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de leurs puces et incinérés. On met aussitôt dans les cuves d'autres rats blancs inoculés de la même manière et ainsi de suite tous les deux jours. Dès la fin de la deuxième semaine, toutes les puces étant dûment infectées, les récoltes commencent. Toutes les 48 heures, les rats agonisants sont sacrifiés et soigneusement épilés. Les poils, englués de déjections de puces sont mis au dessiccateur, sous le vide, en présence de chlorure de calcium anhydre. Le lendemain, les déjections desséchées sont facilement séparées des poils par tamisage sur des soies à bluter de calibre décroissant ; après la récolte,
soies à bluter de calibre décroissant ; après la récolte, la poudre fine obtenue est conservée dans des ampoules scellées sous le vide d'une pompe rotative à l'huile. Tous les quinze jours, les puces infectées sont transférées dans une autre cuve, afin d'éviter l'éclosion de puces neuves, nées de leurs pontes. Pendant toute la durée des récoltes d'ailleurs, on ne mettra dans la cuve que des rats inoculés avec le virus de passage-cobaye, de façon à obtenir un renforcement continuel de l'infection des puces. Trente à quarante récoltes, représentant au total une dizaine de grammes de déjections, sont ainsi faites
total une dizaine de grammes de déjections, sont ainsi faites pour chaque cuve ; après quoi, le nombre des puces allant décroissant, la cuve est supprimée. (*) Soies à bluter Renaud, Tripette et Cie, Paris, calibres XXX double extra nos 8, 9, 10 (0 mm. 40 à 0 mm. 60). (*) Groupe moteur-pompe simple rotative à palettes. Compagnie générale de Radiologie (Gaiffe-Gallot et Pilon) Paris. Deux cuves seulement fonctionnent en général simultanément ; cependant, en cas de besoin, 40 grammes de virus sec pourraient être produits chaque mois sans difficulté. A la fin de l'année, toutes les ampoules de récoltes
A la fin de l'année, toutes les ampoules de récoltes des différentes cuves sont ouvertes et leur contenu mélangé. Deux à trois lots de 30 à 40 grammes sont constitués sur lesquels sont faites les opérations de titrage dont il a été parlé plus haut. Ces lots sont répartis dans des ampoules contenant chacune environ 10 grammes de virus sec ; ces ampoules scellées sous un vide poussé au 1/100ème de millimètre, sont conservées, pour éviter tout accident par suite de fêlure, dans des dessiccateurs sous le vide en présence de chlorure de calcium anhydre. Ces dessiccateurs sont mis à
de chlorure de calcium anhydre. Ces dessiccateurs sont mis à la glacière + 4°, considérée non comme chambre froide mais comme armoire isotherme et obscure. Actuellement, 9 millions de doses environ sont ainsi conservées en stock. Au fur et à mesure des besoins de la vaccination, le virus est réparti en ampoules de 10 cc, en verre neutre, préalablement séchées, à raison de 1 mg par ampoule, pesé sur une balance d'une précision de 1/20ème de mg. Les pesées sont faites en série et les ampoules scellées immédiatement sous le vide de la pompe à huile. Branché en dérivation sur
vide de la pompe à huile. Branché en dérivation sur la canalisation de vide, un tube électrode à électrodes plateaux, alimenté par transformateur, indique la valeur du vide au moment du scellement de chaque ampoule. Les ampoules scellées sont conservées dans un placard obscur à la température du laboratoire ; au moment de l'envoi, elles sont passées par séries de 10 dans un portoir métallique relié à une bobine d'induction : lors du passage du courant, les ampoules intactes s'illuminent en rose violacé, les ampoules fêlées ne s'illuminent pas et sont rejetées. Toutes ces manipulations sont mises en œuvre, non
sont rejetées. Toutes ces manipulations sont mises en œuvre, non pour dessécher le virus (des mesures précises nous ont montré que la perte d'eau ainsi obtenue était pratiquement nulle) mais pour le maintenir, lors du stockage et de l'expédition, à l'abri des conditions hygrométriques. Il est nécessaire de bien spécifier qu'il s'agit là non pas d'un virus desséché, mais d'un virus qui se présente spontanément sec et que l'on se contente de maintenir à sec. TECHNIQUE DE PRÉPARATION DE L'EXCIPIENT Le virus est transformé en vaccin par dilution dans un excipient bilié. Au cours de l'expérimentation, nous avons été amenés
excipient bilié. Au cours de l'expérimentation, nous avons été amenés à abandonner l'eau physiologique, milieu instable et variable, pour la remplacer par une solution isotonique, tamponnée, c'est-à-dire étudiée pour demeurer de pH constant, type solution de Clarke. La solution suivante a été choisie, permettant des préparations toujours identiques à partir de produits chimiquement purs : Phosphate disodique cristallisé (NaHPO4 . 12H2O) 17 grs 91 ou Phosphate disodique anhydre (NaHPO4) 7 grs 16 Acide chlorhydrique N/10 8 cc Eau distillée 1000 cc Le phosphate disodique est dissous à chaud dans 500 cc d'eau distillée, passés ensuite sur papier filtre pour éliminer
cc d'eau distillée, passés ensuite sur papier filtre pour éliminer les impuretés. Les 8 cc d'acide chlorhydrique sont, d'autre part, étendus à 500 cc avec de l'eau distillée. Les deux solutions sont ensuite mélangées : le pH a une valeur constante qui est de 7,5. Cette solution, très stable, peut être conservée indéfiniment. La bile de bœuf ajoutée à l'excipient est préparée de la façon suivante : aussitôt après l'abattage, une ligature est posée sur le col de la vésicule biliaire et le canal cystique tranché d'un coup de couteau. Les vésicules prélevées sont apportées au laboratoire et leur contenu
Les vésicules prélevées sont apportées au laboratoire et leur contenu (150 cc par vésicule environ) vidé dans un pot à lait émaillé. Celui-ci est mis à l'autoclave 1 heure à 120° pour précipitation. Filtration sur papier Laurent humide. Répartition en ampoules de 20 cc (mesurés à la pipette). Stérilisation à l'autoclave 45 minutes à 115° seulement pour éviter une nouvelle précipitation, la bile doit rester parfaitement limpide dans les ampoules. Ces ampoules sont conservées à l'obscurité, il peut arriver qu'à la longue la bile se décolore et précipite à nouveau, elle doit alors être rejetée. L'adjonction de bile à la
elle doit alors être rejetée. L'adjonction de bile à la solution tampon, au taux de 1 / 150ème est faite de la façon suivante : à trois litres de solution tampon, on ajoute le contenu d'une ampoule de bile (20 cc). Le mélange est agité et réparti en ampoules ou en flacons-canettes (selon le conditionnement adopté) préalablement stérilisés au four Pasteur. Ampoules ou flacons sont fermés puis portés à l'autoclave à 110° pendant 45 minutes. L'excipient bilié, ainsi stérilisé, peut être conservé fort longtemps, il est cependant préférable de ne le préparer qu'au fur et à mesure des besoins. CONDITIONNEMENT
le préparer qu'au fur et à mesure des besoins. CONDITIONNEMENT DU VACCIN Rappelons que la dose de virus utilisée pour la vaccination est de 1/100ème de milligramme par personne, soit environ le 1 / 5ème d'une déjection, d'un des grains de cette poudre fine que représente le virus sec. Il ne saurait être question de peser et de répartir sans chances d'erreur grossière de telles quantités. Aussi, considérant que ce mode de vaccination était destiné en général à une application massive, avons-nous adopté, comme il a été dit plus haut, le conditionnement du virus par ampoules de 1 mg, représentant
le conditionnement du virus par ampoules de 1 mg, représentant 100 doses. Une telle quantité ne donne lieu, à la pesée, qu'à des causes d'erreur négligeables ; d'autre part, comme elle représente 50 à 60 grains, même dans le cas (rendu très improbable par les méthodes de récolte) où quelques-uns d'entre eux ne seraient pas virulents, la marge de sécurité reste largement suffisante pour l'ensemble des 100 doses. L'expérimentation a montré, en effet, que cette marge de sécurité était grande, les résultats étant sensiblement les mêmes du 1/300ème au 1/10ème de milligramme. D'autre part, nous n'avons pas voulu dépasser ce
de milligramme. D'autre part, nous n'avons pas voulu dépasser ce conditionnement par 100 doses, même pour les vaccinations massives. L'expérimentation nous a montré, en effet, que le vaccin, une fois préparé (c'est-à-dire le virus dissous dans son excipient), perdait ses propriétés en quelques heures, ce qui nous a amené à fixer comme limite d'utilisation du vaccin, une demi-heure. Cent doses peuvent toujours être inoculées, même par un expérimentateur non entraîné, en moins d'une demi-heure. Ainsi, le conditionnement par un milligramme = 100 doses, évite-il toute cause de perte. Avec un tel conditionnement du virus, il y a intérêt à présenter
tel conditionnement du virus, il y a intérêt à présenter l'excipient liquide également par 100 doses, c'est-à-dire par 100 cc. Pour le Maroc, nous avons adopté la présentation en petits flacons-canettes. Ces flacons, d'une contenance de 125 cc, sont stérilisés au four Pasteur, remplis en série avec un appareil jaugeur semi-automatique, de 100 cc de solution tampon biliée non stérile, puis fermés et stérilisés à l'autoclave, comme il a été dit plus haut. Pour l'expédition, virus et excipient sont groupés en caissettes d'un poids net de 5 kgs, contenant 12 flacons-canettes et 12 ampoules, soit 1.200 doses. Ces caissettes peuvent
flacons-canettes et 12 ampoules, soit 1.200 doses. Ces caissettes peuvent être envoyées par la poste aux infirmeries de bled, sur demande télégraphique. D'autre part, la parfaite conservation du virus peut permettre à ces formations de n'utiliser le vaccin qu'au fur et à mesure des besoins et d'en garder en réserve pour l'attaque immédiate des nouveaux foyers détectés. 70 caissettes de ce modèle, représentant 84.000 doses de vaccin, sont à l'heure actuelle en service, suffisant à assurer le roulement normal de la vaccination au Maroc. Un mode d'emploi, portant au verso un état à remplir par le médecin-vaccinateur et à renvoyer
un état à remplir par le médecin-vaccinateur et à renvoyer avec le matériel vide, est joint à chaque caissette. Ce conditionnement a l'avantage de permettre la décentralisation de la vaccination. Cependant, pour certaines vaccinations massives assurées par équipes spécialisées, un conditionnement différent a pu être adopté par grandes caisses de 36 flacons-canettes de 500 cc, remplis à 450 cc, représentant 16.200 doses, ou par caisses de 24 flacons de 1.000 cc, remplis à 900 cc, représentant 21.600 doses. Les ampoules accompagnant ces flacons restent, comme nous l'avons dit plus haut, de 1 mg, soit 100 doses. Au moment de l'emploi,
de 1 mg, soit 100 doses. Au moment de l'emploi, le préposé à la préparation doit donc être muni d'une éprouvette stérile de 100 cc, avec laquelle il mesure la quantité nécessaire à chaque préparation, faite au fur et à mesure du débit de l'équipe de vaccination, dans un récipient stérile quelconque, verre à pied par exemple. Chaque fois que la vaccination est confiée à une équipe pouvant atteindre un rythme de plusieurs milliers de vaccinations par jour, c'est ce conditionnement qui est adopté, les caissettes de flacons de 100 doses étant réservées aux vaccinations fractionnées faites par les médecins
doses étant réservées aux vaccinations fractionnées faites par les médecins du bled. La pénurie actuelle de flaconnage a amené à adopter ce conditionnement et à remettre la vaccination aux mains d'équipes spécialisées, en Algérie par exemple, où le manque de flacons de 100 cc interdisait la décentralisation aux mains des médecins du bled. Enfin, nous avons réalisé un conditionnement par boîtes de 20 doses, destiné aux vaccinations tout à fait fractionnées, faites par exemple par les médecins en clientèle européenne. Renonçant, pour les raisons que nous avons énumérées plus haut, à mesurer une quantité de virus inférieure à 1 mg,
à mesurer une quantité de virus inférieure à 1 mg, nous avons adopté le système de la double dilution. La boîte contient 3 ampoules : 1° l'ampoule ordinaire de 10 cc contenant 1 mg de virus sec ; 2° une ampoule en verre blanc de 10 cc contenant 10 cc d'excipient bilié ; 3° une ampoule en verre jaune de 20 cc contenant 18 cc du même excipient. Ce système qui fait perdre les 4/5ème du vaccin préparé, a cependant l'avantage d'assurer un dosage précis de la quantité de virus contenue dans chacune des 20 doses inoculées. La vaccination est
contenue dans chacune des 20 doses inoculées. La vaccination est faite par voie intramusculaire (deltoïde). La dose inoculée est de 1 cc pour les adultes et de 0.5 cc pour les enfants de moins de 10 ans. L'expérience des vaccinations massives faites au Maroc, a permis de fixer le personnel et le matériel nécessaire et les techniques utiles aux équipes spécialisées, permettant de faire plusieurs milliers de vaccinations par jour. C'est sur ce schéma que sont organisées les équipes mobiles du Maroc, ainsi que les 4 équipes mobiles de la Direction de la Santé publique d'Algérie. Personnel : 1 médecin,
Direction de la Santé publique d'Algérie. Personnel : 1 médecin, chef d'équipe. 4 infirmiers, dont 1 piqueur, 2 injecteurs, 1 aide 1 infirmier spécialiste ou 1 infirmière pour la préparation du vaccin. Le chauffeur de la voiture. Sont levés sur place, fournis en général par l'administration locale, les comptables, chargés de dénombrer les vaccinés : hommes, femmes, enfants et, le cas échéant, de tamponner les cartes d'identité, d'alimentation ou autres, et le préposé à l'iodage des bras. Matériel : Plateaux blancs, tôle émaillée (20 X 30 environ) 10 Matelas stérilisables pour le fond des plateaux 24 Bouilloires poissonnières 2 Eprouvettes
pour le fond des plateaux 24 Bouilloires poissonnières 2 Eprouvettes de 100 cc 10 Verres à pied de 200 cc 12 Seringues de 5 cc 50 Embouts 50 Aiguilles 30 8/10èmes, * biseaux longs ...................... 150 Pierre à aiguiser Gaze stérile Coton hydrophile Teinture d'iode Alcool Ecouvillons Pinces de Péan Pince universelle Réchaud à pétrole Bidons de pétrole Stérilisateur à sec (Four Pasteur ou Poupinel) Combinaisons Grande tente 1 Corde 20 mm, mètres : 40 Pieux ferres 11 Masse 1 Tables pliantes 3 Chaises pliantes .............. 3 Avec ce personnel et ce matériel transportés dans une camionnette, les opérations peuvent
et ce matériel transportés dans une camionnette, les opérations peuvent être menées de la façon suivante. L'équipe parvenue au lieu de rassemblement établit 2 couloirs de cordages selon le plan ci-joint : 6 mètres de longueur, un à mi-hauteur du piquet, l'autre en haut ; 0 m 60 au maximum de largeur ; à l'extrémité, une bifurcation à branches de 1 mètre de longueur. A l'entrée des couloirs se tient le préposé à l'iodage des bras (1), muni d'un récipient rempli de teinture d'iode et d'un coton monté sur écouvillon. Les gens qui s'engagent dans le couloir de droite relèvent
Les gens qui s'engagent dans le couloir de droite relèvent leur manche gauche et reçoivent une application de teinture d'iode sur la région deltoïdienne gauche (soit à la partie postérieure du tiers supérieur du bras), ceux qui s'engagent dans le couloir de gauche présentent leur bras droit. L'étroitesse des couloirs oblige les gens à se présenter en file indienne devant l'infirmier piqueur (2) qui plante une aiguille alternativement dans un bras gauche (couloir de droite) et dans un bras droit (couloir de gauche). Le sujet, avançant d'un pas avec son aiguille plantée dans le bras, se trouve devant l'infirmier injecteur
aiguille plantée dans le bras, se trouve devant l'infirmier injecteur (3 et 4) qui abouche sa seringue à l'aiguille, injecte la dose et retire l'aiguille. Les files de vaccinés s'écoulent ensuite devant les comptables (5 et 6) et gagnent la sortie. Derrière les trois infirmiers se trouve une table chargée de plateaux. Ces plateaux, au fond garni d'un petit matelas stérilisable au Poupinel, matelas qui permet d'éviter la casse des seringues et l'épointage des aiguilles, sont ainsi répartis : derrière l'infirmier piqueur (2), un plateau d'aiguilles Plan schématique d'un chantier de vaccination Type de pieu pour couloir stériles ; derrière
de vaccination Type de pieu pour couloir stériles ; derrière chaque infirmier injecteur (3 et 4), un plateau de seringues pleines, un plateau pour les seringues vides, un plateau pour les aiguilles souillées. A une autre table plus petite est assis l'opérateur chargé de la préparation du vaccin (7). Devant lui, s'alignent ampoules, flacons-canettes, verres, éprouvettes et deux plateaux à matelas stérile. Aussitôt terminée une préparation de 1. 00 doses de vaccin, selon la technique indiquée plus haut, cet opérateur en remplit 20 seringues et les dépose dans les plateaux qui se trouvent devant lui. Entre les deux tables est
qui se trouvent devant lui. Entre les deux tables est installé le réchaud avec ses bouilloires-poissonnières dont le chauffeur (8) surveille l'ébullition. Un infirmier (9) prend sur la table des vaccinateurs les seringues vides et les aiguilles souillées et les met dans chacune des bouilloires. Il dépose constamment dans les plateaux du préparateur de vaccin des seringues bouillies, dans ceux des injecteurs les seringues remplies par le préparateur du vaccin, dans celui du piqueur des aiguilles bouillies. Par mauvais temps, une grande tente peut abriter tout le chantier de vaccination (ligne pointillée du plan). Une telle équipe, bien entraînée, peut
(ligne pointillée du plan). Une telle équipe, bien entraînée, peut atteindre sans fatigue le rythme de 40 vaccinations à la minute. Ce rythme dépend, pour la plus grande part, de la régularité de l'écoulement des vaccinés dans les couloirs, régularité qui ne peut être assurée que par une police bien faite. Sur le plan, des points noirs ont été mis aux emplacements où une surveillance est nécessaire, surveillance qui ne peut être assurée que par l'administration locale, guidée par le médecin chef d'équipe auquel incombe la surveillance constante et l'organisation de la vaccination. APPLICATION DE LA VACCINATION La vaccination par
de la vaccination. APPLICATION DE LA VACCINATION La vaccination par virus-vaccin vivant sec a commencé d'être appliquée systématiquement au Maroc à partir du 20 novembre 1938, remplaçant peu à peu la première méthode qui devait être définitivement abandonnée à la fin de l'année. Du 20 novembre au 31 décembre 1938, 29.908 vaccinations ont été pratiquées. En 1939, 84.700 doses étaient délivrées à la Direction du Service de Santé des Troupes du Maroc, et 211.200 à la Direction de la Santé et de l'Hygiène publiques du Maroc. En 1940, 80.250 doses à la Direction du Service de Santé des Troupes du
à la Direction du Service de Santé des Troupes du Maroc, 60.400 à la Direction de la Santé et de l'Hygiène publiques, 2.200 doses étaient expédiées au Ministère de l'Afrique italienne, pour des essais d'application de la vaccination en Ethiopie et 10.500 doses à la Direction du Service de Santé des Troupes du Levant à Beyrouth, pour la vaccination du contingent de Syrie. Pour ces expéditions hors du Maroc, il devenait impossible et d'ailleurs inutile d'expédier l'excipient du vaccin. Nous envoyions donc à chacun des destinataires les seules ampoules de virus sec avec les instructions pour la préparation de l'excipient.
virus sec avec les instructions pour la préparation de l'excipient. Chacun organisait sur place la fabrication et la répartition de l'excipient. Dans certains cas, pour la mise en route, nous envoyions la bile stérile et des ampoules de solutions concentrées pour la préparation rapide de l'excipient. En 1941, jusqu'au 15 novembre, nous avons délivré à la Direction de la Santé et de l'Hygiène publiques du Maroc : 297.000 doses ; à la Direction du Service de Santé des Troupes du Maroc : 29.300 doses ; à la Direction du Service de Santé du XIXème corps d'armée (Algérie) : 39.700 doses
de Santé du XIXème corps d'armée (Algérie) : 39.700 doses ; à la Direction de la Santé publique d'Algérie : 37.800 doses ; au Service de Santé de la Zone espagnole du Maroc : 11.000 doses ; à la Direction du Service de Santé à Madrid : 1.200 doses ; à la Préfecture des Bouches du Rhône (Marseille) : 2.400 doses ; à la Direction du chemin de fer transsaharien : 500 doses. Enfin 67 boîtes de 20 doses, représentant 1.340 doses étaient envoyées à divers médecins et pharmaciens pour la vaccination en clientèle européenne. La Direction du Service de
la vaccination en clientèle européenne. La Direction du Service de Santé du XIXème corps d'armée et le Laboratoire central de la Zone espagnole accomplissaient tous deux leurs vaccinations en fabriquant et répartissant sur place, en flacons de 100 doses, l'excipient biliié (Algérie : Pharmacien-colonel Bobier, médecin-commandant Jude ; Maroc espagnol : Docteur Trigueros). Au total donc, depuis le début de l'application de cette méthode par virus-vaccin vivant sec, 901.094 doses de vaccin ont été délivrées, ce qui porte le total général des vaccinations par virus murin vivant bilié à 2.143.919. INNOCUITÉ. EFFICACITÉ L'innocuité de la nouvelle méthode par virus vivant
INNOCUITÉ. EFFICACITÉ L'innocuité de la nouvelle méthode par virus vivant sec s'est révélée, à l'application, égale à ce qu'avait montré l'expérimentation. Les vaccinations de bled ne pouvaient apporter sur ce sujet que des renseignements imprécis ; par contre, les vaccinations de collectivités surveillées, spécialement en milieu militaire, devaient permettre de juger sur des milliers de vaccinés rigoureusement observés, du taux exact des « réactions » provoquées par le vaccin. Sur plus de 50.000 vaccinés indigènes nord-africains, soigneusement observés, le taux des « réactions vaccinales » n'a jamais dépassé 1,2 pour 1.000. Le type de ces « réactions » observées à
1.000. Le type de ces « réactions » observées à la suite de l'inoculation de virus-vaccin vivant sec, est en général assez défini : réaction fébrile de 6 à 10 jours de durée avec céphalée et courbature : très rarement (1 fois sur 10) éruption fugace de 24 à 47 heures de durée au quatrième jour de la réaction fébrile. La « réaction vaccinale » se produit du douzième au vingt-septième jour après la vaccination ; avant ou après ces dates, il ne peut s'agir d'une réaction due au vaccin. Il est souvent tentant, en effet, d'imputer à une vaccination
Il est souvent tentant, en effet, d'imputer à une vaccination par vaccin vivant, susceptible donc de donner des réactions, tous les « accidents » qui pourraient se produire pendant la période consécutive d'observation. Sans parler des malaises ou accidents de toutes sortes, se produisant dans les vingt-cinq jours après l'inoculation, qu'on verra souvent porter au passif du vaccin vivant, il arrivera presque toujours que, dans une vaccination faite en plein milieu épidémique, d'authentiques typhus se produisant chez des vaccinés seront étiquettés « réactions vaccinales » : ainsi ont pu être observées des « réactions » extrêmement graves. L'incubation moyenne du
observées des « réactions » extrêmement graves. L'incubation moyenne du typhus étant en effet d'une dizaine de jours, et, d'autre part, le temps dans lequel s'établit l'immunité chez les vaccinés étant lui aussi de 10 jours, on conçoit qu'un vacciné contractant le typhus dans les 10 jours qui suivent la vaccination, commencera sa maladie du dixième au vingtième jour, moment où précisément peuvent se produire les réactions vaccinales. Bien souvent, surtout chez l'indigène nord-africain, le diagnostic différentiel sera fort délicat et seule l'inoculation aux animaux de laboratoire pourra trancher la question. La réceptivité de l'européen aux viruses typhiques s'étant toujours
question. La réceptivité de l'européen aux viruses typhiques s'étant toujours expérimentalement montrée plus grande que celle de l'indigène nord-africain, nous avons voulu attendre pour appliquer la vaccination ailleurs qu'en Afrique du Nord, ou aux européens vivant en Afrique du Nord, que le nombre des essais, poursuivis sur volontaires, fût suffisant. Aussi recommandons-nous, jusqu'à il y a quelques mois, de ne vacciner strictement que les volontaires. A l'heure actuelle, le chiffre des vaccinations européennes ayant dépassé le millier, sans qu'une seule réaction ait été signalée, la vaccination a pu être généralisée et son emploi systématique envisagé en Europe. L'efficacité de la