Coba jelasin Perlakuan dari Reaksi berantai polimerase transkripsi-balik dong

Dalam prosedur reaksi berantai polimerase transkripsi-balik, perlu diperhatikan hal-hal berikut:

Alat-alat yang bebas dari RNAseRNA sangat rentan terhadap RNAse yang menyebar di lingkungan, sehingga sangat dianjurkan menggunakan  alat-alat yang bebas dari RNAse, seperti tabung Eppendorf dan tip mikropipet.

Aluminium dianjurkan sebagai pelapisan pada peralatan laboratorium berbahan gelas.  Degradasi RNAse melalui sterilisasi pada suhu >180 °C selama 2 jam.

Reagen dan larutan yang digunakan sebaiknya bebas RNAse. Dapat pula diberi perlakuan dengan dietil pirokarbonat (DEPC) 0,1 % v/v yang telah disterilisasi.

Tris Hidroklorida tidak boleh diperlakukan dengan Dietil pirokarbonat, karena bersifat sangat reaktif.

Menggunakan sarung tangan berbahan karet pada saat melakukan isolasi RNA. Tutup tabung eppendorf hanya dilakukan dalam waktu yang singkat.

Meja laboratorium dibersihkan sebelum bekerja, Bahan pembersihnya berupa larutan natrium hipoklorit, etanol dengan kandungan 70 %, atau 0,1 % Sodium Dodesil Sulfat;

Penyimpanan RNA dalam waktu yang lama dianjurkan pada suhu -80 °C.

Isolasi RNA diperlakukan di atas es (suhu 4 °C) selama bekerja.

Penyimpanan stok isopropanol dalam waktu yang lama dilakukan pada suhu -80 °C.

Reagen transkriptase balik disimpan pada suhu -20 °C. Pengerjaan di atas es suhu 4 °C diterapkan pada saat melakukan sintesis DNA komplemen

Penyimpanan DNA dan reagen dalam waktu yang lama dianjurkan pada suhu -80 °C.

Preparasi untuk membuat campuran reaksi dilakukan di atas es dengan suhu 4 °C.

Penyimpanan amplikon selama 1-2 hari menerapkan suhu 4 °C. Anjuran yang umum untuk produk reaksi adalah pada suhu -20 °C untuk penyimpanan waktu lama.  Tujuannya adalah menghindari degradasi oleh aktivitas 5’-eksonuklease dari enzim Taq polimerase.