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et cette constatation me semble avoir la plus grande importance. Aucun des faits que nous avons observés, M. Crémieu et moi, en étudiant l'involution rétrograde du thymus, ne s'oppose à la théorie de l'origine épithéliale des petites cellules. Il n'en est pas de même au sujet de l'origine des cellules hassalliennes. Tous les faits que nous avons observés sont nettement, catégoriquement démonstratifs de l'origine et de la signification épithéliales des cellules hassalliennes aucune de nos observations ne peut être interprétée, croyons-nous, en faveur de l'origine et de la signification conjonctive de ces cellules. L'absence de mitoses dans les cellules hassalliennes caractéristiques n'est pas un argument contre leur origine épithéliale. Il est certain que les cellules des corpuscules de Hassall dérivent, par une longue et lente transformation, des cellules du stroma cortical, c'est-à-dire qu'elles ne sont pas reconnaissables dans les éléments corticaux en division karyokinétique. Faisant il est possible que M. Dustin et ses contradicteurs aient également raison, à propos de l'origine des cellules hassalliennes. Sous ce nom générique, H. Dustin désigne, en effet, des éléments très différents chez les Vertébrés inférieurs et chez les Mammifères. Il est possible que les cellules myoïdes des Amphibiens et des Oiseaux et les cellules des corpuscules de Hassall des Mammifères et des Oiseaux ne soient point homologues. S'il en est ainsi, il n'y aurait rien d'étonnant à ce que les cellules myoïdes soient d'origine conjonctive, et que les cellules des corpuscules de Hassall proviennent du reticulum épithélial. Quoique nous n'ayons pas le moyen de le démontrer actuellement, M. Crémieu et moi nous sommes favorables à une hypothèse d'après laquelle, chez les Mammifères, les éléments épithéliaux du thymus donneraient naissance à la fois aux petites cellules et aux cellules hassalliennes. Je rappellerai enfin que, sans refuser un caractère de plausibilité à l'hypothèse physiologique d'après laquelle le thymus servirait à accumuler, mettre en réserve et libérer de la chromatine nucléaire, nous pensons, M. Crémieu et moi, que les petites cellules thymiques sont destinées à être mises en liberté et à sortir du thymus. M. Loewenthal. L'origine épithéliale des cellules thymiques fut défendue déjà plus anciennement par
des corpuscules de Hassall des Mammifères et des Oiseaux ne soient point homologues. S'il en est ainsi, il n'y aurait rien d'étonnant à ce que les cellules myoïdes soient d'origine conjonctive, et que les cellules des corpuscules de Hassall proviennent du reticulum épithélial. Quoique nous n'ayons pas le moyen de le démontrer actuellement, M. Crémieu et moi nous sommes favorables à une hypothèse d'après laquelle, chez les Mammifères, les éléments épithéliaux du thymus donneraient naissance à la fois aux petites cellules et aux cellules hassalliennes. Je rappellerai enfin que, sans refuser un caractère de plausibilité à l'hypothèse physiologique d'après laquelle le thymus servirait à accumuler, mettre en réserve et libérer de la chromatine nucléaire, nous pensons, M. Crémieu et moi, que les petites cellules thymiques sont destinées à être mises en liberté et à sortir du thymus. M. Loewenthal. L'origine épithéliale des cellules thymiques fut défendue déjà plus anciennement par Retterer. Cette manière de voir rend difficile à comprendre les phénomènes régressifs si fréquents qu'on observe dans les corpuscules de Hassall qui, eux, certainement renferment des cellules dont les caractères épithéliaux seraient difficiles à mettre en doute. Et, d'autre part, l'origine lymphocytaire des cellules thymiques est encore parfaitement conciliable avec l'hypothèse de la sécrétion interne des cellules thymiques. M. Dustin et M. Regaud. Jusqu'à présent nous n'ayons rien publié concernant le thymus des Mammifères, voulant acquérir d'abord des certitudes formelles concernant le thymus des formes inférieures. À propos des cellules myo-épithélioïdes, leur origine nous paraît définitivement démontrée par 1° leur structure et leur aspect morphologique 2° nos expériences de greffes thymiques; 3° nos expériences de cultures thymiques. Les petites cellules thymiques sont très certainement différentes des cellules lymphoides (recherches microchimiques de Bany). À propos de l'origine commune des cellules hassalliennes et des petites cellules, on peut objecter la différence du mode de division cinétique pour les dernières, amitoses pour les premières. La sortie des petites cellules hors du thymus – quoique non démontrée de façon formelle – n'est pas en désaccord avec la fonction chromopexique ou chromotypique que nous supposons. À M. Pensa. L'origine myotomiale des cellules myoïdes est peu
l'hypothèse de la sécrétion interne des cellules thymiques. M. Dustin et M. Regaud. Jusqu'à présent nous n'ayons rien publié concernant le thymus des Mammifères, voulant acquérir d'abord des certitudes formelles concernant le thymus des formes inférieures. À propos des cellules myo-épithélioïdes, leur origine nous paraît définitivement démontrée par 1° leur structure et leur aspect morphologique 2° nos expériences de greffes thymiques; 3° nos expériences de cultures thymiques. Les petites cellules thymiques sont très certainement différentes des cellules lymphoides (recherches microchimiques de Bany). À propos de l'origine commune des cellules hassalliennes et des petites cellules, on peut objecter la différence du mode de division cinétique pour les dernières, amitoses pour les premières. La sortie des petites cellules hors du thymus – quoique non démontrée de façon formelle – n'est pas en désaccord avec la fonction chromopexique ou chromotypique que nous supposons. À M. Pensa. L'origine myotomiale des cellules myoïdes est peu conciliable avec les variations saisonnières du nombre de ces cellules. L'existence de transition entre cellules épithéliales et cellules myoides est pour nous d'une évidence absolue. À M. Lowenthal. Pour M. Retterer, les cellules provenant de l'ébauche épithéliale seraient de vrais lymphocytes. Quant à la régression des cellules de la série hassallienne, nous en avons déjà fourni l'explication dans nos travaux antérieurs. SUR L'HISTOGENESE DE LA VÉSICULE OMBILICALE DU LAPIN Par A. BRANCA J'ai commencé cette année l'examen de la vésicule ombilicale du Lapin. Cette étude d'histogenèse est inachevée les stades initiaux et les stades ultimes de l'évolution me font encore défaut. Aussi me bornerai-je à résumer brièvement ici les faits que j'ai eu l'occasion d'observer. À. Sur les embryons du dixième jour, la paroi de la vésicule est très mince, bien que d'épaisseur fort mélagie. Des vaisseaux, de taille très variable, font saillie sur sa face externe, sur sa face interne ou même à la fois sur ses deux faces. L'endoderme vitellin est formé d'une assise de cellules polyédriques qui sont notablement plus basses au niveau des travées vasculaires que dans les mailles circonscrites par ces travées. Le pôle basal de ces éléments s'implante sur une mince lamelle conjonctive leur
hassallienne, nous en avons déjà fourni l'explication dans nos travaux antérieurs. SUR L'HISTOGENESE DE LA VÉSICULE OMBILICALE DU LAPIN Par A. BRANCA J'ai commencé cette année l'examen de la vésicule ombilicale du Lapin. Cette étude d'histogenèse est inachevée les stades initiaux et les stades ultimes de l'évolution me font encore défaut. Aussi me bornerai-je à résumer brièvement ici les faits que j'ai eu l'occasion d'observer. À. Sur les embryons du dixième jour, la paroi de la vésicule est très mince, bien que d'épaisseur fort mélagie. Des vaisseaux, de taille très variable, font saillie sur sa face externe, sur sa face interne ou même à la fois sur ses deux faces. L'endoderme vitellin est formé d'une assise de cellules polyédriques qui sont notablement plus basses au niveau des travées vasculaires que dans les mailles circonscrites par ces travées. Le pôle basal de ces éléments s'implante sur une mince lamelle conjonctive leur pôle apical, encadré par les bandelettes de fermeture, dessine un feston convexe que surmonte une bordure striée des plus basses (1). Le noyau occupe la base ou la partie moyenne de la cellule. La base de la cellule, généralement claire (2), est occupée par une, deux ou trois vacuoles volumineuses. La zone supra-nucléaire est semée de grains de taille variable et de forme généralement arrondie. Ces grains, après fixation par les liquides picriques, se colorent en rose après l'action de l'hématoxyline-éosine après l'usage de l'hématoxyline ferrique, ces grains sont noirs ou roses certains d'entre eux montrent une partie centrale volumineuse, teinte en rose, et une zone corticale, colorée en noir. Cette zone est fréquemment réduite à une coupule ou à quelques fines granulations. Les fixations par le Muller formolé dessinent, au-dessus du noyau, une série de vacuoles qu'occupent, sans les remplir, les grains de sécrétion colorés en noir par l'hématoxyline de Heidenhain. Ces grains sont encore peu nombreux. Au pôle apical de la cellule, il reste d'ailleurs, immédiatement au-dessous de la bordure striée, une lamelle étroite de protoplasma, qui demeure constamment dépourvue d'enclaves. Enfin, les pièces fixées par les méthodes mitochondriales montrent une série de filaments très longs, très grêles
La zone supra-nucléaire est semée de grains de taille variable et de forme généralement arrondie. Ces grains, après fixation par les liquides picriques, se colorent en rose après l'action de l'hématoxyline-éosine après l'usage de l'hématoxyline ferrique, ces grains sont noirs ou roses certains d'entre eux montrent une partie centrale volumineuse, teinte en rose, et une zone corticale, colorée en noir. Cette zone est fréquemment réduite à une coupule ou à quelques fines granulations. Les fixations par le Muller formolé dessinent, au-dessus du noyau, une série de vacuoles qu'occupent, sans les remplir, les grains de sécrétion colorés en noir par l'hématoxyline de Heidenhain. Ces grains sont encore peu nombreux. Au pôle apical de la cellule, il reste d'ailleurs, immédiatement au-dessous de la bordure striée, une lamelle étroite de protoplasma, qui demeure constamment dépourvue d'enclaves. Enfin, les pièces fixées par les méthodes mitochondriales montrent une série de filaments très longs, très grêles et d'égal calibre. Ces filaments, généralement onduleux, sont assez tassés les uns contre les autres; ils sont orientés parallèlement au grand axe cellulaire. Ce sont là des chondriocontes ils occupent toute l'étendue du cytoplasme, même la région où s'élaborent les grains de sécrétion, et persistent sur les éléments en voie de division, au pourtour de la figure caryocinétique. D. La vésicule s'est épaissie sur les embryons du quinzième jour les cellules endodermiques ont conservé la même structure elles sont toutefois plus hautes les grains de sécrétion sont notablement plus gros et plus nombreux le chondriome, en revanche, n'a pas varié d'aspect. C. Au dix-septième jour, on observe deux particularités nouvelles. Des grains de sécrétion s'élaborent fréquemment dans le pôle basal de la cellule. D'autre part, sur une de mes pièces, dont la fixation d'ailleurs n'est pas aussi rigoureuse que je l'aurais désiré (3), le cytoplasme est parcouru par des canalicules de Holmgren. D. Au vingtième jour, l'endoderme ombilical a grandi, mais son accroissement est inégal, si bien que le revêtement du sac vitellin semble formé d'une série de groupes cellulaires juxtaposés. Chaque groupe simule un éventail où les cellules sont d'autant plus basses qu'elles sont plus voisines de la périphérie
de division, au pourtour de la figure caryocinétique. D. La vésicule s'est épaissie sur les embryons du quinzième jour les cellules endodermiques ont conservé la même structure elles sont toutefois plus hautes les grains de sécrétion sont notablement plus gros et plus nombreux le chondriome, en revanche, n'a pas varié d'aspect. C. Au dix-septième jour, on observe deux particularités nouvelles. Des grains de sécrétion s'élaborent fréquemment dans le pôle basal de la cellule. D'autre part, sur une de mes pièces, dont la fixation d'ailleurs n'est pas aussi rigoureuse que je l'aurais désiré (3), le cytoplasme est parcouru par des canalicules de Holmgren. D. Au vingtième jour, l'endoderme ombilical a grandi, mais son accroissement est inégal, si bien que le revêtement du sac vitellin semble formé d'une série de groupes cellulaires juxtaposés. Chaque groupe simule un éventail où les cellules sont d'autant plus basses qu'elles sont plus voisines de la périphérie du floccule et d'autant plus hautes qu'elles sont plus voisines du centre de ce même floccule. C'est là l'amorce d'un dispositif qui va progressivement s'accentuer. E. Au vingt-deuxième jour, en effet, ces floccules ont pris un énorme développement, si bien que la vésicule se montre, par endroits, hérissée de végétations lamelliformes qui font saillie dans sa cavité. Chacune de ces végétations a pour axe une cloison conjonctivo-vasculaire infiltrée de nombreux leucocytes. Cette cloison, issue du mésoderme vésiculaire, donne implantation à l'épithélium qui, à ce stade, est remarquable par sa grande hauteur, par son étroitesse et par la saillie que forme le pôle apical de chacun des éléments de l'endoderme vitellin. Notons encore qu'aucune différence fondamentale de structure ne différencie les éléments sécréteurs de la vésicule, chez les embryons de Lapin du dixième au vingt-deuxième jour. Et sur chaque les grains de secrétion sont assez rares. Laboratoire des travaux pratiques d'histologie de la Faculté de Médecine de Paris. LA « FIXATION FROIDE » SES AVANTAGES EN TECHNIQUE HISTOLOGIQUE Par A. POLICARD Dans ses leçons sur les phénomènes de la vie communs aux animaux et aux végétaux, Cl. Bernard a créé l'expression et étudié l'état de vie cessé. La vie manifestée dépend
lamelliformes qui font saillie dans sa cavité. Chacune de ces végétations a pour axe une cloison conjonctivo-vasculaire infiltrée de nombreux leucocytes. Cette cloison, issue du mésoderme vésiculaire, donne implantation à l'épithélium qui, à ce stade, est remarquable par sa grande hauteur, par son étroitesse et par la saillie que forme le pôle apical de chacun des éléments de l'endoderme vitellin. Notons encore qu'aucune différence fondamentale de structure ne différencie les éléments sécréteurs de la vésicule, chez les embryons de Lapin du dixième au vingt-deuxième jour. Et sur chaque les grains de secrétion sont assez rares. Laboratoire des travaux pratiques d'histologie de la Faculté de Médecine de Paris. LA « FIXATION FROIDE » SES AVANTAGES EN TECHNIQUE HISTOLOGIQUE Par A. POLICARD Dans ses leçons sur les phénomènes de la vie communs aux animaux et aux végétaux, Cl. Bernard a créé l'expression et étudié l'état de vie cessé. La vie manifestée dépend de certaines conditions essentielles. Si l'une d'elles manque, la vie est suspendue ou même arrêtée. Parmi ces conditions, une des plus fondamentales est la chaleur. Il suffit d'abaisser autour d'un être simple ou d'un tissu la température ambiante pour mettre cet être ou ce tissu en état de mort. Ces phénomènes, de connaissance élémentaire aujourd'hui, ont fait l'objet depuis longtemps d'applications pratiques. Citons par exemple leur utilisation en bactériologie pour la conservation des virus, en biologie générale pour la conservation des pièces destinées à la greffe; il suffit de rappeler les intéressantes applications du cold shock d'Alexis Carrel. Nous avons tenté l'application de ces données à la nation histologique. Incidemment, certains auteurs, et en particulier Borrel (1) (à propos de son liquide chromo-acéto-osmique), Bethe et les histologistes qui instituèrent des variantes de la méthode d'Ehrlich, avaient signalé que certaines opérations techniques donnaient de meilleurs résultats à froid qu'à la température ambiante. Nous apportons aujourd'hui une série de faits et de considérations qui démontrent l'intérêt d'opérer toujours la fixation à basse température et d'adopter la méthode générale de la fixation froide. BASES THÉORIQUES DE LA MÉTHODE Pour donner un exposé clair des bases théoriques de la méthode que nous proposons, nous
phénomènes, de connaissance élémentaire aujourd'hui, ont fait l'objet depuis longtemps d'applications pratiques. Citons par exemple leur utilisation en bactériologie pour la conservation des virus, en biologie générale pour la conservation des pièces destinées à la greffe; il suffit de rappeler les intéressantes applications du cold shock d'Alexis Carrel. Nous avons tenté l'application de ces données à la nation histologique. Incidemment, certains auteurs, et en particulier Borrel (1) (à propos de son liquide chromo-acéto-osmique), Bethe et les histologistes qui instituèrent des variantes de la méthode d'Ehrlich, avaient signalé que certaines opérations techniques donnaient de meilleurs résultats à froid qu'à la température ambiante. Nous apportons aujourd'hui une série de faits et de considérations qui démontrent l'intérêt d'opérer toujours la fixation à basse température et d'adopter la méthode générale de la fixation froide. BASES THÉORIQUES DE LA MÉTHODE Pour donner un exposé clair des bases théoriques de la méthode que nous proposons, nous allons envisager successivement et dans leur ordre chronologique les phénomènes qui se passent successivement dans les couches les plus périphériques de la pièce parfaitement fraîche et au centre de celle-ci, après son immersion dans le réactif fixateur, que nous supposerons être ici un coagulateur salin, mélange bichromate ou osmique par exemple. Nous ne préjugerons quoi que ce soit de la nature intime de la fixation. A. Aussitôt après l'immersion, il se passe entre les couches périphériques de la pièce et le fixateur une sorte de conflit. En particulier, il se produit une contraction brusque non seulement des organes contractiles, mais même de tout protoplasma. C'est un fait que les zoologistes connaissent bien. Cette contraction brusque et intense peut être l'origine de ruptures, d'altérations de l'architecture cellulaire. Pour combattre cette contractilité, les zoologistes ont l'habitude d'anesthésier les animaux avec du chlorate, de la cocaïne, du chloroforme, de la nicotine ou de la fumée de tabac, etc. C'est là une pratique bien connue. Récemment, Rubenthaler (1) a eu l'idée d'expliquer et de combattre d'une façon analogue les altérations dues à la fixation des tissus des Vertébrés. Mais nous pensons que, dans ce dernier cas, cette contractilité nuisible est bien plus facilement annihilée
exemple. Nous ne préjugerons quoi que ce soit de la nature intime de la fixation. A. Aussitôt après l'immersion, il se passe entre les couches périphériques de la pièce et le fixateur une sorte de conflit. En particulier, il se produit une contraction brusque non seulement des organes contractiles, mais même de tout protoplasma. C'est un fait que les zoologistes connaissent bien. Cette contraction brusque et intense peut être l'origine de ruptures, d'altérations de l'architecture cellulaire. Pour combattre cette contractilité, les zoologistes ont l'habitude d'anesthésier les animaux avec du chlorate, de la cocaïne, du chloroforme, de la nicotine ou de la fumée de tabac, etc. C'est là une pratique bien connue. Récemment, Rubenthaler (1) a eu l'idée d'expliquer et de combattre d'une façon analogue les altérations dues à la fixation des tissus des Vertébrés. Mais nous pensons que, dans ce dernier cas, cette contractilité nuisible est bien plus facilement annihilée par l'abaissement de la température ambiante que par les anesthésiques. C'est un fait bien connu en physiologie générale que le froid diminue ou supprime la contractilité du protoplasma. Vers 0°, la contraction brusque du protoplasma au contact du gazateur sera infiniment réduite, presque annihilée. C'est là un premier avantage de la fixation froide que de réduire au minimum les altérations techniques dues à la contraction brusque du protoplasma sous l'influence du réactif fixateur. B. Mais pendant que les couches périphériques de la pièce subissent l'action du fixateur, les éléments du centre n'ont pris aucun contact avec ce dernier. Séparées de l'organisme, en dehors de la circulation, les cellules du centre de la pièce vont subir l'autolyse, c'est-à-dire la digestion intracellulaire sous l'action désordonnée de fermentats dont le rôle est normalement réglé dans la cellule non livrée à elle-même. Cette autolyse, variable avec les cellules, a une double action au point de vue spécial qui nous intéresse a) Par digestion d'organes, d'inclusions, etc., préexistants dans la cellule, par dépôt de substances nouvelles (corps myéliniques) résultant du processus lui-même, etc., cette autolyse modifie considérablement l'aspect de la cellule. b) Mais les troubles les plus importants relèvent aussi d'un tout autre mécanisme. L'autolyse,
la fixation froide que de réduire au minimum les altérations techniques dues à la contraction brusque du protoplasma sous l'influence du réactif fixateur. B. Mais pendant que les couches périphériques de la pièce subissent l'action du fixateur, les éléments du centre n'ont pris aucun contact avec ce dernier. Séparées de l'organisme, en dehors de la circulation, les cellules du centre de la pièce vont subir l'autolyse, c'est-à-dire la digestion intracellulaire sous l'action désordonnée de fermentats dont le rôle est normalement réglé dans la cellule non livrée à elle-même. Cette autolyse, variable avec les cellules, a une double action au point de vue spécial qui nous intéresse a) Par digestion d'organes, d'inclusions, etc., préexistants dans la cellule, par dépôt de substances nouvelles (corps myéliniques) résultant du processus lui-même, etc., cette autolyse modifie considérablement l'aspect de la cellule. b) Mais les troubles les plus importants relèvent aussi d'un tout autre mécanisme. L'autolyse, processus digestif de la substance moléculaire, a pour effet de transformer les grosses molécules protoplasmiques en molécules plus petites, mais plus nombreuses. La pression osmotique dépendant du nombre des molécules, le contenu cellulaire va augmenter de tension osmotique. Ce fait va avoir des conséquences importantes. La cellule, à l'origine, en équilibre osmotique avec le milieu ambiant, ne le sera bientôt plus. Le contenu cellulaire sera plus concentré que le milieu ambiant. La cellule absorbera de l'eau, gonnera et il en résultera les graves dommages histologiques que l'on connaît éclatements, émission de boules sarcodiques, etc. Ces phénomènes sont précoces. Ils dépendent de l'activité cellulaire elle-même et, en fin de compte, se ramènent à une action fermentaire. Or, nous possédons un moyen de réduire au minimum ces actions diastasiques et leurs conséquences fâcheuses: c'est l'abaissement de température. Au voisinage de 0°, les actions diastasiques autolytiques sont nulles, donc les conséquences qui en dérivent. Pour empêcher les cellules du centre de la pièce de subir les graves altérations que l'on sait, il suffit d'abaisser la température du milieu. La théorie conseille donc, en même temps que de réduire l'épaisseur de la pièce, d'opérer à froid la fixation. Il nous est possible de donner