質問: ベクターとインサートの両端をそれぞれ2種類の異なる酵素でカットした場合、順向きにしかインサートは入らないのでしょうか?
回答: 単に二種類の酵素で切るってところがポイントでなくて、二種類で切ったときに切り口が合わない(付着末端が相補にならない)組み合わせというのが大事です。それが守られれば、実験がうまくいっている限り、一方向にしかインサートは入りません。 例えば、異なる二種類の酵素と言っても、Sal1とXho1、BamH1とBgl2などは切り口が合いますので、逆向きにも入ります。 また、ひとつの酵素で切りうる配列が複数あるものがあります。こういうのは使い方によってはひとつの酵素で切ってもつながる方向はひとつしかない、ということも可能でしょう。