Diskussion:Fixierung (Präparationsmethode)

message: Mag jemand die Thiel-Fixierung hier einarbeiten? Ich bin leider kein Fachmann auf dem Gebiet. Gruß, Aspiriniks 10:52, 11. Feb. 2012 (CET)
thread_title:  [[Walter Thiel (Mediziner)]] 

message: Hans Luppa: Grundlagen der Histochemie, Teil 1, 1979, S.51. " Da Äthanol und Azeton  an aktiven Gruppen keine irreversiblen Veränderungen     hervorrufen, sind beide Flüßigkeiten besonders für Verwendung in der Proteinstruktur geeignet". L.Bubendorf, G.E Feichter u.a. in: G Klöppel; Pathologie, 2011, S 609 "Äthylalkohol >96% Äthanol ist ein chemisch weitgehend intaktes Fixierungsmittel,daß die Zusammensetzung der Eiweißkörper und damit die Immunaktivität kaum beeinflußt. Wegen seiner hydroskopischen Wirkung beruht die fixierende Wirkung  in erster Linie auf Wasserentzug." Woher kommt die Bechauptung, daß Äthanol ein chemisch intaktes Fixierungsmittel ist? "Die Fixation mit Alkohol ist nach Gedangengängen von Pischinger(1926), Nayer (1926) und Drawet (1937) von Gesichtspunkt aus vorgenommen worden, daß die elektrische Ladung der Eiweißkörper unverändert erhalten  bleibt und lediglich eine Dehydratation derselben bewirkt wird" (S.Strugger, P. Hilbrich; Deutsche Tierärztliche Wochenschrift; 50,1942, S. 122) Ist der Wasserentzug so harmlos? Dora Boerner-Patzelt; Protoplasma,1950, 39, S 648 "Eine Fixierung mit 100% Alkohol bewirkt eine starke Dehydratisierung und vollständige Stabilisierung der Eiweißsubstanzen. Dementsprechend verhielten sich die Kerne lebenden Zellen, wie zu .erwarten war, genau wie Kerne schon vor der Behandlung abgestorbenen Zellen. Beide zeigten Rotfluoreszenz."  Auch B.G.Eliseew (Osnowi histologii und Histologitscheskoi techniki; Moskau,1967, S.129 ) nimmt an, daß Alkohol mit minimalen chemischen Veränderungen fixiert, aber bie Ihm findet man schon, daß Alkohol die Lipide und Hämoglobin löst. Das Äthanol Lipide und Hämoglobin löst, findet man auch bei B.Romeis:Mikroskopisce Technik, 17 Auflage von P. Böck; München,1989, S.81. Aber was geschiet, wenn Lipide gelöst werden? L.S.Goldin; Osnowi histologitscheskoi techniki elektronnoi mikroskopii, Moskau,1963,S.90: "Alle chemische Stoffe, die Lipoide nicht stabilisieren, zerstören die submikroskopische Struktur des Protoplasmas". Warum? Lipide sind Strukturbestandteile der Plasmamembranen. Wenn die Lipide aus der Membran ausgelöst werden, ändert die Membran ihre Leitfähigkeit nicht nur für kleine Ionen wie NA und K, auch für große Ionen der Farbstoffe. H.Kölbel; Zeitsch. für Naturwissensch, 1947, 2b S.385 untersuchte den Einfluß des Alkohols auf die Höhe der Farbstoffspeicherung der Bäckerhefe. Die unbehandelte Hefe nahm 4% Farbstoff auf; die mit 96% Alkohol behandelte- 7,99, fast das Zweifache.
Ich frage mich:"Ist die Struktur der Eiweißmoleküle und der Nucleinsäuren nur von den Ionenkräften, oder anders gesagt von elektrischen Ladung abhängig?  Die Antwort auf diese Frage findet man bei E.Hofmann(Eiweiße und Nucleinsäure; Braunschweig 1970,S.94,98) "Die hydrophoben   Bindungen sind wichtige, sogar die wichtigsten strukturstabilisierende Kräfte in einem Eiweißmolekül. Auf die Sprängung hydrophoben Bindungen, die sich zwischen hydrophoben Aminosäuren ausbilden, läst sich die denaturierende Wirkung der organischen Lösungsmittel , wie Aceton und Alkohol, aber auch die durch Oberflächenkräfte hervorgerufene Denaturirung zuruckzuführen." Fassen wir die Eigenschaften des Alkohols als Fixierungsmittel zusammen:a)Alkohol dehydratisiert; b)löst Lipide und Hämoglobin; c)sprengt die hydrophoben Bindungen. Gibt es eine Alternative? Schon 1937  schreibt K.Zeiger; Z. wiss. Mikroskopie;1937 54, S 86:  "Formalin erzeugt wenigstens im Bereich mikroskopischen Dimensionen auffallend homogene Gelatinierungen, die sicherlich einen wenn auch nur relativ schwächeren Eingriff in das molekulare Gefüge der Strukturelemente darstellen, als die massiven tiefgreifenden Fällungswirkungen des absoluten Alkohols, die sich schon im mikroskopischen Bild weitgehend und unangenehm bemerkbar machen."  
Die Fluoreszenzmikroskopie hat versagt, nur weil man die Wirkung des Alkohols unterschätzt hat. In erster Linie leidet unter Alkoholfixierung das Zytoplasma; da es einen hohen Wassergehalt zeigt (70-80)% . Genau den Effekt des Zytoplasmas nutzten L.von Bertalanffy in der Krebsforschung.--Meta-kaercher (Diskussion) 10:57, 8. Jun. 2015 (CEST)
thread_title:  Eigenschaften des Alkohols als Fixierungsmittel.