Publication: Magyar Közlöny
Issue: MK-2004-13 (Year: 2004, Number: 13)
Era: 2004-2010
Section: 6. számú melléklet a 6/2004. (II. 10.) ESZCSM rendelethez
Paragraph Index: 713

2. ábra: Csúcsaszimmetria-faktor 5. Számítás A mintaoldatban lévõ tartósítószerek koncentrációjának kiszámításához használjuk a vizsgált tartósítószerek csúcsmagasságának a 2-metoxibenzoesav (belsõ standard) csúcsmagasságához viszonyított arányait és a kalibrációs görbét. A következõ képlet segítségével számítsuk ki a minta benzoesav, 4-hidroxibenzoesav, szorbinsav vagy szalicilsav tartalmát tömegszázalékban (xi): a b a b (m/m) % x i ⋅ = ⋅ ⋅ ⋅ = , ahol: a = a vizsgálati minta (4.1.2.) tömege (g), b = a kivont mintában (4.1.2.) lévõ tartósítószer koncentráció (ì g/ml) a kalibrációs görbe alapján. 6. Megismételhetõség1 0,40% 4-hidroxibenzoesav tartalom esetén azonos mintán, párhuzamosan végzett két mennyiségi meghatározás közötti különbség abszolút értéke nem haladhatja meg a 0,035%-ot. 0,50% benzoesav tartalom esetén azonos mintán, párhuzamosan végzett két mennyiségi meghatározás eredménye közötti különbség abszolút értéke nem haladhatja meg a 0,050%-ot. 0,50% szalicilsav tartalom esetén azonos mintán, párhuzamosan végzett két mennyiségi meghatározás eredménye közötti különbség abszolút értéke nem haladhatja meg a 0,045%-ot. 0,60% szorbinsav tartalom esetén azonos mintán, párhuzamosan végzett két mennyiségi meghatározás közötti különbség abszolút értéke nem haladhatja meg a 0,035%-ot. 7. Megjegyzések 7.1. A módszerrel végzett vizsgálat eredményeinek egyenetlensége azt jelzi, hogy a mintából történõ savas kivonásnál az adagolt kénsav mennyiségét az elõírt határokon belül kell tartani, a kritikus és a feldolgozott minta mennyiségére vonatkoztatva 7.2. Ha szükséges egy megfelelõ védõoszlop (elõtét oszlop) is használható. ISO 5725 C. PROPIONSAV MENNYISÉGI MEGHATÁROZÁSA 1. Cél és alkalmazási terület Ez a módszer a kozmetikai termékekben legfeljebb 2% (m/m) koncentrációban jelen lévõ propionsav meghatározására alkalmas. 2. Fogalommeghatározás Az e módszerrel mért propionsav koncentrációt a termék tömegszázalékában (% m/m) fejezzük ki. 3. Alapelv A propionsavnak a termékbõl történt savas kivonását követõen a meghatározást gázkromatográfiával végezzük 2-metilpropionsav belsõ standard felhasználásával. 4. Reagensek Minden reagensnek analitikai tisztaságúnak kell lennie; desztillált vizet vagy ennek megfelelõ minõségû vizet kell alkalmazni. 4.1. Etil-alkohol, 96%-os (v/v) 4.2. Propionsav 4.3. 2-metil-propionsav 4.4. Ortofoszforsav, 10%-os (m/v) 4.5. Propionsav oldat Pontosan mérjünk be körülbelül 1,00 g ( pgramm)propionsavat egy 50 ml-es mérõlombikba és töltsük fel a jelig etil-alkohollal (4.1.). 4.6. Belsõ standard oldat Pontosan mérjünk be mintegy 1,00 g (e gramm) 2-metilpropionsavat egy 50 ml-es mérõlombikba, és töltsük fel jelig etil-alkohollal (4.1.). 5. Eszközök 5.1. Normál laboratóriumi berendezések és: 5.2. Lángionizációs detektorral felszerelt gázkromatográf 5.3. Üvegcsõ (20 × 150 mm) csavaros kupakkal 5.4. Vízfürdõ, 60 ºC-os 5.5. 10 ml-es üvegfecskendõ szûrõmembránnal (pórus átmérõ: 0,45 ì m) 6. Eljárás 6.1 Mintaelõkészítés 6.1.1. A minta elõkészítése belsõ standard hozzáadása nélkül Mérjünk be mintegy 1 g-nyi (a gramm) mintát egy üvegcsõbe (5.3.). Adjunk hozzá 0,5 ml foszforsavat (4.4.) és 9,5 ml etil-alkoholt (4.1.). Zárjuk le a csövet és erõsen rázzuk fel. Ha szükséges, tegyük a csövet 60 ºC-ra melegített vízfürdõbe (5.4.) 5 percre, a lipid fázis teljes feloldódása érdekében. Gyorsan hûtsük le vízsugár alatt. Az oldat egy részét szûrjük le membránszûrõn (5.5.). A szûrletet ugyanazon a napon kromatografáljuk. 6.1.2. A minta elõkészítése belsõ standard hozzáadásával Mérjünk be 1±0,1 g (a gramm) mintát három tizedes pontossággal egy üvegcsõbe (5.3.). Adjunk hozzá 0,5 ml foszforsavat (4.4.), 0,50 ml belsõ standard oldatot (4.6.) és 9 ml etilalkoholt (4.1.) Zárjuk le a csövet és erõsen rázzuk fel. Ha szükséges, tegyük a csövet 60 ºC-ra melegített vízfürdõbe (5.4.) 5 percre, a lipid fázis teljes feloldódása érdekében. Gyorsan hûtsük le vízsugár alatt. Az oldat egy részét szûrjük le membránszûrõn (5.5.). A szûrletet ugyanazon a napon kromatografáljuk. 6.2. A gázkromatográfia körülményei A következõ üzemeltetési körülmények ajánlottak: Oszlop Típus: rozsdamentes acél Hossz 2 m Átmérõ 1/8" Töltet 10% SPTM 1000 (vagy ezzel egyenértékû) + 1% H3PO4 Kromoszorb WAW tölteten, szemcseméret: 100-120 mesh Hõmérséklet Injektor 200 ºC Oszlop 120 ºC Detektor 200 ºC Vivõgáz nitrogén Ára mlási sebesség 25 ml/perc 6.3. Kromatográfia 6.3.1. Kalibrálás Pipettával csepegtessünk egy 20 ml-es mérõlombik sorozatba 0,25; 0,50; 1,00; 2,00 és 4,00 ml propionsav oldatot (4.5.). Mindegyik mérõlombikba pipettával csepegtessünk 1,00 ml belsõ standard oldatot (4.6.); töltsük fel õket a jelig etil-alkohollal (4.1.) és keverjük össze. Az így készített oldatok tartalmaznak „e” mg/ ml 2-metilpropionsavat, mint belsõ standardot (azaz 1 mg/ ml-t ha e= 1000) és p/4, p/2, p, 2p, 4p mg/ ml propionsavat (azaz 0,25; 0,50; 1,00; 2,00; 4,00 mg/ ml-t ha p=1000). Fecskendezzünk mindegyik oldatból 1 ì l-t és vegyük fel a kalibrációs görbét úgy, hogy a propionsav/2-metilpropionsav tömegének arányát az x-tengelyen, míg a megfelelõ csúcsterüeteket az y-tengelyen ábrázoljuk. Minden oldattal végezzünk három befecskendezést, és számítsuk ki az átlagos csúcsterület arányt. 6.3.2. Mennyiségi meghatározás Fecskendezzünk 1 ì l minta szûrletet (6 .1.1.). Hasonlítsuk össze a kromatogramot a standard oldatok (6.3.1.) kromatogramjaival. Ha a csúcsnak hozzávetõlegesen ugyanaz a retenciós ideje mint a 2-metilpropionsavé, akkor váltsunk belsõ standardot. Ha zavaró hatást nem tapasztalunk, fecskendezzünk 1 ì l minta szûrletet (6.1.2.), és mérjük meg a propionsav csúcsterületét, illetve a belsõ standard csúcsterületét. Minden oldattal végezzünk három-három befecskendezést és számítsuk ki az átlagos csúcsterület arányt. 7. Számítás 7.1. A 6.3.1. pontban felvett kalibrációs görbérõl olvassuk le a 6.3.2. pontban kiszámított csúcsterület aránynak megfelelõ tömegarányt (K). 7.2. Az így kapott tömegarányból számítsuk ki a minta propionsav tartalmát (X) tömegszázalékban a következõ képlet segítségével: a e K a e 0,5 K x%(m/m) = ⋅ ⋅ ⋅ = , ahol: K = a 7.1. pontban kiszámított arány, e = a 4.6. pontban bemért belsõ standard tömege grammban, a = a 6.1.2. pontban bemért vizsgálati minta tömege grammban. Az eredményeket kerekítsük fel egy tizedes értékre. 8. Megismételhetõség1 2% propionsav tartalom esetén az ugyanazon a mintán párhuzamosan végzett két mennyiségi meghatározás közötti különbség értéke nem haladhatja meg a 0,12% -ot. II. HIDROKINON, HIDROKINON MONOMETIL-ÉTER, HIDROKINON MONOETIL- ÉTER ÉS HIDROKINON MONOBENZIL-ÉTER AZONOSÍTÁSA ÉS MEGHATÁROZÁSA KOZMETIKAI TERMÉKEKBEN A. AZONOSÍTÁS 1. Cél és alkalmazási terület Ez a módszer a bõrt világosító kozmetikai termékekben lévõ hidrokinon, hidrokinon monometil-éter, hidrokinon monoetil-éter és hidrokinon monobenzil-éter (monobenzon) kimutatását és azonosítását írja le. 2. Eljárás A hidrokinont és étereit vékonyréteg kromatográfiával (TLC) azonosítjuk. 3. Reagensek Minden reagensnek analitikai tisztaságúnak kell lennie. 3.1. Etil-alkohol, 96%-os (v/v) 3.2. Kloroform 3.3. Dietil-éter 3.4. Futtató oldat: Kloroform / Dietil-éter, 66:33 (v/v) 3.5. Ammónia, 25%-os (m/m) (d420 = 0,91 g/ ml) 3.6. Aszkorbinsav 3.7. Hidrokinon 3.8. Hidrokinon monometil-éter 3.9. Hidrokinon monoetil-éter 3.10. Hidrokinon monobenzil-éter (monobenzon) 3.11. Referencia oldatok A következõ referencia oldatokat frissen kell elkészíteni és egy napig stabilak. ISO 5725 szabvány szerint 3.11.1. Mérjünk be 0,05 g hidrokinont (3.7.) egy 10 ml-es, osztással ellátott kémcsõbe. Adjunk hozzá 0,250 g aszkorbinsavat (3.6.) és 5 ml etil-alkoholt (3.1.). Adjunk hozzá ammóniát (3.5.) addig, amíg a pH értéke 10 lesz, és töltsük fel 10 ml térfogatra etil-alkohollal (3.1.). 3.11.2. Mérjünk be 0,05 g hidrokinon monometil-étert (3.8.) egy 10 ml-es, osztással ellátott vizsgálócsõbe. Adjunk hozzá 0,250 g aszkorbinsavat (3.6.) és 5 ml etilalkoholt (3.1.). Adjunk hozzá ammóniát (3.5.) addig, amíg a pH értéke 10 lesz és töltsük fel 10 ml térfogatra etilalkohollal (3.1.) 3.11.3. Mérjünk be 0,05 g hidrokinon monoetil-étert (3.9.) egy 10 ml-es, osztással ellátott vizsgálócsõbe. Adjunk hozzá 0,250 g aszkorbinsavat (3.6.) és 5 ml etilalkoholt (3.1.). Adjunk hozzá ammóniát (3.5.) addig, amíg a pH értéke 10 lesz, és töltsük fel 10 ml térfogatra etilalkohollal (3.1.) 3.11.4. Mérjünk be 0,05 g hidrokinon monobenzil-étert (3.10.) egy 10 ml-es, osztással ellátott kémcsõbe. Adjunk hozzá 0,250 g aszkorbinsavat (3.6.) és 5 ml etilalkoholt (3.1.). Adjunk hozzá ammóniát (3.5.) addig, amíg a pH értéke 10 lesz és töltsük fel 10 ml térfogatra etilalkohollal (3.1.) 3.12. Ezüst-nitrát 3.13. 12-molibdo-foszfát 3.14. Kálium-ferricianid hexahidrát 3.15. Ferriklorid hexahidrát 3.16. Aeroszolos elõhívószerek 3.16.1. Egy 5%-os (m/v) ezüst-nitrát vizes oldathoz (3.12.) adjunk ammóniát (3.5.) addig, amíg a keletkezett csapadék feloldódik. Vigyázat: az oldat állás közben robbanásszerûen instabillá válik, és használat után ki kell önteni. 3.16.2. 10%-os (m/v) 12-molibdo-foszfát (3.13.) etil-alkoholos (3.1.) oldata. 3.16.3. Készítsünk egy 1%-os (m/v) kálium-ferricianid (3.14.) vizes oldatot és egy 2%-os (m/v) ferriklorid (3.15.) vizes oldatot. Közvetlenül felhasználás elõtt keverjünk össze azonos mennyiséget a két oldatból. 4. Eszközök Szokásos laboratóriumi felszerelés 4.1. Szokásos TLC berendezés 4.2. Készgyártmányú TLC lemezek; szilikagél GHR/UV254; 20x20 cm (Macgery, Nagel vagy ezzel egyenértékû) 4.3. Ultrahangos fürdõ 4.4. Centrifuga 4.5. UV lámpa, 254 nm 5. Eljárás 5.1. Mintaelõkészítés Mérjünk be 3,0 g mintát egy 10 ml-es, osztással ellátott kémcsõbe (3.8.). Adjunk hozzá 0,250 g aszkorbinsavat (3.6.) és 5 ml etil-alkoholt (3.1.). Állítsuk be az oldat pH-ját 10-re ammónia-oldattal (3.6.). Töltsük fel 10 ml-re etil-alkohollal (3.1.). Dugóval zárjuk le a csövet és homogenizáljuk ultrahangos fürdõben 10 percig. Szûrjük át egy szûrõpapíron vagy centrifugáljuk le 3000-es fordulatszámon. 5.2. TLC 5.2.1. Töltsük fel a kromatográfiás kádat futtató oldattal (3.4.). 5.2.2. Vigyünk fel a lemezre 2 ì l referencia oldatot (3.11.) és 2 ì l mintaoldatot (5.1.). A futtatást sötétben végezzük szobahõmérsékleten addig, amíg az oldószer front 15 cm-re eltávolodik az alapvonaltól. 5.2.3. Vegyük ki a lemezt, és szobahõmérsékleten hagyjuk száradni. 5.3. Elõhívás 5.3.1. Vizsgáljuk meg a lemezt UV fény alatt 254 nm-en, és jelöljük meg a foltokat. 5.3.2. Permetezzük le a lemezt a következõ anyagokkal: – ezüst-nitrát reagens (3.16.1.), vagy – 12-molibdo-foszforsav (3.16.2.); melegítsük fel hozzávetõlegesen 120 oC-ra, vagy – kálium-ferricianid oldat és ferriklorid oldat (3.16.3.) 6. Azonosítás Számítsuk ki az Rf értéket minden egyes foltra. Hasonlítsuk össze a mintára kapott foltokat a referencia oldatokra kapott foltokkal a következõ szempontok szerint; Rf értékek, a foltok színe az UV sugárzás alatt; valamint a foltok színe a permetezõ reagenssel végzett elõhívás után. Végezzük el a következõ B szakaszban leírt HPLC vizsgálatot, és hasonlítsuk össze a minta csúcs(ok)ra kapott retenciós idõket a referencia oldatokra kapottakkal. Vessük össze a TLC és a HPLC vizsgálatok eredményeit, hogy azonosítsuk a hidrokinont és/vagy annak étereit. 7. Megjegyzések A leírt körülmények között a következõ Rf értékek adódnak: hidrokinon: 0,32 hidrokinon monometil-éter: 0,53 hidrokinon monoetil-éter: 0,55 hidrokinon monobenzil-éter: 0,58 B. MEGHATÁROZÁS 1. Cél és alkalmazási terület Ez a módszer a bõrt világosító, a kozmetikai termékekben lévõ hidrokinon, hidrokinon monometil-éter, hidrokinon monoetil-éter és hidrokinon monobenzil-éter (monobenzon) meghatározására állapít meg eljárást. 2. Eljárás A mintát víz/metilalkohol eleggyel kivonjuk enyhe melegítés közben, hogy a lipid anyagok megolvadjanak. Az elemzett komponensek meghatározását az így kapott oldatból fordított fázisú folyadék-kromatográfiával, UV detektálással végezzük. 3. Reagensek 3.1. Minden reagensnek analitikai tisztaságúnak kell lennie. A felhasznált víznek desztillált víznek vagy legalább ezzel megegyezõ tisztaságú víznek kell lennie. 3.2. Metil-alkohol 3.3. Hidrokinon 3.4. Hidrokinon monometil-éter 3.5. Hidrokinon monoetil-éter 3.6. Hidrokinon monobenzil-éter (monobenzon) 3.7. Tetrahidrofurán, HPLC minõségû 3.8. Víz/metil-alkohol elegy 1:1 (v/v). Elegyítsünk egy térfogatrész vizet és egy térfogatrész metil-alkoholt (3.2.) 3.9. Mozgó fázis: tetrahidrofurán/ víz elegy 45:55 (v/v). Elegyítsünk 45 térfogatrész tetrahidrofuránt (3.7.) 55 térfogatrész vízzel 3.10. Referencia oldat Mérjünk be 0,06 g hidrokinont (3.3.), 0,08 g hidrokinon monometil-étert (3.4.), 0,10 g hidrokinon monoetil-étert (3.5.) és 0,12 g hidrokinon monobenzil-étert (3.6.) egy 50 ml-es mérõlombikba. Oldjuk fel és töltsük jelig metilalkohollal (3.2.). Készítsünk referencia oldatot úgy, hogy ebbõl az oldatból 10,00 ml-t hígítunk fel 50,00 ml-re víz/etilalkohol eleggyel (3.8.). Ezeket az oldatokat frissen kell elkészíteni. 4. Eszközök Szokásos laboratóriumi felszerelés, és: 4.1. 60 ºC-os hõmérséklet tartására megfelelõ vízfürdõ 4.2. Nagynyomású folyadék-kromatográf változtatható hullámhosszú UV detektorral és 10 ì les fecskendezõ hurokkal 4.3. Analitikai oszlop Rozsdamentes acél, 250 mm hosszú, belsõ átmérõ 4,6 mm, Zorbax fenil-lel (Zorbax SILen kémiailag megkötött fenetil-szilán, a végén trimetilklór-szilánnal bedugaszolva) töltve, szemcsemérete 6 ì m, vagy ezzel egyenértékû. Ne használjunk védõoszlopot, kivéve feniles védõoszlopot vagy ezzel egyenértékût. 4.4. Szûrõpapír, 90 mm átmérõjû, Schleicher és Schull, Weissband 5892 vagy ezzel egyenértékû 5. Eljárás 5.1. Mintaelõkészítés Mérjünk be három tizedes pontossággal 1 ± 0,1 g-nyi (a gramm) mintát egy 50 ml-es mérõlombikba. Diszpergáljuk a mintát 25 ml víz/metilalkohol elegyben (3.8.). Zárjuk le a lombikot és rázzuk erõsen addig, amíg homogén szuszpenziót kapunk. Legalább egy percig rázzuk. Tegyük a lombikot vízfürdõbe (4.1.) és tartsuk 60 ºC-on, hogy elõsegítsük az kivonást. Hûtsük le a lombikot és töltsük fel jelig víz/metilalkohol eleggyel (3.8.). Szûrõpapíron (4.4.) keresztül szûrjük le a kivonatot. Az kivonat elkészítésétõl számított 24 órán belül végezzük el a HPLC-s meghatározást. 5.2. Nagynyomású folyadék-kromatográfia 5.2.1. A mozgó fázis (3.9.) ára mlási sebességét 1,0 ml/perc értékre, a detektor hullámhosszát 295 nm-re állítsuk be. 5.2.2. Fecskendezzünk az 5.1. pontban leírtak szerinti 10 ì l mintaoldatot, és rögzítsük a kromatogramot. Mérjük meg a csúcsterületeket és az 5.2.3. pontban leírtak szerint végezzük el a kalibrálást. Hasonlítsuk össze a minta és a standard oldatokra kapott kromatogramokat. A csúcsterületeket és az 5.2.3. pontban kiszámolt arányossági tényezõket (RF) használjuk arra, hogy kiszámítsuk a mintaoldat komponenseinek koncentrációját. 5.2.3. Kalibrálás Fecskendezzünk 10 ì l referencia oldatot (3.10.) és rögzítsük a kromatogramot. Fecskendezzünk még néhányszor addig, amíg állandó csúcsterületet kapunk. Határozzuk meg a arányossági tényezõt: RFi i i i c P RF = , ahol: pi = a hidrokinon, hidrokinon monometil-éter, hidrokinon monoetil-éter vagy hidrokinon monobenzil-éter csúcsterülete, és ci = a hidrokinon, hidrokinon monometil-éter, hidrokinon monoetil-éter vagy hidrokinon monobenzil-éter referencia oldatainak (3.10.) koncentrációja (g/50 ml). Gyõzõdjünk meg arról, hogy a standard oldatra és a mintaoldatra kapott kromatogramok kielégítik a következõ elvárásokat: – A csúcsszétválásánál leggyengébben szétvált párnak legalább 0,90-nek kell lennie. (A csúcsszétválás definícióját lásd az 1. ábrán).

Source: https://magyarkozlony.hu/hivatalos-lapok/53f83b22112ddee3ba432e293c5a4a07160629ad/dokumentumok/1147f0c2e2ee62fd0d72848b53190fba47bc78de/letoltes