hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
膜型IgEシグナルによるB細胞の運命制御機構の解明

過剰なIgEの産生はアレルギー発症の原因となる。通常、IgE+ B細胞では未知のメカニズムによって長期生存が抑制されており、メモリーB細胞や長期生存プラズマ細胞へとは分化せずIgE産生は一過性に保たれている。本研究では、膜型IgEの自発的シグナル伝達がB細胞の短命化を誘導することの詳細なメカニズムを解明した。膜型IgEはCH1-4ドメインを介して、抗原非依存的にSyk-BLNK経路を活性化して細胞死し、細胞膜直上のドメインを介してCD19経路を介してプラズマ細胞分化を誘導することを明らかにした。また、これら膜型IgEのシグナル伝達経路の異常がアレルギーの原因になることを同定した。過剰なIgEの産生はアレルギー疾患の原因としてよく知られている。通常、IgE陽性B細胞は短命であり、長期に生存できる記憶B細胞や長期生存プラズマ細胞には分化せず、過剰なIgE産生が抑えられている。しかしながら、記憶B細胞や長期生存プラズマ細胞への分化がどのようにして抑制されているのか、その分子メカニズムは全く不明であった。私たちは、自発的な膜型IgEシグナルがIgE陽性B細胞の短命化を誘導することをすでに見出している。この知見をもとに、本研究ではIgE陽性B細胞特有の分化・維持・体内動態の制御機構の解明、さらには、その結果に基づいてアレルギー発症機序の解明を目指して研究を進め、以下の結果を得た。1.膜型IgEが抗原非依存的に細胞死を誘導することを新たに見出した。さらにこの細胞死誘導には、BLNKを介したJNK及びp38 MAPKの活性化が重要であることを同定した。BLNK欠損B細胞では、膜型IgEによる細胞死誘導がほとんど認められなかった。マウスを免疫することにより誘導されるIgE陽性胚中心B細胞においても、BLNK依存的な細胞死の亢進が見られた。さらに、膜型IgEによる細胞死誘導にはCD19を介したシグナル経路は関与しないことも明らかとなった。2.膜型IgEの細胞外ドメインの内、CH1-4ドメインがSyk-BLNK経路の活性化を介した細胞死の誘導に必須であることを見出した。また、膜直上の小さな領域であるExtracellular membrane proximal domain (EMPD)がCD19との恒常的な会合に必須であり、自発的なプラズマ細胞分化に必要であることを見出した。3.培養B細胞にハプテンNP特異的膜型IgG1と膜型IgEを発現させ、それぞれを精製してSDS-PAGEを用いて分離したのち比較解析した。その結果、膜型IgEのみに会合するタンパク質が複数存在することを見出した。当初の研究計画に従って、膜型IgEとIgG1のドメイン置換体を複数作成し、膜型IgEの自発的シグナル誘導の責任領域同定を試みた。その結果、膜型IgEの細胞外ドメインであるCH1-4と膜直上のEMPDが、Syk-BLNK-JNK/p38経路の活性化を介した細胞死と、CD19-PI3K-Aktを介した自発的なプラズマ細胞分化の誘導にそれぞれ必須であることを見出すことができた。しかしながら、自発的シグナル形成メカニズムの解明には至っておらず、現在その解明を目指して解析を進めている。IgEはアレルギーの主要因であるが、IgE陽性B細胞の分化・活性化機構は不明である。また、アレルギー疾患患者に存在すると思われるIgE陽性B細胞の免疫記憶の実体も不明である。正常マウスのT細胞依存性免疫応答ではIgE陽性B細胞は短命のプラズマ細胞に分化しやすく記憶細胞、すなわち、記憶B細胞や長期生存プラズマ細胞にはならないとされている。本研究は、このIgE陽性B細胞特有の分化・維持・体内動態の制御機構の解明を目標として研究を行った。まず、昨年度に明らかにした、アダプター分子であるBLNKおよびCD19を介した膜型IgEの自発的シグナルがIgE型の免疫記憶形成を抑制し、アレルギー発症を防いでいる事について論文を投稿し、この研究成果はNature Immunology紙に掲載され、日刊工業新聞、薬事日報、日経産業新聞に取り上げられた。また、本研究の解説・総説論文を複数報発表した。さらに、IgE陽性B細胞の制御機構について解析を進め、以下の事を明らかにした。1.膜型IgEによる抗原非依存的・自発的なプラズマ細胞分化の誘導と細胞死の誘導には、B細胞がIL-4刺激を受けることが必要であった。2. IL-4刺激により、CD19等の膜分子の糖鎖修飾が変化することを見出した。膜型IgEによる自発的シグナル形成メカニズムを明らかにするために、膜型IgEのCH1-4に結合し、シグナル誘導のトリガーとなる分子を探索する。培養B細胞にNP

特異的な膜型IgG1およびCH1-4がIgE由来のIgG1変異体をそれぞれ発現させ、その細胞溶解物をNP-ビーズを用いて免疫沈降する。沈降物のSDS-PAGEと質量分析法によって、膜型IgG1には結合せずIgG1変異体にのみ結合するタンパク質を同定する。同定した分子を培養B細胞においてノックダウンし、IgE陽性B細胞の長期生存能を解析して機能的な膜型IgEリガンドを同定する。免疫学膜型IgEによる自発的シグナル形成の責任領域を同定することができたが、自発的シグナル形成の分子メカニズムを明らかにするまでには至っていない。次年度では、その全貌を解明すべく当初の計画に従って研究を進める。研究を遂行するために必要な、抗体・サイトカイン等の試薬類、マウス、プラスチック器具類を購入する。さらに、質量分析(外部専門業者に委託する)を重点的に行い、膜型IgEのCH1-4に結合する分子を同定する。
家畜牛類及び近縁野生種のDNA情報による遺伝分化の総合解明と機能遺伝子変異の検索

30年以上にわたるアジア地域の在来家畜の遺伝学的・形態学的調査研究により、在来牛や在来水牛の地域集団、これらの野生原種、あるいは近縁野生種など、牛亜科動物種の試料が抽出DNA試料として保存されている。本研究の目的はこれらの貴重かつ豊富な保存DNA試料を活用して牛亜科の種から地域集団レベルで詳細な類縁関係を解明するとともに、効率的な遺伝子資源保全のための情報を提供すること、及び機能遺伝子の基礎的変異とその分布を体系的に明らかにし、有用機能遺伝子変異の研究の検索・利用基盤を形成することにある。得られた成果の一部は以下のとおりである。1)フィリピンのミンドロ島のみに生息する希少野生水牛(タマラオ)、Bubalus mindorensis、のTf遺伝子の多型を見つけ、集団構造解析の有効な標識となることを示した。さらに、家畜水牛との比較研究を、R-バンド核型、染色体動原体領域のサテライトDNA、テロメア塩基配列及び18S-28SrRNA遺伝子の染色体分布によって行い、タマラオがアジア水牛属の各種から区別される固有種であることを明確にした。2)Cyt-b遺伝子の全塩基配列の比較に基づき、現生アジア水牛属のすべての種の系統進化過程を推定した。3)ベトナム在来牛集団に、Rob(2;28)ロバートソン型融合染色体を同定し、これがガヤールのそれと相同であることを示した。3)ヘモグロビン・ベータ鎖変異遺伝子の地理的分布を調べ、タイ、ラオス、ベトナムに比較的高い頻度で存在するX1型がガヤールのそれと相同遺伝子と推定した。4)タウルス型牛種とインド型牛種を母系遺伝する標識で区別する方法に加えて、Y-染色体のSRY遺伝子を含む領域のRFLP分析によって、両型を容易に区別する方法を確立した。その結果、ラオスとベトナムの在来牛集団は母系的、父系的共にこれらの集団にインド型牛種の影響が極めて大きいことを明らかにした。本研究の目的は地域在来集団を含む牛亜科動物の貴重かつ豊富な保存DNA試料を利活用し、種から地域集団レベルで詳細な類縁関係の解明により遺伝子資源保全への必要な提言をすること、及び、機能遺伝子の基礎的変異と分布を体系的に明らかにし、有用機能遺伝子変異の研究の検索・利用基盤を形成することにある。平成10年度は、1)従来から保存されていたウシ属、アジアスイギュウ属のDNA試料を種、亜種、生息地、飼養地域等に従って分類・整理と分析、2)ベトナムの在来牛及び水牛の地域集団から得られた試料約400個分のDNAサンプル化と整理・保存、3)新たにラオスの在来牛及び水牛の地域集団から得られた試料約300個分のDNAサンプル化と整理・保存を進めた。具体的研究内容としては、1)ミトコンドリアDNA内のチトクロームb遺伝子を含む1150bpの塩基配列の比較から、アジアスイギュウ属全種の分子進化系統樹の作成と成果の論文公表、2)ベトナム及びラオスの在来牛の血液試料を用いた、核遺伝子の産物である血液タンパク、酵素の電気泳動的遺伝変異の解析とこれらの国の在来牛集団内の遺伝的変異の定量と地域集団間における遺伝的分化度の推定及びその成果の取りまとめ、3)細胞遺伝学的研究としては、特に、アジアスイギュウ属の核型を白血球の培養と各種分染法による分析とタマラオ(Bubalus mindorensis)の核型を中心としたアジア水牛属における染色体再構成の進化学的比較研究及び成果の取りまとめと公表、を進めた。

牛亜科の種から地域集団レベルで詳細な類縁関係の解明により遺伝子資源保全への必要な提言をすること、及び、機能遺伝子の基礎的変異と分布を体系的に明らかにし、有用機能遺伝子変異の研究の検索・利用基盤を形成することにある。平成11年度は、特に1)ベトナムの在来牛及び水牛の地域集団から得られた試料約400個分のDNAサンプル化と整理・保存、2)ラオスの在来牛及び水牛の地域集団から得られた試料約300個分のDNAサンプル化と整理・保存、並びに3)家畜アジアスイギュウとタマラオ(Bubalus mindorensis)の核型分析と進化に関する研究成果発表を進めた。具体的研究内容としては、1)ミトコンドリアDNA内のチトクロームb遺伝子を含む1150bpの塩基配列の比較から、アジアスイギュウ属全種の分子進化系統樹の作成と成果の論文公表、2)ベトナム及びラオスの在来牛の血液試料を用いた、核遺伝子の産物である血液タンパク、酵素の電気泳動的遺伝変異の解析とこれらの国の在来牛集団内の遺伝的変異の定量と地域集団間における遺伝的分化度の推定及びその成果の取りまとめ、3)細胞遺伝学的研究としては、特に、アジアスイギュウ属の核型を白血球の培養と各種分染法による分析とタマラオ(Bubalus mindorensis)の核型を中心としたアジア水牛属における染色体再構成の進化学的比較研究及び成果の取りまとめと公表を行った。本研究は、牛亜科の種から地域集団までのレベルで詳細な牛類の遺伝学的類縁関係を解明することにより、遺伝子資源保全への必要な提言をすること、及び、機能遺伝子の基礎的変異と分布を体系的に明らかにし、有用機能遺伝子変異研究の検索・利用基盤を形成することを目的とする。平成12年度は、特に以下の4点について研究成果を論文として公表した。1)フィリピンのミンドロ島のみに生息する希少野生水牛(タマラオ)、Bubalus mindorensis、と家畜水牛の比較研究を、R-バンド核型、染色体動原体領域のサテライトDNA、テロメア塩基配列及び18S-28SrRNA遺伝子の染色体分布によって行い、タマラオがアジア水牛属の各種から区別される固有種であることを明確にした。2)ベトナムの在来牛集団に、アジアでは初めての染色体変異である、Rob(2;28)ロバートソン型融合染色体を同定し、これがガヤール、Bos gaurus frontalis、のそれと相同であることを示した。3)ヘモグロビン・ベータ鎖変異遺伝子の地理的分布を調べ、タイ、ラオス、ベトナムに比較的高い頻度で存在するX1型がガヤールのそれと相同遺伝子と推定し、この地域の在来牛の起源に複数種の野生牛が関与したことを示唆した。4)タウルス型牛種とインド型牛種を、母系遺伝するミトコンドリアDNAの分析で明確に区別する従来の方法に加えて、Y-染色体上にあるSRY遺伝子を含む領域のRFLP分析によって、両型を容易に区別する方法を確立した。この母系及び父系遺伝をする標識を用いて、ラオスとベトナムの在来牛集団にタウルス型牛種とインド型牛種がどの程度それらの成立過程に遺伝的寄与をしたかを定量した。その結果、母系的、父系的ともにこれらの集団にはインド型牛種の影響が極めて大きいことが判明した。
生体情報をフィードバックした機械的鍼刺激で膀胱訓練を行う尿失禁治療装置の開発

本研究において、尿失禁のトレーニング装置の具体化に向けた、適切な鍼刺激の部位、刺激方法に関する基礎的データが集積された。仙骨部の経穴(BL-33)への骨膜に達する刺鍼と半回旋刺激の有効性が、尿失禁の排尿障害を持つ患者(脊損患者を含む)における、種々の指標を用いた比較試験、麻酔ラットでの律動的膀胱収縮さらに排尿中枢のニューロン活動を指標とした実験から明らかとなった。また健常人での得気の検討によっても骨膜刺激がある種の得気を生じる優れた手法であることが明らかとなった。一方鍼刺激の定量化、自動化の目的で開発を行ってきた機械式鍼駆動装置も、まだ一部改良の余地はあるものの実用段階に達し、仙骨部で両側の経穴部位の鍼を同時に任意の頻度で回旋出来るようになった。そして本機を用いた鍼刺激効果と手技による効果とほとんど差がないことが動物実験において示された。また、膀胱訓練を行う上での排尿時の適切な生理学的な指標を見いだすために、まず覚醒下ラットにおいて膀胱内圧をモニターする方法を開発した。小型のテレメーターを腹腔内に埋め込み特殊なゲルの封入されたカニューレを膀胱に挿入する事で6ヶ月あまりの期間安定した内圧の測定が可能であることが示された。そして今回の実験動物における検討では、血圧、瞬時心拍数の変化は排尿反射を予知する指標としては安定性を欠くことが明らかとなった。しかし、まだ臨床的な検討は十分ではないので、今後この分野でさらに詳細な検討がなされれば、ある特定の年齢層や患者群で適当な指標が見いだされる可能性は否定できない。本研究の目的を達成するためには必ず見つけなければならない今後に残された大きな課題であるといえよう。1.基礎研究(動物実験を用いた急性実験)ラットの橋の排尿中枢(laterodorsal tegmental nucleus: LDT)の活動電位を導出し、膀胱内圧、近位尿道の筋電図、血圧を同時にモニターし、第3後仙骨孔部の鍼刺激の排尿動態におよぼす影響を観察し。無刺激群に比べ第3後仙骨孔部鍼刺激群では、排尿までの潜時の延長、膀胱収縮の抑制およびLDTneuron発火の抑制が観察される例が多くみられ第3後仙骨孔部の鍼刺激の高次中枢に対する影響が示唆された。2.臨床研究(尿失禁患者を対象とした研究)尿失禁患者を対象に、第3後仙骨孔部の鍼刺激の膀胱機能におよぼす影響について検討した。尿失禁患者に本研究についてインフォームドコンセントが得られた患者を対象とした。方法は初回に尿量動態検査(膀胱内圧・外尿道括約筋筋電図の同時測定)によって初発尿意、無抑制収縮を確認した。2回目は初回の初発尿意時容量値から第3後仙骨孔部の鍼刺激を行った。結果は初回(無刺激)に比べ鍼刺激を与えると排尿までの潜時の延長、無抑制収縮の抑制が観察された。3.機械的鍼刺激装置の開発超小型のモーター、電磁石を組み合わせ、鍼の機械的な時計・半時計方向への繰り返し回転刺激が可能な装置および、その鍼の支持・固定を簡便におこなうためにの小型のアダプターを開発し、その作動条件について検討を加えている。平成8年度は患者自身が初発尿意を感じたときに、機械的鍼刺激装置を駆動させる。鍼の動きはコンピューターで抑制し、その刺入深度、上下運動の周波数、回転運動の速度、その繰り返しの周波数を任意に設定できるようにし、刺激量の組み合わせも可能となるように改良する。

仙骨部の経穴(BL-33)への骨膜に達する刺鍼と半回旋刺激の有効性が、尿失禁の排尿障害を持つ患者(脊損患者を含む)における、種々の指標を用いた比較実験、麻酔ラットでの律動的膀胱収縮さらに排尿中枢のニューロン活動を指標とした実験から明らかとなった。また健常人での得気の検討によっても骨膜刺激がある種の得気を生じる優れた手法であることが明らかとなった。一方鍼刺激の定量化、自動化の目的で開発を行ってきた機械式鍼駆動装置も、まだ一部改良の余地はあるものの実用段階に達し、仙骨部で両側の経穴部位の鍼を同時に任意の頻度で回旋出来るようになった。そして本機を用いた鍼刺激効果と手技による効果とほとんど差がないことが動物実験において示された。また、膀胱訓練を行う上での排尿時の適切な生理学的な指標を見いだすために、まず覚醒下ラットにおいて膀胱内圧をモニターする方法を開発した。小型のテレメーターを腹腔内に埋め込み特殊なゲルの封入されたカニューレを膀胱に挿入する事で6ヶ月あまりの期間安定した内圧の測定が可能であることが示された。そして今回の実験動物における検討では、血圧、瞬時心拍数の変化は排尿反射を予知する指標としては安定性を欠くことが明らかとなった。しかし、まだ臨床的な検討は十分ではないので、今後この分野でさらに詳細な検討がなされれば、ある特定の年齢層や患者群で適当な指標が見いだされる可能性は否定できない。本研究の目的を達成するためには必ず見つけなければならない今後に残された大きな課題であるといえよう。
非アルコール性脂肪肝炎関連バイオマーカーの探索と分子病態解析

非アルコール性脂肪肝炎(NASH)は近年、メタボリックシンドロームに頻発する肝疾患として認識され、肝硬変・肝癌発症リスクが極めて高い疾患であり、患者数も急増していることが明らかとなりつつある。そのため、NASHに対する有効な診断・治療法の必要性が高まっているものの、NASHの病態形成や、NASHから肝硬変・肝癌へと進展する過程の分子メカニズムについても未だ不明な点が多く、未充足の状態にある。そこで本研究では、NASHの分子病態解明のため、NASH様病態を呈することが明らかとなったCDAA食摂餌マウスや、TSODマウスの肝組織をプロテオームレベルで解析することにより、NASH関連バイオマーカーの探索を試みた。病態モデルマウス肝臓組織発現たんぱく質の二次元ディファレンシャル電気泳動(2D-DIGE)解析を行い、画像解析により発現変動タンパク質スポットを見出し、質量分析装置によって含有たんぱく質を同定した。今後これらNASH関連タンパク質の解析を進めることにより、NASHの発症・進展の分子メカニズムの解明、有効な診断法、治療法の開発に資するものと期待される。非アルコール性脂肪肝炎(NASH)は近年、メタボリックシンドロームに頻発する肝疾患として認識され、肝硬変・肝癌発症リスクが極めて高い疾患であること、患者が急増していることが明らかとなっている。そのため、NASHに対する有効な診断・治療法の必要性が高まっているものの、NASHの病態形成や、NASHから肝硬変・肝癌へと進展する過程の分子メカニズムについては、国内外を問わず、未だ殆ど研究されておらず、その詳細は全く不明である。そこで本研究では、申請者独自の効率的なバイオマーカー探索・絞り込み技術である抗体プロテオミクス技術、および、研究協力者らのグループ等によりNASH様病態を呈することが明らかとなったCDAA食摂餌マウスやMSGマウス、TSODマウスの肝組繊をプロテオームレベルで解析することにより、NASH関連蛋白質の同定を試みる。プロテオミクス技術を駆使することによりNASHのバイオマーカーを同定することを通じて、NASHの発症・進展の分子メカニズムを解明し、有効な診断法、治療法の開発に資することを目指す。本年度、非アルコール性脂肪性肝疾患(NAFLD)あるいは非アルコール性脂肪肝炎(NASH)モデルとして、コリン欠乏アミノ酸置換食(CDAA食)摂餌によるNAFLD/NASHモデルマウス作製を試みた。当該マウスの病態について病理学的変化を組織切片のHE染色、オイルレッド染色で評価した結果、肝組織での脂肪肝様変性を生じていることが確認できた。次年度はCDAA摂餌マウスおよびTSODマウスをモデル動物として用い、NASHの分子病態解析を進める予定である。そこで本研究では、申請者独自の効率的なバイオマーカー探索・絞り込み技術である抗体プロテオミクス技術、および、研究協力者らのグループ等によりNASH様病態を呈することが明らかとなったCDAA食摂餌マウスやMSGマウス、TSODマウスの肝組織をプロテオームレベルで解析することにより、NASH関連蛋白質の同定を試みる。本年度、非アルコール性脂肪性肝疾患(NAFLD)あるいは非アルコール性脂肪肝炎(NASH)モデルマウスとしてCDAA摂餌マウスを用い、本病態マウスと正常マウスの肝組織から蛋白質画分の抽出を行い、たんぱく質発現変動解析を行った。上記蛋白質画分を蛍光標識し、正常マウス由来サンプルと病態マウス由来サンプル間で二次元ディファレンシャル電気泳動(2D-DIGE)解析を行い、画像解析により発現変動蛋白質スポットを見出した。さらにスポットからゲルを切り出し、質量分析装置によって含有たんぱく質を同定した。
現地観測に基づく水・底泥間での溶存酸素・栄養塩の移動フラックス推定手法の構築

本研究では,水・底泥間での溶存酸素・栄養塩等の溶質の移動特性を明らかにするために,室内において底泥材料としてカオリナイトを,溶質としてメチレンブルーを用いて底泥から流水への物質移動に関する基礎実験を行った.実験は水理学的滑面,桟粗面に対して実施するとともに,開水路凹部流れにおける物質移動に関しても検討を加えた.また,水・底泥間での物質移動フラックスは底泥直上の流れ場における物質移動と,底泥内部における物質移動の両者によって決定されると考え,これら両者について理論的考察を加えた.特に,底泥内部での物質移動に関しては,底泥粒子と溶質との間の吸脱着を考慮した.上述の解析に基づいて,水・底泥間での溶質移動過程をモデル化した.一方,水質変化過程には前述のような物理的な物質移動や吸脱着,化学的な物質変換や酸化還元,微生物の代謝に加えて,種々の不確定な要素が含まれることが知られている.本研究では,水質変化過程に内在するこのような不確定要素を確率的成分ととらえる立場から,水質変化過程の解析に確率論的方法を導入して基礎的な検討を行った.解析にあたっては,水質変化過程は決定論的法則に従う確定的成分と偶発的な生起を表す確率的成分からなると考え,確率微分の概念を応用したモデル化を行った.次に,実水域において試料を採取し,室内において水質変化過程に関する基礎実験を行い,得られた時系列を解析してその構造を調べた.また,時系列構造の解析から得られたパラメータを用いて,上述の確率論的考察より構成したモデルによる水質変化過程の再現を試みた.本研究では,水・底泥間での溶存酸素・栄養塩等の溶質の移動特性を明らかにするために,室内において底泥材料としてカオリナイトを,溶質としてメチレンブルーを用いて底泥から流水への物質移動に関する基礎実験を行った.実験は水理学的滑面,桟粗面に対して実施するとともに,開水路凹部流れにおける物質移動に関しても検討を加えた.また,水・底泥間での物質移動フラックスは底泥直上の流れ場における物質移動と,底泥内部における物質移動の両者によって決定されると考え,これら両者について理論的考察を加えた.特に,底泥内部での物質移動に関しては,底泥粒子と溶質との間の吸脱着を考慮した.上述の解析に基づいて,水・底泥間での溶質移動過程をモデル化した.一方,水質変化過程には前述のような物理的な物質移動や吸脱着,化学的な物質変換や酸化還元,微生物の代謝に加えて,種々の不確定な要素が含まれることが知られている.本研究では,水質変化過程に内在するこのような不確定要素を確率的成分ととらえる立場から,水質変化過程の解析に確率論的方法を導入して基礎的な検討を行った.解析にあたっては,水質変化過程は決定論的法則に従う確定的成分と偶発的な生起を表す確率的成分からなると考え,確率微分の概念を応用したモデル化を行った.次に,実水域において試料を採取し,室内において水質変化過程に関する基礎実験を行い,得られた時系列を解析してその構造を調べた.また,時系列構造の解析から得られたパラメータを用いて,上述の確率論的考察より構成したモデルによる水質変化過程の再現を試みた.
歯根膜組織における恒常性維持とMechanical stress応答の分子機構

これまでに得られたデータから、歯根膜細胞は機械的刺激により骨原性細胞へ分化するものの、未分化な細胞に誘導、調節され、細胞密度を高めることにより歯根膜の再生を促進すると考えられ、機械的刺激は、歯根膜の恒常性の調節に関与していることが示唆された。歯根膜は歯周組織の再生および恒常性維持において重要であることは良く知られており、この機能と関連して、歯根膜線維芽細胞が高いアルカリフォスファターゼ(ALP)活性を示し硬組織形成能を有することや、硬組織を形成するためにはBMPなどの誘導蛋白が必要であること、培養下ではdexamethazoneを添加すると骨組織が形成されること、歯根膜線維芽細胞によって産生された接着伸展因子およびFGFはALP活性を阻害すること、細胞密度が高いこと、などの研究結果が示されているものの、その詳細に関しては充分に明らかにされてはいない。本研究の目的は、咀嚼圧(機械的圧刺激)に対して、MERおよびPLはどのように応答するのかを、機械的刺激を培養細胞に与えて検討することであり、圧刺激によって、歯根膜線維芽細胞やマラッセの上皮遺残細胞の細胞増殖、細胞分化、機能発現がどのように変化するのかについて明らかにする。平成13年度は、本年度に納入された培養細胞多方向伸縮装置(フレクサーセル、FX-3000-system、Flexcell社製)を用いて、ラットの抜去歯牙周囲から採取、初期培養した歯根膜線維芽細胞(3継代、4継代培養細胞)を、伸縮装置のシリコンチャンバー上に培養し、細胞を伸展させる実験を開始している。培養細胞は伸展刺激装置に載せて細胞を一方向へ伸展させ、培養細胞への機械刺激方法の一つとしては、伸展活性化チャネル刺激薬である低浸透圧溶液と、電位依存性カルシウムチャネルの有無の確認に電位依存性カルシウムチャネル刺激薬である高濃度KCl溶液を用いた。細胞内のカルシウムイオン濃度を指標に細胞内カルシウム濃度を計測したところ、計測した細胞(n=10)すべてにおいて、低浸透圧刺激による細胞内カルシウム濃度の上昇が認められた。しかし、高濃度KCl溶液による応答は、全体の40%の細胞にしか見出されなかった。ラット歯根膜の培養細胞の全ての細胞に伸展活性化チャネルが存在したことから、伸展刺激により、形態の変化、細胞分化、増殖などの機能発現が促進されるものと考えられた。本研究の目的は、咀嚼圧(機械的圧刺激)に対して、MERおよびPLはどのように応答するのかを、機械的刺激を培養細胞に与えて検討することであり、圧刺激によって、歯根膜線維芽細胞やマラッセの上皮遺残細胞の細胞増殖、細胞分化、機能発現がどのように変化するのかについて明らかにすることである。平成14年度は、ラット切歯歯根膜培養細胞を分離・培養し、初代培養から5継代培養細胞を用い実験をおこなっており、得られた培養細胞を伸縮装置のシリコンチャンバーチャンバー内で多方向伸縮装置(フレクサーセル、FX-3000-system、Flexcell社製)によって、伸展させて実験を行っている。FX-4000に装填し、3%,18%,1Hz/minの条件で24時間伸展刺激を与え、アルカリフォスファターゼ活性を405nmの吸光度にて測定した。対照群(非伸展群)では、351.3mU/mlであるのに対して、伸展群では、伸展率3%(20.4gf/cm2)で259.0mU/ml、伸展率18%(82.3gf/cm2)で385.7mU/mlの結果が得られた。伸展群において、伸展率の低い3%でアルカリフォスファターゼ活性の低下がみられたが、18%ではむしろ活性の上昇を示しており、伸展刺激により、細胞の分化、機能発現が促進され、アルカリ性ホスファターゼ活性が伸展条件によって変化することが示唆された。歯根膜は歯周組織の再生および恒常性維持において重要であることは良く知られており、この機能と関連して、歯根膜線維芽細胞が高いアルカリフォスファターゼ(ALP)活性を示し硬組織形成能を有することや、硬組織を形成するためにはBMPなどの誘導蛋白が必要であること、培養下ではDexamethazoneを添加すると骨組織が形成されること、歯根膜線維芽細胞によって産生された接着伸展因子およびFGFはALP活性を阻害すること、細胞密度が高いこと、などの研究結果が示されているものの、その詳細に関しては充分に明らかにされてはいない。本研究の目的は、咀嚼圧(機械的圧刺激)に対して、マラッセ上皮遺残細胞および歯根膜線維芽

細胞がどのように応答するのかを、培養歯根膜細胞に継続的な機械的圧刺激を与えることで、歯根膜線維芽細胞やマラッセの上皮遺残細胞の細胞増殖、細胞分化、機能発現がどのように変化するのかについて明らかにすることである。平成15年度は、ラット切歯歯根膜培養細胞を分離・継代培養し、3継代目の細胞を培養容器に播種し、対照群、伸展群に分け、伸展群はFX-4000T(多方向伸展装置:FLEXCELL社/USA)にて、1Hz、伸展率3%、18%の条件で24時間、周期的伸展刺激を細胞に与えた。伸展実験後、対照群、伸展群とも各群20例のアルカリフォスファターゼ(ALP)活性を測定、細胞数1×10^5個当たりに換算し、統計学的検定を行い、比較検討した。その結果、対照群、伸展群とも歯根膜の石灰化は起こらなかった。ALP活性は、対照群164.2mU/105cells、3%伸展群157.1mU/10^5 cells、18%伸展群132.6mU/10^5 cellsであった。18%伸展群のALP活性は、対照群と比較して有意の差(P<0.05)をもって低値を示した。このことから、機械的伸展が歯根膜細胞の代謝やALPの機能的役割に影響を与えたため、ALP活性が減弱したと考えられ、その程度は伸展力の大きさに依存することが示唆された。これまでに得られたデータから、歯根膜細胞は機械的刺激により骨原性細胞へ分化するものの、未分化な細胞に誘導、調節され、細胞密度を高めることにより歯根膜の再生を促進すると考えられ、機械的刺激は、歯根膜の恒常性の調節に関与していることが示唆された。
新しい膜プロ-ブを用いたシナプス小胞膜融合機構の解析

膜脂質の挙動を探るプロ-ブとして膜リン脂質を特異的に認識するモノクロ-ナル抗体の作製を行った。一般に膜リン脂質は免疫原性が低く各々のリン脂質を特異性高く認識するモノクロ-ナル抗体の作製はこれまでなされていなかった。我々はリン脂質抗原をサルモネラ菌にコ-トし、脾内に直接免疫することにより効率よく各種リン脂質を特異的に認識するモノクロ-ナル抗体を作製出来ることを見いだした。これまでに、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノ-ルアミン、ホスファチジルコリン、P1P2、P1Pを特異的に認識するモノクロ-ナル抗体群を作製することに成功した。ホスファチジルセリンを脾内に免疫した場合には、ホスファチジルセリンを認識する多様なモノクロ-ナル抗体群が得られ、その中にはホスファチジルセリンを非常に特異的に認識するもの、ホスファチジルセリンとホスファチジルエタノ-ルアミンのみに反応するもの、他の酸性リン脂質と交叉反応性を示すものが含まれている。ホスファチジルコリンを認識するモノクロ-ナル抗体群は大別して二種に分かれ、いずれの抗体もホスファチジルコリンに特異的であるが、その反応性はホスファチジルコリンの脂肪酸部分により大きく影響を受けることが明かとなった。またこの抗体は、赤血球にて都合し、補体依存的に溶血反応をも引き起こすことが示された。この他、Strept-verticillum属に属する放線菌の一種の産生するアミノ酸19個よりなる環状ペプチドRo09-0198がホスファチジルエタノ-ルアミンを非常に高親和性で特異的に認識することを見いだし、さらに同ペプチドをビオチニル化することにより新たな膜リン脂質プロ-ブを作製した。
サイレントスピーチＢＣＩ

サイレントスピーチBCIとして、以下の2つのフェーズから成る仕組みを提案した.発話時の脳波と音声信号を計測した.脳波BP成分にICAとECDLを適用し、ダイポールが主にBroca野に定位された独立成分を抽出し、音声信号をスペクトログラムに変換した.抽出された独立成分とスペクトログラムの関係をKalman Filterで学習した.サイレントスピーチ時に計測された脳波をKalman Filterに入力し、スペクトログラムを推定した.その結果、被験者10名で脳波のみからサイレントジャンケンを正しく認識出来た.更に、HMMを利用することで、母音の推移が同じ"はる"と"なつ"を識別出来た.本研究では、サイレントスピーチを利用した単一試行脳波に基づく新しいBCI(SSBCI)を開発中である。このSSBCIは2つのフェーズ(learning phaseとdecoding phase)から構成され、learning phaseでは発話時の脳波と音声信号を利用し、decoding phaseではサイレントスピーチ時の脳波を利用している。これら両脳波の中に運動準備電位が含まれると仮定し、learning phaseでは、ICA後ECDLによって、運動野、運動前野あるいはBroca野にダイポールが推定された脳波成分と音声信号から、Kalman filterモデルを決定する。decodingphaseでは、発話に関係する領野、特に運動前野がホルマント周波数(F1とF2)をencodeしているという仮説(DIVA仮説)の下に、サイレントスピーチ時に計測された脳波で、そのECDL結果が運動野、運動前野、あるいはBroca野である脳波をKalman filterモデルに入力し、出力として音声信号(スペクトログラム)を予測している。今年度は、サイレント「グー」、「パー」、「チョキ」の正解を以下のように定め、サイレント「グー」、「パー」は勿論の事、本格的なサイレント「チョキ」の予測を試みた。サイレント「グー」ではKalman filter予測値がF1-F2平面上/u/領域を通れば、サイレント「パー」では/a/領域を通れば、サイレント「チョキ」では/o/領域、次に/i/領域を通れば、それぞれ正解とした。その結果、被験者1名ながらサイレント「チョキ」の予測に成功し、これら3予測器(サイレント「グー」、「パー」、「チョキ」)の性能がconfusion matrixによって実証された。さらに、子音識別を伴うサイレントスピーチの予測へ発展させるための脳波計測実験を開始した。サイレントスピーチを利用したBCIとして、以下の2つのフェーズから成る仕組みを提案した。発話時の脳波と音声信号を計測した。脳波のBP(運動準備電位)成分にICAとECDLを適用し、ダイポールが主にBroca野に定位された独立成分を抽出し、音声信号をスペクトログラムに変換し、特にF1とF2に注目した。抽出された独立成分とスペクトログラムの関係をKalman filterによって学習した(learning phase)。サイレントスピーチ時に計測された脳波をKalman filterに入力し、スペクトログラムを推定した(decoding phase)。その結果、当初の計画通り、被験者10名で脳波のみからサイレントジャンケンを正しく認識出来た。更に、HMMを利用することにより、上記の仕組みを使って、母音の推移が同じ"はる"と"なつ"を識別できた。このSSBCIは2つのフェーズから構成され、前者では発話時の脳波と音声信号を利用し、後者ではサイレントスピーチ時の脳波を利用している。これら両脳波の中に運動準備電位が含まれると仮定し、前者のフェーズでは、ICA後ECDLによって、運動野、運動前野あるいはBroca野にダイポール推定された脳波成分と音声信号からKalman filterモデルを特定する。後者のフェーズでは、発話に関係する領野、特に運動前野がホルマント周波数(F1とF2)をencodeしているという仮説(DIVA仮説)の下に、サイレントスピーチ時に計測された脳波で、そのECDL結果が運動野、運動前野、あるいはBroca野である脳波をKalman filterモデルに入力し、出力として音声信号(スペクトログラム)を予測している。今年度は、本SSBCIの前提となる、(1)運動準備電位の確認と(2)DIVA仮説の検証を実施した。その結果、(1)について被験者10名のgrand averagesから運動準備電位が確認でき、更に、発話とサイレントスピーチの場合の運動準備電位の違いも発見できた。(2)については、スペクトログラムと脳波データの相関係数と算出し、検証に成功した。最後に、「グー」と「パー」については、被験者10名全員の予測が正しいことを示せた。サイレント「グー」、「パー」、「チョキ」、すべての予測に成功し、これらの3予測器の性能を実証出来た。

更に、子音識別を伴うサイレントスピーチBCIの研究を開始したから。当初、H23年度は、運動準備電位の確認と、Kalman filterのパラメータ(脳波データと音声信号のtime lag、downsampling、初期値)の検討であったが、これらに加えて、H24年度予定の被験者10名全員で「グー」と「パー」の正答を得たから。被験者全員について、3予測器の性能を改善および実証する。本研究を「チョキ」へ拡張する。また、各被験者内での正解率を調べる。昨年度に続いて国内外での成果発表が中心となるので、そのための費用が主になる。また、脳波計測環境およびデータ解析環境の充実化もはかる。昨年度得た成果を国内外へ発表することが中心になるので、そのための費用が主になる。また、脳波計測環境の充実化もはかる。
カオス力学系の不安定周期軌道解析に関する大規模数値解析とその応用

微分方程式で支配される力学系に関する以下の問題に取り組んだ.1.リアプノフベクトルに基づくローレンツ系の非双曲構造の不安定周期軌道解析2.アトラクタ・マージング・クライシスに関する不安定周期軌道解析1.非双曲構造の理解は十分には進んでいない.そこで,よく調べられている基本的な連続時間力学系であるローレンツ系をパラメタを変えながら調べた.そして,パラメタ変化に伴う非双曲構造,特に安定多様体と不安定多様体の接構造の発生は,サドルノード分岐のノード周期軌道が周期倍分岐するとともに生まれる不安定周期軌道の系列の極限で捉えられることを,リアプノフベクトル計算によって明らかにした.また,すでに数学的に(特異)双曲的であることが知られている古典パラメタからあるパラメタを動かしていった際に系がはじめて非双曲化するパラメタ値をカオス的な軌道に対するリアプノフベクトル計算によって推定した.そのパラメタ値は,系に埋め込まれた不安定周期軌道を用いることによってより精密に得られることも確認した.2.カオス的な振る舞いを生み出す偏微分方程式系である蔵本・シバシンスキー系のアトラクタ・マージング・クライシス前後の構造変化を不安定周期軌道に着目して解析した.分岐点前には,孤立して存在していた小さいアトラクタ各々にとどまる不安定周期軌道(無限個)ならびにクライシスを誘導する不安定周期軌道(1個)の二種類が存在していたが,分岐後にはそれらの二種類の不安定周期軌道に加えてアトラクタ合流後の大きな構造をもつ周期軌道がサドルノード分岐ならびにノード軌道の周期倍分岐によって無限個出現すること,また,クライシス点直後では周期の大きい周期軌道が新たに出現し,クライシス点から離れるにつれて周期の小さな周期軌道が出現する傾向があることを明らかにした.近年、流体力学分野をはじめとして高次元のカオス力学系の生み出すふるまいが、少数の短い不安定周期軌道で捉えられるという報告がなされている。カオス力学系には無限個の不安定周期軌道が埋め込まれており、短い少数の軌道で全体の特徴が捉えられることは、我々の直感に反している。私は、この事実の背景を探る目的で、引受教員である山田道夫京都大学数理解析研究所教授との共同研究を実施し、離散力学系(ロジスティック写像、エノン写像)と連続力学系(ローレンツ系、レスラー系、経済モデル)に関して、ある長さまでの不安定周期軌道を網羅的に検出し、変数の軌道上時間平均を計算し、同程度の長さのカオス軌道断片上の軌道上時間平均との比較をおこなった。ロジティック写像の場合には、両者は基本的に同じ様な統計性質をもち、一方、エノン写像の場合には両者の軌道上平均値すら異なることがわかった。これらの離散力学系の結果は、短い少数の不安定周期軌道を用いたところで、一般にはカオスの統計性質の良い近似を与えないことを意味している。一方、連続力学系の3つのモデルに関しては、不安定周期軌道とカオス軌道断片上の統計性質は大きく異なり、対応するポアンカレ写像周期で周期軌道を分類したときに、ポアンカレ写像周期によらず、軌道上時間平均のヒストグラムは非常に似通っていることを明らかにした。一方、カオス軌道断片の場合には、軌道長を長くすることによって、ヒストグラムは長時間統計量付近に高いピークを持つようになる。すなわち、連続力学系のこれらのモデルでは、同程度の長さの不安定周期軌道とカオス軌道断片は、かなり違う統計性質をもち、短い不安定周期軌道は長い不安定周期軌道と同程度にカオスの長時間統計量の近似を与えうるということがわかった。カオス系の不安定周期軌道解析の適用方法や適用限界等を探るべく,主に微分方程式で記述される力学系に対して大規模な数値計算(大型計算機100CPU程度)を援用した研究に取り組んできた.常微分方程式で記述される3種類のカオス力学系(ローレンツ系,レスラー系,経済モデル)の不安定周期軌道を,大型計算機を用いて倍精度数値計算の届く範囲で網羅的に(1000個程度)検出して個々の不安定周期軌道上の軌道平均値を計算し,いずれの系においても,短い周期をもつ周期軌道が,長い周期をもつ周期軌道と同程度の精度で長時間カオス軌道上の軌道平均値を近似しうるということを明らかにした.これと同時に,周期軌道上の軌道平均値の散らばりは,同程度の長さのカオス軌道断片上の軌道平均値に比べて圧倒的に小さいことも明らかにした(論文公表済).また,複数の軌道平均値間には一般に非常に強い相関があり,線形関係になることも多いことを明らかにした.この事実は,長時間カオス軌道上のある軌道平均値をよく近似する周期軌道は,別の軌道平均値もよく近似する傾向にあるということを意味している.カオス的ふるまいを生み出す偏微分方程式であるKuramoto-Sivashinsky方程式に対しても,本結果が成り立つことを確認した(論文執筆中).これらの結果は,カオス解析における周期軌道の重要性を示唆しており,流体乱流研究において短い少数の不安定周期軌道によって乱流の複数の統計性質が捉えられるという近年報告されている興味深い事実の背景にも,この様な性質が存在していると予想している.現在は,周期軌道上の軌道平均の分布の背景を探るべく,研究を進めている.微分方程式で支配される力学系に関する以下の問題に取り組んだ.1.リアプノフベクトルに基づくローレンツ系の非双曲構造の不安定周期軌道解析2.アトラクタ・マージング・クライシスに関する不安定周期軌道解析1.非双曲構造の理解は十分には進んでいない.

そこで,よく調べられている基本的な連続時間力学系であるローレンツ系をパラメタを変えながら調べた.そして,パラメタ変化に伴う非双曲構造,特に安定多様体と不安定多様体の接構造の発生は,サドルノード分岐のノード周期軌道が周期倍分岐するとともに生まれる不安定周期軌道の系列の極限で捉えられることを,リアプノフベクトル計算によって明らかにした.また,すでに数学的に(特異)双曲的であることが知られている古典パラメタからあるパラメタを動かしていった際に系がはじめて非双曲化するパラメタ値をカオス的な軌道に対するリアプノフベクトル計算によって推定した.そのパラメタ値は,系に埋め込まれた不安定周期軌道を用いることによってより精密に得られることも確認した.2.カオス的な振る舞いを生み出す偏微分方程式系である蔵本・シバシンスキー系のアトラクタ・マージング・クライシス前後の構造変化を不安定周期軌道に着目して解析した.分岐点前には,孤立して存在していた小さいアトラクタ各々にとどまる不安定周期軌道(無限個)ならびにクライシスを誘導する不安定周期軌道(1個)の二種類が存在していたが,分岐後にはそれらの二種類の不安定周期軌道に加えてアトラクタ合流後の大きな構造をもつ周期軌道がサドルノード分岐ならびにノード軌道の周期倍分岐によって無限個出現すること,また,クライシス点直後では周期の大きい周期軌道が新たに出現し,クライシス点から離れるにつれて周期の小さな周期軌道が出現する傾向があることを明らかにした.
新規な人工二核金属酵素の開発と触媒反応への応用

新規な人工金属酵素の開発と触媒反応への応用をめざして研究を行った。その結果、二核銅酸化酵素であるチロシナーゼ、およびその各種変異体の還元型、メト型、酸化型の結晶構造と分光学的および磁気的特性の解明に成功した。さらに、触媒活性や、構造活性相関について系統的に検討し、効率的なフェノール類の触媒的酸化反応系を構築した。また、 超好熱菌由来の金属結合タンパク質TM1459を用いたたZn、Cu、Ni、Co、Fe、Mn、Cr、V、Ru、Os含有人工金属酵素を合成し、過酸化水素などを酸化剤として用いた環境適合型触媒的酸化反応系の開発に成功した。本研究では、高熱菌由来の金属結合タンパク質(TM1459)や二核銅タンパク質(ヘモシアニン、チロシナーセゼなど)の活性中心に銅イオンや鉄イオンを組み込んだ新規な人工非ヘム金属酵素の開発と触媒反応への応用をめざして研究を行った。さらに、金属置換に加え、活性中心の第1配位圏、および、第2配位圏に部位特異的変異導入を行い、新しい触媒機能の開発をめざした。アポ型チロシナーゼ、およびその変異体の調製:コウジ菌由来のチロシナーゼ遺伝子とタグタンパク質をコードした遺伝子を大腸菌に組み込んだ大量発現系を構築した。精製して得られたアポ型チロシナーゼの構造について基本的なデータを収集した。高熱菌由来の金属結合タンパク質、およびその変異体の調製:(1)の場合と同様に高熱菌由来のTM1459タンパク質遺伝子とタグタンパク質をコードした遺伝子を大腸菌に組み込んだ大量発現系を構築した。精製して得られたアポ型タンパク質の構造について基本的なデータを収集した。金属再構成ホロ型タンパク質の調製:上記の実験で得られたアポ型酵素に銅イオンや鉄イオンを導入し、ホロ型酵素を調製した。得られたホロ型酵素の分光学的および磁気的特性を明らかにするとともに、各タンパク質の単結晶を作成し、X線結晶構造解析を試みた。特に再構成チロシナーゼについてはアポ型とホロ型両方の結晶構造解析に成功し、金属の取り込みメカニズムや酵素の活性化過程の詳細を明らかにすることに成功した。上記のホロ型酵素の基本的な反応性を明らかにするため、フェノールなどの外部基質との反応について検討し、酸化活性を評価した。本研究では、超好熱菌由来の金属結合タンパク質(TM1459)や二核銅タンパク質(チロシナーゼ)の活性中心に存在する金属結合部位の第1配位圏、および、第2配位圏に部位特異的変異導入を行い様々な変異体を調製し、新規な人工非ヘム金属酵素の開発と触媒反応への応用をめざして研究を行った。(1)アポ型チロシナーゼ、およびその変異体を調製し、それらの結晶構造を明らかにした。得られたアポ型酵素および変異体に銅イオンを導入し、ホロ型酵素を調製し、デオキシ(還元)型、メト型、オキシ(酸化)型の結晶構造、および、分光学的および磁気的特性を明らかにした。さらに、フェノール類の酸素化反応について検討し、構造活性相関を解明するとともに、金属の取り込みメカニズムや酵素の活性化過程の詳細を明らかにすることに成功した。更に、各種誘起基質の立体選択的酸素化反応系を構築し、有機合成化学への応用をはかった。(2)超好熱菌由来の金属結合タンパク質TM1459、およびその変異体を調製し、Zn、Cu、Ni、Co、Fe、Mn、Cr、V、Ru、Osなどの様々な遷移金属を結合させた人工金属酵素の調製法を確立した。さらに、それらの結晶構造、分光学的・磁気的特性、および反応性について系統的に検討を行った。また、各種有機基質の酸化反応についても系統的に検討し、各金属と反応性の相関関係を明らかにすると共に、触媒反応への応用をはかった。さらに、金属結合部位に導入した様々なアミノ酸残基の翻訳後化学修飾による、新規な有機補欠分子の形成についても検討を行った。生物無機化学二核銅酵素であるチロシナーゼのアポ型およびホロ型の高分解能X線結晶構造解析に成功し、酵素活性中心への金属の取り込み過程やプロ酵素の活性化機構の詳細を明らかにする事ができた。また、高熱菌由来の金属結合タンパク質であるTM1459および各種変異体の太陽発現系の構築に成功し、銅イオンや鉄イオンを導入した新規な人工金属酵素の調製にも成功した。さらにこれらの高分解能X線結晶構造解析にも成功し詳細な構造情報を得ることに成功した。されに、タンパク内に存在するチロシンのフェノール基や外部から加えたフェノール類の酸素化反応が進行することも見いだし、高酸化能を有する人工金属酵素の創成に成功した。以上の様な結果は、当初予定していた計画以上の成果で有り、順調に研究が進展していると言える。

得られた人工金属酵素の構造や分光学・磁気的特性について更に詳細に検討する。得られた成果を基に、構造と活性の相関関係を明らかにし、更なる高活性化をめざして、部位特異的変異導入を行う。それらについても構造と活性について系統的に検討を加え、実際の有機合成化学に応用可能な人工金属酸化酵素の創出を行う。めざす反応としては脂肪族化合物や芳香族化合物の直接的酸素化反応を取り上げる。新規な人工二核金属酵素の開発と触媒反応への応用に関する研究の途中で予想された酵素より、より高い活性を示すものが得られたことにより、さらなる実験が必要となったため。更なる実験に必要な消耗品として使用する。
虐待予防支援につながらない親の「育てにくさ」の認識と行動化との関連について

虐待要因の一つとして、親が感じる「育てにくさ」がある。特に問題であるのは、親が「育てにくさ」を感じながらも周囲に相談や助けを求めることができない孤立してしまう親子と考える。このような親の特性の中で、本研究は、親の精神問題、コミュニケーション能力により周囲とつながらない、世間からの常識的なアドバイスが入らない等があり、それに対して既存の支援機関からのアドバイスが功を奏しないケースに着目した調査を考えている。2018年度の予定は、関連文献レビューと「育てにくさ」を明らかにするためのインタビュー実施であった。関連文献については、「虐待」「ADHD」「PCIT」等のキーワードをもとに文献を確認している。そこで明らかになったことは、虐待が子に影響する問題は世界どこでも深刻であり、虐待を受けた子は、将来的に身体面・精神面に問題をきたすことがわかった。親の特性については、継続している親子相互交流療法施設における親子の状況を整理したところ、「親を喜ばせる反応が少ない」「子どもの機嫌の悪さ」「社会的孤立」「抑うつ・罪悪感」「子どもに愛着を感じにくい」のストレスが高いのではないかと推測できた。さらに、母親の場合は、「夫が母親の子育ての大変さを理解しない」等の訴えがあった。また、特徴的な結果として、母親の特性についてで、ADHDと診断されていないものの家事や子育てをスケジュール立てて実施出来ない等の現状も虐待に影響しており、子がADHDの場合高い確率でこのような現状が起きているのではと推測できた。これらの結果は、現在海外ジャーナルの投稿に向けて情報を整理している。2018年度の研究実施計画は、文献レビューとヒアリング調査により「育てにくさ」を現状から明らかにすることであった。文献レビューから、虐待との関連で、女性のADHD、愛着性障害に着目することが大切であることがわかった。また、過去に実施した研究データを整理したところ本研究の調査につながる母親の特性が見えてきたため、専門家の教員にアドバイスを頂きながらデータ整理をして、海外の専門ジャーナルに投稿していく準備をしている。ヒアリング調査については、想定していた以上にデータ整理に時間がかかってしまい2018年度は実施できなかった。これについては、文献や過去のデータ整理からの結果をもとにヒアリングすべき項目を出し2019年度に実施していく。現在、児童施設、児童相談所等の調査する場を拡大していくことが課題の一つになっている。児童相談所及び児童施設については、2018年度に挨拶は済んでいるが、具体的な研究についての依頼説明は2019年度に実施出来るとよいと考えている。次に、ヒアリング調査、プレテスト実施、質問紙の作成をすることである。質問紙作成に向けて、まだヒアリング調査が出来ていない。それについては、ヒアリング調査、調査方法についても専門的な知識をもっている研究者にアドバイスをいただいている。今後の研究の推進方策は、文献レビューは継続して、以前の研究等のデータ整理を実施した上で、親の特性を絞り込み、本格的な調査を実施出来る準備をしていくことがもっとも重要課題である。具体的には、1虐待と関連のある母親の特性についての海外ジャーナルへの投稿、2調査実施に向けての倫理的審査準備、3専門家にアドバイスを頂いたうえで質問紙作成、4調査可能な施設への研究説明となる。

これについては、文献や過去のデータ整理からの結果をもとにヒアリングすべき項目を出し2019年度に実施していく。現在、児童施設、児童相談所等の調査する場を拡大していくことが課題の一つになっている。児童相談所及び児童施設については、2018年度に挨拶は済んでいるが、具体的な研究についての依頼説明は2019年度に実施出来るとよいと考えている。次に、ヒアリング調査、プレテスト実施、質問紙の作成をすることである。質問紙作成に向けて、まだヒアリング調査が出来ていない。それについては、ヒアリング調査、調査方法についても専門的な知識をもっている研究者にアドバイスをいただいている。今後の研究の推進方策は、文献レビューは継続して、以前の研究等のデータ整理を実施した上で、親の特性を絞り込み、本格的な調査を実施出来る準備をしていくことがもっとも重要課題である。具体的には、1虐待と関連のある母親の特性についての海外ジャーナルへの投稿、2調査実施に向けての倫理的審査準備、3専門家にアドバイスを頂いたうえで質問紙作成、4調査可能な施設への研究説明となる。本学部開学4年目にあたり教育に関わる時間が多くなり、当初予定していた調査の準備が滞ってしまった。そのため、設備備品の購入(ノートパソコン、プリンター)、海外学会参加を含め予算執行ができなかった。2019年度は、設備備品の購入、整理したデータを投稿していくための英文校閲費、調査に必要とされる文具、レターパック等を購入予定である。