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Titolo: amminazione riduttiva

Un aiuto, per favore.
Devo fare una amminazione riduttiva partendo da una proteina idrofobica ed
una aldeide supportata su membrana cellulosica. Ho provato in metanolo puro,
ma non sono ovviamente riuscita a solubilizzare la proteina. Ho riprovato
con una miscela di DMF e sol. tampone acquosa (pH = 7) in proporzione 4:1.
La proteina si č inizialmente sciolta in DMF, ma quando ho aggiunto (molto
lentamente) la sol acquosa la proteina č precipitata nuovamente. Non hanno
migliorato la situazione agitazione, sonificazione e debole riscaldamento.
Potrei lavorare solo in DMF ed ottenere comunque la riduzione con NaCNBH3 ?
Avete qualche altro suggerimento?
Grazie per qualunque consiglio.
Michela

 Devo fare una amminazione riduttiva partendo da una proteina idrofobica 
siccome in senso strettamente chimico questa definizione dice 
poco, provo a suggerire una cosa molto generica :
hai provato a fare la reazione in sole soluzioni acquose 
acidulate ? (nello specifico potresti acidulare con acido 
acetico oppure cloruro di ammonio).
Se la proteina si scioglie (e il cianoboridruro si scioglie pure 
esso), la reazione potrebbe pure avvenire in acqua.
Ciao
Soviet


> lentamente) la sol acquosa la proteina è precipitata nuovamente. Non 


 sciolga in acqua. 
in effetti l'hai definita una proteina "idrofobica".
Bisognerebbe vedere un po' se e quante effettive funzione acide 
(residui glutammici e aspartici) o basiche (res. di lisina, 
arginina, meno bene istidina) ci sono effettivamente.
Fermo restando che sai solo tu se si denaturi o meno ai vari 
piacchi e se ciò, qualora avvenga, sia molto rilevante o meno;
ammettendo che ci sia un numero sufficiente di residui acidi o 
basici (oltre ai gr. terminali, potenzialmente occupati, e/o 
protetti/ancorati) allora dovrebbe essere possibile sciogliere 
in tampone abbastanza basico o acido (o entrambi) anche una 
proteina non idrosolubile vicino al punto isoelettrico.
Un policatione (tampone acido) e un polianione (basico) di 
solito si sciolgono molto meglio delle forme tzwitterioniche o 
già di li.
Cmq, per la successiva riduzione, il tampone acidulo è 
nettamente più adatto al cianoboridruro, quello basico poco.
Un tampone troppo acido cmq consuma molto reattivo riducente 
semplicemente distruggendolo (anche se non è il più acido 
sensibile dei boridruri, una certa reattività ce l'ha, e io non 
lo userei sotto 2,5 o proprio al limite 2, l'optimum essendo tra 
3 e 4,5 forse).
In tampone basico ti converrebbe forse usare il semplice sodio 
boridruro (che al limite si usa bene anche in acqua/metanolo).
Poi vedi tu se fare tentativi o meno, a priori non ho idea se 
alcuno funzioni
ciao
Soviet


Purtroppo tutte le informazioni che mi hai giustamente richiesto non le ho 
neppure io.
Avevo deciso di provare con un tampone leggermente basico (pH=8). Il 
boroidruro lo preferirei, ma da letteratura ho visto che non è selettivo per 
la base di schiff e potrebbe ridurmi l'aldeide. Tu sai se questo è vero 
anche a pH basico?
Grazie per tutto.
Michela
"Soviet_Mario" <Sov...@MIR.CCCP> ha scritto nel messaggio 
news:ITG_g.12449$uv5....@twister1.libero.it...


 Michela
Il sodio cianoboroidruro è un reagente selettivo per le amminazioni
riduttive, ma devi sapere che il pH in cui vanno condotte sta intorno a
6-7 altrimenti si ha riduzione del carbonile (es.: benzaldeide ridotta
ad alcol benzilico in 2 ore a pH 4). Conta poi che per mantenere il pH
a tali valori bisoggna continuamente aggiungere HCl (a volte anche solo
in MeOH anidro) per giorni, e, te lo dico io, non è uno scherzo. Il
riferimento bibliografico in cui se ne parla è:
"The Cyanohydridoborate Anion as a Selective Reducing Agent" Richard F.
Borch, Mark D. Bernstein, and H. Dupont Durst, J. Am. Chem. Soc. 93,
12, 2898 (1971)
Anche l'uso di palladio disperso su carbone non è male, perchè ti
permette di condurre la reazione in soluzione di MeOH/H2O con ammonio
formiato o HCOOH da solo (che però potrebbe formilarti qualche
ammina). Comunque ti conviene guardare l'articolo al completo:
"A modified palladium catalized reductive amination procedure",
Tetrahedron, 58, 5669 (2002).
Personalmente non l'ho mai fatta ma mi sembra un'ottima scelta, vuoi
per il solvente, vuoi per il catalizzatore non invasivo. Tieni conto
comunque che eventuali residui tiolici delle cisteine o di metionine
possono avvelenarti il catalizzatore.
Un altra metodica è quella di usare come solvente isopropanolo (od un
altro alcol a basso PM alifatico) e NaBH4 come agente riducente in
acqua e un pizzico di NaOH per evitarne la decomposizione. Una scuola
di pensiero autorevole (Freifelder & co.) afferma che l'equilibrio di
formazione dell'immina dall'aldeide e ammina non è di molto
influenzato dalla presenza di acqua nel sistema (di certo se non ne
metti a litri) e il protocollo di questa reazione si basa proprio su
questo fatto. Purtroppo non ho l'articolo sotto mano, ma ho messo sù
una reazione di questo tipo l'altro giorno ed i risultati sono stati
incoraggianti. 
Ciao e Buona foruna!

 Michela
Il sodio cianoboroidruro č un reagente selettivo per le amminazioni
riduttive, ma devi sapere che il pH in cui vanno condotte sta intorno a
6-7 altrimenti si ha riduzione del carbonile (es.: benzaldeide ridotta
ad alcol benzilico in 2 ore a pH 4). Conta poi che per mantenere il pH
a tali valori bisoggna continuamente aggiungere HCl (a volte anche solo
in MeOH anidro) per giorni, e, te lo dico io, non č uno scherzo. Il
riferimento bibliografico in cui se ne parla č:
"The Cyanohydridoborate Anion as a Selective Reducing Agent" Richard F.
Borch, Mark D. Bernstein, and H. Dupont Durst, J. Am. Chem. Soc. 93,
12, 2898 (1971)
Anche l'uso di palladio disperso su carbone non č male, perchč ti
permette di condurre la reazione in soluzione di MeOH/H2O con ammonio
formiato o HCOOH da solo (che perň potrebbe formilarti qualche
ammina). Comunque ti conviene guardare l'articolo al completo:
"A modified palladium catalized reductive amination procedure",
Tetrahedron, 58, 5669 (2002).
Personalmente non l'ho mai fatta ma mi sembra un'ottima scelta, vuoi
per il solvente, vuoi per il catalizzatore non invasivo. Tieni conto
comunque che eventuali residui tiolici delle cisteine o di metionine
possono avvelenarti il catalizzatore.
Un altra metodica č quella di usare come solvente isopropanolo (od un
altro alcol a basso PM alifatico) e NaBH4 come agente riducente in
acqua e un pizzico di NaOH per evitarne la decomposizione. Una scuola
di pensiero autorevole (Freifelder & co.) afferma che l'equilibrio di
formazione dell'immina dall'aldeide e ammina non č di molto
influenzato dalla presenza di acqua nel sistema (di certo se non ne
metti a litri) e il protocollo di questa reazione si basa proprio su
questo fatto. Purtroppo non ho l'articolo sotto mano, ma ho messo sů


 vero anche a pH basico ?
essenzialmente supponevo che la base di Shiff tu la preformassi 
e solo dopo avere completato il primo stadio passassi alla 
riduzione dell'immina.
Ti è impossibile procedere in tal modo ? E come mai, cmq ?
Per il resto non so che dirti (carino il metodo che ti ha 
indicato depchem con palladio catalitico e formiato di ammonio 
come fonte di idrogeno. Più maneggevole di così una 
idrogenazione non si può). Tra l'altro (sempre denaturazioni a 
parte) usando acido formico come reagente e solvente penso 
scioglieresti anche un macigno
ciao
Soviet
