jeanflop/post_ocr_correction2 huggingface dataset:
retour à la sensibilité : une culture du type artificiel 3 a 1, obtenu par l'action du phage extrait du type 3 a 1 sur le type 3 a, traitée par le formol, a redonné les réactions du type 3 a. Des cultures du type B. A. O. R. naturel, transformées en groupe Z par le phage primaire extrait du type Dundee, ont redonné, après formolisation, le type B. A. O. R. initial. Remarquons que le type B. A. O. R. est lysogène et que le formol n'a altéré ni sa lysogénéité naturelle, ni sa gamme de sensibilité aux phages Vi, alors que le groupe Z artificiel obtenu à partir du type B. A. O. R. n'a pas résisté à l'action inhibitrice de cet antiseptique. Les types obtenus artificiellement ne présentent donc pas la stabilité remarquable des types naturels. Lorsque des cultures, destinées à la lysotypie, se trouvent sous une forme dégradée (souches déficientes en antigène Vi, forme R, etc.), la méthode de Felix et Callow n'est généralement d'aucun secours. On peut concevoir que les types de ces cultures puissent être cependant indirectement identifiés par l'étude de leurs phages de lysogénéité, en admettant naturellement qu'une culture ayant subi la transformation S*R conserve intact son matériel de lysogénéité. L'étude de la lysogénéité peut également aider à différencier des types encore inconnus. A l'appui de cette affirmation, rappelons que nous avons pu individualiser le type 3 b (moins Beccles et Taunton) avant que son identité avec le type B. A. O. R. nous eût été confirmée par Félix et Callow. Discussion. Le rôle de la lysogénéité dans la diminution de la sensibilité aux bactériophages utilisés pour la lysotypie de S. typhi a été entrevu par Craigie (1942, 1946) : « Some untypable Vi strains carry a potential lytic agent or bacteriophage termed « gamma agent » by Craigie (1942). The résistance of these strains to Vi phage II appears to be a phenomenon analogous to the interference effect known to occur between certain plant or mammalian viruses (Craigie, 1946). Cet auteur cite à ce sujet les exemples suivants : 1° l'agent gamma,
S*R conserve intact son matériel de lysogénéité. L'étude de la lysogénéité peut également aider à différencier des types encore inconnus. A l'appui de cette affirmation, rappelons que nous avons pu individualiser le type 3 b (moins Beccles et Taunton) avant que son identité avec le type B. A. O. R. nous eût été confirmée par Félix et Callow. Discussion. Le rôle de la lysogénéité dans la diminution de la sensibilité aux bactériophages utilisés pour la lysotypie de S. typhi a été entrevu par Craigie (1942, 1946) : « Some untypable Vi strains carry a potential lytic agent or bacteriophage termed « gamma agent » by Craigie (1942). The résistance of these strains to Vi phage II appears to be a phenomenon analogous to the interference effect known to occur between certain plant or mammalian viruses (Craigie, 1946). Cet auteur cite à ce sujet les exemples suivants : 1° l'agent gamma, extrait d'un type D de S. typhi, rend résistantes aux phages Vi spécifiques les cultures Vi des types A et E ; 2° l'agent gamma, provenant d'une souche D 1, pouvait servir à transformer le type E en type D 1. Craigie estime cependant qu'un tel changement de type, facilement obtenu in vitro, ne doit pas se produire avec quelque fréquence au cours des épidémies de fièvre typhoïde. Williams Smith (1948), étudiant le rôle éventuel de la lysogénéité dans la subdivision excessive des staphylocoques par la méthode de Wilson et Atkinson (1945), confirme les observations de ces auteurs et conclut que les différences apparentes entre ces staphylocoques peuvent être dues, en fait, à une phagorésistance acquise. « Since a considérable proportion of strains are lysogenic and hence résistant, it is clear that the classification of staphylococci by phage methods is dependent to a considérable extent, on the past experience of the organisms, with regard to phage infection. For example, two strains that are identical apart from the fact that one of them has acquired a résistance to a phage may be classified as two différent phage types ». Contre cette manière de voir, Rountree, 1949, affirme que les phages de
obtenu in vitro, ne doit pas se produire avec quelque fréquence au cours des épidémies de fièvre typhoïde. Williams Smith (1948), étudiant le rôle éventuel de la lysogénéité dans la subdivision excessive des staphylocoques par la méthode de Wilson et Atkinson (1945), confirme les observations de ces auteurs et conclut que les différences apparentes entre ces staphylocoques peuvent être dues, en fait, à une phagorésistance acquise. « Since a considérable proportion of strains are lysogenic and hence résistant, it is clear that the classification of staphylococci by phage methods is dependent to a considérable extent, on the past experience of the organisms, with regard to phage infection. For example, two strains that are identical apart from the fact that one of them has acquired a résistance to a phage may be classified as two différent phage types ». Contre cette manière de voir, Rountree, 1949, affirme que les phages de lysogénéité sont sérologiquement différents des phages employés pour la lysotypie des staphylocoques, et elle conclut que les différences de sensibilité des staphylocoques aux phages spécifiques des types ne doivent pas être rapportées en premier lieu à la lysogénéité, mais à des facteurs encore inexpliqués. Dans l'espèce S. paratyphi B, Nicolle, Grabar et Gibert, 1946, ont trouvé 22 souches lysogènes sur 31 souches examinées. Vingt souches portaient un phage sérologiquement identique, le phage 1 et les deux autres un phage différent, le phage 2. Les souches considérées à ce moment-là comme non lysogènes étaient sensibles à ces deux phages. Les souches porteuses du phage 1 étaient sensibles au second, mais résistantes au premier et inversement. La lysogénéité et la lysosensibilité ne sont donc deux états incompatibles dans les conditions habituelles que lorsqu'on les envisage, par rapport à un même bactériophage. D'autre part, la majorité des bactériophages utilisés pour la lysotypie de S. paratyphi B ont été obtenus à partir de cultures lysogènes de cette espèce (Félix et Callow, 1943). Il était logique de penser que certains de ces phages de lysogénéité, contrairement à ce que Rountree a constaté dans les cas des staphylocoques, devaient être sérologiquement identiques ou plus ou moins
Grabar et Gibert, 1946, ont trouvé 22 souches lysogènes sur 31 souches examinées. Vingt souches portaient un phage sérologiquement identique, le phage 1 et les deux autres un phage différent, le phage 2. Les souches considérées à ce moment-là comme non lysogènes étaient sensibles à ces deux phages. Les souches porteuses du phage 1 étaient sensibles au second, mais résistantes au premier et inversement. La lysogénéité et la lysosensibilité ne sont donc deux états incompatibles dans les conditions habituelles que lorsqu'on les envisage, par rapport à un même bactériophage. D'autre part, la majorité des bactériophages utilisés pour la lysotypie de S. paratyphi B ont été obtenus à partir de cultures lysogènes de cette espèce (Félix et Callow, 1943). Il était logique de penser que certains de ces phages de lysogénéité, contrairement à ce que Rountree a constaté dans les cas des staphylocoques, devaient être sérologiquement identiques ou plus ou moins apparentés aux autres phages portés par les cultures lysogènes. Il nous a paru alors évident que la lysogénéité des cultures de S. paratyphi B, plus variée et plus fréquente que nous n'avions été en mesure de le montrer dans l'étude limitée que nous avions faite en 1946, devait jouer un rôle de premier plan dans l'appartenance de cette espèce aux différents types de Félix et Callow. Nos expériences de reconstitution artificielle des types lysogènes par l'action des phages de lysogénéité sur les types considérés comme non lysogènes constituent la contre-épreuve de l'étude analytique des souches naturelles que nous avons rapportée dans notre premier mémoire. La lysogénéité explique donc dans une certaine mesure les différences observées, chez les divers types lysogènes, dans leur gamme de sensibilité aux phages de la lysotypie. Elle n'explique pas cependant pourquoi chaque type lysogène ne peut être artificiellement obtenu qu'à partir de l'un des trois types de base à l'exclusion des deux autres. Elle n'apporte aucun éclaircissement au problème des lysosensibilités distinctes constatées chez ces 3 types. Quels sont donc les facteurs qui impriment leur individualité à ces 3 types de base ? Ne seraient-ils pas, du moins l'un ou l'autre d'entre eux, porteurs d'un phage
rôle de premier plan dans l'appartenance de cette espèce aux différents types de Félix et Callow. Nos expériences de reconstitution artificielle des types lysogènes par l'action des phages de lysogénéité sur les types considérés comme non lysogènes constituent la contre-épreuve de l'étude analytique des souches naturelles que nous avons rapportée dans notre premier mémoire. La lysogénéité explique donc dans une certaine mesure les différences observées, chez les divers types lysogènes, dans leur gamme de sensibilité aux phages de la lysotypie. Elle n'explique pas cependant pourquoi chaque type lysogène ne peut être artificiellement obtenu qu'à partir de l'un des trois types de base à l'exclusion des deux autres. Elle n'apporte aucun éclaircissement au problème des lysosensibilités distinctes constatées chez ces 3 types. Quels sont donc les facteurs qui impriment leur individualité à ces 3 types de base ? Ne seraient-ils pas, du moins l'un ou l'autre d'entre eux, porteurs d'un phage inactif sur l'espèce paratyphique B, mais actif sur d'autres Salmonella ? A ce sujet, il faut rappeler que Scholtens a trouvé chez le type 1 un phage actif sur S. dublin n° 65. Ou bien, n'aurait-on pas affaire ici à un cas de « cryptolysogénéité » semblable à ceux qui ont été signalés par Lominski, 1938 ou encore à des facteurs purement bactériens, physiologiques, antigènes ou biochimiques, ou purement bactériophagiques, d'ordre mutationnel ? RÉSUMÉ. Les 7 types lysogènes de S. paratyphi B ont pu être préparés artificiellement, à partir de l'un ou l'autre des 3 types admis provisoirement comme non lysogènes, à l'exclusion des 2 autres, par contamination avec les phages extraits des types lysogènes. Chacun de ces 3 types apparaît donc comme le chef de file d'une famille de types. La lysogénéité, dans ses divers états, explique partiellement les différences de la lysosensibilité présentée par les divers types vis-à-vis des phages utilisés pour la lysotypie. Cependant, elle n'explique pas l'existence des 3 types de base, ni le groupement des types lysogènes en 3 familles ayant chacune un type de base différent. Il faut bien admettre, indépendamment de la présence possible d'un phage actif hors de l'espèce, ou d'un phage
ont été signalés par Lominski, 1938 ou encore à des facteurs purement bactériens, physiologiques, antigènes ou biochimiques, ou purement bactériophagiques, d'ordre mutationnel ? RÉSUMÉ. Les 7 types lysogènes de S. paratyphi B ont pu être préparés artificiellement, à partir de l'un ou l'autre des 3 types admis provisoirement comme non lysogènes, à l'exclusion des 2 autres, par contamination avec les phages extraits des types lysogènes. Chacun de ces 3 types apparaît donc comme le chef de file d'une famille de types. La lysogénéité, dans ses divers états, explique partiellement les différences de la lysosensibilité présentée par les divers types vis-à-vis des phages utilisés pour la lysotypie. Cependant, elle n'explique pas l'existence des 3 types de base, ni le groupement des types lysogènes en 3 familles ayant chacune un type de base différent. Il faut bien admettre, indépendamment de la présence possible d'un phage actif hors de l'espèce, ou d'un phage de cryptolysogénéité, l'existence d'un ou de plusieurs facteurs purement bactériens. BIBLIOGRAPHIE [1] P. NICOLLE, Y. HAMON et E. EDLINGER. Ces Annales, 1951, 80, 000. [2] P. NICOLLE, A. JUDE et R. BUTTIAUX. Ces Annales, 1950, 79, 246. [3] P. NICOLLE. Ces Annales, 1947, 73, 705. [4] J. CRAIGIE. Canad. Publ. Health. J., 1942, 33, 41. [5] J. CRAIGIE. Bact. Rev., 1946, 10, 73. [6] H. WILLIAMS SMITH. J. Hyg., 1948, 46, 82. [7] G. S. WILSON et J. D. ATKINSON. Lancet, 1945, 1, 647. [8] P. M. ROUNTREE J. Gen. Microbiol., 1949, 3, 153. [9] P. NICOLLE, J. GRABAR et P. GIBERT. Ces Annales, 1946, 72, 81. [10] A. FELIX et B. R. CALLOW. Brit. Med. J., 1943, 2, 127. [11] R. Th. SCHOLTENS. Antonie van Leeuwenhoek, 1950, 16, 256. [12] I. LOMINSKI. C. R. Soc. Biol., 1938, 129, 151 et 264. Nous remercions M. Paul Ducrest et Mme Diverneau de l'aide précieuse qu'ils nous ont apportée dans l'exécution technique de ce travail et du précédent. INFLUENCE DU STOCKAGE SUR LA VITALITÉ DU VACCIN BCG par KONRAD BIRKHAUG. (Laboratoire du BCG au Service de Santé de l'Etat de New-York, à Albany.) On admet généralement que le pouvoir antigène du BCG
Health. J., 1942, 33, 41. [5] J. CRAIGIE. Bact. Rev., 1946, 10, 73. [6] H. WILLIAMS SMITH. J. Hyg., 1948, 46, 82. [7] G. S. WILSON et J. D. ATKINSON. Lancet, 1945, 1, 647. [8] P. M. ROUNTREE J. Gen. Microbiol., 1949, 3, 153. [9] P. NICOLLE, J. GRABAR et P. GIBERT. Ces Annales, 1946, 72, 81. [10] A. FELIX et B. R. CALLOW. Brit. Med. J., 1943, 2, 127. [11] R. Th. SCHOLTENS. Antonie van Leeuwenhoek, 1950, 16, 256. [12] I. LOMINSKI. C. R. Soc. Biol., 1938, 129, 151 et 264. Nous remercions M. Paul Ducrest et Mme Diverneau de l'aide précieuse qu'ils nous ont apportée dans l'exécution technique de ce travail et du précédent. INFLUENCE DU STOCKAGE SUR LA VITALITÉ DU VACCIN BCG par KONRAD BIRKHAUG. (Laboratoire du BCG au Service de Santé de l'Etat de New-York, à Albany.) On admet généralement que le pouvoir antigène du BCG dépend du nombre de germes viables que contient le vaccin, de leur multiplication et de leur dissémination dans l'organisme du sujet vacciné. Nous avons déjà eu l'occasion de constater que pour trouver le plus grand nombre de germes vivants (ou d'agglomérats de germes vivants), il faut s'adresser à des cultures de BCG sur milieu de Sauton âgées de 7 à 11 jours ; les cultures de cet âge contiennent, en effet, au moins deux fois plus de bacilles vivants que les cultures sur le même milieu âgées de 20 à 30 jours, employées pour la préparation du vaccin d'après la technique de Calmette. Les recherches concernant le nombre de germes vivants dans le vaccin BCG sont rares et leurs résultats sont contradictoires. Ainsi Aronson constate que « la vitalité des germes contenus dans le vaccin BCG diminue rapidement après cinq à sept jours et continue de diminuer ensuite, comme on peut s'en rendre compte par des ensemencements, par le pouvoir tuberculogène du vaccin et par la consommation d'oxygène de ce même vaccin ». Dubos et Fenner ont cultivé du BCG en profondeur dans un liquide contenant du Tween 80 et une fraction soluble de sérum humain chauffé. Des cultures de
de BCG sur milieu de Sauton âgées de 7 à 11 jours ; les cultures de cet âge contiennent, en effet, au moins deux fois plus de bacilles vivants que les cultures sur le même milieu âgées de 20 à 30 jours, employées pour la préparation du vaccin d'après la technique de Calmette. Les recherches concernant le nombre de germes vivants dans le vaccin BCG sont rares et leurs résultats sont contradictoires. Ainsi Aronson constate que « la vitalité des germes contenus dans le vaccin BCG diminue rapidement après cinq à sept jours et continue de diminuer ensuite, comme on peut s'en rendre compte par des ensemencements, par le pouvoir tuberculogène du vaccin et par la consommation d'oxygène de ce même vaccin ». Dubos et Fenner ont cultivé du BCG en profondeur dans un liquide contenant du Tween 80 et une fraction soluble de sérum humain chauffé. Des cultures de ce genre produisent, entre leurs mains, quand elles sont âgées de 8 jours et ont été maintenues ensuite pendant six semaines à la glacière, 36 x 106 colonies par centimètre cube de culture. Nous avons, depuis septembre 1946, dans notre service, employé une méthode de culture standardisée pour la production hebdomadaire de lots de vaccin BCG en utilisant des cultures sur milieu de Sauton âgées de 10 à 11 jours. Jusqu’à présent 204 lots consécutifs de vaccin fraîchement préparé ont été ensemencés pour contrôler le nombre de germes vivants et, en outre, le même contrôle a été effectué avec des vaccins gardés à la glacière (-2° à -4°) jusqu'à 3 ans 1/2. Nous voudrions, aujourd’hui, décrire l’influence de ce stockage du vaccin sur la vitalité des germes qu’il contient. MATÉRIAUX ET MÉTHODES. — Les 60 premiers lots hebdomadaires consécutifs de vaccin ont été préparés chacun en partant d’environ 6 à 10 g de culture BCG (poids après essorage). Les masses de culture furent homogénéisées par rotation dans des flacons contenant 1 kg de billes en acier inoxydable de 4 mm de diamètre et 0,500 kg de billes de 3 mm de diamètre ; la rotation était faite à la main
hebdomadaire de lots de vaccin BCG en utilisant des cultures sur milieu de Sauton âgées de 10 à 11 jours. Jusqu’à présent 204 lots consécutifs de vaccin fraîchement préparé ont été ensemencés pour contrôler le nombre de germes vivants et, en outre, le même contrôle a été effectué avec des vaccins gardés à la glacière (-2° à -4°) jusqu'à 3 ans 1/2. Nous voudrions, aujourd’hui, décrire l’influence de ce stockage du vaccin sur la vitalité des germes qu’il contient. MATÉRIAUX ET MÉTHODES. — Les 60 premiers lots hebdomadaires consécutifs de vaccin ont été préparés chacun en partant d’environ 6 à 10 g de culture BCG (poids après essorage). Les masses de culture furent homogénéisées par rotation dans des flacons contenant 1 kg de billes en acier inoxydable de 4 mm de diamètre et 0,500 kg de billes de 3 mm de diamètre ; la rotation était faite à la main à environ 30 rotations par minute. Après trois minutes de rotation, la masse de culture était transformée en une pâte huileuse adhérente aux parois du cylindre et aux billes métalliques. Après avoir ajouté 10 cm3 de liquide de suspension (une partie de Sauton et trois parties d’eau physiologique), on continuait la rotation pendant trois minutes environ ; on ajoutait enfin la quantité de liquide nécessaire pour obtenir une suspension de BCG dosée à 20 mg par centimètre cube et on continuait encore la rotation pendant cinq minutes. La suspension contenant 20 mg de BCG par centimètre cube est utilisée pour la vaccination transcutanée de l’homme. Des frottis préparés avec cette suspension révèlent des bacilles acido-résistants minces et granuleux répandus parmi des agglomérats plus ou moins grands, dont certains contiennent plusieurs centaines de germes. Sur ces frottis nous avons trouvé très peu de bacilles fragmentés ou non acidorésistants. Les 144 derniers lots hebdomadaires consécutifs de vaccin proviennent chacun d’environ 20 mg de culture de BCG et furent broyés avec 1,500 kg de billes métalliques de 4 mm de diamètre et 1,500 kg de billes de 3 mm de diamètre. Le broyage eut lieu cette fois non plus à la main, mais
la rotation pendant trois minutes environ ; on ajoutait enfin la quantité de liquide nécessaire pour obtenir une suspension de BCG dosée à 20 mg par centimètre cube et on continuait encore la rotation pendant cinq minutes. La suspension contenant 20 mg de BCG par centimètre cube est utilisée pour la vaccination transcutanée de l’homme. Des frottis préparés avec cette suspension révèlent des bacilles acido-résistants minces et granuleux répandus parmi des agglomérats plus ou moins grands, dont certains contiennent plusieurs centaines de germes. Sur ces frottis nous avons trouvé très peu de bacilles fragmentés ou non acidorésistants. Les 144 derniers lots hebdomadaires consécutifs de vaccin proviennent chacun d’environ 20 mg de culture de BCG et furent broyés avec 1,500 kg de billes métalliques de 4 mm de diamètre et 1,500 kg de billes de 3 mm de diamètre. Le broyage eut lieu cette fois non plus à la main, mais à l’aide d’un moteur électrique permettant 60 rotations par minute. Ayant remarqué que la glycérine possède une légère activité bactéricide sur le BCG, nous avons modifié la composition du milieu liquide de suspension en choisissant une part de Sauton sans glycérine et trois parts de solution tampon phosphatée à pH 7,2 qui a donné, au cours de nombreux tests, des résultats satisfaisants. Le temps de broyage lui-même a été légèrement prolongé en ce sens que nous avons commencé par cinq minutes de rotation de la masse de culture, cinq minutes après avoir ajouté du liquide, juste de quoi couvrir les billes métalliques et finalement dix minutes après avoir ajouté la quantité de liquide suffisante pour obtenir la concentration de 20 mg de BCG par centimètre cube. Les frottis de cette suspension nous ont montré la même distribution irrégulière de bacilles acido-résistants et granulaires individuels répartis entre des amas plus ou moins volumineux, dont certains contiennent plusieurs centaines de bacilles. La prolongation du broyage n’a pas produit un plus grand nombre de bacilles fragmentés ou non acido-résistants que les broyages précédents moins prolongés. Il est évident que le nombre de colonies, produit par l’ensemencement de ces suspensions de BCG contenant des
7,2 qui a donné, au cours de nombreux tests, des résultats satisfaisants. Le temps de broyage lui-même a été légèrement prolongé en ce sens que nous avons commencé par cinq minutes de rotation de la masse de culture, cinq minutes après avoir ajouté du liquide, juste de quoi couvrir les billes métalliques et finalement dix minutes après avoir ajouté la quantité de liquide suffisante pour obtenir la concentration de 20 mg de BCG par centimètre cube. Les frottis de cette suspension nous ont montré la même distribution irrégulière de bacilles acido-résistants et granulaires individuels répartis entre des amas plus ou moins volumineux, dont certains contiennent plusieurs centaines de bacilles. La prolongation du broyage n’a pas produit un plus grand nombre de bacilles fragmentés ou non acido-résistants que les broyages précédents moins prolongés. Il est évident que le nombre de colonies, produit par l’ensemencement de ces suspensions de BCG contenant des amas, ne correspond pas au nombre exact de germes viables, présents dans chaque lot de vaccin, mais représente plutôt la dispersion moyenne d’amas de BCG qui se trouvent dans le vaccin frais ou stocké à la glacière. VITALITÉ DU VACCIN FRAÎCHEMENT PRÉPARÉ. Pour déterminer le nombre d’amas de BCG vivants présents dans chaque lot hebdomadaire de vaccin fraîchement préparé, le vaccin fut d’abord dilué dans de l’eau physiologique de façon à contenir 1 mg de BCG par centimètre cube, et ensuite dilué chaque fois dix fois pour obtenir finalement des dilutions au 1/100 000, 1/1 000 000 et 1/10 000 000, puis 1 cm3 de chacune de ces dilutions fut ensemencé sur 5 grands tubes de milieu à l’œuf de Löwenstein (0,2 cm3 par tube). Les tubes furent placés en position horizontale à l’étuve à 37°5 pendant environ cinq heures pour permettre à l’excès de liquide de s’évaporer presque complètement ; les tubes étaient alors bouchés au caoutchouc et placés la face en bas. Les colonies furent dénombrées après quatre à huit semaines d’incubation à 37°5. Le tableau 1 représente le nombre de colonies de BCG produit dans 5 tubes pour chaque dilution au 1/1 000 000 en série double.