jeanflop/post_ocr_correction2 huggingface dataset:
par trypsination, mises dans du milieu nutritif RPMI 1640 (Gibco) enrichi avec 10 % de sérum de Veau nouveau-né (Gibco) et réparties dans des flacons de culture « Falcon ». Les cultures ont été incubées à 37°C, dans une atmosphère d'air à 5 % CO2, Les subcultures ont été effectuées par trypsination. Aucun antibiotique n'a été utilisé. Morphologie. — Les cultures ont été observées à l'état vivant en microscopie à contraste de phase (Wild M 40). Après fixation, les colorations usuelles utilisées en histologie ont été réalisées à la fois sur les coupes histologiques et sur les cellules en culture sur lamelles. Hétérogreffe. — Pour les essais de greffe sur les Souris nude, les cellules ont été trypsinées puis inoculées par voie sous-cutanée sur les 2 flancs à raison de 2. 101 cellules par animal. Tous les animaux ont été observés pendant une période d'au moins trois mois après l'inoculation. Récepteurs hormonaux. — Le dosage des récepteurs d'oestrogènes et de progestérone a été effectué par les Dr F. Guérinot et C. Bohuon (Villejuif) suivant la méthode décrite par J. P. Raynaud et coll. RÉSULTATS. — Les lignées ont été définies comme établies après avoir montré une stabilisation du rythme de croissance et après avoir atteint au moins 50 passages. CARACTÉRISATION DES LIGNÉES ÉTABLIES. — Lignée SA 52. — Cette lignée a été isolée à partir d'une métastase (fig. 5) d'un carcinome du sein opéré 2 ans auparavant. Au cours de la 1re année in vitro, la croissance a été lente et les cultures ont été repiquées (1/2) 1 fois par mois. Progressivement, au cours de la 2e année, les intervalles entre les passages ont été diminués à 1 semaine. Après 3 ans de culture continue et 80 passages, les flacons ont été repiqués (1/3) 1 fois par semaine. EXPLICATION DES PLANCHES Planche / (lignée SA 52) Fig. 1 et 2. — Formation en « dôme » observée à l'état vivant. La mise au point est d'abord faite au niveau du tapis cellulaire de fond (fig. 1) puis au niveau de la cellule formant le sommet du dôme (fig. 2), hauteur
croissance et après avoir atteint au moins 50 passages. CARACTÉRISATION DES LIGNÉES ÉTABLIES. — Lignée SA 52. — Cette lignée a été isolée à partir d'une métastase (fig. 5) d'un carcinome du sein opéré 2 ans auparavant. Au cours de la 1re année in vitro, la croissance a été lente et les cultures ont été repiquées (1/2) 1 fois par mois. Progressivement, au cours de la 2e année, les intervalles entre les passages ont été diminués à 1 semaine. Après 3 ans de culture continue et 80 passages, les flacons ont été repiqués (1/3) 1 fois par semaine. EXPLICATION DES PLANCHES Planche / (lignée SA 52) Fig. 1 et 2. — Formation en « dôme » observée à l'état vivant. La mise au point est d'abord faite au niveau du tapis cellulaire de fond (fig. 1) puis au niveau de la cellule formant le sommet du dôme (fig. 2), hauteur du dome 60 μm (contraste de phase, G x 350). Fig. 3. — Cellules en culture sur une lamelle après coloration par le mélange de May-Grunwald-Giemsa (G x 130). Fig. 4. — En microscopie électronique, aspect typique d'une jonction entre 2 cellules voisines (G x 17 000). Fig. 5. — Coupe histologique de la tumeur humaine (carcinome du sein) ayant donné issue à la lignée SA 52 (HPS, G x 32). Fig. 6. — Coupe histologique d'un nodule sous-cutané en pleine phase de rejet, 15 jours après inoculation de 107 cellules SA 52. Le nodule est formé d'une gaine fibreuse périphérique limitant un centre entièrement nécrotique (HPS, G x 17). Planche II (lignée SA 72) Fig. 7. — Coupe histologique de la tumeur humaine (mélanome) à l'origine de la lignée SA 72. (Schmorl, G x 310). Fig. 8. — Cellules SA 72 en culture. Nombreux granules de mélanine dans la cellule au centre de la figure. (Fontana G x 400). Fig. 9. — Coupe d'une tumeur chez une Souris nude obtenue 50 jours après inoculation de 107 cellules SA 72 (HPS, G x 9). Fig. 10. — Même tumeur que celle de la figure précédente. Comme en culture la mélanine
Coupe histologique de la tumeur humaine (carcinome du sein) ayant donné issue à la lignée SA 52 (HPS, G x 32). Fig. 6. — Coupe histologique d'un nodule sous-cutané en pleine phase de rejet, 15 jours après inoculation de 107 cellules SA 52. Le nodule est formé d'une gaine fibreuse périphérique limitant un centre entièrement nécrotique (HPS, G x 17). Planche II (lignée SA 72) Fig. 7. — Coupe histologique de la tumeur humaine (mélanome) à l'origine de la lignée SA 72. (Schmorl, G x 310). Fig. 8. — Cellules SA 72 en culture. Nombreux granules de mélanine dans la cellule au centre de la figure. (Fontana G x 400). Fig. 9. — Coupe d'une tumeur chez une Souris nude obtenue 50 jours après inoculation de 107 cellules SA 72 (HPS, G x 9). Fig. 10. — Même tumeur que celle de la figure précédente. Comme en culture la mélanine n'est présente que dans un petit nombre de cellules (Fontana, G x 400). Planche III (lignée SA 87) Fig. 11. — Coupe histologique de la tumeur humaine (carcinome de l'estomac) à l'origine de la lignée SA 87 (PAS, G x 80). Fig. 12. — Culture de cellules épithéliales montrant des membranes ondulantes très actives (contraste de phase, G x 350). Fig. 13. — Tumeur obtenue chez une Souris nude inoculée 21 jours auparavant avec la lignée SA 87. Fig. 14. — La tumeur montrée à la figure 13 est accompagnée d'un envahissement abdominal formé de gros nodules irréguliers (G x 8). Fig. 15. — Noter les masses lobulaires avec une nécrose centrale et un abondant matériel PAS positif. (PAS, G x 100). En microscopie électronique nous avons observé de nombreux desmosomes apparaissant isolés ou associés dans un complexe de jonction au niveau de la limite cellulaire en regard avec le milieu de culture (fig. 4). Le caryogramme établi au 27e passage a montré 2 modes principaux à 80 et 88 chromosomes. La méthode du charbon-dextran a montré que les cellules SA 52 possédaient 30 femtomoles de récepteurs d'œstradiol et 14 femtomoles de récepteurs de progestérone par milligramme de protéine cytoplasmique.
membranes ondulantes très actives (contraste de phase, G x 350). Fig. 13. — Tumeur obtenue chez une Souris nude inoculée 21 jours auparavant avec la lignée SA 87. Fig. 14. — La tumeur montrée à la figure 13 est accompagnée d'un envahissement abdominal formé de gros nodules irréguliers (G x 8). Fig. 15. — Noter les masses lobulaires avec une nécrose centrale et un abondant matériel PAS positif. (PAS, G x 100). En microscopie électronique nous avons observé de nombreux desmosomes apparaissant isolés ou associés dans un complexe de jonction au niveau de la limite cellulaire en regard avec le milieu de culture (fig. 4). Le caryogramme établi au 27e passage a montré 2 modes principaux à 80 et 88 chromosomes. La méthode du charbon-dextran a montré que les cellules SA 52 possédaient 30 femtomoles de récepteurs d'œstradiol et 14 femtomoles de récepteurs de progestérone par milligramme de protéine cytoplasmique. Les cellules SA 52 inoculées par voie sous-cutanée chez 10 souris nude n'ont pas provoqué de tumeur. Les greffes ont été toutes rejetées entre la 2e et 3e semaine après l'inoculation (fig. 6). Lignée SA 72. — Cette lignée a été isolée à partir d'une métastase intracérébrale (fig. 7), survenant 5 ans après l'ablation d'un mélanome du cuir chevelu. Dans la primoculture, les cellules ont adhéré rapidement mais la croissance a été lente. Les flacons ont été régulièrement repiqués (1/2) 2 fois par mois au cours de 2 années consécutives de culture. La pigmentation a été détectée au microscope dans un petit nombre de cellules (fig. 8) et après centrifugation les culots cellulaires ont montré une couleur brune. Le caryogramme établi au 12e passage a montré un nombre variable de chromosomes s'étalant de 64 à 78 sans mode distinct. Après inoculation chez 4 souris nude, la lignée SA 72 a donné chaque fois naissance à des tumeurs se développant en masses irrégulières atteignant 1 x 1 cm en 50 jours (fig. 9). Les caractères cytologiques de ces tumeurs ont été similaires à ceux de la tumeur originale en particulier en ce qui concerne la présence de mélanine (fig. 10). Lignée
5 ans après l'ablation d'un mélanome du cuir chevelu. Dans la primoculture, les cellules ont adhéré rapidement mais la croissance a été lente. Les flacons ont été régulièrement repiqués (1/2) 2 fois par mois au cours de 2 années consécutives de culture. La pigmentation a été détectée au microscope dans un petit nombre de cellules (fig. 8) et après centrifugation les culots cellulaires ont montré une couleur brune. Le caryogramme établi au 12e passage a montré un nombre variable de chromosomes s'étalant de 64 à 78 sans mode distinct. Après inoculation chez 4 souris nude, la lignée SA 72 a donné chaque fois naissance à des tumeurs se développant en masses irrégulières atteignant 1 x 1 cm en 50 jours (fig. 9). Les caractères cytologiques de ces tumeurs ont été similaires à ceux de la tumeur originale en particulier en ce qui concerne la présence de mélanine (fig. 10). Lignée SA 87. — Cette lignée a été établie à partir d'une métastase intracérébrale révélatrice (fig. 11), dont la tumeur primaire au niveau de l'estomac n'a été découverte qu'à l'autopsie du patient. Dans la primoculture les cellules se sont multipliées rapidement et cette croissance vigoureuse a été conservée au cours des passages. En microscopie à contraste de phase, les cellules ont montré de larges vacuoles intracytoplasmiques et des membranes ondulées très actives (fig. 12). Des vacuoles de substance mucoïde ont été mises en évidence après coloration avec le bleu Alcian à pH 2,5 ou au PAS. Le caryogramme établi au 12e passage a montré un mode majeur de 56 chromosomes. Les cellules SA 87 greffées chez 4 souris nude ont provoqué chaque fois des tumeurs qui atteignent 2 x 1 cm trois semaines après l'inoculation (fig. 13). Une de ces tumeurs envahissant les muscles de l'abdomen se développa en volumineuses masses infiltrant les organes abdominaux (fig. 14). L'histologie a montré que ces tumeurs sont composées de cellules épithéliales qui forment des masses lobulaires avec une nécrose centrale et séparées par des septa conjonctifs de l'hôte. Comme la tumeur originale (fig. 11), les greffes chez la Souris ont montré un abondant matériel
passages. En microscopie à contraste de phase, les cellules ont montré de larges vacuoles intracytoplasmiques et des membranes ondulées très actives (fig. 12). Des vacuoles de substance mucoïde ont été mises en évidence après coloration avec le bleu Alcian à pH 2,5 ou au PAS. Le caryogramme établi au 12e passage a montré un mode majeur de 56 chromosomes. Les cellules SA 87 greffées chez 4 souris nude ont provoqué chaque fois des tumeurs qui atteignent 2 x 1 cm trois semaines après l'inoculation (fig. 13). Une de ces tumeurs envahissant les muscles de l'abdomen se développa en volumineuses masses infiltrant les organes abdominaux (fig. 14). L'histologie a montré que ces tumeurs sont composées de cellules épithéliales qui forment des masses lobulaires avec une nécrose centrale et séparées par des septa conjonctifs de l'hôte. Comme la tumeur originale (fig. 11), les greffes chez la Souris ont montré un abondant matériel intra et extra-cellulaire alcianophile et PAS positif (fig. 15). DISCUSSION. — De nombreux cas de contamination cellulaire, en particulier avec la lignée HeLa, ont été récemment reportés dans la littérature (3). Ainsi, au cours de l'établissement de nouvelles lignées cellulaires humaines, une attention particulière doit donc être portée sur le risque de contamination. Les 3 lignées que nous décrivons dans ce travail nous semblent originales et non contaminées pour les raisons suivantes : 1° elles ont été établies dans un laboratoire neuf où aucune autre lignée établie humaine ou animale n'a été manipulée; 2° chacune de nos trois lignées possède au moins 1 marqueur spécifique de leur tumeur originale : formation de domes (4), desmosomes et récepteurs hormonaux pour la lignée SA 52, mélanine pour la lignée SA 72 et enfin mucus pour la lignée SA 87. Les Dr J. C. Salomon, A. Courdi et E. Malaise (Villejuif) nous ont accordés des essais de greffes sur leurs Souris nude. Séance du 10 janvier 1977. (1) J. FOGH et G. TREMPE, Plenum Press, New York, 1975, p. 115. (1) J. P. RAYNAUD, M. M. BOUTON, D. PHILIBERT, J. C. DELARUE, F. GUÉRINOT et C. BOHUON, I.N.S.E.R.M., Monographie n° 5, 1975, p.
risque de contamination. Les 3 lignées que nous décrivons dans ce travail nous semblent originales et non contaminées pour les raisons suivantes : 1° elles ont été établies dans un laboratoire neuf où aucune autre lignée établie humaine ou animale n'a été manipulée; 2° chacune de nos trois lignées possède au moins 1 marqueur spécifique de leur tumeur originale : formation de domes (4), desmosomes et récepteurs hormonaux pour la lignée SA 52, mélanine pour la lignée SA 72 et enfin mucus pour la lignée SA 87. Les Dr J. C. Salomon, A. Courdi et E. Malaise (Villejuif) nous ont accordés des essais de greffes sur leurs Souris nude. Séance du 10 janvier 1977. (1) J. FOGH et G. TREMPE, Plenum Press, New York, 1975, p. 115. (1) J. P. RAYNAUD, M. M. BOUTON, D. PHILIBERT, J. C. DELARUE, F. GUÉRINOT et C. BOHUON, I.N.S.E.R.M., Monographie n° 5, 1975, p. 71. (3) W. A. NELSON-REES, R. R. FLANDERMAYER, P. K. HAWTHORNE, Science, 184, 1974, p. 1093. (1) H. D. SOULE, J. VASQUEZ, A. LONG, S. ALBERT et M. BRENNAN, J. Nat. Cancer Inst., 51, 1973, p. 1409. Laboratoire d'Anatomie-Pathologique, Centre hospitalier Sainte-Anne, 1, rue Cabanis, 75674 Paris Cedex 14. CANCÉROLOGIE EXPÉRIMENTALE. — Sécrétion exocrine du carcinome du pancréas induit par effet immunologique : persistance de la spécificité de la cellule pancréatique carcinomateuse ascitique. Note de J. André Thomas, Membre de l'Académie. Les carcinomes du pancréas électivement induits par effet immunologique maintiennent leur spécificité sécrétoire exocrine aux diverses étapes de leur évolution: pendant la phase de transformation de l'adénome en carcinome; dans le carcinome évolué; dans ses métastases; dans les cellules carcinomateuses ascitiques néoformées. Ils sont désignés carcinomes immuno-induits. Dans les cellules carcinomateuses d'ascites, mortelles dans tous les cas, l'élaboration des grains de sécrétion cesse à la longue, au cours des passages de greffe intrapéritonéale; mais dans les carcinomes solides qu'elles reconstituent par greffe sous-cutanée, la sécrétion figurée, qui contient du trypsinogène et du chymotrypsinogène, réapparaît, même après le 92e passage, au 757e jour. De plus, les immunsérums activent la croissance ainsi que l'affinité pour le pancréas et le tissu adipeux
EXPÉRIMENTALE. — Sécrétion exocrine du carcinome du pancréas induit par effet immunologique : persistance de la spécificité de la cellule pancréatique carcinomateuse ascitique. Note de J. André Thomas, Membre de l'Académie. Les carcinomes du pancréas électivement induits par effet immunologique maintiennent leur spécificité sécrétoire exocrine aux diverses étapes de leur évolution: pendant la phase de transformation de l'adénome en carcinome; dans le carcinome évolué; dans ses métastases; dans les cellules carcinomateuses ascitiques néoformées. Ils sont désignés carcinomes immuno-induits. Dans les cellules carcinomateuses d'ascites, mortelles dans tous les cas, l'élaboration des grains de sécrétion cesse à la longue, au cours des passages de greffe intrapéritonéale; mais dans les carcinomes solides qu'elles reconstituent par greffe sous-cutanée, la sécrétion figurée, qui contient du trypsinogène et du chymotrypsinogène, réapparaît, même après le 92e passage, au 757e jour. De plus, les immunsérums activent la croissance ainsi que l'affinité pour le pancréas et le tissu adipeux des souches d'ascites carcinomateuses qu'ils ont eux-mêmes induites, provoquant parfois l'apparition de cancers nodulaires du foie. Pancreatic carcinomas electively induced by immunological mechanism keep their exocrine secretory specificity along the various stages of their evolution: during the transformation phase from adenoma to carcinoma; in the evolved carcinoma; in its metastasis; in the ascitic carcinomatous cells formed. They are called: immuno-induced carcinomas. The carcinomatous cells of the constantly deadly ascites cease their production of secretion granules after passages by intraperitoneal graft: but this secretion reappears in the solid carcinomas they induce by subcutaneous graft and contains trypsinogen and chymotrypsinogen, even after the 92nd passage, at the 757th day. Besides, the antisera enhance the growth and the affinity for pancreas and adipose tissue of the carcinomatous ascitic strains they induced. They, sometimes, produce nodular hepatic carcinomas. L'injection intrapéritonéale quotidienne, longtemps renouvelée, d'anticorps hétérologues antilipoprotéines estérasiques, provenant de la fraction lipoprotéine-lipase, provoque la formation de carcinomes du pancréas exocrine chez la Souris CD1 ou Swiss, femelle ou mâle. Ces carcinomes sont induits de façon élective, à haute incidence, jusqu'à 100 % selon les antigènes servant à l'obtention des immunsérums. De tels carcinomes sont envahissants et métastatiques; ils sont générateurs d'ascites carcinomateuses pancréatiques greffables
in the ascitic carcinomatous cells formed. They are called: immuno-induced carcinomas. The carcinomatous cells of the constantly deadly ascites cease their production of secretion granules after passages by intraperitoneal graft: but this secretion reappears in the solid carcinomas they induce by subcutaneous graft and contains trypsinogen and chymotrypsinogen, even after the 92nd passage, at the 757th day. Besides, the antisera enhance the growth and the affinity for pancreas and adipose tissue of the carcinomatous ascitic strains they induced. They, sometimes, produce nodular hepatic carcinomas. L'injection intrapéritonéale quotidienne, longtemps renouvelée, d'anticorps hétérologues antilipoprotéines estérasiques, provenant de la fraction lipoprotéine-lipase, provoque la formation de carcinomes du pancréas exocrine chez la Souris CD1 ou Swiss, femelle ou mâle. Ces carcinomes sont induits de façon élective, à haute incidence, jusqu'à 100 % selon les antigènes servant à l'obtention des immunsérums. De tels carcinomes sont envahissants et métastatiques; ils sont générateurs d'ascites carcinomateuses pancréatiques greffables en série et toujours mortelles [e), (Z)]. Nous les désignerons : carcinomes immuno-induits. Le matériel ainsi constitué permet de poser trois questions susceptibles de recevoir chacune une réponse expérimentale : I. L'élaboration des grains de sécrétion pancréatique exocrine peut-elle persister au cours de cette carcinogènesse immuno-induite ? II. La cellule pancréatique exocrine, carcinomateuse et ascitique, donc devenue libre dans la cavité péritonéale, maintient-elle sa spécificité ? III. La cellule pancréatique exocrine, carcinomateuse et ascitique, peut-elle reconstituer, après de nombreux passages de greffe intrapéritonéale, pendant plus de 2 années, un carcinome solide faisant preuve de spécificité ? MATÉRIEL ET TECHNIQUES (1). — Les ascites carcinomateuses sont entretenues par passage hebdomadaire dans la cavité péritonéale de Souris CD1 femelles, soit, en général, de 0,1 ml d'ascite totale, soit de 1 million de cellules lavées. Les souches de cellules ascitiques carcinomateuses sont conservées en ampoules, par congélation à −80°C et suspension à 107 cellules/ml en milieu de Eagle double, avec 10 % de sérum de veau, 10 % de tryptose phosphate et 10 % de glycérol neutre. Les dosages de trypsinogène et de chymotrypsinogène sont effectués par les méthodes de BIETH avec substrat synthétique (4). Microscopie électronique : double fixation glutaraldéhyde à 3
pancréatique exocrine, carcinomateuse et ascitique, donc devenue libre dans la cavité péritonéale, maintient-elle sa spécificité ? III. La cellule pancréatique exocrine, carcinomateuse et ascitique, peut-elle reconstituer, après de nombreux passages de greffe intrapéritonéale, pendant plus de 2 années, un carcinome solide faisant preuve de spécificité ? MATÉRIEL ET TECHNIQUES (1). — Les ascites carcinomateuses sont entretenues par passage hebdomadaire dans la cavité péritonéale de Souris CD1 femelles, soit, en général, de 0,1 ml d'ascite totale, soit de 1 million de cellules lavées. Les souches de cellules ascitiques carcinomateuses sont conservées en ampoules, par congélation à −80°C et suspension à 107 cellules/ml en milieu de Eagle double, avec 10 % de sérum de veau, 10 % de tryptose phosphate et 10 % de glycérol neutre. Les dosages de trypsinogène et de chymotrypsinogène sont effectués par les méthodes de BIETH avec substrat synthétique (4). Microscopie électronique : double fixation glutaraldéhyde à 3 % (tampon Sørensen pH 4); acide osmique à 2 % (tampon Millonig pH 7,2); inclusion épon; contraste : acétate d'uranyle à saturation dans l'alcool à 50°. I. La réponse expérimentale à la première question posée porte, d'une part sur le carcinome pancréatique primitif, d'autre part sur ses métastases. 1. Carcinome pancréatique primitif. — Les cellules acineuses en dédifférenciation réactionnelle. sont dégranulées précocement (fig. 1). Dans les nappes en transformation carcinomateuse. proches des acinus adénomateux dégranulés, se voient des cellules disséminées dont le cytoplasme est plus ou moins riche en grains de sécrétion : il peut s'agir encore de dégranulation (fig. 1). Mais dans les zones carcinomateuses en évolution, les cellules à grains électivement colorés sont assez nombreuses, montrant parfois un pôle excréteur chargé (fig. 2): dans ce cas, bien que l'incertitude entre dégranulation et sécrétion persiste à l'échelle des grandissements histologiques, les images paraissent en faveur d'un processus sécrétoire (fig. 1 et 2, carcinome pancréatique, 43e jour; immunsérum antiantigène LPL; eichsine-paraldélavide; g = 500). L'étude par microscopie électronique montre qu'il s'agit bien, alors, de l'élaboration et de la maturation de grains de sécrétion exocrine ou grains de zymogène, polarisés dans le cytoplasme (fig. 3 et 4, carcinome pancréatique propagé au