質問: ブロッキングに使用するスキムミルクの作製方法 免疫染色を行う際のブロッキングに使用するスキムミルクの作製方法について教えてください。 現在免疫染色を行う際にブロッキング剤として森永のスキムミルクをpbsで溶解させて使用しています。しかし、2%で作製したつもりでも完全に溶けてくれないため時間をあけてから上清を取って使っています。これでは2%ですらないですよね? スキムミルクが安価なためスキムミルクの正しいブロッキング剤の作製方法をご教授いただければと思います。 素人な質問で大変申し訳ありませんがよろしくお願いします。
回答: 免疫染色、ウェスタンブロットでしょうか? pbsにtweenを0.1%加えたバッファー(pbst)で2~5%になるように溶かして使います。 顆粒の溶け具合界面活性剤の影響も少なからずあるかもしれません。 溶けにくいのには原因があると思います。 経験的にはスキムミルクが開封日から過ぎるとだんだん吸湿し、玉になり、溶けにくくなるように思います。 開けたてはサラッとしていて、サッと溶けますが、メーカーにもよるのでしょうか。 一般的にはファットフリーのものが良いとされているます。 うちはコープ(生協)のものを使っていますが、問題ありません。 ちなみに、スキムミルクの固まりがあっても、ブロッキングには影響なしです。 スキムミルクにはリン脂質がたくさん入っていますので、リン酸化検出には使えません。 bsaや、ミルク成分を含まないブロッキング剤をご使用されるのが良いと思います。