hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
核融合・二倍体形成過程の分子遺伝学的解析

分裂酵母における核融合と二倍体形成過程に欠損をもつ突然変異体の分離を試みた。分裂酵母のmeil変異体では半数体細胞の接合と核融合はおこるが、それに引き続く減数分裂に入れない。この性質を利用して、ニトロソグアニジン処理したホモタリックmeil株をphloxinBを含む培地にまき、コロニー中の二倍体形成頻度の低下したと考えられる株を分離した。この培地上では二倍体は濃い赤色の、半数体は白色のコロニーを作る。候補株を次に、フローサイトメトリー法、細胞学的方法ならびに遺伝学的方法で解析した。このようにして、これまでに核融合に欠損をもつ株1株、核融合には欠損を示さないが安定な二倍体を形成できないもの3株を分離した。このような性質をもつ突然変異体は、分裂酵母においてはこれまでに報告されていない。これらの分離株のうち、核融合欠損株についてさらに詳しく解析した。突然変異は1つの核性遺伝子に由来する劣性変異であり、遺伝子をkarlと命名した。karl変異により、接合後90%の核融合がおこらなくなる。またmeil変異を除いた条件では、胞子形成能はもつが、形成される胞子の数と形に著しい異常が認められた。karl変異を相補する遺伝子DNAを分離するために、異常胞子形成を選択指標として、コスミドライブラリーをスクリーニングした。調ベた約600のコスミドのうち、3つのコスミドが相補能を示した。このうち2つは制限酵素切断パターンから同一の部分を含むと考えられた。このうちの1つをサブクローンして、最終的に2.2KbのDNA断片を分離した。組み込みマッピングによってこのDNAがKarl由来であることも確めた。現在このDNAの塩基配列を決定中である。
安定なシリレンおよびゲルミレン錯体の合成とそれらを駆使した触媒反応の機構的研究

1.タングステンを中心金属に用い,いずれもカルボニル錯体の光反応を利用して,ドナーで架橋安定化されたビス(シリレン)錯体,外部ドナーで安定化されたシリル(シリレン)錯体,シリル(シリレン)錯体のカルボニル配位子の酸素が互いにシリレン配位子に配位して8員環を形成した二量体錯体およびドナーの配位していないゲルミル(ゲルミレン)錯体の合成に成功した。これらの錯体の構造をX線構造解析により明らかにした。さらに,単離したシリル(シリレン)錯体上で置換基の1,3-転位が起こることを実証した。2.ビス(シリレン)ルテニウム錯体について反応性の研究を行い,アルコール,水の付加,分子内C-H結合の活性化等が容易に起こることから,シリレン配位子が高い求電子性を持つことを明らかにした。また,ビス(シリレン)ルテニウムおよび鉄錯体にジメチルシリレンが付加し,ジシラニル(シリレン)錯体が生成することを見出した。3. (ホスフィノエチル)シリル配位子を支持配位子として持つイリジウム錯体を用いて,ヒドロジシランのケイ素上の置換基の再分配,メチル(ヒドリド)イリジウム錯体から第1級シランSiRH_3へのメチル基の移動によるメチルシランSiR(Me)H_2の生成,ヒドロシリル配位子から配位不飽和金属中心への1,2-水素移動によるヒドリド(シリレン)錯体の生成等の新しい反応を見出した。4.ドナーで安定化された陽イオン性ゲルミレン錯体および第2級アルキル置換シリレン架橋鉄二核錯体,鉄-タングステン錯体を初めて合成した。5. 1,2-フェニレンジオキシシリル配位子を持つ鉄錯体の初めての合成と構造解析に成功し,さらにその反応性を明らかにした。6.シリル(カルボニル)鉄錯体の新しい反応として,LiAlH_4との反応によるカルボニル配位子の還元とシリル基とのカップリング反応,およびトリアルキルホスファイトP(OR′)_3との反応によるアシル錯体の生成を見出した。1.シリル(シリレン)錯体の安定化型として,塩基がシリレン配位子に配位したシリル(シリレン)鉄およびタングステン錯体の合成に成功した。シリル(シリレン)タングステン錯体については結晶構造解析に成功し,タングステン-シリレン配位子間の結合が短いなど,その特異な構造を明らかにした。またシリル(シリレン)錯体で,シリル基からシリレン配位子への置換基の速い1,3-転位が起こっていることを温度可変NMR法を用いて直接観測することに成功した。2.メトキシ及びエチルアミノ基が架橋したビス(シリレン)タングステン錯体の合成に成功した。この錯体は動的挙動を示し、この動的挙動が塩基の配位していないシリル(シリレン)錯体を中間体として進行することを見いだした。またアルコキシル基で安定化されたビス(シリレン)ルテニウム錯体と水,アルコールとの反応を検討し,シリレン配位子が高い求電子性を持つことを明らかにした。さらにビス(シリレン)ルテニウム錯体を加熱すると,分子内C-H結合の活性化が起こることを見いだした。これはシリレン錯体でC-H結合の活性化が起こった初めての例である。

3.イリジウム(I)錯体を触媒とするヒドロジシランのけい素上の置換基の再分配反応がシリル(シリレン)錯体を経由して進行することを明らかにし,中間体を安定化して単離することに成功した。またメチルイリジウム錯体とRSiH_3を反応させると定量的にRMeSiH_2が得られることを見いだし,シリレン錯体を中間体とする機構を提案した。4.嵩高い置換基を持つ塩基で安定化された陽イオン性シリリン架橋鉄二核錯体の合成に成功し,その結晶構造などを明らかにした。1.ジシラニルタングステン錯体CpW(CO)_3SiMe_2SiMe_3(Cp=η-C_5H_5)を光照射すると,シリル(シリレン)錯体のカルボニル配位子の酸素が互いにシリレン配位子に配位して8員環を形成した二量体錯体[CpW(CO)_2(=SiMe_2)SiMe_3]_2が生成することを明らかにした。また,対応するジゲルミル錯体CpW(CO)_3GeMe_2GeMe_3を光照射すると,塩基の配位していないゲルミル(ゲルミレン)錯体が得られることがわかった。それぞれの錯体の構造を結晶構造解析により明らかにした。2.電子豊富なルテニウムフラグメントを含むアルコキシ架橋ビス(シリレン)錯体が溶液中で動的挙動を示すことを見いだした。この動的挙動の機構として塩基の配位していないシリル(シリレン)錯体を中間体とする機構を提案した。またアルコキシル基で安定化されたビス(シリレン)ルテニウム錯体と遊離のシリレンを反応させると,シリレンがルテニウム-ケイ素間に挿入してジシラニル(シリレン)錯体が得られることを明らかにした。3.アルキル(ヒドリド)(ヒドロシリル)イリジウム(III)錯体の熱反応によってヒドリド(シリレン)錯体が生成することを見いだした。この反応はエチレンの脱離とケイ素からイリジウムへの水素の1,2転位を経て進行することを明らかにした。4.塩基が配位して安定化された陽イオン性ゲルミレン錯体の合成に成功した。5.シリレンが鉄およびタングステンを架橋した錯体の合成に成功した。これはシリレンが異なる金属核を架橋した珍しい例である。
心サルコイドーシス診断における包括的全身造影CT検査および解析法の確立

心臓サルコイドーシスの正確な評価には、多くの専門経験を有し、読影者間の一致率の低さや読影できる医師が限られる限界もあった。そこで我々は、次にFDG PET/CTにおける新たな解析方法としてのテクスチャ解析法を確立し、論文として報告した(Eur J Nucl Med Mol Imaging 2018 Oct 16. doi: 10.1007/s00259-018-4195-9.)。これにより、主観的な評価によらない、客観的かつ定量的な解析が可能となり、自動で正確な判定をできる可能性が示された。今後はこのPETで確立されたテクスチャ解析法を遅延造影心臓CTへも応用し、CTでの病変検出の閾値設定、CTでのテクスチャ指標の統計学的探索及び、検者間での一致率向上の検証を行い、遅延造影CTによる心サルコイドーシスの新たな非主観的解析手法の確立を進める。心臓サルコイドーシスの診断基準のMajor CriteriaであるFDG PETの定量的解析手法(テクスチャ解析法)を確立したものを、遅延造影CT用に応用する必要があるため、解析のアルゴリズムを開発中である。心臓遅延造影CT独特のアーチファクトを拾わずに病変を抽出できる閾値設定やテクスチャ解析指標を統計的に検証する。心サルコイドーシスの診断基準は2015年に日本循環器学会から改定され、FDG PET/CTによる心臓の局所異常集積及び心臓MRIによる心筋の遅延造影所見が主徴候に格上げとなった。心サルコイドーシスの主な臨床症状は、房室ブロックをはじめとする不整脈で、ペースメーカー等のデバイス留置症例では、MRIが撮影できないという限界があった。MRIの代替として、CT遅延造影が様々な心疾患に臨床応用されており、デバイス留置症例でも施行可能なため、心サルコイドーシス診療における臨床的重要性は高い。サルコイドーシスは全身疾患であり、肺病変やリンパ節病変の評価時に同時に心臓評価ができれば、検査が一回ですみ、患者負担も少なく済む。応募者らは、一年目は従来の全身CTによるサルコイドーシス評価時に心サルコイドーシス評価を同時に行う包括的撮影プロトコールおよび、心臓遅延造影CT評価法を確立することを目的とした。被ばく低減のために、通常の管電圧120kVよりも低管電圧の80kV撮影を行っているが、従来の画像ではノイズが多く遅延造影所見の評価が困難であった。各種画像再構成法を比較し、最もコントラストノイズ比が高く診断能の高い画像再構成法を検討した。また心臓MRI及びFDG PET/CTをゴールドスタンダードとして、心臓遅延造影の描出能を比較し、至適再構成表示法を探索した。結果、従来の心臓遅延造影MRIと同等のコントラストノイズ比が得られる低被ばく撮影法及び画像再構成法を確立した。すでに臨床検査として確立されており、治療後定期的に全身評価CTを行っている患者群を対象としているため、分担者からの患者リクルートは順調である。初期評価による心臓遅延造影CTの従来の心臓MRIに対する診断能比較は、H29年の医学放射線学会で発表済みである。初回検査時には全身評価としてCTがオーダーされており、その際に心臓評価を同時に行うプロトコールはすでに確立されている。検査をオーダーする分担者とは定期的に症例検討を行い、研究を進める環境は整っている。また初回検査後に、治療介入しフォローアップで再度撮影する患者においても同様の撮影を行い、治療効果判定能についても評価する。当初予定していた人件費・謝金分は統計解析データベース作成を自分で行い、簡単な統計は専門家に今後依頼予定であるため、次年度に繰り越しとした。遅延造影CT解析アルゴリズム開発について人件費及び謝金を計上していたが、本年度は自分たちでまずFDG PET解析アルゴリズムを開発をし、そのバリデーションを行ったため、遅延造影CT解析アルゴリズムの開発にまでは着手できず、その分が未使用となったため。次年度は遅延造影CT解析アルゴリズムの開発に着手し、使用予定である。
ヒト脳回転状網脈絡膜委縮症の遺伝生化学的研究

脳回転状網脈絡膜萎縮症(Gyrate atrophy of the choroid and retina;GACR)は若年性の強度近視,夜盲,強度白内障,トンネル視から盲目へと不可逆的に進行する眼の変性疾患で、中枢神経障害として〓攣や徐波脳波の出現、また筋萎縮を合併し、オルニチンアミノ基転移酵素(OAT)欠損による代謝障害である高オルニチン血症を伴う、稀な先天代謝異常である。本研究グループは1.抗ラットOAT IgG Fab'-HRP結合体を用いて、ミトコンドリアマトリックス局在のOATを免疫組織化学的に染色することに成功し、従来未知であった眼球内及び脳内のOATの精細な局在分布を明らかにし、GACRの病像と密接な関係にあることを示唆した。2.ラット肝OATのcDNAをクローニングし、活性中心の構造に重要と思われる約400塩基対のcDNA断片をクローニングした。これをプローブとして、正常ヒト及びGACR患者並びにheterozygotesのOAT遺伝子DNAの解折を行う計画である。現在、プローブの大量採取を終え、正常ヒトOAT遺伝子DNAを解折中である。一方、GACR患者のfibroblastを培養して、DNA材料を作製中である。
搾乳ロボット利用技術の開発に関する研究

1.搾乳ロボットには異なった利用の仕方があり、その一つは固定した搾乳間隔で1日に2から3回搾乳する方法である。しかし自動搾乳システムの効率を最大限に利用刷る方法は1日24時間このシステムを利用する方法である。搾乳回数は牛の乳量、乳組成、体重および飼料の摂取量によって決める。この方式では1日に数回牛は搾乳ロボットに自発的に進入する。この牛の進入を確実にするためには搾乳と給餌とを結びつけることである。さらにこれを上手にするためには給餌エリア→休息エリア→搾乳エリア→給餌エリア→休息エリア→搾乳エリア→給餌エリアの牛の移動を円滑にする牛舎配置が必要である。2.このシステムは高泌乳牛に多頻度搾乳を可能にし、牛の福祉にも役立つ。3.ロボット搾乳は雇用労働を軽減する。したがって日本のような高い雇用賃金はこのシステムの導入が促進するものと考えられる。4月7月は乳牛15頭、9月下旬3月は乳牛30頭を使用して、1日2回搾乳を行った。搾乳時刻は4時と16時であった。飼料は濃厚飼料、乾草、サイレ-ジであった。主な結果は以下の通りである。1)自動装着率は90.2%であった.ティートカップの装着には、乳頭の角度が大きな影響を与えることが明らかとなった。また、左右の乳頭の間隔の極端に広い乳頭、逆に乾乳期直前の左右の乳頭間隔が極端に狭い乳房の装着には問題があることが明かになった。2)タイマ付きゲートの利用によって、搾乳ストールに自発的に進入する牛は98.5%であった。定期的に音楽を聞かせることは、搾乳ストールへの進入を促進した。また、濃厚飼料の給餌時刻や粗飼料の給与時刻も牛の自発的な搾乳ストールへの進入を促進した。また、濃厚飼料の給餌時刻や粗飼料の給与時刻も牛の自発的な搾乳ストールへの進入率に影響することが明らかとなった。また、牛を搾乳ロボットに馴らすためには、濃厚飼料を与えながら牛を搾乳ストールに前もって通過させることが必要であった。少なくともこのことを4日行う必要があった。3)ミルキングパーラーでの搾乳牛と比較において、乳量、乳質には違いがなかった。また、乳房炎の感染にも自動搾乳システムは、影響を及ぼさなかった。4)搾乳ロボットを制御するコンピュータの日本語化を図った。5)自動乳試料採取装置の開発を行った。また、塩素剤を使用する搾乳装置殺菌システムの開発を行った。6)乳房炎の感染を診断する画像処理システムの開発を行い、ほぼCMT診断方法と同じ精度が得られた。以上の結果から自動搾乳システムは農家での利用は可能であると思われる。平成7年度は主として搾乳ロボットシステムの評価を行った。平成8年度はこれを維持すると共に農家レベルでの実用化のための研究を行った。(1)北海道十勝地方の農家に搾乳ロボットを設置し、このシステムへの牛の馴化の過程を調査し、最適な馴化方法は、1)搾乳ボックスまで牛を濃厚飼料で誘導し、ボックス内を通過させる。2)ボックス内で濃厚飼料を食べさせる。3)牛に濃厚飼料を食べさせながら搾乳ボックスの扉を開閉し、扉の開閉に馴れさせる。4)牛の状態を観察しながらロボット搾乳を行う。(2)帯広畜産大学の搾乳ロボット(搾乳ボックスが2個)および栃木県那須町の農家の搾乳ロボット(搾乳ボックスが3個)について1日3回搾乳においての搾乳効率の比較を行った。また搾乳牛の行動についても比較した。1)2ボックス型の搾乳ロボットの搾乳効率は1314頭/時、3ボックス型の場合は2022頭/時であった。2)定刻搾乳の場合は搾乳牛が70頭以上になると3ボックス型の搾乳ロボットにおいても牛の行動が抑制されることが明らかとなった。(3)搾乳時刻を固定しない自由搾乳についての実用試験を行った。この搾乳方法は搾乳ロボットは牛が搾乳ロボットに入れば常時稼働できるように設定するものである。研究は帯広畜産大学農場で行った。1)1日2回搾乳の労力で3回搾乳が可能であることが明らかとなった。2)牛の行動は定刻搾乳より自由搾乳の方がゆとりがあり、無駄な行動の束縛が少なかった。

3)搾乳ロボットを効率よく利用するためには、自由搾乳が有効であることが明らかとなった。搾乳ロボットの利用方法には、定刻搾乳と自由搾乳とがある。自由搾乳とは搾乳時刻を指定しない搾乳方法で、通常1日2022時間は搾乳可能が可能である。平成8年度はこの自由搾乳の利用方法について研究した。主な結果は以下の通りである。(1)自由搾乳によって1日35回の搾乳が可能であることが明らかとなった。(2)自由搾乳においてはロボット搾乳による定刻搾乳の1日2回搾乳の労働力で1日35回搾乳が可能であることが明らかとなった。1日34回搾乳を希望する家族経営の酪農家にとって自由搾乳は極めて有効な搾乳法である。(3)自由搾乳の課題としては、ミルカ-の自動装着率が少なくても90%以上であること、また気温の高くなる夏季には自動搾乳システムの洗浄を3回以上すること(冬季は2回)、牛舎内の配置は休息エリアと給餌エリアが分かれていて搾乳ロボットは休息エリアに設置してあること等が重要である。給餌エリア⇒休息エリアへの通路にはワンウエイゲート設置して時刻によって自由通行あるいは一方通行とする。これによって牛は休息エリア⇒搾乳エリア⇒給餌エリア⇒休息エリア⇒搾乳エリアへとスムーズに流れ1日35回搾乳が可能になる。また給餌時刻を牛のこの流れに合わせることによってさらに搾乳ロボットの効率が向上する。
下部マントルにおける3価鉄のスピン転移

Mg-ペロブスカイト(Pv)及びポスト-Mg-ペロブスカイト(PPv)における3価鉄のスピン転移をそれぞれ200GPa及び165GPaに至る条件下でX線発光分光法およびX線回折により調べた.これにより, Pvでは高スピンの3価鉄が50-60GPa以上でAサイトからBサイトに移って低スピンになるのに対し, PPvではその全安定領域で3価鉄はBサイトを占めて低スピンであることが明らかになった.Mg-ペロブスカイト(Pv)及びポスト-Mg-ペロブスカイト(PPv)における3価鉄のスピン転移をそれぞれ200GPa及び165GPaに至る条件下でX線発光分光法およびX線回折により調べた.これにより, Pvでは高スピンの3価鉄が50-60GPa以上でAサイトからBサイトに移って低スピンになるのに対し, PPvではその全安定領域で3価鉄はBサイトを占めて低スピンであることが明らかになった.下部マントルにおける鉄のスピン転移は,下部マントル構成相間の鉄の分配やダイナミクスを考える上で非常に重要である.しかし,下部マントルの主要構成相であるMg-ペロブスカイトとポスト-Mg-ペロブスカイト中の鉄のスピン転移についてはいまだに不明な部分が多い.そこで我々は,Alを含む両相中のFe^<3+>のスピン転移について,X線発光分光法(XES)とX線回折法(XRD)で調べてきた.その結果,平成22年度には以下のことが明らかになった.Mg-ペロブスカイトでは,50GPa以下の低圧,室温ではFe^<3+>はAサイトを占めて高スピンであるが,50-60GPa以上ではアニーリングにより一部のFe^<3+>がBサイトのAlと席を交換して低スピンになり,アニーリングするに従ってその割合が増える.一方,Aサイトに残るFe^<3+>は200GPa(室温)に至っても高スピンのままであった.また,ポスト-Mg-ペロブスカイトでは,165GPa,2100Kで合成後の室温ではFe^<3+>はBサイトを占めて低スピン,AlはAサイトを占めていると思われるが,この試料を室温で減圧しながらスピン状態を調べると,約100GPaあたりから徐々にXESパターンが低スピンに向けて変化していった.以上のことより,下部マントルにおいては,ペロブスカイトでは低圧ではFe^<2+>,Fe^<3+>ともAサイトを占めてともに高スピンであるが,50-60GPa以上の高圧ではFe^<3+>はBサイトのAlと席を交換して低スピンになるのに対し,Fe^<2+>はAサイトを占有し続けて高スピンのままであると思われる.それに対し,ポスト-Mg-ペロブスカイトでは,Fe^<2+>はAサイトを占めて高スピン,Fe^<3+>はBサイトを占めて低スピンとなっていると思われる.下部マントルの様々な現象に大きく影響する鉄のスピン転移,特にMgペロブスカイト相におけるそれは長らく昏迷状態にあったが,最近2つの研究アプローチにより,この問題にもようやく解決の兆しが見えてきたと思われる,1つは,これまで2価鉄のスピン状態の解釈を2分してきたメスバウアー分光における四極子分裂についての理論的なアプローチであり,もう一つは3価鉄のスピン状態に大きな影響を及ぼす3価鉄とアルミの結晶内席交換反応についての実験的なアプローチである.我々は本課題研究で,これまで後者のアプローチでアルミを含むMgペロブスカイトとポストMgペロブスカイトにおける3価鉄のスピン転移の研究に取り組んできて,3価鉄とアルミのA,Bサイト間の交換反応が3価鉄のスピン状態に大きく影響する結果を得た.本年度は,いまだ十分に明らかとなってない,MgペロブスカイとポストMgベロブスカイトにおける3価鉄とアルミの結晶内席交換反応がどのような温度・圧力条件で起きるかに取り組んだ,実験はMgsio_3にFeAlO_3を固溶させたそれぞれの相の試料について,1600Kでアニーリングしたものと,もっと低温でアニーリングしたもの(Mgペロブスカイト)あるいはアニーリFングをしなかったもの(ポストMgペロブスカイト)について,放射光X線発光分光法及びX線回折法により取り組んだ,その結果,3価鉄とアルミの交換反応は,Mgペロブスカイトにおいては,温度が約1600K以上であれば圧力50-70GPa付近で容易に起きること,またポストMgペロブスカイトでも,温度1600K以上であれば圧力が70-110GPa付近で起きるであろうとの結果を得た.
筋形成時におけるリン酸化HSP27の発現および機能の解析

成熟ラットのヒラメ筋に0.03%カルジオトキシンを100μL注入し、14日後にサンプリングを行った。摘出筋は液体窒素で冷却したイソペンタン中で凍結した後、-20°Cのコールドトーム内で凍結横断切片を作成し、各種筋分化マーカーとSer15がリン酸化されたHSP27(p-Ser15)との2重免疫組織化学染色を行った。その結果、筋再生中に出現する筋線維を含む全細胞中約20%がp-Ser15強発現細胞であることが明らかになった。さらに、それら強発現細胞の約80%が横断面積400μm^2以下の小型細胞であった。このような小型細胞にはジストロフィンの周辺局在が認められなかったため、筋管または未熟な筋線維であると考えられる。また、proximity ligation assay法によりp-Ser15とデスミンとのインタラクションの有無を確認したところ、p-Ser15強発現細胞において強いインタラクションが認められた。しかし一方で、p-Ser15強発現細胞が多く認められる低サイズ帯の細胞にはp-Ser15の強発現およびデスミンとのインタラクションが認められないものも多く観察された。以上の結果から、筋再生中に出現するp-Ser15強発現細胞は筋活動等によりダメージまたはストレスを受けた細胞である可能性が高く、筋再生過程においては未熟な細胞がより細胞ストレスを受けやすいことが示唆された。HSP27はsmall HSP familyのひとつであり、他のHSP分子と同様に分子シャペロンとしての役割が一般的には知られている一方、他のHSP分子とは異なり細胞ストレス等の刺激を受けリン酸化されることも報告されている。しかしながら、リン酸化の機序やリン酸化HSP27の機能に関しては未だ不明な点が多い。そこで、リン酸化HSP27が「細胞内で何が起こっている時期に強発現するのか?」、「どのような役割を果たしてしるのか?」を追求することを目的として本研究を実施した。成熟ラットのヒラメ筋に0.03%カルジオトキシンを100μL注入し、7日後にサンプリングを行った。摘出筋は液体窒素で冷却したイソペンタン中で凍結した後、-20°Cのコールドトーム内で凍結横断切片を作成し、Pax7、myogenin、デスミンまたはジストロフィンとSer15がリン酸化されたHSP27(p-Ser15)との2重免疫組織化学染色を行った。その結果、筋損傷からの再生中に出現するp-Ser15強発現細胞はPax7陰性、myogenin陽性、デスミン陽性であった。また、成熟筋線維では、ジストロフィンは筋細胞膜に局在するが、p-Ser15強発現細胞ではこのような局在化が認められなかった。しかしながら、p-Ser15陽性であるがサイズが大きく中心核を保有する筋線維では、ジストロフィンの筋細胞膜への局在が認められた。したがって、p-Ser15は筋線維形成中において筋管から筋線維へ最終分化する段階で強発現していることが判明した。筋損傷からの回復中に引き起こされる筋線維新生過程において、リン酸化HSP27が「細胞内で何が起こっている時期に強発現するのか?」、「どのような役割を果たしてしるのか?」を追求することを目的として本研究を実施した。さらに、それら強発現細胞の約80%が横断面積400μm2以下の小型細胞であった。

このような小型細胞にはジストロフィンの周辺局在が認められなかったため、筋管または未熟な筋線維であると考えられる。また、proximity ligation assay法によりp-Ser15とデスミンとのインタラクションの有無を確認したところ、p-Ser15強発現細胞において強いインタラクションが認められた。しかし一方で、p-Ser15強発現細胞が多く認められる低サイズ帯の細胞にはp-Ser15の強発現およびデスミンとのインタラクションが認められないものも多く観察された。以上の結果から、筋再生中に出現するp-Ser15強発現細胞は筋活動等によりダメージまたはストレスを受けた細胞である可能性が高く、筋再生過程においては未熟な細胞がより細胞ストレスを受けやすいことが示唆された。
生活行動援助に関する新人看護師教育のプログラム構築―排泄援助習得過程からの検討―

本研究は、新人看護師が就職後6ヵ月間でどのように一連の排泄援助を実践し、患者の状況に合わせた援助を習得していくのかという過程を明らかにすることにより、生活行動援助の習得過程モデルを提示し、生活行動援助に関する新人看護師教育のプログラム構築をするものである。本研究の第1段階[2015年度2016年度]は、新人看護師に援助場面についてのインタビューと参加観察を実施した。新人看護師の排泄援助の様相を実践知の獲得や困難さから描き、援助を習得するまでの経時的過程を明らかにするために調査を行った。第2段階[2017年度2018年度]は、調査結果を分析し、習得過程モデルを提示して新人看護師教育への方策を検討することであった。2016年まで継続して行った調査結果をまとめ、データを経時的に整理して分析した。データを変化の見られた複数の視点に分類し、各々からキーとなるテーマが見いだされたため、テーマごとに経時的過程の変化を分析した。その経過を2017年度末にフィールド施設の教育担当者に結果報告し、新人看護師の習得過程の課題を共有した。2018年度末には、「新人看護師が、看護援助においてどのようなことを困難に感じているのか」また「新人看護師が、先輩看護師が指導の場で実践した看護技術についてどのようにとらえているのか」に着目し、排泄援助から生活行動援助に視野を広げ、入職後6カ月間の変化を分析結果としてまとめた。その結果を2019年度に2演題学会発表予定である。本研究の第一段階は、新人看護師への面接と参加観察により詳細なデータを収集し、新人看護師の排泄援助の様相を実践知の獲得や困難さから描くことである。2015年度の課題は、その第一段階の調査を実施するため、1研究フィールドの検討、研究協力・調査に向けた手続き、22014年度調査の結果分析を行い、2016年度調査への示唆を得ること、の2点である。1については、研究フィールドを検討し、施設責任者への研究協力相談を実施した。地域の中核的存在の病院施設で、生活行動援助を要するADLの低下した患者が多く入院しており、看護師が排泄援助を行っている病院・病棟であることが本調査の条件である。なお、倫理的配慮として、研究に参加する新人看護師が、該当病棟外の病院スタッフから特定しにくいよう、4月に新人看護師が20名以上入職し、各病棟に複数の新人看護師が配置される病院を選定条件とした。フィールド候補となった施設については、施設の再編計画に基づき、施設見学・再編の見通しの説明を受け、具体的な調査に向けた協議を継続した。研究者所属の研究倫理審査委員会に研究計画書を提出し承認を得た。また、研究フィールドの倫理委員会へ審査手続きを行い、調査に向けて調整中である。2については進行中であり、現在一次分析を実施している。2015年度の課題は、1研究フィールドの検討、研究協力・調査に向けた手続き、22014年度調査の結果分析を行い、2016年度調査への示唆を得ること、の2点であった。1については、研究フィールドの決定、研究協力への協議を図ることができ、調査に向けて、倫理委員会の承認を得ることができている。よって、おおむね順調に実施されている。2については、2014年度調査の分析が二次まで進んでおらず、2016年度に向けた検討が十分にできていない状況にある。本研究の第1段階は、新人看護師に援助場面についてのインタビューと参加観察をすることにより、新人看護師の排泄援助の様相を実践知の獲得や困難さから描き、援助を習得するまでの経時的過程を明らかにすることを目的としている。2016年度の課題はその調査である。2015年度に行った調査に向けた手続きに従って、調査を実施、終了した。2016年度の調査結果、および過年の調査結果と合わせて、現在分析を進めている。2016年度の調査を予定通り終了した。現在結果分析中である。本研究は、新人看護師が就職後6ヵ月間でどのように一連の排泄援助を実践し、患者の状況に合わせた援助を習得していくのかという過程を明らかにすることにより、生活行動援助の習得過程モデルを提示し、生活行動援助に関する新人看護師教育のプログラム構築を図るものである。本研究の第1段階は、新人看護師に援助場面についてのインタビューと参加観察をすることであった。第2段階は、行った調査結果を分析し、習得過程モデルを提示して新人看護師教育への方策を検討することである。2017年度より第2段階に進み、2016年までに行った調査結果をまとめ、データを経時的に整理して分析した。

データを変化の見られた複数の視点に分類し、各々からキーとなるテーマが見いだされたため、テーマごとに経時的過程の変化を分析した。新人看護師の排泄援助において、技術習得にともなって変化の見られた視点は、【排泄援助で難しく感じること】【オムツに対する考え】【先輩からの指導状況】【先輩とともに仕事をしていて感じること】【自分が大切にしていること・気をつけるよう心掛けていること】【今、困っていること】であった。各々の視点に関して、成長を裏付けるような転換点となるテーマが見いだされている。以上の経過をフィールド施設の教育担当者に結果報告し、新人看護師の習得過程の課題を共有した。2017年度は、2016年度までの調査データを結果としてまとめ、「新人看護師の排泄援助の習得過程モデル」の基礎ができた。また、それをもとに、病院施設担当者と新人看護師教育の方策を話し合うことができた。本研究は、新人看護師が就職後6ヵ月間でどのように一連の排泄援助を実践し、患者の状況に合わせた援助を習得していくのかという過程を明らかにすることにより、生活行動援助の習得過程モデルを提示し、生活行動援助に関する新人看護師教育のプログラム構築をするものである。本研究の第1段階[2015年度2016年度]は、新人看護師に援助場面についてのインタビューと参加観察を実施した。新人看護師の排泄援助の様相を実践知の獲得や困難さから描き、援助を習得するまでの経時的過程を明らかにするために調査を行った。第2段階[2017年度2018年度]は、調査結果を分析し、習得過程モデルを提示して新人看護師教育への方策を検討することであった。2016年まで継続して行った調査結果をまとめ、データを経時的に整理して分析した。その経過を2017年度末にフィールド施設の教育担当者に結果報告し、新人看護師の習得過程の課題を共有した。2018年度末には、「新人看護師が、看護援助においてどのようなことを困難に感じているのか」また「新人看護師が、先輩看護師が指導の場で実践した看護技術についてどのようにとらえているのか」に着目し、排泄援助から生活行動援助に視野を広げ、入職後6カ月間の変化を分析結果としてまとめた。その結果を2019年度に2演題学会発表予定である。1.2016年度は、調査を実施する予定である。年間通じて、研究スケジュールが遂行できるようフィールドとの調整を図っていく。・研究デザイン:半構造化面接法、参加観察法による質的記述的研究・予定研究対象者:2016年4月に就職する新人看護師数名新人看護師の成長は、1病院施設にあっても、配属された病棟、年度の病院風土、業務状況、患者の入院状況に左右され、影響を受ける因子は多様である。そのため、経時的な面接と参加観察による質的調査を行い、研究者1名が1年で調査できる対象者を数名に限定し、詳細なデータをとる。2.過年の調査結果の分析をすすめる分析を進め「新人看護師の排泄援助の習得過程モデル」を検討する。さらに、病院施設の教育担当者とともに、新人看護師教育の年間計画の方策を検討することにより、「生活行動援助に関する新人看護師教育のプログラム」を計画する。さらに分析をすすめて「新人看護師の排泄援助の習得過程モデル」を精錬させ、新人看護師教育プログラムを検討する。
境界問題のないノンパラメトリックな多次元密度推定とその応用について

推定する密度の台に境界がある場合のノンパラメトリック密度推定に焦点を置いて研究を行い、多変量対数正規密度をカーネルとして多変量対数正規カーネル推定量を提案した。さらに重み付き分布の発想から、重み付き多変量対数正規カーネル推定量へと一般化し、その漸近的性質を導出した。また、逆ガンマやその一般化であるAmorosoカーネルを用いた密度推定量も提案し、漸近的性質を導出した。さらに、ベータ、Amorosoカーネル密度推定量のバイアス修正を行った。得られた結果を検証するため、数値実験や実データ解析を行った。本年度は以下の研究成果を得た。1)非対称カーネル推定量の1つであり、台が有界区間である密度を対象とするベータカーネル推定量のバイアス修正を行った。既存の積型バイアス修正に加え、加法型バイアス修正、それらの平滑化パラメータの比が1となる極限のバイアス修正を提示し、それらの漸近的性質(バイアス、分散、平均積分2乗誤差、漸近正規性)を示した。さらに、その平均積分2乗誤差から、極限のバイアス修正が他のバイアス修正より優れた漸近性能を持つことを示した。また、数値実験を実施し、有限標本においても極限のバイアス修正推定量が優れていることを示した。2)台が非負である多次元密度を推定するため、まず多変量対数正規密度をカーネルとして多変量対数正規カーネル推定量を提案し、その漸近的性質(バイアス、分散、平均積分2乗誤差)を示した。さらに重み付き分布の発想から、重み付き多変量対数正規カーネル推定量へと一般化し、その漸近的性質(バイアス、分散、平均積分2乗誤差)を導出し、数値実験により、特定の重みにより性能が改善されることを示した。3)台が非負である密度を対称とする逆ガンマカーネル推定量を再考察して、境界付近での推定における問題を回避できるよう定義し直し、その新たな逆ガンマカーネル推定量の漸近的性質(バイアス、分散、平均積分2乗誤差、平均積分絶対誤差、漸近正規性)について示した。さらに、それらの一般化について着手した。1)ベータカーネル推定量のバイアス修正に関する結果が学術雑誌Journal of Nonparametric Statisticsに掲載された。2)本研究でキーワードとしている「多変量密度推定量」についての研究が進んでいる。具体的には、「多変量対数正規カーネルとその重み付きカーネル」に基づいた非積型の多変量密度推定量について全国学会や研究集会で報告した。さらにその研究成果を学術雑誌に投稿中である。3)逆ガンマカーネル密度推定量の成果を学術雑誌に投稿中であり、さらに、一般化ガンマカーネル推定量の再考察、及び一般化逆ガンマカーネル推定量の研究に着手した(28年度に結果をまとめ、学術雑誌へ投稿できる見込みがある)。1)台が非負である密度を対象とするいくつかの既存の非対称カーネル密度推定量(ガンマカーネルや前年度に研究した逆ガンマカーネル密度推定量を含む)をその特別な場合として含む、Amorosoカーネル密度推定量を提案して、その漸近的性質(バイアス、分散、強一致性、漸近正規性、平均積分2乗誤差)を示した。さらに、その平均積分2乗誤差から、最適なパラメータ設定も示した。また、数値実験を実施して、パラメータを適切に設定することにより、優れたパフォーマンスが得られることを示した。2)Amorosoカーネル密度推定量のバイアス修正を行った。加法型バイアス修正と積型バイアス修正に加えて、それらの平滑化パラメータの比が1となる極限のバイアス修正を提示して、それらの漸近的性質(バイアス、分散、強一致性、漸近正規性、平均積分2乗誤差)を示した。さらに、平均積分2乗誤差から、極限のバイアス修正が他のバイアス修正より漸近性能が優れていることも示した。また、数値実験を実施して、有限標本の場合でも、極限のバイアス修正が良いパフォーマンスを持つことを示した。3)前年度に研究した重み付き多変量対数正規カーネル密度推定量の平滑化パラメータ選択法を考察した。モーメント法によりパラメータを推定したガンマ密度を参照するrule-of-thumbにより平滑化パラメータを選択して、数値実験により、有限標本における性能を検証した。1)現在着手している、一般化ガンマカーネル推定量、及び一般化逆ガンマカーネル推定量について、そのバイアス修正を考える。2)平滑化パラメータ選択法について考察。3)非対称カーネル密度推定の判別分析への応用を考える。28年度が最終年度であるため、記入しない。統計科学28年度が最終年度であるため、記入しない。
3MC症候群の病態への補体関連因子MASP-1/3の関与とその分子機構の研究

3MC症候群は補体関連タンパク質であるMASP-3およびCL-K1がその責任遺伝子として見つかっている。我々は既にMASP1/3を欠損したノックアウトマウス(Masp1/3KO)を世界に先駆けて作成している。Masp1/3KOは胎児期での顎の骨格形成に異常を認めた(論文準備中)。この結果はマウスにおいてもMasp1/3は顎の骨形成に関与することを示し、ヒトの3MC症候群のモデル動物であることを確認できた。そこで我々はMASP-1/-3特にMASP-3がどのように顎の骨形成に関与するのかを分子レベルで詳細に検討するために,まず、MASP-3の組換えタンパク質を作成した。全長MASP-3にタグとしてマウスIgのFcドメインとの融合タンパク質をCHO細胞に発現させて、プロテインAカラムで精製し、純度の高いMASP-3組換えタンパク質を精製することに成功した。プロテインAカラムの素通り画分にほとんどのMASP-3が残存していることがわかり、同様の方法で作成したMASP-1/3の縮合型タンパク質Map44(MAP1)は素通り画分には検出されなかったことから、この現象はMASP-3特異的なものであり、未活性型MASP-3はC末端に存在するセリンプロテアーゼドメイン(SP)がその立体的構造による障壁によって、外部との接触ができないのではと想像できた。そこで、MASP-1/3の競合的阻害作用を示すタンパク質Map44(MAP1)でもMASP-3タンパク質ど同様に標的タンパク質を認識すると仮定し、今後の解析にはMAP44(MAP1)を使用することにした。和光純薬から発売になった新しい発現タグシステム(PAタグ)は従来の6xHis、FLAGなどのタグに比べ、そのモノクローナル抗体のアフィニティーの強さが3オーダー違うシステムを導入し、効率よく組換えタンパク質を純度も高い状態で精製することに成功している。この方法でCL-K1の組換えタンパク質も作成する予定である。概ね26年度の計画に従って、必要な組換えタンパク質の発現精製に成功しているから得られた組換えタンパク質を用い、マウス胎児の脳のライセートと混合し、そのライセート中に組換えタンパク質と特異的に結合できるタンパク質を網羅的に探索する。結合したタンパク質は質量分析器によって解析する。さらにそれぞれの組換えタンパク質を用いて、そのモノクローナル抗体を作成する。
音声と口唇動画像を併用した英語発音練習システムの開発

音声言語認識メカニズムや幼児の発音習得過程に着目し、学習者の口唇の動きをCCDカメラで取り込み、パソコン画面上でモデルスピーカの口唇の動きと比較しながら発音練習を行うCAIシステム"Lip Reading"を開発している。学習者の口唇の動きを画面上に表示し、モデルスピーカのものと比較しながら発音の練習が行える発音練習システムは未だかつて開発されていない新規性に富むシステムである。本CAIシステムを用いた学習者の学習前後における発音上達度を調べた結果、自分の口唇の動きを見て、モデルスピーカと比較しながら発音練習する方法は非常に効果的であることが確認できた。また、音声分析装置を用いて学習前後の日本人学生の/l/-/r/のフォルマント変化を調べた結果からも明らかな学習効果が確認できた。平成13年度は、日本人学習者の発音時の誤りを指摘するシステムの開発に向けて、/l/-/r/発音時の日本人学習者とネーティブスピーカの口唇動画像を比較調査し、/l/と/r/における口唇動作の違いについて分析した。8人のネーティブスピーカが/l/-/r/ミニマルペア5組を発音した時の口唇動作を1秒間に3-フレームの静止画ファイルに保存し、口唇動作を分析した結果、/l/において口唇が縦方向に大きく開いた時と/r/において口唇がすぼめられた時では、口唇の形状(縦幅、横幅)が異なることが確認できた。T検定を行った結果からも、/l/-/r/の特徴が現れた口唇画像における口唇の横幅、縦幅の平均比率には0.01%水準の有意差が認められた。したがって、/l/-/r/ミニマルペア発音時における口唇の縦幅の変化(時間特性)も全く異なっている。一方、発音学習ができていない日本人学習者の場合、一般に/l/において口唇の縦方向の開きが小さく、/r/において口唇がすぼまらないため、/l/-/r/発音時の口唇の形に違いが現れない。しかしし、"Lip Reading"による練習が進むと、口唇の縦方向の動きが大きくなり、モデルスピーカと同様に/l/と/r/で明らかに口唇動作が異なってくることが確認できた。以上の口唇動作分析結果やシステムによる学習効果については"見真似による/l/-/r/発音練習システムの効果"(教育工学会論文誌Vol.26・No.3)において詳細を述べている。国際化が進む現代、英語によるコミュニケーション能力は非常に重要である。コミュニケーションにおける基本は相手の話す内容を正しく聴きとることにあるが、音声言語を認識する際、我々は聴覚からの情報だけでなく無意識に視覚からも多くの情報を取り込んで認識している。また、幼児は大人が話す際の顔の表情をじっと見ながら、その言葉を自分で真似をして繰り返すうちに、無意識に音声言語を習得している。筆者は、音声言語認識メカニズムや幼児の発音習得過程に着目し、学習者の口唇の動きをCCDカメラで取り込み、パソコン画面上でモデルスピーカの口唇の動きと比較しながら発音練習をCAIシステム"Lip Reading"を開発している。平成12年度の研究では、/l/-/r/で始まる英語のミニマルペア(lead/read,light/right等)に加え、連続シラブルに/l/-/r/を含む英語ミニマルペア(例:flesh/fresh,tiled/tired等)を対象にした"Lip Reading"システムを新たに開発した。平成13年度は、/l/-/r/発音時の日本人学習者およびネーティスピーカの口唇動画像を比較調査し、正しい発音時の/l/と/r/の口唇の動き方の違いについて分析する。さらに発音練習条件を変えた場合の学習効果の違いについて調べる評価実験を引き続き行っていく。

8人のネーティブスピーカが/l/-/r/ミニマルペア5組を発音した時の口唇動作を1秒間に3-フレームの静止画ファイルに保存し、口唇動作を分析した結果、/l/において口唇が縦方向に大きく開いた時と/r/において口唇がすぼめられた時では、口唇の形状(縦幅、横幅)が異なることが確認できた。T検定を行った結果からも、/l/-/r/の特徴が現れた口唇画像における口唇の横幅、縦幅の平均比率には0.01%水準の有意差が認められた。したがって、/l/-/r/ミニマルペア発音時における口唇の縦幅の変化(時間特性)も全く異なっている。一方、発音学習ができていない日本人学習者の場合、一般に/l/において口唇の縦方向の開きが小さく、/r/において口唇がすぼまらないため、/l/-/r/発音時の口唇の形に違いが現れない。しかしし、"Lip Reading"による練習が進むと、口唇の縦方向の動きが大きくなり、モデルスピーカと同様に/l/と/r/で明らかに口唇動作が異なってくることが確認できた。以上の口唇動作分析結果やシステムによる学習効果については"見真似による/l/-/r/発音練習システムの効果"(教育工学会論文誌Vol.26・No.3)において詳細を述べている。
土の凍結面近傍におけるクラスレート・ハイドレート生成機構に関する研究

本年度は土中のクラスレート・ハイドレートの生成・解離過程を明らかにすることを目的に、ガラス粉体とTHF水溶液を用いて様々な一方向凍結実験を行った。この結果、粉体中のハイドレートの成長形が、塩濃度、冷却速度、温度勾配、初期含水比などによって平滑なレンズ状、歪んだレンズ状、樹枝状、間隙状と異なることを明らかにし、結果を公表した。次に、粉体中にほぼ純粋な結晶として析出したレンズ状のハイドレート(ハイドレートレンズ)の成長過程を観察し、土の凍上現象の原因であるレンズ状の氷(アイスレンズ)との析出・成長・融解メカニズムの相違点をまとめ、論文として公開した(一部は投稿準備中)。実際の凍土や海底堆積物中においてメタンハイドレートが生成するには、メメタンなどのガスの発生源の特定やその分布を知る必要がある。また、近年地球温暖化や宇宙開発、伝染病発生源などの観点から、凍土中の微生物についての知見が注目されている。そこで、メタン生成菌などの微生物を試料に混入し一方向凍結実験を行い、蛍光顕微鏡を用いてアイスレンズやハイドレートレンズ近傍の微生物の挙動を連続的に観察した。この結果、凍結の進行やレンズ状結晶の成長に伴う微生物分布の再配置、活性の低下などが明らかになった。また、微生物活性をもとに、レンズ状結晶近傍の温度環境をモニターする方法を模索した。次に、こうした被圧力下で微生物の活性がどのように変化するかを調べ、論文として公開した。また、土の凍結に関する知見をもとに、一方向凍結法を用いた土壌の浄化法について実験観察を行い、結果を論文にまとめた。今後は、土の凍結に関するより基礎的なメカニズムを明らかにすると同時に、土の凍結と土壌微生物の関係を明らかにすることや土の凍結を効果的に利用する技術開発を行っていく必要があると思われる。本年度は、凍結過程にある土中のクラスレート・ハイドレートの生成過程を明らかにする目的で、装置の開発および、各種実験を行った。まず、既存の一方向凍結装置(横型)の温度制御部を改良し、実験精度を高めた。また、新たに簡易式の一方向凍結装置(縦型)を作成した。これらの装置を用い、異なる塩種・濃度で飽和した様々なガラス粉体中のTHFハイドレート生成過程を微視的に連続観察したところ、以下の知見を得た。(1)一方向凍結下にある粉体中には、粉体をほとんど含まない、レンズ状の純粋なハイドレート(ハイドレートレンズ)が析出・成長する。(2)ハイドレートレンズの析出条件は粒径、含水比、塩濃度にそれぞれ依存する。こうした析出条件はアイスレンズのものと異なるが、これはハイドレートと氷の表面張力、粘性、ハマーカー常数などの違いによると考えられる。(3)アイスレンズ同様、ハイドレートレンズの成長速度も塩濃度の増加に伴い遅くなる。また、その形は塩濃度の増加によって、平滑なレンズ状、歪んだレンズ状、樹枝状、間隙氷状と異なる。(4)ハイドレートレンズの成長速度は成長面の過冷却度に比例する。このときの比例係数はアイスレンズの場合の比例係数と数10倍異なるが、これは成長面近傍の不凍水の拡散係数の違いに依存すると考えられる。以上の知見とその塩濃度依存性の一部は学会に発表しており、現在はいくつかの雑誌に投稿準備中である。次年度は、アイスレンズとハイドレートレンズの同時成長過程に着目した実験を行う一方、微生物を温度モニターに用いた凍結実験を行う予定である。
近世都市における町共同体の比較史的研究

1.1995年7月914日に京都六角町文書の調査を行った。合計8人の近世都市史研究者の協力を得た。六角町文書の調査は今年で二回目であり、奨励研究という資金的裏付けを得たことによって、多数の研究者の協力を得ることができ、また6日間という長期にわたって調査を行うことができた。その結果、本箱1箱を除いて、六角町町会所の蔵内部にる文書の調査は一通り終了した。2.同年11月1521日に、京都の町の運営に関する史料を網羅的に分析するため、京都府立総合資料館および京都市歴史資料館にて史料調査を行った。この時は、町運営のなかでも特に史料管理に関する史料を探した。その結果、非常に多数の町で作成された近世後期の文書引継ないし管理目録を見いだすことができ、その関連の史料も収集した。3.上記六角町文書の調査目録をコンピュータ入力し、データベースを作成しつつある。4.以上のように当初の予定では、仙台や盛岡などの史料調査も行う予定であったが、史料所蔵者との関係から六角町文書の調査の進行を優先させたこと、また、京都において関連史料が思いのほか豊富であったことにより、京都に調査・研究を集中することになった。
高速液体クロマトグラフィーの高機能化

高速液体クロマトグラフィーの高機能化を計るため(1)高感度検出のための誘導体化,(2)微量検出するための検出法, (3)相分離器を利用する抽出・検出法, (4)選択的検出器として点光検出法(5)多成分イオンクロマトグラフィーのためのカラムスイッチングなどについて總合的に研究を発展させた.その結果の概要は次の通りである.(1)高感度検出の誘導体については,国内外の文献調査研究を行い,その成果を公表した(ぶんせき,100105(1987))まだ脂肪族=トリル類を実例としてミクロ電解還元による誘導体化法として確立した. (分析化学35,614(1986))( 2)微量検出法については,ミクロ液体クロマトグラフィーに靜電場噴霧装置,を試作し,点光検出器として完成させた.この検出器を用いてイオウ化合物,リン化合物などの選択的検出について講演発表した.また,レーザーラマン検出の方法を考案し,微量アミンのミクロ液体クロマトグラフィーとして公表した(J,HRC10,173(1973))(3)粗分離器を利用する抽出検出法について研究し,脂肪族アルデヒド類蛍光検出する方法や赤外検出する方法などについて,その内容を公表した.(4)分離向上のための基礎研究として,逆相分配系に於ける分離挙動について研究し,芳香族アルデヒドを例として明確に考察を行った(J,Chyouctog.404,242(1987)(5)イオンクロマトグラフィーの高機能化をはかるためカラムスイッチングの方法を研究し,チオ硫酸イオンのように保持の長いイオンについて効果的に分析できるように工夫・改善に成功した. (講演発表)講演発表の研究については現在印刷公表の準備中であり,これを含めて高速液体クロマトグラフィーの高機能化が一段と進展させ得た事となり,実用分析法として評価されるものと考える.高速液体クロマトグラフィーの高機能化を計るため(1)高感度検出のための誘導体化,(2)微量検出するための検出法, (3)相分離器を利用する抽出・検出法, (4)選択的検出器として点光検出法(5)多成分イオンクロマトグラフィーのためのカラムスイッチングなどについて總合的に研究を発展させた.その結果の概要は次の通りである.(1)高感度検出の誘導体については,国内外の文献調査研究を行い,その成果を公表した(ぶんせき,100105(1987))まだ脂肪族=トリル類を実例としてミクロ電解還元による誘導体化法として確立した. (分析化学35,614(1986))( 2)微量検出法については,ミクロ液体クロマトグラフィーに靜電場噴霧装置,を試作し,点光検出器として完成させた.この検出器を用いてイオウ化合物,リン化合物などの選択的検出について講演発表した.また,レーザーラマン検出の方法を考案し,微量アミンのミクロ液体クロマトグラフィーとして公表した(J,HRC10,173(1973))(3)粗分離器を利用する抽出検出法について研究し,脂肪族アルデヒド類蛍光検出する方法や赤外検出する方法などについて,その内容を公表した.(4)分離向上のための基礎研究として,逆相分配系に於ける分離挙動について研究し,芳香族アルデヒドを例として明確に考察を行った(J,Chyouctog.404,242(1987)(5)イオンクロマトグラフィーの高機能化をはかるためカラムスイッチングの方法を研究し,チオ硫酸イオンのように保持の長いイオンについて効果的に分析できるように工夫・改善に成功した. (講演発表)講演発表の研究については現在印刷公表の準備中であり,これを含めて高速液体クロマトグラフィーの高機能化が一段と進展させ得た事となり,実用分析法として評価されるものと考える.高速液体クロマトグラフィーの高機能化を達成するためにはカラムと検出法及び試料の調製法について總合的な研究を進めなければならない。(1)試料の調製法:高速液体クロマトグラフィーでは、化合物を高感度に検出するための試料の誘導体化がきわめて重要である。本研究では脂肪族ニトリル類を分析するためのミクロ電解を考案し、電解によって得られるアミンを蛍光誘導体に変換し、カラム分離後蛍光検出器によって高感度検出する方法を完成した。(分析化学誌に発表)また脂肪族アミンの微量を分析するため、ミクロ高速液体クロマトグラフィーについて研究した。微量試料を検出するためレーザーラマン光の1130【cw^(-1)】をモニター可能な、9nlの内体積をもつフローセルを試作した。このセルを用して、ミクロカラム中で分離される脂肪族アミンの一斉検出を可能とした。またラマン検出を効果的に行うための誘導体化についても研究した(Proceeding of I.C.C.Cで発表)。これらの誘導体化については国内外の文献調査を行い、比較研究を進め、その結果を"高速液体クロマトグラフィーにおける誘導体化法"として公表した。(ぶんせき誌に発表)(2)溶離液の静電噴霧する方法について研究開発を進め、新たに尖光検出器を試作した。この検出器は高速液体クロマトグラフィーの溶離液中に存在するイオウ化合物のみに応答するため農薬,医薬,環境などの分野への応用が期待できる。イオウを含む農薬を用いて尖光検出器の作動條件などの基礎検討を終了し、この結果を公表した。(日化年会で講演)