hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
中小・ベンチャー企業の財務政策と経営戦略ならびにガバナンス構造に関する研究

平成17年度は、平成16年度に実施した研究を拡張して、中小・ベンチャー企業が親会社をはじめとする支配的大株主を有する場合のコーポレートガバナンスと業績への影響、ならびに親会社等の財務状況の当該企業への影響に関して、主に研究を行った。支配的大株主が事業会社である場合、すなわち当該企業が親会社を有する場合、当該企業の経営は親会社によるガバナンスの影響を大きく受けることになるが、その結果は必ずしも子会社の少数株主の利害に沿うものになるとは限らない。なぜなら、親会社にとっては企業グループ全体での企業価値最大化が目的となり得るため、企業グループ内取引や企業グループ内の経営資源配分を通じて、子会社にとっては望ましくない経営を強いられる可能性が存在するためである。だが、子会社が上場している場合、株価という形で市場から日々評価されるため、親会社の行動に一定の歯止めがかけられる可能性がある。実証分析の結果、東証2部や大証2部などの既存市場に上場している子会社については、親会社の持株比率が高いほど収益率が高くなっており、親会社は子会社にとって不利益な行動を強いるというよりは、むしろ親会社のコミットメントの強さを市場が評価していると解釈できる結果が示された。また、親会社が子会社の後ろ盾となり得るのであれば、親会社の財務状態が良好であるほど、有効に機能すると考えられる。実証分析の結果、親会社の収益変動リスクが小さいほど、子会社が新規公開する際の初期収益率は低いことが示され、公開価格は高めに決定されていることが示唆された。上記の分析結果から、上場子会社について、親会社によるコミットメントを市場が評価しているが、同時に親会社の経営上のリスクについても市場は注視していることが明らかになった。平成16年度は、中小・ベンチャー企業について、当該企業が親会社を有する場合、あるいは企業グループに属している場合について、主に研究を行った。日本の大企業は、自らが既に公開している場合であっても、その子会社やグループ会社を新規公開させることが珍しくない。欧米においては、既公開の親会社が、支配権を維持したまま子会社を新規公開させることは、あまり行われない。新規公開させるのであれば、親会社株主に子会社の株式を割り当てるスピンオフのような方法が用いられることが一般的と考えられる。親会社が支配権を維持したまま、その子会社等を公開させることは、新規公開によって新規に株主となった者と親会社ならびに親会社株主との利益相反を引き起こす可能性がある。なぜなら、子会社の企業価値最大化と、グループ企業全体の価値最大化は、必ずしも一致するとは限らないからである。一方で、親会社が存在する場合には、子会社が経営危機に陥った際に、後ろ盾となって救済がなされる可能性がある。従って、中堅の中小・ベンチャー企業が新規公開を行う場合について、親会社が存在する場合と存在しない場合の差異については、実証的に明らかにされるべき課題と考えられる。中小・ベンチャー企業に分類される企業であっても、財務政策ならびに経営戦略上、極めて重要な課題である新規公開と、それに至る企業経営の過程は、親会社の有無によって、大きく異なることが予想される。本年度の研究では、なかでも新規公開時に焦点を当てて、親会社と子会社の関係を分析した。実証分析の結果、親会社のコントロール権が強く、また親会社の経営上のリスクが子会社の少数株主に波及する可能性が大きいほど、そのリスクを反映して新規公開時の公開価格がより低めに設定されやすいことが示された。また、長期的な視点でみると、相対的に企業規模の小さい新興市場では流動性が重要であるのに対し、比較的企業規模の大きな既存市場では親会社によるガバナンスの効果が表れやすいことが明らかになった。これらの結果は、支配的大株主としての親会社が、子会社の少数株主との問に深刻な利益相反問題を引き起こす恐れは小さい可能性を示唆している。
Notchシグナルによる骨芽細胞の分化誘導とその臨床応用への展望

未分化間葉系細胞から骨芽細胞への初期のコミットメントにおいて、Runx2およびOsterixが重要であると考えられているが、骨芽細胞分化および骨芽細胞の機能を誘導するメカニズムについてはいまだ不明な点が多い。今回の研究において、さまざまな細胞の分化さらに器官、組織の発生に重要な働きをもつNotchが、未分化間葉系細胞の骨芽細胞への分化および石灰化においても関与していることを明らかにした。すなわち、Notchの細胞内ドメイン(NICD)をトランスフェクトすることによりNotchのシグナルを強制的に入れることにより、骨芽細胞としてのフェノタイプを強く示す骨髄ストローマ細胞由来のKUsaA1細胞において、骨芽細胞系のマーカー発現が抑制された。また、in vivoにおける硬組織形成も強く抑制された。すなわち、Notchは骨芽細胞の分化あるいは石灰化において抑制的に働いていることが明らかになった。この細胞の遺伝子発現をアレイにて解析したところLef1発現が抑制されていたことから、NotchシグナルによるWntシグナルの抑制が今回の結果と関連している可能性が推察される。次に、Notchシグナルを抑制することにより骨芽細胞分化および石灰化が促進できるのではないかとの仮説に基づき、Notchシグナルをブロックすると報告されているCBF1/RBP-JκをKusaA1細胞にトランスフェクトし、その効果について検討した。その結果、NICDの場合とは逆にKusaA1紬胞は骨芽細胞としてのフェノタイプをより強く発現するとともに、in vivoにおいてオリジナルのKusaA1細胞に比べてより大きな硬組織を形成することが明らかとなった。Notchのシグナルをコントロールすることにより、骨芽細胞分化を調節することができ、ひいては硬組織の形成を誘導あるいは抑制することが出来るものと期待される。骨粗鬆症における治療方法は、骨吸収の抑制にターゲットが向けられていた。しかし、骨形成が促進されないことには、根本的な治療は望めない。また、顎口腔領域の外科手術に伴って生じる骨欠損に、骨組織を誘導する、さらには骨組織を再建することは、長年のテーマであるが、骨形成を促進するシステムの開発なくしては実現不可能である。ところで、組織の再生において幹細胞(stem cell)を用いる、あるいはstem cell様の細胞を誘導することは必須であるが、stem cellにおいてはNotchの発現が認められており、Notchはstem cellの維持あるいは分化、機能に重要な働きを担っているものと思われる。これまでに、神経系、免疫系の細胞の分化においてNotchが関与しているとの報告は多数あるが、骨芽細胞の分化においてNotchが関与するとの報告はまだない。しかし、我々は骨芽細胞Kusa AにおいてNotchが発現していることを、RT-PCRおよびNorthern Blottingにて確認した。さらに、Notchのconstitutive active formである細胞内ドメイン(Notch Intra-Cellular Domain : NICD)をKusa Aに、transfectionしstable line(Kusa A NICD>を樹立した。Kusa A NICDにおいては、ALPase活性、オステオカルシン発現をはじめとする骨芽細胞のフエノタイプ発現は全般的に抑制されており、さらにin vivoおよびin vitroの石灰化能も大きく抑制されていた。以上より、骨芽細胞の機能をNotchは全般的に抑制しており、逆にNotchの機能を制御することにより骨芽細胞の石灰化をコントロールできる可能性が示唆された。未分化間葉系細胞から骨芽細胞への初期のコミットメントにおいて、runt-related transcription factor 2/core binding factor 1およびOsterixが重要であると考えられているが、骨芽細胞分化および骨芽細胞の機能を誘導するメカニズムについてはいまだ不明な点が多い。

すなわち、Notchの細胞内ドメイン(NICD)をトランスフェクトすることによりリセプターとして機能するNotchのシグナルを強制的に入れることにより、骨芽細胞としてのフェノタイプを強く示す骨髄ストローマ細胞由来のKusaA1細胞において、骨芽細胞系のマーカー発現が抑制された。また、in vivoにおける硬組織形成も強く抑制された。すなわち、Notchは骨芽細胞の分化あるいは石灰化において抑制的に働いていることが明らかになった。それでは、Notchシグナルを抑制することにより骨芽細胞分化および石灰化が促進できるのではないか、との仮説に基づき、Notchシグナルをブロックすると報告されているCBF1/RBP-JκをKusaA1細胞にトランスフェクトし、その効果について検討した。その結果、NICDの場合とは逆にKusaA1細胞は骨芽細胞としてのフェノタイプをより強く発現するとともに、in vivoにおいてオリジナルのKusaA1細胞に比べてより大きな硬組織を形成することが明らかとなった。Notchのシグナルをコントロールすることにより、骨芽細胞分化を調節することができ、ひいては硬組織の形成を誘導あるいは抑制することが出来るものと期待される。(776字)
骨髄異形成症候群や先天性造血障害を誘発するエンドソーム交通異常の解明

モノソミー7は、小児から高齢者まで、ほとんど全ての病型の骨髄系腫瘍で高頻度に遭遇する染色体異常であるが、その中核となるのは染色体異常としてモノソミー7のみを有する高齢者の孤発例である。一般にその予後は不良であることが知られているが、治療法の開発には、責任遺伝子の同定とその機能解析が必須である。そこでわれわれは、長年にわたりモノソミー7の責任発がん抑制遺伝子の単離を試みてきた。この努力は、Samd9とSamd9L(以下、Samd9/L)両遺伝子の同定という形で結実し(Nagamachi, Cancer Cell 2013)。すなわち、エンドソーム蛋白質をコードするSamd9/Lのヘテロ欠失マウスの半数以上が老年期にMDSを発症することが示されたのである。しかも注目すべきことに、この数年、MIRAGE症候群など、Samd9/L遺伝子の機能亢進型変異を持つ先天性造血不全が相次ぎ報告された。これらの患者から7q-を伴う幼児MDSが多発し、この際に異例なことに、変異を持った7番染色体が脱落し、正常遺伝子が残存する、revertant mosaicismと呼ばれる状況が出現したした。これはMDS発症の要因が、Samd9/Lの欠損や変異に起因する相対的な増殖力の違いであることを示唆する。Samd9/Lが調節している初期エンドソーム交通異常、特に受容体リサイクル代謝異常が、MDSや先天性造血障害を誘発すると思われるので、モデルマウスを作成し、そのメカニズムを検討する。増殖力の弱いMDS細胞が造血スペースを占拠する「MDSの謎」を解く糸口になると考えられる。われわれはCrsp/CAS9法を用いて、MIRAGE症候群に相当するSamd9L遺伝子の点突然変異を持つ遺伝子改変マウスを作成した。作製したSamd9L変異マウスは、概ねメンデルの法則に従って誕生したが、活発ながらも生直後より体格が小さく、貧血、精巣や卵巣の萎縮、腎臓形成不良など、MIRAGE症候群に見られる多臓器機能不全症状を忠実に反映し、全匹が半年程度で死亡した。貧血は小球性低色素性であったが、血清鉄濃度の低下はなく、骨髄細胞のギムザ染色やTer119/CD71によるFACS解析では、前赤芽球好塩基性赤芽球段階での分化障害が認められた。そこで、分化障害の原因を探るため、サイトカイン受容体やトランスフェリン受容体の代謝を検討したところ、受容体の取り込みが正常の半分以下に減少していることを見出した。一方、これまでにわれわれは、Samd9/Lが初期エンドソームの融合を担う蛋白質であるEEA1と結合することを示してきた。分子生物学的な観点からのSamd9/L機能のアプローチをさらに推進するために、免疫沈降で共沈してきた蛋白質を質量解析器で同定したところ、いくつかの興味深い蛋白質がSamd9/Lと結合することを見出した。昨年度までの研究により、エンドソーム蛋白質Samd9/Lは受容体の代謝を制御していることが判明し、EEA1など、そのパートナーとなる蛋白質の候補の同定が進んだ。そこで今後は、早期の論文作成を念頭に、1マウス個体レベルでの検討の最終段階を行う。述べてきたように、われわれはヒト7q-/MDSに相当する病態をほぼ必発するSamd9L欠損マウスと、MIRAGE症候群のモデルマウスであるSamd9Lの機能亢進型点変異マウスを作成したが、正常同胞を加えた3種類のマウスの受容体の取り込みや骨髄細胞の分析を、骨髄移植(競合的骨髄再構築能テスト)やcobble stone formation assayなどの手法を適宜用いておこない、MDS発症に至る個体・細胞レベルのメカニズムを解明する。これに加えて、2Samd9/Lの分子レベルの機能を解析するために、Samd9/Lの変異体が受容体代謝に与える影響の分析を進める。モデルマウスの腎病変は、免疫組織化学染色や免疫蛍光染色など形態学的な解析を行うのに至適であり、また比較的容易に採取できる尿細管上皮初代培養細胞により、サイトカイン添加後の受容体の動的な解析も一定程度可能である。Samd9/Lとの結合パートナー蛋白質は、EEA1を始め、興味深い蛋白質が多数同定されてきているので、これらの蛋白質を発現させ、分子メカニズムを解明する。

これはMDS発症の要因が、Samd9/Lの欠損や変異に起因する相対的な増殖力の違いであることを示唆する。Samd9/Lが調節している初期エンドソーム交通異常、特に受容体リサイクル代謝異常が、MDSや先天性造血障害を誘発すると思われるので、モデルマウスを作成し、そのメカニズムを検討する。増殖力の弱いMDS細胞が造血スペースを占拠する「MDSの謎」を解く糸口になると考えられる。われわれはCrsp/CAS9法を用いて、MIRAGE症候群に相当するSamd9L遺伝子の点突然変異を持つ遺伝子改変マウスを作成した。作製したSamd9L変異マウスは、概ねメンデルの法則に従って誕生したが、活発ながらも生直後より体格が小さく、貧血、精巣や卵巣の萎縮、腎臓形成不良など、MIRAGE症候群に見られる多臓器機能不全症状を忠実に反映し、全匹が半年程度で死亡した。貧血は小球性低色素性であったが、血清鉄濃度の低下はなく、骨髄細胞のギムザ染色やTer119/CD71によるFACS解析では、前赤芽球好塩基性赤芽球段階での分化障害が認められた。そこで、分化障害の原因を探るため、サイトカイン受容体やトランスフェリン受容体の代謝を検討したところ、受容体の取り込みが正常の半分以下に減少していることを見出した。一方、これまでにわれわれは、Samd9/Lが初期エンドソームの融合を担う蛋白質であるEEA1と結合することを示してきた。分子生物学的な観点からのSamd9/L機能のアプローチをさらに推進するために、免疫沈降で共沈してきた蛋白質を質量解析器で同定したところ、いくつかの興味深い蛋白質がSamd9/Lと結合することを見出した。昨年度までの研究により、エンドソーム蛋白質Samd9/Lは受容体の代謝を制御していることが判明し、EEA1など、そのパートナーとなる蛋白質の候補の同定が進んだ。そこで今後は、早期の論文作成を念頭に、1マウス個体レベルでの検討の最終段階を行う。述べてきたように、われわれはヒト7q-/MDSに相当する病態をほぼ必発するSamd9L欠損マウスと、MIRAGE症候群のモデルマウスであるSamd9Lの機能亢進型点変異マウスを作成したが、正常同胞を加えた3種類のマウスの受容体の取り込みや骨髄細胞の分析を、骨髄移植(競合的骨髄再構築能テスト)やcobble stone formation assayなどの手法を適宜用いておこない、MDS発症に至る個体・細胞レベルのメカニズムを解明する。これに加えて、2Samd9/Lの分子レベルの機能を解析するために、Samd9/Lの変異体が受容体代謝に与える影響の分析を進める。モデルマウスの腎病変は、免疫組織化学染色や免疫蛍光染色など形態学的な解析を行うのに至適であり、また比較的容易に採取できる尿細管上皮初代培養細胞により、サイトカイン添加後の受容体の動的な解析も一定程度可能である。Samd9/Lとの結合パートナー蛋白質は、EEA1を始め、興味深い蛋白質が多数同定されてきているので、これらの蛋白質を発現させ、分子メカニズムを解明する。
エントロピー力で駆動される高分子結晶の空隙への分子吸蔵

高分子結晶sPS (syndiotactic polystyrene)の空隙への選択的分子吸蔵を調べるため、初期状態であるキャストフィルムを作成した際に、基盤であるガラスプレート面に対して、sPS結晶が配向していることをsPSフィルムのX線回折測定により見出した。これまでの先行研究においては、配向については記述が無かったので、少なくとも今後は配向があるものとして、研究を進める必要がある。また、選択的吸着については、前提条件として、ヘキサンとクロロホルム等の溶媒が、理想的に混合していることを実験的に確認した上で考察を行いたいと考え、溶媒のみの赤外吸収測定を行った。その結果、吸蔵のゲスト候補となる分子を混合させた溶媒が、理想的な混合溶液(理想溶液)に近いことを確認できた。従って、概ね理想的な混合溶液から、sPSフィルムは、分子鎖の長い分子を選択的に吸着していることになり、実験の前提条件を明確にできた。高分子P4MP1 [poly(4-methyl-1-pentene)]については、その溶融体がヘリウムガスを吸蔵することを、間接的にではあるが実験的に明らかにし、いわば多孔性液体になっていることを提唱する論文を発表した。これまでの実験的結果を理解するための理論計算を、連携研究者である九州大学理学部化学科の秋山良准教授らが行った。具体的には、液体の積分方程式理論と2成分Asakura-Oosawa理論を用いた計算を行い、表面への吸着選択性を計算した。さらに、2成分Asakura-Oosawa理論を用いて高分子結晶の空隙を意識した管内での計算を進め、吸着量について実験結果と定性的に一致する計算結果を得ることができた。現在、sPSフィルムにおけるようなナノスケールの空洞に対する選択的吸蔵の計算を積分方程式理論を用いて行う準備を進めている。sPSフィルムを浸漬するクロロホルムとヘキサン等の混合溶液が、概ね理想的な混合(理想溶液)に近いことを実験的に確認することで、選択的吸着現象は、いわば理想的な混合状態から、分子鎖の長い分子を選択的に吸着していることになり、前提条件を明確にできた。また、P4MP1については、溶融体がいわば多孔性液体になっているということを提唱する論文を発表し、日本物理学会のシンポジウム講演においても、この論文の結果を含む、一連の高分子溶融体に関する実験結果を発表することができた。2018年度は、これまでに得られた実験的な、また理論的な結果をそれぞれ論文発表し、国際会議を含むいくつかの学会において発表する予定である。また、2018年3月に、研究代表者の所属大学内において、高圧下のX線回折実験を行うことができる環境に恵まれたので、高圧容器回りの消耗品(ダイヤモンドやタングステンカーバイドなど)を整備し、高圧下のX線回折測定へと発展させる計画である。圧力を制御することで、特定の溶媒の数密度を一定に保つことができ、秋山准教授らの排除体積効果の計算結果と直接比較することが可能となる。高分子結晶sPS (syndiotactic polystyrene)は、空隙の多い構造を有し、その空隙に各種分子を吸蔵することが知られている。sPSフィルムを各種アルカンの混合溶液に浸漬すると、鎖長の長い分子のほうが選択的に吸蔵される現象が報告されている。我々は、その理由を解明するため、このように既に知られている現象を、実験で再現することから始めた。sPS結晶のフィルムを、クロロホルムとヘキサン、または、クロロホルムとデカンの混合溶液に浸漬し、これらの分子の吸蔵量を赤外分光法により調べた。その結果、ヘキサンよりも、デカンを吸蔵する顕著な傾向を観測でき、過去の文献にある結果を確認できた。特に、クロロホルムとデカンの混合溶液では、クロロホルムのモル分率080%において、クロロホルムは殆ど吸蔵されず、デカンだけが選択的に吸蔵されることなど、新しい知見も得られた。これら2種類の混合溶媒を、大小2種類の剛体球流体で近似し、まず表面吸着の問題から考えてみた。HNC-OZ理論により分布関数を計算した結果、上述のような、選択的吸蔵、ヘキサンよりもデカンを吸蔵する傾向、また、吸蔵量のモル分率依存性を、どれも定性的に説明できることが分かった。吸蔵速度についても、定性的に説明が可能であった。今後は、多孔性のホストへの吸蔵の問題へとつなげたい。また、sPSについて知られている、このような吸蔵現象は、高分子isotactic poly(4-methyl-1-pentene) (P4MP1)の結晶についても起きるのではないかと考え、P4MP1結晶をホストとする一連の実験を行い、たとえば、デカンが吸蔵されることを見出した。その吸蔵速度についても、実験の結果、新しい知見がえられた。まず、sPSと、デカン、ヘキサン、クロロホルムを用い、過去の文献と同様の結果を確認することができた。溶媒の組成を細かく変化させ、これまで発表されていない結果も得ることができた。また、P4MP1結晶についても同様の実験を試み、たとえばデカンが吸蔵されることを見出した。吸蔵速度がクロロホルムの添加で大幅に増大するという結果も、sPSでは報告があったが、P4MP1については、これまで報告のないものである。いくつかの組成に関しては、当初予想していた以上の興味深い結果が得られた。理論部分の進展については、実験結果を、まずは剛体球系による吸着の問題としてとらえ、実験結果を定性的に再現することができた。

しかし、溶媒分子が球状とは言えないことや、吸着でなく吸蔵を扱いたいことなど、実験と理論の間で、扱っている系の開きは、まだ大きい。しかし、理論と実験の間の隔たりは当初から予想していたものである。高分子結晶sPS (syndiotactic polystyrene)の空隙への選択的分子吸蔵を調べるため、初期状態であるキャストフィルムを作成した際に、基盤であるガラスプレート面に対して、sPS結晶が配向していることをsPSフィルムのX線回折測定により見出した。これまでの先行研究においては、配向については記述が無かったので、少なくとも今後は配向があるものとして、研究を進める必要がある。また、選択的吸着については、前提条件として、ヘキサンとクロロホルム等の溶媒が、理想的に混合していることを実験的に確認した上で考察を行いたいと考え、溶媒のみの赤外吸収測定を行った。その結果、吸蔵のゲスト候補となる分子を混合させた溶媒が、理想的な混合溶液(理想溶液)に近いことを確認できた。従って、概ね理想的な混合溶液から、sPSフィルムは、分子鎖の長い分子を選択的に吸着していることになり、実験の前提条件を明確にできた。高分子P4MP1 [poly(4-methyl-1-pentene)]については、その溶融体がヘリウムガスを吸蔵することを、間接的にではあるが実験的に明らかにし、いわば多孔性液体になっていることを提唱する論文を発表した。これまでの実験的結果を理解するための理論計算を、連携研究者である九州大学理学部化学科の秋山良准教授らが行った。具体的には、液体の積分方程式理論と2成分Asakura-Oosawa理論を用いた計算を行い、表面への吸着選択性を計算した。さらに、2成分Asakura-Oosawa理論を用いて高分子結晶の空隙を意識した管内での計算を進め、吸着量について実験結果と定性的に一致する計算結果を得ることができた。現在、sPSフィルムにおけるようなナノスケールの空洞に対する選択的吸蔵の計算を積分方程式理論を用いて行う準備を進めている。sPSフィルムを浸漬するクロロホルムとヘキサン等の混合溶液が、概ね理想的な混合(理想溶液)に近いことを実験的に確認することで、選択的吸着現象は、いわば理想的な混合状態から、分子鎖の長い分子を選択的に吸着していることになり、前提条件を明確にできた。また、P4MP1については、溶融体がいわば多孔性液体になっているということを提唱する論文を発表し、日本物理学会のシンポジウム講演においても、この論文の結果を含む、一連の高分子溶融体に関する実験結果を発表することができた。P4MP1に対する吸蔵現象は、殆ど論文が出版されていないので、まずはP4MP1系から論文化したい。本研究では、枯渇相互作用による吸着を議論したいと考えており、ベンゼン環を持つsPSよりも、ポリオレフィンであるP4MP1を用いる方が、電子的相互作用による影響が軽減される可能性が高く、モデル系として、より良いのではないかと考えている。可能であれば、溶媒に関しても、クロロホルムではなく、アルカンの吸蔵に研究対象を絞りたいが、赤外分光法では、アルカンを区別することが難しいので、重水素化試薬を購入できるかどうか、予算を見ながら進めていきたい。理論部分に関しては、実験で扱っている系とは、モデルに隔たりがあるので、独立した論文としてまとめる予定で、これを引用する形で実験結果を論文化したいと考えている。
ラオスの伝統文化の保存を通した在地の農村開発アプローチに関する実践型地域研究

研究者が当事者として関わる実践型地域研究の手法で実施した本研究の当初の目的は、ほぼ達成することができた。さらに、伝統文化の再認識と定住に到る歴史の記録を通して新しい村のよさが再確認される一方、伝統を残す村との交流を望むなど、伝統文化・歴史に関する意識の変化が本研究を通して村人に起きたことは特筆すべき成果である。以上、実践型地域研究が、農村の問題の克服という課題に充分に対応することが提示された。本研究は、日本とラオスの大学研究者が、ラオス農村で活動するNGO関係者と農民の連携協働による農村開発活動に協力参加した当事者的研究を志向している。ラオスの農村生活から急速に消えつつある伝統文化や「在地の知恵・技術」を積極的に評価、再認識するため、ラオス国立大学農学部のプログラム、東南アジア研究所実践型地域研究推進室とラオス国立大学農学部ラオ伝統農具農民博物館が協働で実施している「集落民俗文化資料館」を通した伝統的文化の保存活動を「農村開発実験」と位置づけ、その活動の実践に積極的に参加し課題に取り組んだ。本年度は、新しく「集落民俗文化資料館」が設置されたビエンチャン市タチャンパ村とアッタプー県ラーニャオ村の2村における建設に向けた住民参加の手続きとプロセスの記録と関係者の聞き取り調査を行った。また、タチャンパ村においては、民俗文化資料館の運営や維持管理、文化の保存活動に対する住民の意識や見解を、参加型学習行動法(PLA)の手法を使って明らかにした。そして、これら得られた結果をもとに、民俗文化資料館の活用や伝統的文化の保存を集落の持続可能な活動とするための活動計画を集会をとおして村人と共有することを試みた。以上の結果、政府の定住政策で数民族が移住して村ができた、歴史の浅いタチャンパ村では、それまで互いに他民族について知識も関心もほとんど持たなかった村人の間に、民俗文化資料館の活動に参加することによって、他の民族の文化や歴史に関心を持つ人が見受けられ始めた。そして、村の集会で伝統文化や道具の保存が自分たちの民俗にとって重要であるなどの意見を述べる村人が現れている。すでに、民俗文化資料館を村の共通の財産として活用する計画が作成されており、文化資料館を通した新しい村の歴史作りと村づくりのモデルの方向性が見えてきたと自負している。本研究は、日本とラオスの研究者がラオス農村住民と協働・推進している農村開発活動に参加する実践型地域研究による当事者的研究を志向した。ラオスの農村生活から急速に消えつつある伝統文化や「在地の知恵・技術」を積極的に評価、再認識する東南アジア研究所実践型地域研究推進室とラオス国立大学農学部ラオ伝統農具農民博物館が協働で実施する「集落民俗文化資料館」活動を伝統的文化保存を通した「農村開発実験」と位置づけ、その活動に参加し課題に取り組んでいる。本年度は、ビエンチャン市サイタニー郡タチャンパ村集落民俗文化資料館の住民たちによる活用と運営の確立に向けた活動(平成22年の参加型学習行動法(PLA)の成果、民俗文化資料館の運営や維持管理、文化の保存への住民の意識・見解のフォーローアップ)支援、住民参加の手続きとプロセスの記録に加え、村人による村の記録作成に向けての聞き取り調査を村人と協働して進めた。また、伝統文化の保存の実践を村人たちとの共有する活動の一環として、村の伝統的な遊びや芸能(歌・踊り)イベントをサイタニー郡郡長など行政関係者の出席を得て開催した。多民族の移住でできた歴史の浅いタチャンパ村では、集落民俗文化資料館設置とその活用プロセスへの村人の参加機会を通して、それまで他民族について知識も関心もほとんど持たなかった村人の間に、互いの文化や歴史に関心を持つ動きが出てきた。そして、伝統文化や道具の保存が自分たちの民族にとって重要であると考える村人が増えている。研究者との協働は、村人自身による文化や生活など村の記録を残したいという希望を生み出しており、経済的なインセンティブに頼らない村づくりの方向性が見えてきた。また、タチャンパ村における活動は現地行政の高評価を得ている。以上から、集落民俗文化資料館を通した村の歴史、村づくりのモデルの有効性が示されていると自負している。本研究は、日本とラオスの大学研究者が、農村住民と連携協働し農村開発に当事者として参加する実践型地域研究手法で実施した。本年度は、東南アジア研究所実践型地域研究推進室とラオス国立大学農学部ラオ伝統農具農民博物館の研究者が、ビエンチャン特別市サイタニー郡タチャンパ村「集落民俗文化資料館」活動を伝統文化・歴史の保存を通した「農村開発実験」と位置づけ、その活動に積極的に実践参加し課題に取りくむとともに、農学部博物館の資料の分類分析を行った。具体的には、研究代表者の矢嶋が、2012年10月(33日間)と2013年1月(15日間)の2回現地において聞取り調査、村人との協働によるPLA(参加型学習行動法)による参加型ワークショップを開催するとともに、資料整理等をラオス国立大学農学部研究者と協力して行った。

研究は終了したが、現在も農学部関係者が「村人の口述による村の歴史」と「農学部博物館所蔵資料カタログ」の作成を継続しており、終了し次第公開する。本研究では、村人の語りから、1965年に戦火を逃れて以来着の身着のまま数回の移住を余儀なくされた後定住したタチャンパ村の先駆け住民たち(多くは黒タイ族)が、他民族や他村の人たちと混住を繰り返しながら現在の村を造ってきた経緯が明らかになった。世代が移るにつれて歴史や伝統を伝える年配者の多くが亡くなり、民族のオリジナルな文化や伝統的道具類だけでなく言葉も変化し、村の新しい伝統と歴史が生まれつつある。仏教とアニミズムなど宗教の違いに加え多民族が混住するラオスの村が、互いの行事や風習を尊重し参加することで成り立っていることが村人を通して浮かび上がった。ほとんど自己主張しないことが、村で一緒に暮らすためのラオスの人びとの知恵である。多様化する社会においてそれぞれの違いをことさら強調する現在の比較研究に対して、ラオスの村人たちの「知恵」が一石を投じている。経済的インセンティブの少ない集落民俗文化資料館活動による伝統的文化や道具の保存を通した村づくり・農村開発に対して、当初の予想を上回る村人の参加が得られた。集落民俗文化資料館の活用と運営は村が責任を持って行う体制がつくられた。その上、村人たちの間には、自分たちで村の記録を残したいという声が上がっており、新しい村づくりが生れ始めていると実感される。以上の理由から、当初の計画以上に進展していると考える。24年度が最終年度であるため、記入しない。これまでのところ当初の計画以上に進展していると考えており、本研究課題の今後の推進方策を大きく変更をすることなく継続する。加えて、上記のように、村人の間に村の記録を自分たちで残したいという意欲が現われており、その意欲を育成し、村人たちの希望の実現を支援する取組みを増やす予定である。
頭部X線規格写真を用いた口腔外科手術ナビゲーションシステムの開発

<ハードウエアの改良>位置発信器として、頭部の動きを追跡するために前額部にLED装置、開閉口運動の動きを追跡するためオトカイ部にLED装置を装着した。LED装置の固定のためにそれぞれ、ヘッドギアとマウスピースを固定源とした固定装置を開発した。LED装置は、外部に電池ボックスを用いる方式を採っていたが、手術の支障になるため、装置内に電池を入れる一体型に変更した。また、LEDは直径を2mmから3mmに変更し、CCDカメラで認識する際の誤差を軽減した。ハンドピース用LED装置は手術部位、角度によって、CCDカメラで追跡しにくい場合があるため、関節を付けることで、CCDカメラに対するLED装置の角度を最適な状態に維持できるようにした。ハンドピースは、ストレート、コントラアングルを使用するため、使用するハンドピースや、ドリル、バーの長さが変わるたびに先端位置を校正する必要がある。そこで、ハンドピースの形態や、さまざまな径のドリル、バーに対応できるように先端位置校正装置を改良し、この装置に使用するLEDの配置を大きな3角形に変更し、CCDカメラで認識する際の誤差を軽減した。CCDカメラについては、レンズ型を使用しているが、実験段階で考えていた、患者との距離60cmから、手術時の敷布、術者の配置、器具の位置を考慮し、100cm程度まで離す必要があると考えた。このため、精度を低下させないよう、CCDカメラに使用するレンズを変更した。<ソフトウエアの開発>CCDカメラからの情報を処理し、コンピュータディスプレイ上てドリル先端の情報をスムーズに表示できた。また、頭位の変化、開閉口運動に対しても、コンピュータ上で、座標位置の変換を行い、リアルタイムのナビゲーションが行えた。セファログラムの正貌、側貌が同時に表示できるように、新しい画面を作成し、画面を見ながらの手術がスムーズに行えるようにした。<今後の課題>上顎のみのナビゲーションを行った場合と比較し、上下顎のナビゲーションを行った場合は、CCDカメラで追跡するLEDの数が多くなる上、空間座標が広がるため精度が低下してしまう。これを改善するために、最適なLEDの大きさや、レンズを模索していく必要がある。LEDの大きさには限界があるため、赤外線を反射する球を用いたシステムも検討しているが、この場合、外乱光の影響を受けやすくなる。今後、さらに実験を行い、精度を向上させるためCCDカメラ、LEDについて検討を行っていく予定である。本研究における特徴は頭部X線規格写真を用いて顎顔面手術ナビゲーションを行うことである。顎顔面外科手術においては、頭蓋の動きや開口に伴う下顎の動きを追尾し補正することが最も重要である、頭部の動きを追跡するために、位置発信器として、前額部にLED装置、開閉口運動の動きを追跡するためオトガイ部にLED装置を装着した。従来のLED装置には、3個のLEDが正三角形に配置されていたが、CCDカメラでの認識を確実にするため2等辺三角形に変更した。また、プローブの位置発信には超音波を利用していたが、術者により遮蔽されたり、障害物による影響を受けることから、LEDとCCDヵメラを利用したものに変更した。さらに、口腔外科領域では手術にハンドピースを使用することが多いため専用のLED装置を開発し、ハンドピースを持ったままでのナビゲーションを可能にした。頭部、オトガイ部のLED装置の固定のために専用のヘッドギアと歯列を利用した固定装置を開発した。ハンドピース先端の位置校正装置は、当初、LEDを配置した装置の穴に先端を入れるようにしていたが、ドリルの経により影響を受けることや、挿入角度により距離が変わってくることから、ドリルの軸方向と、先端位置を規定できる装置を開発した。CCDカメラからの情報を迅速に処理し、ドリル先端の情報をディスプレー上にリアルタイムで表示できるソフトウエアを開発した。また、頭位の変化や開閉口運動に対しても、移動量の演算処理を効率よく行い、リアルタイムのナビゲーションが可能となった。今後の課題としては、実際の手術における精度の検証と、精度は低下させずになお且つ手術の妨げにならない機器の配置を決定し、必要があれば、CCDカメラに望遠レンズ装着することも検討する。危険部位に接近した際のアラーム機能などの機能も追加していく予定である。

CCDカメラについては、レンズ型を使用しているが、実験段階で考えていた、患者との距離60cmから、手術時の敷布、術者の配置、器具の位置を考慮し、100cm程度まで離す必要があると考えた。このため、精度を低下させないよう、CCDカメラに使用するレンズを変更した。<ソフトウエアの開発>CCDカメラからの情報を処理し、コンピュータディスプレイ上てドリル先端の情報をスムーズに表示できた。また、頭位の変化、開閉口運動に対しても、コンピュータ上で、座標位置の変換を行い、リアルタイムのナビゲーションが行えた。セファログラムの正貌、側貌が同時に表示できるように、新しい画面を作成し、画面を見ながらの手術がスムーズに行えるようにした。<今後の課題>上顎のみのナビゲーションを行った場合と比較し、上下顎のナビゲーションを行った場合は、CCDカメラで追跡するLEDの数が多くなる上、空間座標が広がるため精度が低下してしまう。これを改善するために、最適なLEDの大きさや、レンズを模索していく必要がある。LEDの大きさには限界があるため、赤外線を反射する球を用いたシステムも検討しているが、この場合、外乱光の影響を受けやすくなる。今後、さらに実験を行い、精度を向上させるためCCDカメラ、LEDについて検討を行っていく予定である。
ユビキチン依存的DNA-PK活性化が導く抗がん剤感受性のメカニズム解明

抗がん剤であるカンプトテシン(CPT)は、DNA切断端を一つしか持たない損傷(one-ended DSB)を生じる。one-ended DSBの修復に非相同末端連結(NHEJ)が関与すると細胞にとって毒性を示すと考えられ、CPTによる抗がん効果を考える上では、one-ended DSBに対するNHEJ経路の関与機構を明らかにすることは重要となる。これまでの研究から、ユビキチン化因子であるUbcH5がNHEJに関与し、染色体異常の発生や、CPTへの抵抗性に寄与することを見出した。E3ユビキチンリガーゼとしてSIAH1も同定したが、UbcH5とは異なる影響が見られた。DNAの二本鎖切断(DSB)は非常に重篤なDNA損傷として知られ、相同組換え修復(HR)と非相同末端連結(NHEJ)の2つの経路で修復されることがわかっている。一方、DNA切断端が1つしかない様なDSB(one-ended DSB)がDNA複製を介して生じることがある。この場合、NHEJの基質としては不適切であり、HRが主な修復経路と考えられている。カンプトテシン(CPT)は、one-ended DSBを引き起こす抗がん剤であり、HR欠損細胞はCPTに対し感受性を示す。これに対し、NHEJ欠損細胞はCPTに抵抗性を示すことが明らかとなり、NHEJを介した不適切な修復が細胞死の引き金と考えられる。したがって、one-ended DSBに対するNHEJ機構の解明は、CPTの奏功性を考える上で重要となる。CPTによるone-ended DSBに対して、NHEJ因子であるDNA-PKはUbcH5ファミリーが関与するユビキチン化依存的に活性化することを明らかにしてきた。本研究では、UbcH5によるDNA-PK経路活性化の制御メカニズム、および、抗がん剤応答への影響を解明することを目的としている。そこで、UbcH5ファミリーと関連したE3ユビキチンリガーゼに対する二次スクリーニングを行い、E3リガーゼSIAH1を新規DNA-PK活性化因子として同定した。DNA末端を削り、HR経路へと進ませるDNA end resection反応にかんしては、SIAH1によるDNA-PKの活性化とは独立していることを明らかにした。おそらくはDNA-PK関連因子であるKuタンパク質の制御であると考えられるが、免疫染色によるKuタンパク質の検出が難しく、現在条件検討を進めている。siRNAスクリーニングにより、新規DNA-PK制御因子としてSIAH1を同定し、SIAH1によるDNA-PK活性化制御がDNA end resectionとは関連しないことを明らかにした。おそらくはDNA-PKをDSB末端へとつなぎとめるKuタンパク質をSIAH1が制御している可能性が考えられる。しかし、Kuタンパク質は細胞内のタンパク質量も多く、ターンオーバーも長いため、ノックダウンによるNHEJの抑制がうまくいっておらず、CPTによるDNA-PK活性化がKuに依存しているかについての検討が難航している。また、免疫染色によるKuの局在についての解析も難しく、現在条件検討を進めている。また、細胞死の原因と考えられる染色体異常についても解析を進めているが、SIAH1ノックダウン細胞での解析に難航している。DNAの二本鎖切断(DSB)は非常に重篤なDNA損傷であり、相同組換え修復(HR)と非相同末端連結(NHEJ)の2つが主要な修復経路として知られている。一方、DNA複製を介して、DNA切断端を1つしか持たないDSB(one-ended DSB)が生じることがある。カンプトテシン(CPT)は、one-ended DSBを引き起こす抗がん剤であり、HR欠損細胞はCPTに対し感受性を示すことから、one-ended DSNの主要な修復経路はHRだと考えられている。これに対し、NHEJ欠損細胞はCPTに抵抗性を示すことが明らかとなり、NHEJが介在することで、不適切な修復がおこり、細胞死を引き起こしていると考えられる。従って、one-ended DSBに対するNHEJ機構の解明は、CPTの奏功する上で重要と考えられる。これまでに、CPTで引き起こされるone-ended DSBに対する細胞応答として、NHE因子であるDNA-PKの活性化を指標に解析を進め、ユビキチン化因子であるUbcH5とSIAH1を上記応答に特異的に関与する因子として同定した。これらの因子がどのようにしてone-ended DSBに対するDNA-PKの活性化を制御しているのか、そのメカニズムの解明に取り組んでいる。その1つとして、DNA-PK活性化調節因子であるKuタンパク質に着目したが、解析は難航している。一方、UbcH5/SIAH1がDNA損傷応答広範に影響する可能性も見えてきており、解析を進めている。さらに、one-ended DSBに対する修復経路そのものの理解を広げるため、各修復経路とone-ended DSBの修復効率について、解析を進めている。one-ended DSB応答に関与する因子として、これまでに同定したUbcH5とSIAH1というユビキチン化因子がどのようにして、DNA-PK経路を制御しているか、そのメカニズムの解明に取り組んでいる。これまでの解析から、DNA末端を削り込んでHRへと進ませるDNA end resectionの反応とは独立して、DNA-PKの活性化に関わることを明らかとした。そこで、DNA-PK経路はDNA末端に結合するKuタンパク質によって制御されていることから、上記ユビキチン化因子がKuタンパク質のDNA末端への結合に影響する可能性を考えた。研究協力先である群馬大学の協力を仰ぎ、顕微鏡による解析を試みていたが、想定されるKuの像が得られず、現在は中断している。上記ユビキチン化因子のone-

ended DSB応答への関与を解析すると、両者のダブルノックダウンでDNA損傷応答そのものが抑制されていることを見出した。そこで、DNA損傷に対する初期応答から修復段階であるHRのステップまでを、UbcH5/SIAH1ダブルノックダウン細胞で解析中である。また別のアプローチとして、現在はone-ended DSBの修復経路そのものの解析を進めている。これまで言われているHRの寄与度、および、DNA-PKによるNHEJ経路の寄与度を評価する上でも、修復経路を改めて検証している。DNA損傷マーカーであるヒストンH2AXのリン酸化を指標に、one-ended DSBの修復効率を解析した結果、HR欠損でも修復はある程度進んでおり、NHEJ欠損はとくに影響は見られなかった。しかし、end resection欠損では、NHEJによる修復が見られるようになり、別の修復経路の因子の関与も見られた。したがって、HR経路以外に働く、主要なone-ended DSB修復経路が存在することが示唆された。DNA二本鎖切断(DSB)は、切断端を二つ持つ非常に重篤なDNA損傷であり、相同組換え修復(HR)と非相同末端連結(NHEJ)の二つの修復経路の存在が知られている。ところが、DNA複製を介して、DNA切断端を一つしか持たない損傷(one-ended DSB)が生じることがある。カンプトテシン(CPT)は、one-ended DSBを引き起こす抗がん剤であり、HR欠損細胞はCPTに対して感受性を示すことから、one-ended DSBの修復は主にHRによって行われていると考えられている。これに対し、one-ended DSBの修復にNHEJ経路が関与すると、異常染色体の発生原因となり、細胞にとって毒性を示すことが考えられ、CPTによる抗がん効果を考える上では、one-ended DSBに対するNHEJ経路の関与機構を明らかにすることは重要となる。これまでの研究から、ユビキチン化因子であるUbcH5がCPTによるDNA-PK活性化に関与することを示し、パートナー候補E3ユビキチンリガーゼとしてSIAH1をスクリーニングにより同定した。UbcH5ノックダウン細胞はCPT感受性を示したが、SIAH1ノックダウン細胞では、DNA-PK活性化は抑制されたものの、NHEJを介した染色体異常やCPT感受性においては影響は見られなかった。したがって、これらのユビキチン化因子が別の経路で働いている可能性も考えられ、別のE3リガーゼの関与も示唆された。現在は、UbcH5欠損細胞で、DNA-PKの補助因子であるKuタンパク質の制御について解析を進めている。また、DNA末端の削り込み(DNA end resection)を抑えることで、one-ended DSBであってもNHEJで効率的に修復されることを見出し、one-ended DSBの修復に関わる経路自体の再探索も進めている。
糸球体硬化における上皮細胞障害の果たす役割の解明

1.ヒトの腎生検組織での検討ネフローゼ症候群患者の腎生検組織から単離した糸球体において、定量的PCR法で上皮細胞特異的蛋白(主としてGLEPP1)のmRNA発現量の定量を行ったところ、ネフローゼ症候群患者の糸球体では正常対照に比べてその発現量が減少していた。これを原疾患別に検討したところ、微小変化群では正常対照と有意差なかったが、膜性腎症、巣状糸球体硬化症では有意に発現量が低下していた。さらに、巣状糸球体硬化症では微小変化群と比べても有意に低値であった。一方、GLEPP1の免疫組織染色では正常対照と比べて微小変化群、膜性腎症、巣状糸球体硬化症の順で発現量の低下が見られた。これらの結果から、GLEPP1蛋白およびmRNA発現量の低下は上皮細胞傷害を反映しているものと考えられ、またGLEPP1発現量の定量は巣状糸球体硬化症と微小変化群との鑑別に利用できる可能性が示唆された。2.ラットの腎障害モデルでの検討糸球体上皮細胞傷害から糸球体硬化をきたすラットのアドリアマイシン(ADR)腎症の腎組織においてdesmin、synaptopodin、WT1、Ki67、p21の免疫染色を行い、上皮細胞における発現を検討した。上皮細胞傷害マーカーdesminの発現は増加し、分化した上皮細胞に発現するsynaptopodin、WT1は減少していた。また、細胞増殖マーカーKi67と細胞周期制御蛋白p21の発現増加が認められた。これらのことから、正常腎では高度に分化した状態にある上皮細胞は、ADR腎症においては、その傷害によって脱分化と細胞増殖の機転が生じていると考えられた。また、このモデルにアンジオテンシンII(AH)受容体拮抗薬を投与すると、糸球体硬化病変、蛋白尿および上記の変化が同時に抑制されたため、AIIは上皮細胞傷害および続く糸球体硬化に重要な役割を果たしていると考えられた。1.ヒトの腎生検組織での検討腎生検組織から単離した糸球体からRNAを抽出し、competitive RT-PCR法にて上皮細胞特異的蛋白(主としてGLEPP-1)のmRNA発現量の定量を行ったところ、ネフローゼ症候群患者の糸球体では正常対照(生体腎移植のドナー腎など)に比べてその発現量が減少している結果が得られ、これらのmRNAの減少は上皮細胞障害を反映しているものと考えられた。現在は症例数を増やしながらネフローゼ症候群の原疾患別にGLEPP-1 mRNAの発現量の差があるかどうかについて検討している。他の上皮細胞特異的蛋白についてはスクリーニング的に発現量の比較を行っている段階である。2.ラットの腎障害モデルでの検討糸球体上皮細胞傷害をきたし、糸球体硬化から慢性腎不全に至るモデルであるラットのアドリアマイシン(ADR)腎症を作製し、単離糸球体におけるcyclin dependent kinase inhibitor(p21)mRNAの発現量を定量したところ、ADR群では正常対照群に比べてその発現量は有意に増加していた。また、腎組織においてp21蛋白の免疫染色を施行したところ、正常対照群ではp21の発現はほとんど確認できないが、ADR群では病変の比較的早期から糸球体および一部の尿細管細胞にその発現が見られるようになり、特に糸球体における発現部位については概ね糸球体上皮細胞に一致していた。さらに、このモデルにアンジオテンシンIIレセプター拮抗薬を投与すると糸球体病変は著明に抑制されたが、p21の発現もこれと平行して抑制されていた。

したがって、p21は上皮細胞の障害に伴い(おそらくrenin-angiotensin系を介して)発現量が増加し、このモデルにおける糸球体硬化病変に何らかの役割を果たしていると考えられた。1.ヒトの腎生検組織での検討ネフローゼ症候群患者の腎生検組織において上皮細胞特異的蛋白であるGLEPP-1の免疫染色を行い、糸球体における発現量を原疾患別に検討したところ、正常対照(生体腎移植のドナー腎)と比べて微小変化群、膜性腎症、巣状糸球体硬化症の順で発現量の低下が見られた。また、腎生検組織から単離した糸球体でGLEPP-1 mRNAの定量を行い、同様に原疾患別に検討したところ、微小変化群では正常対照と有意差なく減少頃向のみであったが、膜性腎症、巣状糸球体硬化症では有意に発現量が低下していた。さらに、巣状糸球体硬化症では微小変化群に比べてもGLEPP-1 mRNA発現量は有意に低値であった。これらの結果から、GLEPP-1蛋白およびmRNA発現量の低下は上皮細胞傷害を反映しているものと考えられ、またGLEPP-1発現量の定量は巣状糸球体硬化症と微小変化群との鑑別に利用できる可能性が示唆された。2.ラットの腎障害モデルでの検討ラットのアドリアマイシン(ADR)腎症の腎組織においてdesmin、WT1、Ki67、p21免疫染色を行い、上皮細胞における発現を検討した。上皮細胞障害のマーカーとして知られるdesminの発現は増加し、分化した上皮細胞に発現するWT1は減少していた。また、細胞増殖のマーカーであるKi67と細胞周期制御蛋白であるp21の発現増加が認められた。これらのことから、正常腎では高度に分化した状態にある上皮細胞は、ADR腎症においては、その傷害によって脱分化と細胞増殖の機転が生じていると考えられた。また、このモデルにアンジオテンシンII (AII)受容体吉抗薬を投与すると、糸球体病変や蛋白尿に加え、上皮細胞における上記の変化も同時に抑制されたため、AIIは上皮細胞傷害および続く糸球体硬化に重要な役割を果たしていると考えられた。1.ヒトの腎生検組織での検討昨年度までに施行した腎生検組織に加え、今年度新たに追加したネフローゼ症候群患者の腎生検組織において、上皮細胞特異的蛋白GLEPP1の免疫組織染色を行い、光顕画像を用いて糸球体におけるGLEPP1蛋白発現量の定量化を行った。その結果正常対照(生体腎移植のドナー腎)と比べてネフローゼ症候群患者の糸球体ではGLEPP1蛋白の有意な発現量の低下がみられた。これをさらに原疾患別に検討したところ、特に巣状糸球体硬化症の群では他の群に比べて発現量が低下していた。これらの結果は、腎生検組織から単離した糸球体でGLEPP1 mRNAの定量を行った結果とcompatibleであり、蛋白レベル、mRNAレベルのいずれにおいてもGLEPP1発現量の低下は上皮細胞傷害を反映しているものと考えられた。2.ラットの腎障害モデルでの検討昨年度の実験で、ラットのアドリアマイシン(ADR)腎症にアンジオテンシンII(AII)受容体拮抗薬(ARB)を投与すると、糸球体病変の抑制などが留められたが,同時に全身血圧の低下も観察された。