Jelaskan Pengaturan kolom dan tumpak dari Kromatografi afinitas

Pengikatan pada fasa padat dapat diperoleh melalui kromatografi kolom yang mana medium padat dikemas dalam suatu kolom. Campuran awal dialirkan melalui kolom, kemudian larutan pencuci (biasanya larutan penyangga) dialirkan melalui kolom sehingga terjadi elusi. Eluat (hasil elusi) yang keluar dari kolom kemudian dikumpulkan. Alternatif lain, pengikatan dapat dicapai menggunakan perlakuan tumpak (batch), dengan penambahan campuran awal ke fasa padat dalam bejana, mencampurnya, kemudian memisahkan fasa padat dan fasa cairnya, dicuci, disentrifuga, ditambahkan penyangga untuk elusi, disentrifuga ulang, dan eluat dipisahkan.

Terkadang dilakukan metode hibrida seperti pengikatan dilakukan dengan metode tumpak, tetapi fasa padat dengan target molekul yang akan diikat dikemas ke dalam kolom dan dicuci kemudian dielusi dalam kolom.

Metode ketiga, adsorpsi lapisan terekspansi, merupakan kombinasi kelebihan kedua metode di atas, juga telah dikembangkan. Partikel fasa padat diletakkan di dalam kolom, sementara fasa cair dipompa ke dalam kolom dari bagian bawah dan keluar di bagian atas. Gaya gravitasi partikel memastikan bahwa fasa padat tidak keluar dari kolom bersama-sama dengan fasa cair.

Kolom afinitas dapat dielusi dengan mengubah konsentrasi garam, pH, pl, kekuatan muatan dan ion secara langsung maupun bertahap untuk memisahkan partikel yang diinginkan.