Publication: Magyar Közlöny
Issue: MK-2003-42 (Year: 2003, Number: 42)
Era: 1990-2004
Section: 10. számú melléklet a 44/2003. (IV. 26.) FVM rendelethez
Paragraph Index: 1885

5. Vizsgálati eljárások 5.1. Általános elvek a visszanyerés (recovery) vizsgálatához 5.1.1. A „blank” takarmány fogalma: A visszanyerési (recovery) vizsgálathoz lehetõség szerint olyan diklazuril mentes takarmány mintát használjunk, amely összetételében nagyon hasonló a vizsgálati mintához, és a kromatogramon nincsenek a diklazuril csúcsjelét zavaró csúcsok. 5.1.2. A visszanyerési vizsgálat elvégzése (recovery test): A blank minta extrakcióhoz bemért mennyiségéhez adjunk annyi diklazurilt, hogy a vizsgálati mintának megfelelõ diklazuril koncentrációt kapjunk. 1 mg/kg-os diklazuril szintet pl. a következõképpen állíthatunk be. Pipettázzunk 1,0 ml diklazuril közbensõ standard oldatot (3.8.2.) az extraháló edény aljára. Mérjünk rá 50 g-ot a blank mintából. Keverjük össze az edényben a mintát a folyadékkal és hagyjuk állni kb. 10 percig, majd ismét keverjük össze és végezzük el az extrakciót (5.2.). Amennyiben nem áll rendelkezésre blank takarmány (5.1.1.), a visszanyerési vizsgálatot az ún. standard addíció módszerével végezzük el. A vizsgálati mintához annyi standard oldatot adunk, hogy annak diklazuril tartalma a duplája legyen annak, ami várhatóan jelen van a mintában. A mintát, valamint ezt a dúsított mintát extraháljuk (5.2.), majd mérjük (5.3.). A visszanyerést a két vizsgálat eredményének különbségébõl számolhatjuk. 5.2. Extrakció 5.2.1. Takarmánykeverékek: 0,01 g pontossággal mérjünk be 50 g mintát egy 500 ml-es dugós lombikba. Adjunk hozzá 1,0 ml belsõ standard oldatot (3.9.2.) és 200,0 ml extraháló oldatot (3.12.). Az elegyet rázassuk a mechanikus rázógépen, egy éjszakán keresztül. Az extraktum tisztájából 20 ml-nyit kipipettázunk és hozzáadunk 20 l vizet. Az elegyet a szilárd fázisú tisztító oszlopocskán (3.11.) átszívjuk az SPE berendezés (4.5.) segítségével. Az oszlopot ezután az extraháló oldat (3.12.) és víz 65 + 35 (V+V) arányú elegyével mossuk. A diklazurilt és a belsõ standardot az extraháló oldat (3.12.) és víz 80 + 20 (V+V) arányú elegyével eluáljuk. Az eluátumot rotációs vákuumbepárlón (4.3.) 60 °C-on szárazra pároljuk, majd 1,0 ml DMF-be visszaoldjuk, majd hozzáadunk 1,5 ml vizet. Az elegyet összekeverjük, membránszûrõn (4.4.) szûrjük és kromatografáljuk (5.3.). 5.2.2. Takarmány elõkeverékek: 0,001 g pontossággal mérjünk be 1 g mintát egy 500 ml-es dugós lombikba. Adjunk hozzá 1,0 ml belsõ standard oldatot (3.9.3.) és 200,0 ml extraháló oldatot (3.12.). Az elegyet rázassuk a mechanikus rázógépen, egy éjszakán keresztül. Az extraktum tisztájából 10000/p ml-nyit (p = a diklazuril névleges mennyisége a takarmány elõkeverékben mg/kg-ban kifejezve) rotációs vákuumbepárlón (4.3.) 60 °C-on szárazra párolunk. A száraz maradékot 10,0 ml DMF-be visszaoldjuk, majd hozzáadunk 15 ml vizet (3.1.). Az elegyet összekeverjük, membránszûrõn (4.4.) szûrjük, majd kromatografáljuk (5.3.). 5.3. Folyadékkromatográfiás mérés 5.3.1. Vizsgálati paraméterek: Az alábbi paraméterek iránymutató jellegûek, a kromatográfiás rendszertõl függõen más elválasztási paraméterek is alkalmazhatóak, amelyek megfelelõ eredményt adnak. Eluens oldatok (3.13.): Eluens „A”: ammónium-acetát/TBHS oldat (3.13.1.). Eluens „B”: acetonitril (3.13.2.). Eluens „C”: metanol (3.13.3.). Lineáris gradiens: – kezdeti eluens összetétel: A + B + C = 60 + 20 + 20 (V + V + V) – a 10. perctõl a 30. percig: A + B + C = 45 + 20 + 35 (V + V + V) – a 30. perctõl 10 percig a „B” eluenssel öblítés. Áramlási sebesség: 1,5–2 ml/perc Injektált térfogat: 20 µl Kromatográfiás oszlop: 100 × 4,6 mm, Hypersil ODS, 3 µm, vagy egyéb a célnak megfelelõ elválasztó oszlop Detektálás hullámhossza:280 nm

Source: https://magyarkozlony.hu/hivatalos-lapok/69b88ec8e02037a8d3637eee652ef17e0ba2ad2b/dokumentumok/e4451c379dbc96be3daac423580de092693182bb/letoltes