質問: q-3. プロトコルには破砕としてホモジナイザーやソニケーションを推奨されていますが,ボルテックスやピペッティングだけでは不十分でしょうか?
回答: a-3. 本製品ではripa不溶性画分の回収はaバッファーで可溶化後に遠心分離するだけの簡単なプロトコルを採用しています。そのため,細胞・組織の未破砕物や核が残存すると,ripa不溶性画分にコンタミしてしまう可能性があります。特にripaバッファーは核可溶化効率が弱いため,物理的な破砕を加えない場合,核がripa不溶性画分に多量に残存してしまう恐れがあります。一方bバッファーは核可溶化効率が高いため,核が残存するとゲノムdnaが放出され,溶液がドロドロになります。aバッファーで可溶化する際にソニケーションを用いると核の破壊、ゲノムdnaの断片化が可能です。核のコンタミはその後のアプリケーションに悪影響を及ぼす可能性がありますので,ホモジナイザーやソニケーションの使用を強く推奨しています。