са категорични или при спор относно резултатите от направения по някой от рутинните методи анализ, само референтният метод може да бъде използван за проверка на резултатите.
 Б. Категории видове, за които са определени допустими граници за TVB-N
 Допустимите граници за TVB-N са определени за следните категории видове:
 1.
 Sebastes spp., Helicolenus dactylopterus, Sebastichthys capensis;
 2.
 видове, принадлежащи към семейство Pleuronectidae (с изключение на писия: Hippoglossus spp.);
 3.
 Salmo salar, видове, принадлежащи към семейство Merlucciidae, видове, принадлежащи към семейство Gadidae.
 В. Референтна процедура за определяне на концентрацията на TVB-N в риба и рибни продукти
 1. Цел и област на приложение
 Този метод описва референтна процедура за идентифициране на азотната концентрация на TVB-N в риба и рибни продукти. Процедурата е приложима при концентрация на TVB-N от 5 mg/100 g до най-малко 100 mg/100 g.
 2. Определения
 „Концентрация на TVB-N“ означава съдържанието на азот от летливи азотни бази, както е определено от описаната референтна процедура.
 „Разтвор“ означава воден разтвор, както следва:
 а)
 разтвор на перхлорна киселина = 6 g/100 ml;
 б)
 разтвор на натриев хидроксид = 20 g/100 ml;
 в)
 стандартен разтвор на солна киселина 0,05 mol/l (0,05 N). Когато се използва автоматичен дестилационен апарат, трябва да се направи титруване със стандартен разтвор на солна киселина от 0,01 mol/l (0,01 N);
 г)
 разтвор на борна киселина = 3 g/100 ml;
 д)
 силиконов антиразпенващ агент;
 е)
 разтвор на фенолфталеин = 1 g/100 ml 95 % етанол;
 ж)
 индикаторен разтвор (смесен индикатор Tashiro) = 2 g метилово червено и 1 g метиленово синьо, разтворени в 1 000 ml 95 % етанол.
 3. Кратко описание
 Летливите азотни бази се извличат от проба, като се използва разтвор от 0,6 mol/l перхлорна киселина. След алкалинизация екстрактът се подлага на парна дестилация и летливите базови компоненти се абсорбират от киселинен приемник. Концентрацията на TVB-N се определя чрез титруване на абсорбираните бази. Концентрацията се изразява в mg/100 g.
 4. Химически вещества
 Освен ако не е посочено друго, се използват реактивен клас химикали. Използваната вода е или дестилирана, или деминерализирана и най-малко със същата чистота.
 5. Използват се следните инструменти и аксесоари:
 а)
 месомелачка за производство на достатъчно хомогенна рибна кайма;
 б)
 високоскоростен смесител със скорост между 8 000 и 45 000 оборота/минута;
 в)
 нагънат филтър, диаметър 150 mm, бързо филтриращ;
 г)
 бюрета, 5 ml, градуирана до 0,01 ml;
 д)
 апарат за парно дестилиране. Апаратът трябва да може до регулира различни количества пара и да произвежда постоянно количество пара за даден период от време. Той трябва да гарантира, че по време на добавяне на алкализиращите вещества, получаваните свободни бази не могат да бъдат изпуснати.
 6. Изпълнение на референтната процедура
 Когато се работи с перхлорна киселина, която е силно корозираща, се работи с повишено внимание и се вземат необходимите предпазни мерки. Пробите се приготвят колкото е възможно по-скоро след тяхното пристигане в съответствие със следните инструкции:
 а)
 подготвяне на пробата:
 пробата за анализ се смиля внимателно, като се използва месомелачка, както е описано в точка 5, буква а). Част от смляната проба с тегло 10 g ± 0,1 g се претегля в