質問: **実際のウエスタンブロットのバンドサイズが予測と異なるのはなぜですか?** | ウェスタンブロッティングは、タンパク質をサイズによって分離する技術です。 一般に、タンパク質が小さければ小さいほど、SDS-pageゲルを介してより速く移動します。 しかし、移動速度は他の要因にも影響されるため、観察される実際のバンドサイズは予測と異なることがあります。 |
回答: | **考えられる原因** | **説明** | | 翻訳後修飾 | リン酸化、グリコシル化などはタンパク質のサイズを増加させます。 | | 翻訳後切断 | 大部分のタンパク質はプロタンパク質として合成され、次に切断されて活性型を与える。例えば、プロカスパーゼ。 | | スプライスバリアント | 選択的スプライシングにより、同じ遺伝子から転写された異なるサイズのタンパク質が生成されます。これらのスプライスバリアントは、異なるサイズのタンパク質産物の生成をもたらします。スプライスバリアントの発現は、使用する特定の組織および実験条件によって非常に変わりやすいです。 | | アイソフォーム | 多くのタンパク質は異なるサイズの複数のアイソフォームを発現します。同じ標的タンパク質の異なるアイソフォームの発現は使用する特定の組織および実験条件によって非常に変わりやすいです。いくつかのウェブサイトは特定標的のアイソフォームを決定するためにアクセスできます。 | | 相対電荷 | アミノ酸の組成(荷電vs非荷電) | | 多量体 | 例えば、タンパク質の二量体化。相互作用はもっと高いバンドの出現を引き起こすが、これは通常還元条件で阻止されます。 |