hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
糸状菌より発見した新奇な糖脂質の機能と合成経路の解明及び抗生物質探索への応用

動物細胞の細胞膜を構成する糖脂質が種々の生命現象に深く関わっていることが知られている一方、真核微生物である糸状菌の細胞膜を構成する糖脂質の機能などが明らかになっていない。本研究は、我々が土壌中より単離同定した糸状菌に見出した新奇な糖脂質の構造・機能およびその合成経路を解明するとともに、それらの知見を抗生物質探索へ応用しようとする目的で行った。我々は以前に土壌中より単離同定したAcremonium属糸状菌が4種類の新奇な構造の両性スフィンゴ糖脂質(ZGL ; Zwitterionic glycosphingolipid)を有することを見出し、その内の2種類の糖脂質がガスクロマトグラフィーやMALDI-TOF/MS分析によって構造を解明した植物病原性糸状菌Trichoderma virideの新奇な糖脂質と同じであることを明らかにした。これらのZGLはイノシトールリン酸セラミドにグルコサミンとマンノースが結合した構造を有しており、1種類はホスホコリンを含有していた。これらの構造は酵母などが有するイノシトールリン酸セラミドにマンノースのみが結合しているスフィンゴ糖脂質とは全く異なっていた。そこで、これらのZGLがイネ培養細胞に与える影響について調べた。ZGLをイネ培養細胞に添加後、細胞より総RNAを抽出し、ノーザンブロッティングやRT-PCRによって解析したところ、防御応答性遺伝子であるPAL(phenylalanine ammonia lyase)遺伝子やPBZ1遺伝子が発現誘導していることが認められ、これらの新奇なZGLが植物の抵抗性反応を誘起するエリシターとして作用していることが示唆された。一方、ケカビやクモノスカビなどの接合菌類がイノシトールリン酸セラミド合成酵素を阻害する抗生物質Aureobasidin Aによって、その生育が全く阻害されないことを見出し、薄層クロマトグラフィーなどによる構造解析の結果、セラミドに糖が直接結合する生合成系路により、スフィンゴ糖脂質が合成されることを推察した。そこで、Mucor hiemalisのスフィンゴ糖脂質生合成系を明らかにすることを試みて、セラミドにガラクトースを付加する酵素ガラクトシルトランスフェラーゼの酵素活性の解析を行った。その結果、本酵素はミクロソーム画分に存在し、マンガンやマグネシウムなどの二価カチオンによって活性化されることを見出した。また、本酵素の遺伝子のクローニングを行うことを目的としてマウス由来の酵素のアミノ酸配列を基にしてプローブを作成し、M.hiemalisのcDNAライブラリーのスクリーニングを行ったが、相同性のある遺伝子を見つけることはできなかった。植物病原性糸状菌Trichoderma virideが新奇な構造の両性スフィンゴ糖脂質(ZGL ; Zwitterionic glycosphingolipid)を有することを見出すとともに、イネ培養細胞に対する影響を調べた。すなわち、T.virideよりZGLを抽出単離し、薄層クロマトグラフィーによって分析したところ、2種類のZGLが存在することを見出した。

これらのZGLについて、ガスクロマトグラフィーやMALDI-TOF/MS分析によって構造を調べたところ、以前に植物病原菌のAcremonium属糸状菌より見出した4種類の新奇なZGLの内の2種類と同じであることを明らかにした。これらのZGLはイノシトールリン酸セラミドにグルコサミンとマンノースが結合した構造を有しており、1種類はホスホコリンを含有していることを明らかにした。これらの構造は酵母などが有するイノシトールリン酸セラミドにマンノースが結合したスフィンゴ糖脂質とは全く異なっていた。そこで、これらのZGLがイネ培養細胞に与える影響について調べた。ZGLをイネ培養細胞に添加後、細胞より総RNAを抽出し、ノーザンブロッティングやRT-PCRによって解析したところ、防御応答性遺伝子であるPAL(phenylalanine ammonia lyase)遺伝子やPBZ1遺伝子が発現誘導していることが認められ、T.virideのZGLが植物の抵抗性反応を誘起するエリシターとして作用していることが示唆された。一方、イノシトールリン酸セラミドの生合成に関わる酵素イノシトールリン酸セラミド合成酵素を阻害する抗生物質Aureobacidin Aによって生育が全く阻害されないために、セラミドに糖が直接結合する生合成系路を有すると推察されるケカビ糸状菌(Mucor hiemalis)のスフィンゴ糖脂質生合成系を明らかにすることを試みて、セラミドにガラクトースを付加する酵素ガラクトシルトランスフェラーゼの遺伝子クローニングを試みた。すなわち、動物の酵素の一次配列を基にして、プライマーを作成し、M.hiemalisのゲノムを鋳型として得られたPCR産物を指標に、コロニー・ハイブリダイゼーションを行ったところ、目的の遺伝子を有すると思われるコロニーを得た。前年度において、真菌類の菌体の膜構成成分として重要なスフィンゴ糖脂質の生合成を阻害する抗生物質Aureobacidin Aがケカビ糸状菌の生育を全く阻害しないことを見出し、そのスフィンゴ糖脂質の生合成がイノシトールリン酸セラミドを中間体とする生合成系とは全く異なる新しい生合成系で合成されることを見出すと共に、その中間体がセラミド脂質にガラクトースが25残基結合した新奇な糖脂質であることを発見している。本年度は、Mucor hiemalisにおける本合成経路を確認するために、その中間体の解析と生合成に関わる酵素の遺伝子クローニングを試みた。先ず、本生合成系に関わる酵素の所在を調べるためにM.hiemalisの培養菌体からミクロソーム画分を超遠心分離によって調製した。本画分中にはスフィンゴ糖脂質が内在しており、糖供与体としてラベルしたUDP-ガラクトースを添加して反応したところ、セラミド脂質にガラクトースが14残基結合したスフィンゴ糖脂質が生成することを薄層クロマトグラフィーによって確認した。とりわけ、ガラクトースが一残基のみ結合するガラクトシルセラミドについては以前より、薄層クロマトグラフィーによって検出することができなかったが、ラベルした糖供与体を用いることによって、生成物として同定することができた。
ゼブラフィッシュ精原幹細胞の増殖因子の同定とその応用

本課題はゼブラフィッシュにおいて新規の精原幹細胞増殖因子により遺伝子改変可能な長期精原幹細胞培養系の確立を目的とした。マイクロアレイ解析と培養系の検証により、血小板増殖因子、骨形成タンパク阻害剤、ヒアルロン酸、ヘパラン硫酸に精原幹細胞増殖効果があることを認めた。また、がん化精巣を用いることで2ヶ月以上精原幹細胞を培養できること、この細胞へ効果的に遺伝子導入できることがわかった。さらに、免疫不全変異体へ皮下移植することでがん化精巣の継代維持が可能となった。以上の成果により目的の精原幹細胞培養系を確立できた。本研究はゼブラフィッシュにおいて新規の精原幹細胞増殖因子を見つけ、それにより長期にわたり精原幹細胞培養できる系を確立することを目的とする。本年度は、ゼブラフィッシュデータベースから未報告のnanos遺伝子が見つかったため、その解析を進めた。マウスではNanos2を発現する精原細胞が高い幹細胞特性を持つことが明らかとなっているが、ゼブラフィッシュではそのようなマーカー遺伝子は見つかっていなかった。そこで、この未報告nanosに対して生殖細胞のない精巣を用いたRT-PCR解析とアミノ酸配列の系統解析を行ったところ、これがマウスのnanos2に相同することが示唆された。次に、この遺伝子のプロモーターにより緑色蛍光タンパク(GFP)を発現するトランスジェニックゼブラフィッシュの作出を進めた。nanos2の配列を持つゼブラフィッシュBAC cloneに対してnanos2転写開始点付近へegfp遺伝子を組み込み、ベクターバックボーンへのtol2トランスポゾンカセットを導入し、それをtol2 transposase mRNAとともに1細胞胚に顕微注入した。現在、このnanos2::egfpトランスジェニック個体の成長を待っている段階である。精原幹細胞でのGFP発現を確認した後、この細胞で特異的に発現する遺伝子を解明できると考えている。また、がん化した精巣が見つかったため、その精原幹細胞を培養したところ、正常の精原幹細胞に比べ2倍程度の期間培養できることが分かった。遺伝子導入においても正常精原幹細胞に比べて格段に効率よく導入できた。これは最終年度に予定していた応用実験に当たるもので、がん化精巣を得る方法を検討することにより、当初目的の精原幹細胞を用いた遺伝子導入魚の作出法に発展できると考えられる。本課題はゼブラフィッシュにおいて新規精原幹細胞増殖因子により長期の精原幹細胞培養系を確立し、遺伝子改変等に応用することを目的とした。本年度は、Bone morphogenetic proteinの拮抗阻害剤を検討し、精巣体細胞の増殖を抑え精原幹細胞を増殖させることを認めた。同じトランスフォーミング増殖因子-β(TGF-β)系のGlialcell-derivedneurotrophic factorが精原幹細胞の増殖に効果があるため、これら2つのTGF-β系因子は受容体を共有せずに精原幹細胞の増殖・分化に作用するものと推測される。さらに、ショウジョウバエ生殖系幹細胞の増殖に効果を持つヘパラン硫酸を検討し、この魚の精原幹細胞の増殖に効果があることを認めた。初年度に血小板由来増殖因子とヒアルロン酸が精原幹細胞の増殖に効くことを見つけており、現在これらの因子の相加効果を解析し、より長期の培養条件を確立中である。昨年度、がん化精巣を培養することで従来の2倍程度長く培養できること、この細胞への遺伝子導入条件を見つけており、当初目的とした遺伝子改変に対応可能な長期の精原幹細胞培養系を確立できたものと考える。また併行して、がん化精巣はまれにしか出現しないため、その維持法を検討した。ゼブラフィッシュの免疫不全変異体にがん化精巣断片を皮下移植すると、一ヶ月程度でもとのがん化精巣と同等の大きさまで回復すること、それを再度断片化し移植することで、がん化精巣を継代維持できることがわかった。組織切片観察と精原幹細胞培養により継代したがん化精巣の形質を調べたところ、3つのうち2つのがん化精巣は最初に見つかった状態と同じであった。したがって、継代過程で形質が変化をしていない組織を選択していくことでがん化精巣を維持することが可能であり、常時この組織を利用できるようになった。初めに精原幹細胞増殖因子の探索を進めた。ブサルファン処理により未分化型精原細胞のみとなった精巣と正常に精子形成を行っている精巣とのマイクロアレイ解析を行い、未分化型精原細胞のみを含む精巣でアクチビン受容体2b、線維芽細胞増殖因子(FGF)受容体4、血小板由来増殖因子(PDGF)受容体a、インスリン様増殖因子(IGF)2の遺伝子が上昇していることを認めた。vas

プロモーターegfp遺伝子のトランスジェニックの精巣から単離した未分化型精原細胞と分化型精原細胞に対して、それらの遺伝子のRT-PCR解析を行い、PDGFとIGFの受容体が未分化型精原細胞で強く発現していることを確認した。この結果は、IGF1がゼブラフィッシュ精原幹細胞の増殖に効果があるというこれまでの知見と一致した。そこで、新たな因子としてヒトPDGFを精原幹細胞培養系へ添加したところ、培養1ヶ月でおよそ1.5倍の増殖効果が認められた。現在、ゼブラフィッシュPDGFのリコンビナントタンパクを作成し、その効果を検討しているところである。併行して、ヒト胚性幹(ES)細胞で細胞外基質の構成要素ヒアルロン酸が長期間にわたる増殖に必要があることが報告されたため、ゼブラフィッシュの精原幹細胞の増殖効果を同様に培養系で確認した。その結果、PDGFと同等の効果を示すことが明らかとなった。このことは細胞外基質成分がゼブラフィッシュの精原幹細胞の増殖に必要であることを示唆するものである。現在、細胞外基質の他の構成成分も検討するとともにPDGFとの相乗効果を調べ、培養期間に及ぼす効果を解析しているところである。精原幹細胞の増殖因子の探索では大きな進展は見られなかったものの、幹細胞特性をもつ精原細胞のマーカーとして新規のnanos2が見つかり、そのプロモーターで緑色蛍光タンパクを発現するトランスジェニックフィッシュ作出の直前まで達成することができた。本年度、別の研究グループからゼブラフィッシュの未分化型卵原細胞の特異的な遺伝子としてnanos2が報告されており、本トランスジェニックにより精原幹細胞を同定できる可能性は極めて高い。この細胞を用いることで精原幹細胞特異的な遺伝子をこれまでよりも高い精度で単離できるものと考えられる。また、がん化した精巣の精原幹細胞を用いることで、従来の培養系でも2倍程度長い期間培養可能となり、かつ効率よく遺伝子導入も分かった。これを用いることで応用例としての目標であった、精原幹細胞からトランスジェニック魚の作成をほぼ実現できる見込みが立った。精原幹細胞の増殖因子の探索では、すでに精原幹細胞培養系確立時に検討した増殖因子が多く見つかり新規のものが少なかったため、当初予定よりも同定できた因子は少ない。しかし、細胞外基質の影響を検討したところ、その効果が明らかとなり、最終的な目標の精原幹細胞の長期間培養の確立に有用な結果が得られたため。nanos2プロモーターにより緑色蛍光タンパクを発現するトランスジェニック魚を用いることで、精原幹細胞を純度高く単離できるため、精原幹細胞増殖因子については、この細胞標品を用いて再解析を行う予定である。また、がん化精巣を常時準備できる方法を確立する。すでにゼブラフィッシュではがんが多発するトランスジェニック系統が単離されているため、これを中心にがん化精巣の作出あるいは維持法を検討する予定である。精原幹細胞増殖因子については当初解析を想定していた数に比べてそれほど多くないことが判明したが、別の因子として細胞外基質成分の解析の必要があることがわかった。
血漿中フッ素の存在様式の検索とその動態

本研究は,有機フッ素(F)化合物の動態を検討する上でその基礎となる健常人での血漿中Fの存在割合をゲルろ過法を用いて検索する事を目的とした。また,有機F化合物(DF)とNaFを経口投与した場合の血漿および硬・軟組織中のF濃度を検討するために低F飼料条件下での動物実験(ラット)も行った。2.健常な同一人より同時に採血分離した健常人の血清および血漿による実験では,血清の場合にはnon-ionic Fのほとんどがbound Fとなり,また血漿の場合にはbound Fがnon-ionic Fを超える値を示し矛盾する結果となった。これは市販ヒト血清中のtotal Fに比べ健常人のそれは約1/2量と低値であった事に加えて,ゲルろ過の際に流出液中のFが血漿成分に吸着した可能性が考えられた。従ってF含有量が比較的多い動物試料とは異なり,ごく低濃度のF値をもつ健常人のFの割合を検索するにはゲルろ過法は有効な手段とはならなかった。3.投与実験において,DF投与では血漿中へのionic Fの増加が認められなかったがNaF投与では明らかな増加を認め,ionic Fの血漿中への移行に差があった。硬組織(大腿骨,切歯)中のionic Fも血漿と同様の傾向を示し,血漿中の微小なionic F量が硬組織中のF濃度の変動を反映する事が示唆された。4.動物実験において血漿や組織中の微量のionic F濃度を研究するには,低F飼料による実験は有効であった。^<*)>古山公英,ほか:ゲルクロマトグラフィーによる血漿蛋白中フッ素の検索,口腔衛生会誌,40,456-457,1990.本研究は,有機フッ素(F)化合物の動態を検討する上でその基礎となる健常人での血漿中Fの存在割合をゲルろ過法を用いて検索する事を目的とした。^<*)>古山公英,ほか:ゲルクロマトグラフィーによる血漿蛋白中フッ素の検索,口腔衛生会誌,40,456-457,1990.フッ素(F)含有医薬品や食品などから生体へFを取り込む機会は増大していると思われる。しかし,これら有機Fの血漿中動態については解明されているとは言い難い。本研究は,有機Fの動態を追及する上でその基礎となる健常人での血漿中Fの存在割合(ionic F,non-ionic F,bound F)を明らかにすることを目的として行った。『実験』1.市販のヒト血清(アメリカ製,混合)を用い,ゲルろ過法の再現性とFの割合を検索。2.健常人から採血,分離した血漿および血清中Fの割合を検索。ただし,血漿および血清は分離後,数名分を混合して試料とした。3.Fの測定法;(1)ionic FはIE法。(2)total FはPyH-GC法。(3)non-ionic Fはtotal Fからionic Fを差引いて求めた。(4)bound Fはゲルろ過により分画した血漿蛋白中のFを測定し,計算により求めた。『結果』1.市販のヒト血清によるゲルろ過法の再現性は良く,市販のヒト血清中でのFの割合は,従来から言われているionic Fとnon-ionic F(=bound F)の2種類だけでなく,すでに動物投与実験で報告しているように低分子量のF化合物と考えられるnon-ionic F(low molecular F compound)の存在がヒト血清中にも確認された。2.健常人の血清でも市販のヒト血清同様にionic Fとbound Fの他にこのnon-ionoc Fの存在を認めた。しかし,その量は市販の血清と比べ微量であった。これは市販のヒト血清に比べ今回の健常人の血清中F濃度が低い事,食生活などの違いによるものと思われ,Fの割合を明確にするにはさらに多くの試料を地域別に検討する必要がある。3.血漿では血清と同時に同一の健常人から得たものであるにも拘らず同じ結果が得られなかった。

この事については理解し難く,先に述べた動物投与実験では血漿を用いても良好な結果が得られており,今回の血漿での結果は種差による血漿・血清成分の違いやその量によって生じたと思われる。生体内で遊離されるフッ素(F)の動態については吸入麻酔薬や無機Fの研究に比べ,医薬品や食品などの有機F化合物についての研究は少ない。この研究では低F飼料条件下で有機F化合物の経口投与実験を行い,血漿および硬・軟組織中のF濃度の変化を検討した。また同時にNaF投与実験も行い比較した。『実験』1.ラットへのF投与:(1)動物実験;SD系雄ラット3週齢,4週間の予備飼育後,投与4週間。屠殺は,購入時,予備飼育後および投与終了後に行った。(2)飼料および群;通常飼料群(飼料中F=27ppm,F無投与)と低F飼料群{飼料中F=0.5ppm,F無投与(Cont.,CMC),F投与(DF,NaF)}。(3)投与試薬;難水溶性の医薬品Diflunisal(DF)を0.5%CMC溶液に懸濁。(4)投与量;DFおよびNaF共に1.0mgF/Kg・wt/dayを1日1回強制経口投与。『結果』1.血漿中ionic F濃度:1日のF摂取量が同じであるDF群とNaF群ではDF群が有意に低い値を示し,F無投与群と同濃度で有機F投与によって血漿中のionic Fの上昇は認められなかった。また,NaF群と通常飼料群では,共にF無投与群と比べ有意に高値を示したが,両群の間では1日のF摂取量が約1/2量の差があるにも拘らず有意差は見られなかった。2.硬組織(大腿骨,切歯)中ionic F濃度:硬組織中のionic F濃度は,血漿中ionic F濃度と同様の傾向を示し,血漿中のionic F量と硬組織中のionic F濃度が関連する事が示唆された。3.F無投与群の血漿および硬組織中ionic F濃度の推移:通常飼料での飼育では血漿および硬組織中にionic Fの増加を認めた。しかし,低F飼料での飼育では飼育開始時に比べ血漿および硬組織中のionic F濃度は低く,低F飼料での飼育が血漿などの組織中のionic F濃度を減少させる事が示唆された。また,F無投与の場合での微量な差を把握できる事も示唆された。なお,軟組織中のF濃度については現在検討中である。
社会運動としての在宅医療と医師のライフヒストリー

本研究は在宅医療と看取りの社会学的研究として、2008年から2010年まで行われたインタビューと訪問見学を中心とする社会調査の実施とその考察に基づいている。予想される今後30年間の志望者数の増加とがん死の増大から、在宅の看取りは近年、社会的関心が高まっているが、在宅療養支援診療所や訪問看護だけでこれを支えることはできない。ホスピス有床診療所の医療実践を1つの実験的社会モデルとしてとらえることで、当事者と家族や地域を支える仕組みの多様性と選択可能性を保証する必要性が明らかにされる。2008年度の研究は大きく分けて3つの点にまとめることができる。1つは2006年度以降を中心とする開業医師の在宅医療実践とそこに生起する諸問題をとらえるために、文献資料を収集し、また重要な映像資料の閲覧をNHKアーカイブスセンターの協力を得ておこなった。2点目として、在宅医療を社会運動の視点からとらえ、2006年度の医療制度改革以前に行われていた医師や看護師等による独自の取り組みを歴史的に理解し記述することため、開業医師のライフヒストリーの聞き取りを進めた。3点目として、医療・看護・福祉関係者が集う全国レベルの大会に出席し、情報を集めるとともに交流をはかった。2008年度は関西および東京で開業する医師にインタビューを実施し、在宅医療および在宅ケアにかかわる全国規模の学会・研究会(北海道、千葉、京都、鹿児島、大阪)に参加した。また、在宅で看取った経験をもつ家族へのインタビューも協力を得て1名についておこなった。以上の調査は、研究協力者とともに2名でおこなった。インタビュー調査では、1990年代におこった<在宅ケアの全国ネットワーク化>の黎明期を支えた医師を対象に実施した。病院中心あるいは医師中心の医療からなぜ在宅医療に向かっていったのか、固有の生活史および医師としての経験が語られた。これらの医師はいずれも<在宅医療運動>の担い手・第一世代といってよい。全国大会等ではネットワークのIT化が次世代を特徴づけており、社会運動という視点で見ると世代間の連続性と共通性について、今後継続してみていく必要がある。2009年度の研究は以下の3点にまとめることができる。第1に2006年以降を中心とする開業医師の在宅医療実践とそこに生起する諸問題をとらえるために、文献資料を収集した。第2に、医療・看護・福祉関係者が集う全国レベルの大会に出席し、情報を集めるとともに交流をはかった。2009年度は兵庫県および山梨で開業する医師にインタビューを実施した。在宅医療および在宅ケアにかかわる全国規模の学会・研究会(高知、名古屋、長野、群馬、東京、千葉)に参加した。また、人口呼吸器をつけた子どもたちと親の会、市民による生と死を考える会に参加した。第3に、在宅医療を社会運動の視点からとらえ、2006年度の医療制度改革以前に行われていた医師や看護師等による独自の取り組みを歴史的に理解し記述するため、開業医師のライフヒストリーの聞き取りを継続した。インタビュー調査では、1990年代におこった<在宅ケアの全国ネットワーク化>の黎明期を支えた医師、および、緩和ケアおよび在宅医療にかかわる無床診療所の医師と有床診療所の医師、さらに有床診療所を開設後、経済的理由から閉鎖した医師を対象に実施した。以上の調査は、研究協力者とともに2名で実施した。有床診療所という医療実践の特徴は1)地域性2)人間関係の個別性3)医療者-患者・患者家族間の意思決定と伝達の迅速さ4)多職種間の円滑な意思疎通5)専門的サービスと同時に生活支援サービスの提供、という点で病院組織とは区別される。単身世帯化、家族の小規模化が進行する現代において、医療と生活支援の両機能を提供しうる有床診療所の役割と医療実践の有効性は評価される必要がある。当面の課題は担い手となる有床診の経営リスクを減らすうえで制度的支援(診療報酬制度)がこれに応えることが期待される。本研究の目的は2つある。1つは2006年度以降を中心とする開業医師の在宅医療実践とそこに生起する諸問題をとらえること。いま1つは在宅医療を社会運動の視点からとらえ、2006年度の医療制度改革以前に行われていた医師や看護師等による独自の取り組みを歴史的に理解し記述することである。2010年度は、九州では先駆的な取り組みを行っている有床診療所の訪問調査を実施。鹿児島県、長崎県、福岡県で在宅医療および有床診療所を運営する医師を対象としてインタビュー調査を行い、施設見学、事業所で働く看護師やソーシャル・ワーカーなど、医師以外のスタッフにもインタビュー調査を実施した。これとは別に全国各地の医療者や市民らによる、医療実践や市民の取り組みに関する情報交流の場としている全国大会に出席し、広く情報収集を行った。

具体的には、2010年7月日本ホスピス・在宅ケア研究会・全国大会(鳥取県)、9月NPO在宅ケアを支える診療所・市民全国ネットワーク・全国大会(愛知県)、11月死の臨床研究会・全国大会(岩手県)へ出席。在宅医療や在宅ホスピスに取り組む医療関係者および市民と交流し情報交換をした。また2009年以来の継続調査として、山梨県のホスピス有床診療所には2010年5月、9月、11月に訪問し、参与観察と聞き取りを継続した。また、在宅医療にかかわる市民活動として5月に神奈川県大和市の大和生と死を考える会主催の年次大会、8月人工呼吸器をつけた子どもの親の会(通称バクバクの会)全国大会に出席した。以上の調査研究を通じ、日本において極めて少数のホスピス型有床診療所という医療実践とその役割は、「人間らしい死を迎えたい」志向と「家で最後まで看ること」の家族の不安を共に否定せず媒介し調停をはかるところにその特徴があるといえる。課題は、制度上の報酬がその役割と意義に対応し得ていない点の改善にあり、そのことが世代継承性の問題解決につながるといえる。
造血器腫瘍におけるKAP1チロシンリン酸化の機能解析

白血病原因遺伝子であるBCR-ABLチロシンキナーゼの活性型変異体は主に細胞質に局在し、過剰なシグナル伝達を介して造血器腫瘍の発症を促進する。BCR-ABLを含むチロシンキナーゼは実際には核内にも移行することが知られているが、核内におけるチロシンリン酸化シグナル伝達の役割は明らかでない。BCR-ABLトランスジェニックマウスとエピジェネティクスレギュレーターのKAP1をノックアウトマウスと交配した。これらのマウスを用いてKAP1のチロシンリン酸化のin vivoにおける正常造血および白血病発症での機能解析を行なった。分子メカニズムの解析ではK562細胞を用いて解析を行なった。KAP1のチロシンリン酸化による慢性骨髄性白血病の影響を調べるため、CMLのセルラインであるK562細胞の内在性のKAP1をノックダウンした後に、KAP1を発現させるウィルスをK562細胞にインフェクションした。野生型のKAP1(KAP1-wt)、リン酸化しない変異体(KAP1-3YF)をそれぞれ発現させ、細胞への影響を調べた。まず、KAP1によって発現が影響される遺伝子群をGEOのデータベースからピックアップした。そして、CHIPの解析によってこれらの遺伝子へのKAP1-wtとKAP1-3YFの結合の変化について解析した。その結果、野生型に比較してKAP1-3YF変異体では転写を制御する部位への結合が強いことがわかった。また、定量的q-PCRの結果からこれらの遺伝子の発現はKAP1-3YFの発現セルラインでは低いことがわかった。これらのことから、想定した仮説の通り、KAP1のクロマチンへの結合制御が慢性骨髄性白血病の細胞において、転写の制御に関わっていることが示唆された。さらに、in vivoでの解析も行なった。KAP1のコンディショショナルノックアウトマウスを入手した。このマウスから造血幹細胞を分取し、KAP1-wt, KAP1-3YFを発現させて、in vivoのモデルでのKAP1のチロシンリン酸化を介した造血細胞の運命決定制御への影響を解析している。今後はBCR-ABLのノックインマウスも作製したため、慢性骨髄性白血病のin vivoでの影響も解析していく。KAP1チロシンリン酸化による正常な造血細胞での機能解析については、KAP1コンディショナルノックアウトマウスの造血幹細胞に、KAP1-wtまたはKAP1-3YF変異体をそれぞれインフェクションし、致死量放射線照射したレシピエントマウスに移植する。その後、これらのマウスの末梢血や骨髄細胞を採取し、造血の表現系解析を行なうことを計画していた。そして、計画通りにコンディショナルノックアウトマウスを入手し、造血幹細胞を致死量放射線照射したレシピエントマウスに移植開始することが出来た。また、KAP1チロシンリン酸化による造血器腫瘍発症の分子基盤の解明については、K562細胞にKAP1-wtまたはKAP1-3YFをそれぞれインフェクションし、これらの細胞の遺伝子発現を比較する。病態解析については、BCR-Ablトランスジェニックマウスの造血幹細胞に、KAP1-wt、KAP1-3YF変異体をそれぞれインフェクションし、致死量放射線照射したレシピエントマウスに移植することを計画していた。そして計画どおりに、BCR-Ablの発現マウスを入手することができた。セルラインについても樹立に成功し、発現量の解析を行なうことが出来た。KAP1(TIF1beta/TRIM28)のチロシンリン酸化による慢性骨髄性白血病(CML)への影響を調べるため、CMLのセルラインであるK562細胞の内在性のKAP1をまずノックダウンした後に、KAP1を発現させるウィルスをインフェクションした。そして、セルソーターを用いて細胞を分取し、野生型のKAP1(KAP1-wt)、リン酸化されない変異体(KAP1-3YF)をそれぞれ発現させたセルラインを樹立した。KAP1のチロシンリン酸化依存的な複合体の解析を行なうため、タンパク質同士をクロスリンクによって固定した後に、免疫沈降によって複合体を精製し、質量解析によって解析を行ない、結合タンパク質を複数同定することができた。また、KAP1cKOマウス(CD45.2)からソーティングによって造血幹細胞を分取した後に、control vector、KAP1-wtおよびKAP1-3YFを強制発現させるウィルスベクターをインフェクションした後、致死量放射線照射したレシピエントマウス(CD45.1)に競合移植を行なった。想定通り、KAP1のcKOによってCD45.2のキメリズムが顕著に減少したことからKAP1は造血幹細胞の維持・増殖などに影響していることが示された。また、KAP1-wtのウィルスベクターを用いたレスキュー発現によってその減少をキャンセルすることが出来ているため、レスキュー実験は成功している。このKAP1-wtとKAP1-3YFとの変化を現在解析しており、造血幹細胞の増殖の変化や血液のどの分化段階において障害が生じるのかについて解析を行なう。さらに、ROSA-LSL-BCR-ABLノックインマウスとKAP1cKOマウスとを掛け合わせて、実験に必要なマウスの作製に成功した。現在これらのマウスの造血幹細胞を集めて、移植する実験が進行している。KAP1の造血幹細胞における機能解析については、既に移植が終わっているため順調に解析が進んでいる。今後は2次移植なども行ないKAP1の造血幹細胞におけるチロシンリン酸化を介した機能変化について詳細な解析を行なっていく。

骨髄細胞のサンプリングも行なうことで、RNA-seqによる解析なども視野に入れて研究を進めていく。BCR-ABLトランスジェニックマウスについては、正常造血機能の解析と同様に移植の準備を始めており、計画通りに実験を進捗する事ができている。白血病原因遺伝子であるBCR-ABLチロシンキナーゼの活性型変異体は主に細胞質に局在し、過剰なシグナル伝達を介して造血器腫瘍の発症を促進する。BCR-ABLを含むチロシンキナーゼは実際には核内にも移行することが知られているが、核内におけるチロシンリン酸化シグナル伝達の役割は明らかでない。本研究では新たにBCR-Ablをtamoxifen依存的に誘導し、造血器腫瘍を発症するモデルマウスの作製に成功した。この造血器腫瘍マウスとエピジェネティクスレギュレーターのKAP1のコンディショナルノックアウトマウスと交配した。これらのマウスを用いてKAP1のチロシンリン酸化のin vivoにおける正常造血および白血病発症での機能解析を行なった。正常造血においてはKAP1のノックアウトマウスの造血幹細胞(LSK-CD34-CD150+)細胞をセルソーターを用いて分取し、細胞にKAP1の野生型およびチロシンリン酸化変異体を発現させた後に致死量放射線照射したマウスに移植を行なった。チロシンリン酸化変異体で造血幹細胞機能の減少が見られた。造血器腫瘍モデルマウスとの実験ではBCR-ABLノックインマウスは1ヶ月程度で造血器腫瘍を発症し死に至るが、KAP1をノックアウトするとその生存が有意に伸びることがしされた。生き残ったネズミではBCR-ABLを発現しているにもかかわらず、細胞が通常通りの表現系を示していた。BCR-ABLトランスジェニックマウスとエピジェネティクスレギュレーターのKAP1をノックアウトマウスと交配した。分子メカニズムの解析ではK562細胞を用いて解析を行なった。今後は今年度に作製することが出来たin vivoの系をさらに何度か行なうことことで、より確かな結果を得ていくことを目標としている。実験系の作製に関しては研究室全体で取り組んでおり、すでにいくつかの先行している結果も出ているため、十分に実験結果を得ることが出来ると考えている。また、in vivoの系を確立している間にin vitroの系で様々な結果を得ることに成功したため、2年目には特にin vivoの系に取り組むことが出来る。また、in vivoの系で上手く実験することが出来ない場合にはin vitroの系を用いて解析することが出来るように準備をすることが出来た。そのため、2年目以降さらに多くの実験結果を得ていくことが出来ると考えている。
惑星思考の核批評―英語圏と日本の核文学の横断的考察

現代社会は、環境問題をはじめ、貧困、テロ、戦争など、もはや国民国家の枠組みでは対応が困難なほどグローバル化した危機を抱えている。本研究は、そうしたグローバル・リスクの一つである(核兵器と原子力発電の両方を含む)核問題を描いたアメリカ、カナダ、オーストラリア、イギリスを中心とする英語圏の文学と日本の文学を横断的に分析・考察することを通して、人類共通の危機を回避するための国や文化を越えた連帯の可能性と、持続可能な社会を構築するための地球規模の環境的想像力の意義を明らかにした。本研究は、英語圏と日本の核・原爆文学を横断的に検証することで、従来の西欧と日本の核(原爆)批評の限界を超えた新たな核批評の可能性を模索することを目的としている。本研究課題の初年度にあたる本年度は、研究実施計画に従って、国内外の共同研究者の協力を得て、資料の収集と分析を中心に行った。特に、2015年3月半ばに2週間イギリスに滞在し、ロンドンのThe Senate HouseLibraryやThe BritishLibraryを中心に調査を行った。この調査では、核爆弾をはじめて文学作品に描き、のちの科学者による核兵器の開発に影響を与えたとされるH.G.Wellsの1914年の小説『解放された世界』を巡る文献の収集を両図書館のH.G.Wellsコレクションを活用して行った。当時の新聞記事や手紙などを含めた貴重な資料収集を通じて、核戦争を予言し、戦争と人類の滅亡を回避するために世界政府の樹立や人権に関する憲章を考案したWellsの思想を理解し、作品の解釈を進める上で大きな収穫を得た。さらに、2014年8月9日には、神戸市外国語大学で行われた第27回エコクリティシズム研究学会において、「ニュークリア・サイクル:B.ワンガーの連作小説に見る惑星思考」と題した研究発表を行った。本研究発表では、従来の核批評で見過ごされてきたマイノリティの視点、特にオーストラリアの先住民が経験した核実験とウラン採掘に伴う二重の被害をとりあげた文学作品について論じた。以上のように、本年は、英語圏文学の核批評の原点を探ると同時に、その周辺に位置づけられてきたマイノリティの視点からの核批評の研究を進めることで、今後の研究の展開への大きな足掛かりを得ることができた。本研究は、英語圏と日本の核表象を横断的に考察し、西欧の核文学と、日本の原爆文学というジャンルを接続発展させた核批評の構築を目的としている。当該年は、ウラン採掘や核実験の影響を受けた北米やオーストラリアの先住民が経験した核被害を描いた作品の分析を進めた。特に中心に分析を進めた作品は、カナダのDene-Metisの劇作家であるMarie Clementsの劇作_Burning Vision_(2003)とオーストラリアのPitjantjatjara部族のTrevor Jamiesonの劇作_Ngaprtji Ngapartji_(2006)である。_Burning Vision_は、第二次世界大戦前にカナダのPort Radium鉱山で採掘されたウランが、広島と長崎に投下された原子爆弾に使われた史実を描きながら、先住民コミュニティのみならず、米国のラジウムぺインターの女性、採掘に携わった鉱夫、さらには日本の被爆者の経験した被害を重層的かつ包括的に表現している。_Ngaprtji Ngapartji_においては、1950年代のオーストラリアのマラリンガやエミューで行われたイギリスの核実験を先住民の視点から描き出したものとなっているが、本作も先住民の被害に留まらず、実験にかかわった白人兵やヒロシマの被爆者を作中に登場させながら、グローバルな核の被害のサイクルを描き出す。当該年は、核のサイクルと植民地主義の共犯性を明らかにしながら、先住民の視点から描かれた作品がその土地や自然と結びついた価値観による核批評をどのように構築しつつ、地球的な視点で核の問題を表象しているかを明らかにした。アメリカ先住民の核表象の考察は多い一方で、カナダとオーストラリアの先住民による核表象の研究は少ない。こうした劇作の意匠とそこに表れた環境正義を比較検証した点に意義がある。過去2年は、英語圏の文学への考察が中心となってきた。当該年は、その研究の成果としてアメリカの国際学会での発表を行い、国内の書籍(論文集)の一章文分にもまとめた。しかし、この書籍の出版の予定が、編集者の都合により遅れたため、当該年の出版自体は叶わなかった。本来なら、当該年に日本の核表象への分析にとりかかる必要があったが、本テーマによる別の小説の翻訳の仕事が長引いたため、ある一部の研究計画に若干の遅れが生じている。本研究は、英語圏と日本の文学作品における(原爆・原発を含む)核の表象を横断的に考察することで、冷戦時代にジャック・デリダを中心として展開された西欧中心の核批評を再考し、2011年の福島での原発事故を経た現代社会にあって見出しうる新たな核批評の構築を目指すものである。これまで、アメリカ、カナダ、オーストラリアの作品群を分析してきたが、最終年度の本年度は、原子力エネルギーによって支配された世界と、核兵器の誕生と核戦争のありさまを描き、世界ではじめて「原子爆弾」という用語を使用したイギリスの作家H.G.Wellsによる1914年の小説『解放された世界(_The World Set Free: A Story of Mankind)_』と戦後日本の世界連邦運動とを関連づけて分析した。本研究は論文としてまとめられ、共著『架空の国に起きる不思議な戦争』の6章に「核時代の到来を予言した作家ーH.G.ウェルズ『解放された世界』からヒロシマへ」に掲載された。

また、昨年より研究を進めてきたオーストラリアの核実験で被曝した先住民(アボリジニ)の経験を描いた演劇_Ngapartji Ngapartji_に関する分析をまとめ、エコクリティシズム研究学会と多民族研究学会の合同大会のシンポジウムで発表した。さらに、昨年の国際学会で発表したカナダ先住民アーティストMarie Clementsによる演劇_Burning Vision_の論考をまとめた。近日中に共著として発刊される。本年は同時に日本の作家である林京子の『トリニティからトリニティへ』と津島佑子の『ヤマネコ・ドーム』の作品分析を行った。既に分析した英語圏の文学との比較を行い論文にまとめる予定である。現代社会は、環境問題をはじめ、貧困、テロ、戦争など、もはや国民国家の枠組みでは対応が困難なほどグローバル化した危機を抱えている。本研究は、そうしたグローバル・リスクの一つである(核兵器と原子力発電の両方を含む)核問題を描いたアメリカ、カナダ、オーストラリア、イギリスを中心とする英語圏の文学と日本の文学を横断的に分析・考察することを通して、人類共通の危機を回避するための国や文化を越えた連帯の可能性と、持続可能な社会を構築するための地球規模の環境的想像力の意義を明らかにした。資料の収集はおおむね順調に進んでいる。一部作品分析の進んだものをまとめて、国内の学会の全国大会で発表し、今後の研究をさらに発展してゆくヒントを得ることができた。また、国際学会(ASLE Biennial Conference)での研究発表にも採択され、現在準備を進めている。シンポジウムを開催する予定であったが、招聘研究者の予定の関係で来年へと延期することになった。この点のみが変更点と若干の遅れと考えられる。今年度の研究成果を8月の国際学会と11月の国内の学会で発表し、さらに論文としてまとめて出版する。また、オーストラリアの核実験やウラン採掘の問題を日本のヒロシマから捉え辿るオーストラリアのドキュメンタリーの作製にも関わっている。監督や出演者へのインタビューやメイキングの過程を追い、本研究の一環として、論考にまとめる予定である。小説や戯曲などのジャンルを超えて、現在進行形の映像作製、特にドキュメンタリーの核表象についても分析を深め、英語圏と日本に関わるグローバルな核表象の広がりと最新状況を考察していく。英語圏文学・文化今年度収集した資料の分析を進めてゆく。同時進行で、更なる資料収集を目指す。1年目の調査と分析の成果を6月にアメリカのアイダホで行われる環境文学の国際学会(ASLE biennial Conference)で発表する予定である。さらに学会誌と書籍の1章分として2本の論文にまとめて、来年度の出版を目指す。研究の進捗状況に若干の遅れがみられるため。出版を予定していた論集の出版が遅れ、負担金の支払いが次年度になることや、ドキュメンタリー映画の撮影が遅れたこと、調査のために海外渡航が叶わなかったことが具体的な理由として挙げられる。論集の印刷負担金、調査のための渡航費、ドキュメンタリー映画の撮影協力費として使用する。
アメロブラスチン合成ペプチドの骨再生機序の解明と骨再生誘導療法への応用

近年、アメロブラスチンは、エナメル芽細胞の増殖分化に影響を与えるだけでなく、骨発生期にもその発現が認められることが報告されてきた。しかし、骨形成期におけるアメロブラスチンの役割やその機能についての詳細な報告は未だない。そこで、本研究では、アメロブラスチンにおける骨形成への関与について検討した。まず、アメロブラスチンが、骨肉腫症例および骨肉腫細胞株に発現していることを見出し、アメロブラスチンをsiRNAによりknockdownさせると石灰化能が低下することを明らかにした。さらに、アメロブラスチンを発現しない骨肉腫細胞株に、アメロブラスチンを過剰発現させると石灰化を促進することを明らかにした。また、アメロブラスチンが、細胞膜受容体であるCD63(transmembrane-4 glycoprotein superfamily)に結合し、インテグリンβ1の相互作用を介したSrc kinaseの不活化が、骨芽細胞分化や骨形成能の促進に関わることも見出した。骨形成能に加えて、アメロブラスチンは、stress-fiber、focal adhesionの形成を促し、骨芽細胞の運動能を低下させることも見出した。以上の結果より、アメロブラスチンが骨肉腫における分化度や悪性度を調節している可能性が示唆された。今後、アメロブラスチンの発現と骨肉腫症例の予後に関する詳細な検討が必要であるとともに、骨形成促進能を有したアメロブラスチンを骨組織再生誘導療法へ応用できるかどうかの可能性についても検討していく必要があると考える。骨組織におけるアメロブラスチンの役割と骨再生療法への応用の可能性について、初年度年次計画に準じ以下のことを明らかとした。1.アメロブラスチンN末端部合成ペプチド(AMB-N)のin vivoの効果について追加実験を行い、ラット頭蓋骨骨欠損モデルにおいてAMB-Nはcontrol群と比較して有意な新生骨の形成を示すことが明らかとなった。また、マイクロCT画像を撮影し、AMB-N群において3次元的に有意に形成された新生骨を確認した。2.AMB-Nを分泌するベクターを用い、AMB-の持続的な局所への徐放を行う予定であったが、AMB-N(合成ペプチド)の移植で十分な効果が得られたため行わなかった。3.アメロブラスチンを安定的に分泌する骨芽細胞を作製し、同細胞を用い、免疫沈降法にてアメロブラスチンと結合するタンパクの検討を行った結果、CD63(tetraspanin superfamily)がアメロブラスチンと結合することを明らかにした。また、歯牙形成部位に時間・部位特異的に発現すると報告されているアメロブラスチンが、マウス成長時期の骨組織にも発現していることや、骨形成性疾患であるヒト骨肉腫症例やヒト骨肉腫由来細胞株にもその発現が認められることを明らかにした。以上の結果より、アメロブラスチンは、骨組織形成とも密接に関係しており、骨芽細胞の石灰化を促進することが明らかとなった。また、AMB-Nは、骨組織再生促進能を有することが明らかとなり、骨組織再生療法剤に応用できる可能性が示された。現在、大動物実験への応用を検討するとともに、アメロブラスチン結合タンパクとして同定されたCD63との関係について検討を行っている。
脳内時間コーディングに関与する神経ダイナミクスの実証論的理論研究

空間コーディングに関する実験的研究について申請者はこの実験データ解析を行い,共同研究論文がJ. Neurophysiol.誌に発表された.現在試験的実験を開始しており,そこで得られるデータに対して,数理モデルをフルに用いた考察を加えた総合的研究として発展させる計画である,時間コーディング関する実験は,サルの訓練に忍耐を要するものであり,その実験期間は数年にわたっている.研究は実験の成否に左右されるが,これまでに得られた結果もあるので,あと数年で成果を出すことができると考えられる.理論モデルの研究はすでに開始しており,その一部はすでに理論論文にしている.神経スパイク時系列データの解析に関してはレート推定の方法,不規則性の推定などの研究がきわめて順調に推移している(Neural Computation, 2007; J. Phys. A, 2007).スパイク時刻予測の成果も出始めている(Physical review E 2007).空間コーディングに関する実験的研究について申請者はこの実験データ解析を行い,共同研究論文がJ. Neurophysiol.誌に発表された.現在試験的実験を開始しており,そこで得られるデータに対して,数理モデルをフルに用いた考察を加えた総合的研究として発展させる計画である,時間コーディング関する実験は,サルの訓練に忍耐を要するものであり,その実験期間は数年にわたっている.研究は実験の成否に左右されるが,これまでに得られた結果もあるので,あと数年で成果を出すことができると考えられる.理論モデルの研究はすでに開始しており,その一部はすでに理論論文にしている.神経スパイク時系列データの解析に関してはレート推定の方法,不規則性の推定などの研究がきわめて順調に推移している(Neural Computation, 2007; J. Phys. A, 2007).スパイク時刻予測の成果も出始めている(Physical review E 2007).本研究は確実性の高い短期的課題と,今後数年をかけて次の研究を育てていくやや長期的課題とを組み合わせて取り組む.その長期的課題は「脳内時間コーディング」である.実験グループとの共同研究として,動物に時間計測をさせるという課題のデータから脳内時間コーディングに関する解析を行い,時間コーディングに関する端緒をつかんだ.現在のところ,実験動物の数,神経活動データ数などがまだ十分でないために,その結果の普遍性,再現性などの検証に,いますこしの時間が必要である.この,データ待ちの期間に,いくつかの仮説に基づいて時間計測ができるようなニューラルネットワーク・モデルを吟味した.現在はそのモデルの現実性を議論できるようなレベルに発展させている.短期的課題は,細胞発火のダイナミクスの定性的定量的理解のための実証的な研究である.京都大学医学部に大学院生を派遣して行った細胞通電実験のデータを定量的に再現し,スパイク発生タイミングを予測できるモデルの選択に取り組んできた.予測のために用いた数理モデルとしてはこれまでホジキン・ハクスリーのシングルコンパートメントモデルにいくつかのイオンチャンネルを付加したモデルを用いて来たが,現在は,より単純な準線形モデルがデータの再現や,予測をよりよく行うことができることを確認した.,現実のスパイク特性の研究は大幅に進み,大々的にデータを収集してスパイク特性脳地図を作成するプロジェクトを立ち上げた.本研究は確実性の高い短期的課題と,今後数年をかけて次の研究を育てていくやや長期的課題とを組み合わせて取り組んでいる.その長期的課題は「脳内時間コーディング」である.実験グループとの共同研究として,動物に時間計測をさせるという課題のデータから脳内時間コーディングに関する解析を行い,時間コーディングに関する端緒をつかんだ.現在のところ,データがまだ十分でないために,その結果の普遍性,再現性などの検証に,いますこしの時間が必要である.この,データ待ちの期間に,いくつかの仮説に基づいて時間計測ができるようなニューラルネットワーク・モデルを吟味し,モデルの現実性を議論できるようなレベルに発展させた.短期的課題は,細胞発火のダイナミクスの定性的定量的理解のための実証的な研究である.京都大学医学部,および理研にて行った細胞通電実験のデータを定量的に再現し,スパイク発生タイミングを予測できるモデルの選択に取り組み,単純な準線形モデルがデータの再現,予測をよりよく行うことができることを確認した.in vivoスパイク特性の研究は大幅に進み,申請者が提案した新統計測度「局所変動係数Lv」によって,神経発火時系列パターンからそのスパイクを発生した細胞の特性を分類できることがわかった(Neural Computation 2003).さらにその後の研究によって,2種の神経細胞群は大脳皮質内のII-III層とV-VI層に偏在することが明らかになった(J.Neurophysiol.2005).スパイク統計性の違いをさらに系統的に調べるため,現代的な統計手法である経験ベイズ法に基づいた統計解析ツールを開発することに成功した(J.Physics A 2005).さらにデータを収集してスパイク特性脳地図を作成するプロジェクトを開始している.空間コーディングに関する実験的研究について申請者はこの実験データ解析を行い,現在その共同研究論文がすでに受理されている.現在新しい実験パラダイムを作り,試験的実験を開始しており,そこで得られるデータに対して,数理モデルをフルに用いた考察を加えた総合的研究として発展させる計画である.時間コーディング関する実験は,サルの訓練に忍耐を要するものであり,その実験期間は数年にわたっている,研究は実験の成否に左右されるが,これまでに得られた結果もあるので,あと数年で成果を出すことができると考えられる.理論モデルの研究はすでに開始しており,その一部はすでに理論論文にしている.

神経スパイク時系列データの統計解析に関しては申請者の提案になる局所変動係数Lvやベイズ法などの研究がきわめて順調に推移している(Neural Computation, 2003; J.Neurophysiol., 2005; J.Phys.A, 2005).神経細胞のスパイク時間予測に関しても,モデルとデータが与えられた場合の最適方策に関する考察はすでに論文にしている(Neural Networks, 2004; NIPS2006).空間コーディングに関する実験的研究について申請者はこの実験データ解析を行い,共同研究論文がLJ. Neurophysiol.誌に発表された.現在試験的実験を開始しており,そこで得られるデータに対して,数理モデルをフルに用いた考察を加えた総合的研究として発展させる計画である.時間コーディング関する実験は,サルの訓練に忍耐を要するものであり,その実験期間は数年にわたっている.研究は実験の成否に左右されるが,これまでに得られた結果もあるので,あと数年で成果を出すことができると考えられる.理論モデルの研究はすでに開始しており,その一部はすでに理論論文にしている.神経スパイク時系列データの解析に関してはレート推定の方法,不規則性の推定などの研究がきわめて順調に推移している(Neural Computation, 2007; J. Phys. A, 2007).スパイク時刻予測の成果も出始めている(Physical review E 2007).