hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
相対論を考慮したセグメント型基底関数の開発

HからXe、ランタニド系列の元素に対して、セグメント型縮約ガウス基底関数を開発した。Kより重い元素の基底関数では相対論を考慮した。これらの基底関数はコンパクトでありながら、電子相関を良く記述し、原子系で理想的な自然軌道の相関エネルギーの90%以上を再現する。2原子分子への適用では、平衡核間距離、振動数、解離エネルギー、励起エネルギーなどの分光定数における実験値との一致も良好である。これらの基底関数は、Sapporo-(DK)-nZP(n=D,T, Q)としてweb上で公開されている。1.KからXeまでの原子に対してDouglas-Kroll-Hessの3次(以下DK3と略す),原子核を有限殻とするモデルで基底関数を開発した。開発した基底関数は、原子のHF計算で精度をチェックするばかりではなく、縮約を部分的に外し相関用基底関数を加えて、原子系と分子系でのpost HF計算での精度のチェックも行ない、学会発表、学術論文として公表した。全電子用の基底関数として、Xeまでの原子に対して同じ考え方で作られた基底関数は数少なく、コンパクトで高精度であることから、分子計算において有用である。2.H-Neを含むXeまでの非相対論、相対論セグメント型基底関数に対して、原子価関数、相関関数のむだな縮約、冗長性を最適化によって簡潔化した。その結果、従来の基底関数よりもはるかにコンパクトな2倍精度、3倍精度、4倍精度関数ができた。これら関数の電子相関エネルギーに関する精度現在行っている。チェックの後、web上で公開する予定である。3.ランタニド系列の原子に対して、同様のセグメント型基底関数の開発を行った。Post HF計算における使用のために、原子価関数の分割と相関軌道の付加、簡潔化のための最適化を現在おこなっており、学術論文に公表予定である。1)前年度開発したランタニド系列の原子のセグメント型基底関数の原子価軌道の分割、相関用基底関数の追加、無駄な縮約を取り除き簡潔な2倍基底、3倍基底、4倍基底を作った。原子系でのHFエネルギーおよび相関エネルギーのテスト計算を行い、十分な精度を実現したことを確認した。さらに、励起エネルギーのテスト計算の結果、他の基底関数と比べても高い精度を持つことが確認された。2)Be-Xeまでの典型元素に対して、内殻の電子相関を加えることにし、内殻HF軌道の分割、相関基底関数の追加の後、第2,3周期は非相対論、第4、5周期は非相対論と相対論の2倍基底、3倍基底、4倍基底を作成した。原子系でのHFエネルギー、相関エネルギーと分子の分光定数の計算を行い、実験値、他の基底関数による結果と比較して十分な精度を有することを確認した。3)未開発のCsからRnまでの相対論を考慮したHF基底関数の作成を行った。HF極限の結果と比較して満足できる範囲の精度を持つことが確認された。4)H-Xeまでの開発した基底関数の公開は既にweb上で行っているが、更に世界的に広く使われている分子計算ソフトウエアGamessに内蔵することができ、今後この研究で開発された基底関数の利用者の拡大が期待される。また、webアプリケーションの改良を行い、基底関数の出力形式を新たに3つの分子計算ソフトウエアにも対応するようにした。1)前年度にH-Xeまでの開発した基底関数の公開は既にweb上で行っているが、この基底関数に関する論文を公表し、その中で基底関数の正式名称を、Sapporo-(DK3)-xZP(x=D,T,Q)とすることにした。2)前年度開発したランタニド系列の原子のセグメント型基底関数について、2倍精度の基底関数の改良を行った。その結果、原子系における相関エネルギー、励起エネルギーに対して十分な精度を持つことができた。また、分子への応用計算とてLaFとYbFの分光定数の計算を行った。この際に、内殻電子の電子相関の寄与を調べ、本研究で開発した基底関数が内殻電子の電子相関に対しても十分な記述性を有していることが明らかになった。また、得られた分光定数は、基底関数の質を2倍、3倍、4倍基底と上げるにしたがって実験値にスムースに近づくことを確かめた。以上の成果は、現在論文公表準備中である。3)H-Xeまでの開発した基底関数の公開は既にweb上で行っているが、Sapporo基底のweb上での正式な公開を開始した。それにともない、pブロック元素の内殻の電子相関を考慮した基底関数を従来の原子価電子のみ電子相関を考慮したものを置き換えた。これで、公開しているH-Xeのすべての元素で内殻の電子相関を考慮していることになる。4)ランタニド系列の元素の基底関数の公開は、論文公表後すみやかに行うため、既にデータとしては準備が完了した。当初の目標としていたRnまでは18個を残しいるが、これらについても継続して開発していく予定である。
性決定領域の起源と進化：原始的な多細胞海産藻類アオサ・アオノリの系統を探る

アオサ藻綱に属するショウジョウアオノリ(Ulva partita)やスジアオノリ(Ulva prolifera)の雌雄配偶子は同形から異形へわずかに進化した種である。ゲノム解析で明らかになった交配型(MT)領域を手がかりに、原始的な多細胞海産藻類であるアオサ・アオノリにおける性決定領域の起源と進化を明らかにする。ショウジョウアオノリを用いた解析で、アオノリの性決定領域は組換え抑制のため進化速度が極めて速くなっていて、クラミドモナスやボルボックスの系とは異なる遺伝子群から構成されていた。唯一共通する遺伝子としてはMIDがあり、オルガネラの母性遺伝との関係が浮上した。両者は進化的には異なる起源であろうとの推定もあるが、近縁種も含め多細胞性植物における雌雄性の決定に関わる遺伝子や雌雄の非対称性を生み出す分子機構の解明に母性遺伝との関係にも注目して、配偶子の成熟についても急いで解析することにした。1)スジアオノリ雌雄ゲノムの完全解読とMT領域:スジアオノリのゲノムサイズは雌雄ともに70Mb程度で、ショウジョウアオノリの60%程度でしかない。これが何を意味するかは今のところ不明だがショウジョウアオノリをリファレンスとしてゲノムが縮退している理由を探りたい。2)ガメトログを用いたアオサ・アオノリ系統の雌雄性の起源の探索:性染色体領域には雌雄に特異的な遺伝子の他に、雌型と雄型にそれぞれ分化したホモログ(ガメトログ)が複数ある。これらのガメトログと相同組換えが抑制された性染色体領域との関係を明らかにする。これによって非組換え領域が出現する分子メカニズムを知る手がかりになるだろう。3)MT領域内の雌雄特異的遺伝子と雌雄の接合装置に特異的な構造の探索:雌雄の接合装置を識別する方法として、免疫サブトラクション法にレクチン染色も加え、電顕3Dによるアオノリ近縁種の空間的配位も検討したい。スジアオノリの雄株と雄株由来のロングリードの塩基配列データを、PacBio/RSIIを用いた一分子リアルタイムシークエンシング法により、8.61Gbと7.17 Gbを取得した。ロングリード用アッセンブラーCanuを用いて、雄株と雌株で各々91.1 Mbpと94.5Mbpのスキャホールドが得られた。配偶子由来のRNA-seqデータを元にBRAKER2を用いて遺伝子予測を行った結果、予測遺伝子数は雄株と雌株で12,997個と12,225個であった。予測遺伝子との相同性を基準に、近縁種であるショウジョウアオノリのスキャホールドと比較したところ、6,000個程度の遺伝子がシンテニーを形成していることがわかった。また、緑色植物門との進化的な関係を調べる目的で、既知の緑色植物門に属する植物と藻類の遺伝子と比較した。18種類の緑色植物門及び外群である紅色植物の間で保存されている55個の単一コピーの遺伝子を用いて最尤推定法で系統樹を作成したところ、2種のアオサ藻は緑藻綱と姉妹群となった。こうしたゲノム解析に加え、交配型遺伝子と母性遺伝の関係を明らかにするために、ショウジョウアオノリとスジアオノリの成熟誘導の相違を検討し始めている。無性生殖のみで繁殖するスジアオノリの培養株を樹立し、その成熟条件を調べた結果、ショウジョウアオノリよりも成熟を誘導しにくく、放出された2本鞭毛の遊走細胞は短時間で遊泳能を失うことが明らかになった。また、フトジュズモ(Chaetomorpha spiralis)の配偶子、動接合子についても、FE-SEM、TEM、高速ビデオを使って解析し、アオノリなどの動接合子と同じように配偶子由来の2つの眼点が細胞の同じ方向に並ぶことを確認し、配偶子の細胞融合部位の非対称性が生育環境に適応した動接合子を形成するために進化してきたことを予想させる結果を得ている。アオノリの近縁種には緑色植物門に共通遺伝子が多く保存されている。ドラフト解析により近縁種間の比較と近縁綱間の比較でアッセンブルと遺伝子予測の確からしさが示せている。ゲノム、遺伝子データのさらなる改善を目的として、胞子体と雌性配偶体から新たにRNAを抽出し、これまでにない詳細なトランスクリプトーム解析を実施したいと考えている。特に、胞子体由来のRNA解析は初めての試みであり、配偶体、配偶子では発現が見られない遺伝子を新たに発見できる可能性がある。Iluminaを用いてショートリードシークエンスを取得し、ゲノムを補正するだけでなく、RNA-seqデータについても胞子体由来のものを加えてデータの精度を上げる予定である。その上で雄株と雌株のゲノムを比較し、接合型座位およびそこに存在する遺伝子の同定を実施したい。スジアオノリに関しては無性生殖のみで繁殖する系統を樹立できている。これらは有性生殖に必要な機能の一部を失っている可能性があるので、無性生殖のみで繁殖するスジアオノリの成熟条件を検討し、有性生殖との比較をRNAseqを含め実施する必要があろう。動接合子と遊走子の間での鞭毛と眼点の配置の類似性は、同じく4本鞭毛の動接合子と遊走子を形成するアオノリやアオサでも見られる可能性がある。したがって、雌雄配偶子の細胞融合部位の非対称性の進化生態学的な意義を明らかにするために、ナガアオサ(Ulva arasakii)などの近縁種を用いてフトジュズモと同じ現象が認められるかを検証する必要があろう。

ヘマトコッカス藻(Haematococcus pluvialis)を用いたモデル実験で、藻類でもゲノム編集による遺伝子破壊が容易なことを確かめた。性決定領域の解析にゲノム編集による遺伝子破壊技術の導入を検討し、交配型と非対称性、非対称性とオルガネラの母性遺伝の関係を遺伝子レベルで明らかにしたい。雌雄が異なっているのは、動物においてはほとんど当たり前であるし、その配偶子に至っては卵と精子で大きさに極端な相違がある。興味深いのは藻類で、同形から異形、異形から卵生殖へといった進化の中間体が複数の系統で生存している。アオサ藻綱に属するアオノリは雌雄配偶子が同形から異形へとわずかに進化した種である。研究にはUlva prolifera(スジアオノリ)やUlva partitaを用いた(後者は、学名変更とともに、和名も小種名にならってヒラアオノリからショウジョウアオノリに変えた)。大きさという変動しやすい量的形質から、左右の非対称性という空間的で一義的な形質に目を転ずると、眼点と接合装置の位置が雌雄で逆転していて、雌雄の個体サイズの差が生じる前から雌雄に左右の非対称性があることがわかってきている。交配型あるいは性とはこの非対称性のことなのだろうか?細胞構造の非対称性に加えゲノム解析で明らかになった交配型(MT)領域を手がかりに原始的な多細胞海産藻類であるアオサ・アオノリの系統を探り、この系統における性決定領域の起源と進化を明らかにする。当該年度の主な研究実施計画は、1)ヒラアオノリMT領域の詳細マップと大規模EST構築と、2)スジアオノリ雌雄ゲノムの完全解読とMT領域の決定にあるとした。前者には(1)ヒラアオノリMT領域内遺伝子の同定、(2)配偶子発生過程における網羅的RNAseq、(3)MT領域の雌雄に特異的な遺伝子に対する抗体作製、(4)ゲノム編集といった課題が含まれている。課題の遂行にあたっては、本年度は当初想定した以上の成果が上がられ学会発表や論文発表もできた。一方、性決定領域の起源と進化を明らかにするためには、後者のスジアオノリ雌雄ゲノムの完全解読とMT領域の決定が必要で、これによってアオノリの性決定領域のゲノム進化を明らかにすることができると考えている。アオサ藻綱で全ゲノム解読された種はなかった。ショウジョウアオノリの雌雄両方のゲノムシークエンスを子細に比較し、雌雄で構造が異なる性特異的な領域を発見した。雄が1.2Mbp、雌が1.5Mbpで、雌雄で相同な遺伝子23個を含む各々47個と65個の遺伝子が存在した。分子進化解析から当該領域はアオサ目の共通祖先で既に成立していたことが示された。雄の性特異的な遺伝子UpaRWP1には、緑藻綱クラミドモナスの雄性決定遺伝子MIDとの相同性が認められたが、単系統性は支持されなかった。ただ、U. proliferaでも同様の領域にUpaRWP1が存在することがわかった。性特異的な領域はアオノリの性決定に保存的に機能しているが、アオサ藻綱と緑藻綱の性染色体の起源は異なるらしい。雌雄特異的領域内にあって、性決定と性分化に関わる遺伝子を探索するために、配偶子誘導開始後、0、24、48時間目の雌雄の葉状体と配偶子のRNA-Seqを実施した。注目したのはUpaRWP1で、MIDと同じように窒素飢餓に応答するRWP-RKドメインをもっていて、配偶子誘導開始前の葉状体や配偶子で発現していた。
オンライン中国20世紀文学辞典の完成と充実

本研究は、1997年設置の「オンライン中国20世紀文学辞典」(http://bluesky.osaka-gaidai.ac.jp/aono/zjcidian/suoyin.htm)の内容を充実させ、完成した形でデータベースとして提供できるようにすることを目的としている。具体的課題としては、「中国語文学用語辞典」「中国20世紀文学年表」「中国当代文学雑誌目録」の追加作成および既存の「台湾・香港・華僑作家」インデックスの充実に取り組んだ。「中国語文学用語辞典」については項目数が多く、完成には至らなかったが、目標の40%程度の語彙に関して、解説をつけることができた。「中国20世紀文学年表」については、既刊の中国文学関連の書籍を参照しつつ、新たに多くの項目を加え、「オンライン中国20世紀文学辞典」の中の作家の項目へとハイパーリンクをつかって自由に行き来できるようになり、オンライン辞典ならではの独創的な参照体系を築くことができた。「中国当代文学雑誌目録」は、中国文化大革命以降、2003年までに発行された中国の文学雑誌のうち代表的な10数誌に掲載された作品及び評論、論文の題目をデータとして入力した。目下入力作業は終わっているが、検索システムをつけて、データベースとして公表する段階にはいたっていない。「台湾・香港・華僑作家辞典」部分では、大幅に台湾の作家・詩人の項目を増設することができた。本研究の成果は、ほぼ完成した形で「オンライン中国20世紀文学辞典」として、新たに購入したサーバーの上に公開している。URLは、http://aonoken.osaka-gaidai.ac.jp/zjcidian/suoyin.htmである。旧来のものも、そのまま残してあるので、新しい「オンライン中国20世紀文学辞典」と比較すれば、本研究が大きな成果を得たことを明らかにできよう。平成15年度の前半には、SARSによって中国や台湾への渡航ができなくなるような事情があり、本研究の実施計画に大幅な変更を余儀なくされた。研究代表者と研究分担者の話し合いにより、国内でできることから始めることになり、具体的な項目と分担を次のように取り決めた。(1)サーバ構築(青野)(2)台湾作家データ入力(今泉)(3)中国雑誌小説目録の入力(青野)(4)中国文学用語語彙解説データ入力(福家)(5)中国文学史年表(WEB版)作成(今泉)。従って、当初の中国や台湾への渡航によって、現存の作家のデータを集める計画は次年度に持ち越すこととなった。(1)サーバコンピュータは既に購入し、Webサーバとしてデータを公開できるように設定を完了している。URLは、http://aonoken.osaka-gaidai.ac.jp/(仮)である。ただし研究結果はまだ公開できるところまで整理ができていないため、目下研究の概要と計画および(4)の用語リストを掲載する予定。(2)「台湾作家選集」のデータにもとづき、現行の「オンライン20世紀文学辞典索引」の「香港・台湾・華僑作家」に登録されている作家数十名を補充しつつある。作家の略伝などは大学院生が翻訳しているが、時間の関係で、まだ訳のチェックができていない。来年度、当該項目「香港・台湾・華僑作家」をアップデートする予定。(3)『人民文学』『収穫』『当代』『十月』『小説月報』『小説選刊』1980年代部分の目次データをEXELで入力した。目下このデータをWEB上で検索できるデータベース・システムの構築法を検討中である。

(4)中国で出版された複数の『中国文学辞典』類から、文学関係の専門用語をピックアップし、翻訳したものをWEBデータとして検索できるようにした。(5)今年度は着手できなかったので、来年度の課題とした。なお、http://bluesky.osaka-gaidai.ac.jp/ ̄aono/zjcidian/suoyin.htmが公開中であるが、本課題の成果は、随時公表できるものと、完成後に公表すべきものとがあり、随時好評できる分(台湾作家データ)については、こちらでアップデートして公表していく。本課題が完成するまでに、少しずつデータを新サーバに移動し、完成した姿は新サーバで公開できるように計画している。この研究の目的は、すでに1997年より大阪外国語大学ネットワーク上のコンピュータで公開している「オンライン中国20世紀文学辞典」(http://bluesky.osaka-gaidai.ac.jp/aono/zjcidian/suoyin.htm)の未完成部分を補填し、内容をより完成した形にすることにある。本「辞典」は、インターネット上で、20世紀中国の文学現象について検索するものであり、具体的には人物、作品、社団、流派、ジャンル、地域、用語など多面的な索引から必要な事項を検索できるように設計している。できうる限り多くの今日的事項を収集し、内容を深め多角的にデータベース化することによって、中国文学研究の基礎的な資料をさらに多くの人に効果的に提供することが可能になる。この研究では、特に、公開に利用してきたコンピュータシステム(主にサーバを中心とするもの)またデータベース構築に必要とされるコンピュータシステム(入力用パソコンおよびその周辺機器)の老朽化に対応する再構築をほぼ実現し、また作家などを実際に訪問取材することによって得たデータの整理、これまでのデータベース上に比較的手薄であった台湾関係の作家・作品を中心としたデータや中国大陸の持っ地域的特性を考慮したデータ(今回は主として湖南省西部地域に関するもの)の収集と整理、また今回初めて行われた歴史的視点(「オンライン20世紀中国文学史」)に立ったデータベースの新たな構築のための基礎的作業を行った。以上総じて、このたびの研究費補助によって、この日本唯一のオンライン中国20世紀文学データベースに対する、より網羅的かつ奥行き深い充実の作業が実現しえたと言える。
昆虫脚再生における幹細胞群形成の時空間的制御機構の解明

脊椎動物において、マクロファージによる炎症と再生の関係が明らかにされつつあることから、本研究ではフタホシコオロギを用いて、マクロファージ様細胞の機能が脚再生に及ぼす影響とマクロファージ様細胞が産生する再生関連因子の同定を目的とした。マクロファージ選択的に殺細胞効果を示すクロドロン酸処理により、損傷治癒は確認されるが、再生芽は形成されない。そこで、損傷治癒が起こる脚切断4時間後の切断組織において、免疫応答系Toll like receptor 2(Toll2)及び炎症性サイトカインeiger(TNFホモログ)の発現量をqPCRにより解析することでクロドロン酸処理によるマクロファージ様細胞の減少を確認した。その結果、Toll2の発現量は正常な再生脚と比較して減少するのに対し、eigerの発現量は増加することから、マクロファージ様細胞の非存在により炎症反応に異常が生じた結果と示唆された。また、クロドロン酸処理と正常個体の脚切断組織を用いてRNA-Seqによるトランスクリプトーム解析を行った。クロドロン酸処理vs.正常再生脚の2群間で有意に発現変動している遺伝子2,322のうち、発現量が増加した遺伝子は1,676、発現量が減少した遺伝子は646であった。また、GO解析の結果、脚形成、筋組織形成、幹細胞の未分化性維持や増殖、免疫応答系などに関与する遺伝子の発現が有意に変動していた。再生芽形成に必要と考えられる多くの遺伝子の情報を得ることができたため、再生芽形成への影響をRNAiにより調べることで、再生初期に関与する遺伝子の同定を現在遂行中である。さらに、再生芽における未分化細胞を可視化するため、マイクロホモロジー依存的なCRISPR-PITCh法によりSTAT遺伝子の染色体座位の3'末端にGFPをノックインすることに成功しており、現在ノックインコオロギの系統化を行っている。昆虫の脚再生過程において、再生芽を構成する未分化幹細胞群の「脱分化」プロセスの分子機構を明らかにすることを目的とする。本研究では、再生モデル昆虫であるコオロギを用い、脚再生の初期過程に着目し、再生芽形成におけるJAK/STATシグナル径路およびマクロファージ様細胞の関与について解析を行った。脊椎動物において脚切断後にマクロファージ様細胞が誘引され、再生芽形成に関与することが示唆されている。そこで、マクロファージ様細胞がコオロギの脚再生において関与しているか調べた。骨粗鬆症治療薬として開発されたクロドロン酸(Clodronate)は、細胞内でATP類似体としてATP代謝を阻害し、破骨細胞・ミクログリア等のマクロファージへの殺細胞効果を示す。クロドロン酸を内包したリポソームマクロキラーV300は、マクロファージの関与研究ツールとして利用されており、これをコオロギ幼虫に投与し、脚を切断すると、再生芽が形成されず再生が生じないことが明らかとなった。このことから、マクロファージ様細胞がコオロギにおいても再生に関与していることが示唆される。さらに、クロドロン酸処理したコオロギと正常なコオロギの脚切断部位からRNAを抽出し、再生芽形成に必須なSTAT遺伝子の発現をリアルタイムPCRにより解析した。その結果、正常では脚切断後12hでSTAT発現量が2倍に増加するのに対して、クロドロン酸処理によりSTAT発現は上昇しないことが明らかとなった。このことは、再生初期において、マクロファージ様細胞から未分化幹細胞におけるJAK/STATシグナル径路への関与を示唆しており、今後、マクロファージ様細胞が産生する因子の同定を行う予定である。昆虫の脚の再生過程において、クロドロン酸処理により再生芽が形成されないことから、マクロファージ様細胞が再生に関与することが示唆された。一方、再生芽を構成する未分化幹細胞群の維持や増殖もしくは脱分化にマクロファージ様細胞がどのように関与するかは不明なままである。先に我々は、再生芽の形成にJAK/STATシグナル経路の関与を報告しており、STATは未分化性の維持に関係することから、上皮細胞の脱分化過程での関与が示唆される。そこで、上皮性の幹細胞群の特定を行い、再生芽の時間的空間的な形成様式を可視化して解析するため、CRISPR/Casを用いたゲノム編集法を利用し、STAT遺伝子座にGFPをノックインさせた系統の樹立に着手している。さらに、クロドロン酸処理と正常な再生脚でGFP蛍光ラベルした未分化幹細胞群の挙動を比較検討できる。再生モデル昆虫であるフタホシコオロギを用い、脚再生の初期過程におけるDecapentaplegic(Dpp)シグナル径路の関与について解析を行った。先に我々は、フタホシコオロギの脚形成の開始と遠近軸に沿ったパターン形成において、発生と再生でHedgehog(Hh)やWingless(Wg)など共通の因子が利用されていることを明らかにしてきた。脚の再生過程では、これらの因子の働きにより傷口の修復後に切断部位の最も遠位に位置価が付与され、切断部位付近の遠近軸が再パターニングされる。また、再生の初期過程ではdppも発現しており、再生脚の遠近軸形成に必要と考えられるが、RNA干渉法(RNAi)を用いた機能解析で再生脚への影響は確認されなかった。そこで、Dppシグナル伝達物質であるSmadタンパク質(Mad)に着目し、RNAiを用いてその機能を解析した。その結果、mad RNAiにより附節が再生しないことが明らかとなり、再生脚の遠位端(再生芽)形成の開始にDppシグナル経路が関与することが示唆された。

一方、再生脚の脛節において、より遠位方向への伸長が確認されたことから、脛節の遠位方向の伸長抑制とサイズ調節にもDppシグナル経路が関与している可能性が示唆された。また、これら附節と脛節における結果は、DppのTypeI受容体に対するRNAi解析でも同様の結果であることが確認された。従って、Dppシグナル経路が再生脚の最遠位形成と遠近軸に沿った位置情報の維持に関与しており、位置情報に基づいた遠位方向への再生脚伸長の制御に必須であることがわかった。今後、再生の初期において再生芽の形成に関与することが示唆されるマクロファージ様細胞におけるHh、Wg、Dppシグナル径路への関与を解析する予定である。CRISPR/Casゲノム編集法を利用してSTAT遺伝子座にGFPノックインを行い、再生芽を構成する未分化幹細胞群を特定し、再生芽の形成様式の可視化を目指している。そのため、コオロギにおいて正確かつ高効率な遺伝子挿入技術が必要であり、PITCh(Precise Integration into Target Chromosome:標的染色体領域への正確な遺伝子挿入)システムを用いたマイクロホモロジー媒介末端結合(MMEJ)による新たな遺伝子ノックイン技術の確立を試みた。現在、PITChシステム確立のため、従来の非相同末端結合(NHEJ)を介したGFPドナーベクターのノックイン実験が先行して結果が得られているabd-A遺伝子を標的として、abd-AのC末端にGFPタグを付加したAbd-AーGFP融合タンパクとして発現するノックインコオロギ作製を検討した。PITChシステムのため、abd-Aに対して約20塩基対ほどの相同配列を付加したGFPドナーベクターを構築し、abd-A遺伝子座へのGFPノックインを行ったが、まだ期待された成果が得られ始めた段階で、さらなるPITChシステム構築のため検討が必要である。そのため、やや遅れていると判断した。また、筋肉の再生にサテライト細胞が関与することが示唆されているが、どのようにサテライト細胞が活性化されて筋肉細胞に分化するのか解析を進めている。現在、脊椎動物における筋肉サテライト細胞のマーカー遺伝子Pax3/7に対するコオロギの相同遺伝子gooseberry1/2の単離に成功しており、RNAiを用いて筋肉再生への影響を解析中で、こちらはおおむね順調に進んでいる。脊椎動物において、マクロファージによる炎症と再生の関係が明らかにされつつあることから、本研究ではフタホシコオロギを用いて、マクロファージ様細胞の機能が脚再生に及ぼす影響とマクロファージ様細胞が産生する再生関連因子の同定を目的とした。マクロファージ選択的に殺細胞効果を示すクロドロン酸処理により、損傷治癒は確認されるが、再生芽は形成されない。そこで、損傷治癒が起こる脚切断4時間後の切断組織において、免疫応答系Toll like receptor 2(Toll2)及び炎症性サイトカインeiger(TNFホモログ)の発現量をqPCRにより解析することでクロドロン酸処理によるマクロファージ様細胞の減少を確認した。その結果、Toll2の発現量は正常な再生脚と比較して減少するのに対し、eigerの発現量は増加することから、マクロファージ様細胞の非存在により炎症反応に異常が生じた結果と示唆された。
腸内環境と腸管透過性との関連に着目した難消化性糖質による腸管免疫修飾機序の解析

前年度の試験結果から,フラクトオリゴ糖(FOS)を摂取したラット盲腸内のpHおよび有機酸パタンは透過性の亢進とリンクしており,FOS摂取によるdysfermentationが腸管透過性の亢進に関与すると考えられた。そこで,本年度はこの有機酸パタンを作り出す腸内細菌叢について解析を行った。菌種の多様性は,対照群に比べFOS群で半減し,この多様性の減少は摂取8wkでも回復しなかった。この結果は, FOS摂取によって腸内細菌叢を構成する半数の細菌種が死滅することを示しており, FOS摂取によって腸内細菌叢が新たな構成へ遷移したことを意味している。一方,構成比を加味した菌種構成の類似度は,対照群とFOS摂取1wk群間に比べ,対照群とFOS摂取8wk群間で高く,主要な細菌種は摂取期間の延長により復元し, FOS摂取8wkでは,これらの細菌種をコアとした腸内細菌叢が再構築されたと考えられる。FOS群で構成比の上位20を占める菌種を対象にして乳酸,酢酸,酪酸濃度との相関解析を行い,乳酸関連菌12菌種および酢酸・酪酸関連菌13菌種を同定した。ラットではR. faecisに加え,酪酸産生菌であるAllobaculum stercoricanis, EubacteriumtrutuosumおよびClostridium属が酪酸産生を代替していると推定された。一方, FOS長期摂取時の乳酸濃度の低下は, Bifidobacterium属(80%減)およびLactobacillus属(90%減)の減少によると考えられた。以上の結果から,FOS摂取ラットの腸内細菌叢は摂取期間の延長に伴い乳酸産生菌型から酪酸産生菌型に遷移する。この腸内細菌叢の遷移が,有機酸パタンが変化する要因であると考えられた。本年度に予定していた菌叢解析を滞りなく進め,FOS摂取ラットの腸内細菌叢は摂取期間の延長に伴い乳酸産生菌型から酪酸産生菌型に遷移することを明らかにすることができたため。昨年度および本年度の結果から,FOS短期摂取時の腸管透過性の亢進は腸内細菌叢およびその代謝産物である有機酸の変化によって惹起される軽度な粘膜炎症に起因すると考えられた。一方で,長期摂取時には透過性の亢進や異常な菌叢および有機酸パタンは解消されることが明らかとなった。今後は,異常な菌叢および有機酸パタンをを導くことなく適切にFOSが摂取できる食事条件を明らかにすることを目的として基本試料の組成の違いが一連の応答にどのような影響を与えるのかを検討する。本年度は,フラクトオリゴ糖(FOS)摂取時のIgA分泌応答を腸管透過性,粘膜組織でのサイトカイン,pIgR発現量から解析した。FOS摂取初期(3,7日間)の盲腸IgA濃度は,対照に比べ10-20倍上昇したが,盲腸粘膜のIgA形質細胞数とpIgRタンパク質の増加が認められたのは7日目で,3日目ではpIgRタンパク質の増加のみ有意であった。サイトカイン発現量は,3日目でIFN-γ,TNF-α,TGF-βが,7日目ではこれらに加えIL-10,12,17の有意な上昇を示した。FOS摂取7日目には,尿中Cr-EDTA排泄量の有意な増加,MLNへの細菌透過の顕在化,盲腸組織MPO活性の有意な上昇が認められた。一方,FOS摂取56日目の盲腸IgA濃度は対照と差がなく,FOS摂取初期に認められた一連の応答はすべてキャンセルされた。明らかに,FOS摂取初期のIgA分泌促進作用には腸管透過性の更新に伴う軽度な粘膜炎症が関与すると考えられた。この腸管透過性の更新を惹起する要因の候補として胆汁酸,腸内細菌叢および有機酸の解析を行った。胆汁酸分析の結果,胆汁酸濃度はFOS摂取群でむしろ低下してた。腸内細菌叢は摂取期間の延長とともに変化するものの,種多様性(Chao1 index)は摂取期間を通じて,対照に比べ同程度の低値を示しており,種多様性の低下は透過性の亢進とは無関係であると考えられた。一方,盲腸内のpHおよび有機酸パタンは透過性の亢進とリンクしており,FOS摂取によるdysfermentationが腸管透過性の亢進に関与すると考えられた。FOS摂取時の腸管透過性,炎症性サイトカイン,腸内発酵産物を分析し,FOS摂取によるdysfermentationが腸管透過性の亢進に関与することを明らかにした。

一方,構成比を加味した菌種構成の類似度は,対照群とFOS摂取1wk群間に比べ,対照群とFOS摂取8wk群間で高く,主要な細菌種は摂取期間の延長により復元し, FOS摂取8wkでは,これらの細菌種をコアとした腸内細菌叢が再構築されたと考えられる。FOS群で構成比の上位20を占める菌種を対象にして乳酸,酢酸,酪酸濃度との相関解析を行い,乳酸関連菌12菌種および酢酸・酪酸関連菌13菌種を同定した。ラットではR. faecisに加え,酪酸産生菌であるAllobaculum stercoricanis, EubacteriumtrutuosumおよびClostridium属が酪酸産生を代替していると推定された。一方, FOS長期摂取時の乳酸濃度の低下は, Bifidobacterium属(80%減)およびLactobacillus属(90%減)の減少によると考えられた。以上の結果から,FOS摂取ラットの腸内細菌叢は摂取期間の延長に伴い乳酸産生菌型から酪酸産生菌型に遷移する。この腸内細菌叢の遷移が,有機酸パタンが変化する要因であると考えられた。本年度に予定していた菌叢解析を滞りなく進め,FOS摂取ラットの腸内細菌叢は摂取期間の延長に伴い乳酸産生菌型から酪酸産生菌型に遷移することを明らかにすることができたため。FOS摂取によるdysfermentationが腸管透過性の亢進に関与することが示唆されたため,このことが実際の腸管バリアを形成するムチン層やタイトジャンクションに与える影響について検討を行う。昨年度および本年度の結果から,FOS短期摂取時の腸管透過性の亢進は腸内細菌叢およびその代謝産物である有機酸の変化によって惹起される軽度な粘膜炎症に起因すると考えられた。一方で,長期摂取時には透過性の亢進や異常な菌叢および有機酸パタンは解消されることが明らかとなった。今後は,異常な菌叢および有機酸パタンをを導くことなく適切にFOSが摂取できる食事条件を明らかにすることを目的として基本試料の組成の違いが一連の応答にどのような影響を与えるのかを検討する。
覚醒下モデルマウスからニューロン活動を記録し、大脳基底核疾患の病態を解明する

大脳基底核疾患の1つであり、病態が未だ不明であるジストニアの病態を解析することを目的として、2種類のジストニアモデルマウスの神経活動を覚醒下で記録した。その結果、大脳基底核出力部における異常な自発発火のパターンと、大脳皮質からの入力に対する異常な応答パターンが、ジストニアにおける症状発現に寄与していることが示唆された。ジストニアは、四肢および体幹の異常運動を示す神経疾患であり、正確な病態については不明である。本研究では、ジストニアの病態を解明することを目的として、ヒトの全身性ジストニアの原因遺伝子を組み込むことによって作製したジストニアモデルマウスのニューロン活動を解析している。これまでに、マウスの頭部を無痛的に固定した状態で、覚醒条件下でニューロン活動を記録し、大脳基底核の出力部である淡蒼球内節のニューロンが、大脳皮質からの入力に対して長い抑制を伴う異常なパターンで応答することが、ジストニア症状の発現に関与していることを示唆するデータを得た。本年度は、マウスが実際に運動を行うときに、淡蒼球内節ニューロンにおいて大脳皮質の刺激によって惹起されたような長い抑制が観察されるのかどうかを明らかにするために、小型軽量のテレメトリーシステムを用いて、非拘束運動中のマウスのニューロン活動を記録するためのシステムを確立した。マウス個体からのニューロン活動の記録は、遺伝子レベルおよびスライスレベルの実験から得られた知見を行動と結びつけるために不可欠なものであるが、これまでほとんど実験例がなかった。本研究により、頭部固定状態のマウスにおける覚醒下ニューロン活動の記録に加えて、非拘束運動中のマウスからニューロン活動を記録するためのシステムを確立した。この記録システムの確立は、これまで抜け落ちていた個体レベルでの電気生理学的解析の進展を促し、物質-ニューロン活動-行動という神経機能の統合的な理解の実現につながると考えている。また、ジストニア症状発現の機構を明らかにすることが出来れば、効果的な治療法の開発に役立つことが期待できる。さらに、ジストニアのモデルマウスにおいて、大脳基底核ニューロンの活動の異常と、運動の異常との相関を解析することにより、大脳基底核による運動の制御機構の理解にも大きく貢献できる。大脳基底核疾患の1つであるジストニアは、持続性または反復性の筋収縮により、四肢および体幹の異常運動を示す神経疾患である。臨床例から大脳基底核の異常であると考えられているが、病態の解析を行うための適当なモデル動物が存在しないことから、正確な病態については不明であった。本研究ではジストニアの病態を解明することを目的として、ヒトの全身性ジストニアの原因遺伝子を組み込むことによって作製したジストニアのモデルマウスであるDYT1トランスジェニックマウスのニューロン活動を覚醒条件下で記録している。本モデルマウスでは、大脳基底核の出力部である淡蒼球内節において、ニューロンの自発発火の著しい低下と、大脳皮質運動野の電気刺激に対する長い活動抑制を伴う異常な応答パターンが観察され、これらがジストニア症状の発現に関与していることが示唆された。現在、ニューロン活動の異常と症状発現との関係をより詳細に調べるために、実際に運動を行っているマウスのニューロン活動を小型軽量のテレメトリーシステムを用いて記録する実験を進めている。本研究において、頭部固定状態のモデルマウスから覚醒下でニューロン活動を記録することにより、ジストニアの病態解明に迫るデータを得ることが出来た。今後、さらに非拘束運動中のマウスにおけるニューロン活動の解析を行うことにより、ジストニア症状発現のメカニズムを明らかにし、効果的な治療法を検索することが出来ると考えている。また、本研究で確立した実験系を用いることにより、多数存在する他の疾患マウスについても、同様に解析することが可能であるため、様々な疾患の病態解明に貢献出来ると考えている。本研究ではジストニアの病態を解明することを目的として、ジストニアモデルマウスのニューロン活動を覚醒条件下で記録している。小児発症性の遺伝性ジストニアの1つであるドーパ反応性ジストニア(DYT5、瀬川病)は、テトラヒドロビオプテリン生合成の障害により、脳内のドーパミンが欠乏することが原因で発症する。本年度は、ドーパ反応性ジストニアのモデルマウスの神経活動を解析した。淡蒼球内節および外節において、バーストを伴う異常な活動パターンが観察された。また、大脳皮質の電気刺激が惹起する3相性の応答のうち、淡蒼球内節では抑制性応答の著しい減弱が、外節では抑制性応答の増強とそれに続く興奮性応答の著しい増強が観察され、これらの異常な応答がジストニア症状の出現に関与していることが示唆された。

マウス個体からのニューロン活動の記録は、遺伝子レベルおよびスライスレベルの実験から得られた知見を行動と結びつけるために不可欠なものであるが、これまでほとんど実験例がなかった。本研究において、頭部固定状態のモデルマウスから覚醒下でニューロン活動を記録することにより、ジストニアの病態解明に迫るデータを得ることが出来た。今後、さらに非拘束運動中のマウスにおけるニューロン活動の解析を行うことにより、ジストニア症状発現のメカニズムを明らかにし、効果的な治療法を検索することが出来ると考えている。また、本研究で確立した実験系を用いることにより、多数存在する他の疾患マウスについても、同様に解析することが可能であるため、様々な疾患の病態解明に貢献出来ると考えている。
生体低分子の精密構造認識と機能発現

本研究班は生体低分子による複合系形成における精密構造認識を有機化学的手段により解析し、生物機能発現の機構を解明する。プロケトグロボシンがケトグロボシンAの生合成中間体であることを証明するために、放射性および安定同位体標識したプロケトグロボシンを培地に添加したが取り込みはみられなかった。しかしこの中間体を加熱したところ、ヘキサエン中間体を経て、出発原料とこのジアステレオマーが1:1で生成することから、生体内では酵素の関与が強く示唆された。一方ソラナピロンAの生合成では重水素標識した前駆体の取り込み実験により、ピロン環上のアルデヒドは前駆体トリエンのメチル基がCH_3→CHO→環化→ソラナピロンA→ソラナピロンBの順で生成することが明らかとなった。青色デルフィニウムの花弁色素をインタクトのまま取り出すことに成功し、色素成分の構造と金属イオンによる安定化機構を考察した。ダイコン下胚軸の光屈性制御物質ラフアヌサニン類の構造活性相関を検討した。ホルボールエステルの炭素骨格の合成に成功した。(2S)-3-exo-および(2R)-3-endo-ジメチルアミノボルネオールとこのエナンチオマーの混合系触媒を用いてジエチル亜鉛とベンズアルデヒドとの反応におけるエナンチオ選択性を検討した。その結果これらの混合系触媒を用いても高度なエナンチオ選択性がみられることから、自己あるいは非自己を認識してジアステレオマーの関係にある二量体を選択的に生成することが明らかにされた。
抗リン脂質抗体症候群;病因の解明と新たなる治療ターゲット

代表的な抗リン脂質抗体である抗β2グリコプロテインI抗体(抗β2GPI抗体)の血栓原性を明らかにする目的で、単球やマクロファージ細胞株に抗β2GPI抗体を作用させ、抗β2GPI抗体と結合ないし相互作用する細胞表面分子について、免疫沈降法により共沈させ、ウエスタンブロット法あるいは質量分析法などを用いて同定を試みた。質量分析法で同定された複数の候補細胞質蛋白の中でゲルゾリンがβ2GPIと結合していることがウエスタンブロット法で確認された。ゲルゾリンはインテグリンα5β1と共役し、抗β2GPI抗体による細胞刺激に関与する可能性が示唆された。細胞表面分子のみならず抗β2GPI抗体と結合ないし相互作用する流血中の可溶型分子についても検策した。抗リン脂質抗体による細胞刺激シグナル、細胞活性化メカニズムについて検討を行うことにより抗リン脂質抗体症候群発症機構を解明し、さらにシグナル伝達制御による病態制御を可能とすることを目的とした。β_2GPIと結合する細胞表面タンパク質の検出のため、リコンビナントFLAGタグβ2GPIを、RAW264.7の細胞溶解液と混合し、抗FLAG抗体アフィニティークロマトグラフィーによりFLAGタグβ_2GPIと複合体を形成するタンパク質(β_2GPI関連プロテオーム)を網羅的に分離した。MALDI-TOFもしくはESI-LC-MS/MSにより解析し、結果として得られたタンパク質につき、β_2GPIとの結合をFACS法およびウエスタンブロッティング法にて確認をした。さらにそのタンパク質の存在の有無による抗CL/β_2GPI抗体による細胞刺激シグナルの変動について、インテグリン直下のFAKのリン酸化をウエスタンブロッティングにて解析した。次に、RAW264.7にNF一κBレポーターベクターをトランスフェクションし、ルシフェラーゼアッセイにて解析した。その結果、ゲルゾリンがβ_2GPIと結合していることがウエスタンブロッティング法にて確認された。また、フローサイトメーターによりゲルゾリンが細胞膜表面上でインテグリンα5β1と結合することが確認され、さらにβ_2GPIがゲルゾリン、インテグリンα5β1を含む複合体と結合することが確認された。また、抗β_2GPI抗体刺激によりインテグリン直下のFAKのリン酸化の亢進が認められ,抗インテグリン抗体の存在下ではFAKのリン酸化が減弱した。ルシフェラーゼアッセイにより、抗インテグリン抗体によるインテグリンα5β1阻害により、抗CL/β_2GPI抗体による細胞刺激シグナルが減弱することが確認された。(1)代表的な抗リン脂質抗体である抗β2グリコプロテインI抗体(抗β2GPI抗体)の血栓原性を明らかにする目的で、単球やマクロファージ細胞株に抗β2GPI抗体を作用させ、抗β2GPI抗体と結合ないし相互作用する細胞表面分子について、免疫沈降法により共沈させ、ウエスタンブロット法あるいは質量分析法などを用いて同定を試みた。細胞表面分子のみならず抗β2GPI抗体と結合ないし相互作用する流血中の可溶型分子についても検索中である。(2)抗β2GPI抗体の血栓原性の機序として、抗体による単球や血管内皮細胞の活性化の結果組織因子の発現の亢進が誘導されることが挙げられる。単球や血管内皮細胞では抗β2GPI抗体による刺激によりMyD88を介し、p38MAPキナーゼ(p38MAPK)のリン酸化が起こることが明らかとなった。また、もう一つの代表的な抗リン脂質抗体であるホスファチジルセリン依存性抗プロトロンビン抗体(抗PS/PT抗体)も単球や血管内皮細胞を活性化し、その結果組織因子の発現亢進が認められるが、抗β2GPI抗体同様にp38MAPKの活性化が関与し、p38MAPK阻害剤で組織因子の発現亢進が抑制されることを明らかにした。異なる抗リン脂質抗体がシグナル伝達経路を共有している可能性が示唆された。
家族介護者のコーピングの有効性とエンパワーメント支援システムの構築

要介護高齢者を介護している家族介護者の介護ストレスを軽減するためのコーピング(対処)を家族ストレス理論に基づいて解明し、家族介護者への実践的なエンパワーメント支援システムの構築を研究目的にしている。これまでインターネットの介護者向けサイトにおける相談内容と回答・アドバイスの分析、介護者への配票調査、介護者への半構造化インタビューを実施してきた。本年度は配票調査の介護ディストレスに関する解析を行い、介護者の健康、被介護者の要介護度、家族の不平不満の解消や励まし合い・気持の通じ合いと並んで、介護者の介護への肯定的認知が介護ディストレスに有意な影響を与えていることが明らかになった。肯定的認知は役割充実感、自己成長感、被介護者との関係満足感で構成されていた。また、前年から実施してきた介護者へのインタビュー調査の対象者を増やし、インタビュー内容も追加改善した。具体的には「ライフイベント」「心のゆとりの変化」「ディストレススケール」「肯定的認知」「リソースの変化」「価値観の変化」などの質問内容を改善したり新たに追加した。心のゆとりの変化構造や肯定的認知の分析は、介護者支援策を考案するのに有効であると考えられる。肯定的認知のうちでも被介護者との関係満足度は自己成長感や役割充実感に比べて変化しやすく、ディストレスとの関係が強いことが示唆された。さらに、介護者自らが情報収集したり、介護状況を自ら改善したりすることを目指して、各種情報や動画を搭載したタブレットを介護者に2ヶ月間使用してもらい、その効用と課題を分析した。要介護高齢者を介護している家族介護者の介護ストレスを軽減するためのコーピング(対処)をストレス理論に基づいて解明し、家族介護者への実践的なエンパワーメント支援システムの構築を研究目的にしている。初年度は介護者の介護ストレスや負担感に関する内外の研究成果をレビューし、影響要因を探ると共に、コーピングの類型やコーピングの効果をまとめ、家族ユニットとしてのストレスについても検討した。家族介護者の対処スタイルについては、おおよそ問題解決型対処、認知変容型対処、回避情動型対処に分類できることを確認した。さらに、インターネットの介護者向けサイトにおける相談内容と回答・アドバイスの内容を収集・整理し、研究知見との突き合わせを行った。具体的には、介護質問投稿サイト「安心介護」に寄せられた過去5年間の約1万件の投稿から「認知症の介護」「介護疲れ」「介護負担」のキーワードを基に800件の投稿を抽出して、投稿者の属性、質問内容の特性などを検討した。現実の介護者は50歳代以上が90%を占めるが、Webサイトの投稿者の半数は50歳代未満であり、比較的若い層の利用が多いことから、配偶者を介護している介護者の投稿も少ない傾向があった。また、4割以上が介護対処に関する質問をしていた。さらに、認知症に関する内容が多くを占めていた。これらを基に、家族介護者に「介護情報入手とストレス」に関する配票調査を実施し、データ分析に着手している。研究目的は、在宅家族介護者の介護ストレスや負担感などの職場ストレスについて、その影響要因とコーピングの様態についてストレス理論を適用して解明し、介護者のエンパワーメント支援に関するメカニズムを析出することであり、その結果を基に介護者支援のためのシステムを開発するものである。これまでに、研究成果のレビュー、インターネットの介護者向けサイトの相談内容の収集と検討、在宅家族介護者を対象にした配票調査を実施した。当初の予定では、介護者へのインタビュー調査を28年3月から実施する予定であったが、配票調査の実施が若干遅れたことから5月半ばから実施する予定である。既に対象者の選定に着手しており、おおむね順調に進展しているといえる。初年度は介護者の介護ストレスや負担感に関する既存研究のレビューおよび配票調査、インタビュー調査から対処スタイルは問題解決型、認知変容型、回避常道型の3つに分類できることを確認した。2年目の今年度は家族介護において介護情報の収集、不安・疑問解消のための相談等は介護状況を大きく左右することが判明したので、家族介護者の情報収集の実態を明らかにし、介護ストレスとの関係を分析すると共に介護者への情報提供のあり方を探求するために家族介護者に対して配票調査を実施し、300名の回答を得た。普段の介護でほしいと思う情報が「入手できている」「まあ入手できている」のは半数強であった。情報入手が必要(「とても」「少し」)だと回答したのは8割以上であるが、現実にはできていない実態が明らかになった。情報入手手段(10変数、4件法)はケアマネージャーや医師との会話や相談が最も多く、新聞、家族、TV・ラジオが続いている。ほしい情報(14変数、5件法)は「認知症の予防方法」が最も多い。情報入手できているかは介護ストレス(7変数)に有意な影響を与えていた。さらに10名の家族介護者に12時間のインタビュー調査を行った。身近な専門家であるケアマネージャーやかかりつけ医師に必要に応じて相談することで情報を得ている介護者が多く、インターネットを利用しての情報収集はほとんど行われていなかった。これらを基に、家族介護者のインタビューケースを増やし、さらに在宅介護のキーパーソンとなっているケアマネージャーへのインタビューを実施し、効果的な介護者へのエンパワーメント支援方策を構築、試行する計画である。

研究目的は、在宅家族介護者の介護ストレスや負担感などのストレスについて、その影響要因とコーピングの様態についてストレス理論を適用して解明し、介護者のエンパワーメント支援に関するメカニズムを析出することであり、その結果を基に介護者支援のためのシステムを開発するものである。これまでに、研究成果のレビュー、介護者向けのWebサイトの相談内容の収集と検討、在宅家族介護者を対象にした配票調査、インタビュー調査を実施した。当初の予定では、介護者のインタビュー調査は29年3月に終了予定であったが、対象者の選定が若干遅れたことから延期して7月半ばまで実施する予定である。対象者の選定作業は進んでおり、おおむね順調に進展しているといえる。要介護高齢者を介護している家族介護者の介護ストレスを軽減するためのコーピング(対処)をストレス理論に基づいて解明し、家族介護者への実践的なエンパワーメント支援システムの構築を研究目的にしている。初年度は介護者の介護ストレスや負担感に関する既存研究のレビューおよび配票調査、インタビュー調査から対処スタイルは問題解決型、認知変容型、回避常道型の3つに分類できることを確認した。23年目は家族介護において介護情報の収集、不安・疑問解消のための相談等は介護状況を大きく左右することが判明したので、家族介護者の情報収集の実態を明らかにし、介護ストレスとの関係を分析すると共に介護者への情報提供のあり方を探求するために家族介護者に対して配票調査を実施した。その結果、介護者が情報入手できているかは介護ストレス(7変数)に有意な影響を与えていたことから、具体的な事例を検証することを目指して、家族介護者に12時間のインタビュー調査を行った。身近な専門家であるケアマネージャーやかかりつけ医師に必要に応じて相談することで情報を得ている介護者が多く、インターネットを利用しての情報収集はほとんど行われていなかった。また、家族介護者の心のゆとりを時系列的に把握し、介護状況の変化、介護者のこころのゆとりに変化が生じた要因や対処法を明らかにして、家族介護者の心のゆとりの変化構造を探る作業を始めている。平成30年度は家族介護者のインタビューケースを増やし、さらに在宅介護のキーパーソンとなっているケアマネージャーへのインタビューを実施し、効果的な介護者へのエンパワーメント支援方策を構築、試行する計画である。当初の予定では、介護者のインタビュー調査は平成29年8月に終了予定であったが、対象者の選定が若干遅れたこと、さらに研究協力者の病気という事態になり、実施が大幅に遅れてしまった。