Publication: Magyar Közlöny
Issue: MK-2003-42 (Year: 2003, Number: 42)
Era: 1990-2004
Section: 10. számú melléklet a 44/2003. (IV. 26.) FVM rendelethez
Paragraph Index: 1929

5. Vizsgálati eljárások Megjegyzés: A robenidin fényérzékeny, ezért minden mûveletnél sötét üveget vagy védõborítást kell alkalmazni. 5.1. Általános elvek a visszanyerés (recovery) vizsgálatához 5.1.1. A „blank” takarmány fogalma: A visszanyerési (recovery) vizsgálathoz lehetõség szerint olyan robenidin mentes takarmány mintát használjunk, amely összetételében nagyon hasonló a vizsgálati mintához, és a kromatogramon nincsenek a robenidin csúcsjelét zavaró csúcsok. 5.1.2. A visszanyerési vizsgálat elvégzése (recovery test): A blank minta extrakcióhoz bemért mennyiségéhez adjunk annyi robenidint, hogy a vizsgálati mintának megfelelõ robenidin koncentrációt kapjunk. 32 mg/kg-os robenidin szintet pl. a következõképpen állíthatunk be. Pipettázzunk 1,6 ml-nyi standard törzsoldatot (3.9.1.) az extraháló edény aljára, nitrogén áramban pároljuk be kb. 0,5 ml-re. Mérjünk rá 15 g-ot a blank mintából. Keverjük össze az edényben a mintát a folyadékkal és hagyjuk állni kb. 10 percig, majd végezzük el az extrakciót (5.2.). Amennyiben nem áll rendelkezésre blank takarmány (5.1.1.), a visszanyerési vizsgálatot az ún. standard addíció módszerével végezzük el. A vizsgálati mintához annyi standard oldatot adunk, hogy annak robenidin tartalma a duplája legyen annak, mint ami várhatóan jelen van a mintában. A mintát, valamint ezt a dúsított mintát extraháljuk (5.2.), majd mérjük (5.3.). A visszanyerést a két vizsgálat eredményének ismeretében kiszámolhatjuk. 5.2. Extrakció 0,01 g pontossággal mérjünk be 15 g mintát egy 250 ml-es dugós lombikba. Adjunk hozzá 100,0 ml sósavas metanolt (3.2.). A bedugaszolt lombikot rázassuk 1 órán keresztül. Az extraktum teljes mennyiségét átszûrjük egy üvegszálas szûrõn (4.5.). A szûrletbe bemérünk 7,5 g molekulaszûrõt (3.4.) és öt percig rázatjuk az elegyet. Ezután ismét leszûrjük egy üvegszálas szûrõn, majd a szûrletet tisztítási lépésnek vetjük alá (5.3.). 5.3. A minta oldat tisztítása 5.3.1. Az alumínium-oxid oszlop készítése: Az üvegoszlop (4.1.) alsó végébe egy üveggyapot dugót illesztünk, és egy üvegrúddal lenyomkodjuk. Kimérünk 11,0 g elõkészített alumínium-oxidot (3.5.) és az oszlopba töltjük. Ezen lépés során ügyeljünk, hogy lehetõleg ne képzõdjenek légzárványok a töltetben, ezt az üvegoszlop óvatos ütögetésével érhetjük el. 5.3.2. A minta oldat tisztítása: 5,0 ml extraktumot (5.2.) pipettázunk a tisztító oszlop (5.3.1.) tetejére. Hagyjuk, hogy az oldat abszorbeálódjon a tölteten. A robenidint 100 ml metanollal (3.1.), 2–3 ml/perc áramlási sebességgel eluáljuk az oszlopról. Az eluátumot forgó vákuum bepárlóban (4.3.) 40 °C-on szárazra pároljuk. A száraz maradékot 3–4 ml mozgó fázisban visszaoldjuk és egy 10 ml-es mérõlombikba visszük át. A bepárló lombikot többször átöblítjük a mozgó fázis 1–2 milliliteres adagjával és ezen adagokat is a mérõlombikba öntjük. A mérõlombikot végül jelig töltjük az eluenssel. Az oldatot membrán szûrõn (4.7.) szûrjük, majd kromatografáljuk (5.4.). 5.4. Folyadékromatográfiás mérés Vizsgálati paraméterek: Izokratikus elúció. Eluens oldat: (3.8.) Acetonitril (3.3.) + víz (HPLC minõségû) + KH2PO4 oldat (3.6.) + Na 2HPO4 oldat (3.7.)= = 650 + 250 + 50 + 50 (V+V+V+V). Áramlási sebesség: 1,5–2 ml/perc. Injektált térfogat: 20–50 µl. Kromatográfiásoszlop: (C18, 5 µm, 150×4,6 mm, vagy egyéb, a célnak megfelelõ analitikai oszlop). Detektálás hullámhossza:317 nm.

Source: https://magyarkozlony.hu/hivatalos-lapok/69b88ec8e02037a8d3637eee652ef17e0ba2ad2b/dokumentumok/e4451c379dbc96be3daac423580de092693182bb/letoltes