дестилирана вода (50 ml). Добавят се приблизително 80 ml етилов етер (4.6) и делителната фуния се разклаща енергично в продължение на около 60 секунди, като налягането се освобождава периодично чрез нейното обръщане и отваряне на спирателния кран. Изчаква се до получаването на пълно разделяне на две фази (бележка 2). След това сапуненият разтвор се отлива възможно най-изчерпателно в отделна делителна фуния. По същия начин се извършват още две екстракции на фазата на водно-алкохолна смес, като всеки път се използват 60 до 70 ml етилов етер (4.6).
 Забележка 2:
 Всяка емулсия може да бъде разрушена с прибавяне на малки количества етанол (4.7).
 Трите етерни екстракта се смесват в делителна фуния, съдържаща 50 ml вода. Промиването с вода (50 ml) продължава, докато промивната вода престане да се оцветява в розово при добавянето на капка разтвор на фенолфталеин (4.11). След отстраняване на промивната вода се филтрува безводен натриев сулфат (4.4) в предварително претеглена колба с вместимост 250 ml, като фунията и филтърът се промиват с малки количества етилов етер (4.6).
 Разтворителят се изпарява под вакуум чрез дестилация в ротационен изпарител при температура 30 °C. Добавят се 5 ml ацетон (4.5) и летливият разтворител се отстранява напълно посредством слаба струя азот. Остатъкът се изсушава в пещ при температура 103 ± 2 °C в продължение на 15 минути. След това се охлажда в десикатори и се претегля с точност до 0,1 mg.
 ЧАСТ 2
 ОТДЕЛЯНЕ НА ФРАКЦИИТЕ НА АЛКОХОЛНИТЕ СЪЕДИНЕНИЯ
 1. ОБХВАТ
 Неосапуняемите съставки, подготвени в част 1, се разделят на фракции, представляващи отделните алкохолни съединения, алифатните алкохоли, стеролите и тритерпеновите диалкохоли (еритродиол и уваол).
 2. ПРИНЦИП
 Неосапуняемите съставки могат да бъдат разделени на фракции с помощта на основна тънкослойна хроматография (референтен метод), откроени, а съответните ивици издраскани и екстрахирани. Алтернативен метод на отделяне е ВЕТХ с колона от силикагел и ултравиолетов детектор, като се събират отделните фракции. Алифатните и тритерпеновите алкохоли, както и стеролните и тритерпеновите диалкохоли се изолират заедно.
 3. ОБОРУДВАНЕ
 Стандартно лабораторно оборудване, включващо по-конкретно следното:
 3.1.
 Пълен набор за анализ чрез тънкослойна хроматография с използване на стъклени плаки с размер 20 × 20 cm.
 3.2.
 Ултравиолетова лампа с дължина на вълната 366 или 254 nm.
 3.3.
 Микроспринцовки с вместимост 100 μl и 500 μl.
 3.4.
 Цилиндрична фуния за филтруване, подходяща за филтруване под вакуум, с порьозна преграда G3 (порьозност 15—40 μm), диаметър приблизително 2 cm, височина 5 cm и мъжка муфа с шлиф.
 3.5.
 Конусовидна колба с вместимост 50 ml и женска муфа с шлиф, която може да се монтира към фунията за филтруване (3.4).
 3.6.
 Епруветка с вместимост 10 ml с конично дъно и стъклена тапа.
 3.7.
 Десикатор с калциев дихлорид.
 3.8.
 ВЕТХ система, състояща се от:
 3.8.1.
 Бинарна помпа.
 3.8.2.
 Ръчен или автоматичен инжектор, оборудван с дозираща капиляра от 200 μl.
 3.8.3.
 Редови дегазатор.
 3.8.4.
 Детектор за UV-VIS или IR.
 3.9.
 ВЕТХ колона (25 cm × 4 mm в диам.) със силикагел 60 (размер на частицата 5 μm).
 3.10.
 Филтър за спринцовки, 0,45 μm.
 3.11.
 Конусовидна колба 25 ml.
 4. РЕАГЕНТИ
 4.1.
 Калиев хидроксид с минимален титър 85 %.
