質問: 細胞増殖アッセイ alamar blueについて alamarblueによる細胞増殖アッセイについて、どのような原理で反応するのですか?また、培地に入っているフェノールレッドやfbsや2-メルカプトエタノールなどはalamarblueの吸光度や蛍光に影響を与えないのですか?mttやwstといったフォルマザンを形成する細胞増殖アッセイにおいても、フェノールレッドやfbsの影響があったりするのですか?文献をみていると血清フリーや1%などの条件で実験している場合があるので。alamarblueは570nmと600nmの吸光度を測定するということなのですが、570nmと600nmでは何の吸光度を測定して計算しているのですか?ご教授よろしくお願いいたします。
回答: mttやresazurin (alamarblue)で測定するのは細胞の活きの良さ (viability)であって、増殖ではありません。どちらもミトコンドリ アでの呼吸に関わるnadhやnadphにより還元されて呈色します。増殖 能を測定するには、「元気な細胞はドンドン増殖する」ことが成り 立つような系であることが必要です。私は大昔、脳梗塞で神経細胞 が死んだ部位と生きてる部位の鑑別にmttを使ってましたよ。増殖な んかしませんね。 で、resazurinの最大吸収に近い600nmと還元されたresorufinの最大 吸収に近い570nmで吸光度を測定するわけですが、培養液への添加物 が測定を阻害していれば標準曲線を書いた時点で判りますから、と りあえず一度ヤッてみればいいんじゃないでしょうか。