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de trois espèces de singes africains: magot (Macaca sylvanus) cercopithèque (Aethiops sabeus) et babouin (Papio papio), nous avons constaté qu'il existe chez les singes inférieurs les agglutinines a (alpha) et b (bêta) de l'homme et qu'à l'intérieur d'une même espèce (babouin), on peut trouver ces deux agglutinines. La présence ou l'absence de telle ou telle agglutinine ne peut donc servir à établir de rapport entre différentes espèces. Il n'en est pas de même des agglutinogènes. En effet, ceux-ci paraissent nettement différenciés pour chaque espèce. Il est donc intéressant de rechercher si ces agglutinogènes spécifiques peuvent être groupés d'après des caractères communs et permettre de déceler entre différentes espèces des affinités sinon des filiations. Dans cette étude, nous avons recherché: 1. S'il existe un récepteur commun à ces trois espèces de singe par rapport aux sérums humains. 2° Si les immunsérums anti-singe possèdent des caractères communs et d'autres différentiels. 3° Enfin nous avons étudié quelle est l'action de ces immunsérums sur les globules humains et sur les globules de mouton et si l'on peut déceler en eux des caractères de l'antigène de Forssman. (*) Travail inédit. (1) CHAULIN-SERVINIÈRE J. Ces Archives 1940, 2, 323. 1: RECHERCHE D'UN RÉCEPTEUR COMMUN Pour cette recherche, nous avons employé la méthode de saturation des agglutinines et la préparation de solutions pures d'agglutinines. Nous choisissons un sérum humain d'un groupe quelconque mais fortement agglutinant pour les trois espèces. Nous le saturons par les globules de l'une des trois espèces et nous l'essayons sur les deux autres. Nous constatons que le sérum ainsi saturé n'a plus d'action sur les deux autres espèces: le sérum saturé par les globules de magot n'agglutine plus ni le babouin, ni le cercopithèque et réciproquement pour chacun des trois singes. Le pouvoir agglutinant n'est pas modifié pour le lapin et le cobaye; pour le mouton, il est quelquefois supprimé et souvent diminué. SERUMS HUMAINS GLOB. GLOB. GLOB. GLOB. GLOB. GLOB. GLOB. GLOB. SATURÉS PAR GLOBULES BAB. BAB. MAG. MAG. CERC. COB MOUT. BABOUIN 1 2 7 12 2 B. 93 — — + + A. 98 — — — .— + +
recherche, nous avons employé la méthode de saturation des agglutinines et la préparation de solutions pures d'agglutinines. Nous choisissons un sérum humain d'un groupe quelconque mais fortement agglutinant pour les trois espèces. Nous le saturons par les globules de l'une des trois espèces et nous l'essayons sur les deux autres. Nous constatons que le sérum ainsi saturé n'a plus d'action sur les deux autres espèces: le sérum saturé par les globules de magot n'agglutine plus ni le babouin, ni le cercopithèque et réciproquement pour chacun des trois singes. Le pouvoir agglutinant n'est pas modifié pour le lapin et le cobaye; pour le mouton, il est quelquefois supprimé et souvent diminué. SERUMS HUMAINS GLOB. GLOB. GLOB. GLOB. GLOB. GLOB. GLOB. GLOB. SATURÉS PAR GLOBULES BAB. BAB. MAG. MAG. CERC. COB MOUT. BABOUIN 1 2 7 12 2 B. 93 — — + + A. 98 — — — .— + + AB. 97 — — — — + + O . 92 — — + + — O. 100 — — — + + — Ces sérums avant saturation agglutinaient chacun des espèces éprouvées ensuite. En utilisant la méthode que Landsteiner emploie pour préparer des solutions pures d'agglutinines anti A et anti B, nous avons pu préparer des solutions pures d'agglutinines antisinge à partir de sérums humains. Nous choisissons un sérum agglutinant fortement les globules de singe, à 5 cc de ce sérum, nous ajoutons 7 à 10 gouttes d'hématies lavées de singe (magot, babouin ou cercopithèque) et nous procédons ensuite suivant la méthode de Landsteiner: « On laisse le mélange 12 heures à la température du laboratoire. On enlève alors le sérum surnageant et on lave deux fois les globules agglutinés avec de l'eau physiologique pour les débarrasser des dernières traces de sérum ». Par ce procédé, les isoagglutinines sont éliminées, il ne reste que l'hétéroagglutinine spécifique adsorbée par les globules rouges. « On ajoute à ces globules 0 cc, 6 d'eau physiologique et on met 5 minutes au bain-marie à 56° en mélangeant constamment. Les globules rouges, dans ces conditions, cèdent à l'eau physiologique l'agglutinine adsorbée. On centrifuge à
anti B, nous avons pu préparer des solutions pures d'agglutinines antisinge à partir de sérums humains. Nous choisissons un sérum agglutinant fortement les globules de singe, à 5 cc de ce sérum, nous ajoutons 7 à 10 gouttes d'hématies lavées de singe (magot, babouin ou cercopithèque) et nous procédons ensuite suivant la méthode de Landsteiner: « On laisse le mélange 12 heures à la température du laboratoire. On enlève alors le sérum surnageant et on lave deux fois les globules agglutinés avec de l'eau physiologique pour les débarrasser des dernières traces de sérum ». Par ce procédé, les isoagglutinines sont éliminées, il ne reste que l'hétéroagglutinine spécifique adsorbée par les globules rouges. « On ajoute à ces globules 0 cc, 6 d'eau physiologique et on met 5 minutes au bain-marie à 56° en mélangeant constamment. Les globules rouges, dans ces conditions, cèdent à l'eau physiologique l'agglutinine adsorbée. On centrifuge à chaud pour que les globules n'adsorbent pas de « nouveau l'agglutinine. On décante rapidement le liquide surnageant qui contient les agglutinines spécifiques en solution ». Nous avons préparé ainsi des solutions pures d'agglutinines antimagot, antibabouin et anticercopithèque. Nous avons constaté que chacune de ces solutions agglutine, avec la même intensité, les globules des trois espèces de singes. Elles sont sans action sur les globules humains ainsi que sur ceux du lapin et du cobaye, mais elles agglutinent généralement les globules de mouton. SOLUTIONS PURES GLOBULES SINGE GLOB. HOM. D, AGGLUTININES A PARTIR GLOB. LAP. GLOB. COB. MOUT. DE SÉRUMS HUMAINS CERC. MAG. BAB. A B 0 Antimagot + + + — — — — — + Anticerco. -j+ + — — — — — + Antibabouin + + + — — — — — + Nous pouvons donc conclure de ces expériences que par rapport aux sérums humains, il existe chez le magot, le babouin et le cercopithèque un récepteur commun. II. IMMUNSÉRUMS ANTISINGE Nous avons préparé: 4 lapins avec des globules de magot 2 lapins avec des globules de babouin 2 lapins avec des globules de cercopithèque Il se développe dans le sérum des lapins ainsi traités une agglutinine
les globules des trois espèces de singes. Elles sont sans action sur les globules humains ainsi que sur ceux du lapin et du cobaye, mais elles agglutinent généralement les globules de mouton. SOLUTIONS PURES GLOBULES SINGE GLOB. HOM. D, AGGLUTININES A PARTIR GLOB. LAP. GLOB. COB. MOUT. DE SÉRUMS HUMAINS CERC. MAG. BAB. A B 0 Antimagot + + + — — — — — + Anticerco. -j+ + — — — — — + Antibabouin + + + — — — — — + Nous pouvons donc conclure de ces expériences que par rapport aux sérums humains, il existe chez le magot, le babouin et le cercopithèque un récepteur commun. II. IMMUNSÉRUMS ANTISINGE Nous avons préparé: 4 lapins avec des globules de magot 2 lapins avec des globules de babouin 2 lapins avec des globules de cercopithèque Il se développe dans le sérum des lapins ainsi traités une agglutinine spécifique assez forte, active à une dilution variant de 1/128 à 1/512. Mais cette agglutinine n'est pas spécifique pour une seule espèce de singes car elle agit égale ment sur les deux autres. Ainsi l'immunsérum antimagot est aussi actif, à la même dilution, sur les globules rouges du babouin que sur ceux du magot et réciproquement. L'un et l'autre agissent, mais moins fortement, sur le cercopithèque. Par contre, les globules du cercopithèque n'ont développé dans le sérum des deux lapins qu'une agglutinine spécifique très faible et qui agit encore plus faiblement sur les globules du babouin et sur ceux du magot, bien que son action soit supérieure à celle d'un sérum normal de lapin. TITRAGE DE L'AGGLUTINATION IMMUNSÉRUMS IMMUNSÉRUMS IMMUNSÉRUMS ANTIBABOUIN ANTICERCO. ANTIMAGOT K. 49 K. 50 61.48 61.49 43.36 65.5 Glob. babouin 128 + 256 + 32 + 32 + 128 + 512 + Glob. magot 128 + 256 + 32 + 64 + 256 + 512 + "Glob. cerco. 128 + 128 + 128 + 64 + 128 + 256 + En dehors de cette agglutinine agissant sur les trois espèces, nous avons constaté que dans les immunsérums on pouvait mettre en évidence une agglutinine propre à chaque
sur ceux du magot et réciproquement. L'un et l'autre agissent, mais moins fortement, sur le cercopithèque. Par contre, les globules du cercopithèque n'ont développé dans le sérum des deux lapins qu'une agglutinine spécifique très faible et qui agit encore plus faiblement sur les globules du babouin et sur ceux du magot, bien que son action soit supérieure à celle d'un sérum normal de lapin. TITRAGE DE L'AGGLUTINATION IMMUNSÉRUMS IMMUNSÉRUMS IMMUNSÉRUMS ANTIBABOUIN ANTICERCO. ANTIMAGOT K. 49 K. 50 61.48 61.49 43.36 65.5 Glob. babouin 128 + 256 + 32 + 32 + 128 + 512 + Glob. magot 128 + 256 + 32 + 64 + 256 + 512 + "Glob. cerco. 128 + 128 + 128 + 64 + 128 + 256 + En dehors de cette agglutinine agissant sur les trois espèces, nous avons constaté que dans les immunsérums on pouvait mettre en évidence une agglutinine propre à chaque espèce, et particulièrement différenciée pour le cercopithèque. En effet, si nous saturons un immunsérum anticercopithèque par des globules de la même espèce, il perd toute action sur les globules de magot ou de babouin. Mais si nous saturons ce même immunsérum par des globules de magot ou de babouin, il garde son pouvoir d'agglutination sur les globules de cercopithèque. Entre magot et babouin, le résultat est un peu différent. L'immunsérum antibabouin saturé par des globules de magot garde un pouvoir d'agglutination sur les globules de babouin mais très diminué. Le même phénomène se reproduit si on sature un immunsérum antimagot par des globules de babouin. Landsteiner a fait la même observation entre les babouins et le Macacus rhesus (1). Il (1) LANDSTEINER K. et MILLER P. Serological studies on blood of primates. J. exp. Med. 1925, 42, 840. semble donc qu'il y ait plus de parenté entre les anticorps du babouin et du magot qu'entre ceux-ci et ceux du cercopithèque. Cette constatation sera d'ailleurs renforcée par leur comportement vis-à-vis des globules humains que nous étudierons plus loin. Si nous préparons des solutions pures d'agglutinines en partant de ces immunsérums, voici ce que nous obtenons: GLOBULES SINGE GLOB. HUM. SOLUTIONS PURES
garde son pouvoir d'agglutination sur les globules de cercopithèque. Entre magot et babouin, le résultat est un peu différent. L'immunsérum antibabouin saturé par des globules de magot garde un pouvoir d'agglutination sur les globules de babouin mais très diminué. Le même phénomène se reproduit si on sature un immunsérum antimagot par des globules de babouin. Landsteiner a fait la même observation entre les babouins et le Macacus rhesus (1). Il (1) LANDSTEINER K. et MILLER P. Serological studies on blood of primates. J. exp. Med. 1925, 42, 840. semble donc qu'il y ait plus de parenté entre les anticorps du babouin et du magot qu'entre ceux-ci et ceux du cercopithèque. Cette constatation sera d'ailleurs renforcée par leur comportement vis-à-vis des globules humains que nous étudierons plus loin. Si nous préparons des solutions pures d'agglutinines en partant de ces immunsérums, voici ce que nous obtenons: GLOBULES SINGE GLOB. HUM. SOLUTIONS PURES GLOB, GLOB, GLOB. D AGGLUTININES A PARTIR MAG. MOUT. COB. LAP. D 'IMMUNSÉRUMS 17 CERC. BAB. A. B. 0. Antimagot + + + + + + ~~ Anticerco. + + + — — — Antibabouin + + + + + D'après ces expériences, nous voyons qu'il existe chez les singes un récepteur propre à chaque espèce et des récepteurs communs aux trois espèces étudiées et qui peuvent probablement s'étendre à d'autres espèces. Dans le sang humain, il existe également des récepteurs ayant une affinité avec ceux du singe. En effet, les immunsérums antimagot et antibabouin ont un pouvoir d'agglutination très augmenté sur les globules humains des 4 groupes. La dilution active varie de 1/16 à 1/64. Nous avons vu également que les solutions pures d'agglutinines à partir d'immunsérums antimagot et antibabouin agglutinent les globules humains. Par contre, l'immunsérum anticercopithèque n'a pas d'action plus forte sur les globules humains que celle d'un sérum normal de lapin et la solution pure d'agglutinines à partir de l'immunsérum ne les agglutine pas. Ces résultats, en ce qui concerne le babouin et le magot, sont à rapprocher de ceux obtenus par Marshall (1) dans ses expériences sur l'action hémolytique de sérums normaux et d'immunsérums sur
un récepteur propre à chaque espèce et des récepteurs communs aux trois espèces étudiées et qui peuvent probablement s'étendre à d'autres espèces. Dans le sang humain, il existe également des récepteurs ayant une affinité avec ceux du singe. En effet, les immunsérums antimagot et antibabouin ont un pouvoir d'agglutination très augmenté sur les globules humains des 4 groupes. La dilution active varie de 1/16 à 1/64. Nous avons vu également que les solutions pures d'agglutinines à partir d'immunsérums antimagot et antibabouin agglutinent les globules humains. Par contre, l'immunsérum anticercopithèque n'a pas d'action plus forte sur les globules humains que celle d'un sérum normal de lapin et la solution pure d'agglutinines à partir de l'immunsérum ne les agglutine pas. Ces résultats, en ce qui concerne le babouin et le magot, sont à rapprocher de ceux obtenus par Marshall (1) dans ses expériences sur l'action hémolytique de sérums normaux et d'immunsérums sur les globules humains et les globules (1) MARSHALL H. T. Studies in Haemolysis with special reference to the properties of the blood and body fluids of human beings. J. exp. Med. 1901-05, 6, 347. de Macacus thesis; d'où cet auteur conclut qu'il y a une relation entre les récepteurs humains et ceux du singe. III. RECHERCHE DE L'ANTIGÈNE DE FORSSMAN Nous avons recherché s'il s'était développé dans les immunsérums une agglutinine spécifique anti A. Nous ne l'avons trouvée que dans deux cas et encore était-elle très faible, aussi ne pouvons-nous assurer qu'elle était due à l'action des globules de singe. D'autre part, l'action hémolytique des sérums antisinge est extrêmement faible sur les globules humains A. Par contre, sur les globules du mouton, l'action agglutinante et hémolytique est beaucoup plus constante. Nous chauffons nos sérums et immunsérums une demi-heure à 56° et nous les réactivons par du sérum de cobaye. Avec le magot, sur 3 sérums, nous n'avons trouvé ni hémolyse ni agglutination, sauf une hémolyse incomplète avec un sérum pur. Avec les sérums de cercopithèque et de babouin, nous obtenons des résultats positifs d'hémolyse et d'agglutination. HEMOLYSE DES GLOBULES DE MOUTON SERUMS CERCOPITHECINE SERUMS BABOUN SERUMS QUE; 2 1 2
et ceux du singe. III. RECHERCHE DE L'ANTIGÈNE DE FORSSMAN Nous avons recherché s'il s'était développé dans les immunsérums une agglutinine spécifique anti A. Nous ne l'avons trouvée que dans deux cas et encore était-elle très faible, aussi ne pouvons-nous assurer qu'elle était due à l'action des globules de singe. D'autre part, l'action hémolytique des sérums antisinge est extrêmement faible sur les globules humains A. Par contre, sur les globules du mouton, l'action agglutinante et hémolytique est beaucoup plus constante. Nous chauffons nos sérums et immunsérums une demi-heure à 56° et nous les réactivons par du sérum de cobaye. Avec le magot, sur 3 sérums, nous n'avons trouvé ni hémolyse ni agglutination, sauf une hémolyse incomplète avec un sérum pur. Avec les sérums de cercopithèque et de babouin, nous obtenons des résultats positifs d'hémolyse et d'agglutination. HEMOLYSE DES GLOBULES DE MOUTON SERUMS CERCOPITHECINE SERUMS BABOUN SERUMS QUE; 2 1 2 39 40 41 42 43 Sérum pur + + + + + + + + Sérum + + + + + + + Sérum + inc. + + + + Sérum + inc. inc. + + + + 50 Sérum + inc. inc. + 100 Témoin + + + + + + + + Pour les immunosérums, nous avons obtenu les résultats suivants; HEMOLYSE DES GLOBULES DE MOUTON IMMUNSERUMS IMMUNSERUMS IMMUNSERUMS ANTIMAGOT ANTIBABOIN ANTICERCO 61.48 61.49 K. 49 K. 50 65.4 66.5 Immun sérum pur + + + inc. Immun + inc. sérum 10 Immun + inc. sérum 50 Immun + inc. sérum 100 Témoin + + + + + + + + Par inoculation de 1 cc dans le cœur, nous n'avons trouvé aucune action toxique de ces immunosérums sur le cobaye. L'hémolyse et l'agglutination des globules de mouton semblent indiquer la présence d'antigène de Forssman. Par contre, la faible action hémolytique sur les globules humains A, l'absence d'agglutinine spécifique anti A et de toxicité vis-à-vis du cobaye, nous incitent à considérer comme Fischer et Klinkhart (1) qui ont fait les mêmes constatations sur le Macacus rhesus, qu'il s'agit là d'un antigène partiel de Forssman. (1) FISCHER W. et
+ + + + Pour les immunosérums, nous avons obtenu les résultats suivants; HEMOLYSE DES GLOBULES DE MOUTON IMMUNSERUMS IMMUNSERUMS IMMUNSERUMS ANTIMAGOT ANTIBABOIN ANTICERCO 61.48 61.49 K. 49 K. 50 65.4 66.5 Immun sérum pur + + + inc. Immun + inc. sérum 10 Immun + inc. sérum 50 Immun + inc. sérum 100 Témoin + + + + + + + + Par inoculation de 1 cc dans le cœur, nous n'avons trouvé aucune action toxique de ces immunosérums sur le cobaye. L'hémolyse et l'agglutination des globules de mouton semblent indiquer la présence d'antigène de Forssman. Par contre, la faible action hémolytique sur les globules humains A, l'absence d'agglutinine spécifique anti A et de toxicité vis-à-vis du cobaye, nous incitent à considérer comme Fischer et Klinkhart (1) qui ont fait les mêmes constatations sur le Macacus rhesus, qu'il s'agit là d'un antigène partiel de Forssman. (1) FISCHER W. et KLINKHART G. Ueber Hamagglutination und Hämolyse bei Macacus cynomolgus und Simia rhésus. Z. ImmunForsch 1932, 75, 513. CONCLUSIONS 1° Par rapport aux sérums humains, il existe un récepteur commun aux trois espèces de singes étudiées: magot, cercopithèque, babouin. 2° L'inoculation des globules de singe développe chez le lapin un anticorps particulier à chaque espèce, et un anticorps général contre les trois espèces. 3° L'inoculation de globules de magot et de babouin développe également dans le sérum du lapin une agglutinine contre le sang humain des 4 groupes. 4° Les sérums normaux des espèces babouin et cercopithèque et les immunosérums antisinge sont hémolytiques pour les globules de mouton. 5° Ces immunosérums sont très faiblement hémolytiques pour les globules humains et ne possèdent pas d'agglutinines spécifiques anti A ni d'action toxique sur le cobaye. VACCINATION ANTICLAVELEUSE: VACCIN SENSIBILISE OBTENU PAR MELANGE TITRE VIRUS + SERUM * par J. BRIDRE et L. A. MARTIN On sait que le vaccin anticlaveleux dit « sensibilisé » de Bridré et Boquet est constitué par de fines particules de tissu virulent qui, après avoir subi pendant 48 heures l'action du sérum anticlaveleux, ont été séparées du sérum et mises en suspension, en proportion convenable, dans de l'eau
particulier à chaque espèce, et un anticorps général contre les trois espèces. 3° L'inoculation de globules de magot et de babouin développe également dans le sérum du lapin une agglutinine contre le sang humain des 4 groupes. 4° Les sérums normaux des espèces babouin et cercopithèque et les immunosérums antisinge sont hémolytiques pour les globules de mouton. 5° Ces immunosérums sont très faiblement hémolytiques pour les globules humains et ne possèdent pas d'agglutinines spécifiques anti A ni d'action toxique sur le cobaye. VACCINATION ANTICLAVELEUSE: VACCIN SENSIBILISE OBTENU PAR MELANGE TITRE VIRUS + SERUM * par J. BRIDRE et L. A. MARTIN On sait que le vaccin anticlaveleux dit « sensibilisé » de Bridré et Boquet est constitué par de fines particules de tissu virulent qui, après avoir subi pendant 48 heures l'action du sérum anticlaveleux, ont été séparées du sérum et mises en suspension, en proportion convenable, dans de l'eau physiologique. Dès qu'ils eurent reconnu les propriétés d'un tel vaccin, les auteurs se demandèrent s'il n'était pas possible d'obtenir un produit analogue en ajoutant au claveau ou à une suspension virulente la quantité de sérum strictement nécessaire à la sensibilisation du virus (1). Pour établir cette quantité, ils eurent recours à la réaction de déviation du complément. Ils purent ainsi préparer des mélanges virus + sérum qui, après 24 heures, présentaient les propriétés du virus claveleux sensibilisé. Employés avec succès sur quelques centaines d'animaux, ces mélanges titrés furent néanmoins abandonnés. Le titrage par la déviation du complément présentait des difficultés et la lecture des résultats n'était pas toujours très claire. En 1937, G. Blanc et L. A. Martin reprennent l'étude des mélanges virus + sérum et ont l'idée d'effectuer le titrage sur le mouton. Ils préparent une série de mélanges dans lesquels, pour une même quantité de virus, ils font varier la proportion du sérum (1). Après un séjour de 48 heures à la température de 18-20° et à l'abri de la lumière, les divers mélanges sont inoculés à la dose de 0 cc, 2 dans la peau et sous la peau d'un même mouton en des points repérés de
à la réaction de déviation du complément. Ils purent ainsi préparer des mélanges virus + sérum qui, après 24 heures, présentaient les propriétés du virus claveleux sensibilisé. Employés avec succès sur quelques centaines d'animaux, ces mélanges titrés furent néanmoins abandonnés. Le titrage par la déviation du complément présentait des difficultés et la lecture des résultats n'était pas toujours très claire. En 1937, G. Blanc et L. A. Martin reprennent l'étude des mélanges virus + sérum et ont l'idée d'effectuer le titrage sur le mouton. Ils préparent une série de mélanges dans lesquels, pour une même quantité de virus, ils font varier la proportion du sérum (1). Après un séjour de 48 heures à la température de 18-20° et à l'abri de la lumière, les divers mélanges sont inoculés à la dose de 0 cc, 2 dans la peau et sous la peau d'un même mouton en des points repérés de la surface cutanée rasée. Les résultats sont constatés entre le quatrième et le septième jours qui suivent ces inoculations. Il est aisé de voir celui des mélanges qui a fourni la réaction désirable. Le titrage est fait sur un ou plusieurs moutons. Plusieurs cas se présentent où un second titrage est nécessaire: de trop fortes réactions dans toute l'échelle des mélanges obligent à reprendre l'opération avec un virus plus dilué; des réactions trop faibles, à employer un virus plus concentré ou à diminuer encore la proportion de sérum; une différence trop accentuée entre les réactions fournies par deux mélanges voisins, l'une au-dessus, l'autre au-dessous de la réaction optima, conduit naturellement à effectuer un titrage plus précis dans un cadre restreint. Ce sont là questions de détail, faciles à résoudre dans la pratique. Nous avons voulu savoir si un mélange virus + sérum, titré par le procédé de Blanc et Martin, doit être considéré comme un vaccin « sensibilisé ». Pour cela, nous avons fait l'expérience suivante : Un mélange titré virus claveleux + sérum anticlaveleux a été inoculé dans le derme d'un même mouton à divers moments et en des points différents: au point 1, immédiatement après sa préparation; au