Resolución C 24 / 2003
INSTITUTO NACIONAL DE VITIVINICULTURA (I.N.V.)
Fecha de publicación: 2003-08-25

INSTITUTO NACIONAL DE VITIVINICULTURA  Resolución C. 24/2003  Oficialízase el Método de Determinación de la Relación Isotópica 18O/16O del Agua Contenida en los Vinos. Validación del mencionado método. Mendoza., 19/8/2003  VISTO el Expediente N° 311-000406-2003-7, y  CONSIDERANDO: Que por citado expediente se tramita la Oficialización del Método de Determinación de Relaciones Isotópicas del Oxígeno en el Agua de los Vinos por Espectrometría de Masas. Que dicha determinación posibilita el control de la autenticidad de vinos y mostos a través del valor de la relación isotópica de los isótopos estables del oxígeno, 18O/16O, efectuada sobre el agua del vino, mediante un equipo Espectrómetro de Masas de Relaciones Isotópicas de Isótopos Estables (IRMS). Que el factor responsable de dicha relación es el fraccionamiento isotópico que se produce en los procesos de asimilación y evapotranspiración del agua en la planta. Que desde 1996 esta determinación es la base del Método Oficial de la OFICINA INTERNACIONAL DE LA VIÑA Y EL VINO (O.I.V.) para establecer el origen del agua de los vinos. Que la REPUBLICA ARGENTINA es país miembro de la O.I.V., representación ejercida por el INSTITUTO NACIONAL VITIVINICULTURA, y ha participado en la aprobación de este Método Que desde el momento de su aprobación, de acuerdo al Reglamento CEE N° 822/87, es un método aplicable en los estados miembros de la Unión Europea. Que este método ha sido validado con la participación de Organismos de reconocido prestigio internacional y dicha validación ha sido publicada conjuntamente con el Método en el Boletín de Ia O.I.V. Vol. 70 - Enero-Febrero 1997, pág. 45-65. Que este método permite detectar si un vino o mosto ha sido adicionado de agua exógena y evaluar su grado de adición. Que esta determinación tiene el respaldo científico suficiente como para adoptarse como norma de control oficial por el INSTITUTO NACIONAL DE VITIVINICULTURA. Por ello, y en uso de las facultades conferidas por la Ley N° 14.878 y los Decretos Nros. 1279/ 03 y 1280/03,  EL PRESIDENTE DEL INSTITUTO NACIONAL DE VITIVINICULTURA RESUELVE: 1° — Oficializar el METODO DE DETERMINACION DE LA RELACION ISOTOPICA 18O/16O DEL AGUA CONTENIDA EN LOS VINOS que, junto a su VALIDACION, obran como Anexo a la presente resolución, en sus versiones en idioma español. 2° — Regístrese, comuníquese, dése a la Dirección Nacional del Registro Oficial para su publicación y cumplido, archívese. — Enrique L. Thomas. ANEXO A LA RESOLUCION N° C.24/03  METODO DE DETERMINACION DE LA RELACION ISOTOPICA 18O/16O DEL AGUA CONTENIDA EN LOS VINOS DESCRIPCION DEL METODO  1. Objetivo del método  El objetivo del método es medir la relación isotópica 18O/16O del agua de diferentes orígenes. La relación isotópica 18O/16O puede ser expresada como la desviación ‰ con relación al valor de la relación isotópica de la referencia Internacional V.SMOW:  2. Principio  La relación isotópica 18O/16O es determinada por espectrometría de masa de relaciones isotópicas (IRMS) a partir de las corrientes iónicas m/z 46 (12C16O18O) y m/z 44 (12C16O2) producidas por el dióxido de carbono obtenido luego del intercambio con el agua del vino según la reacción: C16O2 + H2 18O ó C16O18O + H2 16O  El dióxido de carbono de la fase gaseosa se utiliza para el análisis. 3. Reactivos  — Dióxido de carbono para análisis. — SMOW (Standard Mean Ocean Water). — GISP (Greenland lce Sheet Precipitation). — SLAP (Standard Light Arctic Precipitation). — Agua de referencia propia del laboratorio, cuidadosamente contrastada con relación a la muestra de referencia de la International Agency of Atomic Energy in Vienna (IAEA). 4. Equipamiento de laboratorio  — Espectrómetro de masa de relaciones isotópicas con una repetibilidad interna de 0,05‰. — Triple colector para registro simultáneo de iones m/z 44, 45 y 46, o en su defecto, doble colector para la medición de los iones m/z 44 y 46. — Sistema termostatizado (+ 0,5°C) para realizar el equilibrado entre CO2 y el agua del vino. — Bomba de vacío que pueda alcanzar una presión interna de 0,13 Pa. — Frascos para muestra con un volumen de 15 ml y un tubo capilar anexo de un diámetro interno del orden de 0,015 mm. — Pipeta Eppendorf con cono de plástico descartable. 5. Determinaciones experimentales  5.1. Método manual: a- Procedimiento del método de equilibrado. — Introducción de la muestra  — Tomar la pipeta Eppendorf de volumen fijo de 1,5 ml, adaptar un cono y pipetear el líquido a analizar para introducirlo en un balón. Luego colocar grasa de siliconas alrededor del cuello del balón y adaptar el balón a la válvula verificando que ésta esté bien cerrada. — Repetir la operación para cada balón de la batería de trabajo, introduciendo agua de referencia del laboratorio en uno de los balones. b- Eliminación del gas de la batería: Se enfrían las dos baterías con nitrógeno líquido, luego abriendo las válvulas, se purga todo el sistema hasta 0,1 mm de Hg. Se cierran las válvulas y se deja calentar el conjunto. Se repite el ciclo de eliminación de gas hasta que no haya más variación de presión. c- Equilibrado del agua y del CO2: Se enfría la batería de trabajo a - 70°C (mezcla de nitrógeno líquido y alcohol) para congelar el agua y se coloca el conjunto al vacío. Luego de estabilizar al vacío, se aísla la batería por medio de una válvula y se purga el sistema por introducción de CO2. Se introduce CO2 gaseoso en la batería de trabajo y luego de haberla aislado del resto del sistema, se introduce la batería en el baño termostatizado a 25°C (± 0,5°C) durante 12 horas (una noche). Para optimizar el tiempo para el equilibrado, se aconseja preparar las muestras al final de la jornada y permitir que se establezca el equilibrio durante la noche. d- Transferencia del CO2 intercambiado en las celdas de medición  Sobre la línea de vacío, al lado de la batería de trabajo, se adapta un portamuestras que soporta tantas celdas de medición como balones que contengan CO2 intercambiado. Las celdas vacías son cuidadosamente purgadas y los gases intercambiados contenidos en los balones, son sucesivamente transferidos a las celdas de medición, enfriadas con nitrógeno líquido. Luego se dejan calentar las celdas de medición a temperatura ambiente. 5.2. Utilización de un aparato de intercambio automático  Con el fin de realizar el equilibrado, se llenan los frascos de muestras, ya sea con 2 ml de vino o 2 ml de agua (referencia de trabajo del laboratorio), se enfrían a -18°C. Los portamuestras que contienen los productos congelados, son adaptados al sistema de equilibrado y luego de haber realizado el vacío en el sistema, se introduce el dióxido de carbono a una presión de 800 hPa. El equilibrio se alcanza a una temperatura de 22 ± 0,5°C luego de un período mínimo de 5h y bajo agitación moderada. Dado que la duración del equilibrado depende de la geometría del frasco, la duración óptima debe ser determinada previamente para el sistema utilizado. El dióxido de carbono contenido en los frascos es luego transferido a la cámara de introducción del espectrómetro de masa por un tubo capilar, y la medición es efectuada según un protocolo apropiado a cada tipo de equipo. 6. Cálculo y expresión de los resultados  La diferencia relativa ’ de la relación de las intensidades de los iones m/z 46 y 44 (I46/I44) entre la muestra y la referencia, es expresada en ‰ por medio de la siguiente relación:  El tenor de 18O de la muestra con relación a la referencia V.SMOW en la escala V.SMOW-SLAP, está dada por la relación:  El valor aceptado para el agua del SLAP es igual a -55,5 ‰ con relación al V.SMOW. La relación isotópica de la referencia debe ser determinada después de cada serie de 10 mediciones con muestras desconocidas. 7. Fidelidad  — la repetibilidad (r) es igual a 0,24 ‰  — la reproducibilidad (R) es igual a 0,50 ‰  VALIDACION DEL METODO DE DETERMINACION DE LA RELACION ISOTOPICA 18O/16O DEL AGUA CONTENIDA EN LOS VINOS ESTUDIO COLABORATIVO INTERLABORATORIOS  1. Participantes  El estudio interlaboratorios ha sido realizado con la participación de 14 laboratorios de Alemania, Francia, Italia, Países Bajos, Reino Unido y Suiza. 2. Muestras  Muestras 1 y 2: agua de canilla local (2 muestras idénticas)    Muestra 3: Vino blanco   A    Muestra 4: Vino tinto   B + 20 % de agua    Muestra 5: Vino tinto   B    Muestra 6: Vino blanco   A + 3 % de agua    Muestra 7: Vino blanco   A + 7 % de agua    Muestra 8: Vino tinto   B + 5 % de agua    Muestra 9: Vino tinto   B + 10 % de agua    Muestra 10: Vino blanco   A + 15 % de agua    3. Cantidad de repeticiones. Se han realizado tres determinaciones sobre cada muestra. 4. Evaluación estadística de los resultados correspondiente a la norma ISO 5725: 1986. 4.1. Prueba de la varianza máxima. Se utiliza la prueba de Cochran para determinar si la varianza de las determinaciones de un laboratorio es significativamente mayor que la de los otros laboratorios. 4.2. Prueba sobre el promedio  La prueba de Dixon de dos colas permite verificar si el menor o mayor promedio puede ser considerado como atípico. 5. Resultados  Los resultados están indicados en los cuadros posteriores. Los laboratorios 8, 11 y 12 presentaron valores atípicos y han sido excluidos del cálculo de la repetibilidad r y de la reproducibilidad R. MUESTRA 1    Lab N°  1  2  3  n    s  s2   1  -8,29  -8,33  -8,36  3  -8,324  0,0356  0,0013   2  -7,96  -7,67  -7,82  3  -7,817  0,1465  0,0215   3  -8,64  -8,24  -8,76  3  -8,546  0,2697  0,0727   4  -8,29  -8,22  -8,30  3  -8,270  0,0436  0,0019   5  -8,27  -8,13  -8,26  3  -8,220  0,0781  0,0061   6  -8,20  -8,21  -8,23  3  -8,213  0,0153  0,0002   7  -8,25  -8,23  -8,30  3  -8,260  0,0361  0,0013   8*  -8,61  -8,47  -8,52  3  -8,531  0,0726  0,0053   9  -8,29  -8,29  -8,31  3  -8,295  0,0103  0,0001   10  -8,35  -8,24  -8,40  3  -8,297  0,0856  0,0073   11 *  -9,12  -9,19  -9,40  3  -9,237  0,1457  0,0212   12 *  -7;64  -7,82  -7,97  3  -7,810  0,1652  0,0273   13  -7,96  -8,06  -7,97  3  -7,999  0,0541  0,0029   14  -8,30  -8,20  -8,30  3  -8,267  0,0577  0,0033     MUESTRA 2    Lab N°  1  2  3  n    s  s2   1  -8,37  -8,33  -8,38  3  -8,359  0,0257  0,0007   2  -7,85  -8,16  -8,08  3  -8,032  0,1600  0,0256   3  -8,29  -7,96  -8,30  3  -8,184  0,1943  0,0378   4  -8,34  -8,30  -8,28  3  -8,307  0,0306  0,0009   5  -8,26  -8,19  -8,22  3  -8,223  0,0351  0,0012   6  -8,34  -8,26  -8,31  3  -8,303  0,0404  0,0016   7  -8,22  -8,29  -8,29  3  -8,267  0,0404  0,0016   8*  -8,35  -8,59  -8,51  3  -8,485  0,1246  0,0155   9  -8,29  -8,30  -8,16  3  -8,252  0,0766  0,0059   10  -8,27  -8,28  -8,03  3  -8,196  0,1412  0,0199   11*  -9,13  -9,31  -9,22  3  -9,233  0,0929  0,0086   12*  -7,57  -7,90  -8,30  3  -7,923  0,3656  0,1336   13  -7,97  -8,07  -7,98  3  -8,002  0,0544  0,0030   14  -8,20  -8,30  -8,30  3  -8,267  0,0577  0,0033     MUESTRA 3    Lab N°  1  2  3  n    s  s2   1  -1,69  -1,61  -1,56  3  -1,622  0,0661  0,0044   2  -1,49  -1,30  -1,51  3  -1,433  0,1175  0,0138   3  -1,78  -1,69  -1,55  3  -1,674  0,1120  0,0125   4  -1,52  -1,49  -1,41  3  -1,473  0,0569  0,0032   5  -1,47  -1,43  -1,48  3  -1,460  0,0265  0,0007   6  -1,33  -1,26  -1,22  3  -1,270  0,0557  0,0031   7  -1,72  -1,76  -1,71  3  -1,730  0,0265  0,0007   8*  -1,98  -1,87  -1,53  3  -1,791  0,2336  0,0546   9  -1,54  -1,54  -1,45  3  -1,510  0,0577  0,0033   10  -1,64  -1,60  -1,60  3  -1,612  0,0269  0,0007   11*  -3,64  -2,74  -3,12  3  -3,167  0,4518  0,2041   12*  -1,50  -1,95  -2,13  3  -1,860  0,3245  0,1053   13  -1,33  -1,40  -1,36  3  -1,362  0,0384  0,0015   14  -1,80  -1,80  -1,70  3  -1,767  0,0577  0,0033     MUESTRA 4    Lab N°  1  2  3  n    s  s2   1  3,37  3,51  3,29  3  3,388  0,1077  0,0116   2  3,82  3,64  4,07  3  3,845  0,2185  0,0477   3  3,67  3,98  3,92  3  3,856  0,1627  0,0265   4  3,59  3,64  3,63  3  3,620  0,0265  0,0007   5  3,71  3,78  3,74  3  3,743  0,0351  0,0012   6  3,46  3,33  3,37  3  3,387  0,0666  0,0044   7  3,30  3,36  3,42  3  3,360  0,0600  0,0036   8*  3,18  3,29  3,22  3  3,231  0,0564  0,0032   9  3,51  3,54  3,56  3  3,538  0,0260  0,0007   10  3,57  3,39  3,61  3  3,523  0,1149  0,0132   11*  2,00  1,93  2,07  3  2,000  0,0700  0,0049   12*  2,69  2,76  2,60  3  2,683  0,0802  0,0064   13  3,80  3,63  3,78  3  3,739  0,0918  0,0084   14  3,50  3,40  3,40  3  3,433  0,0577  0,0033     MUESTRA 5    Lab N°  1  2  3  n    s  s2   1  6,60  6,72  6,59  3  6,635  0,0748  0,0056   2  7,18  7,04  7,33  3  7,179  0,1445  0,0209   3  6,98  7,18  6,80  3  6,986  0,1895  0,0359   4  7,00  7,03  7,08  3  7,037  0,0404  0,0016   5  7,05  7,11  7,09  3  7,083  0,0306  0,0009   6  6,69  6,70  6,63  3  6,673  0,0379  0,0014   7  6,48  6,60  6,55  3  6,543  0,0603  0,0036   8*  6,57  6,61  6,49  3  6,553  0,0616  0,0038   9  6,96  6,92  6,90  3  6,925  0,0295  0,0009   10  6,87  6,74  6,84  3  6,816  0,0690  0,0048   11*  5,06  4,76  5,24  3  5,020  0,2425  0,0588   12*  5,87  5,61  5,29  3  5,590  0,2905  0,0844   13  7,04  6,88  6,99  3  6,970  0,0841  0,0071   14  6,90  6,60  6,70  3  6,733  0,1528  0,0233     MUESTRA 6   Lab N°  1  2  3  n    s  s2   1  -1,87  -1,79  -1,84  3  -1,831  0,0407  0,0017   2  -1,67  -1,50  -1,41  3  -1,525  0,1293  0,0167   3  -1,75  -1,68  -1,86  3  -1,762  0,0905  0,0082   4  -1,84  -1,80  -1,76  3  -1,800  0,0400  0,0016   5  -1,65  -1,65  -1,75  3  -1,683  0,0577  0,0033   6  -1,70  -1,74  -1,64  3  -1,693  0,0503  0,0025   7  -1,93  -1,85  -1,96  3  -1,913  0,0569  0,0032   8*  -3,58  -3,45  -3,11  3  -3,380  0,2449  0,0600   9  -1,84  -1,77  -1,83  3  -1,812  0,0332  0,0011   10  -1,81  -2,02  -1,79  3  -1,871  0,1300  0,0169   11*  -3,42  -2,97  -2,76  3  -3,050  0,3372  0,1137   12*  -2,39  -2,63  -2,81  3  -2,610  0,2107  0,0444   13  -1,76  -1,80  -1,76  3  -1,775  0,0241  0,0006   14  -2,00  -2,10  -1,90  3  -2,000  0,1000  0,0100     MUESTRA 7    Lab N°  1  2  3  n    s  s2   1  -1,90  -1,94  -1,95  3  -1,929  0,0229  0,0005   2  -1,94  -1,79  -1,69  3  -1,803  0,1275  0,0163   3  -2,00  -2,04  -2,22  3  -2,086  0,1199  0,0144   4  -2,08  -2,04  -1,94  3  -2,020  0,0721  0,0052   5  -1,94  -1,88  -1,91  3  -1,910  0,0300  0,0009   6  -2,07  -2,06  -2,18  3  -2,103  0,0666  0,0044   7  -2,21  -2,28  -2,19  3  -2,227  0,0473  0,0022   8'  -3,23  -3,74  -3,28  3  -3,417  0,2773  0,0769   9  -2,08  -2,06  -2,10  3  -2,081  0,0206  0,0004   10  -2,10  -2,19  -2,02  3  -2,104  0,0820  0,0067   11*  -3,55  -3,66  -3,18  3  -3,463  0,2515  0,0632   12*  -2,59  -2,86  -3,06  3  -2,837  0,2359  0,0556   13  -1,70  -2,00  -1,75  3  -1,818  0,1599  0,0256   14  -2,20  -2,40  -2,30  3  -2,300  0,1000  0,0100     MUESTRA 8    Lab N°  1  2  3  n    s  s2   1  5,80  5,96  5,93  3  5,896  0,0876  0,0077   2  6,50  6,28  6,45  3  6,410  0,1155  0,0133   3  6,02  6,20  6,07  3  6,097  0,0926  0,0086   4  5,85  6,02  5,98  3  5,950  0,0889  0,0079   5  6,04  6,15  6,20  3  6,130  0,0819  0,0067   6  5,97  6,01  5,99  3  5,990  0,0200  0,0004   7  5,88  5,89  5,93  3  5,900  0,0265  0,0007   8*  5,70  5,07  5,49  3  5,418  0,3191  0,1018   9  6,09  6,05  6,14  3  6,091  0,0458  0,0021   10  6,01  5,83  6,03  3  5,960  0,1107  0,0123   11*  4,50  4,66  4,57  3  4,577  0,0802  0,0064   12*  5,22  4,90  4,60  3  4,907  0,3101  0,0961   13  5,93  5,86  5,92  3  5,905  0,0409  0,0017   14  5,90  5,90  5,90  3  5,900  0,0000  0,0000     MUESTRA 9    Lab N°  1  2  3  n    s  s2   1  5,10  4,98  5,14  3  5,070  0,0823  0,0068   2  5,65  5,38  5,66  3  5,560  0,1603  0,0257   3  5,33  5,11  5,07  3  5,171  0,1407  0,0198   4  5,19  5,23  5,28  3  5,233  0,0451  0,0020   5  5,40  5,45  5,39  3  5,413  0,0321  0,0010   6  5,17  5,21  5,14  3  5,173  0,0351  0,0012   7  4,93  4,87  4,88  3  4,893  0,0321  0,0010   8*  4,30  4,65  4,38  3  4,441  0,1807  0,0327   9  5,00  5,19  5,02  3  5,071  0,1069  0,0114   10  5,28  5,14  5,23  3  5,215  0,0728  0,0053   11*  3,86  3,75  3,81  3  3,807  0,0551  0,0030   12*  4,71  4,14  4,10  3  4,317  0,3412  0,1164   13  5,30  5,07  5,23  3  5,197  0,1176  0,0138   14  5,10  5,20  5,00  3  5,100  0,1000  0,0100     MUESTRA 10    Lab N°  1  2  3  n    s  s2   1  -2,53  -2,68  -2,51  3  -2,571  0,0912  0,0083   2  , -2,15  -2,53  -2,22  3  -5,301  0,2019  0,0408   3  -2,55  -2,52  -2,63  3  -2,567  0,0604  0,0036   4  -2,64  -2,53  -2,52  3  -2,563  0,0666  0,0044   5  -2,20  -2,37  -2,43  3  -2,333  0,1193  0,0142   6  -2,78  -2,65  -2,75  3  -2,727  0,0681  0,0046   7  -2,75  -2,87  -2,85  3  -2,823  0,0643  0,0041   8*  -3,58  -3,40  -2,90  3  -3,295  0,3527  0,1244   9  -2,82  -2,74  -2,81  3  -2,789  0,0464  0,0022   10  -2,91  -2,76  -2,61  3  -2,761  0,1520  0,0231   11*  -3,99  -4,00  -4,02  3  -4,003  0,0153  0,0002   12*  -2,21  -2,43  -2,51  3  -2,383  0,1553  0,0241   13  -2,43  -2,60  -2,46  3  -2,498  0,0904  0,0082   14  -2,80  -2,80  -2,70  3  -2,767  0,0577  0,0033     Resumen de los resultados estadísticos