Publication: Magyar Közlöny
Issue: MK-2004-21 (Year: 2004, Number: 21)
Era: 2004-2010
Section: a 20/2004. (II. 27.) FVM rendelethez
Paragraph Index: 495

7. Analitikai szûrõmódszerek 7.1. A szûrõmódszerek használatánál különbözõ analitikai célok teljesíthetõek: egyszerû szûrés és kvantitatív meghatározás 7.1.1. A szûrés A minták eredményeit összehasonlítjuk egy, az adott szintet mutató referenciaminta eredményével. A referenciánál kisebb eredményt adó mintákat negatívnak minõsítjük, a nagyobb eredményt adókat pedig feltételezett pozitívaknak. 7.1.1.1. Minden kísérletsorozatnak tartalmaznia kell egy vak- és egy referencia mintát, amelyeket egyidejûleg azonos körülmények között extrahálunk és tesztelünk. A referencia mintának egyértelmûen magasabb eredményt kell adnia, mint a vaknak. 7.1.1.2. Az adott szint ellenõrzésére további, az adott szint felének és kétszeresének megfelelõ referencia mintákat is alkalmazni kell annak igazolására, hogy a teszt az adott tartományban megfelelõ teljesítményû. 7.1.1.3. Amikor más mátrixokat tesztelünk, a referencia minta vagy referencia minták megfelelõségét is bizonyítani kell, lehetõleg olyan minták felhasználásával, amelyek HRGC/HRMS-sel mért TEQ-értéke hasonló a referencia mintáéhoz, vagy másképpen egy vakmintával, ami erre a szintre van beállítva. 7.1.1.4. Mivel a biológiai tesztekben nem használhatók belsõ standardok, nagyon fontosak az ismételhetõségi tesztek ahhoz, hogy meg tudjuk állapítani az egy kísérletsorozaton belüli standard eltérést. A variációs koefficiensnek 30% alatt kell lennie. 7.1.1.5. A biológiai tesztek esetében meg kell határozni a célvegyületeket, az esetleges zavaró hatásokat és az elfogadható vakszintek maximumát. 7.1.2. A kvantitatív meghatározás A kvantitatív megközelítéshez standard hígítási sorok, két vagy három sorozatban párhuzamosan végzett tisztítás és mérés, valamint vak és visszanyerési kontrollok szükségesek. Az eredmények kifejezhetõk TEQ-ben, feltételezve, hogy a jelért felelõs vegyületek megfelelnek a TEQ-alapelvnek. Ezt TCDD (vagy egy dioxin/furán standard keverék) használatával végezhetjük, amellyel felveszünk egy kalibrációs görbét, hogy ez alapján ki tudjuk számolni az extraktumra és így a mintára jellemzõ TEQ-szintet. Ezt azután korrigáljuk a vakmintára számított TEQ-szinttel (hogy figyelembe vegyük az alkalmazott oldószerekbõl és vegyszerekbõl származó szennyezéseket), valamint egy viszanyerésre számított TEQ-szinttel (amelyet egy, kérdéses szint körüli értékû minõségellenõrzõ minta TEQ szintjébõl számolunk). Fontos megjegyezni, hogy a nyilvánvaló visszanyerési veszteség egy része mátrixhatásokból, illetve biológiai tesztekben kapott TEF-értékek és a WHO által rögzített hivatalos TEF-értékek különbségébõl is eredhet. 7.2. A szûrésre használt analitikai módszerekre vonatkozó követelmények 7.2.1 A szûréshez használhatók a GC/MS analitikai módszerek és biológiai tesztek. A GC/MS módszerek vonatkozásában a 6. pontban megállapított követelményeket kell alkalmazni. A sejtalapú biológiai tesztek vonatkozásában a 7.3. pontban, a reagenskészlet-alapú biológiai tesztek vonatkozásában a 7.4. pontban megállapított különleges követelményeket kell alkalmazni. 7.2.2. Egy nagyszámú, a maximális vagy az akciós szint alatti vagy feletti mintákat tartalmazó sorozatnál szükség van a téves pozitív és téves negatív eredmények számával kapcsolatos információkra a megerõsítõ módszerrel meghatározott TEQ-tartalommal összehasonlításban. A téves negatívak tényleges arányának 1% alatt kell lennie. A téves pozitív minták arányának elég alacsonynak kell lenni ahhoz, hogy elõnyös legyen a szûrõmódszer alkalmazása. 7.2.3. A pozitív eredményeket mindig meg kell erõsíteni egy megerõsítõ analitikai módszerrel (HRGC/HRMS). Továbbá HRGC/HRMS-sel meg kell erõsíteni a széles TEQ- tartományból származó mintákat (a negatív minták kb. 2-10%-a). A biológiai tesztek és a HRGC/HRMS eredményeinek összefüggésével kapcsolatos információkat is meg kell adni. 7.3. A sejtalapú biológiai tesztekre vonatkozó különleges követelmények 7.3.1. A biológiai tesztek végzése során minden teszt lefuttatásához szükség van egy TCDD vagy dioxin/furán keverék referenciakoncentráció-sorozatra (teljes dózisválasz görbe, ahol R2 > 0,95). Szûrési célokra azonban egy kibõvített, alacsony szintû minták mérésére alkalmas alacsony-szint görbét alkalmazhatunk. 7.3.2. Egy minõségellenõrzési lapon rögzíteni kell a biológiai tesztek eredményeinek megállapításához az adott idõtartam alatt használt TCDD referencia-koncentrációt (körülbelül a mennyiségi meghatározás határértékének háromszorosa). Alternatív lehetõséget jelenthet egy referencia mintának a TCDD kalibrációs vonalhoz viszonyított relatív válasza, mivel a sejtek válasza sok tényezõtõl függhet. 7.3.3. Minden típusú referenciaanyaghoz fel kell venni egy minõségellenõrzési (QC) diagramot, amelyet ellenõrizni kell annak érdekében, hogy az eredmények összhangban vannak-e a meghatározott iránymutatásokkal. 7.3.4 Különösen a kvantitatív számítások esetén, az alkalmazott hígítási minta indukciójának a válaszgörbe lineáris szakaszára kell esnie. A válaszgörbe lineáris szakasza feletti mintákat fel kell hígítani, és újra meg kell mérni. Ajánlott tehát egyszerre legalább két vagy három hígítást mérni. 7.3.5. Az egyes hígítási minták három párhuzamos sorozatban való mérése esetén a százalékos standard eltérés nem lehet 15% felett, három független kísérlet között pedig nem haladhatja meg a 30%-ot. 7.3.6. A kimutatási határt az oldószeres vak- vagy a háttér által adott válasz standard eltérésének háromszorosában lehet megállapítani. Egy másik megközelítés szerint egy, a napi kalibrációs görbébõl számolt háttér (az indukciós faktor az oldószeres vak ötszöröse) feletti választ alkalmazunk. A számszerûsítési határt az oldószeres vak- vagy a háttér által adott válasz standard eltérésének öthatszorosában lehet megállapítani, vagy alkalmazhatunk egy egyértelmûen a napi kalibrációs görbébõl számolt és a háttérjelnél nagyobb jelet (az indukciós faktor az oldószeres vak 10-szerese). 7.4. A reagenskészlet-alapú biológiai tesztekre vonatkozó különleges követelmények 7.4.1. Követni kell a gyártó mintakészítésre és analízisre vonatkozó utasításait. 7.4.2. A szavatossági idõ lejárta után a reagenskészleteket nem szabad felhasználni. 7.4.3. Nem alkalmazhatók a más reagenskészletekben történõ felhasználásra készített anyagok vagy összetevõk. 7.4.4. A reagenskészleteket a megadott tárolási hõmérsékleti tartományban kell tartani, és a megadott mûködési hõmérsékleten kell felhasználni. 7.4.5. Az immuntesztek kimutatási határát úgy kapjuk meg, hogy a 10 ismétlésben mért vak alapján kapott átlag és a standard eltérés háromszorosának összegét elosztjuk a lineáris regressziós egyenlet meredekségével. 7.4.6. A laboratóriumban végzett tesztekhez referencia standardokat kell használni, hogy biztosítsuk azt, hogy a standardra adott válasz elfogadható tartományba essen.

Source: https://magyarkozlony.hu/hivatalos-lapok/50ffa5371bd67ade8e8b08959aa12136de225c3b/dokumentumok/f23f4f92c4f8dc35e1c0a8f3f93e865a1d7603fe/letoltes