jeanflop/post_ocr_correction2 huggingface dataset:
démontrer le rôle essentiel de certains facteurs dans le mécanisme du tactisme [10]. Rappelons que cette technique consiste à déposer une goutte de suspension contenant des polynucléaires sur une lame recouverte de grains d'amidon de pomme de terre fixés par dessiccation. On recouvre cette goutte d'une lamelle qu'on lute avec un mélange de vaseline et de paraffine ; puis on place la lame à l'étuve à 37° pendant une heure avant d'observer au microscope. Lorsque le tactisme est normal, les leucocytes, après avoir émis de nombreux pseudopodes, viennent s'accoler aux grains d'amidon en formant à leur surface des croissants réguliers. Quand le tactisme est anormal, les cellules montrent un contour arrondi ou bien émettent quelques pseudopodes, mais elles ne se déplacent pas vers les grains. Dans une suspension de cellules en voie d'altération, la proportion des cellules qui vont s'accoler aux grains d'amidon rend compte assez fidèlement de la proportion de cellules normales. L'état des cellules peut être précisé au microscope, par l'étude de l'activité métabolique (émission de pseudopodes) et par l'aspect morphologique (visibilité du noyau et hydrophilie du cytoplasme). Par la méthode de Comandon-Delaunay, nous avons étudié l'action sur des polynucléaires de cobayes : 1° De bacilles de Koch des souches 1137 Rv (virulents) et H37 Ra (non virulents), vivants ou tués ; 2° Du lipopolysaccharide Pmko, isolé par N. Choucroun du bacille tuberculeux. TECHNIQUE EXPÉRIMENTALE. a) Les polynucléaires de cobayes que nous avons utilisés ont été retirés d'un exsudat péritonéal inflammatoire aseptique, provoqué par des injections intrapéritonéales de bouillon de viande peptoné stérile. Les injections (respectivement de 8 cm3 et de 6 cm3) sont faites à trois heures d'intervalle et le prélèvement deux à trois heures après la dernière injection. Ces polynucléaires, après centrifugation douce pendant une minute et demie, sont remis en suspension dans l'exsudat péritonéal faiblement hépariné (1/100 000) à raison de 15 000 leucocytes par millimètre cube. b) Nos suspensions de bacilles ont été préparées, à partir de cultures sur milieu de Sauton, âgées de 4 semaines environ, des souches 1137 Rv et H37 Ra. Les bacilles vivants ou tués par chauffage à l'autoclave à
des souches 1137 Rv (virulents) et H37 Ra (non virulents), vivants ou tués ; 2° Du lipopolysaccharide Pmko, isolé par N. Choucroun du bacille tuberculeux. TECHNIQUE EXPÉRIMENTALE. a) Les polynucléaires de cobayes que nous avons utilisés ont été retirés d'un exsudat péritonéal inflammatoire aseptique, provoqué par des injections intrapéritonéales de bouillon de viande peptoné stérile. Les injections (respectivement de 8 cm3 et de 6 cm3) sont faites à trois heures d'intervalle et le prélèvement deux à trois heures après la dernière injection. Ces polynucléaires, après centrifugation douce pendant une minute et demie, sont remis en suspension dans l'exsudat péritonéal faiblement hépariné (1/100 000) à raison de 15 000 leucocytes par millimètre cube. b) Nos suspensions de bacilles ont été préparées, à partir de cultures sur milieu de Sauton, âgées de 4 semaines environ, des souches 1137 Rv et H37 Ra. Les bacilles vivants ou tués par chauffage à l'autoclave à 120° ont été filtrés, lavés sur le filtre, puis lavés trois fois à l'eau distillée par centrifugation, avant leur mise en suspension dans l'eau physiologique. Les amas de bacilles ont été éliminés par une courte centrifugation (trente secondes environ) à 4 000 tours par minute et par une décantation de plusieurs heures. La concentration en germes des suspensions utilisées fut environ de 1 500 millions par centimètre cube, ou d'une concentration plus élevée (environ du double) pour certaines expériences. c) Les émulsions en eau physiologique du lipopolysaccharide Pmko, qui contenaient 1 ou 2 mg par centimètre cube, ont été préparées à partir d'une solution éthérée contenant 1 mg de ce constituant par centimètre cube. Un volume défini de cette solution est ajouté goutte à goutte à un certain volume d'eau distillée, l'addition de chaque goutte étant suivie d'une vive agitation pour provoquer l'évaporation de l'éther. Quand cette opération est terminée, on double le volume de l'émulsion obtenue au moyen d'une solution de chlorure de sodium à 16 g par litre, pour obtenir une solution isotonique, dont la concentration en Pmko sera définie par le nombre de centimètres cubes de solution éthérée utilisée, rapporté à 1 cm3 du volume de l'émulsion
plusieurs heures. La concentration en germes des suspensions utilisées fut environ de 1 500 millions par centimètre cube, ou d'une concentration plus élevée (environ du double) pour certaines expériences. c) Les émulsions en eau physiologique du lipopolysaccharide Pmko, qui contenaient 1 ou 2 mg par centimètre cube, ont été préparées à partir d'une solution éthérée contenant 1 mg de ce constituant par centimètre cube. Un volume défini de cette solution est ajouté goutte à goutte à un certain volume d'eau distillée, l'addition de chaque goutte étant suivie d'une vive agitation pour provoquer l'évaporation de l'éther. Quand cette opération est terminée, on double le volume de l'émulsion obtenue au moyen d'une solution de chlorure de sodium à 16 g par litre, pour obtenir une solution isotonique, dont la concentration en Pmko sera définie par le nombre de centimètres cubes de solution éthérée utilisée, rapporté à 1 cm3 du volume de l'émulsion finale. L'émulsion la plus concentrée a été préparée par addition de 10 cm3 de la solution éthérée à 2,5 cm3 d'eau distillée, puis de 2,5 cm3 de solution de chlorure de sodium à 16 g par litre, à l'émulsion obtenue. Avant utilisation, les émulsions sont placées sous vide, dans un dessiccateur, pour éliminer toute trace d'éther. d) Les suspensions de leucocytes, préparées comme nous l'avons indiqué, sont mélangées, en volume égal, à des suspensions de bacilles ou de lipopolysaccharide Pmko, suspensions obtenues selon les procédés décrits ci-dessus. Une autre partie de la suspension leucocytaire est additionnée d'un même volume d'eau physiologique et conservée comme témoin. Ces différents mélanges, ainsi que la suspension témoin, sont maintenus une heure à l'étuve à 37° avec une faible agitation. Chaque échantillon est ensuite divisé en deux fractions égales. Sur la première, nous avons fait immédiatement un examen de la phagocytose (par étalage sur lames et coloration par la méthode de Ziehl) et une étude du tactisme leucocytaire (par la méthode rappelée ci-dessus). Les mêmes examens ont été faits sur la seconde fraction, celle-ci ayant été, au préalable, conservée seize à dix-huit heures à 4°. RÉSULTATS. 1° EXPÉRIENCES FAITES AVEC LES BACILLES DE KOCH. —
dessiccateur, pour éliminer toute trace d'éther. d) Les suspensions de leucocytes, préparées comme nous l'avons indiqué, sont mélangées, en volume égal, à des suspensions de bacilles ou de lipopolysaccharide Pmko, suspensions obtenues selon les procédés décrits ci-dessus. Une autre partie de la suspension leucocytaire est additionnée d'un même volume d'eau physiologique et conservée comme témoin. Ces différents mélanges, ainsi que la suspension témoin, sont maintenus une heure à l'étuve à 37° avec une faible agitation. Chaque échantillon est ensuite divisé en deux fractions égales. Sur la première, nous avons fait immédiatement un examen de la phagocytose (par étalage sur lames et coloration par la méthode de Ziehl) et une étude du tactisme leucocytaire (par la méthode rappelée ci-dessus). Les mêmes examens ont été faits sur la seconde fraction, celle-ci ayant été, au préalable, conservée seize à dix-huit heures à 4°. RÉSULTATS. 1° EXPÉRIENCES FAITES AVEC LES BACILLES DE KOCH. — a) Dans les conditions expérimentales décrites, la phagocytose des bacilles de Koch H37 Rv et H37 Ra, morts ou vivants, se produit avec une intensité variable. Cette intensité dépend de plusieurs facteurs : elle s'accroît avec la richesse des suspensions en germes. Elle varie avec la virulence des bacilles : les germes avirulents étant plus aisément phagocytés que les germes virulents. Elle est conditionnée par le temps de contact entre les phagocytes et les bacilles : après une heure de séjour à 37°C, la proportion de cellules ayant englobé un ou plusieurs bacilles est assez faible, tandis qu'après seize heures de contact à 4° le nombre de ces cellules est beaucoup plus élevé et de nombreuses cellules renferment jusqu'à 8 et 10 bacilles. b) L'épreuve de tactisme faite avec les polynucléaires qui ont phagocyté des bacilles de Koch montre que ce tactisme est toujours diminué. Les cellules chargées de bacilles se dirigent beaucoup moins activement vers les grains d'amidon. Cette abolition du tactisme est surtout remarquable dans les préparations où la phagocytose a été particulièrement intense, en d'autres termes, dans celles qui se caractérisent par un nombre élevé de cellules chargées de bacilles de Koch. En bref, les résultats obtenus
les germes avirulents étant plus aisément phagocytés que les germes virulents. Elle est conditionnée par le temps de contact entre les phagocytes et les bacilles : après une heure de séjour à 37°C, la proportion de cellules ayant englobé un ou plusieurs bacilles est assez faible, tandis qu'après seize heures de contact à 4° le nombre de ces cellules est beaucoup plus élevé et de nombreuses cellules renferment jusqu'à 8 et 10 bacilles. b) L'épreuve de tactisme faite avec les polynucléaires qui ont phagocyté des bacilles de Koch montre que ce tactisme est toujours diminué. Les cellules chargées de bacilles se dirigent beaucoup moins activement vers les grains d'amidon. Cette abolition du tactisme est surtout remarquable dans les préparations où la phagocytose a été particulièrement intense, en d'autres termes, dans celles qui se caractérisent par un nombre élevé de cellules chargées de bacilles de Koch. En bref, les résultats obtenus peuvent être schématisés dans le tableau ci-dessous : PHAGOCYTOSE TACTISME Témoins : polynucléaires seuls 0 ++++ Bacilles Il 31 Rv + polynucléaires ++ +++ Bacilles H37 Rv + polynucléaires + -|—[-+ + Bacilles H 37 Ra + polynucléaires ++ +++ Bacilles H37 Ra + polynucléaires + + + + + + L'inhibition du tactisme s'observe après phagocytose de bacilles virulents et avirulents vivants ou tués mais, pour un minimum de germes phagocytés, le tactisme est nettement plus faible après phagocytose de germes virulents. Tout se passe comme si l'inhibition du tactisme d'un leucocyte était obtenue avec un nombre de bacilles virulents moins élevé que le nombre de bacilles avirulents nécessaire pour produire le même effet. c) Cette perte du pouvoir chimiotactique est d'autant plus intéressante à signaler qu'elle semble représenter le premier stade d'une altération de la cellule. On constate que, parmi les cellules chargées de bacilles de Koch qui ne migrent pas, la plupart d'entre elles sont encore capables d'activité pseudopodique et conservent leur pouvoir phagocytaire. C'est ainsi qu'après une heure de contact à 37°C avec une suspension de staphylocoques, ces polynucléaires, infestés de bacilles de Koch et incapables de se déplacer, ont phagocyté les cocci aussi abondamment que
+ L'inhibition du tactisme s'observe après phagocytose de bacilles virulents et avirulents vivants ou tués mais, pour un minimum de germes phagocytés, le tactisme est nettement plus faible après phagocytose de germes virulents. Tout se passe comme si l'inhibition du tactisme d'un leucocyte était obtenue avec un nombre de bacilles virulents moins élevé que le nombre de bacilles avirulents nécessaire pour produire le même effet. c) Cette perte du pouvoir chimiotactique est d'autant plus intéressante à signaler qu'elle semble représenter le premier stade d'une altération de la cellule. On constate que, parmi les cellules chargées de bacilles de Koch qui ne migrent pas, la plupart d'entre elles sont encore capables d'activité pseudopodique et conservent leur pouvoir phagocytaire. C'est ainsi qu'après une heure de contact à 37°C avec une suspension de staphylocoques, ces polynucléaires, infestés de bacilles de Koch et incapables de se déplacer, ont phagocyté les cocci aussi abondamment que des polynucléaires témoins ne contenant pas de bacilles de Koch. Par ailleurs, l'examen microscopique montre, mêlées à des polynucléaires étalés, des cellules encore vivantes, au contour arrondi et au noyau inapparent, et enfin quelques éléments altérés dont le protoplasme granuleux se gonfle peu à peu par absorption d'eau, tandis que le noyau devient réfringent et bien visible : cet aspect caractéristique révèle une atteinte profonde allant jusqu'à la mort cellulaire. En général, la proportion de cellules arrondies (absence de pseudopodes) et de cellules à protoplasme granuleux est très faible après la phagocytose à 37°C pendant une heure, légèrement plus élevée après un séjour prolongé à 4°. Elle est toujours à peu près nulle dans les suspensions de leucocytes témoins, sans bacilles. Parfois, lorsqu'il s'agit de germes virulents, le nombre de cellules en voie d'altération est plus important et déjà facilement appréciable après une heure de phagocytose à 37°C. Il apparaît donc que l'action toxique des germes de souche virulente est plus rapide et plus intense que celle des mêmes germes de souche non virulente. 20 EXPÉRIENCES FAITES AVEC LE LIPOPOLYSACCHARIDE PMKO. L'action du lipopolysaccharide Pmko sur les polynucléaires a été étudiée dans les mêmes conditions que celles décrites pour les
le noyau devient réfringent et bien visible : cet aspect caractéristique révèle une atteinte profonde allant jusqu'à la mort cellulaire. En général, la proportion de cellules arrondies (absence de pseudopodes) et de cellules à protoplasme granuleux est très faible après la phagocytose à 37°C pendant une heure, légèrement plus élevée après un séjour prolongé à 4°. Elle est toujours à peu près nulle dans les suspensions de leucocytes témoins, sans bacilles. Parfois, lorsqu'il s'agit de germes virulents, le nombre de cellules en voie d'altération est plus important et déjà facilement appréciable après une heure de phagocytose à 37°C. Il apparaît donc que l'action toxique des germes de souche virulente est plus rapide et plus intense que celle des mêmes germes de souche non virulente. 20 EXPÉRIENCES FAITES AVEC LE LIPOPOLYSACCHARIDE PMKO. L'action du lipopolysaccharide Pmko sur les polynucléaires a été étudiée dans les mêmes conditions que celles décrites pour les bacilles de Koch, en utilisant les émulsions dont nous avons indiqué la préparation. Bien que ce constituant soit partiellement acido-résistant, la coloration des étalages par le Ziehl n'a pas toujours permis de conclure à une phagocytose certaine. Il est possible que les particules phagocytées soient ultra-microscopiques, ou que la substance se trouve fixée à la surface des cellules et éliminée au cours des diverses opérations de coloration. Néanmoins, si la localisation de ce lipopolysaccharide n'est pas facilement décelable, son influence sur le tactisme des polynucléaires est manifeste et tout à fait comparable à celle observée dans le cas des bacilles virulents. L'abolition du tactisme est d'autant plus intense que le temps de contact des polynucléaires avec l'émulsion de lipopolysaccharide a été plus long. A temps de contact égal, l'inhibition est d'autant plus importante que la concentration en lipopolysaccharide est plus élevée. De plus, l'examen microscopique des préparations semble indiquer que l'action toxique sur la cellule est plus marquée que dans le cas des bacilles même virulents, car la proportion de globules blancs incapables d'activité pseudopodique et celle des cellules altérées croissent plus rapidement avec le temps. DISCUSSION. Nos essais montrent que la phagocytose du bacille de Koch par les polynucléaires
se trouve fixée à la surface des cellules et éliminée au cours des diverses opérations de coloration. Néanmoins, si la localisation de ce lipopolysaccharide n'est pas facilement décelable, son influence sur le tactisme des polynucléaires est manifeste et tout à fait comparable à celle observée dans le cas des bacilles virulents. L'abolition du tactisme est d'autant plus intense que le temps de contact des polynucléaires avec l'émulsion de lipopolysaccharide a été plus long. A temps de contact égal, l'inhibition est d'autant plus importante que la concentration en lipopolysaccharide est plus élevée. De plus, l'examen microscopique des préparations semble indiquer que l'action toxique sur la cellule est plus marquée que dans le cas des bacilles même virulents, car la proportion de globules blancs incapables d'activité pseudopodique et celle des cellules altérées croissent plus rapidement avec le temps. DISCUSSION. Nos essais montrent que la phagocytose du bacille de Koch par les polynucléaires conduit à une inhibition du tactisme leucocytaire. Cette inhibition se produit, non seulement avec les bacilles virulents, mais aussi avec les bacilles avirulents. L'action inhibitrice exercée par chaque sorte de bacilles est d'autant plus forte que la phagocytose a été plus intense. Cependant, l'inhibition du tactisme leucocytaire se produit, dans le cas des bacilles virulents, pour un nombre de bacilles inférieur à celui des bacilles avirulents présents dans les cellules dont la sensibilité chimiotactique est suspendue. Cette dernière observation souligne encore une fois que la différence d'action exercée entre les bacilles virulents et les bacilles avirulents est seulement une différence d'ordre quantitatif, probablement due à la présence en proportions différentes à la surface de la bactérie d'un ou de plusieurs facteurs de virulence. L'action inhibitrice exercée par le lipopolysaccharide Pmko, dont le mode d'extraction par l'huile de paraffine et certaines propriétés semblent indiquer qu'il se trouve à la surface de la bactérie, et le fait démontré que ce constituant peut être extrait du bacille en quantités d'autant plus grandes que la virulence est plus forte, suggèrent l'idée que ce dernier est peut-être, au moins en partie, responsable de l'action toxique exercée sur les polynucléaires par les bacilles de Koch phagocytés.
le cas des bacilles virulents, pour un nombre de bacilles inférieur à celui des bacilles avirulents présents dans les cellules dont la sensibilité chimiotactique est suspendue. Cette dernière observation souligne encore une fois que la différence d'action exercée entre les bacilles virulents et les bacilles avirulents est seulement une différence d'ordre quantitatif, probablement due à la présence en proportions différentes à la surface de la bactérie d'un ou de plusieurs facteurs de virulence. L'action inhibitrice exercée par le lipopolysaccharide Pmko, dont le mode d'extraction par l'huile de paraffine et certaines propriétés semblent indiquer qu'il se trouve à la surface de la bactérie, et le fait démontré que ce constituant peut être extrait du bacille en quantités d'autant plus grandes que la virulence est plus forte, suggèrent l'idée que ce dernier est peut-être, au moins en partie, responsable de l'action toxique exercée sur les polynucléaires par les bacilles de Koch phagocytés. Nos observations sur l'état des cellules après la phagocytose montrent que l'action toxique peut d'abord être mise en évidence par une atteinte du pouvoir migrateur vers les substances chimiotactiques, les modifications de la structure cellulaire apparaissant plus tard. Comment peut-on interpréter cette action toxique ? Dans un travail récent, J. Lebrun et A. Delaunay ont montré que des effecteurs d'enzymes comme l'azide de sodium, l'hydroxylamine, le diéthyldithiocarbamate de sodium, etc., sont capables, comme le cyanure, de suspendre in vitro le déplacement des polynucléaires vers des substances chimiques qui normalement les attirent. On peut se demander si le bacille de Koch, par l'intermédiaire de certains de ses constituants, n'agirait pas sur le tactisme des leucocytes par le même mécanisme d'inhibition d'enzymes cellulaires. En faveur de cette hypothèse, on peut également faire valoir les résultats des recherches de C. Weiss et de ses collaborateurs, qui ont mis en évidence le pouvoir anti-enzymatique de certains polysaccharides extraits du bacille tuberculeux, en particulier du lipopolysaccharide Pmko, dont l'action cytotoxique, comme nous venons de le voir, est importante. On sait enfin que, dès 1944, G. Middlebrook a considéré la possibilité d'une inhibition d'enzymes cellulaires par certains constituants du bacille de Koch dans les phénomènes pathologiques
Lebrun et A. Delaunay ont montré que des effecteurs d'enzymes comme l'azide de sodium, l'hydroxylamine, le diéthyldithiocarbamate de sodium, etc., sont capables, comme le cyanure, de suspendre in vitro le déplacement des polynucléaires vers des substances chimiques qui normalement les attirent. On peut se demander si le bacille de Koch, par l'intermédiaire de certains de ses constituants, n'agirait pas sur le tactisme des leucocytes par le même mécanisme d'inhibition d'enzymes cellulaires. En faveur de cette hypothèse, on peut également faire valoir les résultats des recherches de C. Weiss et de ses collaborateurs, qui ont mis en évidence le pouvoir anti-enzymatique de certains polysaccharides extraits du bacille tuberculeux, en particulier du lipopolysaccharide Pmko, dont l'action cytotoxique, comme nous venons de le voir, est importante. On sait enfin que, dès 1944, G. Middlebrook a considéré la possibilité d'une inhibition d'enzymes cellulaires par certains constituants du bacille de Koch dans les phénomènes pathologiques de la tuberculose. RÉSUMÉ. 1° La phagocytose de bacilles de Koch par les polynucléaires de cobaye diminue ou supprime la sensibilité chimiotactique des cellules (examen du tactisme sur les grains d'amidon de pomme de terre). 2° L'inhibition du tactisme se produit après absorption de bacilles vivants ou tués, virulents ou non virulents. Elle est d'autant plus prononcée que la phagocytose a été plus importante. 3° Cette inhibition s'accompagne d'abord d'une persistance de l'activité pseudopodique, puis d'une perte de cette activité, enfin d'altérations cellulaires cytoplasmiques et nucléaires qui aboutissent plus ou moins rapidement à la mort de la cellule. 4° Le lipopolysaccharide antigénique, extrait du bacille tuberculeux par N. Choucroun, exerce sur le tactisme des polynucléaires une action inhibitrice égale à celle des bacilles virulents. Les propriétés spécifiques déjà établies de ce constituant permettent de supposer qu'il est, au moins en partie, responsable de l'action toxique exercée sur les polynucléaires par les bacilles de Koch phagocytés. Pour expliquer le mécanisme de cette action toxique, il paraît possible de faire intervenir un blocage de systèmes enzymatiques cellulaires. BIBLIOGRAPHIE [1] A. BORREL. Ces Annales, 1893, 7, 593. [2] N. CHOUCROUN. C. R. Acad. Sei., 1939, 208, 1757; Am. Rev. Tub., 1947, 3, 203.