Publication: Magyar Közlöny
Issue: MK-2003-42 (Year: 2003, Number: 42)
Era: 1990-2004
Section: 10. számú melléklet a 44/2003. (IV. 26.) FVM rendelethez
Paragraph Index: 1904

4. Eszközök 4.1. Laboratóriumi rázógép. 4.2. Üvegszálas szûrõpapír (Whatman GF/A vagy annak megfelelõ). 4.3 Üvegoszlop alumínium oxidos tisztításhoz. 300–400 mm hosszú, kb. 10 mm átmérõjû üvegoszlop végén elzáró csappal. 4.4. HPLC mûszer összeállítás, UV vagy diódasoros detektorral. 4.4.1. Folyadékkromatográfiás oszlop, 150 × 4,6 mm, C18, 5 µm, vagy egyéb a célnak megfelelõ elválasztó oszlop. 4.5. Membránszûrõ, 0,22 µm eluens szûréséhez. 4.6. Membránszûrõ, 0,45 µm minta oldat szûréséhez. 4.7. Ultrahangos vízfürdõ. 5. Vizsgálati eljárások Megjegyzés: a karbadox fényérzékeny anyag, a vizsgálat során használjunk sötét edényzetet, vagy alufóliával borítsuk be a lombikokat. 5.1. Általános megjegyzések a visszanyerés (recovery) vizsgálatához 5.1.1. A „blank” takarmány fogalma. A visszanyerési (recovery) vizsgálathoz lehetõség szerint olyan karbadox mentes takarmány mintát használjunk, amely összetételében nagyon hasonló a vizsgálati mintához, és a kromatogramon nincsenek a karbadox csúcsjelét zavaró csúcsok. 5.1.2. A visszanyerési vizsgálat elvégzése (recovery test). A blank minta extrakcióhoz bemért mennyiségéhez adjunk annyi karbadoxot, hogy a vizsgálati mintának megfelelõ karbadox koncentrációt kapjunk. 50 mg/kg-os karbadox szintet pl. a következõképpen állíthatunk be. Pipettázzunk 5,0 ml standard törzsoldatot (3.11.1.) az extraháló edény aljára. Pároljuk be kb. 0,5 ml-re nitrogén áramban, majd mérjünk rá 10 g-ot a blank mintából. Keverjük össze az edényben a mintát a folyadékkal és hagyjuk állni kb. 10 percig, majd ismét keverjük össze és végezzük el az extrakciót (5.2.). Amennyiben nem áll rendelkezésre blank takarmány (5.1.1.), a visszanyerési vizsgálatot az ún. standard addíció módszerével végezzük el. A vizsgálati mintához annyi standard oldatot adunk, hogy annak karbadox tartalma a duplája legyen annak, mint ami várhatóan jelen van a mintában. A mintát, valamint ezt a dúsított mintát extraháljuk (5.2.), majd mérjük (5.3.). A visszanyerést a két vizsgálat eredményének különbségébõl számolhatjuk. 5.2. Extrakció 5.2.1. Takarmánykeverékek (25–50 mg/kg): 0,01 g pontossággal mérjünk be 10 g mintát egy 200 ml-es lombikba. Adjunk hozzá 15,0 ml deszt. vizet és equilibráljuk 5 percig. Adjunk hozzá 35,0 ml metanol/acetonitril elegyet (3.5.), majd a lombikot lezárva rázassuk az elegyet 30 percen keresztül. Az oldatot üvegszálas szûrõn (4.2.) szûrjük. A szûrletet alumínium-oxidon tisztítjuk (5.3.2.). 5.2.2. Takarmány elõkeverékek (0,1–2,0 % ): 0,01 g pontossággal mérjünk be 1 g mintát egy 200 ml-es lombikba. Adjunk hozzá 15,0 ml deszt. vizet és equilibráljuk 5 percig. Adjunk hozzá 35,0 ml metanol/acetonitril elegyet (3.5.), majd a lombikot lezárva rázassuk az elegyet 30 percig. Az oldatot üvegszálas szûrõn szûrjük. A szûrlet aliquot mennyiségét pipettázzuk egy 50 ml-es mérõlombikba. Adjunk hozzá 15,0 ml deszt. vizet és töltsük jelig a metanol/acetonitril (3.5.) eleggyel. A végkoncentráció 10 µg/ml közelében legyen. Az oldatot membránszûrõn (4.6.) szûrjük, majd kromatografáljuk (5.4.). 5.2.3. Egyéb minták (> 2%): 0,0001 g pontossággal mérjünk be 0,2 g mintát egy 250 ml-es lombikba. Adjunk hozzá 45,0 ml deszt. vizet és equilibráljuk 5 percig. Adjunk hozzá 105,0 ml metanol/acetonitril elegyet (3.5.), majd a lombikot lezárva rázassuk az elegyet 15 percig. A rázatás után még 15 percig kezeljük a mintát ultrahangos vízfürdõben (4.7.). Az oldatot üvegszálas szûrõn (4.2.) szûrjük. A szûrlet aliquot mennyiségét úgy hígítjuk vízmetanol/acetonitril (3.12.) elegyével, hogy a végkoncentráció 10 µg/ml között legyen. 5.3. Tisztítás 5.3.1. Az alumínium-oxidos oszlop elkészítése: Töltsünk be 4 g alumínium-oxidot (3.4.) az üvegoszlopba (4.3.). 5.3.2. Mintatisztítás: Csak a tápokból készült extraktumokat (5.2.1.) kell szükség esetén tisztítani. Engedjünk át 15 ml szûrletet az oszlopon. Az elsõ 2 ml-t dobjuk el. A következõ 5 ml-t gyûjtsük egybe és szûrjük át 0,45 µm-es membránszûrõn (4.6.). A szûrletet kromatografáljuk (5.4.). 5.4. Mérési körülmények Az alábbi paraméterek iránymutató jellegûek, a kromatográfiás rendszertõl függõen más elválasztási paraméterek is alkalmazhatóak, amelyek megfelelõ eredményt adnak. Izokratikus elúció. Eluens oldat: 0,01 M Nátrium-acetát puffer, pH = 6,0 (3.9.)/Acetonitril (3.2.) = 82,5 + 17,5 (V+V) Áramlási sebesség: 1,5 ml/perc Injektált térfogat: 20 µl Kromatográfiás oszlop: 150 × 4,6 mm, C18, 5 µm, vagy egyéb a célnak megfelelõ elválasztó oszlop. Detektorjellemzõk: 365 nm.

Source: https://magyarkozlony.hu/hivatalos-lapok/69b88ec8e02037a8d3637eee652ef17e0ba2ad2b/dokumentumok/e4451c379dbc96be3daac423580de092693182bb/letoltes