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considérer que la quantité d’azote basique de cette fraction est de 13 gr. 84 ou qu’elle est de 20 gr. 49, soit 31,8 % de l’azote original de l’extrait de levure ? L’explication du problème posé fut en partie donnée par l’examen du précipité de phosphotungstate de baryum. Après avoir bouilli pendant une heure avec de l’acide chlorhydrique concentré, il fut dilué et filtré. On réussit à extraire ainsi près d’un quart de l’azote. Les extraits chauds laissaient déposer, en se refroidissant, du chlorure de baryum, et comme ils contenaient beaucoup d’acide phosphotungstique libre, la petite quantité de bases organiques qui restait se déposait à l’état de phosphotungstates. Ceux-ci étaient séparés du chlorure de baryum par extraction par l’acétone. On obtenait ainsi plus d’un gramme d’azote semblant appartenir à des substances basiques, et plus de 2 grammes d’azote semblant appartenir à de simples acides monoaminés. Les substances basiques ne furent pas (1) Cet ammoniac perdu provient des solutions alcalines employées pour la séparation de l’acide phosphotungstique et de son sel de baryum. l’objet de recherches plus approfondies, mais la fraction des acides monoaminés céda des quantités appréciables d’acide glutamique et d’acide aspartique ; on obtint en outre une fraction acide monoaminé-monocarboxylique qui, par évaporation, déposa des cristaux ressemblant à la leucine et à la valine. Le résultat positif de la réaction de Millon indiquait la présence de tyrosine, tandis que la faible proportion d’azote aminé (s'élevant seulement à 63 % de l’azote total, malgré une hydrolyse très poussée) indiquait la présence possible de proline. En résumé, cette expérience montre que, ajouté aux substances basiques, l’acide phosphotungstique précipite des composés, probablement des polypeptides, qui cèdent par hydrolyse des acides monoaminés simples. Le fait que l’azote précipité par l’acide phosphotungstique n’appartient pas uniquement aux substances strictement basiques, demeure acquis. L’examen de la solution des substances probablement basiques, obtenues à partir du filtrat de luzerne par décomposition des phosphotungstates avec l’hydroxyde de baryum, a aussi démontré la présence d’azote dans des substances qui ne sont pas des bases. Le procédé standard à employer avec une solution semblable est d’obtenir des fractions représentant des
monoaminé-monocarboxylique qui, par évaporation, déposa des cristaux ressemblant à la leucine et à la valine. Le résultat positif de la réaction de Millon indiquait la présence de tyrosine, tandis que la faible proportion d’azote aminé (s'élevant seulement à 63 % de l’azote total, malgré une hydrolyse très poussée) indiquait la présence possible de proline. En résumé, cette expérience montre que, ajouté aux substances basiques, l’acide phosphotungstique précipite des composés, probablement des polypeptides, qui cèdent par hydrolyse des acides monoaminés simples. Le fait que l’azote précipité par l’acide phosphotungstique n’appartient pas uniquement aux substances strictement basiques, demeure acquis. L’examen de la solution des substances probablement basiques, obtenues à partir du filtrat de luzerne par décomposition des phosphotungstates avec l’hydroxyde de baryum, a aussi démontré la présence d’azote dans des substances qui ne sont pas des bases. Le procédé standard à employer avec une solution semblable est d’obtenir des fractions représentant des composés d’argent insolubles dans l’acide (fraction purine), des composés d’argent insolubles dans l’alcali (fraction histidine et arginine), et un filtrat (fraction lysine). L’auteur se propose de se livrer à des recherches plus approfondies avant de pouvoir séparer ces fractions les unes des autres avec certitude, à plus forte raison avant de pouvoir isoler quantitativement chacune des substances de chaque fraction. Cependant il peut être utile de donner les résultats obtenus avec la fraction lysine, car ils montrent les difficultés qu'on rencontre dans ce genre de travail. Cette solution contenait quatre grammes d'azote soit 7,4 % de l'azote du filtrat de luzerne. Elle fut traitée avec un excès de chlorure mercurique et neutralisée. Le précipité obtenu contenait 22 gr. 6 d'azote. Le filtrat fut alcalinisé et on recueillit un second précipité qui contenait 1 gr. 0 d'azote. Du premier précipité on obtint à peine 0 gr. 1 d'azote sous forme de lysine, par cristallisation du picrate. Les liqueurs-mères étant débarrassées de l'acide picrique, le dosage de l'azote total et aminé indiqua que 38,9 % de l'azote se trouvait à l'état de groupes aminés. Après hydrolyse par l'acide de la substance, on trouva que 71 % de l'azote s'y trouvait à l'état
de pouvoir isoler quantitativement chacune des substances de chaque fraction. Cependant il peut être utile de donner les résultats obtenus avec la fraction lysine, car ils montrent les difficultés qu'on rencontre dans ce genre de travail. Cette solution contenait quatre grammes d'azote soit 7,4 % de l'azote du filtrat de luzerne. Elle fut traitée avec un excès de chlorure mercurique et neutralisée. Le précipité obtenu contenait 22 gr. 6 d'azote. Le filtrat fut alcalinisé et on recueillit un second précipité qui contenait 1 gr. 0 d'azote. Du premier précipité on obtint à peine 0 gr. 1 d'azote sous forme de lysine, par cristallisation du picrate. Les liqueurs-mères étant débarrassées de l'acide picrique, le dosage de l'azote total et aminé indiqua que 38,9 % de l'azote se trouvait à l'état de groupes aminés. Après hydrolyse par l'acide de la substance, on trouva que 71 % de l'azote s'y trouvait à l'état de groupe α-aminé. La solution fut alors traitée par l'acide phosphotungstique, le précipité fut décomposé et on retrouva près d'un demi-gramme d'azote à l'état de picrate de lysine. Le filtrat du phosphotungstate de lysine, débarrassé des réactifs donna de la tyrosine et un mélange de leucine et de valine avec d'autres acides aminés. Une substance du même genre fut trouvée dans le précipité alcalin de mercure. Aucune trace de lysine ne put être extraite de cette solution autant qu'elle n'eut pas été soumise à l'hydrolyse. L'hydrolyse éleva la proportion d'azote α-aminé de 51 à 81 % et de petites quantités de lysine furent alors facilement obtenues par cristallisation du picrate. Il y avait de la tyrosine et d'autres acides monoaminés dans les liqueurs mères. Il est par conséquent évident que la « fraction lysine » obtenue par le procédé habituel contenait une forte proportion d'azote non à l'état de lysine et il est très probable qu'on se trouvait là en présence d'un mélange de polypeptides dont quelques-uns comptaient la lysine parmi leurs constituants. Il serait fastidieux de continuer à décrire les caractères de ces différentes fractions basiques. La fraction purine consistait essentiellement en purines avec quelques substances étrangères, mais dans
d'autres acides aminés. Une substance du même genre fut trouvée dans le précipité alcalin de mercure. Aucune trace de lysine ne put être extraite de cette solution autant qu'elle n'eut pas été soumise à l'hydrolyse. L'hydrolyse éleva la proportion d'azote α-aminé de 51 à 81 % et de petites quantités de lysine furent alors facilement obtenues par cristallisation du picrate. Il y avait de la tyrosine et d'autres acides monoaminés dans les liqueurs mères. Il est par conséquent évident que la « fraction lysine » obtenue par le procédé habituel contenait une forte proportion d'azote non à l'état de lysine et il est très probable qu'on se trouvait là en présence d'un mélange de polypeptides dont quelques-uns comptaient la lysine parmi leurs constituants. Il serait fastidieux de continuer à décrire les caractères de ces différentes fractions basiques. La fraction purine consistait essentiellement en purines avec quelques substances étrangères, mais dans la fraction arginine, comme dans la fraction lysine, il y avait des peptides dont quelques-uns avaient contenu de l'arginine. Il semble clair par conséquent que l'on n'est pas encore à même d'être assuré que l'azote précipité par l'acide phosphotungstique à partir des extraits végétaux soit entièrement de nature basique ; ce n'est pas aller trop loin que d'affirmer que ce réactif est loin d'être, autant qu'on l'a cru, un réactif de choix. Ceci ne veut pas dire qu'on doive en supprimer l'emploi, mais signifie simplement que ce réactif doit être considéré comme fournissant des résultats trop élevés en ce qui concerne l'azote basique. Il est nécessaire de procéder à un examen plus approfondi des précipités obtenus. Dans le laboratoire de l'auteur, on emploie volontiers le procédé dû à Neuberg et Kerb pour la précipitation de certaines substances basiques ainsi bien que des acides aminés. De l'acétate de mercure et du carbonate de soude sont ajoutés alternativement, de manière à maintenir la réaction alcaline jusqu'à ce qu'une addition ultérieure d'une autre solution produise un précipité jaune. À ce moment, on ajoute un égal volume d'alcool pour provoquer la floculation du précipité. Pour illustrer l'efficacité de ce procédé en tant que moyen
ce n'est pas aller trop loin que d'affirmer que ce réactif est loin d'être, autant qu'on l'a cru, un réactif de choix. Ceci ne veut pas dire qu'on doive en supprimer l'emploi, mais signifie simplement que ce réactif doit être considéré comme fournissant des résultats trop élevés en ce qui concerne l'azote basique. Il est nécessaire de procéder à un examen plus approfondi des précipités obtenus. Dans le laboratoire de l'auteur, on emploie volontiers le procédé dû à Neuberg et Kerb pour la précipitation de certaines substances basiques ainsi bien que des acides aminés. De l'acétate de mercure et du carbonate de soude sont ajoutés alternativement, de manière à maintenir la réaction alcaline jusqu'à ce qu'une addition ultérieure d'une autre solution produise un précipité jaune. À ce moment, on ajoute un égal volume d'alcool pour provoquer la floculation du précipité. Pour illustrer l'efficacité de ce procédé en tant que moyen de précipiter l'azote aminé, on peut citer les résultats de l'analyse d'un extrait de levure obtenu par l'eau chaude. Cet extrait contenait 57 gr. 2 d'azote total et 23 gr. 4 d'azote aminé. Le filtrat du précipité obtenu par l'acétate de mercure et le carbonate de soude contenait 5 gr. 2 d'azote total et seulement 0 gr. 67 d'azote aminé. Comme le volume du filtrat était de 256 litres, la petite quantité d'azote aminé qui échappa à la précipitation venait de la solubilité des composés du mercure. L'avantage de ce procédé est qu'il permet de séparer avec précision les bases contenant des groupes aminés de méthylation, telles que la choline et les bétaïnes, des autres substances basiques, et des acides aminés. Dans l'examen du filtrat de luzerne, une solution contenant 41 gr. 1 d'azote total et 1,0 gr. 6 d'azote aminé, fut traitée de cette manière. Le précipité contenait 28 gr. 6 d'azote total et 10 gr. 1 d'azote aminé, tandis que le filtrat contenait 7 gr. 89 d'azote total et seulement 0 gr. 31 d'azote aminé. Les légères différences entre les quantités d'azote aminé récupéré sont probablement dues à l'erreur expérimentale, tandis que la perte de 4 gr. 6
2 d'azote total et seulement 0 gr. 67 d'azote aminé. Comme le volume du filtrat était de 256 litres, la petite quantité d'azote aminé qui échappa à la précipitation venait de la solubilité des composés du mercure. L'avantage de ce procédé est qu'il permet de séparer avec précision les bases contenant des groupes aminés de méthylation, telles que la choline et les bétaïnes, des autres substances basiques, et des acides aminés. Dans l'examen du filtrat de luzerne, une solution contenant 41 gr. 1 d'azote total et 1,0 gr. 6 d'azote aminé, fut traitée de cette manière. Le précipité contenait 28 gr. 6 d'azote total et 10 gr. 1 d'azote aminé, tandis que le filtrat contenait 7 gr. 89 d'azote total et seulement 0 gr. 31 d'azote aminé. Les légères différences entre les quantités d'azote aminé récupéré sont probablement dues à l'erreur expérimentale, tandis que la perte de 4 gr. 6 d'azote est principalement due aux 3 gr. 38 qui n'ont pu être retirés de la grande quantité de sulfure de mercure obtenu en décomposant le précipité mercurique. Des 7 gr. 89 d'azote du filtrat, 4 gr. 67 appartenaient à des substances précipitables par l'acide phosphotungstique ; 3 gr. 68 de cet azote furent obtenus à l'état de dérivés cristallins de stachydrine et de choline ; il y avait également des traces de guanine et de triphénylamine ; Étant donné la difficulté d'isoler des dérivés cristallins en dose quantitative, il est probable que la fraction basique contenait de petites quantités de bases exceptionnelles du type méthyle. Une fraction semblable d'extrait de levure se composait presqu'entièrement de choline et d'acide nicotinique. Les résultats obtenus avec ces fractions sont en contradiction marquée avec ceux qu'on obtient quand les précipités par l'acide phosphorique sont produits dans des solutions contenant des acides aminés et des peptides présents dans l'extrait original. L'azote précipité par l'acide phosphotungstique à partir de ces solutions moins complexes semble en fait se composer entièrement d'azote basique. La conclusion à tirer de ceci est qu'il serait sage de ne considérer l'azote total précipité par l'acide phosphotungstique comme une mesure de l'azote basique
cet azote furent obtenus à l'état de dérivés cristallins de stachydrine et de choline ; il y avait également des traces de guanine et de triphénylamine ; Étant donné la difficulté d'isoler des dérivés cristallins en dose quantitative, il est probable que la fraction basique contenait de petites quantités de bases exceptionnelles du type méthyle. Une fraction semblable d'extrait de levure se composait presqu'entièrement de choline et d'acide nicotinique. Les résultats obtenus avec ces fractions sont en contradiction marquée avec ceux qu'on obtient quand les précipités par l'acide phosphorique sont produits dans des solutions contenant des acides aminés et des peptides présents dans l'extrait original. L'azote précipité par l'acide phosphotungstique à partir de ces solutions moins complexes semble en fait se composer entièrement d'azote basique. La conclusion à tirer de ceci est qu'il serait sage de ne considérer l'azote total précipité par l'acide phosphotungstique comme une mesure de l'azote basique que lorsque le précipité a été produit dans un mélange relativement simple. La précipitation par ce réactif ne doit être considérée en général que comme un procédé préliminaire. Ce travail montre que les extraits obtenus à partir des plantes sont habituellement des mélanges extrêmement complexes. Par conséquent, leur examen chimique ne peut manquer d'être difficile et laborieux. On ne doit pas, jusqu'ici, prendre trop en compte des résultats des méthodes indirectes d'analyse. Quand la présence d'une substance a été démontrée, on a le droit, jusqu'à un certain point, d'employer pour son dosage des méthodes d'analyse rapides. Mais en l'absence de tels renseignements, l'interprétation des résultats de ces méthodes devient un sujet de spéculation et d'incertitude. Ceci peut sans doute décourager les physiologistes, mais on doit se rappeler que, dans les sciences, on tombe facilement dans l'erreur en voulant trop simplifier. Les anciennes affirmations belles et simples des lois physiques de la nature subissent déjà des complications. Un deuxième et un troisième terme s'ajoutent aux équations posées pour tenir compte des légères discordances qu'on trouve en employant des méthodes de mesures plus précises. La physiologie animale devient une science pour laquelle de fortes connaissances de chimie physique sont de plus en
ne peut manquer d'être difficile et laborieux. On ne doit pas, jusqu'ici, prendre trop en compte des résultats des méthodes indirectes d'analyse. Quand la présence d'une substance a été démontrée, on a le droit, jusqu'à un certain point, d'employer pour son dosage des méthodes d'analyse rapides. Mais en l'absence de tels renseignements, l'interprétation des résultats de ces méthodes devient un sujet de spéculation et d'incertitude. Ceci peut sans doute décourager les physiologistes, mais on doit se rappeler que, dans les sciences, on tombe facilement dans l'erreur en voulant trop simplifier. Les anciennes affirmations belles et simples des lois physiques de la nature subissent déjà des complications. Un deuxième et un troisième terme s'ajoutent aux équations posées pour tenir compte des légères discordances qu'on trouve en employant des méthodes de mesures plus précises. La physiologie animale devient une science pour laquelle de fortes connaissances de chimie physique sont de plus en plus nécessaires et il est certain que la physiologie végétale est destinée à devenir un champ d'étude où la chimie organique jouera un rôle encore plus important qu'actuellement. Le fait que la lysine est présente dans telle plante et la choline dans telle autre est intéressant, mais n'est pas autrement important. Ce qui est important cependant, c'est d'avoir une connaissance approfondie du milieu chimique où fonctionne le processus de la vie. Le physiologiste versé dans la science chimique et le chimiste versé dans la science physiologique pourraient peut-être acquérir une conception plus claire de ce qu'est ce processus. BIBLIOGRAPHIE 1. NEUBERG, CARL et KERB, Johannes. Über ein Fällungsmittel für Aminosäuren. Biochem. Zeitschr, 40 498,512. 1912. 2. TURNER, WILLIAM A., et HARTMAN Arthur M. The non volatile organic acids of alfalfa. Jour. Amer. Chem. Soc. 47 : 2044.2047. 1925. 3. VICKERY, H. B. Some nitrogenous constituents of the juice of the alfalfa plant. I. The amide and amino acid nitrogen. Jour. Biol. Chem. 60 : 647.655. 1924. 4. — Some nitrogenous constituents of the juice of the alfalfa plant., IV. La fraction betaine. Jour. Biol. Chem. 65 : 81.80. 1955. 5. — Some nitrogenous constituents of yeast. I. La choline et
important. Ce qui est important cependant, c'est d'avoir une connaissance approfondie du milieu chimique où fonctionne le processus de la vie. Le physiologiste versé dans la science chimique et le chimiste versé dans la science physiologique pourraient peut-être acquérir une conception plus claire de ce qu'est ce processus. BIBLIOGRAPHIE 1. NEUBERG, CARL et KERB, Johannes. Über ein Fällungsmittel für Aminosäuren. Biochem. Zeitschr, 40 498,512. 1912. 2. TURNER, WILLIAM A., et HARTMAN Arthur M. The non volatile organic acids of alfalfa. Jour. Amer. Chem. Soc. 47 : 2044.2047. 1925. 3. VICKERY, H. B. Some nitrogenous constituents of the juice of the alfalfa plant. I. The amide and amino acid nitrogen. Jour. Biol. Chem. 60 : 647.655. 1924. 4. — Some nitrogenous constituents of the juice of the alfalfa plant., IV. La fraction betaine. Jour. Biol. Chem. 65 : 81.80. 1955. 5. — Some nitrogenous constituents of yeast. I. La choline et l'acide nicotinique. Jour. Biol. Chem. 68 : 581.592. 1956. LIVRES ET PUBLICATIONS DIVERSES Les vitamines dans les conserves alimentaires, par KOHLER, Bulletin no 19 de la National Canners Association Research Laboratory W. D. Bigelow Director (Washington, juin 1927). Nature des vitamines. — On admet assez généralement maintenant l'existence de cinq vitamines spécifiques désignées par les lettres A, B, C, D et E. Celle qui fut à l'origine appelée facteur A, vitamine liposoluble, contient en réalité deux substances distinctes de même propriétés physiques, mais de fonctions physiologiques différentes. Ces deux vitamines sont maintenant appelées A et D. Certains auteurs veulent que la vitamine B comporte aussi deux substances de mêmes propriétés physiques, mais ayant des fonctions physiologiques différentes; ils ont conseillé de continuer à appeler B le mélange des deux substances qui seraient elles-mêmes désignées par les lettres F et C. La vitamine A se trouve dans le lait et les œufs, localisée en grande quantité dans leur matière grasse, dans d'autres produits animaux, en particulier dans les tissus glandulaires comme le foie, les graisses animales, les huiles de poisson, et dans les légumes, spécialement dans les espèces à feuilles vertes. Elle joue un rôle important dans la croissance des jeunes
vitamines spécifiques désignées par les lettres A, B, C, D et E. Celle qui fut à l'origine appelée facteur A, vitamine liposoluble, contient en réalité deux substances distinctes de même propriétés physiques, mais de fonctions physiologiques différentes. Ces deux vitamines sont maintenant appelées A et D. Certains auteurs veulent que la vitamine B comporte aussi deux substances de mêmes propriétés physiques, mais ayant des fonctions physiologiques différentes; ils ont conseillé de continuer à appeler B le mélange des deux substances qui seraient elles-mêmes désignées par les lettres F et C. La vitamine A se trouve dans le lait et les œufs, localisée en grande quantité dans leur matière grasse, dans d'autres produits animaux, en particulier dans les tissus glandulaires comme le foie, les graisses animales, les huiles de poisson, et dans les légumes, spécialement dans les espèces à feuilles vertes. Elle joue un rôle important dans la croissance des jeunes ; mais elle intervient aussi, quoique d'une manière moins nettement définie, dans la vie des jeunes et des adultes. Son absence totale du régime détermine une lésion spéciale des yeux appelée xérophtalmie, qui se termine par la mort. La vitamine D, étroitement associée à la vitamine A, se trouve dans l'huile de foie de morue et dans le jaune d'œuf en plus grande quantité que dans n'importe quelle autre substance. On a démontré sa présence dans les épinards et dans la luzerne, mais en quantité plus faible; elle semble moins répandue que la vitamine A. La vitamine B est largement répandue dans toutes sortes de produits alimentaires naturels, dans le germe et l'enveloppe des graines, dans les légumes, les fruits et les produits animaux. Son absence du régime provoque une maladie appelée beriberi chez l'homme et polynévrite chez les oiseaux. La vitamine B est aussi appelée facteur antinévritique; elle semble avoir une influence sur l'appétit. Son absence provoque chez les jeunes animaux un arrêt de croissance et la mort. La vitamine C se trouve abondamment dans les fruits, les légumes et, le lait frais. Son absence du régime provoque le scorbut; elle est appelée pour cette raison vitamine antiscorbutique. Cependant