質問: q-6. 脂質ラフトマーカーがaバッファー可溶性画分に観察されます。何か改善策はありますか?
回答: a-6. 他の手法で脂質ラフトマーカーとして検出されたタンパク質がaバッファー不溶性画分に得られることを保証できません。特に脂質ラフトマーカーによっては細胞種や組織,外部シグナルの有無によっても変動する可能性があります。下記にケースに応じて改善策を記載しますので,ご参照下さい。例1:1% tritonx-100に対して不溶性だが,ripaバッファーで可溶性画分に検出される改善プロトコル:1% tritonx-100より抽出力の強いripaバッファー(1% np-40, 0.1% sds, 0.5% sodium deoxycholate)で可溶化できる可能性があります。その場合,aバッファーの代わりに1% tritonx-100バッファーを用いることで,目的タンパク質の濃縮・および可溶化がおこなえる可能性があります。例2:遠心条件が不十分な場合で,不溶性だが沈殿にならない改善プロトコル:遠心条件は10,000×g以上を推奨しておりますが、目的のタンパク質によって遠心条件が10,000×gでも不十分な場合があります。その場合,遠心条件を20,000×g程度にすることで改善が見られたケースがありますので、遠心分離の条件を検討することを推奨いたします。