hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
脳イメージングと3次元バーチャル空間を使い新しい予測判断トレーニングを開発する

本研究では、テニスのサーブにおいてサーバーがどちらの方向にサーブを打つのかという状況想定して、人間がどの様に状況判断を行っているかについて、脳の活動が見える脳イメージング技術とCG(コンピュータグラフィックス)を使ったバーチャル場面を用いて研究を行った。その結果、脳内の島皮質と呼ばれる領域が重要な役割をにない、特にサーブのインパクト直前にラケットに注意を向けることがサーブレシーブの成績向上に重要であることが示された。【目的】:本研究では、平成19年度に「基礎研究:基礎的な3次元のバーチャル空間の作成及びfMRIによる脳内活動の検討」を行う。また、平成20年度に「応用研究:実際のゲーム場面に近似した3次元のバーチャル空間とfMRIを用いた予測判断モデルの構築及び全国調査による因子分析との比較」を行い、得られた知見をもとに「発展研究:新しい予測判断トレーニング・プログラムの開発及びfMRIを用いたトレーニング効果の確認」を平成21年度に行う。H19年度は「基礎的な3次元のバーチャル空間を作成及びfMRIによる脳内活動の検討」を研究の目的とした。テニスのサーブ動作を対象として、基礎的な3次元のバーチャル空間を作成し、CGを利用したバーチャル空間作成の技術を確立させる。また、3次元のバーチャル空間を見ているときの脳活動についてfMRIを用いて測定することを目的とした。【方法・結果】CGの作成においては、テニスのサーブ動作を高速度カメラで撮影し、リアルタイム3次元動作解析システムを利用して身体座標値を得た。さらに、得られたデータを元に各動作の背景となる物理量(位置,速度,カ,時間等)を算出し、スティック・モデルを完成させた。得られたCGモデルをより実際場面に近づけるために、スティック・モデルからシャドーモデル、スキニングモデルを作成し、背景などのCGと合わせて基礎的なバーチャル空間を完成させた。作成には3D作成ソフトを用い、バーチャル空間での視点の設定(レンダリング)などを行った。また、fMRIを用いた脳活動の測定では、視覚情報の処理と関係する視覚野や注意と関係する頭頂領域での活動が観察されるかについて確認を行った。その結果、頭頂小葉および視覚領域での活動が確認された。なお、本研究はでは、本研究東京工業大学の「疫学研究倫理規定」に従って実験を行い、被験者の権利と利益に十分配慮を行いながら研究が進められた。【目的】:本研究ではfMRIとCGを用いて作成したバーチャル空間を利用して、予測判断トレーニングの効果発揮のメカニズムを明らかにすることを目的とする。本年度については、具体的には以下の点について研究を行った。(1)テニスのサーブ動作を対象として、前年度に作成したCG映像を用いて、その時の脳活動についてfMRIを用いて測定すし、予測判断の脳活動モデルについて検討する。(3)さらに、本年度では予測判断を含めた実際のプレーヤーの環境要因に関する調整も行い、スキルトレーニングの実態や勝利意欲など予測判断やプレー向上にむすびつく要因についても検討を加える。【方法・結果】:実験では具体的に、以下の点について検討を加えた。昨年度行ったCG開発手法を基に、テニスを対象として予測判断を必要とする代表的な場面を取り出し、実際のゲーム場面に近似したCGを作成した。CG作成の各ステップの精度をさらに高め、最終的に、背景などのCGと合わせて完成度の高いバーチャル空間を完成させ、このCGを用いて予測判断トレーニングを行い、トレーニング前後の効果を検討した。また比較の対象としてビデオを用いたときとの効果を比較した。その結果、CGは実際にビデオを用いたときと同等の効果があることが示され、今後CG映像を用いて動作の変調などの操作を用いたトレーニングの可能性が示された。またfMRIを用いた実験において、予測判断トレーニング時に島皮質の活動を見たところ、予測判断後のフィードバック情報を提示するときに島皮質の活動が高まることが示された。このことは、予測判断トレーニングによって強化学習の効果が出現しトレーニング効果につながることが示唆された。なお、調査研究においては予測判断トレーニングを含め勝利意欲と環境要因についての検討なども行った。【目的】:3年目にあたる平成21年度は「新しい予測判断トレーニング・プログラムの開発及びfMRIを用いたトレーニング効果の確認」を研究の目的とした。研究では、これまでに開発したCG技術を応用し、テニスのサーブレシーブを対象として実際のゲーム場面に近似したより精度の高い3次元のバーチャル空間を作成する。さらに、これまでの視線配置研究から予測判断に重要な要素と抽出し、トレーニング・プログラム開発に用いると共に、予測メカニズムを明らかにするために脳活動をfMRIを用いて測定した。得られた結果から予測判断メカニズムについて検証するとともに、予測判断トレーニングのプログラムの開発を目指した。予測判断促進要因の同定およびトレーニング・プログラムの開発:トレーニング・プログラム開発のために必要な予測判断を向上させる要因を特定する実験をテニスのサーブレシーブを対象として行った。その結果、インパクト直前の150ms間におけるラケット周辺への注意の配分が重要であることが指摘された。

そのため、トレーニング・プログラム開発においては、インパクト直前のラケットへの注意配分を促す内容を構築した。さらに、熟練者と初心者を比較した遮蔽実験より、サーバーの色情報と形態情報が重要な要素でもあることが指摘された。fMRIを用いた実験では、予測期間中に島皮質の活動が見られたが、これらの活動に加えて弁蓋部の活動も観察された。これらのことから、タイミング関連の予測としては、補足運動野・弁蓋部が関与し、さらに注意配分においては右前頭部の背外側前頭前野が関連していることが指摘され、トレーニングによってタイミング関連領域の活動および注意配分関連領域の活動に変化が生じる可能性が指摘された。
音声言語によるマン・マシン・インターフェイスの高度化に関する総合的研究

本研究は、音声言語によるマン・マシン・インターフェイスの高度化に関して、我が国の主要な研究者の協力のもとに、国内外の研究の現状を正しく把握し、未解決の問題の明確化と解決への方策・研究体制の検討を行い、重点領域研究として発展させるための基盤を築く事を目的として、以下の実績をあげた。1.各分担課題ごとに、国内・外の研究現況に関するデータを、主として文献リストの形で収集・整理し、これをとりまとめて音声情報処理研究共通の学術データベースとする準備を進めた。さらに、研究代表者等の外国出張の機会、海外研究者の日本訪問の機会をとらえ、海外における音声入出力に関する国家的研究プロジェクトの現状を把握し、我が国での研究体制構築の参考とした。2.6回の全体会議の開催、各分担課題ごとの分担者の個別討議により、音声情報処理関連分野の未解決の問題の明確化、および解決への方策・研究体制の検討を行い、計画研究班10班(総括班を含む)からなる重点領域研究の体制を作成した。昭和62年度発足予定の重点領域研究「音声言語」として申請し、3年間にわたる研究として採択されたのをうけて、ソフトウエア・音声データベースの共有化、ハードウエアの規格統一など研究全体にかかわる課題に対し、ワーキング・グループを選定して作業を開始した。3.重点領域研究「音声言語」に所属する全て研究者が共通の問題意識を持って研究を進めるために、また外部の研究者に研究の意義・役割を周知させるために、シンポジウムを企画・開催し(参加者108名)、その内容を論文集としてまとめ、関係各方面に配布した。昭和62年度以降には、本研究は重点領域研究総括班として発展的に解消し、重点領域研究の有機的統合を進める。
Ｃ型慢性肝炎治療におけるテラプレビル及び光学異性体血中濃度からの副作用予測法確立

【研究目的】テラプレビルは、HCVのプロテアーゼを阻害することによりHCVの増殖を直接抑制する初めての薬物であり、C型慢性肝炎の治療において大きな成果をあげている。しかし副作用発現の予測や検出・対処並びにテラプレビル減量時の治療効果に関する情報は殆ど無い上、減量や中止に伴うテラプレビル耐性ウイルス出現の危険性についても考慮されていないのが現状である。現在多くのプロテアーゼ阻害薬が開発されており、テラプレビルと同様の経過を辿ることが予測される他、薬剤選択基準の構築のためにも、薬剤個別の抗ウイルス活性並びに副作用発現に関わる体内動態特性の解明は必須と考えられる。そこで本研究は、テラプレビル及び光学異性体の血中濃度と副作用の関係に関するエビデンス構築を目的とした。【方法】2012年10月以降、テラプレビル服用中の患者のうち、文書による同意の上で末梢血採取が可能であった8名を対象とした。採取した末梢血は、血漿を分離して速やかに冷凍保管し、LC-MS/MS法にてテラプレビルの血漿中濃度を測定することとした。また、電子カルテより臨床情報を抽出し、テラプレビル血漿中濃度との相関解析を行った。本研究は京都大学大学院医学研究科・医学部及び医学部附属病院医の倫理委員会の承認を得て実施した。【結果・考察】末梢血中のテラプレビルtotal及びD体のLC-MS/MS法による濃度測定法を構築し、L体濃度はtotal-D体として評価した。吐き気・食欲不振・倦怠感それぞれが出現した際のtotalテラプレビル血中濃度は、出現しなかったときの濃度に比べて高いことが明らかとなった(P=0.025)。また、副作用によりテラプレビルが減量された患者は減量されなかった患者と比較し、血中濃度が高めに推移していたことが判明した。さらに、以上の結果は光学異性体の分離評価を必ずしも必要としないことが示唆され、テラプレビル血中濃度と副作用発現の関係は、total濃度の評価によって回避可能であることが考えられた。
歯胚誘導と歯原性腫瘍の発生機序におけるWNT5の役割に関する研究

歯の発生はどのように生じてくるのか。歯は口腔粘膜上皮と間葉系細胞のシグナル因子の相互作用によって生じる。歯の細胞では歯の基質を作る遺伝子とそれを動かす因子は約2000以上存在しているが、未だ数10の遺伝子しかわかっていない。顎骨内で歯胚の細胞が癌化腫瘍化することがある。その場合、顎切除しか治療法が無い。顔の変形や咬めない状況が生じる。従って、顎切除をしない遺伝子治療法の開発,遺伝子シグナル分析が必要である。歯胚が腫瘍化する場合、正常細胞のアクセル(癌遺伝子細胞増殖)の過剰作用、ブレーキ(癌抑制遺伝子増殖抑制)の破綻が生じている口腔癌、歯原性腫瘍発生での固有のアクセル(癌原遺伝子)とブレーキ(癌抑制遺伝子)は知られていない。主要な増殖シグナル系WNTファミリーのWNT5aにターゲットを絞り研究することになった。アクセルとブレーキの多くのシグナル系が関与する中で、アクセルの主要な部分WNTファミリーはβカテニン系シグナルを介して転写因子LEFであり、それはTarget Gene(細胞分裂)を動かす。我々の研究でWNT5aはこのシグナル系の制禦に関連していた。細胞の機能分化と細胞増殖に関与していることを明らかにした。歯原性腫瘍(アメロブラストーマ)、口腔扁平上皮癌、口腔悪性メラノーマの増殖において、WNT5aは蛋白の過剰発現により、細胞増殖を抑える癌抑制遺伝子(ブレーキ)の役目を果たしていることを世界で初めて明らかにできた。このことは歯原性腫瘍の遺伝子治療を考える場合、重要な発見となり、更にそのメカニズムを追求することが必要である。Wntファミリーの研究は開始されたばかりで、歯の誘導や歯原性腫瘍の発生ととの関連については全く不明である。そこで、共同研究テーマとしてWnt5aの歯胚と歯原性腫腫瘍が発生に係る役目について次の3点について実施する。(1)正常マウス歯胚発生との二次口蓋形成Wnt5aの役割の解明(1年目)。(2)Wnt5aKOマウスにおける歯胚発生とWnt5a役割の解明(2年目)。(3)Wnt5aと歯原性腫瘍の解明(3年目)。そこで、1年目について次のように行った。(1)正常マウス歯胚発生と二次口蓋形成のWnt5aの役割の解明材料:胎生期のIGRマウス(2.5日、15.5日、18.5日及び出生後1日)を用い、次の方法により、Wnt5aの発現について検討した。方法:1)マウスWnt5a抗体(R&D Systems)を用い、免疫組織学的染色(Wnt5aの蛋白の局在)を行った。2)共同研究協力者Minoo氏(南カルフォルニア大教授)より供与されるWnt5aのアンテセンス、センスプローブを用いて、in situ hybridization(Wnt5a遺伝子の検出)を行なった。3)歯胚と口蓋部を上皮組織と間葉系組織に分離しそれぞれの遺伝子発現を半定量的RT-PCRにより測定した。上記により、正常マウスの歯胚と二次口蓋の形成にWnt5a遺伝子、蛋白の検出を総合的に行った。来日が、平成16年10月であることから成果をまとめつつある。一方、他の腫瘍におけるWnt5aの役割解明のMalignant melanoma、扁平上皮癌の研究も分担した。Wnt5aはWntファミリーの一つとして、当初器官発生分化に関与するとされていたが、その後の研究で、癌発生の癌遺伝子又は癌抑制遺伝子である可能性もあり、Wnt5aは細胞内シグナル系でより大きな役割を果たしていることが推測されるようになった。実験結果はマウス顎顔面と舌形成発生に於いて、信号伝達シグナル系のWnt5aが重要な役割を果たしていることを示している。我々のデータはWnt5aはマウス切歯ではエナメル芽細胞の増殖に関与することによって、切歯の大きさを調節していることを示唆している。(c)口腔扁平上皮癌におけるWnt5aとβ-カテニンの局在Wnt/β-カテニンシグナル系が腫瘍発生と扁平上皮癌の進展を調節していることを示している。更に、浸潤性の高い扁平上皮癌で膜上β-カテニンの減少は細胞同士の接着が失われることと相関している。これらの結果は現在検査中。β-カテニンの細胞内蓄積はリンパ節転移に関係し、Wnt/β-カテニンシグナル系は転移に重要な役割を果たしていると考えられた。7例の浸潤性、転移性の口腔悪性黒色腫について検討した。Wnt5aはメラノーマ細胞の運動性、浸潤に関与していることが推測された。主要な増殖

シグナル系WNTファミリーのWNT5aにターゲットを絞り研究することになった。アクセルとブレーキの多くのシグナル系が関与する中で、アクセルの主要な部分WNTファミリーはβカテニン系シグナルを介して転写因子LEFであり、それはTarget Gene(細胞分裂)を動かす。我々の研究でWNT5aはこのシグナル系の制禦に関連していた。細胞の機能分化と細胞増殖に関与していることを明らかにした。歯原性腫瘍(アメロブラストーマ)、口腔扁平上皮癌、口腔悪性メラノーマの増殖において、WNT5aは蛋白の過剰発現により、細胞増殖を抑える癌抑制遺伝子(ブレーキ)の役目を果たしていることを世界で初めて明らかにできた。このことは歯原性腫瘍の遺伝子治療を考える場合、重要な発見となり、更にそのメカニズムを追求することが必要である。
科学が広がる香りの世界－科学を身近に体験できる教育プログラムの開発

初・中等教育での実験は、科学的興味を引き出す上で重要である。しかし、時間がかかる実験は実施しにくく、科学を身近に感じる機会が少ない。そこで、本研究では、中学生を対象として、生活に密接に関わりがあり、アロマテラピー等で最近注目されている「香り」をテーマとし、簡単な実験を行った。科学への入口を低くし、更に発展型として、大学ならではの実験や分析を行った。全体を通して、五感で感じる「香り」と分子構造(化学)の関連を中心とした、科学を学べる内容とした。実験内容は、以下の通りである。・様々な香りを嗅ぎ、その違いと分子構造の関連を確認した。特に、鏡像関係にある2種類のリモネンを例にとって説明した。・様々な成分の特徴確認のための簡単な実験を行った。例えば、リモネンを含む精油が発泡スチロールを溶かすことを確認した。また、抗菌作用を持つ精油を含む又は含まない培地で大腸菌を培養し、抗菌作用を確認する等の簡単な実験を行った。・精油抽出方法で最も一般的な水蒸気蒸留法でハープから精油を抽出した。・様々な精油の含有成分を質量分析計(MS)で分析した。香りを嗅ぐという、ごく日常的なところから入り、簡単な実験を行ったことで、日常にも科学が隠れていることを体感させることができたように思う。科学への入口を低くすることで、科学に対する壁を払拭し、さらに、初・中等教育では扱えない研究・開発現場の先端技術に触れたことで、科学への興味を刺激する良い機会になっただろうと思う。今後もこのような活動を続けるため、本研究の発展型、もしくは、より良い内容を模索し続けたい。
薬物依存評価法・治療法の開発に関する心理学的研究

刺激薬物と並び重要な依存性薬物のひとつである,アルコールに対する再飲酒リスクを多次元的に測定するアルコール再飲酒リスク評価尺度(Alcohol Relapse Risk Sacle:ARRS)を開発し,前年度に連携体制を構築したアルコール依存症治療施設の入院・通院患者200名を対象に実施した。併せてアルコールへの渇望感,抑うつ(CES-D)・現在の飲酒状況・1ケ月後の再飲酒の有無など,他変数についても測定を行った。統計解析の結果,おおむね十分な信頼性と妥当性を確保する値を得た。<法務機関と連携体制の構築>刑務所・保護観察所など,薬物依存者とかかわる重要機関の一つである法務機関との信頼関係・連携体制を構築した。具体的には,静岡刑務所(静岡),法務省矯正局,法務省保護局(以上東京)との協力体制である。<依存物質再使用と処方薬の関連を調査するための縦断調査の実施>開発した刺激薬物再使用リスク尺度(SRRS)・アルコール再飲酒リスク尺度(ARRS)を,専門病院に通院する30人/60人程度の薬物依存症者/アルコール依存症者に継続実施し,処方薬や他の社会心理的変数(本人の抱えているストレス状況など)との関連を検討するために,約3ケ月間隔で2回,試験的な縦断調査を実施した。<薬物依存治療施設との連携体制の構築>薬物専門外来を有する病院や民間治療施設などの治療機関との信頼関係を構築した。具体的には、東京都立松沢病院、国立精神・神経センター武蔵病院(以上東京)、セルフ・サポート研究所(市川・沖縄)、復興会垂水病院(神戸)との協力体制である。依存症重症度評価の指標として世界的に普及している構造化面接である嗜癖重症度指標(ASI)の日本語版を、上記施設に入院・通院する薬物依存症患者111名を対象に実施した。面接は専門のトレーニングを受けた精神科医・臨床心理士合わせて5名で行い、合わせて断薬期間・抑うつ(CES-D)・精神的健康(GHQ12)・3ヶ月/6ヵ月以内の薬物再使用の有無など、他変数についても測定を行った。統計解析の結果、おおむね十分な信頼性と妥当性を確保する値を得、依存性薬物に対するASIの標準化をほぼ完了した。並行して、薬物再使用の兆候まで幅広く捉えることを意図した薬物渇望感尺度(渇望感インデックスと命名した)を開発するため、先行研究の整理を行うと共に、依存症治療を専門とする精神科医4名に薬物再使用のシグナルとなる認知・行動を特定するためのインタビューを行い、項目を整理し尺度としての体裁を整えた。<アルコール依存治療施設との連携体制の構築>アルコール専門外来を有する病院や民間治療施設などの治療機関との信頼関係を構築した。具体的には、東京都立松沢病院、うらべ医院,八王子平川病院(以上東京),国立久里浜アルコール症センター(神奈川),中条第二病院(新潟)との協力体制である。刺激薬物への再使用リスクを多次元的に測定する刺激薬物再使用リスク評価尺度(Stimulants Relapse Risk Scale ; SRRS)を開発,前年度に連携体制を構築した薬物依存症治療施設の入院・通院患者100名を対象に実施,併せて薬物への渇望感,抑うつ(CES-D)・精神的健康(GHQ12)・3ヶ月/6ヵ月以内の薬物再使用の有無など、他変数についても測定を行った。統計解析の結果、おおむね十分な信頼性と妥当性を確保する値を得、SRRSの標準化をほぼ完了,結果を英文論文としてまとめた(専門誌に掲載済)。<アルコール再使用リスク評価尺度の開発と標準化のための調査>並行して、アルコールに対する再飲酒リスクを多次元的に測定するためのアルコール再飲酒リスク評価尺度(Alcohol Relapse Risk Scale ; ARRS)を開発し,上述の連携体制を構築したアルコール依存治療施設に入院・通院する患者を対象に,尺度標準化のための調査を開始した。現在も調査は継続中であり,最終的に200例程度の例数が見込める予定である。
1925－45年出生男性の職歴移動の構造－社会制度・社会集団・個人の主体性から－

平成24年度の研究目的は,192545年出生男性の中年期までの「転職」と高齢期における「労働市場からの退出」の規定要因を明らかにすることである.なかでも本研究は,男性の職業意識・主観的健康といったミクロ要因が職歴移動に及ぼす影響に注目する.さらにこの目的を達成するために23年度から実施しているインターネット・パネル調査の第2波調査を実施することも24年度の重要なタスクである.はじめに既存のパネル調査データを用いて,当該男性の中年期までの離職に対し,就業途中の仕事満足(job satisfaction)がどのような影響を及ぼすのかを明らかにし投稿論文にまとめた.分析の結果,この世代の男性の仕事満足はその後の離職行動に対し有意な主効果をもたなかった.しかし意識と職業階層の交互作用効果が存在し,中小企業ブルーカラーのみ満足であれば勤続し不満であれば離職する傾向が認められた.よって,この世代の大企業従業員を中心とした「長期雇用」慣行は,高階層を中心とした「不満・満足にかかわらず勤続する」というミクロレベルで特徴的な働き方の結果であることが新たに示された.男性有職者の後期キャリアとくに「労働市場からの退出」は生活保障や世帯の支出・家族の支援などそれまでのキャリアと比べ影響要因が非常に多く複雑であることが知られている.そこで複雑な後期キャリアを把握すべく,前年度から「60代有職男性の意識とキャリアに関するインターネット・パネル調査」を実施している.24年度は前年度の第1波で回答を得た700名に対し追跡調査(第2波)を実施した.第2波の回収率は約85%であった.これにより1年間のキャリアの変化に対する社会保障要因・家族要因そして職業意識・主観的健康といったミクロ要因の影響を明らかにすることができる.このようなインターネット・パネル調査は実施事例が少ないため,職歴移動研究の領域に方法的な意義をもつ.平成23年度の研究目的は,1925-45年出生男性の後期キャリアにおける「労働市場からの退出」の規定要因を,社会制度要因や個人の主体性要因にも注目し複合的に明らかにすることと,そのための分析枠組みを準備することである.近年の高齢労働者の「労働市場からの退出」に対するマクロな社会制度要因の影響のしかたを,大規模調査を用いたコーホート比較(1925-34年出生男性vs1935-44年出生男性)により明らかにした.計量分析の結果,1990年代以降に後期キャリアを歩んだ後者のコーホートで,社会的資源(例えば学歴)が乏しい者ほど労働市場から退出しやすいことがわかった.このようなコーホートの差異を,日本の年齢規制型の雇用維持政策がグローバル化に脆弱な労働者を市場に留めさせる役割を果たし切れていないことに起因すると解釈した.この研究成果は,高齢期の格差拡大をもたらす労働市場からの退出のタイミングの差異を考えるうえで現行の雇用維持政策の課題を提示した点で意義をもつ.次に後期キャリアの「労働市場からの退出」におけるミクロな主体性要因の影響を評価するため,700名のインターネット・モニターを対象とした「2012年60代有職男性の意識とキャリアに関するインターネット・パネル調査」(第1波調査)を実施した.第1波調査では,健康・勤労観などの主体性要因を測定した.そして来年度に同一対象者を追跡調査(第2波調査)し,短期間の職業キャリアに関する情報を得ることで,主体性要因とキャリアの因果分析が可能となる.この研究成果は,高齢期の健康や勤労観が,格差拡大をもたらす労働市場からの退出のタイミングの差異にどれほど影響力をもつのか実証できる点で重要である.平成24年度の研究目的は,192545年出生男性の中年期までの「転職」と高齢期における「労働市場からの退出」の規定要因を明らかにすることである.なかでも本研究は,男性の職業意識・主観的健康といったミクロ要因が職歴移動に及ぼす影響に注目する.さらにこの目的を達成するために23年度から実施しているインターネット・パネル調査の第2波調査を実施することも24年度の重要なタスクである.はじめに既存のパネル調査データを用いて,当該男性の中年期までの離職に対し,就業途中の仕事満足(job satisfaction)がどのような影響を及ぼすのかを明らかにし投稿論文にまとめた.分析の結果,この世代の男性の仕事満足はその後の離職行動に対し有意な主効果をもたなかった.しかし意識と職業階層の交互作用効果が存在し,中小企業ブルーカラーのみ満足であれば勤続し不満であれば離職する傾向が認められた.よって,この世代の大企業従業員を中心とした「長期雇用」慣行は,高階層を中心とした「不満・満足にかかわらず勤続する」というミクロレベルで特徴的な働き方の結果であることが新たに示された.男性有職者の後期キャリアとくに「労働市場からの退出」は生活保障や世帯の支出・家族の支援などそれまでのキャリアと比べ影響要因が非常に多く複雑であることが知られている.そこで複雑な後期キャリアを把握すべく,前年度から「60代有職男性の意識とキャリアに関するインターネット・パネル調査」を実施している.24年度は前年度の第1波で回答を得た700名に対し追跡調査(第2波)を実施した.第2波の回収率は約85%であった.これにより1年間のキャリアの変化に対する社会保障要因・家族要因そして職業意識・主観的健康といったミクロ要因の影響を明らかにすることができる.このようなインターネット・パネル調査は実施事例が少ないため,職歴移動研究の領域に方法的な意義をもつ.パネル調査データを用い,ミクロな個人の職業観が職歴移動に及ぼす影響を測定する計量分析の枠組みを紹介した投稿論文の掲載が決まった.

また,当該コーホートの後期キャリアに対しこの枠組みを応用するためのインターネット・パネル調査の第1波調査を実施できた.以上より,研究はおおむね順調に進展していると言えるだろう.今後は、後期キャリアにおける健康や職業観が及ぼす影響を測定するための,インターネット・パネル調査の第2波調査を実施する.また,後期キャリアにおけるグローバル化や雇用維持政策の影響を測定するコーホート比較による計量分析の研究成果を,学会で発表し論文投稿する.研究計画の大きな変更はない.
組換え中間体“Holliday構造"を切断するエンドヌクレアーゼRuvCの解析

大腸菌ruvC遺伝子は、遺伝学的な解析から、相同的組換えの後期過程に関与することが示唆されていた。我々は、精製したタンパク質を用いて、RuvCタンパク質が相同的組換えの中間体と考えられているHolliday構造を特異的に切断するエンドヌクレアーゼであることを証明している。本研究期間においては、RuvCエンドヌクレアーゼの生化学的性質についてより詳しく解析し、以下のような知見を得た。1、合成オリゴヌレオチドを用いて作成した十字型DNAはHolliday構造のアナログである。RuvCのDNA結合能は、通常の2重鎖DNAよりも合成十字型DNAに対するアフィニティーの方がより高い。2、RuvCのDNA結合能は、Mg^<++>に有無に影響されないが、切断反応には必須である。3、RuvCは、Holliday構造の交差点を中心にして全く点対称な位置で切幡する。4、合成オリゴヌクレオチドで作製した十字型DNAのみならずY字型DNAもRuvは切断する。このとき、対称な位置にあるDNA同志に相同性が必要である。このことは、Holliday junction(Holliday構造の交差点)の位置の移動(branch migration)の可能な構造が、RuvCによる切断に必要なことを示唆している。また、RuvCタンパク質と同じように、組換え後期過程に関与すると考えられていたRuvA、RuvBタンパク質についてもin vitroの実験で、組換え中間体におけるHolliday Junctionのbranch migrationを促進するという証拠を得た。これらのことから、組換え素過程において、次のようなモデルを提唱した。DNAに2重鎖切断などが生じた場合、プロセッシングにより単鎖DNAが形成される。RecAタンパク質がこの単鎖DNAに結合し、無傷の2重鎖DNAとの相同性を検索し、ヘテロ2重鎖を形成する(Holliday構造の形成)。形成されたHolliday junctionにRuvAB複合体が作用し、brance migrationを促進して組換え領域を拡大する。適当なところまでbranch migrationが進んだときRuvCがHolliday構造を切断解消する。このとき生じたニックはDNAリガーゼでシールされて組換え体が生じる。今後このモデルをより確かのものとするために、RecA、RuvAB、RuvC3種のタンパク質の機能のスウィチングについて解明されなければならないと思われる。
星雲ガスの集積に伴う星間塵の熱変成作用

原始太陽系の星雲ガスとダストとの相互作用を調べるために,衝撃波管を用いた流体力学的実験を行った.昨年度は衝撃波管を設計・製作し,その装置を用いて多孔質ダストの抵抗計数やその変形について詳しく調べた.本年度は低温下での揮発性物質の摩擦加熱・蒸発を調べるため衝撃波管の改良を行い,実験を実施した。揮発性物質の試料にはドライアイスの薄膜(>1μm)を用いた.その薄膜は,液体窒素により冷却したクライオスタット(温度-150-170°C)上のアルミ板に作成した.この薄膜に高速の気流(アルゴンガス)を衝突させ,蒸発量を求めた.衝突気流の速度は9001000m/sであり,その圧力は6000Paであった.蒸発したドライアイス量の測定は波長2.7μmでの赤外発光強度を観測することにより行った.検出器はPbSe(立ち上がり50μs以下)であり,半値幅0.1μmのバンドパスフィルターを用いて分光を行った.ドライアイスの薄膜は高速気流がぶつかるとその表面で摩擦熱が発生し,その熱により蒸発が起こると思われる.確かに実験の結果ドライアイスの蒸発によると思われる赤外発光を観測することができた.そしてこの観測された赤外発光強度から薄膜表面での気流衝突による上昇温度を見積もると8K以下となった.この表面温度の上昇はアルミ板衝突によるアルゴンガスの温度上昇(4000K)と較べると遙かに小さいことがわかる.ドライアイスを蒸発させる熱源としては,摩擦熱・衝突ガスからの熱伝達(輻射・伝導・対流)があるが,それらの熱はドライアイスの潜熱として消費され,ほとんどその表面温度を上げないことを示している.二年間の研究により星間塵と星雲ガスの相互作用を調べるための装置開発と実験技術との蓄積を行うことができた.またこの衝撃波管を用いた実験における技術的課題や可能性も明らかになった.原始太陽系の星雲ガスとダストとの相互作用を調べるために、衝撃波管を用いた流体力学実験を行った。ダストは星雲ガス中で衝突合体を繰り返して空隙率の高い微粒子の集合体に成長していくが、その運動は星雲ガスの抵抗により制御されている。そこで、ダストのモデルとして脱脂綿を用いた実験を行い、様々なバルク密度やサイズを持つ脱脂綿の変形モードの観測と抵抗係数の測定を行った。超音速気流の発生には全長1.3mの矩形管からなる標準型衝撃波管を用いた。この装置により、低圧部の空気にマッハ7までの衝撃波を発生することができる。試料には、星雲ダストの高い空隙率や個々の粒子同士の絡み合いを考慮して脱脂綿を用いた。この脱脂綿を3種類の直径(8,16,30mm)を持つ球に整形して、それぞれの質量を5200mgの間で変化させた。この球形試料を衝撃波管に吊し、高速気流中での運動をイメージコンバータ-カメラで観察した。撮影速度は5万駒毎秒である。撮影した画像から試料の重心運動や全体の変形の様子を解析して、その時受けたガス抵抗力や変形のモードを求めた。試料は高速気流を受けるといったんは流れ方向に縮み、その後同じ方向に引き延ばされる。この圧縮変形が引っ張り変形に転ずるまでの時間は、試料サイズが小さいと短く(Φ=8mm,80μs),サイズが大きいと長くなる(Φ=30mm,200μs)。一方、抵抗係数は、試料サイズが16,30mmの時、密度の増加とともに0.2から0.7と大きくなる。また、サイズが8mmと小さい時は0.1から0.2と密度が大きくなっても変化しない。このようなサイズによる抵抗係数の違いは、先に述べた試料変形の仕方に関係していると思われる。揮発性物質の試料にはドライアイスの薄膜(>1μm)を用いた.その薄膜は,液体窒素により冷却したクライオスタット(温度-150-170°C)上のアルミ板に作成した.この薄膜に高速の気流(アルゴンガス)を衝突させ,蒸発量を求めた.衝突気流の速度は9001000m/sであり,その圧力は6000Paであった.蒸発したドライアイス量の測定は波長2.7μmでの赤外発光強度を観測することにより行った.検出器はPbSe(立ち上がり50μs以下)であり,半値幅0.1μmのバンドパスフィルターを用いて分光を行った.ドライアイスの薄膜は高速気流がぶつかるとその表面で摩擦熱が発生し,その熱により蒸発が起こると思われる.確かに実験の結果ドライアイスの蒸発によると思われる赤外発光を観測することができた.そしてこの観測された赤外発光強度から薄膜表面での気流衝突による上昇温度を見積もると8K以下となった.この表面温度の上昇はアルミ板衝突によるアルゴンガスの温度上昇(4000K)と較べると遙かに小さいことがわかる.

ドライアイスを蒸発させる熱源としては,摩擦熱・衝突ガスからの熱伝達(輻射・伝導・対流)があるが,それらの熱はドライアイスの潜熱として消費され,ほとんどその表面温度を上げないことを示している.二年間の研究により星間塵と星雲ガスの相互作用を調べるための装置開発と実験技術との蓄積を行うことができた.またこの衝撃波管を用いた実験における技術的課題や可能性も明らかになった.
タウオパチー患者脳におけるタウの生化学的解析と神経変性機構に関する研究

アルツハイマー病(AD)の病理学的特徴の一つである神経原線維変化は、高度にリン酸化された微小管結合タンパク質タウが線維を形成して細胞内に蓄積したものであり、神経細胞死との密接な関係が注目されている。線維化し蓄積したタウそのもの、もしくは線維化の前段階で生じるオリゴマーが神経細胞毒性を発揮し、変性を導くものと想定されているが、タウの線維形成機構には不明の点が多く、オリゴマーの存在も実証されていない。本研究では、様々なタウオパチー患者剖検脳に蓄積したタウの生化学的解析を行うとともに、リコンビナントタウの線維形成過程をin vitroで解析する実験系を構築し、タウの線維化、蓄積の分子機構を検討した。また、in vitroのタウの線維形成モデルを用いて、タウの線維化を阻害する低分子化合物の探索とその阻害機構の解析を行った。その結果、私は次の点を明らかにした。(1)トリプシン耐性を示すタウ線維コアの構造は疾患によって異なり、そのパターンはタウ線維の微細形態と関係がある。コアの違いの要因の一つは線維を構成するアイソフォームにある。(2)タウの変異及び高度のリン酸化はタウの線維形成を促進するが、タウ分子間のジスルフィド結合は線維形成速度に影響を与えない。線維形成過程で生じるオリゴマータウは特定の形態を示さないが、タウ線維に類似したプロテアーゼ耐性を獲得している。(3)ポリフェノール、ポルフィリン及びフェノチアジン骨格を持ついくつかの化合物はβアミロイドとタウの線維化を阻害し、その阻害機構にはオリゴマータウの安定化が関与している。βアミロイドとタウの線維形成阻害作用を合わせ持つ化合物は、老人斑と神経原線維変化の形成を同時に抑制することが期待され、ADの予防や治療に有用と考えられる。今後、in vitro系で見出した化合物の有用性について、in vitroレベルでの検討を進めたい。神経原線維変化の構成成分であるタウは、過剰にリン酸化されてPHF、SFといった線維構造をとり脳内に蓄積している。タウの蓄積を伴う疾患はタウオパチーと総称され、ADを始めとしてPick病、PSP、CBDなど数多くの疾患が存在する。また、FTDP-17におけるタウ遺伝子の変異が発見されたことによりタウの異常によって神経細胞死が引き起こされることが明らかとなった。いずれのタウオパチー患者脳にもリン酸化され線維構造をとったタウが蓄積しているため、筆者はタウの線維形成機構に着目して研究を進めている。現在までにin vitroにおけるタウの線維化実験で、タウの線維形成には高濃度のタウ、ポリアニオンの存在(ヘパリン、硫酸グリコサミノグリカンなど)、線維の核となるseedが必要であることがわかっている。我々は作製した線維の生化学的性質を調べることで、seedを添加し作製した線維がヘパリンを添加して作製した線維よりも、in vivoの線維に近い性質を有していることを明らかにした。また、変異タウ、リン酸化タウを線維化し、定量を行うことでその線維形成機構を解析した。その結果、タウの変異は線維形成を促進することを明らかにした。そしてタウはリン酸化される程度と部位によって、線維形成が促進あるいは抑制されることを明らかにした。近年、タウ蓄積の伴わない前頭側頭型痴呆患者において、可溶性のタウがADなどの他の神経変性疾患と比べて特異的に減少しており、新たなタウオパチーとして報告された。そこでこの疾患を含め、数多くの神経変性疾患患者の剖検脳を解析した。その結果、可溶性タウの減少はこの疾患に特異的な現象ではなく、神経変性の激しい症例で認められ、可溶性タウだけではなく微少管系タンパク(チューブリン、MAP5など)も減少していることを明らかにした。また神経変性が軽い症例については可溶性タウは比較的保存されていた。

その結果、可溶性タウの減少はこの疾患に特異的な現象ではなく、神経変性の激しい症例で認められ、可溶性タウだけではなく微小管系タンパク(チューブリン、MAP5など)も減少していることを明らかにした。また神経変性が軽い症例については可溶性タウは比較的保存されていた。アルツハイマー病(AD)の病理学的特徴の一つである神経原線維変化は、高度にリン酸化された微小管結合タンパク質タウが線維を形成して細胞内に蓄積したものであり、神経細胞死との密接な関係が注目されている。線維化し蓄積したタウそのもの、もしくは線維化の前段階で生じるオリゴマーが神経細胞毒性を発揮し、変性を導くものと想定されているが、タウの線維形成機構には不明の点が多く、オリゴマーの存在も実証されていない。本研究では、様々なタウオパチー患者剖検脳に蓄積したタウの生化学的解析を行うとともに、リコンビナントタウの線維形成過程をin vitroで解析する実験系を構築し、タウの線維化、蓄積の分子機構を検討した。また、in vitroのタウの線維形成モデルを用いて、タウの線維化を阻害する低分子化合物の探索とその阻害機構の解析を行った。その結果、私は次の点を明らかにした。(1)トリプシン耐性を示すタウ線維コアの構造は疾患によって異なり、そのパターンはタウ線維の微細形態と関係がある。コアの違いの要因の一つは線維を構成するアイソフォームにある。(2)タウの変異及び高度のリン酸化はタウの線維形成を促進するが、タウ分子間のジスルフィド結合は線維形成速度に影響を与えない。線維形成過程で生じるオリゴマータウは特定の形態を示さないが、タウ線維に類似したプロテアーゼ耐性を獲得している。(3)ポリフェノール、ポルフィリン及びフェノチアジン骨格を持ついくつかの化合物はβアミロイドとタウの線維化を阻害し、その阻害機構にはオリゴマータウの安定化が関与している。βアミロイドとタウの線維形成阻害作用を合わせ持つ化合物は、老人斑と神経原線維変化の形成を同時に抑制することが期待され、ADの予防や治療に有用と考えられる。今後、in vitro系で見出した化合物の有用性について、in vitroレベルでの検討を進めたい。
倭寇小説、倭寇戯曲の研究

研究課題「倭寇小説、倭寇戯曲の研究」に関して、平成29年度においては以下のような内容の研究を実施し、また実績をあげた。1、国内で閲覧可能の中国戯曲作品リスト(主に古典戯曲に関する)を通覧し、比較検討する作業を繰り返すとともに、できる限り作品のストーリー、特徴的トピック、歴史的事実との距離等について考察を加え、中国古典戯曲における倭寇戯曲作品の数量的、内容的全体像の把握を進めた。その結果、想像以上に多くの作品の存在を知ることができた(ただし、すでに佚書となってしまったものもまた多い)とともに、特定の人物(王翠翹、胡宗憲、厳嵩、厳世蕃、徐海、王(汪)直、関白平秀吉......)、やシチュエーション(中国側の政治腐敗と倭寇への内応、日本国家の侵略行為としての倭寇、妖術・異術を駆使する倭寇......)がそれらを支えていることが了解された。2、北京大学図書館、北京図書館、上海図書館等の海外機関に赴き、国内では閲覧不可能な地方戯曲資料を利用して、古典戯曲作品以外の倭寇戯曲作品についてリスト化へ向けての基礎作業を行うとともに、そのテキスの収集に努めた。3、これまでに実施し、また研究成果として公表してきた倭寇小説研究の充実を図るため、改めて白話小説、文言小説作品を対象に資料の発掘に努めるとともに、次年度以降の作品分析のための分析基軸を確認した。4、1の作業に応じて初稿の形ではあるが明清倭寇戯曲目録を作成し、次年度以降の具体的な作品分析を中心とする研究実施の基礎固めをおこなった。昨年度に所属する岡山大学社会文化科学研究科の副研究科長(入試、研究、国際交流担当)に就任したため、当初確保することを想定していた本研究課題に取り組むための時間に大きな制限さが生じた。そのため海外機関での資料調査はほぼ計画通り進めることができたものの、国内機関での調査に十分な時間を割くことができなかった。昨年度実施できなかった国内機関における倭寇戯曲、倭寇小説、倭寇伝説に関する資料調査を年度前半には実施し、それを踏まえてすでに一部完成した倭寇戯曲リストを拡充するとともにに、倭寇戯曲テキストの収集とその分析を進める。また、昨年度研究上の交流を持つに至った韓国の研究者の協力を得て、朝鮮半島における文学への倭寇の影響に関する研究状況を確認するとともに、テキストの発掘、収集に努める。次年度使用額の8,637円は、昨年度実施できなかった山口大学附属図書館での資料調査費(旅費)分に相当する。本年度は次年度使用額を加えた助成金をその山口大学附属図書館に加え京都大学附属図書館および韓国での資料調査旅費と資料購入費に当てることを予定している。また、データ収集、処理用の端末機材の購入も考えている。
神経幹細胞におけるポリコーム依存的運命決定のメカニズムの解析

大脳皮質の発生において、神経系前駆細胞から発生時期依存的に特定の機能を持ったニューロンやグリア細胞が産生される。本研究ではその制御メカニズムについて明らかにすることを目的とした。遺伝子改変マウス等を用いた研究の結果、Polycombが「幹細胞の時間を計り」、産生される細胞の運命転換を司る機構に、神経幹細胞の運命転換の複数のステップで共通に貢献している可能性を明らかにした。神経系前駆細胞(神経幹細胞)は多分化能を有するが、その分化方向は発生過程の時期によって大きく変化する。大脳新皮質において神経系前駆細胞は、時間を追って順次各種のニューロン(6層→5層→4層→2/3層)を産生し、その後にアストロサイトなどのグリア細胞を産生する。この分化運命の変化のタイミングは、各種ニューロンやグリアの数の決定に重要である。運命変化の制御において、幹細胞は細胞自律的な要素により発生における「時間」を計っていると考えられているが、そのメカニズムについては多くが明らかになっていない。そこでPolycombがニューロン分化期内でのいかなる神経系前駆細胞の運命転換に関与するかを調べ、そのメカニズムを検討した。5層のSubcortical neuronの産生には転写因子Fezf2の発現が必要十分である事が知られており、Fezf2は5層ニューロン産生期が終わるとともに発現が低下する。そこで大脳発生前期から後期に渡ってそれぞれのステージにおける大脳皮質神経系前駆細胞を採取し、fezf2プロモーターにおけるヒストンH3 Lys27トリメチル化量の変化を調べた。その結果、fezf2プロモーターにおけるヒストンH3 Lys27トリメチル化量は発生時期依存的に増加していた。Polycomb群タンパク質であるRing1BあるいはEzh2のKOマウス由来神経幹細胞におけるFezf2の発現を調べたところ、野生型ではfezf2の発現が低下する5層ニューロン産生期以降においてもKOマウス由来神経幹細胞においてはfezf2の発現が維持されていた。以上の結果から、Polycombは発生時期依存的に働き、5層ニューロン産生期の終了に重要な役割を果たしていると考えられる。これまでに、大脳皮質神経幹細胞におけるNeurogenin(Ngn)やFezf2などのPolycombによる制御は時期依存的に変化することを明らかにして来た。そこで、どのような機構でこのような時期依存的な変化が起こるのかを明らかにし、発生の「時間」の情報がどのように遺伝子発現制御へ翻訳されるのか、分子的に明らかにすることを目的として実験を行った。そのために、ngn,Fezf2以外のPolycombによって発生時期依存的に発現が抑制される遺伝子の同定、及び発生時期依存的に発現が変化するPolycomb関連遺伝子の同定を試みた。胎生11,14,16,19日目のマウス胎児大脳皮質よりそれぞれ大脳皮質脳室帯を単離し、それぞれのサンプルからcDNAを作成した。また同時にそれぞれのサンプルを用いpolycombによって触媒されるHistoneH3K27triMe修飾について、どの遺伝子座にこの修飾が見られるかを明らかにするため、ChIPアッセイを行った。cDNAプロファイルの同定についてはDNA microarrayを用いて、HistoneH3K27triMe化修飾部位の同定についてはChIP-sequence法を用いて行った。その結果大脳皮質神経幹細胞の発生時期依存的運命制御を司るいくつかの候補遺伝子を同定する事ができた。この候補遺伝子の機能を解析することによって、神経系前駆細胞から産み出される細胞の時期依存的な変化の分子基盤の解明に大きく貢献出来ると考えている。
院内感染菌を対象に質量分析法を応用した菌株間の迅速な相同性解析手法の構築

近年、院内感染はMRSAを始め、腸球菌、緑膿菌、ESBL産生腸内細菌およびカルバペネム系薬耐性腸内細菌など多菌種の微生物が起炎菌となっている。院内感染の確定には同一菌株による蔓延の有無を解析する必要がある。申請者はマトリックス支援レーザー脱イオン化飛行時間質量分析法(以下、MALDI-TOF MSと略す)での波形データを応用し、迅速に菌株間の相同性の違いを鑑別する新しい解析手法の開発に取り組んだ。このMALDI-TOF MS法(MS法)での疫学解析が可能となれば、遺伝子技術で不可能であった菌株の疫学解析にも対応できる。さらに、MS法は分析も短時間で、かつ解析費用も安価なため、院内感染の疑わしい菌株が出現した場合には極めて有用な手法となる。その結果、MRSAに関しては極めて高い相同性の一致率が得られた。緑膿菌に関しては一部、解析手法により乖離の成績が認められたが、全体的には良好な相同性の一致率が認められた。2015年はMRSAおよび緑膿菌の解析菌株を増やし、詳細な疫学解析を実施する予定である。その結果、MRSAではMALDI TOF-MS解析、PFGE解析、POT解析、REP-PCR解析共に良好な成績が認められ、一部の菌株では薬剤感受性パターンとの相関性も確認された。緑膿菌に関してはClinPro Tools解析、PFGE解析、POT解析REP-PCR法では相関が認められたが、MALDI TOF-MS解析との間では乖離が認められた。Clostridium difficileに関してはPCR-ribotypingとClinPro Tools解析を実施したが、クラスター分類は不可能であった。今後、さらなる解析を実施する必要が求められた。1、MALDI-TOF MSでの波形データを応用した解析ソフトの開発:初期段階でのMALDI-TOF MSの波形データ解析には、ClinPro Tools (Bruker Daltonik:Germany)を予定していた。ただし、このClinPro ToolsはMALDI-TOF MS装置に含まれているソフトではないこと、さらに波形データの収得には重複測定が必要になる問題点があった。そこで、菌種同定に利用されるflexAnalysis softwareを使用し、かつ単回測定で解析が可能なソフトを独自開発した。このソフトの開発により、MALDI Biotyper (Bruker Daltonik:Germany)を導入し菌種同定を実施されている施設はすべて疫学解析が可能となった。可能となったため、比較対象の解析法を3種類に増やした。なお、このDiversiLabシステムはPFGE法およびPOT法に比べ疫学解析できる菌種の幅は広く、かつ鮮明な泳動像とシステム化された解析手法のため、世界的にも利用されている特徴がある。ただし、このREP-PCR法は試薬コストが極めて高額なために当初予定していた菌株数を減らす必要が生じた。3、基礎的検討を実施したMRSAおよび緑膿菌に関する解析データ比較:MRSAに関しては極めて高い相同性の一致率が得られた。臨床微生物学1、MALDI-TOF MSでの波形データを応用した解析ソフトの改良:現在、flexAnalysis softwareを使用して独自開発した開発ソフトの更なる充実化を目指す。現状は菌株間での共通ピーク波形を解析者が除去し、異なる波形データでの疫学解析を実施してきた。そこで、ソフトの改良としては自動的に共有のピークを除去し、さらに異なる波形データを基準に自動的に系統樹解析ができるようする。このソフトが開発されれば、解析は格段に向上し、更に多菌種の疫学解析に結びつく。問題点としては菌株間での共通ピークを除去する時の設定値を検討する必要がある。2、MRSAおよび緑膿菌を対象とした追加菌株間での検証法の追加:DiversiLabシステムはPFGE法およびPOT法に比べ疫学解析できる菌種の幅は広く、かつ鮮明な泳動像とシステム化された解析手法のため、世界的にも利用されている特徴が、試薬コストが極めて高額なために基礎的な菌株数を減らした。追加検討では予算の範囲内で菌株を追加し、さらに表現系による疫学解析結果との相同性についても検討を予定している。3、現在、院内感染として注目されているClostridium difficileへの応用:C. difficileは抗菌薬下痢症の起炎菌であり、接触感染による院内感染として極めて早期の対策を必要とする細菌である。そこで、MRSAおよび緑膿菌以外の代表的な菌種として解析をREP-PCR法によるDiversiLabシステムでの成績を基準に相同性を検証する。この疫学解析の結果、高い相同性の一致率が得られた場合には、他菌種への応用の可能性も更に高くなることが予想される。試薬の定価と納入価さらには消費税を考慮し、次年度予算の前倒しを防ぐ目的で試薬・消耗品の購入を抑えて処理したため本年度の試薬購入費として使用する
肺腺癌浸潤における宿主由来線維芽細胞の役割に関する研究

外科切除された肺腺癌における主病変部におけるNecl-5の発現について、免疫組織化学染色で調べ、68%で強い発現を確認した。そして本蛋白質の発現はリンパ節転移の有無、病理病期、BAC率と有意に相関し、発現例では有意に予後不良であった。これらの結果から、同蛋白質が原発性肺癌の臨床において重要な役割を持つことが明白となり、癌治療、とくに癌浸潤・転移コントロールにおける分子標的になり得ることが示された。背景:Necl-5は細胞の接着、運動、増殖の制御に関係するimmunoglobulin(lg)-like moleculeで、様々なタイプの癌細胞でupregulateしていることが報告されている。しかし肺癌においてその発現を詳しく検討した報告はない。目的:原発性肺腺癌におけるNecl-5の発現を観察し、その臨床的意義について検討した。方法:当科で手術された原発性肺腺癌症例63例について、抗Necl-5抗体を用いて切除標本の免疫染色を行い光学顕微鏡にてNecl-5の発現の観察を行った。さらに癌細胞におけるNecl-5の発現と症例の臨床病理的特徴および予後との関係につき解析した。結果:腫瘍の辺縁部の間質、癌細胞が浸潤した部分の間質が強く染色されているのが観察され、癌が浸潤していく部分の間質でNecl-5がupregulateしていることが示唆された。すべての標本で腫瘍の間質部分では中等度から強度の染色が観察された。癌細胞自体でNecl-5が強く発現しているものが43例、癌細胞が染色されないまたは軽度にしか染色されなかったものが20例であった。癌細胞のNecl-5の発現はN因子(p=0.0398)、TNMstage(p=0.0070)、BAC率(p0.023)と有意差を持って関連が認められ、多変量解析で予後(p=0.0305)に影響を与える独立した要因であった。癌細胞でNecl-5が強く発現していた患者の無再発生存率は有意差(p=0.0004)を持って不良であった。浸潤傾向を示さない細気管支肺胞上皮癌(BAC)と間質への浸潤部位(invasive component)を認めるmixed subtypeの腺癌の違いには、宿主由来stromal cellの働きが関わると考えられる。我々は独自に開発したアッセイ法および切除標本を用いて、BAC cell浸潤における癌-宿主相互作用の役割を検討した。【方法】我々が開発したcollagen matrixを重層した培地DL-CGHを用い、A549(BAC cell)、WI-38(lung fibroblast)を封入し、細胞運動を観察した。また肺腺癌切除127例の標本を用いてinvasive componentでのMMPs、接着分子群の発現を検討した。【結果】A549単独での浸潤は微弱であった。これに対し、蛍光標識したA549とWI-38を混合したところ、まずWI-38が樹枝状に進展して行き、それをつたうようにA549が拡がる様子(amoeba-like movement)が観察された。接着分子群の役割を調べたるためRNAiを行ったところE-cadherinの抑制により浸潤は増強した。切除標本における発現の検討では、invasive frontでのNectin3、Necl-5の発現が認められ、それらの発現は予後に強く相関していた。【考察】我々のアッセイにより腫瘍と宿主が形成する微小環境を実験的に再現することができ、癌浸潤におけるその意義が示された。また浸潤部位における接着分子の発現が癌-宿主相互作用に強く関連し予後に直結し、分子標的や分子マーカーとして臨床的意義を持つ可能性が示唆された。背景:Necl-5は細胞の接着、運動、増殖の制御に関係するimmunoglobulin (Ig)-like moleculeで、様々なタイプの癌細胞でupregulateしていることが報告されている。

癌細胞のNecl-5の発現はN因子(p=0.0398)、TNMstage(p=0.0070)、BAC率(p 0.023)と有意差を持って関連が認められ、多変量解析で予後(p=0.0305)に影響を与える独立した要因であった。癌細胞でNecl-5が強く発現していた患者の無再発生存率は有意差(p=0.0004)を持って不良であった。