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中世〈遊女〉の社会史的研究

1.〈遊女〉の生活実態に関わる基礎的事実の解明をすすめた(1)『梁塵秘抄』380番歌および『遊女記』の読解から、遊女・従女の服飾・身分的表象・出自等について解明を進めた。(2)『遊女記』の新解釈を提示し、〈遊女〉の得分について明らかにした。2.〈遊女〉の身分論的把握をすすめた→(1)従女を中心として、〈遊女〉の「家」内外の権力関係を考察した。(2)『遊女記』をもとに、〈遊女〉集団内外の秩序・勢力関係について考察した。その結果、集団内部に遊女・従女の階層が、集団外部に「豪家之侍女」(出遊)との競合関係が存在することがわかった。3.中世後期〈遊女〉史研究への展望をひらくべく、基礎作業を進めた→(1)〈遊女〉の芸態について、芸能史的系譜関係を考察するため、『梁塵秘抄』248番歌の新解釈を提示し、傀儡子と関わる可能性を指摘した。(2)〈遊女〉の芸能を中世芸能環境の中に位置づけるため、仏教芸能を中心として、広く文化・芸能状況の調査を行った。また、神社関係の新出史料を中心に法楽芸能における歌女参仕について分析・考察した。(3)女性を含む芸能者、および被差別民と関連の深い祇園社に関してその実態を探るため、その統括者である社家に関して基礎的な分析を行った。さらに、祇園祭に関する文献の紹介と批判を行った。また、同じく芸能者・被差別民との関係が深い賀茂社に関して新出史料の分析を進めた。(抄録なし)1、中世<遊女>の生活実態に関わる基礎的事実の解明を進めた。(1)<遊女>呼称の変遷について分析し、その変容が芸能の盛衰と関連していることを解明した。(2)<遊女>の居住と変容について分析し、その変容が芸能の衰退と関連していることを解明した。(3)<遊女>の芸態と関わる中世芸能について、文献整理および現行芸能の実地調査と撮影を行った。2、中世<遊女>を身分論的見地から考察した。(1)<遊女>の組織に関する分析を行い、集団内の階層性や<イエ>の重要性を明らかにした。(2)寺社史料の蒐集により、<遊女>集団への支配方式、特に芸能の機能について明らかにした。また五節を分析し、朝廷による<遊女>支配が制度的なものでなかったことを明らかにした。(3)<遊女>と一般女性との共通点・相違点を明らかにするため、絵画史料や文学史料などを渉猟し、行動様式や名前の分析を進めた。3、発生期から近世初期にかけての<遊女>の変容を明らかにした。(1)<遊女>呼称の変遷と居住・生業の変化を関連付けることにより、発生期から近世初期にいたる<遊女>区分の変遷を跡付けた。(2)居住・生業・呼称の変化を通じて、鎌倉中後期における<遊女>の芸能性衰退と売春性顕然化について明らかにした。(3)中世後期における<遊女>の変容、特に男性との関係変化を分析し、売春性と卑賎視の関係に一定の見通しを得た。また、<遊女>を被差別民として扱ってきたこれまでの研究史を、植民地主義・部落問題などの社会背景と絡めながら再検討し、見直しを迫った。1、中世〈遊女〉の生活実態に関わる基礎的事実の解明を進めた。(1)〈遊女〉の所謂「源氏名」について事例を収集した。(2)笙騎・艦取女の職掌について明らかにし、呼称の分析から新しく事例を見出した。(3)『遊女記』の再検討を通して〈遊女〉の所得分配について明らかにした。2、中世〈遊女〉を身分論的見地から考察した。(1)絵画史料・文学史料から、〈遊女〉と女房との共通点・相違点を明らかにした。(2)〈遊女〉の所謂「源氏名」と、一般女性名との比較を行い、集団の再生産について考察した。(3)豊翳・艫取女の身分的表象・集団内の位置づけ等について主人との関係を中心に明らかにした。(4)節会史料を中心に、内教坊の組織と妓女の身分に関する事例を収集した。これによって、内教坊が〈遊女〉の源泉の一つであるとする説は成り立たないことが明らかとなった。3、中世後期〈遊女〉史研究への見通しを得た。(1)仏教歌謡・猿楽・今様・唱導、および白拍子・曲舞・能など、中世芸能相互の影響関係を示す史料や先行研究の蒐集・整理を行った。(2)〈遊女〉を賎民とみなす思想について近世までさかのぼって検討した。〈遊女〉の研究史は、被差別民論・非人論だけではなく、日本民族論とも密接にかかわっていることが判明した。2.〈遊女〉の身分論的把握をすすめた→

(1)従女を中心として、〈遊女〉の「家」内外の権力関係を考察した。(2)『遊女記』をもとに、〈遊女〉集団内外の秩序・勢力関係について考察した。その結果、集団内部に遊女・従女の階層が、集団外部に「豪家之侍女」(出遊)との競合関係が存在することがわかった。3.中世後期〈遊女〉史研究への展望をひらくべく、基礎作業を進めた→(1)〈遊女〉の芸態について、芸能史的系譜関係を考察するため、『梁塵秘抄』248番歌の新解釈を提示し、傀儡子と関わる可能性を指摘した。(2)〈遊女〉の芸能を中世芸能環境の中に位置づけるため、仏教芸能を中心として、広く文化・芸能状況の調査を行った。また、神社関係の新出史料を中心に法楽芸能における歌女参仕について分析・考察した。(3)女性を含む芸能者、および被差別民と関連の深い祇園社に関してその実態を探るため、その統括者である社家に関して基礎的な分析を行った。さらに、祇園祭に関する文献の紹介と批判を行った。また、同じく芸能者・被差別民との関係が深い賀茂社に関して新出史料の分析を進めた。本年度の研究実施計画をほぼ達成した。特に、「研究の目的」で「C.中世後期<遊女>史研究への見通しを得る」としていた点については、より踏み込んで中世後期における<遊女>の変容を実際に解明し、また、発生初期から近世初期に至るより大きなスパンで<遊女>区分の変遷を跡付け、さらに研究史の思想史的再検討をも行うなど、計画以上の進展があった。当初の研究計画をおおむね達成したが、論文「<遊女>と女房」および論文「<遊女>の所謂「源氏名」について」の執筆が未達成である。計画後に依頼された原稿を優先したことにより原稿化が遅れたもので、執筆すべき内容の調査・分析については既に終了している。これらの計画については平成25年度に持ち越して達成したい。一方で、依頼原稿の執筆によって<遊女>の芸能に関する芸能史的系譜関係の理解は当初の予想を超えて進展した。研究の進展に伴い、1、<遊女>の生業である芸能の重要性2、女性一般の地位変動と密接に関わっている点等が明らかとなった。そこで、今後の推進方策として、1、芸能の変遷と芸能者の対応、および観客である貴族・庶民との関係性の変容2、中世女性の地位、特に家族・性規範の変容等を意識し、より広い見地から中世<遊女>の変容を跡付けるようつとめることとする。研究の進展に伴って、1、<遊女>の集団内秩序が予想以上に強く働いていること2、<遊女>集団の本拠地が、芸能の伝承と深く結びついていることが明らかになってきた。このため、当初の計画よりも集団の分析・芸能史的分析を拡充して行う必要を感じている。また、遊女呼称の語彙史的研究については、既発表論文の中に組み込んで論じたので、当初計画していた単体での論文化は行わない方針である。最終年度には、原稿化の遅れている作業も含め、成果の公表を中心に据えて研究を行っていきたい。(抄録なし)
自己硬化型炭酸アパタイトセメントの創製

HApセメントは、硬化中に大気中、体液中より炭酸イオンを吸収し、表層にのみ骨類似成分である炭酸アパタイト(CAp)が形成することを見出し、HAp表層が新生骨に置換されるメカニズムのひとつとして提唱し、新生骨置換におけるCApの重要性を示した。硬化してCApとなるセメントの創製を行った。粉末成分の炭酸カルシウムを安定相のカルサイトから不安定相のバテライトに置換すると、硬化時間の大幅な短縮、CApへの転化効率の向上が認められた。動物実験にて、CApセメントは従来型HApセメントより優れた骨伝導性を示した。CApセメントの優れた骨伝導性と形態形成性を兼備した新規な骨補填材として期待される。自己硬化性を示し、硬化して炭酸アパタイトとなるセメント材料の創製が目的である。平成25年度は、1炭酸カルシウムの多形の一種で最も溶解性の高いバテライトの調製、2炭酸アパタイトセメントの調製を予定していた。バテライトの調製は、水酸化カルシウムを出発原料、メタノールを溶媒、反応温度を4°Cとし、この溶液に対して炭酸ガスをバブリングすることで調製した。粉末X線回折(XRD)測定からバテライトに由来したピークが認められ、走査型電子顕微鏡観察から1μm程度の球状粒子であることを確認した。次に炭酸アパタイトセメントの成分の最適化を行った。粉末をバテライトおよび第二リン酸カルシウム二水和物、液部を0.8 Mの第一(pH 4.2)、第二(pH 8.8)、第三リン酸ナトリウム溶液(pH 12.3)の三種とし、pHの影響を調査した。また、粉液比は1.52.2とした。割型に練和体を入れ、ビッカー針法により硬化時間を測定した。いずれの液成分においても、粉末比が大きくなると、硬化時間は短くなった。粉液比1.5、1.7の場合、第二リン酸ナトリウム水溶液を用いた場合が、最も迅速な硬化を示し約16分であった。粉液比2.2のとき、第一および第二リン酸ナトリウム水溶液でおよそ11分、第三リン酸ナトリウム水溶液の場合およそ17分であった。また、硬化体の圧烈強度は液の種類によらず約3.5 MPaであり、大きな違いは認められなかった。XRD測定より、いずれの硬化体もアパタイトを形成していること、フーリエ変換赤外分光測定より炭酸基を含んでいることが明らかとなった。これまで、バテライトより熱力学的に安定なカルサイトを用いた系では、硬化あるいはアパタイト相形成に過激な条件が必用であり、臨床応用が難しかった。本系では、室温付近で硬化し、炭酸アパタイトを形成することから、臨床応用が期待される。本年度は硬化機構の詳細な検討を行った。はじめに、炭酸アパタイトへの相変換の経時変化をX線回折(XRD)にて調査した。カルサイトを粉末成分として用いた場合は、24時間後で約50%が炭酸アパタイトに変換されたが、10日後においても80%しか炭酸アパタイトに変換されれなかった。一方、バテライトを粉末成分を用いた場合は、24時間後に90%が炭酸アパタイトに変換され、48時間後にはほぼ完全に炭酸アパタイトに変換された。これは、バテライトの溶解性が高いため、系中により高濃度のカルシウムイオン、炭酸イオンが供給されることで、溶解析出反応が加速されたためである。24時間反応後のセメント硬化体の表面構造をSEMにて観察したところ、0.5μm程度のマイクロポアが観察された。気効率は60%程度であり、マイクロポア形成のため、比較的疎な硬化体であった。骨欠損モデルにて、炭酸アパタイトセメントの吸収性および骨伝導性を評価した。炭酸アパタイトセメントは、粉末部(バテライト、リン酸二カルシウム無水物)、液部(0.1 M Na2HPO4)とした。陰性対照は従来型(水酸)アパタイトセメント(TTCP, DCPA)とした。ラット脛骨に直径4 mmの骨欠損を作製し、それぞれ練和したセメントを埋入した。30, 60, 180日後に、マイクロCTを撮像し、吸収性および骨伝導性を観察した。30日後、炭酸アパタイトセメント、水酸アパタイトセメントともに表面に、薄い新生骨が一部認められた。60日後、水酸アパタイトセメントは完全に骨欠損部が回復しなかったのに対して、炭酸アパタイトセメントではほぼ完全に欠損部が封鎖された。180日後、炭酸アパタイトセメントでは、骨の連続性が完全に回復するとともに、骨質も周囲骨とほぼ同等に観察された。しかしながら、病理組織観察にて詳細な検討ができておらず、今後の課題として残った。一方、水酸アパタイトセメントは欠損部の完全な回復は認められなかった。180日後においては、どちらのセメントも大きな吸収が認められなかった。これは、硬化後のセメントが比較的密であるあため、セメント吸収を行う破骨細胞のセメント内部への浸潤がほとんど起きないためだと推察した。

粉末成分の炭酸カルシウムを安定相のカルサイトから不安定相のバテライトに置換すると、硬化時間の大幅な短縮、CApへの転化効率の向上が認められた。動物実験にて、CApセメントは従来型HApセメントより優れた骨伝導性を示した。CApセメントの優れた骨伝導性と形態形成性を兼備した新規な骨補填材として期待される。予定していた細胞実験が実施できなかった。バイオマテリアル細胞実験および動物実験を実施する。本年度は、1炭酸カルシウムの多形の一種で最も溶解性の高いバテライトの調製、2炭酸アパタイトセメントの調製を予定していたが、ともに終了している。予定していた細胞実験および動物実験を実施できなかった。予定していた学会発表ができなかった。本年度は、炭酸アパタイトセメントの調製に成功した。詳細な硬化挙動の調査が必要である。また、炭酸アパタイトへの経時的な相変換反応も調査する必要がある。さらに、来年度は、ラット骨髄由来細胞を用いて、炭酸アパタイトセメントの骨伝導性の評価を行う。細胞実験、動物実験を行う。学会発表を行う。予定していた論文投稿が遅くなり、論文校正費を使用しなかった。次年度予定している動物実験に多額の費用がかかると予想されるため、物品費の一部を充てることにした。本研究論文の英文校正費に充てる。物品費の一部を動物実験にかかる費用に充てる。
レジン系仮封剤に関する総合研究

・レジン系仮封剤は従来型の仮封剤に比較して良好な辺縁封鎖性を有しており,さらにはレジンセメントや近年多用されているレジン強化型合着用グラスアイオノマ-セメントなどの歯質接着性に与える影響はわずかであった.・また,仮封期間を利用した歯質強化を目的として,フッ化ナトリウムを添加したレジン系仮封剤を試作し,その基礎的物性を調査したところ,フッ化ナトリウム添加により基礎的物性に変化が生じたが,臨床使用に支障のあるものではなかった.このことからフッ化ナトリウム添加により,仮封期間を利用した歯質強化が可能となることが示唆された.・レジン系仮封剤は従来型の仮封剤と異なり弾性を有しているため,破壊試験などのような従来の仮封剤の物性試験が応用できない.我々は,既存の規格を一部改変したり独自の試験方法を考案するなどして物性の評価を行った.今後は従来型の仮封剤と同列に扱って評価できる物性試験方法を考える必要がある.・以上のことから,さらに視点を変えた評価がレジン系仮封剤には必要であるが,我々の研究結果から判断すると臨床において有用であり.新たな可能性を秘めた「新世代の仮封剤」といえる材料であるとの結論を得た.・レジン系仮封剤は従来型の仮封剤に比較して良好な辺縁封鎖性を有しており,さらにはレジンセメントや近年多用されているレジン強化型合着用グラスアイオノマ-セメントなどの歯質接着性に与える影響はわずかであった.・また,仮封期間を利用した歯質強化を目的として,フッ化ナトリウムを添加したレジン系仮封剤を試作し,その基礎的物性を調査したところ,フッ化ナトリウム添加により基礎的物性に変化が生じたが,臨床使用に支障のあるものではなかった.このことからフッ化ナトリウム添加により,仮封期間を利用した歯質強化が可能となることが示唆された.・レジン系仮封剤は従来型の仮封剤と異なり弾性を有しているため,破壊試験などのような従来の仮封剤の物性試験が応用できない.我々は,既存の規格を一部改変したり独自の試験方法を考案するなどして物性の評価を行った.今後は従来型の仮封剤と同列に扱って評価できる物性試験方法を考える必要がある.・以上のことから,さらに視点を変えた評価がレジン系仮封剤には必要であるが,我々の研究結果から判断すると臨床において有用であり.新たな可能性を秘めた「新世代の仮封剤」といえる材料であるとの結論を得た.研究目的:合着材の歯質接着性に与える仮封材の影響を調査する目的で,臨床で多用されている合着用レジン強化型グラスアイオノマーセメント(以下強化型アイオノマーセメントと略す)の歯質接着性に与える仮封処置の影響を検討した.面出ししたウシ下顎永久前歯唇面に仮封材を塗布し,水中保管1週間後に仮封材を除去して引っ張り接着試験用治具を,製造業者指示に従って練和した強化型アイオノマーセメントで合着し引っ張り接着強さを測定した.結果及び考察:従来型の仮封材は,仮封材の種類に関わらず強化型アイオノマーセメントの歯質接着強さを有意に低下させていた.また,接着強さの減少はエナメル質面に比較して象牙質面で大きな値を示した.一方,レジン系仮封材は強化型アイオノマーセメントの接着強さを低下させるものの,Plast Sealでは有意差がみられず,象牙質面におけるFuji LuteとFermitの組み合わせのみで有意差がみられた.本実験結果より,仮封処置は強化型アイオノマーセメントの歯質接着性にも影響を与え,特に象牙質でその傾向は顕著に現れることが明らかとなった.以上のことから,強化型アイオノマーセメントを合着材として使用する際には,従来型の仮封材ではなくレジン系仮封材を用いることが推奨される.レジン系仮封材は,従来型の仮封材に比べると歴史の新しい材料であり,その基礎的物性試験のための規格が制定されていない.そこでJIS規格を参考に独自の試験項目を設定しレジン系仮封材の基礎的物性を探るとともに、仮封期間を利用した歯質強化を目論むためにフッ化ナトリウムを添加したレジン系仮封材の開発・試作を行っていたので,当初本研究の計画にはなかったが,フッ化ナトリウムの添加がレジン系仮封材の基礎的物性におよぼす影響をも追加して調査することとした.実験には,レジン系仮封材Plast Sealと,その粉末にフッ化ナトリウム粉末を1,3および5重量%添加して調整した3種類の試作品を用い,以下の項目を調査した.1:圧縮抵抗試験,2:探針刺入抵抗試験,3:崩壊率試験および吸水率試験(これらは試片を37度水中に24時間保管後,及び7日間保管後に測定を行った.)4:硬化時間,5:熱膨張率これらの試験結果から,レジン系仮封材にフッ化ナトリウムを添加することで基礎的物性に変化が生じること,及びその変化はフッ化ナトリウムの添加量に影響されることが明らかとなった.これら基礎的物性の変化は,フッ化ナトリウムを添加したことによる直接的な影響と,仮封材からフッ素などが溶出することによる間接的な影響が原因ではないかと考えられた.
細胞質分裂に関与するスフィンゴ脂質シグナリング

(1)先天性スフィンゴ脂質代謝異常症における多核細胞産生モデル系を用いた研究サイコシンは多核形成を引き起こすと同時に、細胞内小器官の分布異常とりわけWGA顆粒の分布異常を引き起こすことが明らかになった。そこで、WGA顆粒の分布異常と細胞質分裂異常との関係を検討したところ、サイコシン無添加の場合、WGA顆粒はゴルジ体に存在するが、サイコシン添加時にはゴルジ体から移動することが示された。また、このWGA顆粒を電顕で観察したところ、密度の高い小胞が観察された。(2)スフィンゴ脂質減少に耐性を示す新たな酵母遺伝子のSLI6の解析SLI6の遺伝子配列を明らかにしたところ、PI4,5P2合成の最終段階を触媒する酵素であるホスファチジルイノシトール4リン酸5キナーゼをコードする遺伝子であるMSS4と同一であった。また、MSS4のマウスホモログであるマウスPI4P5K遺伝子を同じように酵母に発現させてもスフィンゴ脂質量の減少に伴う細胞死から回避することが明らかにされた。この事実とスフィンゴ脂質合成の類似性を考慮に入れると哺乳動物でも類似の機構があることが予想された。一方、MSS4を強制発現させてもスフィンゴ脂質合成量が変化しないことから、ホスファチジルイノシトール4リン酸5キナーゼの上流にスフィンゴ脂質が位置していると考え、本酵素の機能に対するスフィンゴ脂質の影響を調べたところ、スフィンゴ脂質量の減少により本酵素の細胞内局在が、細胞膜から細胞質内の顆粒へと変化することが明らかになった。また、この細胞内局在の変化に伴い、PI4,5P2によって制御されていることが知られているRom2の細胞内局在も同時に変化したことから、PI4,5P2依存的なシグナルも影響を受けることが明らかにされた。(1)先天性スフィンゴ脂質代謝異常症における多核細胞産生機構多核細胞産生を伴う先天性膜脂質代謝異常症とは、globoid cell leukodystrophyで、本症はスフィンゴ脂質の一種であるgalactosylceramideを分解する特異的β-galactosidase欠損症である。本症患者は、重篤な神経疾患を発症し2-3歳で死亡するが、galactosylceramideを多く含む脳内に、globoid cellと呼ばれる多核細胞が出現する。本症の名前はこの細胞の名前に由来するが、その生成機構はほとんど明らかにされていない。今年度は培養細胞系を用いた巨大多核細胞産生モデル系を用いて、多核形成が細胞質分裂阻害でありその阻害点は、収縮環形成以降にあることを明らかにした。また、多核産生に先立って、アクチンフィラメントの巨大隗が現れるが、この巨大隗の電子顕微鏡写真を取ったところ細かな空胞の集まりであることが明らかになった。(2)スフィンゴ脂質減少に伴う細胞質分裂阻害を抑制する遺伝子の解析スフィンゴ脂質合成阻害剤であるISP-1は、申請者の研究により、酵母に対して細胞質分裂阻害および多核の誘導を引き起こすことが明らかにされている。さらに、ISP-1に耐性を示す6つの遺伝子の単離に成功している。このうちSLI2と命名した遺伝子は、プロテインキナーゼ構造を有する夕ンパク質をコードしていた。このプロテインキナーゼの活性を種々の基質を用いて測定したところ、PKCの一種を用いることで測定可能であることが明らかになった。この測定系を用いて、種々の変異体の活性を測定したところ、ATP結合能を欠いた変異体は化生がないことが示された。また、リン酸化部位と考えられている662のスレオニンを他のアミノ酸に変えた場合も、活性に大きく影響が表れた。本症の多核細胞産生の生成機構はほとんど明らかにされていない。昨年、本症においで蓄積されるサイコシンがマクロファージ系の細胞に多核誘導を起こすことを報告した。今年も多核細胞産生機構について引き続き検討を加えた。その結果多核細胞誘導現象は、マクロファージ系の細胞ばかりでなく種々の細胞で起こることが分かった。接着細胞であるCOS細胞を用いてその詳細を検討したところ、マクロファージ系の細胞と同様、分裂溝出現の後の細胞質分裂が阻害されていることが明らかとなった。このことから、誘導機構は多くの細胞で共通の機構であることが示された。今年は、このうちSLI1と命名した遺伝子は、分子量約50kDのタンパク質をコードしていたが、この遺伝子の欠損株はISP-1に対して超感受性になることから、この遺伝子産物がISP-1耐性の主要な役割を果たしていることが示された。

さらに、この遺伝子を過剰発現させた株は、ISP-1に対する強う耐性を示したことからもこのことが裏付けられた。(1)先天性スフィンゴ脂質代謝異常症における多核細胞産生モデル系を用いた研究(1)多核形成を引き起こすサイコシンによる細胞内小器官の変化サイコシンは多核形成を引き起こすと同時に、アクチン凝集塊の形成も引き起こす。そこで、この細胞内小器官、並びに細胞骨格系の変化を調べることにより、サイコシンの作用機構解析を勧めた。その結果、サイコシンは細胞内のWGA陽性顆粒の分布を変え、しかも細胞分裂時には、このWGA陽性顆粒が分裂面に移行しこれらの顆粒が細胞膜と融合することで、細胞膜の供給が起こるとされているが、サイコシンはこれを阻害するように見えた。以上の結果は、サイコシンの細胞質分裂の機構の一端を説明できるかも知れない。(2)サイコシン耐性能を獲得する酵母遺伝子の解析既にサイコシン耐性遺伝子が含まれている4種のDNA断片を得ている。そこでこのDNA断片の配列を決定することでORFの特定を行う。このDNA断片にはそれぞれ3-5個のORFが含まれていることが予想されるので、これらの内のどのORFが目的とするものかを明らかにした結果、幾つかの遺伝子の同定ができた。(2)スフィンゴ脂質減少に耐性を示す新たな酵母遺伝子の解析これまでに加えて、新たにスフィンゴ脂質減少に耐性を示す酵母遺伝子を得たので、このDNA配列を明らかにすることにより遺伝子の同定を行なった。その結果この遺伝子は分子量約50Kdのタンパク質をコードしていた。また、この遺伝子を欠損させた酵母はスフィンゴ脂質減少に対して極度に感受性になっていた。(1)先天性スフィンゴ脂質代謝異常症における多核細胞産生モデル系を用いた研究(1)多核形成を引き起こすサイコシンによる細胞内小器官の変化のメカニズムサイコシンは多核形成を引き起こすと同時に、細胞内小器官の分布異常を引き起こした。具体的にはリソソーム、初期エンドソームの細胞内分布が変化した。また、細胞質分裂の時の分裂溝への顆粒の移動が阻害された。サイコシンによる細胞質分裂にはこの顆粒の移動阻害が大きく関与していると考えられた。(2)スフィンゴ脂質減少に耐性を示す新たな酵母遺伝子のSLI1およびSLI5解析新たにスフィンゴ脂質減少に耐性を示す酵母遺伝子SLI1についてその機能の解析を行った結果、Sli1タンパク質はスフィンゴ脂質減少をもたらすISP-1のアミノ基をアセチル化していることが分かった。さらに、このアセチルISP-1は細胞毒性が認められず、スフィンゴ脂質合成阻害作用も著しく減少していた。このことよりSli1タンパク質は細胞内で、ISP-1をアセチル化により無毒化していることが明らかになった。(1)先天性スフィンゴ脂質代謝異常症における多核細胞産生モデル系を用いた研究サイコシンは多核形成を引き起こすと同時に、細胞内小器官の分布異常とりわけWGA顆粒の分布異常を引き起こすことが明らかになった。そこで、WGA顆粒の分布異常と細胞質分裂異常との関係を検討したところ、サイコシン無添加の場合、WGA顆粒はゴルジ体に存在するが、サイコシン添加時にはゴルジ体から移動することが示された。また、このWGA顆粒を電顕で観察したところ、密度の高い小胞が観察された。
スウェーデン女性運動の比較発達社会史的研究

本研究は、スウェーデン民衆運動に内包される教育的機能がジェンダー平等化にいかに寄与してきたのかを解明することを目指すものである。スウェーデンでは、1960年代の制度改革を経てジェンダー秩序が劇的に変化した。変化の兆しが現れた当時においては、女性たちの生き方の算段や自己実現の構想が大きく変わり、日常生活を支える実践知の獲得の仕方も変化を余儀なくされたはずである。本研究ではこうした状況を「発達文化」の変容過程と捉え、新たな自己実現のイメージを形成しその実現の手立てを構想した女性たちにとって女性運動がいかなる意味を持っていたのかを探り、それがジェンダー秩序の転換において果たした役割を明らかにする。
新しい混合原子価二核錯体の合成とその分子スイッチへの応用

混合原子価錯体の分子素子への応用を目指し, 2,2'-ジベンズイミダゾレート(BiBzIm)で架橋した新しい混合原子価Ru, Os錯体の合成を行なった.今回得られた結果は次のように要約できる. (1)新規にビピリジンの側鎖に置換基を有する二核錯体〔R_2bpy)_2M(BiBzIm)M'(bpy)_2〕^<2+>(I)(M, M'=Ru, Os;bpy=2.2'-ビピリジン)を合成した.(2)錯体IIの酸化過程は2段の一電子過程として金属上でおこり,還元過程はbpy上でおこり置換基によって挙動が大きく異なり, R=EtOCOのときには6段の一電子還元過程が観測された.酸化電位はEtOCO>H>Me,金属ではRu>Osの順に負電位側にシフトする.(3)混合原子価錯体の安定性を示す尺度である1段目と2段目の酸化電位の差△E1/2はR=EtOCO>Me>Hの順に小さくなり,置換基の異なる異核二核錯体の方が混合原子価Ru(ii)-Ru(iii)状態が安定であることがわかった. (4)Ru(ii)-Ru(iii), Ru(ii)-Os(iii), Os(ii)-Os(iii)混合原子価錯体において,特徴的な原子価間電荷移動(IT)遷移が500010000cm^-に観測された.IT遷移のエネルギーと酸化電位の差△E_<1/2>との間には直線関係が成り立ち, △E_<1/2>が大きくなるとIT遷移のエネルギーも大きくなる.(5)BiBzImを架橋配位子とする(I)の混合原子価錯体の安定な理由として(a)BiBzImは2価の陰イオン性架橋配位子であるので金属イオンとの静電子引力が存在する.また(b)MO計算の結果からBiBzImにはエネルギー的に高いπ軌道が存在し,強いπ供与性の配位子として働き, BiBzImπ-M(iii)dπ相互作用による安定化が大きいことがわかった. (6)Os二核錯体のXPSスペクトルの測定からOs(ii)-Os(iii)混合原子価錯体においては4f7/3に相当するピークが1:1の強度比の一対として5860eVに観測されたことからclassllに属することが示された. (7)二核錯体中のbpy上への置換基の導入の合成ルートが確立されたことから錯体の新しい機能化が期待できる.混合原子価錯体の分子素子への応用を目指し, 2,2'-ジベンズイミダゾレート(BiBzIm)で架橋した新しい混合原子価Ru, Os錯体の合成を行なった.今回得られた結果は次のように要約できる. (1)新規にビピリジンの側鎖に置換基を有する二核錯体〔R_2bpy)_2M(BiBzIm)M'(bpy)_2〕^<2+>(I)(M, M'=Ru, Os;bpy=2.2'-ビピリジン)を合成した.(2)錯体IIの酸化過程は2段の一電子過程として金属上でおこり,還元過程はbpy上でおこり置換基によって挙動が大きく異なり, R=EtOCOのときには6段の一電子還元過程が観測された.酸化電位はEtOCO>H>Me,金属ではRu>Osの順に負電位側にシフトする.(3)混合原子価錯体の安定性を示す尺度である1段目と2段目の酸化電位の差△E1/2はR=EtOCO>Me>Hの順に小さくなり,置換基の異なる異核二核錯体の方が混合原子価Ru(ii)-Ru(iii)状態が安定であることがわかった. (4)Ru(ii)-Ru(iii), Ru(ii)-Os(iii), Os(ii)-Os(iii)混合原子価錯体において,特徴的な原子価間電荷移動(IT)遷移が500010000cm^-に観測された.IT遷移のエネルギーと酸化電位の差△E_<1/2>との間には直線関係が成り立ち, △E_<1/2>が大きくなるとIT遷移のエネルギーも大きくなる.(5)BiBzImを架橋配位子とする(I)の混合原子価錯体の安定な理由として(a)BiBzImは2価の陰イオン性架橋配位子であるので金属イオンとの静電子引力が存在する.また(b)MO計算の結果からBiBzImにはエネルギー的に高いπ軌道が存在し,強いπ供与性の配位子として働き, BiBzImπ-M(iii)dπ相互作用による安定化が大きいことがわかった. (6)Os二核錯体のXPSスペクトルの測定からOs(ii)-Os(iii)混合原子価錯体においては4f7/3に相当するピークが1:1の強度比の一対として5860eVに観測されたことからclassllに属することが示された. (7)二核錯体中のbpy上への置換基の導入の合成ルートが確立されたことから錯体の新しい機能化が期待できる.
マウス初期胚における生体内エネルギーのリアルタイム解析

ATPを可視化するために作出したGO-ATeam2可視化マウス、GO-ATeam1可視化マウスの受精後16日目のマウス胚から樹立したMEF細胞を用いてATP量とGO-ATeamから発せられるFRET/GFP ratio値の相関性を調べるとGO-ATeam2は0.3-5mMのATP濃度の範囲で、またGO-ATeam1は2-20mMのATP濃度の範囲で直線状の相関性を示すことを明らかにした。このことより、このマウスを用いればそれぞれのATP濃度においてFRET ratio値としてATP濃度を詳細に可視化できる事がわかった。このGO-ATeam2可視化マウス、GO-ATeam1可視化マウスを用いて受精後1日目から10日目までの胚にてATPの細胞内局在、各細胞種でのATP量の定量測定と経時変化測定、またマウス成体での臓器毎・細胞毎・細胞内局在を定量的に測定できるかを検討した結果、subcellularレベルでATP量の分布を調べる事が可能である事が示された。細胞内でATP量の変化を詳細に調べる事ができる両方のATP可視化マウスを用いて、glycolisisおよびoxidative phosphorylationを阻害する試薬を添加してATPの経時的変化を確認すると、濃度・時間依存的な変化を観察する事ができた。またここで測定した濃度はLuciferase法にて測定した場合と相関性を示す事ができた。更に、卵割時や低酸素時・疾患時におけるATPの産生と変化に対しても重要な知見を得る事ができた。25年度が最終年度であるため、記入しない。ターゲティングしたES細胞を用いてアグリゲーション法にてキメラマウスを作成した。ターゲティングベクターの構築はCAGプロモーターで制御される形でROSA26領域にGO-ATeam2及びGO-ATeam1を挿入した形にすることで細胞内でATPの量の変化を詳細に調べることができる可視化マウスを作製した(それぞれGO-ATeam2可視化マウス、GO-ATeam1可視化マウスという)。このそれぞれのGO-ATeam2可視化マウス、GO-ATeam1可視化マウスの受精後16日目のマウス胚からMEF細胞を樹立した。これを用いてATP量とGO-ATeamから発せられるFRET ratio値の相関性を調べるとGO-ATeam2は0.3-5mMのATP濃度の範囲で、またGO-ATeam1は2-20mMのATP濃度の範囲で直線状の相関性を示すことを明らかにした。このGO-ATeam2可視化マウス、GO-ATeam1可視化マウスを用いて受精後1日目から10日目までの胚にてATPの細胞内局在、各細胞種でのATP量の定量測定と経時変化測定、またマウス成体での臓器毎・細胞毎・細胞内局在を定量的に測定できる事が示された。当初作出していた構築のマウスでは発現量が低くて実験に使用できなかったが、今回作出したマウスは発現量が十分かつ解析可能で、更にマウス生体も形態的・行動的な異常がない事を確認している。また解析に必要な顕微鏡も群馬大学及び基礎生物学研究所で確認して解析をはじめたのでおおむね順調に進展している。作出したマウスを用いてATPアトラスの作製と各種疾患(糖尿病・心疾患・中枢疾患・がん・腎疾患・老化など)におけるATP量の変化と細胞の機能を疾患モデルマウスを利用して解析している。
蛍光化リポソーム薬物送達システムを用いた消化器癌治療の基礎的検討

新規に開発した疎水性近赤外蛍光プローブICG-C18を用いたリポソームシステムが、薬物送達システムとして消化器癌治療に応用可能かどうかに関する基礎的な検討を行った。マウスの腫瘍モデルを用いた検討で、200nmの平均粒径に整形した蛍光化リポソームは、EPR効果により腫瘍に集積し、近赤外光の照射により腫瘍の発育抑制を認めた。シスプラチンを内包化したリポソームを同様のモデルで検証したところ、発育抑制効果の増強を認めた。ジニトロフェノールを内包化した蛍光リポソームを作製し、in vitroで近赤外光照射による内包内容の放出効率を評価したところ、1.54%程度であることが明らかとなった。1われわれの研究室で開発され、本研究使用されている脂溶性蛍光色素(アルキル化インドシアニングリーン,ICG-C18)は特許出願中であったが、平成13年中に国内製薬企業に有償で権利譲渡された。2DNP内包化蛍光リポソーム(DNBS-LP-ICG-C18)のvitroにおける近赤外光照射によるDNP放出効率の検討を行った。平成2123年度の科学研究費補助金による課題「蛍光化リポソームを用いたダブルイメージングによるセンチネルリンパ節診断法の開発」で確立された、160μmol/Lの蛍光化リポソーム作製過程において、10mg/mlのDNP(DiNitrobenzene Sulfonic Acid)を加えリポソーム内包化を行ない、ゲル濾過により遊離DNPの除去を行ったところ、最大でおよそ6μg/mlのDNP内包化蛍光リポソームが作製可能であった。このDNP内包化蛍光リポソームを96穴プレートに分注し、われわれの研究室にて開発された近赤外光照射装置(特願2012-103379)を用いて近赤外光の照射を行った。照射後のサンプルからゲル濾過により遊離したDNPを抽出し、近赤外光照射によるDNPの放出効率の検討を行った。その結果10分近赤外光照射で約25%、20分で約30%、30分で約35%であった。3鳥取大学獣医学部獣医外科学の岡本芳晴教授との共同研究により、昨年度の研究成果で得られたシスプラチン内包化LP-ICG-C18を用い、家畜犬を対象とした光線力学療法を行った。切除不能の各種腫瘍において、従来の温熱療法と比較し、有意な腫瘍の縮小と生命予後の改善を認めた。本研究課題の中核をなすリポソームと近赤外蛍光色素を組み合わせたトレーサーに関しては、従来の水溶性インドシアニングリーン(ICG)をリポソームに組み込んだものが、十分にリンパ系の動態解析に有用との報告がある(Rroulx et al. Cancer Research 70(18) 7053-62, 2010)。そこでまず、われわれの開発した新規近赤外蛍光色素である脂溶性ICG(ICG8)の生体内動態解析における有用性を旧来の水溶性ICGと比較することとした。等モルのICG水溶液、ICG-リポソーム、ICG8-リポソームをそれぞれマウスのfootpadに投与しリンパ系動態解析を行ったところ、ICG水溶液、またはICG-リポソームを投与したマウスは、投与後60分までに一次リンパ節ばかりではなく、肝臓にも強い集積を認めたのに対し、ICG8-リポソームを投与したマウスでは投与後120分まで、肝臓への集積は認めなかった。このことは、水溶性ICGを用いたリポソームでは、生体内で無視できない量のICG分子がリポソームから解離し血液中にも漏出することを示しており、やはり脂溶性ICGは腫瘍選択性の高い薬物送達システムを構築するために必要不可欠なものと考えられた。また、本研究課題で提案している薬物送達システムの光線力学・温熱療法における有用性の基礎的な検討をマウスモデルにより行った。扁平上皮がん細胞株をマウスの下肢に局注し、10日後ICG8-リポソームにシスプラチンを封入したものを全身投与、腫瘍への近赤外光照射を行った。照射後の腫瘍体積はICG8-リポソーム+シスプラチン< ICG8-リポソーム< controlとなり、本薬物送達システムを用いた悪性腫瘍治療においては光線力学療法と光線温熱療法の相乗効果が見込めるものと推察された。

前年度の検討により、DNP内包化蛍光リポソーム(DNBS-LP-ICG-C18)のin vitroにおける近赤外光照射により内包されたDNPが放出されていること裏付けるデータを得ることができたが、その効率は近赤外光10分の照射で25%程度と低く、リポソームの構成や近赤外光の照射方法等に改善の余地があるものと考えられた。前年度の検討では、放出された遊離DNPとリポソーム内に残されたDNPを分離するためにゲル濾過を用いたが、この方法では計測に相当量のサンプルと時間を要することから、最適化にはより簡便な計測システムが必要なものと考えられた。そこで490nmの励起光で520nm程度の極大波長を有する蛍光を発するフルオレセインが、塩化コバルトと会合することにより消光する性質に着目し、内包物質の放出効率を相関するフルオレセインの蛍光の減弱で検出することのできる新しいシステムの開発を行った。脂溶性のDNPであるDNBS(ジニトロベンゼンスルホン酸)に対し、1:1010:1のモル比のフルオレセインを含有するリポソームを作成し、近赤外光を照射、DNBSの放出量とフルオレセインの蛍光減弱量の相関を検討したところ、DNBSとフルオレセインのモル比5:2のものが最もよく相関することが明らかとなった。今後の蛍光化リポソームのDNP放出効率最適化に向け、効率的な計測システムの構築が可能となったものと考えられる。消化器外科学本年よりvitroの主たる実験を担当する大学院生が卒業により交代となり、蛍光化リポソームの安定した作製が可能となるまでに時間を要した。また、先行した科学研究費補助金の課題「蛍光化リポソームを用いたダブルイメージングによるセンチネルリンパ節診断法の開発」(平成2123年度)の成果を報告した論文の投稿先のジャーナルから追加実験の要求が有り、相応の時間を要した。本研究課題は先行研究の成果を基盤としているため、確固たる研究基盤を構築することは本研究の成果を期待する上で必須であると考えた。申請書に記載した研究協力者の大学院生藤戸寛迪が個人的な事情により昨年度初頭に退学したため、担当予定であった蛍光化リポソームのDNP内包化効率及び放出効率の検討に遅滞を生じた。平成25年度の成果に基づき、本DNP内包化蛍光リポソーム(DNBS-LP-ICG-C18)が担持あるいは内包するDNPをどの程度の効率で培養細胞へ賦与可能かを検討する。すなわち各種消化器癌細胞株の培養液中に、DNBS-LP-ICG-C18を添加、近赤外光を照射し培養細胞のDNP修飾効率を検討する。DNP修飾は抗DNP抗体を用いたフローサイトメトリーにより評価を行う。また、平成24年度の本研究において行った、シスプラチン内包化蛍光リポソームによる抗腫瘍効果の評価の際に用いた動物モデルにDNBS-LP-ICG-C18を投与、標的部位(主病巣あるいは転移病巣)を摘出、前項と同様のFCMを用いた評価を行う。また、あらかじめ大豆油と共にDNPを投与し、抗DNP細胞性免疫を獲得した宿主に対し、DNP担持・内包蛍光化リポソームを投与、標的部位の炎症反応の惹起の有無をみる。また、この宿主より脾臓を摘出、抗腫瘍特異的免疫誘導が行われているかどうかの評価を行う。平成25年度の研究により得られたDNBS-LP-ICG-C18のDNP内包化効率が予想より低いため、リポソームとの親和性がより高い腫瘍免疫修飾物質であるarabinomannanについてもリポソーム内包化・放出効率の検討を行う。平成24年度の研究の過程で蛍光化リポソーム中の蛍光色素モル濃度と蛍光励起効率の関係に関して、in vitroとin vivoで解離があることが明らかになった。これまでin vitroのデータを元に蛍光化リポソームの設計を行ってきたが、この解離の原因を明らかにし、in vivoにおいて最も効率よく蛍光励起及び温熱療法を行うことのできる蛍光化リポソームの再設計を行う。
中国語諸方言の舌尖母音韻母の成立に関する音声学的研究

本研究では,中国語に特有の舌尖の摩擦を伴う母音/i/について,その音声学的な性質と歴史的成立過程の諸側面を明らかにすることを目的として,現代方言の記述資料の比較と音響学的測定を行った。これまでこの母音の出現は,音節初頭子音が舌先の破擦音の系列の音節に限られると考えられていた。しかし,近年になって中国各地の方言調査の進展に伴い,音節初頭子音が唇音の系列の音節にもこの舌尖母音の現われる方言が少なからず存在することが知られるようになってきた。これらの方言資料を収集して比較した結果,その出現分布と成立条件に共通した発展過程のあることがわかった。それは,(1)大部分の方言で/ei/という二重母音が単母音化して/i/になっており,音節^*/pei/が/pi/となったため,それに遂われるかたちで^*/pi/が/pi/へ移行したと考えられる。(2)そのためには破擦音の系列においても同様に,^*/tsi/→/tsi/,^*/tsei/→/tsi/という変化が先に生起していることが前提条件となる。(3)この条件を満たさない方言に/pi/のような音節が存在する場合は,隣接する方言でこれらの変化がすぐに生じており,その借用ではないかと考えられる。という3点である。また,音響測定の結果では,唇音の系列の音節にこの舌尖母音が現われる場合,母音部分はいずれも強い騒音的性質をもつことのほか,音節初頭子音が有気音の場合には,/phi/(<^*/phei/)の気音hの部分が騒音のきわめて少ない空白を示すのに対して,/phi/(<^*/Phi/)では,/psz/と表記しうるような,ほとんど摩擦音に近い騒音が記録された。このことから,/si/が/si/(/sz/)へと変化したのと平行するように,音節初頭子音が唇音の系列の音節では,母音/i/がより高い位置/j/に移行するにともない,有気音子音の気音部分が摩擦音的性質を帯びたのが変化の始まりではなかったかという仮説を立てるに至った。という3点である。
化学感覚情報変換機構の新展開

味細胞と嗅細胞に分子生物学的手法やパッチクランプ法を適用し、情報変換機構に関する新しい多くの知見を得た。従来、嗅細胞における匂い応答は、cAMPかIP3を介して発現するとされてきた。嗅細胞に高濃度のcAMPを注入してcAMP経路を脱感作したのち、cAMPを産生する匂い物質を与えると、また大きな応答が現れた。cAMPを産生する匂い物質はIP3を産生しない。したがって、cAMPもIP3も介さない、第3番目の情報変換機構が存在していることが明らかになった。また、従来サカナの嗅細胞を遊離して、アミノ酸の応答を測定することは困難であった。ニジマスの嗅上皮から、アミノ酸に対する応答能を有する嗅細胞を遊離するのに成功した。今後、この細胞にパッチクランプ法を適用して、サカナのアミノ酸応答に対する情報変換機構が明らかにされると考えられる。マウスの味細胞にサッカリンを与え、セカンドメッセンジャー候補物質の濃度変化を測定した。サッカリンが底濃度では、cAMPが増加し、高濃度になるとIP3が増加した。サッカリンの情報変換には、両者が関与している可能性が示唆された。また、ハエ味覚器の糖に対する応答はIP3産生を阻害する物質で抑制されたことから、への糖応答発現にIP3が寄与している可能性が示唆された。ホスファチジン酸とβラクトグロブリンの複合体が苦味を選択的に抑制することが見いだされたが、さらにホスファチジン酸やホスファチジルイノシトールなどの産生リン脂質が苦味を選択的に阻害することが見いだされた。嗅細胞と味細胞における情報変換機構を中心に研究が行われた.嗅細胞においては,カエル,カメ等の遊離嗅細胞にパッチクランプ法を適用して実験が行われた.カエルの嗅細胞を用いた実験では,一個の嗅細胞が多数の匂いに応答することが明らかにされた.G-蛋白質共役型受容体は,一個の嗅細胞に一種類しか存在しないので,匂いの受容はG-蛋白質共役型受容体以外の受容体でも受容されていることが示唆された.また,嗅細胞におけるCa依存性のClチャネルが,匂いの受容に関与していることを示唆する実験結果も得られた.また,ラット嗅細胞内でカルモジュリンが,順応における負帰還調節に関与していることが示唆された.マウスの舌上皮から味蕾標本を作成し,味細胞からホールセル記録を行う方法が開発された.これにより,味細胞のミクロビリ-膜に局所的に刺激物質を与えることが出来る.この方法で,アミロライド感受性電流の特性が明らかにされた.また,ハエの味覚毛にパッチクランプ法を適用し,cGMPにより引き起こされる電流を観測した.さらにハエの味覚毛にはGq型のG-蛋白質が存在していることが確認された.甘味抑制剤であるグルマリンを用いて,グルマリンと結合する蛋白質の探索が行われたが,現在まで同定されていない.一方,フォスファチジルコリンとβ-ラクトグロブリンからなる苦味抑制剤をカエルの味覚器に適用し,各種の刺激物質を与えたときの味神経応答を測定した.その結果,大部分の苦味物質は顕著に抑制されるが,塩化マグネシウムのような塩型の苦味物質の応答は抑制されないことがわかった.嗅細胞と味細胞における情報変換機構に関する研究で多くの成果が得られた。匂い応答は、cAMPやIP_3などを介さなくとも発現することを見出していた。この経路にはCa^<2+>、NOやcGMPも関与していないことが明らかになったことから、セカンドメッセンジャーを介さない経路が匂い応答の発現に大きく寄与していることが示された。匂い識別能力の温度および匂い物質の濃度への依存性を調べたところ、構造が類似した匂い物質は、温度が高いあるいは匂い物質の濃度が高い場合には識別されにくかった。

嗅受容膜の膜流動性の増加とこれらの匂い識別能の低下の間には良い相関が見られたことから、膜流動性が匂い識別能に大きく関与していることが示唆された。魚類の嗅細胞を遊離することは困難であったが、ニジマス嗅細胞を遊離することに成功した。味刺激により舌上皮から遊離する物質を採取する装置を開発した。この装置を用いて円や糖をラットとスナネズミの味細胞に与えたところ、ペプチド性の物質が遊離することを見出した。また、糖や塩を与えると、スナネズミの味細胞中のCa^<2+>濃度の増加を測定した。さらに、マウスの味細胞にサッカリンを与えたところ、低濃度ではcAMP濃度が増加し、高濃度ではIP_3が増加したことから、これらの物質がセカンドメッセンジャーとして糖受容に関与している可能性が示唆された。ハエの糖応答でもIP_3依存性経路の阻害剤で抑制されたことから、IP_3が関与している可能性が示唆された。リポ蛋白質は苦味を選択的に抑制することを見出していたが、酸性リン脂質単独でも苦味を選択的に阻害する効果を有することを見出した。
膵癌におけるクラスリンアダプターの発現解析と新規治療法の開発

本研究ではクラスリンアダプター分子を標的としたsiRNAによる膵癌治療薬の開発を目的としている。膵癌切除標本および膵癌細胞株を用いて膵癌におけるクラスリンアダプター分子群の発現解析を行い、臨床病理学的因子およびEGFRを含む関連分子との関連解析を行う。膵癌細胞株において、クラスリンアダプターの発現抑制によって得られるin vitroでの増殖抑制効果を解析する。膵癌細胞株をマウスに移植し、in vivoでのsiRNAとスーパーアパタイトナノ粒子法による抗腫瘍効果の解析を行う。
HBV侵淫地域である中国、アフリカにおける新しいHBV母子感染対策の臨床治験

2004年に厚生労働省森島分担班の調査報告によりHBVキャリア化児の約3割が当然受けるべき高力価ヒト免疫グロブリン(HBIG)・HBワクチン併用予防法(厚生省方式,1986)を受けていなかったという調査事実が判明した。これは医療側の理解不足も否定できないが、厚生省方式の内包する欠陥によるところが大きく、その見直しが急務である。我々は当初より生後24時間以内にワクチン接種を開始する千葉大(Inaba)方式(1984)の優位性を主張してきたが、昨年より厚労省大戸班稲葉分担班によりその検証が始まり、新生児免役応答能に関する臨床治験に基づいた、更に簡略された狸協医大方式(新Inaba)方式が文科省基盤研究(B)海外として発足した。以下にこの一年間の活動を記す。1.中国大連医科大学産婦人科(熊曙康助教授担当)、ウガンダマケレレ大学産婦人科(ムゲルワ医師担当)を訪問し、関連施設美々、これまでの経過と成績に関する講演を行い、共同研究を発足させた。2.当科にて1年間経過観察し得た獨協医大方式症例は5例あり、1例が胎内感染症例、残り4例は生後24時間以内、1ヶ月の2回ワクチン接種にて4例とも生後12ヶ月を過ぎて100IU/ml以上の十分なHBs抗体価を持続している。3.大連医科大学産婦人科ではHBe抗原陽性妊婦の出生児8例に本方式を施行、生後6ヶ月に達する症例がまだ無いため判定は次回報告する。4.マケレレ大学では学内倫理委員会、ウガンダ国厚生省に研究申請をして、許可待ちの状態である。
筋ジストロフィーに対する分子標的治療薬の開発

Duchenne型筋ジストロフィー(DMD)患者やそのモデルマウス(mdxマウス)の骨格筋ではMMP-9の発現および活性が亢進している。研究代表者らによるダブルノックアウトマウス(mdx;MMP9-/-マウス)を用いた先行研究では、筋ジストロフィーの骨格筋においてMMP-9は炎症の収束、再生を遅延させることで、組織変性を促進していることが明らかとなり、MMP-9を治療標的とするDMDに対する新規治療の可能性を見出した。しかし、MMP-9の他分子との関係や作用メカニズムについては十分に解明し得ず課題として残った。mdx;MMP9-/-マウスの病初期の骨格筋では、MMP-9の基質であるオステオポンチン(OPN)のmRNA発現がmdxマウスに比し有意に増加しており、mdxマウスの変性骨格筋においてMMP-9は炎症壊死再生に伴うOPNの発現を制御している可能性が高く、筋ジストロフィーの骨格筋におけるOPNの強発現は,筋のリモデリングや再生に必要であると推測された。また、OPNと共通のレセプター:CD44に結合する細胞外マトリックスであるヒアルロン酸も変性骨格筋に多く存在し、MMP-9やOPNとの相互が示唆されたもののそのメカニズムは不明である。29年度にはCardiotoxinを用いて作成したマウスの傷害骨格筋モデルにおいても、MMP-9の欠損によりOPN遺伝子発現が亢進しており、同時期にマクロファージ遊走ケモカインであるMCP-1の遺伝子発現およびマクロファージの浸潤が増加する一方で、好中球遊走ケモカインであるMIP-2の遺伝子発現および好中球の浸潤は減少し、さらに再生促進作用を有するM2マクロファージの浸潤が増加するとともに、炎症の収束および再生が促進されていることが確認された。また、OPNと共通のレセプター:CD44に結合する細胞外マトリックスであるヒアルロン酸も変性骨格筋に多く存在し、MMP-9やOPNとの相互が示唆されたもののそのメカニズムは明らかとなっていない。本研究では、筋ジストロフィーの骨格筋変性に係るMMP-9と他分子との相互作用を解明し,筋ジストロフィーに対するMMP-9抑制剤の有効性について検討する。28年度はmdxマウス及びmdx;MMP9-/-マウスの骨格筋、心筋の病理学的な検討、主には若年マウスの炎症骨格筋における、OPN、CD44、ヒアルロン酸、それぞれのレセプターの局在についての検討、高齢マウスの心筋、骨格筋における線維化の検討を行った。mdx;MMP9-/-マウスの表現型について若年及び高齢で病理学的な検討を進めることができた点は大きな前進であったが、初年度のうちに開始する予定であったMMP-9によるケモカインのプロセッシングや炎症骨格筋組織におけるMMP-9とOPNとの相互関係を解明するためのin vitroでの検討がまだ準備段階であり、やや遅れていると判断した。