hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ニューロン活動依存的転写応答の差異に関与するクロマチンダイナミクス変動解析

ニューロンが興奮した際に素早く応答し発現が誘導される遺伝子群と遅れて誘導される遺伝子群のクロマチン修飾の差異、ならびにそこに関与するクロマチン分子のダイナミクスを解析した。クロマチン修飾、RNAポリメラーゼIIの結合、転写抑制因子の結合などが、両群で異なっており神経活動依存性転写の時間的制御に関与していることを解明した。マウス海馬ニューロンの培養系を用いて、グルタミン酸受容体刺激後発現誘導される遺伝子をマイクロアレイにて網羅的に解析したところ、刺激後速やかに転写量が増加する早期転写型遺伝子群と刺激後緩やかに増加する遅延型遺伝子群に分類されることが分かった。それぞれの群のクロマチン修飾の差異をクロマチン免疫沈降法にて検討した結果、遅延型遺伝子群でピストンH3の9番目リジンのメチル化(H3K9me)が高かった。ヘテロクロマチンタンパク質HP1はH3K9meに結合しヘテロクロマチン形成に寄与しているが、細胞分裂期にH3の10番目セリンのリン酸化(H3S10p)に伴い解離することが知られている。HP1のクロマチンからの解離がニューロンでの転写制御にも関与している可能性が考えられた。遅延型遺伝子群ではグルタミン酸受容体刺激後にH3S10pが増加し、HP1βの結合が減少することが分かった。しかし、H3K9meの低い早期群でも刺激前にHP1β結合が認められたことから、H3K9me修飾とは独立した現象であることが示唆された。現在、HP1βの標的遺伝子に関し、ゲノムワイドな解析を計画している。さらに、別のクロマチン関連分子としてリシカーヒストシH1のダイオナミクスをFRAP法にて検討したとこち、H1は神経活動に依存してハイパーダイナミックな挙動を示すことが分かった。これに関与する機構としてH1のポリADPリボシル化を想定し、責任酵素であるPARPの阻害薬にて検討した結果、H1のハイパーダイナミックな挙動は抑制された。これらの結果は、ニューロンの細胞核内では神経活動に依存してダイナミックなクロマチン制御が行われていることを示すものである。今後、どの遺伝子がこのダイナミックな制御下にあるか、ゲノムワイドな検討を予定している。それぞれの群のクロマチン修飾の差異をクロマチン免疫沈降法にて検討した結果、遅延型遺伝子群で転写抑制に関与するヒストンH3の9番目リジンのメチル化(H3K9me)が高いことが、昨年までの研究で明らかにされた。今年度は、さらにこの遅延型遺伝子群の中に、もう一つの転写抑制性修飾であるH3K27me3が高い遺伝子が存在することを明らかにした。通常、H3K27me3にはポリコーム複合体1(PRC1)が結合しクロマチンを凝縮状態に保っている。そして隣接するセリン残基S28のリン酸化によりPRClはクロマチンから遊離されることで、クロマチンが緩み転写誘導に至ることが示唆されている。今後、ニューロンにおいても神経活動依存性にH3S28のリン酸化およびPRC1のクロマチンからの遊離の有無を検討したい。一方、上述のマイクロアレイによる解析にて、通常分裂細胞にてS期に発現が上昇する複製依存性コアヒストンH3の転写が増強していることが分かった。また、塩抽出法などによりコアヒストンH3は、転写のみでなくタンパク質レベルでの発現上昇が認められることが分かった。申請者らは、現在、クロマチンの中心的構成因子であるコアヒストンも神経活動に依存して発現が上昇し、上昇した新生コアヒストンは、すでにヌクレオソームに取り込まれているヒストンと交換されるのではないかと仮定している。今後、新生タンパク質の代謝ラベルと、クロマチン免疫沈降、およびマイクロアレイを組み合わせることで、ゲノムのどの領域でこのようなヌクレオソームレベルでのダイナミックなクロマチン制御が行われているかを明らかにしていきたいと考えている。それぞれの群のクロマチン修飾の差異をクロマチン免疫沈降法にて検討した結果、遅延型遺伝子群で転写抑制に関与するヒストンH3の9番目リジンのメチル化(H3K9me)が高いこと、さらにこの遅延型遺伝子群の中に、もう一つの転写抑制性修飾であるH3K27me3が高い遺伝子が存在することを昨年度までの研究で明らかにした。また、上述の遺伝子発現解析にて、分裂細胞ではS期特異的に発現上昇する複製依存性コアヒストンH3.2の転写増強を見出した。このことから、クロマチンの主要因子であるコアヒストンが、神経興奮に応じてダイナミックに変換している可能性を考えた。今年度は、コアヒストンがニューロンにおいてタンパク質レベルでも発現増加するかどうかを検討した。

すなわち、ニューロンが興奮した際に新規合成されるタンパク質にメチオニンアナログであるアジ化ホモアラニンを取り込ませた後に、アルキル化ビオチンと反応させ新規タンパク質をビオチン標識した。クロマチンを精製後、ストレプトアビジンビーズにてビオチン標識されたタンパク質を含むクロマチンのみ回収し、ウェスタンブロッティング法にてピストンの検出を試みた。その結果、神経興奮を誘導した際に、ビオチン化されたヒストンH3のクロマチンへの取り込みが増加していることが確認された。すなわち、神経細胞の興奮に伴い、コアヒストンH3の合成が亢進し,かつクロマチンに取り込まれている可能性が示唆された。今後、ゲノムのどの領域に取り込まれているかをハイスループットシークエンシングで確認し、神経活動依存性に発現誘導される遺伝子との関連の有無、特に早期転写型と遅延型遺伝子群との関連について検討し、神経活動依存性転写制御機構をコアヒストンの動態という新規観点から検討していきたい。
オイルアグロメレ-ションによる石炭の事前脱硫を用いた酸性雨防止対策の検討

酸性雨原因物質であるSO_2の発生源対策の一つとして石炭からの事前脱硫を目的として、比較的温和な条件下で進行し高い石炭回収率を有するオイルアグロメレ-ションについて実験的に検討した。1.グラファイトを有機可燃分と見なし、これに種種の無機物質を混合させた模擬石炭を用いて、オイルアグロメレ-ションの原理的な分離性能を確かめた。石炭中の鉱物質の主成分をなすシリカ、アルミナについては96-98%という高い除去率を示し、石炭中の無機硫黄として代表的なパイライトについても90%以上が除去された。このようにパイライトは親水性鉱物とともにテ-ル中に分散したままとなるので、この方法はパイライト除去に対する潜在的有効性を持っている事がわかった。2.粉砕した種種の石炭にオイルアグロメレ-ションを適用したところ、パイライト性硫黄の50%程度が除去されるが、脱硫性能は一般に模擬石炭に対するものより低いことが判った。一つの原因としてスラリ-の分散集合状態を考えて考察した。3.本法では、脱硫と同時に約70%の高い脱灰率がえられるが、脱硫と脱灰は必ずしも同じ挙動を示すわけではない事が判った。例えば、かくはん回転数の増加につれて脱灰は向上するのに脱硫は低下するという逆の傾向が見られた。鉱物質と無機硫黄の分布状態の差異及び石炭の粉砕経過に大きく依存しているものと思われる。
行列変量分布論の進化

本研究は,次の4つのテーマからなる.[テーマ1]多変量分布論で必要となる群作用で不変な多項式,特殊関数の統一化. [テーマ2]非特異行列変量の分布論から特異な場合への展開.[テーマ3]多変量正規母集団からの頑健性を目指した発展.[テーマ4]量子化への展開.テーマ1, 4では,研究計画に示した通り既存研究の調査を行った.テーマ2では,国内研究集会での発表1件,国際会議での発表1件があった.テーマ3では,2本の論文が採択され,これらの研究成果を国内学会で発表1件,国際会議で1件の発表を行った.まず,テーマ3について研究の概略を書いておく.既存の研究が多変量正規分布で仮定されたものであるのに対して,正規分布よりも頑健な楕円分布での最大固有値・最小固有値分布の導出を行なった.1本目の論文では,母集団が1つの場合,2つ目の論文では2母集団の場合にそれぞれ,分布導出をおこなっている.楕円分布の一つである行列変量t分布のもとでのシミュレーション方法を確立した.次にテーマ2では,これまで知られていた多変数の超幾何関数を特異の場合に対応できるように改良,あるいは,新たに導入し,特異ケースでの共分散行列の最大固有値分布を正確に求めた.さらに,自由度や次元が大きくなった場合の理論を用いて,近似分布の導出を行なった.テーマ2で新たに導入した関数はテーマ1の統一化とも関連するため,テーマ1の枠組みでのテーマ2の一般化が今後期待できることが分かった.当初計画どおりに進んでいて,テーマ3については当初計画を達成し,より発展段階に進んだ.本研究は,[テーマ1]多変量分布論で必要となる群作用で不変な多項式,特殊関数の統一化,[テーマ2]非特異行列変量の分布論から特異な場合への展開,[テーマ3]多変量正規母集団からの頑健性を目指した発展,[テーマ4]量子化への展開である.テーマ1は,テーマ2,3,4のすべてに関わることであり,2,3,4の個別に進めて,最終的にテーマ1で統一化を図ることも検討している.したがって,当初計画どおり,来年度もテーマ2,3を重点的に研究する.テーマ2では,正確分布に必要な新たな超幾何関数を導入しその性質を調べ,実際の数値計算が可能かどうか検討する段階にあり今年度中に論文投稿を考えている.テーマ3については,成果もあがり概ね当初計画を達成したが,共同研究者や研究協力者との議論から,さらなる発展が見込めることが分かってきた.テーマ3について,当初の予定をより発展させた成果を今年度中に共同研究者とまとめる予定である.テーマ4について,テーマ2を応用できるかを検討し,また,今年度に研究協力者に文献調査等を行なってもらったので,昨年度までの我々の成果をテーマ4の中でどのように生かしていくか検討していく.本研究は,次の4つのテーマからなる.[テーマ1]多変量分布論で必要となる群作用で不変な多項式,特殊関数の統一化. [テーマ2]非特異行列変量の分布論から特異な場合への展開.[テーマ3]多変量正規母集団からの頑健性を目指した発展.[テーマ4]量子化への展開.テーマ1, 4では,研究計画に示した通り既存研究の調査を行った.テーマ2では,国内研究集会での発表1件,国際会議での発表1件があった.テーマ3では,2本の論文が採択され,これらの研究成果を国内学会で発表1件,国際会議で1件の発表を行った.まず,テーマ3について研究の概略を書いておく.既存の研究が多変量正規分布で仮定されたものであるのに対して,正規分布よりも頑健な楕円分布での最大固有値・最小固有値分布の導出を行なった.1本目の論文では,母集団が1つの場合,2つ目の論文では2母集団の場合にそれぞれ,分布導出をおこなっている.楕円分布の一つである行列変量t分布のもとでのシミュレーション方法を確立した.次にテーマ2では,これまで知られていた多変数の超幾何関数を特異の場合に対応できるように改良,あるいは,新たに導入し,特異ケースでの共分散行列の最大固有値分布を正確に求めた.さらに,自由度や次元が大きくなった場合の理論を用いて,近似分布の導出を行なった.テーマ2で新たに導入した関数はテーマ1の統一化とも関連するため,テーマ1の枠組みでのテーマ2の一般化が今後期待できることが分かった.当初計画どおりに進んでいて,テーマ3については当初計画を達成し,より発展段階に進んだ.本研究は,[テーマ1]多変量分布論で必要となる群作用で不変な多項式,特殊関数の統一化,[テーマ2]非特異行列変量の分布論から特異な場合への展開,[テーマ3]多変量正規母集団からの頑健性を目指した発展,[テーマ4]量子化への展開である.テーマ1は,テーマ2,3,4のすべてに関わることであり,2,3,4の個別に進めて,最終的にテーマ1で統一化を図ることも検討している.

したがって,当初計画どおり,来年度もテーマ2,3を重点的に研究する.テーマ2では,正確分布に必要な新たな超幾何関数を導入しその性質を調べ,実際の数値計算が可能かどうか検討する段階にあり今年度中に論文投稿を考えている.テーマ3については,成果もあがり概ね当初計画を達成したが,共同研究者や研究協力者との議論から,さらなる発展が見込めることが分かってきた.テーマ3について,当初の予定をより発展させた成果を今年度中に共同研究者とまとめる予定である.テーマ4について,テーマ2を応用できるかを検討し,また,今年度に研究協力者に文献調査等を行なってもらったので,昨年度までの我々の成果をテーマ4の中でどのように生かしていくか検討していく.論文投稿のために二万円程度を英文校正費として考えていたが,本年度に英文校正に出す段階までできておらず,次年度に持ち越しとなった.次年度に英文校正費に当てる予定である.
流れを伴う固体壁上でのレジオネラ属菌のバイオフィルム形成機構と薬剤耐性効果の解明

本研究は,人工水環境におけるレジオネラ属菌のバイオフィルム形成機構および薬剤耐性効果の解明により,レジオネラ症の感染防止対策を提言することを目的とした.実際の温水環境を模擬した流れを伴う配管内壁におけるバイオフィルム形成機構を解明し,さらにバイオフィルムの薬剤に対する防御機構を解明する.上記の目的を達成するために以下の二点に重点をおいた.(1)静止培養系の固体壁でのバイオフィルム形成機構と流動培養液系の固体壁上でのバイオフィルム形成機構を比較して温度条件および流動条件による形成機構の相違を明らかにする.(2)流動培養液系において固体壁上に形成されたバイオフィルムに対する薬剤効果(バイオフィルム内への薬剤浸透性,レジオネラの生存率,バイオフィルムの回復率)と薬剤耐性菌の出現の有無を明らかにする.研究成果は以下に記す.実際の温水環境を模擬した流動式温度勾配試験装置(Flow type Temperature Gradient Incubator: FTGI)およびレジオネラ培養装置を製作し,性能試験を行った.10cmペトリ皿に培養した寒天培地1枚のレジオネラを培養容器に入れ,48時間好気培養した後,FTGIで培養した.壁面温度と流体温度をそれぞれ37°C,42°Cに変化させて,サンプル水を24時間毎に採取して,ATP測定によりレジオネラ菌数の増減を測定した.約48時間後に装置を停止して,壁面スライドガラスにレジオネラのバイオフィルム付着を観察した.採取したバイオフィルムをBacLive/Dead染色および蛍光顕微鏡によりレジオネラ生死菌状態,共焦点レーザー顕微鏡により深さ方向のレジオネラ生死菌状態を観察した.温度37°Cと42°Cによるバイオフィルム中のレジオネラ生死菌の相違を明らかにした.本研究は,人工水環境におけるレジオネラ属菌のバイオフィルム形成機構および薬剤耐性効果の解明により,レジオネラ症の感染防止対策を提言することを目的とした.実際の温水環境を模擬した流れを伴う配管内壁におけるバイオフィルム形成機構を解明し,さらにバイオフィルムの薬剤に対する防御機構を解明する.上記の目的を達成するために以下の二点に重点をおいた.(1)静止培養系の固体壁でのバイオフィルム形成機構と流動培養液系の固体壁上でのバイオフィルム形成機構を比較して温度条件および流動条件による形成機構の相違を明らかにする.(2)流動培養液系において固体壁上に形成されたバイオフィルムに対する薬剤効果(バイオフィルム内への薬剤浸透性,レジオネラの生存率,バイオフィルムの回復率)と薬剤耐性菌の出現の有無を明らかにする.研究成果は以下に記す.実際の温水環境を模擬した流動式温度勾配試験装置(Flow type Temperature Gradient Incubator: FTGI)およびレジオネラ培養装置を製作し,性能試験を行った.10cmペトリ皿に培養した寒天培地1枚のレジオネラを培養容器に入れ,48時間好気培養した後,FTGIで培養した.壁面温度と流体温度をそれぞれ37°C,42°Cに変化させて,サンプル水を24時間毎に採取して,ATP測定によりレジオネラ菌数の増減を測定した.約48時間後に装置を停止して,壁面スライドガラスにレジオネラのバイオフィルム付着を観察した.採取したバイオフィルムをBacLive/Dead染色および蛍光顕微鏡によりレジオネラ生死菌状態,共焦点レーザー顕微鏡により深さ方向のレジオネラ生死菌状態を観察した.温度37°Cと42°Cによるバイオフィルム中のレジオネラ生死菌の相違を明らかにした.H15-16年度に製作した温度勾配型インキュベーター(TGI)の製作ノウハウに基づいて流動式温度勾配試験装置(FTGI)を製作した.FTGIは,Bacterial Adherence & Biofilm研究会から発行されているバイオフィルム実験講座において紹介されているキャピラリーフローシステムを参考にした.FTGIは送液ポンプ,培地用タンク,廃液用タンク,バクテリアエアベント,フローセルシステム,培地用温度制御システム,固体壁用温度制御システムから構成されている.フローセルシステムは,流路断面10mm×80mmでありバイオフィルムの形成が観察できるように観察窓を上部および側部に設けた.また,配管材料によるバイオフィルムの形成が比較できるように流路底部に取り外しのできる6枚のスライドガラス(26mm×76mm×1mm)を設置できるように工夫した.温度制御については培地温度と配管固体壁温度が独立して可変できるようそれぞれ循環装置を設置した.温度制御範囲は10°C60°Cであり通常レジオネラ属菌が生育する範囲を模擬できる.塩素などの薬剤はバクテリアエアベント下流に設けたイノキュレーションポートから注入できるようにした.装置の製作後に蒸留水を用いたFTGIの漏洩試験を実施して漏洩箇所のシールを行った.さらに現在蒸留水によるFTGI性能試験を下記の要項で行っている.(1)固体壁上の境界層内における速度分布および温度分布の測定値と理論式との比較,(2)標準温度計と熱電対との温度補正,(3)TGIと同様に48時間の温度変動液体培地BCYE-Alphaの導入してFTGIの性能試験を実施する.本研究は,人工水環境におけるレジオネラ属菌のバイオフィルム形成機構および薬剤耐性効果の解明により,レジオネラ症の感染防止対策を提言することを目的とした.実際の温水環境を模擬した流れを伴う配管内壁におけるバイオフィルム形成機構を解明し,さらにバイオフィルムの薬剤に対する防御機構を解明する.上記の目的を達成するために以下の二点に重点をおいた.(1)静止培養系の固体壁でのバイオフィルム形成機構と流動培養液系の固体壁上でのバイオフィルム形成機構を比較して温度条件および流動条件による形成機構の相違を明らかにする.

(2)流動培養液系において固体壁上に形成されたバイオフィルムに対する薬剤効果(バイオフィルム内への薬剤浸透性,レジオネラの生存率,バイオフィルムの回復率)と薬剤耐性菌の出現の有無を明らかにする.研究成果は以下に記す.実際の温水環境を模擬した流動式温度勾配試験装置(Flow type Temperature Gradient Incubator:FTGI)およびレジオネラ培養装置を製作し,性能試験を行った.10cmペトリ皿に培養した寒天培地1枚のレジオネラを培養容器に入れ,48時間好気培養した後,FTGIで培養した.壁面温度と流体温度をそれぞれ37°C,42°Cに変化させて,サンプル水を24時間毎に採取して,ATP測定によりレジオネラ菌数の増減を測定した.約48時間後に装置を停止して,壁面スライドガラスにレジオネラのバイオフィルム付着を観察した.採取したバイオフィルムをBacLive/Dead染色および蛍光顕微鏡によりレジオネラ生死菌状態,共焦点レーザー顕微鏡により深さ方向のレジオネラ生死菌状態を観察した.温度37°Cと42°Cによるバイオフィルム中のレジオネラ生死菌の相違を明らかにした.
各種機械的補助循環時の冠循環応答様式と心力学的効果の比較及び相関機序の実験的解明

種々の機械的補助循環法において,心力学的計測指標による心室減負荷の定量化と共に冠血流量を測定し,補助循環中の左心機能の推移と冠循環応答様式の分析を行いこれら両因子の不全心回復への影響を検討した.機械的補助循環における不全心の左室圧・容積関係からSuga,Sagawaらの方法を用いて心室の外的仕事量・心収縮能(Emax)・エネルギー効率・酸素消費量などを算出し,同時に左前下行枝冠血流量の変動を計測し次の検討を行った.(1)各種機械的補助法における減負荷(Unloading)効果:遠心ポンプによる左心補助循環では左房脱血で左室ループは左方に平行移動するが左室圧の減少はなく左室脱血では左室ループは脱血量増加につれて左室圧も減少し等容収縮期・拡張期共に容積は変化するため左室ループは三角形となり面積は著減し左室心筋酸素消費量の減少を示した.また,左前下行枝冠血流量は左室ループの変化につれて冠血管抵抗も変動し特に左室脱血では左室圧発生時間は短縮するため冠血流時間は延長し最大値も増加した.したがって左心補助では心力学・冠循環の両面で左室脱血法が効果的であった。(2)大動脈内バルーンパンピング法では心力学的には左室等容収縮期の中期以降でのバルーン収縮でエネルギー効率・酸素消費量ともに至適値を示し冠循環面ではバルーン収縮による冠血流の逆流は消失した.従来のバルーン駆動法より今回案出した駆動法が最近の駆動装置の力量からみてより効果的な駆動法と実験的に証明できた。
インフルエンザウイルスの新規ウイルス蛋白質の解析

これまでに、A型インフルエンザウイルスのPA遺伝子から、ポリメラーゼ複合体を構成するPA蛋白質だけでなく、抗PA抗体と反応するが分子量の小さい未同定の蛋白質が発現することを明らかにしていた。本研究では、この新規ウイルス蛋白質「PA蛋白質N末端欠損体」の機能および重要性を解析した。N末端欠損体はA型インフルエンザウイルスで広く保存されており、ウイルス増殖・病原性の発現に効果的に働くことがわかった。さらに、N末端欠損体はPA蛋白質様のポリメラーゼ機能を持たないことがわかった。つまりPAのN末端欠損体はインフルエンザウイルスの増殖、病原性の発現に重要であることが明らかになった。A型インフルエンザウイルスのPA遺伝子は、ウイルスポリメラーゼ複合体を構成するPA蛋白質をコードする。これまでに、インフルエンザウイルス感染細胞内にPA蛋白質とは分子量が異なる未同定のウイルス蛋白質が発現しており、それはPA mRNAの11番目および13番目のAUGコドンからPA蛋白質と同フレームで翻訳されたものであることを明らかにしていた。本研究では、新規ウイルス蛋白質「PA蛋白質N末端欠損体」の機能および重要性を解明することを目的とした。シークエンスデータベースおよび蛋白質の検出により、N末端欠損体がA型インフルエンザウイルスで広く保存されていることが示唆された。そして、N末端欠損体を発現しないミュータントウイルスの培養細胞における増殖性は、野生型ウイルスの10分の1以下であり、マウスにN末端欠損体を発現しないミュータントウイルスを感染させたところ、ウイルス増殖性は野生型ウイルスの10分の1以下で、病原性も弱くなった。つまり、N末端欠損体の発現がウイルス増殖・病原性の発現に効果的に働くことがわかった。次に、N末端欠損体の機能を調べた。PA蛋白質が存在しない条件でのミニゲノムアッセイにより、N末端欠損体にはPA蛋白質様のポリメラーゼ機能が全くないこと、PA蛋白質存在下でのミニゲノムアッセイにより、N末端欠損体はポリメラーゼ機能にほとんど影響しないことがわかった。そこで、インターフェロンによる抗ウイルス応答への関与を、I型インターフェロンを発現しない細胞におけるウイルス増殖性により調べたところ、N末端欠損体がインターフェロンによる抗ウイルス応答を阻害しないことがわかった。以上の結果から、PAのN末端欠損体は、その機能はいまだ不明であるが、インフルエンザウイルスの増殖、病原性の発現に重要であることが明らかになった。これまでに、インフルエンザウイルス感染細胞内にPA蛋白質とは分子量が異なる未同定のウイルス蛋白質が発現していること、それはPA mRNAの11番目および13番目のAUGコドンからPA蛋白質と同フレームで翻訳されたものであることを明らかにしていた。本研究では、新規ウイルス蛋白質「PA蛋白質N末端欠損体」の、ウイルス増殖における機能および重要性を解明することを目的とした。まず、これまで使用していたA/WSN/33株だけでなく、他のインフルエンザウイルス株でもN末端欠損体が保存されているかどうかを調べたところ、シークエンスデータベースではほとんどのA型インフルエンザウイルスで保存されており、また解析した全てのウイルス株でウイルス感染細胞内にN末端欠損体の発現が確認されたことから、これらのN末端欠損体がA型インフルエンザウイルスで広く保存されていることが示唆された。11番目または13番目のAUGコドンに変異を挿入して作製した、N末端欠損体を発現しないミュータントウイルスの培養細胞における増殖性を調べたところ、野生型ウイルスと比べて10分の1以下に低下した。また、インフルエンザウイルス感染の動物モデルであるマウスに、N末端欠損体を発現しないミュータントウイルスを感染させ、野生型ウイルスと比較したところ、ウイルス量が10分の1以下に低下し、病原性も弱くなった。つまり、N末端欠損体の発現がウイルス増殖・病原性の発現に効果的に働くことが明らかになった。これまでの結果から、PAのN末端欠損体は、インフルエンザウイルスの増殖、病原性の発現に重要であることが明らかになった。これまでに、研究実施計画どおりに、インフルエンザウイルス感染細胞で発現するPAのN末端欠損体のウイルス増殖における重要性を明らかにすることができた。おおむね順調に研究は進んだといえる。今後も、研究実施計画どおりに、PAのN末端欠損体の性質および機能を解析する予定である。具体的には、N末端欠損体および他のウイルス蛋白質の発現カイネティクスを解析し、N末端欠損体の細胞内局在を明らかにし、N末端欠損体のポリメラーゼ機能の解析、また、ウイルスポリメラーゼ蛋白質によるポリメラーゼ機能におけるN末端欠損体の重要性の解析を行う計画である。細胞培養およびPAのN末端欠損体の検出に使用する試薬類などの消耗品に使用する予定である。
bcc-hcp変態の組織形成過程のボンドオーダーポテンシャルによる理解

bcc-hcp変態は,IV族の遷移金属のTi,Zrに見られる同素変態だけでなく,B2型金属間化合物の変態機構や拡散を理解するうえでも重要であり多くの研究がなされている.しかし,なぜ粗な構造であるbcc相が,ZrやTiの高温域で安定かという要因は解明されてなかった.我々は,bccの有限温度での安定性を議論するための計算法の確立と実際の計算をおこなった.第一原理計算によって得られた基底状態の電子状態密度にFermi分布にしたがった温度分布を入れ,電子自由エネルギーを計算した.その結果1.ω相はわずかではあるがhcp相よりも不安定となっている.2.bcc相はhcp相より約0.1eV/atomエネルギーが高くなっている.3.3000Kを越えると,bcc相は格子位置のまわりで局所的に安定となり,さらにhcp相に対してもより安定である.という結果を得た.したがって,bccの安定性には電子系も効いているが,その効果は十分ではないことが判明した.bcc-hcp変態は,IV族の遷移金属のTi,Zrに見られる同素変態だけでなく,B2型金属間化合物の変態機構や拡散を理解するうえでも重要であり多くの研究がなされている.しかし,なぜ粗な構造であるbcc相が,ZrやTiの高温域で安定かという要因は解明されてなかった.我々は,bccの有限温度での安定性を議論するための計算法の確立と実際の計算をおこなった.第一原理計算によって得られた基底状態の電子状態密度にFermi分布にしたがった温度分布を入れ,電子自由エネルギーを計算した.その結果1.ω相はわずかではあるがhcp相よりも不安定となっている.2.bcc相はhcp相より約0.1eV/atomエネルギーが高くなっている.3.3000Kを越えると,bcc相は格子位置のまわりで局所的に安定となり,さらにhcp相に対してもより安定である.という結果を得た.したがって,bccの安定性には電子系も効いているが,その効果は十分ではないことが判明した.
微生物が産生するメンブランベシクルの生産機構及びバイオフィルム中での機能の解明

多くの病原性細菌は毒性を内包する膜小胞"Membrane vesicles(MV)"を細胞外に放出する。MVは宿主や異種微生物へ病原因子を運搬する機能を有する。本研究では田生産機構及びMVによる情報伝達機構の解明、さらにはMV生産制御技術を発見し、MVによる感染制御に繋がる知見を得た。バイオフィルム等の微生物複合系では高濃度の細胞外情報伝達物質が存在しており、この情報伝達物質はバイオフィルム形成に関わる遺伝子の制御も行っている。緑膿菌は細胞外情報伝達物質の一つとしてPseudomonas quinolone signal(PQS)を分泌しており、これはMV生産制御因子としても働く。シグナル物質PQSが異種細菌にどのような影響を与えるかを検討したところ、PQSは異種のグラム陰性細菌のMV生産を促進させるだけでなく、グラム腸性細菌においてもMV生産を誘発させることが明らかになった。また、MVはPQSの情報伝達に重要な役割を果たしているが、MVがどのように細胞と相互作用し情報伝達に寄与しているのか、詳細はあまり良くわかっていない。そこで、蛍光ラベルしたMVを用いて、MVと細胞の相互作用を解析した。その結果、MVが細胞に融合するためには表面の負電荷が重要であることが示された。大腸菌を含む多くの細菌はインドール化合物を細胞外情報伝達物質として分泌する。申請者はインドール化合物を含む二環炭素化合物が緑膿菌のPQS生産及びMV生産を抑制することを発見し、緑膿菌の病原制御における新たな可能性を提示した。MVは宿主や異種微生物へ病原因子を運搬する機能を有することから、細菌感染を制御するためにはMVの生産機構を解明することが重要である。本研究では日和見感染菌として知られる緑膿菌をモデル微生物として用いた。これまでの研究により、外膜タンパクのフォールディングに関与するOmp85ホモログの欠損株ではMVの過剰生産を確認している。このことから、ミスフォールディングな外膜タンパクがMV生産に関与していると作業仮説を立てた。実際に、ペリプラズムに局在する数種プロテアーゼはMV生産抑制因子として働いていることを明らかにし、ミスフォールディングな外膜タンパクによるMV生産制御を実験的に示した。また、ミスフォールディングな外膜タンパクはバイオフィルム構成成分であるアルギン酸合成にも働いていることが知られているが、アルギン酸合成制御因子もMV生産調節因子であることを示し、新規なMV生産経路を提唱した。また、緑膿菌においてMV生産を促進するQuorum sensingのシグナル物質としてPseudomonas quinolone signal(PQS)が知られているが、PQSは異種細菌に対しても形質変化を起こすことを見いだした。モデル微生物として大腸菌を用い、PQSが鉄利用の制御、MV生産の誘発、運動性の抑制といった効果を有することが分かった。また、更なる詳細な解析によって、PQSによるMV生産誘発はリポ多糖の荷電変化によるものであることを示した。さらに、この現象は他の異種細菌に対しても普遍的に起こることを示した。以上の結果は細菌におけるMV生産機構解明に繋がる知見となった。
古代日韓における非鉄金属製品の成分組成に関する比較研究

本研究は,西暦5世紀から7世紀までの間、日本と韓国において使用された金銀装飾の非鉄金属製品とくに金銅製品の成分組成を科学分析することによって、古代日韓におけるそれら製品の製作技法および技術交流の実態を把握しようとしたものである。韓国側では国立文化財研究所保存科学研究室が、三国時代新羅国の王陵とされる皇南大塚(5世紀後半)北墳および南墳出土品のうちの装身具・武具・馬具から分析試料を採取し、また、釜山大学校博物館が同時代伽〓地域の王墓級古墳である大成洞古墳群や玉田古墳群(3世紀後半5世紀)出土品のうちの装身具・馬具から分析試料を採取した。いずれも、学術的には未報告であるが、それらが有する歴史的意義の重要性は日本においても最近報道された貴重な資料である。日本側では国立歴史民俗博物館が、千葉県蕪木5号墳(6世紀)出土の金銅製巾着形容器や金銅装小刀など、古墳時代の前方後円墳に副葬された製品から分析試料を採取した。これらは、日本において極めて類例の少ない形態を呈しており、その製作技法や製作地の解明が課題となっていた資料である。これらの資料の成分組成分析については、日本の国立歴史民俗博物館に設置されている元素分布分析ソフトを併用したエネルギ-分散型X線マイクロアナライザ-付電子顕微鏡を用いた。その分析機器から得られた結果は次のとおりである。1.金銅製品(1)金膜についてその厚さは、210ミクロンの範囲にあり、ほぼ一定している。金膜は、高純度の金であることが多いが、銀を少量混える資料もある。今回の対象資料に限っては、韓国では新羅の王陵への副葬品は金の純度が高く、伽〓地域の古墳への副葬品は金に銀を混えることが多いという地域的傾向を指摘できよう。また、金膜中に水銀を含んでいる資料がほとんどあるので、それらは水銀中に金の薄片を溶融させた金アマルガムを塗布して金膜を固着するアマルガム鍍金法によったものであることを知られた。(2)銅地について金銅製品の基礎材である銅の地板のついては、青銅ではなく、純度の高い銅を用いている。しかし、この銅地中には少量ながら鉛とアンチモンからなる小粒が存在し、資料によっては鉛とアンチモンの構成が鉛で1898%、アンチモンで282%と差異を示すことが判明した。しかも、資料断面に見られるその小粒の分布状態から、分析対象資料の多くが鍛造されたものであることも明らかとなった。つまり、金銅製品の成形には、一部の製品や部品が鋳造技法によるほか、多くの製品が鍛造技法によったとする考古学的見解を裏付ける結果となった。なお、銅地中にも銀を含む資料が存在する。2.鉄地金装飾製品(1)金膜について厚さは金銅製品の金膜と大差なく、また、高純度の金であったり銀を混えることも同様である。一方で、金膜中に水銀が含まれていた点は予想外の結果であった。つまり、理論的には、鉄地にアマルガム鍍金ができないとされていたことに対して、アマルガム鍍金を施した実例が存在することになった。その技法は、地板の分析によって理解できることとなった。(2)鉄地板の表面について鉄地板の表面には、金銅製品の銅地中に含まれていた鉛とアンチモンからなる構成物が層状に存在している事実を認めた。この例は鉄地にアマルガム鍍金を可能にするために施された工夫であり、従来の学説を訂生すべき注目される新例である。以上のほか、日本古墳出土の複数の耳環を分析することによって当初の2個1対の組合せを復元できた成果もある。今後もこの比較研究を継続することによって、製作工程や製作地あるいは製作技術の交流の実態が明らかになろう。その成度は、古代日韓における人の移動のみにとどまらず、政治や文化の交流解明に寄与すると予測される。

1.金銅製品(1)金膜についてその厚さは、210ミクロンの範囲にあり、ほぼ一定している。金膜は、高純度の金であることが多いが、銀を少量混える資料もある。今回の対象資料に限っては、韓国では新羅の王陵への副葬品は金の純度が高く、伽〓地域の古墳への副葬品は金に銀を混えることが多いという地域的傾向を指摘できよう。また、金膜中に水銀を含んでいる資料がほとんどあるので、それらは水銀中に金の薄片を溶融させた金アマルガムを塗布して金膜を固着するアマルガム鍍金法によったものであることを知られた。(2)銅地について金銅製品の基礎材である銅の地板のついては、青銅ではなく、純度の高い銅を用いている。しかし、この銅地中には少量ながら鉛とアンチモンからなる小粒が存在し、資料によっては鉛とアンチモンの構成が鉛で1898%、アンチモンで282%と差異を示すことが判明した。しかも、資料断面に見られるその小粒の分布状態から、分析対象資料の多くが鍛造されたものであることも明らかとなった。つまり、金銅製品の成形には、一部の製品や部品が鋳造技法によるほか、多くの製品が鍛造技法によったとする考古学的見解を裏付ける結果となった。なお、銅地中にも銀を含む資料が存在する。2.鉄地金装飾製品(1)金膜について厚さは金銅製品の金膜と大差なく、また、高純度の金であったり銀を混えることも同様である。一方で、金膜中に水銀が含まれていた点は予想外の結果であった。つまり、理論的には、鉄地にアマルガム鍍金ができないとされていたことに対して、アマルガム鍍金を施した実例が存在することになった。その技法は、地板の分析によって理解できることとなった。(2)鉄地板の表面について鉄地板の表面には、金銅製品の銅地中に含まれていた鉛とアンチモンからなる構成物が層状に存在している事実を認めた。この例は鉄地にアマルガム鍍金を可能にするために施された工夫であり、従来の学説を訂生すべき注目される新例である。以上のほか、日本古墳出土の複数の耳環を分析することによって当初の2個1対の組合せを復元できた成果もある。今後もこの比較研究を継続することによって、製作工程や製作地あるいは製作技術の交流の実態が明らかになろう。その成度は、古代日韓における人の移動のみにとどまらず、政治や文化の交流解明に寄与すると予測される。
神経活性物質の生成と存在様式

SPとENKおよびSPとNTの同一細胞内共存が、ラットの内側視索前野視床下部前核、脳室周囲核、脳弓周囲核、外側核、後核、乳頭体前核においで認められた(塩谷)。またVIPとPHIとAVPとの共存が、イヌの視索上核と室傍核大細胞部において確かめられた(井端)。一方、室傍核小細胞部から正中隆起部に投射するCRF、AVPおよびENK共存細胞の神経終末内で、副腎摘出による変動を観察した(大黒)。またNPYとSSの共存がヒトの弓状核で、Galanin(Ga)とNPYの共存が腹側核で観察され、またGaとSSの共存、GaとGRPの共存も認められた(長村)。またニューロメディンK(NK)の前駆体PPT-Bの遺伝子発現様式の解析から、PPT-Bは126個のアミノ酸からなり、NK配列はC末端にあることがわかった。PPT-BmRNAは視床下部で最も高く、腸、視床、中脳、扁桃体でも高いが、三叉神経節と尾状核では低かった(喜多村)。一方ラットの脳室内に投与したリューモルフィンは、基礎血圧およびアンジオテンシン【II】(A【II】)により上昇した血圧を低下させ、AVPの基礎分泌およびA【II】による分泌亢進を抑制した(井村)。次にCAと5HTの合成酵素であるモノオキシゲナーゼの補酵素のビオプテリンとその生成中間体ネオプテリンのヒト脳内分布を検討した(永津)。またVIPはムスカリン様受容体を介するモルモット副腎髄質からのCA分泌を促進し、チロシンからのCA合成をも促進した(岡)。また、免疫染色法の改良により、ヒスタミン線維の脳内分布が更に詳細に解明され、室傍核、視索上核、三叉神経中脳路核にとくに濃密な終末が観察され、また正中隆起部や下垂体後葉にも線維が認められた(和田)。一方、【VB_1】欠乏食で飼育したmuricideラットにDA作動薬を投与するとmuricideが抑制され、その機作としてDAが前シナプスDA受容体に作用する可能性が示唆された(小倉)。
音声認識による話題語の継時的提示に関する研究

連続的なメディアコンテントに対して、音声認識結果として得られるテキスト情報をもとに、再生時点での要約情報を時間的に変化させる新たな手法を提案した。とくに、話題の変化と提示するキーワード選定の問題を同時に解決する手法として、統計的なトピック言語モデルの適用を提案し、映像に対して字幕とキーワードを付与し、その話題の変化を複数のキーワードによって示すシステムとして実現し、その有効性を明らかにした。平成22年度は,話題語の継時的提示のために,話題の変化と提示するキーワード選定の問題を同時に解決する手法として,複数のLDA(Latent Dirichlet Allocation)を統合する手法を提案し,連続的なメディアコンテントに適用した。LDAは文中の単語の生起確率が潜在的なトピックに依存するトピック言語モデルの一つであり,そのトピックの事前確率がディリクレ分布に従うことを仮定した生成型の確率言語モデルである。これまで複数LDAの統合手法を,単語の予測入力に適用してきた。これは単語列の履歴から,つぎに接続する単語候補を,高精度・ロバストに予測する手法である。本研究では,トピック数の異なる複数のLDAを統合して,話題境界の検出とキーワードの選定に利用している。提示方法としては,キーワードにトピックごとに異なる文字色を付与し,話題の変化を示す方法を提案した。また具体的な提示システムとして,音声と動画を含む映像コンテントに対して,キーワードの文字色を変化させた字幕を付与するシステムを開発した。この提示システムを用いて,被験者に,字幕を付与した映像コンテントを提示し,その有効性を評価する心理学的な実験を行い,その有効性を示した。さらに,フィラー(つなぎ語)の除去や,条件付き確率場を利用した文境界の検出手法について検討した。今後は,トピック言語モデルを用いたテキスト処理と音声認識処理を統合することと,音声認識精度をさらに向上させる必要がある。これらの成果は,国際会議(2件)と国内研究会(1件)において,発表した。映像コンテントの理解を支援するための新しい手法を提案した点が,とくに重要である。本研究の目的は,各時点での要約情報を連続的なメディアに自動付与する手法を明らかにする。継時的な要約提示とは,メディアコンテントに対して,再生時点の話題や内容を短時間に把握できる部分的な要約情報を,時間とともにゆるやかに変化させて自動的に提示することである。ニュース映像では,国際,経済,スポーツなどの様々な内容の説明が一定時間続き,複数の話題の境界も,比較的明確である。一方,解説や講義などでは,全体の内容は特定の領域に関するものであって,内容の変化は小さくまた連続的であり,そうした話題変化の処理が解決すべき課題である。平成23年度は,音声認識結果の利用方法と継時的提示手法の汎用性を検討した。音声認識については,提示するキーワードと言語表現の選択に力点を置いて検討した。トピック境界推定において,実際の話題の変化より早い変化を誤って推定する誤りに対し,音声区間検出などで用いられるハングオーバー処理とトピック混合比の平滑化の2つの方法を検討した。その結果,短い区間のわきだしを抑制し,推定された境界の再現率を向上させることができたが,精度向上にはさらなる検討が必要であった。提示するキーワード候補については,領域の違いや話題展開形式が異なる新聞記事,講演,ニュース解説を対象としてトピック言語モデルとの関連について検討した。とくにトピック混合比による境界推定結果を用いて,対象とするテキストからキーワード候補を選定する方法を検討した。潜在トピック数を変化させることで,適切な候補が得られる見込みが得られたが,対象とする区間が一般的な用語を多く含むような場合への対応が必要であることがわかった。音声認識による映像メディアへの自動字幕付与は,聴覚障碍者や高齢者への支援となる.本研究は,映像メディアの音声認識結果に対して,発話内容を短時間に把握できるような情報を抽出し,字幕とともに提示する技術の開発を目的とした.音声認識結果から,時間とともにゆるやかに変化する話題や内容を表すキーワード群を抽出する手法を提案することと,キーワード群を字幕に併せて提示する方法の有効性を実験的に明らかにすることを特色とする.話題の変化を表すキーワード群による要約提示用のテキスト生成手法と,音声認識結果からの話題語抽出手法と,認知心理学的な評価実験による有効性の評価の3項目に重点を置いた.また経済とスポーツのような大きな話題の変化ではなく,全体の中で話題や内容が小さく連続的に変化するようなコンテントへの適用をねらいとした.コンテント内の話題推移の推定とキーワード群抽出の実験においては,領域の違いや話題展開形式が異なる新聞記事,講演,ニュース解説を対象とした.評価実験においては,映像に字幕とキーワード群を付与した閲覧システムを作成し,被験者実験を行った.キーワード群の抽出においては,複数のトピック言語モデルの結果を統合する方法を新たに提案した.また音声認識誤りの影響についてはWeb文書の利用の有無などの異なる実験条件でキーワード群を抽出して比較を行った.話題の変化とそれを表すキーワード群の抽出手法として,統計的な言語モデルを利用する手法を提案した.また音声認識誤りへの対策として,平均相互情報量の推定にWeb文書を利用する手法を提案した.さらに映像に対して字幕とキーワード群を付与し,その話題の変化を提示するシステムを作成した.被験者

実験によって,提案した手法の有効性を明らかにした.音声認識結果の利用方法と継時的提示手法の汎用性について,新たな知見が得られている。研究成果を,国際会議,国内の学会で発表しており,おおむね順調に進展していると考えている。24年度が最終年度であるため、記入しない。平成24年度は,最終年度として,話題語の継時的提示に関する様々な研究成果を,提示システムとしてまとめて,認知心理学的な実験を行う。とくに話題境界とキーワード候補の推定と,システム利用者の認知的な負担との関連性に留意して,その有効性を評価する。また内容の変化が小さく,連続的なコンテントにおいて,複数トピックが同時に推移するモデルを利用した話題境界とキーワード候補の推定方法を検討する。
ニホンメダカ胸ヒレ欠失変異plの遺伝子解析

葉緑体DNA上のDNA塩基配列情報もしくは核DNA上の18SrDNA遺伝子塩基配列情報を利用し、針葉樹類の系統進化解明を行った。主な成果は次の通りである。(a)戻し交配HNI/pl(雌)Xpl/pl(雄):3組を用いて597個体のF1について調べたところ、野生型278(46.6%)、pl317(53.1)、lpl2(0.3%)であった。さらに約500個体を調べたがこの値はほぼ変わらなかった。lplの出現頻度はかなり高いと言わなければならない。(b)lpl-1(male)xlpl-2(female):pl90(53%)、lpl43(25%)、wild type38(22%)。更に良く解析すると、plについては約半数(47)が発生初期には胸鰭budを形成していることが明らかとなった。(c)lpl-1xpl/pl:lpl-1の表現型とplの表現型が1対1で分離することはなく殆どがplの表現型を示し約1割がlplを示した。これまでの実体顕微鏡による観察から、lpl変異には胸ヒレの成長過程に関して多数の表現型があることが示唆されている。最も典型的なタイプは、発生初期には両方の胸ヒレbudが出現するが発生とともに右ヒレの生育がよいものが目立ち左はbudのままでヒレの成長が見られないものが多く観察された。これまでの実験から、表現型の現われ方は始め予測したものよりも複雑で単一な遺伝子の支配によっては説明できないように思われる。遺伝子のバックグラウンドがヘテロであり、その点も結果を複雑にしているため、今後の実験としてはこの点を改善する必要がある。1.針葉樹全体の系統進化の解明:針葉樹類を構成する8科のatpA、petA、rbcLの葉緑体DNA上の3遺伝子(約3,000bps)の塩基配列を決定した。得られた塩基配列情報を最尤法等で解析した結果、従来の仮説とは異なる知見が得られた。2.ヒノキ科における系統進化の解明:11属を対象として、上記3遺伝子のDNA塩基配列を決定した。これまでヒノキ属に含められていたアラスカヒノキ(Chamaecyparis nootkatensis)は、イトスギ属(Cupressus)に属するのが妥当であることが判明した。さらに、ヒノキ属6種の18SrDNAの塩基配列(1,694bps)を決定した。各樹種は、種特異的な塩基配列を保有しており、これを利用することにより樹種識別が可能であることが明らかとなった。3.マツ科における系統進化の解明:マツ科を構成する9属を対象として、葉緑体DNA上の6遺伝子領域(上記3遺伝子とrpoA、rps2、rps3)の塩基配列を決定し、塩基配列情報に基づく系統解析を行った。マツ科は、4亜科に分類されることが判明した。4.マツ属の新たな分類体系の構築:針葉樹中最大の分類群であるマツ属において、葉緑体DNA塩基配列情報を利用し、系統進化に基づく分類体系の再構築を行った。葉緑体DNA上の3遺伝子(atpA、rbcL、rpoA)の塩基配列情報から分子系統樹を作成し、この系統樹を基に、従来の分類体系とは大きく異なる新たな分類体系を提唱した。新分類体系の4節、11亜節は、分布地域が近い種群で構成され、マツ属の系統進化に地理的要因が大きく影響していた。1.針葉樹全体の系統進化の解明:

針葉樹類を構成する8科のatpA、petA、rbcLの葉緑体DNA上の3遺伝子(約3,000bps)の塩基配列を決定した。得られた塩基配列情報を最尤法等で解析した結果、従来の仮説とは異なる知見が得られた。2.ヒノキ科における系統進化の解明:11属を対象として、上記3遺伝子のDNA塩基配列を決定した。これまでヒノキ属に含められていたアラスカヒノキ(Chamaecyparis nootkatensis)は、イトスギ属(Cupressus)に属するのが妥当であることが判明した。さらに、ヒノキ属6種の18SrDNAの塩基配列(1,694bps)を決定した。各樹種は、種特異的な塩基配列を保有しており、これを利用することにより樹種識別が可能であることが明らかとなった。3.マツ科における系統進化の解明:マツ科を構成する9属を対象として、葉緑体DNA上の6遺伝子領域(上記3遺伝子とrpoA、rps2、rps3)の塩基配列を決定し、塩基配列情報に基づく系統解析を行った。マツ科は、4亜科に分類されることが判明した。4.マツ属の新たな分類体系の構築:針葉樹中最大の分類群であるマツ属において、葉緑体DNA塩基配列情報を利用し、系統進化に基づく分類体系の再構築を行った。葉緑体DNA上の3遺伝子(atpA、rbcL、rpoA)の塩基配列情報から分子系統樹を作成し、この系統樹を基に、従来の分類体系とは大きく異なる新たな分類体系を提唱した。新分類体系の4節、11亜節は、分布地域が近い種群で構成され、マツ属の系統進化に地理的要因が大きく影響していた。(a)戻し交配HNl/pl(雌)×pl/pl(雄):3組を用いて597個体のF1について調べたところ、野生型278(46.6%),Pl317(53.1),lpl2(0.3%)であった。さらに約500個体を調べたがこの値はほぼ変わらなかったlplの出現頻度はかなり高いと言わなければならない。(b)lpl-1(male)×lpl-2(fema1e):pl90(53%),lpl43(25%),wild type38(22%)。更に良く解析すると、plについては半数が約半数(47)が発生初期には胸鰭budを形成していることが明らかとなった。(c)lpl-1×pl/pl:lpl-1の表現型とplの表現型が1対1で分離することはなく殆どがplの表現型を示し約1割がlplを示した。これまでの実体顕微鏡による観察から、lpl変異には胸ヒレの成長過程に関して多数の表現型があることが示唆されている。最も典型的なタイプは、発生初期には両方の胸ヒレbudが出現するが発生とともに右ヒレの成育がよいものが目立ち左はbudのままでヒレの成長が見られないものが多く観察された。これらの表現型と遺伝子変異との関係を厳密に対応付けるため、実体顕微鏡/ビデオモニター観察装置を設置しこれらの典型的lpl変異個体の発生過程を客観的かつ詳細に記述することを試みた。(a)戻し交配HNI/pl(雌)xpl/pl(雄):3組を用いて597個体のF1について調べたところ、野生型278(46.6%),pl 317(53.1),lPl 2(0.3%)であった。さらに約500個体を調べたがこの値はほぼ変わらなかった。lplの出現頻度はかなり高いと言わなければならない。(b)lpl-1(male)xlpl-2(female):pl 90(53%),lpl 43(25%),wild type 38(22%)。