hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
自然発症ニホンザル個体を起点にした早老症モデルの確立

DNA修復能力が低下し、繊維芽細胞の増殖能力が低下しており、幼児期における白内障や大脳皮質・海馬の萎縮、糖代謝異常などの早老症的特徴が見られたニホンザルN416に関しては3歳で死亡したときに採取した組織の元素分析を行い、さまざまな年齢の正常個体との比較を行った。主要臓器において、タンパク質含量の指標となるイオウや核酸含量の指標になるリンは他個体と比べて際立った特徴を示さなかったが、亜鉛が一部の臓器で著しく低い値を示した。亜鉛はDNA修復関連酵素や抗酸化酵素などに関わっているため、その代謝の異常が早老症的症状の発現の一因かと思われたが、萎縮がはなはだしかった大脳皮質や海馬では亜鉛は減少しておらず、亜鉛代謝の異常と早老症様症状との関係は解明できなかった。ニホンザルMff2389に関しては、低い鼻、舌の突き出し、低成長などから当初ダウン症を疑った。しかし、尿の生化学分析やエックス線撮影、骨塩量測定などの解析の結果から、難病指定されているリソソーム病に含まれるムコ多糖症を発症している可能性が高まった。Mff2389の母親はこれまでに7頭の子を産んでいるが、Mff2389以外に2頭が、類似した症状を示していた。検証のためのDNA解析は、ムコ多糖症に様々な型があり、それぞれ原因遺伝子が異なるため難航したが、並行して行ったエクソン解析から、発症していない両親はヘテロに、発症しているMff2389はホモに持つIDUAのミスセンス突然変異を発見した。この変異を検出するPCR、シークエンス解析を行ったところ、発症した3頭は全て当該ミスセンス突然変異ホモ個体であった。非血縁個体に関しても約半数がヘテロ個体であり、この放飼場個体群が世界初のムコ多糖症霊長類モデル生産に利用できる可能性が示された。ヒトの早老症によく似た症状を示したニホンザルN416(シワコ、PLoS One, 2014)の病因解明のため、主要臓器、脳について元素分析を行った。DNA修復関連酵素や抗酸化酵素に関わっている亜鉛が一部の臓器で正常個体より著しく低い値を示したため、亜鉛代謝異常が早老症的症状の発現の一因かと思われたが、詳細は未解明である。特異な顔貌と四肢拘縮を示すニホンザルMff2389とその妹2頭は、尿検査、エックス線検査などの結果から、難病指定されているムコ多糖症であることが強く疑われた。遺伝子検査の結果、ムコ多糖症I型の原因遺伝子IDUAに生じた一塩基置換が症状の原因である可能性が高いことが分かった。ニホンザルN416に関しては、脳の微量元素分析と組織学的解析を進めるとともに、培養細胞での解析を行う。また、組織含量が少なかった亜鉛に関して、取り込みの異常があったのか、排出の異常があったのかをゲノム、組織学の両面で解析する。ニホンザルMff2389に関しては、血縁個体を含めて、形態学、行動学的データの解析を継続するとともに、難病の原因遺伝子に関する遺伝子解析を進める。ニホンザルN416に関しては、亜鉛トランスポーター関連の遺伝解析、脳神経系の組織学的解析と、抗酸化酵素に関わる亜鉛以外の微量元素である銅やセレンの原料解析を行う。これらを元に、論文をまとめる。ニホンザルMff2389と関連個体に関しては、発現形質の継続的な解析を進めるとともに、ムコ多糖症原因遺伝子の遺伝解析を推進し、論文をまとめる。神経科学、霊長類学組織学的解析のために購入を計画していた試薬類を購入しなかったため。素子医学的解析実施に合わせて当該試薬類を購入し、解析に使用する。
唾液腺分泌反応における血小板活性化因子(PAF)の役割

イヌ及びラット顎下腺房細胞におけるplateletactivating factor (PAF)をもちい,PAFの生合成について検索し,以下の成績を得た。1.アセチルコリンと共にインキュベ-トした腺房細胞ではムチン分泌が促進されると同時に血小板凝集活性を有する物質が抽出された。この物質の血小板凝集作用はPAF拮抗薬であるBN 52021の前処置により拮抗された。またphospholipase A_2,Phospholipase Cを作用させることにより消失した。これらの成績から,この物質はPAFと考えられる。2.アセチルコリンは濃度依存的にPAFの産生を高めた。このPAFの産生はきわめて早く,30秒後には有意に増加し,1分で最大に達し,以後30分まで持続した。PhenylmethylsulfonylfluorideはACH刺激及び非刺激細胞でのPAF蓄積を著明に高めた。ACHによるPAF産生と[^<14>C]ーarachidonic acidの遊離は細胞外液Ca^<2+>濃度に依存していた。3.アセチルコリンにより増加したPAFは反応液中には遊出せず,ほとんどが細胞内に貯留していた。4.IonomycinはPAF産生を著明に促進した。Digitoninーpermeabilized cellsにおいてCa^<2+>(300nM以上の濃度)はPAF産生を促進した。イソプロテレノ-ル,ノルアドレナリンではPAF産生促進はわずかであった。5.アセチルコリンは[^<14>C]ーacetateの腺房細胞への取り込みを軽度促進した。6.LysoーPAF: acetylーCoA acetyltransferase及びDTTーinsensitive cholinephosphotransferase活性はAChにより促進された。両活性の促進はPAF産生が長時間持続するにもかかわらず一過性であった。以上,腺房細胞は,刺激に応じてPAFの産生が促進されることが明らかになった。このPAF生成はアセチルコリンに対する特異的な反応であることが示唆された。2.コリン受容対作動薬, acetylcholine(ACh), carbachol及びmuscarine10^<-7>-10^<-5>Mはムチン分泌を有意に増加せしめた(自然遊離の最大約300%).これらの反応は10^<-5>Mのatropineにより拮抗された.同濃度のpirenzepineによる抑制は弱かった.3.AChによるムチン分泌反応は細胞外Ca^<2+>除去により著明に抑制された. Na+除去によっては影響されなかった.5.ほとんど作用を示さない濃度のNE, 3×10^<-8>Mの効果はPAF(C_<16>)存在下で軽度増加した. PAF拮抗薬, BN52021の各種刺激分泌反応に対する効果は現在検討中である.イヌ及びラット顎下腺房細胞におけるplateletactivating factor(PAF)をもちい、PAFの生合成について検索し、以下の成績を得た。1)アセチルコリンと共にインキュベートキュベートした腺房細胞からは血小板凝集活性を有する物質が抽出された。またphospholipase A_2,phospholipase Cを作用させることにより消失した。これらの成績から、この物質はPAFと考えられる。

2)アセチルコリンは濃度依存的にPAFの産生を高めた。このPAFの産生はきわめて早く、30秒後には有意に増加し、1分で最大に達し、以後30分まで持続した。3)アセチルコリンにより増加したPAFは反応液中には遊出せず、ほとんどが細胞内に貯留していた。4) IonomycinはPAFの産生を著明に促進した。イソフロテレノールノルアドレナリンではPAF産生促進はわずかであった。5)アセチルコリンは^<14>C-acetateの腺房細胞への取り込みを軽度促進した。以上、腺房細胞は、刺激に応じてPAFの産生が促進されることが明らかになった。このPAF生成はアセチルコリンに対する特異的な反応であることが示唆された。
咬合高径と口唇閉鎖機能、および咀嚼筋活動との相互関係について

骨格性の開咬患者にみられる口唇閉鎖機能不全は、顔面の垂直的な長さと関連した口唇閉鎖機能を示していると考えられる。平成16年度の研究では、下顎骨の時計回転による顔面高の増加と口唇閉鎖機能との関係について検討した。被験者は正常な切歯被蓋関係を有し、前歯部に著しい叢生を認めない17名の成人ボランティア(平均年齢:20.5±6.5才)である。九州歯科大学倫理委員会の承認を受けた研究の目的と計画を被験者に説明し、インフォームドコンセントを得た。被験者は安静時における口唇閉鎖時と離開時の下唇の筋活動をもとにcompetent lip群とincompetent lip群に分類した。個々の被験者において、オクルーザルスプリントを口腔内に装着して咬合を挙上し、口唇閉鎖および離開時の下唇の筋活動を生体機能測定装置(PowerLab)を用いて30秒間記録し積分値を算出した。その結果、下唇の筋活動と顔面高との間に有意な相関関係を認め、下顎の時計方向への回転による咬合の挙上によって口唇閉鎖不全が発症することが分かった。また、平成17年度の研究では骨格不正咬合者は口唇閉鎖機能不全を示し、ガム咀嚼運動を阻害していることが示唆され、外科的矯正治療による形態の改善が口唇閉鎖機能の回復に有効であることが分かった。本研究では下顎骨の時計回転による顔面高の増加と口唇閉鎖機能との関係について検討した。被験者は安静時における口唇閉鎖時(EMLC)と離開時(EMLA)の下唇の筋活動をもとにcompetent lip(CL)群(9名)とincompetent lip(IL)群(8名)に分類した。個々の被験者において、上下顎切歯間距離を0mmから2mmごとに6mmまで増加した四種類のオクルーザルスプリントを口腔内に装着し、下顎骨の時計回転によって咬合を挙上した.口唇閉鎖および離開時に記録した下唇の筋活動は生体機能測定装置(MacLab, ADInstrument, Australia)を用いて1kHでサンプリングしパーソナルコンピュータに記録し30秒間の積分値を算出した。EMLCとEMLC-EMLA、および(EMLC-EMLA)/EMLCを下唇の筋活動の指標とした.なお、咬筋の筋活動も同時にモニタリングした.1.いずれの群においても、各指標と顔面高との間に有意な相関関係を認めた.2.4mm以上のオクルーザルスプリント装着でCL群も口唇閉鎖不全を示した。4.CL群では、0mmスプリント装着時では筋活動の差が負の値を示したが、2mmのスプリントの装着で正の値に増加した。これらの結果より、下顎の時計方向への回転による顔面高の増加が口唇閉鎖機能に対して有意な影響があること、特にcompetent lip群では口唇閉鎖機能不全を引き起こす顔面高の増加に閾値が存在することが示された。本研究では顎変形症と診断され外科矯正の対象となった骨格性不正咬合者の口唇閉鎖機能を対照群と比較すると同時に術後の変化を比較検討した。正常な切歯被蓋関係を有し、前歯部に著しい叢生を認めない成人ボランティア(平均年齢:20.5±6.5才)を対照群とし、外科矯正治療を予定している骨格性不正咬合者群ともに、九州歯科大学倫理委員会の承認を受けた研究の目的と計画を説明し、インフォームドコンセントを得た。

被験者は安静時における口唇閉鎖時(EMLC)と離開時(EMLA)の下唇の筋活動をもとにcompetentlip群とincompetent lip群に分類した。安静時の下唇の筋活動の他に、チューイングガム30回咀嚼中の筋活動を記録した。機能測定装置(PowerLab)を用いて1kHでサンプリングしパーソナルコンピュータに記録し30秒間の積分値を算出し、筋活動期と弛緩期に区分けして咀嚼運動リズムの評価を行い、以下の結果を得た。2.顎変形症患者の咀嚼サイクルが延長する傾向が認められた。4.術後、ガム咀嚼の運動リズムは短縮する傾向が見られた。5.顎変形症患者の顎顔面の前後的関係は改善した。これらの結果より、顎顔面形態の不調和が口唇閉鎖機能に、外科的矯正治療は審美的改善のみならず、口唇閉鎖機能の改善にも効果があることが分かった。
軽躁チェックリスト他者評価版を用いた効果的な双極性障害のスクリーニング法の開発

これと平行して、インターネット調査会社のモニターを対象として、配偶者がHCL-33EAを用いて評価した患者の軽躁傾向が家族の負担感、抑うつ、感情表出(Expressed Emotion;EE)におよぼす影響について検討を行った。その結果、HCL-33EAの得点は家族の負担間を介して感情表出に影響をおよぼしていることが明らかになった。これらの結果から、HCL-33EAを用いて家族による軽躁傾向の評価することは、家族の高い負担感や家族の高EEを把握し、家族への支援の必要性を把握することにも役立つことが示唆された。多施設共同研究を依頼していた医療機関において、調査協力医師の退職および異動があった。そのため、予定よりもデータ収集が遅れている。調査協力医師の異動などによる研究の進捗の遅れに対しては、2018年度に新たな協力施設を加えることにより対応している。2019年度も引き続き調査を実施するとともに、新たに調査協力を得られる施設を検討する。また家族によるHCL-33EAを用いた軽躁症状の評価と患者本人によるHCL-33を用いた軽躁症状の評価の関連や、患者本人による評価と家族による評価、および両者の不一致が、それぞれどのような要因と関連するかについての検討も行う予定である。本研究の目的は、うつ病との誤診が多い双極性障害を正しく診断し、患者が治療初期から適切な治療をうけることができるように開発された双極性障害スクリーニング尺度「軽躁チェックリスト(Hypomania Check List-33)の他者評価版および本人評価版の日本語版を作成し、東京、名古屋、金沢、大分、鹿児島の7医療機関による協力を得て、その標準化を行うことである。平成29年度は、研究実施計画において1予備調査を行って調査票を確定する、2調査員を雇用して面接評価(ハミルトンうつ病評価尺度、ヤング躁病評価尺度)の研修を実施する、3各施設の倫理審査委員会で審査をうける、4調査票の印刷等の準備を行い、平成30年1月に調査を実施することを予定していた。現時点で4医療機関において倫理審査委員会における承認が得られ調査を開始した。残りの3医療機関においても近いうちに調査を開始できる見通しである。また本調査の実施と並行して、軽躁チェックリスト他者評価版および本人評価版のインターネット調査版を用いて、内適整合性、医師による診断を基準とした基準関連妥当性の検討を行った。現在、この調査データの解析中である。当初の実施計画通りの時期に調査を開始し、現在も調査を実施中である。平成30年度は調査を実施する期間とする。調査実施中は、各施設のデータ収集進捗状況について1カ月に1回電話およびメールによるモニタリングを行い、調査手続きが遵守されているかどうか、対象者の募集は順調であるか、データの収集に漏れがないか等の確認を行う。また平成30年7月1日に研究協力者との会議を行い、研究の進捗状況および今後の計画について話し合う予定となっている。平成31年度は、目標症例数に達するまで、もしくは平成31年6月まで調査を実施する。平成31年7月以降は、得られたデータの解析および、学会発表、論文執筆を行う。協力医療機関において、調査員を雇用し、研修を行うことにかかる費用を計上していたが、すでに調査を開始した機関において、面接調査の経験が豊かな調査員が雇用されていたことなどの理由により、調査員雇用や研修にかかる費用が一部不要となったことが、次年度使用額が生じた理由である。また研究協力者が集まって行う会議を実施する予定であったが、予定が平成30年7月にずれたという事情もある。今後の使用計画としては、平成30年度以降、全国の研究協力者を招集して会議を実施することや、これから調査を開始する医療機関における調査員の雇用や研修にかかる費用等に使用する予定である。協力医療機関のスタッフの異動や退職により、予定よりも対象者の募集が遅れている。今年度は、新たな調査協力機関を募り、調査を実施する予定である。そのため、次年度使用額については、新たな協力施設における評価スタッフの研修および打ち合わせの実施にかかる謝金や旅費、研究協力者への謝金等に使用する予定である。

また2019年度は最終年度であるため、調査によって得られたデータの解析に用いるソフト、および研究成果の発表にかかる旅費、印刷費、業務委託費(英文校正等)なども必要となる。
日本人乳幼児におけるオノマトペの理解とその発達

乳幼児の言語発達には養育者からの言語入力が大きな影響を与えると考えられている。養育者が乳幼児向けに話すときに使われるInfant-Directed Speech(IDS)は、ゆっくりと、誇張した表現で、育児語やオノマトペを多用するという傾向があることが知られている。本研究では、IDSで頻繁に使用されるオノマトペを乳幼児がどのように理解、獲得するのかを明らかにすることを目的とした。採用第3年度は、言語獲得期の乳児におけるオノマトペの理解に関して、触覚オノマトペの理解に触経験が与える影響の検討を行った。触覚オノマトペの直感的な理解の可能性がありつつも、明確な理解を示していない言語獲得初期の12ヵ月児を対象に検討を行ったところ、触経験の影響は特に見られなかった。また、乳幼児の語彙学習に与える言語入力の影響を明確化するため、発話分析を行うことで、日本人養育者におけるInfant-Directed Speech(IDS)の特徴を検討したところ、養育者によるオノマトペや育児語の使用は子どもが2歳から3歳の間に減少し、成人語の使用が増えることが分かった。さらに、オノマトペ使用に関しては、使用のされ方(名詞、動詞、+する、副詞)によってもその発達的変化が異なることが分かった。さらに、養育者のIDSの使用に、乳幼児の言語獲得への足場かけ的側面があることを鑑みると、乳幼児が、オノマトペ等を含むIDSがどのような場面で使われるかを認識することは、自身の言語学習にプラスに働くと考えられる。幼児を対象に、聞き手に不適切な話し方をすることの社会的意味の理解を検討したところ、不適切な話し方の選択が不快感を与えることは、7歳児ごろまで待たなければ理解が見られず、IDS等の話し方の選択の意味の理解には比較的時間がかかることが示唆された。28年度が最終年度であるため、記入しない。研究1年目は、(1)幼児におけるオノマトペの共感覚的な理解に関しての研究を国際誌に投稿し、(2)言語獲得前期および言語獲得期の乳児におけるオノマトペの理解に関して、オノマトペと一般語の理解を比較することで検討を進めた。さらに、(3)養育者によるIDSで使われる語彙の特徴を改めて検討すること、および、(4)乳幼児はIDSがどのような場面で使われるととらえているかに関しても検討を行うことで、乳幼児のオノマトペ理解の包括的な解明に努めた。その結果、(2)言語獲得初期の乳児でも、オノマトペの意味を直感的に理解している可能性が示唆されつつある。また、(3)IDSではAdult-Directed Speech(ADS)に比べ、確かにオノマトペ使用頻度が高く、また、格助詞の脱落頻度が高いことなどが明らかになった。次年度は、オノマトペ使用とIDSの他の特徴との関連を明らかにしたい。さらに、(4)2歳前後の乳幼児であってもIDSとADSを聞き手によって使い分けていることの理解は始まっているが、まだ不完全である可能性が示唆された。研究2年目は、昨年度に引き続き、研究1として、言語獲得前期および言語獲得期の乳児におけるオノマトペの理解に関して、実験の実施および分析を進めた。言語前期の9ヶ月児、言語獲得初期の12ヵ月児、言語爆発期の20ヶ月児を対象に、オノマトペの直感的な理解が可能かを、一般語との比較を通して検討したところ、各月齢で異なる注視パタンを示すことがわかった。また、乳幼児の語彙学習に与える言語入力の影響を明確化するため、研究2として、発話分析を行うことで、日本人養育者におけるIDSの特徴を検討したところ、IDSは幼児の年齢の影響を受けて変化し、親が持つ子どもへのことばかけの信念と関連することがわかった.さらに、IDSが言語獲得の足場かけ的側面を持つことを鑑みると、IDSの使用場面を認識することは、乳幼児の言語学習にプラスに働くと考えられる。これを踏まえ、研究3として乳幼児におけるIDSおよびAdult-Directed Speech(ADS)の使用場面の理解を検討したところ、2歳前後の乳幼児であってもIDSとADSの使用場面の理解は始まっているが、まだ不完全である可能性が示唆された。本課題に関して国際学会で2件の発表を行い、また、国内誌で論文が採択されたため。

養育者が乳幼児向けに話すときに使われるInfant-Directed Speech(IDS)は、ゆっくりと、誇張した表現で、育児語やオノマトペを多用するという傾向があることが知られている。本研究では、IDSで頻繁に使用されるオノマトペを乳幼児がどのように理解、獲得するのかを明らかにすることを目的とした。採用第3年度は、言語獲得期の乳児におけるオノマトペの理解に関して、触覚オノマトペの理解に触経験が与える影響の検討を行った。触覚オノマトペの直感的な理解の可能性がありつつも、明確な理解を示していない言語獲得初期の12ヵ月児を対象に検討を行ったところ、触経験の影響は特に見られなかった。また、乳幼児の語彙学習に与える言語入力の影響を明確化するため、発話分析を行うことで、日本人養育者におけるInfant-Directed Speech(IDS)の特徴を検討したところ、養育者によるオノマトペや育児語の使用は子どもが2歳から3歳の間に減少し、成人語の使用が増えることが分かった。さらに、オノマトペ使用に関しては、使用のされ方(名詞、動詞、+する、副詞)によってもその発達的変化が異なることが分かった。さらに、養育者のIDSの使用に、乳幼児の言語獲得への足場かけ的側面があることを鑑みると、乳幼児が、オノマトペ等を含むIDSがどのような場面で使われるかを認識することは、自身の言語学習にプラスに働くと考えられる。幼児を対象に、聞き手に不適切な話し方をすることの社会的意味の理解を検討したところ、不適切な話し方の選択が不快感を与えることは、7歳児ごろまで待たなければ理解が見られず、IDS等の話し方の選択の意味の理解には比較的時間がかかることが示唆された。研究1年目は、乳児を対象とした実験を実施、次年度前半にはデータの収集が終えられる予定である。また、当初の計画に加え(3)(4)に関しても検討を進めた。研究成果は、国内外の学会で報告し、さらに次年度の国際学会での発表が採択されている。したがって、概ね順調に進展していると考える。現在分析中のデータを国内外の学会で報告、また論文を投稿し、国際誌での採択を目指す。さらに、触覚経験が乳幼児のオノマトペ認識に与える影響及び養育者によるIDSにおけるオノマトペ使用とIDSの他の特徴との関連を検討する。28年度が最終年度であるため、記入しない。投稿中の論文の採択を目指す。また、(2)言語獲得前期および言語獲得期の乳児におけるオノマトペの理解に関しては今年度内にデータをまとめ、国際誌への投稿を目指す。さらに、触覚経験がオノマトペ認識に与える影響を追加検討する。(3)養育者によるIDSで使われる語彙の特徴の検討は、養育者のオノマトペ使用とIDSの他の特徴との関連を明らかにする。(4)乳幼児がIDSをどのような場面で使われるととらえているかに関してもデータをまとめ、国際誌への投稿を目指す。
神経変性疾患におけるタウ蛋白蓄積機構の解明と臨床診断への応用

1)高齢者でみられる運動障害・痴呆を呈する疾患の中で異常タウ蛋白の蓄積がみられるタウオパチーの病態解明をすすめるためタウのアイソフォーのうち4リピートタウを認識する抗体を作製した。この抗体を用いて4リピートタウが蓄積する進行性核上性麻痺(PSP)の剖検脳を調べアストロサイトに4リピートタウが蓄積する点を明らかにした。髄液中の4リピートタウを測定することによりこれらの疾患を診断するためELSAにより高感度で4リピートタウを測定する系を確立した。現在、PSPや大脳基底核変性症の患者さんで倫理委員会の承認をえて髄液の4リピートタウを測定中である。2)タウの遺伝子に異常によるタウ蓄積症はタウ蓄積症の発症メカニズムを解明するのに重要であるが本邦での実態を解明するためタウ遺伝子の検索をおこった。本邦初のP301L変異の家系を見いだし報告した。またその後P301L変異のもう1家系もみいだし、この2家系でのハプロタイプ解析により、本邦の家系では欧米で報告されているものとは異なる祖先からのなることを明らかにした。さらに新変異L266Vの家系を発見し、その剖検脳で従来の報告にはないタウの神経細胞、アストロサイトの蓄積形態をみいだした。3)定量的RT-PCR法により大脳皮質基底核変性症(CBD)の大脳皮質とCBD, PSPの淡蒼球では4R/3Rの比が高くなっているが、免疫組織化学の結果と合わせて、スプライシングと翻訳後の修飾の両方の病態が考えられた。タウオパチーにおけるタウmRNAの変化タウ蛋白の異常蓄積をきたすタウオパチーの中で進行性核上性麻痺(PSP)や大脳基底核変性症(CBD)でタウ蛋白のアイソフォームの4Rタウのみが蓄積する機序を明らかにするために、定量的RT-PCR法をもちいてタウ蛋白のアイソフォームの4Rタウと3RタウのmRNAを測定する条件を確立した.タウオパチーの中で4Rタウのみが蓄積する進行性核上性麻痺(PSP)6例、大脳皮質基底核変性症(CBD)5例、対照例5例の剖検時の凍結脳を測定した.対照例の前頭葉皮質では4Rタウと3Rタウの比率が一定であるのに対し、CBDでは4Rの比率が有意に高かった(vs.control : P<0.05).PSPの前頭葉では様々であり対照と差がなく、淡蒼球ではPSPとCBDともに対照例に比べて4Rの比率が高かった.免疫組織化学による異常蓄積タウの程度とは明らかな相関はみられなかった.今までの結果からはこれらの疾患ではmRNAのレベルで4Rが増える機序が働いているが、更に4Rタウのみが沈着するのには転写、翻訳後の変化が推定される.髄液の4Rタウの測定作製したExono10抗体を用いてELISA法により測定法の確立をはかっている.リコンビナント・タウを用いて検量線をえがき、ナノグラムのレベルまでの4Rタウを測定できることがわかった.更に微量のタウを測定するための精度を上げる検討をおこなっている.また、タウ遺伝子の新変異の家系も発見した.本家系においても上記の検討を行って行く予定である.タウオパチーにおけるタウmRNAの変化進行性核上性麻痘(PSP)と大脳基底核変性症(CBD)で、定量的RT-PCR法をもちいてタウ蛋白のmRNAの測定を行った。対照例の前頭葉皮質では4Rタウと3Rタウが一定であるのに対し、CBDでは4Rの比率が有意に高かった(vs. control : P<0.05)。PSPの前頭葉では様々であり対照と差がなく、淡蒼球ではPSPとCBDともに対照例に比べて4Rの比率が高かった。免疫組織化学による異常蓄積タウの程度とは明らかな相関はみられなかった。これらの疾患ではmRNAのレベルで4Rが増える機序が働いているが、更に4Rタウのみが沈着するのには翻訳後の変化が推定される。これらの結果をまとめて雑誌に報告した。

髄液の4Rタウの測定作製したExon 10抗体を用いてELISA法による測定法を確立した。髄液中のタウを測定には検出感度をあげる必要があり用いる抗体の工夫を行っている。またPSP, CBDでexon2,3を含むタウ蛋白のアイソフォームが蓄積タウに含まれるかどうかをみるためexon2ないし3を含むアイソフォームを認識する抗体を作製した。現在これらの抗体の特異性をCBD, PSPの切片をもちいて検討中である。タウ遺伝子の新規変異をもつ家系の発見とその病態解析L266Vの変異をもつ17番染色体に連鎖する前頭側頭型痴呆とパーキンソニズムの家系を見いだした。その病理像,蓄積タウに生化学的性状,遺伝子変異が蓄積タウをきたす機序の一部を明らかにし,雑誌に発表した。1)高齢者でみられる運動障害・痴呆を呈する疾患の中で異常タウ蛋白の蓄積がみられるタウオパチーの病態解明をすすめるためタウのアイソフォーのうち4リピートタウを認識する抗体を作製した。この抗体を用いて4リピートタウが蓄積する進行性核上性麻痺(PSP)の剖検脳を調べアストロサイトに4リピートタウが蓄積する点を明らかにした。髄液中の4リピートタウを測定することによりこれらの疾患を診断するためELSAにより高感度で4リピートタウを測定する系を確立した。現在、PSPや大脳基底核変性症の患者さんで倫理委員会の承認をえて髄液の4リピートタウを測定中である。2)タウの遺伝子に異常によるタウ蓄積症はタウ蓄積症の発症メカニズムを解明するのに重要であるが本邦での実態を解明するためタウ遺伝子の検索をおこった。本邦初のP301L変異の家系を見いだし報告した。またその後P301L変異のもう1家系もみいだし、この2家系でのハプロタイプ解析により、本邦の家系では欧米で報告されているものとは異なる祖先からのなることを明らかにした。さらに新変異L266Vの家系を発見し、その剖検脳で従来の報告にはないタウの神経細胞、アストロサイトの蓄積形態をみいだした。3)PSPの脳を病理学的に検索しパーキンソン病の脳でみられるLewy小体がみられα-シヌクレインの蓄積がみられることを報告した。また多系統萎縮症とPSPの合併という希有な例も見出し、タウの蓄積とα-シヌクレインの蓄積には関連があることを示唆するデータを得た。
異種有機分子間混晶における分子認識と光反応性

1.異種分子間の混晶の光反応:従来から進めてきた有機混晶の固相光反応を発展させた。具体的には、ニトロベンズアルデヒドとインドールとの光縮合、ベンズイミダゾールの2、3-ジメチルナフタレンへの光付加、カルバゾールあるいはその他のNH複素環化合物のトランス-スチルベンへの光付加、二分子間の光水素移動反応として、ベンゾフェノンと各種の水素供与体(デュレン、ベンズヒドロール等)間の反応、デュロキノンとデュレン間の反応、に成功した。これらのうち、デュロキノン-デュレン系を除いてはすべて両基質の微結晶混合物の界面で起こっていることを明らかにした。2.異種有機分子間の分子化合物の単結晶化と構造解析:今までいくつかの異種有機分子間で溶融-再固化法により結晶性の分子化合物(二分子結晶)が生成することを、粉末X線回折、示差熱分析等により実証した。また、以下の2種の化合物の組合せでは溶液からの結晶化により二分子結晶を単結晶として得る事に成功し、これらのX線結晶解析を行った。(A)デュロキノンとデュレン(2:1),(B)フェナントレンと3-インドール酢酸、(C)(S)-(+)-2-(6-メトキシ-2-ナフチル)プロピオン酸とテトラシアノベンゼン、(D)4-(2,4,6-トリイソプロピルベンゾイル)安息香酸とL-プロリノール。混晶における分子配列と化学反応性との関連性:結晶解析により分子配列のわかった二分子結晶における分子配列と反応の選択性との関連を明らかにした。特に(B)では新しい概念である化学量論的増感反応でインドール酢酸の脱炭酸反応が起こること、(C)ではラジカル中間体を経る光縮合反応でchiralityが保持されること、(D)では不斉導入反応が起こることを示した。
クロマチン制御因子ポリコーム群と転写因子のクロストークによる胚体外組織発生の制御

クロマチン制御因子ポリコーム群による胚体外組織発生の制御機構を理解する目的で、Ring1A/Bコンディショナル欠損TS細胞およびXEN細胞を作成し、解析を行った。Ring1A/Bを欠損したTS細胞は未分化培養条件(+FGF4,+MEF)で維持が可能であったが、分化条件下(-FGF4,-MEF)で分化に遅延が見られた。Ring1A/Bの標的遺伝子のうち、分化遅延の原因となる遺伝子を発現アレイおよびChIP-on-chip解析によりスクリーニングしたところ、Cdx2, Eomes, Sox2をはじめとする転写因子群が同定された。これらの転写因子の発現はFGF4またはMEFからのシグナルに依存しており、シグナルの除去に応答して発現が抑制される過程にポリコーム群Ring1A/Bが必要であることが示唆された。一方、XEN細胞はBMP4存在下で臓側内胚葉(visceral endoderm)へ分化することが知られているが、Ring1A/B欠損XEN細胞はBMP非存在下でも臓側内胚葉へ偏った分化傾向を示した。発現アレイとChIP-on-chip解析を行ったところ、XEN細胞においてBMP4投与依存性に発現上昇する転写因子の多くがRing1A/Bの標的遺伝子になっており、Ring1A/B欠損XEN細胞でも発現が上昇していることが分かった。TS細胞とXEN細胞を用いた以上の解析結果は、胚体外組織由来の幹細胞が細胞外シグナルに応答して分化する過程にポリコーム群が関与していることを示唆していており、幹細胞が分化能を維持するメカニズムを理解する上で重要な知見だと思われる。栄養外胚葉の発生分化におけるポリコーム群の機能を調べるため、Ring1A/Bコンディショナルノックアウトの栄養芽幹(TS)細胞を樹立した。Ring1A/B欠損TS細胞は、分化条件(FGF4, MEFを除去)で培養しても未分化マーカー遺伝子(Cdx2, Eomes, Sox2等)の発現低下があまり見られず、Giant細胞へ殆ど分化しないことが分かった。またゲノムワイド解析により、Cdx2, Eomes, Sox2を含む5つの転写因子がRing1Bの標的遺伝子として同定された。実際これらの遺伝子のプロモーター領域において、ポリコーム群によるヒストン修飾レベルが分化誘導直後に急速に上昇する。さらに、これら転写因子の強制発現によりTS細胞の分化に障害が生じることも分かった。以上より、ポリコーム群は重要な転写因子群の発現抑制を介してTS細胞の分化促進に寄与すると考えられる。このことは細胞外からのシグナルに応答して細胞が分化する際に、ポリコーム群の機能が重要であることを示唆していると思われる。次に、胚体外内胚葉におけるポリコーム群の機能を調べるため、Ring1A/Bコンディショナルノックアウトの胚性幹(ES)細胞にGata6GRを導入し、薬剤投与によりXEN様細胞(胚体外内胚葉細胞)を樹立した。このXEN様細胞においてRing1A/Bを欠損させると細胞形態が上皮様に変化し、Cdx2, Eomesといった胚体外外胚葉で特異的に発現する遺伝子の発現上昇が見られた。そこで野生型胚盤胞とのキメラを作成して、胚体のどの部分に生着するかを調べたところ、胚体外内胚葉のみならず胚体外外胚葉への生着が認められた。よって、ポリコーム群はXEN様細胞の細胞系譜を維持するのに必要であると考えられる。以上の知見は、哺乳類初期発生過程における細胞分化や運命維持を制御する分子基盤の解明に大きく貢献すると思われる。
環境水中のナノ・マイクロ粒子の実時間測定法の開発と応用

本研究では、大気環境学・海洋環境学・環境工学など多くの分野への応用を想定した、流体中に漂うナノ・マイクロ粒子の実時間測定法を開発する。レーザービームを横断する粒子の前方散乱波の振幅・位相を検出することで、単一粒子の体積と複素誘電率の実部・虚部を測定する技術を確立する。さらに、粒子後方に放出される微弱光を集める光学系を組み合わせ、他の分光分析を同時に実施することで体積・複素誘電率以外の粒子の特徴検出も可能にする。開発した測定法が、環境動態解析や産業計測に対してどの程度有効であるのかを、標準試料を用いた実験、現場観測、電子顕微鏡観察との比較から確かめる。
環インド洋西域諸社会における伝統の継承と創出-アジア・アフリカ・アラブ文化の同化と差異化

東アフリカ海岸部からマダガスカルにかけての環インド洋西部地域は、アジア・アフリカ・アラブ・ヨーロッパなどのさよざまに異なる文化伝統の相互作用が繰り返され、多元的文化状況が生み出されてきた特異な地域である。本研究計画は、従来単一の地域として研究されることの少なかったこの地域全体を一つの研究対象ととらえ、圏内の各個別社会を相互に関連づけると同時に、広域社会の特性が個別社会の生活圏の中にどのように読み取れるかを探ろうとするものであった。地域が広汎にわたり、また研究代表者、研究分担者各自の時間的制約にもかかわらず、本研究計画はこの地域の多元的文化状況を理解する研究の端緒となり得たという点で、一定の成果をあげることに成功したと言える。研究代表者、各研究分担者とも、各自の研究地域において広汎な海上及び陸上の交易や人の移動、特殊な儀礼的知識や情報の移動などのネットワークの存在を確認し、それらを実証的に跡付けるとともに、このネットワークに接続した各地域社会における固有の文化状況や問題にも理解を深めることができた。これらの知見を総合して、一つのまとまった成果とするには未だ時期尚早ではあるが、今後のこの地域での研究の確固たる土台は築けたと確信している。また本研究計画を実施する過程で、マダガスカル、タンザニア両国においてそれぞれの国の研究機関や研究者と共同研究のプロジェクトを発足することができたことも、これらの地域における今後の研究の発展につながる成果である。すでにマダガスカルでは初年度より共同の調査を行なっており、またタンザニアにおいてもダルエスサラーム大学と一橋大学杜会学部のあいだで研究協力の協定を結ぶことができた。調査はおおむね当初の計画通り進行した。タンザニア、コモロ、マダガスカルとも、国内の政治状況あるいは現地研究機関との折衝のために、幾分予期せぬ時間を費やしたものの、調査そのものへの支障はきたさなかった。研究代表者、各研究分担者とも、当該の研究地域において、広範な海上および陸上の交易ネットワークの存在を確認し、次年度よりの一層インテンシブな調査への足がかりをうることができた。タンザニアにおいては、このネットワークの中核は大陸海岸部と島しょ部とのあいだの人と物の交流に見られ、またマダガスカルにおいては東部海岸地域と中部高原地域とのあいだの伝統的知識の交流に見られる。コモロはまさしく由来を異にする人間集団の交流の現場であり、研究協力者(花淵)によって、この交流の実態について分析が進められた。本研究の課題であるインド洋西域という地域規定に即していえば、マダガスカルとタンザニア海岸部との接触についての調査は諸についたばかりであるが、本年度の調査によって、歴史的に多重な交流があることが、マダガスカル側の複数のインフォーマントによって示唆された。さらに、当該諸社会において伝統ないし古来の知識とされているものの多くの部分が、人々によっては意識されないものの、歴史的には東南アジア起源、あるいはアラブ・イスラム起源のものであることが、明らかになった。こうした伝統と、さらにはより近年になって海外からもたらされた文物の緊張関係についても、当該の諸社会において予備的ではあるが、調査が進められた。タンザニア、コモロ、マダガスカルとも、国内の政治状況あるいは現地研究機関との折衝を含め、計画外の要因によって支障をきたすことはなかった。研究代表者、各研究分担者とも、当該の研究地域において、広範な海上及び陸上の交易ネットワークの存在を確認したうえ、一層インテンシブな調査を行うことができ、最終年度に向けて多くの成果を得た。マダガスカルにおいてこのネットワークの中核は、東部海岸地域と中部高原地域とのあいだの伝統的知識の交流に見られる。特にこの中間地帯の森林域における現代まで続く人の移動が、物品・知識両面において全マダガスカル的意義を持ちうることが認識された。コモロはまさしく由来を異にする人間集団の交流の現場であり、花渕によって、この交流の実態について分析が進められた。

タンザニアにおいては、とりわけザンジバル・ペンバとケニアのモンバサ、タンザニアのタンガ、ダルエスサラームを互いに結び付けるマシュア、ジャハズと呼ばれる大小の帆船による交易のネットワークが確認された。単に物品のみならず、呪術的知識や治療技術もこれらの地域で頻繁に交流し、各地域のコスモロジーに独特のコラージュ的相貌を付加している。本研究の課題であるインド洋西域という地域規定に即していえば、マダガスカルとタンザニア海岸部との接触についての調査は緒についたばかりであるが、昨年度および本年度の調査によって、歴史的に多重な交流があることが、マダガスカル側の複数のインフォーマントによって示唆された。さらに、当該諸社会において伝統ないし古来の知識とされているものの多くの部分が、人々によっては意識されないものの、歴史的には東南アジア起源、あるいはアラブ・イスラム起源のものであることが、明らかになった。とりわけ後者は、イスラム的知識の土着化という観点から、世界的な視野において特徴的である。調査はおおむね当初の計画通りに進行した。コモロでの予測外の政治的混乱にもかかわらず、研究協力者としてこの地域の調査にあたった花渕は、支障なく調査を完了することが出来た。またケニア海岸地方の治安の悪化、洪水の影響による道路網の分断も調査に対する深刻な障害とはならなかった。各研究分担者、研究代表者はいずれも各人の担当研究地域において、交易や文化的交流や文化的交流の広域ネットワークや、それぞれの地域における異なる伝統の衝突や融合の実態の調査にあたり、各担当地域に固有な問題を取り出すことに成功している。マダガスカルにおいては、東部海岸地域と中部高原地域との間の伝統的知識の交流が、各地域集団のもつ自己の伝統についての意識や、歴史意識、生業形態の変化や新たな適応戦略の選択などのなかに検証された。コモロおいては島民たちの間で広く実践されている憑依霊についての儀礼の中に異なる伝統の接合が検証されたと同時に、憑依霊信仰とイスラムの間の複雑なダイナミズムが生活の場の中で観察された。タンザニア島嶼部では、独立後のプランテーション経営・支配者層であるアラブ、インド人の抜けた後を埋めた信興官僚、事業家たちと土地の人々との複雑な対抗関係が、イスラムとキリスト教をめぐるさまざまな語りのなかに検証された。海岸部においては、広域ネットワークをケニア側から検証するとともに、人々の過去の出稼ぎや交流の記憶のなかに、それぞれの地域において外部に向かう想像力が共同体内の実践にどのように織り込まれてきたかを検証した。今年度新たに足羽によって着手されたモ-リシャスにおいては、インド洋西域において近年大きく変化した政治的・経済的関係の中で、島の人々の言語意識がどのように変容したかが、短期の調査にもかかわらず明らかにされた。
高齢社会における食べる機能の維持・回復に求められる基礎研究の動向調査

高齢社会への対応もままならないうちに超高齢社会に移行しつつある。このような時代にあって、医療と福祉のあり方が問い直されている。特に寝たきり老人の増加は、医療費や介護費の増加だけでなく、生活の自由を失った本人にとっても不幸なことである。最近、脳血管障害患者のリハビリテーションにたずさわる人たちが、患者の要求に応える形で経管的栄養摂取を口腔からの栄養摂取に切り替えたところ、意識レベルの向上や全身状態の改善に効果が見られたと報告している。このように、医療や介護の現場ではQOLの向上を目指して新しい治療方法を模索し、その過程で基礎的な知識にその糸口を求めてきている。このような現状の中で基礎医学を専攻する我々に対しても社会の要望に耳を傾け、少しでも社会に還元できる研究体制を整えることが求められている。そこで、咀嚼・嚥下・唾液分泌・味覚・神経の5つの分野から選別した専門家でその糸口を探ることとした。医療機関・介護福祉機関での聞き取り調査、および摂食・嚥下リハビリテーションに従事する専門家の協力を得て口腔機能研究者に対する要望を調査した。その結果、(1)咀嚼運動と嚥下の関連、(2)唾液分泌促進方法、(3)口腔内食塊移送における舌の役割、(4)嚥下の誘発域、(5)嚥下機能に適した食塊の大きさ、など口腔機能に関する具体的な研究テーマが提示された。この点をふまえ、カナダのトロント大学歯学部を訪れカナダにおける摂食・嚥下機能障害に対する基礎的研究の動向を調査した。その結果、歯学部で直接研究・教育を行ってはいないものの、リハビリセンターでは歯科医が積極的に治療・研究に従事していることがわかった。この点では日本の対応も決して遅いものではなく、この分野の研究を推進することで世界に先駆けた成果をあげられる可能性が示された。
大気バイオエアロゾルの粒径分布に着目した動態解明とモニタリングに関する研究

本研究では,富山大学理学部屋上を中心に大気試料を分級捕集し,細菌・真菌密度と細菌群集構造の解析を行い,それらの地域や粒径による差の把握を目指している。大気試料は,2016年8月2018年1月に富山大学理学部屋上と横浜市の建物の屋上で、アンダーセンエアサンプラーを用いて9段階に分級捕集(分級範囲:0.4311.0μm)した。それらの試料からDNAを抽出後,全細菌と全真菌の定量をリアルタイムPCR法を用いて行った。さらに,一部の試料について,次世代シークエンサーMiseq(Illumina)を用いた細菌群集構造解析を行った。アンダーセンエアサンプラーを用いて分級捕集した試料について定量した結果,興味深いことに全真菌は,真菌の胞子のサイズに近い2.17.0μmの範囲の粒径で高い値を示し,富山市と横浜市で最大ピークとなる粒径に違いが見られた。この結果から,地域によって真菌の優占種が異なっていた可能性が示唆された。一方,全細菌は粒径差が見られなかった。さらに,2016年に分級捕集した試料の細菌群集構造解析の結果,門レベルではProteobacteria門,Actinobacteria門,Firmicutes門が優占していた。目レベルでは,Actinomycetales目,Bacillales目,Rhizobiales目,Sphingomonadales目が優占していた。富山市と横浜市の地域による差に関して,Rhizobiales目は富山市で多く認められたのに対し,Bacillales目は横浜市で多く認められ,地域によって細菌叢を構成する主要な細菌に差異が見られた。粒径による差に関して,Rhizobiales目は粒径2.1μm以上の粗大粒子側で多いのに対して,Actinomycetales目やBacillales目は微小粒子側で多いことが示唆された。粒径別に捕集した大気試料について,リアルタイムPCR法による細菌・真菌密度の定量と次世代シークエンサーを用いた微生物群集構造解析はおおむね順調に進んでいる。これらの結果を日本微生物生態学会第32回大会と南米チリでの国際学会で報告することができた。また,本研究の関連論文が学術雑誌に掲載された。今後も定期的に大気試料のサンプリングを行うと共に,リアルタイムPCR法による細菌・真菌密度の定量と次世代シークエンサーを用いた微生物群集構造解析を進める。特に,検出した微生物種が人の健康,生態系,農業などへ及ぼす影響を文献等を参考に評価する予定である。エアロゾルの粒径別化学組成については多くの研究者により研究されているが,バイオエアロゾルの粒径別組成(微生物の種組成)については研究が十分行われてきていないので,本研究で取り組んだ。日本のほぼ中央で日本海側に位置する富山市と,太平洋側で首都圏に位置する横浜市に定点を設けて,PM2.5サンプリング装置を用い,日本の環境基準であるPM2.5とSPM-PM2.5を捕集した。次に,試料に含まれる細菌や真菌などの微生物について,分子生物学的手法で存在量と微生物群集構造を解析し,それらの地域や粒径による差の把握を目指した。まず,2016年8月12月に採取した試料について,リアルタイムPCRを用いた全細菌と全真菌の定量を検討した結果,大気中の細菌と真菌はいずれも微小なPM2.5より粗大なSPM-PM2.5に多く存在すると考えられた。さらに,次世代シークエンサーIllumina MiSeqを用いた細菌群集構造解析を行ったところ,門レベルではProteobacteria門,Actinobacteria門,Firmicutes門が優占していた。目レベルでは, Actinomycetales目,Rhizobiales目,Enterobacteriales目,Clostridiales目,Sphingomonadales目,Bacillales目,Pseudomonadales目,Lactobacillales目が優占していた。地域による差に関して,Rhizobiales目は富山市で多く認められたのに対し,Clostridiales目は横浜市で多く認められ,地域によって細菌叢を構成する主要な細菌に差異が見られた。また,粒径による差に関して,Rhizobiales目やClostridiales目はSPM-PM2.5に多く認められたが,Actinomycetales目はPM2.5に多く認められた。これらの結果を環境微生物系学会合同大会2017で報告することができた。

この結果から,地域によって真菌の優占種が異なっていた可能性が示唆された。一方,全細菌は粒径差が見られなかった。さらに,2016年に分級捕集した試料の細菌群集構造解析の結果,門レベルではProteobacteria門,Actinobacteria門,Firmicutes門が優占していた。目レベルでは,Actinomycetales目,Bacillales目,Rhizobiales目,Sphingomonadales目が優占していた。富山市と横浜市の地域による差に関して,Rhizobiales目は富山市で多く認められたのに対し,Bacillales目は横浜市で多く認められ,地域によって細菌叢を構成する主要な細菌に差異が見られた。粒径による差に関して,Rhizobiales目は粒径2.1μm以上の粗大粒子側で多いのに対して,Actinomycetales目やBacillales目は微小粒子側で多いことが示唆された。粒径別に捕集した大気試料について,リアルタイムPCR法による細菌・真菌密度の定量と次世代シークエンサーを用いた微生物群集構造解析はおおむね順調に進んでいる。これらの結果を日本微生物生態学会第32回大会と南米チリでの国際学会で報告することができた。また,本研究の関連論文が学術雑誌に掲載された。今後も定期的に大気試料のサンプリングを行うと共に,リアルタイムPCR法による細菌・真菌密度の定量と次世代シークエンサーを用いた微生物群集構造解析を進める。特に,アンダーセンエアサンプラーを用いて分級捕集した試料について解析する予定である。特に,検出した微生物種が人の健康,生態系,農業などへ及ぼす影響を文献等を参考に評価する予定である。旅費において少額の残金が生じたので,次年度に繰り越して,旅費として使用する予定である。
膵癌IVR治療における新規デバイスと治療法の開発

血管解剖および血行動態の複雑である膵癌に対する局所カテーテル治療のデバイスとして、マイクロカテーテルの挿入可能な埋め込み方ポートを開発した。ポートを製作後にポートからのマイクロカテーテル排出試験および血管モデルを用いた選択的カテーテル挿入の評価を行い性能の評価を行った。さらにブタを用いた実験では、留置したデバイスからマイクロカテーテルを挿入し、肝動脈分枝の選択を3週間にわたり毎週繰り返し行った。デバイスを用いた治療の実行可能性が証明された。現在臨床使用されている動注用ポートの内部構造を変化させ、マイクロカテーテルが挿入可能なポートを開発した。ポートはチタン製で内部をロート状構造にして、マイクロカテーテルがスムーズに通過できるように工夫した。蓋部分はシリコンゴムを取り付けた。まず、生体外の実験として、シリコンゴムの穿刺点は同心円状に異なる距離をとり、マイクロカテーテルがロート部を通過してコネクター部分から排出可能かを調査した。ロート部形状の変更が必要であったが、最終形状においては、全ての箇所の穿刺において排出が可能であった。次にコネクター部分に留置カテーテルを接続し、留置カテーテル内へマイクロカテーテルが挿入できるかを調査した。初期のバージョンでは排出できず変更が必要であった。最終形状においては、多少の抵抗はあるが、問題なく挿入可能であることを確認できた。さらに血管モデルを用いて、5Frのヘパリンコーティングした留置カテーテルの側孔からマイクロカテーテルを排出し、肝動脈内へマイクロカテーテルが挿入可能であることを確認した。留置カテーテル先端は胃十二指腸動脈を想定した分枝に挿入し先端固定を行った。側孔は臨床で行っている通りの方法で作成した。本研究結果をもとに生体内での実行可能性を調査する動物実験に移行できるものと考える。生体内実験計画はすでに作成が終了しており、動物実験施設の倫理委員会への申請を行い、承認が得られている。生体外での実験結果、ポート内部構造と排出部を作成し直す必要がでたため、生体外での実験開始が遅れた。前年度に開発・改良したマイクロカテーテルが挿入可能なポートをブタに埋没するパイロット実験を実施した。ブタの大腿動脈を穿刺し、血管造影用カテーテルを用いてガイドワイヤーを胃十二指腸動脈に挿入。カテーテル交換法でヘパリンコーティングした留置カテーテルを留置した。カテーテル先端は、側孔から挿入したマイクロカテーテルを用いて金属コイルで先端固定した。カテーテル中枢側は開発したポートに接続して大腿部皮下に埋没した。留置直後はポートから挿入したマイクロカテーテルを肝動脈まで誘導することができ、リピオドールとエピルビシンのエマルジョンを注入した。エマルジョンは目的の肝区域に分布し、開発中の新規ポートからマイクロカテーテルをして行う血管塞栓術が可能であることが明らかになった。ブタは3週間飼育され、7日ごとにシステムの状況を観察したが、カテーテル挿入部で屈曲が生じ、開創修復を繰り返し行った。ポート埋没部位は、ブタの下腿伸展・屈曲を考慮する必要があることが判明した。本研究の目的は動脈穿刺なしに繰り返し選択的動注療法を行うデバイス開発であるため、安定したカテーテル留置が可能な実験モデルを構築する必要がある。留置翌週の観察で、カテーテル挿入部での屈曲が判明し、実験継続を断念した。ブタの下腿の運動によるものと考えられるが、可動性の低い部位からのカテーテル挿入が必要と考察し、現在検討中である。ブタを用いて、マイクロカテーテル挿入可能な動注ポートシステムを用いた繰り返す選択的肝動脈塞栓療法の実行可能性を評価した。前年度の動物実験では、ブタの股関節の屈曲により留置したカテーテルが折れ曲がるというトラブルがあり中止となった。そのため、今回は、ブタの大腿動脈をカットダウンで露出させ、股関節屈曲の影響の少ない腸骨動脈中枢側からカテーテル挿入を行った。結果、3週間の経過観察で合計3回の選択的肝動脈塞栓術を行うことに成功した。動注ポートを経皮的に穿刺し、ガイドワイヤーを挿入。マイクロカテーテルを追従させてた。挿入したマイクロカテーテルはX線透視下に肝動脈を選択。肝動脈からリピオドールを注入しCTを撮像。目的肝区域に薬剤が注入されたことを確認した。施設倫理委員会の承認を得て、すでに動物実験の準備はすべて整っている。今年度上半期には実験を行えるものと考えている。パイロット実験で明らかになったカテーテル挿入部での屈曲の問題を解決し、留置後7日後ごとに繰り返し血管塞栓術を施行する実験を行う。生体外評価で時間を要し、動物実験開始が遅れたため次年度使用額が生じた。パイロット実験でカテーテル屈曲が生じ、実験モデルの見直しに再検討を要した。そのため予定の実験を行うことができなかった。生体内における実行可能性と安全性を評価するための、豚を用いた動物実験に使用する。新たに2頭のブタで合計6週間、繰り返えしカテーテル治療を行う実験を行う。