jeanflop/post_ocr_correction2 huggingface dataset:
[15] Jones M.H., Sands R., Hyman C.B. — Longitudinal study of the incidence of central nervous System damage following erythroblastosis fetalis. Pediatrics, 1954,14, 346. [16] Mayor F.J., Pages M., Diez-Guerra J., Valdivieso F., Mayor F. — Effect of postnatal anoxia on bilirubin levels in rat brain. Pediatr. Res., 1985,19, 231-236. [17] McDonald J.W., Shapiro S.M., Silverstein F.S., Johnston M.V. — Role of glutamate receptor mediated excitotoxicity in bilirubin-induced brain injury in the Gunn rat model. Exp. Neurol., 1998,150, 21-29. [18] Mitani A., Takeyasu S., Yanase H., Nakamura Y., Kataoka K. — Changes in intracellular Ca2+ and energy levels during in vitro ischemia in the gerbil hippocampal slice. J. Neurochem., 1994, 62, 626-634. [19] Oghoa E.L.M., Wennberg R., An Y., Tandon T., Takashima T., Nguyen T., Chui A. — Interactions of bilirubin with isolated presynaptic nerve terminals : functional effects on the uptake and release of neurotransmitters. Cell. Mol. Biol., 1993,13, 69-86. [20] Orth J. — Über das Vorkommen von Bilirubin Kristallen bei neugeborenen Kindern. Virchows Arch. Pathol. Anat., 1875,65,447-462. [21] Roger C., Koziel V., Vert P., Nehlig A. — Effects of bilirubin infusion on local cerebral glucose utilization in the immature rat. Dev. Brain Res., 1993, 76, 115-130. [22] Sano K., Nakamura H., Matsuo T. — Mode of inhibitory action of bilirubin on protein kinase C. Pediatr. Res., 1985,19, 587-590. [23] Schmorl C. — Zur Kenntnis des Icterus neonatorum insbesondere der dabei auftretenden Gehirnveränderungen. Verh. Deutsch. Pathol. Ges., 1904,6, 109-115. [24] Wallerstein H. — Treatment of severe erythroblastosis by simultaneous removal and replacement of the blood of the newborn infant. Science, 1946,103, 583. [25] Wolvetang E.J., Johnson K.L., Krauer K., Ralph S.J., Linnane A.W. — Mitochondrial respiratory chain inhibitors induce apoptosis. FEBS Lett., 1994,339, 40-44. [26] Zetterström R., Ernster L. — Bilirubin an uncoupler of oxidative phosphorylation in isolated mitochondria. Nature, 1956,178, 1335-1337. DISCUSSION M. Alain LARCAN La synergie hyperbilirubinémie-hypoxie est donc bien prouvée. Existe-t-il un phénomène comparable avec l’hyperoxie, l’hypercapnie et surtout l’acidose ? Qu’en est-il de l'effet « ébouleur » de la bilirubine à l’égard des radicaux libres qui a conduit un moment à respecter des taux faibles
K., Nakamura H., Matsuo T. — Mode of inhibitory action of bilirubin on protein kinase C. Pediatr. Res., 1985,19, 587-590. [23] Schmorl C. — Zur Kenntnis des Icterus neonatorum insbesondere der dabei auftretenden Gehirnveränderungen. Verh. Deutsch. Pathol. Ges., 1904,6, 109-115. [24] Wallerstein H. — Treatment of severe erythroblastosis by simultaneous removal and replacement of the blood of the newborn infant. Science, 1946,103, 583. [25] Wolvetang E.J., Johnson K.L., Krauer K., Ralph S.J., Linnane A.W. — Mitochondrial respiratory chain inhibitors induce apoptosis. FEBS Lett., 1994,339, 40-44. [26] Zetterström R., Ernster L. — Bilirubin an uncoupler of oxidative phosphorylation in isolated mitochondria. Nature, 1956,178, 1335-1337. DISCUSSION M. Alain LARCAN La synergie hyperbilirubinémie-hypoxie est donc bien prouvée. Existe-t-il un phénomène comparable avec l’hyperoxie, l’hypercapnie et surtout l’acidose ? Qu’en est-il de l'effet « ébouleur » de la bilirubine à l’égard des radicaux libres qui a conduit un moment à respecter des taux faibles de l’hyperbilirubinémie ? Existe-t-il des déductions thérapeutiques concernant les traitements classiques (exsanguino-transfusion, photothérapie-barbituriques) ou potentiels ? Bien que le rôle possible de l’hyperoxie, de l’hypercapnie et de l’acidose n’ait pas fait l’objet d’études de notre part, des données de la littérature permettent de répondre que ces trois situations métaboliques ont un rôle défavorable, mais par des mécanismes différents. L’hyperoxie induisant la production de radicaux superoxyde peut endommager l’endothélium artériolaire cérébral, donc la barrière hémato-encéphalique. L’hypercapnie augmente le débit sanguin cérébral, donc la quantité de bilirubine libre offerte aux échanges avec le tissu nerveux. Ces deux mécanismes sont donc susceptibles d’aggraver l'exposition des cellules cérébrales à la bilirubine non conjuguée. Quant à l’acidose, il est connu qu’elle favorise le dépôt d’agrégats de bilirubine acide qui se lient aux phospholipides des membranes cellulaires. M. Georges DAVID Vous avez démontré par votre étude expérimentale que l’ictère nucléaire n’a pas un mécanisme univoque, l’hyperbilirubinémie, mais que l’hypoxie intervient également. N’y a-t-il pas encore un autre facteur, l’immaturité neuronale ? Avez-vous appliqué votre protocole expérimental à des cellules de différents âges ? En ce qui concerne les conséquences cliniques de votre travail, vos constatations n’impliquent-elles pas une révision des règles de surveillance postnatale de l’hyperbilirubinémie
un rôle défavorable, mais par des mécanismes différents. L’hyperoxie induisant la production de radicaux superoxyde peut endommager l’endothélium artériolaire cérébral, donc la barrière hémato-encéphalique. L’hypercapnie augmente le débit sanguin cérébral, donc la quantité de bilirubine libre offerte aux échanges avec le tissu nerveux. Ces deux mécanismes sont donc susceptibles d’aggraver l'exposition des cellules cérébrales à la bilirubine non conjuguée. Quant à l’acidose, il est connu qu’elle favorise le dépôt d’agrégats de bilirubine acide qui se lient aux phospholipides des membranes cellulaires. M. Georges DAVID Vous avez démontré par votre étude expérimentale que l’ictère nucléaire n’a pas un mécanisme univoque, l’hyperbilirubinémie, mais que l’hypoxie intervient également. N’y a-t-il pas encore un autre facteur, l’immaturité neuronale ? Avez-vous appliqué votre protocole expérimental à des cellules de différents âges ? En ce qui concerne les conséquences cliniques de votre travail, vos constatations n’impliquent-elles pas une révision des règles de surveillance postnatale de l’hyperbilirubinémie en fonction en particulier de l’hypoxie, du degré de prématurité ? Nous n'avons pas testé de neurones d’âge différent. Cependant, des travaux de TW Hansen ont montré que la quantité de bilirubine-oxydase, tant dans les neurones que dans les cellules gliales, augmente avec la maturité. Ceci confirme que l’immaturité neuronale joue un rôle. Il faut y ajouter la maturation de la barrière hématoencéphalique. Au sujet des conséquences cliniques, la notion de prématurité est déjà prise en compte pour les seuils décisionnels de photothérapie ou d’exsanguino-transfusion. En revanche, la notion d’hypoxie antérieure ou contemporaine de l’hyperbilirubinémie ne figure pas dans les protocoles. Nos résultats suggèrent que la majoration des risques d’encéphalopathie du fait de l’hypoxie intervient, au cas par cas, dans les choix thérapeutiques. M. Jean-Jacques HAUW Dans votre modèle de primoculture enrichie en neurones de rats, avez-vous cherché la durée d’hypoxie la plus courte entraînant une mort neuronale et l’effet du rétablissement d’une concentration normale en oxygène ? Avez-vous analysé les cellules neurogliales ? Jean-Luc Daval a, dans notre laboratoire, testé l’effet d’une hypoxie de 3 heures comparée à celle de 6 heures présentée ici. Le résultat est surprenant. Une hypoxie plus courte n’a pas, sur ce modèle, entraîné d’accroissement
joue un rôle. Il faut y ajouter la maturation de la barrière hématoencéphalique. Au sujet des conséquences cliniques, la notion de prématurité est déjà prise en compte pour les seuils décisionnels de photothérapie ou d’exsanguino-transfusion. En revanche, la notion d’hypoxie antérieure ou contemporaine de l’hyperbilirubinémie ne figure pas dans les protocoles. Nos résultats suggèrent que la majoration des risques d’encéphalopathie du fait de l’hypoxie intervient, au cas par cas, dans les choix thérapeutiques. M. Jean-Jacques HAUW Dans votre modèle de primoculture enrichie en neurones de rats, avez-vous cherché la durée d’hypoxie la plus courte entraînant une mort neuronale et l’effet du rétablissement d’une concentration normale en oxygène ? Avez-vous analysé les cellules neurogliales ? Jean-Luc Daval a, dans notre laboratoire, testé l’effet d’une hypoxie de 3 heures comparée à celle de 6 heures présentée ici. Le résultat est surprenant. Une hypoxie plus courte n’a pas, sur ce modèle, entraîné d’accroissement de la mort neuronale mais, au contraire, a provoqué un phénomène d’entrée dans le cycle cellulaire avec de nombreuses mitoses. Nous n'avons pas testé d’autres temps d’hypoxie, ni mesuré l’effet de la bilirubine sur les cellules gliales. Cependant, il est connu que ses effets toxiques s’exercent également sur les astrocytes. M. Gabriel BLANCHER Vous avez fait allusion au rôle possible dans l’aggravation de la courte durée d’hospitalisation de la mère et de l’enfant dans le post-partum. Pouvez-vous préciser ce point ? L’ictère nucléaire avait pratiquement disparu dans tous les pays où une surveillance néonatale des taux de bilirubine libre était instaurée. C’est aux États-Unis (et plus récemment au Danemark) qu’a été publiée une résurgence de cette affection du fait des très courtes durées d’hospitalisation de la mère et de l’enfant et, dans certains cas, de l’absence d’un suivi efficace à domicile. Un registre national des ictères nucléaires a été mis en place, une association de parents d’enfants atteints a été créée. Ceci a permis que des dispositions réglementaires interdisent aux organismes d’assurance-maladie d’inciter à la sortie des maternités avant quarante-huit heures. Durant ce temps, il appartient aux médecins de tenter de définir le risque d’hémolyse et de s’opposer à une
M. Gabriel BLANCHER Vous avez fait allusion au rôle possible dans l’aggravation de la courte durée d’hospitalisation de la mère et de l’enfant dans le post-partum. Pouvez-vous préciser ce point ? L’ictère nucléaire avait pratiquement disparu dans tous les pays où une surveillance néonatale des taux de bilirubine libre était instaurée. C’est aux États-Unis (et plus récemment au Danemark) qu’a été publiée une résurgence de cette affection du fait des très courtes durées d’hospitalisation de la mère et de l’enfant et, dans certains cas, de l’absence d’un suivi efficace à domicile. Un registre national des ictères nucléaires a été mis en place, une association de parents d’enfants atteints a été créée. Ceci a permis que des dispositions réglementaires interdisent aux organismes d’assurance-maladie d’inciter à la sortie des maternités avant quarante-huit heures. Durant ce temps, il appartient aux médecins de tenter de définir le risque d’hémolyse et de s’opposer à une rupture de surveillance. Une méthode de mesure du monoxyde de carbone dans l’air expiré comme reflet de la vitesse d’hémolyse a été récemment proposée. Si les résultats sont intéressants, le coût de cette technique est élevé. La meilleure mesure préventive en cas de sortie précoce de la maternité demeure un suivi à domicile ou à l’hôpital. Protection in vitro des fonctions mitochondriales cérébrales par le E-resvératrol dans les états d’anoxie suivie de réoxygénation Protection of CNS mitochondrial functions by E-resveratrol in anoxia followed by reoxygenation Jean-Paul TILLEMENT RÉSUMÉ Nous avons recherché sur un modèle expérimental d’anoxie-réoxygénation appliqué à des suspensions de mitochondries isolées d’encéphale de Rat, les effets du resvératrol ajouté à la préparation ou injecté au préalable à des rats dont on a ensuite extrait les mitochondries. Sur ce modèle, on observe que le resvératrol s’oppose aux effets découlants induits par l’anoxie et la réoxygénation. Il inhibe ainsi totalement la libération de cytochrome c intermembranaire, stade initial de l’apoptose mitochondriale, et s’oppose à la formation d’ATP qui l’effectue. Ces effets sont concentration-dépendants et s’observent à des concentrations très basses. On en conclut que le resvératrol limite ou supprime les effets délétères mitochondriaux provoqués par une anoxie suivie de réoxygénation.
suivi à domicile ou à l’hôpital. Protection in vitro des fonctions mitochondriales cérébrales par le E-resvératrol dans les états d’anoxie suivie de réoxygénation Protection of CNS mitochondrial functions by E-resveratrol in anoxia followed by reoxygenation Jean-Paul TILLEMENT RÉSUMÉ Nous avons recherché sur un modèle expérimental d’anoxie-réoxygénation appliqué à des suspensions de mitochondries isolées d’encéphale de Rat, les effets du resvératrol ajouté à la préparation ou injecté au préalable à des rats dont on a ensuite extrait les mitochondries. Sur ce modèle, on observe que le resvératrol s’oppose aux effets découlants induits par l’anoxie et la réoxygénation. Il inhibe ainsi totalement la libération de cytochrome c intermembranaire, stade initial de l’apoptose mitochondriale, et s’oppose à la formation d’ATP qui l’effectue. Ces effets sont concentration-dépendants et s’observent à des concentrations très basses. On en conclut que le resvératrol limite ou supprime les effets délétères mitochondriaux provoqués par une anoxie suivie de réoxygénation. Mots-clés : Anoxie. Antioxydant. Encéphale. Anti-enzymes. Mitochondrie. Consommation d’oxygène. Stilbènes. Resvératrol. SUMMARY Using an experimental model of anoxia-reoxygenation applied to suspensions of mitochondria isolated from rat cortex, we have searched the effects of resveratrol added to the suspension or previously injected to rats from which mitochondria were extracted. With this model, we observe that resveratrol counteracts decoupling effects induced by anoxia-reoxygenation. It also fully inhibits intermembrane cytochrome c release, initial step of mitochondrial apoptosis and blocks ATP generation which achieves it. These effects are concentration-dependent and take place at low concentrations. It is concluded that resveratrol limits or suppresses the mitochondrial deleterious effects promoted by anoxia followed by reoxygenation. Key-words (Index Medicus) : Anoxia. Antioxidants. Brain. Enzyme inhibitors. Mitochondria. Oxygen consumption. Stilbenes. Resveratrol. INTRODUCTION Different substances antioxidants are currently proposed to limit the toxic effects of excessive radical formation of the oxygen (ROS). These substances are formed in quantity (pathological) important when the respiratory chain of the mitochondria cannot completely reduce the entire oxygen which it receives. This situation is observed particularly in oxidative stress, in cases of reperfusion when it succeeds to an ischemia and more generally in cellular aging. E-resveratrol or trans-resveratrol, 3,4,5,-trihydroxy-E-stilbene (named resveratrol within the text),
model, we observe that resveratrol counteracts decoupling effects induced by anoxia-reoxygenation. It also fully inhibits intermembrane cytochrome c release, initial step of mitochondrial apoptosis and blocks ATP generation which achieves it. These effects are concentration-dependent and take place at low concentrations. It is concluded that resveratrol limits or suppresses the mitochondrial deleterious effects promoted by anoxia followed by reoxygenation. Key-words (Index Medicus) : Anoxia. Antioxidants. Brain. Enzyme inhibitors. Mitochondria. Oxygen consumption. Stilbenes. Resveratrol. INTRODUCTION Different substances antioxidants are currently proposed to limit the toxic effects of excessive radical formation of the oxygen (ROS). These substances are formed in quantity (pathological) important when the respiratory chain of the mitochondria cannot completely reduce the entire oxygen which it receives. This situation is observed particularly in oxidative stress, in cases of reperfusion when it succeeds to an ischemia and more generally in cellular aging. E-resveratrol or trans-resveratrol, 3,4,5,-trihydroxy-E-stilbene (named resveratrol within the text), is a phytoalexin which develops experimentally antioxidant properties, more precisely by capturing and inactivating free radicals. They seem to be at the origin of several pharmacological effects of this substance, anti-inflammatory [2], anti-platelet aggregation [3], anti-ischémic cardiac [4] and more recently anti-tumoral [5], This latter effect has been demonstrated in vitro on lines of cancer mammary cells and seems linked to the properties estrogenic of resveratrol, which is an agonist partial of the receptors of estradiol [6]. For our part, considering that these antioxidant effects could develop in other organs provided that resveratrol reaches them in sufficient quantity, we have researched, in a first time, the effects of resveratrol on the brain using a simplified model, the mitochondria isolated from the brain of Rat. We have been able to show that this substance traps free radicals of oxygen, but also prevents their formation from the complex III of the respiratory chain of the mitochondria [7]. The activity of this latter being inhibited in a competitive way by resveratrol, it was therefore tempting to enquire about its eventual effect on more complex models. We have retained a protocol of anoxia followed by reoxygenation applied to mitochondrial suspensions of brain of Rat
vitro on lines of cancer mammary cells and seems linked to the properties estrogenic of resveratrol, which is an agonist partial of the receptors of estradiol [6]. For our part, considering that these antioxidant effects could develop in other organs provided that resveratrol reaches them in sufficient quantity, we have researched, in a first time, the effects of resveratrol on the brain using a simplified model, the mitochondria isolated from the brain of Rat. We have been able to show that this substance traps free radicals of oxygen, but also prevents their formation from the complex III of the respiratory chain of the mitochondria [7]. The activity of this latter being inhibited in a competitive way by resveratrol, it was therefore tempting to enquire about its eventual effect on more complex models. We have retained a protocol of anoxia followed by reoxygenation applied to mitochondrial suspensions of brain of Rat placed either in the presence of increasing concentrations of resveratrol, or extracted from brains of rats to which this substance had been administered continuously for a week. On these two types of mitochondrial preparations, we have searched whether resveratrol modified the alterations of functions provoked by the sequences of anoxia with or without reoxygenation and, if so, in what sense. Several mitochondrial functions have been studied, the basal respiration and the phosphorylation oxidative, the production of anion superoxide (O2 -), the resistance to decoupling agents. A possible prevention of the triggering of the mitochondrial stage of apoptosis has been sought by measuring the effect of resveratrol on the liberation of cytochrome c intermembrane and on the activity of the NADH cytochrome b5 oxidoreductase which, in the presence of cytochrome c and of NADH (in excess), activates the complex IV which permits the generation of ATP which triggers the apoptosis. MATERIALS AND METHODS Reagents All the reagents used are of analytical quality and are supplied by various laboratories. The resveratrol is dissolved in a mixture of dimethylformamide and distilled water (parts equal), the mother solution is at 10-3 M. All the controls use the same solvent: the final solutions do not
with or without reoxygenation and, if so, in what sense. Several mitochondrial functions have been studied, the basal respiration and the phosphorylation oxidative, the production of anion superoxide (O2 -), the resistance to decoupling agents. A possible prevention of the triggering of the mitochondrial stage of apoptosis has been sought by measuring the effect of resveratrol on the liberation of cytochrome c intermembrane and on the activity of the NADH cytochrome b5 oxidoreductase which, in the presence of cytochrome c and of NADH (in excess), activates the complex IV which permits the generation of ATP which triggers the apoptosis. MATERIALS AND METHODS Reagents All the reagents used are of analytical quality and are supplied by various laboratories. The resveratrol is dissolved in a mixture of dimethylformamide and distilled water (parts equal), the mother solution is at 10-3 M. All the controls use the same solvent: the final solutions do not contain more than 0.05 % of dimethylformamide. Méthodes Isolement des mitochondries de cerveau Elles sont extraites à partir d’un homogénat de deux encéphales de Rat par centrifugations différentielles sur gradient de Percoll, selon la méthode décrite par Sims [8]. Le culot est mis en suspension dans un tampon de respiration (mannitol 300 mM, KH2PO4 10 mM, KC1 100 mM, MgCl2 5 mM, pH = 7,2 à 37° C) maintenu à 4° C. Mesures de la consommation d'oxygène par les mitochondries Elles utilisent une micro-électrode de Clark. Les mitochondries sont préincubées 15 min à 4° C avec (ou sans) résveratrol puis incubées 1 min à 37° C dans le tampon de respiration (avec ou sans inhibiteurs). La respiration mitochondriale est provoquée par l’ajout de malate/glutamate, substrat du complexe I. La consommation d’oxygène est mesurée (V4). La phosphorylation oxydative est ensuite provoquée par l’ajout d’ADP et la nouvelle consommation d’oxygène est mesurée (V3). Le contrôle respiratoire est égal à V3/V4. L’oligomycine est utilisée pour inhiber le complexe V, la carbonylcyano m-chlorophénylhydrazone (CCCP) est utilisée comme découplant. L’activité de la NADH-cytochrome b5 oxydoréductase est mesurée par la méthode décrite par La Piana et coll. [9], Protocole d'anoxie-réoxygénation in vitro Les conditions d’anoxie sont
(mannitol 300 mM, KH2PO4 10 mM, KC1 100 mM, MgCl2 5 mM, pH = 7,2 à 37° C) maintenu à 4° C. Mesures de la consommation d'oxygène par les mitochondries Elles utilisent une micro-électrode de Clark. Les mitochondries sont préincubées 15 min à 4° C avec (ou sans) résveratrol puis incubées 1 min à 37° C dans le tampon de respiration (avec ou sans inhibiteurs). La respiration mitochondriale est provoquée par l’ajout de malate/glutamate, substrat du complexe I. La consommation d’oxygène est mesurée (V4). La phosphorylation oxydative est ensuite provoquée par l’ajout d’ADP et la nouvelle consommation d’oxygène est mesurée (V3). Le contrôle respiratoire est égal à V3/V4. L’oligomycine est utilisée pour inhiber le complexe V, la carbonylcyano m-chlorophénylhydrazone (CCCP) est utilisée comme découplant. L’activité de la NADH-cytochrome b5 oxydoréductase est mesurée par la méthode décrite par La Piana et coll. [9], Protocole d'anoxie-réoxygénation in vitro Les conditions d’anoxie sont obtenues en incubant les mitochondries dans une chambre close maintenue à 37° C. Le mélange malate/glutamate est utilisé comme substrat : un ajout d’ADP permet ensuite de consommer tout l’oxygène présent. Après 5 min d’anoxie, la réoxygénation est obtenue par ouverture de la chambre et addition de tampon respiratoire frais. Puis 5 min après, la chambre est à nouveau fermée et le contrôle respiratoire est mesuré comme précédemment. Les témoins sont traités dans les mêmes conditions mais sans anoxie. Des concentrations croissantes de résveratrol sont introduites dans la chambre d’incubation, soit avant les deux séquences, soit au moment de la réoxygénation. La suspension mitochondriale est ensuite centrifugée, le cytochrome c est mesuré dans le surnageant par une méthode immuno-enzymatique. La production de O2°' au cours de la réoxygénation est quantifiée par la méthode du bleu de nitrotétrazolium. L’anisotropie des membranes mitochondriales est mesurée à l’aide d’une sonde, le 1,6-diphényl - 1, 3, 5 hexatriène (DPH) par polarisation de fluorescence selon les méthodes décrites par Mecocci et coll. [10] et Ricchelli et coll. [11], Injection chronique de résveratrol Les rats sont anesthésiés par une injection SC de chloral (400 mg/kg). Une petite incision interscapulaire permet d’implanter une mini-pompe osmotique délivrant 1