Gentechnische Methoden : eine Sammlung von Arbeitsanleitungen für das molekularbiologische Labor Wie funktionieren bestimmte gentechnische Methoden die dringend benötigte Ergebnisse liefern sollen Welches Verfahren ist für ein Experiment am besten geeignet Welche Kontrollen sind sinnvoll Wie genau muss ein Puffer angesetzt werden und wie war das noch mal mit der Reihenfolge im Pipettierschema In der 5. Auflage dieses bewährten Laborhandbuches werden molekularbiologische Methoden in Form von eindeutigen und reproduzierbaren Arbeitsvorschriften präsentiert um die täglichen Hürden des Laboralltags zu meistern. Es richtet sich an Bachelor Master oder Diplomstudierende sowie an Technische Assistenten die neue Methoden etablieren wollen und erfahrene Wissenschaftler zum schnellen Nachschlagen. Die Autoren sind in Lehre und Forschung oder in der Industrie tätig und geben hier ihr Wissen und ihre jahrelange Laborerfahrung weiter. Die meisten Methoden und Rezepte sind erfolgreich etabliert andere wurden erst aktuell eingeführt. Zu Beginn eines jeden Abschnitts wird der Leser über die wichtigsten Konzepte informiert. Es folgt ein praktischer Teil mit Arbeitsanleitungen die Schritt für Schritt das Erlernen und genaue Anwenden der Methoden ermöglichen. Besonderer Wert wurde auf Sicherheitshinweise und das Aufzeigen möglicher Fehlerquellen gelegt. Inhaltsübersicht: Allgemeine Methoden Gelelektrophoresen Isolierung von DNA Polymerase Kettenreaktion (PCR) Klonierung von cDNA (cDNA Phagenbank) Klonierung von genomischer DNA (genomische Genbank) Isolierung und Markierung von RNA RNA Interference Gewebepräparation Detektion von Protein und Nucleinsäure auf Membran Detektion von mRNA und Protein in situ Transfektion von Säugerzellen Transformationsmethoden für filamentöse Pilze Genexpression in E. coli und Insektenzellen: Produktion und Reinigung rekombinanter Proteine Das Pichia pastoris Expressionssystem Verminderung der Genexpression über Ribozym Targeting Analyse der Genregulation Peptid Arrays auf Cellulosemembranen Genexpressionsanalyse mit Microrrays Webbasierte Sequenzanalyse und Datenbankabfragen Anhang 1 Sequenzierung von DNA Anhang 2 Proteinidentifizierung und Sequenzierung In der 5. Auflage wurden neben der Überarbeitung der grundlegenden Kapitel zu den molekularbiologischen Methoden die Kapitel zu RNAi Bioinformatik und zu Microarrays deutlich ausgebaut. Ein Kapitel zur Fixierung und Aufbereitung von Gewebe ist neu hinzugekommen. Damit ist dieses Buch wiederum ein unverzichtbares Hilfsmittel für jedes molekularbiologische Labor.