hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
セレウス菌芽胞の病衣・リネン汚染による院内感染の防止対策

セレウス菌の乾燥芽胞を芽胞染色で調べると、1視野あたりほぼ100%の芽胞が観察された。さらに、乾燥芽胞による繊維への付着実験の方法を確立した。乾燥芽胞による各繊維への付着実験では、綿、ナイロン、アセテート、羊毛、絹、ポリエステル、レーヨン、アクリルの中で、綿やレーヨンには最も芽胞が付着していなかった。それに対して、羊毛、絹、アクリルには多くの芽胞が付着していた。また、20152016年にA県在住の20歳以上の成人約280名対象に、右または左前腕の皮膚(10×10cm)のセレウス菌汚染状況調査を行った。18.6%の被験者からセレウス菌が検出された。また分離菌の中にはイミペネムなどの抗菌薬に耐性菌も見出された。したがって、点滴針挿入時にはアルコール消毒の前にセレウス菌芽胞を洗い除くなどの対策を講じる必要がある。我々のこれまでのセレウス菌芽胞の繊維への付着実験は、セレウス菌芽胞を滅菌水に懸濁した液に各繊維を浸した後に走査電子顕微鏡で観察して、ポリエステルより綿の方が芽胞が付着しやすい傾向があると結論付けていた。しかし、現実には水に濡れたままの病衣を着用することはあり得ないことから、セレウス菌芽胞の乾燥化を試み、乾燥芽胞の作製に成功した。さらに、乾燥芽胞による繊維への付着実験の方法も確立した。この実験方法により、様々な繊維(綿、ナイロン、アセテート、羊毛、絹、ポリエステル、レーヨン、アクリル)への乾燥芽胞の付着実験を行い、それらの繊維の中で、綿やレーヨンには最も芽胞が付着していなかったが、羊毛、絹、アクリルには多くの芽胞が付着していた。これらの結果から、芽胞の付着しにくい繊維による布を開発するための大きな手がかりが得られた。また、地域在住の20歳以上の成人を対象に右または左前腕の皮膚のセレウス菌汚染状況調査を行い、健常成人の前腕皮膚がセレウス菌に高率に汚染され、また分離菌の中にはイミペネムなどの抗菌薬に耐性菌も見出された。これにより、入院前から前腕皮膚がセレウス菌に汚染されていることが示唆され、末梢静脈カテーテル挿入時に通常実施されているアルコール消毒では到底不十分であり、追加の感染防止対策を提案するための重要なデータとなる。今までのセレウス菌の乾燥芽胞の各繊維への付着実験から、我々は綿やレーヨンには乾燥芽胞が最も付着しないことを見出した。次に繊維の織り方に着目して、14種類の織り方の異なる布について、セレウス菌の乾燥芽胞の付着実験を行った。その結果、麻ブロードや精華パレスの織り方には乾燥芽胞が最も付着していなかったが、ポリエステル100%のシフォンジョーゼットには多くの乾燥芽胞が付着していた。したがって、繊維の織り方の違いによって、乾燥芽胞の付着の状況が異なることが示唆された。また、20152017年にA県在住の4088歳の健常成人350名を対象に、右または左前腕皮膚(10×10 cm)におけるセレウス菌汚染状況調査を行った。この調査は椙山女学園大学看護学部研究倫理審査委員会の承認を得て行った。その結果、19.4%(68名/350名)の被験者からセレウス菌が検出された。分離されたセレウス菌について抗菌薬感受性試験(ディスク拡散法)を行い、68株中8株がアンピシリン、セファゾリンに耐性を示し、そのうち1株がイミペネムにも耐性を示した。この8株については、アンピシリン・スルバクタム(クラスAβ-ラクタマーゼを阻害する)についても抗菌薬感受性試験を行ったところ、8株全てが耐性を示した。以上から、アンピシリン耐性はクラスAβ-ラクタマーゼによるものであることが示唆され、またイミペネム耐性はメタロβ-ラクタマーゼの発現の可能性が考えられた。
Aspergillus niger結晶α-Glucosidaseの構造と活性発現

1.糸状菌α-グルコシダーゼの全一次構造の決定:A.nigerから単離された本酵素は、2つのサブユニット(P1およびP2と略称、分子量はそれぞれ約3.5×10^4および約9.8×10^4)から構成されていることが判明した。両サブユニットを分離後、プロテアーゼ消化や化学的切断法で調製したペプチド断片を気相シークエンサーを用いて配列解析した。その結果、P1は227個の、P2は719個のアミノ酸残基から構成されていることが明らかになった。本酵素のゲノムDNAの配列解析から、P1とP2はDNA上にこの順序で並んでいることが明らかになった。2.自殺基質による糸状菌α-グルコシダーゼの親和標識反応の解析と触媒部位の決定:myo-Inositolから合成したConduritol B Epoxide(CBE)を本酵素に作用させ、その失活反応を検討した結果、本酵素とCBEが等モルで反応し、P2存在する触媒部位のアスパラギン酸が標識されることが明らかになった。3.Maltalに対する2種類のβ-アミラーゼの反応機構の解析:2種のβ-アミラーゼをMaltalに作用させ、生成する2-Deoxymaltoseのアノマー型をβと決定した。次に、酵素反応をD_2O中で行い、単離精製した2-Deoxy-[2-^2H]maltoseを^1H-NMRを用いて解析した。各シグナルの帰属の結果、β-アミラーゼはシス方向からマルタールの二重結合を水和することが明らかになった。4.糸状菌α-Glucosidaseの糖鎖構造の解析:本酵素は約25.5%の糖を含んでいる。アミノ酸配列の解析から13ヶ所以上の部位にAsn結合型糖鎖の存在が示唆された。これらの糖鎖をN-glycanaseで切り出し、HPLOで単離精製後、NMRやメチル化分析によりAsn結合型糖鎖の全構造の決定を行なった結果、α-ガラクトフラノシル残基をもつ3種の新しい糖鎖構造を含む7種の糖鎖構造を明らかにした。(1)Aspergillusniger α-Glucosidaseの全一次構造および遊離SH基、S-S結合の位置を決定した。本酵素は2つのサブユニット(P1およびP2と仮称、分子量はそれぞれ約3万および約9万)から構成されている。両者を分離後、種々のProteaseおよび化学的切断法により断片化し、エドマン法を用いて全一次構造を決定した。その結果、P1は227個の、P2は719個のアミノ酸残基から構成されていた。また、24個の修飾アミノ酸(糖鎖付加など)の存在が明らかになった。P1はCysを2個、P2はCysを5個有している。5,5'-Dithiobis(2-nitrobenzoic acid)の分光滴定から遊離Cysは1残基と推定された。蛍光試薬を用いて遊離Cysとを修飾し、得られたペプチド断片の配列解析から、P2のCys^<75>と推定された。また、両サブユニットのLys-C Protease消化ペプチドを還元後、蛍光SH試薬である7-Fluoro-4-sulfamoy1-2,1,3-benzoxadiazoleを用いて修飾した。

その結果、P1のCys^<38>-Cys^<14>、P2のCys^<232>-Cys^<236>およびP2のCys^<425>-Cys^<436>間にジスルフィド結合が存在していることが推定された。Aspergillusniger α-Glucosidaseの触媒基の位置を推定するため、Mechanism-based inactivatorを用いてアフィニティーラベリングを行なった。親和標識試薬である1DL-1,2-anhydro-myo-inositol(AMIと略)を本酵素に作用させ、擬一次的失活を認めた。この失活反応の詳細な解析(拮抗阻害剤による失活防御、失活反応はMichaelis複合体経由であり、All or Non型であること、酵素とAMIが1:1に反応すること、失活のpK値は基質水解反応のpKe値と一致すること)から、AMIは本酵素の触媒基(酸性側の解離基)を修飾することが明らかになった。AMI修飾酵素からP1およびP2サブユニットを単離し、HCl水解-GLC分析を行なったところ、P2のみからInositolが検出された。従って触媒基の一つはP2サブユニット内に存在することが推定された。(1)X線構造解析用結晶の調製糸状菌結晶αglucosidaseの全一次構造の決定が終了したので、本酵素のX線構造解析用結晶の調製を行い、X-線構造解析を試みたが良好な回折像が得られなかった。この理由は本酵素が糖タンパク質であり、このため糖部分が結晶中でゆらいでいるためと考えられ、今後は糖部分を除いた結晶の調製を試みたい。また、放射性同位元素でラベルしたConduritol-B-epoxideの合成を行ない、この化合物を用いた酵素の修飾による触媒部位の解析を本酵素のみならず他の起源α-glucosidaseにも試みた結果、触媒活性に直接関与しているアミノ酸残基はアスパラギン酸であることが判明した。二重結合を有する特殊基質(上述目的の項)にα-Glucosidase,Glucoamylase,β-Glucosidase,TrehalaseやCellulaseを作用させ、水和反応が生じることを認めた。この反応はMichaelis複合体を経由するものである。生成物の構造解析から、二重結合への水分子の攻撃方向を推定した。OH^-は通常の基質水解反応によって生ずる生成物のアノマー型に一致する方向から付加するのに対し、H^+は用いた基質や酵素によってトランスとシスの両方向の場合があることが判明した。(3)糸状菌α-Glucosidaseを構築するサブユニットの役割糸状菌α-Glucosidaseは二つのヘテロサブユニット(P1,P2)から構成されている。これら両者のいずれに触媒部位が存在するか調べ、自殺基質の結合するサブユニットはP2であることが明らかとなった。また,本酵素の遺伝子解析の結果、P1とP2サブユニットは同一構造遺伝子上に連続的に並んでいることが明らかとなった。(4)糸状菌α-Glucosidaseの糖鎖構造の解析本酵素は約25.5%の糖を含んでいる。アミノ酸配列の解析から13ヶ所以上の部位にAsn結合型糖鎖の存在が示唆された。これらの糖鎖をN-glycanaseで切り出し、HPLCで単離精製後、NMRやメチル化分析によりAsn結合型糖鎖の全構造の決定を行なった結果、α-ガラクトフラノシル残基をもつ3種の新しい糖鎖構造を含む7種の糖鎖構造を明らかにした。
クレン古細菌が産生する相補性トレオニンtRNA合成酵素の構造と機能

トレオニル-tRNA合成酵素(ThrRS)は,タンパク質合成系においてtRNA^<Thr>をアミノアシル化し,間違えて取り付けたアミノ酸を取り外す編集という重要な機能を担っている.ThrRSは通常三コのドメイン(編集ドメイン,触媒ドメイン,アンチコドン結合ドメイン)構造によって構成されている.多くの生物は20種類のアミノ酸それぞれに対して1種類のThrRS遺伝子を持っている.しかし,クレン古細菌に属する少種類の生物は2種類の異なった遺伝子をゲノム内に持っていることが見いだされた.ThrRS-1にはCドメインとAドメインがあるがEドメインがなく,ThrRS-2にはEドメインとAドメインがあるがCドメインがない.これらの生物では,ThrRS-1がアシル化の触媒反応を進め,ThrRS-2がアシル化後の編集機能を果たすことになり,通常は1種類のThrRSが行なう機能をThrRS-1とThrRS-2で分担していることを示唆している.本研究では,このような2種類の酵素に機能分担の立体構造を明らかにするために,クレン古細菌Aeropyrum pernix K1(Ap)とSulfolobus tokodaii strain 7(St)それぞれのThrRS-1とThrRS-2のX線解析を行った.分解能2.3で解析に成功したApThrRS-1の結晶構造から,ApThrRS-1にはEドメインがなく,CドメインとAドメインで構成されていて,2分子のApThrRS-1がCドメイン間で会合して二量体を形成していることを明らかにした.この事実から,ApThrRS-1はcat型のThrRSであることが判明した.したがってThrRS-2はedt型のThrRSであり,ThrRS-1とThrRS-2の2分子で機能を分担していると結論できる.ApThrRS-2のアミノ酸配列を他の生物種のThrRSの配列と比較すると,Eドメインはバクテリアや真核生物のThrRSのEドメインとは相同性がない.真性古細菌Pyrococcus abyssiのThrRSのEドメインと相同性がある.この真性古細菌のEドメインの構造は,バクテリアや真核生物とは全く異なっていて,Eドメイン同士で二量体を形成する可能性がある.本研究で行なったゲルろ過実験はThrRS-1が二量体を形成することを実証した.ThrRS-1同士,ThrRS-2同士はそれぞれ二量体を形成することが明らかになった.反応の連携という見地からは,ThrRS-1とThrRS-2の間での相互作用が期待される.しかし,ThrRS-1とThrRS-2の間の相互作用は観測されず,それぞれが独立に機能していることが考えられる.tRNA^<Thr>との相互作用も調べた結果,ThrRS-1とThrRS-2どちらもtRNAに結合するが,ThrRS-1の方が強くtRNA^<Thr>に結合することがわかった.おそらくtRNA^<Thr>のCCA末端にアミン酸がアシル化されるとThrRS-2の方がより強く結合するものと推定した.tRNA^<Thr>とThrRS-1およびtRNA^<Thr>とThrRS-2の複合体結晶の調製に成功したので,近い将来ThrRS-1とThrRS-2のtRNA^<Thr>との結合様式の相違が明らかになるであろう.トレオニル-tRNA合成酵素(ThrRS)は,タンパク質合成系においてtRNA^<Thr>をアミノアシル化し,間違えて取り付けたアミノ酸を取り外す編集という重要な機能を担っている.ThrRSは通常三コのドメイン(編集ドメイン,触媒ドメイン,アンチコドン結合ドメイン)構造によって構成されている.多くの生物は20種類のアミノ酸それぞれに対して1種類のThrRS遺伝子を持っている.しかし,クレン古細菌に属する少種類の生物は2種類の異なった遺伝子をゲノム内に持っていることが見いだされた.ThrRS-1にはCドメインとAドメインがあるがEドメインがなく,ThrRS-2にはEドメインとAドメインがあるがCドメインがない.これらの生物では,ThrRS-1がアシル化の触媒反応を進め,ThrRS-2がアシル化後の編集機能を果たすことになり,通常は1種類のThrRSが行なう機能をThrRS-1とThrRS-2で分担していることを示唆している.本研究では,このような2種類の酵素に機能分担の立体構造を明らかにするために,クレン古細菌Aeropyrum pernix K1(Ap)とSulfolobus tokodaii strain 7(St)それぞれのThrRS-1とThrRS-2のX線解析を行った.分解能2.3で解析に成功したApThrRS-1の結晶構造から,ApThrRS-1にはEドメインがなく,CドメインとAドメインで構成されていて,2分子のApThrRS-1がCドメイン間で会合して二量体を形成していることを明らかにした.この事実から,ApThrRS-1はcat型のThrRSであることが判明した.したがってThrRS-2はedt型のThrRSであり,ThrRS-1とThrRS-2の2分子で機能を分担していると結論できる.ApThrRS-2のアミノ酸配列を他の生物種のThrRSの配列と比較すると,Eドメインはバクテリアや真核生物のThrRSのEドメインとは相同性がない.真性古細菌Pyrococcus abyssiのThrRSのEドメインと相同性がある.この真性古細菌のEドメインの構造は,バクテリアや真核生物とは全く異なっていて,Eドメイン同士で二量体を形成する可能性がある.本研究で行なったゲルろ過実験はThrRS-1が二量体を形成することを実証した.

ThrRS-1同士,ThrRS-2同士はそれぞれ二量体を形成することが明らかになった.反応の連携という見地からは,ThrRS-1とThrRS-2の間での相互作用が期待される.しかし,ThrRS-1とThrRS-2の間の相互作用は観測されず,それぞれが独立に機能していることが考えられる.tRNA^<Thr>との相互作用も調べた結果,ThrRS-1とThrRS-2どちらもtRNAに結合するが,ThrRS-1の方が強くtRNA^<Thr>に結合することがわかった.おそらくtRNA^<Thr>のCCA末端にアミン酸がアシル化されるとThrRS-2の方がより強く結合するものと推定した.tRNA^<Thr>とThrRS-1およびtRNA^<Thr>とThrRS-2の複合体結晶の調製に成功したので,近い将来ThrRS-1とThrRS-2のtRNA^<Thr>との結合様式の相違が明らかになるであろう.Threonly-tRNAsyntheraseの遺伝子を2種類保有するクレン古細菌のAeropyrum pernix (Ap)とSulfolobustokodaii (St)について,それぞれのThrRS-1とThrRS-2の遺伝子を大腸菌内に導入してタンパク質を発現させ,合計4種類のAp-ThrRS-1とAp-ThrRS-2, St-ThrRS-1とSt-ThrRS-2を得た.また位相決定に利用するためにメチオニンをセレノメチオニンに置換した4種類のタンパク質も得た,これらの結晶化実験から,いずれも結晶化が可能であることがわかった.比較的良質の結晶を与えたAp-ThrRS-1のセレノメチオニン置換体の結晶について放射光を用いて分解能2.3AのX線回折データを測定した.MAD法で位相を決定し,立体構造を組み立てて,最小二乗法で原子パラメータを精密化した.Ap-ThrRS-1の構造は,2分子のタンパク質(サブユニット)が触媒ドメイン同士で会合して二量体を形成し,アンチコドン結合ドメイン同士が互いに反対方向に伸びている.予測どおり,編集ドメインが存在しない.触媒ドメインの活性部位には1C2H型のZnフィンガーが存在する.この触媒部位はEc-ThrRSのものと似ていて,周りのアミノ酸残基もよく保存されている.アンチコドン結合ドメインも,Ec-ThrRSのものとよく似ていて,アンチコドンに結合する残基が保存されている.以上の構造的特徴からAp-ThrRS-1はcat型でトレオニン以外にセリンもtRNA^<Thr>に結合させる可能性があることが立体構造からも明らかとなった.これらの成果をまとめて,論文を作成し,学術雑誌Acta Cryst., F64,903-910(2008)に発表した.また,2008年8月に大阪で開催された国際結晶学連合大会にて発表した.Threonly-tRNAsyntheraseの遺伝子を2種類保有するクレン古細菌のAeropyrum pernix (Ap)とSulfolobus
加齢に伴う歯肉線維芽細胞DNA修復活性の変化に関する研究

加齢による歯内線維芽細胞DNA修復活性の変化:北海道医療大学附属病院を受診した患者の中から全身疾患の既往歴のない若年者(10歳20歳代),高齢者(50歳代以上)を選択し被験者とした。インフォームドコンセントを得た後,抜歯時に抜歯歯周囲の歯肉から歯肉片を採取した。採取した歯肉片からout-growth法によって歯内線維芽細胞を分離した。本研究では,7代継代培養した細胞(7代継代細胞)と14代継代培養した細胞(14代継代細胞)を使用した。歯肉線維芽細胞にTNF-α添加し人工的ストレスを発生させた。その後,2時間おきに細胞と上清を回収し細胞中および培養上清中の8-OhdG産生量を市販のキットにより測定しDNA傷害の程度を評価した。その結果,継代回数の少ない細胞では8-OhdGの産生量がTNF-α添加後より早く非添加群と同程度の量にまで減少した。Porphyromonas gingivalis由来の病原因子による歯内線維芽細胞のDNA傷害P.gingivalis由来の病原因子(リポ多糖,gingipain等)および炎症性サイトカイン(IL-1β,IL-6等)を培養系に添加して細胞にストレスを与えた。細胞および培養上清を回収した8-OhdG量を測定した結果,分離した細胞株により傷害の程度に差はあるが,酸化的傷害を受けることが明らかになった。歯肉線維芽細胞のテロメア長の測定:二分離した細胞からDNAを抽出し,テロメアの配列に特異的なプライマーを用いたPCR法により増幅されたcDNAをアガロース電気泳動にて比較することによってテロメア長を測定した。その結果,分離したヒトの年齢とテロメア長の間には統計的に明らかな関連は認められなかった。本研究の結果から,加齢に伴って歯肉線維芽細胞のDNA修復活性が低下することが歯周病の進行と関連する可能性が示唆された。平成14年度は加齢による歯肉線維芽細胞DNA修復活性の変化をみるための研究を行った。まず、北海道医療大学付属病院を受診した患者の中から全身疾患の既往歴のない若年者(10歳代20歳代),高年者(50歳以上)を選択し被験者とし、インフォームドコンセントを得た後,抜歯時に抜歯対象歯周囲の歯肉から歯肉片を採取する。細胞をコンフレント状態になるまで培養し,その後シャーレから細胞を剥離して細胞数を調製し再度シャーレに播種する。このようにして,ヒト歯肉線維芽細胞を継代していき、7代継代培養した細胞(7代継代細胞)と14代継代培養した細胞(14代継代細胞)を使用した。本研究では,培養したヒト歯肉線維芽細胞に炎症性サイトカインのひとつであるTNF-αを添加したDMEMを加えることにより老化促進因子といわれる酸化的ストレスを引き起こし8-OhdGという活性酸素を人工的に発生させた。その後,0、1、3、5、8、12、24時間ごとに細胞と上清を回収し細胞中および培養上清中の8-OHdG産生量を市販の8-OHdG測定キッドを用により測定しDNA傷害の程度を評価した。また,細胞内DNA傷害を経時的に測定することにより,DNA修復活性をDNA中の8-OHdG量の回復時間を評価した。今までのデーターからは、全体的に高齢者と若年者では高齢者のほうが8-OHdG量が多く、また継代数の高い方が低い方より8-OHdG量が多く産出された。刺激開始後8時間までに最大値を示し、24時間以内にはもとの量にもどることがデーターより明らかになった。
寄生虫感染における腸管杯細胞からの粘液分泌調節機構

腸管杯細胞からの粘液分泌調節機構を研究するために,ムシンの定量法を検討した。ムシンをメンブランにブロットし,レクチンで検出する方法を開発した。N.brasiliensis(Nb)感染C57BL/6マウスの腸管ムシン量は,感染7日をピークに顕著に増加し,その後減少した。このムシン量は,腸管杯細胞数の変化および排虫現象とよく一致した。ヌードマウスにNbを感染させると,ムシンの増加応答は遅れるが,増加量には正常マウスと有意差はなかった。IL-4^<-1->にNbを感染させても,腸管ムシン量に有意差はなかった。Nb感染マウスに,Nb抗原,抗CD4抗体またはシクロホスファミドを投与しても,腸管ムシン量の変化はなかった。現在のところ,Nb感染による腸管ムシン量をin vivoで変化させる系はない。非感染マウスの腸管細胞を分離し,Con Aを加えて培養すると,上清中にムシンの増加が見られた。また,Nb感染ラットの腸管細胞にCon AまたはNb抗原を加えて培養すると,ムシンの増加が見られた。RT-PCRによって,マウス,ラットの腸管からムシンコアタンパク質のmRNAを検出する系は確立できなかった。しかし,ムシンを分泌するヒト大腸癌細胞株LS174Tを用いて,RT-PCRによりムシンコアタンパク質(MUC2)のmRNAを検出できた。LS174T細胞にTNF-αを添加すると,MUC2mRNAの発現が増加した。また,LS174T細胞にIL-13を添加し,培養すると,細胞数には変化は無いが,ムシン分泌が促進された。RT-PCRにより,LS174T細胞にはIL-13レセプターが検出された。LS174T細胞を用いる系は,ムシン産生の調節機構を研究する上で有効な系と考えられる。N.brasiliensis(Nb)感染マウスでの粘液分泌調節機構の研究には,粘液ムシンの定量が必要となる。抗体でムシンを検出するために,感染マウスの小腸粘膜を掻き取って得た粘液からCsCl密度勾配遠心,Sepharose CL-2Bカラムでムシンを精製し,アジュバンドと共にウサギに免疫した。しかし,ムシンに対する十分な抗体価は得られなかった。そこで,slot-blot装置を用いてムシンをニトロセルロース膜に結合させ,PAS染色とperoxidase標識soybean lectinで検出する方法を比較した。測定の安定性と扱いの面で1ectinを用いる方法が優れていた。ムシン量を対数プロットすることで0.3-10 mg/mlの範囲で比較的良い容量曲線が得られた。ムシンの定量方法は改良の余地があるが,とりあえず測定は可能となった。マウスの小腸から粘液を掻き取り,0.1%Tween-PBSでホモジナイズし,遠心上清のムシン量を測定した。Nb感染マウスの腸管ムシン量は感染5日目に増加し,7日目にはピークとなり,9日目にはほぼ正常レベルに減少した。これは組織学的な杯細胞の変化とよく一致した。nu/nuマウスにNbを感染させた場合には,腸管ムシン量の増加がnu/+マウスに比べ遅い傾向があるが,7日目にはほぼ同じ程度になり,ムシンの分泌はヌードマウスでも本質的な違いは無いものと思われた。Nb感染の前日にcyclophophamideまたは抗CD4抗体で処理したマウスの腸管ムシン量はコントロールと差がなかった。

ナイロンカラムとPercollで調整したマウスの腸管細胞をConAと共に培養すると,上清中にムシンの増加が見られた。以上のことから,Nb感染によるムシン量の増加はT細胞の関与は少ないが何らかの免疫応答が関与するものと思われる。ムシンの抽出方法に問題が残るので,今後さらに検討が必要である。N.brasiliensis(Nb)感染でみられる腸管ムシンの急激な増加が抗原刺激による免疫応答かどうかを確認するために,感染マウスに可溶性Nb成虫抗原を腹腔投与した。しかし,抗原投与による腸管ムシン量と杯細胞数の変化は見られなかった。腸管ムシン量の変化とIL-4の関連を検討するために,IL-4 gene knockout(IL-4^<-/->)マウスにNbを感染させた。感染5日目に,IL-4^<-/->マウスでは腸管成虫の回収数は有意に高かったが,腸管ムシン量には差は見られなかった。昨年度,シクロホスファミドと抗CD4抗体の処理によっても腸管ムシン量の変化を認めなかった。Nb感染以外のin vivo系で,腸管ムシン量を顕著に変化させる方法は今のところ見出されない。ムシン産生のin vitro系で,非感染マウスの腸管細胞にNb感染マウスの腸管膜リンパ節細胞と成虫抗原を加えてインキュベートしたが,ムシンの増加は見られなかった。Nb感染ラット腸管細胞では抗原とCon Aの添加によりムシン産生の増加傾向が見られた。しかし,腸管細胞を使う系では再現性に若干の問題が残った。RT-PCRにより,ラット腸管のムシンコアタンパクmRNAを検出する方法は二組のプライマーと種々の条件を変えて検討したが,満足のゆく条件は見つからなかった。ムシンを産生するヒト大腸癌細胞株LS174Tのムシンコアタンパク(MUC2) mRNAをRT-PCRにより半定量的に検出する条件を確立した。LS174T細胞にTNF-αを添加して培養すると,MUC2 mRNAが2-3倍増加した。LS174T細胞にIL-13を添加すると,上清中にムシンの増加が見られた。また,RT-PCRによってLS174T細胞にはIL-13のレセプターが検出できた。Nb感染マウスやラットを使ってムシン産生の調節機構を調べることには,困難な点がある。ムシン産生調節機構をin vitroで検討するには,LS174T細胞を用いる系が有効と思われる。
人形浄瑠璃「かしら」のうなづき構造成立に関する研究

本研究は,人形浄瑠璃において人形表現の根本をなすうなづき構造の成立の問題を解き明かそうとするものである。人形戯発生時のかしらのうなづき構造にはどのような意味があったのだろうか。それは日本人の発想か,大陸伝来の考え方によるものか。この問題を解決するために,民俗行事の人形戯や一人遣い人形等の三人遣い以前の人形,及び大陸伝来といわれる糸操り人形や串人形,指人形等の三人遣い以外の人形の調査・記録・基礎データの収集を行い,それをもとに考察をしていく。本研究は、人形浄瑠璃において人形表現の根本をなすうなづき構造の成立の問題を解き明かそうとするものである。現在の人形浄瑠璃は、たいへん写実的で繊細な人形表現を完成させたが、この人形表現で重要な役割を果たすのが引栓式といううなづき形式である。引栓式の高度な人形表現は人形浄瑠璃発生時から存在したわけではない。かしらのうなづき形式が、幅歯棒式から小猿式へ、小猿式から引栓式へという発展過程を経て、現在の芸術的な人形表現が完成したのである。では、一人遣い以前、人形戯発生時のかしらのうなづき構造には、どのような意味があったのだろうか。また人形表現上重要な意味を持つうなづき構造は、日本人の発想か、それとも大陸伝来の考え方によるものか。この問題を解決するために、まず民俗行事の人形戯や一人遣い人形など三人遣い以前の人形、及び大陸伝来といわれる糸操り人形や串人形、指人形などの三人遣い以外の人形の調査・記録・基礎データ収集を行い、それをもとに考察していく。今年度は群馬県吾妻郡高山村の尻高人形のかしらと操り方の調査と3演目の映像記録、石川県白山市東二口に伝承されている一人遣い人形芝居2演目の映像記録を行った。また、研究成果としては「人形に見る身体技法-日中の比較から-」(平成18年6月『神奈川大学21世紀COEプログラムシンポジウム報告2非文字資料とはなにか人類文化の記憶と記録』所収)、更に本課題のもとにある三人遣いかしらの、うなづき構造の発展過程に関する研究の成果としては、平成18年4月『平成1517年度科学研究費補助金基盤研究(C)研究成果報告書人形浄瑠璃の発生と展開に関する研究』(課題番号15520117)、平成19年3月「人形浄瑠璃の三人遣い成立に関する研究-群馬県渋川市赤城町津久田人形資料より-」(『昭和女子大学大学院生活機構研究科紀要』vol.16-2)がある。かしらのうなづき形式が、傷歯棒式から小猿式へ、小猿式から引栓式へという発展過程を経て、現在の芸術的な人形表現が完成したのである。今年度は、民俗行事の中の人形戯としては茨城県つくばみらい市の小張松下流綱火、滋賀県大津祭の山車人形の映像記録を行った。更に、引栓式とブラリ式に関して、実際の遣い手の方(引栓式-人形浄瑠璃文楽の人形遣いの方、ブラリ式-徳島県の勝浦座の座員の方)に人形の構えやうなづき操作に関する聞取調査と写真撮影を行うとともに、勝浦座の3演目について映像記録も行い、資料を収集した。研究成果としては平成19年7月昭和女子大学文化史学会のシンポジウム「芸能における中央と地方」において「文楽と地方の人形芝居」という題で報告した。更に本課題のもとにある三人遣いかしらのうなづき構造の発展過程に関する研究の成果として、博士論文『人形浄瑠璃の発生と展開に関する研究-各地の人形浄瑠璃のかしらを資料として-』をまとめた。

かしらのうなづき形式が、偃歯棒式から小猿式へ、小猿式から引栓式へという発展過程を経て、現在の芸術的な人形表現が完成したのである。では、一人遣い以前、人形戯発生時のかしらのうなづき構造には、どのような意味があったのだろうか。また人形表現上重要な意味を持つうなづき構造は、日本人の発想か、それとも大陸伝来の考え方によるものか。この問題を解決するために、まず民俗行事の人形戯や一人遣い人形など三人遣い以前の人形、及び大陸伝来といわれる糸操り人形や串人形、指人形などの三人遣い以外の人形の調査・記録・基礎データ収集を行い、それをもとに考察していく。今年度は、人形戯の古態を探る上で重要な資料の一つである福岡県築上郡吉富町八幡古表神社の細男舞と神相撲の聞き取り調査及び映像記録、三人遣いで鉄砲差しを継承する人形座の中で、ブラリ式かしらを遣う淡路人形の遣い方に関する聞き取り調査と映像画像記録、小猿式かしらを遣う神奈川県小田原市の下中座の遣い方に関する聞き取り調査と映像画像記録、同じく小猿式かしらの神奈川県厚木市の長谷座のかしら・衣装調査と聞き取り調査、更に近代の指人形である福島県喜多方市入田付のふくさ人形のかしら等の調査を行い、かしらデータ及び画像映像資料等の収集を行った。今年度の成果は、本課題研究の成果報告書に収める予定である。
在宅看取り介護の初期段階における困難性とその原因の分析

本研究は家族介護者による在宅看取りの準備段階における医療と介護の環境整備の困難性に関して明らかにすることを目的としている。調査対象として北海道A市K区とその周辺域を選択し、初年度には看取り介護における困難性に関連する文献のレヴュー、その後在宅医療を支援する専門医、ケアマネ、訪問看護師等のヒアリングを実施し、支援における医療と介護の連携不足や、地域による資源の格差を明らかにしてきた。今年度は、専門家の継続的聞き取りや地域の施設見学等を経て、家族介護者への支援の在り方が家族介護力を補完するものでしかなく、選択肢を示し当事者の決定を促すものではないことなどを、介護者に対する視線という観点から日本文化人類学会で5月に口演、日本公衆衛生学会では11月に示説で発表を行った。前年度、および補足的な今年度の調査内容から、医療・介護関係者の在宅看取り介護者への視線に関する論稿をまとめ投稿・掲載した(林・永田『地域ケアリング』12月号9499頁北降館2018)。さらに前年度の調査内容から看取りの環境を整えるための資源に関するシートを作成し、医療や介護の専門家から紹介を受けた在宅看取りの家族介護者に対する聞き取り調査を実施した。聞き取り内容の途中経過に関しては、7月に国立民族学博物館の看取りに関する共同研究チームの招聘を受け、記述的内容で発表を行った。家族介護者に関する聞き取りでは、看取りの経緯についての詳細な記録データを提供してくれた人がいて、その看取りの準備性における当事者からの聞き取りと、その後の介護状況の詳細な記録、看取られる患者側の死生観や死の受容の在り方が分かる資料であったため、看取りの初期段階における困難性が、その後の看取りの経過や看取り後のグリーフ・ケアへの影響を考察することができた。また新たな調査課題も示唆された。研究計画では今年度中に20名程度の聞き取り調査を予定していたが、看取り後の専門家と家族介護者の関係に継続性がほとんどなく、グリーフ・ケアが終了していること等の条件を設定していることもあり、調査対象者の獲得に困難をきたした。専門家からの紹介を継続的に依頼しつつ、9月からは対象地域で看取りに関する講演会に呼ばれる都度、在宅看取りの当事者がいないかを参加者に尋ね、直接、調査協力を呼びかけることも試みた。また居宅介護事業所の施設管理者を訪問して、改めて紹介を依頼するようにしたが、結果的には今年度中は9人、10事例を聞き取ることしかできなかった。しかし医療・介護の専門家からの紹介だけでは成功事例に偏る傾向がみられたが、当事者からの事例からは、医療・介護の専門家が抱く家族介護者への視点との乖離に気づくことができ、研究発表や論文にまとめるための切り口を得ることができた。その反面、調査シートを利用した半構成的インタビューであったが、家族介護者の環境整備や看取りの過程は多様で、聞き取り内容の焦点を絞ることは容易ではなく、テキスト・マイニングの分析準備の作業に時間を要した。当初予定していた中国での国際学会の発表は開催が今年度は中止となり、英語による発表は行っておらず、前年度の成果に関する英語論文の作成が滞っている。一方、看取りの患者やその家族介護者には医療・介護関係者以外の支援も必要であることが分かった。特にスビリッチュアル・ケアに関する萌芽的な支援の動きを聞き取ったことで、この点の地域資源の不足を認知することができた。医療・介護関係者や家族介護者の双方から、看取りの環境整備に関する困難性の一つとして予期悲嘆や死の受容への備えが置き去りになっていることの指摘を受け、計画を変更し、研究の更なる進捗のために、そうした資源や環境に関する調査や情報収集の必要性を新たに課題とすることにした。在宅看取りの環境整備の困難性に関する、医療・介護の専門家や家族介護者からの聞き取りの結果からこれまで研究結果をまとめるとともに、今年度得られた新たな課題に取り組み、どのような具体的な知識や技術、あるいは支援があれば看取りの初期段階での困難が回避できるのかを成果として考察する予定である。対象地域では死の受容に関する死生観の共有や、医療・介護の専門家以外からの支援は、ほとんど得ることはできない。家族介護者の看取り後のグリーフ・ケアに関する専門家は地域にはおらず、スピリッチュアル・ケアへの需要や患者や家族介護者のスピリッチュアル・ペインへの備えとして、どのような知識・技術が必要で何か整っていればよいのかということも全く分かっていない。次年度は予定の研究計画の遂行とともに、新たに得られた課題に対応するため、以下の4点を実施する。1.聞き取り対象の家族介護者を一人でも多く確保し、分析するテキストデータを整えて、研究目的である見取りの環境設定における困難性をテキスト・マイニングのソフトを活用して分析すること、2.資源がほとんど確認できなかった医療・介護関係者以外の家族介護者支援に要する専門家や知識、技術に関する情報を国の内外を問わず調査・収集すること、3.それらの結果から、明らかになった困難性を回避するための方法を考察し、その実現の可能性を検討した成果物をまとめること、4.研究代表者が管理している研究用Webサイト『看取りねっと』に、本研究から得られた資料を研究倫理に配慮しつつコンテンツ化してアップし、研究の成果を広く発信することである。なぜ医療・介護の適切な専門家と看取りの家族介護者が繋がることに困難性があるのか、あるいは他の困難性の有無やそれが何に起因するのかを特定地域を対象として明らかにするとともに、看取りの環境整備段階における支援の新たな在り方を模索できるよう努める。

本研究の目的は、在宅での看取り介護の準備段階における医療と介護の環境整備の困難性が何に起因するのかを、家族介護者の視点から明らかにすることである。そのために看取り介護に対する特定地域の医療、介護資源、既存の行政や民間レベルの支援制度の全体像を把握するため、まずは医療と介護の専門職を対象にヒアリング調査を実施し、当該地域で在宅看取りを行う際の地域資源の選択肢を把握する。次に地域資源の資料をもとに作成した地域の医療・介護資源シートを示しながら、看取りを行った家族介護者に聴き取り調査を実施し、どのような具体的な知識や助言があれば、看取りの初期段階での困難は回避できたのかを評価してもらう。看取り介護を経験した家族介護者の対象者は30名程度を予定している。収集した聞き取り内容は、テキスト化して記述的に整理するとともに、意味論分析を行って困難性に関連する要因を検討する。在宅見取りの研究は近年増加しているが、具体的な地域資源との関係でその初期の環境整備に関する困難性を明らかにした研究はないため、本研究の意義は大きい。計画通り看取り介護における困難性に関連する文献のレヴューを行い、予定通り在宅支援診療所、在宅医療の専門医、居宅介護福祉施設、訪問看護ステーション、訪問介護ステーション、在宅療養を支援するNPO法人の専門職から具体的地域資源を調査することができた。医療・介護の専門職における看取り介護の初期支援に関する資料からは、医療と介護の地域資源には地域間格差があること、調査対象とした医療・介護資源の少ない地域では連携が広域にわたるため、地域包括ケアシステムの範囲を超えた連携が絡み合っていて、予定していた2か所の地域の調査ではなく聞き取りを開始した1地域とその周辺域を地域資源の調査対象に変更することとした。医療と介護の専門職からみた看取りの初期段階での困難性に関しては、家族介護力の有無と経済力の有無がまずは問題となるが、本人、あるいは本人と家族が熱心に在宅での看取りを希望している場合は支援の方向で医療・介護の連携を探ることになる。しかし、在宅移行を支援する相談員やケアマネジャーは、自らの経験的知識やパーソナルネットワークによる選択肢の中から、勘に頼った環境整備を行う傾向が高かった。そのため地域資源の情報は必ずしも公正で多様なものではなく、事業所の都合や所属する病院の連携施設の偏りに起因していることも明らかとなった。学会発表や論文にその成果をまとめることができたが、英語論文として投稿する時間がなく、家族介護者を調査対象とする次年度の研究までに作成を予定していた看取り環境を整えるための地域資源に関する調査シートの作成も遅れてしまった。地域資源の実際の情報を閲覧する全国サイトや都道府県レベルのサイトはあるが、項目ごとの表層的な内容であるためシートづくりの作業は困難なものとなっているが、聞き取り対象者のリスト作成は予定より早く着手することができている。本研究は家族介護者による在宅看取りの準備段階における医療と介護の環境整備の困難性に関して明らかにすることを目的としている。調査対象として北海道A市K区とその周辺域を選択し、初年度には看取り介護における困難性に関連する文献のレヴュー、その後在宅医療を支援する専門医、ケアマネ、訪問看護師等のヒアリングを実施し、支援における医療と介護の連携不足や、地域による資源の格差を明らかにしてきた。
二型花柱性ボロボロノキ（ボロボロノキ科）の送粉様式と分布拡大過程に関する研究

ボロボロノキは、二型花柱性という特異な繁殖様式を示し、その送粉者として奄美大島では夜行性の小型ガ類が、熊本ではガ類に加えてマルハナバチ類が重要であった。また送粉者の違いに対応するように集団間で花香成分が大きく異なり、熊本では奄美大島で検出されない成分が検出された。これらの結果は、分布域拡大において異なる送粉者に対応して、花香を変化させてきた可能性を示唆する。そこで本研究では、本種分布域の主要な集団について花粉媒介者、花香成分の実態解明を進め、集団間の遺伝的分化に根ざした系統地理学的解析から、送粉様式の多様化がどこで、どのように起こってきたのか、そのプロセスを明らかにすることを目的とする。
レチノイン酸による神経初期発生特異的ガングリオシドの発現誘導機構の解析

レチノイン酸による発生初期の神経系に特異的に発現するガングリオシドの調節機構を調べる目的で、ニワトリ初期胚よりレチノイン酸に特異的に結合する蛋白を単離し解析をおこなった。(I)ニワトリ初期胚には、二種類の細胞内レチノイン酸結合蛋白、タイプIとIIが存在していた。HPLCを用いて、この二種類のタンパクを精製し、N端アミノ酸配列を決定した。(II)タイプI、IIに対する特異抗体を作製し、イムノブロットを用いて調べた結果、タイプIは外胚葉ー神経系に、タイプIIは中胚葉由来の筋ー骨系に特異的に存在していた。(III)タイプIは、胎児期中枢神経系の神経芽細胞に一過性に発現し、神経系形成と深く関連していることが判明した。(IV)ニワトリ初期胚中枢神経系のcDNAライブラリ-を作成し、タイプIのN端アミノ酸配列より予想されるDNA配列を合成し、プロ-ブとして、タイプICRABPの遺伝子を分離することができた。更に、CRABPよりレチノイン酸を受容する核内レチノイン酸受容体の存在を、ニワトリ初期胚で明らかにするために、受容体遺伝子より推定されるアミノ酸配列(154ー178)を合成し、レチノイン酸受容体に対する抗体を作成した。この抗体をもちいて、組織染色、イムノブロットで調べたところ、レチノイン酸受容体は分子量45KDaであり、二量体として95KDaの分子量をもって存在することが判明した。ビタミンAの誘導体であるレチノイン酸はニワトリ肢芽形成のパターンに関与するモルフォージェン(形態形成因子)として、近年同定されるに至った。レチノイン酸の生理作用は、細胞内レチノイン酸結合タンパク(CRABP)を介して、核へと運搬され、受容体(RAR)による遺伝子発現の調節を受ける。本研究では、レチノイン酸の生理作用の発現に必須な、CRABPの発生過程での発現及び分布を検討した。〔結果〕(1).CRABPのニワトリ初期胚での発現をCRABP抗体を用いて、イムノブロット法、及び組織染色等により調べた結果、CRABPは、肢芽のみならず、脳脊髄等の中枢神経系に特異的に発現しており、その発現は、4-5日胚でピークを示し、一過性の発現を示した。(2).ニワトリ14日胚より、新しいCRABPとして、CRABPIIを発見した。このN-端のアミノ酸配列は、CRABP-Iと83%の類似性を示すものの、明らかに異なった遺伝子によりコードされる新しいCRABPであった。CRABP-IIは、ニワトリ肢芽に、一方、CRABPは、胎生期の中枢神経系に特異的に発現していた。このように、従来、レチノイン酸の応答は、一つの情報伝達経路を経るものと考えられていたが、胎生期には、レチノイン酸は二つの異なったCRABPを介して異なった形態形成の調節を行なっているものと想定された。現在二つのタンパク遺伝子をそれぞれ分離しており、それぞれの遺伝子が、肢芽及び神経系での形態形成でどのように発現され、調節されるかが重要と考える。レチノイン酸は、ニワトリ肢芽前後軸形成における形態形成因子の一つであることが、近年の研究から明らかになってきた。本研究は、発生過程において著しい変化を示すがガングリオシドの生理作用と形態形成因子としてのレチノイン酸の動集とを結びつける目的ではじめられた。ニワトリ胎児期より、我々は、二種類(タイプIとII)の細胞内レチノイン酸結合タンパクが存在することを思い出した。細胞内レチノイン酸結合タンパクは、核内受容体とともに、レチノイン酸の生理作用を媒介する重要なタンパクである。我々は、このタイプIとIIのタンパクをニワトリ胎児より精製することに成功し、そのN端アミノ酸配列を決定することができた。

タイプIとIIのN端アミノ酸配列は、83%のホモロジ-をもつものの、全く異なる遺伝子より生分成されるタンパクであり、タイプIは、主として、中枢神経系に、タイプIIは、筋・骨に存在することが示されたが、成長とともにその発現は減し、成長した組織では、タイプIは、睾丸にみられるが、タイプIIは、どの組織にも検出されなかった。ニワトリ発生過程では、タイプIIは、肢芽形成期の初期に一過性に発現することから、レチイノン酸による肢芽形成に、タイプIIは、重要な役割をもつことが示唆された。今後、タイプIによる神経系の形成、及びタイプIIによる肢芽、骨、筋形成に、それぞれに特異的に発現するがどのように関連するかが大きな問題であり、これら組織形成におけるガングリオシドとタイプIとIIとの関連が興味をもたれる。
メカノケミカル法による高リチウムイオン伝導性ガラスセラミックスの創製

本研究は、メカニカルミリング(MM)法により得られる非晶質微粒子を熱処理することにより、高イオン伝導性結晶を析出させた新しいタイプの固体電解質ガラスセラミックス材料を創製することを目的としている。2年間で得られた主な成果は以下の通りである。(1)MMによるLi_2S-P_2S_5系、Li_2S-P_2S_5-SiS_2系およびLi_2S-P_2S_5-GeS_2系非晶質固体電解質材料の合成を試みた。その結果、何れの系でも広い組成域でガラスが得られた。これらのガラスは室温において10^<-4>Scm<-1>程度の高い導電率を示した。(2)上記(1)で作製したガラスを様々な条件で熱処理することにより、室温での導電率が10^<-3>Scm^<-1>付近の極めて高い導電率を有するガラスセラミックスが得られた。(3)上記(2)で得られたガラスセラミックス中には、現在室温で最も高い導電率を示すLi_<4-x>Ge_<1-x>PxS_4系チオリシコン結晶と類似の結晶がいずれも生成しており、これが高い導電率の得られる要因であることを見出した。(4)Li_2S、単体リン、単体イオウを出発原料として、Li_2S-P_2S_5系ガラスおよびガラスセラミックスの合成をMM法により試みたところ、熱的・電気的性質においてLi_2SとP_2S_5から作製したものとほぼ同等の生成物が得られた。(5)MM法によって得られたLi_2S-P_2S_5系ガラスセラミックスを固体電解質とし、負極にIn金属、正極にLiCoO_2を用いて全固体二次電池を試作し特性を評価した。その結果、初期数サイクルの不可逆容量が大きいものの、初期充電を容量規制で行うことによって放電容量が増大し、200サイクル経過後も放電容量約100mAhg^<-1>、充放電効率ほぼ100%の極めてサイクル特性に優れた全固体電池が得られた。xLi_2S・(100-x)P_2S_5系に対し20時間のメカニカルミリング(MM)処理を施すことによって得られたガラス試料について,200250°Cでの熱処理により結晶化させた試料の室温における導電率を調べた。x=75の場合,導電率の増加の程度が小さいが,これはこの組成のガラスの結晶化温度がガラス転移温度に極めて近く,軟化融着による級密化が十分起こらないためと推察される。x=80の場合に最も高い伝導性を示すガラスセラミックスが得られた。80Li_2S・20P_2S_5組成のガラスを様々な温度まで加熱しX線回折測定を行ったところ、200°C以上で,準安定相と思われる未知の結晶相が析出し,さらに270°C以上でLi3PS4結晶が析出,460°C以上ではLi_7PS_6結晶が析出することがわかった。200°Cにおいて析出する未知相のパターンは,Li_4GeS_4Li_3PS_4系チオリシコン結晶のパターンとほぼ一致することより,このガラスからはチオリシコンと同じ結晶構造を有する高イオン伝導性準安定結晶相が析出するために,加熱後のガラスセラミックスの伝導性が高くなるものと考えられる。

次に,加熱結晶化後の導電率の高かった300°Cで加熱結晶化させた試料を固体電解質として用いた全固体電池を試作し,定電流充放電測定を行った。正極にはLiCoO_2,負極にはIn金属を用い,電流密度は64μAcm^<-2>で測定した。試作した全固体電池は充放電可能であり,サイクル数を重ねるごとに可逆性が改善された。100サイクル充放電を行っても,約100mAhg^<-1>の容量を維持しており,良好なサイクル特性を示すことがわかった。本研究は、メカニカルミリング(MM)法により得られる非晶質微粒子を熱処理することにより、高イオン伝導性結晶を析出させた新しいタイプの固体電解質ガラスセラミックス材料を創製することを目的としている。本年度得られた主な成果は以下の通りである。(1)MMによるLi_2S-P_2S_5-SiS_2系およびLi_2S-P_2S_5-GeS_2系非晶質固体電解質材料の合成を試みた。その結果、何れの系でも広い組成域でガラスが得られ、これらは室温において10^<-4>Scm^<-1>程度の高い導電率を有することが分かった。(2)上記(1)で得られたガラスを様々な条件で熱処理することにより、室温での導電率が10^<-3>Scm^<-1>付近の極めて高い導電率を有するガラスセラミックスが作製できた。(3)上記(2)で得られたガラスセラミックス中には、現在室温で最も高い導電率を示すLi_<4-x>Ge_<1-x>PxS_4系チオリシコン結晶と類似の結晶が、いずれの系でも生成しており、これが高い導電率の得られる要因であることを見出した。(4)Li_2S、単体リン、単体イオウを出発原料として、Li_2S-P_2S_5系ガラスおよびガラスセラミックスの合成をMM法により試みたところ、熱的・電気的性質においてLi_2SとP_2S_5から作製したものとほぼ同等の生成物の得られることが分かった。(5)MM法によって得られたLi_2S-P_2S_5系ガラスセラミックスを固体電解質とし、負極にIn金属、正極にLiCoO_2を用いて全固体二次電池を試作し特性を評価した。その結果、初期数サイクルの不可逆容量が大きいものの、その後サイクルを重ねることによって容量が増大し、200サイクル経過後も放電容量約100mAhg^<-1>、充放電効率ほぼ100%の極めてサイクル特性に優れた全固体電池の得られることが明らかになった。
MUC1ムチンを標的とした新しい腫瘍免疫療法の開発

MUC1ムチンコア蛋白に対するcytotoxic T細胞(CTL)はHLA非拘束であり、MUC1陽性であれば癌の種類に関係なく、誘導されたCTLの標的細胞障害活性は広いスペクトラムを示す。本年度は多発性骨髄腫患者6例の末梢血あるいは骨髄より、抗MUC1 CTLの誘導を試み、2例に誘導が可能であった。これらのbulk CTL linesをそれぞれTSおよびKYと名づけた。表面形質はTSがCD8^+、KYがCD4^+であった。ともにMUC1陽性培養細胞株に対して広く細胞障害活性を示した。この細胞障害活性は、抗HLA抗体では抑制されないが、抗CD3抗体、抗α/βT細胞受容体抗体によって明らかに抑制された。ヒト大腸癌細胞株CHCY-1のMUC1トランスフェクタントは0-グリコシド結合型糖鎖の合成阻害剤であるbenzyl-α-GalNAc処理によって、抗MUC1コア蛋白モノクローナル抗体の反応性が著名に上昇する。このトランスフェクタントに対するTSの障害活性を検討したところ、benzyl-α-GalNAc処理によって障害活性の著名な上昇を認めた。一方、H-rasでトランスフォームしたNIH3T3細胞を用いたMUC1トランスフェクタントは、benzyl-α-GalNAc処理によっても、抗体の反応性、CTL(TS)の障害活性ともに変化が悪かった。すなわち、抗MUC1 CTLの反応性は、糖鎖によって阻害されていることが示唆された。
不定値計量を持つ等質多様体に作用する不連続群

種数2以上のリーマン面の普遍被覆多様体がポアンカレ平面である。この古典的な結果は,「リーマン対称空間SL(2,R)/SO(2)を不連続群で割った商空間として種数2以上のリーマン面が得られる」とも言い替えられる。さて、リーマン面にには互いに同値でない複素構造が存在し、それを記述する空間をタイヒミラー空間と呼ぶ。これは、SL(2,R)/SO(2)の不連続群な一様格子の変形とも言い替えることができる。この例の高次元化も従来より深く研究されている。すなわち,任意のリーマン対称空間に一様格子が存在するが,(Borel,Harish-Chandra,Mostow,玉河),一様格子は4次元以上では変形できない(Weil-Mostow-Margulis)ことが知られている。不定値計量を持つ等質多様体(簡約型等質多様体)においては,必ずしも一様格子は存在しないが,筆者は存在のためのいくつかの新しい条件を証明した。さらに,リーマンでない簡約型等質多様体については,高次元の場合にも一様格子を変形することができる例が存在する事を発見し,その構成を,リー環のコホモロジーの理論を用いて証明した。さて,Hが非コンパクトならば,Gの離散部分群GAMMAは必ずしもG/Hに固有不連続に作用しないという根本的な問題がある。もっとも極端な場合はCalabi-Markus現象と呼ばれ,4次元以上のローレンツ計量を持つ定曲率空間(相対論的spherical form)の基本群は有限群しかありえないという結果がその典型例である。筆者はまた,可解リー群の等質多様体Gにおいては,Gが可解かつ|pi_1(G/H)|<∞ならば,G/Hには無限離散群が固有不連続に作用し,特にCalavi-Markus現象が起こらないことを証明した。これは,1989に解決された簡約型の場合(Calabi-Markus,Wolf,Kulkarni,小林)と対極的な場合が解決されたことを意味する。