hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
液体電極プラズマの発生過渡現象の解明と有機・無機分析への応用

現在、データを取得中であるが、概して安定で、従来よりソフトな条件でよい結果が得られており、流路へのダメージが大幅に軽減された。2.バイオアッセイ系との組み合わせ。すでに銀のナノ粒子を標識剤に用いて従来のELISAより2桁ほど検出感度が下がることを見出しており、現在はカラムやマイクロポンプとの組合せを、元素の固相抽出を題材に評価しながらを進めている。本年度は、作成プロセスの改良により、より安定に動作可能になった他、上記交流プラズマとの組み合わせでも、安定化出来ることが判った。3.モデリング本年度は、はカラム抽出過程をモデルと合わせた。固相抽出に伴うプラズマの強度変化は、モデルと良く合い、測定データの解析過程にモデルとのフィッティングを取り入れることで、より精密にノイズを区別でき、精度が高まった。平成27年度は、交流を用いた液体電極プラズマ(交流LEP)の発生とその特性評価、およびカラムによる前処理を同じチップ内に集積化したシステムを構築しその特性を、従来の直流を用いた液体電極プラズマ(直流LEP)と比較しながら評価した。主な実施項目は次の通り(1)交流を用いた液体電極プラズマの発生と特性評価分担研究者の沖野先生が開発した、交流電源を用いて交流LEPを発生させ、元素分析に最適な発生条件を調査した。その結果、流量30uL/minで最適な発光が得られることが分かった。直流LEPでは、1000uL/min程度が最適なため、約1/30の流量でよいことになる。また、この最適条件で、鉛、カドミウム、鉄などの水溶液の発光スペクトルと、検出限界を調べたところ、スペクトルは、プラズマ温度、検出限界ともに、直流と大差ないことが分かった。一方で、プラズマが流路に及ぼすダメージについては大幅な改善が得られた。従来の直流LEPでは、検出限界を追及すると流路へのダメージが大きくなり、石英製の流路が必須となり、また頻繁な流路の交換が必要となる。しかし交流LEPでは、樹脂の流路を使ってもほとんどダメージが観察されなかった。大雑把な見積もりでは交流では直流と比較して1/3000以下のダメージで同等の検出限界が得られることになる。(2)固相抽出カラムとの一体化交流液体電極プラズマを固相抽出カラムと一つのチップ上に集積化することで、前濃縮による検出限界向上を行った。直流LEPと比べ、少ない流量で良いことは、カラムとの組み合わせでは大きなメリットで、気泡を除くための複雑な流体制御をおこなわずにカラムとの一体化が実現できた。性能は直流LEPとの組み合わせとほぼ同等である。流体制御が要らないため、測定時間が大幅に短縮化された。液体電極プラズマの発光過渡現象とその有機・無機分析応用について研究を行い次の知見を得た。プラズマ中での元素の発光量には、界面濃縮が大きく関わっており、T字型の流路やプラズマ発光部の壁面に窪みを設けることで、感度アップが可能なことを明らかにした。また、交流電源を用いることで、感度はそのままに、流路へのダメージが従来のおよそ1/3000に減るプラズマを発生できた。またイオン交換樹脂を詰めたカラムの先に液体電極プラズマの検出器を組み合わせたチップの開発を行い、これを固相抽出濃縮に用いた例では、チップ外でカラム濃縮処理をしたときに比べ、検出限界が1/40に、必要サンプル量も1/40に向上できた。まず、個々の研究課題について以下に評価する。
肩関節前方脱臼モデルの開発ー病態解明と手術術式の検証のためにー

まず特製の脱臼装置を完成させた。まず豚とサルの新鮮標本を用いて設定確認および動作確認を行った。これらの予備実験にて骨頭が前方へ脱臼することを確かめて新鮮遺体を用いて本実験を行った。脱臼実験と並行して、脱臼時に生じる上腕骨頭の陥没骨折(Hill-Sachs損傷)の実験も行った。どの程度の大きさのHill-Sachs損傷が術後再脱臼のリスクになるのかを調べる方法としてglenoid trackがある。このglenoid trackと肩関節可動域との関係を調べた。その結果、最も影響を与えるのは水平屈曲伸展動作であることがわかった。1.肩関節脱臼を模擬するために過去に報告されている肩関節脱臼の肢位に関する論文を調べたが、具体的な脱臼肢位を明らかにした報告はなかったため脱臼患者100肩のCT画像を用いてHill-Sachs損傷が生じる肢位を計測する画像計測の研究を行った。その結果、外転は74度、外旋は27度の角度で生じていることが明らかになった。2.予備実験として新鮮遺体肩を用いて徒手的に脱臼させた。外転外旋位の位置で水平外転を強制し、前方脱臼を生じさせた。脱臼後関節内を観察すると、いわゆるBankart損傷様のものは生じていた。しかし、骨頭の陥没骨折であるHill-Sachs損傷はみられなかった。次に万能試験機に死体肩標本を設置し、外転外旋位のまま上腕骨を関節窩に圧迫した。すると脱臼した際の圧迫力は850Nであり、その時に骨性Bankart損傷が生じていることが分かった。しかしHill-Sachs損傷はみられなかった。そこで次に関節窩を人工骨に変えて骨頭を人工骨に圧迫した。すると946Nの力が加わった時に骨頭の陥没骨折は生じた。以上の予備実験から関節窩骨欠損は脱臼時に、Hill-Sachs損傷は脱臼後に生じていることが推測された。3.これまで関節窩骨折、Hill-Sachs損傷ともに脱臼時に生じていると信じられてきた。しかし、我々のCT画像を用いた研究ならびに死体肩を用いた予備実験で脱臼時に生じるのは関節窩骨折のみでHill-Sachs損傷は脱臼後、患者が腕を下にさげた際に生じるのではないかということが明らかになった。肩関節が脱臼する際の上腕骨頭の位置変化を磁気センサーで定量的に計測できるか予備実験を行った。この脱臼実験では早い動作で実験を行うため、その早い動作に磁気センサーが対応できるのか、対応できるとしても精度は問題なく計測できるのかを確認した。脱臼時の関節窩と上腕骨頭に生じる骨病変を捉えるためにレントゲン透視装置を別の予算を用いて購入し、豚の骨を用いて脱臼を模擬してレントゲン透視装置でこれらの骨病変を捉えることが可能か予備実験を行なった。同様に早い脱臼動作をレントゲン透視装置で捉えることができるかを確認した。動的な動きの他に、静的な撮影を行い、変位の計測ができる精度があるかどうかを確認した。脱臼させる装置を市販の万能試験機でできないか検討を行った。早いスピードで100kg程度の加重をかけても計測できる装置を探したところそのような装置も市販されていることが分かった。しかし、価格が1000万円以上することがわかり購入はできないためこの万能試験機の購入は断念した。脱臼する際のスピードを再現するために実際にどの程度の速さで脱臼しているのか文献調査を行った。しかし、そのような調査を報告している論文はなかった。ただ、脱臼が生じた際のビデオ撮影を解析した報告はあり、人の肩関節の脱臼スピードの大まかな速さをそのビデオ解析から推測することは可能になった。実際の実験では全く同様のスピードを再現することは困難と考えられるためそれに近いスピードを再現するように実験設定を行うこととした。模擬骨や豚の骨を用いて予備実験を行っている。肩関節が脱臼する際は相当なスピードで脱臼が生じることが予測されるので本実験でもできる限り高速の脱臼装置を完成させるように実験装置を作製してきた。今年度は新規の購入は行わずにこれまで購入した計測機器や器具を用いて予備実験を行ってきた。標本が適切な肢位で固定できるように装置の一部を改良し、脱臼の瞬間を捉えられるように透視装置のアームが脱臼装置内に設置できるように改良した。また上腕骨にかかるトルクを計測するためにロードセルを設置した。脱臼する際に上腕骨がどの方向に動いたのかを計測するために磁気センサーを設置し、動作確認を行った。脱臼装置を完成させた後、まず豚の新鮮標本を使って実験の設定に問題がないか、前方への脱臼が生じるか、計測装置が正しく作動しているかを確かめた。豚の標本で確認ができた後に人体に近いサル(カニクイサル)の新鮮標本を用いて同様の設定確認および動作確認を行った。このglenoid trackは肩関節可動域に影響されることが推測される。そこでglenoid

trackと肩関節可動域との関係を調べた。新鮮遺体肩を特製の肩固定装置に固定し、2つの動作(内外旋、水平屈曲伸展)とglenoid track幅との関係を調査した。その結果、glenoid trackに最も影響を与えるのは水平屈曲伸展動作であることがわかった。水平伸展もしくは外旋角度が大きくなるほどglenoidtrack幅は小さくなっていた。水平伸展角度が大きくなるほどglenoid trackは外下方に変位し、水平屈曲角度が大きくなるほど内上方に変位していた。一方、外旋角度が大きくなるほどglenoid trackは外側に、内旋角度が大きくなるほと内側に変位していた。まず特製の脱臼装置を完成させた。まず豚とサルの新鮮標本を用いて設定確認および動作確認を行った。これらの予備実験にて骨頭が前方へ脱臼することを確かめて新鮮遺体を用いて本実験を行った。脱臼実験と並行して、脱臼時に生じる上腕骨頭の陥没骨折(Hill-Sachs損傷)の実験も行った。どの程度の大きさのHill-Sachs損傷が術後再脱臼のリスクになるのかを調べる方法としてglenoid trackがある。このglenoid trackと肩関節可動域との関係を調べた。その結果、最も影響を与えるのは水平屈曲伸展動作であることがわかった。肩関節を脱臼させるための実験装置の準備は概ね整ってきた。脱臼時に位置を計測する磁気センサーの購入を行い、脱臼時の位置の計測確認を行った。脱臼時の力の計測は万能試験機を用いるが、脱臼時の力の計測の確認は終了した。また脱臼時に骨欠損ができていることを確認するためのレントゲン装置の設置、関節内病変の確認のための関節鏡システムの購入も行った。実験の計測システムが完成し、豚や模擬骨での予備実験を終了した後に新鮮遺体の肩を用いて本実験を行う予定である。整形外科今後はまず実験で使用する新鮮遺体肩の採取を行う。その後、新鮮遺体肩を実験装置に固定し、本当に脱臼が可能かどうかの検証実験を予備実験として行う。実験装置に装着するロードセルを購入しなかったことと、万能試験機の修理費等が必要にならなかったことなどが当初の予定よりも費用がかからなかった理由である。物品費の中の実験装置の作製に使用する費用支出が当初よりも少なかったため。初年度で脱臼装置を完成させる計画であったが、まだ特製の脱臼装置作製ができておらず、この経費105万円分が今年度の余剰金となっている。脱臼装置を完成させるためにロードセルを購入し、脱臼時にかかる力の計測装置を作製する。脱臼装置はまだ作製途中であり、特製の脱臼装置が完成すれば当初の計画通りこの作製費用にあてる予定である。
悪性神経膠腫によるDNAミスマッチ修復異常とアリキル化剤ACNU治療効果の検討

31例の脳腫瘍パラフィン標本を用いて、DNAを抽出し患者の白血球内に存在するDNAとマイクロサテライト領域の長さの違いを検討し、マイクロサテライト不安定性、すなわちDNA修復酵素の異常の有無を推測した。さらに患者の転帰を検討することにより、アリキル化剤ACNUの効果との相関も検討した。マイクロサテライト領域は2、5、10、11、13番染色体上の5つのマイクロサテライト領域について検討したところ、10番染色体上のマイクロサテライト領域の不安定性を悪性のgliomaで検出した。この異常はglioblastomaよりもanaplasticastrocytomaで高頻度に検出された。このマイクロサテライト領域はgliomaの悪性化に関与するとされている領域のすぐ近くにあり、この領域の異常を検出している可能性もあった。アリキル化剤ACNUの治療効果との検討では、この薬剤に反応しにくいglioblastomaよりも、この薬剤に反応したanaplastic astrocytomaにおいてマイクロサテライト不安定性を認めた。しかしながらanaplastic astrocytoma8例の検討では、マイクロサテライト不安定性を認めた4例は生存期間が短く、認めなかった4例は生存期間が長かった。マイクロサテライト不安定性はDNA修復酵素の異常を反映しているものと考えられており、gliomaの組織においてこれらの異常が認められたことは、gliomaの悪性化にDNA修復酵素の異常が関与していることが考えられた。<はじめに>近年DNAミスマッチ修復系がアルキル化剤による細胞致死効果に深く関与していることが明らかになってきた。DNAミスマッチ修復系の異常の有無は、マイクロサテライト不安定性を検出することで容易に検出することができる。今回我々はアルキル化剤であるACNUの治療効果と腫瘍組織内のマイクロサテライト不安定性の存在(ミスマッチ修復系の異常)との相関を検討した。<材料と方法>神経膠腫の手術標本31例のパラフィン切片よりDNAを抽出し、5つのマイクロサテライト領域についてPCRを行い、患者白血球DNAのPCR産物と長さの比較した。腫瘍組織内PCR産物の長さが有意に延長しているものをマイクロサテライト不安定性陽性と判定した。<結果および考察>31例の脳腫瘍パラフィン標本を用いて、DNAを抽出し患者の白血球内に存在するDNAとマイクロサテライト領域の長さの違いを検討し、マイクロサテライト不安定性、すなわちDNA修復酵素の異常の有無を推測した。
周期写像の代数的および超越的性質の研究

研究発表のリストにあるように、本年度は、保型函数論、有限群論、ファジイ理論の方面で成果が得られた。とくに、多変数保型函数の領域では、つぎのような著しい結果を得た。多変数保型形式および保型函数の理論は、アイゼンシュタインにはじまる多変数(3変数以上)の二次形式の理論、1950年代の志村・谷山によるアーベル多様体のモデュライの理論を2つの頂点として、形成されている。本年度の研究では、志村・谷山の理論を幾つかの興味深い情勢で、さらに精密化した。すなわち、ある次元nを固定して、ある定められた虚数乗法を含むアーベル多様体の集合に対するモデュライ空間を記述し、志村・谷山の観点を逆にとらえた、1変数保型函数論におけるシュナイダー型の性質を抽出し、定式化することに成功した。これは、研究代表者の1992年の論文を基礎として、パリ、コレージュ・ド・フランスのP.B.Cohenフランクフルト大学の研究発表のリストにあるように、本年度は、保型函数論、有限群論、ファジイ理論の方面で成果が得られた。これは、研究代表者の1992年の論文を基礎として、パリ、コレージュ・ド・フランスのP.B.Cohenフランクフルト大学の
リンパ球のアポトーシス誘導に基づいた移植免疫寛容の導入

我々はこれまでに、新規免疫抑制物質FTY720はリンパ球にアポトーシスを誘導することにより拒絶反応の予防効果を発現することを明らかにしてきた。この薬剤を用いることにより、ラットの心、肝、腎、小腸移植で生着延長効果を認めた。また、イヌ腎移植でも有効であり、さらにシクロスポリン(CsA)やタクロリムス(FK506)とも相乗的な効果のあることを認めた。本年度は最終年度であり、遺伝子導入とFTY720を用いたリンパ球特異的で強力なアポトーシス誘導を行い、安全で効果的な免疫寛容誘導の研究をすすめた。すなわち、Fasリガンド(L)遺伝子を組み込んだプラスミド(pFasL)をリポソーム膜に包埋し、その外側に不活性化した細胞隔合能を持つセンダイウイルス(HVJ)を結合させベクター(HVJリポソーム)として用いた。pFasL-HVJリポソームをドナーラットの門脈から肝臓に注入し、3日後に同種レシピエントに肝移植を行った。その結果、対照に比較して著明な生着延長が得られ、最高で42日間の生存が認められた。浸潤した活性化Tリンパ球に対してアポトーシスが誘導されていることがR73とTUNEL法による二重染色で明らかにされている。この方法だと、肝に於けるFasL蛋白質の発現率は1020%程度であり、また発現期間も1月位で、免疫寛容を誘導するには不十分である。そこで、攻撃してくるリンパ球を減少させることにより、FasL遺伝子発現の効果を高めてやる目的で、移植前2日間(前日と当日術前)だけFTY720を5mg/Kg投与したところ、さらに著明な生着延長効果が得られるとともに50%で100日以上の永久生存が可能となった。今後は更に高率に免疫寛容を誘導させるためにFasLの発現率の向上を目指しているが、FasLを多量に発現させると移植肝に対して激症肝炎を引き起こすことを認めている。それは発現したFasLがMatrix metaloproteinase(MMP)により遊離型となり、それが好中球を呼び寄せるためであることが明らかにされている。そこで、一つには、遺伝子導入とともにMMPインヒビターを用いること、あるいは遊離型とならない膜結合型のFasLcDNAを作成し、それを導入することなどを中心に研究を進めている。本研究の結論として、FTY720の移植前投与と移植臓器へのFasL遺伝子導入により、リンパ球特異的かつ強力にアポトーシスを誘導させることがてき、生体には副作用がなく安全に免疫寛容を成立させうることが明らかにされた。菌類の一種Isaria sinclairiiの培養濾液中から免疫抑制活性生のある物質ISP-1が分離され、それを化学修飾して新たな免疫抑制剤FTY720が得られた。FTY720はリンパ球特異的にアポトーシスを起こすことを明らかにした。ラットの心移植、肝移植に於いて投与量依存的に生着延長効果が得られ、腎、小腸などさまざまな臓器移植に於いても強い拒絶反応予防効果があるとともに、副作用が殆んど認められなかった。とくに、肝移植では移植前2日間だけの投与でも高い効果を得ることができた。作用機序については、リンパ球をFTY720で培養すると、直ちに細胞内のBax蛋白の増加と、Bcl-2蛋白の減少が認められ、bcl-2を強制発現させたJurkat細胞はFTY720に対して抵抗性があった。これらにより、FTY720によるアポトーシスはbcl-2遺伝子ファミリーの制御を受けていることが示された。また、そのアポトーシス誘導には、Fas抗原が関与しないことが明らかにされた。さらに、ラットの肝移植で、遺伝子導入とFTY720の併用によりリンパ球に特異的で強力なアポトーシス誘導を行い、安全で効果的な免疫寛容誘導の検討を行った。すなわち、Fasリガンド(L)遺伝子を組み込んだプラスミド(pFasL)をリポゾーム膜に包埋し、その外側に不活性化した細胞隔合能を持つセンダイウィルス(HVJ)を結合させベクター(HVJリポゾーム)として用いた。このpFasLHVJリポゾームベクターをドナーの門脈から肝臓に注入し、3日後に同種レシピエントに肝移植を行った。この方法では、肝に於けるFasL蛋白質の発現率が低く、免疫寛容を誘導するには不十分であった。そこで、攻撃してくるリンパ球を減少させて、FasL遺伝子発現の効果を高める目的で、移植前の2日間(前日と当日術前)だけFTY720を5mg/kg投与した。FasL遺伝子の単独発現に比較して、さらに著明な生着延長が得られ、50%で永久生存が可能となった。前臨床試験としてFTY720の拒絶反応予防効果をイヌの同種腎移植で検討した。この薬剤はイヌに於ても免疫抑制効果があり、また、シクロスポリン(CSA)やタクロリムス(FK506)とも相乗的な作用があることが認められた。菌類の一種Isariasinclairiiの培養濾液中から免疫抑制活生のある物質ISP-Iを分離し、それを化学修飾して得られた合成物FTY720は元の物質より毒性が少なく、in vitroでの免疫抑制効果がより強力であることが明らかにされた。

FTY720をラットの脾細胞とin vitroで3時間作用させると、電顕像で核の濃染、細胞表面のmicrovilliの消失、及びアポトーシス小体の形成が認められ、アガロースゲル電気泳動ではDNAの断片化に基づく特徴的なラダー像が得られ、アポトーシスが起こっていることが明らかにされた。しかもFTY720によるアポトーシスはリンパ球に特異的であり、多形核白血球、単球などは影響を受けなかった。ラットの心移植に於いてFTY720を0.0510mg/kgの量を経口投与したところ、投与量依存的に生着延長効果が得られた。ラット肝移植に於いても効果が認められ、ラットの生存延長効果は心臓移植よりも優れていることが明らかにされた。また、FTY720を移植前に投与しても効果が認められ、さらに拒絶反応が発現してから投与しても生着は延長した。このようなことから、FTY720はresting cells並びにactivatedcellsに作用し免疫抑制効果を発揮するものと考えられた。作用機序については、リンパ球をin vitroでFTY720と培養するとアポトーシスの成立に先立ってBaxの増加、引き続いてBcl-2の低下が認められ、この薬剤は遺伝子に作用して、プログラム死を起こすことが明らかにされた。Fas抗原との関連性については、その発現していないmutantであるMRL-lpr/lprマウスの胸腺細胞にFTY720を作用させても細胞死が誘導されることから、FTY720によるアポトーシスはFas抗原を介さないものと考えられた。子嚢菌Isaria sinclairiiの培養濾液中から抽出した免疫抑制活性物質ISP-Iを化学修飾して得られた新しい免疫抑制剤FTY720は、ラットの心、肝、腎、小腸などの臓器移植に於て強い拒絶反応予防効果があるとともに、副作用を殆んど認めないことを明らかにした。とくに、肝移植では移植前2日間だけの投与により、高率に免疫寛容状態を成立させることができた。作用機序については、リンパ球をFTY720で培養すると、早期にBax蛋白の増加と、Bcl-2蛋白の減少が認められ、それに引き続きリンパ球がアポトーシスに向かっていくことが明らかにされた。さらに、bcl-2を強制発現させたJurkat細胞ではFTY720に対して抵抗性があり、これらによりFTY720によるアポトーシスはbcl-2遺伝子ファミリーの制御を受けていることが示された。次にFas抗原との関連性を明らかにするためにfas遺伝子がmutantなMRL-lpr/lprマウス(lprマウス)を用いて検討した。その胸腺細胞は抗Fas抗体には抵抗性があるが、FTY720に対しては感受性を認めた。lpr-マウスでは生後4ヶ月目になると全身のリンパ臓器が腫大し、早期に死亡するが、疾患の発症した4ヶ月目から14日間FTY720を投与するとリンパ臓器に集積したCD3+B220+の異常細胞の減少が起こり、リンパ臓器は縮小し、生存も延長した。電顕像ではリンパ球がアポトーシスに陥っているのが認められた。従って、FTY720によるリンパ球アポトーシスの誘導にはFas抗原は関与しないことが明らかにされた。我々はこれまでに、新規免疫抑制物質FTY720はリンパ球にアポトーシスを誘導することにより拒絶反応の予防効果を発現することを明らかにしてきた。この薬剤を用いることにより、ラットの心、肝、腎、小腸移植で生着延長効果を認めた。また、イヌ腎移植でも有効であり、さらにシクロスポリン(CsA)やタクロリムス(FK506)とも相乗的な効果のあることを認めた。本年度は最終年度であり、遺伝子導入とFTY720を用いたリンパ球
オプトジェネティクスを応用した特異的セロトニン神経刺激による強迫性障害の病態解明

麻酔下マウスで海馬を対象としたオプトジェネティクス特異的刺激を行うことで、マウス機能的MRIで光刺激による変化を全脳評価できることが確認できた(Takata 2015)。無麻酔でマウス用MR画像を撮像する実験系を確立し、オプトジェネティクスを用いた刺激を行っても、体動アーチファクトがほとんど起きないことを確認した。麻酔下と覚醒下や、セロトニン作動性抗うつ薬投与前後での検討では有意な差を検出し、高い精度で測定できていることが確認できた。ヒトOCD患者の安静時機能的MRIデータ収集を行い、脳ネットワークを対象とした判別解析にて、線条体・前頭葉ネットワークと関連した仮説を裏付ける結果が得られた。本研究では、これまでに得られた衝動的行動選択とセロトニン神経機能との関連に関する知見を、光遺伝学(オプトジェネティクス)によるセロトニン神経の特異的刺激という技術を遺伝子改変動物に適応することで詳細に検討する。さらに、そこで得られた結果をヒト強迫性障害(OCD)患者のセロトニン作動性抗うつ薬による治療前後の変化と比較検討することで、衝動的行動選択・セロトニン機能障害・前頭皮質-腹側線条体回路の変化を有機的に結びつけたOCD病態モデルの確立を目的とする。オプトジェネティクスを用いた特異的刺激を機能的MRIで評価できる事を確認するため、まずは麻酔下で海馬刺激を行いデータ収集を行った。結果として海馬を含めた全脳の活動を評価する事に成功し、現在国際誌に投稿中である。無麻酔下でマウス用MR画像を撮像する実験系を確立するために、固定具の試作を行った。試作を行っていく中で、光刺激によりマウスに刺激と関連した激しい体動が生じる事があることが確認され、幾度かの改良を要した。何度かの改善を経て現在試作機にて撮像を行い、データクオリティを確認している。ヒトOCD患者の安静時機能的MRI・異時点間選択課題中の機能的MRIデータに関しては、順調にデータ収集を行う事ができている。現段階で健常群・OCD群ともに30名程度のデータ収集を終えており、大規模脳ネットワークを対象とした判別解析を行う事で、90%程度の判別を行う事に成功するなど良好な成果を挙げている。衝動的行動選択とセロトニン神経機能との関連に関する知見を、光遺伝学(オプトジェネティクス)によるセロトニン神経の特異的刺激という技術を遺伝子改変動物に適応することで詳細に検討する。さらに、そこで得られた知見をヒト強迫性障害(OCD)患者のセロトニン作動性抗うつ薬による治療前後の変化と比較検討することで、衝動的行動選択・セロトニン機能障害・前頭皮質ー線条体回路の変化を有機的に結びつけたOCD病態モデルの確立を目的とする。オプトジェネティクスを用いた特異的神経刺激を、マウスにておいて機能的MRIで全脳評価できることを確認するために、まずは麻酔下マウスにて海馬を対象として予備実験を行った。全脳の脳活動変化を評価できることが確認でき、国際誌にアクセプトされた(Takata, 2015)。次に覚醒下でマウス用MR画像を撮像する実験系を確立し、オプトジェネティクスを用いた刺激を行っても、motion artifactsがほとんど起きないことを確認した。しかし、当初予定していた7TのMR機器では想定していた解析に、S/N比がやや不十分であることが判明し、11.7TのMR機器での撮像を行う研究計画へ変更を行った。こちらの機器を用いて、麻酔下と覚醒下の状態の比較や、セロトニン作動性抗うつ薬投与前後での比較の予備的検討をおこなったが、有意な差を検出することができ、実験系が高い精度で確立できていることが確認できた。今後オプトジェネティクスを用いたセロトニン神経刺激データを収集する予定である。ヒトOCD患者の安静時機能的MRIデータ収集は、セロトニン作動性抗うつ薬投与中の患者を中心として実施した。大規模脳ネットワークを対象とした判別解析にて、仮説を裏付ける結果が得られてきているが、汎化性の高い結果を得るためには外部データを入手する必要があり、現在海外の研究者などにアプローチを行っている。26年度が最終年度であるため、記入しない。精神疾患26年度が最終年度であるため、記入しない。無麻酔下でマウス用MR画像を撮像する実験系の確立に関してはやや遅れているものの、ほぼデータ収集に問題ないことが確認できており、今後の進展に大きな支障はないと考える。一方で、ヒトOCD患者の安静時機能的MRI・異時点間選択課題中の機能的MRIデータ収集に関しては、当初の予定よりも早くデータを集める事ができている。無麻酔下でマウス用MR画像を撮像する実験系の確立出来次第、オプトジェネティクスの技術を用いたセロトニン特異的刺激のデータ収集を開始する。
臨床的、機能的、職業的寛解を目指した関節リウマチの治療アルゴリズムの確立

研究計画・方法に示した基準に該当する症例を継続して蓄積している。同時に、TNF阻害薬を使用した症例における解析を行なった。解析については、10年間の使用実績期間をインパクトのある期間に層別解析を行い、TNF阻害薬導入時の患者背景などの解析を行なった。また、TNF阻害薬併用のMTXについても解析を行っており、MTXの最適の使用方法についても検討を行なった。さらに、TNF阻害薬の寛解後休薬についても着目しており、TNF阻害薬導入時・休薬時・休薬後における因子(患者背景・血液検査値・疾患活動性・年間関節破壊進行度など)について解析を行なった。研究計画・方法に示した基準に該当する症例を蓄積している段階である。また、同時にTNF阻害薬を使用した症例(約700症例)における解析を進めている。研究の目的として、「健常人と同様の生産性をもち、関節リウマチ治療での迅速な1年での寛解到達」としており、迅速に効率的に寛解に到達することにより、休職や就業制限からの復帰を短期間で可能にし、労働力の確保しいては生産性の向上に繋がると考える。当院公衆衛生学教室において統計学的手法を指導していただき、10年間の使用実績期間をインパクトのある期間に層別解析(3群)を行い、TNF阻害薬導入時の患者背景(年齢・性・罹病期間・疾患活動性・血液検査値など)など解析を行っている。また、TNF阻害薬の寛解後休薬についても着目しており、寛解後にTNF阻害薬を休薬する期間を可能とする意義は、TNF阻害薬は高価であり医療経済的負担の軽減もあるが、高額医療を払い続ける患者の精神的負担からの解放を意味し、労働意欲を高めると考える。寛解後休薬症例の蓄積も同時に行っており、現在約100症例の解析を行っている。寛解後休薬症例において、休薬後寛解を維持できている症例と維持できていない症例について、TNF阻害薬導入時・休薬時・休薬後1年時・2年時における因子(罹病期間・血液検査値・疾患活動性・関節破壊進行度(modified Sharp法による骨びらんスコア・関節裂隙狭小化スコア、総スコア)など)について解析を行っている。同時に、TNF阻害薬を使用した症例における解析を実行に移している。研究の目的として、「健常人と同様の生産性を持ち、関節リウマチ治療での効率の良い迅速な1年での寛解到達・維持」としており、ロスの少ない速やかな寛解の到達・維持が、休職から復職あるいは就業制限の緩和・解除を短期間で可能にし、労働力の確保(最低限の損失)しいては生産性の向上に繋がると考える。解析に関しては、まず10年間の使用実績期間をインパクトのある期間に層別解析(3群)を行ない、TNF阻害薬導入時の患者背景(年齢・性・罹病期間・疾患活動性・血液検査など)などの解析を行っている。次に、TNF阻害薬併用のMTXについても解析を行っており、MTXの最適の使用方法についても検討を行っている。寛解後休薬症例の解析を行っており、TNF阻害薬導入時・休薬時・休薬後1年時・休薬後2年時における因子(患者背景・血液検査値・疾患活動性・年間関節破壊進行度(modified total sharp score法による骨びらんスコア・関節裂隙狭小化スコア・総スコア)など)について解析を行っている。研究の目的として、「健常人と同様の生産性を持ち、関節リウマチ治療での効率の良い迅速な1年での寛解到達・維持」としており、ロスの少ない速やかな寛解の到達到達・維持が、休職から復職あるいは就業制限の緩和・解除を短期間で可能にし、労働力の確保(最低限の損失)しいては生産性の向上に繋がると考える。

また、TNF阻害薬併用のMTXについても解析を行っており、MTXの最適の使用方法についても検討を行なった。さらに、TNF阻害薬の寛解後休薬についても着目しており、TNF阻害薬導入時・休薬時・休薬後における因子(患者背景・血液検査値・疾患活動性・年間関節破壊進行度など)について解析を行なった。研究実績の概要で説明したように、種々の解析については順調に進展しているが、研究計画・方法に示した症例数の蓄積が遅れている点で「やや遅れている」とした。リウマチ・膠原病学対象症例数を増やすことを課題としている。対象症例については、TNF阻害薬の使用を検討していく。同時に、関節リウマチのTNF阻害薬治療による寛解導入・維持・寛解後休薬が及ぼす労働生産性の向上などに関する解析も行っていく。1で説明した解析は順調に進展しているが、適切な症例数の蓄積が遅れている点で「やや遅れている」とした。対象症例を増やすことを課題としている。適応症例については、積極的にTNF製剤を導入していく。また、関節リウマチのTNF阻害薬治療による寛解導入が及ぼす生産性の向上・労働力の確保に関する解析も同時に行なっていく。
生体観測用の高分子フォトン走査トンネル顕微鏡システムの開発

生体試料の観測において、フォトン走査トンネル顕微鏡(フォトンSTM)は、空気中や液体中で、生きたまましかも非破壊的に高分解能観測が可能である。本研究では、我々の、光ファイバーを化学エッチングによる先鋭技術を用い金属蒸着により、30nm以下の開口をもつプローブ作成することに成功している。本研究では,そのプローブを用いて生体試料観測用フォトンSTMシステムを開発し、金粒子による本システムの評価を行った。本システムでは、Arイオンレーザからの光を開口つきプローブに導入し、試料を照射した。試料による散乱光を対物レンズで集め、光電子倍増管により検出した。試料は3次元移動可能なピエゾ装置に固定されており、試料-プローブ間距離を一定に保ちながら試料の2次元分布を測定する。試料-プローブ間のVan der waals力を利用し、試料-プローブ間距離を一定に保った。試料としてスライドガラス上に固定された鼠の脳の神経細胞を用いた。試料は染色されてるため、細胞像が高コントラストで観測できた。さらに、細胞間を結ぶ軸索内に信号伝達するためのmicrotubulinが束状になってる構造も初めて光で観測できた。一個のmicrotubulinの半値幅は約26nmであり、これは電子顕微鏡顕微鏡による結果(25nm)とほぼ一致する。本システムの高分解能を評価するため20nm直径の金粒子の観測し、像のフーリエスペクトルを計算した。金粒子を空間的にランダムな2次元ドット配列に置き換え理論的にフーリエスペクトルも計算した。これらからシステムの伝達関数を決定し、カットオフ空間周波数を求めた。その値は0.8nmに相当し、開口の直径より小さい値である。これは開口つきプローブの先端部分での金属とガラスの境界に高い空間周波数を持つevanescent場により生じるものだと考えられる。
複素有界領域の幾何学的解析構造に関する研究

当初の研究目的は、被覆写像に対して、両多様体の多様複素グリーン関数及び対応する不変計量に関する不等式がいつ等号になるか、例で調べてみること。等質有界領域のバーグマン計量に対する正則双断面曲率が非正であれば、擬対称領域かという問題に解答をつけること。この2点であったが、いずれも記述すべき進展が見られなかった。この問題に関連して、次の3つの新しい結果を得た。(1)上に伸びる連分数展開を考えることによって、閏年を4年に一度置き、それを32回に一度やめ、そのやめることを691回に一度やめ、それをやめることを、703回に一度やめれば、真の時間と暦上の時間との違いは、常に24時間以内であることを示した。(2)互いに素なAとBに対して、pはAの平方とBの平方の和であり、奇数であるとする。このとき、(i)直交する二つの位数pのラテン方陣で、それぞれが、対蹟的完備であるものが存在する。ここで、ラテン方陣が対蹟的完備であることは、すべての対蹟の関係にある位数がAの方陣と位数Bの方陣を合わせたものに文字の重複がないことである。(ii)位数pの魔方陣で、対蹟的完備であるものが存在する。ここで、魔方陣が対蹟的完備とは、すべての対蹟の関係にある位数がAの方陣と位数Bの方陣を合わせたものの数の和が定和になることである。(3)5以上の自然数Nに対して、合同変換群が位数Nの回転群でしかないような1つの平行6辺形による平面のタイル張りが存在することを示した。1.研究の目的は、次の2つである:(1)2つの複素有界領域NからMへの正則被覆写像fが与えられたとき、Mにおける多重複素グリーン関数の、Nにおける多重複素グリーン関数の値のfの原像にわたる和による下からの評価式において、いつ等号がなりたつかを調べる。(2)等質有界領域のバーグマン計量の正則双断面曲率の上からの評価を正規j-代数というバーグマン計量を正確に表現しているリー環の研究を通して行う。2.本年度に得られた主な成果は、次の通りである:項目1の(2)の研究を深める為、正規j-代数の言葉で、バーグマン計量の曲率作用素の構造、特に接空間の対称積の自然な分解による曲率作用素の成分がどこで消えるかを調べた。この結果を使って、曲率作用素の固有値分布が分かりやすくなった。3.上記研究課題の研究を支える研究で、研究分担者によって行われた内容は、次の通りである:渡辺教授は、リーマン多様体の接バンドル上の複素構造、ケーラー構造、概四元数エルミート構造等を分類し、幾何学的性質を調べた。古田助教授は、近ケーラー弱対称多様体等に関する研究を行った。野口教授は、正則写像の値分布と代数多様体の有理点分布について研究し、関数体上の値分布理論を証明し、正則曲線のラング予想を準アーベル多様体に対して証明した。児玉教授は、解析的楕円体をその境界の一部分による性質で特徴付けを行った。清水助教授は、実有界領域を基とする柱領域の解析的自己同型群と同値問題を調べた。4.米国から、教授と助教授を迎え、項目1の研究についてのレビューを受けた。1.本研究の目的は、次の2つである:(1)2つの複素有界領域NからMへの正則被覆写像fが与えられたとき、Mにおける多重複素グリーン関数の、Nにおける多重複素グリーン関数の値のfの原像にわたる和による下からの評価式において、いつ等号がなりたつかを調べる。

(2)等質有界領域のバーグマン計量の正則双断面曲率の上からの評価を正規j-代数というバーグマン計量を正確に表現しているリー環の研究を通して行う。2.本年度に得られた主な成果は、次の通りである:項目1の(1)の研究を深める為に、2つの複素2変数単項式の絶対値が1より小という領域の点の原点からのカラテオドリ距離を多項式の次数の比を連分数展開の近似分数で表すことを確認し、それの類推として閏年の決め方が、新しいタイプの連分数で説明出来ることを示した。そして、その連分数の理論から、別の決め方をすれば、真の年と暦上の年が1日以上狂わないことが解った。3.上記研究課題の研究を支える研究で、研究分担者によって行われた内容は、次の通りである:渡辺氏は、リーマン多様体の接バンドル上の、概四元数エルミート構造等の幾何学的性質を調べた。古田氏は、近ケーラー弱対称多様体等に関する研究を行った。阿部氏は普遍関数や特殊な有理型関数の研究を行った。野口氏は、正則写像の値分布と代数多様体の有理点分布について研究した。児玉氏は、解析的楕円体をその境界の一部分による性質で特徴付けを行った。清水氏は、球面状境界点をもつ一般複素楕円体の特徴付けを行った。4.2000年2月に上記研究課題に関連して、「代数的幾何的解析的数学とその応用」という小研究集会を富山で行い、27名の研究者が集い討論を行った。当初の研究目的は、被覆写像に対して、両多様体の多様複素グリーン関数及び対応する不変計量に関する不等式がいつ等号になるか、例で調べてみること。等質有界領域のバーグマン計量に対する正則双断面曲率が非正であれば、擬対称領域かという問題に解答をつけること。この2点であったが、いずれも記述すべき進展が見られなかった。この問題に関連して、次の2つの新しい結果を得た。(1)互いに素なAとBに対して、pはAの平方とBの平方の和であり、奇数であるとする。このとき、(i)直交する二つの位数pのラテン方陣でそれぞれが、対蹟的完備であるものが存在する。ここで、ラテン方陣が対蹟的完備であるとは、すべての対蹟の関係にある位数がAの方陣と位数Bの方陣を合わせたものに文字の重複がないことである。(ii)位数pの魔法陣で、対蹟的完備であるものが存在する。ここで、魔方陣が対蹟的完備とは、すべての対蹟の関係にある位数がAの方陣と位数Bの方陣を合わせたものの数の和が定和になることである。(2)5以上の自然数Nに対して、合同変換群が位数Nの回転群でしかないような1つの平行6辺形による平面のタイル張りが存在することを示した。
高度好熱菌のシリカ誘導性タンパク質の発現機構の解明と異種タンパク質生産への応用

高度好熱菌Thermus thermophilusのシリカスケール形成機序を解明するため、ゲノム解読が完了しているT. thermophilus HB8株に対し過飽和シリカ刺激による発現プロファイルを経時的に解析した。これによって過飽和シリカに応答し、Sipの発現を誘導する遺伝子を網羅的に解析できた。この結果、Sipは環境中の鉄飢餓感知システムにより制御されていることが分かった。Thermus属がシリカ沈殿を形成する生理学的な意義を理解するために、様々な抗生物質とシリカを共存させた系においての菌の挙動について検討を行った。バイオシリカの生理学的意義に関しては、シリカに包埋されることによるUV耐性の向上が報告されているが、それ以外に関する報告はない。本研究では、膜の構造を破壊するコリスチン、ポリミキシンなどの抗生物質に対して、シリカ添加時の菌の増殖が増大する結果が得られ、菌によって形成が促進されたバイオシリカが細胞膜の保護に機能していることが示唆された。本条件下では、ゲノム上のいかなる薬剤耐性遺伝子も転写増大しておらず、この抗生物質耐性獲得の要因がバイオシリカ形成によるものであることが示された。また、シリカ刺激によって発現量が著量増加したsipは鉄結合性ABCトランスポーターのsolute-binding proteinと高い相同性が示されたが、鉄結合性ABCトランスポーターは、近接した遺伝子上にコードされたsolute-binding protein、permiase、ATPaseから構成され、一般に病原菌の宿主への感染、病原性の発露時や菌体の鉄欠乏状態時に鉄取り込みに機能するとされるが、シリカとの関連性は報告されていないため、sipの発現機構を解明した。まず、転写開始点をプライマー伸長法及び5'-RACE法にて決定し、プロモーター部位を推定した。次に、過飽和シリカ添加培地および鉄除去培地中でそれぞれ培養した菌体からmRNAを精製し、ノーザンハイブリダイゼーション及びqRT-PCRを行ったところ、sipはモノシストロニックに転写され、過飽和シリカおよび鉄飢餓刺激の両条件で著しい転写誘導が認められた。このことから、sipの発現は、溶在するコロイド状シリカ表面に鉄イオンが吸着して生じる鉄欠乏を端緒とすることが示唆された。Thermusのシリカスケール形成機序を解明するため、ゲノム解読が完了したThermus thermophilus HB8株に対し過飽和シリカ刺激による発現プロファイルを経時的に解析することとした。これによって過飽和シリカに応答し、Sipの発現を誘導する遺伝子を網羅的に解析することで、特に、バイオミネラリゼーション形成の初期のメカニズムを解明することを目的とした。T.thermophilusHB8を70°C、160rpmの条件で前培養し、50mlのTM培地でO.D._<660>=0.6まで振とう培養した。培養液を集菌し上澄み液を除いた後に、コントロールとして同量のTM培地、サンプルとして同量のシリカ(600ppm)添加TM培地を加え、それぞれを70°Cでさらに15分、もしくは60分培養した。これらの培養液から集菌した細胞の全RNAを抽出した。抽出したRNAを鋳型としてcDNAを合成し、GeneChipを用いてトランスクリプトーム解析を行った。その結果、Fe^<3+>結合性ABCトランスポーターのsolute-binding proteinであるTTHA1628は、TTHA1629、TTHA1630とオペロン構造をとり、3価の鉄イオンの取り込みに機能すると考えられた。シリカ添加15分後ではTTHA1628の転写量増大が見られたのに対し、TTHA1629、TTHA1630の転写量の増大は検出されなかったのに対し、60分後では全ての遺伝子が転写増大していたことから、シリカ結合には鉄結合タンパク質が関与していることが推察された。さらに15分後でみられるTTHB07がコードするSurEは、ストレス反応に関与していることが示唆された。本遺伝子産物はヌクレオチドに特異的なホスファターゼであり、DNAやRNAに対し働き、シリカ添加に対し、ストレス軽減のために働いているのではないかと推察された。シリカスケール中より分離したThermus thermophilusTMYIま、過飽和シリカ含有培地中で非晶質シリカ沈殿を形成する。この際、シリカは菌の生育を阻害しないが、細胞表層に著量のタンパク質発現を引き起こす。本タンパク質はシリカ刺激に応答し発現することからsilica-induced protein (Sip)と命名されたが、同様の誘導産生はT.thermophilus HB8を含む勉Thermus属細菌で広汎に観察された。当該年度は、過飽和シリカ刺激によるシリカ沈殿(バイオミネラリゼーション)機構を転写レベルで網羅的に解析し、特に細胞のシリカ刺激受動と刺激伝達機構の解明を目的として研究を行った。まず、T.thermophilus HB8を70°C、160rpmで培養し、回収した菌体をシリカ添加(600ppm)および無添加のTM培地にそれぞれ懸濁後、15分、60分培養した。これらの培養菌体から全RNAを抽出し、これを鋳型としてcDNA合成を行った。

これらをGeneChipカスタムアレイとハイブリダイズしてトランスクリプトーム解析を行った。その結果、sip(Gene ID : TTHA1628)の転写量は15、60分後では、約4倍、約8倍に増大した。ところが、Sipと共にFe^<3+>結合性ABC transporterを構成し、オペロン構造をとると推定されるTTHA1629、TTHA1630の転写量増大は15分後では観察されなかった。よって、sipは単なる鉄輸送のABC transporterではなく、シリカに特異的な機能を有することが推察された。また、各時間の転写量が有意に異なる遺伝子が検出され、各遺伝子上流の配列からプロモーターを検索し、primer extension法などにより転写開始点の決定とレポーター遺伝子を用いたプロモーター強度の測定を行った。これらの結果を総合して、シリカ刺激応答やバイオミネラリゼーションに関与する遺伝子群を明らかにできた。
分子作用場の解析理論と解析システムの開発

結晶場の解析理論に対しては種々のアプローチが可能であるが本研究においては結晶解析の結果得られる電荷密度分布と電子波動関数を関連づける試み、および更に基礎的な分子内電子分布表現法としての電子数の解析を行った。前者においては従来X線結晶解析から得られる電子密度が電気モーメント等の物理量を与えることはできても更に精密な情報としての一次密度行列や電子波動関数を導くことができなかった理由を考察し、その理由が波動関数の反対称的と考慮していなかった為であることをつきとめた。そこでorthonormalityを確立する為の最小二乗精密化法を創出し、実際の解析データに応用することのできる可能性があることを確かめた。後者においてはabinitio分子軌道法計算によって非環式および環式炭化水素、アルコール、エーテル、過酸化物の電子数を正確に求め、有機化合物のみならず無機化合物にたいしても球平的電子密度増分が段階的に形式的に与えた酸化数に比例して変化することを認めた。解析システムの開発は分子性結晶のパッキング状態の理論的予言および結晶のパッキングエネルギー計算方法の確立という二つのアプローチを試みた。前者に関して本年度は根幹となる分子動力学計算プログラムを作成し、真空中に置いた氷の融解および蒸発過程のシミュレーションを行ってプログラムの動作を確認した。後者に関しては結晶の画像表示の為の高速ワークステーション用システムを開発し、テストを完了した。このシステムを用いて単位セルを中心とする3×3ケの格子を含む系に対する分子力学計算を試行したが、分子間ポテンシャルとくに水素結合力の評価に問題のあることが明らかになった。一方分子配列の設計制御の基本データとなる新しい電荷移動錯体を二、三合成し、そのX線結晶解析を行った。
bクォークからdクォークへの崩壊過程における新物理の探索

Bファクトリー実験において、bクォークからdクォークへの遷移における新物理の探索を行うことがこの研究のである。研究代表者は、Bファクトリー実験(Belle実験)において、CPの破れの解析グループの元リーダーの一人として、CPの破れの測定から標準模型を超える物理の探索を行ってきた。アクティビティーとしては主に二つあり、一つはbクォークがsクォークへ遷移するときのCPの破れと、bクォークがuクォークへ遷移するときの分岐比及びCPの破れの測定である。両者は、本研究課題であるbからdクォークへの遷移の解析において、解析方法・物理的意義としての基盤を与える。前者の解析では、BO→KOpiOの解析の推進を行っていて、2010年に論文出版の運びとなった。後者については、B中間子がa1piという粒子に崩壊する過程において、海外の研究者(J.Dalseno, Max-Planck-Institute)と連絡を取り合いながら、進めていた。特に、a1粒子の解析方法についての取り扱いなどについて意見交換を行っていた。また、奈良女子大学准教授宮林謙吉氏を岡山大学にお招きし、Bファクトリー実験の現状と将来についての講演をして頂き、解析グループの現状や今後の指針などについて、意見交換を行った。また、国内・海外の研究者らと協力して、次期Bファクトリー実験(Belle II)で期待される物理についての論文(arXive:1002.5012)の一部の執筆を行った。特に、本研究課題と密接に関連するCPを破る位相φ2測定の部分について重点的に研究を行い、Belle II実験で得られるφ2の測定精度についての評価を行った。結果、その精度は約1度と見積もられた。これは、強い相互作用・電磁相互作用から来る理論的不定性と同レベルで、Belle II実験は小林・益川行列パラメータを究極の精度で求めることができ、なおかつ新物理にも十分感度を持つ実験であることが示せた。bクォークからdクォークへ崩壊する過程は、素粒子の標準模型では、FCNC(Flavor Changing Neutral Current)相互作用でしか起きない。これはbクォークよりも20倍程度重いtクォークとWボソンが、不確定性原理により一瞬だけ現れる相互作用である。もし、この相互作用に標準模型に含まれていない未知の素粒子が存在すると、標準模型の予想と異なる効果が表れると考えられている。本研究では、第三世代のbクォークから第一世代のdクォークへ遷移する過程を詳しく調べ、未知の素粒子(新物理)の探索を行う。平成20年度は、前年度からの研究の続きで、B中間子が4つの荷電π中間子終状態への崩壊する過程の研究に携わった。この過程には二つのρ0中間子が終状態に含まれており、小林・益川理論が予言しているCPを破る位相φ2の測定に利用できる。この崩壊過程には、f0や非共鳴状態の寄与があるので、それらを正確に差っ引き、その結果の正しさを確認する作業が必要である。この作業は難しく、試行錯誤とBelleコラボレータとの議論に末にようやく結論を出すことができた。残念ながらρ0ρ0の信号を発見することはできなかったが、ゆるやかなφ2の制限を与えることができた。また、純粋なbクォークからdクオークへの遷移であるBO→KSOKSO崩壊におけるCPの破れも測定した。測定結果は、標準模型の予想値と無矛盾であった。測定方法を確立したので、今後さらにデータが溜まればより精度よく新物理に対する知見を得ることができる。