Publication: Magyar Közlöny
Issue: MK-2004-13 (Year: 2004, Number: 13)
Era: 2004-2010
Section: 2. számú melléklet a 6/2004. (II. 10. ) ESZCSM rendelethez
Paragraph Index: 698

2. * A legjobban elõhívható színt jelzi. 6. Vizsgálat kétdimenziós vékonyréteg kromatográfiával A kétdimenziós kromatográfiás eljárás végrehajtásához további standardok és reagensek használata szükségesek. 6.1. Kiegészítõ referencia oldatok és anyagok 6.1.1. β-naftol (β-N) 6.1.2. 2-amino-fenol (OAP) 6.1.3. 3-amino-fenol (MAP) 6.1.4. 4-amino-fenol (PAP) 6.1.5. 2-nitro-1,4-fenilén-diamin (2-NPPD) 6.1.6. 4-nitro-1,2-fenilén-diamin (4-NOPD) Készítsük el a kiegészítõ referencia anyagok 0,5%-os (m/V) oldatát a 3.21. pontban leírt módon. 6.2. Elõhívó oldószer 6.2.1. Etil-acetát–ciklohexán–25%-os ammónia oldat, (65:30:0,5 térfogatarányban) 6.3. Jelzõ rendszer Helyezzünk egy üvegedényt egy vékonyréteg-kromatográfiás elõhívó kádba, mérjünk be körülbelül 2 g kristályos jódot, és zárjuk le a kádat egy fedéllel. 6.4. Kromatográfia 6.4.1. Az 1. ábrán látható módon húzzunk két merõleges vonalat a vékonyréteg lapon (4.1.3.), az adszorbens felületén. 6.4.2. A lapot nitrogén atmoszféra (4.11.) alatt tartva vigyünk fel az 1. ábra szerinti, az 1 jelû kiindulási pontba 1–4 µl kivonatot (5.1.). A kivonat mennyisége az 5.2. szakaszban kapott kromatogramokon megjelenõ foltok intenzitásától függ. 6.4.3. Osszuk el a 2 és 3 jelû pont között (1. ábra) az 5.2. szakaszban azonosított vagy az 5.2. szakasz alapján feltételezett oxidáló színezékeket (a pontok közötti távolság 1,5 cm). Vigyünk fel valamennyi referencia oldatból 2–2 µl-t a DAP kivételével, amelybõl 6 µl-t vigyünk fel a lapra. A mûveletet nitrogén (6.4.2.) alatt végezzük. 6.4.4. Ismételjük meg a 6.4.3. szakaszban leírt mûveletet a 4 és 5 jelû kiindulási pontokban (1. ábra) (a pontok közötti távolság 1,5 cm), és tartsuk a lapot nitrogén alatt, amíg a kromatográfia meg nem kezdõdik. 6.4.5. Öblítsünk át egy kromatográfiás kádat nitrogénnel (3.8.), majd öntsünk bele megfelelõ mennyiségû 3.22.2. oldószert. Tegyük a (6.4.4.) lapot a kádba, és futtassuk fénytõl védve az elsõ elúciós irányba (1. ábra). A kromatografálást addig végezzük, amíg az oldószerfront eltávolodott körülbelül 13 cm-re. 6.4.6. Vegyük ki a lapot a kádból, helyezzük egy elõzetesen nitrogénnel átöblített kádba, és szárítsuk legalább 60 percen át, hogy az eluáló oldószer elpárologjon. 6.4.7. Egy térfogatmérésre alkalmas próbacsõvel mérjünk be megfelelõ mennyiségû eluáló oldószert (6.2.1.) egy elõzetesen nitrogénnel (3.8.) átöblített kádba, tegyük be a (6.4.6.) kádba a lapot az elõzõ helyzetéhez képest 90°-kal elforgatva, és addig végezzük a kromatografálást a másik irányban ugyancsak fénytõl védve, amíg az oldószerfront el nem éri az adszorbens felületén húzott vonalat. Vegyük ki a lapot a kádból, és szárítsuk meg levegõn. 6.4.8. Tegyük be a lapot 10 percre a jódgõzökkel (6.3.) telített kromatográfiás kádba és értékeljük a kétdimenziós kromatogramot az egyidejûleg kromatografált referencia anyagok Rf értéke és színe alapján. (A II. táblázat tájékoztató jelleggel ismerteti az Rf értékeket és a színeket). Megjegyzés: A foltok színének maximális intenzitása úgy biztosítható, ha a kromatogramot az elõhívás után fél órán keresztül hagyjuk levegõn állni. 6.4.9. A 6.4.8. pontban azonosított oxidáló színezékek jelenléte egyértelmûen igazolható, ha a 6.4.1– 6.4.8. pontban írt mûveletsort úgy ismételjük meg, hogy a 6.4.2. pontban az 1 jelû kiindulási pontban felvitt mennyiségen felül 1-1 µl-t felviszünk a 6.4.8.-ban azonosított színezékek referencia oldatából is. Ha ebben a mûveletsorban a 6.4.8. ponthoz képest nem jelenik meg új folt, a kromatogramnak a 6.4.8 szerinti értékelése helyes. II. TÁBLÁZAT Referencia oldatok színe a kromatográfia és a jódgõzökkel történõ elõhívás után Referencia anyag Szín, jódgõzökkel történõ futtatás után R bézs P barna α-N ibolya β-N világosbarna H ibolya-barna MPD sárgásbarna PPD ibolya-barna MTD sötétbarna PTD sárgásbarna Referencia anyag Szín, jódgõzökkel történõ futtatás után DAP sötétbarna OAP narancs MAP sárgásbarna PAP ibolya-barna 2-NPPD barna 4-NOPD narancs

Source: https://magyarkozlony.hu/hivatalos-lapok/53f83b22112ddee3ba432e293c5a4a07160629ad/dokumentumok/1147f0c2e2ee62fd0d72848b53190fba47bc78de/letoltes