hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
二次リンパ組織の形成過程における間質細胞の役割に関する研究

胎児期マウスのパイエル板やリンパ節の原基において、Lin-/IL-7Rα+/integrin α4β7+細胞とVCAM-1+ICAM-1+の間質細胞との相互作用がリンパ球などの構成細胞の誘導と適切な配置をつかさどることは従前の研究によって明らかとなっていた。さらに、野生型C57BL/6およびSCIDマウスの出生後初期のパイエル板の形成過程を詳細に観察することによって、以下の点が明らかとなった。1.IL-7Rα陽性細胞は出生後のパイエル板でも認められ、生後4日ごろまでは分節化せず細胞の集塊として観察されるが、それ以後に濾胞部と一致した局在パターンを示し始め、生後7日目頃にはこの局在パターンは完成し以後も持続する。VCAM-1陽性細胞もIL-7Rα陽性細胞と同じ局在を示す。2.SCIDマウスのパイエル板においてもIL-7Rα陽性細胞およびVCAM-1陽性細胞を認め、その分布は濾胞と一致していた。このことから、パイエル板の基本構造の形成にはIL-7Rα陽性細胞およびVCAM-1陽性細胞の存在が必要かつ十分であり、リンパ球は関与しないことが明らかとなった。3.フローサイトメーターによってパイエル板および腹腔リンパ節から単離されたVCAM-1+ICAM-1+細胞はlymphotoxin β受容体を発現し、CXCL13やCCL19などのケモカインを産生することが確認された。また、TRANCEの発現を検討したところ、腹腔リンパ節ではこの細胞にTRANCEの発現が認められたが、パイエル板では認めなかった。このことから、リンパ節に特異的なTRANCE-RANKシグナルの役割が示唆された。1、胎児期マウスのパイエル板やリンパ節の原基において、IL-7Rα/integrin α4β7/CD4陽性細胞とVCAM-1/ICAM-1陽性の間質細胞との相互作用がリンパ球などの構成細胞の誘導と適切な配置をつかさどることは従前の研究によって明らかとなった。今回C57BL/6およびSCIDマウスを用いた出生後初期のパイエル板の形成過程を詳細に観察したところ、以下の点を見出した。(1)IL-7Rα陽性細胞は出生後のパイエル板でも認められ、生後4日ごろまでは分節化せず細胞の集塊として観察されるが、それ以後にT/Bリンパ球および樹状細胞とは異なった濾胞辺縁部に限局した局在パターンを示し始め、生後7日目頃にはこの局在パターンは完成し以後も持続する。一方VCAM-1陽性細胞は一貫して濾胞に一致した局在を示す。(2)SCIDマウスのパイエル板においてもIL-7Rα陽性細胞およびVCAM-1陽性細胞を認めるが、IL-7Rα陽性細胞は濾胞状に分節化した集塊パターンを取るのみでBL/6マウスのような傍濾胞性パターンは取らない。一方VCAM-1陽性細胞はIL-7Rα陽性細胞と一致した分布を示す。2、上記のパイエル板形成過程におけるリンフォトキシンα1β2(LT)によるシグナルの役割を見るために、新生児マウスにLTβR-Fcを投与してその影響を観察した結果、以下のことが明らかとなった。(1)生後3日以内のBL/6マウスにLTβR-Fcを投与した場合、パイエル板の形成は完全に阻害された。(2)生後4日目のマウスに投与すると、小腸上部(口側)のパイエル板は消失したが、小腸下部(肛門側)では形成は維持された。(3)生後7日目以降のマウスではLTβR-Fc投与の影響を認めなかった。以上より、生後4日と7日の間で部位依存性にLTに依存した組織構造がLT非依存性の構造に質的変化を起こすことが推測された。
複素射影空間の実部分多様体のリッチ曲率に関する研究

複素射影空間のコンパクト極小実部分多様体について,Simons型の積分公式を用いて,リッチ曲率,断面曲率,スカラー曲率等に関する各種挟撃問題の研究を行った.さらに,複素射影空間のある種のコンパクトなA型実超曲面に対して,断面曲率の満たすべき不等式を得た.また,逆に断面曲率がこの不等式を満たすような複素射影空間のコンパクト極小実超曲面が上記の実超曲面に限ることを示した.一方,複素空間形の実超曲面について,第二基本形式や各種曲率に対する正則分布上での条件が実超曲面の性質をどの程度決定するかを調べる問題を研究している.その一環として,主曲率が定数であるような複素空間形の実超曲面で,リッチテンソルが正則分布上でアインシュタインに対応する条件を満たすものを決定した.この結果は,複素空間形の擬アインシュタイン実超曲面のひとつの特徴付けになっている.正の正則断面曲率を持つ複素空間形の,特殊な構造を仮定しない余次元一般の実部分多様体に対して,Simons型の積分公式を与えた.また,得られた積分公式を利用して,第二基本形式の長さ,スカラー曲率との関連から実部分多様体の性質を調べた.従来,複素空間形の実部分多様体を研究する際には,ホップのファイバー束を利用する手法が主として用いられてきたが,この積分公式を用いることにより,ホップのファイバー束を利用せずに直接部分多様体の構造を調べることが可能となる.また,この積分公式を用いて,法接続が平坦,またはsemi-flatであるような複素空間形の余次元一般の実部分多様体の断面曲率に関する挟撃問題に対するいくつかの結果を導いた.一方,正則断面曲率がゼロではない複素空間形のCR部分多様体のリッチテンソルの性質を調べることにより,正則分布の次元が2より大きいとき,recurrentなリッチテンソルを持つ法接続がsemi-flatなCR部分多様体は存在しないことを示した.これは,実超曲面のリッチテンソルに関する既知の結果の拡張となっている.また,定理の証明の過程で得られた結果を用いて,複素空間形のpseudo-Einstein実超曲面に対する特徴付けを行った.複素空間形の実超曲面に対しては,第二基本形式が正則分布上でtotally umbilicalと同様の性質を持つという条件を調べた.これは従来のtotally η-umbilicalという概念を拡張した新しい概念である.これによって,totally η-umbilicalな実超曲面とruledな実超曲面に対する特徴付けを行った.複素射影空間のコンパクト極小実部分多様体について,Simons型の積分公式を用いて,リッチ曲率,断面曲率,スカラー曲率等に関する各種挟撃問題の研究を行った.さらに,複素射影空間のある種のコンパクトなA型実超曲面に対して,断面曲率の満たすべき不等式を得た.また,逆に断面曲率がこの不等式を満たすような複素射影空間のコンパクト極小実超曲面が上記の実超曲面に限ることを示した.一方,複素空間形の実超曲面について,第二基本形式や各種曲率に対する正則分布上での条件が実超曲面の性質をどの程度決定するかを調べる問題を研究している.その一環として,主曲率が定数であるような複素空間形の実超曲面で,リッチテンソルが正則分布上でアインシュタインに対応する条件を満たすものを決定した.この結果は,複素空間形の擬アインシュタイン実超曲面のひとつの特徴付けになっている.
宇宙線生成核種をトレーサーとする物質循環の研究

1.太平洋・南極海における表層水中、(1)^7Be濃度は水温とほぼ相似形の深度分布を示し、夏季には海面から減少し100m付近で0に近づき、冬季には海面から100m付近までは一定でその後急減する。(2)^<10>Be濃度の深度分布は、一定あるいは表面から深部に向かうにつれ濃度が増加する形状であった。(3)^7Be濃度の緯度分布は大気中濃度との相似性は高く、極小値、極大値は、5-10、20-40atoms cm^3.(4)^<10>Be濃度の緯度分布は南半球では大気中濃度との相似性が高く、赤道域と北半球ではほぼ均一な分布を示し、南極海で300-500、極大値は1500、赤道域と北半球で500-900atoms cm^3。2.東京と八丈島の大気中^7Be.^<10>Be濃度、^<10>Be/^7Beは年間通じてよく一致し、^<10>Be/^7Beは東京1.81、八丈島1.75と、海洋大気1.5より高かったが、AI濃度と土壌の^<10>Be/Alを用いる再浮遊の補正によりこれらを一致させることができた。雨水中^<10>Be濃度から算出した、地表へのフラックスの季節変動パターンは異なり、平均値も東京0.040、八丈島0.074atoms cm<-2>s<-1>と大きく異なった。^<10>Be/^7Beの季節変動パターンは類似しており、大気と同様の再浮遊補正により大気中の値とも良い一致を示した。3.西部北太平洋の海底堆積物のex^<230>Th年代と^<10>Be濃度から求めた堆積物への^<10>Beフラックスは、20,40°N付近で0.018-0.037,0.10-0.15atoms cm<-2>s^<-1>と堆積速度に比例する結果となった。前者は表層水中濃度から求めた海洋へのフラックス0.03-0.04と一致したが、後者はその3-4倍と大きく異なり、堆積物中の^<10>Beは大気からのフラックスあるいは海水中濃度ではなく、沈降する物質量に依存することが示唆された。八丈島および日本大学文理学部5号館屋上において大気・雨水試料の連続採取を行い、^7Beについて主にGe半導体検出器によるγ線測定を行った後、化学処理により分離・精製して^<10>BeのAMS(加速器質量分析)測定を行った。大気中^7Be・^<10>Be濃度,^<10>Be/^7Be、雨水中濃度から算出した^7Be・^<10>Beフラックス,^<10>Be/^7Beは全て3-4月に極大を示した。これは成層圏から対流圏への大気の流入を観測したものと考えられる。

大気および雨水の測定結果について八丈島と東京(日本大学文理学部5号館屋上)を比較すると、大気中^7Be・^<10>Be濃度,^<10>Be/^7Beの季節変動のパターンはほとんど同一であるが、すべての値について東京の方がわずかに高いように思われた。顕著な差は3-4月の極大期に見られ、^7Be濃度には差はないが、^<10>Be濃度,^<10>Be/^7Beは東京の方が約2倍高くなった。これが再浮遊の影響と考えられる。次に雨水中濃度から算出した^7Be・^<10>Beフラックスの季節変動のパターンは春期の極大は一致したが、八丈島では夏期の減少が大きく極小期を示すのに対し東京ではむしろ増加している。^7Beの年間平均フラックスはあまり変わりがないが、^<10>Beフラックスは全体的に高く年間平均も当然高い。これも再浮遊の影響と考えられる。さらに大気と雨水の^<10>Be/^7Beの季節変動のパターンは東京・八丈島どちらにおいても顕著な差は見られないが、雨水の場合はどちらにおいても^7Beフラックスが低い場合は^<10>Be/^7Beが高くなるが、これは成層圏の影響ではなく、再浮遊の影響と考えられるので、この値を用いて再浮遊の影響を見積もり、補正することを検討する必要がある。東京(35.6°N,139.7°E)及び八丈島(33.1°N139.9°E)において2002年1月から継続して大気エアロゾルおよび雨水の連続採取を行い、東京においては2003年1月から全降下物採取と、ろ過による雨水のみの採取(八丈島と同一方式)を並行して行った、これらの試料は、^7Beについて主にGe半導体検出器によるγ線測定を行った後、化学処理により分離・精製して^<10>BeのAMS(加速器質量分析)測定を行った。大気中^7Be・^<10>Be濃度および^<10>Be/^7Beの季節変化は、東京と八丈島では非常によく一致しており、緯度・環境の違いによる差はほとんどないように思われ、土壌粒子などの再浮遊の影響がないようにも思われるが、^<10>Be/^7Beを比較すると、平均10%程度東京の方が値が高く、再浮遊の影響がこの原因ではないかと思われる。雨水中濃度から算出された、^7Be・^<10>Be fluxの季節変動は、東京と八丈島でパターン及び値に違いが見られ、大気中濃度との相関も必ずしも良くないので、降水量や降水頻度などの要因の影響が大きいと考えられる。しかしながら、^<10>Be/^7Beの季節変化はかなり良い一致を示し、更に大気と比較しても良い一致が見られたが、東京の全降下物試料のうち1-3月採取された試料は、特異的に高い値を示した。この時期の気候には乾燥・強風という特徴があるので、他の試料との違いは、土壌粒子の寄与と考えることができる。これは、ろ過方式の雨水試料の測定により、陸上の^7Be・^<10>Be fluxが求められることを示唆するもので、^7Be・^<10>Be fluxの分布あるいはglobal averageの推定について展望を与えるものと思われる。ハワイ-ペルー間東部北太平洋及びペルー-タヒチ間東部南太平洋(KH03-1,2003)における表層水中の^7Be・^<10>Be濃度の深度分布測定から、北太平洋においてはKH00-3(2000)と類似の深度分布が得られ、南太平洋においては東部から西部に向かい、1)表層における^7Be,^<10>Be濃度が北太平洋類似の10-15,600-700(atoms cm^<-3>)と低い値、高い^7Be/^<10>Be(0.014-0.020)、2)低^7Be濃度,高^<10>Be濃度(1400-1800 atoms cm^<-3>),低^7Be/^<10>Be(0.007)、3)高^7Be濃度(24-29 atoms cm^<-3>),高^<10>Be濃度,高^7Be/^<10>Be、の海域に分かれるという結果が得られた。また、表面水の^7Be・^<10>Be濃度の緯度分布については、全体的には大気の緯度分布と相似のパターンが得られたが、海域毎に異なった分布を示し、^<10>Beの分布は^7Be・大気の分布と比較して赤道域における濃度増大が見られ、深層からの湧昇の影響が大であると思われた。
馬瀬狂言資料の研究

1、『天保二年能番組』・『嘉永四年能狂言番組』の位置づけ昨年度に引き続き、仙助能の番組である『天保二年能番組』・『嘉永四年能狂言番組』の分析を行った。明和安政期の仙助座の動向を調査し、特に上演記録を中心に収集し、データベースを作成した。新資料の個人蔵『下河原勧進能及び西光寺・六所宮能番組』なども含め、40種近くの関係資料と比較・検討した結果、本資料の狂言の上演は極めて多く、このような上演形態であったことが馬瀬で記録された要因の一つであった可能性を指摘した。またこのデータベースにより、仙助座の役者構成も明らかになり、今様能狂言との関わり(役者・上演曲)も認められた。今後は、馬瀬狂言の芸態における仙助能の影響についても考察する必要があろう。2、馬瀬狂言の主な狂言台本の位置づけ馬瀬狂言資料の中には、十曲以上所収する狂言台本の他に、同一人物が所持した台本や作成の過程が同一と考えられる台本がある(文化二年奥書『狂言六義』・『目近他』・『教言六義』・奥野所持本等)。これらを分類し、それぞれの位置づけを行った。他の狂言台本と比較・検討した結果、和泉流に近い要素は認められるものの、筋立ての簡略化や独自の演出が曲によって認められた。また奥野所持本のように、大蔵流に近い台本や仙助能に関わる台本も所蔵されている。こうした台本の存在が、現在の馬瀬狂言ではどのように受け継がれているのか、その点についても更に追究する必要がある。その一例として、奥野所持本「瓜盗人」・現行「瓜盗人」の分析を試みたところ、和泉流の古典文庫本に近いものの、終曲部は国会図書館蔵『狂言大全集』と一致することから、馬瀬狂言の芸態は、和泉流を主体としながらも、仙助能等も参考にしながら、演出を工夫していた一面が窺える。こうした芸の伝承という側面からの考察も更に行っていきたい。1、馬瀬狂言資料の分析と関連資料(映像資料も含む)の収集まず馬瀬狂言資料の中で、所収曲が十曲以上の、台本としてまとめられた形のものを中心に、翻刻を行った(翻刻の作業は全てパソコンで行い、そのままデータベースとして活用できるようにした)。主なものとして、最古本と思われる文化二年奥書の『狂言大義』、『目近他』(仮題)等である。これらを諸流(特に和泉流)の狂言台本と比較・検討し、その位置づけを今後明らかにする。また馬瀬狂言や仙助能との関係が指摘できる国会図書館蔵『祖家秘書狂言大全集』も収集し、翻刻作業を進めている。映像資料としては、馬瀬狂言の上演(馬瀬神杜祭礼・伊勢の伝統の能楽まつり)を収録した。2、馬瀬狂言の特徴について...馬瀬本「こんくわい」の考察馬瀬狂言独自の曲である「こんくわい」の翻刻と、その変遷についての考察を行った。この曲は本来、伊勢神宮の遷宮の際に行われるお木曳で上演されるもので、諸流の「釣狐」に比べ、一曲の前半にある狐の語リが縮小され、後半の猟師と狐のわなを巡る争いに歌舞の趣向を加えたものである。この台本は文久三(1863)年のものであるが、お木曳関係資料の調査(神宮文庫、神宮徴古館等)により、天明八(1788)年にこの「こんくわい」に類するもの(「釣狐の崩し」)が上演されたことが明らかになった(これは馬瀬狂言の最古の上演記録でもある)。更にこれらの資料から、曲中の馬瀬独自の部分がお木曳という空間と深く関わること、また当時すでに馬瀬の人々が狂言になれ親しみ、その技量もあったことが推測されることを指摘した。1、奥野並之助関係の資料について馬瀬狂言保存会所蔵資料全てを調査し、139点を確認した。内訳は、狂言台本類111種、謡本2種、囃子伝書20種、目録・番組を含むその他6種であった。全体に亙る調査によって、元の所蔵者は違うが、同じ伝本と推測される形式の資料が認められた。その一つである奥野並之助と記された狂言台本は十種あり、その中には大蔵流と記すものもあった。データベース化し、内容を検討したところ、大蔵虎寛本にほぼ一致する台本も一部認められた。これらの台本がどのように伝承され、和泉流と言われている馬瀬狂言の芸とどのように関わっていたのか、更に分析を進める。2、仙助能番組二種(「天保二年能番組」・「嘉永四年能狂言番組」)について馬瀬狂言資料には、辻能の仙助能と関わる資料が現存する。その資料の一つに仙助能の番組(「天保二年能番組」と「嘉永四年能狂言番組」)がある。これらの二種の資料について、その位置づけを行った。これまで仙助能の番組は個々に紹介されてきたが、全体をまとめて分析したものはなかった。そこで、愛媛県立図書館所蔵の番組を始めとして、仙助能の上演記録を収集・分析し、江戸後期の仙助能の実態を把握し、その上で馬瀬での上演の特徴を捉えた。上演日数・上演曲には、他の番組との共通性が見られたが、狂言の上演数は他に比べ多いことが認められた。また出演者の中には、今様能狂言の創始者である林寿三郎がいる。

嘉永四年の番組は、彼が林寿三郎名で堀井惣右衛門や仙助に次ぐ太夫として活躍していたことが明確にわかる資料として注目される。このように、これら二種の番組が仙助能の実態を明らかにする重要な資料の一つであることを明らかにした。こうした仙助能が馬瀬狂言にどのような影響を与えていたのか、今後台本と照合して追究する。(2003年度芸能学会研究大会(平成15年12月)にて口頭発表)1、『天保二年能番組』・『嘉永四年能狂言番組』の位置づけ昨年度に引き続き、仙助能の番組である『天保二年能番組』・『嘉永四年能狂言番組』の分析を行った。明和安政期の仙助座の動向を調査し、特に上演記録を中心に収集し、データベースを作成した。新資料の個人蔵『下河原勧進能及び西光寺・六所宮能番組』なども含め、40種近くの関係資料と比較・検討した結果、本資料の狂言の上演は極めて多く、このような上演形態であったことが馬瀬で記録された要因の一つであった可能性を指摘した。またこのデータベースにより、仙助座の役者構成も明らかになり、今様能狂言との関わり(役者・上演曲)も認められた。今後は、馬瀬狂言の芸態における仙助能の影響についても考察する必要があろう。2、馬瀬狂言の主な狂言台本の位置づけ馬瀬狂言資料の中には、十曲以上所収する狂言台本の他に、同一人物が所持した台本や作成の過程が同一と考えられる台本がある(文化二年奥書『狂言六義』・『目近他』・『教言六義』・奥野所持本等)。これらを分類し、それぞれの位置づけを行った。他の狂言台本と比較・検討した結果、和泉流に近い要素は認められるものの、筋立ての簡略化や独自の演出が曲によって認められた。また奥野所持本のように、大蔵流に近い台本や仙助能に関わる台本も所蔵されている。こうした台本の存在が、現在の馬瀬狂言ではどのように受け継がれているのか、その点についても更に追究する必要がある。その一例として、奥野所持本「瓜盗人」・現行「瓜盗人」の分析を試みたところ、和泉流の古典文庫本に近いものの、終曲部は国会図書館蔵『狂言大全集』と一致することから、馬瀬狂言の芸態は、和泉流を主体としながらも、仙助能等も参考にしながら、演出を工夫していた一面が窺える。こうした芸の伝承という側面からの考察も更に行っていきたい。
貼付型皮膚麻酔の基礎的研究ならびに実用化

1.グルチルレチン酸ヘミフタレートを添加すると有意に貼付リドカインの皮内吸収が促進され,その促進効果はエイゾン,カプリン酸など他の経皮吸収促進剤より優れていた。また,その効果は3%が最適であった。2.グルチルレチン酸ヘミフタレートを添加した場合と添加しない場合の10%リドカインゲルの鎮痛効果をヒトで比較すると,添加ゲルのほうが無痛効果,効果発現時間に関して有意に優れていた。3.本リドカインの60分間貼付で,スポット皮膚麻酔が得られた。その場合,血中リドカイン濃度は0.01μg/ml以下で副作用も認められなかった。4.72時間パッチテストなどでも局所皮膚に有害な反応はみられなかった。5.本リドカインの無痛効果,効果発現時間は,現在ヨーロッパで使用されているEMLAクリームに勝るとも劣らなかった。6.成人手術患者を対象として静脈内留置針刺入60分前に,本リドカインゲルを貼付すると,その80%以上に十分な無痛効果が得られた。7.小児の静脈内留置針刺入に際して,成人以上の除痛効果が得られた。8.腎不全患者が人工透析を受けるときの血管穿刺痛に有効であった。9.急性期の帯状疱疹の痛みの制御に有用であった。10.成長ホルモンを毎日注射する小児15名を対象に,約6ヵ月にわたって本ゲルを注射前に貼付し,本ゲルの無痛効果,有用性を確認した。11.貼付前にストリッピングなど皮膚への前処置を行っておくと,貼付時間を30分に短縮できた。12.本ゲルに添加する経皮吸収促進剤グルチルレチン酸ヘミフタレートは、ゲル貼付部の局所皮膚血管の拡張を抑制し,皮内に浸達した局麻薬の局所滞留を助長した。我々が開発した経皮吸収促進薬GA MHPhを3%含む10%Iidocaine gelは、現在ヨーロッパを中心に臨床で使用されているEMLAクリームと比較し、無痛効果はほぼ同等、副作用はむしろ少ない結果を得た(Anaesthesia 1993)。当Iidocainegelは、角質から浸透するだけでなく毛嚢、汗腺などから皮下に浸達することがわかった(J Anesth 1993)。経皮吸収促進薬GA MHPhはIidocaineによる皮膚血管拡張を抑制する。即ち、経皮的に吸収された微量のIidocaineが血行性に全身に拡散されるのを抑止、局所Iidocaine濃度を高める作用を有することが判った(第41回日本麻酔学会発表1994)。当Iidocaine gelの臨床応用として、帯状疱疹通対策(第6回日本局所麻酔学会発表1993,麻酔1993)や小児の成長ホルモン注射時に用い高い評価を得た(International Symposium on Growth Hormone and Growth Factors 1994)。当Iidocaine gelを用いヒトでこれまで行った知見をまとめた(Kumamoto Med J 1993)。また、貼付型皮膚局所麻酔に関する今日の世界の状況を総説としてまとめた(臨床麻酔1993)。1.10%リドカインゲルに添加する経皮吸収促進剤グルチルレチン酸ヘミフタレートは,ゲル貼付部のリドカインによる局所皮膚血管の拡張を抑制する。皮内に浸達した微量のリドカインの局所滞留を助長し,局所麻酔効果を助長するものと考えられる。2.成長ホルモンを毎日自己注射する小児15名を対象に,約6ヵ月にわたって注射前に本ゲルを貼付し,本リドカインゲルの有用性,安全性を再確認した。
その場顕微赤外分光システム構築と水反応場解析への展開

本研究では、水溶液並びに液中で生きた細胞を赤外分光することができる装置を開発し、本装置の適用範囲が物理化学から、生物・医学分野まで及び生きた細胞の代謝の様子等、これまで測定することが困難であった事象をその場観察できることを実証してきた。特に、生きたマウスの胚細胞の赤外吸収スペクトルの経時変化を測定した結果、ガン細胞(MCA205)が正常細胞(NIH3T3)に比べて解糖系によるATP算出に偏っているというワールブルグ効果を、代謝生成物である乳酸の濃度増加という現象で捉えることに成功した。今後は細胞レベルの測定を組織レベルまで拡大することで、赤外分光によるガン診断の臨床応用へ発展させていくことが期待される。しかし、研究を進めるにつれて反応場たる水の分光学的な特徴の重要性が示唆されてきたため、一旦基礎研究に立ち返り、水そのもののスペクトルの詳細な測定と第一原理計算による構造と赤外吸収のシミュレーションを行い考察を行った。その結果、臨界温度(648K)以上の水蒸気の状態では水分子が単体で回転振動をしている状態から圧力を増大させていくと、水分子の二量体中の水素結合したOH・O結合に起因すると考えられるピークが出現し、過去のマススペクトルと赤外分光を組み合わせた研究の論文及び、本研究で行われた計算機シミュレーションによって検証された。さらに圧力を増大させていくと、三量体以上の水分子の集合体の出現が確認されたが、これらを定量的に分離することは現時点で不可能であった。従って水を赤外分光で観察した場合、水の構造はその赤外吸収スペクトルから『水分子単体』『二量体』『三量体以上』という3つの状態の重ね合わせで表現できることが示され、温度・圧力の変化によってそれぞれの割合が変化することで、水・超臨界水・水蒸気の3つの状態を表現できることが示された。26年度が最終年度であるため、記入しない。本研究では、本来赤外線を吸収してしまう水中において、敢えて最も単純でSN比に優れる『透過法』による赤外吸収スペクトルの測定を目指して装置の研究開発を行っている。この研究によって期待される成果は、生体内を始めとした様々な水溶液環境(氷の状態から高温高圧の超臨界状態まで)を本研究で作製したセル内に再現し、その場測定を行うことで、今まで電気的・光学的手法を用いて間接的にしか測定できなかった反応の現場である、結合状態の変化が直接観察できるようになる。例えば、触媒による合成・分解過程や、電池反応の現場を測定するなどの多岐にわたる応用が期待される。本年度は、顕微機能を有した精密温調光学セルを作製し、氷、水、水蒸気、そして高温高圧の超臨界水といった大きく物性の異なる水の状態を測定する事で、水素結合が高温になるにつれどのように崩壊するのか、そして未だ測定されていない高精度な超臨界水の赤外吸収スペクトルを明らかにした。また、スペクトルのカーブフィッティングを行い、吸収要素の解釈には第一原理分子軌道計算を用いて、定性的な説明を行うことを試みた。その結果、超臨界水という高温高圧の環境下においても、氷と同じ微視的な構造が残留している可能性が示唆された。また、変角振動は水素結合の束縛が解けることによって振動モードが氷の1つから少なくとも4つに増えることが明らかとなった。また、水とマグネシウムが水和反応し、水酸化マグネシウムが生成することは広く知られているが、本装置を用いて過冷却水(-5°C)中でのMg膜の水和反応のその場測定を行った。その結果、Mg膜は-5°Cの過冷却水中でも反応し、水酸化マグネシウムが生成した。また、乾燥状態の通常の水酸化マグネシウムに比べ、水中では非常に強いMg-O-H伸縮振動の他、水酸化マグネシウム膜に吸着、あるいは内包された水分子の振動を明確に捉えることに成功した。本研究では、赤外分光法の弱点ともいえる水反応場におけるその場測定を主眼に置いた装置の開発と応用を行っている。本年度はA1薄膜と水との水熱反応のその場測定と、水の4相(氷、水、超臨界水、水蒸気)における赤外吸収スペクトルをカーブフィット解析し、それぞれの吸収要素の帰属を行った。Al薄膜は膜厚に依存せず63°C付近より水と反応し水酸化アルミニウムの一種であるベーマイトへと改質された。加えて水との反応はこのベーマイトへの改質と、膜内への水の含浸という2段階の反応を経るプロセスであることが明らかとされた。また、水は水分子1個あたりの水素結合数が異なる集合体によって構成され、水素結合数が4の氷の状態から、水素結合数が0の水蒸気までを一貫して説明できるモデルの構築に成功した。水を室温から420°Cまで等圧変化(30MPa)させた場合のスペクトルにこのモデルを適用し、各吸収要素の面積率で比較することで、低温では水素結合ネットワークに属する水分子が多くを占めているが、高温になるにつれて、ネットワーク構造が切断され、水素結合数が1である水の二量体が主要素になり、気体状態の特徴である振動の回転遷移状態に起因するP・R枝の出現する様子が確認された。NMR等を用いた他論文における実験結果との合致からも本モデルは支持されるが、本研究では室温のアセトン水溶液を用いて実験的に水同士の水素結合を切断した状態を作り出したものを同様に測定して、カーブ

フィット解析することで低波数側に存在するエレメントがアセトンの濃度に対して劇的に減少する様子を捉え、このエレメントが水素結合した水に相当することが判明した。また、水とエタノールとの混合状態を同手法によって解析したところ、水とエタノール分子は水溶液中では濃度に依存せず、互いの局所構造を維持しており、殆ど会合していないことが明らかとなった。本研究では、水溶液並びに液中で生きた細胞を赤外分光することができる装置を開発し、本装置の適用範囲が物理化学から、生物・医学分野まで及び生きた細胞の代謝の様子等、これまで測定することが困難であった事象をその場観察できることを実証してきた。特に、生きたマウスの胚細胞の赤外吸収スペクトルの経時変化を測定した結果、ガン細胞(MCA205)が正常細胞(NIH3T3)に比べて解糖系によるATP算出に偏っているというワールブルグ効果を、代謝生成物である乳酸の濃度増加という現象で捉えることに成功した。今後は細胞レベルの測定を組織レベルまで拡大することで、赤外分光によるガン診断の臨床応用へ発展させていくことが期待される。しかし、研究を進めるにつれて反応場たる水の分光学的な特徴の重要性が示唆されてきたため、一旦基礎研究に立ち返り、水そのもののスペクトルの詳細な測定と第一原理計算による構造と赤外吸収のシミュレーションを行い考察を行った。その結果、臨界温度(648K)以上の水蒸気の状態では水分子が単体で回転振動をしている状態から圧力を増大させていくと、水分子の二量体中の水素結合したOH・O結合に起因すると考えられるピークが出現し、過去のマススペクトルと赤外分光を組み合わせた研究の論文及び、本研究で行われた計算機シミュレーションによって検証された。さらに圧力を増大させていくと、三量体以上の水分子の集合体の出現が確認されたが、これらを定量的に分離することは現時点で不可能であった。従って水を赤外分光で観察した場合、水の構造はその赤外吸収スペクトルから『水分子単体』『二量体』『三量体以上』という3つの状態の重ね合わせで表現できることが示され、温度・圧力の変化によってそれぞれの割合が変化することで、水・超臨界水・水蒸気の3つの状態を表現できることが示された。26年度が最終年度であるため、記入しない。氷から超臨界水という水の状態図における幅広い領域の系統的な赤外分光による測定は、過去に例が無く非常に興味深いものである。また、本研究で開発された装置の応用例として水中での反応のその場測定を幾例か行ったが、このことは本研究の計画が着実に進んでいることを示している。赤外分光による水の測定例は前例が少なく、吸収ピークの系統的なカーブフィット解析に耐えうる精度を実現した例は本研究以外には確認されていない。この水分子の赤外吸収スペクトルを解析することで、水分子の水素結合状態を評価する手法は新たな水中環境での溶質分子の水和状態を評価する手法として期待できる。本研究の計画上における定量測定の要となる厳密な光路長の規定のためにMEMS加工を行ったSi製スペーサーの試作を試みたが、現段階の加工精度の関係から現行のNi箔製スペーサーを代替する事は出来なかった。次年度においてはセルの光学窓であるダイヤモンド板に水の流路を直接製形成することで、定量性の向上及び測定の簡便化を目指し、装置の実用化を目指す予定である。本年度の研究成果により、水中の水分子の水素結合状態を赤外分光によって評価し、溶質分子との相互作用を解析するという『水反応科学』の分野の構築に貢献できたと考えられる。
生成器の改良による細胞画像のセグメンテーション

最近では、細胞画像に対してもディープラーニングを用いるのが標準になってきている。ディープラーニングの中でもConvolutional Neural Network(CNN)の有効性が示されている。最近では、CNNに基づく生成器と識別器を用意し、互いに競い合わせながら良い生成器を作成する研究も盛んである。この方法はGenerative Adversarial Networkと呼ばれ、入力を画像にすると様々な画像変換を学習することができる。つまり、入力を細胞の顕微鏡画像、出力をセグメンテーション結果の画像とすると、細胞画像のセグメンテーションにも利用できる。ここではこの方法によるセグメンテーション精度を向上させる研究を行った。生成器がセグメンテーション結果を出力し、その結果の良さを識別器が判定する。この作業を繰り返しながら生成器の精度を向上させるのだが、識別器は生成器により作成されたセグメンテーション結果のどこが良くないのかを知っているはずである。そこで、識別器の中の情報を生成器にリークすることにより、生成器のセグメンテーションを向上させる方法を提案した。細胞画像を用いた実験により、提案手法の有効性を確認した。また、ベースとなる方法は同じであるが、異なるアプローチにより精度を改善する研究も行った。従来は生成器と識別器は1つづつであるが、複数の識別器を用いる方法を考案した。また、複数の生成器と複数の識別器を用いるアプローチも提案した。細胞画像を用いた実験により、従来よりも精度が向上することを確認した。概要の所にも書いたが、いくつかのアプローチにより精度を向上させることができており、おおむね順調に進展していると言える。今年は様々な細胞画像に対して精度を検証していく予定である。また、更なる精度の改善を目指す。
運動連合野における咀嚼運動調節機構の神経生理学的研究

視覚誘導性顎運動課題遂行中のサルの一次運動野および運動前野腹側部から単一ニューロン活動を記録した。実験動物にはニホンザル2頭を用いた。サルに記録用シリンダーを取り付けた後、モンキーチェア-に座らせ頭部を固定した。サルの眼前に置いたモニターに視覚手がかりとなる緑および赤丸を提示した。両視覚刺激はそれぞれ開口、閉口を指示するものであり、サルはこの手がかりに応じて開閉口運動を行った。この時のニューロン活動をエルジロイ電極にて記録した。一次運動野からは開口または閉口運動の開始に同期してニューロン活動を変化させる運動関連ニューロンを記録した。開口時と閉口時のニューロン活動は全て相反しており、一次運動野は咀嚼筋の収縮および弛緩に対して、直接または間接的に関与していると考えられた。一方、運動前野のニューロンは視覚手がかりの提示に同期して一過性の反応を示す視覚関連ニューロンが記録できた。このことは運動前野が顎運動を発現するのに必要な視覚情報を運動命令に変換する過程に関与していることを示唆した。さらに開閉口状態を維持し、次の顎運動を指示する視覚手がかりが提示されるまでの間、ニューロン活動を持続的に増加させる準備関連ニューロンも記録した。このことから運動前野が顎運動の準備に関連していることが明らかとなった。一次運動野の運動関連ニューロンには閉口時と開口時において類似した活動変化を呈するものがあった。運動前野の運動関連ニューロンは筋の収縮および弛緩に関与すると同時に、視覚刺激による顎運動発現に関与していると推察できた。本研究により、一次運動野は顎運動の発現に関与しており、高次運動連合野である運動前野は視覚情報の顎運動命令への変換、顎運動の準備、発現、遂行に関与していると考えられた。視覚誘導性顎運動課題をサルに行わせ、運動前野腹側部から146個の課題関連ニューロンを記録した。課題関連ニューロンは視覚関連ニューロン(5個)、運動関連ニューロン(122個)及び準備関連ニューロン(19個)に分類することができた。視覚関連ニューロンは視覚刺激に応じて、潜時の短い一過性の活動を示した。運動関連ニューロンはさらに3つのタイプに分けられた。Phasic typeニューロンは筋活動に先行し一過性に反応するもので運動の遂行に直接関与していると考えられる。Tonic typeニューロンはPhasic typeニューロンに比べてやや遅れて反応するものが多く、下顎位置の維持に関与していると推察された。Phasic-tonictypeは前述の2つのタイプの特性を兼ね備えていた。準備関連ニューロンは開口及び閉口状態を維持しているときにニューロン活動が連続的に増加し、さらに次の運動時に急激な活動の変化を示した。開口及び閉口時のdynamicな運動が行われているときの反応を比較すると、開閉口時の一方で活動の変化があり、他方では活動の変化がないか又はreciprocalな反応の変化を示すニューロンが全体の約70%、共に同様に活動を変化させるものが約30%あった。開口時と閉口時では基本的には筋の弛緩収縮はreciprocalに行われており、約30%のnon-reciprocalな応答を示したニューロンは筋活動とは直接関与せず、顎運動の他の局面、例えば速度、加速度及び力の大きさなどの絶対値的なものと関連している可能性があった。以上のことから視覚情報を元に顎運動を制御するとき、運動前野が重要な役割を果たしている可能性が示唆された。大脳皮質運動前野の上肢運動における役割について多くの研究が行われているが、顎運動に関して調べた研究はない。

本研究では、視覚誘導性顎運動課題をサルに行わせ、運動前野のニューロン活動を記録し、この領野の顎運動制御に対する役割について調べた。実験動物として2頭のニホンザルを用いた。サルをモンキーチェア-に座らせ、ディスプレイに顎運動の視覚手がかりとなる緑丸と赤丸を提示した。緑丸は開口、赤丸は閉口を指示しており、サルは手がかりに応じて開閉口運動を行った。この時の運動前野のニューロン活動を記録した。視覚手がかり提示後100-190msの潜時の後、一過性の反応を示す視覚関連ニューロンを記録した。上肢運動遂行中のサルからニューロン活動を記録した研究により、運動前野には多数の視覚関連ニューロンが存在し、視覚情報の認知過程よりも視覚情報を運動命令へと変換する過程に関与することが知られている。顎運動においても同様のことが示唆された。開閉口状態を維持し、次の運動を指示する視覚手がかり指示まで発射頻度を増加し続ける準備関連ニューロンを記録した。様々な方向に腕を伸ばさせる課題をサルに行わせた研究により、準備関連ニューロンは次に行うべき運動の方向に依存して活動を変化させると考えられている。記録した準備関連ニューロンの殆どは開口または閉口状態の一方でのみ発射頻度を増加させており、顎運動においても方向選択性があることが示唆された。運動開始時に同期してニューロン活動を変化させた運動関連ニューロンは一過性型、持続型および一過性-持続型に分類することができた。これらのニューロンは顎運動の発現・遂行、または下顎の位置を維持することに関与していると思われた。本研究により、この領野が視覚情報の顎運動命令への変換、顎運動の準備、発現、遂行等に関与していることが示唆された。視覚誘導性顎運動課題遂行中のニホンザルの一次運動野および運動前野腹側部から単一ニューロン活動を記録し、顎運動に対する両領野の役割について比較検討した。実験動物にはニホンザル2頭を用いた。サルに記録用シリンダーを取り付けた後、モンキーチェア-に座らせ頭部を固定した。サルの眼前に置いたモニターに視覚手がかりとなる緑および赤丸を提示した。両視覚刺激はそれぞれ開口、閉口を指示するものであり、サルはこの手がかりに応じて開閉口運動を行った。この時のニューロン活動をエルジロイ電極にて記録した。一次運動野からは開口または閉口運動の開始に同期してニューロン活動を変化させる運動関連ニューロンのみを記録した。さらに開口時と閉口時のニューロン活動は全て相反しており、このことから一次運動野は咀嚼筋の収縮および弛緩に対して、直接または間接的に関与していると考えられた。一方、運動前野のニューロンは視覚手がかりの提示に同期して一過性の反応を示す視覚関連ニューロンが記録できた。このことは運動前野が顎運動を発現するのに必要な視覚情報を運動命令に変換する過程に関与していることを示唆した。さらに開閉口状態を維持し、次の顎運動を指示する視覚手がかりが提示されるまでの間、ニューロン活動を持続的に増加させる準備関連ニューロンも記録した。このことから運動前野が顎運動の準備に関連していることが明らかとなった。また、一次運動野と同様に運動関連ニューロンも記録できたが、閉口時と開口時において類似した活動変化を呈するものも記録できた。
日本における文化接触研究の集大成と理論化

研究の第1の成果は、1990年代に現れてきた構築主義的な枠組での文化接触研究をレビューし、カルチュラル・スタディーズやハピトゥス論の文化接触研究の概念枠組としての可能性について一定の見解を示したことである。第2の成果は、本質主義的な文化接触研究の旗頭であるJ.Berry博士をお招きし直接に話を聞き、また彼が率いるグループの研究論文を批判的に読むことができたことである。その結果、彼の理論では、文化を異にする集団が接触するとき、劣位の位置を取らされる集団が優位な立場の集団の差別的な扱いに反撃し、位置取りを変えていく可能性が扱われていないこと、劣位の集団の特性を本質的で固有のものとした考え方による研究は、状況を変革していくエネルギーを閉ざし、現状維持的に作用するという示唆を得た。以上の理論研究の成果は、報告書の「第1章文化接触研究の理論化に向けて:構築主義の立場から」、「第2章研究方法論としての解釈的アプローチ:客観的な社会的現実はあるのか?」にまとめられた。構築主義的な枠組で、研究代表者とそのもとで博士論文研究を行っている院生が行った個別研究が、報告書の「第3章日米間移動とアイデンティティのハイブリッド化:在日国際学校卒業生の追跡調査から」、「第4章留学生における<文化規範>理解のパターン:ホスト文化と自文化の間で」、「第5章日本の学校との出会いによる文化的アイデンティティの揺らぎ:マジョリティであった<外国語指導助手>の場合」、「第6章オーストラリアの日本語教師たちの日本語教育観:その形成過程と実践を語りから考察する」の4編である。本年は、2年の研究計画の第1年目で、文化接触研究の最近の動向について調査した。(1)カナダ政府の派遣で関西学院大学に滞在中のジョン・ベリー教授を東京に招き、2日にわたり日本の文化接触研究者と共同討議の場をもった。研究交流の成果は、2つあった。カナダへの移民の文化適応研究から出された彼の異文化適応のASIMモデル(Assimilation,Separation,Integration,Mariginalization)についてわれわれは間違った理解をしていたこと、もう一つは、特殊日本的な事象としてレポートされてきた日本での異文化体験を、もっと世界的なパースペクティブのなかに置く必要性を認識した。中国残留婦人人や孤児の日本社会への帰還に伴う問題は、日本特有の問題と考えがちだが、戦争とその後の国交未回復のために自国へ帰れなかったロシア領有地に留まったフィンランド国籍の人の問題とほぼ重なる。インドシナ難民の異文化適応については、現在、10カ国でのインドシナ難民とその子どもの世代が研究されていることがわかった。(2)ストックホルムで開かれた世界心理学会の席上で、アメリカに渡ったブラジル人家族、特に夫婦の役割期待がアメリカ文化と接触することでどのように変わるかの研究に接し、在日ブラジル人家族を比較研究する視点を得た。また、スエーデンから世界各地に出かける国際ビジネスマンとその家族の研究をしているトローブリオン教授とアンデルセン博士との研究懇談で、親の国際間移動に巻き込まれる子どもの異文化体験の類似性を発見した。(3)日本の下層に位置づけられていた従来のニューカマーとは違う、教育水準の高いエリート層の韓国人や中国人が最近は多く来日している事実が明らかになった。本年は、新しい研究動向である構築主義的な文化接触研究について以下のような研究活動をした。(1)2000年度の研究成果の一端「日米間移動とアイデンティティのハイブリッド化-在日国際学校卒業生の追跡調査から-」を『お茶の水女子大学人文科学紀要』第15巻に発表した。(2)アトランタで開催されたアメリカ人類学会のサブフィールドである心理人類学会に参加し、豊田市の日系ブラジル人集住地域で1年間フィールドワークをしたダニエル・リンガー教授と研究懇談した。

この研究交流の成果は、構築主義の立場に立つアイデンティティ研究についての文化人類学サイドの取り組みについての知見を得たことである。リンガー教授からもらった未公刊の論文にヒントを得て、文化接触研究における本質主義と構築主義について理論的研究を一歩前進させることができ、その成果を盛り込んだ論文を研究成果報告書に収録すべく執筆中である。(3)文化接触研究の分野で博士論文を準備中の院生3人との研究会を15回開催、うち2回には最近博士の学位を取得した渋谷真樹、松尾知明の両氏を招き専門的知識の提供を受けた。研究協力者たちのテーマは、「日本の学校場面でのALTの文化接触:クラスマネジメントをめぐるアメリカ文化と日本の学校文化」、「在日留学生の察知する日本文化のルールをめぐって」「オーストラリアの日本語教師の日本語教育観」に収斂してきた。また、矢吹理恵の博士論文の指導を通じて、アメリカ人と結婚した日本人女性が身体装飾や室内装飾を使って自己のアイデンティティを構築する様について検討することができた。(4)中高年層とIT革命の出会いも新しい文化との接触と見なせば、文化接触研究の枠組で研究できる。本科研の知見の他分野への適用の可能性についても検討をはじめた。(1)(2)(3)の成果は冊子体報告書に収録すべく、論文作成中である。
腫瘍血管内皮マーカーを標的とした薬剤耐性の克服

本研究課題において,薬剤感受性に及ぼす腫瘍血管内皮マーカーを同定するために阻害剤もしくはsiRNAを用いてin vitroで腫瘍血管内皮細胞の薬剤感受性解析を行った. MDR-1にコードされるp-glycoproteinの阻害剤ベラパミルを用いるとパクリタキセルに対する感受性が増強しin vitro, in vivo両方において薬剤耐性がキャンセルされることが見出された.これらのことから腫瘍血管内皮マーカーの阻害は薬剤耐性克服の戦略につながる可能性が示唆された.1)血管内皮細胞の分離培養:当初の計画通りまず初めに血管内皮細胞を分離培養した.ヌードマウスにヒト由来腫瘍細胞株(舌がん,腎癌,メラノーマ)を皮下移植し,形成された腫瘍塊からそれぞれ腫瘍血管内皮細胞を,また正常コントロールとして正常マウスの皮膚から正常血管内皮細胞を分離した.血管内皮細胞の分離には磁気ビーズ細胞分離法を用いた.分離した血管内皮の特性解析をPCR法とフローサイトメーターを用いて行い,ヒト癌細胞および他細胞の混入がないことを確認した.2)腫瘍血管内皮細胞特異マーカーの発現解析:分離培養した腫瘍血管内皮および正常血管内皮細胞からトータルRNAを抽出し,Real-time PCR法により薬剤耐性関連遺伝子および幹細胞関連遺伝子の発現を比較検討した.その結果,MDR1をはじめとした薬剤耐性遺伝子の発現が正常血管内皮細胞に比べ,腫瘍血管内皮細胞で亢進していた.またSca-1,CD90,CD133,ALDHなどの幹細胞マーカーの発現も腫瘍血管内皮細胞で亢進しており,これまでの報告と一致した.さらにこれまで腫瘍血管内皮細胞特異マーカーとして報告した遺伝子(COX-2,CXCR7,PTGIR,PTGFR,LOXなど)の発現亢進も確認された.3)腫瘍血管内皮マーカーの阻害およびノックダウン後の薬剤感受性解析:いくつかの腫瘍血管内皮で特異的に発現が亢進していた遺伝子(薬剤耐性遺伝子,幹細胞マーカー,腫瘍血管内皮マーカーを含む)を阻害し,抗がん剤5-FUおよびPaclitaxelに対する抵抗性をin vitroで解析した.その結果,Gene Xについて腫瘍血管内皮の抗がん剤耐性に関わることが示唆された.腫瘍血管内皮細胞における腫瘍血管内皮マーカーの阻害,およびノックダウン後の薬剤感受性解析をおこなった.MDR-1にコードされるp-glycoproteinはカルシウムブロッカーの一つであるベラパミルによって阻害されることが知られていることから,これを用いてパクリタキセルに対する感受性の変化を検討した.ベラパミルにより,腫瘍血管内皮細胞のパクリタキセルに対する感受性が増強し薬剤耐性が阻害されることが見出された.一方,腫瘍血管内皮細胞の中にはALDHhighの集団が多いことなどを見出している.このALDHが薬剤耐性に関与しているかに関してsiRNAを用いたALDHノックダウンにより検討したが,ALDHは5-FU,パクリタキセルに対する耐性には関与していないことがわかった.また,in vivo腫瘍血管におけるp-glycoproteinの発現に関して蛍光二重免疫染色により解析した.正常血管には発現していなかったp-glycoproteinがin vivo腫瘍血管内皮細胞にはみとめられた.さらにがんの悪性度の違いにより,この分子の発現が異なることを見出した.転移能が高いがんにおいては転移能が低いがんに比較して腫瘍血管におけるp-glycoproteinの発現が高いことが見出された.また,マウス腫瘍モデルを用いてベラパミルによる腫瘍血管新生を標的とすることにより抗がん剤の作用増強をもたらせることを示すことができた.腫瘍血管内皮に発現する薬剤耐性関連分子の阻害による耐性回避をマウスモデルにて検討できている.腫瘍血管内皮細胞における腫瘍血管内皮マーカーの阻害,およびノックダウン後の薬剤感受性解析をおこなった.MDR-1にコードされるp-glycoproteinはカルシウムブロッカーの一つであるベラパミルによって阻害されることが知られていることから,これを用いてパクリタキセルに対する感受性の変化を検討した.ベラパミルにより,腫瘍血管内皮細胞のパクリタキセルに対する感受性が増強し薬剤耐性が阻害されることが見出された.TECにおける腫瘍血管内皮マーカーの阻害が薬剤感受性に及ぼす影響を調べるためにTECにおける腫瘍血管内皮マーカーに対する阻害剤もしくはsiRNAを用いてin vitroでTECの抗がん剤や血管新生阻害剤に対する薬剤感受性解析(MTSアッセイ,アポトーシス解析など)を行った.TECの薬剤耐性克服に重要な特異的マーカーおよび阻害薬をパスウェイ解析ソフトIPAにより探った.また,腫瘍血管特異マーカーのin vivo発現をin vivoマウス皮下移植腫瘍組織,およびヒト臨床検体をもちいて免疫染色で腫瘍血管におけるタンパク発現を解析し,治療実験における標的としての可能性を探った.腫瘍血管特異マーカー阻害剤およびsiRNAを併用した血管新生阻害療法の有効性をマウス皮下移植腫瘍モデルにおいて血管新生阻害療法単独群とin vitroでの検討であがった腫瘍血管特異マーカー阻害剤およびsiRNAの併用群を比較し,抗腫瘍効果が得られるか検討をおこなった.阻害剤は腹腔内注射によって、siRNAは腫瘍組織内へ直接、もしくは尾静脈注射によって投与した.腫瘍血管内皮の血管新生阻害効果を,腫瘍径,血管密度,腫瘍細胞および腫瘍血管におけるアポトーシス細胞の数で評価した.本研究課題において,薬剤感受性に及ぼす腫瘍血管内皮マーカーを同定するために阻害剤もしくはsiRNAを用いてin vitroで腫瘍血管内皮細胞の薬剤感受性解析を行った.MDR-1にコードされるp-glycoproteinの阻害剤ベラパミルを用いるとパクリタキセルに対する感受性が増強しin vitro, in vivo両方において薬剤耐性がキャンセルされることが見出された.

これらのことから腫瘍血管内皮マーカーの阻害は薬剤耐性克服の戦略につながる可能性が示唆された.当初の計画通り,血管内皮細胞の分離培養,特性解析ならびに特異的に発現が亢進している遺伝子の発現解析を進めることができた.腫瘍血管内皮細胞で亢進している分子の阻害と薬剤感受性解析については解析中である.血管新生阻害剤など,治療後の血管内皮細胞における薬剤耐性関連分子の発現変動や組織微小環境因子のROSや低酸素と薬剤関連分子の発現との関連について検討をおこなう.血管密度,血管の成熟度などをαSMAによるペリサイト染色により検討する.また腫瘍細胞および腫瘍血管におけるアポトーシス細胞の数で評価する.さらに,これらの腫瘍血管とがん幹細胞の局在についても検討を進める予定である.特にがん幹細胞と血管内皮の間の距離,腫瘍血管内皮マーカー陽性血管内皮細胞とがん幹細胞との位置関係などについても定量解析を行う.腫瘍血管新生in vitroで見出されたマーカーについて,in vivoマウス皮下移植腫瘍組織およびヒト臨床検体(口腔がん,腎癌,大腸癌など)を用いて組織免疫染色法により発現解析を行い,in vivo治療実験における標的となりうるかどうか検討する予定である.H26年度に行う予定だった阻害実験が時間を要して実験途中のため.すでに引き続き実験を進めている.