hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
近年の大河川からの土砂流入急減に伴う黄海西部の堆積環境変動に関する数値的研究

加えて観測結果との比較を行い黄海堆積輸送モデル構築に必要な再懸濁発生に関するパラメタ値を決定した。解析においては各種数値モデル(潮汐、波浪、大循環モデル)出力から見積もった海底底摩擦強度を再懸濁発生の指標として用いた。今回の結果の特筆すべき点の一つは、近年発達した数値モデル技法を導入することで黄海・東シナ海のほぼ全域における底摩擦強度を、従来の研究と比較してはるかに長期間にわたり高い時間・空間分解能で提示できたことである。本研究で見積もられた底摩擦強度の時間変化は現地観測から得られた済州島沖での懸濁物濃度の変化や長江河口沖東シナ海における流速変化と非常に良く対応し、特に前者の事例に関しては、これまで発生機構が特定できなかった暴風収束後の再懸濁発生が潮流の変化に起因していたことを明確に示すことができた。黄海・東シナ海全体で見た場合、波浪は沿岸付近並びに東シナ海の水深50m100mの外洋に面した深い海域で再懸濁を引き起こし、衛星画像にしばしば現れる黄海南西部水深20m50mの内部陸棚域での再懸濁は主に潮流によって生じた可能性が大きいことを指摘した。既存の研究では堆積・再懸濁に対する潮流の効果を見積もる際に半日周潮だけを考慮していたが、本研究の結果から黄海・東シナ海の場合、堆積物の挙動を正しく見積もるためには日周潮の寄与を加味することが不可欠であることがわかった。最終年度である本年度は、前年度に重要性が認識された再懸濁過程に関して、東アジアモンスーン気候に伴う季節変化を重点的に調べた。1997年から2006年の10年間の海上風のデータを元に波浪予報モデルを用いた風波の推定を行うとともに、同じ期間の潮汐シミュレーションも行うことにより、月ごとの海底堆積物の再懸濁の発生頻度を推定した。その結果、海上風が強いため従来再懸濁の発生頻度が高いと見られていた冬季は、吹送距離が短く風波が発達しないため沿岸域を除いては風波による再懸濁はほとんど生じず、逆に夏季並びに秋季には台風接近に伴って外洋からの発達した長周期の風波が入り込むことから、水深の大きい大陸棚外縁部でも再懸濁の発生頻度が比較的高いことが判明した。さらに沿岸部では、モンスーン気候に対する堆積物の応答が場所により異なり、中国南東岸の外洋に面した部分では夏の再懸濁の発生頻度が高い一方、朝鮮半島南西岸では、海岸線の配置の影響で外洋からの波が入りにくく、さらには渤海から南東向きの波が入りやすいために、再懸濁は主に冬季に生じることが推定された。この推定結果は海域両岸にあたる中国、韓国沿岸域の地形変化の現場データと良く対応していた。本研究の成果は東アジア各国の防災に役立つとともに、黄海では海底の土砂の巻き上がりが栄養塩の供給、ならびに海水中の光量を左右する透明度に深く関与していることから、植物プランクトンやエチゼンクラゲの発生など生物環境の実態を把握する上でも役立つものと期待される。
ミクロオートラジオグラフ法によるリグニンの構造および反応の不均一性の解析

本研究の目的は,細胞壁中にあるがまゝのプロトリグニンの特定の構造単位を^3Hおよび^<14>Cで選択的に標識し,これをミクロオートラジオグラフ法で可視化すること,この手法で樹木細胞壁におけるリグニンの形成過程を調べ,その分布および構造の不均一性を明らかにすることにある.リグニン生合成の前駆物質として, ^3Hまたは^<14>Cで標識したP-クマール酸,フェルラ酸,シナピン酸, P-クマリルーβ-D-グルコシド,コニフェリンおよびシリンギンを合成した.これらをクロマツ,ポプラ,コブシ,ライラックなどの樹木に投与して吸収代謝させた.新生木部組織の固定,包埋後薄切片の作成,感光剤による被覆,露出,現像,染色,顕微鏡写真の撮影など実験条件の設定をした.得られたミクロオートラジオグラムの銀粒子分布を解析した結果,次のことが明らかになった.1.リグニンの細胞壁への堆積は,当該細胞自体により制御されている.2.リグニンは二次代謝産物であるため,そる形成は当該細胞の種類,年令等により異なる.3.リグニンの堆積が開始されるよりも前に炭水化物が堆積する.したがってモノリグノールの重合は,炭水化物ゲル中でおこる.4.細胞の分化段階の進展に伴って,堆積するヘミセルロースの種類が変る.また,モノリグノールも, P-クマール酸,フェルラ酸から, P-クマリルアルコール,コニフェリルアルコール,シナピルアルコールへとその種類が変るため,分化の初期に堆積する細胞間層およびセルコーナーのリグニンと,後期に二次壁に堆積するリグニンとは構造が異なる.5.広葉樹では,初期に木質化する道管には主にグアヤシルリグニンが,後期に木質化する木繊維ではシリンギルリグニンが多く堆積することになる.6.ポプラリグニン中に存在するP-ヒドロキシ安息香酸エステルは,細胞壁形成の初期にやゝ多いが,ほゞ全期間にわたってポプラリグニンの構成要素として生成される.本研究の目的は,細胞壁中にあるがまゝのプロトリグニンの特定の構造単位を^3Hおよび^<14>Cで選択的に標識し,これをミクロオートラジオグラフ法で可視化すること,この手法で樹木細胞壁におけるリグニンの形成過程を調べ,その分布および構造の不均一性を明らかにすることにある.リグニン生合成の前駆物質として, ^3Hまたは^<14>Cで標識したP-クマール酸,フェルラ酸,シナピン酸, P-クマリルーβ-D-グルコシド,コニフェリンおよびシリンギンを合成した.これらをクロマツ,ポプラ,コブシ,ライラックなどの樹木に投与して吸収代謝させた.新生木部組織の固定,包埋後薄切片の作成,感光剤による被覆,露出,現像,染色,顕微鏡写真の撮影など実験条件の設定をした.得られたミクロオートラジオグラムの銀粒子分布を解析した結果,次のことが明らかになった.1.リグニンの細胞壁への堆積は,当該細胞自体により制御されている.2.リグニンは二次代謝産物であるため,そる形成は当該細胞の種類,年令等により異なる.3.リグニンの堆積が開始されるよりも前に炭水化物が堆積する.したがってモノリグノールの重合は,炭水化物ゲル中でおこる.4.細胞の分化段階の進展に伴って,堆積するヘミセルロースの種類が変る.また,モノリグノールも, P-クマール酸,フェルラ酸から, P-クマリルアルコール,コニフェリルアルコール,シナピルアルコールへとその種類が変るため,分化の初期に堆積する細胞間層およびセルコーナーのリグニンと,後期に二次壁に堆積するリグニンとは構造が異なる.5.広葉樹では,初期に木質化する道管には主にグアヤシルリグニンが,後期に木質化する木繊維ではシリンギルリグニンが多く堆積することになる.6.ポプラリグニン中に存在するP-ヒドロキシ安息香酸エステルは,細胞壁形成の初期にやゝ多いが,ほゞ全期間にわたってポプラリグニンの構成要素として生成される.1.放射性同位元素標識リグニン前駆物質の合成まずリグニン生合成前駆物質として【^3H】または【^(14)C】で標識したρ-クマール酸,フエルラ酸,シナピン酸,ρ-クマリル+β-D-グルコシド,コニフェリン,シリンギンなどを合成した。2.標識前駆物質の投与によるプロトリグニンの標識各種標識前駆物質をクロマツ,ポプラ,コブシなどの肥大生長期の樹幹部に種々の方法(幹にV字溝を窄ち注入,枝の先から吸収,幹の先端から吸収など)で吸収代謝させ、リグニン中の特定の構成単位を選択的に標識した。3.ミクロオートラジオグラムの作成条件の設定試料の固定,包理,薄切片の作成,感光乳剤膜による被覆,露出,現像,染色などオートラジオグラム作成のための適切な条件の設定を行った。4.ミクロオートラジオグラムの解析方法の検討。オートラジオグラム上の細胞壁長を、Zeiss IBAS1画像解析装置を用いて測定し、組織構造面からみた銀粒子の分布の測定方法を検討した。5.細胞の種類,細胞壁中の場所によるリグニンの構造の不均一性の解明ミクロオートラジオグラム上の銀粒子の分布を解析した結果、細胞壁中のリグニンの構造に関し、次のようなことが明らかとなった。a.クロマツでは、細胞間層リグニンが細胞壁形成の初期に堆積し、二次壁リグニンよりもρ-ヒドロキシフェニルリグニンが多く、グアヤシル核5位縮合型構造に富む。

シリンギルリグニンは主に二次壁に少量存在する。b.ポプラ,コブシでは、道管の木化は本繊維の木化よりも早く、主にグアヤシルリグニンから成る。一方木繊維はシリンギルリグニンを多く含む。c.リグニンの構造は、一般に細胞の種類,細胞壁上の場所によって異なり、高分子自体としても不均一である。
髄膜腫におけるゲノム異常と放射線感受性の関連についての研究

CGHの結果から、DNA copy数の異常を示す染色体領域数は、low grade meningiomaよりもhigh grade meningomaにおいて明らかに多く、また従来の我々のデータや過去の文献と同様に、組織学的に悪性度が高いmeningiomaでは、1番染色体短腕、6番・14番・16番染色体長腕の欠失が有意に多く認められた。但し、組織学的にも臨床上も良性である髄膜腫の中にもhigh grade meningiomaに類似した異常を示す例が存在し、これらの症例が生物学的特長については更に検討が必要である。genome DNA maicroarrayの結果からは、増幅を示す遺伝子に比し欠失を示す遺伝子が多く、また増幅を示すものでもT/R ratioの低いものがほとんどであった。これは髄膜腫の特徴のひとつであると考えられた。また異常を示した頻度の高いtargetはPRKCZ(1p36.33)、D1S1635(1p36.22)、LMYC(1p34.3)、IGH(4qtel)、PDGFB(22q13.1)などであった。これはCGHの結果と矛盾しないが、これらのtarget遺伝子の異常と髄膜腫の生物学性格の関係については更に検討が必要である。
排尿における前帯状皮質の役割：光遺伝学を用いた前帯状皮質の新たな機能解明

平成31年度正常な排尿機構の解明。1.神経トレーサーによる前帯状皮質と膀胱との神経経路の存在を確認。2.fiberphotometryによる前帯状皮質神経群の活動と排尿活動との関連性ついて探索する。平成32年度病的状態の解明。1.前帯状皮質の神経操作による病的排尿障害モデルマウスの作成2.膀胱障害により生じた排尿障害モデルマウスに対する前帯状皮質への選択的な刺激介入は新規治療選択しとなりえるか探索する。
妊娠・分娩・育児期における母親の唾液中オキシトシン濃度と精神的安定性に関する研究

平成30年度は、前年度までに得られた結果を検討した上で、血液中オキシトシン(以降血液中OXTとする)値やそれに影響を与えると言われている血液中コルチゾール値の測定を行い、それらとの関連要因を検討することを目的とし、下記の3点を実施した。ヒト体内でのオキシトシンの変動をより正確に把握でき、唾液中のみの測定よりも信頼性の高い研究結果を得られると考え、当初の計画であった唾液中OXT値以外にも血液中OXT値および血液中コルチゾールを測定する計画を追加した。1.倫理委員会承認の上で研究計画を修正し、唾液中のみでなく血液中OXT値および血液中コルチゾール値を測定することとした。妊娠中の対象者38名に説明し同意を得た。そのうち妊娠後期、分娩前中後を母体血液採取時期とし、この他に胎児側のOXT値を把握・母子間の影響を検討するために当初の計画に追加して臍帯血を採取した。また、唾液採取時期を経膣分娩後3日目、帝王切開術後5日目とし、唾液採取と同時に疲労・ストレス測定システムによる自律神経機能の測定を行なった。2.1.の対象者に対して児への愛着形成の評価を行うために、新たに花沢氏が作成した「対児感情評定尺度」と「The Maternal Attachment Inventory(MAI日本語版)」およびKumarとMarksらによって考案され、吉田が日本語版として翻訳した「赤ちゃんへの気持ち質問表」を追加した質問紙調査を配布し回収した。3.血液中OXT値および血液中コルチゾール値に関連するその他の産科学的要因について検討した。現在はデータ集積の途中段階である。平成31年度は最終年度として得られた全てのデータを分析し、結果をまとめていく。血液中OXT値と唾液中OXT値との相関関係や、コルチゾール値との関連、その他関連する項目の分析を行っていくための準備を行っている。血液検体の集積に時間を要し、唾液検体の集積が思うように進んでいない。データ数を増やす必要があり時間を要しているため、データ分析がやや遅れている。これまで測定したデータ解析においては、現在も解析を進めている途中である。当初予定していた唾液中検体の測定値のほかに、今年度研究計画を修正し追加された血液中検体の測定値についてはデータ数をさらに追加し、基本的属性や産科学的要因についても関連を検討していく。平成31年度は最終年度として、これまでに得られたすべてのデータを解析し、研究成果としてまとめていく。本研究の目的は、オキシトシン(以降OXT)について妊娠・分娩・育児期における母親の唾液中OXT濃度の推移を測定し、児への愛着形成および疲労・ストレスを含めた精神的安定性との関連を検討することである。平成29年度は下記の3点を実施した。1.妊娠(妊娠36週40週)・分娩(分娩第1期進行中)・育児期(授乳前・中・後および産後1ヶ月)の母親14名に対して唾液採取を行い、OXT濃度測定を行った。唾液採取方法およびELISAを用いたOXT濃度測定手順の安定性を確立することが出来た。妊娠・分娩・育児期(授乳前・中・後)では産後1ヶ月に比較して、産褥入院中授乳後の唾液中OXT濃度が有意に高くなっていた。2.対照群として非妊娠女性15名の唾液採取を行い、OXT濃度測定を行った。3.児への愛着形成に関する質問紙調査を1の対象者に対して実施した。児への愛着形成を測る尺度としては、花沢が開発した対児感情評定尺度等を用いた。不安を測る尺度としては、Spielbergerが開発し、肥田野らが作成した新版State-Trait Anxiety Inventory(新版STAI)を用いた。対児感情評定尺度接近得点は、妊娠末期より産褥期に有意に高く、愛着形成が示されたが、唾液中OXT濃度と児への愛着との間に相関は認めなかった。以上のことについて、平成30年度以降の研究計画において資料となる基礎的なデータを得ることが出来た。さらにデータを集積・検討していく予定である。なお、以上の一部分を第58回日本母性衛生学会で発表した。今回得られた結果を検討し、血液中OXTとの相関や、OXT値に影響を与えると言われているコルチゾール値の測定を行うことが、信頼性のある結果につながると考えた。そのため、研究計画を修正し、次年度以降は唾液および血液中OXT・コルチゾール値の測定を行っていくこととする。平成29年度に検討予定であった唾液中オキシトシン濃度の測定方法はおおよそ確立しつつある。機器の使用方法等安定して行うことが出来ており、データは順調に集積されている。日立システムズ株式会社製の疲労・ストレス測定システムを予定通り購入し使用方法を検討した。プレテストは平成30年度に実施予定である。1.倫理委員会

承認の上で研究計画を修正し、唾液中のみでなく血液中OXT値および血液中コルチゾール値を測定することとした。妊娠中の対象者38名に説明し同意を得た。そのうち妊娠後期、分娩前中後を母体血液採取時期とし、この他に胎児側のOXT値を把握・母子間の影響を検討するために当初の計画に追加して臍帯血を採取した。また、唾液採取時期を経膣分娩後3日目、帝王切開術後5日目とし、唾液採取と同時に疲労・ストレス測定システムによる自律神経機能の測定を行なった。2.1.の対象者に対して児への愛着形成の評価を行うために、新たに花沢氏が作成した「対児感情評定尺度」と「The Maternal Attachment Inventory(MAI日本語版)」およびKumarとMarksらによって考案され、吉田が日本語版として翻訳した「赤ちゃんへの気持ち質問表」を追加した質問紙調査を配布し回収した。3.血液中OXT値および血液中コルチゾール値に関連するその他の産科学的要因について検討した。現在はデータ集積の途中段階である。平成31年度は最終年度として得られた全てのデータを分析し、結果をまとめていく。血液中OXT値と唾液中OXT値との相関関係や、コルチゾール値との関連、その他関連する項目の分析を行っていくための準備を行っている。血液検体の集積に時間を要し、唾液検体の集積が思うように進んでいない。データ数を増やす必要があり時間を要しているため、データ分析がやや遅れている。1.平成29年度の結果を参考に、唾液採取時期を決定し唾液中オキシトシン濃度の推移を解析する。また、平成29年度の結果からオキシトシン値のみではなくコルチゾール値をともに測定することで、それぞれのホルモンが及ぼす影響を詳細に分析できると考えたため、具体的な方法を検討していく。2.平成29年度の結果をもとに検討した結果、唾液中のみでなく血液中の値を検討する必要があると考えた。計画を変更しオキシトシンおよびコルチゾール値について血液中からの測定を検討していく。3.オキシトシン・コルチゾール値に併せて母親の精神的安定性について調査していく。(質問紙調査および疲労・ストレス測定システム)これまで測定したデータ解析においては、現在も解析を進めている途中である。当初予定していた唾液中検体の測定値のほかに、今年度研究計画を修正し追加された血液中検体の測定値についてはデータ数をさらに追加し、基本的属性や産科学的要因についても関連を検討していく。平成31年度は最終年度として、これまでに得られたすべてのデータを解析し、研究成果としてまとめていく。当初計画で見込んだ額よりも安価で唾液中オキシトシン濃度測定が実施できたため。その分、次年度使用金額に組み入れ、唾液に追加し血液中濃度測定や消耗品に使用していく予定である。当初予定していた研究計画に修正の必要が生じ、検体収集およびデータ測定がやや遅れたためにその費用を平成31年度に繰り越した。平成31年度は残りのデータ測定やそれに必要な消耗品購入、学会発表及び論文発表に使用する予定である。
共生器官の選択的機能阻害による害虫制御技術の基盤研究

本課題では、害虫防除手法の開発を目指し、タバココナジラミの腹部体腔内に存在する“菌細胞共生系"を対象として、そこで発現する遺伝子群を明らかにした。タバココナジラミの菌細胞では、先行研究で明らかになっているアブラムシとは異なる独自の遺伝子群が高発現しており、データベース上に相同遺伝子が存在しない遺伝子のRNAiにより生存率の低下傾向が示された。併せて、野外集団におけるタバココナジラミの遺伝型や保有共生細菌についても解析し、日本にはアジア初検出の遺伝型MED Q2が侵入していることを明らかにした。本研究課題では、世界最重要害虫の一つであるタバココナジラミを研究対象として、これまでとは全く異なる作用機序をもった害虫防除法の開発の礎を築くことを目標としている。具体的には、害虫にとって必須の共生細菌を収納する器官"菌細胞塊"で作用する遺伝子を網羅的に解析し、その機能を化合物を用いて特異的阻害することにより、効果的で環境負荷の少ない害虫制御技術を開発することを想定している。本年度は、タバココナジラミ菌細胞で特異的に発現する遺伝子を探索するため、RNA-seq用ライブラリ作製法から検討を行った。タバココナジラミは体長1mm未満の微小な昆虫であり、従って解剖によって取り出した菌細胞からは、1頭あたり数ngのtotal RNAしか回収できない。次世代シークエンサーたよる解析に最低限必要な100ng以上のmRNAを得る為には、数千頭を解剖し、菌細胞を回収しなくてはならない計算になる。これを回避するため、Ribo-SPIA法によりmRNA特異的な増幅を行って、数μgのcDNAを得ることに成功した。得られたcDNAからライブラリを作成し、次世代シークエンサーHiSeq 2000を用いて、RNAseq法により解析を行った。既にde novoアセンブリや、アノテーション、マッピングは終了した。得られた結果により、rRNAの割合は抑制され、宿主および共生細菌の遺伝子発現が効率的に捉えられていることが確認された。現在、菌細胞で特異的に発現する遺伝子のプロファイリング作業を行っている。本研究課題は、世界最重要農業害虫の一つであるタバココナジラミを研究対象として、これまでとは全く異なる作用機序をもった害虫防除法の開発の礎を築くことを目標としている。具体的には、害虫にとって必須の共生細菌を収納する器官“菌細胞塊"で作用する遺伝子や菌細胞の遺伝様式を詳細に解析することで、必須の微生物との共生を成立させている機構を明らかにし、その機構を特異的に阻害することにより、効果的で環境負荷の少ない害虫制御技術を開発することを想定している。本年度は、次世代シークエンサーを用いたRNA-seq解析ならびに定量PCRにより、菌細胞で特異的に高発現する複数の遺伝子群の存在を明らかにした。本種の菌細胞発現遺伝子プロファイルは、これまでに報告のあるアブラムシやゾウムシなどが発現する遺伝子群とは大きく異なっており、菌細胞の進化を考察する上できわめて興味深いものであるが、その部分配列にはデータベース上に相同性を示すものが存在せず、遺伝子機能を推定することができなかった。当該遺伝子の機能解析については、虫が微小かつ針の通りにくい形状であり、残念ながら現在までインジェクションによるRNAi法には成功していない。また本年度は、本種にとって必須の器官である菌細胞そのものがどのような遺伝様式を示すのかについての解析も進めた。古くから、本種の菌細胞は体細胞とは異なる遺伝様式をとることが示唆されていたが、我々はマイクロサテライトマーカーを用いた解析を行い、これを指示するデータを得た。本研究課題は、世界最重要農業害虫の一つであるタバココナジラミを研究対象として、これまでとは全く異なる作用機序をもった害虫防除法の開発の礎を築くことを目標とする。具体的には、害虫にとって必須の共生細菌を収納する器官“菌細胞塊"で作用する遺伝子を網羅的に解析することで、必須の微生物との共生を成立させる分子機構を明らかにし、その機能を特異的阻害することにより、効果的で環境負荷の少ない害虫制御技術を開発することを想定している。本年度は、昨年度までにRNA-seq解析によって得られた共生器官特異的発現候補遺伝子について詳細な解析を行った。RNA-seqおよびde novoアセンブリによって得られた配列をアノテーション解析し、共生細菌由来と考えられる原核生物型遺伝子と、タバココナジラミ由来と考えられる真核生物型遺伝子を区別した。得られた真核生物型遺伝子のうち、発現量およびfold changeの値がともに上位100位に入っているものとして、菌細胞で発現する27の共生関連候補遺伝子を同定した。これらのほとんどはデータベース上に存在しないか、機能未知タンパク質の遺伝子であった。候補遺伝子群のうち、特に発現量が高いものとしてisoformを含むを9遺伝子に対する特異的プライマーを設計し、定量PCRによる解析を行った。その結果、それらのうち8種類の遺伝子については、菌細胞でのみ特異的に発現していることが確認された。これらの遺伝子は、微生物との共生によって独自の進化を遂げた新規機能遺伝子である可能性が高いと考えられる。農業害虫、衛生害虫として知られる昆虫の多くは、特定の微生物との間に密接な共生関係を築いており、微生物の持つ特殊な代謝機能に生存を委ねてしまっているものも存在する。タバココナジラミは、腹部体腔内に“菌細胞"と呼ばれる肥大化した細胞を持ち、その細胞質内に必須の共生細菌を住まわせている。

この必須の共生関係を成立させている菌細胞の分子基盤を詳細に明らかにすることで、タバココナジラミにのみ選択的に効き、環境被害の少ない防除法の開発につながることが期待できる。本研究課題では、近年急速な発展を遂げた遺伝子解析技術を用いて、共生器官で機能する蛋白質とその機能を網羅的に解析した。これまでに、菌細胞内における共生細菌の空間分布や共生細菌のゲノム解析により、本種では2種類の共生細菌が同一菌細胞内に存在し、小胞体膜を隔てて棲み分けており、2種の共生細菌が必須アミノ酸の合成にかかわっていることを明らかにした。また、次世代シーケンサーを用いたRNA-seq解析ならびに定量PCRにより、本種の菌細胞発現遺伝子プロファイルは、これまでに報告のあるアブラムシやゾウムシなどが発現する遺伝子群とは大きく異なっており、菌細胞の進化を考察する上できわめて興味深いものであることが示された。菌細胞特異的発現遺伝子として、微生物との相互作用に機能することが期待されるペルオキシダーゼ様遺伝子、菌細胞の細胞骨格形成や小胞輸送に関与すると思われるADP-ribosylation factor6に高い相同性を示す遺伝子等が含まれていた。得られた遺伝子群の部分配列の中には、データベース上に相同性を示すものが存在しなかったものの、7回膜貫通型の受容体のドメインを持つ遺伝子群等が見つかった。また、研究のスピンオフとして、タバココナジラミの日本集団の遺伝型および共生細菌保有状況を明らかにした。本課題では、害虫防除手法の開発を目指し、タバココナジラミの腹部体腔内に存在する“菌細胞共生系"を対象として、そこで発現する遺伝子群を明らかにした。タバココナジラミの菌細胞では、先行研究で明らかになっているアブラムシとは異なる独自の遺伝子群が高発現しており、データベース上に相同遺伝子が存在しない遺伝子のRNAiにより生存率の低下傾向が示された。併せて、野外集団におけるタバココナジラミの遺伝型や保有共生細菌についても解析し、日本にはアジア初検出の遺伝型MED Q2が侵入していることを明らかにした。27年度が最終年度であるため、記入しない。共生生物学、応用昆虫学タバココナジラミの菌細胞から、大量に混入するrRNAを除去しつつ、宿主由来および共生細菌由来の発現遺伝子をRNA-seq法によって解析する方法を確立した。既にdenovoアセンブリ、アノテーション、マッピングは終了しており、研究は順調に進捗している。菌細胞発現遺伝子の機能解析については計画通り進まなかった面もあるが、菌細胞自体の遺伝様式についての新知見も得られている。本課題が対象としている必須共生器官の生物学が明らかになっており、計画はおおむね順調に進展している。RNA-seq法およびその後の定量RT-PCRにより、必須の細菌との共生の成立を司ると考えられる複数の候補遺伝子を得ることが出来た。それらの遺伝子は、データベース上に相同性の高い遺伝子が存在しないか、あるいは機能が明らかになっておらず、微生物との共生によって独自の進化を遂げた新規機能遺伝子である可能性が高いと考えられる。本研究課題は、最終的には新規害虫防除法の開発を目指すものであるが、昆虫類が生態系で生きて行く上で欠かすことのできない分子機構の解明にも貢献できており、研究は順調に進捗している。
エストロゲン受容体とエストロゲン応答遺伝子の前立腺肥大症・前立腺癌における役割

まず前立腺におけるエストロゲン受容体の発現を免疫組織染色法により検証た。ERαは正常前立腺ならびに癌組織ともに間質細胞に優位な発現を認めた。正常前立腺上皮では基底細胞に発現を認めたが、分泌細胞には明らかな発現を認めなかった。癌では低分化癌において時に有意な発現を見たが、一部であり、病理学的パラメーターとの相関はなかった。一方ERβは正常前立腺ならびに癌組織ともに上皮細胞に優位な発現を認めた。また前立腺癌ではwild-type ERβの発現が正常前立腺上皮細胞と比べ低下するのに対して、C-teminal splice variantであるERβcxの発現を認めた。wild-type ERβの発現低下とERβの発現増加はともにpoorcancer-specific survivalと強く相関した。エストロゲン応答遺伝子EBAG9は活性化T細胞のアポトーシスを誘導することが最近明らかにされたRCAS1遺伝子と同一であり、癌細胞に対する免疫細胞攻撃の回避に関与している可能性が示唆されているが、high Gleason score、リンパ節転移と有意に相関した発現を確認した。さらに同遺伝子発現とpoor cancer-specific survivalとの有意な相関が見られた。今後はstable transfectantを用いた癌細胞移植実験による解析を行う予定である。もりひとつのエストロゲン応答遺伝子efpは、若年正常前立腺に比べて前立腺肥大症において間質で際立った発現増加を認め、中年以降の間質を主体とした肥大症発生に関与している可能性が示唆された。今後は同遺伝子ノックアウトマウスによる解析を行う。
神経画像と分子遺伝学の双方向的アプローチによる統合失調病脳病態の統合的解明

3次元MRI・近赤外線スペクトロスコピー(NIRS)・多チャンネル脳磁図(MEG)計測システムからなる非侵襲マルチモダリティ脳計測技術と分子遺伝学的解析を双方向的に組み合わせ、統合失調症の脳病態を統合的に明らかにすることを目的とした。右利き統合失調症患者および健常者を対象とし、脳構造指標として1.5Tの3D-MRI撮像、脳機能指標としてはNIRS(前頭葉賦活課題施行中の前頭部oxyHb変化)、MEG計測(上側頭回ミスマッチ陰性磁場;MMF)の計測を行った。同一被験者に対し、末梢静脈血採血を行い、BDNF,COMT,GRM3の遺伝子解析を行った。得られた遺伝子多型性によって群分けし、脳機能・構造データの有意差を検討した。MRIについて、健常者146名、統合失調症患者46名におけるBDNFval66met多型の影響を検討したところ、用手的MRI計測による海馬・扁桃体体積において有意な影響は見られなかったが、全脳を自動的に検討できるvoxel-based morphometryにおいては、側頭後頭連合野灰白質体積において、統合失調症では健常者よりBDNF多型の影響を強く認めた。NIRSについては、健常者30名、統合失調症患者45名における、COMT val158met多型の影響を検討したところ、統合失調症において左前頭部oxyHb変化に対してCOMT多型が有意に影響を与えていた。MEGについては、健常男性25名による検討の結果、BDNFval66met多型は音素刺激MMFの左半球優位性に、GRM3多型は音素刺激MMF強度(両側上側頭回)に、それぞれ有意な影響を与えていた。これらの結果から、統合失調症の関連遺伝子多型の異常が脳機能・構造に部位・機能特異的な影響を与えることが示唆された。
P糖タンパクの発現を制御する組織因子の研究

多剤耐性癌細胞に見出されたP糖タンパクは脳毛細血管内皮など正常組織にも発現しており、血液脳関門の一部の機能を担っていると考えられている。脳血管内皮におけるP糖タンパクの発現制御機構を明らかにするため、マウス及びウシの脳、肺、肝臓、腎臓より組織マトリクスを調製し、マウス脳毛細血管内皮細胞MBEC4のP糖タンパク発現に及ぼす影響を調べた。その結果、脳のマトリクスのみがMBEC4のP糖タンパク発現量を増加させ、脳組織中に何らの組織因子が特異的に存在することが示唆された。この組織因子をPIC(P-glycoprotein inducing component)と名付け、その性状解析を行なった。PICの活性は等電点電気泳動でpI9.0付近にピークを示し、比活性にして数倍程度に濃縮された。PICの活性は、熱、酸、アルカリに不安定で、トリプシン処理により失活することから、PICはタンパク性の因子であると推測された。組織マトリクスに含まれる成分の中で、I型コラーゲンは肝細胞のP糖タンパク発現量を増加させることが報告されているが、PICをコラゲナーゼで処理してもその活性は失われず、PICはI型コラーゲンとは異なる因子であると考えられた。PICは別の脳毛細血管内皮細胞MBEC2のP糖タンパク発現量を増加させたが、P糖タンパクを発現していないマウス大動脈血管内皮細胞MAEC3に対しては活性を示さなかった。さらに様々な量のP糖タンパクを発現している多剤耐性癌細胞についてPICの作用を調べたが、P糖タンパク発現量の増加は認められなかった。これらの結果から、脳の組織中には脳毛細血管血管内皮細胞に特異的に作用し、P糖タンパクの発現量を増加させる因子PICが存在することが明らかになった。
文献学的方法による超長周期変光星の研究

「Almagest」を始めとして、7つの古い天文学書の調査をした。研究内容としては、まず7つの文献それぞれから等級のデータを抽出し、その信頼性を調べた。7つの文献全てのデータを相互比較し、観測の独立性を証明、次に現在の実視等級と比較し、その信頓性を調査した。ここまでの研究は論文にまとめ、学術雑誌に投稿、受理されて出版された。更にシドニーで行われたIAU General Assemblyで口頭発表を行った。次に7つの星表それぞれに於ける恒星等級のシステムを検証した。始めに全てのデータを等級別に分け、対応する現在の平均等級と比較した。これらのカタログが編纂された時代は、0等、マイナス等級の概念が無かった為、最も明るい1等星として記録されている星の平均は1.0より暗い方へずれる。更に肉眼で観測出来る限界である6等級は、6.0より暗い星が観測出来ない事と、Malmquist Biasが原因で平均等級が明るい方へずれる。この事から1等と6等は現在の実視等級と対等に比較出来ない事が分かったので、25等級と記録されている星のデータのみを使用し、等級システムを検証する。等級システムがlogarithmか、power-lawに従うかを検証する為、等級データに回帰線を引いてそれぞれの補正χ2を算出した結果、7つのカタログ全てを通じてlogarithmに従う事が分かった。次にそれぞれのカタログに於ける光比を算出し、全てのカタログを通じて現行システムの値にほぼ一致する事が分かった。これらの結果は日本天文学会秋季年会(愛媛大学)で「恒星表相互比較による等級データの検証」、「古文献における恒星の等級システム」というタイトルで口頭発表を行った。更にこれらを論文にまとめ、「Magnitude systems in old star catalogues」というタイトルで学術雑誌に現在投稿中である。このうち、「Almagest」と「Suwar al-Kawakib」については、年代が古くて何種類もの写本があり、資料に間違いが含まれている可能性があったため、アラビア文献学者で元ミュンヘン大学教授、Paul Kuniztsch先生と資料の信頼性について議論した。恒星の等級比較を行った結果、αSgrの等級変動がかなり大きかったので、この星の特性について、「αSgrの等級変動について」という題目で日本天文学会秋季年会恒星分科会で報告した。次に「フラムスチード天球圖譜」のオリジナル文献について、去年の研究発表に続いて「Flamsteed「天球圖譜」と「Histria Coelestis Britamica」の相違点II」という題目で日本天文学会秋季年会天文教育分科会でポスター発表した。フラムスチードについては、「Atlas Celeste de Flamsteed」という文献もパリ天文台に残されていたため、これについて調査を行い、論文「「フラムスチード天球圖譜」と「Atlas Celeste de Flamsteed」について(On discrepancies between'フラムスチード天球圖譜' and 'Atlas Celeste de Flamsteed')」を執筆、現在投稿中である。
統合失調症モデル動物を用いたPICK1遺伝子の機能役割の研究

本研究の目的は、統合失調症の病態や遺伝に関与する可能性のあるPICK1遺伝子の機能について、動物モデルを用いて調べることである。フェンサイクリジン(PCP)の頻回投与後の退薬症候として、統合失調症の陰性症状に類似した感情鈍麻、意欲低下、抑うつ気分、睡眠障害を引き起こすこと、統合失調症患者にPCPを投与すると症状が増悪すること、等から、PCP慢性投与ラットを統合失調症モデルとした。行動異常については、活動量を尺度にオープンフィールドテストで測定可能な環境にした。PCP慢性投与モデル動物は、新奇性刺激に対しては、対照群と比較して差は見られなかった。PCP再投与に対して活動量亢進が見られた。コカイン再投与においても、感受性の亢進が見られた。記憶学習障害については、回避テストを応用した学習パラダイムを開発したがPCP慢性投与ラットに明らかな異常は見いだせなかった。現在、連合学習障害を見るために、能動的回避試験を行っている。PCP連続投与モデル動物の側座核および線状体の腹側部で、ダイノルフィン蛋白の出現が増加していた。D-セリンおよびL-セリン含量は、高速液体クロマトグラフを用いて測定し、安定した結果が得られるようにした。PICK1を発現できるウイルスベクターは作成し、健常ラットの前頭葉皮質に打ち込み、D-セリン/L-セリン含量比率は増加傾向を示した。PCP連続投与ラットの前頭葉に、このPICK1遺伝子の入っているウイルスベクターを打ち込み、異常行動に対する効果を調べる予定である。本研突の目的は,統合失調症の病態や遺伝に関与する可能性のあるPICK1遺伝子の機能について,動物モデルを用いて調べることである。フェンサイクリジン(PCP)の頻回投与後の退薬症候として,統合失調症の陰性症状に類似した感情鈍麻,意欲低下,抑うつ気分,睡眠障害を引き起こすこと,統合失調症患者にPCPを投与すると症状が増悪すること,等から,PCP慢性投与ラットを統合失調症モデルとした。行動異常については,活動量を尺度にオープンフィールドテストで測定可能な環境にした。PCPを慢性投与したモデル動物ではPCP急性投与に対して活動量の亢進が見られた。記憶学習障害については,回避テストを用いたがPCP慢性投与ラットでの明らかな異常は見いだせなかった。脳各部位におけるアミノ酸(グルタミン酸,グルタミン,アスパラギン酸,グリシン,セリン,タウリン,アラニン,GABA,D-セリン,等)を高速液体クロマトグラフを用いて測定し,安定した結果が得られるようになった。現在,サンプルを作成して測定中である。PICK1を発現できるアデノウイルスペクターは作成中である。本年度は,PCP連続投与ラットの海馬,側座核,前頭葉にPICK1遺伝子を打ち込み,神経伝達異常や行動異常に対する効果を調べる予定である。

D-セリンおよびL-セリン含量は、高速液体クロマトグラフを用いて測定し、安定した結果が得られるようにした。PICK1を発現できるウイルスベクターは作成し、健常ラットの前頭葉皮質に打ち込み、D-セリン/L-セリン含量比率は増加傾向を示した。PCP連続投与ラットの前頭葉に、このPICK1遺伝子の入っているウイルスベクターを打ち込み、異常行動に対する効果を調べる予定である。
長時間におよぶ超低体温循環停止時における大脳高次機能障害発生機序に関する研究

超低体温循環停止法を用いた弓部大動脈再建手術に際し、60分以上の脳循環停止時間を必要とした症例について、術後脳障害について検討し、また手術と同様に60分90分の超低体温循環停止をした動物実験を行い組織学的に評価した。臨床対象は、60分以上の超低体温循環停止法を補助手段として行った、弓部大動脈手術80例であった。病院死亡は5例(6%)であった。術後脳梗塞を4例(5%)に認めた。また、術後一過性の意識障害を6例(8%)に認めたが、この6例はCTでは特に器質的病変を認めなかった。65例(81%)においては術後脳障害を含めた合併症を認めなかった。脳梗塞と循環停止時間には因果関係を認めなかったが、一過性意識障害を認めた症例群においては、循環停止時間が86.2±16.1分と、脳障害を認めなかった症例群の74.6±10分より有為に長く認めた。また、脳梗塞を認めなかった71症例にっいて、強い不眠を16例(23%)に認め、記銘力低下を15例(21%)に、意欲低下を29例(41%)に認めた。動物実験は、ビーグル犬12頭を用いて行った。循環停止せずに15°Cの超低体温循環90分行った群をA群、循環停止60分行った群をB群、循環停止90分行った群をC群、とした。術後72時間後に灌流固定を行い全脳を摘出した。組織学的に光顕ではA、B群には、大脳および小脳に異常変化は認められなかったが、C群においては、大脳皮質のIII、V錐体細胞層および小脳プルキニエ細胞に著明な萎縮が多数認められ、これらの細胞の多数はTUNEL陽性を呈した。電顕所見では、A、B群に異常所見は認められなかったが、C群においてはアポトーシス様細胞を多数認めた。弓部大動脈再建術において、術前に比べ記銘力の低下、意欲低下が認められた症例があり、それらは動物実験よりアポトーシスによる脳の高次機能の障害の可能性が示唆された。ビーグル犬を用いて、90分以内の超低体温循環停止モデルを体外循環を用いて作成し、虚血72時間後における大脳皮質、小脳、海馬について、病理学的組織変化をHE染色およびTUNEL染色で形態学的に評価検討し、さらに正常細胞、アポトーシス細胞、壊死細胞について透過型電子顕微鏡で定量的に評価した。1.体温15°Cで90分の体外循環を行った群(n=5)では脳神経細胞に異常所見は認められなかった。2.体温15°Cで60分の脳循環停止群(n=5)では脳神経細胞に異常所見は認められなかった。3.体温15°Cで90分の脳循環停止群(n=5)では、海馬、大脳皮質(第III層、第V層の錐体細胞)および小脳プルキニエ細胞の90%にアポトーシス細胞を認め、5%に壊死細胞を認めた。実験結果より、低体温脳循環停止後における術後の脳神経の形態学的変化にアポトーシスが関与していることを明らかとした。臨床研究では、1995年より1999年までに、超低体温循環停止法を用いて弓部大動脈の手術を行った症例中、脳循環停止時間が60分以上であった80症例について、手術成績および術後における記銘力、不眠、意欲などの大脳高次機能について臨床的に評価検討した。手術成績は、病院死亡5例(6%)、脳梗塞4例(5%)、一過性意識障害6例(8%)であった。病院死亡と脳梗塞症例を除いた71例中、薬剤抵抗性の強い不眠を16例(23%)に、記銘力の低下を15例(21%)に、意欲低下を29例(41%)に認めた。基礎実験結果および臨床的所見より、体温15°Cにおいて60分以上の脳循環停止は、脳神経細胞のアポトーシスを引き起こし、術後の大脳高次機能に影響することが考えられた。

循環停止せずに15°Cの超低体温循環90分行った群をA群、循環停止60分行った群をB群、循環停止90分行った群をC群、とした。術後72時間後に灌流固定を行い全脳を摘出した。組織学的に光顕ではA、B群には、大脳および小脳に異常変化は認められなかったが、C群においては、大脳皮質のIII、V錐体細胞層および小脳プルキニエ細胞に著明な萎縮が多数認められ、これらの細胞の多数はTUNEL陽性を呈した。電顕所見では、A、B群に異常所見は認められなかったが、C群においてはアポトーシス様細胞を多数認めた。弓部大動脈再建術において、術前に比べ記銘力の低下、意欲低下が認められた症例があり、それらは動物実験よりアポトーシスによる脳の高次機能の障害の可能性が示唆された。
星間分子進化における水素分子触媒機構の寄与に関する理論研究

最終年度である本年度は、昨年度に計画したH2-H2錯体のイオン化ダイナミクスを主な研究対象として取り上げた。宇宙空間では、高エネルギー粒子が低温ガス中に存在する物質をイオン化し、生成したイオンが様々な反応を引き起こす。H2・H2錯体がイオン化するとH2+イオンが生成し、錯体内でH2と反応してH3+を生成すると予想される。過去の研究で開発されたH2-H2のファンデルワールス力に基づいたポテンシャルエネルギー曲面を用い、経路積分分子動力学シミュレーションによって、初期構造をサンプリングした。その結果、量子的な広がりが極めて大きいことが分かった。しかし、核の量子効果を含めた実時間シミュレーションは計算時間がかかりすぎるため、必要な初期構造をサンプリングするときにのみ、核の量子性を考慮した。原子を古典的に扱った場合には、ポテンシャルエネルギー曲面の安定点付近の局所的な構造だけをサンプリングすることになる。一方、原子を量子的に扱うことで構造の広がった高いポテンシャルエネルギーをもった構造もサンプリングすることになる。サンプリングした構造を用いて古典動力学を実行しても古典サンプリングと量子サンプリングでダイナミクスに大きな違いは見られなかったが、反応確率自体は大きく異なることが分かった。また、HをDに置換した場合の同位体効果については、サンプリングの段階でわずかに違いが見られたが、全体のダイナミクスにおいては顕著な違いは見られなかった。29年度が最終年度であるため、記入しない。水素分子は、宇宙において圧倒的に多く存在する分子であり、星間空間に存在する他のラジカルやイオンと反応して、生成物分子の中に水素原子が組み込まれていく反応試薬でもある。近年、水素分子自身が触媒として働き得ることが指摘されている。そこで、本研究では、星間分子進化過程における水素触媒反応を網羅的に探究し、その上で、典型的な反応例を取りあげて、原子の運動を量子力学的に取り扱うことができる量子反応動力学理論を適用して、その寄与を定量的に評価する方法を確立することを目的としている。昨年度は、水素分子が触媒としてはたらく可能性が高い分子系としてイオン系反応、H2NC+ H2 ->HCNH+ H2、中性反応としてHNCHN + H2-> H2NCH+ H2およびNCOH + H2 -> HNCO + H2についてGRRMコードを利用した反応経路の全面探索を行い、水素分子の触媒効果についての定性的な理解が得ることができた。しかしながら、レベルの低い電子状態計算で探索を行ったため、定量性について問題があることが分かった。そこで、本年度はまず、正確な電子状態計算に基づいて精度の高い反応経路を求めることを行う計画である。量子反応動力学計算については、昨年度は具体的な分子系として、H3+ + H2のイオン分子反応を取りあげて、理論計算を実行したが、反応中間体の寿命が長すぎるために定量的な結果が得ることができなかった。そのため、本年度は、水素分子2個からなるクラスター分子のイオン化ダイナミクスについて量子反応動力学計算を行うことにする。水素分子の触媒効果についての定性的な理解が得ることができた。しかしながら、レベルの低い電子状態計算で探索を行ったため、定量性について問題がある。量子反応動力学計算については、反応中間体の寿命が長すぎるために定量的な結果が得ることができなかったため、水素分子2個からなるクラスター分子のイオン化ダイナミクスについて量子反応動力学計算を行うことにする。イオン化に伴いクラスター内でイオン分子反応が起きること分かっている。幸い、他の研究者がポテンシャルエネルギー曲面の開発をすでに行っているため、そのコードを我々の動力学計算コードへ取り込む。また、H/Dの同位体置換効果について詳細な計算を行う。さらに、本年度は水素分子触媒の新しい系として、固体水素表面反応について検討することも行う。これは、1個の水素分子が触媒反応を起こすことに加えて、複数の水素分子が触媒となる可能性もあるのではないかという仮説に基づいている。

本年度は、引き続きGRRM法による反応経路の探索と、量子反応動力学法の応用計算を行う。また、最終年度となるため、研究総括も行う。29年度が最終年度であるため、記入しない。
BCG failure症例に出現する異型細胞の形態学的・分子生物学的研究

BCG failure症例の検討において重要になってくるのが、BCG膀注療法の作用機序である。癌細胞は細胞周期に異常をきたしたものが多いが、細胞増殖抑制にはp53とpRBという二大タンパクが関与している。そのうち膀胱癌はp53のmutationが多く見られる為、2018年度、我々は比較的異常が少ないpRBと他のタンパク(p21, p27)との関連性を培養細胞(T24, C33a)やsiRNAを用いて調べた。その結果、BCG膀注後1BCG曝露において,p21・p27の核内共発現が効果的細胞周期停止をもたらす、2p27または正常pRbの発現は,核内p21の発現には十分条件であるが,細胞質内p21の発現には必須である、3BCG曝露におけるpRb-T821リン酸化はp21・p27の核内共発現に比較し遅れる、4BCG療法効果判定因子として,核面積の変化は使えないが,核クロマチン・核の縦横比は有効である、ことが分かった。現在、非浸潤性膀胱癌のBCG膀注療法効果判定には、内視鏡や生検、自然尿細胞診がもちいられているが、自然尿細胞診にはBCG failure症例に対する判定基準は確立されていない。そこで、我々はBCG膀注療法を受けた15症例(再発群4例、非再発群11例)の自然尿細胞診を4つの時間軸(治療前、BCG膀注療法後、再発時、最新)で調べた。その結果、1再発症例では、治療前と再発時の細胞は形態的に近い、2BCG failure症例では、初診時自然尿細胞診に、核面積が小さく、核型不整が強く、核クロマチンが中心に濃染した細胞が出現している、可能性が示唆された。実験を含めて順調に進んでいる。概要に記した内容は、学会発表および論文として発表している。1培養細胞を用いた実験:p53とpRBにmutationが見られない細胞(RT-4)を追加して、BCG膀注療法と細胞周期関連タンパクの関連性を詳細に調べるBCG failure群の尿細胞診に出現する異型細胞の形態学的および細胞周期関連タンパクの関連性を検討し、BCG failure群の尿細胞診に特異的に出現する異型細胞の特徴を明らかにすることを本研究の目的とし、以下の検討を行った。1BCG膀注療法症例におけるデータの収集:病理組織学的にNMUCと診断された10症例(膀注療法後観察期間:11-98ヶ月)を測定した。平均年齢は68.1歳(61-78)、男女比は9: 1であった。RD値は、再発症例(5症例:細胞数61)が-40.54±10.41(-117.01-114.31)、非再発症例(5症例:細胞数310)が-11.05±4.41(-108.81-83.76)であった(p<0.01)。治療前自然尿細胞診に出現する比較的小型で核中心が濃染する異型細胞は、BCG failureを示唆する細胞である可能性がある。2BCG曝露によるT24細胞のp21・p27発現における客観的検討:T24(高異型度ヒト尿路上皮癌由来株化細胞)を使用した。共焦点レーザー顕微鏡LSM700を用いてp21の核内発現を(陰性/弱陽性/陽性)で判定した(目視法)。さらに、解析ソフトNIS-Elementを用いて核内発現したp21の輝度積算値を算出(算出法)し、両法に相関が認められるかを調べた。目視法による陰性、弱陽性、強陽性の判定した細胞のp21の輝度積算値は、陰性が平均2594±1996、弱陽性が平均4024±2078、強陽性が平均6461±2469であった。算出法では、陰性と強陽性間には重なりがなく、弱陽性は中間の値をとった。また、目視法と算出法の間には、相関係数0.77という高い正の相関が認められた。臨床検体の選定もほぼ終わり、データ解析も順調に進んでいる。タンパク発現に関する客観的方法も進んでおり、これまでの目視法の精度に関するバックデータも得られ、学会発表の予定である。今後の解析を客観的に進める方法論が、一応揃った状況である。

現在、非浸潤性膀胱癌のBCG膀注療法効果判定には、内視鏡や生検、自然尿細胞診がもちいられているが、自然尿細胞診にはBCG failure症例に対する判定基準は確立されていない。そこで、我々はBCG膀注療法を受けた15症例(再発群4例、非再発群11例)の自然尿細胞診を4つの時間軸(治療前、BCG膀注療法後、再発時、最新)で調べた。その結果、1再発症例では、治療前と再発時の細胞は形態的に近い、2BCG failure症例では、初診時自然尿細胞診に、核面積が小さく、核型不整が強く、核クロマチンが中心に濃染した細胞が出現している、可能性が示唆された。実験を含めて順調に進んでいる。概要に記した内容は、学会発表および論文として発表している。1BCG曝露実験におけるデータの収集:複数の培養細胞の感受性を調べ、曝露実験を行い、pRB, p53, p21, p27,Lamin等の発現を核内、細胞質内に分けて分析する。また、相互関係も調べる。1培養細胞を用いた実験:p53とpRBにmutationが見られない細胞(RT-4)を追加して、BCG膀注療法と細胞周期関連タンパクの関連性を詳細に調べる