hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
省エネルギー熱輸送システム用蓄熱材包含中空粒子の創製

パラフィンは蓄熱効率が高く,高効率の熱輸送システムが期待されるが,乳化剤による乳化方式では高剪断下により乳化パラフィン滴が破壊されてパラフィンと媒体が相分離してしまう。それに対してパラフィンのマイクロカプセル化法ではそのような問題は生じず最も現実的である。しかしながら,奇妙なことにカプセル化によりパラフィンの過冷却の発生や潜熱量の低下が観察されており,この現象は未解明のままである。これらを解消するために,高級アルコールなど高融点試薬を含有させる手法が検討されているが,現象論にとどまっている。本研究では,マイクロカプセル化されたパラフィンの特異な凝固・融解挙動を詳細に検討し,ミクロ空間でのパラフィンの相転移挙動における界面の存在の影響を明らかにする。さらに,独自のマイクロカプセル合成法を熱輸送物質の高効率カプセル化法として確立することを目指している。昨年度は,マイクロカプセル化に伴う潜熱量の低下を抑制/防止することを目的にカプセル壁を構成するポリマーに焦点をあて検討を行った結果,カプセル壁に極性の高い成分を用いることにより,純パラフィンの高い潜熱量を維持したマイクロカプセルの作成に成功した。本年度は,高い潜熱量を維持し,さらに過冷却が抑制されたカプセル粒子の作製を試みた。極性の高い架橋モノマーを用いることにより,高い潜熱量を維持したほぼ真球状のカプセル粒子を得ることが出来た。これまでの知見から,粒子径がより大きいほど過冷却が抑制されることが期待されたが,これまでの重合処方では,大粒径のカプセル粒子を得ることができなかった。重合条件を詳細に検討した結果,重合は完結し,凝集物もなくカプセル粒子を得ることができる重合処方を見出した。得られたパラフィン含有カプセル粒子中は,純パラフィンの高い潜熱量を維持し,過冷却の程度も半減した,高効率の蓄熱性を有していた。本研究では,マイクロカプセル化されたパラフィンの特異な凝固・融解挙動を詳細に検討し,ミクロ空間でのパラフィンの相転移挙動における界面の存在の影響を明らかにすることである。さらに独自のマイクロカプセル合成法を熱輸送物質の高効率カプセル化法として確立することを目指している。本年度は,カプセル壁を構成するポリマーに焦点をあて検討を行った。架橋性成分(ジビニルベンゼン(DVB))に極性の高い成分(各種アクリル酸エステル)を様々な組成で共重合した。重合挙動および生成カプセル粒子の構造解析を行うことにより,特にアクリル酸ブチル(BA)を共電合させると,DVBとBAの共重合反応性の違いから,得られたカプセル壁は内側にBA成分のリッチな層を有する傾斜構造を取っていた。このBAリッチな層の存在により,過冷却温度は5°C程度改善され,熱容量では非常に高い値を示した。これらは単独系の時より,カプセル壁とパラフィンの界而での相互作用が悪くなり,カプセル壁付近のパラフィンが相転移しやすくなったためであると考えられた。また,カプセル化したパラフィンの凝固挙動の検討も行ったところ,パラフィンの凝固は外側から内側に向かって起こっていることを明らかにした。
タンガニイカ湖の魚類を中心とする個体群生態学的研究

タンガニイカ湖沿岸域の魚類群集が複雑であり,ほとんどの種が湖岸の岩礁域に生息し,競争的であると同時に協力的な種間関係を保ちながら共存することが徐々に明らかになりつつある。特にカワスズメ科魚類の種分化が顕著であり,それぞれの種が多様な社会構造によって個体群を維持していることが明らかにされてきた。本調査では,特に群集組成のまったく異なるタンガニイカ湖の北部水域と南部水域の魚類個体群の社会構造,個体群間および種間の関係および個体群動態に係わる生物的要因を比較し,それぞれの種の生態的地位を検討した。また,沖合性魚類各種の資源量を推定し,種間の量的な相互関係の解を試みた。さらに,最終年度にはザイール国の魚類研究者ションボを日本に招へいし,タンガニイカ湖で得られた資料の解析とそれらの論文化を行ってもらった。岩礁域のカワスズメ科魚類については,これまで必らずしも十分でなかった北部水域の魚類相を仲谷が分類学的に検討し,109種の中で81種を記録した。しかし,数種の未確認種を含む多数の標本について現在も検討中である。名越,柳沢,神田,越智,服部,狩野,ガシャガザおよびションボはザイール国で北部水域の沿岸岩礁域に生息するカワスズメ科魚類のうち,これまでに生態学的知見に乏しい種について潜水観察によって調査を行った。典型的な基質産卵・保育型のNeolamprologus tretocephalusでは,子供の発育段階および両親の組合せによって両親の子供保護の役割が異なること,子供の数がある程度まで減少すると,子供を放棄することを明らかにした。Xenotilapia flavipinnisでは,子供の保護期間中にしばしば他の両親へ子供を預けるいわゆる“子預け"の現象が認められた。ParacyprichromisbrieniとCyprichromis microlepidotusは他の他の口内保育型の魚類と異なる特異的な産卵行動をすることが明らかにされた。藻類食者であるPetrochromis polyodonとPatrochromis orthognathusについて口内保育中の摂餌がテリトリーの防衛程度に関係することが明らかにされた。越智,服部および狩野は,ザンビア国で南部水域の沿岸岩礁域に生息するカワスズメ科魚類について潜水観察による調査をした。タンガニイカ湖のLamprologiniの中で唯一の藻類食者のNeolamprologus mooriiの両親は子供が25mm以上に成長すると繁殖なわばり内で子供を攻撃するようになることが明らかにされた。Microdontochromis tenuidentatusの雌は口内保育中でも摂餌することが明らかにされた。Petrochromis fasciolatusでは雄の繁殖なわばりは,雄が除去されると新たな雄がそこになわばりをもつようになり,資源としての繁殖場所の不足していることが明らかにされた。Julidochromis ornatusの繁殖場所がN. mooriiの摂餌なわばりの影響を受けるという種間関係が明らかにされた。南北両水域の岩礁性カワスズメ科の毎年の定量調査から,それぞれの種が特異的な場所を継続して利用していることが明らかにされた。このことについてはザイール国の研究者ガシャガザが1991年度に論文にまとめ,京都大学で理学博士の学位を取得した。成田は,魚類の餌として極めて重要な沿岸域のエビ類の生態調査から,これらの生息量が水深によって異なり,月令によって湖底からの浮上数の異なることを明らかにした。木村は,これまで明らかにされていなかった漁業上重要なニシン科魚類2科Stolothrissa tanganicaeとLimnothrissa miodonの年令と成長を耳石の日周輪か推定することに成功した。前者の寿命は約1年で最大体長は12cm,後者の寿命は2年余で最大体長は雌で18cm,雄で16cmであることを明らかにした。白木原とフィリはザンビア国でタンガニイカ湖南部水域の沖合性魚類の分布および資源量の解析のため,過去の漁狩統計資料の調査と漁業実態調査を行い,現在これらの解析に当っている。また,白木原は,魚群探知機を用い北部水域の沖合性魚類の分布と資源の調査を行い,これらについても現在解析を進めている。さらに,漁獲統計資料から北部水域では沖合性魚類の資源量が近年著しく減少していることを明らかにしている。

名越,柳沢,神田,越智,服部,狩野,ガシャガザおよびションボはザイール国で北部水域の沿岸岩礁域に生息するカワスズメ科魚類のうち,これまでに生態学的知見に乏しい種について潜水観察によって調査を行った。典型的な基質産卵・保育型のNeolamprologus tretocephalusでは,子供の発育段階および両親の組合せによって両親の子供保護の役割が異なること,子供の数がある程度まで減少すると,子供を放棄することを明らかにした。Xenotilapia flavipinnisでは,子供の保護期間中にしばしば他の両親へ子供を預けるいわゆる“子預け"の現象が認められた。ParacyprichromisbrieniとCyprichromis microlepidotusは他の他の口内保育型の魚類と異なる特異的な産卵行動をすることが明らかにされた。藻類食者であるPetrochromis polyodonとPatrochromis orthognathusについて口内保育中の摂餌がテリトリーの防衛程度に関係することが明らかにされた。越智,服部および狩野は,ザンビア国で南部水域の沿岸岩礁域に生息するカワスズメ科魚類について潜水観察による調査をした。タンガニイカ湖のLamprologiniの中で唯一の藻類食者のNeolamprologus mooriiの両親は子供が25mm以上に成長すると繁殖なわばり内で子供を攻撃するようになることが明らかにされた。Microdontochromis tenuidentatusの雌は口内保育中でも摂餌することが明らかにされた。Petrochromis fasciolatusでは雄の繁殖なわばりは,雄が除去されると新たな雄がそこになわばりをもつようになり,資源としての繁殖場所の不足していることが明らかにされた。Julidochromis ornatusの繁殖場所がN. mooriiの摂餌なわばりの影響を受けるという種間関係が明らかにされた。南北両水域の岩礁性カワスズメ科の毎年の定量調査から,それぞれの種が特異的な場所を継続して利用していることが明らかにされた。このことについてはザイール国の研究者ガシャガザが1991年度に論文にまとめ,京都大学で理学博士の学位を取得した。成田は,魚類の餌として極めて重要な沿岸域のエビ類の生態調査から,これらの生息量が水深によって異なり,月令によって湖底からの浮上数の異なることを明らかにした。木村は,これまで明らかにされていなかった漁業上重要なニシン科魚類2科Stolothrissa tanganicaeとLimnothrissa miodonの年令と成長を耳石の日周輪か推定することに成功した。前者の寿命は約1年で最大体長は12cm,後者の寿命は2年余で最大体長は雌で18cm,雄で16cmであることを明らかにした。白木原とフィリはザンビア国でタンガニイカ湖南部水域の沖合性魚類の分布および資源量の解析のため,過去の漁狩統計資料の調査と漁業実態調査を行い,現在これらの解析に当っている。また,白木原は,魚群探知機を用い北部水域の沖合性魚類の分布と資源の調査を行い,これらについても現在解析を進めている。さらに,漁獲統計資料から北部水域では沖合性魚類の資源量が近年著しく減少していることを明らかにしている。本研究はザイ-ルおよびザンビア国のタンガニイカ湖沿岸水域で行われた。
アディクション問題にかかわる看護職支援モデルの試案作成

サンフランシスコで働く看護師(計9人)へのグループインタビューの結果をもとに、アディクション(主として薬物依存症)看護に携わる看護師の考えや実践の変化について明らかにした。その結果を、これまでの研究結果(日本での看護師へのインタビュー調査)と比較検討し、看護の質を向上する上での、看護職に対する支援のあり方について考察した。また、アディクションの問題にかかわる看護師を対象として、看護師を支援するためのグループを定期的に行い(参加者10人程度)、グループで語られた内容から、支援の意義やあり方について検討した。これらの結果をもとに、アディクション問題にかかわる看護職支援モデルの試案を作成した。本研究は、次の二つ目的の研究を行い、アディクション問題にかかわる看護師支援のためのモデルの試案を作成することである。本年度の実績は次の通りである。目的1:アディクション問題にかかわる看護師サポートグループの実践内容の質的な分析を通して、支援の意義やあり方を明らかにする。これまでの調査から、アディクション問題をもつ人とのかかわりにおいて、看護師は怒りや無力感といったネガティブな感情を体験し、疲弊しやすい傾向にあることが明らかとなった。また、そういった体験をしながらも患者とのかかわりに意味を見出していった看護師の特徴として、他者からのサポートを得ていたことが確認された。そこで、援助職サポートの必要性を認識し、2010年度よりグループを開始した。2012年11月から2013年8月まで、3クール目(90分×10回を1クール)を実施した。内容は参加者の同意を得て録音して逐語録を作成し、質的に分析を進めた。得られた結果よりグループの継続の必要性が確認され、2013年12月より2014年9月までの予定で、4クール目を開催している。現在も、分析/解釈しながらグループを継続中である。目的2:米国(サンフランシスコ)でのアディクション問題にかかわる援助職者支援について調査し、支援の意義やあり方を明らかにする。サンフランシスコ在住の研究者の協力を得て、2013年11月に薬物依存症の治療病院1か所と地域での回復支援施設3か所を訪問し、アディクション問題や援助職の現状について講義や情報提供を受け、意見交換を行った。意見交換を通して、米国と日本ではアディクション問題の表面化している状況には違いがあるが、日本同様に、援助職はネガティブな感情を体験し、バーンアウト予防がテーマとなっていることが確認された。そこで、次年度に援助職へのインタビュー調査を行うこととし、その調査準備に着手した。本研究は、次の二つの目的の研究を行い、アディクション問題にかかわる看護師支援のためのモデルの試案を作成することである。目的1:アディクション問題にかかわる看護師サポートグループの質的な分析を通して、支援の意義やあり方を明らかにする。2010年度から実施している10回を1クールとした看護師サポートグループを継続し、2014年度においては、9月に4クール目のグループを終了した。それまでの実践については、12月にサンフランシスコにて、アディクション領域のサイコロジストとしての実績が豊富なN. Piotrowski博士のコンサルテーションを受け、分析をすすめた。その結果、サポートとしての意義や教育的実践の必要性についても明らかとなった。5クール目の実施内容について検討し、これまで通りの方法で実施することとし、3月に参加者をつのるチラシを配布した。2013年度に実施した、サンフランシスコでのアディクション治療・回復支援にかかわる病院や施設視察で得られたネットワーク等を通して、アディクション看護の実践への考え方や考え方の変化等についてのグループインタビューへの参加者を募った。その結果、計9名から参加への同意が得られ、参加者の可能な日時によって調整し、3つのグループに分け、インタビューを実施した。その結果を受けての個人インタビューも予定していたが、本研究でテーマとしていた内容については、共通する特徴が得られたので、今回はグループインタビューの結果を詳細に分析することとした。現在、分析中である。本研究では、次の二つの目的の研究を行い、それらを総合してアディクション問題にかかわる看護師支援のためのモデルの試案を作成する。目的2:米国(サンフランシスコ)でのアディクション問題にかかわる援助者支援について、支援の意義やあり方を明らかにする。目的1:平成27年度には月1回で10回を1クールとしたグループの5クール目を実践した。3グループ目までの実施結果を総合して分析し、4(平成26年度実施)・5クール目及び学会の交流集会でのサポートグループの実践を通し、分析結果の妥当性・信頼性について確認した。2クール目までの総合結果は、平成27年度第25回国際看護師協会大会にて発表した。アディクション問題に関連して様々な感情が喚起され、エモーショナルリテラシーを高めるサポートの重要性が確認された。目的2に関して:平成26年度に実施した、サンフランシスコでの看護師へのグループインタビューについて分析を行い、アディクション(主として薬物依存症)看護の実践への考え方やその変化等についての特徴を明らかにした。感情・価値・知識・態度の変化は、関連しながら現任教育や周囲の人々からのサポートの中で生じていた。

明らかとなった特徴については、分析結果の妥当性および日本の薬物依存症看護実践への適応等について検討するため、薬物依存症看護の熟練看護師6名の協力を得て、薬物依存症看護実践者会議を開催し、さらに考察を深めた。本結果に関しては、日本での調査結果との比較を行い、平成27年度第19回東アジア看護学研究者フォーラムEAFONSにて発表した。目的1と目的2の結果をもとに、アディクション問題にかかわる看護師支援のためのモデルの試案を検討した。試案については、今後発表予定である。サンフランシスコで働く看護師(計9人)へのグループインタビューの結果をもとに、アディクション(主として薬物依存症)看護に携わる看護師の考えや実践の変化について明らかにした。その結果を、これまでの研究結果(日本での看護師へのインタビュー調査)と比較検討し、看護の質を向上する上での、看護職に対する支援のあり方について考察した。また、アディクションの問題にかかわる看護師を対象として、看護師を支援するためのグループを定期的に行い(参加者10人程度)、グループで語られた内容から、支援の意義やあり方について検討した。これらの結果をもとに、アディクション問題にかかわる看護職支援モデルの試案を作成した。目的1については、途中経過の結果の発表がやや遅れている。目的2については、2014年度末までに分析を終える予定であったが、現在分析中である。看護学・地域老年看護学目的1:アディクション問題にかかわる看護師サポートグループを2015年5月から2016年2月まで実施する予定である。実施内容の逐語録を作成し、分析しながら、実施する。また、2クール目までの分析結果は、6月にICN学会で発表予定である。目的2:現在分析中のサンフランシスコでのグループインタビュー調査の結果について、妥当性等について確認するため、日本のアディクション看護領域での熟練看護師による専門家会議またはグループインタビューを開催する。また、サンフランシスコでのインタビュー参加者等にも、確認しながら、アディクション問題にかかわる看護職支援モデルの試案を作成する。目的1:やや遅れている。サポートグループの実践は、予定通りすすんでおり、逐語録の作成および部分的な分析/解釈はすすんでいる。しかし、2013年度中に、3クール目までのデータを総合的に分析/解釈して、学会での発表準備の予定であったが、90分×30回、計2,700分の逐語録の分析/解釈に時間を費やし、発表準備が遅れている。目的2:ほぼ予定通り進行中当初海外での調査を8月か9月に予定していたが、打ち合わせ準備や、研究協力者、訪問先の状況によって、訪問が11月となった。米国での具体的な調査に向けての打ち合わせを2014年3月ころに予定していたが、米国在住の研究協力者が日本への帰国に合わせて、国内にて行った。現地でのフィールドワークや意見交換の報告書については、現在作成中ある。また、予定通り、インタビュー調査の計画を作成中である。目的1:2013年12月より2014年9月までの予定で開催している4クール目のサポートグループを、分析/解釈しながら実施する。
熱帯モンスーン常緑林流域における水・土砂流出機構の解明と土砂流出予測

世界では年間5.2万km2の森林が消失しており、東南アジア諸国においても森林減少は深刻な問題である。森林伐採による土壌侵食量の増加は、豪雨の際に下流の河川の河床上昇や洪水氾濫のリスク増加を引き起こす可能性が非常に高い。斜面での土砂生産は、降雨強度などの気象条件と土壌、土地利用、地形改変などの立地環境条件により規定される。また、流域スケールでの土砂の移動プロセスを理解するためには、土砂の生産および輸送に深く関係する洪水流出の発生プロセスを明らかにする必要がある。本年度は、森林開発が進み、かつて森林だったが現在は、畑地が大半を占めるオーテックロー流域において1年間の土砂観測結果が得られた。洪水時には、水流および堆積土砂による圧力が増大して簡易土砂測定用簡易堰が破壊されたため、直接最大時土砂堆積量の測定はできなかったが、毎日定期観測する委託者の記録により、最大土砂量の高さは確認できた。これによって、2017年5月から1年間の堆積最大土砂量の推定は可能となった。計算の結果、1年間の堆積土砂量は約8 m3と推定された。これを流域面積で除算すると1.98 ×10-3 mmとなった。これは非常に小さい値であり、侵食量が小さいとされる日本の森林地なみの値であった。しかしながら、現地踏査や流域DEMデータにより、対象流域はきわめて平坦な地形であり、土地利用変化が生じても直ちに侵食した土砂が河道まで流れ込むとは考えにくい地域であることが分かっている。このことから、侵食した土砂が河道まで到達するエリアは、対象流域内では、河道近傍の限られたエリアに限定されるものと推測された。また、個別の土地利用ごとの土砂流出特性の解明のための侵食プロットの設置を完了し、降雨ごとの水と土砂のサンプリングを開始した。現地観測の結果、開発が進んだ森林流域における年間生産土砂量を把握するための基礎データを取得した。これにより流域スケールの土砂移動に関する実態把握が進んだ。これらのことから、研究の進捗状況はおおむね順調に進展している。1)個別の土地利用ごとの土砂流出特性の解明のための侵食プロットデータの取得侵食プロットでの観測を継続し、土地利用ごとの流出土砂量の観測を行う。2)斜面スケールでの水と土砂の移動特性解明のため現地観測とデータ処理侵食ピンプロットのデータ解析を進め、森林内の斜面における土砂移動の実態把握を進める世界では年間5.2万km2の森林が消失しており、東南アジア諸国においても森林減少は深刻な問題である。本研究では、カンボジアの熱帯モンスーン常緑林流域において森林率の大きく異なる2つの流域(A流域,B流域)を対象に、1)土地利用の違いが水と土砂の移動特性に及ぼす影響を解明する。2)100km2単位での流域スケールを対象に土地利用および伐採インパクトを含めた水と土砂の流出特性を定量化する。3)上記1)および2)の解析結果に基づいて、水と土砂移動の統合分布型モデルを開発し、適用する。本年度は、土地利用ごとの土砂流出調査を行うためにA流域およびB流域の代表的な土地利用(常緑林、混交林、裸地など)を選定し、侵食プロット作成に着手した。また、A流域とB流域の降水量、流出量の水文観測サイトを選定し、水文観測システムを構築した。各サイトでの雇用者に水と土砂のサンプリング方法を習得させ、安定同位体を測定するための定期採水を開始した。また、両流域における河道を踏査し、堆積土砂量の測定のために好適な場所を選定し、この場所に流出土砂を捕捉するための簡易ダムを設定した。流域スケールとプロットスケールの土砂移動に関する実態把握を行うためのサイトを選定し、それぞれの観測を開始することができたことから、研究の進捗状況はおおむね順調に進展していると考えられた。なお、侵食プロットおよび土砂観測サイトについては安定的な観測を継続するためには、構造的な改善が必要であると思われたので、これに関しては、次年度以降、順次改良していく計画とした。

本年度は、土砂移動を把握するために侵食ピンプロットおよび堆積土砂測定用簡易堰を設置した。侵食ピンプロットは森林斜面からの土砂移動の実態を把握するために,斜面傾斜の異なる2つの地点(プロットNo1とNo2)に侵食ピンプロットを設置した。流域スケールの土砂流出量を把握するために,森林開発の程度の異なる2つの森林流域に堆積土砂測定用簡易堰を設置した。いずれの箇所についても現地測量を実施し、土砂移動の解析に必要となる微地形図を作成した。個別の土地利用ごとの生産土砂量を把握するために必要な侵食プロットの設置を進めたが、観測するためには構造的な改善が必要であることがわかった。流域スケールとプロットスケールの土砂移動に関する実態把握を行うためのサイトを選定し、それぞれの観測を開始することができたことから、研究の進捗状況はおおむね順調に進展していると考えられた。個別の土地利用ごとの生産土砂量を把握するために必要な侵食プロットの設置に関しては、構造的な改善が必要であるため、次年度、改良を加えたのち観測を開始する予定である。世界では年間5.2万km2の森林が消失しており、東南アジア諸国においても森林減少は深刻な問題である。森林伐採による土壌侵食量の増加は、豪雨の際に下流の河川の河床上昇や洪水氾濫のリスク増加を引き起こす可能性が非常に高い。斜面での土砂生産は、降雨強度などの気象条件と土壌、土地利用、地形改変などの立地環境条件により規定される。また、流域スケールでの土砂の移動プロセスを理解するためには、土砂の生産および輸送に深く関係する洪水流出の発生プロセスを明らかにする必要がある。本年度は、森林開発が進み、かつて森林だったが現在は、畑地が大半を占めるオーテックロー流域において1年間の土砂観測結果が得られた。洪水時には、水流および堆積土砂による圧力が増大して簡易土砂測定用簡易堰が破壊されたため、直接最大時土砂堆積量の測定はできなかったが、毎日定期観測する委託者の記録により、最大土砂量の高さは確認できた。これによって、2017年5月から1年間の堆積最大土砂量の推定は可能となった。計算の結果、1年間の堆積土砂量は約8 m3と推定された。これを流域面積で除算すると1.98 ×10-3 mmとなった。これは非常に小さい値であり、侵食量が小さいとされる日本の森林地なみの値であった。しかしながら、現地踏査や流域DEMデータにより、対象流域はきわめて平坦な地形であり、土地利用変化が生じても直ちに侵食した土砂が河道まで流れ込むとは考えにくい地域であることが分かっている。このことから、侵食した土砂が河道まで到達するエリアは、対象流域内では、河道近傍の限られたエリアに限定されるものと推測された。また、個別の土地利用ごとの土砂流出特性の解明のための侵食プロットの設置を完了し、降雨ごとの水と土砂のサンプリングを開始した。現地観測の結果、開発が進んだ森林流域における年間生産土砂量を把握するための基礎データを取得した。これにより流域スケールの土砂移動に関する実態把握が進んだ。
生体色素の光反応にカップリングした高速蛋白ダイナミクスの時間分解振動分光法による解明

蛋白質の特色は、それが柔い構造体であって、その立体構造を変えながら機能を遂行するところにある。したがってダイナミカルな構造を論じる実験データが蛋白質機能を論じるうえで必須である。「一体蛋白質はどれ程大きな構造変化をどの程度の速さで起こし、それがどのように高次構造変化につながるのか?」この問いに答えるのが本研究である。実験法としては、光感受性蛋白の光反応開始の時を時刻ゼロとし、その分子振動の振動数を時間の関数として観測する。観測法として共鳴ラマン分光法を採用した。その理由は、水溶液の測定に適しているだけでなく、(1)共鳴効果と(2)高い時間分解能の2つの利点を生かせるからである。(1)はラマン散乱の励起波長を分子の吸収帯に近づけると、その吸収帯を与える発色団の分子振動の一部が強いラマン線を与える現象の事である。共鳴条件下では試料の濃度を下げる事ができ、また励起波長を変える事によって発色団を選択して観測する事が可能になる。本研究に用いたミオグロビン(Mb)の場合、可視レーザーを用いると色中心のヘムの分子振動が見え、紫外レーザー光を用いるとグロビンの分子振動が見える。(2)はレーザー光源のパルス性を利用し、レーザー光のパルス幅が2.4ピコ秒であったので、ピコ秒の時間刻みで構造変化を追跡した。CO結合型Mbに可視パルス光を照射すると100フェムト秒内にFe-CO結合は切れ、Feの低スピンから高スピンへの変化は2.4ピコ秒内に起こった。それに伴う:Feイオンの面外変位はFe-His伸縮ラマンバンドの強度変化として表れ、-20ピコ秒で起こった。グロビンの構造変化は104ピコ秒の時定数で起こり、その時定数は溶媒の粘度が高くなると長くなった。244nm励起の紫外共鳴ラマンの実験からチロシン151とトリプトファン7がCO脱離により構造変化する事が明らかになった。このようなリガンド脱着による蛋白構造変化はセンサー蛋白の機能発現に必須であり、その方向に研究を進めていく予定である。微量色素タンパク質としてHeme Binding Protein 23(HBP23)とsoluble Guanylate Cyclase(sGC)をとり上げた。HBP23はラット肝細胞質より単離された分子量23kDaの蛋白質でペルオキシダーゼ活性を示し、ヘムと高い親和性(Kd=55nM)を示すが、ヘムの存在下ではペルオキシダーゼ活性は消える。HBP23とヘムは1:1で結合する。そのヘム結合状態の可視共鳴ラマンスペクトルを種々の励起波長で測定した。そのスペクトルパターンから、Fe^<3+>状態では6配位低スピン型であり鉄の軸配位子はNかS原子と推定された。Fe^<2+>状態では5配位高スピン型であるが、Fe-His伸縮バンドが観測されないので、鉄の軸配位子はヒスチヂンではないと思われた。sGCはウシ肺より単離、精製した。4kgの肺より3.2mgとれた。そのCO結合形の共鳴ラマンスペクトルを測定したところ、これまでの酵素と違ってFe-CO伸縮振動のラマン線を2本与えた。

これにYC-1という有機分子を加えると、その内の1本が弱くなり、GTPを加えると完全に1本になった。それらのバンドは^<13>C^<18>Oを用いると振動数シフトを示すことから帰属に間違いはなく、別の標品でも再現性よく観測されることを確認した。消えた方のバンドの振動数はアメリカのグループが報告しているものに近く、残った方は我々が2年前に報告したものと同じであることから、sGCに2種のコンフォメーションがあって、その平衡がエフェクターとなる有機分子やGTPにより変えられる可能性が示唆された。生体色素の光反応として、本研究では一酸化炭素結合形ミオグロビン(MbCO)のCO光解離を取り上げた。ミオグロビン(Mb)のFe-CO結合は可視レーザー光照射により300フェムト秒以内に切れる。COは蛋白外に出ていき、蛋白はdeoxyMbの平衡構造に向かって変化していくが、その過程をピコ秒の時間分解共鳴ラマン分光法で調べた。主光源は1.5ps幅、82MHz繰り返し、平均出力0.7WのTi:sapphireレーザーで、それをNd:YLFレーザーの倍数(527nm)で増幅し、1kHz繰り返しのパルス列にしてから2系列に分け、各々の波長に変換した。光解離にはOPG法で変換した540nmのパルスを用い、ラマン散乱励起光としてはメタンの誘導ラマン散乱で得た442nmのパルスを用いた。両パルスの時間相関幅は2.3psで遅延時間のゼロは0.2psの精度で決まっている。この測定系は国際的にもトップレベルで、同レベルのデータをとれるグループは国際的にも無いと云える。光解離1ps後のスペクトルでは、Fe-His伸縮(V_<Fe-His>)は222cm^<-1>に、ヘムの面外振動(γ_7)が300cm_<-1>に、側鎖C_βC_cC_d変角振動[δ(C_βC_cC_d)]が369cm^<-1>に観測された。V_<Fe-His>およびγ_7バンドの面積強度を遅滞時間に対してプロットすると、γ_7は速い立ち上がりの後、一定強度を示したが、V_<Fe-His>はその後20ps迄じわじわと強度増加を示した。解析の結果、これはMbCO形でヘム面内に位置していた鉄イオンが、deoxy形でヘム面より0.3ÅだけHis側にずれる構造変化を反映している事がわかった。その変化の80%は非常に速いが残り20%が120psで起こる。一方V_<Fe-His>振動数は時定数106±14psで低波数シフトしたが、ポルフィリン環のγ_7やδ(C_βC_cC_d)バンドはその様なシフトを示さなかった。また蛋白のない鉄ポルフィリンイミダゾール錯体のCO光解離でも、V_<Fe-Im>はV_<Fe-His>バンドと同じように強度の時間変化を示したが、振動数変化は示さなかった。したがってV_<Fe-His>の振動数の時間変化は、蛋白質の3次構造の時間変化を反映しているものと思われる。5月に特定領域の領域会議があり、第一班の班長として班員の研究発表会を主催すると共に、自分の研究成果の報告をした。また2002年9月の化学会秋季年会と合同で開催された本特定領域の公開シンポジウムにおいて「酸素分子センサー蛋白、HemATの情報感知機構」と題する招待講演をした。ミオグロビンの一酸化炭素光解離後の蛋白構造変化をピコ秒の時間分解共鳴ラマン法で追跡し、鉄-ヒスチジン伸縮振動の振動数が時定数100ピコ秒で変化する事を見つけた。その時定数が溶液の粘度を高くすると長くなり、両者を対数プロットすると直線になる事から、この振動数変化が蛋白全体の構造変化を反映している事がわかった。
石英粒におけるESR信号強度消失の力学的条件

1.本年度の研究の大半は,回転装置付圧縮試験機の試作に費された.試作上の工夫点は以下のとおりである.(1)油圧装置に中空シリンダータイプを用いた.このことによって試料ホルダー垂直応力を作用させつつ試料ホルダーを回転させることが容易となった.(2)回転の駆動力は電動モーターによるが,回転数の変更を容易にするためにモータードライブの変速器をセットした.(3)試料ホルダーは,汎用性をもたせるように底面は共通の仕様とした.上面のみを目的にあわせて変えられるようにしてある.例えば,本研究の目的である石英粒の粉砕のためには,円弧を描く溝がホルダーの上面に切ってある.断層破砕帯の類似物を作るためには,ディスク状に整形した岩石をホルダー上面にエポキシ系接着材ではりつけたものを用いた.このようにして,実験装置の骨格が試作された.2.試作された実験装置を用いて, 2種類のテストランが繰り返された.1つは石英粒の粉砕であり,他の1つは,花コウ岩を用いた破砕帯類似物の形成である.垂直応力の可変域は070バールでそれ以上の垂直応力に抗して試料を回転させるにはより強力なモーターが必要である.このような低応力実験しかできなかったのは,摩擦係数を0.1としてトルク計算をした設計上のミスによるものである.回転数は110r.p.mとした.3.このような低垂直応力下,低回転数下でも1分間程度実験を継続するならば,石英粒は完全に粉砕され,類似的な断層破砕物を形成することが明らかとなった.当初目的であったESR信号強度消失の力学的条件を決定するには至らなかったが,そのための実験装置の骨格は製作されたといえよう.なお,力学的条件を決定する実験のためには,試作された本装置のモーターをより大きなトルクを持つものに取り換える必要があるが,それは容易である.1.本年度の研究の大半は,回転装置付圧縮試験機の試作に費された.試作上の工夫点は以下のとおりである.(1)油圧装置に中空シリンダータイプを用いた.このことによって試料ホルダー垂直応力を作用させつつ試料ホルダーを回転させることが容易となった.(2)回転の駆動力は電動モーターによるが,回転数の変更を容易にするためにモータードライブの変速器をセットした.(3)試料ホルダーは,汎用性をもたせるように底面は共通の仕様とした.上面のみを目的にあわせて変えられるようにしてある.例えば,本研究の目的である石英粒の粉砕のためには,円弧を描く溝がホルダーの上面に切ってある.断層破砕帯の類似物を作るためには,ディスク状に整形した岩石をホルダー上面にエポキシ系接着材ではりつけたものを用いた.このようにして,実験装置の骨格が試作された.2.試作された実験装置を用いて, 2種類のテストランが繰り返された.1つは石英粒の粉砕であり,他の1つは,花コウ岩を用いた破砕帯類似物の形成である.垂直応力の可変域は070バールでそれ以上の垂直応力に抗して試料を回転させるにはより強力なモーターが必要である.このような低応力実験しかできなかったのは,摩擦係数を0.1としてトルク計算をした設計上のミスによるものである.回転数は110r.p.mとした.3.このような低垂直応力下,低回転数下でも1分間程度実験を継続するならば,石英粒は完全に粉砕され,類似的な断層破砕物を形成することが明らかとなった.当初目的であったESR信号強度消失の力学的条件を決定するには至らなかったが,そのための実験装置の骨格は製作されたといえよう.なお,力学的条件を決定する実験のためには,試作された本装置のモーターをより大きなトルクを持つものに取り換える必要があるが,それは容易である.
機能異常リポ蛋白リパ-ゼの遺伝子解析

[目的]高カイロミクロン血症患者の中から、リポ蛋白の界面を認識することに異常のあるリポ蛋白リパ-ゼ(LPL)が見出された。本LPLはTriton Xー100で乳化したtrioleinに分解活性を示さなかったが、リゾレシチンで乳化したtrioleinには、野性型と同等な活性を有していた。この変異LPLの構造を明らかにし、LPLの界面認識機構の解明を試みた。[方法]患者の末梢血白血球,またはEpsteinーBarrーvirusによってtransformしたリンパ芽球からDNAを抽出し、標的遺伝子はpolymerase chain reaction法によって、増幅した。DNA配列の決定はdideoxyーchaintermination methodによって行なった。LPLcDNAは患者の脂肪細胞から、RNAを調製し、これよりcDNAを作成した。発現ベクタ-はSV40を上流に有するpCDEを用い、発現はCOSー1細胞を用いた。リポ蛋白リパ-ゼ活性の測定はTriton Xー100で乳化した[14C]trioleinを基質に用いた。Esterase活性の測定は[14C]tributyrinを基質に用いた。リポ蛋白リパ-ゼの酵素蛋白量の測定は人リポ蛋白リパ-ゼに対する特異抗体を用いて、enzymeーlinked immunoassay法によって行なった。[結果]本患者のLPL遺伝子解析を行なうと、LPLのExon9の塩基配列1595番目のcytidineからguanineへの変異がヘテロ型で認められた。この変異は野性型LPLが448のアミノ酸からなるのに対して、C末端が2残基短い446のアミノ酸からなるLPLが産成されていることを示唆するものであった。この変異LPLcDNAをCosー1 cellにtransfectionし、発現されたLPL[446]はtributyrin分解活性を有していた。しかしtrioleinの分解活性はTriton Xー100で乳化した時には野性型の約1/2であった。リゾレシチンで乳化したtrioleinには、野性型と同等な活性を有していた。[結論]これらの成績からLPL[446]は界面認識異常LPLであり、かつLPLの構造の中で界面を認識する機能の一部にはC末端447、448が関与している可能性が示唆された。[目的]反復して膵炎に罹患していた高カイロミクロン血症患者の中で血中中性脂肪の分解酵素であるリポ蛋白リパ-ゼ(LPL)の機能に異常のある症例が見出された。そこで1、本患者の機能異常リポ蛋白リパ-ゼの構造解析を行なうために遺伝子解析からアミノ酸配列の異常を明らかにすることを試みた。2、変異LPLを発現させ、その機能を解析し、LPLの活性中心部位と界面認識部位を明らかにし、症例のLPLの機能解析に役立てる。[対象と方法]対象患者はヘパリン静注後血漿中にLPL酵素蛋白は存在しており、長鎖脂肪酸エステルであるトリオレインは分解しなかったが短鎖脂肪酸エステルであるトリブチリン分解し得る性質を有した。リポ蛋白とは結合しなかった。

遺伝子解析はエクソン1から10までをpolymerase chain reaction(PCR)法によって採取し、そのDNA配列を決定した。変異LPLDNAを作成しこれをCOScellにDEAEデキストラン法にてtransfectionし、LPL蛋白を発現させた。[結果]1、本患者のLPL遺伝子のエクソン1から9までは異常がみられずエクソン10のアミノ酸478番目に相当するコドンのTCAがTGAに変化しストップコドンとなっており、患者はそのヘテロ型であった。次年度この部位の変異型geneを作成して発現させその機能を解析する予定である。2、LPL132のセリンがアルギニンにかわった変異LPLはトリブチリン水解活性を有していたがトリオレイン水解活性は低下していた。脂質界面と結合するとトリブチリン水解活性の上昇が見られるが変異LPLではそのような現象は見られなかった。132セリンの意義をさらに検討する必要がある。[目的]高カイロミクロン血症患者の中から、リポ蛋白の界面を認識することに異常のあるリポ蛋白リパ-ゼ(LPL)が見出された。本LPLはTriton Xー100で乳化したtrioleinに分野活性を示さなかったが、リゾレシチンで乳化したtrioleinには、野性型と同等な活性を有していた。この変異LPLの構造を明らかにし、LPLの界面認識機構の解明を試みた。[方法]患者の末梢血白血球、またはEpsteinーBarrーvirusによってtransformしたリンパ芽球からDNAを抽出し、標的遺伝子はPolymerase chain reaction法によって、増幅した。DNA配列の決定はdideoxyーchaintermination methodによって行なった。LPLcDNAは患者の脂肪細胞から、RNAを調製し、これよりcDNAを作成した。発現ベクタ-はSV40を上流に有するpCDEを用い、発現はCOSー1細胞を用いた。リポ蛋白リパ-ゼ活性の測定はTriton Xー100で乳化した[14C]trioleinを基質に用いた。Esterase活性の測定は[14C]tributyrinを基質に用いた。リポ蛋白リパ-ゼの酵素蛋白量の測定は人リポ蛋白リパ-ゼに対する特異抗体を用いてenzymeーlinked immunoassay法によって行なった。[結果]本患者のLPL遺伝子解析を行なうと、LPLのExon9の塩基配列1595番目のcytidineからguanineへの変異がヘテロ型で認められた。この変異は野性型LPLが448のアミノ酸からなるのに対して、C末端が2残基短い446のアミノ酸からなるLPLが産成されていることを示唆するものであった。この変異LPLcDNAをCosー1 cellにtransfectionし、発現されたLPL[446]はtributyrin分解活性を有していた。しかしtrioleinの分解活性はTriton Xー100で乳化した時には野性型の約1/2であった。リゾレシチンで乳化したtrioleinには、野性型と同等な活性を有していた。
神経筋疾患ならびにaxonal guidanceにおけるN-CAMの意義

N-CAMは細胞接着を介して、発生、分化、形態形成に大きく関与している。しかし、N-CAMと神経筋疾患患者の筋線維についてはほとんど解明されてない。本研究では、N-CAMが神経筋疾患にどのように関わっているのか、またN-CAMの各isoformが筋や脊髄の発生分化にどのような役割をはたしているのか検討した。本研究の成果から、N-CAMは筋の再生に重要であり、多発性筋炎、筋緊張性ジストロフィー症、肢帯型筋ジィストロフィー症では、再生筋にN-CAMの発現を認めたが、神経原性の筋萎縮側索硬化症では認めなかった。これらはN-CAMが再生筋のマーカーとして有用であると示したものである。ラット心筋で発生分化についてN-CAMとの関わりについて検討した。N-CAMは胎生10、11日には認められず、胎生12日より出現した。出現部位では、12日目には心外膜にのみ認められ、13日目に心筋の最外側部、次いで14日目に心室中隔上部、肉柱に強く出現した。18日目には、ほぼ心室全体に染色性が認められた。成熟ラットでは、胎生期に比べ染色性は低下していた。また、成熟ラットでは筋細胞結合部に強く認められたが、Z帯には認められなかった。またその出現は時間的、空間的に変化し、心筋の形態発生に大きな役割をはたしていることなどが得られた。また、心筋患を有さないヒト剖検心においても、N-CAMは介在板に発現していた。N-CAM(neural cell adhesion molecule)が筋の発生や分化にどの様に関わっているかを明らかにするために、マウスの胎児でN-CAMのisoformの発現をin situ hybridyzationを用いて、mRNAレベルから検討を行った。In situ hybridizationに用いたprobeはriboprobeとした。これはマウスの脳やマウス由来のmuscle cell lineからtotal RNAを抽出し、^<35>SRNAprobeを作製し、使用した。その長さは平均100bpにし、coding部位はいずれexon内で、intron部位を含まないようにした。N-CAMのTransmembane formは胎生10日目、脊髄の前角部やganglionに発現し始めた。この時期は運動神経細胞が前角に出現する頃と一致していた。以後newbornになるまで前角部から脊髄全体にび慢性に発現が認めたが、N-CAMの発現の程度は弱くなっていき、down regulationが認められた。MSD form(muscle specific domain)は胎生12日目からmyotomeに認められ、以後new bornまで認められた。GPI-linked form、secreted formは脳、脊髄、末梢神経、筋肉にいずれも発現を認めなかった。一般にマウスではmyoblastのfusionによりmyotubeの出現は胎生12日目からといわれており,N-CAMのMSD formがこの時期から発現したのは、N-CAMが接着因子としての働きだけでなく、筋細胞の分化をintegrateしているものと考えた。transmembrane formは運動神経細胞が発生する時期に脊髄前角部で強く発現し、その2日後にmyotubeの時期にMSDがmyotomeに認められているので、N-CAMがaxonal guidanceとしての働きと筋細胞の分化に重要な因子を有していることなどの成果を得た。最近N-CAMには,isoformが見いだされ、それぞれのiso-formの働きに大きな関心がよせられている。本研究では、N-CAMが神経筋疾患にどのように関わっているのか、またN-CAMの各isoformが発生分化にどのような役割をはたしているのか検討した。ラット心筋ではN-CAMは胎生12日目より出現した。
ビニルホスホナートのナザロフ反応の開発とその縮環テルペン類合成への応用

本年度は、リン酸官能基の電子求引性を利用して二重結合の位置選択性の制御を行うことにより、ビニルホスホナートを用いたNazarov環化反応の一般化を目指した。また二重結合の位置選択性発現機構を解明するために、置換基及び酸の効果を分子軌道計算結果と実験結果との比較によって検討を行った。種々の非環状ジビニルケトンに対し、酸触媒存在下、反応溶媒としてヘキサフルオロイソプロパノール(HFIP)を用いることによりNazarov環化反応を行った。その結果、基質によってはリン酸官能基の電子求引性からは予想できないリン側に二重結合が形成した環化生成物が得られた。そこでホスホノジビニルケトンでのNazarov環化反応の二重結合の位置選択性発現機構を解明するために、置換基及び酸の効果を分子軌道計算結果と実験結果との比較によって検討した。中間体であるシクロペンテニルカチオンの分子軌道計算(PM3法)の結果、配位したプロトンに対しアンチペリプラナー位の炭素のLUMOの係数が大きくなることが分かった。即ち、配位した酸のアンチペリプラナー位にオレフィンが生成すると予想される。この計算結果と実験結果を比較すると、Lewis酸を用いた場合にはリン酸基との立体反発によってexo-中間体の方が有利となるためリン側に二重結合の生じた生成物が選択的に得られたものと考えられる。一方、プロトン酸の場合には立体反発が軽減されるためendo-中間体の寄与も大きくなり選択性の低下がみられたものと思われる。これら分子軌道計算結果と実験結果との比較により、二重結合の位置選択性に対する置換基及び酸の効果が説明できる。現在、置換基の位置が変化した様々な非環状ジビニルケトンを用いて、二重結合の位置選択性発現機構に及ぼす置換基及び酸の効果の一般則の解明を目指している。
ネットワークが希薄な公営住宅におけるコミュニティカフェを活用した予防的介入研究

介入の対象となるK市において、以下の取り組みを実施した。1地域包括支援センターに寄せられる相談内容を通じたニーズの把握と資源の集約,2より効果的なネットワーク構築について共に検討,3検討の結果をもとにネットワーク構築に必要となる取り組みについて検討し、実施また、対象となるK市内の特にコミュニティのつながりが希薄な地域であるU地区(府営住宅)において社会福祉協議会や自治会と合同の定期的な取り組みをスタートさせ、同地区内のソーシャルキャピタルの再構築に対する取り組みを開始した。今後は、同地区内に居住する高齢者を対象に、効果測定の調査を行う予定である。介入の対象となるK市において特にコミュニティのつながりが希薄な地域であるU地区(府営住宅)において社会福祉協議会や自治会と合同の定期的な健康相談会の取り組みをスタートさせ、同地区内のソーシャルキャピタルの再構築に対する取り組みを開始した。23年度中の取り組みは下記の通りである。a.自治会における役員会議に定期的に出席し、住民や自治会役員から寄せられる相談から、課題を抽出し、取り組みの糸口を探索する。b.関係機関に寄せられる相談内容や対象者の直接的ニーズ、関係機関が把握している間接的ニーズを集約することで、地域のネットワーク作りの資源の集約、不十分な部分を明確化する。c.上記を踏まえて、社会福祉協議会や市職員との共通認識を構築し、より効果的なネットワーク構築について共に検討する。d.研究者が学会や研究会に参加、先駆的な取り組みの知見を得て、それを担当者と共有する。e.検討の結果をもとにネットワーク構築に必要となる取り組みについて、センターの係員との間で検討を重ねることによって共通の理解を得るように働きかける。f.自治会および社会福祉協議会が実施する高齢者住民の見守りニーズアンケートについて、情報提供および作成、データ処理について協力を行った。g.自治会主催で、ボランティア組織が協力して実施しているコミュニティカフェにおいて、従来社会福祉協議会と在宅支援センターが行っていた「福祉何でも相談会」に、保健師(研究者)が帯同し、「健康相談会」の機能を付与する取り組みを開始した。次年度以降には、主任研究者が担当する調査実施について、協力を得られるよう調整がついている。介入の対象となるK市内でも特にコミュニティのつながりが希薄な地域であるU地区(公営住宅)において、社会福祉協議会や自治会と合同の定期的な健康相談会の取り組みを継続し、同地区内のソーシャルキャピタルの再構築に対する取り組みを行っている。当該年度に至るまでの取り組みは以下の通りである。1)自治会における役員会議に出席し、住民や自治会役員より寄せられる相談内容から地域における課題を抽出し、取り組みの糸口を探索する。2)関係機関に寄せられる相談内容や対象者の直接的ニーズ、関係機関が把握している間接的ニーズの集約することで、地域のネットワークづくりの資源を集約し、不十分な部分を明確化する。3)上記を踏まえて、社会福祉協議会や関係機関職員、自治会役員と共通認識を構築し、より効果的なネットワーク構築について検討する。4)研究者kが学会や研究会に参加、先駆的な取り組みの知見を得て、それを関係者と共有する。5)自治会及び社会福祉協議会が実施する恒例住民の見守りニーズ調査について、情報提供及び調査票の作成やデータ処理について協力する。6)自治会主催で民生委員やボランティア組織が協力して実施しているコミュニティカフェにおいて、定期的な継続した健康相談会の開催。

以上を踏まえて、25年度9月16日に介入効果測定のための調査票配布を行う予定であったが、当該地区近辺での台風被害に伴い、実施が困難となった。現在再調整を行うと同時に、測定方法の再検討を行ったため、倫理委員会へ再申請を市、今年度実施の予定である。介入の対象となるK市内でも特にコミュニティのつながりが希薄な地域であるU地区(公営住宅)において、社会福祉協議会や自治会と合同の定期的な健康相談会の取り組みを継続し、同地区内のソーシャルキャピタルの再構築に対する取り組みを行っている。当該年度に至るまでの取り組みは以下の通りである。1)自治会における役員会議に出席し、住民や自治会役員より寄せられる相談内容から地域における課題を抽出し、取り組みの糸口を探索する。2)関係機関に寄せられる相談内容や対象者の直接的ニーズ、関係機関が把握している間接的ニーズの集約することで、地域のネットワークづくりの資源を集約し、不十分な部分を明確化する。3)上記を踏まえて、社会福祉協議会や関係機関職員、自治会役員と共通認識を構築し、より効果的なネットワーク構築について検討する。4)研究者kが学会や研究会に参加、先駆的な取り組みの知見を得て、それを関係者と共有する。5)自治会及び社会福祉協議会が実施する恒例住民の見守りニーズ調査について、情報提供及び調査票の作成やデータ処理について協力する。6)自治会主催で民生委員やボランティア組織が協力して実施しているコミュニティカフェにおいて、定期的な継続した健康相談会の開催。以上を踏まえて、今年度も介入の継続とその効果の測定を行う予定である。当初23年度に実施予定であった初回調査の実施について、当該年度に自治会及び社会福祉協議会、また、自治体の調査が入っており、住民の負担を鑑みて、次年度に調査を実施することとなったため。25年度が最終年度であるため、記入しない。研究者が定期的に介入対象となる地域へ出向いて、直接的に健康相談会を開催することによって、介入対象となる高齢入居者と自治会役員との関係性の構築が円滑に行えている。さらにそのことによって、25年度における調査研究への協力の約束を得られていることが、研究遂行の最大のメリットとなっている。自治会長および役員との調整の結果、24年度には調査に協力を得られる旨の言質を確保している。また、健康相談会の実施に伴って、住民やボランティア組織、民生委員との関係性も構築されてきており、協力を得られる体制が醸成されつつある。また、健康相談会の実施に伴って、住民やボランティア組織、民生委員との関係性も構築されてきており、協力を得られる体制が醸成さねつつある。
特定の染色体部位に組み込まれる遺伝子導入法の開発

アデノ随伴ウイルス(AAV)の持つヒト第19染色体長腕(q13.4-ter)への特異的に挿入機構を利用して、その特定の領域(AAVS1)に遺伝子ターゲティングできる遺伝子導入法を開発することを目的とした。AAVベクターがAAVS1領域に挿入されるために必須であるが細胞毒性を持つRep蛋白を必要な時だけ短期間に発現させるために、Rep遺伝子をBacteri ophage P1のCre/Lox P系を利用した発現プラスミド(pLRPL)として構築した。このpLRPLプラスミドとCre発現プラスミドおよびITRを持つAAVベクタープラスミドとをそれぞれリポソーム法にてヒト由来の293細胞へ導入したところ、Creの発現に依存したRep蛋白の発現が生じることを確認した。短期間だけ発現するRep蛋白の作用でAAVベクターがAAVS1領域に特異的に挿入さたることをAAVS1とAAVベクターのITRのプライマーを用いるnested-PCR法およびAAVS1領域に設定したオリゴ・ヌクレオチドをプローブとして用いたサザンブロット法により、部位特異的挿入を確認した。Direct-sequenceによりITRおよびAAVS1内の挿入部位を検討したところ、挿入部位はITR部分およびAAVS1部分ともに既報の野生型AAVの挿入部位と類似していた。さらに、ネオマイシン耐性遺伝子導入用のAAVベクタープラスミドを用いて、293細胞のAAVS1領域への導入効率を検討したところ、ネオマイシン耐性コロニーの12%に部位特異的遺伝子導入が認められた。