jeanflop/post_ocr_correction2 huggingface dataset:
R. B. L. GWATKIN, J. Reprod. Fert., 35. 1973, p. 173-176. (11) R. B. L. GWATKIN et A. A. HAIDRI, Exp. Cell. Res., 76, 1973, p. 1-7. (12) T. IWAMATSU et R. YANAGIMACHI, J. Reprod. Fert., 45, 1975, p. 83-90. (13) K. NIWA et M. C. CHANG, J. Reprod. Fert., 43, 1975, p. 435-451. (14) N. Usui et R. YANAGIMACHI, 10th Int. Cong. Anat., Tokyo, 1975, p. 442. J. M. Service d'Endocrinologie et de Gynécologie médicale, (Pr Mauvais-Jarvis), Hôpital Necker, 149, rue de Sèvres, 75730 Paris Cedex 15; M. P. : Laboratoire du Dr de Grouchy, Hôpital Necker, 149, rue de Sèvres, 75730 Paris Cedex 15. PHYSIOLOGIE DES INVERTÉBRÉS. — L'information thermopériodique et l'induction de la diapause chez Pieris brassicae L. Note (*) de Bernard Dumortier et Jeannine Brunnarius ('), présentée par M. Constantin Vago. Appliqué durant toute la vie larvaire, un cycle thermopériodique à l'obscurité permanente conduit, chez Pieris brassicae, à un développement continu ou à une diapause, selon la durée respective des séquences alternées chaudes et froides. La courbe de réponse thermopériodique présente une grande similitude avec la courbe photopériodique de cette espèce. When exposed their whole larval life to a 24 h. thermoperiodic cycle in constant darkness, individuals of Pieris brassicae L. give diapausing or non-diapausing pupae according to the length of the cold and warm sequences. The curve of thermoperiodic induction is similar to the photoperiodic curve. Depuis le travail initial de Kôgure en 1933 (1), un nombre considérable de résultats a porté le déterminisme photopériodique de la diapause au rang des données classiques de la physiologie de l'Insecte. Le caractère de généralité présenté par le phénomène, joint à la somme des qualités objectives qu'offre le signal photopériodique sur le plan de l'information, font que l'on a comparativement peu étudié le pouvoir inducteur possible d'autres facteurs physiques montrant naturellement (ou susceptibles de suivre expérimentalement) une variation périodique. Or, rien n'impose de considérer l'information photopériodique qui conditionne le type de développement autrement que comme la manifestation particulière d'un principe plus général. Dans cette hypothèse, aurait valeur d'information le paramètre constitué par la durée respective de deux niveaux
individuals of Pieris brassicae L. give diapausing or non-diapausing pupae according to the length of the cold and warm sequences. The curve of thermoperiodic induction is similar to the photoperiodic curve. Depuis le travail initial de Kôgure en 1933 (1), un nombre considérable de résultats a porté le déterminisme photopériodique de la diapause au rang des données classiques de la physiologie de l'Insecte. Le caractère de généralité présenté par le phénomène, joint à la somme des qualités objectives qu'offre le signal photopériodique sur le plan de l'information, font que l'on a comparativement peu étudié le pouvoir inducteur possible d'autres facteurs physiques montrant naturellement (ou susceptibles de suivre expérimentalement) une variation périodique. Or, rien n'impose de considérer l'information photopériodique qui conditionne le type de développement autrement que comme la manifestation particulière d'un principe plus général. Dans cette hypothèse, aurait valeur d'information le paramètre constitué par la durée respective de deux niveaux de tout phénomène perçu par l'animal et présentant une alternance, de périodicité égale à 24 h. L'étude de la possibilité d'induction thermopériodique de la diapause chez Pieris brassicae a permis une première vérification de la valeur de l'hypothèse. MATERIEL ET MÉTHODES. — Les larves proviennent d'une souche maintenue depuis plusieurs années en développement sans diapause (LD 16 : 8) à une température de 20 ± 1°C. Les enceintes à régulation thermopériodique utilisées permettant la programmation d'un cycle thermique de 24 h avec des niveaux réglables en amplitude et en durée. Les valeurs choisies sont 13 et 21°C; le passage d'un niveau à l'autre se fait en 10 mn. Une même condition thermopériodique a été maintenue durant toute la vie larvaire, depuis l'œuf ou la larve âgée de moins de 24 h, jusqu'à la formation de la chrysalide. L'expérience s'est déroulée en obscurité permanente dans des cages d'un volume de 10 dm3, parfaitement étanches à la lumière, placées à l'intérieur de l'enceinte régulée, elle-même obscure. La distribution de nourriture (Chou fourrager) a été faite journellement en obscurité complète. Ni les fèces ni les déchets de feuilles n'ont été évacués, un renouvellement d'air étant assuré par une pompe d'un débit de 240
années en développement sans diapause (LD 16 : 8) à une température de 20 ± 1°C. Les enceintes à régulation thermopériodique utilisées permettant la programmation d'un cycle thermique de 24 h avec des niveaux réglables en amplitude et en durée. Les valeurs choisies sont 13 et 21°C; le passage d'un niveau à l'autre se fait en 10 mn. Une même condition thermopériodique a été maintenue durant toute la vie larvaire, depuis l'œuf ou la larve âgée de moins de 24 h, jusqu'à la formation de la chrysalide. L'expérience s'est déroulée en obscurité permanente dans des cages d'un volume de 10 dm3, parfaitement étanches à la lumière, placées à l'intérieur de l'enceinte régulée, elle-même obscure. La distribution de nourriture (Chou fourrager) a été faite journellement en obscurité complète. Ni les fèces ni les déchets de feuilles n'ont été évacués, un renouvellement d'air étant assuré par une pompe d'un débit de 240 l/h. RÉSULTATS. — Maintenues constantes, les deux températures, 21° (E), et 13° (02) entraînent un développement sans diapause. L'effet inducteur qui s'observe dès le cycle 0, 0, 2 : 22 atteint un maximum de l'ordre de 100 %, avec les thermopériodes 0, 0, 2 : 18 et 8 : 16, pour décroître ensuite, puis s'annuler, à partir et au-delà de 0, 0, 2 18 : 6. La thermopériode critique (50 % de diapause) correspond à 0, 0, 2 15 : 9. La figure donne comparativement les courbes d'induction thermo et photopériodique. DISCUSSION. — Les possibilités d'une induction de la diapause par la seule variation cyclique de deux niveaux de température se trouve démontrée chez P. brassicae. La courbe de réponse thermopériodique ainsi obtenue est à rapprocher de celles trouvées pour l'Hyménoptère parasite /asonia ritripennis e) et la Pyrale Diatraea grandiosella (4) ainsi que des indications fragmentaires antérieurement publiées W'), (6), (7)]. La comparaison des deux courbes, photo et thermopériodique, révèle une nette parenté : similitude de la forme générale, caractère progressivement inducteur des combinaisons L/D et 8]/82, proximité des valeurs critiques (LD 14 : 10 et 0, 02 15 : 9) et des valeurs Courbe d'induction thermopériodique de la diapause
pour décroître ensuite, puis s'annuler, à partir et au-delà de 0, 0, 2 18 : 6. La thermopériode critique (50 % de diapause) correspond à 0, 0, 2 15 : 9. La figure donne comparativement les courbes d'induction thermo et photopériodique. DISCUSSION. — Les possibilités d'une induction de la diapause par la seule variation cyclique de deux niveaux de température se trouve démontrée chez P. brassicae. La courbe de réponse thermopériodique ainsi obtenue est à rapprocher de celles trouvées pour l'Hyménoptère parasite /asonia ritripennis e) et la Pyrale Diatraea grandiosella (4) ainsi que des indications fragmentaires antérieurement publiées W'), (6), (7)]. La comparaison des deux courbes, photo et thermopériodique, révèle une nette parenté : similitude de la forme générale, caractère progressivement inducteur des combinaisons L/D et 8]/82, proximité des valeurs critiques (LD 14 : 10 et 0, 02 15 : 9) et des valeurs Courbe d'induction thermopériodique de la diapause en obscurité permanente chez P. brassicae (trait plein) et comparaison avec la courbe d'induction photopériodique à température constante (21 ± 1°C) chez cette même espèce (tirets). Abscisse, 1re ligne, photopériode durée, en heures, de L par 24 h; 2e et 3e ligne, thermopériode durées respectives, en heures, de 8l (21°) et de 8l (13°) par 24 h. Ordonnée pourcentage de diapause. Intervalle de confiance des points de la courbe thermopériodique à p = 0,95. d'induction nulle (LD 16 : 8 et 0, 0, 18 : 6). absence d'effet inducteur des situations non périodiques LL. DD et 0,0, 0202. Cet ensemble de points de ressemblance semble donc bien autoriser la conclusion (i) que l'information thermopériodique, du moins dans les conditions de l'expérience, donne naissance à un message physiologique qui, à partir d'un certain niveau d'intégration, est indiscernable pour le système effecteur du message qu'engendre normalement l'information photopériodique : (ii) que la réponse finale (diapause/développement continu) est mimétique de celle provoquée par la photopériode. Or, les phénomènes physiques en cause, chaleur et lumière, étant d'une nature différente, le caractère identique des messages physiologiques qu'ils produisent impose que soit reconnu un paramètre qu'ils ont en commun et qui constitue le support de l'information
et de 8l (13°) par 24 h. Ordonnée pourcentage de diapause. Intervalle de confiance des points de la courbe thermopériodique à p = 0,95. d'induction nulle (LD 16 : 8 et 0, 0, 18 : 6). absence d'effet inducteur des situations non périodiques LL. DD et 0,0, 0202. Cet ensemble de points de ressemblance semble donc bien autoriser la conclusion (i) que l'information thermopériodique, du moins dans les conditions de l'expérience, donne naissance à un message physiologique qui, à partir d'un certain niveau d'intégration, est indiscernable pour le système effecteur du message qu'engendre normalement l'information photopériodique : (ii) que la réponse finale (diapause/développement continu) est mimétique de celle provoquée par la photopériode. Or, les phénomènes physiques en cause, chaleur et lumière, étant d'une nature différente, le caractère identique des messages physiologiques qu'ils produisent impose que soit reconnu un paramètre qu'ils ont en commun et qui constitue le support de l'information périodique. Ce paramètre est la forme de la distribution temporelle, et plus précisément la durée des séquences LD et 01/01, On ne peut pour autant considérer que ces résultats démontrent l'existence, dans les conditions naturelles, d'une information thermopériodique. En effet, s'il est vrai que, dans la nature, une thermopériode est toujours associée à la photopériode et que ces deux oscillations sont synchrones (coïncidence de la partie haute de la courbe thermique avec le jour et de la partie basse avec la nuit), il est vrai aussi que la sinusoïde thermique peut être considérablement altérée par divers facteurs climatiques (pluie, vent, nébulosité); à la limite, le phénomène peut même devenir apériodique. L'oscillation photopériodique, en revanche, ne saurait être masquée par un quelconque « bruit de fond ». Ainsi, en regard de l'extrême « fiabilité » de l'information contenue dans la photopériode, celle que transmet la thermopériode apparaît-elle particulièrement fragile. TABLEAU Comparaison entre les réponses thermopériodiques (en obscurité permanente) et photopériodiques (température constante : 21 ± 1°C) pour des cycles identiques LD ou 182 Cycle Réponse thermopériodique Réponse photopériodique D 0, O2 N nD D (%) N nD D Co) 0 24 191 0 0 0 2 227 4 1 1,8 4
toujours associée à la photopériode et que ces deux oscillations sont synchrones (coïncidence de la partie haute de la courbe thermique avec le jour et de la partie basse avec la nuit), il est vrai aussi que la sinusoïde thermique peut être considérablement altérée par divers facteurs climatiques (pluie, vent, nébulosité); à la limite, le phénomène peut même devenir apériodique. L'oscillation photopériodique, en revanche, ne saurait être masquée par un quelconque « bruit de fond ». Ainsi, en regard de l'extrême « fiabilité » de l'information contenue dans la photopériode, celle que transmet la thermopériode apparaît-elle particulièrement fragile. TABLEAU Comparaison entre les réponses thermopériodiques (en obscurité permanente) et photopériodiques (température constante : 21 ± 1°C) pour des cycles identiques LD ou 182 Cycle Réponse thermopériodique Réponse photopériodique D 0, O2 N nD D (%) N nD D Co) 0 24 191 0 0 0 2 227 4 1 1,8 4 2 22 49 27 40 55,1 69 60 53 76 88,3 95 4 20 94 85 82 90,4 95 86 82 88 95,3 99 6 18 184 183 98 99,5 100 68 68 95 100 100 8 16 103 100 92 97,1 100 52 52 93 100 100 10 14 26 23 70 88,5 97 171 169 97 98,8 100 12 12 180 149 76 82,8 88 65 64 91 98,5 100 14 10 225 160 65 71,1 77 69 38' 43 55,1 67 16 8 330 24 5 7,3 9 71 0 0 0 5 18 6 265 3 2 1,1 5 20 4 232 3 2 1,3 5 62 0 0 0 6 22 2 78 0 0 0 5 24 0 227 4 1 1,8 4 153 0 0 0 3 Colonne de gauche, durée en heures des deux séquences, photo (LD) ou thermopériodiques (0,02). 0,. O2 les deux niveaux de température (respectivement 21 et 13°C); L, D lumière, obscurité; N nombre de chrysalides; nD nombre de chrysalides en diapause; D (%) pourcentage de chrysalides en diapause (le nombre central qui indique le pourcentage observé est placé entre deux valeurs en italiques qui définissent l'intervalle de confiance
26 23 70 88,5 97 171 169 97 98,8 100 12 12 180 149 76 82,8 88 65 64 91 98,5 100 14 10 225 160 65 71,1 77 69 38' 43 55,1 67 16 8 330 24 5 7,3 9 71 0 0 0 5 18 6 265 3 2 1,1 5 20 4 232 3 2 1,3 5 62 0 0 0 6 22 2 78 0 0 0 5 24 0 227 4 1 1,8 4 153 0 0 0 3 Colonne de gauche, durée en heures des deux séquences, photo (LD) ou thermopériodiques (0,02). 0,. O2 les deux niveaux de température (respectivement 21 et 13°C); L, D lumière, obscurité; N nombre de chrysalides; nD nombre de chrysalides en diapause; D (%) pourcentage de chrysalides en diapause (le nombre central qui indique le pourcentage observé est placé entre deux valeurs en italiques qui définissent l'intervalle de confiance à p = 0,95, selon l'abaque de Fisher et Yates). Or, si l'on se réfère à ce que l'on sait de l'induction photopériodique, il apparaît que la réponse de la Piéride repose sur l'information reçue au cours d'un seul stade (8), soit au plus 5 jours pendant lesquels une défaillance survenant dans le système de référence temporelle considéré a pour conséquence de lui oter toute valeur informative. Ainsi, du fait de sa précarité et de la présence conjointe d'un autre type d'information particulièrement sûr, l'information thermopériodique ne paraît être ni suffisante ni nécessaire pour orienter le choix vital par lequel doit se résoudre l'alternative : diapause/développement continu. Sur le plan des données expérimentales, on doit d'ailleurs retenir que les courbes d'induction photopériodique établies pour des dizaines d'espèces, le sont toujours en conditions de température constante, la photopériode est donc, à elle seule, capable de déclencher la réponse correcte de l'Insecte. La thermopériode, pour sa part, paraît agir, soit comme un facteur limitant dont l'effet s'observe dans le cas de maximums trop élevés ou dans celui d'une inversion artificielle de phase (nuit chaude, jour froid) [(4), (5). (9)], soit, accessoirement, comme un facteur de renforcement de la réponse photopériodique. CONCLUSION. —
survenant dans le système de référence temporelle considéré a pour conséquence de lui oter toute valeur informative. Ainsi, du fait de sa précarité et de la présence conjointe d'un autre type d'information particulièrement sûr, l'information thermopériodique ne paraît être ni suffisante ni nécessaire pour orienter le choix vital par lequel doit se résoudre l'alternative : diapause/développement continu. Sur le plan des données expérimentales, on doit d'ailleurs retenir que les courbes d'induction photopériodique établies pour des dizaines d'espèces, le sont toujours en conditions de température constante, la photopériode est donc, à elle seule, capable de déclencher la réponse correcte de l'Insecte. La thermopériode, pour sa part, paraît agir, soit comme un facteur limitant dont l'effet s'observe dans le cas de maximums trop élevés ou dans celui d'une inversion artificielle de phase (nuit chaude, jour froid) [(4), (5). (9)], soit, accessoirement, comme un facteur de renforcement de la réponse photopériodique. CONCLUSION. — Cet ensemble de raisons nous conduit à considérer que : (i) les résultats obtenus vont dans le sens prévu par l'hypothèse énoncée au début; (ii) la capacité de répondre, dans les conditions de l'expérience, à une information thermopériodique, ne témoigne probablement pas de l'existence d'une même capacité effectivement utilisée dans les conditions naturelles, mais d'une sensibilité artificiellement révélée; (iii) celle-ci peut s'interpréter comme un épiphénomène : la sensibilité photopériodique, du fait de la nature des processus physiologiques qui la sous-tendent, entraînerait une sensibilité accessoire, dépourvue de valeur adaptative, à des informations présentant la même distribution séquentielle d'un facteur physique autre que la lumière; (iv) si cette interprétation est exacte, et aux termes de l'hypothèse proposée au début, d'autres phénomènes physiques, si on leur impose une variation périodique adéquate, devraient aussi devenir vecteurs du même type d'information. (*) Séance du 10 janvier 1977. (1) Avec la collaboration technique de Mme Ch. Karady. (2) M. KOGURE, J. Dept. Agr. Kyushu Univ., 4, 1933, p. 1-93. (1) D. S. SAUNDERS, Science, 181, 1973, p. 358-360. (4) G. M. CHIPPENDALE, A. S. REDDY et C. L. CATT, J. Ins. Physiol., 22, 1976, p. 823-828. (5) S. D. BECK, Proc. N. Central Branch, Entom. Soc.
les conditions naturelles, mais d'une sensibilité artificiellement révélée; (iii) celle-ci peut s'interpréter comme un épiphénomène : la sensibilité photopériodique, du fait de la nature des processus physiologiques qui la sous-tendent, entraînerait une sensibilité accessoire, dépourvue de valeur adaptative, à des informations présentant la même distribution séquentielle d'un facteur physique autre que la lumière; (iv) si cette interprétation est exacte, et aux termes de l'hypothèse proposée au début, d'autres phénomènes physiques, si on leur impose une variation périodique adéquate, devraient aussi devenir vecteurs du même type d'information. (*) Séance du 10 janvier 1977. (1) Avec la collaboration technique de Mme Ch. Karady. (2) M. KOGURE, J. Dept. Agr. Kyushu Univ., 4, 1933, p. 1-93. (1) D. S. SAUNDERS, Science, 181, 1973, p. 358-360. (4) G. M. CHIPPENDALE, A. S. REDDY et C. L. CATT, J. Ins. Physiol., 22, 1976, p. 823-828. (5) S. D. BECK, Proc. N. Central Branch, Entom. Soc. Amer., 17, 1962, p. 18-19. (6) M. MENAKER et G. GROSS, J. Ins. Physiol., 11, 1965, p. 911-914. (7) N. I. GORYSHIN et R. N. KOZLOVA, Zhur. Obshch. Biol., 28, 1967, p. 278-288. (8) J. CLARET, Comptes rendus, 274, série D, 1972, p. 1055. (9) N. I. GORYSHIN, Ent. Obozr., 43, 1964, p. 86-93. (10) P. L. ADKISSON, R. A. BELL et S. G. WELLSO, J. Ins. Physiol., 9, 1963, p. 299-310. Station centrale de Zoologie, I. N. R. A. C. N. R. A., route de Saint-Cyr, 78000 Versailles. ENDOCRINOLOGIE COMPARÉE. — Contrôle de la sécrétion mélanotrope hypophysaire chez un Amphibien Anoure par la thyrolibreinine (TRH). Étude in vitro (1). Note (*) de Hubert Vaudry, Marie-Christine Trochard, François Leboulenger et René Vaillant, présentée par M. Robert Courrier. Les lobes intermédiaires d'hypophyses de Grenouille verte, placés en suspension dans un gel et perfusés à 28°C pendant 7 h libèrent d'importantes quantités d'hormone mélanotrope (c-MSH). Cette libération est inhibée par les basses températures. L'addition de faibles doses de TRH synthétique (10 à 10-7 molaire) au milieu de perfusion stimule de façon hautement significative la sécrétion de α-MSH. Le rôle physiologique de la TRH en tant que facteur de libération de l'hormone mélanotrope
43, 1964, p. 86-93. (10) P. L. ADKISSON, R. A. BELL et S. G. WELLSO, J. Ins. Physiol., 9, 1963, p. 299-310. Station centrale de Zoologie, I. N. R. A. C. N. R. A., route de Saint-Cyr, 78000 Versailles. ENDOCRINOLOGIE COMPARÉE. — Contrôle de la sécrétion mélanotrope hypophysaire chez un Amphibien Anoure par la thyrolibreinine (TRH). Étude in vitro (1). Note (*) de Hubert Vaudry, Marie-Christine Trochard, François Leboulenger et René Vaillant, présentée par M. Robert Courrier. Les lobes intermédiaires d'hypophyses de Grenouille verte, placés en suspension dans un gel et perfusés à 28°C pendant 7 h libèrent d'importantes quantités d'hormone mélanotrope (c-MSH). Cette libération est inhibée par les basses températures. L'addition de faibles doses de TRH synthétique (10 à 10-7 molaire) au milieu de perfusion stimule de façon hautement significative la sécrétion de α-MSH. Le rôle physiologique de la TRH en tant que facteur de libération de l'hormone mélanotrope est discuté. Intermediate lobes from Rana esculenta pituitary glands were continuously superfused for 7 hrs at 28°C with amphibian culture medium. (α-MSH release was measured by use of a sensitive double antibody radio-immunoassay system. (α-MSH secretion was inhibited by low temperatures. A large increase in α-MSH release was observed when Thyrotropin Releasing Hormone (TRH) at doses ranging from 10-9 to 10-7 molar was added to the superfusion medium. Since large amounts of TRH are to be found in the hypothalamus of amphibians but have no effect over pituitary TSH secretion, the action of TRH over α-MSH release may have a physiological significance. Il est bien établi que l'hypothalamus exerce une action essentiellement inhibitrice sur la fonction mélanotrope hypophysaire (2). Cependant, les neurosécrétions hypothalamiques responsables de cette inhibition (mélanostatine ou MIF) sont encore mal connues. Ainsi, les propriétés MIF du tripeptide isolé et caractérisé par Celis et coll. (3) et Nair et coll. (4) n'ont pu être confirmées ni in vivo (e)-C) ni in vitro (1). De plus, les études in vitro montrent que les monoamines participent directement à la régulation de la sécrétion mélanotrope : la dopamine inhibe la libération de α-MSH chez le Rat (8) tandis que la sérotonine
Thyrotropin Releasing Hormone (TRH) at doses ranging from 10-9 to 10-7 molar was added to the superfusion medium. Since large amounts of TRH are to be found in the hypothalamus of amphibians but have no effect over pituitary TSH secretion, the action of TRH over α-MSH release may have a physiological significance. Il est bien établi que l'hypothalamus exerce une action essentiellement inhibitrice sur la fonction mélanotrope hypophysaire (2). Cependant, les neurosécrétions hypothalamiques responsables de cette inhibition (mélanostatine ou MIF) sont encore mal connues. Ainsi, les propriétés MIF du tripeptide isolé et caractérisé par Celis et coll. (3) et Nair et coll. (4) n'ont pu être confirmées ni in vivo (e)-C) ni in vitro (1). De plus, les études in vitro montrent que les monoamines participent directement à la régulation de la sécrétion mélanotrope : la dopamine inhibe la libération de α-MSH chez le Rat (8) tandis que la sérotonine stimule la sécrétion mélanotrope du Lézard (1). Il existerait en outre une neurohormone hypothalamique stimulant la fonction mélanotrope (mélanolibérine ou MRF) qui, selon Celis et coll. (9) serait un pentapeptide dérivé de l'ocytocine. La mise au point récente d'une technique de dosage radio-immunologique sensible et très spécifique de la α-MSH (10) rend possible l'estimation du taux de cette hormone sur un grand nombre d'échantillons. Nous avons appliqué cette méthode (11) au dosage de la α-MSH sécrétée par des hypophyses de Grenouille périfusées selon la technique de Lowry (12). Les résultats rapportés ici montrent pour la première fois que la thyrolibérine (TRH) possède une puissante action MRF intrinsèque chez la Grenouille verte. MÉTODES. — Prélèvement des hypophyses. — Les Grenouilles Rana esculenta L. sont maintenues en aquarium à température constante, à l'obscurité continue pendant les 8 jours qui précèdent chaque expérience. Huit lobes neuro-intermédiaires, prélevés sous microscope binoculaire sont placés dans deux béchers en « Teflon » contenant chacun 5 ml d'un milieu de culture pour Amphibien (183 G. Gibco) préalablement saturé par un mélange gazeux 500 CO2-95 O2 (carbogène). Après 15 mn de préincubation à température ambiante, sous un filet de carbogène, le milieu est renouvelé et les hypophyses sont