Publication: Magyar Közlöny
Issue: MK-2003-42 (Year: 2003, Number: 42)
Era: 1990-2004
Section: 10. számú melléklet a 44/2003. (IV. 26.) FVM rendelethez
Paragraph Index: 1707

5. Vizsgálat 5.1. Oldatkészítés (lásd megfigyelések 7.1.) Oldjunk 150 mg pepszint 100 cm3 sósavoldatban (3.2.). Pipettázzunk 2 cm3 pepszin oldatot egy 50 cm3-es mérõlombikba, és töltsük fel sósavoldattal (3.2.). Ellenõrizzük a pH-t pH mérõvel, az értéknek 1,6 ± 0,1 kell lennie. Tegyük a lombikot a vízfürdõbe (4.1.). 5.2. Hidrolízis Pipettázzunk 5 cm3 hemoglobin oldatot (4.1.) egy kémcsõbe, melegítsük 25 oC-ra a vízfürdõben (4.1.), adjunk hozzá 1,0 cm3 5.1. pont szerint elkészített pepszin oldatot, és keverjük meg egyik végén megvastagított üvegbottal, kb. 10 oda-vissza mozgatással. Hagyjuk a kémcsövet a 25 oC-os vízfürdõben pontosan 10 percig, az idõt a pepszin hozzáadástól kell mérni (az idõtartam és a hõmérséklet szigorúan betartandó). Az idõ letelte után a 25 oC-os oldathoz adjunk 10 cm3 triklórecetsavat (3.4.), homogenizáljuk, száraz szûrõn szûrjük. 5.3. A szín kifejlesztése és az abszorbancia mérése Pipettázzunk 5 cm3 szûrletet egy 50 cm3-es Erlenmayer lombikba, adjunk hozzá 10 cm3 nátrium-hidroxid oldatot (3.5.), és folyamatos rázogatás közben 3,0 cm3 hígított Folin– Ciocalteu reagenst (3.6.). 5–10 perc múlva mérjük az abszorbanciát spektrofotométerrel 750 nm hullámhosszon 1 cm-es küvettában, desztillált vízzel szemben. 5.4. Vakpróba Minden meghatározáshoz végre kell hajtani egy vakpróbát, a következõk szerint: Pipettázzunk 5 cm3 hemoglobin oldatot (3.7.) egy kémcsõbe, és melegítsük 25 oC-ra vízfürdõn (4.1.). Adjunk hozzá 10 cm3 elõzetesen 25 oC-ra melegített triklórecetsav oldatot (3.4.), homogenizáljuk, aztán adjunk hozzá 1 cm3 pepszin oldatot (5.1.), keverjük össze üvegbottal és hagyjuk a 25 oC-os vízfürdõben (4.1.), az összekeveréstõl számított 10 percig. Homogenizáljuk és szûrjük száraz szûrõn. A továbbiakban az 5.3. pont szerint járjunk el. 5.5. Kalibrációs görbe felvétele Pipettázzunk 0, 1, 2, 3 és 5 cm3 alikvot részeket a tyrozin standard oldatból, – melyek megfelelnek rendre 0.0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8 és 1.0 mikromól tyrozinnak –, 50 cm3-es Erlenmayer lombikba. Egészítsük ki a térfogatokat 5 cm3-re sósav oldattal (3.1.), adjunk hozzá 10 cm3 nátrium hidroxidot (3.5.) és folyamatos rázogatás közben 3,0 cm3 hígított Folin–Ciocalteu reagenst (3.6.). Mérjük az abszorbanciát az 5.3. pont utolsó mondata szerint. Ábrázoljuk az abszorbanciát a tyrozin mennyiség függvényében.

Source: https://magyarkozlony.hu/hivatalos-lapok/69b88ec8e02037a8d3637eee652ef17e0ba2ad2b/dokumentumok/e4451c379dbc96be3daac423580de092693182bb/letoltes