름 시간 및 질량분석 스펙트럼으로 각 농약의 성분을 확인할 수 있다.

  6) 정량시험

     정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 정량한다.

   ※ 정량시험은 단일 표준품으로 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

    ※ 이 시험법을 이용하여 사료에서 검출될 경우 정량분석은 사료공정서나 식품공전의 단성분 분석법에 따른다.

9.6.2. 다종농약 다성분 동시분석-제2법

 가. 적용범위

    본 분석법은 배합사료 및 단미사료(곡류, 콩류, 섬유질류)에 적용한다. 

 나. 분석대상 성분

  1) 기체크로마토그래프 분석 대상

┌─┬─────────────┬─┬────────┬─┬─────────┐

│1 │Aldrin+Dieldrin           │2 │Azoxystrobin    │3 │BHC               │

├─┼─────────────┼─┼────────┼─┼─────────┤

│4 │Bifenthrin                │5 │Bitertanol      │6 │Boscalid          │

├─┼─────────────┼─┼────────┼─┼─────────┤

│7 │Chlorobenzilate           │8 │Chlorfenvinphos │9 │Chlorpyrifos      │

├─┼─────────────┼─┼────────┼─┼─────────┤

│10│Chlorpyrifos-methyl       │11│Cyanazine       │12│Cyfluthrin        │

├─┼─────────────┼─┼────────┼─┼─────────┤

│13│Cyhalothrin               │14│Cypermethrin    │15│Cyproconazole     │

├─┼─────────────┼─┼────────┼─┼─────────┤

│16│Cyprodinil                │17│DDT             │18│Diazinon          │

├─┼─────────────┼─┼────────┼─┼─────────┤

│19│Deltamethrin+Tralomethrin │20│Dichlorvos      │21│Difenoconazole    │

├─┼─────────────┼─┼────────┼─┼─────────┤

│22│Dimethoate                │23│Disulfoton      │24│Endrin            │

├─┼─────────────┼─┼────────┼─┼─────────┤

│25│EPN                       │26│Esfenvalerate   │27│Ethylenedibromide │

├─┼─────────────┼─┼────────┼─┼─────────┤

│28│Famoxadone                │29│Fenpropathrin   │30│Fenpropimorph     │

├─┼─────────────┼─┼────────┼─┼─────────┤

│31│Fenitrothion              │32│Fenthion        │33│Fenvalerate       │

├─┼─────────────┼─┼────────┼─┼─────────┤

│34│Fipronil                  │35│Fludioxonil     │36│Flutriafol        │

├─┼─────────────┼─┼────────┼─┼─────────┤

│37│Heptachlor                │38│Imazalil        │39│Indoxacarb        │

├─┼─────────────┼─┼────────┼─┼─────────┤

│40│Isofenphos                │41│Kresoxim-methyl │42│Lindane(r-BHC)    │

├─┼─────────────┼─┼────────┼─┼─────────┤

│43│Pendimethalin             │44│Permethrin      │45│Phenthoate        │

├─┼─────────────┼─┼────────┼─┼─────────┤

│46│Pirimiphos-methyl         │47│Prochloraz      │48│Propargite        │

├─┼─────────────┼─┼────────┼─┼─────────┤

│49│Propiconazole             │50│Pyrimethanil    │51│Quintozene        │

├─┼─────────────┼─┼────────┼─┼─────────┤

│52│Terbufos                  │53│Triadimefon     │54│Trifloxystrobin   │

└─┴─────────────┴─┴────────┴─┴─────────┘

  2) 액체크로마토그래프 분석 대상

┌─┬──────────┬─┬─────────┬─┬─────────┐

│1 │Acephate            │2 │Alachlor          │3 │Aldicarb          │

├─┼──────────┼─┼─────────┼─┼─────────┤

│4 │Aminopyralid        │5 │Atrazine          │6 │Buprofezin        │

├─┼──────────┼─┼─────────┼─┼─────────┤

│7 │Carbaryl            │8 │Carbendazim       │9 │Carbofuran        │

├─┼──────────┼─┼─────────┼─┼─────────┤

│10│Chlorantraniliprole │11│Chlorpropham      │12│Clethodim         │

├─┼──────────┼─┼─────────┼─┼─────────┤

│13│Clothianidin        │14│Cyantrailiprole   │15│Diazinon          │

├─┼──────────┼─┼─────────┼─┼─────────┤

│16│Diflubenzuron       │17│Dinotefuran       │18│Edifenphos        │

├─┼──────────┼─┼─────────┼─┼─────────┤

│19│Ethion              │20│Etofenprox        │21│Fenbuconazole     │

├─┼──────────┼─┼─────────┼─┼─────────┤

│22│Fenobucarb          │23│Flubendiamide     │24│Fluopicolide      │

├─┼──────────┼─┼─────────┼─┼─────────┤

│25│Flusilazole         │26│Fluxapyroxad      │27│Indoxacarb        │

├─┼──────────┼─┼─────────┼─┼─────────┤

│28│Isoprocarb          │29│Isoprothiolane    │30│Isopyrazam        │

├─┼──────────┼─┼─────────┼─┼─────────┤

│31│Malathion           │32│Metaflumizone     │33│Methiocarb        │

├─┼──────────┼─┼─────────┼─┼─────────┤

│34│Methomyl            │35│Methoprene*       │36│Methoxyfenozide   │

├─┼──────────┼─┼─────────┼─┼─────────┤

│37│Oxamyl              │38│Oxydemeton-methyl │39│Parathion         │

├─┼──────────┼─┼─────────┼─┼─────────┤

│40│Phenthoate          │41│Phorate           │42│Piperonyl butoxide│

├─┼──────────┼─┼─────────┼─┼─────────┤

│43│Pirimicarb          │44│Propiconazole     │45│Pyraclostrobin    │

├─┼──────────┼─┼─────────┼─┼─────────┤

│46│Saflufenacil        │47│Simazine          │48│Spinosad          │

├─┼──────────┼─┼─────────┼─┼─────────┤

│49│Spirotetramat       │50│Sulfoxaflor       │51│Tebufenozide      │

├─┼──────────┼─┼─────────┼─┼─────────┤

│52│Thiabendazole       │53│Thiacloprid       │54│Tricyclazole      │

└─┴──────────┴─┴─────────┴─┴─────────┘

 다. 분석원리

    균질화하고 습윤화된 사료를 아세토니트릴로 진탕추출한 다음, NaCl을 가하여 액-액분배를 하여 고농도의 극성 방해물질을 포함하는 물층과 분석 대상 성분을 포함하는 유기용매층으로 분리한 후, 유기용매층에 남아있는 비극성 방해물질을 정제하여 기체크로마토그래프(GC-ECD, GC-FPD, GC-MS/MS)와 액체크로마토그래프(LC-MS/MS)로 측정한다. 

 라. 시약 및 표준용액의 제조

  1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

  2) 일회용 카트리지: 플로리실(500 mg) 등의 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지

  3) 표준원액: 각 농약의 표준품을 유기용매에 녹여 표준원액으로 사용한다.

   * Methoprene은 분해속도가 매우 빨라 불안정하므로 분석 시 표준원액을 새로 만들어 사용한다.

  4) 표준용액: 표준원액을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석하여 사용한다.

  5) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

 마. 시험용액의 조제

  1) 추출

    시료 약 5 g을 정밀히 달아 혼합추출분쇄기(Omni mixer)병에 넣고 물 20 mL를 넣어 2시간 방치하고 아세토니트릴 100 mL를 넣은 후 혼합추출분쇄기로 2～3분간 균질화 한다. 이를 여지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압여과한다. 여액을 염화나트륨 10～15 g이 들어있는 500 mL 분액깔때기에 옮기고 마개를 막은 후 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한다. 아세토니트릴층을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수한 후 별도의 아세토니트릴을 가하여 최종 부피가 100 mL가 되게 한다. 아세토니트릴층 20 mL를 각각 취하고 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하여 용매를 날려버린다. 아세토니트릴로 재용해 후 액체크로마토그래프로 분석한다. 기체크로마토그래프 분석 대상 농약의 경우 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL로 용해한다.

  2) 정제

   가) 기체크로마토그래프 측정 농약

      미리 플로리실 카트리지(Florisil cartridge)에 헥산 5 mL를 유출하여 버린다. 이 카트리지에 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL를 위와 같은 방법으로 유출하여 버린다. 이어서 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL에 녹인 액을 카트리지 상단에 넣고 용출시켜 시험관에 받는다. 다시 카트리지가 용매에 젖어 있는 상태에서 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL를 용출하여 동일 시험관에 모은다. 용출액은 40℃ 이하 수욕상에서 질소 또는 공기를 낮은 유속으로 통과시키면서 용매를 날려 보낸 후 20% 아세톤 함유 헥산에 녹여서 일정량으로 한 후 syringe filter로 여과하여 시험용액으로 한다(단, 카본 카트리지는 색소 등 방해물질 제거에 필요시에 사용한다).

    * 정제과정 중에는 모든 카트리지의 충전제가 마르지 않도록 주의한다.

 바. 기기 분석 조건 

  1) GC-ECD 분석 조건

┏━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┓

┃구분    │조건                                                            ┃

┣━━━━┿━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫

┃Column  │DB-5 컬럼 (30 m × 0.25 mm, 0.25 μm)또는 이와 동등한 것        ┃

┠────┼────────────────────────────────┨

┃Carrier │He, 1.0 mL/min                                                  ┃

┠────┼────────────────────────────────┨

┃Injector│250℃, 1 uL, Split 50:1                                         ┃

┠────┼────────────────────────────────┨

┃Oven    │130℃(1 min) → 7℃/min → 200℃ → 2℃/min → 220℃(4 min) →  ┃

┃        │10℃/min → 300℃(6 min)                                        ┃

┠────┼────────────────────────────────┨

┃Detector│320℃                                                           ┃

┗━━━━┷━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┛

  2) GC-FPD 분석 조건

┏━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┓

┃구분    │조건                                                            ┃

┣━━━━┿━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫

┃Column  │DB-5 컬럼 (30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것       ┃

┠────┼────────────────────────────────┨

┃Carrier │He, 1.0 mL/min                                                  ┃

┠────┼────────────────────────────────┨

┃Injector│250℃, 1 uL, Splitless                                          ┃

┠────┼────────────────────────────────┨

┃Oven    │130℃(1 min) → 7℃/min → 200℃ → 2℃/min → 220℃(4 min) →  ┃

┃        │10℃/min → 300℃(6 min)                                        ┃

┠────┼────────────────────────────────┨

┃Detector│230℃                                                           ┃

┗━━━━┷━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┛

  3) GC-MSMS 분석 조건 및 MRM

┏━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┓

┃구분    │조건                                                                ┃

┣━━━━┿━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫

┃Column  │DB-5MS 컬럼(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것          ┃

┠────┼──────────────────────────────────┨

┃Carrier │He, 1.5 mL/min                                                      ┃

┠────┼──────────────────────────────────┨

┃Injector│280℃, 1 uL, Split 10:1                                             ┃

┠────┼──────────────────────────────────┨

┃Oven    │90℃(3 min) → 20℃/min → 120℃(0 min) → 8℃/min → 300℃(3 min)  ┃

┠────┼──────────────────────────────────┨

┃Detector│MRM(Multiple Reaction monitoring)                                   ┃

┃        │Ionization: Electron Ionization                                     ┃

┃        │Electron energy: 70 eV                                              ┃

┃        │Source temperature: 250℃                                           ┃

┗━━━━┷━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┛

┏━━━━━━━━┯━━━┯━━━━━━━┯━━━━━━━┯━━━┓

┃농약명          │RT    │Q1 mass       │Q3 mass       │CE(eV)┃

┣━━━━━━━━┿━━━┿━━━┯━━━┿━━━┯━━━┿━┯━┫

┃Pyrimethannil   │14.905│198   │183.1 │198   │118.1 │18│27┃

┠────────┼───┼───┼───┼───┼───┼─┼─┨

┃Fenpropimorph   │17.434│128   │110   │128   │86.1  │10│10┃

┠────────┼───┼───┼───┼───┼───┼─┼─┨

┃Cyprodinil      │18.176│224.1 │208.1 │224.1 │197.1 │16│22┃

┠────────┼───┼───┼───┼───┼───┼─┼─┨

┃Chlorfenvinphos │18.54 │323   │267   │323   │295   │16│6 ┃

┠────────┼───┼───┼───┼───┼───┼─┼─┨

┃Flutriafol      │19.422│219   │123   │219   │95    │20│40┃

┠────────┼───┼───┼───┼───┼───┼─┼─┨

┃Fludioxonil     │19.848│248   │127.1 │248   │154.1 │27│21┃

┠────────┼───┼───┼───┼───┼───┼─┼─┨

┃Cyprocoanzole   │20.455│139   │111   │222   │125.1 │15│24┃

┠────────┼───┼───┼───┼───┼───┼─┼─┨

┃Propargite      │22.201│135   │107   │135   │77.1  │15│30┃

┠────────┼───┼───┼───┼───┼───┼─┼─┨

┃Bitertanol      │25.18 │170   │141.1 │170   │115.1 │24│27┃

┗━━━━━━━━┷━━━┷━━━┷━━━┷━━━┷━━━┷━┷━┛

  4) LC-MSMS 분석 조건 및 MRM-사료용

┏━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┓

┃구분            │조건                                                    ┃

┣━━━━━━━━┿━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫

┃Column          │Unison UK-C18(4.6 × 100 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것 ┃

┠────────┼────────────────────────────┨

┃Mobile Phase    │A(4 mM ammonium formate, 0.1% formic acid in Water)     ┃

┃                │B(4 mM ammonium formate, 0.1% formic acid in MeOH)      ┃

┃                │┌─────┬──┬──┬────┐                    ┃

┃                ││시간 (분) │A(%)│B(%)│유속(mL)│                    ┃

┃                │├─────┼──┼──┼────┤                    ┃

┃                ││0.00      │90  │10  │0.3     │                    ┃

┃                │├─────┼──┼──┼────┤                    ┃

┃                ││3.00      │90  │10  │0.3     │                    ┃

┃                │├─────┼──┼──┼────┤                    ┃

┃                ││5.00      │10  │90  │0.3     │                    ┃

┃                │├─────┼──┼──┼────┤                    ┃

┃                ││7.00      │10  │90  │0.3     │                    ┃

┃                │├─────┼──┼──┼────┤                    ┃

┃                ││10.00     │0   │100 │0.3     │                    ┃

┃                │├─────┼──┼──┼────┤                    ┃

┃                ││15.00     │0   │100 │0.3     │                    ┃

┃                │├─────┼──┼──┼────┤                    ┃

┃                ││16.00     │90  │10  │0.3     │                    ┃

┃                │├─────┼──┼──┼────┤                    ┃

┃                ││25.00     │90  │10  │0.3     │                    ┃

┃                │└─────┴──┴──┴────┘                    ┃

┠────────┼────────────────────────────┨

┃Column Temp.    │40℃                                                    ┃

┠────────┼────────────────────────────┨

┃Time            │35 min                                                  ┃

┠────────┼────────────────────────────┨

┃Injection Volume│5 uL                                                    ┃

┠────────┼────────────────────────────┨

┃MS/MS           │Ion source: ESI                                         ┃

┃                │Polarity: Positive                                      ┃

┃                │Nebulizer gas: Nitrogen                                 ┃

┃                │Nebulizer gas flow: GS1; 50, GS2; 45                    ┃

┃                │Ion spray voltage: 5500                                 ┃

┃                │Source temp: 400                                        ┃

┗━━━━━━━━┷━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┛

┏━━━━━━━━━━━┯━━━┯━━━┯━━━┯━━━┯━┯━━━━┓

┃농약명                │RT    │Exact │Q1    │Q3    │CE│Polarity┃

┃                      │      │mass  │mass  │mass  │  │        ┃

┣━━━━━━━━━━━┿━━━┿━━━┿━━━┿━━━┿━┿━━━━┫

┃Acephate 1            │4.1   │183.2 │184.1 │143.1 │13│+       ┃

┃Acephate 2            │      │      │      │125.0 │25│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Alachlor 1            │16.8  │269.8 │270.0 │238.0 │15│+       ┃

┃Alachlor 2            │      │      │      │162.1 │27│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Aldicarb 1            │5.9   │190.3 │208.1 │116.0 │13│+       ┃

┃Aldicarb 2            │      │      │      │89.1  │23│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Aminopyralid 1        │4.0   │207   │207.0 │106.7 │15│+       ┃

┃Aminopyralid 2        │      │      │      │133.9 │43│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Atrazine 1            │9.2   │216.7 │216.1 │174.0 │23│+       ┃

┃Atrazine 2            │      │      │      │104.1 │39│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Carbaryl 1            │7.1   │201.2 │202.1 │145.1 │16│+       ┃

┃Carbaryl 2            │      │      │      │127.1 │39│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Carbendazim 1         │5.1   │191.2 │192.1 │160.1 │29│+       ┃

┃Carbendazim 2         │      │      │      │132.0 │41│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Carbofuran 1          │6.6   │221.3 │222.1 │123.0 │29│+       ┃

┃Carbofuran 2          │      │      │      │165.1 │17│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Chlorantraniliprole 1 │8.8   │483.2 │481.6 │283.9 │23│+       ┃

┃Chlorantraniliprole 2 │      │      │      │450.9 │25│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Chlorpropham 1        │13.5  │213.7 │214.2 │154.0 │25│+       ┃

┃Chlorpropham 2        │      │      │      │172.0 │13│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Clethodim 1           │12.5  │359.9 │360.1 │164.0 │27│+       ┃

┃Clethodim 2           │      │      │      │77.0  │99│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Clothianidin 1        │4.7   │249.7 │250.1 │169.1 │17│+       ┃

┃Clothianidin 2        │      │      │      │132.1 │17│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Diflubenzuron 1       │17.6  │310.7 │311.0 │158.1 │19│+       ┃

┃Diflubenzuron 2       │      │      │      │141.1 │45│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Ethion 1              │27.0  │384.5 │385.0 │142.8 │37│+       ┃

┃Ethion 2              │      │      │      │96.9  │45│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Fenbuconazole 1       │15.6  │336.8 │337.2 │125.1 │41│+       ┃

┃Fenbuconazole 2       │      │      │      │70.0  │35│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Fenobucarb 1          │10.5  │207.3 │208.1 │95.2  │19│+       ┃

┃Fenobucarb 2          │      │      │      │152.0 │11│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Flubendiamide 1       │17.7  │682.7 │683.1 │407.9 │27│+       ┃

┃Flubendiamide 2       │      │      │      │255.9 │87│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Fluopicolide 1        │12.3  │383.6 │383.0 │173.0 │35│+       ┃

┃Fluopicolide 2        │      │      │      │109.0 │91│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Flusilazole 1         │16.8  │315.4 │316.1 │165.2 │39│+       ┃

┃Flusilazole 2         │      │      │      │247.1 │23│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Fluxapyroxad 1        │11.6  │381.3 │382.1 │362.1 │21│+       ┃

┃Fluxapyroxad 2        │      │      │      │342.1 │29│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Isoprocarb 1          │8.3   │193.2 │194.2 │95.2  │19│+       ┃

┃Isoprocarb 2          │      │      │      │137.1 │13│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Isopyrazam 1          │30.4  │359.4 │360.2 │244.2 │33│+       ┃

┃Isopyrazam 2          │      │      │      │320.3 │29│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Malathion 1           │12.6  │330.4 │331.0 │127.0 │19│+       ┃

┃Malathion 2           │      │      │      │99.0  │31│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Methiocarb 1          │11.5  │225.3 │226.2 │121.0 │23│+       ┃

┃Methiocarb 2          │      │      │      │196.2 │13│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Methomyl 1            │4.4   │162.2 │163.1 │88.1  │13│+       ┃

┃Methomyl 2            │      │      │      │106.2 │13│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Methoprene 1          │18.63 │310.5 │153.0 │111.1 │5 │+       ┃

┃Methoprene 2          │      │      │      │83.0  │15│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Methoxyfenozide 1     │12.2  │368.5 │369.3 │149.2 │21│+       ┃

┃Methoxyfenozide 2     │      │      │      │133.1 │31│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Oxamyl 1              │4.1   │219.3 │237.1 │72.1  │25│+       ┃

┃Oxamyl 2              │      │      │      │90.1  │11│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Oxydemeton-methyl 1   │4.1   │246.3 │247.0 │108.9 │39│+       ┃

┃Oxydemeton-methyl 2   │      │      │      │168.9 │21│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Parathion 1           │20.1  │291.3 │292.0 │236.1 │21│+       ┃

┃Parathion 2           │      │      │      │94.0  │50│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Phorate 1             │28.0  │260.4 │261.1 │74.9  │23│+       ┃

┃Phorate 2             │      │      │      │199.0 │13│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Piperonyl butoxide 1  │17.7  │338.4 │356.2 │177.1 │19│+       ┃

┃Piperonyl butoxide 2  │      │      │      │119.2 │47│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Pirimicarb 1          │7.7   │238.3 │239.2 │72.1  │34│+       ┃

┃Pirimicarb 2          │      │      │      │182.2 │21│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Prothioconazole 1     │23.2  │344.3 │344.1 │125.1 │53│+       ┃

┃Prothioconazole 2     │      │      │      │326.0 │17│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Pyraclostrobin 1      │26.0  │387.8 │388.0 │163.0 │29│+       ┃

┃Pyraclostrobin 2      │      │      │      │194.0 │19│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Saflufenacil 1        │8.8   │500.9 │501.1 │198.0 │59│+       ┃

┃Saflufenacil 2        │      │      │      │349.0 │35│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Simazine 1            │7.3   │201.7 │202.1 │104.0 │37│+       ┃

┃Simazine 2            │      │      │      │132.1 │25│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Spinosad 1            │24.1  │732   │732.4 │98.2  │93│+       ┃

┃Spinosad 2            │      │      │      │142.2 │41│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Spirotetramat 1       │13.9  │373.5 │374.1 │216.1 │45│+       ┃

┃Spirotetramat 2       │      │      │      │302.1 │23│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Thiabendazole 1       │5.6   │201.3 │202.1 │175.1 │33│+       ┃

┃Thiabendazole 2       │      │      │      │131.1 │43│        ┃

┠───────────┼───┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Tricyclazole 1        │5.7   │189.2 │190.1 │163.1 │31│+       ┃

┃Tricyclazole 2        │      │      │      │136.0 │37│        ┃

┗━━━━━━━━━━━┷━━━┷━━━┷━━━┷━━━┷━┷━━━━┛

  5) LC-MSMS 분석 조건 및 MRM-볏짚용

┏━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┓

┃구분        │조건                                                            ┃

┣━━━━━━┿━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫

┃Column      │Imtakt, Scherzo SM-C18, (2 × 100 mm, 3 μm 또는 이와 동등한 것 ┃

┠──────┼────────────────────────────────┨

┃Mobile Phase│A(4 mM ammonium formate, 0.1% formic acid in Water)             ┃

┃            │B(4 mM ammonium formate, 0.1% formic acid in MeOH)              ┃

┃            │┌─────┬──┬──┬────┐                            ┃

┃            ││시간 (분) │A(%)│B(%)│유속(mL)│                            ┃

┃            │├─────┼──┼──┼────┤                            ┃

┃            ││0.00      │95  │5   │0.3     │                            ┃

┃            │├─────┼──┼──┼────┤                            ┃

┃            ││1.00      │95  │5   │0.3     │                            ┃

┃            │├─────┼──┼──┼────┤                            ┃

┃            ││12.00     │0   │100 │0.3     │                            ┃

┃            │├─────┼──┼──┼────┤                            ┃

┃            ││18.00     │0   │100 │0.3     │                            ┃

┃            │├─────┼──┼──┼────┤                            ┃

┃            ││18.01     │95  │5   │0.3     │                            ┃

┃            │├─────┼──┼──┼────┤                            ┃

┃            ││20.00     │95  │5   │0.3     │                            ┃

┃            │└─────┴──┴──┴────┘                            ┃

┠──────┼────────────────────────────────┨

┃Column Temp.│40℃                                                            ┃

┠──────┼────────────────────────────────┨

┃Time        │20 min                                                          ┃

┠──────┼────────────────────────────────┨

┃Injection   │5 uL                                                            ┃

┃Volumne     │                                                                ┃

┠──────┼────────────────────────────────┨

┃MS/MS       │Ion source: ESI                                                 ┃

┃            │Polarity: Positive                                              ┃

┃            │Nebulizer gas: Nitrogen                                         ┃

┃            │Nebulizer gas flow: GS1; 50, GS2; 45                            ┃

┃            │Ion spray voltage: 5500                                         ┃

┃            │Source temp: 400                                                ┃

┗━━━━━━┷━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┛

┏━━━━━━━━━━━┯━━┯━━━┯━━━┯━━━┯━┯━━━━┓

┃농약명                │RT  │Exact │Q1    │Q3    │CE│Polarity┃

┃                      │    │mass  │mass  │mass  │  │        ┃

┣━━━━━━━━━━━┿━━┿━━━┿━━━┿━━━┿━┿━━━━┫

┃Buprofezin 1          │13.2│305.1 │306.2 │201.3 │17│+       ┃

┃Buprofezin 2          │    │      │      │116.2 │21│        ┃

┠───────────┼──┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Carbaryl 1            │10.5│201.1 │202.1 │145.1 │16│+       ┃

┃Carbaryl 2            │    │      │      │127.1 │39│        ┃

┠───────────┼──┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Carbendazim 1         │6.4 │191.2 │192.1 │160.1 │27│+       ┃

┃Carbendazim 2         │    │      │      │132.0 │41│        ┃

┠───────────┼──┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Carbofuran 1          │10.0│221.1 │222.1 │123.0 │29│+       ┃

┃Carbofuran 2          │    │      │      │165.1 │17│        ┃

┠───────────┼──┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Chlorantraniliprole 1 │11.3│480.9 │481.6 │283.9 │23│+       ┃

┃Chlorantraniliprole 2 │    │      │      │450.9 │25│        ┃

┠───────────┼──┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Clothianidin 1        │8.0 │249.0 │250.1 │169.1 │17│+       ┃

┃Clothianidin 2        │    │      │      │132.1 │17│        ┃

┠───────────┼──┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Cyantraniliprole 1    │10.6│472.0 │473.0 │284.0 │21│+       ┃

┃Cyantraniliprole 2    │    │      │      │112.0 │85│        ┃

┠───────────┼──┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Diazinon 1            │12.6│304.1 │305.2 │169.2 │27│+       ┃

┃Diazinon 2            │    │      │      │153.2 │29│        ┃

┠───────────┼──┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Dinotefuran 1         │5.3 │202.1 │203.0 │129.0 │19│+       ┃

┃Dinotefuran 2         │    │      │      │87.0  │21│        ┃

┠───────────┼──┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Edifenphos 1          │12.6│310.0 │311.1 │109.1 │41│+       ┃

┃Edifenphos 2          │    │      │      │111.1 │29│        ┃

┠───────────┼──┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Etofenprox 1          │14.2│376.2 │394.3 │177.2 │21│+       ┃

┃Etofenprox 2          │    │      │      │107.0 │57│        ┃

┠───────────┼──┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Fenbuconazole 1       │12.3│336.1 │337.2 │125.1 │41│+       ┃

┃Fenbuconazole 2       │    │      │      │70.0  │35│        ┃

┠───────────┼──┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Fenobucarb 1          │11.4│207.1 │208.1 │95.2  │19│+       ┃

┃Fenobucarb 2          │    │      │      │152.0 │11│        ┃

┠───────────┼──┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Flubendiamide 1       │12.3│682.0 │683.1 │407.9 │27│+       ┃

┃Flubendiamide 2       │    │      │      │273.9 │41│        ┃

┠───────────┼──┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Indoxacarb 1          │12.9│527.0 │528.1 │203.0 │51│+       ┃

┃Indoxacarb 2          │    │      │      │248.9 │25│        ┃

┠───────────┼──┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Isoprothiolane 1      │11.9│290.1 │291.1 │231.1 │15│+       ┃

┃Isoprothiolane 2      │    │      │      │189.1 │27│        ┃

┠───────────┼──┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Metaflumizone 1       │13.3│506.1 │507.1 │178.1 │35│+       ┃

┃Metaflumizone 2       │    │      │      │287.1 │37│        ┃

┠───────────┼──┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Methoxyfenozide 1     │11.9│368.2 │369.3 │149.2 │21│+       ┃

┃Methoxyfenozide 2     │    │      │      │133.1 │31│        ┃

┠───────────┼──┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Phenthoate 1          │12.4│320.0 │321.1 │79.1  │55│+       ┃

┃Phenthoate 2          │    │      │      │163.1 │15│        ┃

┠───────────┼──┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Phorate 1             │12.8│260.0 │261.1 │74.9  │23│+       ┃

┃Phorate 2             │    │      │      │96.7  │37│        ┃

┠───────────┼──┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Propiconazole 1       │12.6│341.0 │342.1 │159.1 │43│+       ┃

┃Propiconazole 2       │    │      │      │69.0  │35│        ┃

┠───────────┼──┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Sulfoxaflor 1         │8.5 │277.0 │278.0 │174.2 │17│+       ┃

┃Sulfoxaflor 2         │    │      │      │154.2 │37│        ┃

┠───────────┼──┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Tebufenozide 1        │12.3│352.2 │353.0 │133.1 │29│+       ┃

┃Tebufenozide 2        │    │      │      │297.1 │13│        ┃

┠───────────┼──┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Thiacloprid 1         │9.2 │252.0 │253.1 │126.1 │27│+       ┃

┃Thiacloprid 2         │    │      │      │98.9  │55│        ┃

┠───────────┼──┼───┼───┼───┼─┼────┨

┃Tricyclazole 1        │9.5 │189.0 │190.1 │163.1 │31│+       ┃

┃Tricyclazole 2        │    │      │      │136.0 │37│        ┃

┗━━━━━━━━━━━┷━━┷━━━┷━━━┷━━━┷━┷━━━━┛

   ※ 기기 분석 조건은 분석실 실정에 맞게 조정할 수 있다.

 사. 정성시험

    위의 조건에서 시험할 때 시험결과는 어느 측정조건에서도 표준품과 일치하여야 한다.

   ※ GC-MS 및 LC-MS 상의 머무름 시간 및 질량분석 스펙트럼으로 각 농약의 성분을 확인할 수 있다. 

 아. 정량시험

    정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 정량한다.

   ※ 정량시험은 단일 표준품으로 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

   ※ 이 시험법을 이용하여 사료에서 검출될 경우 정량분석은 사료표준분석방법이나 식품공전의 단성분 분석법에 따른다.

   ※ 분석결과 0.01 mg/kg 미만은 ‘불검출’로 한다

9.6.3. 다종농약 다성분 동시분석-제3법

 가. 적용범위

    본 분석법은 배합사료 및 단미사료(곡류, 콩류, 섬유질류)에 적용한다.

 나. 분석대상 성분

  1) 기체크로마토그래프 분석대상

┌─┬───────────┬─┬─────────────┬─┬────────────┐

│1 │Alachlor              │2 │Aldrin, Dieldrin          │3 │Atrazine                │

├─┼───────────┼─┼─────────────┼─┼────────────┤

│4 │BHC(alpha,beta,delta) │5 │Bifenthrin                │6 │Chlorantraniliprole     │

├─┼───────────┼─┼─────────────┼─┼────────────┤

│7 │Chlorfenapyr          │8 │Chlorfenvinphos(2 isomer) │9 │Chlorobenzilate         │

├─┼───────────┼─┼─────────────┼─┼────────────┤

│10│Chlorpropham          │11│Chlorpyrifos-methyl       │12│Cyfluthrin(4 isomers)   │

├─┼───────────┼─┼─────────────┼─┼────────────┤

│13│Cyhalothrin           │14│Cypermethrin(4 isomers)   │15│Cyprodinil              │

├─┼───────────┼─┼─────────────┼─┼────────────┤

│16│DDT(4 isomer)         │17│Deltamethrin(tralomethrin)│18│Difenoconazole(2 isomer)│

├─┼───────────┼─┼─────────────┼─┼────────────┤

│19│Dimethoate            │20│Disulfoton                │21│Endrin                  │

├─┼───────────┼─┼─────────────┼─┼────────────┤

│22│EPN                   │23│Ethion                    │24│Fenitrothion            │

├─┼───────────┼─┼─────────────┼─┼────────────┤

│25│Fenpropathrin         │26│Fenthion                  │27│Fenvalerate(2 isomer)   │

├─┼───────────┼─┼─────────────┼─┼────────────┤

│28│Fipronil              │29│Flutriafol                │30│Heptachlor(2 isomer)    │

├─┼───────────┼─┼─────────────┼─┼────────────┤

│31│Indoxacarb            │32│Isofenphos                │33│Lindane(gamma-BHC)      │

├─┼───────────┼─┼─────────────┼─┼────────────┤

│34│Methidathion          │35│Methoprene                │36│Parathion-ethyl, methyl │

├─┼───────────┼─┼─────────────┼─┼────────────┤

│37│Pendimethalin         │38│Permethrin(2 isomer)      │39│Phorate                 │

├─┼───────────┼─┼─────────────┼─┼────────────┤

│40│Piperonyl butoxide    │41│Prochloraz                │42│Propiconazole(2 isomer) │

├─┼───────────┼─┼─────────────┼─┼────────────┤

│43│Quintozene            │44│Simazine                  │45│Terbufos                │

├─┼───────────┼─┼─────────────┼─┼────────────┤

│46│Triadimenol           │  │                          │  │                        │

└─┴───────────┴─┴─────────────┴─┴────────────┘

  2) 액체크로마토그래프 분석대상

     ┌─┬────────┬─┬─────────────┬─┬───────────┐

│1 │Abamectin B1    │2 │Acephate                  │3 │Aldicarb              │

├─┼────────┼─┼─────────────┼─┼───────────┤

│4 │Azinphos-methyl │5 │Azoxystrobin              │6 │Boscalid              │

├─┼────────┼─┼─────────────┼─┼───────────┤

│7 │Carbaryl        │8 │Carbendazim(Thiophanate,  │9 │Carbofuran            │

│  │                │  │Thiophanate-methyl)       │  │(3-Hydroxycarbofuran) │

├─┼────────┼─┼─────────────┼─┼───────────┤

│10│Chlorpyrifos    │11│Clethodim                 │12│Clothianidin          │

├─┼────────┼─┼─────────────┼─┼───────────┤

│13│Cyanazine       │14│Cycloxydime               │15│Cyproconazole(l, ll)  │

├─┼────────┼─┼─────────────┼─┼───────────┤

│16│Diazinon        │17│Dichlorvos(DDVP)          │18│Diflubenzuron         │

├─┼────────┼─┼─────────────┼─┼───────────┤

│19│Dimethenamid    │20│Edifenphos                │21│Etoxazole             │

├─┼────────┼─┼─────────────┼─┼───────────┤

│22│Fenarimol       │23│Fenbuconazole             │24│Fenobucarb            │

├─┼────────┼─┼─────────────┼─┼───────────┤

│25│Flubendiamide   │26│Fludioxonil               │27│Flufenoxuron          │

├─┼────────┼─┼─────────────┼─┼───────────┤

│28│Fluopicolide    │29│Flusilazole               │30│Fluxapyroxad          │

├─┼────────┼─┼─────────────┼─┼───────────┤

│31│Haloxyfop       │32│Imazalil                  │33│Imidacloprid          │

├─┼────────┼─┼─────────────┼─┼───────────┤

│34│Isoprocarb      │35│Kresoxim-methyl           │36│Malathion             │

├─┼────────┼─┼─────────────┼─┼───────────┤

│37│Methiocarb      │38│Methomyl                  │39│Methoxyfenozide       │

├─┼────────┼─┼─────────────┼─┼───────────┤

│40│Myclobutanil    │41│Oxydemeton-methyl         │42│Phenthoate            │

├─┼────────┼─┼─────────────┼─┼───────────┤

│43│Pirimicarb      │44│Pirimiphos-methyl         │45│Pyraclostrobin        │

├─┼────────┼─┼─────────────┼─┼───────────┤

│46│Pyridaben       │47│Pyrimethanil              │48│Spirotetramat         │

├─┼────────┼─┼─────────────┼─┼───────────┤

│49│Sulfoxaflor     │50│Tebuconazole              │51│Tetraconazole         │

├─┼────────┼─┼─────────────┼─┼───────────┤

│52│Thiabendazole   │53│Thiacloprid               │54│Triadimefon           │

├─┼────────┼─┼─────────────┼─┼───────────┤

│55│Tricyclazole    │56│Trifloxystrobin           │  │                      │

└─┴────────┴─┴─────────────┴─┴───────────┘

 다. 분석원리

    균질화한 시료를 분취하여 염을 함유한 아세토니트릴/분상고체상추출법을 이용하여 추출/정제하고 액체크로마토그래프(LC-MS/MS) 및 기체크로마토그래프(GC-MS/MS)로 분석한다. 시료 매질의 영향을 최소화하기 위하여 매질보정 검량법(matrix matched calibration) 또는 표준물질첨가법(standard addition method)을 활용하여 분석할 수 있다.

 라. 장치

    기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS/MS) 및 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)를 사용한다.

 마. 시약

  1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

  2) 표준원액: 각 농약의 표준품을 유기용매에 녹여 표준원액으로 사용한다

  3) 표준용액: 표준원액을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석하여 사용한다.

  4)보호제 원액: 솔비톨 500 mg을 아세토니트릴/물 혼합액(5:5, v/v) 10 mL로 녹인다. D-(+)-gluconic acid-δ-lactone 500 mg을 아세토니트릴:물 혼합액(6 : 4,  v/v) 10 mL로 녹인다. 시킴산 500 mg을 아세토니트릴:물 혼합액(6:4, v/v) 10 mL 로 녹인다. 3-ethoxy-1,2-propanediol은 녹이지 않은 채로 사용한다.

   ※ 주의: 물에 먼저 녹인 후 유기용매로 희석한다.

  5)보호제 혼합용액: 3-ethoxy-1,2-propanediol 0.2 g을 칭량하여 10 mL 부피플라스크에 담는다. D-(+)-gluconic acid-δ-lactone 원액 2 mL, 솔비톨 원액 1 mL, 시킴산(shikimic acid) 원액 1 mL을 부피플라스크에 첨가한다. 아세토니트릴 : 물 혼합액(7:3, v/v)으로 부피플라스크를 10 mL 정용 후 4℃에서 보관한다. 사용 전에 위 보관 용액 : 5% 포름산을 함유한 아세토니트릴(3:1, v/v)로 미리 혼합하여 표준용액과 시료액에 첨가한다.

  6) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

 바. 시험용액의 조제(추출 및 정제)

  1) 시료 5 g를 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고 물 10 mL를 넣어 1시간동안 방치하고 내부표준물질(0.1 mg/L triphenylphosphate)을 함유한 아세토니트릴 10 mL를 넣은 후 1∼2분간 진탕한다.

  2)1)의 원심분리관에 무수황산마그네슘 4.0 g, 염화나트륨 1.0 g, 구연산나트륨 1.0(±0.05) g, disodium citrate sesquihydrate 0.5 g을 넣고 1분간 상하좌우로 흔  들어 혼합한 후, 원심분리(3,000 rpm, 5분)하여 아세토니트릴층과 물층을 분리  시킨 후 아세토니트릴층을 아래 4) 시료액의 LC-MS/MS 시료추출액으로 사용한다. 

   ※ 무수황산마그네슘은 수분이 있을 경우 열이 발생하면서 응집하므로 신속히 흔들어 냉각된 원심분리기 또는 냉각조에 넣어 식힌다.

  3) GC-MS/MS의 경우 PSA 25 mg와 무수황산마그네슘 150 mg (고지방의 시료인 경우 C18 25 mg을 추가할 수 있다)을 넣어둔 분상고체상추출 튜브에 상등액 1.2 mL을 넣고 1분간 진탕 후 원심분리(10,000 rpm, 2분)한 다음 멤브레인 필터(0.2 μm)로 여과하여 아래 4) 시료액의 GC-MS/MS 시료 추출액으로 사용한다. 이때 보호제 혼합용액을 첨가하여 바이알에 담는다.

  4)정량 분석용 매질보정 검량법(matrix matched calibration) 및 표준물질 첨가(standard addition method)에 따른 농도별 표준물질과 시료액은 아래의 예를 참고하여 만든다.

   ※ 무농약 시료추출액: 시료구와 동일한 품목이면서 농약성분이 검출되지 아니한 시료를 바. 에 따라 추출 및 정제한다(단, 내부표준물질을 첨가하지 아니함).

   가) GC-MS/MS용 매질보정 검량(matrix matched calibration) 용액의 조제

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┃구분│검량선 작성용 표준물질                                                            ┃시료액      ┃

┃    ├──────┬──────┬──────┬──────┬──────┬──────┨            ┃

┃    │1           │2           │3           │4           │5           │6           ┃            ┃

┠──┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┨            ┃

┃목적│5 μg/L     │10 μg/L    │25 μg/L    │50 μg/L    │100 μg/L   │250 μg/L   ┃            ┃

┃농도│            │            │            │            │            │            ┃            ┃

┣━━┿━━━━━━┿━━━━━━┿━━━━━━┿━━━━━━┿━━━━━━┿━━━━━━╋━━━━━━┫

┃조제│AP 40 μL   │AP 40 μL   │AP 40 μL   │AP 40 μL   │AP 40 μL   │AP 40 μL   ┃AP 40 μL   ┃

┃방법├──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────╂──────┨

┃    │내부표준물질│내부표준물질│내부표준물질│내부표준물질│내부표준물질│내부표준물질┃아세토니트릴┃

┃    │1000 μg/L  │1000 μg/L  │1000 μg/L  │1000 μg/L  │1000 μg/L  │1000 μg/L  ┃150 μL     ┃

┃    │×100 μL   │×100 μL   │×100 μL   │×100 μL   │×100 μL   │×100 μL   ┃            ┃

┃    ├──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┨            ┃

┃    │STD         │STD         │STD         │STD         │STD         │STD         ┃            ┃

┃    │100 μg/L   │200 μg/L   │500 μg/L   │1,000 μg/L │2,000 μg/L │5,000 μg/L ┃            ┃

┃    │× 50 μL   │× 50 μL   │× 50 μL   │× 50 μL   │× 50 μL   │× 50 μL   ┃            ┃

┃    ├──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────╂──────┨

┃    │무농약      │무농약      │무농약      │무농약      │무농약      │무농약      ┃시료추출액  ┃

┃    │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  ┃810 μL     ┃

┃    │810 μL     │810 μL     │810 μL     │810 μL     │810 μL     │810 μL     ┃            ┃

┗━━┷━━━━━━┷━━━━━━┷━━━━━━┷━━━━━━┷━━━━━━┷━━━━━━┻━━━━━━┛

   ※ AP : 마. 의 5) 보호제 혼합용액

   나) LC-MS/MS용 매질보정 검량(matrix matched calibration) 용액의 조제

┏━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┳━━━━━━┓

┃구분│검량선 작성용 표준물질                                                            ┃시료액      ┃

┃    ├──────┬──────┬──────┬──────┬──────┬──────┨            ┃

┃    │1           │2           │3           │4           │5           │6           ┃            ┃

┠──┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┨            ┃

┃목적│1 μg/L     │5 μg/L     │10 μg/L    │20 μg/L    │50 μg/L    │100 μg/L   ┃            ┃

┃농도│            │            │            │            │            │            ┃            ┃

┣━━┿━━━━━━┿━━━━━━┿━━━━━━┿━━━━━━┿━━━━━━┿━━━━━━╋━━━━━━┫

┃조제│완충용액    │완충용액    │완충용액    │완충용액    │완충용액    │완충용액    ┃완충용액    ┃

┃방법│600 μL +   │600 μL +   │600 μL +   │600 μL +   │600 μL +   │600 μL +   ┃600 μL+    ┃

┃    │아세토니트릴│아세토니트릴│아세토니트릴│아세토니트릴│아세토니트릴│아세토니트릴┃아세토니트릴┃

┃    │200 μL     │200 μL     │200 μL     │200 μL     │200 μL     │200 μL     ┃300 μL     ┃

┃    ├──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┨            ┃

┃    │STD         │STD         │STD         │STD         │STD         │STD         ┃            ┃

┃    │10 μg/L    │50 μg/L    │100 μg/L   │200 μg/L   │500 μg/L   │1,000 μg/L ┃            ┃

┃    │× 100 μL  │× 100 μL  │× 100 μL  │× 100 μL  │× 100 μL  │× 100 μL  ┃            ┃

┃    ├──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────╂──────┨

┃    │무농약      │무농약      │무농약      │무농약      │무농약      │무농약      ┃시료추출액  ┃

┃    │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  ┃100 μL     ┃

┃    │100 μL     │100 μL     │100 μL     │100 μL     │100 μL     │100 μL     ┃            ┃

┗━━┷━━━━━━┷━━━━━━┷━━━━━━┷━━━━━━┷━━━━━━┷━━━━━━┷━━━━━━┛

   ※ 완충용액 : 포름산암모늄 100 mM을 함유한 물(포름산 용액을 이용하여 pH 4∼4.5로 맞춤)

 사. 시험조작

  1) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS/MS)의 분석 조건

   가) 컬럼: DB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

   나) 주입부: Electron ionization(EI) 또는 이와 동등한 방식

   다) 주입량: 1 μL

   라) 온도: 280℃

   마) Splitless 모드

   바) 오븐: 80℃에서 시료액을 주입하고 3분간 유지한 후 15℃/min 비율로 160℃까지 상승시키고 7℃/min 비율로 300℃까지 상승시켜 5분간 유지

   사) 질량분석기: MRM(Multiple reaction monitoring) 모드

   아) Electron ionization(EI): -70 eV

   자) Transfer line: 280℃

   차) Ion source: 280℃

   카) GC-MS/MS의 MRM(Multiple Reaction Monitoring)

┏━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━┯━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━┓

┃농약명                │머무름시간(분)│선구이온            │토막이온          │충돌에너지            ┃

┃                      │              │(Precursor ion, m/z)│(Fragmention, m/z)│(Collision energy,eV) ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Alachlor              │16.33         │160.1               │131.7             │10                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │188.1               │130.0             │32                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │188.1               │Q-160.1           │8                     ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Aldrin                │17.29         │262.7               │191.0             │30                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │262.7               │Q-192.9           │32                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Dieldrin              │18.33         │262.8               │190.9             │30                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │262.8               │Q-192.9           │30                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │262.8               │227.8             │16                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Atrazine              │14.21         │200.0               │122.1             │8                     ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │200.0               │132.0             │8                     ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │215.1               │Q-58.1            │12                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃BHC-alpha             │13.69         │180.9               │144.9             │15                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │182.8               │146.7             │12                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │218.8               │146.6             │20                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │218.8               │Q-183.0           │8                     ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃BHC-beta              │14.34         │180.9               │145.0             │14                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │218.7               │146.6             │18                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │218.7               │Q-183.0           │8                     ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃BHC-delta             │15.10         │182.8               │146.7             │14                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │218.8               │146.5             │20                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │218.8               │182.9             │8                     ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │219.1               │Q-182.9           │10                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Bifenthrin            │23.21         │165.1               │163.6             │24                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │181.0               │Q-165.9           │10                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │181.0               │179.0             │12                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Chlorantraniliprole   │23.48         │243.0               │179.0             │26                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │278.0               │215.1             │22                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │278.0               │Q-249.0           │20                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Chlorfenapyr          │20.53         │136.9               │102.0             │12                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │248.9               │Q-112.0           │24                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │248.9               │137.1             │18                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Chlorfenvinphos       │18.47         │266.9               │Q-159.0           │16                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │266.9               │203.0             │10                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │323.0               │266.9             │14                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Chlorobenzilate       │20.70         │111.0               │75.1              │14                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │139.0               │Q-74.9            │26                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │139.0               │111.0             │12                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Chlorpropham          │12.91         │171.0               │Q-127.0           │8                     ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │213.0               │127.0             │14                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │213.0               │171.0             │6                     ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Chlorpyrifos-methyl   │16.13         │125.0               │Q-47.0            │12                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │125.0               │79.0              │6                     ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │285.9               │93.0              │20                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Cyfluthrin 1          │26.42         │163.0               │65.1              │26                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │163.0               │91.1              │12                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │163.0               │Q-127.1           │6                     ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Cyfluthrin 2          │26.54         │163.0               │91.1              │12                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │163.0               │Q-127.0           │6                     ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │206.0               │151.1             │18                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Cyfluthrin 3          │26.66         │163.0               │91.1              │12                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │163.0               │127.0             │6                     ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │226.0               │Q-206.1           │12                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Cyfluthrin 4          │26.71         │163.0               │91.1              │12                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │163.0               │127.0             │6                     ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │226.0               │Q-206.1           │10                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Cyhalothrin I (lambda)│24.31         │180.9               │152.0             │22                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │197.1               │141.1             │10                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │207.9               │Q-180.9           │8                     ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Cyhalothrin II (gamma)│24.82         │180.9               │152.0             │22                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │197.1               │141.1             │10                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │207.9               │Q-180.9           │8                     ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Cypermethrin -1       │26.86         │163.0               │91.1              │12                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │163.0               │Q-127.1           │8                     ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │180.9               │152.1             │20                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Cypermethrin -2       │26.98         │163.0               │91.1              │12                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │163.0               │Q-127.0           │6                     ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │180.9               │151.9             │18                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Cypermethrin -3       │27.10         │163.0               │91.0              │12                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │163.0               │Q-127.0           │8                     ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │180.9               │152.2             │20                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Cypermethrin -4       │27.14         │163.0               │91.1              │12                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │163.0               │Q-127.1           │6                     ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │180.9               │152.2             │20                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Cyprodinil            │18.09         │224.1               │196.9             │20                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │224.1               │Q-208.0           │18                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │225.1               │209.7             │16                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃o,p-DDT               │ 20.95        │235.0               │Q-165.1           │17                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │235.0               │199.0             │14                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │236.8               │165.0             │20                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃p,p-DDD               │21.05         │235.0               │164.8             │15                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │235.0               │Q-165.1           │22                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │235.0               │199.5             │10                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │236.8               │165.0             │22                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃p,p-DDE               │19.87         │246.0               │Q-176.1           │28                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │248.0               │176.1             │30                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │317.8               │246.0             │20                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │317.8               │248.0             │18                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃p,p-DDT               │21.90         │235.0               │Q-165.1           │20                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │235.0               │199.5             │20                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │235.0               │165.0             │10                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │236.8               │81.0              │20                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │237.0               │97.0              │20                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Deltamethrin          │28.89         │181.0               │152.1             │22                    ┃

┃(tralomethrin)-1      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │252.8               │92.9              │16                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │252.8               │Q-172.0           │8                     ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Deltamethrin          │29.20         │181.0               │152.1             │22                    ┃

┃(tralomethrin)-2      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │252.8               │92.9              │16                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │252.8               │Q-172.0           │8                     ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Difenoconazole-1      │28.72         │265.0               │Q-139.0           │36                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │265.0               │202.1             │16                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │323.0               │265.0             │14                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Difenoconazole-2      │28.82         │265.0               │Q-139.0           │36                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │265.0               │202.0             │18                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │323.0               │265.0             │16                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Dimethoate            │13.97         │87.0                │Q-42.1            │10                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │93.0                │63.0              │8                     ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │125.0               │79.0              │8                     ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Disulfoton            │15.03         │88.0                │45.0              │18                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │88.0                │Q-59.8            │6                     ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │185.9               │96.9              │16                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Endrin                │20.53         │245.0               │173.0             │22                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │262.8               │Q-192.9           │30                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │280.8               │245.3             │8                     ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃EPN                   │23.21         │157.0               │77.0              │22                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │169.0               │77.0              │22                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │169.0               │Q-141.0           │8                     ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Ethion                │21.05         │153.0               │97.0              │10                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │230.9               │Q-128.9           │22                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │230.9               │174.9             │12                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Fenitrothion          │16.84         │125.0               │79.0              │8                     ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │277.0               │109.0             │16                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │277.0               │Q-260.0           │6                     ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Fenpropathrin         │23.39         │97.1                │55.1              │6                     ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │181.0               │126.8             │28                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │181.0               │Q-151.9           │22                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Fenthion              │17.34         │245.3               │125.0             │12                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │278.0               │109.0             │18                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │278.0               │Q-169.0           │14                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Fenvalerate-1         │28.14         │125.0               │Q-89.0            │18                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │167.0               │89.0              │32                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │167.0               │125.0             │10                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Fenvalerate-2         │28.42         │125.0               │Q-89.0            │18                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │167.0               │89.0              │32                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │167.0               │125.0             │10                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Fipronil              │18.47         │366.9               │Q-212.9           │28                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │366.9               │244.9             │20                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │368.8               │214.9             │30                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Flutriafol            │19.40         │123.0               │Q-75.0            │24                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │123.0               │95.0              │12                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │219.0               │123.0             │12                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Heptachlor            │16.38         │99.8                │39.0              │26                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │99.8                │Q-65.0            │12                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │271.8               │236.9             │12                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Heptachlor-epoxide    │18.33         │262.9               │Q-192.9           │30                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │352.8               │262.9             │16                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │354.7               │264.9             │12                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Indoxacarb            │29.09         │133.9               │106.0             │8                     ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │203.0               │106.1             │22                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │203.0               │Q-134.0           │12                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Isofenphos            │18.46         │185.0               │121.0             │10                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │213.0               │Q-121.0           │14                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │213.0               │185.0             │6                     ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Lindane(gamma-BHC)    │14.52         │180.9               │109.0             │26                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │180.9               │145.0             │14                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │218.7               │Q-183.0           │8                     ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Methidathion          │18.92         │145.0               │Q-58.0            │14                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │145.0               │85.0              │6                     ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Methoprene            │18.63         │153.0               │83.0              │15                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │153.0               │Q-111.1           │5                     ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Parathion-ethyl       │17.41         │109.0               │Q-109.0           │10                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │124.9               │Q-47.0            │6                     ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │291.0               │79.0              │12                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Parathion-methyl      │16.13         │124.9               │109.0             │12                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │124.9               │161.0             │6                     ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │263.0               │Q-162.0           │12                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Pendimethalin         │18.24         │252.1               │191.3             │14                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │252.1               │134.0             │8                     ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │252.1               │Q-101.0           │8                     ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Permethrin 1          │25.61         │163.0               │168.0             │12                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │183.1               │153.0             │12                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │183.1               │Q-165.1           │12                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Permethrin 2          │25.78         │183.0               │168.1             │14                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │183.0               │Q-41.1            │10                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │183.0               │79.1              │10                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Phorate               │13.52         │75.0                │Q-75.0            │8                     ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │121.0               │65.0              │8                     ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │260.0               │Q-74.8            │8                     ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Piperonyl butoxide    │22.45         │176.1               │Q-131.1           │22                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │176.1               │Q-168.1           │18                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │176.1               │166.1             │12                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Prochloraz            │26.04         │69.9                │53.0              │8                     ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │180.1               │67.1              │12                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Propiconazole 1       │21.83         │172.9               │145.0             │38                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │172.9               │74.0              │26                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │172.9               │Q-109.0           │16                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Propiconazole 2       │21.99         │172.9               │145.0             │38                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │172.9               │Q-120.1           │24                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │172.9               │144.1             │14                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Quintozene            │14.65         │213.8               │236.9             │28                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │213.8               │151.1             │14                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │294.8               │Q-181.1           │14                    ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Simazine              │14.07         │172.7               │91.0              │6                     ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │172.7               │74.9              │8                     ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │186.0               │Q-101.0           │8                     ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Terbufos              │14.60         │230.9               │203.0             │22                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │230.9               │68.0              │12                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │230.9               │Q-170.1           │8                     ┃

┠───────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┨

┃Triadimenol           │18.57         │112.0               │Q-70.0            │8                     ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │128.0               │43.3              │18                    ┃

┃                      │              ├──────────┼─────────┼───────────┨

┃                      │              │168.2               │Q-183.9           │10                    ┃

┗━━━━━━━━━━━┷━━━━━━━┷━━━━━━━━━━┷━━━━━━━━━┷━━━━━━━━━━━┛

   ※ 기기 분석조건은 분석실 실정에 맞게 조정할 수 있다.

  2) 액체크로마토그래프?질량분석기(LC-MS/MS)의 분석 조건

   가) 컬럼: C18 (2.1 mm × 150 mm, 2.6 μm) 또는 이와 동등한 것

   나) 이동상: A와 B 이동상의 농도 구배

    (1) A 이동상 : 0.1% 포름산과 5 mM 포름산암모늄 함유 수용액

    (2) B 이동상:  0.1% 포름산과 5 mM 포름산암모늄 함유 메탄올 용액

┏━━━━┯━━━━━━┯━━━━━━┯━━━━━━┓

┃시간(분)│유속(mL/min)│이동상 A(%) │이동상 B(%) ┃

┣━━━━┿━━━━━━┿━━━━━━┿━━━━━━┫

┃0       │0.3         │95          │5           ┃

┠────┼──────┼──────┼──────┨

┃3.0     │0.3         │95          │5           ┃

┠────┼──────┼──────┼──────┨

┃15.0    │0.3         │2           │98          ┃

┠────┼──────┼──────┼──────┨

┃18.0    │0.3         │2           │98          ┃

┠────┼──────┼──────┼──────┨

┃20.0    │0.3         │95          │5           ┃

┠────┼──────┼──────┼──────┨

┃25.0    │0.3         │95          │5           ┃

┗━━━━┷━━━━━━┷━━━━━━┷━━━━━━┛

   다) 컬럼 온도: 35℃ 

   라) 주입량: 5 μL(기기 감도에 따라 1∼50 μL로 조절)

   마) 이온화 방식: Electrospray ionization(ESI, positive)

   바) LC-MS/MS의 MRM(Multiple Reaction Monitoring)

┏━━━━━━━━━━┯━━━━━┯━━━━┯━━━━━━┯━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━┓

┃농약명              │머무름시간│관측질량│이온화      │선구이온            │토막이온          │충돌에너지        ┃

┃                    │(분)      │(Exact  │(Ionization)│(Precursor ion, m/z)│(Fragmention, m/z)│(Collision energy,┃

┃                    │          │mass)   │            │                    │                  │eV)               ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Abamectin B1        │16.14     │872.5   │[M+NH4]+    │890.6               │145.1             │30                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │890.6               │Q-305.2           │20                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Acephate            │2.53      │183.0   │[M+H]+      │184.0               │125.1             │19                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │184.0               │Q-142.9           │8                 ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Aldicarb            │9.77      │190.1   │[M+NH4]+    │208.1               │70.1              │15                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │208.1               │89.3              │19                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │208.1               │Q-116.1           │10                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Azinphos_methyl     │12.45     │317.0   │[M+H]+      │318.0               │125.0             │12                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │318.0               │Q-132.1           │10                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │318.0               │160.0             │10                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Azoxystrobin        │12.72     │403.1   │[M+H]+      │404.1               │344.1             │26                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │404.1               │Q-372.1           │16                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Boscalid            │12.91     │342.0   │[M+H]+      │343.0               │140.0             │27                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │343.0               │Q-307.0           │27                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Carbaryl            │11.22     │201.1   │[M+H]+      │202.0               │127.0             │30                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │202.0               │Q-145.0           │12                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Carbendazim         │7.09      │191.1   │[M+H]+      │192.0               │132.0             │33                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │192.0               │Q-160.0           │20                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Thiophanate         │12.18     │370.0   │[M+H]+      │371.0               │Q-151.0           │110               ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │371.0               │325.0             │110               ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Thiophanate-methyl  │10.78     │342.0   │[M+H]+      │342.9               │Q-151.0           │110               ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │342.9               │310.9             │110               ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Carbofuran          │10.85     │221.1   │[M+H]+      │222.0               │123.0             │25                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │222.0               │Q-165.0           │14                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃3-Hydroxycarbofuran │8.79      │237.0   │[M+H]+      │238.2               │163.1             │78.5              ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │238.2               │Q-181.1           │78.5              ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Chlorpyrifos        │15.34     │348.9   │[M+H]+      │350.0               │97.0              │35                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │350.0               │Q-198.0           │23                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Clethodim           │14.77     │359.1   │[M+H]+      │360.2               │77.0              │13                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │360.2               │Q-164.1           │21                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Clothianidin        │8.18      │249.0   │[M+H]+      │250.0               │132.0             │18                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │250.0               │Q-169.0           │14                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Cyanazine           │10.51     │240.1   │[M+H]+      │241.2               │104.1             │28                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │241.2               │132.1             │23                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │241.2               │Q-214.1           │15                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Cycloxydime         │14.75     │325.2   │[M+H]+      │326.2               │180.1             │18                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │326.2               │Q-280.1           │10                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Cyproconazole(I)    │13.1      │291.1   │[M+H]+      │292.2               │Q-70.3            │18                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │292.2               │125.1             │26                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Cyproconazole(II)   │13.32     │291.1   │[M+H]+      │292.2               │Q-70.3            │18                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │292.2               │125.1             │26                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Diazinon            │14.15     │304.1   │[M+H]+      │305.1               │153.1             │23                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │305.1               │Q-169.1           │23                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Dichlorvos(DDVP)    │10.65     │219.9   │[M+H]+      │221.0               │95.0              │38                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │221.0               │Q-109.0           │20                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │221.0               │127.0             │15                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Diflubenzuron       │13.72     │310.0   │[M+H]+      │310.9               │Q-141.1           │27                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │310.9               │158.0             │25                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Dimethenamid        │12.79     │275.1   │[M+H]+      │276.1               │168.1             │26                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │276.1               │Q-244.1           │16                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Edifenphos          │13.99     │310.0   │[M+H]+      │311.1               │109.1             │35                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │311.1               │111.1             │35                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │311.1               │Q-283.0           │15                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Etoxazole           │15.52     │359.2   │[M+H]+      │360.2               │63.0              │40                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │360.2               │Q-141.1           │33                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │360.2               │304.1             │19                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Fenarimol           │13.44     │330.0   │[M+H]+      │331.0               │81.1              │31                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │331.0               │Q-268.1           │25                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Fenbuconazole       │13.64     │336.1   │[M+H]+      │337.1               │70.0              │35                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │337.1               │Q-125.1           │41                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Fenobucarb          │12.6      │207.1   │[M+H]+      │208.2               │Q-95.0            │16                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │208.2               │152.0             │10                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Flubendiamide       │13.94     │682.0   │[M-H]-      │680.9               │Q-254.1           │24                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │680.9               │274.0             │13                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Fludioxonil         │12.98     │248.0   │[M+NH4]+    │266.0               │Q-158.3           │28                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │266.0               │229.0             │30                ┃

┃                    │          │        ├──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │[M-H]-      │247.0               │Q-126.2           │31                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │247.0               │152.0             │39                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │247.0               │169.0             │33                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Flufenoxuron        │15.5      │488.0   │[M+H]+      │489.0               │141.0             │40                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │489.0               │Q-158.0           │20                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Fluopicolide        │13.09     │382.0   │[M+H]+      │383.0               │109.0             │59                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │383.0               │Q-173.0           │35                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Flusilazole         │13.74     │315.1   │[M+H]+      │316.1               │165.1             │30                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │316.1               │Q-247.1           │19                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Fluxapyroxad        │13.09     │381.1   │[M+H]+      │382.2               │342.1             │22                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │382.2               │Q-362.2           │14                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Haloxyfop           │14.85     │361.0   │[M+H]+      │362.0               │Q-91.0            │33                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │362.0               │316.0             │18                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Imazalil            │11.56     │296.0   │[M+H]+      │297.0               │69.0              │35                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │297.0               │Q-158.9           │25                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │297.0               │254.9             │20                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Imidacloprid        │8.22      │255.1   │[M+H]+      │256.0               │175.0             │20                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │256.0               │Q-209.0           │18                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Isoprocarb          │11.79     │193.1   │[M+H]+      │194.0               │77.0              │37                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │194.0               │Q-95.0            │16                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Kresoxim_methyl     │13.91     │313.1   │[M+H]+      │314.1               │222.1             │16                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │314.1               │Q-267.0           │7                 ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Malathion           │13.11     │330.1   │[M+H]+      │331.1               │Q-99.1            │25                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │331.1               │127.0             │15                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Methiocarb          │12.78     │225.1   │[M+H]+      │226.0               │121.0             │16                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │226.0               │Q-169.0           │10                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Methomyl            │6.7       │162.0   │[M+H]+      │163.0               │88.0              │10                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │163.0               │Q-106.0           │10                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Methoxyfenozide     │13.19     │368.2   │[M+H]+      │369.0               │133.1             │26                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │369.0               │Q-149.0           │18                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │369.0               │313.0             │10                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Myclobutanil        │13.18     │288.1   │[M+H]+      │289.1               │Q-70.2            │22                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │289.1               │125.0             │35                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Oxydemeton-methyl   │7.02      │246.0   │[M+H]+      │247.0               │109.1             │24                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │247.0               │125.1             │20                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │247.0               │Q-169.0           │10                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Phenthoate          │13.89     │320.0   │[M+H]+      │321.1               │79.2              │43                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │321.1               │135.2             │30                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │321.1               │Q-247.0           │11                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Pirimicarb          │10.12     │238.1   │[M+H]+      │239.0               │72.0              │21                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │239.0               │Q-182.0           │16                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Pirimiphos-methyl   │14.29     │305.1   │[M+H]+      │306.1               │108.1             │33                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │306.1               │Q-164.2           │24                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Pyraclostrobin      │14.26     │387.1   │[M+H]+      │388.0               │163.0             │26                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │388.0               │Q-194.0           │14                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Pyridaben           │15.93     │364.1   │[M+H]+      │365.1               │147.1             │27                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │365.1               │Q-309.1           │14                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Pyrimethanil        │12.31     │199.1   │[M+H]+      │200.1               │82.0              │30                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │200.1               │Q-107.0           │24                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Spirotetramat       │13.43     │373.2   │[M+H]+      │374.1               │216.1             │34                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │374.1               │Q-302.1           │17                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Sulfoxaflor         │9.13      │277.0   │[M+H]+      │278.0               │154.1             │24                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │278.0               │Q-174.1           │10                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Tebuconazole        │13.99     │307.1   │[M+H]+      │308.1               │Q-70.1            │26                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │308.1               │125.0             │39                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Tetraconazole       │13.5      │371.0   │[M+H]+      │372.0               │70.0              │24                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │372.0               │Q-159.0           │39                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Thiabendazole       │7.98      │201.0   │[M+H]+      │202.0               │131.0             │35                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │202.0               │Q-175.0           │28                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Thiacloprid         │9.47      │252.0   │[M+H]+      │253.0               │99.1              │45                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │253.0               │Q-126.0           │24                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │253.0               │186.1             │17                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Triadimefon         │13.14     │293.1   │[M+H]+      │294.1               │Q-197.1           │17                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │294.1               │225.1             │15                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Tricyclazole        │9.74      │189.0   │[M+H]+      │190.0               │136.0             │30                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │190.0               │Q-163.0           │24                ┃

┠──────────┼─────┼────┼──────┼──────────┼─────────┼─────────┨

┃Trifloxystrobin     │14.65     │408.1   │[M+H]+      │409.1               │Q-186.0           │20                ┃

┃                    │          │        │            ├──────────┼─────────┼─────────┨

┃                    │          │        │            │409.1               │206.0             │16                ┃

┗━━━━━━━━━━┷━━━━━┷━━━━┷━━━━━━┷━━━━━━━━━━┷━━━━━━━━━┷━━━━━━━━━┛

 아. 정성 및 정량시험

  1) 기기분석 순서

   가) 안정적인 기기분석 값을 얻기 위해 검량용액이나 시료를 분석하기 전에 프라이밍(priming)한다.

    (1) GC-MS/MS: 시료 또는 고농도 표준물질 × 2회

    (2) LC-MS/MS: 용매 블랭크 × 3회 

   나) 기기 오염 여부를 확인하기 위해 무농약 시료를 분석한다.

   다) 4수준 이상의 매질보정 검량용액 또는 기타 적정한 검량용액을 분석한다.

   라) 데이터 품질 관리용 시료를 분석하며 일반적으로 회수율 실험한 시료를 활용한다.

   마) 시료 (S1, S2, S3 ,,,, Sn)를 분석한다.

   바) 다)의 4수준 이상의 검량용액을 재분석하는 협차 검량법(bracket calibration)을 활용한다.

  2) 검량선 작성

   가) 표준용액을 농도별로 분석기기에 각각 주입하여 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

   나) 1)의 기기분석 순서에 따른 협차 검량법을 활용한다.

   다) 검량선의 적정성을 평가하는데 결정계수뿐만 아니라 각 농도에서의 잔차가 ± 20% 이하인지 확인하고, 잔차가 ±20%를 넘는 경우 검량선을 작성할 때 가중치 적용(1/x) 방식을 활용할 수 있다.

  3) 정성 확인

    LC-MS/MS 및 GC-MS/MS로 분석하였을 때 시험용액 중 표준물질의 머무름 시간과 측정 질량값(m/z)은 표준용액 중 표준물질의 머무름 시간(±0.2분) 및 측정 질량값(m/z)과 일치하여야 한다. 또한 이온쌍의 피크 비율(±30% 이하)을 참고하여 확인하여야 한다.

  4) 정량 확인

    바.의 4)에서와 같이 시료 추출액을 이용하여 매질보정 검량법에 의한 측정 결과값으로 검량선식(y = ax + b)을 작성한다. 

    (예) y = 4886.5 x + 7450.1

  ┏━━━━━━━┯━━━━━━━┓    측                      

  ┃표준물질      │측정 결과값   ┃    정                      

  ┃농도값 (μg/L)│Response(Area)┃    결                      

  ┣━━━━━━━┿━━━━━━━┫    과                      

  ┃1             │13,143        ┃    값                      

  ┠───────┼───────┨                            

  ┃5             │34,958        ┃                            

  ┠───────┼───────┨                            

  ┃10            │52,729        ┃                            

  ┠───────┼───────┨                            

  ┃25            │132,543       ┃                            

  ┠───────┼───────┨                            

  ┃50            │246,400       ┃                            

  ┠───────┼───────┨                            

  ┃100           │498,258       ┃                            

  ┗━━━━━━━┷━━━━━━━┛                            

                                              표준물질 농도값   

  5) 시료액에서의 측정값과 가)에서의 검량선식을 활용하여 시료액에서의 농도를 계산한다. 

   (예) y = 48,635일 경우 x = (48,635-7,450) ÷ 4,886 = 8.43μg/L

  6) 희석배수를 반영하여 시료에 잔류하는 농약의 검출 농도 값을 산출한다.

    검출농도(μg/kg)= 검량농도(μg/L) × 추출용매량(mL)/시료량(g) × 기기 분석용시액(mL)/분취시료량(mL)

   가) 사료 등 건조 섬유질류

      검출농도 (μg/kg) = 검량농도( μg/L) × 10 mL/5 g × 1 mL/0.1 mL

   나) 내부표준물질을 정량에 활용할 경우(GC-MS/MS)

      검출농도 (μg/kg) = 검량농도( μg/L) × 10 mL/5 g

   다) 내부표준물질을 정량에 활용하지 않을 경우(GC-MS/MS)

      검출농도 (μg/kg) = 검량농도( μg/L) × 10 mL/5 g × 1 mL/0.81 mL

   라) 매질효과(matrix effects)가 최소화된 경우 용매검량법 또는 대표품목의 매질보정검량법 등으로 스크리닝 분석 후 검출량이 허용기준 대비 80%를 초과한 시료에 대해서는 표준물질 첨가법(standard addition method)을 활용 할 수 있다.

   ※ 매질효과: 시료 성분이 정량분석에 미치는 영향 

    (1) 바. 4)에서와 같이 시료의 예상 농도의 50%, 100%, 150% 수준으로 표준물질을 첨가하여 기기분석용 시료액을 조제한다. 검량선이 직선범위에 들어오도록 희석하고 검량농도 범위가 직선성(R2>0.995)을 나타내는지 확인한다.

    (2) 시료 추출액을 이용하여 표준물질 첨가법에 의한 측정 결과값으로 검량선식 (y=ax+b)을 작성한다. 

       (예) y = 55.59 x + 1,313.61

  ┏━━━━━━┯━━━━━━┓    측                            

  ┃첨가한      │측정 결과값 ┃    정                            

  ┃표준물질    │Response    ┃    결                            

  ┃농도값 ( μ │(Area)      ┃    과                            

  ┃g/L)        │            ┃    값                            

  ┣━━━━━━┿━━━━━━┫                                  

  ┃0           │1,290       ┃                                  

  ┠──────┼──────┨                                  

  ┃10          │1,920       ┃                                  

  ┠──────┼──────┨                                  

  ┃25          │2,670       ┃                                  

  ┠──────┼──────┨                                  

  ┃50          │4,100       ┃                                  

  ┗━━━━━━┷━━━━━━┛                                  

                                          첨가한 표준물질 농도값  

    (3) 검량선식을 활용하여 시료액에서의 농도를 계산한다. 

       시료액 농도: x 축 절편(검량식 y=ax+b에서 y=0인 x 값)의 절대값

       희석(아세토니트릴 또는 물 χ μL)배수 또는 주입량에 상관없이 실제 시료액 농도(μg/L) = b / a

       (예) b / a = 1,313.61 ÷ 55.59 = 23.58 μL

    (4) 아. 6)에 따라 희석배수를 반영하여 시료에 잔류하는 농약의 검출 농도값을 산출한다.

   ※ 분석결과 0.01 mg/kg 미만은 ‘불검출’로 한다.

9.7. 기타

9.7.1. 에틸렌디브로마이드(EDB) [C2H4Br2]

 가. 정성법 

  1) 표준용액 조제

      표준품을 아세톤으로 1000 μg/mL 되게 녹인 후, 적정 농도로 희석하여 사용한다.

  2)  시약 및 초자

   가) 시약 : 아세톤, CaCl2 - 특급이상

   나) 초자 : 원심분리용 cornical tube(50 mL)

  3) 방법

    Conical tube에 분쇄시료 10 g을 칭량한다. 아세톤 30 mL을 첨가하여 진탕기를 이용하여 2～3시간 동안 진탕시킨다.(진탕기 사용이 어려울 경우, 때때로 격렬히 흔들어 주면서 방치한다) 진탕 후, CaCl2 1～2 스푼을 넣어 격렬히 흔들어 준다. CaCl2가 다 용해되었을 경우 1스푼 정도 더 첨가하고 혼합한다. tube를 10분간 원심 분리하거나, 30분간 정치시켜 상층액으로 기기분석을 실시한다.

  4)  측정조건(Gas Chromatograph)

   가) 주입부 온도 : 220℃

   나) 오븐 온도 : 120℃(1분) - 분당 3℃상승 - 190℃(1분)

   다) 검출기 : 전자포획검출기(ECD)

    (1) 온도 - 250℃,

    (2) Anode purge flow - N2 6.0 mL/min, 

    (3) makeup flow - N2 54.0 mL/min

   라) Column : capillary HP-FFAP (30 m × 0.53 mm, 1.0 μm)

   마) Carrier gas : N2 - 6.0 mL/min

   바) 주입량 : 1 μL

 나. 정량법

  1) 시약의 조제

   가) 에틸렌디브로마이드 표준액

      에틸렌디브로마이드 0.1 g을 정확히 칭량하여 100 mL의 메스플라스크에 넣는다. 아세톤을 가하여 용해하고, 동용매를 표선까지 가하여 에틸렌디브로마이드표준원액으로 조제한다.(이액 1 mL는 에틸렌디브로마이드 1 mg을 함유한다) 사용시, 표준원액의 일정량을 헥산으로 정확히 희석하고, 1 mL중에 0.01, 0.02, 0.04, 0.08, 0.1, 0.2 μg을 함유하는 각 에틸렌디브로마이드표준액을 조제한다.

   가) 규산마그네슘

       합성규산마그네슘[입경 149～250 μm (100～60mesh) : 플로리실 PR. 미국의 Floridin제]

  2) 방법

   가) 추출

      시료 50 g을 칭량하여 1 L의 Dean-Stark 증류장치용 플라스크에 넣는다. 증류수 400 mL, 헥산 15 mL 및 실리콘유 1방울을 가한 후, 플라스크를 증류장치에 연결하고, 맨틀히터로 1시간 가열하여 추출한다. 방냉한 후, 증류장치의 트랩내의 물을 제거하고, 헥산층을 No. 2S 분액여과지(동양여과지)로 20 mL의 메스플라스크에 여과한다. 여과지를 소량의 헥산으로 세정하고, 헥산을 표선까지 가하여, 컬럼크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

   나) 컬럼크로마토그래피

      규산마그네슘 2 g을 컬럼관(내경 10 mm)에 건식 충진하고, 정제용 컬럼을 조제한다. 시료용액을 컬럼에 넣은 다음, 처음의 유출액 5 mL를 버리고, 유출액을 가스크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

  3) 측정조건(Gas chromatograph)

   가) 검출기 : 전자포획검출기

   나) 컬럼용관 : 글라스제 내경 3 mm, 길이 2m

   다) 컬럼충진제 : FFAP(10%)/가스크롬 Q[입경 177～200 μm(80～60mesh)]

   라) 캐리어가스 : N2 40 mL/min

   마) 컬럼조온도 : 80℃

   바)시료도입부온도 : 150℃

   사)검출기온도 : 250℃

  4) 계산

    측정된 크로마토그램의 피크면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시료중의 에틸렌디브로마이드량을 산출한다.

9.7.2. 치아벤다졸(Thiabendazole) [C10H7N3S]

 가. 시약의 조제

  1) 치아벤다졸 표준액 : 치아벤다졸 20 mg을 정확히 칭량하여 100 mL의 갈색메스플라스크에 넣고 메탄올을 가하여 용해하고 동용매를 표선까지 가하여 표준원액조제(이액 1 mL는 치아벤다졸 0.2 mg 함유) 사용할 때 표준원액을 메탄올로 희석하여 1 mL중 0.05, 0.1, 0.25, 0.5 μg 함유되게 조제하여 사용한다.

  2) Ethyl Acetate : 시약특급

  3) Sodium Acetate 완충액 : Sodium Acetate anhyd. (CH3COONa) 33 g을 증류수에 1 L에 녹인후 염산으로 pH 4.5로 조정하고 NaCl 150 g을 가하여 녹인다.

  4) 5N NaOH용액 : 가성 소다 200 g을 증류수에 녹여 1 L로 한다.

  5) 0.1N HCl 용액 : 농염산 (비중 1.18) 8.7 mL를 증류수로 희석하여 1 L로 한다.

  6) Dichloromethane : 시약특급

  7) Methanol : HPLC용

  8) 0.01M KH2PO4 용액

 나. 추출

    시료 50 g을 300 mL 삼각플라스크에 정확히 취하고 Ethyl Acetate 100 mL와 Sodium Acetate 완충액 50 mL를 가하여 진탕기 250rpm에서 1시간 진탕 추출후 Bell-Jar에 Buchner funnel을 연결하여 No. 6 여과지를 깔고 그 위에 Hyflo Super Cel 1 spoon으로 덮은 후 300 mL 삼각플라스크에 흡인여과하고 Ethyl Acetate로 삼각플라스크와 깔대기의 잔사를 씻어준다.

    분액 깔대기에 시료액을 넣고, 5 N-NaOH 10 mL를 가하고 1분간 진탕 후 물층(하층)은 버리고 Ethyl Acetate층은 증류수 100 mL를 가하여 진탕하고 하층을 버린 다음 0.1 N-HCl 50 mL로 2회 추출한다.

    0.1 N HCl층을 Dichlomethane 50 mL로 씻어주고 5 N-NaOH용액으로 pH 8 이상 조절한 다음 Ethyl Acetate 50 mL로 2회 추출한 후 Ethyl Acetate층을 Na2SO4로 탈수한 후 회전식증발기에서 증발 건고한 후 Methanol 4 mL로 용해하여 검액으로 한다.

 다. 측정(예)

  1) 측정기기 : HPLC

  2) Column : C18 NOVA-PAK 또는 이와 동등한 것(4.6 mm×15 cm)

  3) Mobile phase : 0.136% KH2PO4 : Methanol(4:6)

   ※ H3PO4로 pH 2.5 조정

  4) Detector : Fluorescence Detector

   가) Excitation Filter 300 nm

   나) Emission Filter 355 nm

  5) Flow rate : 1.0 mL/min

 라. 계산

    측정된 크로마토그램의 면적을 구하여 검량선을 작성하고 시료중의 치아벤다졸의 함량을 산출한다. 

9.7.3. 프로피코나졸(Propiconazole) [C15H17Cl2N3O2]

 가. 표준용액의 제조

     프로피코나졸을 헥산에 녹여 100 mg/L이 되게 하고, 표준원액을 각각 헥산에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

 나. 시약

  1) 용매：잔류농약 시험용

  2) 물：증류수 또는 이와 동등한 물

  3) 기타시약：잔류농약 시험용 또는 특급

 다. 방법

  1) 추출

    균질화한 시료 10 g을 달아 물 20 mL를 넣고 2시간 방치한다. 이를 균질기에 넣고 아세톤 100 mL를 넣어 3분간 균질화한 후 여과보조제를 깔은 흡인여과기로 여과한다. 잔류물은 균질기에 다시 넣고 아세톤 100 mL를 넣고 3분간 균질화한 후 위와같이 되풀이하여 여과한다. 여액을 합쳐 40℃이하의 수욕상에서 감압하에 50 mL로 농축한다. 위의 농축액에 인산 1 mL 및 5% 초산아연용액 100 mL를 넣고 때때로 흔들어 섞으면서 15분간 방치한 후 여과보조제를 깔은 흡인여과기로 여과하고 여지상의 잔류물을 물 10 mL로 씻고 여과한다. 

  2) 분배

    여액을 합쳐 1N 수산화나트륨 10 g 및 디클로로메탄 100 mL를 넣고 진탕기로 5분간 심하게 흔들어 섞은 후 정치하여 디클로로메탄층을 삼각플라스크에 취한다. 물층에 디클로로메탄 100 mL를 넣어 위와 같이 되풀이하여 디클로로메탄층을 위의 삼각플라스크에 합친다. 이에 적당량의 무수황산나트륨을 넣고 때때로 흔들어 섞으면서 1시간 방치한 후 여과한다. 다시 디클로로메탄 40 mL로 삼각플라스크를 씻고 이 씻은 액으로 여지상의 잔류물을 씻고 여과한다. 여액을 합쳐 40℃이하의 수욕상에서 감압하에 날려보낸다. 잔사를 에틸아세테이트에 녹여 정확히 5 mL로 하여 시험용액으로 한다. 

 라. 측정조건

    캐필러리 칼럼：0.25 mm의 안지름을 가지는 30 m의 모세관 유리 칼럼에 50% Phenyl 50% Methyl siloxane을 0.25 μm의 두께로 화학결합 또는 Cross??link 코팅한 것 또는 이와 동등한 것(4. 식품중 잔류농약 분석법, 4.1.2.1의 6) 시험조작중 「사용이 가능한 동등한 칼럼」 참조)

  1) 주입부 및 검출기온도：모두 280℃

  2) 칼럼오븐온도：60℃에서 2분간 유지하고 10℃/분으로 온도를 상승시켜 270℃에서 7분간 유지한다.

  3) 캐리어가스 및 유량：헬륨(트리아디메놀이 약 22분에서 유출하는 유속으로 조정하고 공기 및 수소의 유량을 최적조건으로 조정한다)

  4) 검량선의 작성 : 표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

 마. 정성시험

    위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피크의 머무름시간과 일치하여야 한다.

 바. 정량시험

    정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

 사. 질량분석법에 의한 확인시험

    정성시험과 똑같은 조건으로 기체크로마토그래피 질량분석을 하였을 때 시험결과는 표준품과 일치하여야 한다. 또한 필요하면 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

9.7.4. 에토펜프록스(Etofenprox) [C25H28O3]

 가. 표준용액의 조제

    에토펜프록스를 헥산에 녹여 100 mg/kg이 되게 하고, 표준원액 1 mL를 취하여 플라스크에 넣고 실온에서 질소를 통과하면서 증발건고 시킨 후 시험용액의 조제 방법 중 유도체화에 따라 실험하고 헥산으로 적절한 농도로 희석하여 사용한다.

 나. 시약 및 시액

  1) 용매?잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

  2)물?증류수 또는 이와 동등한 것

  3)다공성 Chromosorb 칼럼?SPE용 또는 이와 동등한 것

  4)실리카 카트리지?SPE용 또는 이와 동등한 것

  5)후로리실 카트리지?SPE용 또는 이와 동등한 것

  6)유도체화 시약?idotrimethylsilane(ITMS)

  7)기타 시약?잔류농약 시험용 또는 특급

 다. 방법

  1) 추출

    시료를 잘게 썰거나 갈은 후 20 g을 달아 용기에 넣고 아세톤 100 mL를 넣어 5분간 고속으로 균질화하고 이를 부흐너깔때기로 감압여과한다. 그 잔사를 아세톤 50 mL로 씻고 씻은 액은 위의 여액에 합하여 40℃이하의 수욕중에서 감압농축하여 용매를 대부분 날려 버리고 잔류물에 물을 넣어 15 mL로 한다. 이를 다공성 Chromosorb 칼럼에 넣고 10분간 방치후 헥산 40 mL로 용출하고 용출액은 40℃이하의 수욕중에서 감압농축하여 헥산 3 mL로 용해한다.

  2) 정제(1차)

    미리 헥산 5 mL를 유출시켜 활성화한 실리카 카트리지에 위의 헥산 3 mL를 넣고 유출하여 유출액은 버리고 이어서 아세톤?헥산(5?95) 혼합액 8 mL로 용출하고 용출액을 질소가스 또는 공기를 사용하여 용매를 완전히 날려 버리고 잔류물을 클로로포름 1 mL에 녹인다.

  3) 유도체화

    위의 클로로포름 1 mL에 iodotrimethylsilane(ITMS) 0.1 mL를 넣어 90분간 실온에서 방치 후 0.03% 티오황산나트륨용액 30 mL를 넣고 분액깔때기로 옮겨 잘 흔들어 섞는다. 이에 헥산 50 mL를 넣어 3분간 심하게 흔들어 섞은 후 방치하여 층을 분리하여 헥산층을 감압 농축기용 플라스크에 옮긴다. 다시 물층에 헥산 30 mL를 넣어 위와 같이 되풀이한 후 헥산층을 위의 플라스크에 합하여 무수황산나트륨으로 탈수, 여과한 후 40℃이하의 수욕중에서 감압 농축하여 3 mL로 한다.

  4) 정제(2차)

    위의 헥산 3 mL를 미리 헥산 5 mL로 활성화한 후로리실 카트리지에 넣고 유출하여 버리고 다시 헥산 3 mL씩으로 2회 유출시킨 후 이어서 에틸에테르?헥산(2?98) 혼합액 10 mL로 용출하고 용출액을 질소가스 또는 공기를 사용하여 용매를 날려 버리고 잔류물을 헥산 일정량에 녹여 시험용액으로 한다.

 라. 시험조작

  1) 기체크로마토그래프의 측정조건

   가) 충전칼럼

    (1) 고정상담체?기체크로마토그래프용 크로모솔브 W(AW-DMCS), 크로모솔브 G(AW-DMCS) 및 가스크롬 Q 또는 이와 동등한 것

    (2) 고정상액체?기체크로마토그래프용 5% OV-17(50% 페닐메틸실리콘)

   나) 칼럼?안지름 2.6 mm, 길이 1 m의 유리관 또는 위와 동등한 캘필러리 칼럼

   다) 주입구 및 검출기의 온도?280℃

   라) 칼럼온도?240℃(항온, 필요에 따라 적절히 조절한다)

   마) 캐리어가스 및 유량?질소를 적절하게 조절한다.

   바) 검량선의 작성 : 표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

 마. 정성시험

     위의 조건으로 얻어진 크로마토그램 상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준용액피크의 머무름시간과 일치하여야 한다.

 바. 정량시험

     정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

9.7.5. 포레이트(Phorate)

 가. 표준용액의 조제

     포레이트[phorate 모화합물, phorate의  oxygen analog(phoratoxon, phoratoxon sulfoxide, phoratoxon sulfone), phorate sulfoxide, phorate sulfone]를 아세토니트릴에 녹여 100 mg/kg이 되게 하고, 표준원액을 적절한 농도로 희석하여 표준용액으로 사용한다.

 나. 시약 및 시액

  1) 용매?잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

  2) 물?증류수 또는 이와 동등한 것

  3) 기타 시약?잔류농약 시험용 또는 특급

 다. 방법

  1) 추출

    볏짚 시료를 균질화한 후 10 g을 정확히 칭량하여 50 mL 원심분리관에 넣고 아세토니트릴 20 mL를 넣은 후 shaker에서 1분간 진탕한다. 여기에 4 g MgSO4, 1 g NaCl, 1 g trisodiumcitrate dihydrate를 첨가한 후 다시 1분간 강하게 진탕한다. 원심분리기를 이용하여 3,000 rpm으로 5분간 원심분리한다. 여과액 500 μL에 메탄올 500 μL를 넣고 voltexing하여 기기분석을 실시한다. 

 라. 시험조작

  1) 액체크로마토그래프 질량분석기(LC-MS/MS)의 측정조건

   가) 칼럼?C18 (2 × 100 mm, 3 μm)

   나) 칼럼온도 :40℃

   다) 주입량 : 2 μL

   라) 검량선의 작성 : 표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프 질량분석기(LC-MS/MS)에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

   마) 이동상 : A - 5 mM ammonium formate, 0.1% in Water

               B - 5 mM ammonium formate, 0.1% in 90% Acetonitrile

┌───┬──────┬───┬───┐

│Time  │유속(mL/min)│A (%) │B (%) │

├───┼──────┼───┼───┤

│Intial│0.4         │90    │10    │

├───┼──────┼───┼───┤

│0.5   │0.4         │90    │10    │

├───┼──────┼───┼───┤

│6.0   │0.4         │10    │90    │

├───┼──────┼───┼───┤

│8.0   │0.4         │10    │90    │

├───┼──────┼───┼───┤

│15.0  │0.4         │90    │10    │

└───┴──────┴───┴───┘

 마. 정성시험

    위의 조건으로 얻어진 크로마토그램 상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준용액피크의 머무름시간과 일치하여야 한다.

 바. 정량시험

    정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

9.7.6. 피레트린 등 8종(2,4-D, bentazone, dicamba, MCPA, phosmet, pyrethrins I, pyrethrins II, cinerins I, cinerins II, jasmolins I, jasmolins II, prothioconazole, spinosyn A, spinosyn D) 다성분 분석법

 가. 적용범위

  본 분석법은 단미사료(곡류, 콩류, 섬유질류) 및 배합사료에 적용한다.

 나. 분석대상 성분

  이사-디(2,4-D), 벤타존(Bentazone), 디캄바(Dicamba), 엠시피에이(MCPA),  포스멧(Phosmet), 피레트린(Pyrethrins I, II, Cinerins I, II, Jasmolins I, II), 프로티오코나졸(Prothioconazole), 스피노사드(spinosyn A, spinosyn D)

 다. 분석원리

  균질화한 시료를 1% 포름산 함유 아세토니트릴로 추출하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

 라. 장치

  액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)를 사용한다.

 마. 시약

  1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

  2) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

  3) 표준원액: 각 농약의 표준품을 유기용매에 녹여 표준원액으로 사용한다

  4) 혼합표준용액: 표준원액을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석하여 사용한다.

  5) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

 바. 시험용액의 조제(추출 및 정제)

  1) 2 g의 균질화된 시료를 50 mL 용량의 원심분리관에 칭량하고, 물 10 mL를 넣은 후 1시간 동안 방치한다.

  2) 1% 포름산 함유 아세토니트릴 10 mL을 넣은 뒤 1분동안 강하게 진탕한다.

  3) 원심분리관에 무수황산나트륨 4.0 g, 염화나트륨 1.0 g, 구연산이나트륨·1.5수화물 0.5 g, 구연산삼나트륨·2수화물 1 g을 넣고 1분간 강하게 진탕한 후, 4,000 G에서 5분간 원심분리한다.

  4) 아세토니트릴층 100 μL를, 완충용액 600 μL, 아세토니트릴 300 μL에 희석한 후 멤브레인 필터(0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 사용한다.

  5) 정량 분석용 매질보정 검량법(matrix matched calibration)에 따른 농도별 표준물질과 시료액은 아래의 예를 참고하여 만든다.

      ※ 무농약 시료추출액: 시료구와 동일한 품목이면서 농약성분이 검출되지 아니한 시료를 ‘바.’ 에 따라 추출 및 정제한다

     ○ LC-MS/MS용 매질보정 검량(matrix matched calibration) 용액의 조제

               ┌────┬─────────────────────────────────────────┬──────┐

│구분    │검량선 작성용 표준물질                                                            │시료액      │

│        ├──────┬──────┬──────┬──────┬──────┬──────┤            │

│        │수준 1      │수준 2      │수준 3      │수준 4      │수준 5      │수준 6      │            │

├────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┤            │

│목표농도│1 μg/L     │5 μg/L     │10 μg/L    │20 μg/L    │50 μg/L    │100 μg/L   │            │

├────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┤

│조제방법│완충용액    │완충용액    │완충용액    │완충용액    │완충용액    │완충용액    │완충용액    │

│        │600 μL+    │600 μL+    │600 μL+    │600 μL+    │600 μL+    │600 μL+    │600 μL+    │

│        │아세토니트릴│아세토니트릴│아세토니트릴│아세토니트릴│아세토니트릴│아세토니트릴│아세토니트릴│

│        │200 μL     │200 μL     │200 μL     │200 μL     │200 μL     │200 μL     │300 μL     │

│        ├──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┤            │

│        │STD         │STD         │STD         │STD         │STD         │STD         │            │

│        │10 μg/L    │50 μg/L    │100 μg/L   │200 μg/L   │500 μg/L   │1000 μg/L  │            │

│        │100 μL     │100 μL     │100 μL     │100 μL     │100 μL     │100 μL     │            │

│        ├──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┤

│        │무농약      │무농약      │무농약      │무농약      │무농약      │무농약      │시료추출액  │

│        │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  │100 μL     │

│        │100 μL     │100 μL     │100 μL     │100 μL     │100 μL     │100 μL     │            │

└────┴──────┴──────┴──────┴──────┴──────┴──────┴──────┘

     ※ 완충용액 : 포름산암모늄 100 mM을 함유한 물(포름산 용액을 이용하여 pH 4∼4.5로 맞춤)

 사. 시험조작

  1) 액체크로마토그래프?질량분석기(LC-MS/MS)의 분석 조건

   가) 컬럼: C18 (2.1 mm × 150 mm, 2.7 μm) 또는 이와 동등한 것

   나) 이동상: A와 B 이동상의 농도 구배

     - A 이동상: 0.1% 포름산과 5 mM 포름산암모늄 함유한 물 

     - B 이동상: 0.1% 포름산과 5 mM 포름산암모늄 함유한 메탄올

   다) 농도구배조건

           ┌────┬──┬──┐

│시간(분)│A(%)│B(%)│

├────┼──┼──┤

│0.0     │65  │35  │

├────┼──┼──┤

│2.0     │65  │35  │

├────┼──┼──┤

│5.0     │10  │90  │

├────┼──┼──┤

│6.0     │10  │90  │

├────┼──┼──┤

│7.0     │0   │100 │

├────┼──┼──┤

│9.0     │0   │100 │

├────┼──┼──┤

│9.01    │65  │35  │

├────┼──┼──┤

│10.0    │65  │35  │

└────┴──┴──┘

   라) 이동상 유속: 0.3 mL/분

   마) 컬럼 온도: 40℃ 

   바) 주입량: 10 μL

   사) 이온화 방식: Electrospray ionization(positive, negative)

     ○ LC-MS/MS의 MRM(Multiple Reaction Monitoring)

┌─┬────────────┬──────┬───┬───┬─────┬─────┬──────┐

│번│분석성분                │이온화      │머무름│분자량│선구이온  │생성이온  │충돌에너지  │

│호│(Compound)              │(Ionization │시간  │(MW)  │(Precursor│(Product  │(Collision  │

│  │                        │mode)       │(분)  │      │ion, m/z) │ion, m/z) │energy,     │

│  │                        │            │      │      │          │          │eV)         │

├─┼────────────┼──────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│1 │이사-디                 │-           │5.7   │221.0 │218       │161       │12          │

│  │(2,4-D)                 │            │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │            │      │      │          │125       │25          │

│  │                        │            │      │      ├─────┼─────┼──────┤

│  │                        │            │      │      │220       │163       │15          │

├─┼────────────┼──────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│2 │벤타존                  │-           │5.1   │240.2 │239       │132       │25          │

│  │(Bentazone)             │            │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │            │      │      │          │197       │19          │

│  │                        │            │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │            │      │      │          │175       │18          │

├─┼────────────┼──────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│3 │디캄바                  │-           │4.9   │221.0 │218       │175       │7           │

│  │(Dicamba)               │            │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │            │      │      │          │145       │10          │

│  │                        │            │      │      ├─────┼─────┼──────┤

│  │                        │            │      │      │221       │177       │7           │

├─┼────────────┼──────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│4 │엠시피에이              │-           │5.8   │200.6 │199       │141       │14          │

│  │(MCPA)                  │            │      │      ├─────┼─────┼──────┤

│  │                        │            │      │      │201       │143       │15          │

├─┼────────────┼──────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│5 │포스멧                  │+           │5.6   │317.3 │317       │160       │-29         │

│  │(Phosmet)               │            │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │            │      │      │          │133       │-28         │

│  │                        │            │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │            │      │      │          │77        │-10         │

├─┼────────────┼──────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│6 │피레트린                │+           │7.7   │316.4 │317       │107       │-24         │

│  │(Pyrethrin-Cinerin I)   │            │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │            │      │      │          │149       │-26         │

├─┼────────────┼──────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│7 │피레트린                │+           │6.8   │360.4 │361       │107       │-29         │

│  │(Pyrethrin-Cinerin II)  │            │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │            │      │      │          │149       │-26         │

├─┼────────────┼──────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│8 │피레트린                │+           │8.1   │330.5 │331       │163       │-26         │

│  │(Pyrethrin-Jasmolin I)  │            │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │            │      │      │          │107       │-16         │

├─┼────────────┼──────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│9 │피레트린                │+           │7.1   │374.5 │375       │163       │-29         │

│  │(Pyrethrin-Jasmolin II) │            │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │            │      │      │          │107       │-28         │

├─┼────────────┼──────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│10│피레트린                │+           │7.8   │328.4 │329       │161       │-27         │

│  │(Pyrethrin-pyrethrin I) │            │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │            │      │      │          │133       │-29         │

└─┴────────────┴──────┴───┴───┴─────┴─────┴──────┘

  ┌─┬────────────┬──────┬───┬───┬─────┬─────┬──────┐

│번│분석성분                │이온화      │머무름│분자량│선구이온  │생성이온  │충돌에너지  │

│호│(Compound)              │(Ionization │시간  │(MW)  │(Precursor│(Product  │(Collision  │

│  │                        │mode)       │(분)  │      │ion, m/z) │ion, m/z) │energy,     │

│  │                        │            │      │      │          │          │eV)         │

├─┼────────────┼──────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│11│피레트린                │+           │6.8   │372.5 │373       │161       │-29         │

│  │(Pyrethrin-pyrethrin II)│            │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │            │      │      │          │133       │-27         │

├─┼────────────┼──────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│12│프로티오코나졸          │+           │6.6   │344.2 │344       │326       │-30         │

│  │(Prothioconazole)       │            │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │            │      │      │          │125       │-26         │

├─┼────────────┼──────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│13│스피노신 A              │+           │6.2   │732.0 │732       │142       │-20         │

│  │(Spinosyn A)            │            │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │            │      │      │          │98        │-20         │

│  │                        │            │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │            │      │      │          │99        │-20         │

├─┼────────────┼──────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│14│스피노신 D              │+           │6.3   │746.0 │746       │142       │-20         │

│  │(Spinosyn D)            │            │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │            │      │      │          │98        │-20         │

│  │                        │            │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │            │      │      │          │145       │-20         │

└─┴────────────┴──────┴───┴───┴─────┴─────┴──────┘

※ 질량분석기의 분석조건 및 각 생성이온에 대한 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 선구이온 및 생성이온도 유효성이 확인된 경우 적용이 가능

    2) 정량한계

    ┌──┬────────────────┬────────┐

│번호│분석성분                        │정량한계(mg/kg) │

│    │(Compound)                      │                │

├──┼────────────────┼────────┤

│1   │이사-디(2,4-D)                  │0.2             │

├──┼────────────────┼────────┤

│2   │벤타존(Bentazone)               │0.2             │

├──┼────────────────┼────────┤

│3   │디캄바(Dicamba)                 │0.2             │

├──┼────────────────┼────────┤

│4   │엠시피에이(MCPA)                │0.2             │

├──┼────────────────┼────────┤

│5   │포스멧(Phosmet)                 │0.025           │

├──┼────────────────┼────────┤

│6   │피레트린(Pyrethrins)            │0.05            │

├──┼────────────────┼────────┤

│7   │프로티오코나졸(Prothioconazole) │2.0             │

├──┼────────────────┼────────┤

│8   │스피노사드(Spinosad)            │0.05            │

└──┴────────────────┴────────┘

   아. 정성 및 정량시험

    1) 검량선 작성

     가) 표준용액을 농도별로 분석기기에 각각 주입하여 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

     나) 검량선의 적정성을 평가하는데 결정계수뿐만 아니라 각 농도에서의 잔차가 ± 20% 이하인지 확인하고, 잔차가 ± 20%를 넘는 경우 검량선을 작성할 때   가중치 적용(1/x) 방식을 활용할 수 있다.

    2) 정성 확인

     위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름시간(retention time)과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온(Product ion)간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율이 ± 20∼30% 이내에서 일치하여야 한다.※ 생성이온간 반응세기의 비율 허용 범위

    ┌─────────────┬──────┐

│이온간 반응세기의 비율(%) │허용범위(%) │

├─────────────┼──────┤

│〉50                      │±20        │

├─────────────┼──────┤

│〉20, ≤50                │±25        │

├─────────────┼──────┤

│〉10, ≤20                │±30        │

└─────────────┴──────┘

    3) 정량 확인

     정량시험은 단일 표준품으로 표준용액을 일정농도로 제조한 후 매질보정 검량선을 작성하여 정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 정량한다.    

    4) 대표품목의 매질보정검량법으로 스크리닝 분석 후 검출량이 허용기준 대비 80%를 초과한 시료에 대해서는 표준물질 첨가법(standard addition method)을 활용 할 수 있다.

9.7.7. 글리포세이트(Glyphosate), 설포세이트(Sulfosate)

 가. 적용범위

  본 분석법은 단미사료(곡류, 콩류, 섬유질류) 및 배합사료에 적용한다.

 나. 분석원리

  균질화한 시료를 포름산이 함유된 메탄올로 추출하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

 다. 장치

  액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)를 사용한다.

 라. 시약

    1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

    2) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

    3) 표준원액: 각 농약의 표준품을 유기용매에 녹여 표준원액으로 사용한다

    4) 혼합표준용액: 표준원액을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석하여 사용한다.

    5) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

 마. 시험용액의 조제(추출 및 정제)

    1) 2 g의 균질화된 시료를 50 mL 용량의 원심분리관에 칭량하고, 물 10 mL를 넣은 후 1시간 동안 방치한다.

    2) 1% 포름산 함유 메탄올 10 mL을 넣은 뒤 15분동안 강하게 진탕한다.

    3) 4,000 G에서 5분간 원심분리 하고 상등액 1mL를 취하여 멤브레인 필터(0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 사용한다.

       ※  Glyphosate, Sulfosate는 유리에 흡착하는 성질이 있으므로 모든 시험과정은 폴리프로필렌으로 된 용기를 사용한다.

    4) 정량 분석용 매질보정 검량법(matrix matched calibration)에 따른 농도별 표준물질과 시료액은 아래의 예를 참고하여 만든다.

       ※ 무농약 시료추출액: 시료구와 동일한 품목이면서 농약성분이 검출되지 아니한 시료를 ‘마.’ 에 따라 추출 및 정제한다

     ○ LC-MS/MS용 매질보정 검량(matrix matched calibration) 용액의 조제

               ┌────┬──────────────────────────────────┬─────┐

│구분    │검량선 작성용 표준물질                                              │시료액    │

│        ├──────┬──────┬──────┬──────┬──────┤          │

│        │수준 1      │수준 2      │수준 3      │수준 4      │수준 5      │          │

├────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┤          │

│목적농도│5 μg/L     │10 μg/L    │25 μg/L    │50 μg/L    │100 μg/L   │          │

┝━━━━┿━━━━━━┿━━━━━━┿━━━━━━┿━━━━━━┿━━━━━━┿━━━━━┥

│조제방법│STD         │STD         │STD         │STD         │STD         │시료추출액│

│        │100 μg/L   │200 μg/L   │500 μg/L   │1000 μg/L  │2000 μg/L  │1000 μL  │

│        │50 μL      │50 μL      │50 μL      │50 μL      │50 μL      │          │

│        ├──────┼──────┼──────┼──────┼──────┤          │

│        │무농약      │무농약      │무농약      │무농약      │무농약      │          │

│        │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  │          │

│        │950 μL     │950 μL     │950 μL     │950 μL     │950 μL     │          │

└────┴──────┴──────┴──────┴──────┴──────┴─────┘

 바. 시험조작

    1) 액체크로마토그래프?질량분석기(LC-MS/MS)의 분석 조건

     가) 컬럼: Waters, Anionic polar pesticide (2.1 mm × 100 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

     나) 이동상: A와 B 이동상의 농도 구배

      - A 이동상: 0.9% 포름산 함유한 물

      - B 이동상:  0.9% 포름산 함유한 아세토니트릴

     다) 농도구배조건

           ┌────┬──┬──┐

│시간(분)│A(%)│B(%)│

├────┼──┼──┤

│0.01    │10  │90  │

├────┼──┼──┤

│4.0     │85  │15  │

├────┼──┼──┤

│13.0    │85  │15  │

├────┼──┼──┤

│18.5    │10  │90  │

├────┼──┼──┤

│20.0    │10  │90  │

└────┴──┴──┘

      라) 이동상 유속: 0.5 mL/분

      마) 컬럼 온도: 40℃ 

      바) 주입량: 50 μL

      사) 이온화 방식: Electrospray ionization(positive, negative)

     ○ LC-MS/MS의 MRM(Multiple Reaction Monitoring)

┌─┬──────┬──────┬───┬───┬─────┬─────┬──────┐

│번│분석성분    │이온화      │머무름│분자량│선구이온  │생성이온  │충돌에너지  │

│호│(Compound)  │(Ionization │시간  │(MW)  │(Precursor│(Product  │(Collision  │

│  │            │mode)       │(분)  │      │ion, m/z) │ion, m/z) │energy,     │

│  │            │            │      │      │          │          │eV)         │

├─┼──────┼──────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│1 │글리포세이트│-           │5.0   │169.0 │168       │63        │26          │

│  │(Glyphosate)│            │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │            │            │      │      │          │78        │36          │

├─┼──────┼──────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│2 │설포세이트  │+           │0.4   │245.2 │77        │62        │-18         │

│  │(Sulfosate) │            │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │            │            │      │      │          │47        │-27         │

│  │            │            │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │            │            │      │      │          │45        │-45         │

└─┴──────┴──────┴───┴───┴─────┴─────┴──────┘

       ※ 질량분석기의 분석조건 및 각 생성이온에 대한 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 선구이온 및 생성이온도 유효성이 확인된 경우 적용이 가능

    2) 정량한계

     0.2 mg/kg    

 사. 정성 및 정량시험

  1) 검량선 작성

      가) 표준용액을 농도별로 분석기기에 각각 주입하여 얻어진 크로마토그램상의 각        피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

      나) 검량선의 적정성을 평가하는데 결정계수뿐만 아니라 각 농도에서의 잔차가 ± 20% 이하인지 확인하고, 잔차가 ± 20%를 넘는 경우 검량선을 작성할 때 가중치 적용(1/x) 방식을 활용할 수 있다.

  2) 정성 확인

   위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름시간(retention time)과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온(Product ion)간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율이 ± 20∼30% 이내에서 일치하여야 한다.    ※ 생성이온간 반응세기의 비율 허용 범위

       ┌─────────────┬──────┐

│이온간 반응세기의 비율(%) │허용범위(%) │

├─────────────┼──────┤

│〉50                      │±20        │

├─────────────┼──────┤

│〉20, ≤50                │±25        │

├─────────────┼──────┤

│〉10, ≤20                │±30        │

└─────────────┴──────┘

  3) 정량 확인

   정량시험은 단일 표준품으로 표준용액을 일정농도로 제조한 후 매질보정 검량선을 작성하여 정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 정량한다.    

  4) 대표품목의 매질보정검량법으로 스크리닝 분석 후 검출량이 허용기준 대비 80%를 초과한 시료에 대해서는 표준물질 첨가법(standard addition method)을 활용 할 수 있다.

9.7.8. 다이쾃(Diquat), 패러쾃(Paraquat)

 가. 적용범위

  본 분석법은 단미사료(곡류, 콩류, 섬유질류) 및 배합사료에 적용한다.

 나. 분석원리

  균질화한 시료를 포름산이 함유된 메탄올로 추출하고 C18로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

 다. 장치

  액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)를 사용한다.

 라. 시약

    1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

    2) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

    3) 표준원액: 각 농약의 표준품을 유기용매에 녹여 표준원액으로 사용한다

    4) 혼합표준용액: 표준원액을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석하여 사용한다.

    5) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

 마. 시험용액의 조제(추출 및 정제)

    1) 2 g의 균질화된 시료를 50 mL 용량의 원심분리관에 칭량하고, 물 10 mL를 넣은 후 1시간 동안 방치한다.

    2) 1% 포름산 함유 메탄올 10 mL을 넣은 뒤 15분동안 강하게 진탕한다.

    3) 4,000 G에서 5분간 원심분리 하고 상층액 1 mL를 취하여 멤브레인 필터(0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 사용한다.

    4) 지방성 시료의 경우 시료추출액 1 mL를 C18 50 mg이 담긴 2 mL 원심분리관에 넣고 1분간 진탕 후 4,000 G로 5분간 원심분리하여 시험액으로 사용한다.

       ※  Diquat, paraquat는 유리에 흡착하는 성질이 있으므로 모든 시험과정은 폴리프로필렌으로 된 용기를 사용한다.

    5) 정량 분석용 매질보정 검량법(matrix matched calibration)에 따른 농도별 표준물질과 시료액은 아래의 예를 참고하여 만든다.

       ※ 무농약 시료추출액: 시료구와 동일한 품목이면서 농약성분이 검출되지 아니한 시료를 ‘마.’ 에 따라 추출 및 정제한다

     ○ LC-MS/MS용 매질보정 검량(matrix matched calibration) 용액의 조제               

    ┌────┬──────────────────────────────────┬─────┐

│구분    │검량선 작성용 표준물질                                              │시료액    │

│        ├──────┬──────┬──────┬──────┬──────┤          │

│        │수준 1      │수준 2      │수준 3      │수준 4      │수준 5      │          │

├────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┤          │

│목적농도│5 μg/L     │10 μg/L    │25 μg/L    │50 μg/L    │100 μg/L   │          │

┝━━━━┿━━━━━━┿━━━━━━┿━━━━━━┿━━━━━━┿━━━━━━┿━━━━━┥

│조제방법│STD         │STD         │STD         │STD         │STD         │시료추출액│

│        │100 μg/L   │200 μg/L   │500 μg/L   │1000 μg/L  │2000 μg/L  │1000 μL  │

│        │50 μL      │50 μL      │50 μL      │50 μL      │50 μL      │          │

│        ├──────┼──────┼──────┼──────┼──────┤          │

│        │무농약      │무농약      │무농약      │무농약      │무농약      │          │

│        │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  │          │

│        │950 μL     │950 μL     │950 μL     │950 μL     │950 μL     │          │

└────┴──────┴──────┴──────┴──────┴──────┴─────┘

 바. 시험조작

    1) 액체크로마토그래프?질량분석기(LC-MS/MS)의 분석 조건

     가) 컬럼: HILIC (2.1 mm × 100 mm, 2.6 μm) 또는 이와 동등한 것

     나) 이동상: A와 B 이동상의 농도 구배

      - A 이동상: 20 mM 포름산암모늄 함유한 물 (포름산으로 pH 3으로 조정)

      - B 이동상: 아세토니트릴

     다) 농도구배조건

           ┌────┬──┬──┐

│시간(분)│A(%)│B(%)│

├────┼──┼──┤

│0.01    │20  │80  │

├────┼──┼──┤

│4.0     │80  │20  │

├────┼──┼──┤

│4.1     │80  │20  │

├────┼──┼──┤

│12.0    │80  │20  │

├────┼──┼──┤

│12.1    │20  │80  │

├────┼──┼──┤

│20.0    │20  │80  │

└────┴──┴──┘

     라) 이동상 유속: 0.3 mL/분

     마) 컬럼 온도: 40℃ 

     바) 주입량: 10 μL

     사) 이온화 방식: Electrospray ionization(positive)

     ○ LC-MS/MS의 MRM(Multiple Reaction Monitoring)

┌─┬─────┬──────┬───┬───┬─────┬─────┬──────┐

│번│분석성분  │이온화      │머무름│분자량│선구이온  │생성이온  │충돌에너지  │

│호│(Compound)│(Ionization │시간  │(MW)  │(Precursor│(Product  │(Collision  │

│  │          │mode)       │(분)  │      │ion, m/z) │ion, m/z) │energy,     │

│  │          │            │      │      │          │          │eV)         │

├─┼─────┼──────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│1 │다이쾃    │+           │2.9   │184.2 │184       │128       │-40         │

│  │(Diquat)  │            │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │          │            │      │      │          │156       │-23         │

│  │          │            │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │          │            │      │      │          │155       │-32         │

├─┼─────┼──────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│2 │패러쾃    │+           │3.0   │186.2 │186       │171       │-21         │

│  │(Paraquat)│            │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │          │            │      │      │          │77        │-46         │

│  │          │            │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │          │            │      │      │          │155       │-40         │

└─┴─────┴──────┴───┴───┴─────┴─────┴──────┘

       ※ 질량분석기의 분석조건 및 각 생성이온에 대한 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 선구이온 및 생성이온도 유효성이 확인된 경우 적용이 가능

    2) 정량한계

     0.01 mg/kg    

 사. 정성 및 정량시험

  1) 검량선 작성

   가) 표준용액을 농도별로 분석기기에 각각 주입하여 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

   나) 검량선의 적정성을 평가하는데 결정계수뿐만 아니라 각 농도에서의 잔차가 ± 20% 이하인지 확인하고, 잔차가 ± 20%를 넘는 경우 검량선을 작성할 때   가중치 적용(1/x) 방식을 활용할 수 있다.

  2) 정성 확인

   위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름시간(retention time)과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precusor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온(Product ion)간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율이 ± 20∼30% 이내에서 일치하여야 한다.    ※ 생성이온간 반응세기의 비율 허용 범위

       ┌─────────────┬──────┐

│이온간 반응세기의 비율(%) │허용범위(%) │

├─────────────┼──────┤

│〉50                      │±20        │

├─────────────┼──────┤

│〉20, ≤50                │±25        │

├─────────────┼──────┤

│〉10, ≤20                │±30        │

└─────────────┴──────┘

  3) 정량 확인

   정량시험은 단일 표준품으로 표준용액을 일정농도로 제조한 후 매질보정 검량선을 작성하여 정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 정량한다.    

  4) 대표품목의 매질보정검량법으로 스크리닝 분석 후 검출량이 허용기준 대비 80%를 초과한 시료에 대해서는 표준물질 첨가법(standard addition method)을 활용 할 수 있다.

9.7.9. 디티오카바메이트계 농약(Dithiocarbamates) 

 가. 적용범위

  본 분석법은 단미사료(곡류, 콩류, 섬유질류) 및 배합사료에 적용한다.

 나. 분석대상 성분

  프로피네브(Propineb), 만코제브(mancozeb), 티람(thiram)

 다. 분석원리

  균질화한 시료를 L-cysteine과 EDTA를 이용하여 추출하고, dimethyl sulfate로 methylation을 진행한 뒤 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

 라. 장치

  액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)를 사용한다.

 마. 시약

    1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

    2) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

    3) 표준원액: 각 농약의 표준품을 유기용매에 녹여 표준원액으로 사용한다

    4) 혼합표준용액: 표준원액을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석하여 사용한다.

    5) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

 바. 시험용액의 조제(추출 및 정제)

    1) 균질화된 시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣는다.

    2) 여기에 L-cysteine 0.1 g을 첨가하고, 0.25 M EDTA(0.45M NaOH pH 9.5～9.6) 용액 10 mL를 첨가한다. 

    3) 아세토니트릴 10 mL를 첨가하고, dimethyl sulfate 47.4 μL 첨가 후 15분간 진탕한다.

    4) 위 용액에 무수황산마그네슘 4 g, 염화나트륨 1 g을 넣고 10분간 진탕한다.

    5) 4,000 G에서 5분간 원심분리 하고 상등액 1 mL를 취하여 멤브레인 필터(0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 사용한다.

 사. 시험조작

    1) 액체크로마토그래프?질량분석기(LC-MS/MS)의 분석 조건

     가) 컬럼: C18 (2.1 mm × 150 mm, 2.7 μm) 또는 이와 동등한 것

     나) 이동상: A와 B 이동상의 농도 구배

      - A 이동상: 5mM 포름산암모늄, 0.1% 포름산 함유한 물

      - B 이동상: 아세토니트릴 

     다) 농도구배조건

           ┌────┬──┬──┐

│시간(분)│A(%)│B(%)│

├────┼──┼──┤

│0.01    │60  │40  │

├────┼──┼──┤

│0.5     │60  │40  │

├────┼──┼──┤

│4       │52  │48  │

├────┼──┼──┤

│4.5     │20  │80  │

├────┼──┼──┤

│6.5     │60  │40  │

├────┼──┼──┤

│6.7     │60  │40  │

├────┼──┼──┤

│10      │60  │40  │

└────┴──┴──┘

     라) 이동상 유속: 0.3 mL/분

     마) 컬럼 온도: 40℃ 

     바) 주입량: 10 μL

     사) 이온화 방식: Electrospray ionization(positive)

     ○ LC-MS/MS의 MRM(Multiple Reaction Monitoring)

┌─┬────────┬──────┬───┬───┬─────┬─────┬──────┐

│번│분석성분        │이온화      │머무름│분자량│선구이온  │생성이온  │충돌에너지  │

│호│(Compound)      │(Ionization │시간  │(MW)  │(Precursor│(Product  │(Collision  │

│  │                │mode)       │(분)  │      │ion, m/z) │ion, m/z) │energy,     │

│  │                │            │      │      │          │          │eV)         │

├─┼────────┼──────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│1 │만코제브        │+           │3.6   │239.9 │241       │134       │-15         │

│  │(Mancozeb, EBMe)│            │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                │            │      │      │          │117       │-15         │

│  │                │            │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                │            │      │      │          │193       │-15         │

├─┼────────┼──────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│2 │티람            │+           │3.6   │135.0 │136       │88        │-15         │

│  │(Thiram, DDMe)  │            │      │      │          │          │            │

├─┼────────┼──────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│3 │프로피네브      │+           │3.8   │254.0 │255       │131       │-10         │

│  │(Propineb, PBMe)│            │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                │            │      │      │          │148       │-10         │

│  │                │            │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                │            │      │      │          │159       │-10         │

└─┴────────┴──────┴───┴───┴─────┴─────┴──────┘

       ※ 질량분석기의 분석조건 및 각 생성이온에 대한 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 선구이온 및 생성이온도 유효성이 확인된 경우 적용이 가능

    2) 정량한계

     0.5 mg/kg    

 아. 정성 및 정량시험

  1) 검량선 작성

     가) 표준용액을 농도별로 분석기기에 각각 주입하여 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

     나) 검량선의 적정성을 평가하는데 결정계수뿐만 아니라 각 농도에서의 잔차가 ± 20% 이하인지 확인하고, 잔차가 ± 20%를 넘는 경우 검량선을 작성할 때 가중치 적용(1/x) 방식을 활용할 수 있다.

  2) 정성 확인

   위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름시간(retention time)과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온(Product ion)간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율이 ± 20∼30% 이내에서 일치하여야 한다.    ※ 생성이온간 반응세기의 비율 허용 범위

    ┌─────────────┬──────┐

│이온간 반응세기의 비율(%) │허용범위(%) │

├─────────────┼──────┤

│〉50                      │±20        │

├─────────────┼──────┤

│〉20, ≤50                │±25        │

├─────────────┼──────┤

│〉10, ≤20                │±30        │

└─────────────┴──────┘

  3) 정량 확인

   정량시험은 단일 표준품으로 표준용액을 일정농도로 제조한 후 매질보정 검량선을 작성하여 정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 정량한다.    

  4) 대표품목의 매질보정검량법으로 스크리닝 분석 후 검출량이 허용기준 대비 80%를 초과한 시료에 대해서는 표준물질 첨가법(standard addition method)을 활용 할 수 있다.

9.7.10. 캡탄(Captan)

 가. 적용범위

  본 분석법은 단미사료(곡류, 콩류, 섬유질류) 및 배합사료에 적용한다.

 나. 분석원리

  균질화한 시료를 아세토니트릴로 추출하고 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

 다. 장치

  액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)를 사용한다.

 라. 시약

    1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

    2) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

    3) 표준원액: 각 농약의 표준품을 유기용매에 녹여 표준원액으로 사용한다

    4) 혼합표준용액: 표준원액을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석하여 사용한다.

    5) d-SPE : 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), 1차 2차 아민(PSA, Primary Secondary Amine)

    6) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

 마. 시험용액의 조제(추출 및 정제)

    1) 2 g의 균질화된 시료를 50 mL 용량의 원심분리관에 칭량하고, 물 10 mL를 넣은 후 1시간 동안 방치한다.

    2) 1% 포름산 함유 아세토니트릴 10 mL을 넣은 뒤 2분동안 강하게 진탕한다.

    3) 원심분리관에 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g, 구연산이나트륨·1.5수화물 0.5 g, 구연산삼나트륨·2수화물 1 g을 넣고 1분간 강하게 흔들어 섞은 다음 4,000 G에서 5분간 원심분리 하여 상층액 1mL를 취한다.

    4) 무수황산마그네슘 150 mg과 1차 2차 아민 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘3)’으로부터 얻은 상층액 1 mL를 넣고 1분간 강하게 흔들어 섞은 다음 이를 원심분리한 후 상층액을 멤브레인 필터(0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

    5) 정량 분석용 매질보정 검량법(matrix matched calibration)에 따른 농도별 표준물질과 시료액은 아래의 예를 참고하여 만든다.

       ※ 무농약 시료추출액: 시료구와 동일한 품목이면서 농약성분이 검출되지 아니한 시료를 ‘마.’ 에 따라 추출 및 정제한다

     ○ GC-MS/MS용 매질보정 검량(matrix matched calibration) 용액의 조제               

    ┌────┬──────────────────────────────────┬──────┐

│구분    │검량선 작성용 표준물질                                              │시료액      │

│        ├──────┬──────┬──────┬──────┬──────┤            │

│        │1           │2           │3           │4           │5           │            │

├────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┤            │

│목적농도│10 μg/L    │50 μg/L    │100 μg/L   │200 μg/L   │500 μg/L   │            │

├────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┤

│조제방법│AP 혼합액   │AP 혼합액   │AP 혼합액   │AP 혼합액   │AP 혼합액   │AP 20 μL   │

│        │20 μL      │20 μL      │20 μL      │20 μL      │20 μL      │            │

│        ├──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┤

│        │내부표준물질│내부표준물질│내부표준물질│내부표준물질│내부표준물질│Acetonitrile│

│        │100 μg/L   │100 μg/L   │100 μg/L   │100 μg/L   │100 μg/L   │75 μL      │

│        │50 μL      │50 μL      │50 μL      │50 μL      │50 μL      │            │

│        ├──────┼──────┼──────┼──────┼──────┤            │

│        │STD         │STD         │STD         │STD         │STD         │            │

│        │200 μg/L   │1,000 μg/L │2,000 μg/L │4,000 μg/L │10,000 μg/L│            │

│        │25 μL      │25 μL      │25 μL      │25 μL      │25 μL      │            │

│        ├──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┤

│        │무농약      │무농약      │무농약      │무농약      │무농약      │시료        │

│        │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  │추출액      │

│        │405 μL     │405 μL     │405 μL     │405 μL     │405 μL     │405 μL     │

└────┴──────┴──────┴──────┴──────┴──────┴──────┘

       ※ 완충용액 : 포름산암모늄 100 mM을 함유한 물(포름산 용액을 이용하여 pH 4∼4.5로 맞춤)

 바. 시험조작

  1) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS/MS)의 분석 조건

    가) 컬럼: Rxi-5Sil MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 ㎛) 또는 이와 동등한 것

    나) 주입부: Electron ionization(EI) 또는 이와 동등한 방식

    다) 이동상 가스(carrier gas) 및 유속: He, 1.5 mL/분

      라) 주입량: 1 μL

      마) 온도: 280℃

      바) Splitless mode

      사) 오븐: 90℃에서 시료액을 주입하고 3분간 유지한 후 20℃/min 비율로 120℃까지 상승시키고 8℃/min 비율로 300℃까지 상승시켜 3분간 유지

      아) Ion source: 250℃

○ GC-MS/MS의 MRM(Multiple Reaction Monitoring)

┌───────┬───┬───┬────┬─────┬─────┬──────┐

│분석성분      │머무름│분자량│관측질량│선구이온  │생성이온  │충돌에너지  │

│(Compound)    │시간  │(MW)  │(Exact  │(Precursor│(Product  │(Collision  │

│              │(분)  │      │mass)   │ion, m/z) │ion, m/z) │energy, eV) │

├───────┼───┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│캡탄          │17.6  │300.6 │299     │149       │107       │5           │

│(Captan)      │      │      │        │          ├─────┼──────┤

│              │      │      │        │          │79        │15          │

├───────┼───┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│TPP           │21.0  │326.2 │326     │326       │325       │25          │

│(내부표준물질)│      │      │        │          ├─────┼──────┤

│              │      │      │        │          │169       │25          │

└───────┴───┴───┴────┴─────┴─────┴──────┘

※ 질량분석기의 분석조건 및 각 생성이온에 대한 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 선구이온 및 생성이온도 유효성이 확인된 경우 적용이 가능

    2) 정량한계

     1.25 mg/kg    

  사. 정성 및 정량시험

   1) 검량선 작성

    가) 표준용액을 농도별로 분석기기에 각각 주입하여 얻어진 크로마토그램상의 각        피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

    나) 검량선의 적정성을 평가하는데 결정계수뿐만 아니라 각 농도에서의 잔차가      ± 20% 이하인지 확인하고, 잔차가 ± 20%를 넘는 경우 검량선을 작성할 때   가중치 적용(1/x) 방식을 활용할 수 있다.

   2) 정성 확인

    위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름시간(retention time)과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온(Product ion)간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율이 ± 20∼30% 이내에서 일치하여야 한다.   ※ 생성이온간 반응세기의 비율 허용 범위

       ┌─────────────┬──────┐

│이온간 반응세기의 비율(%) │허용범위(%) │

├─────────────┼──────┤

│〉50                      │±20        │

├─────────────┼──────┤

│〉20, ≤50                │±25        │

├─────────────┼──────┤

│〉10, ≤20                │±30        │

└─────────────┴──────┘

   3) 정량 확인

    정량시험은 단일 표준품으로 표준용액을 일정농도로 제조한 후 매질보정 검량선을 작성하여 정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 정량한다.    

   4) 대표품목의 매질보정검량법으로 스크리닝 분석 후 검출량이 허용기준 대비 80%를 초과한 시료에 대해서는 표준물질 첨가법(standard addition method)을 활용 할 수 있다.

9.7.11. 아미노피랄리드(Aminopyralid)

 가. 적용범위

  본 분석법은 단미사료(곡류, 콩류, 섬유질류) 및 배합사료에 적용한다.

 나. 분석원리

  균질화한 시료를 염산이 함유된 아세토니트릴로 추출하고 HLB 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

  다. 장치

   액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)를 사용한다.

  라. 시약

    1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

    2) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

    3) 표준원액: 표준품을 유기용매에 녹여 표준원액으로 사용한다

    4) 표준용액: 표준원액을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석하여 사용한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 함유).

    5) HLB 카트리지(Hydrophilic-Lipophilic Balance cartridge) : divinylbenzene-N- vinylpyrrolidone copolymer(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

    6) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

 마. 시험용액의 조제(추출 및 정제)

    1) 5 g의 균질화된 시료를 50 mL 용량의 원심분리관에 칭량하고, 물 5 mL를 넣은 후 10분간 방치한다.

    2) 원심분리관에 아세토니트릴 20 mL와 5 N 수산화나트륨 용액 1 mL를 넣어 40 ℃에서 20분간 추출 및 가수분해한다.

    3) 가수분해 후 후 추출물에 6N 염산 2 mL를 넣어 15분간 흔들어 섞고, 무수황산나트륨 6 g, 염화나트륨 1.5 g을 넣어 1분간 상하좌우로 흔들어 혼합한 후, 원심분리(4,000 G, 10분)한다.

    4) 상층액 5 mL를 취하여 40 ℃에서 질소 농축한 후 건고물을 메탄올 5 mL에 녹인다.

    5) HLB 카트리지에 메탄올 3mL와 물 3mL를 차례로 넣어 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다.

    6) 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘4)’로부터 얻은 메탄올에 녹인 5 mL를 카트리지 상단에 넣어 1～2방울/초의 속도로 용출하여 받고, 고정상 상단이 노출되기 전에 메탄올 5 mL를 추가로 넣어 1～2방울/초의 속도로 용출하여 앞서 받은액과 합쳐 부피를 10 mL로 맞춘다.

    7) 정제된 용액을 40 ℃에서 질소 농축한 뒤 0.5% 포름산 함유 아세토니트릴로 부피를 5 mL로 맞추고 멤브레인 필터(0.2μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.  

 바. 시험조작

    1) 액체크로마토그래프?질량분석기(LC-MS/MS)의 분석 조건

     가) 컬럼: C18 (2.1 mm × 100 mm, 2.7 μm) 또는 이와 동등한 것

     나) 이동상: A와 B 이동상의 농도 구배

      - A 이동상: 0.5% 포름산 함유한 물

      - B 이동상: 0.5% 포름산 함유한 아세토니트릴

     다) 농도구배조건

           ┌────┬──┬──┐

│시간(분)│A(%)│B(%)│

├────┼──┼──┤

│0.01    │80  │20  │

├────┼──┼──┤

│1.0     │80  │20  │

├────┼──┼──┤

│3.0     │0   │100 │

├────┼──┼──┤

│6.0     │0   │100 │

├────┼──┼──┤

│6.1     │80  │20  │

├────┼──┼──┤

│12.0    │80  │20  │

└────┴──┴──┘

     라) 이동상 유속: 0.2 mL/분

     마) 컬럼 온도: 40℃ 

     바) 주입량: 5 μL

     사) 이온화 방식: Electrospray ionization(positive)

     ○ LC-MS/MS의 MRM(Multiple Reaction Monitoring)

┌───────┬──────┬───┬───┬─────┬─────┬──────┐

│분석성분      │이온화      │머무름│분자량│선구이온  │생성이온  │충돌에너지  │

│(Compound)    │(Ionization │시간  │(MW)  │(Precursor│(Product  │(Collision  │

│              │mode)       │(분)  │      │ion, m/z) │ion, m/z) │energy, eV) │

├───────┼──────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│아미노피랄리드│+           │1.6   │207.0 │207       │161       │-21         │

│(Aminopyralid)│            │      │      │          ├─────┼──────┤

│              │            │      │      │          │189       │-13         │

│              │            │      │      │          ├─────┼──────┤

│              │            │      │      │          │134       │-27         │

└───────┴──────┴───┴───┴─────┴─────┴──────┘

       ※ 질량분석기의 분석조건 및 각 생성이온에 대한 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 선구이온 및 생성이온도 유효성이 확인된 경우 적용이 가능

    2) 정량한계

     0.01 mg/kg    

 사. 정성 및 정량시험

    1) 검량선 작성

     가) 표준용액을 농도별로 분석기기에 각각 주입하여 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

     나) 검량선의 적정성을 평가하는데 결정계수뿐만 아니라 각 농도에서의 잔차가 ± 20% 이하인지 확인하고, 잔차가 ± 20%를 넘는 경우 검량선을 작성할 때 가중치 적용(1/x) 방식을 활용할 수 있다.

    2) 정성 확인

     위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름시간(retention time)과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온(Product ion)간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율이 ± 20∼30% 이내에서 일치하여야 한다.  ※ 생성이온간 반응세기의 비율 허용 범위

       ┌─────────────┬──────┐

│이온간 반응세기의 비율(%) │허용범위(%) │

├─────────────┼──────┤

│〉50                      │±20        │

├─────────────┼──────┤

│〉20, ≤50                │±25        │

├─────────────┼──────┤

│〉10, ≤20                │±30        │

└─────────────┴──────┘

    3) 정량 확인

     정량시험은 단일 표준품으로 표준용액을 일정농도로 제조한 후 매질보정 검량선을 작성하여 정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 정량한다.    

    4) 대표품목의 매질보정검량법으로 스크리닝 분석 후 검출량이 허용기준 대비 80%를 초과한 시료에 대해서는 표준물질 첨가법(standard addition method)을 활용 할 수 있다.

9.7.12. 벤설탑(Bensultap), 카탑(Cartap), 티오사이클람(Thiocyclam)

 가. 적용범위

  본 분석법은 단미사료(곡류, 콩류, 섬유질류) 및 배합사료에 적용한다.

 나. 분석원리

  균질화한 시료를 2% 시스테인 염산용액, 3% 염화니켈 용액 및 암모니아수를 사용하여 네레이스톡신(Nereistoxin)으로 전환시켜 헥산 및 아세토니트릴로 추출한 후 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

 다. 장치

  액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)를 사용한다.

 라. 시약

    1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

    2) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

    3) 표준원액: 네레이스톡신(Nereistoxin oxalate) 표준품을 유기용매에 녹여 표준원액으로 사용한다

    4) 표준용액: 표준원액을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석하여 사용한다. 단, 벤설탑은 환산계수 2.9[벤설탑의 분자량(432)/네레이스톡신(Nereistoxin) 분자량(149)], 카탑은 환산계수 1.6[카탑의 분자량(237)/네레이스톡신(Nereistoxin) 분자량(149)], 티오사이클람은 환산계수 1.2[티오사이클람의 분자량(181)/네레이스톡신(Nereistoxin) 분자량(149)]을 곱하여 환산한다.

    5) 2% 시스테인(Cysteine) 용액 : 무수염산시스테인(L-cysteine-HCl, anhydrous) 20 g을 0.02 N 염산 용액 950 mL에 녹인 후 10 N 수산화나트륨 용액을 넣어 pH 4로 맞춘 다음 0.02 N 염산 용액을 넣어 1,000 mL가 되게 한다.

    6) 3% 염화니켈(nickel chloride) 용액 : 염화니켈 3 g을 물에 녹여 100 mL가 되게 한다.

    7) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

 마. 시험용액의 조제(추출 및 정제)

    1) 5 g의 균질화된 시료를 50 mL 용량의 원심분리관에 칭량하고, 2% 시스테인 용액 40 mL를 넣고 30분간 흔들어 섞어 추출한다. (단, 추출액의 pH가 4～5 범위를 벗어날 경우, 2 N 염산으로 조절한 후 30분간 다시 흔들어 섞어 추출한다.)

    2) 3,500 G에서 10분간 원심분리한 후 상층액 20 mL를 별도의 50 mL 원심분리관에 취한다. 여기에 3 % 염화니켈 용액과 진한 암모니아수를 각각 1.5 mL씩 첨가한 다음 5분간 흔들어 섞은 후 70 ℃에서 1시간 동안 흔들어 섞어 반응시킨다.

    3) 반응이 끝난 추출액을 냉각시킨 다음 10 N 황산 용액을 넣으면서 pH 5로 맞춘 후 헥산 10 mL를 넣어 흔들어 섞은 뒤, 원심분리(3,500 G, 10분)하여 상층액을 버린 다음 10 N 수산화나트륨 용액을 넣으면서 pH 9로 맞춘다.

    4) 여기에 염화나트륨 6 g과 아세토니트릴 20 mL를 가한 후 흔들어 섞고, 다시 원심분리(3,500 G, 10분) 후, 상층액(아세토니트릴 층)을 멤브레인 필터(0.45 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

     ○ LC-MS/MS용 매질보정 검량(matrix matched calibration) 용액의 조제               

    ┌────┬─────────────────────────────────┬─────┐

│구분    │검량선 작성용 표준물질                                            │시료액    │

│        ├──────┬──────┬──────┬─────┬──────┤          │

│        │수준 1      │수준 2      │수준 3      │수준 4    │수준 5      │          │

├────┼──────┼──────┼──────┼─────┼──────┤          │

│목적농도│2.5 μg/L   │5 μg/L     │10 μg/L    │25 μg/L  │50 μg/L    │          │

┝━━━━┿━━━━━━┿━━━━━━┿━━━━━━┿━━━━━┿━━━━━━┿━━━━━┥

│조제방법│STD         │STD         │STD         │STD       │STD         │시료추출액│

│        │50 μg/L    │100 μg/L   │200 μg/L   │500 μg/L │1000 μg/L  │1000 μL  │

│        │50 μL      │50 μL      │50 μL      │50 μL    │50 μL      │          │

│        ├──────┼──────┼──────┼─────┼──────┤          │

│        │무농약      │무농약      │무농약      │무농약    │무농약      │          │

│        │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액│시료추출액  │          │

│        │950 μL     │950 μL     │950 μL     │950 μL   │950 μL     │          │

└────┴──────┴──────┴──────┴─────┴──────┴─────┘

 바. 시험조작

    1) 액체크로마토그래프?질량분석기(LC-MS/MS)의 분석 조건

     가) 컬럼: HILIC(2.1 mm × 100 mm, 2.6 μm) 또는 이와 동등한 것

     나) 이동상: A와 B 이동상의 농도 구배

      - A 이동상: 0.1% 포름산 함유한 물

      - B 이동상: 0.1% 포름산 함유한 아세토니트릴

     다) 농도구배조건

      - 이동상 A와 B(90: 10)의 혼합액 

     라) 이동상 유속: 0.4 mL/분

     마) 컬럼 온도: 40℃ 

     바) 주입량: 10 μL

     사) 이온화 방식: Electrospray ionization(positive)

     ○ LC-MS/MS의 MRM(Multiple Reaction Monitoring)

┌───────┬──────┬───┬───┬─────┬─────┬──────┐

│분석성분      │이온화      │머무름│분자량│선구이온  │생성이온  │충돌에너지  │

│(Compound)    │(Ionization │시간  │(MW)  │(Precursor│(Product  │(Collision  │

│              │mode)       │(분)  │      │ion, m/z) │ion, m/z) │energy, eV) │

├───────┼──────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│네레이스톡신  │+           │5.8   │149.2 │150       │105       │-19         │

│(Nereistoxin) │            │      │      │          ├─────┼──────┤

│              │            │      │      │          │61        │-26         │

│              │            │      │      │          ├─────┼──────┤

│              │            │      │      │          │71        │-37         │

└───────┴──────┴───┴───┴─────┴─────┴──────┘

       ※ 질량분석기의 분석조건 및 각 생성이온에 대한 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 선구이온 및 생성이온도 유효성이 확인된 경우 적용이 가능

    2) 정량한계

     0.02 mg/kg    

 사. 정성 및 정량시험

    1) 검량선 작성

     가) 표준용액을 농도별로 분석기기에 각각 주입하여 얻어진 크로마토그램상의 각        피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

     나) 검량선의 적정성을 평가하는데 결정계수뿐만 아니라 각 농도에서의 잔차가      ± 20% 이하인지 확인하고, 잔차가 ± 20%를 넘는 경우 검량선을 작성할 때   가중치 적용(1/x) 방식을 활용할 수 있다.

    2) 정성 확인

     위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름시간(retention time)과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온(Product ion)간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율이 ± 20∼30% 이내에서 일치하여야 한다.  ※ 생성이온간 반응세기의 비율 허용 범위

       ┌─────────────┬──────┐

│이온간 반응세기의 비율(%) │허용범위(%) │

├─────────────┼──────┤

│〉50                      │±20        │

├─────────────┼──────┤

│〉20, ≤50                │±25        │

├─────────────┼──────┤

│〉10, ≤20                │±30        │

└─────────────┴──────┘

    3) 정량 확인

     정량시험은 단일 표준품으로 표준용액을 일정농도로 제조한 후 매질보정 검량선을 작성하여 정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 정량한다.    

    4) 대표품목의 매질보정검량법으로 스크리닝 분석 후 검출량이 허용기준 대비 80%를 초과한 시료에 대해서는 표준물질 첨가법(standard addition method)을 활용 할 수 있다.

10장. 동물용의약품

10.1. 정성분석

 가. Charm Ⅱ 분석법

  1) 추출용액 및 시약조제

   가) 정제시약 : 정제시약은 -15℃이하에서 저장, 6개월 정도 보관이 가능하다. 사용할 때 25℃에서 12시간 유효하다.

   나) 추출용액 : 추출용액은 buffer와 유기용매를 아래와 같이 혼합하여 만든다.

┌─────────────────┬────────────┬───┬────┐

│항생물질계열                      │buffer                  │용매  │혼합비율│

├─────────────────┼────────────┼───┼────┤

│ 베타-락탐(β-lactam)             │1% KH2PO4(pH 6.0)       │메탄올│1 : 1   │

├─────────────────┼────────────┼───┼────┤

│ 마크로라이드(Macrolide)          │1% KH2PO4(pH 8.0)       │메탄올│1 : 1   │

├─────────────────┼────────────┼───┼────┤

│ 설폰아미드(Sulfonamide)          │0.1M HCl                │메탄올│1 : 1   │

├─────────────────┼────────────┼───┼────┤

│ 아미노글리코시드 (Aminoglycoside)│18% NaCl or  20mM CaCl₂│H2O   │1 : 1   │

├─────────────────┼────────────┼───┼────┤

│ 테트라싸이클린 (Tetracycline)    │0.1M HCl                │메탄올│1 : 1   │

└─────────────────┴────────────┴───┴────┘

   다) Buffer M : Dried buffer는 4℃에서 저장하며 라벨에 표시된 대로 40℃의 물 100 mL를 넣어 덩어리지지 않도록 녹인다. 사용 전에 4℃로 냉장시킨다. buffer는 얼음 또는 4℃로 유지하면 3일간 유효하며 -15℃로 냉동시키면 3주간 저장할 수 있다.

   라) MSU Multi-antimicrobial Standard (stock) : Dried standard는 4℃에서 저장한다. 10 mL의 증류수를 넣고 잘 혼합하여 15분간 정치시킨 후 사용하고 얼음 또는 4℃에서 24시간 이내에 사용하여야 한다.

  2) 표준용액 조제

   가) Negative Control standard(음성대조) : 임의 조제한 무첨가 사료추출액으로 한다. 음성 대조시료액은 3개 준비한다.

   나) Positive Control standard(양성대조)

      Multi-antimicrobial standard를 지시된 대로 복원시킨 후 적당한 농도로 희석한다. 임의 조제한 무첨가 사료에 첨가하여 추출한 시료액을 사용한다. 이 과정을 6회 반복하여 양성대조 시료액 6개를 준비한다.

  3) 추출방법

   가) 위에서 지시된 대로 추출용액을 조제한다.

   나) 시료를 고운 가루에 가깝게 갈아준 뒤 10g을 칭량하여 50 mL conical tube에 넣는다.

   다) 추출용액 20 mL를 가하고 뚜껑을 씌워 잘 흔들어 준 후 15분간 sonication시켜 추출한다.

   라) 3000rpm에서 10분간 원심분리한 후 상등액을 No 5A 여과지로 여과한다.

   마) 여액을 Charm test로 분석한다.

  4) 각 계열별 분석방법

┌──────────┬─────────────────────────────────────┐

│계    열            │분    석    법                                                            │

├──────────┼─────────────────────────────────────┤

│① 베타-락탐        │공시험관에 green시약 첨가→DW 300 μL첨가, 10초간 혼합→5 mL buffer M     │

│ (β-lactam)        │첨가→시료추출액 200 μL첨가, 10초간 혼합→55℃ 2분간 반응→yellow시약 첨 │

│                    │가, 10초간 혼합→55℃ 2분간 반응→3분간 원심분리→상층액 제거→DW 300 μ  │

│                    │L첨가, 10초간 혼합→측정액 3 mL첨가→뚜껑덮고 10초간 혼합→측정           │

├──────────┼─────────────────────────────────────┤

│② 마이크로라이드   │공시험관에 white시약 첨가→DW 300 μL첨가, 10초간 혼합→5 mL buffer M첨   │

│  (Macrolide)       │가→시료추출액 200 μL첨가, 10초간 혼합→55℃ 2분간반응→green시약 첨가,  │

│                    │10초간 혼합→55℃ 2분간 반응→3분간 원심분리→상층액 제거→DW 300 μL첨   │

│                    │가, 10초간 혼합→측정액 3 mL첨가→뚜껑 덮고 10초간 혼합→측정             │

├──────────┼─────────────────────────────────────┤

│③ 설폰아미드       │공시험관에 white시약 첨가→DW 300 μL첨가, 10초간 혼합→5 mL buffer M     │

│  (Sulfonamide)     │첨가→시료추출액 200 μL첨가, 15초간 혼합→pink시약 첨가, 15초간 혼합→8  │

│                    │5℃ 3분간반응→3분간 원심분리→상층액 제거→DW 300 μL첨가, 10초간 혼합   │

│                    │→측정액 3 mL첨가→뚜떵 덮고 10초간 혼합→측정                            │

├──────────┼─────────────────────────────────────┤

│④ 아미노글리코시드 │공시험관에 white시약 첨가→DW 300 μL첨가, 10초간 혼합→5 mL buffer M     │

│(Aminoglycoside)    │첨가→시료추출액 200 μL첨가, 10초간 혼합→35℃ 2분간 반응→green시약 첨  │

│                    │가, 10초간 혼합→35℃ 2분간 반응→3분간 원심분리→상층액 제거→DW 300 μ  │

│                    │L첨가, 10초간 혼합→측정액 3 mL첨가→뚜껑 덮고 10초간 혼합→측정          │

├──────────┼─────────────────────────────────────┤

│⑤ 테트라싸이클린   │공시험관에 white시약 첨가→DW 300 μL첨가, 10초간 혼합→5 mL buffer M     │

│  (Tetracycline)    │첨가→시료추출액 200 μL첨가→orange시약 첨가, 15초간 혼합→35℃ 3분간 반 │

│                    │응→5분간 원심분리→상층액 제거→DW 300 μL첨가, 10초간 혼합→측정액 3    │

│                    │mL첨가→뚜껑 덮고 10초간 혼합→측정                                       │

└──────────┴─────────────────────────────────────┘

  5) Control point와 양성의 결정 : control point는 양성과 음성을 결정하는 표준이 되는 수치이다.

   가) 6개의 양성대조 시료액으로 부터 평균 CPM을 구한다.

   나) 3개의 음성대조 시료액으로 부터 평균 CPM을 구한다.(이 값은 control point계산에는 영향을 주지 않으나 양성평균 CPM과 비교할 수 있다)

   다) 평균양성 CPM에 15%를 더한 값이 control point이다.

   라) 만일 시료의 CPM이 control point보다 높다면 그 시료는 음성이다. 시료의 CPM이 control point보다 낮거나 같을 경우는 양성으로 판정하고, 각 계열 성분을 개별 정량분석법으로 재분석한다.

 나. 분석 가능한 항생물질 계열

┌────────────────┬────────────────────┐

│항생물질 계 열                  │성        분                            │

├────────────────┼────────────────────┤

│베타-락탐(β-lactam)            │ 페니실린(penicillin)                   │

├────────────────┼────────────────────┤

│마크로라이드                    │ 타이로신(tylosin),                     │

│(Macrolide)                     │ 스피라마이신(spiramycin),              │

│                                │ 린코마이신(lincomycin),                │

│                                │ 에리스로마이신(erythromycin)           │

├────────────────┼────────────────────┤

│설폰아미드                      │ 설파디메톡신(sulfadimethoxine),        │

│(Sulfonamide)                   │ 설파메타진(sulfamethazine),            │

│                                │ 설파퀴녹살린(sulfaquinoxaline),        │

│                                │ 설파치아졸(sulfathiazole)              │

├────────────────┼────────────────────┤

│아미노글리코시드(Aminoglycoside)│ 네오마이신(neomycin)                   │

├────────────────┼────────────────────┤

│테트라싸이클린 (Tetracycline)   │ 클로르테트라싸이클린(chlortetracycline)│

│                                │ 옥시테트라싸이클린(oxytetracycline)    │

│                                │ 테트라싸이클린(tetracycline)           │

└────────────────┴────────────────────┘

10.2. 정량분석

10.2.1. 베타-락탐계열

 가. 페니실린 지(Penicillin G)

  1) 시약

   가) B-6 buffer : 인산2수소칼륨 (KH2PO4) 7.0g / 500 mL 증류수 + 인산수소나트륨(Na2HPO4) 6.0g / 500 mL 증류수(pH : 6.0±0.1)

   나) STD조제 : 페니실린지(Penicillin G) 표준품을 메탄올(HPLC용)에 용해하여 사용

   다) 이동상 조제 : 0.01M 인산2수소칼륨 : 아세토니트릴 : 메탄올 = 70 : 19 : 11, pH 7.1

  2) 방법

    50 mL conical tube에 사료 1～5g을 취하여 매회 메탄올 25 mL, 10 mL씩 넣고 각각 20분씩 초음파처리 한 다음 3000rpm에서 10분간 원심분리하여 합한다. 상등액을 125 mL 농축용플라스크에 옮기고 n-부틸알콜 2 mL, 에탄올 20 mL를 넣고 35～40℃수욕조에서 농축한다. 잔여물에 B-6 완충액 10 mL를 넣고 다시 20분간 sonication한다. 0.45 μm 수용성 멤브레인 필터로 여과하여 HPLC로 측정한다.

  3) HPLC 조건 (예)

   가) Column - C18

   나) 파장- 225 nm

   다) 유속 - 1.0 mL/min

   라)이동상 - 0.01M 인산2수소칼륨(KH2PO4) : 아세토니트릴 : 메탄올 = 70 : 19 : 11, pH 7.1

10.2.2. 테트라싸이클린 계열

   클로르테트라싸이클린-염산(CTC-HCl), 옥시테트라싸이클린-염산(OTC- HCl), 옥시테트라싸이클린-4급암모늄(OTC-NH4)

 가. HPLC법

  1) 방법 A

   가) 시약제조

    (1) 추출용매 - 염산 : 아세톤 : 증류수 = 9 : 40 : 51

    (2) 표준액 - 2.0ppm, 4.0ppm, 6.0ppm

    (3) 이동상 - 증류수+메탄올(55+45) 1 L에 PICB-6 시약 1병을 혼합한 후 인산으로 pH를 2.5로 조정

   나) 방법

     사료 5 g을 갈색공전삼각플라스크에 정확히 넣는다. 추출용매 100 mL를 가한 후, 교반기로 30분간 용해시킨다. No. 5A 여과지로 여과(혹은 원심분리기 3000rpm에서 10분간 원심분리)한 후 여액을 0.45 μm 멤브레인필터로 재여과하여 기기분석용 시료액으로 한다.

   다) 기기분석 예(HPLC)

    (1) Column : C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm)

    (2) 파장 : 369 nm

    (3) 유속 : 1.0 mL/min

    (4) 이동상 : 상동   

  2) 방법 B

   가) 시약제조

    (1) 0.01M 옥살산용액 : 옥살산 1.26 g을 물 1 L에 녹인다.

    (2) 핵산, 벤젠 : 특급 이상

    (3) 메탄올성 옥살산 용액 : 0.01M이 되게 옥살산을 메탄올에 녹인다.

    (4) 표준액 조제 : TC, OTC, CTC 표준품을 메탄올에 용해한 후 다시 메탄올로 희석해서 사용

   나) 방법

      주사기의 아래를 filter paper disk 2장으로 막고 탈지면으로 다시 막은 후, 분쇄시료 0.5～1.0 g을 채우고 그 위에 다시 탈지면으로 막는다. C18 sep-pak cartridge를 연결하고 C18 sep-pak cartridge의 하단부를 막는다. 상부에 핵산 10 mL를 넣고 20분간 sonication 한 후 흘려준다. 벤젠 10 mL을 넣고 똑같이 조작하여 용출시킨다. 벤젠 용출액을 증발 농축시킨 후, 여기에 메탄올성 옥살산 용액 10 mL를 넣는다. 다시 증발 건조시켜 이동상 1 mL로 용해하여 HPLC 분석용 시료로 한다. 

   다) HPLC 조건예

    (1) Column - C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm) 

    (2) 파장 - 360 nm

    (3) 이동상 - 0.01M 옥살산용액 : 아세토니트릴 : 메탄올 = 7 : 2 : 1

 나. GC-MSD법(CTC, OTC, Penicillin G)

  1) 시약

   가) 0.01 M EDTA 2Na-Mcilvaine buffer(pH 4.0) : 0.1 M citric acid 272.5 mL+0.2 M Na2HPO4 227.5 mL를 잘 혼합하여 EDTA 73.2 g을 녹인다. 이 액을 1 L 메스실린더로 옮겨 10% 수산화나트륨이나 1 M 염산을 사용하여 pH 4.0으로 조정한 후 증류수로 1 L 눈금을 맞춘다.

   나) 핵산, 메탄올

   다) 0.01 M 메탄올성 옥살산 : HPLC법 참조

   라) 유도체 시약 : 에리스로마이신(Eythromycin), 스피라마이신(Spiramycin) 법 참조

  2) 방법

   가) 추출 

      사료 1～5g을 칭량하여 0.01M EDTA 2Na-Mcilvaine buffer 20 mL를 넣고 20분간씩 초음파처리 및 흔들어주기를 반복한 후 3000rpm에서 10분간 원심분리하여 상등액을 플라스크에 넣는다. 다시 10 mL를 넣고 똑같이 조작한 후 플라스크에 합하여 No.5A 여과지로 여과한다.

   나) 정제

      메탄올 10 mL, 물 20 mL로 conditioning 시켜 놓은 sep-pak C18 cartridge에 여액을 흘려준다. 여기에 0.01M 메탄올성 옥살산 용액 1 mL로 5회 용출시킨 후 용출액을 합해 완전히 증발 건조시킨다.

   다) 유도체화

      완전히 건조된 잔사에 MSHFB : TMS-Cl : TMS-imidazole(100 : 5 : 2, V : V : V) 혼합용액 50 μL를 넣고 80℃에서 15분간 가열시킨다.

  3) 기기 조건(GC-MSD) (예)

   가) Column : Fused silica capillary(cross-linked 5% phenylmethyl silicone, 17m×0.2 mm×0.33 μm)

   나) 주입부 온도 : 280℃

   다) Transfer line 온도 : 300℃

   라) Ion source 온도 : 200℃

   마) Injection mode : splitless

   바) Carrier gas : He (0.7 mL/min)

   사) Electron energy : 70eV

   아) Oven 온도 : 150℃ - 20℃/min - 270℃(3min) - 5℃/min - 300℃(6min)

   ※ 내부표준물질은 cholesteryl isobutyrate 500ppm 100 μL를 사용

10.2.3. 설폰아미드계(Sulfonamides)

10.2.3.1. 설파메타진(Sulfamethazine), 설파디메톡신(Sulfadimethoxine), 설파퀴녹사린(Sulfaquinoxaline)

 가. 시약의 조제

  1) 표준원액 : 설파메타진, 설파디메톡신, 설파퀴녹살린 각 10.0 mg을 메스플라스크에 달아 메탄올을 넣어 100 mL로 한다.(냉장보관)

  2) 표준원액을 이동상 용매로 희석하여 적절한 농도로 혼합, 희석한다.

  3) n-Hexane : HPLC용

  4) Dichloromethane : HPLC용

 나. 추출

  1) 10 mL 유리주사기속에 탈지면을 깔고 분석시료(오염방지를 위하여 유발에서 마쇄함) 0.5 g을 취한 후, 탈지면으로 시료위를 덮은 후 주사기아래에 Sep-pak C18을 끼우고 다시 Sep-pak 아래에 주사바늘을 끼우고 용액이 흐르지 않게 주사바늘을 고무마개에 끼운다.

  2) 핵산 8 mL를 가하여 초음파세척기에서 10분간 Sonication 후 핵산을 서서히 유출시키고 다시 디클로로메탄 8 mL를 가하여 10분간 Sonication 후 250 mL 증발플라스크에 용출시키고 다시 디클로로메탄 4 mL를 가하여 씻어주고 30～40℃ 회전식증발기에서 증발건고 후 이동상용매 5 mL를 넣고 초음파세척기에서 시료액으로 한다.

 다. 측정

  1) 측정기기 : 고속액체크로마토그래프

  2) 칼럼 : Nova-pak C18  또는 이와 동등한 것

  3) 칼럼 : 3.9 mm×15 cm

  4) 이동상용매 - 아세트니트릴 : 0.1% 인산이수소칼륨 (16:84)의 혼합액을 인산용액으로 pH 3.55되게 조절한다.

  5) 검출기파장 : 268 nm

  6) 유 속 : 1.0 mL/min

  7) 주입량 : 10 μL

 라. 계산

     측정된 크로마토그람의 피이크 높이 또는 피이크 면적을 구하고 검량선을 작성하여 계산한다.

10.2.3.2. 설파치아졸(Sulfathazole)

 가. 시약의 조제

  1) 표준원액 : 설파치아졸 10.0 mg을 메스플라스크에 달아 메탄올을 넣어 100 mL로 한다.(냉장보관)

  2) 표준원액을 이동상 용매로 희석하여 적절한 농도로 혼합, 희석한다.

  3) n-Hexane : HPLC용

  4) Dichloromethane : HPLC용

 나. 추출

    Sulfa계열 동물의약품 동시분석법과 동일

 다. 측정

  1) 측정기기: 고속액체크로마토그래프

  2) 칼럼 :  C18 (3.9 ×150 mm)

  3) 이동상용매 : 아세트니트릴 : 0.1% 인산2수소칼륨 (16:84)의 혼합액을 인산용액으로 pH 3.55되게 조절한다.

  4) 검출기파장 : 287 nm

  5) 유속 : 1.0 mL/min

  6) 주입량 : 10 μL

 라. 계산

    측정된 크로마토그람의 피이크 높이 또는 피이크 면적을 구하고 검량선을 작성하여 계산한다.

10.2.4. 설폰아미드계(Sulfonamides), 니트로퓨란계(Nitrofuranes), 에토파베이트(Ethopabate) 동시분석

10.2.4.1.설폰아미드계(Sulfonamides) : 설파메라진(Sulfamerazine), 설파메타진(Sulfamethazine), 설파치아졸(Sulfathiazole), 설파퀴녹살린(Sulfaquinoxaline), 설파디메톡신(Sulfadimethoxine), 설파다이아진(Sulfadiazine), 니트로퓨란(Nitrofuranes) : 퓨라졸리돈(Furazolidone), 나이카바진(Nicarbagine)

 가. 시약 조제

  1) 0.01N 초산암모늄 조제

  2) 산화알루미늄 - activated basic, 70～230mesh, 200g을 증류수 1 L에 교반하여 감압여과 하면서 메탄올 100 mL씩 3회 세척한 후 100℃에서 건조한다. 건조된 Al2O3을 증류수에 섞어서 사용한다.

  3) 설파메타진, 설파치아졸, 설파퀴녹살린, 설파디메톡신, 에토파베이트, 설파다이아진 1000ppm이 되도록 메탄올에 녹여 적정 농도로 희석하여 사용

  4) 설파메라진 표준품을 아세톤으로 1000ppm으로 녹여 희석하여 사용

  5) 퓨라졸리돈, 나이카바진을 1000ppm되게 디메틸포름아미드로 녹여 적정 농도로 희석하여 사용

 나. 방법

  1) 추출

    사료 1～5 g을 달아 아세톤 15 mL와 아세토니트릴 10 mL 넣고 20분간 초음파로 처리하는 동안 4～5회 흔들어 준다. 2500rpm에서 10분간 원심분리한 후 상등액을 취하고 아세톤 15 mL와 아세토니트릴 10 mL를 똑같이 조작하여 합한다. Whatman No.42 여과지로 여과한다. 이때 1-프로판올 15 mL를 더하고 아세톤 20 mL로 씻어준다. 이 액이 수욕조 45℃에서 약 15 mL정도 남을 때까지 농축한다. 잔여액에 아세톤 20 mL, 핵산 30 mL, 3% NaCl 30 mL를 더하여 10분간 진탕한다. 5분간 정치 후, 핵산층을 제거하고, 클로르포름 : 아세토니트릴(1:1)용액 30 mL씩 넣어 3회 추출한 다음 수욕조 45℃에서 농축한다. 이 잔액에 아세토니트릴 2 mL를 녹인 후 정제용 시액으로 한다.

  2) 정제

    산화 알루미늄 column을 충전하고(1.5 cm) 95% 아세토니트릴, 클로르포름 각 20 mL로 씻어주고 시액을 흘려준다. 아세토니트릴 20 mL, 95% 아세토니트릴 20 mL, 85% 아세토니트릴 20 mL, 1% NaOH 30 mL를 순차적으로 흘려주고 합한다. 최종적으로 클로르포름 10 mL를 흘려주어 더한다. 합한 용출액에 0.8 mL 인산을 넣고 30 mL의 클로르포름으로 3회 추출하고, 디클로로메탄 30 mL로 3회 추출하여 합한다. 무수황산나트륨 5 g으로 탈수시켜 수욕조 45℃에서 농축 후, 아세토니트릴 100 μL에 녹여 HPLC 시액으로 한다.

 다. HPLC 조건(예)

  1) Column : C18(4.6 × 250 mm, 5 μm) 

  2) Column 온도 : 40℃

  3) 유속 : 0.8 mL/min → 1.0 mL/min(15min)

  4) 이동상 : A-0.01M 초산암모늄, 0.0005M 헥산설포닉산 용액, 

             B-아세토니트릴

  5) 파장 : 247 nm, 269 nm, 350 nm

  6) 주입량 : 10 μL

  7) Gradient : A 90%  15분 70%  20분 20%

               B 10% → 30% → 80%

10.2.5. 마크로라이드 계열

10.2.5.1. 에리스로마이신(Erythromycin), 스피라마이신(Spiramycin)

 가. 시약

  1) 메탄올 : HPLC용

  2) n-핵산 : 잔류농약 분석용

  3) 수산화나트륨(Sodiumhydroxide, NaOH),

  4) 클로르포름 (Chloroform), 이산수소나트륨(Na2HPO4), 염산 - 특급

  5) 유도체시약 : [MSHFBA:TMS-Cl:TMS-imidazole(100:5:2, V:V:V)]

                 MSHFBA : N-Methyl-N-trimethylSiylHeptaFluoroButyrAmide - 특급

                 TMS - Cl(=TMCS) : TriMethylChloroSilane - 특급

                 TMS-imidazole(=TMSI) : TriMethylSilylImidazole - 특급

 나. 방법

  1) 추출

    사료 1～5 g을 칭량하여 20 mL 메탄올을 첨가하여 30분간 초음파처리 혹은 진탕한다. 2500～3000rpm에서 10분간 원심분리한 후 상등액을 취해 n-헥산 20 mL를 첨가한 후 잘 흔들어 정치시켜 메탄올층을 취한다. 1N-수산화나트륨 2 mL와 클로르포름 30 mL를 넣고 약 5분간 흔들어 준다. 클로르포름층을 취한 후 농축시킨 다음 다시 클로르포름 5 mL에 녹여 정제용 시액으로 한다.

  2) 정제

    클로르포름 30 mL를 흘려준 sep-pak silicagel column에 시료액을 흘려주고 클로르포름＋메탄올(2＋1)로 10 mL씩 3번 용출시킨다. 용출액을 농축시킨 후 0.3N 염산 15 mL를 첨가시켜 50℃에서 1시간동안 산가수분해한다. 다시 냉각시켜 5N 수산화나트륨을 가하여 염기성으로 만들고 20 mL 클로르포름으로 추출한 후, 클로르포름층을 모아 완전히 농축시킨다.

  3) 유도체화

    증발건조시킨 후 유도체시약 50 μL를 넣고 80℃에서 15분간 가열시킨다.

 다. 기기분석 예(GC-MSD)

  1) Column : Fused silica capillary (cross-linked 5% phenylmethyl silicone, 17m×0.2 mm×0.33 μm)

  2) 주입부 온도 : 280℃

  3) Transfer line 온도 : 300℃

  4) Ion source 온도 : 200℃

  5) Injection mode : auto sampler

  6) Carrier gas : He(0.7 mL/min)

  7) Electron energy : 70eV

  8) Oven 온도 : 200℃-10℃/min-300℃(3min)

   ※ 내부표준물질은 cholesteryl isobutyrate m/z 368 ion을 사용

10.2.6. 폴리에텔계열

10.2.6.1. 라살로시드 나트륨

 가. 시약 및 시액

  1) 표준원액 : 상용표준 라살로시드 나트륨 10mg을 정확히 칭량하여 100 mL 메스플라스크에 넣어서 메탄올을 가해서 용해, 표선을 맞추어 라살로시드 나트륨 표준용액을 제조한다. 사용할 때 메탄올로 희석하여 사용한다.

  2) 인산완충액 : 인산칼륨 2.72g을 물에 녹여 1l로 하고, 인산으로 pH를 3으로 조정한다.

  3) 기타시약 : HPLC 급

 나. 추출

    시료 2-10 g을 측량해서 100 mL 삼각플라스크에 넣고, 메탄올 100 mL를 첨가, 진탕 추출하고, 3000rpm에서 10분간 원심분리한다. 상층액을 0.22 μm 멤브레인 필터로 여과하고 그 여과액을 시료액으로 한다.

 다. 측정

  1) 측정기기 : 고속액체크로마토그래피(Agilent 1100 series)

  2) 검출기 : 형광검출기(FLD, 여기파장: 310 nm, 형광파장: 420 nm)

  3) 컬럼 : C18(4.6 × 150 mm, 5 μm)

  4) 이동상 : 메탄올-0.02M 인산완충액(pH3)=9-1

  5) 유속 : 1.0 mL/min

  6) 칼럼온도 : 40℃

10.2.6.2. 나라신, 살리노마이신, 모넨신나트륨, 샘두라마이신

 가. 시약 및 시액

  1) 표준원액 : 각각의 상용표준품 10 mg을 정확히 칭량하여 100 mL 메스플라스크에 넣어서 메탄올을 가해서 용해, 표선을 맞추어 표준용액으로 한다. 사용할 때 메탄올:증류수(9:1)로 희석하여 사용한다.

  2) 반응액 : 황산 10 mL를 메탄올 475 mL에 저으면서 조금씩 첨가한 후, 바닐린 15 g을 첨가해 녹인다.

  3) 기타시약 : HPLC 급

 나. 추출

    시료 10 g을 측량해서 100 mL 삼각플라스크에 넣고, 메탄올:증류수(9:1) 100 mL를 첨가, 20분간 진탕 추출하고, 3000rpm에서 10분간 원심분리한다. 상층액을 0.22 μm 멤브레인 필터로 여과하고 그 여과액을 시료액으로 한다.

 다. 기기분석 조건(예)

  1) 측정기기 : 고속액체크로마토그래피(Agilent 1100 series)

  2) 포스트칼럼유도체화기(Pickering520X system)

  3) 검출기 : 자외가시흡광광도 검출기(DAD, 520nm)

  4) 컬럼 : C18(4.6 × 150 mm, 5 μm)

  5) 이동상 : 메탄올-DW-초산 = 940-60-1

  6) 반응액 : 메탄올-황산-바닐린 = 950-20-30

  7) 반응조 온도 : 95℃

  8) 유속 : 이동상-0.6 mL/min, 반응액-0.6 mL/min

  9) 칼럼온도 : 40℃

10.2.7. 기타

10.2.7.1. 카바독스(Carbadox)

 가. 시약

  1) 아세토니트릴, 메탄올 : HPLC용, 헥산 : 잔류농약분석용

  2) 무수탄산칼륨, 디메틸포름아미드 : 특급

  3) 표준액 조제 : 100 mg 표준품을 소량 디메틸포름아미드에 녹인 후 메탄올을 가해 100 mL로 한다. 이액 적당량을 취하여 메탄올로 희석하여 사용한다.

 나. 방법

    사료 10 g을 취하여 아세토니트릴 100 mL를 가하여 20분간 가끔 흔들어 주면서 초음파처리 한다. 3000rpm에서 10분간 원심분리하여 플라스크에 상등액을 취한다. 다시 50 mL 아세토니트릴을 똑같이 조작하여 플라스크에 합한다. 여기에 무수탄산칼륨 20g을 가하여 흔들어 섞은 다음 1분간 정치 후 유리여과기(11G4)로 여과하여 분액여두에 받는다. 헥산 100 mL를 가하여 5분간 진탕한 후 정치하여 아세토니트릴층을 농축용 플라스크에 취해 수욕조 40℃에서 증발농축시킨다. 잔류물을 메탄올 2 mL에 녹여 0.45 μm 멤브레인필터로 여과 후 HPLC 시액으로 한다.

 다. HPLC 조건 (예)

  1) Column : Nucleosil 10 C18(4.6 × 250 mm) 혹은 이와 동등한 것

  2) 이동상 : [메탄올 : 물(50 : 50)]

  3) 파장: 380 nm

  4) 유속 : 1.0 mL/min

10.2.7.2. 암프로리움 (Amprolium)

 가. 흡광광도법

  1) 시약의 조제

   가) 추출용매 : 메탄올+증류수(2+1)

   나) 암프로리움표준액 : 암프로리움 25 mg을 정확히 칭량하여 100 mL의 갈색메스플라스크에 넣는다. 추출용매를 가하여 용해하고 동용매를 표선까지 가하여 암프로리움 표준용액을 조제한다.(이 액 1 mL는 암프로리움 0.25 mg을 함유한다) 사용시, 표준원액의 일정량을 추출용매로 정확히 희석하고, 1 mL중에 25 μg을 함유하는 암프로리움 표준액을 조제한다.

   다)염기성알루미나 : 칼럼크로마토그래프용 염기성 알루미나[입경 63～200 μm(230～70mesh) Aluminiumoxide active basic Art. 1076(Merck제)]를 100℃에서 3시간 건조한다.

   라) 수산화나트륨+메탄올액 : 수산화나트륨 용액(1.1W/V%) 15 mL에 메탄올을 가하여 200 mL로 한다.

   마) 나프탈린디올메탄올액 : 2.7-나프탈린디올 25 mg을 메탄올에 용해하여 1 L로 한다.

   바) 발색시액 : 나프탈린디올메탄올액 90 mL를 250 mL의 메스플라스크에 넣고 페리시안화칼륨용액(0.2%, W/V) 5 mL를 가하여 진탕하고, 시안화칼륨용액(1%, W/V) 5 mL를 가하여 진탕한 후, 30분간 정치하고, 수산화나트륨+메탄올액 100 mL를 가하여 진탕 후 글라스 필터(G2)로 여과한다. 이 발색시액은 사용시 조제하여 75분 이내에 사용한다.

  2) 정량

   가) 추출 : 분석시료 15.0g이하 (암프로리움 1.5～2.5 mg 상당량)을 칭량하여 250 mL의 분액여두에 넣고, 추출용매 100 mL를 가하여 1시간동안 진탕하고 추출하여 정치한 후, No.5A 여과지로 여과하여 칼럼크로마토그래프용 시료용액으로 한다.

    * 칼럼크로마토그래피 : 염기성 알루미나 5g을 칼럼관(내경 10 mm)에 건식충진하여, 정제용 칼럼을 조제한다. 시료용액 25 mL를 칼럼에 넣고, 처음의 유출액 5 mL를 버린 후의 유출액은 측정용 시료용액으로 한다.

   나) 측정 : 시료용액 4 mL를 공전원심침전관에 정확히 넣고, 발색시액 10 mL를 가하여 진탕하고, 20분간 정치한 후, 2,000rpm에서 3분간 원심분리하고, 즉시 상등액을 셀에 넣고 뚜껑을 씌워 공시험용액(추출용매 4 mL에 대하여 시료용액과 동일하게 조작한 액)을 대조액으로 하여 파장 530 nm에서 흡광도를 측정한다. 동시에, 암프로리움 표준액 4 mL를 공전원심침전관에 정확히 넣고, 시료원액의 경우와 동일한 조건에서 흡광도를 측정한다.

   다) 계산 : 측정된 흡광도로 시료중의 암프로리움량을 계산한다.

 나. 고속액체크로마토그래피법(1)

  1) 시약의 조제

   가) 추출용매 : 메탄올＋증류수(2＋1)

   나) 암프로리움 표준액 : 암프로리움 25 mg을 정확히 칭량하여 100 mL의 갈색메스플라스크에 넣는다. 추출용매를 가하여 용해하고 동용매를 표선까지 가하여 암프로리움 표준용액을 조제한다.(이 액 1 mL는 암프로리움 0.25 mg을 함유) 사용시에 표준원액의 일정량을 추출용매로 정확히 희석하고, 1 mL중에 2, 4, 6, 8, 10 μg을 함유하는 암프로리움 표준액을 조제한다.

   다) 중성알루미나 : 칼럼크로마토그래프용 중성알루미나[입경 63～200 μm(230～70mesh) : Aluminumoxide 90 active neutral Art.1077(Merck제)] 100℃에서 2시간 건조한다.

  2) 정량

   가) 추출 : 분석시료 3～10g(암프로리움 0.4～0.8 mg상당량)을 정확히 칭량하여 200 mL의 갈색공전삼각플라스크에 넣고, 추출용매 100 mL를 가하여 30분간 흔들면서 추출한다. 추출액을 공전원심침전관에 넣고, 2,000rpm에서 10분간 원심분리하고, 상등액을 칼럼크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

    * 칼럼크로마토그래피 : 중성알루미나 10g을 칼럼관(내경 10 mm)에 건식충진하고, 정제용 칼럼을 조제한다. 시료용액을 칼럼에 넣고, 처음의 유출액 5 mL를 버린 후, 유출액을 멤브레인필터(공경 0.5 μm 이하)로 여과하고, 고속액체크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

    * 고속액체크로마토그래피 : 시료용액 및 각 암프로리움 표준액 각 20 μL를 고속액체크로마토그래프에 주입하고, 크로마토그램을 측정한다.

  3) 측정조건 (HPLC)

   가) 검출기 : 자외흡광광도검출기 (측정파장 : 242 nm)

   나) 컬럼 : μ Bondapak C18(3.9 × 300 mm, 10 μm) 또는 이와 동응한 것

   다) 이동상 : HPLC용 아세토니트릴+구연산완충액＊ (11＋9)

   라) 유속 : 1.0 mL/min

    ＊구연산1수화물 19.2 g을 증류수에 용해하여 1 L로 하고, 수산화나트륨용액(40%, W/V) 으로 pH를 3.5로 조정한 후, 도데실황산나트륨 22.2 g을 가하여 용해한다.

  4) 계산 : 측정된 크로마토그램의 피크의 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시료중의 암프로리움량을 계산한다.

 다. 고속액체크로마토그래프법 (2)

  1) 시약의 조제

   가) 추출용매 : 메탄올＋증류수(2＋1)

   나) 암프로리움표준액 : 암프로리움 25 mg을 정확히 칭량하여 100 mL의 갈색메스플라스크에 넣는다. 추출용매를 가하여 용해하고 동용매를 표선까지 가하여 암프로리움 용액을 조제한다.(이 액 1 mL는 암프로리움 0.25 mg을 함유) 사용시, 표준원액의 일정량을 추출용매로 정확히 희석하고, 1 mL중에 0.1, 0.25, 0.5, 1.2 μg을 함유하는 암프로리움 표준액을 조제한다.

   다) 2-메틸-1-프로판올포화수 : 증류수 100 mL에 2-메틸-1-프로판올(형광분석용시약) 10 mL를 가하여 진탕하고, 하룻밤 방치한 후, 수층을 분리한다.

   라) 중성알루미나 : 칼럼크로마토용 중성알루미나[입경 63～200 μm(230～70mesh) : Aluminiumoxide 90 active neutral Art. 1077 (Merck제)] 120℃에서 2시간 건조한다.

  2) 정량

   가) 추출 : 분석시료 20.0g을 칭량하여 200 mL의 갈색공전삼각플라스크에 넣는다. 추출용매 100 mL를 가하여, 30분간 진탕하고 추출한다. 추출액을 갈색공전원심침전관에 넣고, 3,000rpm으로 5분간 원심분리하고, 상등액을 칼럼크로마토그래피에 제공할 시료용액으로 한다.

    * 칼럼크로마토그래피 : 중성알루미나 10g을 칼럼관(내경 10 mm)에 건식충전하고, 정제용칼럼을 조제한다. 시료용액을 칼럼에 넣고, 처음의 용출액 5 mL를 버린 후, 유출액을 형광화용 시료용액으로 한다.

   나) 형광화 : 시료용액 10 mL를 50 mL의 플라스크에 정확히 넣는다. 40～60℃의 수욕조에서 약 1 mL까지 감압 농축한 후, 질소가스로 건고한다. 잔류물을 10 mL의 눈금부착 공전 원심침전관에 증류수로 세척하면서, 증류수를 가하여 5 mL로 한 후, 메탄올 0.5 mL를 정확히 가한다. 그리고, 수산화나트륨용액(30%, W/V) 1 mL 및 페리시안화칼륨용액(2%, W/V) 0.5 mL를 가하여 혼합하고, 10분간 방치한다. 그 다음, 형광분석용 2-메틸-1-프로판올 1 mL를 가하여 5분간 흔든 후, 3,000rpm에서 3분간 원심분리하고, 2-메틸-1-프로판올층(상층)을 별개의 공전원심 침전관 넣고, 2-메틸-1-프로판올포화수 1 mL를 정확히 가하여, 약 5분간 진탕한 후, 3000rpm에서 5분간 원심분리한다. 2-메틸-1-프로판올층을 고속액체크로마토그래피용 시료 용액으로 한다. 동시에 각 암프로리움 표준액 1 mL를 각각 10 mL의 눈금 부착 공전원심 침전관에 넣고, 증류수를 가하여 5 mL로 한후, 시료용액과 동일하게 조작하고, 고속액체크로마토그래피용 각 암프로리움 표준액으로 한다.

    * 고속액체크로마토그래피 : 시료용액 및 각 암프로리움 표준액 각 20 μL를 고속액체크로마토그래프에 주입하고, 크로마토그램을 측정한다.

  3) 측정조건(HPLC)

   가) 검출기 : 형광검출기(여기파장 : 400 nm, 형광파장 : 440 nm)

   나) 컬럼 : YMC A-312(6 × 150 mm, 5 μm) 또는 이것과 동등한 것.

   다) 이동상 : HPLC용 인산완충액＊＋증류수＋아세트니트릴(3＋2＋1), 인산(1＋1,000)으로 pH를 4.0으로 조정한다.

   라) 유속 : 0.7 mL/min

   마) 칼럼온도 : 40℃

  ＊ 인산2수소나트륨용액(인산2수소나트륨2수화물 7.8g을 증류수에 용해하여 1 L로 한다)

     인산2수소칼륨용액(인산2수소칼륨 6.8g을 증류수에 용해하여 1 L로 한다) (2＋1)

  4) 계산 : 측정된 크로마토그람의 피크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시료중의 암프로리움량을 산출한다.

10.2.7.3. 오라퀸독스(Olaquindox)

 가. 고속액체크로마토그래프법(1)

  1) 시액의 조제

   가) 추출용매 : 메탄올＋증류수(7＋3)

   나) 오라퀸독스 표준액 : 오라퀸독스 50 mg을 정확히 칭량하여 250 mL 갈색메스플라스크에 넣는다. 추출용매를 가하여 용해하고, 동용매를 표선까지 가하여 오라퀸독스 표준액을 조제한다.(이 액 1 mL는 오라퀸독스 0.2 mg을 함유한다)

    * 사용시 표준원액의 일정량을 추출용매로 정확히 희석하고 1 mL중에 1, 2, 4, 6 μg을 함유하는 각 오라퀸독스 표준액을 조제한다.

   다) 중성알루미나 : 칼럼크로마토그래프용 중성알루미나[입경 63～200 μm(230～70 mesh) : Aluminiumoxide 90 active neutral Art. 1077(Merck제)]를 100℃에서 2시간 건조한다.

  2) 정량

   가) 추출 : 분석시료 10.0～20.0g을 칭량하여 200 mL의 갈색공전삼각플라스크에 넣는다. 추출용매 100 mL를 가하여 30분간 진탕하고 추출한다. 추출액을 갈색공전원심침전관에 넣고, 2,000rpm에서 5분간 원심분리하고, 상등액을 칼럼크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

    * 칼럼크로마토그래피 : 중성알루미나 5g을 칼럼관(내경 10 mm)에 건식충진 하고, 정제용 칼럼을 조제한다. 시료용액을 칼럼에 넣고, 처음의 유출액 3 mL를 버린 후, 유출액을 멤브레인필터(공경 0.5 μm이하)로 여과하고, 고속액체크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

    * 고속액체크로마토그래프 : 시료용액 및 오라퀸독스표준액 각 20 μL를 고속액체크로마토그래프에 주입하고, 크로마토그램을 측정한다.

  3) 측정조건(예)

   가) 검출기 : 자외선흡광광도검출기(측정파장 : 380 nm)

   나) 컬럼 : Shodex ODS pak F-411(4 × 150 mm, 5 μm) 또는 이것과 동등한 것

   다) 용리액 : HPLC용 증류수＋HPLC용 메탄올(7＋3)

   라) 유속 : 0.7 mL/min

  4) 계산 : 측정된크로마토그램의 피크높이 또는 면적을 구하는 검량선을 작성하고, 시료중의 오라퀸독스량을 산출한다.

 나. 고속액체크로마토그래프법(2)

  1) 시약의 조제

   가) 추출용매 : 메탄올＋증류수(7＋3)

   나) 오라퀸독스 표준액 : 오라퀸독 50 mg을 정확히 칭량하여 250 mL 갈색메스플라스크에 넣고, 용출용매를 가하여 용해하고, 동용매를 표선까지 가하여 오라퀸독스 표준원액을 조제한다.(이 액 1 mL는 오라퀸독스 0.2 mg을 함유) 사용시, 표준원액의 일정량을 추출용매로 정확히 희석하고, 1 mL중에 0.05, 0.1, 0.2, 0.4 μg을 함유하는 각 오라퀸 표준액을 조제한다.

   다) 중성알루미나 : 칼럼크로마토그래프용 중성알루미나[입경 63～200 μm(230～70 mesh) : Aluminiumoxide 90 active neutral Art. 1077]를 100℃로 2시간 건조한다.

  2) 정량

   가) 추출 : 분석시료 10～20g을 칭량하여 200 mL의 갈색삼각공전플라스크에 넣는다. 추출용매 100 mL를 가하여 30분간 진탕하고 추출한다. 갈색공전원심침전관에 넣고, 2000rpm에서 5분간 원심분리하고 상등액을 칼럼크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

    * 칼럼크로마토그래피 : 중성알루미나 5g을 칼럼관(내경 10 mm)에 건식충진하고, 정제용칼럼을 조제한다. 시료용액을 칼럼에 넣고, 처음의 유출액 3 mL를 버린 후, 유출액 2 mL를 멤브레인필터(공경 0.5 mm이하)로 여과하고, 고속액체크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

    * 고속액체크로마토그래피 : 시료용액 및 오라퀸독스표준액 각 20 μL를 고속액체크로마토그래프에 주입하고, 크로마토그램을 측정한다.

  3) 측정조건 (예)

   가) 검출기 : 자외흡광광도검출기(측정파장 : 380 nm)

   나) 컬럼 : Shodex ODS pak F-411(4 × 50 mm, 5 μm)또는 이것과 동등한 것

   다) 용리액 : HPLC용 증류수＋메탄올(7＋3)

   라) 유속 : 0.7 mL/min

  4) 계산 : 측정된 크로마토그람의 피크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시료중의 오라퀸독스량을 산출한다.

10.2.7.4. 크로피돌(Clopidol)

 가. 시약의 조제

  1) 추출용매 : 메탄올+암모니아수(24+1)

  2) 크로피돌 표준액 : 크로피돌 0.1g을 정확히 칭량하여 100 mL의 갈색메스플라스크에 넣는다. 추출용매를 가하여 용해하고, 동용매를 표선까지 가하여 크로피돌 표준원액을 조제한다.(이 액 1 mL는 크로피돌 1 mg을 함유한다) 사용시 표준원액의 일정량을 메탄올로 정확히 희석하고, 1 mL 중에 10, 15, 20, 25 μg을 함유하는 각 크로피돌 표준액을 조제한다.

 나. 정량

  1) 추출 : 분석시료 10.0～20.0g(크로피돌 1.6～2.5 mg상당량)을 칭량하여 200 mL의 갈색공전삼각플라스크에 넣는다. 추출용매 100 mL를 가하여 10분간 진탕하고 추출한다. 상등액을 공전원심침전관에 넣고 3,000rpm에서 10분간 원심분리하고 상등액을 다시 멤브레인필터(공경 0.5 μm이하)로 여과하여 고속액체크로마토그래프용 시료용액으로 한다.

   * 고속액체크로마토그래피 : 시료용액 및 크로피돌 표준액 각 20 μL를 고속액체크로마토그래프에 주입하고 크로마토그람을 측정한다.

 다. 측정조건(예)

  1) 검출기 : 자외선흡광광도검출기(측정파장 : 260 nm)

  2) 컬럼 : Lichrosorb NH2(4 × 150 mm,10 μm)

  3) 이동상 : HPLC용 아세토니트릴+증류수(49+1)

  4) 유 량 : 2 mL/min

 라. 계산 : 측정된 크로마토그램의 피크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시료중의 크로피돌량을 산출한다.

10.2.7.5. 데콕퀴네이트(Decoquinate)

 가. 형광광도법

  1) 시약의 조제

   가)추출용매 : 염화칼슘 10 g을 메탄올에 용해하여 1 L로 한다.

   나)데콕퀴네이트 표준액 : 데콕퀴네이트 30 mg을 정확히 칭량하여 100 mL의 갈색메스플라스크에 넣는다. 추출용매를 가하여 용해하고, 동용매를 표선까지 가하여 데콕퀴네이트 표준원액을 조제한다.(이 액 1 mL는 데콕퀴네이트 0.3 mg을 함유) 사용시, 표준원액의 일정량을 추출용매로 정확히 희석하고 1 mL중에 6 μg을 함유하는 데콕퀴네이트 표준액을 조제한다.

   다)규산마그네슘 : 합성규산마그네슘[입경 74～149 μm(200～100 mesh)]을 120℃에서 3시간 건조한다.

  2) 정량

   가) 추출 : 분석시료 10.0 g을 칭량하여 100 mL의 공전삼각플라스크에 넣는다. 추출용매 50 mL를 가하여, 20분간 진탕하고 추출한 후, 공전원심침전관에 넣고 2,000rpm에서 5분간 원심분리하고, 상등액을 추출액으로 한다. 추출액 10 mL 및 클로르포름 10 mL를 각각 200 mL의 분액여두에 정확히 넣는다. 염산(1+9) 100 mL를 가하여 진탕한 후, 15분간 정치한 후 클로르포름(하층)을 공전시험관에 넣고, 적당량의 황산나트륨(무수)을 가하여 탈수하고, 칼럼크로마토그래프용 시료용액으로 한다. 동시에 데콕퀴네이트 표준액 10 mL를 200 mL의 분액여두에 정확히 넣고, 추출액의 경우와 동일하게 조작하여 칼럼크로마토그래피용 표준액으로 한다.

    * 칼럼크로마토그래피 : 규산마그네슘 각 0.5 g을 3본의 칼럼관(내경 7 mm)에 각각 건식충진하고 황산나트륨(무수) 각 0.2 g을 충진하여 칼럼을 조제한다. 시료용액 5 mL를 제 1의 칼럼에 정확히 넣고, 표준액 5 mL를 제 2의 칼럼에 정확히 넣은 후 클로르포름 5 mL를 제 3의 칼럼에 넣는다. 칼럼의 액면이 충진제의 상면에서 3 mm의 높이가 될 때까지 유출시킨 후 각각의 칼럼에 메탄올 각 10 mL를 가하여 동일하게 유출시킨다. 20 mL의 시험관을 칼럼의 아래에 두고 제1 및 제2의 칼럼에 추출용매 각 15 mL를 가하여 데콕퀴네이트를 용출시켜 측정용 시료용액 및 표준액으로 한다. 동시에 제3의 칼럼에 대하여 동일하게  조작하여 공시험 액으로 한다.

   나) 측정 : 시료용액, 표준액 및 공시험액에 대해서 여기파장 330 nm 및 형광파장 390 nm에서 형광광도를 측정한다.

   다) 계산 : 측정된 형광광도에서 시료중의 데콕퀴네이트량을 산출한다.

 나. 고속액체크로마토그래프법(1)

  1) 시약의 조제

   가) 추출용매 : 메탄올 + 클로르포름(9+1)

   나) 데콕퀴네이트 표준액 : 데콕퀴네이트 30 mg을 정확히 칭량하여 100 mL의 갈색메스플라스크에 넣는다. 추출용매를 가하여 용해하고, 동용매를 표선까지 가하여 데콕퀴네이트 표준원액을 조제한다.(이 액 1 mL는 데콕퀴네이트 0.3 mg을 함유) 사용시 표준원액의 일정량을 추출용매로 정확히 희석하고 1 mL에 1, 2, 4, 6 μg을 함유하는 데콕퀴네이트 표준액을 조제한다.

  2) 정량 

   가) 추출 : 분석시료 5.0～20.0 g(데콕퀴네이트 0.2～0.8 mg상당량)을 칭량하여 200 mL의 공전삼각플라스크에 넣는다. 추출용매 100 mL를 가한다. 40분간 진탕하고 추출한 후 공전원심침전관에 넣고 3,000rpm에서 5분간 원심분리하고, 상등액을 멤브레인필터(공경 0.5 μm이하)로 여과하여, 고속액체크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

   * 고속액체크로마토그래피 : 시료용액 및 각 데콕퀴네이트 표준액 각 20 μL를 고속액체크로마토그래프에 주입하고, 크로마토그램을 측정한다.

  3) 측정조건 (예)

   가) 검출기 : 형광검출기(여기파장: 326 nm, 형광파장 : 384 nm)

   나) 컬럼 :  C18 (3.9 × 300 mm, 10 μm)

   다) 이동상 : HPLC용 염화칼슘 0.1g을 메탄올+증류수(9+1)에 용해하여 1 L로 한다.

   라) 유량 : 1.0 mL/min

  4) 계산 : 측정된 크로마토그람의 피크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고 시료 중의 데콕퀴네이트량을 산출한다.

 다. 고속액체크로마토그래프법(2)

  1) 시약의 조제

   가) 염화칼슘+메탄올액 : 염화칼슘 10g을 메탄올에 용해하여 1 L로 한다.

   나) 데콕퀴네이트 표준액 : 데콕퀴네이트 40 mg을 정확히 칭량하여 100 mL의 갈색메스플라스크에 넣는다. 염화칼슘＋메탄올액을 가하여 용해하고, 동용매를 표선까지 가하여 데콕퀴네이트 표준원액을 조제한다.(이 액 1 mL는 데콕퀴네이트 0.4 mg을 함유한다) 사용시 표준원액의 일정량을 메탄올로 정확히 희석하고 1 mL중에 0.025, 0.05, 0.2, 0.3, 0.4 μg을 함유하는 각 데콕퀴네이트 표준액을 조제한다.

  2)  정량

   가) 추출 : 분석시료 50g을 칭량하여 300 mL 공전삼각플라스크에 넣는다. 클로르포름 200 mL를 가하여 20분간 진탕하고 추출한다. 추출액을 적당량의 황산나트륨(무수)을 넣은 NO.2S 분액여과지(동양여과지)로 여과하고 카트리지칼럼크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

    * 카트리지칼럼크로마토그래피 : 실리카겔카트리지[SEP-PAK silica cartridge (Waters제)]를 주사기에 연결하고 클로르포름 10 mL로 세정한다. 시료용액 10 mL를 주사기에 정확히 넣고 유속 2～5 mL/min로 압주하여 유출시킨다. 용기를 클로르포름 10 mL로 세정하고, 동일하게 조작한다. 10 mL의 갈색메스플라스크를 실리카겔카트리지의 아래에 두고, 데콕퀴네이트를 메탄올 8 mL로 유속 2～5 mL/min로 압주하여 용출시킨다. 메탄올을 갈색메스플라스크의 표선까지 가하고 멤브레인필터(공경 0.5 μm이하)로 여과하여 고속액체크로마토그래프용 시료용액으로 한다.

    * 고속액체크로마토그래피 : 시료용액 및 각 데콕퀴네이트 표준액 각 20 μL를 고속액체크로마토그래프에 주입하고 크로마토그램을 측정한다.

  3) 측정조건 (예)

   가) 검출기 : 형광검출기(여기파장 : 326 nm, 형광파장 : 384 nm)

   나) 컬럼 : Wakpsil 5 C18 Hg(4.6 × 250 mm, 5 μm)또는 이것과 동등한 것.

   다) 용리액 : HPLC용 염화칼슘 1.0g을 메탄올＋증류수(4＋1)에 용해하여 1 L로 한다.

   라) 유속 : 1.0 mL/min

   마) 칼럼조 온도 : 40℃

  4) 계산 : 측정된 크로마토그램의 피크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시료중의 데콕퀴네이트량을 산출한다.

10.2.7.6. 염산로베니딘(Robenidine)

 가. 시약의 조제

  1) 추출용매 : 염산 8.3 mL에 아세톤을 가하여 1 L로 한다.(사용시 조제한다)

  2) 염산로베니딘표준액 : 염산로베니딘 0.1g을 정확히 칭량하여 250 mL의 갈색 메스플라스크에 넣는다. 적당량의 메탄올을 가하여, 50℃의 수욕조에서 가열하면서 용해하여, 방냉한 후, 동용매를 표선까지 가하여 염산로베니딘 표준원액을 조제한다.(이 액 1 mL는 염산로베니딘 0.4 mg을 함유) 사용시 표준원액의 일정량을 추출용매로 정확히 희석하여 1 mL에 2, 4, 8, 16 μg을 함유하는 각 염산로베니딘 표준액을 조제한다.

  3) 세정용매 : 2-메톡시에탄올 100 mL에 아세토니트릴을 가하여 1 L로 한다.

  4) 용출용매 : 암모니아수 40 mL에 세정용매를 가하여 1 L로 한다.

  5) 트리클로로초산용액 : 트리클로로초산 2g에 세정용매 4 mL를 가하여 진탕한다.

  6) 수산화칼륨시액 : 수산화칼륨 3g에 에탄올 100 mL를 가하여 진탕하고 상등액을 사용한다.

  7) 염기성알루미나 : 칼럼크로마토그래프용 염기성알루미나[입경 53～210 μm(270～65mesh): Alumina Welm B Art. 1. 2069(Welm parma제)]를 105℃에서 3시간 건조한다. 사용시 조제한다.

 나. 정량

  1) 추출 : 분석시료 50g을 칭량하여 1 L의 분액여두에 넣는다. 추출용매 400 mL를 가하여, 1시간 진탕하여 추출하고, 5분간 정치한 후, NO.5A 여과지로 여과하고, 칼럼크로마토그래프용 시료용액으로 한다.

    * 칼럼크로마토그래피 : 염기성 알루미나 13g을 칼럼관(내경 13 mm)에 건식충진하고 칼럼을 조제한다. 시료용액 5 mL를 칼럼에 넣고 액면이 충진제의 상면에서 3 mm높이가 될 때까지 유출시킨 후, 세정용매 10 mL 및 5 mL를 순차적으로 칼럼에 가하여 동일하게 유출시킨다. 50 mL의 갈색메스플라스크를 칼럼의 아래에 놓고 용출용매 20 mL를 칼럼에 정확히 가하여, 액면이 충진제의 상면에서 3 mm의 높이에 도달할 때까지 유출시킨 후, 용출용매 10 mL를 칼럼에 정확히 가하여 염산로베니딘을 용출시켜 시료용액으로 한다.

  2) 측정 : 시료용액을 진탕한 후, 수산화칼륨시액 1 mL를 가하여 진탕하고, 즉시 이 액을 셀에 넣고 뚜껑을 씌워, 용출용매를 대조액으로 하여 파장 440 nm 및 550 nm의 흡광도를 측정하고, 440 nm의 흡광도에서 550 nm의 흡광도를 빼서 흡광도(A)를 구한다. 다음에 이 셀에 트리클로로초산용액 3방울을 가하여 뚜껑을 씌워서 흔들어 퇴색시킨 후 동일하게 조작하여 흡광도(B)를 구하고, 흡광도(A)에서 흡광도(B)를 빼서 흡광도(C)를 구한다. 동시에 각 염산로베니딘 표중액 5 mL를 정확히 추출액의 경우와 동일한 조건에서 조작하여 흡광도(D)를 구한다.

 다. 계산

    측정된 흡광도(D)에서 검량선을 작성하고 시료중의 염산로베니딘 량을 산출한다.

10.2.7.7. 구연산모란텔(Morantelcitrate)

 가. 고속액체크로마토그래피법(1)

  1) 시약의 조제

   가) 구연산모란텔 표준액 : 구연산모란텔 25 mg을 정확히 칭량하여 250 mL의 갈색메스플라스크에 넣는다. 메탄올을 가하여 용해하고, 동용매를 표선까지 가하여 구연산모란텔 표준원액을 조제한다.(이 액 1 mL는 구연산모란텔 0.1 mg을 함유한다) 사용시 표준원액의 일정량을 메탄올로 정확히 희석하고, 1 mL중에 0.05, 0.1, 0.25, 0.5 μg을 함유하는 각 구연산 모란텔 표준액을 조제한다.

   나)염기성 알루미나 : 칼럼크로마토그래프용 염기성 알루미나[입경 63～200 μm(230～70mesh) : Aluminiumoxide 90 active basic Art. 1076 (Merck제)]를 130℃에서 2시간 건조한다.

  2) 정량

   가) 추출 : 분석시료 10.0g을 칭량하여 200 mL의 갈색공전플라스크에 넣는다. 메탄올 100 mL를 가하여 30분간 진탕하고 추출한다. 추출액을 갈색공전원심침전관에 넣고, 3,000rpm에서 5분간 원심분리하고, 상등액을 칼럼크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

    * 칼럼크로마토그래피 : 염기성알루미나 5g을 칼럼관(내경 100 mm)에 건식충진하고 정제용 칼럼을 조제한다. 시료용액을 칼럼에 넣고, 처음의 유출액 5 mL를 버린 후, 유출액 5 mL를 구연산모란텔의 흡착성이 없는 멤브레인필터(공경 0.5 μm이하)로 여과하고, 고속액체크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

    * 고속액체크로마토그래피 : 시료용액 및 각 구연산모란텔 표준액 각 20 μL를 고속액체크로마토그래프에 주입하고, 크로마토그램을 측정한다.

  3) 측정조건 (예)

   가) 검출기 : 자외선흡광광도검출기(측정파장 : 300 nm)

   나) 칼럼 : Shodex C18-5B(4.6 × 250 mm, 5 μm)또는 이것과 동등한 것.

   다) 용리액 : HPLC용 인산완충액＋아세토니트릴(4＋1)

   라) 유속 : 1.0 mL/min

   마) 칼럼조온도 : 40℃

  4) 계산 : 측정된 크로마토그램의 피크면적을 구해 검량선을 작성하고, 시료중의 구연산모란텔량을 산출한다.

 나. 고속액체크로마토그래프법(2)

  1) 시약의 조제

   가) 구연산모란텔표준액 : 구연산모란텔 25 mg을 정확히 칭량하여 250 mL의 갈색메스플라스크에 넣는다. 메탄올을 가하여 용해하고, 동용매를 표선까지 가하여 구연산모란텔표준원액을 조제한다.(이 액 1 mL는 구연산모란텔 0.1 mg을 함유) 사용시, 표준원액의 일정량을 메탄올로 정확히 희석하고 1 mL중에 0.05, 0.1, 0.25, 0.5 μg을 함유하는 각 구연산 모란텔표준액을 조제한다.

   나)염기성 알루미나 : 칼럼크로마토그래프용 염기성알루미나[입경 63～200 μm(230～70mesh): Aluminiumoxide 90 active basic Art. 1076(Merck제)]를 130℃에서 2시간 건조한다.

   다) 탄산완충액 : 탄산수소나트륨 7.6 g 및 탄산나트륨 0.5g을 증류수에 용해하여 1 L로 하고 수산화나트륨 용액(4.2%, W/V)으로 pH를 9.0으로 조정한다.

  2) 정량

   가) 추출 : 분석시료 10.0 g을 칭량하여 200 mL의 갈색공전삼각플라스크에 넣는다. 메탄올 100 mL를 가하여 30분간 진탕하고 추출한다. 추출액을 갈색공전원심침전관에 넣고, 3,000rpm에서 5분간 원심분리하고, 상등액을 칼럼크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

    * 칼럼크로마토그래피 : 염기성알루미나 5 g을 칼럼관(내경 10 mm)에 건식 충진하고 정제용 칼럼을 조제한다. 시료용액을 칼럼에 넣고 처음의 5 mL를 버린 후 유출액 10 mL를 50 mL의 증발플라스크에 정확히 넣고 50℃의 수욕조에서 감압 건고한다. 잔류물을 메탄올＋탄산완충액(1＋1) 5 mL에 용해하고, 카트리지칼럼크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

    * 카트리지칼럼크로마토그래피 : C18 카트리지[SEP-PAK C18 CARTRIDGE (Waters제)]를 주사통에 연결하고 메탄올 10 mL, 증류수 10 mL 및 탄산완충액 10 mL로 순차적으로 세정한다. 시료용액을 주사통에 넣고 유속 약 2 mL/min로 압주하여 유출시킨 후 용기를 메탄올+탄산완충액(1+1) 5 mL로 세정하고, 동일하게 조작한다. 50 mL의 증발플라스크를 C18 카트리지의 아래에 놓고 구연산모란텔을 메탄올＋초산(200＋1) 10 mL를 유속 약 2 mL/min로 압주하여 용출시킨다. 용출액을 50℃의 수욕조에서 대부분 건고될 때까지 감압농축한 후 질소가스로 건고한다. 메탄올 2 mL를 증발플라스크에 정확히 가하여 잔류물을 용해한 후 구연산모란텔의 흡착성이 없는 멤브레인필터(공경 0.5 μm이하)로 여과하여 고속액체크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

    * 고속액체크로마토그래피 : 시료용액 및 각 구연산모란텔 표준액 각 20 μL를 액체크로마토그래프에 주입하고, 크로마토그램을 측정한다.

  3) 계산 : 측정된 크로마토그램의 피크면적을 구해 검량선을 작성하고, 시료중의 구연산모란텔량을 산출한다.

10.2.7.8. 할로푸지논 (Halofuginone)

 가. 고속액체크로마토그래프법(1)

  1) 시약의 조제

    취화수소산할로푸지논 표준액 : 취화수소산할로푸지논 20 mg을 정확히 칭량하여 200 mL의 메스플라스크에 넣는다. 염산(1＋100)을 가하여 용해하고 표선까지 동액을 가하여 취화수소산할로푸지논 표준액을 조제한다.(이 액 1 mL는 취화수소산할로푸지논으로써 0.1 mg을 함유한다) 사용시 표준원액의 일정량을 염산(1＋100)으로 정확히 희석하여 1 mL중에 0.4, 0.6, 0.8, 1, 1.2 μg을 함유하는 각 취화수소산할로푸지논 표준액을 조제한다.

  2) 정량

   가) 추출 : 분석시료 5g을 칭량하여 50 mL의 공전원심침전관에 넣는다. 초산에틸 20 mL 및 탄산나트륨(1%, W/V)용액 10 mL를 가하여 15분간 진탕한 후 3,000rpm에서 10분간 원심분리하고 초산에틸층(상층)을 300 mL의 분액여두에 넣는다. 잔류물에 초산에틸 20 mL를 가하여 동일한 조작을 하고 초산에틸층을 그 분액여두에 가한다. 그리고 이 조작을 4회 반복하여 초산에틸층을 그 분액여두에 가하여 정제용 시료용액으로 한다.

   나) 정제 : 시료용액에 염산(1＋100) 10 mL를 가하여 5분간 진탕하고 정치한 후 염산층(하층)을 200 mL의 플라스크에 넣는다. 잔류액에 염산(1+100) 10 mL를 가하여 동일하게 조작하고, 염산층을 증발플라스크에 가하여 50℃의 수욕조에서 5 mL가 될 때까지 감압 농축한 후, 20 mL의 메스플라스크에 넣고 소량의 염산(1+100)으로 용기를 세정하고, 세정액을 그 메스플라스크에 가하여 표선까지 동액을 가하고 멤브레인필터(공경 0.5 μm이하)로 여과하고 고속액체크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

    * 고속액체크로마토그래피 : 시료용액 및 각 취화수소산할로푸지논 표준액 각 20 μL를 고속액체크로마토그래프에 주입하고, 크로마토그램을 측정한다.

  3) 측정조건 (예)

   가) 검출기 : 자외선흡광광도검출기(측정파장 : 243 nm)

   나) 칼럼 : Wakosil 5 C18-200(4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이것과 동등한 것. 

   다) 칼럼온도 : 40℃

   라) 용리액 : HPLC용 초산완충액 + 메탄올(11+9)

   마) 유속 : 1.0 mL/min

  4) 계산 : 측정된 크로마토그램의 피크높이 또는 면적을 구하고 다음 식으로 시료 중의 할로푸지논폴리스틸렌설폰산칼슘량을 산출한다.

    * 시료중의 할로푸지논폴리스틸렌설폰산칼슘량(g/t)= A×20/8.5

A : 검량선에서 구한 취화수소산할로푸지논의 중량(ng)

 나. 고속액체크로마토그래프법(2)

  1) 시약의 조제

   가) 취화수소산할로푸지논 표준액 : 취화수소산할로푸지논 20 mg을 정확히 칭량하여 200 mL 메스플라스크에 넣는다. 염산(1＋100)을 가하여 용해하고, 표선까지 동액을 가하여, 취화수소산할로푸지논 표준액을 조제한다.(이 액 1 mL는 취화수소산할로푸지논 0.1 mg을 함유한다) 사용시, 표준원액의 일정량을 염산(1＋100)으로 정확히 희석하고 1 mL중에 0.1, 0.2, 0.4, 0.8 μg을 함유하는 각 취화수소산할로푸지논 표준액을 조제한다.

   나) 초산완충액 : 초산암모니움 4.9g 및 초산 7.5 mL를 증류수로 용해하여 1 L로 하고, 초산으로 pH를 4.3으로 조정한다.

  2) 정량

   가) 추출 : 분석시료 5g을 정확히 칭량하여 50 mL의 공전원심침전관에 넣는다. 초산에틸 20 mL 및 탄산나트륨(1%, W/V)용액 10 mL를 가하여 15분간 진탕 후, 3,000rpm에서 10분간 원심분리하고 초산에틸층(상층)을 300 mL의 분액여두에 넣는다. 잔류물에 초산에틸 20 mL를 가하여 동일한 조작을 하고 초산에틸층을 그 분액여두에 가한다. 그리고 이 조작을 4회 반복하여 초산에틸층을 분액여두에 가하여 정제용 시료용액으로 한다.

   나) 정제 : 시료용액을 넣은 분액여두에 염산용액(1＋100) 10 mL를 가하고, 5분간 진탕하고 정치한 후 수층(하층)을 100 mL 증발플라스크에 넣는다. 염산용액(1＋100) 10 mL를 분액여두에 가하고 동일하게 조작한다. 수층을 50℃의 수욕조에서 5 mL정도가 될 때까지 감압 농축하고 카트리지 칼럼크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

    * 카트리지칼럼크로마토그래피 : C18 카트리지[메가본드엘드 C18카트리지, 충진량 1g, 리자바 용량 6 mL(Varian Associates제)]를 메탄올 10 mL 및 증류수 10 mL로 순차적으로 세정한다. 시료용액을 칼럼에 넣고, 액면이 충진제의 상면에서 1 mm의 높이가 될 때까지 유출시킨 후, 증류수 5 mL로 용기를 2회 세정하고 동일하게 조작한다. 칼럼을 증류수 5 mL로 1회, 메탄올＋증류수(3＋2) 각 5 mL로 2회 및 염산(1＋100) 각 5 mL로 4회 세정한다. 50 mL의 증발플라스크를 칼럼의 아래에 두고, 할로푸지논을 메탄올＋클로르포름(9＋1) 10 mL로 용출시킨다. 용출액을 50℃의 수욕조에서 대부분 건고될 때까지 감압 농축한 후 질소가스로 건고한다. 증류수＋아세토니트릴＋초산완충액(62＋23＋15) 1 mL를 증발플라스크에 정확히 가하여, 잔류물을 용해한 후 멤브레인필터(공경 0.5 μm이하)로 여과하고, 고속액체크로마토그래피용 시료용액으로 한다.

    * 고속액체크로마토그래피 : 시료용액 및 각 취화수소산할로푸지논표준액 각 20 μL를 고속액체크로마토그래프에 주입하고 크로마토그램을 측정한다.

  3) 측정조건(예)

   가) 검출기 : 자외흡광광도검출기(측정파장 : 243 nm)

   나) 칼럼 : μBondapak C18 (3.9 × 300 mm, 10 μm)또는 이것과 동등한 것.

   다) 용리액 : 증류수+아세토니트릴+초산완충액 (62+23+15)

   라) 유량 : 1.0 mL/min

   라) 칼럼조온도 : 40℃

  4) 계산 : 측정된 크로마토그람의 피크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고 다음식으로 시료중의 할로푸지논폴리스틸렌설폰산칼슘량을 산출한다.  

    * 시료중의 할로푸지논폴리스틸렌설폰산칼슘량(g/t) = A × 1/ 8.5

A : 검량선에서 구한 취화수소산할로푸지논의 중량 (ng) 

10.2.7.9. 죠렌(Zoalene), 디니톨마이드(Dinitolmide)

 가. 시약

  1) 아세토니트릴, n-핵산, 아세톤, 클로르포름(Chloroform), 무수황산나트륨(Sodium sulfate, anhydrous) : 이상 특급

  2) 5% 염화나트륨 용액

  3) Florisil column : 140℃에서 12시간 활성시킨 10g을 아세톤 30 mL와 잘 혼합시킨다. 이것을 내경 1.5～2.0 cm의 관에 충진한다.

  4) 표준품 : 표준품 100 mg을 칭량하여 아세톤에 녹여 100 mL로 하고 다시 아세톤으로 적절히 희석하여 사용한다. 

 나. 방법

    사료 10g을 칭량하여 아세토니트릴 50 mL를 가하고 잘 혼합시켜 sonication, vortexing을 각 5분씩 한다. 3000rpm에서 10분간 원심분리 상등액을 취한다. 이 조작 2회 반복하여 모두 합한다. 핵산 20 mL로 세정한다. 아세토니트릴층을 45℃ 수욕조에서 약 10 mL 되게 농축한다. 농축물을 5% 염화나트륨 용액 100 mL로 수회 씻으면서 분액여두에 넣고, 클로르포름 50 mL씩 2회 진탕하여 추출한다. 클로르포름층을 무수황산나트륨으로 탈수한 후 농축시킨다. 농축물을 아세톤 10 mL에 녹여 florisil column에 흘려 넣는다. 클로르포름 150 mL로 세정한 후 아세톤 100 mL로 용출한다. 이 용출액을 재농축하고 아세톤 2 mL에 녹여 기기분석용 시료액으로 한다.

 다. 기기조건(GC) (예)

  1) 검출기 : ECD

  2) Column : 액상 OV-17을 1.5% chromosob W에 흡착시켜 2m의 유리컬럼관에 충진

  3) 컬럼 온도 : 270℃

  4) 검출기 온도 : 300℃

10.2.7.10. 오르메토프림(Ormethoprim)

 가. 시약

  1) 초산에틸, 메탄올, 염화칼륨, 염화나트륨, 과염소산, 수산화나트륨, 탄산나트륨, 붕산, 무수황산나트륨, 황산, 클로르포름 이상 특급시약

  2) Buffer(pH 11) : 0.1 M 탄산나트륨 96.5 mL와 붕산-염화칼륨 용액(붕산 6.2g+염화칼륨 7.45 g/1 L 증류수) 3.5 mL를 혼합하여 조제한다.

  3) 표준액 조제 : 메탄올(HPLC용)에 희석하여 조제

  4) 이동상 : 0.5% 과염소산＋메탄올(7＋3)

 나. 방법

    사료 5～10 g을 conical tube에 취하여 0.2 N 황산 20 mL 및 클로르포름 15 mL를 가하여 5분씩 초음파 처리한 후 강하게 흔들어준다. 2500～3000rpm에서 10분간 원심분리한 후 상등액을 분액여두에 취하고 잔류물은 다시 0.2N 황산 15 mL를 넣고 똑같이 조작하여 상등액을 분액여두에 합한다. 1N 수산화나트륨용액을 가하여 pH 12가 되도록 조정한 후 염화나트륨 5 g 초산에틸 100 mL를 가하여 10분간 진탕 추출한다. 정치하여 두 층이 분리하면 상층을 취하고 하층은 초산에틸 50 mL를 가하여 똑같이 조작한 후 앞의 상층과 합한다. 초산에틸층을 무수황산나트륨 5g으로 탈수시켜 농축용 플라스크에 받는다. 이 액을 농축하여 0.5% 과염소산＋메탄올(7＋3)용액 1 mL에 녹여 HPLC 시액으로 한다.

 다. 기기분석(HPLC) (예)

  1) Column : Nucleosil 10 C18(250 × 4.6 mm) 혹은 이와 동등한 것.

  2) 파장: 230 nm

  3) 이동상 : 0.5% 과염소산+메탄올(7+3)

10.3. 미생물평판법

10.3.1. 아연바시트라신(Bacitracin-Zinc)[C66H103N17O16S-Zn]

 가. 시약의 조제

  1) 완충액

     3호 완충액.(pH 6.0) 인산2수소칼륨 7g과 인산수소2나트륨12수 6g을 칭량하여 증류수 750 mL로 용해하고 pH를 5.9～6.1로 조정한 후, 증류수를 가하여 1000 mL로 한다. 

  2) 바시트라신 표준액

     상용표준 바시트라신 적당량을 60℃, 5 mmHg이하의 감압 조건에서 3시간 건조한 후, 40 mg 이상을 정확히 칭량한다. 3호 완충액을 정확히 가하고 용해하여 100IU/ mL의 표준원액을 조제한다. 사용할 때, 표준원액을 3호 완충액＋메탄올(3＋1)로 정확히 희석하여 0.4, 0.2, 0.1, 0.05, 0.025IU/ mL의 각 표준액을 조제하여 사용한다.

  3) 배지 : F-1호 배지.

     펩톤 10g, 육즙 5g, 염화나트륨 2.5g, 한천 13～20g에 증류수 1000 mL를 넣는다. 121℃에서 15분간 멸균 후, 염산(1＋11) 또는 수산화나트륨(4.2%, W/V)으로 pH를 6.4～6.6으로 조정한다.

   4) 균액 및 첨가량

     시험균 Micrococcus luteus ATCC 10240으로 10배 희석한 균액을 적당량 (배지 100 mL당 0.1 mL정도) 첨가한다.

   5) 한천평판

      균액을 일단 용해하여 49～51℃로 보온한 배지에 가하여 충분히 혼합한다. 20 mL를 배양접시(내경 90 mm, 높이 20 mm의 합성수지제 또는 경질유리제)에 일시에 번지도록 분주한 후 수평으로 정치하여 응고시킨다. 평판에서 반경 25 mm의 원주상에 인접하도록 각각 90도 간격이 되는 위치에 직경 7.9～8.1 mm의 원통컵을 올려놓는다.

  6) 추출용매 : 증류수＋메탄올＋염산(75＋77＋2)

 나. 시료액의 조제

    분석시료의 일정량(아연바시트라신으로써 20 IU 상당량)을 칭량한다. 200 mL의 삼각플라스크에 넣고, 추출용매 100 mL를 가하여 20분간 진탕후 추출한다. 추출액을 100 mL의 원심분리관에 넣고, 3000rpm에서 5분간 원심분리한 후, 상등액을 No.5A 여과지로 여과한다. 여액 25 mL를 50 mL의 비이커에 정확히 넣고, 암모니아수＋증류수(2＋3)로 pH 5.9～6.1로 조정한다. 용액전량을 50 mL의 메스플라스크에 옮겨 넣고, 3호 완충액을 표선까지 가한다. NO.5A 여과지로 여과하고, 0.1 IU/ mL의 시료액을 조제한다.

  다. 정량 : 표준곡선법

10.3.2. 황산콜리스틴(Colistin-sulfate)[C53H100N16O13-H2SO4]

 가. 시약의 조제

  1) 완충액 : 5호 완충액(pH 6.0)

     인산2수소칼륨 80g, 인산수소2칼륨 20g을 칭량하여 증류수 750 mL로 용해하고, pH를 5.9～6.1로 조정한 후, 증류수를 가하여 1000 mL로 한다.

  2) 희석용매 

   가) 황산콜리스틴이 10 g(역가)/t이상의 경우 : 5호 완충액 - 아세톤＋피리딘(91＋8＋1)

   나) 황산콜리스틴이 10 g(역가)/t미만의 경우 : 5호 완충액 - 아세톤＋피리딘(83＋15＋2)

  3) 콜리스틴 표준액

     상용표준 콜리스틴 적당량을 60℃, 5 mmHg 이하의 감압조건에서 3시간 건조한 후, 40 mg 이상을 정확히 칭량한다. 5호 완충액을 정확히 가하여 용해하고, 1 mg(역가)/ mL의 콜리스틴 표준원액을 조제한다. 사용 할 때, 표준원액을 희석용매로 정확히 희석하고, 0.8, 0.4, 0.2, 0.1, 0.05 μg(역가)/ mL의 각 표준액을 조제한다.

  4) 배지 : F-9호 배지

     췌소화카제인 17g, 파파인소화대두 3g, 포도당 2.5g, 염화나트륨 5g, 인산2수소칼륨 2.5g, 계면활성제(폴리솔베이트 80) 10g, 한천 13～20g, 증류수 적당량으로 배지 1000 mL를 조제한다. 121℃에서 15분간 고압증기 멸균 후, 염산(1+11) 또는 수산화나트륨(4.2%, W/V)으로 pH를 7.2～7.4로 조정한다.

  5) 균액 및 첨가량

     시험균, Bordetella bronchiseptica ATCC 4617로 100배 희석한 균액을 배지 100 mL당 0.1 mL 정도 가한다.

  6) 한천평판 : 아연바시트라신과 동일

  7) 추출용매 : 증류수＋아세톤＋염산(51＋40＋9)

 나. 시료액의 조제

  1) 황산콜리스틴이 10g/t 이상인 경우

     분석시료의 일정량(콜리스틴으로써 0.1 mg역가 상당량)을 칭량하여 200 mL의 삼각플라스크에 넣는다. 피리딘 5 mL 및 핵산 5 mL를 가하여 2～3분간 진탕한다.

     추출용매 95 mL를 가하고 20분간 진탕하여 추출한다. 추출액을 100 mL의 원심분리관에 넣고, 3000rpm으로 5분간 원심분리한 후 증류수＋아세톤층(하층)을 No. 5A 여과지로 여과한다. 여액 20 mL를 50 mL의 비이커에 정확히 넣고, 암모니아수로 pH를 5.9～6.1로 조정한다. 용액전량을 100 mL 메스플라스크에 옮겨 담고, 5호 완충액을 표선까지 가한 후 No. 5A여과지로 여과하여 0.2 μg역가/ mL의 시료액을 조제한다.

  2) 황산콜리스틴이 10g/t미만인 경우

     분석시료의 일정량(콜리스틴으로써 50 μg역가상당량)을 칭량하여 200 mL의 삼각플라스크에 넣는다. 피리딘 5 mL 및 핵산 5 mL를 가하여 2～3분간 진탕한다. 추출용매 95 mL를 가하고 20분간 진탕하여 추출한다. 추출액을 100 mL의 원심분리관에 넣고, 3000rpm으로 5분간 원심분리한 후 증류수 + 아세톤층(하층)을 No.5A 여과지로 여과한다. 여액 20 mL를 50 mL의 비이커에 정확히 넣고, 암모니아수로 pH를 5.9～6.1로 조정한다. 용액전량을 50 mL 메스플라스크에 옮겨담고 표선까지 5호 완충액을 가한 후 No.5A 여과지로 여과하여 0.2 μg역가/ mL의 시료액을 조제한다.

 다. 정량 : 표준곡선법

10.3.3. 버지니아 마이신(Virginiamycin) [M Type : C28H35N3O7, S Type : C43H49N7O10]

 가. 시약의 조제

  1) 완충액 : 2호 완충액(pH 6.0)

     인산2수소칼륨 3.5 g, 인산수소2나트륨12수 6 g을 칭량하여 증류수 750 mL로 용해하고, pH 5.9～6.1로 조정한 후, 증류수를 가하여 1000 mL로 한다.

  2) 버지니아마이신 표준액

     상용표준 버지니아마이신 40 mg 이상을 정확히 칭량한다. 메탄올로 용해하여 1 mg역가/ mL의 버지니아마이신 표준원액을 조제한다. 사용할 때, 표준원액을 2호 완충액＋메탄올(7＋3)으로 정확히 희석하고, 3.2, 1.6, 0.8, 0.4, 0.2 μg역가/ mL의 각 표준원액을 조제한다.

  3) 배지 : F-4호 배지

     펩톤 6 g, 육즙 1.5 g, 효모 3 g, 포도당 1 g, 한천 13～20 g 증류수 적당량으로 배지 1000 mL를 조제한다. 121℃에서 15분간 고압증기 멸균 후, 염산＋증류수(1＋1) 또는 수산화나트륨(4.2%, W/V)으로 pH를 5.9～6.1로 조정한다.

  4) 균액 및 첨가량

     시험균 Micrococcus luteus ATCC 9341로 100배 희석한 균액을 배지 100 mL당 0.2 mL 정도 가한다.

  5) 한천평판 : 천공법

 나. 시료액의 조제

  1) 버지니아마이신이 10g역가/t이상인 경우

     분석시료의 일정량(버지니아마이신으로써 0.16 mg역가 상당량)을 칭량하여 200 mL의 삼각플라스크에 넣는다. 핵산 20 mL를 가하여 10분간 방치한다. 메탄올＋2호 완충액(1＋1) 100 mL를 가하여 20분간 진탕하여 추출한다. 추출액을 100 mL의 원심분리관에 넣는다. 3000rpm으로 5분간 원심분리한 후 증류수＋메탄올층(하층)을 No.6A 여과지로 여과한다. 여액의 일정량을 2호 완충액＋메탄올(9＋1)로 정확히 희석하고, 0.8 μg역가/ mL의 시료액을 조제한다.

  2) 버지니아마이신이 10g역가/t미만인 경우

     분석시료의 일정량(버지니아마이신으로써 40 μg역가 상당량)을 칭량하여 200 mL의 삼각플라스크에 넣는다. 메탄올 100 mL를 가하여 20분간 진탕하고 추출한다. 추출액을 No.6A여과지로 여과한다. 여액 20 mL를 50 mL 농축플라스크에 정확히 넣고 50℃의 수욕조에서 감압농축하고 핵산 5 mL를 가하여 진탕한다. 메탄올 3 mL를 정확히 가하여 잔류물을 용해한다. 2호 완충액 7 mL를 정확히 가하여 진탕한다. 용액을 50 mL의 원심분리관에 넣고 3000rpm으로 5분간 원심분리하고, 증류수＋메탄올(하층)을 0.8 μg역가/ mL의 시료액으로 한다.

 다. 정량 : 표준곡선법

10.3.4.  타이로신(Tylosin) [C46H77NO17]

 가. 시약의 조제

  1) 4호 완충액(pH 8.0)

     인산 2수소칼륨 13.3 g을 칭량하여 증류수 750 mL로 용해한다. 수산화칼륨용액(6.6%, W/V) 100 mL정도를 가하여 pH를 7.9～8.1로 조정한 후, 증류수를 가하여 1000 mL한다.

  2) 타이로신 표준액

     상용표준타이로신 적당량을 5 mmHg, 60℃에서 3시간 건조한 후 40 mg이상을 정확히 칭량한다. 메탄올 소량을 가하여 용해하고, 4호 완충액을 정확히 가하여 1 mg역가/ mL의 타이로신표준액을 조제한다. 사용할 때, 표준원액을 4호 완충액＋메탄올(4＋1)로 정확히 희석하고, 3.2, 1.6, 0.8, 0.4, 0.2 μg역가/ mL의 각 표준액을 조제한다.

  3) 배지 : F-7호 배지

     펩톤 6 g, 육즙 1.5 g, 효모 3 g, 포도당 1 g, 한천 13～20 g, 증류수 적당량으로 배지 1000 mL를 조제한다. 121℃에서 15분간 고압증기 멸균 후, 염산용액(1+11) 또는 염화나트륨(4.2%, W/V)으로 pH를 7.9～8.1로 조정한다.

  4) 균액 및 첨가량 

     시험균, Micrococcus luteus ATCC 9341로 100배 희석한 균액을 배지 100 mL당 0.1 mL정도 가한다.

  5) 한천평판 : 아연바시트라신과 동일

 나. 시료액의 조제

  1) 타이로신이 40g(역가)/t이상인 경우

     분석시료 일정량[타이로신으로써 0.4 mg(역가)상당량]을 칭량하여 200 mL의 삼각플라스크에 넣는다. 증류수 50 mL를 가하여 20분간 진탕한다. 메탄올 50 mL를 가하여 20분간 진탕추출한 후, No. 5A여과지로 여과한다. 여액의 일정량을 4호 완충액＋메탄올(7＋1)로 정확히 희석하고, 0.8 μg역가/ mL의 시료액을 조제한다.

  2) 타이로신이 10g역가/t이상에서 40g(역가)/t미만인 경우

     분석시료 일정량(타이로신으로써 0.2 mg 역가상당량)을 칭량하여 200 mL의 삼각플라스크에 넣는다. 증류수 50 mL를 가하여 20분간 진탕한다. 메탄올 50 mL를 가하여 20분간 진탕 추출한 후, No. 5A 여과지로 여과한다. 여액의 일정량을 4호 완충액으로 정확히 희석하고, 0.8 μg역가/ mL의 시료액을 조제한다.

   다) 타이로신이 10g(역가)/t이하인 경우

      분석시료 일정량[타이로신으로써 80 μg(역가)상당량]을 칭량하여 200 mL의 삼각플라스크에 넣는다. 증류수 50 mL를 가하여 20분간 진탕한다. 메탄올 50 mL를 가하여 20분간 진탕 추출한 후 No. 5A 여과지로 여과한다. 여액 20 mL를 50 mL 증발플라스크에 정확히 넣는다. 50℃ 수욕조에서 감압농축 한 후, 증류수 8 mL를 정확히 가하여 잔류물을 용해하고 4호 완충액 + 메탄올(2+1) 12 mL를 정확히 가하여 진탕하고 0.8 μg(역가)/ mL의 시료액을 조제한다.

 다. 정량 : 표준곡선법

10.3.5. 스피라마이신(Spiramycin) [C43H74N2O14]

 가. 시약의 조제

  1) 완충액 : 4호 완충액(pH 8.0)

     인산2수소칼륨 13.3g을 칭량하여 증류수 750 mL로 용해한다. 수산화칼륨용액(6.6%, W/V) 100 mL를 가하여 pH를 7.9～8.1로 조정한 후, 증류수를 가하여 1000 mL한다.

  2) 희석용매 : 4호 완충액＋메탄올(7＋3)

  3) 스피라마이신 표준액 

     상용표준 스피라마이신 40 mg이상을 정확히 칭량한다. 메탄올 소량을 가하여 용해하고, 4호 완충액을 정확히 가하여 1 μg역가/ mL의 스피라마이신 표준원액을 조제한다. 사용할 때. 표준액을 희석용매로 정확히 희석하고, 1.6, 0.8, 0.4, 0.2, 0.1 μg/ mL의 각 표준액을 조제한다.

  4) 배지 : F-7호 배지

     펩톤 6g, 육즙 1.5g, 효모 3g, 포도당 1g, 한천 13～20g, 증류수 적당량으로 배지 1000 mL를 조제한다. 121℃에서 15분간 고압증기 멸균 후, 염산＋증류수(1＋11) 또는 수산화나트륨(4.2W/V%)으로 pH를 5.9～6.1로 조정한다.

  5) 균액 및 첨가량

     시험균, Micrococcus luteus ATCC 9341로 10배 희석한 균액을 배지 100 mL당 0.2 mL정도 가한다.

  6) 한천평판 : 천공법

 나. 시료액의 조제

  1) 스피라마이신이 20g역가/t이상으로 모넨신나트륨을 포함하지 않는 경우

     분석시료의 일정량[스피라마이신이 50g역가/t이상의 경우에는 스피라마이신으로써 0.5 mg역가 상당량, 20g역가/t이상, 50g역가/t미만의 경우에는 0.2 mg 역가 상당량, 20g역가/t미만의 경우에는 50 μg역가 상당량]을 칭량하여 200 mL의 삼각플라스크에 넣고, 아세톤 100 mL를 가하여 20분간 진탕하여 추출한 후, No.6A여과지로 여과한다. 여액 24 mL를 50 mL 증발플라스크에 넣고 40℃의 수욕조에서 감압농축하고 희석용매 15 mL를 정확히 가하여 잔류물을 용해한다. 핵산 5 mL를 가하여 진탕한 후 100 mL의 원심분리관에 넣고 3000rpm에서 5분간 원심분리 한 후 증류수＋메탄올층(하층)의 일정량을 희석용매로 정확히 희석하고 0.4 μg역가/ mL의 시료액을 조제한다.

  2) 스피라마이신이 20g역가/t이상으로 모넨신나트륨을 포함한 경우

     분석시료의 일정량[스피라마이신이 50g역가/t이상의 경우에는 스피라마이신으로써 0.5 mg 역가상당량, 20g역가/t이상 50g역가/t미만의 경우에는 0.2 mg역가 상당량]을 칭량하여 200 mL의 삼각플라스크에 넣는다. 아세톤 100 mL를 가하여 20분간 진탕하여 추출하고 No. 6A 여과지로 여과한다. 여액 24 mL를 50 mL증발플라스크에 정확히 넣고, 40℃의 수욕조에서 감압농축하고 희석용매 15 mL를 가하여 잔류물을 용해한다. 핵산 5 mL를 가하여 진탕한 후, 100 mL의 공전원심분리관에 넣고 3000rpm에서 5분간 원심분리 한다. 증류수＋메탄올층(하층) 10 mL를 20 mL의 비이커에 정확히 넣고, 염산으로 pH를 1.0이하로 조정하여 1시간 방치한 후, 암모니아로 pH를 7.9～8.1로 조정한다. 용액전량을 50 mL의 메스플라스크에 옮겨담고 희석용매를 표선까지 가한다. No. 5A 여과지로 여과한 후, 여액의 일정량을 희석용매로 정확히 희석하고 0.4 μg역가/ mL의 시료액을 조제한다.

  3) 스피라마이신이 20g(역가)/t미만이고 모넨신나트륨을 포함할 경우

     분석시료의 일정량(스피라마이신으로써 50 μg역가 상당량)을 칭량하여 200 mL 삼각플라스크에 넣는다. 아세톤 100 mL를 가하고 20분간 진탕 추출하고 No. 6A 여과지로 여과한다. 여액 24 mL를 50 mL 증발플라스크에 정확히 넣는다. 40℃ 수욕조에서 감압농축한 후, 희석용매 15 mL를 정확히 가하여 잔류물을 용해한다. 핵산 5 mL를 가하여 진탕한 후, 100 mL의 원심분리관에 넣고 3000rpm에서 5분간 원심분리한다. 증류수＋메탄올(하층) 10 mL를 20 mL의 비이커에 적당히 넣는다. 염산으로 pH를 1.0이하로 조정한다. 1시간 방치한 후, 암모니아수로 pH를 7.9～8.1로 조정한다. 용액전량을 20 mL의 메스플라스크에 옮긴다. 표선까지 희석용매를 가하여 진탕한 후 No. 5A 여과지로 여과하고 0.4 μg(역가)/ mL의 시료액을 조제한다.

 다. 정량: 표준곡선법

10.3.6.  살리노마이신 나트륨(Salinomycin) [C42H70O11]

 가. 적용범위 : 닭사료

  1) 시약의 조제

   가) 희석용매 : 증류수＋메탄올(7＋3)

   나) 살리노마이신 표준액

      상용표준 살리노마이신 적당량을 60℃, 5 mmHg이하의 감압조건하에서 3시간 건조한 후, 40 mg이상을 정확히 칭량한다. 메탄올을 가하여 용해하고, 1 mg역가/ mL의 살리노마이신 표준원액을 조제한다. 사용할 때, 표준원액을 희석용매로 정확히 희석하고, 3 μg(역가)/ mL의 고농도표준액 및 0.75 μg(역가)/ mL의 저 농도표준액의 각 표준원액을 조제한다.

   다) 배지 : F-16호 배지

      펩톤 2.0g, 효모 2.5g, 포도당 1.0g, 한천 13～20g, 증류수 적당량으로 배지 1000 mL를 조제한다. 121℃에서 15분간 고압증기 멸균 후, 염산＋증류수(1＋11) 또는 수산화나트륨(4.2%, W/V)으로 pH를 5.9～6.1로 조정한다.

   라) 포자액 및 첨가량

      시험균, Bacillus subtilis ATCC 6633으로 1×107개/ mL의 포자액을 배지 100 mL당 0.1 mL정도 가한다.

   마) 한천평판 : 원통법

   바) 추출용매 : 메탄올＋증류수(9＋1)

  2) 시료액의 조제

     분석시료 일정량[살리노마이신나트륨 0.5 mg(역가) 상당량]을 칭량하여 100 mL의 삼각플라스크에 넣는다. 추출용매 50 mL를 가하고, 20분간 진탕하고 추출한 후 No. 5A 여과지로 여과한다. 여액을 칼럼관(내경 14 mm)에 칼럼크로마토그래피용 염기성알루미나[입경 74～177 μm, 200～80mesh, F-20(Alcoa 또는 Merck제)] 12g을 건식으로 충진하고 처음 유출액 5 mL를 버린다. 그 다음 유출액의 일정량을 증류수+메탄올(24+1)로 정확히 희석하여 3 μg(역가)/ mL의 고농도 시료액을 조제하고 희석용매로 정확히 희석하여 0.75 μg(역가)/ mL의 저농도 시료액을 조제한다.

  3) 정량 : 2-2 용량법

 나. 적용범위 : 소사료

  1) 시약의 조제

   가) 희석용매 : 증류수＋메탄올(7＋3)

   나) 살리노마이신 표준액

      상용표준 살리노마이신 적당량을 60℃, 5 mmHg이하의 감압조건하에서 3시간 건조한 후, 40 mg이상을 정확히 칭량한다. 메탄올을 가하여 용해하고, 1 mg역가/ mL의 살리노마이신 표준원액을 조제한다. 사용할 때, 표준원액을 희석용매로 정확히 희석하고, 1.2 μg(역가)/ mL의 고농도표준액, 0.3 μg(역가)/ mL의 저농도표준액의 각 표준원액을 조제한다.

   다) 배지 : F-22호 배지

      효모 2.5g, 포도당 1.0g, 황산나트륨 50g, 한천 13～20g, 증류수 적당량으로 배지 1000 mL를 조성한다. 121℃에서 15분간 고압증기 멸균 후, 염산(1＋11) 또는 수산화나트륨(4.2%, W/V)으로 pH를 5.9～6.1로 조정한다.

   라) 포자액 및 첨가량

      시험균, Bacillus ATCC 6633으로 1×107개/ mL의 포자액을 배지 100 mL당 0.5 mL정도로 가한다.

   마) 한천평판 : 원통법

   바) 추출용매 : 메탄올＋증류수(9＋1)

  2) 시료액의 조제

      분석시료 일정량(살리노마이신나트륨으로써 0.2 mg(역가) 상당량)을 칭량하여 100 mL의 삼각플라스크에 넣는다. 추출용매 50 mL를 가하고, 20분간 진탕하고 추출한 후 No. 5A 여과지로 여과한다. 여액을 칼럼관(내경 14 mm)에 칼럼크로마토그래피용 염기성알루미나[입경 74～177 μm, 200～80mesh, F-20(Alcoa 또는 Merk제)] 12g을 건식으로 충진하고 처음 유출액 5 mL를 버린다. 그 후 유출액의 일정량을 증류수＋메탄올(24＋1)로 정확히 희석하고 1.2(역가)/ mL의 고농도 시료액을 조제하고, 희석용매로 정확히 희석하여 0.8 μg(역가)/ mL의 저농도 시료액을 조제한다.

  3) 정량 : 2-2 용량법

10.3.7.  모넨신나트륨(Monensin-Na)[C36H62O11-Na]

 가. 적용범위 : 닭사료

  1) 시약의 조제

   가) 모넨신나트륨 표준액

      상용표준 모넨신나트륨 40 mg이상을 정확히 칭량한다. 메탄올을 가하여 용해하고 1 mg역가/ mL의 모넨신나트륨 표준원액을 조제한다. 사용할 때 표준원액을 증류수＋메탄올(7＋3)로 정확히 희석하고, 4 μg역가/ mL의 고농도 표준액 및 1 μg역가/ mL의 저농도 표준액을 조제한다.

   나) 배지 : F-16호 배지

       펩톤 2g, 효모 2.5g, 포도당 1g, 한천 13～20g, 증류수 적당량으로 배지 1000 mL를 조제한다. 121℃에서 15분간 고압증기 멸균 후, 염산(1＋11) 또는 수산화나트륨(4.2%, W/V)으로 pH를 5.9～6.1로 조정한다.

   다) 포자액 및 첨가량

       시험균, Bacillus subtilis ATCC 6633으로 1×107개/ mL의 포자액을 배지 100 mL당 0.1 mL 정도 가한다.

   라) 한천평판 : 원통법

   마) 추출용매 : 메탄올 + 증류수 (9+1)

  2) 시료액의 조제

     분석시료의 일정량 모넨신나트륨으로써 0.5 mg(역가상당량)을 칭량하여 100 mL의 삼각플라스크에 넣는다. 추출용매 50 mL를 가하여 20분간 진탕하고, 추출한 후, No. 5A 여과지로 여과한다. 여액을 칼럼(칼럼관내경 14 mm)에 칼럼크로마토그래피용 염기성알루미나[입경 74～177 μm, 200～80 mesh, F-20(Alcoa제 또는 Merck제) 12g을 건식으로 충진한 것]에 넣고 처음의 추출액 5 mL는 버린다. 그 다음 유출액의 일정량을 증류수＋메탄올(9＋1)로 정확히 희석하고 4 μg역가/ mL의 고농도시료액을 조제한다. 이것을 증류수＋메탄올(7＋3)로 정확히 희석하고 1 μg역가/ mL의 저농도 시료액을 조제한다.

  3) 정량 : 2 - 2 용량법

 나. 적용범위 : 소사료

  1) 시약의 조제

   가) 모넨신나트륨 표준액

      상용표준 모넨신나트륨 40 mg이상을 정확히 칭량한다. 메탄올을 가하여 용해하고 1 mg역가/ mL의 모넨신나트륨 표준원액을 조제한다. 사용할 때 표준원액을 증류수＋메탄올(7＋3)로 정확히 희석하고, 2 μg역가/ mL의 고농도 표준액 및 0.5 μg역가/ mL의 저농도 표준액을 조제한다.

   나) 배지 : F-22호 배지

      효모 2.5 g, 포도당 10 g, 황산나트륨 50 g, 한천 18～20 g, 증류수 적당량으로 배지 1000 mL를 조제한다. 121℃에서 15분간 고압증기 멸균 후, 염산 ＋증류수(1＋11)또는 수산화나트륨(4.2%, W/V)으로 pH를 5.9～6.1로 조정한다.

   다) 포자액 및 첨가량

      시험균, Bacillus subtilis ATCC 6633으로 1×107개/ mL의 포자액을 배지 100 mL당 0.5 mL 정도 가한다.

   라) 한천평판 : 원통법

   마) 추출용매 : 메탄올＋증류수(9＋1)

  2) 시료액의 조제

     분석시료의 일정량 모넨신나트륨으로써 0.3 mg(역가 상당량)을 칭량하여 100 mL의 삼각플라스크에 넣는다. 추출용매 50 mL를 가하여 20분간 진탕하고 추출한 후, No. 5A 여과지로 여과한다. 여액을 칼럼(칼럼관 내경 14 mm)에 칼럼크로마토그래피용 염기성 알루미나[입경 74～177 μm, 200～80 mesh, F-20(Alcoa제 또는 Merck제) 12g을 건식으로 충진한 것]에 넣고 처음 추출액 5 mL는 버린다. 그 다음 추출액의 일정량을 증류수로 정확히 희석하고 2 μg역가/ mL의 고농도시료액을 조제하고 이것을 증류수＋메탄올(7＋3)로 정확히 희석하여 0.5 μg역가/ mL의 저농도시료액을 조제한다.

  3) 정량 : 2 - 2 용량법

10.3.8.  라살로시드나트륨(Lasalocid-Na) [C34H53NaO8]

 가. 적용범위 : 닭사료

  1) 시약의 조제

   가) 라살로씨드나트륨 표준액

      상용표준 라살로씨드 40 mg이상을 정확히 칭량한다. 메탄올을 정확히 가하여 용해하고, 1 mg(역가)/ mL의 라살로씨드 표준원액을 조제한다. 사용할 때 표준원액을 증류수＋메탄올(3＋1)로 정확히 희석하고, 1 μg(역가)/ mL의 고농도 표준액과 0.5 μg(역가)/ mL의 저농도 표준액을 조제한다.

   나) 배지 : F-18호 배지

       효모즙 2.5g, 포도당 10g, 염화마그네슘 10g, 한천 13～20g, 증류수 적당량으로 배지 1000 mL를 조성한다. 121℃에서 15분간 고압증기 멸균한다.

   다) 포자액 및 첨가량

       시험균, Bacillus subtilis ATCC 6633으로 1×107개/ mL의 포자액을 배지 100 mL당 0.4 mL정도 가한다.

   라) 한천평판 : 천공법

   마) 실리카겔

       칼럼크로마토그래피용 실리카겔[입경 62～210 μm(250～65mesh) Kieselgel 40 Art 10180 E.Merck제]을 110℃에서 2시간 건조한다.

  2) 시료액의 조제

   가) 추출

      분석시료의 일정량[라살로씨드나트륨으로써 1 mg(역가) 상당량]을 칭량하여 200 mL의 삼각플라스크에 넣는다. 클로르포름 100 mL를 가하여 20분간 진탕추출한 후, No. 5A여과지로 여과한다. 여액 25 mL를 실험관에 넣고, 무수황산나트륨을 가하여 탈수한 후, No. 5A 여과지로 여과한 다음 칼럼크로마토그래피용 시료액으로 한다.

   나) 칼럼크로마토그래피

      칼럼관(내경 10 mm)에 실리카겔 2.5g을 메탄올로 현탁시켜 흘려 보낸다. 메탄올 20 mL 및 클로르포름 50 mL를 순차적으로 세정하여, 칼럼을 조제한다. 시료액 5 mL를 칼럼에 정확히 넣고, 액면이 충진제의 상면에서 3 mm 높이가 될 때가지 유속 2～3 mL/min으로 유출시키고, 클로르포름 30 mL를 가하여, 동일하게 유출시킨다. 50 mL 증발플라스크를 칼럼아래에 두고, 메탄올 15 mL를 칼럼에 가하여 라살로씨드나트륨을 용출시켜 50℃의 농축기에서 감압 농축한 후, 메탄올 5 mL를 정확히 가하여 잔류물을 용해한다. 용액의 일정량을 증류수+메탄올(5+1)로 정확히 희석하고, 1 μg(역가)/ mL의 고농도 시료액을 조제한다. 그 다음 증류수＋메탄올(3＋1)로 정확히 희석하고 0.5 μg(역가)/ mL의 저농도 시료액을 조제한다.

  3) 정량 : 2 - 2 용량법

 나. 적용범위 : 소사료

  1) 시약의 조제

   가) 라살로씨드나트륨 표준액

       상용표준 라살로씨드나트륨 40 mg이상을 정확히 칭량한다. 메탄올을 정확히 가하여 용해하고, 1 mg(역가)/ mL의 라살로씨드나트륨 표준원액을 조제한다. 사용할 때 표준원액을 증류수＋메탄올(3＋1)로 정확히 희석하고, 2 μg(역가)/ mL의 고농도 표준액과 1 μg(역가)/ mL의 저농도 표준액을 조제한다.

   나) 배지 : F-18호 배지

       효모즙 2.5g, 포도당 10g, 염화마그네슘 10g, 한천 13～20g, 증류수 적당량으로 배지 1000 mL를 조성한다. 121℃에서 15분간 고압증기 멸균한다.

   다) 포자액 및 첨가량 : 시험균, Bacillus subtilis ATCC 6633으로 1×107개/ mL의 포자액을 배지 100 mL당 0.4 mL정도 가한다.

   라) 한천평판 : 아연바시트라신과 동일

   마) 효소용액 : 효소제 4g을 증류수로 용해하여 100 mL로 한다.

  2) 시료액의 조제

   가) 추출

       분석시료 18.2g을 칭량하여 200 mL의 삼각플라스크에 넣는다. 효소용액 15 mL를 가하여 진탕한 후, 10～20분간 실온에 방치한다. 아세토니트릴 85 mL를 가하여 30분간 진탕 추출한다. 그 후 No. 5A여과지로 여과하여 정제용 시료액으로 한다.

   나) 정제

       시료액 25 mL를 200 mL 분액여두에 정확히 넣는다. 증류수 25 mL를 가하여 핵산 50 mL를 가하여 10분간 진탕한다. 방치한 후, 핵산층(상층)을 200 mL 농축플라스크에 넣는다. 그리고 분액여두에 핵산 50 mL를 가하여 1분간 진탕하고 핵산층을 그 농축플라스크에 넣는다. 동일한 조작을 반복하고, 핵산층을 합하여, 50℃ 농축기에서 감압 농축한다. 핵산 10 mL를 가하여 잔류물을 용해하고, 카트리지칼럼크로마토그래피용 시료액으로 한다.

   다) 카트리지칼럼크로마토그래피

      실리카겔카트리지(Sep-pak Silica Cartridge, Waters제)를 연결한 주사기에 핵산 10 mL를 넣고 세정한다. 시료액을 주사기에 넣고, 1 mL이하까지 자연 유하시킨다. 그 후, 농축플라스크를 핵산 10 mL로 세정하고, 세액을 주사기에 넣고, 동일한 조작을 2회 반복한다. 그리고, 핵산 20 mL 및 클로르포름 20 mL를 주사기에 넣고 실리카겔카트리지를 순차적으로 세정한다. 50 mL 농축플라스크를 실리카겔카트리지 아래에 두고, 클로르포름＋메탄올(4＋1) 30 mL를 주사기에 넣고 라살로씨드나트륨을 용출시킨다. 용출액을 50℃ 농축기에서 감압 농축한 후, 메탄올 10 mL를 정확히 가하여 잔류물을 용해하고 여과한다. 여액의 일정량을 증류수 + 메탄올(45+7)로 정확히 희석하고 2 μg(역가)/ mL의 고농도 시료액을 조제하고, 그것을 증류수＋메탄올(3＋1)로 정확히 희석하여 1 μg(역가)/ mL의 저농도 시료액을 조제한다.

  3) 정량 : 2 - 2 용량법

10.3.9. 하이그로마이신 B (Hygromycin-B)[C20H37N3O13]

 가. 시약의 조제

  1) 완충액 : 4호 완충액(pH 8.0)

     인산2수소칼륨 13.3g을 칭량하여 증류수 750 mL로 용해한다. 수산화칼륨 용액(6.6%, W/V) 100 mL를 가하여 pH 7.9～8.1로 조정한 후, 증류수를 가하여 100 mL로 한다.

  2) 희석용매

     에틸렌디아민 4초간 2수소 2나트륨 2수화물 1g을 칭량하여, 4호 완충액으로 용해하여 1000 mL로 한다.

  3) 하이그로마인B 표준액

     상용표준 하이그로마이신B 적당량을 5 mmHg이하의 감압하에서 60℃로 3시간 건조한다. 4 mg이상을 정확히 칭량하고, 4호 완충액을 정확히 가하여 용해하고, 1000단위/ mL의 하이그로마이신B 표준원액을 조제한다. 사용할 때, 표준원액을 희석용매로 정확히 희석하고 5, 10, 20, 40, 80단위/ mL의 각 표준액을 조제한다.

  4) 배지 : F-3호 배지

     펩톤 5g, 육즙 3g, 한천 13～20g, 증류수 적당량으로 배지 1000 mL를 조성한다. 121℃에서 15분간 고압증기 멸균한다. 멸균 후, 염산(1＋1) 또는 염화나트륨용액(4.2%, W/V)으로 pH를 7.9～8.1로 조성한다.

  5) 포자액 및 첨가량

     시험균, Bacillus subtilis ATCC 6633으로 1×107개/ mL의 포자액을 배지 100 mL당 0.2 mL 비율로 가한다.

  6) 한천평판 : 아연바시트라신과 동일

  7) 칼럼크로마토그래피용 충진제

   가) 합성흡착제 : 합성흡착제(스틸렌디비닐벤젠중합체, Ambereit XAD - 2, Rohm & Haas제) 100 g을 칭량하여 1 L용 비이커에 넣는다. 메탄올 500 mL로 세정한 후, 세액을 버리고, 메탄올 500 mL를 가하고 하룻밤 방치한다. 그 다음 증류수로 충분히 세정하고 수중에서 보존한다.

   나) 이온교환수지 : 이온교환수지(약산성카치온교환, Ambereit CG-50 Type-1, Rohm & Haas제) 100g을 칭량하여, 1 L용 비이커에 넣는다. 암모니아＋증류수(2＋23) 500 mL로 세정한다. 세액을 버리고 암모니아＋ 증류수(2＋23) 500 mL를 가하여 하룻밤 방치한다. 그 다음 증류수로 충분히 세정하여 NH+4 type 수지를 조제한다. 별도로, 이온교환수지 100g을 칭량하여 1 L용 비이커에 넣는다. 염산＋증류수(1＋11) 500 mL로 세정한 다음, 세액을 버리고 염산＋증류수(1＋11) 500 mL를 가하여 하룻밤 방치한다. 그 다음 증류수로 충분히 세정하고 H+type 수지를 조제한다. NH+4 type 수지 70 mL로 H+ type 수지 30 mL를 가하여 충분히 진탕하고, 수중에서 보존한다.

 나. 시료액의 조제

  1) 추출

    분석시료의 일정량(하이그로마이신B로써 200단위 상당량)을 칭량하여 300 mL 삼각플라스크에 넣는다. 황산수소칼륨용액(1%, W/V) 200 mL를 가하여, 20분간 진탕하고 추출한다. 추출액을 200 mL 원심분리관에 넣고, 3000rpm에서 10분간 원심분리하고, 상등액 150 mL를 200 mL 비이커에 넣고, 수산화나트륨 용액(40%, W/V)으로 pH를 7.9～8.1로 조정한다. 그리고 200 mL 원심분리관에 넣고, 3000rpm에서 10분간 원심분리한 후, 상등액을 No. 5A여과지로 여과하고, 칼럼크로마토그래피용 시료액으로 한다.

  2) 칼럼크로마토그래피

     제1칼럼관(내경 10 mm)에 합성흡착제를 증류수로 현탁시킨 것을 10 cm 높이까지 흘리고, 제2칼럼관(내경 10 mm)에 이온교환수지를 증류수로 현탁시킨 것을 6cm 높이까지 흘린다. 각각의 칼럼관을 탈지면으로 가볍게 막은 후, 증류수 20 mL를 가하여 액면이 충진제의 상면에서 3 mm 높이가 될 때까지 유출시켜 칼럼을 조제한다. 그 다음 제1칼럼의 하단과 제 2칼럼의 상단을 공기가 새지 않도록 연결한다. 시료액 100 mL를 제1의 칼럼에 넣는다. 제1의 칼럼의 액면이 충진제의 상면에서 3 mm의 높이가 될 때까지 유속 2 mL/min로 제2의 칼럼으로 유출시킨 후, 제1의 칼럼에 증류수 40 mL를 가하여, 제2의 칼럼의 액면이 충진제의 상면에서 3 mm의 높이가 될 때까지 유출시킨다. 제1의 칼럼을 분리하고, 제2의 칼럼 하부에 100 mL용 농축플라스크를 두고 암모니아＋증류수(1＋24) 25 mL를 제2의 칼럼에 가하여 하이그로마이신B를 용출시킨다. 용출액을 70℃의 수욕조에서 감압농축한 후, 희석용매를 5 mL를 정확히 가하여 잔류물을 용해하고, 20단위/ mL의 시료액을 조제한다.

 다. 정량 : 표준곡선법

10.3.10. 데스토마이신 A(Destomycin-A)[C20H37N3O13]

 가. 적용범위 : OTC를 포함하지 않은 사료

 나. 시약의 조제

  1) 완충액 : 4호 완충액(pH 8.0)

     인산2수소칼륨 13.3g을 칭량하여 증류수 750 mL로 용해하고, 수산화칼륨용액(6.6%, W/V) 100 mL를 가하여 pH 7.9～8.1로 조정한 후, 증류수를 가하여 1000 mL로 한다.

  2) 희석용매

     에틸렌디아민 4초산 2수소 나트륨 2수화물 1g을 칭량하여, 4호 완충액에 희석하여 1000 mL로 한다.

  3) 데이토마이신A 표준액

     상용표준 데이토마이신A 적당량을 5 mmHg이하의 감압하에서 60℃에서 3시간 건조한 후 40 mg이상을 정확히 칭량한다. 4호 완충액을 정확히 가하여 용해하고, 1 mg(역가)/ mL의 데이토마이신A 표준액을 조제한다. 사용할 때, 표준원액을 희석용매로 정확히 희석하고, 10, 20, 40, 80 μg(역가)/ mL의 각 표준액을 조제한다.

  4) 배지 - F-3호 배지

     펩톤 5g, 육즙 3g, 한천 13～20g, 증류수 적당량으로 배지 1000 mL를 조성한다. 121℃에서 15분간 고압증기 멸균한다. 멸균 후, 염산＋증류수(1＋1) 또는 염화나트륨용액(4.2%, W/V)으로 pH를 7.9～8.1로 조정한다.

  5) 포자액 및 첨가량

     시험균, Bacillus subtilis ATCC 6633으로 1×107개/ mL의 포자액을 배지 100 mL당 0.2 mL비율로 가한다.

  6) 한천평판 : 아연바시트라신과 동일

  7) 이온교환수지

     이온교환수지[약산성카치온교환, Ambereit CG-50 Type-1, Rohm & Haas제] 100g을 칭량하여 1 L용 비이커에 넣고, 암모니아수＋증류수(2＋23) 500 mL로 세정한다. 세액을 버리고 암모니아수＋증류수(2＋23) 500 mL를 가한 다음 하룻밤 방치한다. 그 다음 증류수로 충분히 세정하고 NH+4 type 수지를 조제한다. 별도로 이온교환수지 100g을 칭량하여 1 L용 비이커에 넣고 염산＋증류수(1＋11) 500 mL로 세정한다. 세액을 버리고, 염산＋증류수(1＋11) 500 mL를 가한 다음 방치한다. 그 다음 증류수로 충분히 세정하고 H+type 수지를 조제한다. NH+4type 수지 70 mL로 H+type 수지 30 mL를 가한다. 충분히 진탕한 후 수중에 보존한다.

 나. 시료액의 조제

  1) 추출

    분석시료의 일정량[데스토마이신으로써 0.2 μg(역가)상당량]을 칭량하여 300 mL 삼각플라스크에 넣는다. 황산수소칼륨용액(1%,W/V) 200 mL를 가하고, 20분간 진탕 추출한다. 추출액을 200 mL 원심분리관에 넣고, 3000rpm에서 10분간 원심분리한 후 상등액 150 mL를 200 mL 비이커에 정확히 넣고, 암모니아수로 pH를 7.9～8.1로 조정한다. 200 mL 원심분리관에 넣고 3000rpm에서 10분간 원심분리한 다음, 상등액을 No. 5A여과지로 여과하여, 칼럼크로마토그래피용 시료액으로 한다.

  2) 칼럼크로마토그래피

     이온교환수지를 증류수에 현탁시킨 것을 내경 10 mm 칼럼관에 높이 6 cm까지 흘리고 상부에 탈지면을 가볍게 채운다. 증류수 20 mL를 가하여 액면이 충진제의 상면에서 3 mm가 될 때까지 유출시켜 칼럼을 조제한다. 시료액 100 mL를 칼럼에 넣고, 칼럼의 액면이 충진제의 상면에서 3 mm가 될 때까지 유속 2 mL/min로 유출시킨다. 칼럼에 증류수 40 mL를 가하고 칼럼의 액면이 충진제의 상면에서 3 mm가 될 때까지 유출시킨다. 100 mL 농축플라스크를 칼럼 아래에 두고, 암모니아수 + 증류수(1+49) 25 mL를 칼럼에 가하여 데스토마이신A를 용출시킨다. 70℃의 수욕조에서 감압농축한 후, 희석용매 5 mL를 정확히 가하여 잔류물을 용해시키고, 20 μg(역가)/ mL의 시료액을 조제한다.

 다. 정량 : 표준곡선법

10.4. 펜벤다졸(Fenbendazole)

 가. 분석원리

    사료 시료 중의 펜벤다졸을 에틸아세테이트, 헥산, 에탄올, 0.2 N 염산으로 추출한 후 양이온교환 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

 나. 측정기기

    액체크로마토그래프/질량분석기

 다. 시약 및 시액

  1) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

  2) 표준원액 : 펜벤다졸 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L로 한다. 조제된 표준원액은 냉동보관 한다.

  3) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 펜벤다졸은 0.15, 0.3, 0.45, 0.6 및 0.75 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준용액은 냉장보관한다.

  4) 양이온교환 카트리지 : MCX (Mixed Mode Cation Exchange) 카트리지(60 mg) 또는 이와 동등한 것

 라. 시험용액의 제조

    균질화 한 검체 3 g을 달아 15 mL 원심관에 넣고 에틸아세테이트 8 mL를 가하여 흔들어 섞는다. 이 용액을 3,000 G에서 5분간 원심분리한다. 상층액을 취하고, 잔류물에 에틸아세테이트 8 mL를 가하여 위와 동일하게 원심분리하여 상층액을 모은다. 상층액을 모은 액은 40℃ 수욕조상에서 감압농축 한다. 잔류물에 헥산 5 mL을 가하여 30초 동안 균질화한 후 에탄올:0.2 N 염산(2:1) 혼합용액 1 mL를 가하여 30초 동안 균질화하고 아래층을 취하여 45℃ 수욕조상에서 감압농축 한다. 잔류물에 5% 개미산 메탄올 용액 3 mL를 가하여 녹인다. 미리 아세토니트릴:초산(95:5) 1 mL와 5% 개미산 메탄올 용액 2 mL로 활성화시킨 양이온교환 카트리지에 위의 5% 개미산 메탄올 용액 3 mL에 녹인 잔류물을 흡착시키고 50% 메탄올 용액 2 mL로 세척한다. 25% 수산화암모늄:아세토니트릴(1:4) 혼합용액 3 mL로 용출시켜 40℃이하의 수욕상에서 질소농축하고 잔류물을 0.1% 개미산 용액:메탄올(1:1) 혼합용액 1 mL로 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

 마. 시험조작

  1) 액체크로마토그래프 조건

   가) 칼럼 : C18(2.0 × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

   나) 칼럼온도 : 40℃

   다) 이동상

    (1) 이동상 A : 0.1% 개미산 용액

    (2) 이동상 B : 0.1% 개미산 메탄올 용액

┏━━━━┯━━━━━━┯━━━━━━┓

┃시간(분)│이동상 A(%) │이동상 B(%) ┃

┣━━━━┿━━━━━━┿━━━━━━┫

┃0.0     │20          │80          ┃

┠────┼──────┼──────┨

┃1.5     │20          │80          ┃

┠────┼──────┼──────┨

┃6.0     │95          │5           ┃

┠────┼──────┼──────┨

┃8.0     │95          │5           ┃

┠────┼──────┼──────┨

┃9.0     │20          │80          ┃

┠────┼──────┼──────┨

┃10.0    │20          │80          ┃

┗━━━━┷━━━━━━┷━━━━━━┛

   라) 유속 : 0.3 mL/분

   마) 주입량 : 2 μL

   바) 질량분석기 조건

    (1) Ionization : ESI(positive)

    (2) Capillary Temperature : 450℃

    (3) Collision gas : 질소(N2)

 바. 정량시험

  1) 시험용액 및 표준용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 이후 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름 시간을 비교하고, 펜벤다졸은 m/z 268에 대한 면적으로 각각 검량선을 작성하여 시험용액 중 각각의 함량을 구한다.

┌────┬──────────┬─────────┐

│물질    │Precursor ion (m/z) │Fragment ion (m/z)│

┝━━━━┿━━━━━━━━━━┿━━━━━━━━━┥

│펜벤다졸│300                 │268, 159, 131     │

└────┴──────────┴─────────┘

  2) 정량한계 : 각각 0.001 mg/kg

10.5. 디클라주릴(Diclazuril)

 가. 분석원리

    검체에 존재하는 디클라주릴을 에틸아세테이트로 추출하고 추출액을 농축하여 헥산:아세토니트릴 분배로 정제하여 액체크로마토그래프/ 자외부흡광검출기로 정량한다.

 나. 장치

    액체크로마토그래프/자외부흡광검출기

 다. 시약 및 시액

  1) 표준원액：디클라주릴을 메탄올：디메틸포름아미드(90：10)에 녹여 100 ppm으로 제조하여 사용한다. 

  2) 표준용액：표준원액 일정량을 취하여 메탄올로 희석하여 사용한다.

  3) 기타시약：특급 

 라. 시험용액의 조제 

    검체 일정량을 취하여 물을 4배 부피로 가하고 균질화한다. 균질액 2.5 mL를 취하여 에틸아세테이트 3 mL씩으로 2회 반복추출한다. 유기용매층을 모아 60℃에서 증발건조시킨 후 잔류물을 50% 아세토니트릴 용액 2 mL에 재용해한다. 헥산 3 mL로 2회 세척한 다음 에틸아세테이트 3 mL로 추출하여 증발건조시킨다. 잔류물을 이동상용액 120 μL로 재용해하여 시험용액으로 한다.

 마. 시험조작 

  1) 측정조건 

   가) 칼럼：ODS-Hypersil(4.6 × 100 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

   나) 이동상：0.1 M 초산암모늄(Ammonium acetate):테트라하이드로퓨란(tetrahydrofuran) (69:31)

   다) 유속：3 mL/분

   라) 파장：UV 278 nm

 바. 정량시험

    시험용액 및 표준용액 35 μL를 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름시간을 비교하여 피크의 높이 또는 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 디클라주릴의 농도를 구한다.

10.6. 말라카이트 그린(Malachite Green)

 가. 분석원리

    검체를 아세토니트릴과 디클로로메탄으로 추출하고 감압농축한 후, 2,3-디클로로-5,6-디시아노-1,4-벤조퀴논(DDQ)을 이용하여 류코말라카이트 그린을 말라카이트 그린으로 산화시키고 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프/가시부흡광검출기로 분석한다.

 나. 장치

    액체크로마토그래프/가시부흡광검출기

 다. 시약 및 시액

  1) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

  2) 물：3차 증류수 또는 이와 동등한 것

  3) 표준원액：말라카이트 그린 및 크리스탈 바이올렛 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 하고 갈색유리병에 보관한다.

  4) 표준용액：표준원액을 이동상 A에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

  5)1 mM 2,3-디클로로-5,6-디시아노-1,4-벤조퀴논(2,3-Dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzo- quinone, DDQ) 용액：2,3-디클로로-5,6-디시아노-1,4-벤조퀴논 0.227 g을 100 mL 메스플라스크에 취하고 아세토니트릴로 녹여 표시선까지 채워 10 mM DDQ 용액을 만들어 냉장 보관한다. 사용직전에 10 mM DDQ 용액을 아세토니트릴로 10배 희석하여 사용한다.

  6) 25% 염산수산화아민 용액(Hydroxylamine hydrochloride, HAH)：염산수산화아민 25 g을 100 mL 메스플라스크에 취하고 물로 녹여 표시선까지 채운다.

  7) 1 M p-톨루엔설폰산(p-Toluene sulfonic acid, p-TSA) 용액：p-톨루엔설폰산 9.5 g을 50 mL 메스플라스크에 취하고 물로 녹여 표시선까지 채운다.

  8) 5 mM p-톨루엔설폰산/0.1 M 초산암모늄완충용액：7.7 g 초산암모늄을 1 L 메스플라스크에 취하고 물로 녹여 표시선까지 채운다. 초산 8 mL와 1 M p-톨루엔설폰산 5 mL를 넣어 pH 4.5로 조정한다. 이 액은 이동상 A 용액 조제 시 사용한다.

  9) 알루미나(충진제 Alumina, 중성) 카트리지 또는 이와 동등한 것

  10) 프로필설폰산(충진제 Propylsulfonic acid, PRS) 카트리지 또는 이와 동등한 것 

  11) 기타시약：특급

 라. 시험용액의 조제

    균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 5 mM p-톨루엔설폰산/0.1 M 초산암모늄완충용액 5 mL, 25% 염산수산화아민(HAH) 용액 1 mL, 1 M p-톨루엔설폰산(p-TSA) 용액 100 μL를 넣어 30초간 강하게 균질화한다. 여기에 아세토니트릴 25 mL를 넣어 30초간 강하게 진탕하고 다시 알루미나(80~200메쉬) 10 g을 넣어 15초간 강하게 진탕한 후 0℃, 2,000 G에서 5분간 원심분리하고 상등액은 미리 물 50 mL와 디에틸렌글리콜 2 mL를 넣은 250 mL 분액깔때기에 옮긴다. 다시 아세토니트릴 25 mL를 넣어 1분간 강하게 진탕하고 0℃, 2,000 G에서 5분간 원심분리한 후 상등액을 앞의 액과 합한다. 디클로로메탄 25 mL를 넣고 분액깔때기를 30초간 흔들어 섞은 후 정치하여 디클로로메탄층(아래층)을 취한다. 다시 디클로로메탄 25 mL를 넣어 이 과정을 한 번 반복하고 40℃ 수욕 중에서 감압농축한 후 잔류물을 아세토니트릴 3 mL에 녹이고 1 mM 2,3-디클로로-5,6-디시아노-1,4-벤조퀴논(DDQ) 용액 3 mL를 넣어 30분간 반응시킨다. 알루미나 카트리지(충진제 1 g) 및 프로필설폰산(Propylsulfonic acid, PRS) 카트리지(충진제 500 mg)를 미리 메탄올 5 mL와 아세토니트릴 5 mL로 활성화시키고, 프로필설폰산 카트리지에 아세토니트릴 5 mL를 넣은 후 알루미나 카트리지를 그 위에 연결한다. 검체를 추출한 액과 추출액이 담겨 있던 플라스크를 아세토니트릴 5 mL로 2회 세척한 액을 알루미나 카트리지에 흡착시키고 감압하여 분당 4 mL로 용출하고 알루미나 카트리지를 제거한다. 프로필설폰산 카트리지를 아세토니트릴 5 mL로 세척하고 감압하여 건조시킨 후 15 mL 원심분리관에 이동상 A 용액 4 mL로 용출한 액을 받아 이동상 A 용액으로 5 mL 눈금에 맞춘 후 0.2 μm 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

 마. 시험조작

  1) 측정조건칼럼：C18(4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

  2) 이동상 

   가) 이동상 A(95%)：5 mM p-톨루엔설폰산/0.1 M 초산암모늄완충용액：아세토니트릴(50:50)

   나) 이동상 B(5%)：아세토니트릴

  3) 유속：1.0 mL/분

  4) 측정파장：618 nm 

 바. 정량시험

  1) 시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름 시간을 비교하여 피크의 높이 또는 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 말라카이트 그린의 함량을 구한다.

  2) 정량한계：2 μg/kg

 사. 확인시험

    액체크로마토그래프/질량분석기로 정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 확인한다.

  1) 액체크로마토그래프 조건

   가) 칼럼：C18(2.0 × 100 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

   나) 이동상 

    (1) 이동상 A：0.1% 개미산 수용액

    (2) 이동상 B：0.1% 개미산 메탄올용액

┏━━━━┯━━━━━━┯━━━━━━┓

┃시간(분)│이동상 A(%) │이동상 B(%) ┃

┠────┼──────┼──────┨

┃0.0     │80          │20          ┃

┠────┼──────┼──────┨

┃1.5     │80          │20          ┃

┠────┼──────┼──────┨

┃6.0     │0           │100         ┃

┠────┼──────┼──────┨

┃8.0     │0           │100         ┃

┠────┼──────┼──────┨

┃8.5     │80          │20          ┃

┠────┼──────┼──────┨

┃10.0    │80          │20          ┃

┗━━━━┷━━━━━━┷━━━━━━┛

   다) 유속：0.3 mL/분

  2) 질량분석기 조건

   가) Ionization：ESI(positive)

   나) Capillary Temperature：450℃

   다)Collision gas：질소

┌────────┬─────┬─────┬─────┐

│Compound        │Precursor │Fragment  │Collision │

│                │Ion (m/z) │Ion (m/z) │Energy (V)│

├────────┼─────┼─────┼─────┤

│Malachite green │329       │313       │51        │

│                ├─────┼─────┼─────┤

│                │329       │208       │51        │

│                ├─────┼─────┼─────┤

│                │329       │165       │91        │

└────────┴─────┴─────┴─────┘

10.7. 마두라마이신(Maduramycin)

 가. 시험법 적용범위

    사료 등에 적용한다.

 나. 분석원리

    검체 중 마두라마이신, 샘두라마이신 및 티아물린을 아세토니트릴로 추출하고 SPE(Solid Phase Extraction) 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

 다. 장치

    액체크로마토그래프/질량분석기

 라. 시약 및 시액

  1) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

  2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

  3) 표준원액 : 마두라마이신 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

  4) 표준용액 : 표준원액을 이동상에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

  5) 후로리실 카트리지(500 mg, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

  6) 기타시약 : 특급

 마. 시험용액의 조제

    균질화한 검체 2 g에 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 헥산 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 헥산 5 mL로 활성화시킨 후로리실 카트리지에 추출액을 흡착시키고 헥산 5 mL로 4회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소 농축시키고 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

 바. 시험조작

  1)　액체크로마토그래프 조건

   가) 칼럼：C18(2.1 × 50 mm, 1.9 μm) 또는 이와 동등한 것

   나) 이동상

    (1) 이동상 A : 0.1% 개미산, 5% 아세토니트릴 수용액

    (2) 이동상 B : 0.1% 개미산, 95% 아세토니트릴 수용액

┌────┬───┬───┐

│시간(분)│A (%) │B (%) │

├────┼───┼───┤

│0.0     │80    │ 20   │

├────┼───┼───┤

│15.0    │ 0    │100   │

├────┼───┼───┤

│17.0    │ 0    │100   │

├────┼───┼───┤

│18.0    │80    │ 20   │

├────┼───┼───┤

│25.0    │80    │ 20   │

└────┴───┴───┘

   다) 유속 : 0.2 mL/min

  ２）질량분석기 조건

   가) 칼럼　Ionization : ESI(positive)

   나) Spray voltage : 5 kV

   다) Capillary temperature : 210℃

   라) Sheath gas : 질소(N2)(10 psi)

   마) Auxiliary gas : 질소(N2)(10 psi)

   바) SIM ion : m/z 934

 사. 확인시험

  1) 시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 질량분석기에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름시간을 비교하고 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 마두라마이신의 함량을 구한다.

  2) 정량한계 : 0.002 mg/kg

10.8. 설폰아마이드계 다성분 분석

 가. 설폰아마이드계 동시분석

    설파세타마이드(sulfacetamide),설파디아진(sulfadiazine),설파티아졸(sulfathiazole),설파피리딘(sulfapyridine),설파메라진(sulfamerazine),설파메티졸(sulfamethizole),설파메타진(sulfamethazine),설파클로로피리다진(sulfachloropyridazine),설파메토사졸(sulfamethoxazole), 설파모노메토진(sulfamonomethoxine),설피소사졸(sulfisoxazole),설파디메토신(sulfadimethoxine),설파퀴노살린(sulfaquinoxaline),설파메토시디아진(sulfamethoxydiazine),설피소미딘(sulfisomidine),설파클로로피라진(sulfachloropyrazine)

  1) 시약의 조제

   가) 표준원액 : 각 표준품을 10.0 mg을 메스플라스크에 칭량 후 메탄올로 용해한다. 각 표준품을 혼합하여 냉장고에 보관한다.

   나) 표준용액을 증류수와 메탄올 (1:1)로 적절한 농도로 혼합 및 희석한다.

   다) methanol : HPLC용

  2) 추출

   가) 시료 10 g을 원심분리 시험관에 칭량한 후 0.1 M HCl이 첨가된 methanol을 50 mL첨가한다.

   나) 30분간 진탕 후 30분간 초음파세척기로 추출 한다.

   다) 3000rpm에서 10분 원심분리 한다. 

   라) 원심분리후 상등액 5 mL을 취한후 물로 50 mL 정용한다.

   마) 정용된 상등액을 여과지에 여과시킨다. 

  3) 정제

   가) 상등액 20 mL을 취하여 면역컬럼에 주입한 후 컬럼에 있는 공기를 뺀 후 중력하 또는 시료액이 분당 2 ∼ 3mL가 컬럼을 통과하도록 압력을 조절한다. 

   나) 시료액이 면역컬럼을 통과한 후 증류수 10 mL을 분당 5 mL로 컬럼을 통과시켜 면역 컬럼을 세척한다. 

   다) 메탄올 2 mL로 결합된 설폰아마이드계열 항생제를 용리시킨다.

   라) 질소농축기로 완전히 증발시킨뒤 이동상을 500 μL를 이용해 재용해 시키고 시료액으로 한다.

  4) 측정

   가) 측정기기 : 고속액체크로마토그래피

   나) 컬럼 : ODS C18 또는 이와 동등한 것

   다) 이동상용매 : 0.1% acetic acid with phosphate buffer solution(PBS)

                   0.1% acetic acid with methanol

   라) 검출기파장 : 270 nm

   마) 유속 : 0.5 mL/min

   바) 주입량 : 5 μL

  5) 계산

  측정된 크로마토그람의 피이크 높이 또는 피이크 면적을 구하고 검량선을 작성하여 계산한다.

11장. 생균제(Probiotics)

1. 분석원리

생균제란 숙주에 유익한 작용을 갖는 미생물제제 또는 미생물의 성분으로 적정 농도로 희석한 시료 일정량을 취하여 균에 적합한 선택배지에 도말하여 균 생장에 적합한 온도로 일정시간 배양하여 발생한 집락수를 계수하여 시료 중에 존재하는 균수를 측정한다.

2. 분석방법

 가. 대상균주

┌───────────┬───────────────────────────────────┐

│Lactobacillus sp.     │락토바실러스 락티스, 락토바실러스 루테리, 락토바실러스 불가리쿠스,    │

│                      │락토바실러스 브레비스, 락토바실러스 살리바리우스, 락토바실러스 애     │

│                      │시도필러스, 락토바실러스 카제이, 락토바실러스 커바투스, 락토바실러    │

│                      │스 퍼멘텀, 락토바실러스 프란타럼, 락토바실러스 헬베티쿠스, 락토바     │

│                      │실러스 페롤렌스, 락토바실러스 파라카제, 락토바실러스 크리스파투스     │

├───────────┼───────────────────────────────────┤

│Bacillus sp.          │바실러스 렌투스, 바실러스 리체니포미스, 바실러스 서브틸리스, 바실러   │

│                      │스 세레우스(도요이에 한함), 바실러스 코아글란스, 바실러스 폴리프멘    │

│                      │티쿠스, 바실러스 푸밀루스                                             │

├───────────┼───────────────────────────────────┤

│효모                  │맥주효모, 토룰라효모, 제빵효모, 양조효모, 조사건조효모, 효모배양물,   │

│(Saccharomyces sp.)   │잔토필로마이세스 덴드로하우스, 피키아 파리노사                        │

├───────────┼───────────────────────────────────┤

│Bifidobacterium sp.   │비피도박테리움 롱검, 비피도박테리움 비피덤, 비피도박테리움 서모필     │

│                      │럼, 비피도박테리움 인판티스, 비피도박테리움 슈도롱검                  │

├───────────┼───────────────────────────────────┤

│Enterococcus sp.      │엔테로코커스 락티스, 엔테로코커스 써모필러스, 엔테로코커스 훼시엄     │

├───────────┼───────────────────────────────────┤

│Pediococcus sp.       │페디오코커스 세레비지아, 페디오코커스 애시디락티시, 페디오코커스 펜토 │

│                      │사세우스                                                              │

├───────────┼───────────────────────────────────┤

│Aspergillus sp.       │아스퍼질러스 니이거, 아스퍼질러스 오리제                              │

├───────────┼───────────────────────────────────┤

│Monascus sp.          │모나스커스 퍼퓨리어스                                                 │

├───────────┼───────────────────────────────────┤

│Clostridium butyricum │클로스트리듐 브티리컴                                                 │

└───────────┴───────────────────────────────────┘

 나. 기구 및 시약 등

  1) 기구

    크린벤치, 고압멸균기, 균질기, 광학현미경, 배양기, 교반기, 초순수제조장치 

  2) 시약

    NaCl, L-cystein, KH2PO4, Na2HPO4, tween 80, BPB(Bromophenol blue), TTA(Tartaric acid)

  3) 배 지

  ① DeMan-Rogosa-Sharpe(MRS)② Nutrient Agar(NA) 

  ③ KF Streptococcus④ Potato Dextrose Agar(PDA)

  ⑤ Yeast Extract Glucose Chloramphenicol Agar(YEGC) 

  ⑥ Bifidobacterium Selective Agar(BS)⑦ Salmonella Shigella Agar(SS) 

  ⑧ Xylose Lysine Desoxycholate(XLD)⑨ Clostridium Difficile Agar Base 

 다. 용액 제조

  1) 시료추출용액 : 0.85% 생리식염수

   가) 비이커에 NaCl을 넣고 증류수를 가하여 완전히 녹인다.

   나) 250ml 사각광구병에 90ml, 25ml 시험관에 9ml씩 분주한다.

   다) 마개를 막고 121℃에서 15분간 고압 멸균하여 방냉한다.

  2) 다당류코팅제거 완충액 : 시료에 코팅이 되어있어 시료추출용액(생리식염수)으로 균이 추출되지 않을 경우 완충액을 사용한다. 

┌──┬─────┬───┬───────────────────────────┐

│No. │시약      │중량  │방법                                                  │

├──┼─────┼───┼───────────────────────────┤

│■  │L-cystein │0.5g  │■～■번까지 섞은 후 증류수를 부어 호일로 덮고 온도를 │

├──┼─────┼───┤약간 높여서 섞음(시약량은 증류수 3L제조 기준)         │

│■  │KH2PO4    │2.37g │                                                      │

├──┼─────┼───┤                                                      │

│■  │Na2HPO4   │2.12g │                                                      │

├──┼─────┴───┼───────────────────────────┤

│■  │pH 7.7로 조절     │NaOH, HCl 1N시약으로 pH 조절                          │

├──┼─────┬───┼───────────────────────────┤

│■  │tween 80  │0.05% │온도를 약간 높여 완전히 녹여서 섞음                   │

└──┴─────┴───┴───────────────────────────┘

 라. 배지 및 배양조건 

 ┌──────────┬─────────────────────┐

│균종                │배지종류                                  │

│                    ├────┬────┬───────────┤

│                    │배양조건│배양온도│배양시간              │

├──────────┼────┴────┴───────────┤

│Lactobacillus sp.   │MRS Agar + 0.002% Bromophenol blue        │

│                    ├────┬────┬───────────┤

│                    │혐기    │30～37℃│48～72시간            │

├──────────┼────┴────┴───────────┤

│Bacillus sp.        │Nutrient Agar 또는 Nutrient broth + Agar  │

│                    ├────┬────┬───────────┤

│                    │호기    │35℃    │18～20시간            │

├──────────┼────┴────┴───────────┤

│효모                │Yeast Extract Glucose Chloramphenicol Agar│

│(Saccharomyces sp.) ├────┬────┬───────────┤

│                    │호기    │25℃    │5～7일                │

├──────────┼────┴────┴───────────┤

│Bifidobacterium sp. │Bifidobacterium Selective Agar            │

│                    ├────┬────┬───────────┤

│                    │혐기    │36±1℃ │24～48시간            │

└──────────┴────┴────┴───────────┘

 ┌───────────┬────────────────┐

│Enterococcus sp.      │KF streptococcus Agar           │

│                      ├──┬────┬────────┤

│                      │호기│36±1℃ │48시간          │

├───────────┼──┴────┴────────┤

│Pediococcus sp.       │MRS Agar + 0.002% Bromophenol blue  │

│                      ├──┬────┬────────┤

│                      │혐기│36±1℃ │48시간          │

├───────────┼──┴────┴────────┤

│Aspergillus sp.       │Potato Dextrose Agar + 10% 주석산 │

│Monascus sp.          ├──┬────┬────────┤

│                      │호기│22～25℃│5일             │

├───────────┼──┴────┴────────┤

│Clostridium butyricum │Clostridium Difficile Agar Base │

│                      ├──┬────┬────────┤

│                      │혐기│36±1℃ │24～48시간      │

└───────────┴──┴────┴────────┘

 바. 분석절차 

  1) 시료 10g을 취하여 생리식염수 90ml에 넣고 35℃에서 20분간 진탕하여 균질화한다.

  2) 희석액을 제조한다.

   가) 9ml 생리식염수 시험관에 시료 1ml를 취하여 첫 번째 시험관에 넣고 잘 혼합한다. 

   나) 혼합액 1ml를 취하여 시험관에 10배 단계희석한다.

  3) 혼합액 100 μL를 취하여 배지에 주입하여 물기가 없어질 때까지 도말한다. 

     농도 당 3반복 이상으로 한다.

 사. 균 확인시험 

  1) 생화학적 분석 kit

    생화학적 분석 kit는 Biochemical test, Assimilation test, Fermentation test를 이용한 동정법으로 Biochemical test는 saline용액에 시험균을 현탁하여 대사유무를 색의 변화로써 판정한다. Assimilation test는 현탁한 시험균을 접종 배양한 후 탁도 변화로 판정한다. Fermentation test는 당으로부터 산을 생산하여 pH의 변화로 판정한다. 

  2) 기기분석  

    초미량의 각종 건조 배지 및 생화학적 반응물이 들어 있는 마이크로웰이 있는 플라스틱 카드를 사용한다. 카드의 마이크로웰 내부에서 균의 증식 및 대사가 이루어지고, 이러한 화학반응의 변화를 매 15분마다 Transmittance/Colorimetry Optics으로 측정하여 프로그램상에서 분석 되어진 후 결과를 자동으로 출력한다. 

제12장 효소제

12.1. α-아밀라아제(전분호정화력)

12.1.1. α-아밀라아제(전분호정화력 제1법)

 가. 원리

    아밀라아제(amylase, 전분분해효소)는 전분의 가수분해에 관여하는 효소로 그 종류도 많고 각기 분해생성물도 다르며 성질의 차이에 따라 여러 가지 분류법이 있다. 아밀라아제에 의한 전분의 분해에는 액화, 호화, 당화의 3단계가 행해지며, 특히 액화, 호화력이 강한 것을 액화형 amylase(α-amylase)라 하고, 당화력이 강한 것을 당화형 amylase(β-amylase)라고 한다. 전분이 amylase의 작용을 받아 호정화되어 가면 전분의 요오드정색이 변화한다. 이것에 의하여 amylase의 호정화력을 측정하는 방법이다. 

 나. 시약의 조제

  1) 1% 가용성 전분(soluble starch)용액

  2) 0.01 N-요오드용액

   가) KI 약 50 g을 소량의 증류수로 용해시키고, 요오드 12.69 g을 가하여 완전히 용해한다.

   나) 이것을 1 L로 하여 0.1 N의 용액을 조제하고 다시 10배로 희석한다. 

  3) 0.1 M- 초산염완충용액

   가) 0.1 M 초산(acetic acid)용액과 0.1초산나트륨(sodium acetate)용액을 적당량 혼합해서 그 효소의 최적 pH로 한다.

   나) 0.1 M 초산용액을 적당량 혼합해서 그 효소의 최적 pH로 한다.

   다) 0.1 M 초산용액은 acetic acid 6.005 mL을 정밀하게 청량하여 증류수에 용해시켜 1 L로 하고, 

   라) 0.1 M 초산나트륨(sodium acetate) 용액은 sodium acetate(CH3COONa?3H2O) 13.61 g을 정밀하게 칭량하여 증류수에 용해시켜 1 L로 하여 각각 조제한다.

  4) 2 N 초산(acetic acid)용액

  5) 1/300 M-NaCl용액

  6) 1/300 M 초산칼슘(calcium acetate)용액

 다. 측정

  1) 효소액의 조제시료를 1/300 M NaCl, 1/300 M 초산칼슘(calcium acetate) 혼합액에 용해시켜 적당한 농도로 한다. 

  2) 활성도의 측정

   가) 마개가 있는 시험관 여러 개를 준비하고, 

   나) 효소액을 1, 0.9, 0.8, 0.7, 0.6, ?????, 0.1 mL씩 취한다.

   다) 여기에 0.1 M 초산염완충용액 1 mL씩을 가하여 흔든다. 

   라) 각 시험관에는 미리 40℃로 가열된 1% 가용성 전분 용액을 5 mL씩 가하여 즉시 흔들고

   마) 40℃의 항온수조 내에 넣어 30분간 반응시킨다

   바) 반응정지 즉시 2 N 초산용액 2 mL씩을 가하여 흔들어 반응을 정지시킨다

   사) 0.01 N요오드용액을 1 mL씩 넣어서 발색시킨다.

 라. 계산

    아밀라아제(amylase)활성도 단위는 반응시킨 시험관 안에서 엷은 자색을 나타내는 시험관을 취하여 여기에 첨가한 희석한 효소액의 양으로부터 효소액 1 mL에 의하여 분해된 1% 가용성 전분의 mL수로서 표시한다. 이 효소의 전분 호정화력은 다음과 같이 표시한다.

효소활성도(D40℃30＇)= 5 X (1/E) X F

E : 시험관에 가한 희석한 효소액량( mL)

F : 효소액의 희석배수

D40℃30＇: D는 diastase의 머리글이며, 숫자는 40℃에서 30분간 반응시켰음을 나타낸다.

12.1.2. α-아밀라아제(전분호정화력 제2법)

 가. 분석원리

    검체 중 α-아밀라아제의 정량분석 값은 역가(Unit)로 나타내며, 1 역가(Unit)는 시험용액 조제 조건에서 1분간 전분으로부터 포도당 1 μg을 분해해내는데 필요한 α-아밀라아제의 양으로 정의한다. 검량선을 통해 산출된 시험용액 중 포도당의 양을 검체 1 g이 함유하는 α-아밀라아제의 역가(Unit/g)로 환산한다.

 나. 장치

  분광광도계(Spectrophotometer)

 다. 시약 및 시액

  1) 1% 가용성 전분용액 : 가용성 전분(최순품) 1 g을 증류수에 녹이고 호화하여 100 mL로 한다.

  2) 맥바인(Mcllvaine) 완충액(pH 7.0) : 0.1 N 인산일수소나트륨액 일정량에 0.1 N 구연산액을 넣어 pH 7.0으로 한다.

  3) 0.1% 염화칼슘용액?염화칼슘(순품) 1 g을 증류수에 녹여 1 L로 한다.

  4) DNS 용액 : 3,5-디니트로살리실산(dinitrosalicylic acid) 5.3 g과 수산화나트륨 9.9 g을 증류수 708 mL에 용해한 후 주석산칼륨나트륨(potassium sodium tartarate) 153 g, 페놀 3.8 mL, 메타중아황산나트륨(sodium metabisulfite) 4.15 g을 넣고 용해한 후 증류수를 이용하여 1 L로 한 뒤 빛을 차단하여 보관한다.

  5) 포도당용액 : 포도당(최순품)을 증류수에 녹여 2,000 μg/mL로 한다.

 라. 시험용액의 조제

  1) 시료를 적정량 취하여 증류수 또는 맥바인 완충액에 녹여 100 mL로 한 다음 여과한다.(이를 ‘시료액’이라 한다.)

  2) 20 mL 시험관에 1% 가용성 전분용액 5 mL, 맥바인완충액(pH 7.0) 13 mL와 0.1% 염화칼슘용액 1 mL를 넣고 37℃로 가온하고 1)항의 시료액 1 mL를 넣은 후 37℃에서 20분간 방치 후 100℃에서 10분간 가열 하고 실온에서 냉각한 뒤 4℃, 10,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상층액을 사용한다. 

  3) 무처리(Blank) 처리구는 20 mL 시험관에 1% 가용성 전분용액 5 mL, 맥바인완충액(pH 7.0) 13 mL와 0.1% 염화칼슘용액 1 mL를 넣고 37℃로 가온하고 증류수 1 mL를 넣은 후 37℃에서 20분간 방치 후 100℃에서 10분간 가열 하고 실온에서 냉각한 뒤 4℃, 10,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상층액을 사용한다.

  4) 2)항과 3)항의 상층액 0.4 mL에 DNS 용액 1.2 mL을  각각 넣은 후, 100℃에서 5분간 가열하여 실온에서 냉각한 것을 측정한다.

 마. 검량선 작성

  1) 검량선 작성을 위해 포도당용액을 증류수로 희석하여 직선성이 확보되는 농도로 최소 5 수준이 되도록 한다.

  2) 희석된 포도당 용액들과 증류수 0.4 mL에 각각 DNS 용액 1.2 mL를 가한다. 100℃에서 5분간 가열하여 실온에서 냉각한 것을 검량선 작성을 위한 시험용액으로 하여 흡광도를 측정한다.

  3) 검량선은 농도별 포도당 표준용액의 흡광도 값에 증류수 표준용액의 흡광도 값을 빼준 수치를 이용하여 작성한다.

 바. 시험조작

    증류수를 대조액으로 하여 액층 1 cm, 파장 540 nm에서 흡광도를 측정한다. 이때 시험용액의 흡광도는 공시험용액의 흡광도보다 커야 한다. 발색의 정도가 지나쳐 측정이 곤란한 경우는 시료액을 희석하여 시험하고 희석배수를 적용한다. 시험용액 중 효소반응에 의해 생성된 포도당의 양은 시험용액의 흡광도 값에 공시험용액 흡광도 값을 뺀 수치를 검량선에 대입하여 산출한다.

 사. 효소의 역가 계산

    검량선을 통해 산출된 시험용액 중 포도당의 양을 아래 식과 같이 검체 1 g이 함유하는 α-아밀라아제의 역가(Unit/g)로 환산하여 계산한다.

  역가(Unit/g)  =   A ? 100 ? 50 ? D   

                  ────────────

                    20 ? W               

A : 시험용액 중 포도당 양 (μg/0.4 mL)

100 : 100 mL 중 1 mL 효소반응

50 : 20 mL 중 0.4 mL 발색 반응

D : 시험용액 희석배수

20: 효소반응 시간(분)

W : 검체 무게(g)

12.2. 말토게닉아밀라아제

 가. 적용 및 원리 : 본 시험방법은 Bacillus subtilis 및 그 변종에서 얻어진 효소제의 말토게닉아밀라아제 역가를 측정하는 방법이다. 역가시험은 온도 37℃에서 말토트리오스기질의 가수분해에 근거를 두고 있다. 생성된 포도당은 Glucose dehydrogenase 및 NAD가 함유된 혼합액을 사용하여 측정한다.

 나. 시험용액의 조제 : 검체 일정량을 취하여 1 mL당 0.015～0.075 MANU를 함유하도록 물로 희석한다. 다만, 최종희석액은 1%의 1M 염화나트륨용액을 함유하도록 조제한다.

 다. 시험조작 : 기질용액 0.5 mL를 시험관에 넣고 37±1°의 수욕조에서 항온시킨다. 시험용액 0.5 mL를 정확히 가하고 흔들어 혼합한 후 수욕조에 방치한다. 정확히 30분후 시험관을 수욕조에서 꺼내어 0.06N 수산화나트륨용액 1 mL를 가하여 반응을 중지시킨 다음 이액에 GluDH용액 3 mL를 가하여 잘 혼합하고 상온에서 정확히 30분간 유지시킨다. 기질용액 0.5 mL, 0.06N, 수산화나트륨용액 1 mL, 시험용액 0.5 mL의 순으로 가해주고 GluDH용액 3 mL를 가해준 다음 상온에서 30분간 유지시킨 액을 효소공시험용으로 한다. 효소공시험용액을 대조액으로 하여 액층 1cm, 파장 340nm에서 흡광도를 측정하여 표준곡선에서 포도당표준용액의 농도(μmol/L)를 구한다.

 라. 표준곡선 : 포도당 1.6 g을 정밀히 달아 물을 가하여 1,000 mL로 한다. 이 액을 사용하여 각각 88.8 μmol/L, 177.6 μmol/L, 266.4 μmol/L, 355.2 μmol/L, 444.0 μmol/L, 532.9 μmol/L의 포도당을 함유하도록 포도당 표준용액을 조제한다. 각 표준용액 2 mL를 각각의 시험관에 넣고 GluDH용액 3 mL를 가해준 다음 상온에서 30분간 방치한다. 이들 용액에 대해 물을 대조액으로 하여 액층 1 cm, 파장 340 nm에서 흡광도를 각각 측정하고 포도당표준용액의 농도(μmol/L)에 대한 표준곡선을 작성한다. 

    다음의 계산식에 따라 효소제의 역가를 구한다.

A : 표준곡선에서 얻은 시험용액의 포도당표준용액의 농도(μmol/L)

F : 희석배수

4 : 시험에 사용된 시험용액의 약 0.5 mL와 포도당표준용액의 양 2 mL의 비

30 : 반응시간(분)

W : 검체의 채취량(g)

1,000 : l를 mL로 전화시키는 계수

 마. 역가의 정의 : 1 Maltogenic Amylase Nove Unit(MANU)는 상기시험조건하에서 분당 1μmol/L의 말토트리오스를 분해하는 효소의 양이다.

 바. 시액

  1) 구연산완충액 : 구연산 0.225 g에 물 20 mL를 가하여 녹인 다음 4 N 또는 1 N 수산화나트륨용액을 가하여 pH 5.0으로 조절한 다음 물을 가하여 250 mL로 한다.

  2) 기질용액 : 말토트리오스(Maltotriose)1 g을 구연산완충액에 녹여 50 mL로 한다.

  3) 1 M 염화나트륨용액 : 염화나트륨 29.22 g에 물을 가하여 500 mL로 한다.

  4) 0.06 N 수한화나트륨용액 : 1 N 수산화나트륨용액 30 mL를 취한 다음 물을 가하여 500 mL로 한다.

  5) GluDH용액 : 글루코오스디하이드로게나아제(Glucose dehydrogenase)를 함유한 혼합시액(Merck No. 14853)을 사용한다.

12.3. β-아밀라아제(전분당화력시험법)

 가. 분석원리

    본 시험방법은 아밀라아제가 전분에 작용할 때 전분의 구조 가운데 글루코사이드 결합이 절단되는 정도에 따라 환원력이 증가되는 것을 이용하여 전분이 소화되는 정도의 차이를 측정하는 방법이다.

 나. 시약 및 시액

  1) 1 M 초산나트륨 완충액: 초산나트륨(sodium acetate trihydrate, CH3COONa·3H2O) 136.08 g을 증류수 1 L에 용해하여 조제한다.

  2) 기질(Substrate)

    미리 감자전분 약 1 g을 정확히 칭량하여 105℃에서 2시간 건조하여 그 감량을 측정한다. 그 건조물 1 g에 대응하는 감자전분을 정확히 측정하여 삼각플라스크에 넣어 물 20 mL를 넣고 잘 교반하면서 서서히 2 N 수산화나트륨 시액 5 mL를 넣어 죽상태로 만들고 수욕상에서 교반하면서 3분간 가열한 후, 물 25 mL를 넣어 냉각 후 2 N 염산시약으로 정확히 중화하여 시료의 최대효소활성을 나타내는 pH에 조제한 1 M 초산, 초산나트륨 완충액 10 mL를 넣고 여기에 물을 추가하여 정확히 100 mL를 만든다.

  3) 시험용액의 조제

    시료 적당량을 정밀하게 측정하여 1 mL당의 농도가 0.4 ~ 0.8 전분당화력단위로 되도록 물 또는 시료의 최대효소활성을 나타내는 pH에 조제한 0.1 M 황산염  완충액을 넣어 녹인 후, 시료용액으로 한다. 시료가 완전히 녹지 않는 경우에는 이따금씩 교반 하면서 1시간 방치한 후 원심분리하여 그 상등액을 시료 용액으로 한다. 기질 용액 10 mL를 정확히 칭량하여 직경 30 mm의 시험관에 넣어 37±0.5℃에서 10분간 방치한 후, 시료 용액 1 mL를 정확히 측정하여 넣은 후 즉시 교반하여 37±0.5℃에서 정확히 10분간 방치한다. 다음에 페린용액의 동(銅)액 2 mL를 넣어 시험관 입구에 깔때기를 끼우고 수조속에서 정확히 15분간 가열하여 냉각시킨다. 여기에 짙은 염화칼륨 시약 2 mL 및 묽은 황산(1→6) 2 mL를 넣고, 유리한 요오드를 즉시 0.05 N 티오황산나트륨액으로 적정한다.(지시약 용성전분시약 1∼2방울) 이 경우에 적정 종점은 액의 청색이 없어진 때로 하며 그 적정량을 A mL로 한다. 별도로 기질용액 10 mL 대신 물 10 mL를 취하여 이하 같은 방법으로 조작하여 그 적정량을 B mL로 한다.

 다. 계산방법

  1 g중의 전분당화력 단위 =   (B-A)   ×    1.6   ×    1   ×  1   

                                                      ───  ───

                                                        10      S   

A : 기질 적정량(g)

B : 기질 공시험 적정량(mL)

S : 시료량(g)

12.4. 셀룰라아제(섬유당화력 시험법)

12.4.1. 섬유당화력 시험법 제1법

 가. 기질용액의 조제

    미리 카르복시메틸셀룰로스나트륨 약 1g을 정확히 칭량하고, 105℃에서 4시간 건조하여 그 감량을 측정한다. 그 건조물 0.625g에 대응하는 카르복시메틸셀룰로스나트륨을 정확히 취하여 물 50 mL에 휘저어 섞으면서 조금씩 넣은 후 60～70℃에서 가끔씩 저으면서 20분간 가열하여 녹이고 냉각한 후 시료의 최대효소활성을 나타내는 pH에 조제한 1M 초산, 초산나트륨 완충액 10 mL를 넣어 여기에 물을 넣어 정확히 100 mL로 만든다.

 나. 방법

  1) 시료 적당량을 정밀하게 측정하여 1 mL당의 농도가 0.02～0.08 섬유당화력단위로 되도록 물 또는 시료의 최대효소활성을 나타내는 pH에 조제한 0.1M 초산, 초산나트륨완충액을 넣어 녹인 후, 시료용액으로 한다. 시료가 완전히 녹지 않는 경우에는 이따금씩 교반하면서 1시간 방치한 후 원심분리하여 그 상등액을 시료 용액으로 한다. 기질 용액 4 mL를 정확히 칭량하여 25 mL의 메스플라스크에 넣어 37±0.5℃에서 10분간 방치한 후, 시료 용액 1 mL를 정확히 측정하여 넣은 후 즉시 흔들어 섞고 37±0.5℃에서 정확히 30분간 방치한다. 다음에 알칼리성 동銅 시약 B 2 mL를 넣어 흔들어 섞고 메스플라스크에 뚜껑을 하고 수조속에서 30분간 가열하여 냉각시킨다. 여기에 비소몰리브덴산 시약 2 mL를 넣어 잘 흔든 후, 0.5N 수산화나트륨 시약 3 mL를 넣어 흔든 후 침전을 녹여 20분간 방치한 후 시료의 최대효소활성을 나타내는 pH에 조제한 1M 초산, 초산나트륨 완충액을 넣어 정확히 25 mL로 한다. 이 용액 1 mL를 정확히 칭량하여 시료의 최대효소활성을 나타내는 pH에 조제한 1M 초산, 초산나트륨 완충액 9 mL를 넣어 잘 섞은 후 파장 750nm에서의 흡광도 AT를 측정한다. 별도로 시료 용액 1 mL를 정확히 칭량하고 25 mL의 메스플라스크에 넣어 알칼리성 동銅 시약 B 2 mL를 넣어 흔들고 기질 용액 4 mL를 정확히 칭량하여 넣고 교반하여 메스플라스크에 뚜껑을 막고 수조속에서 30분간 가열하여 냉각시킨다. 이하 같은 방법으로 조작하여 흡광도 AT'를 측정한다. AT 및 AT'에 대응하는 포도당의 양( mg)을 검량선에서 구하여 각각 GT 및 GT'로 한다. 

1g중의 섬유당화력 단위 = 

W : 시료 용액 1 mL 중의 시료의 량(g)

  2) 검량선의 작성

     미리 포도당 약 1g을 정밀하게 칭량하여 105℃에서 6시간 건조 후 그 감량을 측정한다. 그 건조물 1g에 대응하는 포도당을 정확하게 칭량하여 물을 넣어 녹인 후 정확히 1000 mL로 한다. 이 액을 1, 2, 3, 4 및 5 mL를 정확히 측정하여 각각에 물을 넣어 정확히 10 mL로 한다. 각각의 액 1 mL 기질용액 4 mL 및 알칼리성 동銅용액 B 2 mL를 정확히 칭량하고 25 mL의 메스플라스크에 넣어 잘 섞은 후 메스플라스크에 뚜껑을 막고 수욕상에서 30분간 가열하여 냉각시킨다. 비소몰리브덴산 시약 2 mL를 넣어 잘 섞고, 여기에 0.5N 수산화나트륨시약 3 mL를 넣어 잘 섞어 침전을 녹여 20분간 방치한 후 시료의 최대효소활성을 나타내는 pH에 조제한 1M 초산, 초산나트륨 완충액을 넣어 각각 정확히 25 mL로 한다. 이들 용액을 파장 750nm에서의 흡광도 A1, A2, A3, A4 및 A5를 측정한다. 별도로 물 1 mL, 기질용액 4 mL 및 알칼리성 동銅용액 B 2 mL를 정확히 칭량하여 이하 같은 방법으로 조작하여 흡광도 A0를 측정한다. 흡광도 차이 (A1-A0), (A2-A0), (A3-A0), (A4-A0) 및 (A5-A0)를 종축으로 포도당의 양( mg)을 횡축으로하여 검량선을 작성한다.

12.4.2. 섬유당화력 시험법 제2법

 가. 원리 

    셀룰라아제(cellulase, 섬유소분해효소)는 glucose의 β-1,4 결합에 의하여 축합된 셀룰로오스(cellulose, 섬유소)의 가수분해에 관여하는 효소이다. 변성 섬유소인 carboxymethyl cellulase(CMC)를 기질로 하여 효소를 작용시켜 기질이 분해되어 생성되는 환원당을 정량하여 cellulase의 활성도를 측정한다.

 나. 시약의 조제

  1) 0.1 M 초산염완충용액(pH 5.5) : 0.1 M초산(acetic acid)과 0.1 M초산나트륨(sodium acetate)을 14.8:35.2의 비율로  혼합한다.

  2) 1 N-NaOH 용액 

  3) 2%(w/v)-CMC 용액

  4) DNS(dinitrosalicylic acid) 용액

 다. 측정

  1) 효소액의 조제시료를 증류수에 용해시켜 적당한 농도로 사용한다. 최종의 희석액에는 0.1M 초산염완충용액(pH 5.0)을 사용한다.

  2) 활성도의 측정2%(w/v) CMC 용액 1 mL를 시험관에 취하고, 여기에 0.1 M 초산염완충용액(acetate buffer, pH 5.5) 1 mL를 가하여 흔든다. 45℃의 항온수조에서 3분간 예열한 후 효소액(적당하게 희석된 것, 희석배율 F) 0.2 mL를 넣어서 흔든다. 45℃의 항온수조내에서 60분간 진탕 반응시킨다. 반응직후에 1 N-NaOH 용액 1 mL를 가하여 반응을 정지시킨다. 100℃의 끓는 물에서 5분간 가열하여 반응을 정지시켜도 된다. 반응 상층액 0.2 mL를 취해서 DNS(dinitrosalicylic acid) 용액 0.6 mL씩 넣고  100℃의 끓는 물에서 5분간 반응시킨다. 그리고 증류수로 5 mL되게 희석시킨다. 550nm에서 OD값을 측정하여 CMC로부터 유리된 환원당(glucose)의 양을 환산한다. 환원당의 정량은 Somogyi법이나 Bertrand법을 이용해도 무방하다. 측정된 환원당의 양을 G ug이라 한다. 대조로서 2% CMC액 1 mL, 0.1 M 초산염완충용액 1 mL, 1N-NaOH용액 1 mL를 가하여 흔들고, 다시 효소액 1 mL를 가한 혼합액 1 mL의 환원당을 정량하여 glucose로서 표시한다. 이것을 B mg으로 한다. 

 라. 계산 

    셀룰라제 활성도 단위는 45℃에서 60분간에 생성되는 환원당(glucose)의 mg수로서 표시한다. 

셀룰라제 활성도 = (G ? B)×10×F

(F는 효소액의 희석배수)

12.5. β-글루카나아제

 가. 분석원리

    본 시험 방법은 Aspergillus niger 및 그 변종, Bacillus subtilis 및 그 변종에서 얻어진 효소제의 β-글루카나아제 역가를 측정하는 방법이다. 

 나. 시약 및 시액

  1) 0.1 M Sodium acetate buffer (pH 5.0):　Sodium Acetate (3수화물, MW 136.08 g/mol) 13.6 g을 정제수에 용해하여 1000 mL로 만들고 1 M 초산용액을 사용하여 pH 5.0으로 조절한다.

  2) 기질(substrate)

    1.0% (w/w) β-glucan :　β-Glucan(from barely) 1.00 g을 0.1 M Sodium acetate buffer (pH 5.0) 80 mL에 서서히 가하여 녹인다. β-Glucan이 용해되어 현탁액이 될 때까지 격렬히 저어주면서 계속 끓여준다(중탕). 계속 저어주면서 현탁액을 실온으로 식히고 0.1 M sodium acetate buffer (pH 5.0)을 가하여 β-glucan의 농도가 1% (w/w)가 되도록 조정한다. 냉장보관 하여 2일 이내에 사용하여야 한다.

  3) DNS용액 : 10 g의 3,5-dinitrosalicylic acid를 약 600 mL의 물에 분산시키고 용액이 맑아  질 때까지　저어준다. 100 mL의 NaOH용액(16 g의 NaOH를 100 mL의 물에 녹인 것)을 저어주면서 서서히 가하고 용액이 맑아질 때까지 계속 저어준다. 저어주면서 300 g의 sodium patassium tartrate를 서서히 가한다. 필요하면 맑은 용액이 될 때까지 (48℃가 넘지 않도록) 가온한다. 물로 희석하여 1 L가 되게 하고 여과지로 여과하여 사용한다. 이 시약은 갈색병에 담아 실온에서 보관한다. 최대 6개월간 안정하다. 보관 중에 침전물이 생기고 맑지 않으면 새로운 용액을 제조한다.

 다. 시험용액의 조제 및 방법 

  1) 검량선 작성　

    무수 glucose 100 mg/100 mL의 0.1 M sodium acetate buffer로 0.1 mg/mL, 0.2 mg/mL, 0.3 mg/mL, 0.4 mg/mL, 0.5 mg/mL, 0.6 mg/mL을 만든다. 그 후 각 표준용액 1 mL와 1 mL의 sodium acetate buffer용액 그리고 2 mL의 DNS시약을 시험관에 넣고 섞어준 다음 10분간 끓여준다. 그 후 찬물로 실온까지 냉각시키고 540 nm(또는 513 nm) 에서 흡광도를 측정한다. 공시료는 표준용액 대신에 buffer용액을 사용한다. Glucose농도와 그 흡광도 값으로부터 선형방정식을 구한다. 새로운 DNS시약을 만들 때마다 반복 실험하여 검량선을 작성해야 한다. 효소역가 계산시는 선형회귀방정식을 작성하여 사용한다.

  2) 측정 과정

   가) 시료와 기질 용액을 아래와 같이 반응시켜 0.1~0.6 mg/mL의 glucose가 생성될 수 있도록 균질화된 시료를 정밀하게 칭량하여 100 mL 부피 플라스크에 취하고 50 mL에서 60 mL 정도의 0.1 M sodium acetate buffer (pH 5.0)을 가하여 분산시키고 30분 이상 흔들어준다. Buffer 용액으로 표선을 맞추고 진탕 후 원심분리하여 상등액을 취한다(필요에 따라 추가희석 가능). 50℃에서 평형상태가 되도록 5분간 예열된 이 효소액 1 mL에 1mL의 β-glucan 기질용액을 가한 다음 혼합해 주고 50℃에서 정확히 10분간 반응 시킨다. 반응액에 2 mL의 DNS용액을 가하고 혼합시켜 정확히 10분간 끓여준 뒤, 증류수 10 mL을 가하고 찬물로 실온까지 냉각시킨다. 냉각된 용액의 흡광도를 540 nm(또는 513 nm)에서 측정한다(바탕 보정 시료: 물). 

   나) 공시료는 50℃에서 정확히 10분간 정치시킨 1 mL의 β-glucan 기질용액에 2 mL의 DNS시약과 추출한 효소액 1 mL를 가하고 혼합시킨 다음 정확히 10분간 끓여준다. 여기에 증류수 10 mL을 가하고 찬물로 실온까지 냉각시킨 후 냉각된 용액의 흡광도를 540 nm(또는 513 nm) 에서 측정한다(바탕 보정시료: 물).

 라. 역가의 정의　

    1 unit의 역가는 기질인 β-glucan으로부터 분당 1 μmol의 glucose를 유리시키는 효소의 양이다.

 마. 계산방법

    먼저 glucose 표준용액으로 구한 검량선의 선형회귀방정식으로부터 효소액의 glucose 농도를 구하고 다음 계산식으로 구한다.

  역가(U/g 또는 U/mL) =   C × D              

                        ───────────

                          180.16 × 10 × S   

C : 검량선을 통해 확인한 glucose의 농도(μg/mL)

D : 시료와 최종시료 용액간의 희석배수(예: 시료를 녹여 100 mL 용액을 만들고 이를 다시 10배 희석하여 최종시료 용액으로 한 경우, F=1000)

S : 시료량(g)

12.6. 글루코아밀라아제(아밀로글루코시다아제)

 가. 분석원리

    본 시험방법은 Aspergillus niger 및 그 변종에서 얻어진 효소제의 글루코아밀라아제 역가를 측정하는 방법이다. Aspergillus oryzae 및 그 변종에서 얻어진 효소제의 역가측정에서도 변형되어 사용될 수 있다. 역가시험은 일정시간, 온도, pH 및 농도 조건하에서 옥수수전분 가수분해용액이 분해되어 생성된 환원당으로서 측정한다. 

 나. 시약 및 시액

  1) 전분가수분해물용액(4%) : 포도당 당량(Dextrose equivalent, DE)이 15 ～ 20인 옥수수시럽 고형물을 건조물로 40 g에 상당하는 양을 달아 녹여 1000 mL로 한다. 이 용액은 매일 새로 조제하여 사용한다. 

  2) 초산염완충액 : 빙초산 60g을 달아 물을 가하여 1,000 mL로 한 다음, 초산나트륨 (NaC2H3O2?3H2O) 136 g을 녹여 1,000 mL로 한 액으로 pH 4.2로 조절한다.(Aspergillus oryzae, Rhizopus oryzae에 의해 생산된 효소제는 pH 5.0으로 한다)

  3) 펠링시액 A : 황산동(CuSO4?5H2O) 34.66 g을 달아 물을 가하여 500 mL로 한다. 이 용액은 작은 용기에 보관하고 마개를 꼭 하여 보존한다. 

  4) 펠링시액 B : 주석산칼륨나트륨(KNaC4H4O6?4H2O) 173 g을 물 일정량에 녹이고 수산화나트륨 50 g을 가하여 녹인 후 물을 가하여 500 mL로 한다. 이 용액은 적은 용기에 보관하고 마개를 꼭하여 보존한다. 사용시에는 A액과 B액 동량을 혼합한다. 이론적 공시험 적정치는 27.8 mL이나 적정치가 27.5 ～ 29.5 mL이면 적당하다.

 다. 시험용액의 조제

    하기 실험은 글루코아밀라아제 역가 0.1 ~ 0.2 unit를 함유하는 시료의 사용에 기초를 두고 있다. 이 시료의 양은 동 시험조건하에서 환원당 0.2 ~ 0.4 g을 생성하는 양이 되며 이 범위에서 가장 적합한 값이 얻어진다. 액체시료, 고체시료 및 액체농축액은 다음 도표에 따라 조제되고 표시된 일정량이 사용되어야 한다.

  1) 액체시료

┏━━━━━━━━━━━┯━━━━━━┯━━━━━━━┯━━━━━━┓

┃시료중의 효소(단위/mL)│희석배율(mL)│취하는 양(mL) │희석배수(F) ┃

┣━━━━━━━━━━━┿━━━━━━┿━━━━━━━┿━━━━━━┫

┃0.05 이하             │-           │5.0           │0.2         ┃

┃                      │            │              │            ┃

┃0.06～0.1             │-           │2.0           │0.5         ┃

┃                      │            │              │            ┃

┃0.11～0.25            │-           │0.80          │1.25        ┃

┃                      │            │              │            ┃

┃0.3～0.5              │-           │0.40          │2.5         ┃

┃                      │            │              │            ┃

┃0.6～1.0              │-           │0.20          │5           ┃

┃                      │            │              │            ┃

┃1.1～2.0              │-           │0.10          │10          ┃

┃                      │            │              │            ┃

┃2.1～4.0              │5.0→100    │1.00          │20          ┃

┃                      │            │              │            ┃

┃4.1～5.0              │4.0→100    │1.00          │25          ┃

┃                      │            │              │            ┃

┃5.1～7.0              │3.0→100    │1.00          │33.3        ┃

┃                      │            │              │            ┃

┃7.1～10.0             │2.0→100    │1.00          │50          ┃

┗━━━━━━━━━━━┷━━━━━━┷━━━━━━━┷━━━━━━┛

   2) 고체시료 및 액체농축액

 ┏━━━━━━━━━━━┯━━━━━━┯━━━━━━━━┯━━━━━━━┓

┃시료중의 효소(단위/mL)│시료무게(g)*│희석되는 양(mL) │취하는 양(mL) ┃

┣━━━━━━━━━━━┿━━━━━━┿━━━━━━━━┿━━━━━━━┫

┃4이하                 │10          │1,000           │5.0           ┃

┃                      │            │                │              ┃

┃5～10                 │4           │1,000           │5.0           ┃

┃                      │            │                │              ┃

┃11～25                │1.6         │1,000           │5.0           ┃

┃                      │            │                │              ┃

┃26～50                │1.4         │1,000           │3.0           ┃

┃                      │            │                │              ┃

┃51～75                │1.25        │1,000           │2.0           ┃

┃                      │            │                │              ┃

┃76～100               │1.00        │1,000           │2.0           ┃

┃                      │            │                │              ┃

┃101～150              │1.25        │1,000           │1.0           ┃

┃                      │            │                │              ┃

┃151～200              │1.00        │1,000           │1.0           ┃

┃                      │            │                │              ┃

┃201～250              │1.50        │2,000           │1.0           ┃

┃                      │            │                │              ┃

┃251～300              │1.00        │2,000           │1.0           ┃

┗━━━━━━━━━━━┷━━━━━━┷━━━━━━━━┷━━━━━━━┛

   * 시료를 정밀히 달아 1,000 mL 메스플라스크에 넣고 물로 2/3정도 채우고 상온에서 30분간 방치한다. 방치하는 동안 격렬히 흔들어 주는 조작을 5회 이상 실시한 다음 물로 채운다. 이 용액을 와트만 No. 12 또는 동종의 여지를 사용하여 여과한 여액을 시험용액으로 하여 지시된 일정량을 취한다. 

 라. 시험조작

  1) 환원당의 생성 : 전분가수분해물용액 50 mL와 초산염완충액 5 mL를 100 mL 메스플라스크에 넣어 시험용액용 플라스크로 한다. 대조용으로 다른 메스플라스크를 준비하여 시험용액 대신 물을 취하여 시험용액의 경우와 동일하게 취급한다. 플라스크를 60℃ 수욕조에 넣어 10분간 방치한다.(Aspergillus oryzae와 Rhizopus oryzae에 의해 생산된 효소는 55℃에서 실시한다) 해당량의 시험용액용 플라스크에 가하고 동시에 시간을 측정한다.(여러 개의 시료를 분석할 경우는 120분간의 반응시간 후 각각 중화시키는 시간을 고려하여 시험용액을 취하는 시간에 간격을 둔다) 내용물을 흔들어 완벽하합하고 수욕조에서  120분간 방치한다. 반응 시간이 115 ~ 118분 지났을 경우 페놀프탈레인시액 3방울을 가하고 정확히 120분이 되면 플라스크를 수욕조에서 꺼내어 빨리 뷰렛을 사용하여 2％ 수산화나트륨용액으로 중화(약 3 ~ 7 mL가 소요됨)한 다음 흐르는 물로 상온으로 식히고 물을 가하여 100 mL로 한다. 이 액 10 mL와 대조액 10 mL를 취하여 다음과 같이 환원당량을 측정한다.

  2) 환원당의 측정(Schoorl Method)주1) : 펠링시액주2) A, B 각 10 mL씩을 취하여 250 mL 삼  각플라스크에 넣고 위의 환원당 생성에 따라 얻은 용액 10 mL를 정확히 가한다. 대조액도 동일하게 처리한다. 물을 가하여 50 mL로 하고 조용히 흔들어 내용물을 혼합한다. 유리구 2개를 넣고 조그만 깔때기로 마개를 하고 가열하여 3분 이내에 끓도록 하여 2분간 계속 가열한다. 이어 얼음욕이나 흐르는 냉수에 빨리 식힌 다음 소량의 물로 깔때기를 씻어내린다. 이에 30％ 요오드칼륨 10 mL, 28％ 황산 10 mL를 가하고 요오드의 색이 거의 없어질 때까지 0.1 N 치오황산나트륨용액으로 재빨리 적정한 다음, 다시 전분시액 1 mL를 가하여 0.1 N 치오황산나트륨용액의 소비 mL수를 S로 하고 대조액에 소비된 mL수를 C로 한다. 시료에 대해 물 30 mL로 대체하여 시약공시험을 두 개 행한다. 그 소비 mL수의 평균치를 B로 한다. B에서 S를 빼서 시료에 대해 0.1 N 치오황산나트륨용액 소비 mL수로서 표시하여 적정차값을 구하여 Ts로 한다. B에서 C를 빼서 대조액에 대한 적정값을 구하고 이를 Tc로 한다.

   ※ 주1) 본 시험방법은 단백질을 함유하지 않은 용해성물질에서 환원당을 측정하는데 적합한 방법이다. 다만 상당량의 단백질을 함유하는 시료는 단백질 침전제로 처리한 후 실험한다.

      주2) 여러 개의 시료를 분석할 경우 시험용액을 일련의 플라스크에 취하여 물을 가하여 30 mL로 희석하여 펠링시액 A를 가하고 펠링시액 B는 가열하기 직전에 가한다. 

적정차값의 환원당량 환산표

┏━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┓

┃적정차                                                            ┃

┃(mL)    0.0   0.1   0.2   0.3   0.4   0.5   0.6   0.7   0.8   0.9 ┃

┠─────────────────────────────────┨

┃        환원당량(포도당으로) ( mg)                                ┃

┃      ──────────────────────────────┨

┃0.0     0.0   0.3   0.7   1.0   1.3   1.6   1.9   2.2   2.5   2.8 ┃

┃                                                                  ┃

┃1.0     3.2   3.5   3.8   4.1   4.4   4.7   5.0   5.3   5.6   5.9 ┃

┃                                                                  ┃

┃2.0     6.4   6.66  6.9   7.2   7.5   7.8   8.1   8.5   8.8   9.1 ┃

┃                                                                  ┃

┃3.0     9.4   9.8   10.1  10.4  10.7  11.0  11.4  11.7  12.0  12.3┃

┃                                                                  ┃

┃4.0     12.6  13.0  13.3  13.6  10.0  14.3  14.6  15.0  15.3  15.6┃

┃                                                                  ┃

┃                                                                  ┃

┃                                                                  ┃

┃5.0     15.9  16.3  16.6  16.9  17.2  17.6  17.9  18.2  18.5  18.9┃

┃                                                                  ┃

┃6.0     19.2  19.5  19.8  20.1  20.5  20.8  21.1  21.4  21.8  22.1┃

┃                                                                  ┃

┃7.0     22.4  22.7  23.0  23.3  23.7  24.0  24.3  24.6  24.9  25.2┃

┃                                                                  ┃

┃8.0     25.6  25.9  26.2  26.6  26.9  27.3  27.6  28.0  28.3  28.6┃

┃                                                                  ┃

┃9.0     28.9  29.3  19.6  30.0  30.3  30.6  31.0  31.3  31.6  31.9┃

┃                                                                  ┃

┃                                                                  ┃

┃                                                                  ┃

┃10.0    32.3  32.7  33.0  33.3  33.7  34.0  34.3  34.6  35.0  35.3┃

┃                                                                  ┃

┃11.0    35.7  36.0  36.3  36.7  37.0  37.3  37.6  38.0  38.3  38.7┃

┃                                                                  ┃

┃12.0    39.0  39.3  39.6  40.0  40.3  40.6  41.0  41.3  41.7  42.0┃

┃                                                                  ┃

┃13.0    42.4  42.8  43.1  43.4  43.7  44.1  44.4  44.8  45.2  45.5┃

┃                                                                  ┃

┃14.0    45.8  46.2  46.5  46.9  47.2  47.6  47.3  48.3  48.6  48.9┃

┃                                                                  ┃

┃                                                                  ┃

┃                                                                  ┃

┃15.0    49.3  49.6  49.9  50.3  50.7  51.1  51.4  51.7  52.1  52.4┃

┃                                                                  ┃

┃16.0    52.8  53.2  53.5  53.9  54.2  54.5  54.9  55.3  55.6  56.0┃

┃                                                                  ┃

┃17.0    56.3  56.7  57.0  57.3  57.7  58.1  58.4  58.8  59.1  59.5┃

┃                                                                  ┃

┃18.0    59.8  60.1  60.5  60.9  61.2  61.5  61.9  62.3  62.6  63.0┃

┃                                                                  ┃

┃19.0    63.3  63.6  64.0  64.3  64.7  65.0  65.4  65.8  66.1  66.5┃

┃                                                                  ┃

┃                                                                  ┃

┃                                                                  ┃

┃20.0    66.9  67.2  67.6  68.0  68.4  68.8  69.1  69.5  69.9  70.3┃

┃                                                                  ┃

┃21.0    70.7  71.1  71.5  71.9  72.2  72.6  73.0  73.4  73.7  74.1┃

┃                                                                  ┃

┃22.0    74.5  74.9  75.3  75.7  76.1  76.5  76.9  77.3  77.7  78.1┃

┃                                                                  ┃

┃23.0    78.5  78.9  79.3  79.7  80.1  80.5  80.9  81.3  81.7  82.1┃

┃                                                                  ┃

┃24.0    82.6  83.0  83.4  83.8  84.2  84.6  85.0  85.4  85.8  86.2┃

┃                                                                  ┃

┃                                                                  ┃

┃                                                                  ┃

┃25.0    86.6  87.0  87.4  87.8  88.2  88.6  89.0  89.4  89.8  90.2┃

┃                                                                  ┃

┃26.0    90.7  91.1  91.5  91.9  92.3  92.7  93.1  93.5  93.9  94.3┃

┃                                                                  ┃

┃27.0    94.8                                                      ┃

┗━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┛

   ※ 위 도표의 사용은 분석자가 자료가 얻어지는 조건하에 2회의 실험값이 동일하여야 함을 전제로 한다. 오차의 위험은 이미 알고 있는 순수한 포도당의 양(10 ~ 70 mg 범위의 5개 시료)으로 세심한 중복의 표준화에 의해 피할 수 있다. 포도당 mg에 대한 적정차값의 검량선은 원점을 통과하여 약간 굽은 일직선이 된다. 만약 표준화 곡선이 채택될 경우 치오황산나트륨용액은 표정을 구하지 않아도 된다. 0.065 N 치오황산나트륨용액을 사용하므로 공시험 적정값을 44 ~ 45 mL로 증가시켜 더 정확한 결과를 얻을 수 있다. 

 마. 역가의 정의

    1 Glucoamylase unit(GAU)는 상기 시험조건 하에서 1시간에 환원당으로서 포도당 1 g을 생성하는 효소의 양이다. 

 바. 계산방법

    환원당 함량 : 적정값의 환원당량 환산표를 참고로 하여 시료에 대한 적정차값(Ts)에 해당하는 환원당량(mg)을 찾아 그 값을 Ws라 한다. 동일한 방법으로 대조액에 대한 적정차값(Tc)에 대한 환원당량(mg)을 찾아 그 값을 Wc라 한다. 시험용액 취한 양에 의해 생성된 총환원당(포도당)량은 다음 계산식에 따라 구한다. 

  DS/g =  WS × 100     

        ────────

          1,000 × 10   

 대조액에 의해 생성된 총환원당(포도당)량은 다음 식에 따라 구한다.

  Dc/g =  Wc × 100     

        ────────

          1,000 × 10   

 다음 계산식에 따라 분석한 액체시료의 역가를 구한다.

  Glucoamylase, unit/ mL =  DS - Dc   ×  F   

                                        ───

                                          2h  

F: 희석배수

   다음 계산식에 따라 분석한 고체시료 및 액체농축액의 역가를 구한다. 

  Glucoamylase, unit/mL =   (DS ? Dc) × V   

                          ──────────

                            (S × A × 2h)    

V : 희석용량(mL)

A : 시험에 사용된 시험용액의 양

    (시험용액조제에서 고체시료 및 액체농축액에 대한 표를 참조할 것)

S :  시료량(g) 

12.7. 헤미셀룰라아제

 가. 적용 및 원리

    본 시험방법은 Aspergillus niger 그 변종에서 얻어진 효소제의 헤미셀룰라아제역가를 측정하는 방법이다. 역가시험은 pH 4.5, 온도 40℃에서 로커스트콩검기질의 내부 Glycosidic결합의 효소적 가수분해에 근거를 두고 있다. 기질의 점도에 있어서 해당되는 감소는 눈금보정이 된 점도계를 사용하여 측정한다.

 나. 시험용액조제

    최종희석액 1 mL가 본 시험방법의 제시된 조건하에 5분안에 0.18～0.22사이의 상대유동성 변화를 생성하도록 물로 희석하여 시험용액을 조제한다. 검체 일정량을 유리분쇄기에 취하고 물을 넣어 둔다. 이를 적당한 용량의 메스플라스크에 옮겨 물로 일정량으로 희석하고 사용전에 왓트만 No.1 또는 동종의 여지로 여과한다.

 다. 시험조작

    눈금보정된 점도계를 미리 충분한 양의 세제에 담근 다음 물을 사용하여 깨끗이 닦은 다음 40±0.1℃의 유리 수욕조에 정확하게 수직으로 장치한다. 기질용액 20 mL와 초산염완충액 4 mL를 50 mL 공전삼각플라스크에 취하고 1 검체당효소시험용 2개, 기질공시험용 1개를 준비한다. 효소시험용 플라스크에 마개를 하고 수욕조에서 15분간 방치하여 온도를 평형시킨 다음 이에 시험용액 1 mL를 정확히 취하여 가해주고 시간을 측정하기 시작하며 용액을 잘 혼합한다. 즉시 이 혼액 10 mL를 취하여 점도계의 큰가지에 가하고 반응용액을 점도계의 가느다란 가지입구에 고무관을 부착하여 상부눈금위까지 빨아올린다. 용액이 상부눈금에 도달할 때까지의 시간(분)을 측정하고 이를 TR이라고 하고, 다시 상부눈금을 통과하여 하부눈금을 통과하는 시간(초)을 측정하여 이를 TT라 한다. 다시 반응용액을 상부눈금위로 빨아 올리고 액의 표면이 상부의 눈금에 도달 할때까지의 시간(분)을 즉시 측정하여 반응시간 TR로 하고 상부눈금에서 하부눈금까지 도달하는 시간(초)을 측정하여 이를 TT로 한다. 15분 이내에서 반응시간(TR)에 대하여 "다시 반응용액을 상부눈금위로 빨아"이하의 조작을 총 4회 반복한다. 기질공시험용에는 기질용액 20 mL와 초산염완충액 4 mL의 혼액에 물 1 mL를 가하여 혼합하고 이 혼액 10 mL를 즉시 취하여 점도계의 큰가지에 넣은 다음 액을 상부눈금에서 하부눈금까지 도달하는 시간 TS(초)를 5회 반복하여 평균한 값을 TS로 한다. 물공시험용에는 미리 40±0.1℃로 평형시킨 물 10 mL를 취하여 점도계의 큰 가지에 넣고 두 눈금사이에 도달하는 시간 TW(초)를 5회 반복 측정하여 평균 한 값을 TW로 한다. 

 라. 다음 식에 따라 4회의 유출시간(TT)과 반응시간(TR) 각각에 대하여 상대유동성(FR)과 TN값을 구한다. 

FR: 각 반응시간에 대한 상대유동성

TS: 기질공시험에 대한 평균 유출시간(초)

TW: 물공시험에 대한 평균 유출시간(초)

TT: 효소반응용액의 유출시간(초)

TR: 반응의 경과시간(분) (시험용액을 가한 시간에서 유출시간(TT) 측정시작 시간까지)

TN: 반응시간(TR)(분)+ 시험용액 유출시간(TT)(분)의 1/2

    4개의 반응시간(TN)에 대한 4개의 상대유동성(FR)을 사용하여 표준곡선을 작성한다. 이때 하나의 직선이 그려져야 한다. 선의 기울기는 분당 상대유동성변화에 대응하며 효소의 양에 비례한다. 일련의 시험점을 통과하는 최선의 선의 기울기는 단독의 상대유동성 값보다는 좋은 효소역가의 기준이 된다. 표준곡선으로부터 10분과 5분에서 FR값을 측정한다. 유동성의 차이는 0.18～0.22이어야 한다. 

 마. 다음 계산식에 따라 효소제의 역가를 구한다.

FR10 : 반응시간 10분에서 상대유동성

FR5 : 반응시간 5분에서 상대유동성

1,000 : g을 mg으로 환산

W : 시험용액 1 mL에 함유된 검체의 양(mg)

 바. 역가의정의

    1 Hemicellulase unit(HCU)는 상기시험조건하에서 로커스트콩검기질에서 5분동안에 1 상대유동성변화를 생성하는 역가이다.

 사. 장치

  1) 점도계: 싸이즈-100의 눈금보정이 된 캐논-펜스케형 점도계(Cannon- Fenske Type Viscometer)를 사용하거나 이와 동등한 것을 사용하다.

  2) 유리수욕조: 40±0.1℃의 유리항온수욕조를 사용한다.

 아. 시약 및 시액

  1) 초산염완충액(pH 4.5) : 0.2N 초산나트륨용액을 0.2N 초산 400 mL에 계속 저으며 가하며 pH를 4.5±0.05로 조절한다.

  2) 로커스트콩검 : 분말형 로커스트콩검이 기질성분 Lot에 따라 품질이 다르기 때문에 Lot가 바뀔 때는 서로 동질의 것인가를 확인하여야 한다. 서로간의 점도차이가 ±5% 이상이면 동일시험에 적용할 수 없다.

  3) 기질용액 : 혼합기그릇에 0.2N염산 12.5 mL와 더운 물(70～75℃) 250 mL를 가하고 혼합기를 저속에 맞춘다. 건조물로서 2g의 로커스트콩검을 용액 용기내에서 튀어 나오지 않게 하여 천천히 그릇 내에서 분산시킨다. 고무 폴리스만을 사용하여 더운물로 그릇기벽을 씻어 내린 다음 그릇에 뚜껑을 하고 고속에서 5분간 혼합한다. 이를 1,000 mL 비이커에 옮겨 상온으로 냉각시킨 후 0.2N 수산화나트륨용액으로 pH 6.0으로 조절한다. 이를 1,000 mL 메스플라스크에 옮겨 물을 가하며 1,000 mL로 하고 사용전에 거즈로 여과하여 사용한다.

12.8. 펙티나아제(pectinase)

 가. 적용 및 원리 

    본 시험 방법은 Aspergillus niger에서 얻어진 효소제의 펙티나아제 역가를 측정하는 방법이다. 역가시험은 pH 5.0 온도 40℃에서 얻어진 Pecticacid의 가수분해로 생성된 Galacturonic acid의 환원당을 측정하는데 근거를 두고 있다.

 나. 시험용액의 조제

    최종 희석액 1 mL가 20～40 Pectinase units를 함유하도록 물로 희석하여 시험용액을 조제한다.

 다. 시험조작

    기질용액 20 mL를 100 mL 삼각플라스크에 넣고 40℃의 수욕조에서 미리 10분간 항온시킨다. 항온시킨 기질용액에 시험용액 2 mL를 넣고 60분간 작용시킨다. 별도의 삼각플라스크에 1M 탄산나트륨용액 2.5 mL를 가해주고, 이에 위의 반응액 10 mL를 가하여 반응을 중지시킨 다음 0.1N 요오드용액 5 mL를 가해주고 밀전하여 암소에 20분간 방치한 후 2M 황산 5 mL, 전분시액 4～5방울을 가하여 0.01N 치오황산나트륨용액으로 적정한다. 여기에 소비된 양(mL)을 S라 한다. 따로 공시험용으로 시험용액 대신 10분간 수욕조에서 가열실활시킨 시험용액 2 mL를 사용하여 위의 시험조작에 따라 시험하여 0.01N 치오황산나트륨의 소비 mL수를 B라 한다.

    다음 계산식에 따라 효소제의 역가를 구한다.

3.35 : 0.01N 치오황산나트륨용액 1 mL에 상당하는 galacturonic acid의 μ㏖수

f : 0.01N 치오황산나트륨용액의 factor

22 : 최종반응액의 양( mL)

2 : 사용된 시험용액의 양( mL)

10 : 사용된 반응액의 양( mL)

W : 시험용액 1 mL에 함유된 검체의 양(g)

 라. 역가의 정의

    1 Pectinase units는 상기시험조건 하에서 1μ㏖의 galacturonic acid를 생성하는 효소의 양이다.

 마. 시액

  1) 기질용액: 펙틴산(Fluka Co.)을 무수물로서 1g에 상당하는 양을 취한 다음 이에 0.5M 초산완충액 40～50 mL를 가하여 가열용해하고 0.5N 초산완충액을 가하여 100 mL로 한다.

  2) 0.50 M 초산완충용액(pH 5.0)

   가) A액 : 초산 60g을 물에 녹여 1000 mL로 한다.

   나) B액 : 무수초산나트륨 82g을 물에 녹여 1000 mL로 한다.

   다) A액 148 mL와 B액 352 mL를 혼합하고 A액 또는 B액을 사용하여 pH 5.0으로 조절하여 물을 가하여 전량을 1000 mL로 한다.

12.9. 락타아제[펩틴당화력(lactase) 시험법]

 가. 기질용액의 조제

    o-니트로페닐-β-D-가락토피라노시드 0.172g을 칭량하여 시료의 최대효소활성을 나타내는 pH로 조제한 마키르베인완충액을 녹여 정확히 100 mL로 한다. 

 나. 방법

    시료 적당량을 칭량하여 1 mL당 농도가 0.05～0.08 락타아제 단위가 되도록 물을 넣어 녹여 시료용액으로 한다. 시료가 완전히 녹지 않은 경우에는 가끔씩 교반하면서 1시간 방치한 후, 원심분리하여 그 상등액을 시료용액으로 한다. 기질용액 3.5 mL를 정확히 칭량하여 30℃에서 가온하여 시료용액 0.5 mL를 정확히 넣어 30℃에서 정확히 10분간 방치한 후 탄산나트륨시약 1 mL를 정확히 넣어 교반한 후 이 액으로 파장 420nm에서 흡광도 AT를 측정한다. 별도로 기질용액 3.5 mL를 정확히 칭량하여 30℃로 가열하여 탄산나트륨 시약 1 mL를 정확히 넣어 교반한 후 여기에 시료용액 0.5 mL를 정확히 넣어 30℃에서 정확히 10분간 방치하여 이 액으로 같은 방법으로 흡광도 AT'를 측정한다.

 다. 계산

1g중의 락타제 단위 = 

W : 시료용액 1 mL중의 시료량(g)

12.10. 키시라나제(키시란당화력)

 가. 기질용액의 조제

    키시란 4.0g을 정확히 취하여 수산화나트륨 시액 50 mL에 서서히 가열하면서 격렬하게 흔들어 녹이고, 페놀프탈레인 시약 2방울을 넣어, 1N 염산시약으로 중화시킨 후, 시료의 최대효소활성을 나타내는 pH에 조제한 0.1M 초산, 초산나트륨 완충액 100 mL를 넣고 여기에 물을 넣어 정확히 200 mL를 만든다.

 나. 방법

  1) 시료적당량을 정밀하게 취하여 1 mL당의 농도가 0.1～0.2 키시란당화력단위로 되도록 물 또는 시료의 최대 효소 활성을 나타내는 pH에 조제한 0.01M 초산, 초산나트륨 완충액을 넣어 녹인 후 시료용액으로 한다. 시료가 완전히 녹지 않는 경우에는 가끔씩 섞으면서 1시간 방치한 후, 원심분리하여 그 상층액을 시료용액으로 한다. 기질 용액 2 mL를 정확히 취해 25×200mm의 시험관에 넣고 40±0.2℃의 수조 속에 5분간 방치한 후 시료용액 1 mL를 정확히 넣어 잘 섞은 후 즉시 40±0.2℃의 수조 속에 30분간 방치한다. 다음에 묽은 황산((6→100) 0.5 mL를 넣고 잘 흔든 후 10분간 방치한 다음 페놀프타레인 시약 1방울을 넣고 수산화나트륨 시약으로 중화한다. 

    여기에 물을 넣어 5 mL를 만들고 알칼리성 동(銅) 시약에 A 5 mL를 정확히 넣어 시험관 입구를 알루미늄 호일로 가볍게 덮고 가끔씩 흔들면서 20분간 수조속에서 가열한 후 20～30℃로 냉각한다. 냉각 후 염화칼륨용액(1→40) 2 mL를 넣고 여기에 묽은 황산(6→100) 1.5 mL를 넣어 즉시 강하게 흔들어 섞는다. 액이 투명하게된 후, 0.005N 티오황산나트륨액으로 적정한다.(전분지시약 1 mL) 이 경우, 적정의 종점은 액의 청색이 없어진 시기로 하고 그 적정량을 A mL로 한다. 

    별도로 기질용액 2 mL를 정확히 취하여  25×200mm의 시험관에 넣어 묽은 황산(6→100) 0.5 mL를 넣어 잘 흔든 후, 시료용액 1 mL를 정확히 넣어 잘 흔들어 섞는다. 다음에 페놀프타레인 시약 1방울을 넣어 이하 같은 방법으로 조작하여 그 적정량을 B mL로 한다. 0.005N 티오황산나트륨액의 소비량 차이(B-A) mL에 대응하는 키시로스의 양(g)을 검량선에서 구해 K라 한다. 

1g중의 키시란당화력 단위 = 

W : 시료 용액 1 mL 중의 시료의 량(g)

  2) 검량선의 작성키시로스를 105℃에서 3시간 건조하여 그 0.5g을 정확히 취해 물을 넣어 녹여 정확히 100 mL를 만든다. 이 액을 1 mL, 2 mL, 3 mL 및 4 mL를 정확히 칭량하여 각각에 물을 넣어 정확히 100 mL를 만든다. 각각의 액 5 mL를 정확히 칭량하여 각각을 25×200mm의 시험관에 넣어 알칼리성 동(銅) 시약 A 5 mL를 정확히 넣어, 이하 시료와 같은 방법으로 조작하여 그 적정량을 B' mL로 한다. 0.005N 티오황산나트륨액의 소비량 차이 (B'-S1), (B'-S2), (B'-S3) 및 (B'-S4)를 종축으로 각각에 대응하는 키시로스의 양(g)을 횡축으로하여 검량선을 작성한다.

12.11. 키토사나아제

 가. 적용 및 원리

    본 시험 방법은 Aeromonas속 및 Bacillus 속의 배양물에서 얻어진 효소제의 키토사나아제 역가를 측정하는 방법이다. 역가시험은 pH 5.0 온도 48℃에서 Chitosan 기질의 가수분해에 근거를 두고 있다. 가수분해에 의하여 생성된 환원당인 글루코사민을 알칼리성 페리시아나이드 시액과 반응시켜 흡광도측정법으로 측정한다.

 나. 시험용액조제

    시험조건하에서 최종희석액 1 mL가 효소공시험용액과 흡광도차이가 0.1～0.5의 범위가 되도록 일정량을 취한 다음 0.05M 초산염완충용액에 녹여 시험용액을 조제한다. 

 다. 시험조작

    기질용액 2 mL를 시험관에 넣고 이에 미리 48℃의 수욕조에서 5분간 항온시킨시험용액 1 mL를 정확히 가해주고 흔들어 혼합한 후 수욕조에 방치한다. 정확히 5분후 시험관을 끓는 수욕조에서 3분간 가열하여 효소반응을 중지시킨 다음 상온으로 식혀준다. 따로 효소공시험용으로 시험용액대신 미리 수욕조에서 3분간 가열실활시킨 시험용액 1 mL를 사용한다. 별도로 2개의 시험관에 물 1.4 mL를 각각 넣고 이에 위의 효소반응액 0.1 mL와 효소공시험반응액 0.1 mL를 각각 가해준 다음 알칼리성페리시아나이드시액 2 mL씩을 가해 주고 끓는 수욕조에서 15분간 가열하고 상온으로 식힌 다음 액층 1 cm, 파장 420 nm에서 효소시험용액과 효소공시험용액의 흡광도를 각각 측정하여 표준곡선에서 D-글루코사민의 농도(μmol/ mL)를 구한다.

 라. 표준곡선

    미리 건조 항량시킨 D-글루코사민 염산염 215.6 mg을 정밀히 달아 물을 가하여 100 mL로 한다. 이 액을 사용하여 1 mL당 D-글루코사민을 2.0, 4.0, 6.0, 10.0 μmol/mL을 함유하도록 글루코사민표준용액을 각각 조제한다. 각 표준용액 1 mL와 물 2 mL를 각 시험관에 넣고 시험관 모두를 끓는 수욕조에서 3분간 끓여주고 상온으로 식힌 다음 시험조작의 「별도로 2개의 시험관에」이하와 동일조작을 행한다. 따로, 표준용액 1 mL 대신에 물 1 mL를 사용하여 시험한 것을 대조액으로 하여 액층 1 cm, 파장 420nm에서 각각의 흡광도를 측정하고 글루코사민표준용액의 농도(μmol/mL)에 대한 표준곡선을 작성한다.

    다음의 계산식에 따라 효소제의 역가를 구한다.

  CU/mL   =   A       

            ─────

              5 × W  

A : 표준곡선에서 얻은 시험용액의 D-글루코사민 표준용액의 농도(μmol/mL)

5 : 반응시간(분)

W : 시험용액 1 mL에 함유된 검체의 양(mL)

 마. 역가의 정의

    1 Chitosanase Unit(CU)는 상기시험조건하에서 분당 1μ㏖의 D-글루코사민에 상당하는 환원당을 유리시키는 효소의 양이다.

 바. 시액

  1) 0.05 M 초산염완충액 : 0.1 M 초산 14.8 mL와 0.1 M 초산나트륨용액 35.2 mL를 혼합하고 물을 가하여 100 mL로 한다. 이 용액의 pH는 5.0이어야 한다.

  2) 기질용액 : 키토산(Sigma Co.) 0.2 g을 물 40 mL에 현탁시키고 1.0 M 초산 10 mL를 가하여 교반 용해시킨 후 1.0M 초산나트륨용액을 가하여 pH를 5.0으로 조절한 다음 0.05 M 초산염완충액을 가하여 100 mL로 한다. 이 용액은 냉장고에 보관한다. 

  3) 알칼리성페리시아나이드시액 : 페리시안화칼륨(K3Fe(CN)6) 0.5g을 0.5M 탄산나트륨용액 1,000 mL에 녹인다. 이 액은 갈색병에 넣어 밀봉하여 보존한다.

12.12. 리파아제(지방소화력)

 가. 분석원리

    리파아제는 esterase의 일종으로 글리세린과 지방산과의 ester인 지방의 가수분해에 관여하는 효소이다.  리파아제의 ester 분해작용을 측정하기 위해서는 가수분해에 의하여 생성되는 유리된 지방산을 정량한다.

 나. 시약 및 시액

  1) 0.1 M 인산염완충액(pH 6.0)

  2) 기질(Substrate)

     폴리비닐알콜 시약, 올리브유혼합액(3 : 1) 200 ～ 300 mL를 취하여 유화기 500 mL 용기에 넣어 10℃ 이하에서 냉각하면서 매분 12,000 ～ 16,000 회전으로 10분간 유화하여 시원한 곳에서 1시간 방치한 후, 유층이 분리되지 않은 것을 확인한 후 사용한다.

 다. 시험용액의 조제 및 방법

    시료 적당량을 정밀하게 취하여 1 mL당의 농도가 1.0, 5.0 지방소화력 단위가 되도록 차가운 물에 넣어 녹인 후 시료용액으로 한다. 여과 또는 원심분리를 한다. 기질용액 5 mL 및 시료의 최대효소활성을 나타내는 pH 6.0에서 조제한 0.1 M 인산염완충액 4 mL를 정확히 칭량하여 잘 혼합하고 37 ± 0.5℃에서 정확히 20분간 방치한다. 다음에 아세톤, 에탄올 혼합액(1 : 1) 10 mL를 넣어 잘 흔들어 섞어 0.05 N 수산화나트륨 시약 10 mL를 정확히 추가하고 0.05 N 염산으로 적정한다.(지시약 페놀프탈레인 시약 2 ～ 3방울) 이 경우에 적정의 마지막 점은 액의 적색이 없어지는 때로 하고 그 적정량을 A mL로 한다. 별도로 기질 용액 5 mL 및 시료의 최대효소활성을 나타내는 pH에 조제한 0.1 M 인산염완충액 4 mL를 정확히 칭량하여 잘 혼합 후, 37±0.5℃에서 30분간 방치한다. 다음에 아세톤, 에탄올 혼합액(1 : 1) 10 mL를 정확히 넣어 섞고 이하는 같은 방법으로 조작하여 그 적정량을 B mL로 한다.

 라. 계산방법

  1 g중의 지방소화력 단위 =   50×(B-A)   ×    1   ×  1   

                                              ───  ───

                                                20      S   

S : 시료 용액 1 mL 중의 시료의 량(g)

12.13. 피타아제(피틴산분해력)

 1) 시약의 조제

  가) 기질용액의 조제미리 피틴산나트륨을 데시케이터(실리카겔)중에서 24시간 이상 건조하여 0.271g을 정확히 칭량하여 시료의 최대효소활성을 나타내는 pH에 조정한 0.2M 초산, 초산나트륨완충액 50 mL를 넣고 용해하여 0.2N 초산시약을 넣고 pH 5.5로 조정 후, 동 완충액으로 정확히 100 mL로 만든다.

  나) 반응정지 발색액의 조제0.01M 몰리브덴산 암모늄 시약 1용량에 5N 황산시약 1용량과 아세톤 2용량을 넣어 잘 흔든 후 즉시 수중에서 냉각한다. 반응정지 발색액은 사용할 때마다 조제한다.

 2) 방법

  가) 시료 적당량을 정확히 칭량하여 1 mL당 농도가 0.04～0.06 피틴산분해력 단위로 되도록 시료의 최대효소활성을 나타내는 pH에 조정한 0.005M 초산, 초산나트륨 완충액을 넣어 녹인 후 필요하다면 여과하여 시료용액으로 한다. 기질용액 0.5 mL를 정확히 칭량하여 10 mL의 둥근바닥 원심관 또는 시험관에 넣어 37±0.5℃로 가온한다. 이 기질용액에 별도로 37±0.5℃로 가온한 시료용액 0.5 mL를 정확히 넣어 즉시 교반하여 37±0.5℃에서 정확히 10분간 방치한다. 그 후 얼음속에서 냉각한 반응정지발색액 2 mL를 정확히 넣어 잘 혼합하여 여기에 1M 구연산시약 0.1 mL를 정확히 첨가하여 교반한다. 이 액을 5분이내에 물을 대조액으로하여 파장 380nm에서 흡광도 ODT를 측정한다. 별도로 시료용액 0.5 mL를 정확히 측정하여 수중에서 냉각한 반응정지 발색액 2 mL, 기질용액 0.5 mL, 1M 구연산 시약 0.1 mL를 정확히 넣은 후 잘 혼합시킨다. 이하 같은 방법으로 조작하여 흡광도 ODTB를 측정한다. 

1g중의 피틴산분해력 단위 =(ODT-ODTB)×F× 2 × × Z

F : 검량선에서 구한 흡광도차 1에 대응하는 인산이온 농도(μmol/ mL)

W :시료용액 1 mL중의 시료량(g)

Z : 희석배율

  나)검량선의 작성인산이수소칼륨을 데시케이터(실리카겔)중에서 24시간이상 건조하여 0.680g을 칭량하여 물을 넣고 녹여 1000 mL로 한다. 이 액 1, 2, 3 및 4 mL를 정확히 칭량하여 각각에 물을 넣어 정확히 50 mL로 한다. 각각의 액 1 mL를 얼음 중에서 냉각한 반응정지 발색액 2 mL를 넣어 교반하여 여기에 1M 구연산 시약 0.1 mL를 넣고 교반시킨다. 물을 대조액으로하여 파장 380nm에서 흡광도 ODS1, ODS2, ODS3, ODS4를 측정한다. 별도로 물 1 mL를 취하여 얼음속에서 냉각한 반응정지 발색액 2 mL를 넣고 교반하여 여기에 1 M 구연산시약 0.1 mL를 넣어 교반한다. 물을 대조액으로하여 파장 380nm에서의 흡광도 ODSB를 측정한다. 인산이온농도를 횡축으로 흡광도차 (ODS1-ODSB), (ODS2-ODSB), (ODS3-ODSB), (ODS4-ODSB)를 종축으로하여 검량선을 작성한다.

12.14. 산성프로테아제

 가. 분석원리

   본 시험방법은 기질 단백질에 생성되는 단백질 분해산물을 정량하는 방법으로 반응액에 trichloroaceric acid를 가하여 미분해의 단백질을 침전시키고 그 여액에 대하여 비교적 쉽게 비색 정량할 수 있는 티로신(tyrosine)의 증가율을 측정한다.

 나. 시약 및 시액

  1) 0.44 M-Trichloroacetic acid 용액 : Trichloroacetic acid 7.1892 g을 물에 녹이고 100 mL로 정용한다.

  2) 0.1 N-NaOH용액 : 수산화나트륨 4 g을 증류수 100 mL로 용해한다.

  3) 0.55 M-탄산나트륨용액 : 무수 탄산나트륨 5.83 g을 물 100 mL로 용해한다.

  4) Folin-Ciocalteu's Phenol Reagent, 2 N : 이 발색시약을 사용시 3배(시약 1 + 물 2)로 희석하여 사용한다. → 엷은 포린용액

  5) 기질(Substrate) 0.6% casein 용액 : Casein 0.6 g을 정밀하게 칭량한 다음 0.1 M lactic acid 60 mL를 가하고 끓는 수욕 중에서 용해시켜 즉시 냉각 시킨 다음, 0.1 N-NaOH와 0.1 N lactic acid로 pH 2.6으로 조절한 후 0.1 M 유산염완충용액 (pH 2.6) 20 mL를 넣고 다시 물을 가하여 100 mL로 정용한다.

  6) 0.1 M 유산염 완충용액 (pH 2.6) : 0.1 M 유산(lactic acid) 과 0.1 M 유산나트륨(sodium lactate)용액을 16 : 1의 비율로 혼합한다.(0.1 M 유산은 유산 9.008 g을 정밀하게 칭량하여 물에 용해시켜 1 L로 하고, 0.1 M 유산나트륨은 유산나트륨 11.206 g을 정밀하게 칭량하고 물에 용해시켜 1 L로 하여 각각 조제한다.)

 다. 기구 및 장치

  1) 항온수조

  2) 시험관 : Cap test tube (20×150 mm) 

  3) 분광광도계 : 660 nm  

 라. 시험용액의 조제 및 방법

  1) 검량선 작성: 건조된 티로신 표준품을 정밀하게 칭량하여 0.1 M Lactic acid으로 용해하여 정확히 100 mL로 한다. 이 액을 1, 2, 3, 4, 5 mL를 정확히 취하여 0.2 M Lactic acid을 넣어 정확히 100 mL로 한다. 각각 액 2 mL를 정확히 취하여 0.55 M 탄산나트륨액 5 mL 및 엷은 포린용액 1 mL를 넣어 교반시켜 30℃에서 30분간 방치한 후 660 nm에서 흡광도를 측정한다. 별도로 대조군으로 0.1 M Lactic acid 2 mL에 0.55 M 탄산나트륨용액 5 mL 및 엷은 포린용액 1 mL를 교반시켜 660 nm에서 흡광도를 측정해서 흡광도를 보정한다. 시험용액에서 대조군의 흡광도를 뺀 각각의 흡광도 값을 X축으로 그리고 티로신의 양을 Y축으로 하여 검량선을 작성한다.

  2) 시료를 적정량 취하여 물로 추출한다. 최종의 희석액은 0.1 M-유산염완충용액(pH 2.6)을 사용한다.

  3) 효소액 1 mL를 시험관에 취하고 미리 30℃로 예열시킨 0.6% Casein 용액 5 mL를 가하여 잘 흔든 후 정확히 10분간 항온수조 내에서 반응시킨다.

  4) 10분간 경과 즉시 0.44 M TCA용액 5 mL를 넣고 교반하여 반응을 중지시킨다. 30℃에서 30분간 방치한 후, 정량용 여과지로 여과한다.

  5) 시험관에 여액 2 mL를 취해 0.55 M 탄산나트륨용액 5 mL 및 엷은 포린용액(1→3) 1 mL를 넣어 잘 교반시켜 30℃에 30분간 방치한 다음 이 용액을 파장 660 nm에서 흡광도(AT)를 측정한다.

  6) 공시험은 별도로 시료용액 1.0 mL를 캡시험관에 취하고 TCA용액 5 mL를 가한 다음 기질용액 5 mL를 정확히 넣고 30 ± 0.5℃에 30분간 방치한다. 이하 같은 방법으로 위 4)와 같이 조작하여 흡광도 Ab를 측정한다.

 마. 역가의 정의 

    산성프로테아제 활성도의 역가(unit)는 (기질인 casein으로부터) 1분간에 1 ug의 tyrosine을 생성하는 효소의 양으로 표시한다.

 바. 계산방법

  산성프로테아제 활성도(U/g) =     (AT - Ab)  ×    F   ×  11  ×  1   ×  1   

                                                          ───  ───  ───

                                                            2       10      S   

F : 검량선에서 구한 흡광도 1에 대응하는 티로신의 양(μg)

S : 시료용액 1 mL 중의 시료량(g)

12.15. 중성프로테아제 [단백질소화력(protease) 시험법]

 가. 기질용액의 조제

    미리 우유로 만든 카제인 약 1g을 정확히 측정하여 105℃에서 2시간 건조하여 그 감량을 측정한다. 그 건조물 1.20g에 대응하는 우유로 만든 카제인을 정확히 측정하여 0.05M 인산-수소나트륨 시약 160 mL를 넣어 수욕상에서 가온하여 녹인다. 이 액을 흐르는 물에서 냉각시킨 후 1N 염산시약 또는 수산화나트륨 시약을 첨가하여 시료의 최대효소활성을 나타내는 pH에 조제한 후, 물을 넣어 정확히 200 mL를 만든다.

 나. 방법

  1) 시료 적당량을 정밀하게 측정하여 1 mL당의 농도가 10～30 단백질소화력단위로 되도록 물 또는 0.02M 인산염 완충액을 넣어 녹인 후, 시료용액으로 한다. 시료가 완전히 녹지 않는 경우에는 이따금씩 교반 하면서 1시간 방치한 후 원심분리하여 그 상등액을 시료 용액으로 한다. 기질 용액 5 mL를 정확히 칭량하여 25 mL의 메스플라스크에 넣어 37±0.5℃에서 10분간 방치한 후, 시료 용액 1 mL를 정확히 측정하여 넣은 후 즉시 교반하여 37±0.5℃에서 정확히 10분간 방치한다. 다음에 트리클로로초산시약 B 5 mL를 넣어 교반하여  37±0.5℃에서 30분간 방치한다. 여과지에 이 액을 여과시켜 침전물을 완전히 제거한 후, 이 용액 2 mL를 정확히 칭량하여 0.55M 탄산나트륨시약 5 mL 및 엷은 포린시약(1→3) 1 mL를 넣어 잘 교반시켜  37±0.5℃에서 30분간 방치한 후 이 액을 파장 660nm에서 흡광도 AT를 측정한다. 별도로 시료 용액 1 mL를 정확히 칭량하고 25 mL의 메스플라스크에 넣어 트리클로로초산시약 B 2 mL를 교반하고 기질 용액 5 mL를 정확히 넣어 37±0.5℃에서 30분간 방치한다. 이하 같은 방법으로 조작하여 흡광도 AT'를 측정한다. 

1g 중의 단백질소화력 단위 = 

W : 시료 용액 1 mL 중의 시료의 량(g)

F : 검량선에 구한 흡수광도 1에 대응하는 티로신의 양(μg)

  2) 검량선의 작성

    티로신 표준품을 105℃에서 3시간 건조하여 0.5g을 정확히 칭량하고 0.2N 염산시약을 넣어 용해하여 정확히 500 mL로 한다. 이 액을 1, 2, 3, 4 및 5 mL를 정확히 취하여 각각 0.2N 염산시약을 넣어 정확히 100 mL로 한다. 각각의 액 2 mL를 정확히 취하여 0.55M 탄산나트륨시약 5 mL 및 묽은 포린시약(1→3) 1 mL를 넣어 잘 교반시켜  37±0.5℃에서 30분간 방치한 후 이 액을 파장 660nm에서 흡광도 A1, A2, A3, A4를 측정한다. 별도로 0.2N염산시약 2 mL를 정확히 칭량하여 이하 같은 방법으로 조작하여 흡광도 A0를 측정한다. 흡광도 차이 (A1-A0), (A2-A0), (A3-A0), (A4-A0) 및 (AS-A0)를 종축으로 티로신의 양( mg)을 횡축으로하여 검량선을 작성한다. 

12.16. 식물성프로테아제

 가. 정의

    파파인, 피신, 브로멜라인 등 식물에서 얻어진 효소제이다.

 나. 분석원리

    본 역가시험은 pH 6.0, 온도 40℃에서 60분간 카제인 기질의 단백질가수분해에 근거를 두고 있다. 가수분해 되지 않은 기질은 삼염화초산으로 침전하여 여과에 의해 제거되고 용해된 카제인을 흡광도 측정법으로 측정한다.

 다. 시험용액의 조제

    최종희석액 2mL의  흡광도가 0.2～0.5의 범위가 되도록 검체를 정밀히 달아 유발에 취하고 인산염-시스테인-이.디.티.에이.완충액을 가하여 분쇄시킨 다음 이를 메스플라스크에 옮겨 인산염-시스테인-이.디.티.에이.완충액으로 채운다.

 라. 시험조작

    25×150 mm 시험관 3개는 효소시험용으로, 6개는 파파인검량선용으로 하여 이들 각각에 카제인기질용액 5mL씩을 넣는다. 이를 40±0.1℃의 수욕조에서 15분간 항온 시킨 후 시험용액 2mL, 표준용액 2mL를 각각 가하여 흔들어 섞고 마개를 하여 다시 수욕조에서 60분간 항온시킨 후 각각의 시험관에 삼염화초산용액 3mL씩을 가하여 흔들어 섞는다. 별도로 효소공시험용 시험관 9개에는 기질용액 5mL, 삼염화초산용액 3mL를 가하여 흔들어 섞고, 이에 시험용액, 해당 표준용액 2mL를 정확히 취하여 각각 가한다. 시험관 모두를 다시 수욕조에서 30분간 항온하여 침전된 단백질을 완전히 응고시킨 다음 왓트만 No. 42 또는 동종의 여지를 사용하여 여과한다. 초류액 3mL는 버리고 완전히 투명한 여액을 사용하여 각각의 공시험용액을 대조액으로 하여 액층 1cm, 파장 280nm에서 흡광도를 측정한다. 표준용액농도(mg/mL)에 대하여 여액의 흡광도로 검량선을 작성한다. 검량선으로부터 시험용액에서 얻은 여액의 농도를 구한다.

    다음 계산식에 따라 효소제의 역가를 구한다.

  역가(PU/mg)   =   A × C ×   10  

                              ───

                                W   

A : USP 파파인표준품의 역가(PU/mg)

C : 검량선에서 구한 효소시험용액에 대응하는 표준품의 농도(mg/mL)

W : 시험용액 2mL에 함유된 검체의 양(mg)

 마. 역가의 정의

    1 Papain unit(PU)는 상기시험조건 하에서 1시간 동안에 Tyrosine 1μg 상당량을 유리시키는 효소의 양이다.

 바. 시액

  1) 인산나트륨용액(0.05M) : 인산이나트륨(무수) 7.1g을 500mL의 물에 녹이고 물을 가하여 1,000mL로 한다. 이에 보존료로서 톨루엔 한방울을 가한다.

  2) 구연산용액(0.05M) : 구연산(1수화물) 10.5g을 500mL의 물에 녹이고 물을 가하여 1,000mL로 한다. 이에 보존료로서 톨루엔 한방울을 가한다.

  3) 인산염-시스테인-이.디.티.에이.완충액 : 인산이나트륨 7.1g을 약 800mL의 물에 녹이고 이에 이.디.티.에이.이나트륨(2수화물) 14.0g과 시스테인염산염(1수화물) 6.1g을 녹인다. 1N 염산 또는 1N 수산화나트륨용액으로 pH 6.0±0.1로 맞추고 물을 가하여 1,000mL로 한다.

  4) 삼염화초산용액 : 삼염화초산 30g을 물에 녹여 100mL로 한다.

  5) 기질용액 : 카제인(Hammarsten) 1g(건조물로서)을 인산나트륨용액 50mL에 녹이고 끓는 수욕조에서 30분간 때때로 흔들어 주면서 가열시킨다. 이를 냉각시켜 계속 흔들어 주며 구연산용액으로 pH 6.0±0.1로 맞춘다(※주 : 계속 빨리 흔들어주면 침전이 생기지 않는다). 이에 물을 가하여 정확히 100 mL로 한다.

  6) 표준원액 : USP파파인표준품 100.0 mg을 인산염-시스테인-이.디.티.에이.완충액에 녹여 100mL로 한다.

  7) 표준용액 : 표준원액 2, 3, 4, 5, 6 및 7mL를 100mL 메스플라스크에 각각 취하고 이에 인산염-시스테인-이.디.티.에이.완충액으로 용량을 맞춘다.

12.17. 브로멜라인

 가. 분석원리

    본 시험방법은 기질 단백질에 생성되는 단백질 분해산물을 정량하는 방법으로 반응액에 trichloroaceric acid를 가하여 미분해의 단백질을 침전시키고 그 여액에 대하여 비색 정량할 수 있는 티로신(tyrosine)의 증가율을 측정한다.

 나. 시약 및 시액

  1) Buffer solution (for enzyme)

    0.03 M L-cystein·HCl·H2O(5.2689 g/L)과 6 mM EDTA·2Na(2.2335 g/L)을 물에 용해하고 0.1 N HCl 또는 0.1 N NaOH를 사용하여 pH 4.5로 조절한 후 1,000 mL로 만든다.

  2) 기질(Substrate) : Casein from bovine milk

    Casein 0.6 g에 80 mL의 0.05 M Na2HPO4을 가하고 열을 가하면서 녹인다. 투명하게 되면 식히고 나서 0.1 N HCl 또는 0.1 N NaOH를 사용하여 pH 7.0으로 조정하고 100 mL로 만든다.

  3) 반응 정지 시액(TCA시액)

    Trichloroacetic acid 18 g, Sodium acetate?3H2O 29.9 g, 빙초산(CH3COOH) 19 mL를 물에 용해하여 1,000 mL로 만든다.

 다. 시험용액의 조제 및 방법

  1) 시료의 추출(효소용액 제조)

   가) 시료를 100 mL vol.flask에 취하고 Buffer solution을 가하고 1시간 정도 shaking하여 추출한 다음 정용한다. 

   나) 시험용액의 흡광치가 0.1 ~ 1.0이 되도록 Buffer solution으로 적절히 추가 희석한다.

  2) 표준용액의 조제(μg/mL)

    50 mg의 tyrosine을 0.1 N HCl 100 mL에 녹여 표준용액을 준비한 다음 희석하여 3농도 이상, 275 nm에서 흡광도를 측정한다.

  3) 측정방법 

   가) 시험관에 효소용액 1 mL와 기질용액 5 mL를 섞은 후 37℃ 항온수조에 10분간 반응시킨다.

   나) TCA시액 5 mL을 첨가하고 혼합한다.

   다) 37℃ 항온수조에서 30분간 반응시켜 침전된 단백질을 완전히 응고시킨다.

   라) 응고물을 정량용여지로 여과 후 275  nm에서 여과액의 흡광도를 측정한다.

   마) Blank 처리구는 기질용액 5 mL와 TCA시액 5 mL를 넣고, 효소용액 1mL를 가한 후 소화시키지 않고 바로 37℃ 항온수조에 30분간 침전된 단백질을 응고시킨다. 여과 후 275 nm에서 여과액의 흡광도를 측정한다.

 라. 역가의 정의

    1 브로멜라인 단위(CDU) 는 1분 동안 티로신 1 μg에 해당하는 반응물을 생성시키는 효소량으로 한다.

 마. 계산방법

  브로멜라인 활성도(μg/mg) =   C   ×  11    ×  a   

                                      ────  ───

                                        10        S   

C : 시료용액의 티로신 농도(μg/mL)

a : 반응액의 양(mL)

S : 시료용액 1 mL 중의 시료량(mg)

12.18. 알카리성프로테아제

 가. 역가(unit)의 정의

    알칼리성프로테아제 활성도의 역가(unit)는 1분간에 1 μg의 티로신(tyrosine)을 생성하는 효소의 양으로 표시한다.

 나. 장치 및 기구

  1) 항온수조

  2) 시험관 : Cap test tube (20 × 150 mm)

  3) 분광광도계

 다. 시약 및 시액

  1) 완충용액(Buffer) : Glycine을 증류수에 0.1 M 농도로 녹인 후 NaOH로 pH 11로 보정한다.

  2) 반응정지 시액(TCA시액) : Trichloroacetic acid 18 g, Sodium Acetate trihydrate 29.9 g, 빙초산(CH3COOH) 19 mL를 증류수에 용해하여 1,000 mL로 만든다.

  3) 0.5% casein 기질용액 : Casein 0.5 g에 100 mL 완충용액을 수욕상에서 가온하여 완전히 녹인다.

  4) 티로신 표준용액 : 0.1 g의 티로신 표준물질을 완충용액 100 mL에 녹여 희석하여 사용한다.

 라. 시험용액 조제

  1) 시료를 적정량 취하여 완충용액에 100배 희석하여 한다.(이를 이하 ‘시료액’이라 한다. 필요시 추가 희석가능하며 4℃에서 보관 후 활성을 측정할 수 있다.)

  2) 시험관에 기질용액 5 mL를 넣고 60℃에서 10분간 예열한 후 1)항의 시료액을 0.1 mL 첨가하고 혼합한 후 60℃에서 10분간 반응시킨다.

  3) 반응 후 반응정지 시액(TCA시액)을 5 mL 첨가하고 혼합한 후 4℃에서 10분간 방치한 다음 원심분리(9100 g, 4℃, 15분)하여 침전물을 분리하고 상층액을 분광광도계를 이용하여 흡광도를 측정한다.

  4) 흡광파장은 티로신 표준용액으로 파장을 스캔한 후 티로신의 최대흡광파장으로 선택하여 측정한다.

  5) 무처리(Blank) 처리구는 시험관에 기질용액 5 mL와 반응정지 시액(TCA시액) 5 mL를 넣고 1)항의 시료액 0.1 mL를 가한 후 소화시키지 않고 바로 4℃에서 10분간 방치한 다음 원심분리(9100 g, 4℃, 15분)하여 침전물을 분리하고 상층액을 분광광도계를 이용하여 흡광도를 측정한다.

 마. 검량선 작성

  1) 희석된 티로신 표준용액을 가지고 직선성이 확보되는 농도로 최소 5수준이 되도록 완충용액으로 희석한다.

  2) 이 표준용액들을 분광광도계를 이용하여 275 nm에서 흡광도를 측정한다.

  3) 흡광도 값을 횡(X)축으로 하고 티로신의 농도(μg/mL)를 종축(Y)으로 하여 검량선(회기방정식)을 작성한다.

 바. 계산방법

  알칼리성 프로테아제 활성도(U/g)   =   C × 10.1 × D      

                                      ───────────

                                        10 × 1.34 × 0.1   

C : 티로신 농도(μg/mL)

10.1 : Total volume (mL)

D : 희석배수

10 : 반응시간 (분)

1.34 : tyrosine density

0.1 : 효소용액 (mL)

13장 향미제

13.1. 사카린나트륨

 가. 액체크로마토그래피에 의한 정성 및 정량

  1) 분석원리

    검체 중의 사카린나트륨을 반투막을 이용하여 투석한 후, 투석외액을 역상계 및 강음이온교환형 카트리지로 정제한 다음 액체크로마토그래프로 정성 및 정량분석하는 방법이다.

  2) 장치

   가) 정제용 카트리지

    (1) 역상계 카트리지：Sep-pak C18 또는 이와 동등한 것(사용전에 메탄올 5 mL 및 물 5 mL를 차례로 흘려 보낸 후 사용한다).

    (2) 강음이온교환형 카트리지：Sep-pak QMA 또는 이와 동등한 것(사용전에 메탄올 5 mL 및 물 5 mL를 차례로 흘려 보낸 후 사용한다).

  3) 시약 및 시액

   가) 투석내액：염화나트륨 100 g 및 인산 7 mL를 물에 녹여 1,000 mL로 한다.

   나) 투석외액：인산 7 mL를 물에 녹여 1,000 mL로 한다.

   다) 0.1 M TPA-Br용액：TPA-Br(Tetrapropylammonium bromide) 2.66 g을 물에 녹여서 100 mL로 한다.

   라) 표준용액：사카린나트륨을 120에서 4시간 건조시킨 후 100 mg을 정밀히 달아 물에 녹여 100 mL로 한다. 사용시 이 용액 1～10 mL를 취하고 물을 가하여 100 mL로 한 것을 표준용액으로 한다.

  4) 시험용액의 조제

   가) 투석액체검체는 10～20 g을 취하고, 고체 또는 반고체검체는 균질화하거나 잘게 썰어 잘 섞은 후 10～20 g 취한 다음 투석내액 약 20 mL를 가하여 혼합한다. 이 혼합액을 투석용 튜브(분자량 12,000～14,000)에 넣고 튜브의 끝을 밀봉한다. 미리 투석외액 약 150 mL를 넣은 눈금이 있는 용기에 튜브를 넣고 투석외액을 가하여 전량을 약 200 mL로 한다. 때때로 흔들어 주면서 실온에서 24～48시간 방치하여 투석한 후 투석용 튜브를 제거하고 투석외액을 가해 200 mL로 하여 투석액으로 한다.

   나) 정제투석액 20 mL를 25 mL 메스플라스크에 넣고 0.1M TPA-Br용액 2 mL를 가한 다음 물을 가하여 25 mL로 한다. 이 액 5 mL를 역상계 카트리지에 분당 3～4 mL의 속도로 떨어뜨리고 물 10 mL로 세척한 후 메탄올：물 (40：60) 혼합액 10 mL로 용출시킨다. 용출액 전량을 강음이온교환형 카트리지에 분당 3～4 mL의 속도로 떨어뜨리고 0.1% 인산 5 mL와 물 5 mL를 사용하여 세척한 후 0.3N 염산 5 mL로 용출시킨 액을 시험용액으로 한다.

  5) 시험조작

   가) 액체크로마토그래프의 측정조건

    (1) 검출기 :자외부흡광검출기(UV), 210 nm

    (2) 칼럼：Nova-Pak C18 또는 이와 동등한 것

    (3) 이동상：10% TPA-OH(Tetrapropylammonium hydroxide) 20.3 mL를 메탄올：물(30：70)의 혼합액 약 900 mL에 녹이고 인산으로 pH를 4.0으로 조정한 다음 메탄올：물(30：70) 혼합액으로 전량을 1,000 mL로 한다.

    (4) 이동상유량：1.0 mL/min

    (5) 주입량 : 10～20 μL

  6) 정성시험

    시험용액 및 표준용액을 앞의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하고, 얻어진 크로마토그램상의 사카린나트륨의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액과 시험용액의 머무름시간이 일치하여야 한다.

  7) 정량시험

    시험용액 및 표준용액을 앞의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하고, 얻어진 피크의 높이 또는 면적으로부터 작성한 검량선을 이용하여 시험용액 중의 사카린나트륨의 함량을 산출한다.

13.2. 사카린나트륨 및 아스파탐 동시분석법

 가. 분석원리

    검체 중의 사카린나트륨 및 아스파탐을 물로 추출후 여과하거나 반투막을 이용하여 분석한 후, 투석외액을 사카린나트륨은 역상계 및 강음이온교환형 카트리지, 아스파탐은 강양이온교환형 카트리지로 각각 정제한 다음 액체크로마토그래프로 정성 및 정량분석하는 방법이다.

 나. 장치

  1) 정제용 카트리지

   가) 역상계 카트리지：Sep-pak C18 또는 이와 동등한 것(사용전에 메탄올 5 mL 및 물 5 mL를 차례로 흘려 보낸 후 사용한다).

   나) 강음이온교환형 카트리지：Sep-pak QMA 또는 이와 동등한 것(사용전에 메탄올 5 mL 및 물 5 mL를 차례로 흘려 보낸 후 사용한다).

   다) 강양이온교환형 카트리지：Bond Elut SCX 또는 이와 동등한 것(사용전에 메탄올 5 mL 및 물 5 mL를 차례로 흘려 보낸 후 사용한다).

 다. 시약 및 시액

  1) 투석내액：염화나트륨 100 g 및 85% 인산 11.8 g을 물에 녹여 1,000 mL로 한다.

  2) 투석외액：85% 인산 11.8 g을 물에 녹여 1,000 mL로 한다.

  3) 0.1M TPA-Br용액：TPA-Br(Tetrapropylammonium bromide) 2.66 g을 물에 녹여 100 mL로 한다.

  4) 혼합표준용액：사카린나트륨을 120℃에서 4시간 건조시킨 후, 아스파탐은 그대로 각각 100 mg을 정밀히 달아 물에 녹여 100 mL로 한다. 사용시 이 용액 1～10 mL를 취하고 물을 가하여 100 mL로 한 것을 표준용액으로 한다.

  5) 카레스(Carrez)침전제 : 제1액 15%페로시안화칼륨용액, 제2액 30%황산아연용액

 라. 시험용액의 조제

  1) 제1법

   가) 액상검체

       검체 약 5 g을 취하고 물을 가해 50 mL로 하여 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과한 액을 시험용액으로 한다. 다만, 탄산가스가 있는 경우에는 10분간 초음파 처리하여 탄산가스를 제거하며 알코올을 함유한 경우는 70°의 수욕상에서 15분간 가온하여 알코올을 증발시켜 검체를 취한다.

   나) 고체 또는 반고체검체 

       검체를 미리 균질화하거나 잘게 썰어 잘 섞은 후 약 2～5g을 취하여 물 10～20 mL를 가한 다음 10～20분간 흔들어 완전히 용해시키거나 10분간 초음파 추출한다. 이 액에 물을 가해 50 mL로 하고 5,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상등액을 취한 다음 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과한 액을 시험용액으로 한다. 

   다) 단백질 함량이 많은 검체

       검체를 미리 균질화하거나 잘게 썰어 잘 섞은 후 약 2～5 g을 취하여 물 10～20 mL를 가한다. 이 액에 카레스(Carrez) 침전제 제1액 2 mL를 가해 흔들어 섞은 다음 다시 카레스(Carrez) 침전제 제1액 2 mL를 가해 2분간 흔들어 섞는다. 발생한 거품은 초음파 처리하여 제거한 후 물을 가해 50 mL로 하고 5,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상등액을 취한 다음 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과한 액을 시험용액으로 한다.

   라) 지방 함량이 많은 검체

       검체를 미리 균질화하거나 잘게 썰어 잘 섞은 후 약 2～5g을 취하여 물 10～20 mL를 가한 다음 10～20분간 흔들어 완전히 용해시키거나 10분간 초음파 추출한다. 이 액에 물을 가해 50 mL로 하고 5,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상등액을 취한 후 분액깔때기에 옮겨 디에틸에테르 50 mL를 가한 다음 흔들어 정치하고 물층을 취한다. 이 조작을 2회 반복하여 지방성분을 제거한 다음 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과한 액을 시험용액으로 한다. 다만, 상기 가)～라)의 조작후에도 정제가 필요한 경우는 2) 제2법 나) 정제에 따라 시험한다.

  2) 제2법

   가) 투석

      액체검체는 10～20 g을 취하고, 고체 또는 반고체검체는 균질화하거나 잘게 썰어 잘 섞은 후 10～20 g 취한 다음 투석내액 약 20 mL를 가하여 혼합한다. 이 혼합액을 투석용 튜브(분자량 12,000～14,000, 미리 수세한 다음에 사용한다)에 넣고 튜브의 끝을 밀봉한다. 미리 투석외액 약 150 mL를 넣은 눈금이 있는 용기에 튜브를 넣고 투석외액을 가하여 전량을 약 200 mL로 한다. 때때로 흔들어 주면서 실온에서 15～48시간 방치하여 투석한 후 투석용 튜브를 제거하고 투석외액을 가해 200 mL로 하여 투석액으로 한다.

   나) 정제

    (1) 사카린나트륨

       투석액 20 mL를 25 mL 메스플라스크에 넣고 0.1M TPA-Br용액 2 mL를 가한 다음 물을 가하여 25 mL로 한다. 이 액 5 mL를 역상계 카트리지에 분당 3～4 mL의 속도로 떨어뜨리고 물 10 mL로 세척한 후 메탄올：물 (40：60) 혼합액 10 mL로 용출시킨다. 용출액 전량을 강음이온교환형 카트리지에 분당 3～4 mL의 속도로 떨어뜨리고 0.5% 인산 5 mL와 물 5 mL를 사용하여 세척한 후 0.3N 염산 약 5 mL로 분당 3～4 mL의 속도로 용출시켜 전량을 5 mL로 한 액을 시험용액으로 한다.

    (2) 아스파탐

       투석액 5 mL를 강양이온교환형 카트리지에 분당 3～4 mL의 속도로 떨어뜨리고 물 10 mL를 사용하여 세척한 후 15% 염화나트륨용액 : 메탄올(50:50) 혼합액 5 mL로 분당 3～4 mL의 속도로 용출시켜 전량을 5mL로 한 액을 시험용액으로 한다.

 마. 시험조작

  1) 액체크로마토그래프의 측정조건

   가) 검출기 : 자외부흡광검출기(UV), 210 nm

   나) 칼럼：Nova-Pak C18 또는 이와 동등한 것

   다) 칼럼온도 : 25～40℃의 일정온도

   라) 이동상：10% TPA-OH(Tetrapropyl ammonium hydroxide) 20.3 mL를 메탄올：물(20：80)의 혼합액 약 900 mL에 녹이고 인산으로 pH를 4.0으로 조정한 다음 메탄올：물(20：80) 혼합액으로 전량을 1,000 mL로 한다.

   마) 이동상유량：1.0 mL/min

   바) 주입량 : 10～20 μL

 사. 정성시험

    시험용액 및 혼합표준용액을 앞의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하고, 얻어진 크로마토그램상의 사카린나트륨 및 아스파탐의 피크는 어느 측정조건에서도 혼합표준용액과 시험용액의 머무름시간이 일치하여야 한다.

 아. 정량시험

    시험용액 및 혼합표준용액을 앞의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하고, 얻어진 피크의 높이 또는 면적으로부터 작성한 검량선을 이용하여 시험용액 중의 사카린나트륨 및 아스파탐의 함량을 산출한다.

13.3. 소르비톨, 자일리톨

 가. 가스크로마토그래피법

  1) 분석방법

    검체 5 g을 정밀히 달아 물에 녹여 100 mL로 한 것을 시험원액으로 한다. 따로 자일리톨표준품 4.9 g, 소르비톨 표준품을 25 mg 정밀히 달아 100 mL 메스플라스크에 넣고 이에 물을 가하여 100 mL로 한것을 표준원액으로 한다. 시험원액 1 mL 및 표준원액 1 mL를 100 mL 환저플라스크에 각각 취한 후 각 플라스크에 내부표준용액(에리스리톨 500 mg을 취하여 물을 가하여 25 mL로 한 액) 1 mL를 가해주고 감압농축기를 사용하여 60℃의 수욕에서 증발건고시킨 다음 각 건조물에 피리딘 1 mL 및 무수초산 1 mL를 가해주고 환류냉각기를 부착시켜 수욕상에서 1시간 동안 끓여 완전히 아세틸화 한 액을 각각 시험용액 및 표준용액으로 한다. 시험용액 1 μL 및 표준용액 1 μL를 각각 가스크로마토그래피에 주입하고 다음 계산식에 따라 함량(%)을 구한다.

  함량(%) =   100   ×  Ws × Ru  

                      ──────

                        Wu × Rs  

Ws : 표준품의 무게(mg)

Wu : 검체의 무게(mg)(무수물로서)

Ru : 시험용액중의 에리스리톨유도체 피크면적에 대한 자일리톨유도체 피크면적비

Rs : 표준용액중의 에리스리톨유도체 피크면적에 대한 자일리톨유도체 피크면적비

  2) 조작조건

   가) 칼럼 : 내경 2 mm, 길이 2m의 유리판 또는 스테인레스관

   나) 칼럼충전제 : 크로모소브 W?HP에 3% OV?225를 입힌 것

   다) 검출기 : 수소염이온화검출기(FID)

   라) 주입구온도 : 250℃

   마) 칼럼온도 : 200℃

   바) 검출기온도 : 250℃

   사) 캐리어가스 및 유량 : 질소, 30 mL/min

   아) 유지시간(Retention time) : 내부표준물질 에리스리톨의 유지시간은 약 3.3분이며, 에리스리톨의 유지시간을 1.0으로 하였을 때, 각 성분들의 상대적인 유지시간은 자일리톨 약 3.90, 소르비톨 약 8.43이다.

13.4. 멘톨

 가. 기체크로마토그래피법

  1) 분석방법

    검체 5 g을 정밀하게 달아 에탄올에 녹여 정확하게 20 mL로 한다. 이 액 10 mL를 정확하게 취하여 내부표준액 10 mL를 정확하게 넣어 검액으로 한다. 따로 l-멘톨표준품 약 10 g을 정밀하게 달아 에탄올에 녹여 정확하게 100 mL로 한다. 이 액 10 mL를 정확하게 취하여 내부표준액 10 mL를 정확하게 넣어 표준액으로 한다. 검액 및 표준액 1 μL씩을 가지고 다음 조건으로 기체크로마토그래프법에 따라 시험하여 내부표준물질의 피크면적에 대한 멘톨의 피크면적비 QT 및 QS를 구한다.

  멘톨(C10H20O)의 양(mg) =  I-멘톨표준품의 양(mg)   ×  QT  

                                                      ───

                                                        QS  

내부표준액  n-카프릴산에틸의 에탄올용액(1 → 25)

  2) 조작조건

   가) 검출기 : 불꽃이온화검출기

   나) 컬럼 : 안지름 약 3 mm, 길이 약 2 m인 관에 기체크로마토그래프용폴리에틸렌글리콜 6000을 산처리한 180 ~ 250 μm의 기체크로마토그래프용규조토에 25 %의 비율로 피복한 것을 충전한다.

   다) 칼럼온도 : 150 ℃ 부근의 일정 온도

   라) 운반기체 : 질소

   마) 유량 : 내부표준물질의 유지시간이 약 10 분이 되도록 조정한다.

   바) 칼럼의 선정 : 표준액 1 μL를 가지고 위의 조건으로 조작할 때 내부표준물질, l-멘톨의 순서로 유출하고 분리도가 5 이상이다.

13.5. 과당, 설탕, 포도당, 맥아당

 가. 시험법 적용범위

    사료의 전반에 적용이 가능하다.

 나. 장치

    액체크로마토그래프-시차굴절계검출기(RI)

 다. 시약 및 시액

  1) 당류 혼합 표준용액

    각각의 당류 표준품(과당, 포도당, 설탕, 맥아당, 유당)을 60℃ 진공오븐에서 12시간 건조하여 각각을 증류수에 녹여 혼합 조제한다. 이때 검량선용 표준용액의 농도는 시험용액의 피크면적이 각 당류 표준물질의 직선성을 만족할 수 있도록 조정하여 조제한다.

  2) 이동상

    아세토니트릴과 증류수를 80:20의 부피비율로 혼합하여 조제한다. 이때 이동상은 유리섬유필터(Whatman GF/F 0.7 μm 또는 이와 동등한 것) 또는 나일론 66필터(Pall 0.45 μm 또는 이와 동등한 것)로 여과한 후, 사용 전에 초음파 처리하여 가스를 제거하고 사용한다.

  ※ 아세토니트릴 및 증류수를 테프론과 셀룰로오즈 에스테르 멤브레인 필터로 각각 여과하여 사용할 수 있다.

 라. 시험용액의 조제

  1) 시료 중 지방 제거

    시료를 균질화한 후, 50 mL 원심분리관에 균질화된 검체 5 g을 정밀히 달아 넣고 25 mL 석유에테르로 분산시킨다. 이를 2,000 rpm에서 약 10분간 원심분리한 후, 고형분이 제거되지 않도록 조심스럽게 석유에테르를 제거한다. 이를 반복하고 질소를 이용하여 석유에테르를 완전히 증발시킨다. 이때, 지방이 없는 것으로 확인된 시료의 경우 시료 중 지방 제거과정을 생략한다. 

  2) 당류의 추출

    지방이 제거된 시료에 증류수 25 mL 혹은 50% 에탄올 용액을 가하여 무게를 확인한다. 이를 85℃ 수조에서 25분간 가온하여 당류를 추출하고 실온으로 냉각하여 최초 기록한 추출용매의 무게가 될 수 있도록 추출용매를 첨가한다. 이를 0.45 μm의 나일론 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다. 이때, 시험용액이 혼탁할 경우, 2,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 여과한다.

 마. 시험조작

  1) 액체크로마토그래프 조건

   ※ 다)이동상 및 라)유속의 조건은 가)컬럼의 용량요인과 분해능을 만족하는 범위에서 조정할 수 있다.

   가) 칼럼：길이 300 mm, 안지름 4 mm, μ-Bondapak Carbohydrate칼럼 또는 이와 동등한 것

   ※ 칼럼은 다음의 용량요인과 분해능을 만족해야 한다.

   - 과당에 대한 용량요인(Capacity factor, K') = (tR-t0)/t0 ≥ 5

   ?tR : 주입 후 과당의 최대 피크높이까지의 머무름 시간

   ?t0 : 주입 후 용매의 최대 피크높이까지의 머무름 시간

   - 과당과 포도당의 분해능(Resolution, Rs) = (t2-t1)/0.5(tw1+tw2) ≥ 1

   ?t1 : 주입 후 과당의 최대 피크높이까지의 머무름 시간

   ?t2 : 주입 후 포도당의 최대 피크높이까지의 머무름 시간

   ?tw1 : 과당의 베이스라인에서의 피크넓이(Width)

   ?tw2 : 포도당의 베이스라인에서의 피크넓이(Width)

   나) 검출기：시차굴절계검출기(RI)

   다) 이동상 : 아세토니트릴:증류수(80:20, w/w) 

   라) 유속：1.0 mL/분

   마) 칼럼온도：실온

 바. 정량시험

    시험용액 및 표준용액을 각각 10 μL씩 주입하여 얻은 피크의 넓이 또는 높이를 구하여 검량선을 작성한 후 시험용액의 각각의 당류의 농도(μg/mL)를 구하고, 다음 식에 의해 검체 중 당류의 함량(mg/100 g)을 산출한다. 이때 표준용액 검량선의 농도범위는 시험용액 중 각각의 당류의 농도에 대한 직선성이 만족될 수 있도록 조정한다. 

  1) 계산방법

  당함량(mg/100 g)  ＝  S×   a×b            ×  100     

                            ─────────  ─────

                              검체채취량(g)       1,000   

S：시험용액중의 당질의 농도(μg/mL)

a：시험용액의 전량(mL)

b：희석배수

13.6. 네오헤스페리딘 디하이드로칼콘(Neohesperidine Dihydrochalcone)

 가. 아래와 같은 조건을 이용하여 액체크로마토그래피법을 이용하여 적량한다.

  1) 기구 및 실험조건

    Nova Pack RP C18 4 μm처리된 3.9mm ID × 150mm 길이의 컬럼을 사용하며 이동상으로 아세토니트릴/초산 0.5%(20:80 V/V)을 이용하여 분당 1 mL의 속도로 실험한다. 컬럼의 온도는 30℃를 유지하여 282nm의 자외선에서 측정한다.

  2) 실험과정

    50 mL의 DMSO에 네오헤스페리딘 디하이드로칼콘 표준품을 40 mg, 45 mg, 50 mg, 60 mg씩 각각 녹여 플라스크에 담고 위의 실험조건 하에서 실험하여 표준곡선을 얻는다. 본 품 50 mg을 50 mL의 DMSO에 녹여 플라스크에 담고 위의 실험조건 하에서 3차례 실험한 뒤 그 결과를 표준곡선과 비교한다.

    실험결과로 산출된 네오헤스페리딘 디하이드로칼콘의 양을 건조감량된 수분의 양을 고려하여 최종의 함량으로 산출하여 준다.

13.7. 감초추출물(글리시리진산)

 가. 정량법

  1) 이 품목을 글리실리진산으로서 약 20 mg에 상당하는 양을 정밀히 달아 50%에탄올을 가하여 100 mL로 한 액을 시험용액으로 한다. 따로, 글리실리진산표준품 약 20 mg을 정밀히 달아 50% 에탄올을 가하여 100 mL로 한 액을 표준용액으로 한다. 표준용액 및 시험용액 각각 20 μL씩을 다음의 조작조건으로 액체크로마토그래피에 주입하고, 다음 계산식에 따라 감초추출물의 함량을 구한다.

  글리시리진산(%) ＝   TG × Ws   ×  100   

                    ───────          

                       SG × W              

SG : 표준용액의 피크면적

TG : 시험용액의 피크면적

Ws : 표준품의 채취량(mg)(무수물로 환산)

W : 검체의 채취량(mg)(무수물로 환산)

  2) 조작조건

   가) 검출기 : UV 254 nm

   나) 칼럼 : μ-Bondapak C18(내경 4～6 mm, 길이 15～30 cm) 또는 이와 동등 한 것

   다) 칼럼온도 : 40℃

   라) 이동상 : 2% 초산?아세토니트릴의 혼액 (20 : 11)

   마) 유속 : 글리실리진산의 유지시간이 약 10분이 되도록 조정한다.

13.8. 원당(자당)

 가. 시험법 적용범위

    보조사료에 적용한다.

 나. 장 치

    액체크로마토그래프-시차굴절계검출기(RI) 또는 증기화 광산란 검출기(ELSD)

 다. 시약 및 시액

  1) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

  2) 아세토니트릴: HPLC급 또는 이와 동등한 것

  3) 표준원액: 자당을 증류수에 녹여 조제한다.

  4) 표준용액: 표준원액을 증류수에 녹여 적당한 농도로 희석, 혼합한다. 이때 검량선용 표준용액의 농도는 시험용액의 피크면적이 표준물질의 직선성을 만족할 수 있도록 조정하여 조제한다.

 라. 시험용액의 조제

    시료 100 mg에 5 mL 증류수를 넣은 뒤 3분간 진탕하여 추출하고 3000 g에서 10분간 원심분리한다. 상층액 1 mL을 취하여 증류수 1 mL로 희석한 후 멤브레인 필터로 여과한다.

 마. 시험조작

  1) 액체크로마토그래프 조건

   가) 검출기: 시차굴절계검출기(RI) 또는 증기화 광산란 검출기(ELSD)

   나) 칼럼: Asahipak NH2P-50 4E(4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

   다) 이동상 : 아세토니트릴:증류수(80:20, v/v) 

   라) 칼럼온도：35℃

   마) 유속：1.0 mL/분

   바) 주입량: 10 μL

 바. 정성시험

    시험용액 및 표준용액을 앞의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하고, 얻어진 크로마토그램상의 자당 피크는 어느 측정조건에서도 표준용액과 시험용액의 머무름시간(retention time)이 일치하여야 한다.

 사. 정량시험

    시험용액 및 표준용액을 각각 10 μL씩 주입하여 얻은 피크의 넓이 또는 높이를 구하여 검량선을 작성한 후 시험용액 각각의 자당 농도(mg/L)를 구하고, 다음 식에 의해 검체 중 자당의 함량(mg/kg)을 산출한다. 이때 표준용액 검량선의 농도범위는 시험용액 중 자당의 농도에 대한 직선성이 만족될 수 있도록 조정한다. 

 아. 계산

  자당의 함량(mg/kg)    =   C   ×  a   ×  D   

                                  ───        

                                    S           

C : 시험용액의 농도(mg/L)

a : 추출용매의 양(mL)

S : 시료량(g)

D : 희석배수

13.9. L-글루타민산나트륨

 가. 정량법

  1) 장치

    아미노산 분석기 또는 이와 동등한 것

  2) 시험용액의 조제 : 검체 0.2 g을 정확히 취하여 구연산리튬완충액(Lithium citrate buffer, pH 2.2)을 가해 100 mL로 정용한 후 이 중 1 mL를 취하여 50 mL로 한액을 시험용액으로 한다. 다음의 조작조건에 따라 시험한다. 

  3) 조작조건 

   가) 아미노산분석기의 측정조건 

    (1) 칼럼 : HR Na column(4.6 mm × 200 mm)또는 이와 동등한 것 

    (2) 칼럼온도 : 78℃

    (3) 검출기 및 파장 : 흡광검출기(570 nm) 

    (4) 이동상 및 이동상 유량 

     (가) 완충액 : 구연산리튬완충액(Lithium citrate buffer, pH 2.8)을 20 mL/h의 유속으로 흘려줌

     (나) 반응액 : 닌히드린(ninhydrin) 시액을 25 mL/h의 유속으로 흘려줌

     (다) 반응기 온도 : 135℃

     (라) 시료주입량 : 40 μL

  4) 시액

   가) 완충액 : 구연산리튬완충액(Lithium citrate buffer, pH 2.8)

   나) 닌히드린 시액 : 닌히드린(ninhydrin) 18 g과 히드린단틴(hydrindantin) 0.7 g을 정밀히 달아 디메틸설폭시드 675 mL에 녹인다. 이 액에 초산리튬시액(pH 5.2) 225 mL을 가한다.

   다) 표준원액 : L-글루타민산나트륨 표준품 0.2 g을 취하고 구연산리튬완충액 (Lithium citrate buffer, pH 2.2)를 가하여 100mL로 한 액을 표준원액으로 한다.

   라) 표준용액 : 표준원액을 1mL를 취하여 구연산리튬완충액(Lithium citrate buffer, pH 2.2) 를 가하여 50 mL로 한 액을 표준용액으로 한다.

13.10. 향미제 동시분석법

 가. 적용범위 

    본 분석법은 보조사료에 사용되는 천연착향료 및 합성착향료 원료 및 보조사료 제품 중 착향 성분들의 정량에 이용한다.

  1) 본법으로 검정할 수 있는 물질들은 다음과 같다.

┌──────┬───────┬─────────┐

│성 분 명    │동 의 어      │영 문 명          │

┝━━━━━━┿━━━━━━━┿━━━━━━━━━┥

│낙산에틸    │에틸부틸레이트│Ethyl butyrate    │

├──────┼───────┼─────────┤

│낙산이소아밀│              │Iso-amyl butyrate │

├──────┼───────┼─────────┤

│리나롤      │리나로울      │Linalool          │

├──────┼───────┼─────────┤

│초산벤질    │벤질아세테이트│Benzyl acetate    │

├──────┼───────┼─────────┤

│카르본      │              │Carvone           │

├──────┼───────┼─────────┤

│아네톨      │              │Anethole          │

├──────┼───────┼─────────┤

│계피알데히드│신남알데히드  │Cinnamaldehyde    │

├──────┼───────┼─────────┤

│티몰        │              │Thymol            │

├──────┼───────┼─────────┤

│유게놀      │              │Eugenol           │

├──────┼───────┼─────────┤

│카바크롤    │              │Carvacrol         │

├──────┼───────┼─────────┤

│바닐린      │              │Vanillin          │

├──────┼───────┼─────────┤

│에틸바닐린  │              │Ethyl vanillin    │

└──────┴───────┴─────────┘

  2) 본법으로 검정할 수 있는 물질들은 다음과 같다.

┌─────────┬──────┬───────┬────┐

│Chemical Names    │CAS Number  │Linear Formula│Formula │

│                  │            │              │weight  │

┝━━━━━━━━━┿━━━━━━┿━━━━━━━┿━━━━┥

│Ethyl butyrate    │ 105-54-4   │C6H12O2       │116.16  │

├─────────┼──────┼───────┼────┤

│Iso-amyl butyrate │ 106-27-4   │C9H18O2       │158.23  │

├─────────┼──────┼───────┼────┤

│Linalool          │ 78-70-6    │C10H18O       │154.25  │

├─────────┼──────┼───────┼────┤

│Benzyl acetate    │ 140-11-4   │C9H10O2       │150.17  │

├─────────┼──────┼───────┼────┤

│Carvone           │ 2244-16-8  │C10H14O       │150.22  │

├─────────┼──────┼───────┼────┤

│t-Anethole        │4180-23-8   │C10H12O       │148.20  │

├─────────┼──────┼───────┼────┤

│Cinnamaldehyde    │ 14371-10-9 │C9H8O         │132.16  │

├─────────┼──────┼───────┼────┤

│Thymol            │89-83-8     │C10H14O       │150.22  │

├─────────┼──────┼───────┼────┤

│Eugenol           │ 97-53-0    │C10H12O2      │164.20  │

├─────────┼──────┼───────┼────┤

│Carvacrol         │ 499-75-2   │C10H14O       │150.22  │

├─────────┼──────┼───────┼────┤

│Ethyl vanillin    │ 121-32-4   │C9H10O3       │166.17  │

├─────────┼──────┼───────┼────┤

│Vanillin          │121-33-5    │C8H8O3        │152.15  │

└─────────┴──────┴───────┴────┘

 나. 시약 및 표준용액의 제조

  1) 용매: 기체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

  2) 표준원액: 위 표에서 정량에 필요한 표준물질을 메탄올을 이용하여 녹인다(1,000 μg/mL∼2,000 μg/mL).

  3) 표준용액: 표준원액을 각각 50, 100, 250, 500 및 1000 ppm이 되도록 메탄올로 희석하고 검량선 작성에 사용한다.

  4) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

 다. 시험용액의 조제

  1) 추출

   가) 시료 적당량을 칭량하여 추출용기에 취한다. 메탄올(MeOH, LC급)을 일정량 가하고 10분간 vortexing 하거나 sonication 한다.

   나) 분말시료인 경우 MgSO4 1 g을 넣고 다시 5∼10분간 vortexing 하거나 sonication 한다.

   다) 3000 rpm에서 10분 원심분리 후 그 상등액을 취해 syringe filter(0.2 μm 또는 0.45 μm)로 여과한다. 

   라) 예상함량에 따라 추가 희석하여 시험용액으로 사용한다.

 라. 결과계산방법

  향미성분(%) = 시료측정농도(mg/L)  ×  총희석량(mL)    ÷  10,000  

                                      ─────────            

                                        시료채취량(g)               

 마. 기기 분석 조건

  1) 정량시험: GC-FID 기체크로마토그래피 분석 조건 

   가) Injection volume: 1 μL

   나) Inlets condition: Heater 250℃, split ratio 1/25

   다) Column: HP-INNOWAX (60 m × 0.32 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등

   라) Carrier gas: N2 or He

   마) Flow rate: 1.2 mL/min 

   바) Oven program

   ┏━━━━┯━━━━┯━━━━┓

┃℃ / min│Next ℃ │Hold min┃

┠────┼────┼────┨

┃        │50      │1       ┃

┠────┼────┼────┨

┃10      │240     │30      ┃

┠────┴────┼────┨

┃Run Time min      │50      ┃

┗━━━━━━━━━┷━━━━┛

   사) Detector: FID condition

   ┏━━━━━━━━┯━━┓

┃Heater ℃       │250 ┃

┠────────┼──┨

┃H2 flow mL/min  │35  ┃

┠────────┼──┨

┃Air flow mL/min │350 ┃

┠────────┼──┨

┃Makeup flow N2  │30  ┃

┗━━━━━━━━┷━━┛

  2) 확인시험: GC-MSD 분석 조건

   가) Injection volume: 1 μL

   나) Inlets condition: Heater 300℃, split ratio : 1/20

   다) Column: DB-5MS (30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등

   라) Carrier gas: He

   마) Flow rate: 1 mL/min 

   바) Oven program

   ┏━━━┯━━━━┯━━━━┓

┃℃/min│Next ℃ │Hold min┃

┠───┼────┼────┨

┃      │60      │2       ┃

┠───┼────┼────┨

┃2.5   │135     │2       ┃

┠───┼────┼────┨

┃14    │280     │1       ┃

┠───┴────┼────┨

┃Run Time min    │45.36   ┃

┗━━━━━━━━┷━━━━┛

   사) Mass analyzer condition: Interface temp 260℃, Ion source temp 200℃

   아) SIM(Selected Ion Monitering) mode ion

   ┏━━┯━━━━━━━━┯━━━┯━━┯━━┯━━┓

┃No. │Compound        │RT    │MS1 │MS2 │MS3 ┃

┣━━┿━━━━━━━━┿━━━┿━━┿━━┿━━┫

┃1   │Ethyl butyrate  │4.675 │71  │88  │73  ┃

┠──┼────────┼───┼──┼──┼──┨

┃2   │Linalool        │9.95  │71  │93  │121 ┃

┠──┼────────┼───┼──┼──┼──┨

┃3   │Anethole        │12.867│148 │147 │117 ┃

┠──┼────────┼───┼──┼──┼──┨

┃4   │Thymol          │12.842│135 │150 │115 ┃

┠──┼────────┼───┼──┼──┼──┨

┃5   │Eugenol         │13.767│164 │149 │131 ┃

┠──┼────────┼───┼──┼──┼──┨

┃6   │Carvacrol       │12.975│135 │150 │91  ┃

┠──┼────────┼───┼──┼──┼──┨

┃7   │Vanillin        │14.808│151 │109 │152 ┃

┠──┼────────┼───┼──┼──┼──┨

┃8   │Isoamyl butyrate│9.208 │70  │71  │89  ┃

┠──┼────────┼───┼──┼──┼──┨

┃9   │Benzyl acetate  │10.967│108 │91  │150 ┃

┠──┼────────┼───┼──┼──┼──┨

┃10  │Carvon          │12.242│82  │108 │93  ┃

┠──┼────────┼───┼──┼──┼──┨

┃11  │Cinnamaldehyde  │12.708│131 │132 │103 ┃

┠──┼────────┼───┼──┼──┼──┨

┃12  │Ethyl vaniline  │15.333│137 │138 │166 ┃

┗━━┷━━━━━━━━┷━━━┷━━┷━━┷━━┛

      ※ 기기 분석 조건은 분석실 실정에 맞게 조정할 수 있다.

 바. 주의사항

   시험시료를 정량하기 전에 먼저 시험시료를 HPLC급 메탄올로 추출하여 얻은 크로마토그램을 보고 나서 표준용액을 제조하는 것이 바람직하다. 

13.11. 소르비톨

 가. 분석원리

    검체 중의 소르비톨을 30% 에탄올로 추출한 후 유도체화 용액(10% p-nitrobenzoyl chloride, PNBC)을 사용하여 유도체화한 다음 정제한 후 액체크로마토그래프-광다이오드검출기를 이용하여 분석한다.

 나. 장치

  1) 액체크로마토그래프-광다이오드검출기(HPLC-PDA)

  2) 질소농축기

  3) 감압건조기

  4) 정제용 카트리지: Silica Sep-Pak(6 mL 또는 1 g) 또는 이와 동등한 것(사용 전에 n-hexane 10 mL 및 10% 초산에틸/n-hexane 용액 10 mL로 차례로 흘려보낸 후 사용한다.)

 다. 시약 및 시액

  1) p-nitrobenzoyl chloride(PNBC): 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

  2) 피리딘(pyridine) 용액: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

  3) 10% PNBC 용액: PNBC 10 g을 정밀히 달아 피리딘 용액을 가하여 100 mL로 한다. (열을 적당히 가하면서 교반하여 녹인다)

  4) 아세토니트릴: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

  5) 초산에틸

  6) 30% 에탄올

  7) 표준품: 소르비톨(sorbitol)

  8) 표준원액: 표준품에 30% 에탄올을 가하여 1,000 mg/L로 한다.

  9) 표준용액: 표준원액을 적절히 희석하여 최종 농도 1∼200 mg/L이 되도록 검량선용 표준용액을 제조한다. 각 표준용액 1 mL을 취하여 질소농축한 후 시험용액의 조제과정과 동일하게 유도체화 과정을 진행한다.

 라. 시험용액의 조제

    세절한 검체 2 g을 정밀히 달아 30% 에탄올을 가하여 10분간 초음파 추출한 후 전량을 50 mL로 한다. 이 추출액을 4000 g에서 10분간 원심분리한 다음 상층액 일부를 취하여 30% 에탄올로 적절히 희석한다. 이 액 1mL을 취하여 질소농축한 후 2 mL PNBC 용액을 가하여 잘 녹인 다음 50℃에서 60분간 반응시킨다. 반응 중지를 위해 메탄올 5∼6방울을 떨어뜨린 후 다시 질소농축한 다음 5 mL 클로로포름을 가하여 잘 녹인다. 이 액을 미리 활성화시킨 silica Sep-Pak 카트리지에 통과시킨 후 25 mL 초산에틸용액으로 용출시킨다. 용출액을 감압농축한 후 10 mL 아세토니트릴을 가하여 잘 녹인 다음 0.45 μm 멤브레인필터로 여과한 후 필요시 적절히 희석하여 시험용액으로 한다.

 마. 시험조작

  1) 액체크로마토그래프의 측정조건

   가) 검출기: 자외선흡광검출기(PDA), 260 nm

   나) 칼럼: Capcell Pak C18(4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

   다) 이동상: 아세토니트릴 : 물 (75:25, v/v)

   라) 컬럼온도: 37℃

   마) 유속: 1 mL/min

   바) 주입량: 10 μL

 바. 정성시험

    시험용액 및 표준용액을 앞의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하고, 얻어진 크로마토그램상의 소르비톨 피크는 어느 측정조건에서도 표준용액과 시험용액의 머무름시간(retention time)이 일치하여야 한다.

 사. 정량시험

    정성시험 결과 얻어진 소르비톨 피크의 높이와 면적으로부터 검량선과 비교하여 시험용액 중의 소르비톨 함량을 산출한다.

  소르비톨의 함량(mg/kg)  =   C   ×  a   ×  D   

                                    ───        

                                      S           

C : 검량선으로부터 얻은 농도(mg/L)

a : 검체에 30% 에탄올을 가하여 얻은 전량(mL)

S : 검체 채취량(g)

D : 희석배수

13.13. 스테비올배당체

 가. 시험법 적용범위

     보조사료에 적용한다.

 나. 분석원리

    시료 중에 포함되어 있는 스테비올배당체를 30% 아세토니트릴 용액으로 추출 후 액체크로마토그래프를 이용하여 정성 및 정량분석하는 방법이다.

 다. 장치

    액체크로마토그래프-자외부(UV photometric detector)를 사용한다.

 라. 시약 및 시액

  1) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

  2) 아세토니트릴: HPLC 급

  3) 이동상: 10 mM 인산완충액(pH 2.6): 인산일나트륨 1.1998 g을 물에 녹여 1,000 mL로 한다. 인산(1→10)을 가하여 pH 2.6으로 조정한다.

  4) 표준원액: 스테비오사이드 및 리바우디오사이드 A 표준품을 105℃에서 2시간 건조한 다음 각각 50 mg을 정밀히 달아 물:아세토니트릴 (7:3) 혼합액으로 용해하여 50 mL로 한 액을 표준원액으로 한다. 

  5) 표준용액: 표준원액을 물:아세토니트릴 (7:3) 혼합액에 녹여 적당한 농도로 희석, 혼합한다. 이때 검량선용 표준용액의 농도는 시험용액의 피크면적이 각 표준물질의 직선성을 만족할 수 있도록 조정하여 조제한다.

 마. 시험용액의 조제

    시료를 105℃에서 2시간 건조한 후 약 50∼100 mg을 정밀히 달아 물:아세토니트릴 (7:3) 혼합액으로 용해하여 50 mL로 한 액을 시험용액으로 한다. 따로 스테비오사이드 및 리바우디오사이드 A 표준품을 105℃에서 2시간 건조한 다음 각각 50 mg을 정밀히 달아 물:아세토니트릴 (7:3) 혼합액으로 용해하여 50 mL로 한 액을 표준용액으로 한다. 

 바. 시험조작

  1) 액체크로마토그래프의 측정조건

   가) 칼럼: Capcell pak C18 MG II (4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

   나) 이동상 및 유속: 1 mL/min

    (1) A: 아세토니트릴

    (2) B: 10 mM 인산완충액(pH 2.6) 

    (3) A : B (32 : 68)

   다) 주입량: 10 μL

   라) 검출기 및 파장: 자외부 UV기(210 nm)

   마) 칼럼오븐온도: 40℃

 사. 정성시험

    시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하여 얻어진 피크의 머무름시간(retention time)을 비교해서 스테비올배당체의 성분을 확인한다.

 아. 정량시험

    정성시험 결과 얻어진 크로마토그램상의 피크 면적법에 따라 정량한다.

 자. 계산

  각각의 스테비올배당체의 함량(mg/kg)   =   C   ×  a   ×  D   

                                                  ───        

                                                    S           

C : 시험용액의 농도(mg/L)

a : 추출용매의 양(mL)

S : 시료량(g)

D : 희석배수

13.14. 5`-이노신산이나트륨

 가. 시험법 적용범위

    보조사료에 적용한다.

 나. 분석원리

    시료 중에 포함되어 있는 5‘-이노신산이나트륨을 증류수로 추출 후 액체크로마토그래프를 이용하여 정성 및 정량분석하는 방법이다.

 다. 장치

    액체크로마토그래프-자외부검출기(UV photometric Detector)를 사용한다.

 라. 시약 및 시액

  1) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

  2) 메탄올: HPLC급 또는 이와 동등한 것

  3) 표준원액: 5‘-이노신산이나트륨(무수물)을 증류수에 녹여 1000 mg/L로 한다.

  4) 표준용액: 표준원액을 증류수에 녹여 적당한 농도로 희석, 혼합한다.

 마. 시험용액의 조제

    시료 1 g에 증류수 20 mL를 가하여 20분간 초음파 추출 후 증류수로 50 mL로 정용하고 균질하게 혼합한 후 원심분리(3000 g, 10분)한다. 상층액 1 mL를 취한 후 0.45 μm membrane syringe 필터로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

 바. 시험조작

 1) 크로마토그래프의 측정조건

  가) 검출기: 자외부검출기 (250 nm)

  나) 칼럼: CAPCELL PAK C18(4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

  다) 칼럼오븐온도: 35℃

  라) 이동상: 10% TPA-OH(Tetrapropylammonium hydroxide) 20.3 mL를 메탄올：물(30：70)의 혼합액 약 900 mL에 녹이고 인산으로 pH를 4.0으로 조정한 다음 메탄올：물(30：70) 혼합액으로 전량을 1,000 mL로 한다.

  마) 유속: 1 mL/min

  바) 주입량: 20 μL

  사) 머무름 시간: 3.0분

  아) 정량한계: 50 mg/kg

 2) 검량선 작성

    5‘-이노신산이나트륨 표준용액을 희석하여 일정농도가 되도록 제조한 후 HPLC에 20 μL씩 주입한다. 얻어진 크로마토그램상 각 피크의 넓이를 구하여 검량선을 작성한다.

 사. 정성시험

    시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하여 얻어진 피이크의 머무름 시간(retention time)을 비교해서 5‘-이노신산이나트륨의 성분을 확인한다.

 아. 정량시험

    정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 피이크의 면적 또는 높이를 측정하여 작성한 검량선으로부터 5‘-이노신산이나트륨의 함량을 산출한 후 수분함량을 고려하여 정량한다.

  5‘-이노신산이나트륨의 함량(mg/kg)    =   C   ×  a   ×  D   

                                                  ───        

                                                    S           

C : 시험용액의 농도(mg/L)

a : 추출용매의 양(mL)

S : 시료량(g)

D : 희석배수

14장. 보존제

14.1. 유기산 다성분 분석법

 가. 분석원리

   본 방법은 보조사료로 성분 등록된 구연산, 젖산, 사과산, 낙산, 초산, 주석산, 호박산, 개미산, 푸말산, 프로피온산 및 염화물을  0.4% 염산용액으로 추출 후 액체크로마토그래프를 이용하여 정성 및 정량 분석하는 방법이다.

 나. 장치

   액체크로마토그래프-자외부검출기(UV photometric Detector)를 사용한다.

 다. 시약 및 시액

  1) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

  2) 0.4% 염산용액

 라. 시험용액의 조제

    보조사료 약 0.05 ∼ 0.1 g을 칭량하여 50 mL 용량병에 취하고 0.4% 염산용액 20 mL를 가한 후 20분간 초음파 수조에서 용해시킨다. 0.4% 염산용액으로 정용하고 균질하게 혼합한 후 상등액을 원심분리(3000 rpm, 10분)하거나 또는 여과한 후 0.45 μm membrane filter로 여과하여 시험용액으로 사용한다. 

 마. 시험조작

  1) 칼럼 : C18 (4.6 × 250 mm, 3  μm) 또는 이와 동등한 것

  2) 칼럼온도 : 실온 또는 40℃

  3) 이동상 : 5 ∼ 20 mM H2SO4

  4) 검출기 파장 : 자외부(UV) 검출기, 210 nm 

  5) LC Pump : Isocratic pump  

  6) 유속 : 0.7 ~ 1.0 mL/분  

  7) 주입량 : 20 μL

  8) 머무름 시간

┌────┬───┬───┬───┬──┬──┬───┬───┬───┬───┬───┐

│성분    │주석산│개미산│사과산│젖산│초산│구연산│호박산│푸말산│낙산  │프로  │

│        │      │      │      │    │    │      │      │      │      │피온산│

├────┼───┼───┼───┼──┼──┼───┼───┼───┼───┼───┤

│머무름  │4.06  │4.24  │4.89  │5.89│6.13│8.09  │8.99  │10.79 │12.25 │13.91 │

│시간(분)│      │      │      │    │    │      │      │      │      │      │

└────┴───┴───┴───┴──┴──┴───┴───┴───┴───┴───┘

 바. 계산방법

  유기산(%) =   C   ×  a   ×  D   ×  1       

                      ───          ─────

                        S               10,000  

C : 시험용액의 농도(mg/L)

a : 추출용매의 양(mL)

S : 시료량(g)

D : 희석배수

 사. 칼슘, 나트륨 등 무기물 염의 정량

    무기물의 분석방법 중 AAS 또는 ICP법을 따른다.

14.2. 소르빈산, 안식향산과 그 염류 정량

 본 방법은 보조사료 중 소르빈산, 안식향산 및 그 염류에 적용 한다.

 가. 기체크로마토그래피에 의한 정성 및 정량

  1) 장치

    기체크로마토그래프 : 불꽃이온화검출기(FID)를 사용한다.

  2) 시약 및 시액

   가) 내부표준물질용액：0.1% 아세트아닐라이드의 아세톤용액

   나) 표준용액：소르빈산, 안식향산을 내부표준물질 용액에 녹여 0.5～1.0 mg/mL의 용액을 만든다.

  3) 시험용액의 조제

   가) 제1법

    (1) 액체검체：보존료의 함량에 따라 검체 30～100 g을 비커에 취하여 10% 수산화나트륨용액 또는 10% 염산으로 중화하고 이를 500 mL～1 L의 둥근바닥플라스크에 옮기고 이에 15% 주석산용액 5 mL, 염화나트륨 약 80 g 및 실리콘수지 한방울을 가한 후, 전량을 물로 150～200 mL로 한다. 이를 수증기 증류기에 연결하여 증류하고 유액은 매분 약 10 mL의 속도로 하여 500 mL를 취한다. 수증기 증류한 유액 일정량(각 보존료 5～10 mg 함량)을 분액깔때기에 넣고 염화나트륨 10 g, 10% 염산 5 mL를 가하여 에테르 40, 30 및 30 mL씩으로 3회 추출한다. 에테르추출액을 합하여 소량의 물로 씻고 에테르층을 분취한다. 무수황산나트륨을 사용하여 수분을 제거하고 쿠데르나다니쉬 농축기 또는 감압농축기를 이용하여 농축한 후 잔류물에 내부표준물질이 1 mL 중에 1.0 mg을 함유하도록 첨가하여 아세톤으로 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.

    (2) 고체검체：검체를 잘게 썰거나 갈아서 보존료의 함량에 따라 30～100 g을 취하여 물 50～100 mL를 가하여 잘 섞은 후 이하 액체검체와 동일하게 처리하여 시험용액으로 한다.

   나) 제2법

    (1) 수증기 증류기를 이용

     (가) 액체검체 : 증류방법은 가) 제1법과 동일하며, 다만 15% 주석산용액은 10 mL를 가하고, 증류액을 받는 수기끝은 1% 수산화나트륨용액 20 mL에 잠기도록 하여 증류한다. 

     (나) 고체검체 : 검체를 잘게 썰거나 갈아서 보존료의 함량에 따라 검체 30～100 g을 취하여 물 50～100 mL를 가하고 잘 섞은 후 이하 액체검체와 동일하게 처리하여 시험용액으로 한다.

    (2) 수증기 자동증류기를 이용

     (가) 액체검체 : 보존료의 함량에 따라 검체 30～100 g을 비이커에 취하여 10% 수산화나트륨용액 또는 10% 염산으로 중화하고 이를 500 mL～1 L의 플라스크에 옮기고 이에 15% 주석산용액 10 mL, 염화나트륨 약 80 g 및 실리콘수지 한 방울을 가한 후, 적정량의 물을 추가한다. 이를 수증기 자동증류기에 연결하고 증류액을 받는 수기끝을 1% 수산화나트륨용액 20 mL에 잠기도록 하여 증류하고 유액은 매분 10 mL의 속도로 하여 500 mL를  취한다. 수증기 증류한 유액 일정량(각 보존료 5～10 mg 함량)을 분액깔때기에 넣고 염화나트륨 10 g, 10% 염산 5 mL를 가하여 에테르 40, 30 및 30 mL씩으로 3회 추출한다. 에테르추출액을 합하여 소량의 물로 씻고 에테르층을 분취한다. 무수황산나트륨을 사용하여 수분을 제거하고 쿠데르나다니쉬 농축기 또는 감압농축기를 이용하여 농축한 후 잔류물에 내부표준물질이 1 mL 중에 1.0 mg을 함유되도록 첨가하고 아세톤으로 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.

     (나) 고체검체 : 검체를 잘게 썰거나 갈아서 보존료의 함량에 따라 검체 10～100 g을 취하여 물 50～100 mL를 가하고 잘 섞은 후 이하 액체검체와 동일하게 처리하여 시험용액으로 한다.

  4) 시험조작

   가) 기체크로마토그래프의 측정조건

    (1) 칼럼 : HP-5(30m × 0.32mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것 (5%-phenyl- methyl -polysiloxane)

    (2) 검출기: FID(불꽃이온화 검출기)

    (3) 주입부 온도 : 210～230℃

    (4) 검출기 온도 : 230～250℃

    (5) 칼럼오븐온도 : 140～200℃

    (6) 캐리어가스 및 유량 : N2 1.0 mL/min(split)

  5) 정성시험

    시험용액 및 표준용액을 앞의 조건에 따라 기체크로마토그래프에 주입하고, 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액과 시험용액의 머무름시간이 일치하여야 한다.

  6) 정량시험

    시험용액 및 표준용액을 앞의 조건에 따라 기체크로마토그래프에 주입하고, 얻어진 표준용액의 피크의 높이 또는 면적으로부터 작성한 검량선을 이용하여 시험용액 중의 각 보존료의 함량을 산출한다.

 나. 액체크로마토그래피에 의한 정성 및 정량(제1법)

  1) 분석원리

    사료 중의 보존료를 수증기증류한 후, 얻은 유액을 액체크로마토그래프로 정성 및 정량분석하는 방법이다.

  2) 장치

    액체크로마토그래프 : 자외부흡광검출기를 사용한다.

  3) 시약 및 시액

   가)이동상0.1% TBA-OH(0.1% 인산) 용액 : 40% TBA-OH(Tetrabutylammonium hydroxide) 2.5 g과 85% 인산 1.2 g을 증류수로 희석하여 1 L로 한 후 용매여과장치로 여과한다.

   나) 보존료 표준용액：각 보존료 표준품(데히드로초산, 소르빈산, 안식향산 및 각각의 파라옥시안식향산에스테르류) 0.1 g을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mL씩으로 한 액을 각 표준원액으로 한다. 각 표준원액을 취하여 10∼50 mg/L가 되도록 희석한 액을 표준용액으로 한다.

  4) 시험용액의 조제

    기체크로마토그래피에 의한 정성 및 정량시험 4) 시험용액의 조제에 따라 수증기 증류한 유액을 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과한 액을 시험용액으로 한다.

  5) 시험조작

   가) 액체크로마토그래프의 측정조건

    (1) 검출기 : 자외부흡광검출기(UV Detector), 217 nm

    (2) 칼럼：Capcell pak MF-C8(4.6 × 150mm, 4.5 μm) 또는 이와 동등한 것

    (3) 이동상

     (가) 이동상 A : 0.1% TBA-OH(0.1% 인산) 용액

     (나) 이동상 B : 아세토니트릴

┏━━━━┯━━━━━━┯━━━━━━┓

┃시간(분)│이동상 A(%) │이동상 B(%) ┃

┠────┼──────┼──────┨

┃0.0     │75          │25          ┃

┠────┼──────┼──────┨

┃2.5     │75          │25          ┃

┠────┼──────┼──────┨

┃7.0     │65          │35          ┃

┠────┼──────┼──────┨

┃12.0    │60          │40          ┃

┠────┼──────┼──────┨

┃15.0    │70          │30          ┃

┗━━━━┷━━━━━━┷━━━━━━┛

    (4) 이동상유량：1 mL/분

    (5) 주입량 : 10 μL

   나) 표준용액의 크로마토그램

   다) 정량한계: 데히드로초산(0.6 mg/kg), 소르빈산(1.5 mg/kg), 안식향산(1.0 mg/kg), 파라옥시안식향산메틸(1.0 mg/kg), 파라옥시안식향산에틸(1.0 mg/kg)

  6) 정성시험

    시험용액 및 표준용액을 앞의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하고, 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액과 시험용액의 머무름시간이 일치하여야 한다.

  7) 정량시험

    시험용액 및 표준용액을 앞의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하고, 얻어진 피크의 높이 또는 면적으로부터 다음 식에 따라 검체중의 각 보존료의 함량을 산출한다.

  보존료(g/kg)＝각 표준용액의 농도(mg/L) ×   PA  ×  500   ×  1       

                                            ───  ────  ─────

                                              PS      SA        1,000   

PS :표준용액의 높이 또는 면적

PA:시험용액의 높이 또는 면적

SA:검체의 채취량(g)

 다. 액체크로마토그래피에 의한 정성 및 정량(제2법)

  1) 분석원리

    시료 중에 포함되어 있는 소르빈산, 소르빈산칼륨, 안식향산 및 안식향산나트륨을 메탄올로 추출하고 액체크로마토그래프를 이용하여 정성 및 정량분석하는 방법이다.

  2) 장치

    액체크로마토그래프 : 자외부검출기(UV photometric Detector)를 사용한다.

  3) 시약 및 시액

   가) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

   나) 용매: 인산, 메탄올, 아세토니트릴 등은 HPLC 급 또는 이와 동등한 것

   다) 표준원액: 소르빈산 및 안식향산을 각각 메탄올에 녹여 1000 mg/L로 한다.

   라) 표준용액: 표준원액을 각각 메탄올에 녹여 적당한 농도로 희석, 혼합한다.

  4) 시험용액의 조제

    사료 50 mg을 취하여 5 mL의 메탄올로 3분 동안 진탕하여 추출 후 10분간 원심분리(3000 G, 10분)하여 상층액 1 mL를 취하여 10 mL의 메탄올로 표선을 맞추어서 0.2  μm membrane syringe filter 여과한 것을 시험용액으로 한다.

  5) 시험조작

  가) 액체크로마토그래프의 측정조건

    (1) 검출기: 자외부흡광검출기, 240 nm

    (2) 칼럼:  C8 (4.6 × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

    (3) 칼럼오븐온도 : 40℃

    (4) 이동상: A: 0.1% TBA-OH(0.1% 인산) 용액         B: 아세토니트릴

┌─────┬──┬──┐

│시간 (분) │A(%)│B(%)│

├─────┼──┼──┤

│0.0       │75  │25  │

├─────┼──┼──┤

│2.5       │75  │25  │

├─────┼──┼──┤

│7.0       │70  │30  │

├─────┼──┼──┤

│10        │75  │25  │

├─────┼──┼──┤

│12        │75  │25  │

└─────┴──┴──┘

    (5) 유속: 1.0 mL/min

    (6) 주입량: 10 μL

   나) 표준용액의 크로마토그램

 머무름 시간: 소르빈산(3.8분), 안식향산(4.9분)

   다) 정량한계: 1000 mg/kg

   라) 검량선 작성

      소르빈산 및 안식향산 표준용액을 희석하여 일정농도가 되도록 제조한 후 HPLC에 10 μL씩 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상 각 피크의 넓이를 구하여 검량선을 작성한다.

  6) 정성시험

    시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하여 얻어진 피크의 머무름 시간(retention time)을 비교해서 소르빈산 및 안식향산의 성분을 확인한다.

  7) 정량시험

    정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 피크의 면적 또는 높이를 측정하여 작성한 검량선으로부터 소르빈산 및 안식향산의 함량을 정량한다.

  소르빈산 또는 안식향산의 함량(mg/kg)    =   C   ×  a   ×  D   

                                                    ───        

                                                      S           

C: 시험용액의 농도(mg/L)

a: 추출용매의 양(mL)

S: 시료량(g)

D: 희석배수

14.3. 프로피온산 및 그 염류의 정량

 가. 기체크로마토그래피에 의한 정성 및 정량

  1) 분석원리

    사료 중의 프로피온산 및 그 염류를 수증기증류한 후, 얻은 유액을 용매추출 등을 통하여 정제한 다음, 기체크로마토그래프로 정성 및 정량분석하는 방법이다.

  2) 장치

    기체크로마토그래프 : 불꽃이온화검출기(FID)를 사용한다.

   가) 충전칼럼(Packed column)

      고정상담체：기체크로마토그패프용 크로모솔브 101(80～100메쉬) 또는 이와 동등한 것

   나) 캐필라리칼럼

    (1) 고정상액체：Polyethylene glycol-terephthalic acid 또는 이와 동등한 것

    (2) 칼럼：0.2～0.32 또는 0.53 mm의 안지름을 가지는 30 m의 모세관 유리칼럼에 적합한 고정상액을 화학적결합시키거나 또는 Cross link 코팅한 것 (HP-FFAP 또는 이와 동등한 것)

   다) 이온교환수지칼럼：유리관(10 mm×10～15 cm)에 높이 25～30 mm로 강산성 이온교환수지를 충전한다.

  3) 시약 및 시액

   가)강산성 이온교환수지：100～200메쉬의 도웩스(Dowex) 50X8 또는 암버라이트(Amberlite) CG120을 H형으로 하고 물로 씻는다.

   나) 내부표준물질용액 : 트란스크로톤산 0.1 g을 정밀히 달아 물에 녹이고 100 mL로 한 액을 내부표준물질용액으로 한다(사용시 조제).

   다) 프로피온산표준용액：프로피온산 0.1 g을 정밀히 달아 아세톤에 녹이고 100 mL로 한 액을 표준원액으로 한다. 프로피온산표준원액 1 mL 및 내부표준용액 1 mL를 취하고 아세톤으로 희석하여 10 mL로 한다(사용시 조제).

프로피온산 1 mL = 100 μg C3H6O2

  4) 시험용액의 조제

   가) 제1법

       잘게 썰은 검체 30～50 g(프로피온산으로서 100～200 mg)을 1 L 증류플라스크에 넣고 물 200 mL, 염화나트륨 80 g, 10%인산용액 10 mL 및 실리콘수지 한 방울을 가한 다음 수증기 증류를 하여 유액 500 mL를 받는다. 이 때 플라스크는 1% NaOH 20 mL를 가해 냉각기 끝이 잠기도록 한다. 유액 25 mL를 정확히 취하여 감압하에서 농축건조한 다음 잔류물을 물 1 mL로 녹여 미리 강산성 이온교환수지를 채워둔 이온교환수지칼럼의 상부에 넣고 유출액은 내부표준물질용액 1.0 mL를 넣은 10 mL메스플라스크에 받는다. 물 1 mL씩으로 잔류물을 녹여서 이 조작을 되풀이 하여 유출액의 전량을 10 mL로 한 다음 인산 1 mL, 에틸에테르 5 mL를 가하여 흔들어 섞어 추출한다. 다시 물층을 에틸에테르로 1～2회 추출하고 에테르추출액을 합한 다음, 무수황산나트륨을 사용하여 수분을 제거하고 쿠데르나다니쉬 농축기 또는 감압농축기를 이용하여 농축한 후 일정량의 아세톤을 가하여 시험용액으로 한다.

   나) 제2법

       소르빈산, 안식향산 및 그 염류 가.기체크로마토그래피에 의한 정성 및 정량시험 4) 시험용액의 조제 가) 제1법에 따라 얻어진 수증기 증류한 유액 100 mL를 정확히 취하여 분액깔때기에 넣고 염화나트륨 10g, 인산 1 mL 및 내부표준용액 1 mL를 가하여 에테르 50 mL 씩으로 2회 추출하여 에테르층을 모은 뒤, 무수황산나트륨을 사용하여 수분을 제거하고 쿠데르나다니쉬 농축기 또는 감압농축기를 이용하여 농축한 후, 아세톤을 가하여 최종 부피가 10 mL가 되도록 하여 시험용액으로 한다.

  5) 시험조작

   가) 기체크로마토그래프의 측정조건

    (1) 칼럼 : 충전칼럼 또는 캐필라리칼럼

    (2) 주입부 온도 : 200～240℃

    (3) 검출기 온도 : 200～250℃

    (4) 칼럼오븐온도 : 120～200℃

    (5) 캐리어가스 및 유량 : 질소 또는 헬륨을 적절하게 조절한다.

    (6) 검출기의 가스유량：수소와 공기를 적절히 조절한다.

   나) 표준용액의 크로마토그램

프로피온산(3.4분), 트란스크로톤산(6.9분)

   다) 정량한계

      프로피온산(1.0 mg/kg)

  6) 정성시험

    시험용액 및 표준용액을 앞의 조건에 따라 기체크로마토그래프에 주입하고, 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액과 시험용액의 머무름시간이 일치하여야 한다.

  7) 정량시험

    시험용액 및 표준용액을 앞의 조건에 따라 기체크로마토그래프에 주입하고, 얻어진 피크의 높이 또는 면적으로부터 다음 식에 따라 검체중의 프로피온산의 함량을 산출한다.

  프로피온산(g/kg) =    표준용액의 농도(mg/L) ×  PA × PSis  ×  500   ×  1   ×  1       

                                                ───────  ────  ───  ─────

                                                  PS × PAis      SA        CR      1,000   

PS :표준용액 중 프로피온산의 피크 높이 또는 면적

PA :시험용액 중 프로피온산의 피크 높이 또는 면적

PSis :표준용액 중 내부표준물질의 피크 높이 또는 면적

PAis :시험용액 중 내부표준물질의 피크 높이 또는 면적

SA :검체의 채취량(g)

CR : 농축배수(= 취한 유액의 량(mL)/최종 시험용액의 량(mL))

14.4. 에톡시킨(Ethoxyquin)

 가. 시험법 적용범위

   사료에 적용한다.

 나. 분석원리

    검체를 아세토니트릴로 추출한 후 액체크로마토그래프로 측정한다.

 다. 장치

    액체크로마토그래프?형광검출기(Fluorescence Detector)를 사용한다.

 라. 시약 및 시액

  1)용매：잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

  2) 물：증류수 또는 이와 동등한 것

  3) 표준원액：에톡시퀸을 아세토니트릴에 녹여 100 mg/kg이 되게 한다.

  4) 표준용액：표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

  5) 기타시약：잔류농약 시험용 또는 특급

 마. 시험용액의 조제

    시료를 0.85 mm이나 그 이하로 분쇄하고 빛이나 열에 노출되지 않도록 주의한다. 시료 0.1 g을 정밀히 달아 2 mL microcentrifuge에 담고 아세토니트릴 용액을 1.5 mL 넣어 1분 이상 vortex mixer로 혼합 후, 20분간 정치시키고 다시 1분간 vortex mixer로 혼합한다. 또는 시료 무게를 0.5 g 달아 아세토니트릴 7.5 mL과 혼합할 수 있다. 혼합된 시료를 3000 x g에서 원심분리하고 상층액을 취해 0.45 μm 실린지필터로 여과한 후, 갈색 바이알에 담아 시험용액으로 한다. 

 바. 시험조작

  1) 액체크로마토그래프의 측정조건

   가) 칼럼충전제：옥타데실시릴화한 실리카

   나) 칼럼：안지름 4.5 mm, 길이 250 mm의 스테인리스관 (C18, 5 μm)

   다) 칼럼온도：35℃

   라) 이동상：아세토니트릴：0.01 M 암모니아 아세테이트 (70：30, v/v)

   마) 검출기파장 여기파장 360 nm, 형광파장 432 nm

   바) 유속：에톡시퀸이 약 6분에서 유출하는 유속으로 조정한다.

  2) 검량선의 작성

     표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

  3) 정량한계

     0.05 mg/kg

 사. 정성시험

    위의 조건에서 시험할 때 시험결과는 표준품과 일치하여야 한다.

 아. 정량시험

    정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

14.5. 부틸히드록시아니졸(BHA), 디부틸히드록시톨루엔(BHT) 및 몰식자산프로필(PG)

14.5.1. 액체크로마토그래프에 의한 BHA, BHT, PG 동시분석법-제1법

 가. 분석원리

    사료 중의 부틸히드록시아니솔(BHA), 디부틸히드록시톨루엔(BHT), 몰식자산프로필(PG)을 헥산으로 용해?추출하고, 용매추출을 통하여 정제한 다음, 액체크로마토그래프로 정성 및 정량 분석하는 방법이다.

 나. 장치

   액체크로마토그래프 : 자외부검출기(UV photometric detector)를 사용한다.

 다. 시약 및 시액

  1) 0.01 M TBA-OH용액：40% TBA-OH(Tetrabutylammonium hydroxide)용액 6.5 mL에 물 900 mL를 가하고 초산으로 pH 3.0로 조정한 다음 물을 가하여 1,000 mL로 한다.

  2) 0.01 M 염화제이철용액：염화제이철(FeCl3?6H2O) 0.27 g을 0.01N 염산에 녹여 100 mL로 한다.

  3) 표준용액 : BHA, 50 mg과 PG 25 mg, BHT 100 mg을 이소프로판올 및 아세토니트릴혼액 (1：1)에 녹여 50 mL로 한다. 사용시 이액 10 mL를 취하고 이동상으로 희석하여 100 mL로 한다.

 라. 시험용액의 조제

  1) 유지류 : 균질화한 시료 5 g을 비커에 달아, 5 mL 헥산이 들어 있는 125 mL 분액깔때기에 옮기고, 헥산 15 mL로 여러번 나누어서 비커를 씻어 분액깔때기에 합친다. 여기에 헥산포화아세토니트릴 50 mL 씩으로 3회 추출하고(만약 유탁형태가 일어나면 뜨거운 물에 분액깔때기를 5～10초 동안 담가서 분리한다), 추출액을 250 mL 분액깔때기에 합한다. 이 액을 농축플라스크에 서서히 옮겨 40℃이하의 수욕에서 감압농축기를 사용하여 3 ~ 4 mL로 농축하여 눈금이 있는 용기에 옮기고 씻어 전량을 5 mL로 한 후, 이소프로판올 5 mL로 플라스크를 씻어 전량을 10 mL로 하여 시험용액으로 한다.

  2) 수산동물유래 사료 등 : 잘게 썬 시료 5 ~ 20 g을 달아 브랜더캡(Blender Cap)에 옮기고 무수황산나트륨 약 15 g, 헥산 100 mL를 가하여 약 2분간 균일하게 섞은 다음 여과한다. 잔사에 헥산 100 mL를 가하여 추출을 되풀이하고, 여액을 합친다. 여액을 농축하여 약 20 mL로 한다. 이하 가) 유지류에 따라 조작한다. 

 마. 시험조작 

  1) 칼럼 : C18 (4.6 x 250 mm, 5  μm) 또는 이와 동등한 것

  2) 이동상 : 물 · 아세토니트릴 · 초산 (35 : 60 : 5)

  3) 검출기 파장 : 자외부(UV) 검출기, 280 nm

  4) 유속: 1.0~1.5 mL/분   

  5) 주입량: 10~20 μL

  6) 감도: 0.05 AUFS

 바. 계산방법

  산화방지제 (mg/kg) ＝   P   ×  As  ×  10  

                                ───  ───

                                  At      S   

P : 표준용액의 농도(mg/L)

At：표준용액의 높이 또는 면적

As：시험용액의 높이 또는 면적

S：시료량(g) 

14.5.2. 액체크로마토그래프에 의한 BHA, BHT 동시분석법-제2법 

 가. 분석원리

    사료 중의 부틸히드록시아니솔, 디부틸히드록시톨루엔을 아세토니트릴로 추출하고 아세토니트릴 포화 헥산으로 정제한 후 기울기 용리를 이용한 액체크로마토그래프로 정성 및 정량하는 방법이다.

 나. 장치

    액체크로마토그래프 : 자외부검출기(UV photometric detector)를 사용한다.

 다. 시약 및 시액

  1) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

  2) 아세토니트릴

  3) 헥산

  4) 아세트산

 라. 시험용액의 조제

    2 g의 사료에서 10 mL의 아세토니트릴로 10분간 진탕하여 추출 후 10분간의 원심분리 후 상층액을 취한다. 상층액을 2 mL의 아세토니트릴 포화 헥산을 가해주고 10분 동안 진탕 후 하층액을 취하여 0.45  μm 실린지필터로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

 마. 시험조작 

  1) 칼럼: C18 (4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

  2) 검출기 파장 : 자외부(UV) 검출기, 280 nm

  3) 유속 : 1.0 mL/분

  4) 주입량 : 10 μL

  5) 기울기 조건

┌────┬──────────┬─────────────┐

│Time(분)│7% 아세트산(증류수) │4% 아세트산(아세토니트릴) │

├────┼──────────┼─────────────┤

│0       │77.5                │22.5                      │

├────┼──────────┼─────────────┤

│2       │77.5                │22.5                      │

├────┼──────────┼─────────────┤

│14      │4.5                 │95.5                      │

├────┼──────────┼─────────────┤

│17      │4.5                 │95.5                      │

├────┼──────────┼─────────────┤

│25      │77.5                │22.5                      │

├────┼──────────┼─────────────┤

│30      │77.5                │22.5                      │

└────┴──────────┴─────────────┘

  6) 머무름 시간 : BHA 14.50분, BHT 19.50분

 마. 계산방법

  BHA/BHT(%) =  C   ×  a   ×  D   ×  1       

                      ───          ─────

                        S               10,000  

C : 시험용액의 농도(mg/L)

S : 시료량(g)

a : 추출용매의 양(mL)

D : 희석배수

14.6. 케르세틴

 가. 분석원리

    사료 중 케르세틴을 메탄올로 추출한 후 액체크로마토그래프로 정성 및 정량한다.

 나. 장치

    액체크로마토그래프-자외부검출기(UV photometric detector)를 사용한다.

 다. 시약 및 시액

  1) 물 : 3차증류수 또는 이와 동등한 것

  2) 메탄올

  3) 아세트산

 라. 시험용액의 조제

    시료 약 50 mg을 정밀히 달아 메탄올을 가하여 50 mL로 한 다음 30분 초음파 추출하고 이를 0.5  μm 여과기로 여과한 액을 시험용액으로 한다. 따로, 케르세틴(C15H10O7?2H2O) 표준품을 케르세틴으로서 50 mg 함유하도록 정밀히 달아 메탄올을 가하여 50 L로 한 다음 0.5  μm 여과기로 여과한 액을 표준용액으로 한다. 표준용액 및 시험용액 각각 10 μL씩을 다음의 시험조작 조건으로 액체크로마토그래프에 주입하고 다음 계산식에 따라 케르세틴의 함량을 구한다.

 마. 시험조작

  1) 칼럼 : C18 (3.9 × 300 mm, 10 μm) 또는 이와 동등한 것

  2) 칼럼온도 : 실온 또는 40℃

  3) 이동상 : 메탄올 · 물 · 아세트산 (15 : 3 : 1)

  4) 검출기 파장 : 자외부(UV) 검출기, 375 nm

  5) 유속 : 1.0 mL/분

  6) 머무름 시간 : 3.40분

 바. 계산방법

  케르세틴 함량(%) =  P   ×  As  × 100  

                    ───  ───        

                      S       At          

P : 표준품(케르세틴으로서)의 양(mg)

S : 건조물로 환산한 시료량(mg)

At : 표준용액의 피크 면적

As : 시험용액의 피크 면적

14.7. 레스베라트롤

 가. 분석원리

    사료 중 레스베라트롤을 초산에틸로 추출한 후 액체크로마토그래프로 확인 및 정량한다.

 나. 장치

    액체크로마토그래프-자외부검출기(UV photometric detector)를 사용한다.

 다. 시약 및 시액

  1) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

  2) 초산에틸

  3) 아세토니트릴

  4) 0.1% 오르토인산용액

 라. 시험용액의 조제

    시료 약 1.0 g을 정밀하게 달아 부피플라스크에 넣고 10 mL 초산에틸에 녹인다. 30분 동안 초음파추출한 후 추출액을 0.45  μm 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다. 따로 레스베라트롤(C14H12O3) 표준품 0.1 mg을 정밀하게 달아 50% 아세토니트릴 10 mL로 녹인다. 이 액 5 mL를 정확하게 취하여 50% 아세토니트릴을 넣어 100 mL로 하여 표준액으로 한다. 시험액 및 표준액 20 μL를 가지고 상기 조건에서 액체크로마토그래프법에 따라 시험하고 시험액 및 표준액의 피크 면적 AT 및 AS를 구한다.

 마. 시험조작

  1) 칼럼 : C18 (4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

  2) 이동상 : 아세토니트릴·0.1% 오르토인산용액 (20 : 80)

  3) 검출기 파장 : 자외부(UV) 검출기, 306 nm

  4) 유속 : 1.0 mL/분

  5) 머무름 시간 : 39.10분

 바. 계산방법

  레스베라트롤(C14H12O3)의 양(mg) =   P   ×  At  ×  1   

                                            ───  ───

                                              As      40  

P : 표준품(레스베라트롤)의 양(mg)

At : 표준용액의 피크 면적

As : 시험용액의 피크 면적

14.8. 몰식자산 및 몰식자산프로필 동시분석법

 가. 분석법 적용범위

    보조사료에 적용한다.

 나. 분석원리

    시료 중에 포함되어 있는 몰식자산 및 몰식자산프로필을 메탄올로 추출하고 액체크로마토그래프를 이용하여 정성 및 정량분석하는 방법이다.

 다. 장치

    액체크로마토그래프-자외부검출기(UV photometric Detector)를 사용한다.

 라. 시약 및 시액

  1) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

  2) 용매: 메탄올, 아세트산 등은 HPLC 급 또는 이와 동등한 것

  3) 표준원액: 몰식자산 및 몰식자산프로필을 각각 증류수에 녹여 1000 mg/L로 한다.

  4) 표준용액: 표준원액을 각각 50% 메탄올에 녹여 적당한 농도로 희석, 혼합한다.

 마. 시험용액의 조제

    사료 0.1 g을 취하여 10 mL의 메탄올로 3분 동안 진탕하여 추출 후 10분간 원심분리(3000 G, 10분)하여 상층액을 취하고, 50% 메탄올로 희석한 후 0.2  μm membrane syringe filter로 여과하여 시험용액으로 한다.

 바. 시험조작

  1) 크로마토그래프의 측정조건

   가) 검출기: 자외부흡광검출기, 270 nm

   나) 칼럼: C18 (4.6 × 250mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

   다) 칼럼오븐온도 : 40℃

   라) 이동상: A: 0.1% 아세트산 수용액               B: 메탄올

┌─────┬──┬──┐

│시간 (분) │A(%)│B(%)│

├─────┼──┼──┤

│0         │80  │20  │

├─────┼──┼──┤

│2         │80  │20  │

├─────┼──┼──┤

│6         │30  │70  │

├─────┼──┼──┤

│11        │20  │80  │

├─────┼──┼──┤

│12        │80  │20  │

├─────┼──┼──┤

│15        │80  │20  │

└─────┴──┴──┘

   마) 유속: 1.0 mL/min

   바) 주입량: 10 μL

   사) 표준용액의 크로마토그램

   아) 정량한계: 1000 mg/kg

  2) 검량선 작성

    몰식자산 및 몰식자산프로필 표준용액을 50% 메탄올로 희석하여 일정농도가 되도록 제조한 후 HPLC에 10μL씩 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상 각 피크의 넓이를 구하여 검량선을 작성한다.

 사. 정성시험

    시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하여 얻어진 피크의 머무름 시간(retention time)을 비교해서 몰식자산 및 몰식자산프로필의 성분을 확인한다.

 아. 정량시험

    정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 피크의 면적 또는 높이를 측정하여 작성한 검량선으로부터 몰식자산 및 몰식자산프로필의 함량을 정량한다.

  몰식자산 또는 몰식자산프로필의 함량(mg/kg)    =   C   ×  a   ×  D   

                                                          ───        

                                                            S           

C: 시험용액의 농도(mg/L)

a: 추출용매의 양(mL)

S: 시료량(g)

D: 희석배수

14.9. 인산(H3PO4)

 가. 시약의 조제

   4.2. 인(P) 가. 시약의 조제 또는 4.19. ICP 발광분광분석법 가. 표준용액의 제조에 따른다.

 나. 시료액의 조제

   4.2. 인(P) 나. 시료액의 조제에 따른다.

 다. 측정

    4.2. 인(P) 다. 측정 또는 4.19. ICP 발광분광분석법의액 다.방법에 따라 인(P)을 분석한 후 인산(H3PO4)의 함량을 계산한다.

 라. 계산

  인산 (%)  =   인 (%) × 3.163   

3.163 = 인산(H3PO4)의 분자량/인(P)의 원자량 = 97.995/30.973

15장. 사료중 동물성 유래 단백질 혼입검사법

15.1. 현미경 검사법

 가. 비중에 의한 현미경 검사법

  1) 시료채취 방법

    반추동물 배합사료 또는 동물성사료의 최종제품에 대한 시료채취는 사료검사요령(농림부고시)의 규정에 따라 실시한다.

  2) 감정방법

    시료를 1 mm체로 통과할 수 있도록 분쇄한 후, 분쇄한 시료 1 g을 미리 제조한 비중액에 넣어 비중분리용 여과용기에 넣고, 가는 유리봉을 이용하여 혼합하고, 약 20분간 방치한 다음 시료중의 각 원료를 비중 분리한다.

    하층에 분리된 사료원료(육골분 등이 부분적으로 분리) 및 클로로포름을 여지(No 5A)로 여과하고 여지에 부착된 사료원료를 에탄올로 세척하고 여지에 모은다. 여지를 건조한 후 여지에 있는 사료를 100 mL의 톨비이커에 옮겨 5% 수산화나트륨용액 200 mL을 가한 후 30분간 끓이고, 비이커의 상부 까지 물을 채워서 정치하고 상등액을 흡입 제거한다.

    물층이 투명하게 될 때까지 세정조작을 반복한다. 비이커내 침점물 전량을  소형 샤레에 옮겨 광학현미경(배율 50～100배) 및 실체현미경(20～30배)에서 각 시료중의 육골분 유래조직단편의 유무를 확인한다.

 나. 염색에 의한 현미경 검사법

    동물유래물질은 샘플을 체로 치고 침전물도에 따라 구분, 시료(10 g 이상)을 분쇄하여 2개의 대표샘플로 나누어서 하나는 5 g을 체로 치고, 2 g은 침전시켜, 염색시약에 의해 색깔로 확인, 동물유래물질의 현미경 확인은 특수 염색시약을 이용하여 조사가 가능

  1) 시약

    Chloral hydrate, gelatin, Paraffin oil, Bradford reagent Iodine/potassium iodide solution, Millon reagent, Cystin reagent

  2) 방법

   가) 체로 동물유래물질 분리 확인

    (1) 5 g의 샘플을 체를 통하여 분리 

    (2) 0.5 mm이상의 샘플은 실체현미경을 이용하여 다양한 배율에서 조사시 동물유래물질은 체계적으로 나타남

    (3) 0.5 mm 동물유래물질을 여러 배율의 복합현미경으로 현경

   나) 동물유래물질의 현미경 확인은 특수 염색시약을 이용하여 조사가 가능

    (1) Chloral hydrate : 조심스럽게 가열처리하면 세포구조가 분명하게 보임 (전분이 젤라틴화되기 때문, 세포내용물이 제거되어짐)

    (2) gelatin : collagen이 구성 단백질(가열과정에서 tryptophane 파괴)

    (3) Paraffin oil : 골격성분 물질은 대부분이 lacunae(뼈소강, 뼈기질내 공간, 열공)내  공기가 차있고, 5～15 μm정도의 검은 구멍이 있어 확인되어짐

    (4) Bradford reagent : 단백질 검출시 이용(전형적인 푸른 색깔)

    (5) Iodine/potassium iodide solution : 전분 검출시 사용(blue-violet colour), 단백질(yellow-orange colour).

    (6) Millon reagent : By carefully heating, 골격 성분원소는 분홍색으로 됨

    (7) Cystin reagent : By carefully heating, cystin-containing 성분 원소들은 (머리카락, 깃털들, 등등) black-brown으로 됨

   * 견과 양모는 같은 단백질 섬유로 비슷한 염색거동을 갖는다. 그러나 견섬유는 양모와 달리 Cystin을 함유하지 않으므로 Disulfide(S-S)에 의한 가교결합이 없다. 

   다) 침전물로부터 동물유래물질 분리확인

    (1) 샘플 2 g(0.001 g 까지 정확하게)를 시험관이나 분액여두에 넣고 15 mL의 4염화에틸렌으로 처리 

    (2) 혼합 후 정치(1～3분)하여 침전물을 분류

    (3) 침전물을 건조한 후 무게를 칭량(0.001 g에 까지)하여, 골은 건조침전물에서 실체현미경 복합현미경으로 조사

  3) 계산과 평가

    동물유래물질의 정량평가로 골이 함유된 동물성유래물질이라면 계산이 가능하다. 육상 온혈동물(포유류, 조류)의 골 파편내 골소강을 조사하며, 샘플내 동물유래물질은 침전물내 골로 평가된 부분(무게), 동물유래 물질내 골의 비율(무게)을 고려하여 평가한다. 평가시 3개의 슬라이드와 슬라이드 당 5개의 위치를 조사하여야 한다. 혼합 사료내 침전물은 육상동물의 골과 어골뿐만 아니라 고 중량의 물질이 혼합되어 있다(미네랄, 모래, 목지화된 식물체).

   가) 골격파편 비율의 평가치

% 육상동물 골분 파편 ＝ (S×c)/W

% 어골과 비늘 파편  ＝ (S×d)/W

 ※ S = 침전물무게(㎎),

c = 침전물내 육상동물 골의 평가를 위한 보정인자(%)

d = 침전물내 어골과 비늘의 평가를 위한 보정인자(%)

W = 침전되어진 샘플의 무게(㎎)

   나) 동물유래물질의 평가치

      동물생산물의 골격의 비율은 크게 변화할 수 있으며, 골분의 경우에 골의 비율은 50～60%, 육분의 경우 20～30%가 골이며, 어골분과 비늘에 경우에도 어분이 10～20% 함유되어있다. 만일 샘플내 육분의 종류가 알려지면, 함량의 추정이 가능하다.

    (1) 육상동물 생산물 유래물질의 함량 추정 = (S×c)/(W×f) × 100

    (2) 물고기 생산물 유래물질의 함량 추정 = (S×d)/(W×f) × 100

※ S = 침전물무게(㎎),

c = 침전물내 육상동물 골의 평가를 위한 보정인자(%)

d = 침전물내 어골과 비늘의 평가를 위한 보정인자(%)

f = 조사 샘플내 동물유래 물질의 골 부분을 위한 보정인자(%)

W = 침전되어진 샘플의 무게(㎎)

  4) 조사결과의 표현

   가) 현미경으로 관찰시 동물유래물질이 조사샘플에서 발견되지 않음

      현미경으로 관찰시 동물유래물질이 조사샘플에서 발견

   나) 이런 경우는 조사결과 보고서는 상세하게 기술

   다) 현미경으로 조사결과 조사샘플에서 동물유래물질 소량 발견

   라) 조사의 경험에 의존

    (1) 어느 한쪽 현미경으로 관찰 시 조사샘플에서 동물유래물질 소량 발견, 골 파편 내용물(물고기/육상동물-육상동물의 골 파편의 경우, 특히 가금류와 포유류로부터 유래된 골 파편)은 동물유래 생산물내(= f 보정인자 사용) 골(%)에 근거하여 계산했을 때 크기순서에 따라 큰 것(%), 동등한 것(%)

    (2) 현미경으로 관찰 시 조사샘플에서 측정할 수 있는 양의 동물유래물질 발견

    (3) 육상동물유래 골 성분이 확인, 보고서에는 추가기술

      - 상기 물질은 포유동물로부터 유래되어진 가능성 있음, 이것은 육상동물로부터 골 파편이 가금류와 포유류로부터 특이성을 가진다면 필요한 사항이 아님

15.2. ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) : 효소면역측정검사법 

 가. 시약

  1) 사용 kits [Ruminant Kit for Meat&Bone Meals and animal feeds kits] 

  2) kit 내용

   가) Antibody Coated Microwell Module

   나) Biotinylated anti-species antibody

   다) Avidin-peroxidase conjugate

   라) TMB substrate solution

   마) Stop solution

   바) 양성 control 액 / Positive species control

   사) 음성 control 액 / Positive species control

   아) Wash solution concentrate

   자) Extraction additive concentrate

 나. 시약의 조제

  1) Positive controls, Anti-species botinylates, Avidiin peroxidase conjugate는 buffer조제 공급시약 이용

  2) ABTs Concentrate 와 Peroxide Citrate buffer를 1:24의 비율로 희석하여 working ABTs 용액으로 제조하여 사용(희석후 즉시 사용)

  3) Wash solution는 1:9의 비율로 증류수와 혼합하여 사용

 다. 시료추출방법

  1) 측정시료를 막자사발 또는 분쇄기를 이용하여 분쇄한다.

  2) 시료 5 g을 250 mL삼각플라스크에 취한다.

  3) 추출용매(0.5 M NaCl, 10 mM EDTA) 50 mL을 첨가하여 15～30분간 방치한다.

  4) 방치 후, 항온수조에서 95～100℃로 15분간 가열한다.

  5) 상온에서 냉각시킨 후 여과지(Whatman 4)를 이용하여 여과하거나 원심분리하여 시료용액으로 사용 한다.

 라. 측정방법

  1) 측정 kit와 시료추출액은 분석 전 실온에서 측정한다.

  2) 정밀한 마이크로피펫을 이용하여 시료액, 양성 control액, 음성 control액 및 Blank를 각각의 well속에 100 μL씩 첨가한다.

  3) 서서히 손으로 혼합한 후 well을 덮은 후 실온에서 20분 정치 배양시킨다.

  4) 배양 후 well 속의 내용물을 버리고, 흡착지를 이용해 두드려가면서 잔여물을 제거한 후 wash solution 300 μL를 각각의 well에 채우고, 동일한 방법으로 내용물을 버린다(2회 세정을 반복).

  5) Biotinylated anti-species antibody 50 μL을 각각의 well에 넣고, 덮어서 실온에서  20분 정치 배양시킨다. 배양 후 well의 내용물을 버리고 세정을 3회 반복한다.

  6) Avidin-peroxidase conjugate 50 μL을 각각의 well에 넣은 후 덮고 실온에서 20분간 정치배양시킨다. Well의 내용물을 버리고, 6번 세정을 반복한다.

  7) TMB substrate solution 50 μL를 각각의 well에 넣고, 차광 실온에서 20분 정치배양 시킨다.

  8) 배양후 stop solution 50 μL을 각각의 well에 넣고 발색을 정지시킨다.

  9) 15분 이내에 plate reader (450 ㎚파장)에서 흡광도를 측정한다.

15.3. PCR(Polymerase Chain Reaction) : 중합효소연쇄반응검사법

    배합사료, 육골분 및 분쇄중의 포유동물 유래조직, 반추동물유래 조직 및 소, 닭?돼지 등의 각종 동물유래 조직의 유무를 조직중에 함유되어 있는 미토콘트리아 DNA의 각 동물특이적 배열을 PCR법으로 검출함에 의해 확인한다.

 가. 시료 및 검출대상

  1) 대상시료 : 배합사료, 육골분 및 어분 등의 사료원료를 대상으로 한다.

  2) 검출대상 동물종 : 포유동물, 반추동물, 소, 닭, 양, 산양 등 아래표에 각종 프라이마에 의해 검출 가능한 동물치를 나타낸다.

  3) 검출처리 : 본법에 의한 사료중의 소유래 육골분의 검출감도(원물함량 %로서)는 다음과 같다.

   가) 포유동물 검출 프라이마 -- 육골분으로서 0.1～0.01%

   나) 반추동물 검출 프라이마 -- 육골분으로서 0.1～0.01%

   다) 소검출 프라이마 -------- 육골분으로서 0.1～0.01%

       육골분의 검출감도는 육골분 원료동물의 사용비율, 제조방법(가열처리조건) 및 골 성분의 함유비율 등에 의해 다른 경우가 있다. 또한 본 법은 동물유래 DNA를 검출하는 것이기 때문에 육골분에 한하지 않고 탈지분유, 혈장단백질 등의 동물유래 DNA를 포함하는 원료에서도 검출된다.

 나. 시료의 채취 및 분쇄

  1) 시료의 채취

    원칙적으로 시료는 공장내 보관시 등에 다른 원료 혹은 환경에서 오염물질이 오염되는 가능성이 없는 제조품에서 채취한다. 수거방법은 미생물채취법에 준해 대상시료 이외의 물질의 오염이 없도록 신중히 채취한다. 채취시는 플라스틱제 장갑을 끼고 멸균된 스푼을 사용하여 약 500 g을 멸균된 채취봉지에 채취한다.

  2) 분쇄 등

    육골분, 어분은 원칙적으로 분쇄를 하지 않는다(분쇄시 오염의 위험성이 크므로) 입자가 거친 박류 등 큰 육편 등이 포함되는 경우에는 깨끗한 망(1 mm)으로 통과물을 채취한다. 배합사료에서는 1 mm의 망을 통과할 때 까지 분쇄한다. 이 때 시료간의 오염을 방지하기 위하여 시료마다 분쇄반을 세정하거나 교환한다.

  3) 시료의 보존

    시료는 냉장 보관한다. 또한 미분쇄후의 시료를 장기(1주일 이상)보존하는 경우에는 냉동고(-20℃)에서 보존한다.

 다. 시험방법

  1) 시약의 조제

    물은 특별한 경우를 제외하고 이온교환수 또는 증류수를 사용한다. PCR반응액의 조제에 사용하는 물 및 추출 DNA의 희석에 사용하는 물 및 아래에 특별히 기술한 경우에는 고압증기처리(121℃, 15분간)한 초순수(역삼투압으로 정제한 RO수 또는 증류수를 MIlli-Q 등으로 비저항치 17 M/㎝까지 정제한 것)을 사용한다.

   가) 조직?세포용 미토콘드리아 DNA 추출킷트

      mtDNA 엑스트라-CT 킷트(화광순약) 또는 이것과 같은 것을 사용한다.

   나) 0.5 M EDTA 용액

      에틸렌티아민4초산-나트륨-수화물 18.6 g을 초순수 80 mL에 넣고 수산화나트륨(가루형태) 약 2 g을 더하여 녹이고, pH 8.0에 용해시킨 후 초순수를 가하여 100 mL을 만들고 121℃에서 15분간 고압증기멸균한다.

   다) 1 M 토리스 염산완충액

      토리스히드록시메틸아미노메탄 12.1 g을 초순수 80 mL에 넣고 염산 약 4.2 mL을 넣고 녹이고, pH 8.0에 조정한 후 초순수를 넣어 100 mL로 하고 121℃에서 15분간 고압증기멸균한다.

   라) 전기영동용 완충액(TAE완충액)

      토리스히드록시메틸아미노메탄 4.84 g, 초산 1.14 mL 및 0.5 M EDTA용액 2 mL을 물에 녹여 1000 mL로 한다.

   마) TE 완충액 

      1 M 토리스염산완충액 1 mL 및 0.5 M EDTA용액 0.2 mL을 물에 녹여 100 mL로 하고 121℃에서 15분간 고압증기멸균한다.

   바) 아가로스 겔고

      순도 아가로스(전기영동용) 또는 이것과 동등의 것 2.5 g을 전기영동용 완충액 100 mL을 넣고 가열하고 녹인후 50～60℃에서 냉각시킨후 겔의 두께가 3-4 mm가 되도록 겔형 성형에 넣고, 겔과 고무의 사이에 기포가 들어가지 않도록 신중하게 고무를 넣고 실온에서 방치하여 고체화시킨다.

   사) 영동용 색소용액

      프로모페놀블루 25 mg, 키실렌시아놀 25 mg 및 글리세린 3 g을 초순수에 녹여 10 mL로 하고 121℃에서 15분간 고압증기멸균한다.

   아) DNA 사이즈마커(50-1000bp) (FMC, 보주조 등)

   자) 취화에치지움 용액

      취화에치디움 10 mg을 초순수 500 μL에 녹여 취화에치지움 원액을 조제하고 사용시에는 이 원액 25 mL을 전기영동용 완충액 1000 mL에 녹인다.(사용할 때 조제) 또한 취화에치지움 용액은 광분해성이 있으므로 차광 냉장보관한다. 또한 취하에치지움은 독가스가 생기므로 취급시에는 반드시 장갑을 사용하고 시험종료후 흡착제가 들어간 필터 등을 사용하여 처리한 후 폐기한다. 취화에치지움 염색한 아가로스 겔은 5% 차아염산나트륨 용액에 침적후 직사 일광하에 방치하여 광분해시킨후 폐기한다.

   차) 지루코르아비스(직경 1.5 mm)

      YTZ볼(닛카토) 또는 이것과 같은 동등의 것을 121℃에서 15분간 고압증기멸균한다.

   카) 프라이마

    (1) 포유동물 검출 프라이마 : 검출반도싸이즈 176bp

    (2) 반추동물 검출 프라이마 : 104bp

    (3) 소 검출 프라이마 : 120bp

    (4) 소 검출 프라이마 : 271bp

    (5) 닭 검출 프라이마 : 227bp

    (6) 양, 산양검출 프라이마 : 331bp

    (7) 돼지검출 프라이마 : 126bp

   타) PCR 반응용 효소Ampli Taq Gold(applied Biocyateme)

   파) PCR 완충액PCR buffer II, PCR Gold buffer 또는 이것과 동등의 물질

   하) 2 mM dNTPmix

   갸) 양성 콘트롤소 미토콘드리아 DNA, 닭 미토콘드리아 DNA, 양 미토콘드리아 DNA 등 소고기 등에서 "(다)"항에 의해 추출한 DNA를 사용한다.

  2) 장치 및 기구

   가) 사말사이크라

      PE9600, PE9700, PCR Thermal Cycler MP 또는 이것과 동등의 물질

   나) 크린벤치

   다) 비즈파쇄장치

      2000rpm 정도의 회전수에, 2㎖ 튜브에 대응하는 것. BC-20(센트랄과학기구), 마치비즈숀카, Fast Prop, FP120(nskzhtl), Mixer Mill MM300(Qlagen) 또는 이것과 동등의 물질

   라) Autoclave

   마) 전기영동장치 : Mupid-2(코스모바이오) 또는 이것과 동등의 물질

   바) 폴라로이드 카메라

   사) UV 트랜스일루미네이터

   아) 고속냉각원심기

      1.5 mL 및 0.2 mL 튜브대응, 4℃냉각, 12000 × g의 원심분리가 가능한 것

   자) 마이크로피펫트(1000, 200, 200, 20 및 2 μL용 디지털가변형)

   차) 그외 2 mL, 1.5 mL 및 0.2 mL의 각종 플라스틱제 튜브 및 각종 마이크로피펫형 팁등(살균된 것)

  3) DNA 추출

    시판 조직, 세포용 미토콘드리라 DNA 추출킷트 (mtDNA 엑스트라쿠타-CT킷트)을 사용한 DNA의 추출법에 대하여 설명한다.

    또한 육골분의 DNA 추출방법으로서는 그밖에 페놀크로르포름법, 케아니진치오시아네트 완충액을 사용하는 방법, 키렉스 수지를 사용하는 방법이 있다.

   가) 시료 100 mg을 2 mL  플라스틱제 나사형 튜브에 채취하고, 질유니아 비즈를 1.5 g 정도 넣고 추출용완충액(mtDNA 추출킷트에 첨부)를 1 mL 넣고 비즈파쇄장치)에 셋트하여 2000 rpm으로 1분간 진동한다. 1분간 정치한 후 다시 2000 rpm으로 1분간 진동하고 수냉 후 1000×g으로 2분간 원심분리(4℃)한다.

   ※ 주) 통상 호모지나이즈 추출로도 좋으나, 시료간의 오염에 주의를 요한다.

   나) 상층부를 1.5 mL  플라스틱제튜브에 채취하여 10000 × g으로 10분간 원심분리(4℃) 한 후 상층을 제거한다.

   다) DNA 추출용액(킷트 첨부) 50 μL을 가하여 피펫팅에 의해 현탁시키고 여기에 DNA 추출용액 II(킷트에 첨부) 100 μL을 가하여 혼합 후 5분간 수냉한다.

   라) 여기에 미리 수냉해 놓은 DNA 추출용액(킷트에 첨부) 75 μL을 가하여 물루틴스미키사로 혼합후 즉시 수냉한다.

   마) 12000 × g으로 5분간 원심분리(4℃)한 후 상층액 200 μL을 채취하고 새로 1.5 mL튜브에 옮긴다.

   바) 여기에 요화나트륨액(킷트에 첨부) 300 μL을 가하여 혼합후 여기에 500 μL의 이소프로바놀을 가하여 혼합한다. 

   사) 12000 × g으로 5분간 원심분리(실온화)한 후 상층을 제거한다.

   아) 1 mL의 70% 에탄올을 가하여 혼합후 12000 × g으로 5분간 원심분리하고 상층을 제거한다. 다시 1 mL의 70% 에탄올을 가하고 혼합후 12000 × g으로 5분간 원심분리하고 상층을 제거하여 20 μL의 TE 완충액을 가하여 DNA를 용해한다. 이 DNA용액은 냉동 보존한다.

  4) PCR 반응

    일반적인 PCR법의 조작에 준한다. 포유동물 유래 DNA의 검출에 플라이마셋트 anicon5, anicon3, 반추동물유래 DNA의 추출에는 rumicon 52, rumicon 32, 소유래 DNA의 검출에는 cow52, cow31 또는 I8129, H8357을 사용하여도 좋다.

    각 플라스마를 사용할 때의 PCR의 반응조건은 별지 1 (PCR반응조건)에 나타났다. 이하의 조작법은 개략적으로 나타냈다.

   가) 200 μL의 플라스틱제 튜브에 PCR 반응액 18 μL 및 추출 DNA용액의 10배 희석액 2 μL을 가한 것을 PCR반응용의 시약액으로 한다.

   나) 같은 방법으로 PCR 반응액 18 μL 및 소유래 DNA용액의 10배 희석액 2 μL 가한 것을 양성 콘트롤액, PCR 반응액 18 μL 및 물 2 μL을 가한 것을 음성 콘트롤액으로 한다.

   다) 시료액, 양성콘트롤액 및 음성콘트롤액을 사마루사이쿠라에 넣고, 별지1의 반응조건에서 PCR반응을 실시한다.

  5) 전기영동

   가) 아가로스겔을 전기영동용 완충액을 넣은 영동조에 넣고 10분간 100V의 정전압을 넣어 예비 영동한다. 

   나) DNA 사이즈마커 5 μL에 약 1 μL의 영동용색소용액을 가하고 혼합하여 그 전량을 아가로스겔의 스롯트에 주입한다.

   다) PCR 반응이 종료한 시료액, 양성콘트롤 및 음성콘트롤 각각 5 μL에 약 1 μL의 영동용색소용액을 가하고 혼합하여 그 전량을 아가로스겔의 스롯트에 주입한다.

   라) 100V 정전압을 걸고 부로모페놀프레가스롯트에서 3-4 cm 이동할때까지 전기영동을 실시한다.

   마) 전기영동이 종료한 아가로스겔을 취화에치지움 용액에 약 30분간 적시고 염색한다.

   바) 아가로스겔을 UV트랜스일루미네이터에 넣어, 365 ㎚의 자외선을 조사하고 시료액으로 검출한 DNA밴드위치를 사이즈마카의 밴드위치와 비교하여 DNA단편사이즈를 구한다. 흑백필름을 사용하여 폴라로이드 사진을 활용한다.

  6) 판정방법

   가) 양성콘트롤로 검출 사이즈의 밴드가 검출되고, 음성 콘트롤로 밴드가 검출되지 않는 경우에서 또한 시료에 있어 양성콘트롤과 동동일 사이즈의 밴드가 검출되지 않는 경우를 양성으로 한다.

   나) 양성콘트롤으로 밴드가 검출되지 않는 경우, 및 음성콘트롤으로 밴드가 검출되지 않는 경우에는 PCR반응이 정상적으로 행해지지 않을 가능성이 있기 때문에 재시험이 필요하다.

 라. 검사할 때의 주의사항 등

  1) 시험조작상 주의사항

    PCR법은 검출감도가 높고 극미량의 DNA에서도 검출되기 때문에 분석시험중은 목적외의 DNA의 혼입방지에 세심한 주의를 기울일 필요가 있다.

    또한 DNA는 미생물이나 사람의 피부 등에 존재하는 DNA 분해효소에 의해 분해되기 때문에 이 효소의 혼입을 방지하기 위하여 멸균등의 적절한 조작을 할 필요가 있다.

   가) 마이크로피펫용 칩은 멸균된 것을 사용하고 조작시마다 매회 새로운 것으로 바꾼다. 필터가 붙은 칩을 사용하는 것도 바람직하다.

   나) 분석 조작중은 플라스틱제 장갑을 사용하고 장갑위를 알콜로 소독한다.

   다) 샘플링 및 분쇄를 실시하는 경우 PCR조작을 실시하는 장소 및 전기 영동을 실시하는 경우는 분리하는 것이 바람직하다. PCR반응액의 조제는 깨끗한 장소에서 실시한다.

  2) 검사 정확도 확보상의 주의사항

   가) 한 검사체의 시료에서 DNA의 추출은 2점 병행으로 실시하고, 2점의 추출 DNA에 대해 PCR반응을 각각 2점 병행으로 실시한다.

   나) PCR반응을 실시하는 돼지에는 반드시 양성 콘트롤과 양성콘트롤을 동시에 반응시킨다.

   다) 더블첵크를 위하여 프라이마는 2종류 이상을 사용하는 것이 바람직하다. 예를들면 소, 양 등의 동물종을 감별하는 경우에는 포유동물 검출 플라이마 및 각종 동물검출 플라이마를 사용해도 좋다.

  3) 시험결과의 취급

    1 검체당 2점의 추출 DNA중 2점 모두 양성의 결과가 나타난 경우에만 양성으로 판정한다.

15.4. Multiplex PCR,  Multiplex real-time PCR :다중중합효소연쇄반응검사법

 가. Multiplex PCR에 의한 검사법

    사료에 척추동물, 갑각류, 연체동물이 포함되어 있는지의 여부를 온도와 압력에 비교적 안정한 미토콘드리아 DNA에 기초한 멀티플렉스 PCR법을 이용하여 동물성 성분을 동시에 검사할 수 있다.

  1) 시료 및 검출대상

   가) 대상시료 : 반추동물용 배합사료, 반추동물용 섬유질배합사료 등을 대상으로 한다.

   나) 검출대상 동물 종 : 척추동물, 갑각류, 연체동물 

   다) 검출처리 : 본법에 의한 사료 중의 모든 동물성단백질의 검출감도(원물함량 %로서)는 다음과 같다.

   라) 모든 동물성단백질 검출 Primer : 육골분으로서 0.1~0.01% 육골분의 검출감도는 육골분 원료동물의 사용비율, 제조방법(가열처리조건) 및 골성분의 함유비율 등에 의해 다른 경우가 있다. 또한 본 법은 동물성 성분을 검사할 수 있는 것이기 때문에 육골분에 한하지 않고 어분, 혈분 등의 동물유래 DNA를 포함하는 원료에서도 검출된다.

  2) 시료의 채취 및 분쇄

   가) 시료의 채취원칙적으로 시료는 공장내 보관 시 다른 원료 혹은 환경에서 오염물질이 오염되는 가능성이 없는 제조품에서 채취한다. 수거방법은 미생물 채취법에 준해 대상시료 이외의 물질의 오염이 없도록 신중히 채취한다. 채취시는 플라스틱제 장갑을 끼고 멸균된 스푼을 사용하여 약 500 g을 멸균된 채취봉지에 채취한다.

   나) 분 쇄시료는 입자가 거친 박류 등 큰 육편 등이 포함되는 경우에는 깨끗한 망(1 mm)으로 통과물을 채취한다. 배합사료에서는 1 mm의 망을 통과할때 까지 분쇄한다. 이 때 시료간의 오염을 방지하기 위하여 시료마다 분쇄반을 세정하거나 교환한다.

   다) 시료의 보존시료는 냉장 보관한다. 또한 미분쇄 후의 시료를 장기(1주일 이상)보존하는 경우에는 냉동고(-20℃)에서 보존한다.

  3) 시험방법

   가) 시약

    (1) DNA 추출용 Kit [PowerPrepTM, DNA Extraction from Food and Feed Kit]

    (2) DNA 추출용 Kit 내용

     (가) Lysis Buffer A

     (나) Lysis Buffer B

     (다) Binding Buffer

     (라) DNA Binding Column 이와 동등의 추출 Kit 내용 사용

    (3) All animal PCR Kit [PowercheckTM, All animal PCR Kit]

    (4) All animal PCR Kit 내용

     (가) All animal Detection PCR Primer mix

     (나) 5×Reaction Buffer

     (다) DNA loading dye

     (라) Taq. DNA Polymerase

     (마) DNA size marker

     (바) Control DNA 이와 동등의 모든 동물성단백질 PCR Kit내용 사용

    (5) 전기영동용 완충액(1×TAE완충액)

       50×TAE완충액 20 mL를 증류수 980 mL에 희석하여 1000 mL로 한다

    (6) TE 완충액

       1 M 트리스염산완충액 1 mL 및 0.5 M EDTA용액 0.2 mL을 물에 녹여 100 mL로 하고 121℃에서 15분간 고압증기 멸균한다. 

    (7) 아가로스 겔아가로스(전기영동용) 

       2.0 g을 전기영동용 완충액(1×TAE Buffer) 100 mL을 넣고 중불에서 끓인 후 50~60℃에서 냉각 시킨 후 약간 식힌 후 EtBr 3 μL를 넣어 준 후 겔의 두께가 3~4 mm가 되도록 겔형 성형에 넣고, 겔과 고무의 사이에 기포가 들어가지 않도록 신중하게 고무를 넣고 실온에서 방치하여 고체화시킨다.

    (8) DNA 사이즈마커(100-1000bp)  

    (9) Ethidium bromide 용액

       Ethidium bromide 10 mg을 초순수 500 μL에 녹여 ethidium bromide 원액을 조제하고 사용 시에는 이 원액 25 mL을 전기영동용 완충액 1000 mL에 녹인다.(사용할 때 조제) 또한 ethidium bromide 용액은 광분해성이 있으므로 차광 냉장 보관한다. 또한 ethidium bromide는 독가스가 생기므로 취급 시에는 반드시 장갑을 사용하고 실험이 끝난 후 흡착제가 들어간 필터 등을 사용하여 처리한 다음 폐기한다. ethidium bromide로 염색한 아가로스 겔은 5% 차아염산나트륨 용액에 침적 후 직사일광 하에 방치하여 광분해 시킨 후 폐기한다.(아가로즈 젤을 제조할 때 ethidium bromide 용액을 사용하지 않고 직접 ethidium bromide를 넣어 제조하는 경우도 가능하다).  Ethidium bromide 용액과 혹은 이와 동등한 것도 사용 가능하다.

    (10) Primer모든 동물성 성분 검출 프라이머 : 200～210bp   

   나) 장치 및 기구      

    (1) PCR장치Gene Amp PCR system 9700 또는 이것과 동등의 장치

    (2)  크린벤치

    (3) 비즈파쇄장치

       2000 rpm 정도의 회전수에, 2 mL 튜브에 대응하는 것. BC-20(센트랄과학기구), 마치비즈숀카, Fast Prop, FP120(nskzhtl), Mixer Mill MM300(Qlagen) 또는 이것과 동등의 장치

    (4) Autoclave

    (5) 전기영동장치

       Mupid-2plus(코스모바이오) 또는 이것과 동등의 장치

    (6) Gel Doc XR System(전기영동리더기) 또는 이것과 동등의 장치

    (7) 고속냉각원심기

       1.5 mL 및 2 mL 튜브대응, 4℃냉각, 12000 rpm 원심분리가 가능한 것

    (8) 마이크로피펫(1000, 200, 100, 20 및 10 μL용 디지털가변형)

    (9) 멸균된 1000 μL, 300 μL, 100 μL, 20 μL, 10 μL 마이크로피펫형 팁   

   다) DNA 추출

      PowerPrepTM DNA Extraction from Food and Feed Kit를 사용하여 Kit 내 매뉴얼 또는 아래와 같은 추출법으로 사료에서 DNA를 추출한다.

    (1) Sample을 곱게 분쇄한 후 50 mL tube에 0.5~2 g 정량하여 담는다.

    (2) Lysis A buffer 4 mL, Lysis B buffer 400 μL을 첨가하고, vortex한 후, water bath(65℃)에서 1시간 반응시킨다.(Lysis buffer양은 sample에 따라 증가 또는 감소시킨다.)

    (3) Chloroform을 4 mL 넣고 vortex 후, 3,000 rpm 15분 원심분리 한다.

    (4) 2 mL tube에 (3)번 용액의 1 mL, Chloroform 1 mL을 넣고 vortex 후 12,000 rpm에 10분 원심분리 한다.

    (5) 2 mL tube에 (4)번 용액의 상층액 500 μL, Binding buffer와 Iso-propanol을 500 μL씩 넣어준다. (Iso-propanol은 Kit 안에 포함되어 있지 않다.)

    (6) (5)번 용액을 DNA binding column tube에 750 μL을 넣고, 12,000rpm에서 2분 원심분리 한다.

    (7) DNA binding column tube를 통과한 여과액을 버린 후 동일한 DNA binding column tube에 남은 나머지 (5)번 용액 750 μL을 넣고 12,000 rpm에서 2분 원심분리 한다. 

    (8) 75% Ethanol 600 μL넣고 12,000 rpm에서 2분 원심분리 한다.(두번 반복하며, Ethanol은 Kit 안에 포함되어 있지 않다.)

    (9) 빈 DNA binding column tube를 12,000 rpm에서 2분 원심분리하여 Ethanol을 완전히 제거한다.

    (10) DNA binding column tube를 1.5 mL tube로 옮긴 후 멸균된 증류수 100 μL 넣고 1분 동안 상온에 방치한다.(추출된 DNA를 오래 보관할 경우 멸균된 증류수 대신 TE 완충액을 사용한다.)

    (11) 8,000 rpm에서 3분 원심분리 하여 DNA를 얻는다.

    (12) 이 DNA용액은 냉동 보존한다.

   라) PCR 반응일반적인 PCR법의 조작에 준한다. PCR 반응은 DNA polymerase, dNTPs, Reaction buffer 및 Primer 등 PCR 수행에 필요한 구성 성분을 다음과 같은 비율로 혼합하여 PCR 반응액으로 사용하고, DNA를 첨가하여 mixing한 후 PCR 장비에서 반응시킨다.

    (1) 200 μL의 플라스틱제 튜브에 PCR Primer mix 4 μL, 멸균된 증류수 10 μL, 5×Reaction Buffer 5 μL, DNA Polymerase 1 μL을 혼합한 20 μL는 PCR 반응액으로 PCR tube에 분주한 후 여기에 추출된 DNA 용액 5 μL을 가한 것을 시료액으로 한다.

    (2) 같은 방법으로 PCR 반응액 20 μL에 Control DNA용액 5 μL 가한 것을 양성 콘트롤액, PCR 반응액 20 μL에 멸균된 물 5 μL을 가한 것을 음성 콘트롤액으로 한다.

    (3) 시료액, 양성콘트롤액 및 음성콘트롤액을 PCR에 넣고, 아래와 같은 반응조건에서 PCR반응을 실시한다.

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┃Step              │Temp(℃)│Time  │Cycle ┃

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┃Pre-Denaturation  │94      │12min │1     ┃

┠─────────┼────┼───┼───┨

┃Amplification     │94      │20sec │32    ┃

┃                  ├────┼───┤      ┃

┃                  │58      │10sec │      ┃

┃                  ├────┼───┤      ┃

┃                  │72      │30sec │      ┃

┠─────────┼────┼───┼───┨

┃Final Extension   │72      │2min  │1     ┃

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   마) 전기영동

    (1) 아가로스겔은 전기영동용 완충액을 넣은 영동조에서 10분간 100V의 정전압을 넣어 예비 영동한다. 

    (2) 전원을 끈 후 DNA 사이즈마커 100bp 6 μL를 아가로스겔의 스롯트에 주입한다.

    (3) PCR 반응이 종료한 시료액, 양성콘트롤 및 음성콘트롤 각각 5 μL에 DNA loading dye(6x) 1 μL를 가하여 혼합한 후 그 전량을 아가로스겔의 스롯트에 차례대로 주입한다. 

    (4) 100V 정전압을 걸고 부로모페놀프레가 스롯트에서 3-4 cm 이동할 때까지 전기영동을 실시한다.

    (5) 전기영동이 종료한 아가로스겔을 전기영동기에 넣어 UV 365 ㎚의 자외선을 조사하고 시료액으로 검출한 DNA밴드위치를 사이즈마카의 밴드위치와 비교하여 DNA 단편사이즈를 구한다. 

    (6) 판정방법

     (가) 양성콘트롤의 검출 사이즈 밴드가 검출되고, 음성 콘트롤의 밴드가 검출되지 않는 경우, 시료에 있어서 양성콘트롤과 동일 사이즈의 밴드가 검출되는 경우를 양성으로 한다.

     (나) 양성콘트롤으로 밴드가 검출되지 않는 경우나 음성콘트롤으로 밴드가 검출될 경우에는 PCR반응이 정상적으로 행해지지 않을 가능성이 있기 때문에 재시험이 필요하다.

  4) 검사할 때의 주의사항 등

   가) 시험조작상 주의사항

      PCR법은 검출감도가 높고 극미량의 DNA에서도 검출되기 때문에 분석과정 중 오염에 세심한 주의를 기울일 필요가 있다.또한 DNA는 미생물이나 사람의 피부 등에 존재하는 DNA 분해효소에 의해 분해되기 때문에 이 효소의 혼입을 방지하기 위하여 멸균 등의 적절한 조작을 할 필요가 있다.

    (1) 마이크로피펫용 팁은 멸균된 것을 사용하고 조작 시마다 매회 새로운 것으로 바꾼다. 필터가 붙은 팁을 사용하는 것도 바람직하다.

    (2) 분석 조작 중은 플라스틱제 장갑을 사용하고 장갑 위를 70％ 알콜로 소독한다.

    (3) 샘플링을 하거나 시료 분쇄를 할 경우 PCR실이나 전기영동실과는 분리하는 것이 바람직하다. PCR 반응액의 조제는 크린벤치에서 실시한다.

   나) 시험결과의 취급

   1검체당 2점의 추출 DNA중 2점 모두 양성의 결과가 나타난 경우에만 양성으로 판정한다.

 나. Multiplex Real-time PCR에 의한 검사법

    사료에 척추동물, 갑각류, 연체동물이 포함되어 있는지의 여부를 온도와 압력에 비교적 안정한 미토콘드리아 DNA에 기초한 멀티플렉스 Real-time PCR법을 이용하여 동물성 성분을 동시에 검사할 수 있다.

  1) 시료 및 검출대상

   가) 대상시료 : 반추동물용 배합사료, 반추동물용 섬유질배합사료 등을 대상으로 한다.

   나) 검출대상 동물 종 : 척추동물, 갑각류, 연체동물 

   다) 검출처리 : 본법에 의한 사료중의 모든 동물성단백질의 검출감도(원물함량 %로서)는 다음과 같다.

   라) 모든 동물성단백질 검출 Primer : 육골분으로서 0.1~0.01% 육골분의 검출감도는 육골분 원료동물의 사용비율, 제조방법(가열처리조건) 및 골성분의 함유비율 등에 의해 다른 경우가 있다. 또한 본 법은 동물성 성분을 검사할 수 있는 것이기 때문에 육골분에 한하지 않고 어분, 혈분 등의 동물유래 DNA를 포함하는 원료에서도 검출된다.

  2) 시료의 채취 및 분쇄

   가) 시료의 채취

      원칙적으로 시료는 공장내 보관 시 다른 원료 혹은 환경에서 오염물질이 오염되는 가능성이 없는 제조품에서 채취한다. 수거방법은 미생물 채취법에 준해 대상시료 이외의 물질의 오염이 없도록 신중히 채취한다. 채취 시는 플라스틱제 장갑을 끼고 멸균된 스푼을 사용하여 약 500 g을 멸균된 채취봉지에 채취한다.

   나) 분쇄

      시료는 입자가 거친 박류 등 큰 육편 등이 포함되는 경우에는 깨끗한 망(1 mm)으로 통과물을 채취한다. 배합사료에서는 1 mm의 망을 통과할때 까지 분쇄한다. 이 때 시료간의 오염을 방지하기 위하여 시료마다 분쇄반을 세정하거나 교환한다.

   다) 시료의 보존

      시료는 냉장 보관한다. 또한 미분쇄 후의 시료를 장기(1주일 이상)보존하는 경우에는 냉동고(-20℃)에서 보존한다.

  3) 시험방법

   가) 시약

      물은 특별한 경우를 제외하고 이온교환수 또는 증류수를 사용한다. PCR 반응액의 조제에 사용하는 물이나 추출 DNA의 희석에 사용하는 물 및 아래에 특별히 기술한 경우에는 고압증기처리(121℃, 15분간)한 초순수(역삼투압으로 정제한 RO수 또는 증류수를 MIlli-Q 등으로 비저항치 17M/㎝까지 정제한 것)을 사용한다.

    (1) DNA 추출용 Kit [PowerPrepTM DNA Extraction from Food and Feed]

    (2) DNA 추출용 Kit 내용

     (가) Lysis Buffer A

     (나) Lysis Buffer B

     (다) Binding Buffer

     (라) DNA Binding Column 이와 동등의 추출 Kit 내용 사용

    (3) All animal Real-time PCR Kit [PowercheckTM All animal Real-time PCR Kit]

    (4) All animal Real-time PCR Kit 내용

     (가) All animal Primer/Probe Mix

     (나) 2×Real-time Master Mix

     (다) Control DNA 이와 동등의 All animal PCR Kit 내용 사용

    (5) Primer/Probe

     (가) Fluorescence dye : FAM

    (6) TE 완충액

       1 M 트리스염산완충액 1 mL 및 0.5 M EDTA용액 0.2 mL을 물에 녹여 100 mL로 하고 121℃에서 15분간 고압증기 멸균한다.

   나) 장치 및 기구

    (1) Real-time PCR장치

       7500 Real Time PCR System(Applied Biosystems) 또는 이것과 동등의 장치

    (2) 크린벤치

    (3) 비즈파쇄장치2000rpm 정도의 회전수에, 2㎖ 튜브에 대응하는 것. BC-20(센트랄과학기구), 마치비즈숀카, Fast Prop, FP120(nskzhtl), Mixer Mill MM300(Qlagen) 또는 이것과 동등의 장치

    (4) Autoclave

    (5) 고속냉각원심기1.5 mL 및 2 mL 튜브대응, 4℃냉각, 12000 rpm의 원심분리 가능한 것

    (6) 마이크로피펫(1000, 200, 100, 20 및 10 μL용 디지털가변형)

    (7) 멸균된 1000 μL, 300 μL, 100 μL, 20 μL, 10 μL 마이크로피펫형 팁 

   다) DNA 추출

      PowerPrepTM DNA Extraction from Food and Feed Kit를 사용하여 Kit 내 매뉴얼 또는 아래와 같은 추출법으로 사료에서 DNA를 추출한다.     

    (1) Sample을 곱게 분쇄한 후 50 mL tube에 1~2 g 정량하여 담는다.

    (2) Lysis A buffer 4 mL, Lysis B buffer 400 μL을 첨가하고, vortex한 후, water bath(65℃)에서 1시간 반응시킨다. (Lysis buffer양은 sample에 따라 증가 또는 감소시킨다.)

    (3) chloroform을 4 mL 넣고 vortex후, 3,000 rpm 15분 원심분리 한다.

    (4) 2 mL tube에 (3)번 용액의 1 mL, Chloroform 1 mL을 넣고 vortex후, 12,000rpm에 10 분 원심분리 한다.

    (5) 2 mL tube에 (4)번 용액의 상층액 500 μL, Binding buffer와 ISO-propanol을 500 μL씩 넣어준다. (ISO-propanol은 Kit 안에 포함되어 있지 않다)

    (6) (5)번 용액을 DNA binding column tube에 750 μL을 넣고, 12,000rpm에서 2분 원심분리 한다.

    (7) DNA binding column tube를 통과한 여과액을 버린 후 동일한 DNA binding column tube에 남은 나머지 (5)번 용액 750 μL을 넣고 12,000 rpm에서 2분 원심분리 한다.

    (8) 75% Ethanol 600 μL넣고 12,000 rpm에서 2분 원심분리 한다.(두번 반복하며, Ethanol은 kit 안에 포함되어 있지 않다)

    (9) 빈 DNA binding column tube를 12,000 rpm에서 2분 원심 분리하여 Ethanol을 완전히 제거한다.

    (10) DNA binding column tube를 1.5 mL tube로 옮긴 후 멸균된 증류수 100 μL 넣고 1분 동안 상온에 방치한다.(추출된 DNA를 오래 보관할 경우 멸균된 증류수 대신 TE 완충액을 사용한다.)

    (11) 8,000 rpm에서 3분 원심분리 하여 DNA를 얻는다.

    (12) 이 DNA용액은 냉동 보존한다.

   라) Real-time PCR 반응

      일반적인 Real-time PCR법의 조작에 준한다. PCR 반응은 Control DNA, All animal Primer/Probe Mix 및 2×Real-time Master Mix 등 Real-time PCR 수행에 필요한 구성 성분을 다음과 같은 비율로 혼합하여 Real-time PCR 반응액으로 사용하고, DNA를 첨가하여 mixing한 후 Real-time PCR 장비에서 반응시킨다.     

    (1) 200 μL의 플라스틱제 튜브에 All animal Primer/Probe Mix 4 μL, 2×Real-time Master Mix 10 μL을 혼합한 14 μL는 PCR 반응액으로 PCR tube에 분주한 후 여기에 추출된 DNA용액 6 μL을 가한 것을 시료액으로 한다.

    (2) 같은 방법으로 PCR 반응액 14 μL에 Control DNA용액 6 μL 가한 것을 양성 콘트롤액, PCR 반응액 14 μL에 멸균된 물 6μL을 가한 것을 음성콘트롤액으로 한다.

    (3) 시료액, 양성콘트롤액 및 음성콘트롤액을 Real-time PCR에 넣고, 아래와 같은 반응조건에서 Real-time PCR반응을 실시한다. 

┏━━━━┯━━━┯━━━┓

┃Temp(℃)│Time  │Cycle ┃

┣━━━━┿━━━┿━━━┫

┃50      │2min  │1     ┃

┠────┼───┼───┨

┃95      │10min │1     ┃

┠────┼───┼───┨

┃95      │15sec │35    ┃

┠────┼───┤      ┃

┃60      │1min  │      ┃

┗━━━━┷━━━┷━━━┛

   마) 판정방법

    (1) Real time PCR 결과는 확인하고자 하는 Maker을 선택하여 증폭 곡선을 확인한다. 만약 시료에서 15∼33 Ct 사이에 PCR 증폭이 일어날 경우 양성으로 판정하고, Ct값이 너무 낮거나 (15＞Ct), 너무 높은 경우(33＜Ct)에는 재시험이 요구된다.

  4) 검사할 때의 주의사항 등

   가) 시험조작상 주의사항

      PCR법은 검출감도가 높고 극미량의 DNA에서도 검출되기 때문에 분석과정 중 오염에 세심한 주의를 기울일 필요가 있다. 또한 DNA는 미생물이나 사람의 피부 등에 존재하는 DNA 분해효소에 의해 분해되기 때문에 이 효소의 혼입을 방지하기 위하여 멸균 등의 적절한 조작을 할 필요가 있다.

    (1) 마이크로피펫용 팁은 멸균된 것을 사용하고 조작 시마다 매회 새로운 것으로 바꾼다. 필터가 있는 팁을 사용하는 것도 바람직하다.

    (2) 분석 조작 중은 플라스틱제 장갑을 사용하고 장갑 위를 70％ 알콜로 소독한다.

    (3) 플링을 하거나 시료 분쇄를 할 경우 PCR실이나 전기영동실과는 분리하는 것이 바람직하다. PCR 반응액의 조제는 크린벤치에서 실시한다.

   나) 시험결과의 취급1 검체당 2점의 추출 DNA 중 2점 모두 양성의 결과가 나타난 경우에만 양성으로 판정한다.

16장. 올리고당

16.1. 갈락토올리고당

정의 : 당질원료를 이용하여 효소를 작용시켜 얻은 전이갈락토올리고당액 또는 사탕무, 대두 등에서 추출한 라피노스, 스타치오스의 당액을 여과, 정제, 농축한 액상 또는 분말상의 것을 말한다.

16.1.1. 갈락토올리고당(전이갈락토올리고당)

 가. 장치

    고속액체크로마토그래프

 나. 시약

  1) 20%(w/v) 설포살리실린산용액(Sulfosalicylic acid)?시약특급의 설포살리실린산 20 g에 물을 넣어 용해시켜 100 mL로 한다.

  2) Ribose?시약특급

  3) Arabinose?시약특급

 다. 표준용액의 조제

    갈락토올리고당 2 g을 정확히 달아 물에 녹여 50 mL로 한다.

 라. 시험용액 조제

    갈락토올리고당이 약 0.1∼1 g 포함되도록 검체 적당량을 정확히 달아 물을 가해 용해시킨 후 50 mL로 한다. 이 용액을 0.45 μm의 필터로 여과시켜 이를 시험용액으로 한다.

  (주1) 단백질 제거 조작이 필요한 시료에 대해서는 설포살리실린산을 여러 방울 첨가하여 생긴 불용성 단백질을 원심분리로 제거하든가 Sep pak C18 cartridge를 통과시키든가 한다. 이들의 제작을 요하는 경우에는 내부표준으로서 Ribose 또는 Arabinose를 사용한다.

  (주2) 유지를 많이 함유한 시료의 경우 시료의 전처리는 프락토올리고당의 분석법의 전처리방법에 준한다.

  (주3) 시료중에 갈락토올리고당 이외의 3 ~ 6당류인 올리고당이 존재할 경우에는 해당하는 올리고당 분해효소에 의해 단당류, 2당류로 분해하고 나서 분석한다. 그러나 이성화당, 설탕이나 다당류의 존재는 갈락토올리고당의 분석을 방해하지 않는다.

 마. 시험조작

  1) 고속액체크로마토그래프 조건

   가) 칼럼?Shodex Ionpak KS-802 상당품 및 역상 amino column

   나) 칼럼온도?80℃

   다) 이동상?물

   라) 유속?0.4 mL/min

   마) 검출기?시차굴절계(RI)

  2) 정량시험

    갈락토올리고당 표준용액을 2, 4, 6, 8 및 10 mL를 20 mL용 메스플라스크에 정확하게 취하여 물로 눈금을 맞춘 다음, 각각 10 μL씩 고속액체크로마토그래프에 주입시켜 피크의 면적 또는 높이를 읽어내어 검량선을 작성한다. 검체중의 갈락토올리고당의 함량(%)은 다음 식으로 구한다.

갈락토올리고당(%) ＝B mg/mL ××

A?시료채취량(g)

B?검량선에서 구한 갈락토올리고당의 농도(mg/mL)

16.1.2. 갈락토올리고당(라피노스, 스타치오스) 

 가. 시약

  1) 설포살리실린산(Sulfosalicylic acid)

  2) 갈락토올리고당(Raffinose, Stachyose) 표준용액

     각 갈락토올리고당을 각각 0.6 g씩 정확하게 취하여 물에 넣고 용해시켜 20mL로 한다.

 가. 시험용액 조제

  1) 유지를 거의 함유하지 않은 시료인 경우검체 적당량(각 갈락토올리고당 0.07~0.7 g 함유한 양)을 정확히 달아 물을 가하여 용해 혹은 추출하여 50 mL로 한다. 이 용액을 0.45 μm의 필터로 여과한다.

  2) 유지를 많이 함유한 시료인 경우검체가 액체인 경우에는 그 적당량(위의 가)와 같음)을 정확히 재고, 필요하다면 중화한다. 여기에 규조토를 넣고 잘 혼합한다. 60±2℃에서 2～4시간 감압 건조한다. 건조후 전량을 원통여과지에 옮겨 넣고 석유에테르를 사용하여 속시렛 지방 추출기로 8~16시간 탈지한다. 탈지 후 원통여과지안의 전량을 꺼내서 이하 상기 1)과 같이 조작한다. 시료가 분말상태인 경우에는 규조토를 넣지 않고 직접 원통여과지에 넣어 이하 똑같이 조작한다.(주1) 시료에 단백질이 함유된 경우 0.2 g/mL 설포살리실린산 수용액을 수방울 가해 단백질을 제거한다. 또한 덱스트린이 검체중에 혼재하는 경우는 글루코아밀라제(Glucoamylase)로 분해한다.

 나. 시험조작

  1) 고속액체크로마토그래피 조건

   가) 칼럼?Shodex Ionpak KS-802 또는 이와 동등한 것

   나) 칼럼온도?70℃

   다) 이동상?물

   라) 유속?1.0 mL/min

   마) 검출기?시차굴절계(RI)

  2) 정량시험갈락토올리고당 표준용액을 1, 2, 3, 4 및 5 mL를 10 mL용 메스플라스크에 정확하게 취하여 물로 눈금을 맞춘 다음, 각각 10 μL씩 고속액체크로마토그래프에 주입시켜 피크의 높이 또는 면적을 읽어내어 검량선을 작성한다. 검체중의 갈락토올리고당의 함량(%)은 다음 식으로 구한다.

갈락토올리고당(%) ＝ (A＋B) ××

A? 갈락토올리고당의 농도(mg/mL)

B? 시험용액중의 갈락토올리고당의 농도(mg/mL)

C? 시료 채취량(g)

16.2. 프락토올리고당

정의 : 당질원료를 이용하여 1개 이상의 과당분자가 결합되도록 효소를 작용시켜 얻은 당액이나 당질원료를 효소를 이용하여 얻은 당액을 여과, 정제, 농축한 액상 또는 분말상의 것을 말한다.

 가. 장치 : 고속액체크로마토그래프

 나. 시약

  1) 아세토니트릴?HPLC용

  2) 글리세롤?특급

  3) 에탄올?특급(99.5%)

  4) 규조토?여과조제용(정제품)

  5) 80% 에탄올?99.5% 에탄올과 물을 80?20(v/v)으로 혼합한다.

  6) 5% 글리세롤?글리세롤 5 g을 취하여 100 mL 메스플라스크에 넣고 에탄올 50 mL를 넣어 용해시킨 후 물로 표선까지 채워 내부표준물질로 사용한다(글리세롤외에 아라비노스도 내부표준물질로서 사용할 수 있다).

 다. 표준용액의 조제

    1-케스토즈(GF2), 니스토즈(GF3), 1-F 프락토퓨라노실니스토즈(GF4)를 0.4 g씩 달아 각각 20 mL의 메스플라스크에 넣고 약 10 mL의 물을 넣어 용해시킨 후 증류수로 표선까지 채운 것을 표준원액으로 한다. 표준원액 1, 2, 3, 4, 및 5 mL를 정확히 취하여 각각 10 mL용 메스플라스크에 옮겨 넣고, 이에 5% 글리세롤 1 mL를 넣은 뒤 물로 표선까지 채운 것을 표준용액으로 한다.

 라. 시험용액 조제

    프락토올리고당으로서 0.2 ∼ 2 g이 함유되도록 적당량의 시료를 정밀하게 달아 100mL의 용량플라스크에 넣고 이에 물 20mL를 가하여 용해 또는 추출한다(산성인 채로 실험을 진행할 경우 가수분해의 우려가 있으므로 필요하면 중화하고, 가열하면서 혼합하든지 초음파처리를 한다).

    용해되지 않는 물질이 거의 없을 때에는 내부표준용액 20mL를 넣은 후 증류수로 표선까지 채운다. 필요하면 여과(No.5B 또는 10,000 Da cut off 원심분리필터)하여 사용한다. 얻어진 여과액에 동량의 에탄올을 첨가하여 희석한다. 침전 또는 탁한 것이 생겼을 경우에는 여과하고 여과액을 시험용액으로 한다. 

  (주1) 용해되지 않는 물질이 많을 때에는 추출액을 여과(No. 5B)하면서 100 mL 메스플라스크에 전가용물을 옮겨 넣고 이하 똑같이 처리한다.

 마. 시험조작

  1) 고속액체크로마토그래피의 측정 조건

   가) 칼럼?당분석칼럼 또는 이와 동등 이상인 것

   나) 이동상?아세토니트릴?물(65?35)

   다) 검출기?시차굴절계(RI)

   라) 유속?1.0 mL/min

  (주1) 이동상은 칼럼의 종류나 상태에 따라 조성을 달리 할 수 있다. 아세토니트릴과 물의 비율을 65?35에서 70?30정도의 차이로 조정한다. 소량의 에틸알코올을 넣어 조정할 수도 있다.

  2) 정량시험

    표준용액과 시험용액을 각각 10 μL씩 주입하여 앞의 조건에서 시험한다. 표준용액 중 각 프락토올리고당과 내부표준물질의 피크의 면적 또는 높이에 의해 구한 검량선을 사용하여 시험용액 중 각 프락토올리고당의 농도(mg/mL)를 구하고, 다음 식에 의하여 시료 중 프락토올리고당 (GF2＋GF3＋GF4)의 함량(%)을 구한다.

바. 계산

A : 시험용액 중 GF2의 농도(mg/mL)

B : 시험용액 중 GF3의 농도(mg/mL) 

C : 시험용액 중 GF4의 농도(mg/mL) 

b : 희석배수  

16.3. 이소말토올리고당

정의 : 당질원료를 포도당분자가 분지결합의 기본구조를 갖도록 효소를 작용시켜 얻은 당액을 여과, 정제, 농축한 액상 또는 분말상의 것을 말한다.

 가. 장치

    고속액체크로마토그래프

 나. 시약

  1) 50% 알코올

  2) 활성탄?청주용 또는 당액 탈색용

  3) 이온교환수지?강 산성형(H형) 및 강 알칼리형(OH형)

  4) 퍼라이트(Perlite)

  5) 아세토니트릴?HPLC용

  6) 표준당

   가) 단당류?Glucose, Fructose

   나) 이당류?Maltose, *Isomaltose, Sucrose, *Kojibiose, *Nigerose

   다) 삼당류?Maltotriose, *Pannose, *Isomaltotriose

   라) 사당류?Maltotetraose, *Isomaltotetraose

   마) 오당류?Maltopentaose, *Isomaltopentaose

   바) 육당류?Maltohexaose, *Isomaltohexaose

   사) 칠당류?Maltoheptaose, *Isomaltoheptaose 

      (*는 이소말토올리고당의 분기당성분)

 다. 표준용제의 조제

  1) 배제형 이온교환계?각 중합도의 직쇄당을 정확하게 50 mg씩 달아 탈기한 증류수 50 mL에 녹이고, 용해되기 어려울 때는 가온하여 녹이고 냉각 후 증류수 100 mL로 채워 표준용액으로 한다.

  2) 역상분배계?각 분기당의 표준액 100 mg을 증류수 1 mL에 용해한 것을 표준용액으로 한다. 

 라. 시험용액 조제

  1) 유지를 거의 함유하지 않은 검체인 경우

     이소말토올리고당이 약 500 mg이 되도록 시료를 적당량(0.5～5 g)을 정확히 달아 여기에 물 또는 50% 알코올(단백질을 함유한 경우)을 30 mL 넣어서 가열하여 용해, 혹은 추출한다. 추출액은 약 0.5 g의 활성탄과 이온교환수지(양이온 및 음이온을 1?2로 혼합한 것 약 1.5 g)을 사용하여 정제하고, 전량을 500 mL로 하여 시험용액으로 한다.

  2) 유지를 많이 함유한 검체인 경우

     이소말토올리고당 적당량(0.5～5 g)을 정확히 달아 분말인 경우에는 그대로 추출기에 넣고, 시료가 액체인 경우에는 필요하다면(pH 4~10 이외) 중화한 후 퍼라이트를 부석부석하게 될 때까지 넣어서 잘 분산시켜 8~16시간 탈지한다. 탈지 후 원통여과지 안의 전량을 꺼내어 위의 ⓐ와 같이 추출 이후의 조작을 한다.

  (주1) 중합도 2～5와 거의 같은 분자량인 설탕, 유당, 프락토올리고당, Coupling sugar 및 갈락토올리고당이 혼재할 경우에는 각각의 측정법으로 따로 분석한다. 그러나 이성화당, 포도당, 물엿 등의 전분당이 혼재할 경우에는 이소말토올리고당의 분석을 방해하지 않는다.

 마. 시험조작

  1) 고속액체크로마토그래피 조건

   가) 배제형 이온교환계

    (1) 칼럼?∮8 mm × 200 mm MCI GEL CKO  4S 상당품

    (2) 가드칼럼?∮8 mm × 50 mm MCI GEL CKO 8S 상당품

    (3) 칼럼온도?65℃

    (4) 이동상?물

    (5) 유속?0.4 mL/min

    (6) 검출기?시차굴절계(RI)

   나) 역상분배계

    (1) 칼럼?∮4.6 mm×250 mm TSK GEL NH2 -60 상당품

    (2) 칼럼온도?35℃

    (3) 이동상?아세토니트릴?물(63?37)

    (4) 유속?0.8m mL/min

    (5) 검출기?시차굴절(Refractive Index)계

  2) 정량시험

   가) 검량선의 작성?표준용액을 5, 10, 15, 20, 25 mL씩을 넣고 증류수로 각각 50 mL로(이 농도는 25, 50, 75, 100, 125 mg/50mL가 된다) 한 다음 10 μL씩 주입한 후 상당하는 직쇄상의 피크에 따라서 면적 또는 높이를 읽어내어 검량선을 작성한다. 

   나) 계산

    (1) 배제형 이온교환계에서 분석한 피크의 면적 또는 높이에 의해 구해진 각 중합도의 검량선에서 각각의 중합도의 함량이 구해지며 그 결과는 다음과 같다.

     (가) 중합도 DP1(단당류)?A

     (나) 중합도 DP2(이당류)?B

     (다) 중합도 DP3(삼당류)?C

     (라) 중합도 DP4(사당류)?D

     (마) 중합도 DP5(오당류)?E

     (바) 중합도 DP6(오당류)?F

     (사) 중합도 DP7(오당류)?G

   다) 역상분배계에서 시료를 분석한 Data의 각 당분함유율(%)은 다음과 같다.

    (1) DP1 FructoseA1

    (2) DP1 GlucoseA2

    (3) DP2 MaltoseB1

    (4) DP2 SucroseB2

    (5) DP2 IsomaltoseB3

    (6) DP2 NigeroseB4

    (7) DP2 GojibioseB5

    (8) DP3 MaltotrioseC1

    (9) DP3 PannoseC2

    (10) DP3 IsomaltotrioseC3

    (11) DP3 불명(분기당)C4

    (12) DP4 MaltotetraoseD1

    (13) DP4 IsomaltotetraoseD2

    (14) DP5 MaltopentaoseE1

    (15) DP5 IsomaltopentaoseE2

    (16) DP6 이상F

    (17) DP6 IsomaltohexaoseF2

    (18) DP7 MaltoheptaoseG1

    (19) DP7 IsomaltoheptaoseG2

    (20) DP8 이상H

   (주?이소말토올리고당에는 DP4이상의 직쇄당 및 DP8 이상의 성분을 포함하지 않는다)

 바. 계산

    DP1 Fructose       A mg× ＝ a1 mg

    DP1 Glucose       A mg× ＝ a2 mg

    DP2 Maltose       B mg×＝  b1 mg

    DP2 Sucrose       B mg× ＝ b2 mg

    DP2 Isomaltose      B mg× ＝ b3 mg※

    DP2 Negerose       B mg× ＝ b4 mg※

    DP2 Kojibiose       B mg× ＝ b5 mg※

    DP3 Maltotriose     C mg × ＝ c1 mg

    DP3 Pannose        C mg × ＝ c2 mg※

    DP3 Isomaltotriose   C mg × ＝ c3 mg※

    DP3 불명(분기당)    C mg × ＝ c4 mg※

    DP4 Maltotetraose    D mg ×＝ d1 mg

    DP4 Isomaltotetraose  D mg × ＝ d2 mg※

    DP5 Maltopentaose    E mg × ＝ e1 mg

    DP5 Isomaltopentaose  E mg × ＝ e2 mg※

    DP6 이 상  F mg ＝ f mg

    DP6 Maltohexaose      F mg ×＝ f1 mg

    DP6 Isomaltohexaose    F mg × ＝ f2 mg※

    DP7 Maltoheptaose     G mg × ＝ g1 mg

    DP7 Isomaltoheptaose   G mg × ＝ g2 mg※

    DP8 이상          H mg ＝ h mg

    결국 시료채취량을 I mg으로 하고 희석배수를 Ｌ로 하면, 위의 ※은 모두 분기당이므로 분기당함량(%) ＝ (b3＋b4＋b5＋c2＋c3＋c4＋d2＋e2＋f2＋g2) ×L÷I×100 으로 한다.

16.4. 키토올리고당

 가. 총 글루코사민

    시료 0.04 g(글루코사민으로)을 정밀히 취하여 필요한 경우 탈지하고 물에 녹여 액성이 산성인 중화(pH 7.0)시켜 물을 가하여 100 mL로 하여 3,000 rpm에서 10분간 원심분리한 후 상층액을 검액으로 한다. 제21장 추출제 1. 키토산(총글루코사민으로서) 다. 시험조작에 따라 시험한다. 

 나. 유리 D-글루코사민

  1) 표준용액의 조제

    D-글루코사민 표준품 0.5 g을 10 0mL용 메스플라스크에 정밀히 달아 물 50 mL를 가하여 녹인 후 아세토니트릴로 100mL까지 채운다.

  2) 시험용액의 조제

    시료 약 5 g을 메스플라스크에 정밀히 달아 물 25mL를 가하여 녹인 후 아세토니트릴로 50 mL까지 채운다. 이를 0.45 μm의 멤브레인 필터로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

  3) 시험조작

   가) 고속액체크로마토그래프의 측정 조건

    (1) 칼럼 : 길이 250 mm, 안지름 4.6 mm의 NH2-60칼럼 또는 이와 동등한 것

    (2) 이동상 물 : 아세토니트릴(25:75)

    (3) 검출기 : 시차굴절계(RI)

    (4) 칼럼온도 : 40℃

    (5) 유속 : 0.8 mL/min

   나) 정량시험시험용액 및 표준용액을 각각 10 μL 씩 주입하여 얻은 피크의 넓이 또는 높이를 구하여 검량선을 작성한 후 시험용액의 글루코사민의 농도(μg/mL)를 구하고, 다음의 식에 의해 시료 중 글루코사민의 함량(g/100g)을 산출한다.

   다) 계산

S : 시험용액중의 당질의 농도(μg/mL)

a : 시험용액의 전량(mL)

b : 희석배수

 다. 키토올리고당

  키토올리고당 = 총 글루코사민 함량 - 유리 D-글루코사민 함량

16.5. 말토올리고당

 가. 장치

    고속액체크로마토그래프

 나. 시약

  1) 50% 알코올

  2) 활성탄?청주용 또는 당액 탈색용

  3) 이온교환수지?강 산성형(H형) 및 강 알칼리형(OH형) 

  4) 퍼라이트(Perlite)

  5) 물?HPLC용

  6) 표준당

   가) 삼당류(DP3)?Maltotriose

   나) 사당류(DP4)?Maltotetraose

   다) 오당류(DP5)?Maltopentaose

   라) 육당류(DP6)?Maltohexaose

   마) 칠당류(DP7)?Maltoheptaose

 다. 표준용액의 제조

    각 중합도의 직쇄당을 정확하게 50 mg씩 달아 탈기한 증류수 50 mL에 녹이고, 용해되기 어려울 때는 가온하여 녹이고 냉각후 증류수로 100 mL로 채워 표준용액으로 한다. 

 라. 시험용액 조제

  1) 유지를 거의 함유하지 않은 검체의 경우

    시료 4 g을 정확히 달아 여기에 물 또는 50% 알코올(단백질을 함유한 경우)을 30 mL 넣어서 가열하여 용해, 혹은 추출한다. 추출액은 약 0.5 g의 활성탄과 이온교환수지(양이온 및 음이온을 1?2로 혼합한 것 약 1.5 g)을 사용하여 정제하고, 전량을 100 mL로 하여 시험용액으로 한다. 

  2) 유지를 많이 함유한 검체인 경우

    시료 4 g을 정확히 달아 분말인 경우에는 그대로 추출기에 넣고, 시료가 액체인 경우에는 필요하다면(pH 4∼10이외) 중화하고 나서 퍼라이트를 부석부석하게 될 때까지 넣어서 잘 분산시켜 8∼16시간 탈지한다. 탈지후 원통여과지 안의 전량을 꺼내어 위의 1)과 같이 추출이후의 조작을 한다.

  (주 1) 중합도 2∼5와 거의 같은 분자량인 설탕, 유당, 프락토올리고당, Coupling sugar 및 갈락토올리고당이 혼재할 경우에는 각각의 측정법으로 따로 분석한다. 그러나 이성화당, 포도당, 물엿 등의 전분당이 혼재할 경우에는 말토올리고당의 분석을 방해하지 않는다.

 마. 시험조작

  1) 고속액체크로마토그래피 조건

   가) 칼럼?Aminex HP×42A(Bio Rad) 또는 이에 상응하는 배제형 이온교환계

   나) 칼럼온도?85℃

   다) 이동상?물

   라) 유속?0.6 mL/min

   마) 검출기?시차굴절계(RI) 

  2) 검량선 작성

    각 농도의 표준용액을 10 μL 씩 주입하여 분석한 뒤 횡축이 말토올리고당량(mg), 종축에 크로마토그램의 면적을 취하여 검량선을 작성한다.

  3) 계산 

    시료의 말토올리고당의 면적을 읽어 검량선으로부터 시료의 말토올리고당 함량을 구한다. 

말토올리고당 함량(%) ＝× 희석배수

DP3    Maltotriose      A mg

DP4    Maltotetraose    B mg

DP5    Maltopentaose   C mg

DP6    Maltohexaose    D mg

DP7    Maltoheptaose   E mg

16.6. 자일로올리고당

 가. 장치

    고속액체크로마토그래프

 나. 시약

  1) 물 : HPLC용

  2) 아세토니트릴 : HPLC용

  3) 퍼라이트(Perlite)

  4) 표준당

   가) 이당류 - xylobiose

   나) 삼당류 - xylotriose

   다) 사당류 - xylotetraose

   라) 오당류 - xylopentaose

   마) 육당류 - xylohexaose

 다. 표준용액의 제조

    각 중합도의 자일로올리고당이 약 50 ∼ 100 mg 포함되도록 검체 적당량을 정확히 달아 탈기한 물 50 mL에 녹이고 이 용액을 0.45 μm의 필터로 여과시켜 이를 표준용액으로 한다.

 라. 시험용액의 제조

  1) 유지를 거의 함유하지 않은 시료의 경우

    시료 3 g을 정확히 담아 물을 가해 용해하여 30 mL가 되게 한다. 이 용액을 0.45 μm의 필터로 여과시켜 이를 시험용액으로 한다.

  2) 유지를 많이 함유한 시료의 경우

    시료 3 g을 정확히 달아 분말인 경우에는 그대로 추출기에 넣고, 시료가 액체인 경우에는 필요하다면 중화 후 퍼라이트를 부석부석할 때까지 넣고 분산시켜 8~16 시간동안 탈지한다. 탈지 후 원통여과지 내의 전량을 회수하여 ⓐ와 같이 이하 똑같이 조작한다.

 마. 시험조작

  1) 고속액체크로마토그래피 조건

   가) 칼럼 : Carbohydrate column 4.6×250 mm 또는 이에 상응하는 칼럼

   나) 칼럼온도 : 상온

   다) 이동상 : 아세토니트릴 : 물 (75：25) (칼럼의 종류나 상태에 따라 조성을 달리 할 수 있다)

   라) 유속 : 1.2 mL/min

   마) 검출기 : 시차굴절계 (RI detector)

  2) 정량시험

    각 농도의 표준용액을 10 μL씩 주입하여 분석한 후 검량선의 횡축은 자일로올리고당(mg), 종축은 크로마토그램 피크의 면적을 읽어 검량선을 작성한다. 시료중의 자일로올리고당의 함량(%)은 다음 식으로 구한다.

자일로올리고당 함량(%) =× 희석배수 × 100

xylobiose      A mg

xylotriose      B mg

xylotetraose    C mg

xylopentaose   D mg

xylohexaose    E mg

16.7. 겐티오올리고당

 가. 장치

    고속액체크로마토그래프

 나. 시약

  1) 물 : HPLC용

  2) Sodium Hydroxide

  3) Sodium acetate

  4) 퍼라이트(Perlite)

  5) 표준당

   가) 이당류  Gentiobiose, Cellobiose 

 다. 표준용액의 조제

    Gentiobiose와 Cellobiose가 약 50 ∼ 100 mg 포함되도록 검체 적당량을 정확히 달아 탈기한 물 1 L에 녹이고 이용액을 0.45 μm의 필터로 여과시켜 이를 표준용액으로 한다.

 라. 시험용액의 조제

  1) 유지를 거의 함유하지 않은 검체인 경우 

    시료 100 mg을 정확히 담아 물을 가해 용해하여 1 L가 되게 한다. 이 용액을 0.45 μm의 필터로 여과시켜 이를 시험용액으로 한다.

  2) 유지를 많이 함유한 검체인 경우 

    시료 100 mg을 정확히 달아 분말인 경우에는 그대로 추출기에 넣고 시료가 액체인 경우에는 필요하다면 중화 후 퍼라이트를 부석부석할 때까지 넣고 8~16시간 동안 탈지한다. 탈지 후 원통여과지 내의 전량을 회수하여 1)과 같이 이하 똑같이 조작한다. 

 마. 시험조작

  1) 고속액체크로마토그래피 조건(1)

   가) 칼럼 : PA-1 Column 4.6 × 250 mm 또는 이에 상응하는 칼럼 

   나) 칼럼온도 : 상온

   다) 이동상 :

    (1) A : 150 mM Sodium Hydroxide

    (2) B : 150 mM Sodium Hydroxise + 600 mM  Sodium Acetate

   라) 유속 : 1.0 mL/min 

   마) 검출기 : Pulsed Amperometric Detecter

  2) 고속액체크로마토그래피 조건(2)

   가) 칼럼 : Aminex HPX-42A Column 7.8 × 300 mm 또는 이에 상응하는 배제형 이온교환계

   나) 칼럼온도 : 85℃

   다) 이동상 : 물

   라) 유속 : 0.6 mL/min 

   마) 검출기 : 시차굴절계(RI)

  3) 정량시험

   가) 검량선 작성

      각 농도의 표준용액을 10 μL씩 주입하여 분석한 후 검량선의 횡축은 겐티오올리고당 (mg), 종축은 크로마토그램 피크의 면적을 읽어 검량선을 작성한다.

   나) 계산 

      배제형 이온교환계에서 분석한 피크의 면적 또는 높이에 의해 구해진 각 중합도의 검량선에서 각각의 중합도의 함유량이 구해지며 그 결과는 다음과 같다.

중합도 DP1(단당류) : A

중합도 DP2(이당류) : B

중합도 DP3 이상(3당류 이상) : C

      PA-1 칼럼에서 시료를 분석한 Data의 각 당분함유율(%) 은 다음과 같다.

DP1 FructoseA₁

DP1 GlucoseA₂

DP2 MaltoseB₁

DP2 GentiobioseB₂

DP2 CellobioseB₃

DP3 이상C

            DP1 Fructose     A mg  ×  =  a₁mg

            DP1 Glucose     A mg  ×     =  a₂mg

            DP2 Maltose     B mg  ×   =  b₁mg

            DP2 Gentiobiose  B mg  × =  b₂mg

            DP2 Cellobiose   B mg  × =  b₃mg     

겐티오올리고당의 함량(%) = (b₂+ b₃) mg ÷ 시료채취량 mg × 희석배수× 100

17장. 유화제

17.1. 프로피렌글리콜(Propylene glycol)

 가. 적정법

    본 품 약 1 g을 정밀히 칭량하여, 물을 넣어 정확히 250 mL로 하고 그 중 10 mL를 취하여 공전 플라스크에 넣는다. 여기에 과요오드산나트륨 시액 10 mL를 정확히 넣고 이어 황산(1→2) 4 mL를 넣고 잘 흔들어 섞어 40분간 방치한다. 여기에 요오드화칼륨 5g을 넣고 즉시 밀봉하여 잘 흔들어 섞은 후, 어두운 곳에 5분간 방치하여 0.1N 티오황산나트륨액으로 적정한다.(지시약 전분시약 1 mL) 별도로 같은 방법으로 공시험한다.

 0.1N 티오황산나트륨액 1 mL = 3.805 mg C3H8O2

18장. 완충제

18.1. 탄산나트륨(소다회)

 가. 분석방법(기기 분석법)

    본 품목을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 나트륨(Na) 함량을 분석하고 탄산나트륨(Na2CO3)의 함량으로서 계산한다.

 나. 적정법

    이 품목을 건조한 다음 약 0.6 g을 정밀히 달아 물 50 mL에 녹여 0.5 N 염산으로 적정하여 액의 청색이 노란색으로 변할때까지 적정한다.(지시약: 브로모페놀블루시액 3방울). 다만, 종말점 부근에서 끓여 이산화탄소를 날려 보낸 다음 식혀 적정을 계속한다. 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다.

0.5N 염산 1 mL = 26.497 mg Na2CO3

  ※ 브로모페놀블루시액: 브로모페놀블루 0.1 g을 에탄올 20 mL에 용해하고 증류수로 100 mL로 채운다. 

18.2. 탄산수소나트륨(중조)

 가. 중화적정법

    본 품을 데시케이터(실리카겔)에서 4시간 건조 후 그 중 약 2.0 g을 정밀히 칭량하여 물 25 mL를 가하여 녹이고, 1N황산으로 적정하여 액의 청색이 황녹색으로 변할 때 주의하여 끓이고 냉각 후 녹황색을 띌 때까지 적정한다.(지시약 브롬크레졸그린 시액 2방울) 같은 방법으로 공시험을 실시하여 보정한다.

1N 황산 1 mL = 84.01 mg NaHCO3

 나. 기기 분석법

    본 품목을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 나트륨(Na) 함량을 분석하고 탄산수소나트륨(NaHCO3)의 함량으로서 계산한다.

18.3. 산화마그네슘

 가. 분석방법(기기 분석법)

    본 품목을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 마그네슘(Mg) 함량을 분석하고 산화마그네슘(MgO)의 함량으로서 계산한다.

 나. 적정법

    본 품목을 취하여 4.4. 마그네슘(Mg) 가. EDTA 적정법(Volumetric법)에 따라 마그네슘(Mg) 함량을 분석하고 산화마그네슘(MgO)의 함량으로서 계산한다.

19장. 착색제

19.1. 천연착색제(카로틴, 크산토필 및 카로티노이드)

 가. 장치 및 시약

  1) 장치

   가) 코크달린 유리관 컬럼 : 직경 12.5 mm × 높이 300 mm (with stopper)

   나) Reflux Condenser(속실렛 검화장치)

   다) UV/Vis Spectrophotometer ; 카로틴 λ=436nm, 크산토필 λ=474nm

  2) 시약

   가) 추출용액 : Hexane + Acetone + Abs.EtOH + Toluene = 10 + 7 + 6 + 7 

   나) 40% Methanolic KOH 

   다) 10% Na2SO4 용액

   라) Florisil (60-100 mesh)

   마) 카로틴 용출액(carotene eluent) : Hexane +Acetone = 96 + 4 

   바) 크산토필 용출액 : Hexane +Acetone + MeOH = 8 + 1 + 1

 나. 시료의 전처리 방법

  1) 추출

    시료를 색소 함량에 따라 0.5 ∼ 4 g 칭량하여 100 mL 농축 플라스크에 취한다. 색소추출용매 30 mL 정확히 가해 1분간 흔든 뒤, 40% methanolic KOH용액 2 mL 첨가한다. (배합사료는 4 mL) 수분이 낮은 시료는 증류수를 1 mL/2 g 가한다. 56℃의 검화장치에서 30분간 검화 후 냉각시킨 다음, 어두운 곳에서 1시간 방치한다. Hexane 30 mL를 정확히 가하여 1분간 흔들어주고, 10% Na2SO4 용액 50 mL를 가하고 1분간 세게 흔들어 준다. 칼럼크로마토그라피를 하기 전까지 냉암소에 방치한다.(상층부는 50 mL이다)

  2) 칼럼크로마토그라피 준비

    유리관 컬럼에 탈지면을 깔고 Florisil 5 g을 충진하고 상부에 무수Na2SO4를 2cm정도가 되도록 넣고 콜크를 유리막대에 꽂아 눌러준다.

  3) Carotene 과 Xanthophyll의 분리?정량

    조제된 시료의 상등액 중 5 mL를 취해(낮은 농도인 경우 10 mL) 관컬럼을 넣고 초당 2∼3방울 떨어지게 조절한다. Eluent가 마지막으로 adsorbent의 상부에 닿기 전에 먼저 카로틴 용출액(carotene eluent)를 가해주되 carotene band가 25 mL 플라스크에 모아질 때까지 계속한다. 추출 후 carotene eluent로 정용한다 크산토필 용출액(xanthophyll eluent)를 10 mL씩 2회 가하고 25 mL 플라스크에 용출액을 모으고 xanthophyll eluent로 정용한다.

  주1) adsorbent는 항상 용매(eluent용액)로 채워져 있어야 한다. 

  주2) carotene성분이 추출된 후 xanthophyll은 column에 남아 있다. 

 다. 흡광도 측정

    각각의 용출액(eluent)를 공시험 용액으로 하여 카로틴 추출액은 436nm에서 크산토필 추출액은 474 nm에서 흡광도를 측정한다.

  주1) 흡광도값은 0.25 ∼ 0.75 사이에 들도록 한다.

  주2) 크산토필 추출액은 캡산틴의 LC 정량에 사용할 수 있다.

 라. 계산방법 

  다음의 방정식을 사용하여 측정된 수치를 가지고 농도를 계산한다.

   : trans-β-carotene과 trans-lutein의 경우에는 a가 각각 196과 236이다.

  1) 카 로 틴 (mg/kg) = [흡광도(at 436 nm) × 454 × f] / (a)196 × d × 0.4536)

  2) 크산토필 (mg/kg) = [흡광도(at 474 nm) × 454 × f] / (a)236 × d × 0.4536)

  3) (총)카로티노이드의 함량은 1) + 2) 

    여기서 

f : 기계의 deviation factor 

a) 카로틴 : 0.460 / A436

b) 크산토필 : 0.561 / A474

d : 희석비율 : 시료채취량(g) × column에 주입한량(mL) / (50 mL 상등액 × 최종희석액(mL)

19.2. 아스타키산틴(Astaxanthin)

19.2.1. 비색법-제1법

 가. 분석원리

    아스타키산틴을 클로르포름으로 추출한 후 흡광도를 측정하는 방법이다.

 나. 장치

    분광광도계를 사용한다.

 다. 시약 및 시액 : 클로르포름

 라. 시험용액의 조제 및 시험조작   

    본 품 약 0.035 g을 정밀하게 칭량하여 클로르포름을 가하고 녹여 정확히 200 mL로 한다. 이 액 5 mL를 정확하게 취하여 클로르포름을 가하여 정확하게 50 mL로 한다. 여기에 이 액 5 mL를 정확히 취하여 클로르포름을 가하여 정확히 50 mL로 하여 시료용액으로 한다. 이 액으로 클로르포름을 대조로 하여 파장 489 nm 부근의 최대파장에서의 흡광도 A를 측정한다.

  아스타키산틴(C40H52O4)의 양( mg) =  A       ×  200,000   

                                    ─────              

                                      1,975                 

A : 시료용액의 흡광도

19.2.2. 액체크로마토그래프에 의한 정성 및 정량법-제2법

 가. 분석원리

    아스타키산틴에 증류수를 가하고 진탕항온수조에서 추출한 후 액체크로마토그래프로 정성 및 정량 분석한다.

 나. 장치

    액체크로마토그래프-자외부검출기(UV photometric detector)를 사용한다. 

 다. 시약 및 시약

  1) 무수알콜

  2) 클로로포름 

  3) 메탄올

 라. 시험용액의 조제

    시료를 일정량을 평량하여 50 mL 메스플라스크에 넣고 증류수 10 mL를 가해 60℃ 수욕조에서 1시간 방치하여 완전히 용해시킨다. 방냉 후 클로로포름 4 mL를 가하고 무수알콜로 희석하여 혼합한다. 이 용액을 실린지필터(0.45 um)로 여과 후 시험용액으로 사용한다. Astaxanthin 표준물질을 적정량 취하여 시료용액과 동일하게 처리한다.

 마. 시험조작

  1) 칼럼 : C18 (4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

  2) 이동상 : Methanol 100%

  3) 검출기 파장 : UV 470 nm (trans & Cis isomer ; 2 peak)

  4) 유속 : 0.8 mL/분

  5) 머무름 시간 : 5.60분

 바. 계산방법

  아스타키산틴 함량(%) =  P   ×  a   ×  As  ×  100   

                                        ───  ────

                                          At      S     

P : 표준품(아스타키산틴)의 농도(mg/mL)

a : 추출용매의 양(mL)

At : 표준용액의 피크 면적

As : 시험용액의 피크 면적

S : 시료량(mg)

19.3. 칸타산틴(Canthaxanthin)

 가. HPLC법

  1) 시험방법

    본 품 약 1.0g을 증류수 80 mL, 암모니아수(20～30%) 1 mL, 트립신/펩신(1 : 1) 100mg을 가하여 50℃ 초음파 수욕상에서 30분간 방치 한 후, 상온으로 냉각하고 증류수를 가하여 100 mL 되도록 한다. 혼합액 10g에 에탄올 100 mL를 가하여 흔든 뒤 에틸에테르로 250 mL가 되게 한다. n-헥산에 담겨있는 비활성 산화알루미늄을 채운 컬럼에 추출액 25 mL를 넣고 n-헥산 : 에테르(1 : 1) 50～100 mL로 흘려 용리액을 수집하여 용매를 날린 뒤, 건조된 잔류물을 n-헥산 : 아세톤(95 : 5) 5 mL로 용해하여  시료액으로 하고 아래의 조건에서 분석한다. 칸타산틴 함량은 그것과 이성체 피크들의 합으로 계산한다.

  2) 고속액체크로마토그라피 분석조건 (예)

   가) 컬럼 : 실리카겔 충진 컬럼

   나) 이동상 : n-헥산 : 아세톤 (93 : 7)

   다) 유속 : 1.5 mL/min

   라) 시료주입량 : 10～50 μL

   마) 검출기 : 가시광선자외선 검출기, 466 nm

19.4. 아포카로텐산 에스테르(Apocarotenoic Ester)

 가. HPLC법

  1) 시험방법

    본 품 약 1.0g을 증류수 80 mL, 암모니아수(20～30%) 1 mL, 트립신/펩신(1 : 1) 100mg을 가하여 50℃ 초음파 수욕상에서 30분간 방치 한 후, 상온으로 냉각하고 증류수를 가하여 100 mL 되도록 한다. 혼합액 10g에 에탄올 100 mL를 가하여 흔든 뒤 에틸에테르로 250 mL가 되게 한다. n-헥산에 담겨있는 비활성 산화알루미늄을 채운 컬럼에 추출액 25 mL를 넣고  n-헥산 : 에테르(1 : 1) 50～100 mL로 흘려 용리액을 수집하여 용매를 날린 뒤, 건조된 잔류물을 n-헥산 : 아세톤(95 : 5) 5 mL로 용해하여  시료액으로 하고 아래의 조건에서 분석한다. 아포카로텐산 에스테르의 함량은 그것과 이성체 피크들의 합으로 계산한다.

  2) 고속액체크로마토그라피 분석조건 (예)

   가) 컬럼 : 실리카겔 충진 컬럼

   나) 이동상 : n-헥산 : 아세톤 (93 : 7)

   다) 유속 : 1.5 mL/min

   라) 시료주입량 : 10～50 μL

   마) 검출기 : 가시광선자외선 검출기, 466 nm

20장. 추출제

20.1. 키토산(총글루코사민으로서)

 가. 시액 조제

  1) 아세틸아세톤용액 : 증류 정제한 무색 아세틸아세톤(BP 138～140℃) 1.5 mL에 1.2 N 탄산나트륨용액을 가하여 50mL로 한다.

  2) p-디메틸아미노벤즈알데히드(p-Dimethylaminobenzaldehyde)시액 : p-디메틸아미노벤즈알데히드 1.6 g에 염산 30 mL를 가하여 녹이고 96%(v/v) 에탄올 30 mL를 가하여 혼합한다.

 나. 시험용액의 조제

    시료 0.04 g(글루코사민으로)을 정밀히 취하여 필요한 경우 탈지하고 물에 녹여 액성이 산성인 경우 중화(pH7.0)시켜 물을 가하여 100 mL로 하여 3,000rpm에서 10분간 원심분리한 후 상층액을 검액으로 한다.

 다. 시험조작

  1) 검액 10 mL를 취하여 염산 7 mL 및 물을 가하여 20 mL로 하고, 이 액 5 mL를 시험관에 취하고 탈기 밀봉하여 105℃에서 24시간 분해한 후 뚜껑을 열어 감압하에 염산 및 물을 제거한 다음 잔류물을 물 5 mL로 녹이고 불용물이 있으면 여과한다. 이 여액 1 mL를 마개 있는 시험관에 취하고 아세틸 아세톤시액 2 mL 를 가하여 혼합한 후 96℃에서 1시간 가열한 후 흐르는 물에서 냉각시키고 이에 96%(v/v) 에탄올 20 mL를 가하고 p-디메틸아미노벤즈알데히드시액 2 mL를 가하여 혼합하고 실온에서 2시간 방치 후 파장 530 nm에서 흡광도를 측정한다.

  2) 따로, D-글루코사민 또는 N-아세틸 D-글루코사민을 100∼500 μg(D-글루코사민으로)/mL 함유한 용액 10 mL를 취하여 앞의 (1)이하에 따라 동일하게 조작하여 다음과 같이 총글루코사민의 함량을 구한다.

 라. 계산

  총글루코사민(%)   =   P   ×  Sa  ×  10  ×  100   

                              ───  ───  ────

                                St      S       106   

P : 표준용액의 농도(글루코사민으로, μg/10 mL)

Sa : 검액의 흡광도

St : 표준용액의 흡광도

S : 검체의 채취량(g)

20.2. 세포벽추출물(글루칸 혹은 베타글루칸)

 가. 시약 및 시액조제

  1) 에탄올용액

  2) 내열성 α-아밀라아제용액 : Sigma사 Cat. No. A3306 또는 Termamyl 300L, Novo Cat, No. 361-6282 또는 이와 동등한 것

  3) 셀룰라아제 : Sigma사 Cat. No. C8546 또는 이와 동등한 것

  4) 프로테아제 : Sigma사 Cat. No. P3910 또는 이와 동등한 것(냉장 (0～5℃)보존) MES/TRIS 완충액으로 50mg/mL되게 조제한다. 사용 시 조제한다.

  5) 아밀로글루코시다제 용액 : Sigma사 Cat. No. AMG A9913 또는 이와 동등한 것(냉장 (0～5℃)보존)

  6) 0.1N 수산화나트륨용액

  7) 0.1N 염산용액

  8) 5% 페놀용액 : 페놀 5g을 취하여 물을 가하여 100mL로 한다.

 나. 시료의 전처리 및 시험용액의 조제 

  1) 시험은 두개의 시료 및 공시험을 동시에 실시한다.

  2) 시료(지방이 10%이상인 경우 탈지하고, 당을 많이 함유한 경우 85% 에탄올용액으로 시료 1 g당 10 mL씩으로 세척한다) 약 2～10 g을 정밀히 달아 삼각플라스크에 취하고 물 100 mL을 가한다. 여기에 아밀라아제(20unit) 약 40～200 mg을 취하여 넣고 0.1 N NaOH로 pH 6.9로 한 후 20℃에서 2시간동안 진탕하여 효소분해 시킨다. 이에 0.1 N HCl로 pH 5.0으로 하고 셀룰라아제(50unit)를 넣고 37℃에서 2시간동안 진탕하여 효소분해 시키고, 프로테아제(10unit) 약 15～80 mg을 넣고 0.1 N NaOH로 pH 7.5로 한 후 37℃에서 2시간동안 진탕하여 효소분해 시킨다. 이에 아밀로글루코시다제(70unit) 약 20～100mg을 넣고 0.1N HCl로 pH 4.8로 한 후 60℃에서 2시간동안 진탕하여 효소분해 시킨다. 효소분해물에 95% 에탄올 400mL을 가하여 4℃에서 12시간 동안 침전시킨 후, 원심분리(10,000rpm, 10분)하여 시료의 침전물을 취하고, 다시 80% 에탄올 500mL을 침전물에 가하여 4℃에서 1시간 동안 침전시킨 후, 원심분리(10,000rpm, 10분)를 한다. 원심분리된 침전물에 물 20mL를 가한 후 침전물을 호모게나이저를 이용하여 균질화하고 물로 100mL가 되도록 한다. 이를 적정농도가 되도록 희석한 것을 시험용액으로 한다.

 다. 표준용액의 조제

    글루코오스표준품을 증류수에 녹여 표준원액을 만들고(1mg/mL) 표준원액을 증류수로 희석하여 글루코오스 표준용액 0, 25, 50, 75, 100(μg/mL)농도별 표준용액을 만든다.

 라. 시험조작 

    각각의 25mL 시험관에 5% 페놀용액 1mL를 넣고 농도별 표준용액은 각각 1mL를 가하고, 시험용액은 0.1mL와 증류수 0.9mL을 가한 후 10초간 잘 흔들어 섞어 황산 5mL씩을 가하여 혼합하고 20분 동안 실온 반응시켜 470nm에서 측정한다.

 마. 계산

  베타클루칸 함량(mg/g)   =   P   ×  a   ×  10    ×  0.9   

                                    ───  ────          

                                      S       1000            

P ：시험용액중의 글루코오스 농도(μg/mL)

a ：시험용액의 전량(mL)

S : 시료 채취량(g)

0.9 : 베타글루칸 전환계수(162/180)

20.3. 포도종자추출물(프로안토시아니딘)

 가. 분석원리

    이 품목은 포도과 포도(Vitis labrusca LINNE, Vitis vinifera LINNE)의 종자로부터 얻어지는 것으로서 주성분은 프로안토시아니딘이며 함량은 표시량의 90～130%이어야 한다. 

 나. 장치

    분광광도계를 사용한다.

 다. 시약 및 시액

  1) 메탄올

  2) 바닐린-메탄올용액

  3) 염산

  4) 0.1% 오르토인산용액

  5) 물 : 3차증류수 또는 이와 동등한 것 

 라. 시험용액의 조제

    이 품목을 프로안토시아니딘으로서 농도가 10～50 mg 되도록 정밀히 달아 메탄올을 가하여 갈색 부피플라스크 100 mL에 표선을 맞춘 뒤 초음파 추출로 30분간 추출한 것을 시험용액으로 한다. 시험용액 0.5 mL를 갈색시험관에 취하고 바닐린-메탄올용액(4→100) 3.0 mL를 가해준 다음 뚜껑을 덮고 10초간 교반한 후 염산 1.5 mL를 정확하게 가해주고 즉시 뚜껑을 덮고 18～22℃에서 15분간 방치한 다음 물을 대조액으로 하여 500 nm에서 흡광도를 측정하고 검량선으로 부터 시험용액의 (＋)카테킨 상당량을 구한 다음 이를 프로안토시아니딘으로 한다. 따로, 시료 중에 존재하는 안토시아니딘을 보정하기 위한 보정시험으로 바닐린-메탄올용액 3 mL 대신에 메탄올 3 mL를 사용하여 이하 시험용액의 시험조작과 동일하게 조작하여 물을 대조액으로 하여 500 nm에서 흡광도를 측정한다. 

    따로, 시료 중에 존재하는 안토시아니딘을 보정하기 위한 보정시험으로 바닐린-메탄올용액 3 mL 대신에 메탄올 3 mL를 사용하여 이하 시험용액의 시험조작과 동일하게 조작하여 물을 대조액으로 하여 500 nm에서 흡광도를 측정한 값을 시험용액의 흡광도에서 빼준다. 이 때 얻은 흡광도에서 검량선으로부터 시험용액의 (＋)카테킨 상당량을 구한 다음 이를 프로안토시아니딘으로 한다.

 마. 시험조작

    (＋)카테킨표준품 100 mg을 정밀히 달아 메탄올을 가하여 갈색 부피플라스크 100 mL에 표선을 맞춘다. 이 액 1, 2, 3, 5 mL를 각각 취한 다음 이에 메탄올을 가하여 10 mL씩으로 한 것을 각 표준용액으로 한다. 각 표준용액 0.5 mL를 갈색시험관에 각각 취하고 바닐린:메탄올 용액(4→100) 3 mL를 가해준 다음 뚜껑을 덮고 10초간 교반한 후 염산 1.5 mL를 정확하게 가해주고 즉시 뚜껑을 덮고 18～22℃에서 15분간 방치한 다음 물을 대조액으로 하여 500 nm에서 각각의 흡광도를 측정하여 표준용액의 농도(mg/mL)에 대한 흡광도로 검량선을 작성한다. 따로, 공시험은 카테킨표준용액 대신에 물 0.5 mL를 갈색시험관에 취하고 이하 표준용액의 시험방법과 동일하게 조작한다.

 바. 계산방법

  프로안토시아니딘 함량(%) =  A   ×  D   ×  100   

                                            ────

                                              S     

A : 검량선에서 얻어진 시험용액의 (＋)카테킨의 상당량(mg)

D : 희석배수

S : 시료량(mg) 

20.4. 천연비테인

 가. 시약  

  1) Water : LC grade 

  2) 질산칼슘[Ca(NO3)2?4H2O]

  3) Betaine (mw 117.15, Sigma B2629, 99%, 냉장보관) 

 나. 분석방법

    예상함량에 따라 시료와 표준물질을 적당량 칭량하여 50ml Vol. flask에 취하고 40ml 정도의 물을 가한다. 때때로 흔들어 주면서 30분정도 sonication하고 물로 정용한 다음 고루 흔들어준다. 이 용액을 0.45 μm 실린지필터로 여과시켜 그 여액을 시험용액으로 사용한다. 

 다. HPLC 분석조건

  1) 칼럼 : Sugar-pak (6.5 × 300mm) 

  2) 이동상 : 0.004 M Ca(NO3)2?4H2O (사용시 제조)

  3) 검출기 : RID (reflective index detector)

  4) 칼럼오븐 : 80℃

  5) 유속 : 1.0 mL/min

 라. 계산

  비테인 함량(%)  =   P   ×  As  ×  50 mL   ×  100   

                            ───  ─────          

                              At      S                 

P : 표준용액의 농도(mg/mL)

At : 표준용액의 피크 면적

As : 시험용액의 피크 면적

S : 시료량(mg)

21장. 기타성분

21.1. 염기성치환용량(Cation Exchange Capacity)

 가. 시약

  1) 1 N-초산 암모늄 용액 : 암모니아수 68 mL와 초산(Acetic acid) 57 mL를 혼합하고 증류수로 1,000 mL가 되게 만든다. (pH 7로 조정)

  2) 80% 에탄올(Ethanol)

  3) 4% 붕산용액(Boric acid) : 조단백질 정량과 동일

  4) 산화마그네슘(Magnesium Oxide)

  5) 0.1 N-염산용액

 나. 방법

    먼저 칼럼(Column)하부를 탈지면으로 막고 No. 5A 여과지(작게 자른 것)를 1 cm 정도 깔고 1 N-초산암모늄 용액을 가하여 기포를 제거한 다음 시료 2 g을 넣고 1 N-초산암모늄 용액 150 mL가 6～12시간에 유출되도록 마개를 조정한다.

    이 액의 유출이 끝나면 80% 에탄올 150 mL를 가하고 위와 같은 방법으로 유출시키면서 초산암모늄을 제거하고 시료와 여과지를 증류 플라스크에 씻어 넣은 다음 산화마그네슘 5 g과 증류수 300 mL를 가하고 수기(受器)에 4% 붕산용액 50 mL를 넣고 조단백질 때와 같은 방법으로 증류한 다음 0.1 N-염산용액으로 적정한다. 동시에 공시험도 행한다.

 다. 계산

염기성치환용량(meq/100 g) = (T-B)/S×N×F×100

T : 시료 0.1 N - 염산 적정치( mL)

B : 공시험에 대한 0.1 N - 염산 적정치( mL)

N : 염산의 규정농도

F : 0.1 N - 염산의 factor

S : 시료무게(g)

21.2. 요소

 가. 증류법

  1) 시약의 조제 : 조단백질과 동일

  2) 시료액의 조제

    시료(배합사료) 20g을 250 mL 메스플라스크에 취하고 0.1N-염산용액 200 mL를 가하여 30분간 진탕한 다음 0.1N-염산용액으로 표준선을 맞추고 건조 여과지로 여과한다.

  3) 방법

    시료액 25 mL를 증류플라스크에 취하여 메틸레드 지시약 2～3방울을 가한 다음 0.5% 가성소다 용액으로 중화(pH 5.6～5.8)시키고 우레아제(Urease) 0.1g을 가하여 마개를 막은 다음 40～50℃ 항온수조에서 1시간 작용시키고 냉각한 다음 산화마그네슘 3g과 액체 파라핀 2 mL를 가하고 조단백질 정량법과 같이 증류 및 적정한다. 별도로 공시험을 행한다.

  4) 계산

    조단백질 분석법에 준하여 질소(N) 함량을 구하고 계수로써 2.14를 곱하여 요소의 양을 산출한다.

요소(%) =[(0.1N염산적정량-공시험적정량)×F×0.140067×2.14×10]/시료무게(g)

F  : 0.1 N - 염산의 factor

10 : 희석배수

 나. 비색법

  1) 시약의 조제

   가)파라디메틸아미노벤즈알데히드(P-Dimethylaminobenzaldehyde)용액 : DMAB 16.0g을 에탄올 1,000 mL에 용해한 다음 염산 100 mL를 가한다. 약 1개월 동안 안정하며 새로운 용액을 이용할 때는 새로운 표준곡선을 작성한다.

   나) 초산아연 용액 : 초산아연 22.0g을 증류수에 녹인 다음 초산 3 mL를 가하고 100 mL로 희석하여 만든다.

   다) 황혈염(Potassium ferroyanide)용액 : 황혈염 10.6g을 증류수에 용해하고 100 mL로 희석하여 만든다.

   라) 식물성 활성탄(Vegetable charcoal)

   마) 인산 완충액(Phosphate buffer solution) : 무수 제1인산칼륨 3.403g과 무수 제2인산칼륨 4.355g을 증류수 100 mL에 각각 용해한 다음 각 용액을 서로 혼합하고 1,000 mL로 희석하여 만든다.(pH 7.0)

   바) 요소표준액

    (1) 저장액 - 5 mg/ mL : 요소 5.000±0.001g을 증류수에 녹이고 1,000 mL 희석하여 만든다.

    (2) 검정액 - 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0, 1.2, 1.4, 1.6, 1.8 및 2.0 mg의 요소가 5 mL에 함유 되도록 다음과 같이 준비한다. 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18 및 20 mL의 저장액을 250 mL의 메스플라스크에 넣고 인산완충액으로 표선까지 희석하여 만든다.

    (3) 표준액 : 1.0 mg요소/5 mL를 함유하는 용액을 표준으로 사용 24℃이하에서 저장해야 하며 1주일간 안정한다.

  2) 표준곡선 작성

   가) 검정액 5 mL를 25 mL의 시험관에 넣고 각각 DMAB액 5 mL를 넣는다.

   나) 여기에 완충액 5 mL와 DMAB액 5 mL를 넣은 공시험액을 만든다.

   다) 25℃에서 10분간 방치한 다음 파장 420 nm에서 요소농도에 따른 흡광도를 측정한다. 요소농도에 따라서 흡광도는 직선이 얻어져야 하며 그렇지 않은 경우는 새로운 DMAB액을 이용하며 되풀이한다.

  3) 방법

   가) 500 mL 메스플라스크에 분쇄한 시료 0.1g과 활성탄 1g, 증류수 250 mL, 초산아연용액 5 mL 및 황혈용액 5 mL를 넣는다.

   나) 30분간 흔든 다음 증류수로 표선까지 채우고 침전이 생길 때까지 정치한다.

   다) Whatman No. 40 여과하고 여액 5 mL에 DMAB 5 mL를 넣어 잘 흔든다.

   라) 25℃에서 10분간 방치한 다음 420 nm에서 흡광도를 읽는다.

  4) 계산

요소(%) = (1.0×시료의 흡광도×100)/표준액의 흡광도×시료의 무게(mg)×100

※ 1.0 = 표준액 중 요소  mg수

   100(분자) = 희석배수

21.3. 휘발성 염기태질소

 가. 시약의 조제 : 조단백질과 동일

 나. 시료액의 조제

    시료 5～10g을 250 mL 메스플라스크에 정확히 취하고 증류수 200 mL를 가하여 30분간 진탕후 표준선까지 증류수로 채우고 No. 5A 여과지로 여과한다. 여과가 잘 안되면 3000rpm으로 10분간 원심분리하여 상층액을 시료액으로 한다.

 다. 방법

    시료액 50 mL를 분해플라스크에 정확히 취하여 산화마그네슘 2 g, 액체파라핀 0.5 g 및 증류수 50 mL를 가하고 조단백질 정량법에 준하여 증류 및 적정을 행하여 질소량을 산출한다.

 라. 계산

휘발성염기태질소(%) =(0.140067×A×5×F)/시료무게(g)

※ A : 0.1 N - 염산용액의 소모량( mL)

F : 0.1 N - 염산용액의 factor

5 : 희석배수

21.4. 염산불용물질(토사)

    600℃에서 2시간 회화후 잔류회분을 250～400 mL 비이커에 옮겨 3 N의 염산 75 mL 가하여 최소 1시간 이상 지속적으로 열을 가하여 완전하게 건고시킨다. 

    방냉한 후 3 N 염산 75 mL를 넣어 서서히 약 15분간 끓여준 다음 여과지(No. 6 Ashless)를 이용하여 여과하되 산기가 완전히 없어지도록 뜨거운 물로 반복하여 씻어준다. 건조 후 항량을 구한 크루시블에 옮겨 600℃에서 2시간 태우고 난 다음 무게를 측정한다.

염산불용물질(%)=(태운 후 중량 - 크루시불 함량)/시료무게(g)×100

21.5. 유사단미사료 혼입여부 판정방법

 가. 어분 중 우모분 혼입여부 판정방법

    시료 일정량(1～2 g)에 1% NaOH용액 150 mL를 가하고 1분간 끓인 다음 2～3회 물로 씻어주고 방치한 다음 상층에 떠있는 부유물을 슬라이드글라스에 취하고 현미경 100～150배로 관찰하면 우모분은 분해되어 투명하고 교질 상태의 매듭을 갖는 모양을 나타낸다.

 나. 어분 중 식물성 단백질 사료 혼합여부 판정방법

    시료 일정량(2～3 g)에 5% NaOH용액 150 mL를 가하고 거품 방지제 2～3방울 떨어뜨려 30분간 자비한 다음 3～5회 물로 씻어주고 방치한 후 침전물을 슬라이드글라스에 취하여 커버글라스를 덮은 후 현미경 150배 이상으로 관찰하면 식물성단백질사료는 세포막이 벌집모양의 그물 구조를 선명하게 나타낸다.

21.6. 펩신(Pepsin)소화율

 가. 시약의 조제

  1) 0.2% 펩신염산액 : 농염산용액(HCl) 6.1 mL를 증류수 1,000 mL로 희석하여 0.075N 염산용액을 만들어 여기에 2 g의 펩신을 녹여 만든다.

  2) 0.1 N - 염산용액(HCl) : 조단백질 정량방법과 동일

  3) 분해촉진제 : 조단백질 정량방법과 동일

  4) 가성소다(Sodium Hydroxide)혼합액 : 조단백질 정량방법과 동일

  5) 지시약 : 조단백질 정량방법과 동일

 나. 방법

    시료 1 g을 정확히 취하여 탈지한 다음 200 mL 삼각플라스크에 넣고 42～45℃로 미리 가열한 0.2% 펩신염산용액 150 mL를 가하고 45℃ 항온수조에서 흔들어 주면서 16시간 소화시킨 다음 No. 2A 여과지로 여과한다.

    불소화물을 온수로 세척하고 불소화물과 여과지를 분해플라스크에 넣고 조단백질 정량법에 준하여 분해, 증류, 적정하여 불소화물의 조단백질 함량을 구한다. 별도로 시료에 대한 조단백질의 함량도 구한다.

 다. 계산

펩신소화율(%) =(A-B)/A× 100

※ A : 사료중 조단백질 함량(%)

   B : 불소화물중 조단백질 함량(%)

21.7. 전분

 가. 편광계법

  1) 원리

   가) 표준화된 조건하에서 약산으로 사료를 가수분해한 후 여과시킨 용액의 광학적 회전도를 편광기를 이용하여 측정하는 방법이다.

   나) 40% 에탄올에 가용성인 물질(수크로스)도 광학적으로 활성을 띄기 때문에 이 물질의 함량을 제외한 순수한 전분(40% 에탄올에 불용성임)에 의한 광학적 회전도를 측정한다.

   다) 비트펄프 등과 같이 이눌린을 함유한 물질은 산가수분해 또는 효소적 방법에 의한 측정을 하여야 한다.

  2) 기구

   가) 100 mL 메스후라이크 

   나) 여과지(Whatman No.2)

   다) 깔대기

   라) 항온수조

   마) 20 mL 시험관

   바) 편광계

  3) 시약의 조제

   가) 40% 에탄올 (V/V) 조제

   나) 메틸레드 지시약 : 1.0 g의 메틸레드를 96% 에탄올에 녹여 1 L용액을 만든다.

   다) 0.31 N(1.13%)염산 : 24.8 mL의 12.5 N염산을 증류수에 녹여 1 L 용액을 만든다. 0.31 N 염산 10 mL은 메틸레드반응에서 0.1N 가성소다 30 mL를 이용하여야 한다. (Strength check)

   라) Carrez시약Ⅰ: 106 g의 Potassim ferrocyanide(K4Fe(CN)6?3H2O)를 증류수에 녹여 1 L용액(0.25 M)을 만든다.

   마) Carrez시약 Ⅱ : 220 g의 Zinc acetate(ZnC2H3O22H2O)와 30 g의 빙초산을 증류수에 녹여 1 L 용액(Zinc acetate 1 M)을 만든다. 

  4) 측정방법

   가) 제1단계

    (1) 시료는 0.5 mm체를 완전히 통과하여야 한다.

    (2) 메스후라스크에 2.5 g 시료와 0.31 N 염산 25 mL를 넣고 혼합시킨 후 다시 0.31 N 염산 25 mL를 넣은 즉시 100℃ 항온수조에 정확히 15분 동안 두고(플라스크 투입 30초 이내 다시 100℃로 끓여야함) 처음 3분간은 플라스크를 항온수조 내에서 잘 흔들어 준다.

    (3) 항온수조에서 끄집어낸 후 즉시 30 mL의 증류수를 주입하고 빠른시간 내 상온으로 식힌다.

    (4) 식혀진 플라스크에 Carrez시약 Ⅰ 5 mL을 넣고 1분간 혼합한 후 Carrez시약 Ⅱ 5 mL을 넣은 후 다시 혼합한다.

    (5) 증류수로 100 mL 표선을 맞추고 혼합한 후 No. 2 여과지로 여과한다.

    (6) 처음 여과액은 버리고 맑은 여과액을 20 mm길이의 편광기 튜브속에 넣고 광학적 회전도를 측정한다.

   나) 제2단계

    (1) 시료 5g을 100 mL의 메스후라이크에 취한다.

    (2) 40% 에탄올 70～80 mL을 넣어 시료와 잘 혼합시킨 후 1시간동안 상온에서 방치한다. 이때 10분 간격으로 가볍게 흔들어 준다.

    (3) 40% 에탄올을 가지고 100 mL로 맞춘 후 혼합한 다음 여과지로 여과한다.

    (4) 여과액 중 50 mL을 취하여 새로운 100 mL 메스후라이크에 담고 25% 염산용액 2.1 mL를 넣은 후 잘 혼합한다.

    (5) 100℃ 항온수조에서 정확히 15분간 흔들지 않고 놓아둔다.

    (6) 항온수조에서 끄집어 낸 후 빠른 시간 내 상온으로 식힌다.

    (7) 제1단계의 (4), (5), (6) 과정을 거쳐 광학적 회전도를 측정한다.

  5) 계산방법

전분함량(%) ={5000×(제1단계 회전도- 제2단계 회전도)}/α×시료중량

α값 :옥수수전분 = 184.6

보리전분 = 181.5

 감자전분 = 185.7

 밀전분 = 182.7

 쌀전분 = 185.9

* 대부분의 원료사료는 제 2 단계과정을 생략하고 제 2 단계 회전도 대신 증류수에 의한 블랭크 회전도를 측정하면 됨

** 여과액의 농도가 맑지 않을 때는 Carrez시약의 양을 배가한다.

 나. 비색법

  1) 기구

   가) 100 mL 메스후라이크

   나) Voltex

   다) 여과지(Whatman No.2)

   라) 깔대기

   마) 원심분리기

   바) 50 mL 원심분리관

   사) 항온수조

   아) 20 mL 시험관

   자) 비색계

  2) 시약의 조제

   가) 80% 에탄올

   나) 52% Perchloric acid : 100 mL 증류수에 270 mL의 72% Percholic acid 첨가

   다) 황산 용액 : 농황산 760 mL을 증류수(약 330 mL)에 녹여 1 L 용액을 만든다.

   라) Anthrone 용액 : 황산용액 100 mL에 시약 0.1g을 녹임(0.1% 용액제조)당일 분석용으로 준비, 갈색병으로 4℃에 보관하면 48시간동안 사용가능 

   마) D-glucose 표준액 : D-glucose 1g을 증류수 1 L에 녹여 1000 μg/ mL 농도를 만든 후  25, 50, 100, 200 μg/ mL로 희석하여 사용한다.

  3) 분석 방법

   가) 시료 0.2 g(＜0.5 mm)을 칭량 후 50 mL 원심분리관에 넣는다.

   나) 80% 에탄올 2방울을 떨어뜨려 시료를 적신 다음 증류수 5 mL을 넣고 voltex를 이용하여 완전히 혼합한다.

   다) 75℃ 80% 에탄올 25 mL을 첨가하여 완전히 혼합한 후 5분간 방치한 다음 3000rpm에서 원심분리 한다. 

   라) 상등액은 버리고 원심분리관에는 다시 75℃ 80%에탄올 30 mL을 넣고 2차 원심분리한다.

   마) 상등액은 버리고 잔사는 에탄올을 날리기 위해 약 40℃에서 1시간동안 건조한다.

   바) 잔사에 증류수 5 mL을 넣고 흔들어 준 후 52% Percholic acid 6.5 mL을 첨가한 후 20분 동안 매 5분마다 흔들어 준다.

   사) 증류수 20 mL을 넣고 3000 rpm에서 원심분리한다.

   아) 상등액을 100 mL 메스후라스크에 담고 바), 사) 과정을 반복하여 2차 상등액을 1차 상등액이 들어 있는 flask에 담는다.

   자) 아)의 1, 2차 상등액과 2차 원심분리후 남은 잔사를 새로운 100 mL 메스후라스크에 여과하면서 옮겨 100 mL로 정용한다.

   차) 포도당 농도가 약 100 μg/ mL가 되게끔 희석하여 분석에 임한다.

   카) 유리시험관에 희석용액 1 mL을 넣은 즉시 anthrone용액 5 mL을 첨가한다.

   타) 마개를 막은 후 내용물을 잘 혼합하여 100℃의 수조에 정확히 12분간 가열한 다음 얼음 또는 흐르는 물에 급속히 상온으로 냉각시킨다.

   파) 용액의 흡광도를 630 nm에서 측정한다.

  4) 계산방법

전분(%)=0.9×(M/10)×(100/V1)×(100/V0)×(100/E)×(100/MS)

M  = 표준곡선에서의 포도당 농도, μg/ mL

V1 = 희석용 채취량, mL(원액사용시 V1 = 100)

V0 = 분석용액 채취량, mL

E  = 시료무게, g

MS = 시료의 건물함량, %

21.8. 열량(Calorie)

 가. 기구 및 시약

  1) 열량측정기(Bomb caloriemeter)

  2) Balance

  3) 공기 순환식 건조기

  4) 안피지(5×5 cm)

  5) 닉켈선

  6) 산소

  7) 핀세트

  8) 안식향산

 나. 시료의 조제 및 측정

    안피지 무게를 측정 후 시료(사료 1g, 동물성단백질 사료 0.8g, 유지 0.4g)를 취한 다음 시료를 안피지로 싼다. 시료가 들어있는 안피지를 bomb에 연결한 다음 산소를 bomb에 충진한 후 열량을 측정한다.

21.9. 협잡물(이물질시험법)

 가. 정의

    시료를 규정의 방법에 준하여 석유에테르 용해시킬 경우의 불용해 잔분의 백분율을 말한다.

 나. 장치

    항온건조기(100±1℃로 온도조절이 가능한 것)

 다. 시약

    석유에테르(시약 일급)

 라. 방법

  1) 시료 약 20 g을 beaker에 정확히 정량한 후 석유에테르 200 mL 가해 완전히 용해시킨다.

  2) 미리 건조시켜 항량으로 한 whatman No2 여과지에 여과한 후 석유에테르를 사용해서 완전히 추출 세정한다.

  3) 잔분의 여지는 100±1℃의 항온 건조기에서 건조한 후 30분간 방냉하여 칭량한다.(건조에 의한 중량변화가 0.3 mg이하가 되면 항량으로 간주한다)

 마. 계산

  협잡물(%)   =   잔분 중량(g)  ×  100   

                ────────          

                  시료 무게(g)            

21.10. 산가

 가. 원리

    산가는 유지 1 g중에 들어있는 유리지방산을 중화하는데 필요한 KOH의 양을 측정하여 유지의 성상을 판단한다.

 나. 시약

  1) 0.1 N KOH-Ethanol,  ether-ethanol(1 : 1) 혼합액, 

  2) 1% Phenolphthalein 지시약

  3) 0.1 N KOH-Ethanol 용액

    6.58 g(순도85% 기준)의 KOH를 소량의 증류수에 녹이고 Ethanol로 1 L까지 희석하여 2～3일간 방치한 후 여과하여 역가를 표정한다.

  4) 0.1 N KOH-Ethanol 용액 역가 표정법

   가) Benzoic acid를 100～105℃ 2시간 건조시킨다.

   나) 데시케이터에서 30분간 방냉한다

   다) 삼각플라스크에 benzoic acid를 0.2～0.3 g 정도 취한다.

   라) ether -ethanol 혼합액 10 mL에 용해시킨다.

   마) 1% Phenolphtalein 지시약 2～3방울을 가하고 0.1N KOH-Ethanol 용액으로 적정한다.

  Factor  =   Benzoic acid양(g)×1000   ×  10  

            ──────────────        

              122 × 적정치(mL)                 

  * Ether-Ethanol 혼합액 : Ethyl Ether : Ethanol을 1 : 1로 한다

  * 1% Phenolphtalein 지시약 : Phenolphtalein 특급 1 g을 ethanol 100 mL에 녹인다.

 다. 분석

    시료 2 g을 에테르 : 에탄올(1 : 1) 혼합액 100 mL에 녹이고 여기에 알콜에 녹인 1% Phenolphthalein 지시약을 2～3방울 가하고, 30초간 지속하는 담홍색을 띨 때까지 0.1 N KOH-Ethanol 용액으로 적정한다. 동시에 공시험도 행한다.

 라. 계산

  산가  =   (T1-T0) × 5.611 × F   

          ─────────────

            S                       

※ T1 : 시료 0.1N KOH-Ethanol 적정치( mL)

   T0 : 공시험에 대한 0.1N KOH-Ethanol 적정치( mL)

   F  : 0.1N KOH-Ethanol의 factor

   S  : 시료무게(g)

   5.611 : KOH분자량 × 농도(0.1N)

21.11. 우레아제 역가(Urease Activity)

 가. 원리

    대두부산물 1g을 요소용액과 혼합하였을 때 30℃에서 1분간 발생하는 암모니아태 질소의 양으로 urease activity를 측정한다

 나. 기구

  1) 30℃±0.5℃ 유지할 수 있는 진탕수조

  2) 정확한 pH meter(pH 0.02까지 측정 가능한 것)

  3) 시험관(20×150mm 고무마개)

 다. 시약

  1) phosphate buffer soln. 0.05M : 3.403g의 KH2PO4와 4.355g의 K2HPO4를 각각 100 mL의 신선한 증류수에 녹인 다음 두 가지를 섞어 1 L로 한다. 사용전에 강산 또는 강염기로 pH를 7로 조절한다

  2) urea-buffer soln : 15g의 urea를 500 mL phosphate buffer용액에 녹인 다음, toluene 5 mL를 넣고 pH 7로 맞춘다.

 라. 방법

  1) 시료를 열 발생 없이 가능한 미세하게 간다.(0.2mm체 통과)

  2) 0.2g의 준비된 시료를 시험관에 넣고 10 mL의 urea-buffer액을 가한 후, 뚜껑을 닫고 잘 흔들어 30℃ 진탕수조에 넣어 왕복 진탕시킨다. 시간을 기록(test)

  3) 0.2g의 분비된 시료를 시험관에 넣어 blank를 준비한다. 10 mL의 phosphate buffer를 가하고 뚜껑을 한 후, 잘 흔들어 30℃ 진탕수조에 넣어 왕복진탕 시킨다. 시간을 기록(blank)

  4) test blank를 준비하는 사이의 시간은 5분간의 차이를 둔다.

  5) 30분간 왕복진탕 시킨 후 시험관을 꺼내 상등액의 pH를 잰다.

  6) 진탕수조에서 시험관을 꺼낸 후 정확히 5분이 되었을 때 pH를 읽는다.

 마. 계산

    test와 blank의 pH차이는 pH증가 또는 urease activity로 표시한다.

21.12. HCN(청산)

 가. 적용범위 : 타피오카

 나. 측정원리

    타피오카 중의 HCN을 증류수로 추출하고 수증기 증류장치를 이용하여 증류 포집한 후 0.01N AgNO3로 적정하여 계산한다.

 다. 시약의 조제

  1) 0.01N AgNO3

    17g의 AgNO3을 갈색 flask에 넣고 증류수로 1 L가 되게 한다. NaCl로 표정하여 Factor를 구한 후 10배 희석하여 사용한다.

   가) 표정

      NaCl (500℃～600℃에서 50분 가열한 후 황산데시케이터에서 방냉) 1.461 g을 증류수에 녹여 250 mL로 한다. 정확히 25 mL를 취하고 약 25 mL의 증류수를 넣고 Dextrin 5 mL, Fluorescien Na 수 방울을 첨가한 후 0.1N AgNO3로 적정한다.(황록색(형광) ?????? 미적색)

  2) Dextrin액 : Dextrin 2g을 증류수 100 mL에 용해한다.

  3) Fluorescein  Na액 : Fluorescein Na(C20H10O5Na2) 0.2g을 증류수 100 mL에 용해한다

  4)p-Dimethylaminobenzalrhodanine(CH3)2NC6H4CH:CCONHSCS=DMABR) : 0.02g을 acetone 100 mL 에 용해한다

 라. 측정방법

    시료 20g을 500 mL round botton flask에 취하고 증류수 200 mL 첨가한 후 밀봉해서 25～30℃에서 2시간 이상 방치한다. 증류장치에 연결시키고 5%  NaOH 20 mL를 넣은 수기로 200 mL이상 될 때까지 받는다.(HCN의 boiling point는 약 26℃) 증류액에 p-dimethylaminobenzalrhodanine 0.5 mL를 넣고 0.01N AgNO3로 적정한다. (황녹색(형광) ?????? 미적색)

  HCN(ppm)  =   v × f × 0.54  ×  1000  

              ─────────          

                w                         

v : 0.01 N AgNO3 소요양(mL)

f : 0.01 N AgNO3 factor

w : 시료중량(g)

21.13. 유리고시폴(Free Gossypol)

고시폴은 면실박 중 색소로서 유리된 형태로 있을 때 가축에게 독성을 나타내는 유독성 물질이다.

 가. 정의

    유리고시폴은 aqueous acetone에 녹을 수 있는 gossypol과 gossypol 유도체를 말한다.

 나. 적용범위 : 면실박, 면실

 다. 시약 및 제조

  1) aqueous acetone

    700 mL acetone + 300 mL 증류수

  2) aqueous iso-propanol

    800 mL iso-propanol + 200 mL 증류수

  3) Thiourea sol.

    10 g thiourea/100 mL 증류수

  4) 1.2 N HCl

    106 mL HCl(35～37%)/1 L

  5) Anilline(Benzeamine)

    anilline(ACS reagent)에 zinc powder를 넣고 냉각기에 연결 증류하여 용액의 처음과 마지막 10%를 버린 용액(reagent blank의 흡광도가 0.022를 넘으면 재증류해야 한다. 냉암소 보관 유리마개를 한다)

  6) Gossypol 또는 Gossypol acetate 표준용액

   가) 순도결정 실험 : 2mg의 gossypol 또는 gossypol acetate를 100 mL 정량플라스크에 넣고 40 mL cyclo-hexane을 첨가한다. 더운물에서 녹이고 cyclo-hexane으로 100 mL까지 채운 후 358nm에서 흡광도를 측정한다.

Absorptivity = A/C × l

A : absorbance

C : concentration, g/l

l : light path, 1cm

   * 순수표준 gossypol의 absorptivity는 39.9±0.2순수표준 gossypolacetate의 absorptivity는 35.8±0.2

   나) 표준용액 조제 : 25 mg gossypol 또는 27.9 mg의 gossypol acetate를 acetone 100 mL에 녹이고 1 mL의 glacial acetic acid와 75 mL의 증류수를 첨가하고 아세톤으로 250 mL로 맞춘다. 50 mL를 취하여 60 mL 증류수를 가하고 acetone으로 200 mL로 맞춘다.(0.025mg/mL) 24시간 안정하며 차광해야 한다.

 라. 시료

    1mm의 screen을 통과하게 분쇄

 마. 시료량

┌──────┬──────┬─────────┐

│기대치(%)   │시료무게(g) │aliquot size( mL) │

├──────┼──────┼─────────┤

│0.2 ~ 0.4   │0.5         │2                 │

├──────┼──────┼─────────┤

│0.1 ~ 0.2   │1.0         │2                 │

├──────┼──────┼─────────┤

│0.05 ~ 0.1  │1.0         │5                 │

├──────┼──────┼─────────┤

│0.02 ~ 0.05 │1.0         │10                │

├──────┼──────┼─────────┤

│0.01 ~ 0.02 │2.0         │10                │

├──────┼──────┼─────────┤

│below 0.01  │5.0         │10                │

└──────┴──────┴─────────┘

    gossypol의 기대치에 따라 취한다.

 바. 실험방법

  1) 시료를 상기 표에 따라 무게를 달고 초자구를 깔은 공전 삼각플라스크 250 mL 에 넣는다.

  2) 50 mL aqueous acetone을 넣고 shaker 또는 자석교반기로 1시간 진탕한다.

  3) 건조여지로 여과(whatman No 2), 처음 약 5 mL는 버리고 작은 부피의 flask에 담는다. 용매의 휘발방지를 위해 여과기를 유리접시로 덮는다.

  4) 2개의 25 mL 정량플라스크에 표의 aliquot size에 따라 (A, B)액을 취한다

  5) A에 10% thiourea 2방울 (0.10 mL), 1.2N HCl 1방울(0.05 mL)을 넣고 aqueous iso-propanol로 표선까지 채운다.(25 mL)

  6) B에 10% thiourea 2방울, 1.2N HCl 1방울을 넣고 2 mL anilline을 즉시 넣는다.

  7) Reagent blank : 시료와 동량의 aqueous acetone에 2방울의 thiourea와 2 mL의 anilline을 첨가한다.

  8) B와 Blank를 100℃ 수조에서 30분간 가열한다

  9) 수조에서 꺼내 aqueous iso-propanol를 약 10 mL 첨가하고 water bath에서 실온으로 냉각한 후 aqueous iso-propanol로 표선까지 채운다.(25 mL)

  10) 440 nm에서 A용액의 흡광도를 측정한다.(Blank는 aqueous iso-propanol)

  11) reagent의 흡광도 측정(Blank는 aqueous iso-propanol)

  12) B용액의 흡광도 측정(Blank는 reagent blank)

  13) Corrected Absorbance( = B용액의 흡광도 - A용액의 흡광도)

  14) 0.025 mg ～ 0.25 mg 범위의 검량선을 상기 방법으로 작성하여 gossypol mg을 계산한다.

Gossypol(mg) = Corrected Absorbance × factor

 사. 계산

  Free gossypol(%)  =   gossypol(mg) × 희석배수  ×  100   

                      ──────────────          

                        sample(mg)                          

21.14. 멜라민

 가. 액체크로마토그래피/질량분석기/질량분석기에 의한 시험

  1) 분석원리

     검체 중의 멜라민을 아세토니트릴?물(50:50, v/v) 용액으로 추출, 여과하고 이를 양이온교환수지를 사용하여 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기/질량분석기로 분석한다.

  2) 장치

   가) 액체크로마토그래프/질량분석기/질량분석기(LC/MS/MS)

   나) 정제용 카트리지 : 설폰산기(-SO3H)를 갖는 강산성 양이온교환수지 카트리지로서 Oasis MCX(150 mg 함유, 6 mL용) 또는 이와 동등한 것

  3) 시약 및 시액 

   가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

   나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

   다) 표준원액 : 멜라민 표준품 10 mg을 취하여 0.1% 개미산?아세토니트릴(5:95, v/v) 혼합용액으로 녹여 정확히 100 mL로 한다.

   라) 표준용액 : 표준원액을 0.01, 0.02, 0.05, 0.10 및 0.20 μg/mL 농도가 되도록 0.1% 개미산?아세토니트릴(5:95, v/v) 혼합용액으로 희석하여 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다(사용 시 조제한다).

   마) 0.1% 개미산용액 : 개미산(Formic acid) 0.1 mL에 물을 가하여 100 mL로 한다.

   바) 4% 개미산용액 : 개미산 4 mL에 물을 가하여 100 mL로 한다.

   사) 0.1% 개미산?아세토니트릴(5:95, v/v) 혼합용액 : 0.1% 개미산 용액 5mL에 아세토니트릴 95 mL를 가하여 100 mL로 한다.

   아) 0.2% 디에틸아민 함유 아세토니트릴 용액 : 디에틸아민(Diethylamine) 0.2 mL에 아세토니트릴을 가하여 100 mL로 한다.

   자) 2% 디에틸아민 함유 아세토니트릴 용액 : 디에틸아민 2 mL에 아세토니트릴을 가하여 100 mL로 한다.

   차) 20 mM 개미산암모늄 용액 : 개미산암모늄(Ammonium formate) 1.26 g을 물에 녹여 1,000 mL로 한다.

   카) 기타시약 : 특급

  4) 시험용액의 조제

   가) 추출

      검체를 분쇄한 후 시료 1 g을 정밀히 달아 폴리프로필렌 원심분리관에 넣는다. 여기에 물 5 mL를 넣어 검체를 습윤시킨 후 아세토니트릴 5 mL를 가하여 심하게 흔들어 섞고 30분간 초음파 진탕한 다음 원심분리(2,600 × G, 10분)한다. 상등액을 취하여 0.45 μm 멤브레인필터로 여과한 것을 추출액으로 한다(상등액의 층이 분리되어 있을 경우 서로 혼화시킨 후 여과한다).

   나) 정제

      미리 아세토니트릴 5 mL, 4% 개미산용액 5 mL를 차례로 흘려 활성화시킨 정제용 카트리지에 4% 개미산용액 3 mL 및 추출액 2 mL를 함께 주입하고 이를 중력을 이용하여 유출시킨다. 이어서 아세토니트릴 5 mL, 0.2% 디에틸아민 함유 아세토니트릴용액 5 mL를 차례로 흘린 후 카트리지 내에 남아있는 용액을 감압펌프를 이용하여 제거하고 2% 디에틸아민 함유 아세토니트릴용액 4 mL로 용출시킨다. 카트리지 내에 남아있는 용액은 감압펌프를 이용하여 완전히 용출시켜 용출액에 합한다. 용출액 1 mL를 4 mL 바이알에 취하여 50℃에서 질소로 건고한 후 잔류물에 0.1% 개미산?아세토니트릴(5:95, v/v) 혼합용액 1 mL를 가하여 녹인 것을 시험용액으로 한다. 

  5) 시험조작

   가) 액체크로마토그래프의 측정조건

    (1) 칼럼 : HILIC Silica(2.1 × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것  

    (2) 이동상은 A 및 B 용액의 농도 구배조건에 따라 사용한다.

     (가) 이동상 A : 0.1% 개미산?아세토니트릴(5:95, v/v)

     (나) 이동상 B : 20 mM 개미산암모늄?아세토니트릴(50:50, v/v)

┌────┬────┬────┐

│시간(분)│이동상 A│이동상 B│

├────┼────┼────┤

│0.0     │100     │0       │

├────┼────┼────┤

│5.0     │100     │0       │

├────┼────┼────┤

│10.0    │25      │75      │

├────┼────┼────┤

│11.0    │25      │75      │

├────┼────┼────┤

│13.0    │100     │0       │

├────┼────┼────┤

│15.0    │100     │0       │

└────┴────┴────┘

    (3) 유속 : 0.25 mL/분

    (4) 주입량 : 10 μL 

    (5) 칼럼온도 : 35℃

   나) 질량분석기/질량분석기의 조건

    (1) Ionization : ESI (Positive) 

    (2) Source voltage : 4.8 kV

    (3) Capillary Temp. : 350℃

    (4) Auxiliary gas : 질소

    (5) Collision gas : 아르곤 또는 질소

    (6) Source collision energy : 15～30 V

   다) 검량선

       작성표준용액을 액체크로마토그래프/질량분석기/질량분석기에 주입한 후 얻어진 크로마토그램 상의 m/z 85 이온의 피크 높이 또는 면적을 이용하여 검량선을 작성한다.

   라) 정량한계 : 0.15 mg/kg

  6) 정성시험

    위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치 여부를 확인한다. 시험용액의 특성이온이 아래 표와 같이 확인되어야 하고 표준용액과 시험용액 이온간 반응세기의 비(m/z 85 이온에 대한 m/z 68 이온의 백분율, response ratio)를 비교하여 그 비가 ± 10% 이내에서 일치하여야 한다. 

 ┌────┬─────────┬─────────┐

│물  질  │Precursor ion(m/z)│Fragment ion(m/z) │

├────┼─────────┼─────────┤

│멜 라 민│127               │85                │

│        │                  │68                │

└────┴─────────┴─────────┘

  7) 정량시험

    정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험용액의 크로마토그램으로부터 m/z 85 이온의 피크높이 또는 피크면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

  8) 계산

멜라민의 함량(mg/kg) = C × V/S × D

C : 검량선에서 구한 멜라민의 농도 (μg/mL) 

V : 시험용액의 최종 부피 (mL)

S : 시료 채취량 (g)

D : 시험용액의 희석배수

 나. 액체크로마토그래피에 의한 시험

  1) 분석원리

    검체 중의 멜라민을 아세토니트릴?물(50:50, v/v) 용액으로 추출하고 이를 양이온교환수지를 사용하여 정제한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

  2) 장치

   가) 액체크로마토그래프 : 자외부흡수검출기(UV detector)를 사용한다.

   나) 정제용 카트리지 : 설폰산기(-SO3H)를 갖는 강산성 양이온교환수지 카트리지로서 Oasis MCX(150 mg 함유, 6 mL용) 또는 이와 동등한 것

  3) 시약 및 시액

   가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

   나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

   다) 표준원액 : 멜라민 표준품 100 mg을 취하여 물에 녹여 정확히 200 mL로 한다.

   라) 표준용액 : 표준원액을 0.1, 0.5, 1.0, 2.0 및 5.0 μg/mL의 농도가 되도록 물에 녹여 희석하여 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다. 

   마) 4% 개미산용액 : 개미산(Formic acid) 4 mL에 물을 가하여 100 mL로 한다.

   바) 0.2% 디에틸아민 함유 아세토니트릴용액 : 디에틸아민(Diethylamine) 0.2 mL에 아세토니트릴을 가하여 100 mL로 한다.

   사) 2% 디에틸아민 함유 아세토니트릴용액 : 디에틸아민 2 mL에 아세토니트릴을 가하여 100 mL로 한다.

   아) 기타시약 : 특급

  4) 시험용액의 조제

   가) 추출

      검체를 분쇄한 후 시료 1 g을 정밀히 달아 폴리프로필렌 원심분리관에 넣는다. 여기에 물 5 mL을 넣어 검체를 습윤시킨 후 아세토니트릴 5 mL을 가하여 심하게 흔들어 섞고 30분간 초음파 진탕한 다음 원심분리(2,600 × G, 10분)한다. 상등액을 취하여 0.45 μm 멤브레인필터로 여과한 것을 추출액으로 한다(상등액의 층이 분리되어 있을 경우 서로 혼화시킨 후 여과한다).

   주1) 동물의 근육이나 조직을 분석할 경우에는 검체를 분쇄한 후 시료 5 g을 정밀히 취한 후 물 10 mL를 가하여 습윤시키고 아세토니트릴 10 mL를 가한 후 상기와 같이 초음파 진탕, 원심분리 및 여과한다.

   나) 정제

      미리 아세토니트릴 5 mL, 4% 개미산용액 5 mL를 차례로 흘려 활성화시킨 정제용 카트리지에 4% 개미산용액 3 mL 및 추출액 2 mL를 함께 주입하고 이를 중력을 이용하여 유출시킨다. 이어서 아세토니트릴 5 mL, 0.2% 디에틸아민 함유 아세토니트릴용액 5 mL를 차례로 흘린 후 카트리지 내에 남아있는 용액을 감압펌프를 이용하여 제거하고 2% 디에틸아민 함유 아세토니트릴용액 4 mL로 용출시킨다. 카트리지 내에 남아있는 용액은 감압펌프를 이용하여 완전히 용출시켜 용출액에 합한다*. 용출액 2 mL를 4 mL 바이알에 취하여 50℃에서 질소로 건고한 후 잔류물에 물 1 mL를 가하여 녹인 것을 시험용액으로 한다. 

  5) 시험조작

   가) 액체크로마토그래프의 측정조건

    (1) 칼럼 : C18 (4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

    (2) 이동상 : 완충용액?아세토니트릴 (85:15, v/v)

     (가) 완충용액 : 무수구연산 1.92 g과 옥탄설폰산나트륨 [C8H17O3SNa] 2.16 g을 950 mL의 물에 녹이고 1 M 수산화나트륨을 사용하여 pH 3.0으로 한 후 물을 가하여 전량을 1 L로 한다. 

    (3) 검출파장 : 240 nm

    (4) 유속 : 1.0 mL/분

    (5) 주입량 : 10 μL

   나) 검량선 작성

      표준용액을 액체크로마토그래프에 주입한 후 얻어진 크로마토그램상의 피크 높이 또는 면적을 이용하여 검량선을 작성한다.

  6) 정성시험

      위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

  7) 정량시험

      정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험용액의 크로마토그램으로부터 멜라민의 피크높이 또는 피크면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

  8) 계산

멜라민의 함량(mg/kg) = C × V/S × D

C : 검량선에서 구한 멜라민의 농도 (μg/mL) 

V : 시험용액의 최종 부피(mL)

S : 시료 채취량(g)

D : 시험용액의 희석배수

  9) 확인시험

      "액체크로마토그래피/질량분석기/질량분석기에 의한 멜라민 시험법"의 정성시험 또는 "기체크로마토그래피/질량분석기"의 정성시험에 따라 시험할 때 멜라민이 확인되어야 한다.

 다. 기체크로마토그래피/질량분석기에 의한 확인시험

  1) 분석원리

    검체 중의 멜라민을 아세토니트릴?물(50:50, v/v) 용액으로 추출하고 이를 양이온교환수지를 사용하여 정제한 후 유도체화시켜 기체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

  2) 장치

   가) 기체크로마토그래프/질량분석기(GC/MS)

  3) 시약 및 시액

   가) 표준용액

      액체크로마토그래피에 의한 멜라민 시험법의 시약 및 시액 중 표준용액을 사용한다.

   나) 피리딘 : 특급을 사용한다.

   다) 유도체시약(BSTFA)

      N,O-Bis(trimethylsilyl) trifluoroacetamide (1% trimethyl-chlorosilane 함유)를 사용한다.

  4) 시험용액의 조제

   가) 추출 및 정제

      액체크로마토그래피에 의한 멜라민 시험법 5) 시험용액의 조제 가) 추출 및 나) 정제에 따라 *까지 시험하여 용출액으로 사용한다.

   나) 유도체화

      표준용액 및 위의 용출액 200 μL를 각각 바이알에 넣은 다음 70℃에서 질소로 건고한다. 잔류물에 피리딘 200 μL와 유도체시약(BSTFA) 200 μL를 넣고 마개를 닫은 후 70℃에서 30분간 방치한 것을 확인시험용 표준용액 및 시험용액으로 한다. 

  5) 시험조작

   가) 기체크로마토그래프/질량분석기의 측정조건

    (1) 칼럼 : DB-5MS(0.25 mm × 30 m, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

    (2) 주입부 온도 : 250℃

    (3) 검출기 온도 : 250℃ 

    (4) 오븐온도 : 초기 온도 75℃에서 1분간 유지하고 15℃/분의 비율로 300℃까지 온도를 상승시켜 2분간 유지한다.

    (5) 캐리어가스 및 유량 : 헬륨 (1.0 mL/분)

    (6) 주입방법 : splitless

    (7) 주입량 : 1 μL 

    (8) 이온화 방법 : EI mode

    (9) 이온화 전압 : 70 V

  6) 정성시험

    위 조건으로 얻어진 시험용액 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치 여부를 확인한다. 시험용액의 특성이온이 아래 표와 같이 확인되어야 하고 표준용액과 시험용액 이온간 반응세기의 비(m/z 327 이온에 대한 각 이온의 백분율, response ratio)를 비교하여 그 비가 ± 10% 이내에서 일치하여야 한다. 

┌────┬──────┐

│물  질  │이  온      │

├────┼──────┤

│멜 라 민│342   (M)   │

│        │343   (M+1) │

│        │344   (M+2) │

│        │327   (M-15)│

└────┴──────┘

21.15. 요오드가

     요오드가라 함은 일정한 측정법으로 측정한 지질 100 g에 흡수되는 할로겐의 양을 요오드의 g수로 나타낸 것이다.

 가. 하누스법

  1) 시액 및 시약

   가) 브롬요오드시액：요오드 13.2 g을 초산 1,000 mL에 가온하여 녹이고 이것을 25℃로 식힌 다음 20.0 mL를 취하여 0.1 N 티오황산나트륨액으로 적정한다. 요오드용액의 나머지에 그중에 함유되는 요오드의 양과 당량의 브롬(약 3 mL)을 가한다. 이 액은 차광한 마개달린병에 보존한다.

  2) 시험조작

    검체의 요오드가를 감안하여 다음 표에 따라 0.1～0.8 g을 작은 유리용기에 정밀히 달고 250 mL의 마개달린 삼각플라스크 중에 유리용기과 같이 넣는다. 클로로포름 10 mL를 가하여 녹이고 여기에 브롬요오드시액 25 mL를 정확히 가하고 밀전하여 잘 섞고 차광하여 30분간(요오드가가 100이상의 것은 1시간) 방치한다. 다음에 1 N 요오드화칼륨액 30 mL를 가하여 흔들어 섞고 다시 물 100 mL를 가하여 유리한 요오드를 0.1 N 티오황산나트륨액으로 적정한다(지시약 전분시액 1 mL). 따로 검체를 사용하지 않고 같은 방법으로 공시험을 한다.

요오드가：1.269×(b-a)×f/S

a：본시험에 있어서의 0.1 N 티오황산나트륨액의 소비량(mL)

b：공시험에 있어서의 0.1 N 티오황산나트륨액의 소비량(mL)

S：검체의 채취량(g)

f：0.1 N 티오황산나트륨액의 역가

 이 시험에서 만약 브롬요오드시액의 반량 이상이 소비되었을 때에는 검체를 감량하여 그 측정을 되풀이 한다.

┏━━━━┯━━━━━━━┓

┃요오드가│검체채취량(g) ┃

┠────┼───────┨

┃120이상 │0.1～0.2      ┃

┃60～120 │0.2～0.4      ┃

┃60이하  │0.4～0.8      ┃

┗━━━━┷━━━━━━━┛

 나. 위이스법 

  1) 시액 및 시약

   가) 일염화요오드시액 : 재승화시킨 요오드 13 g을 초산 1,000 mL에 녹이고 그 일부에 대하여 티오황산나트륨액으로 적정하여 놓고, 이에 씻은 건조염소를 통하여 다시 일부에 대하여 티오황산나트륨액으로 적정하여 그 양이 최초의 적정량의 2배가 되도록 한다. 요오드는 약간 과잉의 정도로 한다. 이 시액은 마개달린갈색유리병에 넣어 파라핀으로 봉하고 사용직전에 연다. 30일 이상 지난 시액은 사용하면 아니된다.

  2) 시험조작

    검체의 요오드를 감안하여 적당량의 검체를 250 mL의 마개달린 삼각플라스크에 취하고 사염화탄소 또는 클로로포름 15～20 mL를 가하고 일염화요오드시액 25 mL를 피펫으로 일정한 속도로 적가한다. 다음에 암소에 30분간(요오드가가 100이상의 것은 1시간) 방치한 다음 1 N 요오드화칼륨액 20 mL 및 물 100 mL를 가하여 흔들어 섞은 다음 유리한 요오드를 0.1 N 티오황산나트륨액으로 적정한다(지시약 전분시액1 mL). 같은 방법으로 공시험을 한다. 계산은 하누스법에 따라 한다.

21.16. 팽윤도

 가. 적용범위

    본 시험은 Bentonite의 수중에서의 팽윤능력을 실온에서 측정하는 방법이다.

 나. 분석방법 

  1) 메스실린더에 증류수를 100 mL 표선까지 채운다.

  2) 건조된 벤토나이트 분말 2g을 칭량하여 상온에서 2시간에 걸쳐 소량씩 메스실린더에 투입 한다 . 이 때 먼저 넣은 것이 일단 침착한 다음에 다음 것을 넣는다.

  3) 24시간 방치하고 벤토나이트 수화물의 팽창된 부피를 벤토나이트의 팽윤도로 한다(mL/2g). 24시간 방치할 때 그릇 바닥의 덩어리가 팽윤한 용적은 10ml의 눈금 이상이어야 한다.

 다. 데이터 분석 및 정리

  1) 팽윤도(ml/2g)= 메스실린더 바닥에서 시료가 팽윤한 부피 값.

21.17. 브릭스(Brix)

 가. 기구

    아베 굴절계 : Abbe Reflectometer, 온도계

 나. 분석방법

  1) 추출

    시료 5 g 을 100 ml 비이커에 칭량하고, 당밀과 동량의 증류수를 비이커에 넣고 잘 혼합한다.

  2) 측정

   가) 당굴절계의 grinding glass, prism상의 수분을 잘 닦아낸다. 또 굴절계의 보정은 증류수를 검액으로 하여 눈금상의 명암의 경계선이 영점에 오도록 영점조정 나사를 움직여 바르게 보정한다.

   나) Grinding glass 위에 시료 1-2방울을 취하여 프리즘위에 합친다.

   다) 광선이 채광공으로 들어오게 기우려 주고 접안경으로 관측하면 눈금위에는 명암의 경계선이 나타난다.

   라) 접안경을 움직여 초점을 맞추고 경계선상의 눈금의 숫자를 읽  는다. 온도보정은 온도 보정표에 따라 한다.

 다. 분석결과 처리 : 눈금을 읽은 수치에 희석배수를 곱한다

21.18. 비테인염산염(베타인염산염)

 가. 시험용액의 조제

    시료를 예상함량에 따라 (0.1g～1g) 적당량을 칭량하여 100mL 정량플라스크(Vol. flask)에 취하고 80mL 정도의 물을 가한다. 완전히 용해하면서 30분간 초음파(Sonication in ultra sonic bath) 처리하고 물로 정용한다. 0.45μm 필터로 여과한 액을 액체크로마토그래피 시험용액으로 사용한다.

 나. 표준용액의 조제 

    Betaine-HCl(분자량 153.61) 또는 Betaine(분자량 117.15)을 일정량 칭량하여 100mL 정량플라스크(Vol. flask)에 취하고 용해하여 사용한다.

 다. 시약

  1) Water : LC grade 

  2) 질산칼슘[Ca(NO3)2·4H2O]

  3) Betaine-HCl (mw 153.61)

  4) Betaine (mw 117.15)

 라. 분석방법

  1) 분쇄된 시료를 예상함량에 따라 (0.1g ~ 1g) 적당량을 칭량하여 100mL Vol. flask에 취하고 80mL 정도의 물을 가한다.

  2) 완전히 용해하면서 30분 sonication하고 물로 정용한다.

  3) syrindge filter (0.45um)로 여과하여 LC시험용액으로 사용한다.

 마. 액체크로마토그래프 분석조건

  1) 친수성상호작용계

   가) 칼럼 : HILIC 칼럼 또는 이와 동등한 것

   나) 이동상 : acetonitrile + 30mM ammonium acetate (8:2, 사용 시 제조)

   다) 검출기 : 증기화 광산란 검출기(ELSD) 또는 시차굴절계(RID)

   라) 칼럼온도 : 실온

   마) 유속 : 0.8 mL/min

  2) 배제형 이온교환계

   가) 칼럼 : Sugar-pak 칼럼 또는 이와 동등한 것

   나) 이동상 : 0.004M Ca(NO3)2-4H2O (사용 시 제조)

   다) 검출기 : 증기화 광산란 검출기(ELSD) 또는 시차굴절계(RID)

   라) 칼럼온도 : 80 ℃

   마) 유속 : 0.6 mL/min

 바. 계산

  1) Betaine 또는 Betaine-HCl (mg/kg) = (시료용액의 피크면적/표준용액의 피크면적) × 표준용액의 농도(mg/mL) × 총 희석량(mL) × 희석배수 / 시료무게 (g)

  2) Betaine HCl 함량= Betaine 함량 × 153.61 / 117.15

21.19. 불용성불순물

 가. 분석개요

  1) 반추위 사료에 사용되는 동물성유지의 불순물을 측정하는 방법으로 시료에 석유에테르를 첨가하여 유지를 녹인 후 유리여과기(G3)로 여과하고 유리여과기에 잔류하는 물질을 불순물로 하며 불순물은 유지가 아닌 단백질과 그 외 뼈 등이 될 수 있다. 반추위 사료에 사용하는 유지는 불순물이 0.15% 이내로 규정하고 있다. 

  2) 축우용(생후 3개월령 이내의 소)대용유용 배합사료는 동물성 유지(식용의 고기에서 채취한 지방만을 원료로 한 것)의 불용성 불순물의 함량은 0.02%이하여야 한다. 

 나. 적용범위

   식물성유지, 동물성유지, 혼합성유지

 다. 분석원리

   석유에테르를 이용하여 유지류를 용해하여 여과한 후 유지를 생산할때 함유된 단백질 조직, 섬유질, 녹 등의 기타 잡물의 함량을 백분율로 환산한 방법

 라. 분석기기 및 시약

  1) 분석기기 및 초자 : 250 mL 비이커, 유리여과기(G3), 열풍건조기, 삼각플라스크 500 mL 이상

  2) 시약 : Petroleum ether(석유에테르, 특급)

 마. 분석방법

  1) 시료 전처리

   가) 시료 약 20g을 250 mL 비이커에 정확히 칭량한 후 석유에테르 200 mL을 가해 완전히 용해시킨다. 이때 분말 또는 과립으로 된 시료는 항온수조에서 충분히 용해시킨 후 시료로 사용한다. 

   나) 건조기를 이용하여 105℃ 1시간 건조하여 중량을 측정한 유리여과기(G3)로 용해된 시료를 여과하고 여과기 위의 잔류물을 특급 석유에테르 200 mL로 충분히 세정한다. 

   다) 잔류물이 들어 있는 유리여과기를 105±1℃에서 1시간 건조하고, 데시케이터에서 30분간 방냉한 후 중량을 측정한다.  

 바. 계산식

불용성불순물(%) = [여과 후 유리여과기 중량(g) - 여과 전 유리여과기 중량(g)/시료채취량(g)]×100

21.20. 총당(Total sugar)

 가. 레인-에이논(Lane-Eynon) 법

   :  당밀 중의 총당 측정에 적용한다

  1) 기구 

    뷰렛, 삼각플라스크, 가열교반기, 여과지

  2) 시약의 조제

   가) 페링A시액 : CuSO4·5H2O(MW. 249.69) 34.63g을 증류수 500ml에 녹인 다음 여과한다.

   나) 페링B시액 : 173g Potassium sodium tartrate·4H2O(Rochell염, C4H4KNaO6?  4H2O=282.22)과 50g NaOH를 증류수 500ml에 녹임. 2일간 방치 후 여과 한다.

    (1) 페링시약 A,B 혼합용액의 역가 적정

       페링시액 A, B를 5ml 씩 취하여 200ml의 삼각플라스크에 넣고 증류수 40ml와 표준 전화당용액을 적정량(황산동의 색이 퇴색)을 가하여 2분간 끓인 후, 메틸렌블루 지시약을 가하고 표준 전화당용액(본 액 10ml는 전화당 0.05g을 함유)을 적하한다. 1% 메틸렌 블루시액을 지시약으로 청색이 사라지고 적색이 나타날 때를 종말점으로 한다. 이 때 표준전화당 용액 소비량이 10ml 일 때 역가가 1.0이다.

 표준 전화당용액의 역가 = 소비 ml / 10

   다) 표준전화당 용액 : sucrose 4.75g을 증류수 75ml에 용해하여 염산 10ml를 가하여 20℃이하에서 24시간 방치한 후(25∼27℃ 12시간 방치) 염산을 묽은 수산화나트륨(10%)으로 정확히 중화하고 증류수를 가하여 전량을 1,000ml로 한다.

   라) 2.5% HCl 용액 : 염산(37%) 6.76ml에 증류수 가해 100ml 희석한다.

   마) 10% NaOH 용액

   바) 포화초산납 용액 : Pb(CH3COO)·3H2O의 포화수용액

   사) 1% 메틸렌블루지시약

  3) 시료 전처리

   가) 시료를 1∼2g정도를 정확히 칭량하여 2.5% HCl 100ml를 넣고 37℃ 수욕조에서 24시간 분해(전화)시킨 후 여과한다.

   나) 여액을 10% NaOH로 중화(pH 8∼9) 후 여과한 다음 다시 2ml의 포화초산납 첨가 후 20분후 여과한다.(여과기에 NO.5A를 깔고 흡입여과)

   다) 여액에 NaOH 0.7g을 가한 후 10-15분간 교반 후 증류수로 250ml로 맞춘 것을 시액으로 사용한다.

   라) 페링시액 A, B를 5ml씩 취하여 300ml 삼각플라스크에 넣고 증류수 40ml를 첨가한 후 시액 다) 15ml를 넣는다.

   마) 가열기에 올려놓은 후 3분 이내에 끓도록 한다. 끓고 난 후 메틸렌블루 지시약 3-4방울을 넣고 청색이 없어질 때까지 시액(sample solution)으로 적정한다.

   ※ 주의 : 공기의 역투입으로 인해 반응된 펠링 시약이 다시 환원될 우려가 있으므로 적정 중 계속 끓여 수증기의 발생이 이루어져야 한다.

  4) 계산식

총당(%) = A × 250 × f / [1,000×시료량(g)]

  A : 시액 소비ml에 대한 레인-에이논 정량값    

f : 펠링용액의 factor

  ※ 레인-에이논  정량표

┌─────┬────────┬─────┬────────┬─────┬────────┐

│검액의    │검액 100ml중의  │검액의    │검액 100ml중의  │검액의    │검액 100ml중의  │

│소요량(ml)│전화당량(mg)    │소요량(ml)│전화당량(mg)    │소요량(ml)│전화당량(mg)    │

┝━━━━━┿━━━━━━━━┿━━━━━┿━━━━━━━━┿━━━━━┿━━━━━━━━┥

│16.0      │316.6           │19.4      │262.0           │22.8      │224.1           │

│16.1      │314.7           │19.5      │260.7           │22.9      │223.2           │

│16.2      │312.7           │19.6      │259.5           │23.0      │222.2           │

│16.3      │310.8           │19.7      │258.2           │23.1      │221.3           │

│16.4      │308.9           │19.8      │257.0           │23.2      │220.4           │

│16.5      │307.0           │19.9      │255.7           │23.3      │219.5           │

│16.6      │305.2           │20.0      │254.5           │23.4      │218.6           │

│16.7      │303.4           │20.1      │253.3           │23.5      │217.8           │

│16.8      │301.5           │20.2      │252.2           │23.6      │216.9           │

│16.9      │299.8           │20.3      │251.0           │23.7      │216.0           │

│17.0      │298.0           │20.4      │249.9           │23.8      │215.1           │

│17.1      │296.4           │20.5      │248.7           │23.9      │214.2           │

│17.2      │294.8           │20.6      │247.5           │24.0      │213.3           │

│17.3      │293.2           │20.7      │246.5           │24.1      │212.4           │

│17.4      │291.6           │20.8      │245.2           │24.2      │211.6           │

│17.5      │290.0           │20.9      │244.1           │24.3      │210.7           │

│17.6      │288.4           │21.0      │242.9           │24.4      │209.9           │

│17.7      │286.8           │21.1      │241.8           │24.5      │209.0           │

│17.8      │285.2           │21.2      │240.7           │24.6      │208.2           │

│17.9      │283.6           │21.3      │239.6           │24.7      │207.3           │

│18.0      │282.0           │21.4      │238.5           │24.8      │206.4           │

│18.1      │280.5           │21.5      │237.4           │24.9      │205.6           │

│18.2      │279.0           │21.6      │236.2           │25.0      │204.8           │

│18.3      │277.5           │21.7      │235.1           │26.0      │197.4           │

│18.4      │286.0           │21.8      │234.0           │27.0      │190.4           │

│18.5      │274.5           │21.9      │232.9           │28.0      │183.7           │

│18.6      │273.0           │22.0      │231.8           │29.0      │177.6           │

│18.7      │271.5           │22.1      │230.8           │30.0      │171.0           │

│18.8      │270.0           │22.2      │229.9           │31.0      │166.3           │

│18.9      │268.5           │22.3      │228.9           │32.0      │161.2           │

│19.0      │267.0           │22.4      │228.0           │33.0      │156.0           │

│19.1      │265.7           │22.5      │227.0           │34.0      │152.2           │

│19.2      │264.5           │22.6      │226.0           │35.0      │147.0           │

│19.3      │263.2           │22.7      │225.1           │          │                │

└─────┴────────┴─────┴────────┴─────┴────────┘

21.21. KOH용해도

 가. 원리

   열처리된 대두박에서 0.2% KOH 용액에 녹는 단백질을 측정하여 원래의 단백질 값에 대한 백분율을 구한다. 이는 단백질의 질을 평가하는 방법으로 적당한 열처리는 소화율을 향상시키지만 지나친 열처리는 필수아미노산을 파괴하여 단백질의 용해도를 저해시킨다.

 나. 기구

  1) 비이커, 메스실린더

  2) 교반기

  3) 단백질 분석장치

 다. 시약

  1) 0.2% 수산화칼륨용액 : 85% 수산화칼륨 2.353g을 증류수에 녹여 1 L로 한다.(이때 용액의 농도는 0.036N이고 이 용액 50 mL는 0.2N 황산 9 mL에 해당된다) 

  2) 조단백질 정량 시 필요한 시약

 라. 분석방법

  1) 시료준비

   가) 0.5mm의 screen으로 분쇄한 대두박 시료를 준비한다.

   나) 2개로 나눈 후 하나는 총단백질 분석에 사용하고, 나머지는 수산화칼륨 처리를 한다.

  2) 수산화칼륨처리

   가) 시료 1.5g에 0.2%의 KOH용액(평균 0.036N, pH 12.5)을 75ml 넣어준다.

   나) 교반기를 이용하여 20분간 균질화 시킨 후 2,700 rpm에서 15분간 원심 분리한다.

   다) 상등액을 여과하여 15 mL를 취해 단백질 정량하는 방법과 동일하게 분석을 한다. 

 마. 계산

  KOH용해도(%) =  KOH에 용해된 단백질(%)×희석배수   × 100   

                ──────────────────          

                  총단백질(%)                                 

21.22. 이물 시험법

 가. 체 분별법

  1) 시험법 적용범위 : 알곡사료, 펠렛 성형 사료 등

  2) 분석원리 

    사료를 체로 쳐서 제품의 일정 크기보다 월등히 작은 이물을 포집하여 

    육안으로 검사한다.

  3) 시험조작 

    필요에 따라 이물의 종류를 확인하고자 할 때는 현미경으로 약 40배 정도의 저배율로 본다. 이하 이물시험에 있어서는 모두 이와 같다.

 나. 여과법

  1) 당밀 등

   가) 시험법 적용범위 : 당밀, 설탕 등

   나) 분석원리 

      검체가 액체일 때 또는 용액으로 할 수 있을 때 그 용액을 신속여과로 여과하여 여과지상의 이물을 검사한다.

   다) 시험조작

      검체 50 g을 취하여 물 200 mL에 녹여 그 용액을 신속여과로 여과하여 여과지상의 이물을 검사한다. 따로 열탕을 준비하여 여과지에 응고되어 잘 여과되지 아니할 때, 이 열탕으로 완전히 녹여 여과한 후 여과지에 부착된 이물을 검사한다.

  2) 유지 등

   가) 시험법 적용범위 : 동물성유지, 식물성 유지 등

   나) 분석원리 

      검체가 액체일 때 또는 용액으로 할 수 있을 때 그 용액을 신속여과로 여과하여 여과지상의 이물을 검사한다.

   다) 시험조작

      검체 100 g을 1 L의 비커에 넣고 2% 염산용액 200 mL를 가하여 섞은 후 가열하여 검체가 완전히 녹으면 여과지로 여과한다. 따로 열탕을 준비하여 여과지에 지방이 응고되어 잘 여과되지 아니할 때, 이 열탕으로 완전히 녹여 여과한 후 여과지에 부착된 이물을 검사한다.

   3) 대용유 등

   가) 시험법 적용범위 : 대용유 등 분말형

   나) 분석원리 

      검체가 액체일 때 또는 용액으로 할 수 있을 때 그 용액을 신속여과로 여과하여 여과지상의 이물을 검사한다.

   다) 시험조작

      검체 100 g을 1 L의 비커에 넣고 2% EDTA(ethylene diamine tetraacetic acid)용액 100 mL를 가하여 잘 섞어서 덩어리가 없도록 한 후 저으면서 2% EDTA(ethylene diamine tetraacetic acid)용액 400 mL를 천천히 가한다.저어 섞는 동안에 차차 황색의 반투명한 액체가 되며 약 30분 방치하면 완전히 녹는다. 이를 부흐너깔때기 또는 힐슈깔때기로 흡인 여과하여 여과지상의 이물을 검사한다.

 다. 와일드만 플라스크법

  1) 시험법 적용범위

    곤충 및 동물의 털과 같이 물에 잘 젖지 아니하는 가벼운 이물검출에 적용한다.

  2) 분석방법 사료의 용액에 소량의 휘발유나 피마자유 등 물과 섞이지 않는 포집액을 넣고 세게 교반한 후 방치해 놓으면 물에 잘 젖지 않는 가벼운 이물이 유기용매층에 떠오르는 성질을 이용하여 이물을 분리, 포집 후 검사한다.

  3) 시험조작

   가) 와일드만플라스크(Wildeman flask) 중에 검체를 물 및 기타 지정액(1 L의 플라스크에서는 600 mL, 2 L에서는 900 mL)과 섞어 다시 휘발유(무색 투명하고 납을 함유하지 아니하는 것), 피마자유 등 물과 섞이지 않는 포집액을 넣어 플라스크를 약 45℃기울여 교반봉으로 1분에 약 200～250회 저어 섞는다(이 때 공기의 기포가 들어가지 않도록 주의한다).

   나) 그 후 20분간은 수분마다 저어 섞고 약 30분간 방치한 다음 두 액층의 경계가 그림에서와 같은 위치에 올 때까지 물 또는 지정액을 조용히 부어 넣고 고무마개로 플라스크의 기벽을 긁어 부착해 있는 기름방울을 부상시켜 더욱 손잡이를 급속도로 회전시켜 고무마개에 부착된 검체와 기름을 털어내고 마개를 끌어 올려 플라스크의 목에 밀착시키고 이물을 포함한 기름층을 소량의 하층액과 함께 비커에 기울여 취하고 알코올 및 물로 막대기, 고무마개 및 플라스크 내벽을 씻어 그 씻은 액을 비커에 합쳐 그 액을 흡인 여과하여 여과지상에 이물이 있는가를 검사한다.

   다) 현미경으로 검사하고자 할 때는 글리세린?알코올혼액(1：1) 약 5 mL를 담은 페트리접시에 여과지를 옮겨 잘 적신 후 검사한다. 다시 와일드만플라스크(Wildeman flask)에 포집액 10～20 mL를 넣어 잘 저어 섞고 때때로 하층액을 저으면서 약 10～20분간 방치한 다음 먼저와 같이 조작하여 이물을 검사한다. 

   라) 기울여 따라 포집한 액이 다량의 식품조직을 함유할 때 또는 여과지에 식물조직이 다량 협잡되어 현미경 검사가 어려울 때는 다시 새로운 와일드만플라스크(Wildeman flask)에 옮겨 물로 잘 혼합시켜 먼저와 같이 포집하고 식물조직을 하층액에 옮겨 포집액을 여별한다. 다만, 이 조작은 이물의 손실을 초래할 염려가 있으므로 처음의 포집조작에서 가급적 검체가 떠오르지 않게 하는 것이 중요하다. 하층액으로서 포화식염수 또는 수성알코올을 사용하면 식물 조직의 떠오름을 어느 정도 방지할 수 있다.

 라. 침강법

  1) 시험법 적용범위

    쥐똥, 토사 등의 비교적 무거운 이물의 검사에 적용한다.

  2) 분석원리

    검체에 비중이 큰 액체를 가하여 교반한 후 그 액체보다 비중이 큰 것은 바닥에 가라앉고 이보다 비중이 작은 식품의 조직 등은 위에 떠오르므로, 상층액을 버린 후 바닥의 이물을 검사한다.

  3) 시험조작 

   가) 검체에 클로로포름(또는 사염화탄소, 에테르 또는 메탄올 등을 가하여 그 비중을 1.49로 한 것)을 가하여 저어 섞으면 이물은 용기의 밑에 가라앉는다.

   나) 바닥의 이물이 떠오르지 않게 조심하여 상층액을 기울여 버리고 바닥에는 클로로포름 소량과 이물만 남게 하고 이를 흡인 여과하여 여과지상에 이물이 있는가를 검사한다. 현미경검사를 하고자 할 때는 글리세린?알코올 혼액(1：1)을 넣은 페트리접시에 여과지를 옮겨 잘 적신 후 검사한다.

 마. 금속성 이물(쇳가루)

  1) 시험법 적용범위

    분말, 펠렛, 액상 등 

   ＊ 분쇄공정을 거친 원료를 사용하거나 분쇄공정을 거친 제품에 한한다. 단, 제조공정 과정에서 혼입된 경우가 아닌 사료에 천연적으로 함유된 자연유래광물질은 제외한다.

  2) 기구

    건조기, 회화로, 봉자석(10,000가우스 자력), 비닐봉지, 전자저울, 비이커, 표준망체(1.4×1.4mm), 여과지, 유리막대  

  3) 방법 

   가) 사료 1kg을 무게를 재어 취한다.(W)

   나) 사료를 넓게 펼친 다음 비닐을 씌운 봉자석(10,000가우스 자력)으로 10분간 저어 준다.

   다) 봉자석에 달라붙은 물질을 증류수로 씻어 비이커에 모은다.

   라) 비이커에 모은 물질이 알갱이가 없도록 유리막대로 잘 풀어준다.

   마) 30분 이상 정치 후 여과하여 불용성물질을 600℃ 회화로에서 2시간 회화 한다.

   바) 회화한 시료를 물에 용해시킨 후 미리 무게를 재어 놓은 여과지(F1)로 여과한다.

   사) 여과지를 135℃ 건조기에서 2시간 건조 후 무게를 잰다.(F2)

   아) 실험이 끝난 쇳가루를 자력제거장치로 자력을 제거한 후 표준망체(1.4×1.4mm)로 걸러 통과하지 않고 남아 있는 쇳가루의 크기를 측정한다.

  4) 계산

쇳가루 = (F2-F1)/W × 100

   ＊ 필요에 따라 반복 실험을 한다.

22장. 동시다성분

22.1. 잔류농약, 동물용의약품, 곰팡이독소 동시 다성분 분석법

Ⅰ. 잔류농약, 동물용의약품, 곰팡이독소 동시 다성분 분석법-제1그룹

  가. 적용범위

    본 분석법은 단미사료(곡류, 콩류, 섬유질류 등) 및 배합사료에 적용한다.

  나. 분석대상 성분

    ○ 기체크로마토그래프 분석대상

      ┌───────────────┬─┬─────────────┬─┬────────────┐

│잔류농약                      │15│Cyprodinil                │30│Indoxacarb              │

├─┬─────────────┼─┼─────────────┼─┼────────────┤

│1 │Alachlor                  │16│DDT(4 isomer)             │31│Isofenphos              │

├─┼─────────────┼─┼─────────────┼─┼────────────┤

│2 │Aldrin, Dieldrin          │17│Deltamethrin(tralomethrin)│32│Lindane(gamma-BHC)      │

├─┼─────────────┼─┼─────────────┼─┼────────────┤

│3 │Atrazine                  │18│Difenoconazole(2 isomer)  │33│Methidathion            │

├─┼─────────────┼─┼─────────────┼─┼────────────┤

│4 │BHC(alpha,beta,delta)     │19│Dimethoate                │34│Parathion               │

├─┼─────────────┼─┼─────────────┼─┼────────────┤

│5 │Bifenthrin                │20│Disulfoton                │35│Pendimethalin           │

├─┼─────────────┼─┼─────────────┼─┼────────────┤

│6 │Chlorantraniliprole       │21│Endrin                    │36│Permethrin(2 isomer)    │

├─┼─────────────┼─┼─────────────┼─┼────────────┤

│7 │Chlorfenapyr              │22│EPN                       │37│Phorate                 │

├─┼─────────────┼─┼─────────────┼─┼────────────┤

│8 │Chlorfenvinphos(2 isomer) │23│Ethion                    │38│Piperonyl butoxide      │

├─┼─────────────┼─┼─────────────┼─┼────────────┤

│9 │Chlorobenzilate           │24│Fenitrothion              │39│Prochloraz              │

├─┼─────────────┼─┼─────────────┼─┼────────────┤

│10│Chlorpropham              │25│Fenpropathrin             │40│Propiconazole(2 isomer) │

├─┼─────────────┼─┼─────────────┼─┼────────────┤

│11│Chlorpyrifos-methyl       │26│Fenthion                  │41│Quintozene              │

├─┼─────────────┼─┼─────────────┼─┼────────────┤

│12│Cyfluthrin(4 isomers)     │27│Fenvalerate(2 isomer)     │42│Simazine                │

├─┼─────────────┼─┼─────────────┼─┼────────────┤

│13│Cyhalothrin               │28│Fipronil                  │43│Terbufos                │

├─┼─────────────┼─┼─────────────┼─┼────────────┤

│14│Cypermethrin(4 isomers)   │29│Heptachlor(2 isomer)      │44│Triadimenol             │

└─┴─────────────┴─┴─────────────┴─┴────────────┘

┌────────────┬──┬─────────┬──┬───────────┐

│잔류농약                │54  │Thiabendazole     │107 │Praziquantel          │

├─┬──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│1 │Abamectin B1        │55  │Thiacloprid       │108 │Pyrimethamine         │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│2 │Acephate            │56  │Triadimefon       │109 │Ractopamine           │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│3 │Aldicarb            │57  │Tricyclazole      │110 │Rifaximin             │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│4 │Azinphos-methyl     │58  │Trifloxystrobin   │111 │Ronidazole            │

├─┼──────────┼──┴─────────┼──┼───────────┤

│5 │Azoxystrobin        │동물용의약품            │112 │Roxithromycin         │

├─┼──────────┼──┬─────────┼──┼───────────┤

│6 │Boscalid            │59  │Acetanilide       │113 │Salinomycin           │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│7 │Carbaryl            │60  │Albendazole       │114 │Scopolamine           │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│8 │Carbendazim         │61  │Altrenogest       │115 │Spiramycin            │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│9 │Carbofuran          │62  │Antipyrine        │116 │Sulfabenzamide        │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│10│Chlorpyrifos        │63  │Berberine         │117 │Sulfacetamide         │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│11│Clethodim           │64  │Chloramphenicol   │118 │Sulfachlorpyridazine  │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│12│Clothianidin        │65  │Clenbuterol       │119 │Sulfaclozine          │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│13│Cyanazine           │66  │Clindamycin       │120 │Sulfadiazine          │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│14│Cycloxydime         │67  │Clopidol          │121 │Sulfadimethoxine      │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│15│Cyproconazole(l, ll)│68  │Closantel         │122 │Sulfadoxine           │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│16│Diazinon            │69  │Cyproheptadine    │123 │Sulfaethoxypyridazine │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│17│Dichlorvos(DDVP)    │70  │Dapsone           │124 │Sulfaguanidine        │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│18│Diflubenzuron       │71  │Decoquinate       │125 │Sulfamerazine         │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│19│Dimethenamid        │72  │Diclazuril        │126 │Sulfameter            │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│20│Edifenphos          │73  │Dicloxacillin     │127 │Sulfamethazine        │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│21│Etoxazole           │74  │Difloxacin        │128 │Sulfamethoxazole      │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│22│Fenarimol           │75  │Dimetridazole     │129 │Sulfamethoxypyridazine│

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│23│Fenbuconazole       │76  │Diphenhydramine   │130 │Sulfamonomethoxine    │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│24│Fenobucarb          │77  │DL-methylephedrine│131 │Sulfamoxole           │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│25│Flubendiamide       │78  │Emamectin         │132 │Sulfaphenazole        │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│26│Fludioxonil         │79  │Erythromycin      │133 │Sulfapyridine         │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│27│Flufenoxuron        │80  │Febantel          │134 │Sulfaquinoxaline      │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│28│Fluopicolide        │81  │Fenbendazole      │135 │Sulfasomidine         │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│29│Flusilazole         │82  │Florfenicol       │136 │Sulfathiazole         │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│30│Flutriafol          │83  │Fluazuron         │137 │Tetramisole           │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│31│Fluxapyroxad        │84  │Ivermectin        │138 │Thiamphenicol         │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│32│Haloxyfop           │85  │Josamycin         │139 │Tiamulin              │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│33│Imazalil            │86  │Kitasamycin       │140 │Tildipirosin          │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│34│Imidacloprid        │87  │Lasalocid         │141 │Tilmicosin            │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│35│Isoprocarb          │88  │Levamisole        │142 │Tinidazole            │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│36│Kresoxim-methyl     │89  │Loperamide        │143 │Toltrazuril           │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│37│Malathion           │90  │Maduramycin       │144 │Triclabendazole       │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│38│Methiocarb          │91  │Malachiate green  │145 │Trimethoprim          │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│39│Methomyl            │92  │Mebendazole       │146 │Tripelennamine        │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│40│Methoprene          │93  │Metoclopramide    │147 │Tylosin               │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│41│Methoxyfenozide     │94  │Metronidazole     │148 │Valnemulin            │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│42│Myclobutanil        │95  │Monensin          │149 │Virginiamycin         │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│43│Oxydemeton-methyl   │96  │Naloxone          │150 │Yohimbine             │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┴───────────┤

│44│Phenthoate          │97  │Nandrolone        │곰팡이독소                  │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┬───────────┤

│45│Pirimicarb          │98  │Narasin           │151 │Aflatoxin(B1,B2,G1,G2)│

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│46│Pirimiphos-methyl   │99  │Nicarbazine       │152 │Ochratoxin A          │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│47│Pyraclostrobin      │100 │Nitrovin          │153 │Deoxynivalenol        │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│48│Pyridaben           │101 │Novobiocin        │154 │Fumonisn(B1,B2)       │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│49│Pyrimethanil        │102 │Oleandomycin      │155 │T-2 toxin             │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│50│Spirotetramat       │103 │Ormetoprim        │156 │HT-2 toxin            │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│51│Sulfoxaflor         │104 │Oxacillin         │157 │Zeralenone            │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│52│Tebuconazole        │105 │Oxfendazole       │    │                      │

├─┼──────────┼──┼─────────┼──┼───────────┤

│53│Tetraconazole       │106 │Phenacetin        │    │                      │

└─┴──────────┴──┴─────────┴──┴───────────┘

      ○ 액체크로마토그래프 분석대상

  다. 분석원리

    균질화한 시료를 EDTA와 아세토니트릴로 추출하여 기체크로마토그래프(GC-MS/MS) 및 액체크로마토그래프(LC-MS/MS)로 분석한다. 시료 매질의 영향을  최소화하기 위하여 매질보정 검량법(matrix matched calibration) 또는 표준물질첨가법 (standard addition method)을 활용하여 분석한다.

  라. 장치

    기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS/MS) 및 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)를 사용한다.

  마. 시약

    1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

    2) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

    3) 표준원액: 각 농약의 표준품을 유기용매에 녹여 표준원액으로 사용한다.

    4) 혼합표준용액: 표준원액을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석하여 사용한다.

    5) 보호제 원액: 솔비톨 500 mg을 아세토니트릴/물 혼합액(5:5, v/v) 10 mL로 녹인다. D-(+)-gluconic acid-δ-lactone 500 mg을 아세토니트릴:물 혼합액(6 : 4, v/v) 10 mL로 녹인다. 시킴산 500 mg을 아세토니트릴:물 혼합액(6:4, v/v) 10 mL로 녹인다. 3-ethoxy-1,2-propanediol은 녹이지 않은 채로 사용한다.

     ※ 주의: 물에 먼저 녹인 후 유기용매로 희석한다.

    6) 보호제 혼합용액: 3-ethoxy-1,2-propanediol 0.2 g을 칭량하여 10 mL 부피플라스크에 담는다. D-(+)-gluconic acid-δ-lactone 원액 2 mL, 솔비톨 원액 1 mL, 시킴산(shikimic acid) 원액 1 mL을 부피플라스크에 첨가한다. 아세토니트릴 : 물 혼합액(7:3, v/v)으로 부피플라스크를 10 mL 정용 후 4℃에서 보관한다. 사용 전에 위 보관 용액 : 5% 포름산을 함유한 아세토니트릴(3:1, v/v)로 미리 혼합하여 표준용액과 시료액에  첨가한다.

    7) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

  바. 시험용액의 조제(추출 및 정제)

    1) 5 g의 균질화된 시료를 50 mL 용량의 원심분리관에 칭량 하고 0.2 M Ethlenediamine ?tetraaceticacid (EDTA) 15 mL를 넣고 혼합한 후 1시간 동안 방치한다.

    2) 아세토니트릴 10 mL을 넣은 뒤 교반기를 사용하여 1분동안 강하게 진탕한다.

    3) QuEChERS(MgSO4 4 g, NaCl 1 g, Na3C6H5O7 1 g, Na2C6H6O7 0.5 g) 시약을 첨가하여 진탕 후 3,000 G로 5분간 원심분리한 후 아세토니트릴층을 아래 5) 시료액의 LC-MS/MS 시료추출액으로 사용한다.

    4) GC-MS/MS의 경우 상등액 1 mL을 PSA 25 mg, MgSO4 150 mg가 미리 담겨져 있는 2mL 원심분리관에 넣고 1분간 진탕 후 10,000 G에서 2분간 원심분리한 다음 멤브레인 필터(0.2 μm)로 여과하여 아래 5) 시료액의 시료추출액으로 사용한다.

    5) 정량 분석용 매질보정 검량법(matrix matched calibration)에 따른 농도별 표준물질과 시료액은 아래의 예를 참고하여 만든다.

       ※ 무처리 시료추출액: 시료구와 동일한 품목이면서 잔류농약, 동물용의약품, 곰팡이독소 성분이 검출되지 아니한 시료를 ‘바.’ 에 따라 추출 및 정제한다

     ○ GC-MS/MS용 매질보정 검량(matrix matched calibration) 용액의 조제   

    ┌──┬────────────────────────────────────────────────┬──────┐

│구분│검량선 작성용 표준물질                                                                          │시료액      │

│    ├──────┬──────┬──────┬──────┬──────┬──────┬──────┤            │

│    │1           │2           │3           │4           │5           │6           │7           │            │

├──┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┤            │

│목적│1 μg/L     │5 μg/L     │10 μg/L    │25 μg/L    │50 μg/L    │100 μg/L   │200 μg/L   │            │

│농도│            │            │            │            │            │            │            │            │

├──┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┤

│조제│AP 혼합액   │AP 혼합액   │AP 혼합액   │AP 혼합액   │AP 혼합액   │AP 혼합액   │AP 혼합액   │AP 40 μL   │

│방법│40 μL      │40 μL      │40 μL      │40 μL      │40 μL      │40 μL      │40 μL      │            │

│    ├──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┤

│    │아세토니트릴│아세토니트릴│아세토니트릴│아세토니트릴│아세토니트릴│아세토니트릴│아세토니트릴│아세토니트릴│

│    │100 μL     │100 μL     │100 μL     │100 μL     │100 μL     │100 μL     │100 μL     │150 μL     │

│    ├──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┤            │

│    │STD         │STD         │STD         │STD         │STD         │STD         │STD         │            │

│    │20 μg/L    │100 μg/L   │200 μg/L   │500 μg/L   │1000 μg/L  │2000 μg/L  │4000 μg/L  │            │

│    │50 μL      │50 μL      │50 μL      │50 μL      │50 μL      │50 μL      │50 μL      │            │

│    ├──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┤

│    │무처리      │무처리      │무처리      │무처리      │무처리      │무처리      │무처리      │시료        │

│    │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  │추출액      │

│    │810 μL     │810 μL     │810 μL     │810 μL     │810 μL     │810 μL     │810 μL     │810 μL     │

└──┴──────┴──────┴──────┴──────┴──────┴──────┴──────┴──────┘

       ※ AP : 마. 의 6) 보호제 혼합용액

     ○ LC-MS/MS용 매질보정 검량(matrix matched calibration) 용액의 조제

               ┌────┬─────────────────────────────────────────┬───────┐

│구분    │검량선 작성용 표준물질                                                            │시료액        │

│        ├──────┬──────┬──────┬──────┬──────┬──────┤              │

│        │수준 1      │수준 2      │수준 3      │수준 4      │수준 5      │수준 6      │              │

├────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┤              │

│목표농도│1 μg/L     │5 μg/L     │10 μg/L    │20 μg/L    │50 μg/L    │100 μg/L   │              │

├────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼───────┤

│조제방법│완충용액    │완충용액    │완충용액    │완충용액    │완충용액    │완충용액    │완충용액 600  │

│        │600 μL+    │600 μL+    │600 μL+    │600 μL+    │600 μL+    │600 μL+    │μL+          │

│        │아세토니트릴│아세토니트릴│아세토니트릴│아세토니트릴│아세토니트릴│아세토니트릴│아세토니트릴  │

│        │200 μL     │200 μL     │200 μL     │200 μL     │200 μL     │200 μL     │300 μL       │

│        ├──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┤              │

│        │STD         │STD         │STD         │STD         │STD         │STD         │              │

│        │10 μg/L    │50 μg/L    │100 μg/L   │200 μg/L   │500 μg/L   │1000 μg/L  │              │

│        │100 μL     │100 μL     │100 μL     │100 μL     │100 μL     │100 μL     │              │

│        ├──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼──────┼───────┤

│        │무처리      │무처리      │무처리      │무처리      │무처리      │무처리      │시료추출액    │

│        │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  │시료추출액  │100 μL       │

│        │100 μL     │100 μL     │100 μL     │100 μL     │100 μL     │100 μL     │              │

└────┴──────┴──────┴──────┴──────┴──────┴──────┴───────┘

     ※ 완충용액 : 포름산암모늄 100 mM을 함유한 물(포름산 용액을 이용하여 pH 4∼4.5로 맞춤)

  사. 시험조작

    1) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS/MS)의 분석 조건

      가) 컬럼: HP-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 ㎛) 또는 이와 동등한 것

      나) 주입부: Electron ionization(EI) 또는 이와 동등한 방식

      다) 이동상 가스(carrier gas) 및 유속: He, 2.25 mL/분

      라) 주입량: 1 μL

      마) 온도: 250℃

      바) 주입부: Splitless mode

      사) 오븐: 90℃에서 시료액을 주입하고 3분간 유지한 후 20℃/min 비율로 120℃까지 상승시키고 8℃/min 비율로 300℃까지 상승시켜 3분간 유지

      아) Ion source: 250℃

○ GC-MS/MS의 MRM(Multiple Reaction Monitoring)

┌─┬────────────┬────┬───┬────┬─────┬─────┬──────┐

│번│분석성분                │머무름  │분자량│관측질량│선구이온  │생성이온  │충돌        │

│호│(Compound)              │시간    │(MW)  │(Exact  │(Precursor│(Product  │에너지      │

│  │                        │(분)    │      │mass)   │ion, m/z) │ion, m/z) │(Collision  │

│  │                        │        │      │        │          │          │energy, eV) │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│1 │알라클로르              │15.4    │269.8 │269.1   │188       │131       │20          │

│  │(Alachlor)              │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │130       │40          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│2 │알드린                  │16.2    │364.9 │361.8   │263       │228       │35          │

│  │(Aldrin)                │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │192       │45          │

│  ├────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│  │디엘드린                │19.1    │380.9 │380.9   │263       │228       │25          │

│  │(Dieldrin)              │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │193       │35          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│3 │아트라진                │13.4    │215.7 │215.1   │215       │58        │10          │

│  │(Atrazine)              │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │173       │5           │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│4 │비에이치씨-알파         │12.8    │290.8 │287.8   │219       │183       │10          │

│  │(BHC-alpha)             │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │145       │20          │

│  ├────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│  │비에이치씨-베타         │13.5    │290.8 │287.8   │219       │183       │10          │

│  │(BHC-beta)              │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │145       │20          │

│  ├────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│  │비에이치씨-델타         │14.2    │290.8 │287.8   │219       │183       │10          │

│  │(BHC-delta)             │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │145       │20          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│5 │비펜트린                │21.6    │422.9 │422.1   │181       │166       │20          │

│  │(Bifenthrin)            │        │      │        ├─────┼─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │166       │164       │30          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│6 │클로란트라닐리프롤      │21.8    │483.2 │483.2   │278       │249       │20          │

│  │(Chlorantraniliprole)   │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │215       │30          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│7 │클로르페나피르          │19.2    │407.6 │405.9   │249       │112       │24          │

│  │(Chlorfenapyr)          │        │      │        ├─────┼─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │247       │227       │15          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│8 │클로르펜빈포스-시스     │17.1    │359.6 │359.6   │295       │267       │5           │

│  │(Chlorfenvinphos-cis)   │        │      │        ├─────┼─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │267       │159       │20          │

│  ├────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│  │클로르펜빈포스-트랜스   │17.4    │359.6 │359.6   │295       │267       │5           │

│  │(Chlorfenvinphos-trans) │        │      │        ├─────┼─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │267       │159       │20          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│9 │클로로벤질레이트        │19.4    │325.2 │324.0   │251       │139       │15          │

│  │(Chlorobenzilate)       │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │111       │35          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│10│클로르프로팜            │12.1    │213.7 │213.0   │213       │171       │10          │

│  │(Chlorpropham)          │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │127       │20          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│11│클로르피리포스-메틸     │15.2    │322.5 │320.8   │286       │271       │25          │

│  │(Chlorpyrifos-methyl)   │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │93        │25          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│12│사이플루트린            │24.5    │434.3 │433.0   │226       │206       │10          │

│  │(Cyfluthrin)            │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │199       │15          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│13│사이할로트린            │22.6    │449.9 │449.1   │208       │181       │5           │

│  │(Cyhalothrin)           │        │      │        ├─────┼─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │197       │141       │10          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│14│사이퍼메트린            │24.8    │416.3 │415.0   │165       │91        │10          │

│  │(Cypermethrin)          │        │      │        ├─────┼─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │163       │127       │6           │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│15│사이프로디닐            │17.0    │225.3 │225.1   │224       │208       │20          │

│  │(Cyprodinil)            │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │118       │40          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│16│o,p-디디티              │19.6    │354.5 │354.5   │235       │199       │25          │

│  │(o,p-DDT)               │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │165       │25          │

│  ├────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│  │p,p-디디디              │19.6    │320.0 │320.0   │235       │199       │35          │

│  │(p,p-DDD)               │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │165       │35          │

│  ├────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│  │p,p-디디이              │18.6    │318.0 │318.0   │246       │211       │30          │

│  │(p,p-DDE)               │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │176       │30          │

│  ├────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│  │p,p-디디티              │20.4    │354.5 │354.5   │235       │199       │25          │

│  │(p,p-DDT)               │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │165       │25          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│17│델타메트린              │26.8    │505.2 │502.9   │253       │172       │10          │

│  │(Deltamethrin)          │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │93        │20          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│18│디페노코나졸            │26.4    │406.3 │405.0   │323       │265       │15          │

│  │(Difenoconazole)        │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │202       │40          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│19│디메토에이트            │13.2    │229.3 │229.3   │125       │79        │20          │

│  │(Dimethoate)            │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │47        │20          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│20│다이설포톤              │14.2    │274.4 │274.4   │186       │97        │15          │

│  │(Disulfoton)            │        │      │        ├─────┼─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │142       │109       │15          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│21│엔드린                  │19.3    │380.9 │377.8   │263       │228       │20          │

│  │(Endrin)                │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │193       │40          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│22│이피엔                  │21.6    │323.3 │323.0   │157       │110       │20          │

│  │(EPN)                   │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │77        │20          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│23│에티온                  │19.7    │384.5 │383.9   │231       │175       │15          │

│  │(Ethion)                │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │157       │15          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│24│페니트로티온            │15.9    │277.2 │277.0   │277       │260       │10          │

│  │(Fenitrothion)          │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │109       │10          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│25│펜프로파트린            │21.8    │349.4 │349.1   │265       │210       │20          │

│  │(Fenpropathrin)         │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │89        │40          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│26│펜티온                  │16.4    │278.3 │278.0   │278       │125       │15          │

│  │(Fenthion)              │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │109       │15          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│27│펜발러레이트            │26.0    │419.9 │419.1   │225       │149       │9           │

│  │(Fenvalerate)           │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │119       │18          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│28│피프로닐                │17.5    │437.1 │435.9   │367       │255       │30          │

│  │(Fipronil)              │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │213       │30          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│29│헵타클로르              │15.4    │373.3 │369.8   │272       │237       │20          │

│  │(Heptachlor)            │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │235       │20          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│30│인독사카브              │26.8    │527.8 │527.0   │203       │134       │12          │

│  │(Indoxacarb)            │        │      │        ├─────┼─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │167       │106       │25          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│31│아이소펜포스            │17.4    │345.4 │345.1   │213       │185       │10          │

│  │(Isofenphos)            │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │121       │10          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│32│린단                    │13.6    │290.8 │287.8   │219       │183       │20          │

│  │(Lindane)               │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │145       │20          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│33│메티다티온              │17.8    │302.3 │301.9   │145       │85        │5           │

│  │(Methidation)           │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │58        │15          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│34│파라티온-에틸           │16.4    │291.3 │291.3   │291       │109       │10          │

│  │(Parathion-ethyl)       │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │81        │30          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│35│펜디메탈린              │17.2    │281.3 │281.1   │252       │209       │5           │

│  │(Pendimethalin)         │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │191       │10          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│36│퍼머트린                │23.7    │391.3 │390.0   │183       │155       │10          │

│  │(Permethrin)            │        │      │        ├─────┼─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │163       │91        │15          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│37│포레이트                │12.7    │260.4 │260.4   │260       │75        │10          │

│  │(Phorate)               │        │      │        ├─────┼─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │121       │47        │30          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│38│피페로닐                │21.0    │338.4 │338.4   │176       │131       │15          │

│  │뷰톡사이드              │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │(Piperonyl butoxide)    │        │      │        │          │103       │25          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│39│프로클로라즈            │24.1    │376.7 │375.0   │308       │70        │15          │

│  │(Prochloraz)            │        │      │        ├─────┼─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │180       │138       │10          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│40│프로피코나졸            │20.3    │342.2 │341.0   │259       │191       │10          │

│  │(Propiconazole)         │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │69        │10          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│41│퀸토젠                  │13.7    │295.3 │292.8   │295       │237       │20          │

│  │(Quintozene)            │        │      │        ├─────┼─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │237       │119       │25          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│42│시마진                  │13.3    │201.7 │201.7   │201       │186       │15          │

│  │(Simazine)              │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │173       │15          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│43│터부포스                │13.8    │288.4 │288.4   │231       │175       │30          │

│  │(Terbufos)              │        │      │        │          ├─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │          │129       │30          │

├─┼────────────┼────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│44│트리아디메놀            │17.5    │295.8 │295.1   │168       │70        │10          │

│  │(Triadimenol)           │        │      │        ├─────┼─────┼──────┤

│  │                        │        │      │        │128       │65        │20          │

└─┴────────────┴────┴───┴────┴─────┴─────┴──────┘

※ 질량분석기의 분석조건 및 각 생성이온에 대한 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 선구이온 및 생성이온도 유효성이 확인된 경우 적용이 가능

    2) 액체크로마토그래프?질량분석기(LC-MS/MS)의 분석 조건

      가) 컬럼: C18 (3 mm × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

      나) 이동상: A와 B 이동상의 농도 구배

- A 이동상 : 0.1% 포름산과 5 mM 포름산암모늄 함유한 물

- B 이동상:  0.1% 포름산과 5 mM 포름산암모늄 함유한 메탄올

      다) 농도구배조건

           ┌────┬──┬──┐

│시간(분)│A(%)│B(%)│

├────┼──┼──┤

│0.0     │95  │5   │

├────┼──┼──┤

│1.0     │95  │5   │

├────┼──┼──┤

│18.0    │5   │95  │

├────┼──┼──┤

│22.0    │5   │95  │

├────┼──┼──┤

│22.1    │95  │5   │

├────┼──┼──┤

│30.0    │95  │5   │

└────┴──┴──┘

      라) 이동상 유속: 0.3 mL/분

      마) 컬럼 온도: 40℃ 

      바) 주입량: 5 μL

      사) 이온화 방식: Electrospray ionization(positive, negative)

○ LC-MS/MS의 MRM(Multiple Reaction Monitoring)

┌──┬────────────┬─────┬───┬────┬─────┬─────┬──────┐

│번  │분석성분                │이온화    │머무름│분자량  │선구이온  │생성이온  │충돌에너지  │

│호  │(Compound)              │(Ionizatio│시간  │(MW)    │(Precusor │(Product  │(Collision  │

│    │                        │n mode)   │(분)  │        │ion, m/z) │ion, m/z) │energy,     │

│    │                        │          │      │        │          │          │eV)         │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│1   │아바멕틴 B1             │+         │22.8  │873.0   │890       │305       │39          │

│    │(Abamectin B1)          │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │145       │51          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│2   │아세페이트              │+         │7.4   │183.2   │184       │143       │13          │

│    │(Acephate)              │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │125       │25          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│3   │알디카브                │+         │14.4  │196.2   │208       │116       │13          │

│    │(Aldicarb)              │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │89        │23          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│4   │아진포스-메틸           │+         │17.9  │317.3   │318       │132       │19          │

│    │(Azinphos-methyl)       │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │160       │19          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│5   │아족시스트로빈          │+         │17.9  │403.3   │404       │372       │19          │

│    │(Azoxystrobin)          │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │344       │31          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│6   │보스칼리드              │+         │18.3  │343.2   │343       │307       │27          │

│    │(Boscalid)              │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │140       │27          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│7   │카바릴                  │+         │16.2  │201.2   │202       │145       │16          │

│    │(Carbaryl)              │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │127       │39          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│8   │카벤다짐                │+         │10.8  │191.1   │192       │160       │27          │

│    │(Carbendazim)           │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │132       │41          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│9   │카보퓨란                │+         │15.6  │221.2   │222       │123       │29          │

│    │(Carbofuran)            │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │165       │17          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│10  │클로르피리포스          │+         │22.1  │350.5   │350       │97        │43          │

│    │(Chlorpyrifos)          │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │198       │43          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│11  │클레토딤                │+         │20.7  │359.9   │360       │164       │27          │

│    │(Clethodim)             │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │77        │99          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│12  │클로티아니딘            │+         │12.1  │249.6   │250       │169       │17          │

│    │(Clothianidin)          │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │132       │17          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│13  │사이클록시딤            │+         │21.2  │325.5   │325       │280       │19          │

│    │(Cycloxydim)            │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │180       │31          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│14  │시아나진                │+         │15.2  │240.6   │240       │214       │25          │

│    │(Cyanazine)             │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │68        │57          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│15  │사이프로코나졸(l)       │+         │18.7  │291.7   │292       │70        │35          │

│    │(Cyproconazole(l))      │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │125       │39          │

│    ├────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│    │사이프로코나졸(ll)      │+         │18.8  │291.7   │292       │70        │35          │

│    │Cyproconazole(ll)       │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │125       │37          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│16  │다이클로르보스          │+         │15.5  │220.9   │221       │109       │23          │

│    │(Dichlorvos)            │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │127       │21          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│17  │다이아지논              │+         │20.3  │304.3   │305       │169       │27          │

│    │(Diazinon)              │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │153       │29          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│18  │디플루벤주론            │+         │19.6  │310.6   │311       │158       │19          │

│    │(Diflubenzuron)         │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │141       │45          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│19  │디메테나미드            │+         │18.4  │275.7   │276       │244       │19          │

│    │(Dimethenamide)         │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │168       │31          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│20  │에디펜포스              │+         │20.0  │310.4   │311       │109       │41          │

│    │(Edifenphos)            │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │111       │29          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│21  │에톡사졸                │+         │22.1  │359.4   │360       │141       │43          │

│    │(Etoxazole)             │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │63        │129         │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│22  │페나리몰                │+         │19.2  │331.2   │331       │268       │27          │

│    │(Fenarimol)             │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │81        │27          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│23  │펜부코나졸              │+         │19.3  │336.8   │337       │125       │41          │

│    │(Fenbuconazole)         │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │70        │35          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│24  │페노부카브              │+         │18.1  │207.2   │208       │95        │17          │

│    │(Fenobucarb)            │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │77        │51          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│25  │플로벤디아마이드        │+         │19.3  │682.3   │683       │407       │27          │

│    │(Flubendiamide)         │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │255       │87          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│26  │플루디옥소닐            │+         │18.5  │248.1   │266       │229       │21          │

│    │(Fludioxonil)           │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │158       │47          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│27  │플루페녹수론            │+         │21.7  │488.8   │489       │158       │27          │

│    │(Flufenoxuron)          │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │141       │71          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│28  │플루오피콜라이드        │+         │18.6  │383.5   │383       │173       │35          │

│    │(Fluopicolide)          │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │109       │91          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│29  │플루실라졸              │+         │19.5  │315.3   │316       │165       │39          │

│    │(Flusilazole)           │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │247       │23          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│30  │플루트리아폴            │+         │16.7  │301.2   │301       │70        │39          │

│    │(Flutriafol)            │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │95        │69          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│31  │플룩사피록사드          │+         │18.5  │381.2   │382       │362       │21          │

│    │(Fluxapyroxad)          │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │342       │29          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│32  │할록시포프              │+         │19.6  │361.7   │361       │91        │47          │

│    │(Haloxyfop)             │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │315       │25          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│33  │이마자릴                │+         │16.0  │297.1   │297       │159       │33          │

│    │(Imazalil)              │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │69        │35          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│34  │이미디클로프리드        │+         │11.9  │255.6   │256       │209       │21          │

│    │(Imidacloprid)          │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │175       │25          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│35  │아이소프로카브          │+         │16.9  │193.2   │194       │95        │19          │

│    │(Isoprocarb)            │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │137       │13          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│36  │크레속심-메틸           │+         │20.1  │313.3   │314       │116       │19          │

│    │(Kresoxim-methyl)       │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │131       │27          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│37  │말라티온                │+         │18.6  │330.3   │331       │127       │17          │

│    │(Malathion)             │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │284       │11          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│38  │메티오카브              │+         │18.4  │225.3   │226       │121       │23          │

│    │(Methiocarb)            │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │169       │13          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│39  │메소밀                  │+         │10.5  │162.2   │163       │87        │15          │

│    │(Methomyl)              │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │64        │9           │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│40  │메소프렌                │+         │23.67 │310.4   │311       │279       │9           │

│    │(Methoprene)            │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │191       │17          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│41  │메톡시페나자이드        │+         │18.6  │368.5   │369       │149       │21          │

│    │(Methoxyfenozide)       │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │133       │31          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│42  │마이클로뷰타닐          │+         │18.6  │288.7   │289       │70        │27          │

│    │(Myclobutanil)          │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │125       │41          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│43  │옥시데메톤-메틸         │+         │10.0  │246.3   │246       │169       │19          │

│    │(Oxydemeton-methyl)     │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │109       │37          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│44  │펜토에이트              │+         │19.9  │320.3   │321       │79        │55          │

│    │(Phenthoate)            │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │135       │25          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│45  │피리미카브              │+         │15.5  │238.2   │239       │72        │34          │

│    │(Pirimicarb)            │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │182       │21          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│46  │피림포스-메틸           │+         │20.6  │305.3   │306       │108       │39          │

│    │(Pirimiphos-methyl)     │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │164       │29          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│47  │피라클로스트로빈        │+         │20.3  │387.8   │388       │163       │29          │

│    │(Pyraclostrobin)        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │194       │19          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│48  │피리다벤                │+         │23.0  │364.9   │365       │147       │31          │

│    │(Pyridaben)             │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │309       │31          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│49  │피리메타닐              │+         │18.5  │199.2   │200       │107       │31          │

│    │(Pyrimethanil)          │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │82        │35          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│50  │스피로테트라멧          │+         │18.9  │373.4   │374       │216       │45          │

│    │(Spirotetramat)         │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │302       │23          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│51  │설폭사플로르            │+         │13.1  │277.2   │278       │174       │17          │

│    │(Sulfoxaflor)           │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │154       │37          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│52  │테부코나졸              │+         │19.9  │307.8   │308       │70        │41          │

│    │(Tebuconazole)          │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │125       │41          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│53  │테트라코나졸            │+         │18.9  │372.1   │372       │159       │47          │

│    │(Tetraconazole)         │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │70        │37          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│54  │티아벤다졸              │+         │12.1  │201.2   │202       │131       │47          │

│    │(Thiabendazole)         │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │175       │37          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│55  │티아클로프리드          │+         │13.6  │252.7   │253       │126       │27          │

│    │(Thiacloprid)           │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │186       │19          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│56  │트리아다이메폰          │+         │18.6  │293.9   │294       │197       │19          │

│    │(Triadimefon)           │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │225       │19          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│57  │트리사이클라졸          │+         │14.3  │189.2   │190       │163       │31          │

│    │(Tricyclazole)          │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │136       │37          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│58  │트리플록시스트로빈      │+         │20.8  │408.3   │409       │186       │23          │

│    │(Trifloxystrobin)       │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │206       │21          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│59  │아세타닐드              │+         │12.4  │135.1　 │136       │76        │39          │

│    │(Acetanilide)           │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │50        │57          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │43        │47          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│60  │알벤다졸                │+         │18.1  │265.3   │266       │234       │29          │

│    │(Albendazole)           │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │191       │47          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │159       │47          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│61  │알트레노게스트          │+         │19.8  │310.4   │311       │227       │25          │

│    │(Altrenogest)           │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │159       │30          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │251       │20          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│62  │안티피린                │+         │12.1  │188.2   │189       │104       │20          │

│    │(Antipyrine)            │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │55        │33          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │58        │30          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│63  │베버린                  │+         │13.6  │336.4   │336       │278       │40          │

│    │(Berberine)             │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │303       │28          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │262       │46          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│64  │클로라메페니콜          │-         │13.7  │323.1   │321       │257       │-15         │

│    │(Chloramphenicol)       │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │152       │-24         │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │194       │-17         │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│65  │클렌부터롤              │+         │11.6  │277.2   │277       │203       │23          │

│    │(Clenbuterol)           │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │168       │41          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │139       │61          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│66  │실린다마이신            │+         │14.3  │424.9   │425       │126       │34          │

│    │(Clindamycin)           │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │377       │20          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │335       │29          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│67  │클로피돌                │+         │10.6  │192.0   │193       │51        │65          │

│    │(Clopidol)              │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │88        │39          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │50        │99          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│68  │클로산텔                │-         │23.0  │663.1   │660       │126       │-122        │

│    │(Closantel)             │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │344       │-52         │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │314       │-48         │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│69  │사이프로페나파딘        │+         │16.1  │287.4   │288       │96        │22          │

│    │(Cyproheptadine)        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │58        │35          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │70        │30          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│70  │답슨                    │+         │10.7  │248.4   │249       │156       │19          │

│    │(Dapsone)               │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │92        │33          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │108       │27          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│71  │데토퀴네이트            │+         │22.9  │417.5   │418       │372       │34          │

│    │(Decoquinate)           │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │204       │57          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │232       │48          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│72  │디클라주릴              │-         │19.8  │407.6   │404       │333       │-26         │

│    │(Diclazuril)            │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │42        │-80         │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │34        │-74         │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│73  │디클록사실린            │+         │17.4  │470.3   │469       │160       │17          │

│    │(Dicloxacillin)         │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │310       │21          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │114       │57          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│74  │디플록사신              │+         │11.6  │399.4   │400       │299       │30          │

│    │(Difloxacin)            │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │356       │25          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │382       │20          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│75  │디메트리다졸            │+         │9.9   │141.1   │142       │95        │31          │

│    │(Dimetridazole)         │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │81        │37          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │54        │47          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│76  │디펜하이드라민          │+         │14.5  │255.3   │256       │167       │23          │

│    │(Diphenhydramine)       │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │152       │53          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │115       │79          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│77  │DL-메틸페드린           │+         │8.8   │179.3   │180       │117       │25          │

│    │(DL-methylephedrine)    │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │146       │20          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │162       │20          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│78  │엠마멕틴                │+         │20.6  │886.1   │886       │158       │43          │

│    │(Emamectin)             │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │126       │81          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │108       │129         │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│79  │에리스로마이신          │+         │16.1  │733.9   │734       │286       │29          │

│    │(Erythromycin)          │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │83        │60          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │576       │20          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│80  │페반텔                  │+         │19.6  │446.4   │447       │383       │27          │

│    │(Febantel)              │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │415       │19          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │45        │60          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│81  │펜벤다졸                │+         │19.2  │299.4   │299       │268       │31          │

│    │(Fenbendazole)          │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │159       │49          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │104       │75          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│82  │플로르페니콜            │-         │11.9  │357.0   │356       │336       │-18         │

│    │(Florfenicol)           │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │185       │-28         │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │119       │-50         │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│83  │플루아주론              │+         │21.7  │506.2   │506       │141       │81          │

│    │(Fluazuron)             │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │158       │29          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │113       │115         │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│84  │이벌멕틴                │+         │24.4  │875.1   │892       │569       │21          │

│    │(Ivermectin)            │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │307       │35          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │551       │31          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│85  │조사마이신              │+         │16.9  │828.0   │828       │174       │41          │

│    │(Josamycin)             │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │109       │50          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │83        │60          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│86  │키타사마이신            │+         │15.9  │771.8   │772       │109       │38          │

│    │(Kitasamycin)           │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │174       │30          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │83        │45          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│87  │라살로사이드            │+         │23.3  │612.8   │613       │377       │53          │

│    │(Lasalocid)             │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │577       │47          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │318       │19          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│88  │레바미솔                │+         │8.9   │204.3   │204       │178       │31          │

│    │(Levamisole)            │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │91        │51          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │77        │75          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│89  │로퍼라마이드            │+         │16.7  │477.0   │477       │266       │37          │

│    │(Loperamide)            │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │210       │69          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │165       │127         │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│90  │마두라마이신            │+         │24.7  │917.4   │939       │877       │39          │

│    │(Maduramycin)           │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │895       │71          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │859       │87          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│91  │말라카이트 그린         │+         │16.6  │364.9   │329       │208       │65          │

│    │(Malachiate green)      │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │312       │67          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │163       │125         │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│92  │메벤다졸                │+         │17.1  │295.3   │295       │264       │31          │

│    │(Mebendazole)           │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │77        │77          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │105       │45          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│93  │메토클로프라마이드      │+         │11.0  │299.4   │300       │183       │26          │

│    │(Metoclopramide)        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │140       │44          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │227       │16          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│94  │메트로나이다졸          │+         │8.6   │171.2   │172       │82        │35          │

│    │(Metronidazole)         │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │110       │31          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │98        │29          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│95  │모넨신                  │+         │23.3  │692.4   │693       │675       │55          │

│    │(Monensin)              │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │461       │73          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │479       │73          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│96  │날록손                  │+         │8.2   │327.3   │328       │212       │51          │

│    │(Naloxone)              │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │253       │37          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │268       │37          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│97  │난드로론                │+         │18.4  │274.4   │275       │109       │26          │

│    │(Nandrolone)            │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │80        │45          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │239       │20          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│98  │나라신                  │+         │20.8  │765.0   │786       │431       │71          │

│    │(Narasin)               │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │531       │65          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │279       │73          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│99  │니카바진                │-         │19.0  │426.4   │300       │137       │-24         │

│    │(Nicarbazine)           │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │78        │-68         │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │96        │-26         │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│100 │니트로빈                │+         │15.0  │360.3   │361       │154       │51          │

│    │(Nitrovin)              │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │115       │77          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │153       │67          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│101 │노보바이오신            │+         │20.9  │612.6   │613       │189       │41          │

│    │(Novobiocin)            │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │133       │85          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │218       │19          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│102 │올렌도마이신            │+         │14.8  │687.9   │688       │158       │33          │

│    │(Oleandomycin)          │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │544       │25          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │116       │67          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│103 │오르메토피림            │+         │10.4  │274.3   │275       │259       │37          │

│    │(Ormetoprim)            │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │123       │33          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │115       │85          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│104 │옥사실린                │+         │16.4  │401.4   │402       │160       │17          │

│    │(Oxacillin)             │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │243       │19          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │113       │49          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│105 │옥펜다졸                │+         │15.1  │315.4   │316       │159       │41          │

│    │(Oxfendazole)           │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │191       │29          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │284       │20          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│106 │페나세틴                │+         │14.3  │179.2   │180       │110       │20          │

│    │(Phenacetin)            │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │92        │30          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │65        │35          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│107 │프라지콴텔              │+         │18.4  │312.4   │313       │203       │19          │

│    │(Praziquantel)          │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │83        │27          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │174       │30          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│108 │피리메타민              │+         │13.3  │248.0   │248       │177       │41          │

│    │(Pyrimethamine)         │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │128       │65          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │127       │83          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│109 │락토파민                │+         │10.6  │301.2   │302       │121       │31          │

│    │(Ractopamine)           │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │107       │45          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │284       │17          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│110 │리파시민                │+         │19.1  │785.9   │786       │754       │33          │

│    │(Rifaximin)             │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │95        │101         │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │151       │71          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│111 │로니다졸                │+         │8.5   │200.2   │201       │140       │17          │

│    │(Ronidazole)            │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │55        │29          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │110       │23          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│112 │록시트로마이신          │+         │17.4  │837.0   │837       │158       │41          │

│    │(Roxithromycin)         │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │116       │87          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │679       │31          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│113 │살리노마이신            │+         │24.7  │773.0   │773       │431       │73          │

│    │(Salinomycin)           │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │531       │65          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │265       │73          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│114 │스코폴라민              │+         │9.0   │303.4   │304       │138       │30          │

│    │(Scopolamine)           │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │156       │20          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │102       │45          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│115 │설파틀로피리다진        │+         │11.4  │284.7   │285       │156       │30          │

│    │(Sulfachlorpyridazine)  │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │108       │25          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │92        │25          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│116 │스피라마이신            │+         │12.6  │843.0   │422       │174       │37          │

│    │(Spiramycin)            │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │101       │81          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │142       │63          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│117 │설파벤다자마이드        │+         │12.7  │276.3   │276       │156       │15          │

│    │(Sulfabenzamide)        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │92        │31          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │65        │51          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│118 │설파아세타마이드        │+         │7.9   │214.2   │214       │156       │21          │

│    │(Sulfacetamide)         │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │92        │35          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │65        │60          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│119 │설파클로진              │+         │11.6  │284.4   │284       │156       │23          │

│    │(Sulfaclozine)          │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │107       │35          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │92        │39          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│120 │설파다이아진            │+         │8.9   │250.3   │251       │156       │21          │

│    │(Sulfadiazine)          │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │108       │31          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │92        │37          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│121 │설파아디메톡신          │+         │13.5  │310.3   │311       │107       │41          │

│    │(Sulfadimethoxine)      │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │156       │27          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │91        │43          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│122 │설파독신                │+         │12.1  │310.3   │311       │156       │25          │

│    │(Sulfadoxine)           │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │92        │39          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │107       │41          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│123 │설파아세톡시피리다진    │+         │12.9  │294.3   │294       │92        │40          │

│    │(Sulfaethoxypyridazine) │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │107       │35          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │156       │20          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│124 │설파구아니딘            │+         │5.0   │214.2   │215       │156       │19          │

│    │(Sulfaguanidine)        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │92        │31          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │65        │49          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│125 │설파메라진              │+         │10.0  │264.3   │265       │156       │23          │

│    │(Sulfamerazine)         │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │91.9      │39          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │108       │37          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│126 │설파메터                │+         │10.6  │280.3   │280       │215       │41          │

│    │(Sulfameter)            │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │65        │69          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │126       │35          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│127 │설파메타진              │+         │10.8  │278.4   │279       │185       │25          │

│    │(Sulfamethazine)        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │92        │43          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │124       │33          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│128 │설파메톡사졸            │+         │11.6  │253.3   │254       │155       │23          │

│    │(Sulfamethoxazole)      │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │91        │39          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │108       │33          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│129 │설파메톡사피리다진      │+         │10.9  │280.3   │281       │155       │23          │

│    │(Sulfamethoxypyridazine)│          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │108       │41          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │91        │41          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│130 │설파모노메톡사신        │+         │11.8  │280.3   │281       │156       │23          │

│    │(Sulfamonomethoxine)    │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │108       │35          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │91        │41          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│131 │설파모솔                │+         │10.4  │267.3   │267       │92        │39          │

│    │(Sulfamoxole)           │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │108       │35          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │65        │67          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│132 │설파페나졸              │+         │13.0  │314.4   │315       │158       │31          │

│    │(Sulfaphenazole)        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │160       │28          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │92        │40          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│133 │설파피리딘              │+         │9.5   │249.2   │249       │156       │23          │

│    │(Sulfapyridine)         │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │108       │35          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │184       │25          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│134 │설파퀴녹살린            │+         │14.1  │300.3   │301       │155       │23          │

│    │(Sulfaquinoxaline)      │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │92        │41          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │108       │37          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│135 │설파조미딘              │+         │8.8   │278.3   │278       │124       │29          │

│    │(Sulfasomidine)         │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │65        │73          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │92        │43          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│136 │설파티아졸              │+         │9.2   │255.3   │256       │156       │21          │

│    │(Sulfathiazole)         │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │92        │35          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │108       │33          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│137 │테트라미솔              │+         │8.9   │204.3   │205       │177       │20          │

│    │(Tetramisole)           │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │91        │30          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │122       │24          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│138 │티아메페니콜            │-         │10.2  │356.1   │354       │290       │-28         │

│    │(Thiamphenicol)         │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │185       │-28         │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │79        │-32         │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│139 │티아물린                │+         │15.5  │493.7   │494       │192       │25          │

│    │(Tiamulin)              │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │119       │50          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │73        │60          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│140 │틸디피로신              │+         │8.3   │734.0   │734       │98        │54          │

│    │(Tildipirosin)          │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │88        │85          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │174       │46          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│141 │틸미코신                │+         │14.2  │869.0   │869       │174       │55          │

│    │(Tilmicosin)            │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │696       │57          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │88        │119         │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│142 │티니다졸                │+         │9.7   │247.2   │247       │121       │23          │

│    │(Tinidazole)            │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │82        │49          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │128       │29          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│143 │톨트라주릴              │-         │19.8  │425.3   │423       │42        │-58         │

│    │(Toltrazuril)           │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │281       │-32         │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │194       │-58         │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│144 │트리클라벤다졸          │+         │21.0  │359.6   │358       │274       │53          │

│    │(Triclabendazole)       │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │343       │37          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │171       │71          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│145 │트리메트로피림          │+         │9.7   │290.3   │291       │230       │31          │

│    │(Trimethoprim)          │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │261       │35          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │123       │26          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│146 │트리페레나민            │+         │13.3  │255.4   │256.      │119       │28          │

│    │(Tripelennamine)        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │91        │28          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │72        │28          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│147 │티로신                  │+         │15.8  │916.1   │916       │174       │45          │

│    │(Tylosin)               │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │88        │109         │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │101       │85          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│148 │발네물린                │+         │17.4  │564.8   │565       │263       │25          │

│    │(Valnemulin)            │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │147       │49          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │164       │43          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│149 │비르기니마이신          │+         │17.2  │525.6   │526       │355       │27          │

│    │(Virginiamycin)         │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │109       │61          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │133       │33          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│150 │요힘빈                  │+         │12.0  │354.4   │355       │144       │39          │

│    │(Yohimbine)             │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │212       │33          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │143       │81          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│151 │아플라톡신 B1           │+         │15.4  │312.2   │312       │284       │35          │

│    │(Aflatoxin B1)          │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │241       │53          │

│    ├────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│    │아플라톡신 B2           │+         │15.0  │314.2   │314       │287       │37          │

│    │(Aflatoxin B2)          │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │259       │41          │

│    ├────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│    │아플라톡신 G1           │+         │14.4  │328.2   │328       │200       │57          │

│    │(Aflatoxin G1)          │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │243       │39          │

│    ├────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│    │아플라톡신 G2           │+         │14.0  │330.2   │330       │189       │57          │

│    │(Aflatoxin G2)          │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │245       │43          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│152 │오크라톡신 A            │+         │18.8  │403.8   │404       │239       │37          │

│    │(Ochratoxin A)          │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │102       │97          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│153 │T-2 toxin               │+         │17.8  │466.5   │484       │305       │19.6        │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │185       │29          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│154 │HT-2 toxin              │+         │16.8  │424.5   │442       │263       │18          │

│    │                        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │215       │18          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│155 │데옥시니발레놀          │+         │9.7   │296.3   │297       │249       │17          │

│    │(Deoxynivalenol)        │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │115       │89          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│156 │푸모니신 B1             │+         │16.5  │721.8   │722       │334       │57          │

│    │(Fumonisin B1)          │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │352       │51          │

│    ├────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│    │푸모니신 B2             │+         │18.1  │705.8   │706       │336       │53          │

│    │(Fumonisin B2)          │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │688       │39          │

├──┼────────────┼─────┼───┼────┼─────┼─────┼──────┤

│157 │제랄레논                │-         │19.0  │318.3   │316       │174       │-34         │

│    │(Zeralenone)            │          │      │        │          ├─────┼──────┤

│    │                        │          │      │        │          │131       │-38         │

└──┴────────────┴─────┴───┴────┴─────┴─────┴──────┘

※ 질량분석기의 분석조건 및 각 생성이온에 대한 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 선구이온 및 생성이온도 유효성이 확인된 경우 적용이 가능

    3) 검출한계

      0.015 mg/kg     

   ┌─────────────────────────────────┬────────┐

│검출한계 별도 설정 성분                                           │검출한계(mg/kg) │

├─────────────────────────────────┼────────┤

│Diclazuril                                                        │0.003           │

├─────────────────────────────────┼────────┤

│Acetanilide, Aflatoxin(B1,B2,G1,G2), Clopidol, Fenbendazole,      │0.006           │

├─────────────────────────────────┼────────┤

│Ivermectin, Lasalocide, Malachite green, Monensin, Ochratoxin A,  │0.03            │

│Oleandomycin, Oxacillin, Spiramycin, Tildipirosin, Tilmicosin     │                │

├─────────────────────────────────┼────────┤

│HT-2, T-2, Zeralenone                                             │0.06            │

├─────────────────────────────────┼────────┤

│DON, Fumonisin(B1,B2), Narasin                                    │0.12            │

└─────────────────────────────────┴────────┘

    4) 정량한계

      0.05 mg/kg

    ┌─────────────────────────────────┬────────┐

│정량한계 별도 설정 성분                                           │정량한계(mg/kg) │

├─────────────────────────────────┼────────┤

│Diclazuril                                                        │0.01            │

├─────────────────────────────────┼────────┤

│Acetanilide, Aflatoxin(B1,B2,G1,G2), Clopidol, Fenbendazole,      │0.02            │

├─────────────────────────────────┼────────┤

│Ivermectin, Lasalocide, Malachite green, Monensin, Ochratoxin A,  │0.1             │

│Oleandomycin, Oxacillin, Spiramycin, Tildipirosin, Tilmicosin     │                │

├─────────────────────────────────┼────────┤

│HT-2, T-2, Zeralenone                                             │0.2             │

├─────────────────────────────────┼────────┤

│DON, Fumonisin(B1,B2), Narasin                                    │0.4             │

└─────────────────────────────────┴────────┘

  아. 정성 및 정량시험

   1) 기기분석 순서

     가) 안정적인 기기분석 값을 얻기 위해 검량용액이나 시료를 분석하기 전에 프라이밍(priming)한다.

      -  GC-MS/MS: 시료 또는 고농도 표준물질 × 2회

      -  LC-MS/MS: 용매 블랭크 × 3회 

     나) 기기 오염 여부를 확인하기 위해 무처리 시료를 분석한다.

     다) 5수준 이상의 매질보정 검량용액 또는 기타 적정한 검량용액을 분석한다. 

     라) 데이터 품질 관리용 시료를 분석하며 일반적으로 회수율 실험한 시료를 활용한다.

     마) 시료 (S1, S2, S3 ,,,, Sn)를 분석한다.

     바) 다)의 5수준 이상의 검량용액을 재분석하는 협차 검량법(bracket calibration)을 활용한다.

   2) 검량선 작성

     가) 표준용액을 농도별로 분석기기에 각각 주입하여 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

     나) 1)의 기기분석 순서에 따른 협차 검량법을 활용한다.

     다) 검량선의 적정성을 평가하는데 결정계수뿐만 아니라 각 농도에서의 잔차가 ± 20% 이하인지 확인하고, 잔차가 ± 20%를 넘는 경우 검량선을 작성할 때 가중치 적용(1/x) 방식을 활용할 수 있다.

   3) 정성 확인

    위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름시간(retention time)과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온(Product ion)간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율이 ± 20∼30% 이내에서 일치하여야 한다.

       ※ 생성이온간 반응세기의 비율 허용 범위

    ┌─────────────┬──────┐

│이온간 반응세기의 비율(%) │허용범위(%) │

├─────────────┼──────┤

│〉50                      │±20        │

├─────────────┼──────┤

│〉20, ≤50                │±25        │

├─────────────┼──────┤

│〉10, ≤20                │±30        │

└─────────────┴──────┘

   4) 정량 확인

    정량시험은 단일 표준품으로 표준용액을 일정농도로 제조한 후 매질보정 검량선을 작성하여 정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 정량한다.    

   5) 대표품목의 매질보정검량법으로 스크리닝 분석 후 검출량이 허용기준 대비 80%를 초과한 시료에 대해서는 표준물질 첨가법(standard addition method)을 활용해야 한다.

       ※ 단, 곰팡이독소의 부적합 판정은 7장의 곰팡이독소 개별분석법 또는 동시분석방법 등의 정량시험법에 의한 결과를 우선으로 한다. 

Ⅱ. 잔류농약, 동물용의약품, 곰팡이독소 동시 다성분 분석법-제2그룹

  가. 적용범위

    본 분석법은 단미사료(곡류, 콩류, 섬유질류 등) 및 배합사료에 적용한다.

  나. 분석대상 성분

┌──────────┬─┬─────────┬─┬───────────┐

│잔류농약            │11│Cephapirin        │23│Monoacetyl dapsone    │

├─┬────────┼─┼─────────┼─┼───────────┤

│1 │2.4-D           │12│Cloxacillin       │24│Nafcillin             │

├─┼────────┼─┼─────────┼─┼───────────┤

│2 │Prothioconazole │13│Danofloxacin      │25│Ofloxacin             │

├─┴────────┼─┼─────────┼─┼───────────┤

│동물용의약품        │14│Diethylcarbamazine│26│Orbifloxacin          │

├─┬────────┼─┼─────────┼─┼───────────┤

│3 │Aminopyrine     │15│Diminazene        │27│Penicillin V          │

├─┼────────┼─┼─────────┼─┼───────────┤

│4 │Amprolium       │16│Doxycycline       │28│Phenothiazine         │

├─┼────────┼─┼─────────┼─┼───────────┤

│5 │Bacitracin      │17│Florfenicol amine │29│Phthalylsulfathiazole │

├─┼────────┼─┼─────────┼─┼───────────┤

│6 │Cefadroxil      │18│Isometamidium     │30│Sarafloxacin          │

├─┼────────┼─┼─────────┼─┼───────────┤

│7 │Cefalexin       │19│Lincomycin        │31│Succinyl sulfathiazole│

├─┼────────┼─┼─────────┼─┼───────────┤

│8 │Cefalonium      │20│Marbofloxacin     │32│Sulfisoxazole         │

├─┼────────┼─┼─────────┼─┼───────────┤

│9 │Ceftiofur       │21│Metronidazole-OH  │33│Tetramethrin          │

├─┼────────┼─┼─────────┼─┼───────────┤

│10│Cefuquinome     │22│Minocycline       │34│Tulathromycin         │

└─┴────────┴─┴─────────┴─┴───────────┘

      ○ 액체크로마토그래프 분석대상

  다. 분석원리

    균질화한 시료를 1% 아세트산을 함유한 메탄올로 추출하여 액체크로마토그래프(LC-MS/MS)로 분석한다. 시료 매질의 영향을 최소화하기 위하여 매질보정 검량법(matrix matched calibration) 또는 표준물질첨가법(standard addition method)을 활용하여 분석한다.

  라. 수분

    분석대상 성분의 검출량 산출시, 시료의 수분함량이 20% 이상일 경우 함수율에 따른  추출용매의 희석효과를 고려해서 최종 검출량을 산출한다.

  마. 장치

    액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS) 를 사용한다.

  바. 시약

    1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

    2) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

    3) 표준원액: 각 농약의 표준품을 유기용매에 녹여 표준원액으로 사용한다

    4) 혼합표준용액: 표준원액을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석하여 사용한다.

    5) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

  사. 시험용액의 조제(추출 및 정제)

    1) 2.5 g의 균질화된 시료를 50 mL 용량의 원심분리관에 칭량하고, 1% 아세트산을 함유한 메탄올 10 mL를 넣은 뒤 교반기를 사용하여 10분동안 강하게 진탕한다.

    2) 3,000 G로 5분간 원심분리한다.

    3) 상등액을 C18 100 mg 시약이 들어있는 2mL 원심분리관에 넣고 1분간 진탕 후 10,000 G에서 10분간 원심분리한 다음 멤브레인 필터(0.2 μm)로 여과하여 아래 4) 시료액의 시료추출액으로 사용한다.

    4) 정량 분석용 매질보정 검량법(matrix matched calibration)에 따른 농도별 표준물질과 시료액은 아래의 예를 참고하여 만든다.

       ※ 무처리 시료추출액: 시료구와 동일한 품목이면서 잔류농약, 동물용의약품, 곰팡이독소 성분이 검출되지 아니한 시료를 바. 에 따라 추출 및 정제한다

     ○ LC-MS/MS용 매질보정 검량(matrix matched calibration) 용액의 조제 

          ┌────┬───────────────────────────────────────────────┬───────┐

│구분    │검량선 작성용 표준물질                                                                        │시료액        │

│        ├───────┬───────┬───────┬───────┬───────┬───────┤              │

│        │수준 1        │수준 2        │수준 3        │수준 4        │수준 5        │수준 6        │              │

├────┼───────┼───────┼───────┼───────┼───────┼───────┤              │

│목표농도│1 μg/L       │5 μg/L       │10 μg/L      │20 μg/L      │50 μg/L      │100 μg/L     │              │

├────┼───────┼───────┼───────┼───────┼───────┼───────┼───────┤

│조제방법│완충용액 600  │완충용액 600  │완충용액 600  │완충용액 600  │완충용액 600  │완충용액 600  │완충용액 600  │

│        │μL+          │μL+          │μL+          │μL+          │μL+          │μL+          │μL+          │

│        │아세토니트릴  │아세토니트릴  │아세토니트릴  │아세토니트릴  │아세토니트릴  │아세토니트릴  │아세토니트릴  │

│        │100 μL       │100 μL       │100 μL       │100 μL       │100 μL       │100 μL       │200 μL       │

│        ├───────┼───────┼───────┼───────┼───────┼───────┤              │

│        │STD           │STD           │STD           │STD           │STD           │STD           │              │

│        │10 μg/L      │50 μg/L      │100 μg/L     │200 μg/L     │500 μg/L     │1000 μg/L    │              │

│        │100 μL       │100 μL       │100 μL       │100 μL       │100 μL       │100 μL       │              │

│        ├───────┼───────┼───────┼───────┼───────┼───────┼───────┤

│        │무처리        │무처리        │무처리        │무처리        │무처리        │무처리        │시료추출액    │

│        │시료추출액    │시료추출액    │시료추출액    │시료추출액    │시료추출액    │시료추출액    │200 μL       │

│        │200 μL       │200 μL       │200 μL       │200 μL       │200 μL       │200 μL       │              │

└────┴───────┴───────┴───────┴───────┴───────┴───────┴───────┘

        ※ 완충용액 : 포름산암모늄 100 mM을 함유한 물(포름산 용액을 이용하여 pH 4∼4.5로 맞춤)

  아. 시험조작

    1) 액체크로마토그래프?질량분석기(LC-MS/MS)의 분석 조건

      가) 컬럼: C18 (3 mm × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

      나) 이동상: A와 B 이동상의 농도 구배

       - A 이동상 : 0.1% 포름산과 5 mM 포름산암모늄 함유한 물

       - B 이동상:  0.1% 포름산과 5 mM 포름산암모늄 함유한 메탄올

      다) 농도구배조건

           ┌────┬──┬──┐

│시간(분)│A(%)│B(%)│

├────┼──┼──┤

│0.0     │95  │5   │

├────┼──┼──┤

│1.0     │95  │5   │

├────┼──┼──┤

│18.0    │5   │95  │

├────┼──┼──┤

│22.0    │5   │95  │

├────┼──┼──┤

│22.1    │95  │5   │

├────┼──┼──┤

│30.0    │95  │5   │

└────┴──┴──┘

      라) 이동상 유속: 0.3 mL/분

      마) 컬럼 온도: 40℃ 

      바) 주입량: 5 μL

      사) 이온화 방식: Electrospray ionization(positive, negative)

○ LC-MS/MS의 MRM(Multiple Reaction Monitoring)

┌─┬────────────┬─────┬───┬───┬─────┬─────┬──────┐

│번│분석성분                │이온화    │머무름│분자량│선구이온  │생성이온  │충돌에너지  │

│호│(Compound)              │(Ionizatio│시간  │(MW)  │(Precursor│(Product  │(Collision  │

│  │                        │n mode)   │(분)  │      │ion, m/z) │ion, m/z) │energy,     │

│  │                        │          │      │      │          │          │eV)         │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│1 │이사-디                 │-         │16.8  │221.0 │218       │160       │-12         │

│  │(2,4-D)                 │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │35        │-64         │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│2 │프로티오코나졸          │-         │20.0  │344.3 │343       │100       │-30         │

│  │(Prothioconazole)       │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │180       │-30         │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│3 │아미노피린              │+         │9.0   │231.2 │232       │113       │19          │

│  │(Aminopyrine)           │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │56        │61          │

│  │                        │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │97        │45          │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│4 │암프롤리움              │+         │2.8   │278.7 │243       │150       │17          │

│  │(Amprolium)             │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │94        │33          │

│  │                        │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │81        │51          │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│5 │바시트라신              │+         │15.3  │1422.7│474       │199       │35          │

│  │(Bacitracin)            │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │110       │77          │

│  │                        │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │227       │35          │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│6 │세파드록실              │+         │9.8   │ 363.3│363       │158       │21          │

│  │(Cefadroxil)            │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │140       │39          │

│  │                        │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │68        │59          │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│7 │세팔렉신                │+         │10.1  │347.3 │348       │158       │20          │

│  │(Cefalexin)             │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │106       │26          │

│  │                        │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │174       │14          │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│8 │세팔로니움              │+         │9.7   │458.5 │459       │337       │15          │

│  │(Cefalonium)            │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │152       │25          │

│  │                        │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │158       │23          │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│9 │세프니오퍼              │+         │13.9  │ 523.5│523       │125       │85          │

│  │(Ceftiofur)             │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │240       │25          │

│  │                        │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │94        │87          │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│10│세프퀴놈                │+         │9.4   │528.6 │529       │134       │21          │

│  │(Cefuquinome)           │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │167       │35          │

│  │                        │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │395       │17          │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│11│세파피린                │+         │8.5   │423.4 │424       │292       │21          │

│  │(Cephapirin)            │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │151       │33          │

│  │                        │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │181       │31          │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│12│클록사실린              │+         │16.5  │435.8 │435       │178       │33          │

│  │(Cloxacillin)           │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │220       │25          │

│  │                        │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │320       │25          │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│13│다노플록사신            │+         │10.8  │ 357.3│358       │340       │29          │

│  │(Danofloxacin)          │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │314       │25          │

│  │                        │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │96        │31          │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│14│디에틸카바마진          │+         │7.5   │199.2 │200       │127       │20          │

│  │(Diethylcarbamazine)    │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │100       │25          │

│  │                        │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │72        │30          │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│15│디미나진                │+         │8.3   │281.3 │282       │119       │25          │

│  │(Diminazene)            │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │102       │55          │

│  │                        │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │135       │27          │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│16│독시싸이클린            │+         │14.8  │444.4 │445       │428       │27          │

│  │(Doxycycline)           │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │320       │43          │

│  │                        │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │267       │49          │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│17│플로르페니콜아민        │+         │2.8   │247.2 │248       │230       │13          │

│  │(Florfenicol amine)     │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │130       │28          │

│  │                        │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │91        │60          │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│18│이소메타디움            │+         │13.1  │460.3 │461       │313       │27          │

│  │(Isometamidium)         │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │298       │33          │

│  │                        │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │269       │71          │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│19│린코마이신              │+         │9.4   │406.5 │407       │359       │29          │

│  │(Lincomycin)            │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │126       │31          │

│  │                        │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │82        │117         │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│20│마보플록사신            │+         │9.8   │362.3 │363       │320       │21          │

│  │(Marbofloxacin)         │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │72        │47          │

│  │                        │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │345       │29          │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│21│메트로니다졸-OH         │+         │7.0   │187.1 │188       │126       │23          │

│  │(Metronidazole-OH)      │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │123       │19          │

│  │                        │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │41        │47          │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│22│미노싸이클린            │+         │12.3  │457.4 │457       │441       │27          │

│  │(Minocycline)           │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │283       │59          │

│  │                        │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │337       │51          │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│23│모노아세틸답손          │+         │12.1  │290.3 │290       │262       │17          │

│  │(Monoacetyl             │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │dapsone)                │          │      │      │          │134       │19          │

│  │                        │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │179       │19          │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│24│나프실린                │+         │17.2  │414.4 │414       │199       │21          │

│  │(Nafcillin)             │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │171       │51          │

│  │                        │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │143       │60          │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│25│오플록사신              │+         │10.2  │361.3 │362       │261       │40          │

│  │(Ofloxacin)             │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │318       │30          │

│  │                        │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │221       │45          │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│26│오비플록사신            │+         │11.1  │395.3 │396       │352       │27          │

│  │(Orbifloxacin)          │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │295       │33          │

│  │                        │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │254       │41          │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│27│페니실린 V              │+         │16.2  │350.3 │351       │114       │40          │

│  │(Penicillin V)          │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │160       │25          │

│  │                        │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │229       │25          │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│28│페노티아진              │+         │19.6  │199.2 │199       │167       │37          │

│  │(Phenothiazine)         │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │166       │51          │

│  │                        │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │139       │63          │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│29│프탈릴설파티아졸        │+         │12.4  │403.4 │403       │156       │29          │

│  │(Phthalylsulfathiazole) │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │149       │47          │

│  │                        │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │108       │43          │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│30│사라플록사신            │+         │11.5  │385.3 │386       │299       │35          │

│  │(Sarafloxacin)          │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │322       │31          │

│  │                        │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │348       │43          │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│31│석시닐-설파티아졸       │+         │10.6  │355.3 │355       │108       │37          │

│  │(Succinyl               │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │sulfathiazole)          │          │      │      │          │65        │81          │

│  │                        │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │73        │63          │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│32│설피속사졸              │+         │11.8  │267.3 │268       │156       │20          │

│  │(Sulfisoxazole)         │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │113       │20          │

│  │                        │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │92        │35          │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│33│테트라메트린            │+         │21.2  │331.4 │332       │135       │35          │

│  │(Tetramethrin)          │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │107       │40          │

│  │                        │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │163       │30          │

├─┼────────────┼─────┼───┼───┼─────┼─────┼──────┤

│34│틀라스로마이신          │+         │10.4  │806.0 │806       │577       │37          │

│  │(Tulathromycin)         │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │158       │53          │

│  │                        │          │      │      │          ├─────┼──────┤

│  │                        │          │      │      │          │116       │81          │

└─┴────────────┴─────┴───┴───┴─────┴─────┴──────┘

※ 질량분석기의 분석조건 및 각 생성이온에 대한 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 선구이온 및 생성이온도 유효성이 확인된 경우 적용이 가능

  3) 검출한계

      0.015 mg/kg

   ┌─────────────────────────────────────┬────────┐

│검출한계 별도 설정 성분                                                   │검출한계(mg/kg) │

├─────────────────────────────────────┼────────┤

│Aminopyrine, Ceftiofur, Cefuquinome, Cephapirin, Doxycycline,             │0.03            │

│Metronidazole-OH, Minocycline, Monoacetyl dapson, Nafcillin,              │                │

│Penicillin V, Phthalylsulfathiazole, Sarafloxacin, Succinylsulfathiazole, │                │

│Tulathromycin                                                             │                │

├─────────────────────────────────────┼────────┤

│2,4-D                                                                     │0.12            │

├─────────────────────────────────────┼────────┤

│Bacitracin, Cefadroxil, Cefalexin, Cefalonium                             │0.3             │

└─────────────────────────────────────┴────────┘

    4) 정량한계

      0.05 mg/kg

    ┌─────────────────────────────────────┬────────┐

│정량한계 별도 설정 성분                                                   │정량한계(mg/kg) │

├─────────────────────────────────────┼────────┤

│Aminopyrine, Ceftiofur, Cefuquinome, Cephapirin, Doxycycline,             │0.1             │

│Metronidazole-OH, Minocycline, Monoacetyl dapson, Nafcillin,              │                │

│Penicillin V, Phthalylsulfathiazole, Sarafloxacin, Succinylsulfathiazole, │                │

│Tulathromycin                                                             │                │

├─────────────────────────────────────┼────────┤

│2,4-D                                                                     │0.4             │

├─────────────────────────────────────┼────────┤

│Bacitracin, Cefadroxil, Cefalexin, Cefalonium                             │1               │

└─────────────────────────────────────┴────────┘

  자. 정성 및 정량시험

   1) 기기분석 순서

     가) 안정적인 기기분석 값을 얻기 위해 검량용액이나 시료를 분석하기 전에 프라이밍(priming)한다.

      -  LC-MS/MS: 용매 블랭크 × 3회 

     나) 기기 오염 여부를 확인하기 위해 무처리 시료를 분석한다.

     다) 5수준 이상의 매질보정 검량용액 또는 기타 적정한 검량용액을 분석한다. 

     라) 데이터 품질 관리용 시료를 분석하며 일반적으로 회수율 실험한 시료를 활용한다.

     마) 시료 (S1, S2, S3 ,,,, Sn)를 분석한다.

     바) 다)의 5수준 이상의 검량용액을 재분석하는 협차 검량법(bracket calibration)을 활용한다.

   2) 검량선 작성

     가) 표준용액을 농도별로 분석기기에 각각 주입하여 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

     나) 1)의 기기분석 순서에 따른 협차 검량법을 활용한다.

     다) 검량선의 적정성을 평가하는데 결정계수뿐만 아니라 각 농도에서의 잔차가 ± 20% 이하인지 확인하고, 잔차가 ± 20%를 넘는 경우 검량선을 작성할 때 가중치 적용(1/x) 방식을 활용할 수 있다.

   3) 정성 확인

    위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름시간(retention time)과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온(Product ion)간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율이 ± 20∼30% 이내에서 일치하여야 한다.   ※ 생성이온간 반응세기의 비율 허용 범위

       ┌─────────────┬──────┐

│이온간 반응세기의 비율(%) │허용범위(%) │

├─────────────┼──────┤

│〉50                      │±20        │

├─────────────┼──────┤

│〉20, ≤50                │±25        │

├─────────────┼──────┤

│〉10, ≤20                │±30        │

└─────────────┴──────┘

   4) 정량 확인

    정량시험은 단일 표준품으로 표준용액을 일정농도로 제조한 후 매질보정 검량선을 작성하여 정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 정량한다.  

   5) 대표품목의 매질보정검량법으로 스크리닝 분석 후 검출량이 허용기준 대비 80%를 초과한 시료에 대해서는 표준물질 첨가법(standard addition method)을 활용해야 한다.

별표 0026: 메탄저감제의 기준(제8조제1항관련)

[별표 26] 

메탄저감제의 기준(제8조제1항관련)

메탄저감제의 기준

 가. 메탄저감제는 국내 가축사양 실험을 통해 메탄저감효과가 확인된 것으로 그 확인은 농촌진흥청 국립축산과학원장이 정하는 방법에 따른다.

 나. 메탄저감제는 관행적인 사료 급여(대조구) 대비 10% 이상 유의적인 메탄저감효과가 확인되어야 한다.

 다. 메탄저감제를 사용할 경우 가축의 건강 및 및 생산성(증체율, 유량 등)에 유의적인 저하가 없어야 하며, 최종 축산물의 안전성에 영향을 미쳐서는 아니된다.

 라. 메탄저감제는 국내에서 분석가능한 지표를 제시해야 하며, 정량분석을 통한 품질관리가 가능해야 한다. 다만, 식품추출물 등으로서 정량분석이 가능한 지표물질의 제시가 어려운 경우 사료공정심의위원회의에서 수용 여부를 별도 검토한다.

 마. 인정물질에 대한 새로운 과학적 발견이나 문제가 발생할 경우, 재평가하여 효능의 조정 또는 물질의 취소가 가능하다.

 바. 평가수단 : 국제적으로 인정받은 호흡대사챔버(Respiration Chamber), 그린피드(GreenFeed) 장비에 의한 대상 축종의 국내 실험 결과만 인정하며, 타 축종의 실험결과를 확대 적용할 수 없다. (예시: 한우 실험결과는 한우만, 젖소 실험결과는 젖소만, 염소 실험결과는 염소만 인정)

 사. 실험기관 : 바.에서 설명하는 장비(또는 실험방법)에 의한 실험이 가능한 대학, 연구소 등으로 국립축산과학원장이 인정하여 공고한 실험기관. 다만 객관성 확보를 위해 자사 실험실 등을 활용하여 자사 제품을 평가한 경우는 인정하지 않는다.

 아. 메탄저감제는 원료명이 아닌 제품명으로 한다.

2. 메탄저감제의 공고 및 실험기관 사후관리

 가. 국립축산과학원장은 메탄저감제가 설정ㆍ변경ㆍ삭제될 때마다 이를 반영하여 국립축산과학원 홈페이지에 아래 표와 같이 공고한다.

┌──┬──────┬──────┬───┬────────┬────┬──┐

│번호│사료의 종류 │사료의 명칭 │제품명│사료내 첨가 기준│사용축종│비고│

├──┼──────┼──────┼───┼────────┼────┼──┤

│1   │            │            │      │                │        │    │

├──┼──────┼──────┼───┼────────┼────┼──┤

│2   │            │            │      │                │        │    │

└──┴──────┴──────┴───┴────────┴────┴──┘

 나. 국립축산과학원장은 메탄저감제 실험결과의 정확성 및 신뢰성 등을 검토하기 위해 국립축산과학원장이 정하는 바에 따라 실험기관에 대한 점검을 실시한다.

 다. 국립축산과학원장은 나.에 따른 점검결과 실험의 정확성 및 신뢰성 등에 영향을 미칠 수 있다고 국립축산과학원장이 정하는 상황에 해당하는 경우 농림축산식품부장관에게 보고해야 한다.

별표 0001: 사료공정 설정·변경 또는 폐지 신청서

  [별지 제1호서식]                                                        

  사료공정 설정ㆍ변경 또는 폐지 신청서                                                                      

──────────┬───────────────────────┬───────────────────

  접수번호          │접수일                                        │처리기간            3개월             

──────────┴───────────────────────┴───────────────────

─────┬───────────────────────────┬────────────────────

  신청인  │성 명(법인명)                                         │생년월일 (법인등록번호)                 

          ├───────────────────────────┼────────────────────

          │주 소                                                 │전자우편 주소                           

          ├───────────────────────────┼────────────────────

          │전화번호                                              │휴대전화번호                            

─────┴───────────────────────────┴────────────────────

─────┬───────────────────────────┬────────────────────

  신청    │사료의 종류                                           │사료의 명칭                             

  내용    ├───────────────────────────┼────────────────────

          │사료의 형태                                           │주요 성분 또는 물질명                   

          ├───────────────────────────┼────────────────────

          │제조국가 또는 원산지                                  │공정기준                                

─────┴───────────────────────────┴────────────────────

─────────────────────────────────┬────────────────────

  본인의 전자우편, 휴대전화 등을 이용해 요청서 처리와 관련된      │[ ]예    [ ]아니오                      

  정보 제공에 동의하십니까?                                       │                                        

─────────────────────────────────┴────────────────────

    「사료관리법」 제11조제4항 및 같은 법 시행규칙 제11조제2항에 따라 위와 같이                             

   사료공정 설정ㆍ변경 또는 폐지를 신청합니다.                                                              

  년     월     일                                                                                          

  신청인                                     (서명 또는 인)                                                 

    국립축산과학원장  귀하                                                                                  

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──────┬──────────────────────────────────────┬────────

  첨부서류  │1. 새로 개발되어진 사료인 경우.                                             │수수료          

            │ 가. 사료의 제조에 대한 설명 자료 1부.                                      │없음            

            │ 나. 사료의 확인에 대한 설명 자료 1부.                                      │                

            │ 다. 사료의 품질 및 안전성 관련 증빙 자료 1부.                              │                

            │ 라. 대상 동물등 급여시험 결과 또는 국외 공인기관 등록 자료 1부.            │                

            │2. 기타 공정관리의 설정·변경 또는 폐지를 요청하는 경우.                    │                

            │ 가. 사료의 품질 및 안전성 관련 증빙 자료 1부.                              │                

            │ 나. 요청내역을 뒷받침하는 자료 1부.                                        │                

──────┴──────────────────────────────────────┴────────

━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━

  처리절차                                                                                                  

──────────────────────────────────────────────────────

┌──────┐  ┌───────┐    ┌───┐              ┌────────┐  ┌─────────┐

│신청서 작성 │?│접 수         │?  │검 토 │?            │공정 설정       │?│공고 및 고시 개정 │

└──────┘  └───────┘  ─┴───┴─────    └────────┘  └─────────┘

  신청인            국립축산과학원      사료공정심의위원회        농림축산식품부        농림축산식품부      

──────────────────────────────────────────────────────

  210㎜×297㎜[백상지 80g/㎡(재활용품)]                                                                     

별표 0001: 반추동물사료 전용운반

  [그림 1]    

별표 0002: 지대포장, 톤백포장

  [그림 2]                

     1. 동물성사료를 운반하는 경우 : 포   

  장색깔은 노란색을 사용하고, 적색 글씨   

  로 "소 등 반추동물에 사용금지"를        

  표시                                    

  2. 반추동물용 배합사료를 운반하는 경    

  우 : 포장색깔은 녹색을 사용하고,        

  적색글씨로 "소 등 반추동물용 이         

  외 용도로 사용금지"를 표시              


부칙

['부칙 제1조(시행일) 이 고시는 2015년 1월 1일부터 시행한다. 다만 제4조 및 제5조는 2014년 12월 8일부터 시행한다.제2조(다른 고시의 폐지) 「유해사료의 범위와 기준」(농림축산식품부 고시 제2014-46호, 2014. 4. 29.)은 폐지한다.제3조(유효기간) 별표 9의 제1호나목, 제4호, 별표 16의 제2호 단서조항, 별표 18의 제1호마목 단서조항의 개정규정은 2015년 12월 31일까지 그 효력을 가진다.제4조(경과조치) ① 이 고시 시행 당시 종전규정에 따라 행해진 사항은 개정규정에도 불구하고 종전규정에 따른다.② 「유해사료의 범위와 기준」(농림축산식품부 고시 제2014-46호, 2014. 4. 29.) 시행당시 종전규정에 따라 행해진 사항은 폐지에도 불구하고 종전규정에 따른다.③ 이 고시 시행 당시 종전의 규정에 따라 제작된 포장재(용기 및 라벨을 포함한다)는 이 고시 시행일부터 1년 동안 사용할 수 있다. 다만, 제3조에 해당하는 그 밖에 동물ㆍ어류용(양식용 수산동물은 제외한다)의 포장재(용기 및 라벨을 포함한다)는 이 고시 시행일부터 3년 동안 사용할 수 있다.④ 2014년 12월 31일까지 성분등록된 사료는 기존에 등록된 명칭을 2016년 12월 31일까지 사용할 수 있다.제5조(다른 고시와의 관계) 이 고시 시행 당시 다른 고시 등의 규정에서 종전의 「사료공정서」 및 「유해사료의 범위와 기준」 또는 그 조항을 인용한 경우에는 이 고시에 그에 해당하는 규정이 있으면 종전의 고시 또는 그 조항을 갈음하여 이 고시 또는 이 고시의 해당 규정을 인용한 것으로 본다.제6조(재검토기한) 이 고시는 2017년 12월 7일까지 "「훈령ㆍ예규등의 발령 및 관리에 관한 규정」(대통령훈령 제248호)" 제7조 제3항 제2호에 따라 재검토하여야 한다.', '부칙 제1조(시행일) 이 고시는 2015년 9월 1일부터 시행한다. 다만, 제4조 및 제5조는 2015년 8월 21일부터 시행하며, 별표 15 및 별표 20은 2016년 1월 1일부터 시행하며, 별표 16. 제3호는 2016년 7월 1일부터 시행한다.제2조(유효기간) 별표 9의 제1의2호나목, 제4호, 별표 16의 제2호 단서조항, 별표 18의 제1호마목 단서조항의 규정은 2016년 6월 30일까지 그 효력을 가진다.제3조(경과조치) ① 이 고시 시행 당시 종전규정에 따라 행해진 사항은 개정규정에도 불구하고 종전규정에 따른다.② 이 고시 시행 당시 종전의 규정에 따라 제작된 포장재(용기 및 라벨을 포함한다)는 이 고시 시행일부터 2년 동안 사용할 수 있다. 다만, 제3조에 해당하는 그 밖에 동물ㆍ어류용(양식용 수산동물은 제외한다)의 포장재(용기 및 라벨을 포함한다)는 이 고시 시행일부터 3년 동안 사용할 수 있다.③ 농림축산식품부고시 제2014-106호(2014.12.8.) 시행 당시 종전의 규정에 따라 제작된 포장재(용기 및 라벨을 포함한다)는 이 고시 시행일부터 2년 동안 사용할 수 있다. 다만, 제3조에 해당하는 그 밖에 동물ㆍ어류용(양식용 수산동물은 제외한다)의 포장재(용기 및 라벨을 포함한다)는 이 고시 시행일부터 3년 동안 사용할 수 있다.④ 「사료관리법 시행규칙」 별표 4, 「약사법」, 「표시, 광고의 공정화에 관한 법률」, 「부당한 표시ㆍ광고행위의 유형 및 기준 지정고시」 등의 규정을 위반한 경우에는 제2항과 제3항을 제외한다.제4조(재검토기한) 농림축산식품부장관은 「훈련ㆍ예규 등의 발령 및 관리에 관한 규정」에 따라 이 고시에 대하여 2016년 1월1일 기준으로 매3년이 되는 시점(매 3년째의 12월31일까지를 말한다)마다 그 타당성을 검토하여 개선 등의 조치를 하여야 한다.', '부칙 제1조(시행일) 이 고시는 2016년 7월 1일부터 시행한다.제2조(경과조치) 이 고시 시행 당시 종전규정에 따라 행해진 사항은 개정규정에도 불구하고 종전규정에 따른다.', '부칙 제1조(시행일) 이 고시는 2016년 12월 1일부터 시행한다. 다만 별표 3, 별표 13, 별표 16, 별표 17  및 별표 21의 개정규정은 2018년 1월 1일부터 시행한다.제2조(경과조치) 이 고시 시행 당시 종전규정에 따라 행해진 사항은 개정규정에도 불구하고 종전규정에 따른다.', '부칙 제1조(시행일) 이 고시는 2017년 4월 3일부터 시행한다. 다만 별표 10의 개정규정은 2017년 6월 3일부터 시행하고, 별표 1, 별표 5, 별표 11 , 별표 19 및 별표 21 남은음식물사료의 사료공정 변경은 2017년 10월 1일부터 시행한다.제2조(경과조치) ① 이 고시 시행 당시 종전규정에 따라 행해진 사항은 개정규정에도 불구하고 종전규정에 따른다.② 별표 3, 별표 13, 별표 16, 별표 17 및 별표 21에 따른 양돈용 배합사료의 성분등록 변경은 시행일(2018.1.1.) 이전에도 변경이 가능하며, 성분등록증 변경 시 변경된 기준을 적용한다.③ 별표 1, 별표 11, 별표 19 및 별표 21에 따른 "남은음식물사료"의 성분등록 변경은 시행일(2017.10.1.) 이전에도 변경이 가능하며, 성분등록증 변경시 변경된 기준을 적용한다.', '부칙 제1조(시행일) 이 고시는 2018년 11월 27일부터 시행한다.제2조(경과조치) ① 이 고시 시행 당시 종전규정에 따라 행해진 사항은 개정규정에도 불구하고 종전규정에 따른다.', '부칙 제1조(시행일) 이 고시는 2019년 10월 24일부터 시행한다.제2조(경과조치) 이 고시 시행 당시 종전규정에 따라 행해진 사항은 개정규정에도 불구하고 종전규정에 따른다.제3조(재검토기한) 농림축산식품부장관은 이 고시에 대하여 2020년 1월 1일 기준으로 매 3년이 되는 시점(매 3년째의 12월 31일까지를 말한다)마다 그 타당성을 검토하여 개선 등의 조치를 하여야 한다.', '        부칙 제1조(시행일) 이 고시는 발령한 날부터 30일이 경과한 날부터 시행한다.제2조(섬유질 배합사료 등록에 관한 경과조치) 이 고시 시행 당시 종전 규정에 따라 반추동물용 섬유질 배합사료로 성분등록한 사료는 개정 고시에 따른 섬유질 배합사료로 본다. ', '        부칙 제1조(시행일) 이 고시는 공표한 날부터 시행한다. 다만, 별표21의 개정사항은 공표 후 2022년 7월 1일부터 시행한다.제2조(성분등록의 경과조치) 이 고시 시행 당시 종전의 규정에 따라 등록한 성분등록은 개정규정에도 불구하고 2022년 6월 30일까지 유효한 것으로 본다.', '        부칙 제1조(시행일) 이 고시는 발령한 날부터 시행한다.제2조(성분등록에 관한 경과조치) ① 이 고시 시행 당시 「사료 등의 기준 및 규격」(농림축산식품부 고시 제2021-32호, 2021.5.24.)에 따라 등록한 성분등록은 개정규정에도 불구하고 2022년 6월 30일까지 유효한 것으로 본다.② 이 고시 시행 당시 종전의 별표 13 제4호가목에 따라 성분등록한 "중송아지"는 "육성우"로 성분등록한 것으로 본다.', '        부칙 제1조(시행일) 이 고시는 공표한 날부터 시행한다. 다만, 별표 21의 다목 개정사항은 공표 후 2022년 10월 1일부터 시행한다.', '        부칙 이 고시는 발령한 날부터 시행한다.', '        부칙 이 고시는 발령한 날부터 시행한다.']

부칙 공포정보: ['20141208', '20150821', '20160701', '20161201', '20170401', '20181127', '20191024', '20210524', '20211229', '20220311', '20220722', '20231004', '20240401'] (공포번호: ['2014-106', '2015-101', '2016-58', '2016-155', '2017-28', '2018-93', '2019-58', '2021-32', '2021-99', '2022-28', '2022-55', '2023-69', '2024-27'])