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boulevard Haussmann. Paris BULLETIN MATHEMATIQUE Aucune idée générale, aucun courant bien déterminé n'agissent sur la Bourse; chacun achète et vend selon les exigences de sa position en vue de la liquidation dont quelques jours à peine nous séparent. La fermeté est complète, mais le calme aussi; il n'y a un peu d'animation que sur quelques valeurs dont la spéculation s'occupe activement, telles que le Rio et l'Extérieure. On ne sait encore à quoi s'en tenir sur ce que vaudra l'argent au moment des règlements de comptes et c'est ce qui contribue pour beaucoup à atténuer les fluctuations de la cote.
contribue pour beaucoup à atténuer les fluctuations de la cote. En dernier lieu, le 3 0/0 se tient à 101 40 à terme et à 101 27 au comptant. L'Amortissable cote 100 15 et 100 fr. et le 3 1/2 0/0 101.10 et 102.85 sur leurs deux marchés respectifs. Les Sociétés de crédit stationnent aux environs des cours précédents: La Banque de France s'inscrit à 1.220, le Crédit foncier reste fermement tenu à 730. La Banque de Paris est recherchée à 1.162, le Crédit lyonnais à 1.114. Parmi les fonds étrangers, l'Italien est calme à 94 20. Quant à l'Extérieure
étrangers, l'Italien est calme à 94 20. Quant à l'Extérieure espagnole, malgré la rapidité de son avance, elle s'élève sans aucun fléchissement dans les cours à 73.72. Le Brésil 4 % 66 fr. Les valeurs ottomanes oscillent aux environs de leurs cours précédemment cotées, mais avec une légère nuance d'amélioration. Le Turc C est à 26 80 et le Turc D à 23.05. Les Chemins français voient se poursuivre leur raffermissement. Le Suez est en légère augmentation sur hier à 3.490 ainsi d'ailleurs que le Rio à 1.434. INFORMATIONS FINANCIÈRES Les actionnaires du Crédit Foncier sont convoqués en assemblée générale,
Les actionnaires du Crédit Foncier sont convoqués en assemblée générale, pour le 11 avril prochain. C'est à cette date probablement que M. Labeyrie quittera ses fonctions de gouverneur pour aller siéger comme président à la Cour des Comptes, poste auquel il a été appelé par un décret signé hier matin, en remplacement de M. Boulanger démissionnaire. Son successeur est M. Morel, sous-gouverneur de la Banque de France. M. Labeyrie a fait toute sa carrière dans l'administration des finances, où il a été successivement percepteur, trésorier général et directeur de la Caisse des dépôts et consignations avant d'être nommé au Crédit
Caisse des dépôts et consignations avant d'être nommé au Crédit Foncier. M. Morel, le nouveau gouverneur du Crédit Foncier, a été successivement député et sénateur de la Manche. Il s'est démis, il y a deux ans, de son mandat sénatorial pour devenir sous-gouverneur de la Banque de France. Dans sa réunion d'hier, l'assemblée générale des actionnaires de la Compagnie des Omnibus a désigné MM. Boulanger, sénateur, ancien président de la Cour des Comptes, et Albin Chapon, député de Paris, comme nouveaux administrateurs de la Compagnie. Dans sa première séance, le Conseil d'administration élira M. Boulanger comme président du Conseil d'administration.
Conseil d'administration élira M. Boulanger comme président du Conseil d'administration.
ARCHIVES DE L'INSTITUT PASTEUR DU MAROC TOME II FASCICULE 1 1938 IMPRIMERIES REUNIES Rue Georges Mercié CASABLANCA TRAVAUX DE RECHERCHES LE SYSTÈME LIPOPROTÉIDIQUE DU SÉRUM SANGUIN par B. DELAGE INTRODUCTION La stabilité et la mobilité sont, malgré leur apparence contradictoire, deux propriétés fondamentales de la matière vivante. La plupart des cellules et des tissus conservent pendant des intervalles de temps notables une forme, une structure et une composition assez constantes. Le protoplasme qui les constitue est cependant le siège d'une incessante agitation. Mais, entre les processus antagonistes de synthèse et de dégradation, s'établit un équilibre statistique qui n'est d'ailleurs qu'approximatif.
de dégradation, s'établit un équilibre statistique qui n'est d'ailleurs qu'approximatif. La résultante de toutes ces actions imprime à la matière vivante une évolution insensible, variable et irréversible, le vieillissement. La lenteur des transformations, leur enchaînement, le passage à de nouveaux états d'équilibre par un nombre indéfini de paliers thermodynamiques sont conditionnés par l'existence dans les tissus de composés carbonés formés d'un très grand nombre d'atomes. Les aptitudes réactionnelles tout à fait particulières de ces grosses molécules sont encore accentuées par leur tendance à s'unir avec d'autres composés organiques ou minéraux à l'état de complexes plus ou moins stables, de masse
à l'état de complexes plus ou moins stables, de masse souvent considérable. Ceux dont les constituants sont libérés par hydrolyse sont les plus connus et les mieux étudiés. D'autres doivent nous échapper à peu près complètement en raison de leur fragilité extrême, le processus analytique le plus doux suffisant à les altérer ; l'inconnu de la vie leur est lié en partie. Dans les tissus vivants, lipides et protéides ne sont généralement pas à l'état libre ; ils sont engagés dans des complexes dont les propriétés diffèrent de celles des principes immédiats constitutifs. Cet état dissimulé est surtout manifeste pour
principes immédiats constitutifs. Cet état dissimulé est surtout manifeste pour les lipides qui sont dissous dans le sérum et ne se laissent pas extraire par leurs solvants habituels. Nous montrerons que l'on peut distinguer dans le sérum sanguin deux catégories de lipides qui, malgré leur composition chimique très voisine, diffèrent l'une de l'autre par l'intensité des forces qui les unissent aux protéides. Leur étude présente un grand intérêt pratique et théorique. Au point de vue pratique, il arrive souvent que la lipidémie et la protéidémie d'un animal en bonne santé varient de façon irrégulière. Dans certains états pathologiques, par contre,
varient de façon irrégulière. Dans certains états pathologiques, par contre, les variations peuvent être divergentes ou insignifiantes. L'expérience nous a montré que l'on peut définir avec beaucoup de certitude un « état de santé » et un « état de maladie grave » d'après les proportions relatives de ces deux catégories de lipides. Nous espérons que ce test exclusivement physico-chimique de l'état pathologique en général permettra de saisir ce qu'il y a de commun dans toutes les réactions humorales particulières que l'immunologie étudie empiriquement. Au point de vue théorique, nous établirons les relations qui existent entre les deux catégories de
établirons les relations qui existent entre les deux catégories de lipides que nous avons considérées et les deux grandes fractions protéidiques du sérum. Nous parviendrons à saisir plus complètement le mécanisme de l'équilibre, mesure d'activités biologiques essentielles, qui s'établit entre les lipides et les protéides dans le système lipoprotéidique du sérum sanguin. PREMIÈRE PARTIE TECHNIQUES CHAPITRE 1 GÉNÉRALITÉS SUR LA PRÉPARATION DU SÉRUM De tous les constituants de la matière vivante, les plus caractéristiques sont les protéides. Un des buts de ce travail est de montrer que l'intérêt de leur étude est rehaussé si on les considère non comme des
étude est rehaussé si on les considère non comme des principes immédiats, ayant les fonctions que leur donne leur composition chimique, mais comme de véritables systèmes physico-chimiques; on établira leurs relations étroites avec d'autres principes immédiats, en particulier les lipides, et les réactions des uns sur les autres. Les protéides qui proviennent de la plupart des tissus sont enfermés dans le cadre plus ou moins rigide de la cellule à l'état de gels semi-solides. Dans le plasma et le sérum sanguins au contraire, ils sont en solution ; de là leur intérêt particulier. Cet exposé préliminaire a pour but de
leur intérêt particulier. Cet exposé préliminaire a pour but de rappeler quelques généralités sur le sérum, de fixer les conditions de sa récolte et de son emploi, et d'indiquer les principales méthodes analytiques utilisées au cours de cette étude. RAPPORT DU SERUM AVEC LE SANG Ces notions classiques seront brièvement résumées : Le sang circulant est constitué par des éléments figurés (hématies, leucocytes, plaquettes) en suspension dans un milieu liquide, le plasma. Lorsqu'il s'écoule hors d'un vaisseau, le sang se prend plus ou moins rapidement en masse : c'est la coagulation sanguine qui consiste essentiellement en la transformation d'un protéide
coagulation sanguine qui consiste essentiellement en la transformation d'un protéide particulier qui passe de l'état de sol (fibrinogène) à l'état de gel (fibrine). La fibrine, au cours de cette floculation, entraîne les éléments figurés du sang et forme avec eux le caillot. Bien des théories ont été émises pour rendre compte de ce phénomène. Celle de BORDET et DE LANGE [1] est sans doute la plus satisfaisante. D'après ces auteurs, un protéide thermolabile qui existe dans le plasma circulant, le prosérozyme, est activé par des corps étrangers au moment de la saignée, et passe à l'état de sérozyme actif. Un
la saignée, et passe à l'état de sérozyme actif. Un phosphatide thermolabile, le cytozyme de FULD et SPIRO, mis en liberté aux dépens des plaquettes, se combine au sérozyme en présence d'ions calcium pour donner la thrombine qui coagule le fibrinogène. Le sérum est donc, grosso modo, le plasma privé de fibrinogène. Celui-ci ayant tendance à se précipiter, le plasma se prête peu aux manipulations. Tout en étant de structure moins complexe, le sérum est le support de la plupart des propriétés biologiques du plasma circulant. Ce n'est pas un matériel artificiellement obtenu par l'expérimentateur puisqu'il se forme spontanément à
matériel artificiellement obtenu par l'expérimentateur puisqu'il se forme spontanément à partir du tissu liquide dont il provient sans altération d'aucune sorte, chimique, physique ou même mécanique. MODE D'OBTENTION DU SERUM On peut obtenir un « plasma stabilisé » en ajoutant au sang certains anions (fluorhydrique, oxalique, citrique) qui, précipitant le cation calcique, empêchent la floculation du fibrinogène. Mais cette addition d'une substance étrangère au sang entraîne un déséquilibre physico-chimique, en particulier dans la répartition de l'ion chlore entre hématies et plasma. D'après Ch. O. GUILLAUMIN la modification que subit ainsi le rapport est de l'ordre de 2 à 11 %.
le rapport est de l'ordre de 2 à 11 %. HIGOUNET retrouve ces résultats et propose l'emploi d'un anticoagulant type antiferment : l'anéthol disulfonate de soude polymérisé. Les anticoagulants modifient aussi l'équilibre lipidique entre hématies et plasma (BOYD et MURRAY). Il semble donc rationnel d'étudier le sérum plutôt qu'un plasma adultéré par l'addition de substances étrangères. La défibrination est un procédé peu pratique pour l'obtention de quantités importantes de sérum. Celui-ci a toujours été obtenu par coagulation spontanée du sang. CONDITIONS DE PRELEVEMENT DU SANG 1. — Moment du prélèvement. Le sang n'est comparable à lui-même qu'en dehors des périodes
Le sang n'est comparable à lui-même qu'en dehors des périodes digestives ; de nombreux travaux l'ont établi. M. LAUDAT a montré qu'après l'absorption d'un repas comprenant 50 grammes de beurre, la lipidémie passait 5-6 à 8-10 grs. Mme P. JUNG et R. WOLFF ont étudié les variations très considérables que présente le sérum de chien au cours de la période digestive ; excès de lipides à la suite d'un repas riche en viande, excès d'acides gras à la suite d'un repas de féculents. BROCQ ROUSSEAU a montré que le rendement en sérum augmente du début à la fin de la
en sérum augmente du début à la fin de la saignée. Nous avons fait quelques analyses comparatives pour connaître la composition du sérum au début, au milieu et à la fin de la saignée. Elles permettent d'établir que sa teneur en protéides et en lipides diminue au cours de la saignée. L'indice de réfraction varie dans le même sens. 3. — Séjour du sérum sur le caillot. Le temps de contact du sérum sur le caillot influe légèrement sur la composition du sérum. Le sérum conservé 48 heures sur le caillot est moins riche en lipides que le sérum récolté
caillot est moins riche en lipides que le sérum récolté au bout de 24 heures. Les variations observées sont constantes. Elles ne sont pas très considérables mais nettement en dehors des erreurs expérimentales. TECHNIQUE EMPLOYÉE POUR LA PRÉPARATION DU SERUM Ces données justifient le mode opératoire que nous avons adopté : Dans la mesure du possible les animaux reçoivent une nourriture uniforme pendant le cours des expériences. Ils sont mis à la diète complète et au repos 15 à 16 heures avant la saignée. Chez les gros animaux, (équidés, bovidés) le sang est prélevé aseptiquement par ponction de la veine
le sang est prélevé aseptiquement par ponction de la veine jugulaire et récolté dans un vase à saignée stérile ; on laisse tomber la masse de fonte lorsque le caillot est bien formé (une heure après la prise de sang, en général). Chez les petits animaux (rongeurs) le prélèvement est fait par ponction cardiaque. Pour les séries d'expériences comparatives, on prélève une quantité de sang à peu près uniforme (600 à 700 cc chez les gros animaux). Le sérum est décanté au bout de 24 heures et centrifugé. S'il n'est pas utilisé le jour même, on le conserve à la
pas utilisé le jour même, on le conserve à la glacière à une température voisine de + 3°. ÉNONCÉ DE QUELQUES RÉSULTATS L'étude de la technique d'obtention du sérum nous a permis incidemment d'établir les faits suivants : a) La teneur en protéides et en lipides diminue du commencement à la fin de la saignée. b) La teneur en lipides diminue quand le sérum reste en contact avec le caillot. CHIFFRES EXPÉRIMENTAUX Protocole de l'expérience I : Au cours de la saignée, on a recueilli le sang de la façon suivante : Environ 50 cc dans un premier récipient (I)
suivante : Environ 50 cc dans un premier récipient (I) Environ 600 cc dans un deuxième récipient (II) Environ 50 cc dans un troisième récipient (III) Protéides totaux du sérum : Dosage sur 2 cc par la méthode de KAYSER. Dosage par réfractométrie. Cholestérol : Dosage par la méthode colorimétrique de GRIGAUT. Résultats exprimés en gr/litre de sérum. à : Différence entre la composition du sérum au début et à la fin de la saignée rapportée au chiffre moyen % Génisse 60 Génisse 66 Cheval 67 H Protéides Protéides totaux Protéides 3 totaux K ser Réfrac Cholestérol totaux S Q.
Protéides 3 totaux K ser Réfrac Cholestérol totaux S Q. (Kayser) y tométrie (Kayser) 1 60.2 78.8 79.1 1.50 92.1 II 76.1 76.9 77.6 1.45 91.3 III 75.8 74.6 76.5 1.40 90.6 A 5,7 % 5.4 % 3.3 % 7 % 1.6 % Protocole de l'expérience II : On prélève à un cheval 4 litres de sang que l'on récolle dans deux vases à saignée 1 et II : la moitié du sérum de chacun des récipients est séparée du caillot au bout de 24 heures, l'autre moitié au bout de 48 heures. On fait le dosage des lipides totaux.
de 48 heures. On fait le dosage des lipides totaux. (Lipides totaux exprimés en mgr. pour 25 cc. de sérum) 1 II Sérum 24 h. sur caillot 61,0 57,3 Sérum 48 h. sur caillot 56,5 54,1 BIBLIOGRAPHIE 1 — BORDET (J.) et DELANGE (L.) : La coagulation du sang et la genèse de la thrombine. Ann. Inst. Pasteur, 1912, 26, 657 et 737. 2 — GUILLAUMIN (Ch. O.) : Influence de quelques anticoagulants sur la répartition entre le plasma et les globules des constituants sanguins. Bull. Soc. Chim. biol., 1930, 12, 491. 3 — HIGOUNET (H.) : Influence des anticoagulants
12, 491. 3 — HIGOUNET (H.) : Influence des anticoagulants sur la répartition des ions Clentre le plasma et les hématies. Bull. Soc. Chim. biol., 1937, 19, 53. 4 — BOYD (Eldon M.) et MURRAY (Ronald B.) : The effects of anticoagulants on blood lipids. The J. biol. Chem., 1937, 117, 629. 5 — LAUDAT (M.) : Thèse doct. Pharm. Paris, 1913. 6 — JUNG (Mme P.) et WOLFF (R.) : Sur la teneur comparée du plasma et du sérum en lipoïdes. Bull. Soc. Chim. biol., 1923, 5, 137. 7 — BROCQ ROUSSEAU : Du rendement en sérum à la
— BROCQ ROUSSEAU : Du rendement en sérum à la suite des saignées successives. C. R. Soc. Biol., 1926, 95, 68. Les auteurs sont à peu près d'accord pour adopter une première lixiviation par l'alcool et une seconde par l'éther dans un appareil à extraction continue du type KUMAGAWA. Les conditions d'évaporation des solvants et de séchage de l'extrait ne sont pas toujours bien fixées. Certains auteurs opèrent à température aussi basse que possible afin de ne perdre aucune fraction de l'extrait ; d'autres estiment au contraire qu'un chauffage approprié est nécessaire pour éliminer les impuretés volatiles et rendre insolubles
est nécessaire pour éliminer les impuretés volatiles et rendre insolubles dans l'éther des substances résineuses qui ne doivent pas être comptées dans l'extrait lipoïdique. Nous ne discuterons pas ce problème qui sort des cadres de cette étude. Il semble à cet égard que les sérums des différentes espèces animales ne se comportent pas toujours de façon identique. La connaissance chimique et le rôle physiologique des substances que nous voulons doser sont souvent insuffisants. C'est pourquoi les méthodes qu'emploie la chimie biologique ne sont pas toujours parfaites. Il importe donc de ne comparer entre eux que des chiffres obtenus à l'aide
ne comparer entre eux que des chiffres obtenus à l'aide d'une même technique dont les différents temps soient très exactement précisés. Un exemple illustrera mieux ces prescriptions. Parmi les nombreuses méthodes de dosage du glucose sanguin, celle de BAUDOIN et LEWIN d'une part, celle de FONTES et THIVOLLE d'autre part sont parmi les plus sensibles et les plus fidèles. Or la première donne des résultats systématiquement plus faibles que la deuxième parce que la défécation mercurielle qu'elle utilise élimine une substance réductrice (glucide X de FONTES et THIVOLLE) qui passe dans le filtrat de défécation tungstique. La nature chimique de
dans le filtrat de défécation tungstique. La nature chimique de cette substance est inconnue et son rôle, surtout dans le diabète, mal précisé. La question n'est pas tranchée de savoir si l'on doit doser ce glucide x avec le sucre du sang ou au contraire l'éliminer. DOSAGE DE L'UREE Les deux procédés les plus employés pour le dosage de l'urée sont : La méthode de FOSSE. Le sérum convenablement déféqué est additionné de xanthydrol qui précipite l'urée à l'état de xanthylurée. La méthode à l'hypobromite, Ce réactif décompose l'urée en gaz carbonique, qu'on absorbe par la soude, et azote dont
gaz carbonique, qu'on absorbe par la soude, et azote dont on mesure le volume. En réalité l'azote n'est pas entièrement libéré mais par contre il se dégage un peu d'oxygène. Des expériences témoins permettent de dresser des tableaux de correspondance entre la teneur en urée et le volume gazeux recueilli. Elle donne des résultats supérieurs d'environ 25 % à la méthode de FOSSE, mais de plus, comme l'a montré LAUDAT, cet écart n'est pas constant ; il peut tomber à 3 % chez les azotémiques et croître chez certains hépatiques jusqu'à 75 % Cette remarque apporte une nouvelle justification aux
jusqu'à 75 % Cette remarque apporte une nouvelle justification aux prescriptions énoncées précédemment. Technique personnelle La méthode que nous utilisons est essentiellement celle de FOSSE. La technique de séparation de la xanthylurée nous est personnelle. Nous l'employons depuis plusieurs années déjà avec d'excellents résultats. L'emploi de papier filtre est peu pratique et peu sûr, la pellicule que l'on détache est fragile et risque de contenir quelques bribes de ce papier. La préparation des filtres d'amiante est assez longue, minutieuse et ne donne de bons résultats qu'avec certaines qualités d'amiante. Avec les filtres à plaque de verre poreux il y a
les filtres à plaque de verre poreux il y a souvent des pertes importantes. Aussi avons-nous été amenés à utiliser des filtres d'Iéna garnis d'amiante. Voici la technique employée : Dans un tube à centrifuger de 30 à 50 cc, ajouter volumes égaux de sérum et de réactif de FOSSE (P. ex. 10 cc). Mélanger soigneusement avec une baguette de verre, centrifuger et, s'il y a lieu, filtrer. Au volume prélevé du filtrat, ajouter dans un bécher un égal volume d'acide acétique cristallisable et le dixième environ de ce volume d'une solution à 5 % de xanthydrol dans l'alcool méthylique
d'une solution à 5 % de xanthydrol dans l'alcool méthylique pur. Attendre deux à trois heures. Au bout de ce temps l'insolubilisation est totale et la filtration se fait très facilement. Pendant ce temps, on prépare le filtre. Prendre un filtre d'Iéna de porosité G3 de 2 cm, 5 de diamètre sur 10 cm de hauteur ; le garnir d'une petite couche d'amiante en fibres. Laver à l'acide acétique, à l'eau, à l'alcool. Déssécher à 100° (une heure au moins) laisser refroidir une demiheure dans un exsiccateur à vide puis peser. Effectuer la filtration de la xanthylurée en s'aidant d'une
peser. Effectuer la filtration de la xanthylurée en s'aidant d'une légère dépression, rincer le bécher à trois reprises avec de petites quantités d'alcool éthylique saturé de xanthylurée en employant un agitateur muni d'un bout de caoutchouc. Dessécher à l'étuve à 100°, laisser refroidir et peser dans les mêmes conditions que pour le filtre vide. Le poids de xanthylurée exprimé en mgr., divisé par 7 et par la moitié du nombre de cc du filtrat donne la quantité d'urée en gr. par litre de sérum. DOSAGE DU PHOSPHORE A. Phosphore total. Nous avons employé la méthode de MACHEBŒUF à quelques détails
Nous avons employé la méthode de MACHEBŒUF à quelques détails de technique près. Dans un matras de KJELDAHL de 30 cc environ introduire 2 cc de sérum et 1 cc d'acide sulfurique concentré (d = 1.84). Chauffer jusqu'à apparition de fumées blanches, Après refroidissement ajouter 2 cc d'acide nitrique pur (d = 1.38) et porter à l'ébullition. Si la liqueur reste colorée en brun après disparition des vapeurs nitreuses, ajouter encore un peu d'acide nitrique et poursuivre la destruction jusqu'à décoloration complète ou simple persistance d'une légère teinte jaune paille. Après refroidissement, ajouter 6 cc d'eau et 2 cc de
Après refroidissement, ajouter 6 cc d'eau et 2 cc de nitrate d'ammonium en solution saturée. Porter au bain marie bouillant pendant 10 minutes environ. Ajouter alors 6 cc de molybdate d'ammonium à 5 % et laisser au bain marie bouillant pendant 10 minutes exactement. Laisser refroidir et ajouter 5 cc d'alcool à 95°. Le précipité se rassemble au fond du tube. Jeter le liquide surnageant sur un filtre d'Iéna monté sur fiole à vide. Rincer avec de l'alcool à 50° jusqu'à ce que le filtrat ne précipite plus par addition de chlorure de baryum. La fiole à vide est vidée
de chlorure de baryum. La fiole à vide est vidée et rincée. Dissoudre alors le précipité dans le matras à l'aide de quelques cc d'ammoniaque au quart et jeter ce liquide sur le filtre d'Jena. Rincer à plusieurs reprises avec de l'eau additionnée d'un peu d'ammoniaque jusqu'à ce que tout le précipité soit dissous. Transvaser ensuite le contenu de la fiole à vide dans un flacon d'Erlenmeyer de 250 cc environ, ajouter 10 cc de soude et porter à l'ébullition jusqu'à ce que l'ammoniaque soit entièrement chassé (15 à 20 minutes d'ébullition). L'ébullition sera régularisée par l'introduction dans la fiole
minutes d'ébullition). L'ébullition sera régularisée par l'introduction dans la fiole conique d'une petite cloche capillaire. Puis ajouter 20 cc d'acide sulfurique, porter à nouveau à rébullition pendant quelques minutes et titrer à la N sous A "20 sans laisser refroidir en présence de phénolphtaléine. Après l'apparition du virage, on laisse refroidir quelques minutes et on porte à nouveau à l'ébullition. Le virage disparaît. On ajoute alors la quantité de soude nécessaire pour le faire réapparaître. Le nombre de cc de soude lu à la burette multiplié par 0,056 donne le poids en mgr. du phosphore de la prise d'essai. B.