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qualité de fluidification fait nettement préférer la soude. 30 MÉTHODE PROPOSÉE. — Fluidification en mélangeant (au mortier si nécessaire) 2 cm3 de crachats environ avec 6 cm3 de soude à 4 p. 100. Verser dans un tube à centrifuger stérile, couvert de 75 cm3 au moins. On évitera ainsi par la suite toute souillure par les particules non touchées par la soude qui pourraient subsister sur les parois du mortier. Laisser, selon purulence et fraîcheur, vingt à trente minutes à l'étuve à 37°. Ce laps de temps est toujours suffisant si on prend la précaution d'agiter de temps à autre.
si on prend la précaution d'agiter de temps à autre. Ajouter alors 50 cm3 de solution stérile contenant 4,5 cm3 d'acide sulfurique par litre. Centrifuger trois quarts d'heure à une heure à 3 000 tours pour obtenir un culot presque sec. L'émulsionner avec 3 cm3 de solution tampon. Soit : Phosphate monopotassique. 1 Phosphate bipotassique. 2 Glycérine 5 Eau distillée. 500 Répartir sur six tubes de L'ovenstein-Jensen fraîchement préparés [10]. 4° RÉSULTATS. — Dans un but diagnostique, 1 139 cultures ont été pratiquées selon ces principes, au laboratoire central des Villages Sanatoriums, à partir de crachats recueillis directement ou par
Villages Sanatoriums, à partir de crachats recueillis directement ou par tubages gastriques. 6 478 tubes ont été ensemencés. Il s'agit de tubes de milieu de L'ovenstein-Jensen fraîchement préparés au laboratoire. 76 tubes ont été souillés par une flore indésirable, souillure qui n'a eu de conséquence que pour 4 cultures dont tous les tubes étaient souillés. Dans les autres cas, 1 tube sur 6 était contaminé et la lecture restait sur les 5 autres. 558 cultures ont été positives. 5° CONCLUSIONS. Ces résultats sont encourageants. Il n'en reste pas moins vrai que la culture du bacille de Koch reste susceptible de
que la culture du bacille de Koch reste susceptible de subir de gros perfectionnements dans le but de lui faire rejoindre, en sensibilité, l'inoculation au cobaye. Les suggestions de Gernez-Rieux, Sevin et Chenet seront, à ce point de vue, très fructueuses. BIBLIOGRAPHIE [1] F. TISON. Sem. Hôp. Paris, 1949, 9, 389. [2] F. TISON. Ces Annales, 1947, 73, 1024. [3] Ch. GERNEZ-RIEUX et coll. Ann. Inst. Pasteur Lille, 1949, 2, 27. [4] F. TISON. Ces Annales, 1947, 73, 186. [5] F. TISON. Ces Annales, 1947, 73, 407. [6] GOLDIE, Proceed. Soc. exp. Biol. a. Med., 1947, 65, 210. [7] MAC
Soc. exp. Biol. a. Med., 1947, 65, 210. [7] MAC NABB. Am. J. Publ. Health., 1936, 26, 619. [8] CORPER et STONER. J. Lab. a. Clin. Méd., 1946, 31, 1364. [9] CORPER et MYERS. J. Lab. a. Clin. Med., 1930, 15, 348. [10] F. TISON. Ces Annales, 1949, 77, 313. [11] VAN VRANKEN. Am. Rev. Tub., 1947, 55, 374. SOCIÉTÉ FRANÇAISE DE MICROBIOLOGIE (Institut Pasteur, 25, rue du Docteur-Roux, Paris, 75015.) Séance du 5 Avril 1951. Présidence de M. GASTINEL PRÉSENTATION D'OUVRAGES M. Lépine : J'ai l'honneur d'offrir à notre Société, au nom du Professeur Pasteur Vallery-Radot, 4 volumes où
Société, au nom du Professeur Pasteur Vallery-Radot, 4 volumes où celui-ci a patiemment réuni et annoté la correspondance de Pasteur (*) . L'intérêt de cette publication attendue depuis longtemps n'échappera à personne : aussi bien du point de vue de l'histoire que de celui de la science, la lecture de cette correspondance est d'un passionnant intérêt. Elle s'échelonne, en effet, sur toute la vie du fondateur de la Microbiologie. Le premier volume réunit les lettres de jeunesse, nous montre Pasteur d'abord élève au Collège de Besançon puis étudiant à l'Ecole Normale, ensuite agrégé-préparateur dans le laboratoire de Balard, et enfin
Normale, ensuite agrégé-préparateur dans le laboratoire de Balard, et enfin professeur à la Faculté de Strasbourg. Nous y retrouvons les enthousiasmes du lycéen, nous y voyons poindre la vocation scientifique de Pasteur et nous partageons avec lui l'ardeur fébrile des premiers travaux qui culmine avec la découverte des relations entre la forme cristalline, la composition chimique et la polarisation rotatoire. Le second volume est celui de l'étape décisive du passage de Pasteur des études de cristallographie pure à celles des fermentations. C'est la correspondance de Pasteur, administrateur puis directeur de laboratoire à l'Ecole Normale, qui forme l'essentiel du volume :
laboratoire à l'Ecole Normale, qui forme l'essentiel du volume : lettres aux premiers élèves, comme Raulin, aux maîtres comme Jean-Baptiste Dumas ou aux collègues comme Sainte-Claire-Deville, lettres aussi aux puissants du jour, comme le Maréchal Vaillant ou l'Empereur, dont l'appui est indispensable à Pasteur pour obtenir les crédits nécessaires à la poursuite des recherches. A travers toutes ces lettres, si variées de ton, nous voyons l'œuvre de Pasteur prendre son ampleur définitive. Les troisième et quatrième volumes correspondent à l'étape des maladies virulentes, depuis les virus-vaccins du choléra des poules et du charbon, jusqu'à la vaccination contre la rage. Avec
et du charbon, jusqu'à la vaccination contre la rage. Avec eux, c'est (*) PASTEUR, Correspondance, réunie et annotée par Pasteur Vallery-Radot. Flammarion, éditeur, 26, rue Racine, Paris-6e, 1951. toute la fresque de la naissance et du développement de la microbiologie qui défile. Chaque lettre, ou presque, complète ou éclaire de la façon la plus intéressante la monumentale série de mémoires et de travaux que la publication antérieure des Œuvres de Pasteur, véritable pierre angulaire de la microbiologie, a rendus accessibles à tous. Les dernières lettres sont celles du Directeur de l'Institut Pasteur, du savant au faîte de la gloire, du
l'Institut Pasteur, du savant au faîte de la gloire, du Maître qui transmet le flambeau à ses disciples, du grand-père aussi. Car, et ce n'est pas là l'un des moindres charmes de cette correspondance, tout au long de la vie de Pasteur on retrouve, étroitement associé à ses soucis quotidiens, à ses problèmes scientifiques, l'amour de la famille et du foyer : lettres à son père et à ses sœurs, plus tard lettres à Mme Pasteur, à ses enfants, enfin à ses petits-enfants, qui nous apportent le témoignage intime de l'homme et la résonance affective des événements dans sa vie.
l'homme et la résonance affective des événements dans sa vie. A cet égard, la correspondance de Pasteur est un document profondément humain en même temps qu'elle nous apporte des renseignements de premier ordre sur l'évolution de la pensée scientifique de Pasteur ; les lettres à Chappuis, contemporaines des premières découvertes et de l'épanouissement du génie, sont, de ce point de vue, un document incomparable. On retrouve dans toutes les lettres cette logique de la pensée, cette clarté de l'expression et cette précision du terme qui sont caractéristiques de tous les écrits de Pasteur. On y découvre parfois des notes primesautières,
écrits de Pasteur. On y découvre parfois des notes primesautières, des jugements inattendus, des élans de tendresse qui animent d'une vie intérieure cette correspondance et en rendent la lecture si attachante. Je suis certain que tous ceux qui, parmi nous, ont le culte du fondateur de la Microbiologie prendront, à la lecture de ces volumes, un plaisir et un intérêt aussi grands que ceux que j'y ai trouvés moi-même. Impeccablement présentée, accompagnée de très nombreuses notes ainsi que de références chronologiques et d'addenda, la publication de la correspondance de Pasteur, document unique en son genre, est un événement bibliophilique et
document unique en son genre, est un événement bibliophilique et revêt une véritable valeur bibliographique. M. Lépine : J'ai l'honneur de présenter, au nom de notre collègue Albert Delaunay, ce petit opuscule qu'il vient d'écrire dans la Collection « Que sais-je » sur Pasteur et la Microbiologie. L'auteur a cherché à faire œuvre d'historien plutôt que de microbiologiste en retraçant, dans une première partie, l'œuvre de Pasteur qui sert d'introduction à une deuxième partie traitant des étapes de la bactériologie à partir des découvertes pasteuriennes. Ce mode de présentation lui permet de décrire, chemin faisant, les étapes des grandes découvertes
permet de décrire, chemin faisant, les étapes des grandes découvertes ou de retracer la vie des grands disciples comme Metchnikoff et Roux, pour arriver aux travaux les plus récents et exposer, de façon concise mais claire, les problèmes actuels de la prévention et du traitement des maladies infectieuses, de l'anaphylaxie et l'allergie comme les mécanismes de l'immunité ou l'état de la question des viruses. D'une lecture facile, ce livre apporte, dans l'esprit de l'excellente collection où il a été publié, un très bon aperçu scientifique de l'œuvre pasteurienne et ses incidences dans la microbiologie moderne. Sa lecture instruira agréablement les
incidences dans la microbiologie moderne. Sa lecture instruira agréablement les profanes, intéressera même les spécialistes et servira utilement la cause de la microbiologie. COMMUNICATIONS ACTION DE LA TERRAMYCINE SUR LE VIRUS RABIQUE, LA MALADIE DE NEWCASTLE ET LA VARIOLE AVIAIRE par P. LÉPINE, V. PAVILANIS et P. ATANASIU. (Institut de Microbiologie et d'Hygiène de l'Université de Montréal et Institut Pasteur, Paris.) Azevedo et Macedo [1] ont récemment rapporté avoir obtenu dans le traitement de la rage expérimentale par la terramycine des résultats qui, s'ils étaient confirmés, seraient du plus haut intérêt. Après l'inoculation au lapin d'une suspension de virus rabique
intérêt. Après l'inoculation au lapin d'une suspension de virus rabique additionné de terramycine dans la proportion de 0,005 g par millilitre, les animaux survivent tous, tandis que les témoins succombent tous. Lorsque l'antibiotique est administré après l'infection et que le traitement est continué pendant plusieurs jours, on obtient une survie prolongée des animaux (quarante-six jours au moins) et, dans la majorité des cas, la guérison. Si la terramycine est administrée après l'apparition des premiers symptômes de rage, on observe encore une prolongation de la durée de la maladie de cinq jours par rapport aux témoins, mais les animaux finissent néanmoins
jours par rapport aux témoins, mais les animaux finissent néanmoins par succomber. D'autre part, Quilligan, Francis, Rowe et coll. [2] ayant essayé la terramycine sur les viruses de la grippe, l'herpès et la rage, n'ont observé qu'un retard de la multiplication des deux premiers de ces viruses, mais pas d'action dans le cas du virus rabique, ce que confirment de leur côté Levaditi, Vaisman et coll. [3]. Devant cette contradiction, il était intéressant de rechercher systématiquement le degré d'efficacité de la terramycine dans la rage expérimentale. 1° Action « in vitro ». — Une émulsion de virus de rage fixe
vitro ». — Une émulsion de virus de rage fixe (cerveau de lapin paralysé) est diluée à 1/50 avec une solution de terramycine à 4 mg par millilitre. Cette solution possède un pH qui se situe entre 4 et 5. Une suspension témoin est préparée au même taux de virus et ajustée à pH 4. Chacun des mélanges est immédiatement inoculé à 100 souris. Au vingtième jour de l'observation, les résultats sont les suivants : DÉCÈS SURVIE p. 100 p. 100 Virus rabique + terramycine. 40 60 Témoins (virus rabique à pH 4). 45 55 La différence entre les deux
à pH 4). 45 55 La différence entre les deux groupes est très faible et donne à penser que c'est l'acidité de la terramycine qui est responsable de l'action in vitro. Effectivement, il suffit de relever le pH de la terramycine à 5,8 pour voir disparaître à peu près complètement son action virulicide in vitro. Celle-ci paraît donc dépourvue de toute spécificité. D'autre part, si l'on attend plus de dix minutes pour faire les inoculations avec le mélange témoin (virus rabique à pH 4), la destruction du virus est complète, le nombre des survies atteint 100 p. 100 dans le
le nombre des survies atteint 100 p. 100 dans le groupe témoin. 20 Action « in vivo ». — On inocule 300 souris par voie intracérébrale avec du virus fixe dilué à 1/50. 100 souris non traitées servent de témoins ; les 200 souris restantes reçoivent du deuxième au onzième jour 2 mg de terramycine par jour (voie parentérale, 22 mg au total par souris). On observe d'abord que chez les souris traitées par la terramycine, la mortalité par rage apparaît plus précocement que chez les souris témoins : il s'agit là d'un effet dû à l'action additive de la
s'agit là d'un effet dû à l'action additive de la toxicité propre du médicament sur l'infection rabique. Le douzième jour, lorsqu'on cesse le traitement, le nombre des morts est exactement de 50 p. 100 chez les souris traitées et chez les souris témoins, mais à partir de ce moment, il apparaît une légère différence en faveur de la terramycine, de sorte qu'au vingtième jour les résultats sont les suivants : DÉCÈS SURVIVANTES 200 souris traitées. 181 19 (8,5 p. 100) 100 souris témoins. 97 4 (4 p. 100) Là encore les différences sont faibles et ne dépassent pas sensiblement l'erreur
les différences sont faibles et ne dépassent pas sensiblement l'erreur due au hasard. Si l'on augmente les doses de virus rabique inoculées, de façon à atteindre une mortalité de 100 p. 100 chez les témoins, on n'observe plus aucune survie dans les groupes traités. Cependant, nos essais font ressortir, dans ce dernier cas, chez les souris traitées, un allongement à partir du dixième jour de la durée d'incubation de la maladie par rapport à celle des témoins, de sorte que le maximum des décès se place entre le onzième et le douzième jour chez les souris traitées au lieu du
le douzième jour chez les souris traitées au lieu du huitième ou neuvième jour chez les témoins. Nous avons répété l'expérience en traitant des souris préalablement inoculées de rage fixe par la voie intramusculaire (virus fixe, souche Paris entraînée sur souris par cette voie et atteignant une virulence de 10−3). Dans le groupe des souris traitées par voie orale (terramycine 2,5 mg par jour) après infection intramusculaire par le virus rabique, la durée de survie moyenne des souris a été, dans une expérience, de 9,4 jours, dans une deuxième série de 11,5 jours (10 souris par groupe), tandis que chez
de 11,5 jours (10 souris par groupe), tandis que chez les souris traitées par voie intrapéritonéale, la survie a été de 8,8 jours et chez les témoins de huit jours. Il semble donc bien que la terramycine administrée par voie orale entraîne chez la souris un léger allongement de l'incubation de la rage de cet animal ; mais dans aucun cas, et quelles que soient les doses, nous n'avons obtenu la survie des animaux traités. Dans d'autres expériences, nous avons recherché l'action thérapeutique de la terramycine sur le virus de Newcastle et sur la variole aviaire en nous servant de
Newcastle et sur la variole aviaire en nous servant de l'œuf incubé infecté par la voie allantoïque pour le premier virus et par la voie chorioallantoïde pour le second. Nous nous dispensons de rapporter les résultats détaillés de ces expériences qui ont été complètement négatives. Conclusion. — La terramycine exerce une action destructive sur le virus rabique in vitro, mais cette action doit être attribuée uniquement au pH de la terramycine et non à une action spécifique. Si le virus témoin est placé au même pH que la terramycine, les résultats obtenus sont les mêmes. Si le pH de la
résultats obtenus sont les mêmes. Si le pH de la terramycine est relevé, l'action virulicide disparaît complètement. In vivo, l'action curative de la terramycine observée sur des lots de souris allant jusqu'à 200 individus s'est montrée très faible, voire nulle. Elle ne dépasse pas la dispersion statistique des résultats. On observe, par contre, avec la terramycine administrée par voie orale un allongement relatif, net mais faible, de la période d'incubation de la rage chez la souris semblant indiquer que le traitement par la terramycine freine dans une certaine mesure la multiplication du virus chez l'animal infecté, sans toutefois empêcher la
multiplication du virus chez l'animal infecté, sans toutefois empêcher la maladie d'éclater, ni assurer la survie des animaux traités. Ces résultats ne paraissent pas de nature à justifier les espoirs que l'on a pu fonder sur une thérapeutique préventive ou curative de la rage par la terramycine. Contre la maladie de Newcastle et la variole aviaire, la terramycine s'est montrée sans action. BIBLIOGRAPHIE [1] M. P. AZEVEDO et J. J. DE MACEDO. Revista Paulista de Medicina, 1950, 37, 469 et communication au Ve Congrès international de Microbiologie, Rio de Janeiro, août 1950. [2] QUILLIGAN, FRANCIS, Rowe et coll. N. Y.
août 1950. [2] QUILLIGAN, FRANCIS, Rowe et coll. N. Y. Acad. Sci., 1950, 53, 407-411. [3] C. LEVADITI, A. VAISMAN, J. HENRY EVENO et J. VEILLET. Produits pharmaceutiques, 1950, 5, 465-471. ESSAIS D'EXTRACTION DU VIRUS DE LA MOSAÏQUE DU DAHLIA (MARMOR DAHLIAE HOLMES) ET EXAMEN AU MICROSCOPE ÉLECTRONIQUE DES PRODUITS OBTENUS par P. LÉPINE, MU. O. CROISSANT, P. CORNUET et CL. MARTIN. (Institut national de la Recherche agronomique, Station centrale de Pathologie végétale et Institut Pasteur, Service des Virus.) Deux d'entre nous ont publié antérieurement, en collaboration avec P. Limasset [f], une première note relative à l'obtention d'un immunsérum actif
[f], une première note relative à l'obtention d'un immunsérum actif sur le virus de la Mosaïque du Dahlia. La méthode d'extraction et de purification des substances antigéniques à partir des organes infectés du Dahlia a été décrite à cette occasion. Les travaux ayant été poursuivis dans cette voie, d'avantageuses modifications ont pu être apportées à cette méthode. En effet, les plantes, développées en plein air et présentant un développement végétatif puissant, qui avaient été utilisées dans nos premiers essais, renfermaient, en proportion importante, des substances manifestant les propriétés des tanins. Il avait donc été nécessaire d'inhiber l'action dénaturante que ces
Il avait donc été nécessaire d'inhiber l'action dénaturante que ces produits exercent sur les virus. Pour y parvenir, le broyage était effectué au sein d'une solution de sulfate de nicotine à 10 p. 100 de façon à précipiter les tanins. De plus, des substances inhibitrices d'oxydases étaient utilisées, car c'est essentiellement sous leur forme oxydée que les tanins se comportent comme agents précipitants des protéines. Une méthode très simple de relargage au sulfate d'ammonium nous avait ensuite permis d'isoler une substance qui, injectée au lapin, nous mit à même d'obtenir pour la première fois un immunsérum spécifique du virus de
pour la première fois un immunsérum spécifique du virus de la Mosaïque du Dahlia. Il nous paraissait probable que cette substance, purifiée d'une façon partielle, mais déjà pauvre en substances antigéniques normales, était constituée par le virus lui-même. Des photographies au microscope électronique ont été réalisées alors, d'une part à l'aide de ce matériel et, d'autre part, avec des extraits de plantes saines traitées de la même façon. Le produit d'extraction du jus purifié a été dilué à 1 : 5, étalé sur membrane de collodion et ombré par évaporation oblique de palladium. Examiné au microscope électronique (appareil R. C.
oblique de palladium. Examiné au microscope électronique (appareil R. C. A. type E. M. U.), on constate la présence de très nombreuses particules régulièrement sphériques et monodispersées ayant un diamètre de 20 à 25 mp. (fig. 1) couvrant toute la préparation. Dans le jus témoin provenant de plantes saines, extrait de la même façon et examiné de la même manière, on ne rencontre qu'un matériel amorphe, polydispersé, et de très rares particules ayant approximativement la taille de celles rencontrées dans les plantes malades. Ayant poursuivi nos travaux relatifs à l'extraction et à la purification du virus, nous avons constaté qu'en
et à la purification du virus, nous avons constaté qu'en utilisant de jeunes rameaux développés sur les tubercules en serre pendant la période d'hiver, l'usage de l'alcaloïde ne s'avérait plus nécessaire au cours de l'extraction. Le cyanure de potassium, agissant comme inhibiteur d'oxydases, suffisait alors à stabiliser l'antigène. Ceci est vraisemblablement dû à une richesse plus faible de ces jeunes organes en tanins que le blocage des oxydations provoqué par le cyanure suffit à maintenir à l'état réduit. D'autre part, P. Brierley et F. F. Smith ayant pu déterminer la température d'inactivation du virus (85° à 90°) dans les extraits
température d'inactivation du virus (85° à 90°) dans les extraits d'une espèce hospitalière nouvellement découverte (Verbesina encelioides Cav. B et H), nous avons eu l'idée de mettre à profit son exceptionnelle thermostabilité pour éliminer par chauffage une proportion importante des protéines normales contenues dans les jus. La nouvelle technique d'extraction et de purification partielle nous ayant servi à l'obtention de nouveaux immunsérums peut donc se résumer comme suit : on prélève de jeunes rameaux de Dahlias, au stade de développement où l'on détache habituellement les boutures destinées à multiplier la plante ; ces rameaux peuvent être choisis au sein d'une
plante ; ces rameaux peuvent être choisis au sein d'une variété quelconque ; il suffit qu'ils présentent des symptômes de vein clearing accentués. On les broie alors dans un broyeur à hélice en présence d'une solution de bisulfite de sodium à 5 p. 100 et de cyanure de potassium à 0,1 p. 1 000. La quantité de solution doit être approximativement égale à celle du jus extractible. Le liquide obtenu après broyage est passé sur une étamine puis chauffé au bain-marie. Dès que la température de 60° est atteinte, on refroidit et l'on centrifuge à 5 000 tours pour éliminer
refroidit et l'on centrifuge à 5 000 tours pour éliminer le précipité formé contenant les chloroplastes et des protéines dénaturées. Le liquide surnageant doit être parfaitement incolore et limpide, toute coloration brunâtre indiquant une réaction d'oxydation irrémédiable. On refroidit alors le liquide à + 8° et l'on procède à un relargage à sulfate d'ammonium (300 g par litre). Le précipité est rassemblé au bout d'une heure par centrifugation à 5 000 t/m. Après avoir éliminé le liquide surnageant, on reprend ce précipité dans un faible volume d'eau. La partie insoluble est éliminée par centrifugation. Ce liquide, injecté au lapin, fournit
est éliminée par centrifugation. Ce liquide, injecté au lapin, fournit de bons immunsérums présentant une forte réaction antivirus et réagissant très peu avec les protéines normales du Dahlia. La microséroréaction sur lame est immédiate en présence d'un extrait partiellement purifié et nécessite une incubation de quinze minutes avec un jus brut extrait d'une feuille de plante infectée. Pour le diagnostic pratique, on a intérêt à extraire les jus d'organes présumés infectés, par broyage en présence de solution nicotinée réductrice. Les jus de plantes malades, soumis au chauffage préalable à 60°, réagissent aussi fortement que les témoins non chauffés, bien qu'une
réagissent aussi fortement que les témoins non chauffés, bien qu'une partie importante des protéines soit éliminée. De plus, un lapin inoculé avec un jus extrait comme il a été indiqué plus haut, mais non purifié, a fourni un immunsérum présentant une forte réaction antiprotéine normale et une faible réaction antivirus. L'ensemble des faits relatés montre que les tissus infectés renferment une substance antigénique spécifique qu'il est possible de débarrasser de la majeure partie des protéines normales par chauffage des jus suivi de relargage au sulfate d'ammonium. Restait à montrer que cette substance antigénique représente le virus lui-même. A cet effet,
cette substance antigénique représente le virus lui-même. A cet effet, nous avons inoculé 10 jeunes Dahlias issus de semis avec des jus purifiés. L'inoculation était réalisée par friction sur une feuille préalablement saupoudrée de carborundum. Quatre semaines plus tard, les symptômes typiques de la maladie apparaissaient sur les 10 plantes. De plus, les jus extraits de ces plantes réagissaient alors fortement en présence de l'immunsérum obtenu à partir de la préparation qui avait servi à les inoculer. Par conséquent, en même temps que l'on purifie et que l'on concentre l'antigène spécifique, on concentre également le virus. Celui-ci, qui n'est pas