hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ホルモン投与などによるトキ類人工増殖のための基礎的研究

本研究を総括し、その報告書を作成することが本年度の目的であったので、ここには報告書の概要を述べよう。まず昭和57年以来の、トキの飼育循件下での自然繁殖の試みの経過を述べ、その問題点をあげた。そして人工増殖の方法とその可能性を述べ、それに必要な内分泌学的庁法を列挙した。そこで、生殖に直接関与する生殖腺刺激ホルモンと性ステロイドホルモンの血中濃度の周年変化をトキに近縁なクロトキを用いて明らかにした。ついで同じ方法をトキに一部適用し、不完全なデータではあるが、アオという雌において、繁殖期には生殖腺刺激ホルモンの血中濃度が上昇し、クロトキの繁殖期におけるレベルぐらいには達していることを報告した。次に、非繁殖期のクロトキにニワトリ脳下垂体から抽出した生殖腺刺激ホルモンを高濃度に含む糖タンパク質分画を注射し、卵胞の成長をひきおこすことに成功したが、完全な成熟卵をつくるにはいたらなかった。しかしニワトリのホルモンの注射が有効でありかへ無害であることが明らかとなった。そこでウズラの雌を用いて、二種ある生殖腺刺激ホルモンのどちらが有効かを調べてみたところ、両方が必要であること、さらに卵巣に成熟した卵をつくるにはかなり長期間のホルモン投与が必要であることを知ることができた。したがって注射以外の新しいホルモン投与法をトキには用いる必要があると考えられる。ホルモン投与を行なうべき時期を知るには血中ホルモン濃度を調べる必要があるが、トキにおいては頻繁に採血する訳には行かないので、糞中のホルモン量から血中濃度を推定する方法をウズラを材料にして開発した。近くこの方法をトキやクロトキに適用してみることを計画している。
高いプロトン親和性を持つピロロピロール顔料の物性と水素ガスセンサーへの応用

これまでにピロロピロール顔料の中でピリジン環を有するジピリジルピロロピロール(DPPP)が高いプロトン親和性をもち、プロトン化に伴い色調の変化(赤→紫)、電気伝導度の減少、ならびに光伝導の出現など著しい変化が認められることを報告した。本萌芽研究では水素ガスセンサーへの応用を念頭に置き、上記3つの特性の中でも最も感度の高い電気伝導度変化を使ったシステムを構築することを目指した。最大の難関は如何にして水素分子をプロトン化するかということで、プロトン化された後はDPPPがプロトンを捕獲し、薄膜でも2桁以上の抵抗率の減少が得られることが確認できた。プロトン化にあたっては標準水素電極にヒントを得た電気化学的な手法や、フタロシアニン等の有機半導体の表面を利用した系をテストしたが何れの場合も十分な感度が得られなかった。問題解決の糸口はPdあるいはPt等を作用電極上に(電気的にショートしない程度に)島状(アイランド状)にスパッターし、その上にDPPP層を形成してセンサーとすることであった。つまり、セルの構造として基板/Al or ITOの櫛型電極/Pd or Ptのスパッター膜/DPPP蒸着膜である。このセンサーは水素10%,1%,0.1%の雰囲気で電気抵抗が2桁に減少することが確認された。また、応答速度が速く1秒以内で2桁の電気伝導度の変化を誘起できる。更に、エージング等でも特性の劣化は認められない。本萌芽研究は見事に開花し、特許も申請することができた。今後は実用化に向けて検討を進める。一方、科学的な貢献にも顕著なものがあった。DPPPにはプロトンに活性を示す結晶相Iと比較的不活性な結晶相IIが存在することが示唆された。そこで気相ならびに液相の双方から単結晶の育成と結晶構造解析を試みた。気相から得られた平板上の結晶はピリジン環の窒素原子が塞がれておらず、プロトンに活性な結晶相Iであることが分かった。これに対し、液相から育成した針状結晶ではピリジン環の窒素原子が隣接する分子のNH基と水素結合を形成し、プロトンに不活性であることが明らかになった。水素ガスセンサーには結晶相Iが得られる条件でセンサーの作製を行っている。以上のように、本萌芽研究では基礎ならびに応用で大きな成果があった。今年度は「単結晶の育成ならびに結晶構造解析」と「水素分子のイオン化(プロトン化)」に付いての予備実験を主体に研究を進めた。オートクレーブ(高圧反応容器)を用いた単結晶育成では針状の結晶が得られ、これに対し気相から単結晶を育成すると平板状の結晶が得られた(結晶多形)。前者(結晶I)は1分子あたり2本のNH...Oの分子間結合に加え、新規な2本のNH...N分子間水素結合が存在することが分かった。この新規な水素結合により、フリーな窒素原子は1つだけである。また、後者(結晶II)の結晶構造はまだ完全には解けていないが、ピリジン環の代りにフェニル環が結合したピロロピロールと同形であることが明らかになった。この構造では1分子あたりに4本のNH...O分子間水素結合が形成され、2つのフリーな窒素原子が残存している。今回の構造解析の結果は我々の研究に貴重な知見を提供している。つまり、本研究の目的である水素ガスセンサーへの応用には2つのフリーな窒素原子が存在する結晶IIが適していることを示した。構造解析と併行して、水素ガスセンサーの鍵をにぎる「水素分子のプロトン化」の検討を行った。室温近傍で水素分子をイオン化するには、電気化学的な手法(水素電極)も考えられるが、本研究では固体状態でのイオン化を目的とした。櫛型電極にPdを50Å程スパッターする方法や、ジピリジルピロロピロールの表面にもPdをスパッターすると固体状態でも10^3V/cm程度の電界で容易にイオン化することが分かった。今年度で水素ガスセンサーを目指した基礎検討を終了し、来年度は実装的な検討に入る予定であるこれまでにピロロピロール顔料の中でピリジン環を有するジピリジルピロロピロール(DPPP)が高いプロトン親和性をもち、プロトン化に伴い色調の変化(赤→紫)、電気伝導度の減少、ならびに光伝導の出現など著しい変化が認められることを報告した。

更に、エージング等でも特性の劣化は認められない。本萌芽研究は見事に開花し、特許も申請することができた。今後は実用化に向けて検討を進める。一方、科学的な貢献にも顕著なものがあった。DPPPにはプロトンに活性を示す結晶相Iと比較的不活性な結晶相IIが存在することが示唆された。そこで気相ならびに液相の双方から単結晶の育成と結晶構造解析を試みた。気相から得られた平板上の結晶はピリジン環の窒素原子が塞がれておらず、プロトンに活性な結晶相Iであることが分かった。これに対し、液相から育成した針状結晶ではピリジン環の窒素原子が隣接する分子のNH基と水素結合を形成し、プロトンに不活性であることが明らかになった。水素ガスセンサーには結晶相Iが得られる条件でセンサーの作製を行っている。以上のように、本萌芽研究では基礎ならびに応用で大きな成果があった。
土壌水分変動条件に対するイネの適応反応に関わる形質の同定

世界のイネ栽培において、生産性の向上にとって最も大きな制限要因になっているのが、水ストレスである。具体的には、陸稲栽培(畑)では乾燥ストレスが、雨水に依存した天水田や、節水栽培技術を導入した灌漑水田においては、土壌水分変動が生育を抑制するストレス要因として作用していることを見いだした。また、根系が発揮する発育的可塑性が、これらのストレス条件に対する適応にとって重要な役割を果たしていることを明らかにした。1.土壌水分制御圃場における有望系統の選抜日本晴・カサラス由来の染色体断片置換系統群の中から、乾燥ストレス条件下で、日本晴と比較して明らかに高い可塑性を発揮する系統として45番と50番、乾燥-嫌気条件間を変動するストレス条件下で高い可塑性を発揮する系統として47番を選抜した。成育期間中に発育パラメータ(草丈、分げつ数、葉面積、葉数、乾物重)と気孔伝導度、光合成速度さらには、根系の発育(節根、側根の長さや発生密度)を精査し、とくに分枝反応における可塑性が重要であることを明らかにした。2、準同質遺伝子系統の作出これまでに、上記の有望系統47番ならびに50番に日本晴を戻し交雑し、そのF_1種子を人工気象室にて育成し、F_2種子を得た(BC_1F_2)。3.他の遺伝資源を対象にした圃場試験による有望系統の選抜国際イネ研究所において所有している遺伝資源(IR64とその準同質遺伝子系統群)について、土壌水ストレスに対する乾物生産を指標とした地上部成長ならびに根系発育反応を、円筒容器ならびに圃場において評価し、これらにおいても、根系の可塑性が地上部生育に貢献していることを見出した。また、レイテ州立大学において、同様な実験を実施するための準備を始めた。4.他作物種の土壌水分ストレスに対する反応評価イモ類についての従来の研究成果についてまとめて論文を投稿した。また、コムギについても、過湿による土壌水分ストレス対する根の反応が、その耐湿性にとって重要な役割を果たすことを示す実験結果を得つつある。1.根系可塑性の機能的役割の実証昨年度までの研究で、乾燥ストレス条件下で可塑性を発揮する系統として50番を選抜した。根箱法を用いて、根系が、緩い乾燥ストレス条件下で強い可塑的な反応を示すことを認め、この可塑性が水吸収を促進し、光合成、乾物生産を増加させたことを定量的に示した。また、乾燥-嫌気条件間を変動するストレス条件下で可塑性を発揮する系統として47番を選抜し、土壌水分制御圃場において、この系統が発揮する根系の可塑性も、養水分吸収の促進を通じて、光合成、乾物生産に貢献していたことを明らかにした。2.準同質遺伝子系統の表現型評価ならびに遺伝子型解析これまでに、上記の有望系統47番ならびに50番に日本晴を戻し交雑して得たF_2世代(BC_1F_2)の各個体について、水ストレスに対する反応性を評価し、分子マーカーによる各個体の遺伝子型の決定を進めている。このデータをもとに、系統47番と50番の準同質遺伝子系統化をさらに進めていく上で重要な個体を選抜し、それらについてはF_3種子を得たので、これについても同様な解析を進める準備を始めた。3.他の遺伝資源を対象にした圃場試験による有望系統の選抜と機能評価国際イネ研究所ならびにビサヤ州立大学(フィリピン)において所有している遺伝資源について、土壌水分ストレスに対する反応評価をするための実験を実施したので、現在データの整理を行っている。4.他作物種の土壌水分ストレスに対する反応評価キャッサバ根系の乾燥ストレスに対する可塑的反応とその機能的役割に関する研究成果についてまとめた論文が受理された。また、コムギについても、土壌水分ストレス(過湿)条件下での根系発育と機能を維持する能力が耐湿性に重要な役割を果たしていることを明らかにしつつある。今後、重要形質についてイネと比較することによって、その機能的役割についてさらに深く検討する。1.根系可塑性の機能的役割の実証日本晴/カサラス染色体断片置換系統群において、乾燥ストレス条件下で可塑性を発揮する系統として選抜した50番と、乾燥-嫌気条件間を変動するストレス条件下で可塑性を発揮する系統として選抜した47番は、根系の発揮する可塑性によって養水分吸収、光合成、乾物生産が促進されることを定量的に示した。また、土壌水分によって発揮されるこの可塑性は、土壌養分との間に相互作用を示し、養分ストレス条件下では、可塑性の能力は十分に発揮されないことが明らかとなった。2.準同質遺伝子系統の表現型評価ならびに遺伝子型解析これまでに、上記の有望系統47番ならびに50番に日本晴を戻し交雑し、そのF1種子を人工気象室にて育成したF2(BC1F2)世代の各個体について、水ストレスに対する反応性を評価するとともに、分子マーカーによる各個体の遺伝子型の決定を進め、このデータをもとに、系統47番と50番の準同質遺伝子系統化をさらに進めた。

3.他の遺伝資源を対象にした圃場試験による有望系統の選抜国際イネ研究所等において所有している遺伝資源(IR 64準同質遺伝子系統群、Oryza SNP panel)について、土壌水分ストレスに対する反応を評価し、同様に、根系の発育的可塑性が重要な役割を果たしていることを示した。4.他作物種の土壌水分ストレスに対する反応評価キャッサバの乾燥ストレス耐性にとって、不定期な降雨による土壌水分を効率的に利用するための根系構造、すなわち水平方向への広がりを維持する不定根の伸長能力とそれらの分枝能力(可塑性)が重要であることを見いだした。また、コムギについても過湿を含む土壌水分ストレス条件下での生産における根系の役割に関する調査を進め、とくに過湿条件下での節根発生能力ならびにそれらの通気組織形成量能力が耐湿性の鍵であることを明らかにした。
日本語方言形態論における音韻プロセスの相互作用

日本語方言の形態音韻論における音韻プロセスの相互作用を記述し、その言語学上の意義を明らかにするため、調査と分析を行うとともに、辞書作成への支援を通して調査を通して地域社会に研究成果を還元し、得られたデータのデータベース化を進める。分析の対象とするのは音韻的不透明性を呈する音韻プロセスの相互作用が中心になるが、類推などの音韻論では扱えない形態論上の現象も扱う。
高血圧ラットにおけるPKCアイソザイム発現量の検討

本研究は高血圧状態がPKCアイソザイムの発現を変化させるという仮説を証明するために行われ、まず本態性高血圧実験モデルとしてよく用いられているSHRと正常群としてのWKYの血管平滑筋細胞内、細胞膜におけるPKCアイソザイムの発現の差異をWestern blottingで確認しその発現量を画像解析で定量しようと試みた。高血圧自然発症ラット(SHR)とウィスター系ラット(WKY)の大動脈を切離し、ホモジナイザーでバッファーに溶解しサンプルを調整した。同時にラット脳、胃を取り出しコントロールとしてサンプルを調整した。サンプルはSDS--PAGEの後、ニトロセルロース膜にelectro blottingした。各アイソザイムに特異的な抗体(GIBCO社製)αβγδεξを1次抗体として標識し、さらにペルオキシダーゼ活性を有する2次抗体を標識し感度の高いECL法でX-rayフィルムを感光させたのち現像した。ラット大動脈は1匹分で約0.1-0.2gと微量なサンプルであることから、ホモジナイズの後凍結乾燥にて濃縮を試みてみたが得られるシグナルがきわめて弱く、Western Blottingでの解析は困難と考えられた。現在PCR法を用いた解析方法を検討中である。
Cardiomyoplastyに応用する新しい血行改善法-bFGFを用いた血管新生の促進に関する研究-

第一にdynamic cardiomyoplasty作成時に広背筋と心筋の間にbFGFを移植しその影響を検討,以下の点が明らかとなった.(1)collagen-heparinの熱架橋体を応用したbFGFのslow releasesystemの開発に成功した.(2)bFGF移植部では非移植部に比して肉眼的および光学顕微鏡的に線維組織が増生することを確認した.(3)factorVIII染色にて血管内皮細胞の増生と明らかな管腔形成の促進を確認した.本成果は第38回日本人工臓器学会総会(2000.9,三重)にて発表,投稿準備中である.第二に,片側大腿動脈遮断ラットを用い,bFGF類似物質であるVEGF遺伝子による血行改善効果を検討,以下の点が明らかとなった.(1)VEGF遺伝子の局所筋注(IM)は虚血肢の血管新生を促進し,血行を改善した.(2)筋注+electroporation(IM+EP)によるVEGF導入はIMに比してより有効であった.(3)PCR法にてIMおよびIM+EP両法にてVEGF遺伝子発現を確認した.本成果は第10回骨格筋の心臓への応用研究会(1999.3,東京)にて発表,投稿中である.第一にdynamic cardiomyoplasty作成時に広背筋と心筋の間にbFGFを移植しその影響を検討,以下の点が明らかとなった.(1)collagen-heparinの熱架橋体を応用したbFGFのslow releasesystemの開発に成功した.(2)bFGF移植部では非移植部に比して肉眼的および光学顕微鏡的に線維組織が増生することを確認した.(3)factorVIII染色にて血管内皮細胞の増生と明らかな管腔形成の促進を確認した.本成果は第38回日本人工臓器学会総会(2000.9,三重)にて発表,投稿準備中である.第二に,片側大腿動脈遮断ラットを用い,bFGF類似物質であるVEGF遺伝子による血行改善効果を検討,以下の点が明らかとなった.(1)VEGF遺伝子の局所筋注(IM)は虚血肢の血管新生を促進し,血行を改善した.(2)筋注+electroporation(IM+EP)によるVEGF導入はIMに比してより有効であった.(3)PCR法にてIMおよびIM+EP両法にてVEGF遺伝子発現を確認した.本成果は第10回骨格筋の心臓への応用研究会(1999.3,東京)にて発表,投稿中である.dynamic cardiomyoplastyの心補助能力を規定する因子の一つとして,骨格筋の血流改善が重要である.我々はこれまでに,(1)広背筋の血行支配を解剖学的に解明し,(2)筋弁作成後に一定以上の血行改善期間(vascular delay)をおくことで血管新生が生じ血流が増加することを確認してきた.このvascular delay法は現在実際の臨床応用例に用いられているが,準備期間に長時間を要するために,速やかな治療が必要な心不全患者には用い難いという問題があった.また心移植に代わるものとして考えた場合,長期にわたる駆動に耐えうる血流を十分に供給できるかどうか疑問とされてきた.まず我々は,bFGFのslow release systemの開発に着手した.bFGFは移植後組織の血流により速やかにwash outされてしまうため,長期間接続する効果を期待するslow release systemが不可欠である.我々はcollagen-heparinの熱架橋体に着目し,これを応用したbFGFのslow release systemを用いることとした.次に我々は,dynamic cardiomyoplasty作成の際に広背筋と心筋の間にbFGFを移植し,解剖学的に血行の変化が生じるかどうかを急性実験にて調べた.この結果肉眼的・光学顕微鏡的にはbFGF移植部周囲に微少な血管新生が生じていることを確認した.また広背筋と心筋間にまたがる微笑血管の存在も認められ,相互の血流改善に関与する可能性が示唆された.この実験結果については,現在血管新生の定量法に関して検討中であり,近日学会報告予定である.dynamic cardiomyoplastyの心補助能力を規定する因子の一つとして,骨格筋の血流改善が重要である.我々はこれまでの研究で,(1)広背筋の血行支配を解剖学的に解明し,(2)筋弁作成による血行遮断後に一定以上の血行改善期間(vascular delay)をおくことで血管新生が生じ血流が増加することを確認してきた.このvascular delay法は現在実際の臨床応用例に用いられているが,準備期間に長時間を要するため,速やかな治療が必要な心不全患者には用い難いという問題があった.また心移植に代わる治療として考えた場合,長期にわたる駆動に耐えうる血流を十分に供給できるかどうが疑問とされてきた.前年度には,まずcollagen-heparinの熱架橋体を応用したbFGFのslow release systemを開発,また急性実験にてdynamic cardiomyoplasty作成の際に広背筋と心筋の間にbFGFを移植し,肉眼的・光学顕微鏡的にはbFGF移植部周囲に微少な血管新生が生じており,また広背筋-心筋間にまたがる微笑血管が発生して相互の血流改善に関与する可能性があることを確認した.この実験結果については,近日学会報告予定である.本年度は片側の大腿動脈を遮断したラットを用い,bFGFの類似物質であるVEGF遺伝子による血行改善効果を検討した.すなわち,VEGF遺伝子を局所注入することで,血行遮断側の下腿血圧は注入量依存的に増加し,また血管造影検査上側副血行路が増加することを確認した(実験結果は現在雑誌投稿中).

この結果,これら増殖因子の血行改善効果を裏付けるとともに,新しい,より確実な因子投与法の可能性が広がったと考える.今後さらに研究を進めていく.dynamic cardiomyoplastyの心補助能力を規定する因子の一つとして,骨格筋の血流は重要である.しかし広背筋弁作成時には筋末梢の血流遮断を余儀なくされるため,臨床成績をより向上させるためには遮断された血流の改善が必要である.我々はすでに,(1)広背筋の血行支配を解剖学的に解明し,(2)筋弁作成による血行遮断後に一定以上の血行改善期間(vascular delay)をおくことで血管新生が生じ血流が増加することを確認してきた.このvascular delay法は現在実際の臨床応用例に用いられているが,準備期間に長時間を要するため,速やかな治療が必要な心不全患者には用い難く,また心移植に代わる治療として考えた場合長期間の駆動に耐えうる血流を十分に供給できるかどうか疑問とされてきた.まずcollagen-heparinの熱架橋体を応用したbFGFのslow releasesystemを開発した.次に急性実験にてdynamic cardiomyoplasty作成の際に広背筋と心筋の間にbFGFを移植,肉眼的・光学顕微鏡的にbFGF移植部周囲に微少な血管新生が生じ,また広背筋-心筋間にまたがる微少血管が発生して相互の血流改善に関与する可能性があることを確認した.本年度はこの実験系の追加実験を行って評価し,実験結果については現在投稿中である.一方,片側の大腿動脈を遮断したラットを用い,bFGFの類似物質であるVEGF遺伝子による血行改善効果を検討した.すなわち,VEGF遺伝子を局所注入することで,血行遮断側の下腿血圧は注入量依存的に増加し,また血管造影検査上側副血行路が増加することを確認,現在投稿中である.本研究により,これら増殖因子が持つ血行改善効果を裏付け,血行改善法の可能性が広がったと考える.
腫瘍微小環境で作用する分子標的抗がん剤の探索とその標的分子の解析

がんの病態の悪化に大きく寄与する腫瘍内の微小環境における細胞の代謝変化や表現型変化に着目したスクリーニング系を構築して、海洋医薬資源を対象に活性天然物の探索を進め、抗がん剤シーズとして有用な数種の活性天然物を見出した。見出した活性天然物のアナログ化合物合成により構造と活性の相関を解析し、天然物と同等以上の活性を示す化合物の合成に成功した。さらに、汎用性の高い標的分子解析方法を確立するために考案した次世代型プローブ分子を用いて活性天然物の標的分子解析を行うことにより、抗がん剤開発のための新しい薬剤標的分子を見出した。本研究では、腫瘍の微小環境で特異的に観察される細胞の表現型変化に着目した評価系を用いて、底生海洋生物の抽出エキスや海洋由来微生物の培養物ライブラリーを対象とする探索を行う。そして、見出した活性天然物の全合成やアナログ化合物合成を展開することにより、がん細胞特異的に作用する医薬シーズの創製を目指す。またその作用メカニズムを解析する方法論を、ケミカルバイオロジーの手法により確立し、これを見出した新規化合物の標的分子の解析に利用する。今年度は研究計画に従い、構築した5つの評価系によるスクリーニングを実施した。そして、がん血管新生を阻害する化合物として、海洋由来Aspergillus属真菌の培養物から、epoxycarolideと命名した新規ポリケチド化合物およびインドールアルカロイドであるnotoamide Rを見出した。また、血管新生阻害物質として見出しているcortistatin Aのアナログ化合物合成を行い、高い血管内皮細胞選択性と強い増殖阻害活性を有するアナログ化合物の創製に成功した。また、腫瘍内部の低酸素環境に適応したがん細胞に対して、選択的な増殖阻害活性を示すfurospinosulin-1について、アナログ化合物合成による構造活性相関研究を行い、furospinosulin-1の活性発現には分子全体の化学構造が必要であり、標的分子がfurospinosulin-1を厳密に認識していることを示す知見を得た。さらにこの過程で、天然物と同等以上の活性を有するアナログ化合物の創製にも成功した。さらに、ボロン酸を標的分子捕捉のための補助基として用いる次世代型プローブ分子の設計合成にも着手している。今年度は研究計画に従い、構築した5つの評価系によるスクリーニングを継続して実施した。その結果、インドネシア産海綿の抽出エキスから、がん細胞の転移過程の1つである遊走を阻害する化合物として、stylissamide Xと命名した新規環状ペプチドを発見した。また、低酸素環境選択的にがん細胞の増殖を阻害する活性天然物furospinosulin-1については、既存の抗がん剤であるシスプラチンと併用することにより、顕著な相乗効果を示すことを見出し、さらに、前年度までの次世代型プローブ分子の作成と機能評価などの知見をもとにして、furospinosulin-1結合タンパク質を解析するためのプローブ分子を合成し、その最適化にも成功した。一方、前年度のfurospinosulin-1アナログによる構造活性相関研究の過程で見出した3種のアナログ化合物、がん血管新生阻害物質cortistatin Aアナログに関しては、大量合成可能な合成ルートの確立に成功し、各アナログ化合物のマウスを用いる抗腫瘍活性試験に向けた大量合成を行いin vivo評価の準備を完了した。1)研究代表者らが構築している、腫瘍微小環境に着目した5つのスクリーニング系(a:がん細胞特異的な細胞周期阻害物質, b:血管新生阻害物質, c:低酸素環境適応がん細胞選択的な増殖阻害物質, d:上皮間葉転換阻害物質, e:がん細胞の誘導・浸潤・接着阻害物質)での活性物質の探索を継続して実施し、海綿抽出エキスから血管新生阻害物質として、N-isopentenyladenosineおよび新規サポニンを見出した。また両化合物ともに、in vitroで血管内皮細胞の遊走および管腔形成を阻害することを明らかにした。2)低酸素環境に適応したがん細胞の増殖を選択的に阻害するfurospinosulin-1に関して、アナログ化合物合成による構造活性相関研究の過程で見出し、in vitroで有望な活性を示すことが確認されたアナログ化合物を、腫瘍移植マウスモデルを用いて評価した。その結果、経口投与で天然物と同等以上の抗腫瘍活性を示すことが明らかとなった。3)継続して実施している、血管新生阻害活性を示すcortistatin Aのアナログ化合物合成において、がん細胞に対する活性と比較して、500倍以上の血管内皮細胞選択性を示すアナログ化合物の創製に成功した。

4)Cortistatin Aおよびfurospinosulin-1の標的分子解析に使用するプローブ分子合成を進め、活性を保持するビオチン標識プローブの合成に成功した。本年度は、研究計画に従い以下の研究を実施した。1.がん血管新生阻害物質cortistatin Aアナログの合成研究を継続して実施し、これまでに見出しているアナログ化合物と比較して、さらに強力かつ血管内皮細胞選択性を有するアナログ化合物の合成に成功した。2.低酸素環境に適応したがん細胞選択的に増殖阻害活性を示す、海綿由来のテルペノイド化合物については、その不斉全合成に成功するとともに、天然物の絶対立体構造を明らかにした。また、アナログ化合物合成による構造活性相関を検討し、本化合物の活性発現には、分子全体の化学構造が重要であることを明らかにした。3.前年度までの研究で見出した、低酸素環境に適応したがん細胞選択的に増殖阻害活性を示すfurospinosulin-1のアナログ化合物については、マウスを用いるin vivoでの抗腫瘍活性試験に向けて大量合成を行った。また、抗腫瘍活性試験の結果、本アナログ化合物が、経口投与で天然物と同等以上の良好な抗腫瘍活性を示すことを明らかにした。26年度が最終年度であるため、記入しない。天然物化学26年度が最終年度であるため、記入しない。研究計画通り、構築した評価系によるスクリーニングを継続して実施し、新規化合物の発見に成功している。また、furospinosulin-1およびcortistatin Aのアナログ化合物を中心に、新しい医薬シーズ創出に向けた検討が順調に進んでいる。さらに見出した化合物の結合タンパク質を解析するためのプローブ分子の合成や最適化も計画通り実施している。研究計画通り、構築した5つの評価系による探索研究を継続して実施し、がん血管新生阻害物質として、新規化合物を含む2つの活性物質を見出すことに成功した。また、低酸素環境選択的がん細胞増殖阻害物質furospinosulin-1に関する研究についても、合成したアナログ化合物が、腫瘍移植マウスモデルにおいて、天然物と同等以上の抗腫瘍活性を示す知見を得た。さらに、標的分子の解析についても、活性を保持するビオチン標識プローブの合成に成功しており、着実に研究が進展している。一方、血管新生阻害活性を有するcortistatin Aのアナログ化合物合成に関しても、in vitroでの評価において、これまでで最も高い血管内皮細胞選択的活性を示す化合物の創出に成功した。また、標的分子解析のためのプローブ分子の合成についても完了しており、次年度の研究に向け、着実に研究成果を得ている。今後も計画通り、がんに対する新しい医薬シーズ創出のためのスクリーニング、見出した化合物の全合成やアナログ化合物合成を実施する。また、ケミカルバイオロジーの手法による活性物質の結合タンパク質解析を積極的に進めて行く予定である。1)継続して探索研究を進め、医薬シーズとなり得る活性物質の発見を目指す。
新規免疫チェックポイントの同定と阻害方法の開発

昨年度までは、新規免疫チェックポイント分子の有力候補であるTIGITとLAG3をPD-1と同時阻害することで相乗的に抗腫瘍T細胞活性が増強されるかについて、人工T細胞と1つヒト腫瘍浸潤リンパ球を用いて検証、証明してきた。近年、免疫チェックポイント阻害剤投与による抗腫瘍効果の中心を担うのは腫瘍浸潤リンパ球であることが確定的となってきたため、ヒトメラノーマ腫瘍浸潤リンパ球を用いた検証の数を増やすことが重要と考えられた。そこで本年度は追加で準備、作成した複数のヒトメラノーマ腫瘍浸潤リンパ球(TIL)と自己腫瘍細胞株のペアを用いて、PD-1, TIGIT, LAG3の3分子同時阻害によって得られる相乗的な抗腫瘍T細胞反応の増強効果を確認した。各TILと自己腫瘍細胞株の共培養実験に、PD-1、TIGIT, LAG-3それぞれのシグナルを阻害する抗体を添加し、TILの活性化の程度をサイトカイン放出量で定量すると、個人差はあるものの、上記3分子の同時阻害による相乗効果はコンスタントに観察された。上記のうち2分子の同時阻害実験では、PD-1とTIGITの阻害が最も抗腫瘍T細胞反応の増強効果が高かった。さらにTIGITの新規治療標的としての有用性を、ヒト化モデルマウスを用いたin vivo実験で検証した。共同研究を行っている慶応大学先端医科学研究所が保有するヒト化マウスモデルにヒトメラノーマを植えて生着させ、それを認識するT細胞の静脈移入で治療するモデルにおいて、同施設と共同で作成した抗ヒトTIGIT阻害抗体を添加した。その結果、我々が開発した抗ヒトTIGIT阻害抗体によって移入T細胞の腫瘍縮小効果が有意に増強された。ここまでの結果を、日本がん免疫学会、あるいは3つの全国規模の皮膚科学会の招待講演にて発表した。新規免疫チェックポイント分子の有力候補であるTIGITとLAG3について、PD-1との同時阻害による相乗的T細胞活性増強効果が期待出来るか、を検討するために以下の実験を行った。1、健常人末梢血リンパ球よりメラノーマ抗原(MART-1)特異的人工T細胞を作成し、それぞれ複数のMART-1抗原を発現したメラノーマ細胞株と共培養刺激を行った。刺激後24,48,72時間後までのPD-1、TIGIT, LAG-3の発現レベルの経時変化をフローサイトメトリーにて確認した。その結果、これら4つの分子が刺激後に発現されるタイミング、また刺激後に発現が維持される時間、はほぼ同じであることが確認された。2、メラノーマ細胞をIFNgで刺激した後のPD-L1, CD155, MHC class IIの発現レベルの経時変化をフローサイトメトリーにて確認した。その結果、これらの分子が刺激後に発現されるタイミング、また刺激後に発現が維持される時間はほぼ同じであることが確認された。3、メラノーマ特異的T細胞とメラノーマ細胞株の共培養にPD-1、TIGIT, LAG-3それぞれのシグナルを阻害する抗体を添加し、T細胞の活性が相乗的に増強されるかどうかを検討した。その結果、抗PD-1抗体、抗TIGIT抗体,抗LAG-3抗体添加によってT細胞抗腫瘍活性が相乗的に増強された。メカニズムとして、これら3つの抑制シグナルが協調的にT細胞受容体シグナルを抑制していることも明らかにした。ここまでの結果を、米国研究皮膚科学会や日本研究皮膚科学会で発表した。平成28年度は予定していた実験のほとんどを達成した。未達成の実験は以下の通りである。ヒトメラノーマ腫瘍検体の浸潤T細胞を使用した同様の解析は、臨床検体の不足により、予定よりは遅れている。また、PD-1シグナル、TIGITシグナル, LAG-3シグナルの相互干渉の解明についても、T細胞受容体Zap70経路以外の解析を行う必要がある。平成29年度以降の課題であるPD-1シグナル阻害、TIGITシグナル阻害, LAG-3シグナル阻害の相乗効果をin vivoで検討する実験の準備(モノクローナル抗体の作成、実験系の確立)はほぼ、終了した。新規免疫チェックポイント分子の有力候補であるTIGITとLAG3について、PD-1との同時阻害による相乗的T細胞活性増強効果が期待出来るかを、昨年度までは主に、簡便で再現実験が行いやすい人工T細胞を用いて実施した。本年度は主に、ヒトの腫瘍免疫で最も重要な役割を担うとされる腫瘍浸潤T細胞で実施した。ヒトメラノーマ切除組織を酵素で消化し、single cell suspensionを作成する。これより腫瘍浸潤T細胞のラインと腫瘍細胞株のペアを複数、作成できたので、共培養刺激によるT細胞の活性化や癌細胞の殺傷能力を検討した。さらにそこにPD-1、TIGIT, LAG-3それぞれのシグナルを阻害する抗体を添加し、腫瘍浸潤T細胞の自己癌細胞への攻撃活性が相乗的に増強されるかどうかを検討した。その結果、抗PD-1抗体、抗TIGIT抗体,抗LAG-3抗体添加によって腫瘍浸潤T細胞の自己癌細胞刺激に対するサイトカイン放出量が相乗的に増強された。そして、各分子の阻害効果、組み合わせによる増強効果の程度は患者ごとに個人差があることも判明した。全体の傾向としては抗PD-1抗体と抗TIGIT抗体の組み合わせが最良の相乗効果を示した。ここまでの結果を、米国研究皮膚科学会、日本がん免疫学会や日本研究皮膚科学会で発表した。本年度も予定していた実験のほとんどを達成した。

昨年度は主に汎用性、再現性の高い人工T細胞を用いた実験系によって、新規免疫チェックポイント分子の有力候補であるTIGITとLAG3について、PD-1との同時阻害による相乗的T細胞活性増強効果を検討したが、本年度はよりヒトの腫瘍環境に近い、ヒトメラノーマ腫瘍浸潤リンパ球を用いた解析を行うことができた。さらに、慶応大学先端医科学研究所の河上裕先生と共同で、マウス、ヒトそれぞれのTIGITに対する新規モノクローナル抗体を樹立することもでき、ヒトメラノーマ腫瘍浸潤リンパ球に添加した場合のT細胞活性増強効果を確認出来た。未達成の実験は以下の通りである。共同研究を行っている慶応大学先端医科学研究所が保有するヒト化マウスモデルを用いて、抗PD-1抗体、抗TIGIT抗体、抗LAG3抗体による相乗的T細胞活性化作用とメカニズムの解析を行うプランがまだ未達成であるが、条件検討は進んでいる。また、ヒトメラノーマ検体を用いた実験も、目標検体数にはまだ達していないが、平成30年度中には達成出来る予定である。昨年度までは、新規免疫チェックポイント分子の有力候補であるTIGITとLAG3をPD-1と同時阻害することで相乗的に抗腫瘍T細胞活性が増強されるかについて、人工T細胞と1つヒト腫瘍浸潤リンパ球を用いて検証、証明してきた。近年、免疫チェックポイント阻害剤投与による抗腫瘍効果の中心を担うのは腫瘍浸潤リンパ球であることが確定的となってきたため、ヒトメラノーマ腫瘍浸潤リンパ球を用いた検証の数を増やすことが重要と考えられた。そこで本年度は追加で準備、作成した複数のヒトメラノーマ腫瘍浸潤リンパ球(TIL)と自己腫瘍細胞株のペアを用いて、PD-1, TIGIT, LAG3の3分子同時阻害によって得られる相乗的な抗腫瘍T細胞反応の増強効果を確認した。各TILと自己腫瘍細胞株の共培養実験に、PD-1、TIGIT, LAG-3それぞれのシグナルを阻害する抗体を添加し、TILの活性化の程度をサイトカイン放出量で定量すると、個人差はあるものの、上記3分子の同時阻害による相乗効果はコンスタントに観察された。上記のうち2分子の同時阻害実験では、PD-1とTIGITの阻害が最も抗腫瘍T細胞反応の増強効果が高かった。さらにTIGITの新規治療標的としての有用性を、ヒト化モデルマウスを用いたin vivo実験で検証した。共同研究を行っている慶応大学先端医科学研究所が保有するヒト化マウスモデルにヒトメラノーマを植えて生着させ、それを認識するT細胞の静脈移入で治療するモデルにおいて、同施設と共同で作成した抗ヒトTIGIT阻害抗体を添加した。その結果、我々が開発した抗ヒトTIGIT阻害抗体によって移入T細胞の腫瘍縮小効果が有意に増強された。ここまでの結果を、日本がん免疫学会、あるいは3つの全国規模の皮膚科学会の招待講演にて発表した。メラノーマに対する新規免疫チェックポイント阻害療法を開発するために、今後は以下の検討を行う。平成28年度に人工T細胞で確認したPD-1シグナル、TIGITシグナル, LAG-3シグナルの相互干渉や同時に阻害した場合の相乗的なT細胞活性化が、ヒトメラノーマ腫瘍浸潤リンパ球でも観察されるかどうかを検討する。
スピン軌道相互作用誘起モット絶縁体の物性解明と超伝導化

スピン軌道相互作用誘起モット絶縁体Ba2IrO4はLa2CuO4と同構造の層状イリジウム酸化物であり、銅酸化物高温超伝導体に類似した電子状態を持つことが予想されている。本研究では、Ba2IrO4の物性解明と超伝導化を目的とした高品質試料作成、精密な輸送特性および電子物性測定を行った。その結果、スピン軌道相互作用誘起モット絶縁体の特異な電子状態に対する理解が深まり、超伝導化への道筋が見えてきた。本年度はスピン軌道相互作用誘起モット絶縁体Ba2IrO4の単結晶を用いた精密な電子状態解析と高圧下物性測定、および多結晶を用いた圧力とキャリアドーピング効果の検証を行った。高純度単結晶を用いた軟X線吸収分光法(XAS)および共鳴非弾性X線散乱法(RIXS)により、Ba2IrO4では各電子軌道(xy, yz, zx)の電子占有率がほぼ等しいことが分かった。これはIrO6八面体の正方晶歪みによる結晶場分裂エネルギーΔが、スピン軌道相互作用によって緩和され(3 eV →0.05 eV)、Ba2IrO4の基底状態がほぼ理想的なモデル(Δ= 0)に近いことを示唆している。一方、硬X線光電子分光法(HAXPES)および極低エネルギー光電子分光法(ELEPES)により、Ba2IrO4はモット型よりもスレーター型絶縁体に近いが、反強磁性転移温度以上でも電子相関の寄与による異常金属状態を示すことが分かった。これら研究を通して、スピン軌道相互作用誘起モット絶縁体の物性解明に一歩前進したと考えらえる。もう一つの目標である超伝導化は達成できなかったが、ダイヤモンドアンビルを用いた超高圧下単結晶電気抵抗測定により、金属絶縁体転移圧力がキュービックアンビルによる多結晶の測定結果よりも大幅に高圧側にシフトすることが分かった。これはBa2IrO4が圧力の異方性(静水圧性)による影響を強く受けることを意味している。また、圧力とキャリアドーピングを組み合わせた研究により、圧力が電子ドーピング領域において、金属化(超伝導化)に必ずしも有効に働かないことを見出した。本研究を通してスピン軌道相互作用誘起モット絶縁体の物性解明はだいぶ進展したが、超伝導化に関する課題は依然として残っており、今後も研究を継続することが望ましい。本研究はスピン軌道相互作用誘起モット絶縁体、Ba2IrO4の物性解明と超伝導化を目的としている。Ba2IrO4は銅酸化物超伝導体の母物質、La2CuO4と同構造の層状イリジウム酸化物であり、銅酸化物に類似した電子状態が実現していると予想される。本年度はBa2IrO4単結晶の合成と精密物性測定、およびキャリアドーピングによる超伝導化を試みた。単結晶合成については、高圧下における最適な合成条件を見出すことにより、最大500ミクロン程度の大きさの結晶を得ることができた。この結晶を使用して、共鳴X線散乱、ラマン散乱実験を行なった。これよりBa2IrO4の反強磁性状態において、磁気モーメントがIrO2面内で反平行([110]方向)に整列していること、面内における交換相互作用の大きさは銅酸化物の半分程度(600700 K)であることが判明した。キャリアドーピングについては、2価のバリウム(Ba2+)の一部を、1価のカリウム(K+、ホールドーピングに対応)、または、3価のランタン(La3+、電子ドーピングに対応)に置換することに成功した。ゼーベック係数測定より、K置換体がp型、La置換体がn型になることが判明した。これより、Ba2IrO4はホールと電子、両キャリアともドーピング可能な系であると判断された。超伝導に関しては、未だ発見できていないが、各種置換体の物性測定を通して、Ba2IrO4が特異な電子ーホール対称性(銅酸化物超伝導体と比べて、対称的な電子ーホール非対称性)を示すことが判明するなど、興味深い結果を得た。平成24年度の研究目標は、(1)Ba2IrO4高品質単結晶の作成と精密物性測定、および、(2)キャリアドーピングによる超伝導化、の2つである。(1)については、高圧合成法を駆使することにより、目的とした高品質単結晶の合成に成功した。また当初の計画通りに、共同研究(共鳴X線散乱、中性子散乱、ラマン散乱実験)を行った。これにより、Ba2IrO4の磁気構造([110]方向を向いた反強磁性)が判明した。Sr2IrO4との比較から、層状イリジウム酸化物におけるスピン軌道相互作用誘起モット絶縁体状態は、Ir-O-Ir結合角の大幅な変化に対してロバストであることが分かった。また、IrO2面内の反強磁性交換相互作用の大きさは銅酸化物の半分程度(600700 K)であることが判明した。

(2)については、キャリアドーピングについては、2価のバリウム(Ba2+)の一部を、1価のカリウム(K+、ホールドーピングに対応)、または、3価のランタン(La3+、電子ドーピングに対応)に置換することに成功した。ゼーベック係数測定より、K置換体がp型、La置換体がn型であることが判明した。これより、Ba2IrO4はホールと電子、両キャリアともドーピング可能な系であると判断された。Ba2IrO4の超伝導化は実現できていないが、各種置換体の物性測定を通して、本物質が特異な電子ーホール対称性(銅酸化物超伝導体と比べて、対称的な電子ーホール非対称性)を示すことが判明するなど、興味深い結果を得た。以上の成果より、本年度の研究計画は、ほぼ達成したものと判断される。当初の研究計画通り、(1)Ba2IrO4置換体の精密物性測定、および(2)多重極限環境下における超伝導の可能性、を推進する予定である。(1)については、すでにBa2IrO4置換体のμSR測定が完了しており、データ解析および関連物質(Sr2IrO4など)との比較検討の段階にある。また、置換体の良質な単結晶合成が完了しだい、ラマン散乱、共鳴X線散乱を行う予定である。(2)多重極限環境下(超高圧、極低温)の測定については、現在、置換体多結晶試料を用いた予備的実験を完了している。こちらについても、単結晶が得られしだい、本測定を行う予定である。上記に加えて、新しい共同研究として、角度分解光電子分光(ローザンヌ工科大学)および中性子散乱(ヴァージニア大学)を開始した。また、走査型トンネル分光(STS)に関しても、広島大学グループと共同研究を発足する予定である。STS測定は、反強磁性転移温度より高温から生じると予測される擬ギャップ的振舞いを観察することが目的である。さらに、イリジウム以外の4d、5d遷移金属への置換、物質探索も推進しており、興味深い化合物が合成された際には、集中的な物性測定を行う予定である。当該助成金が生じた状況:3月末の物理学会出張に関する旅費精算処理時のミス翌年度分として請求した助成金と合わせた使用計画:実験用具、もしくは試薬代として使用する。
昆虫の交尾器進化における雌の繁殖戦略の役割―ハサミムシ目を中心に―

ハサミムシ類は雄の交尾器形態に著しい多様性が観察されている。本研究では、このような多様性と、雌の繁殖戦略、特に雌が複数の雄とつがうという現象との関わりに重点をおいて調査している。本年度の研究において、以下の諸点が明らかとなった。コバネハサミムシの雌は産卵の都度に交尾しなければ,貯蔵精子が枯渇してしまい,結果として艀化率や産卵数の低下が起きることが昨年度までの研究で明らかとなった。しかし,今年度,ビデオ記録装置を援用して,本種の交尾行動を詳細に分析した結果,一晩あたりの交尾回数は数十回にも及ぶことがあり,精子の枯渇という理由のみでは説明し難いことがわかった。交尾回数と雌の貯蔵する精子数の関係を調べた結果,雌の貯蔵精子数は数回の交尾で飽和することが分かった。分子マーカーを用いた父性分析をおこなった結果,すでに他の雄の精子を十分に持った雌に対して,別の雄が一回交尾した場合,その雄は約2割(0.2)を自分の精子と置換できることがわかった。この値は他の昆虫類で一般に報告されている値(0.51)に比べて低く,本種を特徴づける。すなわち,雄は一回の交尾では,十分な精子置換が達成されず,出会った雌に対して何度も交尾をおこない,このことにより多くの子孫を残す。雄同士は雌が存在する巣穴をめぐって争う行動を示すが,体のサイズが大きい雄ほど,巣穴の中で雌と長く同居し,何度も交尾をする傾向があることがわかった。量的遺伝解析(半兄弟分析)により,体のサイズには遺伝的変異があることが明らかになったので,巣穴を防衛する能力が高い(=大きい)雄とよく交尾することで,雌の側も子供の質(体サイズ)の向上という利益を得ている可能性が示された。この知見は,近年,進化生態学分野で議論されているGood sperm仮説の図式に合致し,実証例の1つとなる。
縄文時代前半期における森林資源利用体系の成立と植物移入の植物学的解明

縄文時代早期後葉には本州中部でクリが多産してウルシが伴い精巧な木製品が製作され,森林資源管理が成立した。しかし土木材へのクリの多用や漆器の製作はまだ把握できておらず,森林資源管理の詳細は不明である。西日本では多数の編組製品が素材を吟味して製作され,集落の周辺での森林資源管理が想定された。西日本で利用されたイチイガシは,縄文時代前期ごろに瀬戸内海沿岸部に広がって照葉樹林を形成した。草創期から早期の植物資源管理が把握しにくいのは,当時の人々の生活の場であった沿岸部が海進によって水没しているためと考えられた。縄文時代前期に成立した森林資源を利用する体系が,縄文的な森林環境の成立した草創期から早期の時期にどのように形成されたのかを解明し,また前期以降に確立した森林資源利用体系の地域による相違を解明することを目的として研究を行った。縄文時代の東日本ではクリを中心とした森林資源利用が行われていたことが明らかとなっているが,西日本では,貯蔵穴から出土する果実からイチイガシの利用が想定されていた。これまでイチイガシは,九州以外では縄文時代における生育状況が不明であったが,兵庫県神戸市垂水区の垂水・日向遺跡から出土した木材化石と大型植物化石を解析することによって,イチイガシが,7300年前に終わる縄文時代早期以降,5600年前2400年前の中期晩期までの間に,大阪湾岸において,照葉樹林の主要な要素であったことを明らかにした。大阪湾岸にこの時期に成立した照葉樹林は,構成種の優占度では,現在の宮崎県の照葉樹林とは異なっていたが,種組成としては共通性が高く,その他に撹乱の大きい開けた立地に生育する種を含んでいた。瀬戸内海周辺で出土している大型植物化石を合わせて考えると,イチイガシを伴った照葉樹林は縄文時代前期頃には沿岸部に広がったと考えられる。一方,東日本におけるクリの森林資源利用が西日本ではどこまで広がっているのかを確認するために福井県三方上中郡の鳥浜貝塚の堆積物の花粉組成を調べた。ここでは,14000年前12000年前の草創期にはコナラ属コナラ亜属が優占して人による森林の利用はあまり明確でないものの,11000年前9800年前の早期の段階でクリの花粉が10%に達し,貝塚の周辺でクリの利用と管理が始まって,6000年前の前期後葉にはクリの花粉が20%以上となってクリの資源管理が成立し,東日本と同様の森林資源管理が行われていたことを明らかにした。またウルシやアサも早期にクリの資源管理に伴って栽培されていた。縄文時代前期に成立した森林資源を利用する体系が、縄文的な森林環境の成立した草創期から早期の時期にどのように形成されたのかを解明し、また前期以降に確立した森林資源利用体系の地域による相違を解明することを目的として研究を行った。本年度は,ほとんど縄文時代の森林資源利用が分かっていない西日本の事例として、九州における編組製品の素材を検討した。縄文時代早期末葉の佐賀県佐賀市東名遺跡からは高さが1mに達する大型の編組製品が破片も含めて700点ほど出土しており、このうちの130点の素材を検討した。その結果、体部の素材の3分の2はムクロジで、残りはイヌビワとツヅラフジであった。また縄文時代前期の福岡県福岡市中村町遺跡の編組製品の素材は、コナラ属アカガシ亜属が10点、ホルトノキが10点であった。従来、北部九州で報告されている編組製品の素材と対比してみると、編組製品の素材選択は縄文時代早期には確定しており、それが縄文時代を通じて後期までは継承されていたことが確認された。一方,かつて様々角度から研究された鳥浜貝塚の試料を対象として新たな視点からの解析をおこなった。まず草創期の層準から出土したウルシ木材の年代測定を行い、草創期の後半にウルシが鳥浜貝塚に存在したことを確認した。さらに堆積物の花粉分析と種実分析を行い、貝塚の近傍にはハンノキ林が草創期以降継続して存在し、スギが早期末ころから増加して縄文的な森林環境が成立したことを明らかにした。以前の解析では存在が明瞭でなかったクリは、草創期末から早期には周辺にある程度生育しており、前期には東日本と共通するようなクリが優占する時期があったことが確認でき、この時期には微粒炭も増加する傾向が認められ、貝塚周辺における人の活動が盛んになったと想定された。千葉県市川市の雷下遺跡と道免き谷津遺跡、および東京都北区御殿前遺跡の出土植物遺体を対象として、種組成を解明し、その時代的な変遷を解析した。いずれの遺跡も東京湾岸か砂州を隔てて湾に接する場所にあり、当時の海際の森林組成の変遷と人間の活動との関係を解明するのに好適な立地にあった。解析の結果、縄文時代早期後葉には、コナラ亜属やエノキ属、ムクノキ属の落葉広葉樹林を背景とした環境のなかで、クリを中心とした森林資源管理が関東地方南部でも確立していた事を明らかにした。この地域では、ハンノキ節を主体とする低地林が広がるのは早くても前期になってからであり、早期には湿地性の草本が優占することもなく、早期の海進期には低地には安定した植生が成立していなかったと想定された。

また、人間の森林資源利用の直接的な証拠として、早期後葉のムクノキ製の丸木舟やクヌギ節製の棒状製品といった木製品類や、ササ製の編組製品を検討することができた。それらの製作技術は、早期後葉の段階でほぼ前期以降のレベルに達しており、早期後葉にはすでに前期以降を特徴づける木工や編組の技術が確立していたことを明らかにした。しかしこの時期の漆器は見つかっておらず、ウルシの花粉が検出されたこととは矛盾していた。現在の関東平野南部で潜在植生とされる常緑のアカガシ亜属が台地上に増加して、関東周辺山地に由来すると考えられるスギ花粉が増えてくるのは晩期以降であり、それまではクリを中心とした資源管理が断続的に継続していた。この間、周辺にはナラ林が継続して存続しており、クリの増減は集落の移動あるいは消長を表していると考えられた。縄文時代早期後葉には本州中部でクリが多産してウルシが伴い精巧な木製品が製作され,森林資源管理が成立した。しかし土木材へのクリの多用や漆器の製作はまだ把握できておらず,森林資源管理の詳細は不明である。西日本では多数の編組製品が素材を吟味して製作され,集落の周辺での森林資源管理が想定された。西日本で利用されたイチイガシは,縄文時代前期ごろに瀬戸内海沿岸部に広がって照葉樹林を形成した。草創期から早期の植物資源管理が把握しにくいのは,当時の人々の生活の場であった沿岸部が海進によって水没しているためと考えられた。26年度が最終年度であるため、記入しない。木材解剖学26年度が最終年度であるため、記入しない。当初に計画していた遺跡の資料調査に加えて,垂水・日向遺跡の資料の調査を行い,西日本におけるイチイガシ資源の成立の様相を解明することができた。その結果,大阪湾岸では早期以降の中期までの段階で,イチイガシを含む照葉樹林が成立し,森林資源管理と利用の基礎が確立されたことを確認できた。一方,鳥浜貝塚では継続して資料の解析を行った結果,東日本を特徴づけるクリ資源の栽培管理が早期段階から行われていた可能性を確認することができた。また中国原産と考えられるウルシやアサも,クリの資源管理に伴っており,東日本で前期に確認されている森林資源管理がより古い時期に確立していたことが確認できた。当初計画していた鳥浜貝塚と東名遺跡の資料の解析を行い,編組製品の素材同定と花粉分析,年代測定においては予想よりも大きな成果が得られた。一方,鳥浜貝塚の種実分析については,資料の乾燥が予想外に進んでいて,同定に手間取っており,年度内では十分詳細な同定を行うことはできなかった。早期から前期の連続した資料の解析が可能な関東地方の遺跡を対象として研究を継続し,鳥浜貝塚の資料と対比しながら森林資源の栽培管理の体系が確立する過程を明らかにする。鳥浜貝塚等の種実分析は,継続して時間をかけて行い,他の遺跡の資料と合わせて,草創期から早期における栽培植物の存在について検討する。