質問: 96wellプレートかたの細胞のはがし方について 基本的な質問で申し訳ありません。 現在、96wellプレートでhela細胞の増殖曲線を描こうとしています 最初の1,2日目は比較的きれいにはがれるのですが、その後日を経るにつれてはがれが悪くなってしまい、きれいにはがすことが出来ず、正確な数が測定出来ない状態です。 プロトコールとしては、培地を除去した後に、20μlの0.05%トリプシンを処理後、37°Cで3分間インキュベートし、その後80μlの培地を入れてピペッティングを行うことではがしています。(ちなみに20μlではwell全体にいきわたっておらずそれも原因の一つかと考えております。) もともとトータルの液量もあまり多くないため、全体をはがそうとして、ピペッティングの回数を増やしますと、泡だってしまうのでそれもどうにか避けたい状況です。 96wellプレートで、細胞の良いはがし方がありましたら教えていただけると光栄です。宜しくお願いいたします。
回答: >20μlではwell全体にいきわたっておらずそれも原因の一つかと考えております 一度全体にいきわたる量のトリプシンで浸したあと、取り除いて20μlのトリプシンを入れてみてください。