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g FeCl3, Traces Solution d'oligo-éléments 2 ml Mancozèbe 50 mg Eau distillée ............................. q.s.p. 1 000 ml Le « mancozèbe » constitue la seule source d'azote, de carbone et de soufre. Ces numérations montrent qu'il existe une micropopulation capable de se développer en utilisant le « mancozèbe » comme élément nutritif. La densité de cette population est très faible en sol non traité (3 500 germes par gramme de terre) mais elle croît dès l'addition du fongicide (fig. 2). L'augmentation de population qui suit le deuxième traitement est très forte (450 000 germes par gramme de terre) avec pour conséquence une accélération de la dégradation. Dès la disparition du fongicide le nombre de ces germes chute très rapidement. Effets de deux applications successives de « mancozèbe » au sol. Fig. 1. — Dégradation du « mancozèbe ». Abscisses temps en jours. Ordonnées milligramme de principe actif par kilogramme de terre. Fig. 2. — Densité de la population « biodégradante ». Abscisses temps en jours. Ordonnées nombre de germes par gramme de terre. SÉLECTION DES GERMES UTILISANT LE « MANCOZÈBE » COMME SEUL NUTRIMENT ORGANIQUE. — Les germes qui se développent peuvent être seulement ceux qui résistent à un traitement de 50 mg/1 et utilisent comme substances nutritives les produits de la dégradation non biologique du fongicide. Une série d'expériences complémentaires est nécessaire pour vérifier l'existence d'une microflore spécifique et permettre l'isolement des souches microbiennes qui la composent. Ces essais sont conduits sur le milieu minéral précédemment décrit, en présence de « mancozèbe » à des doses de 50 et 1 000 mg/1. L'ensemencement est effectué au moyen d'une suspension-dilution du sol étudié, dont la densité microbienne est déterminée par une numération annexe. Les échantillons sont mis à incuber à 28°C soit en aérobiose, soit en semi-anaérobiose (obtenue en recouvrant le milieu de culture d'une couche de 8 à 10 mm d'huile de vaseline). Deux témoins stériles non ensemencés sont mis à incuber dans les mêmes conditions. CORRECTION ### des Laboratoires Laroche-Navarron, Paris, France. Séance du 14 février 1977. B. POMME, R. PLANCHE et J. GIRARD, Thérapie, 16, 1971, p. 798.
50 mg/1 et utilisent comme substances nutritives les produits de la dégradation non biologique du fongicide. Une série d'expériences complémentaires est nécessaire pour vérifier l'existence d'une microflore spécifique et permettre l'isolement des souches microbiennes qui la composent. Ces essais sont conduits sur le milieu minéral précédemment décrit, en présence de « mancozèbe » à des doses de 50 et 1 000 mg/1. L'ensemencement est effectué au moyen d'une suspension-dilution du sol étudié, dont la densité microbienne est déterminée par une numération annexe. Les échantillons sont mis à incuber à 28°C soit en aérobiose, soit en semi-anaérobiose (obtenue en recouvrant le milieu de culture d'une couche de 8 à 10 mm d'huile de vaseline). Deux témoins stériles non ensemencés sont mis à incuber dans les mêmes conditions. CORRECTION ### des Laboratoires Laroche-Navarron, Paris, France. Séance du 14 février 1977. B. POMME, R. PLANCHE et J. GIRARD, Thérapie, 16, 1971, p. 798. R. DUNET et M. HANUS, Le Progrès médical, 95, 1967, p. 589. J. GAMACHE, Médecine Praticienne, 1974, p. 546. PHAM-HUU-CHANH, M. JUNSTAD et A. WENNMALM, Acta Physiol. Scand., 86, 1972, p. 589. PHAM-HUU-CHANH et M. C. NICOT-CARTHERY, Die Naturwissenschaften, 60, 1973, p. 482. A. WENNMALM, PHAM-HUU-LHANH et M. JUNSTAD, Acta Physiol. Scand., VI, 1V/4, p. LU. PHAM-Huu-CHANH, Colloque de la D.G.R.S.T., Bordeaux, 7-8 décembre 1976. NIGEON-DUBREUIL, RABINOWICZ, T. RAHANDRANHA et A. R. RATSIMAMANGA, Thérapie, 9, 1954, p. 481. C. BOMSKOV et BAHNSEN, Arch. fur exper. path. Pharmak., 178, 1, 1935. J. B. LEE, in The Prostaglandins, L P. W. RAMWELL éd., Plenum Press, New York, London, 1973, p. 133. N. A. TERRAGNO, K. U. MALIK, A. NASJLETTI, D. A. TERRAGNO et J. C. MacGIFF, in Advances In Prostaglandin and Thromboxane Research, II, B. SAMUELSSON et R. PAOLETTI éd., Raven Press, New York, 1976, p. 561. J. B. LEE, in Advances in Prostaglandin and Thromboxane Research, II, B. SAMUELSSON et R. PAOLETTI éd., Raven Press, New York, 1976, p. 573. B. Du GRES, D. SAMUEL et F. TENERIELLO, La Vie médicale, 1972, p. 2. J. CHROKRONN et S. FRIEDMAN, Gazette médicale de France, 81, 1974, n° 21, p. 2821. A. R.
Physiol. Scand., VI, 1V/4, p. LU. PHAM-Huu-CHANH, Colloque de la D.G.R.S.T., Bordeaux, 7-8 décembre 1976. NIGEON-DUBREUIL, RABINOWICZ, T. RAHANDRANHA et A. R. RATSIMAMANGA, Thérapie, 9, 1954, p. 481. C. BOMSKOV et BAHNSEN, Arch. fur exper. path. Pharmak., 178, 1, 1935. J. B. LEE, in The Prostaglandins, L P. W. RAMWELL éd., Plenum Press, New York, London, 1973, p. 133. N. A. TERRAGNO, K. U. MALIK, A. NASJLETTI, D. A. TERRAGNO et J. C. MacGIFF, in Advances In Prostaglandin and Thromboxane Research, II, B. SAMUELSSON et R. PAOLETTI éd., Raven Press, New York, 1976, p. 561. J. B. LEE, in Advances in Prostaglandin and Thromboxane Research, II, B. SAMUELSSON et R. PAOLETTI éd., Raven Press, New York, 1976, p. 573. B. Du GRES, D. SAMUEL et F. TENERIELLO, La Vie médicale, 1972, p. 2. J. CHROKRONN et S. FRIEDMAN, Gazette médicale de France, 81, 1974, n° 21, p. 2821. A. R. RATSIMAMANGA, C. LEFOURNIER, H. RABINOWITZ, M. NIGEON-DUBREUIL et P. HALLER, Comptes rendus, 27 4 série D, 1972, p. 1522. M. MOUTON, H. CHALOPIN et M. RABINOWICZ, Bull. Soc. Chim. Biol., 38, 1956, p. 205. Institut de Physiologie, Laboratoire du C.N.R.S., 2, rue Magendie, 31400 Toulouse. MICROBIOLOGIE APPLIQUÉE. — Isolement et identification de souches microbiennes biodégradant le « mancozèbe ». Note de Bernard Doneche, présentée par M. André-Romain Prévot. Il existe dans la microflore des sols de vignobles, des germes capables de se développer en utilisant le « mancozèbe » comme seul nutriment organique. Cette micropopulation est constituée essentiellement de bactéries appartenant au genre Bacillus. Microbes able to grow only with "mancozebe" as organic nutriment exist in microflora of horticultural soils. This micropopulation is composed of bacteria belonging to Bacillus genus. L'étude de la dégradation du « mancozèbe » dans les sols de vignobles a montré que les microorganismes telluriques participent à l'élimination du fongicide; mais cette biodégradation peut résulter de l'activité biologique globale et ne pas être due à l'existence de souches microbiennes déterminées, capables de se développer en utilisant le « mancozèbe » comme seul nutriment organique. Nous nous sommes attachés à isoler et à identifier de tels germes
identification de souches microbiennes biodégradant le « mancozèbe ». Note de Bernard Doneche, présentée par M. André-Romain Prévot. Il existe dans la microflore des sols de vignobles, des germes capables de se développer en utilisant le « mancozèbe » comme seul nutriment organique. Cette micropopulation est constituée essentiellement de bactéries appartenant au genre Bacillus. Microbes able to grow only with "mancozebe" as organic nutriment exist in microflora of horticultural soils. This micropopulation is composed of bacteria belonging to Bacillus genus. L'étude de la dégradation du « mancozèbe » dans les sols de vignobles a montré que les microorganismes telluriques participent à l'élimination du fongicide; mais cette biodégradation peut résulter de l'activité biologique globale et ne pas être due à l'existence de souches microbiennes déterminées, capables de se développer en utilisant le « mancozèbe » comme seul nutriment organique. Nous nous sommes attachés à isoler et à identifier de tels germes à partir d'un sol du Bourgogne présentant une forte activité biologique et dont la microflore joue un rôle important dans la dégradation du fongicide (1). EFFETS DE DEUX TRAITEMENTS SUCCESSIFS. — Un premier échantillon de sol (4 kg) est placé dans une cuve d'incubation. Au cours de cette opération, la teneur en eau est portée aux 3/4 de la capacité de rétention avec une suspension aqueuse de « mancozèbe », de manière à apporter 10 mg de produit par kilogramme de terre. Au 40e jour, cet échantillon 1, qui contient encore 0,6 mg de substance active par kilogramme de terre, reçoit un nouvel apport de « mancozèbe » (10 mg/kg). Un deuxième échantillon de sol, incubant depuis 40 jours, est traité par une quantité de fongicide équivalente à la teneur en substance active de l'échantillon 1 aussitôt après le deuxième traitement (10,6 mg/kg). Nous constatons sur la figure 1 que la disparition du fongicide est plus rapide lors de la seconde application (échantillon 1), Ce phénomène est indépendant de l'incubation préalable dans des conditions d'humidité et de température convenables puisque, dans l'échantillon 2, l'allure de la dégradation reste normale. A partir de prélèvements effectués régulièrement dans ces échantillons de sols,
teneur en eau est portée aux 3/4 de la capacité de rétention avec une suspension aqueuse de « mancozèbe », de manière à apporter 10 mg de produit par kilogramme de terre. Au 40e jour, cet échantillon 1, qui contient encore 0,6 mg de substance active par kilogramme de terre, reçoit un nouvel apport de « mancozèbe » (10 mg/kg). Un deuxième échantillon de sol, incubant depuis 40 jours, est traité par une quantité de fongicide équivalente à la teneur en substance active de l'échantillon 1 aussitôt après le deuxième traitement (10,6 mg/kg). Nous constatons sur la figure 1 que la disparition du fongicide est plus rapide lors de la seconde application (échantillon 1), Ce phénomène est indépendant de l'incubation préalable dans des conditions d'humidité et de température convenables puisque, dans l'échantillon 2, l'allure de la dégradation reste normale. A partir de prélèvements effectués régulièrement dans ces échantillons de sols, nous avons réalisé des numérations de germes en utilisant le milieu de culture suivant : K,HPO4, 5 g NaCl 2,5 g MgCl2, 2,5 g FeCl3, Traces Solution d'oligo-éléments 2 ml Mancozèbe 50 mg Eau distillée ............................. q.s.p. 1 000 ml Le « mancozèbe » constitue la seule source d'azote, de carbone et de soufre. Ces numérations montrent qu'il existe une micropopulation capable de se développer en utilisant le « mancozèbe » comme élément nutritif. La densité de cette population est très faible en sol non traité (3 500 germes par gramme de terre) mais elle croît dès l'addition du fongicide (fig. 2). L'augmentation de population qui suit le deuxième traitement est très forte (450 000 germes par gramme de terre) avec pour conséquence une accélération de la dégradation. Dès la disparition du fongicide le nombre de ces germes chute très rapidement. Effets de deux applications successives de « mancozèbe » au sol. Fig. 1. — Dégradation du « mancozèbe ». Abscisses temps en jours. Ordonnées milligramme de principe actif par kilogramme de terre. Fig. 2. — Densité de la population « biodégradante ». Abscisses temps en jours. Ordonnées nombre de germes par gramme de terre. SÉLECTION DES GERMES UTILISANT LE
carbone et de soufre. Ces numérations montrent qu'il existe une micropopulation capable de se développer en utilisant le « mancozèbe » comme élément nutritif. La densité de cette population est très faible en sol non traité (3 500 germes par gramme de terre) mais elle croît dès l'addition du fongicide (fig. 2). L'augmentation de population qui suit le deuxième traitement est très forte (450 000 germes par gramme de terre) avec pour conséquence une accélération de la dégradation. Dès la disparition du fongicide le nombre de ces germes chute très rapidement. Effets de deux applications successives de « mancozèbe » au sol. Fig. 1. — Dégradation du « mancozèbe ». Abscisses temps en jours. Ordonnées milligramme de principe actif par kilogramme de terre. Fig. 2. — Densité de la population « biodégradante ». Abscisses temps en jours. Ordonnées nombre de germes par gramme de terre. SÉLECTION DES GERMES UTILISANT LE « MANCOZÈBE » COMME SEUL NUTRIMENT ORGANIQUE. — Les germes qui se développent peuvent être seulement ceux qui résistent à un traitement de 50 mg/1 et utilisent comme substances nutritives les produits de la dégradation non biologique du fongicide. Une série d'expériences complémentaires est nécessaire pour vérifier l'existence d'une microflore spécifique et permettre l'isolement des souches microbiennes qui la composent. Ces essais sont conduits sur le milieu minéral précédemment décrit, en présence de « mancozèbe » à des doses de 50 et 1 000 mg/1. L'ensemencement est effectué au moyen d'une suspension-dilution du On constate que, quelle que soit la quantité initiale de « mancozèbe », il existe dans la microflore tellurique du sol étudié des microorganismes capables de dégrader le fongicide. À 50 mg/l comme à 1 000 mg/l, la disparition du fongicide est plus rapide dans des conditions proches de l'anaérobiose qu'en milieu aéré; mais à 1 000 mg/l cette dégradation est proportionnellement plus importante. ISOLEMENT ET IDENTIFICATION DES SOUCHES ACTIVES. — Cette expérience a permis d'isoler 10 souches bactériennes dont 4 à partir du milieu minéral contenant 1 000 mg de « mancozèbe » par litre. Nous avons éprouvé séparément la capacité des différentes souches isolées à
spécifique et permettre l'isolement des souches microbiennes qui la composent. Ces essais sont conduits sur le milieu minéral précédemment décrit, en présence de « mancozèbe » à des doses de 50 et 1 000 mg/1. L'ensemencement est effectué au moyen d'une suspension-dilution du On constate que, quelle que soit la quantité initiale de « mancozèbe », il existe dans la microflore tellurique du sol étudié des microorganismes capables de dégrader le fongicide. À 50 mg/l comme à 1 000 mg/l, la disparition du fongicide est plus rapide dans des conditions proches de l'anaérobiose qu'en milieu aéré; mais à 1 000 mg/l cette dégradation est proportionnellement plus importante. ISOLEMENT ET IDENTIFICATION DES SOUCHES ACTIVES. — Cette expérience a permis d'isoler 10 souches bactériennes dont 4 à partir du milieu minéral contenant 1 000 mg de « mancozèbe » par litre. Nous avons éprouvé séparément la capacité des différentes souches isolées à utiliser le « mancozèbe » comme élément nutritif (tableau). TABLEAU Capacité des différentes souches à utiliser le « mancozèbe » comme élément nutritif (déterminations après 15 jours d'incubation) Nombre Produit dégradé x 100 germes par millilitre Souches Produit restant (témoin stérile) de milieu 1 68,6 450 000 I I 9,6 1 500 II I 8,7 450 I V 7,6 5 V à X ......... 5,1 à 0,7 0 Les souches ont été classées en fonction de leur aptitude à dégrader le « mancozèbe ». La seule souche bactérienne capable de dégrader efficacement le « mancozèbe » à son profit appartient au genre Bacillus (souche I) ainsi que les deux autres souches (souches II et III) ayant, à plus petite échelle, la même capacité. La présence de Beggiatoa (souche IV) parmi les souches isolées est, elle aussi, logique. Ces bactéries ont en effet la propriété d'oxyder le sulfure d'hydrogène et d'accumuler le soufre sous forme de granulations intracellulaires. Il est vraisemblable que, quel que soit le processus de dégradation, le milieu s'enrichit en sulfure d'hydrogène. Les souches V à X sont uniquement résistantes au « mancozèbe » et n'ont pas été identifiées. CONCLUSION. — Il existe donc dans la microflore du
1 500 II I 8,7 450 I V 7,6 5 V à X ......... 5,1 à 0,7 0 Les souches ont été classées en fonction de leur aptitude à dégrader le « mancozèbe ». La seule souche bactérienne capable de dégrader efficacement le « mancozèbe » à son profit appartient au genre Bacillus (souche I) ainsi que les deux autres souches (souches II et III) ayant, à plus petite échelle, la même capacité. La présence de Beggiatoa (souche IV) parmi les souches isolées est, elle aussi, logique. Ces bactéries ont en effet la propriété d'oxyder le sulfure d'hydrogène et d'accumuler le soufre sous forme de granulations intracellulaires. Il est vraisemblable que, quel que soit le processus de dégradation, le milieu s'enrichit en sulfure d'hydrogène. Les souches V à X sont uniquement résistantes au « mancozèbe » et n'ont pas été identifiées. CONCLUSION. — Il existe donc dans la microflore du sol de vignoble choisi, une micro-population spécifique capable de se développer en utilisant le « mancozèbe » comme seul nutriment organique. Elle est essentiellement composée de bactéries du genre Bacillus, ce qui n'est pas étonnant puisque les Bacillus, dont la résistance est grande, sont très répandus dans les sols. Mais la même expérimentation réalisée sur un sol acide, plus favorable à la croissance des Champignons, aurait peut-être conduit à des résultats différents. (*) Séance du 14 février 1977. (1) Produit de coordination de l'ion zinc avec l'éthylène-bis dithiocarbamate de manganèse; Fongicide très actif sur la plupart des maladies des plantes (à l'exception des oïdium) et en particulier sur le mildiou de la Vigne, Plasmopara viticola. (2) B. DONECHE et G. SEGUIN, Comptes rendus, 280, série D, 1975, p. 2265. (3) B. DONECHE, Effects du « mancozèbe » sur les microorganismes des sols de vignobles et participation des microorganismes à sa dégradation (Thèse doct. 3e cycle. Bordeaux, 1976). (4) Cette action de dégradation modifie peu l'équilibre de la microflore tellurique. Institut d'Œnologie, 351, cours de la Libération, 33405 Talence. IMMUNOLOGIE. — Différenciation préférentielle des cellules souches hématopoïétiques transférées chez des Souris irradiées préalablement infectées par du BCG. Note (*) de Gilles
la même expérimentation réalisée sur un sol acide, plus favorable à la croissance des Champignons, aurait peut-être conduit à des résultats différents. (*) Séance du 14 février 1977. (1) Produit de coordination de l'ion zinc avec l'éthylène-bis dithiocarbamate de manganèse; Fongicide très actif sur la plupart des maladies des plantes (à l'exception des oïdium) et en particulier sur le mildiou de la Vigne, Plasmopara viticola. (2) B. DONECHE et G. SEGUIN, Comptes rendus, 280, série D, 1975, p. 2265. (3) B. DONECHE, Effects du « mancozèbe » sur les microorganismes des sols de vignobles et participation des microorganismes à sa dégradation (Thèse doct. 3e cycle. Bordeaux, 1976). (4) Cette action de dégradation modifie peu l'équilibre de la microflore tellurique. Institut d'Œnologie, 351, cours de la Libération, 33405 Talence. IMMUNOLOGIE. — Différenciation préférentielle des cellules souches hématopoïétiques transférées chez des Souris irradiées préalablement infectées par du BCG. Note (*) de Gilles Marchai et Geneviève Milon, présentée par M. Jean Bernard. L'injection de cellules médullaires à des Souris irradiées et infectées au préalable par le BCG montre que la différenciation vers la lignée érythroblastique est très diminuée, même si les animaux infectés subissent une hémorragie importante avant irradiation. Ces résultats apportent une confirmation à l'hypothèse d'une différenciation préférentielle de cellules souches vers les lignées leucocytaires au détriment de la lignée érythrocytaire. Following injection of bone marrow cells in lethally irradiated mice, previously infected with BCG regenerating hemopoietic cell populations differentiate along the leucocyte pathway to the detriment of erythroid lineage. Such a phenomenon persisting even if anemia of infected mice is increased by bleeding just before irradiation and reconstitution supports the hypothesis of preferential differentiation of stem cells. L'injection intraveineuse de 1 mg de BCG (soit 107 particules viables) entraîne, chez la Souris, l'apparition d'une anémie progressivement croissante durant les 4 premières semaines suivant l'infection. Au niveau de la moelle, une érythroblastopénie maximale durant la deuxième semaine est observée. La production d'érythropoïétine est à ce moment très élevée. Cette observation nous avait fait émettre l'hypothèse de l'existence d'une différenciation préférentielle des cellules souches hématopoïétiques vers les lignées blanches, au détriment de la
confirmation à l'hypothèse d'une différenciation préférentielle de cellules souches vers les lignées leucocytaires au détriment de la lignée érythrocytaire. Following injection of bone marrow cells in lethally irradiated mice, previously infected with BCG regenerating hemopoietic cell populations differentiate along the leucocyte pathway to the detriment of erythroid lineage. Such a phenomenon persisting even if anemia of infected mice is increased by bleeding just before irradiation and reconstitution supports the hypothesis of preferential differentiation of stem cells. L'injection intraveineuse de 1 mg de BCG (soit 107 particules viables) entraîne, chez la Souris, l'apparition d'une anémie progressivement croissante durant les 4 premières semaines suivant l'infection. Au niveau de la moelle, une érythroblastopénie maximale durant la deuxième semaine est observée. La production d'érythropoïétine est à ce moment très élevée. Cette observation nous avait fait émettre l'hypothèse de l'existence d'une différenciation préférentielle des cellules souches hématopoïétiques vers les lignées blanches, au détriment de la lignée rouge, lors de la réponse de l'animal à l'infection. Après irradiation létale des Souries, seules les cellules souches hématopoïétiques pluripotentes présentes dans un inoculum de cellules médullaires injecté par voie intraveineuse forment des clones de cellules différenciées au niveau de la rate [(2), (3)]. Les colonies mixtes, comme les colonies formées d'un seul type cellulaire, sont issues d'une même cellule multipotente (4). L'hypothèse d'une différenciation préférentielle des cellules souches hématopoïétiques pluripotentes lors d'une infection par le BCG peut être confirmée par l'utilisation de ces conditions expérimentales. (1) Des Souris NCS des deux sexes, âgées de 5 semaines lors de l'infection, sont irradiées à 880 rd (20 mn sous un irradiateur au césium-137 de débit 44 rd/min) 0, 1, 2, 3 et 4 semaines après injection intraveineuse de 1 mg de BCG vivant. 2 h après l'irradiation, 5.105 cellules nuclées de moelle osseuse sont injectées. 6 jours plus tard, les animaux reçoivent une injection intraveineuse de 0,5 IlCi d'iododéoxyuridine marqué à l'iode 125 et 0,2 jaCi de citrate de fer 59. 24 h plus tard, la rate est prélevée ainsi que 0,2 ml de sang. Au niveau de la rate, la mesure de l'incorporation de l'iode 125 traduit la multiplication