Publication: Magyar Közlöny
Issue: MK-2004-21 (Year: 2004, Number: 21)
Era: 2004-2010
Section: a 20/2004. (II. 27.) FVM rendelethez
Paragraph Index: 479

7. A kivonat elkészítése 7.1. Extrahálás 7.1.1. Koncentrátumok, elõkeverékek és ásványi takarmányok Mérjünk ki 2,0-5,0 g mintát és adjunk hozzá kb. 150 mg aszkorbinsavat (4.13.). Homogenizáljuk 150 ml 50%-os metil-alkohollal (4.5.) egy Erlenmeyer-lombikban (5.3.) és kb. 400 mg triszhidroximetil-aminometán (4.7.) segítségével állítsuk be a pH-t 8,1-8,2-re. Ellenõrizzük a pH-t indikátorpapírral (4.12.). Hagyjuk állni 15 percig, azután újra állítsuk be a pH-t trisz-hidroximetilaminometánnal (4.7.) 8,1-8,2-re, majd forraljuk 10 percig visszafolyós hûtõ alatt (5.4.), állandó keveréssel. Hagyjuk lehûlni, centrifugáljuk a keveréket és dekantáljuk a kivonatot. 7.1.2. Egyéb takarmányok Mérjünk ki egy legalább 30 µg flavofoszfolipolt tartalmazó, 5,0-30,0 g tömegû mintát. Homogenizáljuk 150 ml 50%-os metil-alkohollal (4.5.) egy Erlenmeyer-lombikban (5.3.), és kb. 400 mg triszhidroximetil-aminometán (4.7.) segítségével állítsuk be a pH-t 8,1.8,2-re. Ellenõrizzük a pH-t indikátorpapírral (4.12.). Hagyjuk állni 15 percig, azután újra állítsuk be a pH-t trisz-hidroximetilaminometánnal (4.7.) 8,1-8,2-re, majd forraljuk 10 percig visszafolyós hûtõ alatt (5.4.), állandó keveréssel. Hagyjuk kihûlni, centrifugáljuk a keveréket és dekantáljuk a kivonatot. 7.2. Derítés (a vizsgálat ezen szakasza koncentrátumok, elõkeverékek és ásványi takarmányok esetében elhagyható) 7.2.1. Keverjünk össze 110 ml kivonatot 11 g kationcserélõvel (4.9.), forraljuk egy percig visszafolyós hûtõ alatt (5.4.), állandó keveréssel. Válasszuk le a kationcserélõt centrifugálással vagy szûréssel. Keverjünk össze 100 ml kivonatot 150 ml metil-alkohollal (4.4.), majd tároljuk az oldatot 12-15 óráig 4 °C-on. Szûrjük le még hidegen a flokkulens anyagot. 7.2.2. Helyezzünk egy üvegvatta dugót (4.11.) az üvegcsõ aljára (5.1.), öntsünk a csõbe 5 ml anioncserélõt (4.10.) és mossuk az oszlopot 100 ml, 80%-os metil-alkohollal (4.6.). A csepegtetõtölcsér (5.2.) segítségével öntsünk át az oszlopba legalább 100 ml szûrletet, amely várhatóan 16 µg flavofoszfolipolt tartalmaz (30 g-os takarmányminta esetében, 1 ppm-nél 200 ml-t). Adott esetben, mielõtt az oszlopba töltenénk, hígítsuk a szûrletet 80%-os metil-alkohollal (4.6.), hogy a várt 16 µg/100 ml koncentrációjú flavofoszfolipol-tartalmat kapjuk. Állítsuk be az átfolyási sebességet kb. 2 ml/perc értékre. Öntsük el a szüredéket. Ezután mossuk az oszlopot 50 ml, 80%-os metil-alkohollal (4.6.) és öntsük el a szüredéket. 7.2.3. Eluáljuk a flavofoszfolipolt kálium-klorid metil-alkoholos oldatával (4.8.), az átfolyási sebességet kb. 2 ml/perc értéken tartva. Vegyünk fel 50 ml eluátumot egy mérõlombikban, adjunk hozzá 30 ml vizet és keverjük össze. Ezen oldat flavofoszfolipol-tartalmának 0,2 µg/ml-nek kell lennie (= U8). 7.3. Vizsgálati oldatok 7.3.1. Adott esetben (pl. a derítés kihagyása esetén), hígítsuk a 7.1.1. pontban kapott kivonatot 50%-os metil-alkohollal (4.5.), hogy a várt 0,2 µg/ml koncentrációjú flavofoszfolipol-tartalmat kapjuk (= U8). 7.3.2. Az U8 oldatból, 50%-os metil-alkohollal (4.5.) történõ többszöri hígítás útján (1 + 1 arányban) készítsük el az U4 (várt tartalom: 0,1 µg/ml), az U2 (várt tartalom: 0,05 µg/ml) és az U1 (várt tartalom: 0,025 µg/ml) oldatokat.

Source: https://magyarkozlony.hu/hivatalos-lapok/50ffa5371bd67ade8e8b08959aa12136de225c3b/dokumentumok/f23f4f92c4f8dc35e1c0a8f3f93e865a1d7603fe/letoltes