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à préciser nos connaissances, par l’observation du phénomène dans le cas de nombreuses espèces animales, et, d’autre part, il nous a paru utile d’établir une technique permettant de suivre, avec certitude, la marche de l’hémolyse. Nous décrirons donc, dès maintenant, le procédé spectrophotométrique que nous avons appliqué fréquemment dans nos recherches. I. — PROCÉDÉ SPECTROPHOTOMÉTRIQUE D’ÉTUDE DE L’HÉMOLYSE Effectuant des essais en série sur l’hémolyse dans de nombreuses espèces animales, nous avons songé à substituer au dosage du fer de l’oxyhémoglobine, particulièrement long et délicat, un dosage de la matière colorante entrée en dissolution, par spectrophotométrie, méthode beaucoup plus sensible que la méthode de comparaison colorimétrique usuelle. La technique utilisée est basée sur les considérations suivantes : si, au moyen du spectrophotomètre de Yvon, on détermine la densité optique d’une solution d’oxyhémoglobine, pour une radiation de longueur d’onde déterminée, par exemple, celle correspondant au maximum d’absorption (a = 5.769 U. A.) d’une des bandes de ce pigment, on constate qu’en faisant varier la dilution de la liqueur, les points obtenus pour la valeur de cette densité optique se placent sur une droite. On observe, en somme, avec le dispositif employé, une variation linéaire de la densité optique, en fonction de la concentration. D’autre part, comme les conditions de dilution varient dans de faibles limites au cours de l’expérience, on n’a pas à redouter un déplacement appréciable des bandes de l’oxyhémoglobine. Enfin, des mesures spectrophotométriques sur des solutions témoins prouvent que l’oxyhémoglobine n’est pas altérée au cours de l’essai, à condition d’opérer dans des limites de température convenablement fixées. Il est évident qu'en étant, dans un laboratoire où la température atteint 25°, il est nécessaire de maintenir les suspensions globulaires en cours d’hémolyse à 10°-12°, si l’expérience se poursuit pendant plusieurs heures. Si donc on veut suivre la marche d’une hémolyse sous l’influence d’un facteur déterminé, il suffit de prélever des volumes égaux de liquide à examiner, à des temps donnés, de les centrifuger dans les mêmes conditions, et d’évaluer au spectrophotomètre la densité optique des solutions limpides obtenues. D’autre part, parallèlement à cet essai, on pratique une dilution du même
la concentration. D’autre part, comme les conditions de dilution varient dans de faibles limites au cours de l’expérience, on n’a pas à redouter un déplacement appréciable des bandes de l’oxyhémoglobine. Enfin, des mesures spectrophotométriques sur des solutions témoins prouvent que l’oxyhémoglobine n’est pas altérée au cours de l’essai, à condition d’opérer dans des limites de température convenablement fixées. Il est évident qu'en étant, dans un laboratoire où la température atteint 25°, il est nécessaire de maintenir les suspensions globulaires en cours d’hémolyse à 10°-12°, si l’expérience se poursuit pendant plusieurs heures. Si donc on veut suivre la marche d’une hémolyse sous l’influence d’un facteur déterminé, il suffit de prélever des volumes égaux de liquide à examiner, à des temps donnés, de les centrifuger dans les mêmes conditions, et d’évaluer au spectrophotomètre la densité optique des solutions limpides obtenues. D’autre part, parallèlement à cet essai, on pratique une dilution du même sang, dans des conditions identiques, dans de l’eau distillée ; l’hémolyse est immédiate, et la densité optique trouvée fixera la valeur de celle qui indiquera la fin de l’hémolyse, dans le cas envisagé. Enfin, il est nécessaire d’étudier avec soin les conditions de concentration de mélanges à examiner, afin de pouvoir assister à un phénomène assez lent pour pouvoir être suivi dans tous ses détails. Nous aurons l’occasion d’utiliser fréquemment cette méthode et d’indiquer les renseignements que son emploi a pu nous fournir. II. — ÉTUDE DE L’ACTION PHOTOSENSIBILISATRICE DE L’HÉMATOPORPHYRINE On sait, depuis les travaux de Pfeifer (1905) et d’HAUSSMANN (1908), que l’hématoporphyrine possède la curieuse propriété de sensibiliser à l’action de la lumière divers organismes vivants mono-cellulaires (hématies, paramécies) ou pluri-cellulaires, tel que la souris blanche. Si à une suspension de globules rouges dans du sérum physiologique on ajoute une solution d’hématoporphyrine, et si l’on expose le tube à la lumière, on observe assez rapidement une hémolyse totale; à l’obscurité, on n’observe rien de semblable ; aucune hémolyse ne se produit. Haussmann a constaté que l’hématoporphyrine pouvait se combiner aux hématies, et il a montré au moyen d’écrans au sulfate de cuivre, à l’acide picrique et au bichromate
pouvoir assister à un phénomène assez lent pour pouvoir être suivi dans tous ses détails. Nous aurons l’occasion d’utiliser fréquemment cette méthode et d’indiquer les renseignements que son emploi a pu nous fournir. II. — ÉTUDE DE L’ACTION PHOTOSENSIBILISATRICE DE L’HÉMATOPORPHYRINE On sait, depuis les travaux de Pfeifer (1905) et d’HAUSSMANN (1908), que l’hématoporphyrine possède la curieuse propriété de sensibiliser à l’action de la lumière divers organismes vivants mono-cellulaires (hématies, paramécies) ou pluri-cellulaires, tel que la souris blanche. Si à une suspension de globules rouges dans du sérum physiologique on ajoute une solution d’hématoporphyrine, et si l’on expose le tube à la lumière, on observe assez rapidement une hémolyse totale; à l’obscurité, on n’observe rien de semblable ; aucune hémolyse ne se produit. Haussmann a constaté que l’hématoporphyrine pouvait se combiner aux hématies, et il a montré au moyen d’écrans au sulfate de cuivre, à l’acide picrique et au bichromate de potasse, que dans le cas de paramécies, les radiations actives se trouvaient entre les raies E et F, c’est-à-dire entre 5.270 et 4.870 U. A, soit dans la région verte du spectre. Ayant préparé pour d’autres recherches de l’hématoporphyrine cristallisée, il nous a paru intéressant de reprendre l’étude de cette hémolyse afin de préciser la nature des radiations actives et d’établir l’allure du phénomène. 1° Matériel d'expérience. — Nous nous sommes servis d’hématies de cheval lavées trois fois avec la solution de Ringer, et mises en suspension à 2 p. 1.000, dans le liquide de Ringer-Locke ( 2 ). 2° Source de lumière. — Nous avons utilisé comme source de lumière : a) la lumière naturelle diffuse. b) la lumière d’une lampe électrique à filaments métalliques, de 50 watts. Distance de la lampe à l’essai : 20 centimètres. c) la lumière de brûleur George à vapeur de mercure, 120 volts, 3 amp. 5. Distance de la lampe à l’essai : 40 centimètres. d) cette dernière lumière filtrée sur divers écrans : 1° Écran ultra-violet permettant l’utilisation des radiations 3.650 U. A. 2° Écran violet (de Wratten) 4.800 U. A. 3° Écran vert (de Wratten) 5.460 U. A. 4° Écran
cette hémolyse afin de préciser la nature des radiations actives et d’établir l’allure du phénomène. 1° Matériel d'expérience. — Nous nous sommes servis d’hématies de cheval lavées trois fois avec la solution de Ringer, et mises en suspension à 2 p. 1.000, dans le liquide de Ringer-Locke ( 2 ). 2° Source de lumière. — Nous avons utilisé comme source de lumière : a) la lumière naturelle diffuse. b) la lumière d’une lampe électrique à filaments métalliques, de 50 watts. Distance de la lampe à l’essai : 20 centimètres. c) la lumière de brûleur George à vapeur de mercure, 120 volts, 3 amp. 5. Distance de la lampe à l’essai : 40 centimètres. d) cette dernière lumière filtrée sur divers écrans : 1° Écran ultra-violet permettant l’utilisation des radiations 3.650 U. A. 2° Écran violet (de Wratten) 4.800 U. A. 3° Écran vert (de Wratten) 5.460 U. A. 4° Écran jaune (de Wratten) 5.769-5.790 U. A. 5° Écran rouge ne laissant pratiquement pas passer de lumière visible. ^ c) La lumière de l’arc électrique dont les radiations étaient sélectionnées au moyen d’un monochromateur Jobin. (9 R. Fabre : C. R. Acad. Sc., 2 nov. 1925. ( 2 ) Cl Na : 180,00 ; Cl K : 9,60 ; Cl*Mg: 0,10 ; Cl 2 Ca : 0,42; Glucose : 10,00 ; Eau dist., q.s. : 100,00. CONTRIBUTION A L’ÉTUDE DE L’HÉMOLYSE 393 Expériences : Expérience n° 1 Suspension globulaire à 2 p. 1.000 : 5 centimètres cubes. Solution d’hématoporphyrine à 2 p. 1.000 : quantité variable. Irradiation : variable. Nature de l’irradiation TEMPS OBSCURITÉ LUMIÈRE ÉLECTRIQUE ORDINAIRE LAMPE A VAPEUR DE MERCURE Vol sol. d'hémat. Vol. sol. d’hémat. Vol. sol. d’hémat. en minutes 8 0 cc. 5 0 cc. 25 0 0 0 cc. 5 0 cc. 25 Occ. 12 -4 0 cc. 5 Occ. 25 30 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 45 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 60 0 0 0 0 -1 -4 0 0 0 0 75 0 0 0 0 0 0 0
: 180,00 ; Cl K : 9,60 ; Cl*Mg: 0,10 ; Cl 2 Ca : 0,42; Glucose : 10,00 ; Eau dist., q.s. : 100,00. CONTRIBUTION A L’ÉTUDE DE L’HÉMOLYSE 393 Expériences : Expérience n° 1 Suspension globulaire à 2 p. 1.000 : 5 centimètres cubes. Solution d’hématoporphyrine à 2 p. 1.000 : quantité variable. Irradiation : variable. Nature de l’irradiation TEMPS OBSCURITÉ LUMIÈRE ÉLECTRIQUE ORDINAIRE LAMPE A VAPEUR DE MERCURE Vol sol. d'hémat. Vol. sol. d’hémat. Vol. sol. d’hémat. en minutes 8 0 cc. 5 0 cc. 25 0 0 0 cc. 5 0 cc. 25 Occ. 12 -4 0 cc. 5 Occ. 25 30 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 45 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 60 0 0 0 0 -1 -4 0 0 0 0 75 0 0 0 0 0 0 0 90 0 0 0 0 0 0 0 Expérience n° 2 Suspension globulaire à 2 p. 1.000 : 5 centimètres cubes. Hématoporphyrine : quantité variable. Irradiation : lumière naturelle diffuse. Centimètres TEMPS D’IRRADIATION TITRE DE LA SOL. D’HÉMATOPORPHYRINE 24 heures 48 heures 12 heures Hématoporphyrine à 2 x 10-3 .... 0.25 0.12 0.07 0.00 Expérience n° 3 Suspension globulaire à 2 p. 1.000 : 5 centimètres cubes. Solution d’hématoporphyrine : quantité et concentration variables. Irradiation : lumière totale de la lampe à vapeur de mercure ( 4 ). TITRE DE LA SOL. D'HÉMATOPORPHYRINE Volume 30 m. 60 m. 90 m. 120 m. 150 m. Sol. d’hématoporphyrine à 2 x 10-3 0.50 0.25 0.12 0.07 0.00 Sol. d’hématoporphyrine à 2 x 10-2 0.25 0.12 0.07 0.00 Sol. d’hématoporphyrine à 2 x 10-1 0.25 0.12 0.07 0.00 Essai à l’obscurité de la sol. à 2 x 10-3 0.25 Expérience n° 4 Suspension globulaire à 2 p. 1.000 : 5 centimètres cubes. Solution d’hématoporphyrine à 2 p. 1.000 : quantité variable. Irradiation : lumière totale de la lampe à vapeur de mercure filtrée sur écran de Wratten (Vi : violet, Ve : vert, J : jaune). VOLUME de la solution d'hématoporphyrine DURÉE DE
0.25 0.12 0.07 0.00 Expérience n° 3 Suspension globulaire à 2 p. 1.000 : 5 centimètres cubes. Solution d’hématoporphyrine : quantité et concentration variables. Irradiation : lumière totale de la lampe à vapeur de mercure ( 4 ). TITRE DE LA SOL. D'HÉMATOPORPHYRINE Volume 30 m. 60 m. 90 m. 120 m. 150 m. Sol. d’hématoporphyrine à 2 x 10-3 0.50 0.25 0.12 0.07 0.00 Sol. d’hématoporphyrine à 2 x 10-2 0.25 0.12 0.07 0.00 Sol. d’hématoporphyrine à 2 x 10-1 0.25 0.12 0.07 0.00 Essai à l’obscurité de la sol. à 2 x 10-3 0.25 Expérience n° 4 Suspension globulaire à 2 p. 1.000 : 5 centimètres cubes. Solution d’hématoporphyrine à 2 p. 1.000 : quantité variable. Irradiation : lumière totale de la lampe à vapeur de mercure filtrée sur écran de Wratten (Vi : violet, Ve : vert, J : jaune). VOLUME de la solution d'hématoporphyrine DURÉE DE L’IRRADIATION 30 minutes écran 60 minutes écran 90 minutes écran Vi Ve J. Vi Ve J. Vi Ve J. 0.25 0.07 0.00 Expérience n° 5 Suspension globulaire à 2 p. 1.000 : 5 cc. Solution d’hématoporphyrine à 2 p. 1.000 : 0 cc. 25, ou solution saline. Irradiation : variable. NATURE DE L’IRRADIATION HÉMATOPORPHYRINE hémolyse en: SOLUTION SALINE Obscurité. 0 après 3 h. Hémolyse en 1 h. 15 Hémolyse en 1 h. 30 O après 3 h. O après 3 h. O après 3 h. Hémolyse en 2 h. 30 O après 3 h. O après 3 h. Lampe à filament métallique. Lumière du brûleur George directe Écran ultra-violet Écran violet. Écran vert Écran jaune Écran infra-rouge (lampe à filament métallique) Expérience n° 6 Suspension globulaire à 2 p. 1.000 : 5 centimètres cubes. Solution d’hématoporphyrine : à 2 p. 1.000 et 2 p. 100.000. Irradiation : lumière de la lampe à vapeur de mercure, filtrée sur un écran constitué par une solution d’hématoporphyrine à 2 p. 1.000 dans l’alcool absolu. Cette solution absorbe les rayons ultra-violets de la lampe et donne une lumière de fluorescence visible de 6.100—6.700 U. A. 10 m. 20 m. 30 m. 40 m. 50
NATURE DE L’IRRADIATION HÉMATOPORPHYRINE hémolyse en: SOLUTION SALINE Obscurité. 0 après 3 h. Hémolyse en 1 h. 15 Hémolyse en 1 h. 30 O après 3 h. O après 3 h. O après 3 h. Hémolyse en 2 h. 30 O après 3 h. O après 3 h. Lampe à filament métallique. Lumière du brûleur George directe Écran ultra-violet Écran violet. Écran vert Écran jaune Écran infra-rouge (lampe à filament métallique) Expérience n° 6 Suspension globulaire à 2 p. 1.000 : 5 centimètres cubes. Solution d’hématoporphyrine : à 2 p. 1.000 et 2 p. 100.000. Irradiation : lumière de la lampe à vapeur de mercure, filtrée sur un écran constitué par une solution d’hématoporphyrine à 2 p. 1.000 dans l’alcool absolu. Cette solution absorbe les rayons ultra-violets de la lampe et donne une lumière de fluorescence visible de 6.100—6.700 U. A. 10 m. 20 m. 30 m. 40 m. 50 m. a b a b a b a b a b a b Témoin 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Hématoporph. 2 X 10-3 . 0 0 0 0 0 0 0 0 II II Hématoporph. 2 x 10-5 . 0 0 0 0 0 0 0 0 + Ainsi l’action sensibilisatrice de l’hématoporphyrine pour les hématies, dans les conditions expérimentales indiquées, paraît être excitée seulement par les radiations de la région jaune du spectre, les radiations ultra-violettes n’intervenant pas. Ces résultats ont d’ailleurs été confirmés lorsque nous avons eu à notre disposition un monochromateur (*). La source de lumière utilisée dans ce cas a été l’arc électrique sous 20 ampères, et la suspension globulaire, additionnée d’hématoporphyrine aux dilutions indiquées précédemment, était placée devant la fente du monochromateur. Celui-ci était réglé de façon à utiliser des radiations de longueur d’onde bien déterminées. Dans ces conditions l’hémolyse n’a été véritablement active que pour les radiations de X : 5.760—5.800 U. A. Haussmann, en filtrant la lumière solaire sur des solutions de sulfate de cuivre, d’acide picrique ou de bichromate de potasse, avait constaté qu’en présence d’hématoporphyrine, les paramécies étaient sensibles aux radiations de la région verte du
0 0 + Ainsi l’action sensibilisatrice de l’hématoporphyrine pour les hématies, dans les conditions expérimentales indiquées, paraît être excitée seulement par les radiations de la région jaune du spectre, les radiations ultra-violettes n’intervenant pas. Ces résultats ont d’ailleurs été confirmés lorsque nous avons eu à notre disposition un monochromateur (*). La source de lumière utilisée dans ce cas a été l’arc électrique sous 20 ampères, et la suspension globulaire, additionnée d’hématoporphyrine aux dilutions indiquées précédemment, était placée devant la fente du monochromateur. Celui-ci était réglé de façon à utiliser des radiations de longueur d’onde bien déterminées. Dans ces conditions l’hémolyse n’a été véritablement active que pour les radiations de X : 5.760—5.800 U. A. Haussmann, en filtrant la lumière solaire sur des solutions de sulfate de cuivre, d’acide picrique ou de bichromate de potasse, avait constaté qu’en présence d’hématoporphyrine, les paramécies étaient sensibles aux radiations de la région verte du spectre. Faisons enfin remarquer que l’hématoporphyrine paraît intervenir par sa masse dans la vitesse du phénomène. Ainsi, pour des quantités fixes de 5 centimètres cubes de suspension globulaire, et des quantités décroissantes d’hématoporphyrine, on observe le début de l’hémolyse dans les temps suivants, sous le rayonnement total du brûleur à mercure. Hématoporphyrine à 2. 10−3 : 0,50 cc., 0,25 cc., 0,12 cc. : 30 minutes; 0,07 cc : 60 minutes. Hématoporphyrine à 2. 10−4 : 0,25 cc. : 60 minutes ; 0,12 cc. : 0,70 cc. : 90 minutes. Hématoporphyrine à 2. 10−5 : 0,25 cc. ; pas d’hémolyse en une heure et demie. Hémolyse totale en vingt-quatre heures. En outre, il paraissait important d’étudier comparativement les globules des divers animaux, afin d’éprouver leur résistance respective à l’hémolyse. Les hématies des différentes espèces animales présentent, en effet, des variations parfois importantes au point de vue chimique, et on pouvait espérer pénétrer plus profondément dans la connaissance du phénomène, en entreprenant une telle étude. Nos essais ont porté simultanément sur les hématies des espèces animales suivantes : bœuf, cheval, chien, cobaye, lapin, mouton, porc, rat. Les globules rouges séparés par centrifugation étaient lavés trois fois au sérum de Ringer, puis mis
mercure. Hématoporphyrine à 2. 10−3 : 0,50 cc., 0,25 cc., 0,12 cc. : 30 minutes; 0,07 cc : 60 minutes. Hématoporphyrine à 2. 10−4 : 0,25 cc. : 60 minutes ; 0,12 cc. : 0,70 cc. : 90 minutes. Hématoporphyrine à 2. 10−5 : 0,25 cc. ; pas d’hémolyse en une heure et demie. Hémolyse totale en vingt-quatre heures. En outre, il paraissait important d’étudier comparativement les globules des divers animaux, afin d’éprouver leur résistance respective à l’hémolyse. Les hématies des différentes espèces animales présentent, en effet, des variations parfois importantes au point de vue chimique, et on pouvait espérer pénétrer plus profondément dans la connaissance du phénomène, en entreprenant une telle étude. Nos essais ont porté simultanément sur les hématies des espèces animales suivantes : bœuf, cheval, chien, cobaye, lapin, mouton, porc, rat. Les globules rouges séparés par centrifugation étaient lavés trois fois au sérum de Ringer, puis mis en suspension dans une quantité de ce liquide telle que la purée globulaire obtenue représentait un égal volume de sang primitif. Cette suspension était diluée ensuite à 1 p. 100 dans la solution de Ringer, pour nos expériences, et, à 5 centimètres cubes du liquide obtenu, on ajoutait 0,5 cc. 5 de solution d’hématoporphyrine à 2 p. 1.000. Si l’on soumet, donc, une telle suspension globulaire additionnée d’hématoporphyrine, aux radiations jaunes du spectre (5.760-5.790 U. A.), on observe une rapidité d’hémolyse éminemment variable suivant les espèces animales considérées. Voici, par exemple, le résultat d’une de nos expériences : TEMPS en minutes Cheval 42 Rat 67 Lapin 50 Porc 69 Mouton 55 Cobaye 69 Bœuf 56 Chien 75 Les différences apparaissaient notables et il était naturel de penser à faire varier certains des facteurs auxquels pouvaient être attribuées ces divergences. Ayant effectué la numération globulaire des sangs mis en expérience, nous avons employé des volumes de suspensions de globules tels que dans tous les cas, le même nombre d’hématies était soumis à l’action photosensibilisatrice d’une même quantité d’hématoporphyrine. Dans ce cas, l’ordre de vitesse était le suivant : Ordre de numération globulaire. Ordre d’hémolyse. TEMPS en minutes Cheval 37 Lapin 55
5 de solution d’hématoporphyrine à 2 p. 1.000. Si l’on soumet, donc, une telle suspension globulaire additionnée d’hématoporphyrine, aux radiations jaunes du spectre (5.760-5.790 U. A.), on observe une rapidité d’hémolyse éminemment variable suivant les espèces animales considérées. Voici, par exemple, le résultat d’une de nos expériences : TEMPS en minutes Cheval 42 Rat 67 Lapin 50 Porc 69 Mouton 55 Cobaye 69 Bœuf 56 Chien 75 Les différences apparaissaient notables et il était naturel de penser à faire varier certains des facteurs auxquels pouvaient être attribuées ces divergences. Ayant effectué la numération globulaire des sangs mis en expérience, nous avons employé des volumes de suspensions de globules tels que dans tous les cas, le même nombre d’hématies était soumis à l’action photosensibilisatrice d’une même quantité d’hématoporphyrine. Dans ce cas, l’ordre de vitesse était le suivant : Ordre de numération globulaire. Ordre d’hémolyse. TEMPS en minutes Cheval 37 Lapin 55 Bœuf 57 Rat 62 Mouton 65 Porc 70 Cobaye 85 Chien 85 Bœuf. Mouton Porc . Chien. Cheval. Cobaye Rat.... Lapin . NOMBRE DE GLOBULES 7,2 7.2 5,9 5,7 4,5 4.3 4,2 3.4 Les différences ne paraissent pas appréciables entre l’ordre d’hémolyse à nombre de globules égaux, et à volumes de sang égaux, malgré les variations assez importantes dans le nombre des globules rouges de chaque échantillon considéré. Il importait, dès lors, d’étudier l’hémolyse à quantité d’hémoglobine égale. On sait que les variations entre les taux d’hémoglobine des différents animaux sont assez grandes ; elles apparaissent non seulement d’une espèce à l’autre, mais dans une même espèce entre les animaux considérés, et même chez le même animal, pour des causes très diverses. Pour déterminer la quantité d’oxyhémoglobine, nous avons effectué une évaluation comparative par détermination spectrophotométrique de leur densité optique, après hémolyse totale, pour une radiation déterminée. La radiation utilisée a été celle qui correspond au maximum d’absorption d’une des bandes de l’oxyhémoglobine (5.769 U. A.). Dans ces conditions, nous avons établi le tableau suivant : Ordre du taux d’oxyhémoglobine. Ordre d’hémolyse. DENSITÉ optique TEMPS en minutes Porc 2.15 Bœuf 37 Cobaye 2.30 Chien 40 Bœuf 2.35 Cheval 43 Chien
de sang égaux, malgré les variations assez importantes dans le nombre des globules rouges de chaque échantillon considéré. Il importait, dès lors, d’étudier l’hémolyse à quantité d’hémoglobine égale. On sait que les variations entre les taux d’hémoglobine des différents animaux sont assez grandes ; elles apparaissent non seulement d’une espèce à l’autre, mais dans une même espèce entre les animaux considérés, et même chez le même animal, pour des causes très diverses. Pour déterminer la quantité d’oxyhémoglobine, nous avons effectué une évaluation comparative par détermination spectrophotométrique de leur densité optique, après hémolyse totale, pour une radiation déterminée. La radiation utilisée a été celle qui correspond au maximum d’absorption d’une des bandes de l’oxyhémoglobine (5.769 U. A.). Dans ces conditions, nous avons établi le tableau suivant : Ordre du taux d’oxyhémoglobine. Ordre d’hémolyse. DENSITÉ optique TEMPS en minutes Porc 2.15 Bœuf 37 Cobaye 2.30 Chien 40 Bœuf 2.35 Cheval 43 Chien 2.50 Porc 51 Mouton 3.45 Lapin 55 Cheval 4.30 Mouton 70 Lapin 5.68 Cobaye 75 Il est bien certain que, si la résistance à l’hémolyse était fonction de la teneur en oxyhémoglobine, en faisant agir la même quantité d’hématoporphyrine sur des volumes de sang représentant le même quantité d’oxyhémoglobine, l’hémolyse devrait toujours se faire dans le même temps. Or, nos observations ne permettent pas une telle conclusion. De l’examen de ce tableau, on peut encore conclure que plus le volume du sang, c’est-à-dire le nombre d’hématies mis en réaction est grand, plus la résistance à l’hémolyse est considérable. Toutefois, on observe encore la grande résistance des hématies de cobaye, par rapport à celles du bœuf, ou la plus grande labilité des globules du cheval en comparaison de celle des globules du mouton. L’étude comparative d’un constituant important des hématies, à savoir de la cholestérine, nous a fourni, par contre, des résultats intéressants, confirmés d’ailleurs par d’autres expériences d’hémolyse qui seront relatées dans la suite de cette étude. La teneur en lipoïdes des hématies, et en particulier le cholestérine rapport lypocytique -7 77 apparaissait à Mayer et à Schaeffer d’importance primordiale dans le phénomène de l’hémolyse ; celle-ci peut être considérée