hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
地域住民による地域情報資源ディジタルアーカイブ利活用支援に関する研究

本研究は、地域コミュニティの知識のナレッジベース化を目標としオーラルヒストリーを中心としたコンテンツ制作手法(つくる)、異なるディジタルアーカイブ間を意味的に結びつける(つなぐ)、地域住民のためのディジタルサイネージなどのディジタルアーカイブ利用支援手法(つかう)を課題カテゴリとして進めている。(1)コンテンツ制作(つくる)カテゴリは、地域住民自身、および援助者が既存のディジタルアーカイブのコンテンツを利用してコンテンツにデータを追加する仕組みの開発するものである。実験を通して収集した地域住民の音声を元に、それらをオーラルヒストリーとして整理するための手法の検討を行った。(2)意味的リンキング(つなぐ)カテゴリは、ディジタルアーカイブ間の意味的リンキングのために、地域コミュニティの独特の言い回しを含む語彙をメタデータ語彙として共有するための基盤の開発する。稚内市で実施した実験を通して、語彙にする際の問題点の抽出を行った。(3)利活用支援(つかう)カテゴリは、地域住民・旅行者用コンテンツ利用支援環境の構築するものである。実験を通して、本研究では市民が持つ知識に合わせたコンテンツ分類とアクセス支援、図書館員による市民サービス支援機能実装のための技術について情報を収集し、試作を進めた。本研究の中心課題は、アーカイブを地域住民が自らアップグレードしながら利活用できるようにすることである。そのため、アーカイブのコンテンツの検索や利用に用いられるメタデータ、コンテンツそのものの特性や構造を記述するメタデータを、地域住民にとってわかりやすい表現と結びつけることが基本的課題となる。平成29年度は、これら基本的課題解決のための情報収集を行いつつ、適宜試作と実験を行うことができた、有意義な年度であったと言える。本研究は、地域の記憶として近年着目されている地域情報資源の収集および、メタデータの充実を目的としている。この目標を達成するために、日本最北端のまちである稚内市において、筑波大学三河研究室開発のロボットの頭部に本システムを搭載し、実験を行った。研究の中心である地域情報資源は、過去の研究で構築した地域情報デジタルアーカイブを用いる。しかし、実験的に研究室で構築したため、メタデータの量は少なくそのまま利活用することは難しい。そこで、本研究では地域住民がデジタルアーカイブを利活用することでオーラルヒストリーとして少しづつ情報を追加していくシステムを構築している。具体的には、本システムは遠隔地から操作することで、目標となる地域でオーラルヒストリーを収集する。しかし、過疎が進む地域では、オーラルヒストリーを集めるための人的コストをかけることが難しい。そのため、市役所や地域の公共図書館といった近隣の自治体施設や、遠隔地である本州エリアから遠隔操作することで、コストの削減を狙う。この構想により、人的コストの削減と迅速な運用が可能になる。
自然環境情報の統合化による河川生態系評価モデルの構築

兵庫県内及び周辺地域において、これまでに河川の生物調査が行なわれた報告書や学術論文を収集し、これに基づいて魚類及び水生昆虫について調査地点の位置情報、生物種の分布、採集年、出典などの情報を地理情報システムを用いて統合型のデータベースを作成した。これと同時に、気象や地形・地質、植生図などの環境に関する基盤情報もGISデータとして整備を行なった。これらのデータベースに基づいて、3つの観点から集計・解析を行なった。1つ目は、兵庫県内の河川において魚類、水生昆虫ともに、生物多様性が最も高い地域、『生物多様性ホットスポット』の推定を行い地図として表現した。さらにこのデータと各種環境情報図を重ね合わせて、生物多様性の維持に関連する要因を抽出した。2つ目は底生動物の現存量と環境要因との関連性について解析を行なった。その結果、現存量の多寡に影響する環境要因(河川形態、河床型)と季節性との関連が明らかになった。さらに、種組成のうち造網性トビケラ類(ヒゲナガカワトビケラ属)の占める割合が現存量の多寡に大きく影響することを明らかにし、河川生態系現存量の予測モデルを作成した。3つ目は、山地渓流に生息するイワナの分布情報(既存情報)と独自に実施した野外調査データに基づいて、環境要因との関係をモデル化することで潜在的な生息地(ポテンシャルハビタット)を地図として推定した。その結果、河川の横断工作物による分断化は個体群の存続に著しい影響を及ぼすものと考えられた。これらの成果および解析プロセス等は、兵庫県県土整備部が河川環境の保全を推進するために取りまとめた『ひょうごの川・自然環境調査マニュアル(兵庫県)』へと反映させており、実際の河川環境の保全計画に活用されている。現在、河川生態系の評価モデルとその手法に関する著書を作成している。これらのデータベースに基づいて、2つの観点から集計・解析を行なった。まず底生動物の現在量と環境要因との関連性について解析を行なった。さらに、種組成のうち造網性トビケラ類(ヒゲナガカワトビケラ属)の占める割合が現存量の多寡に大きく影響することが分かった。また、現存量の分布特性と標準的な値についても明らかにすることができ、湿重量で20g/m^2を超える地点は全体の2割程度と少なく、一般的にはこの値以下となる場合が大半であった。次に山地渓流に生息するイワナの分布情報(既存情報)と独自に実施した野外調査データに基づいて、環境要因との関係をモデル化することで潜在的な生息地(ポテンシャルハビタット)を地図として推定した。推定には、ロジスティック回帰モデルを採用した。モデルの推定に有効となったパラメータの中では地下水温(推定値)の寄与が大きく、イワナが生息可能と考えられる閾値以下となる河川の流路長も分布を制限する要因であることが分かった。現在、同様の手法を用いて、数種類の水生昆虫及び魚類各種の潜在生息域の推定と現地調査による分布データの収集を行なっている。
新興市場におけるメタナショナル経営の事例発掘研究

報告者は国際ビジネスを企業活動とビジネス立地の相互作用と捉えている。メタナショナル経営論を新興市場ビジネスに適用するうえで,この前提は本研究の遂行を容易なものとしてくれた。企業は新興市場に存在する優れた経営資源にアクセスし,組織内で活用し,競争優位につなげようとする。その一方で,ビジネス制度に伴うコストを極小化し,新興市場ビジネスを優位に展開すべく努力している。メタナショナル経営論をこのように広義に捉えることによって,新興市場におけるビジネス活動を簡潔に把握することができた。本研究プロジェクトにおいて,新たに発掘したり,メタナショナル経営論に基づく新たな意味づけを行ったりした主な事例は以下のとおりである。生産関連ではロシアにおける米ボーイング社とフィンランドのノキアン・タイヤである。マーケティング分野でバングラデシュのグラミン銀行,John Deereの農機,GEの医療機器などである。ビジネスモデルについては,ヤクルトの新興市場ビジネスやインドのヒンドゥスタン・ユニリーバなどである。研究活動の分野ではロシアの味の素,ブラジルのIBMであり,製品開発はホンダの中国での合弁事業などである。現在準備中の新興市場ビジネス論に関する単著のなかで,理論的検討と発掘事例,事例分析を紹介し,本プロジェクトの成果を学界,ビジネス界,社会一般に還元する予定である。新興市場ビジネスを概念的に理解する方法として,企業活動とビジネス立地が双方に影響を及ぼし合いながら,双方が進化するというFLフレームワークを提案した。このフレームワークを前提にすると,企業の経営活動は,各国が保有する販売市場,生産要素,研究開発をはじめとする知識にアクセスし,利用することで競争優位を構築できるとする「メタナショナル経営」をより立体的に理解できる。メタナショナル経営はややもすると,外部の知識をいかにグローバル企業が消化しうるかという組織論に傾きがちであったが,戦略論と立地論的理解も重要であることを示すことができた。平成22年度の事例発掘は,主にイスラーム諸国(トルクメニスタン,ウズベキスタン,カザフスタン,トルコ)での調査を通じて,イスラーム思想をどのように理解すべきか,これらの市場における起業やビジネス活動がイスラーム思想からどのような影響を受けたかについて検討した。バングラデシュのグラミン銀行を事業創造の事例と理解して,その背景を探り,イスラームの基本思想に基づき,独自のレンズを通して,モノを見る目が不可欠であること,同時に現実を的確に把握し,イノベーションによって,目前の課題を解決し,事業をシステム化することが重要であると指摘した。イスラエルでの調査は,同国に眠る知識資源にどのようなものがあるか,それらの資産にグローバル企業はどのようにアプローチしているのか,課題は何かについて検討した。次年度の他市場での調査結果と併せ,今後順次発表の予定である。新興市場ビジネス研究のなかで,メタナショナル経営論をどのように位置づけるべきかについてのフレームワーク作りを継続した。ビジネス立地の規定要因が企業活動にもたらす立地資産と取引コストをもたらすビジネス制度によって構成されるものと理解し,新興市場ビジネスを定式化した。そのうえで新興市場に眠る経営資源を発見し,企業内に取り込み,競争優位につなげるメタナショナル経営のパラダイムを,企業活動とビジネス立地の共進化という経営プロセスとして理解した。当該年度は,事例発掘のためのフィールド調査を東アジアとロシアを中心に実施した。中国とタイでは,日系企業の現地生産の実態調査を踏まえ,それらの企業が現地で獲得した知識をどのように本国や他の市場に移転しているのかについて,組織メカニズムの文脈で検討し,メタナショナル経営の新たな事例として分析した。現地企業についても同様に,他国で獲得した知識を本国に移転し,活用するプロセスをメタナショナル経営として解明した。他方,ロシアでは,複数のソフトウエア会社とボーイング社のメタナショナル経営の事例について,フィールド調査と文献研究に基づいて事例研究を行った。ボーイング社については,更なる調査が必要なことが判明し,次年度の課題が明らかになった。当該年度の研究成果は,いくつかの学会や研究会において発表の機会を得て,内外の研究者と議論を重ね,次なる課題と研究の方向性が明らかになった。これまで執筆した論文や図書についても,さまざまな形で取り上げられ,評価・批判されており,次年度の研究に向けて示唆に富むものとなった。メタナショナル経営論を国際ビジネス研究,さらには新興市場ビジネス研究においてどのように位置づけるのかについてのフレームワークづくりを継続した。

先進国市場のみならず,新興市場においても企業の競争優位構築を可能にするすぐれた経営資源が賦存していることが知られるようになった。しかし,そうした経営資源をいかに発見し,アクセスし,自社内に取り込み活用するかは,組織能力の如何に係わっている。メタナショナル経営を企業活動とビジネス立地が共進化する経営プロセスと理解したうえで,事例の発掘調査を進めた。本プロジェクト最終年の本年度は,メタナショナル経営の事例を,付加価値創造におけるライン活動の各段階とオーバーヘッド活動の各領域ごとに整理するとともに,新たに発掘した事例を深耕し,新興市場への浸透を図るうえでの教訓を導出した。具体的には,原料調達におけるロシアのボーイング,生産プロセスにおけるフォードやブリヂストン,それにインドのペプシコーラの事例,ロジスティクスの香港・利豊であり,これらが生産活動における優れたビジネスプラクティスの事例である。マーケティングではマーケティング計画のパナソニック,John Deere,GE,販売活動のヒンドゥスタン・ユニリーバ,ヤクルト,アフターサービスのグラミン銀行(バングラデシュ)である。オーバーヘッド活動では,コーポレイト・ガバナンスにおけるインドの主要企業,マネジメント手法の韓国企業,ビジネスモデルのダノン,基礎寄り研究のロシア・味の素とブラジル・IBM,製品開発のホンダ,フィリップスである。取材を通じて,事例の発掘と分析を進めたのは,フィリピンのフレンチ・ベーカー,ブラジルのオービタル・エンゲルハリアなどである。現在,事例執筆の準備を進めている。理論研究は順調に進み,事例発掘のフィールド調査と文献調査も予定通りであるが,それらの成果についての論文執筆は途上である。ただし,研究報告を複数回実施し,他の研究者との議論を重ねており,論文執筆にとって貴重なヒントを得ている。24年度が最終年度であるため、記入しない。フィールド調査は,第一にロシアのボーイング社現地法人での社長インタビューとシベリアの合弁生産会社での調査を計画している。第二は西アジア,中央アジアを含むアジア域内でメタナショナル経営を行う,内外の特徴的な企業を抽出し,現地調査を実施する予定である。次年度は,本研究の最終年度に当たるため,論文執筆,学会発表のペースをやや引き上げ,研究成果を学界や社会に還元する活動に力を入れる予定である。
遺伝子導入したヒト末梢血前駆細胞移植による心筋梗塞治療

ラットによる心筋梗塞モデルにて、心筋梗塞後心臓リモデリングにおけるアルドステロン阻害薬の効果を検討した。アルドステロン阻害薬の投与により収縮能、拡張能の低下が防がれ、また、左室・右室の心筋の形質変換も抑制され左室・右室リモデリングの進展が防がれた。又、そのリモデリングの抑制、心機能低下の予防効果と共に、collagen I、collagen III、atrial natriuretic peptide、brain natriuretic peptide等の梗塞部、非梗塞部におけるmRNA発現の増加を抑制した。さらに、MAPKが炎症のシグナルに関係し、心不全の病態に炎症が深く関与することが示唆されていることより、アデノウィルスベクターを用いて新生児ラット心筋細胞にdominant negative mutantやwild-typeのapoptosis signaling kinase (ASK1)、MAPKを過剰発現させ、アンジオテンシンIIで刺激しmonocytechemoattractant protein-1(MCP1)やplasminogen activator inhibitor-1(PAI1)の発現をみた。ASK1はアンジオテンシンIIによるMCP1、PAI1発現を抑制し、MCP1はP38MAPKを介し、PAI1はJNKを介する経路であることが判明した。肥大、増殖、ストレスに関与するJNK、P38MAPK、AP-1は一部アンジオテンシン系を介し心筋梗塞後心臓リモデリングに関与している可能性が示唆された。また、ラット骨髄単核球分画よりmesenchymal stem cellを培養しVEGFを遺伝子導入した細胞を同種のラット心筋梗塞に移植し心臓リモデリングの抑制効果を検討した。VEGFの遺伝子導入はmesenchymal stem cell移植の効果を増強し、梗塞巣の縮小、リモデリングの抑制が得られた。さらに、ラット下肢虚血モデルにおいてマイクロバブルのエコーコントラスト剤であるOptisonは血管新生を促進させ、骨髄細胞移植治療効果も増強した。ヒト末梢血単核細胞培養では、糖尿病において内皮前駆細胞、平滑筋前駆細胞数は減少し、治療により増加がみられた。スタチンは培養系において平滑筋前駆細胞を減少させ、内皮前駆細胞を増やす働きがある。この作用にVEGFが関与していると思われる。MAPKが炎症のシグナルに関係し、心不全の病態に炎症が深く関与することが示唆されていることより、アデノウィルスベクターを用いて新生児ラット心筋細胞にdominant negative mutantやwild-typeのapoptosis signaling kinase(ASK1)、MAPKを過剰発現させ、アンジオテンシンIIで刺激しmonocytechemoattractant protein-1(MCP1)やplasminogen activator inhibitor-1(PAI1)の発現をみた。ASK1はアンジオテンシンIIによるMCP1、PAI1発現を抑制し、MCP1はp38MAPKを介し、PAI1はJNKを介する経路であることが判明した。肥大、増殖、ストレスに関与するJNK、p38MAPK、AP-1は一部アンジオテンシン系を介し心筋梗塞後心臓リモデリングに関与している可能性が示唆された。また、ラットによる心筋梗塞モデルにて、心筋梗塞後心臓リモデリングにおけるアルドステロン阻害薬の効果を検討した。又、collagen I、collagen III、atrial natriuretic peptide、brain natriuretic peptide等の梗塞部、非梗塞部におけるmRNA発現の増加を抑制した。

さらに、ラット骨髄単核球分画よりmesenchymal stem cellを培養しVEGFを遺伝子導入した細胞を同種のラット心筋梗塞に移植し心臓リモデリングの抑制効果を検討した。VEGFの遺伝子導入はmesenchymal stem cell移植の効果を増強し、梗塞巣の縮小、リモデリングの抑制が得られた。MAPKが炎症のシグナルに関係し、心不全の病態に炎症が深く関与することが示唆されていることより、アデノウィルスベクターを用いて新生児ラット心筋細胞にdominant negative mutantやwild-typeのapoptosis signaling kinase (ASK1)、MAPKを過剰発現させ、アンジオテンシンIIで刺激しmonocytechemoattractant protein-1 (MCP1)やplasminogen activator inhibitor-1 (PAI1)の発現をみた。ASK1はアンジオテンシンIIによるMCP1、PAI1発現を抑制し、MCP1はp38MAPKを介し、PAI1はJNKを介する経路であることが判明した。肥大、増殖、ストレスに関与するJNK、p38MAPK、AP-1は一部アンジオテンシン系を介し心筋梗塞後心臓リモデリングに関与している可能性が示唆された。また、ラット骨髄単核球分画よりmesenchymal stem cellを培養しVEGFを遺伝子導入した細胞を同種のラット心筋梗塞に移植し心臓リモデリングの抑制効果を検討した。さらに、ラット下肢虚血モデルにおいてマイクロバブルのエコーコントラスト剤であるOptisonは血管新生を促進させ、骨髄細胞移植治療効果も増強した。ヒト末梢血単核細胞培養では、糖尿病において内皮前駆細胞、平滑筋前駆細胞数は減少し、治療により増加がみられた。スタチンは培養系において平滑筋前駆細胞を減少させ、内皮前駆細胞を増やす働きがある。この作用にVEGFが関与していると思われる。
TNFシグナル関連分子群に着目したマクロファージの発生分化制御機構の解明

昨年度までの解析から、TAK1欠損マクロファージはTLRリガンドであるLPSやpoly(I:C)あるいはTNFalpha刺激に伴いCaspase8依存的に細胞死を起こすことが判明し、このため当初アポトーシスによる細胞死であるものと考えられた。そこでこの細胞死誘導機構の詳細についてさらに解析を進めたところ、Caspase8/3のみならずCaspase1も活性化されること、そしてCaspase1の下流で制御されるGasdermin D(GSDMD)のタンパク分解が誘導されることを見出した。GSDMDの分解産物は、近年炎症性細胞死として注目されるパイロプトーシスの直接的誘導因子として機能することが示されてきた。このことからTAK1欠損マクロファージに見られた細胞死は、実はアポトーシスではなくパイロプトーシスによるものであることが判明した。次にTAK1欠損マクロファージにおいてパイロプトーシス誘導に関与する分子を特定するため、TLR下流に位置するTRIF分子に着目し、CRISPR/Cas9によるゲノム編集技術を利用してTRIF欠損背景下マクロファージ特異的TAK1欠損マウスを作成した。TAK1xTRIF二重欠損骨髄マクロファージを用いて解析したところ、LPS及びpoly(I:C)刺激による活性化Caspase8及び1の産生やGSDMDのタンパク分解が全て抑制されること、そして細胞死が完全に抑制されることを見出した。一方で、TNFalpha刺激に伴う細胞死はTAK1欠損マクロファージ同様観察された。これらの結果を総合すると、マクロファージにおいてこれまで知られていなかったTLR/TRIF/Caspase8/Caspase1/GSDMDシグナル伝達経路による炎症性細胞死誘導機構が存在すること、そしてこの経路をTAK1が抑制することで炎症反応を負に制御していることが判明した。シグナル伝達分子TAK1の生理的な役割を明らかにする目的で、TNFα欠損背景下におけるマクロファージ特異的TAK1欠損マウス(以下TAK1ΔM x TNFα-/-マウス)を作成したところ、興味深い表現型を観察した。まず研究申請時において一部非リンパ組織において組織常在マクロファージの著しい低下を観察していたが、様々な組織についてフローサイトメトリーを用いて調べてみたところ、肝臓、肺のみならず腹腔、脂肪、粘膜固有層においても組織常在マクロファージの著しい低下が観察された。一方で欠損マウスの個体によっては、対照マウスと同程度の組織常在マクロファージを観察した。この差異を詳細に調べたところ、組織常在マクロファージの著しい低下が認められた全ての個体において臓器炎症を起こしていることが判明した。臓器炎症の詳細について免疫学的、病理学的、生化学的視点から解析したところ、TAK1ΔM x TNFα-/-マウスでは主に肝臓と腹腔における炎症が顕著であった。詳述すると、肝臓、腹腔共に好中球、単球といった炎症細胞の異常な浸潤が認められ、また血清中のAST、ALT、LDH及びIL-6の値が対照マウスと較べて著しく高かったことから、炎症による肝機能障害を誘発していることが考えられた。以上の結果から、マクロファージ中におけるTAK1欠損が、sterile inflammation(無菌性炎症)の発症原因となっていることが推察された。組織常在マクロファージの著しい低下について、マクロファージの発生・分化異常の可能性を探るため、単球・マクロファージの前駆細胞として同定されたcommon monocyte progenitor(cMoP)をフローサイトメトリーで調べたところ、対照マウスと比較して特に顕著な差異は認められなかった。今年度予定していた研究実施計画を順調に遂行できたのみならず、研究成果から当初予想していなかった研究展開の拡がりを見せており、次年度に向けた研究推進とその成果が充分期待されるため。TNF欠損背景下におけるマクロファージ特異的TAK1欠損マウス(TAK1ΔM x TNFα-/-マウス)を作成したところ、様々な組織で無菌性炎症を発症することを昨年度報告した。そこでこの原因を探るため、骨髄由来マクロファージを用い、解析を行った。その結果TAK1欠損マクロファージは各種TLRリガンドの中でも、リポ多糖(LPS)、poly(I:C)刺激特異的に細胞死が誘導されることを見出した。またTAK1特異的阻害剤である5Z-7存在下においても、LPS及びpoly(I:C)刺激特異的にマクロファージの細胞死誘導が観察された。次にこの細胞死の分子機構を調べたところ、TAK1欠損マクロファージはCaspase-8/3の活性化を検出した。このことから、TAK1欠損マクロファージに見られた細胞死はアポトーシスによるものと判明した。さらにTAK1欠損Caspase-8欠損RIPK3欠損マウスより樹立した骨髄由来マクロファージでは細胞死が観察されないこと、TAK1欠損マクロファージにおいてCaspase及びRIPK3阻害剤の併用により細胞死を抑制できることも確認した。以上の結果から、TAK1は特定のTLRシグナル伝達経路において細胞死の誘導を抑制するよう機能していることが示唆された。次に細胞死誘導に関与するTAK1の上流で働くシグナル伝達分子の特定を試みた。MyD88欠損TAK1ΔM x TNFα-/-マウス及びRIPK1キナーゼ欠損TAK1ΔM x TNFα-/-マウスを作成し、マクロファージを調べたところ、TAK1ΔM x TNFα-/-マウス同様にLPS及びpoly(I:C)

刺激による細胞死を認めたことから、MyD88及びRIPK1のキナーゼ活性はTAK1欠損背景下におけるマクロファージ細胞死に寄与していないことが示唆された。予定していた研究実施計画をほぼ順調に遂行できた。また思いのほか結果を効率よく得ることができたため、得られた研究成果をまとめて国内及び国際学会で発表することもできた。昨年度までの解析から、TAK1欠損マクロファージはTLRリガンドであるLPSやpoly(I:C)あるいはTNFalpha刺激に伴いCaspase8依存的に細胞死を起こすことが判明し、このため当初アポトーシスによる細胞死であるものと考えられた。そこでこの細胞死誘導機構の詳細についてさらに解析を進めたところ、Caspase8/3のみならずCaspase1も活性化されること、そしてCaspase1の下流で制御されるGasdermin D(GSDMD)のタンパク分解が誘導されることを見出した。GSDMDの分解産物は、近年炎症性細胞死として注目されるパイロプトーシスの直接的誘導因子として機能することが示されてきた。このことからTAK1欠損マクロファージに見られた細胞死は、実はアポトーシスではなくパイロプトーシスによるものであることが判明した。次にTAK1欠損マクロファージにおいてパイロプトーシス誘導に関与する分子を特定するため、TLR下流に位置するTRIF分子に着目し、CRISPR/Cas9によるゲノム編集技術を利用してTRIF欠損背景下マクロファージ特異的TAK1欠損マウスを作成した。TAK1xTRIF二重欠損骨髄マクロファージを用いて解析したところ、LPS及びpoly(I:C)刺激による活性化Caspase8及び1の産生やGSDMDのタンパク分解が全て抑制されること、そして細胞死が完全に抑制されることを見出した。一方で、TNFalpha刺激に伴う細胞死はTAK1欠損マクロファージ同様観察された。これらの結果を総合すると、マクロファージにおいてこれまで知られていなかったTLR/TRIF/Caspase8/Caspase1/GSDMDシグナル伝達経路による炎症性細胞死誘導機構が存在すること、そしてこの経路をTAK1が抑制することで炎症反応を負に制御していることが判明した。今年度の研究成果から、シグナル伝達分子TAK1のマクロファージにおける作用機序と免疫恒常性維持との関連性が浮かび上がってきた。そこで次年度はTAK1によるマクロファージの制御機構について、in vitro及びin vivoでの解析を中心に据え研究活動を展開する。具体的には、まずin vitroにおける研究展開において骨髄由来培養マクロファージを用いたシグナル伝達経路について網羅的な解析を行い、作用機序の柱となりうるシグナル伝達経路の特定を目指す。次にin vivo解析においては、TAK1欠損マウスに見られる炎症病態を制御していると考えられる候補分子群に着目し、それらの欠損マウスとの交配によりTAK1 x (候補分子群)との多重欠損マウスを作成し、病態制御機構について解析を行う予定である。今年度の研究成果から、TAK1がある特定のTLRシグナル伝達経路において細胞死を抑制するよう機能していることが明らかになった。
地域における高齢者の咀嚼能力と現在歯―補綴歯―機能歯の構成比

高齢者のみならず,私たちの咀嚼能力は現在歯数やその機能に依存しているおり,自分の歯の数が多いほど咀嚼能力が高い。しかし一方で,多くの高齢者は,義歯などの補綴物による人工の歯の力を借りることにより,喪失した咀嚼機能を維持回復して日々の生活を営んでいるという実情もある。本研究は,機能歯三角マップを応用して,現在歯数ばかりでなく補綴歯数も考慮に入れた機能歯数と咀嚼能力との関係を検討することを目的とした。本研究では,3種類の調査データを使用した。すなわち,東京都老人総合研究所の中年からの老化予防に関する医学的研究,日本大学総合学術情報センターの縦断研究プロジェクトによる全国訪問聞き取り調査の結果,それに東京都の離島における高齢者の体力調査資料である。そのような資料を用いて,性,咀嚼能力別に機能歯三角マップ上に個人を布置しその分布を調べた。その結果,咀嚼能力の高い咀嚼能力5の群では,現在歯数20本以上の人が,男女とも確実に存在していた。これとは別に総義歯を含めた機能歯数25本以上の高齢者は,さらに高い割合を示しており,総義歯装着などの補綴処置が咀嚼能力回復に確実に貢献していることを実証的に示した。咀嚼能力が低下するにつれ,現在歯数の多い者の割合は減少していた。特に十分な咀嚼能力が得られない咀嚼能力1は,人数にして1割未満であるが,義歯装着などにより歯の本数はほぼ回復されていたものの,十分な機能回復はなされていなかった。女性の方が男性に比べ相対的に咀嚼能力の低い者の割合が高かったので咀嚼筋力の関連もあろうが,現在使用中の義歯の質が向上すれば,さらに多くの高齢者の咀嚼能力回復が期待できよう。本研究を通じて,機能歯三角マップ法による地域高齢者の歯科保健水準の新しい評価方法は,かなり有効であることを確信した。本研究は、加齢とともに種々の理由で脱落していく個人の歯の状態と、脱落によって喪失した歯の機能を歯科補綴によって回復する有り様を、私が発案した機能歯三角グラフ上で把握するとともに、咀嚼能力を測定してその結果も合わせて評価する試みである。研究資料には、当初予定の平成4年以来10年間継続的に実施されてきた秋田県南外村の65歳以上村民全員の健診資料に加え、本年度から開始した日本大学の高齢者全国調査の資料も用いた。本年度研究実績:秋田県南外村の資料で、機能歯三角グラフを利用し歯の喪失と歯科補綴による咀嚼能力回復との関連について、その方法論の吟味を重ねた。平成12年7月、南外村調査にスタッフとして参加し、歯科健診と咀嚼能力測定を担当した。南外村歯種別データのコンピュータ入力(平成4、6、8、9年度分のデータ)を実施した(継続中)。日本大学高齢者全国調査データについて、機能歯三角グラフを利用した咀嚼能力解析を実施し、横浜市における、第11回日本老年歯科医学会においてその結果の一部を報告した。

新たな研究地域として関西の一村を想定し、同村を訪問して歯科保健担当者に共同研究の打診を行なった(検討中)。機能歯三角グラフをよりビジュアルなものに改善するための、コンピュータグラフィックスによる検討を開始した。研究結果(中間的報告):高齢者の咀嚼能力を評価する上で、本研究で用いたG-1ゼリーによる方法は客観性が高いことを再確認した。咀嚼能力を構成する要素として、現在歯数に補綴歯数を加えることが必要であることが確かめられた。即ち、現在歯数と補綴歯数を合計した「機能歯数」を歯科保健の指標とすることは、特に自分の歯を失っている方が多数を占める高齢者においては有効であると思考するに至った。本研究の今後の課題:地域高齢者データと全国高齢者データとの比較。歯種別データの、機能歯三角グラフへの応用など。本研究は、加齢とともに種々の理由で脱落していく個人の歯の状態と、脱落によって喪失した歯の機能を歯科補綴によって回復する有り様を、私が発案した機能歯三角グラフ上で把握するとともに、咀嚼能力を測定してその結果も合わせて評価する試みである。研究資料には、当初予定の平成4年以来10年間継続的に実施されてきた秋田県南外村の65歳以上村民全員の健診資料に加え、本年度から開始した日本大学の高齢者全国調査の資料も用いた。さらに,本年度は,東京都新島村における1999年の調査資料による,歯種別データの応用を試みた。本年度までの研究実績:秋田県南外村の資料で、機能歯三角グラフを利用し歯の喪失と歯科補綴による咀嚼能力回復との関連について、その方法論の吟味を重ねた。南外村歯種別データのコンピュータ入力(平成4、6、8、9年度分のデータ)を実施した。日本大学高齢者全国調査データについて、機能歯三角グラフを利用した咀嚼能力解析を実施し、横浜市における、第11回日本老年歯科医学会においてその結果の一部を報告した。特に,本年度は,歯種別の機能歯三角グラフを作成した。研究結果:高齢者の咀嚼能力を評価する上で、本研究で用いたG-1ゼリーによる方法は客観性が高いことを再確認した。即ち、現在歯数と補綴歯数を合計した「機能歯数」を歯科保健の指標とすることは、特に自分の歯を失っている方が多数を占める高齢者においては有効であるとの思考するに至った。歯種別データでは,性別で分布が異なり,上下顎で分布が異なることが分かった。ここで描かれたのグラフは,これまでに例を見ない全く新しいものである。
転移関連遺伝子ネットワークを制御するホメオボックス遺伝子

本研究は、胚発生過程において空間的位置情報のマスター遺伝子として働くホメオボックス遺伝子が癌細胞において異常発現した場合、転移・浸潤性が変化するという仮説のもとに行った。HOXD3ホメオボックス遺伝子発現ベクターあるいはアンチセンス発現ベクターをヒト癌細胞に導入・発現させ、以下の検討を行った。1.HOXD3過剰発現させたヒト肺癌細胞株と非発現株からmRNAを抽出し、cDNAマイクロアレイ解析を行い、両者間における遺伝子発現パターンを比較した。その結果、HOXD3の過剰発現によって発現の変動する遺伝子は、1)細胞外基質成分、2)細胞接着因子、3)細胞外基質の分解に関わる分子、4)細胞骨格関連分子、および5)増殖因子・サイトカインの5つのグループに分けられた。特に、HOXD3過剰発現株におけるデスモグレイン、デスモプラキン、プラコグロビン、E-カドヘリンなどの細胞間接着因子の発現低下ならびにインテグリンα4、β3、CD44、トロンボスポンジン、プラスミノーゲン・アクチベーター・インヒビター、MMP-2、uPAなどの細胞-基質間接着因子や細胞外基質分解酵素の発現亢進が浸潤・転移の促進に関与していることが示唆された。2.HOXD3アンチセンス発現ベクターをヒト悪性黒色腫A375M細胞に導入・発現させると、細胞浸潤能、運動能が低下した。その際、トロモミオシン2やcdc42interacting protein4などの細胞骨格関連分子の発現亢進が認められた。以上より、HOXD3の異常発現は、多岐にわたる転移・浸潤関連遺伝子、とりわけ細胞接着因子や細胞骨格蛋白の発現を変化させ、ひいては転移・浸潤を促進することが示唆された。HOXD3ホメオボックス遺伝子を導入して過剰発現させたヒト肺癌細胞とその対照細胞(HOXD3非発現細胞)を用いて以下の検討を行った。1.HOXD3過剰発現株と非発現株からmRNAを抽出し、differential display法およびDNAマイクロアレイ解析を行い、両者間で発現を異にする遺伝子を検索した。その結果、HOXD3過剰発現株において、デスモグレイン、デスモプラキン、プラコグロビン、コネキシン43などの細胞間接着因子の発現が低下していること、一方、インテグリンβ3、CD44、トロンボスポンジン、プラスミノーゲン・アクチベーター・インヒビター、MMP-2、uPAなどの細胞-基質間接着因子や細胞外基質分解酵素の発現が亢進していることが明かとなった。2.HOXD3過剰発現株と非発現株をヌードマウスの尾静脈内に接種し、転移の有無を両者間で比較した。その結果、HOXD3過剰発現株は非発現株や親株に比べ、肺への転移能が有意に高いことが明かとなった。以上より、ヒト肺癌細胞におけるHOXD3の異常発現は、多岐にわたる転移・浸潤関連遺伝子の発現を転移促進方向に変化させること、さらにその変化はin vivoにおける転移能にも反映されていることが示唆された。

その結果、HOXD3の過剰発現によって発現の変動する遺伝子は、1)細胞外基質成分、2)細胞接着因子、3)細胞外基質の分解に関わる分子、4)細胞骨格関連分子、および5)増殖因子・サイトカインの5つのグループに分けられた。特に、HOXD3過剰発現株におけるデスモグレイン、デスモプラキン、プラコグロビン、E-カドヘリンなどの細胞間接着因子の発現低下ならびにインテグリンα4、β3、CD44、トロンボスポンジン、プラスミノーゲン・アクチベーター・インヒビター、MMP-2、uPAなど細胞-基質間接着因子や細胞外基質分解酵素の発現亢進が浸潤・転移の促進に関与していることが示唆された。2.HOXD3アンチセンス発現ベクターをヒト悪性黒色腫A375M細胞に導入・発現させると、細胞浸潤能、運動能が低下した。その際、トロモミオシン2やcdc42 interacting protein 4などの細胞骨格関連分子の発現亢進が認められた。以上より、HOXD3の異常発現は、多岐にわたる転移・浸潤関連遺伝子、とりわけ細胞接着因子や細胞骨格蛋白の発現を変化させ、ひいては転移・浸潤を促進することが示唆された。
家族性アルツハイマー病原因遺伝子プレセニリンの病理作用の解析

アルツハイマー病の一割弱を占める家族性アルツハイマー病の主要原因遺伝子は、長らく不明であったが、95年に同定され、プレセニリン(I・II)と命名された。その病理的作用の解明は、今後のアルツハイマー病研究の方向を左右するほどに重要である。プレセニリン蛋白質は、7回膜貫通型の構造を有し、線虫を含む下等動物にまで存在する。このように動物界に広く存在する蛋白質が、アルツハイマー病というヒト特異的神経疾患に関与する機構は、いまのところ不明である。病理学的作用の一つの可能性としては、アルツハイマー病の病理学的特徴であるβアミロイド沈着を促進することが考えられる。96年になってYounkinらのグループは、患者由来の培養繊維芽細胞が通常のものと比較して不溶性βアミロイドペプチド(Aβ1-42)の生産が上昇していること、また、血漿中の濃度もコントロールよりも高いことを示した。しかし、これは個体差によるばらつきを含む間接的証拠に過ぎない。そこで、我々は、細胞に遺伝子を導入し発言する実験系を用いて、直接的にβアミロイド産生への作用を検証した。その結果、プレセニリンIおよびIIの両方の病原性突然変異が、細胞からのAβ1-42産生を上昇させることを明らかにした。このことによって、早期発症型家族性アルツハイマー病の原因となるすべての遺伝子が、βアミロイド産生に直接作用を与えることが示された。すなわち、アルツハイマー病における「βアミロイド仮説」が実質的に証明されたといってよい。この事実は、今後の孤発性アルツハイマー病の研究の方向性に対する影響も大きい。また、今のところ未同走であるγセクレターゼを知る手がかりになることが期待される。さらに、プレセニリンと特異的に相互作用する細胞内カルシウム結合蛋白質も同定したので、今後さらに検討を加えたい。このように動物界に広く存在する蛋白質が、アルツハイマー病というヒト特異的神経疾患に関与する機構は、今のところ不明である。96年になってYounkinらのグループは、患者由来の培養繊維芽細胞が通常のものと比較して不溶性βアミロイドペプチド(Aβ1-42)の産生が上昇していること、また、血漿中の濃度もコントロールよりも高いことを示した。そこで、我々は、細胞に遺伝子を導入し発現する実験系を用いて、直接的にβアミロイド産生への作用を検証した。このことによって、早期発症型家族性アルツハイマー病の原因となる全ての遺伝子が、βアミロイド産生に直接作用を与えることが示された。

この事実は、今後の弧発性アルツハイマー病の研究の方向性に対する影響も大きい。また、今のところ未同定であるγセクレターゼを知る手がかりになることが期待される。アルツハイマー病の一割弱を占める家族性アルツハイマー病の主要原因遺伝子は、長らく不明であったが、95年に同定され、プレセニリン(I・II)と命名された。その病理的作用の解明は、今後のアルツハイマー病研究の方向を左右するほどに重要である。プレセニリン蛋白質は、7回膜貫通型の構造を有し、線虫を含む下等動物にまで存在する。このように動物界に広く存在する蛋白質が、アルツハイマー病というヒト特異的神経疾患に関与する機構は、いまのところ不明である。病理学的作用の一つの可能性としては、アルツハイマー病の病理学的特徴であるβアミロイド沈着を促進することが考えられる。96年になってYounkinらのグループは、患者由来の培養繊維芽細胞が通常のものと比較して不溶性βアミロイドペプチド(Aβ1-42)の生産が上昇していること、また、血漿中の濃度もコントロールよりも高いことを示した。しかし、これは個体差によるばらつきを含む間接的証拠に過ぎない。そこで、我々は、細胞に遺伝子を導入し発言する実験系を用いて、直接的にβアミロイド産生への作用を検証した。その結果、プレセニリンIおよびIIの両方の病原性突然変異が、細胞からのAβ1-42産生を上昇させることを明らかにした。このことによって、早期発症型家族性アルツハイマー病の原因となるすべての遺伝子が、βアミロイド産生に直接作用を与えることが示された。すなわち、アルツハイマー病における「βアミロイド仮説」が実質的に証明されたといってよい。この事実は、今後の孤発性アルツハイマー病の研究の方向性に対する影響も大きい。さらに、プレセニリンと特異的に相互作用する細胞内カルシウム結合蛋白質も同定したので、今後さらに検討を加えたい。
地すべり発生に与える積雪・融雪の影響に関する研究

新潟県内の地すべり発生件数を調査した結果、地すべりは35月の融雪期、7月末の梅雨末期、1112月の降雨期に多く発生しており、特に融雪期の地すべり発生件数の多いことが改めて明白となった。また、多積年に多いことも判明した。そのために、本研究では地すべりの発生原因を土貭工学的立場から解明するために、現位置での地すベり面に作用する間隙水圧と地すべり地の水位測定と室内での土のせん断試験を行った。現位置での測定は新潟県能生のトチ山地すべり地、栃尾市入塩川地すべり地で行った。このような研究の結果は以下のとうりである。1)地すべり面で直接測定して間陳水圧とオールストレーナー付のパイプで測定した換算間隙水圧は一致しない。2)積雪量・融雪量から判断すると多積年には日雨量3060mmの雨が23週間降ったのと同じ影響があると言える。地すべり土塊地表部の土の浸透能から判断すると、これらの融雪水が地すべり面の間陳水圧を上昇させるとは考えられないので、地すべり面の間隙水圧の増大は地すべりブロックの上部・周辺部からの浸透水の水圧によって生じると言える。3)過去に発生した地すべりの再発生の防止対策を行うに必要となる土のせん断強さは間陳水圧の水昇を考慮した値でなければならない。そのために、一旦残留強さになった土を再圧密して、リングせん断試験によって過圧密土の最大せん断強さを求め、残留強さとの関係を求めた。この際、せん断による間隙水圧の発生もあるが、大変位を生じると過剰間隙水圧は零となるので、残留強さへの間隙水圧の影響は無視出来る。4)繰返し一面せん断試験によっても、残留強さを求めることが可能である。
内因性チャネルを用いた脳内レドックス環境イメージングと老化・病態脳研究への応用

機能分子への酸化修飾の蓄積は、老化や疾患発祥の主要因の一つと考えられている。したがって、脳内環境に関する研究を進める上で、酸化環境に着目することは有意義であると考えられるが、十分な定量性と空間分官能を有する測定法はこれまで確立されていなかった。申請者は近年、リアノジン受容体(RyR)のカフェインに対する応答性(CICR)は酸化シグナルによる影響を受けないが、一酸化窒素(NO)に対する応答(NICR)は阻害されることを見出し、NICR/CICR比の測定による酸化状態モニター法を考案した。本研究では、NICR/CICR比の測定による細胞内酸化状態モニター系を確立した上で、脳神経細胞内酸化環境をモニターし、老化・神経変性疾患との関連性解明を目指したが、研究期間内に以下のような成果が得られている。・若齢マウス個体由来の小脳スライス標本を、様々な濃度の過酸化水素で前処理し、カルシウムイメージング法によりプルキンエ細胞のNICR、CICRを測定し、NICR/CICR比を求めたところ、濃度依存的な低下が確認された。また、NICR/CICR比の低下に伴い、小脳で発現するRyRにおけるジスルフィド化修飾が増加することを、ジスルフィド化修飾を選択的に検出する生化学的手法を自ら確立して明らかにした。・個体の加齢に伴い、プルキンエ細胞のNICR/CICRの低下及び小脳におけるジスルフィド化修飾の増加が見られることを、生後20ヶ月齢の老齢個体マウスを用いて明らかにした。・ホスホチロシンアダプター分子の一種、ShcBの遺伝子欠損マウスにおいて、小脳依存的な運動学習が阻害されることを明らかにし、さらに、その原因として小脳平行線維シナプスの可塑性、小脳プルキンエ細胞における小胞体カルシウムストアの機能維持に阻害が見られることを示した。25年度が最終年度であるため、記入しない。機能分子への酸化修飾の蓄積は、老化や疾患発症の主要因の一つであると考えられている。したがって脳内環境に関する研究を進めるうえで、酸化環境に着目することは有意義であると考えられるが、十分な定量性と空間分解能を有する測定法はこれまで確立されていなかった。申請者は近年、リアノジン受容体(RyR)のカフェインに対する応答性(CICR)は酸化シグナルによる影響を受けないが、一酸化窒素(NO)に対する応答性(NICR)は酸化シグナルにより阻害されることを見出し、NICR/CICR比の測定による酸化状態モニター法を思いついた。このような背景を基に、本研究は、NICR/CICR比の測定による細胞内酸化状態モニター系を確立したうえで脳神経細胞内酸化環境をモニターし、老化・神経変性疾患との関連性解明を目指すとともに、薬物投与による脳内酸化環境の操作が老化・神経変性疾患に及ぼす影響を明らかにすることを目的として計画された。平成24年度には、小脳プルキンエ細胞をモデル系として、NICR/CICR比測定による神経細胞内酸化環境モニター法確立を目的として研究を進め、以下に記すような結果を得た。1.若齢マウス個体由来の小脳スライス標本を、様々な濃度の過酸化水素で前処理し、カルシウムイメージング法によりプルキンエ細胞のNICR、CICRを測定し、NICR/CICR比を求めたところ、濃度依存的な低下が見られた。2. NICR/CICR比の低下に伴い、実際に小脳RyRの酸化修飾、すなわちジスルフィド結合の形成が上昇することを、ビオチンスウィッチアッセイと言う生化学的手法を用いて確認した。3.実際に個体の加齢に伴いNICR/CICR比の低下および小脳における酸化修飾の蓄積がみられることを、生後20ヶ月齢の老齢個体由来の小脳スライス標本を用いて確認した。

本研究は、NICR/CICR比の測定による細胞内酸化状態モニター系を確立したうえで脳神経細胞内酸化環境をモニターし、老化・神経変性疾患との関連性解明を目指すとともに、薬物投与による脳内酸化環境の操作が老化・神経変性疾患に及ぼす影響を明らかにすることを目的として計画されたものである。計画初年度である平成24年度には、小脳プルキンエ細胞をモデル系として、NICR/CICR比測定による神経細胞内酸化環境モニター法確立することが当初の目的であった。そして、研究実績の概要にも記したように、1)若齢マウス個体由来の小脳スライス標本を、様々な濃度の過酸化水素で前処理し、カルシウムイメージング法によりプルキンエ細胞のNICR、CICRを測定し、NICR/CICR比を求めたところ、濃度依存的な低下が見られた、2) NICR/CICR比の低下に伴い、実際に小脳RyRの酸化修飾、すなわちジスルフィド結合の形成が上昇することを、ビオチンスウィッチアッセイと言う生化学的手法を用いて確認した、3)実際に個体の加齢に伴いNICR/CICR比の低下および小脳における酸化修飾の蓄積がみられることを、生後20ヶ月齢の老齢個体由来の小脳スライス標本を用いて確認した、という結果が得られた。これらの結果が得られたことは、今年度における当初の計画目標がほぼ達成されたことを意味する。一方、次年度以降に予定されている、中脳黒質ニューロンなどの神経変性疾患に関与する神経細胞に、NICR/CICR比の測定におる細胞内酸化環境のモニター法を適用するまでには至らなかった。したがって、予想を上回る成果が得られたとは表現しかねる。そこで、(2)おおむね順調に進展しているを自己点検による評価とした。平成25年度には、これらの成果を受けて、神経変性疾患と脳内酸化環境との関係をさらに明らかにするために、以下に記す研究を計画している。1.中脳ドーパミン細胞のレドックス環境モニター細胞内レドックス環境と神経変性疾患との関連性を示す一環として、パーキンソン病(PD)への関与が示されている中脳ドーパミン細胞でもCa2+イメージングによるレドックス環境モニターが可能であることを示す。異なる濃度の酸化試薬(過酸化水素、クロラミンT等)で前処理された中脳スライス標本上のドーパミン細胞にホールセルパッチクランプ法によりCa2+蛍光指示薬(緑色蛍光)を導入し、NO応答(NICR)及びカフェイン応答(CICR)を測定し、酸化試薬の濃度依存的なNICR/CICR比の低下を確認する。さらに、生化学的手法によるタンパク質の酸化状態の検出を並行して行い、酸化試薬の濃度依存的なNICR/CICR比の低下がタンパク質分子の酸化と対応することを確認する。2.神経変性疾患による細胞内酸化の進行様々な神経変性疾患と酸化ストレスとの関係が示唆されている。特にミトコンドリア複合体Iの活性阻害薬(MPTP、ロテノン)がヒトやマウスでPD症状を誘導することから、PD発症/進行時における細胞内酸化が推測される。そこで、MPTP或いはロテノン投与マウスの中脳ドーパミン細胞のNICR/CICR比を測定し、PD発症/進行と脳内レドックス環境変化との関連性を明らかにする。
新硫酸転移酵素によるペプチドやたん白のチロシン基の硫酸化

本研究で発見したヒト腸内菌ユ-バクテリウム由来の新しい硫酸転移酵素を用いて、フェノ-ル性水酸基の硫酸化について検討し、次の研究業績をあげた。1.チロジン含有ペプチドであるCCK、VIP、ILーII、アンジオテンシン、ヒルジン、ガストリン、エンケファリンなどのホルモンおよび絹フィブロインの酵素的硫酸化を行った。脳腸ペプチドは硫酸化によってほルモン活性は著しく増大したが、他のペプチドのホルモン肝性は低下した。ファブロインは硫酸化により水溶性が増加した。さらに硫酸化ペプチドは各種プロテア-ゼによる加水分解に抵抗性を示した。2.カテコ-ルアミン類のフェノ-ル基はよく硫酸化され、生理活性を失った。植物成分であるポリフェノ-ル(フラボン、タンニンなど)も位置特異的に硫酸化された。これらはいずれも水溶性となり、体内での解毒反応の一つと推定される。また、フェノ-ル性抗生物質も硫酸化されたが、抗菌活性は変動しなかった。3.本酵素を単一にまで精製し、酵素化学的性質を明らかとした。本酵素はマグネシウムを持つ金属酵素で、反応はピンポンーバイバイ機構により進行し、また、基質のpKaと反応速度、至適pHとの関係を証明した。4.本酵素産生菌は基質添加培養で適応的に酵素を産生し、グリシン添加培地で菌膜が脆弱化し、量産が容易になった。また、本酵素を固定化することに成功し、長期安定に使用することが可能となった。以上の知見により、経口的に摂取される食品や医薬品中のフェノ-ル化合物が本酵素により消化管内において硫酸化され、吸収、排泄に影響し、解毒効果を示すものと推定した。また、チロジン含有ペプチドやポリフェノ-ルの特異的硫酸化法としての生物工学的応用が期待される。ヒト腸内菌EubacteriumA-44より分離精製した新硫酸移転酵素を用いて次の研究結果を得た。1.化学合成した33個のアミノ酸よりなるヒトのコレシストキンペプチドを原料として本酵素を用いてそのチロシン残基を硫酸化しコレシストキニン(CCK-33)を収量よく調製することに成功した。CCK-33はモルモット摘出胆のう収縮において原料ペプチドの約百倍の活性を示し、--ラットの膵液分泌においては数百倍の活性を示した。またCCK-33はラットに10^<-8>M/kgの腹腔内投与によって摂食量および胃液分泌を抑制したが、原料ペプチドにはこれらの抑制作用は認められなかった。現在、VIP、IL-2、アンジオテンシン-II、-III、ヒルジンガストリンなどのペプチドの酵素的硫酸化を行ない、それらの生現活性について検討中である。2.本酵素によりカテコ-ル、フラボン、カルコン、キサントンおよびタンニンのフェノ-ル性水酸基が硫酸化されることを証明した。特にド-パミン、ケルセチン、カテキンについては硫酸化体の化学構造を決定した。この結果、本酵素はポリフェノ-ル類の特異的な位置を簡便に硫酸化する方法として有用であることが明らかになった。現在食品中のポリフェノ-ルが消化管内においても同様に硫酸化されている可能性について検討している。3.本酵素はEDTAにより阻害され、Mg^<++>によって活性化され、Mg^<++>を分子中に数個含む金属酵素であることが明らかとなった。本酵素はATP、GTP、UTPやCTPにより阻害される。Mg^<++>存在下α-あるいはγ-^<32>PATPを加えると本酵素分子中にATPがそのまま結合することが明らかとなった。従って本酵素はMg^<++>とヌクレオチドミリン酸によってアロステリックに活性が制御されているものと思われる。現在本酵素の反応機構について解析を行なっている。