質問: キノンのtlcについて質問 キノンのtlcについて質問(というより確認)させてください。 細菌のキノンを同定する実験でtlcを行っています。実験自体はうまく行っているの良いのですが気になることがあります。 実験では、tlcで展開後にuvをtlcプレートに当てて、『標品とのrfの一致』と『暗紫色に見える性質』でキノンのスポットを見つけるわけですが、この『暗紫色に見える性質』は要するにキノン(のc=c二重結合)がuvを吸収するからそう見えるのであって、暗紫色に発光しているわけではないですよね? 多分合っていると思うのですが一抹の不安がよぎりますのでご教示ください。
回答: rei00 です。補足を拝見して少し調べてみました。 > tlcシリカゲルプレートが(uvを当てられて)青白く見える > 中で、そのキノンのスポットだけ穴が開いたように暗く > 見えている状態です。 すみません。uv ランプは短波長(254 nm)でしょうか,長波長(360 nm)でしょうか。お書きの様子では短波長と思えますので,そのつもりで回答いたします。 お書きの様にユビキノンは黄色を呈しますが,これはカルボニル基のn→π*遷移による 435 nm 付近の吸収によるものです(「紫外・可視スペクトル」東京化学同人,p.66)。この時,蛍光は吸収した光(435 nm 付近)よりも若干長波長になります(つまり,紫系統)(下記ペ-ジ参照)。 さて,短波長の uv ランプで見た場合,この 435 nm 付近の光は存在しませんから,この蛍光は殆ど見えないと思います。 では,何が『穴が開いたように暗く見えている』のかです。ご存知だとは思いますが,通常のtlcプレ-トは 254 nm の uv ランプ下で蛍光を示す蛍光剤が混ぜてあります。何も化合物が存在しない所では,この蛍光剤の蛍光が青白く見えています。これに対し,uv 吸収を持つ化合物が存在すると,この蛍光を吸収してしまうため,光のない黒色のスポットとして見えます。 「生化学辞典」によると,ユビキノンは酸化型が 275 nm 付近に強い吸収極大を,還元型が 290 nm 付近に弱い吸収極大を示すとあります。したがって,先の蛍光剤の蛍光を吸収して黒くなっているはずです。なお,この吸収はベンゼン系のπ→π*遷移に基づくと考えられます。 これで考えると,お書きの様に『キノンが uv を吸収するからそう(黒く)見える』と考えられます。ただ,そのスポットが黒く見えていたのであればこれで良いと思いますが,本当に「暗紫色」に見えていたのであれば,それは蛍光です。上記のように吸収による場合は光が無くなるわけですから,黒にしかなりません。 いかがでしょうか。