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幼児の自律的自己を育てるための就学前教育プログラムの開発

子どもの自律的自己の発達を認知・情動・社会性等の複数の領域にまたがる実行機能の総体として捉え,就学前児を対象に実験的にその特徴を検討した。次に,子どもたちの教え合う力(peer teaching)を様々な実行機能の総体として捉え直し,心の理論との関係を吟味した。最後に,小学1年生の授業過程の談話分析を通して,子ども同士の教え合い・学び合いの関係を機能的・構造的に精緻化することが保育プログラムの開発に応用できることを示唆した。本研究の目的は,幼児期(年中・年長)の子どもを対象に,子ども同士がともに教え合い・学び合うpeer tutoring課題を設定し,認知・情動・対人関係的問題を自らの力で考えて解決できるようになる自己(自律的自己)を育てるための就学前教育プログラムを開発することである。平成22年度は,(1)実験的介入手法を用いて,幼児期の子どもに相応しいpeer tutoringを構成するために必要な要因(学習課題,教授目標(動機づけ),柔軟な教授形態,社会・認知葛藤の意識化,など)を特定化し,(2)自律的自己の発達尺度を構成しその妥当性について検証を行う,ことを目的とした。年度前半は,保育観察を通して子どもたちの自律的側面にかかわる行動記録をとり,自律的自己の発達と発達支援に関する研究レヴューを「時間を超えた自己」「心の理論」「情動制御」「対人葛藤解決」「言語獲得」「peer tutoring」をキーワードとして行い,当該研究の展開・現況について精査した。年度後半は,子どもの自律的発達の程度を測定するための課題を6領域に分けて作成し,年長児(15名程度)を対象に実施した。具体的な課題は以下のように構成された。[(1)認知発達(時間経過に伴う世界のあり様についての理解:生物の成長過程,物理的世界の変化,心理的発達過程)(2)情動発達(満足の遅延課題を使った情動抑制についての客観的理解)(3)対人関係(仲間とのトラブルの原因理解と解決能力)(4)心の理論(みえと現実,他者の誤信念理解,心と行動についての表象)(5)教授-学習(ゲームルールの理解と運用)(6)言語特性(平均発話数,文法獲得(統語)の程度)]現在は,(1)各課題の分析作業を通して,,自律性を測定する課題としての妥当性と評価尺度の構成をチェックし,(2)6領域にわたる実験課題を子どもどうし協同で解決できるように課題構造(要因)の組み換え作業を行っている。このうち,平成23年度は以下の下位目標を設定した。(1)自律性の発達尺度として,課題に特化した尺度から一般性の高い尺度へと洗練させる。(2)個別の尺度構成のために使用した実験の課題構造を活かし,個別条件から協働条件へ適用可能なものへ組み換える。(3)peer tutoring用の課題を領域別に試作する。(4)自律的自己を育む就学前教育プログラムを作成・試行する。その結果,(1)については,年中児を加え,年長児と2年齢を対象に検証し,6領域について発達的な変化が認められた。一般的尺度については,幼児用の行動評価尺度(CBQ : Rothbart et al.2001)等を参考に,家庭や保育場面でも適用できる質問紙の形式に整える作業を進めている。(2)については,まず,年長児の約1ヶ月にわたる保育場面の観察プロトコルを分析し,課題目標との関係において,保育士のかかわり方の多様さや,支援的・指導的特徴が明らかにされた。(3)については,peer tutoringと心の理論(a他者の誤信念理解,b他者の知識変化の理解)との関係が実験的に検討され,peertutoringには,心の理論(a)が深く関与し,(b)は関連性が弱かった。(4)については,(2)と(3)より,自-他の理解の程度やずれの把握,そのための交渉スキル(何を問うか何を確認するか),教授者としての振る舞い(認知・情動の自律)などが要因として導き出され,それらを踏まえたプログラムを試作途中である。また,上記一連の結果は,現在,分析段階にあり,論文化は次年度の予定である。本研究の目的は,幼児期(年中・年長)の子どもを対象に,子ども同士がともに教え合い・学び合うpeer teaching課題を設定し,認知・情動・対人的問題を自らの力で考えて解決できるようになる自己(自律的自己)を育てるための就学前教育プログラムを開発することである。平成24年度(3カ年の最終年度)の目的は,(1)自律的

自己の発達測定用課題と発達尺度の妥当性の検証,(2)実験場面と保育場面の相互交流的なpeer teaching (peer learning)課題実施と効果測定,(3)就学後を見据えた就学前教育プログラム開発の準備,であった。その結果,(1)については,知的発達(通時的思考),情動制御(満足の遅延),心の理論(他者の誤った信念理解)の3領域の独立した関係要因と上記3要因と対人関係(社会・認知的葛藤解決)との相関関係を検討した。(2)については,平成23年度のpeer teaching(ゲームルール理解)課題を年長児から年中児を対象に実施し,上記(1)の心の理論(誤信念,知識変化)との対応関係や,教授者と学習者の年齢の差異(同年齢,異年齢)も考慮に入れながら,幼児にとっての教えることの発達的意味について量的・質的分析を行った。さらに,子どもに馴染み深い絵本課題を用いて,大人と子どもの間の対話読み(dialogical reading)過程に注目し,読みの展開過程,子ども同士の相互作用,子ども自身の変化(場面予測,内容理解,経験的知識)の各特徴を普通読み(統制)条件と比較した。(3)就学後を見据えた就学前教育プログラム開発の準備に向けて,小学1年生(6月)の算数授業(はじめての引き算)の授業分析を行い,子ども同士で協働的に学び合う過程に見られるメタ認知3領域(9項目)から測定する指標を作成し,上記(1)の自律性発達尺度の再構成を行った。量的な進展具合から見れば,論文化の作業が遅れている。その原因としては,(1)自律性をはかる尺度については,実験課題を認知・情動・対人関係の3領域にわたり,一人あたり合計11課題実施し,しかもすべてwithin計画で実施している。一人ひとり,個別実験にて,すべてのデータを取り揃える為に相当な時間を要している。(2)また,子どもの自律性や自発性を捉える為には,実験的方法のみでは不十分であり,今年度の計画を途中で修正し,約1ヶ月にわたる観察研究を取り入れた。それにより,子どもたちと保育士のプロトコルの転記・分析作業に2ヶ月以上時間が取られることとなった。しかしながら,(1)と(2)は,研究の質を高めるうえでは相当な貢献をしており,質的な進展具合から捉え直せば,当初の計画以上の収穫をあげている。来年度の研究計画の実施に向けてその確実さを保証するものである。24年度が最終年度であるため、記入しない。1.H23年度に実施した,認知・情動・対人関係に関する幼児の自律性を測定するために実施した実験課題のうち,8課題について分析結果をまとめたものを今年5月末6月初めにカナダ(トロント)で開催されるJean Piaget Society 42^<nd> Annual Meetingで発表し,その後,論文化する予定である。2.次年度は最終年度となるため,以下の3つに焦点を当てて一連の研究をまとめるものである。(1)自律的自己の発達尺度の妥当性の検証(特に家庭や保育場面で実施できる幼児用行動評価尺度について)(2)実験場面と保育場面の相互交流的peertutoring課題の実施と効果測定(特に相互交渉スキルの獲得をめざして)(3)就学後を見据えた就学前保育プログラムの開発(小学1年生の協働学習事例との比較を通して)24年度が最終年度であるため、記入しない。
神経欠損に対する新しい神経縫合法の開発

外傷や腫瘍切除などにより末梢神経が欠損し直接縫合が不可能な例に対しては自家神経移植術が行われている。しかし、自家神経移植術では縫合部が2カ所となり瘢痕組織による再生神経の伸長が阻害されるため縫合例に比べて機能回復は劣り,自家神経採取部に知覚低下が残る。神経欠損例でも関節を屈曲させることにより直接縫合が可能となる。術後、徐々に関節を伸展し縫合した神経を延長することができれば緊張下に神経移植を行った場合に比べて、優れた治療成績を得られる可能性がある。このことを実験的に証明するためにラット脛骨神経に欠損を作成した後に膝関節を屈曲し神経直接縫合を行い、再生繊維が縫合部をこえる2週後より膝関節を5°/日伸展した関節屈曲位固定・緩徐伸展群(2週固定・伸展群)の歩行解析を行い神経移植群と同等の機能回復が得られた。今回はさらに切除神経の断端部を直接縫合すると神経束のbucklingを起こしやすいため、断端部を直接縫合しない方法で神経再生の評価を行う。神経再生を阻害しない関節伸展の開始時期と至適関節伸展速度(角度/日)を決定するために以下の実験を行った。<方法>12週齢、体重約350gの雄Wister系ラットの左脛骨神経を6mm切除し、膝関節を130°屈曲する。切除神経の断端部から離れた部位をシリコンシートに固定し断端部は縫合せずシリコンシートで被覆する。術後2週間創外固定器を用い固定し、その後毎日5°ずつ12日間膝関節を伸展した非縫合・伸展群を作製した。<結果>(1)非縫合・伸展群は術後16および24週で2週固定・伸展群、神経移植群に比べて有意差を認めない程の良好な回復を示した。術後4、8、12においては非縫合・伸展群は2週固定・伸展群、神経移植群に比べ有意に回復が劣っていた。(2)平均再生軸索数は、非縫合・伸展群が2週固定・伸展群および神経移植群と比べて有意差を認めなかった。平均再生軸索面積は、非縫合・伸展群が2週固定・伸展群および神経移植群に比べて有意に小さかった。今回、神経再生を阻害しない関節伸展の開始時期と至適関節伸展速度(角度/日)を決定するために以下の実験を行った。<方法>12週齢、体重約350gの雄Wister系ラットの左脛骨神経を6mm切除し、膝関節を130°屈曲することにより神経断端を緊張なしに縫合した。術後1週間創外固定器を用い固定し、その後毎日5°ずつ12日間膝関節を伸展した1週固定・伸展群を作製した。術後4、8、12、16、24週で歩行解析を行い、術後12週で神経採取しトルイジンブルー染色を加えた横断切片から神経線維軸索数と面積を測定した。<結果>(1)1週固定・伸展群は術後4および8週で非固定群に比べて有意に良好な回復を示した。1週固定・伸展群、2週固定・伸展群および神経移植群間に有意差を認めなかった。(2)平均再生軸索数は、1週固定・伸展群が2週固定・伸展群および非固定群に比べて有意に多かた。平均再生軸索面積は、2週固定・伸展群および神経移植群が非固定群に比べて有意に大きかった。

今回はさらに切除神経の断端部を直接縫合すると神経束のbucklingを起こしやすいため、断端部を直接縫合しない方法で神経再生の評価を行う。神経再生を阻害しない関節伸展の開始時期と至適関節伸展速度(角度/日)を決定するために以下の実験を行った。<方法>12週齢、体重約350gの雄Wister系ラットの左脛骨神経を6mm切除し、膝関節を130°屈曲する。切除神経の断端部から離れた部位をシリコンシートに固定し断端部は縫合せずシリコンシートで被覆する。術後2週間創外固定器を用い固定し、その後毎日5°ずつ12日間膝関節を伸展した非縫合・伸展群を作製した。<結果>(1)非縫合・伸展群は術後16および24週で2週固定・伸展群、神経移植群に比べて有意差を認めない程の良好な回復を示した。術後4、8、12においては非縫合・伸展群は2週固定・伸展群、神経移植群に比べ有意に回復が劣っていた。(2)平均再生軸索数は、非縫合・伸展群が2週固定・伸展群および神経移植群と比べて有意差を認めなかった。平均再生軸索面積は、非縫合・伸展群が2週固定・伸展群および神経移植群に比べて有意に小さかった。
慢性肝疾患における細胞外マトリックス分解酵素阻害因子に関する研究

Tissue inhibitor of metalloproteinases (TIMP)は、matrix metalloproteinase (MMP)の特異的阻害因子であり、組織中でのMMPの生物学的活性を規制する重要な因子である。最近我々は慢性肝疾患で肝病変の進行とともに血清中のTIMP-1濃度が上昇することを明らかにした。本研究では慢性肝疾患での肝組織中TIMP-1量、その局在、存在様式を検討するとともに、血清TIMP-1が肝組織中の変動を反映しているかについて検討した。更に、生成促進因子であるTGF-β1との関連についても検討した。肝TIMP-1量は対照群で19.2±8.3ng/mg蛋白であり、慢性非活動性肝炎では変わらなかったが、、慢性活動性肝炎(CAH)2Aでは42.4±11.8、CAH2Bでは55.6±20.4、肝硬変では78.9±5.4と有意に増加していた。肝組織所見と比較検討すると、病変肝での懐死炎症および線維化の進行とともに肝TIMP-1量が増加することが示された。免疫組織染色によりTIMP-1の肝組織内局在を観察すると、硬変肝では肝実質細胞とともに、線維性隔壁の結合織および胆管細胞が染色された。肝組織と血清で同時にTIMP-1を測定すると、両者は有意の正の相関関係を示し、血清TIMP-1が肝TIMP-1の変動を正確に反映することが示された。ゲル瀘過では肝組織および血清中ともTIMP-1の大部分は分子量40kDa前後に抽出され、MMPとの結合型で存在していることが示された。TGF-β1との関連を検討すると、血漿TGF-β1と血漿TIMP-1との間に有意の相関関係が認められた。したがって、慢性活動性肝疾患ではTGF-β1などのサイトカインの増加により、肝組織でのTIMP-1の生成分泌が増加し、細胞外マトリックスの分解が障害されるため、線維肝へと親展することが推測された。なお、これら病態の把握に血清TIMP-1が有用であることが示された。血中TIMP-1濃度は慢性非活動性肝炎、慢性活動性肝炎、肝硬変と肝病変の進展とともに増加し、組織学的肝線維化の程度と密接に関連されていることを明らかにしたが、本年度、肝細胞癌での血中TIMP-1濃度が肝硬変より明らかに高いこと、この増加は腫瘍径の増大と平行していること、さらにTIMP生成促進サイトカインTGF-β1の血漿濃度と密接に関連していることを報告した(薬理と治療)。また慢性ウイルス性肝疾患でB型とC型ではその臨床病態が異なっているが、両群で血清TIMP-1濃度には差がないことを明らかにしJ Hepatolに受理され印刷中である。更に、肝疾患でのTIMP-1量と血漿TIMP-1量との関係を明らかにするため実験を進めている。肝組織よりTIMP抽出方法についてTriton法、加熱法、2Mグアニジン法で検討し、2Mグアニジン法が効率が良いこと、さらに肝重量1-2mgで測定可能であり、生検肝材料で十分測定できることを確認した。現在、各種肝疾患患者での生検肝の一部を用いて測定を進めているが、現時点では生検肝材料の数が少なく正確な結論を出すに至っていない。

ただ、線維化の強い症例で高い傾向を認め、血漿のその変動と似ている感触を得ている。なお、今回血中TIMP-1の測定は血小板の影響を避けるため、血漿を用いて測定しているが、血清のそれに比べて血漿では低値を示したが、血清での成績とほぼ同じ傾向を示している。肝生検を受けた68例(正常肝/脂肪肝10例、慢性持続性肝炎(CPH)18例、慢性活動性肝炎(CAH)2A24例、CAH2B10例、肝硬変(LC)6例)を対象とし、肝組織中のTIMP-1をDeanらの方法により2Mグアニジンで抽出後、TIMP-1EIAキットを用いて肝TIMP-1量を測定した。肝TIMP-1量は対照群で19.2±8.3ng/mg蛋白であり、CPH群では21.9±7.4ng/mg蛋白と変わらなかった。これに対して、CAH2A群では42.4±11.8ng/mg蛋白、CAH2B群では55.6±20.4ng/mg蛋白、LC群では78.9±5.4ng/mg蛋白と対照群、CPH群に比べて有意に増加していた。LC群での肝TIMP-1量は、CAH2A、CAH2Bに対しても有意に高値であった。肝TIMP-1量と肝組織所見を比較検討すると、小葉内変性壊死との関連は少なかったが、門脈周囲壊死、門脈域炎症、肝線維化の程度と密接に関連しており、肝TIMP-1が病変肝での壊死炎症および線維化の進行とともに上昇することが示された。したがって、慢性活動性肝疾患では肝組織でのTIMP-1の生成分泌が増加し、これら病変ではmatrix metalloproteinase活性が抑制され、細胞外マトリックスの分解が障害され、線維肝へと進展することが示唆された。Tissue inhibitor of metalloproteinases(TIMP)は、matrix metalloproteinase(MMP)の特異的阻害因子であり、組織中でのMMPの生物学的活性を規制する重要な因子である。最近我々は慢性肝疾患で肝病変の進行とともに血清中のTIMP-1濃度が上昇することを明らかにした。本研究では慢性肝疾患での肝組織中TIMP-1量、その局在、存在様式を検討するとともに、血清TIMP-1が肝組織中の変動を反映しているかについて検討した。更に、生成促進因子であるTGF-β1との関連についても検討した。肝TIMP-1量は対照群で19.2±8.3ng/mg蛋白であり、慢性非活動性肝炎では変わらなかったが、慢性活動性肝炎(CAH)2Aでは42.4±11.8、CAH2Bでは55.6±20.4、肝硬変では78.9±5.4と有意に増加していた。肝組織所見と比較検討すると、病変肝での壊死炎症および線維化の進行とともに肝TIMP-1量が増加することが示された。免疫組織染色によりTIMP-1の肝組織内局在を観察すると、硬変肝では肝実質細胞とともに、線維性隔壁の結合織および胆管細胞が染色された。肝組織と血清で同時にTIMP-1を測定すると、両者は有意の正の相関関係を示し、血清TIMP-1が肝TIMP-1の変動を正確に反映することが示された。ゲル瀘過では肝組織および血清中ともTIMP-1の大部分は分子量40kDa前後に抽出され、MMPとの結合型で存在していることが示された。TGF-β1との関連を検討すると、血漿TGF-β1と血漿TIMP-1との間に有意の相関関係が認められた。したがって、慢性活動性肝疾患ではTGF-β1などのサイトカインの増加により、肝組織でのTIMP-1の生成分泌が増加し、細胞外マトリックスの分解が障害されるため、線維肝へと進展することが推測された。
フランスのブゥルジュ法学派における法学方法の比較検討と近代法史学の生成過程

私はヨーロッパ初期近代とりわけ16世紀のフランス法学が全体としては新たな方向性を有していたとしても、方法や課題については異なっていたと考えて、そのような見通しのもとに個々の法学者の活動に着目しそれぞれの法著作を通して個別の検討をつみ重ねた。それは、このような基礎的データをふまえることにより、当時の法状況のもとで法学説法理論上いかなる議論が展開されたかを明らかにし、それらがいかなる意義を有したかを探究しうるものと考えるからにほかならない。1991年から3年間にわたって継続してきた本研究において最も留意した点は、各法学者が個別的な法素材をいかに分析したかよりもまずむしろH・E・Troleが方法的に指摘したように、法源領域において前時代と比較してどの程度にまで拡大していったのか、問題領域においてどのような広がりをもったのか、それを推進するに当たって確かな方法的アプローチがどのようになされたかを検討することにあった。以上をふまえて、まずユーグ・ドノーの対象素材に対するアプローチの仕方を再検討し、ついでそれとの比較のためにフランソワ・デュアランやフランソワ・オトマンを検討して、特に前時代との関連性を明らかにした。本研究の最後にとりあげたのはジャック・キュジャスであり、とりわけその『省察と修正』から彼の法源素材対象の広がりについて検討した。その結果、キュジャスはほとんど法の体系的整序に対しては関心を示すことなく、きわめて早い段階から法の諸相を歴史的分析の方法により歴史的な諸段階のものとして明確に把握するという立場に立って法の研究を推進したことが明らかになった。そしてこのような手法は、それ以前の時代との継続性と同時代の問題状況を考慮したとき、専門歴史家の登場(たとえばエチエンヌ・パキエ)とともに法制史学を含む歴史学の研究を支える確固たる方法をも導くことになったと考えられる。1.申請者は、ヨ-ロッパ初期近代とりわけ16世紀のフランス法学が全体としては新たな方向性を有していたとしても、方法や課題については異なっていたのではないかという見通しのもとに、個々の法学者の活動に着目してそれぞれの法著作を通して個別の検討をつみ重ねてきた。このような基礎的デ-タをふまえることにより、当時の法状況のもとで法学説、法理論上いかなる議論が展開されたかを明らかにし、それがいかなる意義を有したかを探究しうるものと考えるからである。2.本年度は、先に公にしたユ-グ・ドノ-の方法をふまえて(「法の歴史学派」とドノ-の方法、ドノ-と法人文主義、愛媛法学会雑誌所掲)、彼のDe iureの検討を中心に、彼の師デュアランのDe iureおよび関係する限りでその学説集注解と同時代のオトマンの法学提要注釈を検討したが、これについてはまだ途上にあり、成果として発表しえていない。3.これに対し、当時の法学界においてドノ-と並び立つジャック・キュジャスについて検討を進めることができた。その結果、ドノ-と比較して大きく異なりをみせているという帰結がえられた。すなわち、この16世紀に大きく進展した法研究の方向性を彼ほど全面的に具現した学者はいないという認識がそれである。キュジャスはドノ-とは異なって法の体系的統合を性急に求めることを排斥し、法素材を6世紀の法典が伝えるまま検討するのではなく、徹底して法素材の歴史的位相にそれぞれをすえて分析的に検討するというアプロ-チを示した。その帰結として種々の新しい方向が提示されている。彼の法源理論は重要である。

彼のこの法研究はまさしく当時の法律学であったが、現在の視点でこれを歴史的にみれば、たとえば法源の改ざん研究、個別法曹のプロソフォグラフィックな研究、パリンゲネシア研究、ロ-マ卑俗法研究等々、近代法史学の進むべき方向性を準備しえたと評価できる可能性を有する。1.ジャック・キュジャスがフランス諸都市の大学を経ての5ブゥルジュ大学に着任した当時には、すでにこの地において新らたな法研究が始められていたから、それとキュジャス自身の方法論とがどのように関連したのかが、方法ばかりでなく法学説という点でも重要な論点となる。本研究の継続的な自的からすれば、彼の法学研究がブゥルジュの法学派の中にあってどのように意義づけられるかに向かうところであった。しかしながら、その種の比較検討を開始するには未だ個々の法学者の素材そのものの検討が不充分であることを認め、本年度今しばらくはキュジャスの著作、しかも法学研究を開始してまもない初期の方法論を確かなものにするに至った作品の検討が必要であると考えた。2.そのような著作として(1)1554年11月刊J・アマリトン編『ウルピアーヌス法範に関する注解』(2)1556年2月刊『ユスティーニアーヌス法学提要に関する注解』(3)1556年3月刊『学説集成表題に対する詳論』(4)1557年12月刊『パウルス意見録に関する注釈』(5)1556年4月1559年6月逐次刊行の『省察と修正』第1巻第5巻のような作品がある。いずれも彼の30代のもので、彼は比較的若い段階で法源研究領域の拡大を目指しているし、ユスティーニアーヌス帝期の素材の注釈に豊富な非法律史料の知見やギリシア語文献の知識を組み入れている。これら個々の検討結果の詳細は未だ途上にあるものも含め順次公にするが、この検討の目的は要するところ彼が法学研究の素材対象としてどれほどまでに拡がりを示しているかを個々の注釈の対象となったテクストにそくして検討することであり、第2回目の彼のブゥルジュ大学就任以前に(彼は生涯を通じ3度にわたってこの地を研究教育の場にした)法へのアプローチについてどこまで新機軸を出すことに成功しているかを明らかにし、後に予定する比較の素材を示すことにある。1991年から3年間にわたって継続してきた本研究は、初期近代における(フランス)法学のありようを従来のように包括的に把握するという立場をいささかなりとも脱して、個々の法学者が対象素材にたいしてどのようなスタンスをとっていたかを明らかにすることに焦点を絞ってきた。その際留意した点は、各法学者が個別的な法素材をどのように分析したかに向かうよりも、まずむしろ、H.E.Trojeが方法的に指摘したように、法源領域において前時代と比較してどの程度にまで拡大していったのか、問題領域においてどのような広がりをもったのか、それを推進するに当って確かな方法的アプローチがなされたのか、を検討することにあった。これらの諸点につき、「研究成果報告書」(1994.3,A-4判,65頁)において指摘したとおり、とりわけ、キュジャスの法源領域の広がりは、法の諸相を歴史的方法により歴史的な諸段階のものとして明確に把握するという立場を示すものになったことが明らかとなった。この歴史的分析の方法は、専門歴史家が登場したときに、法史学を含む歴史学の確固たる方法ともなっていったことも同時に明らかとなった、と考えられる。
TBP-2/Txnipによるインスリン抵抗性機構の解明とケミカルバイオロジー

Thioredoxin interacting protein (Txnip)/TBP-2は、癌抑制、糖代謝制御に重要な役割を果たす。今回、Txnipの分子機構を明らかにするために、プロテオミクス解析を行い、Txnipと相互作用する分子の候補を同定し、新たな2型糖尿病薬と抗癌剤開発のための基盤を提供した。また、スクリーニングにより、糖によるTxnip発現誘導を抑制し、糖取り込みを改善し、動物実験にて血糖値を低下させる効果を示す低分子化合物を得た。さらに、Txnip蛋白質の発現制御経路を明らかにした。これは、未知のシグナル制御機構を明らかにし、新たな糖代謝制御改善薬の開発につながる成果である。アルファアレスチンファミリーに属する分子thioredoxin binding protein-2 (TBP-2)/ thioredoxin interacting protein (Txnip)は高血糖により誘導され、インスリン抵抗性を悪化させる因子である。これまでの研究実施状況として、糖によるTBP-2発現誘導を指標とした低分子化合物スクリーニングにより、糖による細胞内転写活性化シグナルを制御し、糖の細胞内取り込みを改善する化合物の候補を得た。現在、得られた化合物のvalidationを行い、さらにこれらの候補を用いてケミカルバイオロジーとして糖シグナルやインスリン抵抗性制御機構を解析している。さらに、TBP-2はTGFbetaシグナルを制御し、癌抑制因子としても働くので、プロテオミクス解析によりTBP-2と相互作用する分子の候補を得た。現在、その候補についての検証を行っている。さらにプロテオミクス解析の改良を行い、その機構の解明を目指して検討を行っている。アルファアレスチンファミリーに属する分子thioredoxin interacting protein (Txnip) / thioredoxin binding protein-2 (TBP-2)は高血糖により誘導され、インスリン抵抗性を悪化させる因子である。これまでの研究の実施状況として、糖によるTxnip発現誘導を指標とした低分子化合物スクリーニングにより、糖による細胞内転写活性化シグナルを制御し、糖の細胞内取り込みを改善する11個の化合物の候補を得た。得られた化合物を用いて糖シグナルやインスリン抵抗性制御機構を解析し、これらの化合物の働くシグナルpathwayを明らかにした。さらに、プロテオミクス解析により、Txnipと相互作用する分子の候補を得ており、それらの候補について検証を行い、Txnipの分子機構の解析を進めた。これまでの研究の実施実績として、糖によるTxnip発現誘導を指標とした低分子化合物スクリーニングにより、糖によるTxnip発現誘導を抑制し、糖の細胞内取り込みを改善する11個の低分子化合物を得た。これらの化合物AおよびBは2型糖尿病モデルマウスob/obにおいて血糖値を低下させる効果を示した。さらに、得られた化合物を用いてこれらの化合物の働くシグナル経路を解析し、Txnip蛋白質の発現制御機構を明らかにした。これはTxnipを応用した新たな糖代謝制御改善薬の開発につながる成果である。一方、Txnipは癌抑制分子としても働く。プロテオミクス解析により、Txnipと相互作用する分子を同定した。このことによりTxnipの癌抑制における分子機構の解析を進め、新たな抗癌剤開発のための基盤を提供した。これらは、概ね計画どうりであり、計画は順調に進展していると考えられる。病態生化学高血糖によるTxnip発現誘導を阻害し、糖の取り込みを改善する11種類の新規の低分子化合物を用いて、2型糖尿病モデルマウスOb/Obに投与実験を行い、実際にインスリン抵抗性に影響を与えるかどうかin vivo評価を進めるともに、ケミカルバイオロジーとして、そのターゲット分子や構造機能相関を解析する。並行してTxnipの作用の分子機構の解明を行う。現在、得られた化合物を用いて糖シグナルやインスリン抵抗性制御機構を解析している。

さらに、TBP-2はTGFbetaシグナルを制御し、癌抑制因子としても働くので、プロテオミクス解析によりTBP-2と相互作用する分子の候補を得た。さらにプロテオミクス解析の改良を行い、その機構の解析を行っている。これらは、概ね計画どうりであり、計画は順調に進展していると考えられる。1)プロテオミクス解析により同定したTBP-2/Txnipと相互作用する分子についてTBP-2/Txnipとの蛋白質相互作用がどのような分子機構でインスリン抵抗性を調節するか、特にインスリンによるIRS-1の発現誘導やAktリン酸化に与える影響に注目して検討する。TBP-2/TxnipとNeddfamilyユビキチンリガーゼの相互作用を示す知見を得ているので、それらの協調作用によるシグナル伝達機構を解析する。2)同定したTBP-2/Txnipの糖による発現に影響を与える候補について糖による転写活性化やインスリンシグナル制御などについて検討する。また、類縁化合物による検討を行う。3)プロテオミクス解析により同定したTBP-2/Txnipと相互作用する分子について解析し、どのような機構でTBP-2がTGFbetaシグナルを制御するかについて検討する。
DNA修複において重要な役割をもつ、ミスマッチ修複系酵素群の構造機能解析

DNA修復系酵素MutSファミリーのうち、MutS2に着目し、その分子機能解析をおこなった。高度好熱菌mutS2の遺伝子破壊株を作製し、表現型を野生株と比較したところ、mutS2欠損株では、高い相同組換え効率を示すこと、マイトマイシンCに対する耐性が上昇していることが分かった。また、生化学的な解析から、MutS2は、相同組換えの一般的な中間体であるD-loop構造を認識し、切断する活性を持つ事が示唆された。さらに、D-loop構造を切断するヌクレアーゼ活性がMutS2のC末端に存在するSmrドメインに由来することを部位特異的変異導入法により明らかにした。このドメインはバクテリアからヒトまで高度に保存された機能未知のドメインであったが、本研究により新奇のヌクレアーゼドメインであることが示された。そこで、このドメインのヌクレアーゼ活性を詳細に調べるために、フーリエ変換型質量分析計を用いた解析法を確立した。この解析により、Smrドメインのヌクレアーゼ活性は、配列特異性を持たない事、ホスホジエステル結合をリン酸基の5'側で加水分解する事などが分かった。これは、フーリエ変換型質量分析計によりヌクレアーゼ活性を解析した初めての例である。以上の結果から、MutS2は相同組換え申間体を認識し、解離させることにより相同組換えを抑制すると考えられる。相同組換えは、外来DNAの取り込みなどを伸介する反応であり、これを制御することによりゲノムの安定性の維持に関与しているといえる。DNA修復系酵素MutSファミリーのひとつ、MutS2に着目し、その分子機能解析をおこなった。まず、限定分解により、MutS2のN末端領域とC末端は、それぞれ安定なドメインを形成していることがわかった。C末端のドメインと相同性を持つ配列はSmrと呼ばれ、ウィルスからヒトまで広く保存されていることから、このドメインの重要性が予想されているが、その機能については全く知られていなかった。次に、各ドメインについての機能解析を行った。MutS2のN末端側ドメインはATPase活性、DNA結合能を有していた。一方、C末端側のSmrドメインはDNA結合能に加えて、末端の無いDNAを切断する活性を有した。これはSmrがDNA切断活性を持つことを示した最初の報告である。このような活性は、DNA組換えや修復に必須の活性であり、本酵素のDNA組換えや修復への関与が予想される。また、Smrは他のヌクレアーゼとは全く配列相同性を持たないことから、この配列は新規のヌクレアーゼモチーフを含むと考えられる。続いて、N末端側ドメインが組換え中間体であるホリデイ構造に特異的に結合することを明らかにした。N末端側ドメインと相同性を示す領域は、MutS1にも存在するが、MutS1はホリデイ構造に対して特異性は示さないことから、相同性の高いDNA結合ドメインでもわずかな違いにより特殊な構造を認識するようになるといえる。また、驚いたことにSmrドメイン単独でもホリデイ構造を認識することが分かった。さらに、MutS2およびSmrはホリデイ構造を特異的に切断することを発見した。これらの結果は、MutS2がDNA組換えに働くこと、また、生物界にひろく存在するSmrがホリデイ構造の解離酵素として働くことが示された。
電動補助車いすの無段階トルク制御に関する研究

この研究では,開発コンセプトとして,「快適な操作性と軽量なパワステ車いす」を掲げ,自動車のパワーステアリング並みの操作性と利用者一人でも取り扱える程度の軽量性を備えた電動補助車いすの実現化を目標とした.当該研究期間において,以下の項目について研究を行った.(1)制御方法の検討,(2)制御システムの設計・試作,(3)トルク検出器の設計・試作,(4)トルク検出器の設計・製作,(5)トルク検出器用実験装置の設計・製作,(7)試作1号機の製作,(8)試作1号機の制御プログラムの開発,(9)試作1号機によるデータ収集,(10)試作2号機の機構部の設計・製作,(11)試作2号機の制御システムの設計,(12)試作2号機の制御システムの構築,(13)試作2号機によるデータ収集,(14)最適形状等の検討,(15)最適な制御アルゴリズムの検討研究の結果,要である小型軽量な手動駆動力検出器を開発し.非接触での電力・信号伝達の新たな方法を考案するに至り,無段階トルク制御システムを備えた電動補助車いすを提案し,市販品をベースにした試作1号機を製作することができた.また,軽量化設計にも取り組み,利用者一人でも取り扱える程度までの大幅な軽量化を実現した試作2号機を製作することができた.今後の課題として,現在の制御用マイコンであるH8/3048Fではプログラム開発に制約があることから,その後に発売された上位機種のSH2を使用し,より高機能な制御システムを構築予定である.また,市街地での段差の実態調査を行ったところ,車道と歩道の段差など,12段程度の小段差を乗り越えることができれば,車いすの行動範囲が大幅に拡がると予想されるので,軽量な小段差乗り越え機構の開発も必要と思われる.この研究では,開発コンセプトとして,「快適な操作性と軽量なパワステ車いす」を掲げ,自動車のパワーステアリング並みの操作性と利用者一人でも取り扱える程度の軽量性を備えた電動補助車いすの実現化を目標とした.当該研究期間において,以下の項目について研究を行った.(1)制御方法の検討,(2)制御システムの設計・試作,(3)トルク検出器の設計・試作,(4)トルク検出器の設計・製作,(5)トルク検出器用実験装置の設計・製作,(7)試作1号機の製作,(8)試作1号機の制御プログラムの開発,(9)試作1号機によるデータ収集,(10)試作2号機の機構部の設計・製作,(11)試作2号機の制御システムの設計,(12)試作2号機の制御システムの構築,(13)試作2号機によるデータ収集,(14)最適形状等の検討,(15)最適な制御アルゴリズムの検討研究の結果,要である小型軽量な手動駆動力検出器を開発し.非接触での電力・信号伝達の新たな方法を考案するに至り,無段階トルク制御システムを備えた電動補助車いすを提案し,市販品をベースにした試作1号機を製作することができた.また,軽量化設計にも取り組み,利用者一人でも取り扱える程度までの大幅な軽量化を実現した試作2号機を製作することができた.今後の課題として,現在の制御用マイコンであるH8/3048Fではプログラム開発に制約があることから,その後に発売された上位機種のSH2を使用し,より高機能な制御システムを構築予定である.また,市街地での段差の実態調査を行ったところ,車道と歩道の段差など,12段程度の小段差を乗り越えることができれば,車いすの行動範囲が大幅に拡がると予想されるので,軽量な小段差乗り越え機構の開発も必要と思われる.平成10年度は、試作1号機の機構製作、制御システムの設計・試作、制御方法の検討と並行して、軽量化を重視した試作2号機の機構設計を開始した。1.試作1号機の機構製作購入済みの電動補助ユニットを改造し、試作1号機の機構部を製作した。2.制御システムの設計・試作制御回路を設計・製作した。トルク検出器には、改造前のハンドリムスイッチを流用している。ワンチップマイコンには、今後の機能拡張等を考慮して、高機能かつ安価な最新のものを採用した。簡単な制御プログラムを作成し、動作チェックまでを行った。3.制御方法の検討車いすのいくつかの駆動パターンを調べ、備えるべき制御機能について検討を加えた。制御ソフトウェアが備えるべき応用機能として、(1)非線形性補正、(2)中立位置自動設定、(3)不感帯制御、(4)時定数可変加減速制御、(5)左右輪同期制御、などが挙げられる。4.試作2号機の設計トルク検出器の最終形状に大きく影響するので、試作2号機の機構設計を並行して開始した。試作2号機は軽量化を重視している。5.トルク検出器の設計・試作光学スリット式トルク検出器を開発し使用する予定だったが、試作2号機の機構設計の検討結果より、本応用においては歪みゲージ式の方が小形軽量化に適していることが判明したので、方針を変更し、歪みゲージ式トルク検出器の設計を開始した。6.トルク検出器用実験装置の設計・製作試作するトルク検出器の評価を行う実験装置は、方針変更により再設計を行っており、製作は一部部品にとどまっている。平成11年度は、試作1号機の制御プログラムの開発と平行して、軽量化を重視した試作2号機の機構設計・製作および制御システムの設計を行った。また、試作2号機用の高精度小型トルク検出器を開発した。1.試作1号機の制御プログラムの開発制御プログラムが備えるべき応用機能の実現に手間取り、走行データ等の収集を行える段階まで開発することができなかった。

来年度は最優先課題として力を注ぎたい。2.試作1号機によるデータ収集制御プログラムの開発が遅れ、制御系に関するデータ収集を行うに留まった。3.試作2号機の機構部の設計・製作高性能モニタおよび軽量減速機を採用し、片輪重量2.5kgを実現した。これは目標重量3.5kg(全体16kg)を大きく下回っており、開発目標の一つである軽量化を達成できた。4.試作2号機の制御システムの設計トルク検出用および速度検出用に簡易マイコン(PICマイコン)を追加することで、制御用マイコンの負担軽減を図った。今年度は概略設計を終え、詳細設計に着手している。来年度は回路製作に取り掛かる。5.トルク検出器の設計・試作歪みゲージ式の小型トルク検出器(試作2号機用)を設計・試作・製作を行った。構造上、回転トランスによる電力・信号伝達が必要であり、回転トランスにより精度が劣化する問題を回避する方式を開発した。これにより、回転トランスの軽量化および加工・組立精度の抑制も実現することができた。6.トルク検出器用実験装置の設計・製作設計・製作を終えた。試作したトルク検出器の評価を行い、所望の性能を備えていることを確認した。平成12年度は、試作1号機の制御プログラムの開発・データ収集と並行して、軽量化を重視した試作2号機の制御システムの構築を行った。また、試作2号機用回転トランスを開発し、高精度小型トルク検出システムを開発した。さらに、コストダウンについても検討を加えた。1.試作1号機によるデータ収集走行データ等の収集を開始した。試走しながら最適制御条件を探っているため、最適制御アルゴリズムの検討に十分なデータ収集までさらに時間をかける予定である。2.試作2号機の制御システムの構築回路系の詳細設計を終え、必要な回路をすべて製作した。トルク検出器の信号・電力伝達のための回転トランスについて効率等の検討を加え、回転トランスおよび周辺回路の最適化を図った。制御プログラムについては制作中である。3.試作2号機によるデータ収集回転トランスおよび周辺回路の最適化を図ったことで、手動駆動力を、精度よく検出できることを確認した。次年度は走行データの収集までを行いたい。4.最適形状等の検討試作2号機においては軽量化を達成できたが、コスト的には市販品同様高額となっている。そこで、最適形状の検討とともにコストダウンについても検討を加えた。その結果、減速機についてはおよそ1/10まで低コスト化が実現できた。モータについても検討を加え、廉価なモータでは騒音が問題であること、スキュー構造とすることで騒音を低減できることが分かった。形状については、試作2号機に細かい改良を加える程度で十分実用になると思われる。5.最適な制御アルゴリズムの検討これまでのデータより、これまで採用していた時定数可変制御よりも、加速と減速で時定数を変える、異時定数制御の方が、制御アルゴリズムが簡単になるとともに、自繰式車いすの感覚に近くなると予想され、制御プログラムの再構築を図っている。
細胞内蛋白質分解と選択的神経細胞死の発生機構の関連性についての研究

脳神経系における神経細胞の病的細胞死およびその反対側にある不死化(腫瘍化)については未知の部分が多い。第一に、神経疾患であるアンジェルマン症候群(AS)は重度の発達遅滞・痙攣・失調様歩行を特徴とし、顕著な小脳萎縮から選択的な神経細胞死が考えられる。ユビキチンリガーゼE6APおよびそのファミリーの生理機能とともに病態生理を明らかにし、ユビキチン依存性蛋白質分解と神経細胞障害の関連性について解明を推進した。第二に、神経線維腫症2型の病因遺伝子産物NF2は腫瘍抑制蛋白のひとつであり、その遺伝子変異で不死化した神経良性腫瘍を発生する。NF2蛋白(merlin)がカルシウム依存性プロテアーゼ(カルパイン)で特異的に分解されることで、NF2遺伝子に変異のない腫瘍でも蛋白質レベルでの不活性化があることを見出した。このように、神経細胞死および細胞不死化の両面から解析を行った。(1) E6APと同じユビキチンリガーゼファミリーに属するNedd4は、当初、神経分化で発現レベルが低下する遺伝子として報告された。リガーゼドメインに加えて、カルシウム依存性に膜リン脂質に結合するC2ドメイン、蛋白質間相互作用に働くWWドメインから構成されている。哺乳細胞発現ベクターおよび特異的な抗体を用いて、Nedd4は主に細胞質、核周囲および細胞膜近傍に存在した。神経芽細胞の神経分化過程において蛋白質レベルでも低下し、細胞質と神経突起の両者に染色された。結合蛋白または基質の同定には、酵母2ハイブリド・システムを用いて解析中である。リコンビナント蛋白を用いたユビキチン転移システムの解析から、Nedd4およびE6AP共役して働くユビキチン結合酵素(E2酵素)を同定した。(2) merlinの分解と細胞不死化との関連性について解析した。カルパイン切断部位のペプチドシーケンスを決定した。ERM相同領域とa-ヘリツクス領域の間で切断されていた。しかも、髄膜腫などの神経腫瘍組織では、カルパインが恒常的に活性化されていることが判明した。このように蛋白質分解の異常に基づく腫瘍の発生メカニズムを、蛋白質分解変異と名づけた。
希土類錯体及び化合物における混成効果による圧縮率異常

希土類金属間化合物の物性はf電子の波動関数の重なり、即ち混成効果に強く支配されている。物質の圧縮率は近似的にその結合力に反比例する物理量であり、その定量的解析から我々は結晶構造変化、価数転移ばかりでなく、その物質の結合様式を明らかにする事が出来る。本研究は高圧下のX線回折を使い、格子定数の圧力変化や歪み計を使った熱膨張の測定から、高圧下の希土類化合物の電子状態に関する知見を得ることを目的とする。本年度は試料としてCeT_3(T=Al、Pd)化合物にたいする測定を行い以下のような結果を得た。(1)CeAl_3の高圧下におけるX線回折CeAl_3は六方晶型結晶構造を持つ金属間化合物である。このため格子定数はa軸とc軸にたいして測定された。a軸、c軸共に圧力に対して滑らかに減少し、室温下16万気圧まで不連続な飛びや結晶変態は観測されなかった。圧縮率はa軸とc軸の間で大きな違いがあり、a軸のほうが2倍以上圧縮されやすい事が分かった。又軸比c/aの値は高圧下で増加していき六方最密構造の場合の理想的な値1.63に近ずいていくことがわかった。体積弾性率Bは53.6GPaとなり他のCe化合物に比べて異常に小さいことが分かった。この事実はf電子の強い局在性を示唆しているものと思われる。CePd_3及び参照物質としてLaPd_3の熱膨張を4.2K-300Kの温度範囲で測定した。熱膨張係数への磁気的な寄与α_<mag>(T)は約140Kで最大値をとり、結晶場の存在によるShottky型の異常を示唆している。またこの温度で電気抵抗も広い山を持つことがわかった。
組織特異的に細胞の時限破壊を引き起こす新しいマウス交配系の開発とその応用

Cre-loxのDNA配列特異的リコンビネーションを利用して、Cre、loxそれぞれの遺伝子を持つマウスの交配して生じる遺伝形質を解析するのが本研究の目的である。まず生体の中でCre-loxが機能するかを培養細胞で確認する。ターゲット遺伝子に細胞破壊用のジフテリアトキシンAフラグメント遺伝子(DT-A)を、プロモーターにアストグリア特異的遺伝子(S100)の5'上流域あるいはモロニ-白血病ウイルスLTRを用いた。DT-Aの間にloxで挟まれた転写終結シグナス(ストッパー)を挿入した。モロニ-白血病ウイルスLTRに駆動される転写を、ストッパーとして酵母由来のスペーサーDNAを挿入することでほぼ100%転写を止めることができた。DT-Aは強力な細胞破壊効果を示した。Cre遺伝子の発現を内在性の遺伝子発現と区別させるために、人工ペプチドFLAGを付加したターゲット遺伝子とのコトランスフェクションによって検討した。その結果、Creによる正確な切断と挿入を確認することができた。ジーントラップ法はマウス個体での遺伝子発現とその構造、染色体の位置を同時に解析できるので、本研究に関連して新しい遺伝子のプロモーターの検索にジーントラップ法を用いた。本研究を完結するには解決しなければならないいくつかの困難な点が明らかになった。ねらった組織・細胞を選択的して、時期特異的に破壊するために、染色体上での導入遺伝子のポジッション効果を受けないように、ケラチン18遺伝子のインスレーターを使用したが、期待程の効果は得られなかった。しかし他のインスレーターでは効果が見られている(私信)ので再度検討の必要はある。本研究は、プロモーター依存性に組織特異的ならびに時限的に細胞破壊を起こす2系統のマウスを開発することである。7年度に予定し、達成した研究は、1)Creマウス用導入遺伝子の作製。2)Ioxマウス用ターゲット遺伝子の作製。3)上記の導入およびターゲット遺伝子が培養細胞で細胞特異的に発現するかを確認。PCR法によってCre cDNAを調製した。Creが核内で効率良く機能するためにCre cDNAにSV4.0のlarge T抗原のNLSを付加した。またCreが発現している細胞を同定するために、レポーター遺伝子にlacZを用いた。CreとlacZ間にIRESを挿入しジシストロニックmRNAが発現する用に工夫した。1)2)の導入遺伝子の構築は完了した。S100βのプロモーターを使用した時アストログリオーマ由来のC6細胞でCreおよびlacZの発現を確認している。一方、細胞破壊用のDT-Aの発現を制御するためにストッパーとしてSV40ポリAシグナルを34塩基からなるlox配列に挿入した。DT-Aは1分子だけでも細胞を破壊するので、ストッパーは転写を完全に抑制しなければならないことが分かった。現在このストッパーの効果を検証中である。このSV40ポリAシグナルがストッパーとして機能することを培養細胞系で確認した後、Cre、loxの導入遺伝子をマウス受精卵の雄性前核にマイクロインジェクションする。8年度はloxマウス用のターゲット遺伝子とCreマウス用のCre遺伝子を改良し、作製したプラスミドを培養細胞に導入して発現で検討した。ターゲット遺伝子に細胞破壊用のジフテリアトキシンAフラグメント遺伝子(DT-A)を用いた。プロモーターのアストロサイト特異的遺伝子(S100)の5'上流1kbあるいはモロニ-白血病ウイルスLTRとDT-Aの間にloxで挟まれた転写終結シグナル(ストッパー)を挿入した。細胞破壊される効率を検定するために、予備実験としてDT-Aの変わりにレポーター遺伝子として大腸菌βガラクトシダーゼ(lacZ)を用いた。

ストッパーとして、最初、SV40ポリAシグナルを利用したが、モロニ-白血病ウイルスLTRに駆動される転写を止めることができなかったが、酵母由来のスペーサーDNAを挿入することでほぼ100%転写を止めることができた。一方、Cre遺伝子の発現は、初代培養細胞系を使ってターゲット遺伝子とのコトランスフェクションによって検討した。上記のストッパーを5'端に挿入してプロモーター非依存性発現を抑える様にしたが、プロモーターが存在しなくてもCre遺伝子が発現し、ストッパーがはずれレポーター遺伝子のlacZ陽性細胞が観察された。特異的細胞破壊が本研究の中心課題であるため、現在Cre遺伝子の発現の制御に取り組んでいる。神経の形態形成を詳細に観察するため、神経成長円錐に局在する蛋白を分離・精製し、それらのペプチド抗体を作製した。平成9年度の研究実績は、1)Cre-lox遺伝子発現制御システムを応用して、ジフテリアトキシンAフラグメント遺伝子(DT-A)の細胞破壊効果と、2)ジーントラップ法による新しいプロモーターの発見である。1)DT-Aの効果をアストロサイトーマ由来のC6細胞株を用いて行なった。DT-Aを活性化するプロモーターにモロニ-白血病ウイルスLTRを用いた。モロニ-白血病ウイルスLTRの下流に、両端を34塩基からなるlox配列で挟さまれた転写終結シグナル(ストッパー)を挿入し、その下流にDT-Aとネオマイシン耐性遺伝子を連結した細胞破壊ベクターを構築した。G418で選択して形質転換C6細胞株を得た。モロニ-白血病ウイルスLTRに駆動される転写を、ストッパーとして挿入した酵母由来のスペーサーDNAでほぼ100%転写を止めることができた。次に、培養細胞内におけるCreリコンビナーゼの活性を確認できたので、細胞破壊ベクターとCre遺伝子のコトランスフェクション行なった。その結果、loxに挟まれたストッパーがCreによって切断・除去されてDT-Aが転写され、C6細胞が破壊され、Cre-loxによる正確な切断を確認することができた。2)ジーントラップ法はマウス個体での遺伝子発現とその構造、染色体の位置を同時に解析できるので、本研究に関連して新しい遺伝子のプロモーターの検索にジーントラップ法を用いた。神経細胞と心臓に優先的に発現している遺伝子と殆どすべての細胞に発現している2系統のジーントラップマウスを樹立した。これらの遺伝子のプロモーターが利用できる段階まで研究を進めた。
台南文学の研究‐日本統治下の日本語文学を中心に

本研究は、日本統治下にあった戦前の台南における文学活動を、日本語文学を中心に、いかに都市台南を表象したかという視点から研究するものである。台湾の古都台南は、佐藤春夫が1925年に発表した「女誡扇綺譚」以来、日本語による文学表象の対象となり、西川満「赤嵌記」や庄司総一『陳夫人』、新垣宏一「砂塵」などが続々と書かれ、台湾人の詩人呉新榮や楊熾昌も活躍し、また前嶋信次や國分直一による歴史学・民族学研究の対象ともなった。本研究では、文学による台南表象を、当時の歴史的な文脈と照らし合わせつつ研究し、同時にこの作業を通して、周辺からの文学史の再考を試みた。本年度は、研究課題「台南文学の研究-日本統治時代の日本語文学を中心に」について、以下の実績をあげることができた。(1)研究成果の公表:中国文芸研究会の例会(同志社大学、10月)において、「植民地の地方都市で、読書し、文学を語り、郷土を描く-日本統治下台南の塩分地帯における呉新榮の文学活動」と題して口頭発表を行った。また、その内容を論文にまとめ、日本文学協会の学会誌『日本文学』第61巻第11号(11月)に、「植民地の地方都市で、読書し、文学を語り、郷土を描く-日本統治下台南の塩分地帯における呉新榮の文学」と題して掲載した。この発表・論文は、戦前の台南で活躍した作家呉新榮の文学活動について、一、読書経験、二、文学ネットワーク、三、郷土台湾を描く文学、の三点から分析したものである。日本統治期の台南文学について、さらに続稿を準備しており、継続して公表して行きたい。(2)資料・書籍の購入と分析:本年度は、科学研究費助成事業を利用して、植民地・日本文学・外国文学・比較文学と関わる資料や研究書を購入することができた。現在これらの資料や先行研究の分析を順次進めている。(3)資料の調査・収集と分析:12月に台南の台湾文学館や台南市立図書館、台北の国立台湾図書館で、関係する資料の調査・収集を行ない、台南文学と関わる資料や書籍を閲覧できた。現地の図書館のみが所蔵する資料・書籍も多く、成果があった。また、現地の文学研究者と意見を交換するなど、大きな収穫があった。(1)研究成果の公表:本年度は、一回の研究会発表を行い、二編の論文を発表した。まず「新垣宏一の見た台南-「女誡扇綺譚」から「第二世の文学」、「本島人の真実」へ」と題する発表を、東京台湾文学研究会の例会(東京大学、6月)で行った。またその内容をまとめ、「新垣宏一と本島人の台南-台湾の二世として台南で文学と向き合う」と題する論文を、関西学院大学法学部外国語研究室の紀要『外国語外国文化研究』第16号(2014年3月)に掲載した。次に、「古都で芸術の風車を廻す-日本統治下の台南における楊熾昌と李張瑞の文学活動」と題する論文を、大阪市立大学中国学会の雑誌『中国学志』第28号(12月)に掲載した。これで、過去に研究を行った、前嶋信次・國分直一を含む、計4名の日本人作家・学者の見た台南について、研究成果を挙げることができた。現在これらの成果を収めた研究書の刊行を準備中である。(2)資料・書籍の購入と分析:本年度も、科学研究費助成事業を利用して、植民地・日本文学・外国文学・比較文学と関わる資料や研究書を購入することができた。これらの資料や先行研究の分析を進めた。(3)資料の調査・収集と分析:12月に台南の台湾文学館や台南市立図書館で、関係する資料の調査・収集を行ない、台南文学と関わる資料や書籍を閲覧できた。また、本年度も現地の文学研究者と意見を交換するなど、大きな収穫があった。(1)研究成果の公表:10月に台湾台北の中央研究院亜太区域研究専題中心で開かれた国際シンポジウム「日本文学中的台湾」において、「庄司総一『陳夫人に至る道-『三田文学』発表の諸作から日中戦争下の文学へ」と題して発表した。この発表は、シンポジウムと同名の報告論文集に、論文としても掲載された。