# 먹는물수질검사기관 바이러스 및 원생동물 분야 지정 등에 관한 규정
(행정규칙구분=고시, 공포일자=20211220, 시행일자=20211220, 소관부처=국립환경과학원)
행정규칙번호: 2021-90
출처: 국가법령정보센터

행정규칙명: 먹는물수질검사기관 바이러스 및 원생동물 분야 지정 등에 관한 규정
행정규칙종류: 고시
발령일자: 20211220
발령번호: 2021-90
시행일자: 20211220
소관부처: 국립환경과학원
담당부서기관: 국립환경과학원(상하수도연구과)
현행여부: Y

조문내용:
['제1조(목적) 이 규정은「먹는물관리법」제43조과 같은 법 시행규칙(이하 "규칙"이라 한다) 제35조에 따른 먹는물수질검사기관 바이러스 및 원생동물 분야(이하 "검사기관"이라 한다)의 지정, 정도관리 및 분석방법 등에 관하여 필요한 사항을 정함을 목적으로 한다.', '제2조(적용범위) 검사기관의 지정, 정도관리 및 분석방법 등에 관하여는 다른 법령에 특별한 규정이 있는 경우를 제외하고는 이 규정에 따른다.', '제3조(시험법의 적용) 이 규정에서 명시한 모든 시료의 분석은 별표 1의 바이러스 및 원생동물분야 표준시험방법을 준수하여야 한다.', '제4조(지정신청) 검사기관으로 지정을 받고자 하는 자는 규칙 별지 제36호서식의 검사기관 지정신청서(이하"신청서"라 한다)에 다음 각 호의 서류(전자문서를 포함한다)를 첨부하여 국립환경과학원장(이하"과학원장"이라 한다)에게 제출하여야 한다.1. 기술인력 자격요건을 만족하는 증빙자료(학력증명서, 경력증명서 등)와 그 기관의 장에 의해 임명된 사실을 입증할 수 있는 서류2. 보유장비와 기술인력으로 정수시설의 원수시료를 채취하여 분석한 결과와 표준시험방법의 정도관리를 수행한 자료3. 장비목록(장비사진, 장비명, 수량, 제조회사, 제작연도) 및 장비사용대장4. 검사시설 및 장비의 배치도5. 검사수수료, 검사업무 수행절차ㆍ방법 및 측정분석기록물의 보관 등에 관한 자료', '제5조(신청서 검토) 과학원장은 신청기관이 제출한 서류에 대하여 다음 각 호의 사항을 검토하여 적합여부를 판정한다.1. 신청서의 기재사항 적정 및 구비서류 제출 여부2. 측정분석기록물의 적정 및 기술 인력의 자격요건 적합 여부3. 검사시설 및 장비의 적합 여부4. 검사시설이 원활한 분석업무를 수행할 수 있도록 적절히 배치되었는지 여부5. 검사수수료 등을 포함한 검사업무에 관한 사항의 적정 여부', '제6조(신청서 보완) 과학원장은 제5조의 규정에 따라 검토한 신청서의 내용이 미비하다고 인정되는 경우, 신청기관에게 필요한 자료를 14일 이내에 보완하여 제출하도록 문서로 요구할 수 있다. 다만, 보완에 소요되는 기간은 민원처리기간에 산입하지 아니한다.', '제7조(신청서 반려) ① 과학원장은 제6조 또는 제9조에서 규정한 기간 내에 신청서류 또는 현지평가 결과를 보완하지 아니한 때에는 그 사유를 명시하여 접수된 신청서를 반려할 수 있다.② 과학원장은 제8조에서 규정한 측정분석능력평가 결과가 부적합으로 판정된 경우 그 사유를 명시하여 접수된 신청서를 반려할 수 있다.', '제8조(측정분석능력평가) ① 과학원장은 신청서 및 구비서류가 적정하게 제출ㆍ보완된 경우, 신청기관에 대하여 측정분석능력평가를 실시할 수 있다.② 측정분석능력평가는 평가용 표준시료(이하"평가시료"라 한다)를 배부하여 실시하며, 평가항목 및 평가기준은 별표 2와 같다.③ 측정분석능력평가에 소요되는 기간은 민원처리 기간에 포함되지 않으며, 신청기관은 측정분석기록물을 작성하여 시료의 배부일로부터 원생동물 분야는 20일, 바이러스 분야는 50일 이내에 각각 제출하여야 한다.④ 과학원장은 별지 제1호서식에 따라 신청기관의 측정분석능력을 평가하고 모두 적합인 경우 적합으로 판정한다.', '제9조(현지평가) ① 과학원장은 제8조의 측정분석능력평가 결과가 적합으로 판정된 경우, 평가위원 3인(과학원 관계공무원 1인 이상 포함) 이상으로 현지평가를 실시할 수 있다.② 평가위원은 별지 제2호서식(바이러스 분야) 및 별지 제3호서식(원생동물 분야)의 현지점검 평가표에 따라 평가를 실시하고, 별지 제4호서식의 현지점검 평가서를 작성하여 과학원장에게 제출한다.③ 평가결과는 현지점검 평가표의 운영능력 및 분석능력 분야의 종합판정 결과가 모두 적합인 경우에 적합으로 판정한다.④ 과학원장은 현지평가 결과, 보완이 필요한 사항이 있을 경우에는 신청기관에 즉시 문서로 보완을 요구하여야 하며, 신청기관은 14일 이내에 보완을 이행하고 그 결과를 제출하여야 한다. 다만, 보완에 소요되는 기간은 민원처리기간에 산입하지 아니한다.', '제10조(평가위원의 위촉) ① 과학원장은 바이러스 및 원생동물검사 분야에 대해 각각 관련 전문가 15인 이내의 범위에서, 다음 각 호의 업무를 담당할 평가위원을 위촉할 수 있다.1. 제9조의 규정에 따른 현지평가2. 「먹는물 관련 영업장등의 지도ㆍ점검에 관한 규정」제4조 지도점검 시 민간인 참관3. 표준시험방법(바이러스 및 원생동물 분야) 개정 등② 평가위원의 임기는 2년으로 하되, 연임할 수 있다. 다만, 보궐위원의 임기는 전임자의 잔여기간으로 한다.③ 과학원장은 필요하다고 인정되는 경우, 평가위원회를 개최할 수 있다.', '제11조(수당 및 여비) 과학원장은 평가위원의 현지평가 수행 등에 대하여 예산의 범위 내에서 평가수당 및 여비를 지급할 수 있다.', '제12조(종합평가) 과학원장은 신청서 검토, 측정분석능력평가 및 현지평가 등을 종합적으로 검토하여 그 결과가 모두 적합인 경우에 적합으로 최종 판정한다.', '제13조(지정 및 공고) 과학원장은 제12조의 종합평가 결과가 적합으로 판정되면, 신청서가 접수된 날로부터 60일 이내에 신청기관에 검사기관 지정서(이하"지정서"라 한다)를 교부하고 이를 관보에 공고한다.', '제14조(변경지정 신청) ① 검사기관으로 지정을 받은 자가 지정사항을 변경하고자 할 경우에는 관련 구비서류 이외에 제4조제2항의 서류를 첨부하여 과학원장에게 제출하여야 한다.② 과학원장은 기술인력 변경의 경우, 제8조의 측정분석능력 평가를 실시할 수 있다.', '제15조(검사기관의 정도관리) ① 검사기관의 분석책임자는 검사가 시험계획 및 방법 등에 따라 적절히 수행되고 있는 지를 확인하여야 한다.② 검사기관의 분석책임자는 제ⓛ항의 확인을 위하여 분석업무에 참여하지 않는 자 중에서 전문지식이 있는 자를 정도관리담당자로 지정하여야 한다.③ 정도관리담당자는 다음 각 호의 사항을 수행하여야 한다.1. 표준시험방법에 따라 정도관리의 실시 및 기록보관(3년간)2. 분석인력들이 시험계획서와 별표 1의 표준시험방법 등을 준수하고 있는지 확인3. 시험시설이나 분석장비 등의 정기적 검사를 준수하고 있는지 확인4. 시험성적서 결과가 시험기초자료(시험일지 등)를 정확히 반영하고 있는지 확인④ 정도관리 결과 검사가 시험계획 및 방법 등에 따라 적절히 수행되고 있지 못하다고 판단될 때에는 시료분석을 중지하고 원인을 해소한 후 다시 정도관리를 실시한다.', '제16조(지도점검 및 숙련도평가) ① 과학원장은 「먹는물 관련 영업장 등의 지도ㆍ점검에 관한 규정」 제5조에 의하여 지도ㆍ점검을 실시할 수 있다. 다만, 검사기관의 분석인력에 대해 별표 2에 따라 바이러스, 크립토스포리디움 및 지아디아 회수율의 적합 여부를 판단하는 숙련도 평가를 실시한 경우, 이것으로 지도ㆍ점검을 대체할 수 있다. 단, 2년에 1회 이상은 반드시 지도ㆍ점검을 실시해야 한다.② 숙련도평가시 검사기관은 과학원장이 배포한 표준시료에 대해 분석을 실시하고, 그 결과를 과학원장에게 보고하여야 한다.③ 지도ㆍ점검 또는 숙련도평가 결과 부적합 판정을 받은 기관은 그 판정을 통보받은 날부터 해당 검사를 할 수 없다.④ 제3항에 따른 검사기관이 해당 검사 등을 재개하려는 경우에는 부적합한 사항을 보완한 후 지도ㆍ점검 또는 숙련도평가를 다시 신청하여 적합 판정을 받아야 한다.', '제17조(측정분석기록물의 보관) ① 측정분석기록물은 별표 3의 보관방법에 따른다.② 실험실정보관리시스템 및 전자결재시스템을 사용하는 경우에는 측정분석기록물을 전자시스템에 저장하여 보관할 수 있다.', '제18조(규제의 재검토) 과학원장은 「행정규제기본법」에 따라 이 고시에 대하여 2022년 1월 1일을 기준으로 매 3년이 되는 시점(매 3년째의 12월 31일까지를 말한다)마다 그 타당성을 검토하여 개선 등의 조치를 하여야 한다.']


개정문

⊙국립환경과학원고시 제2021-90호

  「먹는물관리법」제43조 및 동법 시행규칙 제35조에 따른 「먹는물수질검사기관 바이러스 및 원생동물 분야 지정 등에 관한 규정」을 다음과 같이 일부 개정ㆍ고시합니다.

   2021년 12월 20일

          국립환경과학원장

「먹는물수질검사기관 바이러스 및 원생동물 분야 지정 등에 관한 규정

[본문 생략]

          부칙 

이 고시는 고시한 날부터 시행한다.


별표

별표 0001: 바이러스 및 원생동물 표준시험방법 (제3조 관련)

[별표 1] 

바이러스 및 원생동물 표준시험방법 (제3조 관련)

1. 바이러스 검사 분야

가. 목 적

 이 시험방법은「수도법」제28조의2에 의한 바이러스의 분포실태조사를 실시함에 있어 검사결과의 정확과 통일을 기하기 위해 필요한 제반사항에 대하여 규정함을 목적으로 한다.

 나. 배양액 및 시약

1) 시료채취과정

 가) 2 % 티오황산나트륨(Na2S2O3)용액 - 티오황산나트륨 100 g을 증류수에 녹여 최종적으로 5 L의 보관용액을 제조하고 121 ℃에서 30분간 고압증기 멸균한다.

나) 염산(HCl)용액 - 0.1, 1, 그리고 5M의 염산용액을 각각 5 L, 1 L, 그리고 100 mL 만든다. 용액은 물시료의 pH를 조정하는데 사용하며 적어도 사용하기 24시간 이전에 준비한다.

2) 시료 전처리과정

가) 수산화나트륨(NaOH)용액 - 각각 4 g과 20 g의 수산화나트륨을 최종 부피 100 mL 의 증류수에 녹여 1 M 및 5 M 수산화나트륨 용액을 준비한다. 수산화나트륨 용액은 상온에서 수개월 동안 보관할 수 있다.

나) 소고기엑스 완충액 - 소고기엑스 V 분말(Difco No. 0115-17이나 동급 제품) 30 g과 글리신(glycine) 7.5 g (글리신의 최종농도 = 0.05M)을 1.9 L의 증류수에 녹여 1.5 % 의 소고기엑스 완충액을 준비한다. 1M 혹은 5M 수산화나트륨 용액을 사용하여 pH를 9.5로 맞춘 다음, 증류수로 최종 부피 2 L가 되도록 조절한다. 121 ℃에서 15분간 고압증기 멸균하여 실온에서 사용한다. 소고기엑스 용액은 4 ℃에서 일주일간 혹은 ?20 ℃에서 장기간 보관할 수 있다 새로 들여오는 소고기엑스 V 분말은 유기침전 농축과정에 사용하기 전에 바이러스 회수에 적절한지 다음의 방법으로 검사한다. ① 1 L의 소고기엑스에 200 PFU/mL의 희석된 정도관리 시료를 1 mL 섞어 위에 설명된 대로 유기응집법과 배양성 바이러스 분석법으로 분석해본다. ② 희석되지 않은 시료와 1:5, 1:25로 희석된 시료를 각각의 양성대조군과 함께 분석한다. ③ 3회 수행했을 때 폴리오바이러스의 평균 회수율이 최소 50 % 에 도달해야 한다. 

. 

다) 인산1수소나트륨ㆍ7수화물(Na2HPO4ㆍ7H2O) - 0.15M

40.2 g의 인산1수소나트륨ㆍ7수화물을 최종 부피 1,000 mL의 증류수에 녹인 다음, 수산화나트륨 용액을 사용하여 pH를 9.0-9.5 사이로 조절하고, 121 ℃에서 15 분간 고압증기 멸균한다. 

3) 총 배양성 바이러스 분석과정

제조업체에 의해 명시된 시약의 보관 조건과 배양액의 만료기일을 엄격하게 지켜야 한다.

가) EDTA(Elthylene diamine tetra acetic acid)-트립신(trypsin) 용액(10 L)

30 g의 트립신(1:250) 혹은 25 g의 트립신(1:300)을 6 L 용량의 플라스크에 담긴 2 L의 증류수에 넣고 자석교반막대를 넣는다. 플라스크를 자력교반기(magnetic stirrer) 위에 놓고 트립신 용액을 빠르게 최소한 1시간 동안 섞는다. 이때 트립신 용액은 계속 불투명한 상태로 남아있게 된다. 20 L 용량의 투명한 내산성 플라스틱 용기에 교반막대를 넣고 4 L의 증류수를 넣는다. 플라스틱 용기를 교반기 위에 놓고 회오리를 일으킬 속도로 저으면서 아래의 시약을 첨가한다. 

 - 80 g 염화나트륨(NaCl), 12.5 g EDTA, 50 g 포도당(dextrose), 11.5 g 인산1수소나트륨ㆍ 7수화물(Na2HPO4ㆍ7H2O), 2.0 g 염화칼륨(KCl), 2.0 g 인산2수소칼륨(KH2PO4)

각각의 시약들은 다음 시약을 넣기 전에 완전히 녹여야 할 필요는 없다. 플라스틱 용기에 4 L의 증류수를 더 첨가하고 모든 시약들이 완전히 녹을 때까지 섞는다. 위의 트립신 용액 2 L를 플라스틱 용기의 용액에 첨가하고 최소한 1시간 동안 저어준다. EDTA-트립신 용액의 pH를 7.5-7.7로 맞춘다. 멸균필터를 사용하여 용액을 여과하고 단단히 밀폐하여 4 ℃에 보관한다.

나) 최소 필수 영양 배양액(MEM/L-15) 10 L

(1) 행크스용액(Hanks' salts)과 L-글루타민이 포함된 이글스 최소 필수영양배양액(Eagle's minimum essential medium, MEM). 단, 탄산수소나트륨(NaHCO3)은 포함되지 않은 것을 사용한다.

(2) L-글루타민이 포함된 레보비츠 배양액(Leibovitz's L-15 medium, Life Technologies Product No. 430-1,300이나 동등 제품). 20 L 용량의 플라스틱 용기에 교반막대와 4 L의 증류수를 넣는다. 플라스틱 용기를 교반기 위에 놓고 회오리를 일으킬 속도로 저으면서 5 L 단위의 L-15 배양액 내용물을 첨가한다. 배양액이 들어있던 용기를 200 mL의 증류수로 3번 세척하고 세척한 증류수도 플라스틱 용기에 부어 넣는다. 배양액이 균일하게 분산될 때까지 젓는다(L-15 배양액은 불균일하게 보일 수도 있으나 완전히 녹여야 할 필요는 없다). 위의 플라스틱 용기에 3 L의 증류수를 넣고 5 L 단위의 MEM 배양액 내용물을 첨가한다. 배양액이 들어있던 용기를 200 mL의 증류수로 3번 세척하고 세척한 증류수도 용기에 부어 넣는다. 800 mL의 증류수와 7.5 g의 탄산수소나트륨(NaHCO3)을 넣고 60분간 더 섞어준다. MEM/L-15 배양액을 압력용기에 옮겨 담고 양압(positive pressure)을 사용하여 0.22 ㎛ 필터로 여과한다. 여과된 배양액을 BGM(Buffalo Green Monkey) 세포 배양에 적절한 부피로 나누어 담고(즉, 1 L 용량의 배양액 용기에 900 mL씩 담는다), 뚜껑으로 단단히 밀폐시켜 4 ℃에서 최대 2개월 동안 보관한다.

다) 트리판블루(Trypan blue) 용액 (100 mL)  이 시약은 살아 있는 BGM 세포의 수를 직접적으로 계수하는데 사용된다.  트리판블루를 제조하고 사용하는데 있어서 피부에 닿거나 흡입하지 않도록 주의한다(이 물질은 미국 환경보호청의 발암물질 후보 리스트에 등재되어 있다).  제조 및 사용 시에 고무장갑을 끼는 것이 좋다. 

0.5 g의 트리판블루를 250 mL 플라스크에 담긴 100 mL의 증류수에 첨가하고 완전히 용해될 때까지 흔들어준다. 위 용액을 121 ℃에서 15분간 고압증기멸균 한다. 나사형 뚜껑이 있는 용기에 담아 실온에 보관한다.

라) 페니실린-스트렙토마이신 저장용액 [100 mL : 100,000 units/mL 페니실린과 100,000 ㎍/mL 스트렙토마이신]

10,000,000 U(units)의 페니실린 G와 10 g의 스트렙토마이신 설페이트(streptomycin sulfate)를 250 mL 플라스크에 담긴 100 mL의 증류수에 섞는다. 항생제가 완전히 용해될 때까지 교반기로 저어준다. 항생제를 0.22 ㎛ 필터로 여과하여 멸균한 다음, 나사형 뚜껑이 딸린 용기에 10 mL씩 담는다.

마) 테트라싸이클린(tetracycline) 저장용액 (50 mL)

1.25 g의 테트라싸이클린 염산염(hydrochloride)과 3.75 g의 아스코빅산을 50 mL의 증류수가 담긴 125 mL 용량의 플라스크에 넣는다. 항생제가 완전히 용해될 때까지 교반기로 섞는다. 항생제를 0.22 ㎛ 필터로 여과하여 멸균한 다음, 나사형 뚜껑이 딸린 용기에 5 mL씩 담는다.

바) 암포테리신 B (Amphotericin B, 푸지존 (fungizone)) 저장용액(25 mL)

0.125 g의 암포테리신 B(푸지존), 페니실린 G를 25 mL의 증류수가 담긴 50 mL 용량의 플라스크에 넣는다. 항생제가 완전히 용해될 때까지 교반기로 섞는다. 항생제를 0.22 ㎛ 필터로 여과하여 멸균한 다음, 나사형 뚜껑이 딸린 용기에 2.5 mL씩 나누어 담는다.

사) 성장용 배양액(Growth medium)

MEM/L-15 배양액에 10 % 소태아 혈청세포배양액에 첨가하는 혈청으로는 멸균된 소태아(fetal calf), 면역글로불린이 제거된 소신생아(gammaglobulin-free newborn calf), 혹은 철이온이 보강된 송아지의 혈청을 사용하되 바이러스나 박테리오파지(bacteriophage), 마이코플라스마(mycoplasma) 등에 의한 오염이 없는 등급의 것이어야 한다.  혈청의 각 롯트(lot)는 구입하기 이전에 세포 성장과 세포독성에 대해 검사한다. 혈청은 ?20 ℃에서 장기간 보관할 수 있으나 일단 혈청을 녹인 후에는, 병째로 56±1 ℃ 항온수조에서 30분간 불활성화(heat-inactivation)시켜 단기간만 4 ℃에 보관한다. 

(fetal calf serum)과 항생제를 첨가하여 제조한다(100 mL의 혈청, 1 mL의 저장용 페니실린-스트렙토마이신, 0.5 mL의 저장용 테트라싸이클린, 0.2 mL의 저장용 푸지존을 900 mL의 MEM/L-15 배양액에 첨가한다).

아) 유지용 배양액(Maintenance medium)

MEM/L-15 배양액에 항생제와 함께 2 % 혹은 5 % 소태아 혈청을 첨가하여 제조한다(20 혹은 50 mL의 혈청, 성장용 배양액와 동일한 양의 항생제들, 80 혹은 50 mL의 증류수를 첨가한다). 세포변성의 관찰 실험에서는 2 %의 혈청을 첨가한 유지용 배지를 사용한다. 성장용(growth) 및 유지용(maintenance) 배양액은 사용하는 날에 제조되어야 한다.

4) 세포독성물질의 최소화과정

가) 세척액

8.5 g 염화나트륨(NaCl)을 980 mL의 증류수에 녹인다. 이 용액을 고압증기 멸균하고 상온으로 식힌 후 20 mL의 소태아 혈청을 첨가하여 혼합한다. 세척액은 4 ℃에 3개월 동안 보관이 가능하며 ?20 ℃에서는 장기간의 보관이 가능하다.

다. 기구 및 재료

1) 시료채취과정

가) 표준필터장치 조립용 부품(그림 1 참조)

표준필터장치(standard filter apparatus)는 전필터(prefilter), 탈염소화 또는 pH의 조정이 필요할 때 이외에는 모든 시료채취에 사용된다.

(1) 역류조절기(Backflow Regulator, BR) 1개 

(2) 회전식 고정장치(Swivel Female insert with garden hose thread, SF) 1개 

(3) 압력튜브(Braided Tubing, BT) 1/2" clear 3 조 각 

(4) 호스 클램프(Hose Clamp, HC1) 6개 

(5) 호스 고정나사 1(Hose Fitting, HF) 1개 - nylon, 3/8" male NPT(National Pipe Thread) x 1/2" tubing ID 

(6) 압력조절기(Pressure Regulator) 1개 

(7) 이음관(PVC Nipple, PN) 1개 - 3/8" male NPT (263A regulator를 사용할 때는 이 부품이 필요하지 않다)

(8) PVC T자 연결관 1개 - PVC TEE with 3/8" female NPT ports. 63A regulator를 사용할 때는 이 부품이 필요하지 않다.

(9) 마모 감소 이음관(Reducing Bushing, RB1) 1개 - 3/8" NPT(M) x 1/4" NPT(F). 63A regulator를 사용할 때는 이 부품이 필요하지 않다.

(10) 압력게이지 1개 ? 0~30 PSI(pound per square inch). 263A regulator를 사용할 때는 이 부품을 1/4" gauge port에 연결한다.

(11) 어댑터(Reducing Adaptor, RA) 1개 - 1/2" female NPT x 3/8" male NPT

(12) 숫나사 신속 연결기 1(Male Quick Connect, MQ1) 1개 - 1/2" NPT. hose fittings과 braided tubing의 연결이 적절하면 quick connects를 사용하지 않아도 좋다.

(13) 암나사 신속 연결기 2(Female Quick Connects, FQ1) 2개 - 1/2" female NPT 

(14) 감속이음관(Reducing Nipples, RN1) 2개 - 3/4" male NPT x 1/2" male NPT 

(15) 카트리지 하우징(Cartridge Housing with wrench, CH) 1개  

(16) 필터 카트리지 1개  - positively charged filter, ZetaPor Virosorb.

(17) 숫나사 신속 연결기 2(Male Quick Connect, MQ2) 1개 - 1/2" female NPT 

(18) 호스 고정나사 2(Hose Fitting, HF2) 1개 - 1/2" male NPT x 1/2" tubing ID 

(19) 유량계(Water Meter, WM) 1개 - 유량계는 수평의 위치에서 사용되어야 하며 추위에 의해 동파되지 않도록 잘 보호해야 한다. 실험자는 유량계의 눈금이 나타내는 계량 단위를 정확히 알아야 한다.

        (1 gal= 0.1337 ft3 또는 3.7854 L; 1 ft3= 7.481 gal 또는 28.316 L)

(20) 호스고정나사 3(Hose Fitting, HF3) 1개 - 3/4" male NPT x 1/2" tubing ID

(21) 유량조절밸브(Flow Control Valve, FV) 1개 

나) 전필터(prefilter) 모듈 조립용 부품 (그림 2 참조)

탁도가 75 NTU를 초과하거나 여하한 이유로 인해 시료의 최소량을 채취할 수 없을 경우에 표준필터장치의 앞부분에 설치하여 사용한다.

(1) 전필터카트리지(PC) 1개 ? 10 ㎛ 폴리프로필렌

(2) 암나사 신속 연결기(female quick connect, FQ1) 1개 

(3) 감속 이음관(reducing nipple, RN1) 2개 

(4) 숫나사 신속연결기(male quick connect, MQ2) 1개 

(5) 카트리지 하우징(cartridge housing, CH) 1개 

다) 단일주입기 모듈 조립용 부품(그림 2 참조)

pH 저감이 요구되는 원수 또는 처리수와 탈염소화가 필요한 처리수를 위한 장치이다.

(1) 암나사 신속연결기(Female Quick Connects, FQ2) 2개 - 1/2" male NPT 

(2) 숫나사 엘보(Male Elbows, ME) 4개  - 3/8" male NPT 

(3) 감속 이음관(Reducing Nipples, RN2) 2개 - 3/8" male NPT x 1/2" male NPT

(4) 마모 감소이음관(Reducing Bushings, RB2) 2개 - 3/8" female NPT x 1/2" male NPT

(5) 유입관(In-Line Injectors, IN) 3개 - 계량펌프, metering pump와 적절한 connector로 injector를 대체할 수 있다.

(6) 호스 집게(hose clamp, HC) 3개 

(7) 표준장치를 조립할 때와 마찬가지로 감소 어댑터(RA) 4개,  PVC T자관 (TE) 4개, 마모 감소이음관 1(RB1) 2개, 압력계(pressure gauge: PG) 2개, 암나사 신속 연결관 1(FQ1) 2개, 숫나사 신속 연결관 1(MQ1) 2개, 숫나사 신속 연결관 2(MQ2) 2개가 추가적으로 필요하다.

라) 기타

(1) 휴대용 pH 측정계 

(2) 휴대용 온도 측정계 

(3) 얼음팩 

(4) 입구가 넓은 1 L 용량의 폴리프로필렌 병 

(5) 휴대용 아이스(단열)박스 

(6) 알루미늄 호일, 기록용지, 호스 연결집게, 수술용 장갑, 클램프 조절용 드라이버 혹은 플라이어, 유성펜.

(7) 30 PSI에서 11.4 L/min을 공급할 수 있는 화학약품내성 펌프와 적당한 connector(원수나 처리수를 채취하는데 필요한 적정한 수압이 발생되는 수도꼭지를 사용할 수 없을 경우, 또는 정도관리 시료를 조작할 경우에 사용한다). 펌프의 초기화는 펌프제조사의 권고에 따라 수행한다.

마) 장치의 조합

표준여과장치는 조절기(regulator)모듈, 필터하우징(filter housing)모듈, 배출기(discharge) 모듈로 구성되며 ‘모듈'이란 여러 부품이 모여 구성하는 하나의 기능단위를 말하는 것으로 필요한 경우 채수장치 전체로부터 간단한 조작으로 분리해낼 수 있어야 한다. 채수장치의 조립은 수중바이러스 검출 및 분석연구에 대해 국가로부터 지정받은 분석실험실에서 수행한다. 모든 비압착식 나사형 연결부위(threaded & non-compression fitting)에는 테프론 테이프를 사용하여야 한다.

(1) 조절기 모듈 - 그림 1에서와 같이, 역류조절기(BR)와 회전식 고정장치(SF)를 차례로 연결한다. 적당한 길이의 압력튜브(BT) 한 조각을 호스 클램프를 이용하여 암나사 회전식 연결관의 튜브 연결기(HC1)에 연결한다. 튜브의 다른 한쪽 끝은 3/8 x 1/2" 호스이음관(HF1)에 클램프로 연결한다. 호스 이음관을 돌려 압력조절기(PR)의 유입구에 연결한다. 압력조절기의 배출구는 PVC 이음관(PN)을 이용하여 PVC T자관(TE)과 연결한다. 압력계(PG)는 마모 감소이음관(RB)를 이용하여 PVC T자관의 꼭대기에 연결한다. 감속 어댑터(RA)를 PVC T자관의 마지막 남은 연결부위에 부착한다. 감속 어댑터에는 숫나사 신속 연결기(MQ1)를 부착한다.

(2) 필터하우징 모듈 ? 감속 이음관(RN1)에 암나사 신속 연결기(FQ1)를 부착한다. 감속 이음관(RN)은 카트리지 하우징(CH)의 유입구에 연결한다. 다른 하나의 감속 이음관을 하우징의 배출구에 연결한다. 감속 어댑터에 숫나사 신속 연경기(MQ2)를 부착한다.

(3) 배출기 모듈 ? 호스 고정기(HF2)에 암나사 신속 연결기(FQ1)를 부착한다. 적당한 길이의 압력호스를 호스 클램프(HC1)를 사용하여 호스 고정기에 연결한다. 관의 다른 한쪽 끝은 새 호스 클램프(HC1)를 사용하여 회전식 암나사 유입구에 부착한다. 회전식 암나사 유입구를 유량계(WM)의 유입구에 부착한다. 또 하나의 회전식 암나사 유입구를 유량계(WM)의 배출구에 부착하고 호스 클램프(HC1)를 사용하여 압력호스(BT) 한 조각과 연결한다. 관의 다른 한쪽 끝은 호스 클램프(HC1)를 사용하여 호스 고정기(HF3)에 부착한다. 호스 고정기를 돌려 유속조절밸브의 유입구에 끼워 넣는다. 배수구까지 충분한 길이의 튜브를 연결하기 위해 여분의 호스 고정기를 유속조절밸브에 부착할 수 있다. 배출기 모듈을 멸균할 필요는 없다.

(4) 신속 연결기(Quick connector)를 사용하여 필터하우징 모듈을 조절기 모듈과 연결한다. 연결된 조절기 및 필터하우징 모듈은 염소로 멸균하여야 한다. 바이러스용 양전하필터 카트리지(FC)는 전멸균하고 무균 조작하여 카트리지 하우징에 넣는다. 카트리지하우징의 덮개를 다시 덮고 카트리지하우징 렌치(wrench)를 사용하여 완전히 조인다. 하우징을 흔들어 필터가 빈틈없이 장착되었는지 확인한다. 제대로 장착된 필터는 흔들리지 않는다. 수송과정의 편의를 위해 조절기 모듈과 필터하우징 모듈을 분리해도 무방하다. 단, 모듈과 연결되는 모든 개구부는 멸균된 알루미늄 호일로 빈틈없이 싸주어야 한다.

(5) 전필터 모듈의 조립 - 그림 2와 같이, 암나사 신속 연결기(FQ1)를 감속 이음관(RN1)에 차례로 연결한다. 감속 이음관을 카트리지하우징(CH)의 유입구와 연결한다. 다른 하나의 감속 이음관은 하우징의 배출구에 연결한다. 숫나사 신속 연결기(MQ2)는 감속 어댑터에 부착한다 조합된 장치는 염소로 멸균소독하고 미리 멸균소독된 폴리프로필렌 전필터 카트리지를 무균조작하여 하우징에 장착한다. 양 말단은 멸균된 알루미늄 호일로 덮는다. 전필터 모듈은 사용 전까지 깨끗한 장소에 보관한다.

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(6) 단일 주입기(single injector) 모듈 - 그림 2와 같이 순서대로 각 부품을 조립한다. 감속 어댑터(RA)에 암나사 신속 연결기(FQ1)를 부착한다. 어댑터를 주입기(IN)의 유입구에 연결한다. 주입기의 배출구를 PVC 이음관(PN)를 경유하여 PVC T자관 (TE)에 연결한다. 마모 감소 이음관(RB1)을 사용하여 압력계(PG)를 PVC T자관의 꼭대기 부분과 연결한다. 감속 어댑터(RA) 다른 하나는 PVC T자관의 남은 연결부위에 부착한다. 감속 어댑터에는 숫나사 신속 연결기(MQ1)을 부착한다 단일 및 이중 주입기 모듈을 염소로 멸균한다. 주입기의 개구부를 포함, 각 말단을 멸균된 알루미늄 호일로 씌운다. 주입기 연결관(Injector Tubing: IT)의 안쪽 및 바깥쪽 표면 모두 멸균한다. 조작 중에 오염시키지 않고도 양 말단을 떼어낼 수 있도록 연결관은 멸균된 플라스틱 주머니나 랩으로 싼다. 주입기 모듈은 사용 전까지 깨끗한 장소에 보관한다.

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(7) 이중 주입기(double injector) 모듈 - 그림 2와 같이 순서대로 각 부품을 조립한다. 감속 어댑터(RA)에 암나사 신속 연결기(FQ2)를 부착함으로써 중심부분을 조립한다. 어댑터는 PVC T자관 (TE)의 상부 연결부에 연결한다. PVC T자관 연결부 중 하나에 숫나사 엘보(ME)를 부착한다. 다른 연결부에는 감속 이음관(RN2) 하나를 부착한다. 만약 신속 연결기 대신에 범용 볼형 조인트(union ball joint)를 사용할 경우에는 PVC 이음관을 나머지 하나의 연결부에 부착한다. 주입기(IN)의 유입구 방향을 숫나사 엘보(ME)에 연결한다. 주입기의 배출구에도 숫나사 엘보 하나를 부착한다. 숫나사 엘보(ME)에는 새 PVC T자관을 연결한다. 감속 이음관(RN2 또는 PVC 이음관)을 이 두 번째 PVC T자관의 다른 한쪽 끝에 연결한다. 마찬가지로 숫나사 신속 연결기(MQ2) 하나를 위의 감소 이음관에 부착한다(또는 두 번째 union ball joint의 한 부분을 PVC 이음관에 부착한다). 두 번째 PVC T자관의 상단 연결부(top connector)를 PVC 이음관을 이용하여 세 번째 PVC T자관에 연결한다. 마모 감속 이음관(RB1)을 사용하여 압력계를 세 번째 PVC T자관의 머리부분에 연결한다. 감속 어댑터(Reducing adaptor)는 세 번째 PVC T자관의 남은 연결부에 부착한다. 감속 어댑터에 숫나사 신속 연결기를 부착한다. 두 개의 숫나사 엘보(ME)를 두 번째 주입기의 유입구와 배출구에 각각 부착한다. 두 개의 마모 감소 이음관(RB2) (또는 union ball joint를 사용할 경우, 바닥부분)를 숫나사 엘보에 연결한다. 각 마모 감소 이음관에 암나사 신속 연결기(FQ1)를 연결한다. 흐름의 방향이 첫 번째 주입기와 동일하도록 두 번째 주입기의 위치를 조정한다(주입기상의 화살표가 모두 조립품의 압력계 방향을 향해야 한다). 조립품의 완성을 위해 2개의 암나사 신속 연결기를 주요 부분의 숫나사 신속 연결기와 연결한다(또는 union ball joint를 사용할 경우 union ball joints의 두 부분을 연결).

2) 시료전처리과정

가) 바이러스 탈리과정

(1) 압력계가 장치된 양압(positive pressure)의 공기 혹은 질소 

    (압력원이 실험실의 공기 호스나 펌프라면, 반드시 오일필터나 공기필터가 장착되어 있어야 한다.)

(2) 5-20 L 용량 압력용기(dispensing pressure vessels)

(3) 복합 전극을 사용하는 pH 측정기: 최소 0.1 pH 단위의 정밀도

(4) 나사형 클램프가 달린 멸균 가능한 압력호스(inner-braided tubing)

(5) 교반기(magnetic stirrer)와 교반막대(magnetic stir bar)

나) 유기응집 농축과정

(1) 냉장이 가능한 원심분리기 (2,500 - 10,000 × g)

(2) 나사형 뚜껑이 부착된 원심분리용 용기 (100 ? 1,000 mL 용량)

(3) 전필터가 장착된 1회용 카트리지 타입의 멸균용 필터 (0.22 ㎛) 판매용 필터가 막힐 정도의 시료는 멸균 필터를 많이 겹쳐서 여과에 사용할 수 있다. 0.22 ㎛ 필터를 유리섬유 전필터(fiber glass prefilter)와 여러 장 겹쳐서 멸균된 필터묶음을 만든다. 위쪽에 AP20 전단계필터를, 아래쪽엔 0.22 ㎛ 필터가 놓이도록 디스크필터 홀더에 쌓는다. 필터묶음은 각각 사용된 뒤에는 해체하여 0.22 ㎛ 필터에 이상이 없는지 검사한다. 필터에 흠이 있거나 파손된 필터로 여과한 배지는 새로운 필터로 재여과 한다.  

   (필터를 사용하기 직전에는 항상 pH 7.0-7.5의 소고기엑스 완충액 10-20 mL를 여과시킨다. 이 과정은 시료를 여과하는 사이에 필터에 바이러스가 흡착되는 것을 방지한다.)

3) 총 배양성 바이러스 분석과정

가) 무균작업대 (Laminar Flow Microbiological Safety Cabinet)

나) CO2 배양기 (36.5±1 ℃)

다) 피펫

라) 초자기구, 파이렉스 (저장용기들은 밀폐가 가능한 뚜껑이 부착되어 있어야 한다.)

마) 원형 필터(disc filter) 홀더 ? 142 ㎜ 혹은 293 ㎜ 반경의 원반형 필터 지지대(양압형 필터 지지대) 

바) 멸균용 필터묶음 ? 0.22 ㎛ 미세공 필터 (Millipore Product No. GSWP 142 50 과 GSWP 293 25나 동등제품). 유리섬유 전필터(prefilter: Millipore AP15 142 50 혹은 AP15 293 25 그리고 AP20 142 50 혹은 AP20 293 25) AP20 및 AP15 전필터와 0.22 ㎛ 멸균용 필터를 디스크 필터 홀더에 쌓는다. 가장 위쪽에는 AP20 전필터를, 가장 아래쪽에는 0.22 ㎛ 멸균용 필터를 쌓는다. 사용 후에는 항상 필터묶음을 해체하여 0.22 ㎛ 멸균용 필터가 완전한지를 확인한다. 파손된 필터로 여과된 배양액은 다른 필터로 다시 여과한다.

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사) 바이러스용 양전하필터 카트리지 ? 10인치 또는 5인치 바이러스용 양전하필터 (Cuno, Cat. No. 45144-01-1MDS 또는 Argonide, Cat. No. VS2.5-5나 동등 제품)를 장착할 수 있는 10인치 또는 5인치 카트리지

아) 배양용 캡슐(culture capsule) 필터

자) 세포배양 용기 - 파이렉스, 소다 혹은 플린트(납) 유리, 플라스틱 용기와 플라스크, 롤러 병(용기들은 투명한 유리나 플라스틱으로 만들어져 배양액을 바깥쪽에서 관찰할 수 있어야 하며 밀폐가 가능한 뚜껑이 있어야 한다. 플라스틱 용기는 세포들이 부착될 수 있도록 제조당시 적절한 처리가 된 것이어야 한다.)

차) 검은 고무 라이너(Liner)가 있는 나사형 뚜껑

카) 롤러 기구(저장용 배양세포의 유지를 위해 롤러 병이 사용될 때만 필요하다.)

타) 항온수조(56±1 ℃로 고정) 

파) 광학현미경, 40 X, 100 X, 400 X 배율 렌즈

하) 도립광학현미경, 40 X, 100 X, 400 X 배율 렌즈

갸) 세포계수기(hemocytometer)

냐) 원뿔형(conical) 원심분리용 튜브 ? 50 mL, 250 mL 용량

댜) 조직배양용 튜브 걸이(rack)

랴) 튜브를 연결할 수 있는 배출구가 있는 흡입기 타입의 병 ? 2,000 mL 용량 (파이펫팅 기계를 사용하기 위한 것)

먀) 저장용 바이알(vials) - 2 mL용량 (-70 ℃에서 견딜 수 있는 것)

라. 실험과정

1) 시료채취과정

 채취자는 반드시 멸균된 수술용 장갑을 착용해야 하며 시료가 바이러스에 오염될 수 있는 조건을 피해야한다. 장갑을 착용한 손이 사람의 피부나 오염되었을 수 있는 부품에 닿았을 경우 새 장갑으로 바꿔 착용해야 한다.

가) 채취할 수도꼭지 또는 양수펌프의 배출구를 열고 2-3분 혹은 꼭지를 통해 나오는 물에서 찌꺼기가 없어지거나 탁도가 균일해질 때까지 흘려보낸 후 꼭지를 잠근다.

나) 불꽃버너를 이용하여 수도꼭지나 배출구 부위를 가열하여 멸균한다.

다) 새 수술장갑을 끼고 조절기 모듈의 유입부 쪽 알루미늄 호일을 제거한 다음 수도꼭지 또는 배출구에 다음의 순서대로 연결한다.

(수도꼭지 - 조절기 모듈 - 배출기 모듈 ? 1 L 용량 플라스틱 병)

라) 수도꼭지를 천천히 열어 수압이 30 PSI 정도가 되도록 한다. 만일 최고 수압이 30 PSI를 넘지 못하면 압력조절기를 최대압력까지 조절한다.

마) 이후 약 76 L 정도의 물을 흘려보낸 후 시료채취기록부에 시료번호, 채취위치, 채취자의 이름 등을 기록하고 플라스틱 병에 담긴 물시료의 pH, 온도, 탁도를 측정하여 기록한다.

바) 수도꼭지를 잠그고 시료가 다음의 조건에 해당되어 부가장치의 연결이 필요한지의 여부를 결정하여 연결한다.

(1) 원수시료의 채취에서 부가장치가 필요한 조건과 설치

  (가) pH가 8이상일 때

   - 단일주입기 모듈을 조절기 모듈과 배출기 모듈 사이에 연결한다.

   - 멸균된 매스실린더에 0.1M 염산 용액을 채우고 단일주입기 모듈에 연결된 튜브의 말단을 염산 용액에 담근다.

   - 수도꼭지를 열고 단일주입기의 우회수로(water bypass) 나사(상단의 큰 나사)를 이용하여 주입기의 압력을 조절기 압력보다 35 % 낮게 조정한다(예,  만일 조절기의 압력이 30 PSI일 때 주입기의 압력은 < 19 PSI).

   - 1 L 용량 플라스틱 병에 담긴 물시료의 pH를 지속적으로 측정하면서 주입기의 미세조절나사를 조정해 시료가 pH 6.5-7.5로 유지되도록 염산 용액의 유입을 조정하고 변화가 없으면 우회수로나사를 고정한다.

   - 주기적으로 시료의 pH가 6.5-7.5의 범위 이내인지 확인하고 바이러스시료채취기록부에 pH를 기록한 다음 수도꼭지를 잠근다. 

  (나) 탁도가 75 NTU 이상일 때

   - 전필터 모듈을 다음의 순서대로 장착한다.

     (조절기 모듈 - 전필터 모듈 - 필터 모듈 - 배출기 모듈)

(2) 정수시료의 채취에서 부가장치가 필요한 조건과 설치

  (가) pH가 8 이상일 때

   - pH 조절과 잔류염소의 제거를 위해 이중주입기 모듈을 다음의 순서대로 연결한다.

     (조절기 모듈 - 이중주입기 모듈 - 배출기 모듈)

   - 연결 후 수도꼭지를 열어놓은 상태로 각 주입기의 우회수로나사를 시계방향으로 끝까지 돌려 완전히 닫는다.

   - 나사를 시계반대방향으로 반 바퀴씩 돌리면서 이중주입기의 압력이 조절기 압력보다 35 % 낮도록 조절한다.

   - 멸균된 튜브로 주입기와 0.1 M 염산 용액이 담긴 매스실린더를 연결하고,  1 L 플라스틱 병에 담긴 물시료의 pH가 6.5-7.5가 되도록 조절한 후 pH를 시료채취기록부에 기록한다.

   - 이중주입기의 나머지 한쪽 튜브는 2 % 티오황산나트륨용액이 담긴 다른 매스실린더에 넣고 2 % 티오황산나트륨 용액을 물 1 gal 당 10 mL가 주입되도록 다음 식을 이용하여 주입율을 조정하고 눈으로 계속 감시한다.

  유속 (L/min)    ×  티오황산나트륨 10 mL  =   티오황산나트륨    

                    ────────────     주입율 (mL/min)  

                      수량(L)                                     

   (나) pH가 8 이하일 때

   - 잔류염소 제거를 위해 단일주입기를 연결하여 위와 같이 물 약 4 L(1 gal)당 2 % 티오황산나트륨 용액 10 mL가 주입되도록 한다.

사) 바이러스 시료채취기록부에 시료채취일, 시작 시간, 유량계의 처음 수치를 기록한다.

아) 필터하우징 모듈의 알루미늄 호일을 벗겨내고 배출기 모듈 앞에 연결한다.

(조절기 모듈 - 전필터 혹은 주입기 모듈 - 필터하우징 모듈 - 배출기 모듈)

자) 천천히 물을 흐르게 하면서 필터하우징 상단의 감압단추을 눌러 필터하우징 내부의 공기가 완전히 빠지도록 한 후 감압단추를 놓고 수도꼭지를 완전히 연다.

차) 조절기의 압력은 30 PSI 이하, 주입기의 압력은 조절기 압력보다 35 % 낮게 조정하고 원수는 200-300 L, 처리수는 1,500-1,800 L를 통과시킨 후 수도꼭지를 잠근다.

카) 바이러스 시료채취기록부에 시료채취 종료일, 종료 시간, 유량계의 최종 수치를 기록한다. 주입된 염산용액 및 티오황산나트륨 용액의 양이 전체 채취량에는 영향을 미치지 않는 것으로 간주한다. 시료채취과정 동안 시료에 이상이 발견되지 않는지 지속적으로 주의를 기울이고 필터가 막히거나 염산 및 티오황산나트륨 용액 등의 첨가로 인해 흐름이 변화할 수 있음에 유의한다.

타) 새 수술장갑을 끼고 수도꼭지로부터 시료채취기구를 떼어낸다.

파) 시료채취기구로부터 필터 모듈을 분리한다. 필터하우징을 거꾸로 뒤집어 남은 물을 버린 후 바로 세워서 필터하우징과 연결된 양끝의 개구부를 멸균된 알루미늄 호일로 싼다. 전필터 장치를 사용했을 경우 동일한 방법으로 취급한다.

하) 필터하우징을 플라스틱 백에 넣어 아이스박스에 담고 아이스팩으로 덮어 냉장상태(냉동되어서는 안 된다)로 만들어 준 후 즉시 바이러스 분석실험실로 보낸다.

2) 시료의 전처리 과정

가) 내부정도관리 및 수행평가시료

내부정도관리시료는 음성정도관리시료 1개와 양성정도관리시료 1개로 구성되어 연 2회 이상의 자체적인 정도관리에 사용되며, 그 자료를 보관한다. 측정능력평가 시료는 검사기관 지정신청과 지정 후 지도점검 시에 이용된다.  

(1) 내부정도관리시료

   (가) 음성정도관리시료: 표준필터장치에 멸균된 바이러스용 양전하필터 카트리지를 장착한다.

   (나) 양성정도관리시료: 멸균된 폴리프로필렌 용기에 증류수 40 L를 넣고 약 200 PFU(Plaque Forming Unit)/mL 농도의 약독화 폴리오바이러스 정도관리용 저장용액 1 mL을 첨가한다. 잘 섞은 물을 펌프를 이용하여 바이러스용 양전하필터가 들어 있는 표준필터장치를 통과시킨다. 다음에 설명된 ‘탈리’, ‘유기응집’ 및 ‘총 배양성 바이러스분석법’에 따라 바이러스용 양전하필터를 처리 및 분석한다.

(2) 수행평가시료

    역가를 밝히지 않은 약독화 폴리오바이러스를 바이러스용 양전하필터 카트리지에 심어 제공되는 수행평가시료는 본 시험방법의 탈리, 유기응집, 총 배양성 바이러스분석법 및 시료와 함께 공지된 사항에 따라서 처리 및 분석한다.

나) 바이러스 탈리과정

필터카트리지는 냉장된 상태로 분석실험실에 도착하여야 하며 냉동되어서는 안된다. 도착조건은 시료채취기록부에 기록되어야 한다. 냉장된 상태로 도착한 필터는 시료채취 시작시간으로부터 72시간 이내에 탈리과정을 시작해야 한다.

(1) 바이러스용 양전하필터가 들어 있는 필터하우징의 유입구와 배출구를 튜브로 연결하고 유입구는 공기나 질소압력원에, 배출구는 멸균된 폴리프로필렌 또는 유리 비이커에 다음의 순서대로 각각 연결한다.

    (2 L 용량 비이커 - 튜브 - (배출구)필터하우징(유입구) - 튜브 - (배출구)멸균된 압력용기(유입구) - 오일필터가 장착된 튜브 ? 압력원(양압))

(2) 적당한 압력을 주어 필터하우징 내부의 남은 물을 완전히 제거한 다음 필터하우징의 감압밸브(vent/relief valve)를 열어 압력을 풀어준다. 

(3) 압력용기의 뚜껑을 열고 미리 데운 1.5 % 소고기엑스 완충액(pH9.5) 1 L를 넣고 뚜껑을 닫은 후 감압밸브를 닫는다 압력용기를 사용하는 대신, ① 멸균된 튜브가 장착된 연동펌프(peristaltic pump)를 사용하여 소고기엑스 완충액을 카트리지 하우징으로 밀어 넣거나 또는, ② 필터하우징(하우징의 내벽과 필터카트리지 바깥 면 사이의 공간)에 직접 부어 넣은 후 양압을 이용하여 완충액이 필터를 통과하도록 해도 무방하다. 

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(4) 필터하우징의 감압단추를 누른 상태로 천천히 압력을 가하여 필터하우징 내부의 공기를 빼내면서 소고기엑스 완충액이 필터하우징 내에 완전히 차도록 한 다음 감압단추를 통해 용액이 넘쳐 흘러나오기 시작하면 감압단추에서 손을 뗀다.  필터하우징의 감압단추를 조작할 때와 흘러넘친 소고기엑스 완충액을 닦을 때는 수술장갑을 착용하고 소독용 요오드 가제를 사용한다.

(5) 압력을 끄고 1분간 기다려 바이러스용 양전하필터에 완충액을 충분히 접촉시킨다.

(6) 다시 적절한 압력을 주어 완충액이 서서히 필터를 통과하도록 하고 통과한 완충액은 멸균된 비이커에 수집한다. 압력용기의 배출구 튜브를 통해 공기가 필터하우징에 유입되기 시작하면 필터하우징을 들어 올려 뒤집어서 소고기엑스 완충액이 완전히 빠지도록 한다.

(7) 비이커에 수집된 소고기엑스 완충액을 압력용기에 다시 옮겨 담고 3)-6) 단계의 과정을 반복한다.

(8) 1 M 염산 용액으로 최종 탈리용액의 pH를 7.0-7.5 사이로 조절하고 부피를 기록한다.

  (가) 기록보관용 시료를 준비하지 않을 경우에는 부피를 측정하여 바이러스시료채취기록부의 최종 탈리 용량(Eluated Volume Recovered, EVR)에 기록한다.

       ATSV = EVR

          (*보정된 시료량, ATSV = Adjusted Total Sample Volume)

  (나) 기록보관용으로 EVR x 0.1의 부피를 제하여 별도의 용기에 넣고 최종 탈리 용량으로 기록한 후 ?70 ℃에 냉동시켜 책임분석자가 관리하는 실험실에 보관한다(보관기한은 시료의 바이러스 분석이 끝난 후 1년으로 한다).

     ATSV = EVR x 0.9

           탈리된 시료는 유기응집 단계까지 4 ℃에서 24시간까지 보관할 수 있으며 또는 유기응집을 즉시 시행하기 어려울 때에는 ?70 ℃에서 장기간의 보관이 가능하다. 냉동된 시료는 37 ℃에서 빠르게 해동시킨다. 

다) 유기응집 농축과정

다음의 제반 과정에서 용액을 젓거나 섞을 때 필요이상으로 저어 거품이 생기지 않도록 한다(바이러스를 불활성화시킬 가능성이 있다).

(1) 소고기엑스 탈리액이 담긴 비이커에 교반막대를 넣고 교반기로 잘 섞는다.

(2) 소고기엑스 탈리액에 pH 전극을 담그고 1M 염산 용액으로 서서히 pH를 3.5±0.1로 맞춘 다음 30분 이상 천천히 섞는다. 침전물이 생성될 것이다. 만약 pH가 3.4 이하로 떨어지면, 1M 수산화나트륨을 가하여 3.5±0.1을 유지시킨다. 어떤 종류의 바이러스는 pH 3.4 이하에서 불활성화 될 수도 있다. pH 측정기는 pH 4와 7에서 표준화되어 있어야 한다. 전극은 각 측정 전후에 미리 멸균되어야 한다.

(3) 침전물이 생기면 소고기엑스 탈리액을 원심분리용 용기에 옮겨 담아 원심분리한다(2,500 x g, 15분, 4 ℃).

(4) 원심분리 후, 상층액을 따라버린 다음 원심분리용 용기에 교반막대를 넣어 바닥의 침전물을 0.15M 인산1수소나트륨용액 30 mL(pH 9.0-9.5)로 녹여 완전히 재부유 시킨다. 소고기엑스 탈리액을 나누어 원심분리한 경우, 재부유하여 합친 총 부피가 30 mL가 넘지 않도록 한다. 침전물이 잘 녹지 않으면 pH 7.0-7.5의 인산1수소나트륨으로 먼저 완전히 녹인 후 다시 pH를 9.0-9.5로 조정하고 다음 단계로 들어가기 전 10분 정도 방치한다.

(5) 교반막대를 꺼내고 재부유된 용액을 다시 원심분리 한다.

    (4,000-10,000 x G, 10분, 4 ℃)

(6) 침전물은 버리고 상층액을 모아 pH를 7.0-7.5로 맞춘다.

(7) 미생물오염을 방지하기 위해 50 mL 주사기를 이용하여 상층액을 멸균용 필터로 여과한다.  사전에 10-20 mL의 1.5 % 소고기엑스 완충액(pH 7.0-7.5)을 멸균용 필터에 통과시켜 시료 중의 바이러스가 필터에 흡착되는 것을 방지한다.

(8) 최종농축시료량(FCSV=final concentrated sample volume)을 바이러스 분석시료 전처리기록부에 기록하고 원 분석량(D=volume of original water sample assayed; 원수=100 L, 정수=1000 L)을 바이러스 분석시료 전처리 기록부에 기록하여 분석시료량(S=assay sample volume)을 다음과 같이 산출한다. 분석시료량(S)은 원수 100 L, 정수 1,000 L를 대표하는 최종농축 시료량이다.

                             D

              S  =  ????????????  ×  FCSV

                      ATSV                 

(9) 최종농축시료의 분할시료(subsample)는 다음과 같이 준비한다.

   (가) 제1분할시료(subsample 1)를 분석시료량의 0.55배로 준비한다.

   (나) 제2분할시료(subsample 2)를 분석시료량의 0.67배로 준비한다.  

   (다) 내부정도관리시료와 수행평가시료는 각각 동일한 양을 2개로 나누어 준비한다 (S=FCSV X 0.4). 시료가 24시간 이내에 분석에 사용될 경우는 4 ℃에 보관하고 나머지는 분석 전까지 ?70 ℃에 보관한다. 

3) 총 배양성 바이러스 분석과정

가) 시료접종 및 세포변성(cytopathic effect: CPE)의 발생

BGM 세포를 분양 받아 계대수 117-250사이에서 사용하도록 한다. 최고의 민감도를 유지하기 위해 세포를 배양용기에 심은 후 3-6일이 지난 세포를 사용한다(싱싱한 세포의 80-90 %가 단층을 이루며 자란다). 7일 이상 된 세포는 폐기한다.

(1) 배양용기의 배양액을 버리고 완충액이나 혈청이 없는 유지용 배양액(maintenance medium, 0.06 mL/cm2 이상)으로 세포표면을 씻고 버린다.

(2) 접종량은 분석시료량(Assay Sample Volume)을 20으로 나누어 0.04 mL/cm2 보다 작도록 조절하여 결정한다(접종량이 0.04 mL/cm2를 넘을 경우에는 보다 큰 배양용기를 사용한다). 

(3) 접종량을 BGM세포에 접종하고 바이러스 시료전처리기록부에 날짜와 함께 기록한다.

나) 총 배양성 바이러스 분석대조군

세포에 접종되는 모든 분할시료마다 양성대조군 및 음성대조군도 접종하여 함께 배양한다.

(1) 음성대조군 : 접종량과 동일한 양의 인산나트륨용액(sodium phosphate, pH7.0-7.5)을 접종한다. 

(2) 양성대조군 : 약독화 폴리오바이러스(attenuated poliovirus type 3)를 접종량과 동일한 양의 인산나트륨용액(pH7.0-7.5)에 희석하여 최종농도가 ‘20 PFU/접종량’이 되도록 하여 접종한다. 음성대조군에서 세포변성이 나타나면 그 원인이 규명될 때까지 실험을 중단한다. 양성대조군에서 세포변성이 나타나지 않으면 그 원인이 규명될 때까지 실험을 중단한다.

다) 시료의 접종

접종할 시료는 실험 바로 전에 녹인다. 일단 녹인 시료는 4 ℃에 4시간 이상 두지 않는다. 소량의 시료를 세포독성의 대조군으로 접종실험 수 일전에 접종할 수 있다.  

(1) 제1분할시료를 녹여(냉동 보관된 상태라면) 접종량을 10개의 배양세포에 접종한다. 배양기에서 80-120분간 배양세포에 시료를 흡착시키되 15-20분 간격으로 배양용기를 좌우로 가볍게 기울여 시료가 골고루 세포에 흡착되도록 한다. 흡착과정동안 접종시료의 양이 세포표면을 충분히 덮지 못해 건조해짐으로 인해 세포가 손상될 염려가 있기 때문이다.

(2) 유지용 배양액을 넣고 36.5 ℃ 배양기에서 배양한다. 25 cm2 플라스크를 사용할 경우 10 mL씩 첨가한다. 배양액은 미리 36.5 ℃로 데워서 사용하고 배양 중 4-7일 마다 갈아준다. 배양액을 첨가할 때 용기 내 세포층이 방해되지 않도록 세포가 부착되어 있는 맞은편으로 배양액을 조심스럽게 흘려 넣는다.

(3) 현미경하에서 세포변성을 관찰한다. (1, 2, 3일째, 그 이후부터는 2일 간격으로 총 2주 동안 관찰)

(4) 접종된 배양세포의 75 %이상이 세포변성을 보이는 배양세포용기를 양성으로 판정하고 배양세포를 용기와 함께 ?70 ℃에 얼린다. 나머지 배양세포용기도 14일 후에는 모두 용기와 함께 ?70 ℃에 얼린다.

(5) 얼린 시료를 모두 다시 녹이고 세포변성을 나타내거나 세균오염가능성을 보이는 배양세포용기의 배양 상층액 중 10 % 정도를 0.22 ㎛ 멸균용 필터에 여과한 후 새로운 배양세포에 다시 접종한다(위 1-5의 과정 반복). 이때 음성으로 나타난 세포배양용기도 포함한다. 세포독성이 나타나지 않고 7일 동안 배양기간에 제1분할시료가 접종된 배양세포 10개 중 3개 이상이 음성이면 제2분할시료를 다시 접종량에 따라 10개의 배양세포에 접종하고, 8개 이상 양성이면 제2분할시료를 희석하지 않은 농축시료 원액 및 1:5, 1:25의 비율로 희석된 희석시료를 각 10개씩 접종한다. 1:25의 희석시료 중 남은 시료를 냉동시켜 두었다가 모두 양성으로 나타나면 다시 5배수씩 더 희석하여 반복 접종한다. 시료 100 L당 500 MPN이상 나타날 경우 25배 이상의 희석시료를 검사하여야 한다. 희석수에서 최소한 1개의 음성이 나타날 때까지 희석한다. 

(6) 1, 2차 검사 모두에서 양성으로 나타난 시료를 최종양성으로 판정하고 1차 검사에서 음성이었으나 2차에서 양성으로 나타난 경우에는 3차 검사를 수행 한다  세포병변효과가 확정된 배양세포를 연구용 목적으로나 임의의 동정연구 등을 위해 ?70 ℃에 보관할 수 있다.

.    

(7) 제1분할시료에서 세포독성이 나타날 경우 아래의 세포독성감소방법을 거쳐 수행한다. 세포독성이 감소하였으면 제2분할시료를 독성을 제거하여 농축시료 원액 및 5배수, 25배수의 희석시료를 10개씩의 배양세포에 접종하여 배양한다.

라) 정도관리 및 수행평가시료의 접종

각 정도관리시료 및 수행평가시료는 제1분할 시료의 원액과 1:5, 1:25 비율로 희석한 시료를 10개씩 배양세포에 접종한다. 제2분할시료는 예비용으로 보관한다. 

4) 세포독성물질의 최소화과정

이 과정은 시료의 계수수치를 감소시키므로 확실한 세포독성이 있을 경우만 시행한다. 세포독성은 접종초기에 매일 관찰한다. 일반적으로 양성대조군 반응이 나타나기 전에 세포독성이 나타난다.

가) 흡착과정 후에 접종한 시료를 수거하여 ?70 ℃에 보관하고 대신 0.25 mL/cm2의 미리 데운 세척액(약 6 mL)을 첨가한다. 후에 세포독성물질이 성공적으로 감소된 것이 확인되면 버린다. 세척액을 주입할 때 세포가 자라고 있는 세포층이 손상되지 않도록 맞은편으로 천천히 흘려 넣는다.

나) 최소 2차례 이상 세포배양용기를 가볍게 흔들어 세포를 잘 씻어준 후 세척액을 조심스럽게 따라낸다.

다) 배양세포에 다시 유지용 배양액을 넣고 36.5 ℃에서 배양하면서 양성 및 음성대조군과 비교하면서 세포독성을 관찰한다.

라) 만일 세포독성이 제거되지 않으면 (1)항에서 보관한 시료를 2배, 4배 희석하고 배양세포의 수를 2배, 4배 늘여서 실험과정을 수행한다 어떤 시료들은 세척과정 없이 농축시료의 희석만으로도 세포독성이 충분히 감소될 수 있다. 다른 한편으로는, 세포독성이 나타나는 첫 단계에서 배양액을 바꿔주어 더 이상의 세포독성이 진전되지 않도록 할 수도 있다.

.

마. 바이러스 정량

1) 세포변성 양성 및 음성으로 나타난 배양용기의 수를 바이러스 세포배양기록부에 기록한다.

2) 바이러스세포배양기록부에 기록된 배양용기의 수를 바이러스 정량산정기록부에 옮겨서 MPN/mL(Mm)과 상하 95% 신뢰한계(Lower and upper 95 % confidence Limit = CLlm, CLum)를 산출한다. 정량용 계산프로그램은 바이러스 최적확수 계산 프로그램(MPNV : computer program, USEPA)을 사용한다.

3) 정량용 계산프로그램으로 산출된 값을 원수 및 정수량으로 환산한 바이러스의 최적확수값(ml)과 95 % 신뢰한계값(CLu, CLl)을 다음과 같이 산정한다. 

가) 100 L(원수) 혹은 1,000 L(정수)의 바이러스 최적확수(Most Probable Number: MPN) = ml

                          100 Mm S

                    ml =  ??????????????????????????????

                              D

나) 100 L(원수) 혹은 1,000 L(정수)의 바이러스 상한 95 % 신뢰한계 = CLu

    100 L(원수) 혹은 1,000 L(정수)의 바이러스 하한 95 % 신뢰한계 = CLl

                             100 CLlm S

                CLl =  ??????????????????????????????

                              D

                          100 CLum S

                CLu =  ??????????????????????????????

                              D

4) 정도관리시료 및 수행평가시료에 대한 MPN값도 계산한다.

바. 기 타

이 시험공정에 소개된 모든 부품, 조립완제품, 장비, 기구, 배양액 및 시약들은 동일한 기능과 조성의 국내외 타제조사 부품이나 조립완제품으로 대체할 수 있다. 모든 기구, 시약 및 항생제, 증류수는 세포배양에 적합한 등급을 사용하여야 한다.

그림 1. 표준필터장치.

그림 2. 표준여과장치에 부착되는 추가 모듈.

그림 3. 총배양성 바이러스 시험 흐름도.

2. 원생동물검사 분야

 가. 목 적

  이 시험방법은「수도법」제28조의2에 의한 지아디아(Giardia) 포낭과 크립토스포리디움(Cryptosporidium) 난포낭의 분포실태조사를 실시함에 있어 검사결과의 정확과 통일을 기하기 위해 필요한 제반사항에 대하여 규정함을 목적으로 한다.

 나. 시약 및 표준용액

   1) pH 조정용 시약

     가) 수산화나트륨 용액

         1 N 및 6 N의 수산화나트륨용액을 준비한다.

     나) 염산 용액

         0.1 N, 1 N 및 6 N의 염산용액을 준비한다.

     다) 이 시험방법은 작은 pH의 변화에도 커다란 영향을 받을 수 있으므로, 가급적이면 완성품을 사용한다. 

   2) 시료채취 및 여과과정

     가) 2 % 티오황산나트륨(Na2S2O3)용액

        티오황산나트륨을 정제수에 녹여 121 ℃에서 30분간 고압증기 멸균한 후 1 - 10 ℃에서 보관한다.

     나) 정제수

        포낭, 난포낭, 자기성 광물질 등 본 시험방법에 영향을 주는 물질이 포함되지 않는 물이어야 한다.

   3) 시료의 추출 및 농축과정

     가) 5 % 헥사메타인산나트륨 (sodium hexametaphosphate; NaHMP) Sigma Chemical Co. Cat. No. 71600, 또는 동급 제품을 사용할 수 있다.

 용액 

        헥사메타인산나트륨((NaPO3)n) 50 g을 약 600 mL의 정제수에 용해시킨 다음, 정제수로 최종부피를 1,000 mL로 맞추어 5 % 용액을 만든다. 만든 용액은 플라스틱이나 유리 용기에 보관하여 실온에서 3개월까지 보관할 수 있다. 유효기간에 도달하거나 유효기간 전에 미생물 성장이 보이면 폐기한다.

     나) 로레쓰-12(Laureth-12) Fisher cat. no. NC9253856, Pall PN4820 또는 동급 제품을 사용할 수 있다.

 용액

         로레쓰-12 10 g을 초음파 또는 열판을 이용하여 약 90 mL의 정제수에 용해시킨 다음, 정제수로 최종부피를 100 mL로 맞추어 10 % 용액을 만든다. 10 % 용액을 멸균된 바이알에 10 mL씩 분주하여 실온 또는 냉동 보관한다. 10 % 로레쓰-12 용액은 실온에서는 2개월, ­20 ℃이하에서는 1년까지 보관할 수 있다. 

     다) 1M 트리스(Tris) Fisher cat. no. BP152 또는 동급 제품을 사용할 수 있다. 또한 제품화된 Tris(Sigma T2194 또는 동급제품)를 사용할 수 있다.

 용액

        트리스 121.1 g을 약 700 mL의 정제수에 녹이고 6 N 염산 또는 6 N 수산화나트륨을 사용하여 pH를 7.4로 맞춘 다음, 정제수로 최종부피가 1,000 mL가 되도록 한다. 제조된 트리스 용액을 미리 멸균 처리된 0.2 μm 필터를 사용하여 여과멸균하고 실온에서 보관한다.

     라) 0.5M 에틸렌디아민테트라아세트산디나트륨ㆍ2수화물(Ethylenediamine tetraacetic acid disodium salt dihydrate) Fisher cat. no. S311 또는 동급 제품을 사용할 수 있다. 또한 제품화된 EDTA(Sigma E7889 또는 동급 제품)를 사용할 수 있다.

 용액

        에틸렌디아민테트라아세트산디나트륨ㆍ2수화물 186.1 g을 약 800 mL에 용해시킨 후, 6 N 염산 또는 6 N 수산화나트륨을 사용하여 pH를 8.0으로 맞춘 다음, 정제수로 최종부피가 1,000 mL가 되게 조정하고, 1 N 염산 또는 1 N 수산화나트륨을 사용하여 pH를 8.0으로 재조정한다.

      마) 소포제(Antifoam A) Sigma Chemical Co. cat. no. 10794, 또는 동급 제품을 사용할 수 있다.

      바)추출완충용액

         바이알에 담긴 10 % 로레쓰-12 용액 10 mL를 정제수를 사용하여 여러 번 헹구어 비이커에 옮긴다. 여기에 1M 트리스 용액 10 mL, 0.5M EDTA 용액 2 mL, 소포제 150 μL를 가한 후 정제수를 추가하여 최종부피를 1,000 mL로 맞춘다. 캡슐필터용 추출완충용액은 사용 시 조제한다. 

   4) (난)포낭의 분리과정

     가) 면역자기분리용 시약 Dynabeadsⓡ GC-Combo, Dynal cat. no. 73012 또는 동급 제품을 사용할 수 있다.

         면역자기분리용 시약은 1?10 ℃에서 냉장 보관하며 동결되지 않도록 한다. 동결되었거나 유효기간이 지난 시약은 폐기한다.

   5) (난)포낭의 염색과정

     가) 메틸알코올

         고순도 메틸알코올을 사용한다.

     나) 직접염색(Direct labeling) 시약 MeriFluorⓡ Cryptosporidium /Giardia, Meridian Diagnostics cat. no. 250050 또는 동급 제품을 사용할 수 있다. 

   Aqua-GloTM G/C Direct FL, Waterborne, Inc. cat. no. A100FLK 또는 동급 제품을 사용할 수 있다.

   Crypt-a-GloTM and Giardi-a-GloTM, Waterborne, Inc. cat. nos. A400FLK and A300FLK 또는 동급 제품을 사용할 수 있다.

   Easy StainTM C&G, BTF Pty Limited 또는 동급 제품을 사용할 수 있다.          

     다) 인산완충용액(Phosphate buffered saline, PBS) 시판완충용액을 사용하거나, 다음과 같이 조제하여 사용할 수 있다. 염화나트륨 8.0 g, 인산2수소칼륨 0.2 g, 인산1수소나트륨(무수화물) 1.15 g, 염화칼륨 0.2 g을 정제수 약 750 mL에 용해시킨 후, pH를 7.4로 맞춘 다음, 정제수로 최종부피가 1,000 mL가 되게 조정하고 0.2 μm 필터를 사용하여 여과멸균하거나 고압증기 멸균하여 사용할 수 있다.

         pH 7.4를 준비한다. 실온 또는 4 ℃에서 보관하며 동결되지 않도록 한다. 이물질 또는 생장물이 검출되거나 6개월이 지난 용액은 폐기한다.

     라) DAPI(4',6-diamidino-2-phenylindole) Sigma Chemical Co. cat. no. D9542, 또는 동급 제품을 사용할 수 있다.

 염색시약 

       (1) DAPI 저장용액

          DAPI 2 mg을 고순도 메틸알코올 1 mL에 용해시키고 1 - 10℃의 암소에 냉장보관하며 동결되지 않도록 한다. 

       (2) DAPI 염색용액

          DAPI 저장용액 10 μL를 인산완충용액 50 mL에 녹여 1:5,000의 희석액을 만든다. DAPI 염색용액은 염색할 때마다 조제하여 사용한다. DAPI 염색 상태가 희미하거나 확산되는 것이 발견되면 염색용액의 농도를 증가시킬 수 있다. 사용이 끝난 잔여용액은 폐기한다. 

     마) 마운팅메디움(Mounting medium)

         직접염색시약에 포함된 마운팅메디움

 MeriFluorⓡ Cryptosporidium /Giardia, Meridian Diagnostics cat. no. 250050 또는 동급 제품을 사용할 수 있다. 

    Aqua-GloTM G/C Direct FL, Waterborne, Inc. cat. no. A100FLK, cat. no. M101 또는 동급 제품을 사용할 수 있다.

    Easy StainTM C&G, BTF Pty Limited 또는 동급 제품을 사용할 수 있다.   

을 사용할 수 있으며, 또는 DABCO (1,4-Diazabicyclo octane) Sigma Chemical Co. cat. no. D27802, 또는 동급 제품을 사용할 수 있다. 

/글리세린 마운팅메디움(2 %)을 다음과 같이 조제하여 사용할 수 있다. 글리세린과 인산완충용액을 6 : 4의 비율로 섞어 글리세린/인산완충용액의 혼합액을 만든다. DABCO 2 g을 따뜻한 글리세린/인산완충용액의 혼합액 약 95 mL에 완전히 용해시킨 후 최종부피를 100 mL로 하여 사용한다.

   6) 정도관리

     가) 정도관리용 (난)포낭 표준용액 EasySeed™(BTF Pty Limited) 또는 AccuSpikeTM?IR(Waterborne, Inc.) 또는 동급 제품을 사용할 수 있다. 

        표준용액을 직접 조제할 경우, 실험결과의 통계학적 신뢰성이 낮으므로, 실험실에 흘림세포계측기(Flow cytometer)가 구비되지 않은 경우 반드시 제조업체에서 시판하는 표준용액을 구매하여 사용하여야 한다. 표준용액은 사용 전까지 1?10 ℃에서 저장하되 얼리면 안 된다. 

 다. 기구 및 재료

   1) 기본 장비 및 재료

     가) 냉장 운반 컨테이너

     나) 교반막대

     다) 교반기

     라) 볼텍스 믹서

     마) pH 측정기

     바) 화학저울

        정밀도가 0.1 mg이고, 최소 10 mg까지 읽을 수 있어야 한다. 

     사) 피펫 

        5 mL, 10 mL 및 25 mL 용량의 유리 또는 플라스틱 재질의 피펫과 1회용 파스퇴르 피펫을 사용한다.

     아) 마이크로피펫 및 마이크로피펫 팁

         0 - 10 μL, 10 - 100 μL 및 100?1,000 μL 용량의 마이크로피펫과 규격에 맞는 마이크로피펫 팁을 사용한다. 

     자) 비이커

         25 mL, 50 mL, 100 mL, 500 mL, 1,000 mL 및 2,000 mL 용량의 유리 또는 플라스틱 재질을 사용한다. 

     차) 미세원심분리관(Microcentrifuge tube)

         1.5 mL 용량의 플라스틱 재질을 사용한다.

   2) 시료채취 및 여과과정

     가) 원수시료 채취통(10 L) 

         하단에 배수꼭지가 장착되어 있고, 최소 1 L 간격의 눈금이 그려져 있어야 한다. 필요시 일회용 10 L 저밀도 폴리에틸렌(Low density polyethylene, LDPE) 병을 사용한다. 

     나) 시료여과를 위한 장비

         원수시료의 여과를 위한 캡슐필터와 정수시료의 여과를 위한 HV 캡슐필터(High Volume Capsule Filter)를 사용하여야 한다.

       (1) 캡슐필터(Capsule Filter) Envirochek™(Pall Gelman Laboratory, Ann Arbor, MI, Envirochek Sampling Capsule, product 12110), 또는 동급 제품을 사용할 수 있으며, Envirochek™은 재사용할 수 없다.

       (2) HV 캡슐필터(High Volume Capsule Filter) Envirochek™ HV(Pall Gelman Laboratory, Ann Arbor, MI, Envirochek Sampling Capsule, product 12099), 또는 동급 제품을 사용할 수 있으며, Envirochek™ HV는 재사용할 수 없다.

     다) 시료여과에 필요한 부속 장치

       (1) 배관 Tygon formula R-3603, 또는 동급 제품을 사용할 수 있다.

          내벽에 (난)포낭이 쉽게 부착되지 않으며, 연동 펌프의 사용에 의한 음압에 배관의 직경이 수축되지 않고, 고압증기멸균에 내구성을 갖는 유리, 폴리테트라플루오로에틸렌(Polytetrafluoroethylene, PTFE), 고밀도 폴리에틸렌(High density polyethylene, HDPE) 등의 재질로 만든 배관을 사용한다.

       (2) 정량 또는 연동펌프 

          0.4 - 4 L/min의 유속을 조절할 수 있어야 한다. 

       (3) 유량계

   3) 시료의 추출 및 농축 과정

     가) 캡슐필터용 팔 달린 진탕기(Wrist-action shaker) Lab-Line model 3589, Lab-Line Model 3587-4, Pall 4822A 또는 동급 제품을 사용할 수 있다. 

     나) 라텍스장갑

         분말가루가 없는 것을 사용하여야 한다.

     다) 메스실린더

         10 mL, 100 mL, 또는 1,000 mL 용량으로 고압증기 멸균이 가능하여야 한다.

     라) 농축장치

       (1) 원심분리기 

          원심분리기는 15 - 250 mL 원심분리관을 수용할 수 있고, 1,500 × G를 달성할 수 있어야 하며, 반드시 원심관 지지 장치(Swing Bucket Rotor)를 사용하여야 한다. 

       (2) 원심분리관

          15 mL, 50 mL, 175 mL 또는 250 mL 용량으로서 눈금이 그려져 있어야 한다. 

       (3) 흡인장치(Aspirator 또는 진공펌프)

   4) (난)포낭의 분리과정

     가) 리톤시험관 Dynal L10, cat. no. 74003, 또는 동급 제품을 사용할 수 있다. 

         60 × 10 mm의 자기포획면(flat-sided magnetic capture area)을 가진 16 × 125 mm의 리톤형 시험관(Leighton-type tube)을 사용한다. 

     나) 회전혼합기(Rotating mixer) Dynal® Sample Mixer, cat. no. 94701, 또는 동급 제품을 사용할 수 있다. 

     다) 리톤시험관용 자기입자농축기 Dynal® MPC®-1, cat. no. 12001D 또는 MPC®-6, cat. no. 12002D 또는 동급 제품을 사용할 수 있다.

     라) 미세원심분리관용 자기입자농축기 Dynal® MPC®-S, cat. no. A13346 또는 동급 제품을 사용할 수 있다. 

   5) (난)포낭의 염색과정

     가) 웰슬라이드 Dynal® Spot-On well slides, Invitrogen, cat. no. 74004 또는 Meridian cat. no. R2206 또는 동급 제품을 사용할 수 있다.

     나) 커버글라스

   6) (난)포낭 현미경 관찰

     가) 현미경 시스템

       (1) 형광/미분간섭대비(Epifluorescence/Differential Interference Contrast) 현미경 Zeiss™　Axioskop, Nikon™ Eclipse E600, Olympus™　BH, 또는 동급 제품을 사용할 수 있다.

 20배(N.A.=0.5), 40배(N.A.=0.75) 및 100배(N.A.=1.5)의 대물렌즈를 가진 현미경을 사용한다.

       (2) 면역형광필터(Excitation/Band-pass Filters for Immuno Fluorescence Assay)

          현미경에는 면역형광염색 관찰을 위하여 450?490 nm 여기필터(Exciter Filter), 510 nm 이색성 광선분리거울(Dichroic beam-splitting mirror), 515 - 520 nm 불투과 또는 억제필터(Barrier or Suppression Filter)가 장착되어야 한다.

       (3)DAPI형광필터(Excitation/band-pass Filters for DAPI)

          현미경에는 DAPI형광염색 관찰을 위하여 340 - 380 nm 여기필터, 400 nm 이색성 광선분리거울, 420 nm 불투과 또는 억제필터가 장착되어야 한다.  

       (4) 마이크로미터

          현미경 관찰 시 (난)포낭의 크기를 측정할 수 있어야 하며, 화상분석시스템으로 대치될 수도 있다.

       (5) 사진기

          형광현미경에 부착되어 현미경으로 관찰된 상을 촬영할 수 있어야 한다.

 라. 시료의 보관 및 처리기간 

   1) 시료는 가능한 한 신속히 처리되어야 한다. 

   2) 당일 시료처리를 완료할 수 없는 경우 시료 채취 또는 여과, 시료의 슬라이드 적용, 염색 직후에 시료처리가 다음과 같이 지체될 수 있다. 

     가) 시료의 추출은 시료채취 또는 여과가 완료된 이후, 96시간 이내에 완료되어야 한다. 단, 지체 시 시료는 1 - 10 ℃에서 냉장보관 되어야 한다. 

     나) 추출, 농축 그리고 면역자기분리과정은 완료 시까지 연속하여 진행하여야 한다. 

     다) 시료의 염색은 슬라이드 적용 후 72시간 이내에 완료되어야 한다.

     라) 현미경 관찰과 확정은 염색이 완료된 후 즉시 실시하되 7일 이내에 완료되어야 한다. 단 염색이 희미해지는 것이 발견되는 경우 시료의 보관시간을 단축하여야 한다. 

 마. 실험과정

   1) 시료채취 및 여과과정 

     가) 시료채취자는 반드시 1회용 장갑을 착용해야 하며 시료가 원생동물에 의해 오염될 수 있는 조건을 피해야 한다. 장갑을 착용한 손이 오염되었을 수 있는 부품이나 부위에 닿았을 경우 새 장갑으로 바꾸어 착용하여야 한다.

     나) 원수시료는 채취지점에서 10 L를 채취하여 실험실로 운반하여 여과하는 것을 원칙으로 한다.

     다) 실험실로 운반된 원수시료는 캡슐필터를 사용하여 여과하여야 한다. 단, 시료채취 지점에 전원이 공급되거나 오염가능성이 없다고 판단되는 등 조건이 갖추어진 경우, 채취지점에서 시료를 여과할 수 있다.

     라) 정수시료는 채취지점에서 HV 캡슐필터를 사용하여 100 L를 여과하고 필터를 실험실로 운반한다. 

     마) 모든 시료는 채취한 당일 실험실로 냉장상태로 운반하여야 하며, 이후의 실험과정에 들어가기 전까지 1 - 10 ℃ 하에 보관하여야 한다. 실험자는 시료를 받은 후 접수번호, 접수일, 접수자, 도착 시 시료온도와 시료의 조건, 시료 보관위치와 보관온도를 원생동물 시험일지에 기록하여야 하며, 이 때 시료의 온도가 20 ℃를 초과하거나 동결상태인 경우 시료를 다시 채취하도록 한다.

     바) 캡슐필터에 의한 원수 여과

       (1) 시료가 들어있는 채취통의 배수꼭지부분과 캡슐필터의 유입구를 배관으로 연결하고, 유출구에서 폐액통으로 연결된 배관의 중간부분에 정량 및 연동펌프가 설치되어지도록 여과장치를 연결한다(그림 1). 

그림 1. 캡슐필터를 이용한 시료여과장치의 모식도.

        (2) 채취통의 배수꼭지를 열어 시료를 통과시켜 캡슐필터 내에 시료를 채운다. 이 때 캡슐필터에 장착된 공기밸브를 열어야 하며 캡슐필터 내에 공기가 모두 없어지면 공기밸브를 닫는다. 시료가 공기밸브를 통하여 새어나오지 않도록 한다.

        (3) 채취통의 시료를 혼합하며 펌프를 서서히 작동시켜 여과를 시작한다. 유속이 2 L/min 이하가 되도록 한다. 

        (4) 시료가 모두 여과되면, 펌프를 끄고 채취통에 정제수 1 L를 가한 후 채취통 벽을 세척하여 그 세척액을 다시 여과한다. 

        (5) 여과가 끝나면, 캡슐필터의 유입구와 유출구를 여과장치에서 분리한 후, 유입구와 유출구를 모두 봉한다.  

        (6) 시료의 여과 시작시간과 종료시간, 사용된 필터의 종류와 로트번호, 여과된 시료의 양 그리고 기타 특이 사항을 원생동물 시험일지에 기록하여야 한다. 

     사) HV캡슐필터에 의한 정수 여과 

       (1) HV캡슐필터를 채취하고자 하는 수도꼭지에 연결하고 후단에 유량계를 장착한다. 필요시 필터 전단으로 2 % 티오황산나트륨용액이 연속 유입되도록 할 수 있다. 

       (2) 수도꼭지를 틀어 유속이 2 L/min 이하가 되도록 조절한다. 필요시 필터 전단에 유속 조절계를 설치하거나 전단 또는 후단에 펌프를 연결하여 유속을 조절할 수 있다. 

       (3) 시료 100 L가 모두 여과되면 수도꼭지를 잠그고 필터의 유입구를 수도꼭지로부터 분리한 후 유입구와 유출구를 모두 봉한다. 

       (4) 시료의 여과 시작시간과 종료시간, 사용된 필터의 종류와 로트번호, 여과된 시료량 그리고 기타 특이사항을 원생동물 시험일지에 기록하여야 한다. 

   2) 시료추출과정 

     가) 기구의 설치 및 준비

       (1) 캡슐필터용 팔 달린 진탕기에 캡슐필터 또는 HV 캡슐필터가 바닥과 수평으로 놓이도록 클램프를 수직으로 장착한다.

       (2) 당일 처리할 모든 시료에 동일한 5 % 헥사메타인산나트륨 용액과 추출완충용액을 사용할 수 있도록 충분한 양을 준비한다. 통상 한 시료 당 약 150 mL의 5 % 헥사메타인산나트륨 용액과 300 mL의 추출완충용액이 필요하다.

     나) 분산제 첨가

       (1) 적절한 도구를 사용하여 필터를 수직으로 세우고 유입구 뚜껑을 연 후 5 % 헥사메타인산나트륨 용액을 주입한다. 주입량은 약 125 mL 정도로서, 캡슐 내부의 필터가 5 % 헥사메타인산나트륨 용액에 잠기어야 한다. 주입 후 유입구 뚜껑을 닫는다.

       (2) 캡슐필터용 팔 달린 진탕기의 클램프에 공기밸브가 위로 향하도록(시계 12시 방향) 필터를 장착하고, 진탕기를 약 900 rpm 또는 최고 속도로 작동시켜 필터를 5분 동안 진탕한다.

       (3) 진탕기에서 필터를 떼어내고, 유출구 뚜껑을 연 후 배관으로 펌프와 연결한다. 필터를 똑바로 세우고 유입구 뚜껑을 열고, 액체가 흘러나오지 않도록 조심스럽게 펌프를 작동시키고, 모든 용액이 여과되면 펌프를 멈춘다. 여과 과정에서 필터가 손상되지 않도록 한다. 

       (4) 다시 필터에 정제수를 (1)과 같이 충분히 주입한 후 뚜껑을 닫고, (3)과정을 반복한다. 

       (5) 유입구 뚜껑을 닫고 필터와 펌프를 분리하고 유출구 뚜껑을 닫는다. 같은 날에 추출 단계를 진행한다.      

     다) 시료의 추출

       (1) 적절한 도구를 사용하여 필터를 수직으로 세우고 유입구 뚜껑을 연 후 추출완충용액을 주입한다. 주입량은 약 125 mL 정도로서, 캡슐 내부의 필터가 추출완충용액에 잠기어야 한다. 주입 후 유입구 뚜껑을 닫는다.

       (2) 캡슐필터용 팔 달린 진탕기의 클램프에 공기밸브가 위로 향하도록(시계 12시 방향) 필터를 장착하고, 진탕기를 약 900 rpm 또는 최고 속도로 작동시켜 필터를 5분 동안 진탕한다.

       (3) 진탕기에서 필터를 떼어내고, 유입구 뚜껑을 연 후 내용물을 250 mL 원심분리관에 옮긴다. 이 때 윗부분에 위치한 유출구 뚜껑도 같이 열어준다.

       (4) 다시 필터에 추출완충용액을 (가)와 같이 충분히 주입한 후 뚜껑을 닫는다.

       (5) 진탕기에 장착하되, 공기밸브가 시계 4시 방향으로 놓이도록 하고 5분 동안 진탕한다.

       (6) 필터의 공기밸브가 시계 8시 방향으로 놓이도록 하고 다시 5분 동안 진탕한다. 

       (7) 진탕기에서 필터를 떼어내고, 유입구 뚜껑을 연 후 내용물을 원심분리관에 옮긴다. 윗부분에 위치한 유출구 뚜껑도 같이 열어준다.

       (8) 분사병 또는 세척병을 사용하여 정제수나 추출완충용액으로 캡슐 내벽을 충분히 씻은 후, 필터를 원심분리관 위에 거꾸로 세워놓고 가능한 한 많은 양의 추출물이 옮겨지도록 한다. 마찬가지로 윗부분에 위치한 유출구 뚜껑도 같이 열어준다. 

   3) 시료의 농축 및 분리과정

     가)원심분리관에 담긴 여과추출액을 1500 × G에서 15분 동안 원심분리 한다. 

     나) 원심분리결과 총 농축물의 부피가 0.5 mL 이하인 경우에는 다음 과정을 따른다.

       (1) 흡인장치(Aaspirator)를 사용하여 농축물이 흡인되지 않도록 원심분리관의 중앙에서 조심스럽게 상등액을 뽑아내어 최종 5 mL까지 남긴다.  

       (2) 농축물이 들어있는 원심분리관을 10 - 15초 동안 강하게 흔들어 농축물을 완전히 재부유 시킨다.

       (3) 거품이 생성된 경우에는 원심분리관을 부드럽게 회전시켜 거품을 감소시킨다. 

       (4) 총 농축물의 부피, 재부유된 시료의 부피를 시험일지에 기록한다.

       (5) 면역자기분리과정을 실시한다.  

     다) 원심분리결과 총 농축물의 부피가 0.5 mL를 초과하는 경우에는 다음 과정을 따른다.

       (1) 농축물 0.5 mL당 액량이 5 mL가 남도록 상등액을 흡인한다. 예를 들면, 총 농축물의 부피가 1.2 mL인 경우에는 총 15 mL가 남도록 상등액을 흡인한다.

       (2) 농축물의 부피가 0.5 mL 이하가 되도록 여러 개의 시료(subsample)로 나눈다.

          이때 필요한 시료의 수는 다)의 총 농축물의 부피를 0.5 mL로 나누고 가까운 정수로 올림하여 결정한다. 예를 들어, 총 농축물의 부피가 1.2 mL이면 필요한 시료의 수는 3개이다.

       (3) 나뉘어진 시료가 들어있는 원심분리관을 10 - 15초간 강하게 흔들어 농축물을 완전히 재부유 시킨다.

       (4) 거품이 생성된 경우에는 원심분리관을 부드럽게 회전시켜 거품을 감소시킨다. 

       (5) 총 농축물의 부피, 재부유된 시료의 부피, 나눈 시료의 수, 나눈 시료의 부피를 시험일지에 기록한다.

       (6) 면역자기분리과정을 실시한다. 

   4) 면역자기분리과정

     본 과정은 (난)포낭을 기타 물질로부터 분리하는 과정으로서 면역자기분리(Immuno- magnetic separation, IMS)방법을 사용한다.

     가) 면역자기분리용 시약의 준비

       (1) 면역자기분리과정은 15 - 25 ℃가 유지되는 실험실에서 수행되어야 하며, 냉장보관된 모든 면역자기분리용 시약 역시 실험 전 미리 같은 조건에 맞추어야 한다. 

       (2) 면역자기분리용 시약에 포함된 10X SL-buffer-A를 정제수로 10배 희석하여 1X SL-buffer-A로 만든다. 10X SL-buffer-A는 냉장보관 시 결정이 생성되므로 실험 전 상온에서 결정을 없애고 희석하여야 한다. 

     나) 자기체(Beads)와 (난)포낭의 결합과정 

       (1) 리톤시험관에 면역자기분리용 시약에 포함된 10X SL-buffer-A 1 mL와 10X SL-buffer-B 1 mL를 넣는다. 

       (2) 3)나) 또는 3)다)의 농축된 시료 또는 재부유된 시료를 10X SL-buffer-A와 10X SL-buffer-B가 들어있는 리톤시험관에 옮긴다. 정제수로 원심분리관 내벽을 세척하여 가능한 모든 물질을 옮겨야 하며, 리톤시험관 내 용액의 최종 부피가 12 mL가 되도록 한다. 시료를 옮기기 전 리톤시험관에 12 mL 되는 곳을 미리 표시할 수 있다. 

       (3) 면역자기분리용 시약에 포함된 anti-Cryptosporidium 및 anti-Giardia 자기체 용액을 각각 100 μL씩 취하여 시료와 SL-buffer가 들어있는 리톤시험관에 첨가한다. 이때 anti-Cryptosporidium 자기체와 anti-Giardia 자기체가 각각 들어있는 플라스틱 용기는 사용 전 10초 동안 강하게 흔들어 자기체가 완전히 부유하여 바닥에 남아있지 않도록 하여야 한다. 

       (4) 리톤시험관을 밀봉한 후 회전혼합기에 장착하고 약 18 rpm으로 최소 1시간 동안 실온에서 회전시킨다. 

       (5) 리톤시험관을 회전혼합기에서 분리하여 평평한 면이 리톤시험관용 자기입자농축기의 자석부분에 닿도록 끼운다. 리톤시험관의 평평한 면이 아래로 향하도록 리톤시험관용 자기입자농축기를 손에 들고 90° 각도(MPC®-6은 180°)로 기울이는 방식으로 부드럽게 흔들어 준다. 대략 초당 1번씩 기울이는 동작을 2분 동안 계속한다. 이 과정은 자기력이 있는 저중량 물질이 자기체에 부착하는 것을 방지하기 위한 것이다. 따라서 만약 시료의 흔들기를 10초 이상 지체하였다면 자기입자농축기에서 리톤시험관을 제거하고 부드럽게 흔들어 내용물을 재부유시키고, (5)의 과정을 처음부터 다시 수행하는 것이 좋다.

       (6) 리톤시험관을 리톤시험관용 자기입자농축기로부터 떼지 않은 상태에서 마개를 열고 리톤시험관에 들어있는 상등액을 모두 적절한 용기로 옮긴다. 이때 자기입자농축기의 자기면이 위로 가도록 한다.

       (7) 자기입자농축기에서 리톤시험관을 분리하고 1X SL-buffer-A 1 mL를 조심스럽게 넣은 후 리톤시험관을 부드럽게 흔들어 시험관내 모든 물질이 1X SL-buffer-A 속에 재부유 되도록 한다. 

       (8) 자석띠가 장착된 미세원심분리관용 자기입자농축기에 1.5 mL 미세원심분리관을 미리 끼워놓고, 여기에 자기체가 재부유된 용액 전량을 옮긴다.

       (9) 1X SL-buffer-A 0.5 mL를 리톤시험관에 넣고, (7)(8)의 과정을 반복한 후 리톤시험관을 똑바로 세워 정치시킨 후 바닥에 모인 용액을 모두 1.5 mL 미세원심분리관으로 옮긴다. 

      (10) 미세원심분리관용 자기입자농축기에 자기체가 재부유된 용액이 담긴 미세원심분리관을 끼운 채 초당 1회의 속도로 1분 동안 180° 각도로 부드럽게 흔들어준다. 이 과정의 결과, 미세원심분리관이 자기입자농축기와 접촉한 부분에 갈색점이 생성된다.

      (11) 미세원심분리관의 상등액을 신속히 흡인, 제거한다. 처리해야 할 시료가 두 개 이상인 경우에는 각 미세원심분리관마다 180° 회전을 세 번 실시한 후 상등액을 제거한다. 상등액을 제거할 때에 자석부위 근처의 미세원심분리관 벽에 부착되어있는 갈색점을 훼손하면 안 된다. 미세원심분리관을 흔들거나 미세원심분리관용 자기입자농축기에서 탈착하여도 안 된다.

      (12) 미세원심분리관에 1X PBS 1 mL를 조심히 넣는다. 이때 갈색점을 훼손하지 않도록 주의한다. 미세원심 분리관의 자석띠를 제거하고 시험관내 모든 물질이 재부유되도록 180° 각도로 8 - 10회 흔들어준다. 자석띠를 장착한 후 (10), (11) 과정을 반복한다. 

     다) 자기체와 (난)포낭 결합체의 해체과정

       (1) 미세원심분리관용 자기입자농축기에서 자석띠를 분리한다. 

       (2) 미세원심분리관에 0.1 N 염산 50 μL를 첨가하고, 50초 이상 격렬하게 교반한 후 격렬하게 교반하되 미세원심분리관의 마개 및 벽면에 시료가 튀지 않도록 조심해야 한다.

 자석띠를 뺀 미세원심분리관용 자기입자농축기에 끼우고 최소 10분 동안 정치한다.  

       (3) 미세원심분리관을 다시 30초 이상 격렬하게 교반한다. 

       (4) 자석띠를 부착한 미세원심분리관용 자기입자농축기에 미세원심분리관을 다시 끼우고 10초 이상 정치한다. 

       (5) 웰슬라이드의 웰에 1 N 수산화나트륨 5 μL를 넣는다. 웰슬라이드는 15 - 20 ℃의 실온에서 미리 준비한다.

       (6) 자석띠를 부착한 미세원심분리관용 자기입자농축기에 미세원심분리관을 끼워둔 채, 내부의 모든 용액을 1 N 수산화나트륨 5 μL가 있는 웰슬라이드의 웰로 옮긴다. 이 때 미세원심분리관에 붙어있는 자기체를 건드려서는 안 된다.

       (7) 웰슬라이드에 있는 시료를 공기 중에서 완전 건조시킨다 염색과정에서 (난)포낭의 손실을 방지하기 위해 완전히 건조하여 시료를 웰슬라이드에 고정시켜야 한다.

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       (8) 자기체나 미세원심분리관을 버리지 말고, (1) - (7) 과정을 다시 반복한다. 

   5) 시료의 염색과정          

     가) 양성대조군(Positive control)과 음성대조군(Nagative control)을 준비한다.

       (1) 양성대조군은 웰슬라이드의 웰 중심부에 (난)포낭이 각각 200 - 400개씩 함유되도록 고르게 도말하거나 직접염색시약을 사용하는 경우 그 사용법에 따라 준비한다.

       (2) 음성대조군으로 인산완충용액 50 μL를 웰슬라이드의 웰에 고르게 도말하거나 직접염색시약을 사용하는 경우 그 사용방법에 따른다.

       (3) 양성 및 음성 대조군이 도말된 슬라이드를 공기 중에서 완전 건조시킨다. 

     나) 양성대조군, 음성대조군 및 시료의 슬라이드가 완전히 건조되면 고순도 메틸알코올 50 μL를 웰슬라이드의 웰에 첨가한다. 

     다) 알코올이 완전히 마르면 사용하는 직접염색시약의 염색방법에 따라 염색한다.

     라)웰슬라이드를 빛이 차단된 습기챔버(humid chamber)에 넣고 실온에서 약 30분 동안 정치한다. 습기챔버는 플라스틱 밀폐용기에 젖은 종이타올을 깔고 그 위에 슬라이드를 올려 놓은 형태를 말하며, 유리재질의 페트리디쉬를 사용하여도 된다.

     마) 슬라이드를 깨끗한 타올 위에 비스듬히 기울여놓고 마이크로피펫을 사용하여 과잉의 검출시약(detection reagent)을 조심스럽게 제거하되 시료를 건드리지 않도록 조심한다. 

     바) 웰슬라이드의 웰에 세정완충액 사용한 직접염색키트에 포함된 세정완충액(wash buffer)을 사용할 수 있다.

을 시료가 모두 잠기도록 첨가하고 마)의 과정과 같이 세정완충액을 제거한다. 

     사) DAPI 염색용액 50 μL를 각 웰에 첨가하고, 1분 이상 실온에서 정치한 후 슬라이드를 깨끗한 타올 위에 비스듬히 기울여놓고 마이크로피펫을 사용하여 과잉의 DAPI 염색용액을 조심스럽게 제거하되 시료를 건드리지 않도록 조심한다. 

     아) 바)의 과정을 수행한다.

     자) 마운팅메디움 한 방울을 웰 중앙에 떨어뜨린다.

     차)커버글라스로 웰슬라이드의 웰을 덮은 후 가장자리를 아주 부드럽게 누른다. 마운팅메디움 내에 공기방울이 생기지 않도록 주의한다. 커버글라스 주변의 과잉의 마운팅메디움을 티슈로 닦아낸 후 매니큐어로 테두리를 봉한다.  

     카) 염색이 완료된 일시를 시험일지에 기록한다. 즉시 관찰이 어려울 경우 암실의 냉장상태(1?10 ℃)에서 보관한다.

   6) (난)포낭의 검출 및 계수과정          

     가) 현미경관찰

       (1) (난)포낭은 현미경 관찰에 의한 면역형광검사(Immunofluorescence assay, IFA), DAPI염색검사 그리고 미분간섭대비(Differential interference contrast, DIC) 관찰을 통해 확인되어야 한다.

       (2) 양성대조군에 대한 면역형광검사와 DAPI염색검사를 실시하여 (난)포낭이 나)와 다)의 판정기준과 같이 확인하기에 적절한 형광성이 관찰되며, 음성대조군에 대한 면역형광검사와 DAPI염색검사를 실시하여 (난)포낭이 발견되지 않을 경우 시료를 주사관찰 할 수 있다. 확인된 (난)포낭의 관찰결과는 최소 1,000배의 총배율에서 찍은 면역형광검사, DAPI염색검사 그리고 미분간섭대비(DIC) 관찰 사진을 크립토스포리디움 난포낭 및 지아디아 포낭에 대해 각각 보관한다.

       (3) 시료에 대한 현미경 관찰은 체계적으로 이루어져야 한다. 그림 2와 같이 웰슬라이드 웰의 옆에서 옆으로 또는 위에서 아래로 지그재그 방식으로 주사관찰 하여야 한다. 

그림 2. 웰슬라이드의 주사관찰 방법.

     나) 지아디아 포낭의 판정

       (1) 최소 400배의 총배율을 갖는 현미경에 의한 면역형광검사를 통하여 테두리가 초록색으로 밝게 빛나는 길이 8 - 18 μm, 폭 5 ? 15 μm 정도의 타원형이나 원형물체가 확인되면 계속해서 DAPI 염색검사와 미분간섭대비(DIC)관찰을 한다. 

       (2) 최소 400배의 총배율을 갖는 현미경에 의한 DAPI 염색검사를 통하여 물체의 내부에 2 - 4개의 밝고 선명한 하늘색 핵이 있거나, 물체의 내부 염색이 외부보다 짙은 하늘색을 띄는 경우 DAPI 양성, 뚜렷한 핵이 없으며 초록색 테두리의 내부염색이 옅은 경우는 DAPI 음성으로 구분한다. 

       (3) 최소 1,000배의 총배율을 갖는 현미경에 의한 미분간섭대비(DIC) 관찰을 통하여 지아디아 포낭에 비정형적인 것(예를 들면, 돌출물, 가지, 부가물, 구멍, 세포 전체를 차지하는 한두개의 핵, 결정체나 포자 등)이 없어야 한다. 비정형적인 구조가 관찰되지 않으며 (1)과 (2)의 기준을 만족하는 물체는 미분간섭대비(DIC) 관찰결과에 따라 다음의 세 가지로 구분한다.

         (가) 속이 빈 지아디아 포낭

         (나) 무정형의 구조를 가진 지아디아 포낭

         (다) 핵이 2 - 4개 이거나, 내부구조(핵, 중심체, 축삭돌기) 중 두 가지 이상을 가진 지아디아 포낭

     다) 크립토스포리디움 난포낭의 판정

       (1) 최소 400배의 총배율을 갖는 현미경에 의한 면역형광검사를 통하여 테두리가 초록색으로 밝게 빛나는 직경 4 - 6 μm, 타원형이나 원형 물체가 확인되면 계속해서 DAPI 염색검사와 미분간섭대비(DIC)관찰을 한다. 

       (2) 최소 400배의 총배율을 갖는 현미경에 의한 DAPI 염색검사를 통하여 물체의 내부에 1 - 4개의 밝고 선명한 하늘색 핵이 있거나, 물체의 내부 염색이 외부보다 짙은 하늘색을 띄는 경우 DAPI 양성, 뚜렷한 핵이 없으며 초록색 테두리의 내부염색이 옅은 경우는 DAPI 음성으로 구분한다.

       (3) 최소 1,000배의 총배율을 갖는 현미경에 의한 미분간섭대비(DIC) 관찰을 통하여 크립토스포리디움 난포낭에 비정형적인 것(예들 들면, 돌출물, 가지, 부가물, 구멍, 세포 전체를 차지하는 한 두개의 핵, 결정체나 포자 등)이 없어야 한다. 비정형적인 구조가 관찰되지 않으며 (1)과 (2)의 기준을 만족하는 물체는 미분간섭대비(DIC) 관찰결과에 따라 다음의 세 가지로 구분한다. 

         (가) 속이 빈 크립토스포리디움 난포낭

         (나) 무정형의 구조를 가진 크립토스포리디움 난포낭

         (다) 내부구조(1 - 4개의 스포로조이트)를 가진 크립토스포리디움 난포낭

     라) 판정 결과 기록

       (1) (난)포낭의 최종 판정은 반드시 분석책임자의 확정을 받아야 한다.

       (2) 관찰된 물체는 크립토스포리디움 및 지아디아 검사결과 기록서에 형태, 크기, DAPI 염색결과, 미분간섭대비(DIC) 관찰결과를 기록한다.

       (3) 관찰된 (난)포낭은 모두 면역형광염색결과, DAPI 염색결과, 미분간섭대비(DIC)관찰결과가 포함되도록 사진 또는 그림 파일로 보관한다.

  바. 정도관리

   본 방법을 사용하는 실험실은 (난)포낭의 검사에 대한 정도보증 프로그램을 수행하여야 한다. 정도보증 프로그램은 본 방법을 수행할 검사능력이 확보되었는지를 증명하기 위한 검사 개시 이전의 초기수행평가와 검사 개시 이후 실험결과의 질을 보증하기 위한 중도수행평가로 구성되어야 한다. 초기수행평가와 중도수행평가는 캡슐필터를 사용하여 수행하고, 결과는 표 1과 표 2의 수행평가 허용기준을 만족하여야 한다. 

   1) 초기수행평가

     초기수행평가는 본 방법을 수행할 검사능력이 확보되었는지를 평가하기 위한 것으로 다음의 절차를 준수하여야 한다.

     가) 초기수행평가는 4개의 접종 정제수시료와 1개의 음성시료 그리고 2개의 접종 현장시료가 검사되어야 한다. 단, 접종 현장시료는 접종하지 않은 현장시료와 동시에 검사되어야 한다.

     나) 접종 정제수시료와 접종 현장시료는 각각 정제수와 현장시료 10 L에 정도관리용(난)포낭 표준용액을 접종하여 조제한다. 

     다) 검사는 본 시험방법에 따라 실시하되 4개의 접종 정제수시료와 음성시료를 우선 검사한다. 음성시료는 접종하지 않은 정제수시료를 의미한다.

     라) 각 접종 정제수시료의 검사에 대한 회수율(R)을 다음의 식을 사용하여 계산하고 평균 회수율과 그 상대표준편차(Relative Standard Deviation, RSD)를 구한다. 상대표준편차는 표준편차를 평균 회수율로 나눈 후 100을 곱하여 구한다.

              R = 회수율(%)

              N = 회수된 (난)포낭의 수

              T = 접종된 (난)포낭의 수

     마) 계산된 평균회수율과 그 상대표준편차를 표 1과 표 2의 수행평가 허용기준과 비교한다. 

     바) 허용기준을 만족할 경우 2개의 접종 현장시료를 1개의 접종하지 않은 현장시료와 함께 검사하고, 각 접종된 현장시료의 검사결과에 대하여 다음 식을 사용하여 회수율(R)을 계산하고, 평균 회수율과 그 상대차이백분율(Relative Percent Difference, RPD)를 구한다. 상대차이백분율은 이중시료의 정밀도를 나타내며 두 측정값의 차이를 그 평균으로 나눈 후 100을 곱하여 구한다.

              R = 회수율(%)

              Nsp = 접종 현장시료에서 회수된 (난)포낭의 수

              Ns = 미접종 현장시료에서 검출된 (난)포낭의 수

              T = 접종된 (난)포낭의 수

     사) 계산된 평균회수율과 그 상대차이백분율을 표 1과 표 2의 수행평가 허용기준과 비교한다. 

     아) 허용기준을 만족할 경우에만 공식적인 분석을 실시할 수 있다.

     자) 초기수행평가에 관한 모든 사항은 반드시 기록하여 3년간 보관하여야 한다.

   2) 중도수행평가

     중도수행평가는 일상적인 분석이 모든 기준을 만족하고 있는지 평가하기 위한 것으로서 다음의 절차를 준수하여야 한다. 

     가) 중도수행평가는 기관별로 실시하되, 연 2회 이상 실시한다. 

     나) 중도수행평가는 1개의 접종 정제수시료, 1개의 음성시료 그리고 1개의 접종 현장시료를 검사한다. 단, 접종 현장시료는 접종하지 않은 현장시료와 동시에 검사한다.

     다) 접종 정제수시료와 접종 현장시료는 각각 정제수와 현장시료 10 L에 정도관리용(난)포낭 표준용액을 접종하여 조제한다. 

     라) 검사는 본 시험방법에 따라 실시한다.

     마) 각 검사에 대한 회수율(R)을 계산하고 표 1과 표 2의 수행평가 허용기준과 비교한다. 

     바) 허용기준을 만족하지 못한 경우, 원인을 규명하고 문제를 해결한 후에 중도수행평가를 재실시 한다. 

     사) 중도수행평가에 관한 모든 사항은 반드시 기록하여 3년간 보관하여야 한다.

표 1. 크립토스포리디움 수행평가 허용기준

┌───────────────┬────────┬───────┬────┐

│수행평가                      │접종 정제수시료 │ 접종 현장시료│음성시료│

├───────────────┼────────┼───────┼────┤

│ 초기수행평가                 │38 - 100        │              │음성    │

│   평균 회수율(%)             │최대 37         │32 ? 100     │        │

│   정밀도(상대표준편차, RSD)  │                │              │        │

│   정밀도(상대차이백분율, RPD)│                │최대 46       │        │

├───────────────┼────────┼───────┼────┤

│ 중도수행평가                 │                │              │        │

│   회수율(%)                  │33 - 100        │32 - 100      │음성    │

└───────────────┴────────┴───────┴────┘

표 2. 지아디아 수행평가 허용기준

┌───────────────┬────────┬───────┬────┐

│수행평가                      │접종 정제수시료 │ 접종 현장시료│음성시료│

├───────────────┼────────┼───────┼────┤

│ 초기수행평가                 │27 - 100        │              │음성    │

│   평균 회수율(%)             │최대 39         │8 - 100       │        │

│   정밀도(상대표준편차, RSD)  │                │              │        │

│   정밀도(상대차이백분율, RPD)│                │최대 97       │        │

├───────────────┼────────┼───────┼────┤

│ 중도수행평가                 │                │              │        │

│   회수율(%)                  │22 - 100        │8 - 100       │음성    │

└───────────────┴────────┴───────┴────┘

   3) 마이크로피펫과 현미경의 보정

     가) 마이크로피펫은 연 1회 이상 제조업체에 보내거나 매뉴얼에 제시된 방법에 따라 보정되어야 한다.  

     나) 현미경은 매뉴얼에 제시된 방법에 따라 또는 전문가에 의해 유지ㆍ관리되고 정기적으로 보정되어야 한다. 현미경 관찰에 앞서 퀠러조명법(Kohler illumination)에 따른 현미경 조절을 실시한다. 

       (1) 퀠러조명법

         (가) 준비된 슬라이드를 현미경 대물대 위에 놓고 원하는 배율의 대물렌즈로 이동시킨 다음 광원을 켜고 조동 및 미동나사를 사용하여 표본상의 초점을 맞춘다.

         (나) 현미경 본체 하단에 위치한 광원 조리개(Radiant field diaphragm)와 집광장치의 개구 조리개(Aperture diaphragm)를 모두 연다. 현미경 아래에 있는 광원 조리개를 투과된 빛의 반점이 최소로 될 때까지 닫는다.

         (다) 집광장치 전단의 왼쪽과 오른쪽에 있는 중심조절나사(Centering screw)를 조절하여 작은 반점을 시야의 중앙으로 옮긴다.

         (라) 홍채조리개(Iris field diaphragm)의 가장자리가 선명한지를 관찰하여, 선명하지 않을 경우에는 집광장치의 초점조절장치로 집광장치 높이를 변경시켜 초점을 보다 뚜렷하게 맞출 수 있다. 밝은 원의 가장자리가 시야에서 사라질 때까지 광원조리개를 연다. 

       (2) 형광 수은램프의 사용시간을 일지에 기록하여 관리하며, 50 W 램프는 가급적 100시간을 넘지 않도록 하고, 100 W 램프는 가급적 200시간을 넘지 않도록 한다.  

 사. 기타 사항

   1) 폐기물 처리

     살아있는 (난)포낭이 부착되거나 함유되었을 가능성이 있는 시료, 시약, 기구 등은 폐기 전에 반드시 멸균하여 배출한다. 

   2) 본 실험방법에 소개된 모든 부품, 조립완제품, 장비, 기구, 시약들은 동일한 기능과 조성의 국내ㆍ외 다른 제조사 부품이나 조립완제품으로 대체할 수 있다. 

별표 0002: 측정분석능력 평가항목과 평가기준 (제8조 관련)

[별표 2]

  측정분석능력 평가항목과 평가기준 (제8조 관련)   

1. 평가항목

  측정분석능력 평가항목은 표 1과 같다. 바이러스 분야의 접종시료(양성시료)는 표준바이러스 용액을 필터에 접종하여 조제한다. 원생동물 분야의 접종 정제수시료는 정제수 10 L에 정도관리용 (난)포낭 표준용액을 접종하여 조제한다.

표 1. 분야별 측정분석능력 평가항목

┌───────────────────────┬─────────┐

│평가항목                                      │평가시료          │

├──────────┬────────────┼─────────┤

│바이러스            │회수율                  │접종시료(양성시료)│

│                    │                        ├─────────┤

│                    │                        │음성시료          │

├──────────┼────────────┼─────────┤

│크립토스포리디움 및 │                        │접종 정제수시료   │

│지아디아            │평균회수율(%) 및 정밀도 ├─────────┤

│                    │                        │접종 정제수시료   │

│                    │                        ├─────────┤

│                    │                        │접종 정제수시료   │

│                    │                        ├─────────┤

│                    │                        │접종 정제수시료   │

│                    │                        ├─────────┤

│                    │                        │음성시료          │

│                    ├────────────┼─────────┤

│                    │회수율1)                │접종 정제수시료   │

│                    │                        ├─────────┤

│                    │                        │음성시료          │

└──────────┴────────────┴─────────┘

1) 크립토스포리디움 및 지아디아 회수율 평가는 지도ㆍ점검 시 평가항목으로 한다.

2. 평가기준

  항목별 평가는 표 2의 평가기준에 따라 허용기준의 만족여부에 따라 적ㆍ부를 판정하고, 종합평가는 전 항목이 적합하면 적합으로 판정한다.

표 2. 평가항목별 허용기준

┌──────────────────────┬────────┬────┐

│        평가항목                            │접종 정제수시료 │음성시료│

├────────┬─────────────┼────────┼────┤

│바이러스        │회수율(%)                 │35 - 150        │음성    │

├────────┼─────────────┼────────┼────┤

│크립토스포리디움│평균회수율(%)             │38 - 100        │음성    │

│                ├─────────────┼────────┤        │

│                │정밀도(상대표준편차, RSD) │최대 37         │        │

│                ├─────────────┼────────┤        │

│                │회수율(%)                 │33 - 100        │        │

├────────┼─────────────┼────────┼────┤

│지아디아        │평균회수율(%)             │27 - 100        │음성    │

│                ├─────────────┼────────┤        │

│                │정밀도(상대표준편차, RSD) │최대 39         │        │

│                ├─────────────┼────────┤        │

│                │회수율(%)                 │22 - 100        │        │

└────────┴─────────────┴────────┴────┘

별표 0003: 측정분석기록물 보관방법 (제16조제1항 관련)

[별표 3] 

측정분석기록물 보관방법 (제16조제1항 관련)

1. 검사기관은 시험계획서 및 시험기초자료, 시험성적서를 발부한 날로부터 3년간 보관하여야 한다.

2. 시험계획서

  시험계획서는 매 시험 마다 각 호의 사항이 기록되도록 시험 전에 작성하여야 한다. 

  가. 시험제목

  나. 시험목적

  다. 시험의뢰자, 명칭 및 소재지 (검사의뢰 받은 경우에 한함)

  라. 시험 개시 및 종료 예정일

  마. 시험방법

  바. 시료채취 및 검사일정

  사. 검사기관의 명칭 및 소재지

  아. 분석책임자의 서명날인  

3. 시험기초자료

  시험기초자료는 매 시료마다 다음 각 호의 사항이 포함되도록 작성하여 사무실 또는 실험실에 비치하고, 사진, 그림파일 및 관찰 슬라이드는 적절한 장소(컴퓨터, 냉장고)에 보관한다.

  가. 바이러스 분야

    1) 시료채취기록부 : [별지 제5호서식] 

    2) 시료전처리기록부 : [별지 제6호서식]  

    3) 세포배양기록부 : [별지 제7호서식]  

    4) 정량산정기록부 : [별지 제8호서식]

    5) 시험성적서  

  나. 원생동물 분야

    1) 시료채취기록부 : [별지 제9호서식]    

    2) 시험일지 : [별지 제10호서식]  

    3) 시험기록부 : [별지 제11호서식] 및 [별지 제12호서식]

    4) 관찰된 (난)포낭에 대한 사진 또는 그림 파일.

      현미경으로 관찰된 (난)포낭 하나하나를 사진 또는 그림파일로 저장ㆍ보관하여야 하며, 양성대조군의 경우 (난)포낭에 대해 각각 3개 이상씩, 원수 및 정수 검사 시에는 관찰된 모든 (난)포낭을 사진 또는 그림파일로 저장하되, 각 사진 또는 그림파일에는 초록색 형광 염색 결과와, 핵 염색 결과, 미분간섭대비(DIC)에 의한 내부구조의 확인 결과가 포함되어야 한다. 

    5) 현미경 관찰 슬라이드

      확정 완료 전까지 슬라이드는 냉암소에 보관하여야 한다.

    6) 시험성적서 : [별지 제13호서식]    

4. 시험성적서 

  가. 바이러스 분야

     시험성적서는 매 시험마다 다음 각 호의 사항이 포함되도록 작성한다.

    1) 시험제목 및 목적

    2) 검사기관의 명칭 및 소재지

    3) 시험의 개시일 및 종료일

    4) 시험방법 및 시료수

    5) 채취일시, 장소 및 방법

    6) 검사결과(총배양성바이러스, 수온, 탁도, 수소이온농도 및 유리잔류염소농도)

    7) 시험성적서 작성일자

    8) 시험책임자의 서명날인

  나. 원생동물 분야

     시험성적서는 매 시험마다 [별지 제13호서식]에 따라 작성한다. 

별표 0001: 측정분석능력 평가서

[별지 제1호서식]

  측정분석능력 평가서   

1. 평균회수율 및 정밀도 평가

┌────────────┬───────┬───────┬─────┬───┬──┐

│평가항목                │표준농도      │분석결과      │평균회수율│정밀도│적합│

│                        │(난(포낭)/10L)│(난(포낭)/10L)│(%)       │(RSD) │여부│

├──┬─────────┼───────┼───────┼─────┼───┼──┤

│크립│접종 정제수시료   │              │              │          │      │    │

│토스├─────────┼───────┼───────┤          │      │    │

│포리│접종 정제수시료   │              │              │          │      │    │

│디움├─────────┼───────┼───────┤          │      │    │

│    │접종 정제수시료   │              │              │          │      │    │

│    ├─────────┼───────┼───────┤          │      │    │

│    │접종 정제수시료   │              │              │          │      │    │

│    ├─────────┼───────┼───────┤          │      │    │

│    │ 음성시료         │              │              │          │      │    │

├──┼─────────┼───────┼───────┼─────┼───┼──┤

│지아│접종 정제수시료   │              │              │          │      │    │

│디아├─────────┼───────┼───────┤          │      │    │

│    │접종 정제수시료   │              │              │          │      │    │

│    ├─────────┼───────┼───────┤          │      │    │

│    │접종 정제수시료   │              │              │          │      │    │

│    ├─────────┼───────┼───────┤          │      │    │

│    │접종 정제수시료   │              │              │          │      │    │

│    ├─────────┼───────┼───────┤          │      │    │

│    │ 음성시료         │              │              │          │      │    │

└──┴─────────┴───────┴───────┴─────┴───┴──┘

2. 회수율 평가

 가. 바이러스 분야

┌─────────┬────┬────┬───┬──┐

│평가항목          │표준농도│분석결과│회수율│적합│

│                  │(MPN/L) │(MPN/L) │(%)   │여부│

├────┬────┼────┼────┼───┼──┤

│바이러스│접종시료│        │        │      │    │

│        ├────┼────┼────┼───┼──┤

│        │음성시료│        │        │      │    │

└────┴────┴────┴────┴───┴──┘

 나. 원생동물 분야

┌─────────────────┬───────┬───────┬───┬──┐

│평가항목                          │표준농도      │분석결과      │회수율│적합│

│                                  │(난(포낭)/10L)│(난(포낭)/10L)│(%)   │여부│

├────────┬────────┼───────┼───────┼───┼──┤

│크립토스포리디움│접종 정제수시료 │              │              │      │    │

│                ├────────┼───────┼───────┼───┼──┤

│                │음성시료        │              │              │      │    │

├────────┼────────┼───────┼───────┼───┼──┤

│지아디아        │접종 정제수시료 │              │              │      │    │

│                ├────────┼───────┼───────┼───┼──┤

│                │음성시료        │              │              │      │    │

└────────┴────────┴───────┴───────┴───┴──┘

별표 0002: 현지점검 평가표 (바이러스 분야) 

[별지 제2호서식]

 현지점검 평가표 (바이러스 분야) 

1. 운영능력 분야

  가. 기술인력

┌───────┬──┬──┬──────┬──┬─────┐

│구 분         │성명│직급│최종학교    │경력│적합여부  │

│              │    │    │(학력/전공) │    │          │

├───────┼──┼──┼──────┼──┼─────┤

│ 분석책임자   │    │    │            │    │          │

├───────┼──┼──┼──────┼──┼─────┤

│              │    │    │            │    │          │

│              ├──┼──┼──────┼──┼─────┤

│분석자        │    │    │            │    │          │

│              ├──┼──┼──────┼──┼─────┤

│              │    │    │            │    │          │

├───────┼──┼──┼──────┼──┼─────┤

│              │    │    │            │    │          │

│              ├──┼──┼──────┼──┼─────┤

│시료채취자    │    │    │            │    │          │

│              ├──┼──┼──────┼──┼─────┤

│              │    │    │            │    │          │

├───────┼──┼──┼──────┼──┼─────┤

│정도관리담당자│    │    │            │    │          │

└───────┴──┴──┴──────┴──┴─────┘

  나. 실험실 시설

┌──┬────────────────────────────────┬────┐

│연번│시설요건                                                        │적합여부│

├──┼────────────────────────────────┼────┤

│1   │온도, 습도, 공기청정장치(HEPA 필터 또는 이와 동등 이상의 제거   │        │

│    │효율을 가진 에어필터 장착) 설치                                 │        │

├──┼────────────────────────────────┼────┤

│2   │작업대 위 조명장치의 적당성                                     │        │

├──┼────────────────────────────────┼────┤

│3   │작업대 표면은 부드럽고 시약 등에 손상 받지 않은 재질일 것       │        │

├──┼────────────────────────────────┼────┤

│4   │분석자 작업공간 및 보관공간의 적당성                            │        │

├──┼────────────────────────────────┼────┤

│6   │실험실 오염제거를 위한 자외선 조사장치 설치                     │        │

├──┼────────────────────────────────┼────┤

│7   │세포 배양실 및 바이러스 배양실이 분리되어 있거나 무균작업대     │        │

│    │ (Laminar flow hood)로 구분되어 있을 것                         │        │

├──┼────────────────────────────────┼────┤

│8   │세포배양실, 바이러스분석실 및 실험준비·전처리실 등의 분리      │        │

├──┼────────────────────────────────┼────┤

│9   │각 실험실의 구조의 적정성이나, 시설 및 장비의 적정 배치         │        │

├──┼────────────────────────────────┼────┤

│10  │실험실과 사무실이 분리되어 있을 것                              │        │

└──┴────────────────────────────────┴────┘

  다. 장비보유 현황

┌──┬──────────────┬──┬──┬────┬──┬──┐

│연번│검사장비                    │단위│수량│제작사  │제작│적합│

│    │                            │    │    │(규 격) │년도│여부│

├──┼──────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│1   │바이러스 시료채취기         │세트│3   │        │    │    │

│    │(전여과기, 여과기, 주입기,  │    │    │        │    │    │

│    │ 조절기, 배출기)            │    │    │        │    │    │

├──┼──────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│2   │양수펌프                    │대  │1   │        │    │    │

├──┼──────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│3   │현장용 pH 측정기 및 온도계  │〃  │1   │        │    │    │

├──┼──────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│4   │현장용 탁도계               │〃  │1   │        │    │    │

├──┼──────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│5   │현장용 잔류염소측정기       │〃  │1   │        │    │    │

├──┼──────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│6   │증류수 제조장치             │〃  │1   │        │    │    │

├──┼──────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│7   │멸균용 건조기               │〃  │1   │        │    │    │

├──┼──────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│8   │ 세포배양기                 │〃  │2   │        │    │    │

├──┼──────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│9   │고속원심분리기              │〃  │1   │        │    │    │

├──┼──────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│10  │pH 측정기                   │〃  │1   │        │    │    │

├──┼──────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│11  │ 온도 기록계                │〃  │2   │        │    │    │

├──┼──────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│12  │ 도립현미경                 │〃  │1   │        │    │    │

├──┼──────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│13  │ 광학현미경                 │〃  │1   │        │    │    │

├──┼──────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│14  │ 고압증기멸균기             │〃  │1   │        │    │    │

├──┼──────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│15  │초저온냉동고(-70℃)         │〃  │1   │        │    │    │

├──┼──────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│16  │ 냉장고                     │〃  │1   │        │    │    │

├──┼──────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│17  │분석용 저울                 │〃  │1   │        │    │    │

├──┼──────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│18  │ 자외선조사장치             │〃  │1   │        │    │    │

├──┼──────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│19  │항온수조                    │〃  │1   │        │    │    │

├──┼──────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│20  │무균작업대                  │〃  │2   │        │    │    │

└──┴──────────────┴──┴──┴────┴──┴──┘

  라. 업무수행계획에 관한 사항  

┌──┬─────────────┬────┐

│연번│시설 요건                 │적합여부│

├──┼─────────────┼────┤

│1   │분석업무 수행절차 및 방법 │        │

├──┼─────────────┼────┤

│2   │정도관리                  │        │

├──┼─────────────┼────┤

│3   │시설장비 유지관리 계획    │        │

├──┼─────────────┼────┤

│4   │분석수수료                │        │

└──┴─────────────┴────┘

  마. 종합의견 및 보완사항

┌┐

││

└┘

  바. 종합판정 : (□적합, □부적합)

                                                         년      월      일

┌────┬──┬──┬──┐

│평가위원│소속│이름│서명│

│        ├──┼──┼──┤

│        │    │    │    │

└────┴──┴──┴──┘

2. 분석능력 분야

  가. 분석업무에 관한 사항

┌─────┬──┬───────────────────────┬──┬──┐

│평가항목  │연번│평가내용                                      │평점│만점│

├─────┼──┼───────────────────────┼──┼──┤

│시료채취  │1   │시료채취기 구성의 적합 여부                   │    │8   │

│준비사항  │    │조절기, 여과기, 배출기 구성요소들의 적합 여부 │    │    │

│          │    │주입기, 전여과기, 연결부품, 튜빙 등 구성요소들│    │    │

│          │    │의 적합 여부                                  │    │    │

│          ├──┼───────────────────────┼──┼──┤

│          │2   │시료채취기 구성요소들의 멸균상태, 시약준비의  │    │7   │

│          │    │적정성 여부                                   │    │    │

│          ├──┼───────────────────────┼──┼──┤

│          │3   │현장측정기기와 시약 구비 여부                 │    │7   │

│          │    │(온도계, pH 측정기, 탁도계, 잔류염소계)       │    │    │

│          ├──┼───────────────────────┼──┼──┤

│          │4   │오염방지를 위한 준비물의 구비 여부            │    │3   │

│          │    │(수술용 장갑, 멸균알루미늄 호일, 알콜 등)     │    │    │

│          ├──┼───────────────────────┼──┼──┤

│          │5   │채취시료 보관기구의 구비 여부                 │    │5   │

│          │    │(아이스박스, 아이스팩 등)                     │    │    │

├─────┼──┼───────────────────────┼──┼──┤

│장비작동  │6   │ 시료채취기의 작동 여부                       │    │10  │

│및        ├──┼───────────────────────┼──┼──┤

│누출확인  │7   │ 시료채취기의 원활한 연결 및 누출 여부        │    │10  │

├─────┼──┼───────────────────────┼──┼──┤

│시료      │8   │ 시료채취지점의 적정성                        │    │5   │

│채취과정  ├──┼───────────────────────┼──┼──┤

│          │9   │유량 및 수압의 적합 여부                      │    │5   │

│          ├──┼───────────────────────┼──┼──┤

│          │10  │시료채취기세트 연결시의 무균조작 시행 여부    │    │5   │

│          ├──┼───────────────────────┼──┼──┤

│          │11  │수질조건에 따른 연결 조건의 숙지 여부         │    │5   │

│          ├──┼───────────────────────┼──┼──┤

│          │12  │제반기록사항의 기재 여부                      │    │5   │

│          ├──┼───────────────────────┼──┼──┤

│          │13  │누수, 오염 등 채취과정상의 문제해결 능력      │    │5   │

├─────┼──┼───────────────────────┼──┼──┤

│시료      │14  │시료채취량의 적정 여부                        │    │10  │

│채취결과  ├──┼───────────────────────┼──┼──┤

│          │15  │정확한 pH 조절, 탁도 초과 시 대처, 잔류염소 중│    │10  │

│          │    │화제 주입 산정 여부                           │    │    │

├─────┼──┼───────────────────────┼──┼──┤

│탈리과정  │16  │배지/시약준비의 적정성                        │    │4   │

│          ├──┼───────────────────────┼──┼──┤

│          │17  │탈리장치 구성과 연결의 적합성                 │    │5   │

│          │    │(공기필터, 양압원 압력용기연결)               │    │    │

│          ├──┼───────────────────────┼──┼──┤

│          │18  │탈리과정 수행의 정확성                        │    │5   │

│          │    │(탈리 전 조치, 탈리 횟수 및 시간 등)          │    │    │

└─────┴──┴───────────────────────┴──┴──┘

┌──────┬──┬────────────────────────┬──┬───┐

│평가항목    │연번│평가내용                                        │평점│만점  │

├──────┼──┼────────────────────────┼──┼───┤

│유기응집농축│18  │ pH의 보정과 소독 및 정확한 측정                │    │6     │

│            ├──┼────────────────────────┼──┼───┤

│            │19  │ 유기응집과정 수행의 정확성(침전물의 생성)      │    │6     │

│            ├──┼────────────────────────┼──┼───┤

│            │20  │ 멸균필터사용의 적정성                          │    │3     │

├──────┼──┼────────────────────────┼──┼───┤

│기타        │21  │전처리 후 기구 및 배지/시약의 처리              │    │3     │

│전처리 관련 ├──┼────────────────────────┼──┼───┤

│            │22  │전처리 기간 및 보관조건의 적정성                │    │3     │

├──────┼──┼────────────────────────┼──┼───┤

│세포준비    │23  │배양액 준비의 적정성(배지, 시약, 배양액 조제)   │    │5     │

│            ├──┼────────────────────────┼──┼───┤

│            │24  │세포주의 계대접종수 및 세포상태                 │    │5     │

│            ├──┼────────────────────────┼──┼───┤

│            │25  │세포배양 및 배양 조건                           │    │5     │

├──────┼──┼────────────────────────┼──┼───┤

│바이러스접종│26  │접종량 산정의 정확성                            │    │5     │

│            ├──┼────────────────────────┼──┼───┤

│            │27  │접종절차의 숙지                                 │    │5     │

│            │    │(배지, 흡착시간 및 조건, 배양조건, 희석조건 등) │    │      │

│            ├──┼────────────────────────┼──┼───┤

│            │28  │계대과정 및 대조군의 정확한 사용                │    │5     │

│            ├──┼────────────────────────┼──┼───┤

│            │29  │세포병변현상, 세포독성현상 판정 능력            │    │10    │

│            ├──┼────────────────────────┼──┼───┤

│            │30  │세포독성현상에 대한 대처 능력                   │    │5     │

├──────┼──┼────────────────────────┼──┼───┤

│바이러스정량│31  │MPN 계산 산정능                                 │    │10    │

│            ├──┼────────────────────────┼──┼───┤

│            │32  │고농도시 희석 및 정량계산의 이해도              │    │10    │

├──────┴──┴────────────────────────┼──┼───┤

│평가 점수                                                           │    │200   │

├──────────────────────────────────┼──┴───┤

│적합여부 판정 (평가점수가 160점 이상일 경우 적합 판정)              │  □ 적합   │

│                                                                    │  □ 부적합 │

└──────────────────────────────────┴──────┘

  나. 종합의견 및 보완사항

┌┐

││

└┘

  다. 종합판정 : (□적합, □부적합)

 년      월      일

┌────┬──┬──┬──┐

│평가위원│소속│이름│서명│

│        ├──┼──┼──┤

│        │    │    │    │

└────┴──┴──┴──┘

별표 0003: 현지점검 평가표 (원생동물 분야)

[별지 제3호서식]

현지점검 평가표 (원생동물 분야)

1. 운영능력 분야

  가. 기술인력

┌───────┬──┬──┬──────┬──┬─────┐

│구 분         │성명│직급│최종학교    │경력│적합여부  │

│              │    │    │(학력/전공) │    │          │

├───────┼──┼──┼──────┼──┼─────┤

│분석책임자    │    │    │            │    │          │

├───────┼──┼──┼──────┼──┼─────┤

│분석자        │    │    │            │    │          │

│              ├──┼──┼──────┼──┼─────┤

│              │    │    │            │    │          │

│              ├──┼──┼──────┼──┼─────┤

│              │    │    │            │    │          │

│              ├──┼──┼──────┼──┼─────┤

│              │    │    │            │    │          │

├───────┼──┼──┼──────┼──┼─────┤

│시료채취자    │    │    │            │    │          │

│              ├──┼──┼──────┼──┼─────┤

│              │    │    │            │    │          │

│              ├──┼──┼──────┼──┼─────┤

│              │    │    │            │    │          │

│              ├──┼──┼──────┼──┼─────┤

│              │    │    │            │    │          │

├───────┼──┼──┼──────┼──┼─────┤

│정도관리담당자│    │    │            │    │          │

└───────┴──┴──┴──────┴──┴─────┘

  나. 실험실 시설

┌──┬─────────────────────────────────┬────┐

│연번│시설요건                                                          │적합여부│

├──┼─────────────────────────────────┼────┤

│1   │실험실과 사무실은 별도로 갖추어야 할 것                           │        │

├──┼─────────────────────────────────┼────┤

│2   │실험실내 원생동물 전처리실과 현미경실(또는 검경 시 빛을 차단시킬  │        │

│    │수 있는 설비를 갖출 것)로 구분되어야 하며, 별도의 전원을          │        │

│    │사용하여 암실을 유지할 수 있을 것                                 │        │

├──┼─────────────────────────────────┼────┤

│3   │실험실 구조, 시설 및 장비의 배치가 적정할 것                      │        │

└──┴─────────────────────────────────┴────┘

  다. 장비보유 현황

┌──┬────────────────┬──┬──┬────┬──┬──┐

│연번│검사장비                        │단위│수량│제조회사│제작│적합│

│    │                                │    │    │        │년도│여부│

├──┼────────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│1   │교반기                          │대  │1   │        │    │    │

├──┼────────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│2   │정량펌프                        │〃  │1   │        │    │    │

├──┼────────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│3   │팔 달린 교반기(Wrist Shaker)    │〃  │1   │        │    │    │

├──┼────────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│4   │볼텍스믹서(Vortex Mixer)        │〃  │1   │        │    │    │

├──┼────────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│5   │흡인장치                        │〃  │1   │        │    │    │

├──┼────────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│6   │고속원심분리기                  │〃  │1   │        │    │    │

├──┼────────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│7   │회전혼합기(Rotating Mixer)      │〃  │1   │        │    │    │

├──┼────────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│8   │리톤시험관용 자기입자농축기     │〃  │1   │        │    │    │

├──┼────────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│9   │ 미세원심분리관용 자기입자농축기│"   │1   │        │    │    │

├──┼────────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│10  │pH측정기                        │〃  │1   │        │    │    │

├──┼────────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│11  │형광/미분간섭대비(DIC) 현미경   │세트│1   │        │    │    │

├──┼────────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│12  │ 탁도계                         │대  │1   │        │    │    │

├──┼────────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│13  │ 시료보관 냉장고                │"   │1   │        │    │    │

├──┼────────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│14  │ 정제수 제조기                  │"   │1   │        │    │    │

├──┼────────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│15  │건조기                          │〃  │1   │        │    │    │

├──┼────────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│16  │ 고압증기멸균기(Autoclave)      │〃  │1   │        │    │    │

├──┼────────────────┼──┼──┼────┼──┼──┤

│17  │화학천평                        │〃  │1   │        │    │    │

└──┴────────────────┴──┴──┴────┴──┴──┘

  라. 업무수행계획에 관한 사항  

┌──┬─────────────┬────┐

│연번│시설요건                  │적합여부│

├──┼─────────────┼────┤

│1   │분석업무 수행절차 및 방법 │        │

├──┼─────────────┼────┤

│2   │정도관리                  │        │

├──┼─────────────┼────┤

│3   │시설장비 유지관리 계획    │        │

├──┼─────────────┼────┤

│4   │분석수수료                │        │

└──┴─────────────┴────┘

  마. 종합의견 및 보완사항

┌┐

││

└┘

  바. 종합판정 : (□적합, □부적합)

                                                         년      월      일

┌────┬──┬──┬──┐

│평가위원│소속│이름│서명│

│        ├──┼──┼──┤

│        │    │    │    │

└────┴──┴──┴──┘

2. 분석능력 분야

  가. 분석업무에 관한 사항

┌──────┬──┬─────────────────────────┬──┬──────┐

│평가항목    │연번│평가내용                                          │평점│만점        │

├──────┼──┼─────────────────────────┼──┼──────┤

│시료채수    │1   │시료채수(여과)장치 구성의 적합여부                │    │10          │

│준비사항    ├──┼─────────────────────────┼──┼──────┤

│            │2   │시료채수장치 구성요소들의 건조 및 청결여부        │    │5           │

│            ├──┼─────────────────────────┼──┼──────┤

│            │3   │채수시료 보관기구의 구비 여부                     │    │5           │

│            │    │(아이스박스, 아이스팩, 여과지 보관용기 등)        │    │            │

├──────┼──┼─────────────────────────┼──┼──────┤

│시료채수    │4   │ 채수지점 선정의 적정성                           │    │10          │

│및          ├──┼─────────────────────────┼──┼──────┤

│여과과정    │5   │ 시료채수(여과)장치의 원활한 연결 및 누출여부     │    │5           │

│            ├──┼─────────────────────────┼──┼──────┤

│            │6   │ 제반 기록사항의 기재여부                         │    │5           │

│            ├──┼─────────────────────────┼──┼──────┤

│            │7   │ 누수, 오염 등 채수과정상의 문제해결 능력         │    │10          │

├──────┼──┼─────────────────────────┼──┼──────┤

│추출 및     │8   │ 추출용액의 적정성 및 기재사항(추출용액명, 조제   │    │10          │

│ 농축과정   │    │ 날짜, 조제자명 등)의 적합여부                    │    │            │

│            ├──┼─────────────────────────┼──┼──────┤

│            │9   │추출과정의 정확성(추출시간, 횟수, 추출액량)       │    │10          │

│            ├──┼─────────────────────────┼──┼──────┤

│            │10  │농축과정 수행의 정확성                            │    │20          │

├──────┼──┼─────────────────────────┼──┼──────┤

│면역자기    │11  │면역자기분리과정에 적용된 농축물량의 적정성       │    │10          │

│분리과정    ├──┼─────────────────────────┼──┼──────┤

│            │12  │면역자기분리용 키트의 적정성(유효기간, 사용법)    │    │5           │

│            ├──┼─────────────────────────┼──┼──────┤

│            │13  │면역자기분리과정 수행의 정확성                    │    │15          │

├──────┼──┼─────────────────────────┼──┼──────┤

│염색과정    │14  │사용재료의 적정성                                 │    │5           │

│            ├──┼─────────────────────────┼──┼──────┤

│            │15  │양성 및 음성 대조군 시험여부 및 적정성            │    │10          │

│            ├──┼─────────────────────────┼──┼──────┤

│            │16  │염색과정 수행의 정확성                            │    │15          │

├──────┼──┼─────────────────────────┼──┼──────┤

│현미경 관찰 │17  │현미경 사용의 정확성                              │    │10          │

│            ├──┼─────────────────────────┼──┼──────┤

│            │18  │(난)포낭의 동정 및 계수의 정확성                  │    │30          │

│            ├──┼─────────────────────────┼──┼──────┤

│            │19  │검출된 (난)포낭에 대한 사진 또는 그림파일 저장의  │    │10          │

│            │    │적합여부                                          │    │            │

├──────┴──┴─────────────────────────┼──┼──────┤

│평가 점수                                                             │    │200         │

├───────────────────────────────────┼──┴──────┤

│적합여부 판정 (평가점수가 160점 이상일 경우 적합 판정)                │□ 적합, □부적합 │

└───────────────────────────────────┴─────────┘

  나. 종합의견 및 보완사항

┌┐

││

└┘

  다. 종합판정 : (□적합, □부적합)

 년      월      일

┌────┬──┬──┬──┐

│평가위원│소속│이름│서명│

│        ├──┼──┼──┤

│        │    │    │    │

└────┴──┴──┴──┘

별표 0004: 현지점검 평가서

[별지 제4호서식]

   현지점검 평가서  

┏━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┓

┃신청기관명      │                                                        ┃

┠────────┼────────────────────────────┨

┃소  재  지      │                                                        ┃

┠────────┼────────────────────────────┨

┃대  표  자      │                                                        ┃

┠────────┼────────────────────────────┨

┃종 합 의 견     │                                                        ┃

┠────────┼────────────────────────────┨

┃    평 가 결 과 │ □ 적합       □ 조건부 적합      □ 부적합            ┃

┃                │ (조건부 사유 :                                )        ┃

┠────────┴────────────────────────────┨

┃    위 기관에 대하여 「먹는물수질검사기관 바이러스 및 원생동물분야 지정   ┃

┃등에 관한 규정」에 따라 붙임과 같이 현지평가를 실시하고 그 결과를 제출    ┃

┃합니다.                                                                   ┃

┃                                                                          ┃

┃                                                     년     월     일     ┃

┃                                                                          ┃

┃  평가위원 : 소속                   직급            성명           (서명) ┃

┃                                                                          ┃

┃                                                                          ┃

┃  신청기관 : 소속                   직급            성명           (서명) ┃

┃                                                                          ┃

┠─────────────────────────────────────┨

┃ ※ 첨부 : 현지점검 평가표 1부                                            ┃

┗━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┛

별표 0005: 바이러스 시료채취기록부

[별지 제5호서식]

바이러스 시료채취기록부

┏━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┓

┃ 1. 시료번호                                                  ┃

┠───────────────────────────────┨

┃ 2. 일반사항                                                  ┃

┠───────────────────────────────┨

┃  ㅇ 정수장명 :                                               ┃

┃  ㅇ 채취지점(혹은 정수장) 주소 :                             ┃

┃  ㅇ 시설규모 등 시설개요 :                                   ┃

┃  ㅇ 수온(℃) :                                               ┃

┃  ㅇ 탁도(NTU) :                                              ┃

┃  ㅇ pH : 조정 전 ;                     조정 후 ;             ┃

┃  ㅇ 잔류염소(mg/L)* :                                        ┃

┃  ㅇ 티오황산염 첨가 유무* : □첨가      □미첨가             ┃

┠───────────────────────────────┨

┃ 3. 채취사항                                                  ┃

┠───────────────────────────────┨

┃  ㅇ 채취일자 :        년       월       일                   ┃

┃  ㅇ 채취시간 : 채취시작 ;             채취완료 ;             ┃

┃  ㅇ 총 채취량(L) :                                           ┃

┃  ㅇ 유량계에 나타난 수(L) : 채취시작 ;          채취완료 ;   ┃

┠───────────────────────────────┨

┃ 4. 특이사항                                                  ┃

┠───────────────────────────────┨

┃  ㅇ 채취시료 이동날짜 :                                      ┃

┃  ㅇ 채취시료 보관상태(냉장) :                                ┃

┃  ㅇ 기타사항 :                                               ┃

┠───────────────────────────────┨

┃ * 정수 채취 시                                               ┃

┗━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┛

년      월       일

 ㅇ 작성자   소속 :                     직급 :             성명 :              (서명)  

별표 0006: 바이러스 시료전처리기록부

[별지 제6호서식]

바이러스 시료전처리기록부

┏━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┓

┃ 1. 시료번호:                                                                                 ┃

┠───────────────────────────────────────────────┨

┃ 2. 분석기관명:                                                                               ┃

┠───────────────────────────────────────────────┨

┃ 3. 분석기관주소:                                                                             ┃

┠───────────────────────────────────────────────┨

┃ 4. 보정 총시료량(ATSV, L)1):                                                                 ┃

┠──────────────┬────────────────────────────────┨

┃ 5. 시료를 탈리한(EVR) 날짜 │ 시간:                                                          ┃

┠──────────────┴────────────────────────────────┨

┃ 6. 최종 탈리량(Elute, mL):                                                                   ┃

┠───────────────────────────────────────────────┨

┃ 7. 보관할 탈리시료량(mL):                                                                    ┃

┠──────────────┬────────────────────────────────┨

┃ 8. 농축한 날짜:            │ 시간:                                                          ┃

┠──────────────┴────────────────────────────────┨

┃ 9. 최종농축시료량(FCSV, mL):                                                                 ┃

┠───────────────────────────────────────────────┨

┃10. 분석시료량(S, mL):                                                                        ┃

┠───────────────────────────────────────────────┨

┃11. 원분석량(D, L2)):                                                                         ┃

┠───────────────────────────────────────────────┨

┃12. 접종량(mL):                                                                               ┃

┣━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫

┃13. 세포병변에 의해 분석한 날짜                                                               ┃

┃                         1차시도            2차시도         3차시도(필요시)                   ┃

┠───────┬───────┬┬──────────────────────────────┨

┃ Subsample  1:│              ││                                                            ┃

┠───────┼───────┼┼──────────────────────────────┨

┃ Subsample  2:│              ││                                                            ┃

┣━━━━━━━┷━━━━━━━┿┷━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫

┃ MPN/100 L3):                 │ 95% 신뢰한계                                                 ┃

┃                              │ 하한:          상한:                                         ┃

┣━━━━━━━━━━━━━━━┷━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫

┃ 비 고:                                                                                       ┃

┃                                                                                              ┃

┣━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫

┃ 분석자:                                                                                      ┃

┣━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫

┃ 1) 최종탈리량에서 기록보관용으로 10 %를 보관할 시료는 0.9를 곱하고, 보관하지 않을 경우 1.0을 ┃

┃    곱한다.                                                                                   ┃

┃ 2) 원수일 때는 100 L로 정수일 때는 1000 L로 한다.                                            ┃

┃ 3) 바이러스 정량산정기록부값에서 계산하여 얻는다.                                            ┃

┗━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┛

*참고 : 보정시료량(Adjusted total sample volume), 분석시료량(Assay sample volume)

        최종농축량(Final concentrated sample volume), 접종량(Inoculum volume)

별표 0007: 바이러스 세포배양기록부

[별지 제7호서식]

바이러스 세포배양기록부

┏━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┓

┃ 1. 시료번호:                                                                                   ┃

┣━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫

┃ 2. 반복시료의 총 수                                                                            ┃

┣━━━━━━┳━━━━━━━━━━━━━┳━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫

┃시   료     ┃Subsample 1               ┃Subsample 2                                           ┃

┃            ┣━━━┯━━━━┯━━━━╋━━━┯━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫

┃            ┃접종수│세포병변│세포병변┃접종수│세포병변│세포병변                            ┃

┃            ┃      │음성    │양성    ┃      │음성    │양성                                ┃

┣━━━━━━╋━━━┿━━━━┿━━━━╋━━━┿━━━━┿━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫

┃1차 계대    ┃      │        │        ┃      │        │                                    ┃

┃음성대조군  ┃      │        │        ┃      │        │                                    ┃

┠──────╂───┼────┼────╂───┼────┼──────────────────┨

┃양성대조군  ┃      │        │        ┃      │        │                                    ┃

┠──────╂───┼────┼────╂───┼────┼──────────────────┨

┃원액        ┃      │        │        ┃      │        │                                    ┃

┠──────╂───┼────┼────╂───┼────┼──────────────────┨

┃1:5 희석    ┃      │        │        ┃      │        │                                    ┃

┠──────╂───┼────┼────╂───┼────┼──────────────────┨

┃1:25 희석   ┃      │        │        ┃      │        │                                    ┃

┣━━━━━━╋━━━┿━━━━┿━━━━╋━━━┿━━━━┿━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫

┃2차 계대1)  ┃      │        │        ┃      │        │                                    ┃

┃음성대조군  ┃      │        │        ┃      │        │                                    ┃

┠──────╂───┼────┼────╂───┼────┼──────────────────┨

┃양성대조군  ┃      │        │        ┃      │        │                                    ┃

┠──────╂───┼────┼────╂───┼────┼──────────────────┨

┃원액        ┃      │        │        ┃      │        │                                    ┃

┠──────╂───┼────┼────╂───┼────┼──────────────────┨

┃1:5 희석    ┃      │        │        ┃      │        │                                    ┃

┠──────╂───┼────┼────╂───┼────┼──────────────────┨

┃1:25 희석   ┃      │        │        ┃      │        │                                    ┃

┣━━━━━━╋━━━┿━━━━┿━━━━╋━━━┿━━━━┿━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫

┃3차 계대2)  ┃      │        │        ┃      │        │                                    ┃

┃음성대조군  ┃      │        │        ┃      │        │                                    ┃

┠──────╂───┼────┼────╂───┼────┼──────────────────┨

┃양성대조군  ┃      │        │        ┃      │        │                                    ┃

┠──────╂───┼────┼────╂───┼────┼──────────────────┨

┃원액        ┃      │        │        ┃      │        │                                    ┃

┠──────╂───┼────┼────╂───┼────┼──────────────────┨

┃1:5 희석    ┃      │        │        ┃      │        │                                    ┃

┠──────╂───┼────┼────╂───┼────┼──────────────────┨

┃1:25 희석   ┃      │        │        ┃      │        │                                    ┃

┣━━━━━━┻━━━┷━━━━┷━━━━┻━━━┷━━━━┷━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫

┃ ※세포배양조건                        세포주 계대수 (     )                                    ┃

┣━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫

┃ ※세포독성 처리여부                                                                            ┃

┣━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫

┃ 1) 1차 계대에서 배양 후 배양시료의 일정량을 2차 계대에 접종함으로써 결과를 확인한다. 2차와 3차 ┃

┃계대에서의 “원액”, “1:5 희석”, “1:25 희석”의 개념은 1차 계대의 원시료 희석으로 간주한다.  ┃

┃만약 이보다 높은 희석을 사용한다면, 양성 반응이 나타난 세 개의 최고희석률을 게재한다.           ┃

┃ 2) 1차에 음성, 2차 계대에서 양성을 나타낸 시료는 확인을 위해 3차 계대를 한다.                  ┃

┗━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┛

별표 0008: 바이러스 정량산정기록부

[별지 제8호서식]

바이러스 정량산정기록부

┏━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┓

┃  시료번호:                                                                                     ┃

┣━━━━━━━┯━━━━━━┯━━━━━━━━┳━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫

┃시  료        │반복시료 수 │세포병변양성 수 ┃MPN/mL│95% 신뢰한계                            ┃

┃              │            │                ┃      ├──┬─────────────────┨

┃              │            │                ┃      │하한│상한                              ┃

┣━━━━━━━┷━━━━━━┷━━━━━━━━╋━━━┿━━┿━━━━━━━━━━━━━━━━━┫

┃원   액1)                                     ┃      │    │                                  ┃

┣━━━━━━━┯━━━━━━┯━━━━━━━━┫      │    │                                  ┃

┃Subsample 1   │            │                ┃      │    │                                  ┃

┠───────┼──────┼────────┨      │    │                                  ┃

┃Subsample 2   │            │                ┃      │    │                                  ┃

┠───────┼──────┼────────┨      │    │                                  ┃

┃총 반복시료수 │            │                ┃      │    │                                  ┃

┣━━━━━━━┷━━━━━━┷━━━━━━━━┫      │    │                                  ┃

┃Subsample 2 결과(희석 필요시)                 ┃      │    │                                  ┃

┣━━━━━━━┯━━━━━━┯━━━━━━━━┫      │    │                                  ┃

┃원액          │            │                ┃      │    │                                  ┃

┠───────┼──────┼────────┨      │    │                                  ┃

┃1:5 희석      │            │                ┃      │    │                                  ┃

┠───────┼──────┼────────┨      │    │                                  ┃

┃1:25 희석     │            │                ┃      │    │                                  ┃

┣━━━━━━━┷━━━━━━┷━━━━━━━━┹───┴──┴─────────────────┨

┃ 1) 희석이 필요하지 않을 때의 MPN/mL의 결과와 신뢰한계를 계산하기 위해서 원액의 결과를  기입한  ┃

┃열을 사용하여 계산한다. 만약 희석을 필요로 한다면 subsample 2 결과를 기입한 열을 사용하여 계    ┃

┃산한다. 더 높은 희석률로 희석하였을 경우는 양성 반응이 나온 가장 높은 희석률부터 세 개를 이     ┃

┃용하고 실제 희석량을 기입한다. MPN/mL의 결과와  신뢰한계 계산은 컴퓨터 프로그램을 이용한다.     ┃

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별표 0009: 원생동물 시료채취기록부

[별지 제9호서식]

원생동물 시료채취기록부

┏━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┓

┃ 1. 시료번호                                                    ┃

┠────────────────────────────────┨

┃ 2. 일반사항                                                    ┃

┠────────────────────────────────┨

┃  ㅇ 정수장명 :                                                 ┃

┃  ㅇ 채취지점(혹은 정수장) 주소 :                               ┃

┃  ㅇ 시설규모 등 시설개요 :                                     ┃

┃  ㅇ 수온(℃) :                                                 ┃

┃  ㅇ 탁도(NTU) :                                                ┃

┃  ㅇ pH :                                                       ┃

┃  ㅇ 잔류염소(mg/L)* :                                          ┃

┃  ㅇ 티오황산염 첨가 유무* : □첨가     □미첨가                ┃

┠────────────────────────────────┨

┃ 3. 채취사항                                                    ┃

┠────────────────────────────────┨

┃  ㅇ 채취일자 :        년       월       일                     ┃

┃  ㅇ 채취시간 : 채취시작 ;             채취완료 ;               ┃

┃  ㅇ 총 채취량(L) :                                             ┃

┃  ㅇ 유량계에 나타난 수(L)* : 채취시작 ;          채취완료 ;    ┃

┠────────────────────────────────┨

┃ 4. 특이사항                                                    ┃

┠────────────────────────────────┨

┃  ㅇ 채취시료 이동날짜 :                                        ┃

┃  ㅇ 채취시료 보관상태(냉장) :                                  ┃

┃  ㅇ 기타사항 :                                                 ┃

┠────────────────────────────────┨

┃  * 정수 채취 시                                                ┃

┗━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┛

                                                        년      월       일

 ㅇ 작성자   소속 :                     직급 :             성명 :              (서명)  

별표 0010: 원생동물 시험일지

[별지 제10호서식]

원생동물 시험일지

┏━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┓

┃ 실험실명 :                                실험실 ID :                                  ┃

┣━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━┫

┃ 시료접수번호                                       │                                  ┃

┠──────────────────────────┴─────────────────┨

┃ 시료의 유형 □ 접종 현장시료 (원수 또는 정수) □ 접종하지 않은 현장시료(원수 또는 정수)┃

┃              □ 접종 정제수시료     □ 음성시료                                        ┃

┣━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━┫

┃ 시료접수일                                         │                                  ┃

┠──────────────────────────┼─────────────────┨

┃ 시료접수자                                         │                                  ┃

┠──────────────────────────┼─────────────────┨

┃ 도착 시 시료온도와 시료조건                        │                                  ┃

┠──────────────────────────┼─────────────────┨

┃ 보관위치와 보관온도                                │                                  ┃

┠──────────────────────────┼─────────────────┨

┃ 시료 탁도 (NTU)                                    │                                  ┃

┣━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┿━━━━━━━━━━━━━━━━━┫

┃ 접종용액의 제조회사 및 제품번호, 로트번호, 유효일자│                                  ┃

┠──────────────────────────┼───┬─────────────┨

┃ 접종된 포낭 및 난포낭 갯수                         │난포낭│포낭                      ┃

┃                                                    │      │                          ┃

┠──────────────────────────┼───┴─────────────┨

┃ 접종 날짜 및 시간                                  │                                  ┃

┠──────────────────────────┼─────────────────┨

┃ 접종용액량 (mL)                                    │                                  ┃

┣━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┿━━━━━━━━━━━━━━━━━┫

┃ 시료의 여과 시작 날짜?시간 및 종료시간            │                                  ┃

┠──────────────────────────┼─────────────────┨

┃ 사용된 필터의 종류와 로트번호                      │                                  ┃

┠──────────────────────────┼─────────────────┨

┃ 여과를 수행한 분석자                               │                                  ┃

┠──────────────────────────┼─────────────────┨

┃ 여과된 시료량 (1/4 L까지 기입, 세척수량 포함 안함) │                                  ┃

┠──────────────────────────┼─────────────────┨

┃ 필터의 폐색여부                                    │                                  ┃

┣━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┿━━━━━━━━━━━━━━━━━┫

┃ 추출 시작 날짜?시간 및 종료시간                   │                                  ┃

┠──────────────────────────┼─────────────────┨

┃ 추출을 수행한 분석자                               │                                  ┃

┣━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┿━━━━━━━━━━━━━━━━━┫

┃ 농축 시작 날짜?시간 및 종료시간                   │                                  ┃

┠──────────────────────────┼─────────────────┨

┃ 농축을 수행한 분석자                               │                                  ┃

┠──────────────────────────┼─────────────────┨

┃ 농축 후 총 농축물의 부피                           │                                  ┃

┠──────────────────────────┼─────────────────┨

┃ 재 부유된 시료의 총 부피                           │                                  ┃

┠──────────────────────────┼─────────────────┨

┃ subsample의 수                                     │                                  ┃

┠──────────────────────────┼─────────────────┨

┃ subsample의 부피                                   │                                  ┃

┣━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┿━━━━┯━━━━━━━━━━━━┫

┃ 사용된 면역자기분리용 키트와 로트번호              │        │                        ┃

┠──────────────────────────┼────┴────────────┨

┃ 면역자기분리과정을 수행한 분석자                   │                                  ┃

┠──────────────────────────┼────┬────────────┨

┃ 사용된 슬라이드와 로트번호                         │        │                        ┃

┠──────────────────────────┼────┼────────────┨

┃ 슬라이드에 시료를 적용한 날짜와 시간               │        │                        ┃

┣━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┿━━━━┿━━━━━━━━━━━━┫

┃ 사용된 직접염색키트와 로트번호                     │        │                        ┃

┠──────────────────────────┼────┴────────────┨

┃ 염색과정을 수행한 분석자                           │                                  ┃

┠──────────────────────────┼────┬────────────┨

┃ 염색완료 날짜 및 시간                              │        │                        ┃

┠──────────────────────────┼────┼────────────┨

┃ 확정완료 날짜 및 시간                              │        │                        ┃

┣━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┷━━━━┷━━━━━━━━━━━━┫

┃ 비 고                                                                                  ┃

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별표 0011: 크립토스포리디움 시험기록부

[별지 제11호서식]

크립토스포리디움 시험기록부

┏━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┓

┃ 채취일:                                │ 시료접수번호:                                        ┃

┠────────────────────┼───────────────────────────┨

┃ 여과량:                                │ 총농축물량:         조사된 농축물량:                 ┃

┠────────────────────┼───────────────────────────┨

┃ 관찰된 시료량:                         │ 시료특이사항:                                        ┃

┠────────────────────┼───────────────────────────┨

┃ 분석자:                                │ 대조군에 대한 형광염색결과:                          ┃

┃                                        │   양성대조군 -  □적합  □부적합                     ┃

┃                                        │   음성대조군 -  □적합  □부적합                     ┃

┠────────────────────┼───────────────────────────┨

┃ 확정자:                                │ 대조군에 대한 DAPI염색결과 :                         ┃

┃                                        │   양성대조군 -  □적합  □부적합                     ┃

┣━┯━━━┯━━┯━━━━━━━━━━━┿━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫

┃번│형태  │크기│DAPI+                 │DAPI-         │DIC                                   ┃

┃호│(타원 │(㎛)├─────┬─────┼───────┼───┬─────┬─────────┨

┃  │형    │길이│하늘색으  │내부가    │녹색테두리의  │속빈  │무정형의  │내부구조를 가진   ┃

┃  │또는  │×폭│로 염색된 │짙은      │내부가 옅은   │난포낭│구조를    │난포낭(F)         ┃

┃  │원형) │    │핵의수    │하늘색을  │하늘색        │(D)   │가진      ├─────────┨

┃  │      │    │(A)       │띰        │(선명한 핵    │      │난포낭    │스포로조이트의 수 ┃

┃  │      │    │          │(B)       │없음)         │      │(E)       │                  ┃

┃  │      │    │          │          │(C)           │      │          │                  ┃

┠─┼───┼──┼─────┼─────┼───────┼───┼─────┼─────────┨

┃1 │      │    │          │          │              │      │          │                  ┃

┠─┼───┼──┼─────┼─────┼───────┼───┼─────┼─────────┨

┃2 │      │    │          │          │              │      │          │                  ┃

┠─┼───┼──┼─────┼─────┼───────┼───┼─────┼─────────┨

┃3 │      │    │          │          │              │      │          │                  ┃

┠─┼───┼──┼─────┼─────┼───────┼───┼─────┼─────────┨

┃4 │      │    │          │          │              │      │          │                  ┃

┠─┼───┼──┼─────┼─────┼───────┼───┼─────┼─────────┨

┃5 │      │    │          │          │              │      │          │                  ┃

┠─┼───┼──┼─────┼─────┼───────┼───┼─────┼─────────┨

┃6 │      │    │          │          │              │      │          │                  ┃

┠─┼───┼──┼─────┼─────┼───────┼───┼─────┼─────────┨

┃7 │      │    │          │          │              │      │          │                  ┃

┠─┼───┼──┼─────┼─────┼───────┼───┼─────┼─────────┨

┃8 │      │    │          │          │              │      │          │                  ┃

┠─┼───┼──┼─────┼─────┼───────┼───┼─────┼─────────┨

┃9 │      │    │          │          │              │      │          │                  ┃

┠─┼───┼──┼─────┼─────┼───────┼───┼─────┼─────────┨

┃10│      │    │          │          │              │      │          │                  ┃

┣━┷━━━┷━━┷━━━━━┷━━━━━┿━━━━━━━┷━━━┷━━━━━┷━━━━━━━━━┫

┃ 관찰 완료일시                          │ 확정 완료일시(염색 후 7일 이내에 완료):              ┃

┃                                        │                                                      ┃

┠────────────────────┼───────────────────────────┨

┃ DAPI+ (A)의 갯수:                      │ DIC-속빈 난포낭(D)의 갯수:                           ┃

┠────────────────────┼───────────────────────────┨

┃ DAPI+ (B)의 갯수:                      │ DIC-무정형의 구조를 가진 난포낭(E)의 갯수:           ┃

┠────────────────────┼───────────────────────────┨

┃ DAPI- (C)의 갯수:                      │ DIC-내부구조를 가진 난포낭(F)의 갯수:                ┃

┗━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┷━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┛

별표 0012: 지아디아 시험기록부

[별지 제12호서식]

지아디아 시험기록부

┏━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┓

┃ 채취일:                                    │ 시료접수번호:                                                  ┃

┠──────────────────────┼────────────────────────────────┨

┃ 여과량:                                    │ 총 농축물량:          조사된 농축물량:                         ┃

┠──────────────────────┼────────────────────────────────┨

┃ 관찰된 시료량:                             │ 시료 특이사항:                                                 ┃

┠──────────────────────┼────────────────────────────────┨

┃ 분석자:                                    │ 대조군에 대한 형광염색결과:                                    ┃

┃                                            │   양성대조군 -  □적합  □부적합                               ┃

┃                                            │   음성대조군 -  □적합  □부적합                               ┃

┠──────────────────────┼────────────────────────────────┨

┃ 확정자:                                    │ 대조군에 대한 DAPI염색결과 :                                   ┃

┃                                            │   양성대조군 -  □적합  □부적합                               ┃

┣━┯━━━━┯━━━━┯━━━━━━━━━━┿━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫

┃번│형태    │크기    │DAPI+               │DAPI-         │DIC                                             ┃

┃호│(타원형 │(㎛)    ├────┬─────┼───────┼───┬─────┬──────────────┨

┃  │또는    │길이×폭│하늘색  │내부가    │녹색테두리의  │속빈  │무정형의  │내부구조를 가진 포낭(F)     ┃

┃  │원형)   │        │으로    │짙은      │내부가 옅은   │포낭  │구조를    ├───┬────┬─────┨

┃  │        │        │염색된  │하늘색을  │하늘색        │(D)   │가진 포낭 │핵의수│중심체  │축사      ┃

┃  │        │        │핵의수  │띰        │(선명한 핵    │      │(E)       │      │(median │(axonemes)┃

┃  │        │        │(A)     │(B)       │없음)         │      │          │      │body)   │          ┃

┃  │        │        │        │          │(C)           │      │          │      │        │          ┃

┠─┼────┼────┼────┼─────┼───────┼───┼─────┼───┼────┼─────┨

┃1 │        │        │        │          │              │      │          │      │        │          ┃

┠─┼────┼────┼────┼─────┼───────┼───┼─────┼───┼────┼─────┨

┃2 │        │        │        │          │              │      │          │      │        │          ┃

┠─┼────┼────┼────┼─────┼───────┼───┼─────┼───┼────┼─────┨

┃3 │        │        │        │          │              │      │          │      │        │          ┃

┠─┼────┼────┼────┼─────┼───────┼───┼─────┼───┼────┼─────┨

┃4 │        │        │        │          │              │      │          │      │        │          ┃

┠─┼────┼────┼────┼─────┼───────┼───┼─────┼───┼────┼─────┨

┃5 │        │        │        │          │              │      │          │      │        │          ┃

┠─┼────┼────┼────┼─────┼───────┼───┼─────┼───┼────┼─────┨

┃6 │        │        │        │          │              │      │          │      │        │          ┃

┠─┼────┼────┼────┼─────┼───────┼───┼─────┼───┼────┼─────┨

┃7 │        │        │        │          │              │      │          │      │        │          ┃

┠─┼────┼────┼────┼─────┼───────┼───┼─────┼───┼────┼─────┨

┃8 │        │        │        │          │              │      │          │      │        │          ┃

┠─┼────┼────┼────┼─────┼───────┼───┼─────┼───┼────┼─────┨

┃9 │        │        │        │          │              │      │          │      │        │          ┃

┠─┼────┼────┼────┼─────┼───────┼───┼─────┼───┼────┼─────┨

┃10│        │        │        │          │              │      │          │      │        │          ┃

┣━┷━━━━┷━━━━┷━━━━┷━━━━━┿━━━━━━━┷━━━┷━━━━━┷━━━┷━━━━┷━━━━━┫

┃ 관찰 완료일시                              │ 확정 완료일시(염색 후 7일 이내에 완료):                        ┃

┃                                            │                                                                ┃

┠──────────────────────┼────────────────────────────────┨

┃ DAPI+ (A)의 총 갯수:                       │ DIC-속빈 포낭(D)의 총 갯수:                                    ┃

┠──────────────────────┼────────────────────────────────┨

┃ DAPI+ (B)의 총 갯수:                       │ DIC-무정형의 구조를 가진 포낭(E)의 총 갯수:                    ┃

┠──────────────────────┼────────────────────────────────┨

┃ DAPI- (C)의 총 갯수:                       │ DIC-2개 이상의 내부구조를 가진 포낭(F)의 총 갯수:              ┃

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별표 0013: 원생동물 시험성적서

[별지 제13호서식]

원생동물 시험성적서

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┃기   관   명                                                                    ┃

┠────────────────────────────────────────┨

┃ 우         소재지                전화           /fax                           ┃

┃담당부서            책임자                 담당자                               ┃

┠────────────────────────────────────────┨

┃문서번호:                                 시행일:                               ┃

┃받    음:                                 보  냄:                               ┃

┠────────────────────────────────────────┨

┃시 료 내 용                                                                     ┃

┠───────┬────────────────────────────────┨

┃①시료접수번호│                                                                ┃

┠───────┼─────────┬──────────┬───────────┨

┃②시료유형    │ ??원수 (    L) │③접수일자          │                      ┃

┃              │ ??정수 (    L) │                    │                      ┃

┠───────┼─────────┼──────────┼───────────┨

┃④정수장명    │                  │⑤채취일자          │                      ┃

┠───────┼─────────┼──────────┼───────────┨

┃⑥채취장소    │                  │⑦검사완료일자      │                      ┃

┠───────┴─────────┴──────────┴───────────┨

┃원생동물 시험결과                                                               ┃

┠───────┬───────────────────┬─────┬──────┨

┃항 목         │구 분                                 │원수      │정수        ┃

┠───────┼───────────────────┼─────┼──────┨

┃⑧크립토스    │속빈 난포낭의 농도                    │난포낭/10L│난포낭/100L ┃

┃  포리디움    ├───────────────────┼─────┼──────┨

┃              │무정형의 구조를 가진 난포낭의 농도    │난포낭/10L│난포낭/100L ┃

┃              ├───────────────────┼─────┼──────┨

┃              │내부구조를 가진 난포낭의 농도         │난포낭/10L│난포낭/100L ┃

┃              ├───────────────────┼─────┼──────┨

┃              │ 총 난포낭의 농도                     │난포낭/10L│난포낭/100L ┃

┠───────┼───────────────────┼─────┼──────┨

┃⑨지아디아    │속빈 포낭의 농도                      │포낭/10L  │포낭/100L   ┃

┃              ├───────────────────┼─────┼──────┨

┃              │무정형의 구조를 가진 포낭의 농도      │포낭/10L  │포낭/100L   ┃

┃              ├───────────────────┼─────┼──────┨

┃              │2개 이상의 내부구조를 가진 포낭의 농도│포낭/10L  │포낭/100L   ┃

┃              ├───────────────────┼─────┼──────┨

┃              │ 총 포낭의 농도                       │포낭/10L  │포낭/100L   ┃

┠───────┴───────────────────┴─────┴──────┨

┃기  관  장  (인)                                                                ┃

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부칙

['부칙 ① 이 고시는 고시한 날부터 시행한다.② 기존의 먹는물수질검사기관 바이러스분야 지정 등에 관한 규정(국립환경과학원 고시 제2012-41호, 2012.11.7.)과 먹는물수질검사기관 원생동물분야 지정 등에 관한 규정(국립환경과학원 고시 제2012-42호, 2012.11.21.)은 폐지한다.③ 이 고시 시행 당시 종전 고시에 따라 먹는물수질검사기관(바이러스 또는 원생동물 검사 분야)으로 지정받은 기관은 이 고시에 따라 지정받은 것으로 본다. ', '부칙 ① 이 고시는 고시한 날부터 시행한다.', '        부칙 이 고시는 고시한 날부터 시행한다.']

부칙 공포정보: ['20140930', '20171027', '20211220'] (공포번호: ['2014-28', '2017-50', '2021-90'])