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C型インフルエンザウイルスの抗原変異に関する分子生物学的研究

C型インフルエンザウイルスの伝播における抗原変異の意義について解析を加え、以下に要約される成績を得た。1.19821983年に近畿地方で分離された3株のC型フイルス(京都/41/82、奈良/82、兵庫/1/83)の抗原性と遺伝子構造を解析したところ、これらのいずれもが1980年に分離されたMississippi/1/80(MS80)株に酷似していることが明らかになった。MS/80株に似たウイルスは1982年以前には我国では分離されておらず、しかもMS/80系統株の抗原性は従来の本部分離株とは大きく異なっていた。この観察は、1980年代初頭に本邦に上陸したMS/80系統株が以前の株とは抗原性が異なるために近畿一帯に急速に拡がったことを示唆しており、C型ウイルスの伝播における抗原変異の重要性を伺わせるものである。2.19851989年にかけて奈良、広島、山形の3県で分離された8株のC型ウイルスに同様の解析を加えた。1985年には2株が分離されたが、そのうち1つ(奈良/1/85)はMS/80系統株であり、もう一つはこれまでの本邦分離株のいずれとも異なるウイルスであった。ところが1986年以降に分離さた6株は、いずれも1981年に愛知県で分離された愛知/1/81株に非常によく似たウイルスであった。この知見は、当該期間では愛知/1/81、系統株が他の株よりはるかに拡がり易かったことを示唆しており、特定の抗原変異株が選択され得るとする上記の考えを支持する。3.C型ウイルスの伝播の様式をさらに詳細に把握するためには、分散株数を激増させる必要がある。このためには、培養細胞を用いた簡便な分離方法の開発が不可欠とされていた。我々は50余種類の培養細胞についてC型ウイルスに対する感受性を調べ、ヒト悪性黒色腫由来のHMV-II細胞がこの目的にかなうことを明らかにした。現在同細胞を用いて、かぜ患者からC型ウイルスが続々と分離されている。我々は本邦で分離されたすべての株について、オリゴヌクレオチド・フィンガープリント法による遺伝子解析と抗HE単クローン抗体による抗原解析を併用することによって、同じ時期に分離されたウイルスでさえそのほとんどが系統を異にすることを明らかにした。ところが興味深いことに、19821983年に近畿地方各地(京都、奈良、兵庫)で3株のC型ウイルスが分離されたが、そのいずれもが非常によく似た抗原性と遺伝子構造を持っていた。これらの株に似たウイルスは以前には一切分離されていない。これらの観察を基に我々は、従来の本邦分離株とは抗原性を異にするウイスルが1982年に持ち込まれ、同地区に急速に拡がったと推測している。この仮設を立証することを目的として、近畿3株の抗原性と遺伝子構造をさらに詳細に解析し、以下の結論を得た。1.近畿3株のHE遺伝子の塩基配列を、合成オリゴヌクレオチドをプライマーとするdideoxy chainterminator法で決定したところ、三者の配列は酷似しており、その違いは0.4%にとどまっていた。

さらにこれらの配列を欧米分離株と比較したところ、1980年に米国で分離されたC/Mississippi/1/80株に非常によく似ている(ホモロジー、98.4%98.6%)ことが判明した。2.そこでC/Miss/1/80株のHE蛋白に対する単クローン抗体を用いて同株と近畿3株の抗原的な関係を調べたところ、それらが全く同じ抗原性を持つことが明らかになった。3.種々の本邦分離株やMiss/1/80株に対する免疫血清を作製し、それらを用いて抗原解析を行ったところ、Miss/1/80関連株と既存の株との抗原性の違いは、ポリクローナル抗体でも識別し得るほど大きいものであることが判明した。以上の成績は、上記の仮説の妥当性を支持するものである。昨年度の研究から、1980年代初頭に近畿地方に上陸したC/Mississipi/1/80系統株が、既存のC型インフルエンザウイルスとは抗原性が大きく異なるために急速に蔓延した可能性が示唆された(Virology 172、125、1989)。C型ウイルスの伝播にも抗原変異が寄与し得るとの概念を提示した最初の報告である。本年度は、この仮説の妥当性を検証することを目的として、以下の2つの研究を実施した。1.1985年から1989年にかけて奈良、広島、山形の3県で分離された8株のC型ウイルスの抗原性と遺伝子構造を比較検討した。1985年の2つの分離株のうち、奈良/1/85はMississippi/1/80系統株であり、奈良/2/85はこれまでの本邦分離株のいずれとも異なる抗原性と遺伝子構造を持つことが明らかになった。ところが1986年以降に分離された6株(奈良/1/86、山形/1/86、奈良/1/87、山形/6/88、広島/1/88、広島/1/89)はいずれも1981年に愛知県で分離されたウイルス(愛知/1/81)に酷似していた。この事実は、19861989年の期間では、愛知/1/81類似株が共存している他の株よりはるかに拡がり易かったことを示唆しており、上記の考えを支持する成績と言える(論文作製中)。2.抗原変異の疫学的意義の把握を困難にしている最大の原因は、C型ウイルスの分離成功例が極端に少ないことにある。ウイルス分離を発育鶏卵羊膜腔内接種法に頼らざるを得ないためであった。我々はこの現状を打破することを目的として、培養細胞によるC型ウイルスの分離方法の開発を試みた。C型ウイルスの増殖をマ-カ-として50数種類の株化細胞をスクリ-ニングしたところ、ヒト悪性黒色腫由来のHMV-II細胞が発育鶏卵に匹敵する感受性を持つことが明らかになった。この細胞を用いてかぜ患者からのウイルス分離を開始したところ、1989年度に20株に及ぶC型ウイルスを得ることができた(J,Gen Virol.70,1653,1989)。
蛋白チップを用いた消化器細胞の分化・再生の段階の指標となる細胞マーカー群の決定

(1)方法継代移植が可能で未分化なマウス腸管上皮粘膜細胞を、ラット消化管の筋線維芽細胞と三次元の共培養し、(A)形態学的な分化増殖に関する変化、(B)その場合に発現されマーカーとなる可能性のある蛋白質群の発現、(C)ホメオボックス遺伝子の発現、を経日的に検討した。(2)結果(A)形態学的変化(1)マウス腸管上皮粘膜細胞は、単独培養の場合にはあまり増殖せず、またその形態も殆ど変化が認められなかった。一方、(2)ラット消化管の筋線維芽細胞と三次元の共培養を行なった場合、ラット消化管筋線維芽細胞の三次元的分布状態に依存して、マウス腸管上皮粘膜細胞の増殖、配列や分化を認めた。すなわち(あ)ラット消化管筋線維芽細胞の三次元的配列が水平面に配列する場合(Running Pattern)には、細胞質が増加して細胞形態は立方体を呈し、ロゼッテを形成したり腺腔様の構造を形成した。他方(い)ラット消化管筋線維芽細胞の三次元的配列が散在的に配列する場合(Scattering Pattern)には、細胞質は増加するものの細胞形態はラウンドで腺腔様構造はとらなかった。(B)蛋白マーカー発現(1)マウス腸管上皮粘膜細胞の単独培養では、発現蛋白にも殆ど変化が認められなかった。(2)ラット消化管の筋線維芽細胞と三次元の共培養を行なった場合の内で(あ)ラット消化管筋線維芽細胞配列がRunning Patternの場合には、消化管内分泌細胞への分化を示すマーカーとしてクロモグラニンAの発現が経時的に増強した。(い)散在的に配列したScattering Patternの場合には上記の変化は明らかではなかったが、反面粘液分泌細胞への分化を示すマーカーとして、PAS染色陽性蛋白の強い発現を認めた。(C)ホメオボックス遺伝子の発現(1)マウス腸管上皮粘膜細胞の単独培養では、これら遺伝子の発現は認めなかった。(2)ラット消化管筋線維芽細胞と三次元の共培養では、ホメオボックス遺伝子の幾つかの発現を認めた。この研究を行うため消化管上皮幹細胞増殖のIN VITROモデルを作成する必要がある。消化管上皮細胞群から構成される粘膜上皮塊や幹細胞を単離した状態でIN VITROで継代培養することは困難で、そのためIN VIVOでの分化・再生の過程をIN VITROで研究するモデルの作成は従来困難であった。そこで当教室で保有する非腫瘍化ラット消化管粘膜上皮細胞であるRIE細胞をIN VITROで培養し、上皮欠損部位に増殖する過程を経時的に検討することにより、消化管上皮幹細胞増殖のIN VITROモデルの作成に成功した。このような消化管粘膜上皮の幹細胞の分化・再生のIN VITROのモデル自体が従来は存在しなかったので、有用な研究モデルと考えられる。2.上記モデルを用いた分化・再生のマーカーとしての蛋白の解析現在、上記モデルを用いて研究を行い、次のような成果が得られた。この蛋白A.B.Cの最終的な同定には、未だ様々な蛋白解析過程が必要であるが、以下に概要を述べる。(1)再生の初期には、上皮欠損部位に極めて近接した部位では特殊な蛋白Aの発現が起る。

このAは幹細胞自体の複製の指標の一つの蛋白と考えられる。(2)やや遅れてこの蛋白Aの発現が活発化した細胞が経時的に欠損部へと移動する。複製された幹細胞の可能性が考えられる。(3)(2)と同時に(1)の周辺では別の蛋白B発現が活発化するが、やがてこの合成を含め蛋白合成は低下する。Bは複製された幹細胞が、通常の上皮細胞への再生過程へ進んでいる指標となる蛋白の一の可能性が考えられる。(4)欠損部ではその後第三の蛋白Cの発現が活発する。これは更に分化した上皮細胞を示す指標となる蛋白の可能性が推定される。継代培養可能なラット小腸粘膜Cell Lineを用いて、コラーゲン・ゲル内で細胞培養を行ない、小腸粘膜上皮への分化を検討した。更に小腸粘膜への分化傾向を認めた場合に特異的に増加・発現するRNAと蛋白質を、DNAチップとプロテオ・ミックスによって解析した。(1)ラット小腸粘膜細胞単独の培養では、形態学的検討では細胞はコレーゲン・ゲルの表面に連続した単層の扁平な上皮として増殖した。この単層の扁平な上皮細胞は、複数の粘液蛋白、小腸上皮内分泌細胞や吸収上皮細胞に特異的な蛋白質に対する酵素抗体染色法による検討でも、何れの方法でも小腸粘膜上皮への分化傾向は全く認められなかった。(2)腎周囲線維芽細胞(NRK-49F)との共培養では、若干の重層化とやや厚みのある細胞形態を示したが、重層化は限定的であった。また複数の粘液蛋白、小腸上皮内分泌細胞や吸収上皮細胞に特異的な蛋白質に対する酵素抗体染色法による検討でも酵素抗体染色による小腸分化傾向は見られなかった。(3)一方、ラット小腸粘膜下層から取った線維芽細胞との共培養では、形態学的にも小腸粘膜細胞の明らかな重層化と不完全ながら腺管構造形成を示し、この変化はラット小腸粘膜下層由来線維芽細胞の細胞濃度に依存的な分布傾向を示した。吸収上皮細胞に特異的な蛋白質に対する酵素抗体染色法では小腸上皮細胞への分化傾向は確認できなかったが、小腸上皮内分泌細胞や粘液蛋白に対する特異的な酵素抗体染色による検討では内分泌細胞や粘液成分を含有した細胞への分化傾向を示した。これらの小腸上皮細胞への分化傾向は、培養開始1週間目頃から認められ、経時的に進行した。(1)と(2)の場合には、蛋白分析では何ら格別な蛋白質の発現は認められなかったが、(3)の場合には培養開始1週間頃からNotch Signal Pathwayに関与する物質の発現が認められ、しかも経時的に増強するのが認められた。(1)方法継代移植が可能で未分化なマウス腸管上皮粘膜細胞を、ラット消化管の筋線維芽細胞と三次元の共培養し、(A)形態学的な分化増殖に関する変化、(B)その場合に発現されマーカーとなる可能性のある蛋白質群の発現、(C)ホメオボックス遺伝子の発現、を経日的に検討した。(2)結果(A)形態学的変化(1)マウス腸管上皮粘膜細胞は、単独培養の場合にはあまり増殖せず、またその形態も殆ど変化が認められなかった。一方、(2)ラット消化管の筋線維芽細胞と三次元の共培養を行なった場合、ラット消化管筋線維芽細胞の三次元的分布状態に依存して、マウス腸管上皮粘膜細胞の増殖、配列や分化を認めた。
未翻刻仏教文献に基づく東アジア仏教の基礎的研究

本研究においては、聖語蔵に収録されていた沙門宗『因明正理門論注』・崇俊『法華決釈記』・『法華略讃嘆』・『法華経二十八品略釈』巻上・『金剛般若経疏』、佛教大学図書館蔵『大智度論略鈔』、国立歴史民俗博物館蔵『唯識比量』(水木家資料)など、従来知られていなかった未翻刻文献を複数発見し、その翻刻デジタルテキストと校訂版を作成することができた。これらの文献には多くの逸文が含まれ、東アジア仏教の解明に資することが期待される。いくつかの文献については学会等で発表し、その重要性が認知されている。近日中にデジタルテキストと校訂版を公開する予定である。平成25年度においては、(1)対象とすべき未翻刻文献の調査・選定、(2)研究推進のためのシステムの設計と構築、(3)古写経等の目録調査・データベース化、(4)文献の複写・翻刻・文献批判、(5)文献分析方法の検討を計画していた。(1)については、聖語蔵経巻データベース(丸善)、東大寺図書館、佛教大学、龍谷大学、国立国会図書館等に収蔵されている未翻刻文献を中心に検討したが、聖語蔵経巻データベースに収録された未翻刻文献を中心に作業を行うという方針を定めた。平成26年度からは、聖語蔵経巻データベース・第V類甲種写経所収の1764『法華決釈記』・1765『法華略讃嘆』・1916『法華略抄』(恐らく東大寺明一のものと思われる)とその裏の沙門宗『因明正理門論注』・1961『法華経二十八品略釈』、第VI類乙種写経所収の2052『金剛般若経疏』(中唐以降の著作か)等の翻刻に着手する予定である。(2)のシステム構築については、MediaWikiなどの既存システムの評価と準備作業を中心に行い、加えて今後の作業のためのPC環境の整備を行った。(3)目録(メタデータ)については、現在整理中である。(4)文献の複写・翻刻・文献批判については、(1)で選定した文献について、平成26年度以降に翻刻を実施する文献についての印刷作業等を行った。翻刻を始めることができなかったので、文献批判についても簡単なことしか行っていない。(5)文献の分析方法については、研究代表者・研究分担者がこれまで取り組んできた、確率的言語モデルによる文献の比較分析手法、変格漢文に関する研究を行った。以上の計画に加えて、上記未翻刻文献に関連する研究発表(11月)や研究集会(2月)を行った。平成26年度においては、平成25年度に調査した未翻刻文献のうち、聖語蔵所収の文献を中心に翻刻(デジタル化)・校訂作業を行った。『金剛般若経疏巻上』(聖語蔵経巻・第VI類・乙種写経・第1号・No.2052)は翻刻・校訂が完了し、『法華決釈記巻四』(同・第V類・甲種写経・第20号・No.1764)、『法華経二十八品略釈巻上』(同・第V類・甲種写経・第69号・No.1961)、『法華略讚嘆』(同・第V類・甲種写経・第21号・No.1765)、聖語蔵経巻第V類・甲種写経『法華略抄』裏の『因明正理門論注』については現在校訂作業中である。これらの文献については、平成27年度中に校訂を完了させ、電子テキストとともに公開を行う予定である。また、江田文庫本『仏説地心陀羅尼経』(駒澤大学図書館蔵)についても、翻刻・校訂・訳注を行った。これ以外のデジタル化を行った文献(東嶺円慈『達磨禅経説通考疏』など)については、研究期間内に校訂作業にまでは着手できないため、データの公開にのみとどめる予定である。また、国立歴史民俗博物館等で追加の資料調査を行った。そこで発見した未翻刻文献(『唯識比量』)についても翻刻作業を行い、平成27年度に完了予定である。本研究の成果の一端については、日本印度学仏教学会・東アジア仏教研究会・駒澤大学仏教文学研究所等で研究発表と論文の投稿を行った。沙門宗『因明正理門論注』については、日本三論宗の文献であること、貴重が逸文を有することなどが明らかになった。著者が不明であった『法華決釈記』については、崇俊『法華決択記』の一部であることが明らかになった。平成27年度においては、沙門宗『因明正理門論注』の校訂と現代語訳の作成(一部)を進めた。本文献は国内外の仏教論理学研究者(インド論理学、東アジア仏教論理学)のあいだで注目されており、概要について論文を発表(『東アジア仏教研究』)したほか、国内で二度、本文献に関する研究会が開催され、概要の報告、現代語訳の検討等を行なった。未翻刻文献を翻刻することを通じて東アジア仏教研究の再構築をはかる、という本研究の方法論は、本文献の「発見」とその後の反響によって、その妥当性が明らかになったとも言えるだろう。加えて平成27年度においては、新たな未翻刻文献として佛教大学所蔵

『大智度論略鈔』の翻刻・校訂、鳳潭『因明論疏瑞源記』(一部)のデジタル化、水木家資料・唯識比量の翻刻とデータ入力等を行った。前者は、慧影、霊見、僧侃らの『大智度論』注釈からの引用が多く、南北朝から隋の仏教を知る資料として価値があると考えられる。当初の計画では、最終年度にこれまでの翻刻・校訂作業をまとめた報告書を作成し、研究者に配布する予定であったが、校訂作業等に予定以上の時間がかかり、年度内の公開には至らなかった。もっとも校訂作業自体は進んでいるので、できるかぎり早い段階で報告書として公開したいと考えている。報告書には、聖語蔵所収『法華決釈記』『法華略讚嘆』『法華経二十八品略釈巻上』『金剛般若經疏』、佛教大学図書館蔵『大智度論略抄』を収録する予定である。沙門宗『因明正理門論注』については、上記の通り、すでに大きな反響を得ているため、報告書とは別の形での発表を考えている。校訂を行なっていない文献についても、デジタルデータを公開する予定である。本研究においては、聖語蔵に収録されていた沙門宗『因明正理門論注』・崇俊『法華決釈記』・『法華略讃嘆』・『法華経二十八品略釈』巻上・『金剛般若経疏』、佛教大学図書館蔵『大智度論略鈔』、国立歴史民俗博物館蔵『唯識比量』(水木家資料)など、従来知られていなかった未翻刻文献を複数発見し、その翻刻デジタルテキストと校訂版を作成することができた。これらの文献には多くの逸文が含まれ、東アジア仏教の解明に資することが期待される。いくつかの文献については学会等で発表し、その重要性が認知されている。近日中にデジタルテキストと校訂版を公開する予定である。平成25年度において調査・選定された未翻刻文献について、ほぼ順調に翻刻・校訂作業が進んでいる。作業の進展にともない、これまで不明であった文献の性格・内容も明らかになってきており、いくつかの文献はこれまで知られていない貴重な情報を含むことがわかってきた。仏教学平成27年度中に、翻刻が終わった聖語蔵所収の文献を中心に校訂作業を進め、電子テキストのインターネット公開と、校訂テキストを冊子の形にまとめた報告書の編集を行う。校訂を行わない文献についても、電子テキストを公開する。また、文献の校訂作業中に明らかになった研究成果については、随時学会等で発表する。平成25年度の作業によって、従来研究者に知られていなかったと思われる未翻刻文献がいくつか聖語蔵経巻等に収録されていることが確認された。現段階では翻刻が完了していないため本格的な検討を行うことはできていないが、予備的な研究においてもこれらの文献が唐代仏教・新羅仏教・日本仏教の文献的な空隙を埋める可能性が認められた。その意味で、本研究の目的として掲げた「『大正新脩大蔵経』を中心とした文献研究を柱とする従来の東アジア仏教研究が再構築」に向かって前進しているものと思われる。しかしながら、調査しようと思っていた文献が修理に入ってしまうなど、不測の事態も発生したため文献調査等に予定以上の時間がかかってしまった。今後の研究活動に大きな遅れはないと思われるが、今後は多少スピードアップをしていく必要があるかもしれない。アルバイトの作業が若干遅れ、謝金の支払いが年度内にできなかったこと、購入予定の物品の選定に時間がかかったことが主な理由である。平成26年度から、研究分担者やアルバイトによる翻刻作業が本格的に開始しており、このまま順調にいけば平成27年度における文献の分析と、インターネットや冊子による公開に向けた作業に予定通りに進むことができると思われる。また、現在作業中の文献については、随時関連学会等で報告をすることで、情報の共有をはかりたい。
σ対称性ポリオールのエナンチオ選択的変換反応

我々はすでに、メソ型1,3,5-トリオールのアセタール化反応にl-メントンを用いると、pro-R酸素と3位の酸素の間での反応がエナンチオ選択的に進行し、3連続不斉中心を持ち光学活性合成原料として有用なメントナイド誘導体が効率的に合成できること、さらに本反応における不斉識別の要因としてメントナイド誘導体におけるジオキサン環の側鎖部分とメンタン環の間にはたらく分子内van derWaals安定化相互作用が大きいことを明らかにしてきた。今回、メントンに代わり、さらに高いエナンチオ選択性の発現が期待されるキラルケトンの分子設計ならびにその合成と反応を検討した。その結果、メントンとのアセタール化反応で認められる立体選択性が、MacroModelを用いた分子力場計算により満足のゆく精度で再現できることが明らかとなった。分子力場計算により、種々のメントン類縁体より生成するアセタールの熱力学的安定性を調べたところ、メンタン環の7位のメチル基をt-ブチル基に置き換えた構造の7,7,7-トリメチルメントンを用いると、ジオキサン環の側鎖部分との間の安定化相互作用が増大し、より高い選択性が期待できることが示唆された。そこで、トリメチルメントン(ラセミ体)を合成し、種々の1,3-アルカンジオール類との反応を検討したところ、特にジオキサン環の測鎖のかさ高さが大きい場合、選択性が2倍程度まで向上することがわかった。しかしながら、メソ型1,3,5-トリオールとのアセタール化では顕著な選択性の向上は認められなかった。本研究と並行して、メントンとのアセタール化を用いるラセミ体3-ヒドドロキシカルボン酸の不斉識別を検討した。その結果、メントンとのアセタール化がヒドロキシカルボン酸類の光学分割ならびに不斉合成に一般的に利用できることが明らかになった。
オルガノイドを用いた味蕾細胞分化における外的因子・内的因子の機能検索

平成30年度では、味蕾幹細胞の局在とその細胞系譜の検索を中心に行った。1.Lgr5-CreERT2-GFPマウスとCAG-floxed-tdTomatoマウスを交配させ、Lgr5-CreERT2-GFP /CAG-floxed-tdTomatoマウスを作製した。作製したマウスにタモキシフェンを投与して、有郭乳頭溝上皮内でのLgr5発現細胞の動態の検索を行った。その結果、Lgr5陽性幹細胞の一部は、味蕾細胞となり、味蕾細胞のマーカーと共発現の検索の結果、Lgr5陽性幹細胞はすべての味蕾細胞型に分化しうることがわかった。また、Lgr5-CreERT2-GFPマウスとCAG-floxed-DTAマウスを交配させ、Lgr5-作製したCreERT2-GFP /CAG-floxed-DTAマウスにおいて、タモキシフェン投与により、味蕾の大きさ・細胞数の減少が認められ、全ての細胞型の減少が確認された。有郭乳頭上皮の厚さも減少し、Lgr5陽性幹細胞は味蕾だけでなく、舌上皮への細胞供給を行っていることが示唆された。2.味蕾におけるWnt, BMP, SHHなどの味蕾細胞の分化に関係する外的因子のレセプターの発現とこれらのレセプターが味蕾のどの細胞型に発現しているのかについて検索を行った。有郭乳頭上皮から抽出したRNAを用いてRT-PCRにより、レセプターの発現を検索した結果、PTCH1, Frizzled-1, 2, LRP5, 6の発現が認められた。その中で、現在味蕾におけるLRP5, LRP6の発現の確認を行っている。3.Lgr5-CreERT2-GFPマウスの有郭乳頭上皮からLgr5陽性幹細胞を単離し、単離したLgr5陽性幹細胞からオルガノイドの作製を行った。現在、味蕾オルガノイドの作製に使う因子の種類と濃度の検討を行っている。今年度、動物実験施設において施設の工事による飼育動物の制限と実験動物の感染事故が起こり動物のクリーニングを行う必要が生じた。その結果、工事期間とクリーニング期間において実験が制限されてしまった。現在、実験に使用する遺伝子改変マウスの繁殖を行っており、実験再開が可能になっている。1.味蕾細胞の分化に関わる外的因子の検索1Lgr5-CreERT2-GFPマウスの有郭乳頭溝上皮からLgr5発現細胞を単離し、オルガノイドを作製する。2オルガノイド内の細胞分化を味蕾細胞のマーカーを用いて検索する。3オルガノイド培養培地に添加する外的因子の検討。味蕾細胞の分化に必要な因子(EGF/Noggin/R-spondin1)のほかに、Wnt, BMP, SHHなどの味蕾細胞の分化に関係する外的因子をそれぞれ添加し、基本培地との差を味蕾細胞マーカーの発現により検討する。4さらに外的因子添加群と基本培地のオルガノイドにおける遺伝子発現の差をPCR-arrayを利用して検索する。5外的因子のシグナル伝達系の阻害剤投与によるオルガノイドにおける味蕾細胞マーカー発現への影響を検索する。2.舌上皮オルガノイドにおけるLGR5・Mash1発現細胞の細胞系譜の検索1Lgr5-CreERT2-GFPマウス, Mash1-CreERT2マウスとCAG-floxed-DTAマウスを交配させ、Lgr5-CreERT2-GFP / Mash1-CreERT2/CAG-floxed-DTAマウスを作製する。2Lgr5-CreERT2-GFP / Mash1-CreERT2/CAG-floxed-DTAマウスの有郭乳頭溝上皮からLgr5発現細胞を単離し、オルガノイドを作製する。32で作製したオルガノイドに、培地にタモキシフェンを添加することでLGR5・Mash1発現細胞を変性させ、味蕾細胞の分化にどのような影響が見られるのかを検索する。

有郭乳頭上皮から抽出したRNAを用いてRT-PCRにより、レセプターの発現を検索した結果、PTCH1, Frizzled-1, 2, LRP5, 6の発現が認められた。その中で、現在味蕾におけるLRP5, LRP6の発現の確認を行っている。3.Lgr5-CreERT2-GFPマウスの有郭乳頭上皮からLgr5陽性幹細胞を単離し、単離したLgr5陽性幹細胞からオルガノイドの作製を行った。現在、味蕾オルガノイドの作製に使う因子の種類と濃度の検討を行っている。今年度、動物実験施設において施設の工事による飼育動物の制限と実験動物の感染事故が起こり動物のクリーニングを行う必要が生じた。その結果、工事期間とクリーニング期間において実験が制限されてしまった。現在、実験に使用する遺伝子改変マウスの繁殖を行っており、実験再開が可能になっている。1.味蕾細胞の分化に関わる外的因子の検索1Lgr5-CreERT2-GFPマウスの有郭乳頭溝上皮からLgr5発現細胞を単離し、オルガノイドを作製する。2オルガノイド内の細胞分化を味蕾細胞のマーカーを用いて検索する。3オルガノイド培養培地に添加する外的因子の検討。味蕾細胞の分化に必要な因子(EGF/Noggin/R-spondin1)のほかに、Wnt, BMP, SHHなどの味蕾細胞の分化に関係する外的因子をそれぞれ添加し、基本培地との差を味蕾細胞マーカーの発現により検討する。4さらに外的因子添加群と基本培地のオルガノイドにおける遺伝子発現の差をPCR-arrayを利用して検索する。5外的因子のシグナル伝達系の阻害剤投与によるオルガノイドにおける味蕾細胞マーカー発現への影響を検索する。2.舌上皮オルガノイドにおけるLGR5・Mash1発現細胞の細胞系譜の検索1Lgr5-CreERT2-GFPマウス, Mash1-CreERT2マウスとCAG-floxed-DTAマウスを交配させ、Lgr5-CreERT2-GFP / Mash1-CreERT2/CAG-floxed-DTAマウスを作製する。2Lgr5-CreERT2-GFP / Mash1-CreERT2/CAG-floxed-DTAマウスの有郭乳頭溝上皮からLgr5発現細胞を単離し、オルガノイドを作製する。32で作製したオルガノイドに、培地にタモキシフェンを添加することでLGR5・Mash1発現細胞を変性させ、味蕾細胞の分化にどのような影響が見られるのかを検索する。その結果、平成30年度に行う予定の実験が一部出来ず、その分の予算を執行することが出来なかった。平成31年度において、前年度に出来なかった実験を含めて予算を執行する予定である。
トマトの野生種が有する高糖度遺伝子の単離と高糖度化機構の解明

トマトをはじめとする多くの果実における重要な品質決定要因として、果実中に含まれる糖が挙げられる。しかし果実の糖度は量的形質であることから、果実を高糖度化する遺伝子の単離やメカニズムの解明は容易ではない。トマトの栽培種S. lycopersicum cv. M82の第8染色体の一部を、野生種S. pennelliiの染色体に置換した染色体断片置換系統IL8-3は、M82に比べて果実が高糖度化する。そこで本研究は、S. pennelliiが有する高糖度遺伝子の単離と、IL8-3の果実が高糖度となるメカニズムの解明を目的に進めた。S.pennelliiの高糖度遺伝子を単離するためにマップベースクローニングを行ったところ、トマトの高糖度化に寄与すると考えられる有力な候補遺伝子を第8染色体上にいくつか見出すことができた。またトランスクリプトーム解析を行うことにより、IL8-3では細胞壁インベルターゼ遺伝子やスクロース合成酵素遺伝子などの糖代謝に重要な遺伝子の発現が、M82よりも高いことが明らかとなった。さらにメタボローム解析でトマト果実の高品質化に寄与する物質の代謝変動を解析したところ、果実に含まれる248代謝物の変動を明らかにすることができた。これらの代謝物について主成分分析と階層クラスタリングを行ったところ、開花後10日目と30日目の果実はM82とIL8-3で代謝物の変動パターンが似ていたが、20日目と成熟期の果実では大きく異なっていた。したがって、IL8-3では比較的小規模な染色体の置換が代謝に大きな影響を及ぼし、その影響が開花後20日目と成熟期の果実で特異的に現れることが明らかとなった。またIL8-3の成熟期の果実では、アミノ酸や機能性に関わる物質など、種々の有用成分がM82よりも増加していることも明らかとなった。27年度が最終年度であるため、記入しない。トマトは世界で最も生産量の多い野菜で、近年では果実作物のモデルとして研究が進んでいる。トマトをはじめとする多くの果菜や果樹における重要な品質決定要因として、果実中に含まれる糖が挙げられる。トマトの第8染色体には、果実の糖度に影響する量的形質遺伝子座が存在し、栽培種S.lycopersicum cv. M82の第8染色体の一部を、野生種S.pennelliiの染色体に置換した染色体断片置換系統IL8-3は、M82に比べて果実が高糖度化する。そこで本研究は、S.pennelliiが有する高糖度遺伝子の単離と、IL8-3の果実が高糖度となる機構の解明を目的に進めた。これまでの研究で、IL8-3の高糖度化の要因が果実発育初期におけるデンプンの蓄積と、それに伴うヘキソースの増加であることが明らかとなっている。またS.pennelliiの高糖度遺伝子は第8染色体の約100kbpの領域に存在し、同領域には11遺伝子が存在することも分かっている。対象となる11遺伝子について、M82とIL8-3でcDNAの塩基配列の比較を行ったところ、6遺伝子のオープンリーディングフレームにアミノ酸配列の違いが確認された。これら6遺伝子の発現解析をリアルタイムPCRで行ったところ、いくつかの遺伝子において発現量の差がみられた。さらにトランスクリプトーム解析で果実の発育に伴うM82とIL8-3の遺伝子発現の違いを調べたところ、細胞壁インベルターゼ遺伝子やスクロース合成酵素遺伝子などの糖およびデンプンの代謝に関わる遺伝子の発現が、M82とIL8-3で異なっていることが明らかとなった。

またIL8-3の成熟期の果実では、アミノ酸や機能性に関わる物質など、種々の有用成分がM82よりも増加していることも明らかとなった。2014年度は、本研究の目的であるトマトの第8染色体に座乗している高糖度に関わる遺伝子の単離、およびトマトの染色体断片置換系統の1つであるIL8-3の果実が栽培種M82に比べて高糖度化する生理機構を明らかにすることを目的に、これまでの研究で見出した高糖度化に関わる候補遺伝子の解析、およびトランスクリプトーム解析を行った。その結果、候補遺伝子を6遺伝子にまで絞り込むとともに、細胞壁インベルターゼ遺伝子やスクロース合成酵素遺伝子といった、糖代謝に重要な遺伝子の発現がM82とIL8-3で異なることを明らかにするなど、研究の完成に向けて一定の成果が得られた。よって、おおむね順調に進展していると評価した。27年度が最終年度であるため、記入しない。2014年度の研究では、トマトの高糖度化に寄与すると考えられる6遺伝子を有力な候補遺伝子として見出すとともに、それぞれの遺伝子がタンパク質としての機能に影響してIL8-3の高糖度化に寄与している可能性を示した。公開されているデータベースによると、これらの候補遺伝子は過去に糖代謝との関係が明らかにされていないことから、2015年度はS.pennellii由来の候補遺伝子を形質転換により栽培種に導入し、糖度の上昇を確認するとともに、トランスクリプトーム解析で見出された細胞壁インベルターゼ遺伝子やスクロース合成酵素遺伝子の発現などとの関係を明らかにする。またIL8-3は機能性成分やアミノ酸など、糖以外の果実品質の向上に関わる重要な代謝物についても多く含まれている可能性があるため、メタボローム解析を行って果実の高品質化に寄与する物質の代謝変動についても解析する予定である。
フィチン酸の低い穀類の開発とその応用に関する研究

穀類に含まれる有機態リン酸化合物のフィチン酸は人間、豚、鶏などの単胃動物では消化・吸収できないために大量に排泄され環境汚染、さらにフィチンと強力に結合しているFe、Znなどの微量元素の吸収を妨げる抗栄養成分として知られている。そこで、これらのフィチンに関わる問題を解決するため突然変異法および交雑育種法を用いて育成したダイズとソルガムについて生産量や成分含量の違いを普通栽培品種と比較しながら、生産性および品質のよい低フィチンダイズとソルガムの育成を行った。ダイズおよびソルガムは、世界中の多くの国々で利用されている穀類であるが、ミオイノシトールにリン酸が6個結合した有機態リン酸化合物のフィチン酸が多く含まれている。フィチン酸は人間、豚、鶏などの単胃動物においては消化・吸収できないために大量のリン酸が排泄され、環境汚染の一因となっている。さらに、フィチン酸にFe、Znなどの微量元素がキレート結合したフィチンは、Fe、Znの吸収を妨げる抗栄養成分として広く知られ、穀類を多く消費する国々ではフィチンによるFeやZnなどの微量元素の不足による栄養障害も発生している。そこで、フィチン酸に関わる多くの問題を解決するために、本研究課題では低フィチン穀類の開発を行う。ダイズは、世界中の多くの国々で、貴重なタンパク源として広く栽培されている。ダイズにはリン(P)、カルシウム、マグネシウムをはじめ、鉄、亜鉛などの微量金属元素が多く含まれている。このうち、Pの80%近くが有機態P化合物のフィチン酸(ミオイノシトール6リン酸)であり、フィチン酸に陽イオンがキレート結合したものがフィチンである。フィチン酸やフィチンは、人間を始めとした単胃動物では分解し消化できないために、Pやミネラル成分が吸収・利用できない。そのため、これらの有用成分が環境中へ大量に排出されている一方で、発展途上国などではフィチンが原因と見られるミネラル欠乏症が発生している。これらの問題を解決するためには、フィチンが低く、動物が吸収利用されやすいPやミネラル成分の多いダイズ品種を開発し利用することも一つの方法である。日本で栽培されている普通品種の全P濃度に対するフィチン態Pの割合は70%以上であるが、その割合が24%と著しく低い突然変異体低フィチンダイズを供試して、普通栽培5品種とミネラル、タンパク質およびイソフラボン含量などを比較して、これらの成分含量に低フィチンがどのような影響を及ぼすかを明らかにした。その結果、普通品種の全P濃度は5.5から8.8mg/gDWであったが、低フィチンダイズでは8.4mg/gであり全P濃度が高かった。一方、低フィチンダイズの無機P濃度は、普通品種に比較し5から10倍高かったが、Ca、Mg、Fe、Zn濃度および全タンパク質濃度に差が見られなかった。一方、各品種の総イソフラボン含量は、低フィチンダイズで、普通品種に比べてやや高かったが、イソフラボン組成は全品種でほぼ同じであり、この結果から、フィチン酸を低下させても、ダイズの主要な有用成分含量に影響を与えないことが明らかとなった。さらに、突然変異体低フィチンダイズと普通品種を交配させ、その交配系統からRFLP解析によって、よりフィチン酸の低い系統の選抜を行なった。ダイズやソルガムに含まれる全リン酸のうち、7090%はフィチン酸である。フィチン酸は、単胃動物では消化・吸収利用できないために、多量のリン酸が農耕地へ蓄積され、環境負荷の一因となっている一方で、穀物中に含まれるFeやZnはフィチン酸と強力にキレート結合しフィチンを形成しているため、これらの微量元素が吸収利用できない。そこで、本研究では、フィチン酸の低い穀類を育成することを目的に実験を行った。まず、2004年に突然変異剤EMS処理した変異体の中から低フィチンダイズを選抜し、これと日本で栽培されている品種とを交配した。2004年度に交配して得られてF1系統を2005,2006,2007年に連続して栽培し採取した種を、2008年6月にポット及び圃場栽培(F4系統)をした。開花日、百粒重などの品種特性、および収穫した種子について半粒法による無機態リン濃度、フィチン態リン濃度などを測定して、フィチン酸のより低い系統を選抜した。F4系統の開花日、総節数、分枝数、主茎長などの特性は、フィチン酸の低い系統とフィチン酸の高い系統で大きな差はなかった。半粒法で測定した無機態P濃度は0.187.65mg/gDWであった。これらの結果と特性や生育状況などから、フィチン酸の低い6系統、フィチン酸の高い3系統を選抜した。フィチン酸の低い6系統の全リン濃度は6.9910.85、さらにフィチン態リン濃度は1.672.80、無機態リン濃度は4.127.02mg/gDWであった。

全リンに対するフィチン態リン濃度の割合は22.028.4%となり、中でも、フィチン酸含量が最も低かったPN5-118-2系統の収量性および品質とも良く、フィチン酸の低い品種として有望な系統と考えられた。さらに、ソルガムについてもEMS処理によりフィチン酸の低い変異体を得た。次年度、この変異体をもとに収量性が高く、品質の良いソルガム品種の育成も行う。ダイズ、ソルガムは世界中の多くの国々で最も利用されている穀類の一つであるが、その穀実にはミオイノシトールにリン酸が6個結合した有機態リン酸化合物のフィチン酸が多く含まれている。フィチン酸は人間、豚、鶏などの単胃動物においては消化・吸収できないために大量のリン酸が排泄され、環境汚染の一因となっている。さらに、フィチン酸にFe、Znなどの微量元素がキレート結合したフィチンは、Fe、Znの吸収を妨げる抗栄養成分として広く知られている。そこで、フィチン酸に関わるこれら多くの問題を解決するために、本研究課題では低フィチンの穀類の開発を行っている。とくに、本課題ではエチルメタンスルホン酸(EMS)処理し得た突然変異体とわが国の西日本奨励ダイズ品種と交配し、その交雑種から安定した生産と環境適応性の優れた低フィチンダイズを、さらにソルガムにおいてもEMS処理して得られた多くの突然変異体の中から、低フィチン酸の低い系統の選抜を行い、フィチン酸の低いダイズとソルガムの育成を目指している。本報告書では、21年度の実験で得られた結果について述べる。1.交配F5系統から低フィチンダイズの選抜20年度までに得られたF5系統の中から高フィチン系統2系統、低フィチン系統4系統を圃場栽培し、生育期間の生育状況調査および収穫後の子実重、百粒重、分枝数や子実の全リン酸(TP)、無機リン酸(Pi)、フィチン態リン酸(Phy-P)濃度を測定し低フィチンダイズを選抜した。その結果、普通栽培品種に比較し、フィチン酸が55-60%低い系統を選抜した。この系統は普通栽培品種と同様に安定した収量が得られ、かつ西日本地域への環境適応性が優れていた。さらに、フィチン酸のみが低く、タンパク質、脂肪含量は豆腐および納豆の加工適性の良い普通栽培品種と同程度であり、この系統はフィチン酸が低く加工適性の高い新規なダイズ品種として有望な系統であると考えられた。2.低フィチンソルガムの選抜突然変異体の14系統群279個体を精密実験圃場で栽培し、収穫後の種子のTP、Pi、Phy-P濃度を測定し、フィチン酸の低いソルガムの選抜を行った。その結果、普通栽培品種のTPに対するPhy-Pの割合は85%であるのに対して、変異体では25から74%と大きな系統間差が見られた。その中でもPhy-Pの割合が17から33%と低い、低フィチン系統群として有望な1系統群が得られた。大豆にはミオイノシトールにリン酸が6個結合した有機態リン酸化合物のフィチン酸が多く含まれている。フィチン酸は人間、豚、鶏などの単胃動物ではは消化・吸収できないために大量のリン酸が排泄され、環境汚染の一因となっている。そこで、本課題ではフィチン酸に関わる多くの問題を解決するために、エチルメタンスルホン酸(EMS)処理し得られた突然変異体とわが国の奨励品種と交配し、その交雑種から生産性の高い低フィチン酸大豆の育成を行っている。わが国では大豆は豆腐などの加工食品として利用されているが、フィチン酸含量を低めた大豆の豆腐加工適性の評価
PTHrPのヒト羊膜における産生調節と羊水中PTHrPの生理的意義について

[方法]1)妊娠3741週の選択的帝王切開症例において、羊水、臍帯動静脈血、母体血、出生直後の新生児気道吸引液、胃内容液、及び新生児初回尿を採取しPTHrP濃度を測定した。2)妊娠36週の子宮内胎児死亡剖検例肺組織におけるPTHrP及ぴPTH/PTHrP receptor mRNAの発現を検討した。3)肺サーファクタント蛋白産生能を有するヒト肺胞上皮細胞株H441を用いて、PTHrPの細胞増殖能と肺サーファクタント蛋白A(SP-A)産生に与える影響を検討した。[成績]1)気道吸引液中のPTHrP濃度は他に比し最も高い値を示し有意差を認めた。2)肺組織において、PTHrP及ぴPTH/PTHrP receptor mRNAの発現を認めた。3)H441細胞の細胞増殖能はPTHrP投与により有意に抑制され、SP-A産生は有意に増加した。[結論]今回各種分泌液中PTHrP濃度を測定し、新生児気道吸引液に最も高濃度に存在することを初めて示した。これは胎児肺で産生されたPTHrPが羊水中に放出される可能性を示している。ヒト胎児肺組織にPTHrP及びPTH/PTHrP receptorの遺伝子発現が認められ、また肺胞上皮細胞株H441においてPTHrPが細胞増殖能を抑制しSP-A産生を増加させたことから、PTHrPは胎児肺における分化を誘導し、その機能的成熟を促進させる可能性が示唆された。
看護職者のための糖尿病女性のリプロダクティブヘルスに関する支援マニュアルの開発

看護職者が糖尿病女性のリプロダクティブヘルスのセルフケア、心理・社会的側面の支援ができるよう糖尿病、性と妊娠・出産の知識を含み、具体的内容の「看護職者のための糖尿病女性支援マニュアル」を有用性の検討も踏まえ開発し、来年秋に出版予定である。併せて看護職者が支援のニーズを把握でき、糖尿病女性・家族と相互理解を深め、双方向性のある支援を考えるセミナーを開発した。今後の支援の動機づけやネットワーク作りに繋がった。【目的】看護職者が糖尿病女性のリプロダクティブヘルスに対するセルフケアの習得への支援と心理・社会的側面からの支援を実施できる「看護職者のための糖尿病女性のリプロダクティブヘルスに関する支援マニュアル」の開発を行う。また併せて、看護職者のための教育セミナーを開催し、支援マニュアルの普及方法に対する検証も踏まえた上で、有効性のあるマニュアルの開発を行う。【方法】(1)支援マニュアルの開発(1)支援マニュアルの概要の検討文献検討や専門家、患者会や家族との意見交換、支援を行っている病院の視察・インタビュー調査、糖尿病女性へのインタビュー調査を行い、概要を検討する。(2)支援マニュアルの試案作成概要を基に、糖尿病女性のリプロダクティブヘルスの看護に携わる専門家と共同でのマニュアルの執筆を行い、原稿を集約した後、研究者にて編集・推敲作業を行う。(3)支援マニュアルの試案の評価専門家、患者会や家族との意見交換、協力の得られた施設へのマニュアルを基にした支援の実施と評価にて試案を評価する。(4)支援マニュアルの完成(2)糖尿病女性のリプロダクティブヘルスに関わるセミナーの開発(1)セミナーの概要の検討文献検討や専門家、患者会や家族との意見交換を行い、概要を検討する。(2)セミナーの試案作成と実施・評価概要を基にセミナーの試案を作成し、研究者が企画・運営を行い、専門家である研究協力者と共に実施する。受講者は、リストアップした施設へアナウンスし、参加希望した看護職者約100名とする。評価は受講終了時、1・3ヵ月後に知識・意識に関るアンケート調査を行う。(3)リプロダクティブヘルスに関る糖尿病教室の開発(1)糖尿病教室の概要の作成文献検討や専門家、患者会や家族との意見交換を行い、概要を検討する。(2)糖尿病教室の試案の作成と実施・評価概要を基に糖尿病教室の試案を作成し、研究者が主体となり実施する。対象は協力の得られた施設、サマーキャンプで18歳以上49歳までの1型・2型糖尿病女性とし、評価は参加者へのアンケート・インタビュー調査にて行う。*完成した糖尿病教室試案は、支援例として支援マニュアルに掲載する看護職者が糖尿病女性のリプロダクティブヘルスのセルフケア、心理・社会的側面の支援ができるよう糖尿病、性と妊娠・出産の知識を含み、具体的内容の「看護職者のための糖尿病女性支援マニュアル」を有用性の検討も踏まえ開発し、来年秋に出版予定である。目的:看護職者のための糖尿病女性のリプロダクティブヘルス(以下リプロヘルスと略す)に関する支援マニュアルを開発することを目指し,19年度は予備的調査として糖尿病女性とその家族のニーズ及び支援を実施している医療施設の現状を基に支援マニュアルの概要を検討することを目的とした。調査の遂行には倫理委員会の承諾を得た。方法:1.医療施設の視察及びインタビュー調査:大学病院2箇所,総合病院2箇所,診療所1箇所のリプロヘルスに関する糖尿病教室の実際を視察し,対象施設に勤務する医療従事者(助産師3名い糖尿病看護認定看護師1名,看護師2名)にインタビュー調査を行った。2.糖尿病女性へのインタビュー調査:出産経験を持つ1型糖尿病女性6名い2型糖尿病女性2名に支援の実際,どのような支援が必要であったか調査した。3.糖尿病女性の家族へのインタビュー調査:糖尿病女性の母親3名,糖尿病女性の夫2名に糖尿病女性へのリプロヘルスの支援を家族が行えるためには,どのような支援が必要か調査した。結果:1.糖尿病の診療、看護を専門とする専門医や認定看護師が主軸となり,糖尿病教室やスタッフの勉強会,内科と産科の連携を図っていた。看護職者は実際に支援が必要とされる場に直面することがなければ糖尿病女性のリプロヘルスの支援を意識することは困難である状況が明かとなった。2.1型糖尿病女性は,(1)月経、避妊,性生活,STDに関する知識の提供,(2)内科と産科の連携,(3)妊娠中の心理面への支援,(4)子育て中の家族との関わり,(5)子どもへ糖尿病のことをどう説明するか,(6)子育てが終わった後の生き方について,2型糖尿病女性は(1)不妊治療中の血糖コントロール,(2)2型糖尿病であることでの自責の念についての支援の必要性が述べられた。3.糖尿病女性の母親は,同じ糖尿病女性の子供をもつ経験者の話が最も効果的な支援であることが述べられた。本研究は、看護職者が糖尿病女性のリプロダクティブヘルスに対するセルフケアの習得と心理・社会的側面からの支援を実施できる支援マニュアルの開発を目的とし、20年度はマニュアルの試案作成と看護職者のリプロダクティブヘルスの支援の意識向上のための教育セミナーの検討を行った。

1.支援マニュアルの試案作成:支援マニュアルの項目案を、糖尿病女性のリプロヘルスに関わる診療・看護の専門家4名と1型糖尿病患者会代表、1・2.型糖尿病女性各1名と意見交換を行い作成した。研究者以外の執筆者(医師2名、助産師9名、看護師2名)を選定し、作成した執筆ガイド、項目毎の概要を提示し執筆を依頼した。各担当執筆者が現在も執筆中であり平成21年5月執筆完成予定である。今後、編集・推敲作業を行い、マニュアルの評価を行う予定である。2.教育セミナーの試案の検討・実施:セミナーの概要を1型糖尿病の患者会代表と意見交換し決定した。参加者は、1型糖尿病女性・母親はNPO法人日本IDDMネットワークより会誌、HPで、看護職者は福岡県糖尿病療養指導士認定会事務局より会誌でのアナウンスで公募した。参加者には日本糖尿病療養指導士認定機構より認定更新の研修単位(2群看護1単位)の認定を得た。セミナーは、平成21年1月18日福岡市男女共同参画推進センターにて、「共に語ろう糖尿病を持つ女性の性と妊娠・出産糖尿病女性が思うこと看護職者が思うこと」のテーマで、1型糖尿病女性13名、看護師7名、助産師4名、管理栄養士1名の参加を得て、講演・グループディスカッションを実施した。セミナー評価のアンケート調査では参加者全員がこのテーマでのセミナーの開催は良かった、今後の役に立ったと回答し、糖尿病女性と看護職者が直接話し合うセミナーは効果的であるとの評価を得た。本研究は、看護職者が糖尿病女性のリプロダクティブヘルスに対するセルフケアの習得と心理・社会的側面からの支援を実施できる支援マニュアルの開発を目的としている。1.支援マニュアルの試案作成:昨年度に執筆予定の支援マニュアル試案の完成は遅れていたが、3月にほぼ終了し今後編集・推敲作業に移り評価を踏まえ完成の予定である。2.教育セミナーの実施・評価:看護職者のリプロダクティブヘルスの支援の意識向上のための教育セミナー「糖尿病を持つ女性と看護職者のためのセミナー」を前年の評価を踏まえ実施した。目的は1型糖尿病女性と家族及び看護職者が糖尿病女性の性と妊娠・出産について意見交換を行い相互に置かれている状況を理解し、共に考え、1型糖尿病女性と看護職者の双方向性のある支援の在り方の構築に繋げることである。参加者はNPO法人日本IDDMネットワークの会誌・HP、日本糖尿病療養指導士認定機構のHP、日本糖尿病学会誌等で公募し、療養指導士認定更新の研修単位(2群2単位)の認定を得た。平成21年10月17日に東京、平成22年1月31日に京都で実施し、併せて1型糖尿病女性28名、家族11名、看護師11名、助産師12名、管理栄養士2名、医師4名の参加を得、講演・グループディスカッションを実施した。アンケートでは全員がセミナーは今後に役立つ、共に話し合う方法は効果的と回答した。また、月経・妊娠の情報提供、患者と医療者が共に対策を考案、気軽に相談できる窓口、母親がサポートできるための看護師の支援、1型糖尿病女性自らの積極的な姿勢等の必要性が話し合われた。
アジア地域木材貿易モデルによる林産物貿易自由化の森林の持続可能性への影響分析

FAOのGFPM(空間均衡分析による世界林産物貿易モデル)を応用したアジア地域の林産物貿易モデルのバージョン2の製作にあたった。今年度のもっとも重要な課題は、丸太供給と天然林劣化の関係をどのようにモデルに組み込むか、ということであった。FAOのGFPMは、丸太供給と森林資源の増減の関係をモデル内に組み込んでおらず、FAOの出した丸太供給量予測を外生的にモデルに組み込んでいるので、林産物の森林資源への影響分析は、説得力に欠けるものとなっている。とはいえ森林資源のタイムシリーズデータを入手できる国は、先進国に限られているため、FAOがこれまでに森林資源と林産物生産をリンクさせた唯一のモデルである、Global Fiber Modelのデータをもとに、アジア地域の森林資源モデルを構築することにした。Global FiberModelでは、森林資源と紙パルプ供給の関係がかなり単純化され、また紙パルプ供給の予測が楽観的になっている。そこで、ワーキングペーパーの熱帯広葉樹の森林資源モデルにインプットされていたデータをもとに、産業用材伐採と森林資源に関する動態的なシミュレーションモデルを構築中である。また森林の持続可能性と林産物貿易の関係について、国際的枠組みをどのように構築すべきかという政策的な議論も展開した。近年のGATT/WTOの貿易と環境についての議論、林産物自由化への動き、地球サミット以降の森林管理についての多国間環境条約への動き、などをフォローし、他方で、過去15年程度の森林資源と林産物貿易の関係についての研究業績をレビューし、あるべき国際的枠組みの姿について考察した。FAOのGFPM(空間均衡分析による世界林産物貿易モデル)を応用し、林産物15製品を対象とし、内生的に生産量、消費量、貿易量が決まるアジア16カ国と、これらの国の主な貿易相手国としての7カ国について、1997年を基本年とし2020年までの林産物需給を求めるアジア林産物貿易モデル(AFPM)のバージョン1を製作し、このモデルによる基本ケース(Business as Usual)のシミュレーションを行った。その結果、アジア地域の林産物の生産、消費、貿易の将来について、以下のようなことがわかった。丸太については生産量の増加率はこれまでより緩やかになり、アジア域外からの輸入量の増加率が輸出量の増加率を上回る。製材の生産量・消費量の伸びは緩やかで、製材のアジア域外への輸出が減少する一方、輸入量が増加する。他方本質ボード類(ベニヤ、合板、パーティクルボード、ファイバーボード)は全般的に消費量の伸びが予想される。特にファイバーボードの消費の伸びが著しい。しかしいずれもアジア域外の輸出より域外からの輪入量の増加率が大きい。紙も全体として消費が増える。特に印刷用紙の伸びが著しい。紙類についても、アジア域外の輸出より域外からの輪入量の増加率が大きい。つまり全体的な林産物に関するアジア地域の将来は、原料供給地としての地位を下げ、域外からの製品輸入への依存度を高めることになるだろうという予測結果になった。しかしこのAFPMのバージョン1は、シミュレーション上のさまざまな問題点が多いため、それらを修正したバージョン2の製作を次年度に行う予定である。