hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
SOX17の発現変化によるWnt活性制御が消化管腫瘍悪性化に及ぼす影響

転写因子であるSOX17は、消化管腫瘍の発生に対して「発がん促進」に作用する可能性と、「発がん抑制」に作用する可能性が指摘されており、その役割は未だ不明である。本研究では、マウスモデルを用いた遺伝学的解析により、腸管腫瘍発生におけるSOX17の役割を解析した。その結果、SOX17遺伝子を欠損させたApc^Δ716マウスでは腸粘膜が肥厚し、腸管腫瘍数の有意な増加を認めたことから、SOX17は大腸がん発生に関して抑制的に作用すると考えられた。腸上皮細胞ではApc遺伝子変異によるWntシグナル亢進が、腫瘍発生の直接的原因となる。研究代表者らはこれまでに、消化管腫瘍の初期病変ではWnt標的因子であるSox17が誘導されていることを明らかにした。Sox17は発生段階で内胚葉の初期発生に重要な因子であり、また大腸がんではがん抑制遺伝子として知られている。本研究は、Wntにより誘導されるSox17の発現変化が腫瘍発生および悪性化にどのような機序により関与しているのか明らかにすることを目的として実施している。Sox17遺伝子をホモで欠損すると胎性致死のため、コンディショナルにSox17を欠損するSox17(f1/f1)マウスを導入し、腸上皮細胞で特異的にCre遺伝子を発現するvillin-Creマウスとの交配実験を行なった。これまでにvillin-Cre Sox17(f1/f1)マウスが数匹生まれたが、生まれる頻度はメンデルの法則を有意に下回っているため腸上皮でのSox17欠損が部分的な胎性致死の原因となっていると1考えられた。villin-Cre Sox17(f1/f1)マウスは体躯が小さいこと以外は正常であった。当該マウスの腸管上皮病理解析は来年度実施する。また、腸管腫瘍を自然発生するApc遺伝子ノックアウトマウス(Apc^<△716>)とSox17 cKOマウスの交配を進めて、これまでにApc^<△716>Sox17(f1/f1)マウスを得ており、さらにvillin-Cre Sox17(f1/f1)マウスとの交配により、Apc^<△716>villin-Cre Sox17(f1/f1)マウスが1匹生まれている。さらに、発生した腸管腫瘍におけるSox17欠損の影響を経時的に解析するために、新たにタモキシフェンでCre活性が誘導されるvillin-CreERマウスを導入し、現在Apc^<△716>マウスおよびSox17 cKOマウスとの交配を進めている。Wntシグナルは腸管上皮幹細胞の維持に重要であり、APC遺伝子変異などによる恒常的なWntシグナル亢進は大腸がん発生の原因となる。一方でSox17にはWntシグナルを阻害する作用があり、がん抑制遺伝子として報告されている。研究代表者はこれまでに腫瘍発生初期過程ではSox17がWntシグナル標的遺伝子として発現誘導されていることを明らかにした。本研究では、Sox17が消化器がん発生および悪性化にどのような機序により関与しているのかを明らかにすることを目的として実施している。これまでに、腸管上皮細胞で特異的にSox17を欠損するマウス、villin-Cre/Sox17(flox/flox)を交配により作製した。昨年度までにこの遺伝子型のマウスは出生率が低いことを観察していたが、villin-Creが胎性初期に一過性に全身で発現する個体があり、それが原因と考えられた。一方、正常に生まれたvillin-Cre/Sox17(flox/flox)マウスは正常であり、腸管粘膜にも組織学的な異常は認められなかった。一方、Apc遺伝子をヘテロで欠損したApc^<Δ716>マウスでは腸管上皮の構造は正常だが、体細胞における正常Apc遺伝子の欠損(LOH)によりWntシグナルが活性化して腫瘍が発生する。興味深いことにApc^<Δ716>/villin-Cre/Sox17(flox/flox)マウスを作製して15週齢で解析すると、大腸粘膜全体の厚さが約1.7倍に肥厚し、大腸ポリープの数が平均で約7倍程度に増加した。小腸での粘膜の厚さや腫瘍発生頻度には変化が見られなかった。以上の結果から、Apc遺伝子のヘテロ変異によりWntシグナル強度が少し上昇した大腸粘膜上皮では、Sox17遺伝子欠損によりさらにWnt活性が上昇して、上記の症状を呈した可能性が考えられた。Wntシグナル活性化により誘導される転写因子SOX17には、Wntシグナル抑制作用が報告されており、「がん抑制遺伝子」としての可能性が大腸がんで指摘されている。一方で消化管の良性腫瘍ではWnt標的因子としてSOX17発現が強く誘導されていることを明らかにした。

したがって、SOX17は発がんの初期過程と悪性化進展過程では異なる役割を果たしている可能性が考えられた。本研究では、SOX17の発がんにおける役割を明らかにする目的で、腫瘍発生モデルマウスおよびSOX17遺伝子欠損マウスを用いた交配実験を実施した。これまでに、Sox17遺伝子コンディショナル欠損マウス(Sox17(flox/flox))、腸管特異的Cre発現(持続型)マウス(villin-Cre)、および腸管腫瘍発生モデルマウス(ApcΔ716マウス)の交配実験を行なった結果、野生型マウスではSox17遺伝子を欠損しても正常腸粘膜構造を保が、ApcΔ716マウスでSox17遺伝子を欠損すると、結腸粘膜の肥厚と発生ポリープ数の増加を認めた。さらに、タモキシフェン(Tmx)投与により腸管特異的Creにを活性化するvillin-CreERマウスを導入してApcΔ716 villin-CreER Sox17(flox/flox)マウスを作製した。このマウスにTmxを5日間連続投与し、コンディショナルに腸管粘膜上皮でSox17遺伝子を欠損させた結果、上記のモデルで認めた腸管粘膜の肥厚とポリープ数増加は見られなかった。すなわち、成熟マウス組織でSox17を発現抑制しても粘膜肥厚に至らないことから、胎仔期の器官形成過程においてSox17発現が抑制されるとWntシグナル亢進により腸粘膜の過形成が誘導され、それによりポリープ発生の確率が高くなった可能性が考えられた。マウスの交配実験は研究計画に沿って進められている。当初予想したSox17遺伝子欠損による腫瘍の悪性化症状は認められなかったが、Wntシグナル亢進とSox17抑制の相互作用による腫瘍発生機序を示唆する、新しい知見が得られており、Sox17による発がん・悪性化機序の解明という本研究の目的に向かって、順調に進展している。24年度が最終年度であるため、記入しない。
ブドウ果皮アントシアニン高含有・果肉着色化の制御機構の解明

`紅高'、`ブラジル'の果皮アントシアニン含量ならびに着色関連遺伝子群の経時的発現変動を調査した。また、両品種の着色遺伝子座に存在し、着色誘導機能を有するVvMYBA1BENアレルのプロモーター領域のDNAメチル化レベルをバイサルファイトシーケンス法で解析するためのプライマー設計を行った。その結果、果皮アントシアニンの蓄積は両品種ともベレーゾン後から開始したが、その後のアントシアニン増加量は両品種間で大きく異なり、収穫時の`ブラジル'果皮のアントシアニン含量は`紅高'の約3.6倍となった。また、VvMYBA1、CHS3、F3'5'H、AOMTなどの遺伝子発現量は両品種ともベレーゾン期に増加したが、いずれも`ブラジル'での発現量が`紅高'よりも著しく高く推移した。以上の結果から、`ブラジル'での果皮アントシアニン含量の増加は、VvMYBA1の転写能力が何らかの機構で向上し、それによりアントシアニン合成系酵素遺伝子群の働きが向上したためであると考えられた。次に、VvMYBA1BENプロモーター領域のDNAメチル化レベル解析に用いるために設計した複数のプライマーセットのうち、Set1とSet2の領域で設計した2組のプライマーセットによりVvMYBA1BENプロモーター領域を網羅できた。これらのプライマーセットを用いてPCR増幅を行った結果、Set1、Set2ともに想定したサイズのPCR増幅産物を`紅高'、`ブラジル'のバイサルファイト処理済DNAから得ることができた。当初の予定通り、`紅高'、`ブラジル'の果皮アントシアニン含量の調査ならびに着色関連遺伝子群の経時的発現変動を調査し、両品種間でアントシアニン含量と着色関連遺伝子群の発現量が著しく異なることを明らかにした。また、着色誘導機能を有するVvMYBA1BENアレルのプロモーター領域のDNAメチル化レベルをバイサルファイトシーケンス法で解析するためのプライマー設計、ならびにPCRによる増幅確認を行い、予定した解析領域をカバーするプライマーを作成することができた。また、バイサルファイトシーケンスによるメチル化レベル解析を現在進行中であり、本研究課題は概ね順調に進展している。`紅高'、`ブラジル'着色開始期果皮のバイサルファイト処理済DNAから得たSet1、Set2のPCR増幅産物をクローニング後、それぞれ数十クローンをシーケンス解析し、得られたシーケンス情報を用いてDNAメチル化レベルの比較解析を行う。次年度のバイサルファイトシーケンス解析に必要なクローニングキット、各種試薬類の購入等に用いる。メチル化解析を行うDNA検体数が当初想定したよりも少なくなり、必要な試薬類の購入費が減ったことと、メチル化領域を解析するためのプライマーの検討が予定よりも少ないプライマー数で設計することができたために、次年度使用額が生じた。
国際労働運動の発展過程－オーラルヒストリーによる労働運動の戦後史研究の再構築

国際労働運動実務者等へのオーラルヒストリー調査を行い、労働運動史を含む労働史研究者、労働組合関係者等への利用・外部への普及等に利用可能なオーラルヒストリー史料群の整備・拡充を図ることを目的とする本研究の実績ついては、本年度は本研究が取り上げている3つの課題の課題ー(1)新調査の計画本研究協力機関と連携したオーラルヒストリー調査協力者のリスト作成、(2)新調査の実施オーラルヒストリー調査協力者への調査、(3)オーラルヒストリー調査協力者から提供された非公式一次史料群のアーカイブ化の推進ーに取り組んだ。具体的には、研究計画で掲げた3つのステップ(【ステップ1】既存のオーラルヒストリー史料群による研究報告、新調査計画の実施、【ステップ2】新調査の実施と調査協力者から提供された非公式資料群のアーカイブ化、【ステップ3】新調査による史料群の研究報告と研究論文の作成)のうち、【ステップ1】と【ステップ2】を実施した。すなわち、岩崎馨氏(一般財団法人・日本生産性本部労働研究センター事務局長)の協力を受け、桝本純氏(元同盟調査局・元連合総合生活開発研究所副所長)にオーラルヒストリー調査を1回実施し、当時の労働組合の運動状況ならびに国際活動の取り組み状況を、浅澤信夫氏(元石川島播磨重工業常務取締役)にオーラルヒストリー調査を2回実施し、当時の労務管理と労使関係の状況を、守山猛氏(元合化労連中央執行委員・総合政策局長)にオーラルヒストリー調査を1回実施し、当時の労働組合の運動状況ならびに産業別組織の変遷をそれぞれ伺った。研究計画で掲げた3つのステップ(【ステップ1】既存のオーラルヒストリー史料群による研究報告、新調査計画の実施【ステップ2】新調査の実施と調査協力者から提供された非公式資料群のアーカイブ化、【ステップ3】新調査による史料群の研究報告と研究論文の作成)のうち、【ステップ1】と【ステップ2】を実施し、現在3人のオーラルヒストリー調査を行った(桝本純氏:1回、浅澤信夫氏:2回、守山猛氏:1回)。なお、浅澤氏、守山氏のオーラルヒストリー調査は次年度も引き続き行うことを、新調査として岩崎馨氏(一般財団法人・日本生産性本部労働研究センター事務局長)へのオーラルヒストリー調査の準備をそれぞれ計画している。【ステップ1】既存のオーラルヒストリー史料群による研究報告について。過年度オーラルヒストリー調査を実施した桝本純氏の取りまとめを終え、同氏から提供され、整理した非公式史料とともに調査報告書の作成を進めた。また、岩崎馨氏の協力を受けながら、翌年度の新調査の計画に向けた検討に取り組み、浅澤信夫氏(元石川島播磨重工業常務取締役)と守山猛氏(元合化労連中央執行委員・総合政策局長)にオーラルヒストリー予備調査を行い、オーラルヒストリー調査を行う目的・意義と調査内容を説明しつつ、当時の労働組合の運動状況、労務管理の状況ならびに産業別組織の変遷を伺った。【ステップ2】新調査の実施と調査協力者から提供された非公式資料群のアーカイブ化について。【ステップ1】における新調査の計画をもとに、浅澤氏と守山氏へのオーラルヒストリー調査を実施し、当該年度中に浅澤氏は2回、守山氏1回の調査を行った。なお、両氏に対するオーラルヒストリー調査は継続中で、翌年度も引き続き調査を行うことを計画している。また、過年度岩崎氏から提供されたアナログ音声の記録媒体のデジタル音声変換を終えたテープ越し編集作業を継続して行った。研究計画に基づき、次年度はつぎの3つを実施することを計画している。【(1)桝本純氏へのオーラルヒストリー調査の完了と報告書の作成】当該年度で桝本氏へのオーラルヒストリー調査を終了したので、翌年度にオーラルヒストリー調査報告書を作成する。【(2)浅澤信夫氏へのオーラルヒストリー調査の完了と報告書の作成】当該年度に実施した浅澤氏に対するオーラルヒストリー調査は継続中であるので、翌年度も引き続き同氏への調査を行い、オーラルヒストリー調査報告書を作成する。【(3)守山猛氏へのオーラルヒストリー調査の完了と報告書の作成】当該年度に実施した守山氏に対するオーラルヒストリー調査は継続中であるので、翌年度も引き続き同氏への調査を行い、オーラルヒストリー調査報告書を作成する。【(4)新たなオーラルヒストリー調査の計画と実施】一般財団法人・日本生産性本部労働研究センター事務局長、岩崎馨氏への新オーラルヒストリー調査の計画を進め、オーラルヒストリー調査を実施する。【(5)デジタル音声のスクリプト変換および編集作業】一般財団法人・日本生産性本部労働研究センター事務局長、岩崎馨氏から提供された産業別組合の組合リーダー複数名を対象に行ったインタビュー調査の非公開アナログ音声の記録媒体(カセットテープ)をデジタル音声データに変換した音声データのスクリプト変換作業を継続して行う。インタビュー調査の対象者となった組合リーダーは現在、鬼籍に入られているため、その音声内容は労働運動史研究において貴重な史料群である。そこで、予算の執行状況を勘案しながら、デジタル音声のスクリプト変換作業を継続していきたい。国際労働運動実務者へのオーラルヒストリー調査を行い、労働運動史を含む労働史研究者、労働組合関係者等への利用・外部への普及等に利用可能なオーラルヒストリー史料群の整備・拡充を図ることを目的とする本研究の実績ついては、本年度は本研究が取り上げている3つの課題の課題ー(1)新調査の計画本研究協力機関と連携したオーラルヒストリー調査協力者のリスト作成、(2)新調査の実施

オーラルヒストリー調査協力者への調査、(3)オーラルヒストリー調査協力者から提供された非公式一次史料群のアーカイブ化の推進ーに取り組んだ。具体的には、研究計画で掲げた3つのステップ(【ステップ1】既存のオーラルヒストリー史料群による研究報告、新調査計画の実施、【ステップ2】新調査の実施と調査協力者から提供された非公式資料群のアーカイブ化、【ステップ3】新調査による史料群の研究報告と研究論文の作成)のうち、【ステップ1】と【ステップ2】を実施した。すなわち、岩崎馨氏(一般財団法人・日本生産性本部労働研究センター事務局長)の協力を受け、桝本純氏(元同盟調査局・元連合総合生活開発研究所副所長)にオーラルヒストリー調査を2回実施し、当時の労働組合の運動状況ならびに国際活動の取り組み状況を伺った。このオーラルヒストリー調査に加えて、新調査の実施に向けた浅澤信夫氏(元石川島播磨重工業常務取締役)と相原正雄氏(元同盟国際局局長)にオーラルヒストリー予備調査を行い、オーラルヒストリー調査を行う目的・意義と調査内容を説明しつつ、当時の労働組合との労使関係状況の取り組み状況を伺った。研究計画で掲げた3つのステップ(【ステップ1】既存のオーラルヒストリー史料群による研究報告、新調査計画の実施【ステップ2】新調査の実施と調査協力者から提供された非公式資料群のアーカイブ化、【ステップ3】新調査による史料群の研究報告と研究論文の作成)のうち、【ステップ1】と【ステップ2】を実施し、桝本純氏のオーラルヒストリー調査を2回行った。なお、同氏のオーラルヒストリー調査は次年度も引き続き行うことを、新調査として浅澤氏へのオーラルヒストリー調査の準備をそれぞれ計画している。【ステップ1】既存のオーラルヒストリー史料群による研究報告について。過年度オーラルヒストリー調査を実施した三浦義氏の取りまとめを終え、同氏から提供され、整理した非公式史料とともに調査報告書を作成した(『三浦義オーラル・ヒストリー(元商業労連国際局局長)』)。また、一般社団法人日本生産性本部労働研究センター事務局長、岩崎馨氏の協力を受けながら、翌年度の新調査の計画に向けた検討に取り組み、浅澤信夫氏(元石川島播磨重工業常務取締役)と相原正雄氏(元同盟国際局局長)にオーラルヒストリー予備調査を行い、オーラルヒストリー調査を行う目的・意義と調査内容を説明しつつ、当時の労働組合の運動状況ならびに国際活動の取り組み状況を伺った。【ステップ2】新調査の実施と調査協力者から提供された非公式資料群のアーカイブ化について。【ステップ1】における新調査の計画をもとに、元同盟調査局・元連合総合生活開発研究所副所長、桝本純氏へのオーラルヒストリー調査を実施し、当該年度中に2回の調査を行った。なお、同氏に対するオーラルヒストリー調査は継続中で、翌年度も引き続き調査を行うことを計画している。また、過年度、岩崎氏から提供されたアナログ音声の記録媒体(カセットテープ)のデジタル音声変換を終えたテープ越し編集作業を行った。
環境の理念と保全手法に関する基礎班

本年度は、特別研究の理念領域としての活動は最終年度であり、新しい重点領域研究へ適切に研究を発展させることが重要であることにかんがみ、そうした連絡調整に重点をおくこととした。幸い、新しい重点領域研究の中でも社会科学関係の研究が重視されて、有力なメンバーがそれに参加することができ、環境科学の中での社会科学の位置づけは、現段階としては、所期の目標をほぼ達成できたと考えられる。次に、特別研究が終了した後、学会としての活動に転換できないかということが、全体としての大きな課題となり、特別研究全体の研究成果の発表のしかたが、従来の領域別のものでなく、新しい観点からの発表を行うこととなったため、公募研究については、それぞれ分散した形で発表された。理念領域としては、今後の進み方を考え、固い組織を固執することなく、ゆるやかな人的交流の場を形成することをもってよしとする考え方で臨んだ。以上のような大きな方向の流れの中で、班としての集まりは、ごく少ないものとなったが、理念領域各研究班の研究会であるとか、研究の場へのメンバーの参加に重点がおかれた。研究会は、第1回は、11月12日から14日まで開催された環境科学シンポジウムの最中に、時間をとって、14日10時から12時まで開催した。そこでの議論は、主として現在の動向についての報告や検討の他、計画研究については、もう一度皆が集まって報告会を行った方がよいということとなった。この方針を受けて、昭和62年2月21日(土)午前10時から午後5時まで、虎の門の国立教育会館5階会議室において計画研究の報告会を開催した。この報告会については、理念領域関係者全員と評価委員等にも連絡し、しめくくりの会合とした。
損傷した中枢神経軸索再生のための基礎研究-プロテオグリカンの作用機序の解明

脊髄損傷部位周辺ではコンドロイチン硫酸プロテオグリカン(CSPG)の濃度勾配が形成され、神経軸索の再生が阻害される。本研究は、CSPG濃度勾配上で再生不全に陥った軸索の先端部を再現した培養系を用い、軸索が再生できない分子的原因を探ることを目的とした。本研究の結果、軸索先端部において細胞と基質側の接着を担う細胞接着斑の形成制御が、CSPG濃度勾配上における軸索再生に重要な役割を果たすことを初めて示した。脊髄損傷部位周辺ではコンドロイチン硫酸プロテオグリカン(CSPG)の濃度勾配が形成され、そこへ再伸長した軸索の先端部は膨瘤した球状体(dystrophic endball)を形成し、軸索の伸長が停止する。本研究は、dystrophic endballが前方への移動を停止する分子的原因を探ることを目的とした。まず、CSPGの一種であるaggrecanの濃度勾配を形成させた培養皿上で成体ラットより単離した脊髄後根神経節神経細胞を培養ずることにより、再伸長した神経軸索の終末が膨瘤して伸長を停止し、dystrophic endballを形成することが再現できた。本培養系を用いて免疫細胞染色を行い解析した結果、dystrophic endballでは、静的な微小管のマーカーである脱チロシン化チュブリン及びアセチル化チュブリンの発現が増加し、細胞-基質間接着(focal complex)マーカーのリン酸化チロシン陽性斑点が周辺部におけて減少していた。これによりdystrophic endballでは微小管タンパクのダイナミクス、fbcalcomplexの形成に異常が生じていることが示唆された。さらに、プロテインキナーゼA(PKA)阻害剤を処置することにより、dystrophic endballが前方への移動を開始することを明らかにし、微小管タンパクのダイナミクスやfocalcomplexの形成不全が正常化することを示唆した。以上、dystrophic endballが前方へ移動できない分子的要因の一端を明らかにした。次年度は、PKAによって制御されるdystrophic endballの前方移動不全の原因となる分子を同定し、その分子を活性化あるいは不活性化することにより培養系において軸索再生を誘発させる予定である。久保山は、脊髄損傷部位周辺で再生不全に陥った軸索先端部(dystrophic endball)を再現した培養系を用い、dystrophic endballが前方への移動を停止する分子的原因を探る目的で本研究を行ってきた。平成19年度までに、プロテインキナーゼA(PKA)阻害剤を処置することにより、dystrophic endballが前方への移動を再開することを明らかにした。さらにその際、dystrophic endballにおける細胞接着斑の形成不全が正常化することが示唆された。そこで平成20年度は、dystrophic endballが前方移動不全となる原因分子を、細胞接着斑に着目して同定することを目指した。P21-activated kinase(PAK)は、paxillinのリン酸化を介して細胞接着斑形成を調整するタンパクであり、PAKの活性はPKAにより負に制御される。Paxillinのリン酸化模倣体を神経細胞に発現させた結果、非リン酸化模倣体を発現させた場合に比べ、プロテオグリカン濃度勾配を横切る軸索の長さが増加(軸索再生)した。また、非リン酸化模倣paxillinを発現させた神経細胞に対してPKA阻害剤を処置しても軸索再生が促進されなかった。以上のことから、PKAの下流でpaxillinのリン酸化が制御される結果、dystrophic endballの前方移動が促進されることが示唆された。次年度は、dystrophic endballの軸索伸長不全・再開における細胞接着斑形成制御の役割を分子的に明らかにする予定である。さらに、リン酸化模倣paxillinを発現する神経細胞の軸索再性能を、脊髄損傷動物で解析する予定である。以上から、細胞接着の制御を介した軸索再生不全の機序について、分子レベル及び個体レベルで明らかにする。久保山は、脊髄損傷部位周辺(プロテオグリカン濃度勾配下)において再生不全に陥った軸索先端部(dystrophic endball)を再現した培養系を用い、dystrophic endballが前方への移動を停止する原因を探る目的で本研究を行った。これまでに、プロテインキナーゼA(PKA)阻害剤を処置することにより、dystrophic endballが前方への移動を再開することを明らかにした。さらに、細胞接着斑構成分子であるpaxillinのリン酸化模倣体を発現させた神経細胞では、非リン酸化模倣体を発現させた場合に比べ、プロテオグリカン濃度勾配を横切る軸索の長さが増加することを明らかにした。そこで本年度は、PKA阻害及びpaxillinのリン酸化によるdystrophic endballの前方移動再開の機序を明らかにすることを目指した。全反射蛍光顕微鏡を用いてpaxillinのライブイメージングを行い、細胞接着斑の形成制御を解析した。リン酸化模倣paxillinを発現させた神経細胞では、非リン酸化模倣paxillinを発現させた場合に比べ、正常な軸索終末部における細胞接着斑の形成・脱離のターンオーバー及び軸索伸長が増加した。Dystrophic endballにPKA阻害剤を処置した場合、処置前に比べて細胞接着斑の形成・脱離のターンオーバーが増加した。

一方、非リン酸化模倣paxillinを発現させたdystrophic endballにPKA阻害剤を処置した場合、処置前に比べて細胞接着斑の形成制御に変化がなく、前方移動再開も阻害された。以上、PKA阻害によりpaxillinがリン酸化され、細胞接着斑形成が制御されることにより、dystrophic endballが前方移動を再開すると考えられた。本研究により、軸索再生における細胞接着斑形成制御の重要性が初めて示された。
超低エネルギー中性子吸収反応における空間時間反転の研究

eV領域の運動エネルギーを持つ中性子が原子核と相互作用する際の主な過程は核の光学ポテンシャルによる弾性散乱と複合核を形成する共鳴吸収である。eV領域では共鳴吸収は分離が良く、一つ一つの吸収が充分別れている。原子核が重くなるにつれ、また中性子のエネルギーが高くなるにつれて分離の度合は悪くなっていく。共鳴吸収においては主に軌道角運動量が0である成分が寄与し(s波共鳴)、通常数kb程度の断面積を持つ。軌道角運動量が1であるような成分の吸収(p波共鳴)はs波共鳴に比べて断面積はきわめて小さく数bの程度である。このような小さなp波共鳴でも他のs波共鳴との分離が良ければ充分観測にかかる。ただしs波共鳴はきわめて大きいので、通常p波共鳴は隣にあるs波共鳴の裾野の上に乗っていることが多い。さて一般に複合核共鳴は弾性散乱などの直接過程に比べて相互作用している時間がきわめて長く、ある寿命を持つ複合核状態が保たれていると解釈できる。よってp波共鳴状態はパリティの異なるs波共鳴の成分と長時間共存することになる。その間にパリティの混合が積み重なり結果的に大きな空間反転の破れを示す場合がある。このようなp波共鳴においては空間反転と時間反転対称性を同時に破る相互作用も空間反転対称性の破れと同様に増幅されることが理論的に予測されており、時間反転対称性の破れの測定の新しい可能性として期待されている。空間反転対称性の破れの増幅機構の解明はそれ自身が重要であるだけでなく、時間反転対称性の破れの測定の可能性も含んでおり、きわめて重要な課題である。ロスアラモス研究所における共同実験においては、主に空間反転対称性の破れについてのきわめて高精度の測定実験を行った。測定は標的の中性子透過度を進行方向偏極中性子の偏極方向を反転しながら空間反転非保存量であるA_Lを求めることで行われた。ロスアラモス研究所では、これまで測定装置の高精度化を図ってきた。その第一は中性子偏極装置の性能向上である。中性子の偏極は偏極陽子フィルターを透過させることによって行っているが、性能向上のためにはまず陽子の偏極を向上させることが第一である。次により大きなフィルターを製作することによって、より多くの偏極中性子を利用できるようにすることである。第二には中性子検出器の有感領域を広げることである。これは高速で中性子を検出できる液体シンチレータを使用し、直径約1メータの大きなものを製作し、55本の光電子増倍管で読み出すというものである。われわれは中性子検出器について大きな貢献をした。その結果ロスアラモス研究所において空間反転対称性の破れをさまざまな標的のp波共鳴吸収においてこれまでの実験精度を約1桁ほど向上させて測定することに成功した。用いた標的はU、Th、In、Ag、Nbなどであり、現在データ解析中であるが、多数のp波について空間反転対称性の破れが新たに発見されている。空間反転対称性の破れの測定ではp波を感度良く測定する方法を採ることが望ましい。^<113>Cdが興味あるアイソトープとして実験に使用されることになったため、ガンマ線の検出器の開発も並行して行った。ガンマ線検出器はバックグラウンドを減らすために中性子源から約60メータ離れた場所に設置された。そのため数十メータにわたって中性子のspinを保持する必要があり、そのための磁場によるspinトランスポートを設置した。本年度の実験によって数々の核について高精度(10^<-3>以下)で空間反転対称性の破れを観測することに成功した。これによって空間反転対称性の破れの増幅効果の原子核質量数依存性が定量的に議論できると期待され、本研究にとって本質的な増幅機構の解明にきわめて重要な結果が得られたと認識している。測定は標的の中性子透過度を進行方向

偏極中性子の偏極方向を反転しながら空間反転非保存量であるA_Lを求めることで行われた。ロスアラモス研究所では、これまで測定装置の高精度化を図ってきた。その第一は中性子偏極装置の性能向上である。中性子の偏極は偏極陽子フィルターを透過させることによって行っているが、性能向上のためにはまず陽子の偏極を向上させることが第一である。次により大きなフィルターを製作することによって、より多くの偏極中性子を利用できるようにすることである。第二には中性子検出器の有感領域を広げることである。これは高速で中性子を検出できる液体シンチレータを使用し、直径約1メータの大きなものを製作し、55本の光電子増倍管で読み出すというものである。われわれは中性子検出器について大きな貢献をした。その結果ロスアラモス研究所において空間反転対称性の破れをさまざまな標的のp波共鳴吸収においてこれまでの実験精度を約1桁ほど向上させて測定することに成功した。用いた標的はU、Th、In、Ag、Nbなどであり、現在データ解析中であるが、多数のp波について空間反転対称性の破れが新たに発見されている。空間反転対称性の破れの測定ではp波を感度良く測定する方法を採ることが望ましい。^<113>Cdが興味あるアイソトープとして実験に使用されることになったため、ガンマ線の検出器の開発も並行して行った。ガンマ線検出器はバックグラウンドを減らすために中性子源から約60メータ離れた場所に設置された。そのため数十メータにわたって中性子のspinを保持する必要があり、そのための磁場によるspinトランスポートを設置した。本年度の実験によって数々の核について高精度(10^<-3>以下)で空間反転対称性の破れを観測することに成功した。これによって空間反転対称性の破れの増幅効果の原子核質量数依存性が定量的に議論できると期待され、本研究にとって本質的な増幅機構の解明にきわめて重要な結果が得られたと認識している。ある特定の原子核のp-波共鳴においてのみ、空間反転の非対称性が増幅されて見えることが高エネルギー研において発見された。特にLa核等が中性子を吸収した場合のp-波共鳴の吸収断面積に10%のヘリシティー非対称性が見出され、空間反転の破れが通常の約10^6倍増幅されていることが分った。そこでこの研究では、中性子強度の強いロスアラモスの中性子源を用いて捕獲γ線の測定を行い、空間反転の破れのメカニズムを解明しようと試みている。本年度はまず、中性子偏極用偏極フィルターの建設を行い、ほぼ完成させた。また分解能のよいγ線カウンターの建設を行い、それを用いた中性子捕獲γ線の測定を行った。これはBGOシンチレーターを用いて種々の核ターゲットで発生するγ線をとらえ、exitchannelにおける空間反転の破れを測定するものである。まず、このための2次元読み出し装置を完成させ、入射中性子のエネルギーと放出γ線のエネルギーを同時に精度よく測定することが可能となった。これを用いてはじめて^<139>La,^<113>Cd,^<111>Cdに低速中性子をあてたときに発生するγ線をそれぞれのレベルに分けて測定することが出来た。
HIV感染のセカンドレセプターを標的としたエイズ治療薬の開発

マングローブの一種であるRhizophoraceae属のR.apiculataの乾燥葉末のアルカリ抽出液を種々のエターノール濃度で遠心操作をして沈殿物を回収し、MTT試験で抗HIV活性を評価した。活性がみられた沈殿物をCellulofine GC-700mカラムクロマトグラフィーで分画して、高い抗HIV活性を示すRAPを精製した。RAPは、中性糖およびウロン酸をそれぞれ41.43%、17.24%含んでおり、HPLCでの分析の結果、ガラクトースを主成分とした多糖体であることが判明した。RAPは、MT-4細胞を感染標的とした実験系で、HIV-1感染による細胞傷害を6.52μg/mlの濃度で50%阻止(EC50)した。非感染MT-4細胞自身に対する50%細胞毒性(CC50)は1545.69μg/mlであり、有効係数(SI=CC50/EC50)が237であると評価できた。このRAPの抗ウィルス活性は、HIV-1のみならずHIV-2や、HIV-1株においても非ヌクレオシド系逆転写酵素阻害剤であるネビラピン耐性ウイルスでも同等の活性を示した。さらに、HIV-1感染においてコレセプターとして働くケモカインレセプター、CXCR4やCCR5を発現したCD4陽性HeLa(HIV-LTR/β-gal)細胞を用いたMAGI(multinuclear activation of galactosidase indicator)アッセイを行った結果、T細胞指向性HIV-1株にもマクロファージ指向性株にも同様に活性を示すことが分かった。その抗HIV作用機序としては、ウィルス吸着阻害であった。RAPの血液抗凝固作用(APTT)を調べてみたところ、500mg/mlという高濃度でもRAPによるAPTTの延長は全く認められなかった。これらの結果から、マングローブ抽出多糖体は強い抗HIV活性を示す反面、知られている副作用は認められない、有効性の高い自然薬になる可能性が示唆された。2) CCR5を標的としたファージクローンの抗HIV活性gp120/CD4とCCR5との結合を阻害し、M-tropic HIV-1の細胞への感染を阻止することを目的として、ファージディスプレイライブラリーから抗CCR5抗体(2D7)に特異的に結合するファージを単離し、それぞれのファージに含まれる15残基のペプチドモチーフの解析を試みた。ファージの単離は、2D7を鋳型としたバイオパンニング法により行った。ELISAによるスクリーニングの結果、9クローンのファージが2D7との結合活性を示し、それらのファージに含まれる15残基のアミノ酸配列をシークエンスした結果、3種類のモチーフに分類することができた。また、これらのモチーフは2D7との特異的結合活性を示したことから、CCR15様モチーフとして機能している可能性が示唆された。
（１→３）β－Ｄグルカン値の上昇と血液検査項目との関連

【背景】(1→3)β-Dグルカン(β-Dグルカン)測定はCandida血症の早期診断の補助検査法の1つである。我々の検討では、β-Dグルカンが100pg/mL以上では患者の死亡率が上昇していた。しかし、β-Dグルカンが11pg/mL(カットオフ値)から100pg/mL未満のCandida血症例においては、その測定値と病態の関連は明らかでない。【目的】Candida血症におけるβ-Dグルカン値の上昇と他の血液検査項目との関連について検討する。【方法】本研究は2007年から2013年の6年間に金沢大学附属病院において血液培養からCandida属が検出された症例のうちβ-Dグルカン・その他の血液検査が同日測定された87例を対象とした。これらについてβ-Dグルカン値と死亡率のROC解析、他の血液検査項目(白血球数、血小板数、リンパ球数、ALB、CRP :計5項目)との比較検討を行った。【結果】ROC解析の結果、β-Dグルカン値58.4pg/mLにおいてYouden Index0.339(感度62.5%、特異度71.4%)であった。そこで、1<11≦58.4pg/mL、2>58.4pg/mLの2群にわけ、血液検査結果を比較したところ、ALB、CRPにおいて有意な差が認められた(有意水準p<0.05)。2は1に対しALB低値、CRP高値であった。【まとめ】Candida血症におけるβ-Dグルカン値の上昇と他の血液検査項目との関連について検討を行った。その結果、β-Dグルカン値が58.4pg/mLを超えると死亡率が高く、ALB低値、CRP高値傾向であることが分かった。β-Dグルカンは患者の重症度と関連しており、予後予測の指標となることが示唆された。また他の血液検査と組み合わせることで、Candida血症の早期診断・治療の補助検査として更なる有用性が期待される。
光をトリガに用いる電力機器用酸化物超電導体スイッチング素子の基礎研究

1.光を照射することにより,酸化物超電導体の臨界電流は低下し,発生電圧が増加する,即ち超電導-常電導転移が促進される.転移促進効果のスペクトル特性を求めたところ,紫外領域の効果が大きいことが分かった.別に求めた試料自体の光吸収特性は,実験の波長領域でほぼ一定であることから,非熱的な機構の可能性が示唆された.2.光照射下の電流-電圧特性は,非照射時に比して,大きなバラツキを持ち,バラツキは光強度とともに増加する.光照射下での試料の温度上昇は計算機シミュレーションから0.5K程度と評価できた.加圧により液体窒素温度を0.5K程度上昇させても光照射なしではバラツキは増加しない.このことから,光照射効果の発生機構として,光によるピン止め磁束の脱出促進などの電子的機構が有力と考えられる.3.強度が一定のパルス光を照射し,電流値を増加させた場合,V-I特性の上昇分電圧は大きくなるが,遅れ時間,ピーク時間はほぼ変化しない.一方,一定電流の下で光強度を増加させた場合,上昇分電圧は大きくなり,遅れ時間,ピーク時間は短くなる.同一試料であっても,光の照射部位によって発生電圧が異なることが分かった.4.YBCO薄膜試料のパルス光に対する応答は大きくかつ極めて速く,幅50μsのパルス光に対しては,10μs程度の遅れで追従することが明かとなった.試料が薄いほど光の影響を受ける試料体積の割合が増し,拘束されている磁束が動きやすくなるためと考えられる.5.外部磁界を印加した状態で,V-I特性に及ぼす光照射の効果を測定したところ,光照射による電圧上昇は,暗中での発生電圧値が同じ場合を比較すると,500ガウスまででは磁界強度にはあまり依存しないことが分かった.また,発生電圧のばらつきは磁界強度が大きくなると減少する傾向にある.1.光を照射することにより,酸化物超電導体の臨界電流は低下し,発生電圧が増加する,即ち超電導-常電導転移が促進される.転移促進効果のスペクトル特性を求めたところ,紫外領域の効果が大きいことが分かった.別に求めた試料自体の光吸収特性は,実験の波長領域でほぼ一定であることから,非熱的な機構の可能性が示唆された.2.光照射下の電流-電圧特性は,非照射時に比して,大きなバラツキを持ち,バラツキは光強度とともに増加する.光照射下での試料の温度上昇は計算機シミュレーションから0.5K程度と評価できた.加圧により液体窒素温度を0.5K程度上昇させても光照射なしではバラツキは増加しない.このことから,光照射効果の発生機構として,光によるピン止め磁束の脱出促進などの電子的機構が有力と考えられる.3.強度が一定のパルス光を照射し,電流値を増加させた場合,V-I特性の上昇分電圧は大きくなるが,遅れ時間,ピーク時間はほぼ変化しない.一方,一定電流の下で光強度を増加させた場合,上昇分電圧は大きくなり,遅れ時間,ピーク時間は短くなる.同一試料であっても,光の照射部位によって発生電圧が異なることが分かった.4.YBCO薄膜試料のパルス光に対する応答は大きくかつ極めて速く,幅50μsのパルス光に対しては,10μs程度の遅れで追従することが明かとなった.試料が薄いほど光の影響を受ける試料体積の割合が増し,拘束されている磁束が動きやすくなるためと考えられる.5.外部磁界を印加した状態で,V-I特性に及ぼす光照射の効果を測定したところ,光照射による電圧上昇は,暗中での発生電圧値が同じ場合を比較すると,500ガウスまででは磁界強度にはあまり依存しないことが分かった.また,発生電圧のばらつきは磁界強度が大きくなると減少する傾向にある.平成3年度の研究によって得られた新たな知見は以下のようにまとめられる。なお,試料としては,浮遊帯溶融法にて作製したBi_2Sr_2CaCu_2O_yの試料(13mmx 0.5mm×18mm)を用いた。1.ハロゲン光源からの光を照射することにより,Bi系酸化物超電導体の臨界電流は低下し,発生電圧が増加すること,既ち超電導ー常電導転移が促進されることを解認した。また,この効果は試料の受光面績が大きいほど著しいことが分かった。2.試料に照射する光のスペクトルを色ガラスフイルタにより変化させて,転移促進効果のスペクトル特性を求めたところ,紫外領域の効果が大きいことが分かった。別に求めた試料自体の光吸収特性は,実験の波長領域でほぼ一定であることから,非熱的な機構の可能性が示唆された。3.幅1msec以下のパルス光に対しも,臨界電流の低下や発生電圧の増加が認められた。かなり速い応答速度が期待できよう。4.光照射下の電流ー電圧特性は,光を照射しないときのそりに比して,大きなバラツキ(標準偏差にして約10倍)を持つことが分かった。光照射下で試料の温度上昇が無視できるほど小さいことを考え合わせると,光照射効果の発生機構として,光による超電動電子対の破壊やピンどめ磁束の脱出促進と言った電子的機構が有力と考えられる。光を照射することにより,Bi系化物超電導体の臨界電流が低下し,超電導ー常電導転移が促進されることは既に平成3年度に確認した。また,転移促進効果は紫外領域の光で大きいことから,非熱的な機構の可能性が示唆された。平成4年度に新たに得た結果をまとめると以下の様になる。

1.光照射下の電流ー電圧特性は,非照射時に比して,大きなバラツキ(標準偏差にして約10倍)を持つことが分かった。光照射下で試料の温度上昇は計算機シミュレーションから0.5K程度と評価できた。加圧により液体窒素温度を0.5K程度上昇させても光照射なしではバラツキは余り増加しない。このことから,光照射効果の発生機構として,光によるピン止め磁束の脱出促進などの電子的機構が有力と考えられる。2.パルス光に対して,臨界電流の低下や発生電圧の増加が認められた。ただし時間遅れがみられ,幅0.6msのパルス光に対しては,電圧上昇波形は立ち上がり4ms,立ち下がり17msとなる。この結果はピン止め中心から脱出した磁束が磁気圧力により加速された後,再び捕獲されるモデルによっても説明できる。3.YBCO薄膜においても光照射により,常電導転移が促進されることを確認した。YBCO薄膜試料のパルス光に対する応答は極めて速く,幅50μsのパルス光に対しては,10μs程度の遅れで追従することが明かとなった。この結果は光トリガ超電導スイッチング素子が実用的に極めて有望であることを示唆する。前年度までの研究において,光照射により超電導-常電導転移が促進されることが,Bi系バルク試料およびY系薄膜試料で確認された.また,その効果は紫外領域で強いこと,磁束フロー状態での発生電圧のばらつきが光照射下で顕著に増大することなどから,光照射効果のメカニズムとして熱的なものではなく電子的なものが有力と考えられた.平成5年度に得た結果をまとめると以下のようになる.1.外部磁界を印加した状態で,V-I特性に及ぼす光照射の効果を測定した.1.1暗中でのV-I特性は磁界強度の上昇とともに劣化する.1.2光照射による電圧上昇は,暗中での発生電圧値が同じ場合を比較すると,500ガウスまででは磁界強度にはあまり依存しないことが分かった.1.3発生電圧のばらつきは磁界強度が大きくなると減少する傾向にある.これから光照射により強いピン止め点がはずされ,なだれ的磁束フローが引き起こされるモデルを提案した.2.一定電流通電時のパルス光に対する応答特性を検討した.2.1一定強度の光照射下で電流値を増加させた場合、V-I特性の上昇分電圧は大きくなるが,遅れ時間,ピーク時間はほぼ変化しない.一方,一定電流の下で光強度を増加させた場合,上昇分電圧は大きくなり,遅れ時間,ピーク時間は短くなる傾向にある.2.2同一試料であっても,光の照射部位によって発生電圧が異なることが分かった.試料の不均質性と内部の磁束分布の偏りによるものと考えられる.2.3Y系薄膜試料の電圧応答波形は,バルク試料のそれより大きく,短時間で終了する.試料が薄いほど光の影響を受ける試料体積の割合が増し,拘束されている磁束が動きやすくなるためと考えられる.
オーダーメイド医療に基づいたIgA腎症の治療戦略

IgA腎症に関連した、LセレクチンTGTハプロタイプ(Takei T eta1.Am J Hum.Genet.70:781-786,2002)では野生型に比べ有意に白血球接着能の減少を認め、さらには白血球表面上のLセレクチン発現低下を認め、IgA腎症の発症・進展に重要な因子であることが証明された(Takei T, et. al.Immunogenetics,58:355-361,2006)。この白血球接着現象の差異にアンジオテンシン変換酵素阻害薬、アンジオテンシン受容体拮抗薬、スタチンなどの既存の薬剤が及ぼす影響を調べ、臨床データと照らし合わせIgA腎症におけるオーダーメイド医療を実現させることが本研究のねらいである。前述の薬剤は白血球接着因子を抑制するという報告が最近、認められている。まず、臨床的差異を調べるため、IgA腎症患者において、これらの薬剤の投与群と非投与群でIgA腎症の疾患活動性がどのように抑制されるかを検討した。正常血圧のIgA腎症患者に少量のアンジオテンシン受容体拮抗薬を投与した群では、血圧非依存性に尿蛋白の減少が図られた。IgA腎症LセレクチンTGTハプロタイプ患者と野生型患者間で尿蛋白減少の程度についての差異はみられなかったが、症例数を増やし今後も検討する。また、白血球接着現象の差異について、患者の白血球およびLセレクチンの野生型と変異型(P238S)をそれぞれ白血球系細胞へ強発現させた上でのアンジオテンシン受容体拮抗薬存在下での実験を施行している。IgA腎症遺伝子多型解析において疾患関連遺伝子として同定した細胞接着因子L-セレクチン及びE-セレクチン遺伝子(Takei T et al., Am.J.Hum.Genet. 70:781-786, 2002)のTGTハプロタイプの機能解析を行った。野生型であるCACとIgA腎症関連TGTハプロタイプで白血球接着現象ならびにレポーターアッセイによるLセレクチンの発現の差異を調べた。IgA腎症関連TGTハプロタイプでは野生型に比べ有意に白血球接着能の減少を認め、さらには白血球表面上のLセレクチン発現低下を認め、IgA腎症の発症・進展に重要な因子であることが証明された(Takei T et al., Immunogenetics, 58:355-361, 2006)。この白血球接着現象の差異にスタチン系薬剤やアンジオテンシン変換酵素阻害薬(ACEI)などの既存の薬剤が及ぼす影響を調べ、さらには臨床データと照らし合わせIgA腎症におけるオーダーメイド医療を実現させることが本研究のねらいである。IgA腎症セレクチンハプロタイプに合わせて作成した組換えアデノウイルスを用いて白血球内皮細胞間の接着現象における薬剤の影響を検討した。Lセレクチンの野生型と変異型(P238S)をそれぞれ白血球系細胞であるHL60細胞ないしTHP-1細胞へ強発現させる。一方、Eセレクチンの野生型と変異型(H468Y)はそれぞれ血管内皮細胞(HUVEC)上に強発現させ、生理的に近い動的な条件下をつまり還流型細胞接着装置を用いて白血球・内皮細胞間に及ぼす接着現象の影響を野生型とIgA腎症に多い変異型での差異がアンジオテンシン変換酵素阻害薬、アンジオテンシン受容体拮抗薬、スタチン系薬剤によって如何に変化するかを比較検討している。
機械受容体刺激による心内膜内皮細胞の細胞応答変化と心不全発症機序との関連性

ブタと若齢(5週齢)、加齢(100週齢)ラットの心内膜内皮細胞(EEC)に機械的刺激として、Shear stress(壁ずり応力)や静水圧(Transmural pressure)を負荷し、EEC由来循環調節物質産生能への影響と、心機能の加齢変化を検討した。<結果> 1.ブタEECにずり応力や静水圧を負荷した後、EECのプロスタサイクリン(PGI_2)産生能は負荷強度依存的に増加した。ずり応力負荷によるPGI_2産生能の増加は、細胞内CaストアーからのCa遊離が阻害されることにより、有意に低下した。さらに、その増加率は、加齢により減少した。2.加齢とともに、ラットEECの増殖能の低下と細胞の肥大化が認められ、さらにPGI_2産生能が減少した。3.走査型電子顕微鏡観察では、モノクロタリン投与右心室不全若齢ラットの右心室EECは肥大化が認められた。4.Langendorff&Working装置を用い、若・加齢ラットの心機能を測定すると、加齢ラットでは若齢ラットに較べ、心拍出量、大動脈流量、心拍数が有意に減少した。ずり応力負荷は細胞内CaストアーからCaを遊離させ、PGI_2産生能を増加させるものと思われる。心機能は加齢に伴い低下し、加齢ラットでは心不全の予備状態となっていることが明かとなった。右心室不全ラットでは、右心室肥大に伴うEECの肥大化が認められ、さらに機械的受容体刺激によるEECでのPGI_2産生能が加齢と共に低下することから、心内膜機能低下が心不全発症に関与する可能性が示唆された。本研究課題は実験材料として、ブタと若齢(5週齢)、老齢(100週齢)ラットの心内膜内皮細胞(EEC)を用いる2年間の継続研究である。本年度は初年度であり、ブタと若齢ラット各々のEECに機械的刺激としてShear stress(壁ずり応力)を負荷し、EEC由来循環調節物質の産生能への影響を検討した。〈結果〉1)ブタEECにずり応力(0.2,1,4,6dyne/cm^2)を負荷した後、灌流液中のProstacyclin(PGI_2)産生能を測定すると、負荷強度依存的にPGI_2産生能は増加した。しかし、その産生能には、左/右心室EEC間での有意差が認められなかった。2)ブタEECに6dyne/cm^2のずり応力を負荷し、細胞内CaストアーからのCa遊離を阻害する8-(dimetilamino)octy13,4,5-trymethoxybenzoate bydrochloride(100uM)存在下で、EECのPGI_2産生能を測定すると、その産生能は66%有意に低下した。しかし、灌流液中にCaキレート剤のEGTA(2mM)をくわえても、その影響は認められなかった。3)ブタ、ラット共に、EECに6dyne/cm^2のずり応力を負荷しても、灌流液中の一酸化窒素量には影響が認められなかった。これらの結果から、ずり応力負荷は細胞内CaストアーからCaを遊離させ、Prostacyclin産生能を増加させるものと思われる。また、血管内皮細胞では、ずり応力負荷により一酸化窒素産生能は増加するが、心内膜内皮細胞ではその影響はみられなかった。これは心機能への一酸化窒素による影響を反映した結果であるかもしれない。本研究課題は実験材料として、ブタと若齢(5週齢)、加齢(100週齢)ラットの心内膜内皮細胞(EEC)を用いる2年間の継続研究である。

本年度は最終年度であり、若・加齢ラット各々のEECに機械的刺激としてShear stress(壁ずり応力)と静水圧(Transmural pressure)を負荷し、EEC由来循環調節物質の産生能への影響と、加齢変化を検討した。また、Langendorff & Working装置を用い、心機能に及ぼす心内膜の影響について検討を試みた。<結果>1、Shear stressの増加や、静水圧負荷により、EECのProstacyclin(PGI_2)産生能は増加し、その加齢ラットの増加率は、若齢ラットにくらべ減少した。2、加齢ラットでは、EECの増殖能の低下と細胞の肥大化が認められ、さらにPGI_2産生能が減少した。3、走査型電子顕微鏡観察では、モノクロタリン投与右心室不全若齢ラットの右心室EECは肥大化が認められた。4、Langendorff & Working装置を用い、若・加齢ラットの心機能を測定し、その比較検討を行った。加齢ラットでは若齢ラットに較べ、心拍出量、大動脈流量、心拍数が有意に減少した。心機能は加齢に伴い低下し、加齢ラットでは心不全の予備状態となっていることが明かとなった。機械的受容体刺激による心内膜PGI_2産生能が加齢と共に低下することから、心内膜機能低下が心不全発症に関与する可能性が示唆された。