hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
新規炎症性関節炎モデルマウス、Ali18の原因遺伝子の探索

マウスでランダムに突然変異を誘発させることで、炎症性関節炎を引き起こすAli18系統が確立された。Ali18変異を同定するために、遺伝的解析及び候補遺伝子のDNA配列の決定を行った。その結果、第4番染色体に位置するリン酸化酵素のコード領域に突然変異が検出された。リン酸化は細胞のシグナル伝達に関係があり、Ali18変異による増殖シグナルの増幅が関節炎発症に関与すると考えられた。また、Ali18シグナルを阻害すれば炎症を抑制できる効果が期待された。Alil8突然変異の原因遺伝子探索のため、その候補遺伝子についてリアルタイムPCRによる発現解析を開始している。組織よりRNAの抽出が必要であるために、こちらでAlil8系統を維持する必要があり、現在までに凍結胚の供給を前述のドイツのグループより受けた。Alil8マウスの凍結胚は問題なく解凍されたものの、生まれて来た産仔の数は予想より少なく、当初予定していた交配を行うペア数を得ることができなかった。また、コントロールとして用いる野生型系統に関しては凍結胚に問題があって産仔が全く得られなかった。これらの理由より当初の計画より1世代余分に交配を行って、マウスを増殖させることが必須となった。現在までにAlil8マウス及びコントロールとして用いる野生型マウスは順調に匹数が増加して、予定していた週齢を揃えたサンプリングが可能となった。GSFドイツ国立研究所(2008年よりHelmholzセンターミュンヘンと改名)のHrabe de Angells教授のグループと共同研究を行っている。2007年12月に当研究所を訪問して、共同研究の進展の確認を行った。現在までに約700の減数分裂を確認し、共同でそれぞれの遺伝子型の解析を行った。その結果、6.1Mbであった候補領域は約2Mbまで狭めることに成功した。しかしながら、遺伝的背景による抑制効果のためにこれ以上狭めることが困難であることも判明した。現在、この点を乗り越えるために討論と協議を行っている。この領域に位置する遺伝子群において候補遺伝子群をピックアップし、そのタンパク質コーディング領域について野生型とAlil8ホモマウスより抽出したゲノムDNAの塩基配列決定を行った。その費用共通利用施設の使用料として計上している。新規炎症性関節炎モデルマウスとして単離されたAli18変異マウスの原因遺伝子の探索を行っている。海外共同研究者であるHrabe de Angelis教授の研究室で、遺伝的地図作製を継続している。416の減数分裂によって6.1MbほどのAli18候補領域が、約700まで減数分裂を増加させたことにより2Mbまで縮小された。さらに、この領域を数百kbまでに縮小する可能性のある組み換え体も見つかった。現在、この領域をカバーするBAC (bacterial artificial chromosome)クローンを用いて物理的地図作製を行っている。8個のBACクローンについて、パルスフィールド電気泳動、PCRとサザン解析を行い、挿入部内に組み換えがないかを確認した。また、それぞれのクローン間の位置関係と重複についても確認した。さらにこの領域の前後を含む2つのクローンよりBACトランスジェニック(Tg)系統の作出をHrabe de Angelis教授の研究室で行っている。得られたTg系統はAli18マウスと交配を行い、関節炎表現型が回復可能かを調べる。しかしながら、Ali18変異は優性変異であるので、レスキューされない可能性もある。また他遺伝的背景における修飾遺伝子群による効果もあるために、縮小された数百kbの領域の外に原因遺伝子が存在する可能性も否定できない。そこで、それより大きい当初の2Mbの領域について、さらに候補遺伝子の塩基配列決定と組織での遺伝子発現の解析を継続する。当確研究施設におけるAli18マウスコロニーは、当初は繁殖が遅れたが、その後は十分量のサンプルを必要組織から得ることができた。骨髄、脾臓、肝臓などの組織よりRNAを抽出して、リアルタイムPCRによって遺伝子発現量の比較計測を行っている。化学変異原のENUによって誘発された突然変異系統であるAli18マウスは、成体になってから末梢四肢に炎症を自然発生させることから炎症性関節炎モデルであると考えられている。Ali18の原因遺伝子を同定するため、海外共同研究者であるHrabe de Angelis教授とともにgenetic mapping解析を行った。F2組換体で約700の減数分裂についてマイクロサテライトマーカーを用いて連鎖解析を行ったところ、Ali18原因遺伝子の存在する候補領域を約2Mbまで狭めることに成功した。さらにmapping解析を継続したところ、候補領域を100kb程度まで絞ることができた。このゲノム領域を含む2つのBACクローンのDNAを用いて、受精卵にマイクロインジェクションを行うことによりトランスジェニックマウスを作製した。これらをAli18系統と交配させて表現型レスキューを試みたが、炎症性関節炎が抑制される結果は得られなかった。この結果については様々な要因が考えられたが、遺伝的背景に存在する修飾遺伝子の効果により候補領域の境界を判定する組換えが正しくない可能性が考えられた。

そのため、修飾遺伝子の抑制効果に影響されない組換えを指標として候補領域を再度規定したところ、当初の2Mbの領域であることが判明した。この領域について、候補遺伝子を文献より絞り込むデータベースであるPosMedを用いて検索を行ったところ、数個の遺伝子がピックアップされた。それらの遺伝子のエクソンをはさむようにプライマーを設定してPCRを行い、PCR産物をサンガー法により塩基配列を決定した。その中のひとつのエクソンにおいて、Ali18マウスのみでATよりGCへの塩基置換が認められた。また、この変異は様々なマウス系統の野生型において、多型がないことを塩基配列解析により確認した。さらに、この変異はアミノ酸置換を引き起こすが、そのアミノ酸は脊椎動物で高度に保存されていた。
アナニダミドの眼に及ぼす影響についての検討

[目的]アナンダミドは、カンナビノイド受容体の内因性リガンドとしてブタ脳より単離され、構造はアラキドン酸のエタノールアミドである。最近、アナンダミドの薬理作用が注目されているが、眼に及ぼす影響については、ほとんど解明されていない。今回われわれは、アナンダミドの眼、特に眼圧に及ぼす影響について検討した。[方法]体重2.0-2.5kgの雄白色家兎を使用し、日照時間などの環境因子による眼圧の変化を考慮し、照明時間や温度の管理された環境下で飼育した。対照実験としてバルミチン酸エタノールアミド(アナンダミドのアラキドン酸部分を飽和脂肪酸に置き換えたもの)を使用した。投与方法は、50mlのミネラルオイルに溶かした各種薬剤を片眼に点眼し、他眼には対照液を点眼した。その後ウサギを覚醒状態で点眼麻酔し、眼圧を経時的に測定した。角膜、虹彩、結膜の症状についても経時的に細隙灯下に観察した。[結果]150mgから1mgのアナンダミドの点眼により点眼1時間後から対照眼に比べ、眼圧が有意に下降し2時間後には最低値に達した。その効果は点眼7時間後まで持続した。バルミチン酸エタノールアミドには眼圧下降作用は認められなかった。細隙灯検査ではアナンダミドの点眼で充血をきたし、その程度は眼圧の変化と同様に2時間後で顕著であった。[結論]アナンダミドは用量依存性に眼圧下降作用があり、新しい緑内障治療薬としての可能性が示唆された。
制御性T細胞への分化誘導を促進する天然化合物の探索と機能解析

本研究では、創薬を目指して自己免疫疾患や、慢性炎症を生じる疾患における過剰な免疫を抑制する制御性T細胞の分化を調節する天然化合物の探索を行った。その結果、沈香という生薬に含まれる成分に制御性T細胞の分化を抑制することを見出した。制御性T細胞の分化を抑制することで、この天然化合物は免疫を賦活化することができ、抗腫瘍活性などが期待される。本研究では、制御性T細胞の分化誘導を促進する天然化合物の探索と機能解析を目的としており、まずは探索について行った。探索資源としては、生薬150種類よりメタノール抽出エキスを作製し、マウスの脾臓・リンパ節より分離精製してきたナイーブT細胞を用いて、TGFベータ刺激による制御性T細胞への分化を促進する生薬エキスのスクリーニングを行った。その結果、24種類の生薬エキスに1.5倍以上の分化誘導促進活性を見出した。また、、逆に分化誘導を大きく抑制する生薬エキスも3つ存在した。過剰な免疫応答により起きる自己免疫疾患において、制御性T細胞の役割が重要になっており、その臨床応用が期待されている。これまでに制御性T細胞の分化誘導を促進する化合物として有名なものとしてレチノイン酸が知られているが、我々のこれまでの研究において、レチノイン酸受容体に作用する生薬エキスも多く存在し、2つのスクリーニング結果を照らし合わせることにより、分化促進作用の信頼性も高くなることが考えられる。しかし、レチノイン酸は脂溶性ビタミンとして重要であるとともに、催奇形性作用をはじめとする副作用も多く、臨床的には一部の疾患にしか用いられていない。このような観点から、レチノイン酸受容体に作用する副作用の少ない天然化合物の探索も別の研究として進められているので、本研究では今後、作用点がレチノイン酸受容体と異なる制御性T細胞分化誘導作用を持つ天然化合物の探索をすすめていくことを予定している。本研究では、制御性T細胞の分化誘導を促進する天然化合物の探索と機能解析を目的として、生薬150種類のメタノール抽出エキスのスクリーニングを行った。その結果、制御性T細胞への分化誘導活性が強いものはあまり見つからず、大きく分化抑制を示す生薬エキスがいくつか見出されたので、これらの抑制活性を示す天然化合物の探索をすすめることとした。自己免疫疾患は過剰な免疫により生じる病態であり、制御性T細胞の増加が有効であるとされているが、癌などでは逆に制御性T細胞の分化を促進し癌細胞の自己防衛に働いてしまうため、制御性T細胞の分化を抑制し免疫賦活化することも重要である。本研究において制御性T細胞の分化抑制を示した天然化合物を探索および機能解析することにより、これまでに発見されていない分化を制御する作用点が見出される可能性があり、本年度はこれらの活性成分の同定を第一目的と、それとともに分化を抑制した際におけるヘルパーT細胞の性質を機能解析することとした。本研究は創薬を目指して、自己免疫疾患や慢性炎症を生じる疾患(肥満・糖尿病・動脈硬化症など)における炎症性T細胞に対する抑制能を持つ制御性T細胞の分化を促進する天然由来化合物の探索とその機能解析を目的とし、生薬150種類のメタノール抽出エキスのスクリーニングを行った。その結果、分化誘導活性の強いものはあまり見つからず、弱く活性化するものが多く見られた。一方、大きく分化抑制を示す生薬エキスを2つほど見出したので、抑制活性を示す天然化合物の探索をすすめた。制御性T細胞は過剰の免疫を抑制することにより、その分化促進作用は自己免疫疾患の治療に有効であると考えられている。一方、その分化を抑制することは癌などにおいて、免疫を賦活化することにもつながり抗腫瘍活性を持つことが考えられる。本研究では制御性T細胞の分化抑制作用を持つ生薬エキスとして沈香を見出し、有機化学的な手法による活性成分の精製を行うとともに、抑制メカニズムの解析を行った。その結果、活性成分に関しては詳細な構造決定中であるが、そのメカニズムとして、NaiveT細胞の活性化およびIFNγの産生を見出した。現在、この活性化およびIFNγ産生に関わる詳細な作用点の解析を行うとともに、動物実験によりこの化合物の抗腫瘍活性の検討を進めている。本研究の発展として、活性成分の構造活性相関の検討を行い、この化合物をシード化合物として有機合成などにより修飾・最適化をおこない、実際の臨床で使用される薬剤の開発につながることを期待している。現在までに、免疫賦活作用を持ち、制御性T細胞の分化を抑制する生薬エキスの活性成分の分離がすすんでいる。分離精製は極性による分離を天然物化学的な手法を用いて、制御性T細胞への分化抑制活性を指標として行い、現在HPLCを用いた精製の最終段階に達している。本研究で活性を見出した生薬エキスは、制御性T細胞への分化を抑制する際に、IFNγを分泌するTh1細胞へ分化促進するとともに、なんらかの作用により細胞間の接着を促進しクラスター化を示す。また、T細胞への作用だけではなく、in vivoに腹腔内投与することによって、肝臓におけるNKT細胞の割合を増加させる結果が見出されており、生体内における免疫賦活効果も明らかとなっている。

これらの研究の達成度は当初の研究計画と所属研究室を移動したため、少し研究計画が変ってきてしまっているが、現在の研究室で行うことが出来る研究計画内容としておおむね順調に進んでいると言える。天然物化学活性成分の分離精製が終了しつつあるので、各種スペクトル機器を利用して、活性成分の構造解析をおこない、類縁化合物との構造活性相関を検討していく。また、精製後の化合物の容量依存性を明らかにし、IC50などを調べる。また、大量分離精製が可能もしくは購入が可能な天然化合物であった場合は、in vivoでの有効性を抗腫瘍活性などを指標として検討を行う。これまでの研究成果により、ナイーブT細胞から制御性T細胞への分化を促進する生薬エキスのスクリーニングを行った結果、1.5倍以上の分化誘導を示した生薬エキスが24種類見られた。予想以上に多くの生薬エキスが分化誘導を促進したので、探索する創薬資源が多く存在することから、順調に進めていけると考えられる。所属研究室の移動により、予定外に必要となる機器、消耗品、試薬などの購入があったため、研究の進行状況と現在の研究環境を考慮して研究計画を行い、研究が順調に進めるために必要な予算として前倒し請求を行った。実験計画をすすめるための使用分を差し引き、残りが次年度分として生じた。スクリーニングによって制御性T細胞への分化誘導促進活性がみられた生薬エキスについて、活性を指標として天然物化学的手法を用いて、活性成分の分離精製をすすめていく。精製後は、各種スペクトル機器により構造解析を行い、活性成分による分化促進のメカニズム解析を行っていく。ヘルパーT細胞の分化状態の解析や、in vivoから採取したリンパ球の解析を行うためのフローサイトメーター用抗体および実験動物などを主に前倒し請求分より購入した、残りの次年度使用分については当初の計画どおりに使用予定。年度末の研究費の使用状況を考え、細胞培養用消耗品などへの使用を予定していたが、余裕を持って確保していたので、少し次年度分使用分が生じた。おおむね順調に研究が進んでいるため、当初の計画通り研究費を使用して研究計画を進めていく予定である。
アゲハチョウ科昆虫における食草認識の多様性を支える分子基盤解明

植食性昆虫が食草を認識するメカニズムを理解するため、食草認識に関与する化学物質の知見が豊富なアゲハチョウ科昆虫を対象として、食草認識の分子基盤を解明することを目的とした。キアゲハ・クロアゲハ・モンキアゲハの3種から、ナミアゲハより発見された産卵刺激物質受容体(尾崎私信)と相同と考えられる遺伝子の一部を同定することができた。平成19年度に実施した研究内容は,1)ナミアゲハ(以下ナミ)の近縁種から,ナミから発見された産卵刺激物質受容体PxutGr1と相同な遺伝子を同定し,そのリガンドを特定する,2)PxutGrlの種内変異について調べ,変異が存在する場合はPxutGrlのリガンドであるシネフリンの受容能に変化をもたらす部位を特定する,の2つである。1)にっいて,PxutGrlの配列をプローブとして,同属のキアゲハ・クロアゲハ・モンキアゲハの3種から類似の遺伝子を同定する事ができた。3種のうちキアゲハはナミと近縁であるが,セリ科植物を食草としており,産卵刺激物質は大きく異なる事が予想される一方,ナミと近縁でないクロ・モンキの2種はナミと同じ食草を利用しており,クロについては産卵刺激物質が一部重複する事が分かっている。これら遺伝子間の相同性は,食草を異にするキアゲハのみで低い事が予想されたが,予想に反して,得られた遺伝子及びそのゲノム構造はナミとキアゲハ,クロとモンキでそれぞれ相同性が高かった。キアゲハに起こった大きな食草選択の違いは,受容体に起きたわずかな変化によってもたらされた可能性が高い。しかしながら,これら遺伝子のリガンドを特定するには至っていないため,今後リガンドの特定を進めていく必要がある。一方,2)PxutGrlの種内変異に関しては,種内変異の存在は認められたが,シネフリン受容能の変異を発見するには至っていない。平成19・20年度に実施した研究内容は、1)ナミアゲハ(以下ナミ)の近縁種から、ナミから発見された産卵刺激物質受容体(尾崎私信、以下ナミ受容体)と相同な遺伝子を同定し、そのリガンドを特定する、2)ナミ受容体の種内変異について調べ、変異が存在する場合はナミ受容体のリガンド受容能に変化をもたらす部位を特定する、の2つである。1)について、ナミ受容体の配列(尾崎私信)をプローブとして、同属のキアゲハ・クロアゲハ・モンキアゲハの3種から類似の遺伝子の一部を同定する事ができた。3種のうちキアゲハはナミと近縁であるが、セリ科植物を食草としており、産卵刺激物質は大きく異なる事が予想される一方、ナミと近縁でないクロ・モンキの2種はナミと同じ食草を利用しており、クロについては産卵刺激物質が一部重複する事が分かっている。これら遺伝子間の相同性は、食草を異にするキアゲハのみで低い事が予想されるため、全長配列の決定によりキアゲハを含む近縁種間で相同性を比較することが望まれる。一方、2)ナミ受容体の種内変異に関しては、種内変異の存在は認められたが、機能の変異を発見するには至っていない。
営業担当者の認知バイアスの研究

一般的にネットワークは営業担当者の助けになるものと考えられる。従って、ネットワークの中心にいる人ほど過度に重要な潜在顧客とみなされる可能性がある。こうしたネットワークによって生じる営業担当者の認知のバイアスを解明するのが本研究の目的である。本研究では、例えば、旧技術の推進者は、売り上げベースでは有望な潜在顧客とみなしうるが、画期的新提案を採用してくれるかどうかに限って言えばそうではない。また売り上げベースでみれば仕事上の人脈が豊富な人は有望な潜在顧客だが、画期的新提案の採用に関してはそうとも言えない。何を求めるかによって、どのようなネットワークを持つ潜在顧客が重要なのかは異なっているのである。本研究の目的は、営業担当者が取引ネットワークを構築し、維持する際の認知バイアス(以下ネットワーク・バイアス)の性質を解明し、そのバイアスに対処するための営業担当者の行動パターンを分析することである。営業担当者は境界連結者と呼ばれ、取引ネットワークを構築することで商流を生み出す役割を担っている。その過程にバイアスが入り込めば、営業活動の成果に少なからず影響が生じるはずである。本研究では、この認知バイアスの性質、帰結、バイアスに対処する方法などを解明することを目標としている。平成25年度のインタビュー調査から、営業担当者は、「構造→行動→成果」というながれの中で、自らの成果を大元で規定する構造的要因に無頓着なことが多いことが予想される。構造要因と言っても、景気動向のようなマクロ経済要因に関しては若干考慮するものの、自らの持つネットワーク構造についてはそれが自らの成果を大元で規定する構造的要因であると考えている者は少ない。あるいはそれを考えているとしても、業界ですでにリーダー的地位にある企業を顧客とすることこそが良いネットワークであると単純に考えて疑わないものが多い。しかし、実際には、リーダー的地位にある大手企業とネットワークを取り結ぶことは、多くの競合企業と構造同値の状態に置かれることを意味し、必ずしも得策ではないと考えられる。見込み顧客がリーダー的地位にある大手企業かどうかということよりも、その見込み顧客とネットワークを取り結ぶことで、構造的空隙を橋渡しするようなユニークなネットワーク上の地位に就くことができるかどうかがその後の取引の成果を規定すると考えられる。今年度の調査から、こうしたことを明確に意識している営業担当者は必ずしも多くなかったが、構造的空隙を橋渡しする地位にあるライバル企業からの切り替えができずに苦労している営業担当者は多く見受けられた。本研究の目的は、営業担当者が取引ネットワークを構築し、維持する際の認知バイアス(以下ネットワーク・バイアス)の性質を解明し、そのバイアスに対処するための営業担当者の行動パターンを分析することにある。平成25年度のインタビュー調査から、営業担当者は、「構造→行動→成果」という流れの中で、自らの成果を大元で規定する構造的要因について、無頓着であることが予想される。構造的要因と言っても、景気動向のようなマクロ経済要因に関しては若干考慮するものの、自らの持つネットワーク構造についてはそれが自らの成果を大元で規定する構造的要因であるという認識は低いようである。あるいはそれを考えているとしても、業界ですでにリーダー的地位にある企業を顧客とすることこそが良いネットワークであると単純に考えて疑わないケースが多いようである。しかし、実際には、リーダー的地位にある大手企業とネットワークを取り結ぶことは、多くの競合企業と構造同値の状態に置かれることを意味し、必ずしも得策ではないと予想される。平成26年度のインタビュー調査からも、おおむね、平成25年度のインタビュー調査と同様の結果が得られたが、一部には大手企業とネットワークを構築しながら、高い成果を上げる営業担当者も見受けられた。取引相手が大手かどうかという単純な問題ではなく、コンティンジェントな視点から一層の調査を進めていく必要がある。本研究の目的は、営業担当者が取引ネットワークを構築し、維持する際の認知バイアス(以下ネットワークバイアス)の性質を解明し、そのバイアスに対処するための営業担当者の行動パターンを分析することである。その過程バイアスが入りこめば、営業活動の成果に少なからず影響が生じるはずである。本研究では、この営業バイアスの性質、帰結、バイアスに対処する方法などを解明することを目標としている。本研究では、インタビュー調査を中心に、認知バイアスの実態の解明に取り組んできた。インタビュイーとなった営業担当者の多くは、ネットワークが営業活動の成果に影響を与えることを漠然と想定はしているものの、明確にそれを意識し、対策を講じているものはかなり少ない。ましてや、ネットワーク構築の際に、認知バイアスが生じると考えているものは少ない。しかし、わずかではあるが、ネットワーク構造を明確に意識し、自らの営業活動に生かしている事例が得られている。理論の予想通り、構造的空隙を橋渡しするポジションを得ることで、高い営業成果を上げている事例が確認された。本研究では、こうした成果を、国際学会(Global Sales Science Institute)等で発表してきた。また研究会を開催し、この問題に関心のある研究者や実務家から、知見を得るべく努力してきた。本研究開始当初、平成25年に実施を予定していた定量調査が、まだ実施できていないので「やや遅れている」としている。

これについては、平成25年度分の報告書で、いくつかの事情で平成28年度に予定している調査と合わせて行うことが適当と判断した旨、報告し、研究計画を修正している。研究開始当初の研究計画からすればやや遅れているという判断にならざるを得ないものの、修正後の計画からは特に遅れておらず、大きな問題はないと考えている。平成27年度は、修正後の計画に沿って、平成28年度の定量調査の実施へ向けた十分な準備を行うことができたと考えている。実績の概要欄でも述べた通り、インタビュイーとなった営業担当者の多くは、ネットワークが営業活動の成果に影響を与えることを漠然と想定はしているものの、明確にそれを意識し、対策を講じているものはかなり少ない。ましてや、ネットワーク構築の際に、認知バイアスが生じると考えているものは少ない。それゆえに、定量調査のための仮説導出が予想以上に難しかった。しかし、当初予定以上にインタビュー調査を多く実施し、ネットワーク構築時の認知バイアスと営業成果との関係に関する仮説を得ることができている。これによって、現状の記述的な理解が進んだという、予想外の成果もあり、この点では、研究は当初計画以上に進展している部分もあるともいえる。また、理論研究も進め、理論面からの仮説の精緻化も進めている。こうした研究の成果を踏まえて、今年度定量調査を実施すれば、最終的には、計画通りの成果を達成できる見込みである。本研究の目的は、営業担当者が取引ネットワークを構築し、維持する際の認知バイアス(以下ネットワークバイアス)の性質を解明し、そのバイアスに対処するための営業担当者の行動パターンを分析することである。営業担当者は境界連結者と呼ばれ、取引ネットワークを構築することで商流を生み出す役割を担っている。その過程にバイアスが入り込めば、営業活動の成果に少なからず影響が生じるはずである。本研究では、このバイアスの性質、帰結、バイアスに対処する方法などを解明することを目標としている。本研究では、研究開始当初、インタビュー調査を中心に、ネットワークバイアスの実態の解明に取り組んできた。インタビュイーとなった営業担当者の多くは、ネットワークが営業活動の成果に影響を与えることを漠然と想定はしているものの、明確にそれを意識し、対策を講じているものはかなり少なかった。ましてや、ネットワーク構築の際に、バイアスが生じていると考えているものはかなり稀であった。しかし、わずかではあるが、ネットワーク構造を明確に意識し、自らの営業活動に生かしている事例が得られている。理論の予想通り、ネットワークの隙間を橋渡しするポジションを得ることで、高い営業成果を上げている事例が確認された。本研究ではこうした成果を国際学会(Global Sales Science Institute)等で発表してきた。
ミース・ファン・デル・ローエのベルリン時代における空間構成の方法

ミースがベルリン時代に設計した建築について幾何学的な分析を行ない、設計手法を明らかにした。全体フレームの長短比は1.5や1.66で、簡単な整数比で表せ、サブフレームの長短比は1.0か2.0の正方形か二倍正方形である。全体フレームに複数のサブフレームを入れ子にし、建物の中心へ導いている。壁や開口部などの位置は1.1mの等間隔のグリッドにより規定し、フレームとは完全に一致している。ミースの設計手法は、敷地にあわせて1:2や3:5など整数比の全体フレームを描き、そこに1.1mなどのグリッドを描き、複数の正方形や二倍正方形を入れ子にしたサブフレームにそって壁や開口部などの寸法と位置を決めている。本研究の目的は、ミース・ファン・デル・ローエがベルリン時代に設計した建物の図面を幾何学的に分析し、その空間デザインの成り立ちを明らかにすることである。初年度である平成25年度は、研究対象となる建築の図面や資料の収集と閲覧をおこなった。1長期休暇を利用し、ミースが設計活動の拠点としていたドイツではベルリンとクレフェルド、チェコではブルノを訪問した。ベルリンではナショナル・ギャラリー、クレフェルドではランゲ邸とエスター邸、そして、ブルノではチューゲントハット邸を調査した。2それぞれの建築で巻尺などを使い、壁や開口部、煉瓦などの寸法を実測し、それが図面と同じかどうかを確認した。31930年から1933年までミースが校長を勤めたデッサウにあるバウハウスや、晩年にミースが設計したベルリンの新ナショナルギャラーには新しい資料がなかったが、MOMA発行で絶版の「THE MIES VAN DER ROHE ARCHIVE」全6巻を手に入れることができた。4計画案だけで、実際の建物が現存していない煉瓦造田園住宅案の分析を行ない、煉瓦寸法を基準とするグリッドシステムで構成され、正方形や二倍正方形など単純な幾何学形で建物が構成されていることを見いだし、日本建築学会で発表した。本研究の目的は、ミース・ファン・デル・ローエが、ベルリン時代に設計した建物の平面図や立面図、断面図を幾何学的に分析し、その空間デザインのつくり方を明らかにすることである。第2年度である平成26年度は、分析の対象であるバルセロナ・パヴィリオンの採寸と、その図面や資料の収集と閲覧を行なった。さらに、トゥーゲントハット邸の分析を行ない、日本建築学会の国内と海外で、論文の投稿と発表を行なった。1長期休暇を利用し、ミースがベルリン時代に設計した代表的な建築であるバルセロナ・パヴィリオンを調査した。2その建築の壁の厚さや間隔、また開口部の巾などを、巻尺を使って採寸し、残された図面と違いがないかを確認した。3バルセロナ・パヴィリオンでは、再建時に作成されたと思われる図面集を手に入れることができた。425年度に現地調査を行なったトゥーゲントハット邸の第2案から最終案まで、3種類の1階と2階の平面図を分析し、バルセロナ・パヴィリオンの正方形グリッドではなく、片辺がバルセロナ・パヴィリオンより少し短い長方形グリッドがすべての案に用いられ、正方形や二倍正方形など単純なフレームで構成されていることを示した。それらは、日本建築学会の国内と海外で、論文の投稿と口頭発表を行なっている。本研究の目的は、ミース・ファン・デル・ローエがベルリン時代に設計した建築の平面図や立面図、断面図を幾何学的に分析し、その空間デザインのつくり方を明らかにすることである。第3年度である平成27年度は、トゥーゲントハット邸とレムケ邸、エスタース邸の配置図と平面図の分析を行い、その結果をまとめた論文を、日本建築学会へ投稿し、発表を行った。1トゥーゲントハット邸のスキームごとの1階平面図と2階平面図を作成し、それらをグリッドシステムとフレームを使って幾何学的に分析し、日本建築学会近畿支部に論文を投稿し、口頭発表を行った。2レムケ邸の最終案の配置図と平面図を作成し、それらもグリッドシステムとフレームで幾何学的に分析した。3エスタース邸の最終案の1階平面図と2階平面図を作成し、グリッドシステムとフレームで幾何学的に分析を行っている。さらに、エスタース邸といっしょに建てられたランゲ邸の最終案の1階平面図と2階平面図も作成している。第3年度である平成27年度は、トゥーゲントハット邸のスキームごとの1階平面図と2階平面図を作成し、それらを幾何学的に分析した。さらに、レムケ邸の最終案の配置図と平面図も作成し、それらにについても分析を行った。レムケ邸とエスタース邸は、主たる分析の対象とは考えていなかったが、大まかな分析を行なったところ、先に分析したバルセロナ・パヴィリオンなどの平面図と幾何学的な関係が見つかったため、トゥーゲントハット邸と同じぐらい詳しく分析を行うこととした。これにより、研究がやや遅れている。本研究の目的は、ミース・ファン・デル・ローエがベルリン時代に設計した建築の平面図や立面図、断面図などを幾何学的に分析し、その空間のつくり方を明らかにすることである。最終年度である平成28年度は、エスタース邸とランゲ邸の1階平面図と2階平面図を、アーカイブに残された図面と、現地での実測をもとに作成した。さらに、それらに描かれた平面構成要素ともっとも良く一致するグリッドシステムを見つけ、フレームを使って幾何学的な分析をおこなった。

また、デ・スティルの絵画と煉瓦造田園住宅との関係を分析した。それらの結果を、日本建築学会の国内と海外で、論文投稿と口頭発表をおこなっている。具体的には、長期休暇を利用し、ドイツのクレフェルトにあるエスタース邸とランゲ邸を調査し、壁の厚さや間隔、開口部の巾や煉瓦のサイズなどを巻尺を使って採寸し、アーカイブに残された図面との違いを確認し、平面図を作成した。また、ミースが設計した工場が近くにあり、この建築の予備調査もおこなった。エスタース邸とランゲ邸を分析した結果、図面には描かれていないが、1.1m(または0.55m)をモデュールとするグリッドシステムが存在し、これにそって壁や開口部など構成要素の位置が決められていることを指摘した。さらに、これら構成要素は正方形やダブルスクェアなどの幾何学的なフレームで関係があり、複数のダブルスクェアが入れ子となり、建築が構成されている。1.1mのモデュールは、バルセロナ・パヴィリオンやトゥーゲントハット邸と同じで、石のサイズで決まったと言われていたが、エスタース邸とランゲ邸の分析により、石ではなく煉瓦のサイズが基準となり決められたことがわかる。また、デ・スティルの絵画ロシアダンスのリズムと煉瓦造田園住宅案とは、構成要素の配置が整数比の比例分割によって決められていることなど、密接な関係があることも指摘した。ミースがベルリン時代に設計した建築について幾何学的な分析を行ない、設計手法を明らかにした。全体フレームの長短比は1.5や1.66で、簡単な整数比で表せ、サブフレームの長短比は1.0か2.0の正方形か二倍正方形である。全体フレームに複数のサブフレームを入れ子にし、建物の中心へ導いている。壁や開口部などの位置は1.1mの等間隔のグリッドにより規定し、フレームとは完全に一致している。ミースの設計手法は、敷地にあわせて1:2や3:5など整数比の全体フレームを描き、そこに1.1mなどのグリッドを描き、複数の正方形や二倍正方形を入れ子にしたサブフレームにそって壁や開口部などの寸法と位置を決めている。第2年度である平成26年度は、トゥーゲントハット邸の平面図を分析し、長方形グリッドで構成され、正方形や二倍正方形などの単純なフレームを使って構成されていることを見つけ、日本建築学会などで発表した。トゥーゲントハット邸の計画平面図が、昨年度購入した「THE MIES VAN DER ROHE ARCHIVE」に多くの種類があり、第1案から最終案までの、1階平面図と2階平面図を作図し、それぞれを分析するのに、時間がかかってしました。27年度はドイツなど現地調査へ行くことができなかったので、最終の今年度は、ドイツのクレフェルトとベルリンへ行き、エスタース邸とランゲ邸、レムケ邸などの資料を収集し、実測の調査を行なう予定である。とくに、煉瓦と目地の大きさや壁の厚みや間隔など、それらが図面と同じかを確認し、作成した平面図を修正する。そして、これらを分析し、ベルリン時代のミースの空間構成の方法を明らかにしたいと考えている。建築設計26年度に続き、長期休暇を利用しベルリンへ行き、ミースがベルリン時代の最後に設計したレムケ邸の資料収集と現地調査を行なう。さらに、レムケ邸について、どのようなグリッドで建物の構成要素が配置され、どのようなフレームでそれらが構成されたかを分析する。そして、すべての分析から、ベルリン時代のミースの空間構成の方法を明らかにしたいと考えている。
現象学的看護研究の教育方法の確立

看護学と哲学の研究者が協力して、現象学的看護研究の教育法の確立を目指した。この作業は研究方法の検討と同時に行う必要があった。そのため、1現象学的研究を行っている研究者や院生に疑問点や問題点を出してもらい、それについて共同討議した。2現象学的看護研究の教科書を出版するために、共同研究者各自の原稿を共同で討議した。3現象学的研究の成果は普遍性をもちうるか、どのようにそれを評価するかといった理論的問題について、講師を招いて討議した。国内外で看護の現象学的研究を実践している看護学研究者や、他の領域での現象学研究を行っている研究者、および現象学者を招いて共同討議を行った。また現象学的看護研究の相談窓口を設置し、大学院生や研究者の研究上の疑問に答えることによって、教育方法の蓄積を行った。第1回研究会は、平成25年6月2日(日)、首都大学東京、荒川キャンパスで行い、西村ユミ(首都大学東京)による「現象学的研究『実践編』看護の視点を編成する」と、グレッグ美鈴(神戸市看護大学)による「現象学的研究方法ー私の経験ー」の発表および指導中の大学院生の研究上の疑問に答えた。第2回研究会は、平成26年1月12日(日)、首都大学東京秋葉原サテライトキャンパスで行い、事務局会議および本間さんの原稿の検討を行った他、屋良朝彦(長野県立看護大学)「看護倫理の意思決定論におけるコンフリクト・レゾリューション・モデル」、および和久紀子(首都大学東京大学院)「婦人科がん手術後の排尿障害の経験の探究」の発表にもとづいて議論を行った。また、平成25年8月に、フランスのアジャクシオで開かれた他領域における現象学研究についての研究会に出席し、各国の研究者と意見を交わした。国内外の現象学的看護研究の実践者を招いて現象学的看護研究の教授法について共同討議を行った。また国内、国外の関係学会に参加して、討議を行った。2012年6月30日に、大阪大学OSIPP千里エクステンションにおいて、第1回研究会を行った。西尾美里氏(京都府立医科大学大学院)に「現象学的な知見を必要とした研究活動の経験について」のタイトルで、氏が大学院博士課程で行った現象学的看護研究の概要と何に困難を感じたかについて話していただき、指導方法について討議した。また、村上靖彦氏(大阪大学)の「トゥールーズにおける看護師と哲学者の対話」の発表と現象学的看護研究の方法論についての著作の執筆状況についての検討会を行った。2012年11月25日に、大阪大学でOSIPP千里エクステンションにおいて、第2回研究会を行った。坂井志織氏(日本赤十字看護大学)に「身体経験を現象学的に記述することの困難さ」のタイトルで、氏が現象学的看護研究を行う上でどのような点に難しさを覚えたかについて話していただき、それにもとづいて現象学的研究の方法論と指導について討議した。ほかに、池田喬氏(明治大学)に「ハイデガーとケア」のタイトルで当事者研究と現象学の可能性について話していただき、討議を行った。2012年4月27日から5月6日にかけて、松葉がダブリンとパリに出張し、看護の現象学研究の学会に参加、あるいは関係者と面談して討議を行った。アイルランドでは、ダブリン大学教授、現象学会副会長のジョセフ・コーエン氏と面会し、同国での現象学研究の現状について情報収集した。また、2012年5月5日、パリの高等師範学校で、エマニュエル・ド・サントベールCNRS研究員が主催するコロック「メルロ=ポンティあるいはエクリチュールに試される哲学(II)」に参加し、討議を行った。2014年4月20日に大阪大学豊中キャンパス大阪大学会館において、石原孝二(東京大学)「当事者研究と現象学」という講演および研究会を行った。12月21日に、東京大学本郷キャンパスにおいて、科研研究「ケアの現象学の具体的展開と組織化」(代表者:榊原哲也、基盤研究(B)、24320004)と共催で、合同研究発表会「ケアの現象学的研究ー方法と実践」を行った。以下はその呼びかけ文である。「看護をはじめとするケアの領域においても、現象学的な研究方法が少しずつ知られるようになってきましたが、まだ「難しい」、「本当に役に立つのだろうか」という声があるのも事実です。そこで今回、看護と哲学の研究者が共同で行ってきた、現象学的看護研究の方法についての探求と、それにもとづく研究実践の成果を報告したいと思います。今回は看護学の領域が中心になりますが、広くケアの現象学的研究に関心のある方々、これから現象学的研究について学びたいという方々にご参加いただきたいと考えています。」第1部では「ケアの現象学的研究の実践」と題して、村上靖彦(大阪大学)、福田俊子(聖隷クリストファー大学)、守田美奈子(日本赤十字大学)の各氏の発表を行い。

第2部では「ケアの現象学的研究の方法」と題して、榊原哲也(東京大学)、松葉祥一(神戸市看護大学)、西村ユミ(首都大学東京)、グレッグ美鈴(神戸市看護大学)の発表とディスカッションを行った。哲学本研究は、看護学領域の研究者と哲学領域の研究者が協力して、現象学的看護研究の教育方法の確立を目指すものである。先行研究で明らかになったことは、現象学的研究の場合、研究そのものに伴走しながらでなければ難しいこと、ただいくつかの指導例を蓄積しておいて事前あるいは解釈中に読むことによって参考にすることはできること、また評価の基準を大枠でよいから決めておく必要があることであった。そこで本研究では、(1)国内外で看護の現象学的研究を実践している看護学研究者や、他の領域での現象学研究を行っている研究者、および現象学者を招いて共同討議を行う。(2)現象学的看護研究の相談窓口を設置し、大学院生や研究者の研究上の疑問に答えることによって、教育方法の蓄積を行う。これらについては、順調に推移し、最終的な目標である(3)現象学的研究方法のための教育プログラムを策定し、一つのモデルとして提案することについても、医学書院より、本科研のメンバーによる『現象学的看護研究の理論と実際(仮題)』として、2015年度中に発行する予定である。また、2015年度に予定している総括のシンポジウムについても、準備が進んでいる。(1)国内外で看護の現象学的研究を実践している看護学研究者や、他の領域での現象学研究を行っている研究者、および現象学者を招いて共同討議を行う。これらについては、順調に推移し、最終的な目標である(3)現象学的研究方法のための教育プログラムを策定し、一つのモデルとして提案することについても、平成26年度中に書籍の形で、成果を発行する予定である。また、平成26年度に予定している総括のシンポジウムについても、順調に準備が進んでいる。(1)現象学的看護研究の方法論の探求国内外で現象学研究を実践している看護学研究者や、リハビリテーション学者、医学研究者など医療・介護関連の研究者のほか、現象学的研究方法を採用している心理学者、社会学者、教育学者、および現象学者を招聘し、教育方法について共同討議を行うことについては研究会そのものは2回だけであったが、関連学会に出席するなどの方法によって順調に進めることができた。(2)現象学的看護研究の教育方法の探求現象学的看護研究を実践しようとする大学院生、研究者をサポートするとともに、その教育・指導の記録を蓄積していくことについても、2回の研究会を通じて活発な議論を行うことができた。また、現在作成中の現象学的研究のためのテクスト(医学書院より発行予定)については、主要部分の原稿を除いてほぼ出揃い、相互検討も進めることができた。(1)現象学的看護研究の方法論の探求については、引き続き、国内外で現象学研究を実践している看護学研究者や、リハビリテーション学者、医学研究者など医療・介護関連の研究者のほか、現象学的研究方法を採用している心理学者、社会学者、教育学者、および現象学者を招聘し、教育方法について共同討議を行う。(2)現象学的看護研究の教育方法の探求についても、引き続き、現象学的看護研究を実践しようとする大学院生、研究者をサポートするとともに、その教育・指導の記録を蓄積していく。
血管内皮細胞由来の組織因子(トロンボプラスチン)の遺伝子クローニング

VII因子は,組織因子とともに,外因系凝固反応の開始因子であるが,その活性化機序,特に組織との分子間相互作用の様式は未だ殆ど明らかでない.その大きな原因の一つは, VII因子と組織因子の生体内での含量が,他の凝固因子に比べて,極端に低いからである.本研究では,血栓形成の本質を理解する上で不可欠な外因系凝固の開始反応機構を知る一歩として, VII因子精製法の改良を試み,血中に極微量しか存在しないVII因子を高純度,高収率で得る方法を確立した.先ず,常法により,ウシ血漿のビタミンK依存性凝固因子をBa吸着させたあと, DEAE-Sepharoseカラム,さらにBenzamidine-Sepharoseカラムで処理して, VII因子の粗画分を調製した.この画分には,全体の約50%のプロスロンビンが混在しているが,従来法はそれを除くため,さらにゲル濾過やポリアクリルアミドを用いた調製用電気泳動を利用している.しかし,本実験で,そうした操作がVII因子の収率を減少させる原因となっていたことが分った.そこで,我々はプロスロンビンと特異的に結合する黄色ブドウ球菌のスタフィロコアグラーゼ(SCと略)に着目し, SCをリガンドとしたAgaroseを作成した.その結果,このアフィニティクロマトにより効果的にプロスロンビンは除かれ,最終的に15lの血漿から510mgのVII因子を得た.この改良法は,従来,広く活用されているNemersonらのVII因子精製法の約5倍の収率を与えた.次にVII因子の全アミノ酸配列をタンパク質レベルで解明する目的で,精製標本をVIIa因子で活性化し, VII因子を構成するH鎖とL鎖を高速液体クロマト法で分別した.目下, H鎖とL鎖について,その全配列を決定しつつあるが,現在までにL鎖を構成する152残基のアミノ酸配列が明らかとなった.VII因子は,組織因子とともに,外因系凝固反応の開始因子であるが,その活性化機序,特に組織との分子間相互作用の様式は未だ殆ど明らかでない.その大きな原因の一つは, VII因子と組織因子の生体内での含量が,他の凝固因子に比べて,極端に低いからである.本研究では,血栓形成の本質を理解する上で不可欠な外因系凝固の開始反応機構を知る一歩として, VII因子精製法の改良を試み,血中に極微量しか存在しないVII因子を高純度,高収率で得る方法を確立した.先ず,常法により,ウシ血漿のビタミンK依存性凝固因子をBa吸着させたあと, DEAE-Sepharoseカラム,さらにBenzamidine-Sepharoseカラムで処理して, VII因子の粗画分を調製した.この画分には,全体の約50%のプロスロンビンが混在しているが,従来法はそれを除くため,さらにゲル濾過やポリアクリルアミドを用いた調製用電気泳動を利用している.しかし,本実験で,そうした操作がVII因子の収率を減少させる原因となっていたことが分った.そこで,我々はプロスロンビンと特異的に結合する黄色ブドウ球菌のスタフィロコアグラーゼ(SCと略)に着目し, SCをリガンドとしたAgaroseを作成した.その結果,このアフィニティクロマトにより効果的にプロスロンビンは除かれ,最終的に15lの血漿から510mgのVII因子を得た.この改良法は,従来,広く活用されているNemersonらのVII因子精製法の約5倍の収率を与えた.次にVII因子の全アミノ酸配列をタンパク質レベルで解明する目的で,精製標本をVIIa因子で活性化し, VII因子を構成するH鎖とL鎖を高速液体クロマト法で分別した.目下, H鎖とL鎖について,その全配列を決定しつつあるが,現在までにL鎖を構成する152残基のアミノ酸配列が明らかとなった.
STAT3,C/EBPεによる好中球分化の分子制御機構の解析

前年度に引き続き、C/EBPεとエストロゲンレセプターのリガンド結合ドメインの融合分子(C/EBPε-ER)を用いてC/EBPεによる好中球分化誘導機構をさらに詳細に検討した。昨年我々は、IL-3依存性マウス骨髄細胞株LGにC/EBPε-ERを導入しその活性を4-hydroxy tamoxifen(4-HT)で誘導すると、細胞増殖の抑制と好中球分化が引き起こされることを報告したが、本年度はC/EBPεの様々な変異体を作製しC/EBPε-ERによる分化誘導効果の詳細な分子メカニズムを検討した。C/EBPεのN末を様々な長さで欠損させた6つの欠失変異体および中央部分の転写抑制領域を欠失させた2種類の変異体を作製し、ERと融合させてLG細胞に導入した。4-HTでこれら細胞株を刺激し細胞増殖・アポトーシス・形態学的分化誘導に与える影響を検討したところ、N末を欠損した変異体はすべて細胞増殖抑制能・アポトーシス/分化誘導能を欠いていることが明らかになった。また中央部の転写抑制領域を欠失させた変異体では、野生型同様に細胞増殖抑制・アポトーシス/分化誘導効果が見られたことから、C/EBPεの細胞増殖抑制・分化誘導作用にはN末部分が重要であり転写抑制領域は関与していないことが示唆された。C/EBPεは好中球分化、特に骨髄球以降の分化に必須の転写因子であり、好中球の形態変化やペルオキシダーゼ・ラクトフェリン・好中球エラスターゼの発現に重要である。我々はG-CSFによる好中球分化においてC/EBPεが重要なターゲットとなっていることを以前明らかにし報告したが、今回C/EBPεによる好中球分化誘導機構をさらに明らかにするため、C/EBPεとエストロゲンレセプターのリガンド結合ドメインの融合分子(C/EBPε-ER)を作成しその効果を検討した。IL-3依存性マウス骨髄細胞株LGにC/EBPε-ERを導入し、その活性を4-hydroxy tamoxifen(4-HT)で誘導したところ、細胞増殖は急激に抑制され、約3日で細胞はG1期に静止した。これらの細胞は形態学的に成熟好中球に分化しており、分化抗原であるMac-1を発現していた。この際一部の細胞はアポトーシスをおこして死滅しているのが観察された。これらより、C/EBPεは単独で細胞増殖の停止、形態変化、およびアポトーシスを引き起こすことが明らかとなった。さらにこの時の細胞周期・アポトーシス関連タンパク質をウエスタンブロットにて解析すると、刺激後4日でサイクリンD2,A,EおよびCdk4,6が急激に減少し、逆にp27の急激な増加を認めた。これと同時に、IL-3存在下にも関わらず、アポトーシス抑制分子であるBcl-2,Bcl-X蛋白の減少およびCaspase3の活性化が認められた。以上より、C/EBPεは細胞の形態変化・機能的成熟だけではなく、分化に伴う細胞増殖の停止やアポトーシスの誘導にも関与していることが示唆された。
難治性てんかん・非定型レット症候群の原因遺伝子欠損マウス作製・解析と分子標的解明

本年度は、全身型Cdk15ノックアウト(KO)マウスの、脳形態、皮質層構造、海馬構築、軸索・樹状突起微小形態につき詳細な解析を行った。海馬神経細胞分散培養、大脳スライス標本のゴルジ染色、更にCdk15 KOマウスとThy1-GFPトランスジェニックマウスの交配により神経細胞をGFP標識したマウスの大脳スライス標本の共焦点レーザー顕微鏡撮影により、樹状突起スパインの形態・数の詳細な解析を行い、Cdk15 KOマウス神経細胞樹状突起の変化を同定した。更にCdk15 KOマウスの海馬スライス電気生理学的解析及び、KOマウスのテストバッテリーを用いた網羅的行動解析を開始し、それぞれの解析結果に異常を認めた。また、yeast two-hybridスクリーニングを用いたCdk15相互作用分子の網羅的探索により得た21の相互作用因子候補のうち、機能重要と考えられる複数の因子(イオンチャンネル、微小管結合蛋白、モーター蛋白、シナプス蛋白)について、マウス脳溶解物を用いた共免疫沈降、GST標識組換え蛋白を用いたpull-downアッセイ、更にin vitroキナーゼアッセイを行った。その結果、新規のCDKL5リン酸化基質及び相互作用蛋白を同定し、更にその相互作用による機能解明を行った。これらの研究成果から、Cdk15の樹状突起スパイン形成制御に関する機能が確認され、この機能不全が、CDKL5遺伝子変異に伴う神経発達障害の分子基盤であることが示唆された。また、CDKL5相互作用蛋白の同定と解析により、新規の神経細胞骨格蛋白、イオンチャンネル分子、シナプス蛋白との相互作用、リン酸化による修飾作用が示され、CDKL5変異による病態にこれらの機能不全が関与する可能性が示唆された。これらの新規知見により、CDKL5の分子機能と遺伝子変異による病態機序の解明へ新たな進歩が得られた。本年度は、我々が作製したCyclin-dependent kinase-like 5 (CDKL5) floxedマウスを、CAG-Creマウス、及びTau-Creマウスと交配し、全身型Cdk15ノックアウト(KO)マウス、及び神経細胞特異的Cdk15 KOマウスを作出した。全身型KOマウス、神経細胞特異的KOマウス、及び野生型の同腹子を、発達ステージ毎に全身及び脳切片の免疫組織学的染色により、脳形態、皮質層構造、海馬構築、軸索走行につき比較解析を行った。海馬神経細胞分散培養により、軸索・樹状突起、棘突起の形態・数の詳細な解析を行った。これまでの解析結果から、Cdk15 KOマウス神経細胞樹状突起の棘密度に変化が認められた。また、yeast two-hybridスクリーニングを用いたCdk15相互作用分子の網羅的探索により、21の相互作用因子候補を得た。各候補因子を、マウス脳溶解物を用いた共免疫沈降、GST標識組換え蛋白を用いたpull-downアッセイ法で確認した。現在有意な因子の抽出を進めている。本年度の研究成果から、Cdk15の樹状突起棘形成制御に関する機能が示され、この機能不全が、CDKL5遺伝子変異に伴う神経発達障害の分子基盤であるこが示唆された。また、相互作用蛋白解析により、神経細胞骨格蛋白、イオンチャンネル分子との相互作用が示され、CDKL5変異による病態にこれらの機能不全が関与する可能性が示唆された。これらの知見は全く新規の発見であり、CDKL5の分子機能と遺伝子変異による病態機序の解明へ向けた新たな進歩である。