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Titolo: enzimologia clinica

Salve a tutti!
Come si effettua praticamente il dosaggio deggli enzimi sierici? Si misura 
l'attività enzimatica o cosa? Insomma: perchè non si fa come per l'albumina 
della quale si misurano i grammi per unità di volume ematico?
Grazie 

 grammi per unità di volume ematico?
A volte lo si fa pure per gli enzimi, ma le ragioni sono storiche ed 
economiche.
Un enzima e' una molecola proteica, che fa una certa funzione (facilita un 
determinata reazione chimica) e in clinica viene usata banalmente come 
marcatore d'organo (teoria e pratica insegnano che i muscoli sono ricchi di 
CK, quindi l'innalzamento della CK riflettera' lesioni muscolari).
Il modo piu' economico di dosare un enzima e' quello che avviene dandogli in 
pasto il suo substrato e guardandolo lavorare. Ad esempio aggiungi una 
emulsione di olio, e gurdi la diminuzione di torbidita' mentre la lipasi lo 
chiarifica. Oppure  aggiungi del nitrofenilfosfato incolore e poi stai a 
guardare la fosfatasi mentre stacca il fosfato e produce nitrofenolo, che e' 
di un bel giallo brillante. Olio e fenilfosfato li compri in drogheria e 
quindi l'analisi costa molto poco.
In alternativa si potrebbe andare a misurare quella molecola proprio in 
quanto molecola, separandola da altre molecole proteiche sulla base di sue 
caratteristiche strutturali (ad esempio con metodi cromatografici, 
immunologici o elettroforetici). Questo approccio e' piu' costoso, richiede 
attrezzature, richiede anticorpi antienzima, ecc.
Tutte le volte che un enzima e' usato come marcatore d'organo ed e' 
ragionevolmente specifico nella sua attivita' catalitica, lo si dosa con 
metodo funzionale e lo si esprime in U/L o nkat/L.
Quando l'attivita' non basta, si passa al dosaggio della molecola e la si 
esprime in unita' di massa. Ad esempio il CKMB cardiospecifico puo' essere 
dosato tanto come enzima che come massa; la fosfatasi acida prostatica puo' 
essere dostata come enzima o come molecola (PAP), ecc.
A questo punto, se misuri delle molecole in unita' di massa,  non ha piu' 
neanche importanza che la molecola-marcatore sia un enzima, una proteina 
funzionale o un vattelapesca di passaggio. Ha importanza solo che sia 
organo-specifica. Ad esempio la troponina I oT che si usa per fare diagnosi 
di infarto, non e' un enzima ma una proteina funzionale (fa parte delle 
fibrille contrattili). Il PSA, che si usa come indicatore di neoplasia 
prostatica, viene misurato in unita' di massa (nanogrammi) e nessuno si 
interessa del fatto che di mestiere sarebbe un enzima (e' una 
fosfotransferasi).
Ciao
B.

 richiede attrezzature, richiede anticorpi antienzima, ecc.
OK, ma ho un dubbio. I metodi da te elencati (metodi cromatografici, 
immunologici o elettroforetici) servono solo a separare o anche a 
quantificare? Cioè: una volta separata l'isoforma CK-MB con elettroforesi o 
altro, posso quantificare l'enzima sia come massa che come attività? Oppure 
le metodiche da te indicate implicano necessariamente che si debba 
quantificare la sola massa?
Inoltre: perchè dell'isoenzima da me appena citato si fanno sia massa che 
attività?
Grazie
Grazie 

 attività?
Il peso della tradizione. I dosaggi catalitici sono stati i primi e, con 
vari limiti (soprattutto di sensibilita'), funzionano abbastanza. I dosaggi 
immunologici del CKMB massa sono piu' sensibili ma molto piu' costosi e a 
volte richiedono strumentazione dedicata.
Esistono anche le saponette bedside immunocromatografiche, con apposito 
reader dedicato, basta aver voglia di spendere...

 inattive, sarebbero sfuggite alla determinazione.
Ciao e grazie.
Ho un ultimo dubbio. Ho visto un tracciato che mostra le attività 
percentuiali di MB1 e MB2, le sotto-isoforme di CK2, e le loro variazioni 
nel tempo.
Questo tipo di traciato veniva realizatop come spieghi qui sopra? E se il 
procedere della reazione non determinasse variazioni cromatiche? Nel caso le 
determinasse, come si quantificano?
Ho letto che le normali bande elettroforetiche si quantificano con metodo 
densitometrico, mentre, per esempio, le reazioni colorimetriche nei pozzetti 
di una piastra per ELISA si quantificherebbero con metodo 
spettrofotometrico: è giusto?
Infine: il mio programma parla di unità di misura nel sistema convenzionale 
ed in quello internazionale: di che si tratta? Non lo trovo da nesuna parte. 
Tu mi hai spiegato la grandezza composta U/l ed il katal, per le attività 
enziamtiche. E' la stessa cosa che UI (o IU)? Ma questa unità di misura la 
trovo anche per gli ormoni o le vitamine: che c'entra con l'attività?
Grazie mille. 

 vitamine: che c'entra con l'attività?
Niente, quelle sono unita' arbitrarie. L'espressione del risultato in unita' 
va definita in metodica.
Ciao

 unita' va definita in metodica.
In che modo si stabilisce quanta b-hCG rappresenti una mU?
Infine: ho studiatoc he sideremia e TIBC sio valutano con metodo 
colorimetrico: si aggiunge un cromogeno che si lega al ferro. Poi si 
quantifica l'intensità di colore (come? Spettrofotometricamente?) e si 
risale alle grandezze cercate: è giusto?
Ultimissimo dubbio pre esame (poi ti dedico il voto ;-))
Non ho capitoil MCHC. Per me, affinche possa esprimere una la concetrazione 
di Hb nel globulo, bisognerebbe dividere per l'ematocrito la concentrazione 
ematica di Hb.
Se in un litro di sangue vi sono 100  gr di Hb (tanto per dire un numero), 
ed il 50% di quel litro è costituito da GR, allora MCHC dovrebbe essere 
uguale a  100/(50/100) = 200 gr/l. Perchè  ovunque trovo per MCHC un valore 
percentuale?
Grazie mille.
Ciao

 percentuale?
Burundilandia! Vetusta ed errata modalita' di espressione dei valori.
La percentuale andrebbe limitata all'espressione di proporzioni fra analiti 
congruenti. Tipo: la carbossiemoglobina e' una percentuale dell'emoglobina 
totale, il CKMB e' una percentuale del CK totale (si confrontano Hb con Hb, 
CK con CK ecc.). E anche li', sarebbe meglio usare la "frazione di uno" (non 
45% ma 0,45).
Quando invece, come nel caso del MCHC, stai confrontando una quantita' 
ponderale (il peso dell'emoglobina nei globuli rossi impaccati) con un 
volume di sangue, devi dire grammi a litro, grammi a decilitro e cosi' via. 
Purtroppo poiche' un decilitro sono 100 millilitri e il millilitro, detto 
anche "centimetro cubo" o "cubico" tout court, e' l'unita' di volume piu' 
usata in laboratorio, viene spesso usata la dizione tipo "33 grammi per 100 
cubici " che poi viene ulteriormente volgarizzata  in 33 %.
Essa in realta' vale 33 g/dL ossia 330 g/L.
L'espressione del MCHC in % e' tradizionalmente diffuso,  ma non e' una 
regola, es. noi lo esprimiamo in g/dL e se fossimo rigorosi useremmo le 
unita' primitive SI quindi g/L.
Un litro di emazie impaccate contiene da 320 a 360 grammi di proteina 
emoglobina, se ne contiene di meno vuol dire che le emazie sono smorte, di 
piu' invece non e' possibile contenerne, perche' sopra il 37 g/dL la 
proteina "non ci sta" e inizia a precipitare. E' un limite fisico e se in un 
emocromo trovi un MCHC superiore a 37 g/dL, vuol dire che c'e' stato un 
errore strumentale (di solito la macchina ha sottostimato il conteggio dei 
rossi e quindi l'ematocrito, quindi attribuisce la giusta emoglobina a un 
minor numero di emazie e a ogni globulo gliene attribuisce piu' del lecito).
Ciao

 percentuale?
Burundilandia! Vetusta ed errata modalita' di espressione dei valori.
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 per 100 cubici " che poi viene ulteriormente volgarizzata  in 33 %.
Sě, lo avevo immaginato, ma non volevo crederci. Da un punto di vista 
dimensionale non ha nessunissimo significato qella escalation di 
generalizzazioni ed approssimazioni che porta da 30g/100ml  a 30%. :-)
Grazie ancora.
Ciao 

 a 37 g/dL, vuol dire che c'e'  stato un errore strumentale 
ma allora quando si dice che nella sferocitosi ereditaria si trova un 
MCHC aumentato rispetto alla norma per via della disidratazione delle 
emazie, che si intende? esattamente 37? :)
-- 
ciao
Es
ICQ 223465821 - MSN enrico81 chiocciola/at gmail punto/dot com
"isolated idiopathic hemiballismus is always an appropriate excuse"