hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
電磁非破壊検査技術向上に向けた高度磁場解析技術の構築

工学的見地から,解析対象の欠陥として,昨年度の「表面き裂」,「内部き裂」に続き,折れ曲がり点を有する屈曲き裂も重要であるとの認識で新たに,折れ曲がり点を有する屈曲き裂への適用に着手した.複素数のべき乗関数が,頂角αの扇形領域から頂角βの扇形領域への等角写像となることを利用して,直線き裂を屈曲き裂に変換することができるようになった.しかしながらこの手法では,原点を中心とする拡大率が,上半面と下半分で異なることにより,エンリッチ関数がき裂端で「食い違い」を生じる現象が発生した.これについては,拡大率を補正することによりこの食い違いを解消することができており,工学的に非常に実用的な成果を得たと考えられる.工学的応用として非破壊検査(欠陥探傷)を念頭に,その基盤技術としての磁場解析の計算手法であるXFEM(拡張型有限要素法)の研究を継続している.静磁場の支配方程式はラプラス方程式で記述されることを利用し,複素関数論の等角写像に基づいた解析手法の構築を基本的な方針にしている.昨年度の表面き裂,内部き裂に加え,新たに,折れ曲がり点を有する屈曲き裂への適用も進めている.これも等角写像のベキ乗関数を用いた方法であるが,その際,原点を中心とする拡大率が,上半面と下半分で異なることにより,エンリッチ関数がき裂端で「食い違い」を生じる現象が発生した.これについては,拡大率を補正することによりこの食い違いを解消することができた.またこの方法では計算誤差を厳密な評価指標がまだ確立しておらず,定性的な傾向を示すだけにとどまっている.今後より定量的な精度評価に取り組む予定である.また、本研究課題で取り組んでいるXFEMの工学的応用として,集中荷重を受ける弾性体への適用が考えられる.これについて定式化の推進と数値解析による検証を進めている.本研究課題で磁場解析方法の中心となる拡張型有限要素法(XFEM)は,従来型の有限要素法(FEM)を発展させ,あらかじめ解の局所的特性が既知となるような問題に対し,それを表す関数を解の近似公式に入れ込む解法であり,これにより解析のための準備データであるFEMメッシュにき裂などの複雑形状をモデル化することが不必要となり運用面で解析の自由度が向上することを期待するものである.これまで本研究課題では「表面」「内部」「屈曲」「曲線」の4種類の欠陥について取り組んできた.これらを等角写像の観点から理論的・体形的に整理を行い,解析精度に与える影響を把握することができた.曲線型の欠陥については,数値積分を実行する際に精度が低下する可能性があることがわかってきており,その回避方法が今後の課題だと考えている.また内部欠陥については良好な結果が得られたが,メッシュが詳細になるにつれ表面型欠陥の結合型と同等の効果となることがわかってきており,よってメッシュが粗い領域がこの手法の有効な適用先になると思われる.また,このエンリッチ関数の効果を用いて解析精度を向上させるという発想の応用展開を探った.新たに集中荷重を受ける弾性体への適用可能性について検討を行った.すなわち「集中荷重を受ける弾性体」の変位場には理論解が存在することを利用し,これをエンリッチ関数に用いたXFEM解析手法について取り組んだ.現在,き裂先端では変位が無限大になることが解析上の障害になっており,その解析の安定化方法に取り組んでいる.本研究課題で取り組んだ「内部欠陥」型の磁場解析手法について,厳密な精度評価を実施した結果,従来型のFEMとの比較で解析精度の大幅な向上,及びメッシュ粗密の変化に対する優れた安定性があることを示すことができた.現在,論文にまとめ投稿中の段階である.本研究課題で磁場解析方法の中心となる拡張型有限要素法(XFEM)は,従来型の有限要素法(FEM)の定式を一部拡張し、あらかじめ解の局所的特性・基本的傾向が既知である場合あるいは問題に対し,その挙動・分布を表現する関数を解の近似公式に入れ込む解法である。
過渡的磁性半導体の機能の研究

非磁性の半導体に円偏光を照射することにより、スピンの揃ったキャリアを生成することができる。本研究では、このように光パルスで形成される「過渡的な磁性半導体」の持つ機能性を追求することを長期的な目標においている。本年度は、量子井戸におけるスピン緩和機構の検討、および量子ドット構造の形成を行った。1.InGaAs量子井戸でのスピン緩和量子井戸での室温でのスピン緩和は、GaAs量子井戸については、D'yakonov-Perel'(D-P)の機構が支配的とされてきた。これに対してInP基板に格子整合したInGaAs量子井戸ではD-P機構とは異なる量子化エネルギ依存性を示すことが分かっている。理論的考察から、この依存性は室温でのもうひとつの有力な緩和機構であるElliott-Yafet(E-Y)機構から予測されるものと同じことがわかった。InGaAs量子井戸では、E-Y機構が支配的である可能性が強いとの結論を得た。2.短波長化のためのInAlAs量子ドットの作製InAs量子ドットは、基底状態の吸収エネルギが1-1.2eV程度であり、光パルスによる測定が難しい領域にある。このため短波長化のためにAlGaAsに挟まれた、InAlAs量子ドットの作製を試みた。MBE法によりGaAs基板に490°Cで成長した。5.2分子層のInAlAs供給で平均高さ1.0nm、直径15.3nm、低温(17K)で0.75μmのブロードな基底発光を有する量子ドットの形成を確認した。
生理活性ペプチドＧｈｒｅｌｉｎの特異性を生かした新しい心筋炎治療法の開発

自己免疫性心筋炎モデルを作製し、4週目より3週間グレリンの投与を行った。超音波検査にて左室リモデリングの評価を行い、グレリンの投与終了時に心内圧を測定し、摘出心筋の生化学的評価を行った。超音波検査では、グレリン投与群において左室径の拡大並びに左室内径短縮率の減少が有意に抑制された。また、左室拡張末期圧の上昇は有意に抑制され、dP/dtは増加していた。組織学的にはグレリンは心筋炎に伴うコラーゲン密度の増加を抑制した。さらに、グレリン投与の心筋ではinterferon -γやinterleukin (IL)-2のmRNAの発現が減少し、IL-4とIL-10の発現が増加していた。急性心筋炎は重篤な症状を呈し予後不良であるにもかかわらず、未だ確立された根本的治療法がない疾患である。一方で、グレリンとその受容体(GHS-R)はTリンパ球およびマクロファージに発現しており、グレリンはGHS-Rを介して炎症誘発性サイトカインの発現を抑制することが報告されている。本研究では、ラットの自己免疫性心筋炎モデルを用いて、グレリンの投与がT細胞の反応を調節し自己免疫性心筋炎の進展を抑制するという仮説を立て検証した。9週齢Lewisラットの後肢掌に精製ブタミオシンを皮下投与し自己免疫性心筋炎モデルを作製した。第4週目より、グレリン(100mg/kg皮下、1日2回)または溶媒のみ(対照群)の投与を3週間行った。心臓超音波検査にて経時的に左室リモデリング進展の評価を行い、6週間後に心臓カテーテルによる心内圧の測定を行い、直後に心臓摘出した。その後、遺伝子発現を中心とした生化学的評価を行った。心臓超音波検査では、グレリン投与群において左室径の拡大並びに左室内径短縮率の減少が有意に抑制されていた。また、グレリン投与により左室拡張末期圧の上昇が有意に抑制され、dP/dtは増加していた。さらに、グレリン投与の心筋では1型ヘルパーT細胞より分泌されるTh1サイトカインであるinterferon-γやinterleukin (IL)-2のmRNAの発現が減少し、2型ヘルパーT細胞からのTh2サイトカインであるIL-4とIL-10のmRNAの発現が増加していた。TNF-α、MCP-1、およびCollagen IIIのmRNA発現も抑制されたが、Collagen IおよびTGF-βについては変化が認められなかった。さらに、Sirius Red染色およびMasson trichrome染色による病理組織学的検討では、グレリン投与群は対照群に比べ左室コラーゲン密度が有意に減少していた。これらの結果より、グレリン投与はTh1/Th2バランス修飾などにより自己免疫性心筋炎の進展並びに心臓リモデリングの進行を抑制したといえる。急性心筋炎は死亡率が約10%と言われており予後不良であるにもかかわらず、未だ確立された根本的治療法がない疾患である。TNF-αおよびCollagenIIIのmRNA発現も抑制された。これらの結果より、グレリン投与はTh1/Th2バランス修飾などにより自己免疫性心筋炎の進展を抑制したといえる。

なお、グレリンの心筋炎後のリモデリング抑制のメカニズムをさらに解明するため、本テーマについて平成25年度も引き続き研究を行っていく予定である。ラットの自己免疫性心筋炎モデルを用いて、グレリンの投与がT細胞の反応を調節し自己免疫性心筋炎の進展を抑制するという仮説を立て検証したところ、心臓超音波検査では、グレリン投与群において左室径の拡大並びに左室内径短縮率の減少が有意に抑制されていた。また、グレリン投与により左室拡張末期圧の上昇が有意に抑制され、dP/dtは増加していた。さらに、グレリン投与の心筋では1型ヘルパーT細胞より分泌されるTh1サイトカインであるinterferon-γやinterleukin (IL)-2のmRNAの発現が減少し、2型ヘルパーT細胞からのTh2サイトカインであるIL-4とIL-10のmRNAの発現が増加していた。TNF-αおよびCollagenIIIのmRNA発現も抑制された。これらの結果より、グレリン投与はTh1/Th2バランス修飾などにより自己免疫性心筋炎の進展を抑制したといえる。ラット自己免疫性心筋炎モデルを用いたグレリン投与による抗リモデリング効果とそのメカニズム解明を引き続き行う。現在進行中の検討に加えて、心臓並びに浸潤細胞(特にリンパ球、マクロファージ)でのグレリン並びにその受容体(GHS-R)の発現を免疫細胞染色等により調べる。そして、同モデルでのグレリン投与の効果について組織学的に検証する。すなわち、Hematoxylin-eosin染色により炎症の程度をスコア化し、Sirius Red染色により形態学的コラーゲン密度を定量する。ラットの購入・飼育費、自己免疫をおこすための精製ブタミオシン・adjubant等の費用、グレリンおよびその受容体(GHS-R)の発現をみるための生化学的試薬、心臓超音波検査・心内圧測定時の備品、グレリン投与後の心筋での遺伝子発現をみるための定量PCR用試薬・組織学的試薬、投与実験用のグレリン購入費用、等に研究費を使用する予定である。
ヒト・ヒスチジン脱炭酸酵素遺伝子の発現調節とヒスタミン合成制御機構の解明

ヒスタミンの合成酵素であるヒスチジン脱炭酸酵素(HDC)は,血球系の細胞では主に肥満細胞系,好塩基球系に限局して発現している.ヒト肥満細胞株HMC-1とヒト赤血球系細胞株K562を比べると,HMC-1ではHDCmRNAが発現しているものの,K562では発現が見られなかった.このような細胞特異的な遺伝子発現はどのような機構で制御されるのであろうか.先ず,核蛋白のRun-On Assayでは,確かにHMC-1ではK562に比べ,HDC遺伝子の転写量が増大していることが判明した.それでは,肥満細胞特異的な転写調節部位はどこにあるのであろう.そのために,HDC遺伝子の上流側からの欠失変異体とルシフェラーゼ遺伝子との融合遺伝子を構築し,肥満細胞系細胞株HMC-1と赤血球系細胞株K562に遺伝子導入した.HMC-1でもK562でも共に上流153bpと52bpとの間でルシフェラーゼ活性が下がるためHDCの基本的な転写にとってこの間に存在する配列が大切である事が推測された.さらに,上流153bpと52bpとの間を細かく評価できるようなプラスミッドを構築し,一過性に遺伝子導入し,ルシフェラーゼの発現を測定した結果,HMC-1,K562共に上流64bpと52bpとの間でルシフェラーゼ活性が下がり,この間に存在するGCboxがHDCの基本的な転写を司っていることが推察された.このGCboxを中心とした配列を持ったオリゴヌクレオチドを用意し,ゲル・シフト法にて結合蛋白の量的あるいは質的な差を検討した.この結果,HMC-1,K562ともにGCboxを中心としたオリゴヌクレオチドに特異的に結合する蛋白が存在し,それはSp1であることが判明した.さらに上流,遺伝子自身,下流に検索をすすめたが,組織・細胞特異的にHDC遺伝子の転写を増強するシス配列は見つかっていない.今後,組織・細胞特異的な遺伝子発現機構を解明するためには,更に種々の実験系を組む必要がある.ヒスタミンの合成酵素であるヒスチジン脱炭酸酵素(HDC)は,血球系の細胞では主に肥満細胞系,好塩基球系に限局して発現している.ヒト肥満細胞株HMC-1とヒト赤血球系細胞株K562を比べると,HMC-1ではHDCmRNAが発現しているものの,K562では発現が見られなかった.このような細胞特異的な遺伝子発現はどのような機構で制御されるのであろうか.先ず,核蛋白のRun-On Assayでは,確かにHMC-1ではK562に比べ,HDC遺伝子の転写量が増大していることが判明した.それでは,肥満細胞特異的な転写調節部位はどこにあるのであろう.そのために,HDC遺伝子の上流側からの欠失変異体とルシフェラーゼ遺伝子との融合遺伝子を構築し,肥満細胞系細胞株HMC-1と赤血球系細胞株K562に遺伝子導入した.HMC-1でもK562でも共に上流153bpと52bpとの間でルシフェラーゼ活性が下がるためHDCの基本的な転写にとってこの間に存在する配列が大切である事が推測された.さらに,上流153bpと52bpとの間を細かく評価できるようなプラスミッドを構築し,一過性に遺伝子導入し,ルシフェラーゼの発現を測定した結果,HMC-1,K562共に上流64bpと52bpとの間でルシフェラーゼ活性が下がり,この間に存在するGCboxがHDCの基本的な転写を司っていることが推察された.このGCboxを中心とした配列を持ったオリゴヌクレオチドを用意し,ゲル・シフト法にて結合蛋白の量的あるいは質的な差を検討した.この結果,HMC-1,K562ともにGCboxを中心としたオリゴヌクレオチドに特異的に結合する蛋白が存在し,それはSp1であることが判明した.さらに上流,遺伝子自身,下流に検索をすすめたが,組織・細胞特異的にHDC遺伝子の転写を増強するシス配列は見つかっていない.今後,組織・細胞特異的な遺伝子発現機構を解明するためには,更に種々の実験系を組む必要がある.ヒスタミンの合成酵素であるヒスジン脱炭酸酵素(HDC)遺伝子の転写調節機構を研究しているが次のような現象が明らかとなった。1.HDC遺伝子の上流5.8Kbとルシフェーラゼ遺伝子の融合遺伝子を作成した。その後、種々の欠失変異体を作成し、肥満細胞株HMC-1、好塩基球細胞株KU-812-F、前骨髄系細胞株K562、子宮頚癌細胞株HeLaに遺伝子導入し、プロモーターの活性を評価した。その結果、HeLaとそれ以外の細胞系では基本転写機構が明らかに異なっていた。HMC-1、KU-812-F、K562ではGC-boxを含むプラスミッドを導入すると転写活性化能があり、その活性は上流5.8Kbまでほぼ同程度だった事から上流5.8Kb以外にエンハンサー、あるいはサプレッサーが存在する可能性が高い。現在解析中である。2.マウス肥満細胞腫由来の細胞株であるP815細胞は、同系マウスBDF1の腹腔内で腫瘍性に増殖する。増殖した肥満細胞は細胞内顆粒の数を増し、顆粒内プロテアーゼの一種であるMMCP-6やHDC遺伝子を発現し始める。この分過程において同時にいくつかの転写因子の遺伝子発現の変化を観察した結果、NF-E2と呼ばれる赤血球系で詳しく研究されている転写因子群が大きく変化していた。

NF-E2は大小二つのサブユニットから成り、大サブユニットであるp45と小サブユニットであるmafKいずれの遺伝子も分化と伴に消失した。今後は、肥満細胞の分化過程におけるこれら転写因子の発現制御がHDCの遺伝子発現にどのように関連するか解析するつもりである。私たちは,ヒスタミンの合成酵素であるヒスチジン脱炭酸酵素(HDC)遺伝子の転写調節機構を研究しているが,その中で次のような現象が明らかとなった.1.ヒト・HDC遺伝子の上流5.8Kbとルシフェラーゼ遺伝子の融合遺伝子を作成した.その後,種々の欠失変異体を作成し,肥満細胞株HMC-1,好塩基球細胞株KU-812-F,前骨髄系細胞株K562,子宮頚癌細胞株HeLaに遺伝子導入し,プロモーターの活性を評価した.その結果,HeLaとそれ以外の細胞系では基本転写機構が明らかに異なっていた.すなわち,HMC-1, kU-812-F, K562など血球系の細胞ではHDCの発現にGC boxを含む配列が基本転写に重要であるが,上皮系の細胞(HeLa)ではGC boxを含んだプラスミッドを導入しても全く転写活性化能はなく,上記の血球系との間に基本的な転写機構の差異を認めた.また,上流ばかりでなく遺伝子全領域に渡って欠失変異体を作成し,ルシフェラーゼ遺伝子の下流に挿入したが,この領域内に明らかに細胞特異性を示すところはなかった.ただし,HDCの発現には基本的に上流52bpから57bpに存在するGC boxが重要であり,この領域を欠くと転写が起こらなくなる事が解明された.また,この領域内にオリゴヌクレオチドを用意し,ゲル・シフト法で結合蛋白を調べたところSp1であることがわかった.従って,HDCの転写には基本的にSp1が必要とされることが判明した.2.マウス肥満細胞腫由来の細胞株であるP815細胞は,同系マウスBDF1の腹腔内で腫瘍性に増殖する.増殖した肥満細胞は顆粒内プロテアーゼの一種であるMMCP-6やHDC遺伝子を発現し始める.この分化過程において同時にいくつかの転写因子の遺伝子発現の変化を観察した結果,NF-E2と呼ばれる赤血球系で詳しく研究されている転写因子群が大きく変化していた.また,NE-E2の発現ベクターとマウスHDC遺伝子のプロモーターとルシフェラーゼとの融合遺伝子をいれたプラスミッドを同時にうずらの線維芽細胞であるQT-6に遺伝子導入すると,ルシフェラーゼ活性が変化したためNF-E2とHDC遺伝子の発現に直接的な関係があることが示唆された.
医療面接シミュレータによる生涯教育と地域連携データベースの応用に関する評価研究

本研究において、我々は医学生および医師の生涯教育用の、医療面接技法及び鑑別診断の批判的吟味の教育に有用なツールとなる、患者シミュレータを開発した。開発した患者シミュレータは、「医師の信頼度」をパラメータして保持し、医学生が理想的と言われている手順で医療面接を行うと、患者の医師の信頼度が上がるようにした。医学生の質問に対する患者シミュレータの返答は、「医師の信頼度」に応じて変化させ、医学生に医療面接手順の誤りを気付かせるようにした。採点方法は、診断に関するものについては想定疾患および鑑別診断全てを網羅した場合に満点とし、医療面接技法に関するものは、減点方式で評価するようにした。我々は6年次医学生のクリニカルクラークシップにおいて、本システムを活用した実習型教育を行った。患者シミュレータを体験した多くの学生が積極的に実習に取り組み、医師と患者のコミュニケーションについて深く学べた等と高く評価した。本研究で、我々は医学生らに正しい医療面接技能と鑑別診断能力を習得させることを目的とする、医療面接用患者シミュレータを開発している。本シミュレータは、WWWシステム上で医療面接用の模擬患者をコンピュータが演じるものであり、患者の医師への信頼度をシミュレートする点が独創的である。本研究の目的は、医用データ共有システムに蓄積された貴重な症例情報等を、患者シミュレータのコンテンツとして登録し利用可能とする手法を確立することと、さらに医療面接用患者シミュレータの精度を上げ、検査結果やX線写真等のマルチメディア情報も扱えるように改良し、よりリアルで実用性の高い患者シミュレータを開発することである。平成20年度は、主に研究環境の整備を実施し、患者シミュレータの精度向上についても重点的に研究した。具体的には、以下のとおりである。1)研究用医用データ共有システムの環境整備として、サーバ機の導入とOSの導入とWebサービスの立ち上げ及び動作確認を実施し、医用データ共有システムのサーバコンポーネントの整備,医用データ管理システムの動作確認を実施した。ネット接続と動作確認として,施設内・外のネットワークに接続した端末からの接続・動作確認,サーバシステムの情報セキュリティに関する脆弱性の最終調査を実施し、問題無いことを確認した。2)医療面接用患者シミュレータシステムの環境構築として,患者シミュレータのサーバコンポーネント(Perlにて開発)の導入,患者シミュレータシステムの動作確認と調整を実施した。ネット接続と動作確認として、施設内・外のネットワークに接続した端末からの接続・動作確認を実施した。併せてサーバシステムの情報セキュリティに関する脆弱性の最終調査を実施し、問題無いことを確認した。このように、本年度は環境の構築が主となった。従来は知識偏重傾向であった臨床医学教育において、最近、医療面接技能の習得が重視されるようになった。現在の医学教育の現場では、模擬患者に対するOSCEが広く実施されており、医療面接技能の向上に一定の成果をあげている。しかし従来の手法ではモデル患者を人間が演じているため、典型的な症状を呈するモデルを1人の学生が数回経験する程度にとどまっている。本研究で、我々は模擬患者による医療面接実習の問題点を克服し、医学生らに正しい医療面接技能と鑑別診断能力を習得させることを目的とする医療面接用患者シミュレータを開発した。さらに本研究では、医用データ共有システムを用いて医療連携を行った貴重な症例情報等を、患者シミュレータのコンテンツとして登録し利用可能とする手法を確立し、実用性の高い患者シミュレータを開発する。平成21年度は、構築した医療面接用患者シミュレータのコンテンツを医用データ管理システムの連携症例から作成するための環境構築を行った。具体的には、まず医用データ管理システムに試験的な医療連携症例情報の登録を行った。つぎに医用データ管理システムから、画像情報、病歴情報、症状所見、薬歴、検査結果等の情報を抽出し、テキストマイニング技術を応用して、症例データベースの元となるデータを作成する為のツールを試作した。抽出されたデータを元に、医療面接用患者シミュレータ用症例データを作成し、システムへの登録及び機能評価を行った。平成21年度に試作したツールでは、記載された症状所見記事をテキスト処理後に一部手作業で修正する必要が残ったが、概ね良好に変換することができた。平成22年以降は、平成21年度に構築した医療面接用患者シミュレータの評価を行う予定である。本研究の目的は、医師の信頼度に応じて、対応する態度を変化させるように設計した医療面接技能取得用の患者シミュレータの開発と評価を行うことである。本年度は、我々が開発した患者シミュレータの評価を主として実施した。

6年次医学生のクリニカルクラークシップの選択科目で、学生は5名程度のグループで4週間滞在し実習を行うが、本研究ではクリニカルクラークシップで医療情報学を選択した学生に対して、医療面接用患者シミュレータを用いた実習を行った。学生は実体験やポリクリで体験した症例、インターネットで公開されている闘病記、地域連携システムに蓄積された症例データ等を参考に、具体的な患者像を考案させ「医師の質問」及びそれに対する「患者の答え」等のマスターを作成させた。学生が作成した症例を患者シミュレータに登録し、グループ内で相互に医療面接を行わせ評価し合い、成果物の完成度を高めさせた。本年度の医療面接用患者シミュレータを用いた実習では、延べ15名の学生が選択し、全員が4例の模擬患者を作成し、実習後のアンケートにて全ての学生が高い満足度を示していた。制作した症例は60症例となった。例示すると神経疾患(くも膜下出血,偏頭痛,重症筋無力症),循環器疾患(狭心症,大動脈解離),呼吸器疾患(気胸,COPD,アスベスト肺),消化器疾患(逆流性食道炎,胆石症,食道癌),小児疾患(アレルギー性紫斑病,周期性嘔吐症)・産科(子宮外妊娠)・内分泌疾患(偽性アルドステロン症,クッシング症候群,甲状腺機能低下・亢進症)・血液疾患(多発性骨髄腫),泌尿器疾患(尿管結石,頻尿),精神疾患(統合失調症)等の多岐にわたる症例を作成し相互評価できた。本システムは医学生のシミュレーション情報教育に欠かせないものとなった。
Fontan術後蛋白漏出性胃腸症の発症機序と病態の解明

Fontan術後の蛋白漏出性胃腸症は予後が極めて不良である。Fontan循環に特徴的な高いCVPが病態に関与しているとされるが、発症機序や病態は不明である。これまでの様々な報告から蛋白漏出性胃腸症に炎症の関与が疑われる。そこでFontan術後の蛋白漏出性胃腸症での炎症の程度を検証するため1炎症性サイトカインやTh1/Th2バランス、2リンパ球サブセットとγδT細胞の比率、CD45dimCD34-CD133+細胞など免疫学的評価を行い蛋白漏出性胃腸症の病態解明を行う。波及効果として、Fontan術後の蛋白漏出性胃腸症に対する免疫製剤や分子標的薬による治療法へと道が拓かれる。
海馬シ-タリズムの位相ダイナミックスと情報統合機能

海馬神経系における知覚情報の意味的統合の原理はよくわかっていない。そこで本分担課題では、空間認知マップ生成に限定してこの問題の解明を試みた。具体的には、ラットの行動可能空間が拡大する過程における空間認知マップ生成をシ-タリズムとの関連において解析するが、今年度はその第一段階として空間拡大過程における動物の行動パターン変化を重点的に調べた。学習課題としては、最初に迷路空間1に対して学習させ、その後、新しい迷路空間2を接続して行動可能領域を拡大するというものを用い、この前後において空間1と2におけるラットの移動距離を計測した。その結果、移動距離変化のオフセット成分では、空間2を追加することで、学習済みの空間1の移動距離も一過的に増加し、その後両空間とも揃って減少した。このことは、認知マップは部分空間ごとに独立に形成されるのではなく、既存マップと新たな空間知覚情報を統合する形で、空間全体に関するマップとして発展的に生成されることを示唆している。一方、移動距離変化の振動成分では、空間2を追加することで距離の増加減少リズムが出現した。そこで、移動距離の増加、減少区間ごとに各試行内での行動速度の加速度分布、角加速度分布を解析し行動ゆらぎを評価したところ、移動距離の増加区間ではゆらぎが大きく減少区間では小さかった。このことは、仮設的マップ生成とそれに基づく空間解釈と呼び得る、意味的に異なる脳内プロセスが経時的かつ循環的に進行し、空間認識が発展的に達成されることを示唆している。
線虫における蛍光法を使ったミトコンドリアを中心とする個体差解析の開発

老化には遺伝子と環境が複雑に関与しているため、その原因を特定することは難しい。線虫の一種であるCaenorhabditis elegans(C. elegans)は雌雄同体であるため、遺伝学的にも環境的にも均一であるにも関わらず寿命に大きな個体差が現れる。この個体差を加味する寿命測定のシステムを構築するために、GFPをモニタリングすることで個体差が見られると考えた。筋肉と脂肪が老化や健康に深く関与していることが示唆されるようになったことから、線虫の筋肉構造に関わる遺伝子に蛍光遺伝子(GFP)を結合させ、蛍光強度を個体差の指標とした。また、筋肉や脂肪の代謝にはミトコンドリアが関与しており、細胞小器官であるミトコンドリアの機能も関与していることから、ミトコンドリアにも着目した。本研究目的に適したGFPが結合されたTG線虫として、筋肉で発現しているミオシンにミトコンドリア移行シグナルとGFPが結合されたSJ4130株を用い、さらに個体差を顕著にするために酸化ストレスや脂質代謝に関与しているmxl-3変異体との二重変異体を作成した。次に作成した変異体のミトコンドリアの形状に差異があるかどうかを共焦点顕微鏡で確認した。酸化ストレスなどでミトコンドリアの断片化がみられることから、mxl-3との二重変異体でも断片化が見られるのではないかと予測したが、顕著な差は認められなかった。酸化ストレスを負荷しても同様であった。今回の検討では蛍光強度との相関まで行えなかったが、今後は蛍光強度によるミトコンドリアの形態の変化を今後行う予定である。しかしながら、ミトコンドリアの観察においては30分以上の麻酔下で構造異常が認められたことから、共焦点の観察における線虫の麻酔条件を検討していく必要がある。次に、GFP抗体を用いて蛍光強度とタンパク質の発現量の相関の確認を行った。蛍光強度が強い群と弱い群を顕微鏡下で20匹ずつ採材し、GFP抗体を用いてWestern blotを行ったが、強い群では発現が弱い群より4倍ほど高い結果となった。個体差がたんぱく質レベルでも確実なものであることから、線虫ソーターで選別を行い寿命と相関を明らかにするこのシステムは、個体差の原因を探る端緒となることが期待される。
間欠的低酸素レジスタンストレーニングが筋の適応、糖脂質代謝、身体組成に及ぼす影響

本年度は、低酸素レジスタンストレーニングが筋の適応に及ぼす影響について、血中および筋内のバイオマーカーに着目し、ミクロな視点から検討した。特に昨年度までの研究において、低酸素レジスタンストレーニング(低酸素群)が常酸素レジスタンストレーニング(常酸素群)よりも筋持久力を向上させる可能性が示唆されたため、特に筋持久力に関わるマーカーに着目し検討を行った。筋持久力の向上には、トレーニングによる筋内の血管新生が関与している可能性が考えられる。それゆえ本年度は、昨年度のトレーニング実験の前後に採取した血液および骨格筋を用いて、血管新生に関わるマーカーの測定を行った。血液からは血管内皮細胞増殖因子(VEGF)、骨格筋からはVEGFレセプターおよびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γコアクチベーター1α(PGC-1α)のmRNA発現、VEGFおよびPGC-1αのタンパク発現を測定した。また筋内の血管新生数をCD31の免疫染色により評価した。血中VEGFは低酸素群のみトレーニング後に有意に増加し、トレーニング後の値は常酸素群と比較し有意に高値を示した。VEGFレセプターおよびPGC-1αのinRNA発現は、両群ともにトレーニング前後で有意な変化は認められなかった。VEGFのタンパク発現は、トレーニング後に両群で有意な増加が認められた。PGC-1αのタンパク発現は両群ともにトレーニング前後で有意な変化は認められなかった。CD31は低酸素群でトレーニング後に有意に増加し、トレーニング後の値は常酸素群と比較して有意に高値を示した。低酸素レジスタンストレーニングは常酸素レジスタンストレーニングと比較し、血管新生をより促進させる可能性がある。本研究結果は、筋機能の向上を目的とした運動プログラムを立案する上で有益なデータとなる可能性がある。(抄録なし)本研究の目的は低酸素レジスタンストレーニングが筋の適応、糖脂質代謝、身体組成に及ぼす影響について明らかにすることである。23年度は、(1)一過性低酸素レジスタンス運動が血中糖脂質代謝マーカーに及ぼす影響、および(2)低酸素レジスタンストレーニングが筋の適応および身体組成に及ぼす影響について検討した。(1)健常成人男性9名を対象として低酸素および常酸素レジスタンス運動を実施した。レジスタンス運動前後に採血を行い、乳酸、グルコース、遊離脂肪酸(FFA)、インスリン、レプチンを測定した。乳酸およびグルコースは、両環境ともに運動前と比較し運動後で有意に増加したが、運動後の乳酸およびグルコースの値は、低酸素環境の方が常酸素よりも有意に高値を示した。FFAおよびレプチンは両環境ともに運動前と比較し運動後で有意に低下したが、運動後のFFAの値は、低酸素環境の方が常酸素よりも有意に高値を示した。インスリンは、低酸素環境のみ運動前と比較し運動後で有意に増加した。(2)健常成人男性16名を対象として、低酸素群9名および常酸素群7名に分類し、8週間のレジスタンストレーニングを実施した。トレーニング前後に大腿部の筋横断面積、最大筋力、筋持久力、身体組成を評価した。筋横断面積および最大筋力は、両群ともにトレーニング前と比較しトレーニング後で有意に増加したが、群間における有意差は認められなかった。筋持久力もまた、両群ともにトレーニング前と比較しトレーニング後で有意に増加したが、トレーニング後の値は低酸素群の方が常酸素群よりも有意に高値を示した。体重および除脂肪量は、両群ともにトレーニング後に有意に増加し、体脂肪率はトレーニング後に有意に低下したが、群間における有意差は認められなかった。以上の結果から本研究は、競技力向上や生活習慣病の予防・改善を目的とした運動プログラムを立案する上で有益なデータとなる可能性がある。本年度は、レジスタンストレーニング前後に血液および骨格筋を採取し、低酸素レジスタンストレーニングが筋肥大、筋機能、および糖脂質代謝に関わるバイオマーカーに及ぼす影響について検討した。健常成人男性16名を対象として、低酸素群9名および常酸素群7名に分類し、8週間のレジスタンストレーニングを実施した。挙上重量70%1RMにおいて、挙上回数10回、5セット、セット間休息90秒でレジスタンストレーニングを2回/週で8週間行った。レジスタンストレーニング前後の安静時に採血および筋生検を行った。血液からは、インスリン様成長因子-1(IGF-1)、IGF結合蛋白3型1テストステロン、コルチゾール、グルコース、インスリン、遊離脂肪酸(FFA)、トレグリセライド、総コレステロール、HDLコレステロール、LDLコレステロールを測定した。骨格筋からは、IGF-1、Myostatin、低酸素誘導因子-1α、血管内皮細胞増殖因子のmRNA発現を測定した。血中コルチゾール(筋肥大関連マーカー)およびFFA(脂質代謝関連マーカー)はトレーニング後に有意に低下したが、群間における有意差は認められなかった。筋内IGF-1(筋肥大関連マーカー)mRNAはトレーニング後に有意に増加し、筋内Myostatin(筋肥大関連マーカー)mRNAはトレーニング後に有意に低下したが群間における有意差は認められなかった。他の測定項目に関しては、トレーニング前後で両群ともに有意な変動は認められなかった。低酸素レジスタンストレーニングは、トレーニング誘発性の血中コルチゾールとFFAの変動および筋内IGF-1とMyostatin mRNA発現に影響を及ぼさない可能性がある本研究は、競技力向上や生活習慣病の予防・改善を目的とした運動プログラムを立案する上で有益なデータとなる可能性がある。

特に昨年度までの研究において、低酸素レジスタンストレーニング(低酸素群)が常酸素レジスタンストレーニング(常酸素群)よりも筋持久力を向上させる可能性が示唆されたため、特に筋持久力に関わるマーカーに着目し検討を行った。筋持久力の向上には、トレーニングによる筋内の血管新生が関与している可能性が考えられる。それゆえ本年度は、昨年度のトレーニング実験の前後に採取した血液および骨格筋を用いて、血管新生に関わるマーカーの測定を行った。血液からは血管内皮細胞増殖因子(VEGF)、骨格筋からはVEGFレセプターおよびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γコアクチベーター1α(PGC-1α)のmRNA発現、VEGFおよびPGC-1αのタンパク発現を測定した。また筋内の血管新生数をCD31の免疫染色により評価した。血中VEGFは低酸素群のみトレーニング後に有意に増加し、トレーニング後の値は常酸素群と比較し有意に高値を示した。VEGFレセプターおよびPGC-1αのinRNA発現は、両群ともにトレーニング前後で有意な変化は認められなかった。VEGFのタンパク発現は、トレーニング後に両群で有意な増加が認められた。PGC-1αのタンパク発現は両群ともにトレーニング前後で有意な変化は認められなかった。CD31は低酸素群でトレーニング後に有意に増加し、トレーニング後の値は常酸素群と比較して有意に高値を示した。低酸素レジスタンストレーニングは常酸素レジスタンストレーニングと比較し、血管新生をより促進させる可能性がある。本研究結果は、筋機能の向上を目的とした運動プログラムを立案する上で有益なデータとなる可能性がある。23年度に計画した研究をすべて実施することができたため、「(2)おおむね順調に進展している」と評価した。研究計画書通り研究は順調に進んでいる。実験で採取したサンプル(血液および骨格筋)の解析も順調に進行しているため、上記の評価とした。今後は23年度のトレーニング実験の前後に採取した筋サンプルからRNAを抽出し、低酸素レジスタンストレーニングが筋内の遺伝子発現に及ぼす影響についてReal-time PCR法を用いて検討する。筋肥大、筋機能(筋力、筋持久力)、および糖脂質代謝に関わる遺伝子発現のトレーニングによる応答を低酸素群と常酸素群で比較検討する。研究計画の変更あるいは研究を遂行する上での問題点は今のところない。今後は今年度採取したサンプルを用いて、筋肥大、筋機能、および糖脂質代謝に関わる他のバイオマーカーを測定し、低酸素レジスタンストレーニングの効果についてより詳細に検討していく予定である.研究計画の変更あるいは研究を遂行する上での問題点は今のところない。(抄録なし)
Rhodococcus属遺伝子プロモーターの放線菌への利用開発

Rhodococcus rhodocurous J1菌由来のタンパク質誘導発現系(ニトリラーゼ系とニトリルヒドラターゼ系)が既に取得されているが、ニトリラーゼ系を利用した場合、εカプロラクタムあるいはシアノバレルアミドを誘導剤とした場合に35%以上を占めるほどニトリラーゼ(ニトリルを酸とアンモニアに分解する酵素)が、ニトリルヒドラターゼ系を利用した場合、尿素を誘導剤とした場合に50%以上を占めるほどニトリルヒドラターゼ(ニトリルをアミドに分解する酵素)が著量発現する。ニトリラーゼ遺伝子プロモーター,ニトリラーゼ構造遺伝子,転写活性化タンパク質遺伝子から構成される本ニトリラーゼ系に対して、切り縮め実験を行った。すなわち、上流域や下流域などを様々に欠失させた断片をそれぞれ構築した。続いて、構築した数種の切り縮め断片を大腸菌で複製するベクターに連結し、得られたプラスミドをそれぞれ大腸菌に導入し、大腸菌内での発現を検討した。しかし、高速液体クロマトグラフィーによるアッセイおよびSDS-PAGEの結果、ニトリラーゼ活性が検出できなかったことから、Rhodococcus菌由来のタンパク質誘導発現系は大腸菌内では機能しないことが判明した。J1菌とは別のRhodococcus属放線菌において発現するかを確認した結果、ニトリラーゼおよびニトリルヒドラターゼいずれの酵素も高発現が確認できたことから高発現ベクターを構築できる可能性が示唆された。そこで、産業上有用な特徴を有するロドコッカス属放線菌の宿主としての利用を目指し、遺伝子組換え系(宿主・ベクター系)の開発を試みた。当研究室保有のロドコッカス属放線菌、国内外の微生物保存機関から購入した計100株以上のロドコッカス属放線菌を対象として、プラスミドを検索したところ、数種のプラスミド保有株がスクリーニングできた。一部のプラスミドについて大腸菌とのシャトルベクターを構築することに成功した。Rhodococcus菌由来のタンパク質誘導発現系(ニトリラーゼ系)が既に取得されているが、本系を利用した場合、イソバレロニトリルを誘導剤として培地に添加することによって、ニトリラーゼ(ニトリルを酸とアンモニアに分解する酵素)が大量に生成する。本研究では、ニトリラーゼ遺伝子プロモーター,ニトリラーゼ構造遺伝子,転写活性化タンパク質遺伝子から構成される本ニトリラーゼ系に対して、切り縮め実験を行った。しかし、高速液体クロマトグラフィーによるアッセイの結果、ニトリラーゼ活性が検出できなかったことから、Rhodococcus菌由来のタンパク質誘導発現系は大腸菌内では機能しないことが判明した。次に、構築した数種の切り縮め断片を放線菌で複製するプラスミドに連結し、それぞれを導入し、放線菌において発現するかを確認した。形質転換放線菌において可溶性画分にニトリラーゼが確認できたことより、Rhodococcus菌由来の遺伝子が放線菌の転写・翻訳系で認識され、放線菌内で発現し、機能することが初めて明らかとなった。Rhodococcu rhodocurous J1菌由来のタンパク質誘導発現系(ニトリルヒドラターゼ系)が既に取得されているが、本系を利用した場合、尿素を誘導剤とした場合に50%以上を占めるほどニトリルヒドラターゼ(ニトリルをアミドに分解する酵素)が著量発現する。

一般的に利用されている大腸菌での発現系ではRhodococcus属由来の遺伝子はしばしば発現しないことが認められていることから、Rhodococcus属由来の酵素による有用物質生産などを考えた場合、Rhodococcus属を宿主とする大量発現系が必要となる。Rhodococcus属放線菌内で複製するプラスミドにニトリルヒドラターゼ遺伝子周辺領域を連結・導入し、J1菌とは別のRhodococcus属放線菌において発現するかを確認した。その結果、(構成的ではあるが)ニトリルヒドラターゼの高発現が確認できたことから高発現ベクターを構築できる可能性が示唆された。次に、産業上有用な特徴を有するロドコッカス属放線菌の宿主としての利用を目指し、遺伝子組換え系(宿主・ベクター系)の開発を試みた。当研究室保有のロドコッカス属放線菌、および理化学研究所微生物系統保存施設(JCM)と独立行政法人製品評価技術基盤機構生物遺伝資源センター(NBRC、旧IFO)から購入した計40株以上のロドコッカス属放線菌を対象として、プラスミドを検索したところ、数種のプラスミド保有株がスクリーニングできた。Rhodococcus rhodocurous J1菌由来のタンパク質誘導発現系(ニトリラーゼ系とニトリルヒドラターゼ系)が既に取得されているが、ニトリラーゼ系を利用した場合、εカプロラクタムあるいはシアノバレルアミドを誘導剤とした場合に35%以上を占めるほどニトリラーゼ(ニトリルを酸とアンモニアに分解する酵素)が、ニトリルヒドラターゼ系を利用した場合、尿素を誘導剤とした場合に50%以上を占めるほどニトリルヒドラターゼ(ニトリルをアミドに分解する酵素)が著量発現する。J1菌とは別のRhodococcus属放線菌において発現するかを確認した結果、どちらの酵素も高発現が確認できたことから高発現ベクターを構築できる可能性が示唆された。そこで、産業上有用な特徴を有するロドコッカス属放線菌の宿主としての利用を目指し、遺伝子組換え系(宿主・ベクター系)の開発を試みた。当研究室保有のロドコッカス属放線菌、国内の微生物保存機関{理化学研究所微生物系統保存施設(JCM)と独立行政法人製品評価技術基盤機構生物遺伝資源センター(NBRC、旧IFO)}および国外の微生物保存機関(German Collection of Microorganisms and Cell Cultures (DSMZ))から購入した計100株以上のロドコッカス属放線菌を対象として、プラスミドを検索したところ、数種のプラスミド保有株がスクリーニングできた。一部のプラスミドについて大腸菌とのシャトルベクターを構築することに成功した。
注入鋳型血管標本作製方法の確立とコメディカル解剖実習使用への試み

解剖実習に使用された各臓器の一部を材料とし、低融点金属をバーナーにて融解した鋳型成分を注射器を用いて強制注入し、自然冷却後、組織を塩酸や苛性ソーダにて腐食させ、鋳型を露出させた。心臓冠動脈では、比較的太い動脈の形態が保持され、心臓の周りを取り囲む血管走行が鮮明に表現された。脳組織では脳底動脈から左右脳内部への血管走行が表現された。腎臓や脾臓においてはそれぞれ腎・脾動脈から注入したが、入口部分は比較的細かい血管まで注入されたが、深部には鋳型が到達できなかった。この二つの臓器に関しては、動脈といえども非常に細い血管が臓器にはりめぐらされており、現状の金属鋳型成分では細部に到達する前に固化してしまい、臓器全体像を表現できるには至らなかった。また、鋳型注入後、数日間放置すると乾燥により組織自体がもろくなるため、密封容器にて加湿を施す事で、極力組織の崩壊を食い止める必要性も作成上重要であった。試作鋳型標本を実際の解剖実習に補助教材として学生に提供したところ、心臓の冠動脈が心筋を取り囲み血液を筋肉へ送り込む血管走行が理解できやすいとの意見をもらい、同様に脳内血管の構造も左右の血管分岐や走行などあらゆる角度から観察でき、非常に理解しやすいとの結果を得た。腎臓と脾臓については、組織全体像は把握できない標本ではあるが、非常に細かい血管が網目状にはりめぐらされていることが部分的に表現できているとの評価をもらった。しかしながら、動脈と静脈の区別や、血管以外の構造物との区別は不明瞭との指摘もあり、今後は、鋳型の種類を変更したり、塗料により動脈と動脈を鮮明に区別するなど更なる改良の必要性があると思われた。標本の完成度としては不十分な点が多いが、鋳型標本の永久的保持、衛生面、臓器の内部構造の理解など、とくにコメディカルの解剖実習においては、解剖実習の補助教材として非常に有意義となり得る事を理解できた。
金属アレルギーの観点からの掌蹠膿疱症のメカニズム解析

掌蹠膿疱症は手掌と足蹠に限局する無菌性膿疱を主徴とした難治性皮膚疾患で、その機序および治療法など各種研究が為され、また耳鼻咽喉科領域においては扁桃病巣感染症の二次疾患として考えらている。歯科領域における根尖病巣の治癒、辺縁性歯周炎の治療といった口腔内の病巣治癒により快方に向かう場合も確認しており、その成果について今年度に、過去6年間の東北大学歯学部附属病院保存科に来院された金属アレルギーの疑いの患者の動態傾向について日本歯科保存学会および日本歯科理工学会において公表した。以下、公表内容とその他接触腐食動態についての結論を示す。1.過去6年間の東北大学歯学部付属病院保存科に来院した掌跡膿疱症の患者は性差および年齢分布に特徴は見られず、特にNi, Pt, Pdの感作性が高かった。2.掌跡膿庖症患者の治癒傾向は口腔内修復物除去(アレルゲン除去)だけで治癒する患者よりも、根尖病巣の治癒、辺縁性歯周炎の治療および扁桃摘出で治癒する患者の方が多い傾向がみられ、原因除去療法は歯科領域のみで対応するよりも、耳鼻咽喉科領域とタイアップする必要性があると思われた。(特にS.C.C.HやR.A.を併発している場合や患者が喫煙者の場合)3.金銀パラジウム合金単独の溶出挙動は乳酸中および生理食塩水中においてもAg, Cuの溶出イオンは確認できたが、その他合金成分のAu、PdおよびZnは検出限界以下であった。白金加金単独の溶出挙動は乳酸中および生理食塩水中においてもZn, Cuの溶出イオンは確認できた。4.口腔内の接触腐食については、複雑な環境下のため多数の組み合わせや咬合様式および咬合負担荷重の通いで変化するためさらに検討が必要だが、現段階では、口腔内で非な修復物が金銀パラジウム合金の場合はAg, Cuの溶出が多く、ニッケルクロム合金の場合では、Ni, Crともに溶出量が多いことが確認できた。アマルガムについては周知のとおりである。また、修復物の表面性状もイオン溶出大きく影響を与えていた。5.ニッケルクロム合金やアマルガムは口腔内で特に構成元素の溶出が起こりやすいため、金属アレルギー患者の口腔内からは撤去する方がよいと思われた。実際、掌跡膿庖症治癒例のほとんどがこの二種の合金撤去の場合であった。今年度までの研究では、ここまでしか解明できなかったが、今後口腔内修復物付近の軟組織に対する溶出イオンの影響や免疫応答についてさらに検討を加える予定である。掌蹠膿疱症は手掌と足蹠に限局する無菌性膿庖を主徴とした難治性皮膚疾患で、その機序および治療法など各種研究が為されている。耳鼻咽喉科領域においては扁桃病巣感染症の二次疾患として考えられているが、発症機序についてはいまだ不明な点が多い。歯科領域における根尖病巣の治癒、辺縁性歯周炎の治療といった口腔内の病巣治癒により快方に向かう場合も確認されており、原因は複雑かつ多様性に富んだ疾患と考えられる。これら原因の中で、特に注目されているのが、歯科用金属アレルギーである。現在は原因除去療法により多数の掌蹠膿疱症患者を治癒させることが可能になったが、本研究では、掌蹠膿疱症の発症メカニズムと金属アレルギーの関係に注目し、以下の結論を得た。1.金銀パラジウム合金単独の溶出挙動は乳酸中および生理食塩水中においてもAgとCuの溶出イオンは確認できたが、その他合金成分のAu、PdおよびZnは検出限界以下であった。白金加金単独の溶出挙動は乳酸中および生理食塩水中においてもZnとCuの溶出イオンは確認できた。2.金銀パラジウム合金と他の金属の接触時の溶出イオンについては、Ti合金の接触では、金銀パラジウム合金単独浸漬の際に溶出したイオン量と同程度Tiイオンの溶出がみられた。ニッケルクロム合金の接触時にはNi、Crイオンの溶出量が多かった。白金加金と他の金属の接触時の溶出イオンについては、Ti合金の接触では、ZnとCuおよびTiイオンの溶出がみられた。Ni-Cr合金の接触時にはNi、Crイオンの溶出量が多く、Ni-Cr合金単独浸漬のNi、Crの溶出量より増加する結果が得られた。3.当科外来に来院した掌蹠膿疱症患者についての傾向は、喫煙率が非常に高く、男女比は女性が有意に多く、年齢は中高年以上が多い傾向がみられた。また、パッチテストによる感作アレルゲン金属はNi、Pdが有意に多かった。

2.掌跡膿庖症患者の治癒傾向は口腔内修復物除去(アレルゲン除去)だけで治癒する患者よりも、根尖病巣の治癒、辺縁性歯周炎の治療および扁桃摘出で治癒する患者の方が多い傾向がみられ、原因除去療法は歯科領域のみで対応するよりも、耳鼻咽喉科領域とタイアップする必要性があると思われた。(特にS.C.C.HやR.A.を併発している場合や患者が喫煙者の場合)3.金銀パラジウム合金単独の溶出挙動は乳酸中および生理食塩水中においてもAg, Cuの溶出イオンは確認できたが、その他合金成分のAu、PdおよびZnは検出限界以下であった。白金加金単独の溶出挙動は乳酸中および生理食塩水中においてもZn, Cuの溶出イオンは確認できた。4.口腔内の接触腐食については、複雑な環境下のため多数の組み合わせや咬合様式および咬合負担荷重の通いで変化するためさらに検討が必要だが、現段階では、口腔内で非な修復物が金銀パラジウム合金の場合はAg, Cuの溶出が多く、ニッケルクロム合金の場合では、Ni, Crともに溶出量が多いことが確認できた。アマルガムについては周知のとおりである。また、修復物の表面性状もイオン溶出大きく影響を与えていた。5.ニッケルクロム合金やアマルガムは口腔内で特に構成元素の溶出が起こりやすいため、金属アレルギー患者の口腔内からは撤去する方がよいと思われた。実際、掌跡膿庖症治癒例のほとんどがこの二種の合金撤去の場合であった。今年度までの研究では、ここまでしか解明できなかったが、今後口腔内修復物付近の軟組織に対する溶出イオンの影響や免疫応答についてさらに検討を加える予定である。