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Nous résumons nos résultats ci-dessous : DURÉE DE L'INCUBATION EXPÉRIENCE VIRUS DANS LE SANG APPARENTE 1 11 jours Présent le deuxième jour 2 19 jours Présent le cinquième jour 3 10 jours Présent le troisième jour 4 De ces constatations, il résulte que l'évolution du virus chez l'animal réceptif est rapide. S'il était possible de multiplier les expériences, il paraît certain que l'on pourrait assigner à la durée de l'incubation vraie, des limites beaucoup plus étroites. Cette notion nouvelle peut modifier les règles de la prophylaxie. Un animal sensible, soumis à un contact infectant, devient porteur de virus et, par cela même, susceptible de disséminer la maladie dans les jours qui suivent le contact infectant et non pas seulement après l'apparition du premier accès fébrile. CONCLUSIONS De ces différentes expériences, nous retiendrons les faits suivants : 1° Il peut exister des équidés réfractaires au virus. 2° Il ne nous a pas été possible d'obtenir d'un virus une maladie à incubation apparente fixée. 3° L'établissement de la formule leucocytaire quotidienne peut avoir une certaine valeur pronostique. 4° L'envahissement de l'organisme par le virus de l'anémie infectieuse est extrêmement rapide et brutal, que l'incubation apparente soit de courte ou de longue durée. L'ANEMIE INFECTIEUSE DES EQUIDES II. DONNÉES DIVERSES SUR LE VIRUS ANEMIQUE par L. A. MARTIN Les expériences rapportées ci-dessous ne présentent pas de lien immédiat entre elles. Elles ont eu pour but commun d'essayer d'obtenir le virus sous une forme telle qu'il soit permis d'entreprendre de nouvelles recherches diagnostiques. Le diagnostic au laboratoire, en dehors de l'inoculation à un équidé, procédé coûteux et difficilement employable en pratique, ne pourra faire à notre avis de progrès que le jour où l'on saura séparer le virus de son support protéinique. Nous avons tenté de libérer le virus soit par fractionnement du sérum infectant, soit par transmission à d'autres espèces animales, soit par infection d'ectoparasites. LOCALISATION DU VIRUS DANS LE SÉRUM Au cours d'expériences concernant le sérum de convalescent, nous avons cherché à voir s'il est possible de séparer dans un même sérum la fraction supportant le virus de la fraction supportant les
L'ANEMIE INFECTIEUSE DES EQUIDES II. DONNÉES DIVERSES SUR LE VIRUS ANEMIQUE par L. A. MARTIN Les expériences rapportées ci-dessous ne présentent pas de lien immédiat entre elles. Elles ont eu pour but commun d'essayer d'obtenir le virus sous une forme telle qu'il soit permis d'entreprendre de nouvelles recherches diagnostiques. Le diagnostic au laboratoire, en dehors de l'inoculation à un équidé, procédé coûteux et difficilement employable en pratique, ne pourra faire à notre avis de progrès que le jour où l'on saura séparer le virus de son support protéinique. Nous avons tenté de libérer le virus soit par fractionnement du sérum infectant, soit par transmission à d'autres espèces animales, soit par infection d'ectoparasites. LOCALISATION DU VIRUS DANS LE SÉRUM Au cours d'expériences concernant le sérum de convalescent, nous avons cherché à voir s'il est possible de séparer dans un même sérum la fraction supportant le virus de la fraction supportant les anticorps supposés. Ce but précis n'a pu être atteint et nous n'avons pu que confirmer les données établies par nos prédécesseurs. Kral, Macek et Sobra (1) ont vu que le virus n'est pas ultrafiltrable et qu'il est lié aux protéines, c'est ainsi que l'urine n'est virulente que si elle est albumineuse. Récemment, Von Mocsy (1) montra que l'infection peut être obtenue non seulement avec du sérum mais également avec les précipités lavés et dialysés de globuline et d'albumine. Pour cet auteur, la fraction albumine est plus régulièrement infectante, le dialysat n'étant jamais infectant. Mohler (2) obtiendrait des résultats opposés et aurait vu son virus détruit après précipitation du sérum infectant par le sulfate d'ammonium. Nous n'avons jamais constaté pareille action du sulfate d'ammonium. Globulines et albumines sont infectantes, mais cependant, entre nos mains, c'est dans la fraction globuline que le virus a été le plus facilement mis en évidence. Technique. Le sérum est additionné d'un volume égal de sulfate d'ammonium saturé pour précipiter les globulines. Après 20 minutes de contact, le précipité est centrifugé et séparé des eaux-mères contenant les albumines. Pour éliminer du précipité toute trace d'albumine, ce dernier est redissout dans un certain volume d'eau distillée, précipité à
albumineuse. Récemment, Von Mocsy (1) montra que l'infection peut être obtenue non seulement avec du sérum mais également avec les précipités lavés et dialysés de globuline et d'albumine. Pour cet auteur, la fraction albumine est plus régulièrement infectante, le dialysat n'étant jamais infectant. Mohler (2) obtiendrait des résultats opposés et aurait vu son virus détruit après précipitation du sérum infectant par le sulfate d'ammonium. Nous n'avons jamais constaté pareille action du sulfate d'ammonium. Globulines et albumines sont infectantes, mais cependant, entre nos mains, c'est dans la fraction globuline que le virus a été le plus facilement mis en évidence. Technique. Le sérum est additionné d'un volume égal de sulfate d'ammonium saturé pour précipiter les globulines. Après 20 minutes de contact, le précipité est centrifugé et séparé des eaux-mères contenant les albumines. Pour éliminer du précipité toute trace d'albumine, ce dernier est redissout dans un certain volume d'eau distillée, précipité à nouveau un égal volume de sulfate d'ammonium saturé et centrifugé. L'opération est répétée à 4 reprises et c'est le quatrième culot qui, repris par l'eau distillée, constitue la solution de globuline injectable. Les albumines contenues dans les premières eaux-mères sont, elles-mêmes, précipitées par addition de 10 cc de sulfate d'ammonium saturé après acidification au pH 3,7 à l'aide de CH2SO4. Le précipité repris par l'eau distillée, constitue la solution d'albumine injectable. Nous donnerons ici nos expériences les plus caractéristiques. Expérience I. Le 13 janvier 1938, on sépare les globulines de 100 cc de sérum provenant de l'âne 22 : saignée du 4 décembre 1937. Le culot est lavé à 5 reprises. Le cinquième culot est dilué dans l'eau distillée. 20 cc sont inoculés sous la peau des ânes neufs : 27, 28, 29, 30; un témoin, l'âne 31, reçoit dans la veine 25 cc du sérum origine. Ane 27. Meurt le cinquantième jour après avoir eu 3 accès. Incubation : 15 jours. Ane 28. Sacrifié le cinquante-deuxième jour. A eu 3 accès. Incubation : 11 jours (dépliant 3). Ane 29. Meurt le dix-neuvième jour en fin du premier accès. Incubation : 14 jours. Ane 30. Réaction douteuse après 22 jours
saturé après acidification au pH 3,7 à l'aide de CH2SO4. Le précipité repris par l'eau distillée, constitue la solution d'albumine injectable. Nous donnerons ici nos expériences les plus caractéristiques. Expérience I. Le 13 janvier 1938, on sépare les globulines de 100 cc de sérum provenant de l'âne 22 : saignée du 4 décembre 1937. Le culot est lavé à 5 reprises. Le cinquième culot est dilué dans l'eau distillée. 20 cc sont inoculés sous la peau des ânes neufs : 27, 28, 29, 30; un témoin, l'âne 31, reçoit dans la veine 25 cc du sérum origine. Ane 27. Meurt le cinquantième jour après avoir eu 3 accès. Incubation : 15 jours. Ane 28. Sacrifié le cinquante-deuxième jour. A eu 3 accès. Incubation : 11 jours (dépliant 3). Ane 29. Meurt le dix-neuvième jour en fin du premier accès. Incubation : 14 jours. Ane 30. Réaction douteuse après 22 jours d’incubation. Ne réagit pas à l’épreuve. Pas de variation des indices hématologiques. Ane 31. Témoin. Accès léger après 6 jours d’incubation. Ne réagit pas à l’épreuve ultérieure. Les indices hématologiques des différents ânes ci-dessus ont varié comme leur courbe thermique. À titre d'exemple, nous donnerons quelques-uns des chiffres relevés pour l'âne 28. 11 JANVIER 27 JANVIER 19 FÉVRIER 1938 1938 1938 Hématies 5.390.000 3.390.000 5.350.000 Leucocytes 8.750 6.650 11.400 Hémoglobine 80 80 80 Indice volumétrique 23 18 21 Vitesse de chute 0,52 0,91 0,83 Expérience JJ. Le 14 octobre 1938, les albumines préparées à partir de 25 cc de sérum de l’âne 78, sont inoculées sous la peau de l'âne 81 qui réagira très violemment après 10 jours d’incubation (dépliant 3). Les deux fractions du sérum déterminées par l’action du sulfate d’ammonium à demi-saturation sont donc infectantes. Le virus semble bien être adsorbé par l’ensemble des molécules protéidiques du sérum et ce n’est qu’à l’aide de moyens physiques plus puissants ou plus subtils, ultracentrifugation, cataphorèse, etc... qu’il sera peut-être possible de mieux isoler le virus de l’anémie infectieuse des équidés. TRANSMISSION A D’AUTRES ESPÈCES ANIMALES Comme d’autres auteurs, nous avons été amenés au cours de nos expériences, à inoculer de
l'âne 28. 11 JANVIER 27 JANVIER 19 FÉVRIER 1938 1938 1938 Hématies 5.390.000 3.390.000 5.350.000 Leucocytes 8.750 6.650 11.400 Hémoglobine 80 80 80 Indice volumétrique 23 18 21 Vitesse de chute 0,52 0,91 0,83 Expérience JJ. Le 14 octobre 1938, les albumines préparées à partir de 25 cc de sérum de l’âne 78, sont inoculées sous la peau de l'âne 81 qui réagira très violemment après 10 jours d’incubation (dépliant 3). Les deux fractions du sérum déterminées par l’action du sulfate d’ammonium à demi-saturation sont donc infectantes. Le virus semble bien être adsorbé par l’ensemble des molécules protéidiques du sérum et ce n’est qu’à l’aide de moyens physiques plus puissants ou plus subtils, ultracentrifugation, cataphorèse, etc... qu’il sera peut-être possible de mieux isoler le virus de l’anémie infectieuse des équidés. TRANSMISSION A D’AUTRES ESPÈCES ANIMALES Comme d’autres auteurs, nous avons été amenés au cours de nos expériences, à inoculer de nombreux lapins et cobayes. Les résultats, toujours négatifs ne seront pas rapportés ici. Nous signalerons simplement deux faits, l’un expérimental, l’autre d’observation. Essai de transmission au singe. Nié par Lührs et par Donatien et Lestoquard, la sensibilité du singe n’a pu être démontrée par Balozet. Cet auteur n’a pu retrouver le virus chez le papion inoculé 14 jours auparavant avec 9 cc de sérum virulent. En 1935, Verge rapporte à l’Office International des Epizooties, une expérience inédite faite avec Placidi, où les auteurs ont pu constater « que le singe, du genre « macaque, inoculé avec l'agent authentique de l’anémie infectieuse des équidés, présentait des accès fébriles en série « et des phénomènes de déglobulisation, donnant ainsi l’illusion d’une anémie infectieuse présentant quelque analogie « avec le processus rencontré chez le cheval ». Nous avons repris sans succès cette expérience. Le 23 juin 1938, un Macacus sylvanus reçoit 10 cc de sérum virulent dans le muscle et 2 cc dans la veine. Un léger accès thermique survenu 55 jours après l’inoculation nous incita à faire une prise de sang au cœur. Le sérum obtenu, soit 7 cc, est inoculé dans la veine d’un âne neuf : Ane 70, qui ne
le virus chez le papion inoculé 14 jours auparavant avec 9 cc de sérum virulent. En 1935, Verge rapporte à l’Office International des Epizooties, une expérience inédite faite avec Placidi, où les auteurs ont pu constater « que le singe, du genre « macaque, inoculé avec l'agent authentique de l’anémie infectieuse des équidés, présentait des accès fébriles en série « et des phénomènes de déglobulisation, donnant ainsi l’illusion d’une anémie infectieuse présentant quelque analogie « avec le processus rencontré chez le cheval ». Nous avons repris sans succès cette expérience. Le 23 juin 1938, un Macacus sylvanus reçoit 10 cc de sérum virulent dans le muscle et 2 cc dans la veine. Un léger accès thermique survenu 55 jours après l’inoculation nous incita à faire une prise de sang au cœur. Le sérum obtenu, soit 7 cc, est inoculé dans la veine d’un âne neuf : Ane 70, qui ne fera aucune réaction. Éprouvé un mois plus tard, cet âne s’infectera. Le macaque est donc vraisemblablement réfractaire au virus de l’anémie infectieuse. Essai de transmission au lion. Nous n’avons naturellement pas essayé d’infecter un lion par inoculation directe. Mais au cours des expériences, les ânes ayant réagi et ne pouvant plus ni servir au laboratoire, ni être vendus, n’étaient pas toujours envoyés à l’équarrissage. Une quarantaine environ d’entre eux furent livrés, au cours des hivers 1937-1938 et 1938-1939, à un jardin zoologique privé, et abattus pour servir de nourriture à trois lions. Ces animaux ne paraissent éprouver aucun trouble. Le premier repas « infectant » remonte à plus de deux ans et jusqu’à présent aucun signe suspect n’est venu troubler la quiétude du propriétaire. ESSAIS DE TRANSMISSION DU VIRUS À L’AIDE D’HEMATOPINUS ASINI Des essais de transmission du virus par les ectoparasites ont été entrepris par de nombreux auteurs. Pour nous en tenir à l’objet même de notre expérience, nous voyons que Lührs, cité par Hecke, n’a pu transmettre l’anémie par inoculation du broyage d’Hematopinus recueilli sur des chevaux infectés. Plus récemment, Mohler transporte 45 Hematopinus asini prélevés sur un cheval en accès fébrile, sur un cheval sain, et ne
plus ni servir au laboratoire, ni être vendus, n’étaient pas toujours envoyés à l’équarrissage. Une quarantaine environ d’entre eux furent livrés, au cours des hivers 1937-1938 et 1938-1939, à un jardin zoologique privé, et abattus pour servir de nourriture à trois lions. Ces animaux ne paraissent éprouver aucun trouble. Le premier repas « infectant » remonte à plus de deux ans et jusqu’à présent aucun signe suspect n’est venu troubler la quiétude du propriétaire. ESSAIS DE TRANSMISSION DU VIRUS À L’AIDE D’HEMATOPINUS ASINI Des essais de transmission du virus par les ectoparasites ont été entrepris par de nombreux auteurs. Pour nous en tenir à l’objet même de notre expérience, nous voyons que Lührs, cité par Hecke, n’a pu transmettre l’anémie par inoculation du broyage d’Hematopinus recueilli sur des chevaux infectés. Plus récemment, Mohler transporte 45 Hematopinus asini prélevés sur un cheval en accès fébrile, sur un cheval sain, et ne réussit pas à contaminer ce dernier. Nous avons repris, chez l’âne, les essais de transmission du virus à l’aide d’Hematopinus asini, d’une part par transfert des insectes sur un animal neuf, d’autre part, par inoculation des déjections de poux récoltés sur un animal infecté. Essais de transmission par piqûres. Sur l’âne neuf 111, on dépose : 160 poux le 25 mars 186 poux le 28 mars 175 poux le 29 mars 190 poux le 30 mars 115 poux le 31 mars 134 poux le 1er avril. Tous ces poux proviennent d’ânes expérimentalement infectés et porteurs certains de virus. Chaque lot de poux passait une nuit à l’étuve, pour récolte des déjections qui devaient servir à une autre expérience. L’âne 111 ne réagissant pas, est éprouvé le 19 avril par inoculation sous-cutanée de 1 cc de sérum virulent. Il fait alors un accès thermique mortel après 10 jours d’incubation apparente (dépliant 3). Du sérum de l’âne 111, récolté avant l’épreuve, est inoculé à l’âne 115, le 2 août 1939. Il ne réagit pas. Utilisé 3 mois et demi plus tard, pour une autre expérience, il se montre réceptif. L’âne 111 ne s’était pas infecté et la transmission par piqûre d’Hematopinus asini
l’âne neuf 111, on dépose : 160 poux le 25 mars 186 poux le 28 mars 175 poux le 29 mars 190 poux le 30 mars 115 poux le 31 mars 134 poux le 1er avril. Tous ces poux proviennent d’ânes expérimentalement infectés et porteurs certains de virus. Chaque lot de poux passait une nuit à l’étuve, pour récolte des déjections qui devaient servir à une autre expérience. L’âne 111 ne réagissant pas, est éprouvé le 19 avril par inoculation sous-cutanée de 1 cc de sérum virulent. Il fait alors un accès thermique mortel après 10 jours d’incubation apparente (dépliant 3). Du sérum de l’âne 111, récolté avant l’épreuve, est inoculé à l’âne 115, le 2 août 1939. Il ne réagit pas. Utilisé 3 mois et demi plus tard, pour une autre expérience, il se montre réceptif. L’âne 111 ne s’était pas infecté et la transmission par piqûre d’Hematopinus asini n’a pu être mise en évidence. Essais de transmission par les déjections de poux. Le 28 mars 1939, 175 poux prélevés sur l’âne 106, anémique, sont laissés 24 heures à 30°, sur une soie à bluter. Les déjections recueillies dans un tube de Borrel sont portées au dessicateur à chlorure de calcium où elles restent jusqu’au moment de l’emploi. Le 31 mars, les déjections qui pèsent environ 2 mg sont dissoutes dans 10 cc d’un milieu tamponné stérile et le tout est inoculé dans la veine de l’âne 112 qui ne réagira pas. Une saignée est pratiquée, le 20 mai, sur cet âne et 10 cc de sérum obtenus sont inoculés dans la veine de l'âne 116 qui ne réagira pas non plus. L'âne 112 ne s'était donc pas infecté et les déjections de poux récoltés sur des animaux malades se sont montrées avirulentes. L'ANEMIE INFECTIEUSE DES EQUIDES 111. RECHERCHES SUR LE TRAITEMENT ET LA PREVENTION DE LA MALADIE par L. A. MARTIN L'attention des auteurs a été depuis longtemps attirée par le fait que les chevaux apparemment guéris de la maladie restent en règle générale insensibles à des inoculations plus ou moins massives de virus et il venait naturellement
de calcium où elles restent jusqu’au moment de l’emploi. Le 31 mars, les déjections qui pèsent environ 2 mg sont dissoutes dans 10 cc d’un milieu tamponné stérile et le tout est inoculé dans la veine de l’âne 112 qui ne réagira pas. Une saignée est pratiquée, le 20 mai, sur cet âne et 10 cc de sérum obtenus sont inoculés dans la veine de l'âne 116 qui ne réagira pas non plus. L'âne 112 ne s'était donc pas infecté et les déjections de poux récoltés sur des animaux malades se sont montrées avirulentes. L'ANEMIE INFECTIEUSE DES EQUIDES 111. RECHERCHES SUR LE TRAITEMENT ET LA PREVENTION DE LA MALADIE par L. A. MARTIN L'attention des auteurs a été depuis longtemps attirée par le fait que les chevaux apparemment guéris de la maladie restent en règle générale insensibles à des inoculations plus ou moins massives de virus et il venait naturellement à l'idée de se servir du sérum de tels animaux, soit en vue de la sérothérapie, soit en vue de la séroprotection. Toutes les recherches faites, soit avec du sérum de l'animal guéri : Carré et Vallée, Lührs, Kral, soit avec du sérum d'animaux ayant subi de nombreuses inoculations de virus : Kral, Stein, sont restées infructueuses et, en 1935, Carré et Verge pouvaient écrire : « Chauffé dans les conditions qui permettent la destruction du virus, sans nuire aux anticorps possibles, le sérum n'exerce aucune action sur les épisodes fébriles, ne diminue pas l'intensité du processus morbide, n'agit point sur les lésions, ne confère aucune immunité et n'accélère point la guérison. » Malgré ces données peu encourageantes, nous avons tenté quelques essais avec le sérum de convalescent. Nous avons choisi, comme donneurs de sérum, des ânes faisant un accès franc, permettant par une lecture facile de la courbe thermique, le choix du jour de la saignée. ESSAIS DE SÉROTHÉRAPIE Sérum de l'âne 31 Ce sérum a été prélevé le 26 janvier 1938, à la défervescence d'un accès bénin (dépliant 4), qui ne sera suivi d'aucun autre (durée de l'observation : 5 mois). Ce sérum a été formolé à 2,5
virus : Kral, Stein, sont restées infructueuses et, en 1935, Carré et Verge pouvaient écrire : « Chauffé dans les conditions qui permettent la destruction du virus, sans nuire aux anticorps possibles, le sérum n'exerce aucune action sur les épisodes fébriles, ne diminue pas l'intensité du processus morbide, n'agit point sur les lésions, ne confère aucune immunité et n'accélère point la guérison. » Malgré ces données peu encourageantes, nous avons tenté quelques essais avec le sérum de convalescent. Nous avons choisi, comme donneurs de sérum, des ânes faisant un accès franc, permettant par une lecture facile de la courbe thermique, le choix du jour de la saignée. ESSAIS DE SÉROTHÉRAPIE Sérum de l'âne 31 Ce sérum a été prélevé le 26 janvier 1938, à la défervescence d'un accès bénin (dépliant 4), qui ne sera suivi d'aucun autre (durée de l'observation : 5 mois). Ce sérum a été formolé à 2,5 %. Expérience I. Ane 28. Cet âne inoculé le 13 janvier, réagit fortement après 7 jours d'incubation. Le traitement est commencé le septième jour de l'accès par une injection de 60 cc de sérum dans la veine. Des injections identiques sont faites le lendemain et le surlendemain; une chute très nette de la température se produit à ce moment, ainsi qu'on peut le voir sur la courbe ci-jointe (dépliant 4). En même temps, le nombre des hématies remonte nettement. 11 JANV. 20 JANV. 27 JANV. 29 JANV. 3 FÉV. 19 FÉV. 3 MARS H. 5.390.000 4.010.000 3.390.000 7.510.000 4.480.000 5.350.000 3.750.000 I.V. 23 22 18 19 21 21 14 V.C. 1 0,52 1 0,73 1 0,91 1 0,93 1 0,86 1 0,83 1 0,87 Y a-t-il eu action du sérum inoculé ou simple coïncidence? Il est difficile de se prononcer. Le 16 février, soit 16 jours après la fin du premier accès, un deuxième accès se déclenche. Une injection intraveineuse de 30 cc de sérum faite le troisième et une autre le cinquième jour de ce deuxième accès n'apportent qu'une rémission peu marquée et la température remonte à nouveau. L'animal est alors sacrifié. Expérience II. Ane 29. Inoculé le 13
nette de la température se produit à ce moment, ainsi qu'on peut le voir sur la courbe ci-jointe (dépliant 4). En même temps, le nombre des hématies remonte nettement. 11 JANV. 20 JANV. 27 JANV. 29 JANV. 3 FÉV. 19 FÉV. 3 MARS H. 5.390.000 4.010.000 3.390.000 7.510.000 4.480.000 5.350.000 3.750.000 I.V. 23 22 18 19 21 21 14 V.C. 1 0,52 1 0,73 1 0,91 1 0,93 1 0,86 1 0,83 1 0,87 Y a-t-il eu action du sérum inoculé ou simple coïncidence? Il est difficile de se prononcer. Le 16 février, soit 16 jours après la fin du premier accès, un deuxième accès se déclenche. Une injection intraveineuse de 30 cc de sérum faite le troisième et une autre le cinquième jour de ce deuxième accès n'apportent qu'une rémission peu marquée et la température remonte à nouveau. L'animal est alors sacrifié. Expérience II. Ane 29. Inoculé le 13 janvier, cet âne fait un accès modéré après 10 jours d'incubation. Le cinquième jour de l'accès, il reçoit 60 cc de sérum dans la veine. La température tombe brutalement de 39,1 à 36,9, mais l'âne meurt 48 heures plus tard (dépliant 4). Sérum de l'âne 37 Cet âne a été inoculé tous les 15 jours, pendant 8 mois, et 3 saignées ont été pratiquées. La première le 23 mai, à la défervescence du troisième accès et 8 jours après la sixième inoculation virulente. Au cours des 5 mois suivants, aucun autre accès n'a été enregistré. Une seconde saignée a été faite le 1er septembre, 14 jours après la douzième recharge en virus; une troisième saignée a été pratiquée le 14 octobre, 18 jours après la quatorzième recharge virulente (dépliant 4). Seul le premier sérum (formolé à 2 %) a été éprouvé. Expérience I. Le 25 mai 1938, les ânes 45, 46, 49 et 39 sont tous quatre inoculés par voie transcranienne à l'aide d'un broyat de cerveau virulent. Un tel mode d'inoculation permettant d'espérer une incubation apparente d'égale durée ; c'est en effet ce qui se produit puisque les incubations sont de : Anes Anes 49 45 et 46 39