hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
中世東地中海文化圏における文書編集の考察

これらはいずれも第三年度目に予定されている総括に際し、国内外からのコメントおよびレビューを有意義なものとするために前もって報告を関係学者に知らせておくという意図がありその目的は達成されている。以上の結果、史料解析作業およびその国際的な開示の活動成果として、進捗がみられた。活動計画に変化が生じたものの、デジタル媒体で入手を果たしていた主要写本の分析を優先する形で研究計画には支障ない形で、在外研究の効率化を目指す。また研究者間のコミュニケーションをより深めた形での総括イベントの設計が可能となった。重要資料を第二年度中に揃えきることに専念して、基本資料収集の大半を終えた形で最終年度を開始することにしたため。変更点としては、初年次で得た国際的なネットワークのため、現時点までの成果に関心を持った研究者との共同研究出版に招聘され、その原稿作成のための校正費用などが必要となった。もともと旅費・在外調査費として計上された経費についての見直しが必要となり、計画していた活動時期を、三年目に移した。初年度の国際学会で得た知見をもとに写本史料収集の計画を検討していたところ、写真・イメージファイルおよびフィルムでの画像収集(これは第二年度までに重要資料分については達成)について、渡航期間・滞在中の活動資格・安全性の確保には十分な余裕をもつべき旨、知見のある研究者より強く注意を受けた。ここで予定していた調査が、主要部分の補足に類する細かな部分に関わる箇所でもあったことから、研究進捗には大きな遅れをもたらすものでないことを確認しつつ、在外調査についてより一層の合理化のため計画を再検討した。また第三年度までで購入を検討していた必要な文献を、調査に先立っての環境整備に専念するために二年度までにすべて収集する形となった。平成30年度は、成果発表を重視した。個別成果の発信に努め、国際学会(米国Byzantine Studies Conference)での報告、英文共著書(Radical Traditionalism)の出版、英文査読国際誌への共著論文の発表、国内全国誌への論文(『西洋中世学研究』誌)発表を行っている。これらは、総合成果として当初予定されていた校本テキスト編纂作業の優先順位を入れ替えて行われたものである。ただしこの結果、研究予定にない形での大きな成果として、査読国際誌(Revue d'Histoire des Textes誌)に共著論文を発表でき、本研究の存在を知らしめるに至った。これらはビザンツ帝国の神学アンソロジーである『ドグマティケー・パノプリア』(現在まで学術校訂の刊行なし)について、その校本の情報整理の過程で、テキスト本文の分析から学術的発見を果たし、その都度に報告を行ったものである。とくに「パウリキアノイ」章にまつわる分析は、その異端者集団の歴史的意義を問い直す論考に結実した。従来研究者が同異端集団を「中世の二元論異端」ととらえてきた根拠に、修辞上のアナクロニズムを指摘し、むしろ同時代においては、教義論上の「異端(heresy)」とするよりも、セクト・カルト・ミリシアとしての活動相に着目すべき必要性を論じている。
廃棄物地層処分に関する泥質軟岩内の微小浸透流の計測と物質移行に関する研究

本研究の内容は大きく分けて、(1)開発したEvaporation Logging装置の改良と、スイス、モンテリ地下実験場への適用、(2)青森県六ヶ所村、余裕深度処分場への蒸発量計測と不飽和浸透流の解析、(3)計測・解析結果の3次元バーチャルリアリティ映像化、(4)岩盤評価、地下水解析及び地下水モニタリングに関する基礎研究、である。モンテリ地下実験場の計測では、現地責任者のP.Bossart博士及び技術者Edi-Meire氏と共に、トンネル周辺に掘削されたボーリング孔内の蒸発量分布を計測した。その結果、トンネル周辺の透水係数が評価でき、また、トンネル掘削に伴う緩み域の発達を評価した。青森県六ヶ所村、余裕深度処分場アクセストンネル周辺岩盤は透水性が大きく、壁面やボーリング孔内に地下水が浸透しEvaporation Logging装置は使用できなかった。そのため、トンネル換気に伴う蒸発量変化を2点センサー型蒸発計で測定し、測定値を用いて、トンネル周辺の不飽和浸透流解析を行い、地下水流れの非定常過程を評価した。さらに、アクセストンネル形状や計測結果の3次元バーチャルリアリティ映像化を行った。基礎研究では、岩盤内の地下水流動経路となる割れ目系形状を定量的に評価する手法、割れ目系内の流れを解析する方法及び、地下水流れをモニタリングする方法を開発した。研究成果は、基礎研究を中心に、平成14年度は5編、平成15年度は4編、平成16年度は5編の論文が国内外学会誌に発表された。なお、現地計測結果についての論文は現在投稿中である。本年度の研究実績は下記である。主に計測装置の設計・製作と基礎的研究に焦点を絞った。まず、Evaporation logging装置の設計・製作を行い、室内試験によりその計測精度を調べた。室内試験で注目した点は、ボーリング孔壁面を乾燥するために送入する空気の乱れである。本装置は、ボーリング孔内への微小湧水量を蒸発させ、蒸発量を測ることにより湧水量を計測し、ボーリング孔付近の不飽和透水係数を推定するものである。計測の基本的なアイデアは、孔壁直上に形成される水分拡散層内で水分流動を測定するものであり、空気流動の乱れに大きく影響される。室内試験は、その乱れの影響を定量的に調べるものである。実験の結果、空気注入点付近で乱れが大きいものの、整流板の設置によりかなり乱れが軽減できることがわかった。室内試験では上記と併せて、モンテリ地下実験場(スイス)のオパリナス泥岩資料、岐阜県地科学センターの泥岩資料を用いて装置の計測精度を調べた。資料採取と、次年度の現位置試験準備のため、研究分担者の長田は2回スイス、モンテリ地下実験場に出張し、計測スケジュールを打ち合わせると共に、室内実験で使用する試料のサンプリングを行った。サンプリングと併せて、泥岩中の浸透流に影響する岩盤緩みの調査を行い、約1.5mの緩み域が存在することを明らかにした。このような基礎研究と共に、トンネル壁面からまた、ボーリングに沿った蒸発量分布を試験的に計測した。研究分担者の風間は、オパリナス泥岩試料、岐阜県地科学センターの泥岩資料、北海道幌延地域泥岩試料の微小構造を電子顕微鏡写真の解析により調べた。その結果、幌延泥岩中に多数の珪藻化石が含まれ、特殊な水みち構造を持っていることを明らかにした。昨年度作製したEvaporation Logging装置を用いて、岐阜県東濃鉱山及びスイス、モンテリ地下研究所においてボーリング孔内蒸発量を測定し、透水係数を算定した。前者は透水係数の比較的大きい岩盤(10^<-6>cm/s)であり、後者は極めて小さい岩盤(10^<-12>cm/s以下)である。現場計測の結果、透水係数の小さな後者の岩盤では、ボーリング孔内が乾燥した状態に置かれ、本装置により蒸発量が精度良く計測できることがわかった。また、得られた蒸発量を用いて、岩盤の透水係数が算定できた。

得られた透水係数は10^<-12>cm/sのオーダーであり、従来、室内試験で得られている値と合致し、現場計測に十分使用しうることが明らかとなった。一方、岩盤の透水係数が大きくなると、浸透流が直接ボーリング孔内に流入し、蒸発量も大きくなる。この場合、ボーリング孔内に乾燥空気を大きな流量で送ることが必要となり、現状の送気システムでは場所によっては十分でなく、改良が必要であることがわかった。この問題のほか、割れ目からのみ蒸発がある場合、ボーリング孔内の空気流れの乱れのため、蒸発量の場所的な分布が把握できないことがわかった。このため、室内試験により、ボーリング内の乱流の影響とその制御について研究した。その結果、試験区間全体の蒸発量の測定には問題ないものの、場所的な蒸発量分布の計測にはまだ問題があることがわかり、整流システムの改良を行っている。蒸発に伴う物質移動を明らかにするため、乾燥したトンネル壁面に析出する鉱物を調べ石膏などカルシウムを主体とした鉱物を確認した。平成16年度の研究は大きく分けて、(1)開発したEvaporation Logging装置の改良と、スイス、モンテリ地下実験場への適用、(2)青森県六ヶ所村、余裕深度処分場への蒸発量計測と不飽和浸透流の解析、(3)計測・解析結果の3次元バーチャルリアリティ映像化、(4)岩盤評価、地下水解析及び地下水モニタリングに関する基礎研究、である。モンテリ地下実験場の計測では、現地責任者のP.Bossart博士及び技術者Edi-Meire氏と共に、トンネル周辺に掘削されたボーリング孔内の蒸発量分布を計測した。その結果、トンネル周辺の透水係数が評価でき、また、トンネル掘削に伴う緩み域の発達を評価した。青森県六ヶ所村、余裕深度処分場アクセストンネル周辺岩盤は透水性が大きく、壁面やボーリング孔内に地下水が浸透しEvaporation Logging装置は使用できなかった。そのため、トンネル換気に伴う蒸発量変化を2点センサー型蒸発計で測定し、測定値を用いて、トンネル周辺の不飽和浸透流解析を行い、地下水流れの非定常過程を評価した。さらに、アクセストンネル形状や計測結果の3次元バーチャルリアリティ映像化を行った。基礎研究では、岩盤内の地下水流動経路となる割れ目系形状を定量的に評価する手法、割れ目系内の流れを解析する方法及び、地下水流れをモニタリングする方法を開発した。研究成果は、平成16年度基礎研究を中心に、4編の国際学会誌、1編の国内誌に発表された。計測結果についての論文は現在投稿中である。
成人学習論に基づく「アジアの日本語教師研修システム」の構築

本研究は「成人学習論にもとづくラウンドテーブル型教師研修」を日中両国で実施し、1参加者教師の学びを質問紙調査とM-GTA、2運営者側の学びを質的研究によって長期縦断的に追究し、検討した。分析対象とした研修は、既に2007年から日中両国で同研修を実施してきたもので、具体的には、「ラウンドテーブル型教師研修:実践のプロセスを協働でふり返り返るー語る・聴くから省察へ」に参加した日本語教師、研修の運営者を対象に日本国内で年12回、海外(中国)で1回実施した。毎回の教師研修後に運営者らとアドバイスセッションを行うとともに談話の録音によるデータを収集した。また、参加者教師らに対するインタビュー調査を併せておこなった。2018年度は日本国内の研修に継続的に参加した教師を対象にインタビュー調査を行い、データの分析を進めた。その結果をまとめて、学術誌に投稿する準備中である。また、中国のラウンドテーブルに継続して参加した教師を対象にインタビュー調査を行い、分析を進めた。調査を実施した時期が2019年3月であったため、結果はまだ明らかにされていないが、分析と検討を繰り返し、得られた結果を学術誌で発表する。以上のことから、今年度は、当該研修に継続的に参加した日中両国の教師らの学びを追究した。そして、2018年度はファシリテーターの研修会(夏期)を行った。この試みは、成人学習論に関する基本的な考えと研修内容の実践を結びつける上で重要であり、運営者らがこれまで行ってきたことを確認する機会となった。また、ファシリテーターを対象とした研修は、当該研修を維持していく上で重要であることが示唆された。今後は、上記1,2の学びの相違点、共通点を比較・考察を行い、得られた知見を研修システムに反映していきたい。本研究は成人学習論に基づく日本語教師研修に着目し、研修を企画する運営側と参加者日本語教師がどのような学びを得ているのかを明らかにすることを目的とする。平成27年度は本プロジェクトを内包する研究会を立ち上げ、日中両国で当該日本語教師研修を実施し、運営側(ファシリテーター、コーディネーター)の実践後の内省データを収集し、どのような気づきや再認識を行っているのかについて分析した。得られた知見は、2015年度日本語教育学会春季大会及び秋季大会で研究発表を行った。結果の一部は、論文(『日語と日本学』8号)としてまとめ、刊行予定である。また、中国で行った当該研修を運営したメンバーの内省データを分析し、日本と文脈が異なる海外で実施する際の学びの特性を明らかにするとともに、当該研修システムの考察を行った。この結果は、平成28年日本語教育学会で発表予定である。28年度は当該研修を継続しつつ、参加者側の意識の追跡について論文にまとめる予定である。当該プロジェクトを内包する研究会を立ち上げることで企画・運営側のメンバーが10名となり、当該研修を定期継続的に行うことが実現している。運営側においては、順調に内省データーを蓄積しつつある。また、28年度も当該研修の国内・海外の研修の継続が決まっている。しかし、参加者側のデータの収集と分析は、継続的な参加者を対象としているため、進行が遅れている。したがって、全体的な評価としては「おおむね順調に進展している」とした。本研究は日中で実施してきた「成人学習論に基づく日本語教師研修プログラム」を継続し、参加者教師の認識と運営側の学びを明らかにすることを目的とする。平成28年度は本プロジェクトを内包する研究会を継続し、日中両国で当該日本語教師研修を実施し、参加者教師の認識と運営側(ファシリテーター、コーディネーター)の実践データを収集し分析を行った。【研究2】(参加者教師の意識形成を質的研究によって明らかにする)では、継続的な参加者を追跡し分析・考察を行った。得られた結果は、カナダ日本語教育振興会年次大会JALE2016CAJLE Annual Conference 2016にて口頭発表(2016年8月18日)を行った。さらに精緻化して論文として刊行する予定である。【研究3】(くり返しサイクルの全過程の中で本研修プログラムを通し運営者の認識の変化を明らかにする)では、日中両国の運営者の学びを考察した。結果は2016年5月22日の日本語教育学会春季大会で発表した。この他、長期的な運営者の学びを時間軸上(初期・中期・後期)で区分して考察した。この結果は、2016年9月日本語教育国際大会ICJLE 2016インドネシア・バリで発表。学術誌2016年『日語教育与日本学2016』第8号に掲載された。上記のほかに、研究叢書を刊行した(理論編と実践編があり、全8章で構成)。この内容の中には成人学習論と日本語教師教育の考察、当該プログラムの参加者の学びと知見などを掲載した。また、2016年『ことばと文字』6号で、研究論文として当該プログラムの研究1に関する結果・考察が掲載された。今年度は研究発表3件(国内1、海外2)、論文(海外学術誌1、国内1)、研究叢書1冊であった。来年度は研究1の量的分析と研究4に着手し、引き続き研究を進めていきたい。当該プロジェクトの運営側においては、順調に内省データを蓄積しつつある。

また、平成29年度も当該研修の国内(関西)と海外(上海)での実施が予定されており、継続的に運営できる見通しがある。これとともに縦断的なデータが収集できそうである。しかし、量的分析は進行が遅れている。そのため、参加者を対象にした質問紙の作成や量的分析が必要である。全体的な評価としては、「おおむね順調に進展している」とした。本研究は日中で実施してきた「成人学習論に基づく日本語教師研修プログラム(ラウンドテーブル型教師研修)」を継続し、参加者教師の認識と運営側の学びを明らかにすることを目的とする。年間サイクルの2年目に当たる平成29年度も日中両国で当該教師研修を実施し、参加者教師の認識【研究2】と運営側(ファシリテーター、コーディネーター)の内省データ【研究3】を蓄積した。継続的に当該研修を実施することにより、参加者教師のリピーターが増え、教師コミュニティの広がりができあがってきた。また、本研究プロジェクトを内包する研究会の運営者メンバーは、12名となり、企画と運営が安定し、システムが整備されてきた。【研究2】(参加者教師の意識形成を質的研究によって明らかにする)では、現在、当該教師研修のリピーターに焦点を当ててデータを長期的に収集し、精査している。平成28年度にカナダ日本語教育振興会年次大会JALE2016CAJLE Annual Conference2016で発表した内容に加え、継続的に参加する教師の学びを分析し、学術誌に投稿する準備を進めている。【研究3】(くり返しサイクルの全過程の中で本研修プログラムを通し運営者の認識の変化を明らかにする)では、日中両国の運営者の学びを考察し、28年度に日本語教育国際大会ICJLEインドネシア・バリで発表した内容を『日本語教育与日本学2016』(第8号)で発表しているが、2年目においてさらに長期的なデーターを収集することができたため、縦断的研究としてまとめ、投稿の準備を行っている。【研究4】日中のフィールドから得た知見を比較し、相違点と通底する特徴を特定するための分析・検討を行っている。運営メンバー12名によって、日中で定期継続的に当該日本語教師研修を行うことが実現している。また、参加者教師が増加し、リピーターも増えてきているため、教師コミュニティーに広がりができてきた。平成30年度も当該研修を国内・海外で実施することが決まり、研修の企画・運営が安定してきた。これらに伴い、参加者教師と運営側の縦断的な内省データも蓄積できてきており、これまで研究2,3で得られた知見をまとめ、研究発表および論文発表を行ってきた。しかし、平成28年度から本務校における業務多忙(学科長、大学院専攻主任、国語教育委員長の兼務)と子の養育期間が重なり、研究に取り組む時間を確保することが厳しくなった。そのため、主に研究2の論文投稿準備、研究4の研究発表と一連の知見を整理して総括することが遅れており、1年間の事業期間延長承認申請を行った。したがって、全体評価としては「少し遅れている」とした。本研究は「成人学習論にもとづくラウンドテーブル型教師研修」を日中両国で実施し、1参加者教師の学びを質問紙調査とM-GTA、2運営者側の学びを質的研究によって長期縦断的に追究し、検討した。
網羅的cDNA解析による個体間情報伝達機構の解明

本研究の目的は、カイコをモデル動物として、触角、脳、前胸腺、フェロモン腺などの感覚器、神経、内分泌器官由来の平均化cDNAライブラリーを作製し、大量cDNA解析によるESTデーターベースを元にした網羅的な解析を行うことで、雌雄個体間で行われるフェロモンを介した情報伝達と、ホルモンによる組織・細胞レベルでの機能調節のメカニズムを分子レベルで解明することである。現在までに、脳、前胸腺、フェロモン腺のcDNAライブラリーを構築し、それぞれからランダムに1000クローンのシークエンスを行い、ESTデーターベースへ投入した。フェロモン腺から得られたESTデーターの詳細な解析から、カイコ性フェロモン(bombykol)生合成カスケードに関与するタンパク質群のESTとして、calmodulin、acyl-CoA-binding protein、acyl-CoA desaturaseが得られ、発現解析と機能解析を行った。平均化cDNAライブラリーの構築は、テストケースとして、培養細胞cDNAライブラリーを元としてBonaldoらの方法に従って平均化を行った。数百クローンのESTを決定し、平均化前のライブラリーとの遺伝子発現プロファイルの比較を行った結果、個別遺伝子レベルでは2-8倍程度の出現頻度の減少が認められ、平均化cDNAライブラリーの作成は新規EST獲得に有効であることが推察された。また触覚のcDNAライブラリーは構築が終了し、大量シークエンスをこれから行う予定である。神経節については、組織のサンプリング中で、近日中にcDNAライブラリーを作成する予定である。これらのフェロモン腺、脳、前胸腺、触覚、神経節の平均化ライブラリーの作成を行い、大量cDNA解析による個体間・内情報伝達機構の解明を試みる。
自然流産と細菌感染の関連に関する研究-とくに妊婦の看護による予防の観点から-

妊娠早期の自然流産の原因として、母体側の原因と胎児側の原因と分けられるが、そのほとんどは胎児側の原因特に染色体異常による。しかし,10-20%は未だ原因の特定されない場合があるといわれている。ある単科産婦人科医院で一年間の自然流産例73例を調べたところ16例(21.9%)に多核白血球浸潤を示す脱落膜が見られた。そこで,原因不明とされる自然流産例の中に上行性感染による可能性があるのではないか調べるために,流産遺残物について組織学的,細菌学的に調査し,更に感染を引き起こす原因と考えられる行為をアンケート調査した。流産遺残物について75症例を病理組織学的に調べると,39例(52%)に多核白血球浸潤が見られ非常に多かった。この39例中組織でグラム染色で細菌陽性は29例(74%)で、多核白血球浸潤陰性例29例では8例(28%)と有意に低率であった。細菌の培養を行った症例は42例で,多核白血球浸潤陽性例20例(内15例は細菌培養陽性),多核白血球浸潤陰性は11例で内培養陽性例は3例でいずれも膣常在菌であるLactobacillus sp.であった。アンケート調査によると,毎日の入浴は向回答の3人以外全てで,ウオシュレット使用は時々を含め5人のみであったがいずれの人も細菌培養陽性であった。妊娠後性交渉を持つ人は14人で8人は一般細菌陽性で,持たないと答えた12人の内4人に細菌培養陽性であった。常在菌以外の細菌(E.coliなど)が多数(30CFU以上/0.2ml of 20%suspenshon)培養された症例は42例中11例で,8例は脱落膜に多核白血球浸潤を示し(2例は脱落膜なし)上行性感染による影響の可能性を示していると考えられた。なお,アンケートを含めた28症例に関しては、組織でのグラム染色と培養が相関せず遺残物の採取に際しての混入や掻爬までの時間があるための感染等を考慮する必要があると思われた。妊娠早期の自然流産の原因としては染色体異常がもっとも多く5060%を占めるといわれ、その他に胎盤異常、胎児の先天異常、内分泌異常等があげられているが原因不明のものも存在する。流産遺残物を観察すると脱落膜に多数の多核白血球浸潤を示す症例があり、ある施設での1年間を調査したところ73例の自然流産のうち16例21.9%に多核白血球浸潤の病巣を認めた。細菌感染の流産を引き起こすメカニズムとして、インターロイキンの産生、プロスタグランチンの誘導、子宮の収縮の連鎖が想定されている。しかし多核白血球浸潤は炎症像としてばかりでなく、心筋梗塞のような組織の壊死の存在でもみられるものである。今回、流産遺残物にみられる多核白血球浸潤を示す炎症像と細菌感染の関連、及び上行性細菌感染を誘導すると思われる性生活の形との関連をみる目的で流産遺残物の組織学的検索に加えて、細菌の存在、アンケートによる性生活のあり方を調査した。現在までの結果、多核白血球浸潤陽性例でグラム染色(細菌を組織標本で染める)

陽性は78.3%(18/23)、多核白血球浸潤陰性でグラム染色陰性は87.5%(21/24)で組織標本での多核白血球浸潤と細菌感染は強い相関を示していた。細菌の定量的培養を行い得たのは現在のところ14例で、4例に炎症像を認めいずれにも多数の細菌が培養され、黄色ブドウ球菌、大腸菌、Bifidobacterium sp.膣常在菌であるLactobacillussp.が検出された。次年度は、細菌の定量まで行う症例を50例ほどまでに増やし、アンケート調査の結果を加え最終的検討を行う予定である。妊娠早期の自然流産の原因として、母体側の原因と胎児側の原因と分けられるが、そのほとんどは胎児側の原因特に染色体異常による。しかし、10-20%は未だ原因の特定されない場合があるといわれている。ある単科産婦人科医院で一年間の自然流産例73例を調べたところ16例(21.9%)に多核白血球浸潤を示す脱落膜が見られた。そこで、原因不明とされる自然流産例の中に上行性感染による可能性があるのではないか調べるために、流産遺残物について組織学的、細菌学的に調査し、更に感染を引き起こす原因と考えられる行為をアンケート調査した。流産遺残物について75症例を病理組織学的に調べると、39例(52%)に多核白血球浸潤が見られ非常に多かった。この39例中組織でグラム染色で細菌陽性は29例(74%)で、多核白血球浸潤陰性例29例では8例(28%)と有意に低率であった。細菌の培養を行った症例は42例で、多核白血球浸潤陽性例20例(内15例は細菌培養陽性)、多核白血球浸潤陰性は11例で内培養陽性例は3例でいずれも膣常在菌であるLactobacillus sp.であった。アンケート調査によると、毎日の入浴は無回答の3人以外全てで、ウォシュレット使用は時々を含め5人のみであったがいずれの人も細菌培養陽性であった。妊娠後性交渉を持つ人は14人で8人は一般細菌陽性で、持たないと答えた12人の内4人に細菌培養陽性であった。常在菌以外の細菌(E.coliなど)が多数(30CFU以上/0.2ml of 20%suspensiion)培養された症例は42例中11例で、8例は脱落膜に多核白血球浸潤を示し(2例は脱落膜なし)上行性感染による影響の可能性を示していると考えられた。なお、アンケートを含めた28症例に関しては、組織でのグラム染色と培養が相関せず遺残物の採取に際しての混入や掻爬までの時間があるための感染等を考慮する必要があると思われた。
高誘電率バイオセラミクスの創生及び高周波特性に関する研究

昨年度までに本補助金を用いてセラミクス過程における粘弾性率及び損失率の時間変化を測定した。その結果弾性率は約3桁上昇し、また、損失率がピークを持つということを明らかにした。この現象は、横軸を温度軸にとった場合の通常の高分子のガラス転移と非常に良く対応していた。この様に物性変化がある程度把握できたので、本年度はそのアプリケーションとして、マイクロ波平面型素子の基板材料へ応用することを試みた。マイクロ波素子は携帯端末の小型化に伴って、低背化が進み平面化している。また、大量の廃棄物による汚染も深刻化している。従ってバイオセラミクスを誘電体基板として使用することは大変有意義である。まず予備実験としてバイオセラミクスのかわりに多結晶のMgO基板を用いて、また導体としては将来非常に有望な酸化物超伝導体を用いて、マイクロ波受動デバイスの基礎となるサーキットボードの開発を試みた。更に得られた超伝導膜を用いてマイクロ波受動素子の基本である共振器及びバンドパスフィルタを使用周波数2GHz付近で作製し、高周波特性の評価を行った。その結果、3段のバンドパスフィルタの場合、中心周波数1.93GHz、帯域幅2.84%における、挿入損失は、超伝導体の場合1.7dBであり通常の金属(銅:挿入損失5.5dB)に比べて非常に優れた特性を得た。生体高分子のゲル化、ガラス化及び今回申請者が初めて観測した結晶化といった物性変化の研究は、医学・生物学と物理学の境界領域であり、特に電子工学分野においてはセラミクス材料として通信デバイス等の基板材料に応用可能である。即ち現行のガリウムやヒ素を用いた材料に比べ、今後非常に有効かつ、"地球に優しい"エコロジカルマテリアルとして大変重要である。セラミクス過程における粘弾性率及び損失率の時間変化を測定したところ、弾性率は約3桁上昇し、また、損失率がピークを持つということを明らかにした。この様に物性変化がある程度把握できたので、アプリケーションとしてマイクロ波平面型素子の基板材料へ応用することを試みた。本年度はセラミクス基板としてバイオセラミクスのかわりに多結晶のMgO基板を用いて実験を行った。また、導体としては酸化物超伝導体を用いた。ゾル-ゲル法によりイットリウム、バリウム、銅の混合溶液を基板に塗布し仮焼成及び本焼結を行い膜を作製した。更に得られた超伝導膜を用いてマイクロ波受動素子の基本である共振器及びバンドパスフィルタを使用周波数2GHz付近で作製し、通常の金属の場合と比較して優れた特性を得ることができた。
神経活動依存的小胞輸送に関わるシナプトタグミン4分子の機能解明

記憶・学習といった高次脳機能を司る複雑な神経回路網の形成には、適切な神経活動に依存した可塑的成熟過程が必要と考えられている。すなわち特定の入力のあった神経突起のみで何らかの質的・量的な変化が起こるはずである。本研究では神経活動に依存した神経突起の質的・量的変化を膜(小胞)輸送という観点から捕らえ、神経活動に依存した細胞体(ゴルジ体)から神経突起の先端部への新規小胞輸送過程(以下、"神経活動依存的小胞輸送(activity-dependent vesicle transport)"とする)の存在を明らかにするため、膜輸送に重要な役割を果たすシナプトタグミン・ファミリーに焦点を当て以下の知見を明らかにした。(1)シナプトタグミン4という4番目のアイソフォームが中枢神経系の神経細胞でゴルジ体及び神経突起の先端に存在する。(2)この分子のタンパク質量は脱分極刺激により数倍にまで増加するとともに、ゴルジ体から神経突起先端方向への輸送が促進されているような免疫組織像が得られている。(3)マウス海馬においてシナプトタグミン4分子の発現は一過性で(生後3日から13日頃まで)シナプスが形成される時期とほぼ一致している。(4)金コロイドを用いた免疫電顕にによりシナプトタグミン4分子は神経細胞のゴルジ体の他に神経突起内の小胞あるいは小さなオルガネラ様の構造物に存在するが、プレシナプスのシナプス小胞には存在しないことが明らかになった。以上の結果から脳内には特異的な"神経活動依存的小胞輸送"システムが存在するものと考えられ、Green fluorescence protein(GFP)融合シナプトタグミン4分子を指標としてこの過程の可視化を試みた。
アミノ酸を出発物質とする機能性イオン液体の合成と物性改善

これまでに合成したアミノ酸由来のイオン液体は、イオン液体の物性に及ぼす側鎖構造を検討するためのよいモデルであるのみならず、それ自体が高極性であることや不斉炭素を有するなど、従来のイオン液体にはない特徴を示す。本研究では、このアミノ酸を構成イオンとするイオン液体の特微を詳細に解析し、機能設計につなげることが目的である。アミノ酸イオン液体と水の混合系が冷却により水と均一に相溶し、昇温により再び相分離する下限臨界溶解温度(LCST)挙動を示すので、今年度は相状熊について詳細に検討を行った。種々のアミノ酸誘導体を用いて検討を行ったところ、LCST挙動を示すためにはカルボキシル基の存在重要であり、pHや疎水性を調整することで相分離温度を任意に制御することができた。さらにバイオ分野での新しい分離抽出プロセスとしての展開を視野にいれ、タンパク質の抽出について検討を行った。モデルタンパク質として用いた馬心筋由来Cytchrome cを水相から100%抽出することができた。イオン液体相に抽出されたCytchrome cのヘム近傍の立体構造をUV分光法およびラマン分光法により検討したところ、水中と同様の立体構造を保持していることを確認した。これは相分離後のイオン液体相にも約30wt%程度の水が存在しているためであると考えられる。さらにタンパク質の種類による抽出効率の違いを利用することで、タンパク質の分離精製や濃縮を行うこともできた。本研究で見出したアミノ酸を出発物質とするイオン液体-水二成分系は10秒程度冷却するだけで、タンパク質の濃縮・分離精製が可能であることから、バイオ分野での新しい分離抽出プロセスとしての応用が期待される。我々が新規に合成したアミノ酸からなるイオン液体は、イオン液体の物性に及ぼす側鎖構造を検討するためのよいモデルであるのみならず、それ自体が高極性であることや不斉炭素を有するなど、従来のイオン液体にはない特徴的な性質を示す。本研究では、このアミノ酸を構成イオンとするイオン液体の特徴を詳細に解析し、機能設計につなげることが目的である。さらに物性とイオン構造の相関を明らかにし、目的に合わせてイオン液体をデザインするための基礎の確立について検討した。本年度は特にアミノ酸アニオンと組み合わせるカチオン構造についての検討を行い、イミダゾリウム系よりも低粘度かつ高い熱安定性を示すイオン液体の作成を試みた。種々のカチオンについて検討を行ったところ、テトラブチルホスホニウムカチオンと組み合わせることで、低粘性かつ低融点のイオン液体を得た。さらにアミノ酸を出発物質とするイオン液体のキラリティーの熱安定性について旋光度計を用いて評価し、100°Cで10時間以上安定であり、キラルな反応場としての十分な可能性があることを明らかとした。加えて、アミノ酸を化学修飾することで疎水性を付与したキラルアニオンを合成し、カルボキシル基を保護し、アミノ基にトリフルオロメタンスルホニルアミド構造を導入したアニオンを合成した。テトラブチルホスホニウムカチオンと組み合わせた場合に、水と相分離する疎水性のキラルイオン液体を得た。さらに、アミノ酸を出発物質とする機能性イオン液体のイオン構造のデザインを検討することで、冷却すると水が溶解し、昇温すると再び相分離する下限臨界溶解温度を示すイオン液体を初めて見出した。数度の温度変化で水との相溶・相分離を制御することができるので、省エネルギー型の新しい反応・抽出プロセスへの応用展開が期待できる。
連鎖解析とキャプチャーリシークエンスによる全身性エリテマトーデスの原因遺伝子同定

全身性エリテマトーデス(SLE)は多因子疾患であることから、ゲノム関連解析によって発症に決定的に寄与する遺伝素因を解明することは困難であった。申請者らは、4名の同胞のうち3名がSLEを含む自己免疫疾患を発症した近親婚歴のある血族家系を見出した。本研究では、この血族家系を対象に、ポジショナルクローニングを行い疾患遺伝子座(FSLE-2; 1.1Mb)を同定した。さらに、エクソンキャプチャー・リシークエンス解析を行い、FSLE-2に含まれる遺伝子多型を明らかにすることによって候補遺伝子を同定した。現在、候補遺伝子産物の生化学的特徴を明らかにするとともに、変異がその分子機能を変化させるメカニズムを解明するために候補遺伝子の遺伝子改変マウスを作製している。全身性エリテマトーデス(SLE)は、慢性で難治性の全身性自己免疫疾患である。特に、ループス腎炎はSLEの主要な合併症であり、進行例では末期腎不全に至る。SLEは多因子疾患と考えられ、疾患感受性に関与する免疫機能分子の遺伝子多型が数多く同定されてきた。しかし、いずれの多型も疾患発症への寄与は決定的ではなく、未だSLEの遺伝的素因の全貌は不明である。以上の背景から、本研究では、近親婚歴を有し、遺伝要因が明らかなSLE大家系を対象に、ポジショナルクローニングおよびエクソンキャプチャー・リシークエンス解析を適用し、SLE責任遺伝子の同定を目指している。この研究の成功は、免疫システムの過剰活性化に起因するSLEの病態の本質的な理解のみならず、自己免疫性腎炎の発症機構について新たな概念を創出できる可能性がある。これまで、両親が近親婚の4名の同胞のうち3名がSLEと精神疾患を発症した極めて稀な家系を対象にゲノム解析を行い、疾患遺伝子座(FSLE2; 1.1Mb)の同定に成功している。本研究の初年度は、FSLE2領域のエクソンキャプチャー・リシークエンス解析により多型を抽出した。本年度は、抽出した多型の中から既知の多型を除外した後、罹患同胞が共有し、非罹患同胞が共有しないホモ接合体の多型を選別し、候補となる多型を同定した。この多型について、日本人におけるアレル頻度を解析したところ、比較的稀な多型であった。さらに、この多型は候補遺伝子の機能ドメインに位置しており、アミノ酸置換を伴う多型であった。また、ミスセンス変異を生じたアミノ酸は種を超えて保存されていることから、候補遺伝子の機能において重要なアミノ酸であることが示唆された。全身性エリテマトーデス(SLE)は、慢性で難治性の経過をとり、多様な臓器に障害を引き起こす全身性自己免疫疾患である。SLEは遺伝要因を含む多因子によって発症が規定されていると考えられ、従来の研究から疾患感受性に関与する免疫機能分子の遺伝子多型が数多く同定されてきた。しかし、いずれの遺伝子多型も疾患発症への寄与は決定的ではなく、未だSLEの遺伝的素因の全貌は明らかではない。これまで、両親が近親婚の4名の同胞のうち3名がSLEと精神疾患を発症した極めて稀な家系を対象にゲノム解析を行い、疾患遺伝子座(FSLE2、LOD値2.5)の同定に成功している。当該年度は、FSLE2(1.1Mb)領域の全エクソンをキャプチャーした後、高速シークエンサーを用いて網羅的に変異検索を行った。現在、検出された多型リストの中から、(1) depth 20以上、(2)変異アレルの頻度が0.8以上のホモ接合体、(3)dbSNP等に登録のない新規多型、(4)エクソン内に存在しアミノ酸変異を伴う多型あるいはスプライシング異常を伴う多型、を条件に、候補となる多型を抽出している。また、SLEの家族症例の調査も継続しており、新たに近親婚歴を有するSLE家系を見出した。現在、検体収集を行っている。

当該年度は、交付申請書に記載した研究計画に従い、FSLE2(1.1Mb)領域の全エクソンをキャプチャー後、高速シークエンサーを用いて網羅的に変異検索を行った。現在、検出された多型リストの中から候補となる多型を抽出しており、当初の計画通りに研究は順調に進展している。【候補遺伝子の同定】多型リストの中から既知の多型を除外した後、罹患同胞が共有し、非罹患同胞が共有しない多型を選別する。選別された多型が健常コントロールにおいて1%以下のアレル頻度であることを確認できたものをrare variantとして候補の遺伝子変異と判断する。【候補遺伝子の機能解析】候補遺伝子産物の生化学的特徴を明らかにするとともに、変異がその分子機能を変化させるメカニズムを解明する。候補遺伝子の遺伝子改変マウスを樹立し、遺伝子機能を個体レベルで検討することで、候補遺伝子がどのようにSLEの病態に寄与しているかについて明らかにする。平成24年度には、候補となる原因遺伝子の遺伝子改変マウスを作製するため、遺伝子工学関連試薬、細胞培養関連試薬、及び実験用マウス購入費を計上する。また、候補分子について生化学的な解析を行うための各種酵素・試薬を計上する。本研究成果を国内および国際学会で発表するための旅費と、論文発表するための論文投稿費を計上する。
中国における制度と古典-科挙制度と言語史・文学史の相関から-

本研究は、多様な音声言語の社会を、制度化された規範的書きことばが支配してきた中国.文化圏を対象として扱い、「古典」の言語が文化的制度としていかに利用され、社会を動かしてきたかを明らかにすることを目的としたものである。研究代表者平田は、主と.して国家制度と言語の関係を調査し、明清代の科挙制度が、音韻規範・文体規範に対していかなる影響を与えてきたかを中心に研究を進め、本年度は、特に古文(論)と八股文の関係、中国の伝統的文法研究と科挙の関係について、南宋の呂祖謙『東莱博議』・清の唐彪『読書作文譜』などから明らかにすることができた。成果の一部は、2003年3月に米国コロンビア大学で開催された古典中国語教育・研究会議で発表し、近く公刊の予定である。また、中国語方言と言語文化史の相関性について、劉丹青教授(中国社会科学院言語研究所)を2ヶ月にわたり招聘して大学院生をまじえた共同研究を実施したほか、林英津研究員(台湾中央研究院言語学研究所)の参加を得た西夏語と漢文化をめぐる研究会を組織している。本研究が、いまひとつの研究課題としてとりあげたのは、中国で形成された書記言語規範が周辺地域へどのような影響を与えたか、という点である。この点を明らかにするため、日本の江戸時代における明代「古文辞」の影響関係を具体的に取り上げ、平田と研究分担者田口の協力のもと、荻生徂徠の利用した中国古典文献の調査・文体の検討をすすめ、『徂徠集』全体の訳稿を逐次作成しつつある。平成15年に、同書巻二十から巻三十までに及ぶ「尺牘」部分の初稿を完成させる予定である。あわせて、伊藤東涯ら京都の古義堂学派と徂徠学派「古文辞」の漢作文をめぐる態度の差異に関して検討を加えた。今年度の研究においては、規範としての「中国語」がいかに形成され、それが歴代の制度の中でどのように具体的なすがたとして現れてきたかを解明することに重点をおいている。(1)書記言語が口頭言語をどのように規制してきたか、相関性に関する調査・分析。六朝唐代の文献について調査をおこない、8世紀前後における口語発音規範の変化が唐代の社会的変動と関係すること、変化に対抗して伝統的発音規範を維持するための装置がいわゆる吏部銓試であったことの可能性を指摘した。(2)性別による言語使用の規制が、歴史的にいかなる経過をたどったかを調査研究し、後漢から1920年代までの女性の言語使用をめぐる規範意識の変遷を明らかにした。公の場での会話・そのために用いられる「官話」から女性を排除するたてまえの存在と同時に、各地の名家へ嫁ぐ可能性を持つ高級官僚の娘たちがかなりの幅広い言語的教養をそなえるという現実もあったことを示した。(3)科挙試験制度の中で絶対的規範であった古典文が、20世紀にその地位を失って口語文が主流となる過程を探求するため、厳復・呉汝綸ら清末開明派官僚の著作を対象として調査した。伝統的教育をそなえた知識人が、日清戦争以後に伝統的教養の解体を認めていく過程を明らかにすることができた。(4)本年1月には科挙に関する重要な新著を公刊されたベンジャミン・エルマン教授(UCLA)を招聘して、京都・東京でセミナーを開催し、中国語学・文学・歴史・思想の多くの研究者との討論をおこない、科挙制度史の研究にあたって言語史・文学史から寄与しうる点が多いことにつき示した。また3月には来日中の徐丹(フランス国立東洋語学校)を招いて、言語規範の諸相に関する研究会を開催している。本研究は、中国六朝から清代に至る言語規範意識を通時的に観察するとともに、そうした言語規範の制度化の過程を追跡する計画の一部である。本年度は唐宋代に重点をおいた調査研究をすすめ、(1)南北朝時代以来の士族・庶族という社会階層の対立が唐代吏部試の「身言書判」制度の背景にあること、(2)文化的中心が江南地域から関中地域へと移動したことにともなう社会階層・文化規範意識の変動が、唐王朝の成立から約100年を経た8世紀初頭に顕在化し、その結果、言語史上の目立った音韻変化などが記録されるに至ったと想定されること、を独自に提示した。科挙の実施による、唐代から宋代にかけての字体規範化・制度化の経緯についても考察をすすめつつある。また、時代間の対照研究をおこなう必要から、唐代に始まる言語規範制度化が最終的に完成した清代の状況につき、漢文「実録」や制度史史料を利用した調査に着手し、宮廷内における声の規範が清朝皇室を中心に定められた経緯を明らかにした。以上のほか、中国古典学の研究現況・今後めざすべき方向性をめぐる討論を深めるため、12年7月1516日にシンポジウム「文化的制度としての中国古典」(講演・報告14篇の内容は、『古典学の現在II』、本特定領域研究総括班事務局、13年2月刊、として公刊)を開催し、中国文化史・文学・語学諸領域にわたる総合的な討論をおこなった。

これ以外にも、研究の進展・必要性に応じて国内外から関係研究者を招待し、11年10月31日に北京大学李零教授講演会、同11月23日に「中国歴史言語学討論会」(コーネル大学梅祖麟教授を招聘)、13年2月22日に「翻訳の文化史」研究会(高麗大学校鄭光教授を招聘)を主催、個別の具体的問題点をめぐって、聴衆を交えた意見交換をおこなうことができた。本研究は、科挙制度と言語史・文学史の相関をめぐる総合的研究を志している。本年度は、14世紀の元代を中心に、その前後の時代までを視野においた調査研究をすすめ、「制度化された言語」を通じた王朝支配がいかに行われるか、またそのようにして成立した言語・文体が「中国」という地域を超えてどのように広がるか、を明らかにするよう努力を払った。(1)元代における韻書使用状況の研究。『礼部韻略』『古今韻会挙要』のもつ規範性の調査。研究協力者の援助を得て、元の范〓の全作品について押韻状況を調査し、「范徳機詩韻譜」を作成した。この内容は、整理の上で公開する予定である。また、散曲を作るための韻書『中原音韻』の流布状況に関しても調査した結果、明代初期に至るまで、『中原音韻』は現在の江西省のみで流布していた、との推定をするに至った。(2)明代散文文体の東アジアに与えた影響。荻生徂徠『徂徠集』に見られる「古文辞」文体を、作品の翻訳を行いつつ検討した。特に、明代流行の文体「古文辞」が、どのようにして日本まで拡散したか、拡散の背景となる思潮はなにか、といった諸点をうらづけるための基礎資料収集・調査を実施している。(3)その他。科挙制度と言語史・文学史の関係は、620世紀までの1300年間にわたるため、特定の時代に集中した研究をおこなうかたわら、「平仄」の形成、試験答案の文体の変遷など、関連する課題についても研究をおこなった。本研究は、多様な音声言語の社会を、制度化された規範的書きことばが支配してきた中国.文化圏を対象として扱い、「古典」の言語が文化的制度としていかに利用され、社会を動かしてきたかを明らかにすることを目的としたものである。研究代表者平田は、主と.して国家制度と言語の関係を調査し、明清代の科挙制度が、音韻規範・文体規範に対していかなる影響を与えてきたかを中心に研究を進め、本年度は、特に古文(論)と八股文の関係、中国の伝統的文法研究と科挙の関係について、南宋の呂祖謙『東莱博議』・清の唐彪『読書作文譜』などから明らかにすることができた。成果の一部は、2003年3月に米国コロンビア大学で開催された古典中国語教育・研究会議で発表し、近く公刊の予定である。また、中国語方言と言語文化史の相関性について、劉丹青教授(中国社会科学院言語研究所)を2ヶ月にわたり招聘して大学院生をまじえた共同研究を実施したほか、林英津研究員(台湾中央研究院言語学研究所)の参加を得た西夏語と漢文化をめぐる研究会を組織している。本研究が、いまひとつの研究課題としてとりあげたのは、中国で形成された書記言語規範が周辺地域へどのような影響を与えたか、という点である。この点を明らかにするため、日本の江戸時代における明代「古文辞」の影響関係を具体的に取り上げ、平田と研究分担者田口の協力のもと、荻生徂徠の利用した中国古典文献の調査・文体の検討をすすめ、『徂徠集』全体の訳稿を逐次作成しつつある。平成15年に、同書巻二十から巻三十までに及ぶ「尺牘」部分の初稿を完成させる予定である。あわせて、伊藤東涯ら京都の古義堂学派と徂徠学派「古文辞」の漢作文をめぐる態度の差異に関して検討を加えた。
魚類補体成分由来の抗菌ペプチドを利用した細菌コントロール

コイC3アイソタイプ(C3-Q1)のC3a領域の部分アミノ酸配列(KVFLECCNLMKTHKNMKTE)を基に合成したペプチドに抗菌作用があり、S.Enteritidis、及びE.coli (XL1-blue mrf、O157:H7 (VT1&VT2))などのグラム陰性菌に対して作用することを明らかにした。また、上記のアミノ酸配列を部分的に置換することにより、抗菌作用を増強することに成功した。一方、抗菌作用の増強と共に細胞障害作用も強まる傾向が観察されたため、さらに本研究で得られた知見を基により副作用の少ない抗菌ペプチドの開発を目指す。これまでの申請者らの研究によって、コイやニジマスなどの多くの硬骨魚類が複数コピーの補体遺伝子をもつことが分かっている。本研究では哺乳類で明らかになった補体C3、及びC4の新機能である抗歯活性が、硬骨魚類の補体成分にも存在し、また機能的多様性を獲得しているのかどうかを明らかにし、これを魚病薬、及び食品の保存技術として応用することを目的としている。平成20年度は、コイ補体タンパク質(C3、C4、C5)由来のタンパク質(C3a、C4a、C5a)、及びこれらのアミノ酸配列を基に作成した合成ペプチドに抗菌活性が見られるかどうかを菌株としてXL1-Blue MRFを用いてRadial Diffusion Assay(RDA)により検討した。(1)ザイモサン処理したコイ血清を用いてRDA法により抗菌活性を測定したが、抗菌作用は観察されなかった。(2)コイ補体C3a(H1アイソタイプ)の精製タンパク質を用いて(1)と同様に抗菌活性を測定したが、19μMの範囲の濃度では抗菌活性は観察されなかった。(3)コイC3a、C4a、及びC5aのアミノ酸配列を基に、4種類、約20残基の合成ペプチドを作成し、抗菌活性を測定したところ、50μM以上の試験区においてC3-Q1、及びC4-2アイソタイプで抗菌活性が確認された。以上の結果からコイ補体C3、及びC4にも哺乳類と同様に抗菌作用を示すアイソタイプが存在することが判明した。しかしながら、今回、通常の免疫応答で生成すると考えられる濃度では抗菌作用が確認されていないことから、これらの生理的作用については検討が必要であると考えられる。本年度はさらに抗菌ペプチドとして有用な部位を特定するとともに抗菌作用を示す菌種についても精査する。本研究では哺乳類で明らかになった補体C3、及びC4の新機能である抗菌活性が、硬骨魚類の補体成分にも存在し、また機能的多様性を獲得しているのかどうかを明らかにし、これを魚病薬、及び食品の保存技術として応用することを目的としている。これまでの研究で、補体活性化断片の新機能である抗菌活性がコイ補体アイソタイプ(C3-Q1及びC4-2)において観察されることを確認した。平成21年度の研究では、これらの抗菌ペプチドがどのような種類の細菌に対して抗菌作用を示すのか、また、抗菌作用の強弱がどのような構造の違いに由来するのかを考察するために以下の2点について検討した。1.主要な食中毒細菌に対する抗菌作用コイ補体成分アイソタイフのアミノ酸配列を基に合成した短鎖ペプチドを用いて、主要な食中毒細菌に対する抗菌作用をRDA法により測定した、これらの短鎖ペプチドは、0-157等の大腸菌、サルモネラ・エンテリティディスに対して抗菌作用を示すが、黄色ブドウ球菌、リステリア、セレウス菌等には作用を示さないことが判明した。一方、ヒトC3などと比較すると抗菌活性は弱く、食品の腐敗防比を目的とした利用を考える上では抗菌作用の増強が必要であると考えられた。2.抗菌作用の強弱に関与する機能部位(アミノ酸残基)の特定抗菌活性の強弱に関与する機能部位(アミノ酸残基)を明らかにするために比較的強く抗菌活性が観察されたC3-Q1のアミノ酸配列を基に14種類の合成ベブチトをデザインし、抗菌活性を比較した,これらの抗菌ペプチドについては概ね抗菌作用の増強が見られたが、ヒトC3由来の合成ペプチドを用いた研究では塩分濃度の影響を強く受ける二とが示唆されており、今後、より詳細な作用条件について検討する必要がある。平成21年度の研究において抗菌活性の強弱に関与する幾つかのアミノ酸残基を同定する二とに成功しており、平成22年度の研究においてはこれらの情報を活用し、より有用性の高い抗菌ペプチドの作成を行う,また、産業面での利用を目的として(1)短鎖抗菌ペプチドを利用した魚病のコントロール、及び食品の腐敗防止(抑制)技術の開発を試みる。

本研究では哺乳類で明らかになった補体C3、及びC4の新機能である抗菌活性が、複数コピーをもつ硬骨魚類の補体成分(C3,C4,C5)にも存在し、また機能的多様性を獲得しているのかどうかを明らかにし、これを魚病薬、及び食品の保存技術として応用することを目的としている。昨年度の研究でコイ補体成分C3-Q1、及びC4-2アイソタイプのアミノ酸配列を基に作成した短鎖ペプチド(19、及び17残基)は、O-157等の大腸菌、サルモネラ・エンテリティディスに対して抗菌作用を示し、また、C3-Q1ペプチドのアミノ酸を2-8残基改変したペプチド(19残基、14種類)は、強いものでは1.6-3.1μMでMICを示し、ネイティブなものよりも10倍ほど強い抗菌作用を示すことを明らかにした。平成22年度の研究では、これらの改変ペプチドの抗菌作用の発現に対する塩濃度の影響、及び細胞障害作用について検討した。(1)改変ペプチドの抗菌作用発現に対する塩濃度の影響一般的な抗菌ペプチドは塩濃度の影響を受けやすく、生理的塩濃度で抗菌作用が低下することが知られている。上記改変ペプチドを用いて150mM、NaCl存在下で抗菌作用がどのように変化するのかを検討した。塩濃度の影響はRDA法によりMICを算出し、比較することにより評価した。改変ペプチドのうち、α-helix構造の安定化を図る目的で23残基をロイシンに置換したものについては抗菌作用の低下が抑制されており、塩濃度に対する耐性獲得に寄与していることが示唆された。(2)改変ペプチドの細胞障害作用改変ペプチドが宿主に対してどの程度の細胞障害作用を持つのかを明らかにするためにヒツジ赤血球を標的細胞とした溶血活性により評価した。5%-glucose(0mM NaCl)試験区では、多くの改変ペプチドが0.1μMでも溶血が観察された一方で、150mM NaCl試験区においては100μMでも溶血が観察されないものがあることが判明した。細胞障害作用の低下に関与するアミノ酸残基は複数あることが示されており、今後より詳細に検証していく必要がある。