jeanflop/post-ocr-correction huggingface dataset:
cellules sont rinçées, congelées dans de l'azote liquide et broyées dans un mortier jusqu'à obtention d'une poudre fine. L'extraction des ARNs s'effectue à 4°C en présence de phénol, de métacrésol et de lauryl sulfate de sodium [(9), CO)]. Après précipitation par de l'éthanol absolu froid, en présence d'acétate de sodium, les acides nucléiques sont dissous dans une solution tamponnée de Tris HCl 10 mM à pH 7,6 contenant 10 mM d'EDTA puis précipités de nouveau. Ces opérations de dissolution-précipitation effectuées à froid, sont renouvelées jusqu'à ce que la radioactivité d'une partie aliquote précipitée à 0°C par de l'acide trichloracétique amené
partie aliquote précipitée à 0°C par de l'acide trichloracétique amené à la concentration finale de 5 %, demeure constante. Les acides nucléiques, dissous dans une solution tampon pH 7,2 de Tris HCl 20 mM, NaCl 10 mM et d'acétate de Mg 5 mM sont alors traités par la désoxyribonucléase I (Boehringer, Mannheim, 15469) (5 µg pour 100 µg d'acide nucléique) à 4°C pendant 45 mn. Les solutions d'ARN (5 mg, A.S. : 56130) ainsi obtenues sont déprotéinisées par un mélange à volume égal de phénol et de chloroforme et fractionnées par chromatographie d'affinité sur une microcolonne (diamètre 5 mm) de
par chromatographie d'affinité sur une microcolonne (diamètre 5 mm) de "Sepharose" poly (U). RÉSULTATS. — La figure 1 montre qu'il est possible d'isoler une fraction d'ARN polyadénylé retenue par les séquences polyuridyliques fixées sur le "Sepharose". La fraction retenue représente 5 à 6 % des ARNs extraits et manifeste 15 %, de la radioactivité totale (tableau I). Comme l'activité spécifique des ARNs polyadénylés est sensiblement le triple de celle de l'extrait global, il existe donc une incorporation préférentielle d'adénosine dans ces ARNs à ce stade de la culture. Fig. 1. — Fractionnement des ARNs par chromatographie d'affinité sur colonne de
— Fractionnement des ARNs par chromatographie d'affinité sur colonne de "Sepharose" poly (U). 1 ml de la solution d'ARN (320 µg) est déposé au sommet de la colonne maintenue à 20°C et contenant environ 300 mg de "Sepharose" poly U. (4 B. Pharmacia Uppsala). La colonne est lavée par 18 ml de la solution tamponnée pH 7.6 contenant 100 mM de NaCl, 10 mM d'EDTA, 10 mM de Tris et 0.2 % de sodium dodécylsulfate. La température de la colonne est amenée à 50°C (') et l'élution de la fraction retenue (flèche) s'effectue par 10 ml de solution tamponnée identique
retenue (flèche) s'effectue par 10 ml de solution tamponnée identique à la précédente mais sans NaCl. Dans le but d'isoler les séquences polyadényliques, on rassemble les fractions non retenues d'une part, et les fractions retenues d'autre part. Elles sont soumies à l'hydrolyse enzymatique par les ribonucléases A et T, (2) (Boehringer, Mannheim 15410 et 15411) et chromatographiées sur colonne de "Sepharose" poly (U). Il apparaît dans le tableau II que la totalité des ARNs poly (A) est contenue dans la fraction précédemment retenue. De plus, les séquences adényliques isolées, résistantes aux ribonucléases A et T, représentent 27 % de la
aux ribonucléases A et T, représentent 27 % de la radioactivité de ces ARNs. Afin d'évaluer la taille de ces séquences, les élusats de la fraction retenue sont rassemblés TABLEAU I Chromatographie sur colonne de "Sepharose" poly (U) de l'ARN extrait Radioactivité Absorbance Activité (cpm) (260 nm) spécifique Fraction non retenue 357 600 7,56 47 300 Fraction retenue 64 240 0,45 142 745 En pour cent du total.... 15,2 5,6 TOTAL ............... 421 840 8,01 52 664 La radioactivité des fractions est déterminée en présence de liquide scintillant "Instagel" (Packard). TABLEAU II Chromatographie sur "Sepharose" poly U des séquences polyadényliques
TABLEAU II Chromatographie sur "Sepharose" poly U des séquences polyadényliques Radioactivité en coups par minute --------- TOTAL Filtrat Éluate Fraction retenue 110 900 81200 29 700 (27 %) Fraction non retenue ........ 399 200 398 600 600 (0,15%) Les fractions précédemment retenues ou non, sont hydrolysées à 37°C pendant 45 mn par les RNAses A et T, (40 μg et 20 U respectivement pour 100 ng d'ARN). La déprotéinisation s'effectue à l'aide du mélange phénol chloroforme (v/v). Les conditions de la chromatographie sont identiques à celles décrites dans la figure 1. TABLEAU III Chromatographie de l'hydrolysat des séquences polyadényliques Système
1. TABLEAU III Chromatographie de l'hydrolysat des séquences polyadényliques Système Système solvant 1 solvant 2 Radioactivité appliquée (cpm) 39 622 57 668 AMP (cpm) 38 028 (98 %) Adénosine (cpm) ...................... 435 (0,75 %) Le système solvant 1 acide isobutyrique-ammoniaque 0,5 N (10/6 v/v) permet d'isoler l'adénosine monophosphate (AMP) (15 h à 25°C). Le système solvant 2 n-butanol-ammoniaque 0,1 N (6/1 v/v) isole l'adénosine (24 h) ("). Les chromatogrammes découpés en fragments de 1 cm sont mis dans des flacons à scintillation avec 0,5 ml d'hyamine pendant 12 h; on ajoute ensuite 10 ml de mélange scintillant (PPO : 4
ajoute ensuite 10 ml de mélange scintillant (PPO : 4 g; POPOP 10 mg; acide acétique glacial 1 ml; toluène q.s.p. 1 l). et précipités par de l'acide trichloracétique froid. Puis ils sont soumis à une hydrolyse alcaline par une solution 0,3 N de potasse, à 37°C pendant 18 h. Après neutralisation, des parties aliquotes sont chromatographiées sur papier « Whatman » n° 1. Les résultats exposés dans le tableau III montrent que la longueur moyenne des segments poly (A), calculée par le rapport AMP/adénosine est d'environ 130 nucléotides (38 028/435 x 57 668/39 622 = 127). CONCLUSION. — Au
028/435 x 57 668/39 622 = 127). CONCLUSION. — Au troisième jour de la culture, alors qu'elles présentent un taux de croissance important, les cellules de Silène renferment des ARN polyadénylés. Il semble vraisemblable que ce type de molécule apparaît à un stade plus précoce du cycle de culture. Le travail en cours doit nous apporter des précisions et sur l'évolution de ces ARN et sur la taille de la séquence adénylique en fonction de la croissance. La méthode d'extraction utilisée ici, aboutit à l'obtention d'espèces moléculaires cytoplasmiques. Une extraction séquentielle en fonction de la température permet d'isoler une fraction
séquentielle en fonction de la température permet d'isoler une fraction d'ARN poly (A) non extractible à froid (résultats non publiés) dont l'origine serait essentiellement nucléaire. Il devient dès lors possible d'étudier le métabolisme de deux populations de molécules réparties dans des compartiments cellulaires différents et de suivre leur évolution lors du cycle cellulaire. Séance du 20 décembre 1976. J. DUBOIS, S. RAMBOUR et J. VASSEUR, Actes du 101e Congrès national de la Société Savante, Lille, 1976, Sc. fasc. 1, p. 441. C. VAN DE WALLE, Febs Letters, 34, 1973, p. 31. C. O. MANAHAN, A. A. APP et C. C.
31. C. O. MANAHAN, A. A. APP et C. C. STILL, Biochem. Biophys. Res. Commun., 53, 1973, p. 588. M. DELSENY, L. ASPART, H. BALAT et Y. GUITTON, Comptes rendus, 278, série D, 1974, p. 1225. D. SAGHER, M. EDELMAN et K. M. JAKOB, Biochem. Biophys. Acta, 349, 1974, p. 32. R. CELLA, F. SALA et H. E. STREET, J. Exp. Bot., 27, 1976, p. 263. R. ESNAULT, G. TRAPY et R. B. VAN HUYSTEE, Eur. J. Biochem., 60, 1975, p. 83. J. DUBOIS, Bull. Soc. bot. Fr., 122, 1975, p. 269. M. TEISSERE, Thèse doctorat d'État, Marseille, 1974, 188
p. 269. M. TEISSERE, Thèse doctorat d'État, Marseille, 1974, 188 p. K. S. KIRBY, Biochem. J., 96, 1965, p. 266. J. MENDECKI, S. Y. LEE et G. BRAWERMAN, Biochem., 11, 1972, p. 792. S. Y. LEE, J. MENDECKI et G. BRAWERMAN, Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A., 68, 1971, p. 1331. K. SCHERRER et J. E. DARNELL, Biochem. Biophys. Res. Commun., 7, 1962, p. 486. Laboratoire de Physiologie végétale. Université des Sciences et Techniques de Lille I, B.P. n° 36, 59650 Villeneuve d'Ascq. PHYSIOLOGIE VÉGÉTALE. — Rôles de l'asparagine et des conditions d'aération dans l'induction de la caroténogenèse et la régulation
conditions d'aération dans l'induction de la caroténogenèse et la régulation du rythme de sporulation chez Leptosphaeria michotii (West) Sacc. Note de Simone Jerebzoff-Quintin et Stéphan Jerebzoff, transmise par M. Henri Gaussen. À l'obscurité, si l'asparagine est fournie en quantité suffisante (6.6.10-3 M) dès le départ, l'02 n'est pas nécessaire à la régulation du rythme chez L. michotii malgré un certain retard dans sa manifestation et une baisse du « pool » des caroténoïdes. Avec 2,6.10-3 M d'asparagine, la première étape de la réaction photosensible a besoin d'02 dès le départ et de l'action énergétique due à la lumière après une
et de l'action énergétique due à la lumière après une phase obscure initiale de 5 jours. In darkness 02 is not necessary for the regulation of a sporulation rhythm in L. michotii. when asparagine (6.6 x 10-3 M) is given at the beginning of the cultures, though rhythm is delayed and the carotenoid's "pool" is lower than control. Using 2.6 x 10-3 M of asparagine, O2 furnished at the beginning and white light after an initial 5 day-long dark period, are necessary for the first step of the photoresponse. Des corrélations ont déjà été établies sous différentes conditions d'éclairement entre
corrélations ont déjà été établies sous différentes conditions d'éclairement entre la régulation du rythme de formation de pycnides chez L. michotii et l'action de l'asparagine d'une part, la synthèse de caroténoïdes colorés d'autre part. Or, les caroténoïdes colorés seraient un des intermédiaires qui règlent la durée de la période de L. michotii à la lumière comme à l'obscurité; dans quelle étape de la réaction photosensible s'effectue alors la liaison entre caroténoïdes et asparagine ? Dans cette voie, et en tenant compte du rôle particulier de la période initiale de 5 jours nécessaire à la régulation de la sporulation, la présente
jours nécessaire à la régulation de la sporulation, la présente expérimentation aura lieu en atmosphère contrôlée et l'asparagine, comme le stimulus lumineux donnés à différents moments. MÉTHODES. — L. michotii est cultivé à 23 ± 0,5°C sur milieu synthétique où est inclus stérilement à froid un tampon Sorensen à pH 6. Puis après filtration (Millipore 0 = 0,45 μm) sont introduites, dès le départ ou en cours d'expérimentation, des concentrations d'asparagine (6,6 ou 2,6.10-3 M) stabilisantes ou non de la période. En milieu solide les cultures poussent sur un filtre en cellulose régenerée, et peuvent donc être transférées d'une condition
en cellulose régenerée, et peuvent donc être transférées d'une condition à l'autre stérilement. En milieu liquide, il est procédé stérilement à une évacuation totale du substrat et à son remplacement. Les cultures sont, soit maintenues à l'obscurité continue (Obs), soit soumises après 5 jours d'obscurité à 7 jours de lumière blanche continue de 10 pEinstein.cm-2.s (5 j Obs + LL) ou encore à une excitation de 6,000 pEinstein.cm-2.S -1/30 mn (5 j Obs + J,L + Obs). Dès l'ensemencement, des séries sont laissées, soit en atmosphère normale (Air) (de composition classique : N2 = 79 %, O2 = 20 %,
classique : N2 = 79 %, O2 = 20 %, CO2 = 0,03 %), soit en atmosphère d'azote (N2) (l'azote N2, ayant subi un passage sur pyrogallate de Na puis sur Cl2Ca anhydre, est introduit dans l'enceinte contenant certaines séries venant d'être ensemencées, après obtention d'un vide de 755 mm de Hg). Pour d'autres séries, des combinaisons de durées variables en « Air » et en « N2 » sont effectuées à k = 595 nm (filtre interférentiel MTO) radiation non active sur la caroténogenèse et le rythme. La détermination des croissances pondérale et linéaire (avec écart-type de la moyenne)
des croissances pondérale et linéaire (avec écart-type de la moyenne) a lieu au terme de chacune des étapes ainsi que l'évaluation de la période 1. Pour chacun des cas, il est procédé à une analyse et à un dosage des caroténoïdes. RÉSULTATS. — I. Dans quelle étape intervient l'asparagine ? (tableau) (a) Sous une tension normale en oxygène (Air), la régulation du rythme a besoin d'asparagine, ajoutée dès le départ dans le milieu, en quantité suffisante (6,6. 10-1 M) à l'obscurité; avec l'action énergétique due à un faible éclairement continu, 2,6. 10-3 M suffit; en outre, l'action d'un éclair lumineux
2,6. 10-3 M suffit; en outre, l'action d'un éclair lumineux intense permet après retour à l'obscurité à la fois le contrôle du système oscillant et une augmentation de la caroténogenèse; (b) l'action combinée de la lumière et de 6,6.10-1 M d'asparagine, facteurs qui pris isolément ont une action optimale, perturbe le système oscillant et la caroténogenèse n'est pas augmentée; (c) l'introduction d'asparagine (2,6 ou 6,6. 10-3 M) au 7e jour de culture réduit à l'obscurité la synthèse des caroténoïdes, et de 50 % la taille des pycnides, et pour 2,6. 10-3 M, supprime les zonations; sous l'action de l'éclairement on
10-3 M, supprime les zonations; sous l'action de l'éclairement on note un retard important de la manifestation du rythme dont la période est irrégulière et une synthèse diminuée des caroténoïdes colorés. II. La réaction photosensible est-elle aérobie ? (fig.) (a) Sous azote dès le départ, avec 2,6.10-3 M d'asparagine, il se produit à l'obscurité une forte réduction du nombre et de la taille des pycnides, une baisse de 40 % de la croissance linéaire et pondérale et de la caroténogenèse. Le rythme à période croissant avec le temps n'apparaît qu'au 18e jour. L'action due à l'éclairement réduit en partie ce
18e jour. L'action due à l'éclairement réduit en partie ce retard de la manifestation du rythme et permet une période de 30 à 40 h quoique irrégulière, mais n'améliore pas le « pool » de caroténoïdes. Avec 6,6.10-3 M d'asparagine à l'obscurité, si l'effet défavorable de l'anaérobiose sur la pycnidiogenèse n'est pas compensé, l'inhibition de la croissance et de la caroténogenèse et le retard dans la manifestation du rythme sont diminués. L'action combinée d'un supplément d'asparagine et de l'éclairement continu stabilise la période; (b) l'apport d'air au 7e jour chez les cultures recevant 2,6.10-3 M d'asparagine assure une amélioration des
les cultures recevant 2,6.10-3 M d'asparagine assure une amélioration des croissances, pycnidiogenèse et caroténogenèse, un bon fonctionnement du rythme à l'obscurité mais non à la lumière où le système oscillant est très perturbé; (c) la suppression d'air au 7e jour chez les cultures recevant 2,6.10-3 M d'asparagine affecte peu la pycnidiogenèse et la croissance par rapport au témoin « Air », mais davantage la caroténogenèse. Étude de la réaction photosensible en aérobiose ou anaérobiose chez L. michotii. Nota. — Les pourcentages sont calculés par rapport au témoin = 100 pris ici pour 2,6.10-3 M d'asparagine (5 j Obs + LL
ici pour 2,6.10-3 M d'asparagine (5 j Obs + LL Air). Pour comparaison, à l'obscurité, les cultures recevant 6,6.10-3 M d'asparagine ont à l'« Air » 100 % de croissance linéaire et 114 % de caroténoïdes, en « N2 » 69 % de croissance et 82 % de caroténoïdes. Le retard important dans la manifestation du rythme observé à l'obscurité est légèrement diminué sous l'action de la lumière, la période irrégulière étant comprise entre 30 et 40 h. Il en ressort que : — lors d'une déficience partielle en asparagine fournie dès le départ, le stimulus lumineux produirait au terme
fournie dès le départ, le stimulus lumineux produirait au terme de la phase obscure initiale de 5 jours et en aérobiose, l'accumulation d'une substance photo-induite qui assure la régulation du système oscillant et une bonne synthèse des caroténoïdes pendant quelques jours. Ces faits sont en accord avec des essais antérieurs et la réversibilité de la réaction photosensible. Le manque en asparagine ne peut être compensé, uniquement en anaérobiose, par l'action due à la lumière. Avec 6,6.10-3 M d'asparagine, il peut être fait l'économie de la substance photo-induite et d'une tension normale en O2. Ces données sont à rapprocher des cas
normale en O2. Ces données sont à rapprocher des cas où les conditions anaérobies permettent cependant la photostimulation de la sporulation comme chez Trichoderma ou bien stoppent le fonctionnement du rythme circadien chez Bryophyllum. — une première localisation de la condition photo-induite contrôlant à la fois le rythme de sporulation et la caroténogenèse montre la nécessité de l'intervention de 3 facteurs (O2, asparagine, lumière); elle souligne aussi le rôle de la phase initiale des 5 premiers jours de culture. Or, l'étape primaire de la caroténogenèse comprendrait un processus de synthèse d'un produit photo-oxydé qui précède la formation d'une protéine caroténogène.
d'un produit photo-oxydé qui précède la formation d'une protéine caroténogène. L'emploi d'inhibiteurs sur la synthèse des enzymes caroténogènes est en cours chez L. michotii. De plus, comme ce champignon synthétise des caroténoïdes à l'obscurité qui, en présence d'assez d'asparagine règlent le phénomène oscillant, il semblerait que l'essentiel des réactions photo-induites soit un transfert possible d'énergie comme cela se produit dans d'autres cas pour la caroténogenèse. Séance du 3 janvier 1977. S. JEREBZOFF, Circadian Clocks, J. ASCHOFF (éd.), North Holland Publ. Co., Amsterdam, 1965, p. 183. S. JEREBZOFF-QUINTIN et coll., Physiol. vég., 13, (1), 1975, p. 55; Comptes rendus, 278, série
vég., 13, (1), 1975, p. 55; Comptes rendus, 278, série D, 1974, p. 1239. S. JEREBZOFF et coll., Comptes rendus, 268, série D, 1969, p. 302. S. JEREBZOFF-QUINTIN, Comptes rendus, 272, série D, 1971, p. 2688. J. GRESSEL et coll., Plant. and Cell Physiol., 16, 1975, p. 367. M. B. WILKINS, Planta, Berlin, 72, 1967, p. 66. W. RAU, Planta, Berlin, 101, n° 3, 1971, p. 251. F. LANG-FEULNER et W. RAU, Photochem. and Photobiol., 21, 1975, p. 179. P. P. BATRA et coll., J. Biol. Chem., 246, n° 23, 1971, p. 7125. E. C. DE FABO, R. W. HARDING
1971, p. 7125. E. C. DE FABO, R. W. HARDING et coll., Plant. Physiol., 57, 1976, p. 440. Laboratoire de Phytohormones, Université Paul-Sabatier, 118, route de Narbonne, 31077 Toulouse Cedex. PHYSIOLOGIE VÉGÉTALE. — Les acides gras du pollen et du style chez Oenothera missouriensis Sims, espèce auto-incompatible. Note de Denise Coustaut et Robert Linder, transmise par M. Paul Jaeger. Deux esters méthyliques naturels, oléate et arachidonate de méthyle, sont identifiés dans les extraits de pollen d'Oenothera missouriensis Sims. Le bilan des acides gras des lipides totaux a été établi dans le pollen, le style vierge et les styles (autopollinisés et
le pollen, le style vierge et les styles (autopollinisés et xénopollinisés). L'acide caprique, inhibiteur de croissance, n'est identifié que dans les extraits du pollen S,. La pollinisation, compatible ou incompatible, s'accompagne d'une manière uniforme d'une forte diminution des teneurs en acides gras dans les styles pollinisés. Two naturally-occurring methyl esters, methyl oleate and methyl arachidonate were purified from Oenothera missouriensis Sims pollen extracts. The fatty acid composition of the total lipids was established for pollen and unpollinated, self-, and cross-pollinated styles. Capric acid, a growth inhibitor, was only found in the pollen S, extracts. The compatible or incompatible pollination was
the pollen S, extracts. The compatible or incompatible pollination was always accompanied by a prominent decrease of the fatty acid level in the pollinated styles. NOTE. — Nos connaissances sur la composition et la signification biologique des lipides des organes reproducteurs des plantes sont moins avancées que celles des organes végétatifs où l'intervention de certaines classes lipidiques sur la croissance est observée : inhibition par des acides gras à chaîne carbonée courte, stimulation par les acides gras naturellement méthylés ou par les acides gras polyinsaturés. Chez Oenothera missouriensis, l'incompatibilité de fécondation gamétophytique met en jeu une inhibition de croissance des
fécondation gamétophytique met en jeu une inhibition de croissance des tubes polliniques porteurs d'un allèle S d'incompatibilité dans les tissus du style qui renferment cet allèle. Cette Note se propose d'une part, l'identification des esters méthyliques naturels dans le pollen et dans le style vierge, d'autre part, l'analyse des acides gras des lipides totaux dans le pollen et le style (vierge et pollinisé). Ainsi un bilan des acides gras, avant et après pollinisation compatible et incompatible, peut être établi en relation avec l'incompatibilité de fécondation gamétophytique. MÉTHODES. — Les plantes utilisées sont celles qui ont servi à la détermination du
utilisées sont celles qui ont servi à la détermination du mécanisme de transmission héréditaire de l'incompatibilité gamétophytique de fécondation (10) : Bb (génotype SIS2), Bg (génotype S2S4) et SI (génotype homozygote S,S, obtenu expérimentalement). La recherche des esters méthyliques naturels est effectuée sur les boutons floraux frais et non congelés (pollen tamisé et styles vierges). Les bilans d'acides gras sont établis sur du matériel congelé comprenant : pollen et styles vierges (témoins) de chaque génotype; styles pollinisés, en combinaison incompatible ou en combinaison compatible (xénopollinisation des styles S,S, par le pollen S2S4 ou S2S4 par le pollen S,S,). EXTRACTION ET
pollen S2S4 ou S2S4 par le pollen S,S,). EXTRACTION ET ANALYSE. — Esters méthyliques naturels d'acides gras. — Les lipides sont extraits (6) par le mélange chloroforme-isopropanol (2 : 1 v/v). Après filtration sur papier dégraissé et évaporation à sec, le résidu de lipides totaux est repris par l'éther de pétrole 60-70°, fractionné par chromatographie sur colonne d'acide silicique (1), selon (9) : 300 mg d'extrait total dissous dans l'éther de pétrole sont chromatographiés sur des colonnes d'acide silicique préparées dans l'éther de pétrole (20 g d'acide silicique « Mallinckrodt » 100 mesh). Le fractionnement de l'extrait total lipidique et
» 100 mesh). Le fractionnement de l'extrait total lipidique et la récupération des esters méthyliques naturels s'effectuent par élution des hydrocarbures saturés (cires et carotènes) par 150 ml d'un mélange éther éthylique-éther de pétrole (1 % v/v). Les esters méthyliques naturels sont ensuite élués par 50 ml du même mélange et après contrôle de pureté sur couches minces, ils sont chromatographiés en phase gazeuse dans un appareil « Aérograph Varian série 1800 », à détecteur à ionisation de flamme selon les conditions suivantes : phase stationnaire = diéthylène-glycol-succinate (DEGS) à 10% sur « chromosorb W » (60-80 mesh); colonne =
10% sur « chromosorb W » (60-80 mesh); colonne = 10 pieds de longueur et 1/8 d'« inch » de diamètre; températures des injecteurs et détecteurs respectivement de 198 et 225°C; phase mobile = azote de qualité R avec un débit constant (20 ml/mn). Les esters méthyliques naturels séparés sont identifiés par comparaison de leurs distances de rétention avec celles d'étalons purs. Extraction des acides gras des lipides totaux. — Le pollen et les styles préalablement pesés sont broyés en présence d'azote liquide qui inactive les enzymes et favorise l'éclatement de l'exine. Après disparition de l'azote liquide, les lipides sont
de l'exine. Après disparition de l'azote liquide, les lipides sont extraits par le mélange chloroforme-méthanol (2 : 1 v/v); le volume de solvant utilisé est égal à 20 fois le nombre de grammes de départ; extraction et purification sont effectuées à + 4°C dans des appareils préalablement refroidis et dégraissés par le solvant. L'absence de phospholipides est contrôlée selon par dosage colorimétrique à 650 nm du complexe phosphomolybdate-molybdique formé. Les valeurs du phosphore obtenties sont toujours inférieures à 1 % pour le pollen et sensiblement nulles pour les styles. L'extrait total obtenu est conservé à −20°C sous atmosphère d'azote. Après