hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
新自由主義下の保育所民営化をめぐる紛争過程

本研究では、保育所民営化をめぐる是非が争われた全国の裁判例を分析した。その結果、1民営化を阻止しようとする側は「子どもの発達保証の論理」に基づいて、一方民営化を推進しようとする側は「行財政改革の論理」に基づいていること、2どちらの論理ともに江論理的な陥穽を有していること、3裁判所の判断は二分されたが、民営化に反対する側の論理も一定の言説的な重みをもちえたことなどが明らかとなった。また、これに付随して、議会における審議の様子も分析した。その結果、議会と裁判所とでは、言説のフレームが大きく変化することが見出された。平成25年度は、保育所民営化問題にかかる横浜市訴訟、神戸市訴訟、川崎市訴訟の分析を行った。当該3裁判に関する裁判資料を収集し、それをもとに、なぜ保護者らは民営化に反対するのか、地方自治体は保護者の論理にどう対抗し、なぜ民営化を進めようとしたのか、裁判所はどのような判断を示したのか、分析した。その結果、保護者が民営化に反対する根拠として「発達保証の論理」が存在すること、地方自治体が民営化を推進する論理として「行財政改革の論理」が存在すること、また裁判においては保護者の論理が認められるようになりつつあることを見出した。同時に、当該地方自治体の議会の議事録も収集し、保育所民営化をめぐってどのような議論がなされたのかを分析した。その結果、議会においては、民営化の是非にもまして、住民の意向をどのように汲み上げるのかが中心的な議題となっていたことを見出した。つまり、裁判所と議会とでは、言説のフレームが変化することが明らかとなった。平成24年度は、資料の収集および一部の判決について分析した。資料収集では、大東市役所、高石市役所、横浜市役所に赴き、当該市において公立保育所の民営化がなされた際の行政文書や議会の議事録を収集した。これらの資料は今後、公立保育所民営化の過程(市における政策決定過程、議会における条例案の審議過程等)を分析するのに活用する予定である。また、判決の分析では、大東市訴訟、高石市訴訟及び横浜市訴訟の原判決および控訴審判決を分析した。その結果、3件の裁判に共通する保護者の論理と地方自治体の論理を見出すことができた。保護者の論理としては、子どもの発達保証を論拠として民営化に反対していること、地方自治体の論理としては、行財政改革の進展を論拠に民営化を推進していることなどを見出すことができた。保護者の論理と地方自治体の論理は3件の裁判で共通するにもかかわらず、裁判所の判断は大きく分かれた。地方自治体の首長が有する公営物の管理にかかる裁量権をもとに保育所民営化の正当性を認めた判決、民営化そのものは是認する一方、その手続きに瑕疵が存するとして、保護者への損害賠償を命じた判決、児童福祉法に基づく保護者の選択権を法的権利と認めて保育所民営化を否定した判決と、判決内容は三分された。以上より、保育所民営化をめぐってさまざまな言説が錯綜している実態を見出すことができた。本研究では、1990年代以降全国各地で展開された保育所民営化裁判を取り上げ、保護者はどのような論理で保育所民営化に反対したのか、行政はなぜ民営化を進めようとしたのか、こうした主張・反論に対して、裁判所はどのような判断を示したのか、保育所民営化をめぐる言説の布置を分析した。また、この課題と付随して、各地の地方議会における民営化問題の論争過程についても分析した。その結果、以下の諸点を明らかにすることができた。1保護者は「子どもの発達保障の論理」に基づき民営化に反対した。2行政は「行財政改革の論理」に基づき民営化を推進した。3しかし、どちらの論理とも、論理的な陥穽を有していた。前者では公立至上主義へと横滑りする危険性があること、後者では公立保育所の廃止が保護者の選択権の保証という新自由主義のテーゼと矛盾することなどである。一方、裁判所の判断は二分された。民営化を是とする判決が多数存在する一方、民営化を否とした判決も一定程度存在した。民営化に反対する判決が出された背景には、民営化反対論者が積み重ねてきた言説的実践の重み、「子どもの権利」概念の成熟化などを指摘することができる。議会の論議は民営化そのものよりも、民営化を進める手続きに比重が置かれていた。すなわち、首長の民営化の進め方が問題視されることが多かった。このように、裁判所と議会のように、議論される場が異なる場合、保育所民営化という同じ問題であっても、言説のフレームが変化することが見出された。教育社会学当初計画した裁判例の分析は順調に進んでいる。加えて、当初は計画していなかった議会の分析も行うことができたので、「当初の計画以上に進展している」と判断した。

研究計画では、平成24年度は主に資料の収集および3件の判決の分析を遂行することとしていた。先に述べたように、本年度には大東市、高石市及び横浜市に赴き、資料を収集することができた。また、これら資料及び判決文をもとに、大東市訴訟、高石市訴訟及び横浜市訴訟の分析も完遂することができた。ただし、従来の研究計画では、本年度は枚方市訴訟を分析する予定であったが、資料収集の都合から、横浜市訴訟を先に分析することとした。順序は入れ替わったが、結果的に従前予定していた3件の裁判の分析を完遂することができた。以上より、研究計画に記した「研究の目的」については、今年度までのところ、計画通り十全に達していると考える。平成26年度は、残る八千代市訴訟の分析を完遂し、調査結果の取りまとめ、報告書の刊行を行う。平成25年度中に、いまだ資料収集が完成していない自治体(枚方市、神戸市、川崎市、八千代市)に赴き、公文書、議事録等の資料の収集を完成させる予定である。また、これら資料及び判決文をもとに、研究計画で予定している、枚方市訴訟、神戸市訴訟及び川崎市訴訟の分析を遂行する予定である。平成26年度には、残りの八千代市訴訟を分析したうえで、研究成果報告書を刊行する。その際、それまでに収集した資料を基に、判決文だけでなく、行政の公文書、議会の議事録等も分析に加え、研究に厚みが増すよう工夫する。また、当研究で得られた知見を広く社会に還元するため、学会発表及び論文の投稿等を順次行っていく。物品費が予定より少なかったため、次年度使用額が生じた。次年度使用額と合わせて、報告書の刊行経費及び郵送費に充てる。次年度の研究計画の第一は、資料収集である。そのため、いまだ資料収集をしていない枚方市、神戸市、川崎市、八千代市に赴き、資料を収集する。そのために、まず旅費として研究費を支出する。ついで、収集した資料及び判決の分析に必要となる、書籍、物品(ファイル等)等を購入する。また、研究が進捗した段階で学会発表や論文の投稿を行うので、学会参加費等その他の支出も予定している。
アドレノメデュリンの糸球体上皮細胞保護作用:疾患形成と病態予測に関する研究

1.各種動物モデルにおける糸球体上皮細胞障害の程度とアドレノメデュリンmRNAの発現糸球体上皮細胞障害モデルとして、Wisterラットを用いて片腎摘出後の抗Thy1.1腎炎を、SDラットを用いて慢性puromycin aminonucleoside(PAN)腎症を作製した。それぞれ、経時的に腎組織を得、アドレノメデュリン(AM)mRNAの発現の程度と分布をin situ hybridizationを用いて検討した。両モデルにおいて、AM mRNAの発現は近位尿細管細胞>遠位尿細管>糸球体の順に強く、糸球体内での発現は弱いものの糸球体上皮細胞にのみ発現を認めた。経時的な変化では、両モデル共にそれぞれ抗Thy1.1抗体およびPAN投与前に比し、投与3日後以降で、糸球体上皮細胞におけるAM mRNAの発現を強く認めたことより、糸球体上皮細胞障害に伴いAMが発現してくるものと考えられた。2.ヒトIgA腎症における尿中アドレノメデュリン排泄と尿中脱落糸球体上皮細胞の解析ヒトのIgA腎症患者58例の尿中AM排泄量は、総AMで15.2±1.7pmol/g cr、成熟型AMで3.9±0.5pmol/g crと、正常コントロールに比べて有意に高かった。同時に採取した尿中脱落細胞で、抗ヒトポドカリキシン(PCX)抗体と抗AM抗体を蛍光抗体間接法を用いて二重染色すると、ヒトPCX陰性で尿細管上皮と考えられる細胞でAMを強く認めたが、共焦点レーザー顕微鏡による観察では、ヒトPCX陽性の糸球体上皮と考えられる細胞でもAMの発現を細胞質にほぼ均一に認めた。また、尿中成熟型AM濃度が尿中β2 microglobulin濃度と強い相関が認めた(p<0.3×10^7)ことより、尿中AM排泄量の測定は糸球体上皮細胞障害よりもむしろ尿細管障害や尿細管修復機転を反映する可能性が示唆された。1.各種刺激による培養糸球体上皮細胞におけるアドレノメデュリンmRNAの発現ラット腎より糸球体上皮細胞を得、K1-3T3メディウムにで培養した。また、ラット腎よりメサンギウム細胞を得、DMEMで培養した。それぞれの培養細胞のメディウムに5%、10%、15%のFCSを添加し、24時間後および72時間後にアドレノメデュリンmRNAの発現をノザンブロット法により観察した。その結果、培養ラット糸球体上皮細胞は、アドレノメデュリンmRNAを発現しており、その発現はFCSの濃度依存性に強くなることが分かった。一方、培養ラットメサンギウム細胞では、アドレノメデュリンmRNAの発現は認められなかった。2.ヒトの各種腎障害時に伴う尿中アドレノメデュリンの解析各種慢性腎疾患患者56例を対象に、血中および新鮮尿中アドレノメデュリン(AM)、成熟型AMを測定し、新鮮尿中NAG、24時間蓄尿中β2MG、protein、albumin、Na、ClおよびCcrと、また腎生検時に検体を採取できた12例の光顕組織上の重松分類による組織障害の指標と比較検討した。AMおよび成熟型AMの血中値はそれぞれ14.3±0.9、2.0±0.2fmol/ml、尿中値はそれぞれ13.6±1.2、3.3±0.3fmol/mlで、それぞれの血中および尿中値に相関は認められなかった。尿中成熟型AMは、尿中β2MGと強い相関が認められ(p<0.3×10^3)、Ccrと弱い相関を認めた(p<0.03)。また、組織学的検討との比較では、急性障害(G)の指標が高いものほど、尿中成熟型AMが高値を示す傾向にあったが、進行度(S)の指標との間には、一定の傾向が認められなかった。

また、尿中成熟型AM濃度が尿中β2 microglobulin濃度と強い相関が認めた(p<0.3×10^7)ことより、尿中AM排泄量の測定は糸球体上皮細胞障害よりもむしろ尿細管障害や尿細管修復機転を反映する可能性が示唆された。
拡散テンソルおよび血液スピンラベリングを用いたヒト味覚伝導路の探索

fMRIに関して、MRI信号に同期させて刺激のON/OFFを指示する自動制御装置を作成し、データ取得、解析を行った結果、味覚刺激時に大脳皮質第一次味覚野(島・前頭弁蓋)に脳活動が生じることを確認した。さらに、咀嚼を加えることで、感覚運動野・前頭前野・海馬にも脳活動が生じることを確認した。拡散テンソルtractographyでは、fMRIで明らかになった脳活動領域をseedとしてdTVによる神経線維追跡を行った結果、橋視床感覚運動野・一部前頭前野に向かう神経線維が描出された。血液スピンラベリングでは、味覚物質を咀嚼する前後で、咀嚼後に脳血液循環が増加している結果が示唆された。本研究の目的は、functional MRI(fMRI)を用いて味覚刺激時のヒト脳機能領域を明らかにした上で、拡散テンソルtractgraphyにより、fMRIで明らかとなった味覚領域に至る神経繊維を追跡・描出し、ヒト味覚伝導路を構造面から追求すること、さらに、血液スピンラベリングを用いて味刺激時の、味覚領域における左右脳血流量を定量評価することで機能面からも追求し、ヒト味覚伝導路を明らかにすることである。次に、実際のfMRI実験における味覚刺激方法、実験パラダイム、MRIの撮像シークエンスについての検討を行い、味覚刺激実験による脳活動データを取得した。これらの取得したデータを解析した結果、味覚刺激により、大脳皮質第一次味覚野である島・前頭弁蓋に賦活が生じることを確認した。拡散テンソルtractographyに関しては、データ取得のためのdiffusiontensor imageの撮像方法の最適化を行い、dTVにおける線維追跡方法の検討を合わせて行った。さらに、fMRIでの活動領域付近をseedにして、線維追跡を行った。22年度は、21年度に得したこれらの知識・手技をさらに発展させていく予定である。fMRI、拡散テンソルtractgraphy、血液スピンラベリングを組み合わせた実験報告は未だ希少で、味覚伝導路における報告は過去に例をみない。本研究により、ヒト味覚伝導路が最新の技術によって画像化され、機能面でも評価されれば、味覚研究に大きく寄与するものと考えられる。本研究の目的は、functional MRI(fMRI)を用いて味覚刺激時のヒト脳機能領域を明らかにした上で、拡散テンソルtractgraphyにより、fMRIで明らかとなった味覚領域に至る神経繊維を追跡・描出し、ヒト味覚伝導路を構造面から追求すること、さらに、血液スピンラベリングを用いて味覚刺激時の、味覚領域における左右脳血流量を定量評価することで機能面からも追求し、ヒト味覚伝導路を明らかにすることである。fMRIに関しては、MRI信号に同期させて刺激のON/OFFを指示する自動制御装置を作成し、前年度に検討・習得した手法に基づき、データ取得、解析を行った結果、味覚刺激時に大脳皮質第一次味覚野(島・前頭弁蓋)に脳活動が生じることを確認した。拡散テンソルtractgraphyでは、fMRIで明らかになった脳活動領域をseedとしてdTVによる神経線維追跡を行った結果、橋視床感覚運動野・一部前頭前野に向かう神経線維が描出されたが、側方に分岐する線維に関しては追跡困難であった。血液スピンラベリングでは、味覚物質を咀嚼する前後で、咀嚼後に脳血液循環が増加していることが示唆された。これまで、ヒトの味覚と脳機能との関係を示すfMRI研究はいくつか報告があったが、拡散テンソルtractgraphyや血液スピンラベリングという新しい手法を取り入れ、神経伝達路や脳循環を加味した研究は皆無であった。本研究において、味覚伝導路の一部が描出されたことは、今後、ヒト味覚伝導路を明らかにする上で大変有意義であり、味覚刺激・咀嚼によりヒトの脳血液循環の変化を画像により描出したことは、将来的に、脳の活性に有効な食品の開発、咀嚼方法などを提示する上で大きく貢献するものと考える。
二重分子識別原理に基づく新しい高精度DNA/RNA検出法

本年度は、DNAの2重らせんのマイナーグルーブに塩基配列特異的に結合できるピロール/イミダゾールからなるホリアミド分子とフェロセン分子を連結したコンジュゲート体の合成を行った。その結果、フェロセン誘導体の合成中間体の安定性も考慮して、最終的にフェロセン分子から鉄原子の上下にあるシクロペンタジエニル基にそれぞれカクボキシル基を介して塩基配列認識能をもつ2種類のピロール/イミダゾールからなるホリアミドを連結することにした。また、この連結には種々のリンカーを検討したところ、炭素数4のリンカーが最も合成化学的にもよい結果をえた。そこで、この分子を実際にDNA2重らせんと結合実験を行ったところ、1.4倍程度加えるとほぼ1:1のコンプレックスができることがCDスペクトル解析によってわかった。そこで、この結合力がミスマッチ塩基を含むDNA2重らせんと比較してどのくらいであるか評価することにした。その結果、DNA2重らせんで、まったく相補的な2重らせんに対しては強く結合し、ミスマッチDNA2重らせんに対してはかなり弱く結合することをみいだした。さらに、この新規ホリアミド分子とフェロセン分子のコンジュゲート体が電気化学応答があるかどうか調べるために、3極電極によりCVを測定した結果、酸化過程の電流応答が顕著にみられることがわかった。しかし、還元反応の電気化学応答は得られないことがわかり、1回のみの電気化学応答分子であることがわかった。また、マッチとミスマッチ塩基配列をもつDNA2重らせんとこのコンジュゲート体のコンプレックスの電気化学応答も調べた。その結果、電圧値は少し高くなるが、明らかな電流応答がマッチ塩基配列をもつDNA-コンジュゲート体のコンプレックスに認められた。しかし、ミスマッチ塩基配列をもつDNA-コンジュゲート体のコンプレックスでも、少し電流応答もみられた。
肺の組織remodeling及び癌細胞浸潤におけるlaminin5の役割

1.前年度では、特発性間質性肺炎(UIP, NSIP)症例において、Lamininのγ2鎖,α3鎖,β3鎖の抗体を用いて免疫染色を施行した。その結果より、UIP, NSIPにおける組織再構築の際、上皮細胞の遊走、分化にはLnγ2が深く関わっていると予想された。その際にはLnα3β3γ2のtrimerからγ2鎖が遊離し、再生上皮細胞質内に移動していることが予想された。2.特発性間質性肺炎(NSIP)3例の凍結材料を用い、Lnγ2鎖のmRNAレベルでの発現の有無をRT-PCRにて検討した。期待した位置にうすいバンドがあるものの、非特異的バンドも多数出現し、陽性コントロールでもバンドはあまり明瞭でなく手技に問題がある可能性もあり評価困難であった。3.特発性間質性肺炎(NSIP)2例、正常肺組織1例の凍結材料において、Western blottingにてLnγ2の蛋白レベルでの発現を検討した。NSIPでは140kDa,100kDa,80kDaの3本のバンド、正常肺組織では140kDa,100kDaの2本のバンドを認めた。このことより、NSIPではγ2鎖全体がLn5のtrimerより遊離するのではなく、γ2の一部が遊離して上皮細胞の遊走・分化に関与していると考えた。また、正常と思われた肺組織においても、100kDaにバンドが認められた理由として、軽度の炎症があり、バンドとしてとらえられない程度の80kDaのγ2鎖蛋白が存在している可能性を考えた。4.まとめ:特発性間質性肺炎において、通常は基底膜上でtrimerの形で存在しているLn5のうちγ2鎖の一部が遊離し、上皮細胞内に移動し、細胞の遊走・分化を誘導していると予想される。このような形でLn5は組織の改築に関与していると考察される。1.間質性肺炎症例15例(UIP,11例、NSIP,4例)・ホルマリン固定パラフィン包埋切片に対し、Lamininγ2鎖(Lnγ2)抗体を用い免疫染色を行った。さらに、数例を選び、MMP2,E-cadherinの免疫染色も行った。Lnγ2は上皮基底膜に加え、再生肺胞上皮の細胞質内にも観察され、特に異型の強い細胞に強く認められた。また、周囲に炎症細胞浸潤が目立つ間質を覆うやや扁平な肺胞上皮も陽性を示していた。蜂窩肺部では、陽性像はほとんどなく、化生細胞には観察されなかった。MMP2に関しては染色手技の問題か、全体に染まり、Lnγ2との関連ははっきりしなかった。E-cadherinは蜂窩肺部の化生細胞の細胞膜に強く観察された。以上より、間質性肺炎の組織再構築の際、上皮細胞の遊走、分化にLnγ2が深く関わっていることが示唆される。また、Lnγ2の発現とE-cadherinの発現は相反するものであると思われる。2.間質性肺炎3例(NSIP)の凍結切片をに対しLnγ2,Lnα3,Lnβ2抗体を用い免疫染色を行った。Lnγ2,Lnα3,Lnβ2全て、上皮基底膜に観察された。しかし、再生上皮細胞質内にはLnγ2のみしか観察されなかった。以上より、Ln5は基底膜に存在するときはLnα3β2γ2のtrimerの形で存在しているが、肺の組織再構築時にはLnγ2が遊離し再生上皮細胞質内に移動することが、再生上皮細胞の遊走、分化に関連していると思われる。4.まとめ:特発性間質性

肺炎において、通常は基底膜上でtrimerの形で存在しているLn5のうちγ2鎖の一部が遊離し、上皮細胞内に移動し、細胞の遊走・分化を誘導していると予想される。このような形でLn5は組織の改築に関与していると考察される。
腎移植後急性拒絶反応の新規診断法の開発

移植腎急性拒絶反応の早期診断には血清クレアチニン以外の鋭敏な感度と特異度をもつ組織・尿中バイオマーカーが必要である。急性拒絶反応症例の腎生検組織における炎症性マーカーPTX-3の発現と尿中測定を検討した。急性拒絶反応症例の組織では、PTX-3が尿細管間質組織に5%以上陽性エリアが認められ、特にボーターライン症例でも5%以上陽性例はその後に急性拒絶反応を発症し腎機能悪化がみられることを証明した。当該年度の平成25年度は、昨年と同様に腎移植拒絶反応症例におけるPTX-3の組織内発現について検討した。特に当該年度では、PTX-3の組織内発現をABO不適合腎移植における抗体関連拒絶反応の早期診断に有用であるかどうか検討した。従来傍尿細管毛細血管(PTC)にC4dが陽性であることが抗体関連拒絶反応の組織学的マーカーとされてきたが、ABO不適合腎移植においては、拒絶反応がなくともC4dはPTCに8090%の頻度で自然陽性となる。そこでPTX-3の組織内発現の確認を併用した。PTC-C4d陽性かつ腎間質-PTX-3陽性症は、真の抗体関連拒絶反応症例であることが判明した。PTX-3の腎組織内発現は、ABO不適合腎移植症例の抗体関連拒絶反応の診断に有用であることが判明した。上記の成果は、2014年3月開催の第47回日本臨床腎移植学会にて発表した。新潟大学腎・膠原病内科学分野、神戸大学腎・血液浄化センター、新潟大学腎泌尿器病態学分野今井直史、西慎一、高橋香、伊藤由美、吉田一浩、河野恵美子、高橋公太、成田一衛移植腎急性拒絶反応の早期診断には血清クレアチニン以外の鋭敏な感度と特異度をもつ組織・尿中バイオマーカーが必要である。当該年度の平成24念には、炎症性マーカーであるPentraxin3(PTX3)の病理学的発現を移植腎生検組織を使用して確認する作業を継続した。この過程、急性拒絶反応症例では、腎間質でのは発現領域が増加することが判明した。また、血中レベルでのPTX3の濃度を測定したが、急性拒絶反応の程度に応じて上昇はするものの、腎組織でのPTX3の発現ほど拒絶反応の重症度を反映しないことがわかった。これらの研究成果は、2013年度の日本臨床腎移植月会議でも発表する予定である。また、今までの研究成果を下記の論文にまとめて発表した。1.吉田一浩、今井直史、西慎一、中川由紀、齋藤和英、高橋公太、成田一衛腎臓におけるPentraxin3(PTX3)の発現と血中濃度の関係(解説):新潟県医師会報:744: 6-7:2012移植腎機能低下の主因は急性拒絶反応であり長期腎予後に影響する。早期診断には血清クレアチニン以外の鋭敏な感度と特異度をもつ有用な組織・尿中バイオマーカーが必要である。今まで、組織学的には傍尿細管基底膜に陽性反応を示すC4dが抗体関連拒絶を示唆する組織学的マーカーとして有用とされてきたが、このC4dはABO不適合腎移植症例を初めてとして非特異的に沈着する場合もあり、必ずしも有用なマーカーと言えなかった。拒絶反応は、一種の炎症反応であり、炎症局所で産生されるpentraxin-3 (PTX-3)に着目し、その急性拒絶反応発症時の腎組織内のPTX-3の発現と尿中排泄の有無を検討した。結果として、0時間生検における正常組織においては、PTX-3の発現は組織学的にみられず、急性拒絶反応発症例の組織では、PTX-3陽性エリアが尿細管間質組織の5%以上の領域に認められた。PTX-3は腎間質に浸潤する炎症性細胞と間質の膠原線維上に陽性反応が認められた。また、ボーターライン症例でも、5%以上の尿細管間質組織に陽性反応を示す症例は、その後に拒絶反応を発症し腎機能悪化がみられることを証明した。次に尿中PTX-3濃度の測定を試みたが、拒絶反応発症例と非発症例で有意差はみられなかった。血中レベルも拒絶反応例で上昇はみられなかった。その理由として、ステロイド薬や免疫抑制薬の影響も推測された。腎組織PTX-3の発現は早期急性拒絶反応の診断マーカーとして有用であると考えられた。腎臓内科学尿検体を用いたPTX-3測定ELISA系の確立は昨年から努力している点であるが、安定したELISA測定系の確立には残念ながら至っていない。抗原であるPTX-3の精製蛋白の種類を変更する、あるいは部分蛋白を用いるなど工夫を加えているが、信頼できる測定系には到達していない。引き続き努力する予定である。目標達成度としては6割程度である。PTX-3の発現をANCA関連血管炎症例のヒト腎生検組織で発現をみることができた。その結果では、急性拒絶反応症例と同様に腎間質への炎症性細胞浸潤領域あるいは半月体形成部位に一致して認められた。同時に測定した血液サンプルでもPTX-3がCRPと同様に上昇していることが判明した。

引き続き、腎移植症例のみならずANCA関連血管炎症例でのPTX-3組織内発現と血中レベルとの相関も検討する予定である。腎生検組織標本は、腎移植があるごとに、神戸大学および協同研究者の斉藤氏の所属する新潟大学で収集し、また、血液検体、尿検体も同時に収集している。これらの検体数が予定の検体数に達してはいないが、順調に集まりつつある。尿検体を利用したPentraxin3のELISAキット作成の取り組みを開始しているが、現在のところ成功していない。今後も、移植腎生検組織材料、血液、尿検体を収集する予定である。また、実験動物におけるPentraxin3の発現に関しては、炎症モデルである抗GBM抗体腎炎の作成努力に入っている。現在のところ、このモデルの作成を安定化させるところに集中している。使用抗体により、腎間質病変の程度が一定せず、モデルとして安定したものを作成することに努力を継続している。人材料として、今後も引き続き組織検体、尿検体、血液検体を収集していく予定である。対象症例は、急性拒絶反応、ボーダーライン症例、再発性腎炎にも加えて、新たにANCA関連血管炎症例も対象としていく予定である。今後の研究の推進方策としては、当初計画していた通り、腎生検標本をできるだけ収集していく。既にある程度の標本数において、petnraxin3が急性拒絶反応の腎組織マーカーであることはある程度確認できた。しかし、まだ十分な組織例数で確認したとは言えない。従って今後も、急性および慢性拒絶反応、ボーダーライン病変、あるいは再発性腎炎などの様々な病態におけるpetnraxin3の発現を組織学的に解析していく必要がある。これらの組織材料で、pentraxin3の発現病態を詳細な検討していく。また、尿材料によるELISA系の確立は引き続き努力していく方針である。また、実験系モデルでの詳細なpetraxin3の発現とその病態的役割を確認していく方針である。当該年度に達成できなかった目標があり、研究が予定通り遂行できず、予算が消費できなかった点がある。来年度は、さらにその達成のために研究を活発化し研究費用を使用する予定である。翌年度は最終年度であり、研究のまとめの段階であるため、さらに研究を加速して予定予算を完全消費できる計画である。次年度においては、実験モデル動物の作製と、ELISAキット作製に費用がかかる予定である。24年度に消費しなかった物品費も次年度で集中的に使用する予定である。また、海外学会への発表、論文化においても研究費を使用する予定である。なお、共同研究者である新潟大学の齋藤氏とも密な連携をとり、齋藤氏においても研究費を使用してもらう予定である。
慢性抑うつの軽減・再発予防に向けた心理療法の統合と自伝的記憶の想起・変容の研究

慢性抑うつ(うつ病)に陥るとこれまでの人生の「ダメな側面」を大雑把に思い出して、それに縛られやすい。このような記憶の障害が起こる無意識的なメカニズムはどのようになっているのだろうか。本研究はこれまでバラバラに研究されてきた記憶心理学,心理療法(臨床心理学),社会心理学,認知科学,認知神経科学,の研究成果を統合し,意識と無意識のメカニズムの解明に迫り,新しい理論モデルを提案し,この現象の真実を探求した。まず、各心理療法の学派における記憶の概念化と記憶心理学を包括的につなぐために神経相関を考慮した理論的モジュールを構成した。さらに臨床的な実践研究を行い、経験サンプリング法を用いた実証研究も行った。文献研究においては、心理療法における記憶心理学の概念と心理療法における記憶の概念のブリッジに当たる成果をいくつか得ることができた。その中で本研究のテーマである「自伝的記憶の過度な概括化」には深い心理学的背景がある可能性が示唆され、一層の文献研究が必要であることが明らかになった。また、短期記憶ーワーキングメモリー意識ー無意識ー情動という一連の心的メカニズムへのさまさまな観点を認知神経科学の成果も含めて整理統合することで、新しい心理学的メカニズムのモデルを提案できる可能性が示唆された。しかしながら、当該テーマに関する記憶心理学、心理療法、認知神経科学ともに膨大な文献がある一方で、それぞれに分野としての整理統合が十分になされていなかった可能性が新たにわかり、本研究にあたって新たにそれぞれを整理統合する作業が必要であることがわかった。そのため、この作業を、国内外の学術集会や学術研究誌においてその成果を公表しながら進めてきた。調査研究は実施と成果公表ともに行い、公表準備中の成果もある。ただし、文献研究における成果を吸収した調査とするために、次の調査研究の計画を一部見直して実施の準備を進めている。尺度作成に当たっては、統計的な処理による予備的な尺度案を作成してその成果を公表した。すでに一定の信頼性は示唆されているが、妥当性をさらに高めるために、理論的背景と項目を十分に吟味する作業が必要であり、その作業を実施中である。この尺度は次の実験にも活用する予定である。実験研究は、ツールとなる尺度完成後に実施する予定であるが、分担研究者が予備的に行った研究の結果を受けて(結果は2013年度公表済み)、一部見直しが必要であることがわかった。一連の作業終了後に実施する予定である。臨床的研究は順調に進んでおり、公表には慎重を期する必要はあるが、倫理的な配慮を行いながらその準備を進めている。今年度は文献研究,最新研究の情報収集,調査研究,次年度の実験のツールの整備,そして代表者および分担研究者それぞれの研究環境の整備を行った。まず,記憶と心理療法の関連について,心理療法の認知行動アプローチ(杉山・大島),精神力動アプローチ(三上・杉山・伊藤),人間性アプローチ(杉山)でどのような考え方や扱い方がなされているかについて,最新情報の収集のためそれぞれが学術集会に出向き,文献の収集を進めた。この成果の一部は2012年度の日本心理学会大会でワークショップの形で公表したが,2013年度は国内外での公表を予定し,準備を進めている。具体的には杉山と大島が認知行動療法で記憶がどのように扱われてきたか資料を収集し,また三上は精神力動的アプローチと記憶をつなぐ概念としての愛着に注目し,AAI(成人愛着面接)に関する資料を収集し,伊藤は特にユング派の心理療法で記憶がどのように扱われてきたか資料を収集した。これらの成果は2013年度に国内外で公表する準備を進めている。次に丹藤はワーキングメモリーと抑うつに関連する記憶心理学研究者の業績情報を収集し,杉山は自伝的記憶の過度の概括化と抑うつの関連および心理療法への所見の援用に関する国内外の資料を収集し,文献研究として公表の準備を進めている。調査研究について,杉山を中心として倫理的配慮に基いて,被験者への心理的負担を極力減らした治療関係,気質,想起不適応スキーマの質問紙の原案を作成し,尺度作成に向けた準備を整えた。調査研究は2013年度早期に行う計画である。また,伊藤を中心に中断法による心理療法過程中の無意図想起の実験で活用するツールを作成し,2013年度に実施する臨床実験(順臨床場面を設定した実験)が行える準備を行った。実験そのものは2013年早期に行う予定である。文献研究においては心理療法における記憶心理学の概念と心理療法における記憶の概念のインターフェースを促す成果をいくつか得ることができた。その中で「自伝的記憶の過度な概括化」をもたらすメカニズムはこれまでの研究の文脈で考えられていたよりも複雑であることが示唆され,また心理学の枠を超えて認知科学,認知神経科学で検討されてきた研究テーマとも関連が深いことがわかり,一層の文献研究が必要になった。

具体的には,ワーキングメモリ-意識-無意識-情動の一連の心的メカニズムへの機能と構造に関する各領域の研究成果をつなぎ合わせることで,自伝的記憶の過度な概括化を含む記憶の障害,それに伴う,または引き起こす感情の障害を説明する理論モデルの提案を目指した。結果的に,うつ病だけでなく不安障害やパーソナリティ障害まで説明し,悪性化と軽減に関する示唆を提供できる理論モデルの構成に至った。この理論モデルを次の研究課題として,科学研究費による助成を申請するに至り採択された。当該理論モデルに基づいた事例研究は順調に進んでおり,一部は査読付き国内誌に公表した。海外への公表も準備中である。実験研究・調査研究で活用する測定ツールの作成は順調に進み,対話における対人関係を評価するツールと気質を反映すると考えられる個性を評価するツールの作成が進んでいる。前者は公表済みで後者は公表準備中である。実験研究・調査研究は当研究の企画当時によく行われていた方法論(日誌法)の活用を予定していたが,その後,経験サンプリングという方法も有効である可能性がわかり,研究の趣旨や目的はほぼ変えずに方法のみ変更し,実施した。ただし,国内であまり例のない方法であったため参考にできる研究が少なく,データの整理や解析は現在進行形である。この1,2年以内の成果の公表を目指している。臨床心理学,社会心理学,認知心理学研究は概ね進展しているものの、計画以上に進展した部分とやや滞っている部分がある。計画以上に進展した部分は文献研究と研究成果の公表に関する部分である。文献研究では予想以上の成果が出るとともに、予想以上に文献的な研究課題があることがわかった。そこで、結果的に文献研究を手厚くせざるを得なくなった。また、国内外の学術集会における成果の好評は計画以上のものとなった。研究論文としての成果公表も行っているが、成果の一部を書籍として発行することにもなっている。調査研究は概ね計画通りに進行しており、一部成果の公表も実施した。今年度公表準備中の成果もあり、また次の調査研究の準備中である。実験研究では予備的に行った一部の実験で期待通りの結果が出なかったことで、次の実験の仮説や手続きを見直すことになった。そのため、実験の施行が滞っているが、準備は進んでいるといえる。文献研究は想定以上の成果が上がっており2012年度中に日本心理学会大会で公表でき、2013年度は国内の学術集会で2件、国際的な学術集会で2件の成果公表を予定している。調査研究と実験についてはその準備が整い、実務者と被験者の都合が付けば実施できる状態にある。また研究への協力を申し出る若手研究者が増えたこともあり研究の規模・成果共に拡大する傾向にある。このような理由から、本研究は概ね順調に進展していると考えられる。文献的な研究課題がさらに見つかったため、文献研究は手厚くせざるを得ないと言えるだろう。研究資源の関係で、当初の予定よりも文献研究の比率が高まりつつあるが、予定していた調査や実験も文献研究の成果を反映して改定しながら実施していきたい。2013年度は仮説的理論モデルの策定を目標にしている。
非ガウス性から探る密度揺らぎの起源と進化

Planckの観測発表を受け、密度揺らぎの非ガウス性に対する制限は非常に厳しいものとなった。そこで、カーバトンなどのspectatorfield模型が満たすべき条件を観測結果発表直後に調べあげ論文として発表した。更に、QCDアクシオンがつくる等曲率ゆらぎとその非ガウス性を解析的及び数値的に求め、この厳しい制限を用いてアクシオンとインフレーションスケールに制限を導くことができた。また等曲率揺らぎの制限を避けるために、QCDアクシオンがインフレーション中に非常に重くなる理論的可能性を追求した。一方、Planck衛星の観測結果を受け、Polynomical chaotic inflationを4次元超重力理論の枠組みで構築した。更に、ごく最近発表のあったBICEP2の結果を説明するHiggs chaotic inflationおよびmulti-natural inflation模型を提唱した。特に、後者においては、通常作るのが非常に困難である大きなrunning spectral indexが生成可能であることを具体的に示し、Planckとのtensionを解く可能性を論じた。このように、現在の宇宙の揺らぎの起源を探ることを第一の目的として研究を進めてきた結果、新しい観測結果と合わせ、その起源の可能性をかなり絞り込むことができた。更に、暗黒物質の有力な候補であるQCDアクシオンに対する制限が非常に厳しいということも、BICEP2の発表後、世界に先駆けて発表することができた。従って、この研究において、学術的な成果を確実にあげ、かつ熾烈な研究競争に勝ったといえる。25年度が最終年度であるため、記入しない。原始密度揺らぎの統計性を調べることによって、その起源に迫ることができる。現在のところもっとも有力な候補はインフラトンの量子揺らぎによるものであり、この場合には非ガウス性はスローロールパラメタで抑制されるために非常に小さく、観測によって検出することが難しい。一方でインフラトン以外の軽いスカラー場の量子揺らぎが原始密度揺らぎを担う場合には、比較的容易に大きな非ガウス性を作ることができる。私は共同研究者とともに、カーバトンと呼ばれるclassの模型について、その密度揺らぎの非ガウス性を正しく求める解析的な方法を構築した。そして、それを応用することによって、ヒルトップ型カーバトン模型において、一般に非ガウス性パラメタタfNLがO(10)になることを示した。また、擬南部ゴールドストンボソンがカーバトンになる模型を考察し、decay constantがGUT scale程度、質量が100TeV以上のmoduliがカーバトンの良い候補となることを示した。特に超弦理論におけるmoduliの虚部分が良い候補としてあげられる。更に、ACT、SPTといった地上における宇宙背景輻射観測実験とWMAP衛星による観測を組み合わせることによって示唆されていたrunning spectral indexを自然に説明するようなカーバトン模型を提唱した。更に、3月21日に発表されたPlanck衛星による精密な宇宙背景輻射の観測結果を受け、ただちにそれがspectator modelに与える示唆について考察を加え論文として発表した。Planck衛星による宇宙背景輻射観測結果発表へ向けて平成24年度は準備を行なってきた。具体的には、自然にfNLがO(10)となるようなcurvaton modelの構築、暗黒輻射を生成する模型の発見、構築、密度揺らぎのパワースペクトルのスケール依存性に関する研究、において論文をそれぞれ書くなど入念な準備をすることができた。更に、H25年3月21日にあったPlanck衛星観測結果発表を受け、ただちにそれが示唆するspectatorfield模型への制限を考察し、論文として発表した。このような素早い対応はこれまでの入念な準備に基づくものであり、更に発展した考察を現在共同研究者とともに行なっている。Planck衛星による観測から原始密度揺らぎの起源に関する情報を引き出すべく、これまでの理論的な準備に加え、実データを用いた解析を行うことで、新たな知見を得たいと考えている。特に、暗黒物質とバリオン存在量の間のcoincidence problemから示唆されるparallel worldの模型において、暗黒輻射とsterile neutrinoの存在が予言されている。このような標準宇宙論からの拡張はこれまでのところPlanck teamによって解析されておらず、その詳細な解析は大変重要である。

また、非ガウス性に関して得られた非常に厳しい制限について、curvaton模型がどのような状況で満たすことができるのか、特にインフレーション模型や宇宙進化との整合性を総合的に考慮して、模型選別を引き続きおこなっていく予定である。25年度が最終年度であるため、記入しない。
免疫賦活剤投与魚で発現する生体防御関連遺伝子の解析

免疫賦活剤であるペプチドグルカンを投与したヒラメの腎臓からcDNAライブラリーを作製し、発現した遺伝子の198クローンについて解析をおこなった。その結果、Gene Bankで登録されている遺伝子と相同性が確認されたのは、92クローンであった。その他のクローン(106クローン)は、新規の遺伝子と考えられた。生体防御に関与する遺伝子として、免疫グロブリンのL鎖とH鎖、リゾチーム、β2ミクログロブリン、チモシン、MHCクラス11αおよびCCケモカインをクローニングすることが出来た。さらに、今回クローニングされたCCケモカインの遺伝子を、サイトメガロウイルスのプロモーターに接続し、そのプラスミドDNAを、ヒラメの筋肉に注射して、その発現と免疫活性について検討した。その結果、ヒラメの筋肉に注射したCCケモカインの遺伝子は、ELISA法でその発現が認められた。さらに、CCケモカインの遺伝子を注射されたヒラメは、食細胞の活性酸素産生能、貪食能および遊走能の増加が確認された。従って、今回クローニングされたCCケモカインは、哺乳類のケモカインと同じような機能を持っていることが確認された。本年度は、免疫賦活剤を投与した魚の腎臓からcDNAライブラリーを作製し、発現する遺伝子について検討を行った。(方法)体重100gのヒラメに1mgのペプチドグルカンを投与して、16°Cで7日間飼育した。その後このヒラメの腎臓からmRNAを抽出し、cDNAライブラリーを作製した。このライブラリーから無作為に198クローンを抽出し、遺伝子の配列を決定した。(結果)今回解析した198クローンのうち、Gene Bankで登録されている遺伝子と相同性が確認されたのは、92クローンであった。生体防御に関与する遺伝子として、免疫グロプリンのL鎖とH鎖、リゾチーム、β2ミクログロプリン、チモシン、MHCクラス11αおよびCCケモカインをクローニングすることが出きた。今回クローニングCCケモカインは、ほ乳類のmacrophage inflammatory proteinに最も構造が類似していた。
量子情報科学におけるエントロピー及び情報量に関する基礎研究

量子情報科学における基本的な情報量やエントロピーに関する数学的な基礎研究を行い,幾つかの結果を得た.主なものとしては, Wigner-Yanase skew informationを用いたシュレーディンガー型の不確定性関係の導出や行列トレース不等式を応用したTsallis相対エントロピーの下界の導出などである.量子情報科学の発展において,エントロピーやskew informationなどの情報量に関連した基本的な結果が必要となることがしばしばある.特に,量子エントロピーや量子相対エントロピー及びskew informationなど量子系におけるほとんどすべの情報量やエントロピーはTraceを用いて定義されるためトレース不等式の成立を示すことにより量子情報科学の諸分野の発展に道が開ける場合があり,本研究では,これらのエントロピーや情報量に関する基礎研究を行列解析や関数解析学の道具を用いて研究し新たな性質を導きだすことにある.量子情報科学における基本的な情報量やエントロピーに関する数学的な基礎研究を行い,幾つかの結果を得た.主なものとしては, Wigner-Yanase skew informationを用いたシュレーディンガー型の不確定性関係の導出や行列トレース不等式を応用したTsallis相対エントロピーの下界の導出などである.本年度は研究実施計画の通り,非加法系(Tsallis統計)の下で, Fisher情報量を定義しクラメール・ラオの不等式を証明した.その結果が,下記のジャーナルに掲載された.この論文の中では一般化期待値の取り方として2通りの場合について考察している.この結果により確率論における基本定理である中心極限定理の一般化の証明がFisher情報量を用いてできる可能性が出てきた.これについては今後の課題となっている.同時にTsallisエントロピー最大化原理についてもラグランジェ未定係数法を用いずに, Tsallis相対エントロピーを用いて証明することに成功した.上記の成果は古典系におけるものであるが,現在は,量子系のFisher情報量やSkew informationに関する研究を行っているところであり,来年度中にはこれらの結果が実を結ぶ予定である.特に不確定性関係に関するトレース不等式に関心を持って研究を続けているところである.本年度の主要な結果として,一派化されたFisher情報量を用いた,一般化されたクラメール・ラオの不等式について,更なる考察を行った.特に,クラメール・ラオの不等式の下界を与える一般化ガウス分布の一般化された分散の振る舞いについて考察した.これについては,2つの国際会議で講演及びポスター発表を行った.また,その学会のプロシーディングスに成果発表の論文を書いた.さらに,一般化されたWigner-Yasase skew informationを用いた不確定性関係タイプのトレース不等式を証明し,これが国際ジャーナルJournal of Mathematical Analysis and Applicationsに掲載された.また,上記のような情報幾何学に関連した内容とは別の情報理論に関する研究成果として,二経数拡張された相対エントロピーの一意性定理の証明に成功し国内学会,第32回情報理論とその応用シンポジウム(SITA2009)で講演した.なお,この内容の研究成果については,現在,論文投稿中である.まず,本研究における主な目的は,エントロピーや情報量に関する基礎研究を行列解析や関数解析学の道具を用いて研究し新たな性質を導きだすことにある.なぜならば,量子情報科学の発展において,エントロピーやskew informationなどの情報量に関連した基本的な結果が必要となることがしばしばあるからであり,特に,量子エントロピーや量子相対エントロピー及びskew informationなど量子系におけるほとんどすべの情報量やエントロピーはTraceを用いて定義されるためトレース不等式の成立を示すことにより量子情報科学の諸分野の発展に道が開ける場合があるためである.次に,本年度の研究実施計画としては,量子情報科学の中でも特に、量子エントロピー論や量子情報理論、量子情報幾何に関係する情報量として、skew information, Fisher information, Tsallisentropy, Tsallis relative entropy, Two-parameter extended relative entropyなどを研究対象にした.その結果,主に以下の成果を得ることに成功した.(2)Wigner-Yanase skew informationを用いてSchrodinger型の新しい不確定性関係を示した.なお,これは,Luoによって2005年に示されたHeisenberg型の不確定性関係を改善するものである.(3)2007年に自分自身が出版した論文の中で予想したあるトレース不等式の証明に成功した.この結果は将来,Tsallis relative entropyの新しい下界の導出に応用できると考えられる.本年度は,本研究課題の最終年度であったが,研究成果に関してはおおよそ満足のいくものであった.当初の目的の通り,自身で予想した行列トレースの解決,さらにはその応用としてTsallis相対エントロピーの下界の導出に成功したからである.さらに,数学的な成果としてYoungの不等式の改良や逆不等式などの成果があった.Belmega-Lasaulce-Debbahの行列トレース不等式を改良した結果もある.そのほか,行列解析の応用としてのランキングの問題や一般化されたダイバージェンスに関する成果もあった.反省点としては得られた数学的成果について必ずしもすべてのものに物理的意味付けが行われているわけではないので,今後はそれらについての考察が必要となると思われる.今後の課題としたい.例えば,上述した不確定性関係はあくまでも数学的な改善に過ぎず,物理的にどのような利点があるのかがまだ不明確である.
柔らかい推論機構における記憶メカニズム及び学習機能の解明とその実現方式の研究

平成2年度(初年度)は記憶メカニズムのモデル構築、ファジィ論理の特性評価、ヒュ-マン・インタフェ-スおよび知識処理原理モデルの学習機能、適用可能性評価を重点にした。主な成果は次の通りである。<1.記憶メカニズムの基本特性>___ー:記憶のプロセスは短期記憶の繰返しがある閾値を超えたとき、長期記憶に転化するとし、グラフ表現による抽象モデルを構成した。但し、短期記憶はパス利得で、長期記憶はル-プ利得で表現した。記憶の想起は入力情報をグラフが含めば非零を、含まなければ零を出力するシステムで、連想もこれから可能になる。今後、遅延ニュ-ロンやシ-タ・リズム等との関連を調べる必要がある。<2.ファジィ論理による推論機構>___ー:ファジィ論理で各種論理演算要素の基本特性と演繹推論における様相の変化を解析した。これらの演算子はニュ-ラルネットの基本素子となり得るものの、多数の素子を結合した場合やソフトウェアとして実現する場合は処理時間に問題がある。<3.ヒュ-マン・インタフェ-ス基本特性>___ー:超音波の位相差を用いた体の動き検出、両眼視・運動視を利用した立体画像表示、ユ-ザの行動に対応した動的画像、入力中の音や振動の発生、頭部の動きを利用したポインティングの各方式をコンピュ-タ上で評価した。今後、これらを有機的に結び付け、学習機能を持つユ-ザモデルを構成する必要がある。<4.知識処理システムの学習機能>___ー:小規模な問題解決モデルの例として最適経路探索問題を複数評価基準で解くシステムを構築とた。モデルの学習可能性は被験者が選択した経路デ-タから新しい問題に対する応答を予測させて検討した。実験の結果、十分な予測における非線形結合の必要性が判った。また、記号処理に対するニュ-ラルネットの適用可能性は日本語漢字表記の読みを生成する問題で検討した。未知デ-タの類推能力に課題は残るが、学習デ-タでは極めて高い想起能力を示した。
植物の低温初期における遺伝子発現誘導機構の解明とその応用

急速な温度低下による低温ストレス時のDREB1遺伝子の発現誘導を制御する転写因子CAMTA3およびCAMTA5の相互作用因子を前年度に引き続き探索した。GFPと融合したCAMTA3またはCAMTA5を過剰発現する形質転換シロイヌナズナの植物体を用いて共免疫沈降をおこない、質量分析装置によって共精製されたタンパク質を同定した。その結果、前年度と同様にすべてのサンプルて_CAMTA3、CAMTA5、CAMTA6が検出された。また、カルシウム結合タンパク質の1つであるカルモジュリン、カルモジュリン様タンパク質、また特定のタンパク質相互作用においてリンカーとなる14-3-3タンパク質が一種ずつ検出された。GFPと融合したCAMTA5を、CAMTA5自身のプロモーターによって発現させる組換えDNAを作製し、CAMTA5のT-DNA挿入変異シロイヌナズナに導入した。得られた形質転換植物体に急速な低温ストレスを与えた時のDREB1遺伝子の発現を測定した。CAMTA5のT-DNA挿入変異シロイヌナズナでは、野生型植物体よりもDREB1遺伝子の発現量が低下したのに対して、得られた形質転換植物体ではDREB1遺伝子の発現量が野生型のものと同程度に回復した。そこで、CAMTA転写因子群が共通して持っている機能ドメインを欠損または変異させたCAMTA5をCAMTA5自身のプロモーターによって発現させる組換えDNAをCAMTA5のT-DNA挿入変異シロイヌナズナに導入し、形質転換体を得た。前年度に引き続き、カルシウムイオンチャネルの阻害剤をスプレーで前処理したシロイヌナズナの野生型植物体に対して急速な低温ストレス処理をおこなった。植物体でのDREB1遺伝子の発現量を測定した結果、阻害剤処理の有無によるDREB1遺伝子の発現量の変化は見られなかった。研究計画のうち、CAMTAの修飾酵素や相互作用因子の同定については、複数の因子が相互作用因子の候補として単離された。また、CAMTAの活性制御部位を解析するための形質転換シロイヌナズナを作出した。以上の研究計画は順調に進展していると考えられる。しかし、CAMTAの活性制御に関わると考えられるカルシウムシグナルの同定については平成29年度と平成30年度とで実験結果が一致しなかった。そのため、実験条件の見直しが必要である。全体としては、概ね順調に進展している。CAMTA2/3/5と、相互作用因子候補とのシロイヌナズナ植物体内での相互作用を1対1のco-IPやsplit luciferase法によって確認する。特に、急速な温度低下処理によって相互作用強度が変化するかを解析する。また、CAMTAと相互作用因子候補の相互作用領域を酵母two-hybrid法によって同定する。変異型CAMTA5をcamta5変異体内で発現させた形質転換シロイヌナズナに急速な温度低下の処理をおこないDREB1遺伝子の発現量を測定する。DREB1遺伝子の発現が回復しなかった部位に相互作用する因子に着目して、その遺伝子のT-DNA挿入変異体あるいはゲノム編集変異体を作出し解析する。シロイヌナズナ植物体にカルシウムイオンチャネル阻害剤存在下で急速な温度低下の処理をおこないDREB1遺伝子の発現量を測定する。急速な温度低下による低温時のDREB1の発現誘導を制御する転写因子CAMTA3およびCAMTA5の相互作用因子を探索するため、35S:CAMTA3-sGFPおよび35S:CAMTA5-sGFPの形質転換シロイヌナズナを作出した。この植物体を用いてco-IPをおこない、LC-MS/MS装置によって共精製されたタンパク質を同定した。その結果、すべてのサンプルでCAMTA3、CAMTA5、CAMTA6が検出された。また、カルモジュリンのホモログであるCML12/TCH3が検出された。さらに、その他の相互作用因子候補として、SKIP/SNW domainを持つクロマチンタンパク質であるSKIPと14-3-3タンパク質の1つであるGRF3もすべてのサンプルで検出された。そこで、LC-MS/MSで検出されたCAMTA5、CML12、GRF3、SKIPとCAMTA5の全長との物理的相互作用を酵母two-hybrid法で解析した結果、全ての因子で相互作用が確認された。また、CAMTA5の部分断片を使った酵母two-hybrid法によって、CML12がCAMTA5内のIQモチーフおよびCaMBドメインを含む領域に相互作用することが示唆された。IQモチーフまたはCaMBドメインを欠損/変異させたCAMTA3を過剰発現するコンストラクトを作製し、camta3/5二重変異体に導入した。シロイヌナズナ植物体にCa2+チャネル阻害剤であるRuthenium Red存在下で2°C/minの低温処理をするとDREB1Bの誘導が弱くなった。一方で、DREB1Aの誘導には変化は見られなかった。平成29年度の研究計画のうち、CAMTAの活性制御に関わるカルシウムシグナルの同定については、CAMTAの活性阻害に関わると考えられるカルシウムチャネル阻害剤を同定できた。CAMTAの修飾酵素や相互作用因子の同定については、複数の因子でCAMTA5との酵母内での相互作用を確認できた。以上のことから、研究計画は順調に進展していると考えられる。