jeanflop/post_ocr_correction2 huggingface dataset:
forme de petits amas granuleux qui végètent. Il y a tout lieu de penser que l'inhibition provient des mauvaises conditions dans lesquelles se font les échanges de l'oxygène et du gaz carbonique, d'une part entre les microbes et le milieu, d'autre part entre celui-ci et l'atmosphère. Si l'on cherche à améliorer ces conditions par injection d'air et brassage mécanique énergique, comme ils sont réalisés dans les fermenteurs, on assiste à la formation de mousses très abondantes qui mettent rapidement un terme à l'expérience. En effet, comme Abribat, Dognon et Cruvelhier l'ont montré, la mousse entraîne avec elle la quasi-totalité des germes acido-résistants. Il en résulte la formation d'une sorte de gâteau formé de microbes et de bulles d'air, qui flotte à la surface du milieu clarifié et l'agitation mécanique n'arrive plus à maintenir la culture en suspension, à moins de recourir à des régimes de rotation qui tuent les germes. Dans le gâteau flottant en surface, les bacilles sont dans de très mauvaises conditions de survie et meurent très rapidement. L'addition de produits antimousses n'apporte qu'une solution partielle et passagère, et l'on est conduit à en ajouter des quantités très supérieures à celles utilisées pour d'autres germes. On a également proposé de remédier à la difficulté de croissance en profondeur des mycobactéries en utilisant, comme l'a décrit Dubos, des milieux additionnés de produits mouillants, Tween 80 ou encore Triton. Il ne faut pas oublier que l'action dispersante de ces produits est considérablement réduite dans le cas des cultures agitées. On est donc, là aussi, amené à forcer la dose et c'est ainsi que pour cultiver le BCG en cuve, l'on a pu préconiser l'addition de 15 g de Tween 80 par litre. Ce chiffre est trente-trois fois supérieur à celui de 0,45 g/1 du milieu de Dubos. Or, c'est une notion bien établie que, déjà dans celui-ci, les modifications de perméabilité des membranes cellulaires sont telles, que les conditions de résistance des germes aux antibiotiques sont fortement perturbées. Ces conditions de culture ont nécessairement une influence sur la composition chimique et les propriétés biologiques des germes récoltés. De sorte que,
proposé de remédier à la difficulté de croissance en profondeur des mycobactéries en utilisant, comme l'a décrit Dubos, des milieux additionnés de produits mouillants, Tween 80 ou encore Triton. Il ne faut pas oublier que l'action dispersante de ces produits est considérablement réduite dans le cas des cultures agitées. On est donc, là aussi, amené à forcer la dose et c'est ainsi que pour cultiver le BCG en cuve, l'on a pu préconiser l'addition de 15 g de Tween 80 par litre. Ce chiffre est trente-trois fois supérieur à celui de 0,45 g/1 du milieu de Dubos. Or, c'est une notion bien établie que, déjà dans celui-ci, les modifications de perméabilité des membranes cellulaires sont telles, que les conditions de résistance des germes aux antibiotiques sont fortement perturbées. Ces conditions de culture ont nécessairement une influence sur la composition chimique et les propriétés biologiques des germes récoltés. De sorte que, même s'il était possible, ce qui n'est pas, d'éliminer par des lavages les agents mouillants, ou anti-mousses, une telle solution devrait être exclue. Nous ne décrirons ici, ni les nombreux dispositifs que nous avons étudiés puis rejetés successivement, ni l'appareil final auquel nous nous sommes arrêtés. Il présente en raison du lent développement des cultures de mycobactéries quelques caractères originaux imposés par la nécessité d'assurer une stérilité absolue et de longue durée. C'est ainsi qu'il ne comporte ni pompe, ni agitateur mû par un moteur, et aucun joint ne se trouve dans des endroits où il pourrait être en contact, soit avec le milieu de culture, soit avec des condensations. L'agitation nécessaire obtenue par la seule injection d'air est énergique sans avoir la brutalité de celle provoquée par les pales d'un agitateur. Le mouvement de celles-ci est éminemment défavorable à la culture et à la survie des mycobactéries. Un dispositif de sas stérile permet de prélever toute la culture ou seulement, si on le désire, une partie de celle-ci et de la remplacer par du milieu neuf dans des conditions de stérilité parfaite. Il est donc possible de recueillir, soit en une fois, soit périodiquement, tous les jours ou tous
du lent développement des cultures de mycobactéries quelques caractères originaux imposés par la nécessité d'assurer une stérilité absolue et de longue durée. C'est ainsi qu'il ne comporte ni pompe, ni agitateur mû par un moteur, et aucun joint ne se trouve dans des endroits où il pourrait être en contact, soit avec le milieu de culture, soit avec des condensations. L'agitation nécessaire obtenue par la seule injection d'air est énergique sans avoir la brutalité de celle provoquée par les pales d'un agitateur. Le mouvement de celles-ci est éminemment défavorable à la culture et à la survie des mycobactéries. Un dispositif de sas stérile permet de prélever toute la culture ou seulement, si on le désire, une partie de celle-ci et de la remplacer par du milieu neuf dans des conditions de stérilité parfaite. Il est donc possible de recueillir, soit en une fois, soit périodiquement, tous les jours ou tous les deux jours, par exemple, une récolte importante, tout en maintenant la culture en phase de croissance continue et régulière. A titre d'exemple, un petit appareil d'essais, calculé pour traiter un volume de milieu de 40 à 50 l, ensemencé avec une quantité de BCG de 10 g pesés à l'état essoré, a pu entrer en production après huit jours. A ce moment, si on avait procédé à une récolte unique, on aurait recueilli plus de 1 kg de culture, dont la respiration au Warburg était de 20,05 l/mg de culture sèche. En continuant la culture, en faisant des récoltes partielles suivies immédiatement de la réinjection de milieu neuf, au trente-cinquième jour de celle-ci nous avons pu, en 11 récoltes, obtenir 20 kg de BCG pesés à l'état essoré et pourtant le régime de marche n'était pas le meilleur, car les temps entre les récoltes étaient irréguliers, variant de deux à quatre jours, et il s'agissait d'une mise au point expérimentale au cours de laquelle plusieurs paramètres ont été modifiés. Pour obtenir la même masse de culture par la méthode traditionnelle, il aurait fallu manipuler environ 10 000 ballons de 250 cm3, alors que pour assurer la maintenance de la
l'état essoré, a pu entrer en production après huit jours. A ce moment, si on avait procédé à une récolte unique, on aurait recueilli plus de 1 kg de culture, dont la respiration au Warburg était de 20,05 l/mg de culture sèche. En continuant la culture, en faisant des récoltes partielles suivies immédiatement de la réinjection de milieu neuf, au trente-cinquième jour de celle-ci nous avons pu, en 11 récoltes, obtenir 20 kg de BCG pesés à l'état essoré et pourtant le régime de marche n'était pas le meilleur, car les temps entre les récoltes étaient irréguliers, variant de deux à quatre jours, et il s'agissait d'une mise au point expérimentale au cours de laquelle plusieurs paramètres ont été modifiés. Pour obtenir la même masse de culture par la méthode traditionnelle, il aurait fallu manipuler environ 10 000 ballons de 250 cm3, alors que pour assurer la maintenance de la culture en cuve, deux ou trois heures de travail d'une seule personne, les jours de récolte ont suffi. Un point important est que la vitalité des cultures ainsi obtenues, appréciée par la méthode de la mesure de la respiration à l'appareil de Warburg que nous avons décrite avec M. Lamensans, s'est montrée aussi bonne et souvent meilleure que celle des cultures classiques, pourvu que la récolte soit faite au moment opportun, moment que l'on peut déterminer par la mesure du pH de la culture, par la richesse en CO2 de l'air à la sortie de l'appareil, enfin par prise directe d'échantillon pour mesure de la viabilité. Cette façon de cultiver le BCG, non seulement en cuve, mais en continu, pendant un certain temps est-elle légitime ? Ne risque-t-on pas de voir apparaître des mutations qui modifieraient les caractères de la souche ? Nous ne le pensons pas et cela pour les raisons suivantes : 1° Depuis le moment où la souche bovine virulente, « lait Nocard », est devenue non virulente, c'est-à-dire depuis plus de soixante ans, le BCG a dans certains laboratoires toujours été entretenu sur milieu de Sauton, conformément aux instructions de Calmette, et il ne s'est sensiblement
s'est montrée aussi bonne et souvent meilleure que celle des cultures classiques, pourvu que la récolte soit faite au moment opportun, moment que l'on peut déterminer par la mesure du pH de la culture, par la richesse en CO2 de l'air à la sortie de l'appareil, enfin par prise directe d'échantillon pour mesure de la viabilité. Cette façon de cultiver le BCG, non seulement en cuve, mais en continu, pendant un certain temps est-elle légitime ? Ne risque-t-on pas de voir apparaître des mutations qui modifieraient les caractères de la souche ? Nous ne le pensons pas et cela pour les raisons suivantes : 1° Depuis le moment où la souche bovine virulente, « lait Nocard », est devenue non virulente, c'est-à-dire depuis plus de soixante ans, le BCG a dans certains laboratoires toujours été entretenu sur milieu de Sauton, conformément aux instructions de Calmette, et il ne s'est sensiblement modifié ni dans ses caractères biologiques, ni dans son pouvoir immunisant, comme plusieurs études l'ont montré. 2° L'expérience de culture continue dont nous avons rapporté les résultats a, en réalité, été prolongée de façon ininterrompue à des fins expérimentales pendant deux cent cinquante-six jours. Il ne nous viendrait certes pas à l'esprit de recommander de maintenir une culture en régime de production pendant si longtemps. Quelques semaines, comme dans l'exemple cité, seraient suffisantes car pendant ce temps le nombre de divisions n'est pas plus élevé que celui que l'on admet pour la culture en cuve d'autres germes. Néanmoins la culture de 134 jours et celle de 256 jours ont fait l'objet d'une étude approfondie par notre collaborateur M. Boisvert, par comparaison avec la souche normale de production de l'Institut Pasteur. Trente-huit critères différents ont été comparés : 8 concernent la morphologie et la croissance, 15 le métabolisme, 12 la sensibilité aux antibiotiques, 3 le pouvoir pathogène. Aucune anomalie, si ce n'est une minime différence dans les taux de résistance à l'éthambutol, épreuve dont on connaît les caractères d'instabilité, n'a pu être retenue. 3° Enfin, la culture de 256 jours a fait l'objet d'un essai d'immunisation. Il a été entièrement satisfaisant.
à l'esprit de recommander de maintenir une culture en régime de production pendant si longtemps. Quelques semaines, comme dans l'exemple cité, seraient suffisantes car pendant ce temps le nombre de divisions n'est pas plus élevé que celui que l'on admet pour la culture en cuve d'autres germes. Néanmoins la culture de 134 jours et celle de 256 jours ont fait l'objet d'une étude approfondie par notre collaborateur M. Boisvert, par comparaison avec la souche normale de production de l'Institut Pasteur. Trente-huit critères différents ont été comparés : 8 concernent la morphologie et la croissance, 15 le métabolisme, 12 la sensibilité aux antibiotiques, 3 le pouvoir pathogène. Aucune anomalie, si ce n'est une minime différence dans les taux de résistance à l'éthambutol, épreuve dont on connaît les caractères d'instabilité, n'a pu être retenue. 3° Enfin, la culture de 256 jours a fait l'objet d'un essai d'immunisation. Il a été entièrement satisfaisant. Les cobayes vaccinés ont été manifestement bien protégés contre une inoculation d'épreuve faite avec une souche exceptionnellement virulente. Par ce qui précède, nous avons simplement voulu montrer que désormais il va être possible de produire des cultures de mycobactéries et de BCG en particulier, dans des conditions meilleures qu'actuellement au point de vue de la sécurité, de l'économie, de la quantité, et ce qui est plus important, de la qualité. Même si l'on ne désire pas maintenir la culture en production continue pendant quelque temps, une récolte unique, faite au moment opportun jugé sur prise d'échantillon, permet de recueillir une masse bacillaire parfaitement homogène, exempte de contamination, telle que l'on peut souhaiter d'en disposer pour préparer, pour un long usage, un vaccin de qualité constante. On peut penser qu'il en résultera des conséquences importantes sur les modalités d'emploi du BCG. (Institut Pasteur, Service de la Tuberculose.) Recherches récentes sur la transplantation rénale par M. Jean Hamburger En 1959 avaient lieu les deux premières homotransplantations rénales réussies entre faux jumeaux, l'une à Boston [10], l'autre dans mon service à Paris [8] : dix ans plus tard, les deux patients sont en excellente santé. Le 12 février 1962 était pratiquée la première
point de vue de la sécurité, de l'économie, de la quantité, et ce qui est plus important, de la qualité. Même si l'on ne désire pas maintenir la culture en production continue pendant quelque temps, une récolte unique, faite au moment opportun jugé sur prise d'échantillon, permet de recueillir une masse bacillaire parfaitement homogène, exempte de contamination, telle que l'on peut souhaiter d'en disposer pour préparer, pour un long usage, un vaccin de qualité constante. On peut penser qu'il en résultera des conséquences importantes sur les modalités d'emploi du BCG. (Institut Pasteur, Service de la Tuberculose.) Recherches récentes sur la transplantation rénale par M. Jean Hamburger En 1959 avaient lieu les deux premières homotransplantations rénales réussies entre faux jumeaux, l'une à Boston [10], l'autre dans mon service à Paris [8] : dix ans plus tard, les deux patients sont en excellente santé. Le 12 février 1962 était pratiquée la première transplantation rénale réussie entre sujets non-jumeaux : nous avions reçu ce jeune malade de 18 ans, alors qu'il se mourait d'une urémie par néphropathie congénitale ; près de huit années après l'ablation des deux reins malades et la transplantation, la fonction du rein greffé est excellente et le patient, d'une activité débordante, jouit d'une santé sans faiblesse. Ces trois premiers succès mondiaux furent suivis de très nombreux autres, et, dans notre seul centre, plus de 150 malades ont été transplantés à ce jour [6]. Mais, aussi bien dans notre statistique personnelle que dans la statistique internationale, on observe encore un certain nombre d'échecs, précoces ou retardés. D'autres greffes d'organe, tentées depuis peu sur le modèle des techniques de greffe de reins, ont démontré plus clairement encore l'imperfection relative des méthodes destinées à éviter tout rejet du greffon [5]. C'est pourquoi nous souhaiterions présenter à l'Académie quelques travaux récents qui permettent peut-être de mieux comprendre la raison de ces échecs et de tenter de les éviter. Ces travaux portent sur deux chapitres : la sélection immunologique du donneur et l'immuno-dépression du receveur. I. SÉLECTION DU DONNEUR La découverte du principal système humain d'histocompatibilité, le système HL-A, a constitué un facteur notable
activité débordante, jouit d'une santé sans faiblesse. Ces trois premiers succès mondiaux furent suivis de très nombreux autres, et, dans notre seul centre, plus de 150 malades ont été transplantés à ce jour [6]. Mais, aussi bien dans notre statistique personnelle que dans la statistique internationale, on observe encore un certain nombre d'échecs, précoces ou retardés. D'autres greffes d'organe, tentées depuis peu sur le modèle des techniques de greffe de reins, ont démontré plus clairement encore l'imperfection relative des méthodes destinées à éviter tout rejet du greffon [5]. C'est pourquoi nous souhaiterions présenter à l'Académie quelques travaux récents qui permettent peut-être de mieux comprendre la raison de ces échecs et de tenter de les éviter. Ces travaux portent sur deux chapitres : la sélection immunologique du donneur et l'immuno-dépression du receveur. I. SÉLECTION DU DONNEUR La découverte du principal système humain d'histocompatibilité, le système HL-A, a constitué un facteur notable du succès des transplantations rénales. Pourtant l'analyse sérologique des antigènes leucocytaires a ses limites : d'une part, elle ne permet de déterminer actuellement qu'une partie des antigènes HL-A ; d'autre part, il arrive que certaines transplantations rénales connaissent un succès total malgré une incompatibilité notoire de ces antigènes et, inversement, que certains échecs soient observés en l'absence de toute différence antigénique apparente entre donneur et receveur. Ces discordances semblent pouvoir être éclaircies par certains résultats obtenus récemment dans notre laboratoire. a) L'haplotypage. Il est démontré aujourd'hui que le système HL-A dépend chez l'homme, comme le système H2 chez la souris, d'un locus génétique unique, subdivisé en deux (et peut-être trois) sous-locus [3]. Or, chez deux sujets d'une même famille, il est fréquemment possible de déterminer si les génotypes HL-A sont identiques (identité des deux allèles ou haplotypes HL-A), semi-identiques (identité d'un des deux haplotypes HL-A), ou différents (aucun des deux haplotypes semblables). Cette reconstitution de la situation génotypique est possible, alors même qu'on ignore encore une partie de la longue liste présumée des antigènes HL-A, par recoupement des phénotypes HL-A d'un nombre suffisant de membres de la famille considérée. C'est ainsi que, dans une fratrie, on peut déterminer si deux
que certains échecs soient observés en l'absence de toute différence antigénique apparente entre donneur et receveur. Ces discordances semblent pouvoir être éclaircies par certains résultats obtenus récemment dans notre laboratoire. a) L'haplotypage. Il est démontré aujourd'hui que le système HL-A dépend chez l'homme, comme le système H2 chez la souris, d'un locus génétique unique, subdivisé en deux (et peut-être trois) sous-locus [3]. Or, chez deux sujets d'une même famille, il est fréquemment possible de déterminer si les génotypes HL-A sont identiques (identité des deux allèles ou haplotypes HL-A), semi-identiques (identité d'un des deux haplotypes HL-A), ou différents (aucun des deux haplotypes semblables). Cette reconstitution de la situation génotypique est possible, alors même qu'on ignore encore une partie de la longue liste présumée des antigènes HL-A, par recoupement des phénotypes HL-A d'un nombre suffisant de membres de la famille considérée. C'est ainsi que, dans une fratrie, on peut déterminer si deux frères ou deux sœurs ont hérité des deux mêmes haplotypes HL-A (probabilité : 25 p. 100), d'un seul de ces haplotypes (probabilité : 50 p. 100) ou d'haplotypes l'un et l'autre différents (probabilité : 25 p. 100). Les résultats que nous avons obtenus à l'aide de cette technique, qu'on pourrait baptiser du néologisme d'« haplotypage », démontrent que l'avenir du greffon peut être ainsi prédit de façon beaucoup plus sûre qu'avec le « typage » HL-A classique. Ainsi, les transplantations rénales que nous avons effectuées entre sujets dont les génotypes ont été reconstitués comme HL-A identiques, fournissent 100 p. 100 de succès (tableau I). Bien plus, 87 p. 100 de ces reins greffés ont, à la biopsie, un aspect rigoureusement normal, impossible à distinguer d'un rein sain [9]. TABLEAU I. Résultats de l'homotransplantation rénale en fonction des résultats de l'« haplotypage » dans 55 cas de greffes interfamiliales. DONNEURS SIGNIFICATION DONNEURS HL-A IDENTIQUES SEMI-IDENTIQUES STATISTIQUE OU DIFFERENTS DE LA DIFFERENCE Nombre de malades 10 45 Pourcentage de greffons fonctionnels 100 76 p = 0,05 Clearance moyenne de la créatinine des reins fonctionnels (ml /mn). 83 62 p < 0,02 Il n'est pas surprenant que l'haplotypage surpasse de beaucoup le simple
baptiser du néologisme d'« haplotypage », démontrent que l'avenir du greffon peut être ainsi prédit de façon beaucoup plus sûre qu'avec le « typage » HL-A classique. Ainsi, les transplantations rénales que nous avons effectuées entre sujets dont les génotypes ont été reconstitués comme HL-A identiques, fournissent 100 p. 100 de succès (tableau I). Bien plus, 87 p. 100 de ces reins greffés ont, à la biopsie, un aspect rigoureusement normal, impossible à distinguer d'un rein sain [9]. TABLEAU I. Résultats de l'homotransplantation rénale en fonction des résultats de l'« haplotypage » dans 55 cas de greffes interfamiliales. DONNEURS SIGNIFICATION DONNEURS HL-A IDENTIQUES SEMI-IDENTIQUES STATISTIQUE OU DIFFERENTS DE LA DIFFERENCE Nombre de malades 10 45 Pourcentage de greffons fonctionnels 100 76 p = 0,05 Clearance moyenne de la créatinine des reins fonctionnels (ml /mn). 83 62 p < 0,02 Il n'est pas surprenant que l'haplotypage surpasse de beaucoup le simple recensement des différences antigéniques connues. Lorsque l'on possède assez d'éléments pour affirmer l'identité des haplotypes, cela signifie que la totalité des antigènes correspondants sont nécessairement identiques, alors que, quand on compare seulement les différences antigéniques une par une, on méconnaît, sans doute, un nombre non négligeable d'antigènes encore inconnus dans le phénotype HL-A. Malheureusement cet important progrès dans la sélection du donneur idéal, n'est applicable qu'aux greffes interfamiliales. C'est pourquoi notre intérêt s'est porté sur une deuxième technique tout à fait différente, la culture mixte des lymphocytes. b) Culture mixte de lymphocytes. Il y a cinq ans, Barbara Bain, à Montréal, et Fritz Bach, à New York, démontraient que la culture en commun des lymphocytes de deux sujets différents donnait naissance à de volumineuses cellules d'aspect blastique, en nombre d'autant plus élevé que les sujets étaient plus histo-incompatibles. Or, appliquant cette technique aux transplantations d'organe, nous avons établi qu'elle a une valeur prédictive très hautement significative des résultats cliniques de la greffe de rein [2] (tableau II). TABLEAU II. Corrélation entre les résultats de la culture mixte de lymphocytes du donneur et du receveur et les résultats de l'homotransplantation rénale (36 cas ; corrélation très significative : p < 0,001).