title: Nicosia Norte

text: En el área urbana del Norte de Nicosia hay 21 instituciones estatales que ofrecen educación primaria, junto con tres instituciones especiales para niños con discapacidades. La ciudad cuenta con tres tipos de escuelas secundarias:. Highschools de propiedad estatal (lise) que enseñan en idioma turco, de propiedad estatal "colegios" (Kolej) que enseñan en las escuelas secundarias privadas que enseñan en idioma inglés y. El Türk Maarif Koleji es una escuela secundaria estatal con más de 1000 estudiantes que también enseñan en inglés, se estableció en 1964 y prepara a los estudiantes para el sistema educativo británico. Las escuelas secundarias privadas en Nicosia del norte son el Cercano Oriente College, el Levent college y el Colegio de TED. Hay también la estatal Anadolu Escuela Superior de Bellas Artes y cuatro escuelas secundarias de formación profesional.


title: Nicosia Norte

text: Nicosia del Norte es un importante centro de transporte en el norte de Chipre, donde las carreteras se unen a otras ciudades importantes del país, los que vienen de las ciudades de Famagusta, Kyrenia y Morfou obligatoriamente cruzan por la capital. La ciudad esata conectada con las otras ciudades con modernas autopistas, de cuatro carriles: la carretera D-30 a partir de Morfou a Famagusta pasa a través de Nicosia del norte, D-25 a Kyrenia. El Aeropuerto Internacional de Ercan se ha utilizado para los vuelos internacionales. No existe un sistema de tren o metro, tampoco esta en plan desarrollar uno. En 2011, los planes para construir un sistema de tranvía fueron presentadas, pero el gobierno y la municipalidad lo rechazaron, sin embargo, la opinión popular está fuertemente a favor de establecer una.


title: Nicosia Norte

text: Nicosia del norte ha visto la construcción de nuevas carreteras y caminos recientemente para resolver su problema de tráfico, incluyendo la construcción de dos carreteras de circunvalación en la década de 2010. Uno de estos enlaces de la zona Metehan e indirectamente a la Avenida Mehmet Akif y Gerolakkos e indirectamente la carretera a Morfou, y fue terminado y abierto al público el año 2014. La otra, la carretera de circunvalación norte de Nicosia, se encuentra actualmente en construcción y se conecta D-30 a partir de Famagusta a Morfou directamente a D-25 de Kyrenia, impidiendo la entrada de vehículos de Kyrenia e ir al aeropuerto y desde Famagusta a Kyrenia, Gönyeli o Morfou a la ciudad. Está programado para ser completado en 2016. La compañía de "LETTAŞ" ofrece servicios de autobús en el norte de Nicosia. Los autobuses son el único medio de transporte público disponible, y el sistema se considera poco fiable debido al crecimiento no planificado de la ciudad, lo que resulta en los vehículos particulares que son el principal medio de transporte. Hay una terminal de autobuses en la región de Yenişehir. la ciudad amurallada se ha visto facilitada a ser accesible llegar a pie, pero el municipio ha sido criticado por la falta de un sistema fiable de transporte público.


title: Torneo de Monterrey 2016

text: El Monterrey Open 2016 es un torneo de tenis femenino jugado en cancha duras al aire libre. Esta es la 8.ª edición del Abierto de Monterrey, un torneo internacional. Se está llevando a cabo en el Club Sonoma en Monterrey, México, del 29 de febrero al 6 de marzo. Heather Watson venció a Kirsten Flipkens por 3-6, 6-2, 6-3


title: Torneo de Monterrey 2016

text: Anabel Medina / Arantxa Parra vencieron a Petra Martić / María Sánchez por 4-6, 7-5, [10-7]


title: Torneo WTA de Kuala Lumpur 2016

text: El BMW Malaysian Open 2016 fue un torneo de tenis femenino que se jugó en canchas duras al aire libre. Fue la 7° edición del BMW Malaysian Open y fue un torneo internacional en el WTA Tour 2016. El torneo se llevó a cabo del 29 de febrero al 6 de marzo en el Kuala Lumpur Golf & Country Club. Elina Svitolina venció a Eugénie Bouchard por 6-7(5), 6-4, 7-5


title: Torneo WTA de Kuala Lumpur 2016

text: Varatchaya Wongteanchai / Yang Zhaoxuan vencieron a Chen Liang / Yafan Wang por 4-6, 6-4, [10-7]


title: César Osorio (luchador)

text: Julio César Osorio, es un luchador venezolano de lucha libre. Ganó una medalla de bronce en el Campeonato Panamericano de 2015.


title: José Oliveros

text: José Oliveros, es un luchador venezolano de lucha grecorromana. Ganó una medalla de plata en el Campeonato Panamericano de 2015.


La Confederación Internacional de Sociedades de Autores y Compositores (CISAC) es una organización internacional no gubernamental sin ánimo de lucro destinada a proteger y promover los intereses de los creadores a nivel mundial. Esta aboga por una protección jurídica sólida del copyright y los derechos de autor. La CISAC es la mayor red internacional de sociedades de autores, también conocidas como Organizaciones de Gestión Colectiva (OGC), sociedades de gestión de derechos de autor/copyright, entidades de gestión colectiva o sociedades de derechos de ejecución Performing Rights Organisations, (PRO).


title: Confederación Internacional de Sociedades de Autores y Compositores

text: El Presidente de la CISAC es el pionero francés de la música electrónica y compositor Jean-Michel Jarre, elegido en junio de 2013. Su predecesor fue el cantante y compositor Robin Gibb de los Bee Gees, que ocupó el cargo de Presidente hasta su fallecimiento en 2012. El pintor desempeñó la función de Presidente interino hasta el nombramiento de Jean-Michel Jarre.


text: En 2013, la organización amplió su Vicepresidencia a cuatro nuevos puestos, permitiendo la representación de más territorios y una mayor variedad de repertorios creativos. Los cuatro nuevos Vicepresidentes son: Angélique Kidjo, la cantante ganadora de un Grammy y activista de Bénin en África Occidental, Javed Akhtar, conocido guionista, poeta y letrista indio, Marcelo Piñeyro, director y productor argentino ganador de un Oscar y Ousmane Sow, respetado escultor de Senegal.


text: Actualmente, 238 sociedades de autores procedentes de 121 países son miembros de la CISAC. Conjuntamente, estas sociedades de autores representan a cerca de cuatro millones de creadores y editores de todas las regiones geográficas y todos los repertorios artísticos (música, audiovisual, artes dramáticas, artes visuales y literatura).


text: En 2014, las sociedades miembros de la CISAC recaudaron 7.900 millones de euros en derechos de autor en cada uno de sus territorios nacionales.


text: La CISAC fue fundada en 1926. Su sede internacional está en Neuilly-sur-Seine, Francia, y además cuenta con cuatro oficinas regionales situadas en Budapest, Hungría (Asuntos Europeos), Santiago, Chile (Asuntos de América Latina y el Caribe), Burkina Faso (Asuntos Africanos) y, desde enero de 2013, Pekín, China (Asuntos Pacífico).


text: La CISAC está financiada por las contribuciones de sus miembros y tiene tres idiomas oficiales: inglés, francés y español.


text: La CISAC fue fundada en Francia en 1926 por 18 sociedades de autores existentes en 18 países europeos que en aquella época representaban principalmente a los artistas dramáticos (es decir, dramaturgos y directores de escena).


text: Las sociedades de autores son predominantemente organizaciones sin ánimo de lucro constituidas por los creadores para facilitar la gestión de sus derechos. Las principales actividades de una sociedad son conceder licencias, recaudar derechos por el uso de las obras creativas de sus socios y repartirlos a los titulares de dichos derechos.


text: Desde sus comienzos, el objetivo de la CISAC ha sido representar a los creadores de todo el mundo y promover sus derechos. Inicialmente, la CISAC estaba formada por cinco federaciones para: derechos dramáticos; derechos de ejecución pública, derechos mecánicos, derechos literarios y derechos cinematográficos. En 1966, la CISAC unificó las cinco federaciones para formar la Confederación Internacional de Sociedades de Autores y Compositores tal como se la conoce hoy en día.


text: Desde 1994, la CISAC trabaja en mejorar los intercambios de datos sobre las obras creativas entre las sociedades de autores. Conocido como el proyecto de Common Information System (CIS – Sistema de Información Común), la CISAC ha trabajado en el desarrollo de estándares internacionales certificados ISO para la identificación de obras creativas y de titulares de derechos.


text: Estos estándares incluyen, entre otros, el Código Internacional Normalizado para obras musicales (ISWC), el Número Internacional Normalizado de obras audiovisuales (ISAN), el Código Internacional Normalizado para obras textuales (ISTC) y el Identificador Internacional Normalizado de Nombres (ISNI), un identificador único vinculado a las partes que contribuyen con sus datos (como un compositor o un editor) y que complementa el Sistema de Información sobre las Partes Interesadas (IPI) de la CISAC, donde figura una información más detallada sobre los titulares de derechos, accesible para las sociedades de autores.


text: La CISAC puso en marcha "CIS-Net powered by FastTrack" en 2004, una red basada en Internet para intercambiar información sobre obras musicales entre sociedades de autores. Al mismo tiempo, la CISAC ha desarrollado la IDA, una base de datos internacional para obras audiovisuales (International Database for Audiovisual Works) y sus titulares de derechos. Al facilitar la identificación de obras creativas y de sus titulares de derechos correspondientes, la finalidad de dichas herramientas es agilizar el reparto de derechos a los creadores por el uso de sus obras.


text: En 2004, la CISAC actualizó sus estatutos, creando una Asamblea General anual y un Consejo de Administración para supervisar las acciones de la CISAC, permitiéndole imponer unas reglas a sus miembros para garantizar un alto nivel de profesionalidad y permitiendo a la Confederación dedicar más recursos para hacer participar directamente a los creadores en la defensa de sus derechos.


text: En junio de 2007, la Asamblea General de la CISAC eligió al cantante y compositor Robin Gibb como Presidente de la CISAC y al director de cine mexicano Alfonso Cuarón como Vicepresidente. El mandato de 3 años de Gibb fue renovado en junio de 2010. El artista plástico y pintor francés, Hervé Di Rosa, cofundador del movimiento artístico “Figuración libre”, fue elegido Vicepresidente en 2010. La función del Presidente y del Vicepresidente de la CISAC es hacerse eco de la opinión de la comunidad internacional de creadores y defender el sistema de gestión colectiva que protege sus derechos. A lo largo de los años, este papel ha sido desempeñado por distintos creadores famosos, como Robert de Flers, Richard Strauss, Armand Salacrou, and Leopold Sedar Senghor.


text: De 2007 a 2013, la CISAC organizó cada dos años una Cumbre mundial de los Creadores un foro internacional para debatir con todas las partes interesadas sobre el futuro de los derechos de autor y los intereses de los creadores en la era digital.


text: En 2008, la CISAC adoptó una serie de Reglas Profesionales para todas sus sociedades miembros. Estas Reglas Profesionales forman un conjunto de principios que las sociedades miembros de la CISAC deben respetar en materia de gestión de derechos y de recaudación y reparto de los mismos. El objetivo de estas Reglas es garantizar que los miembros de la CISAC ejercen su labor de acuerdo con unas estrictas normas profesionales. Este proyecto se consideró necesario para reflejar una mayor transparencia de las sociedades de autores con respecto a los distintos grupos de partes interesadas y los medios de comunicación.


text: La CISAC trabaja para proteger los derechos y promover los intereses de los creadores en todas las regiones del mundo y todos los repertorios artísticos: música, audiovisual, drama, literatura y artes visuales. Esta permite a las organizaciones de gestión colectiva (OGC) representar con transparencia a los creadores en todo el mundo y garantizar que los derechos se revierten a los autores por el uso de sus obras en cualquier parte del mundo. Para ello, la CISAC ofrece apoyo profesional, jurídico y técnico con el fin de proteger los derechos de los creadores y apoyar el desarrollo de la red internacional de sociedades de gestión colectiva.


text: Desde junio de 2015 la CISAC cuenta con 230 sociedades de autor en 120 países que representan indirectamente a cuatro millones de creadores. Existen tres categorías de miembros, en función de la situación y de las actividades de cada sociedad: Miembros, Miembros Provisionales y Miembros Asociados. Las sociedades de autores son, en su mayoría, organizaciones sin ánimo de lucro fundadas por creadores para facilitar la gestión de sus derechos. Puesto que es muy difícil para un creador controlar por sí solo todas las utilizaciones realizadas de sus obras, muchos deciden confiar sus derechos a una sociedad de autores. Las actividades principales que realiza una sociedad son la concesión de licencias, la recaudación de derechos y el reparto de los mismos a los titulares de los derechos por la utilización de sus obras.


text: El presupuesto de la CISAC procede de las cuotas anuales abonadas por las sociedades miembros, basadas en un porcentaje de los derechos brutos recaudados anualmente por cada una de las sociedades miembros.


text: En torno a la Asamblea General, su instancia más representativa, la CISAC está formada por diversos órganos administrativos que se encargan de sus actividades y de su orientación estratégica.


text: La Asamblea General de la CISAC está formada por delegados de todas las sociedades miembros de la CISAC. Dicha Asamblea elige al Consejo de Administración, además de elegir al Presidente y al Vicepresidente de la CISAC, y aprueba las resoluciones, las decisiones y los principales planes, resoluciones y decisiones propuestos por el Consejo de Administración. Sólo los Miembros (ordinarios) tienen derecho a votar en la Asamblea General.


text: La función del Presidente y los Vicepresidentes de la CISAC es representar a la comunidad internacional de creadores y defender el sistema de gestión colectiva que protege sus derechos.


text: Las actividades de la CISAC están regidas por un Consejo de Administración, formado por los representantes de 20 sociedades miembros de la CISAC y elegido para un período de tres años por la Asamblea General. La composición del Consejo refleja la diversidad geográfica de los miembros de la CISAC y la multitud de repertorios artísticos que esta representa.


text: Actualmente, el Presidente del Consejo es Eric Baptiste, Director General de la SOCAN, una sociedad de autores musicales en Canadá; los Vicepresidentes son Javier Gutiérrez Vicén, Director General de la Visual Entidad de Gestión de Artistas Plásticos (VEGAP), una sociedad de autores de artes visuales en España, y por Marisa Gandelman, Directora General de la União Brasileira de compositores (UBC), una sociedad de autores musicales en Brasil.


text: El Director General de la CISAC es Gadi Oron, nombrado para este cargo en septiembre de 2014. Abogado de profesión y experto en legislación internacional en materia de derechos de autor, Oron lleva 15 años trabajando en el sector de la creación. Este se unió a la CISAC en 2012 como Director Jurídico de la organización.


text: La CISAC ha creado una serie de Comités y Comisiones que tratan numerosas cuestiones jurídicas, estratégicas, técnicas, regionales o creativas relacionadas con los derechos de autor y que ofrecen asesoramiento sobre los aspectos operacionales de la organización.


text: Las principales actividades que realiza la CISAC son: establecer una serie de normas profesionales para las sociedades de autores, implantar sistemas de información para facilitar la identificación de obras creativas y sus correspondientes titulares de derechos con el fin de agilizar el reparto de derechos a los creadores, contribuir al desarrollo de las sociedades de autores en todo el mundo, defender los derechos de autor a escala internacional y desarrollar estrategias para ayudar a las sociedades a afrontar los cambios asociados a la era digital. La CISAC forma parte activamente de la comunidad internacional de la propiedad intelectual y colabora con la Organización Mundial de la Propiedad Intelectual (OMPI) de las Naciones Unidas y con la UNESCO en asuntos de interés común.


text: La CISAC aporta a sus miembros unas herramientas que fomentan unas mejores prácticas profesionales en todos los repertorios, incluyendo:


text: Los principios de representación recíproca constituyen la base de la red internacional de sociedades de autores. Estos permiten a una sociedad representar el repertorio artístico mundial en su territorio nacional. Por ejemplo, si una sociedad española y una sociedad australiana firmaron un acuerdo de “representación recíproca”, la sociedad española puede representar el repertorio de la sociedad australiana en España y la sociedad australiana puede representar el repertorio de la sociedad española en Australia. Estas conceden licencias para la utilización de sus respectivos repertorios y recaudan los derechos por dichas utilizaciones.


text: Gracias a este sistema de acuerdos, un usuario de contenidos (como por ejemplo un difusor de radio o una discoteca) puede obtener, de manos de la sociedad de autores local, una licencia única para la utilización del repertorio mundial de obras creativas. Este sistema permite a los creadores recibir un pago de derechos por las utilizaciones que se hayan realizado de sus obras a nivel mundial.


text: En 2008, la CISAC estableció un conjunto de Reglas Profesionales – principios obligatorios que todos los miembros de la CISAC deben respetar. Estas reglas incluyen mejores prácticas en materia de gobierno, gestión financiera, comunicación y administración, aunque también en materia de gestión y de intercambio de datos relativos a las obras creativas y a sus correspondientes titulares de derechos.


text: La CISAC administra un sistema de información internacional (conocido como Sistema de Información Común o CIS, por sus siglas en inglés) que permite a las sociedades de autores intercambiar información sobre las obras y sus utilizaciones y sobre los titulares de derechos de las mismas.


text: Otro de los principales ámbitos de actividad de la CISAC es defender los derechos de autor y servir como portavoz de sus miembros a escala internacional. La CISAC trabaja en estrecha colaboración con las sociedades de autores y los poderes públicos para garantizar que las leyes locales protegen los derechos de los autores. Esta organiza y participa en numerosos programas de formación y seminarios destinados a magistrados y usuarios de contenidos para que adquieran un mejor conocimiento del copyright, de los derechos de autor y de los sistemas de concesión de licencias.


text: Conjuntamente con European Visual Artists (EVA), European Grouping of Societies of Authors and Composers (GESAC) y otras sociedades de artes visuales, la CISAC ha organizado una campaña internacional en favor de la aplicación universal del derecho de participación de los artistas. Los esfuerzos se centran en promover un nuevo tratado internacional que subsanaría las carencias existentes y establecería el derecho de participación como un elemento obligatorio de la protección del derecho de autor.


text: La CISAC sigue de cerca los desarrollos que se producen a nivel internacional y participa en las negociaciones sobre nuevos tratados y otras iniciativas relacionadas con el derecho de autor. La CISAC también tiene en cuenta otros debates relacionados con los tratados que tienen lugar en el marco de la Organización Mundial de la Propiedad Intelectual (OMPI) en Ginebra. En una reunión de alto nivel organizada en 2014, una delegación de representantes de creadores de la CISAC se reunió con el Director General de la OMPI para concertar proyectos comunes y promover una mayor visibilidad para los creadores de la CISAC en el seno de la OMPI.


text: Tradicionalmente, la CISAC organizaba una Cumbre mundial del derecho de autor, que luego pasó a llamarse Cumbre mundial de los Creadores, un encuentro internacional que reunía a sociedades de autores, creadores, líderes de los sectores de la tecnología y el ocio, responsables políticos y representantes de los consumidores para debatir sobre el futuro del derecho de autor/copyright y de la creatividad en la era digital. Se celebraron en total cuatro Cumbres, en los años 2007, 2009, 2011 y 2013.


text: En 2014, la CISAC publicó un estudio económico que identifica el gran potencial existente en Brasil, Rusia, India, China y Sudáfrica (BRICS) para aumentar la contribución de sus industrias creativas al PIB en los próximos diez años. El estudio incluye un plan de acción para que los responsables políticos liberen el potencial de la industria creativa en estas regiones.


text: En 2015, la CISAC publicó un estudio elaborado por Ernst & Young, que cuantifica la contribución económica y social mundial al sector de la creación, analizando 11 industrias creativas y culturales (ICC): publicidad, arquitectura, literatura, videojuegos, música, cine, periódicos y revistas, artes escénicas, radio, televisión y artes visuales.


text: La CISAC publica un informe anual sobre las recaudaciones de derechos de sus miembros. Este informe analiza las recaudaciones de derechos por región, repertorio y tipo de derechos y examina las tendencias del mercado que afectan a la utilización de obras creativas y al pago de derechos.


text: 230 sociedades de autores en 120 países (desde junio de 2015),


text: Incluyendo:El llamado "Caso CISAC" fue un asunto de derecho de competencia entablado por la Comisión Europea contra un grupo de sociedades de autores europeas. Este se refería específicamente a los derechos de ejecución del repertorio musical y a la relación entre las sociedades de autor gestoras de los derechos existentes en los contenidos musicales. El proceso se centró en algunas cláusulas contenidas en los contratos de representación recíproca firmados entre estas sociedades. Estas disposiciones se basaban en un Contrato tipo de representación recíproca, elaborado por la CISAC.


text: La decisión de la Comisión alegaba que 24 sociedades del Espacio Económico Europeo (EEE) habían participado en prácticas concertadas y habían llegado a un acuerdo ilegalmente con respecto al alcance territorial de sus respectivos acuerdos de representación recíproca. La CISAC no figuraba en la decisión, ni se contemplaron sanciones financieras para las sociedades. La CISAC y 21 de las 24 sociedades del EEE recurrieron dicha decisión ante el Tribunal General de la Unión Europea en octubre de 2008.


text: El 12 de abril de 2013, el Tribunal General de la Unión Europea dictó su decisión con respecto al recurso presentado en 2008. La sentencia anuló la decisión dictada en 2008 por la Comisión Europea.


title: Edgardo Caminos

text: Edgardo Caminos es un deportista argentino que compitió en yudo. Ganó dos medallas en el Campeonato Panamericano de Yudo en los años 1996 y 1998.


title: Nonthaburi

text: Nonthaburi (: นนทบุรี, [nōntʰáburīː]) es la ciudad principal del distrito y de la provincia del mismo nombre en Tailandia. Tiene municipio de la ciudad ("thesaban nakhon") estado y cubre cinco subdistritos ("tambon") de Mueang Nonthaburi Distrito: Suan Yai, Talat Khwan, de Bang Khen, Bang, Kraso y Tha Sai. A partir de enero de 2012, tiene una población registrada de 258.550, haciéndolo la ciudad más poblada de Tailandia (excluyendo Bangkok). Debido a su ubicación cerca de Bangkok es en realidad un suburbio de Bangkok, que forma parte del Área Metropolitana de Bangkok. Nonthaburi es servida por sistemas de transporte público que incluyen la Bangkok Mass Transit Authority sistema de autobús de la Autoridad, el Chao Phraya Express Boat, y el bajo-construcción MRT Purple Line.


title: Víctor Montero (luchador)

text: Víctor Manuel Montero Castañeda, es un luchador venezolano de lucha grecorromana. Ganó una medalla de plata en el Campeonato Panamericano de 2015.


title: Cristóbal Aburto

text: Cristóbal Alejandro Aburto Tinoco (Morelia, 2 de octubre de 1975) es un deportista mexicano que compitió en yudo. Ganó una medalla de bronce en el Campeonato Panamericano de Yudo de 1996 en la categoría de –56 kg.


title: Suil Barragan

text: Suil Barragan es un deportista venezolano que compitió en yudo. Ganó tres medallas en el Campeonato Panamericano de Yudo entre los años 1996 y 1998.


title: Hacka Doll the Animation

text: Dentro de un futuro próximo en el actual siglo XXI, los medios de comunicación se ven saturados de información haciendo que sea imposible discernir sobre las correctas necesidades de las personas y sus problemas. Dentro de este contexto, la historia gira en torno a las Hacka Dolls, unas muñecas robot con un sistema de IA creadas para la ayuda y el entretenimiento personal de sus usuarios. Su programa de aplicación IA se sincroniza con un usuario permitiendo analizar automáticamanete los gustos y preferencias de este para luego brindar su servicio de ayuda personal o hacer recomendaciones en la mejora de dichas necesidades. Tres de estas Hacka Dolls no funcionan correctamente, lo que abrirá paso al desarrollo de la trama.


title: Hacka Doll the Animation

text: Hacka Doll #1 (ハッカドール1号 Hakkadōru 1-gō)


title: Hacka Doll the Animation

text: Seiyū: Miyu Takagi


title: Hacka Doll the Animation

text: Hacka Doll #2 (ハッカドール2号 Hakkadōru 2-gō)


title: Hacka Doll the Animation

text: Seiyū: Kaya Okuno


title: Hacka Doll the Animation

text: Hacka Doll #3 (ハッカドール3号 Hakkadōru 3-gō)


title: Hacka Doll the Animation

text: Seiyū: Nanami Yamashita


title: Hacka Doll the Animation

text: Hacka Doll #4 (ハッカドール4号 Hakkadōru 4-gō)


title: Hacka Doll the Animation

text: Seiyū: Reina Ueda


title: Hacka Doll the Animation

text: Hacka Doll #0 (ハッカドール0号 Hakkadōru 0-gō)


title: Hacka Doll the Animation

text: Seiyū: Ryōka Yuzuki


title: Hacka Doll the Animation

text: El manga escrito e ilustrado por , fue serializado por Manga Box desde marzo hasta diciembre de 2015, siendo publicados dos volúmenes tankōbon.


title: Hacka Doll the Animation

text: Un segundo manga denominado fue serializado en Comic Rex desde agosto de 2015 hasta julio de 2016, siendo ilustrado por Nabe Watanabe.


title: Hacka Doll the Animation

text: El anime fue dirigido por Ikuo Geso, quien también es el guionista, director de animación, editor, diseñador, y pintor digital. Creators in Pack TOKYO fue el principal estudio de animación que trabajó en su producción colaborando con Studio Trigger. Las Seiyū de las tres principales Hacka Doll (Miyu Takagi, Kaya Okuno, y Nanami Yamashita) cantan el opening "Touch Tap Baby" y el ending "Happy Days Refrain".


title: Vallejo de Mena

text: Vallejo de Mena es una entidad municipal del Valle de Mena, en la provincia de Burgos, comunidad autónoma de Castilla y León (España). Pertenece a la comarca de Las Merindades y al partido judicial de Villarcayo.


title: Wuileixis Rivas

text: Wuileixis de Jesus Rivas Espinoza (27 de agosto de 1990), es un luchador venezolano de lucha grecorromana. Participó en los Juegos Olímpicos de Londres 2012 en la categoría de 66 kg, consiguiendo un 16.º puesto. Compitió en dos Campeonatos Mundiales, logró la 20.ª posición en 2015. Consiguió la medalla de oro en los Juegos Panamericanos de y en los Juegos Bolivarianos de 2017. Obtuvo la medalla de plata en los Juegos Suramericanos de 2010 y los Juegos Bolivarianos de 2009. Ganó tres medallas en Campeonatos Panamericanos, de oro en 2014.


title: Alexander García (yudoca)

text: Alexander García (16 de febrero de 1972) es un deportista brasileño que compitió en yudo. Ganó una medalla de plata en el Campeonato Panamericano de Yudo de 1996 en la categoría de –60 kg.


title: Querys Pérez

text: Querys José Pérez Mora (13 de abril de 1993), es un luchador venezolano de lucha grecorromana. Compitió en el Campeonato Mundial de 2015 consiguiendo la 22.ª posición. Ganó una medalla de plata en los Juegos Panamericanos de y Campeonato Panamericano de 2015.


title: ¡¡¡Caverrrrnícola!!!

text: ¡¡¡Caverrrrnícola!!! (título original: "RRRrrrr!!!)" es una película francesa de comedia absurda publicada en 2004 dirigida por Alain Chabat, que también participó en el guion y en el reparto.


title: ¡¡¡Caverrrrnícola!!!

text: La película nos sitúa en la época prehistórica, en una tribu conocida como "la tribu del pelo limpio" porque poseen la receta para hacer champú, en la tribu todos se llaman Piedra. Por otro lado está la tribu del pelo sucio, que es la tribu enemiga ya que quieren robarles la receta.


title: ¡¡¡Caverrrrnícola!!!

text: La historia se centra en dos personajes de la tribu del pelo limpio, uno con el pelo rizado y otro con el pelo rubio. En la tribu ha ocurrido el primer asesinato de la historia y entre ellos, el jefe de la tribu, el "curandólogo" y la ayuda de los demás personajes de la tribu investigarán el crimen. Mientras tanto la hija del jefe de la tribu de los pelo sucio se infiltra y seduce al protagonista del pelo rizado para conseguir la receta del champú.


title: ¡¡¡Caverrrrnícola!!!

text: La película tiene un 5,8 sobre 10 en IMDb con 9.782 votos y cuenta con un 82% en Rotten Tomatoes.


title: Bernardo Pérez (yudoca)

text: Bernardo Pérez (20 de mayo de 1976) es un deportista dominicano que compitió en yudo. Ganó dos medallas de bronce en el Campeonato Panamericano de Yudo en los años 1996 y 1997.


title: Luillys Pérez

text: Luillys José Pérez Mora (13 de abril de 1993), es un luchador venezolano de lucha grecorromana. Compitió en dos Campeonatos Mundiales consiguiendo la 26.ª posición en 2011. Ganó una medalla de bronce en los Juegos Panamericanos de . Subió al escalón más bajo del podio en Campeonatos Panamericanos de 2012, 2014 y 2015.


title: Aruba en los Juegos Olímpicos de Atlanta 1996

text: Aruba estuvo representada en los Juegos Olímpicos de Atlanta 1996 por un total de 3 deportistas masculinos que compitieron en 3 deportes.


text: El portador de la bandera en la ceremonia de apertura fue el halterófilo Isnardo Faro. El equipo olímpico arubeño no obtuvo ninguna medalla en estos Juegos.


title: McClein's

text: McClein's es un grupo granadino de Rock/ Indie alternativo creado y formado por Miguel A. Férriz (antiguo integrante y cofundador del disuelto dúo "Proyecto Karma"), Francisco Peña, Daniel Benítez y Luija Puente. El nombre del grupo se debe a una anécdota en la que estando en el Pub granadino "Ruido Rosa", sitio frecuentado por grupos como Los Planetas (banda), Lori Meyers o Napoleón Solo (banda), intentaban decidir el nombre que les representaría como formación grupal, mientras todo esto ocurría, debatían sobre la "La Jungla de cristal" cuyo protagonista es John McClane, a todos les gustó dicho nombre pero no querían que al referirse a ellos hubiese confusión directa con el personaje de ficción, por lo tanto decidieron llamarse de esa forma pero solo en lo que a la fonética respecta, ortográficamente se apodaron "McClein's" que es tal y como suena fonéticamente el nombre.Poco a poco Empezaron a subir vídeos a internet los cuales fueron vistos por Luija, quien decidió añadirle batería a las canciones. Después se uniría Dani a la formación, siendo encontrado por casualidad en una página de internet de Rock/ Indie. El grupo empezó versionando a grupos nacionales sobre todo (Napoleón Solo (banda), Lori Meyers y Supersubmarina), con un estilo más roquero.


title: McClein's

text: En abril de 2013, la banda granadina decidió subir un nivel más grabando su primer disco, contando como modelo para la portada a Laura Castejón. "Vade Retro" se gestó en Granada, concretamente el estudio elegido para su grabación fue el recién estrenado "Los Ángeles Records" teniendo como técnico a Alejandro Pino, quien es un gran amigo de la banda, por lo tanto la dedicación a la producción del disco fue más mayor.


title: McClein's

text: El nombre del disco hace referencia a la modo que por aquel entonces había, la de vestir cono un toque "retro", y la similitud que asoció Férriz entre la expresión latina "Vade retro Satanás" que significa "Apártate, Satanás" y el hacer que una chica de su pasado se alejase de él.


title: McClein's

text: "Vade Retro" está influenciado por Artic Monkeys, The Black Keys, Supersubmarina y The Strokes. A lo largo de los cinco temas se cuentan vivencias personales de los integrantes de la banda como relaciones muy intensas, alcohol, drogas, diversión, la vida de soltero y el deseo sexual.


title: McClein's

text: En 2016 la banda se disolvía debido a varios motivos, Dani emigró a Inglaterra para dedicarse a un nuevo proyecto. Francisco Peña empezó sus estudios de musicología por lo que tuvo que abandonar la formación para dedicarse íntegramente a ello. Férriz tuvo que ingresar en el mundo laboral y Luija continuó su camino ya que la banda se desestructuraba.


title: McClein's

text: En la actualidad Férriz ha iniciado junto a Beck (Toni Pérez), antiguo cofundador de "Proyecto Karma", otro proyecto en el que mezclan rock alternativo con psicodelia, toques de jazz y guitarra clásica, y para el cual todavía no tienen nombre.


title: Aruba en los Juegos Olímpicos de Sídney 2000

text: Aruba estuvo representada en los Juegos Olímpicos de Sídney 2000 por un total de 5 deportistas, 3 hombres y 2 mujeres, que compitieron en 3 deportes.


text: El portador de la bandera en la ceremonia de apertura fue el atleta Richard Rodriguez. El equipo olímpico arubeño no obtuvo ninguna medalla en estos Juegos.


title: Ibn al-Kardabūs

text: Ibn al-Kardabus o Ibn al-Kardabūs (fl. siglo XII) fue un historiador tunecino, tal vez de origen andalusí


title: Ibn al-Kardabūs

text: Nació en Tozeur (Túnez), estudio hadiz y jurisprudencia con el tradicionalista Abū Ṭāhir al-Silafī en Alejandría. Su obra más conocida es "Kitab al-iktifa' fi ajbar al-julafa" conocido como "Kitab al-iktifa" en español "Historia de al-Andalus". Abarca la historia de al-Ándalus desde la conquista hasta la época del califa almohade Abu Yusuf Yaqub al-Mansur. Falleció en Túnez


title: Aruba en los Juegos Olímpicos de Atenas 2004

text: Aruba estuvo representada en los Juegos Olímpicos de Atenas 2004 por un total de 4 deportistas, 3 hombres y una mujer, que compitieron en 3 deportes.


text: La portadora de la bandera en la ceremonia de apertura fue la nadadora Roshendra Vrolijk. El equipo olímpico arubeño no obtuvo ninguna medalla en estos Juegos.


title: Aruba en los Juegos Olímpicos de Pekín 2008

text: Aruba estuvo representada en los Juegos Olímpicos de Pekín 2008 por un total de 2 deportistas masculinos que compitieron en 2 deportes.


text: El portador de la bandera en la ceremonia de apertura fue el yudoca Fiderd Vis. El equipo olímpico arubeño no obtuvo ninguna medalla en estos Juegos.


title: Florencio Sosa Acevedo

text: Florencio Sosa Acevedo (Puerto de Cruz, 1901-Sevilla, 5 de noviembre de 1975) fue un político y sindicalista canario. Durante su vida fue alcalde de Puerto de la Cruz de Tenerife, diputado y maestro.


title: Florencio Sosa Acevedo

text: Era hijo de agricultores humildes. Estudió en el Seminario Conciliar tinerfeño, pero dejó la carrera eclesiástica para hacer magisterio. Trabajó como corresponsal literario de "La Gaceta de Tenerife." Fue presidente de la "Sociedad de Instrucción y Recreo Valle de Taoro de Las Dehesas" de 1927 a 1929. Ingresó en el PSOE y se presentó a las elecciones municipales españolas de 1931, en las que fue elegido alcalde de Puerto de Cruz, cargo que ocupó hasta 1933 en que fue sustituido por Isidoro Luz Carpenter. Fue uno de los que proclamó la Segunda República desde el balcón del ayuntamiento. También se dedicó a organizar sindicalmente a los cultivadores de plátanos del valle de La Orotava y apoyó sus reivindicaciones. Con motivo de la revolución de 1934 fue desterrado durante un año a la isla de El Hierro.


title: Florencio Sosa Acevedo

text: Poco después abandonó el PSOE e ingresó en el PCE, partido con el que fue elegido diputado por Santa Cruz de Tenerife dentro de las listas del Frente Popular a las elecciones generales españolas de 1936. El golpe de estado del 18 de julio de 1936 lo sorprendió en Madrid, donde formó parte de la Comisión Gestora del Museo del Prado y organizó exposiciones en París. También formó parte del "Frente Antifascista de Canarias", con los otros diputados canarios y con Juan Negrín como presidente honorario, que apoyaba a los canarios que huían hacia la zona republicana.


title: Florencio Sosa Acevedo

text: El 18 de marzo de 1939 se creó la dirección clandestina del PCE, en la que fue representante por Canarias y responsable de relaciones con las autoridades republicanas. También formó parte del Comité de Evacuación que negoció con el general italiano Gastone Gambara la salida de refugiados del puerto de Alicante. Hecho prisionero, fue encarcelado en el castillo de Santa Bárbara, donde fue torturado y golpeado. Fue condenado a muerte, pero lo liberaron después de pasar cuatro años en la prisión. Después se estableció en Alicante, donde creó una empresa de comercialización de frutas de Canarias. Murió en un accidente de coche en Sevilla en 1975.


title: Florencio Sosa Acevedo

text: "Nace Florencio Sosa Acevedo en el Puerto de la Cruz en el año 1901, hijo de Florencio Sosa y María Acevedo Rodríguez, sus padres eran jornaleros agricultores, Florencio estudio en el Seminario Conciliar de Tenerife, abandonando el sacerdocio para estudiar magisterio, fue nombrado corresponsal literario de la Gaceta de Tenerife en el Puerto de la Cruz. Ocupó el cargo de presidente de la Sociedad de Instrucción y Recreo Valle de Taoro de Las Dehesas fundada en 1922 durante los años 1927-1929.""Fue una de las cabezas visibles del movimiento obrero tinerfeño, un destacado exponente de la llamada generación de 1930 y uno de los animadores del semanario llamado DECIMOS dirigido por Lucio Illada Quintero, en la que colaboraron muchos de los que serian principales lideres del movimiento obrero durante el periodo republicano.""Abrió una Escuela y una biblioteca en su barrio de Las Dehesas, en esta revista DECIMOS, muchos de sus artículos los dedico al estado deplorable de la enseñanza en la zona. Entre 1930-31 se produjo la reorganización de la Federación de Trabajadores del Valle de La Orotava y la Agrupación Socialista, cuyo comité directivo estuvo presidido por Domingo Pérez Trujillo que resultó elegido diputado en las elecciones a cortes constituyentes de 1931. Tras la proclamación de la segunda República Florencio Sosa se izo cargo de la alcaldía desde 20 de abril de 1931 hasta el 15 de febrero de 1932, y su gestión estuvo orientada a la mejora de las condiciones de vida de los trabajadores." "En 1932-33, se produjo la ruptura del denominado consenso republicano, y se inició el recrudecimiento de la lucha de clases en las islas, es a partir de estos momentos comienza el acercamiento de Florencio a la línea defendida por el partido comunista, la clase obrera del valle en especial los jornaleros agrarios y los de empaquetado de plátanos radicalizan sus posturas ante la ofensiva desatada por los patronos especialmente desde la victoria electoral de las derechas desde noviembre de 1933 alejada progresivamente del socialismo reformista para acercarse a las posturas defendidas por los comunistas. Durante los días 24 al 26 de septiembre de 1934 Tanto en La Orotava como en el Puerto de la Cruz se origina una huelga general de trabajadores, Florencio Sosa, dirige la huelga apoyado por la Confederación Regional de Trabajo, se agrava la situación tabaquera y la industria en general, a la que hay que unir la crisis agraria, particularmente la platanera por la perdida de la exportación frutera y el problema angustioso del paro que coloca al pueblo canario en estado de miseria. El mantenimiento de la huelga y la dureza de las medidas represivas llegando un contingente de Guardias de Asalto en el Valle motivaron entre otros factores que el conflicto se extendiera a toda la isla. Un acontecimiento motivó el final de este conflicto y la derrota de los huelguistas, la huelga general revolucionaria de Asturias ya que el 6 de octubre se declaró el Estado de Guerra en toda España y el día 11 los obreros empezaron a reincorporarse al trabajo. Como consecuencia de la derrota de los huelguistas fueron suspendidos los concejales socialistas de varios municipios y el Ayuntamiento del Puerto de la Cruz al completo el 24 de octubre, fueron sustituidos por una corporación designada por la autoridad gubernativa, encabezada por Isidoro Luz Carpenter, e integrada por miembros del Partido Republicano Tinerfeño y de Acción Popular Agraria Partido integrado en la Confederación española de derechas Autónomas." ".En febrero de 1935 los principales líderes sindicales fueron deportados a otras islas, y Florencio Sosa Acevedo tuvo que marchar confinado a Valverde El Hierro, en estos años era uno de los rincones socialmente más crueles del Archipiélago y así lo refleja el autor en un conmovedor relato donde no sólo narra, desde un punto de vista descriptivo, las penurias de sus habitantes, sino que con gran sinceridad profundiza y denuncia todas aquellas cuestiones con las que ideológicamente se encuentra enfrentado." "Una vez en libertad se integra junto a Lucio Illada Quintero en las filas del Partido Comunista de España, en las elecciones al Parlamento Nacional del 16 de febrero de 1936 resulta elegido por el periodo 1936-1939 con 33950 votos, con la credencial 440 con fecha de alta 11 de marzo de 1936, como tantos canarios se encontraron en la zona leal a la República en el momento del golpe militar del 18 de julio de 1936, como representante del pueblo se puso a disposición de la legalidad republicana y participó en las tareas de encuadramiento tanto en el plano militar como en el político de los isleños que se encontraban en el territorio controlado por la República, se constituyó el Batallón Canarias formado a instancia de los canarios residentes en Madrid."


Las Esclavas del Sagrado Corazón de Santa Catalina Volpicelli (oficialmente en italiano: "Ancelle del Sacro Cuore di Santa Caterina Volpicelli") son una Congregación religiosa católica femenina de derecho pontificio, fundada por la italiana Catalina Volpicelli en Roma, el 27 de diciembre de 1867. A las religiosas de este instituto se les conoce con el nombre de Esclavas del Sagrado Corazón de Volpicelli o simplemente como Hermanas del Volpicelli, y posponen a sus nombres las siglas: A.S.C.V.


title: Esclavas del Sagrado Corazón de Santa Catalina Volpicelli

text: Catalina Volpicelli, con la ayuda de su confesor, el barnabita Leonardo Matera, inició en 1864 con un grupo de mujeres en Nápoles, una asociación femenina con el fin de reparar las ofensas cometidas al Sagrado Corazón de Jesús, llamada Celadoras del Apostolado de la Oración. El 27 de diciembre de 1867, un grupo de estas mujeres comenzaron a hacer vida en común, constituyéndose en una congregación religiosa de derecho diocesano, con el nombre de Esclavas del Sagrado Corazón.


text: Ante la propuesta del sacerdote jesuita, Henri Ramière, de fusionarse con las Oblatas del Sagrado Corazón, por tener un carisma similar, el obispo de Nápoles, Sisto Riario Sforza, abrió un noviciado para la congregación el 3 de marzo de 1875, como negativa a tal unión.


text: El instituto recibió el decreto pontificio de alabanza el 20 de junio de 1890, de parte del papa León XIII. La aprobación definitiva por parte de la Santa Sede le fue conferida el 9 de agosto de 1902.


text: La fundadora fue beatificada por el papa Juan Pablo II, el 29 de abril de 2001, y canonizada por Benedicto XVI el 26 de abril de 2009. Tras la cual, el instituto añadió su nombre al de la Congregación: Esclavas del Sagrado Corazón de Santa Catalina Volpicelli.


text: Las Esclavas del Sagrado Corazón se dedican a diversas obras de misericordia, según las necesidades de los lugares donde están presentes, especialmente a la educación de la juventud y a la propagación del culto del Sagrado Corazón.


text: En 2011, la Congregación contaba con unas 277 religiosas y unas 28 casas, presentes en Brasil, Indonesia, Italia y Panamá. La casa general se encuentra en Nápoles y su actual superiora general es la religiosa Carmela Vergara.


title: Doug Stanhope

text: Douglas Gene "Doug" Stanhope (25 de marzo de 1967) es un comediante de "stand-up", actor y escritor estadounidense. Es considerado una de las figuras más controvertidas en la escena de la comedia "stand-up" norteamericano. Es famoso por sus apariciones en series como "Louie" y "The Man Show", y sus tres álbumes de comedia en vivo en los que desafía los límites de la moral del ciudadano americano.


title: Doug Stanhope

text: Comenzó su carrera como comediante en 1990 en Las Vegas. Desde entonces, ha aparecido en numerosos festivales de comedia como Montreal Just for Laughs, Aspen US Comedy Arts, Chicago Comedy Festival y el Edinburgh Festival Fringe Scotland.


title: José Gabriel Palma Rogers

text: José Gabriel Palma Rogers (1882 - 1961) fue un abogado chileno con destacada participación en el ámbito público.  Ocupó el cargo de Superintendente de Bancos (1931-1941), participó como coautor de la Ley de Quiebras y fue profesor titular de la cátedra de Derecho Comercial en la Escuela de Ciencias Jurídicas y Sociales de la Universidad de Chile. Es autor y coautor de varios libros y artículos en el ámbito jurídico.


title: José Gabriel Palma Rogers

text: Hijo de José Gabriel Palma Guzmán y Carolina Rogers Gutiérrez.  Casado con Gabriela Vial Vicuña en el año 1917, con quien tuvo cuatro hijos: Benjamín, Carlos, Alfonso y Gerardo.


title: José Gabriel Palma Rogers

text: Proviene de una familia dedicada al ejercicio de la abogacía. Abuelo, Padre y posteriormente su hijo, desempeñarían esta profesión y estarían ligados a la historia del Poder Judicial.


title: José Gabriel Palma Rogers

text: Su padre fue José Gabriel Palma Guzmán, abogado, quién fue Presidente de la Corte Suprema de Justicia.


title: José Gabriel Palma Rogers

text: Su abuelo fue José Gabriel Palma Villanueva, abogado, quién fue Diputado de la República, Presidente de la Corte Suprema y Juez, y Vicerrector de la Universidad de Chile participando junto Andres Bello y José Miguel de la Barra en su organización.


title: José Gabriel Palma Rogers

text: Su hijo Alfonso Palma Vial, abogado, se desempeñó como abogado integrante de la Corte Suprema de Justicia.


title: José Gabriel Palma Rogers

text: Abogado de profesión de la Universidad de Chile, obtuvo su título en el año 1905. Se especializó en Derecho Comercial.


title: José Gabriel Palma Rogers

text: En 1905 ingresó al estudio jurídico Palma Abogados, de su familia.


title: José Gabriel Palma Rogers

text: En 1926 fue el primer Intendente en la Superintendencia de Bancos, nombrado por el Superintendente Julio Philipi Bihl.  Fue el autor de las "Circulares" como medio de comunicación oficial entre la Superintendencia y los bancos fiscalizados.


title: José Gabriel Palma Rogers

text: En 1931 asume como Superintendente de Bancos en reemplazo de Julio Philipi Bihl quién presentó su renuncia pues había sido nombrado Ministro de Hacienda en el primer gobierno de Carlos Ibáñez del Campo. Ejercería este cargo hasta el 28-04-1941.


title: José Gabriel Palma Rogers

text: En 1938 se nombra Decano Interino de la Escuela de Comercio y Economía de la Universidad de Chile, tras la renuncia de su primer decano y posterior Presidente de la República Pedro Aguirre Cerda.


title: José Gabriel Palma Rogers

text: En 1951 fue nombrado "Miembro Académico" de la Escuela de Ciencias Jurídicas y Sociales de la Universidad de Chile.


title: José Gabriel Palma Rogers

text: Desempeñó el cargo de Consejero del Colegio de Abogados de Chile. Fue su Vicepresidente entre el 16-04-1958 y el 19-10-1959).


title: José Gabriel Palma Rogers

text: Fue abogado integrante de la Corte Suprema de Justicia.


title: José Gabriel Palma Rogers

text: Participó en la redacción de la Ley de Quiebras que reemplazó el Libro IV del Código de Comercio, colaborando además en la redacción de diversos cuerpos legales.


title: José Gabriel Palma Rogers

text: En el ámbito académico fue profesor de la cátedra de Derecho Comercial en la Escuela de Ciencias Jurídicas y Sociales de la Universidad de Chile hasta 1931.


title: José Gabriel Palma Rogers

text: Fue autor y coautor de diferentes libros en el ámbito jurídico. En 1920 publica el libro "Derecho Comercial: apuntaciones de la clase" de la Editorial Estrella del Pacífico.  En 1925 publica el libro: "Derecho Comercial", con sucesivas ediciones en: 1928 y 1935, libro que ha sido usado por varias generaciones de estudiantes de derecho y abogados, y que aún permanece vigente. En 1937 publica el libro "Derecho Marítimo" (y "Seguros"), de la Editorial Imprenta Universitaria.  En 1940 publica el libro "Legislación de Quiebras", de la Editorial Talleres Gráficos Samaniego.


title: José Gabriel Palma Rogers

text: Ha sido autor y coautor de diversos artículos publicados, entre otros, en la Revista de Derecho, Jurisprudencia y Ciencias Sociales de la Universidad de Chile: "Principios que rigen las compensaciones en la liquidación del Banco Español de Chile" (1927) y "Contrato de prenda industrial" (1928).


title: Cuthona

text: Cuthona es un género de moluscos nudibranquios de la familia Tergipedidae.


title: Cuthona

text: El Registro Mundial de Especies Marinas acepta las siguientes especies válidas en el género:


title: Cuthona

text: Especies cuyo nombre ha dejado de ser aceptado por sinonimia:


title: Cuthona

text: El género se caracteriza por tener un par de tentáculos simples lineales a cada lado de la cabeza; el pie es amplio y tiene los ángulos anteriores redondeados; los rinóforos son lisos y tentaculares; las cerata, o branquias, están dispuestas muy juntas en hileras laterales del dorso; la rádula es uniseriada, con dientes que tienen un único dentículo mediano grande y varios dentículos más pequeños; el sistema reproductivo cuenta con una glándula penial adicional, y el pene puede tener, o no, una especie de estilete. Son ovíparos y hermafroditas simultáneos, que cuentan con órganos genitales femeninos y masculinos. No obstante, no pueden auto fertilizarse, por lo que necesitan copular con otro individuo para ello.


title: Cuthona

text: Los huevos eclosionan larvas planctónicas velígeras que, tras un periodo de unos 56 días, alcanzan un tamaño medio de 1.06 mm. La metamorfosis a la forma adulta dura entre 6 y 8 semanas. Y la maduración de los juveniles hasta alcanzar la madurez sexual y realizar la primera puesta de huevos, oscila entre 11 y 12 semanas.


title: Cuthona

text: Son predadores carnívoros, alimentándose principalmente de hidrozoos, como el colonial "Hydractinia echinata", del que los ejemplares adultos consumen entre 200-500 pólipos en un periodo de 24 horas, o "Sertularella turgida", "Sertularella quadridens", o ejemplares de "Sarsia sp".


title: Cuthona

text: La especie "Cuthona poritophages" se alimenta exclusivamente de los pólipos de colonias de coral del género "Porites".


title: Cuthona

text: Estas pequeñas babosas marinas se distribuyen por los océanos Atlántico, Índico y Pacífico. Desde las costas de Oregón hasta Baja California, norte de Europa, Mediterráneo, y también en el Indo-Pacífico tropical.


title: Cuthona

text: Habitan aguas templadas y tropicales, reportándose un rango de profundidad entre 0,5 y 212 m, y en un rango de temperatura entre -1.28 y 16.40ºC.


title: Rollos de San Antón

text: Los Rollos de San Antón son un postre tradicional de la diputación de San Antonio Abad (Cartagena) típicos en las fiestas de su patrón, San Antonio Abad, el 17 de enero. Su ingrediente más representativo es el anís, que se añade mientras se va preparando la masa. La tradición dice que si se dejaba el último rollo sin comer la casa gozaría de fortuna y bienestar durante un año.


title: Rollos de San Antón

text: La elaboración se compone de huevos batidos mezclados con azúcar a los que se les va añadiendo aceite y anís, posteriormente se coloca todo esto en un volcán de harina y se extiende la masa que se ha de cortar en tiras para poder dar forma a los rollos y finalmente freírlos. La forma de los rollos suele ser redonda aunque también se le puede añadir una especie de lazo. Cabe destacar que en lugar de aceite se pueden hacer con mantequilla, o con manteca (es la forma más tradicional).


title: Rollos de San Antón

text: Existe un proverbio relacionado con los rollos de San Antón en el refranero popular, el cual dice "Quien roba un rollo a San Antón, novios tendrá un montón".


El Sistema de Mutación Refractario a la Amplificación por PCR o ARMS-PCR por sus siglas en inglés (Amplification Refractory Mutation System-Polymerase Chain Reaction) es una técnica para detectar mutaciones puntuales conocidas, que se cree que fue descrita por primera vez por el equipo de Newton en 1989. Se ha desarrollado para el diagnóstico de todas las mutaciones β-talasemia comunes que se encuentran en diferentes grupos étnicos alrededor del mundo y sobre todo en los países asiáticos. La técnica se basa en que un cebador específico solo permita que la amplificación tenga lugar cuando su extremo 3' coincida con su secuencia diana. Por ejemplo, para detectar la mutación β-talasemia (G / C), el nucleótido en el extremo 3' del cebador es una guanina con el fin de que si se encuentra con una citocina, el nucleótido sustituido en el ADN mutante, si no se lleva a cabo la amplificación sería debido a que el cebador formaría un desajuste o "mismatch" G-G con el ADN normal. Esta falta de correspondencia es débil, entonces para que se pueda reducir la eficiencia de hibridación de los cebadores con la cadena molde de ADN entre un 0 y 5% para así evitar la amplificación, una mayor falta de correspondencia con la secuencia diana u objetivo tendría que ser introducida en el segundo, tercero o cuarto de los nucleótidos antes del extremo 3' del cebador utilizado.


En 1989, algunos grupos independientes describieron un tipo de PCR que podría ser utilizada para el análisis de mutaciones puntuales conocidas en el ADN y que así se pudiera distinguir entre el alelo normal, el genotipo heterocigoto y los genotipos mutantes o normales homocigotos; estos grupos independientes fueron los de Newton, Nichols, Okayama, Sommer y Wu. El método se conoce como PCR-ARMS o únicamente ARMS (Sistema de Mutación Refractario a la Amplificación por PCR) nombrado así en el texto publicado por Newton en 1989, como PASA (PCR para la amplificación de alelos específicos) por Sommer y como ASPCR (PCR alelo-específico) por Wu. La aplicabilidad es la de analizar mutaciones asociadas a enfermedades conocidas como la fenilcetonuria y anemia de células falciformes; posteriormente, en 1992, el equipo de investigación liderado por Sommer realizó estudios de validación que establecieron que esta nueva estrategia de Reacción en Cadena de la Polimerasa es aplicable al análisis de cualquier mutación puntual conocida o Polimorfismo de un solo nucleótido.


En su artículo "Analysis of any point mutation in DNA. ARMS.," Newton y su equipo dijeron: ""Hemos mejorado la "Reacción en Cadena de la Polimerasa" (PCR) para permitir el análisis rápido de cualquier mutación conocida en el ADN genómico. Demostramos un sistema, ARMS (Sistema de Mutación Refractario a la Amplificación por PCR) que permite el genotipado únicamente por la inspección de las mezclas de reacción después de la electroforesis en gel de agarosa. El sistema es simple y fiable, permite distinguir claramente alelos heterocigotos u homocigotos en un locus para cualquiera de los dos alelos. El sistema no requiere ni la digestión con enzimas de restricción o de oligonucleótidos específicos de alelos como son aplicados convencionalmente, ni el análisis de la secuencia de los productos de PCR. La base de la invención son los oligonucleótidos que no se unan a la cadena molde en el extremo 3' , así no funcionarían como cebadores en la PCR en condiciones apropiadas. Hemos analizado el ADN de pacientes con calantitripsina (AAT), de portadores de la enfermedad y de individuos normales. Nuestros resultados están en completo acuerdo con las asignaciones de los alelos derivados de la secuenciación directa de los productos de la PCR ... La viabilidad de la PCR-ARMS descrita por Newton se demostró por la amplificación del exón III y parte del intrón III en el gen de AAT humano. La aplicación directa de la PCR-ARMS a los alelos clínicamente significativos se realizó y los diagnósticos estaban de acuerdo con los resultados del análisis de la secuencia de los productos de PCR"".


title: Sistema de Mutación Refractario a la Amplificación por PCR

text: Los grupos independientes antes mencionados demostraron una técnica general que permite la verificación de cualquier polimorfismo o mutación puntual conocidos. La técnica requiere que el extremo terminal 3' de los cebadores de PCR sea específico para los alelos conocidos, tanto mutante como normal. Así, el cebador inicia la síntesis en dos formas. Si el alelo es de la forma "normal", entonces es refractario a la amplificación por PCR sobre la cadena de ADN "mutante", mientras que si la forma es "mutante" es refractario a la PCR sobre el ADN "normal". En algunos casos una sola base que no concuerde sí permite la amplificación, de manera que demostraron que la introducción de algunos otros desajustes adicionales cerca del extremo 3 ' de los cebadores apropiados aminora este problema.


text: ARMS es un método simple, rápido y confiable que proporciona precisión a la hora de hacer un diagnóstico pre- y post-natal y un medio para la detección de heterocigotos. ARMS sigue siendo de beneficio aún si las mutaciones asociadas a la enfermedad, hasta ahora no caracterizada, están vinculados a los polimorfismos caracterizados. En tales casos, la técnica permitirá analizar el haplotipo de manera detallada con una cantidad mínima de ADN. Los diagnósticos prenatales precisos son alcanzables en unas pocas horas si se evita la contaminación materna a partir de material fetal, aunque hoy en día las tecnologías y métodos de diagnóstico con ADN fetal circulante parecen prometedoras. Una consideración práctica importante con este enfoque (como con otras estrategias basadas en la Reacción en Cadena de la Polimerasa) es que es innecesario preparar ADN de alta calidad, adecuado para la digestión con enzimas de restricción.


text: Un requisito previo de la PCR-ARMS es la ausencia de una actividad correctora 3'-exonucleolítica asociada con la ADN polimerasa, igual que el extremo 3'-OH de los cebadores coincidentes sean refractarios a la extensión por la polimerasa de ADN elegida. En los casos en que la falta de coincidencia no es refractaria a la extensión (como se demostró en los resultados de la experimentación de Newton en 1989), son requeridos algunos desajustes más desestabilizadores. Empíricamente, el grado de especificidad observada con los cebadores no coincidentes (y por tanto el requisito de que la desestabilización adicional se lleve a cabo), se correlaciona con el tipo de desajuste. C / T, A / A y desajustes de T / T (que son todos o bien purina / purina o desajustes pirimidina / pirimidina) son considerablemente más refractarios a la extensión por la Taq Polimerasa que los desajustes G / T, T / G, A / C o C / A (donde todos son desajustes purina / pirimidina).


text: Es probable que cualquiera de estos enfoques para desestabilizar deliberadamente los cebadores de la PCR-ARMS y, por lo tanto, mejorar la especificidad puede ser mediante la reducción de dNTPs, magnesio y concentraciones de cebador o el simple aumento de las temperaturas de amplificación / extensión y de hibridación. Por el contrario, un aumento en la concentración de estos reactivos o una disminución de la temperatura de amplificación podría suponer que tenga un efecto adverso sobre las especificidades de los cebadores de manera que no generen previamente ningún producto deseado.


text: La optimización de las concentraciones de magnesio, Taq polimerasa, dNTP y / o de la temperatura exacta a través de los ciclos de la PCR-ARMS, el control cuidadoso de la variable debe ser alcanzable con la instrumentación totalmente automatizada de la PCR-ARMS. De hecho, la adición de Taq polimerasa para mezclas de reacción a 60 ° C y asegurar que la temperatura de reacción nunca cae por debajo de ésta, puede aumentar significativamente la especificidad de reacción y evitar la generación de productos en plantillas no coincidentes.


text: Hemos elegido utilizar grandes cebadores (30-meros) en este ensayo ya que esto permite el uso de altas temperaturas de amplificación para mejorar la especificidad y reduce la posibilidad de un mal acoplamiento de los cebadores en otros lugares del ADN genómico. Un enfoque alternativo podría ser el uso de cebadores más cortos que abarquen una mutación puntual tal que la discriminación entre loci "normal" y "mutante" se logre mediante la hibridación de los cebadores de una manera específica con ciertos alelos en condiciones apropiadas, naturalmente. Es importante tener en cuenta, sin embargo, que en este análisis de la especificidad de los cebadores no se habla de algo absoluto, la ausencia de controles internos podría concebiblemente dar lugar a diagnósticos erróneos y la hibridación de los mismos cebadores. Otras desventajas serían que las diferentes condiciones tendrían que ser determinadas para cada locus de interés lo que complicaría el análisis simultáneo de múltiples loci. "No se nos escapa que la PCR-ARMS puede tener muchas otras aplicaciones en la medicina y la biología molecular. La técnica será útil para la tipificación precisa de los patógenos infecciosos con base en los cambios específicos de la cepa, característicos para cada una, de manera que pueden ser identificados. El análisis de activación de oncogenes es así sencillo al igual que la detección de deleciones en el ADN. Muchas aplicaciones adicionales también se pueden considerar en el contexto de la investigación."-Newton et al., 1989


text: La PCR-ARMS se basa en la observación de que la amplificación por PCR es ineficiente o completamente refractaria si hay un desajuste entre el nucleótido terminal de un cebador en su extremo 3' y la plantilla correspondiente. La Taq ADN polimerasa carece de una actividad de exonucleasa y por lo tanto no se pueden corregir desajustes en los extremos 3' del cebador. Como tal, se requiere la hibridación de bases complementarias en el extremo 3' del cebador para la amplificación eficiente de Taq DNA polimerasa; la amplificación del alelo normal, y no el de la mutante, se lleva a cabo utilizando un cebador que es complementaria al alelo normal y tiene un desajuste entre el residuo 3' y el alelo mutante. Por el contrario, solo el mutante se amplificará si el residuo 3' del cebador es complementario al alelo mutante y no el alelo normal. La especificidad o poder de discriminación del nucleótido terminal en el extremo 3' se puede mejorar aún más si se incorpora una asimetría adicional posicionado cerca del nucleótido 3'.


text: Varios estudios han intentado cuantificar el efecto inhibidor de diferentes desajustes en la amplificación por PCR, como aquellos de los últimos años de la década de 1990. Aunque han surgido algunas tendencias, los resultados han sido notablemente discordantes. Sarkar y sus colegas, en 1990, concluyeron que la PCR es inhibida por desajustes entre la plantilla y el nucleótido en el extremo 3' del cebador. Por otra parte, Kwok y su equipo en 1990 demostraron una reducción de 20 veces en la eficiencia de la amplificación con desajustes A : A (cebador : molde), la reducción de 100 veces con desajustes A : G, G : A, y C : C, y poca o ninguna reducción con otros desajustes. En 1992, Huang y sus colaboradores demostraron algún grado de inhibición con cada combinación de desajustes. La inhibición más débil, la reducción de aproximadamente 100 veces, se asoció con desajustes C : T . Había aproximadamente 10 veces una reducción con desajustes A : C, C : A, G : T, y desajustes; G: 34T 10 a 10 veces de reducción con desajustes T : C y T 6: T ; y al menos 10 veces la tasa de reducción con desajustes A : A, G : A, A : G, G : G, y C : C. Ayyadevara y colegas, que realizaron ciertos experimentos en el año 2000 variaron sistemáticamente tanto el extremo terminal 3' y los nucleótidos de los penúltimos cebadores, todo ello bajo condiciones de relativamente alta rigurosidad. Su estudio indica que los cebadores que terminan Adenina son moderadamente inferiores a los que terminan en otros nucleótidos.


text: La PCR-ARMS está basada en el mismo principio que ASO (Allele Specific Oligonucleotide): la utilización de oligonucleótidos específicos para la secuencia normal y para la secuencia mutada; en la PCR-ARMS estos oligonucleótidos son cebadores de PCR. Se diseñan, por tanto, dos reacciones de PCR que comparten un mismo cebador común pero se diferencian en que un cebador amplificará solo el alelo normal, mientras que el otro cebador amplificará solo el mutado. Dada la rapidez y sencillez de la PCR, esta técnica está desplazando cada vez más a la técnica de ASO.


text: Dicho de otra forma, una PCR ARMS estándar consiste en dos reacciones complementarias (dos tubos) y utiliza 3 cebadores. Un cebador es constante y complementarios a la plantilla en ambas reacciones, los otros cebadores difieren en sus extremos 3' y son específicos para la secuencia de ADN de tipo normal o la secuencia mutada en una base dada. Los productos de PCR se separan por electroforesis a través de un gel de agarosa que contiene bromuro de etidio. Si la muestra es homocigótica para el alelo normal u homocigótico para el alelo mutante, solo se producirá solo en uno de los tubos, si la muestra es heterocigótica se verá en ambos tubos.


text: ARMS es un método basado en la Reacción en Cadena de la Polimerasa, que utiliza cebadores específicos para el alelo normal o el alelo mutante. En este método, un cebador de oligonucleótido con un extremo de triple complementaria a la secuencia de una mutación específica, junto con un cebador común se utiliza en una reacción de PCR. En paralelo, un cebador normal correspondiente, junto con un cebador común se utiliza en otra reacción PCR. La presencia de un producto amplificado en la primera reacción indica la presencia de la mutación mientras que su ausencia indica la presencia de la secuencia de ADN normal en ese sitio específico. En la segunda reacción, la presencia de un producto amplificado indica la presencia de una secuencia de ADN normal en ese sitio específico, mientras que su ausencia indica presencia de la mutación. Se pueden separar los resultados de una PCR-ARMS en un gel de agarosa al 2 o 3%.


text: Como regla general para el diseño de cebadores de una PCR-ARMS, se debe tratar de implementar el desajuste en el segundo nucleótido en la primera instancia y probar la cartilla de la especificidad y la generación de producto. La posición de la desigualdad puede ser alterado si el primario no funciona, o la fuerza de la falta de coincidencia aumenta si se observan bandas inespecíficas. Según Little, S. en Current Protocols in Human Genetics, y como se ha mencionado anteriormente, los desajustes pueden ser: máximos, GA, CT, TT; fuerte, CC; medio, AA, GG; Débil, CA, GT; ninguno, AT, GC.


text: Una prueba de ARMS típica para una sola mutación se compone de dos amplificaciones de la misma mezcla de reacción utilizando el mismo ADN genómico como sustrato. Los resultados de los productos de amplificación a partir del cebador específico y su par de cebadores (cuando la mutación está presente en el ADN genómico) y los otros resultados de la amplificación de dos cebadores que generan un fragmento de control en todos los casos. La generación de un producto de control indica la mezcla de reacción y que el termociclador está funcionando de manera óptima. La estrategia consiste en la detección de las mutaciones comunes en el país de origen étnico del paciente en primer lugar y luego para la detección de las mutaciones más raras. Después de lo cual, las mutaciones no caracterizadas son identificadas por secuenciación genómica.


text: Los cebadores para el diagnóstico de los alelos normales para muchas mutaciones se enumeran en diversos artículos publicados en revistas científicas. En los últimos años se ha visto un aumento exponencial en la generación de bibliografía de este tipo.


text: Generalmente se utilizan 20 µl de volumen final de reacción de PCR. El volumen de reacción se compone de 0,5 microgramos de la plantilla de ADN, 0,01 g de cada uno de los cuatro cebadores (2 cebadores de control, 1 cebador común, y 1 mutante / cebadores para la reacción normal / mutante), 0,5 unidad de Taq ADN polimerasa y 0,2 mM de cada dNTP en una solución de tris-C1 10 mM, MgCl2 50 mM y espermidina 1 mM. El régimen de ciclo térmico consistió en 30 ciclos de: precalentamiento a 94 ºC durante 2 minutos, desnaturalización a 94 ºC durante 1 minuto, se permite la hibridación variable y la extensión a 72 ºC durante 1 minuto.


text: El método descrito por los grupos de investigadores que en 1989 describieron la PCR-ARMS, involucra los siguientes pasos: la preparación de ADN, ADN genómico aislado a partir de células de sangre periférica; amplificación de oligonucleótidos, la amplificación y la secuenciación refractarios; los cebadores comunes cuyas secuencias fueron D (CCCACCTTCCCCT CTCTCCAGGCAAATGGG), d (GGGCCTCAGTCCCAACATGGCTAAGAGGTG), d (TGTCCA CGTGAGCCTTGCTCGAGGCCTGGG) y D (GAGACTTGGTATTTTGTTCAATCATTAAG); así como los cebadores para el control interno, un fragmento de 510 pares de bases de un exón del gen de la apolipoproteína B humana se utilizó sin purificación adicional. Los cebadores de secuenciación para la caracterización inicial de los alelos fueron los descritos anteriormente; caracterización de los alelos por PCR y secuenciación directa, donde los alelos mutantes y normales de la AAT S y Z fueron confirmados mediante amplificación por PCR, las secuencias diana se amplificaron en un volumen de reacción que contenía ADN genómico, desoxiadenosina trifosfato (dATP), desoxicitidina trifosfato (dCTP), trifosfato de desoxiguanosina (dGTP) y trifosfato de timidina (TTP), cada uno a 1,5 mM, así como 67 mM de Tris-HCl (pH 8,8), sulfato de amonio 16.6mM, cloruro de magnesio a una concentración de 6,7 mM, 2-mercaptoetanol, EDTA y cada cebador de amplificación. Las muestras fueron calentadas a 100 ° C durante 5 minutos para desnaturalizar el ADN. Dos unidades de Thermus aquaticus de ADN polimerasa (Taq) se añadieron a cada muestra. Las muestras se cubrieron con aceite mineral ligero, después se calentó a 600 ºC durante 4 minutos para la primera ronda de la síntesis de ADN. Los ciclos posteriores consistieron en una etapa de desnaturalización de 2 minutos a 92 ° C y una etapa de síntesis de la hibridación del cebador y el ADN combinado a 60 ° C durante 4 minutos. La secuenciación directa de los productos de PCR fue como se describió anteriormente.


text: En el 2001, se propuso por un grupo de investigadores que para la identificación de beta-talasemia, las muestras de sangre fueran conservadas en EDTA, así como la toma de muestras de vellosidades coriónicas o de fluido (CVS) se obtuviera de seleccionados al azar de pacientes diagnosticados clínicamente con beta-talasemia menor. Que se extrajera el ADN de las muestras con el fin de llevar a cabo una PCR-ARMS. Después de la extracción del ADN, las reacciones de PCR se establecieron en dos tubos separados para cada muestra. Un tubo de ensayo para la amplificación del cebador de ARMS normal y el segundo para la amplificación del cebador de ARMS mutante.


text: Actualmente, el método propuesto para preparar y realizar un Sistema de Mutación Refractario a la Amplificación por PCR es el siguiente:


text: Para la T-ARMS-PCR se hizo lo siguiente: ADN genómico fue extraído de 0,2 ml de muestras de sangre periférica frescas mediante el uso de la WizardH Genomic DNA Purification Kit (Promega) según las instrucciones del fabricante. muestras de ADN extraídas tenían una concentración final que oscila desde 55 hasta 365 ng / mL.


text: Para superar las limitaciones de los métodos estándar multiplex PCR Arms- T, el método propuesto se ha optimizado en términos de diseño de la cartilla, las condiciones de los ciclos de PCR y en la utilización de cebadores quiméricos y estrategia de TSP, tal como se describe en nuestros informes anteriores en la detección del virus de la gripe de pies y manos y la boca humana asociada agentes patógenos. Se utilizaron un total de 24 cebadores quiméricos cada uno consiste en una secuencia específica de gen con una secuencia de etiqueta universal en el extremo 59. Las porciones de genes específicos de los primers fueron diseñados de acuerdo con los requisitos de la T-ARMS-PCR. La especificidad de los cebadores específicos de alelo es conferido por la identidad del terminal 39 nucleótidos ya sea con el de tipo salvaje o el alelo mutante, la especificidad se incrementa por la introducción de una falta de coincidencia deliberada en la posición -1 de la 39-terminal. Un par de cebadores universales y seis juegos de T-Arms- PCR cebadores quiméricos fueron utilizados para la amplificación. Las secuencias de cebadores detalladas y las concentraciones de trabajo para cada SNP fueron enumerados.


text: El genotipado de los polimorfismos ensayados se realizó mediante amplificación por PCR multiplex y análisis de fragmentos. Seis juegos de cebadores T- ARMS-PCR para la amplificación de doce fragmentos de diferentes tamaños se combinaron en un solo 20 ml de volumen de reacción, que también contenían 10 ml de mezcla maestra kit Qiagen Multiplex PCR, 50-100 ng de ADN genómico, y las concentraciones de cada cebador optimizado. Multiplex PCR se realizó utilizando Bioer LifePro termociclador. Una PCR (TSP) protocolo interruptor de temperatura optimizada, que utiliza cuatro temperatura de hibridación diferente se realizó como sigue: etapa de desnaturalización inicial de 95ºC de 10 min, 3 ciclos de 95ºC durante 30 s, 60ºC durante 30 s, y72ºC durante 45 s, 10 ciclos de 95ºC durante 30 s, 58ºC durante 30 s, y 72ºC durante 45 s, 20 ciclos de 95ºC durante 30 s, 68ºC durante 30 s, y 72ºC para 45 s, 15 ciclos de 95ºC for 30 s, 55ºC por 30 s, 72º C por 45 s, seguidos por un ciclo final de extensión a 72ºC durante 10 min, y después se deja enfriar a 4ºC. Los productos de PCR múltiplex se separaron por ADN QIAxcelH cartucho de gel de alta resolución (Qiagen) en el sistema de QIAxcel (Qia- gen). ADN Tamaño de marcador de 25 a 450 pb (Qiagen) y alineación de marcador 15 pb / 500 pb (Qiagen) se utilizaron en cada QIAxcel se ejecuta y se determinó el tamaño de los productos mediante el software ScreenGel (Qiagen). Debido a que cada uno de los amplicones era de una longitud diferente, se detectaron los alelos sobre la base de los patrones de tamaños de pico. Un total de 186 muestras también fueron secuenciados en paralelo con un ABI 3130 Genetic Analyzer (Applied Biosystems, EE.UU.) de acuerdo con el protocolo BigDye versión 3.1 Terminación de Invitrogen Corporation (Shanghái, China) para confirmar los resultados T- múltiplex ARMS-PCR utilizando el cebadores externos que figuran para cada SNP.  Un total de 186 muestras se tipificaron con un ensayo T-Arms- PCR multiplex y también escribe en paralelo con la secuenciación directa para evaluar la exactitud y la eficiencia del ensayo. Todos los productos de PCR fueron bien resueltos y dimensionadas por CE y ScreenGel, permitiendo la fácil identificación de los diferentes genotipos. Dos de las 186 muestras tenían once amplicones únicos, es decir, aquellos pacientes que tienen un solo SNP homogénea entre los seis loci analizados. imagen gel de estas dos muestras electroferograma y muestran que CE en QIAXEL puede separar claramente un máximo de 11 fragmentos en una muestra. La precisión de múltiples análisis de PCR de una muestra se confirmó por secuenciación directa. tamaños de los fragmentos determinados por la CE basada QIAXEL se enumeran. Leer las longitudes eran de 2 a 10 pb más grande que los esperados, pero esto no interfirió con la determinación de los alelos. Heterocigotos y homocigotos fueron asignados de forma inequívoca a partir de los perfiles de CE. No se observó reacción cruzada. Los genotipos obtenidos a partir del ensayo multiplex eran en 100% de acuerdo con la secuenciación directa.


text: dNTP


text: "Sume 50 µl de una solución 100 mM de cada dNTP y 3,8 ml de agua destilada. El dNTP de la solución madre a 1,25 mM se debe almacenar en alícuotas congeladas".


text: Cebadores


text: "50 mM de KCl, 10 mM Tris-HCl (pH 8,3 a temperatura ambiente), MgCl2 1,5 mM, 100 mg / ml. Un amortiguador a 10x puede ser preparado mediante la suma de 0,5 ml de 1 M Tris-HCl (pH 8,3 a temperatura ambiente), 1,25 ml de 2 M KCl, 75 l de 1 M de MgCl2, 5 mg y 3.275 ml de agua destilada . La reserva de estabilización se calienta a 37 ºC hasta que se disuelve y luego se congela en alícuotas".


text: Taq polimerasas


text: "Las sugeridos son las siguientes, AmpliTaq Gold (PE Biosystems) que funciona mejor para pruebas de digestión ARMS-PCR / RE y Platinum Taq (Gibco Life Technologies) para Gap-PCR. (EDTA Tris-borato (TBE) tampón: 89 mM Tris-borato, 89 mM ácido bórico, 10 mM EDTA pH 8,0)".


text: El diseño y la optimización de los protocolos de ARMS-PCR es hecha en función de la secuencia diana y las diferencias de nucleótidos que definen los alelos. Además de los desajustes entre el nucleótido del extremo 3’ del cebador y la diana, solo los desajustes deberían incorporarse en varias posiciones del extremo 3’. Aparte de las consideraciones teóricas relativas a la posición terminal 3’ de los cebadores específicos para alelos, el diseño y optimización de los cebadores para ARMS-PCR sigue las mismas consideraciones utilizadas para cualquier otro tipo de PCR. Los cebadores se eligen para tener temperaturas de fusión teóricas (Tm) comparables; las longitudes de los cebadores son generalmente de 20 nucleótidos o más, aunque la longitud es menos importante que la Tm; los cebadores no deben tener secuencias auto-complementarias de 4 nucleótidos o más, ni deben tener más de 4 nucleótidos de complementariedad entre sus extremos 3’. Como con cualquier estrategia basada en PCR, los resultados falsos negativos pueden ser el resultado de la presencia de polimorfismos que han tenido un impacto negativo en la hibridación del cebador y / o en la amplificación. Este problema potencial puede ser superado por la orientación de la cadena opuesta para la amplificación, o mediante la incorporación de un nucleótido degenerado en el cebador. Para identificar mutaciones individuales con ARMS-PCR, las condiciones de la PCR se pueden establecer mediante la titulación de la concentración de MgCl2 y / o cambiar las concentraciones del cebador a la temperatura de amplificación constante. Para ARMS multiplex, el primer paso es optimizar las condiciones de PCR para la detección sensible y específica de cada alelo. El objetivo es definir los parámetros de los ciclos de PCR y la concentración de MgCl2 en las que todos los alelos se amplifican de una manera eficiente y específica. Puede ser necesario volver a diseñar uno o más pares de cebadores para lograr la amplificación específica de alelo bajo un conjunto de condiciones de PCR. Una vez se han establecido los parámetros de la PCR, los pares de cebadores se pueden combinar para evaluar el rendimiento del ensayo ARMS-PCR múltiple. Las concentraciones del cebador deben ajustarse de tal manera que cada uno de los alelos se amplifique en un grado comparable. La especificidad del ensayo de ARMS-PCR debe ser evaluada utilizando muestras de los controles normales y de los portadores conocidos de las mutaciones. La especificidad también se puede probar utilizando diluciones seriadas de ADN mutante mezclado con ADN normal (por ejemplo, mutante: normal = 1: 1, 1: 2, 1: 4, 1: 8, etc.); la amplificación uniforme y específica de cada alelo puede requerir manipulación adicional de los parámetros de ciclación o la concentración de uno o más reactivos (cebadores, Taq polimerasa, MgCl2).


text: Muchos trastornos genéticos se caracterizan por un pequeño número de mutaciones comunes que representan una proporción significativa y, en algunos casos, la mayoría de los alelos mutantes representadas en una población dada. Una vez que se ha establecido el espectro de mutaciones y las frecuencias de los alelos individuales, la PCR-ARMS se puede utilizar para la detección de manera simultánea de las mutaciones más comunes. En la práctica, los ensayos multiplex pueden ser desarrollados para la detección de cuatro a seis mutaciones diferentes un solo tubo de PCR.


text: El sistema de mutación refractario a la amplificación por PCR con tetra-cebadores (T-ARMS-PCR) es un método rápido y económico para el análisis de polimorfismos de un solo nucleótido (SNP), requiriendo solo la amplificación por PCR y la posterior electroforesis para la determinación de genotipos. Para mejorar el rendimiento y la eficiencia de la T-ARMS-PCR, se puede combinar la T-ARMS-PCR con una estrategia quimérica de interrupción de temperatura basada en los iniciadores o cebadores de PCR (TSP) y asimismo se puede utilizar la electroforesis capilar (CE por sus siglas en inglés) para la separación e identificación de los resultados de la amplificación o “amplicones” como comúnmente se denominan. En el 2013, algunos investigadores evaluaron este proceso en el genotipado simultáneo de cuatro tipos de cáncer de mama y dos relacionados con el riesgo de cáncer de cuello uterino, todos relacionados con algunos SNPs.


text: Un total de 24 cebadores T-ARMS-PCR, cada uno etiquetado con una secuencia universal en el extremo 5’ y un par de cebadores universales, fueron agrupados para amplificar los 12 alelos de 6 SNPs en 186 muestras de sangre de mujeres que fungirían como controles. También se realizó una secuenciación directa de todas las muestras para evaluar la exactitud de este método.


text: De las 186 muestras se pudieron producir hasta 11 amplicones en una sola PCR y ser separados por Electroforesis Capilar. Los resultados de genotipado con la T-ARMS-PCR múltiple estaban en completa concordancia con la secuenciación directa de todas las muestras. Este nuevo método de T-ARMS-PCR múltiple es el primer método reportado que permite determinar el genotipo de seis SNPs en una sola reacción sin ningún tratamiento post-PCR distinta de la electroforesis; este método es fiable, rápido y fácil de realizar.


text: El papel de los polimorfismos de un solo nucleótido (SNP) es el de contribuir a la variabilidad entre individuos, a veces haciéndolos susceptibles al cáncer, el crecimiento del tumor y la tasa de metástasis, así como en la eficacia del tratamiento y las respuestas secundarias a los medicamentos. Entre los muchos métodos que se han desarrollado para determinar el genotipo de los SNPs; el sistema de mutación refractario a la amplificación por PCR con tetra-cebadores (T-ARMS-PCR) ha demostrado ser rápido, simple y económico. A través de la combinación de dos cebadores externos y los dos cebadores internos específicos para algún alelo, la genotipificación requiere solo una PCR seguida de una separación por electroforesis. La incorporación de una T-Arms- PCR múltiple, con ocho cebadores en una PCR hace capaz la detección de manera simultánea de dos mutaciones.


text: Por otro lado, la hibridación quimérica múltiple por PCR añade una etiqueta universal de 59 nucleótidos a la secuencia de cebadores específicos para varios objetivos, se ha utilizado para mejorar el rendimiento y la eficiencia de la reacción en cadena de la polimerasa. dando buenos resultados. Con su alta eficiencia en la detección de decenas de diferentes productos de PCR en una reacción, el uso de un cebador quimérico para PCR con frecuencia se ha utilizado en la cuantificación de ARNm y la detección de patógenos.


text: El cáncer de mama y el cáncer cérvico-uterino se han convertido en los cánceres más frecuentemente diagnosticados y las principales causas de muerte por cáncer entre las mujeres. Estudios recientes demuestran que las variantes somáticas en regiones de susceptibilidad están asociados con la probabilidad de ocurrencia de cáncer de mama y cánceres ginecológicos.


text: Algunos SNPs fueron escogidos para un estudio que se hizo sobre las asociaciones genéticas reportadas con estos tipos de cáncer y que tiene una alta prevalencia en las poblaciones asiáticas. Se seleccionaron cuatro variantes de baja penetrancia para la predicción del riesgo de cáncer de mama: rs4784227 SNP y rs3803662 se encuentran en el TOX3 un factor de transcripción; rs1219648 se encuentra dentro de FGFR2, que contribuye al crecimiento celular, la invasión, la motilidad y la angiogénesis; rs889312 está dentro de MAP3K1, que está vinculada a la respuesta celular a los mitógenos. Se seleccionaron dos variantes asociadas con el riesgo de cáncer cérvicouterino o de ovario. rs750749 SNP es un polimorfismos en CD83, que está implicado en el reconocimiento inmune y la presentación de antígenos; rs749292 en CYP19A1, que desempeña un papel clave en la biosíntesis de estrógenos.


text: En este trabajo, se describe un nuevo múltiplex T-ARMS-PCR que permite el genotipado simultáneo de 6 SNPs (rs4784227, rs3803662, rs1219648, rs889312, rs750749 y rs749292) asociado con cánceres de mama y ginecológicos en un solo tubo utilizando 24 quimérico cebadores y un par de cebadores universales el uso de cebadores quiméricos y una estrategia de interruptor de temperatura PCR (TSP) se combinaron con T-ARMS-PCR para optimizar los parámetros de amplificación y mejorar el rendimiento de SNP genotipado. La combinación de estas diferentes técnicas de genotipificación de- muestra por primera vez la capacidad de tetra-primer ARMS-PCR para detectar de forma fiable y eficiente seis SNPs en una sola reacción. Desde hace más de 10 productos de PCR con longitudes diferentes deben ser identificados, electroforesis capilar (CE) se utiliza en lugar de la electroforesis en gel de agarosa. El estudio hecho sobre la prevalencia de ciertos tipos de cánceren la población asiática, habla de que de acuerdo con los monitoreos recogidos en los centros de salud comunitarios en Wuhan, China en 2011 un gran porcentaje de la población presenta polimorfismos de un solo nucleótido asociados a estos. Métodos que permitan el bajo costo de la determinación rápida y fiable de los SNPs están generando un creciente interés ahora que vamos encaminados a la era de la medicina personalizada. Es ampliamente reconocido que el uso de la información de múltiples genotipos de SNPs proporciona una evaluación del riesgo más precisa que la predicha por el riesgo de un alelo único, por lo tanto, algunos métodos capaces de identificar múltiples genotipos, tales como MALDI-TOF (espectrometría de masas) y basado en la hibridación o a base de enzimas se han utilizado métodos. Sin embargo, estos métodos requieren equipo especial costoso, como los espectrómetros de masas o tardan mucho tiempo después de la operación. El método de ARMS-PCR con tetra-cebadores se ha convertido en uno de los métodos más comúnmente utilizados para el genotipado de SNP. Solo se requiere equipo de biología molecular regular y elimina la necesidad de hibridación o reacciones enzimáticas adicionales. Aunque se han reportado métodos tríplex y cuádruplex de PCR, se hace un uso limitado de múltiplex T-ARMS-PCR en la determinación del genotipo debido a dos limitaciones clave. En primer lugar, la probabilidad de encontrar cebadores con temperaturas de fusión emparejados cae drásticamente cuando se trata de combinar la detección de varios SNPs en una sola reacción. En segundo lugar, la piscina que resulta de los amplificados requiere suficientes intervalos de longitud entre bandas vecinas en la electroforesis para facilitar la separación. Mediante la combinación de T-ARMS-PCR con una estrategia quimérica basada en los iniciadores de temperatura de activación PCR eludimos en gran medida estas limitaciones. Nuestro método demuestra por primera vez la capacidad de tetra-primer ARMS-PCR para detectar fácilmente seis SNPs en una sola reacción. Es notable que la intensidad de la banda pueden ser objeto de varios factores, incluyendo la calidad del ADN genómico y PCR calidad de los reactivos; se ha encontrado que 50 a 100 ng / ml de ADN es óptima para proporcionar bandas suficientemente clara y brillante con el fondo mínima (datos no mostrados). Además, a diferencia de la mayoría de otros métodos informó T-ARMS-PCR, una falta de coincidencia deliberado en la posición -1 de la 39 terminal se incorporó en ambos cebadores internos y era suficientemente específico para la detección diferencial de dos alelos para cada SNP. Debido a la limitación de tamaño de la discriminación entre los productos de PCR, diseño de cebadores de PCR puede ser restringido en cierta medida, hacer múltiples T-ARMS-PCR difícil de escribir los SNPs que se encuentran más cerca que 20 pb de la otra. Dos claras ventajas del método ARMS-PCR múltiple son el corto tiempo de ensayo y los bajos costos, incluso para ensayar un gran número de muestras. El método propuesto, solo que incluya la PCR convencional con un CE, puede llevarse a cabo antes de 3,5 horas con un mínimo esfuerzo práctico. Después de la extracción de ADN genómico, los pasos posteriores se pueden completar en un solo tubo de reacción, lo que permite el análisis de múltiples muestras listo en una única prueba para cribado de alto rendimiento. Este ensayo consume solamente reactivos de PCR estándar y cartuchos de electroforesis; los costos en este estudio fueron solo 2 US $ para la detección simultánea de seis SNPs por muestra. Para nuestro conocimiento, el método propuesto es el primero en detectar seis SNPs en una única reacción usando tetra-primer ARMS-PCR. El nuevo método multiplex tetra-primer ARMS-PCR desarrollada en este estudio tiene un potencial significativo para ser ampliamente aplicable tanto en entornos comerciales y clínicas para la detección de múltiples SNPs.


text: La leu A3243G ARNmt mitocondrial (UUR) es un punto de mutación que puede causar miopatía mitocondrial, encefalopatía, síndrome de acidosis láctica y episodios de ictus (MELAS), el trastorno de ADN mitocondrial más común, y también se encuentra en los pacientes con diabetes de herencia materna y síndrome de sordera (EDIM). Para correlacionar la manifestación de la enfermedad con las cargas de mutación, es necesario medir el porcentaje de la mutación A3243G en el ADNmt. Para cuantificar de manera fiable las bajas proporciones del ADNmt mutante, hemos desarrollado un sistema de mutación refractario a amplificación por PCR cuantitativo en tiempo real (ARMS-qPCR). Hemos validado el método con muestras experimentales que contienen proporciones conocidas de A3243G mutante ADNmt generados mediante la mezcla de cantidades conocidas de ADN de plásmido clonado que contiene ya sea el de tipo salvaje o las secuencias mutantes. Se encontró un coeficiente de correlación de 0,9995 entre los valores esperados y observados para las proporciones de A3243G mutante en las muestras experimentales. Evaluación de un total de 36 muestras de ADN de pacientes demostró resultados consistentes entre la PCR de restricción polimorfismo de longitud de fragmento de análisis (RFLP) y en ARMS-qPCR. Sin embargo, el último método fue mucho más sensible para la detección de bajos porcentajes de heteroplasmia mutante. Tres muestras contenían mutaciones de oligonucleótidos-detectable pero RFLP-indetectable específicos de alelo. El método en tiempo real ARMS-PCR cuantitativa proporciona un rápido, de un solo paso de detección cuantitativa y fiable de mutante heteroplasmic ADNmt. En los ARMS-PCR de PCR, el cebador inverso (5'-TGGCCATGGGTATGTTGTTA-3 ') era en las posiciones de nucleótidos 3319-3300 para la amplificación de ambos de tipo salvaje ADNmt y la mutación A3243G. Los cebadores directos para el análisis de RT ARMS-PCR de la mutación A3243G se enumeran. Los números corresponden a las posiciones de nucleótidos en GenBank adhesión no. NC001807 y la base de datos MITOMAP (2). Originalmente, una falta de coincidencia en la posición de nucleótido penúltima del sitio de mutación se introdujo en los cebadores directos para aumentar la especificidad de la reacción ARMS basado en los principios descritos por Newton. Sin embargo, la especificidad no era suficiente, y no había señales de fondo en 0% mutante. Dos desajustes en los dos nucleótidos inmediatamente 5 'al sitio de la mutación A continuación, se introducen, que mejora en gran medida la especificidad. Por lo tanto, se utilizaron cebadores modificados hacia adelante desde el conjunto B de este estudio. En el sitio de la mutación, la imprimación de tipo salvaje que contiene una "A" sería conjuntar con la secuencia diana de tipo salvaje, pero sería una falta de coincidencia débil "AC" con la secuencia diana mutante. Del mismo modo, el cebador mutante que contiene una "G" sería una combinación perfecta con la secuencia diana mutante, pero sería una falta de coincidencia débil "GT" con la secuencia diana de tipo salvaje. Por lo tanto, se espera que la introducción de un fuerte desajuste CC en la penúltima de nucleótidos para aumentar la especificidad de imprimación.


text: El ensayo RT-qPCR ARMS se realizó por triplicado para cada tipo salvaje y la secuencia diana mutante. La mezcla de 20-l de reacción de PCR contenía 1 × Platinum SYBR Green qPCR SuperMix UDG (Invitrogen), 500 nM de cada cebador, tinte Rox, y ~ 4 ng de extracto de ADN genómico total, de acuerdo con las instrucciones del fabricante. En tiempo real las condiciones de PCR fueron 2 min a 50 ° C y 10 min a 95 ° C, seguido por 45 ciclos de desnaturalización durante 15 s a 95 ° C y el recocido / extensión durante 60 s a 63 ° C. colorante SYBR Green se une al surco menor del ADN de doble cadena y aumenta la intensidad de las emisiones fluorescentes, mientras que los amplicones se producen en cada ciclo de amplificación. Las intensidades de la señal fluorescente se registraron y analizaron durante la PCR en un sistema 7700 detector de secuencias ABI Prism (Applied Biosystems) utilizando el software SDS (Ver. 1.91). curvas de disociación para los amplicones se generaron después de cada carrera para confirmar que el aumento de la intensidad de fluorescencia no eran atribuibles a las señales no específicas (dímeros de cebadores). El aumento de la señal fluorescente está asociado con un crecimiento exponencial de producto de PCR durante la fase lineal-log. El ciclo umbral (C ^ sub T ^) es el ciclo en el cual se detecta primero un aumento significativo en el producto de reacción. Cuanto mayor sea la cantidad inicial de ADN, se detecta el producto en menos tiempo acumulado en el proceso de la PCR y la parte baja de la C ^ sub t ^ valor. Por lo tanto, el C ^ sub T ^ valores dentro de la fase de aumento exponencial lineal se utilizan para medir los números originales de copia de la plantilla de ADN y para construir la curva de calibración. Si una muestra contenía> 100 000 o <100 copias sobre la base de la C ^ sub T ^, el ensayo se repitió a una dilución mayor o menor del extracto de ADN de manera que la medición caería dentro de un rango de números de copias de ADN lineal.


text: El objetivo de un estudio fue el de comparar el test de KRAS sensibles y con control de calidad con la secuenciación directa y para evaluar el impacto en la toma de decisiones de tratamiento. Se analizó el ADN genómico aislado de las muestras incluidas en parafina fijado en formol por secuenciación directa y un sistema de ensayo de ARMS-Scorpion (ARMS / S). El cetuximab se administró a los pacientes identificados como de tipo salvaje (WT) KRAS mediante secuenciación directa. Los efectos terapéuticos se evaluaron en función de su estado de KRAS como se determina por ARMS / S. Entre los 159 pacientes, la tasa de mutación general se determinó que era 37,0% por secuenciación directa y 44,0% en los ARMS-PCR / S. Para los pacientes diagnosticados como WT por secuenciación directa y tratados con cetuximab (n = 47), se observó una tasa de respuesta del 16,0% para 38 pacientes ARMS-PCR / S WT, mientras que 9 ARMS-PCR / S mutante (MUT) pacientes no respondieron. Los ARMS-PCR / pacientes S WT mostraron una mejoría significativa en la supervivencia libre de progresión (SLP) y la supervivencia global (SG) en comparación con los ARMS-PCR / pacientes S MUT (PFS mediana de 5,0 vs 1,7 meses, promedio de riesgo (HR) = 0,29, p = 0,001; La mediana de SG 12,1 vs 3,8 meses, HR = 0,26, p = 0,001). El test de KRAS sensibles y con control de calidad puede proporcionar una mejor capacidad de predicción para determinar la eficacia de los anticuerpos del factor de crecimiento anti-epidérmicos .