質問: 吸光係数について 吸光度に関してですが、ランベルト・ベールの法則では、吸光度=溶液の濃度×溶液層の厚さ×吸光係数 なのですが、この吸光係数にはどのような値が当てはまるのでしょうか?具体的にもらえるとありがたいです。よろしくお願いします
回答: 御質問がも一つ解り難かったんですが,「吸光係数をどうやって求めるのか?」という質問でしたら,#3 さんの回答にある様に,濃度既知のサンプルを実測して求めます。 そうではなくて,#2 さんの補足に書かれた『dnaを測定したときに出てくる吸光度から濃度をを求める際、濃度はo.d.260の値×50μg/ml×希釈率で求められると思うのですが、これをランベルト・ベールの式に当てはめようとしたら、どのように考えれば良いのだろうか』が本来の御質問でしたら,次の様に考えて下さい。 セル長 l [cm],モル濃度 c [mol/l],モル吸光係数ε[l/mol・cm] とすると,o.d.=ε・c・l となります。 これから,モル濃度 c は c=o.d./(ε・l) [mol/l]となります。通常の測定では,セル長 l は 1 [cm] ですから,c=o.d./ε [mol/l] です。 ここで,お書きの核酸のεが必要になりますが,参考 url に 260 [nm] 近辺の値がでています。平均すると約 10000 です。ですので,c=o.d./10000 [mol/l] となります。 ここで得られた c はモル濃度 [mol/l] ですからお書きの [μg/ml] に直すには分子量が必要です。これも参考 url に出ていますので平均すると約500です。 モル濃度 c [mol/l] と [μg/ml] での濃度 c' との関係は, c' [μg/ml] = (c・500)/1000 [g/ml] = c・(500x10^6/1000) = c・5x10^5 [μg/ml] ですから,c' = (o.d./10000)・5x10^5 = o.d.x50 [μg/ml] 後は希釈率をかけるだけでお書きの式になります。 参考url:http://www.promega.co.jp/cat/technical/17-u.html