לכידת גנים

לכידת גנים היא גישה בעלת תפוקה גבוהה המשמשת להציג מוטציות הכנסה על פני הגנום של האורגניזם. הלכידה מתבצעת עם וקטורים של לכידת גנים שהמרכיב העיקרי שלהם הוא קלטת לכידת גנים המורכבת מגן מדווח ללא פרומוטור ו/או סמן גנטי משתנה, ולצדו אתר חיתוך בקצה 3' במעלה הזרם (רצף SA) ורצף סיום שעתוק במורד הזרם (רצף של פוליאדנילציה; polyA). כאשר מתרחשת החדירה לאינטרון השייך לגן המבוטא, קלטת מלכודת הגנים עוברת שעתוק מהפרומוטור האנדוגני של אותו גן בצורה של שעתוק מאוחה שבו האקסון (ים) במעלה הזרם של אתר ההחדרה נחתכים באותה מסגרת קריאה לגן הדווח/המרקר שנבחר. מכיוון שהשעתוק מסתיים מוקדם עקב אתר הפוליאדנילציה שהוחדר, התעתיק המעובד מקודד לרצף קצר וחסר תפקוד של החלבון התאי ושל הדווח או מרקר הנבחר. לפיכך, לכידות גנים משביתות ומדווחות בו-זמנית על ביטוי הגן הכלוא באתר ההחדרה, ומספקות תיוג DNA (רצף של לכידת גנים, GTST) לזיהוי מהיר של הגן המשובש. הקונסורציום הבינלאומי של מלכודת גנים מרכז את הנתונים ומספק שורות תאים שעברו שינוי. Gossler A, Joyner AL, Rossant J, Skarnes WC (באפריל 1989). "Mouse embryonic stem cells and reporter constructs to detect developmentally regulated genes". Science. 244 (4903): 463–5. doi:10.1126/science.2497519. PMID 2497519. {{cite journal}}: (עזרה) von Melchner H, Ruley HE (באוגוסט 1989). "Identification of cellular promoters by using a retrovirus promoter trap". Journal of Virology. 63 (8): 3227–33. doi:10.1128/JVI.63.8.3227-3233.1989. PMC 250892. PMID 2545900. {{cite journal}}: (עזרה) Friedrich G, Soriano P (בספטמבר 1991). "Promoter traps in embryonic stem cells: a genetic screen to identify and mutate developmental genes in mice". Genes & Development. 5 (9): 1513–23. doi:10.1101/gad.5.9.1513. PMID 1653172. {{cite journal}}: (עזרה) Zambrowicz BP, Friedrich GA, Buxton EC, Lilleberg SL, Person C, Sands AT (באפריל 1998). "Disruption and sequence identification of 2,000 genes in mouse embryonic stem cells". Nature. 392 (6676): 608–11. doi:10.1038/33423. PMID 9560157. S2CID 4329895. {{cite journal}}: (עזרה) Wiles MV, Vauti F, Otte J, Füchtbauer EM, Ruiz P, Füchtbauer A, Arnold HH, Lehrach H, Metz T, von Melchner H, Wurst W (בינואר 2000). "Establishment of a gene-trap sequence tag library to generate mutant mice from embryonic stem cells". Nature Genetics. 24 (1): 13–4. doi:10.1038/71622. PMID 10615117. S2CID 29505338. {{cite journal}}: (עזרה) Stanford WL, Cohn JB, Cordes SP (באוקטובר 2001). "Gene-trap mutagenesis: past, present and beyond". Nature Reviews Genetics. 2 (10): 756–68. doi:10.1038/35093548. PMID 11584292. S2CID 11468334. {{cite journal}}: (עזרה) Skarnes WC, von Melchner H, Wurst W, Hicks G, Nord AS, Cox T, Young SG, Ruiz P, Soriano P, Tessier-Lavigne M, Conklin BR, Stanford WL, Rossant J (ביוני 2004). "A public gene trap resource for mouse functional genomics". Nature Genetics. 36 (6): 543–4. doi:10.1038/ng0604-543. PMC 2716026. PMID 15167922. {{cite journal}}: (עזרה) Hansen J, Floss T, Van Sloun P, Füchtbauer EM, Vauti F, Arnold HH, Schnütgen F, Wurst W, von Melchner H, Ruiz P (באוגוסט 2003). "A large-scale, gene-driven mutagenesis approach for the functional analysis of the mouse genome". Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100 (17): 9918–22. doi:10.1073/pnas.1633296100. PMC 187885. PMID 12904583. {{cite journal}}: (עזרה) Zambrowicz BP, Abuin A, Ramirez-Solis R, Richter LJ, Piggott J, BeltrandelRio H, et al. (בנובמבר 2003). "Wnk1 kinase deficiency lowers blood pressure in mice: a gene-trap screen to identify potential targets for therapeutic intervention". Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100 (24): 14109–14. doi:10.1073/pnas.2336103100. PMC 283554. PMID 14610273. {{cite journal}}: (עזרה) Schnütgen F, De-Zolt S, Van Sloun P, Hollatz M, Floss T, Hansen J, Altschmied J, Seisenberger C, Ghyselinck NB, Ruiz P, Chambon P, Wurst W, von Melchner H (במאי 2005). "Genomewide production of multipurpose alleles for the functional analysis of the mouse genome". Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102 (20): 7221–6. doi:10.1073/pnas.0502273102. PMC 1129123. PMID 15870191. {{cite journal}}: (עזרה) Springer PS (ביולי 2000). "Gene traps: tools for plant development and genomics". The Plant Cell. 12 (7): 1007–20. doi:10.2307/3871251. JSTOR 3871251. PMC 149045. PMID 10899970. {{cite journal}}: (עזרה) מדיה וקבצים בנושא לכידת גנים בוויקישיתוף Cobellis, G; Nicolaus, G; et al. (2005). "Tagging genes with cassette-exchange sites". Nucleic Acids Res. 33 (4): e44. doi:10.1093/nar/gni045. PMC 552971. PMID 15741177. De-Zolt, S; Schnutgen, F; et al. (2006). "High-throughput trapping of secretory pathway genes in mouse embryonic stem cells". Nucleic Acids Res. 34 (3): 25. doi:10.1093/nar/gnj026. PMC 1369290. PMID 16478711. "IGTC, International Gene Trap Consortium". www.genetrap.org. נבדק ב-2018-02-11.