hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
プロバイオティック血液型乳酸菌による潰瘍性大腸炎(UC)予防能ヨーグルトの構築

ヒト大腸に棲息するプロバイオティクスに対して、とくに硫酸基とシアル酸に対する腸管付着性の高い有用細菌を探索する方法を構築し、実際に多くの微生物を単離してライブラリー構築に成功した。大腸ムチンの血液型別に結合する血液型乳酸菌に続いて、世界で初めて血液型ビフィズス菌も発見した。実際に潰瘍性大腸炎(UC)の発症候補菌であるフソバクテリウム・バリウム(バリウム菌)が血液型抗原を認識結合することを発見し、血液型乳酸菌を投与することで腸内での競合阻害により原因菌を排除する予防医学的な可能性を見出すことが出来た。現在、高齢者の大腸がんと並んで若年層の潰瘍性大腸炎(UC)が我が国では急増し、その予防と治療のカギを握るのは、ヒト腸管内プロバイオティック乳酸菌などの「ヒト腸管付着性機構の解明と応用」に関する基盤研究であると考えられる。我々のこれまで蓄積してきたヒト腸管ムチンのABO式血液型抗原糖鎖に結合する「血液型乳酸菌」および一連の新規アドヘシン(細胞付着因子)の発見成果を基礎として、これらの有用菌を用いて炎症性の腸疾患などの原因有害菌の特異的排除機購の解明を行い、最終的には有害菌排除能ヨーグルトの構築により、UCなどの炎症性腸疾患(IBD)の症状緩和や予防を研究目的としている。初年度である平成22年度は、ヒト大腸ムチンに発現する結合糖鎖の中でABO式血液型抗原部位を認識して結合する「プロバイオティック血液型乳酸菌」の広域スクリーニングを行って、より優れた強力なライブラリーを構築できた。また、同じ血液型抗原に対して結合性を有する病原性細菌である「血液型有害菌」の潰瘍性大腸炎患者の腸管からの単離同定も同時並行的に実施して、優れた炎症性病原性細菌ライブラリーも構築できた。今後は、プロバイオティック乳酸菌をより詳細に結合性解析を可能とする、新しいセンサーチップの構築を目指したい。また、プロバイオティックビフィズス菌を用いて、潰瘍性大腸炎の原因菌の一つと考えられているFusobacterium varium(バリウム菌)のヒト大腸ムチン結合糖鎖への付着を阻害する菌株の存在確認を検討したい。これらの研究成果は、来年度のヒト臨床試験を想定した研究の最終ステップに移行できることを確約しているとも考えられ、大切に進めて行きたい。高齢者の大腸がんと並んで若年層の潰瘍性大腸炎(UC)が現在日本では急増し、その予防と治療のカギを握るのは、ヒト腸管内プロバイオティック乳酸菌などの「ヒト腸管付着性機構の解明と応用」に関する基盤研究である。我々のこれまで蓄積してきたヒト腸管ムチンのABO式血液型抗原糖鎖に結合する「血液型乳酸菌」と一連の新規アドヘシン(細胞付着因子)の発見成果を基礎として、有用菌を用いて炎症性の腸疾患などの原因有害菌の特異的排除機構の解明を行い、最終的には有害菌排除能ヨーグルトの構築により、UCなどの炎症性腸疾患(IBD)を予防することを研究目的としている。平成22年度は、ヒト大腸ムチンに発現する結合糖鎖の中でABO式血液型抗原部位を認識して結合する「プロバイオティック血液型乳酸菌」の広域スクリーニングを行って、より優れた強力なライブラリーを構築できた。平成23年度は、ヒト腸管の腸内細菌叢(フローラ)における腸管付着性や定住性機構を解明するために、血液型結合性菌株を善玉菌と悪玉菌から選抜して、その相互作用のBIACOREによる解析、ヒト腸管細胞培養株での相互作用確認解析、結合因子の同定と糖鎖認識部位のエピトープ解析などを実施した。また、新しいBiacore評価系として、ヒト大腸ムチンの結合糖鎖のシアル酸と硫酸基に着目し、シアリダーゼでシアル酸を、スルファターゼで硫酸基を切り出し、これらを特異的に認識するプロバイオティック乳酸菌とビフィズス菌を選抜した。とくにプロバイオティックビフィズス菌を用いて、潰瘍性大腸炎の原因菌の一つと考えられているFusobacterium varium(バリウム菌)のヒト大腸ムチン結合糖鎖への付着を阻害する菌株の存在することを発見した。これらの研究成果は、来年度のヒト臨床試験を想定した研究の最終ステップに移行できることを確約していると考えられた。若年層の潰瘍性大腸炎が現在日本では急増し、その予防と治療のカギを握るのは、ヒト腸管内プロバイオティクスの「ヒト腸管付着性機構の解明と応用」に関する基盤研究である。私たちのこれまで蓄積してきたヒト腸管ムチンのABO式血液型

抗原糖鎖に結合する「血液型乳酸菌」と一連の新規アドヘシン(細胞付着因子)の発見成果を基礎として、選択有用菌を用いて炎症性の腸疾患などの原因有害菌の特異的排除機構の解明を行い、最終的には有害菌排除能ヨーグルトの構築により、UCなどの炎症性腸疾患(IBD)を予防することを研究目的としている。平成22年度は、ヒト大腸ムチンに発現する結合糖鎖の中でABO式血液型抗原部位を認識して結合する「プロバイオティック血液型乳酸菌」の広域スクリーニングを行って、より優れた強力なライブラリーを構築し、また同じ血液型抗原に対して結合性を有する病原性細菌である「血液型有害菌」の優れた炎症性病原性細菌ライブラリーも構築できた。平成23年度は、ヒト腸管の腸内細菌叢における腸管付着性や定住性機構を解明するために、血液型結合性菌株を善玉菌と悪玉菌から選抜して、その相互作用のBIACOREによる解析、ヒト腸管細胞培養株での相互作用確認解析、結合因子の同定と糖鎖認識部位のエピトープ解析などを実施した。平成24年度には、新しいBiacore評価系として、ヒト大腸ムチンの結合糖鎖のシアル酸と硫酸基に着目し、シアリダーゼでシアル酸を、スルファターゼで硫酸基を切り出し、これらを特異的に認識するプロバイオテクスの評価系を世界で初めて構築することができた。最終的には、プロバイオティックビフィズス菌を用いて、潰瘍性大腸炎の原因菌の一つと考えられているFusobacterium varium(バリウム菌)のヒト大腸ムチン結合糖鎖への付着を阻害するヨーグルトを開発提案することができた。まず、ヒト大腸ムチンの結合糖鎖のシアル酸と硫酸基およびABO式血液型抗原への付着性を個別に検討できるBiacore専用のセンサーチップCM5上に構築が完了した。この新しいセンサーチップを使って、とくに硫酸基を特異的に認識結合するプロバイオティックビフィズス菌を選抜できた。この菌を用いて、潰瘍性大腸炎患者より実際に単離したFusobacterium vatiumの野外株のヒト大腸ムチンへの結合性を解析し、競合的にバリウム菌の結合を阻害できる実用株を発見することができた。まずは、センサーチップの完成が予想よりもかなり早く有用菌を単離することに漕ぎつけた。24年度が最終年度であるため、記入しない。初年度の平成22年度には、潰瘍性大腸炎を防止する可能性の高い、プロバイオティック乳酸菌の数株を選抜することができた。本年度の平成23年度には、さらに大腸下部の直腸やS字状結腸でヒト大腸ムチンに高発現している硫酸基に特に強く認識結合するプロバイオティックビフィズス菌の数株を選抜することができた。また、とくにビフィズス菌については、来年度はヒト臨床試験に移行するステップが確保できたので、実際に実施することを試みたい。
複雑化する介護のグローバルチャネルと日本の政策転換

本研究は複雑化する外国人介護従事者の国際移動を整理し、人材育成と労働環境に着眼し制度運用について検討し、問題点を指摘する。経済連携協定に加え、技能実習、留学、特定技能が相次いで設立され、送り出し国も重複・拡大し、介護従事者の国際斡旋網は複雑化した。技能実習や留学は高額斡旋と低賃金の問題が指摘され、詳細な研究は急務だ。本研究は移民研究と介護研究に跨り、送り出し国の研究者とともに国際的・学際的共同研究を実施する。アジアの高齢化により介護従事者の国際移動も変化しており、本研究の意義は大きい。最終的には、グローバルな比較を可能とするレジーム論において介護人材のグローバルなサステナビリティを提言する。
超光度X線天体のブラックホール仮説の検証

近傍の渦巻銀河には、異常に明るいX線の点源が見られ、20年来の謎となってきた。我々はそれらをULX(Ultra-Luminous X-ray Source;超光度X線天体)と名づけ、「あすか」衛星を用いて観測した結果、それらが太陽の数十倍から数百倍の質量をもつ中質量ブラックホールであるという、独創的な仮説を提唱するに至った。本研究は、この解釈を観測から検証することを目的とする。「あすか」に加え、チャンドラ衛星(米)やXMMニュートン衛星(欧)のデータを用い、ULXのX線観測を推進した結果、ULXが中質量プラックホールである可能性を一段と強めることに成功した。「すばる」望遠鏡を用いた光観測では、ULXの連星の相手とおぼしき天体を発見し、ULXが大質量をもつ可能性を強めた。HETE-2衛星の活躍により、長年の謎だったガンマ線バーストは、大質量星が重力崩壊してULXの種となるブラックホールが形成される瞬間に発生する、という可能性が浮上した。ULXを銀河系内のブラックホール連星や、ある種の巨大ブラックホール天体と詳しく比較した結果、質量降着率の高いブラックホールに共通する性質を抜き出すことができた。これらの多くは、2005年7月10日に打ち上げられたX線衛星「すざく」に、引き継がれることになる。ULXの研究を進めるため、本課題では、「すざく」に搭載された硬X線検出器(HXD)の発展版として、撮像型の宙硬X線の撮像装置を開発することも目的とした。その結果、すだれコリメータとCdTeストリップ検出器を用いたフーリエ合成撮像装置を、実験室レベルで実証することに成功した。多結晶シンチレータや、薄板短冊型シンチレータとシリコンストリップ検出器を組み合わせた撮像素子など、新しい検出器素子の基礎開発も進めることができた。以上のように本課題に、3年間の研究期間を通じて、多面的な研究成果を挙げた。これにより、当初の目的を十分に達成することができたといえる。近傍の渦巻銀河には異常に明るいX線の点源が見られ、20年来の謎となってきた。我々はそれらをULX(Ultra-Luminous X-ray Source;超光度X線天体)と名づけ、「あすか」衛星を用いて観測した結果、それらが太陽の数十倍から数百倍の質量をもった新種のブラックホールであるという独創的な解釈を提唱するに至った。本研究の目的は、この解釈を観測から検証することにある。本年度は、以下のような重要な成果を通じ、ULXのブラックホール仮説をひじょうに強めることに成功した。1.いくつかの国際学会などで活発に成果を公表した結果、我々が2000年に提唱したULXという呼称が、国際的に標準の用語として通用するようになった。2.チャンドラ衛星の公募観測により数個のULXの位置を高精度で決定した。その位置を東京大学のハワイMAGNUM望遠鏡で観測し、光学対応天体を探査した。3.チャンドラおよびXMMニュートン衛星の公開データを用い、近傍銀河にある約40個のULXを研究した結果、多温度黒体放射(MCD)スペクトルを示すものと、べき関数(PL)スペクトルを示すものが、ほぽ同数あることが判明した。これは「あすか」の成果を強めるもので、杉保昌彦の博士学位論文となった。

4.これまでMCD型ULXはブラックホール連星のソフト状態に対応し、PL型ULXはそのハード状態に対応すると考えていたが、新たに前者はスリム降着円盤状態、後者はコンプトン円盤状態に対応するという考えを提唱した(Kubota, Done&Makishima 2002)。これにより、ULXのいくつかの矛盾が解決された。5.ブラックホール新星、ULX、狭線セイファート銀河を、降着率の高いブラックホールという立場で統一的に解釈する描像を提唱した(Makishima et a1.2003)。近傍の渦巻銀河には異常に明るいX線の点源が見られ、20年来の謎となってきた。我々はそれらをULX (Ultra-Luminous X-ray Source;超光度X線天体)と名づけ、「あすか」衛星を用いて観測した結果、それらが太陽の数十倍から数百倍の質量をもった新種のブラックホールであるという独創的な解釈を提唱するに至った。本研究の目的は、この解釈を観測から検証することにある。本年度は昨年度に続き研究を進め、以下のような成果を得た。これらはいずれも、ULXのブラックホール仮説を強めるものである。1.チャンドラおよびXMMニュートン衛星の公開データを用い、近傍銀河の中にあるULXの研究を進め、状態遷移の例数を増やした。これにより、昨年度に提唱した「MCD型ULXはスリム降着円盤状態、PL型ULXはコンプトン円盤状態に対応する」という考えをさらに強化した(Kubota et al. 2004)。2.理化学研究所などと協力し、ガンマ線バーストの観測的研究を進めた(Urata et al. 2003)。その結果、ULXとガンマ線バーストの関連が示唆されつつある。3.ブラックホール新星、ULX、および狭線セイファート銀河を、降着率の高いブラックホールという立場で統一的に解釈する描像を推し進め(Makishima et al. 2003)、とくに狭線セイファート銀河の軟X線超過成分を、ULXとの類推で解釈した。4.ハワイの「すばる」望遠鏡に観測時間を確保でき、2月1012の3夜、代表的な.ULXであるM81 X-6の、光学対応天体の光学観測を行った。現在、データ解析を進めている。本研究の目的は、近傍の渦巻銀河に見られる超光度X線天体(ULX ; Ultra-Luminous X-ray Source)が、太陽の数十倍から数百倍の質量をもつ中質量ブラックホールであるという、我々の独創的な仮説を観測から検証することにある。本年度は3年間にわたる研究の締めくくりとして、以下のような成果を導き、当初の研究目的を達成することができた。1.昨年度に引き続き、チャンドラおよびXMMニュートン衛星の公開データを用い、近傍銀河の中にある明るいX線天体の研究を推進した。その結果、ULXの一部は通常の恒星質量ブラックホールと考えられることを突き止めた。2.ULXは中質量ブラックホールではなく、強く放射がビーミングした天体であるとする、対立する学説の当否を検証するため、質量降着率の高い中性子星や、ジェット天体SS433を観測的に研究し、強いビーミングは考えにくいという確証を得た。3.昨年度に引き続き、ブラックホール、ULX、および狭線セイファート銀河を、降着率の高いブラックホールという立場で統一的に解釈する描像を推し進めた。4.昨年度ハワイの「すばる」望遠鏡を用い、代表的なULXであるM81銀河X-6天体の光学対応天体を探査した。
EMAを用いたボディイメージと健康行動に関する実証的研究

身体不満足感は、極端なダイエットや情動摂食など食行動の問題や喫煙など健康行動の背景要因とされている。青年期女子のダイエットの問題とされてきたが、近年は、その他の集団と課題が注目されている。例として、青年期および成人期男性の壮健願望と筋肉増強剤使用、肥満児の食行動、前思春期の子どものボディイメージとダイエット行動の関連である。自己の身体のとらえかたが、社会文化的な文脈でどのように規定され、健康関連行動に結びつくのか。また、日常生活で経験される感情が行動にどのように影響を与えるのか。蓄積された従来の研究を手がかりに、系統的・包括的な解明を進める必要がある。日常生活のなかで行動・経験・心理状態を測定する方法に、携帯端末をもちいたEMAによる測定がある。従来の自己報告式質問紙法を用いてとらえられてきた健康行動についても、生態学的妥当性を備えた方法でその関連を再検証することは、実生活における健康行動の形成要因理解において、意義あることと考えられる。本研究により、従来の方法論で得られた知見を拡張し国内外への発信が期待でき、まだ発展途上のEMAの精錬をとおして、心理学研究の新しい方法論を提供できるものと考えられる。本研究の目的は、従来の質問紙調査法による研究方法の限界をふまえ、生態学的妥当性を備えた測定方法を用いて、以下の3点を明らかにすることにある:1)感情、認知、ボディイメージ、健康関連行動の関連性,2)対人的相互作用、社会文化的要因のとりこみがボディイメージに与える影響の過程,3)生態学的妥当性を備えた、身体不満足改善のための介入方法の検討。2017年度は、2016年度に実施した予備調査の結果の分析、EMAを用いた調査計画の見直しと実施、2016-2017までの研究成果の発信を計画した。日内で、大学生女子の身体不満足が高まる、時間帯、場所、きっかけが明らかとなった。2017年度は、2016年度に行った予備調査の解析・調査設計の精緻化・予備的分析、2016-2017の予備的な研究成果の発信を行うことができた。EMAを用いるにあたり、調査てつづき、データ収集、携帯端末管理、分析方法に習熟する必要がある。2017年度は、分析に必要なintensive longitudinal analysisのワークショップへの参加を通して、分析方法の習得に努めた。EMAを用いた実査を行い、64名からのデータを収集することができた。また、予備調査の見直しにより、調査に対するコンプライアンス率を高めることに成功した。より緻密な分析をするにあたり、必要な統計パッケージと分析方法の両方についての専門性や、調査デザインに見合うサンプルサイズのシミュレーションの必要性があり、分析については海外の専門家のコンサルテーションを受けることとした。一部、予算の繰越を行うことで、より緻密な研究が可能になり、投稿にむけた準備が進められるにいたった。研究成果の学会発表を進めるとともに、投稿準備を行っている。2017年度に収集したデータについて、マルチレベル分析のひとつであるintensive longitudinal data analysisを用いて、身体不満足度に及ぼす個人内/個人間要因を明らかにする。今回の結果を発展させ、大学生女子以外の集団を対象とした調査、健康行動に影響を与える要因をさらに探索すべく、新規調査を準備する。本研究の目的は、従来の質問紙調査法による研究方法の限界をふまえ、生態学的妥当性を備えた測定方法を用いて、以下の3点を明らかにすることにある:1)感情、認知、ボディイメージ、健康関連行動の関連性、2)対人的相互作用、社会文化的要因のとりこみがボディイメージに与える影響の過程、3)生態学的妥当性を備えた、身体不満足改善のための介入方法の検討。具体的には、1. EMA、感情、認知、ボディイメージ、健康関連行動の関連についての国内外の研究の動向、、2. i)感情・認知、ii)社会文化的要因の内在化や対人的相互作用が、ボディイメージや健康行動に及ぼす影響、3. EMIを統合した身体不満足改善および健康行動促進のための予防的介入方法の検討を行うことと目標としている。2016年度は、調査準備および尺度の開発、EMAを用いた、感情、認知、ボディイメージ、健康関連行動の関連性解明の予備調査、本調査の準備と実施を計画した。文献研究、使用尺度のバックトランスレーションのの地、予備調査として33名の女子大学生を対象としたEMA調査を行った。また、EMA調査によって得られるIntensive Longitudinal Dataの解析のため、ワークショップや研究会に参加し、Intensive Longitudinal Data解析のスキル向上をめざした。さらに、これまでに蓄積してきた予備的な研究を国内外の学術大会で発表し、関連する研究を行う研究者とディスカッションを行うことで、今後の研究実査のための示唆を得た。文献研究、使用尺度のバックトランスレーションのの地、予備調査として33名の女子大学生を対象としたEMA調査を行い、おおむね計画通りの進捗状況である。EMA調査において、研究参加者は2週間、携帯端末により調査項目への回答を求められる。このため、一定数以上の調査参加者を確保することに人的労力を費やす必要があり、研究の課題でもある。

当初、2017年度内に本調査を行うことを予定していたが、調査参加者の人数の確保、データの質のコントロールのための方策を講じる必要があるこが判明したことから、本調査を2017ねんどに行うこととした。身体不満足感は、極端なダイエットや情動摂食など食行動の問題や喫煙など健康行動の背景要因とされている。青年期女子のダイエットの問題とされてきたが、近年は、その他の集団と課題が注目されている。例として、青年期および成人期男性の壮健願望と筋肉増強剤使用、肥満児の食行動、前思春期の子どものボディイメージとダイエット行動の関連である。自己の身体のとらえかたが、社会文化的な文脈でどのように規定され、健康関連行動に結びつくのか。また、日常生活で経験される感情が行動にどのように影響を与えるのか。蓄積された従来の研究を手がかりに、系統的・包括的な解明を進める必要がある。日常生活のなかで行動・経験・心理状態を測定する方法に、携帯端末をもちいたEMAによる測定がある。従来の自己報告式質問紙法を用いてとらえられてきた健康行動についても、生態学的妥当性を備えた方法でその関連を再検証することは、実生活における健康行動の形成要因理解において、意義あることと考えられる。本研究により、従来の方法論で得られた知見を拡張し国内外への発信が期待でき、まだ発展途上のEMAの精錬をとおして、心理学研究の新しい方法論を提供できるものと考えられる。本研究の目的は、従来の質問紙調査法による研究方法の限界をふまえ、生態学的妥当性を備えた測定方法を用いて、以下の3点を明らかにすることにある:1)感情、認知、ボディイメージ、健康関連行動の関連性,2)対人的相互作用、社会文化的要因のとりこみがボディイメージに与える影響の過程,3)生態学的妥当性を備えた、身体不満足改善のための介入方法の検討。2017年度は、2016年度に実施した予備調査の結果の分析、EMAを用いた調査計画の見直しと実施、2016-2017までの研究成果の発信を計画した。日内で、大学生女子の身体不満足が高まる、時間帯、場所、きっかけが明らかとなった。2017年度は、2016年度に行った予備調査の解析・調査設計の精緻化・予備的分析、2016-2017の予備的な研究成果の発信を行うことができた。EMAを用いるにあたり、調査てつづき、データ収集、携帯端末管理、分析方法に習熟する必要がある。2017年度は、分析に必要なintensive longitudinal analysisのワークショップへの参加を通して、分析方法の習得に努めた。EMAを用いた実査を行い、64名からのデータを収集することができた。また、予備調査の見直しにより、調査に対するコンプライアンス率を高めることに成功した。より緻密な分析をするにあたり、必要な統計パッケージと分析方法の両方についての専門性や、調査デザインに見合うサンプルサイズのシミュレーションの必要性があり、分析については海外の専門家のコンサルテーションを受けることとした。一部、予算の繰越を行うことで、より緻密な研究が可能になり、投稿にむけた準備が進められるにいたった。
胎盤機能不全の分子病態機序の解明と新規治療法の開発に向けて

胎盤機能不全に伴う周産期疾患(胎児発育不全(FGR)や妊娠高血圧腎症(PE))発症の分子病態機序の解明を目指す。申請者らは、マウスの知見として、母獣の赤血球の酸素運搬能の低下が胎盤の低酸素状態を惹起し、母児間の栄養輸送機構を阻害し、FGRの発症に関与することを明らかとした(Sayama S., Blood, under revision)。マウスでの知見をヒトFGR/PE症例で検討し、病態機序における重要性および治療的可能性を検証する。
免疫応答を制御する転写因子の改変によるモデルマウスの作製とその解析

本研究の目的は、免疫応答制御に関わる転写因子NF-AT及びSTATの機能改変による細胞レベル及び個体レベルでの免疫反応を制御することであった。NF-ATに関しては、本研究開始時にすでにヒトNF-AT遺伝子(NF-ATp/c/x)の単離を終えていたが、期間中にマウスホモログの遺伝子の単離を終えた。NF-ATには、複数のファミリーメンバーが存在するが、その中で我々が世界に先駆けて単離したNF-ATxを中心に解析及び機能改変を行った。まず、ヒトNF-ATxのドメインマッピングを行い、DNA結合活性、AP-lとの相互作用、転写活性化、カルシニューリンとの相互作用に関与する領域及びカルシニューリンによって制御を受ける阻害領域(CRI)を同定した。その中でも特にCRIを欠失させた変異体は、カルシウムシグナル非依存的に活性化した。マウスNF-ATxについても、N末領域のカルシニューリンとの結合に関与する領域を同定し、その結果をもとにNF-AT配列を介する転写活性化に対してdominant negativeにはたらくと思われる変異体を作製した。STATについてはIL-4のシグナル伝達に必要とされるSTAT6をエストロゲン受容体と融合させ、b-エストラジオールアナログである4-Hydroxy-tamoxifenに反応して活性化するconditionally active fromの分子を作製した。また、STATの上流のJAKについても、JAK2-dominant negative変異体を用いて、GM-CSF刺激に対する応答の細胞レベルでの制御に成功した。今後、本研究により得られたNF-AT及びSTATの変異体を用いてトランスジェニックマウスを作製し、個体レベルでの解析を行う予定である。高親和性GM-CSFレセプター(GMR)はα鎖β鎖(βc)の二本鎖から構成され、β鎖はIL-3、IL-5と共有される。GM-CSFの刺激に伴いJAK2キナーゼが活性化される事が報告されているが、各種のシグナル伝達反応での関与は不明であった。そこでJAK2のキナーゼドメインを欠失した変異体(ΔJAK2)を作製しBA/F3細胞に一過性に発現させ、GM-CSFシグナルへの影響を観察した。COS細胞で過剰発現させた野性型JAK2は自己リン酸化される。さらにΔJAK2を共発現させることにより自己リン酸化はΔJAK2の用量依存的に減少しΔJAK2がdominant negativeに作用することが示唆された。BA/F3細胞に一過性に発現させたΔJAK2はGM-CSFによるチミジンの取り込み、c-fos、c-mycの活性化を阻害した。チロシンキナーゼ阻害剤であるgenisteinはGM-CSFによる細胞増殖とc-myc転写活性を阻害するが、c-fos、c-junの活性化には影響しない。JAK2のリン酸化にはGMRの細胞膜貫通領域の直下の部分(領域A)が関与するが、c-fos、c-junの活性化によりC末端側の領域(領域B)が必要である。従ってGMRβの膜貫通部分直下の領域で相互作用するJAK2キナーゼがGM-CSFの刺激により活性化されGMRβの細胞内領域をリン酸化しc-fos、c-junなどの活性化にいたることが予測された。一方細胞増殖とc-mycの活性化にはc-fos、c-junなどの活性化に必要とされる領域bは介さないことから異なるシグナル伝達経路の関与が結論された。新井、渡辺、中畑等はGM-CSF受容体のシグナル伝達におけるJAK/STATシグナル経路の解析をおこなった。kinase domainを欠失したJAK2-dominant nagative変異型の過剰発現によって、GM-CSFによるJAK2,Shc,SHP2の活性化、c-fos,c-jun,c-mycの遺伝子発現、細胞増殖が抑制された。JAKの活性化にはGM-CSF受容体β鎖のBOX1領域が必要だが、受容体のチロシン残基は必要でなかった。

GM-CSF受容体β鎖のチロシン残基をフェニルアラニンに置換した数種の変異型の解析では、SHCの活性化に必要なチロシン残基は577番目の残基と同定できたが、SHP2の活性化には3つのチロシン残基が関与しており、3つのうちの1つがintactであればよいという結果を得た。横田、正井、井上等は、NF-ATの解析を行った。ヒトNF-ATxのDNA結合活性、AP-1との相互作用、転写活性化及びカルシニューリンとの相互作用に関与する領域を同定した。また、マウスNF-ATxがカルシニューリンと複合体を形成して核内に移行することを確認した。また、NF-ATcの発現はT細胞で誘導的であること、マウス初期胚においてNF-ATx,c,pの発現パターンは発生段階に伴いことなるパターンを示すことを確認した。さらに、Th1,Th2細胞のサブセットによってNF-kBおよびAP-1の活性制御がことなることも見いだした。GM-CSF受容体の発現と血球系細胞の分化との関係について検討する目的で、hGM-CSF受容体Tgマウスを用いて解析を行い、hGM-CSFがin vitro及びin vivoにおいて骨髄球系、巨核球系、赤血球系を含む様々な血球系細胞の増殖及び分化を支持することを示した。hGM-CSFは、リンパ球系細胞の分化にも影響を及ぼしており、特に胸腺細胞については、hGM-CSFにより分化が抑制されること、そしてこれはおそらくDNからDPへの移行の阻害が原因であることが判明した。また、IL-4のシグナル伝達に必要とされるSTAT6をエストロゲン受容体と融合させ、b-estradiol analog 4-Hydroxy-tamoxifenに反応して活性化するconditionally active formの分子を作製した。このようなconditional systemは、サイトカインによつて誘導される免疫応答及びTh1/Th2タイプのサイトカイン産生の制御に有用であることが期待される。NFATの解析については、マウスNFATxのN末領域のカルシニューリンとの結合に関与する領域及び転写活性化に関与する領域を同定し、その結果をもとに、dominant negative変異体を作成した。この変異体は、人為的なサイトカイン産生パターンの制御に道を開く可能性が考えられる。さらに、ヒトT細胞分化におけるNFATの制御についても解析を行い、NFATx,c,pの発現がdifferentialな制御を受けていること、特にCD4^+CD8^+DP細胞において発現レベルの高いNFATxは、DP細胞におけるNFAT-DNA結合複合体の主要構成因子となっていることを示した。この結果は、DP細胞においてNFATxが重要な役割を果している可能性を示唆している。
死別への適応における記憶の機能: 故人との絆の変容プロセスの探究

本研究は,死別への適応において故人との「継続する絆」がどのように変容していくか,故人を想起する際の主観的体験と無意図的想起のはたらきに着目し明らかにすることを目指すものである。平成30(2018)年度計画は,1)既に調査を実施した故人の想起における主観的体験に関する研究にさらなる分析を加え,学会等での発表を通し専門家との意見交換を行い,それらに基づき質問紙調査を立案・実施すること,2)既に調査を実施した故人の無意図的想起に関する探索的研究の再分析を行い成果を発表すること,であった。1)既に調査を実施した死別と記憶に関するデータに分析を加え,故人との関係性によって想起の主観的体験が異なること,及び故人との継続する絆は全般的にポジティブな感情を伴う想起と関連することを示唆する結果を得た。これらの成果については日本心理臨床学会第37回大会,日本心理学会第82回大会で研究発表を行った。加えて,広く対象喪失を対象として実施した,喪失対象の想起における主観的体験に関する調査の再分析を行った。喪失対象との出来事を鮮明に想起することは,喪失対象が自身の一部としてあり続けていることの現れである可能性,故人との愛着が手放せない喪の途上ではよりリアルな色付きの記憶が想起されるが,死別に適応するにつれ故人と切り離され距離を置いた想起がなされるようになる可能性が示唆された。この成果については,第5回東北大学教育・発達・臨床心理研究会で発表を行い,さまざまな領域の研究者から今後の研究に向けての有益な示唆を得ることができた。本研究課題の新たな取り組みに先立ち,本研究の基礎となる,これまで実施してきた幾つかの調査研究についてさらなる分析を行うことが,研究上の課題を明らかにするためには必要であった。これまでの調査で扱ってきた変数の多さや対象数の多さなどから,その分析及び成果のまとめ・発表・意見交換に予想以上に時間を要したことが進捗の多少の遅れに関わっていると考えられる。しかしながら,これまで収集した貴重なデータの再分析や専門家との意見交換からは非常に有益な示唆を得ることができ,令和元(2019)年度以降の取り組みに大いに活かすことができると考えられる。令和元(2019)年度は,計画1)に関する研究計画に先立ち,まずこれまでの故人の想起における主観的体験に関する研究データの分析をさらに進め,学会発表及び論文執筆・投稿により成果を発信する。同時に計画2)の無意図的想起に関する再検討を引き続き行い,同様に成果を発信する。これまでの成果がある程度明らかになった後,計画1)に関する調査計画を立案し,実施に向けての準備を行う。同時に,計画4)として面接調査の実施を予定しているため,研究成果を発信すること及び調査対象者を募ること等を目的としたWebサイトの開設に向けて,令和元(2019)年度は取り組んでいきたい。

同時に,計画4)として面接調査の実施を予定しているため,研究成果を発信すること及び調査対象者を募ること等を目的としたWebサイトの開設に向けて,令和元(2019)年度は取り組んでいきたい。平成30(2018)年度は主としてこれまでのデータ分析とその成果発表に取り組んだため,文献等の購入経費や調査実施に関わる物品費及び人件費・謝金を要さなかった。そのため次年度使用額が生じた。令和元(2019)年度は,文献等の購入経費,成果発表に係る経費(物品費,旅費,その他),研究計画立案に係る経費(物品費,旅費,謝金等)を計画している。研究会での研究発表:田上恭子・山中亮(2019).喪失体験への適応における自伝的記憶の特徴と変容第5回東北大学教育・発達・臨床心理研究会
ラット水晶体上皮細胞の増殖について

生後6週齢ラットに対しガラクトースを5、10、15、25%の濃度で含有する食餌によってそれぞれ飼育し、発症する白内障の組織学的観察と同時に上皮細胞の増殖細胞を標識し、増殖状態を観察した。そしてお互いがどの様な関係にあるかを調べた。方法は、それぞれの群におけるラットの水晶体嚢のついた上皮細胞層を経時的に採取し、固定はメタノールにて行い,DAPI染色にて上皮細胞のDNAを螢光染色し螢光顕微測光法により定量した。また、半数の上皮細胞は抗PCNA(Proliferative Cell Nuclear Antigen)抗体を用いた酵素抗体法により水晶体上皮細胞を染色した。形態学的観察では型通り、試料を作成し、メタクリル樹脂に水晶体を包埋し薄切切片を作成し光顕的に観察した。その結果、白内障発症はガラクトース含有濃度の高いほど、発症までの時期が早くそして進行程度は強いと言うことが分かった。そして、白内障つまり繊維膨化が開始する少し前の時期から抗PCNA陽性細胞が主として前嚢中央部に出現した。また、螢光測光法による2倍体細胞数も陽性細胞の出現と同時期であり、出現数も比例し、ピークも繊維膨化の出現とほぼ同じ時期であり、その後白内障進展にもかかわらず細胞数は漸減した。線維膨化は前述の様に投与ガラクトース濃度に関連するので、陽性細胞出現は繊維膨化と直接関連していることが判明した。従って、上皮細胞増殖の引き金となる刺激は細胞間の物理的圧迫の低下ではないかと推測した。しかし、いずれの場合でもその後の水晶体線維膨化の増加があるにもかかわらずむしろ減少し、陽性細胞出現は一過性であったことから、この刺激はその初期に最も強いと考えた。さらに、上皮細胞のDNA量2培体細胞は抗PCNA陽性細胞の出現と同部位に認められたことから、上皮細胞が確かに増殖していることが確認できた。飼育するガラクトース食餌濃度で比較すると、低いものほどPCNA陽性細胞出現は遅くなった。生後3、7、12、24週齢ラットに対しガラクトースをそれぞれ15、25、50%で含有する異なる含有濃度食餌を投与し、白内障を発症させ組織学的観察を行った。その結果、生後週令の早いものほどそしてガラクトース含有濃度の高いほど、発症までの時期と進行程度は早くかつ強かった。る。つまり、発症は幼若ラットの高濃度群が最も強く、老齢ラットの低濃度群が最も弱い事が分かった。それぞれの群におけるラットの水晶体嚢のついた上皮細胞層を経時的に採取した。固定はメタノールにて行い、DAPI染色にて上皮細胞のDNAを螢光染色し螢光顕微測光法により定量した。その結果次のような事実が分かった。白内障つまり線維膨化が開始する少し前の時期から抗PCNA陽性細胞が主として前嚢中央部に出現する。線維膨化は前述の様に生後週令と投与ガラクトース濃度に関連するので、陽性細胞出現は線維膨化と直接関連していることが判明した。

しかし、いずれの場合でもその後の水晶体線維膨化の増加があるにもかかわらず陽性細胞出現は一過性であったことから、この刺激はその初期に最も強いことが示唆された。上皮細胞のDNA量2倍体細胞は抗PCNA陽性細胞の出現と同時期そして同部位に認められたことから、上皮細胞が確かに増殖していることが確認できた。2倍体細胞の細胞数のピークも線維膨化の出現とほぼ同じ時期であり、その後白内障進展にもかかわらず細胞数は漸減した。生後6週齢ラットに対しガラクトースをそれぞれ5%、10%、15%、25%の濃度で含有する食餌をそれぞれ与え飼育した。そして、発症する白内障に対し組織学的観察を行うと同時に増殖細胞の標識を行い観察した。その結果、ガラクトース含有濃度の高いほど、発症までの時期が早くそして進行程度は強いと言うことが分かった。つまり、発症は高濃度群が最も強く、低濃度群が最も弱かった。それぞれの群におけるラットの水晶体嚢のついた上皮細胞層を経時的に採取した。固定はメタノールにて行い、DAPI染色にて上皮細胞のDNAを螢光染色し螢光顕微測光法により定量した。また、半数の上皮細胞は抗PCNA(Proliferative Cell Nuclear Antigen)抗体を用いた酵素抗体法により水晶体上皮細胞を染色した。その結果次のような事実が分かった。白内障つまり繊維膨化が開始する少し前の時期から抗PCNA陽性細胞が主として前嚢中央部に出現する。また、螢光測光法による2倍体細胞数も陽性細胞の出現と同時期であり、出現数も比例し、ピークも線維膨化の出現とほぼ同じ時期であり、その後白内障進展にもかかわらず細胞数は漸減した。。線維膨化は前述の様に投与ガラクトース濃度に関連するので、陽性細胞出現は線維膨化と直接関連していることが判明した。従って、上皮細胞増殖の引き金となる刺激は細胞間の物理的圧迫の低下ではないかと推測した。しかし、いずれの場合でもその後の水晶体線維膨化の増加があるにもかかわらずむしろ減少し、陽性細胞出現は一過性であったことから、この刺激はその初期に最も強いことが示唆された。さらに、上皮細胞のDNA量2倍体細胞は抗PCNA陽性細胞の出現と同部位に認められたことから、上皮細胞が確かに増殖していることが確認できた。飼育するガラクトース食餌濃度で比較すると、低いものほどPCNA陽性細胞出現は遅くなった。
グローバルヘルス・ガバナンスの構造変容とマネジメント上の課題

本研究は、現在のグローバルヘルス・ガバナンスについて、学際的かつ実務との連携も踏まえて歴史的構造変容やマネジメント上の課題について分析し、政策提言を行うことを目的とした。具体的には1エボラ出血熱等を巡る国際対応のレビューの総括。2グローバルヘルス・ガバナンスの歴史的変容と位置づけの検討。3保健に関連するセクターに焦点を当てたグローバルヘルス・ガバナンスの構造分析。4多層的リスクの相互関係に関する複合リスクの問題等グローバルヘルス・ガバナンスのマネジメント上の課題の検討。5感染症タイプ・状況別グローバルヘルス・ガバナンスのあり方の検討である。最終年度の集大成として、2019年2月19日、東京大学において、Global Policy Challenges for the Future Global Health in the SDG eraと題する国際ワークショップを実施した。国内外のアカデミアにとどまらず、政治家、行政関係者などの実務家を含む多様な主体を集め、これまでの研究成果についての報告を行うとともに議論をした。ワークショップでは主として、グローバルヘルスセキュリティとガバナンスの問題、それに大きく関連し、またSDGsの目標の一つでもあるユニバーサルヘルスカバレッジ(UHC)の問題を取り上げた結果、現状と今後の課題が明らかにされた。得られた知見の一部は、本年日本が議長国を務めるG20のエンゲージメント・グループのThink 20(T20)に参画している分担研究者及び研究協力者による提言書を通じてインプットされた。また、本研究成果については『グローバル保健ガバナンス(仮題)』として書籍としての出版に向けた準備を行っている。なお本研究を遂行するにあたり、研究協力者として、JICA研究所の牧本小枝氏、北京大学の土居健市氏、ハーバード大学の武見綾子氏らの参画を得た。本研究は、グローバルヘルス・ガバナンスについて、学際的かつ実務との連携も踏まえて歴史的構造変容やマネジメント上の課題について分析し、政策提言を行う。具体的には以下の5つの作業を行う。1エボラ出血熱等を巡る国際対応のレビューの総括。3保健と人道、貿易、安全保障、金融・開発といった関連セクターとの関係に焦点を当てたグローバルヘルス・ガバナンスの構造分析。4国際、地域、国、地方レベル間関係問題、多層的リスクの相互関係に関する複合リスクの問題や、官民連携の問題に焦点を当てたグローバルヘルス・ガバナンスのマネジメント上の課題の検討。5感染症タイプ・状況別グローバルヘルス・ガバナンスのあり方の検討。本年度は、上記作業のうち1、2、3に関して、文献調査と関連する学会・会議等での発表や議論を通じて、歴史的構造変化を踏まえた上で、現在進展しているグローバルヘルス・ガバナンスの改革に関する情報収集や分析を行った。そして達成事項と残された課題について政策決定者とアカデミア等による国際ワークショップを開催した。緊急時の危機管理体制と平時からのヘルスシステム強化に関する、WHO内部の組織改革やWHOと国連組織(人道等の枠組みであるOCHAなど)との枠組み構築については共通の方向性が確認されたが、具体的な手順・運用・実施における課題が今後の焦点となり、その局面では新たなアクター(シンクタンクや民間)との連携も重要であることが分かった。また、特にWHO西太平洋事務局でのヒアリングから、過去の地域事務局における危機管理のレビュー・教訓の抽出や比較分析の必要性を認識するとともに、長期的な国際保健行政の構造設計(集約的な構造と分散のバランス等)に関する議論を通じ、1、4や5の作業への示唆を得た。研究目的に掲げた5つの作業(1エボラ出血熱等を巡る国際対応のレビューの総括、2グローバルヘルス・ガバナンスの歴史的変容と位置づけの検討、3グローバルヘルス・ガバナンスの構造分析、4グローバルヘルス・ガバナンスのマネジメント上の課題の検討、5感染症タイプ・状況別グローバルヘルス・ガバナンスのあり方の検討)に関して、計画時に記載した通り順調に進んでいる。グローバルヘルス・ガバナンスの歴史的構造と変容については、文献調査等をベースに、論文や論文草稿をまとめた。また、最近のガバナンス改革論議については、文献調査と関連学会(国際保健医療学会、World Health Summit、バンコク・マヒドン王子賞会議、米国リスク学会等)や国際機関(WPRO,UNDP)へのヒアリング・発表・議論等を、WHO総会、伊勢志摩G7サミット、TICAD、神戸保健大臣会合、国連総会など様々な政治的な動きや議論を実務家とも緊密に連携しながらフォロー・アップデートしつつ、検討を進めた。特に、国際ワークショップを開催することで実務家(WHO、UNOCHA、UNICEF等の国連機関に加え、国内の厚労省、外務省、内閣官房、財務省等の関係省庁)やチャタムハウスなど国際的なシンクタンクを交えてStrengthening Global Health Governance Architecture - What are the achievements and what are left behind(2016年11月東京大学)と題する国際ワークショップを開催したことは幅広関係者間で突っ込んだ議論を行えた点で有用であった。また、WHO西太平洋事務局へのヒアリング(2016年11月)を行うことで、過去の地域事務局における危機管理のレビュー・教訓の抽出や比較分析の必要性など検討すべき事項についての示唆も得ることができた。本研究は、現在のグローバルヘルス・ガバナンスについて、学際的かつ実務との連携も踏まえて歴史的構造変容やマネジメント上の課題について分析し、政策提言を行うことを目的としている。具体的には以下の5つの作業を行っている。

5感染症タイプ・状況別グローバルヘルス・ガバナンスのあり方の検討。本年度は、一連のグローバルヘルス・ガバナンス改革の実施が進みつつあることを踏まえ、文献調査や関係者へのヒアリングを重点的に実施するとともに、グローバルヘルスと国連のSDGsとの関連性に関する発表や、歴史的構造変容に関する分析等、一部の成果については関連する国際学会・会議や研究会で発表を行った。ヒアリング調査については、エボラ出血熱後に行われている国連およびWHOにおける改革の現状把握と分析のため、国連及び関連する組織、WHO本部の関連組織において実施した。暫定的な分析であるが、国連とWHOの間では深刻なレベルにおける手続きの策定等が進展し、シミュレーション演習等の運用実施段階に移行している。またWHO本部においては、これまでの規範策定を主とする役割に加え、現場のオペレーションという役割の追加に伴う大規模な組織改革と様々なメカニズムの導入が行われ、それ自体は評価されるべきであるものの、新しく追加された役割に関して何をどこまで実施するのか、また予算をいかに確保するのかが依然として課題であることが分かった。研究目的に掲げた5つの作業(1エボラ出血熱等を巡る国際対応のレビューの総括、2グローバルヘルス・ガバナンスの歴史的変容と位置づけの検討、3グローバルヘルス・ガバナンスの構造分析、4グローバルヘルス・ガバナンスのマネジメント上の課題の検討、5感染症タイプ・状況別グローバルヘルス・ガバナンスのあり方の検討)に関して、計画時に記載した通り順調に進んでいる。特に、ヒアリング調査については、昨年度実施した国際ワークショップの議論を踏まえ、昨年11月に米国にて、国連本部および関連組織(国連人道問題調整事務所(OCHA), UNICEF)、世界銀行、シンクタンク(戦略国際問題研究所, CSIS)を、また、本年3月にジュネーブにてWHO本部で新設されたWHE(WHO Health Emergency Program)とヘルスシステムの各関連部署において実施することができ、現場の担当者と議論することで大きな収穫を得ることができた。とりわけWHOにおいては、新たに着任した事務局長が健康上の危機を重点施策の一つと銘打っており、オペレーション強化に向けた組織改革が断行されていることが認識された。
視細胞前駆細胞の移動・分化におけるCD73とアデノシンの役割の研究

(1)アデノシンA1受容体の網膜における役割(i)アデノシンに関連するATPについては、培養網膜において、網膜プロジェニター細胞の強く増殖を誘導することが知られている。そこで、同様にアデノシンA1受容体の阻害剤、CCPAの影響を短い培養期間(生後3日目培養1日目)で調べたが、特に増殖、アポトーシス共に影響が見られず、アデノシンA1受容体はプロジェニターにおいては作用していないと考えられる。また、培養3日目においても凍結切片により検証したが、コントロールに比べて顕著な違いは観察されなかったことから、培養13日で観察されたCCPAの影響は細胞の分化・運命決定によるものでは無いことが示唆された。(ii)アデノシン受容体がCNSのシナプスにおいて発現している可能性を網膜において調べた。視細胞における発現は、ONLのシナプスではなく視細胞の細胞体(ONL)に観察された。同様にアマクリン細胞についても、IPLでの発現よりもINLの細胞体において、アマクリンマーカーとの共局在が確認された。(2)網膜の機能解析・構造解析の手技の評価網膜でのアデノシン受容体の機能をさらに詳細に解析するための手法として、Vivoでの網膜電位測定と、培養網膜の電子顕微鏡による構造解析の使用について評価した。(i)基本的な網膜電位測定については成功したが、実際にアデノシンの影響をみるためには、薬剤の眼球への注入、期間、およびその間のマウスの維持等の課題が残った。また、2週齢のマウスで網膜電位測定の例はほとんど無いが、今回の実験で2週齢でもアダルト同様の波形の観測が可能なことが分かった。(ii)12週齢のマウスの眼球の網膜においては、細胞核の変化、シナプスの形成等が観察された。しかし、2週齢相当のマウス培養網膜では、Vivoの目に比べて網膜の神経節層が顕著に薄く、シナプス形成にも変化が見られた。(1)発達過程の網膜におけるアデノシン受容体の発現発達段階の網膜での発現が不明だったアデノシンA3受容体についても、mRNAレベルでの発現が確認された。その後アデノシン受容体A1、A2b受容体に焦点を当ててその蛋白の局在を調べた。両受容体共に網膜神経前駆細胞ではほとんど発現されていなかったが、胎児網膜<生後1週目の網膜<成熟した網膜、の順に発現は上がっていることが観察され、mRNAの発現と相関した結果となった。アデノシンA1受容体は哺乳3日以降の網膜において幅広くほぼ全種の細胞の細胞膜での発現が観察された一方で、アデノシンA2b受容体においては、Ganglion細胞とアマクリン細胞の一部でのみ強い発現が見られ、視細胞での発現は観察されず、受容体のサブタイプ別に網膜での発現部位が異なることが示された。(2)発達過程の網膜においてアデノシン受容体を活性化させた場合の影響哺乳3日齢のマウスより摘出した網膜にアデノシンを付加し約2週間培養すると、コントロールの網膜に比べて、視神経の細胞体の局在する外核層(ONL)が薄くなり、アポトーシスを起こしている細胞がONLにおいて多くなることが観察された。一方で、層構造や細胞種特異的なマーカーの発現への顕著な変化は見られなかった。続いてアデノシンA1受容体特異的にAgonistとして作用するとされるCCPAを付加すると、網膜全体におけるONLの比率が上昇し、INLが相対的に薄くなるという、アデノシンとは異なる影響が見られた。培養13日の段階では、顕著なアポトーシスの増加は見らず、アデノシンにより見られた視細胞への毒性はアデノシンA1受容体を介したものでは無いと今のところ考えられる。現在上記のアデノシンとCCPAについて異なる培養時間でその影響を調べているが、今のところ培養下1日目では、いずれについても特に目立った影響は観察されていない。

また、2週齢のマウスで網膜電位測定の例はほとんど無いが、今回の実験で2週齢でもアダルト同様の波形の観測が可能なことが分かった。(ii)12週齢のマウスの眼球の網膜においては、細胞核の変化、シナプスの形成等が観察された。しかし、2週齢相当のマウス培養網膜では、Vivoの目に比べて網膜の神経節層が顕著に薄く、シナプス形成にも変化が見られた。本年度の計画に組み込まれていな網膜におけるアデノシン受容体の発現は順調に進んだ。これに続いて現在網膜培養系を用いての解析を進めている。この培養系を用いた実験により、アデノシン受容体、特にA1受容体が網膜の分化・または生存に関わる可能性が示唆される結果が得られたのは、当初の予測した結果の範囲内であり、良い結果であるといえる。一方で、In Vitroでの網膜培養系の手技的な難しさ等のため、網膜培養系を用いたアデノシン受容体の機能解析の進展の早さに限界があり、当初の計画以上の速さで進展しているとはいえないため、(2)のおおむね順調、という評価になった。引き続き研究課題にそってアデノシン受容体の網膜での役割を機能的に解析してゆく。現在使用している網膜組織培養の実験系を異なる発生時期の網膜を使用したり、異なる培養時間を用いることで、アデノシン受容体の時期特異的な役割を解析する。特に蛋白レベルでの発現がわかっておりサブタイプ特異的な薬剤があるアデノシンA1受容体に焦点を当てて検証を続けたい。また、研究課題に含まれている、CD73との関連性についてもIn Vitroの培養系を用いて次年度に着手する予定である。