Publication: Magyar Közlöny
Issue: MK-2002-109 (Year: 2002, Number: 109)
Era: 1990-2004
Section: a 75/2002. (VIII. 16.) FVM rendelethez
Paragraph Index: 367

d) a reakcióeredmények értékelése az alábbi: Csoport Értékelés + + — — KSP megerõsítve + + + — KSP vakcina törzs + — — + BVD/BD vírus + — — — Nem besorolt vírus, további vizsgálatok szükségesek + + — + Nem besorolt vírus, további vizsgálatok szükségesek + + + + Nem besorolt vírus, további vizsgálatok szükségesek — — — — Nem besorolt vírus, további vizsgálatok szükségesek 2002/109. szám C) A klasszikus sertéspestis vírus elleni ellenanyagok kimutatása A KSP vírus elleni ellenanyagok vérmintákból történõ kimutatása elõsegíti a sertéspestis kórjelzését azokban a gazdaságokban, ahol klinikailag beteg sertések vannak, illetve olyan állományokban, amelyek fertõzött sertésekkel kerültek kapcsolatba. Az ellenanyagok kimutatása elvégezhetõ járványtani szûrés vagy ismeretlen egészségi helyzetû állományok felmérése céljából is. A vérmintákat egy jóváhagyott eljárás szerint kell vizsgálni. A vérminták vizsgálatára az alábbi jóváhagyott eljárások használhatók megfelelõ pozitív és negatív kontroll vérsavók alkalmazása mellett. A szerológiai próbákhoz használandó vírustörzsekrõl az egyes tagállamok Nemzeti Sertéspestis Laboratóriumainak együttes ülésén kell dönteni, kérésre a vírustörzseket a közösség Referencia Laboratóriuma bocsátja a kívánt mennyiségben a nemzeti laboratóriumok rendelkezésére. Minden vizsgálati eljárásnak kielégítõ eredményt kell adnia a Sertéspestis Közösségi Referencia Laboratórium által rendelkezésre bocsátott klasszikus sertéspestis elleni savókkal. A vírus neutralizációs próba A próba célja a neutralizációs titer meghatározása, a vírustenyészetek legalább 50%-ában észlelhetõ gátlás alapján. A vizsgálandó vérsavó különbözõ hígításait azonos mennyiségû vírussal összehozva meghatározott ideig 37 ˚C-on kell tartani, majd sejttenyészetekre oltani. A vírus szaporodását, illetve annak hiányát immunológiai módszerekkel kell kimutatni. Erre a célra a neutralizációs immunfluoreszcenciás próbát (NIF) vagy a peroxidázzal jelzett ellenanyaggal végzett neutralizációs próbát (NIF) kell használni. A próbák részletes leírását az EU nemzetközi sertéspestis referencialaboratóriuma bocsátja rendelkezésre. A vérsavókat elõször tájékozódás céljából 1:10-es hígításban kell vizsgálni. Ha titrálásra is szükség van, a 2-es logaritmus alapú hígításokat az 1:10-es hígításból kell elkészíteni, 1:10-es hígítással indulva. Minden egyes savóhígítást azonos mennyiségû 100 TCID 50 (+/— 0,5 log10) mennyiségû vírussal kell összekeverni. Minden egyes hígítással legalább két sejttenyészetet kell beoltani. A megfelelõ inkubálási idõ után a sejttenyészeteket fixálni kell és a vírus antigént jelzett immunsavóval kell kimutatni. A titerek a vérsavók azon hígításai, amelyek legalább a szövettenyészetek felében gátolták a vírusszaporodást. A két hígítás közötti végpontbecsléssel határozható meg. ELISA (Enzyme — linked immunosorbent assay) Kompetitív, gátlási (blocking) és indirekt módszerek egyaránt alkalmazhatók bármely alkalmas hordozón. Kívánatos, hogy az alkalmazott próbák minél kisebb mértékû keresztreakciót adjanak a BVD-vel és más pestisvírusokkal. Ugyanakkor azonban az adott próbának biztosítani kell valamennyi klasszikus sertéspestis vírus fertõzés kimutatását, a fertõzés bármely szakaszában. Antigén Az antigén az ajánlott KSP vírus törzsek egyikének fehérjéibõl kell, hogy származzon, vagy azzal megegyezõ kell, hogy legyen. Az antigén elõállítására használt sejteknek menteseknek kell lenniük minden más pestisvírus fertõzéstõl. Immunsavók A kompetitív, illetve a blokkoló ELISA-k céljára szolgáló poliklonális ellenanyagokat sertésekben vagy nyulakban kell elõállítani, az ajánlott KSP vírus törzsek egyikével vagy a lapinizált C törzzsel való fertõzéssel. A monoklonális ellenanyagoknak a KSP vírus egyik immunológiai szempontból fontos fehérjéjével szemben kell hatniuk. Az indirekt ELISA-hoz egy olyan anti-sertés immunoglobulint kell használni, amely az IgG-t és az IgM-t egyaránt kimutatja. Az ELISA próbának elég érzékenynek kell lenni ahhoz, hogy pozitív eredményt adjon minden, a neutralizációs próbában reagáló vérsavóval, valamint a Közösségi Sertéspestis Referencia Laboratórium által kiadott pozitív referencia vérsavókkal is. Az ELISA próbákkal kizárólag egyedi vérsavók vagy plazma minták vizsgálhatók. Ha az alkalmazott ELISA eljárás nem KSP-specifikus, a pozitív mintákat tovább kell vizsgálni, az e fejezetben részletezett differenciál diagnosztikai próbákkal. D) A laboratóriumi vizsgálatok eredményeinek értékelése

Source: https://magyarkozlony.hu/hivatalos-lapok/c2988e12fe922f22d0e200d3bf1217f5506e9dec/dokumentumok/f50141276a7f929dc45f12a8fe71b8edaf95bdd1/letoltes