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des tissus des Vertébrés. Mais nous pensons que, dans ce dernier cas, cette contractilité nuisible est bien plus facilement annihilée par l'abaissement de la température ambiante que par les anesthésiques. C'est un fait bien connu en physiologie générale que le froid diminue ou supprime la contractilité du protoplasma. Vers 0°, la contraction brusque du protoplasma au contact du gazateur sera infiniment réduite, presque annihilée. C'est là un premier avantage de la fixation froide que de réduire au minimum les altérations techniques dues à la contraction brusque du protoplasma sous l'influence du réactif fixateur. B. Mais pendant que les couches périphériques
du réactif fixateur. B. Mais pendant que les couches périphériques de la pièce subissent l'action du fixateur, les éléments du centre n'ont pris aucun contact avec ce dernier. Séparées de l'organisme, en dehors de la circulation, les cellules du centre de la pièce vont subir l'autolyse, c'est-à-dire la digestion intracellulaire sous l'action désordonnée de fermentats dont le rôle est normalement réglé dans la cellule non livrée à elle-même. Cette autolyse, variable avec les cellules, a une double action au point de vue spécial qui nous intéresse a) Par digestion d'organes, d'inclusions, etc., préexistants dans la cellule, par dépôt de substances
d'inclusions, etc., préexistants dans la cellule, par dépôt de substances nouvelles (corps myéliniques) résultant du processus lui-même, etc., cette autolyse modifie considérablement l'aspect de la cellule. b) Mais les troubles les plus importants relèvent aussi d'un tout autre mécanisme. L'autolyse, processus digestif de la substance moléculaire, a pour effet de transformer les grosses molécules protoplasmiques en molécules plus petites, mais plus nombreuses. La pression osmotique dépendant du nombre des molécules, le contenu cellulaire va augmenter de tension osmotique. Ce fait va avoir des conséquences importantes. La cellule, à l'origine, en équilibre osmotique avec le milieu ambiant, ne le sera bientôt
équilibre osmotique avec le milieu ambiant, ne le sera bientôt plus. Le contenu cellulaire sera plus concentré que le milieu ambiant. La cellule absorbera de l'eau, gonnera et il en résultera les graves dommages histologiques que l'on connaît éclatements, émission de boules sarcodiques, etc. Ces phénomènes sont précoces. Ils dépendent de l'activité cellulaire elle-même et, en fin de compte, se ramènent à une action fermentaire. Or, nous possédons un moyen de réduire au minimum ces actions diastasiques et leurs conséquences fâcheuses: c'est l'abaissement de température. Au voisinage de 0°, les actions diastasiques autolytiques sont nulles, donc les conséquences qui en
actions diastasiques autolytiques sont nulles, donc les conséquences qui en dérivent. Pour empêcher les cellules du centre de la pièce de subir les graves altérations que l'on sait, il suffit d'abaisser la température du milieu. La théorie conseille donc, en même temps que de réduire l'épaisseur de la pièce, d'opérer à froid la fixation. Il nous est possible de donner un exemple qui montre l'importance du facteur température dans ces phénomènes, en particulier dans le gonflement cellulaire. Dans deux récipients contenant du liquide de Ringer (1) placés l'un à l'étuve à 37°, l'autre à la glacière à 4 ou 5°,
à 37°, l'autre à la glacière à 4 ou 5°, immergeons les reins d'une Grenouille. ### CORRECTION ### Cette cloison, issue du mésoderme vésiculaire, donne implantation à l'épithélium qui, à ce stade, est remarquable par sa grande hauteur, par son étroitesse et par la saillie que forme le pôle apical de chacun des éléments de l'endoderme vitellin. Notons encore qu'aucune différence fondamentale de structure ne différencie les éléments sécréteurs de la vésicule, chez les embryons de Lapin du dixième au vingt-deuxième jour. Et sur chaque les grains de secrétion sont assez rares. Laboratoire des travaux pratiques d'histologie de la Faculté
assez rares. Laboratoire des travaux pratiques d'histologie de la Faculté de Médecine de Paris. LA « FIXATION FROIDE » SES AVANTAGES EN TECHNIQUE HISTOLOGIQUE Par A. POLICARD Dans ses leçons sur les phénomènes de la vie communs aux animaux et aux végétaux, Cl. Bernard a créé l'expression et étudié l'état de vie cessée. La vie manifestée dépend de certaines conditions essentielles. Si l'une d'elles manque, la vie est suspendue ou même arrêtée. Parmi ces conditions, une des plus fondamentales est la chaleur. Il suffit d'abaisser autour d'un être simple ou d'un tissu la température ambiante pour mettre cet être ou
d'un tissu la température ambiante pour mettre cet être ou ce tissu en état de mort. Ces phénomènes, de connaissance élémentaire aujourd'hui, ont fait l'objet depuis longtemps d'applications pratiques. Citons par exemple leur utilisation en bactériologie pour la conservation des virus, en biologie générale pour la conservation des pièces destinées à la greffe; il suffit de rappeler les intéressantes applications du cold shock d'Alexis Carrel. Nous avons tenté l'application de ces données à la nation histologique. Incidemment, certains auteurs, et en particulier Borrel (1) (à propos de son liquide chromo-acéto-osmique), Bethe et les histologistes qui instituèrent des variantes de la
Bethe et les histologistes qui instituèrent des variantes de la méthode d'Ehrlich, avaient signalé que certaines opérations techniques donnaient de meilleurs résultats à froid qu'à la température ambiante. Nous apportons aujourd'hui une série de faits et de considérations qui démontrent l'intérêt d'opérer toujours la fixation à basse température et d'adopter la méthode générale de la fixation froide. BASES THÉORIQUES DE LA MÉTHODE Pour donner un exposé clair des bases théoriques de la méthode que nous proposons, nous allons envisager successivement et dans leur ordre chronologique les phénomènes qui se passent successivement dans les couches les plus périphériques de la pièce
successivement dans les couches les plus périphériques de la pièce parfaitement fraîche et au centre de celle-ci, après son immersion dans le réactif fixateur, que nous supposerons être ici un coagulateur salin, mélange bichromate ou osmique par exemple. Nous ne préjugerons quoi que ce soit de la nature intime de la fixation. A. Aussitôt après l'immersion, il se passe entre les couches périphériques de la pièce et le fixateur une sorte de conflit. En particulier, il se produit une contraction brusque non seulement des organes contractiles, mais même de tout protoplasma. C'est un fait que les zoologistes connaissent bien. Cette
protoplasma. C'est un fait que les zoologistes connaissent bien. Cette contraction brusque et intense peut être l'origine de ruptures, d'altérations de l'architecture cellulaire. Pour combattre cette contractilité, les zoologistes ont l'habitude d'anesthésier les animaux avec du chlorate, de la cocaïne, du chloroforme, de la nicotine ou de la fumée de tabac, etc. C'est là une pratique bien connue. Récemment, Rubenthaler (1) a eu l'idée d'expliquer et de combattre d'une façon analogue les altérations dues à la fixation des tissus des Vertébrés. Mais nous pensons que, dans ce dernier cas, cette contractilité nuisible est bien plus facilement annihilée par l'abaissement de
contractilité nuisible est bien plus facilement annihilée par l'abaissement de la température ambiante que par les anesthésiques. C'est un fait bien connu en physiologie générale que le froid diminue ou supprime la contractilité du protoplasma. Vers 0°, la contraction brusque du protoplasma au contact du gazateur sera infiniment réduite, presque annihilée. C'est là un premier avantage de la fixation froide que de réduire au minimum les altérations techniques dues à la contraction brusque du protoplasma sous l'influence du réactif fixateur. B. Mais pendant que les couches périphériques de la pièce subissent l'action du fixateur, les éléments du centre n'ont pris
subissent l'action du fixateur, les éléments du centre n'ont pris aucun contact avec ce dernier. Séparées de l'organisme, en dehors de la circulation, les cellules du centre de la pièce vont subir l'autolyse, c'est-à-dire la digestion intracellulaire sous l'action désordonnée de fermentats dont le rôle est normalement réglé dans la cellule non livrée à elle-même. Cette autolyse, variable avec les cellules, a une double action au point de vue spécial qui nous intéresse a) Par digestion d'organes, d'inclusions, etc., préexistants dans la cellule, par dépôt de substances nouvelles (corps myéliniques) résultant du processus lui-même, etc., cette autolyse modifie considérablement l'aspect
résultant du processus lui-même, etc., cette autolyse modifie considérablement l'aspect de la cellule. b) Mais les troubles les plus importants relèvent aussi d'un tout autre mécanisme. L'autolyse, processus digestif de la substance moléculaire, a pour effet de transformer les grosses molécules protoplasmiques en molécules plus petites, mais plus nombreuses. La pression osmotique dépendant du nombre des molécules, le contenu cellulaire va augmenter de tension osmotique. Ce fait va avoir des conséquences importantes. La cellule, à l'origine, en équilibre osmotique avec le milieu ambiant, ne le sera bientôt plus. Le contenu cellulaire sera plus concentré que le milieu ambiant. La cellule
cellulaire sera plus concentré que le milieu ambiant. La cellule absorbera de l'eau, gonnera et il en résultera les graves dommages histologiques que l'on connaît éclatements, émission de boules sarcodiques, etc. Ces phénomènes sont précoces. Ils dépendent de l'activité cellulaire elle-même et, en fin de compte, se ramènent à une action fermentaire. Or, nous possédons un moyen de réduire au minimum ces actions diastasiques et leurs conséquences fâcheuses: c'est l'abaissement de température. Au voisinage de 0°, les actions diastasiques autolytiques sont nulles, donc les conséquences qui en dérivent. Pour empêcher les cellules du centre de la pièce de subir les
les cellules du centre de la pièce de subir les graves altérations que l'on sait, il suffit d'abaisser la température du milieu. La théorie conseille donc, en même temps que de réduire l'épaisseur de la pièce, d'opérer à froid la fixation. Il nous est possible de donner un exemple qui montre l'importance du facteur température dans ces phénomènes, en particulier dans le gonflement cellulaire. Dans deux récipients contenant du liquide de Ringer (1) placés l'un à l'étuve à 37°, l'autre à la glacière à 4 ou 5°, immergeons les reins d'une Grenouille. ### CORRECTION ### Cette cloison, issue du mésoderme
d'une Grenouille. ### CORRECTION ### Cette cloison, issue du mésoderme vésiculaire, donne implantation à l'épithélium qui, à ce stade, est remarquable par sa grande hauteur, par son étroitesse et par la saillie que forme le pôle apical de chacun des éléments de l'endoderme vitellin. Notons encore qu'aucune différence fondamentale de structure ne différencie les éléments sécréteurs de la vésicule, chez les embryons de Lapin du dixième au vingt-deuxième jour. Et sur chaque les grains de secrétion sont assez rares. Laboratoire des travaux pratiques d'histologie de la Faculté de Médecine de Paris. LA « FIXATION FROIDE » SES AVANTAGES EN TECHNIQUE
Paris. LA « FIXATION FROIDE » SES AVANTAGES EN TECHNIQUE HISTOLOGIQUE Par A. POLICARD Dans ses leçons sur les phénomènes de la vie communs aux animaux et aux végétaux, Cl. Bernard a créé l'expression et étudié l'état de vie cessée. La vie manifestée dépend de certaines conditions essentielles. Si l'une d'elles manque, la vie est suspendue ou même arrêtée. Parmi ces conditions, une des plus fondamentales est la chaleur. Il suffit d'abaisser autour d'un être simple ou d'un tissu la température ambiante pour mettre cet être ou ce tissu en état de mort. Ces phénomènes, de connaissance élémentaire aujourd'hui, ont
état de mort. Ces phénomènes, de connaissance élémentaire aujourd'hui, ont fait l'objet depuis longtemps d'applications pratiques. Citons par exemple leur utilisation en bactériologie pour la conservation des viruses, en biologie générale pour la conservation des pièces destin Ces reins, détachés sans lésions, soigneusement asséchés à la feuille de soie, ont été préalablement pesés très exactement, au demimilligramme, à la grande balance de Nemetz. À des intervalles variables, ces reins sont retirés du liquide de Ringer, asséchés et pesés. L'augmentation de poids observée nous donnera une mesure de l'eau absorbée, et indirectement nous permettra d'apprécier la grandeur du gonflement et des
indirectement nous permettra d'apprécier la grandeur du gonflement et des lésions que celui-ci produit. Voici les résultats obtenus TABLEAU Composition du liquide de Ringer employé Chlorure de sodium. 6 gr. Chlorure de potassium. 0,1 Chlorure de calcium. 0,1 Bicarbonate de soude. 0,1 Eau 1000 À partir du point de vue cryoscopique, cette solution donne environ A = 0.5. (2) Technique exactement calquée sur celle d'Overton, Lœb, etc., dans leurs travaux sur les propriétés osmotiques du muscle. Rein de Grenouille dans du liquide de Ringer. À LA GLACIERE À L'ÉTUVE POIDS POIDS AUGMENTATION POIDS A LA FIXATION Initia. 0,086 0,036 –
POIDS AUGMENTATION POIDS A LA FIXATION Initia. 0,086 0,036 – Après immersion dans le liquide. 0,053 0.039 -28 Après treize minutes. 0,053 1 0,051 -41 Après six heures 0,086 –1 0,088 +2 Après huit heures trente 0,055 – 1 0,092 +37 Après sept heures trente 0,065 – 1 0,076 -11 Traduit en courbe, ce tableau nous donne le graphique suivant TT~ ~A~0' 1 ~/7~~ <~ ~~i?M2. a~cif <& ix~ 7~/Mët Une expérience analogue avec de la substance corticale de rein de Chien nous donnera des résultats semblables. Fragment de substance corticale de rein de Chien normal. Plongé dans HCl à
corticale de rein de Chien normal. Plongé dans HCl à r «/o. À LA GLACIERE (+ 6°) À L'ÉTUVE (+ 380) POIDS À LA GLACE (+ .) À (+) POIDS À LA FIXATION POIDS AUGMENTATION Initial 0,127 – 0,1't.3 – Après treize minutes 0,133 +1 0,196 +8 Après une heure. 0,131 +5 0,172 -)-19 Après treize minutes trente 0,134 -(-5 5 0,176 -j-20 Il résulte des considérations ci-dessus et des faits expérimentaux qui les appuient qu'il y a un grand avantage à opérer à froid l'opération de la fixation. Cette pratique a cependant un inconvénient que nous devons étudier théoriquement
pratique a cependant un inconvénient que nous devons étudier théoriquement et apprécier quantitativement. La diffusion du fixateur dans la pièce joue un rôle non négligeable dans la réalisation d'une bonne fixation. Le fixateur doit pénétrer vite. Or, la vitesse de diffusion, mesurée par le coefficient de diffusion, varie avec la température. Dans les conditions simples d'un corps diffusant dans un liquide, l'augmentation du coefficient de diffusion est de 2 par degré (d'après V. Henri, Chimie Physique, p. 163). Mais dans le cas de la fixation histologique, les conditions sont beaucoup plus complexes il s'agit de la diffusion d'un corps dans
plus complexes il s'agit de la diffusion d'un corps dans un complexe collagène de très grande viscosité qui se modifie au contact du corps diffusant (condensation). Mais la pratique nous a montré que la diminution de la pénétration d'un fixateur du fait de l'abaissement de la température était presque négative; en tout cas elle représente un inconvénient faible à côté de l'avantage que cet abaissement de température offre d'autre part. BASES PRATIQUES DE LA MÉTHODE La fixation opérée comparativement à la glacière, à la température ambiante et à l'étuve à 31°-38°, toutes autres conditions étant égales d'ailleurs, nous a montré
31°-38°, toutes autres conditions étant égales d'ailleurs, nous a montré que les pièces fixées à froid étaient toujours le mieux fixées. En particulier, le centre des pièces était toujours correctement fixé dans ce cas au contraire, dans les pièces laisses à la température du laboratoire (16° à 19°) et surtout à l'étuve, la fixation au centre de pièces un peu volumineuses était toujours très mauvaise (avec le liquide de Fiesching, le bichromate formol, le bichromate acétique). Un des avantages pratiques de cette méthode est d'obtenir des colorations excellentes de pièces un peu volumineuses. Il y a lieu de faire ici
un peu volumineuses. Il y a lieu de faire ici une remarque. Quand on compare la fixation de pièces fixées, toutes conditions semblables d'autre part, à l'étuve (37°-38°) et à la température ordinaire (16°-18°), on ne constate entre les deux pièces que peu de différences, malgré la diversité des températures. Au contraire, entre la pièce fixée à la température du laboratoire et celle laissée à la glacière à -16°, il y a des différences très nettes, et cependant, dans ce cas, il y a en valeur absolue une moindre différence de température que dans le premier cas (10° à 13°
de température que dans le premier cas (10° à 13° dans le second cas, 22° à 25° dans le premier cas). En réalité, ce pseudo-paradoxe est très facile à expliquer. La courbe qui exprime graphiquement l'intensité des phénomènes vitaux en fonction de la température n'est pas une droite. La variation n'est pas régulièrement proportionnelle. À mesure que s'élève la température, on observe la marche suivante de la courbe elle s'élève d'abord très vite, puis s'incline peu à peu et met un certain temps à atteindre un optimum; elle décroit ensuite assez lentement. Une différence donnée, de 3° par exemple, aura
assez lentement. Une différence donnée, de 3° par exemple, aura un effet beaucoup plus intense si elle a lieu entre 0° et 10° par exemple, qu'entre 25° et 35°. Pour que le refroidissement ait réellement son effet, il faut que la température soit inférieure à 8° ou 10". La mise en œuvre de cette méthode nécessite une glacière ordinaire, d'un modèle tel que son enceinte soit à une température inférieure à + 8'. Les bonnes glacières, même d'un petit modèle, bien alimentées, donnent facilement + 5° ou + 6", ce qui est pratiquement suffisant. On peut atteindre 0°, mais il
qui est pratiquement suffisant. On peut atteindre 0°, mais il ne faut jamais oublier que la diminution de la température de conservation, cela est bien évident. La méthode que nous préconisons est en contradiction formelle avec une coutume suivie fréquemment dans beaucoup de laboratoires et engendrée en méthode générale par M. Rubenthaler, la fixation à la température du corps de l'animal, par exemple pour les Mammifères, à 37'-38°. Nous pensons, au contraire, qu'il ne peut exister de méthode plus détestable. Au point de vue théorique, c'est à cette température que les actions automatiques seront au maximum, que la contractilité protoplasmique
les actions automatiques seront au maximum, que la contractilité protoplasmique sera la plus grande. On ne conçoit donc pas bien la conception de M. Rubenthaler qui, cherchant, justement, à restreindre le facteur contractilité, se place précisément dans les meilleures conditions pour que cetui-ci se manifeste. Ait point de cette pratique, la question est facile à juger il suffit de fixer, toutes conditions étant égales d'ailleurs, un fragment d'organe à l'étuve et à la glacière on sera convaincu. C'est la une expérience facile à faire. Nous demandons aux histologistes de la réaliser. Nous sommes persuadés qu'ils seront vite convaincus de l'avantage
réaliser. Nous sommes persuadés qu'ils seront vite convaincus de l'avantage de la fixation formale. En, toc. Ctt. L'ORIGINE DE L'APPAREIL PULMONAIRE CHEZ LE TARSIUS SPECTRUM Par A. WEBER L'HISTOIRE ÉMBRYONÁIRE ANATOMIQUE Le premier point en discussion dans la question de l'origine de l'appareil pulmonaire chez les Vertébrés est de savoir si les poumons naissent par une ébauche paire et bilatérale, ou impaire et médiane. Depuis que je poursuis l'étude de ce sujet, j'ai toujours été persuadé que l'appareil pulmonaire tirait son origine de formations paires et bilatérales, mais ces bourgeons primitifs qui correspondent aux bronches souches occupent, suivant les espèces,
primitifs qui correspondent aux bronches souches occupent, suivant les espèces, une position très variable sur les faces latérales de l'intestin antérieur. Chez le Canard, ces ébauches sont directement dans le prolongement des poches branchiales entodermiques. Chez le Poulet, dont le développement est plus accéléré que celui du Canard, les bourgeons pulmonaires sont situés plus près de la ligne médiane ventrale. Chez les Mammifères enfin, où j'ai étudié ce point particulier (Phalangioptère ou Porc), les ébauches sont presque confondues avec la face ventrale du tube digestif. Nous avons attribué ce fait, mon ami Duvigneaux et moi, à un phénomène d'accélération de
mon ami Duvigneaux et moi, à un phénomène d'accélération de l'embryogenèse qui rapproche l'ébauche pulmonaire de son emplacement définitif, davantage que les premières phases du développement se succèdent plus rapidement. Tout en étant partisan convaincu de l'origine paire et bilatérale de l'appareil respiratoire des Vertébrés supérieurs, il ne me parait pas impossible que chez quelques espèces ou même quelques individus à développement accéléré, surtout chez les Mammifères (l'Homme par exemple), on puisse trouver au poumon une origine impaire et médiane. Un autre point de vue à considérer également est le suivant : le poumon dans des formes de développement primitives
suivant : le poumon dans des formes de développement primitives (Canard) se constitue sur le prolongement des poches branchiales et apparaît comme étant de nature branchiale. Chez les Mammifères à développement plus rapide, l'ébauche pulmonaire semble avoir perdu tout rapport topographique avec les poches entodermiques. Mais il paraît logique de supposer que s'il y a chez ces animaux des intermédiaires entre les poches branchiales et l'ébauche pulmonaire, en raison du déplacement de cette dernière, les formations intermédiaires doivent se trouver non pas dans le prolongement direct des poches branchiales, mais obliquement sur les faces latérales du tube digestif entre la
obliquement sur les faces latérales du tube digestif entre la dernière de ces formations et les bourgeons pulmonaires primitifs. Grâce à l'extrême obligeance de M. le professeur A. A. W. Hubrecht, j'ai pu étudier l'origine de l'appareil pulmonaire sur un matériel rare et précieux, une collection très complète d'embryons de 7'a?'MMs recueillés. J'ai trouvé la première trace du poumon chez un embryon de 4""° 6 de longueur totale et de 23 paires de somites. Les ébauches pulmonaires sont paires et bilatérales, assez rapprochées de la ligne médiane, mais néanmoins distinctes l'une de l'autre. Ces ébauches sont des épaississements irréguliers des
l'une de l'autre. Ces ébauches sont des épaississements irréguliers des parois latérales du tube digestif, à peu de distance en avant de l'ébauche hépatique. L'ébauche gauche est légèrement et irrégulièrement bosselée; mais l'ébauche droite est divisée en un certain nombre de petits bourrelets, régulièrement disposés les uns à côté des autres, étendus obliquement dans une direction craniocaudale. Dans celui de ces bourrelets qui est le plus rapproché de la ligne médiane, il y a une petite éagination, premier rudiment de la cavité de la bronche souche droite. À peu de distance de ces deux ébauches pulmonaires gauche et droite, du
distance de ces deux ébauches pulmonaires gauche et droite, du côté cranial, les faces latérales du tube digestif présentent de chaque côté un autre épaississement plus ou moins carré et circulaire à droite, allongé en forme de bourrelet à gauche. Ces épaississements sont immédiatement situés en arrière de la quatrième poche branchiale entodermique. Les premières ébauches pulmonaires du 7'embryon sont donc paires et bilatérales. Du côté droit surtout, le premier bourgeon pulmonaire paraît constitué par un certain nombre de formations plus ou moins distinctes. Ces deux ébauches sont en outre séparées de la dernière poche branchiale entodermique par une région