헨리 8세
1497년 오빠 후안 왕자 사망, 1498년 언니 이사벨 사망 그리고 언니 이사벨의 어린 아들 미겔(Miguel) 왕자가 사망함으로써 에스파냐왕국의 왕위 계승 1순위자가 되었다. 1504년 11월 어머니 이사벨 1세가 사망하자 카스티야 여왕을 계승하였다.  왕국 통치는 아버지 페르난도 2세와 남편 필리프 1세 그리고 아들 카를 5세가 하였으며 명목상 여왕의 자리를 유지하였다. 후아나의 여동생은 잉글랜드 헨리 8세(1491~1547)와 결혼한 캐서린이다.