hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
酸化およびアルキル化DNA損傷を防ぐヒト酵素の精製と解析

ヌクレオチドの酸化によって生じる強力な突然変異誘発物質である8-oxo-dGTPの生体内における発生ならびにその除去機構について重要で新たな知見が本研究の過程で明らかになった。すなわち、大腸菌のミューテーター遺伝子産物であるMutT蛋白ならびにその哺乳動物のホモログであるMTH1蛋白はこれまで知られていて8-oxo-dGTPの分解のみならずリボ型の酸化物である8-oxoGTPに対しても分解する活性を示した。とりわけ純化精製されたMutT蛋白のリボ型酸化ヌクレオチドに対する活性はデオキシリボ型に対する活性と同程度である。この事実はMutT、MTH1蛋白がこれまで一般に考えられていたデオキシヌクレオチドプールの浄化のみならずリボヌクレオチドプールの浄化にも関わっていることを強く示唆し浄化機構の機能する範疇をより幅広く捉え直す必要を迫るものである。また同時にこのことはこれまで研究代表者が提案していた誤対合を引き起こす8-oxoG残基の多くがリボヌクレオチドプールから流入するとの仮説を補強するものである(研究発表参照)一方これとは別に酸化された8-oxoGTPはRNAに取り込まれ転写の正確さを低下させ誤った蛋白を生合成する可能性がある。現在研究はこの問題にも新たな展開を見せつつある(論文投稿中)。
LIS1-細胞質ダイニンの分子ダイナミクスと滑脳症発症機構の解明

滑脳症の責任遺伝子の多くが微小管関連因子に分類されることから、微小管上での細胞内輸送を指標に疾患発症に至る分子メカニズムの解明を試みた。まずは、LIS1-細胞質ダイニンと順行性輸送複合体を形成する微小管フラグメント(tMT)との結合因子としてアルファ-シヌクレインを同定し、1LIS1含む輸送複合体と挙動を共にしていること、2tMTの重合/脱重合を制御していること、3この細胞内輸送制御がレビー小体(パーキンソン病、認知症で見られる封入体)形成に関与していることを明らかにした。本研究成果は、これらの神経変性疾患発症に至る共通の分子基盤としての細胞内輸送の重要性を大いに支持するものである。本研究課題は、滑脳症発症機構の分子レベルでの解明とカルパイン阻害薬による治療薬の開発の両面からその治療戦略に挑む。研究代表者は、滑脳症の責任遺伝子産物LIS1の機能不全による細胞内物流(移動細胞内マシナリー)の攪乱・破綻に起因する神経細胞遊走の欠如の観点から、疾患発症に至る分子機構の解明を目指してきた。一方で、LIS1がタンパク質分解酵素の一つであるカルパインによって分解されることを独自に発見し、カルパイン阻害薬による滑脳症治療薬の開発を行ってきた。本研究期間内に於いては、蛍光分子イメージングの先端技術を駆使し、LIS1-細胞質ダイニンをインビトロおよび神経細胞内で可視化して微小管上での分子動態を観察・解析することにより、これらの細胞内ロジスティクスあるいは分子ダイナミクスを明らかにすることで、LIS1機能不全が如何にして滑脳症発症に繋がるのかを分子レベルで解明することを目指す。平成26年度に於いては、LIS1-細胞質ダイニンによる細胞内物質輸送の一つとして、細胞質ダイニンによって微小管マイナス端(中心体側)まで輸送されてきた種々のCargoの荷卸しの過程に着目し、細胞質ダイニン・ダイナクチンによる逆行性輸送複合体の再構成を制御する因子をインビトロ微小管グライディングアッセイにて探索した。その結果、低分子量GTPaseの一種であるARL3(ADP-ribosylation factor-like protein 3)とダイニン軽鎖LC8/DYNN1がダイナクチンと細胞質ダイニンに各々結合することによって、中心体側での輸送複合体の再編成を制御していることが示唆された。さらに、全反射照明型蛍光顕微鏡システムを用いて、インビトロおよび神経細胞内の微小管上でのこれらの分子動態を再現することに成功し、2014年10月にはNature Communicationsに論文が受理された。本研究課題は、発生初期の神経細胞移動障害に起因する先天性神経疾患の一つである滑脳症発症機構の分子レベルでの解明とカルパイン阻害薬による治療薬の開発の両面からその治療戦略に挑む。平成27年度に於いては、LIS1-細胞質ダイニンを含む輸送複合体の形成に関与し、LIS1機能に関与することが示唆されるいくつかの候補因子を同定した。とりわけ、パーキンソン病をはじめとする神経変性疾患の原因因子として知られているアルファ-シヌクレインとLIS1-細胞質ダイニンを含む順行性輸送複合体の土台となる微小管フラグメント(transportable microtubule: tMT)の構成因子でもあるクラスIIIベーターチューブリンとの関係が示唆されたことは、平成28年度以降の本研究課題の展開が大いに期待できる。平成27年度に於いては、LIS1-細胞質ダイニンを含む順行性輸送複合体の土台となる微小管フラグメント(transportable microtubule: tMT)の構成因子でもあるクラスIIIベーターチューブリンに対する特異的なマウスモノクローナル抗体のTuj1を用いた免疫沈降実験により、アルファ-シヌクレインが共沈することを質量分析(MS/MS)などの手法を用いて確認することができた。アルファ-シヌクレインは、パーキンソン病をはじめとする神経変性疾患の原因因子として知られていることから、これまでに私たちが明らかにしてきたLIS1-細胞質ダイニンを含む順行性輸送複合体、特にその土台となる微小管フラグメント(transportable microtubule: tMT)の形成過程に於ける役割を今後明らかにしたい。平成27年度に於いて、本研究計画はおおむね順調に進展している。これまでに私たちは、胎児期の神経細胞遊走(移動)障害に起因した脳形成不全を伴う滑脳症の疾患発症に至る分子メカニズムの解明と創薬探索の両側面からその治療戦略に取り組んできた。滑脳症は、脳回・脳溝(いわゆる脳のしわ)の欠如、脳の層構造の異常を伴う先天性神経疾患で、臨床的には重度の精神発達遅滞、てんかんを主な症状とする。

その罹患率は、新生児1万5千人に1人程度の割合ではあるが、根本的治療法は確立していない。私たちは、この責任遺伝子産物のひとつであるLIS1が微小管分子モーターの細胞質ダイニンの輸送活性を制御することに着目し、細胞内ロジスティックスあるいは分子ダイナミクスといった独自の観点から疾患発症に至る分子レベルの研究を展開させてきた。また、このLIS1がタンパク質分解酵素のカルパインによって分解されることを独自に発見し、カルパイン阻害活性を有する低分子化合物が滑脳症疾患モデル(Lis1遺伝子ヘテロ欠損マウス)でみられる滑脳症(様)症状を個体レベルで改善させることを明らかにした。これらにより、カルパイン阻害薬による滑脳症治療薬の開発へと研究を展開させることができた。本研究課題に於いては、蛍光分子イメージングの先端技術を駆使し、LIS1-細胞質ダイニンをインビトロおよび神経細胞内で可視化して微小管上での分子動態を観察・解析することにより、移動細胞内マシナリーを明らかにすることで、LIS1機能不全が如何にして滑脳症発症に繋がるのかを分子レベルで解明することを目指した。一方で、LIS1-細胞質ダイニンを含む輸送複合体の形成に関与し、LIS1の機能を制御することが示唆されるいくつかの候補因子をMS/MS質量分析法を用いて同定することができた。それらの中でも特に、パーキンソン病をはじめとする神経変性疾患の原因遺伝子として知られているα-シヌクレインの機能的役割について検討した。これまでに私たちは、LIS1-細胞質ダイニンを含む順行性輸送複合体の土台となる微小管フラグメント(transportable microtubule: tMT)の構成因子でもあるクラスIIIβーチューブリンに対する特異的なマウスモノクローナル抗体のTuj1を用いた免疫沈降実験により、いくつかの共沈する因子をMS/MS質量分析法を用いて同定することができた。それらの中でも、α-シヌクレインは、パーキンソン病をはじめとする神経変性疾患の原因遺伝子として知られていることから、これまでに私たちが明らかにしてきたLIS1-細胞質ダイニンを含む順行性輸送複合体、特にその土台となる微小管フラグメント(tMT)の形成過程に於ける役割およびその輸送過程に於ける機能的役割を明らかにしたいと考えた。そこでまずは、神経細胞内でのα-シヌクレインとLIS1/細胞質ダイニン/(荷台となる)微小管フラグメントを含む順行性の輸送複合体を経時的に直接観察できるシステムを確立した。具体的には、高速(切り替え)フィルターホイールを要する蛍光顕微鏡システムによるライブセル・イメージングにより、mTurquoise、mNeonGreen、mCherryの異なる3波長領域の蛍光タンパク質で標識した上記因子の融合タンパクなどを神経細胞内に発現させて、それらの分子動態を解析した。その結果、α-シヌクレインは、細胞質ダイニン/(荷台となる)微小管フラグメントと細胞内で挙動を共にしていることを直接観察することができた。さらに、超解像蛍光顕微鏡により、その輸送複合体の土台を形成する微小管フラグメントの構成因子でもあるクラスIIIβーチューブリンは、細胞骨格を形成するレールとなる微小管と局在を同じくすることから、α-シヌクレインは、細胞質ダイニン/(荷台となる)
生活の質に基づく難病患者のニーズ評価に関する研究

生活の質に基づく難病患者のニーズ評価について、徳島県における全難病患者3、200名から、無作為抽出により640名を選び、ニーズ評価の対象者として用いた。ニーズ評価には、保健婦ら2人1組による訪問面接調査を実施した。ニーズ把握の基礎となる健康状態については、生活の質(国際的に標準化が行われ、わが国での適用可能性が検討されている、多属性健康指標(McMaster Mark III)、EuroQol)を指標に用いた。徳島県下の難病患者の生活の質の水準を見ると、VASスコアでは男女間では差がなく、39歳以下では男性が66.9、女性が68.4であり、男女とも70歳以上では低い値を示した。また、神経系疾患が最も低く、次いで膠原系疾患、内部臓器疾患が最も高かった。多属性の生活の質では、MAUI、ADLにおける障害者の割合は、年齢が高くなるほど高くなる項目が見られた。また、男女間に差は認められなかった。IADLでは、男性は、女性に比べて、障害者の割合が全年齢層にわたって高く、女性では年齢により増加する項目が多く、性差が認められた。疾患系別に比較すると、生活の質に対する障害割合は、神経系疾患が最も大きく、次いで膠原系疾患、内部臓器疾患が最も小さかった。以上把握された生活の質をもとに健康サービスのニーズを評価すると、総件数は1、200件のニーズが認められた。内訳は、福祉分野が最も多く617件、次いで保健分野583件、医療系保健分野41件、その他3件であった。充足割合は、家族が提供するサービスを除き高くはなかった。また、満足度についても、多くの項目で低いことが認められた。さらに、サービスの提供者(機関)等については、難病患者が高齢保健福祉法及び身体障害者福祉法の対象と重複することが多いため、様々な機関で様々な職種が難病患者へのサービス提供にかかわることが明らかとなった。これらの結果から、サービスのマネジメントの重要性が指摘された。
物理化学ストレスが誘発する治療用抗体の凝集化メカニズムの解明と凝集予測理論の構築

本研究は、物理化学ストレスが誘発する治療用モノクローナル抗体の凝集化のメカニズム解明と予測理論構築を目的とし、(A)酸ストレスが誘発する劣化抗体の局所的構造変化の部位の特定、(B)酸ストレスが誘発する劣化抗体のドメインの空間的変位の定量、(C)劣化抗体が形成するマイクロメータ・スケールの凝集体のフラクタル性の判定、(D)異なる物理化学ストレス・異なる可変領域アミノ酸配列の依存性の評価、の4項目を実施する。
日本文学のジャータカ説話(本生譚)と源流・インド説話との比較研究

研究代表者は、平成15年度から18年度まで4年間の基盤研究Cによる研究「日本文学のジャータカ説話(本生譚)と源流・インド説話との比較研究」、及び、これに先立つ数年間の研究成果(平成13年度から14年度にも前段階の研究について科学研究費補助金・若手研究Bを取得)に基づき、博士学位請求論文『ジャータカ説話の原型と展開』を執筆した。これを桃山学院大学大学院文学研究科に提出し、平成18年3月17日、同大学大学院文学研究科より「博士(比較文化学)」(文博乙第一号)を取得している。最終年度・平成18年度には、この博士論文の改稿・整備を行った。並行して、科学研究費補助傘の「研究成果公開促進費」を申請してこれを取得し、汲古書院より、今年度、平成19年6月30日原稿組み入れ予定、平成20年1月16日発行予定として、さらに作業を進めている。書名は『三宝絵本生課の原型と展開』(博士論文の論題を変更)であり、目次によって概要を示せば、第一章『三宝絵』とその本生譚第二章シビ王本生譚の原型と展開第三章シビ王本生譚の主題とその達成第四章スタソーマ王本生譚の原型と展開(一)第五章スタソーマ王本生譚の原型と展開(二)第六章スタソーマ王本生譚の思想的背景第七章大施太子本生譚の原型と展開第八章大施太子本生譚の誕生となっている。日本・平安時代、永観2年(984)成立の『三宝絵』に流入した本生課(ジャータカ説話)にどのようなインド的、仏教的背景があるのか、その原型または起源、展開または変容の諸相について考察している。またそれぞれの本生譚ないしその類型話が文学としてどのように読み解けるかを解明しようとしたものである。平成15年度・科学研究費補助金による研究活動・実績の概要を報告する。-平成15年6月22日(日)、説話文学会・大会(於駒沢大学)において、「スタソーマ王本生譚の思想的背景」と題し、口頭発表を行った。その内容は「スタソーマ王本生譚の思想的基盤」と少々論題を変更したうえで同学会の機関紙『説話文学研究』(第39号)に投稿、掲載が決まった(→「11.研究発表」欄の「スタソーマ王本生譚の思想的基盤」*論題は変更の可能性がある)。この論文の内容を紹介すれば-日本・平安時代の仏教説話集『三宝絵』上巻・第二話の須陀摩王の本生譚、すなわち、スタソーマ王の^^<ジャータカ>は「持戒波羅蜜」(最高の持戒)の例話として知られるが、インド説話としての歴史をたどれば、本来「真実語」の説話であった。古代インドの叙事詩『マハーバーラタ』のさまざまな「真実(語)」の事例を参照し、スタソーマ王の本生譚(ジャータカ)がどのような「真実語」の説話として読めるかを論じたものである。来る平成16年度には、同『三宝絵』上巻・第一話の戸眦王本生譚について同様の手法で考えてゆく予定である。平成15年度は上記の研究のために、また、ひろく仏教説話関係の資料(原文資料をふくめて)を入手するために、数度の出張を行った(おもに東京大学・東洋文化研究所・図書室)。また、仏教説話の比較研究を目的とする当該の研究のためには、本来自分の研究分野ではなかったインド学・仏教学、思想研究などの新たな分野の研究成果を学び、知見を得る必要がある。

そのために、平成15年度・仏教文学・説話文学の学会のみならずインド学・仏教学、思想研究関係の諸学会(パーリ学仏教文化学会、北海道印度哲学仏教学会、日本印度学仏教学会、日本道教学会、仏教史学会等)に出席し多くのことを学び、今後の研究のための基盤をつくることができたのも大きな成果であった。また、説話の比較研究という意味では、報告者が以前からインド説話との比較研究と平行して行ってきた沖縄の伝承・説話の研究でも成果を挙げることができた(→「11.研究発表」欄の「宜保チマシー」、「渡嘉敷ペークー」、「ガーナームイ」)。平成16年度科学研究費補助金の援助によって、説話文学、仏教文学のみならずインド学・仏教学、また、宗教研究関係の学会に出席し、新たな知見を広く獲得した。また、普段は入手が困難な文献を、おもに東京大学東洋文化研究所にて多く収集することができた。そして、こういった好条件を利用して、学会発表「シビ王本生譚の主題とその達成」を行った(於北海道印度哲学仏教学会・平成16年度学術大会、平成16年7月)。その内容を論文(研究発表と同題)に執筆し学会の機関紙(『印度哲学仏教学』第20号、平成17年10月刊行予定)に収載される予定となっている(拙稿「シビ王本生譚の原型と展開」<『伝承文学研究』第46号、平成9年>を承けての考察である)。その論旨を簡単に記せば-「鷹と鴿」(シビ王が鳩の命を救うために鷹に自らの肉を与える)型のシビ王本生譚は日本・平安時代成立の『三宝絵』に入った。この話型(タイプ)のシビ王の説話は『マハーバーラタ』「森の巻」の話に見るよう、本来は「すべての生き物・人民を守るべし」という、バラモン教における王の務めを説くものであった。それが、仏典に入って「求法」(肉体を犠牲にして仏の教えを説く一偈を求める)あるいは「布施」を主題とする説話へと変わったと考えられる。しかし、「鷹と鴿」型のシビ王本生譚は、そのように新たな主題を与えられても、この話型のままでかならずしもそれらの主題を十分に達成・表現し得ているとは言えない。そうした新たな主題に応ずるべく、「施身聞偈(雪山童子)」型、「盲目のバラモン」型という新たな話型を取り入れてゆくことになったと考えられる-というものである。なお、このような科学研究費補助金の援助による研究活動のなかで、本来の専門である日本文学の研究者たちばかりでなく、インド哲学や仏教学の研究者たちと交流を深めることができたのも大きな成果のひとつであったことも付け加えておきたい。平成17年度は、科学研究費補助金の助成を得て、学会・口頭発表を2回行い、それらに基づいて2本の論文を執筆した。さらに、これら、及び、平成16年度までの科学研究費補助金による6本の論文に基づいて学位申請論文を執筆・提出し、博士(比較文化学)の学位を取得した。以上のことを具体的に述べれば...2005年5月1日、説話・伝承学会2005年度大会にて口頭発表(「大施太子本生譚の主題とその達成」)、2005年9月10日、北海道印度哲学仏教学会・第21回学術大会にて口頭発表(「『三宝絵』とその説話」)、2005年9月30日、桃山学院大学に博士(比較文化学)学位申請論文(「ジャータカ説話の原型とその展開」)を提出、2006年2月2日、桃山学院大学にて博士(比較文化学)学位申請論文の審査、2006年3月24日、論文「大施太子本生譚の誕生」(『人文研究』第111集)公刊、2006年3月24日、桃山学院大学にて博士(比較文化学)学位の授与、2006年10月、論文「『三宝絵』研究序説」(『印度哲学仏教学』第21号)公刊予定。博士(比較文化学)学位論文(「ジャータカ説話の原型とその展開」)の目次を挙げておけば...第一章『三宝絵』とその本生譚、第二章シビ王本生譚の原型と展開、第三章シビ王本生譚の主題とその達成、第四章スタソーマ王本生譚の原型と展開
大阪在住済州島人と日本人との民族間関係に関する文化人類学的研究

日本の植民地下の済州島の住民のほとんどが済州島民で構成されていた。都市部に居住するごく一部の両班(貴族階級)や大地主のような人々のみが「日本人」との接触を経験したのである。済州島人が済州島に居住している際には、それらのほとんどは自らを済州島人であるとか朝鮮人であるとかいう自己認知をもたなかった。しかし、日本において「朝鮮人」や「日本人」との接触のあとには、これらの人々は朝鮮半島からの「朝鮮人」らは済州島人、「日本人」からは「朝鮮人」と認知されるので、済州島人や朝鮮人になった。「日本人」という概念は近代国民国家によるひとつの言説として創り出されたものであるので、「日本人」は実体としては考えられない。日本にいる人々は非「日本人」との関係で、「日本人」を認識するのである。言説としての「日本人」は認識論的な関係性によって実体化されたのである。しかしこの関係性は構造主義者のいうような差異の束としてではなく、権力関係として解釈できるのである。政治的な言説である「日本人」と「朝鮮人」は国民国家によって創り出された。これらの言説は、「日本人」と「朝鮮人」間の日常的な権力関係に組み込まれており、客観的な実在として実体化されている。さらに、国民国家も国際関係の産物であり、これは東アジアに利害関心をもつ国民国家間の関係に依っている。済州島人は今日に至るまで、ゲマインシャフト的なネットワークコミュニティを維持してきたが、「文化的な日本人」として文化化された「世代」の人々は、日本人と済州島人間の権力関係によって非「日本人」として排除される。しかも、これらの人々は「朝鮮人」としてアイデンティファイされるのである。これらの人々は自らを、非「日本人」である「朝鮮人」としてアイデンティファイするのである。これらの人々にとって済州島人アイデンティティは何の意味もない。大阪在住済州島人の移民史、戦前から現在にいたるまでの日本政府による移民政策を文献研究で明らかにする一方、フィールドワークによる実態調査をおこなった。民族誌学的観点から(1)済州島人のコミュニティー内部の日本人と済州島人間の関係、(2)コミュニティー外部の人と内部の成員との関係、(3)済州島人内部のネットワーク、(4)本国の済州島との関係、以上に重点を置いて調査した。これらの調査を通じて、(1)済州島人がつくる各村の親睦会によるネットワークコミュニティーの維持によって、済州島人あるいは韓国人アイデンティティーの再生産が続いていること、(2)「日本人」と済州島人の民族間権力関係によって済州島人の生活世界が限定されていること、(3)「日本人」というアイデンティティーが「日本人」と済州島人との権力関係によってダイナミックに出現していること等が明らかになった。これらの調査を通じて、特に日本人と済州島人との民族間関係が、双方の生活方法、意識に影響を与えていることが判明したので、次年度以降この点を重点的に調査することにする。また、日本国内の済州島人ネットワークは大阪だけにとどまらないこともわかったので、日本全体の済州島人ネットワーク理解のため、関東地域と関西地域における済州島人のネットワーク及び双方における済州島人と日本人との民族間関係を比較する必要がある。日本在住済州島出身者の実態調査によって、出身地のムラアイデンティティから、済州島人アイデンティティ、「朝鮮人」アイデンティティへの変化を、ミクロレヴェルの民族間権力関係の観点から明らかにした。これによれば、「民族」

アイデンティティは、ミクロなレヴェルでの権力関係によって(権力関係は日常的、具体的な経験の世界では差別というかたちで経験され、例えば「日本人」、「朝鮮という言葉で表象される)、創り出され、この権力関係に関わる人々に「自然に」内面化される。済州島にいた時にはムラアイデンティティしか持たなかった人々も、日本では陸地(朝鮮半島)出身者から済州島人と名付けられ、また「日本人」からは「朝鮮人」と名付けられることで、それぞれのアイデンティティが創られていった。以上のミクロレヴェルでのアイデンティティ形成は、日本、大韓民国、朝鮮民主主義人民共和国という国民国家による国民イデオロギーと有意味に連関する。日本敗戦前は、理念上は天皇の赤子として同じ「日本人」として処遇されなければならなかったはずであったが、「半島人」としてまだ完全な「日本人」ではないとみなされた。「日本人」によるあからさまな差別は、「朝鮮人」としての意識を強くさせた。日本敗戦後も続いた「朝鮮人」に対する差別と、朝鮮半島における二つの国民国家の国民=民族という国民意識は、朝鮮人あるいは韓国人というミクロレヴェルでのアイデンティティと連関し、国民国家によって生産された権力関係が、個人のアイデンティティまで浸透していき、ミクロとマクロのダイナミックな過程がつくりだされている。以上の内容については、平成7年度と8年度の論文、著作で具体的に論じられている。日本による植民地時代の済州島居住者(ネイティブ)の大半は、自らのムラ以外の人々との接触が限られており、隣ムラとの自村との関係で自らのムラアイデンティティを持ちえたと考えられるが、廉価な労働力を必要とした日本の資本主義による政策の一環で済州島-大阪航路が始められると、それまでにない規模での済州島人による済州島-大阪間の往復が始まり、済州島の他村出身者、朝鮮半島出身者とそれに「日本人」との間の権力関係に位置づけられるようになり、ムラアイデンティティ、済州島人アイデンティティ、それに朝鮮人アイデンティティというアイデンティティが重層化していった。このアイデンティティの重層化にはミクロレヴェルの権力関係とマクロレヴェルの国民国家によるアイデンティティ形成が連関している。さらに済州島人は現在にいたるまでネットワークコミュニティを維持してきたので、このネットワークがムラアイデンティティ維持と関わっている。済州島人密集地である大阪の生野は、大正時代までは都市近郊農村にすぎなかったが、大阪が「東洋のマンチェスター」と呼ばれる頃になると、中小のコ-バがつくられ、「ムラビト」と「ヨソモノ」、それにその「構造」の外部に位置づけられた「朝鮮人」の住むマチに変貌していった。ところが、戦後「日本人」のカテゴリーが強化され、「日本人」と「朝鮮人」の権力関係によって「ムラビト」と「ヨソモノ」の権力関係を覆い隠されるようになった。「日本人」は国民国家によって創られた言説であるが、国家次元の言説が地域社会の権力関係と関わることで、その言説が実体化されていった。以上の記述・分析によって、権力関係によって「民族」、「国民」アイデンティティが言説から実体化していく過程が明らかになったといえる。
日本産共生性コエビ類の分類と宿主選択の特異性

甲殻綱エビ目コエビ下目のうち、他の海産生物と共生関係を持つ種について、分類と宿主選択に関する研究を行った。エビの形態や色彩、宿主との生活の様子から、共生パターンを1)隠れ込み、2)擬態、3)清掃に分けて考えた。刺胞動物門花中綱のナシジイソギンチャクに擬態するテナガエビ科カクレエビ亜科の1種を新属新種とみなし、Izucaris masudaiとして記載した。また、伊豆諸島八丈島の海底洞窟より採集した雄1固体に基づいて、同亜科ムカシカクレエビ属のPalaemonella hachijoを記載した。本論文印刷中に、本種の追加標本を2個体得たが、いずれも他の生物との共生が確認されなかったため、本種はカクレエビ亜科としては珍しく、自由生活をする種であると結論づけた。魚類と清掃の関係にある、同科テナガエビ亜科のソリハシコモンエビ属エビ類の標本を多数採集して比較した結果、従来Urocaridella antonbruuniiとして扱われていた種の中には、少なくとも5種が含まれていた。これらは、形態が極めて類似しており、また共生する魚類の科レベルでの選択にも差異が見いだせなかった。しかし、明らかな色彩の違いが認められたため、隠蔽種の関係にあるものとみなし、Urocaridella antonbruunii complexの分類学的再検討として論文を執筆中である。また、擬態のパターンに区分した共生性コエビ類のうち、以下の新知見を得ることができた。伊豆半島産の標本に基づいて、モエビ科トガリモエビ属テングモエビTozeuma armatumが刺胞動物門花中綱のシロアザミヤギに擬態すること、およびテナガエビ科カクレエビ亜科ホンカクレエビ属のPericlimenes rectirostrisが棘皮動物門ウニ綱のヒラタガゼの棘に擬態することが明らかになった。これらは、従来宿主が確認されていなかった種であることから、宿主の新記録を報告する予定である。伊豆諸島の八丈島において、棘皮動物門ウニ綱のシラヒゲウニから、日本沿岸では初記録となるヨコシマエビ科のGnathophylloides mineriを採集した。本種は従来、シラヒゲウニを含むラッパウニ科ウニ類との共生が知られていたが、南日本でも同様の宿主選択を示すことが明らかになった。本研究では、甲殻綱エビ目コエビ下目のうち、他の海産生物と共生関係を有する種について、分類と宿主選択に関する調査を行った。本州中部の伊豆半島から採集された、刺胞動物門花虫綱のナシジイソギンチャクと共生するテナガエビ科カクレエビ亜科の一種は、新属新種であるとみなされた。ナシジイソギンチャクは個体群によって生時の色彩が著しく異なり、今回調査した標本は、宿主の色彩に応じて著しい斑紋パターンの差異を呈していた。コエビ類では、斑紋パターンが種の標徴形質として有効であるが、本種においては、宿主への隠れ込みに適応した種内変異であると考えられた。本研究の成果は1999年5月に出版予定のアメリカ甲殻類学会誌で公表される。また、同科カクレエビ亜科ムカシカクレエビ属の未記載種一個体を八丈島の海底洞窟より採集した。本種は、棘皮動物門のウミシダ類と共生する、ウミシダカクレエビに酷似する。しかし、胸脚の長さなどによって識別される。本種の宿主は、おそらくウミシダ類ではないものと考えられる。本種については、新種として記載するための論文を準備中である。さらに、八丈島において、魚類と清掃共生の関係にある、同科テナガエビ亜科のソリハシコモンエビ属エビ類の標本を多数採集した。その他の産地から得られた標本も併せて精査した結巣、従来Urocaridella antonbruniiとして扱われていた種の中には、少なくとも5種が含まれていた。これらの種は、生時の色彩は明らかに異なるが、形態は極めて類似しており、隠蔽種の関係にあるものとみなされた。本研究では、これらをUrocaridella antonbrunii complexとして扱い、分類学的再検討を進めている。

これらは、形態が極めて類似しており、また共生する魚類の科レベルでの選択にも差異が見いだせなかった。しかし、明らかな色彩の違いが認められたため、隠蔽種の関係にあるものとみなし、Urocaridella antonbruunii complexの分類学的再検討として論文を執筆中である。また、擬態のパターンに区分した共生性コエビ類のうち、以下の新知見を得ることができた。伊豆半島産の標本に基づいて、モエビ科トガリモエビ属テングモエビTozeuma armatumが刺胞動物門花中綱のシロアザミヤギに擬態すること、およびテナガエビ科カクレエビ亜科ホンカクレエビ属のPericlimenes rectirostrisが棘皮動物門ウニ綱のヒラタガゼの棘に擬態することが明らかになった。これらは、従来宿主が確認されていなかった種であることから、宿主の新記録を報告する予定である。伊豆諸島の八丈島において、棘皮動物門ウニ綱のシラヒゲウニから、日本沿岸では初記録となるヨコシマエビ科のGnathophylloides mineriを採集した。本種は従来、シラヒゲウニを含むラッパウニ科ウニ類との共生が知られていたが、南日本でも同様の宿主選択を示すことが明らかになった。
術後生活機能障害の5年間追跡調査とプレハビリテーションプログラムの有効性評価

先行研究として予定手術患者4000例を対象に、術後生活機能障害に関するコホート研究を実施し、術後3か月のアウトカムについて検証している(平成31年3月で終了)。本研究課題では、上記研究のエントリー患者4000例の術後1年及び術後5年での生活機能の変化について調査し、術後生活機能低下に関連する因子を明らかにした上で、術後1年の生活機能障害リスクの予測式を作成し、その精度について検証する。運動・栄養・禁煙・呼吸療法からなるプレハビリテーションプログラムを呼吸器外科手術100例に実施する。プログラムの確立と実施可能性、身体機能や術後生活機能への影響を検証する。
脳微小血管障害予防のための頭蓋内液循環特性プロファイリング：加齢と身体活動の影響

現在、国内外において認知症予防対策の構築が火急的課題となっている。一方、加齢に伴う循環器機能の低下や疾患は、認知症発症リスクを上昇することで知られる。本研究では、認知症の強力なリスク因子である脳微小血管障害(CSVD)の「発症メカニズム解明」と、「習慣的持久性運動による予防対策の構築」を目的とした基礎研究の一環として、最先端MRI測定手法を用い生理学的エビデンスを集積する。
吟醸酒の次世代ファジイ制御を目的としたオンライン制御システムの開発

吟醸酒の品質と化学成分量のあいまいな関係をモデリングするために、化学成分の分析値と官能評価値の間に非線形な関係が存在する可能性があるので、感性情報処理の手法の一つであるNN(ニューラルネットワーク)あるいはFNN(ファジィニューラルネットワーク)を用いた。吟醸酒の化学成分の分析値と官能評価値、および各官能評価値から総合評価値を精度よく推定することができることを実証した。さらに推定精度を高めるために、HFNN(階層化ファジィニューラルネットワーク)を用いることがよいことがわかった。また、構築したモデルを用いて各官能評価値から吟醸酒の化学成分量を求めるためには、目的の官能評価値になるような最適な化学成分量の組み合わせを求める最適化問題を解けば良いと考えられる。非線形最適化問題の解法として我々はGA(遺伝的アルゴリズム)を応用し、目的の官能評価値を満足する吟醸酒の成分の推定を行うシステムを構築した。製麹工程はその後のもろみ工程や最終生産物である製成酒の品質に大きな影響を及ぼすため、清酒製造において重要な工程である。そこで麹米の状ボウを考慮に入れることが可能なように画像処理による麹菌体量および酵素力価の推定を試み、良好な結果を得た。つぎにもろみ工程のファジィ制御について研究した。ファジィ推論を実際の工場規模での発酵試験に適用することを念頭に置き、そのためのスケールアップの発酵試験を総米10および100kgで行なった。その結果、もろみ工程を良好に制御することができた。さらに総米1000kgの実際の工場仕込の発酵試験を行ない、杜氏による対照試験とほぼ同じ品質の吟醸酒を作りうることがわかった。(1)現在までに作成したファジィルールに従って実験室レベルでの吟醸酒の小仕込みを行い、時系列サンプルを集め、各種の糖、アルコール、エステル類、アミノ酸等の濃度をオフラインで詳細に分析した。また、固形物も同時にサンプリングし、固形分率、酵母濃度、酵素活性、細胞膜脂質含量も分析して、吟醸酒もろみ工程での詳細な実験データを取得した。(2)清酒もろみ工程は固形物としての米の溶解、および溶液中での酵母による発酵が同時に進行する複雑なシステムであるが、これまでに数種の構造モデルが提案されている。そこでこれらのモデル式をベースにして吟醸酒の生産に対する新しいモデル式を考案した。(1)の結果をこの式のパラメータ決定に使用し、オフラインの収集データは時系列データとしては不十分であるため、データを補間した上で多種類の分析値から最適なパラメータを探索した。この研究結果とファジィ制御によるもろみ工程の品質制御、ニューラルネットワークを用いた吟醸酒の品質評価などのこれまでの研究結果をさらに発展させて、ファジィニューラルネットワークを用いたもろみ工程のシミュレーターの構築と遺伝的アルゴリズムを用いたもろみ工程の最適品温軌道の決定が可能なようにした。(3)清酒メーカーでは過去の多くの醸造データを保有している。これらのデータに基づいて、ファジィニューラルネットワークによる吟醸酒醸造制御用ルールの自動抽出を試みた。このルールによる総米100kgの試験仕込も行い、その有効性を確認した。(4)麹は吟醸酒の品質に大きな影響を与える。そこで、清酒メーカーに蓄えられている麹の品質(酵素力価)と麹製造工程の温度履歴に関する時系列データを用い、遺伝的アルゴリズムにより最適な麹製造の温度軌道を探索した。この結果を実際の麹プロセスに応用し、良い結果が得られることを確認した。吟醸酒もろみ(発酵)工程の品質まで考慮した自動制御法の構築を目指し、吟醸酒制御システムの構築と品質評価システムの構築に関する研究を行った。まず、吟醸酒の品質評価システムの構築については、吟醸酒の各種の機器分析値から官能評価値を推定するモデルの構築を目的に、FNN(ファジィニューラルネットワーク)およびHFNN(階層化ファジィニューラルネットワーク)のファジィモデリングの手法を応用した。

構築された二つのモデルの入力項目と推定精度について比較した結果、FNNモデルによる推定誤差は最大10%程度の高い精度となった。さらに、HFNNモデルによる推定誤差は最大7%とさらに高い精度となった。選択された入力変数は熟練者の経験とよく一致したものとなった。次に、吟醸造制御システムの構築については、FNNを用いて吟醸酒発酵制御用ルールの自動抽出を行った。発酵工程を四つの制御領域に分割し、それぞれに対してFNNを構築した。得られたFNNモデルは翌日の設定温度を精度良く推定した。このようにして得られたルールは熟練者である杜氏の経験と良く一致していた。得られたモデルの有用性を我々が開発したシミュレーションで確認した。さらに、構築したFNN推論によるもろみ発酵試験を実際に行った。試験的スケールである総米100kgと商業生産スケールである総米1500kgの発酵試験を行った。対照として熟練者による仕込を行った。その結果、両スケールとも製成酒の各種の化学成分濃度、物理化学値、香気成分濃度、官能検査すべてにおいて、対照仕込とFNN推論仕込の間で大きな違いはみられなかった。このように、FNN推論による制御は熟練者による制御とほとんど同じ品質の製成酒を作ることが可能であった。
細胞分裂機構の解明を目指した細胞焦点接着斑力学刺激負荷デバイスの開発

本研究は,細胞の足場である焦点接着斑と基質との間に生じる力を計測しつつ,それぞれの焦点接着斑部位に力学刺激を負荷できる細胞培養デバイスを開発することを目的として,2年間の研究を進め,下記の成果を得ることができた.1.磁性粒子混入型マイクロピラーデバイス開発手法の確立:フォトリソグラフィによる微細加工技術を適用し,直径23μm,深さ9μmの微細孔が並んだ鋳型を作製した.そして,平均直径約1.5μmの鉄粉をPDMS(polydimethylsiloxane)溶液中に混入して鋳型に流し込んだ後,遠心力および磁力によって磁性粒子を鋳型底面に沈めさた.引き続きPDMSを加熱硬化して,表面近傍のみ磁性体が入った弾性マイクロピラーを作製する条件を見いだした.このピラーの周囲に磁場を形成することにより,磁力線の方向に沿って,特定のマイクロピラー先端に数100nN(細胞の発生張力と同程度)の力を負荷して撓ませることできた.このようにして,細胞の接着部位に局所的な力学刺激を負荷できるマイクロピラーデバイスを安定して作製する技術を確立した.2.マイクロピラーを用いた細胞接着部位への力学刺激負荷と細胞張力変化の計測:作製した弾性マイクロピラーを用いて,ピラー上で血管平滑筋細胞を培養し,顕微鏡下でピラー基板を引張ることによって,細胞の焦点接着部位に力学刺激を加えながら,接着部位の張力変化を計測できる系を構築した.細胞接着部位への引張ひずみが35%以上になると,急激に細胞張力の上昇が観察された.このことから,引張刺激に応じて細胞内のアクチンストレスファイバの収縮機構が活性化する際には,ひずみの閾値が存在することが示唆された.まず,初年度は,細胞焦点接着斑への力学刺激デバイスとして,円柱状の微細な剣山が並んだPDMS(polydimethylsiloxane)製の弾性マイクロピラーの作製方法を検討した。弾性マイクロピラー用の鋳型を作製するために,シリコンの微細加工技術としてドライエッチング法とフォトリソグラフィ法を検討したところ,フォトリソグラフィ法で作製した鋳型を用いた方が,寸法精度,鋳型剥離性がともに安定しており,精密な弾性マイクロピラーを作製できることが分かった。この手法によって,直径23μm,深さ約10μm程度のマイクロピラーデバイスを作製することが可能となった。さらに,この弾性マイクロピラーを駆動させる方法を検討した。ピラーの作製過程において,PDMS溶液中に平均直径約1.5μmの鉄粉を混入して鋳型に流し込んだ後,下方からネオジム磁石によって磁力を負荷して磁性粒子を鋳型底面に沈めさせた。この状態でPDMSを加熱硬化し,表面近傍のみ磁性体が入ったマイクロピラーデバイスを作製することができた。そしてピラーの周囲に磁場を形成することにより,磁力線の方向に沿って,特定のマイクロピラー先端に数100nN(細胞の発生張力と同程度)の力を負荷し,撓ませる技術を確立した。また,細胞分裂などの細胞機能に深く関与する細胞骨格として,アクチンフィラメントと微小管に注目し,それらが細胞内で力学的にどのように作用しているのか調査した。具体的には,アクチンフィラメントや微小管を選択的に重合・脱重合させた状態で,細胞の3次元的な形態や,筋細胞の収縮特性・引張特性などを詳細に調べた。その結果,アクチンフィラメントは細胞内に向かって圧縮力を発生し,微小管はその圧縮力に対する抵抗として機械的に作用しており,それぞれが細胞の3次元形態や機械的特性の制御に大きく関与していることをに示す知見が得られた。本研究は,細胞の足場である焦点接着斑と基質との間に生じる力を計測しつつ,それぞれの焦点接着斑部位に力学刺激を負荷できる細胞培養デバイスを開発することを目的として,2年間の研究を進め,下記の成果を得ることができた.1.磁性粒子混入型マイクロピラーデバイス開発手法の確立:フォトリソグラフィによる微細加工技術を適用し,直径23μm,深さ9μmの微細孔が並んだ鋳型を作製した.そして,平均直径約1.5μmの鉄粉をPDMS(polydimethylsiloxane)溶液中に混入して鋳型に流し込んだ後,遠心力および磁力によって磁性粒子を鋳型底面に沈めさた.引き続きPDMSを加熱硬化して,表面近傍のみ磁性体が入った弾性マイクロピラーを作製する条件を見いだした.このピラーの周囲に磁場を形成することにより,磁力線の方向に沿って,特定のマイクロピラー先端に数100nN(細胞の発生張力と同程度)の力を負荷して撓ませることできた.このようにして,細胞の接着部位に局所的な力学刺激を負荷できるマイクロピラーデバイスを安定して作製する技術を確立した.2.マイクロピラーを用いた細胞接着部位への力学刺激負荷と細胞張力変化の計測:作製した弾性マイクロピラーを用いて,ピラー上で血管平滑筋細胞を培養し,顕微鏡下でピラー基板を引張ることによって,細胞の焦点接着部位に力学刺激を加えながら,接着部位の張力変化を計測できる系を構築した.細胞接着部位への引張ひずみが35%以上になると,急激に細胞張力の上昇が観察された.このことから,引張刺激に応じて細胞内のアクチンストレスファイバの収縮機構が活性化する際には,ひずみの閾値が存在することが示唆された.
不斉合成中間体として有用な環状アセタール化合物の分子設計

本研究の実績を以下に要約する.1.光学活性ジオキシノン体は従来キラリティーの移動またはジアステレオマ-分離法により合成されてきた.今回,プロキラルなジオール体(1)の酵素化学的不斉化により,2及び3の触媒的不斉合成に成功するとともに3型化合物を用いる各種化合物の不斉合成法を開発した.2.2位に種々の置換基をもつキラルジオキシノン体(4,5)のエナンチオ選択的合成法を確立し,れらの配座(X線解析),及びπ面選択性に及ぼす2位置換基効果を解明した.また,ジオキシノン体の4,5,6位sp^2炭素が立体電子効果によりピラミッド化すること,π面選択性に及ぼす立体電子効果(Cieplak効果)の関与も明らかにした.3.キラルなジヒドロピロン体(68)の簡便なエナンチオ制御合成法を開発し,これらの配座(X線解析)及び高いπ面選択性を解明した.同時に6,7のπ面選択性はジオキシノン体の場合と同じ立体電子効果により支配されることを明らかにした.4.エノンを内蔵するキラルな複素7員環化合物(9,10)の配座(X線解析)とπ面選択性(共役付加:anti;Diels-Alder反応:syn)を初めて明らかにした.本研究の実績を以下に要約する.1.光学活性ジオキシノン体は従来キラリティーの移動またはジアステレオマ-分離法により合成されてきた.今回,プロキラルなジオール体(1)の酵素化学的不斉化により,2及び3の触媒的不斉合成に成功するとともに3型化合物を用いる各種化合物の不斉合成法を開発した.2.2位に種々の置換基をもつキラルジオキシノン体(4,5)のエナンチオ選択的合成法を確立し,れらの配座(X線解析),及びπ面選択性に及ぼす2位置換基効果を解明した.また,ジオキシノン体の4,5,6位sp^2炭素が立体電子効果によりピラミッド化すること,π面選択性に及ぼす立体電子効果(Cieplak効果)の関与も明らかにした.3.キラルなジヒドロピロン体(68)の簡便なエナンチオ制御合成法を開発し,これらの配座(X線解析)及び高いπ面選択性を解明した.同時に6,7のπ面選択性はジオキシノン体の場合と同じ立体電子効果により支配されることを明らかにした.4.エノンを内蔵するキラルな複素7員環化合物(9,10)の配座(X線解析)とπ面選択性(共役付加:anti;Diels-Alder反応:syn)を初めて明らかにした.
原子プローブ:レーザー誘起電界蒸発などによる表面研究

本研究の目的は,レーザー光や熱による表面原子の配列や吸着原子・分子の動的経過等を原子プローブ(A-P)や走査型トンネル顕微鏡(STM)により原子のレベルで解明すること,更に,これらの超微視的な研究と平行して,準安定原子ビームや分子線を試料面に照射して,表面構造や電子状態を調べ,微視的で直接的な研究と統計的で間接的な研究との成果を比較検討し,各手法の特性と特長を評価するとともに,表面研究に新しい視点をもたらすことにある.A-PとSTMによる研究では,窒素レーザーやNd-YAGレーザーのパルス光を高温超電導セラミックスやSiに照射し,表面原子の再配列やクラスター化がしらべられた.A-Pによる超電導ケラミックスの分析では,パルスレーザー光で表面原子の電界蒸発を促進するが,複雑の原子がクラスターを形成することや,セラミックスの表面が極めて汚染され易いこと,更に,セラミックス内の組成が数十ナノメートルの幅で著しく変化すること等の興味ある結果が得られた.STMによる研究では,レーザー光の照射により,原子的に滑らかな表面が凹凸の激しい面に変わることが観察されたが,その原因が表面原子の移動によるものか,試料面からの反射光がSTMの周辺部を照射して,そこから蒸発した原子,分子,クラスター粒子等がSi上に付着することによるものかは,現時点では明らかではない.クラスターの形成過程の解明やSTMの性能と画面処理による解像度との向上が進められている.ペニングイオン化電子分光装置がほぼ完成し, NiのCOが調べられた.また,アセチレン分子線を単結晶のSi(100)面に照射して炭化珪素膜の形成過程を調べ,イオンスパッタ法とAES法により膜を分析した. He準安定原子をアルカリ金属吸着表面に衝突させて,表面の局所的ポテンシャルと準安定原子脱励起過程との関係を調べた.本研究の目的は,レーザー光や熱による表面原子の配列や吸着原子・分子の動的経過等を原子プローブ(A-P)や走査型トンネル顕微鏡(STM)により原子のレベルで解明すること,更に,これらの超微視的な研究と平行して,準安定原子ビームや分子線を試料面に照射して,表面構造や電子状態を調べ,微視的で直接的な研究と統計的で間接的な研究との成果を比較検討し,各手法の特性と特長を評価するとともに,表面研究に新しい視点をもたらすことにある.A-PとSTMによる研究では,窒素レーザーやNd-YAGレーザーのパルス光を高温超電導セラミックスやSiに照射し,表面原子の再配列やクラスター化がしらべられた.A-Pによる超電導ケラミックスの分析では,パルスレーザー光で表面原子の電界蒸発を促進するが,複雑の原子がクラスターを形成することや,セラミックスの表面が極めて汚染され易いこと,更に,セラミックス内の組成が数十ナノメートルの幅で著しく変化すること等の興味ある結果が得られた.STMによる研究では,レーザー光の照射により,原子的に滑らかな表面が凹凸の激しい面に変わることが観察されたが,その原因が表面原子の移動によるものか,試料面からの反射光がSTMの周辺部を照射して,そこから蒸発した原子,分子,クラスター粒子等がSi上に付着することによるものかは,現時点では明らかではない.クラスターの形成過程の解明やSTMの性能と画面処理による解像度との向上が進められている.ペニングイオン化電子分光装置がほぼ完成し, NiのCOが調べられた.また,アセチレン分子線を単結晶のSi(100)面に照射して炭化珪素膜の形成過程を調べ,イオンスパッタ法とAES法により膜を分析した. He準安定原子をアルカリ金属吸着表面に衝突させて,表面の局所的ポテンシャルと準安定原子脱励起過程との関係を調べた.
サイトカイン刺激による接着分子の遺伝子発現に対する全身麻酔薬とずり応力の影響

1.研究目的血管内皮上の接着分子(E-セレクチン)は好中球・単球との接着の第一段階であるローリングに関与するとされる。本研究の目的は、E-セレクチン発現に対する麻酔薬の影響を機能的レベル、蛋白レベル及びmRNAレベルで明らかにすることである。2.研究方法・研究成果静脈麻酔薬ケタミンとプロポフォールについて検討した。ヒト臍帯静脈内皮細胞培養キットを使用し、5%CO_2,95%air,37°Cで培養し,コンフルエントとなったものを用いた。ケタミン(0,10,100,1000μM)もしくはプロポフォール(0,0.01,0.1,1,10,100μg/ml)を含む培地で2時間pre-incubation後、更にIL-1(5U/ml)にて4時間刺激し、培地上清を検体として回収した。可溶性E-セレクチンの定量はELISA法により測定した。また同様の実験系で細胞を可溶化し回収しNorthern blottingによりE-セレクチンmRNA量を定量し解析した。可溶性E-セレクチン濃度はIL-1刺激により有意に増加し、ケタミンの前処置はその刺激効果を有意に抑制した。一方プロポフォールの前処置はIL-1の刺激効果に対して有意な変化はなかった。E-セレクチンmRNAはIL-1刺激により有意に増加し、ケタミンの前処置によりその効果は有意に抑制された。一方プロポフォールの前処置はその刺激効果に対して有意な変化はなかった。ケタミンには接着分子E-セレクチンの発現抑制作用があり、SIRS進展に対する予防的効果がある可能性が示唆された。3.今後の展開現在吸入麻酔薬イソフルランとセボフルランについて、ずり応力負荷装置により30dyn/cm2のずり応力を負荷した培養細胞にて上記と同様の実験を行い検討中である。更に、同様の流れのある条件下でadhesion assayにより機能的解析を進める予定である。2.研究方法・研究成果本年度は主に静脈麻酔薬ケタミンについて検討した。血管内皮細胞は正常ヒト臍帯静脈内皮細胞培養キットを使用し、5%CO_2,95%air,37°Cで培養し,コンフルエントとなったものを用いた。ケタミン(0,10,100,1000μM)を含む培地で2時間pre-incubation後、更にIL-1(5U/ml)にて4時間刺激し、培地上清を検体として回収した。可溶性E-セレクチンの定量はELISA法により、ヒトE-セレクチンELISAキットを使用した。また同様の実験系で細胞を可溶化し回収しNorthernblottingによりE-セレクチンmRNA量を定量し解析した。可溶性E-セレクチン濃度はIL-1刺激により有意に増加した。一方ケタミンの前処置はIL-1による刺激効果を有意に抑制した(10μMケタミンにより70%減少)。また、IL-1非刺激下では、ケタミンは有意な変化を示さなかった。

これらのことより、ケタミンには接着分子E-セレクチンの産生抑制作用があり、SIRS進展に対する予防的効果がある可能性が示唆された。以上成果の一部は第6回日米麻酔会議で発表。3.今後の展開現在回転円盤型ずり応力負荷装置により30dyn/cm2のずり応力を負荷した培養細胞にて上記と同様の実験を行い検討中である。更に、同様の流れのある条件下で血管内皮と白血球のadhesion asasayにより機能的解析をする予定である。1.研究目的血管内皮上の接着分子(E-セレクチン)は好中球・単球との接着の第一段階であるローリングに関与するとされる。本研究の目的は、E-セレクチン発現に対する麻酔薬の影響を機能的レベル、蛋白レベル及びmRNAレベルで明らかにすることである。2.研究方法・研究成果本年度は主に静脈麻酔薬プロポフォールについて検討した。正常ヒト臍帯静脈内皮細胞培養キットを使用し、5%CO_2,95%air,37°Cで培養し,コンフルエントとなったものを用いた。プロポフォール(0,0.01,0.1,1,10,100μg/ml)を含む培地で2時間pre-incubation後、更にIL-1(5U/ml)にて4時間刺激し、培地上清を検体として回収した。可溶性E-セレクチンの定量はELISA法により測定した。また同様の実験系で細胞を可溶化し回収しNorthern blottingによりE-セレクチンmRNA量を定量し解析した。可溶性E-セレクチン濃度はIL-1刺激により有意に増加したが、プロポフォールの前処置はIL-1による刺激効果に対して有意な変化はなかた。IL-1非刺激下でも、プロポフォールは有意な変化を示さなかった。E-セレクチンmRNAはIL-1刺激により有意に増加し、プロポフォールの前処置はその刺激効果に対して有意な変化はなかった。ケタミンの結果と合わせると、プロポフォールはE-セレクチン発現にほとんど影響はないが、ケタミンには接着分子E-セレクチンの産生抑制作用があり、SIRS進展に対する予防的効果がある可能性が示唆された。3.今後の展開現在吸入麻酔薬イソフルランとセボフルランについて、ずり応力負荷装置により30dyn/cm^2のずり応力を負荷した培養細胞にて上記と同様の実験を行い検討中である。更に、同様の流れのある条件下でadhesion assayにより機能的解析を進める予定である。