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a été injecté annuellement à la totalité des vaches de ces 7 troupeaux, comprenant chacun 35 à 60 animaux ; le début de l'expérimentation correspondait à la primo-vaccination de ces troupeaux. Appréciation du danger relatif de la voie orale : La sensibilité de la souris à l'infection coxiellique a été testée le même jour suivant deux voies d'inoculation : la voie intrapéritonéale, de référence, la voie orale, par comparaison. À cet effet, chaque dilution de culture vitelline de coxiella, dont le titre in ovo et in vivo était de 108/0,5 ml a été administrée par les deux voies à la dose de 0,5 ml, à 6 souris, en 3 titrages consécutifs effectués dans une même journée. Les résultats 2.2.1 Correspondance entre titre « in ovo » et « in vivo»: Le tableau 1 Contre qu'une suspension vitelline dont le titre in ovo est de 108 DIO (dose infectante œuf) pour 0,5 ml, présente un titre identique sur souris. Le seuil de positivité en anticorps fixant le complément se situant à la dilution sérique du 1/100, ce seuil est obtenu avec la dilution 10-8. En outre, il est intéressant de noter que le titre fixant le complément augmente avec la richesse en particules infectantes de l'inoculum, pour se stabiliser à une valeur maximale aux dilutions 10-1 TABLEAU 1. Réponse sérologique des liquides d'ascite en fonction des quantités de Coxiellas d'une suspension inoculée par la voie intrapéritonéale à la souris. (Titre « in ovo » 1 0-8) et 10-2. Une observation antérieure aboutissait également aux mêmes conclusions [19]. Il découle de ces expérimentations que le modèle souris permet : de détecter des quantités sensiblement identiques de Rickettsies par rapport à la culture in ovo de référence, de donner une valeur estimative assez précise, par le titre en anticorps, de la richesse en particules infectieuses de l'inoculum. Excrétion de Coxiellas dans le lait : En Allemagne, le taux de l'excrétion lactée avant vaccination des élevages A et B est de 29 et 12 En France, dans le groupe des exploitations C, D, E, F. (60 animaux/exploitation en moyenne) et G. (35 animaux), l'excrétion
en particules infectantes de l'inoculum, pour se stabiliser à une valeur maximale aux dilutions 10-1 TABLEAU 1. Réponse sérologique des liquides d'ascite en fonction des quantités de Coxiellas d'une suspension inoculée par la voie intrapéritonéale à la souris. (Titre « in ovo » 1 0-8) et 10-2. Une observation antérieure aboutissait également aux mêmes conclusions [19]. Il découle de ces expérimentations que le modèle souris permet : de détecter des quantités sensiblement identiques de Rickettsies par rapport à la culture in ovo de référence, de donner une valeur estimative assez précise, par le titre en anticorps, de la richesse en particules infectieuses de l'inoculum. Excrétion de Coxiellas dans le lait : En Allemagne, le taux de l'excrétion lactée avant vaccination des élevages A et B est de 29 et 12 En France, dans le groupe des exploitations C, D, E, F. (60 animaux/exploitation en moyenne) et G. (35 animaux), l'excrétion est de 8,3 et 8,8 de la population. Excrétion dans le temps : Cette excrétion est irrégulière, survenant à l, 2, 3 mois après le vêlage. C'est ainsi que pour les 5 vaches trouvées positives, on note : 1ère vache : 16 prélèvements ; positivité du 2e et 14e échantillon 2e vache : 5 prélèvements ; positivité du 5e échantillon 3e vache : 13 prélèvements; positivité du 1er, 11e, 12e échantillon 4e vache : 11 prélèvements ; positivité du 6e échantillon 5e vache : 13 prélèvements ; positivité du 4e échantillon Excrétion chez des bovins ayant présenté un avortement rickettsien : Les prélèvements de lait faits 1, 2, 4 semaines et 2, 3 mois après l'avortement ont tous été négatifs. Importance de l'excrétion : La valeur trouvée en fixation du complément sur les souris après inoculation IP de 10 D.M.I. de Coxiella (1/27e Tableau I) est identique à celle trouvée sur les 9 laits positifs (2 souris/0,5 ml de lait). Compte tenu de nos observations (tableau I) et de celles de Behymer [19] qui constatent une élévation progressive de la positivité sérique des souris en fonction du nombre de rickettsies inoculées, nous en concluons que les quantités de Coxiella excrétées
2e vache : 5 prélèvements ; positivité du 5e échantillon 3e vache : 13 prélèvements; positivité du 1er, 11e, 12e échantillon 4e vache : 11 prélèvements ; positivité du 6e échantillon 5e vache : 13 prélèvements ; positivité du 4e échantillon Excrétion chez des bovins ayant présenté un avortement rickettsien : Les prélèvements de lait faits 1, 2, 4 semaines et 2, 3 mois après l'avortement ont tous été négatifs. Importance de l'excrétion : La valeur trouvée en fixation du complément sur les souris après inoculation IP de 10 D.M.I. de Coxiella (1/27e Tableau I) est identique à celle trouvée sur les 9 laits positifs (2 souris/0,5 ml de lait). Compte tenu de nos observations (tableau I) et de celles de Behymer [19] qui constatent une élévation progressive de la positivité sérique des souris en fonction du nombre de rickettsies inoculées, nous en concluons que les quantités de Coxiella excrétées dans les laits sont très faibles, se situant très approximativement à 10-20 Coxiella par millilitre de lait. Importance relative de l'infection par la voie orale : Les résultats de l'expérimentation sont consignés dans le Tableau II. La dose minimale infectante, (D.M.I.) trouvée a été chaque fois de 10⁴ par la voie orale, 10⁸ par la voie intrapéritonéale, après inoculation d'un lait volontairement contaminé. Il a donc fallu 10.000 fois plus de Coxiella pour contaminer la souris par la voie orale que par la voie intrapéritonéale ; ce qui impliquerait qu'une très forte contamination initiale des laits, contamination que nous n'avons jamais observée Parait nécessaire pour infecter la souris par voie orale. En effet, d'après nos observations, la contamination par voie orale de la souris impliquerait la consommation de plusieurs litres de lait naturellement contaminés, par extrapolation combien en faudrait-il pour contaminer l'homme? Effets de la vaccination : Dans le cas des exploitations A et B la vaccination annuelle a été couplée avec l'élimination des animaux excréteurs, ramenant le pourcentage de positivité, qui se situait initialement à 29 et 12 %, à 1 et 3 en deux ans. Cependant, trois années supplémentaires ont été nécessaires pour obtenir une négativation complète du
voie orale, 10⁸ par la voie intrapéritonéale, après inoculation d'un lait volontairement contaminé. Il a donc fallu 10.000 fois plus de Coxiella pour contaminer la souris par la voie orale que par la voie intrapéritonéale ; ce qui impliquerait qu'une très forte contamination initiale des laits, contamination que nous n'avons jamais observée Parait nécessaire pour infecter la souris par voie orale. En effet, d'après nos observations, la contamination par voie orale de la souris impliquerait la consommation de plusieurs litres de lait naturellement contaminés, par extrapolation combien en faudrait-il pour contaminer l'homme? Effets de la vaccination : Dans le cas des exploitations A et B la vaccination annuelle a été couplée avec l'élimination des animaux excréteurs, ramenant le pourcentage de positivité, qui se situait initialement à 29 et 12 %, à 1 et 3 en deux ans. Cependant, trois années supplémentaires ont été nécessaires pour obtenir une négativation complète du troupeau. Comparaison des voies d'infection orale et péritonéale sur souris. Dans le troupeau G, trois interventions à 2 mois d'intervalle, avec le seul vaccin inactivé en adjuvant huileux, ont abouti au même résultat. Devant la très faible infectiosité des laits contaminés et le faible nombre de vaches excrétrices, nous avons jugé inutile de suivre l'excrétion sur les vaches des autres troupeaux après vaccination. LA CONTAMINATION PAR LES ENVELOPES FOETALES ESSAIS DE PRÉVENTION. Si l'excrétion de Coxiella au niveau des enveloppes fœtales est bien connue en milieu infecté, les travaux faisant état d'une action antibiotique efficace (tetracycline) ou modérée de la vaccination sont rares. Pour clarifier le problème nous avons mené en France et en Allemagne, des expérimentations portant sur l'efficacité clinique et la prévention de l'excrétion avec le vaccin mis au point dans notre laboratoire. Matériel et Méthodes Les placentas : provenant d'exploitations cliniquement infectées; 282 placentas provenant de 7 exploitations hébergeant 455 vaches ont été examinés. La mise en évidence : de Coxiella a été faite sur des frottis de placenta colorés par la méthode classique de Stamp, et examinés au microscope. Le vaccin utilisé: a été le vaccin tué huileux (Aborstop FQ ND) cité précédemment, une injection. Thérapeutique
jugé inutile de suivre l'excrétion sur les vaches des autres troupeaux après vaccination. LA CONTAMINATION PAR LES ENVELOPES FOETALES ESSAIS DE PRÉVENTION. Si l'excrétion de Coxiella au niveau des enveloppes fœtales est bien connue en milieu infecté, les travaux faisant état d'une action antibiotique efficace (tetracycline) ou modérée de la vaccination sont rares. Pour clarifier le problème nous avons mené en France et en Allemagne, des expérimentations portant sur l'efficacité clinique et la prévention de l'excrétion avec le vaccin mis au point dans notre laboratoire. Matériel et Méthodes Les placentas : provenant d'exploitations cliniquement infectées; 282 placentas provenant de 7 exploitations hébergeant 455 vaches ont été examinés. La mise en évidence : de Coxiella a été faite sur des frottis de placenta colorés par la méthode classique de Stamp, et examinés au microscope. Le vaccin utilisé: a été le vaccin tué huileux (Aborstop FQ ND) cité précédemment, une injection. Thérapeutique : le traitement antibiotique consistant en une injection d'oxytétracycline (Terramycine Longue action 10 g/IM par animal) trois semaines avant la date présumée du part. Répartition des animaux : Pour situer l'importance relative de la vaccination et du traitement antibiotique, les 455 bovins de ces 7 exploitations ont été divisés en 4 groupes d'importance inégale : Témoins, vaccinés, traités antibiotique, vaccinés + traités antibiotique. Résultats Ceux-ci sont résumés dans le tableau récapitulatif ci-dessous : NOMBRE NOMBRE POURCENTAGE GROUPE DE PLACENTAS DE PLACENTAS DE POSITIVITE EXAMINÉS FQ POSITIVES Terramycine Vaccin 20 7 35 Terramycine Vaccin + 99 18 19,2 Terramycine + vaccin + 130 7 5,4 Terramycine + Vaccin 33 8 24,2 Ces résultats montrent qu'un tiers environ des vaches d'exploitations cliniquement infectées excrètent Coxiella dans leurs lochies. Une amélioration légère est obtenue après un traitement antibiotique ; celle-ci est plus nette après vaccination et devient manifeste mais encore incomplète lorsque les deux traitements sont associés. CONCLUSION Aux questions que nous nous posions en ce qui concerne l'importance et le danger des produits laitiers infectés par Coxiella burnetii, nos observations Ont permis de préciser un certain nombre de points, objets d'opinions contradictoires dans la littérature scientifique: Coxiella burnetii est excrétée dans les
4 groupes d'importance inégale : Témoins, vaccinés, traités antibiotique, vaccinés + traités antibiotique. Résultats Ceux-ci sont résumés dans le tableau récapitulatif ci-dessous : NOMBRE NOMBRE POURCENTAGE GROUPE DE PLACENTAS DE PLACENTAS DE POSITIVITE EXAMINÉS FQ POSITIVES Terramycine Vaccin 20 7 35 Terramycine Vaccin + 99 18 19,2 Terramycine + vaccin + 130 7 5,4 Terramycine + Vaccin 33 8 24,2 Ces résultats montrent qu'un tiers environ des vaches d'exploitations cliniquement infectées excrètent Coxiella dans leurs lochies. Une amélioration légère est obtenue après un traitement antibiotique ; celle-ci est plus nette après vaccination et devient manifeste mais encore incomplète lorsque les deux traitements sont associés. CONCLUSION Aux questions que nous nous posions en ce qui concerne l'importance et le danger des produits laitiers infectés par Coxiella burnetii, nos observations Ont permis de préciser un certain nombre de points, objets d'opinions contradictoires dans la littérature scientifique: Coxiella burnetii est excrétée dans les laits de façon intermittente, par un nombre restreint de vaches, en milieu cliniquement infecté. Cette excrétion est très faible, de l'ordre de 10 germes par millilitre ; de plus une vache, ayant présenté un avortement rickettsien, n'est pas obligatoirement excrétrice. En outre, des études comparatives d'infection de la souris par voie orale et intrapéritonéale ont montré que le risque oral est 10.000 fois moindre que par l'autre voie. Ces observations confirment notre conviction relative au très faible danger de la consommation des produits laitiers. La vaccination, enfin, contribue à diminuer fortement, mais ne fait pas disparaître le nombre des excréteurs. Aux questions que nous nous posions en ce qui concerne l'importance de l'excrétion coxiellique par la voie placentaire et sa prévention ; la vaccination, outre ses effets thérapeutiques unanimement reconnus réduit l'excrétion de Coxiella en diminuant de moitié environ le nombre d'excréteurs, et probablement en diminuant aussi l'intensité de l'excrétion. Les antibiotiques, à la rigueur envisageables dans le cas de certains troupeaux malades, n'ont qu'une action légère ; l'association des deux méthodes aboutit à des résultats meilleurs. Cependant, il faut remarquer que dans aucun des cas la stérilisation complète n'est obtenue. Force nous est de constater ces faits et de
voie orale et intrapéritonéale ont montré que le risque oral est 10.000 fois moindre que par l'autre voie. Ces observations confirment notre conviction relative au très faible danger de la consommation des produits laitiers. La vaccination, enfin, contribue à diminuer fortement, mais ne fait pas disparaître le nombre des excréteurs. Aux questions que nous nous posions en ce qui concerne l'importance de l'excrétion coxiellique par la voie placentaire et sa prévention ; la vaccination, outre ses effets thérapeutiques unanimement reconnus réduit l'excrétion de Coxiella en diminuant de moitié environ le nombre d'excréteurs, et probablement en diminuant aussi l'intensité de l'excrétion. Les antibiotiques, à la rigueur envisageables dans le cas de certains troupeaux malades, n'ont qu'une action légère ; l'association des deux méthodes aboutit à des résultats meilleurs. Cependant, il faut remarquer que dans aucun des cas la stérilisation complète n'est obtenue. Force nous est de constater ces faits et de vivre avec ; sur un plan pratique, et pour éviter l'infection humaine, nos observations nous amènent à conclure: que, dans un environnement contaminé, les mesures sanitaires (vêlage dans un box séparé, destruction des enveloppes fœtales, mesures d'hygiène au niveau du personnel) sont essentielles, elles doivent être couplées à la vaccination des troupeaux malades; que, en ce qui concerne la consommation de produits au lait cru par l'homme, le danger doit être fortement minoré. Nos expérimentations devraient rassurer le consommateur, rendu inquiet par la masse d'informations alarmantes que les médias lui apportent journellement. RÉSUMÉ La Fièvre Q, zoonose vraie, tire toujours son origine d'une contamination animale. Les causes de l'infection humaine sont essentiellement la voie pulmonaire, plus accessoirement la voie digestive. Nous décrivons, en partant d'un modèle souris, une méthode d'appréciation quantitative de l'excrétion de Coxiella dans le lait. Nos recherches faites sur 400 laits de vaches infectées cliniquement démontrent que l'excrétion mammaire est irrégulière et faible. En outre, il faut 10.000 fois plus de germes pour infecter la souris par la voie orale que par la voie intrapéritonéale. Ces deux considérations tendent à minimiser l'importance de la voie digestive dans l'infection de l'homme. La cause la plus importante reste l'inhalation
des troupeaux malades; que, en ce qui concerne la consommation de produits au lait cru par l'homme, le danger doit être fortement minoré. Nos expérimentations devraient rassurer le consommateur, rendu inquiet par la masse d'informations alarmantes que les médias lui apportent journellement. RÉSUMÉ La Fièvre Q, zoonose vraie, tire toujours son origine d'une contamination animale. Les causes de l'infection humaine sont essentiellement la voie pulmonaire, plus accessoirement la voie digestive. Nous décrivons, en partant d'un modèle souris, une méthode d'appréciation quantitative de l'excrétion de Coxiella dans le lait. Nos recherches faites sur 400 laits de vaches infectées cliniquement démontrent que l'excrétion mammaire est irrégulière et faible. En outre, il faut 10.000 fois plus de germes pour infecter la souris par la voie orale que par la voie intrapéritonéale. Ces deux considérations tendent à minimiser l'importance de la voie digestive dans l'infection de l'homme. La cause la plus importante reste l'inhalation de poussières infectantes. La prévention de cette excrétion animale passe par un certain nombre de mesures classiques de prophylaxie sanitaire. En outre, la vaccination, l'antibiothérapie, ou leur association contribuent à diminuer mais ne suppriment pas l'excrétion de Coxiella dans le milieu ambiant. L'application de tout ou partie de ces mesures est de nature à diminuer fortement le contagion humain. MOTS-CLÉS : Fièvre Q. Humain. Coxiella. Maladie transmissible. SUMMARY : The lacteal and placental excretion of Coxiella burnetti (Q Fever) by the cow : importance and prevention. Q Fever, a true zoonosis, comes always from an animal contamination. The causes of human infection are mainly the pulmonary route and at a less degree the oral route. We describe, from a mouse model, a method of quantitative evaluation of the excretion of Coxiella in the milk. Our experiments done on 400 samples of milk of clinically infected cows, show that the mammal excretion is low and irregular. Moreover it needs 10000 times more of Coxiella to the mouse by oral route than by the intraPeritoneal route. These facts seem to minimize the importance of the digestive route in the human infection. The most important cause remains the inhalation of infected dusts. The
est de nature à diminuer fortement le contagion humain. MOTS-CLÉS : Fièvre Q. Humain. Coxiella. Maladie transmissible. SUMMARY : The lacteal and placental excretion of Coxiella burnetti (Q Fever) by the cow : importance and prevention. Q Fever, a true zoonosis, comes always from an animal contamination. The causes of human infection are mainly the pulmonary route and at a less degree the oral route. We describe, from a mouse model, a method of quantitative evaluation of the excretion of Coxiella in the milk. Our experiments done on 400 samples of milk of clinically infected cows, show that the mammal excretion is low and irregular. Moreover it needs 10000 times more of Coxiella to the mouse by oral route than by the intraPeritoneal route. These facts seem to minimize the importance of the digestive route in the human infection. The most important cause remains the inhalation of infected dusts. The prevention of this animal excretion goes through classical steps of sanitary prophylaxis. Moreover vaccination, antibiotherapy, or association of both reduce but do not stop the excretion in the environment. The application of all or of a part of these measures will strongly reduce the human contamination. KEYWORDS (Index Medicus) : Q fever. Human. Coxiella. Communicable diseases. Sheep diseases. BIBLIOGRAPHIE [1] COCHE B. La fièvre Q bovine en France. Le Point vétérinaire, 1981, 12, 95-100. [2] DURAND M. P., STROHL A. L'Infection bovine par l'agent de la fièvre Q. Rec. Med. Vet., 1978, 129, 491-500. [3] DURAND M. P. La fièvre Q. Manual of recommended diagnostic techniques and requirements for biological products of lists A et B diseases. OIE. Paris, Vol II., B007, 1990, 1-8. [4] WOERNLE H., LIMOUZIN C., MULLER K., DURAND M. P. Effets de la vaccination et de l'antibiothérapie sur l'évolution clinique et l'excrétion de Coxiella dans le lait et les sécrétions utérines. Bull. Acad. Vet. France, 1985, 58, 91-100. [5] DUQUESNEL R. La fièvre Q. Programme sanitaire caprin régional du G.D.S. du Centre (Châteauroux) ; et communication personnelle 1992. [6] TAINTURIER D. Métritis en série chez la vache provoquées par la Fièvre Q. Rec. Med. Vet., 1987,
Q fever. Human. Coxiella. Communicable diseases. Sheep diseases. BIBLIOGRAPHIE [1] COCHE B. La fièvre Q bovine en France. Le Point vétérinaire, 1981, 12, 95-100. [2] DURAND M. P., STROHL A. L'Infection bovine par l'agent de la fièvre Q. Rec. Med. Vet., 1978, 129, 491-500. [3] DURAND M. P. La fièvre Q. Manual of recommended diagnostic techniques and requirements for biological products of lists A et B diseases. OIE. Paris, Vol II., B007, 1990, 1-8. [4] WOERNLE H., LIMOUZIN C., MULLER K., DURAND M. P. Effets de la vaccination et de l'antibiothérapie sur l'évolution clinique et l'excrétion de Coxiella dans le lait et les sécrétions utérines. Bull. Acad. Vet. France, 1985, 58, 91-100. [5] DUQUESNEL R. La fièvre Q. Programme sanitaire caprin régional du G.D.S. du Centre (Châteauroux) ; et communication personnelle 1992. [6] TAINTURIER D. Métritis en série chez la vache provoquées par la Fièvre Q. Rec. Med. Vet., 1987, 163, 195-198. [7] BROWN G. L., COLWELL O. C., HOOPER W. L. An outbreak of Q Fever in Staffordshire. J. Hyg., 1968, 66, 649-655. [8] FISHBEIN D., RAOULT D. A cluster of Coxiella burnetii infections associated with exposure to vaccinated goats and their unpasteurized dairy products. Am. J. Trop. Med. Hyg., 1992, 47, 35-40. [9] JOUBERT L., FONTAINE M., BARTOLI M., GARRIGUE G. La fièvre Q ovine, zoonose d'actualité de type professionnel, rural et militaire. Rev. Med. Vet., 1976, 127, 361-381. [10] DUPUIS G., PETITE J., PETER O., VOUILLOZ M. An important outbreak of human Q fever in a Swiss alpine valley. Internat. Jour. Epidemiol, 1987, 16, 282-287. [11] BIBERSTEIN E. L., RIEMANN H. P., et coll. Vaccination of dairy cattle against Q fever : results of field trials. Amer. Jour. Vet. Res., 1977, 38, 189-193. [12] SADECKY E., ABEL J. Vaccination of cattle against Q fever in the Bratislava district. Veterinarni Medicina, 1978, 23, 719-725, et In Vet. Bull, 1979, 49, 5169. [13] ROTH C. D., BAUER K. Prevalence of Q fever in cattle in northern Bavaria and control measures, with particular reference to vaccination. Tierärztliche Umschau., 1986, 41, 197-201. [14] DÖPFER B. Laboratory and field trials of a