Юстиниан I
В то время в Византийской империи распространилась ересь монофизитов. Юстиниан I и его преемник Юстин II проводили лояльную религиозную политику и в ряде вопросов покровительствовали монофизитам. Анастасий неоднократно выступал с критикой монофизитского вероучения, рассылал послания по всем церквам и ежедневно разъяснял в своём храме Православное учение о двух естествах Иисуса Христа.