час,- филтрира се. Филтратът се оставя настрани за по-късна употреба.5.3. Екстракцията на корен от сладник трябва да бъде извършена три пъти последователно.5.4. Трите филтрата се смесват.5.5. Изпарява се разтворителят (от 5.4.) върху ротативен изпарител.5.6. Улавя се остатъчният екстракт (от 5.5) със 100 ml 50 об. % етанол (4.6.1).6. Апаратура и оборудване6.1. Сепарационна система.6.1.1. Високоефективен течен хроматограф.6.1.2. Помпена система, която може да достигне и поддържа постоянна или зададена скорост на потока при високо налягане.6.1.3. UV/видима спектрофотометрична детекционна система, която може да бъде поставена на 254 и 370 nm.6.1.4. Система за обезгазяване на разтворителя:6.1.5. Колонна пещ, която може да работи при температура 40 ± 0,1 °С.6.2. Изчислителен интегратор или рекордер, който е съвместим с останалата част на сепарационната система.6.3. КолонаМатериал: неръждаема стомана или стъклоВътрешен диаметър: от 4 до 5 mmПостоянна съставка: кварц с напречни връзки с функционална група (С18), производна на октадецила, размер на частиците: 5 μm най-много (съставка с напречни връзки).6.4. Общо лабораторно оборудване, включително:6.4.1. аналитична везна. (точност: ± 0,1 mg);6.4.2. дестилационна апаратура с хладник на водната баня, включващ например:- 250-милилитрова колба с обло дъно със стандартизирана стъклена поставка,- 30 cm дълъг хладник на водната баня и- източник на топлина (всяка пирогенна реакция, включваща извличащо вещество задължително трябва да бъде избегната чрез използването на подходяща подредба).6.4.3. Ротативна апаратура за изпаряване.6.4.4. Задаване на филтрация (т.е. фуния на Buchner).6.5. Условия на хроматография (пример).6.5.1. Характеристики на отстраняване на абсорбирания материал чрез разтворител А (4.6.2) и Б (4.6.3):- превключва се от 20/80 (v/v) до 50/50 (v/v) градиент за 15 минути,- превключва се от 50/50 (v/v) до 75/25 (v/v) градиент за пет минути,- еднаква мощност при 75/25 (v/v) за пет минути,- стабилизация на колоната между инжекциите,- еднаква мощност при 20/80 (v/v) за пет минути.6.5.2. Скорост на потока: 1 ml/min.6.5.3. Настройка на UV детектора:детекторът трябва да бъде поставен на 370 nm, за да детектира наличието на халкони и след това на 254 nm, за да детектира глицеризинова киселина.Забележка: промяната на дължината на вълната (от 370 nm до 254 nm) трябва да бъде извършена 30 секунди преди началото на максимума на отстраняването на глицrризинова киселина.7. Процедура7.1 Приготвяне на спиртната пробаФилтрира се чрез филтър за органични разтвори (диаметър на порите: 0,45 μm).7.2. Приготвяне на остатъчния екстракт от сладник (5.6)Прави се разтвор едно към десет с 50 об. % етанол (4.6.1) преди анализа.7.3. Определяне7.3.1. Инжектират се 20 μl от приготвения екстракт от сладник (7.2). Анализът се извършва като се използват условията на хроматография, описани по-горе (6.5).7.3.2. Инжектират се 20 μl от пробата (7.1) (спиртна проба, подправена с анасон). Анализът се извършва като се използват условията на хроматография, описани по-горе (6.5).7.3.3. Сравняват се двете хроматограми. Двете хроматограми трябва да бъдат много сходни в халконовата изходна зона (по време на детекцията при 370 nm при условията на анализ, описани по-горе) (виж фиг. 1).8. Хроматограма на характеристиките на pastis+++++ TIFF +++++9. Характеристики на работа на метода (точност)Резултати от вътрешнолабораторния тест:следната таблица представя работата за установяване наличието или отсъствието на халкони в pastis и напитки, подправени с анасон.Следващите данни са получени от международно изследване на работата на метода, направено съобразно международно съгласувани процедури.Година на