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「趣味」と「研究」の歴史社会学―１９１０年から５０年代の会員制趣味雑誌を対象に―

申請者は、研究テーマ「趣味と研究の歴史社会学ー1910年代から50年代の会員制趣味雑誌を対象にー」について次ような研究成果を得た。第一に、日本近代文学会において自費出版同盟に関する発表を行った(「「非人情な結束」としての自費出版同盟はいかにして可能か?」2016年春季大会5/29)。この発表では、本研究のテーマである戦前の趣味人や文筆家が組織の論理を通じて社会運動を行ったことについて明らかにした。従来の文学研究では看過されてきた、組織運営の携帯を通じた社会運動という発想が1920年代の日本社会に存在したことを明らかにしたことは文学研究のみならず社会運動研究はメディア史においても重要な知見であると考える。また、日本計画行政学会関東支部・社会情報学会共催第11回若手研究交流会(於一橋大学)において、「淫書か、文献書か?ー軟派出版史における両大戦間期の「珍書屋」の意義と限界ー」を発表した。この発表では、戦前期において、従来淫猥な書物として等閑視されていたメディアを巡る知的な共同体が形成されていたことを示した。ここで重要なのが、そういった書物を知識人読者が「文献」と位置付けていたことである。第二に、理論面に関連する成果として査読論「ファン・アイデンティティの宣言に伴うジレンマーヴィジュアル系ファンへの質的調査からー」がある(『ソシオロゴス』40号、1926年10月)。この研究では、合計約300時間のin depth interviewを行った成果を発表した。以上のように、具体的な歴史資料の検討と理論的な検討の両面から研究を遂行することができた。28年度が最終年度であるため、記入しない。申請者は、研究テーマ(「『趣味』と『研究』の歴史社会学ー1910年代から1950年代の会員制趣味雑誌を対象にー」)について研究を進めてきた。第一に、当時の非公刊雑誌の誌面における「円本」の表象、第二に、非公刊雑誌の流通経路と、そのメディアが「研究」会を称して発禁を回避したこと、第三に、明治期から昭和初期にかけて、「直筆原稿」というメディアを媒介として社会運動的な実践が試みられていたことである。以上の論点は、国内学会発表(関東社会学会、社会情報学会、日本近代文学会)で公表し、オーディエンスから反応を得て内容を精緻化させてきた。これらは公刊の出版メディアに着目してきた先行研究に対して、対象の限定性を克服するとともに、非公刊メディアが当時の読書界に与えた影響について明らかにした点で意義がある。さらに、理論的な貢献として、近代日本における雑誌、出版メディアの「作り手/受け手」に関する議論を精緻化するために、現代のオーディエンス研究の動向と結びつけた査読論文を執筆した(大尾侑子,鈴木麻記, 2015,「近年のオーディエンス研究における「アイデンティティ」の位相:解釈学的図式に対する批判的視角の可能性と限界」『情報学研究』89, 51-65)。加えて、オーディエンス研究に関連する質的調査も同時並行して行うことで、アクチュアルな問題に接続させた(大尾侑子, 2016,「ファン・アイデンティティの宣言に伴うジレンマーヴィジュアル系ファンへの質的調査からー」『ソシオロゴス』第40号(※掲載決定/2016年10月発行予定)。申請者は、査読論文を2本、学会発表を6回行うなど、研究成果を発表することに対しても積極的だったと自己評価できる。とくに、社会情報学会では優秀発表賞を受賞するなど、学会でも評価を得ることができた。また、近代日本の歴史研究をテーマとしているが、理論面で現代的な貢献を行うべくフィールドワークにも取り組んだ。インタビュー調査では1ヶ月に22名の対象者に質的調査を試みた点などは、研究者としての資質も評価できると考える。

以上のように、具体的な歴史資料の検討と理論的な検討の両面から研究を遂行することができた。今後の研究では、新たに資料収集を進め戦後の雑誌の分析を進める。同時に、博士論文の形にまとめるため、これまで発表してきた個別の論文を論理的に連結させる。28年度が最終年度であるため、記入しない。
胎生期におけるreelinをターゲットとした統合失調症発現メカニズムの解明

【研究目的】統合失調症は、幻覚妄想などの精神機能障害を呈する疾患であり、統合失調症の病態には神経構造の異常が関与しているが、そのメカニズムは解明されていない。我々は今回、統合失調症発症の一因となる分子としてreelinに着目した。reelinは層構造形成に必須のタンパク質であり、reelinが欠損すると、神経細胞の異常配置が認められ、統合失調症様症状を示す。これまでに、reelinの分解酵素としてa disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs(ADAMTS)ファミリーが提唱され、新たな創薬標的として注目されている。本研究では、脳で高発現するADAMTS-3をノックダウンすることで、胎生期の脳にどのような影響を及ぼすかを解明し、統合失調症の新規治療法開発を目指した。【研究成果】(1)胎生期マウスへのADAMTS-3のshRNA導入:子宮内電気穿孔法を用いてADAMTS-3のshRNAとGFPを発現するplasmidを胎生期マウスの脳内に導入し、ADAMTS-3遺伝子ノックダウンマウスを作製した。免疫組織化学法によりshRNAの発現を確認した結果、GFPの発現が認められたことから、shRNAが標的細胞に導入されていることを確認した。(2) ADAMTS-3ノックダウンにおける大脳皮質の層構造の解明:ADAMTS-3のshRNAを導入した胎児の脳を1週齢の段階で回収し、免疫組織化学法により、脳神経構造を観察したところ、コントロールマウスと比較して、ノックダウンマウスの層構造に大きな差異は認められなかった。本研究では、胎生期の野生型マウスにADAMTS-3のshRNAを導入したところ、胎生期のADAMTS-3阻害が脳神経構造に大きな変化は認められなかった。ADAMTS-3の他にもreelin分解活性を有するADAMTS-2が脳内に存在する。今後は、ADAMTS-2についても検討して、reelinをターゲットとした精神疾患の新規治療法の開拓をする必要がある。
谷文晁研究―江戸後期美術の社会的文脈に注目して―

今年度は文晁の画業の中でも「大名庭園の絵画化」が持ち得た意味、そして庭園画制作における文晁様式の確立と周囲への影響について考察を進めた。まず、文晁の庭園画の中でも最初期作にあたる「浴恩園図記」(天理大学附属天理図書館蔵)について博士論文の第四章としてまとめた。合装される栗山と蒙斎の園記も読み解きながら、作画内容を分析し、「浴恩園図記」の制作意図を考察した。各図の画中モティーフの解釈を中心に進め、定信と将軍家斉の関係を示唆する図や、定信が老中在任中に最も力を入れた施策を彷彿とさせる図の存在を指摘した。そして文晁には先に成立していた栗山と蒙斎の園記とともに、浴恩園の景観を通じて定信の人格と政治家としての理念を表現することを課せられていたと結論づけた。加えて第三図に文晁が園記には言及のない人物像を見いだし、それらが「漁隠」と「共楽」という二つの理念の象徴であると解釈した。最後に制作目的について、寛政五年七月の定信の老中退任との関わりに着目して論じた。次に屋代弘賢文・菅原洞斎画「衆楽園図」(文化四年頃、千秋文庫)に注目し、文晁の庭園画が同時代に与えた影響を考察した。本作は秋田藩が江戸城北・新堀村に有した抱屋敷の庭園・衆楽園を題材とし、弘賢が和文と和歌をしたため、洞斎が園内二十景を描くものである。実見調査を実施し、その成果を2019年3月発刊の『待兼山論叢』52号にまとめた。内容としては、本作において衆楽園の「名園」化と衆楽園の主・佐竹義和の「名君」化が目指されていたと指摘した。上記2篇の論文執筆に加え、韓国国立中央博物館での木村蒹葭堂「蒹葭堂雅集図」の調査なども実施し、江戸時代後期における絵師を取り巻く文化的・社会的・政治的文脈の読み解きを進めてきた。これらの成果をまとめ、博士申請論文を大阪大学大学院文学研究科に提出し、2019年3月25日に学位が授与された。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。本年度は、谷文晁(1763ー1840)やその周辺の画人による作品、特に実景を描く作品および博物図譜の制作に着目し、江戸後期における画家の役割を概観するという目的を達成すべく、以下の調査活動を実施した第一に、文晁と大名文化圏の関係性についての検討を進めた。文晁が熊本藩第八代藩主・細川斉茲(1755ー1835)のために制作した「東海道勝景」(永青文庫蔵)の実見調査を行い、その作風を文晁の画業全体の中に位置づけ、熊本藩側が文晁作品をどのように認識したのかについて考察した。その成果は平成28年度の美術史学会全国大会において口頭発表した。第二に、文晁の師であった渡辺玄対(1749ー1822)の作品を検討し、文晁との作風および思想上の影響関係や両者を取り巻く交友圏の再現を目指した。細川斉茲の実父で熊本宇土支藩第五代藩主の細川興文(1723ー1785)が、玄対に自身の庭園とそこからの風景を描かせた作品「蕉夢庵景勝図画詩文合巻」(宇土市教育委員会蔵)を実見調査し、その成果を論文投稿した。第三に、江戸中後期の大名達が制作させた博物図譜について検討を進めた。文晁も親しくした木村蒹葭堂(1736ー1802)が薩摩藩藩主・島津重豪(1745ー1833)の依頼で制作した可能性のある昆虫図譜『薩州蟲品』について考察し、平成29年夏頃発刊予定の『木村蒹葭堂全集第二巻』(藝華書院)に寄稿した。江戸中後期の同時代的な動向を理解し、ひいては文晁の博物図譜制作について考察する足がかりになった。第四に、平成28年9月からイギリスに長期滞在し、文晁活躍期の蘭学進展に大きな影響を与えたオランダ商館長、イサーク・ティチング(Isaac Titsingh)によるコレクションの調査など、欧州にある江戸美術に関する資料収集を行い、江戸後期の画家が知り得た西洋由来のヴィジュアル・イメージの実態解明を試みた。今年度は、本研究の中心的なテーマである文晁とその周辺の画家が諸藩の大名のために描いた実景を題材とした作品の調査を進めた。まず、以前から検討を行っていた、文晁の景観表現を検討する上で重要な位置を占める「東海道勝景」について平成28年5月29日に美術史学会全国大会で口頭発表を行った。さらに、文晁が大名文化圏で重用されるようになった理由の一つと考えられる「庭園画」の制作に関して調査を開始した。具体的には文晁らがどの藩の庭園を描いたのか、どのような作品が現存するのかについてリスト化を進めた。その過程で新たに所在が分かった作品もあり、来年度以降、現地での実見調査を行わせていただく予定である。

今年度の大きな成果としては、文晁の師であった渡辺玄対が熊本宇土支藩第五代藩主の細川興文の庭園とそこからの眺めを描いた「蕉夢庵景勝図画詩文合巻」を実見調査および撮影を実施したことが挙げられる。この調査で、絵画のみに着目するのではなく、先学ではあまり注目されてこなかった作品に付属する序跋文・漢詩文等の文字情報の収集および解読も積極的に行い、データを拡充するとともに、その考察の結果を論文にまとめるところまで至った。また江戸後期において庭園文化と密接に結びついた博物学の進展についても目を向け、本年度はとりわけ文晁の本草・博物・物産学や異国文化への関心を深めたと指摘される木村蒹葭堂が制作に関与した可能性のある昆虫図譜『薩州蟲品』について検討した。その内容を全文翻刻し、日本の本草学史の中に位置づけるとともに、博物図譜を美術史的観点から考察し、その成果は『蒹葭堂全集第二巻』(藝華書院)に掲載予定である。文晁の西洋画法需要に関する分析も行うべく、今年度の9月からイギリスに長期滞在することで、戸後期における西洋文化との接触のあり方に焦点を当て、欧州にある江戸美術に関する資料収集を行った。本年度は、江戸後期における画家の役割を概観するという目標を達成すべく、江戸後期の画人・谷文晁と周辺の画家が諸藩の大名のために描いた実景を題材とする作例を中心に検討を進めた。昨年度の成果をアウトプットするとともに、調査活動を継続した。まず、昨年度の学会発表に対するレスポンスを踏まえ、文晁が肥後熊本藩第八代藩主・細川斉茲のために制作した「東海道勝景」(永青文庫蔵、文化五年(1808)頃)の成り立ちについて再検討を試みた。その成果である論文は、『美術史』185号での掲載が決定した。「東海道勝景」の画風に円山派からの影響が見出せること、制作に注文主である斉茲の属する大名文化圏の動向が密接に関わることを検証した。次に、文晁の師であった渡辺玄対が描いた「蕉夢庵景勝図画詩文合巻」(宇土市教育委員会蔵、明和八年(1771)頃)について検討を進め、美術史学会西支部例会(2017年9月)において口頭発表を行った。不明な点の多かった玄対の経歴や交友関係を裏付けた上で、玄対が「蕉夢庵」を描くにあたり、盛唐の詩人・王維の邸宅のイメージを念頭に置いて作画した可能性を提起した。以上のような成果発表の一方で、国内外で調査活動に取り組んだ。まず、文晁による「庭園画」に関する情報収集を続け、全体像を掌握するとともに、個々の分析を行ってきた。なかでも松平定信が江戸築地に整備した庭園「浴恩園」を題材とする「浴恩園図記」(天理大学附属天理図書館蔵、寛政七年(1795)頃)については、より踏み込んだ分析を開始した。さらに、昨年度から2018年6月までイギリスに長期滞在し、江戸後期における西洋文化との接触のあり方に焦点を当て資料収集を行った。文晁による西洋画学習の実態解明を目指しており、特に文晁が描いた「ファン・ロイエン筆花鳥図模写」(神戸市立博物館蔵)について論じるべく準備をしている。当初の研究目的および目標を概ね順調に達成できた。これまでの研究成果を論文執筆と口頭発表によってアウトプットした上に、次年度のための土台作りも進めてきた。「東海道勝景」の考察の中で、江戸後期の大名文化圏のなかで文晁の作画に大きな価値が見いだされていたことが改めて確認された。文晁の主君・松平定信が当時の政治と文化をリードする立場にあったことが文晁の活動といかに関わり合うのかといった重要な課題を考える上で、やはり文晁が大名家のために精力的に制作した「庭園画」の存在は看過できない。なかでも、文晁が定信のために描いた「浴恩園図記」(天理大学附属天理図書館蔵、寛政七年(1795)頃)に注目し、合装される柴野栗山と廣瀬蒙齋の撰文も読み解きながら、各図の描写内容を整理・解釈することからはじめ、文字情報と比較することで、文晁によるモティーフ選択の意図について考察を進めている。また、伝谷文晁画「雲州候大崎別業真景図巻」(松江歴史館蔵)の閲覧および撮影の機会を得たことで、文晁による原本の模写と考えられるこの作品の存在によって、文晁の確立した「庭園画」の影響がどのように広がっていたのかという新たな課題を見いだした。
iPS細胞を活用したヒトキメラマウス肝炎発症モデルの開発とその臨床応用

ヒトiPS細胞の肝細胞への分化において、サイトカイン類に加えバルプロ酸を添加することにより分化効率及び成熟化が促進することが明らかとなった。さらに、三次元培養法によって肝細胞はスフェロイドを形成し、肝細胞マーカー及び主要な薬物代謝酵素であるCYP3Aの遺伝子発現は、二次元培養法と比較し顕著に高かった。このスフェロイドを浮遊培養し、高度免疫不全のTK-NOGマウスにガンシクロビルを投与、肝障害が確認されたのちに、分化した肝細胞(スフェロイド)を門脈経由で移植した。その結果、ヒトiPS細胞由来肝細胞単独を移植した群で一過性のヒトアルブミンの分泌を確認できた。肝細胞への分化は、3つのステップ、すなわちヒトiPS細胞をアクチビンAにて内胚葉へ分化後、ジメチルスルホキシドにて肝細胞に分化、hepatocyte growthfactorやオンコスタチンM、デキサメタゾンなどを添加し肝細胞の成熟を行った。しかし、十分に成熟が認められないことから、以下のような方法にて成熟した肝細胞への分化を試みた。1、三次元培養による成熟化:三次元培養法によるヒト肝臓を模したモデル形成を行い、ヒト生体でのin vitro微小肝臓モデルの構築を目的とした。トランスパレント社が開発した立体培養可能なプレート(Cell-able®)及び培地を用いて三次元培養を行い、成熟化に対する影響について検討した。その結果、三次元培養法によって肝細胞はスフェロイドを形成し、肝細胞マーカー及び主要な薬物代謝酵素であるCYP3Aの遺伝子発現は、二次元培養法と比較し顕著に高かった。また、三次元スフェロイド外膜はNTCPやOATP1B1を高発現し、肝臓血管側極性を示した。2、共培養による成熟化:Cell-ableにおいては3T3細胞と共培養を行うことで、細胞の接着率の向上が期待された。そこで、肝実質細胞と非実質細胞との共培養により、生体に近い肝臓構造を形成し、肝機能が向上するか検討を開始した。近年、ヒト多能性幹細胞から肝細胞への分化を促進するいくつかの低分子化合物は大量かつ安定的に、高純度で合成することが可能であり、組換えタンパク質やウイルスベクター、共培養用細胞を用いる方法よりもリスクやコストが低く、ロット間差が少ないため、ヒトiPS細胞から肝細胞への分化に用いる分化誘導因子として有益であると考えられる。本研究では、ヒトiPS細胞の肝細胞への分化において、サイトカイン類に加えバルプロ酸を添加することにより分化効率及び成熟化が促進することが明らかとなった。また、肝細胞分化及び成熟化の促進作用は、バルプロ酸のヒストン脱アセチル化酵素阻害作用によるものであることが示唆された。さらに、トランスパレント社が開発した立体培養可能なプレート(Cell-able&reg)及び培地を用いて三次元培養を行い、成熟化に対する影響について検討した結果、三次元培養法によって肝細胞はスフェロイドを形成し、その遺伝子発現は、二次元培養法と比較し高かった。Cell-ableにおいては3T3細胞と共培養を行うことで、細胞の接着率の向上するため、肝実質細胞と非実質細胞との共培養も可能であり、生体に近い肝臓構造を形成し、肝機能が向上することが期待される。最終目標である免疫細胞を保持するヒト肝細胞キメラマウスの作製とB型慢性肝炎モデルの構築に関しては、HLA既知のiPS細胞から成熟肝細胞に分化させ、TK-NOGマウスへの移植実験を行う。施設内における動物実験の許可及び必要な実験環境も整ったので、最終年度は複数のストラテジーで研究を進める。最終目標である免疫細胞を保持するヒト肝細胞キメラマウス作製とB型慢性肝炎モデルを構築するために、HLA既知のiPS細胞から成熟肝細胞に分化させ、TK-NOGマウスへの移植実験を行う施設内の動物実験の許可及び実験環境は整った。1、ヒトiPS細胞由来肝細胞の成熟化に向けた検討:より成熟したヒトiPS細胞由来肝細胞を作製するため、分化に有用な添加因子の探索を行った結果、複数の因子を見出した。これらを肝細胞への分化誘導時に用いることで、主要な薬物代謝酵素であるCYP3A4などの薬物代謝酵素の発現上昇が認められた。また、リファンピシンを添加することで、プレグナンX受容体(PXR)を介したCYP3A4の発現誘導も認められ、より成熟したヒトiPS細胞由来肝細胞の作製が可能となった。2、ヒト肝キメラマウス作製に向けた検討:細胞移植に有用と考えられるスフェロイドを形成させる3次元培養により肝細胞へ分化誘導を行った。また、100%異種動物肝臓をもつキメラマウス作製のため、現在ラットES細胞をマウス受精卵に移植する方法を行っている。受精卵が8細胞まで分裂した段階において、ラットES細胞を受精卵に直接導入する方法(injection法)ならびに受精卵の透明帯を破壊した後、ラットES細胞を付着させる方法(aggregation法)の2通りでキメラマウスの作製を試みている。これまでに、マウス肝臓の約30%程度までラット肝臓に置換することが可能となった。3、キメラマウスの作製:ヒトiPS細胞から肝細胞に分化誘導22日後に細胞を剥離し、スフェロイド形成し、その後浮遊培養した。移植用のマウスは免疫不全のTK-NOGマウスにガンシクロビルを投与し、肝障害が確認されたのちに、分化した肝細胞を門脈経由で移植した。

現在、飼育中であり近日中に置換率を解析するために採血を行い、ヒトアルブミンを解析予定である。ヒトiPS細胞の肝細胞への分化において、サイトカイン類に加えバルプロ酸を添加することにより分化効率及び成熟化が促進することが明らかとなった。さらに、三次元培養法によって肝細胞はスフェロイドを形成し、肝細胞マーカー及び主要な薬物代謝酵素であるCYP3Aの遺伝子発現は、二次元培養法と比較し顕著に高かった。このスフェロイドを浮遊培養し、高度免疫不全のTK-NOGマウスにガンシクロビルを投与、肝障害が確認されたのちに、分化した肝細胞(スフェロイド)を門脈経由で移植した。その結果、ヒトiPS細胞由来肝細胞単独を移植した群で一過性のヒトアルブミンの分泌を確認できた。1)肝細胞への分化:近年、ヒト多能性幹細胞から肝細胞への分化を促進するいくつかの低分子化合物は大量かつ安定的に、高純度で合成することが可能であり、組換えタンパク質やウイルスベクター、共培養用細胞を用いる方法よりもリスクやコストが低く、ロット間差が少ないため、ヒトiPS細胞から肝細胞への分化に用いる分化誘導因子として有益であると考えられる。本研究では、ヒトiPS細胞の肝細胞への分化において、サイトカイン類に加えバルプロ酸を添加することにより分化効率及び成熟化が促進することが明らかとなった。また、肝細胞分化及び成熟化の促進作用は、バルプロ酸のヒストン脱アセチル化酵素阻害作用によるものであることが示唆された。2)三次元培養による成熟化:三次元培養法によるヒト肝臓を模したモデル形成を行い、ヒト生体でのin vitro微小肝臓モデルの構築を目的とした。トランスパレント社が開発した立体培養可能なプレート(Cell-able&reg)及び培地を用いて三次元培養を行い、成熟化に対する影響について検討した結果、三次元培養法によって肝細胞はスフェロイドを形成し、その遺伝子発現は、二次元培養法と比較し高かった。また、三次元スフェロイド外膜はNTCPやOATP1B1を高発現し、肝臓血管側極性を示した。3)免疫細胞を保持するヒト肝細胞キメラマウスを作製:第一段階として、HLA既知のiPS細胞から成熟肝細胞に分化させ、TK-NOGマウスへの移植実験を行う施設内の動物実験の許可及び実験環境は整った。これまでの検討で、iPS細胞由来の成熟肝細胞をそのままuPA/SCIDマウスに移植すると癌化することがわかっており、分化方法を工夫した上で、異所性に移植して検討する。27年度が最終年度であるため、記入しない。肝臓病学1)成熟肝細胞特異的に発現する転写制御因子及びmiRNAの探索とその制御:ヒト胎児肝細胞(未熟肝細胞)と成人肝細胞(成熟肝細胞)に発現する転写制御因子及びマイクロRNA(miRNA)をマイクロアレイにて網羅的に解析し、成熟に関与する転写制御因子及びmiRNA候補をピックアップする。発現に関与する液性因子や低分子化合物、miRNA、siRNAを用いて成熟肝細胞と類似した発現プロファイルとなるよう制御することで、成熟化を試みる。2)免疫細胞を保持するヒト肝細胞キメラマウスを作製とB型慢性肝炎モデルの構築:最終年度は成果を上げるために複数の研究計画で進める。
大強度相対論的電子ビームからのサイクロトロン超放射の実験的検証

本研究では超短パルス電子ビームを多段自動加速方式により実現し,この方式で二つのビーム長の異なる大強度電子ビームからの電磁波放射を観測した。ビーム長が装置長より長い場合と短い場合の電磁波放射現象の比較検討を行い,短いビームを用いた場合に,超放射の特徴に一致する現象を観測した。4段自動加速法方式を用い,ブルームライン型パルス整形線路から射出された,パルス幅10ns,エネルギー550keVの大強度相対論的電子ビームを,パルス幅1ns,エネルギー1.1MeVまで圧縮することに成功した。この超短パルス大強度電子ビームを,一様磁場中に置かれた長さ60cmの円筒導波管中に入射したところ,ビーム速度と電磁波の群速度が一致する条件で,発生周波数の絞られた(17GHz付近)強い電磁波の出力を得た。この周波数は理論的に予想されたものに一致する。一方,装置長より長いビームを用いた場合,多くのモードからの多数の周波数が観測された。装置長(共鳴領域長)を変化させた実験では,いずれの場合も,発生周波数は距離とともに絞られるが,短いビームの場合その傾向が顕著であった。電磁波出力に関しては,いずれの場合も装置長とともに指数関数的に増大する。装置長より短いビームの場合の方が長いビームに比べ,伝搬距離に伴う出力の成長は早く,60cmの伝搬後の出力は短いビームの方が約10倍大きかった。ただし,短いビームの電磁波出力にはある距離で飽和することが観測された。これは,電磁波の再吸収が起こっているものと考えられ,外部磁場を増す等で対処が可能と考えている。粒子シミュレーションコードKARATを用いた結果も,実験結果がビーム長の効果であることを示した。これらの結果は超短パルス大強度電子ビームによるサイクロトロン超放射で期待されるものと一致する。更に,発生電磁波出力への電流依存性等を検証する必要がある。本年度は,超短パルス電子ビームの生成と,それを用いた電磁波放射の確認を目指して研究を遂行した。まず,現有の大強度電子ビーム発生装置を用い,多段自動加速によりパルス幅の圧縮が可能であることを確認し,発表した。更にその多段自動加速装置を改良して,超放射実験に適したパラメーターを持つと考えられる電子ビームを生成した。従来の電子ビームに比べ,小半径の,半径5mm,エネルギー1MeV,電流1kA,パルス幅が0.8ナノ秒の電子ビームの取出に成功した。問題点としては,ビームエネルギーの増大が,期待していたものより少なかったことが挙げられるが,この原因は,ビーム電流波形の立ち上がり時間に起因しており,改善は可能と考えられるが、上に述べたビームパラメーターでも,本研究の遂行が可能であることから,この点の後の課題とした。次に,ビームの断面形状については,中空状の電極から中空状のビームを期待した。しかし,加速中の伝搬にともないビームの外径寸法は変化しないが,断面内部にほぼ一様に電子が分布してしまうという現象が起きた。このことは,放射機構を考えると,不利であると考えられる。またこの物理的原因もよくわかっていない。現在この点について機構解明を目指した実験を行うと同時に,磁場,加速管等の改良を検討中である。一方で,放射される電磁場の測定系の整備は,交付された研究費を用いてほぼ整い,現在検出器の較正を行っている。近いうちに,現状のビームからの放射電磁波の測定が可能である。

高出力電磁波源としての大強度相対論的電子ビームの研究は,従来までの弱い定常ビームの延長線上で行われ,ビーム長は無限大として電磁波発生現象が取り扱われてきた。近年,ビーム長が電磁波発生のための装置長より短い場合,発生周波数が絞られ効率の良い電磁波発生機構が関与する事がわかってきた。この現象を超放射と呼ぶ。本研究では技術的に困難であった超短パルス電子ビームを多段自動加速方式により実現し,ビーム長が装置長より長い場合と短い場合の電磁波放射現象の比較検討を行い,短いビームを用いた場合に,超放射の特徴に一致する現象を観測した。4段自動加速法式を用い,ブルームライン型パルス整形線路から射出された,パルス幅12ns,エネルギー550keVの大強度相対論的電子ビームを,パルス幅1ns,エネルギー1.1MeVまで圧縮することに成功した。この超短パルス大強度電子ビームを,一様磁場中に置かれた長さ60cmの円筒導波管中に入射したところ,ビーム速度と電磁波の群速度が一致する条件で,発生周波数の絞られた(17GHz付近)強い電磁波の出力を得た。一方,装置長より長いビームを用いた場合,多くのモードからの多数の周波数が観測された。粒子シミュレーションコードKARATを用いて,この結果がビーム長の効果であることを確認した。電磁波の出力に関する結果では,出力は距離とともに指数関数的に増大し,装置長より短いビームの場合の方が長いビームに比べ,伝搬距離に伴う出力の成長は早く,60cmの伝搬後の出力は短いビームの方が約10倍大きかった。これらの結果は超短パルス大強度電子ビームによるサイクロトロン超放射で期待されるものと一致する。更に,発生電磁波出力への電流依存性等を検証する必要があるが,超放射による大強度電磁波源への可能性は大きく前進した。
放物型方程式の解からなる関数空間の研究

共役調和関数の性質について研究を行った。ここでは,放物型ベルグマン空間において研究した放物型共役関数をモデルにして,放物型ハーディー空間においても同様の概念を持つ関数を定義し,それらについて研究した。特に,p=1のときの放物型ハーディー空間の解析は難しいであろうことが予想される。この解析は,調和関数からなるハーディー空間においても大変難しい部分があり,我々は,これと深い関係にある放物型ブロッホ空間における放物型共役調和関数についも研究を行い,その一意性やノルム評価などの結果を非常に美しい形で示した。連携研究者ら全員が,しっかりした研究計画を持ちながら本研究に取り組めるよう,全体の初動の研究状況を把握し,研究打ち合わせ等を主催した。研究面では,放物型ハーディー空間の性質の研究を行った。特に,平成25年度における研究では,L{\alpha}-調和な拡張関数と放物型極大関数との関係に関する研究を行った。研究代表者と菱川洋介氏はこれまで,放物型ベルグマン空間における放物型共役関数に関する共同研究を行ってきた。ここでは,その研究を参考に放物型ハーディー空間においても同様の概念を持つ関数を定義し,それらについて研究を行った。放物型共役関数に関する研究結果は,p=1のときの双対空間の研究に応用されるであろうことが,予想されている。平成25年度では,p=1のときの双対空間の研究の取りかかりまで着手した。この結果は,共著論文として,まとめ現在は学術雑誌に投稿中である。また,平成25年度においては,放物型ハーディー空間上の作用素の研究を行う準備として,放物型作用素L{\alpha}の基本解の境界付近での挙動の解析を行った。本研究において研究対象としたい作用素は,L{\alpha}の基本解を用いた積分作用素として定義される。よって,この基本解の性質を解析することは重要である。L{\alpha}の基本解は,ほとんど具体的には記述されていない。ゆえに,境界付近での挙動を解析し,評価などを与えることを試み,それらに成功した。さらに,L{\alpha}-調和な拡張関数とハーディー・リトルウッド型の極大関数との関連性についても考察を行った。これらの関連性について,ある程度の結果を得ることに成功し,研究集会等において発表を行い,質疑応答を経て,より洗練された結果が得られた。連携研究者ら全員が,しっかりした研究計画を持ちながら本研究に取り組めるよう,全体の初動の研究状況を把握し,研究打ち合わせ等を行った。平成26年度は,放物型ハーディー空間の解析を引き続き行うとともに,放物型ハーディー空間の上で定義されるトエプリッツ作用素やハンケル作用素を中心とした積分作用素に対する解析を初動研究として,行った。以下に,具体的な内容を述べる。26年度は,ファトゥー型の境界極限存在定理などの研究,p=1のときの放物型ハーディー空間の双対空間の研究などを,平成25年度に引き続いて行った。これらの研究は,平成26年度でその大部分について収束させることが出来た。ファトゥー型の境界極限存在定理については,古典的なハーディー空間と同様の性質が成り立つことを示した。p=1のときの放物型ハーディー空間の双対空間の研究については,S-関数との関連性を示した。一部未解決な部分もあるが,それらについては,27年度の課題とすることとした。また,放物型ハーディー空間に関する研究を土台として,その空間の上で定義された作用素の性質を初動研究として調べた。放物型ハーディー空間上の作用素の研究を行う準備として,放物型作用素の基本解の境界付近での挙動の解析を行った。本研究において研究対象としたい作用素は,基本解を用いた積分作用素として定義される。基本解はの境界付近での挙動を解析し,評価などを与えることに成功した。我々が興味の対象としたいのは,各々の作用素の有界性,コンパクト性,可逆性,シャッテン族に入るための条件等を調べることである。これらに関する本格的な研究は,27年度に行うこととした。平成27年度では,共役調和関数の性質について研究を行った。放物型方程式の解空間では,共役調和関数の概念についてどのように定義されるべきかが問題である。調和関数からなるハーディー空間で重要な研究対象となったのは,共役調和関数の性質である。共役調和関数と極大関数の性質は深く結びついており,幾つかの有名な研究がある。これらの結果は,すでに研究論文として投稿したものや,執筆中のものがある。この解析は,調和関数からなるハーディー空間においても大変難しい部分があり,p=1のときの双対空間の研究結果としてBMOが考え出された。我々は,BMOと深い関係にある放物型ブロッホ空間における放物型共役調和関数についも研究を行い,その一意性やノルム評価などの結果を非常に美しい形で示した。

特に,p=1のときの放物型ハーディー空間の解析は難しいであろうことが予想される。この解析は,調和関数からなるハーディー空間においても大変難しい部分があり,我々は,これと深い関係にある放物型ブロッホ空間における放物型共役調和関数についも研究を行い,その一意性やノルム評価などの結果を非常に美しい形で示した。平成26年度における研究計画では,放物型ハーディー空間の解析を引き続き行うとともに,放物型ハーディー空間の上で定義されるトエプリッツ作用素やハンケル作用素を中心とした積分作用素に対する解析を初動研究として,行うことを目標としていた。放物型ハーディー空間の解析では,ファトゥー型の境界極限存在定理については,古典的なハーディー空間と同様の性質が成り立つことを示した。p=1のときの放物型ハーディー空間の双対空間の研究については,S-関数との関連性を示した。一部未解決な部分もあるが,それらについては,27年度の課題とすることとした。また,放物型ハーディー空間の上で定義されるトエプリッツ作用素やハンケル作用素を中心とした積分作用素に対する解析を初動研究もおおむね順調に行った。解析学平成27年度は,平成26年度における研究の中で残った放物型ハーディー空間の解析を引き続き行う。特に,p=1のときの放物型ハーディー空間の双対空間の研究については,S-関数との関連性を示した。しかし,一部未解決な部分もある。それらについて,平成27年度に解析を引き続き行う。また,放物型ハーディー空間の上で定義されるトエプリッツ作用素やハンケル作用素を中心とした積分作用素に対する解析を行う。各々の作用素の有界性,コンパクト性,可逆性,シャッテン族に入るための条件等を調べる。平成25年度における研究計画では,まず明らかにしたい放物型ハーディー空間の性質及び,今後の研究の見通しなどについて連携研究者ら全員がしっかりした共通認識を持つことから始める予定であった。これについては,しっかりした共通認識を持つことができたと考える。また,25年度に予定していた,放物型共役関数に関する研究について,予定通りに,p=1のときの双対空間の研究の取りかかりまで着手した。この結果は,共著論文として,まとめ現在は学術雑誌に投稿中である。放物型作用素L{\alpha}の基本解の境界付近での挙動を解析し,評価などを与えることを試み,それらに成功した。これも予定通りである。さらに,L{\alpha}-調和な拡張関数とハーディー・リトルウッド型の極大関数との関連性についても考察を行った。これらの関連性について,ある程度の結果を得ることに成功した。以上より,おおむね順調に進展していると考える。平成26年度以降は,放物型ハーディー空間の解析を引き続き行うとともに,放物型ハーディー空間の上で定義されるトエプリッツ作用素やハンケル作用素を中心とした積分作用素に対する解析を行う。平成26年度は,ファトゥー型の境界極限存在定理などの研究,p=1のときの放物型ハーディー空間の双対空間の研究などを,平成25年度に引き続いて行う。これらの研究は,平成26年度でその大部分について収束させ,結果をまとめ研究集会等で発表する予定である。
長鎖アルカンの合成と分解に関わる酵素群の探索と脂質変換反応への応用

プロトテカ属微細藻が直鎖アルカンのサブターミナル酸化経路を持つことを発見した。そこで、P. zopfii JCM9400を用いて、サブターミナル酸化反応に関わると考えられる第二級アルコールをケトンへ酸化する二級アルコールデヒドロゲナーゼの精製及び遺伝子クローニングを試みた。得られ遺伝子を大腸菌で発現し、諸性質を解明したところ2-dodecanolを2-dodecanoneに変換することを見い出した。さらに、ドラフトゲノム解析により、GC含量は極めて高く、ORFで約60%、非翻訳領域では70%以上のGC含量を示すことを見いだした。さらに、パーティクルガン法により遺伝子を導入することに成功した。長鎖n-アルカンをサブターミナル酸化経路で代謝する微細藻Prototheca zopfii JCM9400からその代謝経路に関わると推測されるsecondaryalcohol dehydrogenase (SADH)をコードする遺伝子を単離した。この単離した遺伝子を大腸菌で発現し、基質特異性を評価した。形質転換大腸菌をLB培地で培養し、IPTGで誘導した後、菌体を回収し休止菌体反応に用いた。基質とした各種2級アルコールを0.2%、NAD+を補酵素として反応に用いた。C10からC20の2級アルコールを基質としたところ、2位に水酸基を有する2級アルコールを対応するケトン体へと変換する活性が高いことがわかった。5-ヒドロキシウンデカノールには活性を示すが、ヘキサデカノンの主要な中間代謝物である5-ヒドロキシヘキサデカノールにはほとんど活性を示さなかった。また、長鎖ケトンを基質とした場合の逆反応(還元反応)を評価したところ、反応は進行するものの酸化反応よりも活性は低いこともわかった。ドラフトゲノム解析の結果、P. zopfii JCM9400のゲノム遺伝子のGC含量は極めて高く、ORFで約60%、非翻訳領域では70%以上示すことがわかった。また、今回解析したSADHとは別のホモログの存在も確認しており、今後その酵素(遺伝子)の諸性質を解明する計画である。長鎖アルカンをアルコールに変換すると考えられる酸化酵素がSADHの近傍にある可能性もあり、SADH遺伝子近傍を調査する必要があるとともに、P450遺伝子群を抽出し機能性を評価する必要もある。アルカン資化を指標としてスクリーニングを行い、一部のPrototheca属微細藻が直鎖アルカンをサブターミナル酸化経路を持つことを発見した。そこで、Prototheca zopfii JCM9400を用いて、サブターミナル酸化反応に関わると考えられる第二級アルコールをケトンへ酸化するsecondaryalcohol dehydrogenase (SADH)の精製及び遺伝子クローニングを試みた。P. zopfiiの無細胞抽出液を可溶性及び不溶性画分に分画し、2-dodecanolを基質、NAD(P)+を補酵素としてSADH活性を測定した結果、両画分に活性がみられた。可溶性画分より硫安分画、各種カラムクロマトグラフィーを用いてSADHを精製した。SDS-PAGEにより推定される本酵素の分子量は約35kDaであった。さらに精製酵素を用いて様々なアルコールに対する活性を調べたところ、第二級アルコールに対する活性はあるが第一級アルコールに対する活性が確認できなかったことから、この酵素がサブターミナル酸化経路に関与している可能性が示唆された。精製タンパク質から部分アミノ酸配列を決定し、この配列を基に3,117 bpから成る塩基配列を得た。この塩基配列から推定されたアミノ酸配列をタンパク質データベースで相同性検索した結果、acetoin reductaseと高い相同性を示す822bpの断片を得た。cDNAより対応する遺伝子を取得した結果、推定アミノ酸配列が精製した酵素のアミノ酸配列と一致したので、目的の酵素をコードする遺伝子が得られたと考えられる。このcDNA由来の塩基配列からの推定アミノ酸配列を相同性検索した結果、acetion reductaseやshort chain dehydrogenaseとの相同性を示した。微細藻Prototheca zopfii JCM9400のドラフトゲノム解析を評価することを試みた。GC含量は極めて高く、ORFで約60%、非翻訳領域では70%以上示した。GC含量が極めて高いためにゲノム情報のコンティグ数が多くなり遺伝子のアノテーションを行うことが難しかった。これまでに解析を行ったsecondaryalcohol dehydrogenase (SADH)のホモログ遺伝子の探索を試みたが、遺伝子の断片化のため同定することはできなかった。また、これまでにバクテリアなどで報告されているバイヤビリガーモノオキシゲナーゼと類似の配列を見い出すことができなかった。P. zopfiiは我々がこれまでに得た微生物の中で最も効率的にアルカンをサブターミナル酸化経路で代謝することができる。アルカンの分解能力の高さだけでなく、細胞表層の高い新油性も影響していると考えられる。

そこで、遺伝子工学的アプローチでこれらメカニズムを解明するために、P. zopfiiの形質転換系の構築を試みた。まずは、選択マーカーの探索のために、これまで実績のある薬剤耐性能を試験した結果、カナマイシン、テトラサイクリン、ゼオシンなどの薬剤が比較的低濃度で有効であることがわかった。ここではゼオシン耐性マーカーを利用し、パーティクルガン法による形質転換を試みた。その結果、得られた形質転換体のゲノム上に導入したベクター遺伝子がPCRにより確認することができた。応用微生物学P. zopfii JCM9400におけるアルカンのサブターミナル酸化に関わる酵素遺伝子の基質特異性を評価した。発現させた酵素SADHはNAD+を補酵素とし、1級アルコールの酸化還元は行わず、2級アルコールにのみ活性を持つことが見いだされた。また、本酵素のホモログ遺伝子もドラフトゲノム解析情報から得られており、今後ホモログ遺伝子の諸性質を解明する計画である。さらに長鎖アルカンのサブターミナル酸化に関わると考えられる候補遺伝子を抽出し、機能評価することが期待される。以上のことから達成度は順調であると判断できる。アルカンのサブターミナル酸化に関わる酵素及びその遺伝子をひとつ見いだした。アルカンがPrototheca zopfiiで代謝されていくには多くの酵素反応が関わっていると考えられるが、その糸口を切り開いたことは意義があると考えられる。また、形質転換系の構築においても、P. zopfiiに対してゼオシンなどいくつかの抗生物質が有効であることを見いだしており、遺伝子導入法やP. zopfii内で働くプロモーターの探索などが直近の課題といえる。さらに、25年度以降計画していたゲノム解析を24年度に前倒しして行った。ゲノム情報の整理といったさらなる解析は必要であるもののこれらのツールを駆使してアルカンのサブターミナル酸化に関わる候補となる遺伝子を抽出することが期待される。ドラフトゲノム情報で得られた候補遺伝子(SADH、バイヤビリガーモノオキシゲナーゼなど)を単離し、それらの機能を評価する。さらには一般的に高発現プロモーターと考えられているプロモーターを単離し、形質転換系構築に利用する。ドラフトゲノム情報は得られているが、予想よりもGC含量が高かったため得られた遺伝子情報が断片化されている。今後、別の方法で遺伝子配列決定しより情報量が多いドラフトゲノム情報とすべきであると考えている。まずはドラフトゲノム情報を整理し、候補となるアルカン酸化酵素、アルコール酸化酵素、バイヤビリガー反応に関わる酵素などの候補遺伝子を特定し、それら遺伝子がコードする酵素の機能を解明する。また、一般的に高発現が期待されるプロモーターを選定し、Prototheca zopfiiの形質転換系構築に応用する。
格子欠陥によるフォノン散乱の波長依存性測定と部分還元ルチル熱電材料の高性能化

ルチルを部分的に還元することで導入される面欠陥の周期の変化と熱伝導率の低下割合を部分還元量が異なる試料を作製することで明らかにした.熱伝導率の測定には比較的信頼性の高い定常法を用いることとし,まず定常法の測定系の構築を行った.また,電気伝導率を測定するためのファンデルポー法による電気抵抗測定系も構築し,測定された熱伝導率から電子による熱伝導分を取り除くことで格子熱伝導率を算出した.測定された格子熱伝導率は予想通り面欠陥濃度の上昇に伴い単調に低下したが,その低下率は濃度の上昇とともに減少し格子熱伝導率はある値に漸近していくことが明らかになった.これは,この結晶内にこの面欠陥では散乱されない熱伝導フォノンの成分が存在することを示している.また,同様に格子熱伝導率を低下させる不純物元素(Zr)を添加した時の熱伝導率の低下割合について実測した.面欠陥によってある程度まで減少した試料では不純物元素の添加による原子サイズの欠陥の導入によっても残留していた格子熱伝導率を減少させることはほとんどできなかった.これらから,面欠陥と不純物元素の両者が同じ波長域の熱伝導フォノンを散乱していることが確認された.原子サイズの欠陥によるフォノンの散乱は比較的短波長であることが分かっているため,面欠陥によって散乱されているフォノン成分も比較的短波長成分であることが推測される.次年度は熱処理によって数100nmの大きさの析出物を形成する方法を確立させるとともに,このような比較的大きな欠陥による格子熱伝導率の低下の割合の測定を行う.これにより比較的長波長のフォノンが熱伝導に及ぼしている割合が明らかになると期待している.熱伝導に寄与しているフォノンの波長領域の中で,比較的短い波長領域に対する実験を終えることができた.次年度は比較的長波長領域のフォノンの影響を明らかにすることを目指す.これを定量的に明らかにすることができたならば,最終年度において両者の相乗作用がどの程度見られるかを明らかにし,全波長領域で適切な散乱源を配置する試料作製方法について検討を行う.ルチルを部分的に還元することで導入される面欠陥の周期の変化と熱伝導率の低下割合を部分還元量が異なる試料を作製することで明らかにした.熱伝導率の測定には比較的信頼性の高い定常法を用いることとし,まず定常法の測定系の構築を行った.また,電気伝導率を測定するためのファンデルポー法による電気抵抗測定系も構築し,測定された熱伝導率から電子による熱伝導分を取り除くことで格子熱伝導率を算出した.測定された格子熱伝導率は予想通り面欠陥濃度の上昇に伴い単調に低下したが,その低下率は濃度の上昇とともに減少し格子熱伝導率はある値に漸近していくことが明らかになった.これは,この結晶内にこの面欠陥では散乱されない熱伝導フォノンの成分が存在することを示している.また,同様に格子熱伝導率を低下させる不純物元素(Zr)を添加した時の熱伝導率の低下割合について実測した.面欠陥によってある程度まで減少した試料では不純物元素の添加による原子サイズの欠陥の導入によっても残留していた格子熱伝導率を減少させることはほとんどできなかった.これらから,面欠陥と不純物元素の両者が同じ波長域の熱伝導フォノンを散乱していることが確認された.原子サイズの欠陥によるフォノンの散乱は比較的短波長であることが分かっているため,面欠陥によって散乱されているフォノン成分も比較的短波長成分であることが推測される.次年度は熱処理によって数100nmの大きさの析出物を形成する方法を確立させるとともに,このような比較的大きな欠陥による格子熱伝導率の低下の割合の測定を行う.これにより比較的長波長のフォノンが熱伝導に及ぼしている割合が明らかになると期待している.熱伝導に寄与しているフォノンの波長領域の中で,比較的短い波長領域に対する実験を終えることができた.次年度は比較的長波長領域のフォノンの影響を明らかにすることを目指す.これを定量的に明らかにすることができたならば,最終年度において両者の相乗作用がどの程度見られるかを明らかにし,全波長領域で適切な散乱源を配置する試料作製方法について検討を行う.
肝細胞におけるHDL新生メカニズムの解明

今回の我々が行った研究は末梢から開始されると考えられているコレステロール逆転送系の終点として位置づけられている肝細胞においてHDL新生を検討するという逆転の発想を基盤としたものである。研究対象はヒト肝ガン株細胞であるHepG2とマウス肝初代培養細胞を用いて行った。血中への細胞コレステロールの搬送には1)物理化学平衡に元づく非特異的な拡散と2)両親媒性αヘリックス構造を持つアポリポタンパク質と細胞表面のABCA1タンパク質の共同作用により新生HDL粒子が構築されるという特異的な機構が存在する。後者の反応を特異的に阻害する薬剤を投与したマウスにおいて肝で有意にコレステロール蓄積量が増加したことで本経路が最も活発にコレステロール搬送を担っていることが予想されたので肝細胞の培養上清から分泌されるリポタンパク質粒子を検討した。本研究成果では、HepG2細胞並びにマウス肝初代培養細胞上清は超遠心法にて各種リポタンパク質に分画し、HDL産生について検討した。アポAIに特異的なモノクローナル抗体725-1E2は後者のコレステロール搬出を阻害する(Okuhira, Tsujita et al.2004)がこの抗体存在下では肝細胞からのHDL産生が消失し、ABCA1の自殺基質様阻害剤(Wu, Tsujita et al.2004)投与HepG2細胞やABCA1欠損マウスの肝初代培養細胞においてHDL産生機構は末梢細胞と同様に存在しアポAI-ABCA1によるHDL新生機構が肝からのHDL新生に関与していることが明らかにできた(Tsujita etal.2005)今回の我々が行った研究は末梢から開始されると考えられているコレステロール逆転送系の終点として位置づけられている肝細胞においてHDL新生を検討するという逆転の発想を基盤としたものである。アポAIに特異的なモノクローナル抗体725-1E2は後者のコレステロール搬出を阻害する(Okuhira, Tsujita et al.2004)がこの抗体存在下では肝細胞からのHDL産生が消失し、ABCA1の自殺基質様阻害剤(Wu, Tsujita et al.2004)投与HepG2細胞やABCA1欠損マウスの肝初代培養細胞においてHDL産生機構は末梢細胞と同様に存在しアポAI-ABCA1によるHDL新生機構が肝からのHDL新生に関与していることが明らかにできた(Tsujita etal.2005)肝におけるHDL新生メカニズムを明らかにするため、HepG2細胞ならびにマウス肝初代培養細胞を用いてapoAI-ABCA1経路について検討を行なった。細胞培養上清のHPLCによる解析の結果、LDLとHDLがマウス肝初代培養細胞とHepG2細胞で検出された。HepG2細胞ではHDL-TCは外困性のヒトapoAI(10μg/ml)の添加で1.52倍に上昇した。ABCA1機構の阻害薬、Probucol、の細胞への導入によりHDL-TCは32%に、遊離apoAIに特異的な抗体(725-1E2)存在下ではHDL-TCは4.7%へ低下した。これに対してHDL-PLはapoAIの添加により20%程度が上昇し、Probucol投与並びに725-1E2存在下では50%が低下した。725-1Eに抗体存在下でのHDL画分に検出されるPL粒子を同定するため1.063<d<1.21g/mL画分をSDS-PAGEで展開後、免疫法で共存するタンパク質の検討を行なった。その結果培養上清にはalbuminやapoEが存在し,PL粒子にはこれらの蛋白質が結合していることが推測される。ABCA1機構により構築されたapoE-preβHDL粒子はapoAI-preβHDL粒子と同様なコレステロール:リン脂質比を示すことから、今回のHDL画分に回収されたPL粒子はABCA1による新生機構とは異なる経路由来であると推測される。以上をまとめるとHepG2細胞でのコレステロールを含むHDKの構築反応は他の末梢細胞と同様にapoAI-ABCA1経路に大きく依存し、内因性のapoAIはautocrine様式で反応しHDLを構築する事が明らかとなった。本研究プロジェクトはコレステロール逆転送系の終点として位置づけられている肝細胞でのHDL新生を検討するという逆転の発想を基盤としたものである。血中への細胞コレステロールの搬出には1)物理化学平衡に基づく非特異的な拡散と2)両親媒性αヘリックス構造を持つアポリポタンパク質と細胞表面のABCA1タンパク質の共同作用により新生HDL粒子が構築される、特異的な機構が存在する。

後者の反応を特異的に阻害する薬剤を投与したマウスにおいて肝で有意にコレステロール蓄積量が増加したことで本経路が最も活発にコレステロール搬出を担っていることが予想されたので肝細胞の培養上清から分泌されるリポタンパク質粒子を検討した。HepG2細胞ならびにマウス肝初代培養細胞上清は超遠心法にて各種リポタンパク質に分画し、HDL産生について検討した。アポAIに特異的なモノクローナル抗体725-1E2は後者のコレステロール搬出を阻害する(Okuhira, Tsujita et al. 2004)が、この抗体存在下では肝細胞からのHDL産生が消失し、ABCA1の自殺基質様阻害剤(Wu, Tsujita et al. 2004)投与HepG2細胞やABCA1欠損マウスの肝初代培養細胞の上清からも同様にHDL産生が消失していた。これらの結果から肝細胞においてHDL産生機構は末梢細胞と同様に存在しアポAI-ABCA1によるHDL新生機構が肝からのHDL新生に関与していることが明らかにできた。(Tsujita et al. 2005)
仕事・会社に対する「誇り」と「見通し」が動機づけに果たす役割に関する国際比較研究

本年度は、従業員の動機づけ問題について、外部から与えられる経済的な報酬の影響を捨象した、内発的動機づけの純粋なあり方を抽出するために、オンライン・ソフトウェアの開発者を対象にインタビュー調査を行った。調査対象としてオンライン・ソフトウェアの開発者を選んだのは、ソフトウェアの開発によって経済的な対価をほとんど、もしくはまったく得ていない事例が多く見受けられるため、有能さや自己決定の感覚、あるいは仕事・会社への誇りにもとづく内発的な動機づけによって、仕事への意欲・やる気が決定されていると考えられるからである。インタビュー調査の結果、少なくともこうしたソフトウェア開発の仕事においては、その仕事に参入するかどうかという参加(退出)の意思決定の際には金銭的な報酬が考慮されることはあるが、その仕事を継続するかどうかという動機づけ問題においては、動機づけのレベルを低下させることはあっても強化することはないということが明らかになった。また、自分の開発したソフトウェアが雑誌記事になったり、多くのユーザに指示されていることがわかったりしたときは、自分の仕事や会社に誇りの気持ちを感じ、励まされるという発言が多くの開発者から得られた。つまり、自分の外部から入力される情報をもとにして形成された「誇り」の感情が、仕事に対する動機づけの源泉となっていることがわかったのである。さらに、自分の意図した機能がソフトウェアとして実現されたときには、自らが有能であることを実感し、それによっていっそうやる気が出てくると言う開発者もいた。ここから、やはりDeci(1975)の内発的動機づけの枠組みは、その有効性を失っていないことが確認された。現在、インタビュー調査の結果をもとに、論文を執筆中である。また、インタビュー記録とケース・スタディについてはすでに公表している。