質問: **私のウエスタンブロット上のシグナルが弱いか、またはシグナルがまったくない原因は何ですか。** |
回答: | **考えられる原因** | **説明** | | 抗体滴定 | 最適なs/n比のための適切な抗体濃度を決定するために、滴定実験は複数の抗体濃度でテストする必要があります。一般的に、滴定範囲は0.2~5.0 ug/mlです。 | | 組織/細胞特異性 | 標的タンパク質発現は検査される組織/細胞に依存している。使用されるシステムが標的タンパク質を検出するのに適していることを保証するために、文献検索を行うべきです。 | | 再構成 | 抗体が適切に溶解することを確保にするために、凍結乾燥抗体を再懸濁する際には注意を払う必要があります。一般に、凍結乾燥した抗体ペレットはチューブの底にあるが、チューブ壁に粉末があることもあります。従って、抗体が完全に溶解することを確保するために、溶解はチューブの表面全体を覆うべきです。次いで、チューブを短時間遠心分離し、粉末全体がチューブの底に集まることを確保します。 | | 陽性対照 | ウエスタンブロットアッセイに陽性対照レーンを追加することは、抗体が適切に機能しているかどうか、および実験条件が適切かどうかを評価する最適な手段です。また、文献または内部実験結果に基づく陽性対照を用いて、抗体が適切に機能しているかどうかを評価することもできます。 |