hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
中国と台湾における中小製造企業のビジネス・ネットワーク分析

1中国の中小製造企業に対する質問票調査の実施中国経済が急速的に発展したとはいえ、中小製造企業の経営者や管理者たちが学術的な調査に対して、依然として保守的であるため、22年度に完成する予定の質問票調査が23年度まで持ち越した。今回は上海の調査会社を利用し、上海及び常州に位置する中小製造企業に調査を実施した。248部の質問票を配布したが、128部の回収があった。不完全回答の質問票を除き、実際に分析にしようしたサンプルは70。2台湾と中国の調査結果の比較分析22年度に収集した台湾のデータと今回新たに収集した中国のデータを比較しながら分析した。最も重要な発見物は、緊密なビジネス・ネットワークの中に組み込まれた台・中の中小製造企業の業績はそれぞれのマーケティング活動よりも業界全体の市場規模に影響されるということである。特に経済成長が著しい中国の中小製造企業のほうが、その傾向が強い。中国の調査結果は、2012年のIMP学会に報告として申請中。台・中中小製造企業の比較調査の結果は2012年7月の学内紀要に投稿申請中。
ジストロフィンの脳内生理機能の解明

ジストロフィンの脳内機能の解明のため本年度はジストロフィーモデルである、mdxマウスの痙攣抵抗性につい検討した。この研究の動機はDMD患者のアンケートにおいて熱性痙攣の頻度が2.6%と一般小児における8-9%よりも有意に低値であることが判明したからである。mdxマウスとコントロールマウスであるB-10マウスそれぞれ15匹を用いて、Dixonのupanddown法により最大電撃痙攣の閾値を測定した。その結果mdxマウス20.69±1.83mAにたいしてB-10では16.06±0.91mAと、mdxマウスの方が有意(p<0.005)に痙攣閾値が高かった。またカイニン酸(30mg/kg、i.p.)による痙攣誘発実験では全例に痙攣が認められたが、痙攣までの潜時はmdxマウスで1488±312sec.にたいしB-10マウスでは453±34secとmdxマウスにおいて有意に(p<0.005)潜時は延長していた。しかしペンチレンテトラゾール(50mg/kg、i.p.)では痙攣までの潜時は有意差がなった。カイニン酸受容体のオートラジオグラフィーを行い、大脳各部位におけるカイニン酸受容体密度を検討した結果、大脳皮質、海馬、線状体においてmdxマウスでは有意に低下していることが判明した。Timm染色にてカイニン酸受容体を介する主要な神経伝達経路である、海馬苔状線維の亜鉛含有量を検討したところ海馬のCA3領域において有意に低下していた。以上より、mdxマウスでは誘発痙攣にたいし抵抗性をもっていることがわかり、その機構には少なくともカイニン酸受容体が関与していることが明らかになった。
高分子圧電薄膜を用いた焦点型超音波スペクトロスコピーシステムの開発

本研究における主たる研究成果は以下の通りである。1.超音波変換素子として高分子圧電薄膜を採用することにより、広帯域の超音波の送受信が、更にパルス波とFFT(高速フーリエ交換)の組合わせにより超音波音速・吸収の迅速・広帯域測定が可能な超音波スペクトロスコピー計測システムを構築することができた。2.凹面形状を持つ超音波変換素子または音響レンズ、パルスモータ駆動X-Y-Z試料台およびパーソナルコンピュータとの組合わせにより、物質内部の三次元超音波スペクトロスコピー計測およびその情報処理が可能となった。3.耐熱性高分子ポリイミドをバッファー材に用いることにより、300度までの高温域における超音波スペクトロスコピー測定が可能となった。4.種々の高分子材料(例えば、Nylon-6や高分子液晶)における力学分散現象、特に吸収極大温度の周波数依存性が、一回の昇温過程測定で試料の劣化の心配もなく簡単に求められた。5.超音波スペクトロスコピー法によりガラス/高分子複合体におけるガラス球の直径・分散状態に関する情報が非破壊的に得られる可能性が示唆された。6.金属・複合体・生体組織等の内部構造観測、交渉効果を利用した超薄膜膜厚測定への応用研究が進行中であり、興味あるデータが得られつつある。三次元超音波スペクトロスコピーシステムの採用により、従前の単一周波数を用いたものに比較して、情報量が豊富でコントラストの高い超音波画像が得られることが実証され、実用化が考慮されている。1.超音波変換素子として高分子圧電薄膜を採用することにより、広帯域の超音波の送受信が、更にパルス波とFFT(高速フーリエ変換)の組合わせにより超音波音速・吸収の迅速・広帯域測定が可能な超音波スペクトロスコピー計測システムを構築することができた。2.凹面形状を持つ超音波変換素子または音響レンズ、パルスモータ駆動XーYーZ試料台およびパーソナルコンピュータとの組合わせにより、物質内部の三次元超音波スペクトロスコピー計測およびその情報処理が可能となった。6.金属・複合体・生体組織等の内部構造観測、干渉効果を利用した超薄膜膜厚測定への応用研究が進行中であり、興味あるデータが得られつつある。7.三次元超音波スペクトロスコピーシステムの採用により、従前の単一周波数を用いたものに比較して、情報量が豊富でコントラストの高い超音波画像が得られることが実証され、実用化が考慮されている。
多段階プロセスとしての胎児型赤芽球の循環開始機構の解明

膜貫通型プロテアーゼADAM8はゼブラフィシュにおいて血液循環の開始に関わる(Iida et al., 2010)。血液循環機構のさらなる理解のため、ADAM12の解析を行った。ADAM12-GFP BACTgフィッシュの作成によりADAM12が胚の血球・血管で発現することがわかったが、ADAM12ノックアウトフィッシュでは造血や血管形成には顕著な影響はなかった(Tokumasu et al., 2016)。一方ADAM8欠損マウスの解析により、ADAM8が、筋再生に先行する炎症細胞の損傷筋への浸潤・壊死繊維の除去により、筋再生に関わることを見出した(Nishimura, 2015)。脊椎動物発生過程において最初の造血の場(ほ乳類では卵黄嚢壁の血島)では主に胎児型赤血球が産生されるが、意外にも、そこで産生される赤血球がどのように循環し始めるのか、その制御機構は殆ど解明されていなかった。我々はゼブラフィッシュ胚のライブイメージングにより、胎児型赤血球の循環開始が循環系内で働くメタロプロテアーゼ活性に依存すること、血球で高発現する膜型メタロプロテアーゼADAM8を必要とすることを発見した。本研究はその発見を発展させ、血液循環開始機構をADAM8を中心とする血球・血管の相互作用・接着制御の観点から解明し、能動的プロセスとしての循環開始機構の解明をめざしてきた。その結果、ADAM8に依存する血液循環の開始がないと、血管におけるNotchシグナルに異常が生じ、NotchのリガンドであるDll4・Notchの下流ではたらくhey2の発現上昇がみられること、それは、ADAM8のドミナントネガティブフォームを血球で発現しても同様に見られることから、血球の血管への接着が、血管の分化を妨げて、その結果、節間動脈の形成が妨げられることがわかった。また、ADAM10という他のプロテアーゼのノックダウンでは、さらに早期に血管形成が妨げられること、血球で発現するインテグリンや細胞外基質の変異体においても、血管形成初期でその制御をおこなっていることを見いだした。一方、ホ乳類におけるADAM8の役割を探るため、ADAM8ノックアウトマウスの解析も行っている。ADAM8ノックアウトマウスは、赤血球の循環にしては異常がなかった。そこで、ADAM8を強く発現する炎症性の細胞である好中球・マクロファージに着目し、これらの細胞の挙動をADAM8が制御している可能性を検討した。脊椎動物発生過程において最初にまず胎児型赤血球が産生されるが、そこで産生される赤血球がどのように循環し始めるのか、その制御機構は殆ど解明されていなかった。我々はゼブラフィッシュ胚において胎児型赤血球の循環開始が血球で高発現する膜型メタロプロテアーゼADAM8を必要とすることを発見した。そこでホ乳類におけるADAM8の役割を探るため、ADAM8ノックアウト(KO)マウスの解析を行ったが、ADAM8 KOマウスは、赤血球の循環にしては異常がなかった。そこでADAM8を強く発現する炎症細胞に着目し、これらの細胞の浸潤が起こる骨格筋再生におけるADAM8の役割を検討した。損傷した骨格筋が再生するためには炎症細胞の働きが不可欠であることが知られるが、その動態や役割には不明な点が多い。ADAM8は筋損傷1日後に浸潤してくる好中球で高い発現が認められた。ADAM8の筋再生に対する関与を調べるため、デュシェンヌ型筋ジストロフィーモデルマウスとADAM8 KOマウスを掛け合わせ、遺伝的に筋損傷を誘導したマウスの再生筋を解析した。その結果ADAM8欠損マウスでは壊死した筋繊維の顕著な残存と石灰化像の亢進が観察された。筋損傷時に好中球は損傷筋繊維の基底膜を越えて侵入し、凝集塊を形成する。ADAM8 KOマウスではこの凝集塊を形成する割合が減少していた。さらにADAM8が切断に関与する接着分子P-selectin glycoprotein lignad-1(PSGL-1)の発現を調べたところ、基底膜を通過して損傷筋繊維内に侵入した好中球ではPSGL-1の発現の減少が見られ、ADAM8 KOマウスではPSGLー1lowの好中球の割合が有意に低下していた。このことから好中球の損傷筋組織内移動はPSGL-1消失を伴い、その消失に対するADAM8の寄与が示された。これまでの脈管形成モデルでは、側板中胚葉から体軸中央での脈管形成に至るまで、常に血管内皮細胞に隣り合っている赤芽球の関与については不明である。側板中胚葉に含まれる赤芽球と血管内皮細胞の前駆細胞は、互いに隣接して体軸中央へと移動する。その後、互いを足場とした細胞移動により脈管構造を構築し、赤芽球の血管内侵入を経て血液循環を開始する(Iida et al., Curr Biol, 2010)。このことから、発生における血液循環系の構築において、循環前には赤芽球と血管内皮は接着していることが見出された。しかし、その接着因子は不明であり、赤芽球と血管内皮の接着は脈管形成に対する意義はほとんど分かっていない。そこで本研究では、そのような赤芽球ー血管内皮間接着因子、増殖因子、およびプロテアーゼの役割に着目した。接着因子として、フィブロネクチンのレセプターであるインテグリンα4が赤芽球に特異的に発現しており、それとヘテロダイマーを形成するインテグリンβ1は、赤芽球・血管両方で発現していた。

そこで、標的細胞特異的にインテグリンの機能を阻害する方法として、赤芽球特異的なGal4発現系統(gata1:gal4)と、UAS制御下でインテグリンβ1のドミナントネガティブを発現する系統(UAS: integrin-DN)をそれぞれ作成した。樹立された系統を掛け合わせ、インテグリンβ1が脳血管形成に関与することを見出した。発生初期の血管形成について『可視化』と『ライブイメージング』ができること,さらに、CRISPR-Cas9技術を用いて、細胞の挙動・分子メカニズムに迫れることがゼブラフィッシュの大きな利点である。本研究ではこの利点を生かし、赤芽球-血管内皮細胞というこれまで発生生物学研究ではほとんど注目されることのなかった、新しい細胞間相互作用の意義を明らかにすることができた。特に、ライブイメージングを駆使することにより、インテグリンβ1変異体において、脳血管形成に異常が生じることを見出したこと、インテグリンα4欠損フィッシュ、ADAM12欠損フィッシュの作成に成功し、後者に関してはからだの成長に関わる事を証明することが出来た。赤芽球ー血管内皮間接着因子、増殖因子、およびプロテアーゼの役割に着目し,血管ー血球相互作用がそれぞれの分化や形態形成におよぼす相互の役割について研究している。接着因子インテグリンに着目する研究においては、脳血管形成に寄与するのが、インテグリンα4β1なのかどうかを知るため、CRISPR-Cas9システムを用いてインテグリンα4ノックアウト(KO)フィッシュを作成した。現在、その解析を継続して行っている。一方、血管内皮ではグリア増殖因子ニューレグリンを発現することから、そのKOフィッシュを作成して役割を調べるとともに、ニューレグリンの切断活性化の個体レベルでの可視化に成功した(Kamezaki A., et al., Sci. Rep., 2016)。また、プロテアーゼに着目した研究として、ゼブラフィッシュでADAM12が中胚葉系譜の血管前駆細胞・血球で高発現することを見出し、そのノックアウトフィッシュを樹立した。血管形成には関与していないようであるが、ADAM12が体の大きさに関わる事を見出した(Tokumasu Y et al., Dev Growth Diff., 2016)。一方先行研究として、ゼブラフィッシュで血液循環開始に関わるADAM8が、マウス骨格筋再生に先行する炎症反応に関与し、損傷筋へのミエロイドの移動に必要であることを示したが(Nishimura D., et al., Mechan Dev., 2015)、その実験系を用いて、再生時の血管リモデリングにおける血球の役割について研究を進め、マクロファージの役割の重要性を示す事ができた(現在投稿準備中)。膜貫通型プロテアーゼADAM8はゼブラフィシュにおいて血液循環の開始に関わる(Iida et al., 2010)。血液循環機構のさらなる理解のため、ADAM12の解析を行った。ADAM12-GFP BACTgフィッシュの作成によりADAM12が胚の血球・血管で発現することがわかったが、ADAM12ノックアウトフィッシュでは造血や血管形成には顕著な影響はなかった(Tokumasu et al., 2016)。一方ADAM8欠損マウスの解析により、ADAM8が、筋再生に先行する炎症細胞の損傷筋への浸潤・壊死繊維の除去により、筋再生に関わることを見出した(Nishimura, 2015)。
血球特異的ETS転写因子の新規クロストーク

ETS転写因子のいくつかのものは、血球の増殖・分化に関わり、その異常は白血病の・発症に関わることが知られている。平成17年度、われわれはEts-1転写因子がGfi-1転写因子と結合することを見出し、その生物学的意義について検討した。GST pulldown assayの結果、Ets-1のEtsドメインとGfi-1のZnフィンガードメインが結合することが分かった。アポトーシスに関わるbax遺伝子のプロモーターの近接した部位にEts-1とGfi-1が結合することを見出したので、両者の効果をLuc assayで検討したところ、Ets-1とGfi-1は協調的に転写活性を抑制することが分かった。ChIP assayの結果から、in vivoでもbax promoter上に両転写因子が結合することが確認された。(Oncogene 2007)。平成18年度はわれわれが先に見出していたETS転写因子PU.1とGfi-1B転写因子との結合について、その生物学的意義を検討した。in vitroのLuc assayにおいて、PU.1とGfi-1Bはそれぞれの転写活性に対し拮抗的に働いた。そこで、骨髄前駆細胞である503細胞にPU.1遺伝子を導入すると、Mac-1陽性のマクロファージ系細胞が増加したが、そこにGfi-1B遺伝子を同時に導入するとMac-1の陽性率が半分に抑制された。一方、ヒト臍帯血細胞にGfi-1B遺伝子を導入すると赤血球コロニーの増殖促進が見られたが、そこにPU.1遺伝子を同時に導入すると細胞増殖と赤血球コロニー形成は著しく抑制された。臍帯血へのPU.1遺伝子の単独導入では、赤血球コロニーの出現は非常に少なく、殆どの細胞が樹状細胞に形質転換した。また、Gfi-1Bとは結合するがGATA-1とは結合しないPU.1の変異体を作成し、そのin vivoでの効果を確かめたところ、同変異体でも同様の赤血球コロニー形成が抑制されることが分かった。従って、PU.1はGATA-1の転写活性抑制とは別の経路でGfi-1Bの転写活性を抑制し、赤血球コロニーの増殖・分化を抑制すると考えられた(Oncogene投稿中)。血球特異的ETS転写因子の新規クロストークを探す中で、われわれは新たにEts-1がEtsドメインを介して、T細胞の増殖やアポトーシス阻止に関与する転写因子Gfi-1のZnフィンガードメインと結合することを見出した。クロマチン免疫沈降法(ChIPアッセイ)により、実際にこれらの両転写因子が細胞内でアポトーシス関連bax遺伝子のプロモーターに結合していることが確認された。また、site-directed mutagenesisの結果から、Ets-1はGfi-1と結合することで、bax遺伝子の転写活性の抑制に協調的に働くことも明らかとなった。さらに、細胞のEts-1,Gfi-1の発現をsiRNAにより抑制すると、bax遺伝子の発現が高くなることも明らかとなった。一方、PU.1には、赤血球や巨核球の発生と分化に重要な役割をする転写因子Gfi-1Bが結合し、それぞれの結合配列をもつレポーター活性を相互に抑制することを新たに見出した。マクロファージ系へと分化する503細胞に、PU.1遺伝子を導入するとMac-

1陽性となるマクロファージ系細胞が増加したが、そこにGfi-1B遺伝子を同時に導入するとMac-1の陽性率が半分に低下した。また、ヒト臍帯血細胞にGfi-1B遺伝子を導入すると赤血球コロニーの増殖促進が見られるが、その系にPU.1遺伝子を同時に発現させると細胞増殖と赤血球コロニー形成の増大は著しく抑制された。臍帯血へのPU.1遺伝子の単独導入では、赤血球コロニーの出現は少なく、殆どの細胞が樹状細胞に形質転換した。すなわち、PU.1とGfi-1B転写因子は結合することで相互に拮抗的に働き、骨髄球の分化を部分的に抑制していることがin vitro, in vivoで示された。ETS転写因子は様々なタンパク質と結合し、相互作用することが知られている。われわれは平成17年度、Ets-1転写因子はGfi-1転写因子と結合してBaxプロモーター活性を抑制し、Tリンパ球の生存に協調的に働くことを報告した(Oncogene 2007)。平成18年度はPU.1転写因子と、Gfi-1と相同性を示すGfi-1B転写因子との結合に関して検討を加えた。ルシフェラーゼアッセイにおいて、PU.1とGfi-1Bはそれぞれの転写活性に対し拮抗的に働くことが明らかとなった。PU.1は骨髄球分化のマスターレギュレーターとして働くことが知られている。そこで、マクロファージ系へと分化する骨髄前駆細胞である503細胞に、PU.1遺伝子を導入するとMac-1陽性のマクロファージ系細胞が増加したが、そこにGfi-1B遺伝子を同時に導入するとMac-1の陽性率が半分に低下した。従って、Gfi-1Bはin vivoでもPU.1の転写活性を抑制し、骨髄球分化を抑制すると考えられた。一方、Gfi-1BはGATA-1とともに赤血球・巨核球の増殖分化のマスターレギュレーターである。そこで、ヒト臍帯血細胞にGfi-1B遺伝子を導入すると赤血球コロニーの増殖促進が見られたが、そこにPU.1遺伝子を同時に導入すると細胞増殖と赤血球コロニー形成は著しく抑制された。また、GATA-1とは結合しないがGfi-1Bとは結合するPU.1の変異体を作成し、そのin vivoでの効果を確かめたところ、同変異体でも同様の赤血球コロニー形成が抑制されることが分かった。従って、PU.1はGfi-1Bの転写活性を抑制することで、赤血球コロニーの増殖・分化を抑制すると考えられた。この結果は、現在、英文論文として投稿中である。
スーパーコンピュータと実験風洞を統合したハイブリッド風洞システムの開発

本研究は,従来,数値実験と風洞実験を独立に行った場合には解析が困難であった複雑な流れ場に対する問題解決の手段を確立するため,数値実験と風洞実験を統合したハイブリッド風洞システムを開発するとともに,その有効性を検証することを目的として行われた。最初に小型の風洞実験装置を製作し,これを東北大学流体科学研究所未来流体情報創造センターのスカラー型並列計算機システムと毎秒1ギガビットの転送速度を持つ高速ネットワークにより結合した。ハイブリッド風洞の有効性を検証するために,基本的な流れ場である一様流中に置かれた角柱後流に発生するカルマン渦列を含む流れ場を対象として検討を行った。圧力変換器により計測した角柱表面上の圧力信号をスーパーコンピュータに送り,リアルタイムで流れ場を計算した後,再びデータ処理用のワークステーションに転送し,実際の流れ場の任意の状態量をディスプレイ上に表示するシステムを構築した。実測データのフィードバックにより数値解析結果が実際の流れ場へ収束し得ることを,まず数値シミュレーションを行って確認し,さらに実機による検証をオフライン実験で行った。引き続き,これらの基礎的知見に基づきハイブリッド風洞システムの最適化を行った。すなわち角柱の二つの側壁の圧力をフィードバックすることにより,非定常な流れ場の構造をハイブリッド風洞を用いて解析することが可能となることを明らかにした。またリアルタイム処理の実現のため,数値計算コードの並列化による数値計算の高速化を行った。また,応用として生体内の血流の制御や,流れ場のフィードバック制御による輸送機器の抵抗低減の問題について検討を行い,ハイブリッド風洞による解析の可能性についての知見を得た。小型の風洞実験装置を製作し、これをスーパーコンピュータと高速ネットワークを用いて結合するシステムを構築した。実測データのフィードバックにより数値解析結果が実際の流れ場へ収束し得ることを、風洞内に設置した角柱後流のカルマン渦列に関する実験により検証した。数値計算には,東北大学流体科学研究所未来流体情報創造センターのスカラー型並列計算機システムを用いた。新たに製作した小型の風洞とスーパーコンピュータとの間を,毎秒1ギガビットの転送速度を持つ高速ネットワークにより結合した。計測データはレーザ流速計による速度信号と、圧力変換器による角柱表面上の圧力を用いた。パソコンを用いて処理した測定データをスーパーコンピュータに送り、リアルタイムで流れ場を計算した後,再びデータ処理用のワークステーションに転送し、実際の流れ場の任意の状態量をディスプレイ上に表示するシステムのシミュレーションを行った。本年度は,フィードバックアルゴリズムの検討を主にオフラインで行い,種々のフィードバック則の有効性を明らかにし、ハイブリッド風洞システムを構築するための基礎的知見を得た。また,弾性壁を持った流路内の流れの数値解析、および乱流制御のための効率的な数値解析手法の検討や、分布センサー・アクチュエータに関する検討、およびこれらの制御システムの輸送機器システムへの応用などに関する検討もあわせて行った。数値実験は、流れ場全体の詳細な構造を把握できる長所をもつものの、現在の最高性能の計算機を用いたとしても、工業上重要な種々の流れ場を正確に再現することは、計算時間とメモリ容量の制約から困難である。一方、風洞実験は、流れの正確な情報は得られるものの、測定点数などの制約から、非定常、3次元の流れ場の構造を正確に把握することは困難である。本研究は、従来、数値実験と風洞実験を独立に行った場合には解析が困難であった複雑な流れ場に対する問題解決の手段を確立するため、数値実験と風洞実験を統合したハイブリッド風洞システムを開発するとともに、その有効性を検証することを目的とする。本年度は、代表的な流れの問題に対してハイブリッド風洞システムの最適化を行った。小型の風洞実験装置と、東北大学流体科学研究所のスーパーコンピュータシステムは、毎秒1ギガビットの転送速度を持つ高速ネットワークにより結合されている。

一様流中に置かれた角柱後流に発生するカルマン渦列に対して、圧力変換器による角柱側壁圧力の実測データをフィードバックすることにより、カルマン渦の発振周波数が比較的粗い格子系の数値解析によって予測できることは、既に昨年度の検討により明らかにされている。本年度は、角柱の二つの側壁の圧力をフィードバックすることにより、非定常な流れ場の構造をハイブリッド風洞を用いて解析することが可能となることを明らかにした。またリアルタイム処理の実現のため、数値計算コードの並列化による数値計算の高速化を行った。また、応用として生体内の血流の制御や、流れ場のフィードバック制御による輸送機器の抵抗低減の問題について検討を行い、ハイブリッド風洞による解析の可能性についての知見を得た。
ブドウ糖初期分布容量を指標とする体液評価法の確立と敗血症治療への応用

以前の我々の研究でブドウ糖初期分布容量(IDVG)は、心臓前負荷の一指標として敗血症を含む様々な病態で有用である可能性が示唆された。2016年のSurviving Sepsis Campaign Guideline(SSCG 2016)では初期蘇生で30ml/kgの輸液の施行が推奨されているが、一方で過剰輸液のマイナス面も指摘されている。ブドウ糖初期分布容量は輸液の負荷時のみならず、漏出した体液の血管内へのrefilling状態の指標としても有用である。そこで、敗血症初期治療からその後の治療までtotalの敗血症輸液管理におけるIDVGの有用性を検討するために臨床研究、動物実験を計画した。平成30年度の計画は、敗血症の初期治療時の輸液反応性とIDVGの関係の検討であった。しかし、臨床研究法の施行のため新規の臨床研究の開始が大幅に遅れてしまっている。一方で上記動物実験の研究成果、「敗血症時のIDVGの変化」については、パリで開催された第31回ヨーロッパ集中治療医学会総会で発表し、有意義な議論、助言が得られた。臨床研究法の施行により、新規開始となる臨床研究については審査準備までに大幅な時間が必要となった。そのため、臨床研究ができずにいるため。臨床研究の推進と共に、動物実験を遂行する。内容:豚敗血症モデルにおいて血管収縮薬のIDVGへの影響の検討[方法]エンドトキシンによる豚敗血症モデルを作成し、ノルアドレナリンによる昇圧(NA群,5頭)、バゾプレッシンによる昇圧(Vp群,5頭)、コントロール(5頭)の3群の実験を行う。本年度は臨床研究法施行に伴い審査準備に時間を要したため、研究が遅延した。そのため、臨床面での研究実施ができず、経費の執行が保留となった。次年度以降、臨床研究開始した際に必要となる薬品購入に使用する予定である。
プロビデンシア・アルカリファシエンスが産生する細胞膨化致死毒素に関する研究

P.alcalifaeiensは腸内細菌科に属するグラム陰性桿菌である。1996年に福井県で発生した原因不明の集団食中毒事例の際に、P.alcalifaciensが原因菌として分離・同定され、本菌が単独で下痢症の起因菌となることが明らかとなった。本菌の病原発現機構として細胞侵入性が報告されているが、細胞侵入性を持つ株は下痢症患者から単離されるP.alcalifaciensの一部であり、細胞侵入性を持たない株の病原性については不明である。これまでの研究でP.alcalifaciensが細胞毒性を有する新規のCDT(PaCDT)を産生することを明らかとし、CDTがP.alcalifaciensの病原因子となる可能性を示した。また、PaCDTはCHO細胞に対して細胞毒性を示す一方、大腸菌のCDT-I(EcCDT-I)に対する感受性の高いHeLa細胞には細胞毒性を示さず、PaCDTとEcCDTでは細胞毒性発現機構に違いがある可能性が考えられた。この細胞毒性の違いがCDTのどの構造に由来するかを調べるために、CDTの特異性に関わるサブユニットの同定を試みた。これまでに作製した組換えProvidencia alcalifaciens CdtA(PaCdtA),PaCdtB,PaCdtCに加え、組換え大腸菌Cdt-IA(EcCdt-IA),EcCdt-IB,EcCdt-ICを作製した。作製した組換えCdtサブユニットからPaCDTとEcCDT-Iの各種キメラホロ毒素を再構成しHeLa細胞とCHO細胞に対する細胞毒性を調べ、細胞感受性に最も影響を及ぼすサブユニットはAサブユニットであることまた、細胞との結合に関与するA、Cサブユニットだけでなく、Bサプユニットも細胞感受性に影響を与えることを見いだし、現在論文を作成中である。H24年度の研究実施計画に記載していた内容はほぼ達成することができた。細胞感受性に最も影響を及ぼすサブユニットはAサブユニットであることまた、細胞との結合に関与するA、Cサブユニットだけでなく、Bサブユニットも細胞感受性に影響を与えることを見いだした。P.alcalifaciensは腸内細菌科に属するグラム陰性桿菌である。そこで、CDT産生性P.alcalifaciensが人及び動物に対して病原性を有するかどうかについての研究が必要である。本研究では、P.alcalifaciensの疫学調査、抗PaCdt血清の作製、およびCDT産生性P.alcalifaciensの病原性を証明するためにPaCDTに感受性を示す動物についての検討を行った。GeneBankに登録されたP.alcalifaciensの16S rRNA遺伝子配列からP.alcalifaciensに特異的なプライマーを設計し、P.alcaiifaciens検出用PCRを構築した。このPCR法の特異性や検出限界について評価したところ、10cfu (colony forming unit)/PCRチューブのProvidencia属菌を検出できた。また、Shigella属菌、Saimonella属菌、Vibrio属菌、下痢原性大腸菌など既知の下痢原性細菌を鋳型とした時に非特異的な増幅産物は得られなかった。我が国の小児下痢症患者便および健常小児の便から、構築したPCRによってP.alcalifaciencを検出し、PMXMP培地(Providencia属菌の選択培地)を用いてP.alcalifaciencを分離した。その結果、7検体(1.8%)でPCRによる特異的な増幅産物が得られ、そのうち1検体(0.3%)よりP.alcalifaciencを、4検体(1.0%)よりP.rettgeriを単離した。動物実験については、CDTの病原性を証明するために最適な動物について検討した。10^810^<10> cfuのCDT産生性P.alcalifacilenc臨床分離株をウサギ腸管ループに接種したが、いずれの菌数においても液体貯留は認められなかった。P. alcalifaciensは腸内細菌科に属するグラム陰性桿菌である。1996年に福井県で発生した原因不明の集団食中毒事例の際に、P. alcalifaciensが原因菌として分離・同定され、本菌が単独で下痢症の起因菌となることが明らかとなった。本菌の病原発現機構として細胞侵入性が報告されているが、細胞侵入性を持つ株は下痢症患者から単離されるP. alcalifaciensの一部であり、細胞侵入性を持たない株の病原性については不明である。これまでの研究でP. alcalifaciensが細胞毒性を有する新規のCDT(PaCDT)を産生することを明らかとし、CDTがP. alcalifaciensの病原因子となる可能性を示した。そこで、CDT産生性P. alcalifaciensが人及び動物に対して病原性を有するかどうかについての研究が必要である。本年度は、(1)タイ

および中国におけるProvidencia属菌の疫学調査、(2)CDT産生性P. alcalifaciensの病原性を証明するための動物モデルの構築、および(3)P. alcalifaciensCDT(PaCDT)の受容体の候補の探索を行った。(1)Providencia属菌の分離報告の多いタイ、および中国に赴き、下痢症患者におけるProvidencia属菌の疫学調査を行った。タイでは124検体中10検体(8.1%)でProvidencia属菌検出用PCRによる特異的な増幅産物が得られ、この結果は昨年度に行った日本の結果(1.8%)よりも高かった。中国では12検体すべてでPCRが陰性であった。(2)生後1日齢のサックリングマウスに大腸菌で発現した組み換えCDT溶液を投与したが、下痢原性は認められなかった。次に、10^<10>cfuのCDT産生性P. alcalifaciens野生株(AH-31株、AS-1株)を投与した。AS-1株については投与したマウス12匹すべて陰性であったが、AH-31株では12匹中7匹で下痢が確認された。現在、CDTの下痢原性についてより詳細に調べるために、AH-31株のCDTのアイソジェニックミュータントを作製しているところである。(3)CDTの受容体を抗CdtB抗体、抗CdtC抗体を用いた免疫沈降法、磁気ビーズを結合させたCdtBを用いて検出しようと試みたが、受容体は検出されなかった。P.alcalifaeiensは腸内細菌科に属するグラム陰性桿菌である。1996年に福井県で発生した原因不明の集団食中毒事例の際に、P.alcalifaciensが原因菌として分離・同定され、本菌が単独で下痢症の起因菌となることが明らかとなった。本菌の病原発現機構として細胞侵入性が報告されているが、細胞侵入性を持つ株は下痢症患者から単離されるP.alcalifaciensの一部であり、細胞侵入性を持たない株の病原性については不明である。これまでの研究でP.alcalifaciensが細胞毒性を有する新規のCDT(PaCDT)を産生することを明らかとし、CDTがP.alcalifaciensの病原因子となる可能性を示した。また、PaCDTはCHO細胞に対して細胞毒性を示す一方、大腸菌のCDT-I(EcCDT-I)に対する感受性の高いHeLa細胞には細胞毒性を示さず、PaCDTとEcCDTでは細胞毒性発現機構に違いがある可能性が考えられた。この細胞毒性の違いがCDTのどの構造に由来するかを調べるために、CDTの特異性に関わるサブユニットの同定を試みた。これまでに作製した組換えProvidencia alcalifaciens CdtA(PaCdtA),PaCdtB,PaCdtCに加え、組換え大腸菌Cdt-IA(EcCdt-IA),EcCdt-IB,EcCdt-ICを作製した。作製した組換えCdtサブユニットからPaCDTとEcCDT-Iの各種キメラホロ毒素を再構成しHeLa
女性消費者的公共圏の登場とその変容

平成19年度は、昭和30年代に起きた、女性たちを取り巻く雑誌メディアの変容について考察した。1941年、戦時の用紙統制から女性雑誌の統廃合が起き、その際形成された女性雑誌の出版体制は戦後に引き継がれた。新雑誌の創刊もあったが、女性雑誌では、戦前から続く婦入雑誌の人気は変わらず、女性雑誌の中枢を担っていた。つまり昭和45年以後の「新しい」タイプの女性誌『anan』『non-no』創刊までは、長らく四大婦人雑誌の時代として語られるのが通説であった。だが、昭和45年=1970年代以前と以後とで比較してしまうと、昭和30年代のBG(OL)を中心とする「若い女性」のための新雑誌の登場現象を見逃してしまう。それは、テレビが普及した時代でもあり、「テレビ雑誌」と呼ばれるビジュアル重視の女性誌が新しく考えられるようになった時代であった。雑誌のビジュアル重視の傾向は、「若い女性」たちを読者として意識することでより高まる。女性誌メディアは、「若さ」を意識してその情報内容のみならず形式的にも変化を遂げ、昭和20年代とは一線を画す新しい雑誌となっていった。その影響は、とくにファッション情報をめぐって顕著であり、女性の生活の一部としての「洋裁」が、ジャーナリズムへと組み込まれていくことになった。女性向け雑誌メディアの歴史では、昭和30年代はこれまであまり注目されていなかった。しかし、1970年代以降の新女性誌の傾向として指摘されるビジュアル化は、すでに昭和30年代に進んでいたのみならず、女性向け雑誌の世界が「若い女性」を想定するようになったことで、より「見た目」を重視する感性のメディアとなっていったことは、女性が牽引する公共圏を考える上で、大きな変化の時代であったといえるだろう。平成18年度は、消費を楽しむ若い女性たちが、戦後のいわゆる「大衆天皇制」の積極的担い手となり、皇室「世論」空間を支えたことを明らかにした。この分析をまとめ、8月に『ミッチー・ブーム』(文春新書)を上梓した。1955年『週刊新潮』の創刊をはじめ、新聞社系週刊誌とは異なる出版社系週刊誌の創刊が相次いだ。そのなかの一冊『週刊女性自身』は「皇室自身」と呼ばれるほどの熱心で独自の皇室報道を繰り広げ、皇室にまつわる情報の受容形式を一新する。第一章では、1958年の婚約発表後の「ミッチー・ブーム」の出現を主に新聞と週刊誌報道の対比から、第二章では、女性向けの服飾専門誌の分析から明らかにした。第三章では、国民イベントとなった1959年の「ご成婚」後に登場した議論を紹介した。その議論は、現在の皇室を考える上でも有益な視点を有していたが、知識人中心の議論は、一般の皇室世論と分離していた点が特徴的である。第四章では、新たな皇室世論の担い手が女性であることの意味を検証した。第五章では、女性週刊誌が支える皇室世論を検証した。女性向けファッション雑誌といえば1970年代の『anan』『non-no』の登場をもって語られるが、1958年創刊の『女性自身』は、すでに働く若い女性にとっての流行ファッション情報誌としての特徴を備えていた。女性週刊誌が熱心に皇室についての話題をグラビア付きで報じたのは、若い女性たちが毎日の通勤スタイルへの関心から、皇族女性の「見た目」に無関心ではいられない傾向をいち早く察したことによる。皇族女性の日々の衣装、振る舞い、結婚観等を熱心に報道することで、皇室肯定する気分の維持に貢献した。さらに、美智子皇太子妃のファッション批評を行うことで自らの嗜好を育んだ。個人的嗜好に基づくファッション批評を通じ、戦後の象徴天皇制にっいての新たな世論形成に若い女性読者は参加していったのである。
Ce系化合物における圧力誘起電子転移及びその磁場効果の研究

本年度はCeを中心とした重い電子系化合物のうち、CeInCu_2、CeCu_6及びCePtSi_2に対してそれぞれ電気抵抗、熱膨張係数及び格子定数を高圧下又は高磁場下で測定し圧力誘起の電子構造の変化を確認した。得られた結果を要約すると以下のようになる。(1)圧力誘起の電子転移3つの物質について電気抵抗率の温度変化p(T)を約8万気圧まで測定した。重い電子系物質のp(T)は1気圧で近藤効果特有の極大値を低温(=Tm)でもつが、圧力をかけるとTmは高温側へ移動しそれに伴ってp(T)も大きな変化を受けた。例えばCeInCu_2のp(T)は1気圧でTm=25Kであるが約4万気圧でTm=300Kとなり、これ以上の圧力でp(T)に極大値はみられなかった。これは1気圧ではCeが3価の状態にあったものが高圧下で混合原子価状態に移ったものとして説明される。同様な電子転移はCeCu_6、CePtSi_2においても観測された。(2)CeInCu_2における圧力誘起の正の磁気抵抗効果の測定重い電子系物質の磁気抵抗効果は1K以下の温度でf電子がcoherent stateになったことにより磁気抵抗効果が負から正へと変わることがこれまで観測されてきた。しかしCeInCu_2ではCe原子のdisorderのため、これまでこの現象が観測されていない。本研究ではCe原子の電子状態を高圧下で変えることにより4.2Kで1万気圧以上の圧力範囲でCeInCu_2の正の磁気抵抗効果の観測に初めて成功した。
英語のプロソディーの習得にL１が及ぼす影響

日本の英語教育では、イントネーションについては理論に基づいた教授法が確立されていない。その中でも特にイントネーションの「核(nucleus)」がどの音節に置かれるかということは、文の「意味」伝達にかかわる重要事項であるにもかかわらず、明示的な指導を行うことができる教師は少ない。本研究は、英語学習者がどのような指導を受けたらイントネーションを習得できるのか、様々な条件を設定して観察する。また、習得には順位があるのか、英語学習者のイントネーションを経年的に観察して明らかにする。そのことによって、これまで軽視されがちであった英語のイントネーションを効率よく指導できるようにする。
フィールド・マージンの微生物群集構造と病原菌バンク機能の解明

フィールド・マージンの病原菌バンク機能を明らかにするために,ウリ類ホモプシス根腐病菌およびナシ白紋羽病菌をモデルとして病原生態学的研究を行った。最初に両菌を特異的に検出・定量する手法を開発し,次にフィールド・マージンにおける病原菌量と微生物群集構造との関係を明らかにした。その結果,フィールド・マージンにおける病原菌量は微少であり,病原菌は圃場内土壌に留まっていること,さらに一部の微生物群にのみ影響していることが示唆された。フィールド・マージンの病原菌バンク機能を明らかにするために、平成21年度は、まず白紋羽病菌とホモプシス根腐病菌を定量的に検出するプロトコールを探索した。具体的には、両菌に特異的なリアルタイムPCRプライマーの構築を試みた。前者ではScorpion PCR法をTaqMan probeの系に改良するためのPCRプライマーとプローブの塩基配列を決定した。現在、それらの検出感度と安定性の検証を行っている。後者では、SYBR Green Iを用いたプロトコールを利用して、ホモプシス根腐病菌の宿主特異性を調査した。これはフィールド・マージンの病原菌バンク機能が病原菌の雑草への宿主特異性に依存している可能性が高いためである。この仮説を検証する目的で、キュウリ、カボチャ、メロン、スイカから分離したホモプシス根腐病菌の各3菌株(計12菌株)と6種のウリ科植物を供試し、12菌株の病原力および感染力を接種試験によって判定した。その結果、供試した病原菌はすべてのウリ科植物に感染し、ホモプシス根腐病を発病させたことから、本菌はウリ科内で宿主特異性を持たないか、あるいは極めて小さいことが明らかとなった。しかし、宿主植物間での感受性や菌株間での病原力と感染力には有意差が認められ、これらの相違が本病原菌の生態に関与している可能性が示された。(この成果は平成22年度植物病理学会大会で発表する予定である。)一方、宿主植物の違いによる微生物群集の変化を調べるために、ナス半身萎凋病をモデルにエンバク野生種前作が後作のナス根圏微生物群集に及ぼす影響を調査した。また、この実験を通して微生物群集構造の解析法についての検討を行った。フィールド・マージンの病原菌バンク機能を明らかにするために、平成22年度は、前年度に引き続き白紋羽病菌とホモプシス根腐病菌を定量的検出法のプロトコールを開発し、完成させた。具体的には、両菌に特異的なリアルタイムPCRプライマーおよびTaqManプローブを構築した。その結果、それぞれの検出限界はDNA 0.00001ngであり、極めて高感度であることが実証された。しかし、両プロトコールとも土壌抽出DNAではPCR阻害物質の影響を受けて、検出感度が低下することから、現在、その対策を検討している。また、後者のプロトコールを利用して、ホモプシス根腐病菌の宿主特異性の研究を発展させた。これはフィールド・マージンの病原菌バンク機能が病原菌の宿主特異性に依存している可能性があるためで、具体的にはウリ科野菜4種から分離したホモプシス根腐病菌と6種のウリ科植物を供試し、全ての組合せの発病程度と病原菌の感染・侵入程度を接種試験によって判定した。その結果、供試した病原菌の全てが全ウリ科植物に感染・発病させると共に菌の侵入程度にも宿主特異性は認められなかった。これは前年度にSYBR Green I系の検出プロトコールで得られた結果とほぼ同等であり、これらから本菌はウリ科内で宿主特異性を持たないか、或いは極めて小さいことが確かめられた。しかし、宿主植物間での感受性や菌株間での病原力と感染力には有意差が認められ、これらの相違の原因を探求することが本病原菌の生態を解明する上で重要であると考えられた。フィールド・マージンの病原菌バンク機能を明らかにするために、前年度に完成させた白紋羽病菌の定量的検出法を用いてフィールド・マージンにおける病原菌の定量を行った。具体的には、Rosellinia necatrix菌に特異的なリアルタイムPCRプライマーおよびTaqManプローブを用いて、ナシ白紋羽病が蔓延している2つのナシ園を供試し、宿主根とその根圏土壌およびナシ園周辺部(フィールド・マージン)における病原菌量を測定した。また、同時に土壌微生物群集構造をPCR-DGGEおよびバイオログプレートを用いたCLPP法によって解析した。その結果、白紋羽病に罹病しているナシ根圏土壌の微生物群集構造は健全ナシ根のものとはある程度異なっているものの、全体としては似通っており、病害発生は微生物群集中の一部の細菌群に影響を及ぼしているに過ぎないことが示唆された。また、フィールド・マージン土壌ではR. necatrixのDNAは全く検出されず、白紋羽病菌はほとんど宿主根圏に留まっていると推察された。したがって、本病の蔓延は宿主根の進展に伴って病原菌が拡散するためと考えられた。

ただし、土壌からのDNA抽出とそれをPCRテンプレートにした場合のリアルタイムPCRは、土壌中に存在するPCR阻害物質のために困難であった。そこで、GFP遺伝子を導入した大腸菌を作出し、それを内部標準に用いることで目的のDNA値を補正できるよう上記のリアルタイムPCRプロトコルを改良した。さらに、この改良版プロトコルは、白紋羽病菌以外で既に定量プロトコルが完成しているホモプシス根腐病菌や黒点根腐病菌にも適用が可能であったことから、今後、これらの土壌病原菌のモニタリングシステムに有用であると考えられた。
細胞内におけるタンパク質の高次構造形成と局在化

タンパク質のモルテン・グロビュ-ル状態の意義について調べ、それが生理的条件下で起こり得ることを示した(後藤)。熱ショック応答に翻訳制御が関与することを示し、熱ショックタンパク質GroE、DnaKの生理機能を複数見いだした(由良)。高熱菌の熱ショックタンパク質Hsp61とHsp12の遺伝子とタンパク質を同定した(香川)。HSP90のグルココルチコイド受容体ーアクチン結合における役割、カゼインキナ-ゼIIとの複合体形成を調べた(矢原)。ヒト色素性乾皮症A群を相補する蛋白の核移行シグナルを解析した(河野)。再構成系によりSecA,SecY,SecEのタンパク質膜透過促進機能を解析、またシグナルベプチドの構造・機能相関を調べた(水島)。SecYの機能ドメインに関する遺伝解析と複合体構成成分の同定を行い、またベリプラズムのジスルフィド結合形成因子PpfAを同定した(伊藤)。酵母SRP相同体SRH1を同定し、小胞体膜透過に関与することを示した(天谷)。膜組み込みにおけるシグナル及びシグナル・アンカ-配列の機能、方向性がN末端の電荷と疎水性配列のバランスにより決定されることを示した(阪口)。ミトコンドリアタンパク質前駆体の膜透過に伴う立体構造変化を測定する系を作成した(遠藤)。ベルオキシソ-ム3ーケトアシルーCoAチオラ-ゼの局在化シグナルをN末端延長ベプチドに同定した(大隈)。酵母PDI遺伝子をクロ-ンし、生育必須であることを示した(水永)。膵外分泌腺細胞でのKDELタンパク質の分泌、バフィロマイシンA1の作用機作の解析を行った(吉森)。HSP47の遺伝子を同定、コラ-ゲン特異的シャペロン機能を持つことを提唱した(平芳)。酵母小胞体よりゴルジ体へのタンパク質輸送におけるSar1pとそれによるGTP加水分解の役割を解析した(中野)。酵母の分泌における小胞体内部での構造形成の役割を調べた(徳永)。本総合研究の主要目的である,我国におけるこの分野の研究者の交流,情報交換・討論に関しては,平成2年11月30日,12月1日の2日間にわたり班会議を行った.各班員とも新しい研究成果を含む発表を行い,活発な討論により目的を達成しつつあるものと考える.各班員の研究成果の一端は以下の通りである.合成ペプチド,化学修飾チトクロムC等を用いて,生理的条件下での蛋白質変性状態がモルテン・グロビュ-ル状態であることを示した(後藤).熱ショック蛋白質誘導合成の初期反応に熱ショックσ因子の翻訳レベルでの脱抑制が関与することを見出した(由良).ストレス蛋白質HSP90のサブユニット構成およびグルココルチコイド受容体とアクチン繊維の結合における役割を明らかにした(矢原).蛋白質の核膜透過に関する変異株分離のため酵母のEFー2遺伝子のクロ-ニングと毒素耐性変異の作成を行った(河野).SecE,SecY蛋白質の大量生産,純化および膜透過系の再構成に成功した(水島).変異型SecYのin vitro解析,およびペリプラズム蛋白質の構造形成過程に関する変異株の分離を行った(伊藤).酵母SRH1の条件致死変異を作成し,それが蛋白質分泌に関与していることを見い出した(天谷).膜蛋白質のシグナル・アンカ-配列の機能が,末端の電荷とそれに続く配列の疎水性度に依存することを示した(阪口).

ミトコンドリア蛋白前駆体のリポソ-ムへの結合と膜電位の関係を調べた(遠藤).ペルオキシソ-ム型チオラ-ゼの局在化シグナルを同定した(大隅).酵母PDI遺伝子をクロ-ニング,塩基配列決定,増殖必須性の証明を行った(水永).小胞体残留信号KDELの受容体を同定した(吉森).HSP47cDNAをクロ-ニングし一次構造を決定した(平芳).酵母ERーゴルジ関輸送をin vitroで再構成しSEC12,SAR1の役割を確証した(中野).酵母のキラ-因子の分泌におけるプロ配列の重要性を示した(徳永).モルテン・グロビュ-ル状態とりん脂質リポゾ-ム、熱ショック蛋白質GroELとの相互作用を調べた(後藤)。GroEがストレス蛋白質合成の制御に、DnaKがσ^<132>1の翻訳制御に、DnaJがFプラスミドRepEのDNA結合活性の制御に、それぞれ関与する(由良)。高熱菌のH_<28>2p61とH_<28>12の遺伝子を決定、全蛋白の1ー3%を占め、熱ショックを受ける(香川)。グルココルチコイド受容体ーHSP90間の8S複合体が重合アクチンにHSP90部分を介して結合する(矢原)。酵母BiP遺伝子上流の小胞体内腔変性蛋白質応答領域の塩基配列決定、ヒト爆素性乾皮症A群を相補する蛋白の核移行シグナルの解析(河野)。再構成系によるSecA,SecY,SecEの機能解析、シグナルペプトヂN末端正荷電領域、中央疎水領域の関連(水島)。SecYの優性欠損変異の分離、機能ドメイン解析、複合体構成成分の同定、ベリプラズムジスルフィド結合形成因子PpfAの同定(伊藤)。酵母SRH1のGTP結合部位の低温感受性変異株を分離(天谷)。シグナル及びシグナル・アンカ-配列の機能、方向性がN末端の電荷と疎水性配列のバランスにより決定される(阪口)。ミトコンドリアタンパク質前駆体システイン残基に蛍光プロ-ブを導入、膜透過に伴う立体構造変化をモニタ-(遠藤)。ペルオキシソ-ム3-ケトアシル-CoAチオラ-ゼの局在化シグナルをN末端延長ペプチドに同定(大隅)。酵母PDIは糖鎖導入部位結合蛋白と同一で生育必須である(水永)。膵外分泌腺細胞でのKDELタンパク質の分泌、バフィロマイシンA1の作用機作の解析(吉森)。HSP47の細胞内でのブロコラ-ゲンとの結合、コラ-ゲン特異的シャベロン機能の提唱(平芳)。酵母小胞体よりの輸送小胞の形成を定量、Sar1pによるGTPの加水分解が輸送小胞の形成以後に必要である,小胞体膜タンパク質のゴルジ体から小胞体へと戻る輸送過程変異株の分離(中野)。酵母のBiP/Kar2を精製、性質調査(徳永)。
金属ポルフィリンの短寿命反応中間体の生成と構造

金属ポルフィリンの生成反応は、水銀(II)、カドミウム(II)、鉛(II)によってそれらの濃度が10^<ー8>moldm^<ー3>でも促進される。我々はこの反応において、水銀(II)のような大きな金属イオンと亜鉛(II)のような中程度の大きさのイオンがひとつのポルフィリンに反対側から同時に結合しているヘテロ二核金属ポルフィリン錯体の生成を反応中間体として提案してきた。本研究で、その仮定してきた反応中間体を反応速度の解析と吸収スペクトルの時間変化より直接知ることができた。水銀(II)ポルフィリン錯体と亜鉛(II)イオンとの反応は次のように二段階に進む。ここで、H_2tpps^<4ー>はテトラキス(4-スルフォナトフェニル)ポルフィリンを示す。第1段目の反応は2-3秒で終わり、それに続く第2段目の反応は数分の半減期である。種々の実験条件で測定した速度定数より次のことが分かった。(1)第1段目の反応では、速度は亜鉛の濃度とともに増大し高濃度では一定となる、しかし、水銀の濃度とともに反応は遅くなる。(2)第2段目の反応では、反応速度定数は水銀の濃度にも亜鉛の濃度にも依存しない、即ち1分子反応である。(3)ラッピドスキャンによる第1段目の反応の吸収スペクトル変化より、反応中間体では水銀と亜鉛が同時に結合していることを示唆された。このようにいままで仮定されていたヘテロ二核金属ポルフィリンの反応中間体を二段階反応として捉え,それぞれ反応段階における速度式と吸収スペクトルの変化よりその生成を確証することができた。今後EXAFASによる反応中間体の構造解析を進める予定である。