Alkaline phosphatase
非特異的な結合を防ぐために、メンブレンをブロッキングバッファー内でインキュベート（恒温放置）する。次に一次抗体とインキュベートし、続いて検出抗体または検出分子（一般的にはHRPまたはアルカリホスファターゼ）に結合した一次抗体とインキュベートする。抗体が結合した後、メンブレンを化学発光基質とともにインキュベートして画像形成する。