hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
古代ゲノムで解明するバイカル地域人類集団の変遷

本研究課題では、新モンゴロイド的形質の起源地と考えられる北アジア地域に注目し、バイカル湖周辺における先史時代から現代にかけての人類集団の変遷を復元することを目的とする。そのために、1最新の三次元形態解析手法を用いて頭蓋形態の時代変化を明らかにする。2古人骨のゲノム解析を行い、これまでの現代人および古代人ゲノムと比較することにより、遺伝的成分の地域差および時代変遷を明らかにし、形態データとの関連について検討する。3さらに、歯石のDNA解析および骨の炭素・窒素安定同位体分析により、当時の食性を明らかにし、文化や生業についての知見を得る。本年度は、予備研究において古代DNA解析が可能であることが示された試料から、8試料を選び骨片からコラーゲンを抽出し、accelerator mass spectrometry(AMS)法を用いて放射性炭素年代測定を行った。IntCal13較正曲線をもちいて、較正年代を算出した結果、新石器時代、青銅器時代、鉄器時代、中世の各時代、およそ8000年前ー800年前の人骨が含まれていることを確認した。また、20個体の試料について、次世代シーケンシングによる全ゲノム解析を行うために、出来る限り複数のライブラリーの作成を行った。合計で100個以上の古人骨DNAライブラリーを得て、Agilent 2100バイオアナライザなどを用いて濃度や断片長などのクオリティのチェックを行った。今後、次世代シーケンサーを用いたシーケンシング解析を進め、複数個体のゲノムデータを得た後、集団遺伝学解析を行うことで、集団の時代変遷を明らかにしていく。予定では年度内に次世代シーケンサーを用いたシーケンシングにまで進む予定であったが、年度明けに持ち越しとなった。歯石DNA解析については、研究協力者の産休などにより、あまり進まなかった。古人骨のゲノム解析については、次世代シーケンサーを用いたシーケンシング解析を進め、複数個体のゲノムデータを得た後、集団遺伝学解析を行うことで、集団の時代変遷を明らかにする。同時に、幾何学的形態測定学的手法を用いて頭蓋の三次元画像の形態解析を行い、ゲノムからみた集団の変遷との関係を明らかにする。さらに、ロシアの共同研究機関(IMBTS-SB-RAS)に赴いて新たな試料を追加でサンプリングし、これらの解析を進める。歯石のDNA解析および炭素・窒素安定同位体による食性分析についても順次進め、生業を含めたシベリア集団の全体像を解き明かす。次年度使用額が生じた理由は主に以下の2点である。1)次世代シーケンサーを用いたシーケンシングに年度内に進むことができず、翌年度に持ち越しになったため。しかしながら、年度明け早々にはシーケンシングに進み、予算を使用する予定である。2)本年度予定していた共同研究先訪問が先方との都合が合わず、延期されたため。翌年度に複数回の研究者の往来を予定し、予算を使用する。
哺乳類ミトコンドリア蛋白質合成系の分子機構

哺乳類ミトコンドリアの蛋白質合成系の分子機構ついて、以下の成果を得た。(1)リボソーム再生過程におけるGTP加水分解の役割を明らかにした。(2)クライオ電子顕微鏡観察により、55Sリボソームの構造を10Aの分解能で決定し、更にE-sitetRNAの可視化に成功した。(3)リボソームの生合成因子(ObgH1,Mtg1)について生化学的解析を行い、特にリボソーム結合様式とその制御機構を明らかにした。近年、医療応用の観点から哺乳類ミトコンドリア蛋白質合成系の分子機構の詳細を分子レベルで解明する必要性が高まっている。本研究課題では当該年度までに以下の成果を得た。[1]リボソーム再生機構の解明:申請者が発見した翻訳因子EF-G2mtの作用機序を解析した。EF-G2mtはRRF1mtと協同的にリボソーム解離反応を促進すること、ミトコンドリアRRF1mtはユニークなN末付加配列(NTE)を有しており、このNTEによりEF-G2mtのGTP加水分解非依存的にリボソーム解離反応が促進されることを明らかとした。またEF-G2mtのGTP加水分解は、リボソーム解離反応後にRRF1mtとEF-G2mtがリボソームサブユニットから解離するために必要となる。バクテリアRRFはEF-GによるGTP加水分解依存的にリボソーム解離反応を促進することが知られており、これまでリボソーム再生過程におけるEF-GによるGTP加水分解の役割は不明であった。EF-GのGTP加水分解には1リボソーム解離反応の促進、2因子のリボソームサブユニットからの解離、の2つの側面があり、RRF1mtのNTEにより1の役割が不要になることが明らかとなった。[2] 55Sリボソームの構造解析:ミトコンドリア55Sリボソームの調製方法を独自に確立してcryoEMによる構造解析を進めた。55Sリボソーム上のE-site tRNAの可視化に成功し、55SリボソームにはE-siteが存在しないという他グループによる先行報告を修正することができた。[3]哺乳類ミトコンドリアリボソームの生合成因子の機能解析:55Sリボソームの調製方法が確立されたため、生合成因子(RsfAmt, ObgH1, Mtg1)の生化学的な機能解析を進め、特にリボソームへの結合様式について知見を得た。近年、ミトコンドリア翻訳因子の病的変異が相次いで同定されており、医療応用の観点からもミトコンドリア蛋白質合成系の分子機構の詳細を分子レベルで解明する必要性が高まっている。このような背景をふまえ、本研究では本研究課題では、下記の課題に取り組み、当該年度においては以下の成果を得た。[1]哺乳類ミトコンドリアにおけるリボソーム再生機構の解明:翻訳終結後リボソーム複合体の再生機構の解明:申請者が発見した翻訳因子"EF-G2mt/RRF2m"によるリボソ-ム再生機構の詳細について解析を進めた。バクテリアEF-Gによるリボソーム解離反応にはGTP加水分解が必要であるのに対し、EF-G2mt /RRF2mでは不要である。現在のところ、リボソーム解離反応におけるGTP加水分解の役割は不明である。EF-G2mt/RRF2mtおよびRRF1mtとリボソーム相互作用について解析を行ったところ、RRF1mtのN末ドメインとリボソームの相互作用により、リボソーム解離反応におけるGTP加水分解が不要になっていることを明らかとした(投稿準備中)。[2]哺乳類ミトコンドリアリボソームの構造解析:我々自身の調製方法で得たミトコンドリア55Sリボソームを用い、且つ、適切なバッファー条件下でミトコンドリア55SリボソームのcryoEMによる構造解析を行い、POSTトランスロケーション複合体におけるE-site tRNAを可視化に成功した。概ね当初の研究計画とおりに進展している。論文発表の準備も進めて順調といえる。論文発表の準備を進める。また課題[1]『哺乳類ミトコンドリアにおけるリボソーム再生機構の解明』に関しては、サブ課題のひとつである"異常停止したリボソーム複合体の再生機構の解明(ICT1の機能解析)についての研究"も完成させる。研究計画の変更などの特記事項はない。
視細胞保護治療を目的とした新規カルパイン抑制ペプチド徐放システムの開発

本研究は網膜色素変性の新規治療法の開発を最終目的とした研究で、カルパイン阻害ペプチドによって網膜視細胞の変性を少しでも遅らせることができるかどうかを検証するために、ペプチドを徐々に放出できる物質を遺伝性網膜変性ラットの眼球表面の結膜の下に埋植して実際にラットの網膜変性進行が遅れるかどうかを光干渉断層計や光学顕微鏡および電子顕微鏡による形態的および網膜電図による機能的側面から経時的に計測する。
連続的不安定なネットワーク環境において安定動作する分散システムの実現に関する研究

大規模ネットワーク環境は、計算機の故障、ネットワークトポロジの変化、外部からの攻撃などの外乱のために不安定で絶えず変動している。このようなネットワークにおいて、安定動作する自己適応型分散システム設計の基盤となる理論・技術について研究した。特に、高度な自己適応性を有する自己安定分散アルゴリズムの概念を、断続的な外乱に対応できるように拡張し、いくつかの自己安定分散アルゴリズムを提案した。本研究では、計算機などの構成要素の故障、ネットワークトポロジの変化、外部からの攻撃などによる、ネットワーク環境の不断の外乱のために不安定で絶えず変動しているネットワークにおいて、安定動作する自己適応型分散システム設計の基盤となる理論・技術の確立を目指す。従来の自己適応型分散システムの代表例として、予期せぬ外乱によってどのような状況に陥っても、自動的に正しい状況に復帰できる自己安定分散システムがある。しかし、自己安定分散システムが正しい状況に復帰するためには、新たな外乱が生じない十分に長い期間が存在することが必要であり、不安定で絶えず変動しているネットワーク環境には適用できない。そこで本研究では、断続的な外乱を取り扱えるように自己安定分散システムの概念を拡張することにより、絶えず不安定なネットワークにおいて安定動作する自己適応型分散システム設計の基盤となる理論・技術の確立を目指す。本研究では、(計算機などの構成要素の故障、ネットワークトポロジの変化、外部からの攻撃などによる)ネットワーク環境の不断の外乱のために不安定で絶えず変動しているネットワークにおいて、安定して動作する自己適応型分散システム設計の基盤となる理論・技術の確立を目指している。今年度は、モバイルネットワークやP2Pネットワークなど、構成要素やトポロジが不断に変化するネットワークのさまざまなモデル化を試み、これらのネットワークにおいて、安定に動作する分散システムの基盤となる分散アルゴリズムを提案した。具体的には、ルーティング、相互排除、資源探索などの基本的な問題に対し、自己適応的な分散アルゴリズムを提案し、解析、および、シミュレーション実験による性能評価を行った。また、一時的な外乱に対する高度な適応性を有することが知られている自己安定アルゴリズムに対し、不断の外乱に対する耐性を付加するための基盤技術に関する研究を行った。具体的には、不断の外乱をビザンチン故障としてモデル化し、自己安定アルゴリズムにビザンチン故障耐性を付加することの可能性について考察し、リンク彩色問題に対するアルゴリズムを提案した。さらに、不断の外乱に対する適応性を実現するために、外乱の影響がシステム全体に波及することなく、時間・空間的に封じ込めることが可能な故障封じ込め自己安定アルゴリズムについて、故障封じ込めの特性を保持しながら、複数のアルゴリズムからより複雑な故障封じ込め自己安定アルゴリズムを合成するための手法を提案した。本研究では、(計算機などの構成要素の故障、ネットワークトポロジの変化、外部からの攻撃などによる)ネットワーク環境の不断の外乱のために不安定で絶えず変動しているネットワークにおいて、安定動作する自己適応型分散システム設計の基盤となる理論・技術の確立を目指している。今年度は、アドホックセンサーネットワークなどの構成要素やトポロジが不断に変化し、通信が不安定なネットワークのモデル化を行った。このモデルを始めとする、連続的に不安定なネットワークモデルに対し、安定動作する分散アルゴリズムの提案を行った。また、提案アルゴリズムの性能評価のために、解析、シミュレーション実験およびセンサー実機を用いた実験を行った。さらに、連続的不安定なネットワーク環境で安定動作する分散アルゴリズムの新たな特性として、緩自己安定性および出力安定性の定式化を行い、これらの特性を有する分散アルゴリズムを提案した。緩自己安定性は、不安定なネットワークにおける分散システムの実現困難性を回避するために、分散システムの新たな要求仕様として、従来の自己安定性を緩和した特性として導入したものである。また、出力安定性は、外乱の影響を封じ込めるための新たな方向性として導入したものであり、特に階層的な分散システムにおいて効果的である。さらに、故障封じ込め自己安定アルゴリズムについて、故障封じ込めの特性を保持しながら、複数のアルゴリズムからより複雑な故障封じ込め自己安定アルゴリズムを合成するための手法を提案した。交付申請書に記載した研究実施計画に従って研究を遂行し、以下の成果を得た。1.外乱の生じた周辺のみで分散システムの動作が乱れることを許し、その他の部分に対しては外乱の影響を遮断する(外乱の影響を空間的に封じ込める)という特性を、既存の自己安定アルゴリズムに付加するための手法を提案した。2.永続的な外乱にかかわらず、その影響を有限時間内で遮断する(外乱の影響を時間的に封じ込める)という特性を定式化し、この特性を有する自己安定アルゴリズムを提案した。3.外乱の影響の空間的封じ込めと時間的封じ込めを融合した特性を定式化し、この特性を有する分散アルゴリズムを提案した。さらに、これら2つの特性をバランスよく調整する手法について検討した。4.連続不安定なネットワーク環境において、分散システムの安定動作を実現するために、ランダム性を活用する手法について検討し、汎用性の高い自己安定アルゴリズムを提案した。

また、提案アルゴリズムの性能評価のために、解析、シミュレーション実験およびセンサー実機を用いた実験を行った。上記の自己安定アルゴリズムはいずれも、外乱に適応するために不断のプロセス間通信を必要とし、ネットワークに対する高い負荷を生じる。そこで、研究実施計画に記載した研究に加えて、通信に関して効率的な自己安定アルゴリズムを定式化し、いくつかの自己安定アルゴリズムを提案した。
新型ヒトパピローマウィルスHPV47の分子レベルでの分類学的研究

パピローマウィルス47型(HPV47)DNAの制限酵素、PstIによる3つの切断片、PstI-A、-B、-eの約5000塩基対の配列は、前年度にSanger法を用いてほぼ全容を明らかにしていたが、ウィルスDNAの二次構造などの影響から同法では塩基配列の決定が困難な領域については今年度Maxam-Gilbert法などを用いて確実にした。今年度はさらに残りのPstI-D断片について塩基配列決定を行い、ウィルスゲノム全体の塩基配列を明らかとした。すなわち、Hpv47のDNAは7726塩基対より成る。このように決定した塩基配列の遺伝情報としての意義をコンピューターを用いて解析したが、その要点を以下に箇条書とする。1.G+C含有率は約42%である。2.このウィルスはパピローマウィルスとしての典型的遺伝子構成をとっており、NCR(non-coding region)またはURR(upper reguratory region)と呼ばれる領域に続いてORF(open reading frame)-E6、E7、E1、E2、E4、L2、L1と続きURRに帰着するが、HPV8と同様ORF-E5は存在しない。ORF-L1の3′端からURRにかけてさらに363塩基からなるORFが存在するが、翻訳開始コドンである。ATGは存在しない。3.塩基配列は疣贅様表皮発育異常症に関連するパピローマウィルスの中でも病変の悪性化と関連が深いと言われているHPV5やHPV8との相同性が最も高く、WilberとLipmanの方法でどちらとも80%近い相同性が見られた。4.HPV47のURRはORF-L1の終りからORF-E6の第一ATGの前までの554塩基から成り、HPV5やHPV8と同様に他の多くのパピローマウィルスに比べ短い。URR内には38塩基のATのみから成る配列がある。さらに上流にはE2蛋白の結合部位であり、エンハンサー配列とされるACCGNNNNCGGTのパリンドロームがURR内に3コピー、L1領域に1コピー存在する。我々は疣贅様表皮発育異常症の患者より新型ヒトパピローマウイルス(以下HPVと略称する)DNAを分離した(暫定的にHPV47DNAとよんでいる).本研究はこのウイルスについて本年を初年度として2年間に行なうものであり,次の点を目的としている.(1)ウイルスDNA上で初期遺伝子(E)群や後期遺伝子(L)群がどのように配置されているかの大略を明らかにする.(2)その遺伝子配置や塩基配列の状況からHPV群におけるのウイルスの分類学的位置を推測する.そして,これまでの研究により以下の様な成果を得つつある.HRV47DNAを制限酸素pst1を用いて4つの断片(A, B, C, D)に分け,その各々をベクターpTZ18系に組み込んだ.そのうち3つの断片(A, B, C)の各々の両端から概略200の整数倍にあたる塩基対を欠損した種々の長さの断片を,特異性の異なるヌクレアーゼを組合せ利用して,作成した.そして, Sanger法により,計,約6000塩基対の配列の大略を決定した.その結果と既報のHPV8DNAとの塩基配列の相同性検索により(1)の研究目的の大筋は達成した.従来から用いられているKlenowのDNAポリメラーゼを用いた場合に,解析困難な塩基配列部位が,最近入手が容易になったT7ファージポリメラーゼを用いることによって解明される場合が相当あった.このようにして, A断片(2450塩基対)の塩基配列は確定した.そして,その配列上に翻訳可能枠組み(ORFと略す)を探索した.その結果,一方の転写方向に3つのORFが存在し,それらはHPV8DNAとの相同性から, L1の3 ́末端側部分, E6の全て,およびE7の5 ́末端側一部であることが判った.また, L1とE6の間には上流制御領域に相当する領域があり,転写のためのプロモーターやエンバンサーに関連した配列とか,ポリアデニル化信号などが他のHPVと同じように存在することが判った.今後, A以外の断片の塩基配列を確定的なものとして目的を全うしたい.パピローマウィルス47型(HPV47)DNAの制限酵素、PstIによる3つの切断片、PstI-A、-B、-eの約5000塩基対の配列は、前年度にSanger法を用いてほぼ全容を明らかにしていたが、ウィルスDNAの二次構造などの影響から同法では塩基配列の決定が困難な領域については今年度Maxam-Gilbert法などを用いて確実にした。

ATGは存在しない。3.塩基配列は疣贅様表皮発育異常症に関連するパピローマウィルスの中でも病変の悪性化と関連が深いと言われているHPV5やHPV8との相同性が最も高く、WilberとLipmanの方法でどちらとも80%近い相同性が見られた。4.HPV47のURRはORF-L1の終りからORF-E6の第一ATGの前までの554塩基から成り、HPV5やHPV8と同様に他の多くのパピローマウィルスに比べ短い。URR内には38塩基のATのみから成る配列がある。さらに上流にはE2蛋白の結合部位であり、エンハンサー配列とされるACCGNNNNCGGTのパリンドロームがURR内に3コピー、L1領域に1コピー存在する。
英国ルネサンス期における宴会形式の社会的文化的特徴の考察

本研究では、英国ルネサンス期における宴会形式の社会的文化的特徴を分析した。宴会の実践が、詩や演劇といった文学的表現だけでなく、音楽、舞踏、狩猟、料理などの文化的社会的実践にどのような影響を与えたかを考察した。シェイクスピアや同時代の文学作品における宴会の場を理解する際の困難さが、公私の空間の境界線が曖昧であることに起因することを明らかにした。最後に、エンブレムや植民地主義的言説に視点を広げ、パトロン貴族だけでなく、新興の中産階級の自己形成が当時どのように行われたかを、宴会の実践という場に関連付けて考察した。本研究は、ルネサンス期のイギリスを中心として、宴会という料理形式を通じて多様に交差する社会的文化的実践空間の編成に注目して研究を遂行することを目的としている。そして、この時代の宴会、つまり、"feast"と"banquet"の多様な関係性を明らかにするために、これらの日常的実践が、当時の人々にどのような空間的文化生産の場を提供したかを解明する。本研究では、ルネサンス期の英国社会の様々な社会階層で実践されていた宴会という料理の諸形態がどのような特徴をもっていたかを分析し、その上で当時の文学や演劇といった文化生産にいかなる影響をもたらしたかを検証しようとする。研究体制としては、主勤務地である天理大学の図書館、関西の国公私立大学の図書館、国立国会図書館関西館などを中心として資料の整理、最新批評論文のチェックを行った。また、国内における食文化研究グループやエンブレム研究会などで、成果を発表した。また、来日した海外のエンブレム研究者と交流し、情報を交換した。また、海外では、主に英国における調査の対象「I.料理本や家政学書によって記された調理実践としての宴会」を中心に、ロンドン大学図書館、大英図書館、大英博物館、ロンドン大学ウォーバーグ研究所、そして、ヴィクトリア&アルバート美術館において、関連研究資料を収集した。具体的には、1600年頃に製作されたバンケット木皿に描かれた詩と絵図という視覚芸術の文化的社会的背景を調査し、エンブレムの伝統との関係について考察を進めた。2009年度は、以上のように、バンケットの文化的背景を広く調査・分析することによって、より具体的な事例の分析に進むことができ、翌年度に国内外の学会で成果を発表し、学術機関誌への投稿を開始するために十分な準備を行った。本研究代表者は、「Banqueting as a Cultural and Social Practice in Shakespearean Drama」(ロンドン大学、2005年)で、ルネサンス期の英国文学における"banquet"の実践の社会的文化的意味について詳細に分析した。本研究では、これまで進めてきた研究をさらに発展させるために、様々な社会階層で実践された宴会という料理の諸形態を詳細に分析し、当時の文学や演劇といった文化生産への影響を検証する。本年度も昨年度の英国における調査対象「I.料理本や家政学書によって記された調理実践としての宴会」に引き続き、「II.建築構造的な視点から、空間実践としての宴会」に焦点を当て、国内外の図書館や博物館を中心に資料を収集し、国内外の研究者と情報交換を進めた。英国においては、バンケットルームやレシピ本、手紙などの一次資料の収集・調査・研究をさらに進め、バンケットという宴会空間とエンブレム表象との関係に注目し、特に1600年前後におけるバンケットの文化的歴史的背景の調査研究を実施した。本年度は、前年度までの成果をまとめながら国内外の学会で成果を発表する準備を始め、また関係する学術機関誌への投稿を開始した。「高大連携の取り組みから-国際理解を取り入れた英語教育-」は、英国文化研究の成果を、地域貢献の一環として教育的観点から発表したものであり、またバンケットとエンブレムの関係を中心とした研究成果を次年度に発表できるように、国際エンブレム学会への応募を行い、大会での発表の準備を進めた。「Artificial Exorcism : The Theatre of Nothing in Ql King Learでは、これまで扱っていなかったシェイクスピアの悲劇作品においてバンケットの空間表象のエッセンスとも言える「無」と「演劇性」の関係について考察した。「Sanitising Ajax, or the 'Privy' : Falstaff's Festive Space and the Government of the Body in Henry IV」では、シェイクスピアの『ヘンリー4世』における宴会表象を分析することにより、祝祭空間においてプライバシーと身体感覚がどのように結び付けられているかを明らかにした。本研究の最終年度に当たり、当初の目的であるルネサンス期の英国社会で実践されていた宴会という料理の諸形態と当時の文化や社会との関係への考察をエンブレムと植民地主義の側面から深めた。まず、英国ルネサンス期の宴会においてエンブレムがどのように用いられているかに注目し、主にバンケット(デザート)用木皿に描かれたエンブレムやエンブレム的図絵と、それに付随する警句詩の分析を通して、エンブレムの(食文化や装飾文化を含む)物質文化的背景を考察した。

6月にその研究の成果をエンブレム研究の拠点グラスゴー大学開催の国際エンブレム学会世界大会で「Banqueting Trenchers and the Emblematic Tradition in English Renaissance Culture and Society」として発表した。また、他の木皿の例も取り上げ、エンブレムやエンブレム的意匠が当時の王侯貴族の生活文化で果たしていた役割の一端を明らかにした。同発表原稿はその後国際エンブレム協会の学会誌『エンブレマティカ』に投稿され採用が決まり、現在校正中である。次に、エリザベス朝のカントリーハウス文化を特徴づけている家政術やバンケット(=デザートコース)、仮面劇といった文化的要素を詳細に分析することにより、当時広く流布しつつあった新世界をめぐる植民地主義的言説が、シェイクスピア後期のロマンス劇である『テンペスト』という作品のバンケット表象にどのような影響を与えているかを考察した。そして、その成果を3月に、演劇映像の国際的教育研究拠点である早稲田大学演劇博物館グローバルCOEプログラムの紀要に、「植民地支配の家政術:英国カントリーハウス文化と『テンペスト』におけるプロスペローの魔法のバンケット」として掲載した。貴族的な古い価値観から新しい階級労働者的価値観への変化が、『テンペスト』とその宴会表象にどのように反映しているかについて論じ、また仮面劇やバンケット表象と私的空間への志向性やその創造、それにジェンダーに関わる社会的な問題の関係について検討を加えた。発表や調査を通じて国内外の研究者と連携し、また英国や日本の図書館で資料調査を行うことにより、ルネサンス期英国の宴会と当時の社会文化との関係を明らかにすることができた。
臨床検体を用いたB型肝炎ウイルス（HBV）感染の病態解析

B型肝炎患者(n=7)のHBsAg陽性細胞領域および陰性細胞領域をLaser Microdissection法を用い採取した。それぞれよりRNAおよびDNAを抽出した。RT-PCR法にて遺伝子発現を解析した。HBsAg陽性細胞領域では陰性細胞領域と比較し、RT-PCR法にてpgRNAおよびcccDNAは有意に高かった。ヒト肝細胞キメラマウスより単離した初代培養ヒト肝細胞(PHHs: Primary human hepatocytes)にHBVを感染させたところ、BCAT2およびSLC16A4の発現上昇を認めた。HBV感染PHHsにおいて、BCAT2の発現を抑制したところ、細胞内pgRNAおよびSLC16A4の発現は低下し、培養上清中のHBV DNA量およびHBs抗原量は減少した。一方で、HBV感染PHHsにおいて、SLC16A4の発現を抑制したところ、細胞内pgRNAおよびBCAT2発現、培養上清中のHBV DNA量およびHBs抗原量は変化しなかった。これらの結果からBCAT2発現上昇がHBV複製に寄与している可能性が考えられた。B型肝炎肝細胞癌切除検体非癌部(未治療5例、核酸アナログ治療3例)および肝生検余剰検体(未治療24例、核酸アナログ治療5例)をHBsAgに対する抗体を用い免疫染色を施行した。37例中34例でHBsAg陽性細胞とHBsAg陰性細胞は混在した。未治療のB型肝炎患者肝組織ではHBsAg陽性細胞比率は血清HBV DNA値(r=0.59, p<0.05)およびHBsAg値(r=0.45, p<0.05)と有意な相関関係を認めた。核酸アナログ治療例では未治療例と比較し、HBsAg陽性細胞比率は有意に低かった。B型肝炎肝細胞癌切除検体非癌部(n=3)のHBsAg陽性細胞およびHBsAg陰性細胞をLaser Microdissection法を用い採取し、それぞれよりRNAおよびDNAを抽出した。本研究ではパラフィン固定ホルマリン包埋ブロックを用いるため、抽出したRNAの量をQubitで、品質をバイオアナライザーを用いDV200値にて評価した。RNAの量はHBsAg陽性および陰性の領域面積により異なるが、110ngから450ng程度抽出可能であった。RNAの品質はいずれの検体もDV200値は30以上であり、次世代シーケンサーを用いた網羅的な遺伝子発現解析(RNA-Seq)が可能であった。RT-PCR法にてpregenomeRNA(pgRNA)およびcccDNAを解析した。HBsAg陽性細胞ではHBsAg陰性細胞と比較し、pgRNAおよびcccDNAは有意に高かった。RNA-Seq解析を行い、paired t検定にてcut off値を0.01未満に設定すると、2倍以上の発現変化を認めた遺伝子は21個選択された。このうち7遺伝子はHBsAg陽性細胞において発現が上昇しており、14遺伝子はHBsAg陽性細胞において発現が低下した。FFPE検体よりRNAを抽出し、RT-PCR法によるpgRNA発現解析およびRNA-Seqによる網羅的な宿主遺伝子発現解析が可能であった。ウイルス複製に関与している可能性がある宿主因子候補を選定することができた。本年度選定した遺伝子について、NTCP強制発現細胞株やヒト肝細胞キメラマウス由来の初代培養ヒト肝細胞株を用い、HBV感染との因果関係や自然免疫系の誘導、代謝サイクルの変化について解析を行う。またウイルス複製に関与していることが確証できた遺伝子については、発現を介入することにより、感染効率の変化を解析する。
電気泳動する非イオン性高分子の設計とメカニズムの解明

ポリ(エステルースルホン)以外の非イオン性高分子を探索することで電気泳動に必要な構造単位および泳動機構を決定した。精密な分子構造(メチレンスペーサー、偶奇効果、など)も探り、その普遍性および泳動メカニズムを探求した。最終年度には、前年までの研究結果を踏まえ、電気泳動堆積法によるによる高分子微粒子の階層構造制御による構造色の発色が確認でき、工業的な応用が期待できる結果となった。研究室で合成したポリ(エステル-スルホン)を良溶媒であるN,N-ジメチルホルムアミド(DMF)に溶かし、そこに貧溶媒を添加しポリマーの分散液を得た。貧溶媒として用いたのはn-ブタノール(n-BuOH),メタノール(MeOH),エタノール(EtOH),ジエチレングリコール(DEG)およびジエチレングリコールジメチルエーテル(Diglyme)であり、溶媒の混合比を変えて分散液を調製した。得られた分散液にステンレス板を挿し込み電場を印加してEPDを行ったところ、すべての系でポリ(エステル-スルホン)がAnode選択的に電気泳動した。またそれぞれのゼータ電位の値とEPDの結果を比較し、電気泳動に与える影響を考察した。その結果、アルコールの種類によりゼータ電位、堆積量、初期電流値が変化することがわかった。特にDMF/MeOH=2/2(v/v)におけるサンプルでAnodeへの堆積量が多く、厚い膜を得ることができた。また良溶媒としてジメチルスルホキシド(DMSO),ジメチルアセトアミド(DMAc)を用いて同様にEPDを行ったが、全てのサンプルにおいてAnode選択性を示した。しかし良溶媒の種類によっては堆積膜にひびが入りやすいなどの変化があったため、その原因を今後検討する必要がある。次に貧溶媒としてDEGとDiglymeを用いEPDを行ったところ、DEGを用いたとき、Diglymeを用いた場合よりもAnodeへの堆積量が明らかに多いことが確認できた。この結果からアルコールなどのプロトン性の溶媒がその電気泳動性を高めていることがわかった。これらの結果から、貧溶媒であるアルコールがイオンー双極子相互作用により部分的に電離して電気二重層を形成し、すべり面の電荷の符号が泳動する方向を決定すると考察した。アノード(+)選択的な電気泳動挙動に必要な構造因子の決定と電気泳動メカニズムの二つを主に明らかにすることが出来た。研究成果は学術論文3編と著書1編に研究成果をまとめることができ、A-STEPなどのフィージビリチィースタディーのフェーズまで展開できた。本研究の発展的展開にあたり、メカニズム解明は必須であり、発見研究者の役目と言える。前年度の結果(電気泳動に必要な構造因子の決定, Takasu etal. Biomacromolecules2015, Polym. Chem. 2015)やバイオガラスなどのカチオン性無機物質の存在下でもアノード(+)に泳動すること(高須らMacromolecules 2012)を考慮して、電気泳動メカニズムに迫った。溶媒効果、電極基盤(電極反応)の効果、分散液のゼータ電位測定を行うことによりアプローチし、プロトン性溶媒の誘電的な電荷分離が電気泳動の駆動力であると結論付けた(Takasu et al., Polymer 2016)。また、この機構は自動車や電化製品の電着塗装への応用の可能性が見い出された。電着塗装とは製品を塗料液中に入れてメッキのように電気を流し、付着させた樹脂を乾燥させ、熱硬化させるものを指す。しかし、下塗のカチオン型電着塗装は黒色のため、その後、まずカラーのベースとなる白グレー系の中塗と、カラー・耐候用途の上塗工程が必要である。中塗・上塗工程においては、下塗塗膜が存在するために被塗物に通電されず、電着塗装は行えない。本研究を応用すると下塗と中塗を同時に行える省ステップ・省エネルギー型の電着等を提案できると新たな着想に至った(高須ら、塗装工学2017)。また、次年度の電着による階層構造の創発を念頭に、電気泳動する非イオン性の微粒子をエマルジョン重合を駆使して調製した。300 nm程度の粒子サイズの整った微粒子が得られた。これを電気泳動させると階層構造に起因すると考えられる構造色が確認できた。走査型電子顕微鏡観察を行ったところステンレス基板上にハニカム構造が確認できた(Takasu et al., Polymer 2017および高須昭則、特願2016-171367)。次年度はこの予備的な実験結果を基に、チタン、白金など電極を変えて実験を行い階層構造形成および構造色の発色など表面機能の発現メカニズムに迫る。計画通りに研究が遂行できており、次年度に行う予定であった電気泳動堆積法による階層制御コーティングに関する予備的な知見も得ることができた。前年度の結果(電気泳動に必要な構造因子の決定, Takasu etal.Biomacromolecules 2015, Polym. Chem. 2015)やバイオガラスなどのカチオン性無機物質の存在下でもアノード(+)に泳動すること(高須らMacromolecules 2012)を考慮して、電気泳動メカニズムに迫った。

また、この機構は自動車や電化製品の電着塗装への応用の可能性が見い出された。電着塗装とは製品を塗料液中に入れてメッキのように電気を流し、付着させた樹脂を乾燥させ、熱硬化させるものを指す。しかし、下塗のカチオン型電着塗装は黒色のため、その後、まずカラーのベースとなる白グレー系の中塗と、カラー・耐候用途の上塗工程が必要である。中塗・上塗工程においては、下塗塗膜が存在するために被塗物に通電されず、電着塗装は行えない。本研究を応用すると下塗・中塗・上塗を同時に行える省ステップ・省エネルギー型の電着等を提案できると新たな着想に至った(高須ら、塗装工学2017、ファインケミカル2018)。本年度は、電着による階層構造の創発と機能化を念頭に、電気泳動する非イオン性の微粒子をエマルション重合を駆使して調製した。まず、300 nm程度の粒子サイズの整った微粒子を調製し、これを電気泳動させると階層構造に起因すると考えられる構造色が確認できた。この走査型電子顕微鏡観察を行ったところステンレス基板上にハニカム構造が確認できた(Takasu et al., Polymer 2017および高須昭則、特願2016-171367)。さらに、これらの実験結果を基に、非イオン性の微粒子サイズを変更することで階層構造形成および構造色の色調変化など表面機能の発現制御に関する知見を得るところまで研究を進展させることができた。ポリ(エステルースルホン)以外の非イオン性高分子を探索することで電気泳動に必要な構造単位および泳動機構を決定した。精密な分子構造(メチレンスペーサー、偶奇効果、など)も探り、その普遍性および泳動メカニズムを探求した。最終年度には、前年までの研究結果を踏まえ、電気泳動堆積法によるによる高分子微粒子の階層構造制御による構造色の発色が確認でき、工業的な応用が期待できる結果となった。計画書に従い、アノード(+)選択的な電気泳動挙動に必要な構造因子の決定と傾斜材料への応用展開を模索する。前年度の電気泳動メカニズムを踏まえて傾斜材料など界面階層制御へと研究を展開する。具体的には今年度調製した電気泳動する非イオン性の高分子微粒子を用いた階層構造の高度化を目指したい。他の研究分野との融合や産業への応用特にカラー電着塗装への展開を強く意識して研究を展開したい。すでに特許は申請済みであるが、学術的な裏付けを最終年度に行いたい。また、海外発表も含めた成果発表を積極的に行う。高分子化学装置購入を次年度に見送った。国外での成果発表を次年度に行うため。今年度と同様の実験計画に加え、装置購入を検討し、研究の迅速な遂行を図る。2017年8月にアメリカ化学会にて成果発表を行う。
食道発声症例の構音動態の観測とそのリハビリテーションへの応用に関する研究

習熟度の異なる複数の食道発声症例に単音節を発話させ、その録音サンプルについて聴取実験によって各音節の同定試験を施行した。母音、半母音においてはいずれの例でも高い正答率を示したが、無声破裂音や「ハ」行音では習熟度の高い症例においても比較的正答率が低かった。摩擦音については習熟度の低い症例の正答率がきわめて低い傾向が認められた。健常成人および食道発声者の構音について、エレクトロパラトグラフィの手法を応用して舌・口蓋接触パタンの記録と解析を行った。新たに開発した計算機プログラムによってパラトグラム上で前方から後方に4分割した各分画ごとに接触の時間経過を解析した結果、摩擦音の発話において食道発声者は各分画とも接触率が有意に高いことが明らかになった。とくに「ハ」の発音においては健常人にみられない側方接触が認められた。これらは少ない空気量で有効な摩擦成分を作るための代償機能の現れと解釈された。平成9年度には、個々の症例の解析に先だってその食道発声者が発音した音声サンプルについて、意図した音が正しく表出されているか否かを聴取実験によって厳密に検討し、妥当と判定されたデータについてパラトグラムを作製した。パラトグラム上の所見から、前方から後方に到る各分画において、熟達した食道発声者では、とくに摩擦音、破擦音において側方接触が著明なことが再確認された。子音構音時の口腔内圧を測定したところ、熟達した食道発声者ではとくに無声子音の構音時に健常人の場合より口腔内圧が上昇する傾向が認められ、上述した接触パタンと対比させて考えると、無喉頭状態における有声・無声の弁別を助けるために無声子音の構音に際しては強い接触によて破裂や摩擦を強調することが推論され、この点に着目して発声指導を進めることがリハビリテーション指針として有用であろうと結論した。本年度はまず食道発声者の構音機能の特徴を知るために、食道発声習熟度の異なる複数の症例に単音節を発話させ、その録音サンプルについて聴取実験によって各音節の同定試験を施行した。その結果、母音、半母音においてはいずれの例でも高い正答率を示したが無声破裂音や「ハ」行音では習熟度の高い症例においても比較的正答率が低かった。摩擦音については習熟度の低い症例の正答率がきわめて低い傾向が認められ、構音動態の異常が示唆された。食道発声者における構音動態をさらに詳細に検討するために、正常成人および食道発声者(とくに習熟度の高い症例)のパタトプレートを作製し、エレクトロパラトグラフィの手法を応用して舌・口蓋接触パタンの記録と解析を行った。これに先だって接触パタンと接触時間に関するデータを計算機上で処理するプログラムを開発した。このプログラムによってパラトグラム上で前方から後方に4分割した各分画ごとに接触の時間経過が明瞭に観察できるようになった。解析の結果、摩擦音の発話において正常人と比較して食道発声者においては各分画とも接触率が有意に高いことが明らかになった。とくに「ハ」の発音においては正常人にみられない側方接触が認められた。この知見は食道発声者の構音リハビリテーションにおける指導方針に示唆を与えるものと考えられた。また食道発声者において発話に先行して正常人にみられない舌・口蓋接触が観察され、空気の取り込みに関連するものと推論された。

前年度に引続き食道発声者を対象としてパラトメータプレートを作製し、エレクトロパラトグラフィの手法を用いて、構音時の舌・口蓋接触パタンの記録・解析を行った。解析にあたっては、前年度に開発した処理プログラムをさらに改良したものを用いた。個々の症例の解析に先だってその食道発声者が発音した音声サンプルについて、意図した音が正しく表出されているか否かを聴取実験によって厳密に検討し、妥当と判定されたデータについてパラトグラムを作製するようにした。パラトグラム上の所見から、前方から後方に到る各分画において、熟達した食道発声者では、とくに摩擦音、破擦音において側方接触が著明な傾向が認められた。語音の種類としては無音声の方が有音声より接触の程度が高い傾向があった。そこで複数の症例について子音構音時の口腔内圧を測定したところ、熟達した食道発声者ではとくに無声子音の構音時に健常人の場合より口腔内圧が上昇する傾向が認められ、上述した接触パタンと対比させて考えると、無喉頭状態における有声・無声の弁別を助けるために無声子音の構音に際しては強い接触によて破裂や摩擦を強調することが推論された。この点に着目して発声指導を進めることがリハビリテーション指針として有用であろうと考えられ、食道発声が未熟な症例について応用を試みている現状である。また昨年度も指摘したように食道発声者のほとんどの症例で発話に先行して健常人とは異なった舌・口蓋接触が観察された。これは発話に先だって子音注入によって食堂内への空気摂取を助けているものと考えられたので、この動作を強調することによって、食道発声が未熟な症例における空気の取り込みの強化を図ることとした。このように、食道発声者の構音動態を解析することによって構音リハビリテーションの指針の開発がさらに進められることが期待された。
一般配列での3本鎖DNA形成のための新しい認識分子の設計

ヒトの全遺伝子配列が解明されたのに伴い、遺伝子情報と機能を関連づけるための有効な研究手法の開発がますます必要となってきた。とくに遺伝子異常は難病や発癌の一因とされており、遺伝子配列の正確な認識は診断や治療における次世代の中心的手法となるべきものと期待されている。遺伝子の特定部分に結合し、複製あるいは転写を阻害するアンチジーン法は、理論的には最も直接的で効果的になり得るものと考えられる。核酸誘導体を用いて三本鎖DNAを形成させる手法は幾つかの問題点を抱えており、任意の遺伝子配列の完全認識にまでは至っていない。本研究では、これまでと全く異なる、独自の発想によって新規分子を設計し、一般的配列で三本鎖DNAを形成するための一般法を確立することを目的とした。すなわち、本研究ではプリン塩基を多く含むDNA鎖によって三本鎖形成を検討した。プリン塩基を利用する利点としては(1)塩基間のスタッキング効果によりより安定な三本鎖DNA形成が望めること、(2)このようなDNA鎖によって形成される三本鎖DNAの構造上の特徴により、設計される認識分子は望ましい結合を取りやすいと予想される、点がある。我々は、(1)天然塩基ではできないHoogsteen水素結合の形成、(2)スタッキングの連続性の維持、(3)架橋構造によりコンフォーメーションの固定化、の3項目を考慮して認識分子として[3.3.0]ビシクロオクタン骨格を基本とする化合物を設計した。新分子はコンフォーメーションの固定化したビシクロオクタン骨格にベンゼン環と塩基を結合した構造をとっており、その形状からWNA(W-shapenucleosideanalog)と命名した。種々の塩基構造を組み込んだWNA誘導体を合成し、プリン塩基からなるオリゴヌクレオチドに導入後、3本鎖形成能を評価した。その結果、チミンを組み込んだWNA-βTが2本鎖DNAのTA障害部を特異的に認識し安定な3本鎖DNAを形成できることを見出した。さらに、WNA-βCが2本鎖DNAのCG障害部を特異的に認識できることも明らかにした。重要な知見としてWNAは天然塩基よりも大きな安定化効果をもたらすことが分かった。本研究の結果、従来3本鎖形成にとって障害となっていた塩基対、TAおよびCG塩基対部分でも安定な3本鎖DNAを形成できる人工塩基WNAを開発することができた。平成13年度には非天然型3本鎖形成を目指して設計した認識分子(WNA)をD-riboseから約10ステップで合成した。認識構造にguanosineを組み込んだ4種の異性体を分離した(WNA-7,9,a, b-G)。引き続きWNA-7,9b-Gの2種をホモプリンTFO鎖に組み込み3本鎖形成能を調べた。その結果、WNA-7b-GがT-A塩基対を選択的に安定化することを見出した(TL,42,6915(2001),特許出願)。さらに少量の異性体

WNA-7,9a-GをTFO鎖に組み込み3本鎖形成能を調べたところ、WNA-9a-Gはさらに安定な3本鎖をTA塩基対と生成し、WNA-7a-GはGCおよびCGを安定化することが分かった。本年度の研究により従来達成できていなかったTA塩基対の認識を達成できたばかりでなく、CG塩基対に親和性の高い認識構造を明らかにすることができた。平成14年度中には一般配列の認識を達成する予定である。DNA配列の完全認識を目指し、非天然型人工塩基の研究が世界中で10年以上行われているが、いまだに達成されていない。本研究ではプリン塩基を多く含むDNA鎖によって天然塩基では形成できない配列での三本鎖形成を検討した。プリン塩基を多用する利点としては(1)塩基間のスタッキング効果によりより安定な三本鎖DNA形成が望めること、(2)このようなDNA鎖によって形成される三本鎖DNAの構造上の特徴により、設計される認識分子は望ましい結合を取りやすいと予想される、点がある。このような点を考慮し、本研究では、(1)天然塩基ではできないHoogsteen水素結合の形成、(2)スタッキングの連続性の維持、(3)架橋構造によりコンフォーメーションの固定化、などを考慮した認識分子を設計した。設計分子は形状からW-shape nucleoside analog(WNA)と命名した。設計分子(WNA)を合成するための鍵中間体をD-riboseから合成する経路を確立した。引き続き。鍵中間体を原料にグアニン、アデニン、シトシン、5-メチルシトシン、アデニンとのグリコシル体を合成し、結合部分の立体化学がαおよびβ-体を単離、3本鎖形成オリゴヌクレオチドに導入し、それぞれの3本鎖形成能を評価した。その結果以下のことが分かった。(1)WNA-βTはTA塩基対に特異的に3本鎖を形成した。(2)WNA-βCはCG塩基対に特異的に3本鎖を形成した。(3)WNA塩基による3本鎖は天然型よりも安定であった。(4)WNA塩基はホモプリン鎖の欠点である自己集合を阻害する作用を持っていた。本研究の結果、天然型のA-AT, G-GTに加えて、WNA-βT-TAならびにWNA-βC-CG塩基対の組み合わせで3本鎖形成が可能になりすべての塩基配列の認識が可能となることが示唆された。WNA塩基は、さらにプリン塩基およびピリミジン塩基が混在する配列の2本鎖DNA配列の認識のための基本骨格として発展可能と考えられる。
長時間気球観測データを用いた宇宙線反重陽子・反ヘリウムの精密探索

本研究では、BESS-Polar IIの観測データを用いて反重陽子および反ヘリウムの探索を行った。南極から回収した測定器を用いた検証を行うことにより、実験中に生じた様々な問題について知見を得て、新たな較正により測定器性能を向上させることができた。従来に比べ1桁上の感度での探索を行った結果、観測データ中には反重陽子、反ヘリウムは観測されなかった。反ヘリウムに関しては、過去のBESS実験のデータと合わせる事により、BESS以前の結果にくらべ、1000倍の精度での探査結果となり、我々の周りに反物質優勢の世界がないことの最も直接的な証拠をあたえることとなった。本年度は、BESS-Polar IIのデータを用いて反重陽子・反ヘリウムを探索するのに必要な測定器性能を得るための測定器の較正を行った。1)中央飛跡検出器と高電圧電源、モニタの検証回収した中央飛跡検出器と高電圧電源、モニタ回路を接続して、実際に高電圧をかけてフライト中の問題が再現するかを検証したところ、高電圧は所定の電圧まで安定してかかり、電流も正常な値を示し、フライト中の問題の再現はできなかった。現在、それぞれの個別でのテストを行い、問題の再現性を調べている。2)超伝導ソレノイドの復元およびテスト回収する際に、2つの部分に分けられた超伝導ソレノイドおよびクライオスタットの再組み立ててを行った。作業後に冷却および定格励磁を行い、問題のないことを確かめた。3)中央飛跡検出器の較正得られた(時間変動する)電場計算を元にして、フライト中のデータを用いた較正を行い、ドリフトパラメータを精度よく求めて、運動量分解能の最適化を図った。同時に中央飛跡検出器で測定されるエネルギー損失dE/dXに関しても、時間変化に応じた較正を行い精度を向上させた。4)測定器全体の較正中央飛跡検出器の較正により改善した運動量測定をもとに、その他の測定器(飛行時間測定用ホドスコープ、エアロジェルチェレンコフカウンター)の較正も行い、測定器性能の向上を図った。本年度は、BESS-PolarIIのデータを用いて反重陽子、反ヘリウムの探索に必要な測定器性能を得るために、測定器較正を引き続き行い、以下のような成果を得た。1、測定較正による性能の向上前年度までに得られた中央飛跡検出器の高電圧の不安定に関する情報を利用して、測定器較正を行うことにより、運動量分解能、時間分解能を向上させることに成功した。得られた測定器性能は反ヘリウムの同定に必要十分なものである。現在、反重陽子同定のために重要な、dE/dXの精密較正を行っている。2、反重陽子の探索反重陽子の探索においては、同じ負電荷を持ち流束が多い反陽子が最も厳しいバックグランドとなる。本年度はエアロジェルチェレンコフカウンタおよび飛行時間カウンタのデータを用いて選別を行った。今後dE/dXの情報を用いて、さらに、精度の向上とエネルギー範囲の拡大を試みる。3、反ヘリウムの探索運動量分解能を向上させたデータを用いて、反ヘリウムの探索を行った。正電荷を持つヘリウムからのなだれ込みを排除することにより、探索する運動量範囲を狭めることなく、従来のデータに対して1桁上の感度での探索を行った。得られた結果は、過去のBESS実験のデータと合わせる事により、BESS以前の結果にくらべ、1000倍の精度での探査結果となり、我々の周りに反物質優勢の世界がないことの最も直接的な証拠をあたえることとなった。この結果は論文誌Physical Review Letterに掲載され、APSおよびNature Physicsでもハイライトとして取り上げられた。本年度は、BESS-PolarIIのデータを用いて反重陽子の探索に必要な測定器性能を得るために、測定器較正を引き続き行い、以下のような成果を得た。[測定較正による性能の向上]:前年度までに得られた中央飛跡検出器の測定器較正を行うことにより、運動量分解能、時間分解能を向上させることに成功した。今年度は反重陽子と反陽子を識別するために重要なエアロジェルチェレンコフカウンタの性能向上のために、運動量と閾値に関する較正を行った。さらに中央飛跡検出器のdE/dXを組み合わせることにより、反重陽子の同定能力をさらに向上させることに成功した。[反重陽子の探索]:反重陽子の探索においては、同じ負電荷を持ち流束が多い反陽子が最も厳しいバックグランドとなる。本年度は向上したエアロジェルチェレンコフカウンタおよび飛行時間カウンタのデータを用いて選別を行った。全データから反重陽子事象の探索を行ったが、有力な候補は観測されなかった。[反重陽子流束の上限値の算出]:反重陽子が観測されなかったことから、宇宙線の中の反重陽子の流束の上限値の算出を行っている。

反重陽子に対する検出効率を求めるために新たなモンテカルロシミュレーションコード(MC)を開発した。MCを用いて、検出効率およびアクセプタンスを求めた後に、流束の上限値を求める。昨年度は、反ヘリウムの原著論文として発表することができた。反重陽子に関しては、反陽子の測定結果をまとめるとともに、さらに測定器の性能を向上させ、探索をおこなっているところである。25年度が最終年度であるため、記入しない。本年度中に反重陽子の探索結果を報告し、反ヘリウムの結果とともに、本研究の目的である、初期宇宙における素粒子現象に対して重要な知見が得られる。