Louisville, Kentucky
Магистраль проходит через третий и первый по населению города Кентукки — Боулинг-Грин и Луисвилл. В Луисвилле Interstate 65 пересекает I-64 и I-71. После прохождения через Луисвилл автомагистраль попадает на территорию Индианы.