Strategie zur Erstellung eines Fanconi Anämie Modells im Schwein mittels Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR) Die Fanconi Anämie (FA) ist eine seltene rezessive Erkrankung des Menschen die bei ca. einer von 100000 Geburten auftritt. Dabei kommt es neben einer kleinen Statur zu verschiedenen Geburtsfehlern einer erhöhten Tumorentstehung und zum Knochenmarksversagen. Verantwortlich dafür sind unterschiedliche Mutationen in einem der FA Gene. Am häufigsten betroffen ist hierbei das FANCA Gen. 60 70% der Erkrankten haben eine Mutation in diesem Genlocus. Die Mutationen führen zu einer verminderten oder nicht vorhandenen Expression des FANCA Proteins. Dieses ist Bestandteil im sogenannten Fanconi Reparaturmechanismus. In diesem Mechanismus aktiviert der Fanconi Kernkomplex eine Reparaturkaskade um Interstrand Crosslinks (ICL) zu reparieren. Bei einer Mutation im FANCA Gen wird der Fanconi Kernkomplex nicht vollständig gebildet und ICLs der DNA nicht repariert. Dadurch kommt es zu Problemen bei der DNA Replikation. Besonders auffällig ist dies bei sich stark replizierenden Zellen z.B. den hämatopoetischen Stammzellen. Die durchschnittliche Lebenserwartung von unbehandelten Erkrankten liegt bei ca. 24 Jahren. Die Therapiemöglichkeiten sind begrenzt das Knochenmarkversagen kann durch eine Knochenmarktransplantation behandelt werden. Für nachfolgende Symptome wie die Ausbildung von Tumoren gibt es derzeit keine Therapie. Die bisherigen Mausmodelle haben auch ihre Grenzen da sie die phänotypischen Merkmale nur begrenzt aufweisen und insbesondere das Knochenmarksversagen nicht entwickeln. Aus diesem Grund fokussiert sich diese Arbeit auf die Generierung eines FANCA Models in porzinen Zellen und parthenogenetischen Embryonen da das Schwein in der Physiologie und Pathologie dem Menschen sehr ähnlich ist. Dafür wurde das CRISPR Cas9 System verwendet. Dieses System ermöglicht es gezielt an einer Position in Genom Doppelstrangbrüche herbeizuführen. Diese werden mittels nicht homologer Endverknüpfung (NHEJ) repariert was oft zur Insertionen und Deletionen (INDELs) führt. In dieser Arbeit wurden spezifische CRISPR Cas9 Genscheren für die Exone 7 9 und 10 des FANCA Gen des Schweins entwickelt. Es wurden verschiedene Zelltypen untersucht darunter immortalisierte STE Zellen porzine induzierte pluripotente Stammzellen (iPS) und parthenogenetische porzine Embryonen. Es hat sich gezeigt dass INDELs in allen drei Zelltypen gebildet werden konnten. Dabei war dies in den STE Zellen und Embryonen erfolgreicher als in den iPS Zellen. Zudem zeigte sich eine leichte Tendenz dass eine INDEL Bildung in den Exonen 7 und 10 einfacher zu generieren ist als in Exon 9. Diese Arbeit ist ein vielversprechender Anfang für die Erstellung eines FANCA Schweinemodells um mögliche Therapien evaluieren zu können.