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Titolo: problema HPLC

Ciao a tutti, avrei bisogno di un piccolo aiuto.
Sto facendo delle analisi HPLC in fase inversa su colonna chirale (Merck
Chirapak) di un composto di mio interesse. Cercando di ottimizzare le
condizioni, ho iniettato la miscela racema usando diverse miscele
metanolo-acqua o metanolo-ac.fosforico 0.1% (aggiustando il pH a 3 con KOH).
La separazione aumentava mano a mano che aumentavo la polarità della fase
mobile aumentando la % di acqua. Le condizioni di separazioni migliori le ho
ottenute usando solo la soluzione acquosa senza metanolo, ma ancora non sono
sufficienti per un'analisi quantitativa (i picchi sono fusi a metà altezza).
Purtroppo più del 100% di acqua mi riesce un po' dura andare. Ho provato ad
aumentare la forza ionica del mezzo (non so se fosse un'idea balzana)
cacciandoci dentro 1 g/L di NaCl, ma non è cambiato nulla.
Se diminuisco il flusso (aumentando il tempo di residenza in colonna) i
picchi si allargano, e la separazione è praticamente identica.
La colonna si trova in un fornetto termostatato che però può solo scaldare,
quindi non posso neanche diminuire la temperatura. Alla peggio potrei
riempire lo scomparto in cui si trova la colonna con dei sacchettini pieni
di ghiaccio tritato, ma i risultati non credo siano molto riproducibili.
Qualcuno di voi ha qualche suggerimento da darmi per migliorare la
separazione?
Grazie mille
Tex

 Purtroppo più del 100% di acqua mi riesce un po' dura andare. 
eh he he, ci vorrebbe la costosissima anidride acquea (acqua al 
200%, che idratata fornisce il doppio di acqua .... :-)
scherzi a parte, visto che serve eluente super polare e 
contemporaneamente acido in modo netto, perché non tenti di 
usare soluzioni di acqua ed acido formico ? L'acido formico è 
tra le poche sostanze con una costante dielettrica superiore a 
quella dell'acqua stessa.
Ora magari facilmente il tuo pH arriva fino a due, non so se 
possa essere troppo acido ... potresti cmq tentare di 
aggiustarlo facendo il tampone formiato, quello che volevo dire 
è di usare un tampone piuttosto sbilanciato, con molto acido 
libero e poco sale, e anche molto concentrato, proprio come 
cosolvente.
Non conoscendo la tua molecola non posso dirti se per caso esso 
può reagire chimicamente (l'acido formico talvolta è acilante 
anche da solo, tipo con ammine reattive, senza nessuna 
attivazione, altre volte è un agente riducente, quindi vedi tu 
se il tentativo è adeguato alla sostanza).
ciao
CCCP++Mario


 quella dell'acqua stessa.
[cuttone]
Mumble...
Se il pH scende sotto a 2 la colonna si sfascia, quindi direi che farò una
prova aggiungendo KOH fino a un pH almeno di 2.5.
Il mio composto è un diidrouracile alchil-sostituito, non credo che dia
problemi, almeno se non scendo a pH estremi.
Grazie mille del consiglio.
Tex

 prova aggiungendo KOH fino a un pH almeno di 2.5.
Niente da fare, 'sto eluente mi acceca il rivelatore (leggo UV a 210 nm).
Proverò a passare al GC...
Tex

 termicamente la tua molecola è piuttosto stabile (chiralità a parte)
In realtà è proprio la chiralità che mi interessa, ma dovrebbe anch'essa
essere abbastanza "stabile". Cmq si fa in fretta a vederelo (dovrei avere
uno dei due enantiomeri puro o quasi).
Grazie cmq dell'aiuto.
Tex

 essere abbastanza "stabile". 
si, termicamente non mi preoccuperei troppo nemmeno io.
Mi sarei preoccupato giusto nel caso di voler derivatizzare (ma 
non è adatto al caso) tipo con la catalisi basica.
riciao
passo e chiudo
CCCP++Mario
