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Titolo: Una domanda di HPLC

Perchè una colonna C18 su cui fluisce fase mobile che presenta accoppiante 
ionico (ion pair) si condiziona in molto piu' tempo (2 ore anche) di una 
normale fase mobile per colonne HPLC?
! 

 normale fase mobile per colonne HPLC?
Se nn mi sbaglio le interazioni ioniche sono quelle che richiedono un 
maggiore "tempo di scambio", ovvero uno ione che forma interazioni piů forti 
impiega molto tempo a stostituirne uno piů debole, soprattutto se 
confrontato con gli altri tipi di interazioni(dipolo o dispersive). Questo č 
anche il motivo per cui i picci in scambio ionico sono allargati.
Dato che perň la tecnica non si basa su interazioni ioniche ma su 
interazioni di london, mi sembra molto strano che servano 2 ore per 
ricondizionare la colonna, quando solitamente č un'operazione che richiede 
pochi minuti (in rapporto all'analisi) e anche personalmente o per 
conoscienza diretta nn mi č mai capitato di dover aspettare tempo cosě 
lunghi, forse potrebbe essere una cosa specifica del caso.
Si potrebbe sapere condizioni e analiti? 

 ha scritto nel messaggio 
news:xY6Ji.118208$%k.26...@twister2.libero.it...


 di 2 ore)
Questo lo devi fare una sola volta però, se poi mantieni sempre lo stesso 
controione nell'eluente. E probabilmente è leato solo al tipo di accoppiante 
che devi usare, non in generale. 

On 20 Set, 17:05, "Gianfranco Mese IV M.G.P. \(bis\)"

Mah, guarda, non saprei darti una spiegazione teorica soddisfacente,
ma so per esperienza che in effetti è una tecnica che in effetti
richiede lunghi tempi di equilibratura, tanto più se lavori a basse
lunghezze d'onda. Anche il lavaggio della colonna richiede molto
tempo, se vuoi farlo bene...
Intuitivamente però puoi ben immaginare come sia necessario flussare
parecchio eluente affinche si stabilisca l'equilibrio dinamico tra
catene C18, eluente e reattivo di scambio ionico... in altre parole
affinché la silice si "impregni" in maniera omogenea...
E' una tecnica che sembrava poter risolvere tutti i problemi di
ritenzione su C18 di composti ionici, ma dopo un primo entusiastico
momento, a quanto ne so, è stata un po' ridimensionata...
Se hai a disposizione colonne a scambio ionico potrebbe valer la pena
di testarle.
Ciao

 ha scritto nel messaggio
news:1190618037....@22g2000hsm.googlegroups.com...


Ciao
la cosa negativa e che con il parificante le colonne diventano specifiche e
andrebbero sempre usate per la stessa determinazione . Se si si tenta di
riusarle come reversefase normali cambiano maledettamente ( accorciandoli )
i tempi di ritensione dei composti, rispetto ad una eventuale letteratura
sulla farmacopea e andrebbero riviste le fasi mobili. Se apri una colonna
parificata vedrai che il riempitivo ( silice legata con c18 o c8 ) è di
colore giallo scuro, quindi modificato irreversibilmente. Io per le sostanze
ioniche utilizzavo un tampone molto forte ( es per determinare le 4 vitamine
idrosolubili utilizzavo una uBondapak C18 da 10 um, e una fase mobile di
0.3M di KH2PO4 econ lo 0.3% di ACN ). Usavo una isocratica e il ripristino
delle condizioni era velocissimo. Occhio se si usa un tampone di lavare a
lungo con H2O prima di riporre la colonna con 50/50 ACN/H2O.
enio

 enio
Appoggio in pieno il suggerimento :)
Ciao!

matrice era complessa....
La vitamina C io la determinavo con Jodio 0.1M, effettuando la classica
titolazione con indicatore Tiosfosfato. In HPLC con la C18, con le
condizioni sopradescritte di FM, a PH= 3,0 ( inutile andare al di sotto, per
eliminare il tailing, si rischia di danneggiare la colonna e l'effetto PH si
va a sommare all'effetto del tampone riducendone la vita ), tendeva ad
uscire sul Fronte Dell'onda ed era difficile da quantificare. Molto meglio
utilizzare una colonna Amminica sempre della Water e cercare le condizioni
migliori di uscita ( Rf ), magari utlizzando miscele più consone. ( tieni
conto che le colonne amminiche soffrono l'H2O sopratutto se questa supera la
concentarzione del 40% - tendono a idrolizzarsui a lungo andare ). Ottime
quest'ultime per la determinazione della vit B12 e della Cocarbossilasi ( B1
e suo estere fosforico ). Interessante sarebbe separare con la stessa
colonnau Bondapack C18 la vitamina B2 - 5- fostao. Modificando
opportunamente la FM si ottengono 8 picchi di sottocomposti ben evidenziati
( tieni conto che la B25 fosfato è all'incirca il 72%, gli altri sono
omologhi ).
enio