Publication: Magyar Közlöny
Issue: MK-2003-42 (Year: 2003, Number: 42)
Era: 1990-2004
Section: 10. számú melléklet a 44/2003. (IV. 26.) FVM rendelethez
Paragraph Index: 1952

5. Vizsgálat 5.1. A minta elõkészítése Daráljuk meg a jól homogenizált mintát úgy, hogy áthulljon az 1 mm lyukbõségû szitán {4.2.), majd újból homogenizáljuk. 5.2. Bemérés Az elõkészített vizsgálati mintából 50 g-ot az Erlenmeyer lombikba mérünk. 5.3. Extrakció Adjunk 25 g Celitet (3.8.), 250 ml kloroformot (3.1.) és 25 ml vizet a bemért vizsgálati mintához az Erlenmeyer lombikba. Dugaszoljuk be a lombikot, rázassuk a rázógépen (4.3.) 30 percig. Szûrjük át redõs szûrõpapíron (4.14.). Gyûjtsünk össze 50 ml szûrletet. Ha szükséges, hígítsuk a szûrletet kloroformmal úgy, hogy az aflatoxin B1 koncentrációja a 4 ng/ml-t ne haladja meg. 5.4. Tisztítás (Az eljárást jelentõsebb megszakítás nélkül kell elvégezni.) Figyelmeztetés: Azt a laboratóriumot, ahol a vizsgálatot végzik, megfelelõen védeni kell a természetes fénytõl. Ennek megfelelõ eszközei az alábbiak: (i) UV-fényt elnyelõ fólia az ablakokon, azzal kombinálva, hogy az ablakot direkt napfény nem éri; (ii) függönyök vagy redõnyök és mesterséges fény (fluoreszcens csövek megfelelõek) az aflatoxint tartalmazó oldatokat a lehetõ legjobban védeni kell a fénytõl (sötét helyen tartjuk, alufóliába burkoljuk). 5.4.1. Tisztítás Florisil SPE oszlopon Az oszlopot 10 ml kloroformmal (3.1.) átmosva elõkészítjük. Az oszlopra töltjük a 5.3. szakasz szerint összegyûjtött kivonatot és hagyjuk szabadon lecsöpögni. Átöblítjük 5 ml kloroformmal (3.1.), majd 20 ml metanollal (3.2.). E mûveletek alatt ügyeljünk arra, hogy az oszlop ki ne száradjon. A lecsöpögõ oldatokat elöntjük. Az aflatoxin B1-et 40 ml aceton/víz eleggyel (3.5.1.) mossuk le az oszlopról. Az eluátum teljes mennyiségét gömblombikba (4.4.) gyûjtjük. Rotációs lepárló készülékben 40 és 50 °C közötti hõmérsékleten mindaddig desztilláljuk, amíg több aceton már nem távozik. (Megjegyzés: Ekkor kb. 0,5 ml folyadék marad a lombikban. Kísérletek bizonyítják, hogy a további lepárlás nem káros, és a 0,5 ml bepárlási maradékban már nincs jelen jelentõs mennyiségû aceton. Az aceton nyomok a C18 oszlopon való tisztításkor veszteségekhez vezethetnek.) Adjunk a lombikba 1 ml metanolt (3.2.), körkörösen mozgassuk a lombikot, hogy az aflatoxin Bl-et leoldjuk a lombik oldaláról, adjunk hozzá 4 ml vizet és rázzuk össze. 5.4.2. Tisztítás C18-as SPE oszlopon Az oszlopot 10 ml metanollal (3.2.), majd 10 ml vízzel átmosva elõkészítjük. Az 5.4.1.2. pont szerinti kivonatot vigyük rá az oszlopra. (4.17.). A lombikot öblítsük kétszer 5 ml víz/metanol eleggyel (3.5.2.) le, öntsük az oszlopra és hagyjuk szabadon lecsöpögni. E mûveletek alatt ügyeljünk arra, hogy az oszlop ne száradjon ki. Mossuk az oszlopot 25 ml víz/metanol eleggyel. Öntsük el az eluátumot. Az aflatoxin Bl-et 50 ml víz/aceton eleggyel (3.5.3.) eluáljuk egy 50 ml-es mérõlombikba. Töltsük jelig vízzel és rázzuk össze. Az így keletkezett oldatot használjuk a kromatográfiás meghatározáshoz (5.5.). Figyelmeztetés: A fenti módon elõkészített mintát általában nem szükséges megszûrni a HPLC vizsgálat elõtt. Ha a szûrés elkerülhetetlen, cellulóz membrán nem használható, mert aflatoxin Bl veszteséghez vezethet. Teflon szûrõk megfelelõek. 5.5. Folyadékkromatográfiás mérés Az 1. ábrán látható a jóddal történõ származékképzéses eljárás mûszeres folyamatábrája. A HPLC készüléket a mûszerkönyv szerint üzembe helyezzük. Biztosítsunk elegendõ idõt a mûszerek kondicionálására és stabilizálására. Megjegyzések:

Source: https://magyarkozlony.hu/hivatalos-lapok/69b88ec8e02037a8d3637eee652ef17e0ba2ad2b/dokumentumok/e4451c379dbc96be3daac423580de092693182bb/letoltes