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脳血管障害患者における舌接触補助床の効果

口腔期の嚥下障害に対して,舌接触補助床(PAP)による改善が,近年明らかになっている.本研究では,脳血管障害患者の機能障害の一つである口腔期における嚥下障害に対して,舌接触補助床(PAP)による効果を,主観的,客観的評価から,PAPの効果が期待できる因子を明らかにすることを目的とした.結果は,対象となる患者が少なかったことから,分析する事はできなかったが,ある一定の傾向が認められた.すなわち,義歯の有無,補綴物の適合である.それ以外に,経時的な全身機能の改善が強い影響が出ているようで,十分な結果を得ることができなかった.回復期リハビリテーション病院の脳血管障害患者の中で,口腔期における嚥下障害と診断された患者に対して,舌接触補助床(以下PAP)を製作して機能回復並びに補綴によるリハビリテーションを行った.我々は大阪大学歯学部附属病院に通院する舌腫瘍患者の嚥下障害に対してPAPの効果を実証しており,今回の脳血管障害患者の口腔期における嚥下障害に対しての効果を本研究で進めてきた.本研究で,回復期リハビリテーション病院と協力して患者の選定を行った結果,PAPが適応となった患者は少なかった.PAPの適応患者において,治療として製作しその効果は数例ながら確認した.舌腫瘍切除患者の舌圧では切除部位・切除した大きさと関連が認められるのと違い,測定初期の嚥下時舌圧が相対的に小さく,順序性の不正が見られる脳血管障害患者では,嚥下舌圧の増加と,順序性を考慮した口蓋形態のPAPを製作したが,回復期という特殊性から病状は様々で,経時的に回復し,早期にPAPが不要になる方もいれば,継続的な装着が必要な方,継続的な使用が必要と考えられるが使用感の問題から継続使用を拒否される方もおり,効果があったと考える人は1名に過ぎなかった.PAPの効果に影響を与える因子としては,義歯の有無,補綴物の適合が認められたが,実施人数が少なかったため,有意な結果とはいえない.回復期での嚥下障害の改善は,PAPによる効果以外に,経時的な全身機能の改善を無視できない.今回,この影響が強く出たと考えられる.ただ,先述にあるように,PAP適応患者は存在し,その方への有効性は明らかであるため,引き続き研究を進め,嚥下機能改善の一助として確立してきたい.口腔期の嚥下障害に対して,舌接触補助床(PAP)による改善が,近年明らかになっている.本研究では,脳血管障害患者の機能障害の一つである口腔期における嚥下障害に対して,舌接触補助床(PAP)による効果を,主観的,客観的評価から,PAPの効果が期待できる因子を明らかにすることを目的とした.結果は,対象となる患者が少なかったことから,分析する事はできなかったが,ある一定の傾向が認められた.すなわち,義歯の有無,補綴物の適合である.それ以外に,経時的な全身機能の改善が強い影響が出ているようで,十分な結果を得ることができなかった.現在,我々は回復期リハビリテーション病院の脳血管障害患者の中で,口腔期における嚥下障害と診断された患者に対して,舌接触補助床(以下PAP)を製作して機能回復並びに補綴によるリハビリテーションを行っている.口腔期の嚥下障害の主な症状として,舌の送り込みができない(舌の機能障害)ことによる誤嚥がある,それに対してPAPを製作し,機能低下した舌の運動に調和する口蓋形態を付与することでスムーズな食物の送り込みを目指す.我々は舌腫瘍患者の嚥下障害に対してPAPの効果を実証しており,今回の血管障害患者の口腔期における嚥下障害に対しての効果も本研究で進めてきた.本研究では,回復期リハビリテーション病院と協力して行くにあたり,協力機関での倫理委員会を通す必要があり,その準備を引き続き進めている.また,研究とは別にPAPの適応患者において,治療として製作しその効果は数例ながら確認している.全津腫瘍患者の舌圧では切除部位・切除した大きさと関連が認められるのと違い,脳血管障害患者では嚥下舌圧の低下,順序性の不正が見られる.これらに対して,嚥下舌圧の増加と,順序性を考慮した口蓋形態のPAPを製作することをしているが,回復期という特殊性から病状は様々で,急激に回復しPAPが必要でなくなる方もいれば,継続的な装着が必要な方もおり,効果があったと考える人は1名に過ぎない.またPAPの適応であっても,使用感の問題や全身状態から適応除外となるケースも少なからず認め,歯科医師にかぎらず,医師,言語療法士,看護師も含めた総合的な対応が重要であることを実感している.今後当病院の倫理委員会の申請を通した後に,舌圧測定を行ってその経時的変化,またPAPによる効果を明らかにしていく予定である.嚥下障害検査としてビデオ嚥下造影検査や嚥下内視鏡検査などがあるが,これらは放射線を扱ったり,麻酔をした上で鼻腔から内視鏡を入れるなど患者への身体的負担が大きい.それに対して,舌圧測定は口蓋部にセンサシートを貼付すうのみで患者への身体的負担を伴わない.とはいえ,患者を対象にした研究であるがゆえ,倫理審査については当大学だけではなく,協力機関においても認められたものでなければいけない.

本研究採択されてから,協力機関への倫理審査の準備をしていたが,準備に時間を要しているのが現状である.それとは平行に,PAPの適応と考えられる口腔期の嚥下障害を呈する患者に対してはその製作を行い,少なからずではあるが効果を確認している.1)データ収集の継続引き続き、当病院におけるデータ収集を行う。対象者数を20名を目標とする。術直後、PAP製作時(装着、非装着)、PAP調整時(調整前、調整後)を月に1回、180日間まで計測する。2)結果の分析PAP製作後180日間調整・再評価を続ける.2客観的評価,3主観的評価により,PAP装着前・調整前よりも評価が上がったものをPAPの効果が認められた群,そうでないものを認められなかった群と分類する.効果が認められた群に見られる舌圧パタンと経時的変化を,効果が認められなかった群と比較する.また,PAPの効果が認められた群と認められなかった群の違いをレトロスペクティブに解析する.さらに、PAPの効果を適切に判断するために,舌圧,手術術式,口腔内状況などを説明変数とした多変量解析を行い,舌腫瘍術後患者におけるPAPの効果に影響を与える因子について検討する。1)舌圧測定に使用する備品の購入2)分析に係るソフトの購入3)学会において研究結果の発表(学会参加費・旅費)4)研究結果を論文にする為の諸経費
プラスチドシグナルに関わるＧＵＮ遺伝子と概日時計制御因子、ＴＯＲシグナルの解析

葉緑体は細胞内共生で生じた真核植物細胞のオルガネラであり、その働きには細胞核や他のオルガネラとのコミュニケーションが大事である。本研究では、シロイヌナズナとゼニゴケを用いて、葉緑体から細胞核への情報を伝える仕組みを調べた。この情報伝達ではGUNと呼ばれる一連の遺伝子が働くことが分かっているが、新たなスクリーニング法によって、GBF1、TCTP、LKP2を単離した。これら新規因子の分子遺伝学的な解析を行い、GUNとの遺伝学的相互作用を明らかにした。プラスチドは光合成や物質代謝の場であるばかりでない。たとえば、外部環境刺激(低温・乾燥・病害)や、それ自身の分化・機能状態を細胞(核)にフィードバックして伝える、いわゆる逆行シグナル(プラスチドシグナル)情報伝達系を利用し、細胞機能を調節している。逆行シグナルは、細胞核に於ける転写を調節すること、および原始紅藻においては細胞周期の制御にも関わっており、細胞内共生の確立と共に進化してきた真核細胞普遍的な現象である。本研究では、この逆行シグナルに関わるbZIP型転写因子GBF1、LOV-Fbox-kelch構造をもち概日時計や花成時期の制御で働くLKP2、さらにストレス応答やTORシグナルに関与すると考えられているTCTP遺伝子について、当初計画の通り分子遺伝学的解析を進めた。既知のプラスチドシグナル伝達系突然変異体(gun)との二重変異体を作製したところ、GBF1過剰初減退とgun1およびgun5変異において遺伝学的相互作用が観察された。一方、GFPタグを付加したTCTPを発現したアラビドプシス形質転換体について、逆行シグナルが生ずる条件下での細胞内局在を観察したが、顕著な変化が見られなかった。これについては、次年度以降にさらに詳細な解析と、生化学的な解析を進める。概日時計とgunシグナルについては、LKP2以外に、CCA1過剰発現株も取得しており、これらの解析を進めている。また、昨年度新たにゼニゴケを材料とした葉緑体シグナルの解析を始めた。今年度は、ゼニゴケを薬剤処理して葉緑体分化が阻害された際に見られる、核遺伝子の発現変化について、RNAseq法を試みた。得られた大量データの解析を進めた。また、このシグナル伝達に関わるGUN1およびGUN5遺伝子のノックアウト株作製を進めている。プラスチドは光合成や物質代謝の場であるばかりでなく、外部環境刺激(低温・乾燥・病害)や、それ自身の分化・機能状態を細胞(核)にフィードバックして伝える、いわゆる逆行シグナル(プラスチドシグナル)情報伝達系に関わるbZIP型転写因子GBF1、LOV-Fbox-kelch構造をもち概日時計や花成時期の制御で働くLKP2、さらにストレス応答やTORシグナルに関与すると考えられているTCTP遺伝子について、当初計画の通り分子遺伝学的解析を進めた。これら遺伝子について、過剰発現および遺伝子破壊株の作製と同定を行い、表現型解析が進行中である。さらに既知のプラスチドシグナル伝達系突然変異体との二重変異体作製を進めている。タグを付加したTCTPを発現したアラビドプシス形質転換体については、良好な高発現体が得られており、次年度以降に生化学的な解析を進める。また、新たにゼニゴケを材料とした葉緑体シグナルの解析も進めた。今年度は、ゼニゴケを種々の薬剤で処理することにより葉緑体分化が阻害され、核コードの葉緑体関連遺伝子の転写が抑制されることから、陸上植物の基部に位置するゼニゴケでも葉緑体から核へのシグナル伝達が存在することが分かった。また、このシグナル伝達に関わるGUN1およびGUN5遺伝子のノックアウト株の作製も現在進めている。プラスチドは光合成や物質代謝の場であるばかりでなく、外部環境刺激(低温・乾燥・病害)や、自身の分化・機能状態に応じて、核における遺伝子発現を調節するなど、細胞全体の機能を調節している。本研究は、このようなプラスチドから細胞(核)へのシグナル、いわゆる逆行シグナル(プラスチドシグナル)情報伝達系について、アラビドプシス、ゼニゴケを材料として解析を進めた。これまでに、FOXハンティングシステムを用い、プラスチドシグナルに異常を示す過剰発現型変異体(gun ox)を多数単離した。そのなかで、bZIP型転写因子GBF1や、LOV-Fbox-kelch構造をもち概日時計や花成時期の制御で働くLKP2、さらにストレス応答やTORシグナルに関与するTCTP遺伝子が得られた。既知のプラスチドシグナル伝達系gun変異体との二重変異体の解析から、GBF1oxとGUN1およびGUN5の間で遺伝学的相互作用が観察された。TCTPoxとgunの間では、遺伝学的相互作用が見られなかった。LKP2とCCA1oxについては、二重変異体の作製が遅れており、今年度内に解析ができなかった。別のアプローチとして、gun変異体が概日時計に異常を示す可能性を考え、表現型の詳細な解析を進めている。ゼニゴケを材料とした解析については、プラスチド機能を損ねる薬剤処理によって、細胞核の遺伝子発現が抑制されることを確認した。また、種子植物と同様にGUN遺伝子がシグナリングに機能するか明らかにするため、GUN1およびGUN5遺伝子のKO株作製を進めた。その結果、予備的実験ではgun1ノックアウト株ではプラスチドシグナル伝達が正常に機能することが分かった。GUN5はクロロフィル合成に必須の遺伝子であるため、通常の方法では遺伝子破壊ができないことがわかり、誘導型RNAiコンストラクトの作製を進めている。

プラスチドは光合成や物質代謝の場であるばかりでなく、外部環境刺激(低温・乾燥・病害)や、自身の分化・機能状態に応じて、核における遺伝子発現を調節するなど、細胞全体の機能を調節している。我々は、核の転写を抑制するプラスチドシグナルに着目し、このシグナリングが異常になった突然変異体(gun)とその原因遺伝子の同定を進め、PPRタンパク質GUN1やテトラピロール代謝に関わるMg-chelatase Hサブユニット(GUN5、CHLH)に注目して解析を進めてきた。本課題では、新たな手法でシグナリングに関わる新規gun変異体のスクリーニングを行った。具体的には、アラビドプシスの完全長cDNAライブラリーを35Sプロモーターで過剰発現するコンストラクトを導入したFOXハンティングシステムを用い、プラスチドシグナルに異常を示す過剰発現型変異体(gun ox)を単離した。本年度は、bZIP型転写因子GBF1、LOV-Fbox-kelch構造をもち概日時計や花成時期の制御で働くLKP2、さらにストレス応答やTORシグナルに関与するTCTP遺伝子について解析を進めた。既知のgun変異体を用いた解析では、GBF1oxとGUN4の間で遺伝学的相互作用が新たに見いだされた。TCTPoxとgunの間では相互作用が見られなかった。LKP2oxとCCA1oxについては、gun1との遺伝学的相互作用を示唆する結果が得られており、詳細な解析を進めている。ゼニゴケを材料とした解析については、GUN1遺伝子のノックアウト株(Mpgun1)を作製した。アラビドプシスと異なり、Mpgun1ノックアウト株ではプラスチドシグナル伝達が正常に機能することが分かった。一方、MpGUN1はアラビドプシスgun1変異を相補することから、GUN1のシグナリング機能が苔類で既に獲得されていたことが予想された。葉緑体は細胞内共生で生じた真核植物細胞のオルガネラであり、その働きには細胞核や他のオルガネラとのコミュニケーションが大事である。本研究では、シロイヌナズナとゼニゴケを用いて、葉緑体から細胞核への情報を伝える仕組みを調べた。この情報伝達ではGUNと呼ばれる一連の遺伝子が働くことが分かっているが、新たなスクリーニング法によって、GBF1、TCTP、LKP2を単離した。これら新規因子の分子遺伝学的な解析を行い、GUNとの遺伝学的相互作用を明らかにした。当初目的とした、過剰発現体と既存のgun変異体の遺伝学的解析はおおむね順調に進んだ。ゼニゴケのGUN1とGUN5ノックアウト株取得は、前者については完了したが、GUN5は致死となるため得られていない。RNAiライン作製は進めているため、来年度の繰り越し期間中に結果が得られる見込みである。これらの状況を総合して、当初の研究計画がおおむね順調に進展していると判断した。植物分子遺伝学アラビドプシスを用いた研究では、GUN1から転写因子ABI4(GLK,GBF1)へのシグナル伝達が重要な経路の一つであるため、TCTPやLKP2がこれらの因子の細胞質や核における働きに関与する可能性が考えられる。
ベクトル制御による電動移動車の駆動システムに関する研究

現在、地球規模的に環境あるいはエネルギーの諸問題がクローズアップされ、これらの課題に対して積極的なアプローチと開発が試みられている。研究代表者らは電気工学に携わる者であるが、電気工学の立場から省エネルギードライブシステムの研究に従事してきた。本研究は、バッテリー駆動による電動移動車(電気自動車)の開発・実用化を目的としており、ベクトル制御による三相誘導電動機の駆動システムを構築することを特長としている。日本では、同期機方式が主流であるが、本研究の誘導機方式でも十分実用に供することが明らかになった。研究実績の概要は次の通りである。(1)実用化に向けた技術資料を得るために、10種類の電動移動車を試作した。実験結果から、本システムは十分実用的であることが明らかになった。(2)小型電動移動車用としてアシスト自転車を中心に述べた。(3)定格電圧12V(120W)の三相誘導電動機を開発した。(4)24Vドライブによるコントローラを開発した。(5)市販商品との走行試験比較を行い、誘導機の回生エネルギーが走行距離に大きく寄与していることが明らかになった。(6)誘導機方式は、制御性に富み堅牢である。(7)道路勾配を考慮したトルク制御を採用した。(8)回生エネルギーの高効率制御法が確立された。(9)高速充電器を新たに開発した。以上の研究によってアシスト自転車を実用化し、現在販売中である。この研究成果から、高齢者および身障者用の低価格車椅子の開発に進展中である。本研究は,環境・エネルギー対策を目的として,電動移動車に低価格のかご形三相誘導電動機を採用し,ベクトル制御による高精度可変速運転システムと発電領域における回生エネルギーの高効率回収を目的とする。1.研究項目に対する検討(1)電動移動システムに適したベクトル制御・・・バッテリ-駆動によるIPM・PWM・INVの試作により,普通乗用車から自転車に至る駆動システムの実用化が可能となった。ソフト言語として,QMCLを採用した。(2)始動と停止時を考慮したトルク制御の最適化・・・電動機の特性を十分発揮するため,約250%の最大トルク指令により始動時のトルクと減速時の回生エネルギーを考慮した。(3)低圧三相誘導電動機の試作・・・定格電圧48V,24Vの電動機を試作し,実験の結果十分実用に共することが可能となった。この電動機は,小型電動移動車に搭載される。(4)電動機および発電領域におけるエネルギーフローとエネルギー回生・・・減速時および下り坂における回生(制動)エネルギーの利用により,他社方式の駆動システムと比較して遜色ないことが明らかになった。最大回生効率は,40%である。2.研究成果と今後の研究(1)この研究成果により,某企業からアシスト形電気自転車が実用化された。(2)この駆動方式は,身障者用の電動椅子や携帯用カセットタイプのシステムとして研究される予定である。

(5)市販商品との走行試験比較を行い、誘導機の回生エネルギーが走行距離に大きく寄与していることが明らかになった。(6)誘導機方式は、制御性に富み堅牢である。(7)道路勾配を考慮したトルク制御を採用した。(8)回生エネルギーの高効率制御法が確立された。(9)高速充電器を新たに開発した。以上の研究によってアシスト自転車を実用化し、現在販売中である。この研究成果から、高齢者および身障者用の低価格車椅子の開発に進展中である。
16H結晶構造のシリサイド金属間化合物の材料設計と開発

本研究は、超耐熱材料として有望であるが、研究のあまり進んでいない16H結晶構造のシリサイド金属間化合物の機能向上を図るため、1.16H型シリサイドが高融点を示すメカニズムを結晶学的観点から理論的究明,2.16博型シリサイドのち密体作製と、物理的・機械的特性の測定,3.理論および実験から得られたデータを基にした16H型シリサイドの諸特性の究明を行い、機能の向上した新しい16H結晶構造のシリサイド金属間化合物の設計と作製を行うことを目的とした。上記の目的を達成するため本年度は、1.結晶学を中心とした16博型シリサイドの理論的究明,2.カプセルHIP法による16H型シリサイドのち密体の作製,3.X線回折による結化学的評価,4.物理的および機械的特性の測定,5.実験結果の理論的評価の5段階に分けて行う計画であった。結晶学を中心とした16H型シリサイドの理論的究明により、16H型シリサイドガ高融点を示す理由は、原子の共有結合性が高いためであることを明らかにした。しかし、カプセルHIP法による16H型シリサイドの作製は、焼結時にガラスカプセルが破損し(カプセル材料との化学反応による)、ち密体の作製が困難であるため現在新たな焼結法を探求している。原子の共有結合性が高いために既在の16H型シリサイドの延性は、SiC等のセラミックストと同様に低いと考えられる。16H型シリサイドの延性を高めるため本研究では、原子径の元素を組み合わせることにより金属結合性を高める方法を考案した。その結果、Si_3Zr_5の原子の一部をYで置換した新金属間化合物を設計し作製している。この新金属間化合物は、原子径の違いにより配位数が増え金属結合性が高まっているものと予想した。以上の得られた知見を基に論文を投稿準備中である。また、今後Si_3Y_3Zr_2の特性評価と高融点・低比重で機能の向上した新たな金属間化合物を設計・作製する予定である。
マクロファージレセプターに強く認識される標識化リピドAの設計と合成

リピドAはグラム陰性菌の細胞表層の構成成分リポ多糖の末端部分構造で、リポ多糖が示すエンドトキシン活性の本体である。リピドAが人に対して示す生理活性は、血中の大食細胞の表層のレセプターに認識されることで免疫系が活性化されて引き起こされる。本研究ではリピドAの大食細胞上での挙動を観測するために蛍光標識化誘導体の合成を試みている。合成はアリル系の保護基を用いることにより行い、最終段階で蛍光標識を導入することを計画したが、実際には蛍光標識を導入したのちのリン酸化が進行しない問題が生じ、現在は合成経路の変更を行っている。その経路は合成の早い段階でリン酸化を行ってしまうというもので、その経路による合成は現在最終段階を迎えている。この経路による蛍光標識体の合成が完成したのちには同じ位置に光親和性標識化を施した類縁体の合成を行う。一方、リポ多糖の生合成前駆体はリピドAと共通の構造単位から成っているものの、リポ多糖の活性に対する拮抗阻害を示す。この生合成前駆体の溶液配座を決定するために一部の炭素を^<13>Cで標識した化合物2種類の合成を行った。合成品のNMRを解析することにより、ミセル水溶液中での配座とその会合状態の解析に成功した。さらに拮抗阻害を示さない生合成前駆体類縁体の^<13>C標識化も行い、それらのNMRが互いに異なっていることを見出した。その配座の違いは活性の違いに関係があるものと思われる。
薬剤自然耐性における外膜障壁の役割

本研究においては癌、移植、免疫不全及び繊維症籐の免疫力の低下した患者に頻繁に感染を起こすいわゆる日和見感染の原因となるグラム陰性菌の外膜透過性を明かとすることを目的とした。第一の課題はこの主の菌の中でも特に問題となっいる緑膿菌外膜の透過性を明かとすることである。緑膿菌外膜には分子量数千の多糖を透過させるような大きな孔が存在するけれども抗生物質等の透過は極度に低いと説明されてきた。我々はこの矛盾を明かとするため次の実験を行なった。1.緑膿菌から外膜を分離精製しこれを人工膜リポソームに組み込んでリポソーム膨張法によって透過性を測定した。その結果緑膿菌外膜を介して自由に透過できる糖質はペントース(Mr.150)、及びヘキソース(Mr.180)であり二糖類(Mr.342)は殆ど透過できないことが明かとなった。メチルヘキソース(Mr.194)及びN-アセチルグルコサミン(Mr.220)の透過率はペントースの約5%程度であった。この結果を同様の方法で調べた大腸菌外膜の透過性と比較すると緑膿菌外膜の透過孔は大腸菌のそれより明らかに小さいことが明かとなった。2.緑膿菌外膜に大きな孔を形成するタンパク質はFであるという報告があった。そこで我々はF蛋白欠損変異株を用いて上記と同様の実験を行なったところ、F蛋白欠損外膜には野生株の外膜と同様に二糖類の透過がむずかしいような小さな孔のみが存在することがわかった。更にF欠損株外膜でのβ-ラクタム抗生物質の透過は野生株のそれと同等であった。3.緑膿菌外膜のポーリンを同定するため外膜タンパク質を精製して孔形成能を調べたところタンパク質C、D及びEが上記同様の透過孔を形成するタンパク質であることがわかった。従って緑膿菌外膜には小さな孔のみが存在し、これがこの菌の薬剤耐性に関与しているものと考えられた。緑膿菌と類似の結果はAlcaligenes faecalis及びBacteroides fragilisでも得られた。本研究の目的は癌,移植等の基礎疾患を有する患者に頻繁に感染するグラム陰性菌外膜の溶質及び抗生物質透過性を明らかにすることにある.本年度研究計画の一つは緑膿菌外膜に透過孔を形成するタンパク質が従来言われていたFタンパク質であるのか否かを明らかにすることであった.本研究ではFタンパク質欠損株を用いて次のような実験を行った. (i)F欠損株から外膜を分離し,これをリポソームに再構成して糖質の透過を測定した.その結果F欠損外膜を組み込んだリポソームはペントースやヘキソースをよく透過させるがメチルヘキソース以上の糖質の透過速度は極度に低いことが明かとなった. (ii)この変異菌外膜を組み込んだリポソームの透過性は野性株の外膜を組み込んだリポソームの溶質透過性と区別できなかった. (iii)F欠損株もしくは野性株の外膜を組み込んだリポソームを用いて抗生物質の透過率を測定した.その結果数種のβ-ラクタム剤の透過に関してF欠損株と野性株の外膜透過に差がないことを見いだした.

これらの結果のすべてはFタンパク質は緑膿菌外膜のポーリンではないことを示し,当然のことながらFタンパク質は抗生物質の外膜透過に関わっていないことを明かとした.二番目の研究計画はAlcaligenes faecalisの外膜を介しての溶質及び抗生物質の透過性を明かとすることであった.研究の結果次の結論が得られた. (i)この菌の外膜は分子量約300以上の糖質を透過させない. (ii)この菌のポーリンはMr,43,000の外膜タンパク質と同定された.(iii)この菌のポーリンを介してのブドウ糖及びβ-ラクタム剤の透過速度は大腸菌Bポーリンを介してのそれと比較して各々に約10%及び10-40%程度であった.これらの結果はA.faaecalisの薬剤耐性の機序の一つに外膜の透過性の低さが関与している可能性を示唆した.本研究の目的は特に免疫力の低下した患者に頻繁に感染を起こすグラム陰性菌外膜の透過性を明らかにする事である。昨年度の研究から緑膿菌外膜にある透過孔はこれまで言われていたように分子量数千の多糖が透過できるような大きなものではなく、二糖類がやっと透過できる程度の小さな孔であることが明らかとなった。今年度の研究計画の一つは緑膿菌外膜に小さな透過孔を形成するポーリン蛋白質を同定して、その蛋白質の作る孔の透過性を調べることである。緑膿菌野生株からEDTAーリゾチームを用いた方法で外膜を精製し、この外膜を68mMオクチルグルコシドを含む溶液で可溶化した。可溶化された外膜成分(外膜蛋白の95%以上を含む)はDEAE-HPLCカラムでクロマトグラフィーを繰り返すことにより精製された。この様にして外膜タンパク質C(分子量70K)、D(同、46K)、E(同、43K)、G(同、25K)、H(同、19K)及びIがほぼ単一に精製できた。そこでこの精製蛋白質をフォスファチジルコノンとジセチルリン酸とから成る人工膜に再構成した。この再構成膜を用いて外膜と同様の透過性つまり単糖類はよく透過させるけれども二糖類以上の糖質は透過できないような孔を形成するタンパク質を検定したところ上記蛋白質の内C、D及びEがそれに相当することを同定した。他の蛋白質には孔形成能は認められなかった。これらタンパク質の形成する透過孔は昨年度の研究で明らかとなった緑膿菌外膜の示す透過孔の性質と区別できない程近いものであった。即ちこれらポーリンの形成する孔はペントース(分子量、150)、ヘキソース(同、180)は比較的よく透過させるが二糖類(同、342)以上の糖質の透過は極度に低かった。この様な結果から緑膿菌が高度薬剤耐性を示す原因の一つは緑膿菌外膜に存在する小さな透過孔を抗生物質等が自由に透過出来ないものによるものと解釈できた。当然の事であるが耐性には他の因子も影響を及ぼす。
兎から新しく分離したカリキウイルスの性状、増殖過程並びに病原性に関する研究

我々は韓国で発生した兎の出血病(RHD)例の肝乳剤を出発材料として,新しく分離したカリキウイルスの性状,宿主細胞内の増殖過程,病原性を検索した。精製ウイルス粒子は,肝乳剤を超遠心およびCsCl密度勾配遠心することによって得られた。ウイルス粒子は正20面体構造を示し,直径は3540nmであった。ウイルス粒子はコアとスパイク様構造を持ったカプシド構成され,構成蛋白の分子量は63kDaであった。本ウイルスの病原性は極めて強く,成兎に接種すると20時間から96時間の間に致死させ,急性壊死性肝炎を引き起こした。また,死亡した兎の全身に充・出血と播種性血管内凝固(DIC)が形成されていた。本ウイルスを感染させた兎の肝には,電顕的にウイルス粒子が証明された。ウイルス粒子は,細胞菌に多発性に形成された単位膜に囲れた嚢胞,空胞および小空胞内に認められた。またウイルス粒子は,細胞基質にも孤在したり,嚢胞膜と空胞膜との間に線状に配列していた。一部のウイルス粒子は結晶状配列を示していた。RHDを耐過した兎から得たビチオン化抗RHDウイルスIgG抗体を用い,ABC直接法による免疫染色を行った。この結果,RHDウイルスに特異的抗原を肝細胞細胞質に検出し得た。このウイルス抗原は,肝細胞の変性・壊死に一致して出現していた。RHDの発詳の地である中国からもウイルス材料を入手し,上記と同様の検索を行った。その結果,ウイルスの諸性状ならびに病原性は,韓国由来の株と全く同一であった。以上の成績から,世界に流行したRHDの原因はカリキウイルスと断定され,その特徴病変は急性壊死性肝炎とDICであることが明らかにされた。よって本病は,カリキウイルス性肝炎と呼称すべきである。我々は韓国で自然発生した兎の出血病の肝乳剤から精製ウイルスを得た。このウイルスはネガチブ染色による形態、構成蛋白の分子量(63KDa)と、以下の細胞内の増殖過程から、カリキ(チ)ウイルスと同定された。本ウイルスを成兎に感染させ、この肝を電顕的に観察した。その結果感染兎が死亡する頃(ウイルス接種後24時間)から、肝細胞の細胞質にウイルス粒子が認められた。ウイルス粒子を有する細胞質では、単位膜に囲まれた嚢胞、空胞および小空胞が多数形成されていた。そしてウイルス粒子は、これらの構造内あるいは周縁に、線状あるいは結晶状または類結晶状配列を示して認められたほか、細胞質に孤在しても認められた。一方、崩壊(壊死)した肝細胞にもウイルス粒子は認められた。ウイルス粒子は直径35mmで、コアとスパイク様構造を持ったカプシドで構成されていた。以上のように、ウイルス粒子は細胞質の単位膜構造と密接に関連して増殖し、これは猫のカリキウイルス感染で観察されている増殖パターンと酷似していた。また、肝細胞の壊死はウイルスの直接的影響によって生じることが示唆された。次に、本ウイルスの毒力が極めて強いことは本病の疫学から示唆されてきたことである。これは本ウイルスが急性壊死性肝炎を引き起こすことによるものであった。この肝炎はウイルス接種後23時間から生じ、ウイルスを接種された兎は接種後90時間頃までには100%致死した。肝炎を形態学的に解析した結果、先に記載したようにウイルスの直接的影響に加え、白血球の細胞毒性によっても肝細胞壊死の生じる所見が得られた。

また、本ウイルスが示す病変の1特徴として、播種性血管内凝固(DIC)もあった。このDICはウイルスを接種した兎の血液学的検査によっても証明された。1.宿主内における兎の出血病(RHD)ウイルス抗原の検出RHDウイルス抗原検出を目的に、blockingのためには正常兎血清を、第1抗体としてはビオチン化抗RHDウイルスIgG抗体を用い、ABC直接法による免疫染色を行った。検索標本としては、RHDに感染したホルマリン固定のパラフィン切片と凍結切片を用いた。その結果、両切片にRHDウイルス抗原を特異的に染色することができた。抗原は肝細胞の細胞質に顆粒状に認められ、本抗原は肝細胞の変性・壊死巣に一致して検出できた。肝以外では、抗原は脾の血管内皮とマクロファージに認められ、他の臓器・組織には認められなかった。よってRHDウイルスは、肝細胞親和性であることが確認された。2.RHD発病への免疫学的機序の係りRHDを耐過した兎に免疫抑制剤であるデキサメサゾンを投与したが、発病はなかった。また、若齢の兎が発病しないことに着目し、若齢の兎にデキサメサゾンをあらかじめ投与し、次いでRHDウイルスを接種したが、これも発病しなかった。一方、若齢の兎にRHDウイルスのみを接種したが、発病はしないものの、肝には小型の変性・壊死と、リンパ球浸潤巣が散見された。よって本病の感受性には、肝細胞のレセプターが問題となるのかも知れない。3.中国で発生したRHDの原因ウイルスRHD発祥の地中国から、RHD感染兎肝乳剤を入手し、これを出発材料としてウイルス学的ならびに病理学的検索を行った。その結果、中国由来のウイルス株の諸性状と病原性は、韓国由来のウイルス株と全く同一であった。よって世界的に流行したRHDの原因ウイルスは、カリキウイルスと断定される。4.その他RHDウイルスの兎以外への感受性動物ならびに組織培養細胞株を検討したが、不成功に終わった。
貨幣の比較社会学

本研究員は、採用1・2年度目にイスラームについての研究を通じて、「法人」は近代資本主義における最も基礎的なユニットである、という知見を得た。本年度は、イスラームと並ぶ商業文明を築いた中華帝国についての分析を通じて、同様の知見が得られるのかどうかを検討する作業に取り組んだ。その作業は、現在執筆中である著書『イスラーム・中国の倫理と反資本主義の精神』(弘文堂)において引き継がれており、その概略は以下のとおりである。中国の経済に関する研究には相当な蓄積があるが、その多くは、ウェーバーの仮説に対して否定的である。実際、近年の実証的研究によれば、少なくとも明・清時代の中国には、経済の発展を阻害するような制度的要因は見当たらないように見える。しかし、これらの研究はまだ、ウェーバーが提起した問題を解決してはいない。ここで、近代資本主義に対する「法人」の重要性を考慮するならば、中国における「宗族」という親族組織が問題の中核に現れてくる。宋代以降、中国において経済的な成功を収める方法の一つは、科挙に合格し官僚となることであったが、徹底した均分相続の慣行によって、官僚の資産は瞬く間に分散してしまう傾向にあった。ここで、そうした資産の分散を防ぐ手段として「宗族」という古代の親族組織の再形成が要請される。じつはこうしたプロセスは、西欧における「法人」形成のプロセスとかなりの部分で類似している。それはつまり、中国の「宗族」制には西欧的な「法人」を胚胎させうる可能性が十分にあったということである。だが実際には、西欧において「法人」が果たしたような決定的な役割を、中国の「宗族」が担うことはなかった。このことは、「宗族」と「法人」との間に表層的な機能の類似性には還元できない根本的な差異が存在することを推察させる。その差異を明確に論じること、これが本年度、本研究員が中心的に取り組んだ課題である。貨幣は近代を基礎付ける重要な媒体であるが、前近代において貨幣経済を最も発達させた文明のひとつはイスラーム文明にほかならない。にもかかわらず、イスラームは、なにゆえ近代的な資本主義に発展させなかったのか。貨幣のみならず、様々な商業制度・技術において前近代最高水準の商業文明を築き上げておきながら、イスラームが資本主義を近代に接続する形で発展させなかったのはなぜなのか。以上が、本研究が本年度、中心的に取り組んできた問いである。こういった問いに対して、それはイスラーム法が近代資本主義の中核をなす法人という制度を認めなかったからだ、という結論がさしあたりえられるが、この暫定的結論は、なにゆえイスラームは法人を否定したのか、という疑問を即座に呼び寄せる。契約を基礎とする社会においては、必然的に法人に類する制度が要請とされるにもかかわらず、イスラームはそれを拒絶したからだ。その拒絶を促したものとは何なのか。それは、「時間とは本来的に非連続的である」というイスラームの原子論的な時間意識にほかならない。これが本研究の与える解決である。法人という制度は、その本質において「永続的」であらざるをえないが、その永続性こそが、イスラームの根底にある非連続的な時間観に激しく抵触するのだ。アッラーの超越性を可能な限り厳密に保持しようとすればするほど、時間は一瞬ごとにアッラーの創造に委ねられている、という考えに漸近せざるをえない。それゆえにイスラームは、その商業的な繁栄にもかかわらず、永続的な法人を主体とする近代的資本主義の母体には遂になりえなかったのである。こういった結論を、貨幣はなぜ通用するのか、貨幣はいかにして近代社会(近代資本主義)を基礎付ける媒体となっているのか、という本研究の本来的な問いへと差し戻す作業が今後の課題として残されている。前近代において、イスラーム文明や中国文明はきわめて洗練された貨幣経済を発達させた。貨幣は近代を基礎付ける重要な媒体である。にもかかわらず、イスラーム文明も中国文明もともに、近代的な資本主義を発展させることはなかった。貨幣のみならず、様々な商業制度・技術において高度な商業文明を築き上げておきながら、イスラームや中国が資本主義を近代に接続する形で発展させなかったのはなぜか。こういった問いに対し、イスラームについては、雑誌『思想』(岩波書店)に掲載された「イスラームの倫理と反資本主義の精神」という論文の中でひとつの解答を提示した。その解答とは、イスラームが近代資本主義を発達させなかったのは、イスラームに固有の時間意識が、近代資本主義を成立させる基礎的なユニットである法人の存在と対立するものであったから、というものである。この論文をまとめる過程において、近代資本主義について考える際に、法人というユニットがいかに根本的な意義をもつか、ということが非常に鮮明に浮かび上がってきた。こうした観点から、本年度は中国文明について、関連する文献・資料の分析・考察を進めたところ、「宗族」という親族形態のありようが問題の中核として現れてきた。古来より均分相続の慣習をもつ中国文明において、資産の分散・細分化を防ぐ手段として宗族という組織が必要とされるようになる過程は、西欧において法人が必要とされるようになる過程によく似ている。つまり、宗族という組織は、近代資本主義の基礎的ユニットである法人へと移行しうる可能性をもった組織であったのだ。にもかかわらず、宗族が中国における近代的な資本主義の発達を促進させるということは遂になかった。それはなぜか。この点を論理的に解明していくことが今後の課題である。

本研究員は、採用1・2年度目にイスラームについての研究を通じて、「法人」は近代資本主義における最も基礎的なユニットである、という知見を得た。本年度は、イスラームと並ぶ商業文明を築いた中華帝国についての分析を通じて、同様の知見が得られるのかどうかを検討する作業に取り組んだ。その作業は、現在執筆中である著書『イスラーム・中国の倫理と反資本主義の精神』(弘文堂)において引き継がれており、その概略は以下のとおりである。中国の経済に関する研究には相当な蓄積があるが、その多くは、ウェーバーの仮説に対して否定的である。実際、近年の実証的研究によれば、少なくとも明・清時代の中国には、経済の発展を阻害するような制度的要因は見当たらないように見える。しかし、これらの研究はまだ、ウェーバーが提起した問題を解決してはいない。ここで、近代資本主義に対する「法人」の重要性を考慮するならば、中国における「宗族」という親族組織が問題の中核に現れてくる。宋代以降、中国において経済的な成功を収める方法の一つは、科挙に合格し官僚となることであったが、徹底した均分相続の慣行によって、官僚の資産は瞬く間に分散してしまう傾向にあった。ここで、そうした資産の分散を防ぐ手段として「宗族」という古代の親族組織の再形成が要請される。じつはこうしたプロセスは、西欧における「法人」形成のプロセスとかなりの部分で類似している。それはつまり、中国の「宗族」制には西欧的な「法人」を胚胎させうる可能性が十分にあったということである。だが実際には、西欧において「法人」が果たしたような決定的な役割を、中国の「宗族」が担うことはなかった。このことは、「宗族」と「法人」との間に表層的な機能の類似性には還元できない根本的な差異が存在することを推察させる。その差異を明確に論じること、これが本年度、本研究員が中心的に取り組んだ課題である。
都市の雨水浸透施設における重金属動態の総合的評価

土壌、道路塵埃と道路排水浸透施設の堆積物の性状比較と重金属の存在形態道路塵埃と浸透施設堆積物をその周辺にある土壌(表層土壌と深層土壌)を比較対象として、化学分析により固形物としての性状を調べた結果、土壌は有機物指標(Ignition loss)値や粘度含有率が高めであること、一方、陽イオン交換容量は堆積物で高めであり、道路塵埃のpHが高いことなどが整理できた。そして、重金属の含有量やその存在形態を逐次抽出法と化学分析により評価した結果、表層土壌より深層土壌の重金属含有量は低いこと、道路塵埃、浸透施設堆積物の重金属含有量は土壌に比較して高く、さらに溶出や脱離しやすい画分(Exchangeable fraction)の重金属が、堆積物や道路塵埃に多く含まれていることがわかった。また、環境条件でその溶出や脱離量に影響を与える鉄やマンガンに結合している画分(Reducible fraction)や有機物と結合している画分(Oxidisable fraction)も堆積物や道路塵埃で高い傾向が見られた。安定同位体を用いた重金属の交換能評価表層土壌、深層土壌、堆積物を対象として、人工雨水と混合した液を用意して、十分な時間保持して、液相と固相の重金属濃度が一定となった条件で、その混合液中にあまり存在していない安定同位体を添加して、その同位体比の変化から液相と固相の間で交換可能な重金属量を測定した。この同位体希釈法を、銅、亜鉛、鉛を代表重金属として適用した結果、堆積物中に交換可能な重金属がより多く存在していること、表層土壌と深層土壌を比較すると、表層土壌により多く交換可能な重金属量が存在している傾向も見られた。道路塵埃など道路環境における重金属起源試料の同位体データ整理土壌試料、道路塵埃試料、雨水浸透施設堆積物中の鉛を対象として、その安定同位体比(Pb208/Pb207比,Pb206/Pb207比)を用いた起源解析を行ったところ、例えば、道路塵埃試料は、石油や塗料などの起源試料のプロットに近い位置にプロットされる一方、堆積物は自動車排ガスのプロットに近い位置にプロットされることを確認した。
高機能性遺伝子キャリアーとしてのデンドリマー/シクロデキストリン結合体の構築

我々は,遺伝子導入能が高く,細胞障害性の低い遺伝子導入用ポリマーの開発を企図して,低分子量デンドリマーとシクロデキストリン(CyD)との結合体を種々合成し,その構造,物理化学的性質,in vitroおよびin vivo遺伝子導入能,細胞障害性などについて検討を行った.その結果,空洞系の異なる3種のCyDの中で,空洞系の最も小さなα-CyDがin vitroにおける遺伝子導入効率に最も優れること,また3種のデンドリマーのジェネレーション(G)の中で,G3のものが,さらに結合体中におけるα-CyDの平均置換度が2.4のものがin vitroおよびin vivoにおいて最も優れた遺伝子発現を示し,かつ細胞障害性も低いことを明らかにした.次に,α-CDE結合体に組織特異的遺伝子発現能の付与するため,複数個(115)のガラクトース分子を結合したGalCDE結合体を合成し,その化学的・物理化学的性質をNMR,電気泳動などを用いて検討した.その結果,GalCDE結合体はプラスミドDNA (pDNA)と複合体を形成するが,置換度の増大により形成能は低下すること,GalCDE結合体はいずれの置換度においても,pDNAのコンパクションを惹起しないことを明らかにした.遺伝子導入実験において,アシアロ糖タンパクレセプターを発現したHepG2細胞および非発現細胞NIH3T3を用いて検討した結果,HepG2細胞においてGalCDE結合体中のガラクトースの置換度が4.3および5.2のものが遺伝子発現効率に優れ,α-CDE結合体より約20倍高値を示した.また,ガラクトースの置換度が8.4および14.6のものはα-CDE結合体よりも遺伝子の発現は低値を示した.一方,NIH3T3細胞における遺伝子発現はガラクトースの置換度が4.3のGalCDE結合体が最も高く,α-CDE結合体の約20倍高値を示した.ガラクトース添加による競合実験において,GalCDE結合体の遺伝子導入効果の低下は観察されなかった.これらのことから,糖修飾α-CDE結合体による遺伝子導入効率の改善は細胞表面のレクチンとの結合とは異なる機序により生じ,pDNA複合体の細胞内動態の違いに起因することが示唆された.現在,ガラクトースとCyDとの間にスペーサーの導入ならびに葉酸化CDE結合体の調製について検討中である.我々は,遺伝子導入能が高く,細胞障害性の低い遺伝子導入用ポリマーの開発を企図して,低分子量デンドリマーとシクロデキストリン(CyD)との結合体を種々合成し,その構造,物理化学的性質,in vitroおよびin vivo遺伝子導入能,細胞障害性などについて検討を行った.その結果,空洞系の異なる3種のCyDの中で,空洞系の最も小さなα-CyDがin vitroにおける遺伝子導入効率に最も優れること,また3種のデンドリマーのジェネレーション(G)の中で,G3のものが,さらに結合体中におけるα-CyDの平均置換度が2.4のものがin vitroおよびin vivoにおいて最も優れた遺伝子発現を示し,かつ細胞障害性も低いことを明らかにした.次に,α-CDE結合体に組織特異的遺伝子発現能の付与するため,複数個(115)のガラクトース分子を結合したGalCDE結合体を合成し,その化学的・物理化学的性質をNMR,電気泳動などを用いて検討した.その結果,GalCDE結合体はプラスミドDNA (pDNA)と複合体を形成するが,置換度の増大により形成能は低下すること,GalCDE結合体はいずれの置換度においても,pDNAのコンパクションを惹起しないことを明らかにした.遺伝子導入実験において,アシアロ糖タンパクレセプターを発現したHepG2細胞および非発現細胞NIH3T3を用いて検討した結果,HepG2細胞においてGalCDE結合体中のガラクトースの置換度が4.3および5.2のものが遺伝子発現効率に優れ,α-CDE結合体より約20倍高値を示した.また,ガラクトースの置換度が8.4および14.6のものはα-CDE結合体よりも遺伝子の発現は低値を示した.一方,NIH3T3細胞における遺伝子発現はガラクトースの置換度が4.3のGalCDE結合体が最も高く,α-CDE結合体の約20倍高値を示した.ガラクトース添加による競合実験において,GalCDE結合体の遺伝子導入効果の低下は観察されなかった.これらのことから,糖修飾α-CDE結合体による遺伝子導入効率の改善は細胞表面のレクチンとの結合とは異なる機序により生じ,pDNA複合体の細胞内動態の違いに起因することが示唆された.現在,ガラクトースとCyDとの間にスペーサーの導入ならびに葉酸化CDE結合体の調製について検討中である.組織特異的遺伝子発現の増大を企図して、α-シクロデキストリン(α-CyD)とポリアミドアミンデンドリマー(dendrimer)との結合体(α-CDE結合体)中のアミノ基にガラクトースを115分子結合させた6種のガラクトシル化CDE結合体(Gal-α-CDE結合体)を合成し、そのレポーター遺伝子の発現効率をアシアロ糖蛋白レセプター(AGPR)発現HepG2細胞および非発現細胞であるNIH3T3細胞を用いて検討した。その結果、HepG2細胞においてGal-α-CDE結合体中のガラクトースの置換度が4.3及び5.2のものが遺伝子発現効率に優れ、それらのルシフェラーゼ活性はα-CDE結合体に比べて約20倍増大した。

また、ガラクトースの置換度が8.4および14.6のものはα-CDE結合体よりも遺伝子発現効率は低値を示した。この低い遺伝子発現効率は、電気泳動実験の結果から、プラスミドDNA(pDNA)との複合体形成能が低下したためと推定された。一方、NIH3T3細胞における遺伝子発現効率は、ガラクトースの置換度が4.3のGal-α-CDE結合体が最も高く、α-CDE結合体の約20倍高値を示した。また、HepG2及びNIH3T3細胞へのトランスフェクション時にAGPRに結合するアシアロフェツインを添加し、競合実験を行ったところ、遺伝子発現に変化は見られなかった。さらに、我々は種々の置換度からなるマンノース修飾α-CDE結合体(Man-α-CDE結合体)を合成し、その遺伝子発現効率を検討したが、マンノースレセプターを発現していないA549細胞およびMDCK細胞において、α-CDE結合体よりも約510倍高い遺伝子発現効率の増大が認められた。また、高濃度のマンノースを添加してもMan-α-CDE結合体の遺伝子導入効率は変化しなかった。これらのことから、糖修飾α-CDE結合体による違伝子導入効率の改善は細胞表面のレクチン認識とは異なる機序により生じ、pDNAとの複合体形成及び細胞内動態の差異に起因するものと推察される。今後は、これら糖修飾α-CDE結合体の遺伝子導入改善機構の解明、葉酸化CDE結合体の調製、OTC欠損モデルマウスであるspf^<ash>マウスにおける遺伝子治療効果について検討する予定である。我々は,遺伝子導入能が高く,細胞障害性の低い遺伝子導入用ポリマーの開発を企図して,低分子量デンドリマーとシクロデキストリン(CyD)との結合体を種々合成し,その構造,物理化学的性質,in vitroおよびin vivo遺伝子導入能,細胞障害性などについて検討を行った.その結果,空洞系の異なる3種のCyDの中で,空洞系の最も小さなα-CyDが,また3種のデンドリマーのジェネレーション(G)の中で,G3のものが,さらに結合体中におけるα-CyDの平均置換度が24のものがin vitroおよびin vivoにおいて最も優れた遺伝子発現を示し,かつ細胞障害性も低いことを明らかにした.次に,α-CDE結合体に組織特異的遺伝子発現能の付与するため,複数個(115)のガラクトース分子を結合したGalCDE結合体を合成し,その化学的・物理化学的性質をNMR,電気泳動などを用いて明らかにした.その結果,GalCDE結合体はプラスミドDNAと複合体を形成するが,置換度の増大により形成能は低下すること,GalCDE結合体はいずれの置換度においても,pDNAのコンパクションを惹起しないことを明らかにした.遺伝子導入実験において,アシアロ糖タンパクレセプターを発現したHepG2細胞および非発現細胞NIH3T3を用いて検討した結果,HepG2細胞においてGalCDE結合体中のガラクトースの置換度が4.3および5.2のものが遺伝子発現効率に優れ,α-CDE結合体より約20倍高値を示した.また,ガラクトースの置換度が84および146のものはα-CDE結合体よりも遺伝子の発現は低値であった.一方,NIH3T3細胞における遺伝子発現はガラクトースの置換度が4.3のGalCDE結合体が最も高く,α-CDE結合体の約20倍高値を示した.ガラクトース添加による競合実験において,GalCDE結合体の遺伝子導入効果の低下は観察されなかった.
異なる咀嚼機能を営む人工歯根外周の骨と血管構築の変化に関する実験的研究

本研究の目的は、異なる咀嚼機能を人工歯根に営ませた時、人工歯根の外周の血管・骨組織に生じる経週的変化とその差異を調査することにある。実験動物にはヒトの咬合様式に近いニホンザルを用い、陽極酸化チタニウムの人工歯根を下顎骨臼歯部に植立した。金属冠とレジン冠の各上部構造をそれぞれ人工歯根に装着して異なる咀嚼機能を営ませた。上部構造の装着時期は、臨床でよく行われている植立後12週経過後とした。冠未装着植立後12週経過の標本および冠未装着植立後12週経過後に冠装着をした1、4、8、12、20週経過毎の標本を作製するために、各時期で実験動物を安楽死させた。アクリル樹脂微細血管注入法を用いて微細血管鋳型・骨の同一同時標本を作成し、両組織の変化を走査電顕を用いて三次元的に観察比較を行った。この研究成果を下記に示す。(1)植立後12週間で金属冠あるいはレジン冠を装着したいずれの場合でも、骨増生開始の時期は冠装着から4週間ほど要することとが判明した。(2)植立後12週間で金属冠あるいはレジン冠を装着したいずれの場合でも、インプラント体が十分に生着・固定に至るには冠装着から8週間を要することが判明した。(3)金属冠を装着した場合、インプラント槽骨は経週的に厚さが増大するが、レジン冠を装着した場合はこの槽骨はあまり厚さが増大しないことが判明した。(4)金属冠あるいはレジン冠を装着したいずれの場合でも、装着後4週でインプラント槽骨の外周の骨髄腔に豊富な血管をみるが、経週的に骨髄腔は小さくなり、血管も減少していた。(5)レジン冠を装着した場合、インプラント槽骨周囲の海綿骨では時間経過と共にこの骨小柱は太くなり、12週間経過すると骨髄腔の少ない海綿骨の様相に変化して行くこと、また金属冠を装着した場合と比較して骨小柱は円柱状を呈するものが多いことが判明した。上部構造を装着し、咬合機能を営む時の人工歯根外周の骨と血管構築の変化について研究を行ってきた。前回の研究では金銀パラジウム合金製歯冠を装着した場合の結果を報告をした。今回は緩衝作用のある樹脂製歯冠を暫間的に装着して咬合機能を営ませた場合の人工歯根外周の両組織について調査をするために実験を計画した。実験動物は6頭のニホンザルを用い、それら実験動物の左右の下顎第二小臼歯と下顎第一大臼歯を抜歯し、顎骨に歯の欠損部(中間欠損)を作製した。抜歯後3ケ月間、抜歯窩の完全な治癒を待って、シリンダー型陽極酸化チタニウム人工歯根をそれぞれの欠損部へ植立を行った。いずれの人工歯根も実際に臨床に応用されるときの指示ならびに特定器具によって施術し、インプラント体を植立して粘膜縫合を行う植立術を行った。

それぞれ植立された人工歯根が顎骨へ生着固定するのを12週間待って、各人工歯根に金銀パラジウム合金製歯冠と樹脂製歯冠の上部構造を一定期間装着したのち、アクリル樹脂微細血管注入法によって1、4、8、12週経過した微細血管鋳型と骨の同時標本を作製する計画であるが、進捗状況は人工歯根をすべて実験動物に植立を完了したばかりで、まだ人工歯根の顎骨への生着固定を待っているところである。当初の計画では、平成10年度内に走査電顕で観察開始できる予定であったが、ニホンザルの入手および検疫に時間がかかり、実験開始が3ケ月遅れてしまった。実験動物6頭中5頭において人工歯根植立後の経過は現在のところ順調であるが、残り1頭は健康不調である。本研究の目的は、異なる咀嚼機能を人工歯根に営ませた時、人工歯根の外周の血管・骨組織に生じる経過的変化とその差異を調査することにある。実験動物にはヒトの咬合様式に近いニホンザルを用い、陽極酸化チタニウムの人工歯根を下顎骨臼歯部に植立した。金属冠とレジン冠の各上部構造をそれぞれ人工歯根に装着して異なる咀嚼時機能を営ませた。上部構造の装着時期は、臨床でよく行われている植立後12週経過後とした。冠未装着植立後12週経過の標本および冠未装着植立後12週経過後に冠装着をした1、4、8、12、20週経過毎の標本を作製するために、各時期で実験動物を安楽死させた。アクリル樹脂微細血管注入法を用いて微細血管鋳型・骨の同一同時標本を作成し、両組織の変化を走査電顕を用いて三次元的に観察比較を行った。この研究成果を下記に示す。(1)植立後12週で金属冠あるいはレジン冠を装着したいずれの場合でも、骨増生開始の時期は冠装着から4週間ほど要することが判明した。(2)植立後12週で金属冠あるいはレジン冠を装着したいずれの場合でも、インプラント体が十分に生着・固定に至るには冠装着から8週間を要することが判明した。(3)金属冠を装着した場合、インプラント槽骨は経週的に厚さが増大するが、レジン冠を装着した場合はこの槽骨はあまり厚さが増大しないことが判明した。(4)金属冠あるいはレジン冠を装着したいずれの場合でも、装着後4週でインプラント槽骨の外周の骨髄腔に豊富な血管をみるが、経過的に骨髄腔は小さくなり、血管も減少していた。(5)レジン冠を装着した場合、インプラン槽骨周囲の海綿骨では時間経過と共にこの骨小柱は太くなり、12週経過すると骨髄腔の少ない海綿骨の様相に変化して行くこと、また金属冠を装着した場合と比較して骨小柱は円柱状を呈するものが多いことが判明した。