hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
染色体複製制御に関わるInitiator Titration機構の解明

複製開始反応は細胞周期の決まった時期に1回だけ起きるように厳密に制御されている。本研究では大腸菌細胞周期における複製開始タンパク質DnaAの挙動を解明する目的で以下の研究を行った。(1)細胞周期におけるDnaAタンパク質の細胞内局在DnaAの挙動を生細胞内で観察することはこれまで世界各地で試みられていたが困難であった。我々は、ドメインIIの生育に必須でない配列を同定し、その一部分をEYFPと置換することにより初めて観察に成功した。DnaA-EYFP発現株の解析から、DnaAは、これまでの報告と異なって核様体DNA上に存在しており、しかもかなりの部分はDNA上の限られた部位に集合していることを見いだした。さらに、この集合体が細胞周期を通じて複製起点oriCとInitiator titrationに関わる部位datAの間をダイナミックに行き来していることが示唆された。(2)DnaAタンパク質の細胞内局在を制御する因子の同定複製を正に制御することが知られているDiaAの欠失下では、複製開始時の細胞でDnaA-EYFP集合体の形成が著しく低下していた。DnaAのoriCへの集合にDiaAが関わっていることが示された。一方、複製を負に制御することが知られているSeqAの欠失下では、複製開始時の細胞でDnaA-EYFP集合体の数が著しく増加していた。SeqAがDnaAのoriCへの集合を阻害していることをビジュアルに示すことが出来た。また、IHFおよびFISがDnaA-EYFP集合体形成の時期と効率の制御に関わっていることが判明した。我々は大腸菌ゲノム上に存在する領域(datA)が、複製開始タンパク質DnaAを多量に結合することにより遊離DnaAの濃度を低下させ、過剰な複製開始を抑制する事をこれまでに明らかにしてきた。この機構はInitiator Titrationとよばれている。本研究ではInitiator Titrationの分子機構をより詳細に理解し、また、細胞周期におけるDnaAの挙動を解明する目的で以下の研究を行った。1.datAの機能へのIHFの関試験管内、および生体内で、datA内に存在するIHF認識配列にIHFタンパク質が結合することが判明した。DnaA結合部位とIHF結合部位、およびそれらの近傍にいろいろな変異を導入した株の解析から、IHFにより折り曲げられたdatA領域全体に、秩序正しい3次元構造の変化が引き起こされ、多量のDnaA分子が結合可能になることが判明した。2.DnaAタンパク質ドメインIIの最小必須領域の決定DnaAタンパク質は、4つの機能ドメインからなることが知られているが、このうちドメインIIは正確な領域や機能が不明であった。本研究では、ドメインIIはドメインIとIIIをつなぐためのリンカーで、特定の配列は必要ではなく、30-36残基が欠失可能であることを見いだした。染色体上のdnaA遺伝子内のドメインIIコード領域の欠失可能部位をEYFPに置換した株を作成した。この株はDnaA-GFP融合タンパク質に依存して正常に生育した。蛍光顕微鏡による解析の結果、DnaAは核様体上に分布し、さらに複製開始時の前後には複製起点に集合し、輝点として観察されることを見いだした。
日本語における再帰性―関係節・場所句の統語分析と獲得

本研究では、同じ種類の修飾句が繰り返し埋め込まれた構造、すなわち再帰構造( [[机の]お皿の]みかん)を生み出す能力が生得的かどうかを検討するために、関係節・場所句・所有句を複数含む文の理解実験を35歳の日本語児を対象に行った。その結果、個人差はあるものの、再帰構造を付与する能力は3歳頃から見られるという、再帰構造を生み出す能力の生得性を示唆しうる結果が得られた。一方で、再帰構造が付与可能となる前段階として、並列構造([机の][お皿の]みかん)への嗜好性が強い段階があること、また、言語及び構文固有の性質が並列及び再帰構造の発現に影響を与えることを示す結果も得られた。本研究の目的は、日本語の名詞修飾表現(「の」を含む表現と関係節)の獲得研究により「再帰性(recursion)がヒトの言語に特有であり、かつ生得的な言語能力である」という仮説を検討することである。平成26年度は次の統語分析と獲得予備調査を行った。1.「の」の統語分析:「の」の意味的特性や分布を考慮し、「の」は(1)所有句の「の」(太郎の帽子)、(2)場所句の「の」(机のみかん)、(3)場所句の中の連結詞としての「の」(机の上のみかん)に大別されるという帰結を得た。特に(3)は、「にある」で置き換えが不可能である点で(2)と異なり、(2)のように独自の句を投射しないという結論に至った。2.場所句の獲得:複数の場所句を含む日本語文の獲得に影響を及ぼす要因が、(a)同じ種類の「の」の再帰性なのか、(b)(異なる種類の)「の」の数であり再帰性ではないのかを検討するために、45歳児を対象に仮調査を行った。調査項目は1場所句を2つ含む文、2連結詞を伴う場所句を1つ含む文、3所有句を2つ含む文、他2項目である。(a)の場合は、2、13の順で獲得が容易であり、(b)の場合は123の獲得に相違がないことが予測される。仮調査では、2が最も獲得が容易であるが、3は1よりも獲得が困難であることが観察され、いずれの仮説が妥当であるかに関してはまだ明確な結論が得られていない。3.関係節の獲得:複数の場所句・所有句を含む文の獲得と複数の関係節を含む文の獲得を比較する前段階として、関係節を1つ含む日本語文の獲得について4歳児を対象に仮調査を行った。自動詞を含む関係節と他動詞を含む関係節(主語関係節または目的語関係節)の獲得に相違が見られるかについて検討した。その結果、他動詞を含む関係節に対する子どもの理解度が低いことが観察され、今後は自動詞を含む関係節に焦点をあてることが望ましいという結論を得た。平成27年度は次の獲得調査と統語分析を行った。実験1同一の構造を2つ含む文の獲得に関する構文横断的研究:所有句・場所句・関係節を2つ含む文の獲得実験を4歳6歳児の日本語児を対象に行った。全体的に正答率が高く、4歳までには同一の構造を2つ含む文が獲得され、構文間に差異は見られないという結果を得た。しかし、場所句・関係節については、調査項目に対して子どもが与えている解釈が必ずしも一義的に「再帰的解釈」に決まらないという問題を内在しており、調査項目の再検討を課題として残した。実験2関係節を2つ含む文の獲得に関する追跡実験:実験1で残された関係節に関わる調査項目の再検討を行い、子どもが「再帰的解釈」を与えているか否かが一義的に定義できる項目を用いた追跡実験を行った。実験1において、4歳児で既に高い正答率が得られていたことから、対象年齢を下げ、3歳5歳児を対象とした。現在結果を分析中である。実験3同一の構造を3つ4つ含む文の獲得に関する構文横断的研究:実験1の結果を踏まえ、所有句・場所句を3つ4つ含む文の獲得実験を4歳・5歳児を対象に行った。統語分析1日本語の名詞句に関する統語分析:日本語の名詞句内部での関係節の位置を考察するため、日本語の名詞句の下位分類について再考した。特に人称に関わる情報による統語的分布を考察し、日本語名詞句には、当該情報を担うか否かにより形態統語的な下位分類が存在することを論じた。昨年度の予備実験・統語分析を踏まえ、今年度7月に本実験を実施し、11月にその成果を学会発表した。獲得調査について:昨年度残された課題の全てには取り組めなかったが、7月の本実験の結果をさらに強固なものとする追跡実験の優先度が高いと判断したためであり、研究開始当初の目的達成にとって、より有益な資料を得たといえる。また、3つ以上の同じ構造の繰り返しの獲得に関する予備実験を経て、本実験を行うに至っている。統語分析について:日本語の関係節の統語分析に関して考察を進めており、来年度の発表に向けた準備をしている。

関係節に対する具体的な統語分析案の考察に並行し、再帰性の獲得に関わる証拠が、どのような形で人間言語の固有的特徴としての再帰性の取り扱いに理論的帰結をもたらすかについて、先行研究の収集と考察を進めた。本研究の目的は日本語の名詞句修飾表現(「の」を含む表現と関係節)の獲得研究により「再帰性(recursion)がヒトの言語に特有であり、かつ生得的な能力である」という仮説を検討することである。平成28年度は平成27年度に行った2つの獲得実験の結果を分析し、それぞれの成果を国際会議で報告した。1.複数の場所句を含む文と複数の所有句を含む文の比較獲得研究日本語の「の」は、所有句(太郎の帽子)でも場所句(机のみかん)でも用いられ、2つの異なる意味が同一の音声形式に結びつくという点で英語等とは異なる。本研究では、「太郎の犬の帽子」や「太郎の弟の犬の帽子」のように、24個の所有句・場所句の繰り返しを含む文の理解実験を4・5歳児を対象に実施した。その結果、(1)子どもは24個の同一の句の繰り返しを段階的に獲得し、(2)所有句の「の」の方が場所句の「の」よりも子どもにとって獲得が容易であることが判明した。また、構文間の差異について、場所句「の」の意味の多様性に一因するという分析案を提示した。2.2つの関係節を含む文の獲得研究「机にあるお皿にあるりんご」のような2つの関係節を含む句に対して、幼児が大人と同様の解釈を与えることができるという実験結果を平成27年度に得たが、子どもが実際に再帰構造([[[机にある]お皿]にあるりんご])を与えているのか、並列構造([[机にある][お皿にある]りんご])を与えているのかは判別しえなかった。そこで、追実験として、再帰構造と並列構造を区別しうるよう改善した刺激を用い、35歳児を対象に文理解実験を行った。これにより、子どもは再帰構造を与えることはできるものの、並列構造を与える傾向が強いという結果を得た。本結果は並列構造が再帰構造よりも基本的であり、言語獲得の過程でより早く発現するという分析案を支持するものであることを論じた。本研究では、同じ種類の修飾句が繰り返し埋め込まれた構造、すなわち再帰構造( [[机の]お皿の]みかん)を生み出す能力が生得的かどうかを検討するために、関係節・場所句・所有句を複数含む文の理解実験を35歳の日本語児を対象に行った。その結果、個人差はあるものの、再帰構造を付与する能力は3歳頃から見られるという、再帰構造を生み出す能力の生得性を示唆しうる結果が得られた。一方で、再帰構造が付与可能となる前段階として、並列構造([机の][お皿の]みかん)への嗜好性が強い段階があること、また、言語及び構文固有の性質が並列及び再帰構造の発現に影響を与えることを示す結果も得られた。予備調査までは進行しているものの、本実験及び学会発表準備には至っていない。仮調査に至る前の段階で、調査項目の吟味・検討に時間を要したことや、仮調査を踏まえて、調査項目の再検討が必要となり、本実験へスムーズに移行できなかったことなどから、当初の計画よりやや遅れている。獲得調査について:本年度研究実績の実験2、実験3の結果をまとめ、国内外の学会において発表する予定である。また、7月に再度実験を行い、実験遂行過程で生じた問題や、研究開始当初に掲げた目的に関して、できる限り資料を収集し、考察を深める予定である。具体的には、実験1における2つの場所句の解釈の曖昧性について、その結果を補う実験が可能であれば実施する。さらに、研究開始当初の目的の1つでもあり、昨年度も課題として残した、「同じ構造を複数含む文(複数の場所句等)と異なる種類の構造を1つずつ含む文(場所句と関係節等)の獲得の比較」に関する実験を行う予定である。統語分析について:
選択制授業の成果をあげている中・高校を対象とした教員組織の実態に関する事例研究

前回改訂された学習指導要領において取り沙汰された選択制授業であるが、今回改訂の学習指導要領においてもその方向性には変わりはない。そのような中、選択制授業は多くの学校で導入・実施され、量的には定着段階にあるといえるだろう。しかしながら、その質的高まりに目を向けると、必ずしも充実したものとはなっていないようである。これまで選択制授業の主に教員組織に関する統計的調査を実施してきたが、質問紙調査では限界があると感じたことから、本研究では、特に選択制授業に熱心に取り組み、ある程度の成果が得られた、あるいは得られつつある学校における教員組織の特性(組織過程等の動的側面を中心に)を事例的調査により明らかにしようとした。資料収集、質問紙調査、面接調査等により、中学校および高等学校を対象として調査・分析を行ってきたが、考察を進めていく上で、成功(成果)の陰には、ある種共通した要因が存在しているのではないかと考えた。例えば、中学校では学内、学外問わず保健体育科教員の集まり(科会や研究会や研修会等)が地道に活動を続けてきており、それが基盤となって選択制授業を支えていること。また、教育委員会等の行政組織からの支援を受けたり、連携を図ることでより充実した授業実践を可能にしていること。さらに、生徒の声を励みに、できるところから可能な範囲で実践を重ね、絶えず研究の姿勢を持ち続けたこと。高等学校においてもほぼ同様の結果であるが、これらの要因が上手く機能したことにより、今日の成果があると思われる。ただ、今回は事例数が少なかったことから、この研究結果がすべての学校において該当するとは断定はできない。したがって、今後は事例の数を増やすことにより、本研究の裏づけを深め、また他の要因等の存在についても検討していく。量的には定着段階を迎えている選択制授業ではあるが、様々な問題がいまだ山積している。選択制授業では教員組織の協働(協同)が必要とされることから、本研究では、特に選択制授業に熱心に取り組み、ある程度の成果が得られた、あるいは得られつつある学校における教員組織の特性(組織過程や組織の変遷等)を事例的調査により明らかにすることを目的としている。初年度は中学校を、次年度は高等学校を対象として調査・分析を実施していく。まず、平成9年度は対象校として千葉県のA中学校を選定した。選定の理由としては、選択制授業の実施に関する指定校(3年間)となり、その成果が発表されたり報告書等の形でまとめられていること、また、意図的に個人的スポーツではなく集団的スポーツの選択制授業の導入・実施に積極的に挑戦してきたことがあげられる。そこではやはりキーパーソンとなる人物がおり、その人を中心として組織的な対応をしてきているところが特徴といえよう。現在、報告書等を中心に資料の整理及びまとめを行っている段階であり、今後予定している面接調査において足りないところを補充し、さらにより深い分析ができるような聞き取り調査を実施していく。購入した経営組織関連の文献は理論的な枠組みの構築に貢献し、またカセットコーダーについても聞き取り調査において手助けとなるにちがいない。今後は、中学校の部のまとめを急ぎ、その後高等学校の部の検討に移り、報告書等を作成した後、結果の公表を予定している。
慢性関節リウマチの新しい診断法の開発および遺伝的素因の同定

血清中の可溶性FcγRIIIaをNA1NA1型のRA患者で測定したところ、正常者と比較して有意に高値であった。正常者の可溶性FcγRIIIaがNK細胞数と強い正の相関を示したのに対し、RA患者ではこのような相関は認められず、可溶性FcγRIIIaの起源がNK細胞以外である可能性が示唆された。現在、可溶性FcγRIIIaの免疫沈降のSDS電気泳動により確認中である。RA患者の可溶性FcγRIIIaは、好中球の割合と正の相関を示し、同一患者での比較では、病態の活性のマーカーであるCRP、ESRと相関した。血清中の総可溶性FcγRIIIにおいても、RA患者のほうが、正常者よりも有意に高値を示し、IgG、CRP、ESRと相関した。現在、対象として、OA、SLE患者でのNA1NA1型を検索中である。FcγRIIIBのgenotypeをPCR法で同定したところ、正常者ではNA1NA1型が38例(32.5%)、NA1NA2型が61例(52.1%)、NA2NA2型が18例(15.4%)であったのに対し、RA患者ではそれぞれ88例(47.1%)、81例(43.3%)、18例(9.6%)と、NA1タイプの優勢が認められた。さらに、NA2NA2型では、Stage 1,2の患者が多いのに比べ、NA1NA1型、NA1NA2型では、Stageの進行した患者が優勢であった。一方、OA患者ではNA1NA1型が3例(15%)、NA1NA2型が65例(65%)、NA2NA2型が4例(20%)と、NA2タイプの優勢が認められ、何等かの遺伝的関与が示唆された。現在、FcγRIIA、IIIAのgenotypeの同定の為のPCR法を検討中である。
祖父母の育児サポート力向上に対する「孫育て支援プログラム」の開発

平成29年度は、平成2728年度に実施したアンケート調査から「親と親の育児をサポートする祖父母それぞれが持つ孫育てに関するニーズの実態と特徴」を明らかにし、文献レビューの結果と併せて「孫育て支援プログラム」のコンテンツの精錬化と実施方法の検討に着手した。具体的には、次の2点である。1.親世代と祖父母世代が持つニーズの実態と特徴の明確化親世代と祖父母世代の両世代間に、孫育てに関する知識・技術(親:祖父母に知っておいてほしい知識・技術、祖父母:孫育てに関わる上で知っておきたい知識・技術)について差があるか統計学的手法を用いて分析した。その結果、「食事やおやつ」「水分補給」「スキンケア」「口の中のケア」「衣服や温度・湿度」「睡眠」「よくある癖や行動」「病気や症状への対処」「事故の対処方法」の9項目で、1歳未満、13歳未満、34歳未満全ての年齢において親世代と祖父母世代の間で有意差が認められ、親世代の平均点数が祖父母世代の平均点数よりも有意に高いことが判明した。これらの結果と先行文献のレビューより、祖父母の育児時代と育児の手技や知識が変化している内容を含む項目において、親世代が祖父母世代にその知識や技術を知っておいて欲しいと思っていることが明らかになった。また、「沐浴や入浴」「排せつの世話」「孫とのコミュニケーション」「起こりやすい事故と予防」「遊びと成長発達」の5項目は一時期の年齢で有意差が見られ、里帰り出産等のライフスタイルや孫の成長発達に応じてニーズが高まることが考えられた。2.ニーズの実態と特徴に基づく「孫育て支援プログラム」の開発1で明らかになったニーズ分析を基に、インストラクショナルデザインの基本的モデルを用いて、プログラムのコンテンツの検討と精錬化および実施方法の検討に着手した。今後、本モデルに従ってプログラムの素案作成を行ない、開発を進める予定である。研究目的1のアンケート調査の実施と分析の遅れに伴い、その後の計画に遅れが生じたため。アンケート調査の実施と分析に遅れが生じたが、現在、研究目的1の「親と親の育児をサポートする祖父母それぞれが持つ孫育てに関するニーズの実態と特徴を明らかにすること」から研究目的2「ニーズの実態と特徴に基づく孫育て支援プログラムの開発」へと進捗している。今後は、本研究で用いるインストラクショナルデザインの枠組みに沿ってプログラムの開発(実施方法や教材、評価方法の決定)を進めていく予定である。平成27年度は、研究目的1である「親と親の育児をサポートする祖父母それぞれが持つ孫育てに関するニーズの実態と特徴を明らかにする」を達成するため、質問紙調査の実施に向けて研究を遂行した。1.質問紙の作成親を対象とした質問紙と祖父母を対象とした質問紙の2種類を独自に作成した。本研究代表者が実施したこれまでの研究および先行研究と文献のレビューより、祖父母の育児サポートに関する内容を抽出した。その結果、祖父母が行う育児サポートには、食事や入浴の世話等の「身体的支援」、親の育児を労う等の「精神的支援」、金銭的・物的に支援する「経済的支援」、祖父母世代の伝統や文化を伝える「継承に関わる支援」の4つに係る内容が見出され、これに沿って質問項目を作成した。当該領域の研究者と保健師2名と共に、調査項目や表現方法の検討を重ね、内容妥当性を高めた。さらに、質問紙の回答所要時間を把握し、表面妥当性を高めるために、対象となる世代の15名と上記専門家2名にプレテストを行い、質問紙を作成した。2.倫理委員会の承認本研究は、目的1である「親と親の育児をサポートする祖父母それぞれが持つ孫育てに関するニーズの実態と特徴を明らかにする」ための質問紙調査と、目的2の「ニーズの実態と特徴に基づく祖父母向け孫育て支援プログラムを開発し、その内容と実施方法について有用性を検討する」ためのプログラム試行と評価のためのインタビューで構成される。平成27年度は、目的1を達成するための質問紙調査実施に係る部分について、本研究代表者の所属する大学倫理委員会の承認を得た。親を対象とした質問紙と祖父母を対象とした質問紙の両質問紙を作成するにあたり、質問項目の検討と精錬化に時間を要した。平成28年度は、研究目的1である「親と親の育児をサポートする祖父母それぞれが持つ孫育てに関するニーズの実態と特徴を明らかにする」を達成するため、親世代・祖父母世代の双方に質問紙を配布し調査を実施した。1.親世代に対する質問紙調査の実施親世代が持つ孫育てのニーズを明らかにするために、研究協力の得られたA県B町およびC町の保育園、子育て支援センターに所属する乳幼児の保護者、D県E市の乳幼児健康診査に来所した乳幼児の保護者を対象に無記名自記式質問紙を配布し、郵送法もしくは回収箱にて回収を行った。その結果、1673部配布し872部を回収した。回収率は52.1%、有効回答率は97.9%であった。調査内容は、子・親・祖父母の基本的属性、祖父母からのサポート状況と認識、希望するサポート内容と頻度、祖父母に求める知識・技術・役割、孫育てを受ける上で必要であると思うサービス等であった。2.祖父母世代に対する質問紙調査の実施

祖父母世代が持つ孫育てのニーズを明らかにするために、研究協力の得られたA県およびD県F市の高齢者大学に所属する祖父母世代、D県E市の保育園に所属する園児の祖父母を対象に、無記名自記式質問紙を配布し、郵送法もしくは回収箱にて回収を行った。その結果、1901部配布し1208部を回収した。回収率は63.1%、有効回答率は82.8%であった。調査内容は、孫・その親・祖父母の基本的属性、親へのサポート状況と認識、祖父母世代が行いたいサポートの内容と頻度、孫育てをする上で知っておきたい知識・技術・役割、孫育てをする上で必要であると思うサービス等であった。研究協力の得られた行政が所管する複数の保育園・高齢者大学等において、予め設定されていた祖父母参観やイベント、全体会等の日程に合わせてアンケートを順次配布したため、配布と回収に時間を要した。平成29年度は、平成2728年度に実施したアンケート調査から「親と親の育児をサポートする祖父母それぞれが持つ孫育てに関するニーズの実態と特徴」を明らかにし、文献レビューの結果と併せて「孫育て支援プログラム」のコンテンツの精錬化と実施方法の検討に着手した。具体的には、次の2点である。1.親世代と祖父母世代が持つニーズの実態と特徴の明確化親世代と祖父母世代の両世代間に、孫育てに関する知識・技術(親:祖父母に知っておいてほしい知識・技術、祖父母:孫育てに関わる上で知っておきたい知識・技術)について差があるか統計学的手法を用いて分析した。その結果、「食事やおやつ」「水分補給」「スキンケア」「口の中のケア」「衣服や温度・湿度」「睡眠」「よくある癖や行動」「病気や症状への対処」「事故の対処方法」の9項目で、1歳未満、13歳未満、34歳未満全ての年齢において親世代と祖父母世代の間で有意差が認められ、親世代の平均点数が祖父母世代の平均点数よりも有意に高いことが判明した。これらの結果と先行文献のレビューより、祖父母の育児時代と育児の手技や知識が変化している内容を含む項目において、親世代が祖父母世代にその知識や技術を知っておいて欲しいと思っていることが明らかになった。また、「沐浴や入浴」「排せつの世話」「孫とのコミュニケーション」「起こりやすい事故と予防」「遊びと成長発達」の5項目は一時期の年齢で有意差が見られ、里帰り出産等のライフスタイルや孫の成長発達に応じてニーズが高まることが考えられた。2.ニーズの実態と特徴に基づく「孫育て支援プログラム」の開発1で明らかになったニーズ分析を基に、インストラクショナルデザインの基本的モデルを用いて、プログラムのコンテンツの検討と精錬化および実施方法の検討に着手した。今後、本モデルに従ってプログラムの素案作成を行ない、開発を進める予定である。研究目的1のアンケート調査の実施と分析の遅れに伴い、その後の計画に遅れが生じたため。倫理委員会承認後、早急に調査の実施に着手しており、親世代を対象とした質問紙については、対象者への配布・回収が進んでいる。祖父母世代についても、各研究協力施設での具体的な配布時期・方法が決定し、順次データ収集を行う予定である。データが収集出来次第、統計学的手法で分析を行っていく。現在、回収およびエディティングが終了しデータ入力を進めている。データ固定ができ次第、分析に取りかかり、プログラムの素案作成を行っていく。また、プログラムの試行に関しては、協力施設の確保が完了し、すでにコンセンサスが得られているため、順次詳細の打合せを行っていく。
海外の日本語の新しい言語秩序-日系ブラジル人における待遇表現の新生-

「お」・「ご」の使用、「丁寧語の異なる動詞」の使用とともに「性差」、「年齢」と相関関係が見られないことが明らかになった。いいかえれば、「老若男女」に関係なく、言葉が使われている。しかし、「世代」と「母語」については「丁寧度の異なる動詞」の使用との間に強い相関関係が認められた。「世代」をさかのぼるほど丁寧度の高い表現が選択される傾向がある。戦前の国語教育の歴史が垣間見られる。3世のほうに5段階のぞんざいな表現を使用する傾向が見られる。しかし、ぞんざいな表現を使用するからといって、3世には相手に対する顧慮がないということは言えない。親愛の気持ちを表現している可能性は十分にあり、「ね」の使用が見られる。3世に近づけば近づくほど、階層差をわきまえることより、親愛の関係を協調することが人間関係にとって重要であると認識されているように思われる。「コロニア在住経験のある人」のほうが丁寧な段階の表現を使用している。コロニアにおいては戦前から皇民化教育として国語教育がしっかりと行われていた。家庭内で学習された日本語とコロニア内の学校における国語教育の影響が見られる。両親のどちらかが西日本出身である場合は「レル・ラレル」形の使用率が高い傾向があるが、日系ブラジル人全体としても「レル・ラレル」形は今もよく使われ、共通語家の様子がうかがわれる。西日本、なかでも中国、九州地方を中心とした方言が生きていることからもこのことが裏付けられた。研究初年度の調査結果によって得られた新たな知見は以下の通りである。1)日系ブラジル人の敬語は確実に「デス」「マス」形式に集約されつつある。2)動詞「食べる」の尊敬動詞「召し上がる」の喪失を補うため、類推可能な「レル」「ラレル」の「食べられますか」が2世によって使用されている。3)「オデス」の「お帰りですか」より、「ラレル」の「帰られましたか」のほうがよく使用されるのは1世の多くが西日本出身であることと関係があるようである。4)終助詞「ね」は敬語の喪失にともなって形成された聞き手に対する敬語(丁寧語)としての機能を果している。ポルトガル語の“ne"の干渉も受けている。5)6)「お」「ご」の使用について、「お金」「お寺」などに性差がネイティブに比べて見られない。「お」「ご」の使用についてネ-ティブより使用率が高い。平成10年度(科学研究費補助第2年目)は国内在住の日系人と、その比較対象資料としての国内日本人(ブラジル移住者の出身県、西日本中心)、海外日系人(ブラジル・アメリカ)の調査を終了し、入力分析作業を行った。その結果国内在住の日系人(ブラジル)の属性、日本語における「お」「ご」の付け方や丁寧度の異なった動詞の使用に特徴が見られた。1)名詞、形容詞、動詞の「お」「ご」の使用に関して、国内在住のブラジル日系人は西日本在住国内日本人とブラジル在住日系人との間の中間的な使用率を示した。2)丁寧度の違う動詞の使い分けに関して、ブラジル在住日系人より、国内在住ブラジル日系人のほうが丁寧度が全般的に低い。3)敬語に関する質問項目の中でブラジル在住日系人と国内在住ブラジル日系人とで、大きく結果が異なったのは謝罪に関する項目で、国内在住日系人は非常に丁寧度の高い表現を使用している。日本語について謝罪の表現に学習が観察された。4)国内在住ブラジル日系人とブラジル在住日系人とでは「目上の人に対する言葉づかいに気をつける」「敬語は必要かどうか」という点について意識の変化は見られない。5)国内在住ブラジル日系人はブラジル在住日系人より教育年数(学歴)が約1年程度短い。丁寧度が低い原因の一つと考えられる。6)国内在住ブラジル日系人は86%の人がポルトガル語を8%の人が日本語を母語としている。

7)日本語学習年数は国内在住ブラジル日系人はブラジル在住日系人より約3年短い。労働できる年代が来日していることとも関係があるだろう。8)国内在住ブラジル日系人とブラジル在住日系人の日本語使用時間は変わらない。「お」・「ご」の使用、「丁寧度の異なる動詞」の使用ともに「性差」、「年齢」と相関関係が見られないことが明らかになった。言い換えれば、「老若男女」に関係なく、言葉が使われている。しかし、「世代」と「母語」については「丁寧度の異なる動詞」の使用との間に強い相関関係が認められた。「世代」をさかのぼるほど丁寧度の高い表現が選択される傾向がある。戦前の国語教育の歴史が垣間見られる。3世のほうに5段階のぞんざいな表現を使用する傾向が見られる。しかし、ぞんざいな表現を使用するからといって、3世には相手に対する顧慮がないということは言えない。親愛の気持ちを表現している可能性はじゅぶんにあり、「ね」の多用がみられる。3世に近づけば近づくほど、階層差をわきまえることより、親愛の関係を強調することが人間関係にとって重要であると認識されているように思われる。「コロニア在住経験のある人」のほうが丁寧な段階の表現を使用している。コロニアにおいては戦前から皇民化教育としての国語教育がしっかりと行われていた。家庭内で学習された日本語とコロニア内の学校における国語教育の影響が見られる。両親のどちらかが西日本出身である場合は「レル・ラレル」形の使用率が高い傾向にあるが、日系ブラジル人全体としても「レル・ラレル」形は今もよく使われ、共通語化の様子がうかがわれる。西日本、なかでも中国、九州地方を中心とした方言が生きていることからもこのことが裏付けられた。
難治性舌癖に対する視覚的フィードバックを用いた訓練法の構築

“前歯の裏側に舌を常に押し付けているような状態"を“舌癖"といいます。この症状がみられると歯並びや発音に悪影響を及ぼす可能性が高くなります。しかし目で見えない舌を正しい位置に軌道修正することは難しく舌癖の改善には時間を要します。そこで本研究では舌の位置を視覚的にとらえることができる装置(EPG)を用い、舌癖に対する正しい舌位の誘導法を確立するなる目的で行います。近年、舌突出癖などの「口腔機能発達不全症」により、不正咬合を有する患児に遭遇する機会が増えてきている。現在、このような症例に対しては、舌を動かし口唇を舐めたり、突出させたりといった舌運動訓練を行う「口腔筋機能療法(Oro-Facial Myofunction therapy MFT)」が行われてきた。しかしながら、口腔内で舌がどの位置にあるのか、本当に自分が舌の正しい位置に動かすことができているかの自己判断が難しく、また、術者にとっても口腔内を直視することができないため、視覚的判定ができないといった問題点を持っている。本研究で使用するEPG口蓋床は、これまで言語聴覚士による言語訓練に用いられており、発話時に舌が口蓋のどこに接触したかを経時的に記録し、デジタルデータにて画像を構築して、視覚的フィードバックができるよう開発されたシステムである。具体的には、個人の上顎印象から作製された口蓋床に62個の電極を配置し、口蓋のどこに舌が接触したかを専用ソフトで表出することができるようになっている。このシステムを舌突出癖や異常嚥下癖を有する患児に応用し、舌機能に問題を有する小児の嚥下時や発音時の舌の動きを健常群と比較してその特徴を明らかにしたいと考えている。口腔機能発達不全症の新しい診断法・治療法としての確立を目指したいと考え、本研究を遂行している。本研究では上顎中切歯および側切歯が萌出完了した7歳以上12歳以下の児童を対象とし研究を行うため、倫理審査委員会に申請を行った。また、EPG口蓋床の使用法について学んだ。現在本研究に同意し参加してくれる患児に対し、測定を行わせて頂いている段階である。本研究で使用するEPG口蓋床は、発話時に舌が口蓋のどこに接触したかを経時的に記録しデジタルデータにて画像を構築して視覚的フィードバックができるよう開発されたWIn STARS(EPG録音録画システム)を使用し測定を行う。本科研によりこの装置を購入するため倫理申請を行ったが、その手続きや許可に時間を要してしまったため、研究が遅れている状況である。当病院小児歯科外来に来院され、上の前歯が萌出している7歳以上12歳以下で、唾液をのみこんだ時に舌がでる舌癖のある小児、比較対象として舌癖や発音に問題ない小児が対象とし、舌の動きの違いを明らかにすることを目的に研究を進めていく予定である。またあわせて装置使用後の感想を保護者・お子さんに対して行わせて頂き、装置の効果についての判定を行う予定である。

本科研によりこの装置を購入するため倫理申請を行ったが、その手続きや許可に時間を要してしまったため、研究が遅れている状況である。当病院小児歯科外来に来院され、上の前歯が萌出している7歳以上12歳以下で、唾液をのみこんだ時に舌がでる舌癖のある小児、比較対象として舌癖や発音に問題ない小児が対象とし、舌の動きの違いを明らかにすることを目的に研究を進めていく予定である。またあわせて装置使用後の感想を保護者・お子さんに対して行わせて頂き、装置の効果についての判定を行う予定である。
網膜色素変性の原因遺伝子解析

本年度は前年度に引き続き、アレスチン遺伝子の異常が先天性停止性夜盲のひとつである小口病の原因となっているばかりでなく、進行性夜盲性疾患の網膜色素変性の原因にもなりうることを明らかにすることを目的に遺伝子診断スクリーニングを継続し、遺伝子異常と臨床像の関係について検索を進めた。その結果、小口病と同じアレスチン遺伝子異常(1147delA)変異が常染色体劣性網膜色素変性と考えられる3例に認められた。3例のうち2例には定型的な網膜色素変性が認められ、残る1例は中心型の網膜色素変性に周辺部に金箔様反射を伴った眼底像であった。網膜電図上、3例ともa波とb波の減弱を認めたがその反応は完全には消失しておらず、また30HzフリッカーERGの振幅も減弱しているものの完全には消失していないパターンを共通して示した。また蛍光眼底撮影上、3例とも網膜血管アーケード付近にとくに強い網脈絡膜萎縮所見を認め、変性の最も強く起こる部位が血管アーケード付近であることを示唆していた。しかし、同様の蛍光眼底所見を示した他の網膜色素変性患者数名においてアレスチン遺伝子を検索したところ異常は認められなかったことより、この所見はアレスチン遺伝子異常をもつ網膜色素変性には必ずしも特異的という訳ではなく、単に杆体の傷害が最も強く起こることを示しているにすぎないのではないかと考えられる。いずれにせよ、今回の研究によりアレスチン遺伝子異常による常染色体劣性網膜色素変性の存在が世界で初めて示された。網膜色素変性は本邦における成人中途失明の原因疾患の第3位に位置する。本疾患は遺伝病であるがゆえに適切な治療法がなく眼科診療上も実質的には経過観察が行われているにすぎないのが実情である。したがって本疾患の原因を解明し、病態を正しく理解することによりより有効な治療法を開発することは医学的にも社会的にも重要課題のひとつとなっている。我々はこれまでの研究で小口病におけるアレスチン遺伝子異常を同定してきた。本研究はこれまでの研究をさらに発展させ網膜色素変性におけるアレスチン遺伝子異常の関与を探るものとして位置づけられる。本年度は東北大眼科にて保管している130家系の常染色体劣性網膜色素変性症例についてアレスチン遺伝子の変異スクリーニングを行い、日本人常染色体劣性網膜色素変性におけるアレスチン遺伝子変異の頻度を検索した。その結果、130家系の常染色体劣性網膜色素変性のうち3家系に小口病にて検出された変異と同一の変異(1147delA)がホモ接合にて見出された。このことはアレスチン遺伝子変異がこれまで考えられてきたように小口病の原因遺伝子異常であるばかりでなく、網膜色素変性の発症にも関与するものであることを世界で初めて明らかにするものであるとともに、臨床的にはこれまで非進行性であると考えられていた小口病が進行性疾患である網膜色素変性と極めて近い関係があることを明らかにするものである。今後アレスチン遺伝子変異が同定された常染色体劣性網膜色素変性については遺伝子治療の可能性も検討される価値があると思われる。本年度は前年度に引き続き、アレスチン遺伝子の異常が先天性停止性夜盲のひとつである小口病の原因となっているばかりでなく、進行性夜盲性疾患の網膜色素変性の原因にもなりうろことを明らかにすることを目的に遺伝子診断スクリーニングを継続し、遺伝子異常と臨床像の関係について検索を進めた。

また蛍光眼底撮影上、3例とも網膜血管アーケード付近にとくに強い網脈絡膜萎縮所見を認め、変性の最も強く起こる部位が血管アーケード付近であることを示唆していた。しかし、同様の蛍光眼底所見を示した他の網膜色素変性患者数名においてアレスチン遺伝子を検索したところ異常は認められなかったことより、この所見はアレスチン遺伝子異常をもつ網膜色素変性には必ずしも特異的という訳ではなく、単に杆体の傷害が最も強く起こることを示しているにすぎないのではないかと考えられる。いずれにせよ、今回の研究によりアレスチン遺伝子異常による常染色体劣性網膜色素変性の存在が世界で初めて示された。
温度補償した高速応答可能な低電圧静電駆動型マイクロミラー

薄膜トーションバーにより、静電駆動型マイクロミラーの低電圧駆動を実現していたが、温度特性安定化と高速化が課題であった。これらに対し、以下の成果を得た。(1)SiNに代わり、引張応力の大きい多結晶Siを得た。(2)太鼓の革のような薄膜ミラーを作製し、平坦さと温度安定性を確認した。(3)多結晶Siトーションバーを持つマイクロミラーが製作できた。(4)低電圧駆動特性が温度に対し安定した。(5)微弱な磁場を用いた無線駆動の展開を示した。低電圧で大きな回転角が得られる静電駆動型マイクロミラーの性能向上として、温度特性の安定化と高速化が目的である。本研究で実現すべき性能は複数ある。最終的には全てを兼ね備えたデバイスを目指すが、目的性能に応じて製作する構造を切り分け、本質的議論が進めやすいようにした。4項目を研究実施計画に挙げたが、平成19年度は以下の2項目について結果を得た。1.アモルファスSiから創製した多結晶Siを用いる点が工夫した点である。所有するLPCVD装置における大きな引張応力を得る成膜条件を求めた。石英ガラス基板によって評価した。He希釈10%SiH_4ガスを利用し、525°C,0.6Torrで得た膜を結晶化すると600MPaと高めの引張応力を得た。温度560,550,525°Cを試した。より低温・高圧で結晶を含まないアモルファス状態にする程、応力を大きくできた。2.太鼓の革のように張った薄膜で、平坦なミラーができるかを確認した。薄膜部分がφ380μm、結晶Siリング外径がφ500μmの構造を製作した。プレート構造に対して、慣性モーメントは62%に低減でき、共振周波数は27%向上する設計となる。アモルファスSiのアニーリングのタイミングが重要であることが分かった。製膜後の早い段階で結晶化した方が、プロセス中での物理・化学的耐性と歩留まりが改善する。たわみ量は最大-最小値で20nmを再現性良く得た。可視光に対しても<λ/10で、光学レベルで平坦である。反射率を上げるAl金属を蒸着しても、110°Cの高温状態でも平坦さは維持された。温度特性の安定化は、薄膜が基板Siと熱膨張係数がほぼ同じになったからである。以上、光学レベルで平坦なミラー面を軽量化できること、温度特性を安定化できることを確認した。本研究が狙う性能は複数ある。目的性能に応じて製作する構造を切り分け、本質的議論が進めやすいようにした。平成20年度は以下の4項目について結果を得た。1.アモルファスSiを結晶化して得る多結晶Siから、大きな引張応力を得る条件を求めた。電気的接続がアクチュエータに必須となるため、今年度はドーピング法を合わせて検討した。純粋なa-Si成膜後にリンをイオン注入し結晶化した。目減りはしたが300-400MPaの引張応力を得た。2.薄膜トーションバー製作と整合性を取りつつ縦型櫛歯アクチュエータ製作を実証した。昨年度の、アモルファスSi結晶化をプロセス中で出来るだけ早くする知見を利用した。SiO_2膜ディレイドマスク、プラズマエッチングの等方・異方性利用、UVキュアしたレジスト膜を利用したSi薄膜の側壁保護、の工夫により、引張応力を持つ多結晶Siのトーションバーを持つマイクロミラーが製作できることを見出した。3.マイクロミラーの低電圧特性(12Vで7.7°)と110°Cまで過熱し回転角-電圧特性が安定(温度依存性1.7xlo^<-3°>/°C)していることを確認した。バネ定数がわずかに低くなる温度特性は、値も含めて結晶Siで製作されたミラーと傾向が同じである。薄膜と基板Siの熱膨張係数がほぼ同じになったからである。4.展開として、マイクロミラーが微弱な電圧とエネルギで駆動できる性質を利用し、電磁誘導による非接触エネルギ伝送によるミラー駆動実験を行った。電磁石部で19mTの小さな磁場で16mm離れて励起し、1°以上のミラー回転を得た。生体内部へのデバイスの駆動として魅力がある。
第5回国際地形学会議における岩石制約シンポジウムのための企画調査

本研究の目的は,2001年8月2328日に日本で開催されるIAG第5回国際地形学会議における「岩石制約論シンポジウム」の基調報告の内容および討論課題を設定し,報告者の選定ならびに同シンポジウムに直結する野外巡検候補地の選定のための企画調査である.その成果を以下に要約する.1)文献調査「地形形成過程における岩石物性の役割」を定量的に研究した成果を,世界の主要な学術雑誌,国際会議報告書および既刊書などについて,計254編の文献を収集・整理した.その結果,「岩石制約論シンポジウム」の討論課題としては,総論,各論および岩石物性測定法の三部に大別し,総論では岩石制約論の根本課題の総括,各論では河川侵食過程,海岸侵食過程,マスムーブメント,氷河・周氷河過程,斜面発達,岩盤風化のそれぞれに関連する岩石制約の実例の総括,そして岩石物性測定法では野外測定法と室内測定法の諸問題,をそれぞれ主題および副題とすることとした.各部門と副題のオーガナイザーとしては本研究組織の全員が分担し,外国人では1999年末までの予備登録者の中から選定し,個別折衝して,最終的には2001年1月までに決定することとした.2)野外巡検の企画日本で岩石制約論的観点からの研究成果が累積している北海道豊富町付近,福島県東部海岸,秩父盆地,千葉県各地,三浦半島,宮崎県南東部について,各地区ごとに本研究組織の研究者が現況を確認した.その結果,野外巡検地としては房総地域(4日間)と北海道豊富地域(5日間)の2地域とし,第5回国際地形学会議のFirst Circularに掲載・発送した.3) Proceedings刊行の企画「岩石制約論シンポジウム」の成果をまとめて英文単行本として出版することとした.本研究の目的は,2001年8月2328日に日本で開催されるIAG第5回国際地形学会議における「岩石制約論シンポジウム」の基調報告の内容および討論課題を設定し,報告者の選定ならびに同シンポジウムに直結する野外巡検候補地の選定のための企画調査である.その成果を以下に要約する.1)文献調査「地形形成過程における岩石物性の役割」を定量的に研究した成果を,世界の主要な学術雑誌,国際会議報告書および既刊書などについて,計254編の文献を収集・整理した.その結果,「岩石制約論シンポジウム」の討論課題としては,総論,各論および岩石物性測定法の三部に大別し,総論では岩石制約論の根本課題の総括,各論では河川侵食過程,海岸侵食過程,マスムーブメント,氷河・周氷河過程,斜面発達,岩盤風化のそれぞれに関連する岩石制約の実例の総括,そして岩石物性測定法では野外測定法と室内測定法の諸問題,をそれぞれ主題および副題とすることとした.各部門と副題のオーガナイザーとしては本研究組織の全員が分担し,外国人では1999年末までの予備登録者の中から選定し,個別折衝して,最終的には2001年1月までに決定することとした.2)野外巡検の企画日本で岩石制約論的観点からの研究成果が累積している北海道豊富町付近,福島県東部海岸,秩父盆地,千葉県各地,三浦半島,宮崎県南東部について,各地区ごとに本研究組織の研究者が現況を確認した.その結果,野外巡検地としては房総地域(4日間)と北海道豊富地域(5日間)の2地域とし,第5回国際地形学会議のFirst Circularに掲載・発送した.3) Proceedings刊行の企画「岩石制約論シンポジウム」の成果をまとめて英文単行本として出版することとした.
酸化ストレス亢進マウスを用いた水素分子による認知症予防効果

アルツハイマー病、パーキンソン病に代表される神経変性疾患は、加齢に伴う酸化ストレスの蓄積が大きな要因である。一方、活性酸素種の中には一酸化窒素のように生理的に必要なものもある。従って抗酸化物質を摂取する場合、有害な活性酸素種のみを除去し、生理的に必要な活性酸素種を損なわないようにしなければならない。本研究では、アルツハイマー病モデルマウスにおいて、水素分子を長期摂取することにより、加齢に伴う脳の酸化ストレスが軽減され、神経変性疾患の発症が抑制されることが明らかとなった。加齢に伴う酸化ストレスの蓄積は、アルツハイマー病(AD)をはじめとする神経変性疾患の要因のひとつである。我々が開発した抗酸化物質である水素分子は、反応性の高い活性酸素種のみを選択的に還元し、生体内を自由に拡散することができる画期的な抗酸化物質である。本研究では、アルツハイマー病モデル動物であるミトコンドリア酸化ストレス亢進マウス(1)飢マウス)およびヒト変異APP高発現マウス(Tg2576)に水素分子を飽和させた水(水素水)を投与し、水素分子の長期投与が加齢に伴う神経変性疾患発症抑制に有効であるか否かを検討する。加齢による認知症予防に水素水の摂取が有効であることを実証できれば、老後の質(QOL)を改善することができ、その社会的意義は大きい。1,DALマウスへの水素水投与実験脳でAlDH2^*2の発現が認められた系統のDALマウスを水素水投与群、コントロール水投与群の2群に分けた。生後一カ月齢から水素水投与群には水素水を、コントロール群には水素水から撹拌により脱水素した水を飲料水として自由摂取させ、通常食で飼育した。1)学習・記憶解析:新奇物体認知試験(13-14カ月齢、17-18カ月齢の2回)、受動回避試験(17-18カ月齢1回)の2種類の試験を実施した。いずれの試験においても、水素水投与群において、学習、記憶能力の低下抑制が認められた。2)酸化ストレスの解析:酸化ストレスマーカーとして尿中8-OHTGと脳のMDAを測定した。いずれも水素水投与群で酸化ストレスが軽減していた。3)脳の組織学的判定:脳の海馬領域の切片を作製し、HE染色、免疫染色(4-HNE抗体、神経細胞、神経線維特異的抗体、アストロサイト、ミクログリア特異的抗体、タウリン酸化抗体など)を行った。2.APPマウスへの水素水投与実験Tg2576(APP+/-)マウスとその同腹仔(APP-/-)を購入し、それぞれを4ヶ月齢より水素水投与群、コントロール水投与群に分け、DALマウスと同様に水を自由摂取させ、通常食で飼育した。7ヶ月齢にて新奇物体認知試験を行なった加齢による認知症予防に水素水の摂取が有効であることを実証すべく、引き続き二種類のアルツハイマー病モデル動物に水素水を長期投与し、水素分子の神経変性疾患発症抑制効果について検討した。1.DALマウスへの水素水投与実験1)生後1カ月齢から水素水を投与したDALマウスでは、水素水投与群で学習、記憶障害の改善、酸化ストレス蓄積の軽減、脳海馬領域の神経変性抑制が認められた。そこで成熟期以降に水素水投与を開始しても同様の効果がみられるか否かを確認するために、生後8カ月齢のDALマウスを水素水投与群、コントロール水投与群の2群に分け飼育した。17-18カ月齢において新規物体認知試験を行なった。生後1カ月齢から水素水を投与したDALマウスと同様に、水素水投与群で学習・記憶障害の改善が認められた。2)DALマウスは酸化ストレスの蓄積により有意な寿命低下を特徴とする。そこで生後5カ月齢から水素水投与を開始したDALマウスで延命効果があるか否かを検討中である。2.APPマウスへの水素水投与実験Tg2576(APP+/-)マウスとその同腹仔(APP-/-)はコントロール群と水素水投与群のそれぞれ2群に分け、生後4ヶ月齢より水素水投与を開始した。新奇物体認知試験(7カ月齢、12カ月齢)、水迷路試験(12カ月齢)、Y迷路試験(12カ月齢)を行なった。新規物体認知試験において、水素水投与群のAPPマウスで学習・記憶障害の改善が認められた。13ヶ月齢で解剖後、脳の組織学的、生化学的解析(βアミロイド定量)を行った。APPマウスの水素水投与群で血中、及び脳のβアミロイド(1-40,1-42)の低下が認められた。加齢による認知症予防に水素水の摂取が有効であることを実証すべく、二種類のアルツハイマー病モデル動物に水素水を長期投与し、水素分子の神経変性疾患発症抑制効果について検討した。

昨年度までに、DALマウスへの水素水投与実験、APPマウス(Tg2576)への水素水投与実験が終了し、以下の事が明らかとなった。1. DALマウスへの水素水投与実験:水素水投与群で、学習、記憶障害の改善、酸化ストレスの軽減、脳海馬領域の神経変性抑制が認められた。2. APPマウス(Tg2576)への水素水投与実験:水素水投与群で、学習、記憶障害の改善、血中及び脳のβアミロイドの低下が認められた。さらに今年度はDALマウスへの水素水投与実験において、有意に寿命が延長することが明らかとなった。以上、二種類のアルツハイマー病モデルマウスへの水素水長期投与実験において、水素水の投与が、加齢による酸化ストレスの蓄積を原因とする認知症の予防、治療に有効であり、延命に効果的であることが明らかとなった。水素水投与による学習記憶障害の改善効果が、DALマウス、APPマウスの両方で確認できたことにより、順調な進展であると判断している。24年度が最終年度であるため、記入しない。今後はDALマウスを用いて、認知症予防効果が得られる水素水投与開始時期を検討するとともに、水素水投与による延命効果が得られるか否かを検討する。また水素分子の投与方法について、簡便でより高濃度の水素を摂取可能な酸化マグネシウムの安全性について検討する。
ヒトiPS細胞由来皮質運動神経シートの作成と移植応用

脳血管障害は片麻痺など運動機能障害の主要な原因である。脳血管障害に対する神経細胞移植療法が脚光を浴びている。新しく開発した皮質運動神経細胞シートは、大脳運動領域の皮質梗塞周囲巣の皮質にそのシートの層を置くことで最大限の接触面積を図り、移植細胞の生存率の著しい増加をもたらした。実際、この運動神経細胞シート移植後の、片麻痺モデルマウスの運動機能は著明に改善し、移植後の組織学的修復も十分に改善していた。脳血管障害は運動機能障害の主要な原因である。脳血管障害に対する神経細胞移植療法には大きな期待が集まっている。これまでの多くの研究は、神経幹・前駆細胞を使用し、様々な脳局所に細胞浮遊液を注入移植している。しかし通常の神経細胞移植では移植後に細胞の多くが死滅する。移植細胞はトリプシン処理により細胞浮遊液にされ、通常の細胞相互作用を取り除かれた状態で、非常に高いストレス状態におかれているためと思われる。我々はヒトiPS細胞を用いて脳血管障害の移植部位に、一番ふさわしい皮質運動神経細胞に分化させ、さらに皮質梗塞局所の解剖学的な特徴を考慮し、細胞間相互作用を保持したままの移植が可能な、新しい細胞の供給方法を開発している。脳血管障害ではより高頻度で障害される神経である前脳および皮質運動野神経への分化誘導方法はこれまでに存在しない。そこで、ヒトiPS細胞から前脳運動神経細胞の誘導・純化法の確立を行った。現時点ではヒトの未分化iPS細胞を、レチノイン酸、sonic hedgehogの阻害物質cyclopamine 10-6M及びNoggin-Fcで刺激することで、大脳皮質の一次運動神経のマーカーとしてCTIP2陽性, Fezf2陽性, FoxP2陽性, Crim1陽性でかつヒトneural cell adhesion molecule, NCAM陽性細胞を分化誘導することができた。この細胞は細胞増殖時に取り込まれるBrdUを殆ど取り込まないことからpostmitotic neuronであることが示唆されている。即ちヒトiPS細胞から皮質運動神経細胞(一次ニューロン)を誘導できることが明らかになった。脳血管障害の患者数は現在150万人と言われ毎年25万人以上が新たに発症する。介護が必要な疾患の一位は脳血管疾患(21.5%)である(厚生労働省平成22年度国民生活基礎調査報告)。我々は既にマウス胚性幹(ES)細胞、マウスiPS細胞、サルES細胞、さらにヒトiPS細胞から各種の神経細胞を分化誘導する手技を確立し、これらを移植して片麻痺マウスや脊髄損傷マウスの運動機能、さらには認知症モデルマウスの空間認識能を改善できることを報告した。片麻痺モデル動物においては、分化誘導後の運動神経をトリプシン処理をして神経細胞浮遊液を針で穿刺して線条体に注入している。この神経細胞移植にはいくつかの限界がある。(1)移植後生存細胞が少ないこと(数ヶ月後には1%以下)、(2)神経分化が高度で均一なほど機能回復は良い事がわかっているが、この方法では移植細胞の神経分化の均一化が困難であることである。この問題点を解消するため、我々はヒトiPS細胞より現在皮質運動神経細胞シート(特願2012-165108「神経細胞シート及びその製造方法」発明者:鈴木登)を作成してその移植を行った。この手技は温度変性ゲルを用いてシート状の神経細胞を得るもので、in vitro培養で形成させた神経細胞ネットワークを保護・保存できる優れた方法で、移植細胞の生存率の著しい増加をもたらした。さらに運動機能が移植後に統計学的に有意に回復することを確認した。運動神経細胞で細胞シートを作成して、これを移植する方法は、大脳に人為的な損傷を引き起こすことなく神経細胞移植を行うことができる有用な主義であることが示された。再生医学これまで、どのような幹細胞からであってもヒトの皮質運動神経の分化誘導方法は知られていない。我々は本研究計画の初年度でヒトiPS細胞から高純度の皮質運動神経の分化誘導方法の確立に成功した。これまでのマウスやカニクイザル由来細胞では十分な研究実績を持つが、ヒトiPS細胞においてはこれまでの分化誘導法とは異なる成長因子が必要であることを見出したことが重要であるが、そこを乗り越えた事は十分に高く評価できる。この細胞を用いて、既に、下記の平成26年度分に該当する研究を行っている。我々が樹立した誘導法を用いてヒトiPS細胞から皮質運動神経を分化誘導する。これを用いて温度感応性ゲルを利用してヒトiPS細胞由来運動神経細胞シートの作成を試みる。具体的にはヒトiPS細胞由来の十分量の皮質運動神経細胞を温度感応性gelation polymer(TGP)でコーティングされた培養皿で培養する。短期間培養維持された後、SDF1, MCP1、もしくはその他ケモカインを細胞シートに添加し、より長く伸長した軸策を持つことにより耐久性のあるヒトiPS細胞由来皮質運動野神経細胞シートを得る。この段階はTGPからの脱離と神経細胞シートの回収の成功のために必須な操作である。