金羊毛
1506年，他們的孫子查理繼承了勃艮第公爵頭銜，標誌着勃艮第公國正式被併入神聖羅馬帝國而不復存在，因此，金羊毛騎士團的領主權也隨之由勃艮第大公，轉為對神聖羅馬帝國皇帝效忠。查理五世亦進一步加強騎士團的規律，金羊毛騎士一旦犯罪，必需由其他成員聯合審理；除非當中最少六名成員同意，否則不能逮捕該名被控的騎士。而在審訊期間，被控者不受羈押只需接受軟禁。另外，查理五世還規定只有天主教徒才可以加入金羊毛騎士團。