jeanflop/post-ocr-correction huggingface dataset:
dispositifs que nous avons étudiés puis rejetés successivement, ni l'appareil final auquel nous nous sommes arrêtés. Il présente en raison du lent développement des cultures de mycobactéries quelques caractères originaux imposés par la nécessité d'assurer une stérilité absolue et de longue durée. C'est ainsi qu'il ne comporte ni pompe, ni agitateur mû par un moteur, et aucun joint ne se trouve dans des endroits où il pourrait être en contact, soit avec le milieu de culture, soit avec des condensations. L'agitation nécessaire obtenue par la seule injection d'air est énergique sans avoir la brutalité de celle provoquée par les pales
sans avoir la brutalité de celle provoquée par les pales d'un agitateur. Le mouvement de celles-ci est éminemment défavorable à la culture et à la survie des mycobactéries. Un dispositif de sas stérile permet de prélever toute la culture ou seulement, si on le désire, une partie de celle-ci et de la remplacer par du milieu neuf dans des conditions de stérilité parfaite. Il est donc possible de recueillir, soit en une fois, soit périodiquement, tous les jours ou tous les deux jours, par exemple, une récolte importante, tout en maintenant la culture en phase de croissance continue et régulière.
maintenant la culture en phase de croissance continue et régulière. A titre d'exemple, un petit appareil d'essais, calculé pour traiter un volume de milieu de 40 à 50 l, ensemencé avec une quantité de BCG de 10 g pesés à l'état essoré, a pu entrer en production après huit jours. A ce moment, si on avait procédé à une récolte unique, on aurait recueilli plus de 1 kg de culture, dont la respiration au Warburg était de 20,05 l/mg de culture sèche. En continuant la culture, en faisant des récoltes partielles suivies immédiatement de la réinjection de milieu neuf, au
partielles suivies immédiatement de la réinjection de milieu neuf, au trente-cinquième jour de celle-ci nous avons pu, en 11 récoltes, obtenir 20 kg de BCG pesés à l'état essoré et pourtant le régime de marche n'était pas le meilleur, car les temps entre les récoltes étaient irréguliers, variant de deux à quatre jours, et il s'agissait d'une mise au point expérimentale au cours de laquelle plusieurs paramètres ont été modifiés. Pour obtenir la même masse de culture par la méthode traditionnelle, il aurait fallu manipuler environ 10 000 ballons de 250 cm3, alors que pour assurer la maintenance de la
250 cm3, alors que pour assurer la maintenance de la culture en cuve, deux ou trois heures de travail d'une seule personne, les jours de récolte ont suffi. Un point important est que la vitalité des cultures ainsi obtenues, appréciée par la méthode de la mesure de la respiration à l'appareil de Warburg que nous avons décrite avec M. Lamensans, s'est montrée aussi bonne et souvent meilleure que celle des cultures classiques, pourvu que la récolte soit faite au moment opportun, moment que l'on peut déterminer par la mesure du pH de la culture, par la richesse en CO2 de
pH de la culture, par la richesse en CO2 de l'air à la sortie de l'appareil, enfin par prise directe d'échantillon pour mesure de la viabilité. Cette façon de cultiver le BCG, non seulement en cuve, mais en continu, pendant un certain temps est-elle légitime ? Ne risque-t-on pas de voir apparaître des mutations qui modifieraient les caractères de la souche ? Nous ne le pensons pas et cela pour les raisons suivantes : 1° Depuis le moment où la souche bovine virulente, « lait Nocard », est devenue non virulente, c'est-à-dire depuis plus de soixante ans, le BCG a
virulente, c'est-à-dire depuis plus de soixante ans, le BCG a dans certains laboratoires toujours été entretenu sur milieu de Sauton, conformément aux instructions de Calmette, et il ne s'est sensiblement modifié ni dans ses caractères biologiques, ni dans son pouvoir immunisant, comme plusieurs études l'ont montré. 2° L'expérience de culture continue dont nous avons rapporté les résultats a, en réalité, été prolongée de façon ininterrompue à des fins expérimentales pendant deux cent cinquante-six jours. Il ne nous viendrait certes pas à l'esprit de recommander de maintenir une culture en régime de production pendant si longtemps. Quelques semaines, comme dans l'exemple
de production pendant si longtemps. Quelques semaines, comme dans l'exemple cité, seraient suffisantes car pendant ce temps le nombre de divisions n'est pas plus élevé que celui que l'on admet pour la culture en cuve d'autres germes. Néanmoins la culture de 134 jours et celle de 256 jours ont fait l'objet d'une étude approfondie par notre collaborateur M. Boisvert, par comparaison avec la souche normale de production de l'Institut Pasteur. Trente-huit critères différents ont été comparés : 8 concernent la morphologie et la croissance, 15 le métabolisme, 12 la sensibilité aux antibiotiques, 3 le pouvoir pathogène. Aucune anomalie, si ce
aux antibiotiques, 3 le pouvoir pathogène. Aucune anomalie, si ce n'est une minime différence dans les taux de résistance à l'éthambutol, épreuve dont on connaît les caractères d'instabilité, n'a pu être retenue. 3° Enfin, la culture de 256 jours a fait l'objet d'un essai d'immunisation. Il a été entièrement satisfaisant. Les cobayes vaccinés ont été manifestement bien protégés contre une inoculation d'épreuve faite avec une souche exceptionnellement virulente. Par ce qui précède, nous avons simplement voulu montrer que désormais il va être possible de produire des cultures de mycobactéries et de BCG en particulier, dans des conditions meilleures qu'actuellement au
de BCG en particulier, dans des conditions meilleures qu'actuellement au point de vue de la sécurité, de l'économie, de la quantité, et ce qui est plus important, de la qualité. Même si l'on ne désire pas maintenir la culture en production continue pendant quelque temps, une récolte unique, faite au moment opportun jugé sur prise d'échantillon, permet de recueillir une masse bacillaire parfaitement homogène, exempte de contamination, telle que l'on peut souhaiter d'en disposer pour préparer, pour un long usage, un vaccin de qualité constante. On peut penser qu'il en résultera des conséquences importantes sur les modalités d'emploi du BCG.
résultera des conséquences importantes sur les modalités d'emploi du BCG. (Institut Pasteur, Service de la Tuberculose.) Recherches récentes sur la transplantation rénale par M. Jean Hamburger En 1959 avaient lieu les deux premières homotransplantations rénales réussies entre faux jumeaux, l'une à Boston [10], l'autre dans mon service à Paris [8] : dix ans plus tard, les deux patients sont en excellente santé. Le 12 février 1962 était pratiquée la première transplantation rénale réussie entre sujets non-jumeaux : nous avions reçu ce jeune malade de 18 ans, alors qu'il se mourait d'une urémie par néphropathie congénitale ; près de huit années
d'une urémie par néphropathie congénitale ; près de huit années après l'ablation des deux reins malades et la transplantation, la fonction du rein greffé est excellente et le patient, d'une activité débordante, jouit d'une santé sans faiblesse. Ces trois premiers succès mondiaux furent suivis de très nombreux autres, et, dans notre seul centre, plus de 150 malades ont été transplantés à ce jour [6]. Mais, aussi bien dans notre statistique personnelle que dans la statistique internationale, on observe encore un certain nombre d'échecs, précoces ou retardés. D'autres greffes d'organe, tentées depuis peu sur le modèle des techniques de greffe de
depuis peu sur le modèle des techniques de greffe de reins, ont démontré plus clairement encore l'imperfection relative des méthodes destinées à éviter tout rejet du greffon [5]. C'est pourquoi nous souhaiterions présenter à l'Académie quelques travaux récents qui permettent peut-être de mieux comprendre la raison de ces échecs et de tenter de les éviter. Ces travaux portent sur deux chapitres : la sélection immunologique du donneur et l'immuno-dépression du receveur. I. SÉLECTION DU DONNEUR La découverte du principal système humain d'histocompatibilité, le système HL-A, a constitué un facteur notable du succès des transplantations rénales. Pourtant l'analyse sérologique des antigènes
du succès des transplantations rénales. Pourtant l'analyse sérologique des antigènes leucocytaires a ses limites : d'une part, elle ne permet de déterminer actuellement qu'une partie des antigènes HL-A ; d'autre part, il arrive que certaines transplantations rénales connaissent un succès total malgré une incompatibilité notoire de ces antigènes et, inversement, que certains échecs soient observés en l'absence de toute différence antigénique apparente entre donneur et receveur. Ces discordances semblent pouvoir être éclaircies par certains résultats obtenus récemment dans notre laboratoire. a) L'haplotypage. Il est démontré aujourd'hui que le système HL-A dépend chez l'homme, comme le système H2 chez la souris,
dépend chez l'homme, comme le système H2 chez la souris, d'un locus génétique unique, subdivisé en deux (et peut-être trois) sous-locus [3]. Or, chez deux sujets d'une même famille, il est fréquemment possible de déterminer si les génotypes HL-A sont identiques (identité des deux allèles ou haplotypes HL-A), semi-identiques (identité d'un des deux haplotypes HL-A), ou différents (aucun des deux haplotypes semblables). Cette reconstitution de la situation génotypique est possible, alors même qu'on ignore encore une partie de la longue liste présumée des antigènes HL-A, par recoupement des phénotypes HL-A d'un nombre suffisant de membres de la famille considérée. C'est
d'un nombre suffisant de membres de la famille considérée. C'est ainsi que, dans une fratrie, on peut déterminer si deux frères ou deux sœurs ont hérité des deux mêmes haplotypes HL-A (probabilité : 25 p. 100), d'un seul de ces haplotypes (probabilité : 50 p. 100) ou d'haplotypes l'un et l'autre différents (probabilité : 25 p. 100). Les résultats que nous avons obtenus à l'aide de cette technique, qu'on pourrait baptiser du néologisme d'« haplotypage », démontrent que l'avenir du greffon peut être ainsi prédit de façon beaucoup plus sûre qu'avec le « typage » HL-A classique. Ainsi, les transplantations
qu'avec le « typage » HL-A classique. Ainsi, les transplantations rénales que nous avons effectuées entre sujets dont les génotypes ont été reconstitués comme HL-A identiques, fournissent 100 p. 100 de succès (tableau I). Bien plus, 87 p. 100 de ces reins greffés ont, à la biopsie, un aspect rigoureusement normal, impossible à distinguer d'un rein sain [9]. TABLEAU I. Résultats de l'homotransplantation rénale en fonction des résultats de l'« haplotypage » dans 55 cas de greffes interfamiliales. DONNEURS SIGNIFICATION DONNEURS HL-A IDENTIQUES SEMI-IDENTIQUES STATISTIQUE OU DIFFERENTS DE LA DIFFERENCE Nombre de malades 10 45 Pourcentage de greffons fonctionnels 100
Nombre de malades 10 45 Pourcentage de greffons fonctionnels 100 76 p = 0,05 Clearance moyenne de la créatinine des reins fonctionnels (ml /mn). 83 62 p < 0,02 Il n'est pas surprenant que l'haplotypage surpasse de beaucoup le simple recensement des différences antigéniques connues. Lorsque l'on possède assez d'éléments pour affirmer l'identité des haplotypes, cela signifie que la totalité des antigènes correspondants sont nécessairement identiques, alors que, quand on compare seulement les différences antigéniques une par une, on méconnaît, sans doute, un nombre non négligeable d'antigènes encore inconnus dans le phénotype HL-A. Malheureusement cet important progrès dans la sélection
le phénotype HL-A. Malheureusement cet important progrès dans la sélection du donneur idéal, n'est applicable qu'aux greffes interfamiliales. C'est pourquoi notre intérêt s'est porté sur une deuxième technique tout à fait différente, la culture mixte des lymphocytes. b) Culture mixte de lymphocytes. Il y a cinq ans, Barbara Bain, à Montréal, et Fritz Bach, à New York, démontraient que la culture en commun des lymphocytes de deux sujets différents donnait naissance à de volumineuses cellules d'aspect blastique, en nombre d'autant plus élevé que les sujets étaient plus histo-incompatibles. Or, appliquant cette technique aux transplantations d'organe, nous avons établi qu'elle a
cette technique aux transplantations d'organe, nous avons établi qu'elle a une valeur prédictive très hautement significative des résultats cliniques de la greffe de rein [2] (tableau II). TABLEAU II. Corrélation entre les résultats de la culture mixte de lymphocytes du donneur et du receveur et les résultats de l'homotransplantation rénale (36 cas ; corrélation très significative : p < 0,001). RÉSULTAT DE LA CULTURE MIXTE DE LYMPHOCYTES NOMBRE DE CAS FONCTION DU REIN GREFFÉ DE 1 AN APRÈS LA TRANSPLANTATION RÉSULTAT DE LA CULTURE MIXTE DE LYMPHOCYTES (clearance de la créatinine Ccr négatif positif en ml/mn) (moins de 5 p.
créatinine Ccr négatif positif en ml/mn) (moins de 5 p. 100 (plus de 5 p. 100 de cellules de cellules transformées) transformées) 12 Excellente (Ccr > 70 ml/mn) 12 24 Inférieure à la normale 5 19 (Ccr < 70 ml/mn) II. IMMUNO-DÉPRESSION DU RECEVEUR Les agents immuno-dépresseurs, destinés à minimiser la réaction de rejet de l'hôte contre l'allogreffon, sont aujourd'hui nombreux. Les plus couramment utilisés sont les dérivés de la 6-mercaptopurine, notamment l'azathioprine ou imuran, et les globulines antilymphocytaires. Mais aucun de ces produits n'est entièrement satisfaisant [6]. Les dérivés de la 6-mercaptopurine entraînent un nombre appréciable d'incidents et d'accidents,
de la 6-mercaptopurine entraînent un nombre appréciable d'incidents et d'accidents, en partie parce que leur emploi clinique est très aveugle en l'absence d'une méthode capable d'en suivre le métabolisme dans l'individu. Quant au sérum antilymphocyte, son emploi est plus empirique encore, car il n'y a pas une globuline antilymphocytaire, mais autant de variétés que de préparations, et on ne possédait jusqu'à présent aucune méthode de standardisation. Toutes ces difficultés seront peut-être en grande partie résolues au moyen d'une nouvelle technique, développée dans notre laboratoire par Jean-François Bach, M. Dardenne et C. Fournier, et permettant pour la première fois une mesure
C. Fournier, et permettant pour la première fois une mesure extrêmement sensible et fidèle de l'activité immuno-dépressive in vitro. Cette technique est fondée sur l'inhibition par les drogues immunodépressives et les globulines antilymphocytaires du phénomène de cytoadhérence hétérologue spontané. On savait, depuis longtemps, que lorsqu'une souris est immunisée contre les globules rouges de mouton, ses lymphocytes acquièrent la propriété de former in vitro, en présence d'érythrocytes de mouton, des « rosettes d'immuno-cyto-adhérence ». Il fut découvert qu'un animal non pré-immunisé pouvait également former des images analogues de « rosettes spontanées », en nombre beaucoup plus faible que les rosettes immunes,
», en nombre beaucoup plus faible que les rosettes immunes, mais, en revanche, d'une sensibilité cinquante fois plus grande à l'influence des immunosuppresseurs. C'est ainsi qu'une quantité de l'ordre du microgramme de 6-mercaptopurine/ml suffit à exercer un effet d'inhibition des rosettes spontanées, alors qu'il faut une concentration mille fois plus grande, par exemple, pour que les tests de cytotoxicité deviennent positifs. La remarquable sensibilité de cette méthode nouvelle a eu comme conséquence immédiate la possibilité de mesurer pour la première fois, dans le sang même de l'animal ou de l'homme, l'activité immuno-suppressive provoquée par l'administration d'une drogue comme la 6-mercaptopurine
l'activité immuno-suppressive provoquée par l'administration d'une drogue comme la 6-mercaptopurine ou l'imuran. On s'est aperçu que la courbe d'activité sanguine était fort différente pour une même dose, selon la répartition de cette dose dans les vingt-quatre heures. On a également pu calculer que l'activité immunodépressive obtenue par ces médicaments, comparée à leur activité in vitro, était disproportionnée avec la dose administrée et ne pouvait s'expliquer que par l'intervention de métabolites beaucoup plus puissants que la drogue elle-même. On a pu encore démontrer que, chez les malades atteints d'insuffisance hépatique, l'activité immuno-suppressive s'effondre, ce qui tend à prouver que les métabolites
immuno-suppressive s'effondre, ce qui tend à prouver que les métabolites actifs sont le résultat de la transformation de la 6-mercaptopurine ou de l'azathioprine dans le foie. Bref, on possède maintenant un moyen de suivre, chez l'animal d'expérience et chez le malade traité, le métabolisme et l'activité réelle des produits administrés, si bien qu'on peut espérer que le maniement de ceux-ci deviendra beaucoup moins aveugle et plus efficace que par le passé. Cette même technique semble, en outre, apporter la première méthode satisfaisante de titrage des sérums antilymphocytes et, lors d'une réunion récente, les spécialistes de tous les pays semblent s'être
réunion récente, les spécialistes de tous les pays semblent s'être mis d'accord pour recommander que la méthode décrite dans notre laboratoire soit utilisée pour la définition d'une unité internationale. En effet, il a été possible de démontrer que, aussi bien chez l'homme que chez la souris, le taux d'inhibition des rosettes spontanées d'une globuline antilymphocytaire était proportionnel à l'effet de cette globuline sur la prolongation des greffes de peau. Dans le cas de l'homme, on n'a pas procédé, pour les raisons éthiques que l'on devine, à des greffes cutanées expérimentales, mais quelque cinquante échantillons de sérums antilymphocytes, provenant de toutes
mais quelque cinquante échantillons de sérums antilymphocytes, provenant de toutes les parties du monde, ont été étudiés parallèlement à Paris, par le test in vitro, et en Hollande, sur des allogreffes de peau effectuées chez des singes dans le centre de primatologie de H. Balner ; chaque groupe travaillait sur les mêmes sérums sans connaître les résultats de l'autre groupe ; le dépouillement des résultats fit ressortir une remarquable corrélation entre l'effet de chaque préparation in vivo et son pouvoir d'inhibition des rosettes spontanées in vitro. En dehors de leurs applications pratiques, ces recherches nous ont, bien entendu, paru d'intérêt
applications pratiques, ces recherches nous ont, bien entendu, paru d'intérêt théorique. On est conduit, en effet, à exploiter le parallélisme entre l'inhibition des rosettes spontanées et l'action prolongatrice d'allogreffes, pour éclairer le mécanisme encore imparfaitement connu du rejet des greffes. Les résultats que nous avons présentés prennent toute leur signification à la lumière des travaux qui, de divers côtés, suggèrent que les lymphocytes comportent plusieurs populations, d'origine, de signification et de devenir fort différents. Parmi ces populations lymphocytaires, certaines sont sans doute particulièrement responsables de la reconnaissance de l'antigène et il semble que les arguments sont puissants pour l'hypothèse selon
il semble que les arguments sont puissants pour l'hypothèse selon laquelle les lymphocytes formant des rosettes spontanées ne sont autres que des lymphocytes de reconnaissance antigénique. Or, il est remarquable que, seules, les rosettes formées par les lymphocytes ayant subi l'action du thymus, tels les lymphocytes spléniques, sont sensibles à l'effet du sérum antilymphocyte, alors que les rosettes des lymphocytes non thymo-dépendants de la moelle osseuse ou d'un animal thymectomisé à la naissance, ne sont que peu ou pas sensibles à ce même agent immunodépresseur. On peut donc penser que ces recherches sur la cyto-adhérence spontanée permettent de saisir le
ces recherches sur la cyto-adhérence spontanée permettent de saisir le point d'impact de l'immuno-dépresseur, et, partant, ouvrent la porte à une intelligence plus claire du rôle des diverses populations lymphocytaires dans la naissance et le développement des phénomènes responsables du rejet. RÉSUMÉ Depuis les premières greffes rénales humaines réussies en 1959, d'importants progrès ont amené la proportion de succès à environ 80 p. 100 des observations, dans le cas des donneurs vivants apparentés au receveur, et 60 p. 100 dans le cas de la transplantation de rein de cadavre. On peut espérer que la proportion d'échecs diminue encore à partir
peut espérer que la proportion d'échecs diminue encore à partir de trois données nouvelles établies cette année par le groupe de recherche de l'hôpital Necker : 1° La confrontation, non des seuls antigènes HL-A du donneur et du receveur, mais des génotypes correspondants, reconstitués par regroupement des phénotypes familiaux, aboutit à définir des donneurs dont le génotype HL-A est identique à celui du receveur. La proportion de succès de la transplantation rénale s'élève alors, pour de tels donneurs, à 100 p. 100 des cas de notre série. 2° La culture mixte de lymphocytes du donneur et du receveur permet de
mixte de lymphocytes du donneur et du receveur permet de prédire le succès ou l'échec de la transplantation rénale avec une probabilité très significative (p < 0,001). Le test de cyto-adhérence hétérologue spontané (rosettes spontanées) permet de doser l'activité immuno-suppressive du sang des malades recevant des drogues de la série de la 6-mercaptopurine, d'analyser le métabolisme de celles-ci dans l'organisme, enfin de standardiser pour la première fois, par une méthode in vitro, les sérums antilymphocytes. BIBLIOGRAPHIE [1] BACH (J. F.) et DARDENNE (M.). Signification du phénomène de rosette chez la souris non immunisée. C. R. Acad. Sc. Paris, 1969, 269,
souris non immunisée. C. R. Acad. Sc. Paris, 1969, 269, 751-754. [2] BACH (J. F.), DEBRAY-SACHS (M.), CROSNIER (J.), KREIS (H.) and DORMONT (J.). Corrélation between mixed lymphocyte culture performed before renal transplantation and kidney function. Clin. exp. immunol., sous presse. [3] DAUSSET (J.), COLOMBANI (J.), LEGRAND (L.) et FEINGOLD (N.). Les sous-loci du système HL-A. Le système principal d'histocompatibilité de l'homme. Presse méd., 1969, 77, 849. [4] DORMONT (J.), DEBRAY-SACHS (M.) et BACH (J. F.). Sérums antilymphocytes et transplantations d'organes. Actualités Néphrologiques de l'Hôpital Necker, 1 vol., Paris, 1969, édit. méd. Flammarion, 23-41. [5] HAMBURGER (J.). A reappraisal of
édit. méd. Flammarion, 23-41. [5] HAMBURGER (J.). A reappraisal of the concept of organ « rejection » based on the study of homotransplanted kidneys. Transplantation, 1967, 5, 870. [6] HAMBURGER (J.). Transplantation of kidney : the present position. In Basis of Medicine, 1 vol., 1969, Londres et New York, Academic Press édit., sous presse. [7] HAMBURGER (J.), RICHET (G.), CROSNIER (J.), FUNCK-BRENTANO (J. L.), ANTOINE (B.), DUCROT (H.), MERY (J. P.) et DE MONTERA (H.). Transplantation rénale. In Néphrologie, 1966, mise à jour 1970, 2, 1766, édit. méd. Flammarion. [8] HAMBURGER (J.), VAYSSE (J.), CROSNIER (J.), TUBIANA (M.), LALANNE (C.
HAMBURGER (J.), VAYSSE (J.), CROSNIER (J.), TUBIANA (M.), LALANNE (C. M.), ANTOINE (B.), AUVERT (J.), SOULIER (J. P.), DORMONT (J.), SALMON (Ch.), MAISONNET (M.) et AMIEL (J. M.). Transplantation d'un rein entre jumeaux non monozygotes après irradiation du receveur. Bon fonctionnement au quatrième mois. Presse méd., 1959, 67, 1771. [9] KREIS (H.), LESKI (M.), CROSNIER (J.) and HAMBURGER (J.). The value of a genetic expression of leucocyte typing in renal transplantation. Clin. exp. immunol., sous presse. [10] MERRILL (J. P.), MURRAY (J. E.), HARRISON (J. H.), FRIEDMAN (E. A.), DEALY (J. B., jr) and DAMMIN (G. J.). Successful homotransplantation of
(J. B., jr) and DAMMIN (G. J.). Successful homotransplantation of the kidney between non-identical twins. New Engl. J. Med., 1960, 262, 1251. M. Pierre Grabar : Il semble bien établi que la thymectomie néo-natale supprime le rejet des greffes et donc que le thymus joue un rôle primordial dans ce phénomène tandis que les anticorps humoraux, s'ils interviennent, sont moins importants. Il serait préférable, lorsqu'on fait appel à des immunosuppresseurs (médicaments ou immunsérums) de ne pas attaquer, si possible, les cellules qui participent à la synthèse d'anticorps qui peuvent avoir un effet anti-infectieux. Dans son intéressante communication, le professeur Hamburger