Newsgroup: it.scienza.chimica
Titolo: Metodo HPLC per rivelazione fosfoserina

Buongiorno a tutti!
Sto lavorando da alcuni giorni alla messa a punto di un metodo che mi
permetta di rivelare la fosfoserina all'HPLC.
Dopo aver risolto vari problemi, tra cui la salificazione in colonna (e non
vi dico per ripulirla!), sono riuscito a vederla (alla lunghezza d'onda di
210 nm), anche se male (la soluzione è alla concentrazione di circa 500 ppm,
ma il picco risultante è piuttosto basso), ma non a separare il picco
dell'analita dal picco d'iniezione. La colonna è a scambio cationico e
l'eluente è un tampone fosfato 2M a pH 3,5 con l'1% di metanolo. Ho provato
a variare la concentrazione di sale del tampone (per diminuire la
"competizione" verso i siti di scambio ionico tra gli ioni dell'analita e
quelli fosfato, e quindi aumentare il Tr della fosfoserina), ma non ho
ottenuto risultati apprezzabili.
Qualcuno conosce la pKa della fosfoserina, visto che in rete non ho trovato
nulla? Non vorrei che al pH a cui lavoro (3,5, lo ripeto) l'analita non si
trovi dissociato...
Ringrazio vivamente chi sapesse fornirmi informazioni utili (magari con una
bella metodica già confezionata, ma non pretendo tanto! :)).
A risentirci!
Alessandro
--------------------------------
Inviato via 
http://usenet.libero.it

 l'eluente č un tampone fosfato 2M a pH 3,5 con l'1% di metanolo. Ho


Ciao sono ancora io!!!
Mi č venuta un'idea...
Fase mobile A: 0.1% H3PO4 in acqua
Fase mobile B: 0.1% H3PO4 in acetonitrile
Colonna: una C18 tipo Hypersil ODS, Waters Symmetry
...e prova prima in isocratico e poi in gradiente...
..fammi sapere!!!
PS: che sistema usi???
Roberto

 2) perchč in concentrazione cosě bassa???
Il metanolo viene utilizzato per impedire che l'analita si leghi alla parte
apolare della fase stazionaria. Credo si usi metanolo perché piů "affine"
alle colonne a scambio cationico (che infatti vanno lasciate in metanolo
dopo l'utilizzo).


 PS: che sistema usi???
Caro Roberto, intanto grazie per l'interesse che dimostri verso il mio
problema!
Sono un po' restio ad utilizzare l'acetonitrile perché la scorsa volta al
mio collega era salificata la fosfoserina in colonna, e mi spiacerebbe
sporcare il sistema (tra l'altro lavoro qui da poco tempo, e non è proprio
il caso di fare "esperimenti", vista la fatica che ho fatto per trovare
lavoro!!).
Per adesso cerco di ottimizzare il metodo che mi hanno fornito, che prevede
appunto la colonna a scambio cationico.
Comunque siamo equipaggiati con un Merck Hitachi relativamente recente, con
rivelatore Diode Array.
Un buono strumento, anche se non troppo sensibile...
A risentirci!


Vedi se ti danno idee:
http://www.damicosistemas.com/novedades/AccQ-Tag-Waters.pdf
http://www.catlab.com.ar/article.php?sid=45
http://www.laboratorio-iria.org/HPLC.html
Ciao
Mauro

Il 12 Lug 2002, 16:42, "mbaudino" <maurob...@EliminarEtiscalinet.it> ha
scritto:

Grazie mille anche a te, Mauro.
Nei links che mi suggerisci si parla di derivatizzazione, ed in effetti per
una molecola come la fosfoserina (che assorbe poco o nulla nell'UV) è una
soluzione che avevamo preso in considerazione.
Prima di affrontare il discorso sul limite di rilevabilità volevamo però
risolvere i problemi cromatografici...ne parlerò lunedì con gli altri
colleghi (eh eh...per me che sono arrivato da poco però sarebbe stato
proprio bello risolvere da solo un problema su cui gli altri si cimentano da
almeno un paio di settimane...:))
Grazie ancora, e a risentirci!


 almeno un paio di settimane...:))
IMHO
E' un sistema per tagliarsi tutti i ponti:   lunedi' avresti fatto bella
figura con il tuo capo, da martedi' avresti avuto tutti i colleghi pronti a
far rilevare ogni tuo errore, vero o presunto. Sicuro che sei gia' in grado
di condurre una battaglia?
Ciao
MB

 di condurre una battaglia?
Quello che dici è senz'altro vero, sono qui da un mese (in stage,
oltretutto) e di certo non fa piacere inimicarsi gli altri (anche se il mio
diretto superiore, quello che si è sbattutto per due settimane con questa
maledetta fosfoserina, lavora qui da circa un anno ed è un mio caro amico,
avendo fatto la tesi insieme ed essendoci laureati lo stesso giorno).
Forse è meglio così, anche se io non sono il tipo che si "vanterebbe" per
aver risolto il problema.
Comunque è tanto triste quanto vero constatare come gli ambienti di lavoro
siano così "avvelenati".
Ciao ciao.
