jeanflop/post_ocr_correction2 huggingface dataset:
colonies formées d'un seul type cellulaire, sont issues d'une même cellule multipotente (4). L'hypothèse d'une différenciation préférentielle des cellules souches hématopoïétiques pluripotentes lors d'une infection par le BCG peut être confirmée par l'utilisation de ces conditions expérimentales. (1) Des Souris NCS des deux sexes, âgées de 5 semaines lors de l'infection, sont irradiées à 880 rd (20 mn sous un irradiateur au césium-137 de débit 44 rd/min) 0, 1, 2, 3 et 4 semaines après injection intraveineuse de 1 mg de BCG vivant. 2 h après l'irradiation, 5.105 cellules nuclées de moelle osseuse sont injectées. 6 jours plus tard, les animaux reçoivent une injection intraveineuse de 0,5 IlCi d'iododéoxyuridine marqué à l'iode 125 et 0,2 jaCi de citrate de fer 59. 24 h plus tard, la rate est prélevée ainsi que 0,2 ml de sang. Au niveau de la rate, la mesure de l'incorporation de l'iode 125 traduit la multiplication cellulaire et celle du fer-59 l'importance de la différenciation vers la lignée érythrocytaire. Le rapport (Fe/I) animal infecté)/(Fe/I) animal témoin exprime la modification du nombre des cellules engagées vers la différenciation érythrocytaire chez l'animal infecté par rapport à l'animal non infecté. Au niveau du sang, l'incorporation du fer-59 est proportionnelle à la libération des réticulocytes et des hématies nouvellement formées par les clones hématopoïétiques. La figure 1 rapporte les résultats observés au niveau de la rate chez des animaux irradiés à des temps variables après l'infection par le BCG et recevant le même inoculum de cellules souches hématopoïétiques. Nous voyons que pour des incorporations équivalentes en iode 125, l'incorporation du fer-59 est très diminuée chez les animaux infectés depuis 2 semaines par le BCG. Le rapport de différenciation passe de 1 à 0,51 à la deuxième semaine de l'infection puis augmente ensuite. Fig. 1. — Incorporation de déoxyiodeuridine marqué à l'iode 125 et de fer-59 dans les rates de Souris irradiées à 880 rd et infectées depuis des durées variables avec 1 mg de BCG, au 6e jour après reconstitution avec 5. 101 cellules médullaires. 0 O incorporation d'IUdR (lm); D -D incorporation du fer-59; À&A rapports de différenciation correspondant
à la libération des réticulocytes et des hématies nouvellement formées par les clones hématopoïétiques. La figure 1 rapporte les résultats observés au niveau de la rate chez des animaux irradiés à des temps variables après l'infection par le BCG et recevant le même inoculum de cellules souches hématopoïétiques. Nous voyons que pour des incorporations équivalentes en iode 125, l'incorporation du fer-59 est très diminuée chez les animaux infectés depuis 2 semaines par le BCG. Le rapport de différenciation passe de 1 à 0,51 à la deuxième semaine de l'infection puis augmente ensuite. Fig. 1. — Incorporation de déoxyiodeuridine marqué à l'iode 125 et de fer-59 dans les rates de Souris irradiées à 880 rd et infectées depuis des durées variables avec 1 mg de BCG, au 6e jour après reconstitution avec 5. 101 cellules médullaires. 0 O incorporation d'IUdR (lm); D -D incorporation du fer-59; À&A rapports de différenciation correspondant (fer/iode) animal infecté)/(fer/iode) animal témoin. Moyenne pour 6 souris par point ± erreur standard (1) significatif p < 0,001; (2) significatif p < 0,01. La figure 2 rapporte les observations effectuées au niveau du sang. La production des hématies est très réduite, sinon absente chez les animaux infectés depuis 2 semaines par le BCG. Ainsi, les clones hématopoïétiques formés au niveau de la rate des animaux irradiés infectés par le BCG contiennent des populations cellulaires dont la différenciation vers la lignée rouge est très diminuée, sinon abolie. (2) Nous avons essayé de préciser si la proportion de cellules souches pluripotentes capables d'acquérir un état de sensibilité à l'érythropoïétine pouvait être accrue lors d'anémie plus intense que celle créée par l'infection. Fig. 2. — Incorporation du fer-59 dans 0,2 ml de sang 6 jours après reconstitution avec 5.105 cellules médullaires de souris irradiées à 880 rd, infectées depuis des durées variables par 1 mg de BCG. Moyenne pour 6 souris par point: (1) significatif p < 0,05; (2) significatif p < 0,001; (3) significatif p < 0,01. Fig. 3. — Incorporation du fer-59 dans 0,2 ml de sang au 6e jour après reconstitution avec 5.105 cellules médullaires de Souris irradiées à
semaines par le BCG. Ainsi, les clones hématopoïétiques formés au niveau de la rate des animaux irradiés infectés par le BCG contiennent des populations cellulaires dont la différenciation vers la lignée rouge est très diminuée, sinon abolie. (2) Nous avons essayé de préciser si la proportion de cellules souches pluripotentes capables d'acquérir un état de sensibilité à l'érythropoïétine pouvait être accrue lors d'anémie plus intense que celle créée par l'infection. Fig. 2. — Incorporation du fer-59 dans 0,2 ml de sang 6 jours après reconstitution avec 5.105 cellules médullaires de souris irradiées à 880 rd, infectées depuis des durées variables par 1 mg de BCG. Moyenne pour 6 souris par point: (1) significatif p < 0,05; (2) significatif p < 0,001; (3) significatif p < 0,01. Fig. 3. — Incorporation du fer-59 dans 0,2 ml de sang au 6e jour après reconstitution avec 5.105 cellules médullaires de Souris irradiées à 880 rd, infectées ou non 2 semaines auparavant avec 1 mg de BCG et auxquelles a été soustrait, ou non, 0,5 ml de sang 24 h avant irradiation. N.S., Souris non saignées; S., Souris saignées; non infectées, souris non traitées par le BCG; infectées, souris ayant reçu 1 mg de BCG en intraveineuse. La soustraction de 0,5 ml de sang, soit environ 1/3 de la masse sanguine à des Souris non infectées avant l'irradiation létale et reconstitution entraîne une stimulation de l'érythropoïèse identifiable par une augmentation de l'incorporation du fer-59 au niveau de la rate et du sang. Par contre, chez les animaux infectés par le BCG, 2 semaines auparavant cette anémie plus intense, n'entraîne aucune modification de l'incorporation du fer-59 au niveau de la rate, comme au niveau périphérique (fig. 3). La différenciation de cellules souches hématopoïétiques provenant d'animaux normaux dans la rate de Souris irradiées est influencée par l'existence ou non d'une infection préalable à l'irradiation. La différenciation vers la lignée rouge peut dans ces conditions être totalement absente, même si un stimulus tel qu'une anémie intense avec taux élevé d'érythropoïétine est présent. Un des schémas de la différenciation des cellules souches pluripotentes propose qu'après l'engagement vers les
BCG en intraveineuse. La soustraction de 0,5 ml de sang, soit environ 1/3 de la masse sanguine à des Souris non infectées avant l'irradiation létale et reconstitution entraîne une stimulation de l'érythropoïèse identifiable par une augmentation de l'incorporation du fer-59 au niveau de la rate et du sang. Par contre, chez les animaux infectés par le BCG, 2 semaines auparavant cette anémie plus intense, n'entraîne aucune modification de l'incorporation du fer-59 au niveau de la rate, comme au niveau périphérique (fig. 3). La différenciation de cellules souches hématopoïétiques provenant d'animaux normaux dans la rate de Souris irradiées est influencée par l'existence ou non d'une infection préalable à l'irradiation. La différenciation vers la lignée rouge peut dans ces conditions être totalement absente, même si un stimulus tel qu'une anémie intense avec taux élevé d'érythropoïétine est présent. Un des schémas de la différenciation des cellules souches pluripotentes propose qu'après l'engagement vers les cellules souches de lignée, des mécanismes spécifiques contrôlent secondairement la prolifération et la différenciation terminale. L'exemple le mieux étudié cité à l'appui de ce schéma est celui de l'érythron où après un stade où les cellules acquièrent un état de sensibilité à l'érythropoïétine, cette hormone contrôle secondairement les différenciations terminales. L'hypothèse que nous avions formulée de l'existence d'une différenciation préférentielle des cellules souches hématopoïétiques au cours de l'infection par le BCG se trouve confirmée par les résultats que nous venons de rapporter. Le très faible nombre, voire l'absence de cellules répondant à l'érythropoïétine dans les expériences précédentes souligne que l'effet de l'infection par le BCG se situe bien au moment du passage de la cellule souche multipotente vers la cellule souche unipotente. CONCLUSIONS. — L'anémie avec érythroblastopénie et taux élevé d'érythropoïétine qui apparaît chez la Souris dans les semaines suivant l'injection de 1 mg de BCG par voie intraveineuse est secondaire à un phénomène de différenciation préférentielle des cellules souches hématopoïétiques. Des expériences de reconstitution après irradiation létale de Souris infectées ou non au préalable montrent que la différenciation vers la lignée érythroblastique est très diminuée, voire abolie chez les Souris infectées. Ce processus a lieu au moment du passage
L'hypothèse que nous avions formulée de l'existence d'une différenciation préférentielle des cellules souches hématopoïétiques au cours de l'infection par le BCG se trouve confirmée par les résultats que nous venons de rapporter. Le très faible nombre, voire l'absence de cellules répondant à l'érythropoïétine dans les expériences précédentes souligne que l'effet de l'infection par le BCG se situe bien au moment du passage de la cellule souche multipotente vers la cellule souche unipotente. CONCLUSIONS. — L'anémie avec érythroblastopénie et taux élevé d'érythropoïétine qui apparaît chez la Souris dans les semaines suivant l'injection de 1 mg de BCG par voie intraveineuse est secondaire à un phénomène de différenciation préférentielle des cellules souches hématopoïétiques. Des expériences de reconstitution après irradiation létale de Souris infectées ou non au préalable montrent que la différenciation vers la lignée érythroblastique est très diminuée, voire abolie chez les Souris infectées. Ce processus a lieu au moment du passage du stade des cellules souches multipotentes vers les cellules souches unipotentes comme le montre l'absence ou la diminution importante des cellules sensibles à l'érythropoïétine chez les animaux infectés. (*) Séance du 7 février 1977. (2) G. MARCHAL, Comptes rendus, 282, série D, 1976, p. 1829. (3) L. G. LAJTHA, Brit. J. Haematol., 29, 1975, p. 529-535. (4) D. METCALF et M. A. S. MOORE, Haemopoietic Cells in Frontiers of Biology, 24, 1971, A. NEUBERGER and E. L. TATUM éds., North-Holland Publishing Company, Amsterdam, London. (5) A. M. Wu, J. E. TILL, L. SIMINOVITCH et E. A. MCCULLOCH, J. Cell. Physiol., 69, 1967, p. 177-184. Unité d'Immunophysiologie cellulaire, Département de Biologie moléculaire, Institut Pasteur, 25, rue du Docteur-Roux, 75015 Paris. IMMUNOCHIMIE. — Analyse immunochimique des protéines de l'hémolymphe de Sacculina carcini Thompson, parasite de Carcinus mediterraneus Czerniavsky. Note (*) de Charmaine Herberts, présentée par M. Maurice Fontaine. Les protéines de l'hémolymphe de Sacculina carcini ont été séparées par électrophorèse et comparées à celles du Crabe hôte. L'étude immunochimique permet de caractériser 10 déterminants antigéniques dont 3 se rapportent à une seule fraction isolée en acrylamide. L'absence de réaction de précipitation de la fraction II est discutée. The hemolymph proteins of Sacculina
J. Haematol., 29, 1975, p. 529-535. (4) D. METCALF et M. A. S. MOORE, Haemopoietic Cells in Frontiers of Biology, 24, 1971, A. NEUBERGER and E. L. TATUM éds., North-Holland Publishing Company, Amsterdam, London. (5) A. M. Wu, J. E. TILL, L. SIMINOVITCH et E. A. MCCULLOCH, J. Cell. Physiol., 69, 1967, p. 177-184. Unité d'Immunophysiologie cellulaire, Département de Biologie moléculaire, Institut Pasteur, 25, rue du Docteur-Roux, 75015 Paris. IMMUNOCHIMIE. — Analyse immunochimique des protéines de l'hémolymphe de Sacculina carcini Thompson, parasite de Carcinus mediterraneus Czerniavsky. Note (*) de Charmaine Herberts, présentée par M. Maurice Fontaine. Les protéines de l'hémolymphe de Sacculina carcini ont été séparées par électrophorèse et comparées à celles du Crabe hôte. L'étude immunochimique permet de caractériser 10 déterminants antigéniques dont 3 se rapportent à une seule fraction isolée en acrylamide. L'absence de réaction de précipitation de la fraction II est discutée. The hemolymph proteins of Sacculina carcini, a parasite of Carcinus mediterraneus, are compared with those of the host. The immunochemical analysis revealed ten antigenic components. The absence of reaction of one fraction separated by electrophoresis is discussed. L'association entre Carcinus mediterraneus et Sacculina carcini a été envisagée par de nombreux auteurs en raison des modifications de la croissance et de la sexualité du Crabe sous l'effet du parasite. D'autres travaux ont établi des comparaisons entre Crabes sains et parasités [voir revue dans (1)]. Cependant, les mécanismes d'action de la Sacculine sont encore mal connus; on ignore également s'il existe chez le Crabe une réaction de défense à la présence de la Sacculine. C'est pourquoi il nous a paru intéressant d'analyser les protéines sériques du Crabe et celles de la Sacculine. MÉTODES. — 1° Récolte des animaux, préparation des hémolymphes. — Les Crabes sacculinés des 2 sexes proviennent des étangs de Thau et de Vic (Hérault). Ils ont une largeur céphalothoracique de 21 à 62 mm. Les stades d'intermue sont déterminés par la méthode de Drach et Techernigovtzeff (1); tous les animaux examinés étaient au stade C4 du cycle d'intermue. Les hémolymphes sont prélevées selon la technique déjà indiquée (1). Pour la Sacculine, elles sont rassemblées
de la croissance et de la sexualité du Crabe sous l'effet du parasite. D'autres travaux ont établi des comparaisons entre Crabes sains et parasités [voir revue dans (1)]. Cependant, les mécanismes d'action de la Sacculine sont encore mal connus; on ignore également s'il existe chez le Crabe une réaction de défense à la présence de la Sacculine. C'est pourquoi il nous a paru intéressant d'analyser les protéines sériques du Crabe et celles de la Sacculine. MÉTODES. — 1° Récolte des animaux, préparation des hémolymphes. — Les Crabes sacculinés des 2 sexes proviennent des étangs de Thau et de Vic (Hérault). Ils ont une largeur céphalothoracique de 21 à 62 mm. Les stades d'intermue sont déterminés par la méthode de Drach et Techernigovtzeff (1); tous les animaux examinés étaient au stade C4 du cycle d'intermue. Les hémolymphes sont prélevées selon la technique déjà indiquée (1). Pour la Sacculine, elles sont rassemblées en « pool », réparties en aliquots de 50 ml et congelées à −29°C jusqu'au moment de leur utilisation. Une étude comparative a été réalisée à partir d'hémolymphes fraîches avec les mêmes résultats. 2° Dosage des protéines. — Les concentrations en protéines des hémolymphes sont déterminées par la méthode de Lowry et coll. (4). La concentration d'un « pool » de Sacculine est de 37 mg/ml; celle d'un « pool » de Crabes parasités mâles atteint 69 mg/ml. 3° Électrophorèses. — La séparation des protéines s'effectue par électrophorèse en gel d'acrylamide à 6 % en tampon tris-glycine pH 8,5 et en gel de gradient de concentration continu (4-24 %) avec un tampon tris-borate, pH 8,2 selon la technique déjà indiquée (1) mais sans EDTA. La migration est réalisée à 4° et les protéines sont révélées par l'amidoschwartz. Les fractions cupriques sont mises en évidence par l'acide rubéanique (1), les colorations à l'APS et au noir Soudan ont permis de caractériser les glyco-lipoprotéines. 4° Isolement et concentration des fractions. — Selon leur type de migration les fractions sont recueillies par élution dans le tampon ou par broyage du gel. Le broyat est centrifugé à 6 000 tr/min pendant 10 min; puis
Lowry et coll. (4). La concentration d'un « pool » de Sacculine est de 37 mg/ml; celle d'un « pool » de Crabes parasités mâles atteint 69 mg/ml. 3° Électrophorèses. — La séparation des protéines s'effectue par électrophorèse en gel d'acrylamide à 6 % en tampon tris-glycine pH 8,5 et en gel de gradient de concentration continu (4-24 %) avec un tampon tris-borate, pH 8,2 selon la technique déjà indiquée (1) mais sans EDTA. La migration est réalisée à 4° et les protéines sont révélées par l'amidoschwartz. Les fractions cupriques sont mises en évidence par l'acide rubéanique (1), les colorations à l'APS et au noir Soudan ont permis de caractériser les glyco-lipoprotéines. 4° Isolement et concentration des fractions. — Selon leur type de migration les fractions sont recueillies par élution dans le tampon ou par broyage du gel. Le broyat est centrifugé à 6 000 tr/min pendant 10 min; puis le surnageant est concentré par dialyse sous vide à 4°. Les fractions les plus rapides sont éluées dans le tampon de migration après avoir traversé le gel. Elles sont ensuite dialysées et concentrées comme précédemment. 5° Préparation des immunsérums. — Elle a été réalisée dans le service du professeur A. Capron à l'Institut Pasteur de Lille, selon la méthode de Vaitukaitis (6). Les sérums sont répartis en aliquots de 0,9 ml et lyophilisés. Ils sont ensuite employés purs ou concentrés. Analyses immunochimiques. — Les échantillons sont éprouvés par la technique en double diffusion d'Ouchterlony (2) et par immunoélectrophorèses en gel d'agarose indubiose A 37 à 1 %, tampon tris-barbital sodium barbital pH 8,8 uni et bidimensionnelles (8)(9). Les arcs de précipitation sont observés à l'état frais et après coloration à l'amidoschwartz ou au bleu de Coomassie. Fig. 1. — Schéma immunoélectrophorétique d'une hémolymphe totale de Sacculine. Fig. 2. — Immunoélectrophorèse d'une hémolymphe totale (en haut) et de la fraction 1' (en bas). Dans la goutte, sérum antihémolymphe de sacculine. Fig. 3. — Immunoélectrophorèse d'une hémolymphe totale (haut) et de la fraction intermédiaire (bas) de la Sacculine. Fig. 4. — Réaction de double diffusion; puits périphériques St. Sacculine, hémolymphe totale, fractions
Capron à l'Institut Pasteur de Lille, selon la méthode de Vaitukaitis (6). Les sérums sont répartis en aliquots de 0,9 ml et lyophilisés. Ils sont ensuite employés purs ou concentrés. Analyses immunochimiques. — Les échantillons sont éprouvés par la technique en double diffusion d'Ouchterlony (2) et par immunoélectrophorèses en gel d'agarose indubiose A 37 à 1 %, tampon tris-barbital sodium barbital pH 8,8 uni et bidimensionnelles (8)(9). Les arcs de précipitation sont observés à l'état frais et après coloration à l'amidoschwartz ou au bleu de Coomassie. Fig. 1. — Schéma immunoélectrophorétique d'une hémolymphe totale de Sacculine. Fig. 2. — Immunoélectrophorèse d'une hémolymphe totale (en haut) et de la fraction 1' (en bas). Dans la goutte, sérum antihémolymphe de sacculine. Fig. 3. — Immunoélectrophorèse d'une hémolymphe totale (haut) et de la fraction intermédiaire (bas) de la Sacculine. Fig. 4. — Réaction de double diffusion; puits périphériques St. Sacculine, hémolymphe totale, fractions 1 l' et 1'. Au centre sérum antihémolymphe de Sacculine. RÉSULTATS. — 1° Analyse électrophorétique. — Chez la Sacculine 3 groupes de fractions protéiques différant par leur mobilité électrophorétique ont été mis en évidence. Le premier groupe 1' est le plus important. À l'analyse en gel à gradient de concentration il apparaît formé de une à trois bandes de nature glycoprotéique situées au niveau de la lipoprotéine d'un sérum humain de référence. Les fractions intermédiaires sont beaucoup moins marquées. Ces bandes trouvent leur correspondance chez l'hôte. C'est pourquoi elles sont analysées en même temps que les fractions du Crabe (10). En acrylamide à 6 %, la fraction glycoprotéique 11' caractéristique de la Sacculine migre comme le front des ions. Elle n'est pas retenue dans le gel à gradient de concentration qu'elle traverse après 3 h de migration. Il doit s'agir d'une protéine de faible poids moléculaire, inférieur à 60 000. Ces différentes fractions isolées ont été analysées à nouveau par électrophorèse. La fraction 1' se divise alors en 2 bandes dont l'une migre comme la bande 11, la seconde restant au même niveau que la fraction initiale. Celle-ci semble donc formée d'éléments de plus petit poids moléculaire qui se dépolymérisent
il apparaît formé de une à trois bandes de nature glycoprotéique situées au niveau de la lipoprotéine d'un sérum humain de référence. Les fractions intermédiaires sont beaucoup moins marquées. Ces bandes trouvent leur correspondance chez l'hôte. C'est pourquoi elles sont analysées en même temps que les fractions du Crabe (10). En acrylamide à 6 %, la fraction glycoprotéique 11' caractéristique de la Sacculine migre comme le front des ions. Elle n'est pas retenue dans le gel à gradient de concentration qu'elle traverse après 3 h de migration. Il doit s'agir d'une protéine de faible poids moléculaire, inférieur à 60 000. Ces différentes fractions isolées ont été analysées à nouveau par électrophorèse. La fraction 1' se divise alors en 2 bandes dont l'une migre comme la bande 11, la seconde restant au même niveau que la fraction initiale. Celle-ci semble donc formée d'éléments de plus petit poids moléculaire qui se dépolymérisent lors de leur isolement. Les autres fractions donnent des bandes situées aux mêmes emplacements que lors de la première séparation. 2° Étude immunochimique. — (a) hémolymphe totale. Confronté à de l'hémolymphe de Sacculine, le sérum antisacculine révèle 7 à 10 arcs de précipitation. Dans les conditions de nos expériences ils présentent tous sauf un une migration anodique et peuvent se répartir en 3 groupes de mobilité différente (fig. 1). Certains sont toujours présents [(6), (1), (8)] et nettement marqués (arcs 6, 7, 8 et 1 lorsqu'il est observé), d'autres sont plus discrets [e), (9X (1°)]; les arcs 2, 4, 5, faibles ne sont pas toujours observés. Il ne semble pas y avoir de différence significative entre les images immunoélectrophorètiques de Sacculines provenant de Crabes mâles ou de Crabes femelles. (b) fractions isolées. Elles sont analysées en les faisant réagir en même temps que de l'hémolymphe totale avec le sérum antisacculine. La fraction 1' donne 2 zones de précipitation nettes. Leurs distances relatives de migration comparées à celles des protéines d'une hémolymphe totale, conduit à les assimiler aux arcs 6 et 7; il apparaît une troisième zone plus faible correspondant à l'arc 3 (fig. 2). En réaction de double diffusion, on