hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
放線菌A-ファクター依存性遺伝子群の時空間的発現系に関するバイオイメージング

放線菌S. griseusにおいて、A-ファクター制御カスケードにおける主要な転写活性化因子AdpAは、形態分化・二次代謝関連遺伝子群の制御に必須である。特定の培養時期にてAdpAによって発現活性化されるこれら遺伝子群は、その機能に応じて細胞内の異なる部位にて発現している必要があると思われる。しかし、その詳細は不明である。本年度においては、AdpAの菌糸内における経時的発現分布と局在、およびAdpA依存性の形態分化もしくは二次代謝関連遺伝子群の経時的な発現分布と局在を、蛍光顕微鏡を用いて細胞レベルにて明らかにすることを目的として、共焦点レーザー蛍光顕微鏡を用いた顕微鏡観察の手法開発と各種融合遺伝子の構築、ならびにストレプトマイシン分泌装置、StrV/StrWの機能解析を行った。その結果、顕微鏡観察手法の観察については当初の計画をほぼ達成することができ、構築した解析手法によって、以下のような成果を得た。1)AdpAの構造遺伝子の転写はほぼすべての菌糸にて認められたが、AdpAタンパク質は気中菌糸(胞子鎖)には存在しないことが判明した。3)ストレプトマイシン分泌装置と予想されていたStrV/StrWについて、これらが実際にストレプトマイシン分泌に寄与していること、ならびに菌糸細胞膜に両者が共局在していることをFRET(Fluorescence resonance energy transfer :蛍光共鳴エネルギー転移)観察によって示した。本成果は学会にて発表し、かつ、平成25年度中に論文として投稿予定である。
非ペプチド抗原によるガン細胞標識とγδ型T細胞による認識機構の解明とその臨床応用

γδT細胞の抗原は細菌成分由来のリン酸抗原や、骨粗鬆症治療薬として知られるビスフォスフォネート抗原などの非ペプチド性抗原であることが知られている。申請者は、現在までに非ペプチド性抗原を処理したヒトがん細胞によって、γδT細胞が特異的に活性化されることを示してきた。今回、この処理した非ペプチド性抗原が、がん細胞表面上に提示されているかを検討した。まず、細胞内への抗原の取り込みが必須条件かどうかを検討するため、温度変化、あるいは、パラホルムアルデヒドによる固定処理を行い抗原処理し、γδT細胞の活性化を検討した。結果、ヒト膀胱がん細胞に対し、37°Cでビスフォスフォネート抗原処理した場合ではがん細胞はγδT細胞の強い活性化を誘導できるが、4°Cで処理したがん細胞、あるいは、パラホルムアルデヒドで固定処理したがん細胞に対しては、全く活性化誘導できなかった。ここからビスフォスフォネート抗原は、細胞内への取り込みにより副次的に抗原性が生まれ、直接は提示されていないことが示された。次に、リン酸抗原においても同様の実験を行ったところ、37°Cで処理した場合に比べ、4°C処理した場合、あるいは、パラホルムアルデヒドによる固定処理したがん細胞に対しては、逆にγδT細胞の高い反応性が見られた。ここから、リン酸抗原は、ビスフォスフォネート抗原とは異なり、ヒトがん細胞表面上にリン酸抗原が結合していることが示唆された。更に、RI標識化抗原の100倍濃度のRI非標識化リン酸抗原を同時に処理したところ、値が抑えられたことから、この結合は特異的であることが示され、リン酸抗原提示分子がヒトがん細胞表面上に存在することが示唆された。γδ型T細胞は、結核菌、マラリア原虫、リステリア、リケッチアなどの病原性微生物による感染初期に増殖し、病変部に局在がみられたことから、病原性微生物感染応答に関与することが示唆されている。その抗原としては、病原性微生物由来の非ペプチド性抗原であるピロリン酸モノエステル、アルキルアミンが同定され、更に骨粗髭症抑制剤である窒素含有型ビスフォスフォネートもその一つとして挙げられる。しかし、これら非ペプチド性抗原の認識機構について、分子レベルでの解析はほとんど進められていない。現在までの研究により、末梢血単核球や様々なヒトがん細胞群において、非ペプチド性抗原である窒素含有型ビスフォスフォネートと共培養すると、γδ型T細胞の活性化の誘導が見られ、IL72,IFN-γなどのサイトカインの産生、細胞増殖、がん細胞傷害性などのエフェクター作用の顕著な増強が確認されている。一方、マウス、ラットなどヒト以外の動物細胞種に由来するがん細胞において同様に検討した結果、これらのがん細胞には全くγδ型T細胞活性化誘導能はみられなかった。以上の結果から、ヒトがん細胞特異的に非ペプチド性抗原提示に関与する分子あるいは補助刺激誘導分子が存在することが示唆される。次に、この分子に対するモノクローナル抗体を作製し、新規分子クローニングを行った。ヒト腎臓がん細胞を免疫原としてハイブリドーマを作製し、γδT細胞の反応性に差のある数種類のヒトがん細胞を用いたスクリーニングにより、3種類の同一分子に対する抗体が得られた。この抗体を用いた免疫沈降により濃縮したタンパク質を、トリプシン等の酵素により断片化し、そのペプチド群をMALDI-TOF/MSにて測定、得られた質量値群をもとにデータベース検索を行った結果、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する分子が同定された。現在、この分子によるγδ型T細胞への抗原提示に関する機能解析を検討している。γδ型T細胞は、αβ型T細胞が認識するペプチド抗原とは異なり、非ペプチド抗原を認識することが知られている。主な抗原として、結核菌の成分であるピロリン酸モノエステル、病原性微生物、植物などに含まれるアルキルアミン、骨粗鬆症治療薬として用いられている窒素含有型ビスフォスフォネートが挙げられる。これら非ペプチド性抗原の認識及び提示について、分子レベルでの解析はほとんど進められておらず、申請者はγδ型T細胞への非ペプチド抗原提示機構の解明を目的として研究を進めている。現在までの研究により、末梢血単核球や様々なヒトがん細胞群において、非ペプチド性抗原と共培養すると、γδ型T細胞の活性化の誘導が見られ、サイトカインの産生、細胞増殖、がん細胞傷害性などのエフェクター作用の顕著な増強が確認されている。次に、γδ型T細胞への抗原提示機構に関与する分子を同定するため、ヒト膀胱がん細胞を免疫原としモノクローナル抗体を作製した。γδT細胞の反応性に差のある数種類のヒトがん細胞を用いたスクリーニングにより得られた抗体は、免疫沈降,MALDI-TOF/MAS等の解析によりALCAMを認識することが分かった。ALCAMを強制発現する細胞を抗原提示細胞に用いた実験より、ALCAMはγδ型T細胞の活性化を増強していることが分かった。またRNAiを用いてALCAMの発現量を落とした実験においても同様の結果が得られている。更に免疫細胞染色法を用いてALCAMの局在を調べた結果、そのレセプターとして知られるCD6と共にその接触面の中心に局在していることが分かった。これらの結果からALCAMとCD6はγδ型T細胞ががん細胞を認識する際に補助刺激を導入していることが明らかとなった。

γδT細胞の抗原は細菌成分由来のリン酸抗原や、骨粗鬆症治療薬として知られるビスフォスフォネート抗原などの非ペプチド性抗原であることが知られている。申請者は、現在までに非ペプチド性抗原を処理したヒトがん細胞によって、γδT細胞が特異的に活性化されることを示してきた。今回、この処理した非ペプチド性抗原が、がん細胞表面上に提示されているかを検討した。まず、細胞内への抗原の取り込みが必須条件かどうかを検討するため、温度変化、あるいは、パラホルムアルデヒドによる固定処理を行い抗原処理し、γδT細胞の活性化を検討した。結果、ヒト膀胱がん細胞に対し、37°Cでビスフォスフォネート抗原処理した場合ではがん細胞はγδT細胞の強い活性化を誘導できるが、4°Cで処理したがん細胞、あるいは、パラホルムアルデヒドで固定処理したがん細胞に対しては、全く活性化誘導できなかった。ここからビスフォスフォネート抗原は、細胞内への取り込みにより副次的に抗原性が生まれ、直接は提示されていないことが示された。次に、リン酸抗原においても同様の実験を行ったところ、37°Cで処理した場合に比べ、4°C処理した場合、あるいは、パラホルムアルデヒドによる固定処理したがん細胞に対しては、逆にγδT細胞の高い反応性が見られた。ここから、リン酸抗原は、ビスフォスフォネート抗原とは異なり、ヒトがん細胞表面上にリン酸抗原が結合していることが示唆された。更に、RI標識化抗原の100倍濃度のRI非標識化リン酸抗原を同時に処理したところ、値が抑えられたことから、この結合は特異的であることが示され、リン酸抗原提示分子がヒトがん細胞表面上に存在することが示唆された。
lnc162によるDNA脱メチル化剤感受性増強の分子機構の解明

DNA脱メチル化治療の効果予測マーカーの同定およびDNA脱メチル化剤の作用機序の解明は、固形腫瘍への応用において極めて重要である。申請者は、予備的解析により、胃がん細胞株において高感受性と関連するlong-noncoding RNA linc00162 (lnc162)を同定した。lnc162の過剰発現はDNA脱メチル化剤に対する感受性を増強、ノックダウンは低下させることも確認した。本研究では、lnc162の高発現が5-aza-dCに対する感受性を増強する分子機構を解明する。当該年度は、lnc162と相互作用するタンパク質を免疫沈降により同定することを目的とした。BrdUでラベルしたlnc162のsense鎖およびanti-sense鎖と、DNA脱メチル化効果の高い細胞株(HSC41細胞およびNUGC3細胞)から抽出した核および細胞質分画を反応させ、抗BrdU抗体により免疫沈降した。Sense鎖に特異的に結合したタンパク質のバンドを切り出し、質量分析(mass spectrometry)を行なった。結果、三つの候補タンパク質(HNRNPH1, PRP19, RBM34)が同定した。候補タンパク質に関して、sense鎖への特異的な結合をWestern blottingにより確認したところ、HNRNPH1の結合が確認された。HNRNPH1はRNAスプライシングに関与するタンパクであるため、DNA脱メチル化治療の効果に関わる遺伝子や細胞死誘導に関わる遺伝子の制御を行なっていると予想される。本研究に関わる発表を、国内学会および国際学会の口頭発表で行った。当該年度の目標としては、lnc162と相互作用するタンパク質を免疫沈降により同定することであった。RNA pull-down assayを行うことによって、DNA脱メチル化剤への感受性の高いHSC41細胞およびNUGC3細胞の核内で、lnc162のsense鎖に特異的に結合するタンパク質のバンドを得ることができた。また、mass spectrometryの質量分析で候補を三つ得ることができた。さらに、Western blottingでの確認実験から、HNRNPH1を同定することができ、目標を達成した。よって、研究は順調に進展していると考えられる。当該年度で同定したHNRNPH1のDNA脱メチル化剤感受性への関与の機構を明らかにする。まずは、胃がん細胞株におけるHNRNPH1発現とDNA脱メチル化剤感受性の相関をWestern blottingにより解析する。その後、HNRNPH1のノックダウンもしくはノックアウト細胞株を樹立し、lnc162高発現によるDNA脱メチル化剤感受性増加がキャンセルされるか否かを明らかにする。また、HNRNPH1はスプライシングに関与するタンパクなので、標的遺伝子の探索を、論文検索とRNA-seqを用いて行い、RT-PCRにより確認する。最後に、培養細胞での評価に加え、nudeマウスへの胃がん細胞株移植系を用いてDNA脱メチル化剤治療への感受性の変化を明らかにする。(2)lnc162と相互作用するmiRNAの解析lnc162のsense鎖及びanti-sense鎖の免疫沈降物からRNAを回収し、RNA-seq解析を行う。Sense鎖に特異的に結合をするmiRNAを同定する。miRNAの場合はその標的遺伝子が5-aza-dC感受性に関与するか否か、lnc162との結合が細胞内局在等により変化するかを解析する。

まずは、胃がん細胞株におけるHNRNPH1発現とDNA脱メチル化剤感受性の相関をWestern blottingにより解析する。その後、HNRNPH1のノックダウンもしくはノックアウト細胞株を樹立し、lnc162高発現によるDNA脱メチル化剤感受性増加がキャンセルされるか否かを明らかにする。また、HNRNPH1はスプライシングに関与するタンパクなので、標的遺伝子の探索を、論文検索とRNA-seqを用いて行い、RT-PCRにより確認する。最後に、培養細胞での評価に加え、nudeマウスへの胃がん細胞株移植系を用いてDNA脱メチル化剤治療への感受性の変化を明らかにする。(2)lnc162と相互作用するmiRNAの解析lnc162のsense鎖及びanti-sense鎖の免疫沈降物からRNAを回収し、RNA-seq解析を行う。Sense鎖に特異的に結合をするmiRNAを同定する。miRNAの場合はその標的遺伝子が5-aza-dC感受性に関与するか否か、lnc162との結合が細胞内局在等により変化するかを解析する。
モノクローナルガラクトース抗体を用いた肝転移機構の解析

本研究は種々の癌においてその発現が癌の進行度、転移などと関係が深いと考えられているThomsen-Friedenreich抗原に対するモノクローナル抗体を用いることにより、Colon 26細胞肝転移モデルでの肝転移の抑制効果を見たものである。肝臓は消化器癌の経門脈的血行転移が最も多い転移臓器であり、肝転移の有無が患者の予後を決定するといっても過言ではない。この研究ではneuraminidase処理してガラクトース基(Gal)を露出させた大腸癌細胞は肝転移をきたしやすいという教室のこれまでの結果を踏まえて、その露出させたGalをTF抗原に対するモノクローナル抗体と反応させて覆い隠すと再び肝転移結節数がもとのColon 26大腸癌細胞のそれと同程度に低下するという結果を示した。もちろん肝転移に関連する分子は数多く、シアリルLe^x、ラミニン分子、CEA分子なども関係していると思われる。Colon26細胞表面にはシアリルLe^xとインテグリンα6が表出されていることを確認しているが、これらの分子は本実験系の肝転移には影響を与えず、TF抗原(Gal分子)の表現が重要であることが示された。TF抗原に対するモノクローナル抗体処理により肝転移が抑制されたという結果は非常に興味深く、TF抗原(Gal分子)が確かに肝転移に関係するという因果関係を直接証明した研究として意義深いものと考える。これらの分子が今後単なる腫瘍マーカーとしてではなくその治療に貢献する可能性が示された。これまで大腸癌では,Thomsen-Friendenereich抗原(T抗原)の発現が癌進行度や肝転移と関係があると報告されており,またT抗原をマスクしているシアル酸をNeuraminidase(Nase)処理で除くことによって得られるCryptic T抗原も肝転移に関係するという報告もみられる。これらの関連を解明するためにNase処理したColon26細胞についてモノクローナル抗Thomsen-Friedenreich(TF)抗体処理を行い,細胞表面のCryptic T抗原の発現を解析し,肝転移への影響について検討を行った。【結果】BALB/c系雌性マウスにColon26細胞を門脈内投与し肝転移モデルを作成,3週間後に肝臓を摘出し,肝表面の転移結節数を測定したところ,平均1.6]SY.+-.[0.9個であったのに対して,Nase処理CoLoN26細胞を接種すると平均6.4]SY.+-.[3.9個と肝転移結節数の増加を認めた。Nase処理を行ったColon26細胞にモノクローナル抗Thomsen-Friedenreich(TF)抗体(A78-G/A7)で処理すると,平均1.9]SY.+-.[1.3個の転移であり肝転移が抑制されたのに対して,コントロールとしてマウスIgMmyeloma proteinで反応させた群では平均5.2]SY.+-.[2.9個の転移結節であり,有意差はなかった。Nase処理が十分に行われていることを確認するために,Nase処理Colon26細胞と無処理Colon26細胞をA78-G/A7で反応させた後,二次抗体としてFITC標識抗マウスのヤギIgMを用いてFACScanにより解析したところ,Nase処理後の細胞ではほぼ100%がA78-G/A7と反応し,Nase処理後にCrypticT抗原が発現していることが確認された。Thomsen-Friedenreich抗原(T抗原)は糖鎖抗原の一種で、種々の癌においてT抗原の発現と進行度、特に肝転移との関係が深いことが報告されている。Colon26細胞(C-26)をNeuraminidase(Nase)処理しマウスの門脈内に投与することにより、肝転移が促進される結果を得た。そこでNase処理したC-26をT抗原抗体(A78-G/A7)で処理し、T抗原の発現と肝転移との関係を調べた。BALB/cマウスにC-26(1×10^4)を門脈内投与し肝転移モデルを作成、3週間後に肝臓を摘出し転移結筋数を測定した。

C-26を接種後3週の転移結筋数は、平均1.6±0.9個(n=8)であったのに対してNase処理C-26を接種すると平均6.4±3.9個(n=10)と増加を認めた(p<0.005)。Nase処理C-26をさらにA78-G/A7で反応させた群では、平均1.9±1.3個(n=9)の転移であり肝転移が抑制された。これに対し、マウスIgM myeloma proteinを用いたコントロール群では平均5.2±2.9個(n=10)で抑制されなかった。In vitroでNase処理の効果をみるために、Nase処理C-26と無処理C-26をA78-G/A7で反応させた後、二次抗体としてFITC標識抗マウスのヤギIgM(Goat F(ab')2Anti-Mouse IgM(μ))を用いてFACScanにより解析し、Nase処理後の細胞ではほぼ100%がA78-G/A7と反応し、Nase処理後のC-26ではCryptic T抗原が発現していることが確認された。今回の実験で腫瘍細胞表面のT抗原が肝転移と強く関っていることが示された。Thomsen-Friedenreich抗原(T抗原)は糖鎖抗原の一種で、種々の癌においてT抗原の発現と進行度、特に肝転移との関係が深いことが報告されている。Colon26細胞(C-26)をNeuraminidase(Nase)処理しマウスの門脈内に投与することにより、肝転移が促進される結果を得た。そこでNase処理したC-26をT抗原抗体(A78-G/A7)で処理し、T抗原の発現と肝転移との関係を調べた。BALB/cマウスにC-26を門脈内投与し肝転移モデルを作成、3週間後に肝臓を摘出し転移結節数を測定した。その結果Nase処理を行ったC-26を門脈内投与すると肝転移が促進され、Nase処理C-26をさらにA78-G/A7で反応させた群では肝転移が抑制された。Nase処理を行ったColon26癌細胞に新たな表面抗原の表出がおこっていないかどうかを確認するために、代表的な癌細胞表面抗原として知られているTn抗原、シアリルLe^X抗原、integrina6の発現をフローサイトメトリー法を用いて検討し、Colon26細胞表面にはシアリルLe^Xとインテグリンα6が表出されていることを確認した。以上のことよりNase処理による細胞表面へのβ1-Galの露出により肝転移が増加し、A78-G/A7によるβ1-Galの被覆により肝転移がもとのレベルに減少したと考えられ、Colon26大腸癌細胞の肝転移モデルにおいて腫瘍細胞表面のTF抗原が肝転移と強く関わる分子であることが証明された。
大気化学反応における水溶液界面構造とその役割の解明

大気化学反応と深い関わりがある空気/硫酸水溶液界面構造を分子シミュレーションを用いて解析した.本研究の結果によると,低濃度(モル分率0.02程度)の硫酸水溶液表面には解離イオンによる比較的強い電気二重層構造が形成され,表面第一層にカチオン,表面数層の深さにアニオンが分布していることが明らかになった.一方,大気反応で重要な高濃度硫酸(モル分率0.3程度)では,低濃度の場合と同様に硫酸分子の第一段階解離はほぼ完全解離しているが,電気二重層構造は消失していくことが明らかとなった.これらの成果は,大気反応モデルの構築に有益な情報を与える.大気化学反応と深い関わりがある空気/硫酸水溶液界面構造を分子シミュレーションを用いて解析した.本研究の結果によると,低濃度(モル分率0.02程度)の硫酸水溶液表面には解離イオンによる比較的強い電気二重層構造が形成され,表面第一層にカチオン,表面数層の深さにアニオンが分布していることが明らかになった.一方,大気反応で重要な高濃度硫酸(モル分率0.3程度)では,低濃度の場合と同様に硫酸分子の第一段階解離はほぼ完全解離しているが,電気二重層構造は消失していくことが明らかとなった.これらの成果は,大気反応モデルの構築に有益な情報を与える.大気化学反応と深い関わりがある空気/硫酸水溶液界面構造を分子動力学シミュレーションを用いて解析した.また,界面構造に敏感である振動和周波発生スペクトルを分子シミュレーションによって第一原理的に計算し,実験との比較を行った.分子シミュレーションによって振動スペクトルを計算するためには,電子状態計算を用いた高精度分子モデリングを行う必要がある.初年度は,硫酸水溶液を構成する分子(水,ヒドロニウムイオン,硫酸イオン,重硫酸イオン,硫酸分子)の分子モデリングを行い,バルク,界面の性質をよく再現するモデルの構築に成功した.さらに,そのモデルを用いて比較的低濃度の硫酸の和周波発生スペクトルを計算し,実験をよく再現することが分かった.低濃度硫酸水溶液に対する和周波発生スペクトルは純水のスペクトルと比べるとかなり大きな変化を受けることが知られているが,それがどのような表面構造に起因しているのかは明らかではなかった.本研究の結果によると,低濃度の硫酸水溶液表面には解離イオンによる比較的強い電気二重層構造が形成されることが分かった.その影響を受けて表面水分子は配向し,和周波発生スペクトルに大きな変化を与えることが分かった.従来の実験による研究では水溶液表面でイオンがどのように分布しているか明らかではなかったが,本研究により硫酸の場合には表面第一層にカチオン,表面数層の深さにアニオンが分布していることが明らかになった.以前の塩酸の計算結果を踏まえると,これは比較的低濃度の強酸に特有のイオン分布であり,大気反応モデルの構築に有益な情報を与える.地球大気の成層圏に多く存在する硫酸水溶液エアロゾル界面は,大気反応プロセスにおいて重要な役割を演じている.本研究は,その界面構造(特にイオン分布)を分子シミュレーションにより明らかにすることを目的として成された.昨年度は低濃度の計算を行ったが,本年度は大気化学で重要となる比較的高濃度硫酸の表面構造の特定を行った.手法としは既に実験で報告されている硫酸水溶液界面での界面和周波発生スペクトルを再現するような界面構造を分子シミュレーションにより特定するという方法をとった.本研究の目的を達成するためには,言うまでもなく分子シミュレーションで用いられる溶媒分子(水)のモデルが必要となるが,これまで使われていた水モデルは和周波スペクトルを部分的に再現できないことが明らかとなった.そのため,本研究では過去のモデルの欠点を克服する水モデルの開発を行った.本研究で開発された水モデルは,実験で報告されたスペクトルの特徴をよく再現し,さらには実験では困難だった水の和周波スペクトルの新しい帰属を行った.その結果によると,水表面では特徴的な水素結合ネットワークが形成されており,それが和周波スペクトルに現れることを明らかにした.この新しい水モデルを用いて高濃度硫酸水溶液界面の計算を行った.これまでに明らかになっていることは,モル分率で0.3程度の硫酸であっても硫酸イオンは第一段階がほぼ完全解離していることが明らかとなった.このことは,過去に一部で提唱されてきた非完全解離型の表面構造とは異なる結果であり,大気反応モデルの構築に有益な情報を与えるものと思われる.
自然免疫異常によるグラム陽性菌感染症の重症化機序についての解析

S. aureus感染させたTLR2欠損(KO)マウスは、野生型(WT)マウスに比べて明らかに生存率が低く、S. aureusに対して感受性が高いことが判明した。また、TLR2KOマウスではマクロファージおよび好中球の組織への浸潤はWTマウスと同程度に認められた一方、TLR2KOマウスの排菌が遅れ、死亡まで臓器内の生菌数が高濃度に残存した。マクロファージの貪食能を調べたところ、TLR2KOとWTマウスの間に有意差が認められなかった。これらの結果から、TLR2は食細胞の遊走能に影響しないこと、マクロファージのTLR2は感染初期のS. aureusの貪食排除に必須でないことが分かった。さらに、感染TLR2KOマウスの各臓器(肝、脾、肺、血中)において炎症性サイトカインTNF-α、IL-6は感染初期に過剰に産生することが認められた一方、抗炎症性サイトカインIL-10の産生は臓器により異なることが示唆された。これらの結果から、TLR2欠損はサイトカインストームを惹起し、マウス死因の一つになると考えられる。サイトカインストームにおけるマクロファージと好中球の寄与を調べるために、WTマウスおよびTLR2KOマウスよりそれぞれ肝臓マクロファージ、肺マクロファージおよび腹腔誘導好中球を分離し、in vitroにおいてこれらの細胞のサイトカイン産生能をリアルタイムPCR法、ELISA法にて、感染マウスの各臓器に浸潤したマクロファージのサブタイプをフローサイトメーター、化学免疫染色により評価しているところ。今後主にin vitroにおいてTLR2欠損によるマクロファージ、好中球機能異常のメカニズムを解析し、グラム陽性菌感染病態の形成におけるTLR2の役割を明らかにする。具体的に、(1) TLR2KOマウスの臓器に多量の生菌が残存したことから、TLR2欠損によりマクロファージおよび好中球の殺菌力が低下したと考え、これらの細胞の活性酸素産生能(殺菌能)をChemiluminescence測定により評価する。(2) IL-10は主にマクロファージより産生される。感染臓器においてIL-10の産生が異なるのは、各臓器に浸潤したマクロファージのサブタイプによるものと考えられ、各臓器のマクロファージをフローサイトメーターや化学免疫染色により検討する。さらに、IL-10の産生経路において影響因子を同定する。平成29年度に、主にin vitroでマクロファージより産生された炎症性サイトカインinterleukin (IL)-10の産生メカニズムについて解析した。本研究では、野生型マクロファージおよびToll like receptor (TLR)2欠損マクロファージに黄色ブドウ球菌(S. aureus)の加熱死菌を投与し、細胞を炎症状態にした上でIL-10の遺伝子レベルおよびタンパク質レベルでの発現、TLR2シグナル経路におけるIL-10の発現誘導因子の活性化をReal-time PCR、western blotting、ELISAにより比較検討した。今後in vivoでさらに検証する。S. aureus感染におけるCD36とTLR2の活性化、相互作用についても解析した。そこで、S. aureusの加熱死菌の刺激によるCD36の発現変化をTLR2欠損マクロファージと野生型マクロファージでReal-time PCR法、共焦点レーザー顕微鏡にて比較した。また、CD36の活性化にはCD36多量体形成が必須であるため、TLR2欠損が多量体形成、CD36シグナルの下流蛋白質(JNKなど)の活性化に及ぼす影響をwestern blotting法とフローサイトメーターにより評価した。実験に使用する肺炎球菌(S. pneumonia)の入手、増殖には時間がかかったため、計画よりやや遅れている。好中球の機能異常により細菌感染症は重篤な病状を呈することが多いが、好中球上のTLR2がどのように細胞機能に影響を与えるかはほとんど報告されていない。よって、今後TLR2欠損による好中球機能異常のメカニズムを解析し、グラム陽性菌感染病態の形成における好中球のTLR2の役割を明らかにする。

具体的には、野生型好中球とTLR2欠損好中球を死菌と共培養し、好中球の貪食能をフローサイトメーターにより、活性酸素産生能(殺菌力)をChemiluminescence測定により評価する。また、これまでほとんど報告されていない好中球のTLR2シグナル経路に着目し、TLR2下流分子の活性化をwestern blotting法とフローサイトメーターにより、サイトカイン産生能をReal-time PCRとELISAによりin vivoおよびin vitroで評価する。今後主にin vitroにおいてTLR2欠損によるマクロファージ、好中球機能異常のメカニズムを解析し、グラム陽性菌感染病態の形成におけるTLR2の役割を明らかにする。具体的に、(1) TLR2KOマウスの臓器に多量の生菌が残存したことから、TLR2欠損によりマクロファージおよび好中球の殺菌力が低下したと考え、これらの細胞の活性酸素産生能(殺菌能)をChemiluminescence測定により評価する。(2) IL-10は主にマクロファージより産生される。感染臓器においてIL-10の産生が異なるのは、各臓器に浸潤したマクロファージのサブタイプによるものと考えられ、各臓器のマクロファージをフローサイトメーターや化学免疫染色により検討する。さらに、IL-10の産生経路において影響因子を同定する。S. pneumoniaの入手、増殖は時間がかかったため、感染実験はやや遅れている。繰り越し分はS. pneumoniaの感染実験に使用する予定である。繰り越し部分は、H30年度に試薬の購入費、マウスの飼育費に充てた。
児童の工作技能・生活技能の発達に関する実証的研究

1.東京160名,愛知120名,和歌山120名,計約400名の児童について,ナイフ,ノコギリの使用技能(具体的には,前者は鉛筆削り,後者は木片の切断)を調査し,次のことを明らかにした.(1)児童の道具使用技能の発達は,小学三年生あたりで質的に変化することが明らかとなった.ナイフ使用においても, ,ノコギリし使用においても,一・二年生では比較的短い時間に仕上げるが,そのできばえの程度は低い.それに対し,三年生あたりでは時間をかけてよりよいものを仕上げようとし,できばえもよくなる.さらに五年生では短時間に仕上げるようになり,できばえもよりよくなっている.このことは,未経験者を含むときには成り立たないが,学校などで道具使用の場が各学年に設けられている場合にははっきりと出てくる.道具使用技能の発達における9【double plus】Aたりの質的変化を見い出し,実証したのは本研究が最初であると思われる.(2)道具の使用方法は学校間の違いがきわだっていた.学校での指導に大きく左右されていることがはっきりした.現代では学校での指導が大きな位置を占めていることも明らかとなった.道具使用法の類型は研究代表者が提唱していたものに近いことが実証された.しかし,その類型とできばえとの間には,強い関連は見られなかった.(3)道具使用についての子どもたちの意識と技能程度との間には強い相関はなかった.2.上記の子どもたちの生活背景的要因の分析のため,上記の地域で小・中学生に対しアンケート調査を行った.生活活動の地域差,学年差が明らかとなったが,道具使用技能には顕著な影響は見られなかった.3.動作解析用のパソコンプログラムを開発したが,試行にとどまり,十分な分析を行うことができなかった.4.道具使用技能の発達におよぼす要因を解明し,技能の指導法を確立するのが次の課題である.1.東京160名,愛知120名,和歌山120名,計約400名の児童について,ナイフ,ノコギリの使用技能(具体的には,前者は鉛筆削り,後者は木片の切断)を調査し,次のことを明らかにした.(1)児童の道具使用技能の発達は,小学三年生あたりで質的に変化することが明らかとなった.ナイフ使用においても, ,ノコギリし使用においても,一・二年生では比較的短い時間に仕上げるが,そのできばえの程度は低い.それに対し,三年生あたりでは時間をかけてよりよいものを仕上げようとし,できばえもよくなる.さらに五年生では短時間に仕上げるようになり,できばえもよりよくなっている.このことは,未経験者を含むときには成り立たないが,学校などで道具使用の場が各学年に設けられている場合にははっきりと出てくる.道具使用技能の発達における9【double plus】Aたりの質的変化を見い出し,実証したのは本研究が最初であると思われる.(2)道具の使用方法は学校間の違いがきわだっていた.学校での指導に大きく左右されていることがはっきりした.現代では学校での指導が大きな位置を占めていることも明らかとなった.道具使用法の類型は研究代表者が提唱していたものに近いことが実証された.しかし,その類型とできばえとの間には,強い関連は見られなかった.(3)道具使用についての子どもたちの意識と技能程度との間には強い相関はなかった.2.上記の子どもたちの生活背景的要因の分析のため,上記の地域で小・中学生に対しアンケート調査を行った.生活活動の地域差,学年差が明らかとなったが,道具使用技能には顕著な影響は見られなかった.3.動作解析用のパソコンプログラムを開発したが,試行にとどまり,十分な分析を行うことができなかった.4.道具使用技能の発達におよぼす要因を解明し,技能の指導法を確立するのが次の課題である.1.児童のノコギリ使用においては、低学年ほど柄を持った手の前後運動が湾曲すること、その結果として例えば5cm幅の試験片の切断において、両端及び中点における切断面の角度が異なることが明らかとなった。また、従来、目の位置が重要であることは指摘されてはいても、切断面の角度と目の位置との関係が実証的に明らかにされていなかったが、160例のビデオ撮影を行って分析した結果、具体的にその関係を示す見通しを得た。2.ナイフによる鉛筆削りにおいては、学年によって削ることの到達目標が大きく異なり、高学年になる程時間をかけて削ることが明らかとなった。時間、削った形状を測定することによって得た発達段階による技能程度の差と、子どもの技能程度に関する意識との関連は、単純に直線的に変化するのではなく、質的な飛躍を有するものであることが明らかとなった。工作技能におけるこの点の実証的な研究はこれまでなかった。3.かなづちによる釘打は、低学年ほど個人差が大きいことが明らかとなった。それは腕力の違いというよりも、持つ位置、手首のスナップをきかすことができているか、といった使用法によることが大きいことも明らかとなった。4.以上のような結果をふまえつつ、道具使用法の類型化を行うことが次の課題である。また、技能の観察調査と子どもの技能に対する意識との関係を数量的に解析することも残されている。5.13は試行的に特定の学校、園で行ったものであるので、次年度は他地域においても調査分析し、地域、生活歴の違いによる差についても検討していくことが課題である。
適応的遺伝的アルゴリズムのための専用プロセッサアーキテクチャに関する研究

大規模で複雑な組合せ最適化問題に対する解法として多くの分野において利用されている遺伝的アルゴリズム(GA)の計算時間の短縮を目的として,GA専用プロセッサのアーキテクチャを考察し,LSIチップとして試作した.本研究で開発したGA専用プロセッサ(DLX-GAと呼ぶ)はRISCべースであり,RISC部分の命令セットについてはDLXアーキテクチャ(Hennessy & Patterson,1990)に準拠した(たたし浮動小数点命令を除く).さらに,GAに特有のビット演算や乱数発生のための命令を加えた.並列処理を実現するための割込み機能も装備した.DLX-GAの仕様を決定した後,ハードウェア記述言語Verilog-HDLを用いてハードウェア設計を行った.ゲートレベルシミュレーションの結果より試作チップは70MHzのクロック周波数で動作可能であることを確認した.また,試作チップのソフトウェア開発環境として,コンパイラとアセンブラを開発した.設計したLSIチップについて,東京大学大規模集積システム設計教育研究センター(VDEC)にデザインルール0.35μmのスタンダードセル(4.93mm角)によるチップ試作を依頼した.試作されたLSIチップに対して評価ボードを作成し,動作を検証した結果,当初の設計仕様通りにチップが動作することが確認された.本研究で得られた主な成果として,(1)GAに特有の演算を考慮した命令セットを実現することによりGAの実行時間が大幅に短縮できること,(2)GAを効率よく実行するための命令セットに対する知見,(3)乱数生成のハードウェア化がGAの実行時間短縮に大きく寄与すること,がわかった.また,本研究に関連して,適応的遺伝的アルゴリズムの並列アルゴリズム化,および遺伝的アルゴリズムのVLSIレイアウト設計手法への応用についても研究を行い,多くの成果を得た.大規模で複雑な組合せ最適化問題に対する解法として多くの分野において利用されている遺伝的アルゴリズム(GA)の計算時間の短縮を目的として,GA専用プロセッサのアーキテクチャを考察し,LSIチップとして試作した.本研究で開発したGA専用プロセッサ(DLX-GAと呼ぶ)はRISCべースであり,RISC部分の命令セットについてはDLXアーキテクチャ(Hennessy & Patterson,1990)に準拠した(たたし浮動小数点命令を除く).さらに,GAに特有のビット演算や乱数発生のための命令を加えた.並列処理を実現するための割込み機能も装備した.DLX-GAの仕様を決定した後,ハードウェア記述言語Verilog-HDLを用いてハードウェア設計を行った.ゲートレベルシミュレーションの結果より試作チップは70MHzのクロック周波数で動作可能であることを確認した.また,試作チップのソフトウェア開発環境として,コンパイラとアセンブラを開発した.設計したLSIチップについて,東京大学大規模集積システム設計教育研究センター(VDEC)にデザインルール0.35μmのスタンダードセル(4.93mm角)によるチップ試作を依頼した.試作されたLSIチップに対して評価ボードを作成し,動作を検証した結果,当初の設計仕様通りにチップが動作することが確認された.本研究で得られた主な成果として,(1)GAに特有の演算を考慮した命令セットを実現することによりGAの実行時間が大幅に短縮できること,(2)GAを効率よく実行するための命令セットに対する知見,(3)乱数生成のハードウェア化がGAの実行時間短縮に大きく寄与すること,がわかった.また,本研究に関連して,適応的遺伝的アルゴリズムの並列アルゴリズム化,および遺伝的アルゴリズムのVLSIレイアウト設計手法への応用についても研究を行い,多くの成果を得た.並列処理を前提とした適応的GAに対し,プロセッサ間の協調動作によるGAパラメータの適応的調整手法を開発した.また,開発したパラメータの適応的調整手法を汎用並列処理GAソフトウェアPVM_GALOPPSに組み込み,通常の並列処理GAと比較して提案手法の有効性を検証した.さらに,GA専用プロセッサ(DLX-GAと呼ぶ)のハードウェア設計を行った.まず,DLX-GAの仕様を決定した.DLX-GAはRISCベースであり,RISC部分の命令セットについてはDLXアーキテクチャ(Hennessy & Patterson,1990)に準拠した(たたし浮動小数点命令を除く).さらに,GAに特有のビット演算や乱数発生のための命令を加えた.並列処理を実現するための割込み機能も装備した.仕様を決定した後,ハードウェア記述言語Verilog-HDLを用いてハードウェア設計を行った.設計された結果をRTLレベルでシミュレーションし,仕様どおりの動作をするかどうかを確認した.さらに論理合成を行って,ゲートレベル回路に変換し,ゲートレベルシミュレーションによりハードウェアとしての性能を評価した.この結果,試作チップは100MHzのクロック周波数で動作可能であることを確認した.また,試作チップのソフトウェア開発環境として,コンパイラとアセンブラを開発した.最後に,レイアウト設計を行い,チップのマスクデータを作成した.作成したマスクデータを東京大学大規模集積システム設計教育研究センター(VDEC)に提出し,デザインルール0.35μmのスタンダードセル(4.93mm角)によるチップ試作を依頼した.試作チップは平成13年7月に納入の予定である.大規模で複雑な組合せ最適化問題に対する解法として多くの分野において利用されている遺伝的アルゴリズム(GA)の計算時間の短縮を目的として,GA専用プロセッサのアーキテクチャを考察し,LSIチップとして試作した.本研究で開発したGA専用プロセッサ(DLX-GAと呼ぶ)はRISCベースであり,RISC部分の命令セットについてはDLXアーキテクチャ(Hennessy & Patterson,1990)に準拠した(たたし浮動小数点命令を除く).

さらに,GAに特有のビット演算や乱数発生のための命令を加えた.並列処理を実現するための割込み機能も装備した.DLX-GAの仕様を決定した後,ハードウェア記述言語Verilog-HDLを用いてハードウェア設計を行った.ゲートレベルシミュレーションの結果より試作チップは70MHzのクロック周波数で動作可能であることを確認した.また,試作チップのソフトウェア開発環境として,コンパイラとアセンブラを開発した.設計したLSIチップについて,東京大学大規模集積システム設計教育研究センター(VDEC)にデザインルール0.35μmのスタンダードセル(4.93mm角)によるチップ試作を依頼した.試作されたLSIチップに対して評価ボードを作成し,動作を検証した結果,当初の設計仕様通りにチップが動作することが確認された.本研究で得られた主な成果として,(1)GAに特有の演算を考慮した命令セットを実現することによりGAの実行時間が大幅に短縮できること,(2)GAを効率よく実行するための命令セットに対する知見,(3)乱数生成のハードウェア化がGAの実行時間短縮に大きく寄与すること,がわかった.また,本研究に関連して,適応的遺伝的アルゴリズムの並列アルゴリズム化,および遺伝的アルゴリズムのVLSIレイアウト設計手法への応用についても研究を行い,多くの成果を得た.
超音波による体表からの骨位置計測ー多関節ロボットを用いた靭帯損傷診断への応用ー

我々は、外傷による靭帯損傷の診断のひとつである動揺性検査にロボティクスを応用し、より信頼性のある診断方法の確立を目指している。昭和62年度以来、文部省の科学研究費の補助によりこの新しい診断方法の開発を行ってきた。その過程で、数々の問題に行き当たったが、もなかでも問題だったのは、「外から見えない大腿骨と脛骨の相対変位をどのように計測するか」ということだった。本研究では、生体に無害である超音波を用いることで、この問題を解決することを試みた。まず、予備実験では音波測定装置を、電子冷熱器、被験体を入れる浴槽、超音波トランスデューサとその位置決め器、パルスレシーバ、デジタルオシロスコープ、計測用パーソナルコンピュータ(本科学研究費にて購入)を用いて構成した。豚のもも肉を被験体として、生体内における音波速度を計測したところ、1564m/sとなった。予備実験における音速の結果を基に、本実験を行った。音波測定装置を、すでに開発済みの「膝関節動揺性試験ロボット」(科学研究費による開発)に組み込んだ。測定対象として12人の健常な人間の膝を用いた。動揺性試験を試みる手順で膝関節を装具に固定し、超音波による膝関節の相対変位と、レントゲンによる相対変位を比較した。その結果、超音波で測定された変位は、レントゲンで測定された変位に対し相関係数0.98で相関しており、99%信頼域も極めて小さかった。つまり、超音波により膝の相対変位が計測可能であることが分かった。さらに、超音波を用いた膝動揺性の測定の結果と、用いなかった測定の結果を調べたところ、全体としては差がなかったものの、超音波を用いたほうが測定のばらつきが小さくなる傾向を示した。これは、従来の方法では解決できなかった軟組織の厚みの影響を、超音波による方法で除外したためであると考えられた。超音波による骨の位置計測方法を確立し、その有効性を確認した。本方法を用いて、ロボティクスによる膝靭帯の損傷診断をさらに信頼性のあるシステムに改良中である。
マンノース結合蛋白(MBP)の補体活性化制御機構と腎糸球体沈着に関する研究

人の血清に存在するマンノース結合蛋白(MBP)は補体活性化に関わる分子で、個体発生学的には若い時期に高く、年齢と共に減少することから、人の幼少期に重要な生体防御関連分子と考えられる。事実、この分子の欠損は幼少期に反復性感染を示す。このMBPの補体活性化はMBPに結合するMBP-associated serine protease(MASP)が関わる。本研究はMASP(蛋白分解酵素)による補体活性化の制御機構の存在、ならびにMASPの生体に於ける存在様式について解析した。[結果]1)人血清に存在するMBP中には、MBP、MASP、およびα2macroglobulinの3分子が複合体を形成しているものがあることを、見出した。2)この複合体の結合順序はMBP-MASP-α2macroblobulinの順で、MBP-MASP間の結合にはCaイオンを介するもので可逆的であるが、MASP-α2macroglobulin間の結合は非可逆的なものであった。3)MASPはesterolytic活性で補体を活性化する分子であるが、α2macroblobulin-MASP複合体はその活性が抑制されていた。4)MASPの血液中の存在様式を詳しく検討すると、MBPやα2macroblobulinとも結合しない形態でも存在し、また各分子の血液中での分子数は明らかに異なっていた。分子数的にはMASPが最も多いものであった。5)MASPの個体発生上の量的変化はMBPと同様に、幼少期に高く年齢と共に減少した。[考察]α2macroblobulinは多数の蛋白分解酵素のinhibitorとして作用し、系統発生的にも古い分子に属する。MBP-MASPを介する補体系は古く、その制御も古い酵素inhibitorであるα2macroblobulinで行われていることは、理にかなっている。人は最も発達した抗体系、補体系を持つにも関わらず、古いMBP補体系をも合わせもつのは、それなりの理由がある。事実、MBPやMASPの個体発生をみると、幼少期に多く、年齢と共に減少する。このことは、抗体を介する新しい補体系が成熟するまでの間、古いMBP系が働くものと考えられる。マンノース結合蛋白(mannose binding protein;MBP)の補体活性化はこの分子に特有のセリンプロテアーゼであるMASP(MBP・associated serine protease)が関わることが最近発見された.一方、我々はプロテアーゼ阻害作用のあるα2マクログロブリン(α2M)がMBPに結合することを見いだしたことから、これがMBPの補体活性化の制御因子の可能性が示唆された.本研究は、MBPの補体活性化分子MASPの制御因子の固定、解析を行った.[方法]1)ヒト新鮮血清から種々のクロマトグラフィを利用し、MBP、MASPおよびα2Mをそれぞれ精製した.一方、精製行程にCaイオンを存在させ、MBP/MASP複合体およびMBP/MASP/α2M複合体を得た.2)MBP、MASPおよびα2Mの抗血清を作製(MASP.α2Mの抗体は既存)し、それぞれの測定系(ELISA)を開発した.[結果]

2)MASPのプロテアーゼ活性はMBP・MASP・α2M複合体には存在せず、一方、α2Mを精製MASPに加えるとその活性が抑制されたことから、血液中ではα2MがMBP・MASP複合体の補体活性化を制御しているものと推測した.[考察]系統発生的に古い補体系であるMBP補体活性化経路(レクチン経路)が高等動物に人に存在することは、抗体を介した特異的な生体防御機構を補佐する機構として残存したものと考えられる.実際、この経路の異常であるMBP欠損症は易感染性を示すことから、未だ生体にとって重要な感染防御機構として作用している事は明らかである.この経路の制御因子として、系統発生的に古い血清蛋白であるα2Mが同定されたことは、生体防御の発生の点で興味深い.人の血清に存在するマンノース結合蛋白(MBP)は補体活性化に関わる分子で、個体発生学的には若い時期に高く、年齢と共に減少することから、人の幼少期に重要な生体防御関連分子と考えられる。事実、この分子の欠損は幼少期に反復性感染を示す。このMBPの補体活性化はMBPに結合するMBP-associated serine protease (MASP)が関わる。本研究はMASP(蛋白分解酵素)による補体活性化の制御機構の存在、ならびにMASPの生体に於ける存在様式について解析した。[結果]1)人血清に存在するMBP中には,MBP、MASP、およびα2macroglobulinの3分子が複合体を形成しているものがあることを、見出した。4)MASPの血液中の存在様式を詳しく検討すると、MBPやα2macroblobulinとも結合しない形態でも存在し、また各分子の血液中での分子数は明らかに異なっていた。分子数的にはMASPが最も多いものであった。5)MASPの個体発生上の量的変化はMBPと同様に、幼少期に高く年齢と共に減少した。[考察]α2macroblobulinは多数の蛋白分解酵素のinhibitorとして作用し、系統発生的にも古い分子に属する。MBP-MASPを介する補体系は古く、その制御も古い酵素inhibitorであるα2macroblobulinで行われていることは、理にかなっている。人は最も発達した抗体系、補体系を持つにも関わらず、古いMBP補体系をも合わせもつのは、それなりの理由がある。事実、MBPやMASPの個体発生をみると、幼少期が多く、年齢と共に減少する。このことは、抗体を介する新しい補体系が成熟するまでの間、古いMBPが働くものと考えられる。
英語の構文選択メカニズム：構文交替へのコーパス基盤的アプローチと認知言語学の接点

本研究は、コーパスの実例に基づく分析と認知言語学の理論とを組み合わせ、場所格交替(a. John loaded hay onto the truck / b. John loaded the truck with hay)と身体部位所有者上昇交替(c. John hit Bill's head / d. John hit Bill on the head)を考察するものである。構文の典型的な用法、レジスターなどの使用文脈の観点から構文選択の問題に取り組み、事例研究を進めることができたと考えられる。特に平成28年度は、昨年度作成したレシピのデータを拡張させ、場所格交替の研究成果を着実に出すことができたと思われる。レシピでは上述のb型の構文が多く用いられること、それはレシピというディスコースの性質(具材の状態変化を描写する)に動機づけられていることをUK Cognitive Linguistics Conferenceで発表した。このデータに本来場所格交替に参与しないといわれる動詞が見つかったことを踏まえ、慣習化した事例からの類推やレシピなどの文脈的要因が交替可能性に関わることを論じた(論文がHuman Linguistics Reviewに掲載)。これらの研究に基づき、日英語で場所格交替が関わる調理表現の差違を明らかにし、その成果をレシピ翻訳の分析へ応用する内容で発表する(人工知能学会)。また、場所格交替のうちb構文が形容詞的受身構文で用いられたときのみ可能になる表現があることに着目し、このような構文の組み合わせを構文文法で扱うための枠組みの提案を行った。さらに、構文交替の研究で得られた知見を生かして、結果構文や動詞接頭辞over-/under-で見られる反義関係に関する共同研究を行った。28年度が最終年度であるため、記入しない。場所格交替(1)、身体部位所有者上昇交替(2)を中心に、類義の構文のうちどれが選択されるのかという問題を扱い、それと関連するテーマで共同研究やワークショップも行った(3)。1.場所格交替(a. John loaded hay onto the truck / b. John loaded the truck with hay)についての論文が『東京大学言語学論集』に掲載された。bの構文が形容詞的受身文と組み合わさると、一時的な状態にとどまらず、恒常的な属性を表現することがある点、感情的な意味合いを持ちやすい点を明らかにした。また、場所格交替動詞がレシピの文脈に多く見られることに注目し、料理本をもとにレシピ・コーパスを自作し、場所格交替の二つの構文の使用傾向を日本英語学会で発表した。レシピというレジスターが構文の選択に密接に関わっていることを論じた。2.身体部位所有者上昇交替(c. John hit Bill's head / d. John hit Bill on the head)を扱う一環として、身体部位所有者上昇構文(dの構文)について発表した(成蹊大学アジア太平洋研究センター・研究プロジェクト「認知言語学の新領域開拓研究」)。これまでの研究では、この構文における前置詞の役割が十分に明らかにされていなかった。本発表では大規模コーパスでこの構文に用いられる前置詞on/inを調査し、前置詞の分布と力の働きかけの関係を論じた。3.レシピと構文に関する調査の一つとして、複合変化結果構文と複数の節を用いる表現の使用傾向を分析し、その成果を共同研究として発表した。また、構文選択に関連する研究として、動詞接頭辞over-/under-で見られる反義関係に関する共同研究を行い、使役現象をめぐるワークショップの一部として動詞laughに見られる多義性について発表した。場所格交替については、形容詞的受身文の事例を扱うことで、二つの構文がほかにどの構文と組み合わさるかという点で異なることが明らかとなった。感情的な意味、話し手が事態をどのように評価するかという側面が構文選択において果たす役割について分析する手がかりを得ることができ、引き続きこの点について考察を深めるつもりである。レシピ・コーパスを作成することができ、データ収集の点でも一定の成果を上げることができた。身体部位所有者上昇交替については、これまでのところまとまった研究が少なく、本研究は記述的な面でも貢献をしたと思われる。また、共同研究やワークショップを通じて、認知言語学を中心とした関連研究に従事する研究者と積極的に意見交換をすることができ、重要な知見を得ることができた。

さらに、構文交替の研究で得られた知見を生かして、結果構文や動詞接頭辞over-/under-で見られる反義関係に関する共同研究を行った。今後も場所格交替と身体部位所有者上昇交替について研究を進めていく。場所格交替は、動詞によって評価的意味がどのように現れてくるかが異なるようである。個々の動詞に着目した事例研究を積み重ねる必要があり、そのためのデータを収集しているところである。構文の組み合わせは、構文文法にとっても興味深いデータであり、この現象を扱うことで構文文法の理論的な貢献も目指す。レシピ・コーパスを用いた調査結果をさらに発表していくとともに、大規模コーパスを用いた調査も行う予定である。身体部位所有者上昇交替については、扱う動詞の数を増やし引き続き身体部位所有者上昇構文を中心に扱う予定であり、現在口頭発表に基づいた論文を執筆中である。これらの研究をするにあたって、共同研究で得られた成果を生かしていくつもりである。28年度が最終年度であるため、記入しない。