hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
変異理論の新展開と日本語変異データの多角的分析

実時間調査班は、岡崎敬語調査関連で品詞比率分析を論文化し、実時間調査の諸問題点について口頭発表を行った。札幌山鼻地区における共通語化調査では、生涯変化は観察し難いとこと、言語イデオロギーが影響力を持つことなどが判明した。混合モデル分析班は、日本在住英語母語話者同士の自然談話から、標準アクセントの使用は話者の日本語能力の自己評価と英語母語英語教師とのネットワークと相関があることを示した。言語理論班は、連濁の数量的条件を明らかにした。社会音声学班は、鹿児島方言二型アクセントの音調交替現象について起伏式音調への対応は脱方言化現象,平板式音調への対応は脱標準語化現象であることを示した。太田は鹿児島方言若年層話者のアクセントの変異とそれに関連する社会的要因の特定を試み、いくつかの社会的要因が影響を与えていると判断できる結果を得た。その内容については,一部は8月のUrban Language Seminar 11 (広島)で発表し、さらに今年8月にオランダで開かれるMETHODS15において発表予定である。佐野は日本語の音韻現象の中で借用語の有声促音化、連濁、および動詞活用の中で可能形の変化に注目して計画を実施した。コーパスとオンライン実験によりこれらのデータを収集し、さらに混合効果モデルをはじめとする統計手法を用いてデータ分析を行った結果、従来の方法論に従う分析より詳細な知見を得ることができた。高野は札幌方言アクセントの経年的変化(共通語化)について、小野(1993)を先行調査として、同一の調査票を用いて同一被験者を再調査する実時間パネル調査を札幌市山鼻地区で行った。研究成果の一部を北海道方言研究会例会(2014年2月16日)で発表した。平野は、日本に一定期間在住した英語母語話者の日本語へのコードスイッチングを検証するため、英語母語話者同士の会話中に観察される英語で表現可能な日本語を抽出し、それらの使用頻度と被験者の社会的ネットワークの関連を考察した。統計分析により、「英語で表現可能な日本語」の使用頻度と被験者の英語教師とのネットワーク強度に強い正の相関関係が見られた。松田は岡崎敬語調査パネルデータ分析のワークショップを日本語学会2013年度春季大会で開催し、全般的結果を発表した。また回答発話データの名詞、代名詞、動詞の相対頻度分析を行い、そこに加齢効果はないが性差効果が見られ、それが両性の敬語使用の差によることを8月にドイツのマックスプランク研究所で開催されたワークショップで発表し、『国立国語研究所論集』第7号に掲載予定である。実時間調査では、昨年度に岡崎敬語調査の発話データを用いて行った名詞・代名詞・動詞比率分析に、詳細な統計分析を施した上で論文として発表した。次に実時間調査独自の方法論上の諸問題点についてまとめ、MethodsXVにおいて口頭発表した。さらに日英語変異理論研究史の対比研究を行い、論文として発表した。また、札幌市方言名詞アクセントの共通語化について、実時間パネル調査データの多変量解析結果を論文にまとめた。四半世紀程度では生涯変化は観察されないこと、生涯変化を示すごく少数の話者については話者の社会生活や言語意識に特殊性が見られること、内的要因として語彙特性が重要であること、要因間の力関係には四半世紀を経てもほとんど変動がないことなどを議論した。混合モデル分析班では、日本在住英語母語話者同士による英語自然談話コーパスに観察される日本語の発音方法について社会的属性だけでは説明できない変化要因を探った。統計分析からは、日本語的発音使用率は話者が仕事以外で日本人と付き合う頻度、その際の使用言語、仕事の満足度と強い相関関係のあることが判明した。言語理論的側面では、連濁において無声阻害音が特定環境で有声化する現象に必異原理が影響を与えていると仮定し調査した。「日本語話し言葉コーパス」の自然発話データの中から対象となる複合語を抽出、無声阻害音が無声音・有声音のいずれで発話されているかを調べ、条件を数量的に明らかにした。社会音声学に関しては、鹿児島方言の二型アクセントの音調交替現象について,多変量解析による結果をまとめた。解析にはテレビ番組の視聴に関する変数,子ども時代のアニメ視聴に関する変数,標準語使用能力を示す変数を使った。起伏式音調への対応は「脱方言化」現象,平板式音調への対応は「脱標準語化」現象である可能性を示唆した。佐野は、「連濁」と「外来語有声促音の無声化」(例,ドッグ=>ドック)を対象に「日本語話し言葉コーパス」を用いて数量的分析を行い,混合効果モデルによりこれらを促進・抑制する要因,及び相互作用を明らかにした。太田は鹿児島方言若年層話者のアクセント型の交代現象について,言語的要因,話者要因,メディア要因などを独立変数,革新形の生起を従属変数として統計モデルにより説明を試みた。これらの要因の影響は特に平板式音調において顕著であることが確認された。平野は日本在住英語母語話者同士による自然談話の英語コーパスに観察される日本語に焦点を当て、日本語の標準アクセントの使用率を話者の社会的ネットワークと言語生活の側面から考察した。統計分析の結果、標準アクセントの使用は話者の日本語能力の自己評価、英語母語話者英語教師とのネットワークと強い相関関係のあることが判明した。高野はこれまで行ってきた札幌市中央区山鼻地区における札幌市方言名詞アクセントの共通語化に関する実時間パネル調査を完了した。

約四半世紀前に行われた前回調査の結果と照らし合わせ、各被験者の生涯変化の動態を分析したところ、ほとんどの被験者において生涯変化は観察し難いという結論に達した。その後、言語内的要因だけでなく、社会的要因に焦点を当て、混合効果モデルを含めたRbrulによる当該変異の分析を行った結果、各話者の持つ「言語イデオロギー」が独立変数として影響力を持つことが判明した。松田は国会会議録を用いた日本語学、政治学などの学際的研究の可能性について検討した。さらに、大正昭和戦前期の演説・講演録音における漢語の読みの変異についての分析を行い、「軍人読み」の可能性などについて論じた。実時間調査班は、岡崎敬語調査関連で品詞比率分析を論文化し、実時間調査の諸問題点について口頭発表を行った。札幌山鼻地区における共通語化調査では、生涯変化は観察し難いとこと、言語イデオロギーが影響力を持つことなどが判明した。混合モデル分析班は、日本在住英語母語話者同士の自然談話から、標準アクセントの使用は話者の日本語能力の自己評価と英語母語英語教師とのネットワークと相関があることを示した。言語理論班は、連濁の数量的条件を明らかにした。社会音声学班は、鹿児島方言二型アクセントの音調交替現象について起伏式音調への対応は脱方言化現象,平板式音調への対応は脱標準語化現象であることを示した。本科研課題の最重要課題であった「最新の社会言語理論による日本語言語変異分析、およびその海外発信」というテーマに照らし合わせると、2014年度は各自が各担当分野について口頭ないし論文という形で国内外において発信を行ってきている。まずこの点からして昨年度の活動内容には及第点を出せると判断できる。論文数は15本、口頭発表数は10本に達し、うち論文は8本が、口頭発表は9本が英語によるものであり、海外への発信も十分である。昨年度も2回の全体会合(2014年9月15日17日に札幌、2014年12月18日20日に鹿児島で開催)で行った。とりわけ2回目の会合では、研究会に併せてRbrulのワークショップも開催し、非常に充実した会合となった。。以上の事情を総合的に判断すると、2014年度の達成度は、当初予想していたものを上回るものと考えても差し支えないものと判断した。27年度が最終年度であるため、記入しない。社会言語学前回も書いたことであるが、ともかく「論文」という形でのアウトプットを一つでも多く生産すること、これが今後の研究の推進方策の中心である。口頭発表がなされたものは、国内外を問わず、なんであれともかく印刷媒体への発信を心がけることにしたい。このような盛んな論文生産体制を強化するためにも、年数回の全体会合は是非開催し続け、できるかぎり討議への時間を割きたい。全体会合では、他科研プロジェクトとの共同開催を試みており、研究者間の交流も深めている。また、前年度に好評であったワークショップも、再び開催することを試みたい。本科研課題の最重要課題であった「最新の社会言語理論による日本語言語変異分析、およびその海外発信」というテーマに照らし合わせると、2013年度は各自が各担当分野について口頭ないし論文という形で海外において発信を行ってきている。
内耳病態におけるフリーラジカルの関与とその防御因子の臨床応用に関する実験的研究

内耳の恒常性維持や内耳病態にフリーラジカルが関与するか否かを検討し、下記の結果を得た。♯1.アミノ配糖体内耳中毒におけるフリーラジカルの関与アミノ配糖体による内耳薬物中毒にフリーラジカルが関与する可能性を細胞組織学にて証明した。これらはアミノ配糖体の用量依存性であり、発生したフリーラジカルは内耳局所でのスカベンジャーにて消去されている可能性が示唆された。♯2.内耳蝸牛血流調節におけるフリーラジカルの関与蝸牛血流の調節は蝸牛外因子(神経、ホルモン等)にはよらず、蝸牛内に発生する一酸化窒素(NO)によっている可能性を証明した。すなわち、NOは血管条毛細血管内皮より放出され、血管内腔に働いては血小板凝集抑制を、血管外周においては周皮細胞に働き弛緩作用を行い、血管条血流を調節しているものと推定された。この結果は、突発性難聴をはじめ、内耳循環障害がその病態であろうと考えられている疾患治療に大いに役立つものと考える。♯3.蝸牛においては鼓室階に面した膜面に付着するマクロファージが、外来異物に対する防御としてのフリーラジカル発生源の可能性が示唆された。♯1、2 3、4共、新事実であり、♯1.の結果は内耳薬物中毒の軽減に対する治療法に結び付くものと考える。♯2.の結果は非常にreasonableであり、蝸牛血管条血流が局所のautoregulation mechanismでしかもフリーラジカルで調節されていることは非常に興味深い結果と考えられた。♯3、4の結果は内耳には、他臓器同様局所防御機構が存在することを示唆するものであり、これをいかに修飾するかが今後の内耳治療の1つに繋がるものと考える。内耳においてフリーラジカルの発生が起こりうるのか?また起こりうるのならそれらが内耳にどのような作用を及ぼしているのかを検討し下記の様なデータをえた。♯1.アミノ配糖体内耳中毒におけるフリーラジカルの関与アミノ配糖体による内耳薬物中毒のイニシエーションとしてフリーラジカルが関与することを細胞組織学にて証明した。これらはアミノ配糖体の用量依存性であり、内耳局所でのスカベンジャーにて消去されている可能性が示唆された。♯1、♯2 ♯共、新事実であり、♯1.の結果は内耳薬物中毒の軽減に対する治療法に結び付くものと考える。モルモットに120-130dBの強大音響を3時間暴露すると血管条血流の停滞とその後の再灌流が生ずるが,これらの事象にフリーラジカルの出現、消失が随伴しているのが観察された。すなわち、血管条血流の停滞に一致して、血管条辺縁細胞の内リンパ腔側膜面にフリーラジカルが出現し、その後消失するが、血管条血流の再開とともに再び同部の現れていた。

これは他臓器でも報告されている虚血-再灌流により生じたフリーラジカルが臓器障害を起こすように、内耳でも同様の機転で音響による内耳障害が生じている可能性を示すものである。モルモットないカナマイシン投与による内耳障害を惹起させ、内耳障害とフリーラジカルの関係を検討したところ、カナマイシンによる外有毛細胞障害にフリーラジカルが関与していることが判明した。またこのフリーラジカルの外有毛細胞での発生はカナマイシンの内耳移行と密接に関係していた。内耳の恒常性維持には特異的防御機構(免疫機構)発現以前の非特異的防御機構の役割が大事と思われる。内耳は侵入異物に対し即座に対応出来る能力を有するか否かを検討するため、モルモット内耳にK562細胞を接種し、その内耳での動態を経時的に観察した。その結果、循環血流中のNK細胞の内耳への出現は他臓器での出現に比べて遅れることが判明した。この出現の遅れは内耳は感染に対して初期防御機構が弱いことを示すものである。また、内耳に在住するNK細胞はほとんどなく、少数のマクロファージのみが鼓室階膜面に存在することが確認された。この内耳での非特異的防御機構を亢進させるため、モルモット内耳にOK432(ピシバニール)を投与したところ、他臓器同様多数のマクロファージが投与2日目より内耳に出現した。この事実は、内耳が種々のBiological response modifier (BRM)に反応出来る器官であることを示唆しており、今後の内耳感染治療の研究に繋がるものと期待される。♯1.アミノ配糖体内耳中毒におけるフリーラジカルの関与アミノ配糖体による内耳薬物中毒の病因の1つとしてフリーラジカルが関与することを細胞組織学にて証明した。局所投与されたアミノ配糖体は内耳に浸透するにつれその部位でフリーラジカルを発生していたこれらはアミノ配糖体の用量依存性であり、内耳局所でのスカベンジャーにて消去されている可能性が示唆された。♯2.内耳蝸牛血流調節におけるフリーラジカルの関与蝸牛血流の調節の1因子として蝸牛内に発生する一酸化窒素(NO)が関与する可能性を証明した。すなわち、NOは血管条毛細血管内皮より放出され、血管内腔に働いては血小板凝集抑制を、血管外周においては周皮細胞に働き弛緩作用を行い、血管条血流を調節していることが示唆された。この結果は、突発性難聴をはじめ、内耳循環障害がその病態であろうと考えられている疾患治療に大いに役立つものと考える。♯3.モルモット内耳にBiological response modifier(BRM)を接種したところ、局所に他臓器同様、早期からのマクロファージの集積をみた。これは内耳が内耳感染に対し、人為的に感染機構を修飾出来る可能性を有する器官であることを示唆してるものであり、今後の内耳感染治療に寄与する所見である。
同種造血幹細胞移植後の細胞免疫療法における免疫抑制受容体の制御に関する研究

同種造血幹細胞移植後の出血性膀胱炎の原因となるアデノウイルス血清型11の日本人に最も頻度が高いHLAーA*24:02拘束性の新規エピトープを同定し、体内で抗原特異的T細胞の標的として機能していることを示した。T細胞上に発現する共刺激分子のレセプター4-1BBに対する抗体を用いることで、抗原提示細胞を用いずに、簡便に抗原特異的T細胞を樹立できることを明らかにした。また、抑制性受容体PD-1のリガンドであるPD-L1は、CD80/86とともに抗原提示細胞上に発現することで抗原特異的T細胞の誘導において促進的に作用していることを示した。以上の成果は、今後、細胞療法への応用が期待できる。平成25年度に同種造血幹細胞移植を行った10症例において、サイトメガロウイルス(CMV)、エプスタインバールウイルス(EBV)、ヒトヘルペスウイルス-6(HHV-6)の末梢血中ウイルス量をリアルタイムPCRにてモニタリングを行った。また、出血性膀胱炎の原因となるアデノウイルス血清型11(AdV-11)について、出血性膀胱炎を発症した2症例について血液と尿よりウイルス量を定量した。日本人において最も頻度の高いHLA-A24:02拘束性となるエピトープはこれまで同定されていなかったため、その同定を行った。HLA-A24に結合するペプチドをコンピュータープログラムより推定、ペプチドによる末梢血単核球の刺激にて抗原特異的T細胞を誘導した。候補の10ペプチド中、3つのペプチドに反応してインターフェロンガンマを産生するT細胞を樹立できたが、TYFNLGNKFに特異的なT細胞(TYF特異的T細胞)のみAdV-11感染細胞を認識し、インターフェロンガンマを産生したことより、TYFNLGNKFをAdV-11のHLA-A24:02拘束性エピトープと同定し、TYF特異的T細胞を検出するためのテトラマーを作成した。平成26年度に同種造血幹細胞移植を行った16症例でサイトメガロウイルス(CMV)、エプスタインバールウイルス(EBV)、ヒトヘルペスウイルスー6(HHV-6)の末梢血ウイルス量をリアルタイムPCRにてモニタリングを行った。ウイルス抗原特異的細胞傷害性T細胞(CTL)の新たな簡便な誘導方法として、末梢血単核球にエピトープペプチド、IL-2に抗4-1BB抗体を加えることで、強力な抗原提示細胞である樹状細胞に劣らないウイルス抗原特異的CTLを誘導できることを示した。プロフェッショナルな抗原提示細胞である樹状細胞には、正の共刺激分子であるCD80/86とともにPD-L1も高発現しており、T細胞が抗原刺激を受けて抗原特異的CTLが誘導される段階で、抗原提示細胞上のPD-L1がT細胞に対してどのように作用しているかは明らかにされていない。そこで、CD3陽性T細胞をサイトメガロウイルス(CMV) pp65由来ペプチドをパルスした樹状細胞で刺激し、抗PD-L1抗体存在下でCMV-CTLの誘導を行ったところCMV-CTL誘導能が低下した。この結果から、樹状細胞に発現するPD-L1がCTL誘導において促進的に作用している可能性が示唆された。さらに、K562細胞株にHLAクラスI分子及びCD80/86、PD-L1を遺伝子導入した人工抗原提示細胞を作成し、抗原提示細胞上のPD-L1の影響を検討した。CD3陽性T細胞をCMV pp65由来ペプチドパルスした人工抗原提示細胞で刺激したところ、K562+CD80/86+PD-L1を用いた場合に、より多くのCMV-CTLが誘導された。K562細胞にわずかに発現するCD80の影響を排除するために、CRISPR/Cas9システムを用いてCD80の発現をノックアウトした上で、人工抗原提示細胞を用いてCMV-CTLの誘導を行ったところ、K562+PD-L1では誘導されるCMV-CTLは増加せず、K562+CD80/86+PD-L1を用いた場合にのみ有意な増加を認めた。このことから、PD-L1自体はCTL誘導に促進的に働いておらず、CD80/86とともにPD-L1が抗原提示細胞上に発現していることでCMV-CTLの誘導が促進されると考えられた。PD-L1はPD-1だけでなくCD80とも結合し、また、他のレセプターが存在する可能性もあり、PD-L1がCTL誘導を促進しているメカニズムは明らかではなく今後解明すべき課題である。また、K562+CD80/86+PD-L1は、健常人の末梢血より分離したT細胞から、腫瘍抗原であるWT1特異的CTLを誘導することも可能であったことから、腫瘍抗原特異的CTLを用いた細胞療法の開発において有用な人工抗原提示細胞となり得る可能性がある。

以上の成果は、今後、細胞療法への応用が期待できる。同種造血幹細胞移植後のウイルス感染症における抗原特異的T細胞上の免疫抑制受容体の発現と機能の解析を行うために、移植後のウイルス感染のモニタリングおよび単核球と血漿保存が順調に進んでいる。MDSCによる抗原特異的T細胞機能低下にはPD-1/PD-L1が関与していることを示したが、抗原特異的T細胞を活性化させる抗原提示細胞上に発現するPD-L1の役割は詳細に解明されておらず、この点を明らかにすることで、腫瘍の微小環境などでの抗原特異的T細胞疲弊化のメカニズムのさらなる解明に繋がることが期待される。この研究遂行のための新たな作成した人工APCを用いて、今後、検討を進めていく。血液内科学これまでに保存した血漿や単核球を用いて、同種造血幹細胞移植後のウイルス感染や再発における抗原特異的T細胞の免疫抑制受容体発現について解析し、難治性ウイルス感染や再発のバイオマーカーを検討する。また、樹状細胞上のPD-L1がCMV-CTLの誘導を促進している可能性が示されことから、共刺激分子とPD-L1を遺伝子導入した人工APCを用いてPD-L1の新たな役割について詳細に検討していく。さらに、WT1などの腫瘍抗原特異的CTL誘導における効果やPD-L1陽性人工APCで誘導されたCTLの機能解析などを行い、細胞療法への応用について検討していく。平成25年度は、抗原特異的T細胞の免疫抑制受容体の発現と機能および血清中IL-6のバイオマーカーとしての有効性の検討(平成26年度以降も継続)とMDSCの培養方法の確立を計画していた。これまでに移植後のウイルス感染のモニタリングを行うとともに、末梢血単核球と血漿の保存を行っており、今後、抗原特異的T細胞の機能解析やサイトカイン測定のための準備が整ってきている。また、HLA-A24:02拘束性AdV-11エピトープの同定とその抗原特異的T細胞検出のためのテトラマーを作成し、AdV-11感染に関する検討も可能となった。また、末梢血中のMDSCの頻度は少ないため、機能解析は困難であるが、in vitroでの培養方法を確立することができ、今後の抗原特異的T細胞の機能低下への影響についての検討が可能となった。同種造血幹細胞移植後の検体(単核球や血漿)保存は進めているが、T細胞の機能解析やサイトカインなどの測定が予定より少なかったため。同種造血幹細胞移植後のウイルス感染における抗原特異的T細胞の機能低下のメカニズムについて免疫抑制受容体の発現などの検討を行う。また、血漿中IL-6などのサイトカイン測定により、難治性ウイルス感染症に関するバイオマーカーの同定を進める。T細胞表面上の免疫抑制受容体発現調節およびT細胞の機能低下へのMDSCの関与を明らかにする。また、強力な抗原提示能を有する樹状細胞(DC)の表面上には、免疫抑制受容体programmed death-1のリガンドであるPD-L1が高発現していることから、MDSCとDCを比較することでT細胞の機能低下のメカニズムを検討する。これまでの研究によりPD-L1の新たな役割の可能性が示唆されており、PD-L1による腫瘍抗原特異的T細胞の誘導など研究開始時点では予定されていない研究も行う必要があり、それらの研究遂行のための試薬を購入する予定である。
線維化病態における骨髄前駆線維細胞の役割と新規治療薬の効果判定に関する研究

新規抗線維化薬であるピルフェニドン(PFD)が骨髄由来の線維細胞fibrocyteにどの様な作用を有するかを肺線維症モデルマウスを用いて検証した。C57BL/6マウスにブレオマイシン(BLM)を浸透圧ポンプで投与し、PFDを14日間経口投与する予防モデルと,10日目から21日目まで投与する治療モデルを作成した。いずれのモデルでも肺内のfibrocyte (CD45, collagen I陽性細胞と定義)のpool sizeは抑制された。この抑制にはケモカインであるCCL2の抑制とCCL2に対する遊走能の抑制が関与していた。以上の結果は、PFDの新規抗線維化作用の一つと考えられた。特発性肺線維症は呼吸器難病であり、進行性の線維化病態に骨髄前駆細胞(fibrocyte)が関わる可能性が示唆されている。本研究では実験的線維化病態におけるfibrocyteの関わりを解明することにより線維化の細胞資源を解明し、同時に新規治療薬ピルフェニドン(PFD)導入後のfibrocyteの推移、phenotypeの変化を検証することを目的としている。昨年度の検討で、C57BL/6マウスに対するブレオマイシン(BLM)の投与経路として、osmotic pumpを用いることとした。fibrocyteの観察時期の検討では、fibrocyteのマーカーであるCD45とcollagen Iを用いて二重染色を行い、BLM投与14日目に解析することとした。FACSに関しては14日目を選択した。BLMの投与量として100mg/kg、PFDは300mg/kg/dayを14日間とした。本年度は昨年度までのpreliminaryな検討を踏まえて解析を進めた。FACSによる解析では、BLM投与によりCD45陽性、Collagen I陽性のfibrocyteは肺内で増加したが、これらはPFDの投与により減少した。免疫染色を行い定量化したところ、この減少は有意であった。fibrocyteはCCL2, CXCL12, CCL12, CCL21などのCC chemokineにより遊走されることが知られているが、肺内におけるこれらのchemokineをELISAで測定した。BLM投与後CCL2は増加し、PFDはこれを有意に抑制した。CXCL12では統計的に有意には至らないものの同様の傾向が見られたが、CCL12, CCL21では明らかではなかった。CCL2の免疫染色ではBLM投与により、肺胞上皮細胞・肺胞マクロファージ・細気管支上皮に発現の亢進がみられたが、これらはPFDで抑制された。本研究では実験的線維化病態におけるfibrocyteの関わりを解明することにより線維化の細胞資源を解明し、同時に新規抗線維化薬ピルフェニドン(PFD)導入後のfibrocyteの推移、phenotypeの変化を検証することを目的としている。昨年度までの検討では、C57BL/6マウスにブレオマイシン(BLM) 100mg/kgをosmotic pumpを用いて投与し、これと同時にPFDを14日間投与するprophylactic modelを作成した。肺内のfibrocyteをCD45とcollagen Iに対する抗体で二重染色し、FACSにて解析した所、PFDの投与により肺へのfibrocyteの集積が抑制された。これは免疫染色でも定量的に確認された。Fibrocyteの遊走に関わるケモカイン類の検討ではBLMの投与により増加する肺内のCCL2はPFDにより有意に抑制された。またCCL2の免疫染色ではBLM投与により、肺胞上皮細胞・肺胞マクロファージ・細気管支上皮に発現の亢進が見られたが、これらはPFDにより抑制された。昨年度までの検討ではCCL12に対する効果は明らかでは無かったが、再検を繰り返した結果、PFDはCCL12も有意に抑制することが明らかとなった。本年度はBLM投与後、10日目から20日目までPFDを投与するtherapeuticmodelに対するPFDの効果を検討した。同モデルにおいても、fibrocyteの集積抑制が確認された。更にfibrocyteの遊走能の評価をBoyden chamberを用いて行った。BLMを投与したマウス肺組織よりmesenchymal cellを培養、magnetic beadsを用いてCD45陽性細胞を抽出し、CCL2に対する遊走能を評価した。CCL2に対する遊走細胞の増加は、PFD投与により抑制された。Fibrocyte上のCCL2に対するレセプターであるCCR2のPFDによる抑制も関与していると考えられた。骨髄由来fibrocyteに対する抑制効果はPFDの抗線維化作用の一つであると考えられた。特発性肺線維症は呼吸器難病であり、進行性の線維化

病態に骨髄前駆細胞(fibrocyte)が関わる可能性が示唆されている。本研究では実験的線維化病態におけるfibrocyteの関わりを解明することにより、線維化の細胞資源を解明し、同時に、新規治療薬pirfenidone治療導入後のfibrocyteの推移、phenotypeの変化を検証することを目的としている。本年度はC57BL/6マウスに対するブレオマイシンの投与経路の検討から開始した。経気管、経静脈、osmotic pumpを用いた投与方法を検討したが、簡便性や再現性の良さなどからosmotic pumpによる投与を選択した。次にfibrocyteの観察時期の検討を行った。fibrocyteのマーカーであるCD45とcollagen Iを用いて二重染色を行い、fibrocyteを観察した。ブレオマイシン投与14日目、21日目の両方で、fibrocyteが確認された。FACSに関しては14日目を選択した。細胞内のcollagen Iの検出が困難であったが、抗体の細胞内への透過を良くするためにBDのcytofix/cytopermを用い、biotin/streptoavidinの系で検出することが可能となった。ブレオマイシンへのpirfenidoneの併用では、マウスへの負担も観察されたが、最終的にブレオマイシン100mg/kg、pirfenidone 300mg/kg/day×14日でマウスへの負荷も十分認容性のあることが確認された。まだpreliminaryな段階ではあるが、ブレオマイシン投与で増加したfibrocyteがpirfenidoneにより抑制されることが観察されている。初年度はブレオマイシンの最適な投与経路の検討、またブレオマイシン及びピルフェニドンの指摘投与量の検討に時間を要した。さらにfibrocyte検出時のcollagen Iの染色に際して抗体を細胞内に導入する手技に時間を必要としたが、最終的にすべて安定して行える条件を整えることができた。本年度は昨年度のpreliminaryな検討を踏まえ、FACS、免疫染色、さらにケモカインの解析など、滞りなく進めることができ、有意なデータを得ることに成功した。当該年度はマウスへのブレオマイシンの投与経路の決定、fibrocyteの検出をまず目標に掲げて研究を開始した。fibrocyteの検出に工夫を要したが、最終的にこの検出は可能となった。またブレオマイシンにpirfenidoneの併用で、fibrocyteが抑制されることが、preliminaryなデータではあるが、確認された。pirfenidoneのみではなく、NACやPC-SODの使用も計画したが、これらの薬剤の使用にまでは至らなかった。ピルフェニドンがブレオマシン投与による肺内のfibrocyte集積を抑制、これにCCL2の産生抑制が関与していることが示唆された。今後はこれらの知見を踏まえ、fibrocyteのCCL2に対する遊走をピルフェニドンが抑制しうるか否かを、Boyden chamberを用いたchemotaxis assayを行うことにより検討する。
日本出土原始古代繊維製品の分析調査による発展的研究

本研究は、平成10年度13年度に実施した科学研究費補助金基盤研究(A)(2)「日本出土原始古代繊維製品の集成及び基礎的研究」(研究代表者:松浦宥一郎)の継続研究である。まず、前回に引き続き、遺跡出土繊維の時代別・地域別の集成を、刊行されている発掘調査報告書によって全国的に行った。今回は、奈良文化財研究所所蔵の発掘調査報告書のうち、平成13年度までに調査した東京国立博物館蔵のものと重複するものを除いた約2万冊の発掘調査報告書で、前回の欠を補うための作業を行い、日本原始古代遺跡出土の繊維製品および紡織器具関係の資料集成を行った。出土繊維の種類、それぞれの出土状態および遺存状態、繊維付着の遺物の種類と付着繊維との関係等の実態を把握することにっとめた。調査・検索事項については従来どおりで、資料カードに記述して資料台帳を作成し、データベース化をはかった。国内の遺跡出土繊維関係資料の現地調査は、九州、富山、北海道を中心に行った。特に、宮崎県内古墳出土繊維資料の調査は、前回に引き続き集中的に行い、多数のデータを収集した。日本の原始古代と関係の深い韓国内の遺跡出土繊維関係資料の現地調査も継続して行い、新羅・百済・加耶の地域の資料調査を行い、日本との比較資料を得た。なお、平成14年度に任孝宰氏(ソウル大学校教授)、平成15年度に林永珍氏(全南大学校教授)、崔完奎氏(圓光大学校教授)、平成16年度に河文植氏(世宗大学校教授)を招いて、古代の繊維について情報交換を行った。なお、研究成果の一部として、『季刊考古学』第91号(2005)の特集「原始・古代の出土繊維」のなかで、数人の研究分担者による論文が発表された。最後に、以上の成果をまとめて成果報告書を作成した。今年度は、まず日本原始古代遺跡出土の繊維製品関係の資料集成を引き続き行った。昨年まで東京国立博物館蔵の22,000冊に及ぶ発掘調査報告書により集成した資料について成果報告書を刊行したが、当館蔵の発掘調査報告書は全国で刊行されているものの50%前後位と推定されるので、必ずしも全国的に全てを網羅したものではないしそこで研究分担者を通じて、独立行政法人文化財研究所奈良文化財研究所の所蔵する膨大な発掘調査報告書の中で東京国立博物館蔵のものと重複するものを除いた発掘調査報告書によって、その欠を補うための検索、集成を開始した。調査、検索事項については従来どおりで、資料カードに記述して資料台帳の作成を行い、デ-ターベース化を行った。本年度より資料の現地調査に重点を移し、実地に資料の分析を行うこととした。現地調査にあたっては各自の分担地域、時代のみならず次のように重点的な調査地域と目標を設定することとした。(1)九州地域に重点をおき、九州各県の弥生時代、古墳時代遺跡出土の繊維製品関係資料の実地調査によって中国・朝鮮半島との関連を追究する。(2)北海道地域において縄文時代・続縄文時代・オホーク文化時代・擦文文化時代の繊維製品関係資料の調査によって大陸北方との関連を追究する。(1)においては、毎年度継続的に実施してきた資料を集中的に収蔵している宮崎県埋蔵文化財センターをはじめとし、近年出土資料の充実してきた大分県、熊本県、長崎県、鹿児島県等において実施した。(2)においては、特に道東のオホーツク文化時代の遺跡から出土した繊維製品そのものの調査を行った。(1)、(2)の調査によって来年度以降の調査の見通しをたてることができた。

今年度も、昨年度に引き続き研究分担者を通じて独立行政法人文化財研究所奈良文化財研究所の所蔵する膨大な発掘調査報告書によって日本原始古代遺跡出土の繊維製品関係の資料集成を行った。調査、検索事項については従来どおりで、資料カードに記述して資料台帳の作成を行い、データーベース化を行った。本年度の現地調査にあたっては各自の分担地域、時代のみならず次のように重点的な調査地域を設定し、日本列島全体の状況を把握することとした。(1)昨年度に引き続き九州地域に重点をおき、九州各県の弥生時代、古墳時代遺跡出土の繊維製品関係資料の実地調査によって中国・朝鮮半島との関連を追究するため、福岡県、大分県、熊本県の各機関が所蔵している資料の調査を行った。(2)韓国内の現地調査も継続させ、今年度は新羅の中心地域である慶州市天馬塚古墳出土の繊維製品そのものの調査を行い、前回の百済地域の調査と比較できる貴重な調査資料を得ることができた。(3)昨年まで日本の北方地域である北海道における縄文時代・続縄文時代・オホーク文化時代・擦文文化時代の繊維製品関係資料の調査によって大陸北方との関連を追究してきたが、本年度は日本の南端地域である沖縄における遺跡出土繊維製品関係資料の調査を行い、日本列島の南北地域の状況を把握することに努めた。(4)毎年度継続的に実施してきた資料を集中的に収蔵している宮崎県埋蔵文化財センターにおける資料調査を今年度も実施した。(5)(1)(2)に関連して、日本の資料と関係の深い韓国方形周溝墓、および前方後円形墳の研究者2名を招聘し、研究発表と情報交換を行った。今年度も、昨年度に引き続き研究分担者を通じて独立行政法人文化財研究所奈良文化財研究所の所蔵する膨大な発掘調査報告書によって日本原始古代遺跡の繊維製品関係の資料集成を行った。調査、検索事項については従来どおりで、資料カードに記述して資料台帳を作成し、データーベース化を行った。本年度の現地資料調査は、各自の分担時代、地域のみならず、次のように重点的な調査地域を設定し、日本列島全体の状況を把握することとした。(1)一昨年度、昨年度に続き、九州地域に重点をおき、弥生時代、古墳時代遺跡出土の繊維製品関係資料の実地調査によって中国・朝鮮半島との関連・交流関係を追及するため、福岡県、佐賀県、長崎県、大分県で、さらには古墳や地下式横穴墳から鉄器付着の繊維製品を大量に出土している宮崎県の西都原考古博物館で本年も調査を続行し、調査は7年におよぶことになった。(2)韓国内の現地調査も継続させ、今年度は2ヶ所の地域で実施し、韓国国立昌原文化財研究所で伽耶地域の古墳から出土した繊維製品と、韓国国立扶余文化財研究所で百済地域の中心地の扶余・公州の古墳から出土した繊維製品とを調査した。(3)本年度は、とくにこれまで調査の行き届いていない山陰と北陸地域の現地調査を実施した。山陰地方では、鳥取市青谷上寺地遺跡の弥生時代の絹そのものを調査することができた。北陸地方では、石川県能登半島の古墳から出土した繊維製品を富山大学、富山市埋蔵文化財センター、氷見市立博物館で集中して行った。(4)(1)(2)に関連して、日本の資料と関連の深い韓国との情報交流をはかるため、考古研究者1名(世宗大学校河文植教授)を招聘し、情報を入手するとともに意見交換を行った。(5)今年度を含めてこれまでの現地資料調査の成果の一部を松浦、澤田をはじめ数人の研究分担者による研究発表が本年4月刊行予定の考古学専門誌『季刊考古学』に遺跡出土
高齢一卵性双子１２２０組の老化遺伝子発現差からみた健康寿命決定分子機構の解明

かねてより長年にわたり協力を得てきた高齢双生児コホートについて、平成21年度は特に唾液及び血液の分析を中心に生活環境調査を実施した。生活環境調査としては栄養調査、運動スポーツ調査、職業、飲酒量、喫煙量、嗜好品、家族構成、居住環境、収入・経済状況、ライフヒストリー、既往歴、学歴、ソーシャルサポート、社会交流、ストレス尺度、性格テスト、人生満足度テスト、肥満度、等について大阪府及び近隣府県の居住者を対象にデータ分析を実施した。唾液の分析については、準備段階の予備実験においてDNAのメチル化分析が唾液中のRNAにより阻害されることが判明したことから、平成21年度は、血清の分析中心に実施し、DNAメチル化分析については次年度以降に実施することとした。平成21年度の血液分析では、血清アポ蛋白(Apo A-I, Apo A-II、Apo B, Apo C-II, Apo C-III、Apo E)の血中濃度について142組の高齢双生児を対象に共分散構造の分析のMX解析を実施し、これら血清アポ蛋白濃度の遺伝寄与率及び環境寄与率を算定した。双生児の卵生診断は、血液型9種類:ABO, Rh (C, c, D, E, e), MN (M, N), Lewis (Lea, Leb), P(P1), Duffy (Fya, Fyb), Kidd (JKa, JKb), Kell (K), Diego (Dia)を用いた。このMX解析による遺伝寄与率の算定は現在、国際的に最も広く用いられる解析手法となっている。また一卵性及び二卵性における各々のアポ蛋白の級内相関係数もペア内での類似度の指標として算定した。級内相関係数の卵性間比較では、一卵性が二卵性を全てのアポ蛋白において有為に高い数値を示しアポ蛋白の血清濃度について遺伝的関与の強いことが示唆された。また共分散分析のMX解析により算定された各アポ蛋白の血清濃度の遺伝寄与率については、Apo-AI(男:0.37,女:0.60),Apo-A-II(男:0.30,女:0.65),Apo B(男:0.32,女:0.59),Apo-C-II(男:0.61,女:0.75),Apo-CIII(男:0.00,女:0.00),Apo E(男:0.48,女:0.73)と算定された。男女別の比較では、男性で最も高い遺伝寄与率を示した項目は、Apo-C-IIであった。また女性で最も高い遺伝寄与率を示した項目は、Apo C-II(0.75)及びApo E(0.73)であった。当教室がかねてより研究協力を得ている国際的にも非常に貴重な研究対象である高齢双生児コホートについて、大阪大学病院に来院を求め各種臨床検査を含む精緻な健診調査を実施した。平成22年度については主に大阪府、兵庫県、京都府など近畿地方に在住する高齢双生児を対象に自主的な健診希望者を募った。血液検査については臨床検査項目として、TP, A1b, UA, CRE, UN, Tcho, TG, HDL-C, LDL-C, ApoA1, ApoB, ApoE, AST, ALT, Insulin, Cortisol, boneALP, Vitamin B12、抗CCP抗体,抗dsDNA抗体,等多項目について測定した。また、ゲノムワイドなエピジェネチック分析については理化学研究所に委託して厳密な分析を試みた。また同時に、ライフスタイルや生活環境因子について、ブレスローのライフスタイル指標などを応用して、多面的なライフスタイル関連の詳細なデータをインタビュー形式にて収集した。更に自宅訪問による説明とインタビューを希望するものについては自宅訪問調査を実施した。生活環境因子に関する調査項目としては、栄養摂取問診票(DHQL)、運動量、職業内容、飲酒量、喫煙量、嗜好品、家族構成、居住環境、収入・経済的状況、ライフヒストリー、ライフコース病歴、学歴、ソーシャルサポート、社会交流、ストレス尺度、人生満足度テスト、肥満度等について調査を実施した。収集した研究結果については現在、解析中であるが、今回の研究結果については社会的注目度が非常に高いことから既にNHK科学番組制作部やテレビ朝日などから取材申し込みが届いており、また新聞では日本経済新聞にて記事掲載された。当教室のコホート研究にかねてより協力を得ている高齢一卵性双生児の居住地が北海道から九州まで全国的に広く散在していることから、本年度は、近畿地方と愛知県、三重県、岐阜県等の中部地方在住者を対象に自発的に総合的健診を希望するものに大阪大学病院に来院を求めて総合的健診を実施した。また同時に、ライフスタイルや生活環境因子について、ブレスローのライフスタイル指標などを応用して多面的にライフヒストリーを含め環境関連データを収集した。更に自宅訪問による説明を希望するものについては、自宅訪問を実施し、インタビュー形式により生活関連情報を聞き取った。生活環境因子の調査項目としては、栄養摂取(BDHQ-1-1-L)、運動量、職業歴、飲酒量、嗜好品、ストレス尺度、性格テスト、人生満足度テスト、肥満度等について調査を実施した。また本研究では、目的とする老化遺伝子は長寿遺伝子であるSirt1、Klotho、AMPK等および寿命抑制遺伝子のmTOR,IGF-1,Clock等である。その他に、ハウスキーピング遺伝子も同時に測定して相対定量を行った。

更に、目的とする老化関連遺伝子のメチル化率を解析し、リアルタイムPCR法によって得られた老化関連遺伝子の発現量と同遺伝子のメチル化の頻度からメチル化と遺伝子発現との関連を解析した。同時に、高齢一卵性双生児のライフスタイルや生活環境因子に関して収集したデータから老化関連遺伝子ごとに高齢一卵性双生児ペア内でメチル化率の差異とライフスタイル因子との関連を検討した。また、疾患感受性遺伝子[JAZ1(糖尿病)、MTHFR(高血圧)など]の遺伝子多型をRFLP法TapMan,PCR法、ダイレクト市区円ス法などで解析した。研究の目的:人間の高齢期に見られる老化現象や様々な生体現象は、遺伝要因と環境要因の相対的影響下において進行することが多い。双生児研究法は、遺伝と環境が複雑に絡み合う健康問題において非常に有力な研究法とされている。特に、高年齢に達した一卵性双生児は、生活歴やライフスタイルがペア内で大きく異なっているペアが数多くみられることから、遺伝素因が同一でありながら異なった環境で長年生活した場合の老化度や健康度の差異を比較することが可能となる。実際に、老年期認知症や糖尿病などにおいてペアの片方のみが発症し、他方は正常な一卵性ペアは非常に数多く見られる。これら不一致の一卵性双生児についてペアの各々が生きてきたライフコースとライフスタイル上の差異を詳細に調べることにより、非常にユニークで予防医学上極めて有益な地検を得ることが可能である。本研究では、健康寿命決定分子機構の解明を主たる目的に、特に老化関連遺伝子としてあきらかになっているSirt1遺伝子やKlotho遺伝子および老年期疾患遺伝子について、エピジェネティック分子生物学の手法を用いて、一卵性双生児の同胞間比較から遺伝子のメチル化や脱メチル化に関与するライフスタイルや環境因子を解明することを目的にしている。本年度の研究実施計画と成果:平成24年度においては、かねてより当教室のコホート研究に協力を得ている高齢双生児の内、近畿地区在住者、中部地区在住者、東北地区在住者の内、大阪大学医学部付属病院にて各種臨床検査を含む総合的な検診を自主的に希望する242名の高齢者について詳細な総合的検査を実施することができた。老化現象については、遺伝因子と環境因子の両方の因子が相互に関与して老化現象が進行することが推察されている。双生児研究は、遺伝と環境の両方が関与する生体現象に有用な研究手法とされている。特に中高年に達した成人の一卵性双生児については、遺伝因子が同一でありながら別々に異なった環境で生活した場合の老化現象の差異を直接比較することが可能であることから、ライフスタイル因子や生活環境の影響を詳細に分析することが可能となる。本研究では、これらペア内で老化現象に差異がみられる一卵性双生児について、老化現象に関与する遺伝子であるSirt 1遺伝子やKlotho遺伝子を中心にエピジェネチックな分析手法をも用いて環境因子の関与を解明することを主眼としている。特にこれら老化遺伝子については、メチル化等の分析をペア内で比較して予防医学の進展に貢献する遺伝疫学的研究を実施する。また老化現象と関連が深い認知症や糖尿病等の生活習慣病についても高齢双生児を対象に、双生児研究独自の分析手法で国際的に用いられているMX解析プログラムを利用した軽量遺伝学のデータ解析を実施することにより、生活環境因子と遺伝因子の相対的なベクトルの強度についても解析し、予防医学上の指標として提示することを目的としている。
肝癌自然発症LECラットを用いたストレス応答経路の発癌に対する影響の研究

本研究は肝臓に銅を蓄積し、ほぼ100%に肝癌を自然発症するLECラットの高い発癌率における種々のストレスに対する応答経路の関与を明らかにすると共に種々のストレスに対する高い感受性の原因遺伝子を解析し、その異常と肝癌発生との関連性を明らかにすることを目的として実施し、以下のような研究成果を得た。1.LECラット肝細胞でのDNA損傷の生成は主として銅の蓄積に依存し、鉄は関与しないこと、DNA損傷の生成頻度に性差はなく、初期損傷でなくその後の発症過程に性差が存在することを示し、肝障害発症機序に関し重要な知見を得た。2.LECラットへの銅特異的キレート剤トリエンチンの投与によってDNA損傷の生成が防護され、一旦生じた損傷も修復されること、抗酸化剤、亜麻リグナンの投与によって酸化ストレス由来肝障害が防護されることを示し、肝臓内銅濃度を一定に保つことや抗酸化剤の投与によって肝炎・肝癌の発症を予防できることを示唆した。3.LECラット胸腺細胞は高いX線誘発アポトーシス感受性を有すること、X線と異なる損傷を生成する中波長紫外線にLECラット線維芽細胞はアポトーシス誘発の高い感受性を有すること、LEbラット細胞はDNA複製阻害剤に高い感受性を有するが、この感受性はアポトーシスの誘発に起因しないことを示し、LECラッ卜細胞において種々のストレス応答経路に異常があることを示した。4.LECラットの細胞における高い放射線感受性はDNAの2本鎖切断の修復に関わるKuタンパク質のX線照射後の細胞内局在を調節する機序の異常が原因あることを示した。5.LECラットにおけるストレス応答経路の異常の原因遺伝子と肝発癌との関連性について現在検討中である。本研究は肝臓に銅を蓄積し、ほぼ100%に肝癌を自然発症するLECラットの高い発癌率における種々のストレスに対する応答経路の関与を明らかにすると共に種々のストレスに対する高い感受性の原因遺伝子を解析し、その異常と肝癌発生との関連性を明らかにすることを目的として今年度は以下のような結果を得た。1)肝細胞における銅および鉄の蓄積とDNA損傷の解析:LECラット肝細胞では銅だけでなく鉄も蓄積し、銅および鉄は共に酸化ラジカルを生成することが報告されているが、LECラットを用いた解析から肝細胞における鉄の蓄積はDNA切断の直接の原因とならないことを示した。2)DNA損傷と発癌関連性の解析:LECラットの肝炎・肝癌の発症はメスでオスよりも重篤である。本研究の結果は銅の蓄積、DNA切断頻度ともに性差は認められず、肝炎・肝癌の発症には単に酸化ラジカルだけの寄与ではなく性ホルモンなど他の要因も重要であることを示した。3)DNA損傷の修復の解析:致死的なDNA損傷である2本鎖切断の修復において、Kuタンパク質の核内移行と核内における維持が必要であることを示し、LECラット細胞におけるその修復異常の原因がKuタンパク質が核中に効率的に保持されないことが原因であることを示した。4)ストレス応答経路の解析:酸化ラジカルとは異なる型の損傷を生じる中波長紫外線に対してLECラット細胞は高感受性を示し、その原因がアポトーシスの誘発に起因することを示し、LECラット細胞において種々の型のストレス応答経路に異常があることを示した。5)肝癌関連ならびにストレス応答遺伝子の解析:LECラット細胞における種々のストレスに対する応答経路の異常が単一の遺伝子異常に起因するのかを検討すると共に原因遺伝子のクローニングならびにその遺伝子の塩基配列を現在検討中である。

1)肝細胞における銅および鉄の蓄積とDNA損傷の解析:LECラット肝細胞では銅だけでなく鉄も蓄積し、銅および鉄は共に酸化ラジカルを生成することが報告されているが、低鉄食を用いた解析から肝細胞における鉄の蓄積はDNA切断の直接の原因とならないことを示した。2)肝炎・肝癌の発症予防の試み:銅特異的キレート剤であるトリエンチンの投与によってLECラット肝細胞におけるDNA損傷の生成がほぼ完全に抑制された。一方、投与後に銅の蓄積は防止されたが、濃度は減少せず、高い銅濃度が維持された。これらの結果は一定の濃度以下に肝臓内銅濃度を保つことによって肝炎・肝癌の発症を予防できることを示唆した。3)DNA損傷の修復の解析:致死的なDNA損傷である2本鎖切断の修復における、LECラット細胞の修復異常はKuタンパク質が核内で効率的に保持されないことが原因であることを示した。4)ストレス応答経路の解析:LECラット胸腺細胞はアポトーシスの誘発に対して高感受性を示した。また、ラット胸腺細胞やヒトリンパ腫株化細胞におけるアポトーシスの誘発の機序について検討し、LECラット細胞におけるストレス応答経路に異常があることを示した。5)肝癌関連ならびにストレス応答遺伝子の解析:LECラット細胞における種々のストレスに対する応答経路の異常に複数の遺伝子が関与していることを示し、原因遺伝子のクローニングならびにその遺伝子の塩基配列について現在検討中である。本研究は肝臓に銅を蓄積し、ほぼ100%に肝癌を自然発症するLECラットの高い発癌率における種々のストレスに対する応答経路の関与を明らかにすると共に種々のストレスに対する高い感受性の原因遺伝子を解析し、その異常と肝癌発生との関連性を明らかにすることを目的として今年度は以下のような結果を得た。1)腎細胞における銅および鉄の蓄積とDNA損傷の解析:LECラットでは腎細胞でも肝細胞と同様に銅が蓄積し、銅の蓄積によってDNA切断が生成することを示した。2)腎障害の発症予防の試み:銅特異的キレート剤であるトリエンチンの投与によってLECラット腎細胞における銅の蓄積ならびにDNA損傷の生成がほぼ完全に抑制された。3)DNA損傷の修復の解析:致死的なDNA損傷である2本鎖切断の修復においてDNA切断端のprocessingなどに関与しているMre11やNbs1タンパク質は正常ラット細胞ではX線照射後2時間程度で細胞内の存在量が増加し、核に蓄積するのに対し、修復異常が見られるLECラット細胞ではこれらタンパク質の増加や核内への蓄積が起こらないことを示した。4)ストレス応答経路の解析:LECラット細胞は複製阻害剤ヒドロキシウレアに対して高感受性を有することが示されたが、この高感受性はアポトーシスの誘発に起因しないことを示し、複製阻害剤による複製フォークの進行阻害によるストレス応答経路に異常があることを示した。5)肝癌関連ならびにストレス応答遺伝子の解析:LECラット細胞における種々のストレスに対する応答経路の異常に複数の遺伝子が関与していることを示した。