Itachi Uchiha
membentuk segel. Itachi juga mampu bergerak dalam jarak yang sangat dekat dalam waktu yang sangat cepat sehingga gerakannya hampir tampak seperti jurus teleportasi. Kecepatannya begitu tinggi sehingga Sasuke maupun Kakashi, yang juga sama-sama memiliki kecepatan yang tinggi dan juga merupakan pengguna Sharingan, tidak bisa mengikuti gerakannya di Part I.
Menjadi bagian dari klan Uchiha, seperti yang dijelaskan oleh Kakashi, Itachi adalah pewaris sejati mata Sharingan. Itachi sendiri mulai menguasai Sharingan ketika ia masih berusia 8 tahun. Dalam posisi diam, ia mempelajari gerakan lawannya dengan Sharingan dan meresponnya, seringkali dengan Genjutsu. Itachi sering dipuji karena kehebatannya dalam menggunakan genjutsu,
ia sendiri dapat menjebak lawannya dalam genjutsu hanya dengan menatap mata atau menunjuk lawannya. Itachi juga bisa membalikkan genjutsu lawan dengan Magen: Kyo-tenchi Ten. Menurut Ao, Itachi juga dapat menggunakan genjutsu untuk mengendalikan orang lain dari jarak jauh. Sebagian besar kekuatan genjutsu Itachi berasal dari Sharingan, dan jurus tersebut dapat menyebabkan trauma mental yang kuat pada lawannya.
Itachi juga mendapatkan Mangekyou Sharingan dari temannya Shisui, yang memberikannya agar tidak diambil oleh Danzou.
Susanoo Itachi berwarna kuning di manga, dan merah di anime. Dengan menggunakan Susanoo, Itachi mampu menggunakan Cermin Yata di tangan Susanoo-nya, dan Pedang Totsuka di tangan Susanoo-nya.
Setelah ujian chunin selesai, dua orang tampak memandangi Konoha. Dua orang ini adalah anggota Akatsuki yaitu Itachi Uchiha dan partnernya yaitu Kisame Hoshigaki. Saat Kurenai dan Asuma sedang berjalan-jalan, mereka melihat 2 anggota akatsuki itu. Beruntung Kakashi cepat datang dan menolong mereka. Namun, kakashi terkena "Tsukuyomi" milik Itachi. Itachi dan Kisame mundur
setelah kedatangan Might Guy, dan Itachi mengatakan bahwa mereka tidak datang untuk bertarung. Saat Naruto dan Jiraiya akan masuk ke hotel, Jiraiya menyuruh Naruto masuk dulu karena Jiraiya melihat perempuan yang sudah dihipnotis Itachi. Ketika Itachi datang ke kamar Naruto, Sasuke juga tepat waktu datang. Namun, Sasuke dengan mudah dikalahkan oleh Itachi. Saat Sasuke kalah,
Jiraiya datang dan menyerang Itachi dengan jutsu "Kuchiyose: Gamaguchi Shibari". Akhirnya, Itachi berhasil keluar dan kabur dengan jurus "Amaterasu".
Itachi pertama kali muncul dalam bentuk Yuura, ia diubah oleh teknik "Shoten No Jutsu" untuk menghambat tim Konoha yang ingin mengambil kembali Gaara, karena Bijuu dalam dirinya diambil oleh para Anggota Akatsuki untuk menghidupkan Juubi.
Sedangkan tubuh Yuura dengan bentuk Itachi dikendalikan oleh dirinya sendiri, dengan memperoleh 30% chakra dirinya. Ia pun bertemu dengan tim yang terdiri dari Naruto, Kakashi, Sakura dan Nenek Chiyo. Mereka pun akhirnya bertarung, Itachi menggunakan "Genjutsu" hanya dengan menunjuk Naruto, Naruto yang melihat jari telunjuk Itachi terjebak ke dalam "Genjutsu" tersebut.
Naruto sempat melawan dengan jurus pelepas ilusi yang diajarkan Jiraiya kepadanya. Namun, "Genjutsu" Itachi terlalu kuat. Hingga akhirnya Naruto tersadar dengan bantuan Sakura dan Nenek Chiyo yang mengacaukan aliran chakranya dan terlepas dari "Genjutsu". Kakashi pun mulai menyerang Itachi, Itachi menjebak Kakashi dengan "Genjutsu Tsukuyomi" tetapi berhasil digagalkan karena
dirinya yang diserang hanya "Kagebunshin". Akhirnya tubuh tipuan Itachi berhasil dikalahkan oleh Naruto dengan "Rasengan".
Sebelum pertarungannya melawan Sasuke, Itachi sempat menemui Naruto terlebih dahulu dan menanyakan kepadanya, "Mengapa kau sangat ingin menyelamatkan Sasuke dan membawanya kembali ke desa?" dan Naruto pun menjawab, "Karena aku lebih menyayangi Sasuke sebagai temannya dibandingkan kau saudaranya sendiri". Setelah mendengar jawaban dari Naruto, Itachi pun tersenyum dan memberikan setengah kekuatannya kepada Naruto.
Itachi bertemu dengan Sasuke dalam bentuk "Kagebunshin" untuk memberi tahu Sasuke bahwa pertarungan mereka di tempat persembunyian klan Uchiha. Akhirnya mereka pun bertarung, pertarungan dimulai dengan saling adu "Genjutsu", saat Itachi berhasil ditusuk oleh pedang Sasuke ternyata Itachi hanya "Kagebunshin", lalu Itachi pun menceritakan kepada Sasuke siapa orang yang pertama kali dapat
membangkitkan Mangekyou Sharingan dan itu adalah Madara Uchiha, Salah satu Pendiri Desa Konoha, dan ia juga memberi tahu kalau Madara masih hidup dan ia adalah dalang di balik pimpinan Akatsuki. Dan Itachi pun menganggap Madara sebagai kaki dan tangan sekaligus guru baginya. Madara juga pemilik Mangekyou Sharingan Abadi dengan mengambil mata adiknya, dan Itachi berkomentar bahwa ia sengaja
membiarkan Sasuke hidup untuk mengambil matanya agar dapat menyempurnakan Mangekyou Sharingan Abadi juga seperti Madara.
Pertarungan pun dilanjutkan, Itachi menjebak Sasuke dengan "Genjutsu Tsukuyomi" yang membuat ilusi seolah-olah Itachi mengambil mata Sasuke. Tapi "Genjutsu" terkuat milik Itachi berhasil dipatahkan oleh Sasuke, Itachi berkomentar bahwa "Tsukuyomi" bisa dipatahkan dengan orang yang memiliki hubungan darah. Lalu adu jurus elemen api dimulai, mereka mengeluarkan jurus elemen
api yang sama, yaitu jurus bola api raksasa ("Katon: Goukakyou No Jutsu"), lalu Itachi mengeluarkan jurus kedua terkuatnya, yaitu api hitam yang disebut "Amaterasu" yang dapat membakar apa saja selama 7 hari 7 malam.
Sasuke lalu mengeluarkan jurus Naga Petir dengan kekuatan alam. Ia lalu dapat menggunakan "Kirin" dengan menyalurkan "Chidori" dari tangannya ke langit dengan bentuk Naga. Karena kekuatan alam, Zetsu berkomentar bahwa "Kirin" memiliki kecepatan 1/1000 detik untuk mencapai tanah dan sangat mustahil untuk seseorang menghindari dari serangan tersebut, jika Itachi tidak menggunakan "Susanoo" pasti ia sudah mati.
Karena tidak adanya chakra yang menekan segel Juin-nya, Orochimaru pun keluar dari tubuh Sasuke dalam bentuk ular putih raksasa berkepala delapan (Yamata No Orochi), walaupun begitu Itachi lebih unggul dari Orochimaru, dan akhirnya Orochimaru tersegel oleh Pedang Totsuka milik Itachi selama-lamanya dan segel Juin pada Sasuke pun menghilang.
Saat Itachi mulai mendekati Sasuke, Sasuke menyerang tetapi semua itu sia-sia karena Itachi masih dilindungi oleh Susanoo. Saat dikira Itachi ingin mengambil mata Sasuke, ternyata Itachi hanya meletakkan jari tengah dan telunjuknya pada dahi Sasuke sama seperti waktu mereka kecil dulu, dan di sisa chakra-nya Itachi menanamkan Mangekyou Sharingan pada Sasuke dan tewas di hadapannya, karena kelelahan Sasuke pun terbaring di samping kakaknya.
Kabuto yang berhasil membangkitkan kembali para ninja yang telah mati, menggunakan Itachi sebagai boneka mayat hidup dalam Perang Dunia Shinobi, namun Itachi yang menyimpan mata Sharingan spesiai milik Uchiha Shisui menghipnotis dirinya sendiri kemudian terbebas dari kendali Kabuto. Pada akhirnya ia bertarung melawan Kabuto hingga ia berhasil mengalahkannya dengan bantuan Sasuke yang
muncul secara misterius. Setelah diberitahu segel oleh Kabuto melalui Izanami, Itachi mengendalikan Kabuto untuk melepas jiwa semua ninja yang dibangkitkan, sementara adiknya menyatakan ia masih tidak bisa memaafkan Konoha atas apa yang telah mereka lakukan pada Itachi.
Sebelum Jurus Edo Tensei selesai, Itachi bergerak menuju Sasuke dengan tangannya terulur untuk menyodoknya seperti yang selalu dilakukannya. Sebelum keberadaannya memudar, Itachi menggunakan Sharingan dan berbagi kenangan dengan Sasuke dan kebenaran yang mengarah menuju kudeta klan mereka yang telah direncanakan. Sambil mendekat kepadanya, Itachi mengatakan bahwa ia tidak lagi ingin
berbohong kepada Sasuke dan merenungkan hal-hal berbeda andai ia telah menjelaskan kejadian yang sebenarnya terjadi pada malam itu. Sambil menunjuk dan menyandarkan kepala pada Sasuke, Itachi mengatakan kepada adiknya bahwa ia tidak harus memaafkannya, sebab tidak peduli apa yang terjadi pada Sasuke sejak malam itu, ia akan selalu