Entwicklung eines multiplex real time PCR Protokolls zum Nachweis von Koi Herpesvirus (KHV) und Untersuchungen zur Pathogenese der Koi Herpesvirus Infektion bei experimentell infizierten Spiegelkarpfen (Cyprinus carpio) KHV real time PCR Pathogenese; KHV real time PCR pathogenesis. Die Koi Herpesvirus (KHV) Infektion hat seit den 1990er Jahren große Schäden in der Aquakultur von Nutzkarpfen und Koi verursacht. Der KHV Nachweis konnte mit der Entwicklung konventioneller PCRs gegenüber der Virusisolierung mittels Zellkultur und des elektronenmikroskopischen Nachweises von Viruspartikeln entscheidend verbessert werden. GILAD et al. (2004) entwickelten den genomischen Nachweis von KHV in Form eines real time PCR assays weiter. In der vorliegenden Untersuchung wurde die real time PCR von GILAD et al. (2004) erstmals als multiplex real time PCR Protokoll verwendet mit dem spezifisch und sensitiv KHV Genom simultan zu einer internen Kontroll DNA nach HOFFMANN et al. (2006) bestimmt werden kann. Das Detektionslimit von GILAD et al. (2004) von 10 Kopien KHV Genomäquivalenten konnte mit dem entwickelten multiplex real time PCR Protokoll bestätigt werden. Mit dem vorliegenden Protokoll wurden fluktuierend 1 Kopie und verlässlich 10 bis 1010 Kopien KHV Genomäquivalente gemessen. Die Verwendung und Koamplifikation einer universell einsetzbaren internen Kontrolle die während der DNA Extraktion hinzugefügt wird ermöglicht die Qualitätskontrolle von DNA Extraktion und PCR Amplifikation. Mittels Koamplifizierung der internen Kontrolle wird die Sicherheit der diagnostischen Aussage erhöht außerdem wird die schnelle und einfache absolute Quantifizierung der genomischen KHV DNA in Probenmaterial überhaupt erst ermöglicht. Das multiplex real time PCR Protokoll stellte sich als vergleichbar sensitiv zu den Protokollen basierend auf BERCOVIER et al. (2005) (konventionelle PCR) BERGMANN et al. (2006) (nested PCR) und PIKARSKY et al. (2004) (konventionelle PCR) heraus. Die konventionellen PCRs nach GRAY et al. (2002) modifiziert nach YUASA et al. (2005) und zuletzt die PCRs nach GRAY et al. (2002) und GILAD et al. (2002) schnitten schlechter ab. Zusätzlich wurden in der vorliegenden Arbeit Untersuchungen zur Pathogenese der KHV Infektion mit dem Ziel der Verbesserung der Diagnostik durchgeführt. Im Infektionsversuch wurden dafür Spiegelkarpfen mit KHV infiziert und im Verlauf sowohl klinisch erkrankte als auch rekonvaleszente Tiere untersucht. Parallel zu adulten Karpfen wurden juvenile Spiegelkarpfen zum Vergleich der Empfänglichkeit von verschiedenen Altersklassen infiziert und mit den adulten Karpfen zusammen gehältert. Die Karpfen wurden bei der für KHV permissiven Temperatur von 23 ʿC gehältert und mit zwei verschiedenen Infektionsdosen im Bad infiziert. Bei den adulten Spiegelkarpfen wurde zu regelmäßigen Beprobungszeitpunkten eine Untersuchung von Niere Kieme Kiemenabstrich und peripheren Blutleukozyten (PBL) durchgeführt. Mit dem entwickelten...