jeanflop/post_ocr_correction2 huggingface dataset:
Nouvelle centrifugation. Le précipité est lavé dans une petite quantité de 0,01 N d'acide chlorhydrique. La solution transparente avec l'eau de lavage (dont la quantité ne doit pas dépasser 500 centimètres cubes) est précipitée par 1 lit. 5 d'alcool refroidi, après forte agitation elle est remise à la glacière. Le lendemain, le précipité, séparé par centrifugation, est dissous dans l'eau additionnée de NaOH jusqu'à réaction alcaline. On ajoute de l'eau jusqu'à dissolution complète du polysaccharide spécifique; les substances non dissoutes sont séparées par centrifugation et rejetées. La solution transparente en quantité de 100 à 125 centimètres cubes est additionnée de 10 grammes d'acétate de sodium; après dissolution du sel, on refroidit le liquide et on le précipite par 70 centimètres cubes d'alcool refroidi. Le lendemain, on centrifuge à froid. Le culot additionné de 200 centimètres cubes d'eau est centrifugé de nouveau. Le liquide transparent, acidifié par de l'acide acétique jusqu'à pll = 3,4, est séparé du précipité par une nouvelle centrifugation. Le polysaccharide ainsi obtenu est lavé dans 100 centimètres cubes d'une solution 0,05 N d'acide acétique refroidi. Centrifugation Lavage à l'alcool absolu, puis à l'acétone distillé, filtration sur entonnoir de Buchner, de nouveau lavage à l'acétone absolu. Séchage dans le vide à la température du laboratoire. Le polysaccharide spécifique du pneumocoque de type II fut préparé suivant la méthode classique, non modifiée, de Avery et Heidelberger. Les 2 polysaccharides obtenus égalaient par leurs propriétés les meilleures préparations des auteurs américains. RÉACTION DE PRÉCIPITATION PAR LE POLYSACCHARIDE SPÉCIFIQUE. Le polysaccharide était toujours employé à la dilution de 1 10.000. De 25 de dilutions décroissantes de sérum, additionnées d'un volume égal de polysaccharide, étaient laissées deux heures à l'étuve et ensuite pendant vingt heures environ à la glacière. Les dilutions (sérum et polysaccharide) ont été faites avec de l'eau physiologique. Tous les essais ont été faits en double. On notait les résultats pour la première fois après deux heures d'étuve, la lecture définitive avait lieu le lendemain. Les résultats étaient évalués comme il suit : ++ précipitation très nette à grands flocons; + précipitation nettement visible; - précipitation à peine visible
le vide à la température du laboratoire. Le polysaccharide spécifique du pneumocoque de type II fut préparé suivant la méthode classique, non modifiée, de Avery et Heidelberger. Les 2 polysaccharides obtenus égalaient par leurs propriétés les meilleures préparations des auteurs américains. RÉACTION DE PRÉCIPITATION PAR LE POLYSACCHARIDE SPÉCIFIQUE. Le polysaccharide était toujours employé à la dilution de 1 10.000. De 25 de dilutions décroissantes de sérum, additionnées d'un volume égal de polysaccharide, étaient laissées deux heures à l'étuve et ensuite pendant vingt heures environ à la glacière. Les dilutions (sérum et polysaccharide) ont été faites avec de l'eau physiologique. Tous les essais ont été faits en double. On notait les résultats pour la première fois après deux heures d'étuve, la lecture définitive avait lieu le lendemain. Les résultats étaient évalués comme il suit : ++ précipitation très nette à grands flocons; + précipitation nettement visible; - précipitation à peine visible à l'œil nu ; — absence de réaction. Le titre du sérum était représenté par la dilution maximale du sérum qui provoquait une précipitation évaluée au moins en ++. Le titrage de chaque sérum était toujours accompagné d'un essai parallèle avec le sérum étalon, dont la valeur précipitante avait été déterminée soigneusement d'avance plusieurs fois ; elle était égale à 1/30 pour le sérum étalon de type I et à 1/40 pour celui du type II. Les tableaux I et II représentent les titres de tous les sérums dont nous avons évalué le titre suivant la méthode que nous venons de décrire. LA DÉTERMINATION DE L'AZOTE DANS LE PRÉCIPITÉ SPÉCIFIQUE (d'après Heidelberger, Sia et Kendall). La méthode consiste à évaluer par micro-analyse la quantité d'azote contenue dans un précipité qu'on obtient en faisant agir sur un volume donné de sérum non dilué une quantité déterminée de polysaccharide en concentration constante. En voici la technique : On verse dans 2 tubes à essai stériles (l'expérience est faite en double) 0 c. c. 5 de sérum, 1 cent, cube de solution physiologique et 0 c. c. 5 de polysaccharide dilué dans du liquide physiologique dans la proportion de 1 1.000, de sorte
déterminée soigneusement d'avance plusieurs fois ; elle était égale à 1/30 pour le sérum étalon de type I et à 1/40 pour celui du type II. Les tableaux I et II représentent les titres de tous les sérums dont nous avons évalué le titre suivant la méthode que nous venons de décrire. LA DÉTERMINATION DE L'AZOTE DANS LE PRÉCIPITÉ SPÉCIFIQUE (d'après Heidelberger, Sia et Kendall). La méthode consiste à évaluer par micro-analyse la quantité d'azote contenue dans un précipité qu'on obtient en faisant agir sur un volume donné de sérum non dilué une quantité déterminée de polysaccharide en concentration constante. En voici la technique : On verse dans 2 tubes à essai stériles (l'expérience est faite en double) 0 c. c. 5 de sérum, 1 cent, cube de solution physiologique et 0 c. c. 5 de polysaccharide dilué dans du liquide physiologique dans la proportion de 1 1.000, de sorte que le volume total contenu dans chaque tube soit égal à 2 cent, cubes. Les tubes fermés par des bouchons stériles sont soigneusement agités et placés pendant deux heures à l'étuve et ensuite à la glacière. Le lendemain, on centrifuge à froid pendant dix minutes à petite vitesse (1.000 tours par minute) et on enlève complètement le liquide surnageant. Les éprouvettes sont ensuite mises dans de l'eau glacée et le précipité lavé par 2 cent, cubes d'une solution à 1/20.000 de polysaccharide spécifique. On mélange bien le contenu en ayant soin de détacher le culot du fond des tubes. Ceux-ci sont placés pendant une demi-heure à la glacière. Nouvelle centrifugation avec élimination du liquide surnageant. On verse dans chaque tube 0 c. c. 5 d'eau distillée, on agite le liquide jusqu'à ce que le précipité détaché du fond forme une suspension homogène: Il faut ajouter quelques gouttes de NaOH normale ajoutées à ces émulsions pour amener après agitation la dissolution complète du précipité. Les dilutions sont transportées dans des ballons de Kjeldahl pour micro-analyse; la quantité d'azote est évaluée, d'après n'importe quelle méthode (nous nous sommes servis de la méthode de Pregl). La quantité d'azote trouvée, multipliée par 20, représente
par minute) et on enlève complètement le liquide surnageant. Les éprouvettes sont ensuite mises dans de l'eau glacée et le précipité lavé par 2 cent, cubes d'une solution à 1/20.000 de polysaccharide spécifique. On mélange bien le contenu en ayant soin de détacher le culot du fond des tubes. Ceux-ci sont placés pendant une demi-heure à la glacière. Nouvelle centrifugation avec élimination du liquide surnageant. On verse dans chaque tube 0 c. c. 5 d'eau distillée, on agite le liquide jusqu'à ce que le précipité détaché du fond forme une suspension homogène: Il faut ajouter quelques gouttes de NaOH normale ajoutées à ces émulsions pour amener après agitation la dissolution complète du précipité. Les dilutions sont transportées dans des ballons de Kjeldahl pour micro-analyse; la quantité d'azote est évaluée, d'après n'importe quelle méthode (nous nous sommes servis de la méthode de Pregl). La quantité d'azote trouvée, multipliée par 20, représente la teneur en protéine spécifique précipitée. Les résultats de nos expériences (21 sérums) sont représentés sur les tableaux I et II 60 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR ÉVALUATION DES AGGLUTININES DANS LES SÉRUMS. La technique de l'agglutination a été celle dont on se sert d'habitude. On versait dans un tube à essai 0 c. c. 5 de chaque dilution; on y introduisait ensuite 0 c. c. 1 d'une culture de dix-huit heures de nos souches virulentes de pneumocoques (standardisés); le tout était laissé deux heures à l'étuve et ensuite dix-huit à vingt heures à la température du laboratoire. Les résultats ont été évalués de la façon suivante : + + + précipitation intense, liquide surnageant clair: + + agglutination bien visible à l'oeil nu; + agglutination à peine visible à l'oeil nu; — absence de réaction. Le titre agglutinant était représenté par la dilution maxima qui montrait une agglutination évaluée au moins par -|—|-. Les titres des sérums étudiés sont représentés sur les tableaux I et II. DÉTERMINATION DES BACTÉRIOTHÉOPINES DANS LES SÉRUMS. Pour déterminer le pouvoir bactériotrope des sérums, nous avons opéré suivant la méthode de Neufeld et Boenck : des quantités décroissantes de sérums sont additionnées de pneumocoques et
essai 0 c. c. 5 de chaque dilution; on y introduisait ensuite 0 c. c. 1 d'une culture de dix-huit heures de nos souches virulentes de pneumocoques (standardisés); le tout était laissé deux heures à l'étuve et ensuite dix-huit à vingt heures à la température du laboratoire. Les résultats ont été évalués de la façon suivante : + + + précipitation intense, liquide surnageant clair: + + agglutination bien visible à l'oeil nu; + agglutination à peine visible à l'oeil nu; — absence de réaction. Le titre agglutinant était représenté par la dilution maxima qui montrait une agglutination évaluée au moins par -|—|-. Les titres des sérums étudiés sont représentés sur les tableaux I et II. DÉTERMINATION DES BACTÉRIOTHÉOPINES DANS LES SÉRUMS. Pour déterminer le pouvoir bactériotrope des sérums, nous avons opéré suivant la méthode de Neufeld et Boenck : des quantités décroissantes de sérums sont additionnées de pneumocoques et de leucocytes et placées un certain temps à l'étuve à 37°. Des frottis colorés sont préparés avec le contenu de chaque tube et on détermine au microscope la dilution maxima qui présente, par comparaison avec le sérum normal, une phagocytose marquée. Voici les détails de l'expérience : Un cobaye de 300-370 grammes reçoit, en injection intraperitonéale, 10 cent, cubes de bouillon stérile chauffé à 37°. L'animal est tué quinze à dix-huit heures après l'injection; le péritoine est lavé à l'eau physiologique stérile chauffé à 37° et additionnée de citrate de sodium (solution à 0,1 p. 100). L'exsudat aspiré est lavé deux fois avec la solution physiologique et centrifugé à très petite vitesse. Le précipité leucocytaire est émulsionné dans le liquide physiologique, chauffé à 37° et amené à l'opacité d'un test de lecithine diluée à 1 : 3; 0,1 cent, cube de dilutions décroissantes de sérum à titrer est introduit dans des tubes à essai ; on se sert comme contrôle d'un tube avec 0,1 cent, cube de sérum normal en dilution égale à la plus petite dilution du sérum à titrer. On ajoute ensuite 1 goutte de culture de dix-huit heures de pneumocoque TITRAGE DES SÉRUMS ANTIPNEUMOCOCCIQUES 61 homologue au
300-370 grammes reçoit, en injection intraperitonéale, 10 cent, cubes de bouillon stérile chauffé à 37°. L'animal est tué quinze à dix-huit heures après l'injection; le péritoine est lavé à l'eau physiologique stérile chauffé à 37° et additionnée de citrate de sodium (solution à 0,1 p. 100). L'exsudat aspiré est lavé deux fois avec la solution physiologique et centrifugé à très petite vitesse. Le précipité leucocytaire est émulsionné dans le liquide physiologique, chauffé à 37° et amené à l'opacité d'un test de lecithine diluée à 1 : 3; 0,1 cent, cube de dilutions décroissantes de sérum à titrer est introduit dans des tubes à essai ; on se sert comme contrôle d'un tube avec 0,1 cent, cube de sérum normal en dilution égale à la plus petite dilution du sérum à titrer. On ajoute ensuite 1 goutte de culture de dix-huit heures de pneumocoque TITRAGE DES SÉRUMS ANTIPNEUMOCOCCIQUES 61 homologue au sérum étudié et 2 gouttes de l'émulsion leucocytaire. Les tubes sont bien agités et laissés à l'étuve quarante-cinq minutes. Pendant le premier quart d'heure, on agite plusieurs fois les tubes. Après quarantecinq minutes, le liquide surnageant est aspiré d'abord avec une pipette et ensuite avec du papier filtre; on répartit le reste avec une anse en platine sur lame de verre, on fixe les préparations à l'alcool-éther et on les colore au bleu de méthylène dilué. Les lames sont soigneusement étudiées et les résultats notés de la manière suivante : + + + phagocytose très intense : la majorité des leucocytes est bourrée de cocci; des pneumocoques libres se rencontrent par exception. + + phagocytose intense : la majorité des leucocytes contient des pneumocoques, mais pas en quantité très grande. Les cocci libres se rencontrent en nombre considérable. + phagocytose à peine marquée : quelques leucocytes contiennent des pneumocoques en petit nombre. La plupart des cocci sont libres en dehors des leucocytes. — absence de phagocytose. Le titre bactériotrope était représenté par la dilution maxima qui provoquait une phagocytose évaluée au moins en -j—|-. Chaque titrage de sérum inconnu était accompagné des tubes de contrôle avec le sérum étalon, dont
le reste avec une anse en platine sur lame de verre, on fixe les préparations à l'alcool-éther et on les colore au bleu de méthylène dilué. Les lames sont soigneusement étudiées et les résultats notés de la manière suivante : + + + phagocytose très intense : la majorité des leucocytes est bourrée de cocci; des pneumocoques libres se rencontrent par exception. + + phagocytose intense : la majorité des leucocytes contient des pneumocoques, mais pas en quantité très grande. Les cocci libres se rencontrent en nombre considérable. + phagocytose à peine marquée : quelques leucocytes contiennent des pneumocoques en petit nombre. La plupart des cocci sont libres en dehors des leucocytes. — absence de phagocytose. Le titre bactériotrope était représenté par la dilution maxima qui provoquait une phagocytose évaluée au moins en -j—|-. Chaque titrage de sérum inconnu était accompagné des tubes de contrôle avec le sérum étalon, dont le titre bactériotrope était préalablement déterminé par des titrages multiples. RÉSULTATS DES EXPÉRIENCES. Les tableaux I et II montrent les valeurs quantitatives des différents anticorps contenus dans nos sérums. Sur ces tableaux, les sérums sont disposés suivant leurs titres préventifs décroissants. Le titre des anticorps est représenté par la quantité d'anticorps contenue dans 1 cent, cube de sérum. Comme il ressort de ces tableaux, les quantités d'anticorps dans les sérums augmentent lorsque leurs titres préventifs montrent que plus le pouvoir prophylactique est grand, plus les valeurs des autres anticorps augmentent, et plus il diminue, plus les autres valeurs sont petites et même nulles. C'est ainsi que plusieurs sérums du type II, dont le pouvoir prophylactique était nul, étaient également dénués de toute action agglutinante, précipitante et bactériotrope. Or, une question se pose : est-il possible de juger, d'après ces derniers titres, du pouvoir préventif d'un sérum ou, autrement dit, l'augmentation des titres des anticorps est-elle en raison directe du pouvoir préventif? Pour répondre à cette question, il serait peut-être plus commode d'évaluer les différents titres des anticorps en unités préventives, en comparant les données que nous avons obtenues dans l'étude de nos sérums et celle des sérums étalons. Pour déterminer
d'anticorps contenue dans 1 cent, cube de sérum. Comme il ressort de ces tableaux, les quantités d'anticorps dans les sérums augmentent lorsque leurs titres préventifs montrent que plus le pouvoir prophylactique est grand, plus les valeurs des autres anticorps augmentent, et plus il diminue, plus les autres valeurs sont petites et même nulles. C'est ainsi que plusieurs sérums du type II, dont le pouvoir prophylactique était nul, étaient également dénués de toute action agglutinante, précipitante et bactériotrope. Or, une question se pose : est-il possible de juger, d'après ces derniers titres, du pouvoir préventif d'un sérum ou, autrement dit, l'augmentation des titres des anticorps est-elle en raison directe du pouvoir préventif? Pour répondre à cette question, il serait peut-être plus commode d'évaluer les différents titres des anticorps en unités préventives, en comparant les données que nous avons obtenues dans l'étude de nos sérums et celle des sérums étalons. Pour déterminer ces valeurs, on peut s'adresser à la formule suivante : L.r - Lv - 1 - f dans laquelle : U.r = quantité d'unités préventives dans 1 cent, cube de sérum à étudier. U,= quantité d'unités préventives dans 1 cent, cube de sérum étalon. Tx = titre d'anticorps donné dans 1 cent, cube de sérum à étudier. T,= titre d'anticorps donné dans 1 cent, cube de sérum étalon. Pour notre sérum étalon du type 1 (série 493), les éléments de cette formule ont les valeurs que voici : U = 300, T. précipit. = 30. T. azote spécif. =0,324, T. agglut. = 150 et T. bactériotrope = 50. Pour le sérum étalon du type II (série 9), ces valeurs sont : U=100, T. précipit. = 50, T. azote spécif. = 0,336, T. agglut =160 et T. bactériotrope = 80. En présence de ces données et des titres des anticorps dans un sérum à étudier, on peut, à l'aide de cette formule, évaluer la quantité d'unités préventives de tout sérum. Nous avons mis dans le tableau III les titres prophylactiques de nos sérums évalués d'une part par l'épreuve de protection chez les souris, d'autre part, par la recherche des anticorps et
1 cent, cube de sérum à étudier. T,= titre d'anticorps donné dans 1 cent, cube de sérum étalon. Pour notre sérum étalon du type 1 (série 493), les éléments de cette formule ont les valeurs que voici : U = 300, T. précipit. = 30. T. azote spécif. =0,324, T. agglut. = 150 et T. bactériotrope = 50. Pour le sérum étalon du type II (série 9), ces valeurs sont : U=100, T. précipit. = 50, T. azote spécif. = 0,336, T. agglut =160 et T. bactériotrope = 80. En présence de ces données et des titres des anticorps dans un sérum à étudier, on peut, à l'aide de cette formule, évaluer la quantité d'unités préventives de tout sérum. Nous avons mis dans le tableau III les titres prophylactiques de nos sérums évalués d'une part par l'épreuve de protection chez les souris, d'autre part, par la recherche des anticorps et la substitution des données trouvées dans la formule citée plus haut. En examinant ce tableau, on constate que les titres préventifs, trouvés in vivo, accusent une concordance presque parfaite avec ceux déterminés in vitro par la méthode de précipitation avec le polysaccharide spécifique. La concordance est presque absolue dans les sérums du type I. Les titres des trois sérums du type II, à pouvoir préventif assez grand, présentent également une concordance satisfaisante. Moins bons sont les résultats obtenus dans les recherches comparatives du titre préventif in vivo et par le dosage d'azote dans les précipités. Il en est de même du titre préventif calculé d'après les titres agglutinant et bactériotrope. Donc, dans l'immunisation du cheval, l'augmentation des précipitines spécifiques est en raison directe de l'augmentation du pouvoir protecteur tandis que le titre des anticorps agglutinants et bactériotropes ne monte que parallèlement au titre préventif. Or, l'évaluation de l'effet curatif d'un sérum étant basée sur son pouvoir protecteur, la quantité d'agglutinines et de bactériotropines contenues dans le sérum ne peut pas servir pour juger de son efficacité. Le tableau IV est une représentation graphique des résultats que nous avons obtenus. Le dessin n° 1 montre la courbe des titres préventifs des
sérums du type I. Les titres des trois sérums du type II, à pouvoir préventif assez grand, présentent également une concordance satisfaisante. Moins bons sont les résultats obtenus dans les recherches comparatives du titre préventif in vivo et par le dosage d'azote dans les précipités. Il en est de même du titre préventif calculé d'après les titres agglutinant et bactériotrope. Donc, dans l'immunisation du cheval, l'augmentation des précipitines spécifiques est en raison directe de l'augmentation du pouvoir protecteur tandis que le titre des anticorps agglutinants et bactériotropes ne monte que parallèlement au titre préventif. Or, l'évaluation de l'effet curatif d'un sérum étant basée sur son pouvoir protecteur, la quantité d'agglutinines et de bactériotropines contenues dans le sérum ne peut pas servir pour juger de son efficacité. Le tableau IV est une représentation graphique des résultats que nous avons obtenus. Le dessin n° 1 montre la courbe des titres préventifs des sérums du type I, obtenus par titrage in vivo; les autres représentent les courbes des titres préventifs de ces mêmes sérums calculés d'après les données des réactions immunobiologiques. Il est facile de constater que la première courbe concorde en tous points avec la deuxième. Les trois dernières courbes, tout en montrant, dans leur allure générale, une certaine concordance s'éloignent notablement de la courbe n° 1. Les résultats de nos expériences ont montré que la détermination du titre précipitant par rapport aux polysaccharides spécifiques peut servir de méthode de titrage commode des sérums antipneumococciques, la réaction de précipitation classique (détermination de la dilution maxima) étant de plus préférable au dosage de l'azote spécifique dans le précipité; cette dernière méthode étant beaucoup plus compliquée et moins précise. La réaction de précipitation telle que nous venons de l'exposer, peut remplacer avantageusement le titrage plus coûteux et plus compliqué du pouvoir antimicrobien chez la souris, au moins dans les titrages préalables des saignées d'épreuve. RÉACTION DE PRÉCIPITATION AVEC LE POLYSACCHARIDE OBTENU PAR MÉTHODE SIMPLIFIÉE. Les résultats que nous avons obtenus dans nos expériences nous ont incités à rechercher une méthode plus simple pour préparer le polysaccharide spécifique; les difficultés auxquelles on se heurte dans
montrant, dans leur allure générale, une certaine concordance s'éloignent notablement de la courbe n° 1. Les résultats de nos expériences ont montré que la détermination du titre précipitant par rapport aux polysaccharides spécifiques peut servir de méthode de titrage commode des sérums antipneumococciques, la réaction de précipitation classique (détermination de la dilution maxima) étant de plus préférable au dosage de l'azote spécifique dans le précipité; cette dernière méthode étant beaucoup plus compliquée et moins précise. La réaction de précipitation telle que nous venons de l'exposer, peut remplacer avantageusement le titrage plus coûteux et plus compliqué du pouvoir antimicrobien chez la souris, au moins dans les titrages préalables des saignées d'épreuve. RÉACTION DE PRÉCIPITATION AVEC LE POLYSACCHARIDE OBTENU PAR MÉTHODE SIMPLIFIÉE. Les résultats que nous avons obtenus dans nos expériences nous ont incités à rechercher une méthode plus simple pour préparer le polysaccharide spécifique; les difficultés auxquelles on se heurte dans sa préparation pouvant présenter un obstacle sérieux dans l'évaluation du pouvoir curatif des sérums antipneumocoques par précipitation. Les recherches comparatives que nous avons poursuivies dans cette direction ont permis d'établir que le polysaccharide préparé d'une façon plus simple et plus rapide d'après les indications de Zozaya, Boyer et Clark, peut remplacer avec avantage celui de Avery et Heidelberger. TECHNIQUE SIMPLIFIÉE POUR PRÉPARATION DU POLYSACCHARIDE SPÉCIFIQUE (d'après Zozaya, Boyer et Clark). — Une culture de pneumocoques sur bouillon phosphaté, âgée de huit jours, est évaporée jusqu'au 1/15 de son volume initial. Cette solution est refroidie et précipitée par de l'acide trichloracétique cristallisé en quantité correspondant à 5 p. 100 du volume total. Ce précipité est rejeté après centrifugation immédiate; le liquide surnageant, translucide, d'un brun foncé, est additionné d'alcool en quantité égale à 1,5 de son volume. Le précipité obtenu contient le polysaccharide. Celui-ci est dissout dans l'eau et purifié par nouvelle précipitation à l'alcool. Enfin une dernière précipitation est produite par de l'acétone. Le polysaccharide du type I ainsi préparé ne cédait à celui préparé par la méthode de Avery et Heidelberger ni par la quantité d'azote, ni par son titre précipitant; cependant son rendement était quatre fois plus considérable.