jeanflop/post_ocr_correction2 huggingface dataset:
que nous appellerons A. Les Rf de A dans 6 solvants sur papier (solvants de Partridge et Forestal, phénol saturé d'eau, acide acétique à 25 %, acide acétique à 60 %, benzène/acide acétique/eau 6/7/8 phase supérieure) et 2 solvants sur gel de silice non activé (benzène/acétone 3/1, n-butanol/hexane/acétone 8/1/1) sont identiques à ceux du produit G3, mentionné dans le travail e). A est méthylé, ne se dédouble pas après hydrolyse; son spectre ultraviolet est identique à celui de G3; A donne les mêmes réactions colorées que G3. A est donc identique à G3 que nous pensions être du 3-méthylkaempférol. Nous avons pu isoler suffisamment de composé A pour effectuer une déméthylation réalisée selon une technique décrite en (4). De fait, dans ces conditions, A donne bien du kaempférol. Nous pouvons donc conclure que A est du 3-méthylkaempférol. Étude de la bande B. — La bande B est un mélange de plusieurs dérivés dont un seul, B2, a pu être isolé dans un état de pureté suffisante. Pour cela, B est rechromatographié en bande sur couche mince de cellulose dans la phase supérieure du solvant nitrométhane/benzène/eau (2/3/5). On prélève, pour élution dans du méthanol tiédi, la bande B, migrant pratiquement avec le front du solvant. B2, de fluorescence brune en lumière ultraviolette, est soumis aux mêmes essais que le produit A, y compris la déméthylation. Les résultats ainsi obtenus et les données du spectre ultraviolet montrent que le composé analysé est un quercétol dont les OH en 3 et 3' sont combinés, les OH en 5 et 7 libres. Le Rf très élevé de B2 dans le solvant nitrométhane/benzène/eau ci-dessus indique avec une grande probabilité qu'il s'agit d'un dérivé diméthylé (1). La fluorescence verte, et non orangée, après pulvérisation du réactif de Neu confirme les données du spectre. Il est probable que B2 est du 3,3'-diméthylquercétol. La comparaison de certaines constantes physiques de B2 avec celles qu'on trouve dans la littérature donne les résultats suivants : 1° Rf (sur papier) (tableau 1). TABLEAU 1 3,3'-diméthylquercétol B2 Acide acétique à 15% 0,18 (6) 0,10 Acide acétique à 25 % 0,35 (7) 0,26
le front du solvant. B2, de fluorescence brune en lumière ultraviolette, est soumis aux mêmes essais que le produit A, y compris la déméthylation. Les résultats ainsi obtenus et les données du spectre ultraviolet montrent que le composé analysé est un quercétol dont les OH en 3 et 3' sont combinés, les OH en 5 et 7 libres. Le Rf très élevé de B2 dans le solvant nitrométhane/benzène/eau ci-dessus indique avec une grande probabilité qu'il s'agit d'un dérivé diméthylé (1). La fluorescence verte, et non orangée, après pulvérisation du réactif de Neu confirme les données du spectre. Il est probable que B2 est du 3,3'-diméthylquercétol. La comparaison de certaines constantes physiques de B2 avec celles qu'on trouve dans la littérature donne les résultats suivants : 1° Rf (sur papier) (tableau 1). TABLEAU 1 3,3'-diméthylquercétol B2 Acide acétique à 15% 0,18 (6) 0,10 Acide acétique à 25 % 0,35 (7) 0,26 Butanol tertiaire/acide acétique/eau (3/1/1 phase supérieure) 0,82 (6) 0,78 Benzène/acide acétique/eau (6/7/3 phase supérieure) 0,28 (6) 0,22 Les Rf de B2 sont très voisins de ceux qui ont été trouvés dans la littérature. 2° Spectre ultraviolet (tableau II). TABLEAU II 3,3'-diméthylquercétol (8) B2 Méthanol 257 270 355 254 268 (292) 352 Acétate de sodium 274 319 375 275 318 378 Acétate de sodium + acide borique 254 266 356 254 268 356 Chlorure d'aluminium 266 (272) (300) 368 404 263 (300) 352 410 Chlorure d'aluminium + acide chlorhydrique 266 (274) 297 357 401 263 (300) 356 400 Soude 270 (329) 408 272 (330) 400 Les deux spectres sont extrêmement proches, non seulement par les maximums mais également par les minimums, comme nous avons pu le vérifier sur les courbes du témoin. Tous ces faits nous amènent à penser que B2 est effectivement du 3,3'-diméthylquercétol, dérivé assez rare dans la nature. C'est la première fois, à notre connaissance, qu'il a été isolé dans la famille des Composées. Étude de la bande C. — La bande C est un mélange de plusieurs produits dont un seul, C1, a pu être isolé par chromatographie sur couche mince de gel de silice non activée
352 Acétate de sodium 274 319 375 275 318 378 Acétate de sodium + acide borique 254 266 356 254 268 356 Chlorure d'aluminium 266 (272) (300) 368 404 263 (300) 352 410 Chlorure d'aluminium + acide chlorhydrique 266 (274) 297 357 401 263 (300) 356 400 Soude 270 (329) 408 272 (330) 400 Les deux spectres sont extrêmement proches, non seulement par les maximums mais également par les minimums, comme nous avons pu le vérifier sur les courbes du témoin. Tous ces faits nous amènent à penser que B2 est effectivement du 3,3'-diméthylquercétol, dérivé assez rare dans la nature. C'est la première fois, à notre connaissance, qu'il a été isolé dans la famille des Composées. Étude de la bande C. — La bande C est un mélange de plusieurs produits dont un seul, C1, a pu être isolé par chromatographie sur couche mince de gel de silice non activée dans l'hexane/acétone/n-butanol (8/1/1). Son Rf dans ce solvant est de 0,53. Sa fluorescence est brune en lumière ultraviolette. Les réactions mentionnées à propos de B2 et le spectre ultraviolet montrent que C1 est un dérivé méthylé du kaempférol, vraisemblablement diméthylé, dont les OH en 3 et 7 sont combinés, les OH en 4' et 5 libres. Ici encore, il s'agit d'un flavonol qui pourrait donc être du 3,7-diméthylkaempférol. On compare les valeurs des Rf et du spectre ultraviolet avec les indications de la littérature : 1° Rf (tableau III). TABLEAU III 3,7-diméthylkaempférol C1 Acide acétique à 15% 0,19 (8) 0,19 Acide acétique à 25 0,45 (8) 0,34 Butanol tertiaire/acide acétique/eau (3/1/1 phase supérieure) 0,91 (8) 0,87 (6) 0,83 Benzène/acide acétique/eau (6/7/3 phase supérieure) 0,82 (8) 0,88 2° Spectre ultraviolet (tableau IV). TABLEAU IV 3,7-diméthylkaempférol (8) C1 Méthanol 267 (293) 350 267 (297) 356 Acétate de sodium 260 266 388 267 (295) 370 Acétate de sodium + acide borique 266 348 267 348 Chlorure d'aluminium 276 304 354 400 275 302 345 400 Chlorure d'aluminium + acide chlorhydrique 277 302 348 398 267 302 345 400 Soude 268 (300) 391 272 (295) 394 Les spectres sont voisins. C'est dans l'acétate de
OH en 4' et 5 libres. Ici encore, il s'agit d'un flavonol qui pourrait donc être du 3,7-diméthylkaempférol. On compare les valeurs des Rf et du spectre ultraviolet avec les indications de la littérature : 1° Rf (tableau III). TABLEAU III 3,7-diméthylkaempférol C1 Acide acétique à 15% 0,19 (8) 0,19 Acide acétique à 25 0,45 (8) 0,34 Butanol tertiaire/acide acétique/eau (3/1/1 phase supérieure) 0,91 (8) 0,87 (6) 0,83 Benzène/acide acétique/eau (6/7/3 phase supérieure) 0,82 (8) 0,88 2° Spectre ultraviolet (tableau IV). TABLEAU IV 3,7-diméthylkaempférol (8) C1 Méthanol 267 (293) 350 267 (297) 356 Acétate de sodium 260 266 388 267 (295) 370 Acétate de sodium + acide borique 266 348 267 348 Chlorure d'aluminium 276 304 354 400 275 302 345 400 Chlorure d'aluminium + acide chlorhydrique 277 302 348 398 267 302 345 400 Soude 268 (300) 391 272 (295) 394 Les spectres sont voisins. C'est dans l'acétate de sodium qu'on observe les plus grandes différences : on peut d'ailleurs remarquer que les valeurs indiquées dans la littérature [(6), (8), (9)] varient, pour la grande longueur d'onde dans l'acétate de sodium, entre 355 et 403 nm. Nous pensons pouvoir conclure que Cl est un 3,7-diméthylkaempférol impur. Ce flavonoïde, assez rare dans la nature, a cependant été identifié chez deux autres Composées, Flourensia cernua (10) et Ambrosia eriocenta (9). III. LES FLAVONOÏDES DE L'EXTRAIT CHLOROFORMIQUE DU G. aphanactis. — L'extrait chloroformique du G. aphanactis est purifié, de la même façon que celui du G. squarrosa. Après chromatographie préparative sur couche mince de gel de silice dans chloroforme/acide acétique (9/1), on met en évidence 4 bandes de fluorescence brune : (a), correspondant à A du G. s.; (b) semblant correspondre à B du G. s. et qui doit être éluée et rechromatographiée sur couche mince de cellulose dans le solvant nitrométhane/benzène/eau (2/3/5 phase supérieure). On prélève le produit migrant au front et appelé bx ; (c) et (d) impures et à peine visibles, qui n'ont pas été analysées. En raison de la petite quantité de plante dont nous disposions, nous avons effectué uniquement une comparaison des Rf sur couche mince de
rare dans la nature, a cependant été identifié chez deux autres Composées, Flourensia cernua (10) et Ambrosia eriocenta (9). III. LES FLAVONOÏDES DE L'EXTRAIT CHLOROFORMIQUE DU G. aphanactis. — L'extrait chloroformique du G. aphanactis est purifié, de la même façon que celui du G. squarrosa. Après chromatographie préparative sur couche mince de gel de silice dans chloroforme/acide acétique (9/1), on met en évidence 4 bandes de fluorescence brune : (a), correspondant à A du G. s.; (b) semblant correspondre à B du G. s. et qui doit être éluée et rechromatographiée sur couche mince de cellulose dans le solvant nitrométhane/benzène/eau (2/3/5 phase supérieure). On prélève le produit migrant au front et appelé bx ; (c) et (d) impures et à peine visibles, qui n'ont pas été analysées. En raison de la petite quantité de plante dont nous disposions, nous avons effectué uniquement une comparaison des Rf sur couche mince de gel de silice de a et du 2-méthylkaempférol du G. squarrosa, de bx et du 3,3'-diméthylquercétol du G. squarrosa dans les solvants benzène/dioxane/acide acétique (90/25/4), chloroforme/acide acétique (9/1), benzène/acétone (9/1), benzène/acétone (3/1), hexane/acétone/n-butanol (8/1/1), benzène/méthyléthylcétone (9/1). L'identité des valeurs obtenues permet d'affirmer que l'extrait chloroformique du G. aphanactis contient, entre autres, du 3-méthylkaempférol et du 3,3'-diméthylquercétol. Séance du 7 février 1977. Avec la collaboration de Mlle Nicole Didry. M. Torck, M. Pinkas et N. Didry, Comptes rendus, 282, série D, 1976, p. 1453. M. Torck, M. Pinkas, N. Didry et L. Bézanger-Beauquesne, Plantes méd. Phytoth., 10, 1976, p. 188. L. Bézanger-Beauquesne, M. Debray, M. Pinkas et F. Trotin, Comptes rendus, 281, série D, 1975, p. 2025. C. H. Yang, H. D. Braymer, E. L. Murphy, W. Chorney, N. Scully et S. H. Wender, J. org. Chem., 25, 1960, p. 2063. A. G. Valeski, E. Rodriguez, G. VanderVelde et T. J. Mabry, Phytochem., 11, 1972, p. 2821. M. Sakakibara, Dan DiFeo, N. Nakatani, B. Timmermann et T. J. Mabry, Phytochem., 15, 1976, p. 727. Les valeurs sont celles qu'indique la photocopie d'un spectre ultraviolet envoyé par T. J. Mabry et P. Neuman. W. Herz, B. Fitzhenry et G. D. Anderson, Phytochem.,
autres, du 3-méthylkaempférol et du 3,3'-diméthylquercétol. Séance du 7 février 1977. Avec la collaboration de Mlle Nicole Didry. M. Torck, M. Pinkas et N. Didry, Comptes rendus, 282, série D, 1976, p. 1453. M. Torck, M. Pinkas, N. Didry et L. Bézanger-Beauquesne, Plantes méd. Phytoth., 10, 1976, p. 188. L. Bézanger-Beauquesne, M. Debray, M. Pinkas et F. Trotin, Comptes rendus, 281, série D, 1975, p. 2025. C. H. Yang, H. D. Braymer, E. L. Murphy, W. Chorney, N. Scully et S. H. Wender, J. org. Chem., 25, 1960, p. 2063. A. G. Valeski, E. Rodriguez, G. VanderVelde et T. J. Mabry, Phytochem., 11, 1972, p. 2821. M. Sakakibara, Dan DiFeo, N. Nakatani, B. Timmermann et T. J. Mabry, Phytochem., 15, 1976, p. 727. Les valeurs sont celles qu'indique la photocopie d'un spectre ultraviolet envoyé par T. J. Mabry et P. Neuman. W. Herz, B. Fitzhenry et G. D. Anderson, Phytochem., 12, 1973, p. 1181. M. O. Dillon, T. J. Mabry, E. Besson, M. L. Bouillant et J. Chopin, Phytochem., 15, 1976, p. 1085. Université de Lille, Laboratoire de Matière médicale, Faculté de Pharmacie, Rue du Professeur-Laguesse, 59045 Lille Cedex. BIOCHIMIE. — Mise en évidence d'une activité N-acétyl-galactosaminyltransférase au cours du lymphome murin YC8. Note de Françoise Raimond-Pironneau, Nicole Achy-Sachot, Maximilienne Turpin et Évelyne Morel, présentée par M. Bernard Halpern. L'activité N-acétyl-galactosaminyltransférase a été étudiée dans les fluides biologiques des Souris Balb/c porteuses du lymphome YC8. Elle augmente au cours de l'évolution de 1 à 30 fois dans les liquides péritonéaux, et de 1 à 10 fois dans les sérums. Elle reste nulle dans les urines. Les conditions optimales d'activité ont été définies. Les résultats suggèrent qu'il existe au cours de la cancérisation, non seulement un accroissement de l'activité enzymatique, mais également une synthèse de nouvelles molécules servant d'accepteurs endogènes pour l'enzyme. The N-acetyl-galactosaminyltransferase activity has been studied in the biological fluids of YC8-lymphoma bearing Balb/c mice. It is enhanced during tumor development from 1 to 30 times in peritoneal fluids and from 1 to 10 times in sera. This activity is nil in urines. Optimal requirements for activity have been
lymphome murin YC8. Note de Françoise Raimond-Pironneau, Nicole Achy-Sachot, Maximilienne Turpin et Évelyne Morel, présentée par M. Bernard Halpern. L'activité N-acétyl-galactosaminyltransférase a été étudiée dans les fluides biologiques des Souris Balb/c porteuses du lymphome YC8. Elle augmente au cours de l'évolution de 1 à 30 fois dans les liquides péritonéaux, et de 1 à 10 fois dans les sérums. Elle reste nulle dans les urines. Les conditions optimales d'activité ont été définies. Les résultats suggèrent qu'il existe au cours de la cancérisation, non seulement un accroissement de l'activité enzymatique, mais également une synthèse de nouvelles molécules servant d'accepteurs endogènes pour l'enzyme. The N-acetyl-galactosaminyltransferase activity has been studied in the biological fluids of YC8-lymphoma bearing Balb/c mice. It is enhanced during tumor development from 1 to 30 times in peritoneal fluids and from 1 to 10 times in sera. This activity is nil in urines. Optimal requirements for activity have been determined. Results suggest the existence, during tumor process not only of an enhancement of enzymatic activity, but also of a new molecule synthesis, molecules which are endogenous acceptors for the enzyme. INTRODUCTION. — Parmi les enzymes impliquées dans la synthèse des glycolipides à la surface de la membrane cellulaire, on a démontré la présence d'une et p-N-acétylgalactosaminyltransférases dans les cellules normales et transformées (1, 2, 4). Jusqu'à présent, il n'a pas été possible de relier la glycosylation de la surface cellulaire et le développement de la tumeur. Pour certaines lignées de cellules murines, on a observé que la transformation s'accompagnait d'une baisse de l'activité N-acétyl-galactosaminyltransférase (1, 2, 4). Par contre, Patt et coll. en étudiant diverses activités glycosyltransférases dans les cellules normales et transformées de la lignée Balb/c, n'ont pu démontrer de différences significatives entre les deux types cellulaires (3). Au cours de travaux précédents, concernant l'activité galactosyltransférase, dans les fluides biologiques de Souris Balb/c porteuses du lymphome YC8, nous avons émis l'hypothèse d'une solubilisation d'enzymes membranaires venant de la cellule tumorale dans la circulation de l'hôte (6, C). Dans la présente Note, nous rapportons des résultats préliminaires relatifs à l'activité N-acétyl-galactosaminyltransférase endogène dans les sérums, les liquides péritonéaux et
a démontré la présence d'une et p-N-acétylgalactosaminyltransférases dans les cellules normales et transformées (1, 2, 4). Jusqu'à présent, il n'a pas été possible de relier la glycosylation de la surface cellulaire et le développement de la tumeur. Pour certaines lignées de cellules murines, on a observé que la transformation s'accompagnait d'une baisse de l'activité N-acétyl-galactosaminyltransférase (1, 2, 4). Par contre, Patt et coll. en étudiant diverses activités glycosyltransférases dans les cellules normales et transformées de la lignée Balb/c, n'ont pu démontrer de différences significatives entre les deux types cellulaires (3). Au cours de travaux précédents, concernant l'activité galactosyltransférase, dans les fluides biologiques de Souris Balb/c porteuses du lymphome YC8, nous avons émis l'hypothèse d'une solubilisation d'enzymes membranaires venant de la cellule tumorale dans la circulation de l'hôte (6, C). Dans la présente Note, nous rapportons des résultats préliminaires relatifs à l'activité N-acétyl-galactosaminyltransférase endogène dans les sérums, les liquides péritonéaux et les urines de Souris Balb/c témoins et de Souris Balb/c porteuses de la tumeur YC8. MATERIEL ET MÉTHODES. — La tumeur ascitique YC8 a été transmise chez des Souris Balb/c mâles (2 lots de 50 souris, C.N.R.S., Orléans-la-Source) par injection intrapéritonéale de 0,5 ml de suspension cellulaire à 1 .106 cellules/ml. Les ascites tumorales ont été prélevées à des jours variables au cours de l'évolution et centrifugées à 700 g à 4°C afin de séparer les cellules du liquide ascitique (LA). Les sérums des animaux ont été recueillis en même temps (SA). Les urines ont été collectées sur une période de 24 h (UA), les Souris ayant été placées en cage à métabolisme (Médi-Labo). Un lot de 100 animaux témoins nous a fourni des liquides péritonéaux (LN), des sérums (SN) et des urines (UN). L'activité galactosaminyltransférase a été dosée dans les différents milieux sans accepteur exogène. Le milieu d'incubation complet contient, sauf indications contraires : 10 μl de fluide biologique, 10 μl de H2O bidistillée, 10 μl de tampon Tris-HCl, 0,1 M pH 7,0, 5 μl de MnCl2 0,2 M, 5 μl d'UDP-['H]-N-acétyl-galactosamine, d'activité spécifique 13 Ci/mmole (New England Nuclear Corporation) diluée à 6,3 pmole. La réaction est arrêtée après
cellules/ml. Les ascites tumorales ont été prélevées à des jours variables au cours de l'évolution et centrifugées à 700 g à 4°C afin de séparer les cellules du liquide ascitique (LA). Les sérums des animaux ont été recueillis en même temps (SA). Les urines ont été collectées sur une période de 24 h (UA), les Souris ayant été placées en cage à métabolisme (Médi-Labo). Un lot de 100 animaux témoins nous a fourni des liquides péritonéaux (LN), des sérums (SN) et des urines (UN). L'activité galactosaminyltransférase a été dosée dans les différents milieux sans accepteur exogène. Le milieu d'incubation complet contient, sauf indications contraires : 10 μl de fluide biologique, 10 μl de H2O bidistillée, 10 μl de tampon Tris-HCl, 0,1 M pH 7,0, 5 μl de MnCl2 0,2 M, 5 μl d'UDP-['H]-N-acétyl-galactosamine, d'activité spécifique 13 Ci/mmole (New England Nuclear Corporation) diluée à 6,3 pmole. La réaction est arrêtée après 60 mn d'incubation à 37°C par refroidissement dans un bain de glace et par addition de 10 μl d'EDTA 0,1 M. Des aliquotes de 20 μl de chaque milieu réactionnel ont été disposées sur du papier « Whatman n. 3 ». La chromatographie et la détection de la radioactivité ont été réalisées selon la méthode décrite précédemment (6). TABLEAU 1 Variations de l’activité N-acétyl-galactosaminyltransférase dans les fluides biologiques des Souris Balbc au cours de l’évolution du lymphome YC8. Liquides péritonéaux Sérums Urines c.p.m. e) UDP-N-ac-Gal/mg (b) c.p.m. (") UDP-N-ac-Gal/mg (b) c.p.m. (Q) Témoins 8 0,14 78 0,15 0 3e jour 161 1,17 167 0,29 0 7e jour 644 1,89 480 1,06 0 9e jour 1 280 4,06 643 1,59 0 13e jour 1 632 4,04 1 011 1,60 0 (") Les résultats sont exprimés en c.p.m. pour 5 026 c.p.m. totaux (2,52 pmoles) déposés sur la chromatographie. (b) Les résultats sont exprimés en pmoles d’UDP-N-acétyl-galactosamine transférées par mg de protéines dans la réaction d'incubation. NB. Les expériences ont été réalisées en double et chaque détermination a été effectuée sur deux aliquotes. Les protéines ont été dosées selon la méthode de Lowry (8) avec le sérum albumine bovine cristallisé comme témoin
été réalisées selon la méthode décrite précédemment (6). TABLEAU 1 Variations de l’activité N-acétyl-galactosaminyltransférase dans les fluides biologiques des Souris Balbc au cours de l’évolution du lymphome YC8. Liquides péritonéaux Sérums Urines c.p.m. e) UDP-N-ac-Gal/mg (b) c.p.m. (") UDP-N-ac-Gal/mg (b) c.p.m. (Q) Témoins 8 0,14 78 0,15 0 3e jour 161 1,17 167 0,29 0 7e jour 644 1,89 480 1,06 0 9e jour 1 280 4,06 643 1,59 0 13e jour 1 632 4,04 1 011 1,60 0 (") Les résultats sont exprimés en c.p.m. pour 5 026 c.p.m. totaux (2,52 pmoles) déposés sur la chromatographie. (b) Les résultats sont exprimés en pmoles d’UDP-N-acétyl-galactosamine transférées par mg de protéines dans la réaction d'incubation. NB. Les expériences ont été réalisées en double et chaque détermination a été effectuée sur deux aliquotes. Les protéines ont été dosées selon la méthode de Lowry (8) avec le sérum albumine bovine cristallisé comme témoin de référence. RÉSULTATS. — L’activité N-acétyl-galactosaminyltransférase mesurée dans les fluides biologiques des Souris Balb/c augmente au cours de l’évolution de la tumeur YC8 de 1 à 30 fois dans les liquides péritonéaux et de 1 à 10 fois dans les sérums (tableau I). Elle reste nulle dans les urines. TABLEAU II Effet des cations divalents sur l’activité N-acétyl-galactosaminyltransférase. ",@o d’activité Milieu + Mn + 100 Milieu sans cations 14 Milieu + Co + + 22 Milieu + Cd + +, Mg+ +, Ca + + 0 Nous avons recherché les conditions optimales de l’activité N-acétyl-galactosaminyltransférase. L’influence du pH a été déterminée sur un « pool » de liquides d’ascite prélevés le 7e jour après l’injection de la tumeur et sur un « pool » de sérums recueillis au bout de 13 jours (fig. 1). Dans le liquide d’ascite, l’activité présente 2 pH optimaux en tampon Tris-HCl 0,1 M (7,0 et 8,0) et un pH optimal de 6,6 en tampon cacodylate de sodium 0,1 M. On retrouve les mêmes optimums pour le sérum, celui de pH 8,0 en tampon Tris-HCl 0,1 M étant toutefois moins net. Fig. 2. — Variations de l’activité N-acétyl-galactosaminyltransférase en fonction du temps d’incubation dans les liquides
II Effet des cations divalents sur l’activité N-acétyl-galactosaminyltransférase. ",@o d’activité Milieu + Mn + 100 Milieu sans cations 14 Milieu + Co + + 22 Milieu + Cd + +, Mg+ +, Ca + + 0 Nous avons recherché les conditions optimales de l’activité N-acétyl-galactosaminyltransférase. L’influence du pH a été déterminée sur un « pool » de liquides d’ascite prélevés le 7e jour après l’injection de la tumeur et sur un « pool » de sérums recueillis au bout de 13 jours (fig. 1). Dans le liquide d’ascite, l’activité présente 2 pH optimaux en tampon Tris-HCl 0,1 M (7,0 et 8,0) et un pH optimal de 6,6 en tampon cacodylate de sodium 0,1 M. On retrouve les mêmes optimums pour le sérum, celui de pH 8,0 en tampon Tris-HCl 0,1 M étant toutefois moins net. Fig. 2. — Variations de l’activité N-acétyl-galactosaminyltransférase en fonction du temps d’incubation dans les liquides d’ascite (LA du 7e jour, m ••• a ) et dans les sérums (SA du 13e jour. (0-0). Le milieu contenait du tampon Tris-HCl 0,1 M pH 7,3 et du MnCl2 0,4 M. Les résultats sont exprimés en cpm pour 5 026 cpm totaux (2,52 pmole) déposés sur la chromatographie. Nous avons soumis nos milieux d’incubation à l’action de divers cations divalents (tableau II). Les cations Cd + +, Mg + +, Ca" se sont révélés inhibiteurs de la réaction de transfert tandis que le maximum d’activité est obtenu en présence de Mn + +, avec un optimum pour une concentration de 0,2 M. L’influence du temps d’incubation sur l’activité est montrée dans la figure 2. Dans les liquides d’ascite, l’activité augmente encore après 120 mn, alors que la réaction est maximale au bout de 90 mn en ce qui concerne les sérums. Nous avons déterminé les Km apparents pour l’UDP-N-acétyl-galactosamine dans les liquides d’ascite et les sérums. Dans le premier cas, nous avons trouvé un Km apparent de 0,6.10-6 M, dans le second cas, le Km apparent était de 2,3.10-6 M. CONCLUSION. — Nous avons démontré une très forte augmentation de l’activité N-acétyl-galactosaminyltransférase dans les sérums et les liquides