質問: 細胞培養中の継代でのトリプシン処理について、改善方法を教えてください。 現在、接着系ヒト癌細胞を使っております。 継代の際に、容器中培養液の1/5量のトリプシン/edtaを添加して、3分インキュベートしてから、同量の培養液を入れて、ピペッティングして細胞を剥がしております。 しかし、なかなかプレートから細胞が剥がれず、インキュベート時間を長くしたり、セルスクレーパーを用いたりして無理やり剥がしてみたのですが、細胞塊が増えるだけで、細胞がバラバラになってくれません。 遠心をして、トリプシン溶液を除いて培養液中でピペッティングしても細胞塊状態で、細胞がバラバラになってくれません。 現在、他に教えていただく方がおりませんので、ご教授よろしくお願いいたします。
回答: 古いトリプシンを使っていませんか? 私のやり方も1の方と同じです。時々タッピング(ディッシュ?を横から軽くたたく) してます。 ピペッティングは先端を遠沈管の底にくっつけて培養液を出し入れするといいかもしれないです。