hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
直腸癌転移再発制御を目指した癌幹細胞の放射線誘導性上皮間葉移行の分子生物学的研究

我々は化学放射線療法に抵抗し遺残した癌細胞の中に癌幹細胞が多く含まれているとの仮説を立て、遺残癌細胞の分子生物学的特徴が直腸癌化学放射線療法後の遠隔転移再発や予後に関連し、術前化学放射線療法によって刺激を受けた癌細胞の一部が上皮間葉移行をきたし転移能を獲得しているのではないかと考えた。化学放射線療法に抵抗性を示したと考えられる遺残癌細胞では、CD133やLgr5(幹細胞マーカー)、GLUT1(糖代謝)やHIF1a(組織低酸素)の発現は再発や予後不良と関連していた。またTSやDPD(5-FU抵抗性マーカー)の発現は再発と関連していた。遺残癌細胞周囲の間質細胞では、CXCR4やCXCL12(癌増殖、浸潤、転移と関連)やFAP-αやSDF-1(cancer-associated fibroblasts関連)の発現は再発や予後と関連していた。Neurotrophic receptor tropomyosin related kinase (TrkB)高発現大腸癌ではE-cadherinの発現が低く予後不良であり、TrkBが大腸癌細胞の上皮間葉移行を誘導した。放射線照射が大腸癌細胞の上皮間葉移行を誘導し、移動能、浸潤能を増強した。放射線照射後の生存(遺残)細胞ではCD133の発現が上昇し、放射線照射が大腸癌細胞の上皮間葉移行を誘導し、照射後遺残細胞にCD133発現陽性細胞が多く存在していることが示唆された。今後も、大腸癌肝転移巣における癌幹細胞の振る舞いや癌幹細胞の上皮間葉移行の関与を形態学的および分子生物学的に検討する必要がある。平成22年度は、直腸癌切除標本を用いた遺残癌細胞と間質細胞の遺伝子発現の検討により、化学放射線療法に抵抗性を示した癌細胞(癌幹細胞の存在が示唆される)の分子生物的検討を行っている。また、治療抵抗性癌細胞(癌幹細胞の存在が示唆される)として大腸癌細胞株HT29細胞を用い致死量以下の5-FU長期、頻回暴露や放射線長期、頻回暴露による抵抗性クローンの作成を行い、その分子生物学的検討を行っている。GFP標識マウスの脾臓にRFP標識大腸癌細胞株(Anticancer社から購入)を接種する大腸癌肝転移モデルにおける二光子励起顕微鏡下生体内リアルタイムイメージング法を確立し、RFP標識癌細胞が、肝類洞内に接着、停止する像、血小板凝集を伴って肝類洞内で停止する像、肝類洞からDisse腔へ形態変化と伴いながら浸潤する像などを600倍以上の倍率でとらえられることが可能となった。すなわち、生きた癌細胞が、生きたマウスの生きた肝臓内でどのように転移巣を形成するかが観察可能となったことで、現在、大腸癌肝転移における癌幹細胞振る舞いや癌幹細胞の上皮間葉移行の関与の検討に着手している。また、研究計画を鋭意進めながら、癌幹細胞や上皮間葉移行に関連する臨床研究も行い、国内外の学会や論文等で精力的に発表を行っている。GFP標識ヌードマウスの脾臓にRFP標識大腸癌細胞株を接種し大腸癌肝転移モデルを作成。二光子レーザー顕微鏡下生体内観察法にて、癌細胞が肝類洞からDisse腔へ形態変化(紡錘形)と伴いながら浸潤する像を捉えた。このRFP標識大腸癌細胞株を用いて、5-FUや放射線の長期、頻回暴露による抵抗性クローンの作成し、その後大腸癌肝転移モデルを用いて、治療抵抗性(放射線や抗癌剤)癌細胞(癌幹細胞の存在が示唆される)の転移巣での形態学的変化の有無を評価中である。

我々はin vitroにおいて放射線照射がヒト大腸癌細胞株の上皮間葉移行を誘導することも報告しており(Kawamoto A et al.Oncol Rep.2012)、今後、大腸癌肝転移巣における癌幹細胞振る舞いや癌幹細胞の上皮間葉移行の関与を形態学的および分子生物学的に検討する予定である。5-FUや放射線の長期、頻回暴露による抵抗性クローンの作成し、その後大腸癌肝転移モデルを用いて、治療抵抗性(放射線や抗癌剤)癌細胞(癌幹細胞の存在が示唆される)の転移巣での形態学的変化を検討した。抵抗性クローンによる肝転移巣は肉眼的には腫瘤形成性増殖から瀰漫性増殖に変化したが、二光子レーザー顕微鏡下生体内観察では個々の細胞レベルでの形態学的差異は明らかにすることはできなかった。今後も、大腸癌肝転移巣における癌幹細胞振る舞いや癌幹細胞の上皮間葉移行の関与を形態学的および分子生物学的に検討する必要がある。臨床検体を用いた検討は、国内外の学会発表や論文発表を含め、おおむね順調に進展している。一方、細胞株を用いた基礎研究では、大腸癌幹細胞を特異的表面抗原から分離する方法論とその手技の確立に難渋している。24年度が最終年度であるため、記入しない。細胞株を用いた基礎研究の遂行にあたり、大腸癌幹細胞を特異的表面抗原から分離する方法論とその手技の確立に難渋している。そのため、癌幹細胞の存在が理論的にも経験的にも示唆される治療抵抗性癌細胞を用いた上皮間葉移行と転移との関連を検討している。放射線照射だけでなく、抗癌剤暴露によって治療抵抗性クローンを作成し、その分子生物学的、形態学的特徴と転移能との関連を二光子レーザー顕微鏡にて生体内観察し可視化していく。
森林土壌におけるエステル硫酸態イオウの保持機構の解明

森林土壌におけるエステル硫酸態イオウの保持機構を調査した。まずエステル硫酸態イオウは土壌中の金属酸化物に吸着されているという仮説をたて、吸着実験を行ったが、吸着等温線は得られなかった。この結果は鉄酸化物の存在が土壌中でのエステル硫酸態イオウの保持に寄与するものの、単純な吸着反応では説明できない可能性があることを示す。また、エステル硫酸態イオウは従来の測定法では過剰評価になる恐れが最近になって欧州で指摘されたため、その測定法を改良し、土壌における貯留量を再評価した。その結果、エステル硫酸態イオウは全イオウの23割程度を占める主要画分であることには変わりがなく、腐植金属複合体中に含まれ、土壌中に安定して存在していると考えられた。高純度合成酸化物を用いてエステル硫酸の吸着等温線を作成するため、まずエステル硫酸態イオウの簡便な測定方法を開発した。従来、エステル硫酸態イオウの測定は、行程が煩雑な蒸留法が用いられてきた。この方法は時間がかかるため、本課題には適さないと考え、高圧反応分解容器(ボンブ)を用いてエステル硫酸を分解し、分解液中の硫酸イオンをイオンクロマトグラフィーで測定する方法を試行した。その結果、エステル硫酸態イオウの回収率が良く再現性ある結果を得ることができ、この方法が本課題に適用できることを確認した。次に土壌中に存在することが知られているエステル硫酸態イオウの1種、アミノエチルヒドロジェン硫酸を用いて高純度鉄酸化物に対し吸着実験を行った。アミノエチルヒドロジェン硫酸を0.01mmol2.00mmolの6段階の濃度で添加し、26度の条件下で16時間振とうしたところ、エステル硫酸態イオウ濃度の増加に従い反応液中の濃度の減少を認めた。エステル硫酸態イオウ濃度の最大減少量は、鉄1gあたり52μmolSの吸着量に相当した。この結果は鉄酸化物の存在が土壌中でのエステル硫酸態イオウの保持に寄与する可能性があることを示している。ただし本年度の実験では吸着等温線の作成には至らなかった。その原因は、温度条件が厳密に保たれていなかったこと、設定濃度が適切でなかったことなどが考えられる。今後これらの実験条件設定を変更し、再度吸着等温線の作成を試行する予定である。高純度合成酸化物を用いてエステル硫酸の吸着等温線の作成を試みた。高純度鉄酸化物に土壌中に存在することが知られているエステル硫酸態イオウを0.01mmol2.00mmolの5段階の濃度で添加し、16時間26度環境下で振とうしたところ反応液中のイオウ濃度の減少を認めたが、吸着等温線は得られなかった。この結果は鉄酸化物の存在が土壌中でのエステル硫酸態イオウの保持に寄与するものの、単純な吸着反応では説明できない可能性があることを示している。また、エステル硫酸態イオウと認識されてきた画分の中に、無機の硫酸イオンが多量に含有される可能性があることが最近になって欧州で指摘されたため、Andisols(火山灰性土壌)とInceptisols(岩石性土壌)についてリン酸溶液(従来法、吸着態硫酸イオンを抽出)の代わりにシュウ酸溶液(改良法、吸着態硫酸イオン、アルミニウム硫酸塩鉱および吸蔵態硫酸イオンを抽出)を用いて硫酸イオンを定量し、エステル硫酸態イオウを求めた。その結果、エステル硫酸態イオウはかつてAndisolsで全イオウ現存量の5割、Inceptisolsで4割を占めると計上されていたが、実際には両土壌とも全イオウの2割程度であることが明らかになった。リン酸溶液で定量されず、シュウ酸溶液で定量される硫酸イオン(アルミニウム硫酸塩鉱および吸蔵態硫酸イオン)は、Andisolsでは全イオウ現存量の36%、Inceptisolsの24%を占めた。これらの結果から、動態が十分解明されていないが存在量が無視できないイオウ画分としては、エステル硫酸態イオウのほかにアルミニウム硫酸塩鉱および吸蔵態硫酸イオンがあることが明らかになった。大気により負荷されたイオウが土壌に蓄積されると、随伴する酸が消費されることから、イオウの蓄積は土壌の耐酸性に深くかかわっている。そこで土壌イオウの主要な蓄積形態であるエステル硫酸イオンの保持機構の解明を目的とし,高純度合成酸化物を用いてエステル硫酸の吸着等温線を作成し,エステル硫酸態イオウと酸化物との結合様式の推定を試みた。またエステル硫酸態イオウの蓄積量は過大評価されている可能性があるため、その蓄積量の正当な評価を試みた。

高純度鉄酸化物にエステル硫酸態イオウ数種を0.01mmol2.00mmolの5段階の濃度で添加し、16時間26度環境下で振とうしたところ反応液中のイオウ濃度の減少を認めたが、吸着等温線は得られなかった。また、エステル硫酸態イオウと認識されてきた画分の中に無機の硫酸イオンが多量に含有されていることが近年欧米で報告されるようになったため、本邦土壌でもエステル硫酸と誤認されている無機硫酸イオン含量とその挙動に関与する土壌成分を調査した。その結果,エステル硫酸態イオウと誤認されている無機硫酸イオン含量は吸蔵態・沈殿態硫酸イオンが主体であり、全イオウ含量のおよそ1割程度、修正前のエステル硫酸イオン含量の半分を占めていることが明らかになった。この吸蔵態・沈殿態硫酸イオンは遊離酸化物含量と高い相関を持ち,一方,修正後のエステル硫酸イオン含量と鉄の遊離酸化物含量の間の相関はなく、アルミニウム遊離酸化物含量とは(吸蔵態・沈殿態硫酸イオンよりは弱い)相関が認められた。これらの結果から、今回のエステル硫酸態イオウ含量の再評価によって、エステル硫酸態イオウは硫酸イオンのように比較的単純な吸着反応に支配されるのではないこと、遊離酸化物との共存にも選択性があることが明らかになった。
中国唐後半期の財政運営における宦官の権力拡大の研究

唐後半期において、宦官は皇帝の廃立に関与するなど政治の動向を左右するほどの権力を握った。こうした宦官の権力獲得の要因の一つが令外官である内諸司使である。本研究では、大盈庫使・瓊林庫使をはじめとする財政関連の内諸司使を考察した上で、財政運営への宦官の関与と権力拡大、皇帝権力との関係を検討する。また、宦官が権勢を獲得し、それを維持できた要因として、宦官が養子をとって家系の存続が可能となったことにより、宦官身分の形成、宦官勢力の団結がなされたことも大きい。宦官養子制だけでなく、宦官家族内の助成を取り上げ、宦官の家系の維持、発展と、彼らの勢力拡大に対する役割を考察する。上記2つの課題により、唐後半期の宦官の勢力拡大の背景を明らかにすることを通じて、最終的には唐宋変革期の皇帝権力の特色を明らかにすることを目的としている。上記の研究課題を行うために、平成30年度では、引き続き研究を進める基盤づくりとして、新出の石刻史料の整理、先行研究の整理を行った。石刻史料については、今後の研究でも利用できるよう、目録化に備えて項目を立てて整理を進めている。特に新出の墓誌銘の中には、宦官、その妻や娘のものだけでなく、養子となった一般男性のものも含めると、かなりの数に上る。その整理の過程で、大盈庫副使など財政関連の内諸司使に任命されたと思われる宦官の墓誌を見つけ、この墓誌銘の誌文を分析している。それらの考察については、論文化して大学内の紀要に投稿する予定である。宦官家族に関する墓誌の情報収集は進めているものの、その分析と考察がまだ十分には行われていない。平成30年度では、前年度と引き続き研究を進める基盤作りが中心となった。具体的には、新出の石刻史料の整理、先行研究の整理を行った。近年の中国では、墓誌が収録された図録が続々と公刊されているだけでなく、その他に報告書の形で墓誌銘の情報も数多く出されているため、それらの情報を収集するのに手間取っている。収集と整理の過程で、財政関連の内諸司使に任命された宦官の墓誌もいくつか集まったが、それらの分析と検討に時間を要し、論文として公表できるのが平成31年度前半にずれこんでしまった。その影響で、宦官家族に関する墓誌の整理と分析もずれ込んでしまい、宦官の家系の発展と彼らの勢力拡大の背景についての検討結果がまだ論文化できないでいる。以上から、当初の計画よりもやや遅れていると評価せざるを得ない。平成29年度、30年度に引き続き、唐代宦官の墓誌銘を中心とする石刻史料の収集と整理をするが、今年度はこれを目録化して公表できるようにする。次に、平成29年度と30年度における宦官墓誌の整理から、今年度は宦官養子制と宦官家族内の女性の役割に関する研究を中心にすえ、その研究成果を、個別論文化して順次公表する。30年度はほかの研究の影響でやや遅れがちだったが、宦官の家系の発展や宦官身分の形成、勢力の団結に関する研究を通じて、唐代宦官の勢力拡大と皇帝権力との関係を検討するという本研究の研究目的を遂行できるようにしたい。さらに、大盈庫使・瓊林庫使など財政関連の内諸司使に関する研究は、これまで誌文の分析が中心となっているが、これを宦官の遷官の動向と結びつけることで、宦官の職掌における財政関連の内諸司使の位置づけを検討し、論文化につなげる。また、宦官が権勢を獲得し、それを維持できた要因として、宦官が養子を取って家系の存続が可能となったことにより、宦官身分の形成、宦官勢力の団結がなされたことも大きい。宦官養子制だけでなく、宦官家族内の女性を取り上げ、宦官の家系の維持、発展と彼らの勢力拡大に対する役割を考察する。上記の2つの課題により、唐後半期の宦官の勢力拡大の背景を明らかにすることを通じて、最終的には唐宋変革期の皇帝権力の特色を明らかにすること目的としている。上記の研究課題を行う為に、平成29年度では、まず以後の研究を進める基盤作りを行った。具体的には、新出の石刻史料の収集と整理、先行研究の整理を行い、石刻史料については、今後の研究でも利用できるよう、今後の目録化に備えて項目を立てて整理を進める。特に新出の墓誌銘の中には、宦官、その妻や娘のものだけでなく、養子となった一般男性のものも含めてかなりの数にのぼる。その整理の過程で、宦官の妻や娘など女性に関連する情報の収集が進み、宣宗期の有力宦官の妹とその宦官の娘の墓誌から、当時の有力宦官層における婚姻が果たす役割を考察した。

さらに、中下層の宦官集団における婚姻についても調べることができた。これらの考察については、「唐代宦官家族における女性の役割に関する一試論」として論文化し、現時点での成果を発表することができた。ただ、大盈庫使・瓊林庫使など財政関連の内諸司使に関する情報は収集を進めているものの、細分化された情報の整理と分析がまだ十分には行われていない。平成29年度では、まず以後の研究を進める基盤作りを行った。具体的には、新出の石刻史料の収集と整理、先行研究の整理を行い、石刻史料については、今後の研究でも利用できるよう、今後の目録化に備えて項目を立てて整理を始めた。特に新出の墓誌銘の中には、宦官、その妻や娘のものだけでなく、養子となった一般男性のものも含めてかなりの数にのぼる。石刻史料の収集と整理については、収集は順調に進んでいるものの、どうしても膨大な数量の史料収集が主となり、それを項目を立てて整理する作業のほうが十分には進んでいない。また、昨年夏に中国西安市の博物館数か所を訪問し、石刻史料の所蔵調査を行った際、未公刊の墓誌銘が相当あり、その中に宦官の墓誌も含まれることが分かった。近々図録が公刊されるとの情報もあるので、こうした史料の取り扱いについても検討する必要がある。その収集の過程で、宦官の妻や娘など女性に関連する情報の収集が進み、宣宗期の有力宦官の妹とその宦官の娘それぞれの墓誌を調べ、当時の有力宦官層における婚姻が果たす役割を考察した。この考察については、「唐代宦官家族における女性の役割に関する一試論」として論文化し、現時点での成果を発表することができた。宦官の家系の発展と彼らの勢力拡大の背景を明らかにするという課題については、当初の計画以上に進んでいる。他方で、大盈庫使・瓊林庫使など財政関連の内諸司使に関する情報は収集を進めているものの、細分化された情報の分析がまだ十分にできていないため、こちらの課題に関する成果が未だにまとまらないでいる。以上から、全体的に見ると当初の計画よりもやや遅れていると評価せざるを得ない。唐後半期において、宦官は皇帝の廃立に関与するなど政治の動向を左右するほどの権力を握った。こうした宦官の権力獲得の要因の一つが令外官である内諸司使である。本研究では、大盈庫使・瓊林庫使をはじめとする財政関連の内諸司使を考察した上で、財政運営への宦官の関与と権力拡大、皇帝権力との関係を検討する。また、宦官が権勢を獲得し、それを維持できた要因として、宦官が養子をとって家系の存続が可能となったことにより、宦官身分の形成、宦官勢力の団結がなされたことも大きい。宦官養子制だけでなく、宦官家族内の助成を取り上げ、宦官の家系の維持、発展と、彼らの勢力拡大に対する役割を考察する。上記2つの課題により、唐後半期の宦官の勢力拡大の背景を明らかにすることを通じて、最終的には唐宋変革期の皇帝権力の特色を明らかにすることを目的としている。上記の研究課題を行うために、平成30年度では、引き続き研究を進める基盤づくりとして、新出の石刻史料の整理、先行研究の整理を行った。石刻史料については、今後の研究でも利用できるよう、目録化に備えて項目を立てて整理を進めている。特に新出の墓誌銘の中には、宦官、その妻や娘のものだけでなく、養子となった一般男性のものも含めると、かなりの数に上る。その整理の過程で、大盈庫副使など財政関連の内諸司使に任命されたと思われる宦官の墓誌を見つけ、この墓誌銘の誌文を分析している。それらの考察については、論文化して大学内の紀要に投稿する予定である。宦官家族に関する墓誌の情報収集は進めているものの、その分析と考察がまだ十分には行われていない。
活性イオウ分子による新たな還元ストレス/レドックス制御機構の解明

活性イオウ分子(Reactive sulfur species, RSS)は,高い抗酸化性/求核性を有し,酸化/親電子ストレス制御に重要な役割を担いる事を報告してきた.一方、生体内での過剰な抗酸化物質の蓄積はレドックスバランスを乱し,疾患リスクを高める報告がなされており,酸化ストレスに対し還元ストレスという概念が近年提唱されている.以上を統合すると, RSSの生体内量は、厳密に制御されており,その破綻は健康リスクを高めると考えられた.そこで本研究は,生体内RSS量の制御機構と,その破綻による生体影響を検討した.本研究では生体内RSS量を変化させるために, RSS産生酵素のひとつであるCystathionine γ-lyase (CSE)を高発現させたマウスとCSEの基質含有量を調整した飼料を用いた.CSE高発現マウスは,各臓器で高いCSE発現を示したにもかかわらず,臓器中のRSS量は野生型と比べ,有意な変化は見られなかった.生体でも余剰のRSSが臓器外へ放出されていると考え,臓器外である血漿中のRSS量を測定した.その結果、野生型と比べ, CSE高発現マウスで有意なRSS量の増加が認められた.CSEの基質であるシスチンを高含有するエサをCSE高発現マウスに与えた結果,血漿中での過剰なRSS量の増加に伴い,肝臓や筋肉量の減少が見られ,投与後3週間以内に全てのマウスが死亡した.これらの結果より,高い求核性を持つRSSは,細胞内に高濃度蓄積するとレドックスバランスが還元に傾き毒性を示すことが明らかになった.さらに,生体は余剰なRSSによる細胞内の還元ストレスを回避するために,細胞外へと積極的に放出する輸送システムを有していることが示唆された.当初の計画通り,活性イオウ分子の産生酵素のひとつであるCystathionine γ-lyase (CSE)を高発現させたマウスとCSEの基質含有量を調整した飼料を用いる事で生体内活性イオウ分子の量を変化させる事に成功した.さらに,当マウスモデルを用いて,高い求核性を持つ活性イオウ分子の蓄積がレドックスバランスを崩し,健康リスクを高めることを証明することができた.これらの結果より,本研究課題の進捗状況はおおむね順調に進展していると考えた.今後は,活性イオウ分子の排出トランスポーターを同定し、その発現量がレドックスバランスの維持に寄与しているかを明らかにする.研究方法として,活性イオウ分子を排出するトランスポーターは細胞内の活性イオウ分子量に依存して発現量が変化する可能性が高い.そこで,細胞内活性イオウ分子量を増加させた際に上昇を示すトランスポーター群をマイクロアレイ解析にて探索する.また,候補トランスポーターをアフリカツメガエルの卵母細胞に発現させ,マイクロインジェクターにて活性イオウ分子を卵母細胞に注入し, RSSが細胞外へ放出されるか否かを判断する.アフリカツメガエルの卵母細胞は膜タンパク質の発現性に優れ,細胞の巨大さから,基質の注入も容易であるため,トランスポーターの機能評価に最適な実験系であると考える.活性イオウ分子(Reactive sulfur species, RSS)は,高い抗酸化性/求核性を有し,酸化/親電子ストレス制御に重要な役割を担いる事を報告してきた.一方、生体内での過剰な抗酸化物質の蓄積はレドックスバランスを乱し,疾患リスクを高める報告がなされており,酸化ストレスに対し還元ストレスという概念が近年提唱されている.以上を統合すると, RSSの生体内量は、厳密に制御されており,その破綻は健康リスクを高めると考えられた.そこで本研究は,生体内RSS量の制御機構と,その破綻による生体影響を検討した.本研究では生体内RSS量を変化させるために, RSS産生酵素のひとつであるCystathionine γ-lyase (CSE)を高発現させたマウスとCSEの基質含有量を調整した飼料を用いた.CSE高発現マウスは,各臓器で高いCSE発現を示したにもかかわらず,臓器中のRSS量は野生型と比べ,有意な変化は見られなかった.生体でも余剰のRSSが臓器外へ放出されていると考え,臓器外である血漿中のRSS量を測定した.その結果、野生型と比べ, CSE高発現マウスで有意なRSS量の増加が認められた.CSEの基質であるシスチンを高含有するエサをCSE高発現マウスに与えた結果,血漿中での過剰なRSS量の増加に伴い,肝臓や筋肉量の減少が見られ,投与後3週間以内に全てのマウスが死亡した.これらの結果より,高い求核性を持つRSSは,細胞内に高濃度蓄積するとレドックスバランスが還元に傾き毒性を示すことが明らかになった.さらに,生体は余剰なRSSによる細胞内の還元ストレスを回避するために,細胞外へと積極的に放出する輸送システムを有していることが示唆された.当初の計画通り,活性イオウ分子の産生酵素のひとつであるCystathionine γ-lyase (CSE)を高発現させたマウスとCSEの基質含有量を調整した飼料を用いる事で生体内活性イオウ分子の量を変化させる事に成功した.さらに,当マウスモデルを用いて,高い求核性を持つ活性イオウ分子の蓄積がレドックスバランスを崩し,健康リスクを高めることを証明することができた.これらの結果より,本研究課題の進捗状況はおおむね順調に進展していると考えた.今後は,活性イオウ分子の排出トランスポーターを同定し、その発現量がレドックスバランスの維持に寄与しているかを明らかにする.研究方法として,活性イオウ分子を排出するトランスポーターは細胞内の活性イオウ

分子量に依存して発現量が変化する可能性が高い.そこで,細胞内活性イオウ分子量を増加させた際に上昇を示すトランスポーター群をマイクロアレイ解析にて探索する.また,候補トランスポーターをアフリカツメガエルの卵母細胞に発現させ,マイクロインジェクターにて活性イオウ分子を卵母細胞に注入し, RSSが細胞外へ放出されるか否かを判断する.アフリカツメガエルの卵母細胞は膜タンパク質の発現性に優れ,細胞の巨大さから,基質の注入も容易であるため,トランスポーターの機能評価に最適な実験系であると考える.
共通病態再現モデル動物を用いた広汎性発達障害の分子病態解明

強迫的な繰り返し行動は、自閉症スペクトラム(広汎性発達障害)と強迫障害スペクトラム(強迫性障害、トゥーレット症候群、抜毛症等)に共通した中核症状である。この異常行動の発症機序はほとんど分かっていない。本研究では、脳の興奮性-抑制性のアンバランス(過剰な興奮)が、強迫的な繰り返し行動を引き起こすことを、遺伝子改変動物を用いて初めて明らかにした。さらにその神経回路基盤と治療薬候補を同定した。自閉症を含む広汎性発達障害は、遺伝的関与が強いものの、多因子疾患であること、ヒト脳の研究上の制約から、優れたモデル動物の確立が病態解明・新規治療法開発に重要である。本研究では、従来の単一遺伝子の変異によるモデルマウスはなく、グルタミン酸輸送体(GLAST,GLT1)の様々な時期・程度での欠損により、広汎性発達障害の共通病態である興奮性-抑制性神経伝達のアンバランス(興奮性が優位になる)を再現するモデル動物を作製、詳細な異常行動の解析とその分子機構同定、広汎性発達障害の病態解明を目的とした。これまでに申請者が作製したモデル動物(GLAST(+/-)&GLT1(+/-))は広汎性発達障害の大半の症状を再現するものの、発症頻度が不安定であるという課題があった。22年度は、より興奮性が優位になるものの、従来、生後2週齢で死亡してしまうGLT1(-/-)マウスを、グルタミン酸受容体NR2B(+/-)との交配により、長期間生存させることに成功した(GLT1(-/-)&NR2B(+/-))。行動解析の結果、このGLT1(-/-)&MR2B(+/-)マウスは全ての個体で社会性行動の欠損という広汎性発達障害様の行動異常を示した。これより安定的に広汎性発達障害を忠実に再現するモデルマウスを作出することに成功した。さらに、生後3週齢でGLT1欠損を誘導されたマウスが、広汎性発達障害と一部症状が重複し関連性が指摘されている、強迫性障害に似た行動異常(頭頚部の脱毛・損傷、毛づくろい行動の増加)を示すことを発見した。これらは興奮性優位の程度・時期により、異なる精神疾患を発症し得ることを示唆している。現在これらのモデルマウスの行動解析を継続しており、終了後脳サンプルを採取し、DNAチップ解析などの分子機構解明を行う。またGLT1欠損をより早期(胎児期)に誘導することで、より優れた広汎性発達障害のモデルマウスの開発を並行して進めており、これらについても同様の解析を進める。この異常行動の発症機序はほとんど分かっていないが、近年の研究は、これまで主流であったセロトニン神経伝達ではなく、グルタミン酸神経伝達の異常が原因となる可能性を示唆しつつある。23年度は、前年度に作製した、強迫的繰り返し行動(毛づくろい行動の大幅増加とこれに伴う頭頚部の脱毛・損傷、運動チック)を示すグルタミン酸輸送体GLT1の時期特異的欠損マウス(GLTIcKO)の詳細な解析を行った。温度感覚試験や皮膚の病理からは、繰り返し行動が末梢性ではなく中枢性であることが示唆された。形態学的解析からは神経細胞の消失、アストロサイトの活性化、細胞死等の異常所見は認められなかった。電気生理学的・生化学的解析からは、大脳皮質-線条体間シナプスにおける基本的なグルタミン酸神経伝達の異常は認められなかったが、一方、繰り返し刺激の条件下ではグルタミン酸神経伝達の過剰な活性化が観察された。行動学的解析からは、強迫障害スペクトラムの別の中核症状である不安の亢進、自閉症スペクトラムの別の中核症状である社会性の喪失は認められなかった。GLT1 cKOの強迫的繰り返し行動はNMDA型グルタミン酸受容体の阻害剤であるアルツハイマー病治療薬メマンチンにより大幅に抑制された。以上の結果は、大脳皮質-線条体間シナプスにおけるグルタミン酸神経伝達の過剰活性化が、自閉症スペクトラム・強迫障害スペクトラムに共通する強迫的繰り返し行動の発症に重要であることを示唆している。GLT1 cKOマウスは強迫的繰り返し行動のみを示す為、その回路・分子基盤の解明や治療薬評価の有用なツールとなり、またGLT1は強迫的繰り返し行動の有望な治療標的と考えられる。
離散と連続の多変量解析の対称性構造と融合

離散多変量解析(分割表統計解析)と連続多変量解析において対称性のモデルとその分解を考え,離散と連続の多変量解析での対称性の構造の融合を考えた.(1)多元分割表解析において,種々の対称性のモデルを提案した.また,モデルからの隔たりを測る尺度を導入した.さらに,尺度の分解も考えた.(2)多変量確率密度関数に関して,対称性と点対称性の両性質をもつ密度関数の概念を考え,それに関する密度関数の分解を与えた.本年度は,具体的に得られた研究成果は主として次の点が上げられる:(1)順序カテゴリをもつ正方分割表において,対称性からの隔たりを測る新しい尺度を提案した.具体的には,隣接したいくつかのカテゴリを併合してできる任意の3x3分割表において対称性からの隔たりを測る尺度を考え,各併合分割表の部分尺度の算術平均タイプの尺度を提案した.そして実際のデータ解析へ適応し,提案尺度の有用性を示した.(2)順序カテゴリの正方分割表において,対称(S)モデルが成り立つための必要十分条件は,f-ダイバージェンスQSモデルと周辺積率一致モデルの両方が成り立つことであるという定理を与えた.また,Sモデルの適合度検定統計量の分解定理を与えた.(3)順序カテゴリー正方分割表において,対称モデルよりも制約の厳しい拡張対角指数型対称(EDES)モデルという新しいモデルを提案した.さらに,拡張準対角指数型対称(EQDES)モデルと周辺平均分散一致(MVE)モデルを提案し,EDESモデルが成り立つための必要十分条件は,EQDESモデルとMVEモデルの両方が成り立つことであるという定理を与えた.これらの研究成果は,従来の推定法,検定法,モデル選択法などに加えて,モデルの提案,モデルの分解,検定統計量の分解,尺度の提案などに基づく新しい分割表解析法を提案しており,本研究は大きな貢献をしていると言える.本研究の交付申請書に記載した研究目的は以下のように複数ある.順に自己点検による評価を行う:(1)多元分割表で種々の対称性モデル(一般的な対称性モデル)の提案と分解を与える;ということに関しては,一般的な対称性のモデルはまだ満足できるモデル提案はできていないが,研究実績の概要のところでも述べたように,具体的に種々の対称性,非対称性のモデルを提案し,そしてモデルの分解も与えることができ,ある程度の目標は達成できた.(2)多元分割表で種々の対称性モデルに関する尺度の提案と分解を与える;ということに関しては,まだ満足できる研究成果は得られていないが,現在進行中である.(3)多変量確率密度関数における種々の対称性の概念(種々の準対称や周辺対称)を与える;ということに関しては,過去に本研究代表者の研究成果があるが,更にそれらに関連する研究や発展させる研究は現在も取り組んでいる.また,ある程度研究成果は得られ,論文にまとめ,現在学術雑誌へ投稿中である.(4)離散と連続の多変量解析における融合を潜在分布が2変量対数正規分布で考える;ということに関しては,ある程度研究成果が得られ,論文にまとめ,現在学術雑誌へ投稿中である.(5)多次元離散データ収集(または連続データで離散型のデータに直す)・文献調査する;に関しては現在進行中である.(6)研究成果を論文にまとめ,学術雑誌へ投稿する;に関しては,複数の論文を投稿中である.(7)学会,シンポジウム等で研究発表する;に関しては,数多く種々の学会やシンポジウムへ研究成果を発表した.本年度は,具体的に得られた研究成果は主として次の点が上げられる:(1)順序カテゴリ正方分割表において,対称モデルよりも制約の厳しい対角指数型条件付対称(DECS)モデルと準対角指数型条件付対称(QDECS)モデルという新しいモデルを提案した.更に,対角指数対称(DES)モデルの3通りの分解定理を与えた.たとえば,DESモデルが成り立つための必要十分条件は,DECSモデルと行変数と列変数の平均一致モデルが成り立つことである,という定理を与えた.(2)順序カテゴリ多元分割表において,順序準点対称モデルを提案し,点対称モデルが成り立つための必要十分条件は,順序準点対称モデルと平均点対称モデルの両方が成り立つことであるという,定理を与えた.(3)順序カテゴリ正方分割表において,離散的な2変量正規分布型対称モデルを提案した.提案したモデルは,潜在的連続分布として2変量正規分布が仮定できるとき,良く適合するモデルである.シミュレーションで提案モデルの有用性を示した.(4)正方分割表において,部分対称モデルを提案し,さらにそのモデルからの隔たりを測る尺度を提案した.(5)多元分割表において,2次周辺対称性からの隔たりを測る尺度を提案した.この尺度は,T元rカテゴリ分割表において,任意のrxr表に於いてエントロピーを用いた部分尺度を考え,(T-1)個のその重み付き平均により構成されている.これらの研究成果は,従来の推定法,検定法,モデルの選択法などに加えて,モデルの提案,モデルの分解,尺度の提案などに基づく新しい分割表解析法を提案しており,本研究は大きな貢献をしていると言える.本研究の交付申請書に記した研究目的は以下のように複数ある.順に自己点検による評価を行う:

(1)多元分割表で種々の対称性モデル(一般的な対称性モデル)の提案と分解を与える;ということに関しては,一般的な対称性のモデルはまだ十分なモデルは提案できていないが,研究実績の概要のところで述べたように,具体的に対角指数型条件付対称モデル,準対角指数型条件付対称モデル,順序準点対称モデル,離散的2変量正規分布型対称モデルなどを提案し,そしてモデルの分解も与えることができ,ある程度の目標は達成できた.(2)多元分割表で種々の対称性のモデルに関する尺度の提案と分解を与える;ということに関しては,研究実績の概要のところで述べたように,多元分割表において,2次周辺対称性からの隔たりを測る尺度を提案した.さらに別な尺度に関しては現在研究が進行中である.(3)多変量確率密度関数における種々の対称性の概念(種々の準対称や周辺対称)を与える;ということに関しては,過去に本研究代表者の研究成果があるが,更にそれらに関連する研究や発展させる研究は現在も取り組んでおり,そして論文が1編投稿中である.(4)離散と連続の多変量解析における融合を潜在分布が2変量対数正規分布で考える;ということに関しては,それに関する論文を作成し,現在学術雑誌へ投稿中である.さらに,連続な潜在分布が2変量t分布のときに良くあてはまる離散型の対称モデルを提案し,それを論文にまとめ,現在投稿中である.(5)多次元離散データを収集(または連続データで離散型のデータに直す)・文献調査する;に関しては現在進行中である.(6)研究成果を論文にまとめ,学術雑誌へ投稿する;に関しては,複数の論文を投稿中である.(7)学会,シンポジウム等で研究発表する;に関しては,多くの学会やシンポジウムで研究成果を発表した.本年度は,具体的に得られた研究成果は主として次の点が上げられる:(1)順序カテゴリ正方分割表において,モデルの適合度を評価する際に,適合度検定統計量(たとえば,尤度比カイ2乗統計量)が用いられる.複数の分割表データに対して対称モデルの当てはまりが悪いとき,非対称性の程度を比較することに関心がある.適合度検定統計量を用いて,複数の分割表データに対して非対称性の程度を比較する際,非対称性の方向性を区別できない,という問題点がある.Tomizawa et al.(2001)は対称性からの隔たりを測る尺度を提案したが,非対称性の方向性の区別はできない.一方,Tahata et al.(2010)は対称性からの隔たりを測る別な尺度を提案した.それは非対称性からの区別はできるが,尺度最小値は対称構造と同値とならない.そこで,本研究では,両方の尺度を同時に考えたベクトル型尺度を提案した.この尺度により,両者の問題点が解決された.(2)正方分割表において,点対称性の拡張モデルを提案し,点対称モデルの分解定理を導出した.(3)正方分割表において,周辺オッズを用いての周辺同等性からの隔たりを測る尺度の改良版を提案した.(4)正方分割表において,二重対称モデルの拡張モデルを提案し,二重対称モデルの分解定理を導出した.これらの研究成果は,従来の推定法,検定法,モデルの選択法などに加えて,モデルの提案,モデルの分解,尺度の提案などに基づく新しい分割表解析法を提案しており,本研究は大きな貢献をしていると言える.離散多変量解析(分割表統計解析)と連続多変量解析において対称性のモデルとその分解を考え,離散と連続の多変量解析での対称性の構造の融合を考えた.(1)多元分割表解析において,種々の対称性のモデルを提案した.また,モデルからの隔たりを測る尺度を導入した.さらに,尺度の分解も考えた.
GSK-3およびオートファジー活性に着眼した新規心臓リモデリング抑制薬の開発

平成30年度はジメチルセレコキシブ(DMC)の心筋リモデリングに対する効果をin vivo実験にて検証した。C57BL/6マウスに対し、osmotic-pumpを用いて非選択的β受容体刺激薬であるイソプロテレノール(ISO)を持続皮下投与した(20mg/kg/day, 2週間)。治療薬であるDMCは同期間エサに混合(1000ppm)して経口摂取させた。2週間後に安楽死させ、心臓を摘出し評価を行った。Control群、ISO群、ISO+DMC群で比較を行った。ISO投与により、心拍数と収縮期血圧が有意に上昇した。ISO心重量が有意に増大したが、DMCはこれを抑制する傾向を示した。組織評価にて、ISOは心筋細胞断面積を有意に増大させたが、DMCはこれを有意に抑制した。また、DMCはISOにより誘導された左室線維化を有意に抑制した。これらにより、ISO投与により誘導された心臓リモデリング(心筋肥大、心臓線維化)をDMCが抑制することが示唆された。続いて上記の機序について検討を行った。Western blottingによりISO投与によりAktおよびGSK-3βのリン酸化の割合が有意に増加したが、DMCはこれを有意に抑制させた。GSK-3は心筋肥大を抑制する因子と言われている。従ってDMCはAkt阻害によりGSK-3を活性化することで心筋肥大を抑制していることが示唆された。オートファジーとの関与については、重要なマーカーであるLC-3を中心に検証を行っているところである。ISO投与により、心臓リモデリング(心筋細胞肥大、心臓線維化)が誘導され、DMCがそれを抑制することが確認されたことから、仮説通りの結果を得ることができた。さらにDMCによるAkt阻害とそれに続くGSK-3β活性化が確認でき、DMCの効果における重要な機序であると考えられた。これらの効果とオートファジーとの関与を検証しているが、重要なマーカーであるLC-3の検出がwestern blottingにて十分にできていない状況である。LC-3は低分子タンパクであるため、条件が適切に設定できていない可能性が考えられる。Western blottingによりLC-3の変化を適切に捉えられる様に、ゲル組成やバッファー、転写時間、メンブレンの条件を再検討する。また、western blottingのみではなく、免疫蛍光染色を用いて変化を捉えることができないか検討する。さらにその他のマーカーであるBeclin-1、p62、mTOR等についても検証を行っていく。当初、オートファジーのマーカーであるLC-3、Beclin-1、p62、mTOR等の抗体を購入し実験を行う予定であったが、最も重要なLC-3の検出に時間を要しているため、それ以外のマーカータンパクの検証に移行できておらず、試薬購入も延期している状況である。今後はLC-3の蛍光染色を行うための試薬、LC-3以外のオートファジーマーカー検出に必要な抗体等の試薬購入に充てたいと考えている。
赤外円偏光二色性による水素結合の不斉構造の研究

1.赤外円偏光二色性測定装置の性能改善これまで、光色として使用していたハロゲンランプを輝度の高いキセノンランプに交換することにより、S/N比を数倍高くすることができた。又、パーソナルコンピュータ(PCー286)をRSー232Cインターフェースを介して接続し、測定の自動化と積算による測定の効率化をデータ処理が容易に行えるようになった。2.分子内水素結合系におけるIRCDの研究光学活性なβージオール(HOーCHR_1ーCHR_2ーOH)およびβーアミノアルコール(NH_2ーCHR_1ーCHR_2ーOH)のOーHおよびNーH伸縮振動領域の赤外円偏光二色性(IRCD)の測定・解析を行い、OーH伸縮振動吸収帯のコットン効果と、分子内水素結合の不斉構造の関係を明らかにした。すなわち、HOー〓〓〓ーOHおよびNH_2ーC〓CーOHのCーC結合のまわりでG^+コンホメーションをもつ分子内水素結合におけるOーH伸縮振動のIRCDバンドは、負のコットン効果を示すことを明らかにした。3.IRCDの理論研究IRCDのコットン効果とコンホメーションの関係を明らかにするために、上述のβージオールおよびβーアシノアルコールの分子内水素結合系について、ab initio法による分子振動の旋光強度の理論計算を行っている。
遺伝子プロモーターおよび遺伝子組換えヘルペスウイルスによる特異的遺伝子治療の開発

単純ヘルペスウイルス(Herpes Simplex Virus,HSV)を利用した悪性腫瘍に対する遺伝子治療の研究を行った。HSVの細胞障害活性は両刃の刃であるが、その細胞障害活性を何らかの方法で腫瘍細胞のみに向けられるようにコントロールできれば、replication competentなmutant HSVは理想的な遺伝子治療用ウイルスと考えられる。複製極初期に発現されるICP4はHSVの自己複製に重要であり、ICP4欠損HSVはこれ自体では遺伝子複製不能であり増殖できない。よって、ICP4遺伝子を腫瘍特異的な遺伝子プロモーターの下流に接続し、ICP4欠損変異型HSVに導入できれば、そのプロモーターが働く腫瘍細胞でのみウイルス遺伝子が複製され、その細胞を特異的に破壊することが期待される。われわれはhepatoma-specificなalbumin enhancer/promoter (e/p)を利用し、ICP4欠損変異型HSVにalbumin e/pによりICP4遺伝子をdriveする組換えウイルスG92Aを作成し、その分子ウイルス学的特性の解析を行った。G92AはSouthern Blot Analysisにて、狙い通りの遺伝子構築を確認しえた。また、G92Aはalbumin産生肝細胞癌に対しては、非albumin産生腫瘍細胞株に比べ、1000倍以上のプラーク形成能を認めた。また、in vitroにおいて、G92Aは肝細胞癌株においてはreplicationを示したが、非肝細胞癌においてはほとんどreplicationを示さなかった。in vivoにおいてもG92Aはヌードマウスに作成した肝細胞癌株Hep3B腫瘍塊中では活発にreplicationを示したが、前立腺癌株PC3、子宮頚部癌株HeLa中ではreplicationを示さなかった。一方対照として用いた、組織特異性を示さない組換えHSV(hrR3)は全ての腫瘍塊中でreplicationを示した。また、ヌードマウスに作成したHep3B腫瘍塊にG92Aを投与すると、著名な腫瘍退縮効果を認めた。また、マウス肝内に直接野性株HSVを投与すると、そのマウスは死亡したが、G92Aをその100倍量投与しても、何ら毒性を発揮しなかった。単純ヘルペスウイルス(HSV)は感染した細胞で遺伝子が複製され、その細胞を死に至らしめるが、その複製には各種ウイルス感染蛋白質(ICP)が関与している。ことにウイルスDNAの複製極初期に発現されるICP4は重要であり、ICP4欠損HSVはこれ自体では遺伝子複製不能であり増殖できない。よって、ICP4遺伝子を腫瘍特異的な遺伝子プロモーターの下流に接続し、ICP4欠損変異型HSVに導入できれば、そのプロモーターが働く腫瘍細胞でのみウイルス遺伝子が複製され、その細胞を破壊することが期待される。われわれは肝細胞で特異的に発現するalbuminに注目し、そのenhancer/promoterでICP4遺伝子をdriveさせる組換えHSVであるG92Aを作成した。G92Aはalubumin enahncer/promoter-ICP4 unitがウイルス固有のtymidine kinase (tk)geneのcodingregionに組み込まれており、tk活性(-)であり、従って肝細胞癌特異的なHSVであることが予想された。この組換えHSVを用いて、われわれは以下の解析を行った。先ず、Southern blot analysisにてG92Aの遺伝子構築が予想したものと同一であることを確認した。

ついで、種々の細胞にG92Aを感染し、ICP4蛋白が発現するか検討したところ、albuminを産生する肝細胞癌でのみ効率よく発現していた。またG92Aを種々の細胞に感染させ、その細胞より、ウイルスを回収し、力価を測定したところ、肝細胞癌ではそれ以外の細胞に比べ、100倍程度高率にウイルスを産生していた。最後に種々の細胞にG92Aを感染させ、そのプラークの個数を数えると、肝細胞癌ではそれ以外の細胞に比して、1000倍程度多くのプラークを産生した。以上の結果より、G92Aは肝細胞癌を特異的に破壊しつつ、自己を複製する組換えHSVであると考えられた。以上の結果は現在Proc. Natl. Acad. Sci. USAおよびCancer genetherapyへ投稿中である。以上の結果を踏まえて、次年度はin vivoの感染実験を行いたい。単純ヘルペスウイルス(Herpes Simplex Virus,HSV)を利用した悪性脳腫瘍に対する遺伝子治療の研究を行った。HSVの細胞障害活性は両刃の刃であるが、その細胞障害活性を何らかの方法で腫瘍細胞のみに向けられるようにコントロールできれば、replication competentなmutant HSVは理想的な遺伝子治療用ウイルスと考えられる。複製極初期に発現されるICP4はHSVの自己複製に重要であり、ICP4欠損HSVはこれ自体では遺伝子複製不能であり増殖できない。よって、ICP4遺伝子を腫瘍特異的な遺伝子プロモーターの下流に接続し、ICP4欠損変異型HSVに導入できれば、そのプロモーターが働く腫瘍細胞でのみウイルス遺伝子が複製され、その細胞を特異的に破壊することが期待される。われわれはhepatoma-specificなalbumin enhancer/promoter(e/p)を利用し、ICP4欠損変異型HSVにalbumin e/pによりICP4遺伝子をdriveする組換えウイルスG92Aを作成し、その分子ウイルス学的特性の解析を行った。G92AはSouthern Blot Analysisにて、狙い通りの遺伝子構築を確認しえた。また、G92Aはalbumin産生肝細胞癌に対しては、非albumin産生腫瘍細胞株に比べ、1000倍以上のプラーク形成能を認めた。また、in vitroにおいて、G92Aは肝細胞癌株においてはreplicationを示したが、非肝細胞癌においてはほとんどreplicationを示さなかった。in vivoにおいてもG92Aはヌードマウスに作成した肝細胞癌株Hep3B腫瘍塊中では活発にreplicationを示したが、前立腺癌株PC3、子宮頚部癌株HeLa中ではreplicationを示さなかった。一方対照として用いた。組織特異性を示さない組換えHSV(hrR3)は全ての腫瘍塊中でreplicationを示した。また、ヌードマウスに作成したHep3B腫瘍
炎症性細胞応答のイオン制御機構におけるＮａ＋／Ｃａ２＋交換体の役割

免疫反応を担うマクロファージは、様々な生活習慣病の病態にも関与することが明らかになり、新しい創薬標的として注目されている。本研究では、マクロファージ活性化のCa2+シグナル機序に注目し、その分子機序におけるNa+/Ca2+交換輸送体(NCX1)の生理的役割について調べるとともに、最近マクロファージ活性化との関わりが明らかにされたCa2+透過型TRPチャネル(TRPM2、TRPV2)との機能連関についても検討することを目的とした。現在までに、マクロファージにNCX1が高発現していることをreal-time PCRおよび特異的NCX1抗体による免疫染色により確認した。また、骨髄由来マクロファージ(M-CSF処置による分化誘導)を用いた蛍光ビーズ貪食活性の測定方法を確立し、NCX1の機能抑制(特異的NCX阻害薬処置やNCX遺伝子欠損)が活性化マクロファージの貪食能に影響を及ぼすことを実験的に観察した。さらに、同条件下で、マクロファージ活性化における細胞内Ca2+濃度変化とNCX1機能の関係を詳細に解析する予定であったが、平成25年10月に研究機関を異動することになり(福岡大学医学部より東京理科大学薬学部へ異動)、研究テーマの変更により、本研究を中断することとなった。
菊池容斎についての基礎的研究

*作品調査米国・ポストン美術館にある菊池容斎の作品6点、および弟子の渡辺省亭の作品4点を調査した。うち菊池容斎の《地蔵・閻魔・脱衣婆図》《九相図》はそれぞれ弘化2年(1845)、嘉永元年(1848)の年記をもち、幕末期の容斎の画風を知る上で重要な作例。また明治4年(1871)の年記を有する渡辺省亭の《弁慶牛若》は現在確認される限りで省亭の最初期の画であり、のちに独自の花鳥画を開拓する省亭だが、この作品には歴史画家である師の作風が未だ色濃くみとめられる。国内では個人が所蔵する菊池容斎の人物写生図を調査。前年度に調査を行った東京国立博物館所蔵の資料同様、容斎の描く歴史人物画が人体モデルの写生に基づいていることを裏付けるものであった。*『前賢故実』の分析菊池容斎が日本歴史上の賢人を絵画化した人物画伝『前賢故実』の人物図は、上記のように多く人体写生に基づいている。しかしながら中には過去の肖像画をほぼ踏襲したものもあり、その摘出を行いつつ『集古十種』等にみられる当時の古器旧物研究との関わりを考察した。*データ化東京国立文化財研究所が所蔵する筆記録「災後要録」抜記のデータ化を行った。これは戦前に菊池容斎作品を多く有していた東京・神田の所蔵家の手記を抜粋したものであり、東京都下にその作品の所在が集中していたがゆえに震災・戦争によって大半が失われてしまった今日、それらをうかがう資料として貴重である。*作品調査日本国内にある菊池容斎の作品52点を調査した。その成果は展覧会「菊池容斎と明治の美術」(平成11年10月24日12月5日於練馬区立美術館)に反映させ、図録に主要作品の解説、落款・印章一覧等を掲載した。*作家研究上記展覧会図録のテキストとして、「容斎断章」と題した菊池容斎のモノグラフを試みた。内容は以下の通り。I、「菊池容斎之碑」を読む容斎伝の基礎資料ともいうべき墓碑(「菊池容斎之碑」)の全文註釈を行う。II、作品にみる容斎上記の作品調査に基づき、容斎の重層的な画風を分析する。III、容斎をめぐるネットワーク容斎の交遊関係から、その画業と水戸学や医学との関わりを考察する。IV、菊池容斎、その後容斎が没後どのように評価され、位置づけられたのかを諸文献を通して追う。*東京国立博物館所蔵資料の調査東京国立博物館には菊池容斎に関する資料109点が一括所蔵されており、その調査を行った。容斎が所持していたと思われる書物やその著書『前賢故実』の画稿等、容斎を研究する上で重要な資料が含まれており、なかでも『前賢故実』画稿は容斎が人体モデルを使って人物画を描いていたことをあらためて実証するものとなった。*容斎関係文献の収集菊池容斎に関する明治期以降の文献を収集、文献目録を作成し上記展覧会図録に掲載した。またこれに基づいて、上記の通り容斎に対する没後の評価の変遷をテキストの中で祖述した。