質問: こんにちは!! 大変初歩的な質問で申し訳ないのですが、ご回答お願いいたします。 大学でタンパク質の精製実験をし、チトクロムCの純度が上がっていくのを確認するためにSDS-PAGEをおこないました。 SDS-PAGEでは、マーカーのRf値と分子量の対数値をプロットしたグラフを作成し、そこから分子量未知の試料の分子量を求めるということは理解しています。 Rf値は、ブロモフェノールブルーの移動度を1とした各試料の相対移動度であるということですが、ブロモフェノールブルーの移動度はどこからわかるのでしょうか。 SDS-PAGEの結果のカラーコピーがあるのですが、これをものさしで測ってやればいいのでしょうか?(>_<) ご回答お願いします。 あと、試料は、タンパク質精製のいろいろな段階からとったもので3種類あります。これらの試料から、チトクロムCの純度を求めるのですが、これはSDS-PAGEで染色されたすべての部分の総分子量(1)とチトクロムCの分子量(2)をもちいて、 (2)/(1)で求めればいいのでしょうか? いろいろな文献を読んでもわかりませんでした。 大変初歩的で申し訳ないですが、ご返答よろしくお願いします。
回答: そもそも、ブロモフェノールブルーとは何かわかりますか?実験方法とかをよく見てください。 サンプルが青色であったと思いますが、その青色の色素がブロモフェノールブルーです。 この色素はサンプルをアプライするときにわかりやすいとか、電気泳動がどのくらい進行したかということを目的に入れてあります。 ゆえに、電気泳動したゲルの一番下にある青いラインがブロモフェノールブルーです。 時々、時間を長く泳動した場合はその色素がゲルから流れてしまって無くなることもありますが。 もう少し、実験の内容とやっている意味を把握することが大事です。 このままでは全く実験をやっている意味がありません。 頑張ってください。