jeanflop/post_ocr_correction2 huggingface dataset:
granulo-floconneuse. Bien que s’inscrivant dans ce schéma général, les structures des différentes populations présentent néanmoins des variations d’une population à une autre, et au sein d’une même population, d’un individu à un autre. Entre les populations, les différences portent sur la structuration en bandes, sur le développement plus ou moins important des écharpes, sur leur surcharge en hétérochromatine a et enfin sur les processus de clivages longitudinaux. Entre les individus d’une même population existent également des différences qui portent essentiellement sur le nombre de bandes fines et sur les clivages longitudinaux plus ou moins prononcés. Le plus souvent chez un même animal, ces variations n’affectent pas tous les chromosomes de façon identique et dans un certain nombre de cas, elles paraissent liées au degré de polyténie des chromosomes. Une variation plus curieuse aboutit à la formation de chromosomes à « jupettes » (fig. A3, B3). Elle semble résulter de la coalescence de deux masses d’hétérochromatine, ce qui a pour effet de laminer et de rejeter sur les côtés toute la partie de l’écharpe située entre ces 2 masses. Mais dans ce cas, tout comme dans ceux du clivage de l’écharpe granulo-floconneuse (fig. A3, A4) ou de l’existence d’écharpes supplémentaires (fig. C3), les chromosomes VI des individus concernés sont tous, ou presque tous, affectés de façon identique. Chez quelques rares individus du Puymorens ont également été observés (fig. A7, AI, A5) des chromosomes courts condensés, qui semblent correspondre à des ébauches de chromosome VI, peut-être de VII dans certains cas. 3 individus de la population d’Egat ont présenté des chromosomes VI qui tous appartenaient à un type totalement différent (fig. C4) que l’on retrouve plus à l’Est dans la vallée de la Têt et au-delà du col de la Perche jusque dans le massif du Canigou. Ce polygénotypisme au sein de la population d’Egat s’explique donc par le fait que nous sommes là dans une zone de contact entre 2 aires de répartition. CHROMOSOME VII. — Formé d’une écharpe centrale plus ou moins allongée, portant à l’un de ses pôles une bande chromophile très prononcée. De part et d’autre de cette
C3), les chromosomes VI des individus concernés sont tous, ou presque tous, affectés de façon identique. Chez quelques rares individus du Puymorens ont également été observés (fig. A7, AI, A5) des chromosomes courts condensés, qui semblent correspondre à des ébauches de chromosome VI, peut-être de VII dans certains cas. 3 individus de la population d’Egat ont présenté des chromosomes VI qui tous appartenaient à un type totalement différent (fig. C4) que l’on retrouve plus à l’Est dans la vallée de la Têt et au-delà du col de la Perche jusque dans le massif du Canigou. Ce polygénotypisme au sein de la population d’Egat s’explique donc par le fait que nous sommes là dans une zone de contact entre 2 aires de répartition. CHROMOSOME VII. — Formé d’une écharpe centrale plus ou moins allongée, portant à l’un de ses pôles une bande chromophile très prononcée. De part et d’autre de cette écharpe, 2 courts bras euchromatiques aboutissent aux écharpes télomériques. Les variations observées entre populations, entre individus d’une même population, ou entre plusieurs noyaux d’un même individu, relèvent de phénomènes beaucoup moins accusés, mais néanmoins similaires de ceux qui affectent les chromosomes VI. Les 3 individus d’Egat dont le chromosome VI n’appartenait pas au type « cerdan » présentent également un chromosome VII particulier (fig. C7). Cette analyse montre l’existence au sein des populations étudiées de différentes structures chromosomiques résultant de plusieurs types de variations se situant à des niveaux hiérarchiques différents. Un phénomène d’isolement géographique très vraisemblablement, aurait tout d’abord permis la différenciation d’un « modèle » chromosomique que nous qualifierons de type « cerdan » très différent des structures rencontrées, aussi bien à l’Est d’une ligne approximative col de la Perche-rive droite de la Têt, qu’à l’Ouest dans les vallées de la haute Ariège. Ce type « cerdan » se serait ensuite plus ou moins diversifié au sein de chaque population ou de groupe de populations en fonction notamment des facteurs écoclimatiques rencontrés. Enfin, au niveau d’une population ou même d’un individu existent des microvariations résultant parfois du degré de polyténie, traduisant peut-être dans certains cas des états physiologiques
n’appartenait pas au type « cerdan » présentent également un chromosome VII particulier (fig. C7). Cette analyse montre l’existence au sein des populations étudiées de différentes structures chromosomiques résultant de plusieurs types de variations se situant à des niveaux hiérarchiques différents. Un phénomène d’isolement géographique très vraisemblablement, aurait tout d’abord permis la différenciation d’un « modèle » chromosomique que nous qualifierons de type « cerdan » très différent des structures rencontrées, aussi bien à l’Est d’une ligne approximative col de la Perche-rive droite de la Têt, qu’à l’Ouest dans les vallées de la haute Ariège. Ce type « cerdan » se serait ensuite plus ou moins diversifié au sein de chaque population ou de groupe de populations en fonction notamment des facteurs écoclimatiques rencontrés. Enfin, au niveau d’une population ou même d’un individu existent des microvariations résultant parfois du degré de polyténie, traduisant peut-être dans certains cas des états physiologiques particuliers, mais dont la signification nous échappe encore totalement dans la majorité des cas. (*) Séance du 7 mars 1977. (1) H. DALENS, Comptes rendus, 282. série D, 1976, p. 1817. Université Paul-Sabatier, Laboratoire de Zoologie, Écologie des Invertébrés terrestres, Équipe de Recherche associée n° 490, « Écobiologie des Arthropodes édaphiques », 118, route de Narbonne, 31077 Toulouse Cedex. PHYSIOLOGIE. — Contribution à l’étude de l’activité génétique de l’oocyte de Souris lors de sa maturation « spontanée » in vitro. Note de Henri Alexandre et Yves Gérin, transmise par M. Jean Brachet. La reprise de l’activité méiotique de l’oocyte de Souris par sa libération du follicule requiert la présence de Ca++. Le PHMPS exerce une action toxique sur ce mécanisme. Une synthèse d'ARN messager pendant les premières heures de la maturation semble nécessaire à la poursuite du phénomène. Une synthèse de protéines est également requise; nous suggérons qu'elle serait, entre autre, responsable de l'élaboration des microtubules de la métaphase I. Mouse oocytes, liberated from ovarian follicles, resume meiosis in the obligatory presence of Ca++. PHMPS exerts a toxic effect on this mechanism. m-RNA synthesis, in contrast to that of α-RNA, seems to be required during the first hours of maturation
édaphiques », 118, route de Narbonne, 31077 Toulouse Cedex. PHYSIOLOGIE. — Contribution à l’étude de l’activité génétique de l’oocyte de Souris lors de sa maturation « spontanée » in vitro. Note de Henri Alexandre et Yves Gérin, transmise par M. Jean Brachet. La reprise de l’activité méiotique de l’oocyte de Souris par sa libération du follicule requiert la présence de Ca++. Le PHMPS exerce une action toxique sur ce mécanisme. Une synthèse d'ARN messager pendant les premières heures de la maturation semble nécessaire à la poursuite du phénomène. Une synthèse de protéines est également requise; nous suggérons qu'elle serait, entre autre, responsable de l'élaboration des microtubules de la métaphase I. Mouse oocytes, liberated from ovarian follicles, resume meiosis in the obligatory presence of Ca++. PHMPS exerts a toxic effect on this mechanism. m-RNA synthesis, in contrast to that of α-RNA, seems to be required during the first hours of maturation in order to ensure realization of the following steps; in addition, the 2nd maturation period, corresponding to the first polar body extrusion, depends on the presence of proteins synthesized during the chromatin condensation process and germinal vesicle breakdown. We suggest that it might be a factor responsible for microtubule formation in metaphase I. Dans les ovaires des Mammifères, la progression des oocytes de la phase dictyotène jusqu'à la métaphase de la 2e division méiotique et l'ovulation s'effectuent à la suite de la maturation folliculaire. Cette séquence d'événements est dirigée par la sécrétion de gonadotrophines hypophysaires. La nature du stimulus de la maturation reste cependant inconnue puisqu'il est possible de l'induire par simple libération mécanique de l'oocyte dans un milieu simple, chimiquement défini (Krebs-Ringer modifié). Ces études ont conduit à penser que l'absence d'une source d'énergie pourrait être le facteur limitant. La présence de pyruvate est en effet requise pour que la maturation in vitro des oocytes de Souris et humains se réalise; cependant, chez le Rat, les oocytes peuvent utiliser une source d'énergie endogène. La technique de mise en culture d'oocytes de souris ne permet donc pas encore de connaître les causes réelles de l'induction de la maturation cellulaire in
in metaphase I. Dans les ovaires des Mammifères, la progression des oocytes de la phase dictyotène jusqu'à la métaphase de la 2e division méiotique et l'ovulation s'effectuent à la suite de la maturation folliculaire. Cette séquence d'événements est dirigée par la sécrétion de gonadotrophines hypophysaires. La nature du stimulus de la maturation reste cependant inconnue puisqu'il est possible de l'induire par simple libération mécanique de l'oocyte dans un milieu simple, chimiquement défini (Krebs-Ringer modifié). Ces études ont conduit à penser que l'absence d'une source d'énergie pourrait être le facteur limitant. La présence de pyruvate est en effet requise pour que la maturation in vitro des oocytes de Souris et humains se réalise; cependant, chez le Rat, les oocytes peuvent utiliser une source d'énergie endogène. La technique de mise en culture d'oocytes de souris ne permet donc pas encore de connaître les causes réelles de l'induction de la maturation cellulaire in situ; cette technique offre cependant des avantages évidents pour l'étude détaillée des mécanismes tant morphologiques que biochimiques de la maturation. C'est pourquoi nous avons utilisé ce système pour analyser quelques aspects du contrôle de la maturation. MATÉRIEL ET MÉTHODES. — Les oocytes sont obtenus par des piqûres répétées dans la couche périphérique des ovaires de Souris albinos, à l'aide d'une paire d'aiguilles hypodermiques. Ils sont débarrassés des cellules folliculaires par des passages répétés dans une micropipette de 0,10-0,12 µm de diamètre intérieur, contrôlée par la bouche; ils sont progressivement rassemblés dans une goutte de milieu sans pyruvate, sous huile de paraffine, en attendant de les mettre en culture dans le milieu normal ou expérimental. Les minigouttes de culture, disposées dans des boîtes de Petri en « plastic Falcon », sous huile de paraffine, renferment de 20 à 30 oocytes. Les boîtes sont mises dans un incubateur à 37°C, sous une atmosphère de 5 CO2 dans l'air. La préparation des chromosomes sur lames a été réalisée conformément à la technique de Tarkowski et al. Les lames ont été colorées au mélange de Giemsa. Les oocytes destinés à l'analyse ultrastructurale ont été fixés par de la glutaraldéhyde à 1,5% dans du tampon
couche périphérique des ovaires de Souris albinos, à l'aide d'une paire d'aiguilles hypodermiques. Ils sont débarrassés des cellules folliculaires par des passages répétés dans une micropipette de 0,10-0,12 µm de diamètre intérieur, contrôlée par la bouche; ils sont progressivement rassemblés dans une goutte de milieu sans pyruvate, sous huile de paraffine, en attendant de les mettre en culture dans le milieu normal ou expérimental. Les minigouttes de culture, disposées dans des boîtes de Petri en « plastic Falcon », sous huile de paraffine, renferment de 20 à 30 oocytes. Les boîtes sont mises dans un incubateur à 37°C, sous une atmosphère de 5 CO2 dans l'air. La préparation des chromosomes sur lames a été réalisée conformément à la technique de Tarkowski et al. Les lames ont été colorées au mélange de Giemsa. Les oocytes destinés à l'analyse ultrastructurale ont été fixés par de la glutaraldéhyde à 1,5% dans du tampon Sorensen 0.1 M pH 7, surfixés avec le OsO4, déshydratés et inclus dans le « Spurr ». RÉSULTATS. — Nous avons isolé les oocytes dans un milieu sans pyruvate, qui inhibe la maturation de manière réversible, afin de pouvoir établir avec précision le temps zéro de la mise en culture dans toutes nos expériences. 1. Effet de l'absence de Ca++ . — Lorsque le CaCl2 est remplacé dans le milieu par une quantité équivalente de NaCl, on assiste à un blocage de la maturation. La chromatine se condense cependant dans un certain nombre de cas, comme l'ont révélé les coupes semi-fines; mais la majorité des oocytes se lysent après 6 h de culture. 2. Effet du PHMPS. — Le PHMPS a été ajouté au milieu de culture sans pyruvate à la concentration de 10-6 M, suivant les indications de Brachet et Pays-De Schutter, afin de rechercher une éventuelle action inductrice sur la maturation. Comme on pouvait s'y attendre, cette substance qui agit comme la progestérone chez les Batraciens, s'est avérée incapable de lever l'inhibition de la maturation due à l'absence d'une source d'énergie; elle exerce d'ailleurs une action toxique rapide : le cytoplasme des oocytes prend en effet un aspect
dans toutes nos expériences. 1. Effet de l'absence de Ca++ . — Lorsque le CaCl2 est remplacé dans le milieu par une quantité équivalente de NaCl, on assiste à un blocage de la maturation. La chromatine se condense cependant dans un certain nombre de cas, comme l'ont révélé les coupes semi-fines; mais la majorité des oocytes se lysent après 6 h de culture. 2. Effet du PHMPS. — Le PHMPS a été ajouté au milieu de culture sans pyruvate à la concentration de 10-6 M, suivant les indications de Brachet et Pays-De Schutter, afin de rechercher une éventuelle action inductrice sur la maturation. Comme on pouvait s'y attendre, cette substance qui agit comme la progestérone chez les Batraciens, s'est avérée incapable de lever l'inhibition de la maturation due à l'absence d'une source d'énergie; elle exerce d'ailleurs une action toxique rapide : le cytoplasme des oocytes prend en effet un aspect granuleux et devient opaque. Le PHMPS exerce les mêmes effets toxiques lorsqu'il est ajouté au milieu complet, contenant du pyruvate. 3. Effet de l'actinomycine D. — L'actinomycine D à 1 μg/ml n'exerce aucun effet visible sur la rupture de la vésicule germinative et l'émission du premier globule polaire. L'analyse cytologique des oocytes fixés et séchés sur lames, 18 h après leur mise en culture, et colorés au mélange de Giemsa, montre cependant que les chromosomes en dyades présentent des altérations, à l'inverse de ceux des témoins, qui gardent leur structure intacte en culture. La maturation nucléaire est terminée après 15 à 17 h de culture comme l'a montré Donahue. A la concentration de 10 ng/ml, l'actinomycine D inhibe la rupture de la vésicule germinative. La condensation de la chromatine, observée dans ce cas pourrait n'être que le signe d'un début de pycnose. 4. effet de la cycloheximide. — La cycloheximide à 0, 1 μg/ml n'exerce aucun effet visible sur la maturation de l'oocyte de Souris. A 1 μg/ml, elle reste sans effet sur la condensation de la chromatine et sur l'apparition des tétrades de la diakinèse. L'étude ultrastructurale a montré que la rupture de la vésicule germinative se produit, comme
des oocytes fixés et séchés sur lames, 18 h après leur mise en culture, et colorés au mélange de Giemsa, montre cependant que les chromosomes en dyades présentent des altérations, à l'inverse de ceux des témoins, qui gardent leur structure intacte en culture. La maturation nucléaire est terminée après 15 à 17 h de culture comme l'a montré Donahue. A la concentration de 10 ng/ml, l'actinomycine D inhibe la rupture de la vésicule germinative. La condensation de la chromatine, observée dans ce cas pourrait n'être que le signe d'un début de pycnose. 4. effet de la cycloheximide. — La cycloheximide à 0, 1 μg/ml n'exerce aucun effet visible sur la maturation de l'oocyte de Souris. A 1 μg/ml, elle reste sans effet sur la condensation de la chromatine et sur l'apparition des tétrades de la diakinèse. L'étude ultrastructurale a montré que la rupture de la vésicule germinative se produit, comme chez les témoins, après 4 h de culture (fig. 1). Mais tous les événements ultérieurs de la méiose sont inhibés : après 8 h de culture, la chromatine est restée dans l'état de condensation qu'elle avait acquise après 4 h et des fragments de la membrane nucléaire sont toujours présents; on note surtout l'absence totale des faisceaux de microtubules du fuseau, caractéristiques de ce stade (fig. 2 a et 2 b). Enfin, à la concentration de 10 μg/ml, la cycloheximide exerce un effet toxique immédiat, en tous points comparable à celui de l'actinomycine D à la même concentration. EXPLICATION DE LA PLANCHE Légende des figures MN, fragments de la membrane nucléaire; Ch, chromosomes; MT, microtubules; Mt, mitochondries. Fig. 1. — Oocyte cultivé pendant 4 heures en présence de cycloheximide 1 μg/ml (G x 13 000). Fig. 2 a. — Oocyte cultivé pendant 8 h (G x 13 000); 2 b. — Oocyte cultivé pendant 8 h en présence de cycloheximide 1 μg/ml (G x 13 000). PIECCE HENRI ALEXANDRE Ces résultats sont résumés dans le tableau ci-dessous (tableau). TABLEAU Effets de l'actinomycine et de la cycloheximide sur la maturation in vitro des oocytes de Souris V.G. Cond. Bivalents Monovalents (%)
on note surtout l'absence totale des faisceaux de microtubules du fuseau, caractéristiques de ce stade (fig. 2 a et 2 b). Enfin, à la concentration de 10 μg/ml, la cycloheximide exerce un effet toxique immédiat, en tous points comparable à celui de l'actinomycine D à la même concentration. EXPLICATION DE LA PLANCHE Légende des figures MN, fragments de la membrane nucléaire; Ch, chromosomes; MT, microtubules; Mt, mitochondries. Fig. 1. — Oocyte cultivé pendant 4 heures en présence de cycloheximide 1 μg/ml (G x 13 000). Fig. 2 a. — Oocyte cultivé pendant 8 h (G x 13 000); 2 b. — Oocyte cultivé pendant 8 h en présence de cycloheximide 1 μg/ml (G x 13 000). PIECCE HENRI ALEXANDRE Ces résultats sont résumés dans le tableau ci-dessous (tableau). TABLEAU Effets de l'actinomycine et de la cycloheximide sur la maturation in vitro des oocytes de Souris V.G. Cond. Bivalents Monovalents (%) A. Actinomycine D Témoins 9 28 63 1 ng/ml 3 23 74 10 μg/ml 100 B. Cycloheximide Témoins 10 26 64 0,1 μg/ml 7 10 83 1 (μg/ml 20 74 6 10 (μg/ml 100 Les résultats sont exprimés en pour cent. Vésicule germinative V.G., chromatine condensée cond., chromosomes bivalents Bivalents, chromosomes monovalents (métaphases II) Monovalents. CONCLUSIONS ET DISCUSSION. — Nos expériences montrent que la présence de l'ion Ca++ dans le milieu est nécessaire pour obtenir la maturation spontanée de l'oocyte de Souris. L'absence de cet ion dans le milieu de culture n'empêche cependant pas la condensation de la chromatine jusqu'au stade dit de la « condensation circulaire » (4). Le rôle essentiel du Ca++ dans la maturation est fort bien établi chez de nombreux Invertébrés marins [(11), (14)] ainsi que chez les Batraciens [(5), (16)]. Les Mammifères n'échappent donc pas à cette règle générale. Nous retiendrons surtout de ce travail que l'actinomycine D à 10 μg/ml inhibe complètement la maturation, tandis qu'à la concentration de 1 μg/ml, elle s'effectue normalement jusqu'à l'émission du premier globule polaire; cet inhibiteur provoque toutefois des altérations chromosomiales comme l'ont déjà montré Donahue (17) et Jagiello (18). Nos résultats suggèrent qu'une synthèse d'ARN messager serait
chromosomes monovalents (métaphases II) Monovalents. CONCLUSIONS ET DISCUSSION. — Nos expériences montrent que la présence de l'ion Ca++ dans le milieu est nécessaire pour obtenir la maturation spontanée de l'oocyte de Souris. L'absence de cet ion dans le milieu de culture n'empêche cependant pas la condensation de la chromatine jusqu'au stade dit de la « condensation circulaire » (4). Le rôle essentiel du Ca++ dans la maturation est fort bien établi chez de nombreux Invertébrés marins [(11), (14)] ainsi que chez les Batraciens [(5), (16)]. Les Mammifères n'échappent donc pas à cette règle générale. Nous retiendrons surtout de ce travail que l'actinomycine D à 10 μg/ml inhibe complètement la maturation, tandis qu'à la concentration de 1 μg/ml, elle s'effectue normalement jusqu'à l'émission du premier globule polaire; cet inhibiteur provoque toutefois des altérations chromosomiales comme l'ont déjà montré Donahue (17) et Jagiello (18). Nos résultats suggèrent qu'une synthèse d'ARN messager serait nécessaire, pendant les premières heures, pour que la maturation s'effectue, alors qu'une synthèse d'ARN ribosomiaux ne serait pas indispensable. On sait, en effet, que l'actinomycine D à faible concentration exerce un effet partiellement sélectif sur la synthèse des ARN ribosomiaux tandis que l'inhibition de la synthèse de tous les ARN s'obtient à haute concentration (19). Bloom et Mukherjee (20) ont montré, par autoradiographie, qu'une synthèse d'ARN a lieu pendant les 6 premières heures de la mise en culture des oocytes et il conviendrait donc d'étudier les effets de l'actinomycine, aux différentes concentrations, sur cette synthèse. Nos expériences avec la cycloheximide indiquent l'existence de deux périodes métaboliquement dissociables, dans le mécanisme de la maturation : la première, recouvre la condensation de la chromatine, la rupture de la vésicule germinative et l'apparition des tétrades; la seconde correspond à l'émission du premier globule polaire. Cette seconde période requiert une synthèse protéique, comme l'indiquent nos résultats, qui concordent avec ceux d'autres auteurs [(6), (8)] qui ont utilisé la puromycine. Nous apportons cependant la preuve, par la microscopie électronique, de la rupture de la vésicule germinative et surtout, de l'inhibition de l'assemblage des microtubules lors de la métaphase 1 de la méiose, qui n'avaient pas
s'obtient à haute concentration (19). Bloom et Mukherjee (20) ont montré, par autoradiographie, qu'une synthèse d'ARN a lieu pendant les 6 premières heures de la mise en culture des oocytes et il conviendrait donc d'étudier les effets de l'actinomycine, aux différentes concentrations, sur cette synthèse. Nos expériences avec la cycloheximide indiquent l'existence de deux périodes métaboliquement dissociables, dans le mécanisme de la maturation : la première, recouvre la condensation de la chromatine, la rupture de la vésicule germinative et l'apparition des tétrades; la seconde correspond à l'émission du premier globule polaire. Cette seconde période requiert une synthèse protéique, comme l'indiquent nos résultats, qui concordent avec ceux d'autres auteurs [(6), (8)] qui ont utilisé la puromycine. Nous apportons cependant la preuve, par la microscopie électronique, de la rupture de la vésicule germinative et surtout, de l'inhibition de l'assemblage des microtubules lors de la métaphase 1 de la méiose, qui n'avaient pas été démontrées. Nos résultats, permettent donc de penser qu'une synthèse d'ARN messagers s'effectue pendant les premières heures de la maturation; il n'est pas possible de savoir, à l'heure actuelle, si ces messagers sont traduits immédiatement ou seulement pendant les premières phases du développement embryonnaire. En tous cas, des protéines, qui sont synthétisées au même moment, sont indispensables à la réalisation de la seconde période de la maturation. Cette synthèse protéique pourrait être en rapport avec la condensation des chromosomes, comme le proposent Wassarman et Letourneau (8), mais également avec l'élaboration et l'assemblage des microtubules du fuseau méiotique. Séance du 14 février 1977. (1) J. D. BIGGERS, D. G. WHITTINGHAM et R. P. DONAHUE, Proc. Nat. Acad. Sc. U.S., 58, 1967, p. 560. (2) J. F. KENNEDY et R. P. DONAHUE, Science, 164, 1969, p. 1292. (3) G. H. ZEILMAKER, J. P. W. VERMEIDEN, C. M. P. M. VERHAMME et A. C. W. VAN VLIET, Europ. J. Obstet. Gynec. Reprod. Biol., 4, 1974, p. 15. (4) R. P. DONAHUE, J. Exp. Zool., 169, 1968, p. 237. (1) A. M. BLOOM et B. B. MUKHERJEE, Exptl. Cell Res., 74, 1969, p. 577. (6) S. STERN, A. RAYYIS et J. F. KENNEDY, Biol.