hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
聴覚誘発電位(中潜時成分)の基礎・臨床的検討

1.視床内側膝状体破壊前後のNearfield potentialsとFar fieldpotentialsの比較では、Far fieldのP_6波(8.57±0.88msec)に一致して、Near fieldにN_6波が記録され、破壊後は、P_6波は65%、N_6波は90%の振幅の減少がみられ、視床内側膝状体とP_6波の関係が最も考えられた。2.大脳皮質聴覚領野AI、AII部の破壊前後の波形の比較では、Far fieldのP_7波(11.08±1.08msec)に一致してNear fieldに陰性電位N_7波が記録された。一側半球のAI、AII部の破壊では、P_7波は51.7%、N_7波39.1%の振幅の減少がみられた。両側AI、AII部の破壊後は、P_7波81.7%、N_7波77.6%の減少が認められ、大脳皮質聴覚領野とP_7波の関係が最も考えられた。3.細胞外電極による視床内側膝状体のユニット反応の記では、17個の音刺激に一対一の対応を示すユニットが得られた。これらユニットとFar fieldの波形の比較では、ユニットの陽性波潜時が8.36±0.44msecであり、N_7波の潜時8.7±0.21msecと対応がみられ、陰性波は潜時が10.8±0.19msecであり、これはP_7波10.7±0.1msecとの対応が見られ、視床内側膝状体の活動とP_7波の関係が示差された。4.大脳皮質聴覚領野AI部よりの記録では、14個の音刺激に対し一体一の対応がみられる反応が得られた。これらユニット反応とFar fieldの波形の比較では、陽性波潜時は8.05±0.05msec、陰性波潜時が10.09±0.93msecであり、これらはN_7波8.7±0.1msec、P_7波10.71±0.66msecとの対応がみられた。細胞活動電位記録による潜時の比較では、視床内側膝状体および大脳皮質聴覚領野と共に、Far fieldのN_7波、P_7波との関係が認められた。1.視床内側膝状体破壊前後のNear field potentialsとFarfieldpotentialsの比較では、Far fieldのP_6波(8.57±0.88msec)に一致して、Near fieldにN_6波が記録され、破壊後は、P_6波は65%、N_6波は90%の振幅の減少がみられ、視床内側膝状体とP_6波の関係が最も考えられた。1)通常ネコにおけるFar fieldの電位は, DiD7ついで比較的緩やかなNa, Pa, Nbの2つの陰性電位および1つの陽性電位からなる.それらの頂点潜時は, Di:2, 4±0.22msec, P2:3.14±0.23msec, P3:3.75±0.28msec, P_4:4.77±0.37msec, P5:6.27±0.47msec, P6:8.57±0.88msec, P_7:11.08±1.08msec, Na:18.18±1.17msec, Pa:31.77±1.05msec, Nb:40.41±1.14msec (n=15)である.

これらネコにおいては,潜時1015msecに現われるN_o, PO波に相当する波はみられない.視床内側膝状体でのNear field記録では,潜時がP_6に一致して陰性電位(N_6)が記録され,同部の破損(3mm×3mm)にてN_6およびP_6波の振幅の消失あるいは減少が認められた.破壊前後のP_6およびN_6の比較では,頂点潜時に関しては特に変化はみられていないが,振幅に関しては,破壊後P_6では平均65%, N_6では90%の減少が認められ,内側膝状体とFar fieldのP_6との関連が最も考えられた.2)健康成人16例における中潜時聴覚誘発電位の波形の検討では、覚醒時と入眠安静時とでは極めて異なる。覚醒時には、音刺激後1015msecの間に陰性・陽性波が現われ、Pictonらの言うN_o、PO_o波に一致する。3例における覚醒時および入眠安静時の波形の比較では、これらの波は入眠安静に至る過程で振幅が漸次減少1著明な変化を来たす。入眠安静時にN_o、P_o波の消失した例が一例において認められた。これは、音刺激に伴う聴神経・顔面神経を介する筋反射であり、Post Auricalar Muscle Reflex(P.A.M)と呼ばれるものである。N_o、PO波は、脳内の聴覚路の活動を反映した電位ではなく、成人における中潜時聴覚誘発電位はVI、VII波について現われるNa、Pa、Nb波より成ることが考えられた。3)従来大脳皮質聴覚領野AI、AII部由来とされたNa、Pa波は、AI、AIIの除去にて著明な変化はみられず、むしろ皮質聴覚領野以外の部が起源として考えられた。そこでさらに上位の大脳半球皮質を除去したところ、一側の半球皮質の除去にてNa;33.0±10.7%、Pa;47.5±13.8%の、両側半球皮質の除去にて、それぞれ100%の減少を来たし波形は、消失した。以上よりNa、Pa波は、大脳皮質聴覚領野由来というよりは広範な大脳皮質を由来とした電位であることが考えられた。1)細胞外電極記録により視床内側膝状体より30個のユニット反応が得られ、そのうちの17個がクリック音刺激に対し一対一の対応がみられた。これらのtime locked respcnseを呈したユニットにつき以下のような検討を加えた。これらユニットは、陽性-陰性の2相性波からなり、シングルスウィ-プでは明らかではないが、50回、200回加算した波形とFar fieldの波形とを比較すると、陽性波はN7波、陰性波はP7波に主に相当していた。N7、P7波の平均頂点潜時は8.7±0.21msecおよび10.7±0.1msecであり、陽性波および陰性波のそれは、それぞれ8.36±0.44msecおよび10.80±0.19Mmsec(200回加算の波形)であり、統計上(t-test)ではN7波と陽性波、P7波と陰性波の間で潜時において有意の差は認められなかった。2)大脳皮質聴覚領野AI部よりの記録では、10匹のネコより21個のユニットが得られ、そのうちの14個がtime lockedに反応するユニットであった。14個のうちの3個は、比較的分離されたユニット反応であったが、残りの11個は、negative field potentialsであった。3個のユニットの陽性波は、N7波に、陰性波はP7波に主に相当していた。negative fieldpotentialsの活動は広くN6、P6、N7およびP7にまで及んでいた。N7およびP7波の平均頂点潜時は、8.7±0.1msecと10.71±0.66msecであった。一方陽性波の平均頂点潜時は、8.05±0.05msec(200回加算)であり、陰性波およびnegative field potentialsのそれは、10.90±0.93msecであった。それぞれの間には、内側膝状のユニット同様に、有意の差は統計上みられなかった。視床内側膝状体および大脳皮質聴覚領野AI部のユニットは、波形上far
超高圧水素の金属転移と構造：準粒子計算に基づくバンドからみた構造

200GPaから400GPaで実現可能性の高い構造に対し、GW計算を行い圧縮水素の金属転移圧の予測値を求めた。結果をエンタルピー比較から得られるそれぞれの構造の出現圧力領域と照らし合わせると、280GPa以下では非金属状態のC2/c-24構造をとり、約280GPaでCmca-12構造へと転移するが、Cmca-12構造は280GPaではすでに金属状態となっている。Cmca-12構造は380GPaまで続き、Cmca-4構造へと転移する。Cmca-4構造はバンドギャップのないバンド構造で、常に金属状態である。結局、水素の金属転移は280GPa付近でCmca-12構造への転移により実現される。本研究では圧縮水素の金属転移圧のより正確な評価を目指し、通常のLDA,GGAの近似に基づく第一原理計算を越える、GW近似に基づいた手法を用いてバンドギャップの評価を行い、金属転移圧のより正確な評価をする。GW近似に基づくバンド構造を得るための利用可能な第一原理計算パッケージは存在し、その計算精度もほぼ判ってきているが、利用出来るパッケージの数はまだ多くなく、そのため種々の物質への適用には、なおある程度の注意深い精度確認等も必要である。我々は、日本で鳥取大の小谷岳生氏を中心に維持開発が行われているECALJと呼ばれるパッケージを用いる。これまでYH3の圧力誘起金属転移を調べ、計算結果の確認のためヨーロッパ開発のVASPパッケージによるチェックも行ってきた。得られたYH3の転移圧は最近の阪大極限センターでの実験結果を支持するものであった。本年度の前半では、同じく阪大の極限センターの実験グループによるヨウ素の高圧構造と圧力誘起金属転移の詳細な測定結果の発表を受けて、GW近似計算の精度確認のためヨウ素のGW計算による圧力誘起金属転移の転移圧評価を行った。結果は阪大極限センターのグループの実験結果とよい一致を示すものであり、2013年秋のロンドンでのヨーロッパ高圧会議(EHPRG)で発表するとともに、High Pressure Reseachに投稿し受理されている。それに続いて本研究の主目的である水素の高圧構造探索と、すでに予測されている高圧構造でのバンド構造と金属転移圧評価のための計算を始めている。2011年Eremets等による約300万気圧近い超高圧縮下での水素の金属化を示唆する実験の報告から4年が経過し、また論文として公表されてはいないが、ごく最近同じグループによって150万気圧を越える超高圧下で水素化物が今までの最高超伝導転移温度を示すとの報告がなされ、水素および水素化物の超高圧下での金属化、超電導等の物性に大きな関心が集まっている。このような水素および水素化物の金属化や高い超伝導転移温度の可能性に関する理論的な研究は以前から行われているが、金属転移圧の高精度の予測が、実験的な構造決定が難しいこと、理論研究で多く用いられているLDA、GGAに基づくバンド計算の手法がバンドギャップの過少評価という欠点故に、依然として金属転移圧が精度よく評価できないままである。本研究においては半導体のバンドギャップを精度よく評価出来ることがわかってきている準粒子モデルすなわちGW近似と呼ばれる手法を用いたバンド計算によって、超高圧縮水素および超高圧縮水素化物の金属転移圧の評価を行っている。初年度の25年度のYH_3に続いて26年度においては、超高圧縮水素の構造としてイギリスのPickard等によって提唱されてきたいくつかの構造について、GW計算を行った。単位胞に12個までの水素原子を含む構造に関しては現有計算機システムで計算出来たが、300万気圧付近で最も低エンタルピー構造と予測されているB2/n構造は構造が複雑で計算機メモリーと演算速度の点から計算できないまま残した。26年度後半には阪大極限センターの計算機設備が強化され、これを使って計算可能性を試みていたが、最近になってより複雑な構造の計算可能性がわかって来て、現在B2/n構造に対するGW計算を進めている。26年9月までの結果は26年9月にフランスのリオンで開かれたヨーロッパ高圧グループ会議および日本での高圧討論会で発表した。超高圧縮水素に関しては、常温で気体の物質の超高圧下での金属転移、地上での最高超伝導転移温度予測、最も軽い物質故の原子核の示す量子性の物性への影響等、理論的実験的に興味深くかつ難しい問題を多く含んでおり、興味が尽きない。この間高圧実験技術の着実な進歩に支えられて2010年以後300万気圧を越える圧力領域での実験が進展を見せ、特に2011年のEremets等のグループによる金属化の報告は注目されているが、今のところ確証には至っていない。高温高圧下での実験技術もすすんでおり、2014年から2015年にかけて、300万気圧を越える圧力と加熱された温度領域での、圧縮水素の新しい相の発見に及んでいる。その中には常温での液体相、分子解離した金属相の報告もある。水素は同位体として重水素が存在し、その原子核質量比は実在する元素の中では最も大きく、したがって原子核運動の量子性に起因する量子効果が最も大きいと期待されるため、相境界の差にも大変興味がもたれている。本研究では水素の固体相のバンド構造をバンドギャップのより信頼出来る計算手法であるGW近似を用いてしらべ、圧縮水素の金属転移圧を調べて来た。最終年度ではイギリスのPickard等により理論的に提唱されている低エネルギー構造のうちの最も複雑な単位胞に24個の原子を含む、B2/nについて調べた。

手持ちの計算機の計算機能力の不足から、阪大極限センターの計算機を利用させて頂いた。B2/n構造でのバンドギャップ消失は420GPaから450GPaで起こることがわかった。この圧力はC2/c構造の340GPaから370GPaより高い。またCmca構造は280GPa付近でバンドギャップが閉じる。これらの結果と予想される圧縮水素の金属転移については2015年広島での高圧討論会で報告し、現在論文を執筆中である。200GPaから400GPaで実現可能性の高い構造に対し、GW計算を行い圧縮水素の金属転移圧の予測値を求めた。結果をエンタルピー比較から得られるそれぞれの構造の出現圧力領域と照らし合わせると、280GPa以下では非金属状態のC2/c-24構造をとり、約280GPaでCmca-12構造へと転移するが、Cmca-12構造は280GPaではすでに金属状態となっている。Cmca-12構造は380GPaまで続き、Cmca-4構造へと転移する。Cmca-4構造はバンドギャップのないバンド構造で、常に金属状態である。結局、水素の金属転移は280GPa付近でCmca-12構造への転移により実現される。超高圧縮水素の構造に関して、イギリスのPickard等がGGAに基づく第一原理計算により、金属転移の可能性が最も高いと予想される圧力領域の、約200GPaから400GPaの圧力下での低エンタルピー構造を報告している。それらは斜方晶系で単位胞に4個および12個の水素からなるCmca-4およびCmca-12構造と単斜晶系で単位胞に24個の原子を含むB2/n-24構造である。本年度はこれらについて、GW近似を用いた第一原理バンド計算を行って来た。計算には鳥取大学の小谷岳生氏等によって開発されているEcaljコードを用いている。このコードは、単位胞に12個程度までの原子数からなる構造に対しては、手持ちの計算機のメモリーとCPUパワーでも計算可能であったが、単位胞に24個のB2/n-24になるとメモリーとCPU時間(約90GBと1Job約1週間)の関係で計算が進まなかった。そこで計算コードの高速化をすすめると同時に、最近増強された阪大極限センターの計算機が利用可能になったため、これの利用を試みていたところ、B2/n-24構造もなんとか計算可能であることが判明した。現在これを用いて計算をすすめている。結果の確認のためVASPコードでも計算を行っているが、VASPコードはk-点の間隔が自由に選べずバンド図を描くことが難しい。EcaljはGW計算でバンド図が描ける点がVASP等の海外コードにない特徴で、間接バンドギャップの評価には適している。当初予想した進度より2、3ヶ月送れているが、次年度はじめには今年度の目標点に到達出来る。物性物理学Pickard等によって提唱されている構造のうち単位胞に24個の原子をもつ最も複雑な構造に対する、GW計算も最近阪大極限センターのクラスター計算機を用いれば何とか可能であることがわかり、現在計算を進めている。そのあとVASPコードを用いていくつかのk-点でのバンドギャップを評価し、Ecaljの計算結果のチェックを行う。結果は今まで学会等で発表して来た結果と合わせて論文で公表予定である。
キマーゼの形成する新規生理活性物質エンドセリン(1-31)の発見とその生理機能解析

喘息患者の気道に、抗ET抗体反応物質と肥満細胞が著明に増加するという現象観察から、従来型のET(1-21)に対して長い収縮作用を示す新規の生理活性ペプチドET(1-31)が肥満細胞の分泌するキマーゼによって形成されることを見出した。なおこのET(1-31)は,さらにプロテアーゼによって切断され、ET(1-21)に変換されて作用するのではないことを確認している。この新規活性物質は、ET(1-21)と同程度か、いくぶん弱く気管や血管平滑筋を収縮させる強力な生体内物質の1つである。我々はこの新規生理活性物質の生体内含量を測定するために、高感度免疫測定法の確立を行い生体内濃度を測定した。その結果、臓器による差異はあるもものET(1-31)はET(1-21)と同程度か、むしろ多量に含まれていることが明らかとなった。さらに従来ETのレセプターとされていたET_A,ET_BレセプターにET(1-31)は、結合せず、ET(1-31)に対する特異的レセプターの存在の可能性が示唆された。しかし細胞内Ca^<++>の流入効果や、MAPキナーゼの活性化の程度に関してはET(1-31)はET(1-21)と明らかな差異を示さなかった。従来の研究から、Big Endotheolin(ET)はET変換酵素により21個のアミノ酸からなる生理活性ペプチドのET(1-21)になり、その生理機能が発見するとされていた。我々は肥満細胞に局在するキマ-ゼがBig ETを限定分解し31個のアミノ酸からなる新たな生理活性物質ET(1-31)を作ることを見出した。生体内に存在する他のキモトリプシン型プロテアーゼのカテプシンGや、α-キモトリプシン、さらにラットのキマ-ゼは、Big ETを複数の部位で切断し、不活性型に分解した。ET(1-31)はET(1-21)と同様血管平滑筋や気管支平滑筋を収縮し、収縮に先立って細胞内Ca^<++>の流入を引き起こした。特にラットの気管では、ET-2(1-31)に対する反応性が強く、ET-1(1-31)に対して、約10倍近い収縮性を示した。またヒトの肺や心臓には、ET(1-21)よりむしろET(1-31)が多く存在し、中でもET-2(1-31)はET-2(1-21)に比較して10倍量も多いことが判明した。さらにET-1(1-31)はこれまでに知られているET-1(1-21)のエンドセリンレセプターのET_AやET_Bに親和性を示さず、ET(1-31)には、別のレセプターの存在が推定された。但し、これまでに知られているET_Aのアンタゴニストは、ET-1(1-31)の効果を抑制することから、ET_AアンタゴニストはET_Aレセプター以外にもET(1-31)のレセプターに結合することが考えられた。従来のBig Endothe1ine(ET)はET変換酵素により21個のアミノ酸からなる生理活性ベプチドのET(1-21)になり、その生理機能が発見するとされていた。我々は肥満細胞に局在するキマーゼがBig ETを限定分解し31個のアミノ酸からなる新たな生理活性物質ET(1-31)を作ることを見出した。本年度の研究では、ET(1-31)が実際に生体内に存在しているかを明らかにするため、ET(1-31)のみを認識して、Big ET,ET(1-21)と反応しない高感度酵素免疫測定法の開発を行った。その結果3種のET(1-31)のそれぞれのN末端側を認識する抗体と、C末端側を認識する抗体を用いたサンドイッチEnzyme Immuno Assay(EIA)系を作成することができた。このEIAは、Big ET,ET(1-21)とは反応せず正確にそれぞれのET(1-31)を定量できる。

これを用いてヒトの顆粒球内のET(1-31)と概知のET関連物質を測定したところ、ET(1-31)はET(1-21)に比して2倍の含量を、ET-2(1-31)はET-2(1-21)と同程度、ET-3(1-31)はET-3(1-21)の2倍の含量を示した。以上のことから新規に見出されたET-(1-31)は生体内に実際に存在していることが確認された。
現代舞踊家の舞踊作品創作方法およびトレーニング方法に関する研究

本研究は、日本の現代舞踊家であるケイ・タケイ(1939-)と山田せつ子(1950-)を対象とし、文献研究、インタビュー調査、トレーニングおよび作品創作過程を収録したビデオ分析を行い、2氏の舞踊観、トレーニング方法、舞踊作品創作方法の特徴を明らかにした。また、2氏の方法論は、学校教育における表現・創作ダンスの指導においても有効であり、特に即興表現と作品創作の指導法について多くの知見を得ることができた。1、本研究(平成1921年度)の目的(1)日本の現代舞踊家であるケイ、タケイ,山田せつ子,木佐貫邦子を対象とし,3氏の舞踊観や舞踊作品創作方法,トレーニング方法を明らかにする。(2)(1)の結果について,学校教育における表現、創作ダンス指導への応用の可能性を探り,モデルプランの作成を試みる。(3)上記の研究結果とともに,国内外の舞踊芸術、舞踊教育関係者へのインタビューを通して,これからの日本の舞踊教育の方向性について考察する。2、平成19年度の研究の成果主に上記(1)について研究をすすめた。具体的内容は以下の通りである。(1)舞踊家の作品創作,トレーニング,および学校教育における表現・創作ダンスの指導法に関する基礎的研究(文献研究)(2)現代舞踊家3氏を対象とした研究(1)舞踊観文献およびインタビューにより,3氏の舞踊観を考察した。インタビューはタケイと山田を対象に実施した(タケイ2回,山田3回)。木佐貫については20年度実施予定である。(2)舞踊作品創作方法3氏の公演日程,作品内容より検討し,山田の2公演(作品)を対象とし,資料収集を行なった。・『恋する虜-ジュネ/身体/イマージュ-』(平成20年3月7-9日京都芸術劇場春秋座)作品創作に関する資料収集。リハーサルの観察、VTR収録。公演本番の鑑賞等。・公演タイトル未定(平成20年8月1-3日吉祥寺シアター予定)初回リハーサル(3/23)の観察、VTR収録。公演本番まで継続的に観察する予定。(3)トレーニング方法山田の京都造形芸術大学での授業「舞台芸術VIB」「舞台芸術VIIIB」の観察、VTR収録を行なった。3氏を対象とした研究では,即興を基盤にした創作、演技、トレーニングについての新しい知見を得ることができた。本研究成果は,現在,即興を重視する表現・創作ダンス指導法に生かされるものと期待できる。1.本研究(平成1921年度)の目的(1)日本の現代舞踊家であるケイ・タケイ、山田せつ子、木佐貫邦子を対象とし、3氏の舞踊観や舞踊作品創作方法、トレーニング方法を明らかにする。(2)(1)の結果について、学校教育における表現・創作ダンス指導への応用の可能性を探り、モデルプランの作成を試みる。(3)上記の研究結果とともに、国内外の舞踊芸術・舞踊教育関係者へのインタビュ"を通して、これからの日本の舞踊教育の方向性について考察する。2.平成20年度の研究の成果研究実施計画に示した通り、主に上記(1)の研究を進めた。(1)タケイと山田の2氏を対象とし、以下の通り行なった。(1)舞踊観19年度に実施したインタビューの分析、および19-20年度に収集した文献から、2氏の舞踊観を考察した。(2)舞踊作品創作方法日程等の都合により作品創作から公演本番に至るまでの資料を継続的に収集することができなかった。21年度の課題としたい。(3)トレーニング方法タケイのワークショップ、山田の京都造形芸術大学での授業「舞台芸術VIB」の観察・VTR収録、結果の分析を行なった。(2)(3)モデルプランの作成に向けて、国内外の舞踊教育についての文献研究の他、平成120年告示の学習指導要領作成協力者にインタビューを行ない、知見を得た。1.本研究の目的(1)日本の現代舞踊家であるケイ・タケイ、山田せつ子を対象とし、2氏の舞踊観や舞踊作品創作方法、トレーニング方法を明らかにする。2.平成21年度の研究の成果(1)タケイと山田の2氏を対象とし、それぞれの舞踊方法論を明らかにした。(1)舞踊観インタビューおよび文献等3年間に収集した資料から、2氏の舞踊観をまとめ、比較考察を行った。(2)舞踊作品創作方法タケイの2作品について、作品創作から公演本番に至るまでの資料を収集し、タケイの言語分析等から創作方法を具体的に明らかにした。(3)トレーニング方法ワークショップおよび授業等3年間に収集した資料から、2氏のトレーニング方法をまとめ、比較考察を行った。(4)(1)(3)から、タケイと山田、それぞれの舞踊方法論をまとめた。(2)タケイと山田の舞踊方法論について、表現・創作ダンス指導への応用について検討した。

その結果、2氏の即興表現、および即興表現から作品へとつなげる方法は学校教育における指導にも多くの示唆を与えるものであり、題材や指導の進め方(授業モデル)等を明らかにすることができた。
転写サイクルにおけるクロマチンリモデリング複合体のリサイクル機構の解明

ゲノムは核内でクロマチンを形成して収納されており、このクロマチン構造が転写開始、伸長などを含む様々な転写サイクルの制御に関与している。これまでに、クロマチン構造を変換するクロマチンリモデリング複合体が、この転写サイクル制御に関わっていることが示されている。しかし、細胞あたりのクロマチンリモデリング複合体の分子数は、これらの複合体の機能を考えると著しく少ない。このところから、転写サイクルの過程では、クロマチンリモデリング複合体の形成、クロマチン結合・解離、複合体の解消といった、リサイクルが活発に行われていることを示唆している。本研究では、転写サイクルにおけるクロマチンリモデリング複合体のリサイクルとその機構を明らかにすることを目的として研究を進めた。INO80クロマチンリモデリング複合体の構成因子であるIno80, Arp5, Arp8に注目して解析を行った。まず、大腸菌で発現、精製したArp8を用いた解析を行った。ゲルシフト解析やArp8ノックアウト細胞の解析によって、Arp8が一本鎖DNAに高親和結合することをはじめて明らかにした。また、十川計画研究班員との共同研究により、Ino80, Arp5, Arp8のFRAP解析および一分子解析を行った。その結果、これらのINO80クロマチンリモデリング複合体の構成因子が、それぞれ核内で異なった挙動を示すことが明らかとなった。この結果は、INO80クロマチンリモデリング複合体の構成因子が、転写サイクルの進行に伴って解離・形成を繰り返して機能している可能性を示している。26年度が最終年度であるため、記入しない。転写開始や伸長を含む様々な転写サイクルの過程にクロマチン構造が関わっていると考えられているが、その詳細については、未だ不明な点が多い。我々は、INO80複合体構成因子に着目して、クロマチンリモデリング複合体と転写サイクルとの関連を明らかにしようとしている。我々はまず、INO80クロマチンリモデリング複合体の構成因子であるアクチン関連タンパク質Arp5およびArp8の遺伝子破壊細胞を用いて、INO80クロマチンリモデリング複合体と転写サイクルとの関連を解析した。ヘムオキシゲナーゼ1(HO-1)遺伝子の発現と、HO-1遺伝子領域におけるINO80, Arp5, Arp8の結合の解析を行った。その結果、酸化ストレスに対応したHO-1の発現制御において、これらのクロマチンタンパク質の結合が大きく変化していることが示された。また、東工大・十川博士との共同研究により、これらのタンパク質の一分子イメージング観察実験系を確立した。また、Arp5, Arp8の解析、およびその創薬への応用展開を目的として、これらのタンパク質に結合するbicycle peptideのスクリーニングを行った。その結果、Arp5, Arp8に結合するbicycle peptideの単離に成功した。このペプチドを化学合成して、精製したArp5, Arp8に対する結合をin vitroで解析したところ、これらのペプチドが今後の解析に必要な結合能力を有することを示唆する結果が得られた。ヘムオキシゲナーゼ1遺伝子の解析を通じて、酸化ストレスに応答した遺伝子発現制御に伴う転写サイクル変化を、INO80クロマチンリモデリング複合体の構成因子(Ino80、Arp5, Arp8)の挙動の変化を通じて観察することができた。また、これらのタンパク質の挙動・機能をさらに解析するための、一分子イメージの観察実験系を、領域内共同研究で立ち上げることができた。さらに、Arp5, Arp8に結合するbicyclic peptideの単離・合成に成功し、今後の機能解析や、創薬への応用展開に道を開くことができた。これまでに作成した、Arp5およびArp8に対するbicycle peptideを用いることにより、これらのタンパク質およびINO80クロマチンリモデリング複合体の機能解析を行う。また、ヘムオキシゲナーゼ1の遺伝子発現が異常になっている癌細胞にこれらのペプチドを導入して解析することなどにより、創薬への応用展開も目指す。

また、これらのタンパク質の一分子イメージングをおこなうことにより、転写サイクルにおけるArp5, Arp8, Ino80のダイナミクスと機能との関連を詳細に解析する。さらに、我々は、出芽酵母の系においても、クロマチンリモデリング複合体と転写サイクルとの関連を見出していることから、出芽酵母の変異株を用いることにより、その詳細を明らかにしていく。
微動に含まれる複数の波動・モードを考慮した3成分微動アレー探査法の改良

微動探査は、微動に含まれる表面波の位相速度や、微動の水平動と上下動の振幅比(H/V)が周波数とともに地盤構造によって変化する現象(分散)を利用する。従来の研究では、表面波の基本モードのレイリー波のみを考慮して、位相速度解析やH/V解析を行ってきた。しかし、実際の微動がどのような波動で解釈できるか現時点では不明瞭であったため、上記の手法の妥当性に疑問が残る現況にあった。我々は今まで、微動がレイリー波とラブ波で構成される仮定に基づいて、3成分空間自己相関法の開発によって、3成分微動アレー観測により、両者の位相速度の分散関係を識別することに成功した。この研究では、実際の微動の場において、盛岡市域の複数の観測地点で、レイリー波とラブ波のパワーの比率を推定し、地盤構造や周囲の振動源の影響によってそれらがどのように変化するのかを検証した。その結果、すべての観測点で、レイリー波とラブ波のパワーの比率は一定値を示し、10Hz以下の周波数帯で、その比率はほぼ1:1であった。さらに上記の結果に基づいて、微動のH/Vスペクトル比から、レイリー波とラブ波が1:1の比率で存在する仮定のもとで、表面波H/Vを計算し、遺伝的アルゴリズム(GA)の手法を利用して、地下S波速度構造の推定を行った。GAの手法を利用することにより、従来まで一意に決定することが困難であった地下構造の逆解析手法に改良を加えた。その結果、すべての地点で地下構造探査に成功し、その結果は、独立に3成分微動アレー探査から求められたものとほぼ一致した。微動のH/Vスペクトル比はその構造から期待される予測値とほぼ一致した。この結果は、微動がレイリー波とラブ波が同じ比率で構成されることを意味している。微動は弾性波動の複雑な確率現象である.通常の微動アレー探査法では観測したすべての時間またはある安定した一部の時間を使用してスペクトル解析が行われる.波動場が定常であれば問題ないが,実際の観測では非定常な交通振動が含まれる場合が多い.本研究では,観測されたアレー微動記録をどの程度利用した場合,推定される位相速度やパワー比に影響を与えるかどうかを調査した.盛岡市内15地点の学校のグラウンドを利用して,7台の地震計からなる三角形型のアレー微動観測を行った.各地点でアレーサイズを40m,25m,10mとした3回の観測を行った.観測時間は1回につき40分である.こうして得られた微動記録を使用して,基本区間を40秒とし個々の区間の平均振幅を算出する.全区間の平均振幅を規準として,個々の区間の平均振幅がある値以下のみをスペクトル解析に使用して,その比の値により推定される位相速度や微動に含まれるRayleigh波とLove波のパワー比がどのように変化するのか検討した.その結果,全観測地点において比の値が上がるにつれ,推定された表面波の位相速度の分散曲線のばらつきが減少することが確認された.比の値は1.8程度まで大きな値を示したときでも,分散曲線は安定した値を示した.従来の考えでは,常時微動は非定常な交通振動は利用しないほうがよいため,振幅の小さい区間のみを使用して解析するべきだとの考えがあったが,今回の結果はその考えと反する結果となっている.1,8のとき,使用する区間は全観測時間の90%以上に及ぶ.ただし,観測場所により車の通行状況が異なるため,一般化した結論を導き出すことは難しい.微動探査は、微動に含まれる表面波の位相速度や、微動の水平動と上下動の振幅比(H/V)が周波数とともに地盤構造によって変化する現象(分散)を利用する。
唾液中カンジダマンナン抗原測定による口腔カンジダ関連疾患の診断法開発

カンジダマンナン抗原はカンジダの細胞壁を構成する要素で,カンジダに特異な抗原であるため臨床において深部性真菌症の血清学的診断に用いられてきた.とくに感度の高いELISAを用いた検査が臨床でも応用されるようになりその診断精度は向上している.そこで唾液中のカンジダマンナン抗原を測定することにより,口腔カンジダ症の診断に応用できるのではないかと思われる.この研究の目的は口腔カンジダ症患者の唾液中のカンジダマンナン抗原を測定してその臨床診断の可能性について検討することである.方法;1)カンジダマンナン抗原測定患者より1mlの無刺激性の全唾液を紙コップに採取(口腔全体から排出)、測定直前まで-30°C冷凍保存した.カンジダ抗原値はELISAを用いた高感度カンジダマンナン測定キット,ユニメディカンジダを用いて行った.2)菌分離培養検査検体採取および菌培養口腔カンジダ症の診断には選択培地を用いて判定した.滅菌綿棒にて病変部位(健常者は口腔全体)を擦過し,直にCHROMagar培地(関東科学)に塗抹37°C48時間培養後判定した.結果:選択培地から分離されたカンジダ菌はC.albicans単独(45例),C.glabrata単独(3例),C.tropicalis単独(1例),C.albicans+C.glabrata(12例)であった.口腔カンジダ症群のCMA値の平均は2.48U/mLであったのに対し,健常者では菌種によるCMA値はC.albicans, C.tropicalis, C.glabrataの順に高かったCMA値は抗真菌剤の使用後明らかに低下した.また1週間後よりも2週間後のほうが低値を示した.カットオフ値を0.6とすると感受性は88.5%特異性は100%であった.結論:唾液中のカンジダマンナン抗原値を高感度ELISA法を用いて測定し、口腔カンジダ症ではカンジダマンナン抗原(CMA)値は高値を示し口腔カンジダ症の診断に用いる検査法として有用と考えられた.また抗真菌剤による治療により、自他覚症状の緩和とともにカンジダマンナン値は低下傾向を示し治療効果の判定にも有用と思われた.カンジダマンナン抗原はカンジダの細胞壁を構成する要素で,カンジダに特異な抗原であるため臨床において深部性真菌症の血清学的診断に用いられてきた.とくに感度の高いELISAを用いた検査が臨床でも応用されるようになりその診断精度は向上している.そこで唾液中のカンジダマンナン抗原を測定することにより,口腔カンジダ症の診断に応用できるのではないかと思われる.この研究の目的は口腔カンジダ症患者の唾液中のカンジダマンナン抗原を測定してその臨床診断の可能性について検討することである.方法;1)カンジダマンナン抗原測定患者より1mlの無刺激性の全唾液を紙コップに採取(口腔全体から排出)、測定直前まで-30°C冷凍保存した.カンジダ抗原値はELISAを用いた高感度カンジダマンナン測定キット,ユニメディカンジダを用いて行った.2)菌分離培養検査検体採取および菌培養口腔カンジダ症の診断には選択培地を用いて判定した.滅菌綿棒にて病変部位(健常者は口腔全体)を擦過し,直にCHROMagar培地(関東科学)に塗抹37°C48時間培養後判定した.結果:選択培地から分離されたカンジダ菌はC.albicans単独(45例),C.glabrata単独(3例),C.tropicalis単独(1例),C.albicans+C.glabrata(12例)であった.口腔カンジダ症群のCMA値の平均は2.48U/mLであったのに対し,健常者では菌種によるCMA値はC.albicans, C.tropicalis, C.glabrataの順に高かったCMA値は抗真菌剤の使用後明らかに低下した.また1週間後よりも2週間後のほうが低値を示した.カットオフ値を0.6とすると感受性は88.5%特異性は100%であった.結論:唾液中のカンジダマンナン抗原値を高感度ELISA法を用いて測定し、口腔カンジダ症ではカンジダマンナン抗原(CMA)値は高値を示し口腔カンジダ症の診断に用いる検査法として有用と考えられた.また抗真菌剤による治療により、自他覚症状の緩和とともにカンジダマンナン値は低下傾向を示し治療効果の判定にも有用と思われた.口腔の紅斑や白班を伴う粘膜病変を有し臨床的に口腔カンジダ症が疑われた症例中,クロモアガーカンジダ培地に陽性を示し,本研究の趣旨に同意を得た患者54例から,治療前治療後に延べ121検体の唾液サンプルを採取し、ELISA法を用いてカンジダ菌の特異抗原であるカンジダマンナン値の測定を行った。またコントロールとして臨床症状がなくカンジダ選択培地陰性の成人15名の唾液中のカンジダマンナン値を測定した.これらを分析した結果,カンジダ選択培地により口腔カンジダ症と診断された症例では、コントロール群に比べてカンジダマンナン値は有為に高値を示した。また菌数が多いほど検査値は高い傾向がみとめられ、この検査法の診断手段としての有用性が示された。また抗真菌剤の投与によりカンジダマンナン値は低下する傾向があり、それとともに自他覚症状の軽減がみられた。

よってこの検査が口腔カンジダ症の治療効果の判定にも役立つものと考えられた。一方で,カンジダ菌の菌種としてはCandida albicansに比べてCandida grablataに対する感度は低かったが、これは検査の基準となっているカンジダマンナンの性質によるものと思われた。目的:カンジダ菌関連疾患の診断や抗真菌剤の効果を判定するためにELISA法を用いた高感度のカンジダマンナン検査を適用して,さまざまな口腔粘膜疾患を有する患者の唾液中のカンジダ菌の細胞壁の構成成分であるカンジダマンナンの抗原値を計測する.対象:口腔粘膜病変を主訴として当科に来院した43症例で,男性19名,女性24名で平均年齢67.7歳であった.対照群として15人の健康成人,平均年齢43.6才に同様の検査を行った.方法:治療開始前にマンナン抗原を計測するために口腔から唾液を採取する一方,病変の擦過によりカンジダ培地を用いた分離培養を行った.カンジダマンナン抗原の計測は高感度カンジダマンナン検査キットを用いて行い,培養検査は選択培地を用いて行った.結果:口腔カンジダ症患者のカンジダマンナン抗原値の治療前の平均は2.64±1.32u/mlであり,健康成人の平均値は0.18±0.38u/mlで,この相違は明らかであった(p<0.001).抗真菌剤による治療後,カンジダマンナン抗原値は著明に減少した(p<0.001).また口腔症状とカンジダマンナン抗原値には正の相関が認められた.結論:唾液中のカンジダマンナン抗原値は口腔カンジダ症の診断と治療効果の判定の補助として有用である.(第6回アジア口腔顎顔面外科学会総会,第49回日本口腔外科学会における報告)カンジダマンナン抗原はカンジダの細胞壁を構成する要素で,カンジダに特異な抗原であるため臨床において深部性真菌症の血清学的診断に用いられてきた.とくに感度の高いELISAを用いた検査が臨床でも応用されるようになりその診断精度は向上している.そこで唾液中のカンジダマンナン抗原を測定することにより,口腔カンジダ症の診断に応用できるのではないかと思われる.この研究の目的は口腔カンジダ症患者の唾液中のカンジダマンナン抗原を測定してその臨床診断の可能性について検討することである.方法;1)カンジダマンナン抗原測定患者より1mlの無刺激性の全唾液を紙コップに採取(口腔全体から排出)、測定直前まで-30°C冷凍保存した.カンジダ抗原値はELISAを用いた高感度カンジダマンナン測定キット,ユニメディカンジダを用いて行った.2)菌分離培養検査検体採取および菌培養口腔カンジダ症の診断には選択培地を用いて判定した.滅菌綿棒にて病変部位(健常者は口腔全体)を擦過し,直にCHROMagar培地(関東科学)に塗抹37°C48時間培養後判定した.CMA値は抗真菌剤の使用後明らかに低下した.また1週間後よりも2週間後のほうが低値を示した.カットオフ値を0.6とすると感受性は88.5%特異性は100%であった.結論:唾液中のカンジダマンナン抗原値を高感度ELISA法を用いて測定し、口腔カンジダ症ではカンジダマンナン抗原(CMA)値は高値を示し口腔カンジダ症の診断に用いる検査法として有用と考えられた.また抗真菌剤による治療により、自他覚症状の緩和とともにカンジダマンナン値は低下傾向を示し治療効果の判定にも有用と思われた.
オゾンー触媒反応場による溶存態窒素酸化プロセスの開発

溶存窒素のうち,主にアンモニウムイオンのオゾン/触媒処理における酸化特性・機構について,常温・希薄水溶液中にて実験的検討を行った。その結果,オゾン/触媒処理におけるアンモニウムイオンの酸化は,触媒表面への吸着によって促進されること,またヒドロキシルラジカルの寄与は小さいことを示した。さらに,共存無機イオンの影響として,塩化物イオンおよびカルシウムイオンが存在するとき,アンモニウムイオンの酸化が促進されることを明らかにした.あわせて,有機物が共存する場合にも,酸化反応が促進されうることを指摘した。またその単位濃度あたりの寄与は,カルシウムイオンおよび塩化物イオンの寄与を上回ることを示した。オゾン-触媒反応場におけるアンモニウムイオンの酸化について,より高効率の反応条件を探索するため,反応気候について実験的検討を行った。まず酸化白金触媒(0 or 1 g/L)存在下,pH= 7.0,オゾン注入率800 mg/L,過酸化水素/オゾンモル比=0 or 1において,1 mg N/Lのアンモニウムイオンの酸化を試みた。過酸化水素を添加の有無によらず,酸化白金存在下の場合は,硝酸イオンへの変換効率が約20%であった。一方,触媒なしの場合には,オゾン単独処理であっても,オゾン/過酸化水素処理であっても変換効率はほぼ0%であった。これらの結果は,オゾン-触媒反応場における主たる酸化剤がヒドロキシルラジカルではなく,他のメカニズムによることを示唆するものである。続いて,ヒドロキシルラジカルのスカベンジャー(t-ブタノール)の有無による変換効率の違いを比較したが,酸化白金触媒,パラジウム触媒ともにスカベンジャーの影響は認められず,この結果からも通常の促進酸化処理とは異なる酸化メカニズムの存在が示された。さらに,ゼオライトによる反応効率の向上を試みるために,テフロン製のネットにゼオライト(F型,高シリカ型)を保持し、酸化処理実験を行った。その結果,オゾン単独処理と比較した場合硝酸イオンへの変換効率の若干の向上が認められたが,酸化白金触媒やパラジウム触媒の効果の方が高く,ゼオライトにアンモニウムイオンを保持することによる反応効率の大幅な向上は認められなかった。水道水の快適性を大きく損なう原因となる、トリクロラミンの前駆体であるアンモニウムイオンに着目し、オゾン/触媒処理でのアンモニウムイオンの酸化特性•機構を明らかにすることを最終目標とし実験的検討を行った。まず,オゾン/触媒処理においてpHや触媒濃度、吸着量がアンモニウムイオンの酸化効率に及ぼす影響について検討を行った。その結果、O3/PtO2処理ではpHによるアンモニウムイオンの吸着量には大きな変化は見られなかったが、O3/Pd/Al2O3処理では中性域においてアンモニウムイオンの吸着性が高く、吸着量が多いとき硝酸イオンの生成量が増加する傾向が見られた。また、触媒濃度は高ければ高いほど硝酸イオンの生成量は増加した。これによりオゾン/触媒処理におけるアンモニウムイオンの酸化は、触媒表面への吸着によって促進され、ヒドロキシルラジカルの寄与は小さいと結論付けた。次に,無機イオンや有機物との共存下における、アンモニウムイオンの酸化効率の変化について考察した。その結果、塩化物イオンおよびカルシウムイオンがオゾン/触媒処理におけるアンモニウムイオンの酸化に寄与することを示した。また、触媒表面へのアンモニウムイオンの吸着阻害は、ナトリウムイオンによる寄与が大きいことを示した。水中で共存する有機物による影響として、O3/PtO2処理ではNa2C2O4が、O3/Pd/Al2O3処理ではCH3COONaがそれぞれアンモニウムイオンの酸化に寄与することを示した。これらの有機物のアンモニウムイオン酸化に対する寄与は、カルシウムイオンおよび塩化物イオンの寄与と同等もしくはそれ以上であると考えられた。本研究では、水道水の快適性を損なうカルキ臭原因物質としてアンモニウムイオンに着目し、オゾン/触媒反応場を用いた除去の可能性について調査した。得られた知見を以下に述べる。まず、酸化白金、アルミナ、アルミナ担持触媒3種、ZSM-5についてオゾン/触媒処理を行うことによりその反応性を比較し、その反応について検討を行った。この結果、パラジウム/アルミナ触媒が最も効率が高く、さらにその反応はオゾンと触媒の相互作用によりヒドロキシルラジカルの生成が促進された結果であると推定した。また,酸化白金については触媒表面への吸着など別の相互作用も期待できることがわかった。次に,パラジウム/アルミナ触媒についてpH 5、pH 6、pH 7それぞれについてアンモニア態窒素濃度が100 μg-N/L、500 μg-N/L、1000 μg-N/Lとなる条件でオゾン/触媒処理を行い、触媒の反応効率について論じたのち、得られた結果を用いてアンモニウムイオン除去量を注入オゾン量に対する関数として表した。

これを用いてより低濃度域(50 μg-N/L、20 μg-N/L、10 μg-N/L)において、注入オゾン量に対するアンモニウムイオン除去量を推定し、より実条件に近い場合の反応効率を推定した。その結果、この反応はpHと初期アンモニウムイオン濃度に強く依存し、もっとも効率の高い結果となったpH 7、初期アンモニウムイオン濃度100 μg-N/Lにおいても除去率は最大で51%であった。ヒドロキシルラジカル以外のアンモニウムイオンの酸化メカニズムの存在について重要な情報を得ることができた。この結果はヒドロキシルラジカルの生成よりも,アンモニウムイオンの電荷の中和と白金触媒などによるヒドロキシルラジカル以外の酸化剤に適した触媒デザインの必要性を示すものであり,最終年度の触媒デザインにおいて重要な知見であると判断した。予定通り,触媒のスクリーニングを行い,触媒のタイプによってラジカルの生成に寄与するもの,触媒表面と対象物質自体が相互作用するものなどいくつかの機能を確認したため。予備実験により,触媒濃度が高い場合よりも低い方が酸化反応の効率がよいことを見いだした。このため,触媒濃度の影響と,ゼオライトと酸化白金やパラジウム触媒との組み合わせについて評価する。あわせて,アンモニウムイオン以外の窒素化合物,具体的にはアミノ酸やペプチドの酸化メカニズムについても検討し,浄水処理におけるオゾン-触媒反応場の意義について議論する。当初の計画通り,本研究では,水道水の安全性と快適性に大きく影響する原水中のアンモニア態窒素と有機態窒素を触媒反応を応用して高効率で除去する水処理プロセスを開発する。具体的には,オゾン+触媒型の促進酸化処理による低濃度域での窒素化合物の酸化に適した触媒(ゼオライトを基本骨格とし,金属酸化物を担持したもの)を探索・合成し,これらの制御法を確立する。これにより,塩素消費(快適性および消毒副生成物に影響),カルキ臭(快適性),消毒副生成物(特に窒素を含むもの),難分解性微量汚染物質といったこれまでの浄水処理プロセスの課題を,現行の高度浄水処理プロセスの利点を活かしつつ,解決するシステムを提案する。本研究の具体的な目的は以下のようになるが,特に24年度は触媒の効率化と反応生成物の検討を中心に実験的検討を進める。目的1:本申請で提案するオゾンと触媒を組み合わせた窒素化合物の酸化に有利な反応場を構築するために,最適な触媒を探索し,この酸化処理プロセスが有機態窒素とアンモニウムイオンについて浄水処理で対象となる濃度範囲で適用可能であることを示すこと。目的2:上記目的1の触媒利用型酸化処理プロセスが,原水中の窒素化合物に加えて,微量汚染物質・消毒副生成物(臭素酸イオン,トリハロメタン・ハロ酢酸生成能,NDMA等窒素系消毒副生成物)制御の観点からも優れていることを示すこと。目的3:触媒利用型酸化処理プロセスとその他の酸化プロセスの組み合わせ,例えばオゾン/過酸化水素型の促進酸化処理による前処理(アンモニウムイオンまでの酸化)との組み合わせによるプロセスの最適化について検討すること。
不全心におけるサイトカインの心筋障害及び催不整脈作用の基礎的検討

【目的】TNF-αは心不全、急性心筋梗塞等で上昇することが報告されているが、その電気生理的作用については不明な点が多い。今回TNF-αの遅延整流K電流(IK)に対する作用を検討した。【方法】単離モルモット心室筋細胞を全細胞型パッチクランプ法に供し、保持電位-40mVから、2秒のtest pulseを種々の膜電位まで加え、定常電流と末尾電位を測定した。細胞外は5.4mMK、細胞内は150mMKとし、nisoldipine(2μM)を加え、L型Ca電流を抑制した。全ての実験は37°Cで行った。【結果】TNF-αは無刺激時にはIKを抑制しなかった。Isoproterenol(ISP)(20nM)にて増強時にIKを濃度依存性に抑制した(IC50 116±U/ml,Bmax107±17%)。また、抑制には電位依存性は認めなかった。さらに、Histamine(250nM)、Forskolin(500nM)で増強されたIKも同様に抑制し、あらかじめcAMP(1mM)を細胞内投与しIKを増強した場合には抑制を認めなかった。また、TNF-αの効果はphosphatase inhibitorであるsodium orthovanadate(100μM)あるいは、phosphodiestarase inhibitorであるisobutylmethylxanthine(100μM)存在下でも抑制は同様に認められた。百日咳毒素(PTX)処理後にはその効果は消失し、ceramidase inhibitorであるNOEにても、その効果は消失した。【総括】TNF-αは、1)ISP誘発性のIKsを濃度依存的に抑制した。2)Histamine、Forskolin誘発性のIKsを抑制し、cAMPで増強されたIKsは抑制せず、PTX処理にてその抑制効果は消失し、NOE処理にてもその効果は消失した。3)TNF-αが心不全、心筋梗塞時などカテコラミン分泌増加時にIKsを抑制し、活動電位時間を延長させ、催不整脈性に働く可能性があることが示唆された。Isoproterenol(lSP)(20nM)にて増強時にIKを濃度依存性に抑制した(IC50 116±U/ml,Bmax 107±17%)。百日咳毒素(PTX)処理後でも同様の抑制効果が認められた。2)Histamine、Forskolin誘発性のIKsを抑制し、cAMPで増強されたIKsは抑制せず、cAMPの調節に関与していると考えられた。

百日咳毒素(PTX)処理後にはその効果は消失し、ceramidase inhibitorであるNOEにても、その効果は消失した。【総括】TNF-αは、1)ISP誘発性のIKsを濃度依存的に抑制した。2)Histamine、Forskolin誘発性のIKsを抑制し、cAMPで増強されたIKsは抑制せず、PTX処理にてその抑制効果は消失し、NOE処理にてもその効果は消失した。3)TNF-αが心不全、心筋梗塞時などカテコラミン分泌増加時にIKsを抑制し、活動電位時間を延長させ、催不整脈性に働く可能性があることが示唆された。
骨組織に特異的に発現する新規コラーゲン分子(マウス24型α1鎖)の機能解析

マウス24型コラーゲンα1鎖遺伝子の発現調節機構を解析するために、まず全cDNAをクローニングし、Ologo-Cap Race法によりこの遺伝子の転写開始点を検索した。その結果、24型コラーゲンの遺伝子産物が少なくとも2つ存在していた。次に、この遺伝子の発現調節機構を解析するために、ルシフェラーゼコンストラクトを作製し、ラット骨芽細胞株(ROS17/2.8)を用いてそのプロモーター活性を検討したところ、基本プロモーター領域は、今回新しく発見した転写開始点の上流部分のみであった。次に、発現調節機構に関わる転写因子の存在を明らかにするために、ゲルシフトアッセイを行った結果、いくつかの転写因子の存在が明らかになり、結合配列から転写因子CREB/AP1ファミリーの関与が示唆された。そこで、特異抗体を用いてスーパーシフトアッセイを行ったところ、c-Jun、CREB1、ATF1、ATF2が同定され、overexpressionの実験より、同定したすべての転写因子において、そのプロモーターの活性を上昇させることが出来た。更に、ChIPアッセイを行ったところ、同定したすべての転写因子が細胞内でDNAに結合しており、以上の結果から、これら転写因子が、マウス24型コラーゲンの基本転写活性に正に作用している事が示された。24型コラーゲンの組織発現を検討する前に、培養細胞での発現をRT-PCR法で検討した。その結果、分化過程の進んだ骨芽細胞やマウスの初代calvaria細胞に発現しているが、分化程度の低い骨芽細胞や繊維芽細胞にはほとんど発現していない事が分かった。そこで、in situ hybridization法により、マウスの発生段階での発現を検討したところ、骨組織に特異的に発現が認められた。更に、新生マウスのtibiaを用いて検討したところ、骨のシャフト部分に発現が認められ、その発現領域はI型コラーゲンやosteocalcinと同じであり、II型コラーゲンやX型コラーゲンの内側であった。更に、24型コラーゲンの発現が、骨分化過程とどのような関係であるかを調べるために、いくつかの未分化培養細胞および初代calvaria細胞を用いて検討した。その結果、未分化間葉系細胞を骨に分化させる事により24型コラーゲンの発現を誘導する事ができた。マウス24型コラーゲンα1鎖の発現調節機構を解析するために、まずこの遺伝子の全cDNA及びこの遺伝子のプロモーターに関与しているgDNAをクローニングした。次に、Oligo-Cap Race法によって、その転写開始領域を決定した。次に、転写調節機構を解析するために、まず、RT-PCR法によって、培養細胞での発現を検討し、ラット骨芽細胞(ROS17/2.8)に発現していることを確認した。次に、ルシフェラーゼ遺伝子のコンストラクトを作製し、ROS細胞を用いてその基本プロモーター領域を決定した。更に、基本プロモーター領域に関与する転写因子を調べるために、この領域のプローブを作製し、EMSAによりプロモーター活性に不可欠な領域を決定すると共に、その領域に結合する転写因子がCREB/ATFであることを同定した。