質問: 検量線の計算方法について こんにちは。 現在hplcを扱っております。検量線を使っているのですが 計算方法がよく理解できておりません。 【化粧品100g中に有効成分aは何g含まれているか】を求めるものです。 まず、 標準品 0g、0.1g、0.3g、0.5g を精密に量り、全て精製水で正確に 100mlとします。この各液から、さらに1mlを精密に量りとり、精製水を 加えて正確に100mlとします。 試料は 1mlを精密に量り、精製水を加えて正確に100mlとしました。 ピークのareaですが【標準品】 0.1g→ 574221 0.3g→ 1671182 0.5g→ 2717212 【試料area】は1738876 です。 excelで検量線の計算式を出したところ下記のような式になりました。 y=5e+06x + 46962 r2 =0.9998 この場合、100g中に何g含まれているかを求めるには どうしたらいいのでしょうか? 私なりに計算して四捨五入で0.3gとなったのですが あっているでしょうか? 長くなってしまいましたが、教えてください!
回答: ちょっと整理するために長くなりますが、順番に書きますね。 1.まず検量線に用いた標準溶液の濃度をきちんと計算しましょう。 ○標品 0g、0.1g、0.3g、0.5g →mgに換算すると0mg, 100mg, 300mg 500mg ○全て精製水で正確に100mlとする →濃度は0mg/ml, 1mg/ml, 3mg/ml, 5mg/ml ○1mlを量りとり精製水を加え100mlとする(100倍希釈) →濃度は0mg/ml, 0.01mg/ml, 0.03mg/ml, 0.05mg/ml →μgに換算すると0μg/ml, 10μg/ml, 30μg/ml, 50μg/ml 2.計算した濃度(μg/ml)を横軸xに、hplcで得られた面積の値を縦軸yにしてグラフを描きます(エクセルならば散布図ですね)。 この時、0μg/mlの試料を分析したときの値も使いましょう(ピークが出ないのならば、面積は0とする)。 3.近似式を追加して検量線の式を計算させると、 y = 54291x + 19103 r2 = 0.9997 となります。 4.これで検量線ができたので、未知試料を分析したときのピーク面積1738876をyの部分に代入して計算します。 5.xの値として31.6769...(μg/ml)と出てきます。 6.この値はあくまでも"分析した試料"の濃度です。目的としている化粧品1mlを100mlに希釈したものがこの濃度であることから、化粧品中の濃度は100倍して約3158(μg/ml)となります。mgやgに換算しなおすと、それぞれ3.2mg/ml、0.0032g/mlとなります。 7.もし【化粧品"100ml"中に有効成分aは何g含まれているか】ということならば、単純に濃度に100mlをかけて、0.32gとなります。 ここで注意が必要なのは、【化粧品"100g"中に有効成分aは何g含まれているか】となっていることです。厳密には100mlと100gは同じ量を表していません。化粧品100mlの密度(g/ml)が分かればこの値を0.32にかければ【化粧品"100g"中に有効成分aの量】が出せます。密度が不明なときは、例えば100mlを正確に量り取ってから、その質量を精密天秤で測ってください。質量÷体積で密度が計算できます。