Catherine de' Medici
1527年，神圣罗马帝国的查理五世洗劫了罗马，佛罗伦萨人利用意大利全国的骚乱乘势而起重建共和国。在教宗的帮助下，亚历山德罗和其他美第奇家族成员一起逃离了佛罗伦萨，当时才8岁的凯瑟琳·德·美第奇留了下来。当时米开朗基罗被邀请为美第奇家族建造小教堂，动乱发生后，他留下为佛罗伦萨建造堡垒以示支持。教宗很快和皇帝达成了和平协议，在帝国军队的帮助下，1530年的夏天，美第奇家族重新统治了佛罗伦萨。克勉七世任命19岁的亚历山德罗为佛罗伦萨公爵，这项任命得到了查理五世的承认。1531年7月5日，亚历山德罗到任，9个月后，他被皇帝任命为世袭公爵（作为回报，塔斯卡尼脱离教宗统治）。这也标志着佛罗伦萨共和国的正式终结。