hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
網膜神経節細胞特異的タンパク質Ｈｅｒｍｅｓによるアポトーシス制御機構の解析

網膜は複数種の神経細胞から構成される組織である。RNA結合タンパク質HERMESは網膜組織の最内側面に位置する網膜神経節細胞(以下、RGC)に強く発現し、RGC軸索の終末における分岐形成に必須の働きをすることが示唆されている。これまでに私は、マウス網膜由来の神経系細胞株RGC-5を用いた解析から、薬剤刺激によって神経様に分化させたRGC-5細胞において、HERMESがストレス顆粒の代表的な構成因子として知られるG3BP1や核局在性RNA結合タンパク質NonO、PSFなどとともに、軸索や樹状突起へのRNA輸送および局所的な翻訳制御に働く神経RNA顆粒を形成することを明らかにした。興味深いことに、NonO、PSFは分化誘導前のRGC-5細胞では核にのみ存在したことから、RGC-5細胞の神経様分化をきっかけとしてNonO、PSFの核外移行、および、HERMES、G3BP1などとの細胞質性顆粒形成が誘導されることが示唆された。そこで私は、神経様分化時に働くNonO、PSFの核外移行制御機構の解明を目標に、RGC-5細胞をモデル系として翻訳後修飾に着眼した解析を行っている。阻害剤やsiRNAによる検討から、NonO、PSFの核外移行、および、細胞質における顆粒形成がSUMO化修飾によって制御されることを見出した。また、RGC-5細胞においてNonO自身がSUMO化されていることを確認しており、SUMO化の標的になり得る配列に変異を導入した変異型NonOは、分化誘導前のRGC-5細胞においても細胞質で顆粒を形成することを明らかにした。さらにRGC-5細胞の神経様分化に伴って、特定の脱SUMO化酵素のタンパク質量が増加することを見出した。現在は、SUMO化によるタンパク質の細胞内局在制御機構の詳細について、更なる検証を行っている。27年度が最終年度であるため、記入しない。私は網膜組織においては神経節細胞特異的に発現するRNA結合タンパク質HERMESの機能について、マウス網膜由来培養細胞RGC-5を用いてアポトーシス制御の観点から解析を進めてきた。その過程でHERMESタンパク質が細胞質に局在して顆粒を形成することを見出し、またHERMESとともに顆粒を構成するタンパク質としていくつかのRNA結合タンパク質を同定した。RGC-5細胞は非選択的PKC阻害剤スタウロスポリン(STS)やヒストン脱アセチル化酵素阻害剤の刺激によって神経細胞様に分化する。HERMES顆粒の構成因子は化合物刺激によって神経様に分化したRGC-5細胞(以下分化した細胞)と未刺激の細胞(以下未分化細胞)で異なっており、分化した細胞ではパラスペックルの構成因子として知られる核内RNA結合タンパク質NonO、PSFが細胞質に移行してHERMESとRNAを含む顆粒(リボヌクレオタンパク質顆粒、以下RNP顆粒)を形成することを見出した。この顆粒は神経突起にも局在した。一方でストレス顆粒の構成因子であるG3BP1は細胞の分化状態にかかわらず常にHERMES顆粒に含まれた。分化した細胞の細胞質に形成されるHERMES、NonO、PSF、G3BP1を含むRNP顆粒は、ストレス条件下においたRGC-5細胞やSTSで刺激したHeLa細胞では形成されず、またキネシン分子モータータンパク質と神経突起で共局在したことから、神経突起へのmRNA輸送や局所翻訳を制御するために神経細胞特異的に形成される神経RNP顆粒であることを提唱した。この成果は全て私が解析を行ったものであり、筆頭著者の論文としてGenes to Cells誌に掲載が許可されている。

これまで不明であったHERMESの分子機能を明らかにするとともに、HERMESが網膜組織においては神経節細胞特異的に発現することの生理的意義の解明の糸口をつかむことができた。私は、神経節細胞ではHERMESが神経RNP顆粒にリクルートされることで、HERMESとの相互作用を介して顆粒に取り込まれるRNAやタンパク質の構成に神経節細胞特異性が付与されるのではないかと考えている。またこれまでの成果から、HERMESを構成因子とする神経RNP顆粒はどのような機序で形成されるのか、何を運んでいるのか、運ばれたRNAはどのような転写後制御をうけるのか、や、パラスペックルの構成因子として知られるNonOやPSFがなぜ分化した細胞では細胞質に移行するのか、それはどのような機序で制御されているのか、他の神経細胞ではどうなのか、といった今後さらなる発展が期待できる課題を得ることができた。27年度が最終年度であるため、記入しない。今後はHERMESを構成因子とする神経RNP顆粒がどのような機序で形成され、どのようなRNAを運び、それらがどのような転写後制御をうけるのか、またNonOやPSFの細胞質移行がどのようにして制御されるかについて検討する。具体的にはHERMESやNonOと相互作用するタンパク質を質量分析によって同定し、また他の神経由来培養細胞を用いてHERMES以外の神経RNP顆粒の構成因子の動態を調べることで、RNP顆粒の形成や局在を制御する因子の候補を得る。さらに、HERMESやNonOと相互作用するタンパク質はどういった転写後制御に関わるタンパク質なのか、それらとの結合が報告されているRNAはHERMESを構成因子とする神経RNP顆粒に含まれるのかなどを調べることで、神経節細胞特異的に形成される神経RNP顆粒の構築から転写後制御までの全体像を明らかにする。
日本の主婦・母親像の形成―衣生活の変容から考える女性と家族の研究

賢母良妻教育が提唱された明治から大正期の主婦の装いを英国と比較検討した。英国の主婦には家政を取り仕切る女主人の役割と、他者を意識した装いが求められた。一方、日本の主婦にも家政を担う役割が求められたが、社会とのつながりを意識した装いではなかった。また、家事使用人の人材不足から、自らが家事を行う主婦へ転換した。家事労働着が家庭着と称され、家事労働を行うための装いが主婦の装いとなった。良妻賢母の姿は家事労働をする姿に集約された。さらに、戦後の寝衣の変遷について検討した。夫の視線を意識するネグリジェから、カジュアルなスウェット等への移行の背景には、生活空間や夫婦関係の変化が関与している。平成26年度には(一社)日本家政学会にて口頭発表を行い、タイトル「イギリス19世紀末から20世紀初頭にかけての主婦の装い」として、近代に日本の家族観、家庭観に強く影響を及ぼしたイギリス社会の家庭生活、主婦像についてその服飾行動から検証した。ミドルクラスの主婦に求められたもてなしを司る女主人の役割は、その家庭の文化度を測る指標となり、主婦の装いは教養や社交術を表明する重要な役割を果たしていたことを明らかにした。また、国際服飾学術会議のポスターセッションではタイトル「良妻賢母の姿ー近代日本の主婦の装いー」として、20世紀初頭(大正初期)の日本における主婦・母親の立場と装いに着目し、服装行動から女性に求められた規範を検討をおこなった。大正初期の主婦は家庭内労働を担う立場となっていたため、その装いは「質素な服装で、家事に励んでいる姿は、却って傍からは立派にみえる。」と記事にあるように、行為と結びつくことで「良妻賢母」を具現化していたことを明らかにした。また、申請時には平成27年度以降に予定していた海外調査を、スケジュール調整がついたため、平成26年9月に実施した。調査先はイギリスのヴィクトリア&アルバート美術館(ロンドン)である。主に所蔵文献資料の閲覧作業を行った。特に1896-1916年にロンドンにて出版された女性雑誌“Lady's Realm"を調査し、女性と家事労働、ファッションに関する記事などを収集することができたことは、今後の研究に大きな示唆を得ることができた。平成27年度には(一社)日本家政学会第67回大会においてタイトル「イギリス20世紀初頭の家事と主婦の装い」について口頭発表した。平成26年度のイギリス出張で収集した雑誌資料“The Lady's Realm"などを利用した。同誌は1896年に創刊された女性向け月刊誌で、連載小説、家庭生活一般、職業、ファッションにいたるまで、当時の女性の関心事を幅広く網羅している。20世紀初頭のイギリスの主婦の装いについて家事労働との関わりにおいて検討した。現代ではヴィクトリアン・メイドのエプロン姿は使用人の象徴的なスタイルでもあるが、当時の社会情勢の変化に伴う彼女たちの減少はそのエプロンを女主人であった主婦に着用させることになった。しかしながら、その背景をさらに考察するとそこには学校教育などを通して、合理的な家事を習得することで、家事が新たな営みに転換されていること、古き良き時代のイメージを模索する姿が関わりあい、誕生した新たな主婦像であったと結論付けた。さらに7月以降に、研究分担者として難波知子(お茶の水女子大学)を加え、資料調査を推進した。主に石川武美記念図書館所蔵『主婦の友』を調査し、大正期の主婦の衣生活、被服費等の情報を収集した。次に、研究代表者所属機関が所蔵している明治末期から大正期の雑誌『婦人世界』(マイクロフィルム)の情報分析を行った。課題の2年目に当たり、前年度に収集したイギリス雑誌資料の内容を検討することができた。また、共同研究者を加えたことによって調査作業が著しく進捗した。備品費を使用してデジタルフィルムスキャナおよび19世紀イギリス女性の文献資料のマイクロフィルムを購入できたので、資料収集や調査環境面が充実した。研究代表者は明治末の良妻賢母の様相について、同時期の雑誌『婦人世界』を中心に分析した。西洋からの洋服文化の流入といった物質的な側面だけではなく、服装規範、着装意識といった心理的な側面での西洋からの影響も認めることができた。主婦の装いには良人を悦ばせるためのみならず、他者との交際を勧め、他者を意識した装いを提言されていた。研究分担者は大正期の主婦がつかさどる家計における被服費について、同時期の雑誌『主婦の友』および『家計調査集成』(多田吉三編、青史社、1991年)所収の大正期の家計調査を中心に分析した。被服費の家計に占める割合を明らかにするとともに、和服と洋服の二重生活の改善が叫ばれた大正期の衣生活を家庭の主婦がどのように計画立て、運用したのかを考察した。これらの研究成果については(一社)日本家政学会大会(2016年5月於金城学院大学)においてそれぞれが口頭発表『明治末期の良妻賢母の装い』『大正期の家庭における被服費ー家計に占める割合と家計管理ー』を行った。また、研究代表者は戦後の家庭生活における寝衣の様相について、一般紙『朝日新聞』『読売新聞』、婦人雑誌『婦人世界』『婦人倶楽部』を中心に分析した。この研究成果についてはThe 27th International Costume Congress (Korean Society of Costume、国際服飾学会、Chinese Textile and Clothing Association共催、2016年8月於Seoul)においてポスター発表を行った。

本発表をもとに主婦の寝衣の変化とニューファミリー・友達夫婦といった家族形態の関わりに着目し論文「第二次大戦以降のナイトウエアから考える主婦と家庭生活」を国際服飾学会に投稿した。研究代表者は20142016年度まで20世紀初頭イギリスおよび、明治大正の主婦の装いと良妻賢母との関わりについて多角的に検討してきた。当初はこれらの結果を独立した論文にまとめる計画を立てていたが、日英の事象を横断的に分析することで新たな見解を述べることができるのではないかと、年度途中で構想に変更が生じた。そのため、研究成果を論文として公表する時期が遅れている。研究分担者は家計費、被服費に関する資料の収集を継続し、研究成果を論文とし、公表する予定である。明治後期以降に広がった良妻賢母思想のなか、家族とのかかわりや家庭生活の中で作り出されてきた日本の主婦の姿を検証した。平成26・27年度は日本に多様な影響を与えた西洋の文化・生活に着目し、イギリスにおける当時の主婦の姿を検証した。主婦に求められた能力として家庭の女主人としての役割があり、その理想の装いは明るさ、軽やかさであった。また、家事使用人の減少という社会的な問題と相まって、主婦には家事労働に励む姿が求められるようになったのが20世紀初頭のことであった。平成28・29年度には、1899年(明治32年)の高等女学校例の中に「賢母良妻教育」が提言されて以降の、日本の主婦の姿を当時の婦人雑誌から検証した。そこにみられるのは、西洋の家庭観、家族観からの服装規範における影響であり、良人を喜ばせる妻の行為としての衣生活が確認された。また、粗服を着用することが賢母としての子への教えの意味が認められた。また、大正時代になり、社会での経済的混乱期を迎え、女中払底が問題となると、家事労働の中での衣類の調達・整理等に関する労力の削減が提案されている。主婦が家事労働の軽減、省力化を図る中で、家族の衣類を和服から洋服へと変化させていくことは、主婦の行為が家族の衣生活を作り出すことに加え、次世代の衣生活を変化させていく一因となったといえよう。以上の内容をもとに日本の主婦像について、影響を与えたイギリスとの比較において論考し、投稿論文を作成した。また、家事労働の観点から衣生活の変容をとらえる新たな視点を見出すことができた。また、平成28年度にはこのほかに第二次大戦以降の日本の主婦の寝衣について取り組んだ。主婦にとって寝衣とは夫婦や家族のコミュニケーションツールの一つであり、家族とのかかわり方の変容を表象していたと結論付け、論文として発表した。賢母良妻教育が提唱された明治から大正期の主婦の装いを英国と比較検討した。英国の主婦には家政を取り仕切る女主人の役割と、他者を意識した装いが求められた。一方、日本の主婦にも家政を担う役割が求められたが、社会とのつながりを意識した装いではなかった。また、家事使用人の人材不足から、自らが家事を行う主婦へ転換した。家事労働着が家庭着と称され、家事労働を行うための装いが主婦の装いとなった。良妻賢母の姿は家事労働をする姿に集約された。さらに、戦後の寝衣の変遷について検討した。
異型配偶の進化と配偶子の走光性及び性誘因機構

同型配偶から異型配偶への進化については、数理生物学の理論によってその進化生態学的条件が詳細に解析され数多くの論文や解説書が公表され一般にも注目されている。しかし、これらの理論の根拠となる仮定はかなり単純化されており、配偶子の挙動や接合子の適応度と個体の体制分化に関する実測データの集積の必要性が指摘されている。そこで異形世代交代を行う海産緑藻について、配偶体と胞子体の体制分化の程度を比較考慮しながら、同型配偶から異型配偶への進化が雌雄配偶子のサイズ、鞭毛の長さ、走光性、遊泳速度、遊泳持続時間、性誘因機構がどのように関与しているかを研究した。1)配偶体が1層の葉状体であり胞子体が単細胞のシストであるエゾヒトエグサ(Monostroma angicava)では、僅かに異型の配偶子間で受精が起こる。雌雄の配偶子は共に走光性を示し、遊泳速度と遊泳持続時間について僅かに雌雄間で差異が認められた。雌雄個体が各々配偶子生産に当てる資源量は等しく、異型配偶子の生産は配偶子形成に関与する細胞分裂回数の差異に起因し、雄は雌の2倍の数の配偶子を放出している。2)配偶体が羽状の管状多核体であり胞子体がミクロの糸状体であるハネモ(Bryopsis plumosa)では、明確に異型の配偶子間で受精が起こる。雄配偶子には眼点が無く走光性を示さないが、雌配偶子には眼点があり走光性を示す。遊泳速度と遊泳持続時間について雌雄間で顕著な差異が認められ、雄配偶子はより早く泳ぐが短命である。雌配偶子嚢及び雌配偶子はフエロモン様物質により雄配偶子を誘因する。3)配偶体が嚢状多核体であり胞子体が直立分岐糸状体であるツユノイトケバ(Derbesia tenuissima)では、ハネモよりさらに明確な異型の配偶子間で受精が起こる。雌雄の配偶子は共に走光性を示さず、性フエロモンが受精に重要な役割を果たしていることが推察される。
構造が明確なナノスケールポルフィリンの合成と機能発現

分子サイズが分子の性質に与える量子的な効果は、単分子と分子集合体との境界線付近に発現されることが期待されている。この分野の研究は、主に理論が先導して研究が進行してきたが、研究対象となるべき具体的な物質が存在しないため、物性に関する知見は限られていると言わざるを得ない。従来はポリマー、デンドリマー、超微粒子の科学がその対象として提唱されてきたが、そこで扱われる物質はある程度の分子量分布を伴った混合物でしかなく、研究遂行の大きな妨げとなってきた。ところで、合成有機化学は、複雑な天然物を実験室内で再現する一方、自然界には見出されなかったような特異な構造を有する人工有機分子の創成にも貢献してきた。近年では分子間相互作用を制御することにより、興味深い高次の分子集合体(超分子集合体)を得るに至っている。そこで、本研究では、構造が明確な単一物質で、かつ100Å以上の分子サイズを有する分子の分子設計とその合成を行った。
神経樹状突起による動物行動符号化の解明

樹状突起上での情報統合様式は、記憶想起や注意などといった脳の高次機能も含めた動物の行動に関連して変化することが予測される。しかしこの仮説は未だ検証されていない。そこで本研究では樹状突起活動の光学的測定法と実験動物心理学的手法を組み合わせて、樹状突起活動と動物行動との因果関係を解析する。研究代表者は2010年3月1日に独立行政法人理化学研究所で研究室をスタートさせた。研究活動スタート支援は2010年11月から開始した。研究代表者はまず、本研究課題で使用する光ファイバ顕微鏡を構築した。樹状突起から得られ光信号は微弱な為、効率的な光照射と光検出が必須である。信号-ノイズ比を向上させるため、光学経路の再設計、フォトダイオード検出器の使用、高輝度LED光源の使用、単レンズによる光照射などの改良を行い、従来に比べ2倍強の信号-ノイズ比示す光ファイバ顕微鏡を実現した。本研究ではラットの行動時における樹状突起活動を記録する。この時、その動物行動によって光ファイバがよじれる場合、行動の制約や光ファイバの損傷などが考えられる。そこで光ファイバがよじれることなく、かつ光学測定に影響を及ぼさない回転式高効率光転送装置を開発した。これにより、動物の行動時における神経活動の光ファイバ測定が長期間安定に行えるようになった。今後はラットに行動課題を行わせ、課題遂行時における樹状突起活動の記録を試みる。本研究により、長年検証されることができなかった「樹状突起活動が脳の高次機能に関与する」という仮説を検証することが可能である。
免疫抑制のための生体適合性共連続体膜の創成

異種動物の膵島移植を可能にする,免疫細胞は通さず,糖,酸素,インシュリンは出入り可能で,血管新生が容易な生体適合性共連続体膜の開発を行った。ポリエチレングリコール鎖を有するモノマーから合成した共連続体膜は,優れた生体適合性を示し,ラット埋め込み実験において,組織との癒着を抑え,血管新生を可能にする多孔質膜を得ることに成功した。また,それらを皮下埋め込み可能なバック状に試作成形することにも成功をした。本研究では次の3つの小目的に関して検討を行った。すなわち,1.免疫細胞は通過できないが,糖,酸素,インシュリンは通過できる100 nm程度の貫通孔を有する共連続体膜を開発する。2.膜素材を柔軟かつ生体成分や細胞の癒着が無い素材で構成,あるいは,追加表面処理する。3.共連続膜を「袋状」に成形し,膜厚1 mm程度,内部空洞厚み600 &#61549;m程度にする。これらの小目的の達成により,膵島細胞を内部に閉じ込め,免疫反応を受けない状態で,糖に反応してインシュリンを放出する移植用の生体適合性多孔性デバイスを創成する。平成23年度に引き続き,全体の課題について検討を進めた結果,下記に示す成果を得た。すなわち1.親水性多孔体をラット皮下に入れ癒着度,血管新生について観察したところ,両親媒性の高分子多孔体において良好な結果を得た。2.両親媒性の多孔性制御により,生体適合性が大幅に改善されることが明らかとなった。3.これら高分子多孔体をモデルながら袋状に成形し,糖,ならびにインシュリン透過実験を実施することができた。4.高分子多孔体を中空の袋状に成形する手法について,複数の方法を考案した。5.汎用性の高いブロック高分子の表面特性制御により,予想に反して,生体適合性の発現が認められ,その原因について検討を開始している。これらのこから,1反応誘起相分離を用いるナノサイズ細孔を有する有機高分子共連続体の合成,2共連続体の物質透過,およびその速度の検討,3生体成分や細胞組織の癒着の無い,生体適合性有機高分子の開発と,共連続構造体の開発,4生体適合性の検討と,表面修飾による生体適合性のさらなる向上と安定性の確認について予定通りの成果を得,懸案とされていた袋化についてもその目処を得た。残された課題は,明確な生体適合性の根拠の確認と,袋化方法の確立,さらには実用的使用である。平成23年度は下記に示す課題について検討を行った。1.反応誘起相分離を用いるナノサイズ細孔を有する有機高分子共連続体の合成2.共連続体の物質透過,およびその速度の検討3.生体成分や細胞組織の癒着の無い,生体適合性有機高分子の開発と,共連続構造体の開発4.生体適合性の検討と,表面修飾による生体適合性のさらなる向上と安定性の確認課題1は本研究の最も大事な課題であり,重点を置いて研究を行った。その結果,一般に用いられるラジカル重合において反応系の粘度,極性を制御し,さらには,光重合との組み合わせを行うことでナノサイズに近い構造を有する共連続体の合成が可能となった。また,一般に生体適合性が高いといわれる酸素原子を含むモノマーの使用においては,その性質上ラジカル重合を用いられない場合もあり,今回特に,比較的温和な条件で用いることが可能なカチオン重合を応用し,系の相分離の制御を行うことで,ナノサイズに近い細孔を有する共連続体の開発に世界で初めて成功した。課題2の物質透過性に関しては,特に生体内での使用を考慮して,水の透過に関して検討を行った。素材の強度を下げ,柔軟性を持たせると,水の透過性は低下傾向にあったため,柔軟性を維持したまま骨格強度を上げる試みを行ったところ,微細粒子のハイブリッド化により,それらが改善し,水の透過,吸水が改善されることが明らかとなった。課題3,4に関しては,震災影響で評価を行って頂くはずの大学病院での実験が滞り,現在,主にタンパク質を対象とした非特異的吸着の有無を中心として検討を進めている。初期的な結果として,非特異的タンパク吸着を極限まで抑えることが可能な素材の開拓には目処が立ちつつあり,これらと課題1,2との連携を進めつつ,平成24年度において成果のジャンプアップを期したいと考えている。生体適合性の検討における大学病院での細胞等を用いる評価に震災影響の遅れが若干認められるが,生体成分(タンパク質)での検討において充分に予定していた検討を行えている。加えて低分子に対する挙動も検討が進んでいる。また,最も重要な課題であった課題(1),つまり,共連続体の合成において,新規な方法を含めて今後の研究を加速するに充分な成果を得ることが可能となっており,差し引きしても,概ね順調(以上)に進展していると確信している。病院での評価数の低減により,予算的には次年度への繰り越しが多くなっているが,上記のように成果は出ているため,研究遂行には直接結びつくものではない。

前年度の研究成果を発展されるために,素材の生体内での適合性について検討を進め,併せて下記の検討を行う。1.共連続体膜の成形について,膜を得てから光重合を用いる接着に基づく「袋化」2.袋が得られる「鋳型」の中での重合→共連続体袋の開発3.共連続体袋が低分子を透過し,細胞等を透過しないかの確認課題1および2に関しては,得られた候補共連続体膜の成形に関わる課題であり,予備的な成果を得つつある。また,共連続体の形成と同時に成形する方法に関しても検討を行う。課題3については,本研究の一応のゴールと考えているが,成形された袋の透過性検討を行う予定である。特に実際の系に近い環境での試験に主眼を置き,23年度で得られた成果を基に,まず,それらが実環境で機能するかを早急に確認する。基本的に素材の生体適合性については確認を終えているので,化合物応答性や,細胞の生存性について検討を行う。これに23年度からの持ち越している費用を充当する。また,これらに関連する物品費として充当する。このことと同時に共連続体の袋化,さらには細孔構造制御を詳細に検討し,メディアの完成を目指す。平成24年度配当分について,この検討に充当する。
前房関連性免疫偏位(ACAID)を用いた網膜色素上皮細胞移植時の拒絶反応抑制

一方、加齢性黄斑変性症に対する治療方法の1つとして網膜色素上皮細胞移植術がある。この場合もやはり拒絶反応の抑制が問題になってくる。もし、網膜色素上皮細胞自体がACAIDを誘導することができれば、この治療方法の臨床応用が現実味を帯びてくる。そこでまず我々は、網膜色素上皮細胞がACAID誘導に重要な役割を果たしているTGF-βの産性能を有していることを確認した。次いで、マウスおよびラットの網膜色素上皮細胞を前房中に注入しACAIDの導入を試みたが、残念ながらACAIDは誘導されなかった。これらの結果は網膜色素上皮細胞が抗原提示細胞になりえないことを示唆した。マウスの網膜色素上皮細胞(RPE)を、他の報告にしたがってラットRPEを採取する方法を応用して、マウスより採取して、培養などの本実験に使用しようと試みたが、マウス自体の眼球が小さくて、数十匹合わせても十分量のマウスRPEを採取することは不本意ながら不可能であった。そこで、マウスRPEのcell-lineでの代用を模索したが、商業ベースでも、他の研究者より譲ってもらうことも不可能であった。そこで、recobinantのTGF-βを用いて、in vitroで前房関連性免疫偏位(ACAID)を導入できることと、マウスと種が違うヒト前房水中のTGF-βを用いても、同様にACAIDを導入することは既に他の実験で確認していたため、ラットRPEのcell lineを入手して、RPEとACAIDをの関係を追求した。培養したラットRPE上にマウスより採取したマクロファージを様々な条件で播取し、上澄みを採取してTGF-βの濃度を測定した。その結果は、平均17.13pg/ml(n=10)と微々たるものであっが、ACAIDの導入の有無を検討したところ、ACAIDは導入されなかった。そこで、培養したラットRPEに小さなキズをつけた24時間後にマウスマクロファージを播取し、TGF-βを測定したところ、平均で181.71pg/mlであった。TGF-βが上がったため、ACAIDの導入の有無を、再度試みたが、確実なACAIDの導入は認められなかった。本年度は、ACAIDの導入を違う方法で試みることに主体をおき、RPEとACAIDの関係解明を目指す予定である。そして、網膜色素上皮移植とACAIDの関係について追求する所存である。マウスの網膜色素上皮細胞(RPE)を、他の報告にしたがってラットRPEを採取する方法を応用して、マウスより採取して、培養などの本実験に使用しようと試みたが、マウス自体の眼球が小さくて、数十匹合わせても十分量のマウスRPEを採取することは不可能だったため、マウスRPEのcell-lineを用いた培養マウスRPE細胞にて、昨年と同様に再度、ACAIDの導入を試みた。培養したラットRPEに機械的に小さなキズをつけ創傷治癒過程中と創傷が治癒した直後の2時期の培養上清のTGF-β濃度を測定したところ、治癒過程中は、平均で213.53pg/ml,治癒直後は、193.85pg/mlであった。TGF-β(度が上がっていたため、マクロファージを播取し、ACAIDの導入の有無を再度試みたが、確実なACAIDの導入は認められなかった。以上より、培養マウスRPEを用いた実験に見切りをつけた。そこで、直接マウスRPEをシート状に取り出すことを再度試みたが困難だったため、既に、確立されている方法に準じて、ラットRPEをシート状に取り出した。培養マウスRPEと同様の手法で、ラットRPE上に、マウスマクロファージを播取し、マウスを用いてACAIDの導入を試みた。結果は、残念ながらACAIDの導入は認められなかった。本研究での昨年度および今年度の実験結果を鑑みると、残念ながら、網膜色素上皮細胞はACAIDを導入し得ないという結論に至った。従って、網膜色素上皮細胞移植時にACAIDを用いた拒絶反応抑制は、現状では困難であると考えられる。前回はラットの網膜色素細胞をマウスに導入する異種移植を施行してACAIDの導入が得られなかった。しかし、本来、移植手術は同種移植であるので、今回はラットの網膜色素細胞をラットに導入する同種移植にてACAIDの導入が得られるか否かを検討した。Lewisラットの網膜色素細胞を既報の方法を用いてシート状に取り出して培養した。その培養網膜色素細胞シート上にBSAの存在下で、マクロファージを播種して24時間培養し、その上澄みを無処置Lewisラットに静注し、1週間後にこのラットをBSAで感作、抗原特異的な遅延型過敏反応が抑制されているか否かを検討した。しかし、残念ながら遅延型過敏反応の抑制は認められなかった。

次に、シート状に取り出して培養したLewisラットの網膜色素細胞に小さな傷を多数つけた後、BSAの存在下で、マクロファージを播種して24時間培養し、その上澄みと共に、網膜色素細胞自体も一緒に無処置Lewisラットに静注した。先の実験と同様に1週間後にこのマウスをBSAで感作、抗原特異的な遅延型過敏反応が抑制されているか否かを検討したが、前回同様に遅延型過敏反応の抑制は認められなかった。以上の結果より、網膜色素細胞はACAIDの導入し得ないとの結論にいたった。臨床的に多くの臨床家が網膜色素細胞移植を施行しようと試みているが、網膜色素細胞移植時にACAIDが導入され拒絶反応が抑制される可能性は少ないものと考えられる。
小学校段階における英語の歌曲に関する題材の開発

1.研究の目的小学校の音楽科カリキュラムに位置づく「小学校段階における英語の歌曲に関する題材を開発」することを目的とする。2.研究の方法(1)英語歌曲の収集英語圏で古くから伝わり、現在も家庭や幼稚園などで活用されている「マザーグース」や、総合的な学習の先行研究で取り上げられている英語歌曲を収集し教材活用の有効性を吟味する。(2)比較鑑賞・授業公開英語の歌のコンサートを鑑賞し、日本語の歌と比較して感じ取ったことを記述させ、評価する。唱歌、わらべうた、マザーグースなどを追求するグループを構成し発表表現の後、感想交流を行う。(3)英語の詩や発音に関する実技講習韻に関する講習を受け、児童の発表曲に存在する韻について理解する。3.研究の成果(1)小学校段階に適切な英語歌曲の条件一音節中の母音や子音の数は、通常英語の方が多いため、歌唱表現における発音とリズム表現が技術的にやや高度になることが多い。児童の実態を観察した結果、小節数が少なく構成音が単純でありながら音楽的に優れている英語歌曲が音楽の教材としてふさわしいことがわかった。(2)比較鑑賞の有効性同一曲を日本語と英語で比較したり、日本に伝わる諸外国の歌と、日本古来のわらべうたを比較することにより、曲想の違いや文化の違いを感じ取ることができる。
シトルリン化ヒストンH3を標的とした重症病態の制御

今年度は、組織損傷モデル(広範囲熱傷III度20%)(Burn)と感染モデル(盲腸結紮穿刺)(CLP)の自然免疫受容体とシグナル分子の遺伝子発現パターンを判別分析で比較検討した。TLR2, TLR4, NLRP3, MyD88の発現はCLP, Burnにおいて3時間後から有意に上昇した(p<0.05)。CLPにおいてTLR9は12, 24時間後でSham, Burnより有意に低下(p<0.05)、IRF-7は有意に上昇した(p<0.05)。3時間後から各群で特徴的な遺伝子発現パターンを示し、判別分析では3時間後で判別過誤率6.06%、6時間後からは0%で各病態を判別できた。以上より、自然免疫系のパターン解析により全身性炎症反応の病態を判別できる可能性が示唆された。上記モデルを用いて、NETs形成のためのヒストンH3のシトルリン化に必須の酵素であるPeptidylarginine deimininase 4(PAD4)の発現を測定した。また、PAD4阻害薬(CI-Amidine)を用いて、PAD4によるシトルリン化を阻害して、上記モデルにおけるNETs形成阻害の自然免疫系への影響を評価した。しかし、PAD4阻害薬の投与は自然免疫受容体の遺伝子発現およびシグナル分子の遺伝子発現に影響を及ぼさなかった。臨床研究では、NETs産生との関連が注目されている静脈血栓塞栓症とその予防法についての研究を行った。外傷の重症度を示すInjuryseverity scoreが15以上、VTE発症のリスク指標であるRisk AssessmentProfile scoreが5以上の重症外傷患者(n=69)に対して臨床的に止血が完成した時点から未分画ヘパリン1万単位/日を最長14日間投与した。その結果、VTEの発症率はhistorical control群(n=105)と比較して29%から15%まで有意に低下した。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。臨床においては、気道熱傷患者の偽膜および喀痰を採取してNETsの存在を免疫染色で確認した。偽膜は損傷された気道の脱落上皮、白血球、フィブリン等から形成され、時に気道閉塞の原因となる。NETsが偽膜形成に関与していると推測されることから、DNase吸入薬を用いることにより偽膜形成を抑制できる可能性がある。本結果は第42回日本熱傷学会総会の教育講演で発表した。マウスモデルにおいて自然免疫受容体の遺伝子発現パターンを、感染モデル(盲腸結紮穿刺(Cecal Ligation and puncture: CLP))、および非感染モデル(体表面積20%のIII度熱傷(Burn))において経時的に測定して、判別分析により感染、非感染炎症の診断を試みた。TLR2,TLR4の発現は6時間後からCLP、Burnにおいて有意に上昇した。TLR9の発現はCLPにおいてSham, Burnより12時間後から有意に低下した。NLRP3の発現は6時間後、24時間後でCLP、Burnにおいて有意に上昇した。判別分析では6時間後から、各群で特徴的な遺伝子発現パターンを示し、識別誤り率3.03% (6 hr), 6.25% (12hr)、および6.06% (24hr)で各病態を判別することができた。研究結果は、本年9月に76th Annual Meeting of the AASTで口演予定である。臨床の重症病態における研究は見直しを行う必要がでてきた。動物モデルにおける自然免疫受容体の発現の評価はできたが、Cit-H3やNETsの評価は行えなかった。基礎研究においては、感染性炎症と非感染性炎症の病態を自然免疫の発現パターンから判別することを目的として研究を行った。感染性炎症モデルとして盲腸結紮穿刺を、非感染性炎症モデルとして20%III度熱傷モデルを用いて、受傷6、12、24時間後に全血よりtotal RNAをを抽出して定量RT-PCRにより自然免疫受容体(TLR2、TLR4、TLR9、NLRP3、RIG-I)の遺伝子発現を測定し判別分析を行った。その結果、受傷後6時間後から各群で特徴的な遺伝子発現パターンを示し、各時間(6、12、24)において過誤率0%で各病態を判別することができた。この結果は、米国外傷学会に口演発表し論文化した。また、新たな重症病態とCit-H3やNETs発現との関連を評価するため、頭部外傷モデルの作成に着手した。臨床研究においては、NETs産生との関連が注目されている静脈血栓塞栓症(VTE)とその予防法についての研究を行った。外傷の重症度を示すInjuryseverity scoreが15以上、VTE発症のリスク指標であるRisk AssessmentProfile scoreが5以上の重症外傷患者(n=27)に対して止血が完成した時点から未分画ヘパリン1万単位/日を最長14日間投与した。その結果、VTEの発症率はhistorical control群(n=82)と比較して32.9%から7.4%まで有意に低下した。本予防法においてもVTEが生じた症例ではNETsの過剰産生が関与している可能性がある。その他の臨床研究として、救命救急センターおよび外傷センター開設が、担当地域の救命率向上に寄与したかを地域網羅的に解析した。

当初は、重症病態においてNETsの放出時に起こるヒストンのシトルリン化を制御することにより、重症病態の炎症制御、および予後改善に寄与する予定であったが、重症病態のモデル開発とその病態解析の段階で止まっており、治療の段階にまで達していない。今年度は、組織損傷モデル(広範囲熱傷III度20%)(Burn)と感染モデル(盲腸結紮穿刺)(CLP)の自然免疫受容体とシグナル分子の遺伝子発現パターンを判別分析で比較検討した。TLR2, TLR4, NLRP3, MyD88の発現はCLP, Burnにおいて3時間後から有意に上昇した(p<0.05)。CLPにおいてTLR9は12, 24時間後でSham, Burnより有意に低下(p<0.05)、IRF-7は有意に上昇した(p<0.05)。3時間後から各群で特徴的な遺伝子発現パターンを示し、判別分析では3時間後で判別過誤率6.06%、6時間後からは0%で各病態を判別できた。以上より、自然免疫系のパターン解析により全身性炎症反応の病態を判別できる可能性が示唆された。上記モデルを用いて、NETs形成のためのヒストンH3のシトルリン化に必須の酵素であるPeptidylarginine deimininase 4(PAD4)の発現を測定した。また、PAD4阻害薬(CI-Amidine)を用いて、PAD4によるシトルリン化を阻害して、上記モデルにおけるNETs形成阻害の自然免疫系への影響を評価した。しかし、PAD4阻害薬の投与は自然免疫受容体の遺伝子発現およびシグナル分子の遺伝子発現に影響を及ぼさなかった。臨床研究では、NETs産生との関連が注目されている静脈血栓塞栓症とその予防法についての研究を行った。外傷の重症度を示すInjuryseverity scoreが15以上、VTE発症のリスク指標であるRisk AssessmentProfile scoreが5以上の重症外傷患者(n=69)に対して臨床的に止血が完成した時点から未分画ヘパリン1万単位/日を最長14日間投与した。その結果、VTEの発症率はhistorical control群(n=105)と比較して29%から15%まで有意に低下した。動物実験を中心に研究を進める。自然免疫受容体の下流の主なシグナル分子群をターゲットに遺伝子発現を測定し、Cit-H3、NETsの発現と重症病態の関係を評価する。臨床研究については現実的な方策を立案する。今年度は、昨年度に引き続き重症病態の動物モデルを用いてNETsの発現と重症病態の関係を評価する。また、新たな重症病態として、頭部外傷モデルの作成に着手する。臨床研究として、外傷患者の合併症、および予後に関する研究を行う。・頭部外傷合併外傷に対する静脈血栓塞栓症(DVT)の予防法は確立していないことから、止血を得た後に未分画ヘパリンを投与することにより予防効果があるかを検証する。また、DVT発生がNETs産生能と関連しているかを検証する。患者血漿を用いて血中NETs濃度をELISA法にて測定(MPO-DNA複合体の同定)する。また、DNaseI、IL-6、可溶性VCAMをELISAで測定する。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
２Ｄ，３Ｄイメージ用ガラス放射線検出器の新規な測定法の確立と放射線飛跡への応用

本研究で得られた成果は以下のようにまとめることができる:(1)橙色RPLの代替としての青色RPLの使用で,通常必要な100°C,10分程度の「プレヒート」処理が不要となった。このため書込み,読取り,消去の3工程全てを光処理だけで代替できた。(2)青色RPLの蛍光寿命は5 nsと格段に短いため,今後リアルタイムでの線量や線量率測定への応用が確認できた。(3)構築したディスク型蛍光ガラス読取機は共焦点配置を成しているため表面から深さ400μm程度のイメージまで迅速に高いコントラストで再構築できた。(4)UV励起の共焦点レーザー顕微鏡を用いて,この材料での蛍光核飛跡の取得に世界で初めて成功した。まず,放射線用`蛍光ガラス線量計'の材料として知られている銀活性リン酸塩ガラス検出器からの青色ラジオフォトルミネッセンス(RPL)を用いた2次元(2D),3次元(3D)線量分布の新たな再構築法の提案とその実証を試みた。この提案は,本材料による線量測定・評価で用いられてきたオレンジRPLの代替として新たに青色RPLを用いるものである。この青色RPLの導入で,従来の熱処理炉による100°C,30分程度の`プレヒート工程'が不要となった。さらにオレンジRPL(蛍光寿命,2300 ns)に比較して着目する青色RPLは蛍光寿命が5 nsと桁違いに短いため,リアルタイムでの線量分布イメージ読出しに繋がる。次に,2つの異なる機能:1つは100 mmΦ程度の大面積の2D,3Dメージを迅速に収集可能な機能,もう1つは高速性よりむしろ数百nm程度の高い空間分解能で線量分布を可視化する機能を併せ持つ読取装置の構築を目指した。当該年度は,これらの機能を達成するため,各システムの改善と新たな拡張による構築とその評価を行ってきた。当該年度中に実施・解決を予定している課題に対して,(1)青色RPLを用いることで`プレヒート工程'が不要となることを実証した。これにより,発明の名称:「ラジオフォトルミネッセンスガラスのラジオフォトルミネッセンス測定方法及び装置」,特許番号:第5707531号,登録日2015.3.6の特許の裏づけができた。(2)受動型ガラス検出器による高速読出しの可能性に関して,直径100 mmΦ,厚さ1 mmのディスク型ガラス検出器に書き込まれたX線イメージ読取機を開発した。これにより高精細な2D,3Dイメージを空間分解能1ミクロン,時間5分程度で可視化できた。(3)'読取''プレヒート''消去工程'を光学処理で代替する課題において,'消去工程'を除き光のみでの処理が可能となった。(4)2つの異なる機能を有する読取機の構築について,大面積の線量分布情報を迅速に読出す機能は達成できたが,高い空間分解能を有するイメージの再構築と検出器の深さ方向の分布再構築については継続して取り組む状況である。しかし,現時点で4編の査読付欧文に発表していることから,総合的にみて,おおむね順調に進展していると判断した。「蛍光ガラス線量計」の材料として用いられている銀活性リン酸塩ガラスを単なる個人あるいは環境線量モニタリングとしての応用だけでなく,材料が有する可能性を生かし,これに本申請者独自の提案を導入することで三次元(3D)イメージ蛍光ガラス検出器の開発を行った。一般に,この蛍光ガラス材料は,各種放射線照射後,単一の紫外線(UV)励起によって青色・橙色2波長領域でのラジオフォトルミネッセンス(RPL)が観測される。従来,中心波長630 nmの橙色RPLが線量測定に用いられてきている。本研究では青色RPL使用での新たな成果を得た。(1)橙色RPLの代替として中心波長460 nmの青色RPLを用いることで橙色RPLを使用する際に必要なRPL測定前の100°C,30分程度の「プレヒート工程」が不要となった。この成果は2015/3/6に「ラジオフォトルミネッセンスガラスのラジオフォトルミネッセンス測定方法及び装置」で特許を取得した(特許番号:第5707531号)。(2)青色RPLの使用は,書込み,読取り,プレヒート,消去(再利用)の全工程を光学処理だけで代替可能となった。(3)青色RPLの蛍光寿命は5 ns以下と橙色RPLの蛍光寿命(2300 ns)に比較して桁違いに短いため,今後リアルタイムでの線量や線量率測定への応用にも繋がることが確認できた。(4)さらに,RPL蛍光の読取り方法として本研究者の提案による2つの機能を有する読取機を構築した。1つは蛍光ガラスを直径10 cm程度のディスク形状検出器に加工し,高速回転(最大3200 rpm)させながら1μm以下に集光したUV光照射で迅速に微弱青色RPL信号を検出しイメージ再構築が可能となった。もう1つは,高速性は前者には劣るが,空間分解能が数百nm(縦,横方向)と格段に高く,放射線核飛跡のイメージング測定も可能な共焦点レーザー顕微鏡を開発した。

(2)青色RPLの蛍光寿命は5 nsと格段に短いため,今後リアルタイムでの線量や線量率測定への応用が確認できた。(3)構築したディスク型蛍光ガラス読取機は共焦点配置を成しているため表面から深さ400μm程度のイメージまで迅速に高いコントラストで再構築できた。(4)UV励起の共焦点レーザー顕微鏡を用いて,この材料での蛍光核飛跡の取得に世界で初めて成功した。今後の開発方向として,上記(4)のもう1つの課題である光学顕微鏡,高感度デジタルカメラ,Zモニタードライブを組み込んだ高空間分解能システムの構築を引き続き実施する。これが完成すれば,各種放射線(X線,ガンマ線,重粒子線)を照射した銀活性リン酸塩ガラス検出器内に形成される各種蛍光中心の分布の可視化と共にこの検出器の新たな知見が得られると考えている。さらに,異なる線種に対する飛跡の比較検討も可能となる。放射線物理計測旅費,人件費・謝金の配分額を多く見積もり過ぎたため。次年度の助成金と合わせて物品費の購入に充てる。
人文主義者とナチズム－その抵抗・傍観・協力の類型をめぐる考察

研究の二年目に当たる2018年度は、初年度の資料の存在状況に関する調査に基づき、夏季の休暇を利用してドイツ、アメリカ合衆国の図書館・大学資料館(マールブルク大学図書館、ゲッティンゲン大学資料館、ゲッティンゲン市資料館、ベルリン大学資料館、グライフスヴァルト大学資料館、ライプツィヒのドイツ国立図書館、ハーヴァード大学図書館)を訪問した。そしてK.ツィークラー、W.シャーデヴァルト、W.イェーガーといった当該の人文主義者に関する(一次、二次)資料を収集(閲覧・複写・撮影)した。これにより、本研究の基礎と言える閲覧可能な資料のほぼ全てを閲覧することができた。資料の読解、論文の執筆といった研究成果の公開も一部、行うことができた。今年度の資料収集に当たって大きな成果としては、以下の二点があげられる。第一に、ゲッティンゲン大学資料館、グライフスヴァルト大学資料館に所蔵されているK.ツィークラーの記録を閲覧でき、彼の大学での役割、ドイツ社会での評価を知ることができたことである。第二に、ハーヴァード大学図書館においてW.イェーガーによる膨大な量の遺稿を閲覧できたことである。その中に、ナチズムと直接関係のある資料は非常に少なかったが、1920年代から30年代にかけてのドイツの人文主義の状況を知る上で、重要な資料が含まれていた。上の研究と並行して、W.イェーガーの主著『パイデイアギリシアにおける人間形成』上巻の翻訳を刊行できた。資料の整理、読解と関わる。研究の初年度、二年目にわたって、研究の対象とする人文主義者について、非常に多くの(一次、二次)資料を収集(閲覧・複写・撮影)することができた。これらの収集した資料を整理、読解するのに予定を上回る時間を要し、研究成果の公表のための作業が予定よりもやや遅れている。第一に、夏季休暇を利用してドイツの大学資料館、図書館を訪問し、今までの資料収集で閲覧対象から漏れた資料を閲覧する(ミュンヘン大学資料館におけるハルダー、バイエルンアカデミー図書館におけるK.v.フリッツに関する資料など。経費は所属大学の研究費から支出する予定)。第二に、今までに収集した資料の読解を行う。それを基に学会発表や所属大学の紀要等への発表、研究報告書の執筆を行う。研究の初年度に当たる2017年度は、まずインターネットやメールでの問い合わせ等を介して、ドイツ語圏の図書館・大学資料館・文書館における、研究対象となる人文主義者に関する資料の所蔵状況を調査した。その過程で、ベルリンとバイエルンのアカデミー図書館にも当該の人文主義者に関する資料が所蔵されていることがわかり、この二つの図書館も現地での調査先へ加えた。次に夏季および春季の休暇を利用してドイツ語圏の図書館・大学資料館・文書館を実際に訪問し、当該の人文主義者に関する(一次、二次)資料を収集(閲覧・複写)した。さらに類似のテーマに関して研究を行っているドイツ、スイスの研究者と情報の交換を行った。これにより、研究の対象とする資料の所蔵状況がおおよそ明らかとなっただけではなく、本研究の基礎と言える(閲覧可能な一次)資料の約七八割を閲覧することができた。資料の読解や、論文の執筆や研究会での発表といった形での研究成果の公開も、部分的に行うことができた。今年度の資料収集に当たって大きな成果として、以下の二点が挙げられる。第一に、バイエルン・アカデミー図書館に所蔵されているK.v.フリッツの記録を閲覧できたことである。その中には、後の彼によるヒトラーへの忠誠宣誓拒否の背景を考える上で貴重な資料があった。第二に、H.ベルヴェに関する非ナチ化の審査文書が閲覧できたことである。その中には、人文主義者によるナチズムへの協力を考える上で重要な記録が含まれていた。主に以下の二点が挙げられる。第一に、研究を進める過程で、研究計画の一部変更を余儀なくされた点である。当初の計画ではナチズムへの「協力」を代表する人文主義者の一人としてJ.フォークトを取り上げる予定であった。しかし彼の言行について調べてゆくうちに、彼とナチズムとの関わりの評価が難しいこと(彼の擁護派と糾弾派の対立)、フォークトの遺稿が所蔵されているウルビノ大学図書館で資料の閲覧に困難が予想されること等が判明した。したがってナチズムへの「協力」者としてほぼ異論の余地がなく、(一次、二次)資料が多く保存されているR.ハルダーを、フォークトの代わりに研究対象として取り上げることとした。第二の点は、資料の読解と関わる。研究の初年度、研究の対象とする人文主義者に関して、予想を上回る多くの(一次、二次)資料を収集(閲覧・複写)することができた。これらの収集した資料を整理するのに予定よりも多くの時間を要し、資料の読解や研究成果の公表のための作業が予定よりもやや遅れている。

今年度の資料収集に当たって大きな成果としては、以下の二点があげられる。第一に、ゲッティンゲン大学資料館、グライフスヴァルト大学資料館に所蔵されているK.ツィークラーの記録を閲覧でき、彼の大学での役割、ドイツ社会での評価を知ることができたことである。第二に、ハーヴァード大学図書館においてW.イェーガーによる膨大な量の遺稿を閲覧できたことである。その中に、ナチズムと直接関係のある資料は非常に少なかったが、1920年代から30年代にかけてのドイツの人文主義の状況を知る上で、重要な資料が含まれていた。上の研究と並行して、W.イェーガーの主著『パイデイアギリシアにおける人間形成』上巻の翻訳を刊行できた。資料の整理、読解と関わる。研究の初年度、二年目にわたって、研究の対象とする人文主義者について、非常に多くの(一次、二次)資料を収集(閲覧・複写・撮影)することができた。これらの収集した資料を整理、読解するのに予定を上回る時間を要し、研究成果の公表のための作業が予定よりもやや遅れている。第一に、初年度の関心を継続し、研究対象となる人文主義者に関する(一次、二次)資料のドイツ語圏の図書館・大学資料館・文書館における収集(閲覧・複写)を行う。夏季休暇にはグライフスヴァルト大学の資料館、ゲッティンゲン市の文書館においてK.ツィークラーに関する資料を収集し、ベルリン・フンボルト大学の資料館においてW.イェーガーとW.シャーデヴァルトについて調査することを計画している。ライプツィヒのドイツ国立図書館においては、日本の大学図書館に所蔵されていない、研究の対象とする人文主義者の著作、関係文献の収集を行う。さらにアメリカのハーヴァード大学図書館においてW.イェーガーの遺稿、ニューヨーク州立大学オールバニ分校の図書館においてK.v.フリッツに関する資料の収集を行う。初年度の調査で、ドイツの図書館、大学資料館、文書館における遺稿・自筆原稿等の所蔵資料を調べるためのKalliopeというサイトの存在を知らされた。このサイトを有益に活用し、遺漏ができるだけない資料収集を心がけたい。その他、外国への滞在中には、本研究と交わる研究を行っている外国人研究者との情報交換を行う。第二に、研究計画の変更点として学術コロキウムの開催は行わない。理由は、本研究は日本で一般化していないテーマのため、コロキウムの準備や開催後のまとめのため相当な時間、労力が予想されることがわかったである。その代わりに収集した資料の読解を重視し、コロキウムとは別の形で研究成果の公開を行い、論文や学会発表の準備を優先させることとする。第一に、夏季休暇を利用してドイツの大学資料館、図書館を訪問し、今までの資料収集で閲覧対象から漏れた資料を閲覧する(ミュンヘン大学資料館におけるハルダー、バイエルンアカデミー図書館におけるK.v.フリッツに関する資料など。経費は所属大学の研究費から支出する予定)。第二に、今までに収集した資料の読解を行う。それを基に学会発表や所属大学の紀要等への発表、研究報告書の執筆を行う。