jeanflop/post_ocr_correction2 huggingface dataset:
morganii NCTC 235 et Pseudomonas aeruginosa 8203, ainsi que les E. coli K 12, P 111 et P 453 respectivement producteurs de β-lactamases extrachromosomiques type 1 et type 2 (Pr. Pitton de Genève) et le E. coli RP 4 producteur de β-lactamase extrachromosomique TEM 2 (Pr. Chabbert, Institut Pasteur). Cultures bactériennes des β-lactamases. — Un protocole précédemment décrit a été respecté. Cependant, dans le cas des Proteus et Pseudomonas dont les β-lactamases sont inductibles, la pénicilline G a été introduite dans le bouillon de culture, en milieu de phase exponentielle de croissance 3 h avant la récolte, aux concentrations finales de 500 et 5 000 µg/ml respectivement. Électrofocalisation en veine liquide sur colonne. — Nous avons respecté le protocole décrit antérieurement. La durée de la focalisation est de 72 h. Cliché 1. — Électrofocalisation de la β-lactamase du E. coli P 111, l'enzyme est déposé sous forme de gouttes selon une diagonale du gel matérialisée par la ligne en pointillée. Du côté acide, une activité résiduelle reste visible aux dépôts. Électrofocalisation analytique sur gel de polyacrylamide. — La technique que nous utilisons a été décrite récemment dans cette revue. La durée de focalisation est d'environ 18 h, sous un potentiel limité à 700 V (atteint après 3 h de focalisation) et une puissance limitée à 5 W. RÉSULTATS ET DISCUSSION. — En respectant les protocoles expérimentaux proposés, nous avons obtenu les pl relatés dans le tableau. On constate que dans le cas des β-lactamases TEM 1 (6) ou type 1 de Pitton C) et TEM 2 (6), les 2 techniques sont en bon accord, et nous retrouvons les résultats de la littérature. Cependant, la variabilité de ces déterminations est systématiquement plus grande en gel qu'en veine liquide. Par contre, une différence importante, très supérieure aux erreurs expérimentales, apparaît dans le cas des 2 souches de la NCTC et le E. coli P 453. En électrofocalisation analytique, nous avons cependant reproduit les résultats de la littérature. Un problème se pose donc au niveau de l'une des deux techniques. Quelques constatations expérimentales fortuites nous ont amené à vérifier si la position initiale
limité à 700 V (atteint après 3 h de focalisation) et une puissance limitée à 5 W. RÉSULTATS ET DISCUSSION. — En respectant les protocoles expérimentaux proposés, nous avons obtenu les pl relatés dans le tableau. On constate que dans le cas des β-lactamases TEM 1 (6) ou type 1 de Pitton C) et TEM 2 (6), les 2 techniques sont en bon accord, et nous retrouvons les résultats de la littérature. Cependant, la variabilité de ces déterminations est systématiquement plus grande en gel qu'en veine liquide. Par contre, une différence importante, très supérieure aux erreurs expérimentales, apparaît dans le cas des 2 souches de la NCTC et le E. coli P 453. En électrofocalisation analytique, nous avons cependant reproduit les résultats de la littérature. Un problème se pose donc au niveau de l'une des deux techniques. Quelques constatations expérimentales fortuites nous ont amené à vérifier si la position initiale du dépôt de la préparation enzymatique sur le gel de polyacrylamide pouvait influer sur la migration ultérieure de l'enzyme. Or, Matthew et coll. (1) ont écrit que les pl déterminés par cette technique sont indépendants de la position du dépôt initial, sans toutefois préciser dans quels cas ceci a été vérifié. Afin d'élucider cet aspect, nous avons déposé chaque enzyme le long d'une diagonale du gel, sous la forme de gouttes de 5 µl, déposées tous les 10 mm; l'activité de la préparation enzymatique étant préalablement ajustée à 10 U/ml. Cliché 2. — Électrofocalisation de la céphalosporinase du Ps. aeruginosa NCTC 8203; les dépôts sont réalisés comme dans le cliché 1. Le gel n'a été révélé que partiellement. Dans le cas des β-lactamases TEM 1 et TEM 2, les enzymes focalisent selon une courbe, sensiblement droite iso-pH à pH 5,4 et 5,6 respectivement. Le cliché 1 représente le cas de la β-lactamase TEM 1. Par contre, dans le cas de la β-lactamase type 2 et des β-lactamases de Proteus et de Pseudomonas, le résultat de l'électrofocalisation est tout à fait différent. L'enzyme focalise selon une courbe d'allure sigmoïde, et le cliché 2 représente le cas du Ps. aeruginosa NCTC 8203.
vérifié. Afin d'élucider cet aspect, nous avons déposé chaque enzyme le long d'une diagonale du gel, sous la forme de gouttes de 5 µl, déposées tous les 10 mm; l'activité de la préparation enzymatique étant préalablement ajustée à 10 U/ml. Cliché 2. — Électrofocalisation de la céphalosporinase du Ps. aeruginosa NCTC 8203; les dépôts sont réalisés comme dans le cliché 1. Le gel n'a été révélé que partiellement. Dans le cas des β-lactamases TEM 1 et TEM 2, les enzymes focalisent selon une courbe, sensiblement droite iso-pH à pH 5,4 et 5,6 respectivement. Le cliché 1 représente le cas de la β-lactamase TEM 1. Par contre, dans le cas de la β-lactamase type 2 et des β-lactamases de Proteus et de Pseudomonas, le résultat de l'électrofocalisation est tout à fait différent. L'enzyme focalise selon une courbe d'allure sigmoïde, et le cliché 2 représente le cas du Ps. aeruginosa NCTC 8203. Ces phénomènes sont reproductibles et assez indépendants des conditions expérimentales utilisées. Diverses expériences, non relatées ici, montrent que la position finale de l'enzyme ne dépend que de la position initiale du dépôt sur le gel. En outre, la pureté des préparations permet d'exclure une hétérogénéité des β-lactamases. L'influence d'un possible problème redox a été éliminé à l'aide d'une électrofocalisation en présence, au niveau de l'anode, de mercapto-éthanol qui prévient la diffusion de toute substance oxydante. Enfin, les enzymes utilisées dans ce travail sont toutes monomères, ce qui permet d'exclure un problème d'équilibre monomère-dimère qui serait fonction du pH. L'artefact se situe donc au niveau de l'une des techniques utilisées. En électrofocalisation en veine liquide, il ne se pose aucun problème puisque la préparation de la lactamase est initialement introduite dans la totalité du gradient de densité, et l'enzyme focalise, sous forme d'un pic fin, de largeur, à mi-hauteur, de l'ordre de 0,1 unité pH (dans un gradient 3,5-10). Cette résolution n'est atteinte qu'après 70 h. Un temps de focalisation aussi long ne peut être appliqué au gel de polyacrylamide en raison de la détérioration de ce gel et du gradient de pH. En électrofocalisation sur gel de polyacrylamide, la migration
problème redox a été éliminé à l'aide d'une électrofocalisation en présence, au niveau de l'anode, de mercapto-éthanol qui prévient la diffusion de toute substance oxydante. Enfin, les enzymes utilisées dans ce travail sont toutes monomères, ce qui permet d'exclure un problème d'équilibre monomère-dimère qui serait fonction du pH. L'artefact se situe donc au niveau de l'une des techniques utilisées. En électrofocalisation en veine liquide, il ne se pose aucun problème puisque la préparation de la lactamase est initialement introduite dans la totalité du gradient de densité, et l'enzyme focalise, sous forme d'un pic fin, de largeur, à mi-hauteur, de l'ordre de 0,1 unité pH (dans un gradient 3,5-10). Cette résolution n'est atteinte qu'après 70 h. Un temps de focalisation aussi long ne peut être appliqué au gel de polyacrylamide en raison de la détérioration de ce gel et du gradient de pH. En électrofocalisation sur gel de polyacrylamide, la migration de l'enzyme, sous l'effet du champ électrique, est ralentie par les mailles du gel. Si la masse moléculaire de l'enzyme est grande, ou si le pourcentage d'ionisation de la protéine au voisinage de son pl est faible, la vitesse de migration ralentie considérablement bien avant que l'on atteigne le pl. On ne peut, cependant, pas exclure d'éventuelles interactions dans le système ternaire : ampholytes-protéine-acrylamide. Cet aspect est à l'étude. CONCLUSION. — Il ressort des résultats précédents qu'il faut absolument exclure l'électrofocalisation en gel de polyacrylamide pour la mesure des points isoélectrique des protéines et, en particulier, des β-lactamases. Cependant, cette méthode reste séduisante pour la comparaison de diverses protéines à condition de respecter un protocole expérimental strict. Dans la mesure où les interactions protéines-ampholytes sont négligeables l'électrofocalisation en veine liquide permet une meilleure approche de la valeur absolue du pi, valeur alors reproductible puisque indépendante de l'expérimentation. Cet aspect du problème est particulièrement important puisqu'il est souvent impossible de se procurer, à titre comparatif, des produits ayant fait l'objet de publications. Séance du 7 mars 1977. Isoelectric Focusing. J. P. ARBUTHNOTT et J. A. BELLAMY éd., 1975. Ritterwort hs. England (2) M. MATTHEW, A. M. HARRIS, M. J. MARSHALL et
On ne peut, cependant, pas exclure d'éventuelles interactions dans le système ternaire : ampholytes-protéine-acrylamide. Cet aspect est à l'étude. CONCLUSION. — Il ressort des résultats précédents qu'il faut absolument exclure l'électrofocalisation en gel de polyacrylamide pour la mesure des points isoélectrique des protéines et, en particulier, des β-lactamases. Cependant, cette méthode reste séduisante pour la comparaison de diverses protéines à condition de respecter un protocole expérimental strict. Dans la mesure où les interactions protéines-ampholytes sont négligeables l'électrofocalisation en veine liquide permet une meilleure approche de la valeur absolue du pi, valeur alors reproductible puisque indépendante de l'expérimentation. Cet aspect du problème est particulièrement important puisqu'il est souvent impossible de se procurer, à titre comparatif, des produits ayant fait l'objet de publications. Séance du 7 mars 1977. Isoelectric Focusing. J. P. ARBUTHNOTT et J. A. BELLAMY éd., 1975. Ritterwort hs. England (2) M. MATTHEW, A. M. HARRIS, M. J. MARSHALL et G. W. Ross, J. Gen. Microbiol., 88, 1975, p. 169-178. (3) R. LABIA, M. BARTHÉLÉMY et J. M. MASSON, Comptes rendus, 283, série D, 1976, p. 1597. (4) R. LABIA, F. LE GOFFIC et J. ANDRILLON, Biochimie, 56, 1974, p. 1025-1030. (1) R. LABIA, Comptes rendus, 279, série D, 1974, p. 109. (6) R. B. SYKES et M. MATTHEW, J. Antimicrob. Chemother., 2, 1976, p. 115-157. (7) J. S. PITTON, Path. Microbiol., 39, 1973, p. 3. (8) M. MCPHAIL et A. J. FURTH, Biochem. Soc. Trans., 1, 1974, p. 1260-1263. C.N.R.S., C.E.R.C.O.A., 2 à 8, rue Henry-Dunant, B.P. n° 28, 94320 Thiais. GÉNÉTIQUE. — Étude des groupes HLA dans les psychoses infantiles de développement et hypothèse d'une enzymopathie. Note de Bernard Golse, Pierre Debray-Ritzen, Jean Dausset, Marc Lipinski et Jacques Hors, présentée par M. Jean Hamburger. Le groupage HLA (locus A et B) d'une série préliminaire de quinze enfants psychotiques a montré une augmentation de fréquence des antigènes A9 et B5. A partir de ces observations et des faits biologiques actuellement connus dans le domaine des psychoses, les auteurs émettent l'hypothèse d'une anomalie qualitative ou quantitative de la superoxyde dismutase (SOD-2) dont le gène est porté par le même chromosome
p. 109. (6) R. B. SYKES et M. MATTHEW, J. Antimicrob. Chemother., 2, 1976, p. 115-157. (7) J. S. PITTON, Path. Microbiol., 39, 1973, p. 3. (8) M. MCPHAIL et A. J. FURTH, Biochem. Soc. Trans., 1, 1974, p. 1260-1263. C.N.R.S., C.E.R.C.O.A., 2 à 8, rue Henry-Dunant, B.P. n° 28, 94320 Thiais. GÉNÉTIQUE. — Étude des groupes HLA dans les psychoses infantiles de développement et hypothèse d'une enzymopathie. Note de Bernard Golse, Pierre Debray-Ritzen, Jean Dausset, Marc Lipinski et Jacques Hors, présentée par M. Jean Hamburger. Le groupage HLA (locus A et B) d'une série préliminaire de quinze enfants psychotiques a montré une augmentation de fréquence des antigènes A9 et B5. A partir de ces observations et des faits biologiques actuellement connus dans le domaine des psychoses, les auteurs émettent l'hypothèse d'une anomalie qualitative ou quantitative de la superoxyde dismutase (SOD-2) dont le gène est porté par le même chromosome (six) que le complexe HLA. The HLA typing (loci A and B) of a series of fifteen psychotic children has shown an increase of the frequency of both HLA-A9 and B5 antigens. These preliminary data and previous biochemical findings in psychotic patients lead the authors to postulate the hypothesis of a qualitative or quantitative anomaly of the superoxide dismutase (SOD-2), the gene of which is situated on the same chromosome (sixth) as the HLA complex. Parmi les psychoses infantiles, nous nous sommes exclusivement intéressés aux psychoses de développement, c'est-à-dire aux psychoses débutant de façon précoce, dans les premiers mois ou premières années de la vie. Sur un échantillon de 15 malades non apparentés, rigoureusement sélectionnés sur le plan clinique (présentant un comportement autistique, un mutisme et des stéréotypies sans anomalie neurologique ou électroencéphalographique) et qui étaient tous d'origine caucasoïde, nés en France de parents nés en France, nous avons effectué pour chacun d'eux un groupage HLA (Human Leucocyte Antigen) pour les deux locus A et B. Nous avons trouvé une augmentation des groupes A9 et B5 qui passent respectivement de 24 % dans la population générale à 40 % dans notre échantillon (p non significatif) et de 13 % à
a qualitative or quantitative anomaly of the superoxide dismutase (SOD-2), the gene of which is situated on the same chromosome (sixth) as the HLA complex. Parmi les psychoses infantiles, nous nous sommes exclusivement intéressés aux psychoses de développement, c'est-à-dire aux psychoses débutant de façon précoce, dans les premiers mois ou premières années de la vie. Sur un échantillon de 15 malades non apparentés, rigoureusement sélectionnés sur le plan clinique (présentant un comportement autistique, un mutisme et des stéréotypies sans anomalie neurologique ou électroencéphalographique) et qui étaient tous d'origine caucasoïde, nés en France de parents nés en France, nous avons effectué pour chacun d'eux un groupage HLA (Human Leucocyte Antigen) pour les deux locus A et B. Nous avons trouvé une augmentation des groupes A9 et B5 qui passent respectivement de 24 % dans la population générale à 40 % dans notre échantillon (p non significatif) et de 13 % à 33,3 % [p < 0,03 et pc non significatif]. Bien que non significatifs pour A9 et à la limite de la signification pour B5 sur ce petit nombre de cas, ces résultats corroborent ceux de deux autres équipes ayant travaillé dans le domaine des schizophrénies de l'adulte [(6), C3)] et en partie — seulement en ce qui concerne A9 — ceux rapportés par d'autres auteurs [(4), (11)]. Ces résultats reposeraient donc le problème d'un rapport nosologique entre les psychoses infantiles de développement et certaines schizophrénies de l'adulte, en apportant une lumière nouvelle sur ce débat déjà ancien (1). En revanche d'autres chercheurs ont rapporté, toujours dans les schizophrénies de l'adulte, une variation de fréquence d'autres antigènes HLA [C), (10), (12), (16)]. Quoi qu'il en soit, si une association entre certains allèles HLA et les psychoses infantiles de développement se confirmait sur une série plus importante de malades, plusieurs hypothèses seraient alors à envisager : soit imaginer que certains produits allèliques du système HLA puissent être eux-mêmes responsables du processus pathologique (mais cela semble peu concevable, puisque l'association n'est pas absolue), soit supposer l'existence d'une association génétique entre certains allèles du système HLA et un éventuel facteur génétique responsable de ces
en partie — seulement en ce qui concerne A9 — ceux rapportés par d'autres auteurs [(4), (11)]. Ces résultats reposeraient donc le problème d'un rapport nosologique entre les psychoses infantiles de développement et certaines schizophrénies de l'adulte, en apportant une lumière nouvelle sur ce débat déjà ancien (1). En revanche d'autres chercheurs ont rapporté, toujours dans les schizophrénies de l'adulte, une variation de fréquence d'autres antigènes HLA [C), (10), (12), (16)]. Quoi qu'il en soit, si une association entre certains allèles HLA et les psychoses infantiles de développement se confirmait sur une série plus importante de malades, plusieurs hypothèses seraient alors à envisager : soit imaginer que certains produits allèliques du système HLA puissent être eux-mêmes responsables du processus pathologique (mais cela semble peu concevable, puisque l'association n'est pas absolue), soit supposer l'existence d'une association génétique entre certains allèles du système HLA et un éventuel facteur génétique responsable de ces psychoses infantiles. Quel pourrait être alors ce facteur génétique ? Nous postulons qu'il s'agit d'une activité superoxyde dismutasique anormale donnant lieu à une perturbation du métabolisme indolique et éventuellement à la production de corps indoliques toxiques à partir du tryptophane (ou de ses précurseurs) voire à partir de certaines catécholamines, aboutissant ainsi à la création d'un véritable processus d'intoxication endogène. On sait en effet que, dans le domaine des psychoses, les principales caractéristiques biologiques qui ont été mises en évidence sont, d'une part des perturbations du métabolisme du tryptophane (présence plasmatique et urinaire de métabolites anormaux, augmentation des hydroxyindoles urinaires et notamment chez les enfants autistiques de l'hydroxycynurénine qui est un métabolite normal du tryptophane, diminution de la charge plaquettaire en sérotonine avec diminution corrélative de l'excrétion urinaire de l'acide 5 hydroxyindole acétique) et d'autre part l'existence de métabolites anormaux des catécholamines objectivés dès 1954 par les travaux de Hoffer et Osmond. Toutes ces anomalies sont donc liées au métabolisme indolique et c'est pourquoi nous avons été amenés à envisager l'hypothèse d'une anomalie du fonctionnement de la superoxyde dismutase (SOD-2) comme « plaque tournante » de ces différents dysmétabolismes, dans la mesure où l'activité superoxyde dismutasique semble contrôler le niveau
aboutissant ainsi à la création d'un véritable processus d'intoxication endogène. On sait en effet que, dans le domaine des psychoses, les principales caractéristiques biologiques qui ont été mises en évidence sont, d'une part des perturbations du métabolisme du tryptophane (présence plasmatique et urinaire de métabolites anormaux, augmentation des hydroxyindoles urinaires et notamment chez les enfants autistiques de l'hydroxycynurénine qui est un métabolite normal du tryptophane, diminution de la charge plaquettaire en sérotonine avec diminution corrélative de l'excrétion urinaire de l'acide 5 hydroxyindole acétique) et d'autre part l'existence de métabolites anormaux des catécholamines objectivés dès 1954 par les travaux de Hoffer et Osmond. Toutes ces anomalies sont donc liées au métabolisme indolique et c'est pourquoi nous avons été amenés à envisager l'hypothèse d'une anomalie du fonctionnement de la superoxyde dismutase (SOD-2) comme « plaque tournante » de ces différents dysmétabolismes, dans la mesure où l'activité superoxyde dismutasique semble contrôler le niveau d'oxydation de plusieurs enzymes intervenant dans le métabolisme des neuromédiateurs [(9), e4)]. La région chromosomique codant pour le système HLA se situe en effet sur le chromosome six où elle occupe un espace de moins de 2 cm organique. Or, sur ce chromosome six, se trouve également le locus codant pour la SOD-2, sans qu'on ait pu jusqu'à présent définir avec précision la position de ce locus par rapport au groupe de liaison HLA, l'appartement du locus SOD-2 au chromosome six ayant été démontrée grâce à des études d'hybridation cellulaire [(5), (17)] qui ont seulement prouvé la situation synténique de SOD-2 et de HLA. (Cela laisse par conséquent la possibilité que le gène SOD-2 soit très proche du complexe HLA.) Un des facteurs génétiques en cause dans les psychoses infantiles de développement pourrait donc être une anomalie du gène codant pour la SOD-2, anomalie aboutissant à une perturbation qualitative ou quantitative de cet enzyme : la diminution de la charge plaquettaire en sérotonine (probable reflet de la baisse du taux intracérébral de ce neuromédiateur) pourrait alors s'expliquer soit par un trouble de la biosynthèse de cette bioamine consécutif à une anomalie quantitative de la SOD-2, soit par le détournement d'une
pour la SOD-2, sans qu'on ait pu jusqu'à présent définir avec précision la position de ce locus par rapport au groupe de liaison HLA, l'appartement du locus SOD-2 au chromosome six ayant été démontrée grâce à des études d'hybridation cellulaire [(5), (17)] qui ont seulement prouvé la situation synténique de SOD-2 et de HLA. (Cela laisse par conséquent la possibilité que le gène SOD-2 soit très proche du complexe HLA.) Un des facteurs génétiques en cause dans les psychoses infantiles de développement pourrait donc être une anomalie du gène codant pour la SOD-2, anomalie aboutissant à une perturbation qualitative ou quantitative de cet enzyme : la diminution de la charge plaquettaire en sérotonine (probable reflet de la baisse du taux intracérébral de ce neuromédiateur) pourrait alors s'expliquer soit par un trouble de la biosynthèse de cette bioamine consécutif à une anomalie quantitative de la SOD-2, soit par le détournement d'une fraction de la sérotonine de sa voie métabolique normale vers la production de corps indoliques toxiques pour le fonctionnement cérébral, dans l'hypothèse d'une anomalie qualitative de la SOD-2. Le dysfonctionnement enzymatique de la SOD-2, que nous avons évoqué, n'est encore qu'une hypothèse de travail. Même envisagé comme trouble de base dans le domaine des psychoses infantiles de développement, ce mécanisme pourrait, bien sûr, n'être qu'un des éléments du déterminisme de ces affections (influence du milieu, autres facteurs génétiques associés) et, dans un tel modèle polyfacteur, on conçoit combien les études génétiques classiques peuvent être entravées, soit par une pénétrance ou une expressivité variable du facteur génétique en cause, soit par la nécessité même de la conjonction de plusieurs facteurs dans le déclenchement de ces maladies. En conclusion, notre hypothèse, qui attire l'attention sur la SOD-2 dans l'étude des psychoses infantiles, nous semble avoir le double intérêt de permettre peut-être une localisation plus précise du locus SOD-2 sur la carte chromosomique grâce à des études familiales et surtout de fournir un modèle permettant de rassembler de manière cohérente autour d'un dysfonctionnement enzymatique la plupart des anomalies biologiques décrites jusqu'à maintenant de façon éparse dans ce domaine de la pathologie. Il reste