Publication: Magyar Közlöny
Issue: MK-2005-154 (Year: 2005, Number: 154)
Era: 2004-2010
Section: 9. számú melléklet az 56/2005. (XI. 29.) EüM–KvVM–BM együttes rendelethez
Paragraph Index: 278

1. MÓDSZER Ez a módszer az OECD TG 217 (2000) módszer megfelelõje. 1.1. Bevezetés Ez a vizsgálati módszer egy olyan laboratóriumi módszert ismertet, amelynek célja annak vizsgálata, hogy a növényvédõ szerek és esetleg más vegyi anyagok egyszeri expozíció esetén milyen potenciális hosszú távú hatásokat gyakorolnak a talajlakó mikroorganizmusok szénátalakítási aktivitására. A vizsgálat elsõsorban az Európai és Földközi-tenger Melléki Növényvédelmi Szervezet ajánlásain alapul (1). Azonban más iránymutatásokat, ezen belül a German Biologische Bundesanstalt (2), az Egyesült Államok Környezetvédelmi Hivatala (3) és a SETAC (4) iránymutatásait is figyelembe vettünk. Az 1995-ben az olaszországi Belgirateban megrendezett, a talajok/üledékek kiválasztásával kapcsolatos OECD-munkaértekezleten (5) megegyezés született az e vizsgálatban alkalmazandó talajok számáról és típusáról. A talajminták gyûjtésérõl, kezelésérõl és tárolásáról szóló ajánlások egy ISO Útmutatón (6) és a belgiratei munkaértekezlet ajánlásain alapulnak. A vizsgálandó anyagok toxikus jellemzõinek meghatározása és értékelése során szükség lehet a talaj mikrobiális aktivitására gyakorolt hatások meghatározására, például olyan esetben, ha adatokra van szükség a növényvédõ szereknek a talaj mikroflórájára gyakorolt esetleges mellékhatásaival kapcsolatban, vagy ha a talajlakó mikroorganizmusoknak növényvédõ szerektõl eltérõ vegyületekkel szembeni expozíciója várható. A szénátalakítási vizsgálat végrehajtásának célja az ilyen vegyületeknek a talaj mikroflórájára gyakorolt hatásainak meghatározása. Amennyiben mezõgazdasági vegyi anyagok (pl. növényvédõ szerek, mûtrágyák, erdészeti vegyi anyagok) vizsgálatáról van szó, mind a szénátalakítási, mind a nitrogénátalakítási vizsgálatot el kell végezni. Ha nem mezõgazdasági vegyi anyagok vizsgálata történik, elég a nitrogénátalakítási vizsgálatot elvégezni. Ha azonban a nitrogénátalakítási vizsgálat az ilyen vegyületek esetében olyan EC50-értékeket eredményez, amelyek a kereskedelmi forgalomban kapható nitrifikációgátló szerek (pl. nitrapirin) esetében tapasztalt tartományba esik, további információk gyûjtése érdekében a szénátalakítási vizsgálatot is el lehet végezni. A talajok élõ és élettelen komponensekbõl épülnek fel, amelyek komplex és heterogén elegyek formájában léteznek. A mikroorganizmusok számos fajjal fontos szerepet játszanak a termõtalajok szervesanyag-tartalmának lebontásában és átalakításában, hozzájárulva a talajok termékenységének különféle aspektusaihoz. Az ilyen biokémiai folyamatokat megzavaró hosszú távú hatások potenciálisan megzavarhatják a tápanyag-körforgalmat, ami megváltoztathatja a talaj termékenységét. Szén- és nitrogénátalakítás minden termõtalajban folyik. Bár az e folyamatokért felelõs mikrobaközösségek talajonként eltérõek, az átalakítási útvonalak lényegében azonosak. Ennek a vizsgálati módszernek a célja valamely anyagnak az aerob feltalajokban zajló szénátalakítási folyamatra gyakorolt hosszú távú káros hatásainak kimutatása. A vizsgálati módszer érzékeny a szénátalakításért felelõs mikrobaközösségek méretében és aktivitásában bekövetkezõ változásokra, mivel ez kémiai stresszt és szénéhezést okoz ezekben a közösségekben. A vizsgálathoz alacsony szervesanyag-tartalmú homokos talajt kell használni. Ezt a talajt kezelni kell a vizsgálandó anyaggal, majd gyors mikrobiális anyagcserét biztosító körülmények között inkubálni kell. Ilyen körülmények között hamar kimerülnek a talaj könnyen hozzáférhetõ szénforrásai. Ez szénéhezést okoz, ami elpusztítja a mikrobákat és egyben nyugalmi állapotot és/vagy spóraképzést idéz elõ. Ha a vizsgálat több mint 28 napig tart, e reakciók összessége a kontroll- (kezeletlen) talajokban a metabolikusan aktív mikrobiális biomassza progresszív elvesztéseként mérhetõ (7). Ha valamely vegyi anyag jelenléte a vizsgálat körülményei között befolyást gyakorol a szénstresszelt talaj- 2005/154/II. szám ban található biomasszára, akkor a biomassza nem tud visszatérni ugyanarra a szintre, mint a kontrolltalajokban. A vizsgálandó anyag által a vizsgálat során bármikor elõidézett zavaró hatás tehát gyakran egészen a vizsgálat végéig fennmarad. Azokat a teszteket, amelyekbõl ezt a vizsgálati módszert kifejlesztették, elsõsorban olyan anyagokhoz dolgozták ki, amelyek esetében elõre jelezhetõ a talajba kerülõ mennyiség. Ez a helyzet például a növényvédõ szerek esetében, amelyeknél ismert a szántóföldi alkalmazás mértéke. A mezõgazdasági vegyi anyagok esetében elegendõ két, a várt vagy becsült alkalmazási mérték szempontjából releváns dózist alkalmazni. A mezõgazdasági vegyi anyagok vizsgálhatók aktív összetevõként (a.ö.) vagy formulázott termékként is. A vizsgálat azonban nem korlátozódik kizárólag a megbecsülhetõ környezeti koncentrációval rendelkezõ anyagokra. Mind a vizsgálandó anyagnak a talajban alkalmazott mennyiségét, mind az adatok kiértékelésének módját módosítva, a vizsgálat mezõgazdasági vegyi anyagoktól eltérõ vegyületekre is alkalmazható, amelyek esetében nem ismert a talajba várhatóan bejutó mennyiség. A nem mezõgazdasági vegyi anyagok esetében tehát egy sor koncentrációnál meg kell határozni a szénátalakításra gyakorolt hatásokat. Az ilyen vizsgálatokkal kapott adatok dózis-válasz görbék elkészítésére és ECx-értékek számítására használhatók fel, ahol x jelentése % hatás. 1.2. Fogalommeghatározások »Szénátalakítás«: szerves anyagok mikroorganizmusok által végzett lebontása a megfelelõ szervetlen végtermékké, azaz szén-dioxiddá. »ECx (hatásos koncentráció)«: a vizsgálandó anyag olyan talajbeli koncentrációja, amely x %-osan gátolja a szén szén-dioxiddá alakulását. »EC50 (közepes hatásos koncentráció)«: a vizsgálandó anyag olyan talajbeli koncentrációja, amely 50 százalékosan (50%-osan) gátolja a szén szén-dioxiddá alakulását. 1.3. Referenciaanyagok Nincs. 1.4. A vizsgálati módszer elve Az átszitált talajt a vizsgálandó anyaggal kell kezelni, vagy kezeletlenül kell hagyni (kontroll). Mezõgazdasági vegyi anyagok vizsgálata esetén minimálisan két vizsgálati koncentráció alkalmazása ajánlott, amelyeket a szántóföldeken várható legmagasabb koncentráció függvényében kell megválasztani. Az inkubálás 0., 7., 14. és 28. napja után a kezelt és az ellenõrzõ talajmintákhoz glükózt kell keverni, majd 12 órán át folyamatosan mérni kell a glükózindukált légzési sebességet. A légzési sebességet a felszabaduló szén-dioxidban (mg szén-dioxid/kg száraz talaj/óra) vagy az elfogyasztott oxigénben (mg oxigén/kg talaj/óra) kell kifejezni. A kezelt talajokban mért közepes légzési rátát össze kell hasonlítani az ellenõrzõ minta esetében mérttel, majd ki kell számítani a kezelt és az ellenõrzõ talajminták közötti százalékos eltérést. Minden vizsgálatot legalább 28 napig kell végezni. Ha a 28. napon a kezelt és nem kezelt talajok közötti különbség 25% vagy annál nagyobb, a méréseket 14 napos intervallumokban, legfeljebb 100 napos idõtartamig folytatni kell. Ha nem mezõgazdasági vegyi anyagok vizsgálata történik, a vizsgálandó anyag egy sor különbözõ koncentrációját kell a talajmintákhoz adni, és 28 nap után meg kell mérni a kezelt és az ellenõrzõ mintákban a glükózindukált légzési sebességeket (azaz a képzõdõ szén-dioxid vagy az elfogyasztott oxigén átlagos mennyiségét). A különbözõ koncentrációk alkalmazásával kapott vizsgálati eredményeket regressziós modell segítségével kell elemezni, majd ki kell számítani az ECx-értékeket (azaz az EC50-et, az EC25-öt és/vagy az EC10-et). Lásd a fogalommeghatározásokat. 1.5. A vizsgálat érvényessége A mezõgazdasági vegyi anyagokkal kapott vizsgálati eredmények értékelése az ellenõrzõ és a kezelt talajmintákban felszabaduló szén-dioxid vagy elfogyasztott oxigén közötti viszonylag kis különbségeken (azaz az átlag ± 25%-a) alapul, így az ellenõrzõ minták közötti nagy eltérések hamis eredményekhez vezethetnek. A párhuzamos ellenõrzõ minták közötti eltérésnek ± 15%-nál kisebbnek kell lennie. 1.6. A vizsgálati módszer leírása 1.6.1. Eszközök Kémiailag inert anyagból készült vizsgálati edényeket kell használni. Ezeknek megfelelõ, a talajok inkubálására alkalmazott eljárással, például az ömlesztve inkubálással vagy egyedi talajminták sorozataként történõ inkubálással megfelelõ összhangban lévõ kapacitásúnak kell lenniük (lásd az 1.7.1.2. szakaszt). Ügyelni kell egyrészrõl a vízveszteség minimalizálására, másrészrõl a gázcsere lehetõvé tételére a vizsgálat során (például a vizsgálati edények perforált polietilén fóliával fedhetõk le). Illékony anyagok vizsgálata esetén zárható és légmentesen záródó edényeket kell alkalmazni. Az edényeknek olyan méretûnek kell lenniük, hogy a talajminta térfogatuk körülbelül egynegyedéig töltse fel õket. 2005/154/II. szám A glükózindukált légzés meghatározásához inkubáló-rendszerekre és a szén-dioxid termelés vagy az oxigénfogyasztás mérésére alkalmas mûszerekre van szükség. Ilyen rendszerekre és mûszerekre példák a (8) (9) (10) és (11) hivatkozásban találhatók. 1.6.2. A talajok kiválasztása és száma Csak egyféle talaj használható. A javasolt talajjellemzõk a következõk: – homoktartalom: legalább 50% és legfeljebb 75%; – pH: 5,5–7,5; – szervesszén-tartalom: 0,5–1,5%; – meg kell mérni a mikrobiális biomasszát (12) (13), amelynek széntartalma a talaj teljes szervesszén-tartalmának legalább 1%-a kell hogy legyen. Az esetek többségében az ilyen jellemzõkkel rendelkezõ talaj a legrosszabb helyzetet reprezentálja, mivel minimális a vizsgálandó vegyület adszorpciója, viszont maximális a hozzáférhetõsége a mikroflóra számára. Következésképpen általában nincs szükség más talajokkal végzett vizsgálatokra. Bizonyos körülmények között azonban, például amikor a vizsgálandó anyag várható fõ felhasználási területe a különleges talajok, például a savanyú erdõtalajok vagy az elektrosztatikus töltéssel rendelkezõ vegyületek esetében is, szükség lehet ennek egy másik talajtípussal való helyettesítésre. 1.6.3. A talajminták begyûjtése és tárolása 1.6.3.1. Gyûjtés Részletes információkkal kell rendelkezni annak a szántóföldi területnek a történetérõl, ahonnan a vizsgálati talajminta begyûjtése történik. Ilyen részletek például a pontos hely, a növénytakaró, a növényvédõ szerekkel végzett kezelések idõpontjai, a szerves és szervetlen trágyák alkalmazásai, a biológiai anyagok hozzáadása vagy a véletlen szennyezések. A talajminták gyûjtéshez olyan helyet kell választani, amely hosszú távon használható erre a célra. Megfelelõek például az állandó legelõk, az évente gabonatermést (kivéve kukoricát) hozó területek vagy a zöldtrágyával sûrûn bevetett területek. Követelmény, hogy a kiválasztott mintagyûjtési helyet a mintagyûjtést megelõzõen legalább egy évig ne kezeljék növényvédõ szerekkel. Továbbá legalább hat hónapig ne kapjon szerves trágyázást. Ásványi mûtrágya alkalmazása csak akkor elfogadható, ha a haszonnövény igényeinek megfelelõen történik, és a mûtrágyázást követõen legalább három hónapig nem szabad talajmintákat venni. Kerülni kell az ismert biocid hatású mûtrágyákkal (pl. kalcium-ciánamiddal) kezelt talajok alkalmazását. Kerülni kell a mintavételt hosszú (30 napnál hosszabb) ideig tartó szárazság vagy elvizesedés esetén, illetve közvetlenül ilyen idõszakok után. Szántott talajok esetében a mintákat 0–20 cm mélységbõl kell venni. Legelõk vagy egyéb olyan talajok esetében, amelyeket hosszú ideig (legalább egy vegetációs periódusig) nem szántanak fel, a mintavétel maximális mélysége 20 cm-nél kicsit több (pl. 25 cm) is lehet. A talajmintákat olyan edényekben és olyan hõmérsékleti feltételek mellett kell elszállítani, amelyek garantálják, hogy a talaj eredeti tulajdonságai nem módosulnak szignifikáns mértékben. 1.6.3.2. Tárolás Legelõnyösebb a frissen gyûjtött talajok alkalmazása. Ha a laboratóriumi tárolás nem kerülhetõ el, a talajok sötétben, 4 ± 2 °C-on legfeljebb három hónapig tárolhatók. A talajok tárolása során aerob körülményeket kell biztosítani. Ha a talajminták begyûjtése olyan területeken történt, ahol a talaj az év legalább három hónapjában fagyott, szóba jöhet hat hónapos, mínusz 18 °C hõmérsékleten való tárolás is. Minden egyes kísérlet elõtt meg kell mérni a tárolt talajok mikrobiális biomasszáját, és a biomassza széntartalmának el kell érnie a talaj teljes szervesszén-tartalmának legalább 1%-át (lásd az 1.6.2. szakaszt). 1.6.4. A talaj kezelése és elõkészítése a vizsgálatra 1.6.4.1. Elõinkubálás Tárolt talaj használata esetén (lásd az 1.6.4.2. és az 1.7.1.3. szakaszt) ajánlatos 2-tõl 28 napig terjedõ elõinkubálást alkalmazni. Az elõinkubálás során a talaj hõmérsékletének és nedvességtartalmának hasonlónak kell lennie a vizsgálat során alkalmazott hõmérséklethez és nedvességtartalomhoz (lásd az 1.6.4.2. és az 1.7.1.3. szakaszt). 1.6.4.2. Fizikai-kémiai tulajdonságok A talajból manuálisan el kell távolítani a nagyobb tárgyakat (például köveket, növényi részeket stb.), majd a túlzott kiszáradást kerülve a talajt nedvesen át kell szitálni úgy, hogy a részecskeméret legfeljebb 2 mm legyen. A talajminta nedvességtartalmát desztillált vagy ioncserélt vízzel a maximális víztartó képesség 40–60%-ára kell beállítani. 1.6.5. A vizsgálandó anyag elõkészítése a talajon történõ alkalmazáshoz A vizsgálandó anyagot általában hordozó segítségével kell alkalmazni. A hordozó lehet víz (vízben oldható anyagok esetében) vagy valamely inert szilárd anyag, így például finom kvarchomok (részecskeméret: 0,1–0,5 mm). Kerülni kell a víztõl eltérõ folyékony hordozók (például szerves oldószerek, így például aceton, kloroform) alkalmazását, mivel ezek károsíthatják a mikroflórát. Ha hordozóként homokot használunk, a homok be is vonható a megfelelõ oldószerben feloldott vagy szuszpendált vizsgálandó anyaggal. Ilyen esetekben az oldószert a talajba való bekeverés elõtt el kell párologtatni. Ahhoz, hogy a vizsgálandó anyag optimális módon oszoljon szét a talajban, a következõ arány ajánlott: 10 g homok per 1 kilogramm száraztalaj. Az ellenõrzõ mintákat ugyanilyen mennyiségû vízzel és/vagy kvarchomokkal kell kezelni. 2005/154/II. szám Illékony vegyületek vizsgálata esetén kerülni kell a kezelés közbeni veszteséget, valamint a vegyület talajban való homogén eloszlásának biztosítására is törekedni kell (például a vizsgálandó anyagot több helyen is be kell injektálni a talajba). 1.6.6. Vizsgálati koncentrációk Növényvédõ szerek és egyéb, megbecsülhetõ környezeti koncentrációval rendelkezõ vegyületek vizsgálata esetén legalább két koncentrációt kell alkalmazni. Az alacsonyabb koncentrációnak legalább a gyakorlatban a talajba várhatóan bejutó legnagyobb mennyiségnek kell megfelelnie, a magasabb koncentrációnak pedig az alacsonyabb koncentráció valamely többszörösének kell lennie. A talajhoz adott vizsgálandó anyag koncentrációját 5 cm-es mélységig egyenletes beépülést és 1,5 g/cm3-es talajtérfogat-sûrûséget feltételezve kell kiszámolni. A közvetlenül a talajra kihordott mezõgazdasági vegyi anyagok vagy az olyan vegyületek esetében, amelyeknek a talajba bejutó mennyisége elõre jelezhetõ, az ajánlott vizsgálati koncentrációk a következõk: a megbecsülhetõ környezeti koncentráció (PEC) és ennek ötszöröse. Azoknak az anyagoknak az esetében, amelyeket egy idényben várhatóan több alkalommal is kihordanak a talajokra, a vizsgálathoz alkalmazandó koncentráció a PEC-értéknek a kihordások maximálisan várható számával történõ megszorzásával számítható ki. A vizsgált magasabb koncentrációnak azonban nem szabad meghaladnia az egyszeri maximális alkalmazási arány tízszeresét. Nem mezõgazdasági vegyi anyagok vizsgálata esetén legalább öt, mértani sort alkotó koncentrációt kell alkalmazni. A vizsgált koncentrációknak le kell fedniük az EC x-értékek meghatározásához szükséges tartományt. 1.7. A vizsgálat végrehajtása 1.7.1. Az expozíció körülményei 1.7.1.1. Kezelés és kontroll Mezõgazdasági vegyi anyagok vizsgálata esetén a talajt három, egyenlõ tömegû részre kell osztani. Két részlethez a terméket is tartalmazó hordozót kell keverni, a harmadikhoz pedig csak hordozót (kontroll). Ajánlatos a kezelt és nem kezelt talajokat is legalább három másolati mintában vizsgálni. Nem mezõgazdasági vegyi anyagok vizsgálata esetén a talajt hat, egyenlõ tömegû részletre kell osztani. Öthöz a vizsgálandó anyagot is tartalmazó hordozót kell keverni, a hatodikhoz pedig csak hordozót. A kezeléseket és az ellenõrzõ kísérleteket is ajánlatos legalább három másolati mintában végezni. Vigyázni kell arra, hogy az anyag homogén módon legyen eloszlatva a kezelt talajmintákban. A bekeverés során el kell kerülni a talaj tömörödését vagy összecsomósodását. 1.7.1.2. A talajminták inkubálása A talajminták inkubálása kétféle módon történhet: az egyes kezelt és nem kezelt talajokból vagy ömlesztett mintákat kell készíteni, vagy egy sor önálló és egyforma méretû részmintát. Illékony vegyületek vizsgálata esetén azonban a vizsgálatot csak egy önálló részmintákból álló sorozattal kell elvégezni. A talajok ömlesztve történõ inkubálása esetén minden kezelt és nem kezelt talajt nagy mennyiségben kell elkészíteni, és a vizsgálat során szükség szerint ezekbõl kell részmintákat venni a különféle analízisekhez. Az, hogy kiindulásképpen milyen mennyiséget kell készíteni az egyes kezelésekhez és ellenõrzõ vizsgálatokhoz, függ a részminták méretétõl, az analízishez használt másolati minták számától, valamint a mintavételek várható maximális számától. A részminták vétele elõtt az ömlesztve inkubált talajokat alaposan össze kell keverni. Ha a talajok inkubálása önálló részminták sorozataként történik, az egyes kezelt és nem kezelt ömlesztett talajmintákat a szükséges számú részmintára kell felosztani, amelyeket azután igény szerint kell felhasználni. Olyan kísérleteknél, amikor várhatóan több mint két alkalommal kell majd mintát venni, elegendõ számú részmintát kell készíteni ahhoz, hogy azokból minden másolati mintára és mintavételi alkalomra jusson. A teszttalajokat legalább három másolati mintában kell aerob körülmények között inkubálni (lásd az 1.7.1.1. szakaszt). Minden egyes vizsgálat során megfelelõ gõztérrel rendelkezõ edényeket kell használni annak érdekében, hogy ne alakuljanak ki anaerob körülmények. Illékony anyagok vizsgálata esetén a vizsgálatot csak egy önálló részmintákból álló sorozattal kell elvégezni. 1.7.1.3. A kísérlet körülményei és idõtartama A vizsgálatot sötétben, 20 ± 2 °C-os szobahõmérsékleten kell elvégezni. A talajmintákat a vizsgálat idõtartama alatt a talaj maximális víztartó kapacitásának 40 és 60 százaléka közötti értéken kell tartani (lásd az 1.6.4.2. szakaszt) ± 5%-os eltéréssel. Szükség esetén desztillált vagy ioncserélt víz adható a mintákhoz. A vizsgálat minimális idõtartama 28 nap. Mezõgazdasági vegyi anyagok vizsgálata esetén össze kell hasonlítani a kezelt és az ellenõrzõ mintákban felszabaduló szén-dioxid vagy elfogyasztott oxigén mennyiségét. Ha a 28. napon ezek több mint 25%-kal eltérnek egymástól, a vizsgálatot addig kell folytatni, amíg a különbség 25%-ra vagy az alá nem csökken, vagy legfeljebb 100 napig, ha az a korábbi idõpont. Nem mezõgazdasági vegyi anyagok vizsgálata esetén a vizsgálat a 28. nap után véget ér. A 28. napon meg kell határozni a kezelt és az ellenõrzõ talajmintákban felszabaduló szén-dioxid vagy elfogyasztott oxigén mennyiségét, és ki kell számítani az EC x-értékeket. 2005/154/II. szám 1.7.2. Mintavétel és a talajok elemzése 1.7.2.1. Talajminta-vételi program Mezõgazdasági vegyi anyagok vizsgálata esetén a 0., 7., 14. és 28. napon meg kell mérni a talajmintákban a glükózindukált légzési sebességeket. Ha hosszabb idõtartamú vizsgálatot kell végezni, a további méréseket a 28. nap után 14 naponta kell végezni. Nem mezõgazdasági vegyi anyagok vizsgálata esetén legalább öt vizsgálati koncentrációt kell alkalmazni, és a talajminták glükózindukált légzését az expozíciós idõszak kezdetén (0. nap) és végén (28. nap) kell megmérni. Szükség esetén be lehet iktatni egy köztes mérést is, például a 7. napon. A 28. napon kapott adatokból meg kell határozni a vegyi anyag ECx-értékét. Szükség esetén a 0. napon az ellenõrzõ mintákban mért adatok segítségével meg lehet becsülni, hogy a talajban eredetileg milyen mennyiségben volt jelen metabolikusan aktív mikrobiális biomassza (12). 1.7.2.2. A glükózindukált légzési sebesség mérése Minden mintavételi idõpontban meg kell határozni az egyes kezelt és ellenõrzõ másolati mintákban tapasztalható glükózindukált légzési sebességet. A talajmintákhoz olyan mennyiségû glükózt kell keverni, hogy az azonnali maximális légzési választ váltson ki. Az adott talajban a maximális válasz kiváltásához szükséges glükózmennyiséget elõzetes vizsgálatokkal lehet meghatározni, amelyhez egy sor különbözõ glükózkoncentrációt kell alkalmazni (14). A 0,5–1,5% szerves szént tartalmazó homokos talajok esetében azonban általában elegendõ, ha 2000-2000 mg/kg száraztalaj mennyiségben adunk hozzá glükózt. A glükóz tiszta kvarchomokkal [10 g homok/kg száraztalaj] porrá õrölhetõ és homogén módon a talajhoz keverhetõ. A glükózzal feljavított talajmintákat a légzési sebességet folyamatosan, óránként vagy kétóránként mérõ, megfelelõ berendezésben (lásd az 1.6.1 szakaszt), 20 ± 2 °C-on inkubálni kell. A felszabaduló szén-dioxidot vagy elfogyasztott oxigént 12 órán át folyamatosan mérni kell, és a mérést a lehetõ leghamarabb, azaz a glükóz hozzáadása után 1–2 órán belül el kell kezdeni. Meg kell mérni a 12 óra alatt felszabaduló szén-dioxid vagy elfogyasztott oxigén teljes mennyiségét, és ebbõl meg kell határozni a közepes légzési sebességeket.

Source: https://magyarkozlony.hu/hivatalos-lapok/531ab852c9c8e6fbf551815ecfee8739e812b126/dokumentumok/ee337623f7c24e3a6c53e0c5b26de1b66206f086/letoltes