質問: 遠心分離の際の回転数の決め方 遠心分離をする際に、7000×g・10分間、105000×g・60分間などというような記述がありますが、遠心機の回転数はどのように決めているのでしょうか。 分離遠心法の場合、沈降係数(s値)の違いで成分を分けています。遠心にかける時間は沈降係数(s値)とkファクター(k値)で決まってきて、沈降時間=s/kです。kファクターはn(遠心機の回転数rpm)の関数で、遠心機の回転数が大きいほど沈降時間は短くなります。 私は、回転数は遠心機の最大回転数にすれば、沈降時間が短くなり、実験が早く終わるので、常に最大回転数にすれば良いのではないかと思うのですが、何故回転数を変えて遠心機にかけているのでしょうか。 回転数が高すぎると、細胞構造が破壊されるからといったような問題があるのでしょうか。もし、そうでしたら、目安みたいな回転数はどここかで参照できないでしょうか。たとえば、何回転以上に設定するとタンパク質が壊れる、何回転以上に設定するとグリコーゲンが破壊される、何回転以上させると細胞内小器官が破壊される・・・などです。 文章が長くなりましたが、ご存じの方いらっしゃいましたらお教えください。よろしくおねがいいたします。
回答: 問題の本質部分については解答が出揃っていると思います。 それ以外の部分について、、、。 回転数を大きくすると生じる問題 1、チューブの限界耐圧を超えて、チューブが割れてしまう。 2、回転にはぶれがあります。特に回転初期の場合に気をつける必要があります。 ぎりぎりで設定すると排除したいものも沈殿する可能性が高くなります。 3、得られたペレットが硬すぎて、次の実験に使えない。 次の段階で再溶解させる必要がタンパクの実験の場合多いと思われます。 単に実験を円滑に進めるためで、本質部分には触れていませんが、 こういった作業性に関することはプロトコルの中で大きな位置を占める場合が多いです。 ご参考までに。