Publication: Magyar Közlöny
Issue: MK-2005-154 (Year: 2005, Number: 154)
Era: 2004-2010
Section: 7. számú melléklet az 56/2005. (XI. 29.) EüM–KvVM–BM együttes rendelethez
Paragraph Index: 190

1. MÓDSZER Ez a módszer az OECD TG 416 (2001) módszer megfelelõje. 1.1. Bevezetés E kétgenerációs reprodukciós toxicitási vizsgálati módszer segítségével általános információk nyerhetõk egy vizsgálandó anyagnak a hím és nõi szaporítórendszer épségére és teljesítõképességére, ezen belül az ivarmirigyek mûködésére, az ivari ciklusra, a párzási viselkedésre, a fogantatásra, a vemhességre, az ellésre, a szoptatásra és az elválasztásra, valamint az utódok növekedésére és fejlõdésére gyakorolt hatásaival kapcsolatosan. A vizsgálat emellett információkat nyújthat a vizsgálandó anyagnak az újszülött kori morbiditásra, mortalitásra gyakorolt hatásaival kapcsolatosan, elõzetes adatokat szolgáltathat a prenatális és posztnatális fejlõdési toxicitásról, illetve útmutatóként szolgálhat a késõbbi vizsgálatokhoz is. Az F1 generáció növekedésének és fejlõdésének tanulmányozásán kívül e vizsgálati módszer segítségével a hím és nõi szaporítórendszer épsége és teljesítõképessége, valamint az F2 generáció növekedése és fejlõdése is tanulmányozható. A fejlõdési toxicitással és a funkcionális defektusokkal kapcsolatban további információk úgy szerezhetõk, ha ezt az eljárást adott esetben a fejlõdési toxicitási és/vagy fejlõdési neurotoxicitási módszereket segítségül híva további vizsgálati protokollokkal egészítik ki, de az említett végpontok a megfelelõ vizsgálati módszerek alkalmazásával külön vizsgálatokban is tanulmányozhatók. 1.2. A vizsgálati módszer elve A vizsgálandó anyagot fokozatosan növekvõ dózisokban kell adagolni hím és nõstény állatok több csoportjának. A P generációba tartozó hímeknek egyrészt a növekedés során, másrészt legalább egy teljes spermaképzõdési ciklus során (egérben körülbelül 56 nap, patkányban pedig körülbelül 70 nap) kell adagolni az anyagot ahhoz, hogy bármilyen, a spermaképzõdésre gyakorolt káros hatást ki lehessen váltani. A spermára gyakorolt hatásokat egy sor spermaparaméter (pl. spermamorfológia és -motilitás), valamint szövetpreparátumok és részletes kórszövettani vizsgálatok segítségével kell meghatározni. Ha rendelkezésre állnak megfelelõ idõtartamú, pl. legalább 90 napos ismételt dózisú vizsgálatokból származó, a spermaképzõdéssel kapcsolatos adatok, a P generációba tartozó hímeket nem kell bevonni az értékelésbe. A spermamintákat vagy az azokról készült digitális felvételeket azonban ajánlatos az esetleges késõbbi értékelések céljára megõrizni, illetve elmenteni. A P generációba tartozó nõstényeknek egyrészt a növekedés során, másrészt több teljes ivari ciklus során kell adagolni a vizsgálandó anyagot ahhoz, hogy észlelhetõk legyenek az ivari ciklus szabályosságára kifejtett esetleges káros hatások. A vizsgálandó anyagot a párzás és az ennek eredményeként létrejövõ vemhesség során, sõt egészen az F1 utódok elválasztásának ideje alatt is kell adagolni a szülõknek (azaz a P generációba tartozó állatoknak). Az elválasztáskor a kezelést az F1 utódokon kell folytatni, egészen felnõtté válásukig, párzásukig, illetve az F2 generáció létrejöttéig, amíg meg nem történik az F2 generáció elválasztása. Minden állaton klinikai megfigyeléseket és kórbonctani vizsgálatokat kell végezni a toxicitás jeleinek kimutatása érdekében, és külön hangsúlyt kell fektetni a hím és nõi szaporítórendszer épségére és teljesítõképességére, valamint az utódok növekedésére és fejlõdésére. 1.3. A vizsgálati módszer ismertetése 1.3.1. Az állatfaj kiválasztása A vizsgálatok céljára a preferált állatfaj a patkány. Ettõl eltérõ fajok alkalmazását megfelelõen indokolni kell, és a megfelelõ módosításokra is szükség lesz. Nem szabad olyan törzseket alkalmazni, amelyek kevéssé termékenyek, vagy amelyekben magas a fejlõdési defektusok elõfordulási gyakorisága. A vizsgálat megkezdésekor az egyes kísérleti állatok testtömegének csak minimális mértékben szabad különböznie egymástól, és egyik ivar esetében sem térhet el 20%-nál magasabb mértékben az ivar átlagától. 1.3.2. Az állatok tartásának és etetésének körülményei A kísérleti helyiség hõmérsékletének 22 °C (±3 °C)-nak kell lennie. Bár a helyiség relatív páratartalmának legalább 30%-nak kell lennie, illetve a takarítás idõtartamától eltekintve lehetõleg ne haladja meg a 70%-ot, a célértéknek 50 és 60% között kell lennie. A világítás legyen mesterséges; 12 órás világos és 12 órás sötét periódusok váltsák egymást. Az etetéshez standard laboratóriumi takarmány alkalmazható, korlátlan mennyiségû ivóvíz biztosítása mellett. A takarmány megválasztását az is befolyásolhatja, hogy ha a vizsgálandó anyagot táplálékkal adják be, akkor azok megfelelõ módon keveredjenek el egymással. Az állatok egyedileg vagy azonos ivarú egyedekbõl álló kisebb csoportokban is tarthatók. A pároztatásokat erre a célra alkalmas ketrecekben kell végezni. Ha meggyõzõdtek a párzás megtörténtérõl, a pároztatott nõstényeket egyedileg kell elhelyezni elletõ vagy fiaztató ketrecekben. A pároztatott patkányokat kis csoportokban is lehet tartani, de az ellés 2005/154/II. szám elõtt egy vagy két nappal külön kell választani õket. Az ellés közeledtével a pároztatott állatok számára megfelelõ és meghatározott fészekrakó anyagot kell biztosítani. 1.3.3. Az állatok elõkészítése Legalább 5 napon át a laboratórium körülményeihez szoktatott, egészséges állatokat kell alkalmazni, amelyek korábban nem voltak más kísérletnek alanyai. A kísérleti állatok jellemzésekor meg kell adni az állat faját, törzsét, származását, ivarát, testtömegét és/vagy életkorát. Ismerni kell, hogy mely állatok között áll fenn testvéri viszony, hogy elkerülhetõ legyen ezek pároztatása. Az állatokat véletlenszerûen kell beosztani a kontroll- és a kezelési csoportokba. A ketreceket úgy kell elrendezni, hogy minimálisra lehessen csökkenteni a ketrec elhelyezése jelentette lehetséges hatásokat. Minden állatot egyedi azonosítószámmal kell ellátni. A P generáció esetében ezt még a kezelés megkezdése elõtt meg kell tenni. Az F1 generáció esetében a késõbbi pároztatásra kiválasztott állatokat az elválasztáskor egyedi azonosítóval kell ellátni. Minden kiválasztott F1 állat esetében meg kell õrizni azokat az adatokat, amelyek rögzítik, hogy az állat melyik alomból származik. Ha az utódok testtömegének mérését vagy bármely más funkcionális vizsgálat elvégzését is fontolóra veszik, akkor ajánlatos a születés után a lehetõ leghamarabb azonosítóval ellátni a kölyköket. A kezelés megkezdésekor a szülõknek (P generáció) körülbelül 5–9 hetesnek kell lenniük. Amennyire csak megoldható, az állatoknak az összes vizsgálati csoportban nagyjából azonos testtömegûnek és korúnak kell lenniük. 1.4. Eljárás 1.4.1. Az állatok száma és ivara Minden kezelési és kontrollcsoportban elegendõ számú állatnak kell lennie ahhoz, hogy az elléskor vagy akörül lehetõleg legalább 20 vemhes nõstény tartozzon egy-egy csoportba. A kezeléssel összefüggésben nemkívánatos hatásokat (pl. sterilitást vagy magas dózisban túlzott toxicitást) kiváltó anyagok esetében elõfordulhat, hogy ezt nem lehet megoldani. A cél az, hogy elegendõ számú vemhesség jöjjön létre az anyagnak a termékenységre, a vemhességre, az anyai viselkedésre és szoptatásra, az F1 utódoknak a fogantatástól az ivarérettségig történõ növekedésére és fejlõdésére, valamint az F2 utódoknak az elválasztásig tartó idõszakban történõ fejlõdésére gyakorolt esetleges hatások értékeléséhez. Nem feltétlenül teszi érvénytelenné tehát a vizsgálatot az, ha nem lehet megoldani, hogy a kívánt számú (azaz 20) vemhes állat álljon rendelkezésre, és ennek jelentõségét minden egyes esetben külön-külön kell értékelni. 1.4.2. A dózisok elõkészítése A vizsgálandó anyagot ajánlatos orálisan adagolni (a táplálékkal, az ivóvízzel vagy mesterséges táplálással), kivéve, ha más beadási módot (pl. dermális vagy inhalálásos alkalmazást) tartanak megfelelõbbnek. Ahol szükséges, a vizsgálandó anyagot megfelelõ vivõanyagban kell feloldani vagy szuszpendálni. Ahol lehet, elsõsorban vizes oldatot/szuszpenziót ajánlatos alkalmazni, másodsorban olajos (pl. kukoricacsíra-olajban elkészített) oldatot vagy emulziót, és csak harmadsorban más vivõanyagokban elkészített oldatot. A víztõl eltérõ vivõanyagok esetében ismerni kell a vivõanyag toxikus jellemzõit. Meg kell határozni továbbá azt is, hogy a vizsgálandó anyag mennyire stabil az adott vivõanyagban. 1.4.3. Adagolás Legalább három dózist és ezzel párhuzamos kontrollt kell alkalmazni. Hacsak a vizsgálandó anyag fizikai-kémiai jellege vagy biológiai hatásai nem szabnak ennek határt, a legmagasabb dózist úgy kell megválasztani, hogy toxicitást idézzen elõ, de ne okozzon elhullást vagy súlyos szenvedést. Váratlan elhullások esetén, ha a szülõi (P) generáció elhullási aránya alacsonyabb, mint körülbelül 10 százalék, a vizsgálat még általában elfogadható. A dózisok csökkenõ sorrendjét úgy kell megválasztani, hogy kimutathatók legyenek az esetleges dózisfüggõ hatások és a nem észlelhetõ káros hatás szintje (NOAEL). A csökkenõ dózisszintek meghatározásához gyakran optimális a 2–4-szeres intervallumok alkalmazása, és nagyon nagy intervallumok (pl. 10-nél magasabb szorzófaktor) alkalmazása esetén gyakran elõnyös a dózisok közé egy negyedik vizsgálati csoportot is beiktatni. A táplálékkal való beadást alkalmazó vizsgálatok esetében a dózisintervallum nem lehet háromszorosnál nagyobb. A dózisszinteket a korábbi toxicitási adatok és különösen az ismételt dózisú vizsgálatok eredményeinek figyelembevételével kell megválasztani A vizsgálandó vegyület és a szerkezetileg rokon anyagok metabolizmusával és kinetikájával kapcsolatban rendelkezésre álló összes információt is figyelembe kell venni. Ezek az információk segítik majd az adagolási rend megfelelõ voltának igazolását is. A kontrollcsoport egy kezeletlen csoport, vagy ha a vizsgálandó anyag beadásához vivõanyagot használnak, akkor egy vivõanyaggal kezelt kontrollcsoport. A kontrollcsoportba tartozó állatokat a vizsgálandó anyag beadásától eltekintve ugyanolyan módon kell kezelni, mint a vizsgálati csoportokban lévõket. Vivõanyag alkalmazása esetén a kontrollcsoportban a legnagyobb alkalmazott mennyiségben kell beadni a vivõanyagot. Ha a vizsgálandó anyagot a táplálékkal adják be, és emiatt csökken a táplálékfogyasztás vagy hasznosítás, akkor szükség lehet egy párban etetett kontrollcsoport alkalmazására is. A párhuzamos párban etetett kontrollcsoport helyett felhasználhatók olyan kontrollcsoportokkal végzett vizsgálatokból származó adatok is, amelyek célja a csökkent táplálékfogyasztás reproduktív paraméterekre gyakorolt hatásának értékelése. A vivõanyagok vagy egyéb adalékok esetében a következõ jellemzõket kell figyelembe venni: a vizsgálandó anyag felszívódására, eloszlására, metabolizmusára vagy visszatartására gyakorolt hatások; a vizsgálandó anyag kémiai tulaj- 2005/154/II. szám donságaira gyakorolt hatások, amelyek módosíthatják annak toxikus jellemzõit; valamint az állatok táplálék- és vízfogyasztására vagy tápláltsági állapotára gyakorolt hatások. 1.4.4. Határérték-vizsgálat Ha egy egyetlen, legalább 1000 mg/testtömeg-kg/nap orális dózis felhasználásával végzett, vagy táplálékkal vagy ivóvízzel történõ beadás esetén a táplálékban vagy ivóvízben ezzel egyenértékû százalékos arány alkalmazásával történõ és az itt ismertetett eljárások szerint lefolytatott vizsgálat sem a szülõkben, sem utódaikban nem idéz elõ észlelhetõ toxicitást, és ha a szerkezetileg és/vagy metabolizmus szempontjából rokon vegyületekkel kapcsolatos adatok alapján nem várható toxicitás, megfontolható a több dózisszinttel végzett teljes vizsgálat elhagyása. Határérték-vizsgálatot kell minden esetben alkalmazni, kivéve, ha a humán expozíció magasabb orális dózis alkalmazását teszi szükségessé. Más típusú beadási módok, így például inhalálás vagy dermális alkalmazás esetén a vizsgálandó anyag fizikai-kémiai tulajdonságai – így például oldhatósága – gyakran elõre jelezhetik, illetve korlátozhatják a lehetséges expozíciós szint maximumát. 1.4.5. A dózisok beadása Az állatoknak a hét minden napján adagolni kell a vizsgálandó anyagot. A preferált beadási mód az orális (táplálékkal, ivóvízzel vagy mesterséges táplálással történõ bevitel). Az ettõl eltérõ beadási módok használatát meg kell indokolni, és ennek megfelelõ módosításokra is szükség lehet. A megfelelõ hosszúságú kísérleti idõszak során minden állatnak azonos módszerrel kell beadni az anyagot. Ha a vizsgálandó anyagot mesterséges táplálással juttatják be, gyomorszondát kell alkalmazni. Az egyszerre beadott folyadéktérfogat nem haladhatja meg az 1 ml/100 g testtömeg-arányt (kukoricacsíra-olajban történõ adagolás esetén a maximum a 0,4 ml/100 g testtömeg-arány), kivéve vizes oldatok esetében, amikor 2 ml/100 g testtömeg-arány is alkalmazható. Az irritáló vagy korróziós hatású anyagok kivételével, amelyek esetében a magasabb koncentrációk súlyosabb hatásokat okoznak, minimálisra kell csökkenteni a térfogatbeli eltéréseket, amihez a koncentrációt kell úgy beállítani, hogy minden dózisszinten állandó térfogatot lehessen biztosítani. A mesterséges táplálást alkalmazó vizsgálatokban a kölykök általában mindaddig csak közvetve, az anyatejen keresztül kapják a vizsgálandó anyagot, amíg az elválasztáskor meg nem kezdõdik a közvetlen adagolás. A táplálékkal vagy ivóvízzel történõ adagolást alkalmazó vizsgálatok esetében a kölykök közvetlenül is megkapják a vizsgálandó anyagot, amikor a szoptatási idõszak utolsó hetében önállóan is elkezdenek táplálkozni. A táplálékkal vagy ivóvízzel bejuttatott anyagok esetében fontos, hogy a vizsgálandó anyag mennyisége ne zavarja a normál táplálkozást vagy vízháztartást. Ha a vizsgálandó anyagot táplálékkal juttatják be, vagy a táplálékbeli koncentrációt (ppm), vagy pedig az állat testtömegére számított dózist kell állandó értéken tartani, és meg kell adni, hogy melyik alternatívát alkalmazzák. A mesterséges táplálással bejuttatott anyagok esetében a dózist mindig a nap hasonló idõszakában kell beadni, és legalább hetente újra be kell állítani ahhoz, hogy az állat testtömegéhez viszonyítva állandó értéken lehessen tartani a dózist. A mesterséges táplálással bejuttatott és testtömegen alapuló dózis beállításakor figyelembe kell venni a méhlepénybeli eloszlással kapcsolatos információkat is. 1.4.6. A kísérleti program A P generációba tartozó hímek és nõstények napi kezelését 5–9 hetes korukban kell elkezdeni. Az F1 hímek és nõstények napi kezelését az elválasztáskor kell elkezdeni; nem szabad megfeledkezni arról, hogy ha vizsgálandó anyagot táplálékkal vagy ivóvízzel adagolják, az F1 utódok közvetlen expozíciója már a szoptatási idõszakban megkezdõdhet. Az adagolást mindkét ivar (P és F1) esetében legalább 10 héten át folytatni kell a párzási idõszak elõtt. Az adagolást a 2 hetes pároztatási idõszakban sem szabad abbahagyni egyik ivar esetében sem. Amikor a reproduktív hatások értékelése szempontjából már nincs szükség a hím állatokra, humánus módon exterminálni kell õket és megvizsgálni. A szülõi (P) generációba tartozó nõstények esetében az adagolást a vemhesség ideje alatt is folytatni kell, egészen az F1 generáció elválasztásáig. Fontolóra kell venni az adagolási rend módosítását a vizsgálandó anyaggal, ezen belül a meglévõ toxicitási adatokkal, az anyagcsere fokozódásával vagy biológiai felhalmozódással kapcsolatban rendelkezésre álló információk alapján. Az egyes állatoknak beadandó dózist általában a legutóbbi testtömeg-mérés eredménye alapján kell meghatározni. A vemhesség utolsó trimeszterében azonban óvatosan kell eljárni a dózis beállításakor. A P és F1 hímek és nõstények kezelését exterminálásukig kell folytatni. Minden felnõtt P és F1 hímet és nõstényt humánus módon exterminálni kell, ha már nincs rájuk szükség a reproduktív hatások értékeléséhez. Az elválasztás után a pároztatásra ki nem választott F1 utódokat és minden F2 utódot humánus módon exterminálni kell elválasztásukat követõen. 1.4.7. A pároztatási eljárás 1.4.7.1. A szülõi (P) generáció pároztatása Minden egyes pároztatáskor a nõstényt egy azonos dózissal kezelt hímmel kell összerakni (1:1 pároztatás), és addig kell együtt hagyni õket, amíg a párzás meg nem történik, vagy 2 hét el nem telik. Mindennap meg kell vizsgálni, hogy a nõstényben észlelhetõ-e ondó vagy hüvelydugó. A vemhesség 0. napja definíció szerint az a nap, amikor hüvelydugó vagy ondó figyelhetõ meg a nõstényben. Ha a pároztatás sikertelen volt, fontolóra kell venni a nõstények újrapároztatását egy azonos csoportbeli és már sikeresen pároztatott hímmel. Az adatok között egyértelmûen fel kell tüntetni a pároztatott párokat. Kerülni kell a testvérek pároztatását. 2005/154/II. szám 1.4.7.2. F1 pároztatás Az F1 utódok pároztatásakor minden alomból legalább egy hím és egy nõstény állatot kell kiválasztani az elválasztáskor, hogy késõbb egy másik alomból származó, de azonos csoportba tartozó állattal pároztatva létrejöjjön az F2 generáció. A kölykök kiválasztását minden egyes alomban véletlenszerûen kell elvégezni, feltéve, hogy nincs szignifikáns különbség az egy alomba tartozó állatok testtömege vagy külsõ megjelenése között. Ha azonban van különbség, akkor minden alomból a legreprezentatívabb egyedet kell kiválasztani. A gyakorlatban ezt a testtömeg alapján lehet a legjobban elvégezni, de esetenként megfelelõbb lehet a külsõ megjelenés alapján tenni ezt. Mindaddig nem szabad pároztatni az F1 utódokat, amíg teljesen ivaréretté nem válnak. Az utód nélküli pároknál meg kell vizsgálni a látszólagos terméketlenség okát. Ennek keretében lehetõség biztosítható számukra más olyan hímekkel vagy nõstényekkel való párzásra, amelyeket már sikeresen pároztattak, vagy el lehet végezni a szaporítószervek mikroszkópos vizsgálatát, vagy meg lehet vizsgálni az ivari ciklust vagy a spermaképzõdést. 1.4.7.3. Második pároztatás Bizonyos esetekben, így például ha az alomméret a kezeléssel összefüggésben megváltozik, vagy ha az elsõ pároztatáskor nem egyértelmû hatásokat figyelnek meg, ajánlatos a felnõtt P és F1 állatokat újrapároztatni és így egy második almot kialakítani. Ajánlatos újrapároztatni azokat a hímeket és nõstényeket is, amelyek bizonyítottan nemzõképes ellenkezõ nemû partnerekkel sem hoztak utódokat. Ha a két generáció bármelyikében szükségesnek látszik egy második alom kialakítása, az állatokat körülbelül egy héttel az utolsó alom elválasztása után kell újrapároztatni. 1.4.7.4. Az alom mérete Hagyni kell, hogy az állatok a szokásos módon elljék és neveljék utódaikat az elválasztásig. Az alomméret standardizálása nem kötelezõ. Ha azonban elvégezzük a standardizálást, részletesen ismertetni kell az erre alkalmazott módszert. 1.5. Megfigyelések 1.5.1. Klinikai megfigyelések Mindennap klinikai megfigyelést kell végezni, és a mesterséges táplálással való adagolás a beadás idõpontjának meghatározásakor azt is figyelembe kell venni, hogy a beadás után a hatások várhatóan mikor érik el a maximumukat. A viselkedésbeli változásokat, a nehéz vagy hosszan tartó ellés jeleit és a toxicitás minden tünetét rögzíteni kell a jegyzõkönyvben. Legalább hetente egyszer alaposabban is meg kell vizsgálni az állatokat, célszerûen akkor, amikor a testtömeg-mérésre kerül sor. Naponta kétszer, illetve a hétvégeken adott esetben naponta egyszer meg kell vizsgálni az állatokat megbetegedés és elhullás szempontjából. 1.5.2. A szülõk testtömege, valamint táplálék- és vízfogyasztása A kezelés elsõ napján, majd azt követõen legalább hetente egyszer meg kell mérni a szülõk (P és Fl) testtömegét. Az anyaállatokat (P és F1) legalább a vemhesség 0., 7., 14. és 20. vagy 21. napján kell megmérni, a szoptatás idõszakában pedig ugyanazokon a napokon, amikor az utódokat is megmérik, valamint az állatok exterminálásának napján is. A megfigyeléseket minden egyes felnõtt állat esetében külön-külön kell rögzíteni. A pároztatás elõtti idõszakban és a vemhesség alatt legalább hetente meg kell mérni a táplálékfogyasztást. Ha a vizsgálandó anyagot az ivóvízzel adagolják, legalább hetente egyszer a vízfogyasztást is meg kell mérni. 1.5.3. Ivari ciklus Az ivari ciklus hosszát és szabályosságát hüvelykenet alkalmazásával kell meghatározni a P és F1 nõstényekben a pároztatás elõtt és adott esetben a pároztatás során mindaddig, amíg be nem bizonyosodik, hogy párzás történt. A hüvelyi/méhnyaki sejtek vétele során vigyázni kell arra, hogy meg ne sérüljön a nyálkahártya, és ezáltal nehogy álvemhesség alakuljon ki (1). 1.5.4. Spermaparaméterek A vizsgálat befejezésekor minden P és F1 hím esetében meg kell mérni a here és a mellékhere, valamint a kórszövettani vizsgálatokra megõrzött minden szerv közül az egyiknek a tömegét (lásd 1.5.7. és 1.5.8.1. szakasz). A P és F1 hímek minden egyes csoportjából egy-egy, legalább tíz hímbõl álló részhalmaz esetében a megmaradó heréket és mellékheréket a homogenizálásnak ellenálló spermatidák és mellékhere farki részében tárolt ondósejtek számlálására kell felhasználni. A hímek ugyanezen részhalmazában spermát kell gyûjteni a mellékhere farki részébõl vagy az ondóvezetékbõl, amelyet a spermamotilitás és -morfológia vizsgálatára kell felhasználni. Ha kezeléssel összefüggõ hatásokat észlelnek, vagy ha más vizsgálatok eredményei a spermaképzõdésre gyakorolt lehetséges hatásokra utalnak, a sperma értékelését az összes dóziscsoportban minden hímben el kell végezni; egyéb esetben elegendõ lehet, ha a számlálást csak a kontroll- és a magas dózissal kezelt P és F1 hímekben végzik el. Meg kell határozni a herében lévõ homogenizálásnak ellenálló spermatidák és a mellékhere farki részében található ondósejtek teljes számát (2) (3). A mellékhere farki részében lévõ ondókészlet nagyságát a kvalitatív értékelésekhez használt szuszpenzióban lévõ ondó koncentrációja és mennyisége, valamint a fennmaradt mellékhere farki részébõl kinyert szövet ezt követõ darálásával és/vagy homogenizálásával kinyert ondósejtek száma alapján lehet meghatározni. Az összes kezelési csoportban közvetlenül az exterminálás után kell elvégezni a számlálást a hímek e kiválasztott részhalmazában, kivéve, ha video- vagy digitális felvételt készítenek, vagy ha a mintákat késõbbi elemzésig lefagyasztják. Ilyen 2005/154/II. szám esetekben a kontroll- és a magas dózissal kezelt csoportot célszerû elõször megvizsgálni. Ha nem észlelhetõ kezeléssel összefüggõ hatás (pl. az ondósejtszámra, valamint a motilitásra és morfológiára gyakorolt hatás), a többi dóziscsoportot nem kell megvizsgálni. Ha a magas dózissal kezelt csoportban kezeléssel összefüggõ hatásokat észlelünk, akkor az alacsonyabb dóziscsoportokat is meg kell vizsgálni. Az exterminálás után azonnal értékelni kell vagy videofelvételen rögzíteni kell a mellékherébõl (vagy ondózsinórból) kinyert ondósejtek motilitását. A spermát a károsodások minimális szintre szorítása mellett kell kinyerni, majd elfogadható módszerek segítségével kell hígítani a motilitásvizsgálathoz (4). Az elõrehaladó mozgást mutató ondósejtek százalékos arányát vagy szubjektíven, vagy objektíven kell meghatározni. Ha számítógéppel támogatott motilitásvizsgálatot alkalmaznak (5) (6) (7) (8) (9) (10), az elõrehaladó mozgás levezetése az átlagos pályasebesség és egyenes vonalú mozgás vagy lineáris index felhasználó által beállított küszöbértékein alapul. Ha a boncoláskor a mintákról videofelvételt

Source: https://magyarkozlony.hu/hivatalos-lapok/26d18afd3335f9e39211d188f5f0154594a09258/dokumentumok/0a7c03030150447d3a33f0c38728a9fa2952eaf3/letoltes