jeanflop/post_ocr_correction2 huggingface dataset:
à un taux insuffisant qui devient limitant quand la croissance est accélérée par l'augmentation de la concentration en AMP. Le besoin alimentaire en dérivés pyrimidiques peut être couvert par le CMP dans un milieu carencé en UMP et en thymidine, ce qui traduit la possibilité de conversion du CMP en UMP. L'excès de CMP peut donc conduire à un excès d'acide désoxyuridylique, substrat de la thymidylate synthétase, enzyme dont le cofacteur est l'acide 5, 10-méthylénetétrahydrofolate. Nous savons que la carence en acide folique dans un milieu déficient en thymidine se traduit par une morphogenèse appendiculaire abortive [e), (3)]. Dans un milieu contenant de l'acide folique et carencé en thymidine, l'aminoptérine, inhibiteur de la réduction de l'acide folique, exerce la même action morphogénétique (1), par contre le 5-fluorodésoxyuridine inhibiteur de la thymidylate synthétase n'induit pas de morphogenèse appendiculaire abortive (3). TABLEAU Action du rapport nucléotides puriniques/pyrimidiques sur la croissance, la survie et la morphogenèse appendiculaire d'Artemia 20 mg AMP 60 mg AMP Index de croissance larvaire Morphogenèse croissance larvaire Morphogenèse 14e jour (%) appendiculaire 14e jour (%) appendiculaire CMP: 10 mg %. UMP 10 mg UMP 0 CMP 0 UMP 0 CMP 100 mg UMP: 0 La réalisation de la morphogenèse appendiculaire normale nécessite donc l'AMP et l'acide folique. La déficience en AMP et la déficience en acide folique ont des effets que l'on peut qualifier d'opposés sur la morphogenèse appendiculaire. Nos expériences montrent qu'un antagonisme existe entre les effets de l'AMP et du CMP sur la morphogenèse appendiculaire. La morphogenèse normale résulterait d'un équilibre entre les bases puriniques et pyrimidiques. Ces résultats confirment que l'effet morphogénétique de la concentration en AMP est indépendant de la vitesse de croissance (1). La concentration du milieu en AMP gouverne donc, d'une part la vitesse de croissance et d'autre part certains aspects de la morphogenèse comme la longueur relative de l'abdomen (1) et les gonopodes surnuméraires par deux systèmes métaboliques indépendants. Nous poursuivrons nos recherches pour préciser la nature qualitative et quantitative du besoin alimentaire d'Artemia en dérivés pyrimidiques et pour déterminer si la concentration en CMP modifie l'effet morphogénètique de la concentration en
appendiculaire normale nécessite donc l'AMP et l'acide folique. La déficience en AMP et la déficience en acide folique ont des effets que l'on peut qualifier d'opposés sur la morphogenèse appendiculaire. Nos expériences montrent qu'un antagonisme existe entre les effets de l'AMP et du CMP sur la morphogenèse appendiculaire. La morphogenèse normale résulterait d'un équilibre entre les bases puriniques et pyrimidiques. Ces résultats confirment que l'effet morphogénétique de la concentration en AMP est indépendant de la vitesse de croissance (1). La concentration du milieu en AMP gouverne donc, d'une part la vitesse de croissance et d'autre part certains aspects de la morphogenèse comme la longueur relative de l'abdomen (1) et les gonopodes surnuméraires par deux systèmes métaboliques indépendants. Nous poursuivrons nos recherches pour préciser la nature qualitative et quantitative du besoin alimentaire d'Artemia en dérivés pyrimidiques et pour déterminer si la concentration en CMP modifie l'effet morphogénètique de la concentration en AMP en gouvernant le taux de biosynthèse de la thymidine. Séance du 17 janvier 1977. J. S. CLEGG, A. H. WARNER et F. J. FINAMORE, J. Biol. Chem., 242, 1967, p. 1938-1943. A. HERNANDORENA, Crustaceana, 19, 1970, p. 49-58. A. HERNANDORENA, Comptes rendus, 271, série D, 1970, p. 1406. A. HERNANDORENA, Arch. Zool. exp. gen., 113, 1972, p. 425-432. A. HERNANDORENA, Arch. Zool. exp. gen., 113, 1972, p. 489-498. A. HERNANDORENA, Biol. Bull., 146, 1974, p. 238-248. A. HERNANDORENA, Biol. Bull., 148, 1975, p. 416-428. A. HERNANDORENA, Biol. Bull., 151, 1976, p. 314-321. L. PROVASOLI et A. d'AGOSTINO, Biol. Bull., 136, 1969, p. 434-453. A. H. WARNER et D. K. MCCLEAN, Develop. Biol., 18, 1968, p. 278-293. Laboratoire du Muséum national d'Histoire naturelle Centre d'Études et de Recherches scientifiques, 64200 Biarritz. BIOLOGIE CELLULAIRE. — Localisation autoradiographique de la synthèse des ARN in vitro au cours de l'ovogenèse de Parascaris equorum. Note de Joëlle Starck et Jean Brun, présentée par M. Pierre-Paul Grassé. La mise au point d'une technique d'incubation in vitro des gonades de Parascaris equorum en présence d'uridine tritiée, a permis d'étudier, pour la première fois, la synthèse des ARN tout au long de l'ovogenèse de ce nématode. En
HERNANDORENA, Arch. Zool. exp. gen., 113, 1972, p. 425-432. A. HERNANDORENA, Arch. Zool. exp. gen., 113, 1972, p. 489-498. A. HERNANDORENA, Biol. Bull., 146, 1974, p. 238-248. A. HERNANDORENA, Biol. Bull., 148, 1975, p. 416-428. A. HERNANDORENA, Biol. Bull., 151, 1976, p. 314-321. L. PROVASOLI et A. d'AGOSTINO, Biol. Bull., 136, 1969, p. 434-453. A. H. WARNER et D. K. MCCLEAN, Develop. Biol., 18, 1968, p. 278-293. Laboratoire du Muséum national d'Histoire naturelle Centre d'Études et de Recherches scientifiques, 64200 Biarritz. BIOLOGIE CELLULAIRE. — Localisation autoradiographique de la synthèse des ARN in vitro au cours de l'ovogenèse de Parascaris equorum. Note de Joëlle Starck et Jean Brun, présentée par M. Pierre-Paul Grassé. La mise au point d'une technique d'incubation in vitro des gonades de Parascaris equorum en présence d'uridine tritiée, a permis d'étudier, pour la première fois, la synthèse des ARN tout au long de l'ovogenèse de ce nématode. En ce qui concerne les cellules germinales, les ovocytes diakinétiques (oviducte) et en division de maturation (utérus) n'incorporent pas, alors que, dans l'ovaire, les ovogonies et les ovocytes I en accroissement sont nettement marqués. Dans les cellules somatiques de la paroi de la gonade, on détecte toujours une synthèse d'ARN particulièrement active au niveau de l'oviducte et de l'utérus où la paroi est beaucoup plus développée qu'au niveau de l'ovaire. Technical elaboration of in vitro incubation of Parascaris equorum gonads with 3H-Uridine has permitted, for the first time, the study of RNA synthesis during oogenesis along the whole gonadic tube. In germ cells, oocytes in diakinesis (oviduct) and in division of maturation (uterus) show no label. On the contrary, oogonia and growing oocytes in ovary are labelled. RNA synthesis is always detected in all parietal cells but is more active in oviduct and uterus where the gonadic wall is particularly developed. Chez Parascaris equorum, des travaux cytologiques [e), e] ont montré que les jeunes ovocytes de premier ordre renferment un ou plusieurs nucléoles et une quantité importante d'ARN, laissant supposer une synthèse probable de cet acide nucléique lors de l'accroissement ovocytaire comme chez la plupart des espèces. L'étude autoradiographique effectuée par
active au niveau de l'oviducte et de l'utérus où la paroi est beaucoup plus développée qu'au niveau de l'ovaire. Technical elaboration of in vitro incubation of Parascaris equorum gonads with 3H-Uridine has permitted, for the first time, the study of RNA synthesis during oogenesis along the whole gonadic tube. In germ cells, oocytes in diakinesis (oviduct) and in division of maturation (uterus) show no label. On the contrary, oogonia and growing oocytes in ovary are labelled. RNA synthesis is always detected in all parietal cells but is more active in oviduct and uterus where the gonadic wall is particularly developed. Chez Parascaris equorum, des travaux cytologiques [e), e] ont montré que les jeunes ovocytes de premier ordre renferment un ou plusieurs nucléoles et une quantité importante d'ARN, laissant supposer une synthèse probable de cet acide nucléique lors de l'accroissement ovocytaire comme chez la plupart des espèces. L'étude autoradiographique effectuée par Moritz (3) après incubation in vivo semble confirmer cette hypothèse. Mais cette étude est limitée à la phase initiale de l'ovogenèse. Nous nous sommes donc attachés à une analyse autoradiographique plus précise de cette synthèse d'ARN au cours des différents stades ovogénétiques, après incubation in vitro. MATÉRIEL ET MÉTHODES. — Les Ascarides femelles adultes (20 cm de long environ), prélevés aux abattoirs, sont rincés et disséqués dans un milieu nutritif de Eagle (BME-bio Mérieux). Chaque gonade est incubée, à 37°C, dans 2 ml de ce milieu en présence d'uridine 5-H (CFA 25 Ci m M) à raison de 25 (a Ci ml. pendant soit 2, 6 ou 8 h. Après fixation au mélange de Carnoy et double inclusion gélose-paraffine, on applique la technique du « stripping » film, avec l'émulsion pelliculable « Kodak AR 10 », sur des coupes longitudinales de 5 g d'épaisseur. Les autoradiogrammes sont révélés après 45 jours d'exposition et examinés en microscopie photonique. Dans le cas de digestions enzymatiques, les préparations sont traitées, avant émulsionnage, pendant 4 h, par de la ribonucléase (Calbiochem 100 mg/ml) dissoute par une solution de sulfate de magnésium (4.10-2 M) tamponnée à pH 7.5 par un mélange de phosphate de sodium
Les Ascarides femelles adultes (20 cm de long environ), prélevés aux abattoirs, sont rincés et disséqués dans un milieu nutritif de Eagle (BME-bio Mérieux). Chaque gonade est incubée, à 37°C, dans 2 ml de ce milieu en présence d'uridine 5-H (CFA 25 Ci m M) à raison de 25 (a Ci ml. pendant soit 2, 6 ou 8 h. Après fixation au mélange de Carnoy et double inclusion gélose-paraffine, on applique la technique du « stripping » film, avec l'émulsion pelliculable « Kodak AR 10 », sur des coupes longitudinales de 5 g d'épaisseur. Les autoradiogrammes sont révélés après 45 jours d'exposition et examinés en microscopie photonique. Dans le cas de digestions enzymatiques, les préparations sont traitées, avant émulsionnage, pendant 4 h, par de la ribonucléase (Calbiochem 100 mg/ml) dissoute par une solution de sulfate de magnésium (4.10-2 M) tamponnée à pH 7.5 par un mélange de phosphate de sodium et de potassium. RÉSULTATS. — L'appareil génital femelle de Parascaris equorum est formé de deux tubes génitaux de diamètre croissant et le long desquels la différenciation des cellules germinales se déroule de façon linéaire. Chaque tube gonadique est formé successivement : 1° D'un ovaire renfermant, à partir de l'extrémité aveugle, tout d'abord des gonies (10 premiers centimètres) puis, sur 1 m de long, des ovocytes en accroissement, de forme triangulaire, disposés en « parts de tarte » autour du rachis central (formation cytoplasmique anucléée spécifique des Nématodes). 2° D'un oviducte très court renfermant des ovocytes, arrondis, au stade diakinétique. 3° Enfin d'un utérus (long d'environ 10 cm) où, après la fécondation, les ovocytes subissent les deux divisions de maturation en s'entourant de plusieurs coques. Dans les deux dernières régions de la gonade, la paroi est très développée et dentelée. Localisation générale du marquage dans les cellules germinales. — Aucun marquage des ovocytes diakinétiques ou en division de maturation n'a été obtenu. Par contre l'ovaire montre une incorporation aussi bien dans les ovogonies que dans les ovocytes en accroissement (fig. 1, 2, 4 et 5). Cependant ces différents stades ne présentent pas la même intensité de marquage. Quelque soit la durée
tout d'abord des gonies (10 premiers centimètres) puis, sur 1 m de long, des ovocytes en accroissement, de forme triangulaire, disposés en « parts de tarte » autour du rachis central (formation cytoplasmique anucléée spécifique des Nématodes). 2° D'un oviducte très court renfermant des ovocytes, arrondis, au stade diakinétique. 3° Enfin d'un utérus (long d'environ 10 cm) où, après la fécondation, les ovocytes subissent les deux divisions de maturation en s'entourant de plusieurs coques. Dans les deux dernières régions de la gonade, la paroi est très développée et dentelée. Localisation générale du marquage dans les cellules germinales. — Aucun marquage des ovocytes diakinétiques ou en division de maturation n'a été obtenu. Par contre l'ovaire montre une incorporation aussi bien dans les ovogonies que dans les ovocytes en accroissement (fig. 1, 2, 4 et 5). Cependant ces différents stades ne présentent pas la même intensité de marquage. Quelque soit la durée de l'incubation, celle-ci est maximale au début de la phase d'accroissement (début de la disposition rayonnée des ovocytes) et plus faible à la fin de cette région. Marquage des cellules pariétales. — Ces dernières présentent une incorporation aussi bien au niveau de l'ovaire que de l'oviducte et de l'utérus (fig. 4, 5 et 7). Influence de la durée d'incubation. — Dans les cellules germinales de l'ovaire. — L'augmentation de la durée d'incubation se traduit par une intensification du marquage et son évolution intracellulaire. Aussi bien dans les ovogonies que dans les ovocytes en accroissement, les (ou le) nucléoles apparaissent plus intensément marqués que le nucléoplasme après une incubation de courte durée (fig. 1). Si l'incubation se prolonge, la distinction entre les marquages nucléolaire et nucléaire devient de moins en moins possible (fig. 2). Quant au marquage cytoplasmique, insignifiant lors d'une courte durée d'incubation, il s'intensifie progressivement lorsque l'on augmente le temps de contact avec le précurseur (fig. 4 et 5). Dans les cellules de la paroi. — Des constatations analogues à celles effectuées au niveau des cellules germinales peuvent être faites, c'est-à-dire : intensification du marquage en fonction de la durée d'incubation et marquage du noyau avant le cytoplasme. Cette
4, 5 et 7). Influence de la durée d'incubation. — Dans les cellules germinales de l'ovaire. — L'augmentation de la durée d'incubation se traduit par une intensification du marquage et son évolution intracellulaire. Aussi bien dans les ovogonies que dans les ovocytes en accroissement, les (ou le) nucléoles apparaissent plus intensément marqués que le nucléoplasme après une incubation de courte durée (fig. 1). Si l'incubation se prolonge, la distinction entre les marquages nucléolaire et nucléaire devient de moins en moins possible (fig. 2). Quant au marquage cytoplasmique, insignifiant lors d'une courte durée d'incubation, il s'intensifie progressivement lorsque l'on augmente le temps de contact avec le précurseur (fig. 4 et 5). Dans les cellules de la paroi. — Des constatations analogues à celles effectuées au niveau des cellules germinales peuvent être faites, c'est-à-dire : intensification du marquage en fonction de la durée d'incubation et marquage du noyau avant le cytoplasme. Cette évolution intracellulaire est nettement visible au niveau de l'ovaire où le cytoplasme pariétal n'apparaît marqué que très tardivement (fig. 4 et 5) contrairement à l'oviducte et à l'utérus où cette évolution semble beaucoup plus rapide puisque le cytoplasme y est marqué dès 2 h d'incubation. Digestions enzymatiques. — Dans les cellules germinales de l'ovaire (ovogonies et ovocytes) aussi bien que dans l'ensemble des cellules pariétales, noyau et cytoplasme n'incorporent plus après action préalable de la RNase (fig. 3 et 6). DISCUSSION ET CONCLUSION. — La disparition du marquage, après action de la RNase, laissant admettre une bonne spécificité, l'incorporation, in vitro, d'uridine tritiée dans la gonade féminelle de Parascaris equorum démontre une synthèse d'ARN dans les ovogonies, les ovocytes en accroissement et les cellules de la paroi. Le marquage initial du noyau, puis l'évolution vers le cytoplasme, correspond au modèle classique de synthèse unidirectionnelle de l'ARN (4). Ces résultats obtenus in vitro sont en tous points comparables à ceux obtenus in vivo, d’une part par nous-même et d’autre part, en ce qui concerne les cellules germinales jusqu’à la fin de l’accroissement cytoplasmique, par Moritz. Les variations de l’intensité du marquage au niveau de l’ovaire sont parallèles à celles de la
cellules germinales de l'ovaire (ovogonies et ovocytes) aussi bien que dans l'ensemble des cellules pariétales, noyau et cytoplasme n'incorporent plus après action préalable de la RNase (fig. 3 et 6). DISCUSSION ET CONCLUSION. — La disparition du marquage, après action de la RNase, laissant admettre une bonne spécificité, l'incorporation, in vitro, d'uridine tritiée dans la gonade féminelle de Parascaris equorum démontre une synthèse d'ARN dans les ovogonies, les ovocytes en accroissement et les cellules de la paroi. Le marquage initial du noyau, puis l'évolution vers le cytoplasme, correspond au modèle classique de synthèse unidirectionnelle de l'ARN (4). Ces résultats obtenus in vitro sont en tous points comparables à ceux obtenus in vivo, d’une part par nous-même et d’autre part, en ce qui concerne les cellules germinales jusqu’à la fin de l’accroissement cytoplasmique, par Moritz. Les variations de l’intensité du marquage au niveau de l’ovaire sont parallèles à celles de la pyroninophilie observées lors d’études cytologiques à l’Unna. Par contre, l’absence de marquage dans les ovocytes en division de maturation, après la fécondation, paraît incompatible avec l’augmentation de la basophilie cytoplasmique observée après la pénétration du spermatozoïde qui synthétiserait alors de l’ARN. L’explication principale de cette absence d’incorporation semble être l’imperméabilité de la coque formée autour de l’ovocyte après la fécondation. En effet, Kaulenas et Fairbairn ont obtenu un marquage, in vitro, d’ovocytes fécondés après dissolution chimique préalable des coques. Cependant cette explication ne peut s’appliquer au cas des ovocytes diakinétiques qui ne sont pas encore entourés de coques : il n’y aurait donc pas de synthèse à leur niveau ou cette synthèse serait trop faible pour être détectée ici. A ce sujet, on peut noter que d’une façon très générale, la deuxième hypothèse concernant une baisse très importante et non un arrêt de la synthèse d’ARN après la phase d’accroissement semble être de plus en plus admise. En ce qui concerne les cellules pariétales, l’évolution du marquage du noyau vers le cytoplasme, est plus lente au niveau de l’ovaire qu’au niveau de l’oviducte et de l’utérus dont la paroi est beaucoup plus développée. Cette importante activité synthétique au niveau des
de la coque formée autour de l’ovocyte après la fécondation. En effet, Kaulenas et Fairbairn ont obtenu un marquage, in vitro, d’ovocytes fécondés après dissolution chimique préalable des coques. Cependant cette explication ne peut s’appliquer au cas des ovocytes diakinétiques qui ne sont pas encore entourés de coques : il n’y aurait donc pas de synthèse à leur niveau ou cette synthèse serait trop faible pour être détectée ici. A ce sujet, on peut noter que d’une façon très générale, la deuxième hypothèse concernant une baisse très importante et non un arrêt de la synthèse d’ARN après la phase d’accroissement semble être de plus en plus admise. En ce qui concerne les cellules pariétales, l’évolution du marquage du noyau vers le cytoplasme, est plus lente au niveau de l’ovaire qu’au niveau de l’oviducte et de l’utérus dont la paroi est beaucoup plus développée. Cette importante activité synthétique au niveau des parois oviductaire et utérine, qui se traduit d’ailleurs par une forte pyroninophilie, peut être mise en relation avec la polyploïdie des cellules pariétales à ce niveau et le fait que ces dernières secrètent la coque protéïque la plus externe des œufs. En définitive, notre système in vitro permet un marquage normal après une incubation beaucoup plus courte (2 h) qu’in vivo (36 h), technique qui nécessite par ailleurs l’injection du précurseur dans la cavité générale des Nématodes maintenus en survie dans du milieu de Eagle. Ce mode d’injection in vivo présente en outre l’inconvénient d’être la source d’une forte variabilité entre individus. Nous avons en effet observé un fort rejet de la radioactivité dans le milieu extérieur, par ces Nématodes très turgescents. La croissance in vitro des Nématodes est sensible à l'illumination à 365 nm. Note de Gilles Thomas et Alain Favre, présentée par M. Raymond Latarjet. Thirteen different mutants of E. coli K12 selected for a reduced near ultra-violet induced growth delay have been isolated. The t-RNAs extracted from these clones have all a depressed content of A-thiouridine. One of these mutants, called Nop, has an almost negligible growth delay and completely lacks 4-thiouridine in its t-RNAs. Thus we
normal après une incubation beaucoup plus courte (2 h) qu’in vivo (36 h), technique qui nécessite par ailleurs l’injection du précurseur dans la cavité générale des Nématodes maintenus en survie dans du milieu de Eagle. Ce mode d’injection in vivo présente en outre l’inconvénient d’être la source d’une forte variabilité entre individus. Nous avons en effet observé un fort rejet de la radioactivité dans le milieu extérieur, par ces Nématodes très turgescents. La croissance in vitro des Nématodes est sensible à l'illumination à 365 nm. Note de Gilles Thomas et Alain Favre, présentée par M. Raymond Latarjet. Thirteen different mutants of E. coli K12 selected for a reduced near ultra-violet induced growth delay have been isolated. The t-RNAs extracted from these clones have all a depressed content of A-thiouridine. One of these mutants, called Nop, has an almost negligible growth delay and completely lacks 4-thiouridine in its t-RNAs. Thus we provide genetic proofs that A-thiouridine is the chromophore for growth delay. La 4-thiouridine, ou est un nucléoside naturellement peu abondant que l’on trouve dans les t-RNAs de transfert et en particulier dans les t-RNAs de la bactérie E. coli. Dans les souches sauvages de cette bactérie, 70 % des t-RNAs contiennent ce nucléoside. Lorsqu’il est présent il occupe une position unique dans la séquence des t-RNAs : la huitième à partir de l’extrémité 5'. Ses propriétés spectroscopiques sont exceptionnelles car il est le seul constituant des acides nucléiques qui absorbe fortement dans le proche ultraviolet (300-380 nm). Si l’on irradie à ces longueurs d’onde un t-RNA, contenant une 4-thiouridine en position 8 et une cytidine en position 13 on établit au sein de cette macromolécule un lien covalent entre ces nucléosides. In vitro les t-RNAs, ainsi « pontés » restent fonctionnels à toutes les étapes de la biosynthèse des protéines. Cependant l’acylation de certaines espèces d’ARN, en particulier l’ARNri, est considérablement affectée. Les mêmes processus photochimiques et biochimiques ont lieu in vivo. Très vraisemblablement ils sont responsables du blocage temporaire de la croissance des bactéries E. coli illuminées à 365 nm. L’illumination de la souche E. coli B/r entraîne un