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aussi bien les germes morts que les germes vivants, mais il n'y a aucun rapport constant entre les chiffres fournis par les deux méthodes de numération (fait déjà signalé par Gray et Thornton [2]. Par ailleurs, dès que l'on quitte les expériences en pots ou en terres laissées en jachère, pour travailler sur des terres en culture, les interréactions de facteurs innombrables interviennent qui rendent l'interprétation des résultats aléatoire. Il nous semble inutile de donner le détail de nos résultats, mais seulement les moyennes obtenues (voir tableau). Ces résultats semblent indiquer que les différentes substances utilisées ont pratiquement la même action sur la microflore, qu'il s'agisse des divers groupements physiologiques (fixateur, cellulolytique, nitrificateur) ou de la microflore totale. Cette action varie suivant le type de terre. Pour la terre A (N total = 1,3 p. 100, C = 14 p. 100, C/N = 10) cette action est nulle. Pour la terre B (N total = 1,12 p. 100, C = 19 p. 100, C/N = 17) cette action est plutôt dépressive en ce qui concerne les mêmes groupements physiologiques, alors qu'elle est faible ou nulle sur la microflore totale. On peut noter, ce qui est d'ailleurs classique, que la numération sur plaques, qui ne compte que les germes vivants, donne toujours des chiffres inférieurs à ceux fournis par la numération directe, qui donne les germes vivants et morts. Une très grande différence entre les deux chiffres indiquerait une action toxique § 3 = H M § ¡; s U I I g g I go 00 M 5 H "O Ho H O KO H v @ H .2 M 3 NATURE -«JO [H O &lt;0 p. ■&lt; ■&lt; O P6 NATURE DO TRAITEMENT S S « O. &lt; P. I S S 3 Ê s g § ag U g K Terre A : rémoin A 11 38 64 37 1 100 000 000 6 400 000 000 l D* D. 800 kg par ha + y H.C.H. 25 45 41 37 3 000 000 000 7 400 000 000 0,7 kg par ha. I y H.C.H. 0,7 kg
sur plaques, qui ne compte que les germes vivants, donne toujours des chiffres inférieurs à ceux fournis par la numération directe, qui donne les germes vivants et morts. Une très grande différence entre les deux chiffres indiquerait une action toxique § 3 = H M § ¡; s U I I g g I go 00 M 5 H "O Ho H O KO H v @ H .2 M 3 NATURE -«JO [H O &lt;0 p. ■&lt; ■&lt; O P6 NATURE DO TRAITEMENT S S « O. &lt; P. I S S 3 Ê s g § ag U g K Terre A : rémoin A 11 38 64 37 1 100 000 000 6 400 000 000 l D* D. 800 kg par ha + y H.C.H. 25 45 41 37 3 000 000 000 7 400 000 000 0,7 kg par ha. I y H.C.H. 0,7 kg par ha. 15 30 78 41 1 400 000 000 4 400 000 000 ;. Phossol. 500 kg par ha + 13 41 63 33 875 000 000 5 000 000 000 y H. C. H. 0,7 kg par ha. Terre B : rémoin B 10 41 38 31 2 200 000 000 6 500 000 000 l Shell D.D. 800 kg par ha. 0 30 8 13 1 600 000 000 2 100 000 000 ). Pentachlorophénol. 333 litres 4 41 67 37 2 250 000 000 3 700 000 000 par ha. L Shell D.D. 400 kg par ha. 3 52 21 27 2 700 000 000 6 000 000 000 Terre A : provient de Ezmael-les-Tirlemont. Terre B : provient du Jardin d'essais de l'Institut à Tirlenont. Les quatre premières colonnes indiquent la proportion sur cent de grains de terre donnant une culture. L'effet remarquable de l'Huile d'Olives par A. DELAUNAY, JACQUELINE LEBRUN, SUZANNE BAZIN et R. ROBINEAUX (Institut Pasteur.) Des polynucléaires de cobaye, mis en suspension dans du sérum homologue frais et déposés sur une lame à la surface de laquelle ont été fixés par dessiccation des grains d'amidon de pomme de terre, se dirigent activement
200 000 000 6 500 000 000 l Shell D.D. 800 kg par ha. 0 30 8 13 1 600 000 000 2 100 000 000 ). Pentachlorophénol. 333 litres 4 41 67 37 2 250 000 000 3 700 000 000 par ha. L Shell D.D. 400 kg par ha. 3 52 21 27 2 700 000 000 6 000 000 000 Terre A : provient de Ezmael-les-Tirlemont. Terre B : provient du Jardin d'essais de l'Institut à Tirlenont. Les quatre premières colonnes indiquent la proportion sur cent de grains de terre donnant une culture. L'effet remarquable de l'Huile d'Olives par A. DELAUNAY, JACQUELINE LEBRUN, SUZANNE BAZIN et R. ROBINEAUX (Institut Pasteur.) Des polynucléaires de cobaye, mis en suspension dans du sérum homologue frais et déposés sur une lame à la surface de laquelle ont été fixés par dessiccation des grains d'amidon de pomme de terre, se dirigent activement vers ces grains. Dès qu'ils les ont atteints, ils s'accrochent à leur surface en prenant la forme de croissants réguliers. Nulle technique, à notre avis, n'est plus pratique pour étudier les phénomènes de chimiotactisme leucocytaire [1]. Dans des notes antérieures, nous avons pu montrer qu'entre lame et lamelle le déplacement orienté des globules blancs exige, pour se produire, un milieu de suspension convenable. En fait, nous n'avons jamais observé de migration leucocytaire lorsque les cellules étaient placées dans une solution simplement minérale (eau physiologique). Pour se diriger vers les grains d'amidon, les polynucléaires doivent se trouver dans un milieu séérique. Le sérum utilisé ne doit pas être nécessairement le sérum homologue (on peut se servir par exemple de leucocytes de cobaye et de sérum de cheval), mais il faut que ce sérum renferme en quantité suffisante deux (au moins) de ses constituants : le complément et les sels de calcium. Dans un sérum décomplémenté par vieillissement, par chauffage ou par adsorption sur des microbes sensibilisés, on n'observe jamais de tactisme : les cellules sont vivantes, elles demeurent capables d'émettre encore quelques "pseudopodes" mais leur déplacement est pratiquement nul [2]. Tout tactisme se trouve aussi complètement inhibé lorsqu'on opère avec un
orienté des globules blancs exige, pour se produire, un milieu de suspension convenable. En fait, nous n'avons jamais observé de migration leucocytaire lorsque les cellules étaient placées dans une solution simplement minérale (eau physiologique). Pour se diriger vers les grains d'amidon, les polynucléaires doivent se trouver dans un milieu séérique. Le sérum utilisé ne doit pas être nécessairement le sérum homologue (on peut se servir par exemple de leucocytes de cobaye et de sérum de cheval), mais il faut que ce sérum renferme en quantité suffisante deux (au moins) de ses constituants : le complément et les sels de calcium. Dans un sérum décomplémenté par vieillissement, par chauffage ou par adsorption sur des microbes sensibilisés, on n'observe jamais de tactisme : les cellules sont vivantes, elles demeurent capables d'émettre encore quelques "pseudopodes" mais leur déplacement est pratiquement nul [2]. Tout tactisme se trouve aussi complètement inhibé lorsqu'on opère avec un sérum dont le calcium a été bloqué (par le citrate de sodium) ou précipité (par l'oxalate de sodium). Sans doute, dans les sérums citratés, l'activité complémentaire est également abolie [3] mais il n'en est pas de même dans les sérums oxalatés, le complément étant ici respecté. On peut donc admettre en conclusion que, pour être capables de manifester in vitro leur sensibilité chimiotactique, les polynucléaires doivent être dans un milieu qui renferme à la fois du complément et des sels de calcium. Ceci dit, ajoutons que ces conditions indispensables ne sont pas à elles seules suffisantes. Il faut encore que les cellules mises en expérience soient dans un état physiologique convenable. Dans la communication qui fait suite à celle-ci, nous indiquons comment nous avons pu avec des effecteurs d'enzymes — et cela sans toucher à la constitution normale du milieu sérique — suspendre tout chimiotactisme leucocytaire in vitro. Ici, nous rapporterons les résultats remarquables que nous venons d'enregistrer en étudiant l'action d'huiles diverses sur les polynucléaires du cobaye. Des polynucléaires de cobaye, présents dans un exsudat péritonéal de nature inflammatoire et réunis en culot par centrifugation, sont remis en suspension dans quelques centimètres cubes d'une huile d'olives neutre. La préparation
en conclusion que, pour être capables de manifester in vitro leur sensibilité chimiotactique, les polynucléaires doivent être dans un milieu qui renferme à la fois du complément et des sels de calcium. Ceci dit, ajoutons que ces conditions indispensables ne sont pas à elles seules suffisantes. Il faut encore que les cellules mises en expérience soient dans un état physiologique convenable. Dans la communication qui fait suite à celle-ci, nous indiquons comment nous avons pu avec des effecteurs d'enzymes — et cela sans toucher à la constitution normale du milieu sérique — suspendre tout chimiotactisme leucocytaire in vitro. Ici, nous rapporterons les résultats remarquables que nous venons d'enregistrer en étudiant l'action d'huiles diverses sur les polynucléaires du cobaye. Des polynucléaires de cobaye, présents dans un exsudat péritonéal de nature inflammatoire et réunis en culot par centrifugation, sont remis en suspension dans quelques centimètres cubes d'une huile d'olives neutre. La préparation ainsi faite est laissée pendant deux heures à la température du laboratoire. Elle est alors centrifugée et le culot leucocytaire, après lavage avec de l'eau physiologique, est repris par du sérum de cobaye frais. Une goutte de cette suspension est déposée sur une lame de verre chargée de grains d'amidon. Cette goutte est recouverte d'une lamelle. Cette lamelle est lutée pour éviter toute dessiccation ultérieure. Finalement, la préparation est placée sur la platine d'un microscope et observée dans une chambre-étuve à 37°. On remarque, dans ces conditions, les faits suivants. Les polynucléaires sont morphologiquement en excellent état mais, arrondis, ils n'émettent sur place que quelques courts pseudopodes et ils ne montrent aucune tendance à se diriger vers les grains d'amidon ; autrement dit, le chimiotactisme est nul. Nous avons reproduit un grand nombre de fois ce type d'expérience et avec des huiles d'olives de sources diverses : le résultat n'a jamais varié. Il était évidamment intéressant de savoir si ce phénomène particulier pouvait être observé, dans les mêmes conditions, avec des huiles d'une autre nature. Dans un premier temps, nous nous sommes servis de l'huile de paraffine et de l'huile de vaseline. En ces cas, le résultat obtenu fut radicalement
Cette goutte est recouverte d'une lamelle. Cette lamelle est lutée pour éviter toute dessiccation ultérieure. Finalement, la préparation est placée sur la platine d'un microscope et observée dans une chambre-étuve à 37°. On remarque, dans ces conditions, les faits suivants. Les polynucléaires sont morphologiquement en excellent état mais, arrondis, ils n'émettent sur place que quelques courts pseudopodes et ils ne montrent aucune tendance à se diriger vers les grains d'amidon ; autrement dit, le chimiotactisme est nul. Nous avons reproduit un grand nombre de fois ce type d'expérience et avec des huiles d'olives de sources diverses : le résultat n'a jamais varié. Il était évidamment intéressant de savoir si ce phénomène particulier pouvait être observé, dans les mêmes conditions, avec des huiles d'une autre nature. Dans un premier temps, nous nous sommes servis de l'huile de paraffine et de l'huile de vaseline. En ces cas, le résultat obtenu fut radicalement différent ; le chimiotactisme observé fut très beau. Le contact préalable avec les huiles ne paraissait suivi d'aucune conséquence. Nous avons alors recommencé les expériences — toujours dans des conditions identiques — en mettant en jeu diverses huiles qui, par leur nature chimique, se rapprochent davantage de l'huile d'olives, c'est-à-dire l'huile d'amandes douces, l'huile d'arachide et l'huile de lin (nous nous servions en tout cas, cela va sans dire, de préparations parfaitement neutres). Les résultats obtenus furent absolument comparables à ceux que nous avait fournis l'emploi de l'huile de paraffine et de l'huile de vaseline : cellules d'apparence intacte, très étalées, chimiotactisme positif très net. Compte tenu de ces résultats, nous pouvons donc dire qu'une seule huile paraît capable d'inhiber la sensibilité chimiotactique des polynucléaires de cobaye : c'est l'huile d'olives. Comment agit-elle ? a) Les huiles d'olives que nous avons employées dont le pH était rigoureusement physiologique ne peuvent certainement pas être considérées comme des poisons banals pour les globules blancs. Les altérations cellulaires produites par un contact de dix-huit heures dans ces huiles sont un peu plus marquées que celles que l'on observe pour un séjour de même durée dans l'huile de paraffine, l'huile de vaseline ou l'huile
l'huile d'amandes douces, l'huile d'arachide et l'huile de lin (nous nous servions en tout cas, cela va sans dire, de préparations parfaitement neutres). Les résultats obtenus furent absolument comparables à ceux que nous avait fournis l'emploi de l'huile de paraffine et de l'huile de vaseline : cellules d'apparence intacte, très étalées, chimiotactisme positif très net. Compte tenu de ces résultats, nous pouvons donc dire qu'une seule huile paraît capable d'inhiber la sensibilité chimiotactique des polynucléaires de cobaye : c'est l'huile d'olives. Comment agit-elle ? a) Les huiles d'olives que nous avons employées dont le pH était rigoureusement physiologique ne peuvent certainement pas être considérées comme des poisons banals pour les globules blancs. Les altérations cellulaires produites par un contact de dix-huit heures dans ces huiles sont un peu plus marquées que celles que l'on observe pour un séjour de même durée dans l'huile de paraffine, l'huile de vaseline ou l'huile d'arachide, mais elles ne sont pas plus intenses que celles qui sont déterminées par l'huile d'amandes douces ou l'huile de lin. b) L'huile d'olives supprime-t-elle les migrations leucocytaire en modifiant les propriétés de surface des cellules ? Nous le penserions volontiers car nous avons pu remarquer que les globules blancs qui ont subi le contact de cette huile deviennent incapables, non seulement de se déplacer, mais aussi de saisir des corps étrangers, par exemple des microbes. Autrement dit, il y a inhibition à la fois du tactisme et de la phagocytose. Sans doute nous ne sommes pas parvenus, en étudiant la charge électrique des leucocytes traités par l'huile d'olives (et aussi bien par les autres huiles que nous avons également utilisées), à découvrir une modification de l'électrisation superficielle des cellules. Cela ne suffit pas cependant à indiquer qu'il n'y a pas eu adsorption d'un mince film d'huile ou de certaines molécules des constituants de l'huile par la surface cellulaire. c) Une autre hypothèse pourrait encore être avancée. L'huile d'olives est certainement phagocytée par les polynucléaires. Peut-être un de ses constituants normaux — ou encore une des impuretés qu'elle renferme ont-ils modifié l'équipement enzymatique des cellules et de telle manière que
qui ont subi le contact de cette huile deviennent incapables, non seulement de se déplacer, mais aussi de saisir des corps étrangers, par exemple des microbes. Autrement dit, il y a inhibition à la fois du tactisme et de la phagocytose. Sans doute nous ne sommes pas parvenus, en étudiant la charge électrique des leucocytes traités par l'huile d'olives (et aussi bien par les autres huiles que nous avons également utilisées), à découvrir une modification de l'électrisation superficielle des cellules. Cela ne suffit pas cependant à indiquer qu'il n'y a pas eu adsorption d'un mince film d'huile ou de certaines molécules des constituants de l'huile par la surface cellulaire. c) Une autre hypothèse pourrait encore être avancée. L'huile d'olives est certainement phagocytée par les polynucléaires. Peut-être un de ses constituants normaux — ou encore une des impuretés qu'elle renferme ont-ils modifié l'équipement enzymatique des cellules et de telle manière que la mobilité cellulaire s'est trouvée abolie. En faveur de cette façon de penser, les résultats présentés dans le mémoire ci-après [4] ne sont pas sans plaider. Il faut pourtant remarquer que la sensibilité chimiotactique des cellules qui ont subi le contact de l'huile d'olives est à jamais perdue ; or, ce fait n'a presque jamais été observé au cours de nos expériences avec des effecteurs d'enzymes : dès que ceux-ci sont éliminés du milieu, les cellules retrouvent toute leur sensibilité chimiotactique. Et puis de quel constituant, de quelle impureté s'agirait-il ? Nous ne pouvons pas répondre. Qu'il nous suffise de dire que les polynucléaires de cobaye qui ont séjourné deux heures dans l'oléate de méthyle, dans une faible concentration de lin, dans du laurate de méthyle, une fois repris par le sérum homologue, restent parfaitement capables de s'étaler et de se mouvoir. Nous avons aussi fait diverses expériences en mettant en jeu l'alcool oléique, l'oléate de sodium, l'acide oléique (dissous dans l'huile de paraffine), le glycérol. Toutes ces expériences ont échoué, les produits en cause, même rigoureusement neutralisés, ayant entraîné la lyse des cellules. BIBLIOGRAPHIE [1] J. COMANDON. Ces Annales, 1920, 34, 1. [2] A. DELAUNAY et J. PAGES. Ces
ce fait n'a presque jamais été observé au cours de nos expériences avec des effecteurs d'enzymes : dès que ceux-ci sont éliminés du milieu, les cellules retrouvent toute leur sensibilité chimiotactique. Et puis de quel constituant, de quelle impureté s'agirait-il ? Nous ne pouvons pas répondre. Qu'il nous suffise de dire que les polynucléaires de cobaye qui ont séjourné deux heures dans l'oléate de méthyle, dans une faible concentration de lin, dans du laurate de méthyle, une fois repris par le sérum homologue, restent parfaitement capables de s'étaler et de se mouvoir. Nous avons aussi fait diverses expériences en mettant en jeu l'alcool oléique, l'oléate de sodium, l'acide oléique (dissous dans l'huile de paraffine), le glycérol. Toutes ces expériences ont échoué, les produits en cause, même rigoureusement neutralisés, ayant entraîné la lyse des cellules. BIBLIOGRAPHIE [1] J. COMANDON. Ces Annales, 1920, 34, 1. [2] A. DELAUNAY et J. PAGES. Ces Annales, 1946, 72, 458. [3] A. DELAUNAY. Ces Annales, 1944, 70, 372. [4] J. LEBRUN et A. DELAUNAY. Ces Annales, sous presse. RECHERCHES SUR LE TACTISME LEUCOCYTAIRE. ACTION, SUR CE PHÉNOMÈNE, DE DIFFÉRENTS EFFECTEURS D'ENZYMES par JACQUELINE LEBRUN et A. DELAUNAY r). (C. N. R. S. et Institut Pasteur.) INTRODUCTION. — Le tactisme des polynucléaires, tel qu'on peut le mettre en évidence par la technique de J. Comandon [1], requiert, pour se manifester normalement, un milieu de suspension qui contient à la fois des ions calcium et un facteur particulier, présent dans le sérum frais, dont les propriétés sont identiques à celles de l'alexine [2, 3, 4]. Des recherches plus récentes [5] nous ont appris qu'en dehors de ces conditions relatives au milieu, il en existe d'autres se rapportant à l'état biochimique de la cellule elle-même. C'est ainsi que le contact de doses non toxiques de cyanure de Na, qui ne modifient pas la teneur en Ca++ et le complément du milieu, mais qui diminuent le métabolisme respiratoire des cellules, inhibent totalement le tactisme. Les leucocytes, cependant, recouvrent leur pouvoir chimiotactique, même après un séjour prolongé dans le milieu cyanuré, lorsqu'ils sont remis en suspension dans du sérum normal. Cette
— Le tactisme des polynucléaires, tel qu'on peut le mettre en évidence par la technique de J. Comandon [1], requiert, pour se manifester normalement, un milieu de suspension qui contient à la fois des ions calcium et un facteur particulier, présent dans le sérum frais, dont les propriétés sont identiques à celles de l'alexine [2, 3, 4]. Des recherches plus récentes [5] nous ont appris qu'en dehors de ces conditions relatives au milieu, il en existe d'autres se rapportant à l'état biochimique de la cellule elle-même. C'est ainsi que le contact de doses non toxiques de cyanure de Na, qui ne modifient pas la teneur en Ca++ et le complément du milieu, mais qui diminuent le métabolisme respiratoire des cellules, inhibent totalement le tactisme. Les leucocytes, cependant, recouvrent leur pouvoir chimiotactique, même après un séjour prolongé dans le milieu cyanuré, lorsqu'ils sont remis en suspension dans du sérum normal. Cette action, si frappante, du cyanure de sodium, nous a conduits à penser que le tactisme des globules blancs pouvait se trouver sous la dépendance de certaines réactions enzymatiques, et c'est afin de vérifier cette hypothèse et de préciser dans la mesure du possible la nature du ou des systèmes enzymatiques en cause que nous avons entrepris l'étude du comportement des polynucléaires en présence de différents effecteurs couramment utilisés en Enzymologie. TECHNIQUE EXPÉRIMENTALE. — Les leucocytes étudiés ont été obtenus à partir d'exsudats inflammatoires déterminés dans le péritoine de cobayes par deux injections de bouillon stérile. Une ponction de cette cavité, faite cinq heures après la première injection, permet en général de recueillir un liquide qui renferme environ 9 000 cellules par millimètre cube. Ce liquide est divisé en plusieurs fractions de 2 cm3 et celles-ci sont centrifugées à faible vitesse. Les culots sont finalement repris par un mélange composé de : 1 cm3 de sérum homologue frais et de 1 cm3 d'une solution plus ou moins concentrée d'un effecteur d'enzyme, cette solution en eau physiologique ayant été ajustée tout d'abord à pH 7,5. Pour la série d'expériences rapportées ici, nous nous sommes servis des effecteurs suivants : Azide de sodium,
en cause que nous avons entrepris l'étude du comportement des polynucléaires en présence de différents effecteurs couramment utilisés en Enzymologie. TECHNIQUE EXPÉRIMENTALE. — Les leucocytes étudiés ont été obtenus à partir d'exsudats inflammatoires déterminés dans le péritoine de cobayes par deux injections de bouillon stérile. Une ponction de cette cavité, faite cinq heures après la première injection, permet en général de recueillir un liquide qui renferme environ 9 000 cellules par millimètre cube. Ce liquide est divisé en plusieurs fractions de 2 cm3 et celles-ci sont centrifugées à faible vitesse. Les culots sont finalement repris par un mélange composé de : 1 cm3 de sérum homologue frais et de 1 cm3 d'une solution plus ou moins concentrée d'un effecteur d'enzyme, cette solution en eau physiologique ayant été ajustée tout d'abord à pH 7,5. Pour la série d'expériences rapportées ici, nous nous sommes servis des effecteurs suivants : Azide de sodium, Hydroxylamine, Diéthyldithiocarbamate de sodium, Dithizone, 0-Phénanthroline, Bisulfite de sodium, Cystéine, Acide thioglycolique, Fluoroacétate de sodium, Fluorure de sodium, Pyrophosphate de sodium, Uréthane et Acide malonique [soit au total, 13 corps (1)]. Dans les préparations témoins, la solution d'effecteur était remplacée par un égal volume d'eau physiologique. Toutes ces préparations, une fois obtenues, ont été soumises aux examens suivants : 1. Examen du tactisme « in vitro ». — 1 goutte de la suspension leucocytaire est déposée sur une lame de verre à la surface de laquelle ont été fixés par dessiccation des grains d'amidon de pommes de terre [4]. Elle est recouverte d'une lamelle. Celle-ci est lutée. Enfin, la préparation est placée sur la platine d'un microscope enfermé dans une chambre-étuve à 37°. Dans les conditions normales, c'est-à-dire lorsque toutes les conditions requises pour le déroulement d'un tactisme se trouvent réunies, on observe le phénomène suivant : en moins d'une heure, les polynucléaires, sans doute attirés par les dextrines solubles que libère l'amidon dans le milieu, se dirigent vers les grains. Ces derniers une fois atteints, les cellules s'accolent à leur surface en prenant la forme de croissants réguliers. Nous parlons d'une suppression totale du tactisme quand, au bout d'une