Untersuchungen über den Einfluss der akuten Staupevirusinfektion auf die Funktion ex vivo kultivierter kaniner Monozyten Monozyten Staupevirus Demyelinisierung. In der akuten Phase der Infektion mit dem kaninen Staupevirus (CDV) kommt es bei der neurologischen Verlaufsform klassischerweise zu einer Immunsuppression gefolgt von einer Demyelinisierung in der weißen Substanz des zentralen Nervensystems (ZNS). Die Pathogenese der Demyelinisierung ist nicht abschließend geklärt jedoch werden verschiedene Hypothesen postuliert. Zum einen kann der Zellmetabolismus der Oligodendrozyten durch eine CDV Infektion direkt gestört werden woraus eine Schädigung des Myelins resultiert (primäre Demyelinisierung). Zum anderen führt die CDV Infektion zu einer Aktivierung der Mikroglia welche als einen Mechanismus der unspezifischen Immunabwehr reaktive Sauerstoffspezies (ROS) produziert. Oligodendrozyten sind besonders empfindlich gegenüber ROS und können als innocent bystander geschädigt werden was ebenso zu einem Myelinschaden führen kann (sekundäre Demyelinisierung). Eine weitere vom Immunsystem initiierte Reaktion bei der CDV Infektion ist die Rekrutierung von Monozyten aus dem peripheren Blut ins ZNS wo sie sich zu Makrophagen wandeln. Sobald die Monozyten in das ZNS eingewandert sind ist eine Differenzierung von der dort ansässigen Mikroglia schwierig. Daher ist nicht sicher zu bestimmen was den Ursprung der ROS Produktion darstellt da die eingewanderten Monozyten genauso wie die Mikroglia zur ROS Produktion befähigt sind und somit auch einen Beitrag zur Pathogenese der sekundären Demyelinisierung leisten können. Demnach war das Ziel dieser Arbeit die Hypothese zu belegen dass CDV infizierte Monozyten ROS produzieren und dass das Ausmaß dieser Produktion vom Virusstamm abhängig ist und somit den Einfluss auf das Immunsystem widerspiegelt. Des Weiteren sollte die Isolation der Mikroglia optimiert werden um eine Reinkultur mit Mikroglia für die Bearbeitung weiterer Fragestellungen zu etablieren. Zur Optimierung der Mikroglia Isolation wurden verschiedene Protokolle angewendet und deren Effektivität mittels der Expression von CD11b CD18 und CD45low durchflusszytometrisch bestimmt. Die Dichtegradientenzentrifugation mit anschließender MACS Separation lieferte die höchste Zellzahl mit der höchsten Reinheit und Vitalität der isolierten Mikroglia. Des Weiteren sollten die Bedingungen definiert werden die es erlauben Mikroglia in Reinkultur zu halten. Dazu wurden zwei Medien Microglia Medium (MM prf) und Sato Medium jeweils mit und ohne Makrophagenkolonie stimulierendem Faktor (m csf) verglichen. Es konnte gezeigt werden dass eine Kultivierung im MM prf Kulturmedium eine höhere Gesamtzellzahl Reinheit und Vitalität der Mikroglia erzielte als im Sato Medium. Dennoch wiesen die Mikroglia in der Reinkultur nach 24 Stunden eine sehr hohe Mortalitätsrate auf. Daher konnte eine Untersuchung der Mikroglia nur innerhalb der ersten 24 Stunden durchgeführt werden. Zur Untersuchung ob Mikrogliazellen in vitro mit CDV infiziert werden können wurden sie mit zwei verschiedenen Virusstämmen dem attenuierten Onderstepoort (OND) und dem virulenten R252 Stamm inkubiert. Interessanterweise konnte eine Infektion der Mikroglia mit dem R252 durchflusszytometrisch nachgewiesen werden während eine Infektion mit dem Impfstamm OND nicht nachgewiesen werden konnte. Zur Untersuchung der Monozyten wurde 10 ml Vollblut von zehn gesunden Beaglen entnommen und die Monozyten mittels Dichtegradientenzentrifugation isoliert. Die Monozyten wurden anschließend kultiviert und mit dem Impfstamm OND oder dem R252 Virusstamm infiziert und mit nicht infizierten Monozyten als Negativkontrolle verglichen. Der Nachweis intrazellulären CDV Antigens die Expression von CD14 und die ROS Produktion wurden direkt nach der Infektion (p.i.) und nach drei Stunden...