jeanflop/post_ocr_correction2 huggingface dataset:
fuseau de maturation ne se forme pas. Un traitement de 30 mn suffit pour induire, après report dans de l'eau de mer artificielle, l'entrée en maturation de 70 à 100 % des œufs, même si elle est privée de Ca++ et de Mg++ pendant 15-20 h dans la valinomycine (que l'eau de mer contienne ou non des ions K+ et Ca++), il se forme, dans 50-60 % des cas, un volumineux lobopode hyalin, qui peut parfois se séparer complètement de la masse vitelline (fig. 2). Ce lobopode est extrêmement basophile à l'Unna; le noyau, qui est souvent petit et pycnotique, se trouve toujours dans la masse vitelline. Le PHMPS 3.10-4 induit, après un traitement de 1 h environ, une maturation complète et le soulèvement de la membrane de fécondation. Il est toxique en traitement continu (fragmentation de l'œuf, pycnoses). En cas de report dans de l'eau de mer artificielle après 1 h de traitement, il se produit une forte synthèse d'ADN et certains œufs se différencient sans clivage (fig. 3 a, b). Il n'y a ni éclosion, ni formation de cils, mais on note une forte activité amiboïde de ces larves multinucléées. Le DTT est paradoxalement moins toxique à la concentration de 10-2 M qu'à celle de 10-1 M; il n'induit la maturation que si on reporte les œufs dans de l'eau de mer artificielle. Ce report a été suivi de cytolyse dans 2 expériences et d'une très belle différenciation sans clivage, avec de nombreuses larves nageantes, dans une troisième (fig. 4). La colchicine inhibe fortement la différenciation sans clivage; les noyaux, au lieu de migrer vers la périphérie, restent au centre de l'œuf. Elle n'affecte guère la formation de lobopodes hyalins après traitement à la valinomycine. Au contraire, la cytochalasine inhibe cette ségrégation de l'hyaloplasme et du vitellus et ne touche pas profondément la différenciation sans clivage (à part l'apparition de cils). (a) (b) Fig. 3. — (a) Tendance à la différenciation sans clivage (ségrégation du vitellus et de l'hyaloplasme) et expulsion de « mini-cellules » anucléées après traitement pendant 1 h dans le PHMPS 3. 10-4 M et
concentration de 10-2 M qu'à celle de 10-1 M; il n'induit la maturation que si on reporte les œufs dans de l'eau de mer artificielle. Ce report a été suivi de cytolyse dans 2 expériences et d'une très belle différenciation sans clivage, avec de nombreuses larves nageantes, dans une troisième (fig. 4). La colchicine inhibe fortement la différenciation sans clivage; les noyaux, au lieu de migrer vers la périphérie, restent au centre de l'œuf. Elle n'affecte guère la formation de lobopodes hyalins après traitement à la valinomycine. Au contraire, la cytochalasine inhibe cette ségrégation de l'hyaloplasme et du vitellus et ne touche pas profondément la différenciation sans clivage (à part l'apparition de cils). (a) (b) Fig. 3. — (a) Tendance à la différenciation sans clivage (ségrégation du vitellus et de l'hyaloplasme) et expulsion de « mini-cellules » anucléées après traitement pendant 1 h dans le PHMPS 3. 10-4 M et report dans l'eau de mer pendant 17 h (Unna, G x 300). (b) Gros noyau riche en ADN dans un œuf du même lot (Feulgen, G x 1 200). DISCUSSION. — Nos expériences confirment l'importance des ions Ca++ pour l'entrée en maturation des oocytes de Chétopyge. Mais elles montrent aussi que la différenciation sans clivage et la synthèse d'ADN qui l'accompagne ne nécessitent pas la présence d'ions Ca++ dans le milieu. L'emploi de l'ionophore A 23187 confirme la nécessité du Ca++ pour l'entrée en maturation; il peut induire, après report, la différenciation sans clivage; mais sa toxicité le rend inférieur au KCl. En raison de l'efficacité du KCl pour induire la différenciation sans clivage, il est surprenant, à première vue, que la valinomycine ne la produise jamais. Cette inefficacité est très probablement due au fait que la maturation provoquée par la valinomycine est rapidement abortive. Il en va, d'ailleurs, de même chez le Xénope : un traitement des oocytes par la valinomycine en l'absence d'ions K+ provoque la rupture de la vésicule germinative sans qu'elle soit suivie de l'édification d'un fuseau méiotique (travail en préparation). À la longue, la valinomycine produit une curieuse ségrégation entre l'hyaloplasme et le vitellus; elle
que la différenciation sans clivage et la synthèse d'ADN qui l'accompagne ne nécessitent pas la présence d'ions Ca++ dans le milieu. L'emploi de l'ionophore A 23187 confirme la nécessité du Ca++ pour l'entrée en maturation; il peut induire, après report, la différenciation sans clivage; mais sa toxicité le rend inférieur au KCl. En raison de l'efficacité du KCl pour induire la différenciation sans clivage, il est surprenant, à première vue, que la valinomycine ne la produise jamais. Cette inefficacité est très probablement due au fait que la maturation provoquée par la valinomycine est rapidement abortive. Il en va, d'ailleurs, de même chez le Xénope : un traitement des oocytes par la valinomycine en l'absence d'ions K+ provoque la rupture de la vésicule germinative sans qu'elle soit suivie de l'édification d'un fuseau méiotique (travail en préparation). À la longue, la valinomycine produit une curieuse ségrégation entre l'hyaloplasme et le vitellus; elle devrait permettre d'obtenir facilement des fragments nucléés et anucléés d'œufs de Chétopyge. Fig. 4. — Œuf traité par le DTT 10-2 M pendant 1 h et reporté dans l'eau de mer pendant 17 h gros noyau et noyaux secondaires riches en ADN, typiques de la différenciation sans clivage (Feulgen, G x 1 200). Les effets du PHMPS et du DTT ressemblent beaucoup plus à ceux qu'ils exercent sur les oocytes de Xénope qu'à ceux qui ont été observés dans le cas des oocytes d'Étoile de mer. Un blocage de certains groupes -SH de la surface cellulaire semble favorable à l'entrée en maturation, alors que la réduction des ponts disulfures n'a guère d'autres effets que la cytolyse à plus ou moins longue échéance. Enfin, les expériences faites avec la colchicine et la cytochalasine indiquent que les microtubules (notamment ceux qui constituent les monasters) doivent jouer un rôle important dans la différenciation sans clivage, alors que les microfilaments seraient principalement en cause lors de la ségrégation de l'hyaloplasme et du vitellus dans les œufs traités par la valinomycine. 67, rue des Chevaux, 1640 Rhode St. Genèse, Brabant, Belgique. Note de Georges Strudel, Robert Meiniel et Gérard Gateau, présentée par M. Étienne Wolff.
x 1 200). Les effets du PHMPS et du DTT ressemblent beaucoup plus à ceux qu'ils exercent sur les oocytes de Xénope qu'à ceux qui ont été observés dans le cas des oocytes d'Étoile de mer. Un blocage de certains groupes -SH de la surface cellulaire semble favorable à l'entrée en maturation, alors que la réduction des ponts disulfures n'a guère d'autres effets que la cytolyse à plus ou moins longue échéance. Enfin, les expériences faites avec la colchicine et la cytochalasine indiquent que les microtubules (notamment ceux qui constituent les monasters) doivent jouer un rôle important dans la différenciation sans clivage, alors que les microfilaments seraient principalement en cause lors de la ségrégation de l'hyaloplasme et du vitellus dans les œufs traités par la valinomycine. 67, rue des Chevaux, 1640 Rhode St. Genèse, Brabant, Belgique. Note de Georges Strudel, Robert Meiniel et Gérard Gateau, présentée par M. Étienne Wolff. L'observation par la méthode de Falck et Owman de cordes d'embryons de Poulet de 3 jours d'incubation, traités à 48 h, soit par du sulfate de nicotine, soit par du carbachol montre un accroissement de la fluorescence. L'injection de L-Dopa ou de NA augmente très nettement la teneur en amines fluorigènes. L'addition d'atropine ou de propranolol ou encore de réserpine diminue très fortement ou supprime la fluorescence. Ces observations permettent d'admettre qu'il existe une relation de cause à effet entre l'administration des cholinergiques et la teneur en amines fluorigènes des cordes. The investigation of 3 day old notochords by the fluorescence method of Falck and Owman showed an increase of the fluorescence after treatment of the chick embryos at 48 hrs of incubation, with nicotine sulfate or carbachol. The addition of norepinephrine or L-Dopa emphasized the formaldehyde induced fluorescence. The simultaneous treatment with a cholinergic agent and atropine, propranolol or reserpine decreased or suppressed the fluorescence. These results demonstrate the existence of a relationship between the treatment with a cholinergic agent and the amount of chordal biogenic amines. Dans une série de publications nous avons montré que des agents cholinergiques injectés à des embryons de Poulet de 40 à 48
fluorigènes. L'addition d'atropine ou de propranolol ou encore de réserpine diminue très fortement ou supprime la fluorescence. Ces observations permettent d'admettre qu'il existe une relation de cause à effet entre l'administration des cholinergiques et la teneur en amines fluorigènes des cordes. The investigation of 3 day old notochords by the fluorescence method of Falck and Owman showed an increase of the fluorescence after treatment of the chick embryos at 48 hrs of incubation, with nicotine sulfate or carbachol. The addition of norepinephrine or L-Dopa emphasized the formaldehyde induced fluorescence. The simultaneous treatment with a cholinergic agent and atropine, propranolol or reserpine decreased or suppressed the fluorescence. These results demonstrate the existence of a relationship between the treatment with a cholinergic agent and the amount of chordal biogenic amines. Dans une série de publications nous avons montré que des agents cholinergiques injectés à des embryons de Poulet de 40 à 48 h d'incubation, provoquent des anomalies morphogénétiques se traduisant chez les embryons âgés par des malformations vertébrales. La première anomalie se manifeste, quelques heures après l'injection, par une déformation torsadée de la chorde cervicale. Cette anomalie semble être à l'origine des autres malformations. Nous avons montré que l'action des cholinergiques est inhibée par des antagonistes des cholinergiques et par des ligands des récepteurs cholinergiques. Elle est également inhibée par des bloquants des récepteurs adrénergiques ou par des agents provoquant la déplétion des amines biogènes. Or, en 1972, Kirby et Gilmore ont démontré à l'aide de la méthode d'histofluorescence de Falck et Owman, la présence de catécholamines dans les cordes d'embryons de Poulet de 3 à 5 jours. Dans cette Note, nous rapportons les observations réalisées à l'aide de la méthode de Falck et Owman, des variations de la teneur en amines fluorigènes cordales d'embryons soumis : 1° à une injection de sulfate de nicotine ou de carbachol ; 2° à des injections simultanées d'un agent cholinergique et d'un antagoniste cholinergique ou d'un antagoniste adrénergique ou encore de réserpine. Parallèlement à ces recherches, nous avons procédé à des analyses biochimiques qualitatives et quantitatives des amines biogènes de cordes d'embryons normaux et d'embryons
inhibée par des antagonistes des cholinergiques et par des ligands des récepteurs cholinergiques. Elle est également inhibée par des bloquants des récepteurs adrénergiques ou par des agents provoquant la déplétion des amines biogènes. Or, en 1972, Kirby et Gilmore ont démontré à l'aide de la méthode d'histofluorescence de Falck et Owman, la présence de catécholamines dans les cordes d'embryons de Poulet de 3 à 5 jours. Dans cette Note, nous rapportons les observations réalisées à l'aide de la méthode de Falck et Owman, des variations de la teneur en amines fluorigènes cordales d'embryons soumis : 1° à une injection de sulfate de nicotine ou de carbachol ; 2° à des injections simultanées d'un agent cholinergique et d'un antagoniste cholinergique ou d'un antagoniste adrénergique ou encore de réserpine. Parallèlement à ces recherches, nous avons procédé à des analyses biochimiques qualitatives et quantitatives des amines biogènes de cordes d'embryons normaux et d'embryons traités par du sulfate de nicotine. Les résultats de ces analyses, relatés dans une Note présentée à la même séance, apportent une base biochimique à des observations décrites dans la présente Note. MÉTHODES. — Les expériences ont été réalisées avec des embryons de Poulet de race Leghorn blanche. La recherche des amines fluorigènes est effectuée selon la méthode de Falck en tenant compte des observations faites par Kirby notamment du fait que la chorde peut fonctionner comme une « pompe » à amines et capter les amines exogènes. Les amines fluorigènes sont recherchées sur des coupes de différents types d'embryons : (a) des coupes d'embryons témoins; (b) des coupes d'embryons traités, soit avec 1,7 mg de sulfate de nicotine, soit avec 1 mg de chlorure de carbamylcholine; (c ) des coupes d'embryons traités à la fois par un cholinergique et par 4 mg d'atropine ou par 0,5 mg de propranolol ou encore par 2 mg de réserpine [agent de déplétion des catécholamines et des indolamines]; (d) des coupes d'embryons des types (a), (b) et (c ) traités à 70 h par un précurseur aminergique. Tous les produits utilisés sont administrés, soit sous la forme de solution aqueuse injectée dans le
des amines fluorigènes est effectuée selon la méthode de Falck en tenant compte des observations faites par Kirby notamment du fait que la chorde peut fonctionner comme une « pompe » à amines et capter les amines exogènes. Les amines fluorigènes sont recherchées sur des coupes de différents types d'embryons : (a) des coupes d'embryons témoins; (b) des coupes d'embryons traités, soit avec 1,7 mg de sulfate de nicotine, soit avec 1 mg de chlorure de carbamylcholine; (c ) des coupes d'embryons traités à la fois par un cholinergique et par 4 mg d'atropine ou par 0,5 mg de propranolol ou encore par 2 mg de réserpine [agent de déplétion des catécholamines et des indolamines]; (d) des coupes d'embryons des types (a), (b) et (c ) traités à 70 h par un précurseur aminergique. Tous les produits utilisés sont administrés, soit sous la forme de solution aqueuse injectée dans le sac vitellin, soit sous forme d'une suspension aqueuse déposée sur le blastoderme. Tous les œufs sont ouverts à 48 h. Les œufs témoins sont refermés et remis en incubation. Les œufs expérimentaux sont refermés après traitement et remis également en incubation. À 70 h, les œufs destinés à recevoir un précurseur aminergique reçoivent une dose de 2 mg de L-DOPA ou de noradrénaline (NA), déposée en suspension aqueuse sur le blastoderme. À 72 h, tous les embryons sont sacrifiés. La congélation des embryons se fait à l'azote liquide, la lyophilisation est effectuée pendant 24 h à —40°C et le traitement aux vapeurs de paraformaldéhyde se fait pendant 2 h à +80°C. L'inclusion à la paraffine est effectuée sous vide et les blocs sont débités en coupes de 5 g. L'observation microscopique est faite en lumière ultraviolette à l'aide d'un microscope « Leitz » équipé des filtres BG 12 et K 530. RÉSULTATS. — Dans les coupes d'embryons témoins, nous n'avons décelé qu'une très faible fluorescence verdâtre n'affectant que quelques cellules chordales et uniquement dans la région cervicale (fig. 1). Sur des coupes d'embryons témoins traités, soit par la L-DOPA, soit par la NA, une fluorescence plus prononcée est décelable tout
précurseur aminergique reçoivent une dose de 2 mg de L-DOPA ou de noradrénaline (NA), déposée en suspension aqueuse sur le blastoderme. À 72 h, tous les embryons sont sacrifiés. La congélation des embryons se fait à l'azote liquide, la lyophilisation est effectuée pendant 24 h à —40°C et le traitement aux vapeurs de paraformaldéhyde se fait pendant 2 h à +80°C. L'inclusion à la paraffine est effectuée sous vide et les blocs sont débités en coupes de 5 g. L'observation microscopique est faite en lumière ultraviolette à l'aide d'un microscope « Leitz » équipé des filtres BG 12 et K 530. RÉSULTATS. — Dans les coupes d'embryons témoins, nous n'avons décelé qu'une très faible fluorescence verdâtre n'affectant que quelques cellules chordales et uniquement dans la région cervicale (fig. 1). Sur des coupes d'embryons témoins traités, soit par la L-DOPA, soit par la NA, une fluorescence plus prononcée est décelable tout le long de la chorde, avec toutefois une intensité plus accusée dans la région cervicale (fig. 2). Les coupes d'embryons traités par le sulfate de nicotine possèdent une fluorescence verte assez intense s'étendant sur toute la longueur de la chorde avec un maximum dans la région cervicale. EXPLICATION DE LA PLANCHE Fig. 1. — Coupe de la chorde d'un embryon témoin de 3 jours. Sans injection de précurseur aminergique. Faible fluorescence verdâtre n'affectant que quelques cellules (G x 120). Fig. 2. — Coupe d'une chorde d'un embryon témoin de 3 jours traité à 70 h par une injection de NA. Forte fluorescence occupant un grand nombre de cellules chordales. Remarquez la fluorescence de la partie ventrale du tube nerveux (G x 120). Fig. 3. — Coupe d'une chorde d'un embryon de 3 jours, traité à 48 h par 1,7 mg de sulfate de nicotine et à 70 h par 2 mg de NA. Forte fluorescence couvrant totalement la surface chordale. La partie ventrale du tube nerveux est également fluorescente (G x 50). Fig. 4. — Coupe d'une chorde d'un embryon de 3 jours, traité à 48 h par 1 mg de carbachol et à 70 h par 2 mg de
PLANCHE Fig. 1. — Coupe de la chorde d'un embryon témoin de 3 jours. Sans injection de précurseur aminergique. Faible fluorescence verdâtre n'affectant que quelques cellules (G x 120). Fig. 2. — Coupe d'une chorde d'un embryon témoin de 3 jours traité à 70 h par une injection de NA. Forte fluorescence occupant un grand nombre de cellules chordales. Remarquez la fluorescence de la partie ventrale du tube nerveux (G x 120). Fig. 3. — Coupe d'une chorde d'un embryon de 3 jours, traité à 48 h par 1,7 mg de sulfate de nicotine et à 70 h par 2 mg de NA. Forte fluorescence couvrant totalement la surface chordale. La partie ventrale du tube nerveux est également fluorescente (G x 50). Fig. 4. — Coupe d'une chorde d'un embryon de 3 jours, traité à 48 h par 1 mg de carbachol et à 70 h par 2 mg de NA. Très forte fluorescence n'affectant pas tous les compartiments cellulaires (G x 190). Fig. 5. — Coupe d'un embryon de 3 jours, traité à 48 h par 1 mg de carbachol et par 4 mg d'atropine et à 70 h par 2 mg de NA. La fluorescence des cellules chordales a pratiquement disparu mais il subsiste une forte fluorescence périchordale et autour d'une partie du bord ventral du tube nerveux (G x 120). Fig. 6. — Coupe de la chorde d'un embryon de 3 jours traité à 48 h par 1 mg de carbachol et par 2 mg de réserpine et à 70 h par 2 mg de NA. Forte diminution de la fluorescence des cellules chordales mais persistance d'une fluorescence périchordale intense (G x 120). Les coupes d'embryons traités à la fois par le sulfate de nicotine et avec un précurseur aminergique font apparaître une vive fluorescence vert-jaune couvrant la totalité des coupes (fig. 3). Cette fluorescence existe tout le long de la chorde mais présente néanmoins un gradient céphalo-caudal avec un maximum d'intensité dans la région cervicale. La fluorescence des chordes d'embryons traités par le chlorure de carbamylcholine présente dans l'ensemble les mêmes images que les chordes d'embryons
a pratiquement disparu mais il subsiste une forte fluorescence périchordale et autour d'une partie du bord ventral du tube nerveux (G x 120). Fig. 6. — Coupe de la chorde d'un embryon de 3 jours traité à 48 h par 1 mg de carbachol et par 2 mg de réserpine et à 70 h par 2 mg de NA. Forte diminution de la fluorescence des cellules chordales mais persistance d'une fluorescence périchordale intense (G x 120). Les coupes d'embryons traités à la fois par le sulfate de nicotine et avec un précurseur aminergique font apparaître une vive fluorescence vert-jaune couvrant la totalité des coupes (fig. 3). Cette fluorescence existe tout le long de la chorde mais présente néanmoins un gradient céphalo-caudal avec un maximum d'intensité dans la région cervicale. La fluorescence des chordes d'embryons traités par le chlorure de carbamylcholine présente dans l'ensemble les mêmes images que les chordes d'embryons traités par le sulfate de nicotine. Les images des chordes d'embryons traités par la carbamylcholine et par un précurseur aminergique font toutefois ressortir une différence importante. Toute la surface des chordes (fig. 4) n'est pas fluorescente. En plus des lacunes chordales, il y a des compartiments cellulaires dépourvus de fluorescence aminergique. Il est important de noter que chez tous les embryons traités par la L-DOPA ou la NA apparaît une faible fluorescence à la base du tube nerveux affectant la forme d'une lunule (fig. 2, 3 et 4). Parfois la fluorescence décrit un fin liseré à la limite inférieure du tube nerveux. Le traitement simultané par un cholinergique et par l'atropine ou par le propranolol (bloquant l'adrénergique) et également par la réserpine, diminue considérablement sinon totalement la fluorescence des cellules chordales. Seule une très faible fluorescence verte subsiste à leur niveau (fig. 5 et 6). Une forte fluorescence jaune persiste à la limite externe de la chorde. Cette fluorescence est localisée dans le matériel extracellulaire périchordal qui, à ce niveau, est très condensé et forme ce qu'on appelle communément la gaine chordale. La fluorescence induite à la base du tube nerveux par les précurseurs aminergiques persiste également. Nous ne pouvons
aminergique. Il est important de noter que chez tous les embryons traités par la L-DOPA ou la NA apparaît une faible fluorescence à la base du tube nerveux affectant la forme d'une lunule (fig. 2, 3 et 4). Parfois la fluorescence décrit un fin liseré à la limite inférieure du tube nerveux. Le traitement simultané par un cholinergique et par l'atropine ou par le propranolol (bloquant l'adrénergique) et également par la réserpine, diminue considérablement sinon totalement la fluorescence des cellules chordales. Seule une très faible fluorescence verte subsiste à leur niveau (fig. 5 et 6). Une forte fluorescence jaune persiste à la limite externe de la chorde. Cette fluorescence est localisée dans le matériel extracellulaire périchordal qui, à ce niveau, est très condensé et forme ce qu'on appelle communément la gaine chordale. La fluorescence induite à la base du tube nerveux par les précurseurs aminergiques persiste également. Nous ne pouvons expliquer la localisation de cette fluorescence, ni sa persistance après le traitement par les antagonistes ou par la réserpine. Nous ne pensons pas qu'elle soit due à la présence d'un aminergique incomplètement pompé par la chorde ni à une autofluorescence de l'un des produits employés. Les contrôles effectués pour rechercher des phénomènes d'autofluorescence ont tous été négatifs. CONCLUSIONS. — Cette étude apporte d'abord une confirmation des résultats obtenus par Kirby (6) et, en plus, elle montre que l'injection de certains cholinergiques a pour conséquence une augmentation de la fluorescence chordale. Après l'injection le nombre de cellules fluorescentes est nettement plus élevé que chez les témoins. Il est difficile de tirer des conclusions d'après la couleur de la fluorescence sur la nature des amines fluorigènes présentes dans les chordes. L'instabilité de la fluorescence sous les rayons ultraviolets, l'absence d'autofluorescence des substances employées, et la disparition de la fluorescence des cellules chordales après le traitement par des antagonistes ou par la réserpine, apportent des arguments supplémentaires en faveur de la présence d'amines biogènes dans les cellules chordales d'embryons de Poulet de 3 jours. Les mêmes faits parlent en faveur de l'accroissement des amines biogènes chordales provoqué par certains agents cholinergiques et également