jeanflop/post_ocr_correction2 huggingface dataset:
nitrotyrosine sur le groupement carboxylique essentiel de la 3-phosphoglycérate kinase d'une façon analogue à celle obtenue précédemment avec la glycine éthyl ester (2). La quantité de tyrosine nitrée incorporée sur des échantillons diversement inactivés a été déterminée sur analyseur d'acides aminés (Technicon, type TSM 1), après hydrolyse acide totale; les résultats obtenus reportés sur la figure 2 montrent qu'il existe une relation linéaire entre la perte d'activité et l'incorporation du nucléophile et qu'à une mole de tyrosine nitrée fixée par mole d'enzyme, correspond une inactivation totale. Fig. 1. — Inactivation de la 3-phosphoglycérate kinase de levure par le CMC. Tampon phosphate 0,1 M, pH 6,1, température 17°C. Concentration en enzyme 0,05 mmole/ml. (A) Concentration en ester éthylique de la nitrotyrosine 0,03 mmole/ml. (x) Concentration en CMC 0,1 mmole/ml. (0) Concentration en CMC 0,1 mmole/ml et en ester éthylique de la nitrotyrosine 0,03 mmole/ml. Fig. 2. — Effet de l'incorporation de la nitrotyrosine sur l'activité de la 3-phosphoglycerate kinase. Ensuite, la nature chimique du résidu modifié a été déterminée sur une enzyme inactivée à 80 %. Pour ce faire, l'échantillon a été soumis à une protéolyse totale; ainsi, après carboxyméthylation de l'enzyme [(7), (8)] une digestion trypsinique (pH 8,5, 38°C, E/S= 1/100 pendant 3 h) est effectuée. La réaction est prolongée toute la nuit après addition d'une même quantité de trypsine; la protéolyse est poursuivie par action de la pronase (E/S= 1/10, pH 7,6, 20 h à 37°C), enfin, elle est achevée par l'aminopeptidase M en utilisant une égale quantité d'enzyme et de substrat. L'isolement du peptide contenant la nitrotyrosine est réalisé par immunoaffinité, sur colonne de sépharose couplée à des anticorps spécifiques de la nitrotyrosine (9). Fig. 3. — Isolement du peptide à nitrotyrosine. 0,5 gramme (20 mg) d'un hydrolysat protéolytique total de l'enzyme modifiée sont appliquées sur une colonne (1 x 4 cm) de sépharose couplée aux anticorps spécifiques de la nitrotyrosine (25 mg). La colonne est lavée avec du bicarbonate d'ammonium 0,1 M, puis le peptide à nitrotyrosine est élué avec l'ammoniaque 4 M. (0) Lectures de l'absorption à 280 nm et (8) à 380 nm. Le profil
1/100 pendant 3 h) est effectuée. La réaction est prolongée toute la nuit après addition d'une même quantité de trypsine; la protéolyse est poursuivie par action de la pronase (E/S= 1/10, pH 7,6, 20 h à 37°C), enfin, elle est achevée par l'aminopeptidase M en utilisant une égale quantité d'enzyme et de substrat. L'isolement du peptide contenant la nitrotyrosine est réalisé par immunoaffinité, sur colonne de sépharose couplée à des anticorps spécifiques de la nitrotyrosine (9). Fig. 3. — Isolement du peptide à nitrotyrosine. 0,5 gramme (20 mg) d'un hydrolysat protéolytique total de l'enzyme modifiée sont appliquées sur une colonne (1 x 4 cm) de sépharose couplée aux anticorps spécifiques de la nitrotyrosine (25 mg). La colonne est lavée avec du bicarbonate d'ammonium 0,1 M, puis le peptide à nitrotyrosine est élué avec l'ammoniaque 4 M. (0) Lectures de l'absorption à 280 nm et (8) à 380 nm. Le profil d'élution de cette colonne est présenté sur la figure 3, la purification de la fraction nitrée est achevée par électrophorèse sur papier à pH 6,5 dans le solvant pyridine-acide acétique-eau (25/1 224, v/v/v) sous un champ électrique de 70 V/cm. L'hydrolyse acide totale de ce produit purifié libère 2 acides aminés : 1,0 Glu, 0,9 Tyr et le même échantillon non hydrolysé donne sur l'analyseur d'acides aminés un large pic au niveau de la valine avec un coefficient de ninhydrine de 0,65 par rapport à l'acide glutamique. Ce composé correspond au dipeptide Glu-N02 Tyr que nous avons pu obtenir avec un excellent rendement (45 %). En conclusion, l'incorporation de la tyrosine nitrée dans la 3-phosphoglycérate kinase de levure dont le résidu carboxylique essentiel est activé par le carbodiimide, entraîne la modification chimique d'un seul résidu par mole d'enzyme, modification qui conduit à une perte totale de l'activité enzymatique. L'isolement du dipeptide Glu-N02 Tyr par immuno-chromatographie permet de conclure à l'implication d'un groupement glutamique dans l'activité de la 3-phosphoglycérate kinase. La localisation de ce résidu dans la structure primaire fera l'objet d'une prochaine publication, cette méthode nous ayant permis d'isoler les fragments contenant ce résidu marqué et obtenus après coupure au
aminés : 1,0 Glu, 0,9 Tyr et le même échantillon non hydrolysé donne sur l'analyseur d'acides aminés un large pic au niveau de la valine avec un coefficient de ninhydrine de 0,65 par rapport à l'acide glutamique. Ce composé correspond au dipeptide Glu-N02 Tyr que nous avons pu obtenir avec un excellent rendement (45 %). En conclusion, l'incorporation de la tyrosine nitrée dans la 3-phosphoglycérate kinase de levure dont le résidu carboxylique essentiel est activé par le carbodiimide, entraîne la modification chimique d'un seul résidu par mole d'enzyme, modification qui conduit à une perte totale de l'activité enzymatique. L'isolement du dipeptide Glu-N02 Tyr par immuno-chromatographie permet de conclure à l'implication d'un groupement glutamique dans l'activité de la 3-phosphoglycérate kinase. La localisation de ce résidu dans la structure primaire fera l'objet d'une prochaine publication, cette méthode nous ayant permis d'isoler les fragments contenant ce résidu marqué et obtenus après coupure au bromure de cyanogène ou après hydrolyse trypsique. Séance du 14 février 1977. D. G. HOARE et D. E. KOSHLAND Jr., J. Biol. Chem., 242, 1967, p. 2447. A. BREVET, C. ROUSTAN, G. DESVAGES, L.-A. PRADEL, N. V. THOAI, Europ. J. Biochem., 39, 1973, p. 141. D. B. PHO, C. ROUSTAN, G. DESVAGES, L.-A. PRADEL, N. V. THOAI, FEBS Letters, 45, 1974, p. 114. D. B. PHO, C. ROUSTAN, A. NGUYEN THI TOT, L.-A. PRADEL, 1977, soumis à publication. R. K. SCOPES, Biochem. J., 122, 1971, p. 89. A. FATTOUM, R. KASSAB, L.-A. PRADEL, Biochem. Biophys. Acta, 405, 1975, p. 325. C. ROUSTAN, A. FATTOUM, L.-A. PRADEL, Biochemistry, 15, 1976, p. 2172. M. HELMAN, D. GIVOL, Biochem. J., 125, 1971, p. 971. Laboratoire de Biochimie cellulaire, Collège de France, place Marcelin-Berthelot, 75231 Paris Cedex 05. PHARMACOLOGIE. — Action de la toxine II isolée de l'Anémone de mer (Anemonia sulcata) sur l'iléon isolé de Cobaye (1). Note (*) de France Tazieff-Depierre, Marc Choucavy et Danièle Goudou, présentée par M. Jacques Tréfouël. L'iléon de Cobaye isolé mis en contact avec de la toxine II extraite de l'Anemonia sulcata sécrète non seulement un surplus d'acétylcholine mais aussi de la sérotonine. Nous avons conclu que
G. DESVAGES, L.-A. PRADEL, N. V. THOAI, FEBS Letters, 45, 1974, p. 114. D. B. PHO, C. ROUSTAN, A. NGUYEN THI TOT, L.-A. PRADEL, 1977, soumis à publication. R. K. SCOPES, Biochem. J., 122, 1971, p. 89. A. FATTOUM, R. KASSAB, L.-A. PRADEL, Biochem. Biophys. Acta, 405, 1975, p. 325. C. ROUSTAN, A. FATTOUM, L.-A. PRADEL, Biochemistry, 15, 1976, p. 2172. M. HELMAN, D. GIVOL, Biochem. J., 125, 1971, p. 971. Laboratoire de Biochimie cellulaire, Collège de France, place Marcelin-Berthelot, 75231 Paris Cedex 05. PHARMACOLOGIE. — Action de la toxine II isolée de l'Anémone de mer (Anemonia sulcata) sur l'iléon isolé de Cobaye (1). Note (*) de France Tazieff-Depierre, Marc Choucavy et Danièle Goudou, présentée par M. Jacques Tréfouël. L'iléon de Cobaye isolé mis en contact avec de la toxine II extraite de l'Anemonia sulcata sécrète non seulement un surplus d'acétylcholine mais aussi de la sérotonine. Nous avons conclu que l'action spasmogène de cette toxine provient de l'hypersécrétion de ces deux transmetteurs. When the Guinea-Pig isolated ileum is treated with the Toxin II from Anemonia sulcata, it releases not only acetylcholine but also serotonin. These transmitters are both involved in the spasmogenic action of the toxin. Nous avons montré antérieurement que le mode d'action des toxines isolées de l'Anémone de Mer (Anemonia sulcata : TH ASU) s'apparente à celui des toxines extraites du venin de Scorpion (Androctonus australis). Action de la TH ASU sur l'iléon isolé de cobaye (fig. 1, 2, 3, 4 et 6). Fig. 1. — Action du sulfate d'atropine (Atr) sur les effets de la TH ASU. A, témoin; B. atropine ajoutée avant la TH ASU. Nous avions trouvé que dans les deux cas, leurs effets spasmogènes sur l'iléon isolé de Cobaye pouvaient être expliqués par la sécrétion d'acétylcholine qu'elles provoquent. Cependant, la protection exercée par l'atropine vis-à-vis de la TH ASU n'est que de faible durée le spasme initial est complètement supprimé mais l'activité automatique est seulement retardée (fig. 1). Nous avons donc poursuivi nos expériences avec la toxine TH ASU qui se montre la plus active des toxines (2) isolées de cette Anémone. Celle que
que le mode d'action des toxines isolées de l'Anémone de Mer (Anemonia sulcata : TH ASU) s'apparente à celui des toxines extraites du venin de Scorpion (Androctonus australis). Action de la TH ASU sur l'iléon isolé de cobaye (fig. 1, 2, 3, 4 et 6). Fig. 1. — Action du sulfate d'atropine (Atr) sur les effets de la TH ASU. A, témoin; B. atropine ajoutée avant la TH ASU. Nous avions trouvé que dans les deux cas, leurs effets spasmogènes sur l'iléon isolé de Cobaye pouvaient être expliqués par la sécrétion d'acétylcholine qu'elles provoquent. Cependant, la protection exercée par l'atropine vis-à-vis de la TH ASU n'est que de faible durée le spasme initial est complètement supprimé mais l'activité automatique est seulement retardée (fig. 1). Nous avons donc poursuivi nos expériences avec la toxine TH ASU qui se montre la plus active des toxines (2) isolées de cette Anémone. Celle que nous avons utilisée dans ce travail a été purifiée par G. Wunderer (4). Nous avions constaté que l'iléon désensibilisé à la sérotonine par de fortes doses de ce même médiateur répondait toujours à la TH ASU (fig. 2) et nous en avions conclu que celui-ci n'intervenait pas dans les effets pharmacologiques de cette toxine (2). Cependant, ultérieurement, nous avons observé qu'une forte dose de sérotonine arrêtait complètement l'activité déclenchée par la TH ASU quand elle était ajoutée après que la toxine ait déclenché ses effets (fig. 3). Nous en avons déduit que la sérotonine était peut-être sécrétée plus tardivement que l'acétylcholine. Nous avons donc renouvelé nos expériences en supprimant l'effet de l'acétylcholine par l'atropine et en recherchant si dans ces conditions l'activité tardive qui se développe après atropine pouvait être supprimée par l'injection d'une forte dose préventive de sérotonine. Fig. 2. — Action du sulfate double de créatinine et de sérotonine (Ser) ajouté à une dose désensibilisante à elle-même sur les effets de la TH. Fig. 3. — Même dose de sérotonine (Ser) mais ajoutée après la toxine. Effectivement, nous avons constaté que si l'iléon est traité par l'atropine avant l'injection désensibilisante à elle-même de la sérotonine, l'activité automatique déclenchée
pharmacologiques de cette toxine (2). Cependant, ultérieurement, nous avons observé qu'une forte dose de sérotonine arrêtait complètement l'activité déclenchée par la TH ASU quand elle était ajoutée après que la toxine ait déclenché ses effets (fig. 3). Nous en avons déduit que la sérotonine était peut-être sécrétée plus tardivement que l'acétylcholine. Nous avons donc renouvelé nos expériences en supprimant l'effet de l'acétylcholine par l'atropine et en recherchant si dans ces conditions l'activité tardive qui se développe après atropine pouvait être supprimée par l'injection d'une forte dose préventive de sérotonine. Fig. 2. — Action du sulfate double de créatinine et de sérotonine (Ser) ajouté à une dose désensibilisante à elle-même sur les effets de la TH. Fig. 3. — Même dose de sérotonine (Ser) mais ajoutée après la toxine. Effectivement, nous avons constaté que si l'iléon est traité par l'atropine avant l'injection désensibilisante à elle-même de la sérotonine, l'activité automatique déclenchée par la TH ASU est supprimée (fig. 4). Cela pourrait donc signifier que la sérotonine est libérée tardivement et plus durablement que l'acétylcholine. Si ces conclusions sont exactes, on doit pouvoir supprimer la sécrétion exagérée mais fugace d'acétylcholine sans antagoniser l'activité durable déclenchée par la TH ASU. Nous avons utilisé les propriétés de l'hémicholinium (HC3) de s'opposer à la synthèse de la ACh (5) pour éprouver cette hypothèse. On voit que suivant les données classiques (6) la sécrétion de la ACh est fortement diminuée (fig. 5). Celle provoquée par la TH ASU est réduite mais non supprimée, elle est de l'ordre d'un témoin normal. Dosages de l'acétylcholine sécrétée par l'iléon pendant une période de 10 min, exprimés en microgrammes par gramme d'iléon frais. Fig. 5. — Tyr N en milieu Tyrode normal; Tyr + HC3 en milieu Tyrode + Hémicholinium 200 μg/ml, mis en contact 90 min avec l'iléon préalablement au séjour dans le liquide sériné destiné aux dosages. La composition du milieu et la méthode de dosage sont les mêmes que celles utilisées précédemment (2). Fig. 6. — Action de l'hémicholinium (HC3) sur les effets de la toxine. A, témoin TH. Voir la source de ce document sur le
les propriétés de l'hémicholinium (HC3) de s'opposer à la synthèse de la ACh (5) pour éprouver cette hypothèse. On voit que suivant les données classiques (6) la sécrétion de la ACh est fortement diminuée (fig. 5). Celle provoquée par la TH ASU est réduite mais non supprimée, elle est de l'ordre d'un témoin normal. Dosages de l'acétylcholine sécrétée par l'iléon pendant une période de 10 min, exprimés en microgrammes par gramme d'iléon frais. Fig. 5. — Tyr N en milieu Tyrode normal; Tyr + HC3 en milieu Tyrode + Hémicholinium 200 μg/ml, mis en contact 90 min avec l'iléon préalablement au séjour dans le liquide sériné destiné aux dosages. La composition du milieu et la méthode de dosage sont les mêmes que celles utilisées précédemment (2). Fig. 6. — Action de l'hémicholinium (HC3) sur les effets de la toxine. A, témoin TH. Voir la source de ce document sur le site de l'Académie des sciences. II ASU: B. HCI injecté 90 mn avant la toxine. ACh Acétylcholine (chlorure). Bien que le taux de sécrétion de la ACh soit ramené à la normale par le HC3, les effets de la T.II ASU sur l'ileon de Cobaye ne sont que faiblement diminués par l'hémicholinium (fig. 6). Cela montre bien que la sécrétion exagérée d'acétylcholine provoquée par la T.II ASU n'est pas seule responsable de l'activité déclenchée par la toxine. Comme d'autre part nous avons montré que l'atropine seule ou la sérotonine seule ne suppriment que partiellement les effets de la T.II ASU alors que la combinaison des deux les abolit complètement, nous pouvons donc conclure que l'action pharmacologique de la T.II ASU sur l'ileon isolé de Cobaye est due à une décharge d'acétylcholine et de sérotonine. Séance du 31 janvier 1977. Ce travail a bénéficié de l'aide de la Direction des Recherches et Moyens d'Essais. F. TAZIEFF-DEPIERRE, M. CHOUCAVY et P. METEZEAU, Comptes rendus, 283, série D, 1976, p. 699. L. BERESS, R. BERESS et G. WUNDERER. F.E.B.S. Letters, 50. 1975, p. 311. La toxine T.II ASU a été préparée et purifiée par G. Wunderer. F. C. MACINTOSH, F. C. BIRKS et
par l'hémicholinium (fig. 6). Cela montre bien que la sécrétion exagérée d'acétylcholine provoquée par la T.II ASU n'est pas seule responsable de l'activité déclenchée par la toxine. Comme d'autre part nous avons montré que l'atropine seule ou la sérotonine seule ne suppriment que partiellement les effets de la T.II ASU alors que la combinaison des deux les abolit complètement, nous pouvons donc conclure que l'action pharmacologique de la T.II ASU sur l'ileon isolé de Cobaye est due à une décharge d'acétylcholine et de sérotonine. Séance du 31 janvier 1977. Ce travail a bénéficié de l'aide de la Direction des Recherches et Moyens d'Essais. F. TAZIEFF-DEPIERRE, M. CHOUCAVY et P. METEZEAU, Comptes rendus, 283, série D, 1976, p. 699. L. BERESS, R. BERESS et G. WUNDERER. F.E.B.S. Letters, 50. 1975, p. 311. La toxine T.II ASU a été préparée et purifiée par G. Wunderer. F. C. MACINTOSH, F. C. BIRKS et P. B. SASTRY, Nature, 178. 1956. p. 1181. E. S. JOHNSON, Brit. J. Pharmacol., 21, 1963, p. 555. Laboratoire de Pharmacologie, Service de Chimie des Protéines, Institut Pasteur, 28. rue du Docteur-Roux, 75015 Paris. PHARMACOLOGIE. — Étude de l'action de la prostaglandine E2 (Pg E2) sur la biosynthèse et la destinée de la noradrénaline (NA) au niveau du cœur isolé et perfusé de Lapin. Note de Pham-Huu-Chanh, In Sokan et Waltraud Lehmann-Schad, présentée par M. Albert Rakoto Ratsimamanga. Au niveau du cœur isolé et perfusé de Lapin, la Pg E2 aux concentrations variant entre 1.10-8 et 1. 10-4 M n'a manifesté aucune action significative ni sur la biosynthèse, ni sur le métabolisme de la noradrénaline. Par contre, elle inhibe la captation de NA, cette action est toutefois faible. In isolated perfused Rabbit heart. Pg E2 at concentrations ranging from I. 10-8 to I 10-1 M has shown no significant action either on the biosynthesis or on the metabolism of NA. But it inhibited NA uptake, nevertheless this action was weak. Dès 1934, von Euler avait signalé que les Pg brutes réduisaient les réponses pressives à l'adrénaline. L'antagonisme entre la NA et les Pg a été aussi mis en évidence sur
destinée de la noradrénaline (NA) au niveau du cœur isolé et perfusé de Lapin. Note de Pham-Huu-Chanh, In Sokan et Waltraud Lehmann-Schad, présentée par M. Albert Rakoto Ratsimamanga. Au niveau du cœur isolé et perfusé de Lapin, la Pg E2 aux concentrations variant entre 1.10-8 et 1. 10-4 M n'a manifesté aucune action significative ni sur la biosynthèse, ni sur le métabolisme de la noradrénaline. Par contre, elle inhibe la captation de NA, cette action est toutefois faible. In isolated perfused Rabbit heart. Pg E2 at concentrations ranging from I. 10-8 to I 10-1 M has shown no significant action either on the biosynthesis or on the metabolism of NA. But it inhibited NA uptake, nevertheless this action was weak. Dès 1934, von Euler avait signalé que les Pg brutes réduisaient les réponses pressives à l'adrénaline. L'antagonisme entre la NA et les Pg a été aussi mis en évidence sur la micro-circulation et les vaisseaux isolés. Mais selon Weiner et Kaley, l'antagonisme entre les Pg et les catécholamines ne résulte pas d'une sommation d'effets. Au niveau du cœur isolé de Lapin, les Pg E1 et PgE2 inhibent par contre, l'inhibition de la biosynthèse des Pg, la déprime la libération de la NA en réponse à une stimulation nerveuse sympathique. On a alors pensé que les Pg pourraient jouer le rôle de modulateur de la neurotransmission adrénergique et qu'elles participent à l'homéostasie du système cardiovasculaire. Il se pose alors le problème du mécanisme et des sites d'action des Pg sur la neurotransmission adrénergique au niveau du myocarde. Cette série d'expériences a été réalisée dans le but de rechercher si l'effet de la PgE2 sur la libération de la NA en réponse à une stimulation nerveuse sympathique ne résulterait pas d'une action de la PgE2 sur la synthèse ou la destinée de la NA. MÉTHODES. — Les expériences ont été réalisées sur des cœurs de Lapin isolés et perfusés à 37°C sous une pression de 60 cm H20 par une solution de Tyrode contenant 20 ng/ml d'acide ascorbique et aérée avec du carbogène (5 % CO2, 95 % O2). BIOSYNTHÈSE DE LA
la NA en réponse à une stimulation nerveuse sympathique. On a alors pensé que les Pg pourraient jouer le rôle de modulateur de la neurotransmission adrénergique et qu'elles participent à l'homéostasie du système cardiovasculaire. Il se pose alors le problème du mécanisme et des sites d'action des Pg sur la neurotransmission adrénergique au niveau du myocarde. Cette série d'expériences a été réalisée dans le but de rechercher si l'effet de la PgE2 sur la libération de la NA en réponse à une stimulation nerveuse sympathique ne résulterait pas d'une action de la PgE2 sur la synthèse ou la destinée de la NA. MÉTHODES. — Les expériences ont été réalisées sur des cœurs de Lapin isolés et perfusés à 37°C sous une pression de 60 cm H20 par une solution de Tyrode contenant 20 ng/ml d'acide ascorbique et aérée avec du carbogène (5 % CO2, 95 % O2). BIOSYNTHÈSE DE LA NORADRÉNALINE. — L'étude de la biosynthèse de la NA a été effectuée selon la méthode préconisée par Levitt et coll. Le cœur a été perfusé avec de la 14C tyrosine (Radiochemical Center Amersham, 483 mCi/mmol) pendant 30 mn. Ensuite on prenait le cœur, on le séchait, le pesait et on l'homogénéisait dans l'acide perchlorique 0,4 N (contenant 0,1 g/ml d'EDTA). La 14C NA extraite a été purifiée par chromatographie. La radioactivité de l'éluat a été déterminée par comptage de 1 ml d'aliquot dans l'« Instagel (R) » dans un spectromètre à scintillation liquide « Tricarb 2450 (R) » « Packard ». DESTINÉE DE LA 14C NA. — La captation et la dégradation métabolique de la 14C NA a été étudiée suivant la méthode de Kopin et coll. CAPTATION DE 14C NA. — On perfusait le cœur avec la 14C NA [L (méthylène 14C) noradrénaline bitartrate, 57 mCi/mmole, du Radiochemical Center Amersham, concentration finale 10 ng/ml] pendant des temps de 2, 4, 6 et 8 minutes. On recueillait le perfusat pendant la durée de l'expérience dans des flacons tarés contenant 0,2 ml de 1 N HCL. A la fin de la perfusion on enlevait le cœur, on extrayait la 14C NA
l'homogénéisait dans l'acide perchlorique 0,4 N (contenant 0,1 g/ml d'EDTA). La 14C NA extraite a été purifiée par chromatographie. La radioactivité de l'éluat a été déterminée par comptage de 1 ml d'aliquot dans l'« Instagel (R) » dans un spectromètre à scintillation liquide « Tricarb 2450 (R) » « Packard ». DESTINÉE DE LA 14C NA. — La captation et la dégradation métabolique de la 14C NA a été étudiée suivant la méthode de Kopin et coll. CAPTATION DE 14C NA. — On perfusait le cœur avec la 14C NA [L (méthylène 14C) noradrénaline bitartrate, 57 mCi/mmole, du Radiochemical Center Amersham, concentration finale 10 ng/ml] pendant des temps de 2, 4, 6 et 8 minutes. On recueillait le perfusat pendant la durée de l'expérience dans des flacons tarés contenant 0,2 ml de 1 N HCL. A la fin de la perfusion on enlevait le cœur, on extrayait la 14C NA et on la purifiait selon la méthode précédemment décrite. La radioactivité de la 14C NA du perfusat et du cœur a été déterminée par spectrométrie à scintillation liquide. On calculait ensuite le rapport (cpm/g de cœur/cpm/ml de perfusat) en fonction du temps de perfusion. MÉTABOLISME DE LA 14C NA. — On perfusait le cœur avec de la 14C NA (concentration finale 20 ng/ml) pendant 15 mn. On recueillait le perfusat toutes les 2 mn pendant la perfusion de 14C NA et pendant les 12 mn suivant l'arrêt de cette perfusion. On mesurait par spectrométrie à scintillation liquide la radioactivité totale du perfusat et celle de la 14C NA extraite de ce même perfusat après chromatographie. La différence entre ces deux valeurs représente la radioactivité des métabolites totaux de la NA. RÉSULTATS EXPÉRIMENTAUX. — Biosynthèse de la noradrénaline. — La Pg E2, aux concentrations variant entre 1.10-8 et 1. 10-4 M a été perfusée 10 mn avant puis pendant toute la durée de la perfusion de 14C tyrosine. Dans les expériences témoin, la perfusion de PgE2 a été remplacée par une perfusion d'une solution de Tyrode standard. Les expériences témoin et celles utilisant la PgE2 ont été réalisées alternativement. Dans les