jeanflop/post_ocr_correction2 huggingface dataset:
Bull. Soc. Chim. Biol., 1931, 13, 1178. 4 — MACHEBŒUF (M ) : Méthode permettant le dosage exact du phosphore dans de petites quantités de sang. Bull. Soc. Chim. biol., 1926, 8, 464. 5 — JAVILLIER (M.) et FABRYKANT (M.) : Le phosphore sanguin chez l'homme. Bull. Soc. Chim. biol., 1931, 13, 685. 6 — JAVILLIER (M.) et ALLAIRE (H.) : Sur la technique de dosage du phosphore nucléoprotéidique. Bull Soc. Chim. biol., 1931, 13, 678. 7 — LEMELAND (P.) : Recherches sur le dosage des lipoïdes dans le sang et les tissus. Nouvelle méthode de dosage de l'insaponifiable total et des acides gras totaux. Bull. Soc. Chim. biol., 1923, 5, 110. 8 — CAMINADE (R.) : Sur quelques modifications apportées au dosage de la cholestérine par la méthode de Windaus. Bull. Soc. Chim. biol., 1922, 4, 601. 9 — GUILLAUMIN (Ch. O.) WAHL et LAURENCIN ; Sur le dosage des albumines sériques. Comparaison de quelques résultats obtenus par pesée, par azotométrie et par réfractométrie. Bull. Soc. Chim. biol., 1929, 11, 387. 10 — GRIGAUT (A.), BOUTROUX et CODOUNIS : Le dosage des protéines du sérum sanguin par précipitation alcoolique. Bull. Soc. Chim. biol., 1930, 12, 20. 11 — KAYSER (F ) : Dosage rapide des protéines dans le sérum sanguin. Bull. Soc. Chim. biol., 1930, 12, 523. 12 — MACHEBŒUF (M.) : Thèse doctorat ès sciences, Paris (1928). 13 — LEFROU (G.) et BONNET (P.) : L'équilibre protéique du sérum sanguin des lépreux. Bull. Soc. Pathologie exotique, 1934, 27, 35. DEUXIÈME PARTIE EXPOSÉ HISTORIQUE ET CRITIQUE DU PROBLÈME DES PROTÉIDES CHAPITRE 1 LES PROTÉIDES SÉRIQUES Le sérum sanguin est un milieu d'une très grande complexité. Glucides, lipides, protéides, les produits de leur Métabolisme et des substances minérales entrent dans sa composition. Ces constituants contractent entre eux des liaisons de nature et d'intensité très différentes et forment par leur union des systèmes physico-chimiques. Parmi ceux-ci, on doit placer en première ligne ceux qu'on nomme « protéides » du sérum parce que la partie protéidique en est la plus importante pondéralement et la plus caractéristique aux points de vue chimique (teneur
(F ) : Dosage rapide des protéines dans le sérum sanguin. Bull. Soc. Chim. biol., 1930, 12, 523. 12 — MACHEBŒUF (M.) : Thèse doctorat ès sciences, Paris (1928). 13 — LEFROU (G.) et BONNET (P.) : L'équilibre protéique du sérum sanguin des lépreux. Bull. Soc. Pathologie exotique, 1934, 27, 35. DEUXIÈME PARTIE EXPOSÉ HISTORIQUE ET CRITIQUE DU PROBLÈME DES PROTÉIDES CHAPITRE 1 LES PROTÉIDES SÉRIQUES Le sérum sanguin est un milieu d'une très grande complexité. Glucides, lipides, protéides, les produits de leur Métabolisme et des substances minérales entrent dans sa composition. Ces constituants contractent entre eux des liaisons de nature et d'intensité très différentes et forment par leur union des systèmes physico-chimiques. Parmi ceux-ci, on doit placer en première ligne ceux qu'on nomme « protéides » du sérum parce que la partie protéidique en est la plus importante pondéralement et la plus caractéristique aux points de vue chimique (teneur en azote, présence de groupements particuliers, etc...) et biologique (propriétés diastasiques, immunologiques, etc...) ; mais en réalité d'autres principes immédiats, en particulier des lipides, leur sont étroitement liés. Le problème des protéides sériques et de leurs grandes réactions, fera l'objet de ce chapitre. Nous tâcherons de dégager d'un ensemble de faits assez confus la conception que l'on peut se faire des globulines et des albumines du sérum sanguin. Nous exposerons ensuite la structure de ces constituants fondamentaux du sérum, en nous attachant surtout aux relations entre lipides et protéides. Cette question est traitée de façon plus complète par G. SANDOR dans l'ouvrage « Le problème des protéides », 1 vol. Doin 1933. RECHERCHES ANALYTIQUES SUR LES PROTEIDES DU SERUM Vers le milieu du siècle dernier, les savants, imbus de notions qui se montraient si fécondes dans l'étude des substances simples, minérales ou organiques, cherchèrent à isoler du sérum des espèces chimiques par les procédés habituels de l'analyse chimique. Nous verrons plus loin ce qu'il faut penser de leurs espoirs qui furent aussi ceux d'auteurs plus récents. Il était naturel que l'on cherchât tout d'abord à scinder les protéides par précipitation fractionnée et c'est dans cette voie que furent effectués les
faits assez confus la conception que l'on peut se faire des globulines et des albumines du sérum sanguin. Nous exposerons ensuite la structure de ces constituants fondamentaux du sérum, en nous attachant surtout aux relations entre lipides et protéides. Cette question est traitée de façon plus complète par G. SANDOR dans l'ouvrage « Le problème des protéides », 1 vol. Doin 1933. RECHERCHES ANALYTIQUES SUR LES PROTEIDES DU SERUM Vers le milieu du siècle dernier, les savants, imbus de notions qui se montraient si fécondes dans l'étude des substances simples, minérales ou organiques, cherchèrent à isoler du sérum des espèces chimiques par les procédés habituels de l'analyse chimique. Nous verrons plus loin ce qu'il faut penser de leurs espoirs qui furent aussi ceux d'auteurs plus récents. Il était naturel que l'on cherchât tout d'abord à scinder les protéides par précipitation fractionnée et c'est dans cette voie que furent effectués les plus importants travaux d'isolement des protéides. FRACTIONNEMENT : Précipitation par dilution et acidification : PANUM, [1] (1851) semble être le premier auteur qui ait abordé la question. Par acidification du sérum dilué, il obtenait un précipité qu'A. SCHMIDT [2] nomma (1862) globuline car il le supposait provenir des globules blancs. Le filtrat contenait encore des matières albuminoïdes à caractère acide que PANUM, appela sérum caséine. Plus tard (1877) WEYL [3] remplaça l'acide acétique par l'acide carbonique. Précipitation par les sels à anion divalent : Un peu plus tard, on mit en œuvre des procédés d'insolubilisation différents. HAMMARSTEN [4] (1883-1884) étudia en détails la précipitation du sérum par le sulfate de magnésium, réactif que DENIS [5] (1859) semble être le premier à avoir indiqué comme précipitant des protéides sériques. Nous devons à POHL [6] (1886) l'emploi du sulfate d'ammonium universellement employé aujourd'hui pour la précipitation fractionnée du sérum. Deux autres savants KAUDER [7] et surtout HOFMEISTER [8] s'attachèrent à l'étude des zones de discontinuité dans la précipitation fractionnée par les sulfates. Pour le sulfate d'ammonium cette concentration critique se trouve aux alentours de la demi-saturation et sert de définition aux deux grands groupes de protéides sériques : Globulines. Protéides précipitant par
Le filtrat contenait encore des matières albuminoïdes à caractère acide que PANUM, appela sérum caséine. Plus tard (1877) WEYL [3] remplaça l'acide acétique par l'acide carbonique. Précipitation par les sels à anion divalent : Un peu plus tard, on mit en œuvre des procédés d'insolubilisation différents. HAMMARSTEN [4] (1883-1884) étudia en détails la précipitation du sérum par le sulfate de magnésium, réactif que DENIS [5] (1859) semble être le premier à avoir indiqué comme précipitant des protéides sériques. Nous devons à POHL [6] (1886) l'emploi du sulfate d'ammonium universellement employé aujourd'hui pour la précipitation fractionnée du sérum. Deux autres savants KAUDER [7] et surtout HOFMEISTER [8] s'attachèrent à l'étude des zones de discontinuité dans la précipitation fractionnée par les sulfates. Pour le sulfate d'ammonium cette concentration critique se trouve aux alentours de la demi-saturation et sert de définition aux deux grands groupes de protéides sériques : Globulines. Protéides précipitant par le sulfate d'ammonium à demi-saturation et par le sulfate de magnésium à saturation. Albumines ou Sérines. Protéides précipitant par le sulfate d'ammonium à saturation. HOFMEISTER définissait même les limites extrêmes de la précipitation par le sulfate d'ammonium. Si l'on désigne par 10 la saturation complète, les globulines précipiteraient entre les limites 2,9 et 4,6 et les albumines entre 6,4 et 9. Ces chiffres n'ont pas une telle généralité. Il faut bien noter qu'il n'y a pas identité entre les groupes ainsi définis et ceux de PANUM et d'A. SCHMIDT ; les « globulines » de ces savants ne constituent qu'une fraction des globulines d'HOFMEISTER. Le résultat de cette série de recherches est donc le suivant : Une discontinuité nette et assez générale dans la courbe de précipitation fractionnée du sérum par le sulfate d'ammonium permet de définir deux grands groupes de protéides sériques : les globulines et les albumines. CARACTÈRES PHYSIQUES DES PROTEIDES Il était naturel que l'on cherchât à caractériser par leurs propriétés physiques les groupes ainsi définis. Et parmi celles-ci, les constantes électrochimiques et le poids moléculaire offrent un intérêt particulier. Les constantes électrochimiques et le poids moléculaire offrent un intérêt particulier. PROPRIETES ELECTROCHIMIQUES DES PROTEIDES A. —
limites 2,9 et 4,6 et les albumines entre 6,4 et 9. Ces chiffres n'ont pas une telle généralité. Il faut bien noter qu'il n'y a pas identité entre les groupes ainsi définis et ceux de PANUM et d'A. SCHMIDT ; les « globulines » de ces savants ne constituent qu'une fraction des globulines d'HOFMEISTER. Le résultat de cette série de recherches est donc le suivant : Une discontinuité nette et assez générale dans la courbe de précipitation fractionnée du sérum par le sulfate d'ammonium permet de définir deux grands groupes de protéides sériques : les globulines et les albumines. CARACTÈRES PHYSIQUES DES PROTEIDES Il était naturel que l'on cherchât à caractériser par leurs propriétés physiques les groupes ainsi définis. Et parmi celles-ci, les constantes électrochimiques et le poids moléculaire offrent un intérêt particulier. Les constantes électrochimiques et le poids moléculaire offrent un intérêt particulier. PROPRIETES ELECTROCHIMIQUES DES PROTEIDES A. — Point isoélectrique Le transport électrique de particules albuminoïdes fut observé pour la première fois en 1899 par W. B. HARDY [9] sur une solution d'ovalbumine portée à l'ébullition et filtrée. Ces particules sont électronégatives quand le liquide est alcalin et vont à l'anode ; en milieu acide, elles sont électropositives et vont à la cathode. Pour une acidité bien déterminée, les particules et le liquide qui les baigne sont dans le même état de neutralité électrique, le transport est nul : c'est le point isoélectrique du protéide considéré. SoRENSEN, ayant élaboré des méthodes précises de mesure de la concentration en ions hydrogène, MICHAELIS entraprit de déterminer le point isoélectrique des protéides naturels. Pour la globuline le pH isoélectrique est de 6 environ, pour l'albumine 4,7. Cette constante physique est d'une grande importance théorique et pratique. C'est pour cette valeur du pH qu'un protéide peut être le plus facilement débarrassé de ses impuretés ionogéniques et que diverses propriétés : pression osmotique, viscosité, nombre d'alcool de FENN, conductivité, gonflement, passent par un minimum. Le point isoélectrique d'un protéide naturel ne peut malheureusement être déterminé avec assez d'exactitude pour être une bonne constante physique et permettre de distinguer l'un de l'autre deux protéides
et vont à la cathode. Pour une acidité bien déterminée, les particules et le liquide qui les baigne sont dans le même état de neutralité électrique, le transport est nul : c'est le point isoélectrique du protéide considéré. SoRENSEN, ayant élaboré des méthodes précises de mesure de la concentration en ions hydrogène, MICHAELIS entraprit de déterminer le point isoélectrique des protéides naturels. Pour la globuline le pH isoélectrique est de 6 environ, pour l'albumine 4,7. Cette constante physique est d'une grande importance théorique et pratique. C'est pour cette valeur du pH qu'un protéide peut être le plus facilement débarrassé de ses impuretés ionogéniques et que diverses propriétés : pression osmotique, viscosité, nombre d'alcool de FENN, conductivité, gonflement, passent par un minimum. Le point isoélectrique d'un protéide naturel ne peut malheureusement être déterminé avec assez d'exactitude pour être une bonne constante physique et permettre de distinguer l'un de l'autre deux protéides de point isoélectrique voisin. Pourtant, différents travaux, en particulier ceux de VLES [10] relatifs à la mesure des points isoélectriques par inversion de transport (tubes à cataphorèse) nous ont doté d'une méthode assez précise et d'un grand intérêt pratique. Les travaux récents ont fait apparaître des objections d'ordre théorique très graves. Le point isoélectrique varie avec la concentration et la nature des électrolytes présents dans le milieu. Cette variation peut atteindre, pour ne parler que des protéides du sérum, 0,6 unités de pH. B. — Point isoionique Le point isoionique d'un électrolyte amphotère, un protéide par exemple, est le pH pour lequel celui-ci n'émet pas et n'absorbe pas d'ion hydrogène. Les points isoionique et isoélectrique ne peuvent coïncider que si la charge ne dépend que de l'émission ou de l'absorption des ions H+ et OH-. En général le protéide se trouve dans une solution saline avec laquelle il échange d'autres ions que ceux de l'eau par le jeu, soit d'affinités chimiques, soit d'impuretés adsorbées. Ces ions influent sur la charge du protéide, donc sur le point isoélectrique. Ainsi celui-ci dépend essentiellement du milieu dispersant. Au contraire le point isoionique dépend du seul ion H+. Or il semble bien établi à
graves. Le point isoélectrique varie avec la concentration et la nature des électrolytes présents dans le milieu. Cette variation peut atteindre, pour ne parler que des protéides du sérum, 0,6 unités de pH. B. — Point isoionique Le point isoionique d'un électrolyte amphotère, un protéide par exemple, est le pH pour lequel celui-ci n'émet pas et n'absorbe pas d'ion hydrogène. Les points isoionique et isoélectrique ne peuvent coïncider que si la charge ne dépend que de l'émission ou de l'absorption des ions H+ et OH-. En général le protéide se trouve dans une solution saline avec laquelle il échange d'autres ions que ceux de l'eau par le jeu, soit d'affinités chimiques, soit d'impuretés adsorbées. Ces ions influent sur la charge du protéide, donc sur le point isoélectrique. Ainsi celui-ci dépend essentiellement du milieu dispersant. Au contraire le point isoionique dépend du seul ion H+. Or il semble bien établi à l'heure actuelle que l'ion hydrogène fait partie de la constitution des protéides. Le point isoionique est donc une caractéristique de ceux-ci, alors que le point isoélectrique dépend de conditions extérieures à leur constitution. SANDOR, qui a fait une étude théorique détaillée et une mise au point de cette question a indiqué une méthode de détermination exacte des points isoioniques. Celle-ci consiste à transformer les protéides en protéides purs ne contenant que des ions sodium puis à doser la quantité de sodium liée au protéide et après avoir ajouté une dose d'acide équivalente à ce sodium, à prendre le pH de la solution. C'est le point isoionique à quelques millièmes d'unités de pH près. Une variante de la méthode est celle-ci. On élimine par dialyse contre l'eau distillée (2 à 3 semaines) toute impureté ionique liée au protéide. Il ne reste que des traces infimes de cendres résiduelles (0,5 p. 1.000 environ) dont le rôle exact reste ignoré. On obtient ainsi par dialyse simple des valeurs du point isoionique exactes à 0,1 unité de pH. Voici quelques chiffres déterminés par SANDOR [111] pour le sérum de cheval : Le point isoionique des globulines varie entre les pH 5,8 et 6,0. Celui
indiqué une méthode de détermination exacte des points isoioniques. Celle-ci consiste à transformer les protéides en protéides purs ne contenant que des ions sodium puis à doser la quantité de sodium liée au protéide et après avoir ajouté une dose d'acide équivalente à ce sodium, à prendre le pH de la solution. C'est le point isoionique à quelques millièmes d'unités de pH près. Une variante de la méthode est celle-ci. On élimine par dialyse contre l'eau distillée (2 à 3 semaines) toute impureté ionique liée au protéide. Il ne reste que des traces infimes de cendres résiduelles (0,5 p. 1.000 environ) dont le rôle exact reste ignoré. On obtient ainsi par dialyse simple des valeurs du point isoionique exactes à 0,1 unité de pH. Voici quelques chiffres déterminés par SANDOR [111] pour le sérum de cheval : Le point isoionique des globulines varie entre les pH 5,8 et 6,0. Celui des albumines est généralement compris entre 5,10 et 5,14. Dans certains cas, il atteint 5,40. POIDS MOLECULAIRE Le poids moléculaire d'un protéide serait une assez bonne constante physique s'il pouvait être déterminé avec certitude et précision. Les méthodes actuelles de détermination de celui-ci sont d'ordre chimique et physique. Méthodes chimiques. — Elles consistent à déterminer le taux d'un élément ou d'un acide aminé dont la teneur est maxima dans le protéide considéré et à écrire que celui-ci contient au moins un atome de l'élément ou une molécule de l'acide aminé. Le nombre déterminé n'est qu'une limite inférieure du poids moléculaire, et ne peut servir que de recoupement aux chiffres obtenus par d'autres méthodes. Méthodes physiques : Bien plus intéressantes sont les techniques qui s'appuient sur des propriétés telles que la pression osmotique, la tension superficielle, la vitesse et l'équilibre de sédimentation, la vitesse de diffusion à travers une paroi poreuse. Le tableau ci-dessous montre que le poids moléculaire de la sérum-albumine oscille autour de 70.000. Celui de la sérum-globuline semblait être fixé aux environs de 150.000 (chiffres de A. ROCHE et J. BRACCO [12] correspondant avec ceux de SVEDBERG [13] corrigés par MUTZENBECHER [14]). Les recherches récentes de BURK [15]
— Elles consistent à déterminer le taux d'un élément ou d'un acide aminé dont la teneur est maxima dans le protéide considéré et à écrire que celui-ci contient au moins un atome de l'élément ou une molécule de l'acide aminé. Le nombre déterminé n'est qu'une limite inférieure du poids moléculaire, et ne peut servir que de recoupement aux chiffres obtenus par d'autres méthodes. Méthodes physiques : Bien plus intéressantes sont les techniques qui s'appuient sur des propriétés telles que la pression osmotique, la tension superficielle, la vitesse et l'équilibre de sédimentation, la vitesse de diffusion à travers une paroi poreuse. Le tableau ci-dessous montre que le poids moléculaire de la sérum-albumine oscille autour de 70.000. Celui de la sérum-globuline semblait être fixé aux environs de 150.000 (chiffres de A. ROCHE et J. BRACCO [12] correspondant avec ceux de SVEDBERG [13] corrigés par MUTZENBECHER [14]). Les recherches récentes de BURK [15] (1937) donnent un chiffre (173.000) voisin de celui d'ADAIR et ROBINSON (175.000). Auteur Méthode employée Sérum-albumine Sérum-globuline Sørensen (1925) Pression osmotique 45.000 80 à 140 -000 Adair (1930) OblllSOn Pression osmotique 72.000 175.000 et J. A. Bracco (1934) Pression 150.000 Burk (1932) Pression osmotique 74.000 Burk (1937) Pression osmotique 173.000 et Sjögren Svedberg (1928) Ultra centrifugation 67.500 103.800 Mutzenbecher (1933) Ultra centrifugation 148.000 1 La détermination des poids moléculaires par des mesures de pression osmotique peut encore être améliorée, non seulement au point de vue technique mais par une connaissance théorique plus approfondie de la méthode. Les mesures sont généralement faites sur des solutions aqueuses. J. DUCLAUX (1938) vient d'attirer l'attention des chercheurs sur l'intérêt qu'il y aurait à les répéter avec d'autres solvants non ionisants [16]. On éliminerait ainsi les phénomènes d'association ou de dissociation et la concordance des nombres obtenus serait la meilleure preuve de leur exactitude, comme en cryoscopie. Les poids moléculaires des différents protéides (dont nous ne nous occupons pas ici) varient en une progression dont le terme initial est de 34.500. SVEDBERG [17] considère les protéides d'un tel poids moléculaire comme « homomolaires » tandis que les autres sont des agrégats de molécules à 34.500
et Sjögren Svedberg (1928) Ultra centrifugation 67.500 103.800 Mutzenbecher (1933) Ultra centrifugation 148.000 1 La détermination des poids moléculaires par des mesures de pression osmotique peut encore être améliorée, non seulement au point de vue technique mais par une connaissance théorique plus approfondie de la méthode. Les mesures sont généralement faites sur des solutions aqueuses. J. DUCLAUX (1938) vient d'attirer l'attention des chercheurs sur l'intérêt qu'il y aurait à les répéter avec d'autres solvants non ionisants [16]. On éliminerait ainsi les phénomènes d'association ou de dissociation et la concordance des nombres obtenus serait la meilleure preuve de leur exactitude, comme en cryoscopie. Les poids moléculaires des différents protéides (dont nous ne nous occupons pas ici) varient en une progression dont le terme initial est de 34.500. SVEDBERG [17] considère les protéides d'un tel poids moléculaire comme « homomolaires » tandis que les autres sont des agrégats de molécules à 34.500 dissociables réversiblement en ces molécules de taille unité. A la suite d'expériences plus récentes, il semble qu'on doive considérer l'unité comme étant 17.250 et non 34.500. Ceci s'applique aux protéides intacts qui seraient constitués de molécules ayant une même structure ; les différences de grandeur moléculaire résulteraient du mode d'agrégation. Pour les protéides dénaturés, les mesures étant faites sur des mélanges en proportions variables de particules de grosseur différente ne signifient plus grand chose. Les chiffres obtenus par les différents auteurs, malgré quelques discordances qui ne sont pas d'un ordre de grandeur excessif, eu égard aux difficultés d'application et aux erreurs inhérentes à de telles mesures, montrent que les globulines et les albumines séparées du sérum existent sous forme de particules de grandeur définie, assez constante et nettement différente pour chacune d'elles. CARACTÈRES CHIMIQUES DES PROTÉIDES Les travaux dont nous allons dire quelques mots montrent que la détermination de leurs constantes physiques permet de différencier beaucoup plus aisément globulines et albumines que leur composition chimique. ANALYSE ÉLÉMENTAIRE L'analyse élémentaire ne peut nous être d'un grand secours puisqu'à une même formule brute peut correspondre un nombre très grand de composés différents. Elle a été faite néanmoins par HAMMARSTEN qui donne pour