Publication: Magyar Közlöny
Issue: MK-2003-42 (Year: 2003, Number: 42)
Era: 1990-2004
Section: 10. számú melléklet a 44/2003. (IV. 26.) FVM rendelethez
Paragraph Index: 1721

5. Vizsgálati eljárások 5.1. A vizsgálati minta elõkészítése A mintát 0,5 mm lyukátmérõjû darálón megõröljük. A túlságosan nedves mintákat 50 °C-nál nem magasabb hõmérsékleten légszáraz állapotba hozzuk, vagy liofilizátorban szárítjuk ki, a darálást megelõzõen. A magas zsírtartalmú mintákat petroléterrel (3.9.) zsírtalanítani kell, a darálást megelõzõen. 5.2. Szabad formájú triptofán extrakciója Mérjünk be a vizsgálati mintából 0,1 mg-os pontossággal a becsült triptofán tartalom alapján 1–5 gnyi mennyiséget. Adjunk hozzá 100 ml belsõ standarddal dúsított extraháló oldatot (3.16.1.). Rázassuk, vagy kevertessük 60 percen keresztül. Rázatás után hagyjuk a zagyot leülepedni, majd a kitisztult felülúszóból vegyünk ki 10 ml-t egy fõzõpohárba. Adjunk hozzá 5 ml 0,5 mol/l-es foszforsavat (3.14.). Állítsuk be az oldat pH-ját 3,0-ra 1,0 mol/l-es nátrium-hidroxiddal (3.10.). Ezután adjunk hozzá annyi metanolt, hogy a véghígításban a metanol tartalom 10–30% között legyen. A teljes oldatmennyiséget mossuk át 50 ml-es mérõlombikba és töltsük jelig vízzel (3.1.). Az oldat becsült triptofán koncentrációja 10 µg/ml körül legyen. A mintaoldatot 0,45 µm-os membránszûrõn (0,45) szûrjük. Az oldatot az 5.4. pontban leírtak alapján kromatografáljuk. Ha a mintaoldat aznap nem kerül mérésre három napig eltartható hûtõben 5 °C alatti hõmérsékleten. 5.3. A kötött és szabad triptofán együttes meghatározása hidrolízis után Mérjünk be 0,1 mg pontossággal 0,1–1 g közötti mintamennyiséget egy polipropilén hidrolizáló edénybe (4.4.). A bemért minta mennyiség nitrogén tartalma 10 mg körüli érték legyen. Adjunk hozzá 8,4 g bárium-hidroxidot (3.4.) és 10 ml vizet. Mágneses keverõn vagy kémcsõkeverõvel kevertessük az elegyet. A teflonozott keverõ mágnest az edényben hagyva az edény oldalára került részecskéket 4 ml vízzel bemossuk az edény aljára. A hidrolízist autoklávban 110 °C-on 20 órán keresztül végezzük. A hidrolizátumhoz még kevéssel 100 oC alatt a bárium-hidroxid kikristályosodása megelõzésére, adjunk 30 ml szobahõmérsékletû vizet. Óvatosan rázzuk össze az elegyet, majd adjunk hozzá 2,0 ml belsõ standardot (3.16.). Hûtsük az elegyet jeges vízfürdõben kb. 15 percig. Ezután adjunk hozzá 5 ml c = 0,5 mol/l foszforsav oldatot (3.14.). Állandó hûtés közben elõször c = mol/l-es sósavval (3.11.) közömbösítjük a hidrolizátumot, majd c = 1 mol/l-es sósavval (3.12.) a pH-t 3,0-ra állítjuk. Ezután adjunk az elegyhez annyi metanolt, hogy a végtérfogatban a mennyisége 10–30% között legyen, majd vízzel 100 ml-es mérõlombikba mossuk át és jelig töltjük. A metanol hozzáadásánál kicsapódás nem történhet. A mintaoldatot 0,45 µm-os membránszûrõn (4.5.) szûrjük. Az oldatot az (5.4.) pontban leírtak alapján kromatografáljuk. Ha a mintaoldat aznap nem kerül mérésre, három napig eltartható hûtõben 5 °C alatti hõmérsékleten. Fénytõl védve tároljuk. 5.4. Folyadékkromatográfiás mérés Az alábbi paraméterek iránymutató jellegûek, a kromatográfiás rendszertõl függõen más elválasztási paraméterek is alkalmazhatóak, amelyek megfelelõ eredményt adnak. 5.4.1. Vizsgálati paraméterek. Izokratikus elúció. Eluens oldat (3.22.): Öntsünk össze 3,00 g ecetsavat (3.18.) + 900 ml vizet (3.1.) + 50,0 ml 1,1,1-triklór-2-metil-2propanol oldatot (3.19.). Állítsuk be az oldat pH-ját 5,00-ra etanolaminnal (3.20.). Töltsük fel az oldatot 1000 ml-re vízzel (3.1.). Áramlási sebesség: 1 ml/perc Injektált térfogat: 20 µl Kromatográfiás oszlop: C18, 125 × 4 mm, 3 µm, vagy egyéb a célnak megfelelõ analitikai oszlop. Detektálás hullámhossza: – gerjesztési: 280 nm – emissziós: 356 nm

Source: https://magyarkozlony.hu/hivatalos-lapok/69b88ec8e02037a8d3637eee652ef17e0ba2ad2b/dokumentumok/e4451c379dbc96be3daac423580de092693182bb/letoltes