Publication: Magyar Közlöny
Issue: MK-2004-13 (Year: 2004, Number: 13)
Era: 2004-2010
Section: 4. számú melléklet a 6/2004. (II. 10.) ESZCSM rendelethez
Paragraph Index: 708

b) 2-naftol: 0,2 g 100 ml 1 M kálium-hidroxidban. 3.4. Standard oldatok: alfa-monogliceril-(4-amino)-benzoát: 0,05 g 100 ml 3.1. szerinti oldószerkeverékben; etil-(4-amino)-benzoát: 0,05 g 100 ml 3.1. szerinti oldószerkeverékben; 3.5. Szilikagél 60 F254 lapok, 0,25 mm vastag, 200 mm × 200mm. 4. Eszközök 4.1. Általános vékonyréteg kromatográfia eszközei. 4.2. Ultrahangos készülék. 4.3. Millipore szûrõ FH 0,5 ì m vagy azzal megegyezõ. 5. Eljárás 5.1. Mintaelõkészítés Mérjünk be a vizsgálati mintából 1,5 g-ot egy 10 ml-es, dugóval ellátott mérõlombikba. Töltsük fel a jelig a 3.1. oldószerrel. Zárjuk le a dugóval és hagyjuk egy órára az ultrahangos készülékben (4.2.). Szûrjük át egy Millipore szûrõn (4.3.) és a szûrleten végezzük el a kromatográfiát. 5.2. Vékonyréteg kromatográfia Vigyünk fel a mintaoldatból (5.1.) és minden standard oldatból (3.4.) 10-10 ì l-t a lapra (3.5.). Futtassuk a kromatogramot 150 mm-es magasságig egy olyan futtatókádban, amelyet elõzõleg a 3.2. oldószerrel telítettünk. Hagyjuk a lemezt a szobahõmérsékleten megszáradni. 5.3. Elõhívás 5.3.1. Figyeljük meg a lemezt 254 nm-es UV fényben. 5.3.2. A teljesen megszárított lemezt permetezzük be a 3.3. a) oldattal. Hagyjuk szobahõmérsékleten 1 percig száradni és azonnal permetezzük be a 3.3. b) oldattal. Szárítsuk a lemezt 60 oC-os kemencében. A foltok narancs színben tûnnek elõ, a következõ Rf -kel: alfa-monogliceril-(4-amino)-benzoát: Rf 0,07; etil-(4-amino)-benzoát: Rf 0,55. B. MENNYISÉGI MEGHATÁROZÁS 1. Cél és alkalmazási terület Ez a módszer az alfa-monogliceril-(4-amino)-benzoátot határozza meg. Szintén meghatározza az etil-(4-amino)-benzoátot. Nem alkalmas 5% (m/m) feletti alfamonogliceril-(4-amino)-benzoát, illetve 1% (m/m) feletti etil-(4-amino)-benzoát meghatározására. 2. Fogalommeghatározás Az ezzel a módszerrel meghatározott alfa-monogliceril-(4-amino)-benzoátot és etil- 4-amino)-benzoátot a termék tömegszázalékában (% m/m) fejezzük ki. 3. Alapelv A vizsgálati terméket metanolban szuszpendáljuk, majd a minta megfelelõ kezelését követõen nagynyomású folyadék-kromatográfiával (HPLC) határozzuk meg. 4. Reagensek Minden reagensnek analitikai tisztaságúnak, továbbá ahol szükséges, HPLCminõségûnek. kell lennie 4.1. Metanol. 4.2. Kálium-dihidrogén-ortofoszfát (KH2PO4). 4.3. Cink-di(acetát) (Zn(CH3COO)2·2H2O). 4.4. Ecetsav (d 4 20 = 1,05). 4.5. Tetrakálium-hexaciano-ferrát, (K4(Fe(CN)6)·3H2O). 4.6. Etil-4-hidroxi-benzoát. 4.7. Alfa-monogliceril-(4-amino)-benzoát. 4.8. Etil-(4-amino)-benzoát. 4.9. Foszfát puffer oldat (0,02 M): oldjunk fel 2,72 g kálium-dihidrogén-ortofoszfátot (4.2.) egy liter vízben. 4.10. Oldószer: foszfát puffer oldat (4.9.)/ metanol (4.1.) 61/39 (v/v). A mozgó fázis összetétele változtatható, annak érdekében, hogy az oszlop felbontása R  1,5 legyen. W W R d' R d' R + − = , ahol: R1 és R2 = a két csúcshoz tartozó retenciós idõ, percben, W1 és W2 = a csúcsoknak magasság felénél mért szélessége, milliméterben, d' = a papíradagolás-sebessége, milliméter/percben. 4.11. Alfa-monogliceril-(4-amino)-benzoát törzsoldat: pontosan mérjünk be kb. 40 mg alfamonogliceril-(4-amino)-benzoátot és tegyük be egy 100 ml-es mérõlombikba. Oldjuk fel 40 ml metanolban (4.1.). Töltsük fel a jelig a puffer oldattal (4.9.) és keverjük össze. 4.12. Etil-(4-amino)-benzoát törzsoldat: pontosan mérjünk be kb. 40 mg etil-(4-amino)- benzoátot és tegyük be egy 100 ml-es mérõlombikba. Oldjuk fel 40 ml metanolban (4.1.). Töltsük fel a jelig a puffer oldattal (4.9.) és keverjük össze. 4.13. Belsõ standard oldat: pontosan mérjünk be kb. 50 mg etil-4-hidroxibenzoátot (4.6.) és tegyük be egy 100 ml-es közönséges lombikba, oldjuk fel 40 ml metanolban (4.1.), töltsük fel a jelig a puffer oldattal (4.9.) és keverjük össze. 4.14. Standard oldatok: készítsünk négy standard oldatot 100 ml oldószerben (4.10.) való feloldással, a következõ táblázat szerint: Alfa-monogliceril- 4-amino)-benzoát Etil-(4-amino)- benzoát Etil-4hidroxibenzoát Standard oldat (ì g/ ml)* ml (4.11.) (ì g/ ml) ml (4.12.) (ì g/ ml) ml (4.13.) I II III IV * Ezek az értékek jelzésül szolgálnak és a 4.11., 4.12. és 4.13. szerinti pontos tömegekre vonatkoznak. Megjegyzés: Ezeket az oldatokat más módon is el lehet készíteni. 4.15. Carrez I oldat: oldjunk fel 26,5 g tetrakálium-hexaciano-ferrátot (4.5.) vízben és töltsük fel 250 ml-re. 4.16. Carrez II oldat: oldjunk fel 54,9 g cink-di(acetátot) (4.3.) és 7,5 ml ecetsavat (4.4.) vízben és töltsük fel 250 ml-re. 4.17. Merck Lichrosorb RP-18, vagy annak megfelelõ, 5 ì m átlagos részecskemérettel. 5. Eszközök 5.1. Szokásos laboratóriumi felszerelés. 5.2. Nagynyomású kromatográfiás berendezés változtatható hullámhosszú UV detektorral és hõszabályozós kamrakészlettel, 45 °C-ra beállítva. 5.3. Rozsdamentes acél oszlop: hossz: 250 mm; belsõ átmérõ: 4,6 mm; töltet: Lichosorb RP – 18 (4.17.). 5.4. Ultrahangos fürdõ. 6. Eljárás 6.1. Mintaelõkészítés 6.1.1. Pontosan mérjünk be kb. 1 g mintát egy 100 ml-es fõzõpohárba és adjunk hozzá 10 ml metanolt (4.1.). 6.1.2. Tegyük a fõzõpoharat az ultrahangos fürdõbe (5.4.) 20 percre szuszpenzió elkészítése céljából. Tegyük át az így kapott szuszpenziót veszteségmentesen egy 100 ml-es mérõlombikba nem több mint 75 ml oldószerrel (4.10.). Adjunk hozzá egymás után 1 ml Carrez I oldatot (4.15.) és 1 ml Carrez II oldatot (4.16.) és minden hozzáadás után keverjük össze. Töltsük fel jelig az oldószerrel (4.10.), keverjük újra össze és szûrjük át egy redõs szûrõpapíron. 6.1.3. Pipettával tegyünk 3,0 ml-t a szûrletbõl, amelyet a 6.1.2. szerint kaptunk és 5,0 ml-t a belsõ standard oldatból (4.13.) egy 50 ml-es mérõ lombikba és keverjük össze. Majd töltsük fel jelig az oldószerrel (4.10.). Használjuk az így kapott oldatot a 6.2.-ben leírt kromatográfia elvégzéséhez. 6.2. Kromatográfia 6.2.1. Állítsuk be a mozgó fázis (4.10.) ára mlási sebességét 1,2 ml/percre és állítsuk az oszlop hõmérsékletét 45 oC-ra. 6.2.2. Állítsuk be a detektort (5.2.) 274 nm-re. 6.2.3. fecskendezzünk be egy mikrofecskendõvel 20 ì l-t a (6.1.3.) szerinti oldatból a kromatográfba és mérjük le a csúcsok alatti területet. Legalább kétszer ismételjük meg a mérést. 6.3. Kalibrációs görbe 6.3.1. Fecskendezzünk be 20-20 ì l-t minden egyes standard oldatból (4.14.) és mérjük meg a csúcsok alatti területet. 6.3.2. Minden koncentrációhoz számítsuk ki az alfa-monogliceril-(4-amino)-benzoát csúcs alatti területe és a belsõ standard csúcs alatti területe közötti arányt. Ábrázoljuk ezt az arányt az abszcisszán, míg az ordinátán a kapcsolódó tömegeket tüntessük fel. 6.3.3. Járjunk el hasonló módon az etil-4-hidroxibenzoát esetében is. 7. Számolás 7.1. Olvassuk le a tömegarányokat (RP1, RP2) a 6.3. szerint kapott kalibrációs görbérõl, amelyek a 6.2.3. szerint számított csúcs alatti területek közötti arányoknak felelnek meg, ahol: RP1 = az alfa-monogliceril-(4-amino)-benzoát tömege/ az etil-4-hidroxibenzoát tömege, RP2 = az etil-(4-amino)-benzoát tömege/ az etil-4-hidroxibenzoát tömege. 7.2. Az így kapott tömegarányokból számítsuk ki az alfa-monogliceril-(4-amino)-benzoát és az etil-(4-amino)-benzoát tartalmat, mint tömegszázalékot (% m/m) a következõ képlet segítségével: RP% (m/m) alfa-monogliceril-(4-amino)-benzoát =RP1 × 6p q RP% (m/m) etil-(4-amino)-benzoát =RP2 × 6p q q = az etil-4-hidroxibenzoát (belsõ standard) bemért mennyisége, milligrammban, a 4.12. szerint, p = az minta bemért mennyisége, grammban, a 6.1.1. szerint. 8. Megismételhetõség1 8.1. 5%-os (m/m) alfa-monogliceril-(4-amino)-benzoáttartalom esetén azonos mintán, párhuzamosan végzett két mennyiségi meghatározás közötti eltérés értéke nem haladhatja meg a 0,25%-ot. 8.2. 1%-os (m/m) etil-(4-amino)-benzoáttartalom esetén azonos mintán, párhuzamosan végzett két mennyiségi meghatározás közötti eltérés abszolút értéke nem haladhatja meg a 0,10%-ot. ISO 5725 szabvány szerint. 9. Megjegyzések 9.1. A vizsgálat végrehajtása elõtt ellenõrizzük, hogy a minta tartalmaz-e olyan anyagokat, amelyek a kromatogramon fedésben vannak a belsõ standard (etil-(4-amino)-benzoát) csúcsával. 9.2. Annak ellenõrzésére, hogy esetleges zavaró hatás nem áll-e fenn ismételjük meg a meghatározást a metanol mozgó fázisbeli arányának 10%-os megváltoztatásával. II. KLÓRBUTANOL MENNYISÉGI MEGHATÁROZÁSA 1. Cél és alkalmazási terület Ez a módszer az aeroszolok kivételével bármely kozmetikai termékben jelen lévõ klórbutanol (INN) meghatározására alkalmazható, legfeljebb 0,5%-os koncentráció esetén. 2. Fogalommeghatározás Az ezzel a módszerrel meghatározott klórbutanol tartalmat a termék tömegszázalékában (% m/m) fejezzük ki. 3. Alapelv A vizsgálati termék megfelelõ kezelése után a meghatározást gázkromatográfiával végezzük 2,2,2-triklór-etanol belsõ standard mellett. 4. Reagensek Minden reagensnek analitikai tisztaságúnak kell lennie. 4.1. Klórbutanol (1,1,1-triklór-2-metil-propán-2-ol). 4.2. 2,2,2-triklór-etanol. 4.3. Abszolút etanol. 4.4. Klórbutanol belsõ standard oldat: 0,025 g 100 ml etanolban (4.3.) (m/v). 4.5. 2,2,2-triklór-etanol standard oldat: 4 mg 100 ml etanolban (4.3.) (m/v). 5. Eszközök 5.1. Szokásos laboratóriumi felszerelés. 5.2. Gázkromatográf, elektron befogásos detektorral felszerelve, Ni 63. 6. Eljárás 6.1. Mintaelõkészítés Pontosan mérjünk be egy 0,1 és 0,3 g közötti mennyiséget a mintából. Tegyük egy 100 ml-es mérõlombikba. Oldjuk fel etanolban (4.3.), adjunk hozzá 1 ml-t a belsõ standard oldatból (4.5.) és töltsük fel a jelig etanollal (4.3.) 6.2. Gázkromatográfiás körülmények 6.2.1. A mûködési körülményeknek R  1,5 felbontást kell eredményezniük. W W R d' R d' R + − = ahol: R1 és R2 = a csúcsokhoz tartozó retenciós idõk, percben, W1 és W2 = a csúcsoknak a magasság felénél mért szélessége, (milliméterben), d' = a papíradagolás sebessége, milliméter/percben. 6.2.2. Példaként, a következõ mûködési körülmények biztosítják a kívánt felbontást: Oszlop I. II. Alapanyag Üveg Rozsdamentes acél Hossz 1,80 m 3 m Átmérõ 3 mm 3 mm Álló fázis 10% Carbowax 20 M TPA, 80-100-as mesh Gaschrom Q-n 5% OV 17 80-100-as mesh WAW DMCS-en Kondicionálás 2-3 nap 190 oC-on Hõmérsékletek: – fecskendõ 200 oC 150 oC – oszlop 150 oC 100 oC – detektor 200 oC 150 oC Vivõgáz Nitrogén Argon/metán (95/5 v/v) Ára mlási sebesség 35 ml/perc 35 ml/perc 6.3. Standard görbe Öt 100 ml-es mérõlombikba tegyünk 1 ml standard oldatot (4.5.) és rendre 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 és 0,6 ml 4.4. szerinti oldatot, és töltsük fel a jelig etanollal (4.3.) majd keverjük össze. Fecskendezzünk be 1 ì l-t ezeknek az oldatoknak mindegyikébõl a kromatográfba a 6.2.2. pont szerint leírt mûködési körülményeknek megfelelõen és szerkesszük meg a kalibrációs görbét úgy, hogy a klórbutanol tömege és a 2,2,2-triklór-etanol tömege közötti arányt az abszcisszán, míg az a megfelelõ csúcs alatti területeket az ordinátán tüntetjük fel. 6.4. Fecskendezzünk be 1 ì l-t a 6.1. szerint kapott oldatból és járjunk el a 6.2.2.-ben leírtaknak megfelelõen. 7. Számolás 7.1. Számítsuk ki az „a” mennyiséget a standard görbe (6.3.) alapján a 6.1. oldatban, a klórbutanol ì g-jaiban kifejezve. 7.2. A minta klórbutanol tartalmát a következõ képlet szerint számíthatjuk ki: % klórbutanol (m/m) = p a p a × = × × ahol: p = 6.1.1. pont szerinti bemérés g-ban 8. Megismételhetõség1 0,5%-os (m/m) klórbutanol-tartalom esetén azonos mintán, párhuzamosan végzett két mennyiségi meghatározás közötti eltérés értéke nem haladhatja meg a 0,01%-ot. Megjegyzés Ha az eredmény eléri vagy meghaladja a megengedett legnagyobb koncentrációt, akkor ellenõrizni kell, az esetleges zavaró hatásokat. ISO 5725 szabvány szerint. III. KININ AZONOSÍTÁSA ÉS MEGHATÁROZÁSA A. AZONOSÍTÁS 1. Cél és alkalmazási terület Ez a módszer a kinin samponokban és hajszeszekben való jelenlétének kimutatására szolgál. 2. Alapelv Az azonosítás vékonyréteg kromatográfiával szilikagélen történik. A kimutatást a kinin savas körülmények között adott kék fluoreszcenciája által végezzük 360 nm-en. További bizonyításképpen a fluoreszcenciát meg lehet szüntetni bró mgõzzel, és ammóniagõz segítségével sárgás fluoreszcencia megjelenését elõidézni. 3. Reagensek Minden reagensnek analitikai tisztaságúnak kell lennie. 3.1. Szilikagél lapok, fluoreszcens indikátor nélkül, 0,25 mm vastag, 200 mm x 200 mm. 3.2. Futtató oldat: toluol/ dietil-éter/ diklór-metán/ dietil-amin/ 20/20/20/8 (v/v/v/v). 3.3 Metanol. 3.4. Kénsav (96% ; d 4 20 = 1,84). 3.5. Dietil-éter. 3.6. Elõhívószer: óvatosan adjunk 5 ml kénsavat (3.4.) 95 ml dietil-éterhez (3.5.) egy hûtött tartályban. 3.7. Bróm. 3.8. Ammónium-hidroxid oldat (28% ; d 4 20 = 0,90). 3.9. Vízmentes kinin. 3.10. Standard oldat: pontosan mérjünk be kb. 100,0 mg vízmentes kinint (3.9.) egy közönséges lombikba és oldjuk fel 100 ml metanolban (3.3.). 4. Eszközök 4.1. Általános vékonyréteg kromatográfiás felszerelés. 4.2. Ultrahangos fürdõ. 4.3. Millipore szûrõ FH 0,5 ƒm vagy azzal megegyezõ, megfelelõ szûrõberendezéssel. 5. Eljárás 5.1. Mintaelõkészítés Pontosan mérjünk be a mintából akkora mennyiséget, amely kb. 100 mg kinint tartalmaz egy 100 ml-es mérõlombikba, oldjuk fel és töltsük fel a jelig metanollal (3.3.). Zárjuk le a lombikot dugóval és hagyjuk egy órára szobahõmérsékleten az ultrahangos készülékben (4.2.). Szûrjük le (4.3.) és a szûrletbõl végezzük el a kromatográfiá meghatározást. 5.2. Vékonyréteg kromatográfia Cseppentsünk fel 1,0 ì l-t a standard oldatból (3.10.) és 1,0 ì l-t a mintaoldatból (5.1.) a szilikagél lapra (3.1.). Futtassuk fel a kromatogramot 150 mm-es távolságra futtató kádban, amelyet elõzõleg a 3.2. oldószerrel telítettünk. 5.3. Elõhívás 5.3.1. Szárítsuk meg a lapot szobahõmérsékleten. 5.3.2. Permetezzük be a 3.6. reagenssel. 5.3.3. Hagyjuk a lapot száradni egy órán keresztül szobahõmérsékleten. 5.3.4. Figyeljük meg a lapot 360 nm-es UV lámpa fényében. A kinin élénk, kék fluoreszcens folt formájában jelenik meg. Példaként az alábbi táblázat megadja a fõ alkaloidák a kininhez viszonyítva RF értékeit a 3.2. oldószerrel való elõhívás esetén: Alkaloida RF Kinin 0,20 Kinidin 0,29 Cinkonin 0,33 Cinkonidin 0,27 Hidrokinidin 0,17 5.3.5. A kinin jelenlétének további igazolása céljából a lapot kb. egy órán keresztül bró mgõz hatásának tesszük ki (3.7.). A fluoreszcencia eltûnik. Ha ugyanezt a lapot ammóniagõz (3.8.) alá helyezzük, akkor a foltok ismét megjelennek barna színnel és a lap ismételt 360 nm-es UV fény alatti megfigyelése esetén sárgás fluoreszcencia tapasztalható. Érzékelési határérték: 0,1 ì g kinin. B. MENNYISÉGI MEGHATÁROZÁS 1. Cél és alkalmazási terület Ez a módszer a kinin meghatározását írja le. Alkalmas a samponokban megengedett 0,5% (m/m) és a hajszeszekben megengedett 0,2% (m/m) legnagyobb koncentráció meghatározására. 2. Fogalommeghatározás Az ezzel a módszerrel meghatározott kinint a termék tömegszázalékában (% m/m) fejezzük ki. 3. Alapelv A vizsgálandó termék megfelelõ kezelését követõen a meghatározást nagynyomású folyadék-kromatográfiával (HPLC) végezzük. 4. Reagensek Minden reagensnek analitikai tisztaságúnak és emellett alkalmasnak kell lennie folyadékkromatográfiára is. 4.1. Acetonitril. 4.2. Kálium-dihidrogén-ortofoszfát (KH2PO4). 4.3. Ortofoszforsav (85% ; d 4 20 = 1,7). 4.4. Tetrametil-alumínium-bromid. 4.5. Vízmentes kinin. 4.6. Metanol. 4.7. Ortofoszforsav oldat (0,1 M): mérjünk be 11,53 g ortofoszforsavat (4.3.) és oldjuk fel 1000 ml vízben egy mérõlombikban. 4.8. Kálium-dihidrogén-ortofoszfát oldat (0,1 M): mérjünk be 13,6 g kálium-dihidrogénortofoszfátot (4.2.) és oldjuk fel 1000 ml vízben egy mérõlombikban. 4.9. Tetrametil-ammónium-bromid oldat: oldjunk fel 15,40 g tetrametil-ammónium-bromidot (4.4.) 1000 ml vízben egy mérõlombikban. 4.10. Oldószer: ortofoszforsav (4.7.) / kálium-dihidrogén-foszfát (4.8.) / tetrametil-ammóniumbromid (4.9.) / víz / acetonitril (4.1.) 10/50/100/340/90 (v/v/v/v/v). A mozgó fázis összetétele változtatható, olyan módon, hogy az oszlop felbontása R  1,5-t eredményezzen. W W R d' R d' R + − = ahol: R1 és R2 = a csúcsokhoz tartozó retenciós idõk, percben, W1 és W2 = a csúcsoknak a magasság felénél mért szélessége, milliméterben, d' = a papíradagolás-sebessége, milliméter/percben. 4.11. Oktadecil-szilánnal kezelt szilikagél, 10 ì m szemcsenagyság 4.12. Standard oldatok: mérjünk be egymást után pontosan kb. 5,0, 10,0, 15,0 és 20,0 mg vízmentes kinint (4.5.) egy sorozat 100 ml-es mérõ lombikba. Töltsük fel a jelig metanollal (4.6.) és rázzuk a lombikok tartalmát addig, amíg a kinin fel nem oldódik. Szûrjük át mindegyik mintát 0,5 ì m-es szûrõn. 5. Eszközök 5.1. Szokásos laboratóriumi felszerelés. 5.2. Ultrahangos fürdõ. 5.3. Nagynyomású kromatográfiás berendezés változtatható hullámhosszú detektorral. 5.4. Oszlop: hossz: 250 mm ; belsõ átmérõ:4,6 mm ; töltet: szilika (4.11.). 5.5. Millipore szûrõ FH 0,5 ì m, vagy azzal megegyezõ, megfelelõ szûrõberendezéssel. 6. Eljárás 6.1. Mintaelõkészítés Pontosan mérjünk be egy 100 ml-es lombikba megfelelõ mennyiséget a mintából, amely 10,0 mg vízmentes kinint tartalmaz és adjunk hozzá 20 ml metanolt (4.6.), majd tegyük a lombikot az ultrahangos fürdõbe (5.2.) 20 percre. Töltsük fel jelig metanollal (4.6.). Keverjük össze az oldatot és szûrjük le egy részletét (5.5.). 6.2. Kromatográfia Ára mlási sebesség: 1,0 ml/perc. Detektor hullámhossz (5.3.): 332 nm. Befecskendezési térfogat: 10 ì l szûrt oldat (6.1.) Mérés: csúcs alatti terület. 6.3. Kalibrációs görbe Fecskendezzünk be legalább háromszor egymás után 10,0 ì l-t minden egyes referencia oldatból (4.12.), mérjük meg a csúcs alatti területeket és számítsuk ki az átlagos területet minden egyes koncentráció esetében. Készítsük el a kalibrációs görbét és ellenõrizzük a linearitást. 7. Számolás 7.1. Határozzuk meg a vízmentes kinin mennyiségét ì g-ban, a befecskendezett t érfogatra vonatkoztatva (6.2.) a kalibrációs görbe alapján (6.3.). 7.2. A vízmentes kinin tömegszázalékban (% m/m) kifejezett koncentrációja a mintában a következõ képlet segítségével számítható ki: % (m/m) vízmentes kinin = A B , ahol B a vízmentes kinin mennyisége, ì g-ban, amit 10 mikroliter leszûrt oldat tartalmaz (6.1.). A a minta tömege, grammban (6.1.). 8. Megismételhetõség1 0,5%-os (m/m) vízmentes kinintartalom esetén azonos mintán, párhuzamosan végzett két mennyiségi meghatározás közötti eltérés értéke nem haladhatja meg a 0,02%-ot. 0,2%-os (m/m) vízmentes kinintartalom esetén azonos mintán, párhuzamosan végzett két mennyiségi meghatározás közötti eltérés értéke nem haladhatja meg a 0,01%-ot. IV. SZERVETLEN SZULFITOK ÉS HIDROGÉN-SZULFITOK AZONOSÍTÁSA ÉS MEGHATÁROZÁSA Cél és alkalmazási terület Ez a módszer a kozmetikai termékekben található szervetlen szulfitok és hidrogénszulfitok azonosítását és meghatározását írja le. Ez a módszer csak olyan termékek esetében alkalmazható, amelyekben van vizes vagy alkoholos fázis és amelyekben a kéndioxid koncentrációja nem haladja meg a 0,2%-ot. A. AZONOSÍTÁS 1. Alapelv A mintát sósavban melegítjük és a felszabaduló kén-dioxidot a szaga, vagy az indikátorpapíron jelentkezõ hatása alapján azonosítjuk. 2. Reagensek Minden reagensnek analitikai tisztaságúnak kell lennie. 2.1. Sósav (4 M). 2.2. Kálium-jodát keményítõs papír vagy annak megfelelõ más megoldás. 3. Eszközök 3.1. Általános vékonyréteg kromatográfiás felszerelés. 3.2. Lombik (25 ml) rövid visszafolyós hûtõvel felszerelve. 4. Eljárás 4.1. Tegyünk kb. 2,5 g mintát a lombikba (3.2.) 10 ml sósavval (2.1.). ISO 5725 szabvány szerint. 4.2. Keverjük össze és forraljuk fel. 4.3. Vizsgáljuk meg a kén-dioxid kibocsátását szag alapján vagy indikátorpapír segítségével (2.2.). B. MENNYISÉGI MEGHATÁROZÁS 1. Fogalommeghatározás A mintának ezzel a módszerrel meghatározott szulfit vagy hidrogén-szulfit tartalmát a kén-dioxid tömegszázalékában fejezzük ki. 2. Alapelv A minta savanyítása után a felszabaduló kén-dioxidot hidrogén-peroxid oldatba desztilláljuk. A képzõdõ kénsavat hitelesített nátrium-hidroxid oldattal titráljuk. 3. Reagensek Minden reagensnek analitikai tisztaságúnak kell lennie. 3.1. Hidrogén-peroxid 0,2% (m/v). Naponta készítsük. 3.2. Ortofoszforsav (d 4 20 = 1,75). 3.3. Metanol. 3.4. Nátrium-hidroxid, (0,01 M) hitelesített oldat. 3.5. Nitrogén. 3.6. Indikátor: metilvörös (0,03%-os m/v etanolban) és metilénkék (0,05%-os m/v etanolban) 1: 1 arányú keveréke. Szûrjük le az oldatot. 4. Eszközök 4.1. Szokásos laboratóriumi felszerelés. 4.2. Desztilláló felszerelés (lásd ábra). 5. Eljárás 5.1. Pontosan mérjünk be kb. 2,5 g mintát az A desztilláló lombikba (lásd ábra). 5.2. Adjunk hozzá 60 ml vizet és 50 ml metanolt (3.3.), majd keverjük össze. 5.3. Tegyünk 10 ml hidrogén peroxidot (3.1.), 60 ml vizet és egy pár csepp indikátort (3.6.) a desztilláló D gyûjtõedényébe (lásd ábra). Adjunk hozzá néhány csepp nátrium-hidroxidot (3.4.), amíg az indikátor zöld színûvé nem válik. 5.4. Ismételjük meg az 5.3.-t az E mosóüvegre (lásd ábra). 5.5. Szereljük össze a készüléket és állítsuk be a nitrogén (3.5.) ára mlási sebességét kb. 60 buborék/perc. 5.6. Eresszünk 15 ml ortofoszforsavat (3.2.) a tölcsérbõl az A desztilláló lombikba. 5.7. Melegítsük fel gyorsan forrásig majd tartsuk enyhe forrásban 30 percig. 5.8. Válasszuk le a desztilláló D gyûjtõjét. Öblítsük át a csövet, majd titráljuk nátriumhidroxid oldattal (3.4.), amíg az indikátor zöld színûvé nem válik (3.6.). 6. Számítás Számítsuk ki a minta tömegszázalékos szulfit vagy hidrogén-szulfit tartalmát a következõ képlet segítségével: % m/m kén-dioxid = m MV 3,2 , ahol: M = a nátrium-hidroxid oldat (3.4.) moláris koncentrációja, V = a nátrium-hidroxid oldat (3.4.) térfogata, amire a titrálás (5.8.) során szükség volt, milliliterben, M = a minta (5.1.) tömege grammban. 7. Ismételhetõség1 0,2%-os m/m kén-dioxid-tartalom esetén azonos mintán, párhuzamosan végzett két mennyiségi meghatározás közötti eltérés értéke nem haladhatja meg a 0,006%-ot. Tanner szerinti kén-dioxid desztilláló berendezés Minden méret mm-ben van megadva ISO 5725 szabvány szerint. égõ V. AZ ALKÁLIFÉMEK KLORÁTJAINAK AZONOSÍTÁSA ÉS MEGHATÁROZÁSA Cél és alkalmazási terület A módszer leírja a klorátok azonosítását és meghatározását fogkrémekben és más kozmetikai termékekben. A. AZONOSÍTÁS 1. Alapelv A klorátokat vékonyréteg kromatográfiával elválasztjuk a többi halogenáttól, és a jodid jóddá oxidálásával azonosítjuk. 2. Reagensek Minden reagensnek analitikai tisztaságúnak kell lennie. 2.1. Referencia oldatok: frissen készített kálium-klorát, -bromát és -jodát vizes oldata (0,2% m/v). 2.2. Futtató oldat: ammónia oldat (28% m/v) aceton / butanol (60/130/30 v/v/v). 2.3. Kálium-jodid, vizes oldat (5% m/v). 2.4. Keményítõoldat (1-5%-os m/v). 2.5. Sósav (1 M). 2.6. Készgyártmány cellulóz vékonyréteg lapok (0,25 mm). 3. Eszközök Általános vékonyréteg kromatográfiás felszerelés. 4. Eljárás 4.1. Vonjunk ki kb. 1 g-ot a mintából vízzel, szûrjük le és hígítsuk fel kb. 25 ml-re. 4.2. Vigyünk fel a lapra (2.6.) az oldatból (4.1.) 2 ì l-t, a h árom referencia oldat (2.1.) mindegyikének 2 ì l-es részleteivel együtt. 4.3. Tegyük a lapot futtatókádba és futtassuk a kromatogramot a lap (2.6.) hosszának kb. háromnegyedéig a 2.2. pont szerinti oldószerrel. 4.4. Vegyük ki a tartályból és hagyjuk, hogy az oldószer elpárologjon. (NB: Ez akár két órát is igénybe vehet.) 4.5. Permetezzük be a lapot kálium-jodiddal (2.3.) és hagyjuk száradni kb. 5 percig. 4.6. Permetezzük be a lapot keményítõ oldattal (2.4.) és hagyjuk száradni kb. 5 percig. 4.7. Permetezzük be a lapot sósavval (2.5.). 5. Értékelés Ha a klorát van jelen, akkor egy kék folt (esetleg barna folt) jelenik meg fél óra múltán kb. 0,7-0,8 RF értéknél. Halogenátok RF Jodát 0 – 0,2 Bromát 0,5 – 0,6 Klorát 0,7 – 0,8 Meg kell jegyezni, hogy a bromátok és a jodátok azonnali reakciót adnak. Vigyázni kell, hogy a bromátok és a jodátok foltjai ne keveredjenek össze. B. MENNYISÉGI MEGHATÁROZÁS 1. Fogalommeghatározás A minta ezzel a módszerrel meghatározott klorát tartalmát a klorát tömegszázalékában fejezzük ki. 2. Alapelv A klorátot savas körülmények között cinkporral redukáljuk. A képzõdõ kloridot potenciometriás titrálással mérjük ezüst-nitrát oldat segítségével. Redukció elõtt a halogenátok esetleges jelenlétét egy hasonló meghatározás lehetõvé teszi. 3. Reagensek Minden reagensnek analitikai tisztaságúnak kell lennie. 3.1. Ecetsav, 80% (m/m). 3.2. Cinkpor. 3.3. Ezüst-nitrát standard oldat (0,1 M). 4. Eszközök 4.1. Szokásos laboratóriumi felszerelés. 4.2. Potenciométer ezüst jelzésére alkalmas elektróddal felszerelve. 5. Eljárás 5.1. Mintaelõkészítés Pontosan mérjünk be kb. 2 g tömegû „m” mennyiséget egy centrifugacsõbe. Adjunk hozzá 15 ml ecetsavat (3.1.) és alaposan keverjük össze. Várjunk 30 percet és centrifugáljuk 15 percig 2000 fordulat/perc sebességgel. Tegyük át a felülúszó folyadékot egy 50 ml-es mérõlombikba. Ismételjük meg a centrifugálást kétszer, a maradékhoz 15 ml ecetsav hozzáadásával (3.1.). Gyûjtsük össze a klorátot tartalmazó oldatokat ugyanabba a mérõlombikba és töltsük fel a jelig ecetsavval (3.1.). 5.2. A klorát redukciója Vegyünk 20 ml-t az 5.1. szerinti oldatból és adjunk hozzá 0,6 g cinkport (3.2.). Forraljuk fel egy visszafolyós hûtõvel felszerelt lombikban. 30 perc forralás után hûtsük le és szûrjük le. Öblítsük át a lombikot vízzel. Szûrjük le és egyesítsük a szûrletet az kiöblítettel. 5.3. A klorid mennyiségi meghatározása Titráljunk meg 20 ml 5.2. oldatot ezüst-nitráttal (3.3.) potenciométer alkalmazása mellett (4.2.). Hasonló módon titráljunk meg 20 ml 5.1. oldatot ezüst-nitráttal (3.3.). Megjegyzés: Ha a termék bróm vagy jódszármazékokat tartalmaz, amelyekbõl bromid, illetve jodid szabadulhat fel a redukció után, akkor a titrálási görbe több inflexiós pontot fog tartalmazni. Ebben az esetben a titráló oldat (3.3.) térfogatát, ami a kloridnak felel meg, az utolsó és az utolsó elõtti inflexiós pont közötti különbség adja. 6. Számítás A minta tömegszázalékos (% m/m) klorát tartalmát a következõ képlet segítségével számíthatjuk ki: Klorát (ClO3 –)%m/m = ( ) m M V’ V 20,9 − , ahol: V = az 5.2. szerinti oldat titrálásához felhasznált ezüst-nitrát oldat (3.3.) térfogata milliliterben, V’ = az 5.1. szerinti oldat 20 ml-ének titrálásához felhasznált ezüst-nitrát oldat (3.3.) térfogata milliliterben, M = az ezüst-nitrát oldat (3.3.) molaritása, m = a minta tömege grammban. 7. Ismételhetõség1 3-5%-os m/m kloráttartalom esetén azonos mintán, párhuzamosan végzett két mennyiségi meghatározás közötti eltérés értéke nem haladhatja meg a 0,07%-ot m/m. VI. NÁTRIUM-JODÁT AZONOSÍTÁSA ÉS MEGHATÁROZÁSA Cél és alkalmazási terület Ez a módszer nátrium-jodátot tartalmazó kozmetikai termékek lemosóinak azonosítására és mennyiségi meghatározására vonatkozó eljárást írja le. A. AZONOSÍTÁS 1. Alapelv A nátrium-jodátot elválasztjuk a többi halogenáttól vékonyréteg kromatográfiával, és a jodid jóddá oxidálásával azonosítjuk. 2. Reagensek Minden reagensnek analitikai tisztaságúnak kell lennie. 2.1. Referencia oldatok: frissen készített kálium-klorát, -bromát és -jodát vizes oldata (0,01% m/V). 2.2. Elõhívó oldat: ammónia oldat (28% m/v)/ aceton/ butanol (60/130/30 v/v/v). 2.3 Kálium-jodid, vizes oldat (5% m/v). 2.4. Keményítõoldat (1-5%-os m/v). 2.5. Sósav (1 M). 3. Eszközök 3.1. Készgyártmány cellulóz vékonyréteg lapok (0,25 mm). 3.2. Általános vékonyréteg kromatográfiás felszerelés. 4. Eljárás 4.1. Vonjunk ki kb. 1 g-ot a mintából vízzel, szûrjük le és hígítsuk fel kb. 10 ml-re. 4.2. Vigyünk fel a mintából 2 ì l-t a lap alapvonalára (3.1.), a három referencia oldat (2.1.) mindegyikének 2 ì l-es részleteivel együtt. 4.3. Tegyük a lapot futtató kádba és futtassuk fel a kromatogramot a lap (2.6.) hosszának kb. háromnegyedéig a (2.2.) szerinti oldószerrel. 4.4. A lap kivétele után hagyjuk, hogy az oldószer szobahõmérsékleten elpárologjon. (Megjegyzés: Ez akár két órát is igénybe vehet.) ISO 5725 szabvány szerint. 4.5. Permetezzük be a lapot kálium-jodiddal (2.3.) és hagyjuk száradni kb. 5 percig. 4.6. Permetezzük be a lapot keményítõ oldattal (2.4.) és hagyjuk száradni kb. 5 percig. 4.7. Végül permetezzük be a lapot sósavval (2.5.). 5. Értékelés Ha a jodát jelen van, akkor egy kék folt (esetleg barna vagy állás közben megbarnuló folt) jelenik meg azonnal kb. 0-0,2 RF értéknél. Meg kell jegyezni, hogy a bromátok azonnali reakciót adnak kb. 0,5-0,6 RF értéknél, és a klorátok kb. 30 perc múltán ugyancsak adnak reakciót 0,7-0,8 RF értéknél. B. MENNYISÉGI MEGHATÁROZÁS 1. Fogalommeghatározás Az ezzel a módszerrel meghatározott nátrium-jodát tartalmat a nátrium-jodát tömegszázalékában fejezzük ki. 2. Alapelv A nátrium-jodátot vízben feloldjuk és nagynyomású folyadék-kromatográfiával (HPLC) határozzuk meg, egy C18 oszlop és egy anioncserélõ oszlop alkalmazásával. 3. Reagensek Minden reagensnek analitikai tisztaságúnak és nagynyomású folyadék-kromatográfiára alkalmasnak kell lennie. 3.1. Sósav (4 M). 3.2. Nátrium-szulfit vizes, 5% m/v. 3.3. Nátrium-jodát törzsoldat. Készítsünk törzsoldatot, amely 50 mg nátrium-jodátot tartalmaz 100 ml vízben. 3.4. Kálium-dihidrogén-ortofoszfát. 3.5. Dinátrium-hidrogén-ortofoszfát 2H2O. 3.6. Nagynyomású folyadék-kromatográfia mozgó fázisa: oldjunk fel 3,88 g káliumdihidrogén-ortofoszfátot (3.4.) és 1,19 g dinátrium-hidrogén-ortofoszfátot 2H2O-t (3.5.) 1 liter vízben. A kapott oldat pH-ja 6,2 legyen. 3.7. Általános indikátorpapír, 1-11 pH tartományú. 4. Eszközök Szokásos laboratóriumi felszerelés. 4.1. Kerek szûrõpapír, 110 mm-es átmérõjû, Scleicher és Schüll 575-ös számú, vagy azzal megegyezõ. 4.2. Nagynyomású folyadék-kromatográf változtatható hullámhosszú detektorral. 4.3. Oszlop: hossz: 120 mm, belsõ átmérõ 4,6 mm; szám: kettõ, sorba kötve, az elsõ oszlop: necleosil R 5 C18 vagy azzal megegyezõ, második oszlop – Vydac TM-301-SB vagy azzal megegyezõ. 5. Eljárás 5.1. Mintaelõkészítés 5.1.1. Folyékony minták (samponok) Pontosan mérjünk be kb. 1,0 g vizsgálati mintát egy 10 ml-es csiszolt üvegdugós kalibrált csõbe vagy mérõlombikba. Töltsük fel a jelig vízzel és keverjük össze. Szükség esetén szûrjük le az oldatot. Határozzuk meg az oldat jodát tartalmát HPLC-vel az 5.2. szakaszban leírtak szerint. 5.1.2. Szilárd minták (szappanok) Vágjuk apróra a minta egy részét és pontosan mérjünk be kb. 1,0 g vizsgálati mintát egy 100 ml-es csiszolt üvegdugós edénybe. Töltsük fel 50 ml-re vízzel és rázzuk erõsen 1 percig. Centrifugáljuk le és szûrjük át szûrõpapíron (4.1.) vagy hagyjuk a keveréket legalább egy éjszakán át állni. Rázzuk meg erõsen a kocsonyás oldatot és szûrjük át szûrõpapíron (4.1.). Határozzuk meg az oldat jodát tartalmát HPLC-vel az 5.2. szakaszban leírtak szerint. 5.2. Kromatográfia Ára mlási sebesség: 1 ml/perc. Detektor hullámhossz (4.2.): 210 nm. Befecskendezési térfogat: 10 ì l. Mérés: csúcs alatti terület. 5.3. Kalibrálás Pipettázzunk sorrendben 1,0, 2,0, 5,0, 10,0 és 20,0 ml nátrium jodát törzsoldatot (3.3.) 50 ml-es mérõlombikokba. Jelig töltsük fel és keverjük össze. Az így kapott oldatok rendre 0,01, 0,02, 0,05, 0,10 és 0,20 mg nátrium-jodátot tartalmaznak milliliterenként. Fecskendezzünk be egy 10 ì l-es r észletet minden egyes standard jodát oldatból a folyadék-kromatográfba (4.2.) és vegyük fel a kromatogramot. Határozzuk meg a jodát csúcs alatti területét és rajzoljunk fel egy görbét, ami megadja az összefüggést a csúcs alatti terület és a nátrium-jodát koncentráció között. 6. Számítás Számítsuk ki a nátrium-jodát tartalmat tömegszázalékban (% m/m) a következõ képlet segítségével: % (m/m) nátrium-jodát = m Vc , ahol: m = a vizsgálati minta (5.1.) tömege, grammban, V = a mintaoldat teljes térfogata, milliliterben, az 5.1. pont szerint elõállítva, C = a nátrium-jodátnak a kalibrációs görbérõl (5.3.) leolvasott koncentrációja milligramm per milliliterben. 7. Ismételhetõség1 0,1%-os (m/m) nátrium-jodát-tartalom esetén azonos mintán, párhuzamosan végzett két mennyiségi meghatározás közötti eltérés értéke nem haladhatja meg a 0,002%-ot. ISO 5725 szabvány szerint. 8. Megerõsítés 8.1. Alapelv Egy kozmetikai termék savanyított oldatában, a jodátot (IO3–) szulfittal jodiddá (I–) redukáljuk és a kapott oldatot HPLC-vel vizsgáljuk. Ha egy csúcs, amely a jodátnak megfelelõ retenciós idõnél jelentkezik, a szulfitos kezelés után eltûnik, akkor az eredeti csúcsot nagy valószínûséggel a jodátnak tulajdoníthatjuk. 8.2. Eljárás Pipettázzunk egy 5 ml-es adagot az 5.1.-ben leírtak szerint kapott mintaoldatból egy Erlenmeyer lombikba. Állítsuk az oldat pH értékét 3-ra vagy alacsonyabbra sósavval (3.1.); általános indikátor papír ellenõrizzük (3.7.). Adjunk hozzá három csepp nátrium-szulfit oldatot (3.2.) és keverjük össze. Fecskendezzünk be egy 10 ì l-es részletet az oldatból a folyadék-kromatográfba (4.2.). Hasonlítsuk össze ezt a kromatogramot az 5 pontban megadottak szerint ugyanarra a mintára kapott kromatogrammal. (A 85/490/EGK irányelv alapján)

Source: https://magyarkozlony.hu/hivatalos-lapok/53f83b22112ddee3ba432e293c5a4a07160629ad/dokumentumok/1147f0c2e2ee62fd0d72848b53190fba47bc78de/letoltes