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que nous rapportons ont tous été effectués dans une cuve en acier inoxydable de 10 m3 à forme parallélépipédique. Dans cette cuve, nous avons placé un thermomètre et un hygromètre enregistreurs, un ventilateur électrique à commande extérieure, un aérosoliseur type Touan, modifié selon nos plans, relié à une canalisation d'air comprimé. Plusieurs robinets permettent d'effectuer des prélèvements dans l'air de la cuve. 2° LE VIRUS utilisé dans nos essais était Myxovirus multiformis, agent de la maladie Newcastle (pseudopeste aviaire), dont la souche nous avait été remise par le Service des Virus de l’Institut Pasteur. Nous l'entretenons par inoculation dans la cavité allantoïque de l'œuf de poule Leghorn blanche fécondé au onzième jour d'incubation en couveuse. Après quarante-huit heures de séjour à + 370 C, les œufs sont refroidis et le liquide allantoïque prélevé aseptiquement, après ouverture de l'œuf au niveau de la poche à air. Le liquide riche en virus est conservé en ampoules scellées au réfrigérateur à 30° C. Cette suspension de virus a été titrée par recherche de la dose infectante 50 p. 100 léthale. Des dilutions de 10 en 10 de la suspension sont effectuées en solution tamponnée à pH 7,2 contenant du sérum et des antibiotiques. Celle-ci est préparée de la façon suivante : a) Solution tampon : Chlorure de sodium 7 g CINa Phosphate monoacide de Na 1,36 g P04HNa212H20 Phosphate diacide de K 0,20 g P04H2K Eau distillée neutre Q. S. p 1 000 Après dissolution et filtration, la solution est répartie à raison de 90 ml en flacons de 125 ml et stérilisée à + 120° C pendant vingt minutes. b) Au moment de l'emploi, ajouter dans chaque flacon 10 ml de solution préparée aseptiquement, contenant : Pénicilline (sel de Na) 5 000 unités Streptomycine (sulfate) 0,5 mg Sérum de cheval filtré 2 ml Solution isotonique stérile. Q. S. p. 10 ml Chaque dissolution est injectée à 10 œufs embryonnés de onze jours, à raison de 0,1 ml par œuf, dans la cavité allantoïque. Le troisième jour, le dénombrement des embryons morts est effectué par mirage. Le nombre de morts et de vivants
Celle-ci est préparée de la façon suivante : a) Solution tampon : Chlorure de sodium 7 g CINa Phosphate monoacide de Na 1,36 g P04HNa212H20 Phosphate diacide de K 0,20 g P04H2K Eau distillée neutre Q. S. p 1 000 Après dissolution et filtration, la solution est répartie à raison de 90 ml en flacons de 125 ml et stérilisée à + 120° C pendant vingt minutes. b) Au moment de l'emploi, ajouter dans chaque flacon 10 ml de solution préparée aseptiquement, contenant : Pénicilline (sel de Na) 5 000 unités Streptomycine (sulfate) 0,5 mg Sérum de cheval filtré 2 ml Solution isotonique stérile. Q. S. p. 10 ml Chaque dissolution est injectée à 10 œufs embryonnés de onze jours, à raison de 0,1 ml par œuf, dans la cavité allantoïque. Le troisième jour, le dénombrement des embryons morts est effectué par mirage. Le nombre de morts et de vivants pour chaque dilution permet d'obtenir par la méthode de Reed et Muench la dilution 50 p. 100 léthale. Chaque mort représente au moins une unité infectante. Nos suspensions de virus contiennent en général 10.9 particules infectantes par millilitre. 3° L'OZONE nous a été fournie par les laboratoires de l'Air Liquide sous forme d'une solution dans le Fréon 12. Les ampoules contiennent un volume déterminé de gaz ozone (à la demande selon l'essai). PROTOCOLE D'ESSAI. Dans l'aérosoliseur contenu dans la cuve, nous plaçons 10 ml de dilution de suspension de virus contenant 5.108 unités infectieuses par millilitre. Sur un support spécial nous plaçons l'ampoule contenant la solution d'ozone. Le degré hydrométrique de la cuve est amené jusqu'à 65 p. 100 environ par pulvérisation d'eau. Après fermeture hermétique de la cuve, nous notons la température et le degré hygrométrique. La suspension de virus est alors pulvérisée sous une pression de 750 g/cm2, jusqu'à ce que l'aérosoliseur soit vide, ce qui demande douze minutes environ. L'action du ventilateur permet de répartir l'aérosol viral dans toute la cuve. Après cinq minutes de repos un prélèvement de 100 l d'air est effectué. Celui-ci à la vitesse de 20 l à la minute et pendant cinq
sous forme d'une solution dans le Fréon 12. Les ampoules contiennent un volume déterminé de gaz ozone (à la demande selon l'essai). PROTOCOLE D'ESSAI. Dans l'aérosoliseur contenu dans la cuve, nous plaçons 10 ml de dilution de suspension de virus contenant 5.108 unités infectieuses par millilitre. Sur un support spécial nous plaçons l'ampoule contenant la solution d'ozone. Le degré hydrométrique de la cuve est amené jusqu'à 65 p. 100 environ par pulvérisation d'eau. Après fermeture hermétique de la cuve, nous notons la température et le degré hygrométrique. La suspension de virus est alors pulvérisée sous une pression de 750 g/cm2, jusqu'à ce que l'aérosoliseur soit vide, ce qui demande douze minutes environ. L'action du ventilateur permet de répartir l'aérosol viral dans toute la cuve. Après cinq minutes de repos un prélèvement de 100 l d'air est effectué. Celui-ci à la vitesse de 20 l à la minute et pendant cinq minutes, passe dans un barboteur (fiole de Kitasato avec tube adducteur plongeant jusqu'à 5 mm du fond) contenant 90 ml de solution tamponnée isotonique. Aussitôt après, à l'aide de manches en caoutchouc, l'ampoule d'ozone est ouverte. Le gaz se dégage brutalement et se répand dans la cuve. Le ventilateur permet alors une répartition correcte. Des prélèvements de 100 l d'air sont effectués de même après cinq, quinze, trente et soixante minutes de contact. Tous les liquides de barbotage reçoivent 10 ml de solution de pénicilline et streptomycine contenant le sérum de cheval. Ils sont introduits dans des flacons plats bouchés au caoutchouc et ceux-ci sont placés dans un grand vase Dewar de 4 l avec de la glace, durant le transport au laboratoire (moins d'une heure). A partir de chacun de ces liquides de prélèvement, nous préparons des dilutions à 1.10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5. Chaque dilution est inoculée à 10 œufs fécondés de poule Leghorn blanche, au onzième jour d'incubation, à raison de 0,1 ml par œuf, dans la cavité de l'allantoïde. Les œufs sont alors placés à + 37° C, dans une étuve aérée et humide, et examinés par mirage dans une pièce noire, tous les jours. Tout
alors une répartition correcte. Des prélèvements de 100 l d'air sont effectués de même après cinq, quinze, trente et soixante minutes de contact. Tous les liquides de barbotage reçoivent 10 ml de solution de pénicilline et streptomycine contenant le sérum de cheval. Ils sont introduits dans des flacons plats bouchés au caoutchouc et ceux-ci sont placés dans un grand vase Dewar de 4 l avec de la glace, durant le transport au laboratoire (moins d'une heure). A partir de chacun de ces liquides de prélèvement, nous préparons des dilutions à 1.10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5. Chaque dilution est inoculée à 10 œufs fécondés de poule Leghorn blanche, au onzième jour d'incubation, à raison de 0,1 ml par œuf, dans la cavité de l'allantoïde. Les œufs sont alors placés à + 37° C, dans une étuve aérée et humide, et examinés par mirage dans une pièce noire, tous les jours. Tout embryon recevant au moins 1 particule infectieuse meurt en trois jours. RÉSULTATS. 1° Le premier prélèvement qui nous donne la concentration en virus dans l'air de la cuve au début de chaque essai, nous a montré que cette méthode assure une bonne dispersion du virus, qu'elle n'altère pas sensiblement son activité et enfin que la technique de prélèvement est satisfaisante. En effet le liquide de l'aérosoliseur contient environ 5.109 virus et nous retrouvons après pulvérisation totale, de 8.108 à 2.109 particules infectieuses selon les essais (dans les 10 m3 d'air de la cuve). 2° La stabilité du virus dans la cuve en fonction du temps semble également suffisante pour la validité des essais, puisque après trente minutes nous retrouvons plus de 108 particules infectieuses. 3° RÉSULTAT TYPE D’UN ESSAI. Degré hygrométrique : 70 p. 100 ; température + 23° C. Concentration en ozone : 10-6 (en volume), c’est-à-dire 10 ml dans les 10 m3 (à la pression atmosphérique normale et à + 20° C), soit 21,4 mg de O3. Temps 0 m : Début de l’aérosolisation du virus. 12 m : Fin de l’aérosolisation du virus. 17 m : Premier prélèvement de 100 l d’air de la cuve. 22 m
activité et enfin que la technique de prélèvement est satisfaisante. En effet le liquide de l'aérosoliseur contient environ 5.109 virus et nous retrouvons après pulvérisation totale, de 8.108 à 2.109 particules infectieuses selon les essais (dans les 10 m3 d'air de la cuve). 2° La stabilité du virus dans la cuve en fonction du temps semble également suffisante pour la validité des essais, puisque après trente minutes nous retrouvons plus de 108 particules infectieuses. 3° RÉSULTAT TYPE D’UN ESSAI. Degré hygrométrique : 70 p. 100 ; température + 23° C. Concentration en ozone : 10-6 (en volume), c’est-à-dire 10 ml dans les 10 m3 (à la pression atmosphérique normale et à + 20° C), soit 21,4 mg de O3. Temps 0 m : Début de l’aérosolisation du virus. 12 m : Fin de l’aérosolisation du virus. 17 m : Premier prélèvement de 100 l d’air de la cuve. 22 m : Fin du premier prélèvement. 23 m : Ouverture de l’ampoule d'ozone. Action du ventilateur. 27 m : Arrêt du ventilateur. 28 m : Deuxième prélèvement. 32 m : Fin du deuxième prélèvement. 38 m : Troisième prélèvement. 43 m : Fin du troisième prélèvement. 53 m : Quatrième prélèvement. 58 m : Fin du quatrième prélèvement. Inoculations des prélèvements. TAUX DE DILUTION EMBRYONS INOCULÉS MORTS EN 3 JOURS (SUR 10) DES LIQUIDES DE BARBOTAGE DE L’AIR Avant ozone 5 min après 15 min après 30 min après DES PRÉLÈVEMENTS (Témoin) action de l'ozone action de l'ozone action de l'ozone Pur. 10 10 9 8 10-1. 10 10 4 0 10-a 10 10 0 0 10-a 10 10 0 10-« 10 4 10-11 2 0 10-8 0 0 A cette concentration en ozone, la diminution du taux de virus dans l’air est très importante en trente minutes, mais cependant insuffisante pour une désinfection rapide. A la concentration de 5.10-6 nous ne retrouvons plus de virus après quinze minutes de contact pour quelques essais, cependant qu'à 10-5 il y a encore quelquefois des morts avec le prélèvement pur après quinze minutes. Le taux de 1,5.10–5 ne laisse que quelques virus après
58 m : Fin du quatrième prélèvement. Inoculations des prélèvements. TAUX DE DILUTION EMBRYONS INOCULÉS MORTS EN 3 JOURS (SUR 10) DES LIQUIDES DE BARBOTAGE DE L’AIR Avant ozone 5 min après 15 min après 30 min après DES PRÉLÈVEMENTS (Témoin) action de l'ozone action de l'ozone action de l'ozone Pur. 10 10 9 8 10-1. 10 10 4 0 10-a 10 10 0 0 10-a 10 10 0 10-« 10 4 10-11 2 0 10-8 0 0 A cette concentration en ozone, la diminution du taux de virus dans l’air est très importante en trente minutes, mais cependant insuffisante pour une désinfection rapide. A la concentration de 5.10-6 nous ne retrouvons plus de virus après quinze minutes de contact pour quelques essais, cependant qu'à 10-5 il y a encore quelquefois des morts avec le prélèvement pur après quinze minutes. Le taux de 1,5.10–5 ne laisse que quelques virus après cinq minutes, alors qu’à 2.10-5 nous n’avons jamais retrouvé de virus après cinq minutes, même dans le liquide pur. La concentration de 1CM semble entraîner une destruction presque immédiate des virus présents. Enfin nous avons vérifié que le solvant de l'ozone, le Fréon 12, n’offre pas lui-même une activité antivirale. La quantité de Fréon servant de solvant aux 200 ml dans l’essai à 2.10-5 a été évaporée dans la cuve dans les mêmes conditions. Après trente minutes on trouvait encore au moins 107 virus dans l’air de la cuve. CONCLUSION. Il est possible de supprimer l’activité infectieuse de virus présents dans l’air (Myxovirus multiformis) même en forte concentration (environ 108 par mètre cube) par action de l'ozone à des concentrations de l’ordre de 10–5 (en volumes). La stérilisation est obtenue en moins de cinq minutes si la concentration dépasse 2.10-5. Ces résultats ne sont valables que dans une cuve en acier inoxydable, c’est-à-dire sans matières fixant ou détruisant l'ozone, avec un degré hygrométrique voisin de 80 p. 100 à une température d’environ + 22° C. (Laboratoire de Virologie et Immunologie de la Faculté de Pharmacie de Paris). BIBLIOGRAPHIE [1] W. J. ELFORD et J. VAN DEN ENDE. L’Hyg., 1942, 42,
La quantité de Fréon servant de solvant aux 200 ml dans l’essai à 2.10-5 a été évaporée dans la cuve dans les mêmes conditions. Après trente minutes on trouvait encore au moins 107 virus dans l’air de la cuve. CONCLUSION. Il est possible de supprimer l’activité infectieuse de virus présents dans l’air (Myxovirus multiformis) même en forte concentration (environ 108 par mètre cube) par action de l'ozone à des concentrations de l’ordre de 10–5 (en volumes). La stérilisation est obtenue en moins de cinq minutes si la concentration dépasse 2.10-5. Ces résultats ne sont valables que dans une cuve en acier inoxydable, c’est-à-dire sans matières fixant ou détruisant l'ozone, avec un degré hygrométrique voisin de 80 p. 100 à une température d’environ + 22° C. (Laboratoire de Virologie et Immunologie de la Faculté de Pharmacie de Paris). BIBLIOGRAPHIE [1] W. J. ELFORD et J. VAN DEN ENDE. L’Hyg., 1942, 42, 240-265. [2] A. W. EWEL. Refrig. Data Book 2 (1940). [3] A. W EWEL. Chap., 1946, 18, 143-199. [4] R. NAGY. Application of Ozone from sterilamp in Ozone chemistry and technology. American Chemical Society, Washington, 1959. [5] J.-A. THOMAS. Bull. Acad. Méd., 1960 144, 835-838. [6] A. TORICELLI. Sterilisation of empty containers for food industry in Ozone Chemistry and technology, 1959. M. J. André-Thomas : Je me permets de rappeler que c’est par suite des irrégularités des résultats de la stérilisation par l’ozone seul que j’ai été amené à mettre au point une méthode générale de stérilisation par l’oxyde d’éthylène-ozone : celle-ci donne régulièrement satisfaction. Sur la polymérisation sous l'action des rayons X, par MM. Jean-Jacques Trillat et Claude Sella. On sait, depuis quelques années, que les rayons X, comme d’ailleurs les rayons γ, sont susceptibles de provoquer d’importantes modifications dans certaines substances et particulièrement dans les hauts polymères. La microscopie électronique, combinée à la diffraction des électrons ou des rayons X, a apporté dans ce domaine des résultats du plus haut intérêt, en permettant de suivre et d’interpréter les actions dues aux rayonnements utilisés. Une étude toute récente entreprise dans notre laboratoire nous a permis de montrer que la
empty containers for food industry in Ozone Chemistry and technology, 1959. M. J. André-Thomas : Je me permets de rappeler que c’est par suite des irrégularités des résultats de la stérilisation par l’ozone seul que j’ai été amené à mettre au point une méthode générale de stérilisation par l’oxyde d’éthylène-ozone : celle-ci donne régulièrement satisfaction. Sur la polymérisation sous l'action des rayons X, par MM. Jean-Jacques Trillat et Claude Sella. On sait, depuis quelques années, que les rayons X, comme d’ailleurs les rayons γ, sont susceptibles de provoquer d’importantes modifications dans certaines substances et particulièrement dans les hauts polymères. La microscopie électronique, combinée à la diffraction des électrons ou des rayons X, a apporté dans ce domaine des résultats du plus haut intérêt, en permettant de suivre et d’interpréter les actions dues aux rayonnements utilisés. Une étude toute récente entreprise dans notre laboratoire nous a permis de montrer que la microscopie électronique était capable de mettre en évidence la formation de macromolécules à partir d’un monomère solide cristallisé et non encore polymérisé, sous l’influence d’une irradiation par les rayons X. Ce type de polymérisation s’applique à un nombre sans cesse croissant de monomères solides et s’est révélé être un phénomène assez général. Dans cette Communication, nous prendrons comme exemple le cas de l’amide acrylique, dont la cinétique de polymérisation par les rayons X et γ a été étudiée par d’autres auteurs. L’étude de l’évolution des diagrammes de rayons X du cristal de monomère au cours de la polymérisation et l’examen au microscope optique de la progression de la réaction dans le cristal d’acrylamide permet de penser que la polymérisation n’est pas homogène dans le cristal et que monomère et polymère forment deux phases séparées. Pour préciser ces divers points, nous avons suivi au microscope électronique les différents stades de la polymérisation d’un monocristal d’acrylamide pur soumis à l’irradiation d’un faisceau de rayons X à la température ambiante. CORRECTION ### 1° Le premier prélèvement qui nous donne la concentration en virus dans l'air de la cuve au début de chaque essai, nous a montré que cette méthode assure une bonne dispersion
assez général. Dans cette Communication, nous prendrons comme exemple le cas de l’amide acrylique, dont la cinétique de polymérisation par les rayons X et γ a été étudiée par d’autres auteurs. L’étude de l’évolution des diagrammes de rayons X du cristal de monomère au cours de la polymérisation et l’examen au microscope optique de la progression de la réaction dans le cristal d’acrylamide permet de penser que la polymérisation n’est pas homogène dans le cristal et que monomère et polymère forment deux phases séparées. Pour préciser ces divers points, nous avons suivi au microscope électronique les différents stades de la polymérisation d’un monocristal d’acrylamide pur soumis à l’irradiation d’un faisceau de rayons X à la température ambiante. CORRECTION ### 1° Le premier prélèvement qui nous donne la concentration en virus dans l'air de la cuve au début de chaque essai, nous a montré que cette méthode assure une bonne dispersion du virus, qu'elle n'altère pas sensiblement son activité et enfin que la technique de prélèvement est satisfaisante. En effet le liquide de l'aérosoliseur contient environ 5.109 virus et nous retrouvons après pulvérisation totale, de 8.108 à 2.109 particules infectieuses selon les essais (dans les 10 m3 d'air de la cuve). 2° La stabilité du virus dans la cuve en fonction du temps semble également suffisante pour la validité des essais, puisque après trente minutes nous retrouvons plus de 108 particules infectieuses. 3° RÉSULTAT TYPE D’UN ESSAI. Degré hygrométrique : 70 p. 100 ; température + 23° C. Concentration en ozone : 10-6 (en volume), c’est-à-dire 10 ml dans les 10 m3 (à la pression atmosphérique normale et à + 20° C), soit 21,4 mg de O3. Temps 0 m : Début de l’aérosolisation du virus. 12 m : Fin de l’aérosolisation du virus. 17 m : Premier prélèvement de 100 l d’air de la cuve. 22 m : Fin du premier prélèvement. 23 m : Ouverture de l’ampoule d'ozone. Action du ventilateur. 27 m : Arrêt du ventilateur. 28 m : Deuxième prélèvement. 32 m : Fin du deuxième prélèvement. 38 m : Troisième prélèvement. 43 m : Fin du
2° La stabilité du virus dans la cuve en fonction du temps semble également suffisante pour la validité des essais, puisque après trente minutes nous retrouvons plus de 108 particules infectieuses. 3° RÉSULTAT TYPE D’UN ESSAI. Degré hygrométrique : 70 p. 100 ; température + 23° C. Concentration en ozone : 10-6 (en volume), c’est-à-dire 10 ml dans les 10 m3 (à la pression atmosphérique normale et à + 20° C), soit 21,4 mg de O3. Temps 0 m : Début de l’aérosolisation du virus. 12 m : Fin de l’aérosolisation du virus. 17 m : Premier prélèvement de 100 l d’air de la cuve. 22 m : Fin du premier prélèvement. 23 m : Ouverture de l’ampoule d'ozone. Action du ventilateur. 27 m : Arrêt du ventilateur. 28 m : Deuxième prélèvement. 32 m : Fin du deuxième prélèvement. 38 m : Troisième prélèvement. 43 m : Fin du troisième prélèvement. 53 m : Quatrième prélèvement. 58 m : Fin du quatrième prélèvement. Inoculations des prélèvements. TAUX DE DILUTION EMBRYONS INOCULÉS MORTS EN 3 JOURS (SUR 10) DES LIQUIDES DE BARBOTAGE DE L’AIR Avant ozone 5 min après 15 min après 30 min après DES PRÉLÈVEMENTS (Témoin) action de l'ozone action de l'ozone action de l'ozone Pur. 10 10 9 8 10-1. 10 10 4 0 10-a 10 10 0 0 10-a 10 10 0 10-« 10 4 10-11 2 0 10-8 0 0 A cette concentration en ozone, la diminution du taux de virus dans l’air est très importante en trente minutes, mais cependant insuffisante pour une désinfection rapide. A la concentration de 5.10-6 nous ne retrouvons plus de virus après quinze minutes de contact pour quelques essais, cependant qu'à 10-5 il y a encore quelquefois des morts avec le prélèvement pur après quinze minutes. Le taux de 1,5.10–5 ne laisse que quelques virus après cinq minutes, alors qu’à 2.10-5 nous n’avons jamais retrouvé de virus après cinq minutes, même dans le liquide pur. La concentration de 1CM semble entraîner une destruction presque immédiate des virus présents. Enfin nous avons vérifié que le solvant de l'ozone, le Fréon
l'ozone action de l'ozone action de l'ozone Pur. 10 10 9 8 10-1. 10 10 4 0 10-a 10 10 0 0 10-a 10 10 0 10-« 10 4 10-11 2 0 10-8 0 0 A cette concentration en ozone, la diminution du taux de virus dans l’air est très importante en trente minutes, mais cependant insuffisante pour une désinfection rapide. A la concentration de 5.10-6 nous ne retrouvons plus de virus après quinze minutes de contact pour quelques essais, cependant qu'à 10-5 il y a encore quelquefois des morts avec le prélèvement pur après quinze minutes. Le taux de 1,5.10–5 ne laisse que quelques virus après cinq minutes, alors qu’à 2.10-5 nous n’avons jamais retrouvé de virus après cinq minutes, même dans le liquide pur. La concentration de 1CM semble entraîner une destruction presque immédiate des virus présents. Enfin nous avons vérifié que le solvant de l'ozone, le Fréon 12, n’offre pas lui-même une activité antivirale. La quantité de Fréon servant de solvant aux 200 ml dans l’essai à 2.10-5 a été évaporée dans la cuve dans les mêmes conditions. Après trente minutes on trouvait encore au moins 107 virus dans l’air de la cuve. CONCLUSION. Il est possible de supprimer l’activité infectieuse de virus présents dans l’air (Myxovirus multiformis) même en forte concentration (environ 108 par mètre cube) par action de l'ozone à des concentrations de l’ordre de 10–5 (en volumes). La stérilisation est obtenue en moins de cinq minutes si la concentration dépasse 2.10-5. Ces résultats ne sont valables que dans une cuve en acier inoxydable, c’est-à-dire sans matières fixant ou détruisant l'ozone, avec un degré hygrométrique voisin de 80 p. 100 à une température d’environ + 22° C. (Laboratoire de Virologie et Immunologie de la Faculté de Pharmacie de Paris). BIBLIOGRAPHIE [1] W. J. ELFORD et J. VAN DEN ENDE. L’Hyg., 1942, 42, 240-265. [2] A. W. EWEL. Refrig. Data Book 2 (1940). [3] A. W EWEL. Chap., 1946, 18, 143-199. [4] R. NAGY. Application of Ozone from sterilamp in Ozone chemistry and technology. American Chemical Society, Washington, 1959. [5] J.-A. THOMAS. Bull. Acad. Méd., 1960