hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
カタラーゼ遺伝子プロモーターに結合するレドックス制御転写因子の単離と機能解析

活性酸素により引き起こされる疾患や遺伝子発現異常のメカニズムを明らかにし、疾病の詳細な理解と新しい治療方針の確立に役立てることを目標に、本研究において、カタラーゼ遺伝子発現調節に関わるレドックス制御転写因子を単離し、その因子の酸化還元による活性化のメカニズムや生物的な意義の解析を行った。さらに本年度は、カタラーゼ遺伝子発現を強く誘導し、肝臓細胞の分化誘導に関与するフォークヘッド蛋白HNF-3γについての解析を行った。その結果、カタラーゼ遺伝子プロモーターの逆重複配列構造に結合する4種の蛋白のレドックス制御を解析し、酸化還元によりその結合活性が制御されていることを発見した。また、これと関連して遺伝的海綿状脳症を引き起こす疾患モデル動物脳において、カタラーゼ遺伝子発現が有意に低下し、その結果レドックス環境の変動が誘発し、神経細胞死が誘導されるしくみを明らかにし、レドックス制御の異常が重要な病因の一つであることを証明した。一方、カタラーゼ遺伝子発現を強く誘導する肝特異的転写因子HNF-3γ遺伝子をアデノウイルスベクターに組み込み、初代肝細胞培養に導入したところ、myc遺伝子発現を抑制し、細胞周期を制御して細胞増殖を抑制した。さらに、カタラーゼ、アルブミン、OTCなど肝特異的遺伝子発現を誘導し肝細胞分化を維持、肝機能低下を改善することが明らかとなった。さらにこの遺伝子の肝機能維持効果はモデル動物実験でも解析され、活性酸素を介する肝障害に対して非常に強い保護効果を示すことを明らかにした。以上の結果は、細胞内における酸化還元状態の維持は生存にとって重要な意味を持っており、活性酸素除去酵素であるカタラーゼはこの環境を反映して調節されるとともに、細胞障害の制御にも関わっていることを明らかにした。活性酸素により引き起こされる疾患や遺伝子発現異常のメカニズムを明らかにして、疾病の詳細な理解と新しい治療方針の確立に役立てることを目標に、本研究において、カタラーゼ遺伝子発現調節に関わるレドックス制御転写因子を単離し、その因子の酸化還元による活性化のメカニズムや生物的な意義の解析を行った。その結果、カタラーゼ遺伝子のプロモーターに逆重複配列構造を見いだし、そのコア配列に結合する4種の蛋白複合体は酸化還元によりその結合活性が制御されていることを発見した。さらにこの蛋白質複合体の酸化還元にRef-1蛋白質やチオレドキシンなどの細胞内因子の関与を解析した。ラットRef-1/APEX遺伝子は岡山大学医学部・関教授より分与され、このcDNAにグルタチオンSトランスフェラーゼとの融合蛋白を構築し、大腸菌で発現させ、蛋白質を精製をおこなった。この蛋白が、カタラーゼ・プロモーター結合蛋白の還元に関与するかどうか、ゲルシフトアッセイにより解析した。また、サイトメガロウイルスプロモーターの制御下で強く発現させ、細胞内でもカタラーゼ転写因子がレドックス制御を受けているかどうか調べたが、細胞内のレドックス環境の大きな変動は細胞にとって毒性が強くその対策を検討している。以上の結果は、細胞内における酸化還元状態の維持は生存にとって重要な意味を持っており、活性酸素除去酵素であるカタラーゼは、この環境を反映して制御されていることが明らかとなった。

また、これと関連して遺伝的海綿状脳症を引き起こす疾患モデル動物脳において、カタラーゼ遺伝子発現が有意に低下し、その結果レドックス環境の変動が誘発し、神経細胞死が誘導されるしくみを明らかにし、レドックス制御の異常が重要な病因の一つであることを証明した。一方、カタラーゼ遺伝子発現を強く誘導する肝特異的転写因子HNF-3γ遺伝子をアデノウイルスベクターに組み込み、初代肝細胞培養に導入したところ、myc遺伝子発現を抑制し、細胞周期を制御して細胞増殖を抑制した。さらに、カタラーゼ、アルブミン、OTCなど肝特異的遺伝子発現を誘導し肝細胞分化を維持、肝機能低下を改善することが明らかとなった。さらにこの遺伝子の肝機能維持効果はモデル動物実験でも解析され、活性酸素を介する肝障害に対して非常に強い保護効果を示すことを明らかにした。以上の結果は、細胞内における酸化還元状態の維持は生存にとって重要な意味を持っており、活性酸素除去酵素であるカタラーゼはこの環境を反映して調節されるとともに、細胞障害の制御にも関わっていることを明らかにした。
健康改善に対する医療技術の寄与の再評価

1.健康改善に対して医療技術の果たした寄与を定性的・定量的に再評価を行うために、わが国の過去約100年間にわたる長期死亡統計、医療および社会経済的指標に関する資料・情報の収集とその分析を行った。2.コンピュ-タ・デ-タベ-ス化をはかるために、人口学的指標としては性別年令階層別のデ-タ、疾病構造については感染症、母子保健、成人病に関する現在までの死亡率のデ-タ、社会経済的要因としてはセンサスデ-タを中心として明治7年以降から現在までのデ-タを収集、一部入力を行った。3.主な疾患の検討事例として、今年度は乳児死亡率と結核死亡率をとりあげた。死亡率の時系列分析によると、乳児死亡率と結核死亡率が平均寿命の延長に最も寄与していると思われるからである。4.乳児死亡率の変曲点は3ー4点認められ、時期別に母子保健の医療技術及び保険医療、社会経済的要因との関連を検討すると、実質国民所得、看護婦数、抗生物質の生産量、国民皆保険制度等の要因が、それぞれの時期別に関連性が推定された。一方医療技術では乳児死亡と直接関連する周産期医療技術は、導入が1950年代後半、普及が60年代以降であり、乳児死亡率の低下には極めて限られた影響しか及ぼしていないことが判明した。5.他方結核死亡率は全年令では1916年から低下し始め、1932年から45年にかけて緩やかに上昇し(戦時過剰死亡)、その後は急速に低下する。これらの変化の特性には、戦前の産業構造の変化、戦争による種々のストレス、戦後の生活水準・栄養の改善のほか、1940年代に始まる集団BCG接種、戦後の化学療法等々、特異的・非特異的要因の作用が寄与したと考えられるが、今後は国際比較も含め、これらについて更に立ち入った検討を行う予定である。
現代青少年の対面的コミュニケーションに関する文化社会学的研究

従来、メディア・コミュニケーションや数量的調査に偏りつつあった研究動向を補完し、現代日本の若者たちのコミュニケーションの新しい側面を捉えるために、本研究においては、「よさこい系祭り」という一群の文化現象を事例として取り上げて、フィールドワークを実施した。その結果、若者たちにとっても、非日常空間における対面的コミュニケーションが依然として大きな魅力を保持していることが確認されると同時に、その提供のスタイルには従来と異なる大きな変化が発見された。本研究の課題は、現代日本社会における青少年のコミュニケーションの現状を客観的に把握し、従来の言説の真偽を文化社会学的な観点から明かにすることにある。その際、質問紙調査による研究やメディア・コミュニケーションに関する研究に関しては、蓄積があるので、対面的なコミュニケーション空間の中から特徴的なものを選び、フィールドワークを中心に作業を行うことを目指している。本年度は、そうした作業の一環として、現代青少年のコミュニケーション空間の変遷に関する文献資料の収集と、多くの若者が集まり熱狂的な支持を集めるよさこい祭りに関して、阿波踊りとの比較の上で予備的なフィールドワークを実施した。このうち、前者の作業で集めた資料の収集と分析はいまだ中途ではあるものの、これまでに、多くの言説が携帯電話やインターネットなどのメディア・コミュニケーションに注目する一方で、現代日本の青少年が多様な対面的コミュニケーションを展開しており、それが彼らの人間関係やアイデンティティの維持に無視し得ない影響を与えていることが確認されている。残る課題は、こうした現代青少年の対面的コミュニケーションの実態と効果が、これまでの世代と比較してどのように異なっているのかであるが、これについては、二番目のお祭りのフィールドワークから徐々に見通しが付きつつある。よさこい祭りの特徴は、(1)パフォーマンスの枠組みが非常に自由でバリエーションに富んでいること、(2)実施者の集団が地縁共同体を基盤としないお祭り期間だけの組織であること、(3)参加者の意識がホスト(サービスの提供者)よりもゲスト(サービスの消費者)的な色彩が強いことなどであるが、ここには、共同体的な拘束を避けつつも、対面的に集まり、相互作用の中で増幅する高揚感や他者との一体感を通じて、「自分らしさ」を追い求めるという現代青年に適合的な特徴が見出されている。研究2年目となる本年度は、対象をよさこい系祭りにしぼりこんで、以下の3つの活動を行った。まず、第1は、前年の高知よさこい祭り・徳島阿波踊りに対予備的な調査を踏まえて、近年日本全国に活動が広まり、多くの若者が参加している、高知市のよさこい祭りを原形とする祭りに、実地に出かけて、視察と資料収集を中心とするフィールドワークをはじめたことである。今年度は、最大の分派である札幌のYOSAKOIソーラン祭りをはじめ、ひのよさこい(東京都日野市)、坂戸よさこい(崎玉県坂戸市)、朝霞彩夏祭関八州よさこいフェスタ(埼玉県朝霞市)、原宿表参道スーパーよさこい(東京都渋谷区)、東京よさこい(東京都豊島区)、ドリームよさこい(東京都港区)、よさこい東海道(静岡県沼津市)など、多くの祭りを視察し、会場や図書館で関連資料を精力的に収集した。うち、札幌では、代表的なチームの代表にインタビューを実施した。第2に、こうしたよさこい系祭りと比較対照するために、徳島市の阿波踊りとその分派について、最大の分派である東京高円寺阿波おどりを中心的な対象として、視察および関連資料の収集を行った。ここで得られたデータは、前年度に収集した徳島市の阿波踊りや各種文献などから入手した全国の阿波踊りのデータとつき合わせ、さらにそれを1つ目の活動で集めたよさこい系祭りのデータと比較対照することで、よさこい系祭りとその参加チームの特徴を明らかにすることにある程度成功した。そして、その成果を、所属機関の紀要に論文として掲載した。第3に、2007年に実施された関東圏のよさこい系祭りに限定して、参加チーム数による規模の分類と、チームの参加状況のデータベースの構築を図った。このデータは、「よさこいチームが、年間を通じてどのように動いているか」「それぞれの祭りはどのようなチームから構成されているか」を示すデータとして今後解析することで、最終年度の研究に多くの知見を生み出すものと思われる。本年度は、当初の計画通り、青少年の対面的コミュニケーション空間の中から、よさこい系祭りという新種の祝祭空間を選び、活動実態や社会的コンテクストなどの解明を目指して、首都圏において本格的なフィールドワークを実施した。具体的には、出自の異なる3チーム(地域:原宿よさこい連、企業:東京メトロ群青(シーブルー)、学生:早稲田大学“踊り侍")を対象に、練習や祭りの見学、主催者や一般メンバーに対するインテンシブ・インタビュー、質問紙調査などを組み合わせて、活動の実態、参加者の行動と意識、参加者間のコミュニケーションの形態などに関して多角的なデータを収集した。

この作業からは、首都圏のよさこい系祭りが、(1)集団的な一体感、非日常的な精神的昂揚、メンバー間のコミュニケーションなど、従来の祭りでも見られる魅力を引き継ぎつつも、(2)いずれのチームも母体となる集団から実質的に独立したクラブチームとしての顔を濃厚に持つなど、組織やコミュニケーションの面では一線を画す特徴を持っており、(3)その結果として、祭り・チーム・踊り子の3者間の結びつきが従来より弱い独特の構造を持つことが確認された。そして、(3)この構造が、祭りに対するチームの関わりやチームに対する踊り子の関わりに大きな自由と多様な参加形態を可能にする一方で、祭りやチームの運営に独特の困難や問題を生み出している現状が明らかとなった。本年度は、さらに、関東圏のよさこい系祭りの実態とよさこいチームの動態に関するデータベースを完成した。このデータベースの分析はいまだ途上であるが、祭りとチームの分布、祭りとチームとの関係などを示す基礎データとして貴重であると考える。
局所麻酔薬の抗炎症作用の解明-炎症性疼痛の治療への応用を目指して

局所麻酔薬の抗炎症効果を解明するため研究を行った。まずこの研究には血中および組織内の局所麻酔薬濃度の解析が不可欠である。覚醒状態のラットに対してマイクロダイアライシス法を用いて、静脈内投与した局所麻酔薬の血中および組織内の濃度の定量に成功した。3種類の局所麻酔薬の脳組織中の濃度と血中濃度の比は等しく、定常状態における組織への移行は3種類の局所麻酔薬間で差が無いことが明らかになった。リドカインは抗炎症作用を有し、術後の回復を早め予後を改善するが、リドカイン以外のアミド型局所麻酔薬の抗炎症作用については殆ど明らかにされていない。またリドカインは神経伝達の遮断に必要とされるよりも低濃度で抗炎症作用を発現するが、その際の血中濃度や組織濃度の閾値についても検討されていない。そこで局所麻酔薬を動物に投与し、局所麻酔薬の血中濃度と組織中濃度および炎症メディエーターの関係を明らかにすることを目的として実験を行った。局所麻酔薬として、リドカイン、ブピバカインおよびブピバカインの一方の光学異性体であるレボブピバカインを用いた。覚醒状態のラット動静脈にカテーテルを留置したモデルを用い、硬膜外麻酔目的で持続投与を行った場合よりも血中濃度が低く保たれるよう、投与量の設定について検討した。その結果、リドカインは0.5μg/kg/min以下、ブピバカインおよびレボブピバカインは0.1μg/kg/min以下では血行動態や呼吸状態に影響を及ぼさないことが明らかになった。次に、これらの速度で持続投与を行った際の血中濃度の変化を検討した。血漿分離が必要であること、一度に得られる血液量に限度があるため、高速液体クロマトグラフ-質量分析装置を用いて微量の血液検体中の局所麻酔薬濃度の定量を試みた。その結果20μlの血漿で、リドカインは0.1-5μg/ml、ブピバカイン、レボブピバカインは0.1-2μg/mlの範囲で血中濃度の測定が可能なことが明らかになった。経時的に血中濃度を定量した結果、120分間の持続投与後には3種類の局所麻酔薬の血中濃度はほぼ一定に達することが明らかになった。また蛋白結合率はリドカインが約50%、ブピバカイン・レボブピバカインが約80%で、臨床における値とほぼ等しいことが明らかになった。またリドカインは神経伝達の遮断に必要とされるよりも低濃度で抗炎症作用を発現するが、その際の血中濃度と組織濃度の閾値についても検討されていない。そこで局所麻酔薬を動物に投与し、血中濃度とともに組織中濃度を測定し、これらの関係を明らかにすることを目的として実験を行った。動静脈にカテーテルを留置した覚醒状態のラットモデルを用い、局所麻酔薬としてリドカイン、ブピバカインおよびブピバカインの一方の光学異性体のみを含むレボブピバカインを用いた。昨年度の実験結果に基づき、投与速度はリドカイン0.5μg/kg/min、ブピバカインおよびレボブピバカインは0.1μg/kg/minとし、120分間にわたる持続投与の後に血中濃度を求めた。次に、組織中の局所麻酔薬の濃度を測定するため、ラットより脳を摘出してホモジェネートを作成し、これに既知量の局所麻酔薬を加えて検量線を作成した。その結果、リドカインについては0-100μg/ml、ブピバカイン、レボブピバカインについては、0-50μg/mlの範囲で優れた直線性を有する検量線が作成され、組織内の局所麻酔薬の濃度の正確な定量が可能であることが示された。そこで血中濃度を測定した群とは別のラットに対してこれらの麻酔薬を同じ投与速度で120分間持続投与し、その後にチオペンタールの腹腔内投与により安楽死させ、脳組織を取り出した。表面の血管を慎重に除去した後に局所麻酔薬を定量したところ、リドカイン、ブピバカイン、レボブピバカインとも、脳組織中の濃度と血中濃度の比は等しく、長時間持続投与後、定常状態における組織への移行は3種類の局所麻酔薬間で差が無いことが明らかになった。リドカインは抗炎症作用を有し、術後の回復を早め予後を改善する。リドカイン以外のアミド型局所麻酔薬、長時間作用型のブピバカインおよびブピバカインなどの抗炎症作用については殆ど明らかにされていない。またリドカインは神経伝達の遮断に必要とされるよりも低濃度で抗炎症作用を発現するが、その際の血中濃度と組織濃度の閾値についても検討されていないため我々は局所麻酔薬を動物に投与し、血中濃度とともに組織中濃度を測定し、昨年までに方法を確立した。

本年度は動物実験モデルのラットを調整し、その脳組織内および血液中の局所麻酔薬の濃度の定量を計画していたため、実験動物モデルの炎症性疼痛モデルと神経因性疼痛モデルの作成に取りかかった。まず、神経因性疼痛モデルの作成を行った。当初研究実施計画で予定していたBennetらの方法を文献に従って行った。大腿二頭筋の筋頭間直下坐骨神経を露出し、分岐部の中枢側をchromic gutを用いて1mm間隔で4カ所緩く結紮し、神経因性疼痛モデルを得ることを目標にした。Von Freyfilamentで疼痛の程度を評価して、モデルラットにおける疼痛の発現について評価を行い、疼痛モデルとしての適切であるかを判定した。しかし、調整したラットの行動および疼痛の発現について観察を行ったが、疼痛の発現およびその行動についても一定では無かったため、更なるモデルラットの調整が必要であった。
フランス語圏国際共同体と多言語・多文化社会の形成についての研究

フランスおよびフランス語を使用し、あるいはフランス文化を共有するフランス共和国以外の諸国・地域、あるいは世界におけるフランス語話者(フランコフォン)で構成される共同体「フランス語圏」とこれを基盤とする国際組織「フランコフォニー」の成立過程および主要なアクターを分析することにより、フランス語圏およびフランコフォニーの原則は近代以降のフランスにおける政治、経済、社会、文化の根底にある「共和主義」の原則とは異なるものであることを明らかにした。現地調査を下記の地域にて実施した。フランス(本国・2008年8月および9月)主として、コルシカ島のコルシカ大学を中心に資料収集ならびに関係者へのインタビューを実施した。フランス領ニューカレドニア(6月)主として、ヌーメア市のニューカレドニア大学およびシャンプラン協会を訪問、滞在し、ニューカレドニアの自治、民族、言語事情に関する資料の収集、聞き取り等を行った。またこれに併せて2006年に同じくフランス領の南太平洋自治領であるポリネシアで実施した調査と比較検討し、その成果の一部は2009年3月の社会言語科学会で発表及び論文掲載にて行った。フランス領レユニオン、マダガスカル、モーリシャス(8月)フランス領レユニオンを基点にフランス語とマダガスカル語、クレオール語、その他民族語の使用状況ならびに言語政策の実態、およびフランス語圏国際共同体に対する関係及びインド洋地域における関係について調査を実施。現在その成果を分析中で2009年度には発表を行う予定。マリ(9月)現地におけるフランス語と国語の使用状況と政策について調査を実施。収集したカナダ・ケベック州の新聞Le Devoirの196870年までのフランス語圏共同体成立にかけての記事を購読、分析を行い、共同体成立におけるケベック州とカナダ連邦政府の対立と妥協関係について考察した。20年度に行ったケベックの新聞Le Devoirの196870年までのフランス語圏共同体成立にかけての記事を購読、分析、考察の結果をまとめ、共同体成立におけるケベック州とカナダ連邦政府の対立と妥協関係について論文を執筆公表した。同年、フランス共和国憲法が改正され、その大きな変化として、(1)これまで何ら法的地位の与えられてこなかった地域語が「国民の文化遺産」という形で規定されたこと、(2)しかしそれはフランス語と対等な公用語とするのではなく、「フランス語圏=フランス語を共有する世界との特別な関係」を規定することにより、フランス語のさらなる優位を確定するものであること、が国会議論によって確認された。この議論および思想についての分析を論文執筆し、公表した。フランス共和主義理念とその政策、特に外交面のそれと、サンゴールら旧フランス植民地アフリカ諸国出身の政治指導者たちが1960年代以降導き、現在の国際フランス語圏共同体の理念にもなっている思想とその政策との「食い違い」について、サンゴールの著作の読み込みと、近年のフランス国会におけるフランコフォニー政策に関する議論の分析から明らかにし、これについての論文を執筆し、公表した。補足的な資料収集とベルギーのフランコフォニーとの関係についての調査のため、鳥羽美鈴氏に代行出張依頼し、現地して資料を収集した。最終年度にあたる22年度については、研究成果の報告ならびに将来的な出版の準備作業、さらには補完的な調査の実施に充てられた。研究成果はコルシカ島の文化、特に映像文化・表現文化の近年の形成過程について、フランスおよびフランス語圏の政治社会状況を背景に明らかにしたものを、6月、国際島嶼文化会議(イギリス)にて英語で発表を行い、高い評価と関心を得た。この報告については国内の学会誌にはなるが、そのまま英語で論文として公表する予定である。将来的な出版については、日本フランス語教育学会の枠内であるが、フランス語圏の地域およびその言語文化に関する事典、とわが国初となる「フランス語圏研究」に関する研究書の刊行の2点を準備しており、これまでに行った調査およびその資料の分析成果が反映されることになる。上記のため、先の年度では入手できなかった資料、さらなる分析の正確さのために必要な補足的資料を上述の国際会議の際の渡仏、渡英時、およびインターネット等による入手で補完し、より正確かつ詳細なデータを得ることができた。これらは、上記の出版にも反映され、日本におけるフランス語圏研究の本格的な進展に大いに資することになると考えられる。
絶食により誘導されるニホンウナギの変態のトランスクリプトーム解析

変態機構を理解するため、ウナギ仔魚に絶食処理を施し、変態を誘導させた。変態過程の個体からRNAを抽出し、RNA-seq法によるトランスクリプトーム解析に供した。解析の結果、約3億7千万リードの塩基配列データを得た。各群の発現量を比較したところ、変態過程の中盤で遺伝子が大きく変動しており、特に転写伸長因子、筋原繊維サイズの調節や解糖に関わる遺伝子が変動していることが明らかとなった。また、変態の進行に伴って甲状腺ホルモンレセプターの発現も上昇していた。そこで変態前の個体にチロキシンを曝露したところ変態が誘導された。したがって、ウナギにおいても甲状腺は変態に重要な役割をしていることが示唆された。ニホンウナギの変態機構解明するため、変態期のトランスクリプトーム解析を実施した。変態期を、形態から変態前・変態前期・変態後期・変態後の4期間に分け、それぞれ8個体づつサンプリングした。各個体から頭部と体部からtotalRNAを抽出した。各群・各組織8個体分をプーリングし、RNA-seq法による解析を実施した。その結果、約3億7千万リードの生データを取得した。得られたデータはSolexaQAにより低クオリティーリードのトリミングした後、ConDeTriを用いて、illumina sequenceのPCR特有の非特異的な増幅リードの除去を行った。次にTrinityとTrans-ABySSおよびCLC Genomic Workbenchを用いてde novo assembleは実施し、cDNAのカタログ配列を得た。上記のデータをCLC Genomic Workbenchにより各リードをMappingし、各群の発現を比較した。その結果、体部の発現の相関は変態前vs変態前期でr=0.96、変態前期vs変態後期でr=0.79、変態後期vs変態後でr=0.95であり、変態前期と変態後期で大きく発現が変化することが明らかにあった。次に、変態前期と変態後期で特異的に高発現している遺伝子に関してBlast2Goを用いて、Gene Onotolgy解析をしたところ分子としての機能、細胞の構成要素、生物学的なプロセスの3側面すべて、変態前期でより多様に変化していることが示唆された。また、レプトセファルスでシラスウナギに比べて5倍以上の発現が高かったコンティグ数は2705contig中でアノテーションのついたcontig数は735であり、73%が機能が未知のコンティグであることが明らかとなった。昨年度は変態期のトランスクリプトーム解析により得られた「発現データの解析」と変態のトリガー因子を探るために「絶食実験」を実施した。・発現データの解析Trinityによるde novo assemblyによりコンティグ数438364のcDNAカタログ配列を作成した。冗長性除去のためCD-Hit-ESTにより80%配列同一性でクラスタリングし、コンティグ数を320321まで減らした後、BlastXおよびBlast2Goによりアノテーション付与を行った。CLC genomic workbenchを用いてマッピングおよび各群の発現量の比較を行った。レプトセファルス期と変態初期の発現遺伝子に着目して解析したところ、頭部では65コンティグ、体部では131コンティグの発現変動遺伝子(FDR corrected p-value < 0.01)が見つかった。またアノテーションテストを実施後、REVIGOを用いて結果を可視化した。以上の解析から、GAPDHは変態が進行するほど全身で増加し、定量PCRなどの内部標準遺伝子として不適であることは、Cathl1が変態期の初期のみで有意に増加していることなど新しい知見を得られた。またGene onotology解析により、体部における発現変動遺伝子はBiological Processの側面からは翻訳伸長・筋繊維の調節・解糖に関わる遺伝子が大きく変化していることが明らかとなった。・絶食試験変態期のトリガー因子を探る目的で日齢220日に達したウナギ仔魚に対して絶食処理を実施した。絶食開始時点、絶食開始後1, 3, 7日後に20尾ずつサンプリングした。サンプリングした個体はフェノキシエタノール(400ppm)で麻酔し、形態計測後、RNAlater中に保存した。本研究は、ニホンウナギの変態に関してトランスクリプトーム解析を実施し、変態期に変化する遺伝子を網羅的に調べ、ニホンウナギの変態に関する分子メカニズムを明らかにすること目的としている。また、ニホンウナギの変態は絶食により誘導されることが報告されており、絶食と変態の関係についても解析することを目的としている。2年度目は、初年度に得られた発現データの解析を中心に研究を遂行した。発現データの解析は当初予定していたアッセンブルで得られた全contigに対するアノテーション、発現変動遺伝子の抽出、Gene ontology解析を実施できた。また、変態期のトリガー遺伝子探索のために、まず解析材料を準備した。昨年の秋に交配したニホンウナギ仔魚を200日以上かけて育て、絶食試験に供した。絶食試験は大きなトラブルもなく実施でき、解析サンプルの入手が出来た。以上、トランスクリプトーム解析で得られる発現解析の主要なものはほぼ出来たこと、変態のトリガー因子探索のための実験材料を確保出来たことから、本年度の研究はおおむね順調に進展していると考えられる。最終年度も、順調に研究をすることで、いままで全く未知であったレプトセファルスの変態の分子生物学的基盤の一端が明らかとなることが期待される。変態メカニズム解明のために、最大伸長期に達したニホンウナギ仔魚に絶食処理を施し、変態を誘導させた。変態過程を肛門全長と体高から変態前、変態前期、変態後期、変態後の4期間に分け、サンプリングした。

各群からRNAを抽出し、RNA-seq法によるトランスクリプトーム解析に供した結果、約3億7千万リードの塩基配列データを得た。Trinityによるde novo assemblyによりコンティグ数438364のcDNAカタログ配列を作成した。冗長性除去のためCD-Hit-ESTにより80%配列同一性でクラスタリングし、コンティグ数を320321まで減らした後、BlastXおよびBlast2Goによりアノテーションを付与した。CLC genomic workbenchを用いてマッピングし、各群の発現量を比較した。変態前と変態前期の発現遺伝子に着目して解析したところ、頭部では65コンティグ、体部では131コンティグの発現変動遺伝子(FDR corrected p-value < 0.01)が見つかった。またアノテーション付与後、REVIGOを用いたGene Ontology解析を実施し、結果を可視化した。以上の解析から、GAPDHは変態が進行するほど全身で増加し、定量PCRなどの内部標準遺伝子として不適であることや、Cathl1が変態前期のみで有意に増加していることなどが明らかとなった。また、変態に伴って甲状腺ホルモンレセプターの発現が上昇することが明らかとなった。そこで、甲状腺ホルモン曝露実験を実施した。最大伸長期においてT4-100nMの海水で24時間浸潤曝露させたところ、曝露した17尾全てで変態が誘導されたことを確認した。一方、対照群では試験期間中に変態が開始された個体は40%以下であった。従って、ニホンウナギにおいても甲状腺は変態に重要な役割をしていることが示唆された。変態機構を理解するため、ウナギ仔魚に絶食処理を施し、変態を誘導させた。変態過程の個体からRNAを抽出し、RNA-seq法によるトランスクリプトーム解析に供した。解析の結果、約3億7千万リードの塩基配列データを得た。各群の発現量を比較したところ、変態過程の中盤で遺伝子が大きく変動しており、特に転写伸長因子、筋原繊維サイズの調節や解糖に関わる遺伝子が変動していることが明らかとなった。また、変態の進行に伴って甲状腺ホルモンレセプターの発現も上昇していた。そこで変態前の個体にチロキシンを曝露したところ変態が誘導された。したがって、ウナギにおいても甲状腺は変態に重要な役割をしていることが示唆された。本研究の目的は、柳の葉の形をしたレプトセファルスからシラスウナギへの劇的な形態変化を伴うニホンウナギの変態に関して、トランスクリプトーム解析により、その生理メカニズムを明らかにすることである。また、ニホンウナギの変態は絶食により誘導されることが報告されており、絶食と変態の関係についても解析することを目的としている。初年度(平成26年度)は、「レプトセファルスの作出と飼育」と「絶食処理とサンプリング」を実施予定であった。
新規小胞体ストレス調節因子Ｓｄｆ２ｌ１の肝臓でのインスリン感受性調節作用の検討

我々はこれまで摂食時の肝臓におけるコシャペロンSdf2l1の役割を明らかにしてきた。その作用機序の1つとして、代表的なシャペロンであるBiPとの相互作用に注目したところ、確かに肝細胞で両者は結合し、かつそれが小胞体ストレスによって亢進することが分かった。しかし肥満・糖尿病のモデルマウスでは、肝臓におけるSdf2l1の発現が転写レベルで大きく低下しており、このことが病態形成に寄与している可能性が想定された。実際成獣マウスでSdf2l1を欠損させると、以前我々が解析した同遺伝子を一時的にノックダウンしたマウスと同様の表現型を示し、本分子の果たす生理的役割の重要性が改めて示されたものと考えられた。Sdf2l1-floxedマウスを、Alb-cre(アルブミンプロモーター下にcreリコンビナーゼを発現)マウスとかけ合わせて作製したLSdf2l1KO(肝臓特異的Sdf2l1欠損)マウスについて、50週齢に至るまで観察を継続したが、耐糖能やインスリン抵抗性に明らかな表現型を認めなかった。そこで次にSdf2l1-floxedマウスにAd-cre(CMVプロモーター下にcreリコンビナーゼを発現するアデノウイルス)を投与することで、成獣になってから肝臓特異的にSdf2l1を欠損させたマウスを作製した。このマウスではノックダウンの時と同様に、耐糖能異常、インスリン抵抗性を認め、また摂食時に小胞体ストレスが亢進していた。このマウスに高脂肪食負荷を行なったが、その表現型も同様であった。すなわちSdf2l1の果たす糖脂質代謝における役割を、以前とは異なる系でも確認することができた。一方でSdf2l1の機能解析についてはBiPとの相互作用に着目し、両者の抗体を用いたProximity Ligation Assayを新たに行なった。実際にラット肝細胞由来のFao細胞において、相互作用を示すシグナルが観察された。更にこのシグナルは、ツニカマイシン刺激下で増加したことから、両者が小胞体ストレス応答において、シャペロン複合体として機能を果たしていることが、より強く示唆された。まず我々が着目したコシャペロンであるSdf2l1と、代表的なシャペロンであるBiPの相互作用の解析を進めた。発現ベクターを用いて、タグつきの両分子、すなわちSdf2l1-FLAGとBiP-HAを培養細胞系に発現させ、共免沈を手法で解析したところ、確かに両分子間に相互作用があることが示された。一方で、Sdf2l1が有すると予測される3ヶ所のMIRを欠損した変異体を作製したが、いずれもBiPとの相互作用は保たれていた。次に肥満・糖尿病モデルであるdb/dbマウスを用い、絶食と再摂食の状態で、小胞体ストレス関連シグナルの変化を包括的に解析した。その結果、確かに小胞体ストレスセンサーであるIRE1αやPERKのリン酸化は亢進していた一方、より下流の分子の発現や活性化は寧ろ低下しており、Sdf2l1の発現も大きく低下していた。この機序を明らかにするために、免疫クロマチン沈降法による解析を行なったところ、db/dbマウスではSdf2l1プロモーターとXBP1との結合が低下していた。最後に肝臓特異的Sdf2l1欠損(LSdfKO)マウスに関して、予定通りSdf2l1-floxedマウスとAlb-creマウスとのかけ合わせにより、実験群を作出した。しかしながら予想に反して、少なくとも若週齢においては、LSdfKOマウスと対照となるfloxマウスの間で、耐糖能やインスリン感受性に差は見られなかった。体重や摂餌量にも差を認めなかった。概ね当初の予定通りに、各種解析を進めることができたと考えている。Sdf2l1とBiPの相互作用については、予想通りに示すことができ、小胞体でのシャペロン機能を考える上でも中心的な役割を果たすBiPと複合体を形成していることから、Sdf2l1も重要な役割を担っているとの期待が増している。但しSdf2l1のどの部位がこの相互作用に重要であるかは、今後の検討課題である。肥満・糖尿病の肝臓における小胞体ストレスの全貌に関しては、小胞体ストレスセンサーが活性化していたことから、小胞体ストレスは確かに過剰であることが示された。しかしながらより下流で、本来小胞体ストレスを収束させるはずの分子については、活性が低下しているものと考えられた。このことが更なる小胞体ストレスの亢進につながる、という悪循環が形成されている可能性が明らかとなった。またこのような病態形成にSdf2l1の発現低下が寄与しているものと考えられるが、その低下は転写レベルで生じていることも示された。LSdfKO

マウスについても、実験群の作出自体は予定通りに進めることができた。しかしながら予想に反して若週齢では表現型を認めず、更に週齢を追っての解析が必要と考えられる。またfloxマウスの肝臓にアデノウイルスを用いてcreリコンビナーゼを発現させる手法も検討すべきと思われる。当初の予定通り、平成25年度にLSdfKOマウスの表現型を引き続き解析する。具体的には加齢に伴って表現型が顕在化する可能性が想定されるため、より長期間に渡って飼育を続け、体重、耐糖能、インスリン抵抗性の評価を反復するものとする。またfloxマウスにcreを発現するアデノウイルスを投与し、成獣になってからSdf2l1を肝臓特異的に欠損させたマウスを作製することで、その表現型を改めて解析する。Sdf2l1と他分子の関連に関しては、引き続きどのドメイン、または残基が、BiPとの相互作用や、シャペロン機能の発揮に重要なのか、培養細胞系を用いた検討を進める。またSdf2l1の上流として転写因子XBP1の重要性が示唆されてきたため、XBP1を欠損させたマウスにSdf2l1、またはその機能を喪失した変異体を補充し、XBP1欠損に伴う表現型が回復するか否かを検討する予定である。引き続き遺伝子改変マウスの維持と実験群作出、培養細胞系での種々の解析、並びに学会・研究会への参加と発表にかかる費用として、使用する予定である。
新規の植物育種のための植物人工染色体ベクターの作出

今年度は、動植物両方で機能するシャトルベクターの作出をめざし、昨年度までに設定した条件での細胞融合により、シロイヌナズナ染色体のヒトHT1080細胞への導入を行った。その結果、植物染色体がヒト染色体へと転座した融合染色体を持つ細胞を獲得した。この細胞に対してFISH解析を行い、この転座染色体がヒト15番染色体長腕のテロメア部位に植物染色体が転座したものであり、両末端部にそれぞれの生物由来のセントロメア配列をもつことを明らかにした。また、長期培養を行うと、植物セントロメアのみをもつミニ染色体の出現が観察された。ミニ染色体の割合は培養2ヶ月目でピークを迎え、39.5%の細胞がミニ染色体を維持した。しかし、その後ミニ染色体を持つ細胞の割合は次第に低下した。一方で、反復配列が増幅した染色体組成をもつ染色体が現れ、その割合は4ヶ月目には28,3%にまで増加した。これらのミニ染色体、増幅型染色体は、共にヒトDNAを染色するhcot-1プローブでは全く染色されない。それぞれの染色体におけるhCENP-Aの局在を免疫染色により観察すると、転座染色体ではヒトセントロメアにのみシグナルが観察され、またヒトセントロメアをもたないミニ染色体上にもシグナルが観察された。これらの結果は、シロイヌナズナのセントロメアが長期培養により活性化し、二動原体状態となってミニ染色体が出現したことを示唆している。また、この融合細胞を用いてシロイヌナズナ遺伝子の網羅的遺伝子発現解析を行い、シロイヌナズナの遺伝子がヒト細胞においても発現していることを確認した。本年度までにシャトルベクターとしての有用性を示すことはできなかったが、シャトルベクターの基盤となる融合染色体を獲得することができた。また、今回新しく構築した細胞を用いて得られた新たな知見は、種の壁をこえたセントロメア、遺伝子発現機構の保存を示唆している。これらの結果は現在、投稿に向けて準備中である。(抄録なし)本年度は、ヒト人工染色体(Human Artificial Chromosome;HAC)システムを活用した植物人工染色体作製を目的として、まずHAC技術の習得を行った。動物細胞においては、染色体ベクターの正確かつ効率的な改変、他細胞への運搬技術が確立されており、これらの技術の習得は、植物への応用を目指す本研究において必要不可欠であった。次に、植物への導入実験に用いることのできるHACベクターの作製を行った。具体的には、植物で汎用的に用いられているカリフラワーモザイクウイルス35Sプロモーターならびに緑色蛍光タンパク質(sGFP)遺伝子、nosターミネーター、ハイグロマイシン耐性遺伝子を、部位特異的組み換え酵素システムであるCre-loxPシステムを用いてHACに対して導入した。これにより、植物細胞へHACを導入した際に、導入の成否を蛍光の有無、抗生物質耐性の有無で確認できるHACベクターを作製することに成功した。この構築したHACを植物用改変HACと呼ぶ。次に、この構築した植物用改変HACを用いて植物への染色体導入条件の検討を行った。導入方法としては、微小核融合法と細胞融合法を試した。植物細胞としては、シロイヌナズナの葉肉プロトプラストを用い、動物細胞としては植物用改変HACを保持するCHO細胞とマウスA9細胞を用いた。細胞融合が起きている事は、それぞれの細胞を別の蛍光色素で染色した後に融合し、融合処理後に両方の蛍光を発する細胞を観察することで確認した。両手法ともに、PEG処理条件、ドナー細胞数、ドナー細胞株など数条件試しているが、未だGFPを発現するシロイヌナズナ葉肉プロトプラストは得られていない。これら植物用改変HACの構築、異種細胞融合の確認は本年度の成果として挙げられ、来年度は染色体導入条件をさらに検討していく予定である。ボトムアップアプローチによる植物人工染色体作製については、ABRCよりTACライブラリーフィルターを入手した。今後、これを用いてセントロメアDNAを含むTACクローンの選抜を行う。今年度は、タバコ培養細胞への染色体導入条件の検討を行った。これまでの結果より、シロイヌナズナの葉由来プロトプラストに対して、微小核融合法、細胞融合法、バイオアクティブビーズ法を用いて染色体を導入することが困難であることがわかってきた。これらの結果をふまえ、今回はタバコ培養細胞に対して染色体を導入する条件の検討を行った。タバコ培養細胞は、汎用的に用いられている培養細胞であり、増殖が早く、Aphidicolinなどによって細胞周期の同調も行うことができる。これらの利点をふまえ、タバコ細胞の同調条件の検討、M期に細胞周期を同調した状態での染色体導入条件の検討を行った。M期への同調に注目した理由としては、前回同調処理を行った細胞において染色体導入によると考えられるGFPの発現が見られたことが挙げられる。Aphdicolinによる細胞周期のS期同調を行い、細胞の洗浄、Aphidicolinからのリリース後、6h-8hでM期細胞の集積が見られた。このM期同調細胞を用いて細胞融合、微小核融合、バイオアクティブビーズ法による染色体導入を行った。結果として、いずれの方法においても染色体導入により付与されるGFP蛍光、抗生物質耐性をもったプロトプラストは得られなかった。予備実験として行った、動物細胞からタバコ培養細胞への細胞融合によるプラスミドベクターの伝達実験は成功し、それぞれ植物細胞特異的なプロモーター下のGFP遺伝市の発現が確認できていることから、細胞融合そのものは成功していると考えられる。

しかし、染色体レベルになると導入が困難になるため、より細胞腫、同調条件、融合条件などの検討が必要であると考えられる。同時並行として進めていた植物から動物細胞へと染色体を導入する系においては、良好な結果が得られてきており、双方を進める事でシャトルベクターシステムの構築が可能となると考えられる。今年度は、動植物両方で機能するシャトルベクターの作出をめざし、昨年度までに設定した条件での細胞融合により、シロイヌナズナ染色体のヒトHT1080細胞への導入を行った。その結果、植物染色体がヒト染色体へと転座した融合染色体を持つ細胞を獲得した。この細胞に対してFISH解析を行い、この転座染色体がヒト15番染色体長腕のテロメア部位に植物染色体が転座したものであり、両末端部にそれぞれの生物由来のセントロメア配列をもつことを明らかにした。また、長期培養を行うと、植物セントロメアのみをもつミニ染色体の出現が観察された。ミニ染色体の割合は培養2ヶ月目でピークを迎え、39.5%の細胞がミニ染色体を維持した。しかし、その後ミニ染色体を持つ細胞の割合は次第に低下した。一方で、反復配列が増幅した染色体組成をもつ染色体が現れ、その割合は4ヶ月目には28,3%にまで増加した。これらのミニ染色体、増幅型染色体は、共にヒトDNAを染色するhcot-1プローブでは全く染色されない。それぞれの染色体におけるhCENP-Aの局在を免疫染色により観察すると、転座染色体ではヒトセントロメアにのみシグナルが観察され、またヒトセントロメアをもたないミニ染色体上にもシグナルが観察された。これらの結果は、シロイヌナズナのセントロメアが長期培養により活性化し、二動原体状態となってミニ染色体が出現したことを示唆している。また、この融合細胞を用いてシロイヌナズナ遺伝子の網羅的遺伝子発現解析を行い、シロイヌナズナの遺伝子がヒト細胞においても発現していることを確認した。本年度までにシャトルベクターとしての有用性を示すことはできなかったが、シャトルベクターの基盤となる融合染色体を獲得することができた。また、今回新しく構築した細胞を用いて得られた新たな知見は、種の壁をこえたセントロメア、遺伝子発現機構の保存を示唆している。これらの結果は現在、投稿に向けて準備中である。本年度の大きな目的の一つは、既に押村研で確立されているヒト人工染色体(HAC)システムの習得であった。この点においては、技術習得を既に終了している。また、植物への応用可能性を示すために必要不可欠な実験材料である、植物への導入に使用可能なHACベクターの構築も既に終了している。植物への導入については、現在条件検討等を行っている所であり、今後の進展が期待できる。また、ボトムアップアプローチについては実験材料の入手にとどまっているが、前述のヒト人工染色体を用いたアプローチが進展しているため、全体としておおむね順調に進展していると評価した。これまでの研究より、シロイヌナズナをレシピエントとして染色体導入に用いることが困難である事がわかってきた。
強皮症線維芽細胞を用いた線維化の機序の解明

線維化のin vitroモデルである強皮症線維芽細胞を解析し、細胞外マトリックスの1つであるトロンボスポンジン-1(TSP-1)の過剰発現とそのリガンドであるCD36の発現低下を見いだした。これらの現象はautocrineTGF-βsignalingによることを明らかにし、さらにTSP-1の過剰発現あるいはCD36の発現抑制にて線維化が誘導できることを証明した。正常および強皮症培養線維芽細胞を用いて免疫ブロット法、免疫沈降法にてトロンボスポンジン-1(TSP-1)蛋白の発現量を検討したところ強皮症線維芽細胞において発現が亢進していた。Northern blot法にて強皮症線維芽細胞においてTSP-1 mRNAの発現が亢進していた。皮膚組織を用いた免疫染色法にて強皮症線維芽細胞におけるTSP-1の発現亢進がin vivoで確認された。TSP-1の過剰発現はI型コラーゲン過剰発現、Smad3のリン酸化亢進と相関した。また強皮症線維芽細胞ではNorthern blot法にてTSP-1 mRNA stabilityが亢進している事が示され、またTSP-1遺伝子プロモーター領域を用いたCAT assayにて強皮症線維芽細胞ではTSP-1遺伝子転写活性は亢進していなかった。また正常線維芽細胞においてTGF-β刺激にてTSP-1発現が促進され、強皮症線維芽細胞ではTSP-1の過剰発現はTGF-β中和抗体あるいはTGF-β1アンチセンスオリゴにて抑制され、autcrine TGF-βsignaling(強皮症線維芽細胞自身が分泌するTGF-βが活性化してTGF-β情報伝達が亢進した結果)によるものと考えられた。またTSP-1中和抗体あるいはTSP-1アンチセンスオリゴにて強皮症線維芽細胞コラーゲン発現亢進、Smad3のリン酸化亢進が抑制され、強皮症線維芽細胞におけるautocrine TGF-βsignalingにTSP-1過剰発現が関与していると考えられた。TSP-1の受容体として細胞膜蛋白のCD36が知られている。CD36蛋白の発現量を正常および強皮症培養線維芽細胞を用いて免疫プロット法で検討したところ強皮症線維芽細胞において発現が低下していた。Real time PCR法にてCD36 mRNA発現を検討したところ強皮症線維芽細胞において発現が低下していた。このCD36の強皮症線維芽細胞における発現低下の機序、意義を検討するためにCD36 knock downを行い、各種細胞が今トリックス蛋白発現、mRNA発現、MMPs、TIMPs、情報伝達について検討するところである。正常および強皮症培養線維芽細胞を用いて免疫プロット法にてCD36蛋白の発現量を検討したところ強皮症線維芽細胞において発現が低下していた。皮膚組織を用いた免疫染色にて強皮症線維芽細胞におけるCD36蛋白の発現を検討したところCD36発現低下がin vivoにて確認された。またreal-time quantitative PCR法にてCD36 mRNA発現の低下が認められた。CD36蛋白の発現低下はトロンボスポンジン-1の過剰発現、I型コラーゲン過剰発現、α-smooth muscle actin過剰発現、Smad3のリン酸化亢進と相関した。また正常線維芽細胞ではTGF-β刺激にてCD36発現低下が確認され、強皮症線維芽細胞におけるCD36の発現低下はautocrineTGF-βsignaling(強皮症線維芽細胞自身が分泌するTGF-βが活性化してTGF-β情報伝達が亢進した結果)によるものと考えられた。また正常線維芽細胞におけるsiRNACD36を用いたRNA干渉によるCD36発現抑制によってトロンボスポンジン-1の過剰発現、I型コラーゲン過剰発現、α-smooth muscle actin過剰発現、Smad3のリン酸化亢進が誘導され、CD36発現抑制は線維化を誘導する可能性が示唆された。強皮症線維芽細胞におけるCD36発現低下の意義をさらに明らかにするため、正常および強皮症線維芽細胞へのlatent form TGF-β添加によってCD36の発現量、TGF-β活性化、トロンボスポンジン-1の発現量、I型コラーゲン発現量、α-smooth muscle actin発現量、Smad3のリン酸化の程度を今後検討する予定である。さらに正常および強皮症線維芽細胞におけるCD36とトロンボスポンジン-1の介合、CD36とlatent form TGF-βの介合、トロンボスポンジン-1とlatent form TGF-βの介合について検討を加えたい。また正常線維芽

細胞ではTGF-β刺激にてCD36発現低下が確認され、強皮症線維芽細胞におけるCD36の発現低下はautocrineTGF-βsignaling(強皮症線維芽細胞自身が分泌するTGF-βが活性化してTGF-β情報伝達が亢進した結果)によるものと考えられた。また正常線維芽細胞におけるsiRNACD36を用いたRNA干渉によるCD36発現抑制によってトロンボスポンジン-1の過剰発現、I型コラーゲン過剰発現、α-smooth muscle actin過剰発現、Smad3のリン酸化亢進が誘導され、CD36発現抑制は線維化を誘導する可能性が示唆された。強皮症線維芽細胞におけるCD36発現低下の意義をさらに明らかにするため、正常および強皮症線維芽細胞へのlatent form TGF-β添加によってCD36の発現量、TGF-β活性化、トロンボスポンジン-1の発現量、I型コラーゲン発現童、α-smooth muscle actin発現量、Smad3のリン酸化の程度を検討した。正常線維芽細胞ではlatent form TGF-β添加によってCD36の発現低下、TGF-β活性化、トロンボスポンジン-1の発現亢進、I型コラーゲン発現亢進、α-smooth muscle actin発現亢進、Smad3のリン酸化亢進が確認されたが、強皮症線維芽細胞においてはCD36の発現量、TGF-β活性化、トロンボスポンジン-1の発現量、I型コラーゲン発現量、α-smooth muscle actin発現量、Smad3のリン酸化の程度に変化を認めなかった。さらに強皮症線維芽細胞におけるCD36とトロンボスポンジン-1の介合、CD36とlatent form TGF-βの介合、トロンボスポンジン-1とlatent form TGF-βが確認されたが、正常線維芽細胞では無刺激下では各々認められなかった。
放射線効果修飾薬のマウスモデルによる スクリーニングシステム構築

本研究では、薬剤の放射線効果に対する修飾作用をマウスで正常組織および腫瘍組織について評価する。正常組織での評価は、放射線による空腸陰窩細胞に対する影響を薬剤の投与の有無で比較する。腫瘍については、マウスに移植した腫瘍に放射線を照射し、その後、腫瘍と取り出して酵素処理することで単細胞にし、その細胞の生存率をコロニー形成能で測定する。以上により放射線効果を修飾する薬剤のスクリーニングシステムを構築する。
わが国における医師のプロフェッショナリズム探索と推進・教育に関する事業研究

<研究の目的>医療を受ける側と提供する側が信頼しあいながら医療サービスが成立するために、現在解決されなければならない問題はいくつもある。我々研究班は、2年間の事業の中で、現在起こっている医療に関する問題点について、医師のプロフェッショナリズムの視点から考察し、実証的な根拠を提示するとともに、プロフェッショナリズム推進への方略や、プロフェッショナリズム涵養のためにあるべき教育について多面的な研究事業を行なうことを目的とした。各事業に先立ち、我々は、まずインターネットによるW.EB掲示板機能を用いた「WEB討論会」を開催した。その内容を基礎資料として、以下の分担事業を行った。<医師の思考と職業意識に関する論考集の出版>分担研究者を中心とした医師の思考を文化人類学的に考察した『医師アタマ』を出版するとともに、事例を基にした論考連載「白衣のポケットの中:医師のプロフェッショナリズムについて考えるフォーラム」をおこなった。<医師が持つべきプロフェッショナリズムに関する質的調査および量的調査>医師が持つべきプロフェッショナリズムの内容に対し、医療専門職や患者、市民等に対して質的インタビューを行い概念の整理を行った。その上、医師の態度と行動に対する調査を、医師、患者、市民に実施し、結果の比較を行った。<医師のプロフェッショナリズム推進および教育事業>映画や事例の振り返りによる、医師の態度教育に関する教育ツールを開発し、有用性の観察を行った。<良質な医療サービスを提供するために必要な就労環境についての調査>医師の就労環境改善を提言するための現状調査を行った。以上の調査等を踏まえ、複数の種類にわたる医療専門職のほか、倫理学、メディエーター、マスコミ関係者、患者を代表する者等による合同ワークショップ「ともに考える医療ワークショップ」を開催し、医療者行動規範宣言書の草案を作成した。平成18年度においては医療者・市民への質的調査、医師への質問紙調査を行い、医師のプロフェッショナリズム教育・推進に向け、概念的な探索及び整理を行なうとともに、特に焦点を当てて取り扱うべきテーマを明確にした。また、インターネット上で、様々な個別臨床事例に基づいて医療プロフェッショナルとしてどうあるべきか等についての公開検討会を1週間にわたりWEB討論会として行なった。さらに、本研究グループのメンバーを執筆者として、同テーマでの誌上連載を開始した。以下、分担研究者の研究進捗状況を列記する。早野班:医師の就労環境と仕事満足、患者安全への意識に関する調査について、倫理委員会承認の上調査を開始した。現在、データ収集中である。野村班:医師たち自身がどのような態度や行為を患者や家族の信頼を損なう好ましくない行為と考えているのか、また日本の医療界でそのような態度や行為がどの程度行われていると認識しているのかを把握するためのインターネット調査を行なった。大西班:利益相班に関する医師への調査を行なうとともに、事例による振り返りに基づいたプロフェッショナリズム育成のためのプログラム作成に着手した。浅井班:今年度の調査を総括し、プロフェッショナルに関する概念的な整理を行なった。また、映像作品を用いたプロフェッショナリズム育成のためのプログラム作成に着手した。大生班;患者・市民を対象に、医師が持つべきプロフェッショナリズムに関する探索的質的調査を行なった。竹村班:医師・医療者を対象に、医師が持つべきプロフェッショナリズムに関する探索的質的調査及び量的調査を行なった。平成19年度は、平成18年度結果を基に、国民との対話セッションやプロフェッショナリズム推進のための具体的なキャンペーン事業を行なう事を計画している。研究事業の年度計画に基づき、以下の研究事業を遂行した。