Jabarkan Pengasingan dan kematian dari Katherine dari Aragon

Setelah kembali ke Dover dari suatu pertemuan dengan François I, Raja Prancis di Calais, Henry menikahi Anne Boleyn di dalam sebuah upacara rahasia. Beberapa sumber berspekulasi bahwa Anne telah hamil pada saat itu (dan Henry tidak ingin mengambil risiko memiliki anak haram karena lahir sebelum menikah), namun yang lain bersaksi bahwa Anne (yang telah melihat saudarinya Mary Boleyn dijadikan sebagai gundik raja dan kemudian dicampakkan sewenang-wenang) menolak untuk tidur dengan Henry sampai mereka resmi menikah. Henry membela keabsahan ikatan mereka dengan menunjukkan bahwa Katherine sebelumnya telah menikah. Jika ia dan Arthur telah menyempurnakan pernikahan mereka (istilah untuk pasangan yang telah berhubungan intim), Henry oleh hukum kanon memiliki hak untuk menikah lagi. Pada tanggal 23 Mei 1533, Cranmer, duduk di pengadilan khusus yang diadakan di Dunstable Priory untuk memutuskan keabsahan pernikahan Henry dengan Katherine, menyatakan bahwa pernikahan tersebut tidak sah meskipun Katherine bersaksi bahwa ia dan Arthur tidak pernah melakukan hubungan badan selama masa pernikahan mereka yang singkat. Di sisi lain, Cranmer menyatakan bahwa pernikahan Henry dan Anne sah lima hari kemudian, pada tanggal 28 Mei 1533.

Sampai akhir hayatnya, Katherine merujuk dirinya sendiri sebagai satu-satunya istri Henry dan Permaisuri Inggris yang sah, dan para pelayannya terus memanggilnya dengan gelar tersebut. Henry menolak status Katherine sebagai permaisuri dan menyebutnya "Putri Wales Janda", mengindikasikan bahwa dia hanya berstatus sebagai janda Pangeran Arthur.

Katherine diasingkan ke kastil The More pada musim dingin tahun 1531/32.

Tahun 1535 ia dipindahkan ke Kastil Kimbolton. Di sana ia mengurung dirinya sendiri di dalam sebuah ruangan (yang hanya ditinggalkan untuk menghadiri misa), hanya mengenakan pakaian Silisium Ordo Santo Fransiskus dan puasa terus menerus. Meski sesekali ia diizinkan untuk menerima pengunjung, ia dilarang untuk melihat putrinya, Mary. Mereka juga dilarang untuk saling berkirim surat, tetapi para pendukung mereka diam-diam mengantarkan surat-surat di antara keduanya. Henry menawarkan baik kepada Katherine dan Mary izin untuk bertemu dan mengunjungi satu sama lain jika mereka mengakui Anne Boleyn sebagai permaisuri. Namun tawaran itu ditolak oleh keduanya.

Pada akhir Desember 1535, ketika ia merasa ajalnya mendekat, Katherine membuat surat wasiat dan menulis kepada keponakannya, Karl V, Kaisar Romawi Suci, yang memintanya untuk melindungi putrinya. Katherine meninggal di Kastil Kimbolton pada tanggal  1536. Keesokan harinya, berita kematiannya sampai di telinga raja. Pada saat itu terdapat rumor bahwa ia telah diracuni diduga oleh Gregory di Casale. Menurut penulis kronik Edward Hall, Anne Boleyn mengenakan pakaian berwarna kuning untuk berkabung, yang dapat ditafsirkan dengan berbagai cara; Polydore Vergil menafsirkan bahwa ini berarti Anne tidak berkabung. Chapuys melaporkan bahwa Raja Henry yang berpakaian kuning, merayakan berita tersebut dan membuat acara besar untuk dirinya dan anak perempuan Anne, Elizabeth, untuk orang-orang di istananya. Hal ini dipandang sebagai tindakan yang tidak menyenangkan dan vulgar oleh banyak orang. Teori lain adalah berpakaian kuning adalah untuk menghormati Katherine yang konon warna kuning adalah warna berkabung untuk bangsa Spanyol. Tentu saja di kemudian hari dilaporkan bahwa Henry dan Anne baik secara individu maupun secara pribadi menangisi kematiannya. Pada hari pemakaman Katherine, Anne Boleyn keguguran seorang putra. Desas-desus kemudian beredar bahwa Katherine telah diracuni oleh Anne atau Henry, atau keduanya, karena Anne mengancam akan membunuh Katherine dan Mary pada beberapa kesempatan. Kabar itu muncul setelah pembalseman jenazah Katherine, diketahui bahwa terdapat warna hitam di jantungnya yang kemungkinan disebabkan oleh racun. Ahli medis modern sepakat bahwa perubahan warna jantungnya bukan karena racun melainkan disebabkan oleh kanker, penyakit yang tidak dipahami pada saat itu.

Katherine dimakamkan di Katedral Peterborough dengan format upacara yang diadakan sebagaimana untuk memakamkan Putri Wales, bukan untuk seorang permaisuri. Henry tidak menghadiri pemakamannya dan melarang Mary untuk menghadirinya pula. Di kemudian hari, anak perempuan Henry dan Katherine, Mary, naik takhta sebagai Ratu Inggris.