Publication: Magyar Közlöny
Issue: MK-2002-108 (Year: 2002, Number: 108)
Era: 1990-2004
Section: a 68/2002. (VIII. 15.) FVM rendelethez
Paragraph Index: 279

2. A minták elõkészítése virológiai vizsgálatra 2.1. Fagyasztás kivételes esetben Ha gyakorlati nehézség merül fel (pl. rossz idõjárás, munkaszüneti nap, laboratóriumi problémák stb.), ami megakadályozza a sejtek mintavételt követõ 48 órán belüli leoltását, elfogadható a minták szövettenyésztõ folyadékban való —20 ˚C-ra vagy még kisebb hõmérsékletre történõ fagyasztása és a virológiai vizsgálat 14 napon belüli elvégzése. A szövetmintát azonban a vizsgálat elõtt csak egyszer szabad fagyasztani és felengedtetni. A minta fagyasztásának indokairól (vihar, elhalt sejtvonal stb.) pontos nyilvántartást kell vezetni. 2.2. A szervek homogenizálása A csövekben lévõ szöveteket a laboratóriumban teljesen homogenizálni kell (mozsárban, aprítóban, keverõben steril homokkal), és ezt követõen az eredeti szállító oldattal kell szuszpenziót készíteni. Ha a minta 4 cm-nél kisebb egész hal, ezeket steril ollóval vagy szikével kell feldarabolni a bélcsatorna nyílása utáni testrész eltávolítását követõen. Ha a minta egész halat tartalmazott, amely 4—6 cm hosszúságú, a vesékkel együtt a belsõ szerveket kell feldarabolni. Ha a hal 6 cm-nél nagyobb, a szövetmintákat az I. 1.3. pontban leírtak szerint kell steril ollóval vagy szikével feldarabolni, a fent leírt módon homogenizálni és szállítóoldatos szuszpenziót készíteni. A szövetminta és a szállító oldat végsõ aránya laboratóriumban beállítva 1:10 legyen. 2.3. A homogenizátum centrifugálása A homogenizátumot hûtött centrifugában 2—5 ˚C-on 2000—4000 g között 15 percig kell centrifugálni és a felülúszót vagy 15 ˚C-on 4 óráig vagy egy éjszakán át 4 ˚C-on antibiotikummal (pl. gentamicin 1 mg/ml) kell kezelni. Ha a minta szállítása szállító oldatban történt (vagyis antibiotikumos védelem alatt), a felülúszó antibiotikumos kezelése elhagyható. Az antibiotikum kezelés célja a minták bakteriális szennyezésének kiküszöbölése, a szûréses sterilizálás ebben az esetben elhagyható. Ha a felülúszót —80 ˚C-on tárolják a mintavételt követõ 48 órán belül, akkor csak egyszer használható újra virológiai vizsgálatra. Gyakorlati problémák (termosztáthiba, szövettenyészet probléma stb.) esetén, ha a minták leoltása a szövetminta gyûjtése után 48 órán belül nem oldható meg, elfogadható a felülúszó —80 ˚C-ra történõ lefagyasztása a 14 napon belül elvégzett virológiai vizsgálat idõpontjáig. A leoltás elõtt a felülúszó sejtjeit egyenlõ mennyiségû, megfelelõen hígított, a helyileg elterjedt IPN vírus szerotípusok elleni ellenanyaggal kell keverni, és legalább egy órán át 15 ˚C-on vagy maximum 18 órán át 4 ˚C-on kell inkubálni. Az ellenanyag titerének legalább 1:2000-nek kell lennie az 50%-os plakk neutralizáció teszt alapján. Minden leoltás IPN vírus elleni antiszérummal való kezelése azt célozza, hogy megelõzzék a beoltott sejtkultúrákban az IPN vírus által okozott citopatogén hatást. Az eljárás csökkenti a virológiai vizsgálat idõtartamát és csökkenti azoknak az eseteknek a számát, amikor a citopatogén hatás potenciálisan a VHS vagy IHN vírus jelenlétre utalna. Ha a minták IPN-tõl mentes termelési egységekbõl jönnek, az IPN vírussal való elõkezelés elhagyható.

Source: https://magyarkozlony.hu/hivatalos-lapok/d5d58498e1ab7841b427cb4caa66f7af7beea701/dokumentumok/6238aa8868606e1794f1b737427f72033d8f51a4/letoltes