質問: q-13. stopperを使用するorisでは,どのように遊走・浸潤前コントロールを設定すればよいですか?
回答: a-13. orisのstopperは,アッセイ開始前に検出領域に細胞が遊走していくのを防ぐ,物理的なバリヤの役割を担っています。この場合,アッセイが終了するまでstopperを外さないウェルを用意することで,遊走前コントロールが作製できます。コントロール用のウェルでは,アッセイの間に細胞が増殖し過ぎてしまうのを防ぐため,通常よりも低い密度で細胞を播種する必要があります。アッセイ用のウェルではstopperを外す際に95~100%コンフルエントに達しているように細胞播き込み数を調整しますが,コントロール用のウェルでは50~75%程度になるよう調整します。コントロール用ウェルはアッセイが終わるまで(浸潤アッセイでは,ecmを重層する際も引き続き)stopperをセットしたままにしておきます。アッセイが終了した時点でコントロール用ウェルからstopperを外し,アッセイ用ウェルと一緒に細胞染色,解析を行います。