hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
損傷を受けた神経細胞に対する麻酔・鎮静薬の毒性に関する検討

脊髄神経障害モデルでは、術後約23週間以降に疼痛行動を発症する。そのメカニズムとして、成体動物では想定的に有意であるKCC2が減少し、NKCC1が増加することで、細胞内Cl-濃度が増加し、GABA刺激により細胞が過剰興奮することが提唱されている。SNLではKCC2の変化が誘導されなかったため、過去の報告を参考にしCCIモデルに変更して実験を行った。CCIではモデル作成2週間後に脊髄後角でのpKCC2の低下を認めた。またweight distributiontestでも、健足負荷の時間増加を認めた。しかしながらCCI動物にCLP290を投与しても、行動学的変化は認められなかった。傷害を受けたニューロンでは、Catio- Chloride- Cotransporter発現の変化によりGABAA受容体刺激が興奮作用をもたらす幼若化が起きることが知られており、この興奮作用が細胞の修復と同時に細胞死増強にも働くことが報告されている。本研究では、成体のラットを用いた神経損傷モデルにおいて、ミダゾラム、プロポフォール投与によってGABAA受容体刺激作用を介して、障害を受けたニューロンの神経細胞死を増強するかどうか、増強する場合はそのメカニズムと予防法を解明することを目的としている。すなわち、本研究の臨床的意義は、頭部外傷や脊髄損傷などの急性期において、人工呼吸等の集中治療管理のために鎮静薬としてGABAA受容体刺激薬を使用することが神経損傷に対して不利に働く危険性について検討することである。当初は脊髄前根損傷による脊髄前角細胞の細胞死などを検証する計画を建てたが、手術手技の検討では、手術手技が非常に難しく、特に後根を温存することが困難であった。このため、前根、後根が合流したより末梢においてL5神経根を引き抜き損傷するモデルに変更し、手術手技の修得を計った。これまでの実験から短時間に安定してL5引き抜き損傷を作成する手技を修得した。損傷後数日の動物から脊髄を摘出し、L5相当レベルの脊髄前角細胞の免疫染色を行い、caspase 3の発現により健側に比べて手術側でアポトーシスが増強していること、すなわち神経損傷モデルが確立できていることを確認中である。そのメカニズムとして、成体動物では相対的に有意であるKCC2が減少し、NKCC1が増加することで、細胞内Cl-濃度が増加し、GABA刺激により細胞が過剰興奮することが提唱されている。本研究では、SNLモデルを作成し、3週間目以降よりVon Frey testで疼痛の程度を定量する。神経障害動物ではKCC2の減少、NKCC1の増加を生じ、そこへ麻酔薬曝露をすることで増加したNKCC1の活性化を介して、細胞興奮から神経因性疼痛を増悪させるという仮説を立てた。脊髄神経障害モデルラットに対して麻酔薬を曝露させ、疼痛が増悪するかを行動学的に評価し、その脊髄での興奮性変化を組織染色により検討する。最終的には、KCC2刺激薬を投与し、麻酔薬曝露によって増悪した疼痛が改善しているかを生化学的・行動学的に検討した。CCIではモデル作成2週間後にvon freytestでの疼痛閾値の低下を認めるとともに、脊髄後角でのKCC2の低下を認めた。またweight distrubution testでも、健足負荷の時間増加を認めた。しかしながらCCI動物にCLP290を投与しても、行動学的変化は改善されなかった。したがって、投与濃度や投与期間を検討することで、改善効果を検討する。麻酔科学神経損傷モデルとして当初計画していた脊髄前根損傷モデルは、手術手技が難しく、後根の損傷を防ぐのが困難であることが判明し、両方の神経根の合流した末梢でのL5神経根の引き抜き損傷モデルに変更した。この間、2種類の手術手技の検討、修得に非常に時間を要した。L5神経根の引き抜き損傷により脊髄前角細胞に、細胞死が再現性よく誘発できる事を確認中である。これが確認できた後、鎮静薬投与による前角細胞の傷害の変化を検討してゆく。神経損傷モデルの確立に時間を要したため、その結果の評価であるCa imagingや免疫染色などを実施する実験は数が少なかった。そのため、これらの実験に用いる試薬類、実験補助の人件費などが当初計画を大幅に下回った。モデル確立後は、Ca imaging、免疫染色などを順次実施してゆく。これらの実験に使用する試薬、実験補助人件費などに差額を充てる予定である。
運動反応時間を用いた尿道括約筋の不随意運動と随意運動の鑑別

本研究は、尿道括約筋機能の新しい評価法として、運動反応時間を用い尿道括約筋の病的な不随意収縮と正常な随意収縮のより客観的な鑑別法の確立を目的としたものである。しかし、今回の研究の過程で、無抑制括約筋弛緩(UISR)の問題に直面した。UISRは、排尿筋括約筋協調不全のひとつの病態と考えられるが、筋電図活動が消失するために、運動反応時間の手法が利用できない。そのため、平成11年度からは、本研究の方法論を運動反応時間から仙髄反射活性測定(BCR-EP)に変更するに至ったが、以下の研究実績が得られ、その成果を公表することができた。対象と方法:正常男性17例と、UISR伴う神経因性膀胱男性3例を対象とした。陰茎背神経を電気刺激し、尿道周囲横紋筋から導出したBCR-EPを、正常症例では膀胱空虚時と随意排尿時に、UISR例ではUISRによる尿失禁時と排尿企図下の尿排出時を比較検討した。結果:正常全例で膀胱空虚時にBCR-EPを認めたが、随意排尿時には17例中16例ではBCR-EPを検出できなかった。UISR時では、明瞭なBCR-EPが存在し、膀胱空虚時との振幅比はそれぞれ0.78、0.79、0.84であった。排尿企図下では3例中2例でBCR-EPが残存するものの振幅比は0.15、0.56、1例では明瞭なBCR-EPを認めなかった。結語:正常症例では排尿時にはBCR-EPは相対的に抑制されたが、UISR例では抑制は不完全で、排尿企図下のBCR-EPはUISR時に比し明らかに抑制された。排尿時のBCR-EPにより、病的括約筋弛緩と随意排尿の客観的鑑別の可能性が示唆された。以上から、尿道括約筋の病的な不随意運動と正常な随意運動の客観的鑑別法の手がかりが得られたと考えられ、方法論の変更をやむなく行ったが、当初の目的は達成された。本研究は、尿道括約筋機能の新しい評価法として:筋の興奮ー収縮連関を反映すると考えられる運動反応時間を初めて泌尿器科領域の臨床検査に導入し、尿道括約筋の病的な不随意収縮と正常な随意収縮のより客観的かつ定量的な鑑別法の確立を目的としたものである。平成10年度は以下の研究計画に沿って研究を進めた。1)運動反応時間の測定:陰茎背神経の電気刺激による尿道括約筋の反射性収縮(球海綿体反射)を利用して、尿道括約筋筋電図と括約筋部尿道内圧の同時測定を行い、刺激開始・筋電図活動開始・尿道収縮開始の各時間軸から潜時や運動反応時間の測定を試みる。その結果、意思疎通可能な患者にて、球海綿体反射時の各パラメータを測定したところ、刺激から筋電図活動開始までの潜時は平均36ms、刺激から尿道収縮開始までの潜時は平均59msであった。従って、球海綿体反射時の運動反応時間は平均23msとなった。臨床患者を対象として、上記の方法論にて運動反応時間の測定が可能であることが、初めて判明した。2)不随意収縮と随意収縮の鑑別: 1)で方法を確立した後、神経学的な正常例において、不随意収縮と随意収縮時の運動反応時間を測定する。具体的には、不随意運動としては最大電気刺激時の球海綿体反射をスタンダードとして用い、随意収縮としては球海綿体反射が誘発されない程度で知覚閾値以上の陰茎背神経への電気刺激をトリガーとして、被験者に尿道随意収縮を行わせて、これをスタンダードとする。その結果、随意収縮時の運動反応時間の測定では、球海綿体反射時の測定に比較して正確な筋電図の開始時間の同定が困難であった。以上から、積分筋電図による筋電図開始時間の測定等の方法論の改良が必要と考えられた。平成11年度は、球海綿体反射を利用した不随意収縮時の運動反応時間の正常値の決定を行い、随意収縮との違いを鑑別する予定である。

UISR時では、明瞭なBCR-EPが存在し、膀胱空虚時との振幅比はそれぞれ0.78、0.79、0.84であった。排尿企図下では3例中2例でBCR-EPが残存するものの振幅比は0.15、0.56、1例では明瞭なBCR-EPを認めなかった。結語:正常症例では排尿時にはBCR-EPは相対的に抑制されたが、UISR例では抑制は不完全で、排尿企図下のBCR-EPはUISR時に比し明らかに抑制された。排尿時のBCR-EPにより、病的括約筋弛緩と随意排尿の客観的鑑別の可能性が示唆された。以上から、尿道括約筋の病的な不随意運動と正常な随意運動の客観的鑑別法の手がかりが得られたと考えられ、方法論の変更をやむなく行ったが、当初の目的は達成された。
コンテンツ創出のマネジメント戦略-日韓米欧における共同事業の実態調査研究

2年に亘る現地調査により、欧米のメディアコングロマリットが、我が国で問題となっている新聞、出版だけでなく、技術革新で生まれてくる新メディアを含めたマネジメントを扱った。コングロマリットになれば良いという結論ではないが、メディアは革新する。コンテンツは、時代時代に合わせてメディアを選択する。従って、それぞれの領域で専門化を遂げ、強みを更に強める分野でニーズの多様化に対応する必然性がでてくるであろう。初年度は、理論構築を中心としながら、海外での提携事業の実態調査を実施した。理論構築作業の中心として、組織間関係論、経営戦略論の発展型としてのマネジメント論構築に向けた文献を検討した。組織間関係の中間形態、組織間関係をマネジメントすること、そしてマネジメントのプロセスの成果としてのプロダクト創出が、ものづくり経営とは異なる知識資産創出、コンテンツ創出にいかに結びつけることができるのかが焦点である。理論的フレームワークの構築の際、経営学の領域にとらわれず、クリエイティブインダストリーが国家の経済成長にいかに寄与するのかという側面からの先行研究をも検討に加え、学際的アプローチを試みた。実施計画にまとめたコンテンツ産業分析の先行研究の収集・分析、知識創造関連プロダクトのライフサイクル論の内外論文、著作の収集・分析、知識創造関連と企業成長戦略との関連性における理論研究、プロダクト・ライフサイクルマネジメントの戦略的フレームワークの構築という一連のプロセスを踏み、検討を重ねた。実証研究としては、米国フィラデルフィアで開催されたAcademy of Managementにおいて、知識資産のマネジメント、戦略、新規プロダクト開発に関る研究者との有益な議論とインタビューを実施した。フィラデルフィアに続き、ボストンでは、ハーバード大学、MIT、ボストン大学に所属する研究者、映画を中心としたコンテンツクリエーターとのインタビューを実施した。その成果は、9月初旬に実施された日本経営学会第81回大会で報告し、また、世界思想社から出版された『コンテンツ学』の筆者担当章において、一部を記述した。予定していた韓国、ドイツ訪問は達成できなかったが、次年度に実現する予定である。本研究の目的は知識資産をプロダクトとするコンテンツ産業が、確固たる業界として磐石な土台の上に成長を続ける方策を、企業経営の側面から分析、研究することであった。そのために、まずは国家戦略としてのビジネス制度が確率しているアメリカ、イギリス、そしてフランスなどのコンテンツ先進諸国の事例を改めて分析し、コンテンツ産業が企業として成長するための企業戦略、成長戦略を導き出すことである。まずは、初年度の文献研究と調査研究を継続し、20年度はアメリカのアナハイムで開催された経営学会において、コンテンツ産業やメディア産業のマネジメント戦略を専門とする有識者とのセミナーを開催した。セミナーに続き、特にメディアコングロマリットに属するタイムワーナー社、ソニーピクチャーズ、ウォルトディズニー、ヴァイアコムの4社を訪問し、プロダクト開発のイノベーション創出のプロセスについて聞き取り調査を実施した。成果の一部は、本年1月に出版された下記の著作に記してある。昨年秋には、ドイツのケルンで開催された戦略経営学会に出席し、同様に、コンテンツ産業、メディア産業のマネジメント戦略に関するワークショップに参加した。ヨーロッパにおいては、キルヒのプロダクト開発戦略を検討した。日欧米の事例を通して、コンテンツという無形資産を開発するためのマネジメント戦略は、様々なメディアを縦軸とすれば、コンテンツの内容で横軸を組むことができる。技術革新の激しいメディア業界にはハードとしてのメディア技術開発を特化させ、コンテンツを細分化し、さらに専門化させることにより、競争力と開発力を育成することがポイントではないかという段階に来た。計画に記述していた韓国をはじめアジア地域を中心とした聞き取り調査を含めることができなかったことが本研究で唯一不足した点である。今後の課題としたい。
欠損変異プリオン蛋白を用いたプリオン構造の解析

N末端66個のアミノ酸を欠損した変異プリオン蛋白(PrP)を発現するトランスジェニック(Tg)マウスへの接種実験、および発症Tgマウスから同じ変異分子を発現するTgマウスへの継代接種実験では、欠損を持たないPrPを発現するTgマウスの場合と比較して潜伏期間が延長し、欠損させたN末端アミノ酸がプリオン伝搬を促進する働きをもつことが明らかとなった。最もN末端寄りのhelixを欠損した変異PrP(PrPdelH)を発現するTgマウスへの接種実験では、野生型マウスPrP(MoPrP)を欠損しPrPdelHのみを発現するTgマウスの場合、依然として発症が認められず、PrPdelHは感染型に変換されない可能性が高い。PrPdelHとヒト・マウスキメラPrPの両者を発現するマウスにヒトプリオンを接種した場合ヒト・マウスキメラPrP単独を発現するマウスの場合と比較して潜伏期間の延長が認められ、PrPdelHはヒト・マウスキメラPrPによるヒトプリオンの伝搬に対しても抑制的に働くことが明らかとなった。すなわち、PrPdelHによるプリオン増殖抑制効果は、プリオン増殖に関する「種の壁」を越えて働きうることが示された。C末端のGPI付加シグナル配列を欠き分泌型蛋白になる変異PrP(PrPsec)とMoPrPの両者を発現するTgマウスで認められた高度アミロイド沈着を伴うプリオン病では、PrPsec発現量が多いほど潜伏期間が延長し、PrPsecはプリオン増殖に対して抑制的に働いていることが示唆された。発症Tgマウス脳組織中のPrPsecは、少なくとも一部が蛋白分解酵素耐性型に変換されていた。このことからPrPsecは、プリオンに組み込まれつつプリオン増殖には抑制的に働くという、これまで知られていない特異な様式でプリオンと相互作用していることが示唆された。PrPdelHとヒト・マウスキメラPrPの両者を発現するマウスにヒトプリオンを接種した場合、ヒト・マウスキメラPrP単独を発現するマウスの場合と比較して潜伏期間の延長が認められ、PrPdelHはヒト・マウスキメラPrPによるヒトプリオンの伝搬に対しても抑制的に働くことが明らかとなった。
プリオン病の革新的な非侵襲的な診断法の開発

プリオン病は100%の致死性急速進行性認知症であり、プリオン病の診断法・治療法は未だ確立されていない。我々はプリオン病患者髄液中の超微量の異常プリオン蛋白の検出に世界で初めて成功した。本研究は世界に先んじて血液を含んだ非中枢神経の臓器からのプリオン病の革新的なさらに非侵襲的な診断を試みることを研究目的とする。2017年から2022年までにこれまでの研究成果を基に4つの研究を基盤に画期的な診断法を確立する。I.微量の異常プリオン蛋白の半定量化の確立、特にヒトサンプルでの微量の異常プリオン蛋白の半定量化を確立する。II.保存しているサンプルでの解析(後向き研究)と4年後前向き試験による研究を行い、髄液から診断に対する感度・特異度を確立し、半定量も行う。III.プリオン病患者のサンプル(血清・各種臓器)からの異常プリオン蛋白の新規検出法を開発し、その有効性について検討を行う。IV.プリオン病患者のサンプルからの異常プリオン蛋白を検出できた臓器についてヒト型ノックインマウスで感染実験を行い、感染性について検討する。は本研究の概要とする。2017年と2018年度にヒトサンプルでの微量の異常プリオン蛋白の半定量化を確立した。さらに論文化まで行うことができた。さらに保存しているヒトサンプルについても定量することも可能であり、後向きのサンプルの感度・特異度については学会にて発表をおこなうことができた。2019年度は4年間(3年目)の前向き試験による研究を行い、髄液から診断に対する感度・特異度を確立し、半定量も行う予定である。過去のホルマリン固定の脳から微量の異常プリオン蛋白の検出及び半定量を行う予定であり、臓器から微量の異常プリオン蛋白の半定量化を行い、論文化する。さらにプリオン病患者のサンプルからの異常プリオン蛋白を検出できた臓器についてヒト型ノックインマウスで感染実験を行う。感染実験以外は順調に進んでいる。IV.プリオン病患者のサンプル(血清・各種臓器)からの異常プリオン蛋白を検出できた臓器についてヒト型ノックインマウスで感染実験を行い、感染性について検討する。これについては3については順調に進んでいるが、症例数が十分ではない。検体が集まり次第再検討を行う。我々はプリオン病患者髄液中の超微量の異常プリオン蛋白の検出に世界で初めて成功したが、我々の研究にて感度・特異度の点において十分ではない。最近プリオン病の完治の可能性を秘めた治療薬の報告が報告され、脳生検に近いかつ感度・特異度が100%に近い新規診断法の開発が求められている。現在まで臓器における診断法の確立をほぼ完成しているが、血液特に血漿や血清からの診断法の確立には未だ至っていない。残りの3年間を通して皮膚・尿・血液(特に血清・血漿)からの異常プリオン蛋白の検出を試みる。プリオン病患者のサンプル(血清・各種臓器)からの異常プリオン蛋白の新規検出法の開発本研究課題で最も重要な研究課題である。

血清・各種臓器特に非中枢神経系一般臓器(皮膚や胃粘膜)から異常プリオン蛋白の検出にトライする。非中枢神経系一般臓器や血液では他の臓器に比べ極めてごく微量の異常プリオン蛋白しか存在しないと考えられる。そのため正常及び異常プリオン蛋白が微量のため効率よく集積させ、RT-QUIC法を改良した方法での検出が極めて現実的である。そのため2つの方法つまり抗プリオン蛋白抗体による免疫沈降法を利用する方法とプリオン蛋白の電荷の違いを利用し、マグネットビーズによるプリオンの免疫沈降法の2つを行う。1)抗プリオン蛋白抗体による免疫沈降後RT-QUIC法を改良した法での検出2)マグネットビーズによるプリオンの免疫沈降後RT-QUIC法を改良した法での検出III.プリオン病患者のサンプル(血清・各種臓器)からの異常プリオン蛋白の新規検出法を開発し、その有効性について検討を行う。IV.プリオン病患者のサンプル(血清・各種臓器)からの異常プリオン蛋白を検出できた臓器についてヒト型ノックインマウスで感染実験を行い、感染性について検討する。これについては3については順調に進んでいるが、症例数が十分ではない。検体が集まり次第再検討を行う。消耗品を呈するために次年度の使用額を残している。予算として動物実験の利用料として準備していたものが予算としてあまった。次年度に動物実験の利用料として使用する。又検体数を増やして検査を行うために使用する。
両大戦間期における「外地青年団」の形成・展開に関する研究

今年度の研究では、昨年度収集した資料と新たに収集した資料をもとに、旧植民地における「外地青年団」の成立と社会教育行政の成立の相関についての分析をこころみた。その成果の一端は、「日本・沖縄・東アジアの社会教育法制研究に関するノート」(東京学芸大学社会教育研究室編『東アジアの社会教育・成人教育法制』1993,12)としてまとめておいた。(1)まず、「外地青年団」の成立を朝鮮、台湾、南洋群島、満州、樺太の五つに類別化してみたとき、台湾がいち早く大正3年、それに続いて南方大正11年と続いている。朝鮮では、青年団の成立は遅く、昭和10年を過ぎてからの組織化となっており、満州では青年団としての組織化の資料はまだ未見である。(2)そのように青年団の組織化に対して、社会教育行政の成立ならびに施設の設立に関しては、(1)朝鮮では、大正10年朝鮮総督府内務部社会課設置、大正12年図書館開館、(2)台湾では、大正3年図書館開館、大正9年教育課(社会教化担当)設置、(3)南洋群島では、大正3年から各種講習会開催、大正4年内地観光団の組織化、(4)満州では、大正7年関東都督府図書閲覧場設置、大正8年関東庁学務課設置、(5)樺太では、大正5年樺太庁博物館設置、昭和5年社会教育官設置となっている。いずれも限定された資料のなかからではあるが、旧植民地における社会教育行政の設立は、それぞれ特徴をもちながらすすめられ、青年団の設立よりも社会教育施設の設置が先行してすすんでいることがわかる。外地青年団の設立についても、それぞれに特色をもっているが、年齢階梯組織をもっていたところではいち早く、また抗日運動の程度によって青年団の組織化がすすめられたことが明らかになってきた。
圧縮センシングによるＭＲ高速撮像：実用化のための問題点探索と施策開発

圧縮センシングMRIとは、情報技術を用いて少ない計測データから画像を取得する新しいMR高速撮像法である。技術開発が進展する中、臨床応用の立場から見た画像の得失を見極めることが重要であり、適切な画質評価指標が求められている。今回種々の条件で画質評価実験を進めた結果、個々のアプリケーション固有の評価も重要であることが分かった。本研究では特に、臨床上重要なMR血管描出法(MRアンギオ)について、脳血管を模擬した数値モデルを用いて血管描出能の再構成およびノイズ条件依存性を半定量的に評価する方法を提案した。情報理論の基礎分野で著しい進歩のあった圧縮センシング法(Compressed Sensing、以下CSと略記)は、少ない計測数のデータから元データを復元する手法で、様々な領域で活用されている。本研究では、CSをMRIの画像生成に取り入れた高速撮像法(以下、CS-MRI)の実用化のために必要な、CS画質の評価について検討を進めている。昨年度までに、基本的な計算機実験環境の整備と初期的な画像生成実験を行ったが、さらに3次元化などの実験環境整備を進めながら、以下のようなテーマを設定して検討を行った。(1)これまでの画質指標によるCS画像の評価結果の比較検討(2)シミュレーションモデルによるアプリケーション固有の評価法の検討を試みた。(1)では、実用化の上で最も重要なルーチン画像(T1およびT2強調画像やMR angiography (MRA))を対象とした。これまで放射線技術分野や情報理論分野で提案されている複数の画質指標間でのCS画像評価結果の比較検討を行い、類似点・相違点・現状での限界の把握を行った。その結果のひとつとして、汎用の指標以外にも、アプリケーションに固有の評価法が必要であることが強く認識され、(2)の検討を行った。今回は3D-MRAについて、直接血管の描出能を数値評価するシミュレーション実験を試み、血流信号のCS再構成条件への依存性やノイズの影響についての知見を得ることができた。これらの検討結果は随時学会で報告を行ってきた。関連分野の研究者とは情報交換を行いながら、検討すべき内容は必要に応じて修正もしながら進めている。検討結果の一部は、雑誌での解説記事として掲載された。情報理論の基礎分野で著しい進歩のあった圧縮センシング法は、できるだけ少ない計測数のデータから元データを復元する新しい手法である(Compressed Sensing、以下CSと略記)。本研究は、CS法の技術をMRIの画像生成に取り入れた高速撮像法(以下、CS-MRIと略記)を、実際の臨床応用にむすびつけるための、すなわち実用化のための画質評価法の検討を行うものである。そのために、今年度は、(1)学会等での技術調査活動、(2)計算機実験の環境整備、(3)初期的なCS画像生成の計算機実験、の3つを項目を行った。(1)の技術調査では、情報基礎の新しい技術とMRI技術の結び付きについて、関連分野の研究者と情報交換をしながら、ポイントとなる点を整理した。この検討結果は、専門学会・研究会での2回の招待講演発表、学会誌での招待講演資料としての解説記事掲載となっている。この間、(2)の計算機上の実験環境を整備を進め、可能となったものから順次、(3)の初期的な画像生成実験を進めた。ファントムのほか、倫理委員会承認済みの健常ボランティアデータを対象とした画像生成実験も行った。まだ初期検討結果ではあるが、積極的に学会での情報交換を行う方針で進めており、結果の一部は年度明けの4月の学会にて発表した。実験を順に進めながら、本来の目的である実用化のための画質評価の検討の進め方を検討しているところである。来年度以降、いくつかの典型的なモデルを構築して、実質的な画像評価実験を進められる道筋を立てることができた。圧縮センシング(Compressed Sensing: CS)とは、少ない計測データから元データを復元する手法で、様々な領域で応用されている汎用技術である。本研究は、CS法をMRIの画像生成に取り入れた高速撮像法(CS-MRI)を、実際の臨床応用にむすびつけるための画質評価法の検討を行うものである。できるだけ一般化した形で画質評価指標を提案し、CS-MRIの実用化に貢献することを上位の目標とした。実際の検討は、主に計算機による画像再構成実験により進めた。実験環境の整備後は、実用化の上で重要なルーチン画像(T1/T2強調画像やMR angiography (MRA)を対象として、これまで放射線技術分野や情報理論分野で提案されている複数の画質指標によるCS画質評価の比較検討を進め、指標間の相違点・類似点、現状での限界の把握を行った。その検討を通して、汎用の指標以外にもアプリケーション固有の評価法が必要であることが強く認識されるに至った。そこで、当初目指した一般的な評価指標とは若干異なるアプローチとなるが、シミュレーションモデルによるアプリケーション固有の評価法の検討を進めることとした。

最終年度にかけては、血管モデルの信号値を直接数値評価するシミュレーション実験に注力し、血管描出能のCS再構成条件依存性やノイズの影響についての知見を得た。得られた結果は、2014/11にシカゴで開催された北米放射線学会(RSNA)にて報告し、Certificate of Meritを受賞した。ターゲットを絞った評価という当初目標とは少し異なる形であるが、CS-MRIの理解の助けとなり、学会でも評価される提案ができたものと考えている(2015/3、論文投稿済み)。当初の目標であった一般的評価指標についての検討は、今後もさらに継続する予定である。磁気共鳴イメージング概要にも記したとおりに具体的テーマで結果を出している。昨年度までに整備した計算機実験環境を生かして、当初予定していた「指標の検討と改良モデルでの計算機実験」を進めることができた。設定テーマは当初の予定項目と若干の違いはあるが、初期検討を踏まえて再選定するとともに、検討方法の確立のために1つめのテーマを絞ったためである。全体としては、最終年度である来年度にまとめに向けて着実に推進しており、おおむね順調に進展していると考えている。概要にも記した3つの項目、(1)学会等での技術調査活動、(2)計算機実験の環境整備、(3)初期的なCS画像生成の計算機実験、は、当初からの計画であり、ほぼ予定通りである。積極的に、関連研究者との情報交換を行ったこともあり、(2)の整備、(3)の画像生成実験も、比較的スムーズに立ち上げることができた。来年度以降の本格的な検討に向けて十分な整備ができた状況とすることができたと考えている。アプリケーションに固有の評価法として計算機シミュレーションを用いた方法の考え方と実験方法の具体例(今回は3D-MRA対象)ができたため、これを複数のアプリケーションに適用し、知見を深めたいと考えている。また、これまでは再構成のみの計算機実験にとどまっていたが、生の収集データを利用する目途がたったため、収集再構成の両者にわたるシミュレーションも進める。こうした検討を通して、当初目標である、画質評価指標の提案に結び付ける予定である。(今後の推進方策)初年度の簡易化モデルでの画像再構成実験の結果を踏まえて画質指標に関する検討を進める。検討にあたっては、初年度に整備した計算機環境を活用し*)、より詳細な条件での計算機実験を進める。すなわち、3次元データ(空間3次元、空間2次元+他の可変パラメータ、あるいは空間2次元+複数受信チャンネル等)に対する処理を進めていく。具体的な検討内容として例えば、ラベリングを空間+遅れ時間の混合空間と考えてどのようなデータ取得の圧縮法が画像の特性と結び付いているか明らかにする。あるいはまた、CS-MRIの画質評価法として、従来の評価手法がどこまで有効でどのような追加指標が必要なのか明らかにするなど、いくつかの具体例について検討を進めて、画質評価のための指標の提案等に結び付けていく予定である。当該年度、主に研究室の大学院生と共同で進めていた計算機実験が軌道に乗ったため、研究室での実験に注力し、成果の論文化の準備を進めた。
ジペプチジルペプチダーゼ４活性からみた小児糖尿病の病態および治療に関する研究

小児1型糖尿病患児において末梢血ジペプチジルペプチダーゼ4(DPP4)濃度が膵ベータ細胞の障害程度を反映しているかどうかを確かめるために小児1型糖尿病患児(n = 22)の血清を用いて血中DPP4,C-ペプチド、グリコアルブミン、抗GAD抗体、HbA1cを測定した。対象の年齢は9.8±2.3歳、男児6名、女児16名。Body mass index(BMI)は18.3±2.7。血中DPP4濃度は、ELISA(Human DPP4/CD26 Assay Kit-IBL)で酵素蛋白量を測定した。DPP4濃度は767.0±121.6ng/ml、血中C-ペプチド0.32±0.34ng/ml、グリコアルブミン22.7±2.7%、抗GAD抗体価182.2±477.7 U/ml(陰性4例)、HbA1c 7.6±0.7%。同じ測定法によるDPP4の健康成人での正常値が200-600ng/mlと報告されており、同年齢での比較ではないが、小児1型糖尿病児のDPP4は高値である可能性があると思われた。また、DPP4はHbA1cとの間に統計学的有意差はないものの負の相関関係が認められた。血中C-ペプチド陰性群(C-ペプチド0.1 ng/ml未満、n = 15)では、C-ペプチド分泌能維持群(n = 7)に比べてDPP4が高い傾向が認められ、より高いDPP4によってインスリン分泌を刺激するインクレチン(GLP1,GIP)活性が抑制されている可能性が示唆された。DPP4と年齢、BMI、グリコアルブミン、抗GAD抗体価との間には有意な関連は認められなかった。今後さらに症例数を増やして小児1型糖尿病におけるDPP4の動態を検討する必要があると思われた。対象となる小児1型糖尿病患者が予定数に達するのが遅れており、血液中のジペプチジルペプチダーゼ4(DPP4),Cペプチド、インスリン抵抗性に関する各種アディポサイトカイン、膵自己抗体価などELISAで測定する項目は、一度に多数の検体を用いて測定する方が効率的かつ同一測定条件を担保できることから測定が遅れている。十分な検体数が確保できた時点で測定を行う予定にしている。1型糖尿病の罹病期間により、膵ベータ細胞の障害度が異なることが推測され、罹病期間別に血中DPP4を検討する。罹病期間の短い例ではインスリン分泌能が保たれていることがあり、さらに緩徐進行性1型糖尿病では、長期間にわたりインスリン分泌能が保たれていることから罹病期間別にDPP4を検討する意義がある。平成30年度はDPP4の蛋白濃度を測定するにとどまったが、酵素活性を測定するELISA kitも発売されており、次年度は蛋白濃度と酵素活性を同時に測定する予定である。

罹病期間の短い例ではインスリン分泌能が保たれていることがあり、さらに緩徐進行性1型糖尿病では、長期間にわたりインスリン分泌能が保たれていることから罹病期間別にDPP4を検討する意義がある。平成30年度はDPP4の蛋白濃度を測定するにとどまったが、酵素活性を測定するELISA kitも発売されており、次年度は蛋白濃度と酵素活性を同時に測定する予定である。当初予定していた対象検体数が集まらず、ELISA測定キットに有効期限があるため、測定すべき対象検体数がそろった時点で測定キットを購入する予定である。
カニクイザルES細胞への遺伝子導入法の開発とその移植応用をめざす研究

1.レンチウイルスベクターによる遺伝子導入サル免疫不全ウイルス(SIV)ベクターを用いてサルES細胞への効率のよい遺伝子導入法の開発を行った。(1)SIVベクターによる遺伝子導入:SIVベクターを用いるとサルES細胞へ高い効率で遺伝子導入が可能であった。しかもその遺伝子発現は長期間持続し、ES細胞を分化させても遺伝子発現は衰えなかった。(2)SIVベクターの改良:ある特殊な塩基配列(cPPTとWPRE)の付加によって、導入遺伝子発現の増強が認められた。(3)プロモーターの検討:一般的な汎用プロモーター(CMV、EFla、PGK)の内、EFlaプロモーターがカニクイザルES細胞において最も高い遺伝子発現をもたらした。2.センダイウイルスベクターによる遺伝子導入センダイウイルスベクターによってカニクイザルES細胞へ効率よく遺伝子を導入できた。同ベクターによってGFP(green fluorescent protein)遺伝子を導入したES細胞の分化能を検討した。in vitroでGFPを発現する血液および神経細胞への分化に成功した。また、NOD/SCIDマウスに移植したところGFPを発現するテラトーマを形成した。よってセンダイウイルスベクターはカニクイザルES細胞の分化能を損なわない。また、細胞の継代や分化に伴う導入遺伝子の発現衰弱は認められなかった。3.カニクイザルES細胞の移植系の確立カニクイザルES細胞の同種移植の系として、同細胞をカニクイザル胎仔4頭へ移植した。2頭は腹腔内へ、2頭は肝臓内へ移植した。いずれも妊娠経過は順調であった。これらのサル胎仔では、広範な組織に移植細胞の生着を認めた。胎仔にはとくに前処置を加えなくても移植した幹細胞が生着できるスペースが存在すること、生着した細胞はその場に応じた分化を遂げること、移植細胞は拒絶されないことが明らかになった。胎児細胞治療の根拠になるデータが得られたといえる。一方、1頭のサルではテラトーマ形成もみられたことから、臨床応用の際には未分化ES細胞の混入がないよう十分注意が必要である。1.カニクイザルES細胞への遺伝子導入:サルES細胞への効率のよい遺伝子導入をめざしてレトロウイルスベクターおよびレンチウイルスペクターを作成した。そのなかでも、サル免疫不全ウイルス(SIV)をベースとするレンチウイルスベクター(SIVベクター)が、サルESに対して極めて高い遺伝子導入効率を示した。マーカー遺伝子としてgreenfluorescent protein(GFP)遺伝子を発現するSIVベクターを用いると、カニクイザルES細胞の90%前後にGFP遺伝子導入が可能であった。しかも、この高いGFP遺伝子発現は、遺伝子導入後5ヶ月経ても続いた。さらに、GFP遺伝子を導入したカニクイザルES細胞から胚様体を作成したところ、GFP遺伝子の発現は衰えなかった。これはES細胞を初期分化させても導入遺伝子の「サイレンシング」が起こらなかったことを示す。これらの観察結果は、今までのレトロウイルスベクターでは実現できなかったことである。SIVベクターによる遺伝子導入法は、霊長類ES細胞の遺伝子操作の大きな武器になると思われる。2.カニクイザルES細胞の血液細胞への分化誘導:カニクイザルES細胞を特殊なフィーダー細胞(OP9)上に置き、骨形成因子(BMP)-4の存在下で培養すると、浮遊細胞が出現する。この細胞は極めて未熟な造血細胞と考えられ、その表面マーカーなどの解析を行っている。3.カニクイザルES細胞のマウスへの移植:上記2で得られた浮遊細胞に造血幹細胞が含まれるかどうかを調べるために、これらの細胞をNOD/SCIDマウスへの移植する予定である。

また、これらの細胞をヒツジ胎仔へ移植した。一部のヒツジ胎仔はすでに帝王切開によって取り出した。現在、その体内にサルの血液が出来ているかどうか解析中である。1.レンチウイルスベクターによる遺伝子導入サル免疫不全ウイルス(SIV)ベクターを用いる遺伝子導入法の改良を行った。(1)SIVベクターの改良:ある特殊な塩基配列(cPPTとWPRE)の付加によって、導入遣伝子発現の増強が認められた。2.センダイウイルスベクターによる遺伝子導入センダイウイルスベクターによってカニクイザルES細胞へ効率よく遺伝子を導入できた。同ベクターによってGFP(green fluorescent protein)遺伝子を導入したES細胞の分化能を検討した。in vitroでGFPを発現する血液およぴ神経細胞への分化に成功した。また、NOD/SCIDマウスに移植したところGFPを発現するテラトーマを形成した。よってセンダイウイルスベクターはカニクイザルES細胞の分化能を損なわない。また、細胞の継代や分化に伴う導入遺伝子の発現衰弱は認められなかった。3.カニクイザルES細胞の移植系の確立カニクイザルES細胞の同種移植の系として、同細胞をカニクイザル胎仔4頭へ移植した。2頭は腹腔内へ、2頭は肝臓内へ移植した。いずれも妊娠経過は順調であった。未分化ES細胞を移植したサル胎仔1頭では移植3ヶ月後にテラトーマの発生を確認した。ES細胞移植応用にあたっては未分化ES細胞の除去が重要である。カニクイザルES細胞の異種移植の系として、同細胞をヒツジ胎仔(9頭)へ移植した。当初、子宮壁に切開を加えて移植手術を行ったが流産率が高かったため(約50%)、エコーガイド化で移植手術を行ったところ流産は大幅に減少した。この系はES細胞の増殖や分化を調べるin vivoアッセイ系となりうる。
現代朝鮮語における＜ｎ挿入＞の総合的研究

本研究の主たる目的は若年層(20代)ソウル方言話者の〈n挿入〉実現実態を闡明するところにある.そのために,本研究では,若年層ソウル方言話者を対象にインフォーマント調査とその分析を行なった.その結果,若年層ソウル方言話者の〈n挿入〉実現如何には,総じて後行要素の頭音が最も大きく関わっていること,また,後行要素の長さ,先行要素の末音,なじみ度,語構造,後行要素の第1音節の音節構造,語句の長さなど,多種多様な要因が抗衡しつつ,重層的に関与していることを明らかにした.こうした様相はいわゆる規範と懸隔しており,社会言語学的にも興味深いものである.本研究の主たる目的は若年層(20代)ソウル方言話者の〈n挿入〉実現実態を闡明するところにある.そのために,本研究では,若年層ソウル方言話者を対象にインフォーマント調査とその分析を行なった.その結果,若年層ソウル方言話者の〈n挿入〉実現如何には,総じて後行要素の頭音が最も大きく関わっていること,また,後行要素の長さ,先行要素の末音,なじみ度,語構造,後行要素の第1音節の音節構造,語句の長さなど,多種多様な要因が抗衡しつつ,重層的に関与していることを明らかにした.こうした様相はいわゆる規範と懸隔しており,社会言語学的にも興味深いものである.本研究は,現代朝鮮語の所謂〈n挿入〉について論じるものである。〈n挿入〉をめぐる先行研究を博捜し,その問題点を剔抉した上で,1〈n挿入〉が起きる形態論的条件,2〈n挿入〉の発生論と機能論,3若年層ソウル方言話者の実現実態などについて,攷察,詳論した。その梗概を簡潔に述べると次の通りである。1:〈n挿入〉が起きるためには「後行要素が自立形態素でなければならない」とする論考と「必ずしも後行要素が自立形態素である必要はない」とする論考が存在することを指摘し,そもそも〈形態素の自立性〉とは何かという根源的な問題について諸研究を参看しつつ論じた。そして,その結果,〈n挿入〉が起きるためには後行要素が自立的な要素であることが必要であることを闡明した。2:〈n挿入〉がなぜ生じるのかという問題について,従前の研究ではしばしば混同されがちであった〈通時的側面〉と〈共時的側面〉を峻別し,その双方から〈n挿入〉を照射した。これらは各々〈n挿入〉の〈発生〉および〈機能〉に関わる問題であり,「なぜ〈n挿入〉が起きるようになったか」,そして「なぜ〈n挿入〉が今なお起き続けているのか」を明らかにした。3:3度にわたる,若年層ソウル方言話者の〈n挿入〉実態調査を行ない,若年層ソウル方言話者の〈n挿入〉の実現如何には,総じて後行要素の頭音が最も大きく関わっていること,また他にも,後行要素の長さ,先行要素の末音,なじみ度,語構造,後行要素の第1音節の音節構造,語句の長さ,発話速度など,多種多様な要因が抗衡しつつ,重層的に関与していることを明らかにした。こうした様相はいわゆる規範と懸隔しているものであり,社会言語学的にも興味深いものである。25年度が最終年度であるため、記入しない。
運動、運動学習を制御する大脳基底核神経回路の作動原理の解明

大脳基底核神経回路は、運動の調節に重要であることが知られている神経回路である。光遺伝学(光学と遺伝学を融合し、光受容体を神経に発現させ光照射により神経活動を操作する技術)をマウスに用いて、運動における特定の神経経路の役割を解析した。片側の線条体投射ニューロンの興奮を選択的に誘導したところ、大脳基底核神経回路からの出力信号が一過性に減り、マウスは一方向への回転運動を始めた。出力信号の一過性の変化が運動の調節に重要な役割を果たしていることが示唆された。大脳基底核が制御する運動などの神経生理機能の作動原理を明らかにするため、光遺伝学を用いて大脳基底核を構成する特定の神経経路の活動を操作し、投射先や大脳基底核の出力核の神経活動を制御する機構と行動の調節に与える影響を解析した。大脳皮質ー線条体経路の生理学的役割を解析するため、逆行性のレンチウイルスベクターを利用して、線条体から逆行性に大脳皮質ー線条体経路に光受容体であるchannelrhodopsin-2(ChR2)の遺伝子導入を行った。大脳皮質に光ファイバーを接着した記録電極を刺入して神経活動を記録したところ、光照射に応じた興奮が認められ、大脳皮質ー線条体経路の同定と選択的な興奮誘導に成功した。一方で、線条体投射ニューロンの神経生理学的役割を解析するため、線条体投射ニューロンにChR2を発現する遺伝子組換えマウス(PDE10A2-tTA::tetO-ChR2マウス)を利用し、線条体投射ニューロンが大脳基底核の他の神経核や出力核の神経活動を制御する機構を解析した。PDE10A2-tTA::tetO-ChR2マウスを覚醒下で脳定位固定装置に保定し、光ファイバーを接着した記録電極を線条体に刺入して神経活動を記録したところ、光刺激に応じた興奮が線条体で認められた。次に、線条体に光ファイバー、線条体の投射先である淡蒼球外節および黒質網様部に記録電極を刺入して神経活動を記録したところ、線条体への光照射に応じた一過性の抑制が認められた。そこで、神経活動と運動制御の関係を明らかにするため、線条体にカニューレを留置し、カニューレから光ファイバーを刺入して、自由行動下でのマウスの行動を観察した。光を照射するとマウスは一方向への回転運動を始め、線条体による淡蒼球外節および黒質網様部の一過性の抑制が運動の制御に重要であることが示唆された。大脳基底核における線条体投射ニューロンの神経生理学的役割を解明するため、線条体投射ニューロンに光受容体であるチャネルロドプシン(ChR2)を発現する遺伝子組換えマウス(PDE10A2-tTA/tetO-ChR2)を利用した電気生理学的解析を行った。光ファイバーを接着した記録電極を覚醒下のPDE10A2-tTA/tetO-ChR2マウスの線条体に刺入し、光照射による神経活動の変化を細胞外記録した。その結果、光照射に応じた興奮が認められた。次に、線条体投射ニューロンの投射先である淡蒼球外節と黒質網様部に光ファイバーを接着した記録電極を刺入し、線条体投射ニューロンの神経終末を光照射したときの投射領域における神経活動の変化を細胞外記録した。淡蒼球外節でも黒質網様部でも光照射に応じた抑制が認められ、抑制性のGABA作動性神経である線条体投射ニューロンが興奮した結果であることが示唆された。一方で、大脳皮質ー線条体経路の神経生理学的役割を解明するため、逆行性に遺伝子導入できるレンチウイルスベクター(RVG-ChR2)をマウス線条体に注入し、大脳皮質ー線条体経路にChR2を発現させ、このマウスを用いて電気生理学的解析を行った。これまでの実験で問題となっていたRVG-ChR2による大脳皮質ー線条体経路のChR2の発現量を改善するため、テトラサイクリン遺伝子発現制御システムを導入し、ChR2の発現量の増加を試みた。その結果、遺伝子導入されるニューロンの数は少ないものの、遺伝子導入されたニューロンは高い発現量を示した。そこで、光ファイバーを接着した記録電極を覚醒下のマウスの大脳皮質運動野に刺入し、光照射による神経活動の変化を細胞外記録したところ、光照射に応じた興奮が認められた。この結果は、大脳皮質ー線条体経路の同定と特異的な興奮誘導に成功したことを示唆している。PDE10A2-tTA/tetO-ChR2マウスを用いた線条体投射ニューロンの神経生理機能の解析では、最初に線条体における光照射に応じた興奮誘導の確認を行い、次に神経終末へ光照射することにより、線条体ー淡蒼球投射ニューロンと線条体

ー黒質投射ニューロンの各々の経路の興奮を誘導した。光照射に応じた淡蒼球外節と黒質網様部における神経活動の変化から、線条体投射ニューロンの電気生理学的機能が明らかとなった。RVG-ChR2を用いた大脳皮質ー線条体経路の神経生理機能の解析では、テトラサイクリン遺伝子発現制御システムを利用した発現量の改善に成功したことが大きく、大脳皮質ー線条体経路の同定と特異的な興奮誘導に成功した。現在、大脳皮質ー線条体経路を光照射で興奮誘導したときの淡蒼球外節や黒質網様部での神経活動の変化を記録している。これらの状況はほぼ実験実施計画の通りであり、順調に進展していると言える。RVG-ChR2を用いて大脳皮質ー線条体経路を光照射で特異的に興奮誘導し、淡蒼球外節や黒質網様部での神経活動の変化をさらに詳細に解析する。次に、PDE10A2-tTA/tetO-ChR2マウスとRVG-ChR2を用いて、線条体投射ニューロンおよび大脳皮質ー線条体経路の行動学的役割の解析に着手する。PDE10A2-tTA/tetO-ChR2マウスにおいては、線条体、淡蒼球外節、黒質網様部、RVG-ChR2を用いたマウスにおいては大脳皮質運動野にカニューレを埋め込み、カニューレから光ファイバーを刺入して、自由行動下で光照射が出来るようにする。自発運動量やローターロッドでの運動学習機能に線条体投射ニューロンおよび大脳皮質ー線条体経路の興奮がどのような影響を与えるのかを解析する。研究費は主に、電極、カニューレ、光ファイバー、実験動物などの物品の購入に使用する予定である。
潰瘍性大腸炎およびColitic Cancer発症におけるREG蛋白の役割の解明

1.潰瘍性大腸炎の持続炎症からcolitic cancerの発癌に至る過程におけるREG蛋白の役割を明らかにするために、前回のreg遺伝子発現の検討をLoVo細胞を用いてさらにすすめた。その結果regIα遺伝子プロモーターのプロモーターアッセイでは、やはりIFN-γとIL-6のみが増強作用を有しており、特にIL4,IL5,IL13などのTh2系サイトカインにはreg遺伝子発現増強作用はまったく認められなかった。2.さらにREG蛋白は前回の検討で、細胞増殖作用ならびに抗アポトーシス作用を有することが判明したが、今回の検討でreg蛋白はAktのリン酸化を介して、BclXL,Bcl2蛋白の発現を増強させることが明らかとなった。さらにこれらの作用はREG蛋白発現細胞株で認められること、またその作用が抗REG抗体で消失することから、REG蛋白はautocrine機序で、これらの作用を発揮していると考えられた。3.一方REG蛋白の発現は、ヒトでは潰瘍性大腸炎のみならず、クローン病、Proctitisにおいても、強く認められた。なおその際特に潰瘍性大腸炎では、reg遺伝子の発現は、炎症の程度、さらに病悩期間と強い相関を認めた。したがってreg遺伝子、REG蛋白の発現は、胃におけるのと同様、様々な炎症において広く発現していることが明らかとなった。4.以上のように、REG蛋白は潰瘍性大腸炎においてその発現が増強しており、colitic cancerの発症に重要な役割を果たしていると考えられるが、この現象は潰瘍性大腸炎に特徴的なTh2反応を介しているのではなく、主としてIFN-γやIL-6など、より一般的な炎症性サイトカインの発現によってもたらされることが明らかとなった。1.炎症から発癌に至る過程におけるREG蛋白の役割を明らかにするために、まず動物実験で、Mongolian GerbilにH.pyloriを感染させてreg遺伝子、REG蛋白の発現を検討した。その結果H.pylori感染によって、reg遺伝子、REG蛋白ともに胃上皮細胞での発現が増加した。2.さらにヒトの胃炎、胃癌においてREG蛋白の発現を見たところ、REG蛋白の発現は胃炎の程度に比例し、かつ腸上皮化性粘膜での発現上昇が見られた。さらに胃癌細胞にもREG蛋白の発現がみられた。以上より、REG蛋白が胃炎から胃癌の発症にいたる過程に関与している可能性が示唆された。3.一方、reg遺伝子、REG蛋白の発現は、潰瘍性大腸炎(UC)粘膜上皮にも強くみられ、かつその発現は炎症の程度に比例していた。さらにUC粘膜に生じた大腸癌(colitic cancer)にもREG蛋白の強い発現が見られた。4.このようにregの発現は炎症の程度に相関していたことから、胃癌、大腸癌細胞株を用いて、種々のサイトカイン、増殖因子のreg遺伝子発現に及ぼす効果を検討した。その結果、IL1β、TNFαはreg1αの発現を著明に増強した。一方EGF,HGFなどの増殖因子はregIVの発現を著明に増強させた。さらにこれらの増強効果は、それぞれのプロモーターを導入した、プロモーターアッセイにても確認された。5.REG蛋白のアポトーシスに対する効果を検討したところ、REG蛋白は大腸癌細胞株に対して強い抗アポトーシス作用があることが判明した。6.以上より、reg遺伝子は炎症の場において、種々のサイトカイン、増殖因子によってその発現が増強し、上皮細胞の維持や、胃炎や大腸炎かちの発癌過程に深く関与している可能性が示唆された。
細胞増殖因子と抗炎症製剤併用による肺病変修復促進と治療法開発

1.培養細胞を用いてEthylpyruvate (EP)のNF-kBに対する抑制効果を検索した。細胞をTNF-αで刺激すると、NF-kBが活性化されるが、EPで濃度依存性に抑制された。これはNF-kBのsubunitsのRelAやp50の核内移行を抑制し、DNA結合能抑制により炎症や傷害を抑制することが示唆された。2.肺傷害が進行すると、肺線維化が起こり重篤な呼吸不全に陥る。細菌の鞭毛抽出物flagellinにepidermal-mesenchymal transition(EMT)促進作用があり、肺胞上皮細胞の線維化を起こす作用が示唆され、細菌性肺炎の線維化の一つの機序が示唆された。1.培養細胞を用いてEthyl pyruvate (EP)のNF-kBに対する抑制効果を検索した。1.培養肺胞II型上皮細胞気管内投与による投与(培養)細胞の動態-これまでの研究成果から、KGF投与後23日目に最大増殖能(BrdU取り込み最大)を示し、イオン輸送能もそれとよく相関することなどが明らかになった。4.肺傷害が進行すると肺線維化が起こり、重篤な呼吸不全に陥るが、TGF-b1は肺線維芽細胞を増殖させ、線維化を促進させる作用がある。細菌の鞭毛抽出物に肺上皮細胞を線維化させる作用があり、TGF-b1の作用を増強させることがわかった。肺の細菌性炎症により線維化がおこる一つの機序を示すものと考えられ、分子レベルの解析を進めている。5.肺胞上皮細胞を増殖させるKGFのNF-kB活性化に対する作用など分子レベルの解析を行い、細胞増殖作用の修復効果促進手段や方法の開発を進められるよう研究を発展させている。1.培養肺胞II型上皮細胞気管内投与による投与細胞の動態ーこれまでの研究成果からKGF投与後23日目に最大の増殖能を示し、イオン輸送能もそれと相関した。2.Ethylpyruvate (EP)による肺炎症抑制機序の解明ー培養細胞を用いてEPのNF-kBに対する抑制効果を検索した。細胞をTNF-αで刺激すると、NF-kBが活性化されるが、この作用がEPで濃度依存性に抑制された。この作用は、NF-kBのsubunitsのRelAやp50の核内移行を抑制し、DNA結合能を抑制することによることが示唆された。EPはNF-kBシグナル経路の活性化を引き起こす炎症や傷害を抑制することが示唆された。3.肺傷害が進行すると、肺線維化が起こり重篤な呼吸不全に陥る。肺の線維化を如何に防ぐかが重要である。サイトカインのTGF-β1は肺線維芽細胞増殖を起こし、線維化を促進させる。4.炎症に関与するサイトカインTNF-αは、p38MAP kinase系を活性化し上皮成長因子受容体(EGFR)のSer1047のリン酸化を引き起こす。レジオネラは鞭毛を有しその構成蛋白のFlagellinはToll-like receptor-5 (TLR5)を刺激する、肺胞上皮細胞のp38MAP kinaseが活性化されること、EMTが促進されることが示され、FlagellinによりSer1047がリン酸化されることが示された。今後、炎症におけるこのリン酸化の病態生理学的意義を検索する。5. FlagellinとTGF-b1刺激による遺伝子発現の変化をマイクロアレイ法で検索し、flagellinによりfibronectinが増加し、E-cadherinが減少した。従ってflagellinによるEMT様変化はこれらにより誘導されること、そして線維化が促進されることが示唆された。