jeanflop/post_ocr_correction2 huggingface dataset:
en outre, que la disparition du pliage des cultures à 44° n'a lieu que si les bactéries sensibles sont en voie de multiplication. Les sérums antimicrobiens, qui inhibent la lyse à 37°, inhibent également la disparition du phage à 44°, vraisemblablement en empêchant sa fixation sur les germes sensibles. Nous avons comparé, à ce point de vue, le comportement de deux phages staphylococciques. L'un (H) disparaît des cultures à 44°, tandis que l'autre (Twort) s'y maintient au titre initial. La disparition du phage à 44° paraissant, comme sa multiplication à 37°, liée à la présence des bactéries sensibles en cours de développement, nous avons étudié comparativement, à ces deux températures, la fixation du phage sur les germes sensibles, ainsi que les variations du nombre des corpuscules actifs et des germes viables au cours du développement des cultures. Nous avons recherché qu'elle était l'action, à 44°, sur ces deux phages staphylococciques, de l'hydrolysat acide de caséine et d'extrait de levure, dont l'action sur la multiplication du phage de Staphylococcus muscae a été étudiée par Price [7, 8], ainsi que de facteurs, indispensables à la reproduction de certains phages staphylococciques, mis en évidence par Rountree [9] dans le complexe des vitamines B et dans le bouillon non autoclave. Ces facteurs ne sont généralement pas nécessaires à la croissance des germes sensibles, ou seulement en quantités inférieures à celles exigées pour la multiplication des bactériophages. MATÉRIEL ET TECHNIQUE. Nous avons choisi pour ce travail deux phages staphylococciques, les phages H et Twort, que nous avons étudiés précédemment [2]. Le premier, actif sur un très grand nombre de staphylocoques dorés et blancs, pathogènes ou non, donne sur gélose ordinaire de très petites taches ; il est donc probablement de grande taille. Le second, à taches moyennes, et par conséquent plus petit, lyse uniquement deux staphylocoques blancs, non pathogènes, les staphylocoques Twort et Ew. Les germes sensibles utilisés sont : le staphylocoque JB (doré pathogène) sensible au phage H et les staphylocoques Twort et Ew sensibles aux phages H et Twort. Les cultures sont faites en bouillon ordinaire, en tubes contenant 5 cm3, au bain-marie
et dans le bouillon non autoclave. Ces facteurs ne sont généralement pas nécessaires à la croissance des germes sensibles, ou seulement en quantités inférieures à celles exigées pour la multiplication des bactériophages. MATÉRIEL ET TECHNIQUE. Nous avons choisi pour ce travail deux phages staphylococciques, les phages H et Twort, que nous avons étudiés précédemment [2]. Le premier, actif sur un très grand nombre de staphylocoques dorés et blancs, pathogènes ou non, donne sur gélose ordinaire de très petites taches ; il est donc probablement de grande taille. Le second, à taches moyennes, et par conséquent plus petit, lyse uniquement deux staphylocoques blancs, non pathogènes, les staphylocoques Twort et Ew. Les germes sensibles utilisés sont : le staphylocoque JB (doré pathogène) sensible au phage H et les staphylocoques Twort et Ew sensibles aux phages H et Twort. Les cultures sont faites en bouillon ordinaire, en tubes contenant 5 cm3, au bain-marie à 44° ou à l'étuve à 37°. Les ensemencements sont faits au moyen d'une goutte de culture de vingt-quatre heures du germe sensible en bouillon. Les numérations de phages sont toujours faites à 37° selon la méthode de la double couche de gélose décrite par Gratia, et sauf si on spécifie le contraire, à partir des cultures totales et non à partir de filtrats. Les numérations de germes sont faites à 37° par dénombrement des colonies sur boîtes de gélose. Les nombres de phages et de germes sont toujours exprimés par goutte (0,05 cm3). Résultats EXPÉRIMENTaux. I. COMPORTEMENT du phage H à 44°. — Lorsqu'on ensemence simultanément deux tubes de bouillon ordinaire, l'un avec 1 goutte de phage H et 1 goutte de culture du staphylocoque JB, l'autre avec 1 goutte de culture seulement, le développement de la culture témoin, après quatre heures trente à 37°, est déjà abondant, tandis que la culture additionnée de phage, après s'être légèrement troublée, s'est complètement éclaircie. Si l'on répète cette expérience à 44°, la culture avec phage se développe aussi rapidement que la culture témoin, et il n'y a pas d'éclaircissement même après vingt-quatre heures. Suivons par des numérations échelonnées dans le temps
spécifie le contraire, à partir des cultures totales et non à partir de filtrats. Les numérations de germes sont faites à 37° par dénombrement des colonies sur boîtes de gélose. Les nombres de phages et de germes sont toujours exprimés par goutte (0,05 cm3). Résultats EXPÉRIMENTaux. I. COMPORTEMENT du phage H à 44°. — Lorsqu'on ensemence simultanément deux tubes de bouillon ordinaire, l'un avec 1 goutte de phage H et 1 goutte de culture du staphylocoque JB, l'autre avec 1 goutte de culture seulement, le développement de la culture témoin, après quatre heures trente à 37°, est déjà abondant, tandis que la culture additionnée de phage, après s'être légèrement troublée, s'est complètement éclaircie. Si l'on répète cette expérience à 44°, la culture avec phage se développe aussi rapidement que la culture témoin, et il n'y a pas d'éclaircissement même après vingt-quatre heures. Suivons par des numérations échelonnées dans le temps les variations du nombre de germes et de phages à 44° et à 37°. On place au bain-marie, à 44°, deux tubes de bouillon contenant, l'un 110 000 staphylocoques JB par goutte, l'autre 110 000 staphylocoques JB et 76 700 phages H. Une paire de tubes identiques est mise à l'étuve à 37°. En deux heures trente minutes, à 44°, le nombre de phages tombe à 4 200, soit 5 à 6 p. 100 du phage ensemencé, tandis que le nombre de germes s'élève à 295 000. Dans le témoin, on compte 205 000 germes. Pendant ce temps, à 37°, le phage s'est multiplié soixante-dix fois, la culture est en voie de lyse et dans le témoin on compte environ 572 000 germes. Le phage H, simplement dilué en bouillon, conserve toute son activité, même après vingt-quatre heures de séjour à 44°. En présence de la culture sensible, au contraire, on ne retrouve, dans les mêmes conditions, que 1/1000 à 1/2 000 du phage mis en œuvre. On voit qu'en présence du staphylocoque JB en voie de multiplication, la disparition du phage H à 44° s'amorce aussi précocement que sa multiplication à 37°, puisqu'en deux heures trente 95 p. 100
l'étuve à 37°. En deux heures trente minutes, à 44°, le nombre de phages tombe à 4 200, soit 5 à 6 p. 100 du phage ensemencé, tandis que le nombre de germes s'élève à 295 000. Dans le témoin, on compte 205 000 germes. Pendant ce temps, à 37°, le phage s'est multiplié soixante-dix fois, la culture est en voie de lyse et dans le témoin on compte environ 572 000 germes. Le phage H, simplement dilué en bouillon, conserve toute son activité, même après vingt-quatre heures de séjour à 44°. En présence de la culture sensible, au contraire, on ne retrouve, dans les mêmes conditions, que 1/1000 à 1/2 000 du phage mis en œuvre. On voit qu'en présence du staphylocoque JB en voie de multiplication, la disparition du phage H à 44° s'amorce aussi précocement que sa multiplication à 37°, puisqu'en deux heures trente 95 p. 100 du phage ensemencé ont disparu. Contrairement à ce qui se passe à 37°, le nombre de bactéries viables à 44° est le même dans la culture avec phage et dans la culture sans phage. (Le phage paraît ici sans action sur les bactéries sensibles, aussi avons-nous vérifié que sa fixation s'effectue normalement sur les germes sensibles à 44°. Plaçons simultanément au bain-marie à 44° et à l'étuve à 37°, deux tubes de bouillon contenant chacun environ 267 000 corpuscules de phage par goutte et 4 gouttes d'une suspension épaisse du staphylocoque JB, obtenue en récoltant une culture de vingt-quatre heures sur gélose, dans 8 gouttes de bouillon. Après une heure, on dénombre à 44°, 144 000 phages dont 80 sont libres ; à 37°, 520 000 phages dont 2 734 sous forme libre. On voit que le phage H se fixe sur les staphylocoques sensibles aussi bien à 44° qu'à 37°. Remarquons, en outre, qu'après une heure le phage a déjà disparu en partie à 44°, tandis qu'il s'est multiplié à 37° ; il y a probablement un peu de phage libre nouvellement formé. Si l'on augmente fortement la quantité de phage H par rapport au nombre de staphylocoques JB
s'effectue normalement sur les germes sensibles à 44°. Plaçons simultanément au bain-marie à 44° et à l'étuve à 37°, deux tubes de bouillon contenant chacun environ 267 000 corpuscules de phage par goutte et 4 gouttes d'une suspension épaisse du staphylocoque JB, obtenue en récoltant une culture de vingt-quatre heures sur gélose, dans 8 gouttes de bouillon. Après une heure, on dénombre à 44°, 144 000 phages dont 80 sont libres ; à 37°, 520 000 phages dont 2 734 sous forme libre. On voit que le phage H se fixe sur les staphylocoques sensibles aussi bien à 44° qu'à 37°. Remarquons, en outre, qu'après une heure le phage a déjà disparu en partie à 44°, tandis qu'il s'est multiplié à 37° ; il y a probablement un peu de phage libre nouvellement formé. Si l'on augmente fortement la quantité de phage H par rapport au nombre de staphylocoques JB ensemencés, ceux-ci ne se développent à 44° qu'avec un retard de plusieurs heures. Cependant le staphylocoque JB finit toujours par se développer et aussi abondamment que dans la culture sans phage. Après vingt-quatre heures, lorsque les deux cultures sont également développées, on retrouve généralement de mille à trois mille fois moins de phage qu'au départ. Il nous a paru utile de rechercher ce qu'il advient du phage et des germes pendant les quelques heures d'inhibition complète de la culture. Si l'on ensemence, par goutte de bouillon, 3 380 000 phages pour 338 000 germes, le bouillon reste limpide pendant six à sept heures, mais après une heure, on ne compte plus que 2 300 000 phages et 200 germes, et après six heures trente minutes, 150 000 phages pour 5 germes. Après vingt-quatre heures, il reste 926 phages, mais on dénombre 5 200 000 germes et 4 940 000 dans le témoin sans phage. Pendant la période d'inhibition de la culture, l'inactivation du phage s'accompagne donc de la mort de l'immense majorité des bactéries sensibles. Cette action léthale du phage pour les germes sensibles à 44° ne se manifeste, comme le « killing effect » décrit par Andrewes et Elford
moins de phage qu'au départ. Il nous a paru utile de rechercher ce qu'il advient du phage et des germes pendant les quelques heures d'inhibition complète de la culture. Si l'on ensemence, par goutte de bouillon, 3 380 000 phages pour 338 000 germes, le bouillon reste limpide pendant six à sept heures, mais après une heure, on ne compte plus que 2 300 000 phages et 200 germes, et après six heures trente minutes, 150 000 phages pour 5 germes. Après vingt-quatre heures, il reste 926 phages, mais on dénombre 5 200 000 germes et 4 940 000 dans le témoin sans phage. Pendant la période d'inhibition de la culture, l'inactivation du phage s'accompagne donc de la mort de l'immense majorité des bactéries sensibles. Cette action léthale du phage pour les germes sensibles à 44° ne se manifeste, comme le « killing effect » décrit par Andrewes et Elford pour un coliphage à 37°, que si le phage est très abondant. Lorsqu'il est utilisé en quantité moindre, il n'y a pas de « killing » : les germes restent viables jusqu'à peu de temps avant que ne débute la lyse. Si on appauvrit, par contact avec les germes sensibles, un lysat très riche en phage H, il perd de ce fait son action inhibitrice sur la culture du staphylocoque JB à 44°. Il semble donc que c'est le phage lui-même qui est responsable de l'activité bactéricide du lysat, et non un produit du métabolisme bactérien, analogue par exemple au facteur bactériostatique de Wahl et Josse-Goichot. L'intervention d'un antibiotique présent dans le lysat paraît peu vraisemblable également, le phage H ayant toujours été régénéré sur le staphylocoque JB lui-même. II. COMPORTEMENT DU PHAGE TWORT À 44°. — Si nous répétons avec du phage Twort et du staphylocoque Twort l'expérience réalisée avec le phage H et le staphylocoque JB, nous voyons que dès les premières heures d'incubation à 44°, la culture contenant le phage est moins abondante que la culture témoin, mais contrairement à ce qui se passe avec le phage H ce retard ne sera jamais comblé. Bien plus, après
un lysat très riche en phage H, il perd de ce fait son action inhibitrice sur la culture du staphylocoque JB à 44°. Il semble donc que c'est le phage lui-même qui est responsable de l'activité bactéricide du lysat, et non un produit du métabolisme bactérien, analogue par exemple au facteur bactériostatique de Wahl et Josse-Goichot. L'intervention d'un antibiotique présent dans le lysat paraît peu vraisemblable également, le phage H ayant toujours été régénéré sur le staphylocoque JB lui-même. II. COMPORTEMENT DU PHAGE TWORT À 44°. — Si nous répétons avec du phage Twort et du staphylocoque Twort l'expérience réalisée avec le phage H et le staphylocoque JB, nous voyons que dès les premières heures d'incubation à 44°, la culture contenant le phage est moins abondante que la culture témoin, mais contrairement à ce qui se passe avec le phage H ce retard ne sera jamais comblé. Bien plus, après quarante-huit heures, cette culture sera presque complètement éclaircie. Les numérations du phage faites après sept heures, vingt-quatre heures et quarante-huit heures montrent que le taux de celui-ci reste à peu près constant pendant toute la durée de l'expérience. A l'ensemencement, 1 goutte du mélange contient 1 300 X 103 corpuscules. Après 7 heures 1 410 X 103 corpuscules. Après 24 heures 510 X 103 corpuscules. Après 48 heures 1 310 X 103 corpuscules. Après quarante-huit heures d'incubation à 44°, la culture avec phage est filtrée sur bougie Chamberland L3. On ne compte plus alors que 66 corpuscules par goutte de filtrat, la quasi-totalité du phage était donc du phage fixé. 2 gouttes de ce filtrat introduites au moment de l'ensemencement dans une culture du staphylocoque Twort en provoquent la lyse partielle en vingt-quatre heures à 44°. Après quarante-huit heures, la lyse a encore progressé, sans toutefois être complète. L'étalement de la culture totale permet de dénombrer à ce moment 750 000 corpuscules par goutte de culture non diluée. Après filtration sur bougie Chamberland L3, on en retrouve 27 000 dans le filtrat. Cette fois, quoique l'ensemencement en phage ait été très pauvre (6,6 particules par goutte de bouillon ensemencé), la
Après 7 heures 1 410 X 103 corpuscules. Après 24 heures 510 X 103 corpuscules. Après 48 heures 1 310 X 103 corpuscules. Après quarante-huit heures d'incubation à 44°, la culture avec phage est filtrée sur bougie Chamberland L3. On ne compte plus alors que 66 corpuscules par goutte de filtrat, la quasi-totalité du phage était donc du phage fixé. 2 gouttes de ce filtrat introduites au moment de l'ensemencement dans une culture du staphylocoque Twort en provoquent la lyse partielle en vingt-quatre heures à 44°. Après quarante-huit heures, la lyse a encore progressé, sans toutefois être complète. L'étalement de la culture totale permet de dénombrer à ce moment 750 000 corpuscules par goutte de culture non diluée. Après filtration sur bougie Chamberland L3, on en retrouve 27 000 dans le filtrat. Cette fois, quoique l'ensemencement en phage ait été très pauvre (6,6 particules par goutte de bouillon ensemencé), la multiplication a été considérable. Des passages successifs permettent dès lors d'obtenir régulièrement la multiplication du phage Twort à 44°. Dès le quatrième passage, on obtient une lyse totale en cinq heures trente à la dilution 10-1 et au cinquième passage une lyse totale à 10-2 en six heures trente. Nous avons ainsi réalisé dix passages successifs. Le filtrat du dixième passage, que nous appellerons Twort/10, contient 210 x 105 corpuscules par goutte. A 44°, il lyse partiellement les cultures du staphylocoque Twort jusqu'à la dilution 10-8 en vingt-quatre heures. A 37°, il lyse complètement ce germe, sans culture secondaire, aussi rapidement et au même titre que le phage Twort originel, du même âge, régénéré à 37°, c'est-à-dire qu'en vingt-quatre heures, il donne une lyse totale jusqu'à la dilution 10-9. Le phage Twort/10 régénéré à 37°, au cours de dix passages successifs, garde intact son pouvoir de lyser le staphylocoque Twort à 44°. Par des passages successifs, on peut également entraîner le phage Twort à lyser le staphylocoque Ew à 44° ; le phage ainsi obtenu lyse aussi bien les staphylocoques Twort et Ew, à 44° et à 37°. Les phages H et Twort, qui se distinguent l'un de l'autre par
avons ainsi réalisé dix passages successifs. Le filtrat du dixième passage, que nous appellerons Twort/10, contient 210 x 105 corpuscules par goutte. A 44°, il lyse partiellement les cultures du staphylocoque Twort jusqu'à la dilution 10-8 en vingt-quatre heures. A 37°, il lyse complètement ce germe, sans culture secondaire, aussi rapidement et au même titre que le phage Twort originel, du même âge, régénéré à 37°, c'est-à-dire qu'en vingt-quatre heures, il donne une lyse totale jusqu'à la dilution 10-9. Le phage Twort/10 régénéré à 37°, au cours de dix passages successifs, garde intact son pouvoir de lyser le staphylocoque Twort à 44°. Par des passages successifs, on peut également entraîner le phage Twort à lyser le staphylocoque Ew à 44° ; le phage ainsi obtenu lyse aussi bien les staphylocoques Twort et Ew, à 44° et à 37°. Les phages H et Twort, qui se distinguent l'un de l'autre par l'étendue de leur gamme d'action à 37° et sans doute aussi par leur taille, se différencient encore par la manière dont ils se comportent à 44° au contact de la culture sensible. Cette différence de comportement à 44° est bien le fait du phage et non des germes, car les résultats sont identiques si l'on fait agir le phage H sur le staphylocoque Twort plutôt que sur le staphylocoque Ew. On peut mettre cette différence en évidence de façon particulièrement nette en faisant agir simultanément, et en mélange, du phage H et du phage Twort/10 sur le staphylocoque Twort à 44°. On obtient, en quelques heures, la lyse totale de la culture, avec multiplication du phage Twort/10, et perte d'activité du phage H, exactement comme dans les tubes où ces phages ont été ensemencés séparément. III. RECHERCHE DE FACTEURS SUSCEPTIBLES DE PERMETTRE OU D'ACTIVER LA MULTIPLICATION DES PHAGES H, TWORT ET TwORT/10. — Nous avons recherché l'action sur les phages H, Twort et Twort/10 à 44° et à 37°, d'un extrait de levure préparé par auto-lavage en eau distillée selon une technique décrite par Dirkx [3], d'un extrait de viande non stérilisé par la chaleur et d'hydrolysat de caséine sans
résultats sont identiques si l'on fait agir le phage H sur le staphylocoque Twort plutôt que sur le staphylocoque Ew. On peut mettre cette différence en évidence de façon particulièrement nette en faisant agir simultanément, et en mélange, du phage H et du phage Twort/10 sur le staphylocoque Twort à 44°. On obtient, en quelques heures, la lyse totale de la culture, avec multiplication du phage Twort/10, et perte d'activité du phage H, exactement comme dans les tubes où ces phages ont été ensemencés séparément. III. RECHERCHE DE FACTEURS SUSCEPTIBLES DE PERMETTRE OU D'ACTIVER LA MULTIPLICATION DES PHAGES H, TWORT ET TwORT/10. — Nous avons recherché l'action sur les phages H, Twort et Twort/10 à 44° et à 37°, d'un extrait de levure préparé par auto-lavage en eau distillée selon une technique décrite par Dirkx [3], d'un extrait de viande non stérilisé par la chaleur et d'hydrolysat de caséine sans vitamines (Difco). 1. Préparation de l'extrait de viande. — 500 g de viande de bœuf hachée et dégraissée et 1100 cm3 d'eau de ville sont mélangés et portés à ébullition pendant une demi-heure, puis filtrés sur un linge pour séparer la viande. On laisse refroidir le filtrat jusqu'au fond L'extrait de levure accélère aussi la multiplication des phages Twort et Twort/10, mais de façon moins marquée que l'extrait précédent. La substance active de ces extraits est précipitable par l'alcool, elle est détruite par autoclavage en milieu neutre ou alcalin, mais résiste parfaitement à 120° pendant vingt minutes en milieu acide (pH 1 à 5). Nous avons vérifié que l'extrait de viande n'a aucune action sur la croissance du staphylocoque Twort, mais que l'extrait de levure la favorise très légèrement. D'autre part, ces extraits sont sans action sur la multiplication du pigment à 37° ni sur sa disparition à 44°. L'addition au bouillon de 10 gouttes d'une solution d'hydrolysat acide de caséine sans vitamines à 12 p. 100 n'accélère pas la lyse du staphylocoque Twort par le phage Twort à 44°, mais augmente de cinq à dix fois la quantité de phage produite. Dans certains lots de bouillon, cette augmentation est
de levure accélère aussi la multiplication des phages Twort et Twort/10, mais de façon moins marquée que l'extrait précédent. La substance active de ces extraits est précipitable par l'alcool, elle est détruite par autoclavage en milieu neutre ou alcalin, mais résiste parfaitement à 120° pendant vingt minutes en milieu acide (pH 1 à 5). Nous avons vérifié que l'extrait de viande n'a aucune action sur la croissance du staphylocoque Twort, mais que l'extrait de levure la favorise très légèrement. D'autre part, ces extraits sont sans action sur la multiplication du pigment à 37° ni sur sa disparition à 44°. L'addition au bouillon de 10 gouttes d'une solution d'hydrolysat acide de caséine sans vitamines à 12 p. 100 n'accélère pas la lyse du staphylocoque Twort par le phage Twort à 44°, mais augmente de cinq à dix fois la quantité de phage produite. Dans certains lots de bouillon, cette augmentation est déjà apparente après six heures, dans d'autres elle ne l'est qu'après vingt-quatre heures seulement. Enfin, ajouté à certains bouillons, l'hydrolysat retarde légèrement le développement du staphylocoque Twort. A 37°, il n'affecte pas la lyse du staphylocoque Twort par le phage Twort, ni la multiplication de ce dernier. L'hydrolysat acide de caséine n'a pas d'action sur la disparition du phage H à 44°. Ici encore, nous avons remarqué la nécessité d'opérer en milieu de composition constante, car, ajouté à certains lots de bouillon, l'hydrolysat accentue l'effet inhibiteur du phage sur le développement de la culture sensible. Cet effet n'est pas visible avec tous les bouillons. À 37°, l'hydrolysat paraît augmenter légèrement la multiplication du phage H. CONCLUSIONS. L'étude comparative, à 44°, des phages staphylococciques H et Twort montre que ces deux phages font appel pour leur multiplication à des processus métaboliques distincts. En effet, la multiplication du phage H à 44° est totalement impossible, tandis qu'on peut entraîner le phage Twort à se multiplier et à lyser le germe sensible, à cette température. On obtient par passages successifs un variant stable, le phage Twort/10, qui ne se distingue de la souche initiale que par son aptitude à se multiplier et à