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d'une petite quantité de lymphe, on peut augmenter le matériel virulent en faisant quelques passages par la voie intradermique. Si, enfin, la pulpe recueillie est sèche, on la fait macérer dans de l'eau glycérinée pendant quelques jours et on opère avec le liquide de macération comme on le fait avec la lymphe claveleuse. Si, en cours d'isolement, le virus est contaminé par des bactéries pathogènes telles que le microbe de Preisz-Nocard, le pyobacille, des microcoques ou des staphylocoques pyogènes, on s'en débarrasse par filtration. Si c'est le germe de l'agalaxie qui est en cause, il suffit de chauffer le claveau contaminé à 52-53° pendant dix minutes. De 1926 à 1932 nous avons isolé 6 virus claveleux dont nous poursuivons l'étude expérimentale. Voici la technique détaillée de leur isolement. 1° Le virus D fut isolé au cours d'une enzootie légère sévissant dans une bergerie de Draria aux environs d'Alger en automne 1926. Un animal atteint de clavelée généralisée fut sacrifié à la période d'éruption. Au niveau d'un groupe de pustules, la peau fut soulevée aseptiquement et on préleva les parties enflammées du derme et de l'hypoderme. Ce matériel fut découpé en morceaux que l'on mit à exsuder en vase clos sur un hamac de gaze. On recueillit ainsi quelques centimètres cubes de lymphe claveleuse. Le tissu qui restait sur le hamac était broyé et dilué dans trois parties d'eau physiologique. Un agneau reçut d'un côté du thorax quelques inoculations intradermiques de lymphe et de l'autre côté une inoculation sous-cutanée de dilution de pulpe. L'agneau présenta une réaction bilatérale et, en le sacrifiant au bout de neuf jours, on put recueillir une certaine quantité de pulpe et de lymphe. On fit de la même façon six passages, mais au sixième passage on voyait au sein de la réaction claveleuse quelques foyers de suppuration. Il s'agissait de pyobacillose. Une dilution de 6 centimètres cubes de claveau dans 80 centimètres cubes d'eau physiologique fut filtrée sur bougie Chamberland L 1 bis à une pression de 30 centimètres cubes de mercure pendant trente minutes. Le filtrat reconnu stérile, fut inoculé sous la peau d'un agneau
un hamac de gaze. On recueillit ainsi quelques centimètres cubes de lymphe claveleuse. Le tissu qui restait sur le hamac était broyé et dilué dans trois parties d'eau physiologique. Un agneau reçut d'un côté du thorax quelques inoculations intradermiques de lymphe et de l'autre côté une inoculation sous-cutanée de dilution de pulpe. L'agneau présenta une réaction bilatérale et, en le sacrifiant au bout de neuf jours, on put recueillir une certaine quantité de pulpe et de lymphe. On fit de la même façon six passages, mais au sixième passage on voyait au sein de la réaction claveleuse quelques foyers de suppuration. Il s'agissait de pyobacillose. Une dilution de 6 centimètres cubes de claveau dans 80 centimètres cubes d'eau physiologique fut filtrée sur bougie Chamberland L 1 bis à une pression de 30 centimètres cubes de mercure pendant trente minutes. Le filtrat reconnu stérile, fut inoculé sous la peau d'un agneau qui réagit au bout de huit jours donnant 73 grammes de pulpe et 4 centimètres cubes de claveau pur. 2° Le virus P fut isolé au cours de l'hiver 1926-1927 dans un troupeau de Perrégaux (département d'Oran) sur lequel sévissait une clavelée grave. Les mêmes manœuvres préalables furent opérées. On fit, en raison du peu de lymphe recueillie, deux passages, par inoculation intradermique. A partir du troisième passage on pratiqua une inoculation sous-cutanée d'une dilution de 1 centimètre cube de claveau dans 203 centimètres cubes d'eau salée d'un seul côté. L'animal réagit, donnant une certaine quantité de pulpe qui laissa exsuder un claveau pur. 3° Le virus M. C. fut isolé en 1931 sur un agneau provenant d'une bergerie de Maison-Carrée (environs d'Alger). Le prélèvement fut effectué comme dans les deux cas précédents. Des inoculations intradermiques et sous-cutanées furent effectuées sur l'agneau 925 qui réagit et fut sacrifié onze jours après, 1 cm 5 de son claveau dilués dans 303 centimètres cubes d'eau salée furent inoculés sous la peau de l'agneau 952 qui fut sacrifié huit jours après et donna 185 grammes de pulpe. Le claveau de 952 donnait, après ensemencement en bouillon, une culture d'un microbe banal puisque, au
fit, en raison du peu de lymphe recueillie, deux passages, par inoculation intradermique. A partir du troisième passage on pratiqua une inoculation sous-cutanée d'une dilution de 1 centimètre cube de claveau dans 203 centimètres cubes d'eau salée d'un seul côté. L'animal réagit, donnant une certaine quantité de pulpe qui laissa exsuder un claveau pur. 3° Le virus M. C. fut isolé en 1931 sur un agneau provenant d'une bergerie de Maison-Carrée (environs d'Alger). Le prélèvement fut effectué comme dans les deux cas précédents. Des inoculations intradermiques et sous-cutanées furent effectuées sur l'agneau 925 qui réagit et fut sacrifié onze jours après, 1 cm 5 de son claveau dilués dans 303 centimètres cubes d'eau salée furent inoculés sous la peau de l'agneau 952 qui fut sacrifié huit jours après et donna 185 grammes de pulpe. Le claveau de 952 donnait, après ensemencement en bouillon, une culture d'un microbe banal puisque, au cours du passage suivant sur l'agneau 59, on obtenait en neuf jours 455 grammes de pulpe et un claveau pur. 4° Le virus français FI: fut isolé dans l'Aude en 1931. On fit quatre passages par inoculation intradermique. Le claveau, recueilli au cinquième passage, fut inoculé sous la peau de l'agneau 375 qui fut sacrifié au bout de dix jours. Le claveau de cet animal était contaminé par le germe de l'agalaxie. Ne pouvant éliminer ce germe par filtration, on s'en débarrassa par un chauffage de dix minutes à 52-53°. Le claveau chauffé et dilué fut inoculé sous la peau d'un agneau qui présenta une réaction claveleuse, fut sacrifié au bout de dix jours et donna une pulpe qui laissait exsuder un claveau pur. 5° Le virus Dbsc fut isolé à la fin de 1932 sur un agneau de l'exploitation Delbosc de Maison-Carrée. La pulpe recueillie étant très sèche fut mise à macérer pendant cinq jours dans l'eau glycérinée. La macération, inoculée dans le derme de l'agneau 784, donna une réaction et l'agneau fut sacrifié le onzième jour. De la pulpe recueillie, s'écoulait un claveau pur. Ce virus fut donc isolé dès le premier passage. 6° Le virus F2 fut
l'agneau 375 qui fut sacrifié au bout de dix jours. Le claveau de cet animal était contaminé par le germe de l'agalaxie. Ne pouvant éliminer ce germe par filtration, on s'en débarrassa par un chauffage de dix minutes à 52-53°. Le claveau chauffé et dilué fut inoculé sous la peau d'un agneau qui présenta une réaction claveleuse, fut sacrifié au bout de dix jours et donna une pulpe qui laissait exsuder un claveau pur. 5° Le virus Dbsc fut isolé à la fin de 1932 sur un agneau de l'exploitation Delbosc de Maison-Carrée. La pulpe recueillie étant très sèche fut mise à macérer pendant cinq jours dans l'eau glycérinée. La macération, inoculée dans le derme de l'agneau 784, donna une réaction et l'agneau fut sacrifié le onzième jour. De la pulpe recueillie, s'écoulait un claveau pur. Ce virus fut donc isolé dès le premier passage. 6° Le virus F2 fut isolé sur un troupeau de la région d'Arles-sur-Rhône, en novembre 1932. Ici encore, la pulpe sèche fut mise à macérer dans la glycérine. Après quatre jours de contact, la macération servit à pratiquer 12 inoculations intradermiques sur l'agneau 308. Neuf jours après, de belles réactions claveleuses s'étaient développées. La pulpe prélevée laissa exsuder 5 centimètres cubes de claveau. Avec ce claveau on opéra de nouveau 12 inoculations intradermiques sur l'agneau 348 qui présenta après huit jours une clavelée généralisée et qui fut sacrifié le lendemain. On obtint une grande quantité de pulpe. Le claveau était contaminé par un diplocoque. Une filtration fut effectuée comme pour le claveau D. Le filtrat, reconnu stérile, était inoculé sous la peau de l'agneau 382 qui, sacrifié le neuvième jour, donna 315 grammes de pulpe et un claveau pur. Préparation et culture du virus claveleux. — Quand on a réussi à isoler un virus et que l'on veut obtenir de grosses quantités nécessaires à l'expérimentation ou à la production de vaccins et de serums, on utilise le procédé imaginé par Borrel. C'est l'inoculation sous-cutanée d'une dilution étendue de claveau dans l'eau salée à 8 p. 1.000. Borrel avait choisi l'hypoderme de l'abdomen de la brebis.
prélevée laissa exsuder 5 centimètres cubes de claveau. Avec ce claveau on opéra de nouveau 12 inoculations intradermiques sur l'agneau 348 qui présenta après huit jours une clavelée généralisée et qui fut sacrifié le lendemain. On obtint une grande quantité de pulpe. Le claveau était contaminé par un diplocoque. Une filtration fut effectuée comme pour le claveau D. Le filtrat, reconnu stérile, était inoculé sous la peau de l'agneau 382 qui, sacrifié le neuvième jour, donna 315 grammes de pulpe et un claveau pur. Préparation et culture du virus claveleux. — Quand on a réussi à isoler un virus et que l'on veut obtenir de grosses quantités nécessaires à l'expérimentation ou à la production de vaccins et de serums, on utilise le procédé imaginé par Borrel. C'est l'inoculation sous-cutanée d'une dilution étendue de claveau dans l'eau salée à 8 p. 1.000. Borrel avait choisi l'hypoderme de l'abdomen de la brebis. Nous pratiquons, à l'Institut Pasteur d'Algérie, l'inoculation sous la peau des faces latérales du thorax et des flancs de l'agneau. La dilution se compose de 5 à 30 centimètres cubes de claveau (suivant la souche) dans 600 centimètres cubes d'eau physiologique stérile. 300 centimètres cubes sont inoculés de chaque côté du thorax, l'animal étant maintenu en décubitus latéral. L'inoculation est pratiquée à la partie supérieure de la région si bien que, lorsque l'animal est remis sur pied, la masse injectée descend lentement et ensemence l'hypoderme de la région dans toute sa hauteur. Il se développe plus ou moins rapidement un œdème inflammatoire aigu spécifique qui intéresse le derme, l'hypoderme et les muscles superficiels de la région inoculée. La réaction arrive à maturité plus ou moins rapidement suivant la souche (cinq à onze jours). L'animal est sacrifié par saignée et, après délimitation de la réaction au cautère, on soulève un volet de la peau et on prélève toute la réaction inflammatoire sous forme de fragments musculaires et conjonctifs que l'on dépose sur un hamac de gaz tendu dans un bocal stérile. Ces fragments ou pulpe claveleuse forment une masse de 200 à 2.500 grammes suivant la souche et le claveau, exsudé
du thorax, l'animal étant maintenu en décubitus latéral. L'inoculation est pratiquée à la partie supérieure de la région si bien que, lorsque l'animal est remis sur pied, la masse injectée descend lentement et ensemence l'hypoderme de la région dans toute sa hauteur. Il se développe plus ou moins rapidement un œdème inflammatoire aigu spécifique qui intéresse le derme, l'hypoderme et les muscles superficiels de la région inoculée. La réaction arrive à maturité plus ou moins rapidement suivant la souche (cinq à onze jours). L'animal est sacrifié par saignée et, après délimitation de la réaction au cautère, on soulève un volet de la peau et on prélève toute la réaction inflammatoire sous forme de fragments musculaires et conjonctifs que l'on dépose sur un hamac de gaz tendu dans un bocal stérile. Ces fragments ou pulpe claveleuse forment une masse de 200 à 2.500 grammes suivant la souche et le claveau, exsudé est, également suivant la souche, fluide, filant ou visqueux. On dispose ainsi de grandes quantités de claveau qui peuvent permettre d'effectuer toute l'expérimentation désirée. Mais pour la production de vaccins ou de serums, c'est surtout à la pulpe claveleuse que l'on s'adresse. Cette pulpe broyée successivement au broyeur Latapie et au broyeur Chalybaus est déchirée et divisée en particules assez fines, pesée et diluée dans trois parties d'eau physiologique. On a ainsi une suspension virulente qui correspond à peu près à celle qu'utilisait Borrel en 1903 et qui, diluée à 1 p. 10.000 ou à 1 p. 20.000 est encore virulente à la dose de 1 centimètre cube inoculé sous la peau. Cette dilution est couramment employée pour l'hyperimmunisation des moutons producteurs de sérum. Pourtant, on peut lui reprocher de contenir de trop grosses particules et de s'opposer ainsi à certaines manipulations, la sensibilisation par exemple. On se débarrasse des plus gros amas par filtration sur trois épaisseurs de tarlatane et par décantation. Les très fines particules qui restent sont rassemblées par une centrifugation d'une heure à 3.600 tours à la minute (centrifugeuse de 5 litres de Jouan). Ce culot, mis en suspension dans deux parties d'eau physiologique, est encore
au broyeur Chalybaus est déchirée et divisée en particules assez fines, pesée et diluée dans trois parties d'eau physiologique. On a ainsi une suspension virulente qui correspond à peu près à celle qu'utilisait Borrel en 1903 et qui, diluée à 1 p. 10.000 ou à 1 p. 20.000 est encore virulente à la dose de 1 centimètre cube inoculé sous la peau. Cette dilution est couramment employée pour l'hyperimmunisation des moutons producteurs de sérum. Pourtant, on peut lui reprocher de contenir de trop grosses particules et de s'opposer ainsi à certaines manipulations, la sensibilisation par exemple. On se débarrasse des plus gros amas par filtration sur trois épaisseurs de tarlatane et par décantation. Les très fines particules qui restent sont rassemblées par une centrifugation d'une heure à 3.600 tours à la minute (centrifugeuse de 5 litres de Jouan). Ce culot, mis en suspension dans deux parties d'eau physiologique, est encore très virulent à la dose de 0,5 grammes. Le virus claveleux se présente ainsi sous trois aspects : claveau, dilution de pulpe claveleuse, culot de centrifugation. La culture in vivo du virus claveleux permet ainsi d'obtenir facilement de très grandes quantités de virus. Cependant, on a essayé de le cultiver in vitro. Tout dernièrement, Bridré a pu faire quatre repiquages de virus claveleux dans le milieu suivant placé dans des fioles d'Erlenmeyer en pyrex : Liquide de Drew 3 cc. Sérum frais de mouton 1 cc. Tissu testiculaire vivant fragment. Le claveau primitif a été ainsi dilué à 1 p. 10.000 et la durée de conservation à 37° a atteint quatorze jours. La quatrième culture, inoculée à la dose de 0,01 dans le derme de deux moutons, a provoqué une réaction claveleuse. Bridré conclut à la réalisation de la culture in vitro du virus claveleux. Propriétés physiques. — Température : À 25°, Duclert note que le claveau perd son activité en douze jours. Une autre fois (Duclert et Conte), le virus est encore vivant après vingt-trois jours. À 37°, le claveau D réparti en ampoules de 1 centimètre cube a résisté quinze jours et, dans un autre cas, vingt-trois jours
in vitro. Tout dernièrement, Bridré a pu faire quatre repiquages de virus claveleux dans le milieu suivant placé dans des fioles d'Erlenmeyer en pyrex : Liquide de Drew 3 cc. Sérum frais de mouton 1 cc. Tissu testiculaire vivant fragment. Le claveau primitif a été ainsi dilué à 1 p. 10.000 et la durée de conservation à 37° a atteint quatorze jours. La quatrième culture, inoculée à la dose de 0,01 dans le derme de deux moutons, a provoqué une réaction claveleuse. Bridré conclut à la réalisation de la culture in vitro du virus claveleux. Propriétés physiques. — Température : À 25°, Duclert note que le claveau perd son activité en douze jours. Une autre fois (Duclert et Conte), le virus est encore vivant après vingt-trois jours. À 37°, le claveau D réparti en ampoules de 1 centimètre cube a résisté quinze jours et, dans un autre cas, vingt-trois jours avec retard de la réaction. Du virus dilué au 1/3 peut être chauffé pendant trois heures à 52° sans être détruit (Ducloux). À 52-53°, le claveau résiste au moins quinze minutes. À 56-58°, le virus est tué en trois minutes. Le froid n'a aucune action sur le virus claveleux. Le claveau peut être congelé. On se sert de cette résistance pour conserver le virus. Les divers claveaux qui servent à nos expériences sont répartis en ampoules scellées de 10 centimètres cubes et conservés dans un frigorigène à -20. Ils ne perdent aucune de leurs propriétés après plus de deux ans. Dessiccation : Ce moyen n'a aucune action sur la vitalité du virus. Lumière : Le claveau D n'est pas détruit quand il est exposé pendant trois jours à la lumière d'un laboratoire très lumineux (Alger). Dilution : Le claveau D, dilué au 1/10.000 détermine une pustule quand il est inoculé à la dose de 0,01 dans le derme d'un mouton sensible. Filtration : Borrel a pu effectuer des filtrations rapides extemporanées sous pression de poire de caoutchouc à travers la bougie Berkefeld et certaines bougies Chamberland, sans altérer les propriétés virulentes du virus claveleux. Nous avons vu que ce virus
claveau peut être congelé. On se sert de cette résistance pour conserver le virus. Les divers claveaux qui servent à nos expériences sont répartis en ampoules scellées de 10 centimètres cubes et conservés dans un frigorigène à -20. Ils ne perdent aucune de leurs propriétés après plus de deux ans. Dessiccation : Ce moyen n'a aucune action sur la vitalité du virus. Lumière : Le claveau D n'est pas détruit quand il est exposé pendant trois jours à la lumière d'un laboratoire très lumineux (Alger). Dilution : Le claveau D, dilué au 1/10.000 détermine une pustule quand il est inoculé à la dose de 0,01 dans le derme d'un mouton sensible. Filtration : Borrel a pu effectuer des filtrations rapides extemporanées sous pression de poire de caoutchouc à travers la bougie Berkefeld et certaines bougies Chamberland, sans altérer les propriétés virulentes du virus claveleux. Nous avons vu que ce virus traverse facilement la bougie Chamberland L 1 bis à la pression de 30 centimètres de mercure. Propriétés chimiques. — Nous avons vérifié la notion classique de la stérilisation du virus claveleux quand on fait agir sur lui l'acide phénique à 2 p. 100. Le claveau D résiste quand il est mis en contact avec de l'acide phénique à 1 p. 5.000. Pour ce même virus, le culot de centrifugation mis en contact pendant deux jours avec du sérum phéniqué à 8 p. 1.000 reste virulent. De même, quand ce culot est dilué au 1/10 dans l'eau phéniquée à 5 p. 1.000 et que le contact dure quatre jours. Ducloux et Cordier répartissent du virus claveleux dans plusieurs flacons et font agir le formol à des taux variant de 1,25 à 5 p. 1.000 à la température de 14-15°, pendant quarante-huit heures, à l'obscurité. À 5 p. 1.000 le virus est stérilisé. À 3 p. 1.000 il n'est pas détruit en totalité car la moitié des moutons inoculés réagissent. D'après Jezic, le formol à 1 p. 100 ou à 0,5 p. 100 détruit le virus dans le claveau ou la dilution de pulpe en une minute sur des fragments de bois
mis en contact avec de l'acide phénique à 1 p. 5.000. Pour ce même virus, le culot de centrifugation mis en contact pendant deux jours avec du sérum phéniqué à 8 p. 1.000 reste virulent. De même, quand ce culot est dilué au 1/10 dans l'eau phéniquée à 5 p. 1.000 et que le contact dure quatre jours. Ducloux et Cordier répartissent du virus claveleux dans plusieurs flacons et font agir le formol à des taux variant de 1,25 à 5 p. 1.000 à la température de 14-15°, pendant quarante-huit heures, à l'obscurité. À 5 p. 1.000 le virus est stérilisé. À 3 p. 1.000 il n'est pas détruit en totalité car la moitié des moutons inoculés réagissent. D'après Jezic, le formol à 1 p. 100 ou à 0,5 p. 100 détruit le virus dans le claveau ou la dilution de pulpe en une minute sur des fragments de bois ou sur la laine, le virus desséché est détruit en deux minutes par le formol à 1 p. 100; de même dans les squames cutanées mais en dix à quinze minutes et en trente minutes par le formol à 0,5 p. 100. Le formol à 1 p. 1.000 détruit le virus en une heure. La vitalité du virus claveleux n'est pas complètement détruite après un contact de huit à dix jours avec l'éthyléther (Mori). Le pélargonate de sodium au 1/100 tue le virus D dans le claveau en quarante-huit heures à 25°. Dans les mêmes conditions, il n'exerce aucune action quand la dilution atteint 1 p. 1.000. Duclert avait observé qu'un mélange à volume égal de glycérine et de claveau perdait son activité au bout de douze jours à la température de 25°. Nous avons mélangé à parties égales du claveau D et de la glycérine et avons chauffé pendant une heure à 60° ce mélange réparti dans des ampoules de 50 centimètres cubes. L'inoculation de ce mélange chauffé, quinze jours après sa préparation, a montré qu'il renfermait encore des traces de virus D vivant. L'Institut Pasteur d'Algérie envoyait autrefois en Espagne du claveau glycériné au 1/3 en toutes saisons.
virus en une heure. La vitalité du virus claveleux n'est pas complètement détruite après un contact de huit à dix jours avec l'éthyléther (Mori). Le pélargonate de sodium au 1/100 tue le virus D dans le claveau en quarante-huit heures à 25°. Dans les mêmes conditions, il n'exerce aucune action quand la dilution atteint 1 p. 1.000. Duclert avait observé qu'un mélange à volume égal de glycérine et de claveau perdait son activité au bout de douze jours à la température de 25°. Nous avons mélangé à parties égales du claveau D et de la glycérine et avons chauffé pendant une heure à 60° ce mélange réparti dans des ampoules de 50 centimètres cubes. L'inoculation de ce mélange chauffé, quinze jours après sa préparation, a montré qu'il renfermait encore des traces de virus D vivant. L'Institut Pasteur d'Algérie envoyait autrefois en Espagne du claveau glycériné au 1/3 en toutes saisons. Le délai d'utilisation était de un mois. On n'a jamais signalé d'échec de clavelisation. Par ailleurs, nous relevons dans le traité de Nocard et Leclainche les données suivantes : l'anhydride sulfureux tue le virus en quinze minutes; l'eau oxygénée acide, l'eau iodée à 1 p. 1.000, le sublimé à 1 p. 1.000, l'acide sulfurique et le sulfate de zinc à 2 p. 100, l'émulsion d'essence de térébenthine à 25 p. 100 détruisent le virus. Par contre, l'acide borique à 5 p. 100, le sulfite de soude à 10 p. 100, le chlorure de zinc à 2 p. 1.00, le chlorure de chaux à 10 p. 100, l'eau salée à saturation sont sans action. UNICITÉ DU VIRUS CLAVELEUX Depuis une dizaine d'années plusieurs expériences systématiques de comparaison des diverses souches de virus claveleux ont été réalisées et ont démontré l'unicité du virus claveleux. Pour notre part, nous avons démontré l'identité de plusieurs virus algériens, d'un virus tunisien, d'un virus indochinois et d'un virus albanais. Jacotot et Evanno ont confirmé l'identité du virus indochinois et d'un virus algérien. Jezic a comparé un virus algérien, un virus tunisien, un virus yougoslave, un virus grec et un virus bulgare et a démontré que tous