jeanflop/post_ocr_correction2 huggingface dataset:
est obtenue, comparable à son état précédent l'induction. DÉGRADATION DE L'ÉTAT ANTIVIRAL PAR ADDITION DE PHA. — Protocole expérimental. — Des cellules murines L 929 (105 cellules/ml/tube) sont incubées à 37°C en présence de 300-400 unités d'interféron murin de référence, pendant 5 h (temps nécessaire à l'induction de l'état antiviral dans la cellule). L'interféron est ensuite éliminé et les cellules traitées par la PHA. La PHA utilisée est un extrait brut de Phaseolus vulgaris formé M de Gibco dont l'activité hémagglutinante mesurée en présence de globules rouges humains O+ est de 1 024 unités. Après une période d'incubation de 18 à 20 h à 37°C, la PHA est éliminée et les cellules infectées par le virus E.M.C. à la multiplicité d'infection de 2. L'effet antiviral de l'interféron est mesuré après 2 cycles de réplication virale, par titrage du rendement infectieux exprimé en unités formant plaque (UFP). RÉSULTATS. L'étude de la relation effet-dose entre l'activité de la PHA et le rendement infectieux du virus E.M.C., en présence d'une dose fixe d'interféron souris (400 U réf.) est présentée dans la figure 1. Dans les cellules traitées par l'interféron pendant 5 h la réplication du virus E.M.C. est inhibée d'environ 300 fois. L'addition de PHA à la seconde heure après l'interféron entraîne la dégradation de l'état antiviral dans les 18 h suivantes. Le taux d'inhibition varie linéairement en proportion de la dose de lectine appliquée à la cellule. Pour la dose de PHA la plus élevée (256 U HA) la restauration de la sensibilité cellulaire au virus E.M.C. est presque totale. Dans les cellules témoins, non traitées par l'interféron, les différentes doses de PHA n'affectent pratiquement pas la réplication virale. CINÉTIQUE DE L'ACTION DE LA PHA SUR L'ÉTAT DE RÉSISTANCE ANTIVIRALE. — Nous avons cherché à déterminer le temps de contact nécessaire entre cellule et PHA pour obtenir la restauration de l'état initial de la cellule. Les cellules sont, comme précédemment, incubées avec 400 unités d'interféron pendant 5 h puis traitées par 256 U HA de PHA durant les intervalles de temps de : 1, 3, 6, 9 et 19 h. Après chaque
de PHA à la seconde heure après l'interféron entraîne la dégradation de l'état antiviral dans les 18 h suivantes. Le taux d'inhibition varie linéairement en proportion de la dose de lectine appliquée à la cellule. Pour la dose de PHA la plus élevée (256 U HA) la restauration de la sensibilité cellulaire au virus E.M.C. est presque totale. Dans les cellules témoins, non traitées par l'interféron, les différentes doses de PHA n'affectent pratiquement pas la réplication virale. CINÉTIQUE DE L'ACTION DE LA PHA SUR L'ÉTAT DE RÉSISTANCE ANTIVIRALE. — Nous avons cherché à déterminer le temps de contact nécessaire entre cellule et PHA pour obtenir la restauration de l'état initial de la cellule. Les cellules sont, comme précédemment, incubées avec 400 unités d'interféron pendant 5 h puis traitées par 256 U HA de PHA durant les intervalles de temps de : 1, 3, 6, 9 et 19 h. Après chaque période d'incubation, la PHA est éliminée et les cellules infectées aussitôt par le virus E.M.C. Les rendements viraux obtenus à chaque étape sont résumés dans la figure 2. Dans les cellules traitées uniquement par l'interféron, l'état antiviral continue à augmenter de façon linéaire en fonction du temps, malgré l'élimination de l'interféron. Au contraire, dans les cellules traitées successivement par l'interféron et par la PHA-M, la pente de la droite s'inverse et l'état antiviral diminue au fur et à mesure de la durée de contact avec la lectine. Les préparations de phytohémagglutinine peuvent, selon le mode d'extraction, contenir plusieurs fractions hétérogènes (8). Une solution de PHA purifiée (PHA-P Difco) a donc été essayée. La PHA-P dégrade comme la PHA-M l'état antiviral induit par l'interféron (expériences non publiées). DISCUSSION. — Les résultats ici présentés illustrent le rôle déterminant joué par la membrane cellulaire, non seulement dans l'induction, mais également dans le maintien de l'état antiviral. En effet, dans l'établissement de l'état antiviral par l'interféron, on peut distinguer deux étapes : la fixation de l'interféron sur les sites membranaires de la cellule puis l'activation spécifique du site récepteur instaurant dans la cellule l'état antiviral. L'addition de PHA à des cellules préalablement traitées par
l'interféron. Au contraire, dans les cellules traitées successivement par l'interféron et par la PHA-M, la pente de la droite s'inverse et l'état antiviral diminue au fur et à mesure de la durée de contact avec la lectine. Les préparations de phytohémagglutinine peuvent, selon le mode d'extraction, contenir plusieurs fractions hétérogènes (8). Une solution de PHA purifiée (PHA-P Difco) a donc été essayée. La PHA-P dégrade comme la PHA-M l'état antiviral induit par l'interféron (expériences non publiées). DISCUSSION. — Les résultats ici présentés illustrent le rôle déterminant joué par la membrane cellulaire, non seulement dans l'induction, mais également dans le maintien de l'état antiviral. En effet, dans l'établissement de l'état antiviral par l'interféron, on peut distinguer deux étapes : la fixation de l'interféron sur les sites membranaires de la cellule puis l'activation spécifique du site récepteur instaurant dans la cellule l'état antiviral. L'addition de PHA à des cellules préalablement traitées par l'interféron dégrade l'état antiviral et restaure dans la cellule un métabolisme normal. Cette restauration ad integrum de la sensibilité cellulaire au virus dépend de la quantité de lectine, du temps de contact avec la cellule et de la présence de récepteurs membranaires à la PHA. Deux éventualités peuvent être envisagées pour expliquer le mécanisme de dégradation de l'état antiviral par la PHA. 1. La PHA induirait ou stimulerait la synthèse intracellulaire de facteurs inhibiteurs de l'état antiviral précédemment évoqués lors d'une étude sur la régulation de la résistance antivirale (9). Il est connu en effet que dans les lymphocytes la PHA stimule l'ensemble du métabolisme cellulaire (3). 2. La PHA se fixerait sur la membrane cellulaire. Dans un premier temps, l'interféron pourrait stabiliser dans un « état actif » les différents antigènes membranaires pour permettre l'expression de l'état antiviral. L'addition de PHA, qui présente une grande affinité pour les gangliosides, constituant le site de fixation de l'interféron (10) désorganiserait cet « état actif » en déplaçant l'interféron ou en provoquant un changement conformationnel de la surface cellulaire. Ceci suggère qu'une certaine configuration des constituants de la membrane gouvernée par l'interféron est nécessaire au maintien de l'état antiviral. L'action conjuguée de
pour expliquer le mécanisme de dégradation de l'état antiviral par la PHA. 1. La PHA induirait ou stimulerait la synthèse intracellulaire de facteurs inhibiteurs de l'état antiviral précédemment évoqués lors d'une étude sur la régulation de la résistance antivirale (9). Il est connu en effet que dans les lymphocytes la PHA stimule l'ensemble du métabolisme cellulaire (3). 2. La PHA se fixerait sur la membrane cellulaire. Dans un premier temps, l'interféron pourrait stabiliser dans un « état actif » les différents antigènes membranaires pour permettre l'expression de l'état antiviral. L'addition de PHA, qui présente une grande affinité pour les gangliosides, constituant le site de fixation de l'interféron (10) désorganiserait cet « état actif » en déplaçant l'interféron ou en provoquant un changement conformationnel de la surface cellulaire. Ceci suggère qu'une certaine configuration des constituants de la membrane gouvernée par l'interféron est nécessaire au maintien de l'état antiviral. L'action conjuguée de ces mécanismes pourrait également expliquer l'effet biologique observé. Séance du 10 janvier 1977. (1) K. LANDSTEINER et H. RAUBITSHEK, Zentralbl. Bacteriol. Parasitenkd. Infecktionskr., 45, 1908, p. 660. (2) P. C. NOWELL, Cancer Res., 20, 1960, p. 426-466. (3) T. WEBER, C. T. NORDMAN et R. GRASBECK, Scand. J. Haematol., 4, 1967, p. 77-80. (4) H. Lis et N. SHARON, Ann. Rev. Biochem., 42, 1973, p. 541-574. (5) G. Dupuis, Canad. J. Biochem., 54, 1976, p. 717-728. F. BESANÇON et H. ANKEL, Comptes rendus, 283, série D, 1976, p. 1807. M. F. BOURGEADE et F. BESANÇON, Comptes rendus, 277, série D, 1973, p. 2833. D. A. RIGAS et E. E. OSGOOD, J. Biol. Chem., 22, 1955, p. 607-615. C. CHANY, F. FOURNIER et S. ROUSSET, Nature, 12, 1971, p. 113-114. F. BESANÇON, H. ANKEL et S. BASU, Nature, 259, 1976, p. 576-578. Institut national de la Santé et de la Recherche médicale, Unité 43, hôpital Saint-Vincent-de-Paul, 74, avenue Denfert-Rochereau, 75014 Paris; University of California, School of Medicine, Cancer Research Institute, Department of Pediatrics, San Francisco, Cal, U.S.A. IMMUNOLOGIE. — Titrage de l'activité hémolytique du complément humain après diffusion radiale. Note de Evelyne Bourret, Madeleine Bastide, Jean-Marie Bastide et Lucette Bardet, présentée
1967, p. 77-80. (4) H. Lis et N. SHARON, Ann. Rev. Biochem., 42, 1973, p. 541-574. (5) G. Dupuis, Canad. J. Biochem., 54, 1976, p. 717-728. F. BESANÇON et H. ANKEL, Comptes rendus, 283, série D, 1976, p. 1807. M. F. BOURGEADE et F. BESANÇON, Comptes rendus, 277, série D, 1973, p. 2833. D. A. RIGAS et E. E. OSGOOD, J. Biol. Chem., 22, 1955, p. 607-615. C. CHANY, F. FOURNIER et S. ROUSSET, Nature, 12, 1971, p. 113-114. F. BESANÇON, H. ANKEL et S. BASU, Nature, 259, 1976, p. 576-578. Institut national de la Santé et de la Recherche médicale, Unité 43, hôpital Saint-Vincent-de-Paul, 74, avenue Denfert-Rochereau, 75014 Paris; University of California, School of Medicine, Cancer Research Institute, Department of Pediatrics, San Francisco, Cal, U.S.A. IMMUNOLOGIE. — Titrage de l'activité hémolytique du complément humain après diffusion radiale. Note de Evelyne Bourret, Madeleine Bastide, Jean-Marie Bastide et Lucette Bardet, présentée par M. André-Romain Prévot. Une méthode de dosage du complément humain après diffusion dans un gel renfermant des hématies sensibilisées permet d'évaluer de façon très satisfaisante l'activité hémolytique de ce complément. L'analyse des résultats par la méthode des moindres carrés a permis de constater qu'il existe une relation linéaire entre l'aire d'hémolyse et le logarithme de la concentration. The hemolytic activity of human complement is evaluated after diffusion in agarose containing sensitized erythrocytes. The results show a linear relation between hemolysis area and logarithm of concentration. L'intérêt suscité actuellement par le système complémentaire humain fait considérer de façon plus approfondie les méthodes de dosages de ce complexe globulinique. Elles peuvent se répartir en deux groupes : — les méthodes faisant appel à l'activité hémolytique du complément sur des globules rouges sensibilisés par l'anticorps hémolytique qui permettent d'évaluer l'activité réelle du complément ; — les méthodes basées sur l'immunoprécipitation des protéines du système complémentaire par leur antisérum, surtout utilisées pour doser les fractions du complément, qui dosent seulement la protéine sans refléter son activité enzymatique. Notre choix s'est donc porté sur une méthode appartenant à la première catégorie. Les méthodes qui se basent sur le phénomène hémolytique se lisent dans la
l'aire d'hémolyse et le logarithme de la concentration. The hemolytic activity of human complement is evaluated after diffusion in agarose containing sensitized erythrocytes. The results show a linear relation between hemolysis area and logarithm of concentration. L'intérêt suscité actuellement par le système complémentaire humain fait considérer de façon plus approfondie les méthodes de dosages de ce complexe globulinique. Elles peuvent se répartir en deux groupes : — les méthodes faisant appel à l'activité hémolytique du complément sur des globules rouges sensibilisés par l'anticorps hémolytique qui permettent d'évaluer l'activité réelle du complément ; — les méthodes basées sur l'immunoprécipitation des protéines du système complémentaire par leur antisérum, surtout utilisées pour doser les fractions du complément, qui dosent seulement la protéine sans refléter son activité enzymatique. Notre choix s'est donc porté sur une méthode appartenant à la première catégorie. Les méthodes qui se basent sur le phénomène hémolytique se lisent dans la zone de 50 % d'hémolyse afin d'augmenter la sensibilité de lecture; la technique de Kabat et Mayer se rattachent à ce principe. En 1974, Hiramoto propose un dosage hémolytique du complément de cobaye réalisé après immunodiffusion du complément dans une suspension en gel d'hématies sensibilisées et non en tubes comme les techniques précédentes. Nous avons appliqué cette méthode au complément humain, et nous avons été amenés à étudier et à modifier les paramètres établis par Hiramoto; ceci nous a permis de mettre au point une nouvelle méthode applicable au sérum humain, de manipulation facile et de lecture très précise. PROTOCOLE EXPÉRIMENTAL. — Toutes les manipulations sont effectuées en milieu tampon véronal sodique de Mayer. La suspension d'hématies de Mouton lavées jusqu'à obtention d'un surnageant limpide, est ajustée à une concentration globulaire de 0,85.109 cellules par millilitre. On réalise un mélange à parties égales de cette suspension et d'une dilution au 1/100 d'un sérum hémolytique antihématies de Mouton préparé sur Lapin. Cette suspension est ajoutée extemporanément à une solution d'agarose, équilibrée à 55°C, de concentration finale égale à 10 g/1. On découpe à l'emporte pièce des puits régulièrement répartis dans le gel solidifié. Deux séries de neuf dilutions, de raison géométrique
les techniques précédentes. Nous avons appliqué cette méthode au complément humain, et nous avons été amenés à étudier et à modifier les paramètres établis par Hiramoto; ceci nous a permis de mettre au point une nouvelle méthode applicable au sérum humain, de manipulation facile et de lecture très précise. PROTOCOLE EXPÉRIMENTAL. — Toutes les manipulations sont effectuées en milieu tampon véronal sodique de Mayer. La suspension d'hématies de Mouton lavées jusqu'à obtention d'un surnageant limpide, est ajustée à une concentration globulaire de 0,85.109 cellules par millilitre. On réalise un mélange à parties égales de cette suspension et d'une dilution au 1/100 d'un sérum hémolytique antihématies de Mouton préparé sur Lapin. Cette suspension est ajoutée extemporanément à une solution d'agarose, équilibrée à 55°C, de concentration finale égale à 10 g/1. On découpe à l'emporte pièce des puits régulièrement répartis dans le gel solidifié. Deux séries de neuf dilutions, de raison géométrique 0,75 correspondant respectivement au sérum étalon et au sérum échantillon, sont déposées dans la même boîte. Le sérum étalon dosé par la technique de Kabat et Mayer titre 43 U.H. 50/ml. Le titre théorique du sérum à éprouver est de 29 U.H. 50/ml. Le volume de chaque dépôt est de 20 μl. Les boîtes sont placées pendant 24 h à 5°C, puis incubées 1 h à 35°C. Le diamètre des cercles d'hémolyse, propre à chaque dépôt de concentration relative CR est mesuré au 1/10 de millimètre près. L'aire d'hémolyse Y est évaluée en millimètres carrés. ANALYSE DES RÉSULTATS. — L'analyse des résultats a d'abord été effectuée selon la loi linéaire décrite par Hiramoto reliant l'aire de lyse à la racine carrée de la concentration relative du sérum CR, L'activité hémolytique d'un sérum étalon est alors donnée par le rapport des pentes bx/bE des droites d'origine commune « a ». Le graphe obtenu, linéaire pour des concentrations CR < 0,25, accuse une courbure nette vers les fortes dilutions. En outre, les droites de régression propres aux sérums étalon et échantillon, tracées à partir des points expérimentaux respectant la linéarité, n'ont pas d'ordonnée à l'origine commune. Ceci infirme le principe même du
20 μl. Les boîtes sont placées pendant 24 h à 5°C, puis incubées 1 h à 35°C. Le diamètre des cercles d'hémolyse, propre à chaque dépôt de concentration relative CR est mesuré au 1/10 de millimètre près. L'aire d'hémolyse Y est évaluée en millimètres carrés. ANALYSE DES RÉSULTATS. — L'analyse des résultats a d'abord été effectuée selon la loi linéaire décrite par Hiramoto reliant l'aire de lyse à la racine carrée de la concentration relative du sérum CR, L'activité hémolytique d'un sérum étalon est alors donnée par le rapport des pentes bx/bE des droites d'origine commune « a ». Le graphe obtenu, linéaire pour des concentrations CR < 0,25, accuse une courbure nette vers les fortes dilutions. En outre, les droites de régression propres aux sérums étalon et échantillon, tracées à partir des points expérimentaux respectant la linéarité, n'ont pas d'ordonnée à l'origine commune. Ceci infirme le principe même du dosage et le titre moyen du sérum à éprouver est très différent du titre théorique (tableau, A). Devant l'insuffisance de cette méthode, nous avons essayé d'adapter à l'hémolyse en gel après diffusion les lois proposées pour les techniques d'immunoprécipitation par diffusion radiale (2) et (3) : les représentations obtenues (fig. 1 et 3) montrent que ces modèles ne peuvent être appliqués à un dosage hémolytique en gel du complément humain. TABLEAU Paramètres des droites de régression calculés par la méthode des moindres carrés A. Selon la méthode d'Hiramoto et coll. B. Selon notre relation activité-log dose Y = a + b VCR Y = a + b log CR Sérum étalon Sérum échantillon Sérum Sérum Nombre Titre exp. étalon échantillon Titre de boîtes bE aE bx ax (U.H. 50 ml) bE bx (U.H. 50 ml) 5 130,53 38,06 129,10 21,70 42 91,02 92,65 28 5 119,81 50,76 126,78 30,86 45 88,28 91,35 29 5 110,22 32,56 100,71 49,30 39 74,42 78,77 31 3 113,99 49,38 108,93 44,42 41 85,03 84,85 34 3 119,47 49,18 120,50 36,99 43 76,98 76,80 30 Titre moyen = 42 U.H. 50/ml Titre moyen = 30 U.H. 50/ml Titre théorique de l'échantillon = 29 U.H. 50/ml
1 et 3) montrent que ces modèles ne peuvent être appliqués à un dosage hémolytique en gel du complément humain. TABLEAU Paramètres des droites de régression calculés par la méthode des moindres carrés A. Selon la méthode d'Hiramoto et coll. B. Selon notre relation activité-log dose Y = a + b VCR Y = a + b log CR Sérum étalon Sérum échantillon Sérum Sérum Nombre Titre exp. étalon échantillon Titre de boîtes bE aE bx ax (U.H. 50 ml) bE bx (U.H. 50 ml) 5 130,53 38,06 129,10 21,70 42 91,02 92,65 28 5 119,81 50,76 126,78 30,86 45 88,28 91,35 29 5 110,22 32,56 100,71 49,30 39 74,42 78,77 31 3 113,99 49,38 108,93 44,42 41 85,03 84,85 34 3 119,47 49,18 120,50 36,99 43 76,98 76,80 30 Titre moyen = 42 U.H. 50/ml Titre moyen = 30 U.H. 50/ml Titre théorique de l'échantillon = 29 U.H. 50/ml Régression significative pour CR < 0,25 aF significativement différent de ax montrant l'incompatibilité avec le principe du dosage Régression significative bE et bx sensiblement identiques 4) dont la validité est contrôlée statistiquement. L'analyse de variance indique une haute signification de la linéarité au seuil de probabilité de 5 %, quelles que soient les concentrations. Les coefficients de régression bE et bx des droites des sérums étalon et échantillon témoignent d'un bon parallélisme (tableau, B). L'activité hémolytique de l'échantillon peut être alors évaluée à partir du rapport d'activité A, antilog de l'écart horizontal M' entre les droites étalon et échantillon (6). Le titre moyen calculé de 30 U.H. 50/ml, compatible avec le titre théorique de 29 U.H. 50/ml, démontre la validité de la méthode proposée pour le titrage du complément humain. Nous devons à la Société Biomérieux d'avoir pu réaliser ce travail. (*) Séance du 3 janvier 1977. (1) V. K. GHANTA, J. MCGHEE, S. J. SOONG, N. M. HAMLIN, D. HURST et R. HIRAMOTO, Immunochemistry, 10, 1973, p. 645-649. (2) G. MANCINI, A. O. CARBONARA et J. F. HEREMANS, Immunochemistry, 2, 1965, p. 235-254. (3) G. SANDOR et Z. UROSEVIC, Comptes rendus, 276, série D, 1973, p. 2753. (4) E.
que soient les concentrations. Les coefficients de régression bE et bx des droites des sérums étalon et échantillon témoignent d'un bon parallélisme (tableau, B). L'activité hémolytique de l'échantillon peut être alors évaluée à partir du rapport d'activité A, antilog de l'écart horizontal M' entre les droites étalon et échantillon (6). Le titre moyen calculé de 30 U.H. 50/ml, compatible avec le titre théorique de 29 U.H. 50/ml, démontre la validité de la méthode proposée pour le titrage du complément humain. Nous devons à la Société Biomérieux d'avoir pu réaliser ce travail. (*) Séance du 3 janvier 1977. (1) V. K. GHANTA, J. MCGHEE, S. J. SOONG, N. M. HAMLIN, D. HURST et R. HIRAMOTO, Immunochemistry, 10, 1973, p. 645-649. (2) G. MANCINI, A. O. CARBONARA et J. F. HEREMANS, Immunochemistry, 2, 1965, p. 235-254. (3) G. SANDOR et Z. UROSEVIC, Comptes rendus, 276, série D, 1973, p. 2753. (4) E. A. KABAT et M. M. MAYER, Complement and Complement Fixation in Experimental Immunochemistry, chap. 4, 1961, C. C. THOMAS. (5) D. H. CAMPBELL, J. S. GARVEY, N. E. CREMER et D. H. SUSSDORF, in Methods in Immunology, 1964, W. A. Benjamin, Inc. New York. (6) J. PHILIPPE, Les méthodes statistiques en pharmacie et en chimie, chap. XI, 1967, p. 264, Masson, Paris. Laboratoire d'Immunologie, Faculté de Pharmacie, 34060 Montpellier Cedex; Laboratoire de Physique industrielle, Faculté de Pharmacie, 34060 Montpellier Cedex. GYNÉCOLOGIE. — Variations des stéroides non conjugués dans le liquide amniotique au cours des dernières semaines de la grossesse. Note présentée par M. Robert Debré. Le cortisol, l'oestradiol et la progestérone ont été mesurés dans 172 liquides amniotiques recueillis par amniocentèse au cours des 10 dernières semaines de grossesse, soit au cours de grossesses normales dont l'accouchement a eu lieu à terme, soit au cours de grossesses qui se sont terminées prématurément. Des variations importantes des taux de ces stéroïdes ont été mises en évidence à l'approche de la date de l'accouchement, que celui-ci survienne à terme ou prématurément. Levels of cortisol, estradiol and progesterone were measured in 172 amniotic fluid samples collected by amniocentesis during late pregnancy. An increase