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Titolo: help-lipasi

devo aiutare una ragazza inglese a fare il compito dell'ultimo anno di 
scuola.
Deve fare un esperimento sulla lipasi che comporti:
1)formulare un'ipotesi di lavoro
2)testarla preliminarmente in laboratorio
3)sulla base di questo primo test pianificare un esperimento a regola d'arte
4) trarre risultati numerici statisticamente testabili.
Mi ha preso in contropiede perche' sta cercando qualcosa di originale e 
mi ha fatto la domanda a bruciapelo.
Tra i parametri che puo' variare ci sono: ph; temperatura; inibitori, 
enzima legato o libero; verie ed eventuali.
La scuola e' dotata di laboratorio con colorimetro e non si sa che altro.
Io le ho suggerito di testare la lipasi con vari grassi (usando quindi 
il substrato come variabile dipendente), saturi ed in saturi. l'aggiunta 
della lipasi dovrebbe mandare i grassi in sospensione con tempi diversi 
(quindi il tempo dovrebbe essere la variabile indipendente), perche' a 
seconda di quanto il grasso e' saturo e' piu' compatto quindi offre una 
superficie di attacco minore alla lipasi, e questo ovviamente ha 
ripercussione sui tempi di digestione dei vari cibi.
Per simulare i sali biliari potrebbe aggiungere del detersivo, ma e' da 
vedere.
L'idea sarebbe che lei aggiunge la lipasi alle due fasi grasso acqua, e 
col colorimetro (ma sarebbe meglio un turbidometro) osserva la 
variazione di torbidita' della sospensione. Dopo un tempo x non dovrebbe 
riscontrare alcuna variazione. Il tempo andrebbe messo in correlazione 
col numero di doppi legami presenti nell'acido grasso.
alla fine dovrebbe ottenere una curva che metta in relazione il numero 
di doppi legami presenti col tempo per mandare tutti i grassi presenti 
in emulsione, mostrando come varia l'azione dell'enzima in base alla 
superficie di attacco.
Per confronto, potrebbe ripetere l'esperimento con e senza sapone, ma su 
questo non ho le idee molto chiare.
Che ne pensate? altre idee? la ragazza ha carta bianca, purche' ci sia 
la lipasi dentro.
Ogni suggerimento sarebbe ben accetto. Che succede aggiungendo sapone 
_e_ lipasi?
che esperimento si potrebbe fare altrimenti? cosa inibisce la lipasi?
grazie a tutti per le idee e suggerimenti
-- 
fila di oche selvatiche-
alta sulle pendici dei monti
e' stampata la luna

Prima di tutto si dovrebbe usare un tampone acquoso perchč gli acidi grassi
libarati dalla lipasi abbasserebbero il pH in maniera dale da rendere
inattivo l'enzima, oppure usare un sistema tipo pH-stat.
Quando organizziamo il lab studenti per gli ingegneri biomedici, gli
facciamo fare un'esperienza sulla lipasi in cui usiamo come indicatore del
rosso cresolo: se voi avete a disposizione un colorimetro (cioč uno
spettrofotometro UV?) potete correlare l'attivitą dell'enzima al tempo
necessario a fare variare i picchi di assorbimento dei cromofori
dell'indicatore.
Ciao
Tex

 
grazie
ladybat
-- 
E' primavera!
sottili veli di nebbia
celano anche la montagna senza nome

> non ho capito, potresti spiegarti piu' in dettaglio?
Beh, il rosso cresolo è giallo a pH acidi e fucsia a pH basici, dove "acidi"
e "basici" si intendono relativamente al punto di viraggio.
Quello che tu vedi come cambiamento di colore, lo spettrofotometro lo
raffigura come scomparsa di un picco di assorbimento e comparsa di un altro.
La reazione si può quindi seguire monitorando gli assorbimenti della
soluzione alle due lambda(max).
Ciao
Tex

 grazie a tutti per le idee e suggerimenti
-- 
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