jeanflop/post_ocr_correction2 huggingface dataset:
Pour les protéides dénaturés, les mesures étant faites sur des mélanges en proportions variables de particules de grosseur différente ne signifient plus grand chose. Les chiffres obtenus par les différents auteurs, malgré quelques discordances qui ne sont pas d'un ordre de grandeur excessif, eu égard aux difficultés d'application et aux erreurs inhérentes à de telles mesures, montrent que les globulines et les albumines séparées du sérum existent sous forme de particules de grandeur définie, assez constante et nettement différente pour chacune d'elles. CARACTÈRES CHIMIQUES DES PROTÉIDES Les travaux dont nous allons dire quelques mots montrent que la détermination de leurs constantes physiques permet de différencier beaucoup plus aisément globulines et albumines que leur composition chimique. ANALYSE ÉLÉMENTAIRE L'analyse élémentaire ne peut nous être d'un grand secours puisqu'à une même formule brute peut correspondre un nombre très grand de composés différents. Elle a été faite néanmoins par HAMMARSTEN qui donne pour les globulines et les albumines du sérum de cheval des chiffres de C, H, O, N, très voisins ; seules les teneurs en S sont assez nettement distinctes. ANALYSE DES ACIDES AMINES OBTENUS À L'HYDROLYSE Les résultats sont plus nets. Certains amino-acides (glycolle, arginine, lysine, histidine) entrent dans la composition de la globuline mais pas de l'albumine (ABDERHALDEN et MOERNER (1902). D'autres (cystine, proline) y sont en proportions nettement différentes. INDEX AMINIQUE Le rapport de l'azote total à l'azote formolittirable ou index aminique est la mesure inverse des groupements aminés libres (OBERMAYER et WILLHEIM) (1913). Il diminue de la fraction la plus précipitable à la fraction la moins précipitable par les sels. Mais les chiffres obtenus sont trop variables pour chaque fraction protéidique, même dans des conditions identiques, pour qu'on en puisse tirer autre chose que des renseignements qualitatifs. RECHERCHES ANALYTIQUES SUR LES GLOBULINES ET LES ALBUMINES FRACTIONNEMENT DES GLOBULINES La non-concordance entre la définition des globulines par la méthode de dilution et celle de précipitation saline fut le point de départ des travaux de MARCUS EMIL [18] : le sérum débarrassé par dialyse des fractions insolubles dans l'eau distillée donne encore un précipité abondant par le sulfate d'ammonium à
de la globuline mais pas de l'albumine (ABDERHALDEN et MOERNER (1902). D'autres (cystine, proline) y sont en proportions nettement différentes. INDEX AMINIQUE Le rapport de l'azote total à l'azote formolittirable ou index aminique est la mesure inverse des groupements aminés libres (OBERMAYER et WILLHEIM) (1913). Il diminue de la fraction la plus précipitable à la fraction la moins précipitable par les sels. Mais les chiffres obtenus sont trop variables pour chaque fraction protéidique, même dans des conditions identiques, pour qu'on en puisse tirer autre chose que des renseignements qualitatifs. RECHERCHES ANALYTIQUES SUR LES GLOBULINES ET LES ALBUMINES FRACTIONNEMENT DES GLOBULINES La non-concordance entre la définition des globulines par la méthode de dilution et celle de précipitation saline fut le point de départ des travaux de MARCUS EMIL [18] : le sérum débarrassé par dialyse des fractions insolubles dans l'eau distillée donne encore un précipité abondant par le sulfate d'ammonium à demi-saturation. Il y aurait donc deux fractions dans le système globulinique. Les travaux entrepris vers la même époque sur les caractères de précipitabilité par FULD et SPIRO et sur le fractionnement immunologique par SENG semblaient étayer une telle classification d'un ensemble imposant de caractères d'ordres très différents. Les globulines seraient constituées par deux protéides : 1°) L'Euglobuline, précipitable par le sulfate d'ammonium au tiers de saturation, insoluble dans l'eau, sans caractère sérologique particulier. 2°) La Pseudoglobuline, précipitable par le sulfate d'ammonium entre tiers et demi-saturation, soluble dans l'eau, support des sensibilisatrices dans les antisérums. Malheureusement la réalité n'est pas aussi simple et les fractions définies par la solubilité ne sont pas identiques à celles définies par la précipitation saline. FRACTIONNEMENT DES ALBUMINES HALLIBURTON (1886) distinguait trois fractions albuminiques d'après la température de coagulation, caractère très mal défini et dépendant de facteurs tels que l'acidité, la nature et la concentration en électrolytes. On ne peut davantage baser une classification sur l'existence d'une albumine cristallisée et d'une albumine amorphe, le rendement de la cristallisation dépendant uniquement des conditions physiques de l'expérience. AUTRES TRAVAUX SUR LE FRACTIONNEMENT DES PROTEIDES SERIQUES Travaux de HOWE Paul E. HOWE (1921) préconisa pour fractionner le sérum l'emploi
constituées par deux protéides : 1°) L'Euglobuline, précipitable par le sulfate d'ammonium au tiers de saturation, insoluble dans l'eau, sans caractère sérologique particulier. 2°) La Pseudoglobuline, précipitable par le sulfate d'ammonium entre tiers et demi-saturation, soluble dans l'eau, support des sensibilisatrices dans les antisérums. Malheureusement la réalité n'est pas aussi simple et les fractions définies par la solubilité ne sont pas identiques à celles définies par la précipitation saline. FRACTIONNEMENT DES ALBUMINES HALLIBURTON (1886) distinguait trois fractions albuminiques d'après la température de coagulation, caractère très mal défini et dépendant de facteurs tels que l'acidité, la nature et la concentration en électrolytes. On ne peut davantage baser une classification sur l'existence d'une albumine cristallisée et d'une albumine amorphe, le rendement de la cristallisation dépendant uniquement des conditions physiques de l'expérience. AUTRES TRAVAUX SUR LE FRACTIONNEMENT DES PROTEIDES SERIQUES Travaux de HOWE Paul E. HOWE (1921) préconisa pour fractionner le sérum l'emploi du sulfate de soude. Au maximum de solubilité la globuline est précipitée en totalité, la sérine reste dans les eaux-mères. La solubilité du sulfate de soude croît rapidement jusqu'à 32°,38 pour décroître ensuite beaucoup plus lentement. Pratiquement on travaille à l'étuve à + 37° avec des solutions à 222 grs de sel anhydre par litre. Si l'on représente graphiquement les quantités de protéide précipitées en fonction des concentrations croissantes en ce sel, on obtient une courbe à trois paliers. Ces trois zones critiques de précipitation ont pour abscisses les concentrations de 13.5, 17.4 et 21.5 pour 100 de sulfate de soude anhydre. L'auteur s'appuie sur ces données pour distinguer trois fractions globuliniques qu'il appelle respectivement euglobuline, pseudoglobuline I, pseudoglobuline II. La méthode a un intérêt pratique ; elle permet de doser les protéides obtenus par azotométrie (ce n'est qu'une méthode approchée) sans chasser le sel par dialyse, ce qu'on est obligé de faire pour le sulfate d'ammonium. De plus, la filtration est beaucoup plus facile qu'avec le sulfate d'ammonium et surtout le sulfate de magnésium qui donne avec le sérum un précipité gélatineux. On peut obtenir des solutions pauvres en sel (5 %) en refroidissant. Enfin le sulfate de soude
de sel anhydre par litre. Si l'on représente graphiquement les quantités de protéide précipitées en fonction des concentrations croissantes en ce sel, on obtient une courbe à trois paliers. Ces trois zones critiques de précipitation ont pour abscisses les concentrations de 13.5, 17.4 et 21.5 pour 100 de sulfate de soude anhydre. L'auteur s'appuie sur ces données pour distinguer trois fractions globuliniques qu'il appelle respectivement euglobuline, pseudoglobuline I, pseudoglobuline II. La méthode a un intérêt pratique ; elle permet de doser les protéides obtenus par azotométrie (ce n'est qu'une méthode approchée) sans chasser le sel par dialyse, ce qu'on est obligé de faire pour le sulfate d'ammonium. De plus, la filtration est beaucoup plus facile qu'avec le sulfate d'ammonium et surtout le sulfate de magnésium qui donne avec le sérum un précipité gélatineux. On peut obtenir des solutions pauvres en sel (5 %) en refroidissant. Enfin le sulfate de soude n'est pas toxique ce qui permet dans des études biologiques l'injection à l'animal sans dialyse préalable. Travaux de JAMESON Eloïse et ROBERTS Dorothy. Ces auteurs (1937) ont appliqué la règle des phases à l'étude des protéides du sérum sanguin. Le sérum frais est additionné à 0° et pH = 6,8 de citrate de potassium à différentes concentrations. Après séparation du précipité formé, on détermine la concentration en protéides et en citrate de la phase liquide. Les résultats sont consignés dans un diagramme représentatif d'équilibres chimiques, selon GIBBS, en l'espèce le triangle équilatéral. Les constituants sont le protéide, le sel et l'eau. La variation de composition de la phase liquide serait représentée par une droite s'il n'y avait qu'un protéide ; or c'est une ligne brisée. La première cassure se produit pour des concentrations en citrate de 22-23 %, pour le sérum de cheval et de 24-25 % pour celui du rat. La deuxième cassure apparaît pour le sérum d'homme au pH = 5,5 et pour le rat femelle par changement de température. La troisième cassure est nette pour le sérum d'homme et de rat mâle mais non de cheval. Les auteurs concluent qu'il existe dans le sérum quatre sortes de
de citrate de potassium à différentes concentrations. Après séparation du précipité formé, on détermine la concentration en protéides et en citrate de la phase liquide. Les résultats sont consignés dans un diagramme représentatif d'équilibres chimiques, selon GIBBS, en l'espèce le triangle équilatéral. Les constituants sont le protéide, le sel et l'eau. La variation de composition de la phase liquide serait représentée par une droite s'il n'y avait qu'un protéide ; or c'est une ligne brisée. La première cassure se produit pour des concentrations en citrate de 22-23 %, pour le sérum de cheval et de 24-25 % pour celui du rat. La deuxième cassure apparaît pour le sérum d'homme au pH = 5,5 et pour le rat femelle par changement de température. La troisième cassure est nette pour le sérum d'homme et de rat mâle mais non de cheval. Les auteurs concluent qu'il existe dans le sérum quatre sortes de protéides définis. Travaux de T'ISELIUS Arne En soumettant divers échantillons de sérum à l'électrophorèse, TISELIUS a pu séparer outre l'albumine trois globulines qu'il désigne par les lettres a, Pl, ; elles ont le même poids moléculaire mais leurs propriétés électrochimiques (point isoélectrique, mobilité) sont différentes. L'étude du sérum de lapins ayant reçu de nombreuses injections d'ovalbumine a montré que les anticorps étaient transportés avec la globuline dans le champ électrique. Cette méthode permet donc de concentrer les substances spécifiques des antisérums. BIBLIOGRAPHIE 1 — PANUM : Virchow. Arch., 1851, 3, 251 ; et 4, 419. 2 — SCHMIDT (A.) : Reichters und Du Bois Raymond Arch. (1852). 3 — WEYL (Th.) : Beiträge zur Kenntnis tierischer und pflanzenfäriger Eiweissstoffe. Zeitschr. f. phys. Chem., 1877, 1, 72. 4 — HAMMARSTEN : Cf. Lehrbuch der physiologischen Chemie. Münich (1922). 5 — DENIS : Mémoire sur le sang. Paris (1859). 6 — POHL (J.) : Ein neues Verfahren zur Bestimmung des Globulins in Harn und in serösen Flüssigkeiten. Arch. f. exp. Path. u. Pharm., 1886, 20, 246. 7 — KAUDER : Arch. f. exp. Path. u. Pharm., 1886, 20, 411. 8 — HOFMEISTER : Zur Lehre von der Wirkung der Salze. Arch. f.
ayant reçu de nombreuses injections d'ovalbumine a montré que les anticorps étaient transportés avec la globuline dans le champ électrique. Cette méthode permet donc de concentrer les substances spécifiques des antisérums. BIBLIOGRAPHIE 1 — PANUM : Virchow. Arch., 1851, 3, 251 ; et 4, 419. 2 — SCHMIDT (A.) : Reichters und Du Bois Raymond Arch. (1852). 3 — WEYL (Th.) : Beiträge zur Kenntnis tierischer und pflanzenfäriger Eiweissstoffe. Zeitschr. f. phys. Chem., 1877, 1, 72. 4 — HAMMARSTEN : Cf. Lehrbuch der physiologischen Chemie. Münich (1922). 5 — DENIS : Mémoire sur le sang. Paris (1859). 6 — POHL (J.) : Ein neues Verfahren zur Bestimmung des Globulins in Harn und in serösen Flüssigkeiten. Arch. f. exp. Path. u. Pharm., 1886, 20, 246. 7 — KAUDER : Arch. f. exp. Path. u. Pharm., 1886, 20, 411. 8 — HOFMEISTER : Zur Lehre von der Wirkung der Salze. Arch. f. exp. Path. u. Pharm., 1888, 24, 247. 9 — HARDY (W.B.) : Proc. roy. Soc., 1900, 66, 110. 10 — VLES (F.) : Nouveaux tubes à cataphorèse. Arch. Physique biologique, 1927, 6, 139. 11 — SANDOR (G.) : Point isoionique des protéides du sérum. Bull. Soc. Chim. biol., 1936, 18, 877 et 1937, 19, 555. 12 — ROCHE (A.) et BRACCO (J.) : Pression osmotique et poids moléculaire des globulines du sérum. Bull. Soc. Chim. biol., 1934, 16, 1479. 13 — SVEDBERG et SJÔGREN : The molecular weight of serum albumin and of serum globulin. Journ. of amer. chem. Soc., 1928, 50, 3318. 14 — MUTZENBECHER : Die analyse des Serums mit Ultracentrifuge. Bioch. Zeitschrift, 1933, 266, 226. 15 — BURK (N.F.) : Osmotic pressure, molecular weight and stability of serum globulin. The J. of biol. Chemistry, 1937, 121, 373. 16 — DUCLAUX (J.) : Pression osmotique des protéides dans les solvants autres que l'eau. Volume jubilaire en l'honneur du Professeur S.P.L. Sorensen pour son 71e anniversaire, 1938, p. 155. 17 — SVEDBERG (Th.) : Les molécules dans un champ centrifuge intense. J. de Phys. et le Radium, 1931, 7. 2 n° 7, 227. 18 — MARCUS EMIL: Zeitschrift für
877 et 1937, 19, 555. 12 — ROCHE (A.) et BRACCO (J.) : Pression osmotique et poids moléculaire des globulines du sérum. Bull. Soc. Chim. biol., 1934, 16, 1479. 13 — SVEDBERG et SJÔGREN : The molecular weight of serum albumin and of serum globulin. Journ. of amer. chem. Soc., 1928, 50, 3318. 14 — MUTZENBECHER : Die analyse des Serums mit Ultracentrifuge. Bioch. Zeitschrift, 1933, 266, 226. 15 — BURK (N.F.) : Osmotic pressure, molecular weight and stability of serum globulin. The J. of biol. Chemistry, 1937, 121, 373. 16 — DUCLAUX (J.) : Pression osmotique des protéides dans les solvants autres que l'eau. Volume jubilaire en l'honneur du Professeur S.P.L. Sorensen pour son 71e anniversaire, 1938, p. 155. 17 — SVEDBERG (Th.) : Les molécules dans un champ centrifuge intense. J. de Phys. et le Radium, 1931, 7. 2 n° 7, 227. 18 — MARCUS EMIL: Zeitschrift für physiologische Chemie, 1899, 28, 509. 19 — FULD et SPIRO: Über die lähmende und lähmende Wirkung des Blutes. Zeitschrift für physiologische Chemie, 1900, 31, 132. 20 — SENG (W.): Zeitschrift für Hygiene und Infectionskrankheiten, 1899, 31, 513. 21 — HOWE (P. E.): The use of sodium sulfate as the globulin precipitant in the determination of proteins in blood. J. Biol. Chem., 1921, 49, 93. 22 — JAMESON (E.) et ROBERTS (D.): J. gen. Physiol., 1937, 20, 475. 23 — TISELIUS (Arne): Biochem. J., 1937, 31, 1478. CHAPITRE II PREMIÈRE DISCUSSION SUR LA NATURE DES PROTÉIDES SÉRIQUES ET LEURS RELATIONS RÉCIPROQUES Un travail de longue haleine (1917 à 1930) a été entrepris par S. P. L. SÖRENSEN [1] pour essayer de résoudre le problème de la nature physique des protéides naturels. Étudiant en premier lieu les solutions d'ovalbumine cristallisée, il a montré qu'elles possédaient les propriétés essentielles des solutions vraies. L'albumine d'œuf cristallisée est une substance bien définie qui a un coefficient de solubilité sensiblement constant. Son poids moléculaire est connu avec beaucoup de certitude et il y a un accord remarquable entre les chiffres obtenus par des méthodes aussi différentes que la pression osmotique (SÖRENSEN 1917) la tension superficielle (LECOMTE
precipitant in the determination of proteins in blood. J. Biol. Chem., 1921, 49, 93. 22 — JAMESON (E.) et ROBERTS (D.): J. gen. Physiol., 1937, 20, 475. 23 — TISELIUS (Arne): Biochem. J., 1937, 31, 1478. CHAPITRE II PREMIÈRE DISCUSSION SUR LA NATURE DES PROTÉIDES SÉRIQUES ET LEURS RELATIONS RÉCIPROQUES Un travail de longue haleine (1917 à 1930) a été entrepris par S. P. L. SÖRENSEN [1] pour essayer de résoudre le problème de la nature physique des protéides naturels. Étudiant en premier lieu les solutions d'ovalbumine cristallisée, il a montré qu'elles possédaient les propriétés essentielles des solutions vraies. L'albumine d'œuf cristallisée est une substance bien définie qui a un coefficient de solubilité sensiblement constant. Son poids moléculaire est connu avec beaucoup de certitude et il y a un accord remarquable entre les chiffres obtenus par des méthodes aussi différentes que la pression osmotique (SÖRENSEN 1917) la tension superficielle (LECOMTE DU NOUY 1925), l'ultracentrifugation (SVEDBERG et NICHOLS 1926), la vitesse de diffusion (Mc BAIN, DAWSON et BARKER 1934). La valeur de ce poids moléculaire est de 34.500 à 35.000. SÖRENSEN la considère comme une espèce chimique. L'auteur s'est alors attaqué aux protéides du sérum de cheval. La sérum-albumine est déjà beaucoup plus complexe et bien qu'elle soit cristallisable, il n'a pu la regarder comme une espèce chimique. Plus complexe encore est la sérum-globuline dont aucune fraction n'a pu être obtenue à l'état cristallisé. Par dialyse contre l'eau distillée, elle se dissocie en euglobuline E et pseudoglobuline P, la première insoluble, la deuxième soluble dans l'eau. La globuline elle-même serait un complexe de la forme EP susceptible de se dissocier réversiblement suivant le schéma : la composition de la fraction dissoute dépendant de la solubilité des différentes combinaisons, par conséquent de la teneur en sels et de la concentration en globuline. SÖRENSEN pense que les protéides sont formés par des complexes unis entre eux en un système de composants par des valences résiduelles (forces de valence secondaire) pouvant s'ouvrir par voie réversible. Chaque composant serait formé par des chaînes polypeptidiques (et lipidiques) unies par des valences principales (forces de valence primaire).
beaucoup plus complexe et bien qu'elle soit cristallisable, il n'a pu la regarder comme une espèce chimique. Plus complexe encore est la sérum-globuline dont aucune fraction n'a pu être obtenue à l'état cristallisé. Par dialyse contre l'eau distillée, elle se dissocie en euglobuline E et pseudoglobuline P, la première insoluble, la deuxième soluble dans l'eau. La globuline elle-même serait un complexe de la forme EP susceptible de se dissocier réversiblement suivant le schéma : la composition de la fraction dissoute dépendant de la solubilité des différentes combinaisons, par conséquent de la teneur en sels et de la concentration en globuline. SÖRENSEN pense que les protéides sont formés par des complexes unis entre eux en un système de composants par des valences résiduelles (forces de valence secondaire) pouvant s'ouvrir par voie réversible. Chaque composant serait formé par des chaînes polypeptidiques (et lipidiques) unies par des valences principales (forces de valence primaire). Beaucoup de biochimistes admettent aujourd'hui que les protéides naturels ont des poids moléculaires multiples de 34.500 (ou de 17.250). D'aucuns pensent que seuls existent les termes d'une progression arithmétique (peut-être même géométrique) dont la raison serait ce chiffre, unité fondamentale. L'ovalbumine serait constituée par une unité à 34.500, la sérum-albumine en comporterait deux, la sérum-globuline quatre (cinq selon certains auteurs). Cette conception nouvelle est en bon accord avec les faits. Elle met en lumière une unité de structure qui est à la base de la constitution des protéides naturels. Limitant notre examen à ceux du plasma sanguin, cherchons à faire ressortir leurs différences et les relations qu'ils présentent entre eux. Si on les range par ordre de précipitabilité décroissante (leur définition est précisément basée sur ce caractère) on obtient la série : Fibrinogène ; Euglobuline ; Pseudoglobuline ; Albumine. Cet ordre est naturellement celui des pH isoélectriques décroissants à partir de la neutralité (fibrinogène : 7,2 ; globuline : 5,6 ; albumine : 4,7) et aussi celui des températures de coagulation croissantes. Cette gamme est également celle de leur néoformation ; après les hémorragies, la réparation se fait dans l'ordre : fibrinogène, globuline, albumine. D'autres propriétés sont fonction de la
en comporterait deux, la sérum-globuline quatre (cinq selon certains auteurs). Cette conception nouvelle est en bon accord avec les faits. Elle met en lumière une unité de structure qui est à la base de la constitution des protéides naturels. Limitant notre examen à ceux du plasma sanguin, cherchons à faire ressortir leurs différences et les relations qu'ils présentent entre eux. Si on les range par ordre de précipitabilité décroissante (leur définition est précisément basée sur ce caractère) on obtient la série : Fibrinogène ; Euglobuline ; Pseudoglobuline ; Albumine. Cet ordre est naturellement celui des pH isoélectriques décroissants à partir de la neutralité (fibrinogène : 7,2 ; globuline : 5,6 ; albumine : 4,7) et aussi celui des températures de coagulation croissantes. Cette gamme est également celle de leur néoformation ; après les hémorragies, la réparation se fait dans l'ordre : fibrinogène, globuline, albumine. D'autres propriétés sont fonction de la précipitabilité. Dans le groupe des globulines, les fractions successives précipitées par le sulfate d'ammonium sont de moins en moins riches en C, N et S et de plus en plus riches en H comme l'ont montré PORGES et SPIRO [2]. Concentration en sulfate d'ammonium C % H % N % S % (Notation de Hofmeister) 3,0 à 3,7 52,6 7,70 16,0 1,13 3,7 à 4,4 50,4 7,75 15,5 0,98 4,4 à 5,0 47,5 8,07 14,4 0,92 Encore les résultats obtenus sont-ils fonction du réactif précipitant. Le sulfate de soude a permis à HOWE [3], de distinguer quatre fractions protéidiques, comme nous l'avons vu précédemment. Le citrate de potassium (JAMESON et ROBERTS) [4] amène à une conclusion semblable en apparence : il y aurait quatre fractions protéidiques mais celles-ci dépendraient à la fois de l'espèce animale et du sexe ; ce résultat à rapprocher de ceux de VLES [5] qui distingue chez l'être humain normal des points isoélectriques différents suivant le sexe et aussi l'état sexuel. Les recherches de TISELIUS [6] sur l'électrophorèse du sérum le conduisent également à distinguer trois globulines et une albumine. Les courbes de précipitation par les sulfates d'ammonium et de sodium ne sont pas réductibles l'une