hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
自律移動型パケットによるアクティブネットワークの研究

本研究の目的は、(1)アクティブネットワークにおけるセキュアなネットワークノード実行環境の開発、(2)自律移動型のパケットを実現するアクティブルータの開発、(3)アクティブネットワークを活かすアプリケーションの探索である。上記の目的にそって、研究を行い以下の実績を得た。(1)ノードOS(Linux)上で動作する開発環境を2種類開発した.1つは、プログラマブルスイッチ方式を実現するための開発環境であり、エージェント技術を用いることで柔軟性を向上させた点に特徴がある。2つめは、プログラムサイズの制限を無くすため、プログラムを分割して転送できるようにした「パイプライン方式」である。(2)LinuxをOSとするサーバに、本研究で開発したアクティブネットワークの実行環境を載せて動かし、サーバをアクティブノードとして動作させた。アクティブノード複数台をLANで接続して連携動作させ、パケットを"ストア&コンピュート&フォワード"させた。(3)自律移動型のパケットを実現するアクティブルータを開発した。パケットの中に、データとプログラムを入れておき、パケットがアクティブノードに到着すると、このプログラムを取り出して、ノードの実行環境の上で、実際に動作させた。(4)アクティブルータに、高性能サーバを接続して、実験システムを構築し、アクティブネットワークを応用したアプリケーションを開発した。(5)上記実験構成を用いて実機での評価を行った。評価は、巡回時間、プログラム規模、ノードでのCPU処理時間/CPU負荷などについて、実測ベースで行った。本研究の目的は、(1)アクティブネットワークにおけるセキュアなネットワークノード実行環境の開発、(2)自律移動型のパケットを実現するアクティブルータの開発、(3)アクティブネットワークを活かすアプリケーションの探索である.平成14年度は、上記の目的にそって、初年度の研究を推進し、以下の実績を得た.(1)アクティブネットワークの実行環境を開発した.ノードOS(Linux)上で動作する開発環境を2種類開発した.1つは、プログラマブルスイッチ方式を実現するための開発環境であり、エージェント技術を用いることで柔軟性を向上させた点に特徴がある.2つめは、カプセル方式に基づく開発環境であるが、カプセル方式の欠点であるプログラムサイズの制限(最大パケット長以下)を無くすために、改良した方式である.すなわち、プログラムを分割して、複数のパケットにより転送して、パケットが着くたびに即座に実行開始できるようにした新方式「パイプライン方式」を開発した.(2)アクティブネットワークの実行環境の評価を行った.LinuxをOSとするサーバに、本研究で開発したアクティブネットワークの実行環境を載せて動かし、サーバをアクティブノードとして動作させた.アクティブノード複数台をLANで接続して連携動作させ、パケットを"ストア&コンピュート&フォワード"させた.さらに、テストプログラムにより、実際にパケットを転送することで開発した実行環境の動作を確認すると共に、性能を評価した.本研究の目的は、(1)アクティブネットワークにおけるセキュアなネットワークノード実行環境の開発、(2)自律移動型のパケットを実現するアクティブルータの開発、(3)アクティブネットワークを活かすアプリケーションの探索である。平成15年度は、上記の目的にそって、最終年度の研究を推進し、以下の実績を得た。(1)アクティブルータの開発平成14年度に開発した実行環境を用いて、自律移動型のパケットを実現するアクティブルータを開発した。当該プログラムは、同じパケットの中のデータを取り出して、たとえば巡回の道順を示す情報に基づき、次のノードを決定して、再度パケット(データ+プログラム)をネットワークに送出する。(2)アクティブネットワークの特徴を活用したアプリケーションの開発アクティブルータに、高性能サーバを接続して、実験システムを構築し、アクティブネットワークを応用したアプリケーションを開発した。(3)実行環境の機能、性能を検証し、効果を評価した。上記実験構成を用いて実機での評価を行った。評価は、巡回時間、プログラムの機能レベル、プログラム規模、ノードでのCPU処理時間/CPU負荷などについて、実測ベースで行った。
融合人工進化酵素創製による代謝経路変換の試み

まず、本研究で具体的代謝経路として選んだ、二酸化炭素からメタノールを生成する経路に関与する3つの酵素たんぱぐ質(ギ酸脱水素酵素、ホルムアルデヒド脱水素酵素、アルコール脱水素酵素)を取得し、それらの酵素の基礎的性質について検討した。その際に、NADHを補酵素として用いるだけでなく、化学的メディエーターであるメチルビオロゲンも補酵素として有用であるかどうかについても検討した。その結果、これら3つの酵素の中ではホルムアルデヒド脱水素酵素の酵素的性質を改変することが、この代謝経路を用いて二酸化炭素からメタノールを生成する場合に、もっとも重要なステップであるごとを示唆する結果を得た。そこで、このホルムアルデビド脱水素酵素の遺伝子を取得し、この酵素遺伝子に対して人工進化操作を施した。その結果、機能の高まった酵素遺伝子を取得することができ、この遺伝子に対して人工進化操作が有用であることが示された。どの高機能化した酵素を用いて、二酸化炭素からメタノールを生成する反応について検討し、今後の代謝経路変換、およびメタノール生成に向けての、基礎的で重要なデータを得た。さらに、ギ酸脱水素酵素およびアルコール脱水素酵素についても、それらの酵素遭伝子を取得し、人工進化操作を施すため準備を整えつつある。
iPS細胞由来NKT細胞をベースとした抗腫瘍T細胞の構築と膵臓癌治療への応用

ヒト末梢血単核球(peripheral mononuclearcell:PBMC)にα-galactosylceramide(α-GalCer)を負荷してヒト人工多能性幹細胞(iPSC)由来iNKT細胞(iPSC-iNKT細胞)を刺激した。刺激3日後、レトロウイルスベクターを用いてがん特異的キメラ抗原受容体(chimeric antigen receptor: CAR)遺伝子を導入(レトロネクチン法)した。しかし、遺伝子導入時のiPSC-iNKT細胞の増殖が弱く、導入効率が極めて低いことが明らかになった。CARを発現するiPSC-iNKT細胞分画をセルソーターで分離して、さらにPHA刺激後の細胞を用いて、がん細胞に対する細胞傷害活性を評価した。その結果、iPSC-iNKT-CARは、がん抗原の有無に関わらず、複数のがん細胞を傷害することが明らかになった。詳細な解析の結果、iPSC-iNKT細胞は、NKG2D及びDNAM-1依存性のNK活性により、がんを傷害することが明らかになった。以上より、我々が分化誘導している細胞は、T細胞というよりもNK細胞に近い表現系を示していることが示唆された。がん抗原特異的エフェクター機能を得るためにNK活性の低いエフェクター細胞に分化誘導する方法を試みた。OP9-delta1上でT細胞分化誘導する際に添加するサイトカインを変更した検討においても、充分なT細胞機能を発揮する細胞への分化が得られなかった。iPS細胞から分化誘導したiNKTは、NK活性が強くキメラ抗原受容体の抗原特異的細胞傷害活性を評価することが困難であることが明らかになった。現時点で、人工胸腺オルガノイド(Artificial Thymic Organoid: ATO)を用いたT細胞分化誘導法によって作製された細胞は、最もT細胞に近いと考えられている。この方法に改善を加えて抗原特異的エフェクター機能を発揮する細胞の構築を行う。その一方でiPSC-iNKT細胞に代わる他の細胞をベースとしたエフェクター細胞の構築も行い、CARの性能評価などを行う。がん細胞表面抗原に対する1本鎖抗体の可変領域をリンカーで結合した抗体部分にCD8α膜貫通ドメインとシグナル伝達領域(CD28/4-1BB/CD3ζ鎖)を融合した第三世代キメラ抗原受容体遺伝子を作製してレトロウイルスベクターに組み換えた。これとgag-pol、env遺伝子発現ベクタープラスミドと共にレトロウイルス産生細胞に遺伝子導入して、一過性の組み換えウイルスを作製した。これをGibbon ape leukemia virus (GaLV)ベースのレトロウイルスパッケージング細胞に感染させ、ウイルス安定産生株を樹立した。これの培養上清(組み換えレトロウイルス)をT細胞に添加してレトロネクチン法により遺伝子導入した。細胞傷害性試験の結果、CAR導入T細胞は、細胞表面のがん抗原を認識して、抗原特異的にがん細胞株を傷害することが明らかになった。一方、ヒトiNKT細胞に由来するiPSCから造血系分化を経由して、Flt3L, IL-7存在下, OP9-delta1上でT細胞への分化を誘導した。最終分化段階にIL-2とIL-15を添加した。分化したT細胞(iPSC-iNKT細胞)は、PHA刺激で増殖させることが可能であり、もとのiNKT細胞と同じT細胞受容体α鎖(Vα24)とβ鎖(Vβ11)を発現することをフローサイトメトリーで確認した。iPSC-iNKT細胞は、α-galactosylceramide(α-GalCer)を負荷した抗原提示細胞に対して、interferon-γを産生するとともに増殖応答を示し、抗原特異的にT細胞応答を示すことが明らかになった。以上より、我々が分化誘導したiPSC-iNKT細胞に、CARを導入することで、抗原特異的にターゲット細胞を傷害する可能性が示唆された。iPSCからiNKT細胞を分化させる為に使用する血清の選択に時間を要した。ヒト末梢血単核球(peripheral mononuclear cell: PBMC)にα-galactosylceramide(α-GalCer)を負荷してヒト人工多能性幹細胞(iPSC)由来iNKT細胞(iPSC-iNKT細胞)を刺激した。iPS細胞から分化誘導したiNKTは、NK活性が強くキメラ抗原受容体の抗原

特異的細胞傷害活性を評価することが困難であることが明らかになった。iPSC-iNKT細胞の機能解析を進めるとともに、iPSC-iNKT細胞にCARを導入して、in vitroでがん特異的細胞傷害活性を明らかにする。iPSC-iNKT細胞に対するCAR導入が困難な場合が想定されるので、iPSCの段階でCARを導入した後にiNKT細胞に分化誘導する方法も試みる。現時点で、人工胸腺オルガノイド(Artificial Thymic Organoid: ATO)を用いたT細胞分化誘導法によって作製された細胞は、最もT細胞に近いと考えられている。この方法に改善を加えて抗原特異的エフェクター機能を発揮する細胞の構築を行う。その一方でiPSC-iNKT細胞に代わる他の細胞をベースとしたエフェクター細胞の構築も行い、CARの性能評価などを行う。2017年度予定の研究に若干の遅れがあった。これに伴い未使用研究費が発生した。これらの未使用研究費は遅れた分の実験を次年度に行う際の消耗品に充てる予定である。充分なiPSC-iNKT細胞分化が誘導できず分化後の解析を進められなかった。残予算は次年度の解析に充てられる。
骨細胞・骨細管系による骨基質ミネラル維持機構の解明

本研究の目的は、骨に無数に張りめぐらされている骨細胞ネットワーク(骨細胞・骨細管系)が骨基質ミネラルの調節・維持および骨リモデリングに対してどのような細胞学的作用を示すのかin vivoで解明することである。本研究によって明らかにされた点は以下である。1)骨細胞・骨細管系の配列における幾何学的規則性は、成熟骨である皮質骨で発達しており、そのような規則的に配列した骨細胞からはスクレロスチンやFGF23といった因子が多量に産生されること、2)オステオプロテジェリン遺伝子欠損マウスやklotho遺伝子欠損マウスといった骨代謝回転が異常を示す状態では、骨細胞・骨細管系の配列が不規則となり、DMP-1やスクレロスチンなどの産生が影響を受けることも明らかにしている。3)さらに、規則的な骨細管系に存在する骨細胞は、副甲状腺ホルモンに反応して、周囲の骨基質ミネラルを溶出する可能性も得られた。本研究計画では、破骨細胞が存在しないc-fos^<-/->マウスをPTH投与群・非投与群に分けて組織化学的に検索した。生後9週齢のc-fos^<-/->マウスおよび野生型マウスにhuman PTH(1-34)を214ng/kg/hを2週間投与しアルデヒド溶液にて灌流固定後、大腿骨を摘出してパラフィンあるいはエポキシ樹脂に包埋した。解析項目として、dentin matrix protein 1(DMP-1)、血清リン濃度を調節するfibroblast growth factor23(FGF23)・骨芽細胞抑制因子であるsclerostin組織化学および鍍銀染色を行い、また透過型電子顕微鏡観察を行った。その結果、野生型マウスの大腿骨皮質骨には規則的な骨細管系が認められたが、c-fos^<-/->マウスでは不規則な骨細管系しか観察されなかった。DMP-1は野生型マウスおよびc-fos^<-/->マウスともに骨細胞や骨細管に局在していた。しかし、c-fos^<-/->マウスでは、極弱いFGF23陽性反応とsclerostin強陽性反応を示す骨細胞、ならびにごく弱いALP陽性反応を示す骨芽細胞しか観察されなかった。野生型マウスでは規則的配列を示す骨細管系に強いFGF23/sclerostin発現が認められることから(Ubaidus, Amizuka et al., 2009)、c-fos^<-/->マウスでは骨細管系が不規則な配列を示すだけでなく、FGF23の産生低下とsclerostin産生上昇が誘導されていると考えられた(佐々木、網塚ほか日本解剖学会2010年盛岡)。c-fos^<-/->マウスにPTHを投与しても、骨細胞周囲の骨基質の微細構造、FGF23, sclerostinの産生は大きな変化を示さなかった。従って、不規則な骨細管系は機能的に非効率であると推測された。現在、引き続き、詳細な解析を続けている。我々の研究によって、骨細胞・骨細管系の配列における幾何学的規則性はその機能の効率性に影響を及ぼすこと、また、骨改造が骨細管系の規則性を調節していることを明らかにしている。従って、骨改造異常を示す状態では、骨細管系の機能も異常を示すと推測される。そこで、平成22年度ではOPG遺伝子欠損(OPG^/)マウスとklotho^<-/->マウスにおける骨細管系の配列およびDMP-1,sclerostin,FGF23を解析した。その結果、骨改造が激しいOPG^/マウスではDMP-1とsclerostinの発現が低下したが、その原因として、DMP-1は骨細管系の不規則性や細胞死に依存しており、sclerostinは骨芽細胞の活性化状態に影響を受ける可能性が示唆された(Masuki,Amizuka et al.,BioMed.Res,2010)。一方、高リン・高カルシウム血症を示すklotho^<-/->マウスでは、過剰なDMP-1産生とごく僅かなsclerostin・FGF23産生を示した。DMP-1は局所的基質石灰化と関連があることから、klotho^<-/->マウスにおける骨基質低石灰化の原因の1つとしてDMP-1過剰産生が推測された。

さらに、FGF23産生の低下は、klotho^<-/->マウスの腎臓におけるklotho欠損だけでなく骨細胞からのFGF23産生が抑制されていることも高リン血症の原因の1つと考えられた(佐々木、網塚ら:歯科基礎医学会2010年、論文作成中)。一方、sclerostinの産生低下と骨芽細胞の抑制とは、これまでに考えられている機序では説明がつかず、現在、解析中である。申請者らは、klotho欠損マウスは血中カルシウム・リン濃度が上昇しているにもかかわらず、骨基質石灰化が局所的に欠落していることを報告してきた(Sasaki, Amizuka et al.,米国骨代謝学会、2011年)。その原因として、リン酸カルシウム結晶と結合するdentin matrix protein-1やosteocalcinが産生されていること、さらには、石灰化抑制に作用するmatrixGla proteinが骨細胞から過剰産生されていることを見いだした(Sasaki, Amizuka論文投稿中)。このことから、骨細胞は有機性成分を介した骨基質の石灰化を積極的に行っていることを強く示唆していると推測される。しかし一方で、骨細胞・骨細管系がリン酸やカルシウムといった骨基質ミネラルの沈着・脱灰を直接行うか否かについて、解析する必要性があると判断した。過去の報告からBelangerは骨細胞性骨溶解を報告しており、血清カルシウムを上昇させる副甲状腺ホルモン(PTH)により、骨細胞は周囲の骨基質を溶解するという。そこで、申請者はマウスにPTHを投与したところ、規則的に配列し機能的に効率が高いと思われる皮質骨の骨細管系において、骨小腔の拡大と基質ミネラルの脱灰、液胞型プロトンポンプ、酸性フォスファターゼを確認したが、骨梁など不規則な骨細胞系の骨小腔では、そのような基質溶解を確認できなかった。また、腎動静脈を結紮してPTH投与3時間後の血中カルシウムを測定したところ、有意なカルシウム上昇が認められた。さらに、その後、カルセイン投与を行うと、今度は、骨小腔周囲にカルセイン標識が認められたことから、骨細胞は周囲基質を溶解したり、沈着する可能性が強く示唆された。以上から、骨細胞・骨細管系は積極的に基質ミネラルの調節をしていると考えられた。
現代ベトナムにおけるマイノリティの教育達成と「少数民族」認識をめぐる実証研究

採用三年目にあたる平成24年度は、特別研究員としての最終年度として、これまでの研究成果のまとめと公開に取り組んだ。とりわけ、3年間の目的として掲げた「少数民族」認識の多様性と重層性を教育資源分配という視点から明らかにする研究計画の最終段階として、教育市場の自由化に伴いベトナム社会における「少数民族」認識が変容した結果、人々の認識と実践にどのような変化がもたらされたのかという点を中心に調査・分析を行った。そこで平成24年度も、平成23年度に引き続きベトナム国家大学ハノイ校の協力のもと、山間部少数民族地域出身の少数民族、および多数派民族であるキン族大学生を対象とする聞き取り調査を実施した。昨年までの成果を踏まえたうえで今年度の調査では、「少数民族」に対するキン族側の認識に焦点を当てて聞き取りを行った。この結果、高等教育進学層が急速に拡大し、大学を経由した地位達成のあり方がベトナム社会に普及していくなかで、家族の生存戦略として子供を大学に進学させようとするキン族の側から、これまで「遅れた人々」として自らとの差異化を図ってきた「少数民族」に対する肯定的な再解釈がなされている、という事実が明らかとなった。さらに、家族の生存戦略としての民族籍変更という行動のあり方は、ベトナムの伝統的な家族のかたちにも一定の変化をもたらしつつあることが明らかとなった。フィールドワークで得られた調査結果の分析から、こうした姓と民族籍の変更は、女子においてより顕著であることが明らかとなった。これは、家父長制的規範において、家族のもっとも周辺部に置かれてきた女子に対する新たなまなざしの出現とも密接に関連する。賃金労働者となることで家族に現金収入をもたらしてくれることへの期待が、家父長制規範の周辺部であるがゆえによりスムーズな形で姓と民族籍の変更という現象となって表れていることを解き明かした。フィールドワークおよび、司法省ウェブサイトの言説分析を通じて、「少数民族」に対するベトナムの人々の認識を明らかにするとともに、雑誌論文への投稿、および国内、国際学会で研究発表を行い、調査データを基にした研究成果を積極的に公表することができた。本研究課題の成果として、平成23年7月に東京大学大学院総合文化研究科に提出し、博士号を取得した『ベトナム北部山間部における民族寄宿学校と少数民族:選抜メカニズムの地域的多様性と人々の選択』については、平成25年度中に単行本として出版する予定である。本研究の目的は、ベトナムにおける、地域社会を軸とした「少数民族Jに対する認識の多様性と重層性に着目し、ドイモイ政策導入以降の少数民族の教育達成プロセスの変化と、少数民族優遇政策による地位配分構造を解き明かすことである。平成22年度は、「少数民族」認識をめぐるベトナム北部三地域モデル(フート省、ランソン省、ラオカイ省)についての仮説を検討し、学術論文の執筆を行った。また、フート省民族寄宿学校におけるフィールドワークを実施した。学術論文の執筆では、フート省とラオカイ省民族寄宿学校における受験者情報の量的分析を行い、生徒の選抜をめぐるメカニズムが、それぞれ、機会の平等型と結果の平等型という、まったく異なる形式で実施されていることを解き明かした。選抜メカニズムの運用をめぐるこれらの多様なあり方について、本研究では、これまで厳格な上位下達の関係にあるとみなされてきた、社会主義国家における中央と地方の関係性において、地方行政の自由な裁量性が発揮された側面であることを突き止めた。また、民族寄宿学校という学校制度を通じて、必ずしも自意識としてのエスニシティとは一致しない、ハイブリッドに構成されたものとして、自らの民族籍を捉えるという、新たな認識のあり方が醸成されつつあることを明らかにした。また、2011年3月3日から22日にかけて、ハノイ市内におけるベトナム国家図書館、民族学研究所図書室での資料収集、および北部山間部のフート省フート市に所在する、フート省民族寄宿学校においてフィールドワークを行った。フート省民族寄宿学校における調査では、教員、および少数民族生徒(高校3年生)に対する聞き取り調査を実施した。また、フート省教育訓練局副局長グエン・ヴァン・リエム(Nguyen Van Liem)氏、普通教育室副室長ドー・グエン・トゥオン(Do Nguyen Thuong)氏に対するインタビューを実施し、フート省での少数民族教育の位置づけと、地方行政による政策運用の方針に関する聞き取りを行った。また、ハノイ市では、教育訓練省民族教育部部長モン・キー・シャイ(Mong Ky Slay)氏にインタビューを行い、2008年以降、ベトナムで展開されている少数民族教育政策の実施状況と今後の発展ビジョンについて、具体的な資料収集と聞き取りを行った。採用二年目にあたる平成23年度は、「少数民族」認識をめぐるベトナム北部三地域モデル(フート省、ランソン省、ラオカイ省)について実証的な検討を行い、学術論文の執筆および学会での口頭報告に専心した。また、ベトナム国家大学ハノイ校において山間部出身大学生に対する聞き取り調査を実施した。学術論文の執筆では、フート省とラオカイ省民族寄宿学校における受験者情報の量的分析を行い、少数民族生徒の選抜メカニズムをめぐる、地域社会ごとの多様なあり方を明らかにした。ベトナムにおける中央と地方の関係について扱ったこれまでの先行研究では、中央レベルの政策決定機関(教育分野では教育訓練省)を頂点とし、末端の地方行政に至る縦割りの行政システムの機能性に一定の評価を下しつつ、同時に、下級機関から上級機関への異議申し立ての経路が存在し、それが時として社会の側からの要求を実現させる重要なイニシアティブを発揮してきたとして、縦方向の関係性に焦点が当てられて論じられてきた。

これに対し、本研究では、上級機関に対する下級機関の横方向の関係性、すなわち、同じレベルにある機関が、それぞれの上位機関とどのような関係を取り結び、地域社会的な文脈の中で、上位機関から与えられた目標を実現するためにどのような戦略的な方策をとっているのか、という点を解き明かすことを目的とした。少数民族生徒の選抜メカニズムをめぐる分析結果より、フート省とラオカイ省では、それぞれの地域社会において「少数民族」に範疇化される集団に対する社会認識にズレが存在すること、それが「優遇政策の恩恵を受ける」という行為をめぐる人々の認識に一定の影響を及ぼしていることを明らかにした。また、2012年3月にベトナム国家大学ハノイ校で行った、山間部出身大学生に対する綿密な聞き取り調査の結果、少数民族優遇政策の対象者となることを目的として、出生時にいったん登録した民族籍を変更しようとする人々の動きが明らかとなった。採用三年目にあたる平成24年度は、特別研究員としての最終年度として、これまでの研究成果のまとめと公開に取り組んだ。とりわけ、3年間の目的として掲げた「少数民族」認識の多様性と重層性を教育資源分配という視点から明らかにする研究計画の最終段階として、教育市場の自由化に伴いベトナム社会における「少数民族」認識が変容した結果、人々の認識と実践にどのような変化がもたらされたのかという点を中心に調査・分析を行った。そこで平成24年度も、平成23年度に引き続きベトナム国家大学ハノイ校の協力のもと、山間部少数民族地域出身の少数民族、および多数派民族であるキン族大学生を対象とする聞き取り調査を実施した。昨年までの成果を踏まえたうえで今年度の調査では、「少数民族」に対するキン族側の認識に焦点を当てて聞き取りを行った。この結果、高等教育進学層が急速に拡大し、大学を経由した地位達成のあり方がベトナム社会に普及していくなかで、家族の生存戦略として子供を大学に進学させようとするキン族の側から、これまで「遅れた人々」として自らとの差異化を図ってきた「少数民族」に対する肯定的な再解釈がなされている、という事実が明らかとなった。さらに、家族の生存戦略としての民族籍変更という行動のあり方は、ベトナムの伝統的な家族のかたちにも一定の変化をもたらしつつあることが明らかとなった。フィールドワークで得られた調査結果の分析から、こうした姓と民族籍の変更は、女子においてより顕著であることが明らかとなった。これは、家父長制的規範において、家族のもっとも周辺部に置かれてきた女子に対する新たなまなざしの出現とも密接に関連する。賃金労働者となることで家族に現金収入をもたらしてくれることへの期待が、家父長制規範の周辺部であるがゆえによりスムーズな形で姓と民族籍の変更という現象となって表れていることを解き明かした。ベトナム少数民族の「少数民族」に対する社会イメージを明らかにするため、ベトナムの各地における質問紙およびインタビュー調査を行い、量的データおよび質的データを集積することができた。同時に、雑誌論文および学会発表を継続して行い、調査データを基にした研究成果を積極的に公表することができた。
ソフィック測度上のマルチフラクタル解析とその応用

測度に対する数学的に厳密なマルチフラクタル解析は,これまで主にヘルダー連続なポテンシャル関数に対するギブス測度について行われてきた.ヘルダー連続なギブス測度を含む最も広いクラスとして,準乗法的測度に対してマルチフラクタル解析が行われている.本研究ではヘルダー連続性や準乗法的性質を持たないソフィック測度に対して,マルチフラクタル解析を行った.ソフィック測度が既約のとき,ソフィック測度を構成する部分遷移行列の積から性質のよいものを探すことにより,ソフィック測度に対応する非負の逆温度を持つギブス測度の族が構成されることと,それらが混合性を持つことが示された.また,同様にしてソフィック測度の自由エネルギーが存在することが示された.ソフィック測度で特定の特異性を持つ集合上でのギブス測度の特異性を考察し,ビリングスレイの定理を適用することにより,ソフィック測度の特異性スペクトルが評価できる.ソフィック測度の特異性スペクトルは,特異性スペクトルが最大値をとる特異性以下で自由エネルギーのルジャンドル変換で与えられることが示された.また,特異性スペクトルの最大値を与える特異性よりも大きな特異性では,一般に自由エネルギーよりも特異性スペクトルが小さくなる.このことは,これまで数学的に研究されてきた準乗法的な測度では生じない現象である.フラクタル集合の断面の次元の分布を特徴づけるものとして,次元スペクトルがある.フラクタル集合の次元スペクトルは,フラクタル集合上の一様な測度を射影して得られる測度の特異性スペクトルと関連づけられる.自己アファイン集合上の一様な測度の射影はソフィック測度となるので,ソフィック測度の特異性スペクトルについて得られた結果を用いて,既約な自己アファイン集合の次元スペクトルとハウスドルフ次元の性質が調べられた.測度に対する数学的に厳密なマルチフラクタル解析は,これまで主にヘルダー連続なポテンシャル関数に対するギブス測度について行われてきた.ヘルダー連続なギブス測度を含む最も広いクラスとして,準乗法的測度に対してマルチフラクタル解析が行われている.本研究ではヘルダー連続性や準乗法的性質を持たないソフィック測度に対して,マルチフラクタル解析を行った.ソフィック測度が既約のとき,ソフィック測度を構成する部分遷移行列の積から性質のよいものを探すことにより,ソフィック測度に対応する非負の逆温度を持つギブス測度の族が構成されることと,それらが混合性を持つことが示された.また,同様にしてソフィック測度の自由エネルギーが存在することが示された.ソフィック測度で特定の特異性を持つ集合上でのギブス測度の特異性を考察し,ビリングスレイの定理を適用することにより,ソフィック測度の特異性スペクトルが評価できる.ソフィック測度の特異性スペクトルは,特異性スペクトルが最大値をとる特異性以下で自由エネルギーのルジャンドル変換で与えられることが示された.また,特異性スペクトルの最大値を与える特異性よりも大きな特異性では,一般に自由エネルギーよりも特異性スペクトルが小さくなる.このことは,これまで数学的に研究されてきた準乗法的な測度では生じない現象である.フラクタル集合の断面の次元の分布を特徴づけるものとして,次元スペクトルがある.フラクタル集合の次元スペクトルは,フラクタル集合上の一様な測度を射影して得られる測度の特異性スペクトルと関連づけられる.自己アファイン集合上の一様な測度の射影はソフィック測度となるので,ソフィック測度の特異性スペクトルについて得られた結果を用いて,既約な自己アファイン集合の次元スペクトルとハウスドルフ次元の性質が調べられた.
歯科医師のうつ病対策おける情報提供システムの確立

歯科医師208名からの調査結果から、「興味や喜びの喪失」「気分の落ち込み」はうつ病の特徴的な症状と言われているが、これらについて90%以上の歯科医師が、うつ病の診断に重要であると理解していたが、一方で、「睡眠」、「体重・食欲の増減」、「思考力や集中力の減退」、「精神運動性の焦燥・制止」の症状はうつ病の診断で重要度が低いとの回答が得られたことから、睡眠の問題に着目することでうつ病を発症するリスクのある受診者の診断が可能になると思われた。加えて、うつ病の過大評価を防ぐために、抑うつ症状と不安症状の鑑別と、不安症状の背後にあるかもしれない抑うつ症状を、見逃さない注意の必要性が確認された。平成25年度はドライマウス研究会会員2,300名に対して開業歯科医師がうつ病を疑い精神科に紹介した数やうつ病に関する実態調査を行った。このアンケート調査の質問項目選定に関して研究代表者と研究分担者とで協議の上、正しいと思う場合は「正」、間違っていると思う場合は「誤」の回答式にした。質問項目はうつ病に対する認識の実態調査の部分と「ある患者さんが「うつ病」だと診断されるとき、以下にあげた患者さんの訴えは、その方がうつ病であるかどうかの判断にどれだけ重要であると思いますか?当てはまる数字でお答えください。」とし「重要か重要でないか」の5段階評価とした。現在までのアンケートの回収状況は配信数の約10%であり240余名の返信を得た。これら集積したデータを現在統計学的に解析し、歯科医療従事者のうつ病に対する現状認識やうつ病に対する対応方法についての現状を把握するための検討を行っている。うつ病の対策には,早期発見・早期治療が効果的であるにも関わらず、うつ病の患者は自ら精神科や心療内科を受診しない傾向にある。多くは,内科等を受診し,身体症状を訴えるため,うつ病が見逃されることも少なくない。しかしながら,自ら抑うつ症状を訴えていない患者でも,注意深く話を聞いていくと,抑うつ症状の発見につながることが示されている。抑うつ症状の見逃しを少なくし,早期対応のための技術を教育する試みが医師を中心に続けられており、うつ状態の方を発見する確率を高めていくために,このような個々の医療者のうつ病を発見する力を向上させることは不可欠である。現在,うつ病の患者を発見するために,医師だけでなく,薬剤師など異なる職種が関わる取り組みが始まっている理由がそこにある。ドライマウスが原因で医療機関を受診している患者の中にも,うつ病の症状に苦しんでいる方がおり、そのため,この研究課題では、ドライマウスに関わる医療者もうつ病発見の取り組みの一端を担えるのではないかと考え、そのプラットホーム作りを行っている。うつ病の患者さんを発見するためには,抑うつ症状についての知識が不可欠であり、ドライマウスにかかわる医療者がそうした知識を有しているか確かめるために,本研究課題ではドライマウス研究会の会員を対象に調査を行った。調査の中では,1抑うつ症状を正確に理解しているか,2不安症状と抑うつ症状を区別できるか,という2点に注目し、研究会の会員へドライマウス通信を通じて、うつ病発見に向けてのドライマウスにかかわる医療者が果たせる可能性と今後の課題について報告してきた。うつ病は非常に有病率の高い疾病であり,世界的に大きな社会問題である。うつ病によって引き起こされる問題の1つに自殺があり、自殺対策の観点からうつ病の早期発見が試行されている。うつ病患者の半数以上が歯科医療のために歯科医院を利用していると報告されていることから、うつ病スクリーニングの役割を歯科医師が担うことができれば、プライマリケアでの対処法で確立できれば見逃されているうつ病患者の発見に対して大きな効果が期待できる。調査は歯科医師208名の協力のもとに行われ、うつ病の診断基準として用いられる症状について、うつ病の診断の際にどの程度重要だと考えているかを検証した結果、9割の歯科医師がうつ病診断に重要である項目を理解していた。しかしながら「睡眠」、「体重・食欲の増減」、「思考力や集中力の減退」、「精神運動性の焦燥・制止」の症状についての理解は乏しく、睡眠の問題に着目することでうつ病を発症するリスクのある受診者の診断が可能になることが判明した。加えて、抑うつ症状と不安症状はしばしば同時に併発するが、不安症状を持つ方の半数以上は抑うつ症状が認められないことも報告されていることから、うつ病の可能性を過大に評価してしまうことを防ぐために,抑うつ症状と不安症状を区別できるようにしていく必要が判明した。また、最終年度の解析から、受診者の訴えが強くはっきりしている不安症状とは異なり、抑うつ症状は目立ちにくいため、不安症状に隠れてしまう可能性があることから不安症状の背後にあるかもしれない抑うつ症状を、見逃さないように注意する必要が重要であると考えられた。

うつ病の診断の際にこれらの症状を有していることがどの程度重要であるかの調査を行った結果、以下の傾向が得られた。9つの症状の中でも,「抑うつ気分」と「興味または喜びの喪失」はうつ病の中核症状と言われ、うつ病の患者では,これら2つの症状がどちらも認められる可能性が非常に高いと報告されている。これらの症状について,90%以上のドライマウスにかかわる医療者がうつ病の診断において重要であると考えられた。このことから,うつ病のスクリーニングのために必要な知識をドライマウスにかかわる医療者の多くが有していると想定される。一方で,9つの症状の中で重要性が高く評価されていない症状も確認され、「不眠/睡眠過多」,「体重減少/増加,食欲減退/増加」,「思考力や集中力の減退,決断困難」,「精神運動性の焦燥,制止」の症状は,3分の1から4分の1程度の方にとって,うつ病の診断で重要な症状とはなっていなかった。うつ病の症状は多岐にわたり、中核症状のみに注目するだけでも相当数の患者の発見につながる可能性はある。このことから、うつ病の症状に幅広く注目することができれば,より正確に患者さんを発見することが可能となる。この中でも「不眠/睡眠過多」は,多くのうつ病患者が訴える症状であり、また,睡眠の問題を抱えた患者はうつ病を発症しやすいといわれている。睡眠の問題に着目することで,その時点でうつ病に悩んでいる患者だけでなく,うつ病を発症するリスクのある患者の発見も可能になると思われ、今後も同様な解析を進める予定である。病理うつ病の患者は,抑うつ症状のみに苦しんでいることはそれほど多くなく、身体疾患からくる体の不調に苦しんでいる場合もあれば,不安やストレスなど抑うつ症状以外の精神症状を強く感じている場合もある。うつ病患者にみられやすい症状の1つが不安症状であり、抑うつ症状と同様に,うつ病の診断の際にこれらの不安症状を有していることがどの程度重要であるかを今後調査すると共に、今回の解析結果からドライマウスにかかわる半数以上の医療者がうつ病の診断に重要であると評価していた。不安症状が認められる患者のすべてがうつ病に当てはまるわけではなく,半数以上には抑うつ症状が認められないといわれている。うつ病の可能性を過大に評価してしまうことを防ぐために,抑うつ症状と不安症状を区別できるようにしていく必要がある。また,不安症状は患者の訴えが強くはっきりしているため,目立ちやすい症状である。それに比べると,抑うつ症状は目立ちにくいため,不安症状に隠れてしまう可能性がある。不安症状の背後にあるかもしれない抑うつ症状を見逃さないように注意する必要があり、これらの点を検討する予定である。自殺予防を目的としたうつ病の早期発見では、かかりつけ身体科医にその役割を担うことが期待されてきた。しかしながら、家庭医制度のない本邦では、かかりつけ医の数は減少している。また、家庭医制度のある欧米でも、かかりつけ医のうつ病の発見には限界があり、うつ病の見逃しが3050%存在すると言われている。一方、歯科医師は、開業歯科での診療が大半を占め、より地域密着型で国民の70%程度はかかりつけ歯科医がいると言われており、家庭医としての役割が大きい。さらにうつ病あるいは抑うつ状態の患者は、味覚異常や口腔乾燥感、義歯不適合感などの様々な口腔症状を訴えることも多く、潜在的に相当数の患者が歯科を初診しているものと推測される。
仏教・儒教・シャーマニズムの観点を媒介とした日韓古典文学の比較研究

平成5年度の調査範囲は、韓国南部の全羅道・済州島であるが、一部前年度の地域を再調査した。まず儒教関係では前年度の南原郷校に続き、全州郷校、晋州郷校の調査を行なった。現在管理運営している人たちから郷校の運営や活動の様子、儒聖の祭祀、郷校の構造などについて詳しく聞くことができ、郷校の地域社会での活動など明確にできた点は数多い。また夏休み中であったので小学生たちの千字文の学習を見たが、その朗唱のリズムは独特である。これまでの書院調査、宗廟、祀堂の調査と併せて韓国の儒教的文化の根幹を理解する上で貴重な成果があった(日向、小林)。仏教関係では仏教説話、説話画について、林が前年度に引き続き忠清北道の法住寺での調査を行なった。その「龍華浄土の図(全13図)」(仮称)は近年の石刻図であるが、その第12図「娑婆苦悩相」の図柄は、いわゆる「五趣生死輪」であり、早く『高麗大蔵経』中の「大方広仏華厳経巻第三十七変相」と題する図と一致する。これらは元暁、義湘に代表される朝鮮仏教界の華厳思想の展開を考える上で貴重な資料であり、また庶民を対象とした仏教説話画の果たしてきた役割を考える上でも貴重である。この他釜山市の梵魚寺捌相殿内の「釈加八相図」にはすべての場面に解説文が付けられていて、かつて絵解きがなされたことが推定されるものである。全羅南道の松広寺では地蔵殿の外壁に「仏説大報父母恩重経図(全10図)」が描かれ、大雄殿外壁には「六波羅密図(全6図)」が描かれるが、これらは韓国仏教の性格や多様性を考える上で貴重な資料である。特に「六波羅密図」は初めて見た図で興味深い。済州島の寺院については従来韓国内で刊行された書籍でもあまり触れられていないようであるが、今回山房窟寺以下、11箇寺を調査した。その中で特に月井寺の大雄殿には慧能譚や元暁、義湘の説話がそれぞれ絵画化されていたのが興味深かった。本研究費に基づく調査と研究成果は別紙のとおり公表したが、従来韓国では手薄であった仏教説話画の本格的な研究にいささか寄与しえたのではないかと自負している(林)。また日向は全羅南道の実相寺、仙巌寺、大興寺、華厳寺、また慶尚南道の仏国寺、通度寺、表忠寺などにおいて浄土教的寺院構造の特徴を調査した。これは無量寿経や観無量寿仏経疏などの浄土教経典に描かれる浄土と現世との関係構造が寺院建築にどのように構造化されているかという調査である。日本における浄土庭園や浄土宗、浄土真宗の寺院建築の構造と比較し、浄土往生の比喩説である「二河白道」説の流布状況を推定するためである。日本においても韓国においても「二河白道」説に淵源する独自な浄土教的文化の成立と展開が見られる点について、論文として発表した(日向)。文学関係では小林が、唐津の茶山草堂、王仁博士廟、ポギル島の尹善道の流謫地、光州市の崔致遠廟である芝山影堂、配流の宰相鄭徹の故地である潭陽の松江亭、息影亭など、また済州島の表善民俗村ではこれまた流罪となった光海君の囲離御所を訪ねた。前年度までの各地の文学、伝説関連の史跡や遺跡の調査、扶余、新羅の旧都調査と併せて、朝鮮古典文学の風土を実地に観察できた意味は大きい。その文学の独特の政治性、隠逸の文人の系譜、貴種流離譚など、日本の古典文学との類縁性と異質性を考える手掛かりができたと思う。(小林・勝原)崔は日韓文化における宗教の役割を比較研究することに重点を置いた調査を行なってきた。シャーマニズムの調査としては全羅南道のタンゴルの実状について引き続きインタビュー調査を行なう一方、今日の韓国におけるキリスト教の伝道、布教活動について各地の実態調査をした。都市化によって伝統宗教であるシャーマニズムは表面的には弱化していくが、実は山奥に聖所を求めて半ば隠れながら、存続していることを本調査を通じて各地で確認した。またキリスト教が巫俗を迷信として否定しながら、布教活動の中に巫俗を取り入れていることも分かってきた。これらについては既に雑誌等に発表してきたし、また発表予定である(崔)。

その「龍華浄土の図(全13図)」(仮称)は近年の石刻図であるが、その第12図「娑婆苦悩相」の図柄は、いわゆる「五趣生死輪」であり、早く『高麗大蔵経』中の「大方広仏華厳経巻第三十七変相」と題する図と一致する。これらは元暁、義湘に代表される朝鮮仏教界の華厳思想の展開を考える上で貴重な資料であり、また庶民を対象とした仏教説話画の果たしてきた役割を考える上でも貴重である。この他釜山市の梵魚寺捌相殿内の「釈加八相図」にはすべての場面に解説文が付けられていて、かつて絵解きがなされたことが推定されるものである。全羅南道の松広寺では地蔵殿の外壁に「仏説大報父母恩重経図(全10図)」が描かれ、大雄殿外壁には「六波羅密図(全6図)」が描かれるが、これらは韓国仏教の性格や多様性を考える上で貴重な資料である。特に「六波羅密図」は初めて見た図で興味深い。済州島の寺院については従来韓国内で刊行された書籍でもあまり触れられていないようであるが、今回山房窟寺以下、11箇寺を調査した。その中で特に月井寺の大雄殿には慧能譚や元暁、義湘の説話がそれぞれ絵画化されていたのが興味深かった。本研究費に基づく調査と研究成果は別紙のとおり公表したが、従来韓国では手薄であった仏教説話画の本格的な研究にいささか寄与しえたのではないかと自負している(林)。また日向は全羅南道の実相寺、仙巌寺、大興寺、華厳寺、また慶尚南道の仏国寺、通度寺、表忠寺などにおいて浄土教的寺院構造の特徴を調査した。これは無量寿経や観無量寿仏経疏などの浄土教経典に描かれる浄土と現世との関係構造が寺院建築にどのように構造化されているかという調査である。日本における浄土庭園や浄土宗、浄土真宗の寺院建築の構造と比較し、浄土往生の比喩説である「二河白道」説の流布状況を推定するためである。日本においても韓国においても「二河白道」説に淵源する独自な浄土教的文化の成立と展開が見られる点について、論文として発表した(日向)。文学関係では小林が、唐津の茶山草堂、王仁博士廟、ポギル島の尹善道の流謫地、光州市の崔致遠廟である芝山影堂、配流の宰相鄭徹の故地である潭陽の松江亭、息影亭など、また済州島の表善民俗村ではこれまた流罪となった光海君の囲離御所を訪ねた。前年度までの各地の文学、伝説関連の史跡や遺跡の調査、扶余、新羅の旧都調査と併せて、朝鮮古典文学の風土を実地に観察できた意味は大きい。その文学の独特の政治性、隠逸の文人の系譜、貴種流離譚など、日本の古典文学との類縁性と異質性を考える手掛かりができたと思う。(小林・勝原)崔は日韓文化における宗教の役割を比較研究することに重点を置いた調査を行なってきた。シャーマニズムの調査としては全羅南道のタンゴルの実状について引き続きインタビュー調査を行なう一方、今日の韓国におけるキリスト教の伝道、布教活動について各地の実態調査をした。都市化によって伝統宗教であるシャーマニズムは表面的には弱化していくが、実は山奥に聖所を求めて半ば隠れながら、存続していることを本調査を通じて各地で確認した。またキリスト教が巫俗を迷信として否定しながら、布教活動の中に巫俗を取り入れていることも分かってきた。これらについては既に雑誌等に発表してきたし、また発表予定である(崔)。平成3年度の調査範囲はソウルを中心とする韓国北部の京畿道・江原道である。儒教文化・祭祀に関しては、東九陵・西五陵をはじめとする主要な王陵、宗廟、江陵や春川、楊州の郷校などの調査と資料収集を行なった(日向担当)。王陵と一般の墓地との構造的な類似、宗廟の祭祀、郷校の建築様式やそれが現在もなお地域社会に一定の役割を果たしていることなど明確にできた点は数多く、韓国の儒教的文化を理解する上で成果があった。仏教関係の説話伝承・絵画に関しては、林の担当であるが、これまでの寺院調査に今年度の分を加えると、80カ寺以上の調査を行なったことになる。主に日韓寺院の儀礼・作法、あるいは「仏伝図」「十王図」「十牛図」を中心とする仏画について調査してきて、日本との共通点と相違点が明確になってきたのは、大きな成果である。
骨髄形質細胞シングルセル解析によるPOEMS症候群の分子病態の解明

POEMS症候群はplasma cell dyscrasiaを基盤として高VEGF血症とMタンパク血症を伴い,多発神経炎を始めとする多彩な全身症状を呈する予後不良な疾患であるが,その発症機構は依然不明である。本症候群のMタンパクはほぼ全例でλ型であり,わずか2種類のgermlineに由来するという極めてユニークな特徴を有する。そこで本研究では骨髄形質細胞に着目し,本症候群患者の形質細胞の網羅的遺伝子解析と遺伝子発現解析に加え,単一細胞レベルで遺伝子変異解析とRNA発現解析を行うことにより,モノクローナル形質細胞の病的特性を明らかにする。また,病的形質細胞クローンの免疫グロブリン遺伝子構造解析をもとに,in vitroにて患者特異的モノクローナル抗体を精製し,VEGF産生機構における役割を明らかにする。さらに,これらモノクローナル抗体が結合する抗原を新たに同定・解析することにより,POEMS症候群の発症機構を解明することを目的とする。これらにより治癒を目指した新たな治療戦略の確立のための基盤形成を目指す。本研究ではPOEMS症候群におけるクローナル形質細胞の同定および遺伝子発現パターンの解析を行うために、POEMS症候群患者から採取した骨髄より、FACSを用いてCD138陽性形質細胞を純化した上で、Fludigm C1 Single Cell Auto Prep Systemを用いて最大96個のシングルセルRNAライブラリーを作成し、これを次世代シークエンサーを用いて解析した。シークエンス結果のレパトア解析によりクローナル形質細胞を同定し、さらにクローナル形質細胞に特徴的な遺伝子発現パターンの解析を行った。現在までに、POEMS症候群9例(IgA-λ:6例、IgG-λ:2例、Mタンパク陰性:1例)、MGUS 2例、多発性骨髄腫2例、正常コントロール2例のシングル形質細胞RNAシークエンスを行った。クローナル形質細胞の同定にあたっては、免疫グロブリン構成遺伝子のV-D-J(V-J)のgermlineが同一、V-J間にランダムに挿入される塩基で特異的な抗原認識に重要な役割を担うCDR3領域の配列が同一、かつ免疫グロブリンのクラスが同一なものをクローナル形質細胞と定義した。クローン比率は、MMが90%以上、MGUSが70-80%程度といずれも非常に高い割合を認めたのに対し、POEMS症候群では、5/9例のみでしかクローンが同定できず、さらにクローンが同定できた症例に関しても、そのクローン比率は7-33%と低値であった。すなわち先行研究で得られた仮説の通り、POEMS症候群では骨髄形質細胞に占めるクローナル形質細胞の割合が他の形質細胞腫瘍と比較して明らかに少ないことが初めて証明された。また、本研究は世界で初めてPOEMS症候群のクローナル形質細胞を特定した研究となった。さらに興味深いことに、POEMS症候群5例のクローナル形質細胞のレパトア解析では、IGLV1-44 : IGLJ3 : IGLC2 3例、IGLV1-36 : IGLJ3 : IGLC2 1例、IGLV1-47 : IGLJ3 : IGLC21例といずれも非常に類似したgermlineを有していた。POEMS症候群では血中のVEGF高値が広く認知されているが、VEGF産生細胞は未だ明らかとなっていない。本研究ではまずクローナル形質細胞がVEGF産生に寄与している可能性を疑い解析を行ったが、クローナル形質細胞のVEGF mRNAレベルは非クローンもしくは他の形質細胞疾患と比較して有意な差は認められなかった。この結果から形質細胞以外の細胞がVEGF産生を行っていることが示唆された。2レパトア解析:L鎖免疫グロブリンのアミノ酸配列の解析を行うことで、POEMSクローンにおけるアミノ酸配列の相同性を検討する。3クローナル形質細胞の網羅的遺伝子発現解析:POEMS症候群のクローナル形質細胞の遺伝子発現パターンを、正常コントロールもしくは他の形質細胞腫瘍と比較し、POEMS症候群クローン特異的な遺伝子発現パターンが認められるかどうか検討する。特に治療標的となりうる発現変化や、新規マーカーとなりうる特異的表面抗原の同定を目指す。4クローナル形質細胞の遺伝子変異解析:発現量の多い遺伝子に関しては、RNAシークエンス結果から遺伝子変異解析を行うことが可能となっている。永尾Drの先行研究でPOEMS症候群に特異的な遺伝子変異が認められていることから、同様の遺伝子変異が認められるかどうかについて検討する。

本研究ではPOEMS症候群におけるクローナル形質細胞の同定および遺伝子発現パターンの解析を行うために、POEMS症候群患者から採取した骨髄より、FACSを用いてCD138陽性形質細胞を純化した上で、Fludigm C1 Single Cell Auto Prep Systemを用いて最大96個のシングルセルRNAライブラリーを作成し、これを次世代シークエンサーを用いて解析した。シークエンス結果のレパトア解析によりクローナル形質細胞を同定し、さらにクローナル形質細胞に特徴的な遺伝子発現パターンの解析を行った。現在までに、POEMS症候群9例(IgA-λ:6例、IgG-λ:2例、Mタンパク陰性:1例)、MGUS 2例、多発性骨髄腫2例、正常コントロール2例のシングル形質細胞RNAシークエンスを行った。クローナル形質細胞の同定にあたっては、免疫グロブリン構成遺伝子のV-D-J(V-J)のgermlineが同一、V-J間にランダムに挿入される塩基で特異的な抗原認識に重要な役割を担うCDR3領域の配列が同一、かつ免疫グロブリンのクラスが同一なものをクローナル形質細胞と定義した。クローン比率は、MMが90%以上、MGUSが70-80%程度といずれも非常に高い割合を認めたのに対し、POEMS症候群では、5/9例のみでしかクローンが同定できず、さらにクローンが同定できた症例に関しても、そのクローン比率は7-33%と低値であった。すなわち先行研究で得られた仮説の通り、POEMS症候群では骨髄形質細胞に占めるクローナル形質細胞の割合が他の形質細胞腫瘍と比較して明らかに少ないことが初めて証明された。また、本研究は世界で初めてPOEMS症候群のクローナル形質細胞を特定した研究となった。さらに興味深いことに、POEMS症候群5例のクローナル形質細胞のレパトア解析では、IGLV1-44 : IGLJ3 : IGLC2 3例、IGLV1-36 : IGLJ3 : IGLC2 1例、IGLV1-47 : IGLJ3 : IGLC21例といずれも非常に類似したgermlineを有していた。POEMS症候群では血中のVEGF高値が広く認知されているが、VEGF産生細胞は未だ明らかとなっていない。本研究ではまずクローナル形質細胞がVEGF産生に寄与している可能性を疑い解析を行ったが、クローナル形質細胞のVEGF mRNAレベルは非クローンもしくは他の形質細胞疾患と比較して有意な差は認められなかった。この結果から形質細胞以外の細胞がVEGF産生を行っていることが示唆された。2レパトア解析:L鎖免疫グロブリンのアミノ酸配列の解析を行うことで、POEMSクローンにおけるアミノ酸配列の相同性を検討する。3クローナル形質細胞の網羅的遺伝子発現解析:POEMS症候群のクローナル形質細胞の遺伝子発現パターンを、正常コントロールもしくは他の形質細胞腫瘍と比較し、POEMS症候群クローン特異的な遺伝子発現パターンが認められるかどうか検討する。