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d'autres espèces sporulées et leur conférer temporairement une thermorésistance plus élevée que la leur propre, sans qu'elles acquièrent pour autant la propriété de la produire. La nature chimique de cette substance reste à déterminer. CONCLUSIONS. — 1° La notion classique que Cl. sporogenes résiste en moyenne une heure à l'ébullition est fausse. Sur 54 souches étudiées dont 22 provenaient du sol, 11 de gangrènes gazeuses, 10 de conserves infectées et 11 de divers habitats, nous n'avons trouvé qu'une seule souche dont la thermorésistance était d'une heure à 100°. Sur les 42 souches dont la thermorésistance est inférieure à cette durée, 35 ne résistaient pas plus de quinze minutes à 100° et 7 résistaient de vingt à cinquante minutes à 100°. 11 souches avaient une thermorésistance dépassant six heures à 100°. Parmi ces 11 souches figurent toutes celles qui ont été isolées de conserves infectées (10) et une provenant d'une péritonite. Sur ce total, 9 résistaient de huit heures à huit heures trente à 100° ; quinze minutes à 110° et cinq minutes à 115°. 3° Nous devons désormais considérer comme normales et répondant à l'espèce-type toutes les souches de Cl. sporogenes résistant moins d'une heure à 100° et considérer les souches hautement thermorésistantes comme une variété physiologique : Cl. sporogenes var. stavangerensis. 4° Le contact entre les cultures de Cl. sporogenes var. stavangerensis et de W. perfringens pendant une heure entraîne ce dernier à résister trente minutes à 100°, alors que sa résistance normale est de trois minutes. 5° La substance responsable de ce phénomène d'entraînement se trouve dans les corps microbiens et diffuse dans les cultures. BIBLIOGRAPHIE [1] WEINBERG, NATIVELLE et PRÉVOT. Les microbes anaérobies, 1937, 345. [2] Cité par WEINBERG, NATIVELLE et PRÉVOT. Les microbes anaérobies, 304. [3] M. RAYNAUD. C. R. Acad. Sci., 1947, 225. 543. Tularensis sont dénués de toxicité. Le point de vue auquel nous nous sommes placés diffère de celui des auteurs précédents. Nous avons voulu seulement rechercher si, dans le groupe des Pasteurella auquel on tend à rattacher l'agent de la tularémie, celui-ci se rapprochait, par l'existence ou l'absence d'un antigène complet (Boivin),
souches hautement thermorésistantes comme une variété physiologique : Cl. sporogenes var. stavangerensis. 4° Le contact entre les cultures de Cl. sporogenes var. stavangerensis et de W. perfringens pendant une heure entraîne ce dernier à résister trente minutes à 100°, alors que sa résistance normale est de trois minutes. 5° La substance responsable de ce phénomène d'entraînement se trouve dans les corps microbiens et diffuse dans les cultures. BIBLIOGRAPHIE [1] WEINBERG, NATIVELLE et PRÉVOT. Les microbes anaérobies, 1937, 345. [2] Cité par WEINBERG, NATIVELLE et PRÉVOT. Les microbes anaérobies, 304. [3] M. RAYNAUD. C. R. Acad. Sci., 1947, 225. 543. Tularensis sont dénués de toxicité. Le point de vue auquel nous nous sommes placés diffère de celui des auteurs précédents. Nous avons voulu seulement rechercher si, dans le groupe des Pasteurella auquel on tend à rattacher l'agent de la tularémie, celui-ci se rapprochait, par l'existence ou l'absence d'un antigène complet (Boivin), de Pasteurella sensu stricto qui contient ce principe ou de P. pestis et P. pseudotuberculosis qui en sont dépourvus. D'autre part, était-il possible de mettre en évidence chez P. tularensis un principe toxique que l'on sait présent chez P. avicida et P. pestis, tandis qu'il est très exceptionnel chez P. pseudotuberculosis ? Nos investigations ont porté sur deux souches isolées depuis deux ans en France, l'une de l'homme (souche L), l'autre d'un lièvre (souche C), toutes deux hautement virulentes, mortelles pour la souris à la dose voisine de l'unité. Elles se sont comportées dans nos expériences de façon identique. 1° PRÉSENCE D'UN ANTIGÈNE COMPLET (BOIVIN), NON TOXIQUE, CHEZ P. tularensis. — Des cultures de trois jours de P. tularensis (souche L), sur milieu de Francis et en tubes de Legroux (poids à l'état frais, 1 708 g) sont, après lavage à l'eau physiologique, traitées par la technique de Boivin à l'acide trichloracétique. L'extrait, très opalescent, est dialysé contre de l'eau courante, puis de l'eau distillée, et précipité par addition de 8 volumes d'alcool à 96°. Le précipité après lavage à l'acétone et à l'éther se présente sous l'aspect d'une poudre blanchâtre. Repris par 100 cm3 d'eau physiologique, il s'y dissout
pseudotuberculosis ? Nos investigations ont porté sur deux souches isolées depuis deux ans en France, l'une de l'homme (souche L), l'autre d'un lièvre (souche C), toutes deux hautement virulentes, mortelles pour la souris à la dose voisine de l'unité. Elles se sont comportées dans nos expériences de façon identique. 1° PRÉSENCE D'UN ANTIGÈNE COMPLET (BOIVIN), NON TOXIQUE, CHEZ P. tularensis. — Des cultures de trois jours de P. tularensis (souche L), sur milieu de Francis et en tubes de Legroux (poids à l'état frais, 1 708 g) sont, après lavage à l'eau physiologique, traitées par la technique de Boivin à l'acide trichloracétique. L'extrait, très opalescent, est dialysé contre de l'eau courante, puis de l'eau distillée, et précipité par addition de 8 volumes d'alcool à 96°. Le précipité après lavage à l'acétone et à l'éther se présente sous l'aspect d'une poudre blanchâtre. Repris par 100 cm3 d'eau physiologique, il s'y dissout rapidement en totalité en donnant une solution colloïdale opalescente, mais parfaitement stable. Cet extrait purifié ne donne aucune réaction des protéines, mais une réaction de Molisch positive. Il précipite spécifiquement avec un sérum de tularémique à la dilution de 1/200. L'extrait a été injecté à 3 lapins par voie intraveineuse à doses croissantes (4 doses réparties sur douze jours) sans provoquer aucun trouble ni amaigrissement. Le sérum de ces lapins, prélevé dix jours après la dernière injection, précipitait à 1/200 l'extrait purifié et agglutinait à 1/500 la suspension de P. tularensis utilisée pour le séro-diagnostic de la tularémie. A noter que le sérum de deux de ces lapins donnait une agglutination croisée à 1/50 et 1/10 avec Br. abortus suis, ce qui est courant pour les sérums tularémiques. Une deuxième préparation d'antigène à partir de la souche C nous a fourni un extrait qui s'est comporté chimiquement et sérologiquement comme le précédent. Des essais de toxicité se sont montrés négatifs. Deux lots de souris ont reçu par voie péritonéale des doses variables d'extrait trichloracétique purifié, la plus faible correspondant à 1,7 mg de microbes frais, la plus forte à 17 mg. Tous ces animaux sont restés indemnes. La sensibilité cutanée
à doses croissantes (4 doses réparties sur douze jours) sans provoquer aucun trouble ni amaigrissement. Le sérum de ces lapins, prélevé dix jours après la dernière injection, précipitait à 1/200 l'extrait purifié et agglutinait à 1/500 la suspension de P. tularensis utilisée pour le séro-diagnostic de la tularémie. A noter que le sérum de deux de ces lapins donnait une agglutination croisée à 1/50 et 1/10 avec Br. abortus suis, ce qui est courant pour les sérums tularémiques. Une deuxième préparation d'antigène à partir de la souche C nous a fourni un extrait qui s'est comporté chimiquement et sérologiquement comme le précédent. Des essais de toxicité se sont montrés négatifs. Deux lots de souris ont reçu par voie péritonéale des doses variables d'extrait trichloracétique purifié, la plus faible correspondant à 1,7 mg de microbes frais, la plus forte à 17 mg. Tous ces animaux sont restés indemnes. La sensibilité cutanée du lapin normal vis-à-vis de cet antigène a été éprouvée suivant les modalités du test utilisé par G. Larson. Injectée dans le derme du flanc, après épilation, une dose d'extrait correspondant à 42,5 mg de microbe frais n'a produit qu'une papule modérée disparaissant en moins de soixante-douze heures. 2° ABSENCE DE PRINCIPE TOXIQUE DANS LES EXTRAITS TOTAUX MICROBIENS. — Des cultures de trois jours de P. tularensis sur milieu de Francis au sang de lapin d'un côté, à l'extrait globulaire de l'autre, sont récoltées sur 14 boîtes de Legroux et mises en suspension en eau distillée (10 cm3 par boîte). Ce matériel est soumis à trois congélations et décongélations successives suivant le procédé Gory-Grasset. On obtient un extrait très trouble que la centrifugation n'éclaircit qu'à peine. Les germes ne sont pas tous tués, comme le prouve l'inoculation à la souris qui succombe en quarante-huit heures de septicémie tularémique. Une portion de l'extrait est recouverte de toluol et stérile après trois jours. Une autre est filtrée sur L3. 6 souris injectées par voie péritonéale avec chacun de ces extraits, 2 avec 1/20, 2 avec 3/10, 2 avec 5/10 de centimètre cube restent indemnes. Dans des conditions expérimentales identiques, les extraits de
DE PRINCIPE TOXIQUE DANS LES EXTRAITS TOTAUX MICROBIENS. — Des cultures de trois jours de P. tularensis sur milieu de Francis au sang de lapin d'un côté, à l'extrait globulaire de l'autre, sont récoltées sur 14 boîtes de Legroux et mises en suspension en eau distillée (10 cm3 par boîte). Ce matériel est soumis à trois congélations et décongélations successives suivant le procédé Gory-Grasset. On obtient un extrait très trouble que la centrifugation n'éclaircit qu'à peine. Les germes ne sont pas tous tués, comme le prouve l'inoculation à la souris qui succombe en quarante-huit heures de septicémie tularémique. Une portion de l'extrait est recouverte de toluol et stérile après trois jours. Une autre est filtrée sur L3. 6 souris injectées par voie péritonéale avec chacun de ces extraits, 2 avec 1/20, 2 avec 3/10, 2 avec 5/10 de centimètre cube restent indemnes. Dans des conditions expérimentales identiques, les extraits de P. pestis tuent toujours la souris à la dose de 1/10 au moins. Nous savons aussi que la souris supporte sans dommage de fortes doses de P. tularensis tuée par chauffage, tandis qu'aux mêmes doses P. pestis la tue par intoxication. DISCUSSION ET CONCLUSION. — La présence d'un antigène complet (Boivin) sépare P. tularensis de P. pestis et P. pseudotuberculosis et la rapproche du microbe type du genre Pasteurella, P. avicida. L'absence de toxicité pour la souris de ce complexe est un fait intéressant, unique croyons-nous, jusqu'à présent, et que confirme la non-toxicité des extraits totaux de ce microorganisme. Si le terme d'endotoxine usité pour désigner l'antigène 0 complet des germes Gram-négatif, Salmonelles et autres, se conçoit puisque ce complexe antigénique est pathogène, il ne saurait convenir à un extrait microbien qui ne l'est pas. Les réactions que les extraits de P. tularensis provoquent sont essentiellement de nature allergique comme l'a bien montré Lavergne. La « tularine » n'est donc pas une endotoxine au sens littéral du mot. Ces conclusions n'infirment en rien celles des auteurs qui, comme H. Drieux et coll., attribuent à une toxine fortement nécrosante les lésions constatées à l'examen histopathologique des organes des animaux infectés expérimentalement.
(Boivin) sépare P. tularensis de P. pestis et P. pseudotuberculosis et la rapproche du microbe type du genre Pasteurella, P. avicida. L'absence de toxicité pour la souris de ce complexe est un fait intéressant, unique croyons-nous, jusqu'à présent, et que confirme la non-toxicité des extraits totaux de ce microorganisme. Si le terme d'endotoxine usité pour désigner l'antigène 0 complet des germes Gram-négatif, Salmonelles et autres, se conçoit puisque ce complexe antigénique est pathogène, il ne saurait convenir à un extrait microbien qui ne l'est pas. Les réactions que les extraits de P. tularensis provoquent sont essentiellement de nature allergique comme l'a bien montré Lavergne. La « tularine » n'est donc pas une endotoxine au sens littéral du mot. Ces conclusions n'infirment en rien celles des auteurs qui, comme H. Drieux et coll., attribuent à une toxine fortement nécrosante les lésions constatées à l'examen histopathologique des organes des animaux infectés expérimentalement. Un raisonnement analogue est aussi bien valable pour la pseudo-tuberculose, comme nous l'avons fait remarquer ailleurs; le comportement in vitro et in vivo d'un germe pathogène n'est pas nécessairement identique. RÉSUMÉ. — On a mis en évidence, chez Pasteurella tularensis, la présence d'un antigène complet, type Boivin, qui est atoxique. Les extraits totaux du microbe sont eux-mêmes dépourvus de toxicité. PAILLÉ et G. THIÉRY. Rec. Méd. vét. Ecole Alfort 1949 423, 816. Que le Dr Lee Foshay, qui a bien voulu nous adresser en communication la thèse de son élève P. S. Nicholson, travail non publié, veuille bien trouver ici l'expression de notre vive gratitude. L'ACTION DE L'AURÉOMYCINE SUR LA CULTURE D'UN STAPHYLOCOQUE OBSERVÉE AU MICROBIOPHOTOMÈTRE par EWALD EDLINGER et MICHEL FAGUET. (Institut Pasteur. Service du Bactériophage.) L'étude de la sensibilité à l'auréomycine des différents microorganismes montre de très grandes différences selon les auteurs. Paine et coll. [1] indiquent que la concentration bactériostatique est de 1 à 2 µg par centimètre cube pour le staphylocoque. Pour Price et coll. [2], cette dose est de 0,09-25 µg par centimètre cube. Bryer et coll. [3] ont constaté que 0,6 µg par centimètre cube d'auréomycine inhibait le staphylocoque. Lankford et Lacy [4] utilisent
Les extraits totaux du microbe sont eux-mêmes dépourvus de toxicité. PAILLÉ et G. THIÉRY. Rec. Méd. vét. Ecole Alfort 1949 423, 816. Que le Dr Lee Foshay, qui a bien voulu nous adresser en communication la thèse de son élève P. S. Nicholson, travail non publié, veuille bien trouver ici l'expression de notre vive gratitude. L'ACTION DE L'AURÉOMYCINE SUR LA CULTURE D'UN STAPHYLOCOQUE OBSERVÉE AU MICROBIOPHOTOMÈTRE par EWALD EDLINGER et MICHEL FAGUET. (Institut Pasteur. Service du Bactériophage.) L'étude de la sensibilité à l'auréomycine des différents microorganismes montre de très grandes différences selon les auteurs. Paine et coll. [1] indiquent que la concentration bactériostatique est de 1 à 2 µg par centimètre cube pour le staphylocoque. Pour Price et coll. [2], cette dose est de 0,09-25 µg par centimètre cube. Bryer et coll. [3] ont constaté que 0,6 µg par centimètre cube d'auréomycine inhibait le staphylocoque. Lankford et Lacy [4] utilisent une méthode turbidimétrique : la concentration inhibant la croissance dans la proportion de 50 p. 100, est, en dix-huit heures, pour la souche la plus sensible, de 0,012 µg et pour la plus résistante de 0,033 µg par centimètre cube. Beigelmann [5] recherche les causes de ces divergences et obtient des résultats sensiblement comparables à ceux de Lankford et Lacy [4]. Il attire l'attention sur le moment de la lecture qui serait responsable du désaccord. Chandler et Bliss [6], Bliss et Chandler [7], Bliss et Todd [8] signalent que l'action de l'auréomycine n'est que transitoire. A une courte période de bactériostase succéderait une nouvelle phase de croissance. Il s'ensuit que le temps d'observation est d'une très grande importance. Mais les auteurs qui utilisent la méthode des cylindres sur boîte de gélose ne peuvent obtenir un résultat visible qu'après l'apparition d'un gazon bactérien suffisant. A ce moment la nouvelle croissance est déjà amorcée. Donc, la méthode des dilutions est généralement préférable, surtout lorsqu'on utilise un appareil à mesurer la turbidité. Cependant, tous les auteurs cités constatent une période bactériostatique à la suite de l'introduction de l'antibiotique dans la culture bactérienne. Pour expliquer l'apparition de la nouvelle croissance, plusieurs hypothèses sont avancées
des résultats sensiblement comparables à ceux de Lankford et Lacy [4]. Il attire l'attention sur le moment de la lecture qui serait responsable du désaccord. Chandler et Bliss [6], Bliss et Chandler [7], Bliss et Todd [8] signalent que l'action de l'auréomycine n'est que transitoire. A une courte période de bactériostase succéderait une nouvelle phase de croissance. Il s'ensuit que le temps d'observation est d'une très grande importance. Mais les auteurs qui utilisent la méthode des cylindres sur boîte de gélose ne peuvent obtenir un résultat visible qu'après l'apparition d'un gazon bactérien suffisant. A ce moment la nouvelle croissance est déjà amorcée. Donc, la méthode des dilutions est généralement préférable, surtout lorsqu'on utilise un appareil à mesurer la turbidité. Cependant, tous les auteurs cités constatent une période bactériostatique à la suite de l'introduction de l'antibiotique dans la culture bactérienne. Pour expliquer l'apparition de la nouvelle croissance, plusieurs hypothèses sont avancées : apparition d'une culture résistante, mais surtout destruction de l'antibiotique qui est très sensible à la réaction alcaline du milieu et aux températures élevées (Dornbush et coll. [9], Aitoff [10], Henneberg et Waterstrat [11]). Cependant, les observations faites dans un autre but (Faguet et Edlinger [12]) nous avaient conduits à penser que le microbiophotomètre de M. Faguet [13], par son enregistrement continu des densités optiques, devait se prêter d'une manière particulièrement adéquate à l'observation des phénomènes qui se produisent lorsque l'auréomycine est ajoutée à une culture bactérienne. Expériences : Les 6 cuves de l'appareil reçoivent chacune 20 cm3 d'eau peptonée (à 1 p. 100 de peptone UCLAF et 0,1 p. 100 de glucose préalablement ensemencée avec environ 500 000 germes par centimètre cube provenant d'une culture de dix-huit heures de staphylocoque Twort sur gélose inclinée, à 37° C. L'auréomycine utilisée dans nos expériences provenait d'échantillons commerciaux (auréomycine Lederlé) en ampoule contenant 100 mg de poudre ; nous avons dilué cette quantité dans 100 cm3 d'eau bidistillée stérile. Cette solution-mère et les dilutions appropriées à nos expériences étaient conservées à la glacière et n'étaient utilisées que pendant quinze jours. Des 6 cuves de l'appareil, une était réservée à la culture-témoin. Les
penser que le microbiophotomètre de M. Faguet [13], par son enregistrement continu des densités optiques, devait se prêter d'une manière particulièrement adéquate à l'observation des phénomènes qui se produisent lorsque l'auréomycine est ajoutée à une culture bactérienne. Expériences : Les 6 cuves de l'appareil reçoivent chacune 20 cm3 d'eau peptonée (à 1 p. 100 de peptone UCLAF et 0,1 p. 100 de glucose préalablement ensemencée avec environ 500 000 germes par centimètre cube provenant d'une culture de dix-huit heures de staphylocoque Twort sur gélose inclinée, à 37° C. L'auréomycine utilisée dans nos expériences provenait d'échantillons commerciaux (auréomycine Lederlé) en ampoule contenant 100 mg de poudre ; nous avons dilué cette quantité dans 100 cm3 d'eau bidistillée stérile. Cette solution-mère et les dilutions appropriées à nos expériences étaient conservées à la glacière et n'étaient utilisées que pendant quinze jours. Des 6 cuves de l'appareil, une était réservée à la culture-témoin. Les autres recevaient différentes quantités d'auréomycine. Résultat des expériences : La figure 1 montre une partie de ces expériences. La courbe 1 représente les changements de la densité optique au cours de la croissance. A une courte phase de latence succède la phase exponentielle à laquelle fait suite la phase d'arrêt de la croissance. Les cuves 2, 3, 4 et 5 ont reçu respectivement 0,01, 0,1, 1 et 10 µg d'auréomycine par centimètre cube. Les courbes correspondantes montrent une phase de latence d'une durée sensiblement égale à celle de la courbe de la culture témoin, mais ensuite, la densité optique n'augmente qu'à un rythme beaucoup plus lent. Les maxima sont plus bas que le maximum du témoin. En traçant pour chaque courbe la tangente correspondant à des points situés sur une droite parallèle à l'axe des abscisses et se trouvant à une distance a de cet axe, et en calculant les valeurs respectives de ces tangentes, on constate que ces valeurs varient régulièrement avec la concentration en auréomycine. Nous avons ainsi mesuré l'angle a obtenu dans toutes nos expériences. Les résultats sont représentés sur la figure 2. En ordonnées figurent les valeurs des tangentes a, en abscisses les concentrations en auréomycine
de la croissance. Les cuves 2, 3, 4 et 5 ont reçu respectivement 0,01, 0,1, 1 et 10 µg d'auréomycine par centimètre cube. Les courbes correspondantes montrent une phase de latence d'une durée sensiblement égale à celle de la courbe de la culture témoin, mais ensuite, la densité optique n'augmente qu'à un rythme beaucoup plus lent. Les maxima sont plus bas que le maximum du témoin. En traçant pour chaque courbe la tangente correspondant à des points situés sur une droite parallèle à l'axe des abscisses et se trouvant à une distance a de cet axe, et en calculant les valeurs respectives de ces tangentes, on constate que ces valeurs varient régulièrement avec la concentration en auréomycine. Nous avons ainsi mesuré l'angle a obtenu dans toutes nos expériences. Les résultats sont représentés sur la figure 2. En ordonnées figurent les valeurs des tangentes a, en abscisses les concentrations en auréomycine en notation semi-logarithmique. Les valeurs s'échelonnent sur une courbe d'allure régulière. Discussion. — Nos expériences sont en contradiction avec les résultats obtenus par les auteurs cités plus haut : nous n'avons pas retrouvé la phase bactériostatique de l'auréomycine précédant l'apparition d'une nouvelle croissance qu'ils ont décrite. Nous avons constaté que la culture microbienne présentait une croissance continue. Cette croissance est moins active et n'atteint pas le même degré de turbidité que la culture non traitée par l'antibiotique. Nous croyons que cette divergence essentielle est due aux différences des méthodes utilisées, tandis que les autres auteurs ne font qu'une lecture turbidimétrique à un temps donné ou, dans le cas le plus favorable, à des intervalles de deux à quatre heures (Beigelmann [5]), nous avons enregistré, grâce au microbiophotomètre, le développement continu de la culture. Ainsi, nous avons pu constater l'élévation continuelle de la courbe de croissance et l'influence de la concentration en auréomycine sur le niveau atteint. De cette constatation, nous nous croyons autorisés à suggérer l'utilisation du microbiophotomètre comme méthode de titrage de l'auréomycine. [1] Paine et coll., J. Clin. Invest. 1946, 25, p. 280. [2] Price et coll., Lancet 1948, 1, p. 67. [3] Bryer et coll., Brit. Med.