hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
スナネズミにおける体外受精法の検討と精子および卵子の凍結保存法の確立

1.スナネズミ1細胞期胚からの体外培養法の検討:初期の胚の発育にはグルコースとリン酸が阻害的に働く事が確認された。また、摘出した卵管内へ再び導入した器官内培養、サル卵管上皮細胞との共培養、37°C・6.2%CO_2下での培養により胚の発育率が向上したが、培養液の量や胚の密度などの要因によっても影響を受けることが理解された。2.顕微授精法の検討:精子頭部を卵子細胞質内へ直接導入する顕微授精(ICSI)由来の胚の発生能を調べた。胚移植により桑実胚および胚盤胞へ発育したものの、233個の胚を16匹の受容雌へ移植したが全く着床は認められなかった。3.精子および卵子の凍結方法の検討:精巣上体尾部から採取した精子をマウスの方法に準じて18%ラフィノース3%スキムミルク液にて凍結保存後融解したところ、約1-5%の精子に運動性が認められた。これらは精子頭部がかぎ状構造をしており、凍結-融解操作によりかぎ状構造が壊れるほどのダメージを受けた精子は運動能力を失う事が推察された。また卵子をマウスの方法に準じてエチレングリコールおよびDMSOベースの耐凍剤を用いて凍結-融解したところ、回収された卵子の10-52%が形態的に正常と判断され、卵子凍結の可能性が示唆された。4.まとめ:スナネズミ胚は体外での環境の変化に影響を受け易く、多くの要因によってその発育が阻害されてしまう。顕微授精法の導入により体外での受精率は飛躍的に増大したが着床には至らなかった。精子・卵子共にマウスに準じた方法での凍結保存が可能とは思われたが、最適な条件を模索していくことが必要であった。以上一連の研究において、生物全般の受精機構や胚の発生に必要な要因を研究していくためにスナネズミは重要な動物種である事が再認識された。1.スナネズミにおける体外胚培養法の確立:各種実験用小動物マウス、ラツト、ハムスター、ウサギの初期胚に用いられているWM,M-16,HTF,CZB,HECM-3,RD等の各培養液を用いてスナネズミDay1(交尾確認日)の胚を培養(37°C、5%CO^2)したところ、8細胞期以降への発育は全例で見られなかった。最も有効であったM-16を用いると、Day2およびDay3の胚の28%および29%、Day4の胚の53%が胚盤胞へ達したものの、これらの条件では1細胞期から4細胞期以降へ、2細胞期以降から胚盤胞への発育が困難であった。次に、他系統(MG-B、MG-W)とそれらとの交雑F1およびF2動物から1-2細胞期胚を採取して同様に培養したが、有意な改善は認められなかった。2.体外受精法の検討:スナネズミ精子の受精能を調べたところ、HTF液を精子前培養および媒精に用いた時に、透明帯除去ハムスター卵子(n=147)の58%、透明帯除去スナネズミ卵子(n=159)の43%にそれぞれ精子の侵入が認められた。しかし無処置のスナネズミ卵子では、精子前培養;精子濃度3-100×10^5/mlで3-6時間、卵子採取;hCG投与後14.5-16.5時間、媒精;精子濃度2-10×10^5/mlで5時間以上、の各条件に加え培養液も様々試みたが、2-7%の卵子に雄性前核を認めたにとどまった。また、マウスでの方法に準じて顕微受精を試みたところ、処理卵(n=128)の63%において雄性前核の形成を認めた。更にそれらを偽妊娠スナネズミの卵管中に移植し5日後に回収したところ、移植胚(n=57)中の12%が桑実期胚もしくは胚盤胞として回収できた。3.まとめ:最適な体外胚培養および体外受精法の各条件は更に検討が必要だが、顕微受精直後に胚移植を行うことで、卵子および精子から桑実期胚もしくは胚盤胞を得ることに成功した。

また卵子をマウスの方法に準じてエチレングリコールおよびDMSOベースの耐凍剤を用いて凍結-融解したところ、回収された卵子の10-52%が形態的に正常と判断され、卵子凍結の可能性が示唆された。4.まとめ:スナネズミ胚は体外での環境の変化に影響を受け易く、多くの要因によってその発育が阻害されてしまう。顕微授精法の導入により体外での受精率は飛躍的に増大したが着床には至らなかった。精子・卵子共にマウスに準じた方法での凍結保存が可能とは思われたが、最適な条件を模索していくことが必要であった。以上一連の研究において、生物全般の受精機構や胚の発生に必要な要因を研究していくためにスナネズミは重要な動物種である事が再認識された。
含高配位典型元素複素三員環化合物の新規合成法の開発

Martinリガンドを有するフルオロホスホランをCF_3SO_3SiMe_3と反応させ、ホスホニウム塩へと変換した後、脱プロトン化することで、リンイリドを得た。得られたリンイリドを低温で1当量の単体硫黄と反応させることにより、5配位チアホスフィランの合成に成功した。X線結晶構造解析により、チアホスフィランが大きく歪んだ三方両錐構造であることがわかった。種々の溶媒中での^<31>P NMRにおいて溶媒のdonor numberとの相関が見られたことと、求電子剤であるメチルトリフラートとの反応で硫黄上がメチル化されたことから、5配位チアホスフィランのP-S結合は、大きく分極していることを明らかにした。次に、3配位ホスフィレンに対して1当量のo-クロラニルを作用させて、5配位ホスフィレンを合成した。X線結晶構造解析により、5配位ホスフィレンは歪んだ正方錐構造であることがわかった。^<31>P NMRでは5配位リン化合物に特徴的な高磁場領域にシグナルが観測されたが、化学シフトの溶媒依存性はほとんど見られなかった。5配位ホスフィレンの三員環をなすP-C間の結合定数(^1J_<PC>)は、3配位ホスフィレンに比べ減少しており、三員環を形成するP-C結合が正方錐構造における高いp性を帯びたベイサル結合であることがわかった。5配位ホスフィレンは、メチルトリフラートと反応せず、三員環内のP-C結合の分極はそれほど大きくないことがわかった。ジエン類とのDiels-Alder反応、ボランとの還元反応も進行せず、5配位ホスフィレンの三員環内の二重結合は化学的に不活性であることがわかった。以上のように、5配位チアホスフィラン、5配位ホスフィレンを合成し、その構造および環内の結合の性質について明らかにすることができた。1.Martinリガンドを有する5配位セレナホスフィラン{[-2-C_6H_4C(CF_3)_2O-]PhP(-CMe_2Se-)}の合成については、まず、環状フルオロホスホラン[-2-C_6H_4C(CF_3)_2O-]PhPFCHMe_2をエーテル中、CF_3SO_3Si(CH_3)_3と反応させ、対応するホスホニウムトリフラートを得た。このホスホニウム塩にTHF中、2,4,6-トリメチルフェニルリチウムを作用させ、対応するリンイリド[-2-C_6H_4C(CF_3)_2O-]PhP^+-C^-Me_2を調製した。これに、1.6当量の単体セレンを反応させることによって、目的の5配位セレナホスフィランの合成に成功した。X線結晶構造解析から酸素とセレン原子をアピカル位に持つ、かなり歪んだ三方両錐構造をとっていることが分かった。2.5配位オキサゲルミラニドの合成検討の過程で、Martinリガンドを有するヒドロゲルマン[-2-C_6H_4C(CF_3)_2O-]GePhHにヘキサメチルリン酸トリアミド(HMPA)存在下、t-BuLiを反応させ、脱プロトンを試みたところ、HMPAを取り込んだ化合物が得られた。X線結晶構造解析から、この化合物はホスホリル基の酸素とゲルマニウム間に強い相互作用を持つ、5配位1,3,2,5-オキサザホスファゲルモリジン{[-2-C_6H_4C(CF_3)_2O-]PhGe[-CH_2NMeP(NMe_2)_2O-]}構造をとっていることが分かった。この反応において、LiCH_2NMePO(NMe_2)_2の介在が別途明らかにされている。従って、これを用いた反応は、Lewis酸性の高い部位を分子内に有する系に拡張可能であると考えられので、新規な複素環化合物の合成法として興味深い。

5配位ホスフィレンは、メチルトリフラートと反応せず、三員環内のP-C結合の分極はそれほど大きくないことがわかった。ジエン類とのDiels-Alder反応、ボランとの還元反応も進行せず、5配位ホスフィレンの三員環内の二重結合は化学的に不活性であることがわかった。以上のように、5配位チアホスフィラン、5配位ホスフィレンを合成し、その構造および環内の結合の性質について明らかにすることができた。
表現者と共にいるということ－障害のある人の芸術表現に関する実践的研究－

本研究は、知的障害や発達障害等の障害のある表現者とそこに共にいる人との相互作用的な関係性、そしてそこから立ち上がってくる表現を同時に提示することによって、人が「表現」することの根源的な意味の問い直しを行うものである。3年目の30年度は、1昨年度に引き続きKさん(33歳/知的障害,精神障害)と私との継続的な創作活動(今年度28回実施)の場のありようを参与観察し、分析・考察を行った。その中で、Kさんの母親の長期入院を契機に、Kさん・私それぞれが相互作用の中で変容するあるようを捉えることができた。2障害のある人たち・生きづらさを抱えている人たち・学校や施設等に気持ちが向かないでいる人たち等が美大生と共にアート活動を中心とした「表現」を行う場である「アートリンクうちのあかり」の企画・運営を行い、参与観察を実施した。「アートリンクうちのあかり」は本年度6月より地域活動支援センターとして、週5回、年間241回の活動を実施した。本研究では、そこで生起したことの記録を蓄積した。また、主に共にいる人である美大生に対してインタビュー調査を行い、障害のある表現者とそこに共にいる人との相互作用的な関係性と、そこからの美大生の変容に関する知見を得た。3水津哲氏(社会福祉法人びわこ学園粘土室担当)・今泉岳大氏(高浜市やきものの里かわら美術館学芸員)による講演、植松永次氏(陶芸家)・水津哲氏(社会福祉法人びわこ学園粘土室担当)による障害のある人たちと美大生との粘土によるアートワークショップを開催した。初年度は年間30回程度だった「アートリンクうちのあかり」の活動が、今年度は年間241回と格段に増えたため、参与観察による事例収集の機会も格段に増えた。そのことによって、多様な人々の間で起こる「アート表現」を媒介にした相互作用について、また、一人の人の一年を通した変容についてデータを収集することが出来、知見が深まった。特に、発達障害がある参加者同士、そして発達障害のある参加者と共にいる人としての美大生との相互作用的な関係性とそれぞれの変容についてデータを収集することができた。しかし、得られた知見から考察を深め、論文発表等の成果に結びつけるに至らなかった。よって進捗はやや遅れていると考える。今年度は最終年度となるため、引き続き継続して実践と参与観察を継続させながら、過去3年間で収集したデータをまとめ、分析し、考察を深めて論文を執筆する。これまでの実践と参与観察で得られたデータを7月までに整理してまとめ、そこから見えてきたことについて論文を執筆する。そのことを元に、必要に応じてインタビュー調査を行いながら、12月までは本研究を通して取り組んで来た実践と参与観察から、多様な人々のアート表現を媒介とした相互作用と、そのことによって生起したそれぞれに人の変容について分析と考察を深め、文献調査を行いながら論文を執筆する。本研究は、障害のある人の芸術表現に関する実践的研究として、障害のある表現者とそこに共にいる人との相互作用的な関係性の中から表現が立ち上がっていく,そのありようを提示することによって,人が「表現」することの根源的な意味の問い直しを行うものである。28年度は、1、Kさん(31歳/知的障害・精神障害)と私との継続的な創作活動(今年度13回実施)の場のありようを参与観察し、分析・考察を行なった。その内容を論文として大学美術教育学会誌に投稿し、掲載された。2、社会福祉法人みぬま福祉会にてフィールドワーク及び職員へのインタビュー調査を実施し、分析・考察を行なった。その内容を論文として美術科教育学会誌に投稿し、掲載された。3、障害のある人たちと美大生らを中心とした,絵画や陶芸,その他多様な創作活動を行う場「アートリンクうちのあかり」(今年度12回実施)を企画・運営した。そしてその過程を参与観察し、質的データの収集を行なった。4、はじめさん(59歳/精神障害)とはじめさんが所属する福祉施設職員へのインタビュー調査を行なった。研究成果の社会・国民への発信として、秋田公立美術大学ギャラリーBIYONGPOINTにて、はじめさんの色鉛筆画とはじめさんへのインタビューで構成された展覧会を開催した。4、障害のあるなしに関わらず「表現」をすることの根源的な意味の問い直しを行い,新たな芸術の価値について論じるための文献調査を行なった。平成28年度の研究実施計画に沿って、「アートリンクうちのあかり」での参与観察による継続的な事例収集が遂行されている。フィールドワーク及びインタビュー調査については、予定していたやまなみ工房(滋賀)での実施は29年度に順延になったが、予定外であったNPO法人あきた福祉共生会(秋田)でのフィールドワーク及びインタビュー調査を行うことができ、その成果の一端を展覧会の企画開催によって示すことができた。よって、おおむね順調に進展していると考える。2年目の29年度は1、昨年度に引き続きKさん(32歳/知的障害・精神障害)と私との継続的な創作活動(今年度12回実施)の場のありようを参与観察し、分析・考察を行なった。

2、障害のある人たちと美大生らを中心とした,絵画や陶芸,その他多様な創作活動を行う場「アートリンクうちのあかり」(今年度12回実施)を企画・運営した。また、新たに「アート公民館うちのあかり」(今年度21回実施)という活動実践と参与観察の場を設けた。そしてその過程を参与観察し、質的データの収集を行なった。昨年度は特に障害のある表現者とそこに共にいる人との間の1対1の相互行為・相互作用に注目してデータの収集を行ったが、今年度は共同体(7名前後)全体の中で生起する相互行為・相互作用についても視座を広げた。また、表現者・共にいる人双方ともに障害がある人の事例についても参与観察を行った。3、社会福祉法人びわこ学園(滋賀)粘土室担当職員にインタビュー調査を実施した。また、研究成果の社会・国民への発信として、秋田公立美術大学ギャラリーBIYONG POINTにて、展覧会「つち→←にんげん」展を開催した。4、人と人との相互行為・相互作用のありように関する文献調査を行った。研究実施計画に沿って、「アートリンクうちのあかり」での参与観察による継続的な事例収集が遂行されている。当初予定していたよりも実践研究の機会を多く持つことができている。今年度は社会福祉法人びわこ学園でのインタビュー調査を行なうことができ、その成果の一端を展覧会の企画開催によって示すことができた。よって、おおむね順調に進展していると考える。本研究は、知的障害や発達障害等の障害のある表現者とそこに共にいる人との相互作用的な関係性、そしてそこから立ち上がってくる表現を同時に提示することによって、人が「表現」することの根源的な意味の問い直しを行うものである。3年目の30年度は、1昨年度に引き続きKさん(33歳/知的障害,精神障害)と私との継続的な創作活動(今年度28回実施)の場のありようを参与観察し、分析・考察を行った。その中で、Kさんの母親の長期入院を契機に、Kさん・私それぞれが相互作用の中で変容するあるようを捉えることができた。2障害のある人たち・生きづらさを抱えている人たち・学校や施設等に気持ちが向かないでいる人たち等が美大生と共にアート活動を中心とした「表現」を行う場である「アートリンクうちのあかり」の企画・運営を行い、参与観察を実施した。「アートリンクうちのあかり」は本年度6月より地域活動支援センターとして、週5回、年間241回の活動を実施した。本研究では、そこで生起したことの記録を蓄積した。また、主に共にいる人である美大生に対してインタビュー調査を行い、障害のある表現者とそこに共にいる人との相互作用的な関係性と、そこからの美大生の変容に関する知見を得た。3水津哲氏(社会福祉法人びわこ学園粘土室担当)・今泉岳大氏(高浜市やきものの里かわら美術館学芸員)による講演、植松永次氏(陶芸家)・水津哲氏(社会福祉法人びわこ学園粘土室担当)による障害のある人たちと美大生との粘土によるアートワークショップを開催した。初年度は年間30回程度だった「アートリンクうちのあかり」の活動が、今年度は年間241回と格段に増えたため、参与観察による事例収集の機会も格段に増えた。そのことによって、多様な人々の間で起こる「アート表現」を媒介にした相互作用について、また、一人の人の一年を通した変容についてデータを収集することが出来、知見が深まった。
構造設計を含む大規模非線形遅延結合ネットワーク系の巨視的同期制御

本研究では,同一の非線形システムの遅延結合による大規模ネットワークにおける同期問題に対し,1.スケーリングに基づいて完全同期と部分同期の発生条件の推定法を示し,直積ネットワークに基づく同期ネットワークの構成法を示した.2.外部入力の印加による部分同期の同期パターンの発生原理を明らかにした.この結果は,外部入力の印加により,同期パターンの制御が可能であることを示唆している.3.直積グラフで表される遅延結合ネットワークにおける完全同期,部分同期の条件を導出した.さらに,有向グラフで表現されるネットワークに対し,グラフ理論に基づく同期パターンの解析を行い,同期に基づくシステムの縮約法を示した.本研究の目的は,多数のサブシステムからなる大規模遅延結合ネットワークシステムの同期制御問題を考え,従来のシステム間の結合強度と遅延時間に関する同期条件の導出だけでなく,ネットワーク構造を含めた同期ネットワークの設計法を導出することである.さらに,巨視的同期的挙動を解析するためのダイナミクスの縮約法を検討し,新たな同期及びパターン形成の制御手法を開発することを目的としている.本年度は,特に,この目的の下に設定した3つのサブテーマのうち(b)外部入力による非線形遅延結合ネットワーク系の同期解析・制御手法の開発を行うことを計画していた.昨年度までに得たネットワーク系の同期条件の下で,外生入力の一部サブシステムへの印加に伴う部分同期パターンの発現と,そのパターンの制御手法について,グラフ理論における公平分割の概念を導入することにより推定可能であることを明らかにした.また,このように外生入力により生じる部分同期に基づくシステムのクラスター化について検討を行い,サブテーマ(c)大規模ネットワークの巨視的同期条件の解析・制御手法の開発の基礎理論の開発を行った.さらに,昨年度の結果を発展させ,直積構造を持つネットワーク系の部分同期パターンの形成条件について検討を進め,さらにHindmarsh-Rose回路を用いた直積ネットワーク系における部分同期パターンについて,実験検証を行い,実システムにおける個体差による推定誤差は伴うものの,概ね推定通りの結果が得られることを明らかにした.本研究の目的は,多数のサブシステムから構成される大規模遅延結合ネットワークシステムの同期制御問題を考え,従来のシステム間の結合強度と遅延時間に関する同期条件の導出だけでなく,ネットワーク構造を含めた同期ネットワークの設計法を導出することである.さらに,巨視的同期挙動を解析するためのダイナミクスの縮約法を検討し,新たな同期およびパターン形成の制御手法を開発することである.本研究課題の最終年度に当たる本年度は,これまでに得た知見を基に,双方向と一方向が混在する一般的なネットワーク構造におけるネットワーク同期問題について検討した.この結果から,サブテーマc)大規模ネットワーク系の巨視的同期現象の解析・制御手法の開発について取り組んだ.まず,グラフ理論の公平分割の定義を有向グラフネットワークに対して拡張し用いることで,ネットワーク上の同期可能なサブシステム群を明らかにした.その上で,ネットワーク上の一部のシステムに外生入力を印加した場合に現れる同期パターンについて検討し,外部入力がない状況における同期パターンと,外生入力を入力ノードとして考慮したグラフの最大公平分割との関係から,外生入力の印加による同期パターンの制御の可能性について明らかにした.これらの成果から,同一のダイナミクスを持つ非線形システムを結合することで構成されるネットワークシステムにおいて生じる同期パターンについて,そのパターンの決定原理と外生入力の印加によるパターン制御のための理論が構築できた.ここでの結果は,群移動ロボットなどの群制御にも活用可能であることも実験により検証している.本研究では,同一の非線形システムの遅延結合による大規模ネットワークにおける同期問題に対し,1.スケーリングに基づいて完全同期と部分同期の発生条件の推定法を示し,直積ネットワークに基づく同期ネットワークの構成法を示した.2.外部入力の印加による部分同期の同期パターンの発生原理を明らかにした.この結果は,外部入力の印加により,同期パターンの制御が可能であることを示唆している.3.直積グラフで表される遅延結合ネットワークにおける完全同期,部分同期の条件を導出した.さらに,有向グラフで表現されるネットワークに対し,グラフ理論に基づく同期パターンの解析を行い,同期に基づくシステムの縮約法を示した.本研究は,多数のサブシステムからなる大規模遅延ネットワークシステムの同期制御問題を考え,従来のシステム間の結合強度と遅延時間に関する同期条件の導出だけでなく,ネットワーク構造を含めた同期ネットワークの設計法を導出することである.特に,本年度においては,設定した3つのサブテーマのうち(a)構造設計を含む非線形結合ネットワーク系の同期解析・制御手法の開発を行うこととしている.本研究においては,ネットワーク構造を表すグラフラプラシアンの固有値と,結合強度と遅延時間からなる同期条件との関係に基づく解析から,二つのサブシステムを遅延結合により双方向結合した場合の同期条件から,任意のネットワークの同期条件を推定可能であることを明らかにしているが,この解析をさらに進め,ネットワークの一部が同期現象を生じる部分同期現象の解析にも拡張できることを明らかにした.

さらに,各サブシステムが強準受動性を有しない場合,結合により各システムが発散する場合があるが,本研究ではLur'e系を対象にして,そのような発散現象の発生も同様の解析手法で推定可能であることを明らかにした.今年度はさらに,上述の同期条件の推定法を用いて,ネットワークの直積構造とグラフラプラシアンの固有値の性質に着目し,与えられた同期条件の下で同期を発生するネットワークの構造設計法を明らかにした.一般に,結合されるサブシステム数が増加すると,ネットワーク同期のために許容される最大遅延時間は短くなる傾向があるが,本提案手法を用いることにより,サブシステム数が増加した場合にも,許容される最大遅延時間を下げることなく同期が可能となるネットワークの構成法を示した.これらの解析および設計法は数値シミュレーションにより妥当性を検証しており,国内会議において一部発表を行った.また,国際会議で論文が採択されている.本年度は,3カ年の研究テーマの下に設定されたサブテーマのうち,主に2年目に割り当てられている(b)外部入力による遅延結合ネットワークシステムの同期制御手法の開発,について検討を行い,外生入力の印加によるグラフの公平分割に基づく部分同期パターンの発生条件を明らかにしている.さらに,25年度で主に実施することを予定しているサブテーマについても着手している.また,前年度の結果を発展させ,直積ネットワーク系の部分同期条件を明らかにし,さらにニューロン回路を用いた実験による検証も行なっている.以上の通り,申請時に計画した研究計画にしたがって,ほぼ順調に研究が実施されており,おおむね順調に進展していると評価できる.本年度は3ヵ年の研究テーマの下に設定されたサブテーマのうち(a)構造設計を含む非線形結合ネットワーク系の同期解析・制御手法の開発,が主たるテーマであり,その下に置かれた検討事項について,概ね順調に成果を得ている.特に,申請者らの同期条件推定法を拡張させて,同期ネットワークの構造設計法を得ることができた.また,異なる遅延時間を有する遅延結合ネットワークの同期問題についても検討を行い,一定の結果を得ている.また,24年度に予定をしていた群移動ロボットのインターネットを用いた情報結合による遠隔同期実験に一部取り組み,実験環境の整備及び海外との試行実験を行った.したがって,全体としてほぼ計画通りに遂行されており,順調に進展していると評価できる.25年度においては,サブテーマ(c)大規模システムの縮約と同期・パターン形成,について主に取り組む.さらに,双方向と一方向結合が混在する一般的なネットワーク構造に於けるネットワーク同期問題について,検討を行う.24年度に購入したHPC計算サーバを用いることにより,従来よりも大規模システムの数値実験が可能になったので,その縮約法の開発と数値シミュレーションによる検証を行う.また,24年度においては,実システムを用いた同期実験も併行して行なってきた.倒立振子や移動ロボットのような機械システムやニューロン回路を用いた実験を通じて,開発した同期条件の推定法などの妥当性についても確認してきた.25年度においては,上記の理論開発のみならず,これらの実験検証についても,3カ年の最終年度として,成果をまとめていく予定である.24年度においては,本年度に得たサブネットの結合による同期に関する結果を,群移動ロボットを用いた同期問題に応用する.
モノからヒトへ伝播する院内感染を制御する方法の確立

本研究の目的は、医療設備および機器の細菌汚染によって起きる院内感染の調査を行い、その制御方法を確立することである。具体的には、各種の設備や機器の細菌汚染状況を調査し、それが院内感染の原因となる危険性の検討を行う。さらに、汚染の原因および汚染菌種を明らかにし、汚染の除去方法の確立を目指している。2016年から2017年にかけては、大型の設備や機器を対象とした調査を行ってきた。2018年においては、やや視点を変え、医療従事者が日常的に持ち歩く小型の医療器具の細菌汚染およびそれらを介した細菌の伝播について検討を行った。具体的には、医療用粘着テープ、駆血帯、消毒薬携帯用のポーチなどの検討を行い、これらが高頻度に細菌に汚染されており、細菌を伝播しうることが明らかになった。これらの中で最も興味深い結果が得られたのは医療用粘着テープであった。粘着テープは医療現場の様々な場面で用いられるにもかかわらず、法的には医療器具ではなく、単なる雑品である。しかし、粘着テープは細菌を巻き付けやすい性質を持っている。さらに、医療従事者の手指と頻繁に接触するため、その表面は皮膚の常在菌に高頻度に汚染されることになる。さらに、その汚染テープを患者の皮膚に貼付することで、細菌の伝播が起きることが判明した。テープの細菌汚染はその使用期間に伴い増加する傾向が認められた。2018年におけるもうひとつの研究目標は、細菌に汚染された設備や機器から効率的に細菌を除去する方法の検討である。通常の細菌は消毒によって比較的簡単に除去できる。しかし、設備や機器を汚染する細菌の中には消毒薬に高度抵抗性の芽胞を形成するものがあり、これらの除去は非常に難しい。しかし、我々は芽胞の除去方法の検討を行い、物理的な拭き取りと高レベル消毒薬である過酢酸を併用することが、芽胞の除去に最も有効であることを明らかにした。本研究の目的は、医療用の機器や用具を介して起きる院内感染の調査を行い、その制御方法を確立することである。具体的には、各種の機器や用具の細菌汚染状況を調査し、それが院内感染の原因となる危険性の検討を行っている。2016年度に調査を行った医療機器および用具は、内視鏡洗浄消毒器、凍結血漿融解装置、医療用テープである。1)内視鏡洗浄消毒機は内視鏡を高レベル消毒薬で消毒し、水で濯ぐ操作を自動的に行う機械である。消毒薬が通過する配管は清潔であったが、濯ぎ用の水が通過する配管が高率に細菌に汚染されていた。汚染菌種としては、非結核性抗酸菌とブドウ糖非発酵グラム陰性桿菌(NF-GNR)が分離された。内視鏡洗浄機の細菌汚染が実際に院内感染を起こした症例はほとんどなかったが、誤診をもたらした例は少なくなかった。2)凍結血漿融解装置は凍結保存されていた血漿を温浴槽で温めて融かす機械である。温浴槽は高率にNF-GNRに汚染されており、操作パネルは主にブドウ球菌に汚染されていた。また、汚染装置を用いて血漿を融解すると、血漿容器の表面も細菌に汚染されることが判明した。しかし、血漿容器を温浴層に直接入れるのではなく、簡易のビニール袋に入れたうえで温浴層に入れることで、血漿容器自体の汚染を簡単に防ぐことができた。3)医療用テープは医療現場で汎用される物品のひとつであり、医療従事者が持ち歩くことが多い。さらに、粘着剤が塗布されているため、汚れを付着させやすい。医療用テープの細菌汚染を実際に調査してみると、テープの表面や側面から高率にバシラス属細菌やブドウ球菌が分離された。さらに、汚染テープを皮膚に貼付することで、皮膚に細菌が伝播されることが判明した。現在、細菌汚染調査と並行して、テープの利用状況についての調査も行っている。これらを比較することで、医療用テープの清潔な管理方法を確立することが期待できる。本研究は異なる医療機器や用具を対象とする複数の小研究より構成されている。2016年度に調査を行った機器および用具は、内視鏡洗浄消毒器、凍結血漿融解装置、医療用テープである。それぞれの進捗状況は以下のとおりである。1)内視鏡洗浄消毒機の細菌汚染調査は既に終了している。装置の汚染箇所、汚染菌種および汚染菌の侵入経路も明らかになっている。さらに、汚染された装置の除染方法の検討も終了している。この成果については、既に研究内容を論文にまとめ投稿中である。さらに、内視鏡洗浄消毒機の管理方法に関するガイドラインを作成中である。しかし、この研究の問題点としては、協力施設を見つけることができず、単一施設での検討になってしまった点が悔やまれる。2)凍結血漿融解装置の細菌汚染調査は既に終了している。この研究は十分な数の協力施設を得ることができ、多施設研究として行うことができた。さらに、血漿融解装置から血漿容器へ細菌が伝播するのを防ぐ方法の検討も終了している。以上の成果については、既に研究内容を論文にまとめ、現在投稿準備中である。さらに、凍結血漿融解装置の管理方法に関するガイドラインを作成中である。3)医療用テープの細菌汚染調査は現在進行中である。この研究は十分な数の協力施設を得ることができ、多施設研究として行っている。

現在までに得られているデータから、医療用テープの汚染菌種および汚染レベルの高い部位などの概要はほぼ把握している。この研究では、細菌汚染の調査と並行して、医療用テープの管理状況のアンケート調査を行っている。しかし、細菌汚染調査とアンケート調査は別箇に検討を進めており、その比較分析は両者のデータが出揃った段階で行う予定である。したがって、現時点ではテープの管理状況と細菌汚染の関係については未検討である。本研究の目的は、医療設備および機器の細菌汚染によって起きる院内感染の調査を行い、その制御方法を確立することである。具体的には、各種の設備や機器の細菌汚染状況を調査し、それが院内感染の原因となる危険性の検討を行う。2017年度に調査を行った設備および器具は、医療施設の水道設備、無菌水作成装置、ジェット式手指乾燥機である。日本の水道局から供給されている水道水は若干の細菌を含んでいる。しかし、医療施設で使用されている水道水がそれより多くの細菌を含んでいることがあった。さらに興味深いのは、低層階の水が比較的清潔であるのに対し、高層階の水が多くの細菌を含んでいた点である。その原因を調査したところ、低層階では水道局の水をそのまま使用するのに対し、高層階では屋上のタンクに水を貯め、それを使用するためであることが判明した。つまり、貯水タンクの汚染が水の汚染の原因になっており、タンクの管理の重要性を示唆する結果となった。血液内科病棟などの無菌室では、免疫抑制状態の患者に供給する水を作るために、無菌水作成装置が使用されている。この装置は濾過および紫外線照射を用いることで水道水中の細菌を除去するものだが、濾過に用いるフィルターの交換を怠ると、装置自体が細菌に汚染されてしまい、水道水より多くの細菌を含む水を供給することが判明した。したがって、本装置の使用に際しては、厳しい保守管理が要求される。手洗い後の濡れた手を乾かすための装置がジェット式手指乾燥機であり、多くの商業施設で使用されている。さらに、これを採用する医療施設も増えている。本装置は高速の気流を手に吹き付けることによって、手を乾かす。しかし、この気流には多くの細菌が含まれていた。これは空気の取り入れ口が装置の底面部にあり、床の埃を吸い上げて手に吹き付けているためと判明した。以上より、医療施設における本装置の使用は推奨できない。本研究は異なる医療設備や機器を対象とする複数の小研究より構成されている。2017年度に調査を行った設備および機器は、医療施設の水道設備、無菌水作成装置、ジェット式手指乾燥機である。それぞれの進捗状況は以下のとおりである。医療施設の水道設備の細菌汚染調査は既に終了している。さらに、汚染の原因が貯水タンクであることも判明している。この汚染が実際に院内感染の原因になっていること示す証拠は得られていないが、免疫抑制状態の患者を多数抱える医療施設にとっては危険であると思われる。次に、貯水タンクから菌を取り除く方法の検討を行わなくてはいけないのだが、飲用にも使う水を貯めるものであるため、人体にも有害な高レベル消毒薬を使うことができず、この問題の解決方法に関しては足踏み状態と言わざるを得ない。血液内科病棟などの無菌室で使用される無菌水作成装置の細菌汚染調査は既に終了している。
前房隅角組織におけるmatrix metalloproteinaseの発現

前房隅角組織での検討では、摘出した前房隅角組織の線維柱帯組織とみられる組織を切徐し、培地にて培養を試み、matrix metall oproteinaseの活性をザイモグラフィーにて見てみたが、十分な活性は捕まえられず、残念ながらまだこれらの活性を同定するにはいたらなかった。角膜実質培養細胞での検討においては、角膜実質細胞の培養細胞は、pseudomonas elastase,alkalin protease,exotoxin A,LPSによりmatrix metalloproteinase(MMP)-2とMMP-9を分泌するこをすでに示している。今回の実験系では、これらのfactorと同様にTNF-α,IL-1β自体も角膜実質細胞からMMP-2とMMP-9を分泌させることがわかった(これらの研究成果はアメリカ合衆国での学会で報告した)。さらに、家兎における角膜損傷の役割について、matrix metalloproteinaseのみならず、活性酸素の役割も考えられ、活性酸素の消去物質であるsuperoxisidedismutase(SOD)の作用について検討した。家兎での角膜損傷を緑膿菌により引き起こし、これに抗菌薬(オフロキサシン)点眼とSOD点眼との併用にて角膜損傷をみてみると、SOD点眼併用のほうが併用なしよりも角膜損傷が少なく、MMPと同時に活性酸素も角膜損傷に関与していることが示された。前房隅角組織におけるの発現の実験系の前段階として、matrix metalloproteinaseのassey系を確立する必要があり、本年度は以下の実験を中心に行った。1)assay系の確立は、従来我々がモデルとして用いている角膜系の細胞においてmatrix metalloproteinaseの測定を行おこなった。測定はゼラチンおよびカゼインを基質としたzymography方を用いて行った。角膜実質細胞由来の培養した線維芽細胞にTNF-α添加によりmatrix metalloproteinase-9を発現することを確かめた。さらにその他の緑膿菌由来のproteaseによってもmatrix mettalloproteinase-2、およびmatrix metalloproteinase-9が発現することを確かめた。この結果は平成10年度にアメリカ合衆国にて開催される眼研究会議に発表の予定である。このようにmatrix metalloproteinaseのassey系を確立した。2)metarialの採取については、平成9年度に緑内障の手術を約100例程施行し、適当な症例から、前房水の採取と前房隅角の組織を採取し、次年度にて1)のassey系を用いてmatrix metalloproteinaseの解析段階に入る予定である。平成10年度も引き続き、緑内障の手術患者の線維柱帯切除術中に必要に応じて前房水を採取し、切除した前房隅角の組織標本を採取している。切除した前房隅角の組織は、線維柱帯を切除し、ブロック培養を行い、線維柱帯細胞の培養を確立中である。また、高眼圧モデルなどのより臨床モデルに近い各実験系を考案中である。また、各増殖因子が培養線維柱帯に対する影響の検討も進行中である。前房水は冷凍保存しており、ある程度まとまった段階で、matrixmetalloproteinaseの活性測定を行い、また同時に前房中の増殖因子の活性も測定し、matrix metalloproteinaseとの相関の考察を進行中である。平成11年度も引き続き、緑内障の手術患者の線維柱帯切除術中に必要に応じて前房水を採取し、切除した前房隅角の組織標本を採取している。前房水は冷凍保存しており、ある程度まとまった段階で、matrix metalloproteinaseの活性測定を行い、また同時に前房中の増殖因子の活性も測定し、matrix metalloproteinaseとの相関の考察を進行中である。
新規液相酸化法による再生可能資源からの有用化学物質の高効率回収

本研究では、バイオマス系廃棄物を再生可能なエネルギー資源と捉え、廃熱レベルのエネルギー投入で有用化学物質に変換することで、環境浄化とエネルギー回収を同時に実現する新技術の開発を目標にしている。本年度はまず、バイオマスの構造(リグニン、セルロース)中の含酸素官能基に着目して、バイオマス、廃棄物などの低品位資源を過酸化水素水などの酸化剤で80°Cまでの低温、常圧で酸化分解することで、一部芳香環を解裂させながら低分子化し、有用化学物質を得る技術の開発を目指し、バイオマスの新規酸化法に関して検討を実施した。その結果、実際のバイオマス廃棄物の新規酸化法として水熱処理-液相酸化法を提案し、その有効性を検討した。その結果、まず180°Cの水熱処理によってヘミセルロースを完全に分解し糖類を回収できること、続くH_2O_2酸化でリグニンのみを分解させ、約30wt%の低級脂肪酸を回収するとともに純セルロースのみを固体として回収できることを明らかにした。次に、生成液のアップグレーディング法として、フェントン試薬による第二段酸化法を検討した。室温で生成液にFeを単に加えるだけで、蓚酸を主成分とする約30wt%の低級脂肪酸を回収できることを見いだした。また、第一段酸化で生成した有機物は、芳香環が開環したリグニンであるため、迅速ガス化できる可能性を有している。そこで、ガス化速度の定量を試み、ガス化に伴う構造変化を踏まえて速度解析を実施した。その結果、第一段酸化で得られた水溶性有機物は、通常のリグニンのガス化速度の1000倍の速度を有すること、この高反応性は、リグニン構造が液相酸化で改質されたためでることを明らかにした。以上、提案した方法は、廃熱程度のエネルギー投入で、バイオマス廃棄物を有用化学資源に変換できる方法であることが明らかになった。その結果、セルロースは無触媒下でのH_2O_2酸化では60°Cまでの温度で全く分解しないこと、少量Fe添加でセルロースの70%近くが分解され30%程度の水溶性有機物が生成し、約15%の収率で蟻酸、グリコール酸を回収できることがわかった。また、リグニンは、無触媒下でのH_2O_2酸化でも分解し、この生成液にFeを添加して室温で二段酸化することで、蓚酸を主成分とする低級脂肪酸が44%も回収することに成功した。これは、f_a値との比較から第一段酸化による芳香族の開環で多量の蓚酸前駆体が生成したためと推察された。さらに、以上の知見を踏まえて、実際のバイオマス廃棄物の新規酸化法として水熱処理-液相酸化法を提案し、その有効性を検討した。今後、生成液のアップグレーディング等の検討を実施していく予定である。

本研究では、バイオマス系廃棄物を再生可能なエネルギー資源と捉え、廃熱レベルのエネルギー投入で有用化学物質に変換することで、環境浄化とエネルギー回収を同時に実現する新技術の開発を目標にしている。本年度はまず、バイオマスの構造(リグニン、セルロース)中の含酸素官能基に着目して、バイオマス、廃棄物などの低品位資源を過酸化水素水などの酸化剤で80°Cまでの低温、常圧で酸化分解することで、一部芳香環を解裂させながら低分子化し、有用化学物質を得る技術の開発を目指し、バイオマスの新規酸化法に関して検討を実施した。その結果、実際のバイオマス廃棄物の新規酸化法として水熱処理-液相酸化法を提案し、その有効性を検討した。その結果、まず180°Cの水熱処理によってヘミセルロースを完全に分解し糖類を回収できること、続くH_2O_2酸化でリグニンのみを分解させ、約30wt%の低級脂肪酸を回収するとともに純セルロースのみを固体として回収できることを明らかにした。次に、生成液のアップグレーディング法として、フェントン試薬による第二段酸化法を検討した。室温で生成液にFeを単に加えるだけで、蓚酸を主成分とする約30wt%の低級脂肪酸を回収できることを見いだした。また、第一段酸化で生成した有機物は、芳香環が開環したリグニンであるため、迅速ガス化できる可能性を有している。そこで、ガス化速度の定量を試み、ガス化に伴う構造変化を踏まえて速度解析を実施した。その結果、第一段酸化で得られた水溶性有機物は、通常のリグニンのガス化速度の1000倍の速度を有すること、この高反応性は、リグニン構造が液相酸化で改質されたためでることを明らかにした。以上、提案した方法は、廃熱程度のエネルギー投入で、バイオマス廃棄物を有用化学資源に変換できる方法であることが明らかになった。
NADP(H)に着目した抗がん剤による日周リズムの維持・変動メカニズムの解明

がん時間薬物療法は、抗がん剤の投薬時刻を設定することで効果を増大・副作用を軽減することを目的とした薬物療法であり、実験動物のみならず臨床試験においてもその有用性が確認されている。しかし抗がん剤により細胞周期や代謝酵素の日周リズムが変動し、時間薬物療法の有効性が減少することが指摘されている。そのため、抗がん剤投与による日周リズムの変動メカニズムを解明することは時間薬物療法を臨床で使用する上で重要なテーマである。本研究では、酸化還元ストレスが日周リズムに影響を与えることに着目し、抗がん剤投与による日周リズムの変動メカニズムを解明する。2018年度は、直接酸化還元ストレスに影響を及ぼし、且つ、新規抗がん剤として期待されているスルファサラジンを用いて、既存の日周リズムが変動する投薬時刻・変動しない投与時刻を探索した。その結果、スルファサラジンの抗腫瘍効果の作用点であるシスチントランスポーターxCTノックダウン細胞での時計遺伝子発現量の変動結果から、既存の日周リズムが変動する投薬時刻・変動しない投与時刻が存在することを明らかにした。日周リズムが変動する投薬時刻では、時計遺伝子発現量のピークおよびトラフとなる時刻つまり位相がズレる場合やピーク値とトラフ値の変動幅が減少することによる日周リズムの消失などが確認された。既報で申請者は、スルファサラジンの投薬時刻を設定することで抗腫瘍効果が増大することを報告しており、本実験結果より抗腫瘍効果が増大する投薬時刻は、日周リズムが維持されていることを確認した。多忙のため。但し、本研究テーマの基盤となるデータを得ることができた。in vivoとin vitroの結果の整合性も取れており、2019年度は着目しているメカニズムの解明を行う。実験1)酸化還元ストレスによる日周リズムの発振作用の解明:xCT阻害作用を持つスルファサラジンが時計遺伝子の発現量を一過性に変動させる効果のみであるのか、またはスルファサラジン自体が日周リズムを発振させる効果を持つかを解明するため、培養細胞にスルファサラジンを暴露し、日周リズムが発振されるか明らかにする。実験2)スルファサラジン(xCT阻害)による日周リズムの変動メカニズムの解明:酸化還元ストレスによって、時計遺伝子応答配列に対する時計遺伝子の結合量が変動するため、その点に着目しスルファサラジンの投薬時刻によって既存の日周リズムが維持・変動するメカニズムを解明する。多忙のため。多忙のため。
線虫をモデルとした個体間相互作用が行動を制御する分子機構の解明

本研究は、動物の学習・記憶・判断に影響を与える種々の環境情報を伝達する修飾経路を明らかにすることを目標とした。そこで、あえて、弱く不安的な学習行動であると思われる、5分間という短い条件付けによって引き起こされる線虫C. elegansの嗅覚可塑性に注目した。この不安定な嗅覚可塑性は個体群密度に依存することが、先行研究により報告されている。昨年度までに、この不安定な嗅覚可塑性について異常を示す変異体として、低分子量Gタンパク質Rapを負に制御するGTPase Activating Protein(GAP)と予想されるsipa-1の変異体を同定した。sipa-1は、頭部・尾部・腹神経索の数多くの神経細胞、体壁筋や咽頭などに発現が確認された。そこで、それぞれの組織に特異的に野生型sipa-1のcDNAを発現させ、sipa-1変異体の嗅覚可塑性異常を回復できるかどうかを調べた。その結果、多数の神経細胞に発現を誘導するプロモーターを用いた場合のみsipa-1変異体の異常を回復することができた。これはsipa-1の神経細胞での機能が嗅覚可塑性を制御することを示唆する。哺乳類ではsipa-1はRapを負に制御するGAPであることが報告されている。C. elegansのRap-1は哺乳類のRapと高い相同性を持つ。そこで、恒常活性化型と予想されるrap-1(G12V)を野生型に導入したところ、sipa-1プロモーター、またはH20プロモーター(全神経)による発現で、sipa-1変異体と同程度の嗅覚可塑性異常を再現することができた。この結果は、神経細胞における適切な強度のRapシグナリングが嗅覚可塑性において重要であることを示唆し、またrap-1がsipa-1のターゲットであることに矛盾しない。今後は生化学的な実験によりsipa-1とrap-1の直接的な相互作用を示すべきであろう。27年度が最終年度であるため、記入しない。個体群密度依存的に嗅覚可塑性を制御する神経ペプチドsnet-1の下流で機能する遺伝子を同定するために、修士課程までにsnet-1過剰株の抑圧変異体を、順遺伝学的なスクリーニングによって合計5株得た。このうちの1つJN1352について、由来の異なる2つの線虫株N2とCB4856の間の一塩基多型(SNP)を利用して原因変異のマッピングを開始した。しかし、大まかな遺伝子マッピングの段階で、原因変異の有無に関わらず、SNPの組み合わせにより嗅覚可塑性の表現型が大きく変動するという問題が発生した。そこで原因変異の存在が予想されたX染色体のみがCB4856由来になった株を利用する工夫をして詳細なマッピングを行った。その結果、β一Arrestinの線虫オルソログであるarr-1に点変異が見つかった。そこで現在、JN1352の表現型の原因が、arr-1の点変異であることを証明するために遺伝子導入実験を試みている。ARR-1はGPCRによるシグナル伝達を制御する分子である。神経ペプチド受容体として機能するGPCRは多く知られており、SNET-1の受容体もGPCRであることが予想される。したがって、arr-1の機能細胞や、関連が予想される遺伝子を調べることで、SNET-1の標的細胞や下流の分子経路を同定できる可能性がある。また、snet-1のnull変異体においても嗅覚可塑性の個体群密度依存性は維持されていることを発見した。この結果により、snet-1経路以外にも個体群密度依存的に嗅覚可塑性を制御する経路が存在することが示唆された。本研究で嗅覚可塑性の実験系として用いているのは、匂いを含むbuffer中に線虫を置く条件付けの時間が5分間という比較的短い時間である系である。この系では、線虫が完全に匂いから忌避するまでには至らず、ちょうど誘引と忌避が拮抗した状態となる。したがって、飢餓やBuffer中でのストレスといった直接的な要因だけではなく、様々な環境情報が統合されて匂いへの走性が変化しうる段階の嗅覚可塑性と言える。そのような環境情報の一つとして、線虫の培養時の個体群密度が嗅覚可塑性に影響を与えるという現象にこれまで注目してきたが、この他にも思いもよらない未知の経路が存在している可能性がある。そこで、今後は個体群密度と嗅覚可塑性を結びつける経路に対象を限定せずに、嗅覚可塑性を制御する新奇分子機構の発見を目指すことにした。本年度は、順遺伝学的にスクリーニングされた、野生型に比べて嗅覚可塑性が不十分な変異体の原因変異の同定を試みた。SNP(一塩基多型)を利用した遺伝子マッピングと、次世代シーケンサーを用いた全ゲノムシーケンスを併用することで、4株の変異体について原因変異の候補を同定した。そのうち2株は、個体群密度が嗅覚可塑性を制御する経路に属する既知遺伝子であるnep-2に変異があることが分かった。残りの2株は、small G proteinであるRapのGAP(GTPase activating protein)と予想されているsipa-1に変異が見つかった。Rapによる行動可塑性の制御についての報告は他の生物を含めて少なく、本研究での今後の解析により新奇の知見がもたらされることが期待される。

そこで、あえて、弱く不安的な学習行動であると思われる、5分間という短い条件付けによって引き起こされる線虫C. elegansの嗅覚可塑性に注目した。この不安定な嗅覚可塑性は個体群密度に依存することが、先行研究により報告されている。昨年度までに、この不安定な嗅覚可塑性について異常を示す変異体として、低分子量Gタンパク質Rapを負に制御するGTPase Activating Protein(GAP)と予想されるsipa-1の変異体を同定した。sipa-1は、頭部・尾部・腹神経索の数多くの神経細胞、体壁筋や咽頭などに発現が確認された。そこで、それぞれの組織に特異的に野生型sipa-1のcDNAを発現させ、sipa-1変異体の嗅覚可塑性異常を回復できるかどうかを調べた。その結果、多数の神経細胞に発現を誘導するプロモーターを用いた場合のみsipa-1変異体の異常を回復することができた。これはsipa-1の神経細胞での機能が嗅覚可塑性を制御することを示唆する。哺乳類ではsipa-1はRapを負に制御するGAPであることが報告されている。C. elegansのRap-1は哺乳類のRapと高い相同性を持つ。そこで、恒常活性化型と予想されるrap-1(G12V)を野生型に導入したところ、sipa-1プロモーター、またはH20プロモーター(全神経)による発現で、sipa-1変異体と同程度の嗅覚可塑性異常を再現することができた。この結果は、神経細胞における適切な強度のRapシグナリングが嗅覚可塑性において重要であることを示唆し、またrap-1がsipa-1のターゲットであることに矛盾しない。今後は生化学的な実験によりsipa-1とrap-1の直接的な相互作用を示すべきであろう。次世代シーケンサーの使用により、嗅覚可塑性異常変異体の原因変異候補の同定が効率よく行えるようになった。同定したsipa-1の解析を開始したのに加え、他の変異体のいくつかについても原因変異を同定できる見込みが立っている。27年度が最終年度であるため、記入しない。rap変異体等を用いた遺伝学的手法と、Rapに対するGAP活性の測定などの生化学的手法によりsipa-1のターゲットがrapであるかを検証する。これまで、線虫の嗅覚可塑性にはsmall G proteinのRasと、その下流のMAPK経路が関わっていることが知られている。さらに哺乳類では、RasとRapが拮抗的に機能することでMAPK経路が制御されることが知られている。そこで、嗅覚可塑性におけるRasとRapの相互作用の可能性と、それぞれが伝える情報がMAPK経路で統合される可能性について検証したい。本研究では順遺伝学的な手法を用いており、目的の達成には、遺伝子マッピングをできるだけ手早く行い、複数の変異体の原因変異を同定する必要があることが予想されるが、現在1つの変異体の解析に留まっているため。JN 1352以外にも得られている、snet-1過剰発現株の抑圧変異体の解析を開始する。遺伝子マッピングの効率を上げるために、従来の一塩基多型を用いた方法に加えて、次世代シーケンサーによる全ゲノムシーケンスを併用する。