質問: q-2. バンドが薄い(シグナルが弱い)
回答: a-2. 目的タンパク質-抗体間の結合が弱い:メンブレンの洗浄回数を減らして下さい。洗浄バッファー中のnacl濃度を減らして下さい(0.15~0.5m)。抗体の希釈液中のnacl濃度を減らして下さい(0.15~0.5m)。使用抗体に問題がある:使用抗体の目的タンパク質に対するアフィニティが低い。抗体濃度を2~4倍に上げて下さい。タンパク室質量が不十分である:ゲルに泳動する総タンパク質量を増やして下さい。酵素-基質複合体の形成が不十分である:酵素と基質をチューブで混合して下さい。もし発色しない場合は,混合が不十分です。eclが弱い,eclが古い:新しいeclを使用して下さい。スキムミルクによって目的タンパク質のバンドがマスクされている:ブロッキングバッファーや抗体希釈液中のスキムミルク濃度をい下げるか,3%bsaに置き換えてみて下さい。