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de leur utilisation. Avec certaines espèces il y a incontestablement une évolution constante vers la sélection des souches les plus résistantes. Pour chaque antibiotique, un pourcentage variable de souches échappent au traitement ou sont très résistantes. L'augmentation des souches résistantes est souvent un phénomène local se produisant dans un milieu hospitalier donné. Certaines espèces ne présentent pas une sensibilité prédominante vis-à-vis de tel ou tel antibiotique. Si les divers pourcentages donnés sont capables de guider la thérapeutique, il est préférable de se fier, chaque fois que cela est possible, à la détermination in vitro du taux de sensibilité. BIBLIOGRAPHIE [1]
la détermination in vitro du taux de sensibilité. BIBLIOGRAPHIE [1] Y. CHABBERT. Ces Annales, 1948, 76, 68. [2] Y. CHABBERT. Ann. Biol. clinique, 1951, 9, 81. [3] M. BARBER. J. Path. a. Bact., 1947, 59, 373. [4] R. MARTIN, Y. CHABBERT, B. SUREAU et H. MOUSSET. La Presse Médicale, 1950, 865. [5] T. M. GOCKE, G. G. JACKSON, C. WILCOX et M. FINLAUD. Ann. N. Y. Acad. Sci., 1950, 53, 297. ACTION DU 2, 3 DIMERCAPTOPROPANOL (BAL) SEUL OU ASSOCIÉ AU CHLORAMPHÉNICOLOU À L'AURÉOMYCINE SUR QUELQUES BACTÉRIES À GRAM- NÉGATIF par G. RENOUX et J. ROUX. (Laboratoire de Microbiologie de
par G. RENOUX et J. ROUX. (Laboratoire de Microbiologie de la Faculté de Médecine et Centre (OMS) de Recherches sur la Fièvre ondulante, Montpellier. Directeur : Professeur L. CARRÈRE.) Dans une précédente publication nous établissons [1] le très remarquable renforcement in vitro de l'action de l'auréomycine ou du chloramphénicol sur les Brucella en présence d'un microgramme de dimercaptopropanol par millilitre de milieu, dose par elle-même insuffisante pour amener une stase bactérienne. In vivo, un premier essai sur la souris [2] autorise les plus grands espoirs. Il était intéressant de voir si l'association du BAL et du chloramphénicol ou de l'auréomycine
si l'association du BAL et du chloramphénicol ou de l'auréomycine avait la même action sur d'autres bacilles à Gram-négatif, soit pour permettre un traitement plus actif à moindres doses des affections causées par ces bactéries, soit comme première étape pour essayer d'élucider le mécanisme intime de cette synergie antimicrobienne adaptée aux Brucella. Nos essais ont porté sur 21 souches de bacilles à Gram-négatif : 8 Salmonella, 2 Escherichia, 2 Proteus, 3 Aerobacter, 3 Shigella, 2 Vibrio, 1 Pasteurella. Pour chacune de ces souches, nous avons recherché la dose inhibitrice de 2,3 dimercaptopropanol, de chloramphénicol, d'auréomycine et la dose inhibitrice de
2,3 dimercaptopropanol, de chloramphénicol, d'auréomycine et la dose inhibitrice de ces deux antibiotiques en présence d'une dose uniforme de 1 microgramme de BAL par millilitre de milieu. Culture en eau peptonée à 20 p. 1 000, glucose à 10 p. 1 000 additionnée de rouge de phénol. Chaque tube contient 1 millilitre de milieu de culture ; l'antibiotique est ajouté stérilement au rhéomètre, en sorte que chaque tube contienne la moitié de la dose du tube qui le précède. L'ensémencement est d'une goutte d'une suspension dans 5 ml d'eau peptonée de 2 millimètres d'une culture de vingt-quatre heures du microorganisme
de 2 millimètres d'une culture de vingt-quatre heures du microorganisme considéré sur bouillon gelosé. Lecture des résultats après vingt-quatre heures à l'étuve à 37°. La dose inhibitrice étant celle contenue dans le premier tube où il n'y a pas de développement microbien apparent. Le tableau 1 résume cette expérience. TABLEAU I. — Doses inhibitrices après 24 heures de culture à 37° en microgrammes par millilitre de milieu. CHLORAMPHÉNICOLOURÉOMYCINE NUMÉRO SOUCHES BAL ————————————— ————————————— 1 + 1 µg 1 + 1 µg seul de BAL seul de BAL de BAL 1 Salmonella typhi, 4810. > 25 6 6 6 6 2.
Salmonella typhi, 4810. > 25 6 6 6 6 2. Salmonella typhi, 3010. > 25 6 6 6 12 3. Salmonella typhi, 2201. > 25 3 6 6 12 4. Salmonella paratyphi B, 2208. > 25 6 6 12 12 5 Salmonella paratyphi B, x 45. > 25 3 3 12 12 6 Salmonella paratyphi B, 77 > 25 6 6 12 24 1. Salmonella paratyphi C, 408. > 25 3 3 0,36 0,36 8. Salmonella enteritidis, 104. > 15 6 6 1,50 3 9. Escherichia coli, 1812. 25 0,75 1,50 0,72 0,75 10. Escherichia coli, 112. >25 1,20 3
1,50 0,72 0,75 10. Escherichia coli, 112. >25 1,20 3 0,18 0,36 11 Aerobacter aerogenes, 1346. > 25 0,75 3 0,18 0,36 12 Aerobacter aerogenes, 1416. > 25 0,18 0,75 6 6 13. Aerobacter aerogenes, 1466. > 25 0,15 1,20 1,50 3 14. Proteus vulgaris, 301. > 25 6 12 25 25 15. Proteus morbidus, 303. > 25 6 6 25 25 16. Vibrio cholerae, 464. 6 0,18 0,18 0,18 0,18 17. Vibrio el Tor, B. 2. 12 0,18 0,36 0,36 0,36 18 Shigella shiga, M. > 25 0,36 0.18 12 25 19. Shigella dysenteriae II, 54. > 25 0,75
12 25 19. Shigella dysenteriae II, 54. > 25 0,75 0,75 1,50 1,50 20 Shigella dysenteriae V, 541. 25 6 12 25 12 21. Pasteurella pseudotuberculosis >25 0,18 0,18 0,09 0,09 1° Sensibilité au chloramphénicol ou à l'auréomycine des souches étudiées. 12 souches se montrent plus sensibles au chloramphénicol qu'à l'auréomycine 4/8 souches de Salmonella typhi (2201), paratyphi B (2208, x 45 et 77). 2/3 souches d'Aerobacter aerogenes (1416 et 1466). 2/2 souches de Proteus. 1/2 vibrio (El Tor B. 2). 3/3 Shigella (noter en particulier la très grande différence pour Sh. shiga 51). Il y a égalité d'activité antibiotique
pour Sh. shiga 51). Il y a égalité d'activité antibiotique vis-à-vis de : 2/8 Salmonella typhi (1810 et 3010). 1/2 E. coli (1812). 1/2 Vibrio cholerae (464). L'auréomycine est plus active que le chloramphénicol contre : 2/8 Salmonella paratyphi C (408) et enteritidis (404). 1/2 E. coli (112). 1/4 A. aerogenes (1346). 1/1 Pasteurella. 2° Pouvoir bactériostatique du 2,3 dimercaptopropanol. Le dimercaptopropanol est peu ou pas bactériostatique pour les souches étudiées : plus de 25 microgrammes pour la plupart des souches ; seules les souches E. coli 1812 et Flexner Il 54 sont inhibées par 25 microgrammes et les souches
Il 54 sont inhibées par 25 microgrammes et les souches de Vibrio cholerae 464 et El Tor B 2 respectivement par 6 et 12 microgrammes. Première différence avec les Brucella, dans l'ensemble sensibles. 30 Pouvoir bactériostatique du chloramphénicol, en présence de 1 microgramme de BAL par millilitre de milieu. Dans 12 expériences sur 21 il n'y a aucune différence entre les deux séries d'essais, les doses inhibantes de chloramphénicol sont les mêmes en présence ou non de BAL. Dans 8 expériences (nos 3, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 20) la présence de BAL semble augmenter les capacités de résistance
la présence de BAL semble augmenter les capacités de résistance du microbe considéré à l'action de l'antibiotique ; il faut des doses de chloramphénicol doubles ou même quadruples pour obtenir l'effet de stase quand le milieu contient du dimercaptopropanol. Il s'agit essentiellement d'entérobactéries, Escherichia et Aerobacter. Dans un cas seulement (expérience n° 18) une souche de Shigella shiga, quoique résistante au BAL seul, est plus sensible au chloramphénicol associé au BAL qu'au chloramphénicol seul. 4° Pouvoir bactériostatique de l'auréomycine, en présence de 1 microgramme de BAL par millilitre de milieu. Dans 12 expériences sur 21 aucune différence entre les deux
Dans 12 expériences sur 21 aucune différence entre les deux séries d'essais. Dans 8 expériences (2, 3, 6, 8, 10, 13, 18) la présence de BAL diminue le pouvoir bactériostatique de l'auréomycine : ce groupe comprend 4 Salmonella, 1 Escherichia, 1 Aerobacter, 1 Proteus et 1 Shigella. Dans un cas seulement (n° 20) une souche de Shigella flexner V (54) est plus sensible à l'auréomycine quand le BAL est présent. Il n'y a pas, apparemment, de rapport entre la sensibilité de la souche considérée à l'antibiotique en cause et son comportement quand on fait agir le même antibiotique en présence
comportement quand on fait agir le même antibiotique en présence de BAL. Dans nos essais sur les Brucella nous avions noté que le dimercaptopropanol renforçait l'action des antibiotiques étudiés et la prolongeait dans le temps ; un essai (tableau II) de l'action du chloramphénicol seul ou associé au BAL sur les Salmonella nous a montré une action inverse ; en présence de BAL et dès la quarante-huitième heure, les doses de chloramphénicol nécessaires pour maintenir l'inhibition augmentent. Ici encore, les résultats sont tout à fait opposés à ceux que nous avions obtenus avec les Brucella, où, rappelons-le, la présence dans
avions obtenus avec les Brucella, où, rappelons-le, la présence dans le milieu de culture de 1 µg de BAL permettait de maintenir pendant les six jours de l'expérience le même taux valable d'antibiotique, qu'il s'agisse de chloramphénicol ou d'auréomycine. TABLEAU II. — Action du chloramphénicol seul ou associé à 1 µg de BAL par millilitre sur les Salmonella, en fonction du temps. TEMPS D'INCUBATION À 37° en jours SOUCHES 1 2 3 4 1 2 3 4 Salmonella typhi, 1810. Chloro. seul. 6 6 6 6 Chloro. + BAL. 6 12 12 12 Salmonella typhi, 3010. Chloro. seul. 6 6
12 12 12 Salmonella typhi, 3010. Chloro. seul. 6 6 6 12 Chloro. + BAL. 6 12 12 12 Salmonella typhi, 2201. Chloro. seul. 3 6 6 12 Chloro. + BAL. 6 12 12 25 Salmonella paratyphi B, 2208. Chloro. seul 6 12 12 25 Chloro. + BAL. 6 25 25 25 Salmonella paratyphi, x 45. Chloro. seul. 3 6 6 12 Chloro. + BAL. 3 12 12 12 Salmonella paratyphi, 77. Chloro. seul. 6 12 12 12 Chloro. + BAL. 6 12 12 12 Il nous est venu à l'esprit une objection, qui expliquait peut-être les différences de comportement
l'esprit une objection, qui expliquait peut-être les différences de comportement des Brucella et des autres bactéries Gram-négatif étudiées ; dans le cas des Brucella nous avions éprouvé le pouvoir antibiotique en bouillon au foie tandis que nous avons utilisé l'eau peptonée glucosée pour les autres bacilles, ce qui pourrait expliquer, par la présence ou l'absence de certains métabolites dans le milieu de culture, ces résultats divergents. Nous avons donc recherché l'action du chloramphénicol seul ou associé au BAL en milieu bouillon au foie. Cette expérience a porté sur 5 souches (tableau III). Les résultats de cette expérience ne diffèrent pas
(tableau III). Les résultats de cette expérience ne diffèrent pas sensiblement de nos premiers essais (tableau I) : le milieu de culture n'a pas TABLEAU III. — Action du chloramphénicol seul ou associé au BAL ; action du BAL seul quand les bacilles sont cultivés en bouillon au foie. DOSES INHIBANTES EN GAMMAS DE SOUCHES BAL —————————————————————————— chloramphénicol chloramphénicol seul + BAL Salmonella typhi, 3010. >25 1,5 3 Paratyphi A. 108. 25 3 3 Aerobacter aerogenes, 1416. > 25 0,15 0,75 Shigella, flexner II, 52. >25 1,5 1,5 Proteus vulgaris, 301. > 25 6 6 d'influence réelle sur l'action des
301. > 25 6 6 d'influence réelle sur l'action des antibiotiques, sous la réserve d'un développement microbien correct. Ainsi le 2,3 dimercaptopropanol n'a pas ou a une faible activité bactériostatique sur les bacilles à Gram-négatif étudiés autres que les Brucella, et en présence de ce produit le chloramphénicol ou l'auréomycine ont une activité diminuée dans la plupart des cas vis-à-vis des bacilles à Gram-négatif. De cette étude nous pouvons tirer plusieurs conclusions : 1° Il existe une grande différence entre les Brucella et d'autres bacilles à Gram-négatif dans leur comportement à l'égard du dimercaptopropanol qui est antibiotique, ou plutôt bactériostatique,
à l'égard du dimercaptopropanol qui est antibiotique, ou plutôt bactériostatique, pour le premier groupe et ne l'est pas pour le second. 2° Si le BAL augmente et renforce l'action du chloramphénicol ou de l'auréomycine sur les Brucella, il est sans valeur pour les autres bactéries étudiées, quand il n'a pas une action empêchante. 30 On suppose que le chloramphénicol agit en inhibant les estérases microbiennes (Smith, Worrel et Swanson) [3] et que l'auréomycine empêche le microbe d'assimiler le phosphore inorganique (Loomis) [4] ; ces études ont été faites sur des bacilles à Gram-négatif autres que les Brucella. Il importe de
bacilles à Gram-négatif autres que les Brucella. Il importe de vérifier si l'action de ces antibiotiques sur les Brucella se fait par l'intermédiaire des mêmes métabolismes ; en tout cas il semble bien que le BAL n'inhibe aucun métabolisme des autres bactéries. On sait l'action de cette drogue sur les diastases contenant un métal lourd : peut-être trouve-t-elle chez les Brucella, et pas chez les autres microbes étudiés ici, une telle diastase. [1] Inserm, U. 146, Biologie des Brucelles, Paris. [2] Brucella pyrrotoprimivorus. [3] Smith, Worrel, Swanson, Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 78, 323-325 (1951). [4] Loomis, Proc. Soc. Exp.
Biol. Med. 78, 323-325 (1951). [4] Loomis, Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 78, 126-129 (1951). 4° On devra tenir compte de ce fait — que le BAL peut gêner l'action bactériostatique du chloramphénicol ou de l'auréomycine — dans le traitement des malades justiciables à la fois de la thérapeutique antibiotique et de la thérapeutique par le BAL. BIBLIOGRAPHIE [1] G. RENOUX et J. Roux. Ces Annales, 1951, 80, 189. [2] G. RENOUX et J. Roux. Ass. Micr. L. Franç., ces Annales, 1951, 80, 425. [3] C. N. SMITH, C. S. WORRET, et A. L. SWANSON. J. Bact. 1949, 58, 803-809.
WORRET, et A. L. SWANSON. J. Bact. 1949, 58, 803-809. [4] W. F. LOOMIS. Science, 1950, 111/2887, 474. LES FACTEURS ANTIGÉNIQUES DU VIBRION CHOLÉRIQUE ET LEUR DÉTERMINATION PAR AGGLUTINATION MICROSCOPIQUE par A. WAHBA (2). (Institut des Sérums et Vaccins du Caire.) L'existence de 13 facteurs « 0 » chez le vibrion cholérique ayant été affirmée par Burrows et ses collaborateurs [1], Gallut [2] a poursuivi ces travaux par l'étude détaillée de 82 souches de vibrions. Ce dernier travail fut très important car il démontra que parmi les 35 souches isolées de l'épidémie égyptienne de 1947, il existait une variation assez
de l'épidémie égyptienne de 1947, il existait une variation assez vaste de la formule antigénique. Comme ces expériences furent terminées vers la fin 1948, il restait à voir si ces souches, conservées dans la gélose profonde, avaient encore la même formule après une durée de plus de deux ans, Burrows ayant suggéré la possibilité d'une instabilité antigénique. En même temps, l'emploi de l'agglutination sur lame comme technique usuelle de détermination de facteurs antigéniques a été envisagé. Kauffmann [3] ayant attribué à l'emploi de gélose mince ou trop dure une insuffisance de production d'antigène « 0 », une gélose fraîche et
de production d'antigène « 0 », une gélose fraîche et épaisse a été utilisée dans toutes les expériences. D'autre part, cet auteur n'accepte pas la présence des facteurs D M et il attribue les agglutinations positives aux facteurs rough non spécifiques R et Q. Gurkipal Singh et Ahuja [4] partagent aussi cette opinion. Pour éviter la présence d'un élément rough, les essais suivants furent adoptés avant de procéder à l'agglutination macroscopique des souches provenant de l'épidémie égyptienne : a) Agglutination microscopique avec un sérum Inaba. (1) Travail effectué à l'Institut Pasteur de Paris, dans les laboratoires du Dr J. Gallut,
Pasteur de Paris, dans les laboratoires du Dr J. Gallut, qu'il m'est agréable de remercier ici pour présentation de souches et excellentes conditions de travail. (2) Société Française de Microbiologie, séance du 1er mars 1951. b) Agglutination microscopique et macroscopique, contrôle avec l'eau physiologique. c) Mise en contact des suspensions avec le réactif de Millon et ébullition pendant dix minutes. d) Thermostabilité : suspension en eau physiologique mise en ébullition pendant deux heures. Les souches n'agglutinant pas avec le sérum spécifique, étant auto-agglutinables, donnant une réaction de Millon positive ou n'étant pas thermostables, furent ainsi écartées. 1° Agglutinants. — Quatre
n'étant pas thermostables, furent ainsi écartées. 1° Agglutinants. — Quatre agglutinants différents furent employés dont la suspension vivante et celle tuée par ébullition se sont montrées satisfaisantes. L'antigène préparé par la récolte des cultures sur gélose peptonée âgées de dix-huit heures, puis additionné de formol à 5 p. 1 000, n'a été satisfaisant qu'en cas d'utilisation immédiate. Plus tard, l'antigène C disparaissait. Nous reviendrons plus loin sur ce point. L'antigène préparé d'une culture liquide (bouillon) formolée, recommandé par Gardner et Venkatraman [5], a donné des résultats non spécifiques. 2° Antisérums. — Des antisérums de lapin saturés et spécifiques : anti-A,
— Des antisérums de lapin saturés et spécifiques : anti-A, B, C, D, E, F, 1 K, H M et L ont été employés. 30 Epreuve d'agglutination macroscopique. — Un taux du centième au millième est utilisé. Le mélange ne doit pas être trop dense pour éviter une difficulté dans la lecture. Les tubes sont placés au bain-marie à 52° C et la lecture faite à l'œil nu après quatre heures. Puis les tubes sont gardés jusqu'au lendemain à la température du laboratoire pour la lecture finale. Après les quatre premières heures le résultat des facteurs A B C D
premières heures le résultat des facteurs A B C D E est net, comme il a été rapporté par Gallut. L'agglutination des facteurs mineurs est plus lente et n'est nette que le lendemain. TABLEAU I. — Comparaison des formules antigéniques suivant le temps de conservation des souches. SOUCHE 1948 1951 SOUCHE 1948 1951 8 945 AC ACDE 12 989 ACDL ACDE Suelem AC ACDE 8 991 ACDL ACDE El Kourein AC ACDE V4 Suez. ACDEL ACDE V 2 Farana. AC ACDE P. S. 163 ACDEFL ACDEF il ACL ACD 8 990 ACDEIIML ACDEFIM P S. 296. ACDL ACDE P S.
990 ACDEIIML ACDEFIM P S. 296. ACDL ACDE P S. 291 ACL ACDE 8 946 ACDEFGIJKL ABCDEFIKL (1) P. S. 285. ACDL ACDE 35 013 ACDEL ABCDEFIKL (1) L'antisérum GJ manquait. 4° Résultats. — En comparant les résultats obtenus en 1948 et en 1951 on peut conclure, d'une façon générale, à l'apparition des facteurs D et E dans les souches où ils étaient absents et la disparition complète (à part deux exceptions) du facteur L. 5° Agglutination microscopique. — La possibilité d'une agglutination microscopique a été d'abord examinée avec la souche 8 946 qui donna en agglutination macroscopique un taux
souche 8 946 qui donna en agglutination macroscopique un taux élevé avec tous les sérums spécifiques. En principe, une dilution du sérum au quarantième donna un résultat positif indiquant la présence des facteurs majeurs et mineurs. Il est à remarquer aussi que l'agglutination A, B, C, D et E fut instantanée ou du moins rapide ; celle des autres fut lente. TABLEAU II. — Agglutination sur lame de la souche 8 946 par sérums spécifiques dilués. SÉRUM PUR 1/10 1/20 1/40 1/80 1/160 REMARQUES A + + + + + + Rapide. B -j+ + + + + Rapide. G
+ Rapide. B -j+ + + + + Rapide. G -f+ + + + + Rapide. D + + + + + + Rapide. E + + + + + + Rapide. F + + + + + + Lente. IK. + -4 + + Lente. HM L. + + + + + + Lente. L'agglutination sur lame doit se faire avec une culture sur gélose âgée de préférence de moins de vingt-quatre heures. Les formules antigéniques ainsi déterminées correspondent exactement aux formules trouvées par la méthode macroscopique. 60 La particularité du facteur C. CORRECTION ### 4° On devra tenir
particularité du facteur C. CORRECTION ### 4° On devra tenir compte de ce fait — que le BAL peut gêner l'action bactériostatique du chloramphénicol ou de l'auréomycine — dans le traitement des malades justiciables à la fois de la thérapeutique antibiotique et de la thérapeutique par le BAL. BIBLIOGRAPHIE [1] G. RENOUX et J. Roux. Ces Annales, 1951, 80, 189. [2] G. RENOUX et J. Roux. Ass. Micr. L. Franç., ces Annales, 1951, 80, 425. [3] C. N. SMITH, C. S. WORRET, et A. L. SWANSON. J. Bact. 1949, 58, 803-809. [4] W. F. LOOMIS. Science, 1950, 111/2887, 474. LES
803-809. [4] W. F. LOOMIS. Science, 1950, 111/2887, 474. LES FACTEURS ANTIGÉNIQUES DU VIBRION CHOLÉRIQUE ET LEUR DÉTERMINATION PAR AGGLUTINATION MICROSCOPIQUE par A. WAHBA (2). (Institut des Sérums et Vaccins du Caire.) L'existence de 13 facteurs « 0 » chez le vibrion cholérique ayant été affirmée par Burrows et ses collaborateurs [1], Gallut [2] a poursuivi ces travaux par l'étude détaillée de 82 souches de vibrions. Ce dernier travail fut très important car il démontra que parmi les 35 souches isolées de l'épidémie égyptienne de 1947, il existait une variation assez vaste de la formule antigénique. Comme ces expériences furent
assez vaste de la formule antigénique. Comme ces expériences furent terminées vers la fin 1948, il restait à voir si ces souches, conservées dans la gélose profonde, avaient encore la même formule après une durée de plus de deux ans, Burrows ayant suggéré la possibilité d'une instabilité antigénique. En même temps, l'emploi de l'agglutination sur lame comme technique usuelle de détermination de facteurs antigéniques a été envisagé. Kauffmann [3] ayant attribué à l'emploi de gélose mince ou trop dure une insuffisance de production d'antigène « 0 », une gélose fraîche et épaisse a été utilisée dans toutes les expériences. D'autre
et épaisse a été utilisée dans toutes les expériences. D'autre part, cet auteur n'accepte pas la présence des facteurs D M et il attribue les agglutinations positives aux facteurs rough non spécifiques R et Q. Gurkipal Singh et Ahuja [4] partagent aussi cette opinion. Pour éviter la présence d'un élément rough, les essais suivants furent adoptés avant de procéder à l'agglutination macroscopique des souches provenant de l'épidémie égyptienne : a) Agglutination microscopique avec un sérum Inaba. (1) Travail effectué à l'Institut Pasteur de Paris, dans les laboratoires du Dr J. Gallut, qu'il m'est agréable de remercier ici pour présentation de
Gallut, qu'il m'est agréable de remercier ici pour présentation de souches et excellentes conditions de travail. (2) Société Française de Microbiologie, séance du 1er mars 1951. b) Agglutination microscopique et macroscopique, contrôle avec l'eau physiologique. c) Mise en contact des suspensions avec le réactif de Millon et ébullition pendant dix minutes. d) Thermostabilité : suspension en eau physiologique mise en ébullition pendant deux heures. Les souches n'agglutinant pas avec le sérum spécifique, étant auto-agglutinables, donnant une réaction de Millon positive ou n'étant pas thermostables, furent ainsi écartées. 1° Agglutinants. — Quatre agglutinants différents furent employés dont la suspension vivante et
Quatre agglutinants différents furent employés dont la suspension vivante et celle tuée par ébullition se sont montrées satisfaisantes. L'antigène préparé par la récolte des cultures sur gélose peptonée âgées de dix-huit heures, puis additionné de formol à 5 p. 1 000, n'a été satisfaisant qu'en cas d'utilisation immédiate. Plus tard, l'antigène C disparaissait. Nous reviendrons plus loin sur ce point. L'antigène préparé d'une culture liquide (bouillon) formolée, recommandé par Gardner et Venkatraman [5], a donné des résultats non spécifiques. 2° Antisérums. — Des antisérums de lapin saturés et spécifiques : anti-A, B, C, D, E, F, 1 K, H M
anti-A, B, C, D, E, F, 1 K, H M et L ont été employés. 30 Epreuve d'agglutination macroscopique. — Un taux du centième au millième est utilisé. Le mélange ne doit pas être trop dense pour éviter une difficulté dans la lecture. Les tubes sont placés au bain-marie à 52° C et la lecture faite à l'œil nu après quatre heures. Puis les tubes sont gardés jusqu'au lendemain à la température du laboratoire pour la lecture finale. Après les quatre premières heures le résultat des facteurs A B C D E est net, comme il a été rapporté par
D E est net, comme il a été rapporté par Gallut. L'agglutination des facteurs mineurs est plus lente et n'est nette que le lendemain. TABLEAU I. — Comparaison des formules antigéniques suivant le temps de conservation des souches. SOUCHE 1948 1951 SOUCHE 1948 1951 8 945 AC ACDE 12 989 ACDL ACDE Suelem AC ACDE 8 991 ACDL ACDE El Kourein AC ACDE V4 Suez. ACDEL ACDE V 2 Farana. AC ACDE P. S. 163 ACDEFL ACDEF il ACL ACD 8 990 ACDEIIML ACDEFIM P S. 296. ACDL ACDE P S. 291 ACL ACDE 8 946 ACDEFGIJKL ABCDEFIKL (1) P.