hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
新規プリオン結合因子ソーティリンによるプリオン病治療基盤技術の開発

新規プリオン結合因子としてソーティリンを同定した。ソーティリンは、プリオンのソーティング受容体として作用し、細胞表面からの取り込みおよび、後期エンドソームへのソーティングに関与していることを示した。ソーティリンの機能抑制が異常プリオン分解抑制、過剰蓄積を引き起こすことも示した。また、プリオン感染は、ソーティリンの過剰分解を引き起こしその機能を障害していることを示した。さらに、ソーティリン過剰発現によるその機能回復が、有意に異常プリオンの減少を引き起こすことを示した。また、ソーティリン欠損マウスでは、プリオン感染に対して早期に異常プリオンが蓄積し、潜伏期間および生存期間が短縮することを示した。平成26年度実施計画に基づき以下のことを明らかにした。ソーティリンは、プリオンタンパク質(PrP)のN末端領域に結合していることそして、この領域を欠損するPrPは、ソーティリン機能抑制と同様その分解が抑制され細胞表面に過剰に蓄積し、PrPとソーティリンの結合がPrP分解に重要であることを示した。また、PrPはソーティリンと細胞表面で複合体を形成していることさらに、細胞表面だけではなく初期および後期エンドソームでも複合体を形成していることを見出し、細胞表面からのPrPの取込みだけでなく細胞内におけるPrPの輸送にもソーティリンが関与していると考えられた。また、N2a細胞由来のソーティリン欠損(Sort-KO)細胞、PrP欠損N2a細胞およびソーティリン/PrP二重欠損N2a細胞を構築した。そして、Sort-KO細胞ではPrP発現量が高くなっていることを示した。さらに、Sort-KO細胞および野生型(WT)細胞におけるプリオン感染実験を実施し、ウエスタンブロットによる解析ではSort-KO細胞はWT細胞と比べて異常プリオンタンパク質が過剰に形成されていることを明らかにした。また、この時、Sort-KO細胞では約5倍プリオン感染細胞の割合が高くなっており、ソーティリン機能欠損はプリオン感染に対して高感受性を示すことを見出した。生体においても、ソーティリン機能欠損は過剰なPrP発現を引き起こすのかを明らかにするために、Sort-KOマウスおよびWTマウス脳におけるPrP発現量を比較したところ、Sort-KOマウスではPrP発現量が高くなっていることを明らかにした。さらに、当初計画に基づきマウスにおけるプリオン感染実験を開始した。感染実験は現在も継続中だが、途中経過として60dpiにおける異常プリオン蓄積量を比較したところすでに、Sort-KOマウスでは有意に異常プリオン蓄積量が高いことを明らかにした。平成27年度に得られた研究成果を以下にまとめる。1.N2a細胞を用いプリオン感染実験を行い、異常プリオン蓄積とSortilin発現量との関係をウエスタンブロットおよび間接蛍光抗体法により解析し結果、プリオン感染後十分に感染が拡大していない感染初期からSortilin発現低下が生じていることを明らかにした。2.これまでの研究結果から、プリオン感染細胞ではSortilinタンパク質の分解が亢進していると考えられたため、プリオン感染細胞をプロテアソームおよびリソソーム阻害剤で処理したところ、リソソーム阻害剤で処理した場合のみSortilin発現量が回復しことから、リソソームにおける分解の亢進により発現量がしていることを明らかにした。そして、この分解の亢進は、レトロマー複合体によるエンドソームからトランスゴルジネットワークへのSortilin回収機構が正常に作用していないためであることを明らかにした。3.プリオン感染野生型細胞およびSortilin欠損細胞において、異常プリオン分解を比較した結果、Sortilin欠損細胞では異常プリオン分解が抑制されていることを明らかにした。また、Sortilin過剰発現は異常プリオンの減少を引き起こすことを明らかにし、Sortilinの機能回復がプリオン病治療に有効であることを示した。4. Sortilinは、内在性異常プリオンだけでなく外来性異常プリオンの処理にも作用しており、この機能が抑制されることでSortilin欠損細胞がプリオン感染に対して高感受性を示すことを明らかにした。5.前年度に引き続き、野生型およびSortilin欠損マウスでのプリオン感染実験、個体数を増やし実施した結果、プリオン感染に対してSortilin欠損マウスでは有意に潜伏期間、生存期間が短縮することを明らかにした。平成27年度に予定していた実施項目すべてにおいて目的が達成された。具体的には、計画した、(i)Sortilin発現量低下が生じるプリオン感染ステージ、(ii)プリオン感染によるSortilin発現低下メカニズム、(iii)異常プリン分解に対するSortilinの役割、(iv)Sortilin機能欠損がプリオン高感受性を示すメカニズム、を明らかにした。また、平成27年度に実施を計画していた個体数を増やしたSortilin欠損マウスにおけるプリオン感染実験も当初計画通り実施した。マウスにおけるプリオン感染実験は、通常半年1年程度を要するため平成27年度は感染実験の実施のみを計画していたが、その解析をすでに開始しており当初予定以上に研究が進んでいる。平成27年度の研究成果により、Sortilinの機能回復がプリオン病の原因である異常プリオンの除去に有効であることまた、プリオン感染によるSortilinの発現量低下は、レトロマー複合体とSortilinとの相互作用の障害が原因でSortilinがエンドソームからトランスゴルジネットワークに回収されなくなりその結果、Sortilinが過剰にリソソームに流入し分解が亢進していることを明らかにした。そこで、平成28年度は、レトロマー複合体をSortilinとの相互作用を回復することでSortilinの発現量低下を抑制し、異常プリオン蓄積を抑制することを試みた。

まず、Sortilinと直接結合するレトロマー複合体複合体構成因子であるVPS35の過剰発現を試みた。しかし、細胞に導入したVPS35遺伝子の転写は上昇していたが、VPS35タンパク質の発現量増加は認められず、翻訳の抑制や分解によりVPS35発現量が調節されていることが示唆された。これらの結果から、今後、VPS35発現量抑制機構の解明がSortilin発現量回復において重要であり、プリオン病治療法開発においても重要であると考えられた。平成27年度に実施したプリオン感染実験において、Sortilin欠損マウスではプリオン感染に対して潜伏期間および生存期間が有意に短縮することを明らかにした。平成28年度は、継時的に脳内に蓄積される異常プリオン量、グリオーシスなどの生化学的、病理学的病態を解析した結果、Sortilin欠損マウスにでは、野生型マウスと比較して早期に異常プリオンが蓄積しさらに、グリオーシスも早期に生じることを明らかにした。これらことから、Sortilin機能はプリオン病の病態に大きく関与しており、プリオン感染によるSortilin機能抑制を抑制することがプリオン病治療において有効であることが示唆された。新規プリオン結合因子としてソーティリンを同定した。ソーティリンは、プリオンのソーティング受容体として作用し、細胞表面からの取り込みおよび、後期エンドソームへのソーティングに関与していることを示した。ソーティリンの機能抑制が異常プリオン分解抑制、過剰蓄積を引き起こすことも示した。また、プリオン感染は、ソーティリンの過剰分解を引き起こしその機能を障害していることを示した。さらに、ソーティリン過剰発現によるその機能回復が、有意に異常プリオンの減少を引き起こすことを示した。また、ソーティリン欠損マウスでは、プリオン感染に対して早期に異常プリオンが蓄積し、潜伏期間および生存期間が短縮することを示した。H26年度実施計画で予定していた実施項目に対して、(1)PrP分解に対するソーティリンの作用機序の解明に対しては、計画通り、細胞膜、初期および後期エンドソームでソーティリン/PrP複合体が形成されていることを明らかにしさらに、PrPのN末端領域を介して複合体を形成することも明らかにした。また、複合体形成が抑制されることでPrP分解が抑制されることも明らかにした。(2)ソーティリン欠損細胞を用いたプリオン分解およびプリオン感染に対するソーティリン機能の解明の準備としてH26年度はソーティリン欠損細胞の構築とSortilin変異体の作成を計画していたが、これらについてはすでに構築済みである。(3)マウスにおけるSortilin機能とPrP発現量との関係についても、当初計画通りSort-KOマウスおよびWTマウスにおけるPrP発現量の比較によりSort-KOマウスでPrP発現量が上昇していることを明らかにしている。
癌特異的ペプチドを標的とした新規drug delivery systemの開発

5種類の扁平上皮癌細胞(HSC2、HSC3、HSC4、Sa3、H1)を用いた2つのmicroarray解析の結果を基に、細胞膜上に共通して高い発現を示す遺伝子からcDNA libraryにクローンが存在し、かつqRT-PCR法で口腔癌細胞において高発現となる遺伝子を検索し、癌組織特異的遺伝子候補としてOLR1遺伝子とEBI3遺伝子を選定した。正常ヒト胎児線維芽細胞と樹状細胞に候補遺伝子を搭載した発現ベクターを導入し、導入効率とエキソソーム抽出効率を比較した。さらに、当該エキソソームを用いて正常細胞と癌細胞に対する吸着能の比較をし、エキソソームの癌細胞への非特異的吸着能を確認した。本研究では、修飾エキソソームの各種癌への特異的吸着性と標的細胞への「注入」の2つの事項に関し、効率を高めるために適した標的細胞表面発現ペプチドを検索同定し、これを搭載したエキソソームによる新規drug deliverysystemの開発を目的とする。このため、以下の研究項目から構成されている。1癌組織特異的ペプチドの探索2修飾エキソソームの作製と吸着能評価実験本年度は下記のように実施した。1癌組織特異的ペプチドの探索:当科で過去に実施した独自cDNAmicroarray作成研究の際に作成したcDNA libraryと、多くの研究で実施し蓄積したmicroarray解析databaseの比較を行ない、候補cDNAを選別した。具体的には5種類の扁平上皮癌細胞株(HSC2、HSC3、HSC4、Sa3、H1)を用いた2つのmicroarray解析の結果を基に、共通して高い発現を示し、かつ細胞膜上に高い発現を示す遺伝子を最初に50個選定した。さらに、その中からcDNA libraryにクローンが存在し、かつqRT-PCR法で口腔癌細胞において高発現となる遺伝子を検索し、癌組織特異的ペプチド候補とした。一方、ファージディスプレイ法による口腔癌細胞表面分子の探索では、抽出したクローン中のファージDNAの確認が困難であることが判明した。洗浄操作の繰り返しで流出してしまうファージDNAが多数存在しており、次年度に技術的な問題を解決する予定である。2修飾エキソソームの作製と吸着能評価実験:マウス樹状細胞は、既存のtsDCを購入した。増殖速度が遅く生育が環境に左右されやすい点が培養の課題となっている。この培養上清より超遠心法にてエキソソームを十分量確保する手技は確立できた。次年度の課題として、エキソソーム膜状へのターゲットペプチドの発現と内部へのsiRNAの導入手技の確立を予定している。ファージディスプレイ法は困難であるが、data baseからのターゲットペプチドの選定は成果を上げている。来年度の内容であるエキソソームの回収技術も確立できている。今後は、選定したターゲットペプチドのエキソソーム膜状への発現とその確認、さらにエキソソーム内へのsiRNAの導入技術の確立が課題である。医師薬学歯学・外科系歯学
環境ホルモン(内分泌かく乱物質)のアレルギー性鼻炎に及ぼす影響

近年アレルギー性鼻炎患者が急増している。本州は山林にスギが多いという植生から、春季のスギ花粉症患者が多いことは勿論、ダニやハウスダストなど通年性アレルギー性鼻炎患者数も極めて多く、かつ発症も低年齢化している。一方、環境中にダイオキシン類などの環境ホルモン(内分泌かく乱物質)が体内に残留し、われわれの健康に影響を与える恐れがあることが指摘されているものの、その関心は発癌性、生殖器系や甲状腺の機能に関するものが多く、アレルギー性鼻炎に及ぼす影響についての研究は極めて少ない。アレルギー反応において中心的な役割を果たしている好酸球及び好中球に及ぼす環境ホルモンの影響を研究することは、この疾患の病態を解明し治療に道を開くものとなると考えられる。また、ダイオキシン等の環境ホルモンの急性毒性に関しては報告されているが、低濃度のダイオキシンに長時間暴露された場合の影響についての検討はなされていない。特に、ダイオキシンの好中球に及ぼす影響についての検討は皆無である。近年、共焦点レーザー顕微鏡を用いることによって、好中球の鼻粘膜への遊走及び局所での活性化の機序について単離細胞レベルで解析することが可能となった。本研究では、好中球が低濃度の環境ホルモンに長時間暴露された場合の好酸球の生存率及び機能について検討することが目的である低濃度のダイオキシンと好中球を混合培養した後、接着分子の発現を検討したところ、ダイオキシンによってCD11bの発現は上昇し、セレクチンの発現が減少した。これら結果は、ダイオキシンが好中球の接着分子の発現を変化させることによって炎症反応と組織障害を促進し、アレルギー反応を遷延化させる可能性を示唆するものと考えられた。さらに、この接着分子増強における機序について各種阻害剤を用いて検討した。その結果、チロジンキナーゼが関与している可能性が高いことが示唆された。ダイオキシン等の環境ホルモンの急性毒性に関しては報告されているが、低濃度のダイオキシンに長時間暴露された場合の影響についての検討はなされていない。特に、ダイオキシンの好中球および好酸球に及ぼす影響についての検討は皆無である。本研究では、好中球が低濃度の環境ホルモンに長時間暴露された場合の好酸球の生存率及び機能について検討することが目的である。低濃度のダイオキシンと好中球を混合培養した後、接着分子の発現を検討したところ、ダイオキシンによってCD 11 bの発現は上昇し、セレクチンの発現が減少した。また、ダイオキシンは好酸球由来の細胞株であるEol-1のVEGFのmRNAを濃度依存性に増強させた。これは、ダイオキシンがアレルギー炎症の増悪に関与する可能性を示唆するものと考えられた。

本研究では、好中球が低濃度の環境ホルモンに長時間暴露された場合の好中球の生存率及び機能について検討することが目的である。低濃度のダイオキシンと好中球を混合培養した後、接着分子の発現を検討したところ、ダイオキシンによってCD 11 bの発現は上昇し、セレクチンの発現が減少した。これら結果は、ダイオキシンが好中球の接着分子の発現を変化させることによって炎症反応と組織障害を促進し、アレルギー反応を遷延化させる可能性を示唆するものと考えられた。さらに、この接着分子増強における機序について各種阻害剤を用いて検討した。その結果、チロジンキナーゼが関与している可能性が高いことが示唆された。また、ダイオキシンは好酸球由来の細胞株であるEol-1のVEGFのmRNAを濃度依存性に増強させた。これは、ダイオキシンがアレルギー炎症の増悪に関与する可能性を示唆するものと考えられた。
窒素デルタドープGaAsからの波長均一オンデマンドもつれ光子対放出の実現

大きな遷移双極子モーメントを持つ物質中の局所電子状態は光子と固体との量子インターフェースを構築する上で不可欠である。半導体中不純物に束縛された励起子は究極の量子ドットであり、発光波長は不純物固有なので均一である。本研究ではわれわれが開発したGaAsへの窒素デルタドーピング技術を利用して2次元に配列した窒素束縛励起子を作製し、歪ポテンシャル制御を通じて均一発光波長で0.85μm光通信バンドで動作するオンデマンド量子もつれ光子対生成を実現した。また、マイクロキャビティと融合させてもつれ光子輻射性能を連続的に制御する技術を開発した。大きな遷移双極子モーメントを持つ物質中の局所電子状態は光子と固体との量子インターフェースを構築する上で不可欠であり、これを利用した究極的な光子操作は、量子通信にかかわる未来型デバイスの基礎原理には欠かせない。従来から研究されている自己形成量子ドットとは異なり、半導体中不純物に束縛された励起子は究極の量子ドットであり、発光波長は不純物固有なので均一である。本研究ではわれわれが開発したGaAsへの窒素デルタドーピング技術を利用して2次元に配列した窒素束縛励起子を作製し、歪ポテンシャル制御を通じて均一発光波長で0.85μm光通信バンドで動作するオンデマンド量子もつれ光子対生成を実現する。また、マイクロキャビティと融合させてもつれ光子輻射性能を連続的に制御する技術を開発する。平成25年は配列した不純物を用いた新しいコンセプトの量子ドットとしてふるまう配列励起子ナノ構造を作製し、励起子微細構造偏光分離特性基礎光物性を明らかにした。励起子微細構造を制御するために、不純物に加わる結晶場の制御や電場・磁場による交換相互作用の精密制御を実施した。具体的には、Q値を制御したキャビティ構造を作製して電子状態と共鳴するキャビティー構造を最適化した。また、分子線エピタキシー結晶成長技術を駆使してGaAs(001)(2×4)再構成表面にプラズマセルで生成した原子状窒素を吸着させた。(001)2次元面内の窒素濃度を変化させて、濃度に応じた電子状態の変化を磁気発光特性によって明らかにした。本研究ではわれわれが開発したGaAsへの窒素デルタドーピング技術を利用して2次元に配列した窒素束縛励起子を作製し、歪ポテンシャル制御を通じて均一発光波長で0.85μm光通信バンドで動作するオンデマンド量子もつれ光子対生成を実現を目指した。具体的には、AlAs/GaAs DBR構造によりQ値を制御したキャビティ構造を作製して強い光閉じ込めを実現し、均一な励起子数に依存した励起子-光結合速度の制御を通じてもつれ光子対放出の輻射性能を制御する技術を構築した。また、シミュレーションにより励起子-光結合速度の制御性を明らかにした。本研究の特徴は、電子状態が均一な窒素束縛励起子を利用することによって、これまでは不可能であった励起子の歪ポテンシャル制御によるもつれ状態を創り出すことを可能にするだけでなく、励起子とキャビティフォトンのスケーラブルな相互作用によって輻射性能も制御できる。半導体電子工学(001)2次元面内で窒素濃度を変化させたときの電子状態の変化において、非常に顕著な0次元から2次元への物性変化(転移)を確認することに成功した。これは当初予定していない範囲のことで、濃度による電子状態の制御が非常に精度よく実現できることを実証したといえる。当初の計画を変更することなく以下のように研究を進める。成26年にはマイクロキャビティによる光閉じ込めを行い、均一な励起子数に依存した励起子-光結合速度の制御を通じてもつれ光子対放出の輻射性能を制御する。具体的には、はAlAs/GaAsDBR構造によりQ値を10000程度まで制御したキャビティ構造を作製して、窒素ペアの高均一な電子状態とキャビティフォトンの結合に関わる基礎科学を明らかにし、マイクロキャビティの作製と光子放出特性の詳細な評価を実施する。また、輻射性能の制御による高効率もつれ光子対放出デバイスの試作する。

さまざまなQ値のキャビティ構造を作製し、励起子-キャビティ結合速度のスケーラビリティーをラビ分裂幅や輻射緩和時間の変化を通じて観測する。輻射性能の変化を蛍光寿命測定で明らかにする。サブマイクロメートル径のDBRマイクロポストキャビティを作製して、ドットからの光子は波数選択則が無いのでキャビティモードと結合させることで指向性のあるもつれ光子対放出を実証する。平成26年度予算と合算して使用するため。平成26年度予算と合算して速やかに使用する。
20世紀初頭ロシアにおける<新しい人間>の創造と演劇

20世紀初頭ロシアのさまざまな思想潮流における〈新しい人間〉を創造する手段としての演劇の理論を研究し、それぞれの潮流における演劇理論と人間観および世界観との相互関係を分析した。また20世紀初頭ロシア思想・文化史の新たな枠組みを構築することを目的として、さまざまな潮流の間でおこなわれた演劇をめぐる論争を検証し、それらを<新しい人間>の創造をめぐる論争として再解釈した。本年度は3年間の研究の1年目に当たる。本年度の研究計画は、1900-1910年代のロシア諸思想潮流における<新しい人間>創造の理念と演劇理論との相互関連を検討することにあった。本年度は特に後期象徴主義とマルクス主義を重点的にとりあげ、その<新しい人間>観、背後の世界観、演劇理論を抽出した。双方においてともに演劇が<新しい人間>創造の手段とみなされていること、さらに世界観の相違にもかかわらず、後期象徴主義とマルクス主義の演劇観にいくつかの共通性が存在しでいることを明らかにした。演劇が個人主義の克服と新たな共同体の実現にとって有効とされている点、役者と観衆との乖離を克服した集団創造、祝祭劇が理想化されている点などである。こうした成果のいくつかについては、現在、論考を準備中である。本年度発表済みの研究成果は以下の2点である。論文「ヴァノフとチュルコフにおける<実在性>概念の二面性」(『ロシア史研究』第85号3-19頁)は、後期象徴主義者の中でとりわけ演劇に着目した二人の代表的理論家の、演劇理論の基盤をなす世界観について、従来の学説(後期象徴主義者は形而上学的本質のみを<実在性>みなしたと主張する)とは異なる新たな解釈を提示したものである。後期象徴主義者たちが形而上学的本質のみならず現象世界にも<実在性>を回復させようとしていたことを明らかにした。共著書、松井康浩編『20世紀ロシア史と日露関係の展望』(九州大学出版会、2010年)では第1章「20世紀初頭ロシア思想の新たな見方:知的転換と知識人の間の論争をめぐって」(13-57頁)を分担執筆し、20世紀初頭ロシア思想を、新たな世界観の担い手である<新しい人間>創造の手段をめぐる論争としてとらえなおす可能性を探った。本年度は3年間の研究の2年目にあたる。本年度の研究計画は、昨年度の研究の成果を受け、1900-1910年代のロシアの諸潮流における演劇の実践活動を跡づけ、〈新しい人間〉創造実験の実態を明らかにし、さらに諸潮流間での〈新しい人間〉と演劇とをめぐる相互交流と論争の展開を具体的に追跡し、論争の論点と構図を明確にすることにあった。本年度はまず、演劇を〈新しい人間〉創造の手段とみなす考えをとりわけ強くうちだした後期象徴主義者イヴァノブとチュルコフをとりあげ、その演劇理論をより詳細に解明するとともに、彼らの独創的な世界観である〈神秘的無政府主義〉との関連を探った。とくに、形而上学的本質世界の直観的・神秘的把握による自己確立の理念と、祝祭的演劇による新しい共同体創造の理念とが、イヴァノブとチュルコフにおいてどのようにして包摂・統合されているのかを、両者の著作を用いて検証した。次に、〈神秘的無政府主義〉をめぐって象徴主義の内部で展開された激しい論争を、〈新しい人間〉創造手段としての新しい演劇のありかたをめぐる論争という視角から、当時の雑誌を主要な資料として用いて追跡し、論点の整理をおこなった。さらに、昨年度の研究にひきつづいて、後期象徴主義とマルクス主義との演劇理論をめぐる知的交流、類似した理論が共有される過程を、両者が共に参加した論集などを用いて跡づけた。こうした今年度の研究成果については、昨年度の研究成果で得られた知見もおりまぜつつ、現在論考を準備中である。本年度は3年間の研究の3年目にあたる。本年度の研究計画は、前2年間の研究の成果を受け、演劇の理論と実践の検討により明らかになった知見を、1900-1910年代ロシア文化・思想史の新たな枠組へと組み込み、近代を超克する<新たな世界観>とそれを体現する<新しい人間>の創造の理念とその実現手段をめぐる論争という視角から、20世紀初頭ロシア思想・文化史の再構築・記述を試みることにあった。本年度既に発表済みの研究成果は以下の2点である。論文佐藤正則「ゲオルギー・チュルコフの<神秘的アナーキズム>」(『言語文化論究』第28号)においては、象徴主義内部のみならずマルクス主義陣営においても大きな議論を呼んだ<神秘的アナーキズム>の世界観と演劇理論を解明することで、神秘的アナーキズムがもたらした論点を明確化し、象徴主義内部での論争、さらに象徴主義とマルクス主義と間の論争を、新たな視点から再検討するための礎を得た。また、共著書小松久男・塩川伸明・沼野充義(編)『ユーラシア世界越境と変容の場第3巻記憶とユートピァ』(東京大学出版会)(近刊)では、佐藤正則「革命と哲学世紀転換期

ロシアにおけるマルクス主義者たちの哲学的模索と論争」を分担執筆し、マルクス主義者を3つのグループに分け、それらの間での世界観をめぐる論争を跡付け、「認識理論」「摩史の必然性と人間の自由」「価値と倫理」という3つの論点を抽出するとともに、思考様式の共通性を明るみにした。これらの論争点は人間の精神性や文化運動(とりわけ演劇)の問題と深く関連している。このほか、マルクス主義者とりわけボリシェヴィキのプロレタリア演劇理論について、またマルクス主義者と象徴主義者との論争について、より具体的に検討した論考を現在準備中である。
悪性疾患患児の母親の攻撃性に関する研究

小児の白血病や固形腫瘍などの悪性疾患は近年治療成績が向上してきたが,それらの病気はなお「不治の病」というイメージが強いため,我が子が「小児がん」という告知を受けた親の衝撃は大きく計り知れない。小児看護では患児の看護のみならずその家族への看護も必要であるが,悪性疾患患児の母親への援助はまだ十分ではない。そこで一番身近で患児を支える母親への看護を検討する際の基礎とするため,悪性疾患の子どもを持った母親の病気の受容過程を,攻撃性の変化から調査している。調査は東北大学医学部附属病院小児病棟に入院した子どもの母親のうち同意を得られた母親に対して,Buss & Durkee(1957)の攻撃性尺度を中心に,Rosenberg(1965)の自尊感情尺度,大日向(1988)の母性意識尺度,田研式親子関係診断テストを加えて行っている。これまで収集できたデータでは,入院し病名告知を受けて23日後のBuss & Durkee(1957)の攻撃性尺度のうち,身体的攻撃尺度(10項目),言語的攻撃尺度(13項目),短気尺度(11項目)では平均点が低いが,恨み尺度(8項目)では平均点が高かった。また治療の進行に従って,攻撃性が低くなっていく傾向にあった。今後はさらにデータを収集し,攻撃性の変化と病気の受容との関連性および自尊感情,母性意識,養育態度との関連性,その他の関連因子を明らかにしていき,悪性疾患患児への母親への看護を検討していく予定である。
アミノ酸飢餓後のタンパク質異化を制御する新規分子メカニズムの解明

アミノ酸飢餓に対する細胞応答において、細菌Obgタンパク質ファミリーのヒトのホモローグであるObgH2(別名GTPBP10)が果たす役割、特にObgH2がアミノ酸欠乏を感知してタンパク質異化を制御する機構を検討していくために、HEK293T細胞を、コントロールsiRNAあるいはObgH2 siRNAで処理後、アミノ酸を欠いた培地で培養し、mTORC1シグナルおよびオートファジーをウエスタンブロッティングで検出した。その結果、ObgH2のノックダウンでは、アミノ酸飢餓後のmTORC1シグナルの減弱およびオートファジーの亢進に大きな変化は検知できなかった。また、同様の実験系でリボソームでの翻訳制御に関与するeIF2αおよびeEF2のリン酸化状態を観察したが、ObgH2のノックダウンで明らかな変化は認めなかった。さらに、Obgタンパク質のもう一つのヒトホモローグであるObgH1の関与も考え、ObgH1とObgH2を同時にノックダウンする実験も行ったが、アミノ酸飢餓後のシグナルに大きな変化は認められなかった。一方、GST-ObgH2融合タンパク質を用いたプルダウン実験で同定したObgH2結合候補タンパク質のひとつであるNucleophosminとの関連について解析を開始した。mycタグをつけたObgH2(myc-ObgH2)を細胞に過剰発現して免疫沈降し、myc-ObgH2と内在性のNucleophosminが結合していることを確認した。Nucleophosminは核小体での役割がよく知られているタンパク質であるが、ObgH2が主に局在するミトコンドリアにも存在していることが報告されており、今後、特にミトコンドリアでのObgH2とNucleophosminの相互作用について検討していく予定である。アミノ酸飢餓後の細胞応答におけるObgH2のはたらきについて検討し、大きな関与がないという結果となったが、その関係を明確にすることができた。また、ObgH2と結合しうるタンパク質の同定によって、ObgH2の機能解明の糸口をつかむことができたため、おおむね順調に経過していると考える。ObgH2結合候補タンパク質のひとつとして同定したNucleophosminとの関係について解析していく。また、2018年に2つの研究グループから、GTPBP10(ObgH2の別名)がミトコンドリアのリボソームの生合成に関与していることが報告されているので、それらの報告も参考にして検討を進めていく予定である。アミノ酸飢餓に対する細胞応答におけるObgH2の役割、特にObgH2がアミノ酸不足を感知してタンパク質異化を制御する機構を解明していくため、平成29年度はまず、作製した抗ObgH2抗体が、ウエスタンブロッティング等に使用可能であることをObgH2のsiRNAを用いたノックダウン実験で確認した。また、抗ObgH2抗体を用いた免疫蛍光染色では、ObgH2タンパク質は、細胞質、特にミトコンドリアなどの細胞小器官に局在する可能性を見出した。次に、アミノ酸飢餓後に生じる既知のシグナルとObgH2との関連を検討するため、コントロールsiRNAあるいはObgH2 siRNAで処理したHEK293T細胞をアミノ酸不含培地で培養し、mTORC1経路、オートファジー、GCN2経路の活性化状態を、抗phospho-S6 kinase抗体、抗LC3B抗体、抗phospho-eIF2α抗体などを用いて観察した。これまでのところ、ObgH2のノックダウンで、アミノ酸飢餓後のmTORC1経路、オートファジー、GCN2経路のいずれにも大きな変化はない結果を得ている。一方、ObgH2タンパク質と結合するタンパク質を同定するため、GST-ObgH2融合タンパク質を用いたプルダウン実験を行い、いくつかのリボソーム関連タンパク質を同定した。また、ヒトObgH2 cDNAには、NCBIのREFSEQと比較して2か所の塩基が異なっている(両方ともアミノ酸も変化している)ものがあることから、ObgH2には遺伝子多型が存在する可能性があることがわかった。平成29年度に得たい結果であった、アミノ酸飢餓後におけるObgH2と他の既知シグナルとの関係がほぼ明らかとなったこと、そして、ObgH2と結合するいくつかの候補タンパク質を同定できたことなどから、ほぼ順調に進捗していると考えられる。

Nucleophosminは核小体での役割がよく知られているタンパク質であるが、ObgH2が主に局在するミトコンドリアにも存在していることが報告されており、今後、特にミトコンドリアでのObgH2とNucleophosminの相互作用について検討していく予定である。アミノ酸飢餓後の細胞応答におけるObgH2のはたらきについて検討し、大きな関与がないという結果となったが、その関係を明確にすることができた。また、ObgH2と結合しうるタンパク質の同定によって、ObgH2の機能解明の糸口をつかむことができたため、おおむね順調に経過していると考える。平成29年度に同定したObgH2と結合する可能性のあるタンパク質とObgH2が実際に細胞内で結合しているのかを検討し、ObgH2の機能を探っていく。一方、ObgH2が、種々のストレスから細胞を保護する分子メカニズムについても検討していく。ObgH2結合候補タンパク質のひとつとして同定したNucleophosminとの関係について解析していく。また、2018年に2つの研究グループから、GTPBP10(ObgH2の別名)がミトコンドリアのリボソームの生合成に関与していることが報告されているので、それらの報告も参考にして検討を進めていく予定である。平成29年度に行ったObgH2と結合するタンパク質の同定に関する一部の解析を平成30年度に行うこととしたため。結合候補タンパク質とObgH2が細胞内で実際に結合しているかを、候補タンパク質の抗体を購入して確認する。他の解析との兼ね合いで、ストレス応答におけるObgH2の役割の解析については、次年度に行うこととしたため。ストレス応答に関連する分子の抗体を購入して実験を行う。井澤一郎.二分脊椎と葉酸.日本二分脊椎・水頭症研究振興財団機関誌Brain and Spinal Cord “B & C".25(4): 2-3, 2018.
動作解析のための着衣内の身体計測点追跡用機器の開発と改良

着衣している内側(着衣下)の計測ポイントを特定できるマーカーの開発と改良を目的に、被服のゆるみや被服素材とその厚さや色などによる影響が最小限で布帛を透過する赤外線マーカーに着目して検討をした。すなわち、衣服のゆとり量、素材の材質、色、厚さなどによる透過性と其の精度について、実験者を試作し、着用実験からその関係を明らかにして、衣服表面のポイントと衣服下の計測ポイントとのずれを計測することが出来るようになった。室内の自然照明において、特殊なカメラを使用せずに計測用マーカーを追跡することが可能であることが検証された。そこで、上衣(前あきシャツ)下衣(パンツ)を試作し、ランプの出力、方向、大きさなど、人が着衣した状態での適否に関して着用実験を行った。その結果、実際に衣服と身体表面の計測点の動作中のずれや着衣のままで姿勢変化や動作による身体寸法の変化を捉えることが可能であることが確認された。よって、今回試作したマーカーは動作解析に有用であるとの結論に達した。本研究の成果を「着衣内の身体計測点追跡のための計測マーカーについて」と題する研究報告としてまとめ、学会誌投稿の準備が整い、現在英文等の最終チェックをしている。また、本研究に関連して、(社)日本家政学会第58回大会(秋田、2006.5)において以下の報告をした。・「福祉教育に向けた衣服着脱時の障害者体験に関する基礎的研究」平林優子、大村知子・「ローライズパンツのはき心地に関する研究」大村知子、山内幸恵さらに、本年度の成果を(社)日本家政学会第59回大会(岐阜、2007.5)において発表する。・「前あきシャツにおけるサイズの違いによる着用状態への影響」平林優子、大村知子他2名・「パンツの着崩れに関する研究」大村知子、山内幸恵衣服の厚さやゆるみの多少、衣服素材などに左右されることなく着衣の内側の身体計測点を特定できる被服を透過する赤外線マーカーの改良を現在試みている。そのために、衣服のゆとり量、素材、形、色などの条件をかえて実験用の上衣を試作した。実験着の色はできるだけ明度の低い色が、衣服下の計測点を検出しやすいことがわかったが、ゆとりとの関係については現在実験中であり、色とゆとりとの関係とが明らかになれば衣服と身体表面とのずれの解明が可能になる。室内での自然照明の状態で、衣服下の複数のマーカーを捉えられることが可能な赤外線ビデオカメラを株式会社ヒューテック改造製作に依頼し、性能の検証を繰り返している段階である。マーカーの試作と改良を平行して進めて、随時、試着実験を繰り返しながら検討中である。他方、従来、使用していた三次元動作解析用ソフトの改良(ヒューテック社製)もあわせて進め、これまで動作途中での分析の分割ができなかったので、1動作中の画面を分割セーブすることができるように改良した。マーカーの性能を利用して動作追跡によったローライズパンツを実験衣とした動作による着崩れと身体計測点のずれについての実験結果を平成18年度(社)日本家政学会大会(2006年5月28日、秋田)において報告する。・「前あきシャツにおけるサイズの違いによる着用状態への影響」平林優子、大村知子他2名・「パンツの着崩れに関する研究」大村知子、山内幸恵
擬似位相整合素子を用いた時空間光ソリトンの発生と超短光パルス制御応用

2次元的擬似位相整合素子を用いた第2高調波発生:2次非線形媒質中の時間ソリトンは、基本波と第2高調波が互いに捕捉しあいながら伝搬する。この時間ソリトンを小さな光強度で実現するためには、非線形媒質中での基本波と第2高調波の群速度を等しくする必要がある(群速度整合)。これはすなわち、超短光パルスの第2高調波発生効率を向上させるために必要な条件と同一である。そこで、非平行な擬似位相整合配置を利用して群速度整合を達成する手法について実験と理論解析を行った。ニオブ酸リチウムの周期分極反転素子を作製し、それを用いてフェムト秒光パルスの第2高調波発生を行い、効率50%以上を達成した。擬似位相整合素子中の断熱的なソリトン生成に関する理論解析:擬似位相整合かつ群速度整合配置における断熱的ソリトン生成の理論検討を行った。擬似位相整合素子では、素子の分極反転周期を変化させることで容易に位相不整合量を制御できるが、この位相不整合量の空間分布を設計することにより、思惑の時間ソリトンを断熱的に生成できることが明らかになった。特に、分極反転周期に線形チャープをもつMgO:LiNbO_3素子の第2高調波発生配置を利用すれば、パルス幅100fsの入射基本波から、約20mmの伝搬長でともに約30fsに圧縮された基本波・第2高調波のソリトンパルスを励起できることがわかった。
粘膜類天疱瘡患者血中抗ラミニン332抗体のエピトープ解析

本研究では、ラミニン332のβ3鎖とVII型コラーゲンが結合しているという既知の研究結果から、ラミニン332抗体(特にβ3鎖抗体)が陽性の粘膜類天疱瘡患者では、この結合部位に対する自己抗体が存在しており、競合的に結合することで蛋白同士の結合を阻害し、皮膚および粘膜の接着障害をきたすのではないかという仮設を立て、その検証を行う。まず、既知の報告でVII型コラーゲンとの結合部位とされているラミニンβ3鎖のLE domain (EGF-like domain)、またはそのフラグメントと、VII型コラーゲンとの結合をみる実験を行うために、ヒトラミニンβ3鎖全長、LE domain全長、そのフラグメント(LE domainを3分割)の組み換え蛋白を哺乳細胞株で発現させ、目的蛋白の発現があることをウエスタンブロットで確認した。次に以前より保有している大腸菌発現のVII型コラーゲン組み換え蛋白を用いて、上記蛋白との免疫沈降法を行ったが、過去の報告からは結合することが予想されるラミニンβ3鎖全長、LE domain全長組み換え蛋白も、VII型コラーゲンとの結合を確認することができなかった。表皮角化細胞培養上清中のVII型コラーゲンをVII型コラーゲン抗体を用い精製して使用することを検討したが、発現量が少ないためか十分に精製する事ができなかった。そのため、VII型コラーゲン組み換え蛋白を哺乳細胞株発現へ切り替えることとし、現在プラスミド作製を行っている。当初予定していた研究計画が他のグループによって既に報告されたことにより、研究計画の変更を行う必要があった。新たな研究計画に沿って組み換え蛋白作製を行ったが、追加で組み換え蛋白の作製が必要となり、当初の予定よりも遅れている。必要な組み換え蛋白の作製を行い、蛋白の結合を免疫沈降法で評価する。その後に更にエピトープを絞り込むために合成ペプチドを用いたELISA法を行う予定である。しかし新たな研究計画に沿って、組み換え蛋白作製への準備は進んでいる。新たな研究計画に沿って必要な組み換え蛋白を作製し、実験を遂行する。(理由)当初の実験計画からの変更があったため。(使用計画)研究実績に記載した研究計画に沿って必要な試薬、消耗品の購入に当てる。前述のように、当初の計画より実験の進行が遅れており、それに伴い助成金対象期間の延長を申請した。繰越し使用額は組み換え蛋白の作製、合成ペプチドの作製等に使用する。
心筋内微小循環系の機能的特性とその障害の実験的臨床的解析

本研究は、心筋内微小循環系とくに容量血管の冠循環調節における意義を明らかにし、その病態生理を動物実験および臨床研究により解明することを目的とした。このため動物実験では、冠流入圧を制御しつつ、光ファイバ型レーザドプラ血流計を用いて、心筋内微小循環系への流入部(冠動脈)、流出部(冠静脈)血流を計測した。一方、臨床研究では、80チャネル20MHz超音波血流計を用いて、心臓手術時にヒト冠動静脈血流を計測した。麻酔開胸犬において、光ファイバ型レーザドプラ血流計で、冠静脈血流を計測し、コンピュータにより冠灌流圧と心拍を制御することにより、心筋内微小循環系の容量血管の機能的特性およびそれの冠循環調節における意義の一端を解明した。その結果、心筋肉容量血管が機能的にunstressed volume(UV)と通常のコンプライアンスより構成されていること、UVは血液貯溜に適した特性を有し、大きさが5ml/100g心筋程度であることが明らかとなった。さらに、UVが血液により満たされると有効下流圧の変化を伴わずに心筋流入抵抗が増大すること、拍動性冠静脈血流の調節が主としてUV内血液量により行われていること、が明らかとなった。また、心筋流入血流の抵抗のみならば有効下流圧もまた血液のレオロジカルな性質の影響を受けることを明らかにした。一方、心臓手術時に20MHz80チャネル超音波ドプラ血流計を用いてヒト冠動脈血流を計測することにより、狭窄部およびその下流における血流の流体力学的構造を明らかにした。さらに、圧負荷肥大心の拍動性冠動脈血流の特性を解明した。一方、デュアルコア光ファイバ型レーザドプラ血流計の開発に成功したが、本システムは光ファイバより遠ざかる血流や乱れを有する血流の計測に有効であるので、拍動性心筋冠血流の解析に威力を発揮すると期待される。本研究は,心筋内微小循環系とくに容量血管の冠循環調節における意義を明らかにし,その病態生理を動物実験および臨床研究により解明することを目的とした.このため動物実験では,冠流入圧を制御しつつ,光ファイバ型レーザドプラ血流計を用いて,心筋内微小循環系への流入部(冠動脈),流出部(冠静脈)血流を計測した.一方,臨床研究では,80チャネル20MHz超音波血流計を用いて,心臓手術時にヒト冠動静脈血流を計測した.麻酔開胸犬において,光ファイバ型レーザドプラ血流計で,冠静脈血流を計測し,コンピュータにより冠灌流圧と心拍を制御することにより,心筋内微小循環系の容量血管の機能的特性および,それが拍動性冠静脈血流をいかに調節しているかを明らかにした.その結果,心筋内容量血管は機能的に内圧変化を伴わずに容量の変化しうるunstressed volume(UV)と通常のコンプライアンスより構成されていること,UVは血液貯溜に適した特性を有するがその大きさは5ml/心筋100g程度であることが明らかとなった.次に種々の方法で冠血流を変化させたとき,冠静脈血流は心筋内容量血管に貯溜する血液量と高い相関を示したが,冠静への血流搾り出しの時定数とは有意の相関がなかった.従って,冠静脈血流は,主としてUV内に貯溜する血液量により調節されていると考えられる.心臓手術時に20MHz80チャネル超音波血流計によりヒト冠動脈およびバイパスグラフト内血流速プロフィルを計測した.その結果,狭窄部血流の収縮期成分が多くかつ流れスペクトルが広く心筋への流入が十分得られないことが示された.

また,バイパス部血流については内胸動脈バイパス内の血流速プロフィルが大伏在静脈バイパスのそれに比してより整って放物線状を示し,同バイパスの長期開存率の高さとの関連において興味ある結果であった.ただ,ヒト冠灌流圧制御が困難であるため,ヒト心筋内冠循環系の特性の定量的解析は残された課題となった.本研究の目的は、心筋内容量血管の冠循環調節における意義を明らかにし、その障害の病態生理を、動物実験および臨床例で解明することである。そのため動物実験では、研究代表者らが世界で最初に開発した光ファイバ型レーザドプラ血流計を用いて心筋微小循環系へのinflow部位およびoutflow部位の微小冠動静脈血流を、冠流入を制御しつつ、計測した。一方、臨床例では、これも研究代表者らが開発したフーリエ機能を備えた20MHz80チャネル超音波血流計で、心臓カテーテル時あるいは心臓手術時に、冠動静脈血流を計測した。同時に、装置面の前進として、デュアルコア光ファイバ型レーザドプラ血流計を開発するとともに、20MHz超音波ドプラカテーテルの計測精度の検討を行った。その結果、デュアルコア光ファイバ型レーザドプラ血流計の試作に成功し、コア径、コア間隔の最適化を達成した。デュアルコア・システムは、サンプルボリウムを光ファイバ先端より離れた小さな領域に限定できるため、光ファイバより遠ざかる流れや乱れのある流れの計測に際して、シングルコア・システムより有利であることが明らかとなった。一方、20MHz超音波ドプラカテーテルの精度を検討し、カテーテル自体が血流を乱すことや信号処理上の問題などにより、計測された血流速が真の血流速と比例関係にはあるが、絶対流速の計測は困難であることが明らかとなった。動物実験の結果、心筋内容量血管に貯溜する血流量の増大が、心筋流入血管抵抗を増大させることとけつえきのレオデカルな性質が、心筋内冠血流の抵抗のみならず、有効下流圧にも影響することが明らかとなった。臨床研究では、ヒト圧負荷肥大心における冠動脈血流の拍動特性が、収縮期の著明な逆流出現と拡張期血流の立ち上がり速度の減少により特徴付けられることを明らかにした。これは、肥大心筋と心筋内微小血管系の相互作用により出現すると考えられた。
シリコン基板上の複合圧電ダイアフラム構造を用いた溶液系物性値測定用ラム波センサ

本研究は、酸化亜鉛/パイレックスガラス複合薄膜構造を伝搬する弾性波(ラム波)を用いて、溶液系物性値測定用センサを実現することを目的とした。先ず、ラム波の伝搬特性が溶液の物性値によりどの様に変化するか詳しく検討し、膜厚が非常に小さい場合には、その最低次反対称モードが速度変化率が液体の質量密度によりほぼ決定されることが判った。また、電気的特性や温度安定性などについても詳しく検討し、センサ応用に適した構造を明らかにした。そして、非常に薄い複合薄膜構造が実現できる酸化亜鉛/アルミ箔構造を提案し、実験結果の比較により理論解析の妥当性を示すと共に、質量密度センサとして優れた特性が実現できることを明らかにした。また、このラム波デバイスにガス吸着膜を塗布すれば、同一原理に基づき高感度なガスセンサが構成できることが判った。次に、ウィグナー分布を利用して、測定結果を時間及び周波数領域両面から解析するシステムを構築し、このシステムによりラム波の各モードの応答を視覚的に特徴付けることが可能であることを示した。更に、シリコン基板上に比較的大面積で歪の少ない複合薄膜上に、ラム波励振用のすだれ変換子を形成するプロセスを構築し、試作デバイスによりラム波の励振・検出に成功し、液体センサとして利用可能なことを示した。しかし、設計よりも挿入損失が大きく、より詳細に検討したところ、シリコン基板のエッチャントとして用いたTEAにより、パイレックスガラス薄膜の表面が荒れ、その上に作成した酸化亜鉛薄膜の膜質が劣化したことに起因するが判った。現在、新たな作成プロセスを考案し、その実施に向け検討すると共に、ガスセンサへの応用についても検討している。本研究は、酸化亜鉛/パイレックスガラス複合薄膜構造を伝搬する弾性波(ラム波)を用いて、溶液系物性値測定用センサを実現することを目的としている。先ず、理論解析においては、酸化亜鉛/パイレックスガラス複合ダイアフラム構造について理論解析し、その電気機械結合係数、付加された溶液の弾性波速度とラム波伝搬速度の関係を検討した。その結果、複合薄膜の膜厚を非常に薄くした場合、ラム波の伝搬速度が液体の質量密度に比例することを見い出した。また、液体の付加によってラム波の実効的な電気機械結合係数が変化することを見いだし、現在その振舞いを詳しく調べている。今後、更にラム波の温度安定性を解析し、センサ応用に適したデバイス構造を決定する予定である。一方、複合ダイアフラムの作製プロセスを実験的に検討し、異方性エッチングやスパッタの条件等を検討し、大面積で歪の少ない複合ダイアフラムを作製すると共に、その上にラム波励振用のすだれ変換子を形成するプロセスを確立した。このプロセスに従って、実際にラム波デバイスの試作を行い、ほぼ理論解析に対応したデバイス特性を得ている。また、現有のマイクロコンピュ-タを利用して、デバイス特性のウィグナ-分布を3次元表示するシステムを試作し、実際の弾性波デバイスの特性測定に適用し、その有効性を示している。今後、デバイスの作製プロセスを検討し、特性の改善を図ると共に、シリコンウェハに液溜と液体の導入及び排出経路を作製させた一体構造型の液体センサの実現を試みる。そして、測定結果を多面的に解析し、その結果からラム波の各モ-ドの応答を抽出して観測することにより、溶液系の物性値を換算するセンサシステムの実現を計る予定である。

そして、非常に薄い複合薄膜構造が実現できる酸化亜鉛/アルミ箔構造を提案し、実験結果の比較により理論解析の妥当性を示すと共に、質量密度センサとして優れた特性が実現できることを明らかにした。また、このラム波デバイスにガス吸着膜を塗布すれば、同一原理に基づき高感度なガスセンサが構成できることが判った。次に、ウィグナー分布を利用して、測定結果を時間及び周波数領域両面から解析するシステムを構築し、このシステムによりラム波の各モードの応答を視覚的に特徴付けることが可能であることを示した。更に、シリコン基板上に比較的大面積で歪の少ない複合薄膜上に、ラム波励振用のすだれ変換子を形成するプロセスを構築し、試作デバイスによりラム波励振・検出に成功し、液体センサとして利用可能なことを示した。しかし、設計よりも挿入損失が大きく、より詳細に検討したところ、シリコン基板のエッチャントとして用いたTEAにより、パイレックスガラス薄膜の表面が荒れ、その上に作成した酸化亜鉛薄膜の膜質が劣化したことに起因するが判った。現在、新たな作成プロセスを考案し、その実現に向け検討すると共に、ガスセンサへの応用についても検討している。
早期発症型歯周炎患者に特異的な好中球遺伝子発現

本研究では、歯周疾患感受性に関連する遺伝子を検索するために病態の異なる歯周炎患者の好中球において特異的に誘導される遺伝子についてmRNA発現の違いを一枚のゲル上でfinger printするRNA arbitrarily primed PCR(RAP-PCR)法で検討した。本実験では、典型的な早期発症型歯周炎(EOP)患者6名、対照として成人性歯周炎(AP)患者6名と健常人(H)8名を被験者として選定し、各々の末梢血液より好中球を分離した。合成ペプチドのfMLPによる刺激後、全RNAを抽出し、任意の45種類のRAP-PCR primersを用いてRAP-PCRを行った。その結果、他のグループに比べEOPにおいて37バンドか強く、27バンドが弱く発現した。それらの遺伝子についてクローニング、シーケンシング、プライマー設計及びRT-PCRによる半定量を行った結果、EOPにおいて有意に強く発現する遺伝子としてHeat shock transcription factor 4bが、Hと比較してEOPにおいて有意に低く発現する遺伝子としてKruppel-like zincfinger transcription factor 9とMuskelinが特定された(J Periodont Res,in press)。