hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
腸管免疫担当細胞と上皮細胞および腸内細菌群の機能的連絡網の解明

現在までに得られた知見を基に、腸管上皮細胞の再生が亢進しているIgm鎖の細胞膜のexon部分をターゲッティングしたB細胞欠損マウスについて、末梢血および腹腔細胞(PEC)を回収し、様々なB細胞のサブセット(B-1やB-2細胞など)のsortingを行い、これを移入し、キメラマウスを作成した。移入後どのサブセットがいずれの組織(脾臓、リンパ節、PEC、末梢血、腸管など)に再構築するかをFACS can、免疫化学的手法および共焦点レーザー顕微鏡を用いて解析しているが、現在のところ追究中である。また。腸内細菌叢がもたらす腸管上皮細胞の再生速度への影響の検討においては、B細胞欠損マウスにおいて抗生物質の投与により再生速度が正常化することを確認した。その後、抗生物質の投与前後において腸内細菌叢の変化を検討中である。一方、γδ型T細胞欠損マウスにおいて腸管上皮細胞の再生速度は減退していることからγδ型T細胞が再生を正の方向に統御していることは以前報告した。今回は特に腸管に存在するVγ1、Vγ4、Vγ7の各サブセットの抗体を精製し、マウスに腹腔内投与することでそれぞれのサブセットを特異的に消失させることができた。この方法を用いて免疫組織科学的検討を行い、腸管に特異的なサブセットであるVγ7がこの統御を行っている可能性が高くなった。今後はそのサブセットをC57BL/6マウスを用いてsortingし、RNAを抽出した後、マイクロアレイ法、RT-PCR法等を用いて特異的な因子を同定していく検討を重ねる。また。
拡張型心筋症に対するiPS心筋細胞に基づくドラッグリポジショニング

iPS心筋細胞等を用いて市販医薬品類から、血管新生、抗線維化、間葉系幹細胞動員集積、及び体内再生因子誘導作用等をメルクマールとしてスクリーニングを行った。その結果、選択された有望医薬品類を用いて、自然発症拡張型心筋症(J2N-k)ハムスターモデルを用いて、無毒性量にて20週齢から8週間反復経口投与を行い、心機能(LVEF)の改善効果を確認した結果、媒体群に比し6種(PDE阻害剤、気管支拡張剤、蛋白分解酵素阻害剤、キナーゼ阻害剤、TGF-β抑制剤、PG関連薬等)の医薬品類で有効性が確認された。今回、これらの6種の医薬品類を用いて、各々の臨床投与量での有効性を確認した。その結果、媒体群では、20週齢から28週齢にて左室収縮機能の悪化[LVEFの低下)が観察された。無毒性量投与で有効性が確認された6種の医薬品を再度臨床投与量にて確認した所、降圧作用を示さない以下の4種の医薬品で媒体群に比し、有意なEFの低下を抑制した。即ち、気管支喘息薬として使用されている気管支拡張剤投与群では、投与4週間後のEF値が、慢性動脈閉塞症及び脳梗塞再発抑制剤として使用されているPDE阻害剤投与群では、投与4及び8週間後のEF値が、特発性肺線維症として使用されているTGF-β抑制剤投与群では、投与4及び8週間後のEF値が、また、特発性肺線維症薬として使用されているチロシンキナーゼ阻害剤投与群では、投与8週間後のEF値が媒体群と比較して有意に高値であり、拡張型心筋症の悪化抑制作用が確認された。一方、本態性高血圧症や虚血性心疾患又は拡張型心筋症に基づく慢性心不全薬として臨床応用されているβブロッカー投与群では、投与4及び8週間後のEF値が媒体群と比較して有意に高値であった。βブロッカーに加えてこれらの降圧作用を有さない作用機序の異なる数種の医薬品類の併用投与(配合剤)は相乗効果が期待できる。自然発症拡張型心筋症(J2N-k)ハムスターモデルを用いて、無毒性量にて20週齢から8週間反復経口投与を行い、心機能(LVEF)の改善効果を確認した結果、媒体群に比し6種(PDE阻害剤、気管支拡張剤、蛋白分解酵素阻害剤、キナーゼ阻害剤、TGF-β抑制剤、PG関連薬等)の医薬品類で有効性が確認された。即ち、気管支拡張剤であるオザグレル塩酸塩水和物(3.3mg/kgx2回/日)投与群、PDE阻害剤であるシロスタゾール(1.7mg/kgx2回/日)投与群、TGF-β抑制剤であるピルフェニドン(15mg/kgx2回)投与群、及びチロシンキナーゼ阻害剤であるニンテダニブエタンスルホン酸塩(2.5mg/kgx2回)投与群では、媒体群と比較してEF値の有意な低下抑制作用が確認された。一方、本態性高血圧症や虚血性心疾患又は拡張型心筋症に基づく慢性心不全薬として臨床使用されているβブロッカーのカルベジロール(0.17mg/kgx2回)投与群でもEF値の低下が有意に抑制された。また、我々が現在開発中の体内再生因子誘導剤であるONO-1301(3mg/kgx2回)投与群では、投与前に比しEF値の改善効果が確認され、拡張型心筋症治療薬として期待できる。βブロッカーに加えてこれらの作用機序の異なる数種の医薬品類の併用投与(配合剤)は拡張型心筋症治療薬として相乗効果が期待できる。希少疾病医薬品指定疾患である拡張型心筋症(DCM)は、末期心不全にあっては1年死亡率が75%とされる。DCMに対する根本治療は心臓移植であるが、臓器移植法改定後においてもドナーの絶対的不足状態は変わらない。心臓移植適応患者には、待機的治療として補助人工心臓(LVAD)が施行されるが、合併症(脳梗塞、感染症等)の危険性も高く、待機死する患者も多い。我が国における深刻なドナー不足を鑑みると、早期治療介入による心臓移植・LVAD装着の回避及び遅延を目指した新しい再生創薬医薬品の開発は喫緊の課題である。今回、我々はiPS心筋細胞等を用いたin vitroスクリーニングにて選択された幾つかの既存医薬品類を用いて、δ-筋グリカン欠損自然発症拡張型心筋症ハムスター(J2N-k)モデルにてin vivoスクリーニング(その1)を実施した。各投与量は長期毒性試験における無毒性量を基準として設定し評価した結果、6種の有望医薬品類が選択された。

本研究目的は、これらの選択された医薬品類から、さらに臨床投与量を基準としたin vivo再評価(その2)を行い、これらの有望医薬品類を用いて、現在本態性高血圧症や虚血性心疾患又は拡張型心筋症に基づく慢性心不全薬として臨床応用されているβブロッカー等を含めて、これらの併用投与における相乗効果の検討を行い、これらの作用機序の異なる医薬品類の併用投与(配合剤)から拡張型心筋症に対する最適医薬品の組み合わせを選択し、医師主導治験開始準備を行うことにある。本研究の目的は、これらの医薬品類(配合剤を含む)の効能追加(ドラッグリポジショニング)を目的とするが、さらに選択された最適医薬品類をリード化合物として作用機序解明から、新しいスクリーニング系を再構築し、再生創薬としてさらに有用な画期的新規医薬品を開発(リーバースドラッグディスカバリー)することを最終目的とする。iPS心筋細胞等を用いて市販医薬品類から、血管新生、抗線維化、間葉系幹細胞動員集積、及び体内再生因子誘導作用等をメルクマールとしてスクリーニングを行った。その結果、選択された有望医薬品類を用いて、自然発症拡張型心筋症(J2N-k)ハムスターモデルを用いて、無毒性量にて20週齢から8週間反復経口投与を行い、心機能(LVEF)の改善効果を確認した結果、媒体群に比し6種(PDE阻害剤、気管支拡張剤、蛋白分解酵素阻害剤、キナーゼ阻害剤、TGF-β抑制剤、PG関連薬等)の医薬品類で有効性が確認された。今回、これらの6種の医薬品類を用いて、各々の臨床投与量での有効性を確認した。その結果、媒体群では、20週齢から28週齢にて左室収縮機能の悪化[LVEFの低下)が観察された。無毒性量投与で有効性が確認された6種の医薬品を再度臨床投与量にて確認した所、降圧作用を示さない以下の4種の医薬品で媒体群に比し、有意なEFの低下を抑制した。即ち、気管支喘息薬として使用されている気管支拡張剤投与群では、投与4週間後のEF値が、慢性動脈閉塞症及び脳梗塞再発抑制剤として使用されているPDE阻害剤投与群では、投与4及び8週間後のEF値が、特発性肺線維症として使用されているTGF-β抑制剤投与群では、投与4及び8週間後のEF値が、また、特発性肺線維症薬として使用されているチロシンキナーゼ阻害剤投与群では、投与8週間後のEF値が媒体群と比較して有意に高値であり、拡張型心筋症の悪化抑制作用が確認された。一方、本態性高血圧症や虚血性心疾患又は拡張型心筋症に基づく慢性心不全薬として臨床応用されているβブロッカー投与群では、投与4及び8週間後のEF値が媒体群と比較して有意に高値であった。βブロッカーに加えてこれらの降圧作用を有さない作用機序の異なる数種の医薬品類の併用投与(配合剤)は相乗効果が期待できる。自然発症拡張型心筋症(J2N-k)ハムスターモデルを用いて、無毒性量にて20週齢から8週間反復経口投与を行い、心機能(LVEF)の改善効果を確認した結果、媒体群に比し6種(PDE阻害剤、気管支拡張剤、蛋白分解酵素阻害剤、キナーゼ阻害剤、TGF-β抑制剤、PG関連薬等)の医薬品類で有効性が確認された。即ち、気管支拡張剤であるオザグレル塩酸塩水和物(3.3mg/kgx2回/日)投与群、PDE阻害剤であるシロスタゾール(1.7mg/kgx2回/日)投与群、TGF-β抑制剤であるピルフェニドン(15mg/kgx2回)投与群、及びチロシンキナーゼ阻害剤であるニンテダニブエタンスルホン酸塩(2.5mg/kgx2回)投与群では、媒体群と比較してEF値の有意な低下抑制作用が確認された。一方、本態性高血圧症や虚血性心疾患又は拡張型心筋症に基づく慢性心不全薬として臨床使用されているβブロッカーのカルベジロール(0.17mg/kgx2回)投与群でもEF値の低下が有意に抑制された。
可視光応答型薄膜状光触媒を用いたタンデム型太陽電池の開発

高活性な可視光応答型光触媒の開発をめざして、硫化物の新規合成を精力的に推進した。大量の合成が可能な,大気中でのチオシアン酸亜鉛の熱分解という新しい方法を用いて,階層状で細孔を調節できる様々な形態(マクロ球状型,タンポポ型,ナノチューブ型など)を有する硫化亜鉛(ZnS)を発見し,それらの特性について,最新の表面分析手法を駆使して調べた結果,窒素と炭素をZnS中に取り込んだ触媒が生成しており,可視光応答型になることを見いだすと共に、生成機構も解明しアメリカ化学会の雑誌に公表した。ZnSそのものは,紫外光(約400nm以下の光)しか吸収しない。しかし,太陽光には紫外光はわずか数%しか含まれていないので,このままでは,効率が悪いので,可視光(波長が約400nm以上の目に見える光)化することが求められている。発見した光触媒は,可視光下で高い有機物分解活性を示すと共に,助触媒を併用することなく可視光照射下で水から水素を発生させる高い活性があることを明らかにした。同様な手法を拡張して、ミネラルを活用した、形態を制御できる硫化カドミウムの大量合成に成功し、水から水素を生成できる高い活性があることを明らかにすると共に、生成機構も解明し、アメリカ化学会の雑誌に公表した。銅は酸化されやすいが、酸化されない状態で銅ナノ粒子を調製する合成法を初めて開発し、国際誌に公表した。室温でレーザーを用いて作った酸化鉄(いわゆる鉄の赤さび)薄膜をさらに最適の温度で電気炉で焼いたものを使用して太陽電池を作製すると、その性能が著しく向上することを発見し、国際誌に公表した。本研究で新しく発見・開発した光触媒や金属ナノ粒子の太陽電池や水素発生系の材料としての評価や改良,課題等について引き続き研究を行っており、タンデム型太陽電池の開発に向けて努力を傾注しているところである。年度途中での採用(10月末に来日)であったが、調節できる様々の形態や細孔を有する、高活性な可視光応答型光触媒の開発をめざして、酸化鉄のような酸化物や硫化物のような非酸化物の新規合成を精力的に行った。この短期間の間に、ナノタワー型の硫化カドミウム(CdS)の発見、階層状で細孔を調節できるタンポポ型やナノチューブ型の硫化亜鉛(ZnS)の発見、さらにはマクロボール型やナノシート型の酸化鉄の発見を行った。今後は、これらの新規の光触媒の特長を詳細に調べた後、太陽電池に組み込んでその性能を調べる。さらに、これらの光触媒を用いて、可視光下での水素発生や有機物分解、がん細胞死滅への効果に関する研究も試みる。併行して、可視光下での水素発生用光触媒として、固溶体にも着目して研究を進めた。レーザーアブレーション法は、ペレット状に圧縮したターゲットにレーザーを照射し発生したプルームを基板に蒸着させて薄膜を作製する方法であるが、ターゲットとしてGaNとIn_2O_3の混合粉末を用いて、この方法で室温で薄膜を作製した後に600°Cで焼成すると固溶体が出来ることを見いだした。GaNの融点が約800°C、In_2O_3の融点が2000°C以上であるので、両方の融点以下の温度で固溶体の作製に成功したことは大変注目すべきことである。なお、スキージー法はペースト状のターゲットをガラス棒などで引き伸ばして薄膜を作製する方法であるが、この方法では焼成温度を高くしても全く固溶体を作製出来なかった。以上の結果は、レーザーアブレーション法を用いて、他の様々な材料も含めて固溶体の作製に取り組むことにより、新規の可視光応答型薄膜状光触媒の開発が可能であることを強く示唆しており、次年度の大きな研究対象の一つである。調節可能な様々の形態や細孔を有する、高活性な可視光応答型光触媒の開発をめざして、硫化物のような非酸化物や酸化鉄のような酸化物の新規合成を精力的に行った。大量の合成が可能な,大気中でのチオシアン酸亜鉛の熱分解という新しい方法を用いて,階層状で細孔を調節できる様々な形態(マクロ球状型,タンポポ型,ナノチューブ型など)を有する硫化亜鉛(ZnS)を発見し,それらの特性について,最新の表面分析手法を駆使して調べた。その結果,窒素と炭素をZnS中に取り込んだ触媒(N,C-ドープZnS)が生成しており,可視光応答型になることを見いだした。ZnSそのものは,バンドギャップが3.6eVであり,紫外光(約400nm以下の光)しか吸収しない。しかし,太陽光には紫外光はわずか数%しか含まれていないので,このままでは,効率が悪いので,可視光(波長が約400nm以上の光)化することが求められている。発見した光触媒は,可視光下で高い有機物分解活性を示すと共に,助触媒を併用することなく可視光照射下で水(亜硫酸塩存在下)から水素を発生させる高い活性があることを明らかにした。ZnSの場合と同様な熱分解法を用いて,ナノタワー型の硫化カドミウムを発見すると共に,可視光照射下で高い水素発生活性を示すことも見いだしている。また,同様な光触媒をマイクロ波照射法を用いて短時間(数分)で合成できる方法も開発し,さらに研究中である。この他に,マクロ球状型やナノシート型の酸化鉄の発見も初めて行った。

今後は,新規の可視光応答型光触媒の開発を続行すると共に,本研究で新しく発見・開発した光触媒の太陽電池や水素発生系の材料としての評価や改良,課題等について努力を傾注する。高活性な可視光応答型光触媒の開発をめざして、硫化物の新規合成を精力的に推進した。大量の合成が可能な,大気中でのチオシアン酸亜鉛の熱分解という新しい方法を用いて,階層状で細孔を調節できる様々な形態(マクロ球状型,タンポポ型,ナノチューブ型など)を有する硫化亜鉛(ZnS)を発見し,それらの特性について,最新の表面分析手法を駆使して調べた結果,窒素と炭素をZnS中に取り込んだ触媒が生成しており,可視光応答型になることを見いだすと共に、生成機構も解明しアメリカ化学会の雑誌に公表した。ZnSそのものは,紫外光(約400nm以下の光)しか吸収しない。しかし,太陽光には紫外光はわずか数%しか含まれていないので,このままでは,効率が悪いので,可視光(波長が約400nm以上の目に見える光)化することが求められている。発見した光触媒は,可視光下で高い有機物分解活性を示すと共に,助触媒を併用することなく可視光照射下で水から水素を発生させる高い活性があることを明らかにした。同様な手法を拡張して、ミネラルを活用した、形態を制御できる硫化カドミウムの大量合成に成功し、水から水素を生成できる高い活性があることを明らかにすると共に、生成機構も解明し、アメリカ化学会の雑誌に公表した。銅は酸化されやすいが、酸化されない状態で銅ナノ粒子を調製する合成法を初めて開発し、国際誌に公表した。室温でレーザーを用いて作った酸化鉄(いわゆる鉄の赤さび)薄膜をさらに最適の温度で電気炉で焼いたものを使用して太陽電池を作製すると、その性能が著しく向上することを発見し、国際誌に公表した。本研究で新しく発見・開発した光触媒や金属ナノ粒子の太陽電池や水素発生系の材料としての評価や改良,課題等について引き続き研究を行っており、タンデム型太陽電池の開発に向けて努力を傾注しているところである。
脳の高次処理研究の推進に関する調査研究

平成4年度においては1回の研究会をもち、平成5年度より発足する重点研究「脳の高次処理」の研究戦略、実施の基本方針、この研究に関する世界の状況などについて討議した。この結果、1)重点研究の達成目標を、i)脳内情報のスパース表現、ii)認知・記憶系の順逆変換、iii)運動・行動系の順逆変換、iv)コバリアンス学習作業仮説の証明とする、2)この目標を理論と実験の共同研究により達成する、3)共同研究は、i)学習・記憶の情報処理班、ii)知覚・認知の情報処理班、iii)運動・行動の階層的情報処理班、iv)可塑的神経回路の情報処理班など4つの計画班において行う、4)本重点研究においては理論の側から提出された仮設を実験的に検証することが主体となるが、このための最も有力な研究手法として電位感受性色素あるいはCa感受性色素による神経活動の光学的記録を用いることなどが決定された。本重点研究に関連する世界の研究環境については、欧米においても理論と実験を統合した神経科学の研究所あるいは研究講座がぞくぞくと組織されているので、理論と実験の共同研究を行うことがぜひとも必要であること、光学的記録の電子技術については日本は世界最高のレベルにあり、光学的記録法を本重点研究の主要な研究手法とすることは極めて適切な戦略であることなどが議論された。平成2年度においては、視覚、聴覚、体性感覚、味覚を含む感覚系のさまざまなレベルで知覚認知の情報処理の神経機構を調べる実験的研究を行った。視覚系については、膝状体系、膝状体外系の詳細な神経路が明らかにされ、またX、Y神経節細胞の神経膜の電気的特性の差違が示された。またネコのクレアビショップ野、サルMT野、下側頭回などの高次視覚中枢では、3次元運動、Visualーflow、顔や風景などの複雑な視覚パタ-ンに選択的に反応する神経細胞が見いだされた。他の感覚系についても、ネコの聴覚野のフォルマント細胞、ラットの味覚中枢の神経細胞の反応選択性が解析され、認知の神経機構に関するさまざまな重要な知見がえられた。理論的な研究についても、さまざまな拘束条件を利用して2次元の視覚情報から視覚対象の3次元構造を推定する能力を備えたtopーdownの情報処理に基づく図形理解Neural net、眼球運動と中心視、周辺視の機能を備え、眼球運動により図形認知を行うNeural net、連想記憶による時系列情報処理を行う聴覚認知のNeural netのモデルなどヒトの認知機能に極めて近い認識機構を備えたモデルを構成する研究が試みられた。またchaosなどの非定常性を利用して、効率的に情報を記憶し、また記憶した情報と入力された情報とを効果的に照合し、類似したあるいは同一の記憶を読み出す機能を備えたNeural netなどの極めて野心的な認知と記憶のモデル研究が行われた。
新規開発NMR法によるH^+-ATP合成酵素回転触媒機構の解明

H^+-ATP合成酵素は生体膜に形成される電気化学ポテンシャルを用いてATPを合成する重要な酵素である。本酵素は回転触媒を行うという特異の性質を持つ。この酵素は水相に存在するF_1ドメインと膜中に存在するF_0ドメインからなる。本研究では、の回転のキーをなすβサブユニットのリガンド結合による構造変化の実態解明とサブユニットcの構造解析を中心に進めた。βサブユニットは分子量5万のため、標識部位が異なる4種の区分標識体を作成して主鎖シグナルの90%を帰属した。帰属したCα,Cβ,C',Nの化学シフト値からTALOSを用いて2次構造を推定し、ADPを加えた時に起こる化学シフト値の変化からおおよその構造変化領域を特定した。さらにN末端およびC末端のみが標識されているもので残余双極子相互作用(RDC)をそれぞれについて測定し、N末端とC末端の相対配置の決定を試みた。2次構造予測、化学シフト摂動の結果からこれらの領域は固い構造をとっていてヌクレオチドに対する影響もない部分である。RDCを使って計算した結果、N末端とC末端の相対配置はADPがある場合ではopen、ない場合ではclosedに近い結果が得られた。以上よりβサブユニットは単体のみでもα_3β_3γ複合体で見られたようなopenからclosedへの構造変化を起こすことが示唆された。このことからリガンド結合によって引き起こされるβサブユニットの構造変化はF_1の回転の駆動力になりうることが明らかになった。さらに、H^+-ATP合成酵素の膜に埋まっている部分であるF_0ドメインを構成するcサブユニットの^<13>C,^<15>N均一標識試料を得て、有機溶媒中での構造決定を行った。およびその固体構造についても固体NMRで解析を行い、二次構造についての情報を得た。この結果はc-ringの回転メカニズム解明に重要な示唆を与えるものである。H^+-ATP合成酵素は呼吸に基づく生体エネルギー生産系の最後に位置する重要なエネルギー変換タンパク質である。本研究では、われわれが開発してきた新奇なNMR手法を用いることにより、この酵素の回転触媒機構を原子の分解能で明らかにすることを目指している。本年度はまず、(1)区分安定同位体標識F_1βサブユニットを用いて巨大タンパク質骨格NMRシグナルの高分解能測定と帰属に取り組んだ。好熱菌βサブユニットの遺伝子をアミノ酸配列で(1390、391473)のように2つに分けて、インテインとともに別々のプラスミドに入れ、別々の大腸菌で発現させることにより区分標識されたβサブユニットを作製した。この際、^2H,^<13>C,^<15>Nの標識を行った。これを用いて、TROSY法による^1H-^<15>N相関2次元スペクトルおよびさまざまな3次元スペクトルを測定することにより、ポリペプチド主査シグナルの帰属を行った。次に、βサブユニット主鎖の帰属されたシグナル用いて、Mg-ADP、Mg-ATPなどのリガンドの結合がβにどのような構造変化を引き起こすかを全アミノ酸残基の情報を基に解析した。その結果、チロシンやヒスチジンに注目して解析を行ったときと同じように、リガンド結合によりβサブユニットはオープン型からクローズ型への構造変換をしているという結論に達した。(2)膜内在性ドメインF_0の固体高分解能NMRによる構造解析に関しては、サブユニットbおよびサブユニットcの大量発現法を確立した。そこで、サブユニットcを大量調製して膜に再構成し、その構造を調べている。

その際、本補助金で購入した固体NMRプローブを用いている。H^+-ATP合成酵素の水相F_1ドメインについては、触媒部位であるβサブユニットのリガンドによる構造変化の解析に溶液NMRを用いて取り組んでいる。βサブユニットは約52000の分子量を持ち、今までの方法では解析が困難である。そこで、山崎等が開発したインテインによる区分標識法を用いて均一標識された^<13>C,^<15>Nの信号の約90%を帰属するのに成功した。この帰属を基にタンパク質の二次構造解析を行い、α_3β_3γ複合体中における二次構造とほとんど同じであることを確認した。これを基に、リガンド結合によるβサブユニットの構造変化を解析するために残余双極子の測定を始めた。H^+-ATP合成酵素の膜に埋まっている部分であるF。ドメインを構成するcサブユニットの大量発現と精製を行い、一定の^<13>C,^<15>N均一標識試料を得ることが出来るようになった。さらに、大腸菌由来cサブユニットの固体試料について解析を行うために、固体高分解能NMR測定法の開発を行った。膜蛋白質を研究するモデルとして15残基のペプチド、マストパランX-Glyを対象として、一連の技術の開発に取り組んだ。固体NMRによって、結晶を作ることなく、脂質膜にある蛋白質の構造と機能を解析できる。^<13>Cと^<15>Nで完全標識した試料の固体NMR信号を帰属するために、約5種類の2次元および3次元NMRパルス系列を開発した。これらを用い、主鎖の炭素・窒素とβ炭素について完全な帰属を行った。等方化学シフトと立体構造の相関を利用して二次構造解析を行った。F_0F_1-ATP合成酵素cサブユニットについて、上記のような方法が適用できることを示すために、^<13>C均一標識試料について固体状態で、^<13>C2次元相関スペクトルを測定した。本年度は3年間の仕上げとして、回転触媒機構の駆動力がどこから来るかを明らかにすることに重点的に取り組みこれを明らかにすることができた。具体的には、モノマーβサブユニットのリガンド結合による構造変化の実態解明に焦点を絞った。βサブユニットは分子量5万のため、標識部位が異なる4種の区分標識体を作成して主鎖シグナルの90%を帰属し、2次構造を推定した。さらにN末端およびC末端のみが標識されているものでResidual Dipolar Coupling(RDC)をそれぞれについて測定し、N末端とC末端の相対配置の決定を試みた。RDCはN末端ドメインで65個、C末端ドメインで40個観測された。βモノマーのみの構造は報告されていないためα_3β_3の結晶構造からβサブユニット部分を使って計算値を求めた。観測されたRDCを全て使って実測値と計算値をフィットさせた場合両者に良い一致が見られなかった。これは計算値に正確なモノマーβの構造を使っていないことによるものと考えられる。よって2次構造をとっている領域のみでフィットを行った。
エンゲージド・ブッディズム(社会参加仏教)の現状と歴史

これまでの研究成果を学会誌に英語および日本語論文を投稿した(Japanese Journal of Religious Studiesおよび『近代仏教』)。昨年度末に東京にて開催された国際宗教学宗教史会議世界犬会(IAHR)における研究発表をもとに、内容をさらに発展させたものである(ただし、日本語雑誌の発行は2006年3月以降となる)。ほかにPacific World、The Eastern Buddhist編集部からも原稿依頼があったが、上記2点の論文執筆に加えてさらに2件の研究会議を基にした共著研究書の執筆負担が重なり(カリフォルニア大学における在米日系仏教徒の思想と活動に関する研究会議と、ハワイ大学における大戦間期ハワイの国際主義と日系人の役割に関する研究会議)、今年度中には果たせなかった。これら2誌への投稿は、来年度に実現したい。なお執筆分担した共著の研究書は、現在アメリカの大学出版会から出版するべく、それぞれ編集作業に入っており、来年度に公刊される予定である。夏期休暇中、3週間に及ぶ勤務校の学生引率業務が重なったため、10月にインドで開催された仏教者国際連帯会議(INEB)への参加や必要なインタビュー調査ができなかったことが悔やまれる。しかし2006年1月3月までデューク大学宗教学部で、客員教授としてTransnational Buddhismのクラスを担当するため、アメリカにおけるエンゲージド・ブッディズム関係資料の収集および研究者との交流を図ることに切り替えたことで、研究上のマイナス面は解消されたといえる。また12月にビルマ人僧侶が来日し、INEBメンバーの日本人僧侶とともに開催した講演会において、情報交換や教示を得ることができ、さらにロサンゼルス在住のスリランカ僧侶との連絡を取り続けた事もあって、上座部仏教徒の活動および仏教思想を考える上で多くの示唆を得た。本年度は、基礎的な文献、資料を収集してエンゲージド・ブッデイズムの理論枠組みの構築に向けて予備的な研究を行った。上座部仏教徒によるすぐれた理論枠組みがすでに提唱されており、欧米の研究者もそれにそう形で議論を展開しているが、東アジアの大乗仏教徒によるものはまだ量的にも質的にも乏しい状況である。具体的な事例を近代仏教史上に求め、その系譜を跡づける作業を行った。2003年6月と2004年1月にそれぞれ、エンゲージド・ブッディズ本に関する数少ない先駆的研究を発表した研究者を講師として迎えて研究会を行った。明治学院大学教授・阿満利麿氏に、近代日本史における事例、中部大学助教授・野田真里氏に、タイにおける事例をそれぞれ報告していただき、出席した仏教関係者との意見交換をふまえて新たな知見を得た。本年度は、近代日本仏教史におけるエンゲージド・ブッディズムの萌芽的な思想について、トランスナショナルな接触によって生起した様々な思想的営みがどのように展開したのか、という点から研究を行った。2004年11月、以前(2001年8月)にハワイ大学で開催された、大戦間期における日系人の歴史に関する国際会議での報告が、ハワイ大学出版会より出版予定となったので、エンゲージド・ブッディズムの視点を加えて投稿した。2005年3月、IAHRにて"Japanese Zen on the State"と題して発表。日本人仏教徒(国際的に活躍した鈴木大拙と、無名ながら一貫して平和・非暴力を唱えた井上秀夫)をとりあげた。彼らのトランスナショナルな接触がどのように思想の深化に影響したのかについて、パネリストからの教示を得て2005年5月〆切のJapanese Jounal of Religions Studiesに投稿する予定。
抗原の扁桃投与によって唾液腺に誘導される特異的IgA産生細胞の移行経路の検討

これまでの研究から,研究代表者は口蓋扁桃投与法が従来の経鼻投与や胃内投与法よりも,唾液中に特異的な分泌型IgAを効果的に誘導させる投与法であることを既に明らかにした.しかし,口蓋扁桃投与法によって唾液腺組織に誘導される特異的IgA産生細胞が,どのような経路によって唾液腺組織内に優先的に誘導されたのか明らかになっていない.このため,まず,抗原で感作された扁桃リンパ球の組織への接着能を調べることで,扁桃リンパ球がこの組織から唾液腺組織へ移行できるかどうか調べた.ウサギの扁桃リンパ球を,in vivoでヒツジ赤血球によって感作した.次いで,このリンパ球を別のウサギの様々な組織から作成した凍結切片と反応させた.各組織の凍結切片と接着した抗原特異的リンパ球の単位面積あたりの細胞数は,唾液腺組織の場合が最も多く,鼻粘膜,腸粘膜がこれに続いた.唾液腺組織での単位面積あたりの感作リンパ球の細胞数は,各大小唾液腺組織を通じてほぼ一定であった.このことから,扁桃リンパ球は唾液腺組織に選択的に移行する可能性が高いことが示された(投稿準備中).今後は,抗原を感作させた扁桃のリンパ球を別のウサギへ移入することによって,実際に唾液腺組織へ移行するか直接的に確かめたい.すなわち,感作が成立した扁桃リンパ球をいくつかの異なった経路で別のウサギに移入し,口蓋扁桃,大小唾液腺,脾臓などの免疫に関連する様々な組織に,特異的IgA産生細胞がどの程度分布しているか測定する予定である.また,各組織に分布する特異的IgA産生細胞が実際に特異的IgAをどの程度分泌しているか定量する予定である.これまでの研究から,研究代表者は口蓋扁桃投与法が従来の経鼻投与や胃内投与法よりも,唾液中に特異的な分泌型IgAを効果的に誘導させる投与法であることを既に明らかにした.しかし,口蓋扁桃投与法によって唾液腺組織に誘導される特異的IgA産生細胞が,どのような経路によって唾液腺組織内に優先的に誘導されたのか明らかになっていない.このため,まず,抗原で感作された扁桃リンパ球の組織への接着能を調べることで,扁桃リンパ球がこの組織から唾液腺組織へ移行できるかどうか調べた.ウサギの扁桃リンパ球を,in vivoでヒツジ赤血球によって感作した.次いで,このリンパ球を別のウサギの様々な組織から作成した凍結切片と反応させた.各組織の凍結切片と接着した抗原特異的リンパ球の単位面積あたりの細胞数は,唾液腺組織の場合が最も多く,鼻粘膜,腸粘膜がこれに続いた.唾液腺組織での単位面積あたりの感作リンパ球の細胞数は,各大小唾液腺組織を通じてほぼ一定であった.このことから,扁桃リンパ球は唾液腺組織に選択的に移行する可能性が高いことが示された(投稿準備中).今後は,抗原を感作させた扁桃のリンパ球を別のウサギへ移入することによって,実際に唾液腺組織へ移行するか直接的に確かめたい.すなわち,感作が成立した扁桃リンパ球をいくつかの異なった経路で別のウサギに移入し,口蓋扁桃,大小唾液腺,脾臓などの免疫に関連する様々な組織に,特異的IgA産生細胞がどの程度分布しているか測定する予定である.また,各組織に分布する特異的IgA産生細胞が実際に特異的IgAをどの程度分泌しているか定量する予定である.
アンドロゲン依存性前立腺癌細胞株へのIL6遺伝子導入による細胞形質の変化

ヒトのアンドロゲン依存性前立腺癌細胞株LNCaPにIL-6の遺伝子を組み込んだ発現ベクターをlipofectamine法により導入し、IL-6強制発現株を選別した(以下LNCaP/IL-6と略す)。コントロールとして発現ベクターのみを導入したLNCaP/Coを同時に作成した。IL-6の濃度測定に関しては培養上清液を用い市販のELISA kitを用いた。母細胞であるLNCaPやLNCaP/Coでは培養上清液中にIL6は検出されなかったのに対し、LNCaP/IL-6は約1ng/mlのIL6を分泌していた。さらに分泌されたIL6の生理活性をBioassayを用いて確認した。LNCaP、LNCaP/Co、LNCaP/IL6との間でin vitroでの増殖能の違いについて検討したが増殖能に関し細胞間に有意な差は認められなかった。LNCaP/IL6をヌードマウスに移植したところ母細胞のLNCaPやLNCaP/Coと比較して腫瘍増殖能の亢進を認めた。一方、移植後に精巣摘除を行うとアンドロゲン依存性であるLNCaP/Coは一時的な退縮を示した後、増殖能を再度獲得した。これに対しLNCaP/IL-6は精巣摘除により腫瘍は著明な退縮を示し廃絶された。IL-6導入によりアンドロゲン非依存性の獲得が予想されたが、実際にはLNCaP/IL-6はアンドロゲン除去に対する感受性が増大していた。in vitroにおいてメディウム中のアンドロゲンを除去するとin vivoと同様LNCaP/IL-6はLNCaP/Coと比較し増殖能は抑制されていた。LNCaP/Co、LNCaP/IL-6を接種したヌードマウスの血清中のPSA値を測定したところ精巣摘除によりLNCaP/Coを接種したマウスのPSA値は元に戻ったのに対しLNCaP/IL-6ではPSA値の著明な減少を認めた。内分泌療法は前立腺癌に対する有効な治療法の一つであるが、致命的な欠点として治療中に前立腺癌が本療法に対する抵抗性を獲得することが挙げられる。内分泌療法抵抗性前立腺癌(以下HRPCと略す)の耐性のメカニズムに関しては多くの研究が展開されてきたが詳細なメカニズムは未だ明らかにされていない。一つの機序としてBリンパ球の増殖を促進するサイトカインであるIL6がautocrine fashionで前立腺癌細胞の増殖を促しHRPCの発症に関与する可能性が示唆されている。本研究においては内分泌感受性前立腺癌細胞株にIL6の遺伝子を導入、発現させることにより内分泌依存性に変化が生じるか否かを明らかにしようとするものである。IL-6発現ベクターの作成:ヒト末梢血よりフィコール法にて単核球を調整しCon A存在下にて3日間in vitroにて培養した細胞からRNAを抽出した。ヒトIL-6mRNAのcodinglesionを含むoligo DNAを作成しRT-PCR法にてさきほど調整したRNAよりヒトIL-6のcoding lesionを含むDNA fragmentを増幅すし、得られたDNA fragmentをTA cloning法によりvectorに導入し、IL-6発現ベクターを作成した。IL-6強制発現細胞株の作成:LNCaP細胞に種々のヒト癌細胞株に上記のIL-6発現ベクターをlipofectamine法により導入した。薬剤耐性マーカー(Geneticin)を用いて遺伝子が導入された細胞株を選択樹立した。樹立された細胞株に関しては一定の条件で培養上清液を調整し上清液中のIL-6濃度を測定することによりIL-6強制発現株を選別した(以下LNCaP/IL-6と略す)。

IL-6の濃度測定に関しては市販のELISA kitを用いた。今後は腫瘍細胞のathymic nude mouseやscid mouseへの皮下移植、同所移植実験を行っていくつもりである。IL-6発現ベクターの作成:ヒト末梢血よりフィコール法にて単核球を調整しConA存在下にて3日間in vitroにて培養した細胞からRNAを抽出した。ヒトIL-6mRNAのcodinglesionを含むoligo DNAを作成しRT-PCR法にてさきほど調整したRNAよりヒトIL-6のcoding lesionを含むDNA fragmentを増幅すし、得られたDNA fragmeatをTA cloning法によりvectorに導入し、IL-6発現ベクターを作成。IL-6強制発現細胞株の作成:LNCaP細胞に種々のヒト癌細胞株に上記のIL-6発現ベクターをlipofectamine法により導入した。薬剤耐性マーカー(Geneticin)を用いて遺伝子が導入された細胞株を選択樹立した。樹立された細胞株に関しては一定の条件で培養上清液を調整し上清液中のIL-6濃度を測定することによりIL-6強制発現株を選別した(以下LNCaP/IL-6と略す)。同腫瘍をnude mouseに移植したところ母細胞のMBT2と比較して腫瘍増殖能の亢進を認めた。今後、この増殖機能亢進のメカニズムに関し実験を進める予定である。ヒトIL-6 mRNAのcodinglesionを含むoligo DNAを作成しRT-PCR法にてさきほど調整したRNAよりヒトIL-6のcoding lesionを含むDNA fragmentを増幅すし、得られたDNA丘agmentをTA cloning法によりvectorに導入し、IL-6発現ベクターを作成した。IL-6の濃度測定に関しては市販のELISAkitを用いた。ヒトのアンドロゲン依存性前立腺癌細胞
能動操作器を用いた教示操作量の力覚表示による技能習熟支援システム

本研究は,技能習熟支援システムの一手法として,能動操作器に多軸系のジョイスティックを用いた場合の有用性や,被訓練者の心的動揺度も考慮した教示操作量の総合手法の確立を目的に行われた.能動操作器に市販の力覚表示機能を有するジョイスティックを用い,またマニピュレータ型ロボットを制御対象とした手動制御系を構成した.まず力覚表示機能を作用させず,習熟者の手動制御によるマニピュレータの障害物回避操作から,マニピュレータ指先の軌跡を測定し,これを目標軌道とした.そして,この目標軌道と被訓練者によるマニピュレータの軌道との偏差に比例した力をその差が減ずる方向に発生させ,目標軌道を実現する操作量を力覚教示する訓練を行った.その結果,訓練期間は,能動操作器を用いない訓練よりも半減させることができ,ジョイスティックを能動操作器として用いても,その訓練の有用性を実証することができた.また,訓練時における被訓練者の心的動揺度を評価するため,GSR(Galvanic Skin Reflex;皮膚電気反射)を測定した.その結果,GSRを目的変数に,そして訓練状況を表す種々の変数を説明変数に用いた重回帰分析より,主としてジョイスティックの縦方向の操作時で心的動揺が生じる可能性を見出した.しかしながら,GSRには個人差が大きく存在することもわかった.さらにGSR反応には時間的遅れが存在するなどといった問題点が明らかとなり,被訓練者の心的動揺度も考慮した教示操作量を総合するまでには至らなかった.そこで,被訓練者の心的動揺を軽減するという観点から,ニーズ適応型支援を組み入れた.このような訓練とGSRとの明確な関連を見出すことはできなかったが,訓練効果としては,上述の結果よりも良好な結果を得た.本研究は,技能習熟支援システムの一手法として,能動操作器に多軸系のジョイスティックを用いた場合の有用性や,被訓練者の心的動揺度も考慮した教示操作量の総合手法の確立を目的に行われた.能動操作器に市販の力覚表示機能を有するジョイスティックを用い,またマニピュレータ型ロボットを制御対象とした手動制御系を構成した.まず力覚表示機能を作用させず,習熟者の手動制御によるマニピュレータの障害物回避操作から,マニピュレータ指先の軌跡を測定し,これを目標軌道とした.そして,この目標軌道と被訓練者によるマニピュレータの軌道との偏差に比例した力をその差が減ずる方向に発生させ,目標軌道を実現する操作量を力覚教示する訓練を行った.その結果,訓練期間は,能動操作器を用いない訓練よりも半減させることができ,ジョイスティックを能動操作器として用いても,その訓練の有用性を実証することができた.また,訓練時における被訓練者の心的動揺度を評価するため,GSR(Galvanic Skin Reflex;皮膚電気反射)を測定した.その結果,GSRを目的変数に,そして訓練状況を表す種々の変数を説明変数に用いた重回帰分析より,主としてジョイスティックの縦方向の操作時で心的動揺が生じる可能性を見出した.しかしながら,GSRには個人差が大きく存在することもわかった.さらにGSR反応には時間的遅れが存在するなどといった問題点が明らかとなり,被訓練者の心的動揺度も考慮した教示操作量を総合するまでには至らなかった.そこで,被訓練者の心的動揺を軽減するという観点から,ニーズ適応型支援を組み入れた.このような訓練とGSRとの明確な関連を見出すことはできなかったが,訓練効果としては,上述の結果よりも良好な結果を得た.被訓練者の制御技能レベルに依存するだけでなく,訓練負担の軽減を図るために,心理状態(心的負担)をも考慮した教示操作量の総合方法を検討した.まず,従来の1自由度の能動操作器(回転つまみ+サーボモータ)を用いて構築してきた支援方策が多自由度の能動操作器(市販の力覚機能を有するジョイスティック)にも適応できることを,実験的に確かめた.ただし,訓練作業はディスプレイ上を8の字を描くように動く目標をパーソナル・コンピュータにより発生させ,これをジョイスティックの2次元操作により追跡する作業とした.つぎに,手動制御時における心的動揺度に関する基礎解析を行うために,被訓練者の皮膚電位反射(GSR:Galvanic Skin Reflex)を測定した.ただし,制御作業は上述のものと同様であり,また力覚教示は行っていない.その結果,GSRを目的変数に,そして訓練状況を表す種々の変数を説明変数に用いた重回帰分析より,主としてジョイスティックの縦方向の操作時で心的動揺が生じる可能性を見出した.これは人間の手首の構造(骨格等)からもほぼ妥当な結果であると思われる.しかしながら,GSRの波形(数値)には個人差が大きく存在することもわかった.そのため,どのように心的動揺度を考慮した教示操作量に調整するかのといった問題までを解決することはできなかった.これらは来年度の検討課題であるともに,研究計画として,GSRを測定し,その値をもとに実時間で力覚教示量を総合するという支援方法の他に,今回の実験のように,まずGSRによりどのような制御状況が被訓練者に心的動揺を及ぼすのかを明らかにした上で,訓練時にそのような状況が現れたときに,教示操作量を調整するといった支援方法の検討も要すると考えられる.本研究は,技能習熟支援システムの一手法として,能動操作器に多軸系のジョイスティックを用いた場合の有用性や,被訓練者の心的動揺度も考慮した教示操作量の総合手法の確立を目的に行われた.

そこで,能動操作器に市販の力覚表示機能を有するジョイスティックを用い,また制御対象にマニピュレータ型ロボットを採用した手動制御系を構成した.まず力覚表示機能を作用させず,習熟者の手動制御によるマニピュレータの障害物回避操作から,マニピュレータ指先の軌跡を測定し,これを目標軌道とした.そして,この目標軌道と被訓練者によるマニピュレータの軌道との偏差に比例した力をその差が減ずる方向に発生させ,目標軌道を実現する操作量を力覚教示する訓練を行った.その結果,訓練期間は,能動操作器を用いない訓練よりも半減させることができ,ジョイスティックを能動操作器として用いても,その訓練の有用性を実証することができた.しかしながら,訓練時における被訓練者の心的動揺度を評価するため,GSR(Galvanic Skin Reflex;皮膚電気反射)を測定したが,個人差が大きく,またGSR反応には時間的遅れが存在するなどといった問題点が明らかとなり,被訓練者の心的動揺度も考慮した教示操作量を総合するまでには至らなかった.そこで,被訓練者の心的動揺を軽減するという観点から,訓練手法を再検討した.すなわち,被訓練者に心的動揺を与える一要因として,目標操作量を常時力覚教示することが考えられることから,この要因による心的動揺を軽減するため,被訓練者がどのような操作量で操作すればよいか分からなくなったときのみ被訓練者の申し出により,操作量を教示する手法(ニーズ適応型支援)を組み入れた.このような訓練とGSRとの明確な関連を見出すことはできなかったが,訓練効果としては,上述の結果よりも良好な結果を得た.
リバースジェネティクス法を用いたアレナウイルスのウイルス蛋白間相互作用の解析

平成23年度は主に研究テーマに対する基盤の確立を行ったが、平成24年度は、昨年度に確立した研究基盤をもとに、アレナウイルスの細胞侵入機構について主に解析を行った。具体的には、アレナウイルスのうち、ラッサウイルスとフニンウイルスについて、膜糖蛋白(GP)のC末端に2つのタグ(FLAGタグおよびOne-STrEPタグ)を融合したタンパクを発現するプラスミドを用いてシュードタイプウイルスを作成し、これらのシュードタイプウイルスの性質を調査した。結果、今回シュードタイプウイルスの作製に用いたGPは、2つのタグを融合したタンパクであるにもかかわらず、本来のGPの性質を失わず、シュードタイプウイルスは高い感染性を有していた。また、シュードタイプウイルスの細胞侵入機構に関する複数の実験を行ったところ、これらのシュードタイプウイルスは、本来のアレナウイルスの細胞新入機構を正確に反映している可能性が高いことが示唆された。したがって、これらのシュードタイプウイルスは、アレナウイルスの細胞侵入の際の、タンパク間相互作用の解析に非常に有用なツールであるといえる。さらに、これらのシュードタイプを用いてアレナウイルスの細胞侵入機構を解析した結果、フニンウイルスが細胞侵入の際にカテプシンLを用いている可能性を見出した。この成果は、アレナウイルスの細胞侵入機構についての新たな知見であり、アレナウイルスの感染経路をターゲットとした薬剤の開発等に有用な知見であるといえる。本年度は、平成23年度から平成24年度までの研究結果の統合考察を行い、研究成果として博士論文にまとめ、提出した。平成23年度はアレナウイルスの蛋白間相互作用の解析の基盤を構築するため、アレナウイルスの各種ウイルス蛋白を発現する発現ベクターの構築を中心に研究を遂行した。リンパ急性脈絡髄膜炎ウイルス(LCMV)、およびラッサウイルス、ルジョウイルス、南米出血熱ウイルス(フニンウイルス、マチュポウイルス、サビアウイルス、ガナリトウイルス、チャパレウイルス)の核タンパク(NP)および膜糖タンパク(GP)について、それぞれタンパク発現ベクターを構築した。GP発現ベクターについては、今後タンパク質間の相互作用を解析するためにGPのC末端にFLAG-OneStrep(FOS)タグを付加した融合タンパクを発現するベクターも構築し、WesternBlot法によるタンパク発現の確認およびFoS融合GPを外套したVSVシュードタイプの細胞への感染によって融合タンパクの機能保持の確認を行った。また、今回作成したこれらのフニンウイルスGP外套VSVシュードタイプを利用して、アルゼンチン出血熱のウイルス中和試験の確立を行い、アルゼンチン出血熱患者血清を用いてその有用性を評価した。結果、VSVシュードタイプを用いたウイルス中和試験はウイルス自体を用いた中和試験と同程度に有用であることが確認された。さらに、近年新たに発生したアレナウイルス性出血熱であるチャパレウイルス、ルジョウイルスについて、これらのウイルスが細胞侵入に用いるレセプター分子を、今回作成したVSVシュードタイプを用いて解析を行った。「研究の目的」に記載した【研究1】については、NR,GP等のウイルス蛋白発現プラスミドの作成には成功したものの、リバースジェネティクスを用いたウイルスの復元までには至っていない。しかし、【研究2】については各種アレナウイルスに関してVSVシュードタイプを作成し、その性状解析および診断系への利用可能性に関する検討等を行い、当初計画以上に進展していると言える。【研究1】については引き続き、未だ完成していない各種プラスミドベクターの作成を継続し、リバースジェネティクス系の改良を試みる。【研究2】については、これまでに作成した各種アレナウイルスGP搭載VSVシュードタイプおよびFOSタグを付加したGP融合タンパクがウイルスの細胞侵入機構の解析に非常に有用であることから、今後はGPと他のタンパクの蛋白間相互作用について特に重点をおいて研究を遂行していく予定である。
インテグリン関連分子CD47の消化管上皮における生理的役割と病態的意義

CD47は細胞外領域にイムノグロブリン様ドメインを持ち組織普遍的に発現する5回膜貫通型タンパク質である。CD47はこれまで血球細胞において細胞運動の制御に関与することが示されているが、上皮細胞における生理機能に関してはいまだ明らかではない。CD47は1回膜貫通型のレセプター型分子SHPS-1と細胞外領域を介して双方向性にシグナルを伝える細胞間シグナル伝達システム(CD47-SHPS-1系)を構成することが明らかにされつつある。CD47はこれまでの研究から小腸上皮組織に発現していることが明らかとなっており、消化器癌の発癌機構や浸潤転移の分子機構にCD47-SHPS-1系の関与が考えられる。今回、デキストラン硫酸ナトリウム(DSS)誘導性腸炎モデルを作成し、CD47-SHPS-1系の炎症性腸炎における役割を明らかにすることを試みた。SDラットを用い、0.5%DSSを7日間投与した群と飲水のみを7日間行なった群とに分け、それぞれの小腸と大腸を摘出、パラフィン切片を作成した。組織はCD47モノクローナル抗体にて免疫染色後、ヘマトキシリンによる核染色を行ない、顕微鏡にて観察を行なった。それぞれの群の小腸粘膜上皮でCD47の発現が認められたがその発現量には差が認められなかった。大腸粘膜上皮は小腸粘膜上皮と比較して発現量は少なく、またそれぞれの群での発現量の差は明らかではなかった。DSS投与群の大腸粘膜には好中球、マクロファージが浸潤しており、CD47陽性の炎症細胞の浸潤が増加していた。今回の結果からDSS誘導性腸炎モデルにおいてCD47陽性の炎症細胞が誘導されることが示唆されたが、炎症細胞と大腸粘膜上皮細胞間との相互作用については明らかではなかった。今後、KOマウスを用いたDSS誘導性腸炎モデルを作成し、CD47-SHPS-1系の炎症性腸炎における役割を明らかにする予定である。