Untersuchungen zur Optimierung der Kryokonservierung von Hundesperma mittels Zentrifugation und Verwendung eines Eidotter freien Verdünners Ziele der vorliegenden Studie waren 1. die Einbeziehung der Zentrifugation der nativen spermienreichen Ejakulatfraktion in das Prozedere der Tiefgefrierkonservierung von Hundesperma zur Vereinheitlichung des Seminalplasmaanteils und der Resuspension auf eine standardisierte Spermienkonzentration (106 ml) bzw. Spermienzahl pro 0 5 ml Paillette 2. die Optimierung der Nutzung computergestützter Spermien Analyseverfahren durch Anwendung eines Eidotter freien und damit weitgehend Partikel freien Low Density Lipoprotein (LDL) Verdünners 3. die Erfassung individueller Einflüsse auf die Tiergefrierfähigkeit von Hundesperma. Dazu wurden im Studienabschnitt I in Vorversuchen an gepooltem Sperma von vier geschlechtsgesunden Beaglerüden mit Normospermie in drei Durchgängen Zentrifugationsprotokolle mit den Beschleunigungszahlen 300 x g 700 x g und 1400 x g für jeweils für 5 und 10 Minuten vergleichend angewandt. Die resultierenden Samenpellets wurden je zur Hälfte mit Tris Eidotter Verdünner und einem kommerziell erhältlichen LDL Verdünner (CaniFREEZE® IMV Technologies) versetzt. Als Kryoprotektivum wurde einheitlich Glycerol in einer Endkonzentration von 6% zugefügt. Alle Proben wurden vor und nach der Kryokonservierung mit konventionellen und computergestützten Untersuchungsmethoden bezüglich der Spermienmotilität der Akrosom und Plasmamemembranintegrität und des Mitochondrienmembranpotentials (MMP) analysiert. In einem weiteren Schritt wurde das Zentrifugationsprotokoll (700 x g für 5 Min) welches im ersten Vorversuch die besten Ergebnisse erbrachte im Vergleich zu einem Einfrierprotokoll ohne Zentrifugation angewandt. Dabei wurden die Spermienpellets der zentrifugierten Proben auf eine Spermienkonzentration von 100 x 106 oder 200 x 106 resuspendiert so dass in einer 0 5 ml Paillette 50 x106 bzw. 100 x 106 Spermien enthalten waren. Im Studienabschnitt II wurden die Ejakulate von 27 Rüden unterschiedlicher Rassen aufgeteilt in die Altersgruppen ≤48 Monate (n=13) und >48 Monate (n=14) und nach Ejakulatbeschaffenheit (Normospermie n=20 Teratozoospermie n=7) unter vergleichender Anwendung beider Verdünner nach Zentrifugation bei 700 x g für 5 Minuten tiefgefroren und entsprechend der Vorgehensweise im Studienabschnitt I untersucht. Für die computergestützte Motilitätsanalyse stand das SpermVision® System (Fa. Minitüb Tiefenbach) für die Untersuchung der Spermienmembranen und des MMP das Durchflusszytometer Dako Galaxy® (Fa. Agilent Technologies Santa Clara USA) zur Verfügung. Die Anwendung der Zentrifugationsprotokolle von 700 x g und 1400 x g resultierten in einem höheren Anteil an motilen Spermien im Vergleich zu 300 x g die Zentrifugationszeit von 5 Minuten wirkte sich positiv auf die Integrität von Akrosom und Plasmamembranen sowie auf das MMP aus. Auch im Vergleich zu nicht zentrifugierten Proben erwies sich die Zentrifugation in Bezug auf die Membranintegrität als vorteilhaft. Die Resuspension der Spermienpellets auf 100 x 106 Spermien ml zeigte lediglich anhand eines signifikant höheren kurvolinearen Geschwindigkeit (VCL) der Samenzellen einen Vorteil gegenüber den höher konzentrierten Proben. In den Vorversuchen waren in den mit dem Tris Eidotter Verdünner eingefrorenen Proben signifikant höhere Anteile insgesamt und progressiv motiler Spermien als in den mit LDL Verdünnern verarbeiteten Vergleichsproben nachweisbar in welchen jedoch die VCL höher war. Der letztgenannte Befund war auch im Studienabschnitt II im Durchschnitt der 27 individuellen Spermaproben zu verzeichnen dagegen waren die Anteile insgesamt und progressiv motiler Spermien für beide Verdünner annähernd identisch. Verdünner abhängige Unterschiede ergaben sich für die Anteile an Spermien mit geschädigter Plasmamembran (Tris Eidotter < LDL) und mit geschädigter Akrosom und Plasmamembran (LDL < Tris Eidotter) jedoch nicht für den Anteil an Spermien mit intakten Membranen. Bezüglich des Alters der Samenspender zeigten die untersuchten Parameter im aufgetauten Sperma keine Unterschiede. Aus dem Einfrieren von Sperma mit einem erhöhten Anteil an formabweichenden Spermien (Teratozoospermie) resultierte nach dem Auftauen ein signifikant geringerer Anteil an membranintakten Spermien als in den Vergleichsproben mit Normospermie gefunden wurden. Anhand der vorliegenden Ergebnisse ist als erster Schritt nach Erstellung des Basisspermiogramms die Zentrifugation der nativen spermienreichen Fraktion bei 700 x g für 5 Minuten und die Resuspension auf 100 x 106 Spermien ml im Sinne einer Standardisierung zu empfehlen. In der vorliegenden Studie hat sich das MMP nicht als geeigneter zusätzlicher Parameter zur Qualitätsbeurteilung von aufgetautem Hundesperma erwiesen. Trotz der geringeren Partikelzahl im LDL Verdünner war bezüglich der Beurteilbarkeit des aufgetauten Spermas mittels computergestützter Verfahren kein Vorteil zum Tris Eidotter Verdünner zu erkennen.