コジモ1世
メディチ家とは血縁は無いが、治世を通してフィレンツェ公コジモ1世と深く結びついていた。兄がコジモ1世に仕えていただけでなく、ピウス4世もコジモ1世に財政支援で教皇選出を後押しされた事情があり、見返りにコジモ1世の次男ジョヴァンニを1560年3月28日に枢機卿に叙任、コジモ1世のローマ表敬訪問を迎えたり、1562年にコジモ1世が結成したの認可を与えたりしている。政略結婚にも手を貸し、コジモ1世の長男フランチェスコとフェルディナント1世の娘ジョヴァンナの婚約を1563年に取り付け、教皇の死後1565年12月16日に結婚式が挙行された。コジモ1世がピウス4世と結びついた背景は公爵より上の称号を狙っていたからで、ハプスブルク家の反対を押し切りピウス4世の下で「トスカーナ王」の称号を受けることが目的だったが、ピウス4世の死去で挫折した。コジモ1世の野望が叶うのは、次の教皇ピウス5世の下で王より格下だが公より格上の「トスカーナ大公」の称号を授与される1569年8月24日である。