jeanflop/post_ocr_correction2 huggingface dataset:
contenu muqueux de texture fibrillaire. Après la centrifugation initiale, les substances muqueuses se concentrent dans la zone de saccharose 1,89 M. Elles conservent leur nature fibrillaire mais ont perdu leur individualité d'alvéoles (pl. I, fig. 4). Les membranes limitantes migrent à d'autres niveaux : soit dans la sous-fraction M2, soit avec les enveloppes ovocytaires. III. Isolement des enveloppes ovocytaires. — Matériel très dense, les enveloppes ovocytaires constituent systématiquement le culot de toutes les centrifugations réalisées. Leur structure (pl. I, fig. 6) est en général bien préservée. Sous le chorion d'épaisseur constante, la membrane plasmique est par endroit fragmentée et forme alors des vésicules. Les microvillosités persistent partout et conservent leur disposition en quinconce. CONCLUSION. — La technique de fractionnement que nous avons décrite aboutit à la purification de fractions membranaires de l'ovocyte de P. cultrifera et permet d'envisager, dans l'immédiat, deux perspectives de recherche. D'une part, l'incubation in vitro de fragments isolés de reticulum ou de l'appareil de Golgi rend possible la vérification de l'hypothèse du contrôle par l'hormone cérébrale de l'activité des glycosyltransférases [Séance du 28 mars 1977] ; et d'autre part, la purification des enveloppes ovocytaires autorise l'amorce de travaux sur les récepteurs cellulaires de cette hormone. Laboratoire de Chimie biologique III et Laboratoire d'Endocrinologie des Invertébrés, associé au C.N.R.S. n° 148, Université des Sciences et Techniques de Lille I, 59650 Villeneuve-d'Ascq, B.P. n° 36. EMBRYOLOGIE ENZYMOLOGIQUE. — Analyse électrophorétique de la N-acétyl-D-glucosaminidase intestinale, au cours du développement larvaire et de la métamorphose de Discoglossus pictus. Note de Jacques Hourdry, présentée par M. Étienne Wolff. L'électrophorèse de préparations d'intestin, réalisée sur gel de polyacrylamide, a permis de séparer 2 isoenzymes de la N-acétyl-D-glucosaminidase (G1 et G2), au cours du développement larvaire et de la métamorphose de Discoglossus pictus. Le rapport G2/G1 des activités totales ou solubles des 2 isoenzymes s'élève jusqu'au climax. Polyacrylamide gel electrophoresis of gut preparations has permitted us to separate 2 isoenzymes of N-acetyl-D-glucosaminidase (G1 and G2), during larval development and metamorphosis of Discoglossus pictus. The G2/G1 ratio of the total and soluble activities increases up to climax. Au moment de la métamorphose, l'épithélium intestinal
de Chimie biologique III et Laboratoire d'Endocrinologie des Invertébrés, associé au C.N.R.S. n° 148, Université des Sciences et Techniques de Lille I, 59650 Villeneuve-d'Ascq, B.P. n° 36. EMBRYOLOGIE ENZYMOLOGIQUE. — Analyse électrophorétique de la N-acétyl-D-glucosaminidase intestinale, au cours du développement larvaire et de la métamorphose de Discoglossus pictus. Note de Jacques Hourdry, présentée par M. Étienne Wolff. L'électrophorèse de préparations d'intestin, réalisée sur gel de polyacrylamide, a permis de séparer 2 isoenzymes de la N-acétyl-D-glucosaminidase (G1 et G2), au cours du développement larvaire et de la métamorphose de Discoglossus pictus. Le rapport G2/G1 des activités totales ou solubles des 2 isoenzymes s'élève jusqu'au climax. Polyacrylamide gel electrophoresis of gut preparations has permitted us to separate 2 isoenzymes of N-acetyl-D-glucosaminidase (G1 and G2), during larval development and metamorphosis of Discoglossus pictus. The G2/G1 ratio of the total and soluble activities increases up to climax. Au moment de la métamorphose, l'épithélium intestinal des larves d'Amphibiens Anoures dégénère, grâce à l'intervention d'hydrolases lysosomales qui diffusent dans le hyaloplasme. Les activités spécifiques des enzymes totales s'accroissent, et tout particulièrement celle de la N-acétyl-D-glucosaminidase [1]. Les isoenzymes qui composent les hydrolases lysosomales ont été rarement recherchées chez les Anoures [2]. Au cours du présent travail, les isoenzymes intestinales de la N-acétyl-D-glucosaminidase ont été discriminées par électrophorèse chez la larve du Discoglosse, avant et pendant la métamorphose. La composition en isoenzymes a été déterminée lors des diverses étapes du développement larvaire. MATÉRIEL ET MÉTHODES. — Les individus sont choisis au cours des différentes périodes du développement larvaire. Certains sont en prémétamorphose et présentent des membres postérieurs rudimentaires. D'autres sont en prométamorphose, période durant laquelle les membres postérieurs s'allongent. D'autres enfin arrivent au climax de la métamorphose; pendant cette période de transformations intenses, les membres antérieurs apparaissent, cependant que la queue régresse. 1. Enzyme totale. — Sa solution est préparée selon une méthode décrite précédemment [4]. 2. Enzyme soluble. — Une préservation optimale des lysosomes est réalisée en homogénéisant l'intestin dans une solution isotonique de saccharose (0,25 M). Les sumageants sont prélevés à l'issue d'une centrifugation de 10 min, à 3 000 g. Dans ces conditions, l'enzyme
les isoenzymes intestinales de la N-acétyl-D-glucosaminidase ont été discriminées par électrophorèse chez la larve du Discoglosse, avant et pendant la métamorphose. La composition en isoenzymes a été déterminée lors des diverses étapes du développement larvaire. MATÉRIEL ET MÉTHODES. — Les individus sont choisis au cours des différentes périodes du développement larvaire. Certains sont en prémétamorphose et présentent des membres postérieurs rudimentaires. D'autres sont en prométamorphose, période durant laquelle les membres postérieurs s'allongent. D'autres enfin arrivent au climax de la métamorphose; pendant cette période de transformations intenses, les membres antérieurs apparaissent, cependant que la queue régresse. 1. Enzyme totale. — Sa solution est préparée selon une méthode décrite précédemment [4]. 2. Enzyme soluble. — Une préservation optimale des lysosomes est réalisée en homogénéisant l'intestin dans une solution isotonique de saccharose (0,25 M). Les sumageants sont prélevés à l'issue d'une centrifugation de 10 min, à 3 000 g. Dans ces conditions, l'enzyme soluble que l'on obtient représente en grande partie l'enzyme libre dans le hyaloplasme. Les molécules de N-acétyl-D-glucosaminidase sont séparées sur gel de polyacrylamide, par application de la méthode d'Allen et Gockerman [1], modifiée par Robinson [2]. L'électrophorèse est réalisée à 4°C, pendant 2 h, sous une différence de potentiel de 100 V. Les colonnes de gel sont ensuite placées pendant 60 min dans un milieu d'incubation à 37°C. Le milieu comprend : 12 mg de substrat (N-acétyl-D-D-glucosamine naphthol AS-LC, Sigma) dissous dans 1,5 ml de monométhyl éthylène glycol, 15 mg de Fast Garnet GBC et 15 ml du tampon citrate-phosphate de Macllvaine (0,1 M, pH 5,2). Les bandes d'activité traduisent la formation d’un composé azoïque rouge, combinaison du sel de diazonium et du naphtol libéré par l’activité enzymatique. L'arrêt de l’incubation est obtenu par lavage des colonnes de gel dans l'eau. Celles-ci sont ensuite conservées à 4°C dans l’acide acétique à 5 %. L’activité propre à chaque bande est calculée au moyen d’un densitomètre (Vernon) réglé à la longueur d'onde de 540 nm. RÉSULTATS. — 2 isoenzymes sont mises en évidence : G1 (forme à migration rapide) et G2 (forme à migration lente). Fig. 1. — N-acetyl-p-glucosaminidase activités des isoenzymes
100 V. Les colonnes de gel sont ensuite placées pendant 60 min dans un milieu d'incubation à 37°C. Le milieu comprend : 12 mg de substrat (N-acétyl-D-D-glucosamine naphthol AS-LC, Sigma) dissous dans 1,5 ml de monométhyl éthylène glycol, 15 mg de Fast Garnet GBC et 15 ml du tampon citrate-phosphate de Macllvaine (0,1 M, pH 5,2). Les bandes d'activité traduisent la formation d’un composé azoïque rouge, combinaison du sel de diazonium et du naphtol libéré par l’activité enzymatique. L'arrêt de l’incubation est obtenu par lavage des colonnes de gel dans l'eau. Celles-ci sont ensuite conservées à 4°C dans l’acide acétique à 5 %. L’activité propre à chaque bande est calculée au moyen d’un densitomètre (Vernon) réglé à la longueur d'onde de 540 nm. RÉSULTATS. — 2 isoenzymes sont mises en évidence : G1 (forme à migration rapide) et G2 (forme à migration lente). Fig. 1. — N-acetyl-p-glucosaminidase activités des isoenzymes dans les gels de polyacrylamide; (a-c) enzyme totale; (a) prémétamorphose; (b) prométamorphose; (c) climax; (d, e) enzyme soluble; (d) prémétamorphose; (e) climax. Fig. 1. — N-acétyl-p-glucosaminidase : activités des isoenzymes dans les gels de polyacrylamide; (a-c) enzyme totale; (a) prémétamorphose; (b) prométamorphose; (c) climax; (d, e) enzyme soluble; (d) prémétamorphose; (e) prométamorphose; (f) climax. 1. N-acétyl-p-glucosaminidase totale (fig. 1 a-c et 2 a-c). — La bande G1 est étroite et intensément colorée. Chez les larves en prémétamorphose, la bande G2 reste discrète. Ultérieurement, elle s’élargit et devient très apparente. 2. N-acétylp-glucosaminidase soluble (fig. 1 d et e et 2 d-f). — Dans une gamme d’intensités plus faibles, les résultats obtenus ressemblent aux précédents. La bande G1 demeure étroite et nette. La largeur et la densité optique de la bande G2 s’élèvent au cours du développement. 3. Expression en pourcentages des activités de G1 et de G2. — Les résultats statistiques précisent les observations, la somme des 2 activités totales ou solubles équivalant à 100 % Activité de la G2. Les activités totale ou soluble de l’isoenzyme sont exprimées en pourcentages de l’activité totale ou soluble de l’enzyme. Chaque valeur est suivie de son erreur-standard et du nombre d’animaux utilisés (entre
(e) prométamorphose; (f) climax. 1. N-acétyl-p-glucosaminidase totale (fig. 1 a-c et 2 a-c). — La bande G1 est étroite et intensément colorée. Chez les larves en prémétamorphose, la bande G2 reste discrète. Ultérieurement, elle s’élargit et devient très apparente. 2. N-acétylp-glucosaminidase soluble (fig. 1 d et e et 2 d-f). — Dans une gamme d’intensités plus faibles, les résultats obtenus ressemblent aux précédents. La bande G1 demeure étroite et nette. La largeur et la densité optique de la bande G2 s’élèvent au cours du développement. 3. Expression en pourcentages des activités de G1 et de G2. — Les résultats statistiques précisent les observations, la somme des 2 activités totales ou solubles équivalant à 100 % Activité de la G2. Les activités totale ou soluble de l’isoenzyme sont exprimées en pourcentages de l’activité totale ou soluble de l’enzyme. Chaque valeur est suivie de son erreur-standard et du nombre d’animaux utilisés (entre parenthèses). Activité totale Activité soluble Prémétamorphose Prométamorphose Climax Prométamorphose Climax 24,5 ± 4,1 (13) 42,9 ± 4,8 (21) 53,8 ± 4,4 (22) 26,0 ± 4,0 (11) 46,8±6,1(14) 58,7 ±2,0 (15) DISCUSSION. — Quel que soit le degré de développement des larves, l’électrophorèse permet de discriminer 2 isoenzymes dans l’intestin. La dualité des isoenzymes peut être consécutive aux modifications chimiques subies par les hydrolases, lorsqu’elles cheminent du réticulum endoplasmique granulaire aux lysosomes via l’appareil de Golgi (6). Un enrichissement en séquences glucidiques, spécialement au niveau des saccules golgiens, faciliterait la migration des molécules vers l’anode en augmentant leur électronégativité [C] à eO). Les molécules initialement liées aux membranes lysosomales pourraient présenter une électronégativité plus faible et migrer plus lentement vers l’anode, après leur libération. Selon Goldstone et Koenig (9), les isoenzymes liées seraient plus pauvres en groupements glucidiques que les isoenzymes indépendantes des membranes, à l’intérieur des lysosomes. Dans la mesure où elle migre plus lentement vers l’anode, la forme G2 pourrait représenter une population de molécules primitivement liées. Au contraire, la forme rapide G1 ne serait jamais associée aux lipoprotéines membranaires. Exprimée en pourcentages, l’activité de l’isoenzyme cationique G2 augmente de la prémétamorphose au climax. Simultanément, le taux de thyroxine
dualité des isoenzymes peut être consécutive aux modifications chimiques subies par les hydrolases, lorsqu’elles cheminent du réticulum endoplasmique granulaire aux lysosomes via l’appareil de Golgi (6). Un enrichissement en séquences glucidiques, spécialement au niveau des saccules golgiens, faciliterait la migration des molécules vers l’anode en augmentant leur électronégativité [C] à eO). Les molécules initialement liées aux membranes lysosomales pourraient présenter une électronégativité plus faible et migrer plus lentement vers l’anode, après leur libération. Selon Goldstone et Koenig (9), les isoenzymes liées seraient plus pauvres en groupements glucidiques que les isoenzymes indépendantes des membranes, à l’intérieur des lysosomes. Dans la mesure où elle migre plus lentement vers l’anode, la forme G2 pourrait représenter une population de molécules primitivement liées. Au contraire, la forme rapide G1 ne serait jamais associée aux lipoprotéines membranaires. Exprimée en pourcentages, l’activité de l’isoenzyme cationique G2 augmente de la prémétamorphose au climax. Simultanément, le taux de thyroxine s’élève dans le milieu intérieur (10). Cette observation suggère un contrôle par l’hormone des mécanismes génétiques conduisant à l'apparition des isoenzymes. En agissant sur la vitesse de synthèse de G1 et de G2, la thyroxine présiderait aux variations d’activité de la N-acétyl-P-glucosaminidase (11). Séance du 7 mars 1977. J. HOURDRY, Thèse de Doctorat d’État, Orsay, 1972. C. R. FILBURN, Arch. Biochem. Biophys., 159, 1973, p. 683. H. ROBINSON, J. exper. Zool., 180, 1972, p. 127. J. HOURDRY, C. R. Soc. Biol., 170, 1976, p. 285. J. M. ALLEN et J. GOCKERMAN, Ann. N. Y. Acad. Sci., 121, 1964, p. 616. C. DE DUVE et R. WATTIAUX, Ann. Rev. Physiol., 28, 1966, p. 435. D. ROBINSON et J. L. STIRLING, Biochem. J., 107, 1968, p. 321. J. A. VERPOORTE, J. Biol. Chem., 247, 1972, p. 4787. A. GOLDSTONE et H. KOENIG, Biochem. J., 132, 1973, p. 267. S. B. NEEDLEMAN, H. KOENIG et A. D. GOLDSTONE, Biochim. Biophys. Acta, 379, 1975, p. 57. W. ETKIN, Metamorphosis : a Problem in Developmental Biology, W. ETKIN et L. I. GILBERT éd., Appleton-Century-Crofts, New York, 1968, p. 313. Laboratoire de Biologie Vertebrés, Centre d'Orsay, Université de Paris-Sud, 91405 Orsay. MÉDÉOLOGIE. — Incidence de la
Thèse de Doctorat d’État, Orsay, 1972. C. R. FILBURN, Arch. Biochem. Biophys., 159, 1973, p. 683. H. ROBINSON, J. exper. Zool., 180, 1972, p. 127. J. HOURDRY, C. R. Soc. Biol., 170, 1976, p. 285. J. M. ALLEN et J. GOCKERMAN, Ann. N. Y. Acad. Sci., 121, 1964, p. 616. C. DE DUVE et R. WATTIAUX, Ann. Rev. Physiol., 28, 1966, p. 435. D. ROBINSON et J. L. STIRLING, Biochem. J., 107, 1968, p. 321. J. A. VERPOORTE, J. Biol. Chem., 247, 1972, p. 4787. A. GOLDSTONE et H. KOENIG, Biochem. J., 132, 1973, p. 267. S. B. NEEDLEMAN, H. KOENIG et A. D. GOLDSTONE, Biochim. Biophys. Acta, 379, 1975, p. 57. W. ETKIN, Metamorphosis : a Problem in Developmental Biology, W. ETKIN et L. I. GILBERT éd., Appleton-Century-Crofts, New York, 1968, p. 313. Laboratoire de Biologie Vertebrés, Centre d'Orsay, Université de Paris-Sud, 91405 Orsay. MÉDÉOLOGIE. — Incidence de la pollution sur la faune du Léman : données préliminaires sur l’accumulation d’étain par divers Invertébrés. Note de Roger Martoja, Micheline Martoja, Christiane Ballan-Dufrancis, Anne-Yvonne Jeantet, Denise Lhonoré, Jacques Lhonoré et Michel Truchet, présentée par M. Pierre-Paul Grassé. Sur 61 invertébrés récoltés en juillet et octobre 1976 dans le Léman, 36 appartenant à 14 familles d'Annélides, Mollusques et Arthropodes présentaient une teneur en étain anormalement élevée. Le métal est accumulé dans divers organes et surtout dans l’épiderme et l’exosquelette. Aucune lésion histologique n’a été observée. Among 61 invertebrates collected in the lake Leman in July and October 1976, 36 animals from 14 families of Annelids, Molluscs and Arthropods showed a above-normal level of tin. Metal was present in several organs, mainly in the epidermis and exoskeletons. No histological damage was found. L’étain contribue à la pollution du Léman (1), mais on ignore son action sur la faune du lac. Les données biologiques relatives à cet élément sont d’ailleurs réduites : on sait seulement qu’il est un constituant normal de la matière vivante (2), que divers tissus animaux et végétaux le concentrent (3) et que certains de ses composés sont toxiques (4). Nous avons cherché quelle était la réaction d’animaux aquatiques à
appartenant à 14 familles d'Annélides, Mollusques et Arthropodes présentaient une teneur en étain anormalement élevée. Le métal est accumulé dans divers organes et surtout dans l’épiderme et l’exosquelette. Aucune lésion histologique n’a été observée. Among 61 invertebrates collected in the lake Leman in July and October 1976, 36 animals from 14 families of Annelids, Molluscs and Arthropods showed a above-normal level of tin. Metal was present in several organs, mainly in the epidermis and exoskeletons. No histological damage was found. L’étain contribue à la pollution du Léman (1), mais on ignore son action sur la faune du lac. Les données biologiques relatives à cet élément sont d’ailleurs réduites : on sait seulement qu’il est un constituant normal de la matière vivante (2), que divers tissus animaux et végétaux le concentrent (3) et que certains de ses composés sont toxiques (4). Nous avons cherché quelle était la réaction d’animaux aquatiques à l’égard d’une surcharge du milieu en étain, en analysant par spectrographie des rayons X et par émission ionique secondaire des Invertébrés provenant les uns du Léman, les autres de mares et rivières où aucune pollution de ce type n’est signalée. MATÉRIEL ET MÉTHODES. — Les animaux (plusieurs individus par espèce) furent égorgés, plongés pendant quelques instants dans de l’acétone anhydre à 99 % pour fixer les pigments et gardés à 4°C jusqu’à l’analyse. I) ont été récoltés par dragage ou à la benne de Heckman dans le Léman (pl. II, fig. 1) en juillet et octobre 1976. Les témoins sont d'origines diverses : Haute-Seine et canal de Briare (Dreissena), canal de Bourgogne (Limnaea), ruisseaux d'Ile-de-France (Gammarus), mares d'Auvergne (Herpobdella, Asellus, Chironomidae), provenance indéterminée (Hirudo du commerce). Les coquilles ont été gardées à sec. Les autres pièces ont été fixées par le mélange de Carnoy, incluses à la paraffine et coupées à 7 (a. L'étain a été cherché par trois procédés 1. Spectrographie des rayons X. — Les coupes étalées sur terphane carboné ont été analysées par une sonde électronique « Cameca MS 46 » équipée de spectrographes dispersifs en longueur d'onde. L'étain a été caractérisé par ses raies La, LPl,
furent égorgés, plongés pendant quelques instants dans de l’acétone anhydre à 99 % pour fixer les pigments et gardés à 4°C jusqu’à l’analyse. I) ont été récoltés par dragage ou à la benne de Heckman dans le Léman (pl. II, fig. 1) en juillet et octobre 1976. Les témoins sont d'origines diverses : Haute-Seine et canal de Briare (Dreissena), canal de Bourgogne (Limnaea), ruisseaux d'Ile-de-France (Gammarus), mares d'Auvergne (Herpobdella, Asellus, Chironomidae), provenance indéterminée (Hirudo du commerce). Les coquilles ont été gardées à sec. Les autres pièces ont été fixées par le mélange de Carnoy, incluses à la paraffine et coupées à 7 (a. L'étain a été cherché par trois procédés 1. Spectrographie des rayons X. — Les coupes étalées sur terphane carboné ont été analysées par une sonde électronique « Cameca MS 46 » équipée de spectrographes dispersifs en longueur d'onde. L'étain a été caractérisé par ses raies La, LPl, Lp, LYl (cristal P.E.T.), La, LPl, (cristal de quartz). Les données indiquées dans les résultats ont été obtenues pour la raie La (cristal P.E.T.). 2. Émission ionique secondaire. — Les coupes étalées sur or, ont été analysées au moyen d'un appareil « Cameca SI MI 300 » équipé d'un filtre électrostatique (6). La présence d'étain se traduit par un spectre d'émission situé entre les masses 112 et 124, très semblable au spectre théorique (pl. II, fig. 2 et 3). Certains pics pouvant interférer avec des ions polyatomiques, une étude à haute résolution a été effectuée pour le principal isotope (120) et n'a révélé qu'une très légère contamination du signal par un ion indéterminé (pl. II, fig. 4). A la masse 120, les images donnent donc la localisation de l'étain 120Sn dans les tissus. 3. Procédés cytochimiques. — Les coupes ont été soumises soit à la réaction au toluène-dithiol, soit à l'analyse spectrographique après traitement par les solvants des sels d'étain. RÉSULTATS. — Sur 61 animaux provenant du Léman, 36 contenaient de l'étain décelable par les méthodes physiques (Pl. I). La recherche n'est restée négative que pour deux espèces et ceci pourrait être provisoire, Crenis étant représenté par un seul individu
électrostatique (6). La présence d'étain se traduit par un spectre d'émission situé entre les masses 112 et 124, très semblable au spectre théorique (pl. II, fig. 2 et 3). Certains pics pouvant interférer avec des ions polyatomiques, une étude à haute résolution a été effectuée pour le principal isotope (120) et n'a révélé qu'une très légère contamination du signal par un ion indéterminé (pl. II, fig. 4). A la masse 120, les images donnent donc la localisation de l'étain 120Sn dans les tissus. 3. Procédés cytochimiques. — Les coupes ont été soumises soit à la réaction au toluène-dithiol, soit à l'analyse spectrographique après traitement par les solvants des sels d'étain. RÉSULTATS. — Sur 61 animaux provenant du Léman, 36 contenaient de l'étain décelable par les méthodes physiques (Pl. I). La recherche n'est restée négative que pour deux espèces et ceci pourrait être provisoire, Crenis étant représenté par un seul individu et les quatre Bythinia ayant été récoltées au même point. Pour les témoins, au contraire, l'étain n'a été détecté que chez une sangsue du commerce qui en contenait une quantité minime (5 chocs/s), en quelques points du tégument. L'énumération ci-dessous indique la localisation de l'étain mis en évidence par sonde électronique. Elle ne tient pas compte de faibles quantités révélées par analyse ionique dans les muscles et le tissu conjonctif (Pl. III, fig. 2). Les teneurs sont exprimées en chocs/seconde pour un volume de 1 Jl3 environ, le même volume de SnCl2, 2H20 donnant une réponse de 4 200 chocs/s : Eiseniella et Bythonomus, épiderme et cuticule (20 à 500), épithélium digestif (0 à 60), muscles (0 à 100); Herpobdella, épiderme et cuticule (30 à 600); Hemiclepsis, épiderme et cuticule (30 à 150); Dreissena, coquille (0 à 5), épithélium externe du manteau (40 à 150) et du pied (100). filaments branchiaux (50 à 400); Anodonta, periostracum (50), épithéliums externe (20 à 100) et interne (0 à 50) du manteau, du pied (40 à 50), filament branchial normal (20 à 50), filaments du marsupium (40 à 50); Pisidium, épithélium externe du manteau (100); Valvata, épithéliums du manteau (150) et du céphalopodium