hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
痴呆高齢者の睡眠・覚醒リズムを整える看護援助に関する研究

1)長期療養施設で生活する認知症高齢者の睡眠・覚醒リズムと照度の実態調査認知症高齢者が生活する場の光環境を調整するために,まずは建物の立地の特殊性もふまえた構造的な照度の特性と,認知症高齢者が実際に受けた照度の両面からの総合的なアセスメントが重要である。これをもとに生活の場における光を有効活用するために,「屋内採光を活用するための居場所の選択」「移動能力に応じた居場所づくり」「屋外活動の導入」「光を受けるタイミングの意図的な計画」といったケアの方向性が見出された。2)認知症高齢者の睡眠・覚醒状態を把握するための方法の検討について睡眠・覚醒観察法の異なる観察間隔における相違,睡眠・覚醒観察法とアクチグラフにおける睡眠・覚醒状態の把握の相違について分析した。その結果,以下のような示唆が得られた。(1)認知症高齢者に対して睡眠・覚醒観察法とアクチグラフの2つの測定方法で測定された,「一日の総睡眠時間」「夜間睡眠時間」「夜間睡眠率」「夜間中途覚醒回数」は,すべてに違いがみられた。(2)睡眠・覚醒観察法は,観察間隔よりも短い間隔で中途覚醒が起こると見逃す可能性が高くなり,臥床閉眼状態で身体の動きが止った時や寝息がない時に,睡眠・覚醒の判別を誤りやすい可能性がある。(3)アクチグラフは,筋攣縮のような不随意な動き,掻く,寝具をまさぐる動きは「覚醒」と判別し,覚醒していても著しく身体活動性が低下していると「睡眠」と判別しやすい傾向がある。(4)夜間中途覚醒が少なく,睡眠がまとまっている対象の睡眠・覚醒状態の把握には,睡眠・覚醒観察法およびアクチグラフのどちらでも有効である。睡眠・覚醒観察法は,身体活動性が低下している対象や,身辺への関心や焦燥感が強くアクチグラフ装着の協力を得られない対象の睡眠・覚醒状態の把握に有効である。アクチグラフは,夜間中途覚醒が多く睡眠が断片化している対象の睡眠・覚醒状態の把握に有効である。施設で生活する痴呆高齢者は,生活活動性の低下や低照度環境によって,睡眠・覚醒リズムの同調因子の減弱を生じやすいことが指摘されている。そこで平成15年度は,病院に入院している痴呆高齢者の睡眠・覚醒リズムと施設の照度環境を調査した。対象は、長期療養型医療施設に入院し痴呆と診断されている高齢者20人(男性3人,女性17人,年齢86.7±6.4歳)で、NMスケールでの痴呆の重症度では中等症7人,重症13人であった。痴呆高齢者の睡眠・覚醒リズムを知るために,連続する3日間30分毎に行動的睡眠を観察した。同時に居場所の照度測定を1時間毎に行なった。病棟の照度特性を知るために,照度センサー(T&D社製)を用いて快晴の日の病棟内の各病床,パブリックスペースであるデイルーム,ナースステーション付近を1時間毎に測定した。調査は平成15年12月中旬に行なった。病棟は廊下をはさんで南東側と北西側に配置されており,パブリックスペースは北西側にあった。各場所の最高照度時刻はほぼ午前7-11時だった。南東側病床は概ね2,500luxを超えたが,北西側病床は1,000lux未満で,有意な差はないものの南北の病床照度に違いがあった。南東側でも2,500luxを超えなかった廊下側病床では,窓側の照度と有意な差が認められた。

パブリックスペースは,一日を通して2,000lux未満だった。睡眠状態が良好な者は9人で,他の11人には夜間長時間の中途覚醒や頻回覚醒,日中の長時間の睡眠が見られた。睡眠状態に関わらず,一日の5割以上臥床して過ごす者が大半を占めていた。対象の照度が最大になる時刻の行動的睡眠をみると,睡眠状態が良好な者は82%覚醒しているのに対して,睡眠状態が不良なものは55%しか覚醒していなかった。対象の居場所は,移動能力に関わらず病床,デイルームとナースステーション付近の2-3か所に限られていた。以上のことから,(1)一日の5割以上病床にいる対象が大半であり,特に北西側に病床がある場合は低照度になりやすい,(2)病床から移動してもパブリックスペースが低照度である,(3)最大照度時刻に睡眠していることで,採光を睡眠・覚醒リズムの同調因子としてうまく用いていないことが考えられる。なお,詳細な分析については今度早急に取りかかる予定である。昨年度に施行した調査データの分析に基づいて,今年度は,以下の成果発表を行なった。第5回日本痴呆ケア学会大会では,「施設で生活する痴呆高齢者の睡眠状態と居場所の照度との関連」のテーマで,施設内で対象が過ごす場の照度の違いが,睡眠状態(夜間睡眠の持続性,日中の睡眠時間,入眠時刻の規則性)に何らかの影響を及ぼしている可能性について述べた。日本老年看護学会第9回学術集会では,「痴呆高齢者における睡眠状態の観察-アクチグラフと行動的睡眠観察の比較-」について発表した。痴呆高齢者の睡眠状態の特徴をとらえるために,従来から行なわれてきた行動的睡眠観察のあり方についてアクチグラフとの比較から以下のように考察した。(1)短時間で睡眠と覚醒を頻回に繰り返し,アクチグラフにおいて著しく睡眠判別区間が断片化している場合は,行動的睡眠観察ではその状態をとらえることはむずかしいものの,30分ごとに行動的睡眠を観察することで,中途覚醒が頻回な睡眠の特徴をある程度とらえられる可能性があると示唆される。(2)身辺への関心が保たれていたり焦燥感が強い痴呆高齢者では,活動量計を装着する協力を得られないこともあり,このような対象においては30分ごとの行動的睡眠観察が有効であると考える。(3)睡眠中でも,掻破行為や痴呆高齢者にみられる何かをつかもうとするような上肢の動きは,アクチグラフでは覚醒と判別され,身体活動量が低下している場合では,覚醒していてもアクチグラフでは睡眠と判別される可能性がある。今年度成果発表した演題については,随時,投稿準備に入る予定である。当初,今年度に計画していた試験調査は,実施対象施設の選択と調整に時間を要したため,次年度への持越し課題となった。痴呆高齢者の睡眠・覚醒リズムが回復していく際に,自発性の向上,集中力の向上などの変化が表れることが先行研究で明らかになっていることから,それらの評価方法については次年度も継続して検討する。昨年度に成果発表した,認知症高齢者の睡眠・覚醒状態を把握するための方法の検討について,睡眠・覚醒観察法の異なる観察間隔における相違,睡眠・覚醒観察法とアクチグラフにおける睡眠・覚醒状態の把握の相違について分析した。対象は,施設療養する中等症から重症の認知症高齢者10人のうち,アクチグラフ装着が継続困難な対象を除いた6人である。方法は,睡眠・覚醒観察法(30分と60分間隔)とアクチグラフによる連続3日間の同時測定を実施し,「一日の総睡眠時間」「夜間睡眠時間」「夜間睡眠率」「夜間中途覚醒回数」について比較分析した。
リサイクル可能な新規均一系金属錯体触媒の開発

本研究では、コア部中心に三級窒素を有するデンドリマー支持体を基にデンドリマー固定化酸化オスミウム触媒を合成し、これを用いてオレフィンのジヒドロキシル化反応を行い、新規均一系酸化オスミウム触媒の有効性を明らかにした。このものを用いた場合、コア部中心に三級窒素を持たない触媒を用いた場合よりも、ジヒドロキシル化反応におけるオスミウムの溶出が抑えられ、また、反応終了後は再沈殿により触媒は回収され、再利用も可能であった。昨年度コア部の中心に三級窒素を有するデンドリマー固定化酸化オスミウム触媒が良好な触媒活性を与えることを明らかにしたので、今年度はまず当該構造の最適化を試みた。その結果、コア部の中心に三級窒素を2つ有するデンドリマー固定化酸化オスミウム触媒は、全く触媒活性を有しないことが分かり、各種三級アミンを共存させジヒドロキシル化反応を行った結果と併せ、分子内三級窒素導入の新規効果を明らかにすることができた。そこで、デンドリマーコア部の中心に三級窒素を一つ有するデンドリマー固定化酸化オスミウム触媒を用いて、種々のオレフィンのジヒドロキシル化反応を行ったところ、スチレン類縁体、鎖状オレフィンおよび環状オレフィン等の何れのオレフィンの場合も、対応するジオール体が収率よく得られ、またこれまでに報告された不均一系酸化オスミウム触媒と比較して反応が速いことがわかった。また、電子求引基を有するオレフィンや内部オレフィン等の比較的反応性の低いオレフィンを用いた場合でも、反応時間を延ばすことにより、収率よく対応するジオール体が得られた。さらに、デンドリマーコア部の中心に三級窒素を一つ有するデンドリマー固定化酸化オスミウム触媒と光学活性配位子として(DHQ)2PHALをそれぞれ1 mol%用い不斉ジヒドロキシル化反応を行った。反応終了後再沈殿により、デンドリマー固定化触媒と光学活性配位子両者を回収でき、光学活性配位子を再び添加することなく繰り返し不斉ジヒドロキシル化反応が達成された。さらに多様な触媒活性が期待される含窒素複素環カルベン-金錯体触媒の活性向上と長寿命化を企図し、含窒素複素環カルベン-金錯体をデンドリマーコア部に導入したデンドリマー固定化カルベン-金錯体を新規に合成することができた。前年度に合成したデンドリマー固定化含窒素複素環カルベン-金錯体を触媒として用い、プロパルギルアミンと二酸化炭素との反応を試みたところ、メタノール溶媒中室温で、触媒として第1世代のデンドリマー固定化含窒素複素環カルベン-金錯体を用いた場合、低収率ながら目的生成物の2-オキサゾリジノンが得られた。また、触媒のデンドリマーの世代に関わらず、反応温度を上げることにより収率は向上し、さらに第1世代の触媒よりも第2世代の触媒を用いることにより、良好な収率で2-オキサゾリジノンが得られ、均一系触媒であるデンドリマー固定化触媒の優位性が示された。また、デンドリマーを支持体とする酸化オスミウム触媒のコア部を替え、オレフィンのジヒドロキシル化反応におけるそれぞれの触媒活性および反応中のオスミウムの溶出率について比較検証した結果、デンドリマーのコア部の中心に酸素原子を有する触媒は、配位性置換基を有しない触媒と同程度の反応性及びオスミウムの溶出率を示した。一方、コア部の中心に三級窒素を有する触媒を用いた場合、反応性は同程度ながらオスミウムの溶出が抑制された。次に、コア部の中心に三級窒素を有する触媒を用い、ジヒドロキシル化反応における触媒の回収、再利用について調べた結果、触媒は再沈殿により回収され、再利用を行うことにより、5回目までいずれも収率よく対応するジオール体が得られ、デンドリマー固定化に基づく、触媒のリサイクル可能性等の有用性が示された。また、オスミウムの溶出率は触媒のリサイクルに伴い抑制される傾向が見られ、さらに、本触媒は広い基質一般性を有することや、不斉反応に適用可能であることも分かり、均一系触媒であるデンドリマー固定化酸化オスミウム触媒の汎用性が示された。近年、固相固定型オスミウム触媒の開発により、オレフィンのジヒドロキシル化反応において触媒の回収や再利用が可能となったが、これらは不均一系であるが故に触媒活性が十分ではない。一方我々は、デンドリマーのコア部にオスミウムを固定化することにより、ジヒドロキシル化反応が均一系で円滑に進行し、さらに再沈殿により触媒の回収も可能であることを明らかにした。今回我々は、コア部にクリプタンド骨格やコア部中心に三級窒素を有する支持体を基にデンドリマー固定型酸化オスミウム触媒を合成し、これを用いてオレフィンのジヒドロキシル化反応を行った。まず、DMF中で[2,2,2]クリプタンドやN,N,N',N'',N'' -ペンタメチルジエチレントリアミン、と第3世代のポリ(アリールエーテル)デンドロン臭化物を反応させ、対応するビス(四級アンモニウム塩)コアデンドリマーをそれぞれ合成した。

そしてこれらの塩化メチレン溶液にオスミウム酸カリウム水溶液を添加することにより、コア部にオスミウム酸イオンを固定化した触媒をそれぞれ得た。そこで、これらの触媒を1 mol%用い、オレフィンのジヒドロキシル化反応を行ったところ、いずれの場合もオレフィンは30分で消失した。反応後、再沈殿により触媒を回収して繰り返し反応を行った。その結果、5回目の反応でも良好な収率でジオール体を得ることができた。また、N,N,N',N'',N'' -ペンタメチルジエチレントリアミン由来の触媒は、コア部中心に三級窒素を持たない触媒を用いた場合よりも、ジヒドロキシル化反応におけるオスミウムの溶出が抑えられ、本触媒設計手法の有用性が示された。デンドリマー型支持体の多様化と各種遷移金属錯体への適用により、本触媒設計手法の一般性と汎用性が示され、さらに不斉反応にも適用可能なことから、高付加価値製品の製造をも可能としており、研究は順調に進展していると判断される。コア部にクリプタンド骨格を有するデンドリマー固定型酸化オスミウム触媒をはじめ各種デンドリマー固定型酸化オスミウム触媒を合成し、これらを用いオレフィンのジヒドロキシル化反応を行ったところ、オスミウムのリーチングの抑止が確認され、研究は順調に進展していると判断される。当初の研究計画どおり、各種触媒系に展開させる。特に含窒素複素環カルベン錯体触媒を用いた各種触媒系に適用させ、本触媒設計の有用性、汎用性を実証する。当初の研究計画どおり、他の金属や他の触媒反応に展開させる。またイオン交換による固定化に留まらず、カルベン錯体触媒等にも適用させ、本触媒設計の有用性、汎用性を実証する。上記研究の実施にあたり、研究費は消耗品(有機試薬、無機試薬、ガラス器具、理科学雑品)、国内旅費(成果発表)、その他(学会参加登録費、外注分析費)等に充当する。上記研究の実施にあたり、研究費の殆どは消耗品に充当する(試薬、ガラス器具、理化学雑品)。他に国内旅費(成果発表)、その他(学会参加登録費、外注分析費)等に充当する。
植物根アポプラストを対象としたAl障害機構の解析

VDAC破壊株を用いたクエン酸分泌機構の解析昨年度の解析においてライムギ根端でAlにより誘導される9種の膜タンパク質を同定した。このうちVDAC(Voltage-dependent Anion Channel)に着目し、相同遺伝子の領域にトランスポゾンが挿入されているシロイヌナズナタグラインを用いた解析を行った。シロイヌナズナVDAC破壊株ではAl無処理条件において野生株の約2倍のクエン酸が分泌されており、また細胞内クエン酸濃度も約1.5倍に上昇していた。シロイヌナズナには7種のVDACホモログが存在しており、破壊されたVDACの機能を他のアイソザイムが補ったためであると考えられ、VDACが有機酸の代謝ならびに分泌に影響を与える可能性が示された。Al耐性および感受性オオムギの根端における網羅的遺伝子発現解析オオムギはAl耐性において大きな品種間差があり、また耐性と根から分泌されるクエン酸の量には強い相関がある。このクエン酸分泌機構を明らかにするためにAl耐性種と感受性種を用いたマイクロアレイによる遺伝子発現解析を行った。解析にはBarleyl genechipを用いた。Alにより2倍以上の発現誘導が見られた遺伝子は耐性種、感受性種でそれぞれ149、211遺伝子であった。誘導された遺伝子の多くはストレス応答に関与しており、耐性種ではタンパク質分解に関連する遺伝子の増加が、感受性種においてはABCトランスポーターの誘導が特徴的であった。有機酸代謝の関連遺伝子は耐性種において誘導が認められず、転写レベルでの耐性機構には関与していないと考えられた。また耐性種においては複数の輸送体タンパク質が感受性種に対し恒常的に高い発現を示しており、現在これらの輸送体遺伝子の機能について解析を進めている。アポプラストタンバク質に対するAlの影響の解析植物根の細胞伸長に関与すると考えられるアポプラストタンパク質に対するAlの障害を検討した。ダイズ根の伸長帯アポプラストからタンパク質を抽出し、二次元電気泳動による解析を行ったところ、20μMのAl処理により抽出されなくなるタンパク質が3種確認された。これらタンパク質のうち分子量27kDaのタンパク質(SAP27;Soybean Apoplast Protein of 27 kDa)の抽出は処理後1時間以内にAlの影響を受けており、Alによる短時間での伸長阻害に関与している可能性が考えられた。このSAP27のN末端アミノ酸配列を6残基決定し、データベースにて検索を行ったところ、ダイズα-ガラクトシダーゼ中に同様の配列が確認された。Alによるアポプラストタンパク質不溶化機構の解析SAP27は1時間のAl処理後でも高濃度の抽出液を用いると抽出されることから、Alにより不溶化されていると考えられた。この機構を明らかにするため多価カチオン処理、低pH処理ならびに既知タンパク質不溶化機構である過酸化水素処理における解析を行ったがSAP27の不溶化は見られなかった。Alに特異的な現象であることが示唆されたため、有機酸によるAlの除去がSAP27の不溶化を緩和するか検討した。SAP27不溶化後に1mMクエン酸溶液(含0.2mM CaCl_2,pH4.5)で2時間育成すると根伸長速度の一時的な回復が見られ、またSAP27の可溶化も認められた。またAl処理根を10mMクエン酸溶液(同,4°C)で30分洗浄してAlを除いた場合もSAP27が可溶化したことから、アポプラストからのAl除去がタンパク質不溶化を解消すると考えられた。以上から有機酸放出によるAl毒性の緩和機構はアポプラストにおけるタンパク質の機能回復に対しても有効であることが示唆された。アポプラストにおける有機酸分泌機構の解析アポプラスト溶液を用いた有機酸定量手法の確立を試みた。アポプラスト溶液の抽出には遠心法を用い、細胞内に局在するリンゴ酸デヒドロゲナーゼ(MDH)を指標として細胞質液の混入が最小限となる条件を検討した。その結果、1000×gの遠心では総MDH活性の約5%がアポプラストで認められたのに対し、700×gでは1%以下であった。試料に用いたライムギではAlによるクエン酸分泌の誘導に数時間を要することが根圏への分泌量から明らかにされており、アポプラスト溶液においてもAl処理後6時間で分泌量の増加が確認された。また他の植物種においてもアポプラスト中の有機酸濃度を測定し、有機酸分泌によるAl無毒化機構の詳細な解析を行っている。ライムギ根端におけるAl誘導性膜タンパク質の解析ライムギのAl応答性クエン酸分泌機構に着目し、Alにより誘導される膜タンパク質、特にクエン酸分泌に関与するとされるアニオンチャンネルタンパク質の同定を試みた。アポプラストにおける有機酸分泌が十分に誘導される12時間のAl処理を行ったライムギの根端から可溶性、難溶性そして不溶性のタンパク質を抽出し、二次元電気泳動によりAl誘導性タンパク質の発現を解析した。膜タンパク質の候補として24のタンパク質が得られ、LC-MS/MSによる質量分析結果からアミノ酸配列の決定を行った。得られた配列情報を基に相同タンパク質のデータベース検索を行ったところ、9種のホモログが得られた。現在これらのタンパク質からH^+-ATPase、14-3-3タンパク質そしてアニオンチャンネルであるVDAC (Voltage-dependent Anion Channel)の遺伝子をクローニングし、Alによる発現誘導の解析を進めている。

このうちVDAC(Voltage-dependent Anion Channel)に着目し、相同遺伝子の領域にトランスポゾンが挿入されているシロイヌナズナタグラインを用いた解析を行った。シロイヌナズナVDAC破壊株ではAl無処理条件において野生株の約2倍のクエン酸が分泌されており、また細胞内クエン酸濃度も約1.5倍に上昇していた。シロイヌナズナには7種のVDACホモログが存在しており、破壊されたVDACの機能を他のアイソザイムが補ったためであると考えられ、VDACが有機酸の代謝ならびに分泌に影響を与える可能性が示された。Al耐性および感受性オオムギの根端における網羅的遺伝子発現解析オオムギはAl耐性において大きな品種間差があり、また耐性と根から分泌されるクエン酸の量には強い相関がある。このクエン酸分泌機構を明らかにするためにAl耐性種と感受性種を用いたマイクロアレイによる遺伝子発現解析を行った。解析にはBarleyl genechipを用いた。Alにより2倍以上の発現誘導が見られた遺伝子は耐性種、感受性種でそれぞれ149、211遺伝子であった。誘導された遺伝子の多くはストレス応答に関与しており、耐性種ではタンパク質分解に関連する遺伝子の増加が、感受性種においてはABCトランスポーターの誘導が特徴的であった。有機酸代謝の関連遺伝子は耐性種において誘導が認められず、転写レベルでの耐性機構には関与していないと考えられた。また耐性種においては複数の輸送体タンパク質が感受性種に対し恒常的に高い発現を示しており、現在これらの輸送体遺伝子の機能について解析を進めている。
汎化性能向上に資する大規模データセット構築のためのサンプル選択手法に関する研究

本研究では、汎化性の意味で識別性能等を向上させられる学習用大規模データセットの構築に資するため、学習用データセット構築をサンプル選択の問題と捉え、特徴空間上のサンプル分布に関する幾何的考察から新たな数理的手法を提案するとともに、この提案手法を用いて既存データセットの再構築を行うことで、所望の性能が得られることを実験的に示す。
大腸Label-retaining杯細胞の同定・機能解析と炎症粘膜再生への応用

本研究は研究代表者らが独自に見出した、マウス大腸近位粘膜に限局して長期に渡り生存する"ラベル保持杯細胞(LR型杯細胞)"の同定・機能解析を通じ、同粘膜に内在する特殊な傷害抵抗・組織再生機構を明らかにすると共に、潰瘍性大腸炎に対する「近位大腸の組織再生・維持特性を利用した粘膜再生医療」の開発を目的とする。この為、マウス大腸におけるLR型杯細胞特異的マーカー等の探索、生体モデルにおけるLR型杯細胞誘導オルガノイドの組織再生機能等を検討する。併せてヒトLR型杯細胞の誘導法探索とこれを用いた遠位大腸粘膜の「LR型杯細胞粘膜」への置換についても検証を加える。
水素量低減ＤＬＣを応用したインプラント周囲骨リモデリングの制御

口腔インプラント治療の成功のためには、強固なオッセオインテグレーション(骨結合)の獲得や骨のリモデリングに配慮したインプラント体の開発が必要である。我々は新規インプラント体材料として水素量低減DLCコーティングチタンに着目し、骨芽細胞および破骨細胞分化に対するin vitroでの影響を検討した。その結果、DLCには骨芽細胞および破骨細胞の分化制御に対して最適な水素量が存在することが示唆された。したがって、特定の水素量のDLCコーティングはインプラント治療におけるオッセオインテグレーション獲得効率の向上およびインプラントの長期安定のための有効なチタン表面修飾方法となる可能性があることが示された。平成24年度は、はじめに作製した水素量低減Diamond-1ike carbon(以下DLC)コーティングチタンを利用して、骨芽細胞と破骨細胞の分化に与える影響の解明と、適切な水素量の決定を試みた。その結果、水素量低減DLCコーティングチタンにおいて、骨芽細胞様細胞株MC3T3-E1細胞における骨芽細胞の分化マーカーであるtypel collagen mRNAの発現量を、非処理チタンと比較して経時的に有意に促進する水素量が存在することが確認された。同様に、破骨細胞前駆細胞様細胞株RAW264.7細胞においてもsRANKLを添加した場合、破骨細胞の分化マーカーであるTRAPおよびcathepsin K mRNAの発現抑制が認められる水素量が存在することが確認された。以上より,水素量低減DLCコーティングチタンには、周囲の細胞に影響を与える適切な水素量が存在する可能性が示唆された。よって,この両者の細胞に対して最適な条件範囲の中で今後の研究を遂行する予定である。また、インプラント周囲炎に関与が考えられるサイトカインについても検討を加えた。平成25年度は、平成24年度に得られた、水素量低減DLC成膜処理を施したJIS2種チタンが、マウス破骨細胞様細胞株であるRAW264.7細胞およびマウス骨芽細胞様細胞株であるMC3T3-E1細胞の分化に与える影響について、さらなる詳細な検討を行い、その有用性についてエビデンスを集積した。まず、水素量低減DLC成膜処理を施したJIS2種チタン上にて、可溶性RANKL存在下でRAW264.7細胞を培養した。その結果、どの水素量の水素量低減DLC成膜処理を施したJIS2種チタンにおいても、破骨細胞分化に必須のマスターレギュレーターであるNFATc1タンパクの発現および破骨細胞分化マーカーの発現が、未処理JIS2種チタン上に比較して抑制された。このことから、破骨細胞の分化に対してはどの水素量においても高品質DLC成膜の有用性が一定に保たれることが示唆された。次に、水素量低減DLC成膜処理を施したJIS2種チタン上にてMC3T3-E1細胞を培養した。その結果、特定の水素量において、骨芽細胞分化マーカーの上昇が認められた。よって、骨芽細胞の分化においては有効な水素量が存在する可能性が示唆された。今後、さらにエビデンスの蓄積を行う予定である。また、IL-1のファミリーサイトカインであるIL-33のRANKL発現への関与についても検討を行った。MC3T3-E1細胞の分化誘導において、IL-33の刺激により、RANKL mRNAおよびRANKLタンパクの発現が有意に促進した。さらに、IL-33誘導性RANKLの発現に関与するMAPKシグナル経路を探索した。IL-33の刺激によりリン酸化が認められたERK、p38、JNK経路のうち、ERK、p38経路を抑制するとRANKL mRNAの発現が有意に抑制された。これらの結果から、骨芽細胞様細胞株MC3T3-E1細胞のRANKLの発現は、IL-33によって誘導されERK、p38経路を介すことが示唆された。これらの結果は、骨のリモデリング制御に非常に重要な知見であると考えられる。最終年度である平成26年度は、前年度までに得られた、水素量低減DLCコーティングチタンが、マウス破骨細胞様細胞株であるRAW264.7細胞およびマウス骨芽細胞様細胞株であるMC3T3-E1細胞の分化に与える影響について、さらなる詳細な検討を行った。水素量低減DLCコーティングチタン上にてMC3T3-E1細胞を培養後、骨芽細胞分化マーカーの遺伝子発現について解析を行った結果、いずれの遺伝子も特定の水素量において発現量が上昇することがわかった。また、水素量低減DLCコーティングチタン上にて、可溶性RANKL存在下でRAW264.7細胞を培養したところ、特定の水素量において、破骨細胞分化に必須のマスターレギュレーターであるNFATc1および破骨細胞分化マーカーのタンパク発現が顕著に抑制されることが明らかとなった。さらに、オッセオインテグレーション(骨結合)の獲得にはチタン表面性状が関与していると言われているため、水素量低減DLCコーティングチタンの表面粗さおよび濡れ性を検討した。その結果、これらに関して未処理の純チタンと水素量低減DLCコーティングチタンとの間で大きな差は認められなかった。

つまり、細胞の分化に対する水素量低減DLCコーティングチタンの影響について、表面粗さおよび濡れ性に関する表面性状の影響はないと考えられた。以上のことから、特定の水素量低減DLCコーティングチタンは骨芽細胞分化を正に、破骨細胞分化を負に制御し骨リモデリングに十分配慮することで、インプラント治療の長期的な成功のための有用な材料になり得ることが示唆された。26年度が最終年度であるため、記入しない。歯学26年度が最終年度であるため、記入しない。平成24年度の検討事項であった、水素量低減DLCの適切な水素量の幅を確定した。この水素量変化については、本申請課題の基盤技術となるため、平成25年度以降も引き続き検討を加える予定である。以上の理由から、平成24年度についてはおおむね計画通りに研究が進展した。平成25年度の検討事項であった、水素量低減DLCコーティングチタンがインプラント周囲の骨リモデリングに与える影響について精査した。この成果は、平成26年度の研究内容に繋がる知見であり、引き続き検討を加える予定である。以上の理由から、平成25年度についてはおおむね計画通りに研究が進展した。これまでに得られた知見を基盤として、水素量低減DLCコーティングチタンがインプラント周囲の骨リモデリングに与える因子について詳細に検討する。これまでに検討した骨芽細胞や破骨細胞の分化に与える影響の詳細なメカニズムを明らかにするため、DNAマイクロアレイ等の詳細な検討を行い、エビデンスの蓄積を行う。直接経費次年度使用について、今年度納品予定だった外注モノクローナル抗体が年度内に納品されなかったため生じた。本抗体は平成25年度初めに納入される予定であり、また当初の予定でも平成24年度は、抗体準備を目的としていたため、本研究遂行のための計画に大きな変更はない。学会発表、情報収集等の出張を予定していたが、諸事情により行けなくなったため。今年度は学会発表を積極的に行いながら、さらにエビデンスを集積する。
英米探偵小説における隠れた言葉遊びの使用法

本研究の目的は英米探偵小説における隠れた言葉遊ひの役割を明らかにすることである。英米探偵小説における言葉遊びの研究は極めて少なく、隠れた言葉遊びについてはその存在事態がほとんど認知されていない。本研究は英米探偵小説における言葉遊びの役割を本格的に解明しようする初の試みである。これまで「面白いギミック」程度に考えられていた言葉遊びが、実は形式面でも主題面でも重要な技法であることを示すことで、探偵小説というジャンルの研究に新たな批評的視点を提供する。
企業家精神と革新的企業の成長-歴史、計量、事例による実証研究-

リーダーがトップの座を維持する、フォロアーがキャッチアップないし逆転する、といったダイナミックな成長を企業にもたらし、結果として、企業間競争において優位な地位を獲得するにいたった主体的条件とは何か。この点を解明すべく、成長企業に革新的企業者活動をもたらした企業家精神(アントレプレナーシップ)の要素と役割は何か、そして経営戦略とそれにいたる意思決定について、経営史研究(久保)・計量分析研究(本庄)・先端事例研究(秋澤)の3名の専門家が同じ問題関心のもとに集い、共通のプラットフォームを構築し、方法論的三角測量を行った。アンケート調査では、機械・電機・情報系産業を対象業種とし、東京都に本社をもつ株式会社の経営者に対して質問調査を行った。この調査では、わが国企業の新事業活動への取り組みについての実態調査を目的とし、独自に作成した調査票を用いて、企業の新技術・新商品開発についてたずねた。調査票は、会社概要、経営者属性、経営理念・目標、新技術・新商品開発の状況に関する質問などから構成されており、調査票の送付先企業は、わが国最大の信用調査会社の1つである(株)東京商工リサーチが提供するデータベースから選定した。調査票は、調査票を発送した10,659社のうちの1,896社から回収されており、アンケートの有効回答率は18.4%となった。集計結果では、約8割の企業が新技術・新商品開発に取り組んでおり、また、約7割の企業は業績に結びついた新技術・新商品開発があると回答している。さらに、若干ながら、競合他社が存在する企業ほど、業績に結びついた新技術・新商品開発をもつ割合が高い傾向が示されている。こうした結果以外にも、今回のアンケート調査からは興味深い結果が導き出されつつあり、とりわけ関心のもたれる個別企業のヒアリング結果も踏まえ、今後学会報告や学会誌の場で本格的成果を公にしていく。本研究の初年度に当たる平成14年度は、前半において3人による理論的基礎づくりを行いつつ共通のプラットフォームを確立した上で、アンケート調査のためのフレームワークづくりおよびアンケートの具体的質問項目の作成を行った。そして、(株)東京商工リサーチのデータベースにもとづいて、東京都内に存在する機械製造業・電機製造業・通信業・情報サービス業関係の約10,000社を対象に、2002年秋にアンケート「我が国企業の新事業活動に関する調査」を実施し、約2000社からの回答を得ることができた。目下そのアンケート結果をデータ入力する作業がほぼ完了しつつある。それを踏まえて、次年度の平成15年度に向けてアンケート結果を分析し、リーダーがトップの座を維持する、フォロアーがキャッチアップないし逆転する、といったダイナミックな成長を企業にもたらし、結果として、企業間競争において優位な地位を獲得するにいたった主体的条件とは何か。この点を解明すべく、成長企業に革新的企業者活動をもたらした企業家精神(アントレプレナーシップ)の要素と役割は何か、そして経営戦略とそれにいたる意思決定を、とりわけ新規事業展開をめぐるイノベーションとそれにいたる革新的な戦略意思決定プロセスを考察することによって解明し、学会報告および論文公刊という形で研究成果を公開していきたいと考えている。その際、経営史研究・計量分析研究・先端事例研究の方法論的三角測量という学際的研究のメリットを最大限生かしつつ、企業に成長をもたらす企業家精神とは何か、企業成長をもたらす経営者を中心とする主体的条件とは何かという、シュムペーター以来の経営学・経済学の大命題であり、最大のブラックボックスでもあった命題にチャレンジし、少なからぬインプリケーションを抽出したいと思う。

この点を解明すべく、成長企業に革新的企業者活動をもたらした企業家精神(アントレプレナーシップ)の要素と役割は何か、そして経営戦略とそれにいたる意思決定について、経営史研究(久保)・計量分析研究(本庄)・先端事例研究(秋澤)の3名の専門家が同じ問題関心のもとに集い、共通のプラットフォームを構築し、方法論的三角測量を行った。アンケート調査では、機械・電機・情報系産業を対象業種とし、東京都に本社をもつ株式会社の経営者に対して質問調査を行った。この調査では、わが国企業の新事業活動への取り組みについての実態調査を目的とし、独自に作成した調査票を用いて、企業の新技術・新商品開発についてたずねた。調査票は、会社概要、経営者属性、経営理念・目標、新技術・新商品開発の状況に関する質問などから構成されており、調査票の送付先企業は、わが国最大の信用調査会社の1つである(株)東京商工リサーチが提供するデータベースから選定した。調査票は、調査票を発送した10,659社のうちの1,896社から回収されており、アンケートの有効回答率は18.4%となった。集計結果では、約8割の企業が新技術・新商品開発に取り組んでおり、また、約7割の企業は業績に結びついた新技術・新商品開発があると回答している。さらに、若干ながら、競合他社が存在する企業ほど、業績に結びついた新技術・新商品開発をもつ割合が高い傾向が示されている。こうした結果以外にも、今回のアンケート調査からは興味深い結果が導き出されつつあり、とりわけ関心のもたれる個別企業のヒアリング結果も踏まえ、今後学会報告や学会誌の場で本格的成果を公にしていく。
病原性口腔内バイオフィルム新規制御法の確立

う蝕はS. mutansのバイオフィルム(B.F.)に起因しており、ペリクルへの初期付着から始まる。本研究では初期付着の阻害に主眼を置き、SspBペプチドを用いたS.mutansのB.F.制御法の確立を目的とした。(1)ヒト唾液との反応性が最も高いSspBペプチド(A4K-A11K)による初期付着阻害効果は、S. mutansに特異的に認められた。(2) A4K-A11Kに殺菌作用は認められなかった。(3)A4K-A11Kを添加してS. mutansを培養すると、疑似ペリクル上のB.F.形成は抑制された。以上より、A4K-A11Kは新規B.F.制御法に応用できる可能性が示唆された。う蝕をはじめとする口腔内感染症は、口腔細菌により形成されたバイオフィルム(B.F.)に起因しており、ペリクルへの付着から始まる。また、口腔内B.F.は薬剤耐性遺伝子のリザーバーであり、従来の殺菌的・静菌的な制御法とは異なる新規B.F.制御法の確立が望まれている。そこで申請者は、初期付着の阻害という着想に至った。(1)ヒト唾液(濾過滅菌済み)をコートしたELISAプレートに、複数種のビオチン化SspB相同ペプチド(650 μM)を処理した。アルカリフォスファターゼによる発色反応をプレートリーダー(405 nm)にて解析する事で、ヒト唾液との反応性が最も高いペプチドを選別した。(2)ヒト唾液をコートした細胞接着プレートに、選別したSspB相同ペプチドを加えた。プレート1 wellあたり、20 μl (4.0×104CFU)のS. mutans菌液:180 μlのTSB (without dextrose)培地を加え、37°Cで培養した。形成されたB.F.を染色し、プレートリーダー(492 nm)にて評価した。(3)ペプチドに殺菌作用がない事を検証するため、SspB相同ペプチド、0.04%クロルヘキシジン、未処理、それぞれの条件での細菌のgrowthを濁度計にて計測した。本研究ではin vitroにおけるSspBペプチドの機能解析を行い、成果をまとめた。ELISA法、B.F.アッセイを用いて、SspBペプチドのヒト唾液への結合能や、B.F.抑制効果を評価した。アルカリフォスファターゼによる発色反応をプレートリーダー(405 nm)にて解析する事で、ヒト唾液との反応性が最も高い390-A393K-T400K-402ペプチドを選別した。(2)ヒト唾液をコートした細胞接着プレートに、390-A393K-T400K-402を加えた。S. mutansのB.F.形成は、390-A393K-T400K-402により抑制された。(3)ペプチドに殺菌作用がない事を検証するため、390-A393K-T400K-402、0.04%クロルヘキシジン、無添加、それぞれの条件での細菌の生育を濁度計にて計測した。390-A393K-T400K-402を混入した培養液では、クロルヘキシジンでみられた生育の阻害は生じず、無添加と同等であった。。矯正・小児系歯学平成25年度ではELISA法、B.F.アッセイを用いて、SspBペプチドのヒト唾液への結合能や、S. mutansのB.F.抑制効果を評価した。更に、SspBペプチドによる、歯周病原性細菌P. gingivalisへの特異的相互作用をELISA法により検証し、その成果を第28回日本小児歯科学会・関東地方会にて発表した。

以上より、達成度はおおむね順調に進展していると考える。ペプチドと唾液の結合能については、ELISA法に加えてBIAcoreシステムにより、分子レベルでの解析を実施する。B.F.アッセイでは、細胞接着プレートによる手法から、ハイドロキシアパタイトディスクを用いて、よりヒトの歯面に近似したコンディションで検討を行う。更に、in vivo: SspB相同ペプチドのマウス口腔内への応用を行う。申請者らが確立したNOD/SCID.e2f1-/-マウスによる実験系は、ヒトの唾液ペリクルを再現している。SspB相同ペプチドによるB.F.抑制効果を口腔内という実環境の中で評価する。<SspB相同ペプチドのマウス口腔内への応用>NOD/SCID.e2f1-/-マウスのメス(4か月齢)を使用する。クロルヘキシジンにてマウス口腔内を消毒し、PBSにて洗浄後ヒト唾液をマウス歯面に処理する。次にB.F.抑制効果のみられたペプチドを歯面に処理し、S. mutans MT8148株のovernight culture (109 CFU/ ml)250 μlを接種する。菌接種から180分間、30分毎に滅菌綿球によるスワブ法で菌を回収する。回収した菌をPBSに懸濁し、MSB培地に植菌、得られたコロニー数を、ペプチド処理群と未処理群とで比較する。また、DNAベースによる評価では、回収菌をテンプレートとしたPCRを行う。画像解析システム(ATTO社製デンシトグラフ)を使用して、S. mutans-specific primerを用いたPCR産物の濃度を蛍光強度から定量し、ペプチド処理群と未処理群とで比較する。蛍光強度によるPCR産物の定量性が困難な場合には、SYBRグリーン法や蛍光プローブ法による定量PCRで対応する。2カ年で得られた結果を取りまとめ、成果の発表を行う。平成25年度では、国内(岐阜)での学会発表を予定していたが、成果発表が間に合わず神奈川県にて成果発表を行った。岐阜への旅費代が浮いたため、次年度使用額として生じた。SspBペプチドの追加合成が必要になるため、ペプチド合成代に充てる。更に、B.F.アッセイの追加消耗品として、ハイドロキシアパタイトディスクの購入に充てる。
植物細胞培養器の振とう・培養液の攪拌によるせん断力の解析

本研究の目的は、植物細胞や細胞塊の液体培養で、培養液の混合や酸素補給のための撹はんによる細胞への物理的ストレス(せん断力)を解明し、よりストレスの少ない培養法開発のための基礎的な知見を得ることである。その手法として、培養液流動を可視化し、その画像を解析することによって、培養液流動の特性を解析する方法を選んだ。対象としては、もっとも普及しているフラスコの振とう培養とバイオリアクターを選んだ。培養液流動の可視化はトレーサー法によった。培養液にトレーサーとしてナイロン粒子を入れておき、粒子の軌跡を撮影することで、流動が可視化される。また、流線の大きさだけでなく、流線の向きも判定するときは、ストロボスコープを用いて、カメラのシャッターが開いた直後と閉じる直前に異なる色の光を発光させ、撮影画面の流線の初めと終わりにマークをつける方法を採用した。得られた画像をコンピュータで解析し、流線ベクトルの分布、渦度の分布、せん断応力の分布や、その平均値などを計算した。フラスコの振とう培養では、さらに振とう中のフラスコの側面から、薄い膜状のレーザー光線(レーザーライトシート)を当て、水平2次元平面内の流れを可視化した。フラスコの中には、高速域、中速域、低速域があるパターンで分布し、そのパターンがフラスコの回転とともに回転していることがわかった。このパターンは振とう回転数により変化する。振とう回転数の増加にしたがって、渦度の絶対値の平均値、せん断応力の平均値ともに増加した。バッフルつきのフラスコではせん断応力の平均値はバッフルなしのフラスコより大きな値となった。バイオリアクター内の培養液流動は3次元的に捉える必要がある。そのため2方向からの撮影画像の解析が必要であるが、粒子の2画像間での対応づけなど解決すべき課題が残っている。植物細胞や細胞塊の培養では、培養液の箆拌と酸素補給のために、培養器の振とう、培養器への空気の送入(エアリフト形培養器)やインペラ-の回転など行なわれている。この場合、細胞の生長・増殖に影響する重要な因子として、溶存酸素量と細胞(塊)に作用するせん断力をあげることができる。本研究では、培養液の溶存酸素量と細胞(塊)に働くせん断力の科学的に解明を目的とし、実験的および理論的に培養条件と上記2因子の関系を明らかにする事を目的とする。特に、既存の研究が少ないせん断力に重点を置く。初年度は、培養液のみかけの粘性率と培養条件の関係の解明と、流れの可視化の予備実験を中心に行った。培養液の基本特性であるみかけの粘性率が細胞密度などの条件によってどのように変わるかということは、培養液流動の流体力学的な検討において最も基本的な事項である。いろいろな条件を変えて培養液の粘性率を計測するために実際の細胞を使うのは煩雑であるばかりでなく、希望する条件を得られない場合も多い。そこで、疑似細胞(寒天を細胞(塊)の大きさに粉砕したもの)で実験を行った。その結果、次のことが分かった。細胞濃度が増加するに従って、みかけの粘性率は指数関数的に増加する。異なる2つの寒天濃度で実験を行ったところ、ヤング率の大きな寒天の場合の方がみかけの粘性率は大きくなった。なお、測定結果は、ある細胞濃度のところで、みかけの粘性率が大きく増加したが、これが物理的な現象を表しているのか、測定方法上の問題なのか、現在検討中である。今後、この点を含め、細胞のヤング率、細胞の形状などとみかけの粘性率の関係をさらに追求する予定である。

また、アルミ粉末をマ-カ-に使った流れの可視化実験を行うとともに、振とう培養時の可視化のための装置を製作した。溶存酸素の測定などは次年度に行う予定である。本研究の目的は、植物細胞や細胞塊の液体培養で、培養液の混合や酸素補給のための撹はんによる細胞への物理的ストレス(せん断力)を解明し、よりストレスの少ない培養法開発のための基礎的な知見を得ることである。本年度は、もっとも普及しているフラスコの振とう培養を対象とし、そのなかの培養液の流動の可視化および可視化画像の画像処理と主に取り組んだ。基本的な方法は次のようである。振とう中のフラスコの側面から、薄い膜状のレーザー光線(レーザーライトシート)を当てる。培養液には、トレーサーとしてナイロン粒子を入れておく。レーザーライトシートに照射された粒子の軌跡を撮影することで、水平2次元平面内の流れが可視化される。この方法により、振とう培養の流れを観測し、流れのパターンを把握した。フラスコの中には、高速域、中速域、低速域があるパターンで分布し、そのパターンがフラスコの回転とともに回転していることがわかった。このパターンは振とう回転数により変化する。以上の方法だけでは、流線の大きさはわかるが、流線の向きは判定できない。そこでストロボスコープを用いて、カメラのシャッターが開いた直後と閉じる直前に異なる色の光を発光させ、撮影画面の流線の初めと終わりにマークをつける方法で、流線の向きを決定した。得られた画像をコンピュータで解析し、流線ベクトルの分布、渦度の分布、せん断応力の分布や、その平均値などを計算した。また、これらの数値が、振とう回転数や、フラスコの形状(バッフルの有無)などによってどのように異なるかを調べた。振とう回転数の増加にしたがって、渦度の絶対値の平均値、せん断応力の平均値ともに増加した。バッフルつきのフラスコではせん断応力の平均値はバッフルなしのフラスコより大きな値となった。本研究の目的は、植物細胞や細胞塊の液体培養で、培養液の混合や酸素補給のための撹拌による細胞への物理的ストレス(せん断力)を解明し、よりストレスの少ない培養方法開発のための基礎的な知見を得ることである。昨年度までに、もっとも普及しているフラスコの振とう培養の培養液の流動の可視化および可視化画像の解析による渦度やせん断力の分析を行った。本年度は対象をバイオリアクターとし、同じく培養液流動の可視化および可視化画像の解析による渦度、せん断力の解析を試みた。しかしながら、フラスコ振とう培養の場合、培養液の流動は近似的に2次元平面内での動きとみなすことができるのに対し、バイオリアクターの場合、流動はあくまで3次元的である。そこで、レーザー光線を平面的に照射して2次元断面を可視化することはあきらめ、3次元的流動をそのまま捉えることを試みた。方法はナイロン粒子を用いたトレーサー法である。3次元流動を捉えるため、2方向から撮影した。また、ストロボスコープを用い、流線の最初と最後に色付けをし、流線ベクトルを同定するようにした。上記の方法で3次元流動を捉えることを試みたが、次の困難にぶつかった。2つの撮影画面上で粒子の対応付けを行う必要があるが、粒子数を増やすと対応関係の把握が非常に困難になる。逆に、粒子数を減らせば、この困難は解消できるが、得られる情報が少なくなる。この困難を克服するためにいろいろな方法を試みているところである。
透析アミロイドーシスの分子機構の解明とそれに基づいた早期診断法の確立

β2マイクログロブリンのc末のアミノ酸92-99番目を認識する抗体を作成し、その透析アミロイド症における臨床的意義、小胞体ストレスとの関係について検討した。得られた、β2マイクログロブリンのc末のアミノ酸92-99番目を認識するモノクローナル抗体(mAbβ2MG92-22)は、通常の立体構造を示すβ2MGとの反応は非常に軽微で、β2MG92-99のペプチドに非常に特異性の高いものであることを確認した。β2MGタンパク、アミロイド化β2MGにてmAbβ2MG92-22との反応性を検討したところ、中性状態の正常の立体構造に近いβ2MGは、mAbβ2MG92-22とほとんど反応がなかったものの、酸化状態にするとわずかに反応性がみられた。また、アミロイド化β2MGは、mAbβ2MG92-22の抗体にて非常に強い反応性があることがわかった。正常の立体構造のβ2MGは、c末がタンパク内部にかくれており、アミロイド化することにより、立体構造変化し反応するようになったと考えられる。単球系の細胞において、温度刺激、浸透圧刺激、ラジカル刺激などにおいて、mAbβ2MG92-22に反応するβ2MGが増加することがわかり、種々の刺激で折れ畳異常のβ2MGが増加していることが確認された。同様の刺激で、小胞体ストレスの度合いをみたところ、小胞体ストレスも上昇していることが分かった。また、透析アミロイド症患者からとられた手根管組織の検討において、β2MGの沈着、アミロイド化、mAbβ2MG92-22の反応性について、組織学的検討をおこなったところ、β2MGの沈着がすべてアミロイド化繊維と一致しなかったが、mAbβ2MG92-22の染色される部分はアミロイド化が起こっているところが大部分であった。1)β2ミクログロブリン(β2M)の蛋白立体構造変化(ミスフォールディング:折れ畳み異常)が、たんぱく質合成段階でおこるか、放出後におこるかの検討。ヒトの培養細胞セルラインである、THP-1を用いて、化学的小胞体ストレスを起こす、Tunicamycin、DDT、を使用し、細胞内、細胞表面の抗92-99抗体に反応する、折れ畳み異常β2Mが出現するかの検討を行った。細胞表面の発現を、フローサイトメトリーにて検討したところ、10μg/ml Tunicamycin,2.5mM DTT刺激において、抗92-99抗体反応性の折れ畳み異常β2Mの細胞表面上の上昇がみとめられた。同様に、温熱刺激、浸透圧刺激、にてでも同様に、抗92-99抗体反応性の折れ畳み異常β2Mの発現増強がみとめられた。種々の刺激によって、抗92-99抗体反応性の折れ畳み異常β2Mが細胞表面上に発現がたかまっていることが確認された。細胞内の折れ畳み異常β2Mを、細胞質成分を抽出し、EIAにて測定をおこなった。非刺激のコントロール群と比較し、Tunicamycin、DDT投与群で抗92-99抗体反応性β2Mの上昇が見られた。小胞体ストレス刺激により、細胞外、細胞内ともにミスフォールディングβ2Mが増加することを確認した。2)透析患者検体でのミスフォールディングβ2Mの発現の検討を行った。透析者の末梢血白血球表面のミスフォールディングβ2Mをフローサイトメトリーにて解析、発現量を検討した。ミスフォールディングβ2MのEIAを確立し、血清中および透析濾過液のミスフォールディングβ2M量を検討した。

今回の、検討では、透析者、健常者とも血清中のミスフォールディングβ2Mの検出はなされなかった。また、白血球表面上のミスフォールディングβ2M発現の検討において、健常者群と比較し、透析アミロイド症の確認されている透析歴10年以上の透析者の一部においてミスフォールディングβ2Mの白血球上の発現増強があった。β2MGタンパク、アミロイド化β2MGにてmAbβ2MG92-22との反応性を検討したところ、中性状態の正常の立体構造に近いβ2MGは、mAbβ2MG92-22とほとんど反応がなかったものの、酸化状態にするとわずかに反応性がみられた。また、アミロイド化β2MGは、mAbβ2MG92-22の抗体にて非常に強い反応性があることがわかった。正常の立体構造のβ2MGは、c末がタンパク内部にかくれており、アミロイド化することにより、立体構造変化し反応するようになったと考えられる。単球系の細胞において、温度刺激、浸透圧刺激、ラジカル刺激などにおいて、mAbβ2MG92-22に反応するβ2MGが増加することがわかり、種々の刺激で折れ畳異常のβ2MGが増加していることが確認された。同様の刺激で、GRP78のmRNAの上昇の程度にて、小胞体ストレスの度合いをみたところ、折れ畳異常のβ2MGが発現増強している刺激においては、小胞体ストレスも上昇していることが分かった。維持透析患者にて、白血球細胞膜表面上の折れ畳異常のβ2MGの発現をみたところ、健常者に比し発現が上昇傾向にあった。また、患者検体の白血球よりRNAをとり、小胞体関連シャペロン分子の発現をみたところ、透析者ではGRP78のmRNAは健常者と比し増加傾向がみられた。維持透析者においても、ERストレス、折れ畳異常のβ2MGの発現がみられていた。また、透析アミロイド症患者からとられた手根管組織の検討において、β2MGの沈着、アミロイド化、mAbβ2MG92-22の反応性について、組織学的検討をおこなったところ、従来のポリクローナルβ2MG抗体により検出されるβ2MGの沈着部分は、コンゴレッド、偏光顕微鏡にてアミロイド化を検討し比較したところ、すべてアミロイド化されているとはかぎらなかった。mAbβ2MG92-22の染色される部分はアミロイド化が起こっているところが大部分であった。