質問: q-5. a不溶性画分がほとんど見えません。bバッファーを添加してもほとんどタンパク質量が得られません。どうしたらよいでしょうか?
回答: a-5. ripaバッファーは全タンパク質のうち膜タンパク質も含め約90~95%程度可溶化することができます(組織・細胞種によって多少異なります)。そのため,タンパク質総量で考えるとripa不溶性画分に含まれるタンパク質は試料全体の10%以下と極微量です。ripa不溶性画分が目視で観察できない場合,細胞数・組織量を増やす必要があります。bバッファー可溶化画分のタンパク質濃度を向上したい場合は,ripa不溶性画分に添加するbバッファーの量を減らすことで改善できます。条件検討として下記のポジディブコントロールを実施することを推奨します。