hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
PHF形成における脳cdc2様NFHキナーゼ/cdk5の役割

アルツハイマー病患者の脳でみられるPHFは高度にリン酸化された微小管結合蛋白質タウから構成されていることが知られており、このリン酸化に関わるキナーゼとしてGSK3β(タウプロティンキナーゼI)、cdk5(タウプロティンキナーゼII)とMAPキナーゼが候補にあげられている。昨年度、我々はcdk5に対する特異的阻害剤を用いて、ブタ脳抽出液中ではcdk5が最も主要なタウキナーゼであることを報告した。今年度は、タウのcdk5によるリン酸化の微小管による促進機構について検討した。神経細胞内ではタウの殆どは微小管に結合していると考えられ、微小管存在下でのタウのリン酸化がより生理的な条件を反映していると考えれる。タウのcdk5によるリン酸化はチューブリン濃度に依存して促進された。この促進は微小管と結合しないペプチドをリン酸化の基質としたときにはみられないことから、リン酸化の促進は微小管によるcdk5の活性化ではなく、タウが微小管に結合したことによる構造変化を反映していると考えられた。リン酸化の促進に部位特異性があるかを、二次元フォスフォペプチドマップにより検討した。微小管を加えると一つのスポットのリン酸化シグナルが亢進しているのが観察された。この部位を、cdk5のリン酸化部位のリン酸化型を認識する抗体を用いて調べたところ、Ser202とThr205が微小管存在下で選択的にリン酸化が増加しているのが観察された。この部位のリン酸化がPHF形成にどのように関係しているかを今後調べていく予定である。
子どもの論理・数学的認識の獲得における自己組織化のメカニズムに関する実証的研究

1認知発達における自己組織化は、当初考えていたより、その過程がはるかに頑強(robust)であり、もっと内在的であることが分かった。このことは、自己組織化が自律的なメカニズムに従っていることを示唆している。2認知システムを認知的撹乱に対する補償システムとして捉え,矛盾は肯定(認知的撹乱のポジティブな側面)と否定(認知的撹乱のネガティブな側面)との不完全な補償に由来するとする、ピアジェ(Piaget 1974)の矛盾の捉え方は極めて有効であることが分かった。しかし、認知システムにとって何が肯定であり、何が否定であるかはあらかじめ決められないことも示された。3被験者にとっての肯定と否定とを実験手続きによって反転させることによって、被験者は均衡化への手がかりが与えられ、認知発達における自己組織化を促進できる可能性が示唆された。4認知発達の自己組織化における矛盾の役割は限定的であった。そもそも被験者自身が自分の推論や考え方に矛盾があることを意識化することがほとんどない。さらに、被験者を矛盾事態に直面させても矛盾の意識化は誤りの自覚に留まる。矛盾そのものはどこで誤ったかを教えるものではないため、直ちに理解することにつながらないのである。認知システムにおける矛盾は自己組織化のきっかけになることあってもそれ自体が自己組織化の促進要因にはなりえないことが示唆された。5本調査で、論理数学的認識の獲得において急速な自己組織化が見られたのは、自己組織化に必要な道具立てが被験者に既に備わっている場合であった。この場合、認知発達の自己組織化は当該の課題についてじっくり考えさせるという、内在的思考活動に訴えるだけで十分効果的であることが示された。しかし、自己組織化のための道具立てそのものがいかに獲得されるのかについては未解明である。この点についてはこれからの研究課題となろう。申請書の研究実施計画通り、初年度は数学的認識における自己組織化、特に、くじ引き課題を用いて割合観念の自己組織化について実験的調査を行った。ただ、当初は小中学生を通して行う計画であったが、自生的な自己組織化的変容が顕著にみられると予想される時期に的を絞って調査を実施した。即ち、小学生低中学年を被験児として、昨年11,12月には通常式くじ引き課題(二つのくじ袋で当たる確率の大小を比較させる課題)を実施し、この課題に関する理解水準を調べ、今年1,2月には同じ被験児について変数式くじ引き課題(一方のくじ袋の当たりの数あるいははずれの数を連続的に変化させていくくじ引き課題)および確率等化くじ引き課題(二つのくじ袋で当たる確率を同じにするため必要な当たりやはずれのくじ数を決めさせる課題)を実施し、次のような知見を得ることができた。1通常式くじ引き課題では発達の筋道が一様ではなく、筋道にいくつかのタイプがあることが明らかになった。2変数式くじ引き課題では変数の変化にも関わらず一定の反応をする者から変化の系列ごとに異なる反応を示す者まで、認知システムの安定性に大きな幅があることが明らかになった。3変数式くじ引き課題あるいは確率等化くじ引き課題に対する反応は、通常式くじ引き課題に対する反応に必ずしも対応しておらず、極端な場合は、当たりとはずれの数で言えば全く同じ組み合わせを持つくじ引き課題であっても、三つの課題(通常式、変数式、確率等化)でそれぞれ異なる判断を示した者さえ見いだされた。4調査の途中で生ずるような突然の自己組織化的反応がほとんど見られなかったことは、自己組織化が行動として表出されることは希であり、むしろ認知システムにおける流動性の変容として捉えられるべきことが示唆された。

科研費交付申請書の研究実施計画に従って、2年度は主として論理的認識の獲得における自己組織化の役割について実験的調査を行った。具体的には、大学生を被験者として条件型命題論理の獲得における自己組織化を、小学生を被験児として選言型論理の獲得における自己組織化について実験的調査を行った。さらに、初年度の数学的認識の獲得における自己組織化の研究の補足として、くじ引き課題を用いた割合観念の教授学習の可能性について小学生を被験児として発達的調査を行った。以上の実証的研究から、次のような知見を得ることができた。1課題に対する反応レベルではほとんど同じ反応をし、同じ発達水準にある者として位置づけられる被験者同士であっても、実験者の側での示唆や反対教示に対する反応が大きく違うことがあることが分かった。即ち、被験者が課題解決において困難に遭遇したとき、実験者のちょっとしたヒントによってたちまちその困難を乗り越えて高次の反応レベルに移行する者から課題解決のための手がかりを繰り返し与えても困難を解決できずに同じ反応レベルに低迷しつづける者までいた。このことは、認知システムのダイナミズムを明らかにするためには、認知システムの自己組織化における準備状態をも解明しなければならないことを示唆しているように思われる。2認知システムの安定性には大きな幅があり、均衡状態にある認知システムに撹乱を与えた時、小さな撹乱要因に対してすぐに動揺を示して不均衡状態に陥る者から大きな撹乱要因に対しても均衡状態を維持し得る者までさまざまであることは既に昨年度の研究から明らかにされていたが、当初不安定であった認知システムも撹乱に対する動揺を繰り返すことによって、次第に安定性を増し、システムの自己組織化はその内部で静かに進行している可能性があることが今年度の研究によって明らかにされた。今年度科研費交付申請書の研究実施計画に従って、自己組織化を誘発すると予測されるような問題場面を意図的に設定して調査を行った.具体的には、幼稚園年長児・小学生を被験者として『加減の同時性と差異の意識化』における自己組織化、小学生を被験児としてThog課題と呼ばれる仮説演繹的推論課題における自己組織化について実験的調査を行った。1『加減の同時性と差異の意識化』においては、同数集合間で要素を移動させた場合、両集合間の要素数の差異を予測させた。ほとんどの被験者は最初差異として移動要素数を予測した。実際に移動を実行し差異を確認させると最初の予測と違っていたことを認めるものの、次の試行になると再び同じ誤りを操り返すことが多かった。このことは認知システムの出す回答が現実と一致しないことを確認するだけでは、そこに何か不可思議なことが生じている、としか捉えることが出来ず、それだけではシステムの自己組織化を促すには十分ではないことを示している。2 Thog課題では、手がかりとなる情報から仮説を立て、いずれの仮説の元でも同じ帰結をうる事から一定の結論を導くという仮説演繹的推論が求められる。この課題を仮説演繹的推論課題としてそのまま与えるとほとんどの者は誤った推論をするにもかかわらず、この課題の仮説演繹的推論過程を複数の過程に分解し、各過程を一つの課題として順次提出していくといずれの課題についても難なく解答できる者が多かった。
生物体硬組織をつくるメソスコピック構造の機能的意義

生物硬組織の内部構造のうち機能的に意味があるのはミリメートルないし数十ミクロンオーダーのメソスコピック構造であるが、メソスコピックレベルの構造は従来注目されていなかった。この研究ではまず機能的視点にたった記載から始めた。さまざまなメソスコピック構造のうちから、二枚貝その他の動物殻の軽量構造、同じく固着のための構造、二枚貝と光合成藻の共生に関連する貝殻の光透過構造、哺乳類歯牙のエナメル質の層構造などを選び、それらメソスコピック構造をつくる超微構造のタイプとその組合せを記載し、メソスコピック構造の形成過程を調べ、機能形態的な意味を考察することを目的とした。泥底に棲むカキ類の殻を軽量化しているメソスコピック構造についてその形態を記載し、機能的意義について総括した。カキの殻内部にみられる空隙の多い構造は種類ごとに形態が違う。マガキ類のboxwork構造、カキツバタ類のhoneycomb構造はきわめて比重が小さく、カキが泥に浮いて生活するための基本的構造となっている。カキの固着部には、構造単位が細かく、緻密に石灰化がおこり固着に役立つridige-and-furrow構造が現れる。同じ固着性二枚貝でもナミマガシワでは足糸が石灰化して固着する。石灰化した足糸には小孔があって、そこから接着剤の役をする有機物が足糸と基盤の間に供給されて固着が起こることがわかった。コウイカの細管連結構造、トグロコウイカの甲殻の構造の微細構造を起載しその形成と機能について論じた。ザルガイ類の殻にみられる光透過構造を記載した。マルスダレガイ科の6種で殻表面に微細な石灰質の針状結晶がみられることが発見され、これが殻皮によって分泌されたもので、これらの二枚貝類が堆積物中に潜没し、その姿勢を安定に保つのに役立っていることがわかった。化石長鼻類Parastegodonの歯のエナメル質は著しく薄く、明瞭な2層構造をなし、またそのエナメルプリズムは他の種に比べ横長であることがわかった。その機能的意義について検討中である。主として(1)この研究に必要な走査電顕を購入し,その設置・調整を行なった。(2)計画にそって観察を開始した。成果の概要は以下の通り。1)カキ類の殻にみられる軽量構造の記載。カキ類の殻で空隙をつくり殻を軽くしている構造には,空洞,樹状,カ-ドハウス,ハニカム,の4タイプがあることがわかった。この順に構造が組織化され,予知可能な構造となっている。後2者は樹状構造に分類される方解石結晶を基盤として成長していることもわかった。2)カキ類の固着部分の殻には,従来二枚貝の構造タイプとして報告されたことのない構造が発見された。これは,約5μmの間隔で畝状になった方解石とその間の溝を埋める有機物からなるもので,ridgeーandーfurrow構造とよぶことにした。この構造は,固着部に特有で基盤から離れると直ちに通常カキの殻表面にみられる稜柱構造に移化する。生体が破壊された殻を修復する実験の結果からみると,この構造は,外套膜先端部が,分泌した殻物質を固着基盤に押しつける行動をとるときのみに形成されるので,このような押しつけによって形成される構造と判断される。しかし,他の固着性二枚貝ではまだこの構造は見出されていない。

3)ザルガイ類の中には藻類と共生しているものがいる。この類のうちアオイガイ類では,殻の一部に窓のような透明に近い光を通す部分がある。殻のなかで光を通しにくい部分は普通にみられる交差板状構造をなしているのに対し,“窓"の部分は稜柱構造に近い未知の結晶配列をしていることがわかった。しかし,共生藻類をもちながら,オオヒシガイやカワラガイにはこのような“窓"の構造はみられない。ザルガイ類の光透過構造は,必ずしも共生藻類の存在に対応した構造ではないことがわかった。1.カキの穀に見られるチョ-ク層の部分について,日本に多産する種類を用い,種による構造・形態の違い,出現部位の違いを調べた。その結果,種による差異はごくわずかで,むしろ出現部位とチョ-ク層の厚さによって,その構造に違いが現われるらしいことがわかった。すなわち貝穀の内部構造が,遺伝的あるいは生化学的要因でなく,出現場所による物理的条件の違いに支配されている可能性が大きいと思われる。2.カキツバタ類の穀の空室にみられるハニカム構造について観察し以下のことがわかった。(1)ハニカム天井部(最後の形成)はメノウなど無機的沈殿物が岩石中の空洞に同心状に沈殿してつくるのと同じような同心状形態を示し,結晶配列は求心状で,動物の分泌細胞から直接に分泌したものでないことを示唆している。(2)壁の微細構造は長さ12um,太さ0.2umほどの桿状ないし紐状の結晶の集合からなる。(3)小空洞中には針状の結晶が多くみられる。この針状結晶は,マガキ類の空室に生ずるものと結晶型が同じで,これも種類によらず無機的要因で結晶成長が起こっている。3.二枚貝類の固着には,カキのように穀物質を用いてセメントするものと,イガイのように足糸を分泌してそれで固定する種類とがいる。ナミマガシワ類は,足糸で固定するグル-プに含められてきたが,その固着メカニズムの詳細は不明であった。ナミマガシワでは,足糸に相当する部分が石灰化し,台状の構造物をつくる。この台の下部は方解石で上部はアラレ石からなり,台の上端で筋に接続している。今年の研究で台には多数の穴があいていて,その中には表皮細装胞の突起が入っていることもわかった。このような台がどのようにして基盤に固着するか,接着剤はなにか,が今後の課題となる。カキの殻をつくる軽量構造の形態形成機構と機能について総括した。形態形成機構:チョーク層やハニカムなどの軽量構造は、いずれも殻の内部の空隙を埋めていて、殻を分渉する表皮細胞から隔離した環境で晶出した。しかし、この構造形態は種ごとに独特で著しい秩序性がみられる。軽量構造のうち、ハニカムや樹状で、成長線らしいものがみられるタイプは、生物体が分泌する薄膜あるいは糸状の物質(有機物)を鋳型として、その表面に炭酸塩の結晶成長が起こったものであろう。ハニカム構造は、有機薄膜からなる泡が、その側面で石灰化を起しながら成長していくと考えると理解できる。これを連続バブルモデルとよぶ。軽量構造の機能的意義:この構造は、(1)軟らかい泥の干潟上に浮いて生活するための殻の軽量化、(2)軽く経済的な詰め物として、殻内部に沈積して内部を整形し、成長速度を調節し、環境に応じて外部形態を変化させる。(3)厚い殻で軟体部を包み、穿孔性の捕食者、寄生者の害を防ぎ殻の強化に役立つ、など多様な機能をもつ。
AMP活性化キナーゼによるTリンパ球のアポトーシスの回避・始動の制御機構

Tリンパ球の炎症刺激下でのクローンの拡大とアポトーシスによる縮小の制御は炎症の経過に極めて重要である.従って,アポトーシスがストレスに対応して始動されるか,回避されるかが重要な鍵となる.なかでも様々なストレスによる生体のエネルギー擾乱に対応するAMP活性化キナーゼ(AMPK)はその制御の鍵を担っている.AMPKは触媒ユニットであるα,と調節ユニットであるβ,γの3つのsubunitによる三量体で,各subunitは2-3種のisoformを有している.本研究ではマウス組織に特徴的はその構成を明らかにした.飢餓ストレスは胸腺細胞,筋細胞でいずれもその主isoformのmRNAとタンパクの発現、up-regulationされ,特にリン酸化AMPK・の上昇が認められた.胸腺細胞ではこれらの発現上昇は飢餓に伴うグルコルチコイド血症と低血糖による制御が示唆された.AMPKを活性化するaminoimidazolecarboxamide-riboside(AICAR)の前処理で培養胸腺のアポトーシスがBcl-2ファミリータンパクの制御により回避された.しかも,PKCの活性化を伴うとアポトーシスの回避の増強が観察された.さらに,授乳期から成獣期への咬筋の発達にともないその組成が変化することから筋線維の型変化とも関わっていることが示唆された.ストレス対応にはユビキチン・プロテアソーム系が関わり,その抑制はアポトーシスの抑制,あるいはPKCとの協調で促進することもあり,しかもAMPKの活性化でFASリガンドの発現が抑制されリンパ球のactivation-induced cell deathもまた抑制されつことが明らかなり,ストレスによるアポトーシスの回避と始動にAMPKが重要な機能をもっていると考えられた.Tリンパ球の炎症刺激下でのクローンの拡大とアポトーシスによる縮小の制御は炎症の経過に極めて重要である.従って,アポトーシスがストレスに対応して始動されるか,回避されるかが重要な鍵となる.なかでも様々なストレスによる生体のエネルギー擾乱に対応するAMP活性化キナーゼ(AMPK)はその制御の鍵を担っている.AMPKは触媒ユニットであるα,と調節ユニットであるβ,γの3つのsubunitによる三量体で,各subunitは2-3種のisoformを有している.本研究ではマウス組織に特徴的はその構成を明らかにした.飢餓ストレスは胸腺細胞,筋細胞でいずれもその主isoformのmRNAとタンパクの発現、up-regulationされ,特にリン酸化AMPK・の上昇が認められた.胸腺細胞ではこれらの発現上昇は飢餓に伴うグルコルチコイド血症と低血糖による制御が示唆された.AMPKを活性化するaminoimidazolecarboxamide-riboside(AICAR)の前処理で培養胸腺のアポトーシスがBcl-2ファミリータンパクの制御により回避された.しかも,PKCの活性化を伴うとアポトーシスの回避の増強が観察された.さらに,授乳期から成獣期への咬筋の発達にともないその組成が変化することから筋線維の型変化とも関わっていることが示唆された.ストレス対応にはユビキチン・プロテアソーム系が関わり,その抑制はアポトーシスの抑制,あるいはPKCとの協調で促進することもあり,しかもAMPKの活性化でFASリガンドの発現が抑制されリンパ球のactivation-induced cell deathもまた抑制されつことが明らかなり,ストレスによるアポトーシスの回避と始動にAMPKが重要な機能をもっていると考えられた.マウス胸腺細胞はデキサメサゾンやエトポシドでアポトーシスが誘発される。ストレス応答酵素であるAMPにより活性化されるキナーゼ、AMPKをaminoimidazole-carboxamide-riboside(AICAR)の前処理で活性化すると、デキサメサゾンで誘発されるアポトーシスはほぼ完全に、トポイソメラーゼ阻害剤であるエトポシドで誘発されるアポトーシスは約50%の抑制がみられた。エトポシドによるアポトーシスはprotein kinase C(PKC)を活性化するTPAの同時処理によりほぼ完全にまで抑制された。すなわちAMPKの活性化がアポトーシスの起動を抑制したか、細胞生存系を賦活化したと考えられる。細胞生存を賦活化するERKの活性化とTPAによるその持続が観察されたが、MEK/ERK経路の阻害剤の存在下でもアポトーシスの回避が観察され、ERK系による生存回路の賦活化は関与していないと考えられた。アポトーシスの進行をミトコンドリアレベルで抑制するBcl-2ファミリーであるBcl-XLの発現がアポトーシスの進行に伴い減少し、逆にアポトーシスを促進するBaxの発現は増強する。AMPKの活性化はこのBcl-XLの発現低下を抑制し、Baxの発現増強を抑制する。今後AMPKによるこれらの転写制御機構の解明が必要であろう。AMPKはα、β、γのサブユニットからなりそれぞれにまた2-3個のイソフォームがあり、それらのmRNAの発現をリアルタイムPCRで測定する方法を確立した。臓器によりその発現が特徴的であり、それらの量比が細胞の機能を特徴をづける可能性が示唆された。また、AMPKそのものにホモロジーをもつ酵素の存在も明らかになり、アポトーシスの回避と始動に関わっていることも考えられ、その解析の必要性も示唆されるにいたった。AMPKは、生体のエネルギー代謝に重要な調節作用を持つエネルギー枯渇に対応する酵素である.AMPKはcatalytic subunitであるα,とregulatory subunitであるβ,γの3つのsubunitによるheterotrimerから構成されている.

また,各subunitは2-3種のisoformを有し,それらの発現が臓器により異なっていることから,機能との関わりが強く示唆される.胸腺の萎縮は,飢餓による最も特徴的な所見の一つであり,、アポトーシが関与している.事実,飢餓条件での,マウス胸腺細胞数は12時間で,約60%,24時間で約80%と著名に減少した.胸腺細胞ではα2,β1,γ1が主要なsubunitとして発現している.飢餓条件下ではα2,β1,γ1 mRNAとタンパクの発現が時間依存的にup-regulationされ,特にリン酸化AMPKαの上昇が認められた.これらの発現上昇は飢餓に伴うグルコルチコイドによる誘導である.一方デキサメサゾンやエトポシドでアポトーシスが誘発される胸腺細胞アポトーシス,AMPKを活性化するaminoimidazole-carboxamide-riboside (AICAR)の前処理で抑制がみられた.すなわち,AMPKの活性化がアポトーシスの起動を抑制したか,細胞生存系を賦活化したと考えられる。しかし,細胞生存を賦活化するERKの活性化とTPAによるその持続が観察されたが,MEK/ERK経路の阻害剤の存在下でもアポトーシスの回避が観察され,ERK系による生存回路の賦活化は関与していないと考えられた.AICARの細胞内移行の抑制やリン酸化の阻害しても,アポトーシスの回避機構が観察されたこと,またアデノシンもその脱アミノ酵素の阻害剤の存在下ではAICARと同じようなアポトーシスの抑制作用が観察された.しかも,この阻害にはcAMPの関与は否定的であり,従来のAICARによる直接的なAMPK活性化との異なった作用の関与が示唆されるにいたっている.1)AMPKのイソ酵素の発現とアポトーシス制御機構マウス胸腺細胞AMPKは他の臓器とはことなり活性サブユニットα2,と制御サブユニットβ1,γ1の三量体から構成されている.飢餓ストレスにより胸腺細胞のアポトーシスによる著明な萎縮が起きる。AMPK各サブユニットmRNA,タンパクは時間依存性に発現が上昇した,この発現は低血糖によるものではなくグルココルチコイドによるものであった.各サブユニットの遺伝子上流にグルココルチコイド反応性領域が2-3箇所あり,ルチフェラーゼ反応によって発現誘導が確認された.一方,低血糖によりAMPKαのリン酸化による活性化が喚起された(投稿中)。また、飢餓による咬筋の萎縮は老人の嚥下障害の一因にもなるが、その際にもAMPK発現が増強された.また咬筋では,誕生から成獣になる過程で,筋線維のタイプ変化に伴いその発現がことなり,筋線維の変化にも関わっていることが示唆され,その機能の多様性が明らかにされた(投稿中).2)AMP活性化キナーゼ(AMPK)の活性化機構と細胞生存系シグナルの解析(木崎,太田)AMPKのAMPK活性化はBaxのmRNAとタンパクの発現抑制とBcl-xLのmRNAとタンパクの発現を誘導し、多様な刺激によるアポトーシスを抑制した(78回日本生化学会)。
超臨界流体からの有機磁性体の結晶成長

有機磁性体を構成する成分の溶解度測定を,極性の異なる三種類の超臨界流体(二酸化炭素,亜酸化窒素,トリフロロメタン)中で,温度範囲293.2K328.2K,最高圧力20MPaで測定を行った。いずれの流体においても,臨界圧力近傍で溶解度の増大が観測された。有機金属化合物の溶解度は低かったが,テトラシアノエチレン(TCNE)についてはある程度の溶解度を示した。ただ,流体による各成分の溶解度の差はそれほど大きくはなかったので,一番安価な二酸化炭素を流体として使用するのが適当であると判断した。しかしながら,有機金属化合物の溶解度があまりにも低いので,当初予定していた有機磁性体についての検討が不可能となった。そこで,有機磁性体の今後のモデル化合物として有望であるTCNEを一成分し,金属を含まない電子供与体との電荷移動錯体の結晶化を308.2K328.2Kの温度,最高圧力20MPaの条件下で,流体の流出速度を変化させて試みた。その結果,次のような結果が得られた;結晶化の温度は,流体の密度変化が大きくなる臨界温度(304.2K)近傍の温度(308.2K)を選択するのが良い;圧力は各成分が完全溶解すれば,高圧力にする必要はない;各成分の仕込み比を2倍程度変化させても,1:1の結晶生成が可能(過剰成分は単独で結晶化する);臨界圧力近傍で流出速度を非常に小さくすることにより,15mm程度の針状結晶がヘキサメチルベンゼンとTCNE系では得られるが,流出速度が速すぎると,針状結晶ではなく粉末状に近い結晶となる。超臨界流体中での結晶成長を行わせるためには,超臨界流体中への固体物質の溶解度がある程度なければならない。そのため,有機磁性体の候補に挙げている各物質について,現有の高圧光学セルを用いた溶解度測定を行った。非極性流体である二酸化炭素中のテトラシアノエチレン(TCNE)の溶解度は結晶成長を行わせるのに十分な量であった。しかし,いくつかの有機金属化合物について二酸化炭素中での溶解度を検討してみたが,溶解度は極めて微量であった。そのため,極性がわずかにある亜酸化窒素,極性の高いトリフロロメタン中での溶解度を測定中である。TCNEはこれら両流体中においても十分溶解した。また,新規購入のフィンガータイト高圧容器、デジタル圧力計及び現有設備である高圧液クロ用送液ポンプを組み込んだ結晶成長システムの構築を行った。システムの信頼性を検討するために,超臨界二酸化炭素中でのTCNEといくつかの電子供与体との組み合わせによる電荷移動錯体の結晶成長を行った。その結果,固体電子供与体とTCNEの場合には,短時間でうまく結晶成長できることが分かった。長さ10mm程度の針状結晶を与えるものもあった。また,仕込み組成比(1:11:2)を変化させても,その組成比が1:1である結晶を得ることができた。
肝特異的遺伝子発現における転写因子の解析:サイレンサー結合タンパクのクローニング

ヒト成人肝においてAFP遺伝子は抑制的な発現調節を受けていると考えられている。われわれはこれまでこの抑制的発現調節に厳密に関係している31-bpコア配列を含む110-bpサイレンサー領域をヒトAFP遺伝子の上流に同定した。成人正常肝やAFP低発現型の肝ガン細胞株にはこの配列に結合する転写調節因子が多く産生され、AFPの成人肝における抑制的発現調節に密接に関与していると考えられた。ヒト成人肝由来cDNAとファージλ-gt11を用いて発現ライブラリーを作成し、サウス-ウエスタン法によりこのサイレンサー領域に結合能を持つと思われる4種類のcDNAクローンを単離して、プラスミドべクターpGEM-7Zにサブクローンした。これらの部分塩基配列を決定し、得られた配列のホモロジー検索をGenBankDNAデータベースに対して行ったところ、そのうちの3種類(pSL-4(insert size:3.3kb),pSL-7(1.5kb),pSL-9(1.3kb))がヒトDNA-binding proteinB(dbpB)あるいはY box binding protein-1(YB-1)遺伝子と94-95%の相同性を有していた。さらにpSL-20(0.9kb)はヒトprolactin regulatoryelement-binding proteinと100%の相同性を示した。これらのタンパクの性質については詳しくはわかっておらず、AFPの転写調節機能についての解析が待たれる。これらについて検討を重ねているところである。本研究の目的は、ヒトα-フェトプロテイン(AFP)及びアルブミン遺伝子等の肝特異的発現機構の解析から、l)細胞の分化や発ガン機構に関わる遺伝子の発現制御機構の解析、2)肝特異的転写因子の発現制御機構の解析を行い、さらに3)遺伝子療法開発のために必要な肝特異的に発現するTargeting vectorの作成を行う事である。これまでに肝組織の分化と肝ガン発生の機序を探るため、AFP遺伝子の発現調節に関与する各種、肝特異的転写因子をクローニングし、その特性を調べた。これら因子は肝組織の分化を決定する上で重要なトランス活性化因子で、ヒトばかりでなくラット、マウスのAFP遺伝子の制御領域に結合し肝特異的遺伝子発現に関わっていることを報告した(第57回日本癌学会総会、於:横浜)。また、M干遺伝子発現の抑制に関与するサイレンサー因子とガン抑制遺伝子異常との関係を調べている。以上の結果を踏まえ、肝細胞ガンの遺伝子療法には正常細胞では発現せず肝ガン細胞でのみ特異的に強く発現するTargeting vectorを作成するため、多数のグループと共同研究を行ってきた。これまで報告してきたように、従来のadenovirus vectorを用いたTargeting vectorを改良し、AFP遺伝子の制御領域で発現をコントロールされたsite-specific recombinase Creにより、発現量を大幅に改良することに成功した(Sato,et al.,1998)。ヒト成人肝由来cDNAとファージλ-gt11を用いて発現ライブラリーを作成し、サウス-ウェスタン法によりこのサイレンサー領域に結合能を持つと思われる4種類のcDNAクローンを単離して、プラスミドベクターpGEM-7Zにサブクローンした。これらの部分塩基配列を決定し、得られた配列のホモロジー検索をGenBank DNAデータベースに対して行ったところ、そのうちの3種類(pSL-4(insert size : 3.3kb),pSL-7(1.5kb),pSL-9(1.3kb))がヒトDNA-binding protein B (dbpB)あるいはY box binding protein-1(YB-1)遺伝子と9495%の相同性を有していた。
マイロナイトの組織・構造の発達様式と,細粒化の程度,変成度との関係に関する研究

本研究においては,日高変成帯・飛騨変成帯・日本国片麻岩分布域の花崗岩質はんれい岩質マイロナイトに発達する複合面構造の種類(S,C,C'面)と,マイロナイト化作用による細粒化の程度・組織との関係,そしてマイロナイト形成時の温度条件との関係について検討した.野外調査・顕微鏡下における観察と測定・EPMA分析の結果,以下の事柄が明らかとなった.地域によらず,マイロナイト中のポ-フィロクラストの量比(PCP)が10%未満になると,C'面は無く,S,C面が発達する.これは,動的再結晶作用により形成された細粒鉱物が岩石全体の変形作用を支配し,延性度が増加したためであろう.また,50%および30%のPCPを境にして,発達する複合面構造の種類は変化しないが,ポ-フィロクラストの伸長度・再結晶鉱物の粒径などが変化する.このことは,形成温度・構成鉱物種が同じであっても,細粒鉱物の増加によって,形成組織に変化が生じることを示している.また,原岩種が同じでPCPが10%以上のマイロナイトについてみると,800700°Cで形成されたマイロナイトにはS,C面のみが観察され,主要構成鉱物は全て延性的変形を示す.一方,600300°Cで形成されたマイロナイトにはS,C面と共にC'面が強く発達し,主要構成鉱物は必ずしも延性的変形を示さない.両マイロナイトに共通しかつ構成比の大きい鉱物である斜長石の変形についてみると,前者の高温型マイロナイトでは延性的であるが,校舎の低温型マイロナイトでは延性-脆性境界領域におけるものである.これらのことは,斜長石の変形特性がC'面の有無を支配し,有無の境界温度条件が約600°Cであることを示している.以上のことは,複合面構造の種類を識別し,主要構成鉱物の組織的特徴を比較・検討することが,マイロナイトの形成温度を大まかに見積もるための一つの指標となり得ることを示している.本研究においては,日高変成帯・飛騨変成帯・日本国片麻岩分布域の花崗岩質はんれい岩質マイロナイトに発達する複合面構造の種類(S,C,C'面)と,マイロナイト化作用による細粒化の程度・組織との関係,そしてマイロナイト形成時の温度条件との関係について検討した.野外調査・顕微鏡下における観察と測定・EPMA分析の結果,以下の事柄が明らかとなった.地域によらず,マイロナイト中のポ-フィロクラストの量比(PCP)が10%未満になると,C'面は無く,S,C面が発達する.これは,動的再結晶作用により形成された細粒鉱物が岩石全体の変形作用を支配し,延性度が増加したためであろう.また,50%および30%のPCPを境にして,発達する複合面構造の種類は変化しないが,ポ-フィロクラストの伸長度・再結晶鉱物の粒径などが変化する.このことは,形成温度・構成鉱物種が同じであっても,細粒鉱物の増加によって,形成組織に変化が生じることを示している.また,原岩種が同じでPCPが10%以上のマイロナイトについてみると,800700°Cで形成されたマイロナイトにはS,C面のみが観察され,主要構成鉱物は全て延性的変形を示す.一方,600300°Cで形成されたマイロナイトにはS,C面と共にC'面が強く発達し,主要構成鉱物は必ずしも延性的変形を示さない.両マイロナイトに共通しかつ構成比の大きい鉱物である斜長石の変形についてみると,前者の高温型マイロナイトでは延性的であるが,校舎の低温型マイロナイトでは延性-脆性境界領域におけるものである.これらのことは,斜長石の変形特性がC'面の有無を支配し,有無の境界温度条件が約600°Cであることを示している.以上のことは,複合面構造の種類を識別し,主要構成鉱物の組織的特徴を比較・検討することが,マイロナイトの形成温度を大まかに見積もるための一つの指標となり得ることを示している.
マイクロRNAサイレンシングの分子機構と定量的解析

本研究では、次の2項目の研究を実施した。(1)RNAサイレンシングエフェクター複合体に含まれる内在性microRNA(miRNA)が、細胞外からmiRNAを導入することによって交換するメカニズムについて、マイクロアレイを用いた解析を行った。(2)miRNAの標的mRNAに対する抑制効率が、2本鎖miRNAの塩基対合力によって決まることを明らかにし、数式を用いて定量化することに成功した。MicroRNA (miRNA)やsmallinterfering RNA (siRNA)などの小分子RNAは、1分子種で数百数千の遺伝子の発現を抑制しているが、その抑制の程度は小分子RNAの配列や構造の違い、あるいは標的mRNA側の要因によって多様に制御されている。そのため、小分子RNAは非常に複雑な遺伝子発現の調節をしている。そこで、本研究では、RNAサイレンシングの素過程における小分子RNAによる遺伝子抑制の分子機構を明らかにし、それに基づいて、遺伝子ネットワークの大きな変動をシステマティックに定量化することを目的とした。まず、我々はsiRNAによるオフターゲット効果はシード領域の塩基配列に依存し、その程度はシード領域の塩基対合の安定性に依存していることを報告していた。しかしながら、予備的解析からは、miRNAはsiRNAとは異なり、その抑制効率と、シード領域と標的mRNAの対合エネルギーとの相関は認められなかった。siRNAとmiRNAの大きな違いは2本鎖状態での形が完全に対合しているか、あるいは不完全に対合しているかであり、このような構造の違いによる1本鎖化への解離エネルギーの違いを考慮し、抑制効率との相関を定量的に解析した。また、本来のmiRNAの抑制効率を解析するためには、すでに細胞内でサイレンシングを起こしている内在性miRNAの影響を無視することはできない。そのため、内在性miRNAによるゲノムワイドな遺伝子発現制御機構についてもマイクロアレイを用いた解析を行った。MicroRNA (miRNA)やsmallinterfering RNA (siRNA)といった小分子RNAによる遺伝子サイレンシングは、幅広い生物種において共通に保存された遺伝子発現制御機構である。miRNAは約22塩基のバルジ構造をもつ2本鎖RNAであり、ガイドとなるRNA鎖の5'末端から2-8塩基(シード領域)と相補的な配列をもつmRNAを標的遺伝子として識別し、それらの翻訳を抑制する。しかし、個々のmiRNAによる抑制の程度は様々であり、どのような機構でこのような違いが生じるのかは明らかではない。これに対し、もともと完全に相補的な2本鎖RNAであるsiRNAは、ガイド鎖と全長にわたって相補的な配列をもつmRNAに対しRNA interference (RNAi)という抑制作用を示す。一方で、miRNAと同様に、siRNAのシード領域のみの塩基対合に依存したoff-target効果と呼ばれる抑制作用も示す。我々はsiRNAによるoff-target効果の程度はシードと標的mRNA間で形成される塩基対合の熱力学的安定性に依存していることを明らかにしている。miRNAによるサイレンシングの機構はsiRNAによるoff-target作用と類似していると考えられる。そこで、miRNAによるサイレンシング効率を定量化するためレポーターアッセイやマイクロアレイを用いた解析を行い、miRNAによるサイレンシング効率は、シードと標的間の熱力学的安定性だけに依存しているわけではなく、miRNAのunwindingに関わると考えられる領域の熱力学的安定性がサイレンシングの程度に大きな影響を与えることを明らかにした。miRNAやsiRNAなどの小分子RNAは、1分子種で数百数千の遺伝子の発現を抑制しているが、その抑制の程度は小分子RNAの配列や構造の違い、あるいは標的mRNA側の要因によって多様に制御されている。そのため、小分子RNAは非常に複雑な遺伝子発現の調節をしており、その全体像を把握することは難しい。本研究では、RNAサイレンシングの素過程における小分子RNAによる遺伝子抑制の分子機構を明らかにし、それに基づいて、遺伝子ネットワークの大きな変動をシステマティックに定量化することを目的としているが、その要となるsiRNAおよびmiRNAによる遺伝子サイレンシングの程度の解析方法の確立について、おおよその目処がついたため。本研究の最終的な目的である、遺伝子ネットワークの大きな変動のシステマティックな定量化のために、さらに、miRNAの一本鎖化の機構に関わる相互作用タンパク質の機能、miRISCに含まれる内在性miRNAの外来性miRNAによる交換機構、およびmiRNA標的配列の位置や構造の違いによる抑制作用の解析を詳細に行う。次年度は、研究計画に従って、特に試薬や消耗品費に研究費を重点的にあてることによって、研究のより一層の進展をめざす予定である。
科学的介護に向けた介護レセプトの計量経済分析: ビッグデータ分析とマッチング実証

皆保険制度開始から15年以上がすぎ、日本の介護保険は様々な問題を孕みながらも進展を広げてきた。本研究で班介護レセプトデータへの先進的なデータサイエンス手法の応用を通じ、エビデンスに基づく効果的な科学的介護を提案する。2018年度の研究内容としては、介護レセプトデータに対応する高次元回帰分析手法の開発と実際のデータ解析から、「どの介護サービスの組み合わせが効果的に健康状態を維持・改善するか」を明らかにすることであった。この分野において、1つの研究についてSSRNワーキングペーパーNo.3138435, Sugawara, Shinya. "What comprises effective formal elder care at home?Estimatingeffects for combinations of multiple services"として発表し、European Health Economic Associationで研究発表を行ったほか、英文雑誌に投稿中である。SSRNワーキングペーパーNo.3138435, Sugawara, Shinya. "What comprises effective formal elder care at home?Estimatingeffects for combinations of multiple services"となった研究は、左辺を要介護度、右辺に介護サービス投入・個人属性などの要素を説明変数として導入した回帰分析を行ったものである。非実験データにおける疑似相関を排除し、介護サービスの直接的な効果を分析することが目的であった。主な関心は「介護サービスの組み合わせ」の回帰係数である。J種類の介護サービスに対し、その組み合わせは2^J個あり、これをどう処理するかという高次元回帰分析となる。具体的には、実際に買われる頻度の高かった組み合わせのみを考えるアイテムセットマイニングによる次元圧縮を行った。具体的な発見としては、14サービス、16000以上の組み合わせの中から、主に利用されるものは200の組み合わせに過ぎないこと、そのなかでも医療系、特にリハビリ系サービスの効果が顕著であるが、こうしたサービスの立地には地域間格差があり、良いサービス組み合わせが誰にでもアクセスできるようにはなっていないことが問題であることが見いだされた。本科研申請の際に2018年度の中心課題としてあげていたものであり、順調な進展であるといえる。「どの介護サービスの組み合わせが効果的に健康状態を維持・改善するか」という課題について、引き続き介護レセプトデータを利用して、より詳細な研究を行う予定である。SSRNワーキングペーパーNo.3138435, Sugawara, Shinya. "What comprises effective formal elder care at home?Estimatingeffects for combinations of multiple services"に関しては、介護サービスの組み合わせを離散的にとらえているという限界があった。しかし、介護レセプトデータでは、連続変数である利用量も観測される。こうした連続情報をつかい、かつ高次元性を処理する手法として、2019年にはでは機械学習分野で発展している非負値行列分解を次元圧縮手法として用いる分析を行う。例えば、(通所介護を2000円,訪問介護を1000円)を(通所介護を2,訪問介護を1)という基底1000単位に分解・圧縮できる。そして、分解後の基底を新しい説明変数とした回帰分析を行うことで、高次元連続データに関する次元圧縮と回帰分析を組み合わせた手法を提案する。さらに、パネルデータの特性を生かし、こうした手法を時系列方向などにも拡張する。この分野については大阪経済大学石原庸博氏との共同研究として、2018年中より進めている。具体的には、ベイズ統計学における動学パネル分析の方法を用いての分析を行っている。データクリーニングが終わり、分析プログラムを作成中である。さらに、ケアマネージャー行動のマッチングモデルによる構造推定を行う予定である。

「どの介護サービスの組み合わせが効果的に健康状態を維持・改善するか」という課題について、引き続き介護レセプトデータを利用して、より詳細な研究を行う予定である。SSRNワーキングペーパーNo.3138435, Sugawara, Shinya. "What comprises effective formal elder care at home?Estimatingeffects for combinations of multiple services"に関しては、介護サービスの組み合わせを離散的にとらえているという限界があった。しかし、介護レセプトデータでは、連続変数である利用量も観測される。こうした連続情報をつかい、かつ高次元性を処理する手法として、2019年にはでは機械学習分野で発展している非負値行列分解を次元圧縮手法として用いる分析を行う。例えば、(通所介護を2000円,訪問介護を1000円)を(通所介護を2,訪問介護を1)という基底1000単位に分解・圧縮できる。そして、分解後の基底を新しい説明変数とした回帰分析を行うことで、高次元連続データに関する次元圧縮と回帰分析を組み合わせた手法を提案する。さらに、パネルデータの特性を生かし、こうした手法を時系列方向などにも拡張する。この分野については大阪経済大学石原庸博氏との共同研究として、2018年中より進めている。具体的には、ベイズ統計学における動学パネル分析の方法を用いての分析を行っている。データクリーニングが終わり、分析プログラムを作成中である。さらに、ケアマネージャー行動のマッチングモデルによる構造推定を行う予定である。海外での在外研究を計画していたが、同行予定であった妻が妊娠したため、実行しないことにしたため。
鳴鳥の発生中枢の結晶に及ぼす性ホルモンの影響

本研究は、鳴鳥の歌の結晶化の過程と歌の機能的役割について明かにすることを目的とした。フィンチ類のキンカチョウ・ジュウシマツは、歌を指標として、脳の発声系中枢神経核の発達と形成、またホルモン制御作用を調べるのに好材料である。特に歌の形成は学習によるもので、学習における神経核の発達とホルモン制御を神経行動学的に明かにすることが期待される。本研究はまず、1.歌の発声系中枢神経核が個体発声における発達段階において、行動発現と併せてどのように形成されるかを雄のジュウシマツを材料として調べた。2.キンカチョウの発声系中枢神経核の発達に伴って、発現する歌行動とホルモン(エストラジオールとテストステロン)の働きについて明かにした。3.キンカチョウの性行動において、雌が雄をどんなリリーサーによって認知するかを歌行動とホルモンの働きから明かにした。具体的成果は、Undirect song(US)(間接歌)とDirect song(DS)(直接歌)とホルモン制御についてである。USはエストラジオールの血中濃度が上昇した後、歌の練習時にあたるふ化後約40日に始まり、DSはふ化後約6070日間の一時的なテストステロンの上昇後のふ化後約80日で歌われた。ふ化後40日頃は歌の発声中枢神経核の機能は完成されていない発達段階である。従って、エストラジオールの働きが神経核の発達を維持している。約80日になるテストステロンの分泌が上昇して、歌の発声中枢が完成し、活性化されて完全な歌行動を解発した。エストラジオールは雌の性行動にも必要で、血中濃度の上昇に伴って求愛ディスプレー(ソリシテション行動)が活性化される。興奮性神経毒カイニンによるHVc核及びRA核の破壊により各核の歌形成の役割を明かにした。HVcとRAは歌の異なる要素をencodeしている。フィンチ類(キンカチョウ、ジュウシマツ)の繁殖行動における歌は、本能と学習に関する脳の神経回路機構を解析する上でよい課題である。本研究は、1.歌の発声系中枢神経核の各核の回路と、歌の構成に関する神経核の役割を明らかにすること、2.発声系中枢神経核の発達に伴って発現する歌行動と、ホルモン制御の関係を明らかにすることを目的とする。1.ジュウシマツの成鳥の雄を材料として、歌の発声系中枢神経核で最高次にあるHVc核を興奮性神経毒カイニン酸の微量圧注入によって化学的に破壊した。この破壊と併せて、破壊前後に歌を記録し、歌の構造の仕組みを解析した。片側脳半球のHVc核の破壊前後でundirect song(間接歌)を調べてみると、シラブルの順序は破壊後に変動を生ずるが、シラブルそのものは回復し、新しい順序の歌をうたった。これによって、HVc核はシラブルの順序を決める役割をしていることが予測できた。さらに片側脳のHVc核の破壊と同時にRA核を破壊すると、片側脳は正常であっても、歌のシラブルも順序も破壊前と異なり、歌の構造を失った。術後3週間経っても歌としての構成は回復せず、単純なノート的リズムの繰り返しであった。片側RA核の破壊はシラブルと、その順序の変化をもたらしてしまい、片側の発声系HVc核・RA核が正常でも歌に関する機能を失うことが解った。発声系中枢のRA核にはHVc核からの直接の回路と、X核、LMAN核、DLM核を介した間接の回路がある。おそらく間接回路の制御が働かなくなることが、歌の再構築に影響を与えるのではないかと予測される。

2.ジュウシマツ雄の成鳥の歌行動には、雌に対して直接示すdirect song(直接歌/DS)、雌が見えなくとも繁殖時に歌うundirect song(間接歌/UDS)がある。テストステロンを体外から与えて、血中濃度を上昇させるとDSを生み出しUDSには影響を与えなかった。DSとUDSの歌の構造を解析し、ホルモン制御と歌の構造の関係を明らかにした。フィンチ類(キンカチョウ・ジュウシマツ)は繁殖行動における歌を指標として、脳の発声系中枢神経核の発達と形成、またホルモン制御作用を調べるのに好材料である。特に歌の形成は学習によるもので、学習における神経核の発達とホルモン制御を明かにすることが期待される。本研究は前年に引き続いて、1)歌の発声系中枢神経核の形成が個体発生における発達段階において、行動発現とあわせてどのように形成されるかを雄のジュウシマツを材料として調べる。2)発声系中枢神経核の発達に伴って、発現する歌行動とホルモン(エストラジオールとテストステロン)の働きについて明らかにする。3)キンカチョウの性行動において、雌が雄をどんなリリーサーによって認知するかを行動とホルモンの働きから明らかにする。まず、歌にはUndirect song(US)(間接歌)とDirect song(DS)(直接歌)がある。USはエストラジオールの血中濃度が上昇した後、歌の練習時にあたるふ化後約40日に始まり、DSはふ化後約6070日間の一時的なテストステロンの上昇後のふ化後約80日で歌われる。ふ化後40日頃は歌の発声中枢神経核の機能は完全に完成されていない発達段階である。従ってエストラジオールの働きが神経核の発達を維持している。約80日になるテストステロンの分泌が上昇して、歌の発声中枢が完成し、活性化されて完全な歌行動を解発する。エストラジオールは雌の性行動にも必要で、血中濃度の上昇に伴って求愛ディスプレー(ソリシテイション行動)が活発化される。キンカチョウの雌の求愛行動は雄のDSによるだけでなく、雄の鳴く姿がみえるという視覚的刺激によって雄の認知を行っている。
ICTを用いた異文化トレーニングに関する理論的・実証的研究

ICTを用いた異文化トレーニングは、学生の異文化に対する気付きと理解を深めるのに役立つことが示された。新たなる課題としては、オンライン学習への意欲を維持するための教師の役割について明確にする必要性が明らかにされた。本年度は、ICTを用いた異文化トレーニングの理論的整備のための基礎的研究として、ICT上で特徴的な設問設定等の教育方法と評価方法を、文献調査および専門家の知見により明らかにすることを目的に研究を進めた。最初に、異文化トレーニング事例の資料・教育工学分野資料の文献調査では、通常の異文化トレーニングとICTを用いた時の相違に焦点化して精査し、その体系的整理を行った。成果の一部として学会・論文発表を行い、学会においては国内外の研究者との交流を深めることができた。次に、関連分野の研究者・実践経験者への面接調査を実施した。米国の異文化コミュニケーション研究所Intercultural Communication Institute(ICI)では、オンラインによる異文化コミュニケーション教育を専門とする研究者、および日本では、異文化トレーニング実践経験が豊富なファシリテーターに対し調査を行った。さらに、教育工学分野からの補完もすべく、オンライン教育を専門とする教育工学研究者に対する調査を行う機会も得た。調査では、ICTを用いた異文化トレーニングは、異文化に対する興味を喚起し、理解を深める教育方法の一つとして肯定的な意見を得られた。これにより、設問設定と内容の妥当性に対してある一定の評価が得られたと考えられる。今後の課題としては、明確な目的に応じた内容設定・オンラインに特徴的な教授方法のありよう・対象者に応じた評価方法の設定、以上の3点について、さらなる整備の必要性が明らかにされた。来年度は、今年度の調査結果を踏まえて、理論的整備の研究を継続しつつ、実証的研究のためのICTを用いた異文化トレーニングシステムの形式的評価を重ねることにより、研究内容を深めてゆくこととしたい。本年度は、前年度の基礎的研究を元に、ICTを用いた異文化トレーニング教育支援システムの実践のための研究を開始した。最初に、研究者・実践経験者に対する面接調査を行った。対象者は、教育方法が専門のChris Kyriacou教授、批判的思考摂取を重視するIan Davies教授(両名とも英国ヨーク大学所属)、ほか国内外で異文化理解促進に関するワークショップ等実践が豊富な専門家である。調査では、ICTを用いた異文化トレーニング教育支援システムは、異文化に対する興味を喚起し、理解を深める教育方法の1つとして有効であろうという肯定的な意見を得られた。そして、本システムを講義の「導入」として位置づけ、その内容を用いて、異文化理解に関する考察を深めるような授業を行うこと、すなわち、ハイブリッド(ブレンディッド)教育の可能性について示唆された。次に、パイロット研究として、高等教育における学生に対する試験的な実践を試みた。本システム単体による実践で、異文化理解度を測定する1つの尺度である客観的テストを実施したが、実践の前後における有意義な差は見受けられなかった。これらの面接調査とパイロット研究により、本システムをハイブリッド教育にて実践することの重要性が示され、今後の実証的研究の方向性を見出すことができたといえる。今後の課題は、ハイブリッド教育という形態を前提に、ICTを用いた異文化トレーニング教育支援システムの実践における教師の役割・支援のありようを明確に整備することである。今後は、ハイブリッド教育を前提とした教育方法について、実践と形式的評価を重ねて模索し、本システムの高等教育における実践の意義を探究してゆくこととしたい。本年度は、高等教育機関における異文化トレーニング教育支援システムの実践を行い、その実証的研究を行った。本実践の目的は、本システムの異文化トレーニングが、異文化コミュニケーションに関する知識と理解を深めるための導入として役立つのかどうかを探り、時間的制限・人材不足・継続的な実践研究の不足という3つの問題の改善の可能性について検討し、今後の課題について明らかにすることである。また、前年度までの調査を元に、ブレンディッド教育の手法による実践を試みた。本実践は、教育学的な視点による教育的効果の検証を主眼とし、これまで積み重ねてきた形成的評価の一区切りとしての実証的研究として位置づけられる。分析対象は、実践対象者の学期末試験結果、ICAPSテスト結果、および紙面調査結果である。それによると、本システムの異文化トレーニングは、その理解を深める導入として役立つということ、異文化トレーニング実践に関わる諸問題のうち、上記の3点については、本システムを用いることにより軽減される可能性があることが示された。これにより、設問設定と内容の妥当性に対し、ある一定の評価が得られたと考えられる。しかしながら、ICTを用いることによる課題も浮き彫りにされた。それは、教師の役割の明確化の必要性、教育方法の継続的な研究の必要性、そして内容の充実を図る必要性である。最終年度である本年度は、本研究の結果について、論文等の形で報告することができた。現在、関係する学会等において報告を重ね、多方面からの意見を汲み上げることで、本研究で明らかにされた課題に、いかにして取り組むかを探究しているところである。今後も、ICT活用教育と、これまで積み重ねられてきた異文化トレーニング研究の学術的意義の探究、そして異文化コミュニケーション学への貢献に繋がるよう、研究を進める予定である。研究者・実践経験者に対する面接調査、パイロット研究によって、来年度の実証的研究へ向けた内容の整備と補強ができた。