hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
免疫空間における腸型樹状細胞の誘導とその攪乱

腸間膜リンパ節(MLN)には、レチノイン酸(RA)産生能を持つ樹状細胞(DC)が存在し、RA依存性にリンパ球ホーミングとT細胞機能分化を制御して免疫反応や経口免疫寛容に寄与する。我々は、RA合成酵素RALDH2の発現に関与する因子としてGM-CSFとRAなどを同定したが、生理的な成熟型CD103(+)RALDH2(high) MLN-DC(「腸型DC」)の分化誘導機序には不明の点が多かった。本研究では、多くの「腸型DC」が小腸粘膜固有層由来であり、その分化成熟過程に伴う、腸の四次元空間でのDCの動きと小腸組織内環境との相互作用を考慮、解析して、「腸型DC」の分化誘導系の構築を図った。Flt3リガンドで骨髄細胞から分化誘導した未熟DCを、RAとGM-CSFで一定期間刺激すると、CD103(+)RALDH2(intermediate) DCへと分化した。このDCを、Toll様受容体などから刺激すると、成熟型CD103(+)RALDH2(high) DCへと分化したが、炎症性サイトカインを産生した。一方、小腸上皮細胞に発現し、CD103への結合能を有するE-cadherinでRA/GM-CSF処理DCを刺激したところ、炎症性サイトカインを産生しないCD103(+)RALDH2(high)成熟DCへと分化した。但し、E-cadherinはCD103ではなく、主にインテグリンβ1を介して作用していた。このDCは、TGF-βの存在下で、腸指向性のFoxp3(+)制御性T細胞を分化誘導し、「腸型DC」の性質と合致していた。さらに、このDCの投与は、実験的炎症性腸炎の寛解を促進した。他方、RAシグナル欠乏下では、一部のMLN-DCサブセットが、その性質を著しく変化させ、IL-13高産生性の新規炎症性ヘルパーT細胞を分化誘導し、経口抗原特異的IgE抗体産生に寄与することが示唆された。26年度が最終年度であるため、記入しない。腸間膜リンパ節(MLN)には、レチノイン酸(RA)合成酵素RALDH2を発現する成熟樹状細胞(DC)が存在し、腸管免疫に重要な役割を担っている。しかし、この「腸型DC」の分化誘導機序は不明である。我々は、GM-CSFとRAがこの誘導に重要な役割を持つことを示したが、GM-CSFの関与をさらに明確にするために、従来のGM-CSF受容体のβc鎖欠損マウスを用いた解析結果を踏まえ、GM-CSF欠損マウスを用いて解析した。そして、GM-CSF欠損によっても顕著にMLN-DCのRALDH2発現が低下することを見出した。我々は、Flt3リガンドで骨髄細胞から誘導した未熟DCから腸型DCを分化誘導する条件を探索した。腸型DCのほとんどが小腸粘膜固有層由来であることを考慮して、GM-CSFとRAまたはRAを代替するRA受容体アゴニストによる刺激に加えて、DCに、小腸組織の微小環境中に存在する種々の刺激を与えて解析した。腸内細菌などがもたらすToll様受容体(TLR)刺激はDCを成熟させるだけでなく、以前に我々が示したようにGM-CSFによるRALDH2発現を増強したが、得られたDCは炎症性サイトカインを産生し、腸型DCとは異なる性質を示した。しかし、現在までに、RALDH2発現は増強するが炎症性サイトカイン産生を誘導しない成熟刺激の候補を見出しており、その確定検証を進めている。また、RAシグナル欠乏状態でのMLN-DCの性質変化については26年度に実施する予定であったが、特定のDCサブセットの性質がRAシグナル欠乏により特に大きく変化し、IL-13とTNF-αを高産生する炎症性ヘルパーT細胞を誘導して、アレルギー炎症性疾患を誘導する可能性があることを既に見出している。この結果は、学会および論文(現在はon line出版まで)にて発表した。

但し、E-cadherinはCD103ではなく、主にインテグリンβ1を介して作用していた。このDCは、TGF-βの存在下で、腸指向性のFoxp3(+)制御性T細胞を分化誘導し、「腸型DC」の性質と合致していた。さらに、このDCの投与は、実験的炎症性腸炎の寛解を促進した。他方、RAシグナル欠乏下では、一部のMLN-DCサブセットが、その性質を著しく変化させ、IL-13高産生性の新規炎症性ヘルパーT細胞を分化誘導し、経口抗原特異的IgE抗体産生に寄与することが示唆された。26年度が最終年度であるため、記入しない。腸型DCのin vitroの誘導については、まだ、公開する段階には至っていないが、ほぼ達成できており、腸組織の免疫四次元空間におけるDCの分化の様子をほぼ再現できるようになったと考えている。また、次年度に予定していたレチノイン酸欠乏状態でのDCの分化異常と疾患の関係についても、一部結果が得られて論文がまずon lineで出版された。また、レチノイン酸合成酵素の発現誘導機構におけるレチノイン酸自体の分子作用機序についても明らかにし、論文が受理された。腸関連組織特有で、レチノイン酸(RA)産生能力を持ち、抗炎症性の樹状細胞(DC)の、分化誘導とその攪乱の可能性をさらに追求する。そのために、Flt3リガンドで骨髄細胞から誘導した未熟DCから腸型DCを分化誘導する条件を、これまでに得た知見に基づき確定する。腸に存在する種々の刺激因子の中から、GM-CSFとRAまたはこれを代替するRARアゴニストによる刺激に加え、さらにTLR刺激に代わる刺激を与えて活性化、成熟させることで、高いレチノイン酸産生能を持ち、かつ炎症性サイトカインを産生しない腸型DC様細胞の分化誘導法を確立する。そして、この分化誘導法に関わる刺激が、他の免疫細胞や上皮細胞、ストローマ細胞を含む腸組織空間においてどのような時間経過で、どのような機序と役割を持ってその分化誘導に関与するのか解明する。さらに、得られた腸型DC分化誘導法を用いて、レチノイン酸欠乏を始めとする種々の攪乱要因がDCを介して免疫学的疾患の制御に影響を与える可能性を解析する。また、腸型DCをin vitroで分化誘導し、このDC自身またはこれによって誘導される制御性T細胞を、腸炎などのモデルマウス個体に養子移入することで疾患制御の可能性を検証する。
細胞・細胞小器官の増殖とその調節機構の解析

研究計画に従って植物細胞と細胞小器官の遺伝,増殖,分化の機構を細胞生物学や分子生物学的方法を用いて解析し,次の成果を得た.1.色素体(pt)の母性遺伝機構の解析を車軸藻,シダ,高等植物(ユリ他10種)で行い,受精直前に雄由来ptDNAの選択的消化がこれら殆ど全てにおいて起こることを明らかにした(黒岩). 2.異種のタバコ培養細胞をの融合させた実験から,異種のptを含む植物は分化しにくいことが分かった(平井). 3.エンドウの各組織でpt遺伝子(13遺伝子)の発現を解析し,光合成系遺伝子(7種)の発現は葉で多く,根では極めて少ないことが分かった.一方House keeping遺伝子(6種)は組織特異性を示さず一定量発現していた(佐々木).またタバコ培養細胞から原ptの分離法を開発した.これを用い原pt核(核様体)の無傷単離に成功し, 4種のptDNA結合蛋白質(MW:69KD, 31KD, 30KD, 14KD)を同定した(黒岩).原ptから分化したシダの葉緑体は光の影響を受けず,むしろ細胞伸長に関係し分裂した(和田). 4.ミトコンドリア(mt)の形成機構を薩摩芋のチトクロムオキシダーゼのサブユニットVcの塩基配列から解析し,この分子が他のサブウニットとの会合の橋渡しをしていることが示唆された(旭).またmt遺伝子の制御機構を解析するために, mt核の無傷単離を行い, DNA結合蛋白質(MW:67KD, 54KD, 38KD, 30KD, 20KD)を同定した.この蛋白質とタバコ細胞由来のmtDNAから複合mt核の作製に成功した(宮川). 5.核小体内における遺伝子制御の機構を調べるため,酵母の細胞核にある酸性フォスファターゼ遺伝子(PHO5)をベクターに繋ぎ核小体に挿入した結果,フォスファターゼが生産され,核小体内はかなり自由に分子の出入りがあることが分かった(東江). 6.液胞の膜系に関しては,プロトンポンプを駆動するATPaseとPPaseはそれぞれ液胞膜の細胞質側及び内側に局在し全く異なった生理機能を持つことが示唆された(吉田).研究計画に従って植物細胞と細胞小器官の遺伝,増殖,分化の機構を細胞生物学や分子生物学的方法を用いて解析し,次の成果を得た.1.色素体(pt)の母性遺伝機構の解析を車軸藻,シダ,高等植物(ユリ他10種)で行い,受精直前に雄由来ptDNAの選択的消化がこれら殆ど全てにおいて起こることを明らかにした(黒岩). 2.異種のタバコ培養細胞をの融合させた実験から,異種のptを含む植物は分化しにくいことが分かった(平井). 3.エンドウの各組織でpt遺伝子(13遺伝子)の発現を解析し,光合成系遺伝子(7種)の発現は葉で多く,根では極めて少ないことが分かった.一方House keeping遺伝子(6種)は組織特異性を示さず一定量発現していた(佐々木).またタバコ培養細胞から原ptの分離法を開発した.これを用い原pt核(核様体)の無傷単離に成功し, 4種のptDNA結合蛋白質(MW:69KD, 31KD, 30KD, 14KD)を同定した(黒岩).原ptから分化したシダの葉緑体は光の影響を受けず,むしろ細胞伸長に関係し分裂した(和田). 4.ミトコンドリア(mt)の形成機構を薩摩芋のチトクロムオキシダーゼのサブユニットVcの塩基配列から解析し,この分子が他のサブウニットとの会合の橋渡しをしていることが示唆された(旭).またmt遺伝子の制御機構を解析するために, mt核の無傷単離を行い, DNA結合蛋白質(MW:67KD, 54KD, 38KD, 30KD, 20KD)を同定した.この蛋白質とタバコ細胞由来のmtDNAから複合mt核の作製に成功した(宮川). 5.核小体内における遺伝子制御の機構を調べるため,酵母の細胞核にある酸性フォスファターゼ遺伝子(PHO5)をベクターに繋ぎ核小体に挿入した結果,フォスファターゼが生産され,核小体内はかなり自由に分子の出入りがあることが分かった(東江). 6.液胞の膜系に関しては,プロトンポンプを駆動するATPaseとPPaseはそれぞれ液胞膜の細胞質側及び内側に局在し全く異なった生理機能を持つことが示唆された(吉田).
河川底生動物群集に着目した亜鉛の生態リスク評価

水生生物の保全を目的とした亜鉛の水質環境基準の妥当性を検討する上での資料を得るために,以下の研究を行った。1.河川上流域において亜鉛濃度が河川底生動物群集に及ぼす影響去年度の成果より,底生動物群集の種多様性は基準値(30μg/L)の2倍程度の亜鉛濃度でも顕著に減少しないことが示唆された。本年度はこの成果を広く公表するべく,国際学会での発表や国際亜鉛協会への訪問等を行い,高い評価を受けた。さらに,この結果をより多く調査データを用いて検証するために,英国に3ヶ月間滞在し,英国・米国等の重金属汚染河川約400地点における底生動物調査結果を用いた解析に着手した。本研究の成果は日本の水質環境基準や海外で提示されている安全濃度の妥当性を検討する上で有用な資料となることが期待される。2.河川下流域において亜鉛濃度が河川底生動物群集に及ぼす影響前述した上流域の結果が下流域に適用可能かを検討するために,群馬県碓氷川水系及び粕川での野外調査を去年度実施した。暫定的な結果ではあるが,碓氷川での調査結果より下流域でも上流域の結果と同様な傾向が得られている。今後は,有機汚濁の進行した河川(粕川)での調査結果をまとめ,これら成果をできるだけ早く公表する予定である。上記に加え,亜鉛等重金属がファットヘッドミノー個体群に及ぼす影響を数理モデルを用いて評価した。その結果,当該個体群が維持される亜鉛濃度は約80μg/Lと推定された(掲載雑誌において,注目論文に選出された)。亜鉛濃度が河川底生動物群集に及ぼす影響を評価するために,以下の2つの研究を実施した。1.河川上流域における亜鉛濃度の影響上流に廃鉱山が存在する,兵庫県市川,宮城県迫川,山形県寒河江川の3水系における計25地点(約半数は亜鉛濃度が30μg/L(亜鉛の水質環境基準値)未満)における野外調査結果に基づき,亜鉛濃度の影響を評価した。統計解析の結果,底生動物群集の種多様性は基準値の2倍程度の亜鉛濃度でも顕著に減少しないことが示唆された(岩崎ら,投稿準備中)。日本を含む海外においても,野外調査結果からこのような結論を示した研究はほとんどなく,学術的にも有用な結果が得られたと考えられる。また,2003年に設定された水生生物の保全を目的とした亜鉛の水質環境基準の妥当性を検証する上でも,貴重な知見が得られたと思われる。2.河川下流域における亜鉛濃度の影響上流域と下流域では,潜在的に生息する底生動物相が異なる。また,下流域においては工場排水や生活排水等の流入により,有機汚濁の進行した地点が多く存在するため,すでにその影響により底生動物の生息が制限されている可能性がある。本研究では,2008年8月及び2009年3月に,下流域に相当する群馬県碓氷川水系及び粕川での野外調査を実施し,現在解析を進めている段階である。また,亜鉛の水質環境基準及び排水基準に関わる問題について整理した論文が環境科学会誌に受理された。本論文は,水生生物の保全を目的とした水質環境基準等の策定を今後検討していく上で,重要な問題提起及び視点の提供を行っている。
アミノ酸ホモポリマー生合成遺伝子の取得とその機能改変による新規ポリマーの創製

放線菌Streptomyces albulusの二次代謝産物として生産されるε-Poly-L-1ysine(ε-PL)は,L-リジンがイソペプチド結合でっながった2535残基からなる直鎖状のアミノ酸ホモポリマーである。Ε-PLは,幅広い抗菌スペクトラムと高い安全性を併せ持ち,天然物系抗菌剤として実用化されている。Ε-PLの抗菌活性はL-リジンの鎖長に依存し,9mer以上で高い抗菌活性を示す。また,ε-PLにおけるL-リジンのイソペプチド結合は抗菌活性に極めて重要であり,それを構築するε-PLの生合成酵素においては,(1)L-リジンの「ε」と「α」位の認識機構,(2)構成アミノ酸の基質特異性,(3)ペプチド鎖長の決定機構,これら3点が特に興味深い。そこで,本研究では,ε-PLの生合成遺伝子の取得と機能解析を主目的とした。平成18年度の研究成果より,遺伝子工学的手法では,ε-PLの生合成遺伝子の取得は困難であることが判明し,平成19年度からは研究計画を一部変更して,ε-PL生合成酵素(Pls)の精製(生化学的手法)を開始した。ε-PLの合成活性は本菌株の膜画分に認められたことから,この膜各分から各種クロマトグラフィーによる精製を種々検討した。Plsの精製には困難を極めたが,SDS-PAGE上で単一バンドとして精製することに成功し,in vitroの反応においてε-PLの生成を確認した。そこで,Plsの内部アミノ酸配列を決定し,その配列情報を基にS.albulusのゲノムDNAからε-PL生合成遺伝子(pls)を取得した。また,本遺伝子の破壊株はε-PLを生産しないことから,実際にε-PL生合成遺伝子であることが明らかになった。さらに,Plsは,新しいドメイン構造を有する新規NRPSであることを明らかにし,現在,その基礎的な触媒機能について解析している。放線菌Streptomyces albulusの二次代謝産物として生産されるε-PLは、L-リジンのε-アミノ基とα-カルボキシル基がペプチド結合でつながった2535残基からなる直鎖状のアミノ酸ホモポリマーである。ε-PLは、幅広い抗菌スペクトラムと高い安全性を併せ持ち、現在、天然物系抗菌剤として実用化されている。興味深いことに、本化合物の抗菌活性はL-リジンの鎖長に依存し、9mer以上ではじめて抗菌活性を示す。他方、50merの鎖長を有するα-PL(α-アミノ基とα-カルボキシル基がペプチド結合で連結)は抗菌活性を殆ど示さない。以上のように、ε-PLにおけるL-リジンのイソペプチド結合は抗菌活性に極めて重要であり、それを構築するε-PLの生合成酵素においては、(1)L-リジンの「ε」と「α」位の認識機構、(2)構成アミノ酸の基質特異性、(3)ペプチド鎖長の決定機構、これら3点が特に興味深い。そこで、平成18年度は、ε-PLの生合成遺伝子の取得を主目的とし、当初の研究計画通り、ε-PL分解酵素遺伝子(pld遺伝子)の近傍領域の解析、および、ε-PL生合成閉鎖株の取得を行った。pld遺伝子の近傍領域約30kbの塩基配列を決定したところ、残念ながらε-PLの生合成遺伝子と思われる遺伝子を見出すことはできなかった。ε-PL分解酵素は複数あることが知られており、ε-PLの生合成遺伝子は、その他のε-PL分解酵素遺伝子とクラスターを形成していると考えられる。そこで、ε-PLの生合成遺伝子のショットガンクローニングを目的に、ε-PL生合成閉鎖株の取得を行い、複数の候補株の取得に成功した。現在、これら株を宿主として用いた-PLの生合成遺伝子のショットガンクローニングを行っている。また、ショットガンクローニングが計画通り進展しない場合を想定し、ε-PL生合成酵素の精製を開始した。そこで,Plsの内部アミノ酸配列を決定し,その配列情報を基にS.albulusのゲノムDNAからε-

PL生合成遺伝子(pls)を取得した。また,本遺伝子の破壊株はε-PLを生産しないことから,実際にε-PL生合成遺伝子であることが明らかになった。さらに,Plsは,新しいドメイン構造を有する新規NRPSであることを明らかにし,現在,その基礎的な触媒機能について解析している。
機能特性をもつ食品ペプチドの生産-ホローファイバー型酵素反応器の利用-

食品蛋白質・ペプチドの構造とそれらの機能特性に関する研究は、食品化学分野の主要課題の一つである。本研究では、蛋白分解酵素の利用を中心とした酵素修飾による食品蛋白質の改質による栄養及び機能特性に優れた食品素材の開発を目的に、(1)各種機能特性をもつ食品ペプチドを調整する手段としてのホローファイバー(中空糸膜)型酵素反応システムを構築するための諸要因を探り、(2)蛋白分解酵素を用いた酵素修飾反応による食品蛋白質の改質について基礎的解析を行った。その結果、次のことを明らかにした。(1)ホローファイバー膜(人工腎臓透析器)への蛋白質の吸着、透過性等を調べ、パパインによるアゾカゼイン分解をモデル反応として反応効率に関与する因子を検索した結果、物理的要因による酵素の不活性化が大きな問題となることが明らかになった。(2)ホローファイバー型反応器に適した酵素の条件を探るため、分子内架橋の導入、高分子多糖デキストラランの付加、合成高分子ポリエチレングリコールの付加、膜面へ酵素の直接固定について検討した。高分子による修飾は高分子基質に対する活性を低下させるものの、各種環境条件に対する酵素の安定性を向上させ、リアクター用酵素として優れていることを検証した。(3)キモトリプシン及びカルボキシペプチダーゼAによる2段階酵素処理やプロナーゼ処理とホローファイバー型透析器との組合せにより、大豆蛋白質よりフェニルアラニン含量の低いペプチド混合物(フェニルケトン尿症患者用食品素材)を調整できることを示した。(4)高濃度含水有機溶媒系で、トウモロコシ・プロラミン蛋白質ゼインを分子量3000のペプチドへ酵素的に限定加水分解できることを見い出し、この現象がゼインの二次構造に基づくものであることを明らかにした。1.蛋白分解酵素を利用した食品タンパク質の部分加水分解により生成するペプチドの分析を行い,機能特性を持つ食品ペプチドの生産条件を精査し,酵素反応リアクターへの適用条件を明らかにする研究項目について.(1)低利用蛋白資源の用途拡大・有効利用を目的に,トウモロコシ・プロラミン蛋白質ゼインを高濃度含水有機溶媒(50-70%エタノール)を用いた均一反応系で蛋白分解酵素により限定加水分解する条件を見い出した.加水分解度は15%程度で,分子量8000および3-4000のペプチドを得ることができた.この限定分解を利用した機能性ペプチドの開発が当面の課題である.(2)大豆分離蛋白質を原料に,各種プロテアーゼを用いて低フェニルアラニンペプチドの効率的生産条件を検討した.α-キモトリプシンとカルボキシペプチダーゼAの併用により調製したペプチド混合物を人工腎臓用ホローファイバー装置に循環し,原料(5.5%Phe含有)に較べ, 0.6%まで含量を低下させたものを得ることができた.従来のゲル〓過分取法に対し収率は低くなるが,製品のアミノ酸バランスは優れており,処理量・時間当りの収量を考慮すると有利な方法となることが期待され,さらに条件を検討している.2.人工腎臓用ホローファイバーを組み込んだシステムを作り,物理的に遊離酵素を封入した膜分離型酵素反応器として反応効率,酵素安定性,生成物の性質について検討する研究項目について(1)パパインによるカゼインの加水分解反応をモデル系として反応器の特徴を明らかにした.酵素・基質溶液を高流速で循環し膜透過性を高めた系の方が反応効率が高いが,反面酵素活性の低下が大きく連続反応に不向きであった.パパインをデキストランと共有結合させた高分子化学修飾

酵素は安定性に優れており,長時間連続反応を行う遊離酵素循環方式に有効であることを見い出し,応用研究を試みている.蛋白質分解酵素を利用した酵素修飾による食品蛋白質の改質ならびに有用ペプチドの製造に関し、62年度において得られたホローファイバー型酵素反応器の特性、適用条件等をもとに、(1)ホローファイバー(中空糸膜)型人工腎臓透析器を用いたシステムを組み込んだ低フェニルアラニン・ペプチド(フェニルケトン尿症患者用食品素材)の調製。(2)反応器に適した安定化された酵素を得るために、合成高分子であるポリエチレングリコールで化学修飾したハイブリッド酵素の調製および修飾酵素の特性解析を行った。1.分離大豆蛋白質を原料に、プロナーゼ1段階酵素処理およびα-キモトリプシンとカルボキシペプチターゼAを利用した2段階酵素処理の2方法を用いて酵素分解物を調製し、それら生成物の比較検討を行った。ついで、ホロファイバー型透析器に通過させることにより、遊離アミノ酸、低分子ペプチドを除去することでフェニルアラニン含量の低い素材を得ることができた。操作性や時間の点で効果的な方法となると思われるが。基質の溶解性、回収率等の問題が残った。原料の選択、酵素処理時間の厳密な制御によってさらに有効性が高まると期待される。2.2,4-ビス(0-メトキシポリエチレングリコール)-6-クロロ-S-トリアジンを酵素パパインのアミ基と反応させ、過剰の試薬および未修飾酵素を限外濾過により除き、高分子化された両親媒性修飾酵素を得た。修飾率が高いほど、また、基質蛋白質の分子量が大きいほど高分子基質に対する活性の低下がみられるが、未修飾の酵素に比べて熱安定性、pH安定性、プロナーゼ消化に対する安定性などが優れていた。親水性、疎水性両有機溶媒への溶解性も向上し、種々の反応条件を要求されるホロファイバーシステムに対応しうる特性をもつことが明らかとなった。
無声映画の音―帝政期ロシアにおける初期映画興行研究

本研究は「無声映画の音」という観点から、帝政期ロシアにおいて発行された映画雑誌を網羅的に分析することで、帝政期ロシアにおける初期映画興行の全体像を明らかにする際の基盤を構築した研究である。本研究を通じて、第一次世界大戦以前に世界の初期映画興行の9割近くを占有し、世界各国の映画製作に少なからぬ影響を与えたフランス映画の視覚的な無国籍性とは対照的に、帝政ロシアにおいて提供されていた無声映画の伴奏音楽に、ナショナルな先行ミディアムの影響が見られたという事実が明らかになった。これらの学術的成果について、国内における紀要論文の刊行や、国際的な映画雑誌における英・仏語論文の刊行等によって公表した。第一次世界大戦以前に世界各国の映画市場を席巻していたのは、主としてフランスのパテ社やゴーモン社が製作した文芸映画や喜劇映画であった。この二大映画ジャンルが世界各国の映画製作の礎を築いてきたことは、これまでも知られて来たが、当時の映画雑誌の残存率は極めて低く、その変容過程が詳細なデータを裏付けとして示されたことはない。そこで本研究では、全102種類ときわめて残存率の高い帝政期ロシアの映画雑誌群に掲載されている作品データを分析することで、帝政期ロシアにおいても初期フランス映画が主要な位置を占めており、それらが帝政期ロシア映画の変容に大きな役割を果たしたことを明らかにしたい。本年度も帝政期ロシアの映画雑誌『キノ・ガゼッタ』『シネマ・パテ』『キネモ』等を中心に綿密な文献調査を行う一方、質量共に最大の媒体である映画雑誌『シネ・フォノ』の目次のリスト化を継続して行い、同誌に掲載されているパテ社(仏)、ゴーモン社(仏)、ハンジョンコフ社(露)、ドランコフ社(露)等により当時公開された新作映画のタイトル、ジャンル、フィルム長、価格のデータベース化を行った。その研究成果は、国際学会DOMITORでの研究発表「Reception of Film d'Art and its Impact on Japanese Sound Culture」や、スイス・ローザンヌで開催された国際シンポジウムでの招待講演「Max au Japon, ver unenouvelle gestualite comique」、東西研での招待講演「新しい身体性と編集のリズムー越境者マックス・ランデーに注がれたまなざし」に結実した(いずれも日露における帝政期ロシア映画の受容の問題について議論した)。本科研費の助成を受け、当初は日仏の比較映画研究に留める予定であった博士論文は、最終的に「帝政ロシア」の事例も含めた博士論文「仏・露・日における無声映画の音ー初期フランス映画の受容研究」(2013年7月23日、京都大学大学院人間・環境学研究科共生人間学専攻博士号取得)へと結実した。同論文は、仏・露・日の無声映画興行において「音」が果たしていた役割を比較映画史的に考察することにより、初期フランス映画の受容がもたらした日露両国の初期映画の変容過程において「音」が果たしていた役割を実証的に解明した論文である。さらに博士論文での議論を発展させる形で、論文「越境するスターダムー帝政ロシアと日本におけるマックス・ランデーの受容」、堀潤之・菅原慶乃編『越境の映画史』、関西大学出版部、2014年3月、pp.57-98)を執筆した。帝政ロシアと日本におけるマックス・ランデーの受容の実態に迫るため、両国におけるフィルモグラフィの作成を行うとともに、音と結びついたランデー受容の実態にも触れることで、そのスターダムの共時的な越境性を顕在化させるとともに、両国それぞれの歴史的特殊性を浮かび上がらせることができた。本研究は、帝政期ロシアにおいて発行された102種類にも及ぶ蓄音機・映画雑誌を網羅的に分析することで、第一次世界大戦以前に世界の初期映画興行の9割近くを占有し、世界各国の映画製作に少なからぬ影響を与えたフランス・パテ社やゴーモン社の製作する喜劇映画や芸術(文芸)映画が、帝政期ロシア映画の製作と興行に与えた影響を解明することにある。フランス・パテ社の提供する無声の芸術映画や喜劇映画が様々な「音」(ピアニストによる伴奏、オーケストラ伴奏、蓄音機、音響効果)と共に受容されていた点を踏まえ、フランス製の無声映画の「音」が帝政期ロシア映画にもたらした波及効果について解明を進めている。本年度は、米・仏・露における帝政期ロシア映画研究に関する「文献目録」を作成した上で、日本国内の研究機関未所蔵の重要文献『映画学紀要Киноведческиезаписки』1-25号を入手し、研究基盤を整備した。

さらに、研究発表「ソヴィエト映画の出発点ー帝政期ロシアにおける初期フランス映画と音の共鳴」(日本映画学会第7回全国大会、2011年12月)を行い、フランス製の無声の喜劇映画が革命前のロシアにおいて音と共に受容されていたことを指摘した上で、そうした事実が、ソビエト映画の出発点においても、重要なモメントとなっていたことを明らかにした(一例を挙げれば、ソビエトを代表する映画作家ジガ・ヴェルトフはパテ社製の芸術映画を仮想敵としながらも、演出技法という点で多くをパテ社の喜劇映画から学んでいた)。さらに、比較映画史という観点から、国際学会SCMSにおいて、研究発表「Before Reimei: Early Attempts to Produce Talking Japanese Cinema through the Phonograph」(2012年3月)を行った。最終年度は、東京国立近代美術館フィルムセンター(NFC)が所蔵する「日露戦争記録映画群」のカタロギング作業を通じて、琵琶等の伴奏音楽と共に上映されていた日露戦争映画興行の実態が明らかになるとともに、同映画群が、世界的にもオリジナル版の現存が確認されていない『旅順の降伏』(ジョゼフ・ローゼンタール撮影、1905年)の「複数バージョン」を構成していることが明らかになった(『東京国立近代美術館紀要』19号、2015年)。近年、フィルム・アーカイブにおける映像の考古学的調査は世界的に大きな進展が見られるが、2012年8月以降のNFCへの所属研究機関の変更に伴い、新たに取り組んだ本研究もまた、その傾向に属している。同研究成果は、英語論文「The Multiple Versions of Joseph Rosenthal's Siege and Surrender pf Port Arthur(1905)」と題し、国際フィルム・アーカイブ連盟が発行する学術誌『Journal of Film Preservation』(92号、2015年)に掲載された。さらに本研究では、帝政ロシア映画研究に関する文献リスト及び映画雑誌『СИНЕ-ФОНО』の索引データを作成したが、これらの研究成果についても公表を行う予定である。映画史、映画学本年度は当該研究期間中に、早稲田大学演劇博物館から東京国立近代美術館フィルムセンターへの所属研究機関の変更があり、職場環境が大幅に変わったため、当初予定していたペテルブルク出張が行えず、研究計画に遅滞が生じてしまった。しかしながら、国際的な研究成果の発信として、これまで学術的交流を続けてきたフランス・パテ社研究の第一人者であるローラン・ル・フォレスティエ教授(レンヌ第二大学)とローラン・グイド教授(ローザンヌ大学)から「マックス・ランデー国際シンポジウム」に招待を受け、これまでの研究成果を海外の研究者らと共有できたことで、成果発表の面での達成度については当初の計画以上に進展している(同発表原稿は、フランス語圏の映画雑誌『1895』の「マックス・ランデー特集」に採録される予定である)。2012年8月以降、東京国立近代美術館フィルムセンターへの所属研究機関の変更に伴い、同館の通常業務である映画フィルムの収集、保存、復元及びアクセス対応が研究時間の大半を占めるため、本研究課題に従事可能なエフォート率は5%程度となっている。その限られた時間の中で、上記の研究業績を残すことはできたが、当初の研究計画からは進捗が大幅に遅れている。研究対象が、帝政期ロシアにおいて発行された蓄音機・映画雑誌102種類と広範に渡り、研究発表を学術誌に投稿する時間が確保できなかった点は大いに反省をしている。2011年度の文部科学省「特色ある共同研究拠点の整備の推進事業」(A09351900/
ヒトiPS細胞由来CD82陽性心筋前駆細胞を用いた先制的心不全治療法の開発

生後不変であると考えられていた心筋細胞が再生しているという報告(Bergmann O. et al Science, 2009)がされているが、その再生能力は極めて乏しく心筋梗塞や心不全を自然に克服する能力はなく、心臓は再生医療の重要なターゲットである。現在、心筋再生療法としてヒトiPS細胞やES細胞から誘導される心筋細胞を用いた細胞移植が、心臓移植に代わる再生医療として臨床応用が試みようとされている。現在、治療対象は基本的に心移植を待つしかない重症心不全患者に対してであるが、今後、治療対象が重症心不全にだけ限られるものではなく、根本的な治療法がない進行する心不全の患者に対しても応用可能となるような治療法を開発することが期待される。そこで、移植細胞源として、前駆細胞に着目しCD82陽性心筋特異的前駆細胞を同定した。(特許第5924750号)(Cell Reports 2018)。前駆細胞としては、今までに数々の心血管前駆細胞が同定されているが、分化能として心筋細胞や血管・間葉系に分化する能力を有するが、生体内で安定して心筋細胞に分化せずむしろ血管・間葉系に分化する傾向を示すため、心筋再生能は乏しいと考えられる。一方、CD82陽性心筋特異的前駆細胞は、心筋細胞のみに分化することが運命決定されており、生体内で高率に安定して心筋細胞に分化することができるという特長を有している。そこで、生体内で高率に心筋細胞に分化し、多数の心筋を産生する能力を有するCD82陽性心筋特異的前駆細胞を用い、進行性の病態に対して効果的に心筋を再生し機能改善をもたらす治療法になるのではと考えられた。本研究では、まず小動物(特にラット)を用いて移植効果の検討を行い、2x106個また5x106個の移植細胞数で1か月において心機能改善効果を示した。短期間での観察にとどまり長期での観察を行えなかった。本年度で行った移植実験を継続して長期での観察を行う。
ウイルス性ぶどう膜炎における眼内液中のウイルス転写産物の解析

本研究では、眼内ウイルス性疾患を迅速にかつ定量的に診断し、これらの疾患の治療において有用となる検査法を開発し、臨床検体に応用する可能性について研究した。具体的にはサイトメガロウイルス(CMV)網膜炎および急性網膜壊死(ARN)を主としたウイルス性ぶどう膜炎症例を対象とし、前房水および硝子体液を検体とし解析を行った。LightCyclerを用いたリアルタイムPCRよる解析では、CMV網膜炎、ARN、帯状庖疹によるぶどう膜炎それぞれで、ウイルスゲノムのコピー数は疾患の活動性と相関しており、抗ウイルス薬治療後、急速にゲノムコピー数が減少することを明らかにした。一方、CMV網膜炎が鎮静化した後の免疫能の改善により生じたimmune recovery uveitis症例の硝子体の検索では、CMVゲノムは検出されなかったが、硝子体中に高い濃度のCMV抗原が検出された。さらに、近年開発された迅速、簡易、精確な遺伝子増幅法であるLAMP(Loop-Mediated Isothermal Amplification)法を用いて解析を行った。水痘帯状疱疹ウイルス(VZV)を標的としたLAMPを用いた解析で、ARN症例の前房水および硝子体液で高感度にVZV DNAを検出することができた。この結果はLightCyclerを用いたリアルタイムPCRよる解析結果と相関したが、ゲノムコピー数が10コピー未満の検体は陰性であった。DNA抽出操作を行わなくても1検体を除きVZV DNAを検出することが可能であり、DNA抽出を行った場合と比較し同等の検出感度であった。定量性については、LAMP法は半定量的であり、LightCyclerを用いたリアルタイムPCRと比較すると定量性は乏しかった。LAMP法によるウイルスDNA解析は簡便な装置でごく短時間で検索可能であり、眼科領域での臨床応用への可能性が示された。サイトメガロウイルス(CMV)網膜炎および急性網膜壊死(ARN)を主としたウイルス性ぶどう膜炎症例の前房水および硝子体液を収集し、解析を行った。LightCyclerを用いたリアルタイムPCRよる解析では、CMV網膜炎患者の前房水中に抗ウイルス薬治療前にはCMVゲノムは10^110^4コピー/μl存在し、網膜炎の範囲、活動性と相関していた。CMVゲノムコピー数は抗ウイルス薬の治療により急速に減少したが、症例によっては長期に微量のウイルスゲノムが検出された。また、ARN症例では、抗ウイルス薬治療前の前房水中に水痘帯状庖疹ウイルス(VZV)ゲノムは1.6x10^31.1x10^6コピー/μl存在し、病変の範囲、進行度によって異なっていた。VZVゲノムコピー数は抗ウイルス薬治療により急速に減少したが、減少の程度は症例によって異なっていた。硝子体中には前房水に比して、約5倍のウイルスゲノムが存在していた。また、眼底病変を伴わないVZVぶどう膜炎患者の前房水の検索では、VZVゲノムは4.9×10^6コピー/μl存在し、ARNと同程度以上のゲノムコピー数が存在していた。本例では前眼部主体の炎症が生じていたため、多数のウイルスゲノムが前房水中に存在していたものと考えられた。CMV網膜炎が鎮静化した後、免疫能の改善により生じたimmune recovery uveitis症例の硝子体の検索では、CMVゲノムは検出されなかったが、硝子体中に高い濃度のCMV抗原が検出された。硝子体中のCMV抗原に対する免疫反応がimmune recovery uveitisの病因と考えられた。このCMV抗原の性状について、今後検索する予定である。

現在、NASBA、RT-PCRを用いた転写産物の解析系を作成し、これらの症例の転写産物と病気の活動性との関係について検索中である。ウイルス性ぶどう膜炎症例の前房水および硝子体液を収集し、ウイルスゲノムと転写産物の動態の解析を行い、ウイルスの活動性と疾患の関係について検討した。サイトメガロウイルス(CMV)網膜炎、急性網膜壊死(ARN)、帯状疱疹によるぶどう膜炎から得られた検体を用いた。LightCyclerを用いたリアルタイムPCRよる解析では、CMV網膜炎、ARN、帯状疱疹によるぶどう膜炎それぞれで、ゲノムコピー数は疾患の活動性と相関しており、抗ウイルス薬治療後、急速にゲノムコピー数が減少していた。しかし、CMV網膜炎が鎮静化した後の免疫能の改善により生じたimmune recovery uveitis症例の硝子体の検索では、CMVゲノムは検出されなかったが、硝子体中に高い濃度のCMV抗原が検出された。また、長期に炎症が持続し網膜前膜の形成をきたしたHSVによるARN症例の検索でも、HSVゲノムは検出されなかった。HSV抗原については現在検索中である。ウイルス転写因子について検討を重ねているが、検体中の転写因子が微量であるためと考えられ、十分な解析ができていない。現在LAMP (Loop-Mediated Isothermal Amplification)による検索を施行中である。LAMPは、迅速、簡易、精確な増幅法として近年開発された遺伝子増幅法で、標的遺伝子の6箇所の領域に対してプライマーを設定し、鎖置換反応を利用し一定温度で反応させることを特徴とする。増幅効率が高く、DNAを15分1時間で10^910^<10>倍に増幅することができ、その極めて高い特異性から、増幅産物の有無で目的とする標的遺伝子配列の有無を判定することができる。本研究では、眼内ウイルス性疾患を迅速にかつ定量的に診断し、これらの疾患の治療において有用となる検査法の開発を試みてきた。LAMP (Loop-Mediated Isothermal Amplification)法は、迅速、簡易、精確な増幅法として近年本邦において開発された遺伝子増幅法で、標的遺伝子の6箇所の領域に対してプライマーを設定し、鎖置換反応を利用し一定温度で反応させることを特徴とする。増幅効率が高く、一定温度においてDNAを15-60分で10^9-10^<10>倍に増幅することができ、その極めて高い特異性から増幅産物の有無で目的とする標的遺伝子配列の有無を判定することができる。本研究においてはVZV(水痘帯状疱疹ウイルス)を標的としたLAMPを用いた解析で、急性網膜壊死(ARN)症例の前房水および硝子体液で高感度にVZV DNAを検出することができた。この結果はLightCyclerを用いたリアルタイムPCRよる解析結果と相関したが、ゲノムコピー数が10コピー未満の検体は陰性であり、従来の方法に比し微量のウイルスゲノムのみが存在する検体が陰性となってしまう問題が残っている。DNA抽出操作を行わなくても1検体を除きVZV DNAが検出され、DNA抽出を行った場合と比較し同等の検出感度であった。検出できなかった検体は硝子体液で、VZV DNAコピー数が少なく、硝子体線維に感染細胞が捕捉されていた、あるいは検体中の蛋白成分が多く増幅が阻害された可能性が考えられた。
脂質二重層に類似の層状結晶を用いた細胞膜の放射線損傷モデル

細胞膜の放射線損傷の初期過程を追跡するには,細胞膜を大量にしかも揃えて測定することが必要であるが,それは困難である.ところが,アルキルアンモニウム塩化カドミウムは大きな単結晶を作成でき,しかも脂質二重膜と類似のアルキルアンモニウムイオンを有し,細胞膜のモデル物質として利用できる.その部分に損傷を多数作り,それを電子スピン共鳴(ESR)によって検出し,細胞膜の放射線による初期損傷の受け方を調べた.エックス線及びガンマー線を液体窒素温度で照射した上記の結晶には,塩化カドミウム部分に二原子分子イオン(Cl_2^-)ができ,そのESRシグナルがアルキルアンモニウムイオン部分にできる損傷と重なって複雑になる.しかし温度を200K以上にするとこの二原子分子イオンのESRシグナルが消失し,アルキルアンモニウムイオン部分にできる損傷のESRシグナルのみが検出できた.結晶の方位角を変えながら測定したところ,アンモニウム基から水素核(プロトン)が取れたラディカルが損傷としてできることが判った.つまりアルキル基の様な強い共有結合の部分ではなくて,イオン化したアンモニウム基部分が放射線損傷を受けやすいことが判った.このようなラディカルは膜の中では,脂質ラディカルとなり隣接した脂質と置換しながら,あるいは隣接した脂質のアンモニウム基のプロトン移動によってラディカル状態が膜中を移動し,膜中のイオンポンプ蛋白質に到達すると考えられる.そしてその脂質ラディカルはイオンポンプ蛋白質と反応してその立体構造を歪める.その結果,イオンポンプとしての機能に障害を起すものと考えられる.放射線を受ける面積は,膜の部分がイオンポンプの部分に比して大きいので,膜が受ける放射線損傷は重要である.細胞膜の放射線損傷の初期過程を追跡するには,細胞膜を大量にしかも揃えて測定することが必要であるが,それは困難である.ところが,アルキルアンモニウム塩化カドミウムは大きな単結晶を作成でき,しかも脂質二重膜と類似のアルキルアンモニウムイオンを有し,細胞膜のモデル物質として利用できる.その部分に損傷を多数作り,それを電子スピン共鳴(ESR)によって検出し,細胞膜の放射線による初期損傷の受け方を調べた.エックス線及びガンマー線を液体窒素温度で照射した上記の結晶には,塩化カドミウム部分に二原子分子イオン(Cl_2^-)ができ,そのESRシグナルがアルキルアンモニウムイオン部分にできる損傷と重なって複雑になる.しかし温度を200K以上にするとこの二原子分子イオンのESRシグナルが消失し,アルキルアンモニウムイオン部分にできる損傷のESRシグナルのみが検出できた.結晶の方位角を変えながら測定したところ,アンモニウム基から水素核(プロトン)が取れたラディカルが損傷としてできることが判った.つまりアルキル基の様な強い共有結合の部分ではなくて,イオン化したアンモニウム基部分が放射線損傷を受けやすいことが判った.このようなラディカルは膜の中では,脂質ラディカルとなり隣接した脂質と置換しながら,あるいは隣接した脂質のアンモニウム基のプロトン移動によってラディカル状態が膜中を移動し,膜中のイオンポンプ蛋白質に到達すると考えられる.そしてその脂質ラディカルはイオンポンプ蛋白質と反応してその立体構造を歪める.その結果,イオンポンプとしての機能に障害を起すものと考えられる.放射線を受ける面積は,膜の部分がイオンポンプの部分に比して大きいので,膜が受ける放射線損傷は重要である.
上皮細胞におけるSLPIによるpIgRの発現抑制について

腸管などの粘膜組織に特異的に発達した粘膜免疫機構では上皮細胞で産生されたpIgRと呼ばれる蛋白が重要な働きをしている。このpIgRは粘膜上皮にのみ産生されるが、皮膚などの上皮細胞では産生されない。上皮細胞におけるpIgRの産生の相違が蛋白分解を阻害するSLPI蛋白によるNF-kBの活性化の低下によることを明らかにした。また、ヒトの腸管や唾液腺におけるSLPIとpIgRの組織内局在の検索からも生体内でpIgRの産生がSLPIによる抑制が示唆された腸管などの粘膜組織に特異的に発達した粘膜免疫機構では上皮細胞で産生されたpIgRと呼ばれる蛋白が重要な働きをしている。また、ヒトの腸管や唾液腺におけるSLPIとpIgRの組織内局在の検索からも生体内でpIgRの産生がSLPIによる抑制が示唆されたHT-29細胞はpIgRを定常的に発現するが、培地にSLPIを1μg/mlまたは10μg/mlの濃度になるように添加して1、2および3日間培養した後、ELISA法で培地に分泌されたpIgR量を検索した結果、SLPIによりpIgR分泌量は8ng/mlから5ng/mlへと約50%減少した。また、SLPIの濃度により大差は認めなかった。しかし、1および2日の検索では今回用いた方法では検出限界以下であり、今後、再現性のある濃縮法が必要である。HT-29細胞はSalmonella(S)minnesota由来のLPS(10μg/ml)刺激によりpIgRの発現の増加が知られている。HT-29細胞をS minnesota由来のLPS(10μg/ml)およびSLPI(10μg/ml)の存在下で3日間培養し、ELISA法およびWestern blot法で培地に分泌されたpIgR量を検索した結果、LPSの添加によりpIgR濃度は10μg/mlから20μg/mlに増加を示したが、SLPIおよびLPSとSLPIを培地に添加するとpIgR濃度は両者とも5μg/mlに大きく減少した。また、RT-PCR法による遺伝子発現も大きく減少した。また、HT-29細胞およびCaCO2細胞を同様に刺激してサイトスピン標本を作製し、抗SC抗体で染色した結果、両細胞ともSLPIにより陽性細胞が減少する傾向を示した。以上結果からSLPIは上皮細胞におけるpIgRの発現に大きく関与することが確認された。扁平上皮癌由来のCa9-19細胞におけるSLPIを抑制し,pIgRを発現するNUSD-1細胞におけるpIgRの発現とNF-κBの活性化との関係について検索を行った。その結果、NUSD-1細胞およびCa9-22細胞においてNF-κBおよびIκκαの発現をINF-γの刺激の有無におよび刺激時間に関係なく認めたが、Iκκβの発現はNUSD-1細胞では明らかな発現を認めたが、Ca9-22細胞では明らかな発現を認めなかった。さらに、IκBβはCa9-22細胞では強く、NUSD-1細胞では弱い発現を示した。これらの結果はSLPIがIκBβの発現に関与することと符合し、pIgRの発現に関与している事が示唆された。また、腸管の上皮細胞におけるpIgRとSLPIとの組織局在を免疫染色で検索を行った。エタノール固定・パラフィン切片を脱パラフィンした後、抗ヒトSLPI抗体で1時間反応させ、PBSで洗浄し、RITC標識抗ウサギIgG抗体と1時間反応させた。切片をPBSで洗浄した後、FITC標識抗ヒトSC抗体と1時間反応後、蛍光顕微鏡で観察した。検索の結果、SLPIとpIgRの陽性部位は両者とも上皮細胞の胞体内にみられるが、発現を示す細胞は相補的であった。この結果から正常組織においてもpIgRの発現にSLPIの関与が示唆された。SLPIおよびpIgRの組織内局在についてヒト腸管(凍結切片、ホルマリン固定パラフィン包埋切片)およびヒト唾液腺(ホルマリン固定パラフィン包埋切片)を用いて酵素抗体法または蛍光抗体法による免疫組織染色法を用いて検索を行った。その結果、ヒト腸管においてpIgRは上皮細胞の細胞質に局在を認めたが、杯細胞などその他の細胞には認めなかった。また、SLPIも一部の上皮細胞にその局在を認めた。しかし、凍結切片による蛍光抗体二重染色法によりSLPIとpIgRの両者の局在を示す上皮細胞は認めなかった。さらに、唾液腺ではpIgRは漿液性腺房細胞、半月、導管上皮細胞にその局在を認めたが、SLPIは一部の粘液性腺房細胞に局在を認めた。これらの結果はSLPIとpIgRの発現が相補的であり、pIgRの発現がSLPIにより抑制されていることを示唆している。HT-29細胞やCaCo2細胞をconfluentになるまで培養した後、培地にSLPIを0.1,1.0,10μg/mlの濃度になるように添加し、3日間培養した。

培地に分泌されたpIgRの分泌量を検索した結果、0,1,1.0μg/mlでは分泌量の低下を示したが、10μg/mlではその値のバラツキが見られた。このことからHT-29細胞を1.0μg/mlのSLPIを添加した培地で10,20,30および60分間培養した後、核抽出物を抽出し、NF-κB, IκBβ, IκBαなどのシグナル伝達を検索した。現在、pIgRの発現を増加させるINF-γやTNF-αとSLPIの関与について検索を続けている。
悪性リンパ腫におけるアミノ酸トランスポーターの解析と治療への応用

悪性リンパ腫細胞株でのアミノ酸トランスポーターおよび関連する蛋白LAT-1、ASCT-2、CD98の発現を、CD19抗体でnegative selectionした末梢血単核球をコントロールとしてリアルタイムPCRで検討し、約半数の細胞株で発現が亢進していた。悪性リンパ腫の臨床検体112例でLAT-1、CD98の発現、MIB-1陽性率を免疫組織化学染色で検討した。びまん性大細胞型B細胞リンパ腫(DLBCL)、バーキットリンパ腫ではほぼ全例で強陽性、ホジキンリンパ腫は5060 %陽性、濾胞性リンパ腫(FL)は1020 %、濾胞辺縁帯B細胞リンパ腫(MZBCL)および小リンパ球性リンパ腫(SLL)は陽性率10 %以下で、CD98も同様の傾向であった。一部の低悪性度リンパ腫(MZBCL、FL)で陽性率の高い症例が少数ながら見られており、その臨床像、治療反応性、予後について検討中である。DLBCLではLAT-1とMIB-1陽性率で相関傾向を示したが、他の病型での両者の相関関係、および、ASCT-2発現については検討中である。増殖能の高いアグレッシブタイプのリンパ腫でアミノ酸トランスポーターLAT-1が強く発現していることは、その阻害により細胞増殖を抑えられる可能性がある。リンパ腫治療の新たな戦略となりうると思われ、現在、細胞株を用いてLAT-1阻害薬、および、SiRNAを用いた実験を進めている。FAMT-PETは11例で行い、現在も症例をリクルート中である。新たに実施した症例、および以前行った症例と合わせて解析予定である。リンパ腫細胞株(CTB-1、TL-2、SLVL、OCI-Ly2、OCI-Ly7)におけるアミノ酸トランスポーターLAT1、CD98のmRNA発現量を、CD19抗体でnegative selectionした末梢血単核球をコントロールとして、リアルタイムPCR法で確認した。現在、リンパ腫症例の臨床検体を用いて、その遺伝子発現量を同法で検討している。アミノ酸代謝を応用したFAMT-PETは、倫理指針変更に伴うプロトコール修正が必要となり、そのIRB申請、承認手続きを行なったこと、また、器械の入れ替え作業があり、数か月間検査実施患者数を制限していたため、研究用にPET検査を実施できなかった。器械の入れ替えが終了したので、新年度から順次患者のリクルートを進める予定である。免疫組織化学染色の条件設定に時間が取られたのと、研究室の引越しのため、予定より遅れている。また、PET器械入れ替えのため、PET検査実施数に制限がかかったため、研究目的で行うPET検査は実施できなかった。リンパ腫細胞株におけるアミノ酸トランスポーターASCT-2のmRNA発現量を、CD19抗体でnegative selectionした末梢血単核球をコントロールとして、リアルタイムPCRで確認した。約半数の細胞株で発現が亢進していた。現在、リンパ腫症例の生検による臨床検体を用いて、ASCT-2、LAT1、CD98の遺伝子発現量をリアルタイムPCRで検討している。FAMT-PET検査は、Indolentリンパ腫では十数例で実施できたが、DLBCLなどのAggressive typeのリンパ腫では、なかなか症例登録が進んでいない。・細胞株では、検討したアミノ酸トランスポーター陽性率が高くなかった。他の癌種では発現が亢進している報告が多かったため、確認実験を繰り返す必要があった。・免疫組織化学染色の条件設定が難しく、至適法の確立に時間がかかった。・病理専門医と病理標本の検討を行なう予定であったが、諸事情により延期となった。・FAMT-PETでは、Indolentリンパ腫では検査実施の協力が得られやすかったが、Aggressive typeリンパ腫では、治療を急がねばならない症例が多く、なかなか検査協力が得られなかった。免疫組織

化学染色の条件が整ったので、今後は比較的スムーズに進むものと予想している。また、器械の入れ替えが終わったので、FAMT-PET検査の患者リクルートに努める。・免疫組織化学染色の至適条件が確立し、病理診断、治療内容、予後が判明している症例のピックアップが終了しており、免疫染色は比較的円滑に行えるものと考えている。・病理専門医と病理標本の検討を少なくとも年2回実施する。・FAMT-PETでは、Aggressive typeリンパ腫患者のリクルートを進める。外来担当医に生検の時点から症例登録してもらい、病理診断が判明した受診日に、FAMT-PET[検査の同意説明文書を外来担当医に渡す。免疫組織化学染色の条件設定に遅れが生じたため、今年度は免疫染色がなかなか進まなかった。・リアルタイムPCR、免疫染色の進行が遅れており、消耗品の使用頻度が少なかった。しかし、免疫染色の条件は安定してきており、検討予定症例もピックアップ済みであり、検討が円滑に進むものと考えている。免疫組織化学染色を行なう症例数を増やすとともに、Cell stockまたはOCTとして検体を保存してある検体のリアルタイムPCRで、遺伝子発現量の定量を行なう。