Einfluss von Haltezeiten während der Frühphase der Konservierung auf den Energiemetabolismus und die Qualität von Eberspermien Eberspermien Haltezeiten Energiemetabolismus. Ziel der vorliegenden Studie war es den Einfluss von Haltezeiten zwischen 30 min und 6 h bei 21 °C sowie 32 °C während der Frühphase der Konservierung auf die Qualität gelagerten Eberspermas unter Anwendung gängiger Praxisverfahren zu untersuchen. Dabei wurden neben spermatologischen Parametern wie der Motilität und Membranintegrität mögliche Einflüsse auf den Energiestoffwechsel und das bakterielle Wachstum betrachtet. Zusätzlich sollten die praxisüblichen Verarbeitungsmethoden überprüft und Temperaturprofile während der Verarbeitungskette erhoben werden. Es wurden sechs Experimente durchgeführt. Bei allen Experimenten wurden die Motilität der Spermien mittels CASA und der Anteil membranintakter Spermien mittels Durchflusszytometrie bestimmt. In Experiment 2 wurde zudem mit dem Fluoreszenzfarbstoff JC 1 durchflusszytometrisch das Mitochondrienmembran potential ermittelt sowie der Nukleotidgehalt (ATP ADP AMP) und die Energieladung der Samenzellen gemessen. Ein weiteres Augenmerk wurde darauf gelegt den genauen Verlauf der Abkühlung jeder Verarbeitungsvariante im Labor zu dokumentieren. Im ersten Experiment wurden zunächst die zweistufig isotherme Verdünnung mit der zweistufig hypothermen Verdünnung bei zwei Verdünnungsgraden 10 x 106 Spermien ml und 20 x 106 Spermien ml verglichen. Während der Lagerung bei 17 °C wiesen die isotherm verdünnten Proben eine bessere Qualität auf. Dies zeigte sich vor allem beim höheren Verdünnungsgrad. In den Experimenten 2 bis 4 wurden daraufhin die Auswirkungen von Haltezeiten für 30 min 60 min 3 h und 6 h bei 32 °C und 21 °C bei verschiedenen Verarbeitungsbedingungen geprüft. Die Haltezeiten beeinträchtigten dabei die Spermienqualität den Adenylat Gehalt sowie das Mitochondrienmembranpotential nicht. Dies deutet darauf hin dass Eberspermien über einen sehr effizienten Energiestoffwechsel verfügen. Das Keimwachstum wurde durch die Haltezeiten bis zu 60 min des 1:1 verdünnten Samens nicht negativ beeinflusst. Im fünften Experiment wurden die Auswirkungen einer beschleunigten Abkühlrate des ausverdünnten Samens nach isothermer Verdünnung untersucht. Die schnelle Abkühlrate bei einer direkten Abkühlung bei 17 °C wirkte sich tendenziell negativ auf die Motilität aus. Allerdings wurden hier aufgrund des hohen spermatologischen Niveaus nur geringe Schwankungen der Werte ermittelt. Im abschließenden Experiment wurde im ersten Schritt der Temperaturverlauf der Prozesskette der hypothermen Samenverarbeitung auf einer Besamungsstation mit dem Verlauf des isotherm durchgeführten Laborstandards verglichen. Die Samenportionen in der Besamungsstation kühlten aufgrund der höheren Temperatur der Verdünner und der Abkühlung in Bündeln von ca. 40 – 60 Tuben langsamer ab als die des Laborstandards. Im zweiten Schritt wurden die beiden Verarbeitungsverfahren im Hinblick auf die Spermienqualität verglichen wobei die Motilität und Membranintegrität sich bei der langsamen Abkühlung der Besamungsstation als tendenziell besser erwiesen. Die Temperaturmessungen der Verdünnungsverfahren ergaben bei dem Vergleich der zweistufig hypothermen mit der zweistufig isothermen Verdünnung dass entgegen den Erwartungen durch den hypothermen Verdünner eine schnellere Abkühlung auf die Lagerungstemperatur nicht erreicht wird. Bei beiden Methoden wurde diese nach der gleichen Zeitspanne erreicht. Schlussfolgernd sind Haltezeiten bis zu 60 min bei 32 °C und 21 °C sowohl des 1:1 vorverdünnten als auch des ausverdünnten Samens vorteilhaft für die Samenqualität; verlängerte Haltezeiten führen nicht zum Energiedefizit der konservierten Spermien. Allerdings könnten Haltezeiten über 60 min je nach Keimbelastung und Bakterienart kritisch für den Keimgehalt während der Lagerung sein. Es konnte nachgewiesen werden dass eine isotherme Verdünnung und ein langsames Abkühlen zu einer verbesserten Qualität der Besamungsportionen führt. Das derzeit in der Praxis noch häufig durchgeführte zweistufig isotherme Verfahren ist aus spermatologischer Sicht nicht empfehlenswert.