Gw mau tau Southern Blot electrophoresis dari Fibrosis sista. Jelasin dalam bahasa melayu

Pada masa yang sama, dua orang pakar sains bernama Lap-Chu Tsui dan Francis Collins berjaya mengasingkan probes daripada Sistik Fibrosis interval. Oleh itu mereka dapat menggunakan teknik lompatan kromosome yang lebih mudah untuk mengurangkan masa yang diperlukan untuk mengasingkan Gen Sistik Fibrosis berbanding menggunakan teknik biasa. Untuk menentukan lokasi tepat bagi Gen Sistik Fibrosis , probe diambil dari susunan nucleotide, hasil proses lompatan kromosome. Probe ini didapati dari pengasingan DNA daripada kuda, lembu, ayam, dan tikus dengan menggunakan Southern Blot electrophoresis. Empat probe yang didapati melekat kepada keempat-empat DNA haiwan membuktikan bahawa pasangan asas di dalam probe mempunyai maklumat penting, ataupun Gen Sistik Fibrosis itu sendiri. Daripada empat probe itu, dua disingkirkan kerana tidak mempunyai bingkai bacaan terbuka "open reading frames", iaitu rangkaian DNA yang menghasilkan mRNA yang bertanggungjawab bagi Gen.

Teknik elektrolisis Tompokan Utara (Northern Blot) kemudiannya digunakan untuk membezakan baki dua probe untuk memastikan yang mana satu sebenarnya mempunyai gen Sistik Fibrosis . Ini boleh dilaksanakan oleh kerana elektrolisis Tompokan Utara (Northern Blot) menggunakan RNA dan bukannya DNA. RNA jenis sel yang dijangkiti Sistik Fibrosis , bersama RNA sel normal daripada pancreas, kolon, dan hidung, tetapi tidak bercantum kepada sel RNA daripada jenis sel yang tidak dijangkiti seperti sel otak atau jantung. Probe nombor satu tidak bercantum hanya kepada jenis sel yang boleh dijangkiti oleh Sistik Fibrosis sementara probe nombor dua hanya bercantum dengan sel yang boleh dijangkiti oleh Sistik Fibrosis . Berdasarkan bukti ini, telah dapat dipastikan bahawa probe nombor dua mengandungi gen Sistik Fibrosis . Ketika pengasingan gen Sistik Fibrosis , didapati bahawa probe nombor dua tidak bergabung (hybridize). Peluang pengabungan juga berkurangan disebabkan cDNA yang digunakan tidak terdiri daripada jenis sel yang boleh dijangkiti Sistik Fibrosis . Penyelesaian untuk ketiadaan gabungan

Peluang pembentukan hibrid juga berkurangan kerana cDNA yang digunaka tidak dihasilkan daripada jenis sel sebenar yang dijangkiti CF. Penyelesaian bagi kekurangan pembentukan hibrid adalah dengan menghasilkan perpustakaan cDNA yang diperbuat sepenuhnya dari sel dijangkiti Sistik Fibrosis. Perpustakaan baru ini diasingkan dari sel dalam kelenjar peluh. Dengan menggunakan perpustakaan cDNA baru ini, probe nombor dua didapati menghibrid secara berlebihan. Ia diteori bahawa kejayaan ini disebabkan sejumlah besar gen Sistik Fibrosis hadir dalam kelenjar peluh, atau gen itu sendiri terbabit dalam keluarga protin yang besar. Walaubagaimanapun, pengikatan probe ini mampu membuktikan bahawa gen Sistik Fibrosis wujud dalam jujukan asas nukleotide yang sedang dianalisa.

Gen yang diasingkan dibuktikan sebagai bertanggungjawab bagi menyebabkan CF dengan membandingkan jujukan pasangan asasnya dengan jujukan pasangan asas yang serupa pada sel yang tidak dijangkiti. Keseluruhan jujukan cDNA CF adalah sekitar sepanjang 6,000 nukleotide. Dalam 6,000 n.t. tersebut, tiga pasang asas didapati hilang dalam sel dijangkiti, kesemuanya ada pada exon #10. hasil ketiadaan ini mengakibatkan kehilangan sisa phenylalanine dan ia bertanggungjawab bagi tujuh puluh peratus mutasi CF. Tambahan kepada pola kehilangan tiga pasangan asas, sehingga 200 mutasi berlainan telah dijumpai dalam gen menyebabkan CF, kesemuanya dengan pelbagai tahap berbeza.