jeanflop/post_ocr_correction2 huggingface dataset:
fois obtenues, ont été soumises aux examens suivants : 1. Examen du tactisme « in vitro ». — 1 goutte de la suspension leucocytaire est déposée sur une lame de verre à la surface de laquelle ont été fixés par dessiccation des grains d'amidon de pommes de terre [4]. Elle est recouverte d'une lamelle. Celle-ci est lutée. Enfin, la préparation est placée sur la platine d'un microscope enfermé dans une chambre-étuve à 37°. Dans les conditions normales, c'est-à-dire lorsque toutes les conditions requises pour le déroulement d'un tactisme se trouvent réunies, on observe le phénomène suivant : en moins d'une heure, les polynucléaires, sans doute attirés par les dextrines solubles que libère l'amidon dans le milieu, se dirigent vers les grains. Ces derniers une fois atteints, les cellules s'accolent à leur surface en prenant la forme de croissants réguliers. Nous parlons d'une suppression totale du tactisme quand, au bout d'une heure, les leucocytes ne se sont pas groupés autour des grains d'amidon. Comme nous le montrerons plus loin, 11 effecteurs d'enzymes, sur les 13 que nous avons utilisés, ont été capables, à doses convenables, et sans entraîner la mort des cellules, de produire cet effet. 2. Recherche du calcium et du complément. — Calcium et complément sont, on le sait, absolument indispensables pour la mise en jeu in vitro d'un tactisme leucocytaire. Nous avons donc systématiquement vérifié la présence de ces deux éléments dans nos différents milieux de suspension. La présence du calcium fut mise en évidence par précipitation au moyen d'oxalate de sodium et identification microscopique des cristaux. La richesse en complément a été déterminée avec l'aide de la méthode hémolytique (premier temps de la réaction de Calmette et Massol). 3. Mesure du pouvoir phagocytaire et du métabolisme respiratoire des cellules. — Quelle action des effecteurs d'enzymes capables de troubler le pouvoir chimiotactique des polynucléaires exercent-ils sur le pouvoir phagocytaire et le métabolisme respiratoire de ces cellules ? Il était évidemment intéressant de la connaître. L'action sur le pouvoir phagocytaire a été évaluée d'après l'intensité avec laquelle des polynucléaires de cobaye ont englobé en une heure, et en présence
du complément. — Calcium et complément sont, on le sait, absolument indispensables pour la mise en jeu in vitro d'un tactisme leucocytaire. Nous avons donc systématiquement vérifié la présence de ces deux éléments dans nos différents milieux de suspension. La présence du calcium fut mise en évidence par précipitation au moyen d'oxalate de sodium et identification microscopique des cristaux. La richesse en complément a été déterminée avec l'aide de la méthode hémolytique (premier temps de la réaction de Calmette et Massol). 3. Mesure du pouvoir phagocytaire et du métabolisme respiratoire des cellules. — Quelle action des effecteurs d'enzymes capables de troubler le pouvoir chimiotactique des polynucléaires exercent-ils sur le pouvoir phagocytaire et le métabolisme respiratoire de ces cellules ? Il était évidemment intéressant de la connaître. L'action sur le pouvoir phagocytaire a été évaluée d'après l'intensité avec laquelle des polynucléaires de cobaye ont englobé en une heure, et en présence de tel ou tel effecteur, des staphylocoques vivants. Étude de frottis colorés au bleu de méthylène. La consommation en oxygène des leucocytes, également en présence d'effecteurs, a été mesurée par la méthode manométrique (appareil de Warburg). La quantité d'oxygène absorbée fut notée de demi-heure en demi-heure pendant soixante ou quatre-vingt-dix minutes et exprimée en millimètres cubes d'O2 par million de cellules et par heure. La diminution du métabolisme respiratoire des cellules placées dans un milieu qui renfermait un effecteur d'enzyme a été calculée d'après ces chiffres et rapportée à 100 volumes d'oxygène. 4. Appréciation du pouvoir cytotoxique propre à chaque effecteur d'enzyme. Nous avons considéré, au cours de ces expériences, comme dose optima, la plus petite quantité d’effaceur qui, sans tuer la cellule, a été capable de supprimer totalement le tactisme, l’examen des préparations étant fait au bout d’une heure. Pour démontrer le caractère vivant des cellules, nous opérions de la façon suivante : après une heure de contact avec chacun des effecteurs employés, les suspensions cellulaires étaient centrifugées, le liquide surnageant était rejeté et le culot de leucocytes finalement repris par 2 cm3 de sérum de cobaye frais. Une goutte de cette nouvelle préparation servait alors à faire un
minutes et exprimée en millimètres cubes d'O2 par million de cellules et par heure. La diminution du métabolisme respiratoire des cellules placées dans un milieu qui renfermait un effecteur d'enzyme a été calculée d'après ces chiffres et rapportée à 100 volumes d'oxygène. 4. Appréciation du pouvoir cytotoxique propre à chaque effecteur d'enzyme. Nous avons considéré, au cours de ces expériences, comme dose optima, la plus petite quantité d’effaceur qui, sans tuer la cellule, a été capable de supprimer totalement le tactisme, l’examen des préparations étant fait au bout d’une heure. Pour démontrer le caractère vivant des cellules, nous opérions de la façon suivante : après une heure de contact avec chacun des effecteurs employés, les suspensions cellulaires étaient centrifugées, le liquide surnageant était rejeté et le culot de leucocytes finalement repris par 2 cm3 de sérum de cobaye frais. Une goutte de cette nouvelle préparation servait alors à faire un nouvel examen de tactisme. Celui-ci était-il positif — déplacement rapide des leucocytes vers les grains d’amidon nous nous estimions en droit de conclure à l’intégrité des cellules. Pour parfaire ce résultat, nous avons aussi étudié, en tous cas, l’effet d’un contact prolongé entre polynucléaires et effecteurs d’enzymes. Ce contact fut de dix-huit heures, en glacière, pour éviter dans la mesure du possible l’intervention spontanée des ferments protéolytiques. Passé ce délai, les préparations étaient centrifugées et le culot cellulaire était repris par 2 cm3 de sérum frais de ZD cobaye. Avec cette nouvelle suspension nous faisions, dans les conditions habituelles, un examen du tactisme. Cette fois encore il nous permettait d’apprécier aisément le bon état, la vitalité, des cellules. De plus amples détails sur les diverses techniques utilisées ici ont été donnés dans nos précédentes notes [2, 3, 4, 5]. Le lecteur pourra s’y reporter. RÉSULTATS. — Rappelons que nous considérons comme dose optima, la plus petite quantité d’effaceur qui, sans tuer la cellule, supprime le tactisme (examen des préparations après une heure de séjour à 37°). 1. Action de l’azide de sodium. — Pour l’azide de sodium, cette dose optima correspond à la concentration M/7 (soit 9,2 mg/cm3). En présence
de dix-huit heures, en glacière, pour éviter dans la mesure du possible l’intervention spontanée des ferments protéolytiques. Passé ce délai, les préparations étaient centrifugées et le culot cellulaire était repris par 2 cm3 de sérum frais de ZD cobaye. Avec cette nouvelle suspension nous faisions, dans les conditions habituelles, un examen du tactisme. Cette fois encore il nous permettait d’apprécier aisément le bon état, la vitalité, des cellules. De plus amples détails sur les diverses techniques utilisées ici ont été donnés dans nos précédentes notes [2, 3, 4, 5]. Le lecteur pourra s’y reporter. RÉSULTATS. — Rappelons que nous considérons comme dose optima, la plus petite quantité d’effaceur qui, sans tuer la cellule, supprime le tactisme (examen des préparations après une heure de séjour à 37°). 1. Action de l’azide de sodium. — Pour l’azide de sodium, cette dose optima correspond à la concentration M/7 (soit 9,2 mg/cm3). En présence de cet effaceur, les cellules contenues dans du sérum dilué de moitié restent en bon état, elles sont arrondies ou émettent quelques courts pseudopodes, mais elles ne se déplacent pas vers les grains d’amidon. Après centrifugation, rejet du liquide surnageant puis reprise du culot leucocytaire par du sérum frais, le tactisme, cependant, redevient normal. Le pouvoir phagocytaire des polynucléaires n’est pas affecté par l’azide de sodium au même degré que leur pouvoir chimiotactique. Il est cependant un peu diminué. La respiration est progressivement inhibée ; après quatre-vingt-dix minutes de contact, l’inhibition est environ de 50 p. 100. L’azide de sodium ne bloque pas le calcium du milieu et il n’altère pas le complément. Remarque. — L’azide de sodium, à la dose nécessaire pour inhiber le tactisme, s’avère, à la longue, toxique pour les cellules : cette toxicité, qui se manifeste non seulement par la perte du pouvoir chimiotactique mais encore par d’importantes altérations morphologiques des leucocytes, est évidente au bout de dix-huit heures de contact. 2. Action de l’hydroxylamine. — A la concentration M/15 (soit 2,2 mg/cm3), qui est ici la dose optima, le tactisme est complètement inhibé. Mais il est rétabli dès que l’effaceur d’enzyme a été éliminé du
tactisme, cependant, redevient normal. Le pouvoir phagocytaire des polynucléaires n’est pas affecté par l’azide de sodium au même degré que leur pouvoir chimiotactique. Il est cependant un peu diminué. La respiration est progressivement inhibée ; après quatre-vingt-dix minutes de contact, l’inhibition est environ de 50 p. 100. L’azide de sodium ne bloque pas le calcium du milieu et il n’altère pas le complément. Remarque. — L’azide de sodium, à la dose nécessaire pour inhiber le tactisme, s’avère, à la longue, toxique pour les cellules : cette toxicité, qui se manifeste non seulement par la perte du pouvoir chimiotactique mais encore par d’importantes altérations morphologiques des leucocytes, est évidente au bout de dix-huit heures de contact. 2. Action de l’hydroxylamine. — A la concentration M/15 (soit 2,2 mg/cm3), qui est ici la dose optima, le tactisme est complètement inhibé. Mais il est rétabli dès que l’effaceur d’enzyme a été éliminé du milieu. La phagocytose est légèrement moins belle qu’en milieu sérique normal. La respiration est diminuée de 50 p. 100 environ en une heure. A la dose utilisée pour inhiber le tactisme, l’hydroxylamine ne bloque pas le calcium sérique et elle laisse le complément intact (fait déjà observé par Pillemer [6]). Remarque. — Les cellules maintenues pendant longtemps en présence d’hydroxylamine à la concentration M/15 finissent par être altérées. Lésions nettes après dix-huit heures de contact. 3. Action du diéthyldithiocarbamate de sodium. — La concentration optima correspond cette fois à M/30 (soit 4,9 mg/cm3). A cette dose, l’effaceur d’enzyme inhibe le tactisme. Cependant, il ne parvient à exercer cette action qu’après un temps de contact anormalement long (deux ou trois heures). De plus, en ce cas, le pouvoir chimiotactique des cellules n’est pas rétabli dès que celles-ci sont remises dans un milieu sérique normal. Plusieurs lavages sont nécessaires pour leur rendre ce pouvoir. Phagocytose normale. Aucune action sur le calcium ou sur le complément. En présence du diéthyldithiocarbamate de sodium, la respiration cellulaire est assez rapidement diminuée de 75 p. 100. Remarque. — Toxicité apparemment négligeable. 4. Action de la dithizone. — Ce produit, très peu soluble, a été employé à
Remarque. — Les cellules maintenues pendant longtemps en présence d’hydroxylamine à la concentration M/15 finissent par être altérées. Lésions nettes après dix-huit heures de contact. 3. Action du diéthyldithiocarbamate de sodium. — La concentration optima correspond cette fois à M/30 (soit 4,9 mg/cm3). A cette dose, l’effaceur d’enzyme inhibe le tactisme. Cependant, il ne parvient à exercer cette action qu’après un temps de contact anormalement long (deux ou trois heures). De plus, en ce cas, le pouvoir chimiotactique des cellules n’est pas rétabli dès que celles-ci sont remises dans un milieu sérique normal. Plusieurs lavages sont nécessaires pour leur rendre ce pouvoir. Phagocytose normale. Aucune action sur le calcium ou sur le complément. En présence du diéthyldithiocarbamate de sodium, la respiration cellulaire est assez rapidement diminuée de 75 p. 100. Remarque. — Toxicité apparemment négligeable. 4. Action de la dithizone. — Ce produit, très peu soluble, a été employé à demi-saturation dans du sérum au demi. Dans un tel milieu, le tactisme des polynucléaires n’est que partiellement inhibé. Les cellules sont étalées et émettent de longs pseudopodes. La phagocytose est normale et la respiration cellulaire n’est pas sensiblement diminuée. Calcium et complément, enfin, ne sont pas touchés. Remarque. — Employée dans les conditions qui viennent d’être indiquées, la dithizone ne manifeste aucun pouvoir cytotoxique, même après action prolongée (examen fait au bout de dix-huit heures). 5. Action de l’o-phénanthroline. — Ce produit, très peu soluble comme la dithizone, a été employé au 1/3 de saturation dans du sérum dilué au demi. Dans ce milieu, le tactisme leucocytaire est totalement inhibé et les cellules restent rondes ; le tactisme, cependant, redevient parfait après élimination de l’effaceur. La phagocytose est un peu moins belle qu’en milieu sérique normal. La respiration cellulaire est lentement diminuée, de 40 p. 100 environ en une heure. Calcium et complément ne sont pas touchés. Remarque. — A cette dose le produit ne paraît pas être cytotoxique, même après un contact prolongé pendant dix-huit heures. 6. Action du bisulfite de Na. — Concentration optima : M/8 (soit 13 mg/cm3) dans du sérum au demi. Dans ce milieu, le
dans les conditions qui viennent d’être indiquées, la dithizone ne manifeste aucun pouvoir cytotoxique, même après action prolongée (examen fait au bout de dix-huit heures). 5. Action de l’o-phénanthroline. — Ce produit, très peu soluble comme la dithizone, a été employé au 1/3 de saturation dans du sérum dilué au demi. Dans ce milieu, le tactisme leucocytaire est totalement inhibé et les cellules restent rondes ; le tactisme, cependant, redevient parfait après élimination de l’effaceur. La phagocytose est un peu moins belle qu’en milieu sérique normal. La respiration cellulaire est lentement diminuée, de 40 p. 100 environ en une heure. Calcium et complément ne sont pas touchés. Remarque. — A cette dose le produit ne paraît pas être cytotoxique, même après un contact prolongé pendant dix-huit heures. 6. Action du bisulfite de Na. — Concentration optima : M/8 (soit 13 mg/cm3) dans du sérum au demi. Dans ce milieu, le tactisme est inhibé totalement mais il réapparaît après élimination du produit. La phagocytose est partiellement diminuée. L’absorption d’O2, est considérablement augmentée. Mais cette augmentation ne paraît pas tenir à une modification du métabolisme cellulaire, car elle existe au même degré dans un milieu qui ne renferme pas de leucocytes. La teneur en calcium et en complément n’est pas modifiée. Remarque. — Après dix-huit heures de contact en présence de bisulfite de Na à concentration M/8, les cellules reprises par du sérum frais ne recouvrent qu’une faible partie de leur pouvoir chimiotactique et elles montrent des altérations morphologiques importantes. 7. Action de l'uréthane. — Concentration optima : M/5 (soit 15 mg/cm3) dans du sérum au demi. Dans ce milieu, il y a inhibition totale du tactisme leucocytaire mais le tactisme redevient normal dès que l'uréthane a été éliminé du sérum. La phagocytose, en présence de ce produit, est légèrement diminuée. La respiration est progressivement inhibée (en une heure et demie) dans une proportion de 75 p. 100. Calcium et complément restent intacts. Remarque. — L'action cytotoxique de l'uréthane (à la dose ici employée) paraît être nulle, même après un contact prolongé. 2. Action du fluorure de Na. — Concentration optima :
teneur en calcium et en complément n’est pas modifiée. Remarque. — Après dix-huit heures de contact en présence de bisulfite de Na à concentration M/8, les cellules reprises par du sérum frais ne recouvrent qu’une faible partie de leur pouvoir chimiotactique et elles montrent des altérations morphologiques importantes. 7. Action de l'uréthane. — Concentration optima : M/5 (soit 15 mg/cm3) dans du sérum au demi. Dans ce milieu, il y a inhibition totale du tactisme leucocytaire mais le tactisme redevient normal dès que l'uréthane a été éliminé du sérum. La phagocytose, en présence de ce produit, est légèrement diminuée. La respiration est progressivement inhibée (en une heure et demie) dans une proportion de 75 p. 100. Calcium et complément restent intacts. Remarque. — L'action cytotoxique de l'uréthane (à la dose ici employée) paraît être nulle, même après un contact prolongé. 2. Action du fluorure de Na. — Concentration optima : M/4 (soit 10,5 mg/cm3) dans du sérum dilué au demi. Dans un tel milieu, le tactisme est totalement inhibé mais, cette fois encore, il redevient normal lorsque, après une heure de contact avec le fluorure, les cellules sont remises dans un sérum normal. La phagocytose est diminuée. Le complément n'est pas touché. En revanche, le calcium a été éliminé du milieu. Remarque. — On note des altérations très nettes lorsque les leucocytes ont été maintenus dix-huit heures dans du sérum qui contient le fluorure de Na à concentration M/4. 3. Action du pyrophosphate de Na. — Concentration optima : M/200 (soit 2,2 mg/cm3) dans du sérum au demi. Dans ce milieu, inhibition totale du tactisme mais le phénomène survient de nouveau lorsque les globules blancs, après une heure de contact avec l'effet d'enzyme, sont remis en suspension dans un sérum normal. Phagocytose convenable. Le calcium a été éliminé du milieu, le complément est détruit ; du moins il n'exerce plus son pouvoir hémolytique. Remarque. — Action cytotoxique nulle, même après contact prolongé. 4. Action de la cystéine. — Concentration optima : M/10 (soit 10 mg/cm3) dans du sérum au demi. Dans ce milieu, inhibition totale du tactisme mais, comme dans
pas touché. En revanche, le calcium a été éliminé du milieu. Remarque. — On note des altérations très nettes lorsque les leucocytes ont été maintenus dix-huit heures dans du sérum qui contient le fluorure de Na à concentration M/4. 3. Action du pyrophosphate de Na. — Concentration optima : M/200 (soit 2,2 mg/cm3) dans du sérum au demi. Dans ce milieu, inhibition totale du tactisme mais le phénomène survient de nouveau lorsque les globules blancs, après une heure de contact avec l'effet d'enzyme, sont remis en suspension dans un sérum normal. Phagocytose convenable. Le calcium a été éliminé du milieu, le complément est détruit ; du moins il n'exerce plus son pouvoir hémolytique. Remarque. — Action cytotoxique nulle, même après contact prolongé. 4. Action de la cystéine. — Concentration optima : M/10 (soit 10 mg/cm3) dans du sérum au demi. Dans ce milieu, inhibition totale du tactisme mais, comme dans la plupart des cas précédents, le phénomène est rétabli par élimination de la cystéine. Phagocytose normale. Le calcium ne paraît pas touché mais le complément est en grande partie détruit. Remarque. — Action cytotoxique nulle, même après contact prolongé. 5. Action de l'acide thioglycolique neutralisé. Concentration optima : M/32 (soit 3 mg/cm3) dans du sérum au demi. Dans ce milieu le tactisme est totalement inhibé. Il survient de nouveau dès que les cellules ont été transportées dans un sérum neuf. La phagocytose est un peu diminuée. Teneur en calcium normale ; en revanche, l'activité complémentaire du milieu paraît légèrement altérée. Remarque. — La dose utilisée ici ne paraît pas toxique, même lorsqu'elle a été maintenue à son contact pendant dix-huit heures. 6. Action du fluoroacétate de Na. — Concentration optima : M/20 (soit 5 mg/cm3) dans du sérum au demi. Dans ce milieu, le tactisme est totalement inhibé mais il est rétabli aussitôt après l'élimination de l'effet d'enzyme. Le calcium reste intact mais le complément est partiellement altéré. 7. Action de l'acide malonique neutralisé. — Concentration optima : M/10 (soit 10,4 mg/cm3) dans du sérum au demi. Dans ce milieu, le tactisme n'est pas totalement inhibé, il est cependant beaucoup
3 mg/cm3) dans du sérum au demi. Dans ce milieu le tactisme est totalement inhibé. Il survient de nouveau dès que les cellules ont été transportées dans un sérum neuf. La phagocytose est un peu diminuée. Teneur en calcium normale ; en revanche, l'activité complémentaire du milieu paraît légèrement altérée. Remarque. — La dose utilisée ici ne paraît pas toxique, même lorsqu'elle a été maintenue à son contact pendant dix-huit heures. 6. Action du fluoroacétate de Na. — Concentration optima : M/20 (soit 5 mg/cm3) dans du sérum au demi. Dans ce milieu, le tactisme est totalement inhibé mais il est rétabli aussitôt après l'élimination de l'effet d'enzyme. Le calcium reste intact mais le complément est partiellement altéré. 7. Action de l'acide malonique neutralisé. — Concentration optima : M/10 (soit 10,4 mg/cm3) dans du sérum au demi. Dans ce milieu, le tactisme n'est pas totalement inhibé, il est cependant beaucoup moins accusé que normalement. Il redevient parfait lorsque les cellules sont reprises, après centrifugation, par du sérum frais. Phagocytose légèrement diminuée. Calcium intact ; complément altéré. Remarque. — L'acide malonique neutralisé, à la dose employée ici, finit par altérer quelque peu le bon état des leucocytes. Résumons, tout d'abord, nos observations (voir tableau). Utilisés à dose et à pH convenables, 10 sur les 13 effecteurs d'enzymes que nous avons utilisés ont été capables in vitro, sans tuer les cellules, de supprimer le pouvoir chimiotactique des polynucléaires du cobaye. Ce sont l'azide de sodium, l'hydroxylamine, l'orthophénanthroline, le bisulfite de Na, l'uréthane, la cystéine, l'acide thioglycolique, le fluoroacétate de Na, le fluorure de Na, enfin le pyrophosphate de Na. En présence de ces différents corps, l'inhibition du tactisme a été immédiate et totale. Le phénomène, cependant, a été réversible. Les cellules ont retrouvé tout leur pouvoir chimiotactique dès que les effecteurs en cause ont été éliminés du milieu. Le diéthyldithiocarbamate de sodium, effecteur dont nous nous sommes également servis, exerce une action un peu particulière. Dissous dans un milieu sérique à la concentration M/30 (soit 4,9 mg/cm3), il est capable lui aussi d'inhiber le tactisme mais son effet n'est pas immédiat, un