jeanflop/post_ocr_correction2 huggingface dataset:
globulines dans la réaction de Bordet-Wassermann. Cette interprétation est manifestement inexacte et il est à peine besoin de faire remarquer qu'une propriété thermolabile des globulines ne peut être invoquée pour expliquer le mécanisme d'une réaction qui se pratique exclusivement sur du sérum chauffé. La seule conclusion qu'on puisse tirer de ces résultats d'expériences est que les globulines jouent un rôle essentiel dans les réactions non spécifiques auxquelles on s'expose en pratiquant la réaction de fixation sur un sérum non chauffé, c'est-à-dire dans des conditions différentes de celles de la réaction de Bordet-Wassermann. Les conclusions de nos expériences sur le rôle inhibiteur de la fraction précipitable par l'acide chlorhydrique nous ont engagés à étudier la possibilité d'appliquer dans la pratique courante du séro-diagnostic de la syphilis le procédé que nous avions utilisé pour pratiquer la réaction de Bordet-Wassermann sur la fraction non précipitable des sérums chauffés. Nous avons recherché pour chacun des temps opératoires les conditions d'expériences qui présentent le plus de garanties pour l'exactitude des résultats et le plus d'avantages pour la commodité des manipulations. Élimination de la fraction précipitable. La première question que nous avons examinée a été de déterminer quels sont le titre et la quantité d'acide chlorhydrique les plus avantageux à employer pour précipiter le sérum. Nous avons étudié l'influence de ces 2 facteurs sur l'abondance de la précipitation et la sensibilité de la réaction de Bordet-Wassermann. 88 sérums dont 45 syphilitiques ont été précipités simultanément par plusieurs procédés différents : addition de 8, 9, 10 ou 11 volumes d'acide chlorhydrique N/250 ou N/300. L'abondance des fractions précipitées a été évaluée en prenant pour base la densité optique du milieu, mesurée à l'aide du photomètre de Vernes, Bricq et Yvon. La réaction de Bordet-Wassermann a été pratiquée sur les fractions non précipitables suivant la technique précédemment indiquée. Nous avons constaté que : 1° L'abondance de la précipitation varie suivant les sérums lorsqu'on emploie un titre et une quantité fixes d'acide chlorhydrique; elle varie aussi pour un même sérum suivant le titre et la quantité d'acide utilisés. La précipitation la plus abondante correspond pour la majorité des sérums
les plus avantageux à employer pour précipiter le sérum. Nous avons étudié l'influence de ces 2 facteurs sur l'abondance de la précipitation et la sensibilité de la réaction de Bordet-Wassermann. 88 sérums dont 45 syphilitiques ont été précipités simultanément par plusieurs procédés différents : addition de 8, 9, 10 ou 11 volumes d'acide chlorhydrique N/250 ou N/300. L'abondance des fractions précipitées a été évaluée en prenant pour base la densité optique du milieu, mesurée à l'aide du photomètre de Vernes, Bricq et Yvon. La réaction de Bordet-Wassermann a été pratiquée sur les fractions non précipitables suivant la technique précédemment indiquée. Nous avons constaté que : 1° L'abondance de la précipitation varie suivant les sérums lorsqu'on emploie un titre et une quantité fixes d'acide chlorhydrique; elle varie aussi pour un même sérum suivant le titre et la quantité d'acide utilisés. La précipitation la plus abondante correspond pour la majorité des sérums à l'addition de 10 volumes d'acide chlorhydrique N/300 ou 9 volumes d'acide N/250. La précipitation obtenue par addition des 9 volumes d'acide chlorhydrique N/300 utilisés pour nos recherches reste généralement incomplète et n'entraîne qu'une fraction souvent assez faible de la totalité des globulines précipitables par cet acide dans d'autres conditions d'expériences. Les variations de l'abondance du précipité s'expliquent de la façon suivante : La quantité de globuline précipitée dépend à la fois du taux de dilution du sérum (Lecomte du Nouy [29], Boutaric et Doladille [30]) et de la concentration en ions H du sérum dilué (Doladille [31]). Elle atteint un maximum lorsque le pH du sérum additionné d'acide chlorhydrique acquiert une valeur optima qui dépend du taux de dilution et correspond au point isoélectrique des globulines dans le milieu considéré. L'abondance du précipité diminue rapidement dès que le pH s'écarte sensiblement de cette valeur, et la précipitation cesse de se produire lorsqu'il dépasse une certaine limite supérieure ou une certaine limite inférieure. D'où il résulte que : 1° Toute variation, même peu importante du titre et de la quantité d'acide mis en œuvre fait nécessairement varier l'abondance du précipité puisqu'elle modifie le taux de dilution et le pH du
d'expériences. Les variations de l'abondance du précipité s'expliquent de la façon suivante : La quantité de globuline précipitée dépend à la fois du taux de dilution du sérum (Lecomte du Nouy [29], Boutaric et Doladille [30]) et de la concentration en ions H du sérum dilué (Doladille [31]). Elle atteint un maximum lorsque le pH du sérum additionné d'acide chlorhydrique acquiert une valeur optima qui dépend du taux de dilution et correspond au point isoélectrique des globulines dans le milieu considéré. L'abondance du précipité diminue rapidement dès que le pH s'écarte sensiblement de cette valeur, et la précipitation cesse de se produire lorsqu'il dépasse une certaine limite supérieure ou une certaine limite inférieure. D'où il résulte que : 1° Toute variation, même peu importante du titre et de la quantité d'acide mis en œuvre fait nécessairement varier l'abondance du précipité puisqu'elle modifie le taux de dilution et le pH du milieu de précipitation ; 2° L'abondance du précipité obtenu en ajoutant uniformément tous les sérums d'une même quantité d'acide chlorhydrique d'un titre déterminé varie nécessairement suivant les sérums pour deux raisons : La première est que le pH du milieu de précipitation adopté varie suivant les sérums dans les limites assez larges. En mesurant ce pH par la méthode électrométrique (procédé à la quinhydrone) pour 30 sérums additionnés de 9 volumes d'acide chlorhydrique N/300, nous avons trouvé des valeurs échelonnées entre 6,35 et 6,71. La valeur moyenne était de 6,49 pour l'ensemble des sérums étudiés. La deuxième raison est que les globulines du sérum subissent sous certaines influences physiologiques ou pathologiques des altérations qui s'accompagnent de déplacements parfois importants de leur point isoélectrique (Vès et Coulon [32], Rossier [33]). 2° La sensibilité de la réaction de Bordet-Wassermann pratiquée sur la fraction non précipitable du sérum ne varie pas lorsqu'on emploie 8 volumes d'acide N/300 au lieu des 9 volumes utilisés pour nos expériences; elle diminue très légèrement lorsqu'on emploie 9 volumes d'acide N/250 ou 10 volumes d'acide N/300. Aucun rapport précis n'est apparu entre l'abondance de la précipitation et la sensibilité de la réaction de Bordet-Wassermann. La seule remarque qu'il
assez larges. En mesurant ce pH par la méthode électrométrique (procédé à la quinhydrone) pour 30 sérums additionnés de 9 volumes d'acide chlorhydrique N/300, nous avons trouvé des valeurs échelonnées entre 6,35 et 6,71. La valeur moyenne était de 6,49 pour l'ensemble des sérums étudiés. La deuxième raison est que les globulines du sérum subissent sous certaines influences physiologiques ou pathologiques des altérations qui s'accompagnent de déplacements parfois importants de leur point isoélectrique (Vès et Coulon [32], Rossier [33]). 2° La sensibilité de la réaction de Bordet-Wassermann pratiquée sur la fraction non précipitable du sérum ne varie pas lorsqu'on emploie 8 volumes d'acide N/300 au lieu des 9 volumes utilisés pour nos expériences; elle diminue très légèrement lorsqu'on emploie 9 volumes d'acide N/250 ou 10 volumes d'acide N/300. Aucun rapport précis n'est apparu entre l'abondance de la précipitation et la sensibilité de la réaction de Bordet-Wassermann. La seule remarque qu'il soit possible de faire est que l'intensité de la réaction fournie par la fraction non précipitable de certains sérums syphilitiques diminue très légèrement lorsque la précipitation augmente d'abondance. Nous avons conclu de cette étude qu'il n'y avait pas lieu de modifier la proportion de 9 volumes d'acide chlorhydrique N/300 pour 1 volume de sérum adopté dès le début de nos recherches. La deuxième question que nous avons examinée a été de déterminer s'il est préférable de chauffer les sérums avant ou après l'élimination de la fraction précipitable. Les expériences que nous avons faites à ce sujet ont montré que : 1° l'abondance de la précipitation varie légèrement suivant que le sérum est ou non préalablement chauffé; 2° les résultats de la réaction de Bordet-Wassermann sont exactement les mêmes lorsqu'on opère sur la fraction non précipitable d'un sérum chauffé avant ou après l'élimination de la fraction précipitable. D'où il résulte que l'opérateur peut choisir à son gré de chauffer le sérum avant de le précipiter ou de précipiter le sérum avant de chauffer la fraction non précipitable (diluée onze fois en milieu neutre et isotonique). Lorsqu'on doit opérer sur un grand nombre de sérums, il est préférable de chauffer le sérum
1 volume de sérum adopté dès le début de nos recherches. La deuxième question que nous avons examinée a été de déterminer s'il est préférable de chauffer les sérums avant ou après l'élimination de la fraction précipitable. Les expériences que nous avons faites à ce sujet ont montré que : 1° l'abondance de la précipitation varie légèrement suivant que le sérum est ou non préalablement chauffé; 2° les résultats de la réaction de Bordet-Wassermann sont exactement les mêmes lorsqu'on opère sur la fraction non précipitable d'un sérum chauffé avant ou après l'élimination de la fraction précipitable. D'où il résulte que l'opérateur peut choisir à son gré de chauffer le sérum avant de le précipiter ou de précipiter le sérum avant de chauffer la fraction non précipitable (diluée onze fois en milieu neutre et isotonique). Lorsqu'on doit opérer sur un grand nombre de sérums, il est préférable de chauffer le sérum entier afin de réduire l'encombrement des tubes qui doivent être placés au bain-marie. Neutralisation de la fraction non précipitable. Un autre problème était de déterminer à quel pH il convient d'amener la fraction non précipitable du sérum pour y pratiquer la réaction de Bordet-Wassermann avec le maximum d'avantages. Nous avons étudié dans cette intention l'influence des variations du pH de la fraction non précipitable sur la spécificité et la sensibilité de la réaction. Les résultats que nous avons observés concordent généralement avec les données déjà publiées par Sierakowski et Zablocki [34], qui ont étudié l'influence des variations du pH sur la réaction de Bordet-Wassermann pratiquée dans le sérum entier. Voici ce que nous avons constaté : 1° La spécificité de la réaction de Bordet-Wassermann est intégralement conservée lorsque le pli de la fraction non précipitable est compris entre 7 et 9; elle diminue très sensiblement dès qu'il s'abaisse au-dessous de 7 et devient complètement nulle lorsqu'il atteint 6,6 ou 6,5; 2° La sensibilité de la réaction n'est pas modifiée lorsque le pH de la fraction non précipitable varie entre 7 et 7,8; elle diminue lorsqu'il est compris entre 8 et 9. D'où il résulte que les valeurs de pH comprises
étudié dans cette intention l'influence des variations du pH de la fraction non précipitable sur la spécificité et la sensibilité de la réaction. Les résultats que nous avons observés concordent généralement avec les données déjà publiées par Sierakowski et Zablocki [34], qui ont étudié l'influence des variations du pH sur la réaction de Bordet-Wassermann pratiquée dans le sérum entier. Voici ce que nous avons constaté : 1° La spécificité de la réaction de Bordet-Wassermann est intégralement conservée lorsque le pli de la fraction non précipitable est compris entre 7 et 9; elle diminue très sensiblement dès qu'il s'abaisse au-dessous de 7 et devient complètement nulle lorsqu'il atteint 6,6 ou 6,5; 2° La sensibilité de la réaction n'est pas modifiée lorsque le pH de la fraction non précipitable varie entre 7 et 7,8; elle diminue lorsqu'il est compris entre 8 et 9. D'où il résulte que les valeurs de pH comprises entre 7 et 7,8 correspondent au maximum de sensibilité qui puisse être obtenu sans diminuer la valeur spécifique de la réaction. Nous avons conclu de cette étude : 1° Qu'il n'y avait pas lieu de modifier la valeur de 7,2 adoptée dès le début de nos recherches pour le pli de la fraction non précipitable; 2° Qu'il était indispensable de prendre des garanties contre les erreurs auxquelles on s'exposerait en pratiquant la réaction de Bordet-Wassermann sur une fraction non précipitable dont le pH serait sensiblement inférieur à 7 ou supérieur à 8. Au cours de nos recherches sur le rôle des globulines dans la réaction de Bordet-Wassermann nous avions dû, pour éviter de telles erreurs, contrôler pour chaque sérum et corriger au besoin le pH de la fraction non précipitable préalablement additionnée d'une proportion uniforme de soude. Ce procédé nous a semblé peu pratique pour opérer sur un grand nombre de sérums et nous l'avons modifié de la façon suivante : Au lieu de soude, nous ajoutons à la fraction non précipitable un tampon de phosphates convenablement choisi qui amène uniformément le pH à 7,2 pour tous les sérums. Il devient inutile, dans ces conditions, de contrôler dans chaque cas
de la fraction non précipitable; 2° Qu'il était indispensable de prendre des garanties contre les erreurs auxquelles on s'exposerait en pratiquant la réaction de Bordet-Wassermann sur une fraction non précipitable dont le pH serait sensiblement inférieur à 7 ou supérieur à 8. Au cours de nos recherches sur le rôle des globulines dans la réaction de Bordet-Wassermann nous avions dû, pour éviter de telles erreurs, contrôler pour chaque sérum et corriger au besoin le pH de la fraction non précipitable préalablement additionnée d'une proportion uniforme de soude. Ce procédé nous a semblé peu pratique pour opérer sur un grand nombre de sérums et nous l'avons modifié de la façon suivante : Au lieu de soude, nous ajoutons à la fraction non précipitable un tampon de phosphates convenablement choisi qui amène uniformément le pH à 7,2 pour tous les sérums. Il devient inutile, dans ces conditions, de contrôler dans chaque cas le pli de la fraction de sérum utilisée pour la séro-réaction. Les petites erreurs d'expérience dans la préparation ou la mesure des réactifs ne peuvent en aucun cas faire varier le pli de la fraction non précipitable suffisamment pour fausser les résultats de la réaction de Bordet-Wassermann. Technique. Voici les détails d'exécution du mode opératoire que nous avons finalement adopté. RÉACTION DE BORDET-WASSERMANN DANS LE SÉRUM 1° PRÉPARATION DE LA FRACTION NON PRÉCIPITABLE DU SÉRUM. — Tous les sérums non altérés peuvent être utilisés même s'ils sont lactescents ou teintés d'hémoglobine; il est inutile de les centrifuger avant de les précipiter. On commence par chauffer 1 volume (habituellement 2 c. c. 5) de sérum à 56° pendant trente minutes; puis, on ajoute 9 volumes d'acide chlorhydrique N/300. On mélange et on abandonne pendant au moins une heure à la température du laboratoire. La durée de cette attente peut sans inconvénient être portée à vingt-quatre heures à condition de placer les sérums en glacière pendant la précipitation. On centrifuge ensuite à 3.000 tours par minute pendant trois à quatre minutes; l'adhérence du culot rend la décantation très facile et permet de recueillir la totalité du liquide surnageant. Ce liquide est ensuite
détails d'exécution du mode opératoire que nous avons finalement adopté. RÉACTION DE BORDET-WASSERMANN DANS LE SÉRUM 1° PRÉPARATION DE LA FRACTION NON PRÉCIPITABLE DU SÉRUM. — Tous les sérums non altérés peuvent être utilisés même s'ils sont lactescents ou teintés d'hémoglobine; il est inutile de les centrifuger avant de les précipiter. On commence par chauffer 1 volume (habituellement 2 c. c. 5) de sérum à 56° pendant trente minutes; puis, on ajoute 9 volumes d'acide chlorhydrique N/300. On mélange et on abandonne pendant au moins une heure à la température du laboratoire. La durée de cette attente peut sans inconvénient être portée à vingt-quatre heures à condition de placer les sérums en glacière pendant la précipitation. On centrifuge ensuite à 3.000 tours par minute pendant trois à quatre minutes; l'adhérence du culot rend la décantation très facile et permet de recueillir la totalité du liquide surnageant. Ce liquide est ensuite mesuré et additionné d'un dixième de son volume de la solution suivante : 2 M Solution de phosphate monopotassique -p-, soit 18 gr. 156 par litre, en centimètres cubes 65 2 M Solution de phosphate disodique 211*0 -p, soit 23 gr. 752 par litre, en centimètres cubes 435 Chlorure de sodium, en grammes 85 Eau distillée quantité suffisante pour (centimètres cubes) . 1.000 Lorsqu'on opère simultanément sur plusieurs sérums précipités et centrifugés dans des conditions identiques, il n'est pas nécessaire de mesurer pour chaque sérum la quantité de liquide recueillie après décantation totale; cette quantité varie si peu d'un cas à l'autre qu'il n'y a aucun inconvénient à la considérer comme invariable. La petite erreur ainsi commise ne peut avoir aucune influence sur les résultats de la séroréaction. Les phosphates nécessaires pour préparer cette solution sont vendus dans le commerce sous la désignation de « phosphates pour la détermination du pli ». Ils doivent être conservés à l'abri de l'humidité dans des flacons soigneusement bouchés. Il est prudent de vérifier la perte de poids subie après calcination qui doit être de 13,23 p. 100 pour le phosphate monopotassique et de 25.28 p. 100 pour le phosphate disodique 2H2O. Les produits
sodium, en grammes 85 Eau distillée quantité suffisante pour (centimètres cubes) . 1.000 Lorsqu'on opère simultanément sur plusieurs sérums précipités et centrifugés dans des conditions identiques, il n'est pas nécessaire de mesurer pour chaque sérum la quantité de liquide recueillie après décantation totale; cette quantité varie si peu d'un cas à l'autre qu'il n'y a aucun inconvénient à la considérer comme invariable. La petite erreur ainsi commise ne peut avoir aucune influence sur les résultats de la séroréaction. Les phosphates nécessaires pour préparer cette solution sont vendus dans le commerce sous la désignation de « phosphates pour la détermination du pli ». Ils doivent être conservés à l'abri de l'humidité dans des flacons soigneusement bouchés. Il est prudent de vérifier la perte de poids subie après calcination qui doit être de 13,23 p. 100 pour le phosphate monopotassique et de 25.28 p. 100 pour le phosphate disodique 2H2O. Les produits qui renferment un excès d'eau peuvent être utilisés à condition d'en tenir compte dans la préparation des solutions. La liqueur obtenue après addition de la solution chlorurée phosphatée est prête à servir à la recherche de la réaction de Bordet-Wassermann; elle renferme la fraction non précipitable du sérum diluée onze fois dans un milieu isoionique de pH=7,2. 2° RÉACTION DE BORDET-WASSERMANN. — Nous suivons pour la réaction de fixation la technique décrite par Calmette et Massol. Titrage préalable de l'alexine. — L'eau salée utilisée pour ce titrage est amenée au pH 7,2 par addition d'un vingtième de volume du tampon suivant : 2 M Solution de phosphate monopotassique -.-2-, en centimètres cubes 135 2 M Solution de phosphate disodique 211*0 -.-2-, en centimètres cubes 365 Des quantités d'alexine croissant de 0,001 à 0,015 sont diluées dans cette eau salée sous un volume uniforme de 3 centimètres cubes et placées pendant une heure dans un bain-marie à 37°. Chaque tube reçoit ensuite 0 c. c. 2 de globules de mouton à 25 p. 100 sensibilisés par 20 unités de sérum hémolytique de cheval; le portoir est replacé pendant trente minutes dans le bain-marie. La lecture du résultat est faite après deux
fois dans un milieu isoionique de pH=7,2. 2° RÉACTION DE BORDET-WASSERMANN. — Nous suivons pour la réaction de fixation la technique décrite par Calmette et Massol. Titrage préalable de l'alexine. — L'eau salée utilisée pour ce titrage est amenée au pH 7,2 par addition d'un vingtième de volume du tampon suivant : 2 M Solution de phosphate monopotassique -.-2-, en centimètres cubes 135 2 M Solution de phosphate disodique 211*0 -.-2-, en centimètres cubes 365 Des quantités d'alexine croissant de 0,001 à 0,015 sont diluées dans cette eau salée sous un volume uniforme de 3 centimètres cubes et placées pendant une heure dans un bain-marie à 37°. Chaque tube reçoit ensuite 0 c. c. 2 de globules de mouton à 25 p. 100 sensibilisés par 20 unités de sérum hémolytique de cheval; le portoir est replacé pendant trente minutes dans le bain-marie. La lecture du résultat est faite après deux heures d'attente à la température du laboratoire. La plus petite dose qui suffit à assurer l'hémolyse totale est prise pour unité d'alexine; elle est généralement comprise entre 0,005 et 0,012. Réaction de fixation. — La fraction non précipitable est employée uniformément à la dose de 3 centimètres cubes correspondant à 0 c. c. 27 de sérum entier. L'antigène de Bordet-Ruelens est employé après l'évaporation au bain-marie à 37°. Le résidu est broyé dans une capsule avec 8/10 de volume d'eau distillée et additionné de 7,2 volumes d'eau salée physiologique. L'émulsion ainsi obtenue est employée uniformément à la dose de 0,5 c. c. 2, correspondant à 1/40 de centimètre cube d'antigène pur. Les tubes utilisés pour la séro-réaction ont un diamètre intérieur d'environ 12 millimètres. Ils reçoivent successivement la fraction non précipitable, l'antigène et l'alexine, et sont placés pendant une heure dans un bain-marie à 37°. On ajoute à ce moment la dose de globules sensibilisés que nous avons déjà indiquée pour le titrage de l'alexine et les porteurs sont replacés dans le bain-marie pendant trente minutes. La lecture des résultats est faite une première fois peu après la sortie du bain-marie; elle est recommencée une deuxième fois le lendemain matin
0 c. c. 27 de sérum entier. L'antigène de Bordet-Ruelens est employé après l'évaporation au bain-marie à 37°. Le résidu est broyé dans une capsule avec 8/10 de volume d'eau distillée et additionné de 7,2 volumes d'eau salée physiologique. L'émulsion ainsi obtenue est employée uniformément à la dose de 0,5 c. c. 2, correspondant à 1/40 de centimètre cube d'antigène pur. Les tubes utilisés pour la séro-réaction ont un diamètre intérieur d'environ 12 millimètres. Ils reçoivent successivement la fraction non précipitable, l'antigène et l'alexine, et sont placés pendant une heure dans un bain-marie à 37°. On ajoute à ce moment la dose de globules sensibilisés que nous avons déjà indiquée pour le titrage de l'alexine et les porteurs sont replacés dans le bain-marie pendant trente minutes. La lecture des résultats est faite une première fois peu après la sortie du bain-marie; elle est recommencée une deuxième fois le lendemain matin après une nuit d'abandon à la température du laboratoire. La réaction est considérée comme positive lorsque chacune des deux lectures permet de constater la fixation d'au moins une unité d'alexine. III. — Comparaison de la nouvelle technique avec les réactions de Bordet-Wassermann, de Kahn, de Vernes et de Hecht pratiquées sur le sérum entier. Nous avons cherché à nous rendre compte des avantages et des inconvénients que cette nouvelle technique pouvait présenter dans la pratique du sérodiagnostic de la syphilis, et nous avons entrepris de l'expérimenter sur un grand nombre de sérums en comparant sa sensibilité et sa spécificité à celles des réactions de Bordet-Wassermann, de Kahn, de Vernes et de Hecht pratiquées sur le sérum entier. 48 sérums nouveaux et 1891 sérums pathologiques ont été étudiés. Les sérums normaux ont été prélevés chez des étudiants en médecine ou des infirmières qui ne présentaient aucun symptôme ou antécédent suspect de syphilis. Les sérums pathologiques proviennent pour la plupart du service de Clinique Médicale du Professeur G. Carrière et du service de Clinique des Maladies cutanées et syphilitiques du Professeur E. Bertin. Nous avons choisi de préférence des sujets hospitalisés ou régulièrement suivis à la consultation externe et nous avons éliminé