Publication: Magyar Közlöny
Issue: MK-2004-13 (Year: 2004, Number: 13)
Era: 2004-2010
Section: 2. számú melléklet a 6/2004. (II. 10. ) ESZCSM rendelethez
Paragraph Index: 696

2. oldat: Oldjunk fel 4 g vas-klorid-hexahidrátot (3.18.) 100 ml 96%-os etanolban (3.3.). Az elõhíváskor ezeket az oldatokat külön kell alkalmazni, elõbb az 1. oldatot, majd a 2.-t. 3.23.4. Ammóniás ezüst-nitrát Adjunk annyi 25%-os ammóniát (3.4.) ezüst-nitrát (3.15.) 5%-os (m/V) vizes oldatához, hogy a csapadék éppen föloldódjon. A reagenst közvetlenül felhasználás elõtt kell készíteni. Nem tárolható. 4. Eszközök 4.1. A vékonyréteg-kromatográfia szokásos laboratóriumi eszközei. 4.1.1. Mûanyag vagy üveg fedél, amelynek kialakítása olyan, hogy a foltok felvitele és szárítása alatt a kromatográfiás lap környezetében nitrogén atmoszférát lehet létrehozni. Az óvintézkedésre bizonyos színezékek erõs oxidációs hajlama miatt van szükség. 4.1.2. 10 µl-es, 0,2 µl-es beosztású mikrofecskendõ négyzetes tûvel, vagy még jobb egy befogóállványon rögzített 50 µl-es ismétlõ adagoló, amely úgy van felszerelve, hogy a lapot nitrogén alatt lehessen tartani. 4.1.3. 0,25 mm vastag, 20x20 cm-es azonnal használható szilikagél vékonyréteg lapok (mûanyaghordozós Macherey and Nagel, Silica G-HR, vagy ezekkel egyenértékû) 4.2. 4000 ford/perc fordulatszámú centrifuga 4.3. 10 ml-es, PTFE bevonatú menetes kupakkal rendelkezõ centrifugacsövek, vagy ezekkel egyenértékû csövek. 5. Eljárás 5.1. A vizsgálati minták kezelése Ne használjuk a tubusból kinyomott krém elsõ két-három cm-ét. Mérjük be a következõket egy elõzõleg nitrogénnel átöblített centrifugacsõbe (4.3.): 300 mg aszkorbinsavat, és 3 g krémet vagy 3 g homogenizált folyadékot. Csepegtessünk 25%-os ammóniát (3.4.) az anyaghoz, amíg a pH 10-et el nem éri. Töltsük fel 10 ml-re 96%-os etanollal (3.3.). Homogenizáljuk nitrogén (3.8.) alatt, zárjuk le, majd centrifugáljuk 4000/perc fordulatszámon 10 percig. Használjuk a felülúszó folyadékot. 5.2. Kromatográfia 5.2.1. A minta felvitele a lapokra Vigyünk fel a kromatográfiás lapra a fent említett referencia oldatokból 1-1 µl-t nitrogén atmoszféra alatt (3.8.) egy egyenes mentén 9 pontban. A referencia oldatok foltjainak sorrendje a következõ: R P H PPD DAP PTD OPD OTD MPD MTD α-N A 10-es és 11-es pontban pedig 2 µl-t cseppentsünk az 5.1. pontban kapott mintaoldatokból. A lapot mindaddig tartsuk nitrogén atmoszféra (3.8.) alatt, amíg a kromatográfiát el nem indítjuk. 5.2.2. Futtatás Helyezzük a lapot elõzetesen nitrogénnel (3.8.) átöblített, a négy (3.22.) oldószer egyikének gõzeivel telített kádba, szobahõmérsékleten (20–25 °C) fénytõl védve futtatjuk, amíg az oldószerfront az alapvonaltól 15 cm-re távolodik. Vegyük ki a lapot a kádból, és szárítsuk nitrogén (3.8.) alatt szobahõmérsékleten. 5.2.3. Elõhívás Azonnal fújjuk le a lapot a 3.23. pontban leírt négy elõhívó egyikével. 5.2.4. Azonosítás Hasonlítsuk össze a minta Rf értékét és színét a párhuzamosan kromatografált referencia anyagok hasonló jellemzõivel. Az 1. táblázat példaként megadja valamennyi anyag Rf értékét és színét az összes oldószerre és indikátorra. Ha az azonosítás eredménye nem egyértelmû, sikerre vezethet a ráméréses módszer, amikor a vizsgálati mintához hozzáadjuk a megfelelõ referencia anyagot. 5.2.5. Félkvantitatív mérési módszer Szemrevételezéssel hasonlítsuk össze az 5.2.4. pontban azonosított minden egyes anyag foltjának intenzitását és a referencia oldatokkal a megfelelõ koncentráció-tartományban felvett kromatogramok foltjainak intenzitását. Ha a mintában elõforduló egy vagy több anyag koncentrációja túlságosan nagynak mutatkozik, hígítsuk a minta kivonatot és ismételjük meg a mérést. I. TÁBLÁZAT A foltok Rf értéke és színe közvetlenül a permetezés után Elõhívó oldószerek Indikátor permetezõk Rf értékek Foltok színe (3.20) Referencia anyag (3.22.1) (3.22.2) (3.22.3) (3.22.4) Diazo (3.23.1) Ehrlich (3.23.2) Dimetil-fenol (3.23.3) AgNO3 (3.23.4) OPD MPD PPD OTD MTD PTD DAP H α-N P R 0,62 0,40 0,20 0,60 0,40 0,33 0,07 0,50 0,90 0,37 0,50 0,60 0,60 0,50 0,60 0,67 0,65 – 0,35 0,80 – 0,37 0,30 0,47 0,30 0,53 0,45 0,37 0,80 0,90 0,67 0,80 0,57 0,48 0,48 0,60 0,60 0,70 0,05 0,20 0,75 0,05 0,17 világosbarna ibolya-barna * barna barna * vörösesbarna* barna barna * – narancsbarna barna narancs * – sárga élénkpiros halvány narancs sárga narancs narancs narancs – nagyon halvány ibolya halvány ibolya – világosbarna ibolya világosbarna barna ibolya * ibolya ibolya ibolya * nagyon halvány barna nagyon halvány barna világosbarna világosbarna szürke szürkésbarna fekete szürke barna fekete * fekete barna * világosbarna Megjegyzések:

Source: https://magyarkozlony.hu/hivatalos-lapok/53f83b22112ddee3ba432e293c5a4a07160629ad/dokumentumok/1147f0c2e2ee62fd0d72848b53190fba47bc78de/letoltes