hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
白血病等に伴う続発性肺胞蛋白症の発症に新規転写制御因子MEFが関与する

MEFは上皮細胞において感染防御因子(lysozyme,defensin-1,defensin-2)の発現を増加させる一方、炎症性サイトカイン(GM-CSF)の産生は抑制することがわかった。その作用機序は、lysozymeについてはLKLFというKLF familyに属するzincfinger転写因子との相互作用が関与し、GM-CSFについては、ETSファミリーのETS-2がGM-CSF promoterを活性化(新規知見)するのに対し、MEFがDNA上でETS-2に対して拮抗作用を示すことを明らかにした。また、MEF高発現株をヌードマウスに移入した研究によりMEFがin vivoにおいて強力な抗癌効果を有することを示した。この作用機序としては、MEFがBcl-Xのプロモーターを強力に活性化し、アポトーシスを誘導し癌細胞を死滅させるとともに、MMP-9の発現を抑制し、angiogenesisを抑制することを明らかにした。さらに、同じETS転写制御因子ファミリーであるESE-1が線維芽細胞を上皮細胞に分化転換させる可能性も見いだした。この知見は線維化組織を正常化するための遺伝子として注目に値する。肺胞蛋白症との関与を調べる過程で癌の抑制遺伝子として機能するMEFという転写因子の全貌が明らかになってきた。本研究では,MEFの過剰発現した上皮細胞では,漿液細胞様の上皮細胞へと分化が誘導されるのではないかという仮設を立て,それを立証するために,MEFを上皮細胞に安定的に高発現させた細胞株を作成した.MEF高発現株においては,漿液細胞様の形態変化だけでなく,漿液細胞のマーカー遺伝子であるlysozymeの発現が増加していることがわかった.また,この細胞において,炎症時には増加するというGM-CSFの発現は逆に減少することを明らかにした.これらの知見は,上皮細胞が正常化するための細胞内シグナルとしてMEFが重要な役割を果たしている可能性を示唆した.さらに,上皮細胞におけるGM-CSFの発現が気道炎症病態と密接に関係するという報告に基づき.GM-CSFの発現を高めるETS転写因子ファミリーについてスクリーニングを行った.その結果,血球系細胞だけでなく上皮細胞にも発現している転写因子ETS2がGM-CSFの発現を著明に上昇させることを明らかにした.本研究において,以下の二つの新しい事実を明らかにすることができた。(1)新規転写因子MEFはサイトカインGM-CSFを抑制する作用を持つ。(2) ets-2はGM-CSFと結合し、更にはGM-CSFの転写を強力に活性化する。
劇場としての利用にみる寺社や史跡等の歴史的空間の特性

本研究の目的は、文化財の活用という観点から、寺社や史跡等で実施されている演劇やコンサート等の催事について、現況の把握と空間特性の分析により、これらの催事の意義を考察することである。昨年度は、歴史的空間で実施される催事について、日本全国での事例を広く情報収集した。対象は、寺社、史跡、建造物、名勝である。その結果、種類別、空間構成別、公演者や主催者別にそれぞれ傾向が認められ、いくつかのグループに分けて分析することが有効であることがわかった。本年度は、それぞれのグループから代表的な事例を選び調査し、文化財の活用としての意義や劇場としての空間の特性を考察した。調査対象は、史跡で実施する市民による野外劇の事例として函館市五稜郭、史跡で実施する伝統芸能の事例として大阪城や姫路城の薪能、寺社で実施する大規模なコンサートの事例として京都と奈良の寺院、文化財指定された伝統的芝居小屋の現代的な活用の事例として山鹿市八千代座などである。これら催事は、その場所の歴史や文化財としての価値の理解に役立っているものと考えられ、史跡の活用や地域の活性化にも結び付けられている。実際に、歴史に関わる演目や伝統芸能、伝統楽器などの催事をおこなっている事例が多い。一方、主催する側からは、歴史的な雰囲気や文化的なイメージと並んで、地形や空間構成に着目しその場所を開催地として選んでいる傾向があることがわかった。例えば、五稜郭跡の野外劇では濠が舞台の一部に効果的に用いられ、大宰府跡や平城宮跡の野外コンサートなどでは囲繞感や正面性が意識されている。また、遺跡を背景として活かす形が、大坂城跡や姫路城跡での薪能などにみられた。本研究の目的は、社寺や史跡等における催事の現況の把握、劇場として使う場合の社寺や史跡等の空間的な特性の明確化、歴史的空間の価値を見直すことによる現代的活用方法の再考を通じて、今後もますます増加していくと思われる史跡等での催事計画に役立つ知見を得ることである。今年度は、歴史的空間で実施される催事について、日本全国での事例の情報収集を現地調査、関連情報誌・文献、新聞、インターネットなどの検索により実施した。対象は、寺社、史跡、建造物、名勝とした。調査項目は、主催者、目的、種類、演目、舞台形式、観客数、控室、運営スペース、全体的な空間構成、設備、人的体制、運営費などである。その結果、社寺史跡別、空間構成別、公演者や主催者別にそれぞれ傾向が認められ、グループごとに分析することが有効であることが分かった。そしてそれぞれのグループから代表的な事例を選びさらに詳細に調査しそれぞれを比較しながら、劇場としての空間の特性を考察し、それぞれに適した催事内容や運営のための具体的な方法を検討することが必要であることが分かった。その際、鑑賞者の意識にも着目し、また、文化財保護の面からどのようなことが問題となるかについて検討することも重要である。調査に適していると考えられるのは、史跡で実施する野外劇の事例として函館市五稜郭、寺社で実施する大規模なコンサートの事例として京都と奈良の寺院、文化財指定された伝統的芝居小屋の現代的な活用の事例として山鹿市八千代座などがある。他方で、寺社における古来からの劇場としての空間利用の歴史と意味、また史跡の活用として催事が実施されるようになった経緯について基礎的な情報を収集した。
ゲノム情報に基づくビフィズス菌の革新的遺伝子操作技術の開発

ビフィズス菌は、ヒトの健康にとって重要な役割をはたしていると考えられているが、そのエビデンスは必ずしも多くない。これは、本菌の遺伝子操作技術が開発されていない事に起因する。本研究では、ビフィズスのゲノム解析の結果に基づき新規形質転換系、新規選択マーカー、及び遺伝子破壊系の開発を行った。ビフィズス菌は、便秘の緩和、悪玉菌の抑制、免疫腑活、アレルギー症状の緩和など様々な健康への効果が注目されている。しかし有効な遺伝子操作系が開発されていなかったことから、あまり生理的、生化学的な研究や、遺伝学的な研究が行われてきていない。我々がこれまでに決定した成人腸管で最も優勢なB.adolescentisの全ゲノム配列に基づき、ビフィズス菌属細菌の1)形質転換効率を画期的に上げる方法の開発、2)最小培地の開発、3)安定な選択マーカの確立、4)相同組み換えによる遺伝子破壊法の開発、4)酸素耐性の付与といった各種の遺伝子操作の方法を開発し、本菌属における遺伝子操作を、大腸菌と同程度に簡便化することを目的とした。このうち本年度は、1),2)を達成した。1)については、対象とするビフィズス菌の制限修飾系に注目し、ゲノム情報に基づき修飾酵素遺伝子を大腸菌で発現させ、これをホストとしてプラスミドを調整したところ、通常の方法に比べ、100,000倍高い形質転換効率を得ることが出来た。この方法を、plasmid Artificial Modificationと名付けた。ゲノム情報が得られている全ての微生物において一般的に応用できる。2)については、Bifidobacterium adolescentisについて、平板培地で無機塩とビタミンのみでできた最小培地の作成に成功した。ビフィズス菌は、下痢防止・便秘改善といった整腸作用、免疫活性化作用、皮膚アレルギー低減などの効果を持つことが報告されている。ヒトの健康維持に大きく関わっているビフィズス菌は近年たいへん注目されている。我々は、これまで成人大腸内の主要菌株であるB.adolescentisに注目し、その基準株であるATCC15703株のゲノム解析を行った。さらにゲノム情報に基づきPAM法と命名した新規遺伝子導入法を開発し、報告してきた。今回は、新たな遺伝子層亜技術を創世するための基盤となる、シャトルベクターの温度感受性変異株の取得をおこなった。これにより、従来困難であった部位特異的変異の導入が可能になった。本年度は、4)相同組み換えによる遺伝子破壊法の開発、に取り組む。これまでにおこなった2)最小培地の開発、3)安定な選択マーカの確立の研究の結果から温度感受性シャトルベクターの構築に成功した。これを用いて、2回相同組み替えによる遺伝子破壊を繰り返し複数の遺伝子を対象にして行う方法論を確立することを目的とした。シャトルベクターpKKT427をもとに、そのビフィズス菌アンプリコン部分を、Error Prone PCR法で増幅する事により、rep遺伝子上に変異を導入した。その結果、30°Cでは正常に複製できるが、42°Cでは複製できない変異型プラスミドpKO371を取得した。これを用いて二回組換え型の相同組み換えによる遺伝子破壊法を構築した。選択マーカとしては、ピリミジン合成経路の遺伝子、pyrE、遺伝子の破壊株を構築した。本遺伝子は、Uracil等のピリミジン成分を含まない最小培地では必須遺伝子であり、正の選択マーカとして機能する一方、ピリミジンの前駆体であるオロチン酸のアナログ化合物である5-フルオロオロチン酸を培地に加えた場合、これを毒性の5-フルオロウラシルに変換するため、負の選択マーカとしてはたらくため、pyrEの形質転換体のみを選択することができるため、ポジ/ネガ双方向の選択マーカとして活用できる事が期待される。ゲノム配列に基づき、pyrE遺伝子の上流と下流部分をPCRで増幅したノックアウトカセットを作成し、Bifidobacterium longum 105-A株に導入し、5-FOA、ウラシルを加えた培地で選択したところ、予想どおりのpyrE欠失変異体をえる事が出来た。これを用いて、確かにポジ/ネガ双方向の選択が出来る事を確認した。
卵胞顆粒膜細胞生死決定における卵胞刺激ホルモンのシグナル伝達スイッチングの意義

排卵数の決定機構は生殖過程の中でも極めて重要であるにもかかわらず、その仕組みの詳細は未だ不明である。その鍵を握るのは、卵胞顆粒膜細胞の生死の制御と考えられる。当研究室では、顆粒膜細胞初代培養系を用い、卵胞の発育・成熟を司る卵胞刺激ホルモン(FSH)による、細胞内因子・MAPキナーゼの一つERK(Extracellular-regulated kinase)の活性化が、卵胞発育に伴い、cAMP依存型から非依存型ヘスイッチすることを見出した。本研究では、そのスイッチングの仕組みと意義、さらにESHによるMAPキナーゼ活性化経路に関して以下の知見を得た。1.卵胞発育に伴い血清成分が卵胞内に流入し、血清に多く含まれるリゾホスファチジン酸(LPA)が、FSHのシグナリングスイッチングを誘導することが分かった。2.未成熟卵胞では、FSHによるERK活性化はcAMP依存的であるが、未成熟、成熟卵胞共に過去の文献と異なり、FSHによるERK活性化にはホスフォリパーゼC(PLC)の活性化が不可欠であることが明らかとなった。3.分化した顆粒膜細胞ではcAMPは生存には必要なく、むしろ細胞死を誘導する方向に作用した。4.FSHによる顆粒膜細胞の生存には、MAPキナーゼのうち、ERKとp38の両方のMAPキナーゼ活性化が不可欠であった。また、興味深いことに、顆粒膜細胞の細胞死にもp38の活性化が関与していたが、生存にはp38aが、細胞死にはp38bが働くことが明らかとなった。以上より、卵胞の成熟には、FSHのcAMPを介した作用が必要であるが、成熟した卵胞ではFSHによるcAMPの作用はむしろ顆粒膜細胞の生存には好ましくなく、これに対抗して、cAMP非依存的なERK活性化経路を獲得すると考えられる。研究代表者は、細胞の生存・増殖・分化に深く関わる細胞内因子・MAPキナーゼの一つERK(Extracellular-regulated kinase)のFSHによる活性化が、顆粒膜細胞(未分化状態で採取)を血清存在下で培養することによりcAMP依存型からホスフォリパーゼC依存型にスイッチし、かつこのスイッチングが分化状態で採取した顆粒膜細胞でも起きていることを見出した。そこで、「卵胞成熟に伴う卵胞への血清成分の流入がFSHのシグナル伝達のスイッチングを誘導し、これが顆粒膜細胞の生存につながり、卵胞が閉鎖を逃れ排卵に至る」との仮説を持って研究を進めている。現在までに、以下のことが明らかとなった。1.情報伝達のスイッチングを起こす血清成分の、少なくとも一つはリゾフォスファチジン酸である。2.FSHの作用は膜7回貫通型の受容体に結合後、Gsタンパク質を介してアデニレートシクラーゼが活性化され、その結果cAMPが産生されて発揮されるとされてきた。しかし、cAMP依存型の未分化顆粒膜細胞においても、ERK活性化を指標にすると、Gqタンパク質を介入した経路も同時に不可欠であることが分かった。これは、FSHのシグナル伝達そのものを再考を必要とする極めて重要な知見である。3.ERK活性抑制と同様に、他のMAPキナーゼであるp38の活性抑制も、FSH依存的顆粒膜細胞の生存を阻害し、アポトーシスに陥らせる。従って、卵胞閉鎖を考える際、FSH依存的p38の活性化も重要な要素となることが明らかとなった。

当研究室では、顆粒膜細胞初代培養系を用い、卵胞の発育・成熟を司る卵胞刺激ホルモン(FSH)による、細胞内因子・MAPキナーゼの一つERK(Extracellular-regulated kinase)の活性化が、卵胞発育に伴い、cAMP依存型から非依存型ヘスイッチすることを見出した。本研究では、そのスイッチングの仕組みと意義、さらにFSHによるMAPキナーゼ活性化経路に関して以下の知見を得た。1.卵胞発育に伴い血清成分が卵胞内に流入し、血清に多く含まれるリゾホスファチジン酸(LPA)が、FSHのシグナリングスイッチングを誘導することが分かった。2.未成熟卵胞では、FSHによるERK活性化はcAMP依存的であるが、未成熟、成熟卵胞共に過去の文献と異なり、FSHによるERK活性化にはホスフォリパーゼC(PLC)の活性化が不可欠であることが明らかとなった。3.分化した顆粒膜細胞ではcAMPは生存には必要なく、むしろ細胞死を誘導する方向に作用した。4.FSHによる顆粒膜細胞の生存には、MAPキナーゼのうち、ERKとp38の両方のMAPキナーゼ活性化が不可欠であった。また、興味深いことに、顆粒膜細胞の細胞死にもp38の活性化が関与していたが、生存にはp38aが、細胞死にはp38bが働くことが明らかとなった。以上より、卵胞の成熟には、FSHのcAMPを介した作用が必要であるが、成熟した卵胞ではFSHによるcAMPの作用はむしろ顆粒膜細胞の生存には好ましくなく、これに対抗して、cAMP非依存的なERK活性化経路を獲得すると考えられる。
グリオキシゾームへのタンパク質輸送機構に関連した突然変異株の単離

高等植物の脂肪性種子では、グリオキシル酸サイクルと呼ばれる発芽の初期段階に特有な代謝系が存在する。発芽過程で種子貯蔵脂肪の分解により生じたアセチルCoAは、グリオキシル酸サイクルの働きによりコハク酸に変わった後、ミトコンドリアと細胞質を経てスクロースへ変換される。このような脂肪からの糖新生は、光合成能を獲得する以前の植物の主要なエネルギー源として使われる。従って、遺伝的変異によってグリオキシル酸サイクルが作用しない突然変異体は、貯蔵脂肪から糖新生できないために発芽しないが、コハク酸を与えれば正常に発芽すると考えられる。そこで、発芽過程でコハク酸要求性を示す変異体の選抜を行った。一回目の選抜は、以下のように行った。まずEMS処理により突然変異を誘導したアラビドプシス種子を水の中で5日間発芽させる。この中から未発芽の種子のみを選び出して10mMコハク酸を含む寒天に移し、発芽するものを選抜した。この方法ではかなり多数の個体が選抜された。しかしながら、得られたM2世代の個体を解析したところ、これらがコハク酸要求性株ではなく、水中で(おそらく嫌気的には)発芽しない突然変異体であることが判明し、このスクリーニング法が不適当であると判断した。そこで、方法を改め再度スクリーニングを行った。2回目の選抜では、寒天に濾紙をひいた上に種子をまき5日間発芽させた後、濾紙を乾燥させることによって発芽している個体を枯らした。ついで、この濾紙を10mMコハク酸を含む寒天上にのせて、発芽するものを選抜した。この方法では、約10000個をスクリーニングした結果、38個の陽性個体を得た。これらのうちで、6個体は本葉のセネッセンスが急速に進むという特異な表現系を示した。現在、M2種子を採取しているところである。
ジアリールエテンをスイッチングユニットとして用いた光応答性磁性体の構築

ニトロニルニトロキシドを2個、ジベンゾチエニルエテンにp-フェニレンカップラーを用いて連結させたビラジカル1aを合成した。π共役系の長さを調節することにより、スイッチングをESRを用いて検出することに成功した。開環体1aは313nmの紫外光により閉環体1bに、1bは578nmの可視光で1aにそれぞれ変換され、可逆なフォトクロミズムを示した。分取した閉環体との比較により、光定常状態での変換率は99%であることが分かった。フォトクロミズムに伴うESRスペクトル変化を追跡した。開環体1aは、複雑な15本線を示し、交換相互作用が超微細結合定数と同程度であることを支持している。366nmの紫外光を照射すると直ちに9本線のスペクトルが現れ、光定常状態のスペクトルは9本線となった。閉環体1bにおいて、交換相互作用の値は超微細結合定数よりも十分大きいことを示している。開環体由来のシグナルは光定常状態では観測されず変換率が非常に高いことを反映している。光定常状態に達した試料に対して、520nm以上の可視光を照射すると元の開環体のスペクトルに戻った。スペクトルのシミュレーションの検討により、開環体と閉環体で2桁程度の交換相互作用の変化があることが分かった。ニトロニルニトロキシドを2個,ジベンゾチエニルエテンに配したジラジカル1aを合成した。酢酸エチル溶液中で開環体1aは紫外光により閉環体1bに,1bは可視光により1aにそれぞれ変換率100%で可逆に相互変換された。可視域に吸収を持つニトロニルニトロキシドが存在してもジアリールエテンの閉,開環反応は進行することが分かった。閉環反応,開環反応の量子収率はラジカル置換基の無い場合と比べてそれぞれ1/8,1/280に減少した。閉環体1bではキノイド構造との共鳴安定化があるために開環反応の量子収率が小さくなったと考えられる。1aは濃青色結晶,1bは黒色結晶として得られた。両異性体の構造と磁性をX線結晶構造解析,磁化率測定,ESR測定によりキャラクタリゼーションした。室温,ベンゼン溶液中のESRスペクトルは両異性体とも9本線であった。開環体1aではベンゾチエニル環とシクロペンテン環が86.1°と直交しており,分子内磁気的相互作用は2J/K_B=-2.2Kとほとんどなかったのに対して閉環体1bでは分子は平面であり,分子内磁気的相互作用は2J/K_B=-11.6Kと大きくなった。高分子フィルム中での磁気測定では閉環体の分子内磁気的相互作用は2J/K_B=-12.5Kとなり,相互作用の増加が分子内由来であることが確認できた。開環体1aでは,ねじれ構造,芳香族性,disjoint型のトポロジーを持つことから相互作用がOFF状態を取る条件を満たしているのに対して.閉環体1bでは,平面構造、非芳香族性,non-disjoint型のトポロジーを持つことから相互作用がON状態を取る条件を満たしている。磁気的相互作用の変化はこれらの変化を反映したものであると考えられる。
19世紀フランスにおける社会変動と労働政策の展開

本研究は、当初、19世紀中葉フランスにおける社会変動の実態・特徴を把握すべく、「労働政策」に着目することを予定していた。しかし研究の開始早々当時の「社会変動」をいかに理解するかに関して混乱が生じた。そのため、この問題について最も有効な分析視角を提供していると思われる「歴史社会学」の研究成果に学ぶべく、合衆国における上級教科書(スコチポル編「歴史社会学の構想と戦略」)の翻訳を開始した。訳業は1994年12月に終了し、訳書は1995年4月に刊行の予定である(木鐸社刊)。その過程で理解されたことは、19世紀の社会変動には[1]身分制社会から解放された個人が社会的に上昇してゆく、[2]上昇困難な賃金労働者が析出される、という2種類のものがある、ということであった。では我が国歴史学界ではこの問題はいかに取り扱われているのだろうか。本研究は次にこの問題に取り組んだ。その結果、1945年以降の歴史研究に関しては、この2つの社会変動の存在は認識されていたものの、両者の関連如何は明示的な焦点とはならなかったことが判明した。この研究の成果は前掲訳書「解題」および“Where Have All the Revolutions Gone?"(Bollettino del 19Secolo,Napoli,forthcoming)として公表される予定である。以上の作業をふまえ、次に19世紀中葉フランスを代表する2人の政治家ギゾ-とティエールの社会変動観の検討を開始した。この作業は現在のところ未完であるが、当時の社会構造の階統秩序の原理としては「能力」と「財力」とがあり、どちらが採用されるかが労働政策に影響するのではないかとの見通しを得るにいたった。この点については今後さらに検討を進め、公表を期したい。
ヒト胎児側胎盤循環障害の発症機序の胎盤灌流法による検討

本研究の結果、ヒト胎盤胎児側循環に影響を及ぼす因子として、エタノールについて詳しく検討できた。エタノールの血管収縮作用は、Ca^<2+>-channel agonist様作用と小胞体内のCa^<2+>放出作用が関係していること,さらにK^+-channel様作用があることも示された.NOとPGsとの関係については、血管リング標本による検討では影響を認めず、灌流法で影響したことより、血管以外の胎盤組織から産生されたNOがエタノールの昇圧反応を抑制し、PGsは昇圧反応を増強していることが推測された。また、通常の高血圧ではあまり重要な意味を持たないserotoninが、NOの合成阻害などの条件が重なると実験的には強力な血管収縮物質であるET-1とほぼ同濃度でも収縮を認めることを明らかにした。妊婦ではserotoninの血中濃度はET-1よりはるかに高濃度であり、妊婦および胎盤循環での本物質の重要性が示された。さらに、NO合成を阻害する生体内物質であるADMAは妊娠中毒症発症機序としてはもちろん、IUGRの主因になっている可能性が示唆され、今後さらに検討していく必要がある。さらに胎児側胎盤循環に影響していると考えられる物質について今後検討していく予定である。本研究の最終目標であった"妊娠中毒症などの胎児側胎盤循環障害の病態を明らかにし、胎児側胎盤循環障害の改善方法すなわち治療法を明らかにすること"にはまだほど遠い結果である。今後は、妊娠中毒症患者の胎盤を使用した検討や、各因子の妊婦・臍帯血中濃度などをさらに検討し、胎児側胎盤循環障害の原因を明らかにするとともに、その改善法すなわち治療法の検討を行っていく予定である。【目的】目的は,妊娠中毒症の発症に関連する母体因子がどのような機序で胎児側胎盤循環に影響を及ぼしているかを母児両側を独立して灌流するヒト胎盤灌流法ならびに胎盤絨毛膜板血管のリング標本を用いて明らかにすることである.今年度は,以前からの実験の継続であるが,エタノールの胎盤循環に及ぼす影響についての検討を行った.【方法】ヒト胎盤の灌流は既に報告した方法(大橋ら,1995)により行った.灌流液はMedium199を使用,母体側灌流液は5%CO_2+95%O_2によりoxygenationし18ml/minの速度で,胎児側灌流液は5%CO_2+95%N_2によりdeoxygenationし3ml/minの速度で,各々定流量ポンプにより灌流を行った.胎児側動脈に圧トランスデューサーを接続することにより,胎児側灌流圧をHewlett-Packard78432Aにてモニターした.また,作用機序を明らかにするために胎盤絨毛膜盤の血管のリング標本を用いた検討も行った.【成績】母体側,胎児側灌流液中へのエタノールの投与により濃度依存性に灌流圧は上昇し,0.3%エタノールでそれぞれ15.0±7.1%,17.8±1.1.1%上昇した.また,母体側投与と胎児側投与で胎児側灌流圧の上昇率はほぼ同等であった.リング標本を用いた作用機序の検討では,エタノールのCa^<2+>-channel agonist様作用と小胞体内のCa^<2+>放出作用が関係していること,さらにK^+-channel様作用があることも示唆された.【結論】今年度の検討では,エタノールが胎盤胎児側の血管を収縮することが胎児性アルコール症候群における子宮内発育遅延の発症機序の一つになっていることが明らかにされた.さらに,妊娠中毒症に関連した血管作動性物質について検討する予定である.

【目的】妊娠中毒症の発症に関連する母体因子がどのような機序で胎児側胎盤循環に影響を及ぼしているかを母児両側を独立して灌流するヒト胎盤灌流法ならびに胎盤絨毛膜板血管のリング標本を用いて明らかにすることが目的である.今年度は,endothelin-1(ET-1),serotonin(5-HT)の胎盤循環に及ぼす影響についての検討を行った.【方法】ヒト胎盤の灌流は既に報告した方法(大橋ら,1995)により行った.灌流液はMedium199を使用,母体側灌流液は5%CO_2+95%O_2によりoxygenationし8ml/minの速度で,胎児側灌流液は5%CO_2+95%N_2によりdeoxygenationし3ml/minの速度で,各々定流量ポンプにより灌流を行った.胎児側動脈に圧トランスデューサーを接続することにより,胎児側灌流圧をHewlett-Packard 78432Aにてモニターした.【成績】一酸化窒素(NO)合成酵素阻害剤であるL-NAMEまたはcyclooxygenase阻害剤であるindomethacinの投与時のET-1,5-HTによる胎児側灌流圧の上昇の程度は,単独投与時の上昇に比べ,有意に高くなった.このことは,ET-1,5-HTによる血管収縮時に血管内皮細胞より血管弛緩物質であるNOやPGI_2が放出され,血管のトーヌスをコントロールしていることを示している.特に5-HTによる収縮の際にNOやPGI_2の関与が大きく,L-NAME投与によりNO合成を阻害した時の5-HTによる灌流圧の上昇は,単独投与時に比べ著明に上昇した.【結論】妊娠中毒症時にはET-1,5-HTともに血中濃度が上昇するが,生体内では5-HTの濃度の方が高いため,妊娠中毒症のようなNO産生が抑制された状態では,5-HTが高血圧の主因であることが示唆された.【目的】胎児側胎盤循環に影響を及ぼす母体因子の検討を行うために,prostacyclinや一酸化窒素(NO)などの血管拡張物質の産生に影響する物質(ADMA : asymmetrical dimethylarginine, BH4:tetrahydrobiopterin)などを母体側灌流液中に投与し、胎児側胎盤循環の変化を明らかにする。さらにその機序について血管のリング標本を用いた系でも検討することを目的とした。【方法】ヒト胎盤の灌流はすでに報告した方法(大橋ら,1995)を用い、以下のように行った。分娩直後の胎盤を用い、その周辺部分葉の絨毛膜板状の動静脈にカテーテルを挿入し胎児循環とし、この分葉に対応する母体側より絨毛間腔を灌流し母体循環とした。灌流液はMedium 199を使用し、母体側灌流液は5%C02+95%02によりoxygenationし18ml/minの速度で、胎児側灌流液は5%C02+95%N2によりdeoxygenationし3ml/minの速度で、各々定流量ポンプにより灌流を行った。【成績】prostacyclinの分泌を抑制する目的でindomethacin(10^<-5>M)を灌流液中に投与したが、単独投与では灌流圧の変化は認めなかった。また、NO synthaseの補酵素であるBH4を灌流液中に投与したが、灌流圧に影響を与えなかった。一方、NO synthaseの内因性の阻害物質として知られているADMAは、濃度依存性に灌流圧を上昇させた。【結論】
骨格筋および末梢循環における力学的負荷の重要性の解明

筋萎縮はサルコペニアやフレイルに見られる主症状であり、その予防・治療戦略の構築が求められている。ラット新生児心筋細胞に高濃度のATP刺激を行うと心筋は萎縮する。その機構にTRPC3-Nox2複合体の活性化が関与することを見出した。高濃度ATP曝露によりP2Y2受容体を介してTRPC3-Nox2複合体が活性化され、活性酸素生成に依存して筋萎縮マーカータンパク質MAFbxの発現が増加することを見出した。グルコース除去や栄養飢餓を施した際に起こるATP放出によっても、P2Y2受容体-TRPC3-Nox2複合体が活性化され、心筋萎縮が起こることも明らかとなった。これまでに、ドキソルビシン誘発性の心萎縮もTRPC3-Nox2機能連関が仲介することを報告した(JCI insiht, 2017)。TRPC3とNox2はマクロファージに多く発現していることから、Raw264.7細胞株のドキソルビシン誘発性細胞死を指標に、1270種類の既承認薬の中からTRPC3-Nox2機能共役を抑制する化合物の探索を行ったところ、イブジラスト(商品名ケタス、適応疾患:気管支喘息)を新たに同定した。イブジラストはドキソルビシン投与によるマウスの体重量および組織重量の低下や酸化ストレス障害を有意に抑制した。以上の結果は、TRPC3-Nox2複合体が抗がん剤投与による筋組織萎縮の原因となり、薬理学的にこれを抑制することが全身毒性を軽減する新たな治療戦略となる可能性を示している。力学的負荷の低下が、筋組織の萎縮を引き起こすことはよく知られ、宇宙での長期滞在における最も大きな問題の一つであることが知られる。本研究は、重力運動喪失により引き起こされる筋組織の萎縮機構の解明を通して、筋萎縮を予防する新規医療技術の開発基盤を開発することを目的とする。今年度までに、我々は心筋の萎縮機構のメカニズムとしてTRPC3-Nox2の機能連簡による過剰な活性酸素種の生成メカニズムに注目してきた。しかしながらTRPC3-Nox2複合体の上流に何がシグナルとして存在するのかが不明であった。今回我々は、高濃度の細胞外ATPが心筋細胞の萎縮を引き起こすことを明らかにした。そこで様々な萎縮ストレス(低酸素・低栄養・抗がん剤投与)において細胞外ATPが確かにその萎縮シグナルを仲介することを明らかにした。心筋細胞が萎縮ストレスに曝されると細胞からATPが放出され、それが細胞膜上のP2Y2受容体を活性化し、その下流でTRPC3-Nox2が活性化、過剰な活性酸素種が生成されることを突き止めた。また、TRPC3-Nox2の機能連関が筋萎縮における創薬標的であることを明らかにしたことから、TRPC3-Nox2を標的とする化合物スクリーニングを行い、PDE4阻害剤イブジラストが新たな薬効としてTRPC3-Nox2の相互作用を遮断する効果を有することを明らかにした。以上のことから、基礎的な萎縮メカニズムの新たな詳細を明らかに出来、且つ筋委縮を予防するポテンシャルを有する化合物の同定に至った。筋萎縮ストレスに対して、TRPC3/C6の抑制が有意な抵抗性を示すことをこれまでに明らかにしてきた。そこで今後は、その詳細なメカニズムを解析する。抵抗性獲得機構として、既にTRPC3/C6筋細胞がストレス抵抗性を有している可能性と、ストレスに暴露された筋細胞においてTRPC3/C6の機能が上昇し、筋萎縮が亢進する二つの可能性が考えられる。そこで、まずはTRPC3/C6の欠損により、通常条件において筋線維内でのタンパク質分解系因子の発現を確認する。また筋細胞自身の代謝変化やストレス抵抗性因子(転写因子NRFやHO-1)の発現変化が既に認められるかを解析する。そこで、既に変化があった場合、それら因子の発現変化の様式を共通する転写因子の同定や、パスウェイ解析により明らかにする。またストレス誘導性にTRP3/C6の機能が上昇する可能性を検討するため、筋萎縮ストレスに暴露した筋細胞におけるTRPC3/C6の活性を蛍光イメージング(カルシウムおよび膜電位)やパッチクランプ法により解析する。もしTRPC3/C6の機能が増加していた場合、その増加機構の解明を行う。転写レベルでの調節であればプロモーター解析に基づき転写因子を同定し、その萎縮シグナル依存的活性化メカニズムを明らかにする。また翻訳レベルでの調節機構である可能性を考慮し、miRNAの網羅的解析を行う。上記検討でTRPC3/C6の活性制御因子が同定されれば、それら発現を抑制したトランスジェニックマウスおよび欠損筋細胞株を作成し、微小重力環境および薬剤誘導性の筋萎縮に対する影響を解析する。

TRPC3とNox2はマクロファージに多く発現していることから、Raw264.7細胞株のドキソルビシン誘発性細胞死を指標に、1270種類の既承認薬の中からTRPC3-Nox2機能共役を抑制する化合物の探索を行ったところ、イブジラスト(商品名ケタス、適応疾患:気管支喘息)を新たに同定した。イブジラストはドキソルビシン投与によるマウスの体重量および組織重量の低下や酸化ストレス障害を有意に抑制した。以上の結果は、TRPC3-Nox2複合体が抗がん剤投与による筋組織萎縮の原因となり、薬理学的にこれを抑制することが全身毒性を軽減する新たな治療戦略となる可能性を示している。力学的負荷の低下が、筋組織の萎縮を引き起こすことはよく知られ、宇宙での長期滞在における最も大きな問題の一つであることが知られる。本研究は、重力運動喪失により引き起こされる筋組織の萎縮機構の解明を通して、筋萎縮を予防する新規医療技術の開発基盤を開発することを目的とする。今年度までに、我々は心筋の萎縮機構のメカニズムとしてTRPC3-Nox2の機能連簡による過剰な活性酸素種の生成メカニズムに注目してきた。しかしながらTRPC3-Nox2複合体の上流に何がシグナルとして存在するのかが不明であった。今回我々は、高濃度の細胞外ATPが心筋細胞の萎縮を引き起こすことを明らかにした。そこで様々な萎縮ストレス(低酸素・低栄養・抗がん剤投与)において細胞外ATPが確かにその萎縮シグナルを仲介することを明らかにした。心筋細胞が萎縮ストレスに曝されると細胞からATPが放出され、それが細胞膜上のP2Y2受容体を活性化し、その下流でTRPC3-Nox2が活性化、過剰な活性酸素種が生成されることを突き止めた。また、TRPC3-Nox2の機能連関が筋萎縮における創薬標的であることを明らかにしたことから、TRPC3-Nox2を標的とする化合物スクリーニングを行い、PDE4阻害剤イブジラストが新たな薬効としてTRPC3-Nox2の相互作用を遮断する効果を有することを明らかにした。以上のことから、基礎的な萎縮メカニズムの新たな詳細を明らかに出来、且つ筋委縮を予防するポテンシャルを有する化合物の同定に至った。筋萎縮ストレスに対して、TRPC3/C6の抑制が有意な抵抗性を示すことをこれまでに明らかにしてきた。そこで今後は、その詳細なメカニズムを解析する。抵抗性獲得機構として、既にTRPC3/C6筋細胞がストレス抵抗性を有している可能性と、ストレスに暴露された筋細胞においてTRPC3/C6の機能が上昇し、筋萎縮が亢進する二つの可能性が考えられる。そこで、まずはTRPC3/C6の欠損により、通常条件において筋線維内でのタンパク質分解系因子の発現を確認する。また筋細胞自身の代謝変化やストレス抵抗性因子(転写因子NRFやHO-1)の発現変化が既に認められるかを解析する。そこで、既に変化があった場合、それら因子の発現変化の様式を共通する転写因子の同定や、パスウェイ解析により明らかにする。またストレス誘導性にTRP3/C6の機能が上昇する可能性を検討するため、筋萎縮ストレスに暴露した筋細胞におけるTRPC3/C6の活性を蛍光イメージング(カルシウムおよび膜電位)やパッチクランプ法により解析する。もしTRPC3/C6の機能が増加していた場合、その増加機構の解明を行う。
COPD患者の情報ニーズに対応したセルフケア能力向上のための教育プログラムの構築

本研究の目的は,慢性閉塞性肺疾患(COPD)患者の持つセルフケアに関する情報ニーズの現状を把握し,患者のセルフケア能力を高めるための教育プログラムの構築とその効果を検証することである。セルフケア能力向上のための教育プログラムには,対象者の特性を十分理解し,対象者ができる限り在宅で安定した療養生活を送ることができるよう,本人及びその家族の持つ力を最大限引き出せる介入が必要である。そのためには疾患,禁煙,薬物療法,栄養,運動療法,心理社会活動に対する包括的な介入が重要である。本研究の目的は、COPD患者の持つセルフケアに関する情報ニーズの現状を把握し、患者が必要としている情報提供のありかたを検討することである。また、患者のセルフケア能力を高めるための教育プログラムの構築とその効果を検証することである。平成20年度は、外来へ通院する在宅療養中のCOPD患者を対象に、療養に必要な医療情報のニーズを調査し、療養状況などの背景要因との関係を検討した。調査には、情報ニーズを簡便に評価するLINQを用い、「病気の理解」「薬」「自己管理」「禁煙」「運動」「栄養」の6つの項目について検討した。その結果、「禁煙」「薬」に関する情報は充足しているが、自己管理、栄養、運動といった生活管理に関する情報ニーズは高いことが明らかとなった。また、罹病歴の長さや、在宅酸素療法の有無といった療養状況による情報ニーズの違いは少なかったが、対象者の年齢では差がみられた。特に75歳以上の患者では74歳以下の患者に比べ、「病気の理解」「運動」「栄養」についての情報ニーズが高いことが明らかになった。これらのことから、在宅療養中のCOPD患者は外来通院時に医師、薬剤師との面談の中で「禁煙」「薬」への情報を繰り返し受ける機会があるのに比べ、運動などの生活面での指導を受ける機会が少ないことが示唆された。また、高齢者へ配慮した情報提供の在り方が求められると思われ、今後は、療養生活支援に責任を持つ看護師が、患者への情報提供にかかわる必要性があり、効果的な教育プログラムの構築が重要である。本研究の目的は,COPD患者の持つセルフケアに関する情報ニーズの現状を把握し,患者が必要としている情報提供のあり方を検討することである。また,患者のセルフケア能力を高めるための教育プログラムの構築とその効果を検証することである。平成20年度のCOPD患者を対象に行った調査から,在宅療養中のCOPD患者は外来通院時に医師,薬剤師との面談の中で「禁煙」「薬」への情報を繰り返し受ける機会があるのに比べ,運動などの生活面での指導を受ける機会が少ないことが示唆された。この結果から平成21年度は,COPD患者のセルフケア能力を高めるための教育プログラム内容を検討する上での,運動療法及び在宅での生活を維持するための指導方法に注目して,文献検討及び情報収集を中心に行った。それによると,COPDの疾患及び生活に関しての,多方面からのアプローチ(栄養指導,運動療法,薬剤指導等)について様々な職種がチームでCOPD患者を支援していくことへの重要性について注目されていることが明らかとなった。中でも訪問看護師による日常生活動作や生活関連活動に関する動作訓練や,住環境整備に関する介入が積極的に行われ,その重要性が認知されてきていることや,外来及び病棟看護師のCOPD患者への呼吸管理,急性増悪防止のための教育等の包括的介入が重要であることが強調されてきている。これらのことから,今後,看護師がCOPD患者のセルフケア能力を高めるための包括的プログラムを構築し,積極的に関わっていく必要があることが重要であると考える。加えてCOPD予備軍が40歳以上では約500万人いると推定されていることから,COPD予備軍や健康者に対してのCOPDに関する認知度を高めていくことが重要であると考える。以上のことから平成22年度は患者のセルフケア能力を高める教育プログラムを実際に実施し,その効果の検証を行う事を目標とする。本研究の目的は、慢性閉塞性呼吸器疾患(COPD)患者の持つセルフケアに関する情報ニーズの現状を把握し、患者が必要としている情報提供のあり方を検討することである。平成20年から継続して行ったCOPD患者への実態調査では、対象者は高齢者が多く、病期も重症患者が多かった。また、対象者のほとんどが男性の喫煙経験者であったため、外来通院時には、禁煙と薬物療法に関する指導は受けており、対象者のニーズもその2点においては低かった。しかし、急性増悪時の対応などを含む疾患の自己管理の方法についての知識は低く、加えて運動療法や栄養に関する知識も低かった。高齢で重症期にあるCOPD患者は、呼吸に対する代謝が亢進する一方、日常生活動作が低下することで全身の筋力低下が起こるため、適切な呼吸リハビリテーションと栄養補給は、急性増悪を回避しできるだけ長い安定期を保つ上で重要な要素である。本研究の調査では、これらの点において対象者への情報提供が不十分であることが明らかとなった。

これらの結果を踏まえ、セルフケア能力向上のための教育プログラムには、対象者の特性を十分理解し、対象者ができる限り在宅で安定した療養生活を送ることができるよう、本人及びその家族の持つ力を最大限引き出せる包括的な介入が必要である。そのためには疾患、禁煙、薬物療法への指導のみではなく、栄養、運動療法、心理社会活動に対する積極的な介入について、多職種で取り組むことが重要である。今後は継続して包括的教育プログラムに対して、患者の予後のみではなく、患者の生活の質の視点で評価を行う必要がある。
抗肥満、抗糖尿病ホルモンの分泌を刺激する食品ペプチドに関する研究

〈小豆加水分解物経口投与による食欲抑制作用〉食後の満腹感を誘導する消化管ホルモンCholecystokinin (CCK)の分泌を刺激する食品ペプチドとして、種々の北海道産豆類の加水分解物の中から、小豆加水分解物に強い活性があることを前年度の培養細胞での試験により見出した。これを絶食させたラットに経口投与し、その後の摂餌量を観察する試験を行ったところ、投与量依存的に摂餌量が低下することが明らかとなった。低下した摂餌量は、投与した小豆加水分解物の重量よりも大きいことより、小豆加水分解物は、たんぱく質としてのエネルギー摂取とは異なり、消化管からのCCK分泌を介して摂餌量を低下させることが示唆された。〈大豆βコングリシニン加水分解物の長期的な食欲抑制作用〉大豆βコングリシニンを食品加工用の種々のプロテアーゼで加水分解し、培養細胞でのCCK分泌活性を調べたところ、ブロメライン、サーモライシンで分解したものに強い活性が見られた。これをラットに単回投与したところ、ブロメライン分解物(BconB)に食欲抑制作用が見られた。このBconBを、一日2回(各1時間)のみ食餌を与える条件(Meal feeding)下で10日間、連日給餌直前に経口投与したところ、1日100mg(50mgを2回)の投与で、1日平均1g以上の摂餌量の低下を引き起こした。これにより食品加工用のプロテアーゼで分解したβコングリシニンが、単回のみでなく連日の経口投与でも食欲を抑制することが明らかとなり、ヒトでの実用化の可能性が高まった。1.北海道産品を中心に種々の豆類よりペプシン分解物を調製し、消化管内分泌細胞株STC-1における消化管ホルモンCholecystokinin (CCK)の分泌活性を比較したところ、小豆、緑豆の加水分解物に、既知の大豆ペプチドよりも高い活性があることが示された。同様に、パパインやブロメラインなどのプロテアーゼで加水分解したものを調整したが、ペプシン分解物の方が高い活性を有することが明らかとなった。これにより、小腸のCCK産生細胞は、胃でのペプシン消化を受けたペプチドを認識しやすいということが示唆された。2.上述の各種豆類加水分解物の、消化管ホルモンGlucagon-like peptide-1 (GLP-1)分泌への影響を、消化管内分泌細胞株GLUTagを用いて検討したところ、小豆のペプシン分解物にのみ強い活性が見られた。これによりGLP-1産生細胞とCCK産生細胞では、食品ペプチドの認識様式が異なることが示された。3.小豆のペプシン分解物を強力なペプチダーゼであるプロナーゼ処理を行ったとことろ、CCK分泌活性は消失したことから、小豆由来のペプチドが活性本体であることが示された。4.小豆のペプシン分解物をゲル濾過クロマトグラフィーにより分離、分画したところ、分子量1000-6000の画分に高い活性が見られ、比較的高分子のペプチドに活性があることが示唆された。これらの画分を、さらに逆相クロマトグラフィーにより分画したところ、疎水性のペプチドに活性が局在することが明らかとなった。これにより、小豆加水分解物中の疎水性高分子ペプチドが強いCCK分泌活性を持つと考えられた。
複室構造横穴式石室の形成と展開に関する研究

昨年度に収集・実見した横穴式石室資料をもとに、以下の項目について研究をすすめた。1)複室構造横穴式石室の成立過程の分析。熊本県北部の菊池川下流域(玉名郡域)の資料で系統的にたどることができた。最古の複室構造は5世紀後葉の横穴式石室の羨道幅を拡幅し、その内部を立石によって区画する羨道区画型に始まり、6世紀前葉に定型の羨道分離型が完成したとみた。従来、定型の羨道分離型の出現をもって複室構造の出現とみるのが一般的であったが、羨道区画型を設定することによって定型化への形成過程が明確となり、複室構造の出現背景に朝鮮三国の高句麗からの直接的な影響はないと考えた。2)石室構造と石室系譜の分析。約980基の複室構造横穴式石室は九州約780基、中国31基、中国12基、近畿12基、東海47基、関東・東北90基である。そのうち中国・四国・東海の複室の石室は構造的にみて九州との直接的な交流によって成立した可能性が高く、また関東多摩川下流域・荒川中流域の石室は東海地域を介した2次的影響化に成立したと推測した。3)地域性と階層性に関する分析。複室の横穴式石室在地型の分布形態には広域・狭域分布の2種が認められ、大型の首長墳クラスが前者、中小墳が後者の場合が多いことが確認できた。また複室の横穴式石室が分布する地域では、同時期の単室構造横穴式石室と比べて、石室規模・使用石材規模や加工度においてより優位性が認められる。こうした地域性と階層性は、地域区分や社会構成分化の内容と地域社会を越えた首長層間の広域交渉の解明に有効である。(1)日本における複室構造横穴式石室は、アイディアの導入に百済からのインパクトがあったかもしれないが、基本的には5世紀後葉から末葉の肥後型横穴式石室の内的構造変化のなかにその成立契機を認めることができる。熊本県北部の菊池側流域において源初形態から定型化にいたる過程を示す横穴式石室が明かとなった。(2)複室構造横穴式石室の肥後北部から北部九州地域への拡散は、6世紀前葉から中葉にいたる短期間のあいだに急速に行われたことが確定的となった。そしてその初現期の場合、石室構造だけでなく埋葬付属施設としての石屋形や、肥後北部で成立した壁画系装飾を伴うケースが多いことが判明した。これによって、複室構造のアイディアだけでなく、埋葬習俗に伴う各種のイデオロギーを含めた複合的な墓制伝播と予想されるにいたった。(3)九州・山口を除く地域の複室構造横穴式石室は、横穴式石室の基本形の成立過程と系譜関係、そして複室構造の導入過程と系譜関係を区分する必要が明確となった。四国と中国北部は在地化した九州系横穴式石室、畿内の一部と東海東部では畿内系横穴式石室に複室構造のアイディアが取り入れられたものと想定されるた。また畿内および関東以北に分布する複室構造は、九州系と異なった出現系譜であることが明確となった。

従来、定型の羨道分離型の出現をもって複室構造の出現とみるのが一般的であったが、羨道区画型を設定することによって定型化への形成過程が明確となり、複室構造の出現背景に朝鮮三国の高句麗からの直接的な影響はないと考えた。2)石室構造と石室系譜の分析。約980基の複室構造横穴式石室は九州約780基、中国31基、四国12基、近畿12基、東海47基、関東・東北90基である。そのうち中国・四国・東海の複室の石室は構造的にみて九州との直接的な交流によって成立した可能性が高く、また関東多摩川下流域・荒川中流域の石室は東海地域を介した2次的影響化に成立したと推測した。3)地域性と階層性に関する分析。複室の横穴式石室在地型の分布形態には広域・狭域分布の2種が認められ、大型の首長墳クラスが前者、中小墳が後者の場合が多いことが確認できた。また複室の横穴式石室が分布する地域では、同時期の単室構造横穴式石室と比べて、石室規模・使用石材規模の加工度においてより優位性が認められる。こうした地域性と階層性は、地域区分や社会構成分化の内容と地域社会を越えた首長層間の広域交渉の解明に有効である。以上の成果のうち、九州地域の研究結果を『複室構造横穴式石室の基礎的研究(九州編)』として印刷・刊行した。
離島小学校複式学級における理科学習内容の分析と指導計画の作成

1研究の目的小学校複式学級において,学年別異内容の授業を行うために,理科の学習内容と複式の学習指導法を実践を基に検討した。2研究方法(1)小学校複式学級理科授業の問題点を,単式学級理科授業と比較して洗い出す。(2)小学校複式学級において効果的な理科授業を展開するための学習内容の分析。(3)指導計画を想定して,授業実践。(4)授業実践を基に,授業分析をし,小学校複式理科授業の指導計画の検討。3研究成果(1)小学校複式教育の問題点○1時間に2学年の学習内容を教えるため,物理的に難があり,学習内容の重点化あるいは,厳選が必要。○観察・実験及び野外観察等においても安全面の配慮や学習場所等の指導計画の検討が必要。(2)学習内容の分析○1単位時間において,複式理科学習では,学習内容の重点化を図り,1番重要な学習内容を絞ってその場面を直接指導する。あとは,間接指導の学習形態をとる。重点化が図れないと必ず時間不足となる。○指導計画は,児童の発達特性もあるが,同じ領域の単元を組み合わせた方が,児童の理解も,教師の準備も負担がない。(3)授業実践○実際の授業では,教師が発問を想定してのぞむ必要がある。教師が答えを言うのではなく,「今,何が問題なの」「何でそう思うの」「どうなると思う」「どうなった」「そのことから何がわわるの」「今日,何がわかった」等児童に思考させたり活動させたりする発問を行う。○板書は,児童の頭の中がそのまま現れるような,構造的(順序性と関係性がわかる)にする。(4)指導計画の検討○1年間研究をしたが,指導計画を作成するまでには至らなかった。ただ,指導計画を作成する際に,必ず,2学年のうちに1学年に傾斜をかけ両学年の学習内容の重点化を図ることと,同じ領域の単元を配置した方がよいことがわかった。
コプラナーPCBs排泄輸送ポンプ関連遺伝子のクローニング

内分泌かく乱物質である性ホルモン類似化学物質やアリルハイドロ受容体(AhR)やエストロゲン受容体に対する非生体物質は、多くの生体にとって有害な反応に関係することが知られてきている。我々は、ヒトMDR1遺伝子を発現ベクターにクローニングし、ブタ腎上皮細胞(LLC-PK1)に導入してMDR1を安定的に発現した単層細胞(LLC-COL)培養系を用いて、ステロイド系物質であるコルチゾールおよびエストロジェン、AhRのリガンドでありコプラナーPCB異性体のひとつである3,3',4,4'テトラクロロビフェニール(TeCB)の膜輸送および細胞内蓄積を検討した。コルチゾールの基底側から頭頂側への正味の輸送はビンブラスチン同様、LLC-PK1に比較して、LLC-COLでは増加していたが、エストラジオールの輸送は両方向とも見られなかった。エストラジオールの拡散輸送は両方向ともコルチゾールに比べて高く、細胞内蓄積もコルチゾールに比べて大きかった。TeCBの膜輸送は非常に低く、正味の基底側から頭頂側への輸送も見られなかったが、細胞内蓄積は高かった。細胞内蓄積は、高濃度においてLLC-PK1よりLLC-COLで僅かに高かった。ヒトP糖タンパク質の61番目のヒスチジン(H61)がフェニールアラニン(F)に置換されると低分子の薬剤に対する抵抗性が増加すること、あるいはセリン(S)に置換すると高分子の薬剤に対する抵抗性が増加することがすでに報告されている。そこで、これらの遺伝子をヒトがん細胞であるKB-3に導入し、MDR1を発現させた細胞を用いて、ビンブラスチン、コルヒチン、TeCBの細胞内蓄積を検討した。ビンブラスチンおよびコルヒチンの細胞内蓄積は、P糖タンパク質導入細胞において著しく減少した。しかしながら、TeCBでは細胞内蓄積の減少はいずれの細胞においても見られなかった。P糖タンパク質を発現する細胞の細胞内蓄積の減少は、P糖タンパク質の阻害剤であるベラパミルによって阻害された。同様な阻害は、TeCBによる処理によっても認められた。それゆえ、TeCBはP糖タンパク質によって排泄されるのではなく、かえってP糖タンパク質を阻害し、薬物の膜輸送に影響を及ぼすことが示唆された。さらに、犬の癌由来の細胞株数株から、MDR1を生化学的および遺伝学的に証明し、薬物輸送を検討しているが、現在までにコプラナーPCBsを輸送するMDR1のクローニングはされていない。今後は、P糖タンパク質以外のトランプポーター例えばABCタンパク質などを標的をしてコプラナーPCBs輸送可能な遺伝子のクローニングを試みる。本研究では、ATP依存性のMDR/P糖蛋白質およびcMORTに焦点を絞り、コプラナ-PCBsの体外排泄に関与するATP依存性のMDR/P糖蛋白質およびcMORTの遺伝子の検出を目的とした。初めに従来から我々が用いている