hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ニワトリ細胞株DT40の遺伝子破壊による、DNA損傷への応答機構の網羅的解析

相同組換えは、抗がん剤(シスプラチン、カンプトテシン)によって生じたDNA損傷を修復する機構の1つであり、50種類以上の分子が関与する。我々は、ニワトリDT40細胞で遺伝子破壊を実施することにより、以下のタンパク分子の、相同組換えにおける役割を解明した。解析した分子とは、RAD51補助因子(BRCA1, BRCA2, Palb-2, RAD51 paralogs (5種類), Rad52, Sfr1, Sws1)、DNA合成酵素、DNA切断酵素(CtIP, Fan1, RAP80, Slx4)である。#ニワトリDT40細胞株を使った、変異原をハイスループットにスクリーニングする実験手法の構築(論文投稿中)毎年1,000種類以上の化学物質が、新たに産業界に導入される。化学物質の変異原を検出する為に、日本の化学物質審査規制法(化審法)は、エームステスト(Ames test、細菌の復帰突然変異の検出)を使うことを定めている。エームステストには、擬陽性が多い。そして、エームステストは、フレームシフトを起こす変異原しか検出できず、DNA切断を起こす変異原を検出できない。よって、変異原性がある化学物質のなかの半分しか、その変異原性を検出できない。すなわち偽陰性も多い、という問題がある。化学物質の変異原を検出する為に、化審法で定められた、もう1つの方法は、小核テスト(ヒト細胞の染色体断裂を細胞核の形態観察にて検出)である。この手法も、擬陽性が多い。さらに、染色体断裂を誘導する化学物質しか、その変異原性を検出できないという擬陰性問題もある。これまでの、変異原性を検出するバイオアッセイでは、すべて、"野生型"(=DNA修復機能が正常)細胞が使われている。この手法には、以下の問題がある。野生型細胞は、化学物質が作ったDNA損傷をすぐに修復できることである。ゆえに、野生型細胞を使う限り、そのバイオアッセイの感度には限界がある。感度を上昇させる為に、我々はDNA修復欠損株を使うことを提案する。そして、化学物質に曝露したときに、DNA修復欠損株と野生株とのあいだで、化学物質への応答に差異があれば、それは、化学物質のDNA毒性(変異原性)を反影していると言える。我々は、以上のアイデアに基き、変異原をハイスループットにスクリーニングする実験手法を樹立した。(1)CTIPの機能解析CTIPは、BRCA1(家族性乳がん原因遺伝子で相同組み換えに関与)と結合する。CTIP完全欠損細胞とBRCA1と結合できないCTIP S332A発現細胞とを作った。そしてCTIPが、BRCA1依存的およびBRCA1非依存的に機能するDNA修復をそれぞれ解明することを試みた。以下の2点を解明した:(i)CTIPがBRCA1非依存的に相同組換えの最初のステップに機能する。(ii)CTIPがBRCA1依存的に、トポイソメラーゼポイズンと呼ばれる抗がん治療薬によって生じた2重鎖切断(切断端にトポイソメラーゼが共有結合)を修復するのに特異的に関与(共有結合したポリペプチドを除去)する。この研究成果は、PLoSGeneticsに発表した。SSB1-/-細胞とSSB2-/-細胞とをそれぞれ作製した。これからSSB1-/-/SSB2-/-2重遺伝子破壊細胞を作製する予定である。(3)相同組み換えにおける、ヒストン修飾の機能解析UBC13(E2)と共同して働くE3ユビキチンリガーゼの1つが、RNF168であることを明らかにした。(4)新規のRad51活性の制御因子の機能解析(5)標的組み換えに関与するDNAポリメラーゼの同定複製ポリメラーゼδは、4種類のタンパク分子から構成される。このうちp66と呼ばれるタンパク分子の遺伝子破壊細胞を作った。この破壊細胞は、相同組換えが低下していなかった。(1)RAP80の機能解析RAP80は、腫瘍抑制遺伝子、BRCA1と直接に結合する。このBRCA1-RAP80複合体の機能は不明であった。この機能をRAP80遺伝子破壊細胞を作出することにより解析した。そしてBRCA1-RAP80複合体は、DNA切断5'端から化学修飾を除去するのに必要なことを証明した。成果は、我々の教室の院生と准教授とが論文発表した(論文1)。(2)相同組換えに関与するDNAポリメラーゼの同定-1相同組換えは、必ずDNA合成のステップを伴う。このステップに、どのDNAポリメラーゼが関与するかは必ずしも明らかでなかった。我々は、Polη/Polν/Polθの3重欠損株をニワトリBリンパ細胞株(DT40)から作製し、相同組換えによる抗体V遺伝子の多様化を解析した。

そして、この3種類のDNAポリメラーゼが相同組換えに関与することを証明した(論文2,3)。(3)新規のRad51活性の制御因子の機能解析(4)相同組換えに関与するDNA切断酵素の同定相同組換えでは、2本の相同DNAがホリデイ組換え中間体をいったん形成した後、それがDNA切断酵素によって分離される。我々は、分離に関与する切断酵素を検索し、FAN1とSLX4複合体に含まれる切断酵素とが分離に関与することを証明した。成果は、我々の教室の院生が論文発表した(論文5,6)。
ラット小腸アポリポタンパクBm RNA editingに関する栄養生理学的解析

小腸に発現するアポリポタンパク(アポ)Bはカイロマイクロンの主要タンパクで食餌脂質の輸送に不可欠な因子であり、一方冠状動脈心疾患の発症との相関が見いだされている。血漿アポBは、B-48とB-100の2つの分子種からなり、これらは単一のアポB遺伝子からmRNA editingという機構により合成される。本研究では食餌による血漿コレステロール低下作用におけるアポB遺伝子発現動態の関与を明らかにすることを目的とし、更に小腸におけるアポBの遺伝子発現制御機構を解明する一環として、小腸切除後の残存回腸における応答を観察した。血漿コレステロール低下作用を有するビ-ト繊維を摂取させたラットの小腸及び肝臓アポBmRNAをNorthern blottingにより分析したところ、無繊維飼料摂取ラットに比して低下傾向が見られた。アポB mRNAのediting siteを含む275bpのcDNAをRT-PCRにより取得し、それを鋳型にしてprimer extension/dideoxytermination assayを行うことによりアポB mRNA editingを比較したところ、ビ-ト繊維は肝臓及び小腸におけるアポBmRNA editingに影響を及ぼさなかった。現在、血漿コレステロール低下作用を示す他のregimen(大豆タンパク質及び魚油添加飼料)が、アポB mRNAレベル及びアポB mRNA editingに及ぼす影響について解析中である。一方、小腸広範囲切除後の残存回腸においては、アポA-IV mRNAが迅速かつ著明な増加を示したのに対してアポA-I及びアポB mRNAに変化は認められず、更にアポB mRNA editingにも変化は見られず、約80%がeditされていた。小腸切除後の残存回腸においては脂質吸収・輸送の代償的増加がを生じると予想されるが、本研究の結果より、カイロマイクロンの主要タンパクであるアポA-I、A-IV及びBは異なった様式により応答するものと推測された。
抗ウイルス効果を規定するC型肝炎ウイルスゲノム領域の機能解明

C型肝炎ウイルス(HCV)のペグインターフェロン+リバビリン併用療法の効果にはHCVのコア領域の変異の有無によって大きな違いがある。本研究では培養細胞を用いた検討にてコア蛋白変異の持つ機能的な役割、増殖に与える影響について解析した。さらに実際の多数の臨床検体での解析によりコア蛋白変異と臨床背景因子にはどのような関連があるのか検討を行った。1HCVコア単独発現系を用いたコア変異導入による細胞内機能変化の検討●コア蛋白の細胞内で持つ本来の機能、さらには70番変異がその機能をどのように修飾するのか解明するために、genotype-1b由来のHCV遺伝子が組み込まれているプラスミドをもとにHCVコア発現プラスミド、さらにsite-directed mutagenesisを用いて70番変異を導入したプラスミドを構築、ウエスタンブロットにて両コア蛋白の発現を確認した。●自然免疫系における抗HCVシステムには2つの経路が存在することが報告されている。すなわち細胞内におけるHCV複製を認識してインターフェロンを産生する第一の系であるRIG-Iシステム、次に細胞外に分泌されたインターフェロンを細胞表面のレセプターが認識し、多様なインターフェロン誘導遺伝子群を発現させる第2のシグナルであるJAK-STAT系である。我々は培養肝癌細胞株において上記プラスミドを用い、2つの経路における野生型と変異型コア蛋白の影響をRIG-I発現プラスミド産生下でのISRE活性、あるいはインターフェロン培地添加下でのISRE活性をアウトプットとして検討した。その結果いずれの経路においてもコア蛋白変異の有無によってISREの活性に有意な違いは認められないことを明らかとした。2全長HCVレプリコン系を用いたコア変異導入によるウイルス複製能、葉剤感受性変化の検討●細胞内で自律複製するHCVレプリコンの系で、コア蛋白変異を導入し、実際にコア蛋白変異の有無によって細胞内HCV-RNA複製ウイルス増殖がどのように変化するのかを検討するため、上記と同様にsite-directed mutagenesisを用いて70番変異を導入したHCV-1b株由来のレプリコンを作成した。現在は変異によってHCV-RNA複製活性がどのように変化するのか一過性発現系と持続発現系の2系統の検討を行っているが、持続発現系における検討ではコアの点変異の導入によりHCV-RNA複製は殆ど不可能となることを明らかにしつつある。1HCVレプリコン系を用いたIL28B蛋白によるウイルス複製能変化の検討●H21年になってペグインターフェロンとリバビリン変化効果を規定する宿主因子としてIII型インターフェロンの一つであるIL28B(インターフェロンλ3)遺伝子多型の関与が明らかとなった(Nat Genet.2009;41(10):1100-4.Nat Genet.2009;41(10):1105-9.Nature.2009;461(7262):399-401.)。興味深いことに臨床的観察からIL28B遺伝子多型とウイルス遺伝子、とくにコア蛋白の変異には顕著な相関があることを我々は明らかにしているが、一方で、実際にIL28B多型がどのようなメカニズムで治療効果に関与するのか明らかとなってはおらず、この解明が急務となっている。インターフェロンλは配列構造の類似したλ1、2、3からなるファミリーを形成するが、われわれはHCVレプリコン系を用い、H22年度においてλ1、2、3による抗ウイルス効果について検討した。その結果λ1、2、3は3種類ともインターフェロンαと同様に、HCV-RNAの細胞内増殖の抑制、あるいは細胞外における粒子の産生を抑えることを明らかとした。また特にλ3はインターフェロンαとの相乗作用を示すことを明らかとした。2保存血清を用いた検討●われわれは、ペグインターフェロン・リバビリン併用療法を施行し、さまざまな経過を辿った多数症例のデータベースとこれらに対応する血清、一部の症例において宿主ゲノムを有している。このデータベースを用いてH21年度に引き続いてさらに症例数を積み重ねて詳細な検討を行ったところ、IL28B遺伝子多型とウイルス遺伝子、とくにコア蛋白の変異には顕著な相関があることを検証した。1.HCVレプリコン系を用いたIL28B蛋白によるウイルス複製能変化における機序の検討H22年に引き続き、HCVコア蛋白変異と密接な関連があるIL28B(インターフェロンλ3)遺伝子の抗ウイルス効果について、HCVレプリコン系を用い検討を行った。H22年度においてλによる抗ウイルス効果はインターフェロンαの相乗作用について報告したが、H23年度はさらにその詳細な機序について検討を行った。すなわち、インターフェロンλ3はインターフェロンαと同様に、ISREの活性化を通じて、抗ウイルス効果を発揮する。一方、ISREの活性化のタイムコースはαとλでは異なっており、αが投与後24時間程度で抗ウイルス効果がピークを迎え、以降は減弱するのに対し、λでは48時間以降も抗ウイルス効果が持続することを明らかとした。

さらに詳細な検討を行うため、HCV培養細胞を用いて、マイクロアレイ解析を行い、その結果λで誘導される遺伝子群はαと違いはなく、発現されるタイムコースが、ISREと同様に両者では異なっており、αと比較しλはより長時間にわたり各種インターフェロン誘導遺伝子を発現誘導していることを明らかとした。2.保存血清を用いた検討われわれは、ペグインターフェロン・リバビリン併用療法を施行し、さまざまな経過を辿った多数症例のデータベースとこれらに対応する血清、一部の症例において宿主ゲノムを有している。H22年度に引き続いてさらに症例数を積み重ねて詳細な検討を行ったところ、IL28B遺伝子多型とウイルス遺伝子、とくにコア蛋白の変異には顕著な相関があることを検証した。さらにコア蛋白、IL28B遺伝子多型、さらに宿主因子であるG-GTPの値には密接な関連があることを明らかとした。
転写とDNA修復に関与するXAB2の機能解析

1)XAB2と相互作用する蛋白質の検索とその解析:Flag-tagを付加したXAB2をHeLa細胞で発現させ、抗Flag抗体を用いて精製すると、XAB2はpre-mRNAのスプライシングに関与する5種を含む約20種の蛋白質と共に精製された。この分画をゲル濾過、miniQを用いてさらに精製すると、XAB2は5種の蛋白質と同一画分に精製されることから、これら5種の蛋白質(p160,p57,p50,p42,p35)はXAB2と強固な複合体を形成していると考えられた。p57は核マトリクス蛋白質でスプライシングとDNA修復に関与する酵母prp19と、p42はスプライシングに関与する酵母ISY1と相同性が見られた。p35は以前私たちがYeast two-hybridスクリーニングによりXAB2と結合する蛋白質として同定したRNA結合能を持つサイクロフィリンであった。抗体を用いて細胞内局在を調べたところXAB2は核内に点在していた。これらの結果と、XAB2がRNAポリメラーゼIIと免疫共沈することから、XAB2は"RNA factory"の構成因子でRNA代謝と関連する種々の細胞内機構に関与していることが推測された。2)XAB2欠損細胞および個体の作成と解析:遺伝子ターゲティング法を用いてXAB2完全欠損及びC末端欠損マウスの作成を行った。ヘテロ接合体は正常に発生、生育した。ヘテロ接合体同士の交配を行ったが、ホモ接合体は得られなかった。ヘテロ接合体同士の交配により得られた3.5日胚を解析した結果、どちらのホモ接合体とも受精後、桑実胚期で発生が止まり、胚盤胞まで発生できないことが判明した。これらのことからXAB2は哺乳動物の初期発生に必須な因子であることが判明した。1)XAB2と相互作用する蛋白質の検索とその解析:XAB2カルボキシ端243アミノ酸領域と結合する蛋白質をtwo-hybrid法で検索し、癌抑制蛋白質p53を見出した。p53は転写鎖上のDNA損傷により活性化され、XAB2は転写共役DNA修復因子であることから、DNA損傷によるp53活性化にXAB2が関与することが考えられる。Tag付きXAB2を発現させたHeLa細胞から抗Tag抗体で少なくとも10種の蛋白質がXAB2と共に精製された。その中にtwo-hybrid法でXAB2結合蛋白質として見出したRotamaseが含まれていた。また、XAB2はRotamaseを含む3種の蛋白質と強固な複合体を形成していた。2)XAB2欠損細胞の作成とその解析:標的遺伝子組換え法によりXAB2完全欠損とカルボキシ端欠損(cd)ES細胞を分離し、XAB2欠損マウスを作成した。cdマウスヘテロ接合体同士の交配で得たマウス64匹と13.5dpc胚41例の遺伝子型は、野生型52例、ヘテロ接合体53例、ホモ接合体0例であった。この結果はXAB2が必須遺伝子であることを示す。また、ヘテロ接合体の割合が半減していることから、XAB2遺伝子は1倍体では個体発生に不十分である可能性とXAB2cdがドミナント・ネガティブに働く可能性が考えられる。3)XAB2を欠損したヒト遺伝病の検索:劣性遺伝性疾患cerebro-oculo-facio-skeletal(COFS)症候群原因遺伝子産物CSBはXAB2と複合体を形成し転写共役DNA修復因子であることから、XAB2遺伝子がCOFS症候群の原因遺伝子である可能性が考えられた。

ヒトXAB2遺伝子の構造を決定し、COFS症候群7例とその類縁遺伝病MICRO12例のXAB2遺伝子解析を行った。エキソンに3箇所、イントロンに7箇所の塩基置換を認めたが、いずれも突然変異とは考えられなかった。1)XAB2と相互作用する蛋白質の検索とその解析:Flag-tagを付加したXAB2をHeLa細胞で発現させ、抗Flag抗体を用いて精製すると、XAB2はpre-mRNAのスプライシングに関与する5種を含む約20種の蛋白質と共に精製された。この分画をゲル濾過、miniQを用いてさらに精製すると、XAB2は5種の蛋白質と同一画分に精製されることから、これら5種の蛋白質(p160,p57,p50,p42,p35)はXAB2と強固な複合体を形成していると考えられた。p57は核マトリクス蛋白質でスプライシングとDNA修復に関与する酵母prp19と、p42はスプライシングに関与する酵母ISY1と相同性が見られた。p35は以前私たちがYeast two-hybridスクリーニングによりXAB2と結合する蛋白質として同定したRNA結合能を持つサイクロフィリンであった。抗体を用いて細胞内局在を調べたところXAB2は核内に点在していた。これらの結果と、XAB2がRNAポリメラーゼIIと免疫共沈することから、XAB2は"RNA factory"の構成因子でRNA代謝と関連する種々の細胞内機構に関与していることが推測された。2)XAB2欠損細胞および個体の作成と解析:遺伝子ターゲティング法を用いてXAB2完全欠損及びC末端欠損マウスの作成を行った。ヘテロ接合体は正常に発生、生育した。ヘテロ接合体同士の交配を行ったが、ホモ接合体は得られなかった。ヘテロ接合体同士の交配により得られた3.5日胚を解析した結果、どちらのホモ接合体とも受精後、桑実胚期で発生が止まり、胚盤胞まで発生できないことが判明した。これらのことからXAB2は哺乳動物の初期発生に必須な因子であることが判明した。
心臓再生・心機能向上を司るエピ因子群の統合理解

本研究期間を通して、哺乳類心臓再生を向上させる機構について、2つの研究結果をまとめることが出来た。一つは、心筋再生に関わる際に心臓前駆細胞遺伝子マーカーSall1が発現しエピ因子の機能を制御することを見出した(Morita et al., submitted 2016b)。Sall1は初期心臓発生において、心筋心臓前駆細胞遺伝子である(Morita et al., JMCC 2016; 3月号雑誌表紙:特願2015-187363)。二つめは、クロマチン因子Baf60cは心臓再生において重要な働きをしていることを見出した(Nakamura et al., DGD 2016)。心臓再生時に発現亢進するクロマチン制御因子A:心筋(aMHC)プロモータ上にGFPをノックインしたトランスジェニックマウス(aMHC-GFP TG)マウスを用いて心臓切除(resection)有無で、GFP陽性の細胞を選別後BrdU陽性細胞と陰性細胞とで遺伝子発現(qPCR)比較を行った。これにより、増殖心筋特異的な発現変化を調べることが可能となる。その結果、心臓切除されたGFP+;BrdU+分画の細胞群でGFP+BrdU-分画の細胞群に比べて、クロマチン構造変換因子(Smarcd3とSmarca4)において3.5倍強の顕著な発現変化が見受けられた。つまり、serectionすることにより、心筋増殖活性が亢進し、その際にクロマチン因子Smarcd3の発現亢進も同様な挙動を示すことが分かった。B:次に、マウス心臓再生時におけるこれらの遺伝子の時系列な発現変化を免疫組織化学法を用いて追跡したところ、切除後1日以内にBaf60c(Smarcd3がコードしている)タンパク質の発現が亢進していることが確認された。ウエスタンブロッティング法を用いても同様な結果を得ている。さらに、この一過的な発現亢進がマウス心臓再生特異的なものなのか、心臓再生共通のメカニズムなのか知る為に、再生能力の高い有尾両生類アホロートルを用いて心臓切除後のBaf60cの発現変化を調べた。その結果、心臓切除後1日後以内にはBaf60cタンパク質の発現が一過的に亢進しており、心臓切除後9日目にはBaf60cの発現は切除前の量に戻っていることが明らかとなった。これにより、上記Aの遺伝子発現とタンパク局在の変化を統括して、Baf60c(Smarcd3)は哺乳類のみならず生物が心臓再生を行う上で、共通して一過的に発現が亢進する因子であることが分かった。1心臓再生時におけるヒストン修飾が変化する遺伝子群:心臓発生過程において、発生が進むに連れて発現が減少し心臓形成に重要と思われる遺伝子として心トロポニン(Tnnt2)とGata4、そしてVEGF遺伝子のプロモータ上でのヒストン修飾変化をChIP解析法を用いて調べた。その結果、発生が進むにつれてこれらのプロモータ上ではH3K27me3度合いが亢進しており、H3K4me度合いが減少していることが明らかとなった。つまり、発生が進むにつれてこれらのプロモータは不活化されていくことが分かる。2Baf60c(Smarcd3)の強制発現によって、エピジェネティック変化が生じ再生能が向上する:心臓再生能がほぼ消失された4週齢マウスにおいて、Baf60cレンチウイルスを用いて心臓での強制発現を試みた。その結果、心トロポニン(Tnnt2)プロモータにおいて、H3K27acが顕著に亢進しており、H3K27me3が抑制されていた。また、Tnnt2基本転写領域(基部側)においてはBaf60cの結合とポリメラーゼIIのリクルートメントが確認された。この結果と酷似した結果を心臓転写因子Gata4およびVEGFのプロモータ上においても確認できた。3線維芽細胞からの分化転換能:陽性細胞の性質理解を行ったところ、Sall+;Thy1陽性細胞であることが見いだされた。このSall1陽性細胞は心臓切除後7日間で消失することから、心臓再生時早期に機能する細胞と考えられ、Sall+;Thy1+細胞を選別後、再培養を試みた。その結果、心筋へと分化する細胞が見いだされたことから、少なくとも哺乳類の心臓再生にはThy1陽性の細胞群からの心筋へ分化転換することが見いだされた。1:心臓再生に関わる心筋の可塑機構心臓再生において、心筋増殖可否が主たる重要な機構であると考えられている。心筋増殖が行われる上で重要な機構の一つとしてエピジェネティックな遺伝子発現制御が考えられる。我々は心臓発生においてクロマチン構造変換因子群が遺伝子発現を制御することを見出しており、心臓再生機構においても酷似した機構が行われていると考えた。その中で、Baf60c (Smarcd3)に着目して、心臓再生過程時とBaf60cの発現誘導との関連を中心に研究を進めてきた結果、心臓再生に深く関与することを見出した(Nakamura et al., Develop. Growth.Differ. 2016 in press)。また、Baf60cは、心臓転写因子であるGata4遺伝子、心筋収縮因子であるTnnt2遺伝子のプロモーターに結合しヒストン修飾を調節し、ポリメラーゼIIのリクルートメントに関与していることを見出した。2:心臓再生に関わる心筋環境を整える細胞群の機能心筋以外の細胞が心臓再生環境を整備している、援助している可能性が考えられる。その中でも線維芽

細胞は数多く存在し、様々な細胞へと分化することが報告されている(森田ら,日本臨床2015)。我々は、線維芽細胞が一様ではないヘテロな細胞集団であること見出し、その中で一過的にSall1陽性となる線維芽細胞が心筋へと分化することを見出した(Morita et al., submitted 2016)。Sall1は心臓発生において未分化な心臓前駆細胞に特異的に発現する因子であり、我々は心筋分化と密接な関係があることを報告した(Morita et al., JMCC 2016;特願2015-187363)。以上から、発生過程において重要な2つの遺伝子が、心臓再生時においても特異な細胞において一過的に機能することは興味深い。本研究期間を通して、哺乳類心臓再生を向上させる機構について、2つの研究結果をまとめることが出来た。一つは、心筋再生に関わる際に心臓前駆細胞遺伝子マーカーSall1が発現しエピ因子の機能を制御することを見出した(Morita et al., submitted 2016b)。Sall1は初期心臓発生において、心筋心臓前駆細胞遺伝子である(Morita et al., JMCC 2016; 3月号雑誌表紙:特願2015-187363)。二つめは、クロマチン因子Baf60cは心臓再生において重要な働きをしていることを見出した(Nakamura et al., DGD 2016)。CHIPの系を立ち上げて、結果が順調に得られている。次年度には論文へと持っていくことが可能であると考えられる。心筋がなぜ再生能を失うのか、明確になってきたと思われる。BAF60Cに関しては大凡結果がまとまった。論文作成に移行している。心筋以外の細胞で心臓際に寄与する可能性のある細胞群を見いだした。しかも、細胞分化転換する可能性が示唆され、その為に慎重に実験系を遂行している。THY1陽性かつSALL1陽性の細胞群の特定を目指す子tが重要な課題であり、これが特定されることにより、心臓研究に大きな発展と展開が見込まれる。27年度が最終年度であるため、記入しない。分子発生生物学心筋の可逆性を分子のレベルから証明した初めての研究であると考えている。エピジェネティックな変化が心筋における遺伝子発現(心筋:心トロポニン、心臓転写因子:Gata4、血管新生サイトカイン:VEGF)の抑制を引き起こし、結果として急な環境変化に対して心筋細胞が対応できないような性質へと変化していくことを証明した。逆に心臓切除によりTNFαの発現が誘導され易くなり心筋壊死プログラムが遂行される環境となっていることを見いだした。これらのゲノム修飾変化はBAF60cの強制発現系において、これらの抑制が解除され結果的に遺伝子発現の再誘導が引き起こされることを見いだした。つまり、Baf60cは心筋壊死プログラムを緩和またはリセットし、幼若期へと巻き戻していると示唆される。これらの研究によって、心筋細胞の中で、環境変化をセンスし反応する細胞群が存在するのではないかと考えられる。このような細胞が出生後における心臓全体内でどう局在するのか、または心筋細胞全てが持っている能力なのか、が今後のテーマであると考えられる。1現在研究中のBAF60Cと心臓再生の関連をまとめており、投稿準備中である。
麹菌アクリルアミド代謝遺伝子群の解明と実用麹菌での効率的育種法の研究

アクリルアミド(AA)を分解できるアミダーゼ高生産麹菌(セルフクローニング)にアクリル酸(AS)分解候補遺伝子高生産株であるASC5-4の麹菌は、水およびコーヒーでのASの低減化効率が高くなることが分かった。AAの低減化には特に効率が上がる現象は認められなかった。これにより育種した麹菌はAS分解に関連する遺伝子の1つであることが分かった。しかしながらアミダーゼと連動せずに別々で働き、細胞内での各酵素の局在性に問題があると考えられる。アミダーゼ高生産麹菌の繰り返し再利用の条件を確立し、セルロースの担体の廃棄処理を抑える技術開発の目途が付いた。液体飲料中(例えばコーヒー)の焙煎時に生成するアクリルアミド(AA)を分解可能な麹菌アミダーゼ遺伝子を高生産するセルフクローニング麹菌は育種済みである。これまでにAA高生産麹菌を利用したコーヒー中のアクリルアミド分解では、次の分解物であるアクリル酸(AS)が生産され、この物質はAA以上に麹菌には毒性物質として働き、分解が滞ってしまう。そこでAS分解に関連する候補遺伝子を数種類まで絞込み、その中で一番候補遺伝子については、アミダーゼ高生産プラスアクリル酸分解候補遺伝子高生産の共発現麹菌の育種に成功した。H27年度は、これらの育種麹菌のAAとASに対する分解効率の評価とこれまでの研究では麹菌の菌体処理によるAA分解の効率的手法を検討し、その中で固定化菌体を利用する方法が、繰り返し処理に合致する方法であることを見出し、乾燥状態では平板となっているセルローススポンジを利用し、麹菌の胞子懸濁液を分散し、セルローススポンジの立方体に膨らむ際、胞子がセルロース内部に入り込み、栄養培地で一定時間培養し、発芽した胞子からの菌糸をゆっくり絡ませる、足場をしっかり固定したセルロース菌体の培養条件をほぼ確立できた。その後の液体培養でセルロース担体周辺に菌体が覆い、まりも状の固定化担体を作成した。この菌体を用いてAAの低減化を行い、その後洗浄し栄養培地で培養し、まりも状の固定化担体を繰り返し再利用する培養条件を検討した。これにより固定化担体が繰り返し利用でき廃棄物削減の技術開発に目途がついた。AS分解候補遺伝子の絞り込みでは、アミダーゼとこの候補遺伝子の共発現がAS分解に関して、水およびコーヒー中での分解効率が高くなることを見出し、AS分解候補遺伝子がAS分解に関与する遺伝子であることを解明した。この株を利用して水およびコーヒー中のASの分解が早まることを発見した。固定化セルロース担体に麹菌を成育させる手法は、担体内部の麹菌胞子を入り込ませ、必要最小限の栄養培地で一定時間、比較的低温で発芽をゆっくりさせ菌体を担体に絡みつき易い培養条件をほぼ確立でき、菌体でAAおよびASの低減化試験により、まりも状であった担体の外側の菌体が剥がれても、栄養内地の戻すことにより内部の足場の菌体を再利用して、繰り返しまりも状に固定化担体の再利用できる培養条件を確立することができた。アミダーゼ高生産のアクリル酸分解候補遺伝子の共発現麹菌は、ASの分解効率が高まる結果が取得でき、AS分解に関わる遺伝子であることを確認できた。但しこの遺伝子単独だけではなく、他にもAS分解に関わる遺伝子がある可能性あるとも考えられる。この点当初の研究実施計画からは予想できなかった点である。コーヒーやほうじ茶など焙煎加工中に生成する飲料中のアクリルアミド(AA)を分解する麹菌アミダーゼ遺伝子を取得し、麹菌だけの発現ベクターでアミダーゼ高生産のセルフクローニング麹菌を取得している。またアクリル酸分解遺伝子も取得し、アミダーゼとの共発現麹菌も育種済みである。H27年度は麹菌のセルロース固定化担体での吸着条件を確立し、AA添加水、コーヒーでの複数回の繰り返し低減方法を実用可能レベルまで検討した。アミダーゼとアクリル酸分解遺伝子との共発現株で、アクリル酸の分解は促進できたが、アミダーゼの分解効率はアミダーゼ高生産麹菌と変わらない結果となった。アクリル酸は麹菌には毒物であり効率的な分解が望まれるが、それぞれの酵素の細胞内での局在性が異なることが予想される結果となった。H28年度は別に開発している脱澱粉小麦フスマ培地(アミラーゼ系酵素が全く生産できない環境であり、分泌経路に余裕が出てくるので菌体内酵素が菌体外にどの程度生産できるか検討に値する)におけるアミダーゼ高生産麹菌のアミダーゼの生産効率を通常のフスマ培地との比較を行い酵素生産性とその酵素剤としての有用性の検討を行い、酵素剤として利用するより、麹菌体処理法が有効方法であることが分かった。H29年度は麹菌菌体処理方法の繰り返し使用可能な条件検討を行い、有用麹菌での実用レベルの有害物質の除去や有用物質の物質生産における菌体処理方法の確立を目指す。大学院進学者がいなくなり、4年生だけの卒論研究では継続的研究がなかなか難しい研究環境が生じたためである。アミダーゼとアクリル酸分解遺伝子との共

発現株で、アクリル酸の分解は促進できたが、アミダーゼの分解効率はアミダーゼ高生産麹菌と変わらない結果となった。アクリル酸は麹菌には毒物であり効率的な分解が望まれるが、それぞれの酵素の細胞内での局在性が異なることが予想される結果となった。H28年度は別に開発している脱澱粉小麦フスマ培地(アミラーゼ系酵素が全く生産できない環境であり、分泌経路に余裕が出てくるので菌体内酵素が菌体外にどの程度生産できるか検討に値する)におけるアミダーゼ高生産麹菌のアミダーゼの生産効率を通常のフスマ培地との比較を行い酵素生産性とその酵素剤としての有用性の検討を行い、酵素剤として利用するより、麹菌体処理法が有効方法であることが分かった。H29年度は麹菌菌体処理方法の繰り返し使用可能な条件検討を行い、有用麹菌での実用レベルの有害物質の除去や有用物質の物質生産における菌体処理方法の確立を目指した。アクリルアミド(AA)を分解できるアミダーゼ高生産麹菌(セルフクローニング)にアクリル酸(AS)分解候補遺伝子高生産株であるASC5-4の麹菌は、水およびコーヒーでのASの低減化効率が高くなることが分かった。AAの低減化には特に効率が上がる現象は認められなかった。これにより育種した麹菌はAS分解に関連する遺伝子の1つであることが分かった。しかしながらアミダーゼと連動せずに別々で働き、細胞内での各酵素の局在性に問題があると考えられる。アミダーゼ高生産麹菌の繰り返し再利用の条件を確立し、セルロースの担体の廃棄処理を抑える技術開発の目途が付いた。アミダーゼ高生産麹菌はセルフクローニングの麹菌だけのベクター構成であるので、我々のオリジナルのデンプン質除去小麦フスマ培地で窒素源などを加えると、デンプン質除去していないフスマ培養に近い麹菌の生育旺盛な環境に戻すことができることが分かっている。この培養条件ではアミラーゼ系酵素を分泌生産しないので、今年度はアミダーゼの食品加工用の酵素剤への検討として、上記培養によりアミダーゼが抽出生産可能かどうか、高純度生産可能かどうかなど評価したいと考えている。上記の生産量を見て今後の研究方針を決定する。脱デンプンフスマ培養でアミダーゼは菌体外に生産できないことが分かり、菌体処理法が現実的であるので、固定化菌体の廃棄物を排出しない継続的な繰り返し使用法を確立する研究を行う。応用微生物8669円の消耗品費が余剰した。1953円の消耗品費が余剰した。次年度の消耗品購入に充てる。
葉緑体置換に伴うクロロフィルａ合成系進化：「１足す１は１」型ゲノム進化解明へ

1.研究成果を学術誌に投稿大量培養したT.tasmanica細胞よりRNAを抽出した。次世代シーケンサーIllumina Nextseq500による150 bpペアエンド解析を実施し約33.7 Gbpの塩基配列を決定した。所属研究室の計算機を使用して配列アセンブリソフトウェアTrinityによるmRNA配列再構築を実施した結果、396,830コンティグ配列を取得したことから本種の十分な網羅的発現遺伝子データ構築に成功したと判断した。29年度が最終年度であるため、記入しない。1.葉緑体を置換した渦鞭毛藻におけるクロロフィルa(Chl a)合成系遺伝子配列探索2.葉緑体を置換した渦鞭毛藻におけるChla合成系遺伝子の系統解析次に、1.の調査にて同定したChla合成系5段階に関与する遺伝子について最尤法およびベイズ法による分子系統解析を行い、5種の渦鞭毛藻がもつこれら遺伝子の起源を推測した。その結果KareniaおよびKarlodiniumでは葉緑体の起源となった共生ハプト藻由来の遺伝子が5段階全てに関与していることが判明した。一方、緑藻起源の葉緑体をもつLepidodiniumでは本合成系2段階に共生緑藻由来遺伝子が関与していたが、これらの遺伝子に加えて本種からは共生藻とも渦鞭毛藻とも系統的に離れた生物と起源を共有する遺伝子を複数検出した。本年度得られた成果は、葉緑体置換系統におけるChla合成系進化傾向に多様性があることを解明するとともに、この進化傾向の多様性が生じた要因を追究する、さらなる発展的研究への基盤を築くものとなった。葉緑体を置換した渦鞭毛藻がもつChla合成系遺伝子の起源を推測するため、本研究課題では分子系統解析を行う。この解析には葉緑体を置換した渦鞭毛藻に加えて、系統的に広範な光合成真核生物からサンプリングしたChla合成系遺伝子配列を含むデータセットが必要であった。葉緑体を置換した系統に関しては本年度に調査を予定していた渦鞭毛藻のうち2種(鶴岡株および室蘭株)において計画の未達があったが、その他調査対象とした渦鞭毛藻5種でChl a合成系遺伝子配列の取得を達成した。また、既知の主要な光合成真核生物計10系統(緑藻、紅藻、灰色藻、渦鞭毛藻(非葉緑体置換系統)、不等毛植物、ハプト藻、クリプト藻、クロメラ藻、クロララクニオン藻およびユーグレナ藻)においてはいずれの系統からもChl a合成系遺伝子の取得を達成した。したがって本年度は葉緑体置換系統のサンプリングに改善の余地を残すものの、その他の光合成生物のサンプリングは既知の系統を十分に網羅したデータセットを構築できたと評価できる。以上の理由を勘案し本研究課題はおおむね順調に進展していると判断した。1.緑色渦鞭毛藻におけるChla合成系遺伝子配列探索緑藻由来の葉緑体をもつ渦鞭毛藻(以下、緑色渦鞭毛藻)鶴岡株および室蘭株における網羅的発現遺伝子データの整備に着手した。まず両種の大量培養を行い、RNA抽出を行うのに十分な細胞量を回収した。得られた精製RNAサンプルを次世代シーケンサー(Illumina Hi-seq2000)による網羅的発現遺伝子解析に供した。所属研究室の計算機を使用して配列アセンブリソフトウェアTrinityによる遺伝子配列データの復元を行った結果、鶴岡株では約393,000コンティグ配列、室蘭株では約286,000コンティグ配列を取得した。復元した網羅的発現遺伝子配列データに対し既知Chla合成系遺伝子(計12遺伝子)をクエリ配列として相同性検索を行ったところ、両種からはそれぞれ8遺伝子の配列データを検出した。この遺伝子レパートリーはChla合成系を再構築するのにほぼ十分なものであった。2.緑色渦鞭毛藻におけるChla合成系遺伝子の系統解析続いて、鶴岡株および室蘭株がもつChla合成系遺伝子の起源を推測するために最尤法およびベイズ法による分子系統解析を行った。その結果、両種のChl a合成系には共生藻となった緑藻から獲得した遺伝子の他に、渦鞭毛藻とも共生藻とも系統的に離れた藻類と起源を共有する遺伝子が複数存在することが明らかになった。このような特徴は本研究前年度の調査から緑色渦鞭毛藻Lepidodinium1属において既に見出されていたものであったが、当時は比較対象となる緑色渦鞭毛藻種のデータが他に存在せず進化傾向として議論するに至らなかった。しかしながら本年度鶴岡株および室蘭株から得られた結果と併せて考えることで、獲得経緯の不明な遺伝子について「緑色渦鞭毛藻におけるChl a合成系遺伝子進化の傾向」と一般化して解釈することが可能になった。本研究の骨子は葉緑体置換の起きた渦鞭毛藻種のサンプル数を可能な限り確保することにある。調査対象とした渦鞭毛藻種には葉緑体の起源となった共生藻が異なる系統を網羅しており、これには各渦鞭毛藻種のChla合成系進化に対し共生藻が与えた影響の差異を理解する狙いがある。そうした意図のもと本年度までに申請者は計7渦鞭毛藻種(内訳:ハプト藻由来葉緑体をもつ2種、緑藻由来葉緑体をもつ3種、珪藻由来葉緑体をもつ2種)についてそれぞれChl a合成系遺伝子の起源解析を完了した。この成果をもって申請者は調査したChla合成系遺伝子の起源について

1.共生藻の種類が異なる種間における比較解析、および2.共生藻の種類が同じ種間における比較解析の2点を行うことができた。その結果申請者は共生藻の種類とChla合成系の進化に一定の傾向が存在することを見出し、研究当初の狙いを達成しつつある。以上の理由から、本研究課題はおおむね順調に進展していると判断した。1.研究成果を学術誌に投稿大量培養したT.tasmanica細胞よりRNAを抽出した。次世代シーケンサーIllumina Nextseq500による150 bpペアエンド解析を実施し約33.7 Gbpの塩基配列を決定した。所属研究室の計算機を使用して配列アセンブリソフトウェアTrinityによるmRNA配列再構築を実施した結果、396,830コンティグ配列を取得したことから本種の十分な網羅的発現遺伝子データ構築に成功したと判断した。次年度は調査対象とした渦鞭毛藻種のうち、本年度中に培養を達成しなかった緑色渦鞭毛藻2種(鶴岡株および室蘭株)において網羅的発現遺伝子データ取得に着手する。2種の培養条件が整い次第大量培養を実施し、十分な細胞量が回収できた時点でRNA抽出を行う。RNAサンプルは次世代シーケンス解析に供し、網羅的発現遺伝子データを取得する予定である。次年度は調査対象とした渦鞭毛藻種のうち残りの2種であるTakayama属渦鞭毛藻(Takayama helixおよびTakayama tasmanica、いずれもハプト藻に由来する葉緑体をもつ)の網羅的発現遺伝子データ取得に着手する。現在、両種の培養を開始した段階である。細胞が順調に増殖した場合は大量培養に移し、十分な細胞量が回収できた段階でRNA抽出を試みる。次世代シーケンスを行い網羅的発現遺伝子データを取得し、得られたデータ中からChla合成系遺伝子配列を探索する。本年度までに構築した系統解析用データセットにTakayama属の配列を追加し、最尤法およびベイズ法による系統解析を実施する。その他は当初の研究計画通り進める。29年度が最終年度であるため、記入しない。
”ケア”労働の社会化に関する国際比較研究－ジェンダー公平な福祉国家の実現に向けて

日本における"ケア"労働に関するジェンダー公平な政策を展望するために、ジェンダー平等な国と評価されるスウェーデンを指標に研究を進めてきた。具体的には高齢者介護、育児政策に焦点をあて、その現状と課題を現地調査、スウェーデン在住の研究協力者との共同研究により明らかにした。そのうえで、日本の現在の制度・政策との比較を試み、両国の相違をもたらす要因について考察を深めた。その一つとして、スウェーデンのケアに関わる政策、つまり家族政策形成の歴史を検証し、日本との比較を行った。これらの研究は、今後日本がジェンダー平等な政策を展開していく上での貴重な材料となるはずで一定の成果が得られたと考える。今年度の大きな共同研究の成果は、7月にストックホルムで開催されSocial Work Social Development 2012: Action and Impact Conferenceにおける報告と、スウェーデンの視察調査である。調査の成果については10月日本社会福祉学会で「ジェンダーの視点からみた年金制度における育児期間の配慮措置について」(寺本first)で行った。また成果は、大塩「スウェーデンの近親介護者サポート」『龍谷大学社会学部紀要』第41号/「理念重視のスウェーデンの高齢者住宅」『同志社社会福祉学』第26号、今井・陳「スウェーデンにおける雇用労働と家族“ケア"労働の調和」『Human Welfare』第5巻第1号、寺本「年金制度における育児期間の配慮措置の検討」『梅花女子大学現代人間学部紀要』第9号という形で刊行した。本共同研究は、日本の“ケア"労働の社会化が行き詰まりをみせているという問題意識から出発し、ケア"労働に関する新たな政策的対応が必要であるとの認識に立ち、日本の将来に実現可能な政策ビジョンを考案する材料を提供することを目的として進めてきた。ジェンダー公平な政策が実現した国としてスウェーデンを位置づけ、その政策の形成過程、さらに現在の状況と課題を日本と比較することによって、その限界と課題を明らかにすることを目的としたのである。具体的には主に研究代表者が歴史的な検証を、研究分担者協力者はスウェーデンの現状とその課題を調査し、日本と比較することで政策提言を行っていくという計画をたてた。そしてストックホルムの国際学会における報告と、スウェーデンの現地調査を一つの軸に、事前の研究と事後の分析、研究のまとめを中心に研究を遂行していったのである。最終年度の2014年3月には、これまでの成果をまとめた成果報告書(全155頁)を刊行し、領域をこえた多くの研究者に配布して、研究の還元に努めた。その一部は英文で構成されており、スウェーデンの研究協力者を通じて、海外の研究者にも配布していく予定であり、研究成果の公表だけでなく今後の研究の発展に貢献した。申請時には、平成23年度のメインプロジェクトとして、スウェーデンへの視察・調査を計画していた。しかし、計画の見直しが必要となり、2年目に設定していた「各研究者のアプローチにより"ケア"労働についてジェンダーの視点から分析、検討」することを今年度の計画にも組み込むことにした。そして研究会で個別研究の内容を検討し、それを反映した成果を学会等(今井:社会政策学会/ジェンダー史学会、寺本:日本社会福祉学会、アンベッケン:SYSTED 2011)で公開した。また陳は、その成果を平成24年11月ボストン開催の64th Annual Scientific Meeting of the Gerontological Society of Americaに申請、採用が決まっている。国際的あるいは分野をまたがった学会で成果を報告することは、本研究のテーマ上、大きな意義がある。このように個別研究を進めると同時に、6月にはWESTERN MICHIGAN UNIVERSITYの斎藤理香氏(女性史研究)、9月には龍谷大学の大塩まゆみ氏(家族政策)を招き、公開研究会を実施(大塩氏は平成24年度から研究分担者として参画)した。さらに共同研究としては、2012年7月スウェーデンにおけるIASSW、ICSW、FSW主催によるSocial Work Social Development 2012: Action and Impact Conferenceへの参加を目標にし、社会政策系と家族ケア系の分科会それぞれに成果を申請、応募した3報告すべて採用という成果を得た。国際学会での報告は、研究テーマに適した舞台であり、共同研究の促進に有益なばかりか、社会福祉教育や専門職の団体も主催者であることから、国際的なレベルにおける社会福祉の研究、教育、実践という局面で貢献できると考える。今年度は共同研究の全力を7月のスウェーデンにおける学会報告と調査研究に注いだ。具体的な目標があったことから、4月から研究会や打合せを何度も行い、ポスターや補助資料を作成し、また現地での調査研究が深まるように機関や施設との連携を現地協力者のアンベッケン先生やサンド先生とお願いし、綿密な計画をたてた。その作業において、スウェーデンへの理解も深まり、日本を相対化する上での貴重な知識を入手することができた。また現地では学会報告3本、政治活動家へのインタヴュー、施設訪問やソーシャルワーカー、利用の自宅訪問など、中身の濃い調査を行うことができた。

さらにそれらの成果を帰国後、整理し、学会報告やレポートあるいは論文として雑誌に掲載した。このように研究の大きな進展があった2012年度であるが、「(2)おおむね順調に進展している」を選んだのはこの一連の活動において、当初の研究計画にあったイギリス、アメリカも国際比較にいれた研究について軌道修正を行ったからである。すなわち予想以上の成果と、また事前の準備、事後の整理を繰り返すうちに、国際比較についてはスウェーデンと日本の2国にしぼっていくという方向で行った方が、適切ではないかとの認識に至ったからである。すなわち、最終目標である、日本におけるジェンダー公平なケアの社会化を進めていくための政策提言を行うために、スウェーデンをそのモデルとしてビジョンを描いていくことの妥当性が研究者の間で確認できたからである。大きな理由は研究分担者の研究環境の変化である。一名は体調不良により採用決定以降、研究会に参加できなくなったこと、また一名は今年度途中からスウェーデンへの移動が決まったことである。アンベッケンは大学移籍後も研究協力者として共に研究を続けていく意志があり、また研究のフィールドがスウェーデンと日本の比較でもあることから、今後も研究を続けることに、実質上の支障はない。むしろ、申請時にも研究協力者としてあげたサンド氏とも今後はさらに密に連携がとれること、平成24年度のスウェーデン調査の企画、実施の立場からすれば、研究全体にはプラスに働いているとも考えられる。しかし孫良の脱退は、体調不良という理由があり、不可抗力ではあるにせよ、計画遂行に大きな痛手となった。そのため今年度の後半には、孫の不在を埋めるために、家族手当、高齢者ケアの第一人者である大塩まゆみ氏の協力、分担者への承諾を依頼することになった。また、計画の見直しによって、一年目に予定していたスウェーデン調査の可能性を模索しながら、徐行運転のような状況での研究のスタートとなった。全体的な研究計画がなかなか確定できないなか、さらに分担者の一人の体調不良による不在のなかで、暫定的な手段として2年目に予定していた個別研究「各研究者のアプローチにより"ケア"労働についてジェンダーの視点から分析、検討する」計画を同時に遂行していく方針をとった。このような理由から、1年目に予定していた「基礎研究として、各国の"ケア"労働に関するA社会保障・福祉制度、B専門職の現状、C歴史的プロセス(現在の政策の紹介と先行研究の整理)を明らかにする」計画については、その遂行が遅れている。最終年度にあたる次年度には、研究成果報告集を出したいと考えている。2013年度はその報告集の作成に最も大きな力を注いでいく。すなわち報告集の構成は、1日本の家族政策形成史(英米と比較して相対化)2日本の現状とその課題
低線量全身照射が癌組織の細胞動態及び免疫細胞反応に及ぼす影響について

移植腫瘍組織に浸潤する免疫細胞に対する低線量放射線全身照射(LDTB1)の効果を調べる為、以下の実験を行った。(方法)8週令の雄C3H系マウスを全身照射群と非照射群の2群に分け、全身照射群のマウスにはネンブタール麻酔下で0.05Gyの全身照射を行った。全身照射4時間後に両群のマウス左大腿部皮下に、培養系で維持されていたEhrlich腫瘍細胞を移植した(10^6cells/mouse)。移植2、7、14日後に腫瘍組織を摘出し、組織の長径と短径、重量を測定後、免疫細胞の免疫組織化学及び酵素組織化学用には4%パラホルムアルデヒド液で固定した後、凍結切片を作製した。電顕観察用には腫瘍組織を4%パラホルムアルデヒドと5%グルタールアルデヒドの混合液で固定後、1%オスミウム酸液により後固定を行い、樹脂包埋後、超薄切片を作製した。(結果及び考察)移植2日後には固形化した腫瘍組織内に好中球、マクロファージの浸潤が認められた。全身照射群では非照射群に比べ、これら浸潤細胞の出現頻度が増加していた。全身照射群では好中球は腫瘍の深部に集合し、その周囲の腫瘍細胞は壊死に陥っており、壊死組織はマクロファージにより盛んに貪食されていた。全身照射群ではマクロファージの貪食像もより活発な像を呈していた。その後両群の腫瘍組織の大きさ、重量には有意な変化は認められなかったが、移植14日後では非照射群の腫瘍が充実性の状態を保っているのに対し、全身照射群の腫瘍組織内部は広汎な壊死に陥っており、多数の好中球、マクロファージの浸潤像が認められた。また、腫瘍周囲には多数のリンパ球が集合しているのが観察された。今回の研究により、LDTB1は移植後早期に腫瘍内に浸潤する食細胞系の出現頻度、活性を高めることにより、その後の腫瘍に対する免疫反応を強める可能性があるのではないかと推測された。
スウェーデンにおける要支援の子ども・家庭への在宅型サービス

スウェーデンにおける要支援の子ども家庭への支援は,予防的で家庭支援重視のアプローチによる豊富な在宅型サービスを特徴とする.本研究は自治体ごとに多種多様なその在宅型サービスに注目し,具体的な制度と実践およびその社会的機能を明らかにすることを目的とする.文献調査と行政・関係機関へのインタビューを通して,1概念・理念と法制度上の位置づけの明確化,2行政・市民社会による多様な事業・実践の内容・方法・効果の明示,その社会的機能の視点からの分析,3一般子育て支援施策,在宅型サービス,社会的養護の連続性の視点からの考察,の三段階で進め,子どもと家庭への効果的な予防型支援のあり方について示唆を見出す.スウェーデンにおける要支援の子ども家庭への支援は,予防的で家庭支援重視のアプローチによる豊富な在宅型サービスを特徴とする.本研究は自治体ごとに多種多様なその在宅型サービスに注目し,具体的な制度と実践およびその社会的機能を明らかにすることを目的とする.文献調査と行政・関係機関へのインタビューを通して,1概念・理念と法制度上の位置づけの明確化,2行政・市民社会による多様な事業・実践の内容・方法・効果の明示,その社会的機能の視点からの分析,3一般子育て支援施策,在宅型サービス,社会的養護の連続性の視点からの考察,の三段階で進め,子どもと家庭への効果的な予防型支援のあり方について示唆を見出す.
マトリックスポテンシャルによる水分ストレスが鉢物,果菜類の品質に及ぼす影響

1,植物の根圈には土壌も養液も存在しない栽培装置を試作し、その栽培装置で従来の土耕、ロックウ-ル耕と比較し、遜色ない大きさ、速度で園芸作物(コリウス、ペチュニア、パンジ-、メロン(育苗のみ)等)を育成することに成功した。このとき供給養液と植物を隔てるものは、セラミックフィルターよりルーズな逆浸透濾過膜の方が良いことがわかった。2,上記栽培装置で栽培したコリウスを200日程度、ほとんど徒長させずに屋内条件で保てることを発見した。このときの条件は供給養液をイオン交換水に変えるだけであった。このとき対照区の土耕、ロック-ル耕のコリウスは10日程度で徒長し、1545日程度で全て枯死した。3,上記コリウスを屋内に持込んだとき,PEGにより1MPa程度の浸透圧をかけたものに変えると、1か月以上植物茎葉は伸長せず、葉色の退色もかなり抑えられた。今後の課題(1),他の植物での屋内持込み条件の確認。(2),水ストレスをより安定にかける方法の探索。(3),屋内長期持込み時のコリウスの生理状態の調査。(4),水以外の肥料成分の管理方法の確立と管理したときの植物の様相の調査1,植物の根圈には土壌も養液も存在しない栽培装置を試作し、その栽培装置で従来の土耕、ロックウ-ル耕と比較し、遜色ない大きさ、速度で園芸作物(コリウス、ペチュニア、パンジ-、メロン(育苗のみ)等)を育成することに成功した。(4),水以外の肥料成分の管理方法の確立と管理したときの植物の様相の調査
ラマンホールバーニング法の開発とその水の局所構造ダイナミクスの研究への応用

本研究では水の局所構造や微視的ダイナミクスを研究することを目的として、七次の非線形分光法であるラマンホールバーニング法を実験的・理論的に開発することを試みてきた。まず、理論的には非線形分光学の理論家である米国Rochester大学のMukamel教授と協力して以下のことを行った。(I)密度行列法を用いて水のダイナミクスと水のOH伸縮振動の位相緩和を記述する方法を展開したが、その際水の中の水素結合のダイナミクスと構造的な揺らぎの動的挙動を同時に考慮できるようにした。そしてラマンホールバーニングのシグナルの時間変化を与える一般的な式を導出した。(II)水のダイナミクスを調べる非線形分光法としてラマンホールバーニング法以外の方法、CARS(coherent anti-Stokes Raman Scattering)シグナルのスペクトル測定法の基礎的理論を発展させた。実験的には(I)OH伸縮振動のバンドに対して選択的励起を行うために時間幅、バンド幅(50cm^<-1>150cm^<-1>)を規定したレーザー光を得ることに成功した。(II)ラマンホールバーニング法では3発のレーザー光と3発のStokes光を必要とするが、この6発を入射する角度(位相整合条件)を実験的に決定した。(III)他の七次の非線形現象である倍音(v=3)のシグナルの観測に成功し、実際ラマンホールバーニングの実験が可能であることを示した。