Publication: Magyar Közlöny
Issue: MK-2003-42 (Year: 2003, Number: 42)
Era: 1990-2004
Section: 10. számú melléklet a 44/2003. (IV. 26.) FVM rendelethez
Paragraph Index: 1712

3. Szükséges vegyszerek Az oldatok készítéséhez megfelelõ tisztaságú vizet, bideszt vagy HPLC minõségût kell használni (konduktivitás < 10 µS). 3.1. Hidrogén-peroxid, w = 30% 3.2. Hangyasav, w = 98–100% 3.3. Fenol 3.4. Nátrium-diszulfit 3.5. Nátrium-hidroxid 3.6. 5-Szulfo-szalicilsav 3.7. cc HCl 3.8. Trinátrium-citrát dihidrát 3.9. 2,2’-Tiodietanol (tiodiglikol) 3.10. Nátrium-klorid 3.11. Ninhidrin 3.12. Petroléter, forráspont 40–60 °C 3.13. Norleucin belsõ standard 3.14. Nitrogén gáz (<10 ppm oxigén) 3.15. 1-Oktanol 3.16. Aminosav standard minõségû kristályos anyagok (amennyiben magunk készítjük a standard törzsoldatot). Felhasználás elõtt egy hétig vákuum exikátorban szárítjuk P2O5 vagy kénsav felett. 3.16.1. Ciszteinsav, standard minõségû anyag. 3.16.2. Metionin-szulfon, standard minõségû anyag. 3.17. Nátrium-hidroxid oldat, c = 7,5 mol/l. Oldjunk fel vízben 300 g NaOH-t (3.5.) egy 1000 ml-es mérõlombikban, majd töltsük jelig a lombikot. 3.18. Nátrium-hidroxid oldat, c = 1 mol/l Oldjunk fel vízben 40 g NaOH-t (3.5.) egy 1000 ml-es mérõlombikban, majd töltsük jelig a lombikot. 3.19. Fenolos hangyasav oldat Elegyítsünk 889 g hangyasavat (3.2.) 111 g vízzel, majd adjunk hozzá 4,73 g fenolt (3.3.). 3.20. Hidrolizáló elegy, c = 6 mol HCl/l, ami 1g/l fenolt tartalmaz Adjunk 1 g fenolt (3.3.) 492 ml HCl-ba (3.7.), majd vízzel egészítsük ki 1000 ml-re. 3.21. Extraháló oldat, c = 0,1 mol HCl/l, ami 2% tiodiglikolt tartalmaz 8,2 ml cc HCl-t (3.7.) felhígítunk kb. 900 ml vízzel, majd hozzáadunk 20 ml tiodiglikolt (3.9.) végül 1000 ml-re töltjük vízzel. (A tömény sósavat és a tiodiglikolt ne elegyítsük közvetlenül.) 3.22. 5-szulfo-szalicilsav, 6%-os Feloldunk 60 g 5-szulfo-szalicilsavat (3.6.) vízben, majd 1000 ml-re töltjük vízzel. 3.23. Perhangyasavas oxidáló elegy Elegyítsünk 0,5 ml hidrogén-peroxidot (3.1.) és 4,5 ml fenolos hangyasav oldatot (3.19.), majd az elegyet 1 órán keresztül állni hagyjuk szobahõmérsékleten (20–30 °C). Ezután jeges vízfürdõben 0 °C-ra hûtjük és úgy adjuk a mintához. 3.24. Citrát puffer, c = 0,2 mol Na+/l, pH 2,2 Feloldunk 19,61 g nátrium citrátot (3.8.), 5 ml tiodiglikolt (3.9.), 1 g fenolt (3.3.) és 16,50 ml HCl-t (3.7.) kb. 800 ml vízben. Az oldat pH-ját 2,20-ra állítjuk, majd 1000-re töltjük vízzel. 3.25. Pufferek az aminosav analizátorhoz, a készülék dokumentációja alapján készítendõek. 3.26. Ninhidrin reagens, a készülék dokumentációja alapján készítendõ. 3.27. Aminosavak standard oldata. Amennyiben kristályos aminosavakból (3.16.1.) készítjük a kalibráló közös standard oldatot, elõzõleg valamennyi aminosavból külön-külön törzsoldatot készítünk. Az oldatokat hûtõben 5 °C alatt tároljuk. 3.27.1. Aminosav standardok (3.16.1.) közös törzsoldata, c = 2,5 µmol/ml aminosavanként (kivétel cisztin és metionin 1,25 µmol/ml) sósavas oldatban. Vagy az elõzõekben elkészített aminosav törzsoldatokból készítjük, vagy a kereskedelemben készen kapható bizonyítvánnyal ellátott standard oldatot használjuk. 3.27.2. Ciszteinsav és metionin-szulfon törzsoldata, c = 1,25 µmol/ml Feloldunk 0,2115 g ciszteinsavat (3.16.2.) és 0,2265 g metionin-szulfont (3.16.3.) citrát pufferben (3.24.) egy 1000 ml-es mérõlombikban, majd ugyanezen pufferral jelig töltjük. Hûtõben 5 °C alatt tárolva 1 évig eltartható. 3.27.3. Norleucin belsõ standard törzsoldata, c = 20 µmol/ml Oldjunk fel 0,6560 g norleucint (3.13.) citrát pufferben (3.24.) egy 250 ml-es mérõlombikban, majd töltsük jelig a citrát pufferral. Hûtõben 5 °C alatt tárolva 6 hónapig eltartható. 3.27.4. Aminosavak közös kalibrációs oldata, nátrium kloriddal (magas ionkoncentrációt tûrõ kromatográfiás oszlopokhoz) 0,100 µmol/ml ciszteinsav és metionin-szulfon, többi aminosav 0,200 µmol/ml. Oldjunk fel 2,2 g NaCl-t (3.10.) egy 100 ml-es fõzõpohárban 30 ml citrát puffer (3.24.) felhasználásával. Adjunk hozzá 4,00 ml közös standard törzsoldatot (3.27.1.), 4,00 ml ciszteinsavmetionin-szulfon törzsoldatot (3.27.3.) és 0,50 ml belsõ standard törzsoldatot (3.27.3.). Az oldat pH-ját 2,2-re kell beállítani nátrium-hidroxid oldattal (3.18.). A beállított pH-jú oldatot teljes mennyiségében átvisszük egy 50 ml-es mérõlombikba, majd citrát pufferrel (3.24.) jelig töltjük. Az oldat 5 °C alatt tárolva 3 hónapig tartható el. A standard oldattal kapcsolatban lásd még Megjegyzések (9.1.). 3.27.5. Aminosavak közös kalibrációs oldata, nátrium-klorid nélkül (magas ionkoncentrációt nem tûrõ kromatográfiás oszlopokhoz). Az 5.3.3.1. és 5.2. pontokban leírt módon elõkészített mintákhoz alkalmazható kalibrációs standardként. Elkészítése, összetétele teljesen megegyezik az elõzõ fejezetben (3.27.4.) leírtakkal, kihagyva a nátrium-klorid hozzáadását. Az oldat 5 °C alatt tárolva 3 hónapig tartható el.

Source: https://magyarkozlony.hu/hivatalos-lapok/69b88ec8e02037a8d3637eee652ef17e0ba2ad2b/dokumentumok/e4451c379dbc96be3daac423580de092693182bb/letoltes