Newsgroup: it.scienza.chimica
Titolo: consiglio HPLC

Ciao a tutti, volevo chiedervi un consiglio. avendo una apparecchiatura HPLC
con rilevatore UV a quale lunghezza d'onda vi piazzereste se doveste
analizzare un estere? L'estere è metilato e la coda derivante dall'acido puo
contenere 5-6 atomi di C. Penso che il gruppo cromoforo sia il carbonile ma
secondo voi la grandezza dell'estere influisce sulla scelta della lunghezza
d'onda?
--------------------------------
Inviato via 
http://arianna.libero.it/usenet/

 analizzare un estere?
Uhm... già le ammidi non è che si vedano granché all'UV, ma con un estere 
alifatico la vedo ancora più dura. Ad ogni modo proverei con 210 nm.
Tex 

 alifatico la vedo ancora più dura. Ad ogni modo proverei con 210 nm.
Concordo, naturalmente.
E aggiungerei che, per migliorare la sensibilità, è consigliabile
ovviamente utilizzare una fase mobile il più trasparente possibile,
per esempio (per la fase inversa) acetonitrile-acqua (l'acetonitrile
assorbe meno del metanolo, e se l'estere non contiene gruppi
ionizzabili è inutile tamponare con sali).
E' presumibile che l'estere sarà molto trattenuto, per cui dovrai
andarci giù pesante con l'acetonitrile...
Vale sempre questa legge: la fase mobile migliore è quella più
semplice... :)

per esempio (per la fase inversa) acetonitrile-acqua
Se mi ricordo bene la lunghezza di cut off(250 nm o 270) dell'acetonitrile 
non permette l'analisi a quelle lunghezze d'onda 

 non permette l'analisi a quelle lunghezze d'onda
Ora, non so i dati di cut-off, però le analisi le faccio molto spesso a 
quella lunghezza d'onda (210 nm), anche a percentuali abbondanti di 
acetonitrile (60%), e non ho problemi. E' vero anche che, di solito, ho un 
cromoforo aromatico, per cui non ho problemi di sensibilità.
Tex 

 non permette l'analisi a quelle lunghezze d'onda
Il cutoff dell'acetonitrile è ca 200nm, è uno dei solventi organici
più trasparenti all'UV... Non è che ti confondi con l'acetone?

Una volta tentai con successo una operazione al contrario ovvero feci 
una fase mobile che assorbiva moltissimo a una certa lunghezza d'onda e 
vedevo gli eluati in modo inverso ovvero picchi al contrario.
Infatti quando passavano composti diversi si aveva un calo durissimo 
sull'assorbanza. Dato che mi apparivano al contrario sul rivelatore ho 
invertito la polarità di questo ed è venuta una analisi molto buona.



Già... quello dei picchi negativi è un fenomeno che si presenta
frequentemente, per esempio, con la tecnica della coppia ionica (si
aggiungono alla fase mobile additivi, tipicamente tensioattivi in
concentrazione 1mM, che interagiscono sia con le catene C18 che con
analiti ionizzabili, in modo da riuscire a trattenerli anche in fase
inversa), dove la fase mobile è appunto poco trasparente all'UV.
Ma, a parte la curiosità dell'esperimento, sei sicuro che fosse
veramente necessario operare in quelle condizioni?
Non era meglio utilizzare una fase mobile molto trasparente?

Sembra che Snautzer abbia detto :

Avevo provato un po di tutto e il sercondo rivelatore a indice di 
rifrazione pur rispondendo mi dava un segnale debole che con le piccole 
concentrazioni analizzate era penalizzante.
Ho tentato questa soluzione in quel particolare frangente ed è andata 
benissimo, anzi credo che dove lavoravo la utilizzano ancora...

 ha scritto nel messaggio
news:Q7AQh.45966$zG1.4...@twister2.libero.it...

ti ricordi malissimo perchè un acetonitrile della merck uvasol per hplc
scende anche a 190 nm. Io addirittura riuscivo a vedere gli ftalati a 210
nm. Devi semplicemente aver pazienza nello stabilizzare la linea di base
perchè dovrai usare delle sensibilità abbastanza forti.