Establishment of a bovine placental trophoblast cell line and a 3 dimensional spheroid culture model: biological effects of epidermal growth factor (EGF) Boviner Trophoblast Sphäroid Epidermaler Wachstumsfaktor (EGF). Die vorgelegte kumulative Arbeit beschreibt die Etablierung einer bovinen plazentaren Trophoblastzelllinie (F3) für die zusätzlich ein 3 dimensionales Kultursystem (Sphäroid) entwickelt wurde. Es wird außerdem gezeigt dass EGF die Proliferation der Trophoblastzelllinie über eine Aktivierung des Ras MAPK Signalweges stimuliert. Der bovine Trophoblast besteht aus 80% uninukleären Trophoblastzellen (UTC) und 20% invasiven Trophoblastriesenzellen (TGC). TGC sind in der Lage mit einzelnen Karunkelepithelzellen zu fusionieren und produzieren Hormone wie das bovine plazentare Laktogen (bPL). Zusätzlich zeigen sie im Gegensatz zu den UTC nicht die Expression des epithelialen Markers Zytokeratin (ZK). Einige der Wachstumsfaktor Systeme die in der Rinderplazenta vorkommen (VEGF PAF FGF) sind in den TGC kolokalisiert. Auch wenn in vielen früheren Studien mit primären bovinen plazentaren Trophoblastzellen gearbeitet wurde so existierte bis heute keine permanente bovine plazentare Trophoblastzelllinie. In dieser Arbeit wird erstmalig die Isolation einer solchen Zelllinie (F3) beschrieben welche von einem männlichen Fetus stammt. Die Zelllinie wurde anhand folgender Kriterien charakterisiert: (1) Vorhandensein eines Y Chromosoms (2) ZK Expression (3) Vorkommen von ZK negativen aber bPL positiven TGC in frühen Zellpassagen (4) Nicht Aufnahme von Dil Ac LDL und (5) unterschiedliche Zellmorphologie im Ggensatz zu Karunkelepithelzellen (BCEC) in Kultur. Nachfolgend wurde der Einfluss von EGF (50ng ml) auf die Proliferation von F3 mittels MTT Assay untersucht. Weiterhin wurde untersucht ob die Stimulation von F3 Zellen mit EGF zur Ras (Ras Pull Down Assay Western Blot) oder MAPK42 44 (Western Blot) Aktivierung führt. Es konnte gezeigt werden das EGF seine proliferativen Effekte in der Trophoblastzelllinie über die Aktivierung des Ras MAPK Signalweges vermittelt. Im Gegensatz dazu zeigten BCEC Zellen keine Aktivierung des Signalweges oder vermehrte Proliferation nach EGF Gabe. Ein Hauptmerkmal der Dedifferenzierung boviner Trophoblastzellen in Kultur ist dass die...