質問: ウエスタンブロッティングについて。 電気泳動して、ブロッティングして、抗体反応させて、いざバンドの検出をしたら、 120kdに出るはずのバンドが、100kdに出てしまいました。 すごく濃く出ているバンドなので、その目的のバンドなんだと思いますが。。。 こういう現象って起こりますか? またなにが原因なんでしょうか? わかる方いましたら教えてください。 条件は、 ・bis-trisゲル。 ・ブロッティングはうまくいっています。 ・マーカーはall blue standardとmagic mark xp。ふたつのマーカーの位置を定規ではかってあわせるとほぼ同じ。 ・しかし、magic mark xpのバンドが見本以外の部分にもたくさん出て割れています。。。 ・二次抗体はanti-rabbitのもの。anti-mouseだとmagic mark xpが割れることはない。
回答: ゲルの組成は結構泳動度に影響したりします。 マーカはアミノ酸の組成が違うので、gel のphなどによって影響を受けますので、組成に関しては一度ご確認ください。 あとよくあるのがsample bufferです。dttを使用するかbeta-メルカプトエタノールを使用するかでも変わってくる場合があります。 膜レセプターの場合boilの方法でも変わってくる可能性があってやっかいなところです。 例えばsdsで全タンパク質を流して比較されたことありますか? もしかしたらタンパクの抽出が悪くて流せてない可能性があります。 メンブレンにたまたま弱く反応できるタンパク質が100kdaに会ったと言うだけかもしれませんからね。