hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
病院・診療所各施設の特徴から生じる出産の真の満足を達成する助産ケア

本研究は、病院・診療所で出産した女性が「出産の真の満足」を得られる助産ケアを明らかにすることを目的とした。病院・診療所で出産した女性14名にインタビューを行い、質的記述的に分析を行った。その結果、出産に「満足している」と実感している女性は、陣痛に集中できる環境を自ら作り出していた。予想を上回る夫・家族からのケアがあり、また夫らしいサポートだったと振り返り、感謝していた。さらに、柔らかい物腰と絶妙のタイミングで語りかけてくれる助産師が存在し、欲求が満たされていた。本年度は、助産師と女性が認識する主体的な出産を達成する助産ケアについて、双方の結果の共通点・相違点、ならびにその理由を明らかにし、産婦中心の助産ケアを検討する基礎資料を得ることとした。これまでの研究活動で得ていた総合病院または診療所で出産した女性と、各施設(助産所を除く)に勤務する助産師のインタビューデータを分析し、双方から抽出されたカテゴリーを照合した。その結果、産婦が有益であったと認識していた助産ケアと助産師が実践しているケアはおおむね一致していた。しかし、助産師側から得られた〔家族と信頼関係の構築とケアの方向性の共有〕という家族を対象とした助産ケアは、女性側の結果には認められなかった。家族を対象としたケアが女性側から抽出されなかった理由としては、出産中、女性は陣痛を乗り越えるのに精一杯で、助産師と家族の関係にまで注意が向かなかったためと考える。しかし、非日常的な環境である病院・診療所で出産する女性にとって、気を許し、信頼のおける家族の存在は大きな支えとなる。助産師は女性の主体的な出産を達成するためには、家族のサポートも重要であると捉え、家族とのかかわりを積極的にもつようにしていたのではないかと考える。病院・診療所においては、助産師が継続的に付き添うことが困難な場合や勤務交代で担当助産師が入れ替わることも多いため、産婦が気を許せる家族は、産婦の主体的な行動やその維持において重要な役割を担うことが期待される。そのため、女性側からは抽出されなかったが、助産師の家族に対するケアは、必要不可欠なものといえる。今回、ケアの受け手である女性側が有益であったと認識する助産ケアと助産師が実践している助産ケアがおおむね一致することが分かった。さらに、家族へのケアの重要性も示された。今後の研究活動に向け、女性の主体性を尊重する助産ケアの具体的内容として有効に活用できる成果となった。本年度は、「出産の真の満足」とはどのようなものか手がかりを得るために、文献レビューを行った。その結果、出産の満足に関連する記述の多くが助産所で出産した女性を対象としたものであり、出産の満足を「出産体験の自己評価」で測定しているものが多いことがわかった。一方で、理性や知性から解放され、従来の「満足なお産」、「快適なお産」という概念では説明しきれない、自分の身を委ねる体験による「豊かな出産体験」があることが報告されており、「出産体験」そのものを定量的に評価する重要性が示されているものがあった。本研究では、これまでの文献レビューから、出産の満足を産婦自ら力を発揮し、自分なりの頑張りを好評価できることが重要な要件であると考えてきた。しかし、再度「出産の満足」という概念を確認し、さらに助産所以外で出産した女性の「出産の満足」を記述する必要性があることがわかった。この手順を踏むことで、どのような施設においても体験できる「出産の真の満足」とはどのようなものか、そのありようについて明らかにすることができると考える。平成27年度は、「出産の真の満足」のありようを国内外の文献検討から探究、記述し、出産体験の詳細ならびに出産時に受けた助産ケアを語ることができる対象者を得るため、フィールド開拓を行なった。文献検討では、日本では医学中央雑誌Web版、海外のものはCINAHLを中心に検索した。日本国内における「出産の満足」に関連する先行研究では、出産体験の捉え方を評価する尺度や、出産体験における自己評価を得点化する出産体験自己評価尺度が開発されている。特に後者の出産体験自己評価尺度は、「出産の満足」を測定する尺度として多くの研究で使用されていたが、出産体験の自己評価はあくまで出産時の母親自身の体験を評価するものであり、「出産の満足」とは区別すべきであると考えられた。その他、出産体験そのものを測る出産体験尺度が作成されている。本尺度は、出産以前の事柄や分娩期のケアに関する項目は、出産体験に影響を与える可能性の要因として扱うべきだとされ、産婦の身体感覚やそのときの思いや態度のみで構成されていた。一方、海外では、「出産の満足」は多面的で複雑であるため、非常に困難とされていながらも、医療スタッフからのサポートと産婦のコントロール感は最重要事項であることは研究者間でも意見が一致していた。特に産婦のコントロール感の概念分析では、「意思決定」、「情報へのアクセス」などの属性が明らかにされていた。以上の結果から「出産の真の満足」のありようは、出産時の母親の体験そのものとその体験を「満足」と認識しているかどうか、そしてその認識には周囲からのサポートと母親自身のコントロール感が含まれると考えられた。当初の研究計画では、これまでの研究成果から「出産の真の満足」とは、産婦自ら力を発揮し自分なりの頑張りを好評価することで得られると仮定していた。

しかし、他の研究者からの意見を得ることで、まず文献検討によって「出産の真の満足」のありようについて、更に検討が必要と考えた。「出産の真の満足」の記述が終了後、データ収集に進むよう計画を修正した。平成27年度に行なった文献検討とフィールドの開拓で、倫理審査承認後は、データ収集までは速やかに進めると考えられるため、やや遅れているとした。平成2728年度にかけて行った文献検討の結果、研究成果をより洗練させるためには、研究計画の見直しが必要であるという結論に至り研究計画の再検討を行った。当初は研究の第1段階として、施設の特徴別に主体的な出産に影響を及ぼす背景要因とそこで実践されている助産ケアを記述し、第2段階では出産体験の満足に向けた施設の特徴別の助産ケアを提言する予定であった。しかし文献検討から、出産体験の満足は多様な要因からなる多元的なものであり、主体的な出産はその一要因に過ぎないということがわかった。また、これまでの出産体験の満足に関する先行研究は助産所に限られており、病院・診療所の出産体験の満足を理解する十分な知見が得られなかった。そのため、まずは病院・診療所で出産し、自身の出産に満足していると実感している女性の「出産体験の満足」とはどのようなものか、その様相を明らかにすることとした。その後、助産師は女性の「出産体験の満足」に向けどのようなケアを提供しているのかを記述する。大学病院や診療所など施設別の助産ケアの照合・比較を行い、共通点や相違点を検討し「出産体験の満足」に寄与する施設ごとの助産ケアの工夫や特徴を提示する。その結果、本研究の最終目的である女性が施設を問わず「出産の満足」が得られるような助産ケアについての示唆を与える提言ができると考える。現在は倫理審査の承認を受け、対象者のリクルートにとりかかっているところである。文献検討の結果、当初の研究計画について見直しを行った。今年度までの進捗状況においても「やや遅れている」状況にあったため、さらに滞る結果となった。そのため補助事業期間延長の申請を行った。期間延長が承認されたため、現在は修正後の研究計画に沿って研究活動に取り組んでいる。周産期母子センターや診療所など、その施設が担う役割によって分娩期の管理体制は異なる。本研究は、女性が施設を問わず「出産体験の満足」が得られる助産ケアを明らかにすることである。当初、病院・診療所を特徴別に分け、妊産婦ケアに影響を及ぼす背景要因に起因する助産ケアを記述することで、出産場所を問うことなく女性が「出産体験の満足」が得られる助産ケアを提言する予定であった。しかし文献検討を進める中で「出産体験の満足」は主観を含む多様な要素が絡み、非常に複雑で多元的なものであることがわかり、背景要因に起因する助産ケアの記述では不十分であるという結論に至った。まずは病院・診療所で出産した「出産体験の満足」の様相を明らかにすることが先決と考え研究計画の修正を行った。研究計画の修正により、本年度は病院・診療所において経腟分娩で出産し、自身の出産に「満足している」と実感している母親にインタビューを行い、その様相を明らかにすることを目的に研究を進めた。その結果、診療所で出産した母親7名、病院(総合周産期・地域周産期医療センター含)で出産した母親7名の計14名にインタビューを行い、データを得た。
フェライト法によるベリリウム廃液処理の基礎研究

湿式酸化フェライト合成の実験設備を整え、各種濃度のベリリウムイオンを添加し、ベリリウム組み込みフェライトスラッジを合成し、得られたフェライトスラッジ及びろ液中のベリリウムイオン濃度を原子吸光光度計により定量した結果は、すべてのフェライトスラッジ中からベリリウムイオンが検出された。また、ろ液中のベリリウムイオンは、ベリリウムイオン添加量40mg/lまでは検出されず、ベリリウムイオン添加量90mg/l以上からはベリリウムイオンが検出された。得られたベリリウム組み込みフェライトスラッジの格子定数を精密定量した結果は、ベリリウムイオン添加量40mg/lまでは格子定数は減少し、その後は増加し一定となった。得られたベリリウム組み込みフェライトの電子顕微鏡観察結果は、ベリリウムイオン添加量が増加するにつれて結晶の大きさが小さくなっているのが観察された。これはイオン半径の小さいベリリウムイオンが格子中に取り込まれたことによって結晶が小さくなったためと考えられる。得られたフェライトスラッジの飽和磁化sigmaはほぼ60(emu/g)以上であり、安定なフェライトスラッジであるといえる。以上の結果より、今回の条件においては、ベリリウムの固溶領域は40mg/l程度までであり、固溶体として安定していることがわかった。またベリリウム含有廃液の処理法としてフェライト法が利用でき、処理後発生するスラッジも有効利用できる可能性があることがわかった。
胚性腫瘍と胚幹細胞の成立と分化の機構

胚性腫瘍細胞の未分化状態(がん状態)から体細胞への分化の際に生じる転写制御系の切り換わりが、本研究班の中心の一つである。POU-転写因子群に関する研究、がん状態におけるレトロウイルスLTRの抑制に関する研究で大きな成果が得られた。濱田班員は、EC細胞と繊維芽細胞との融合によって得られた細胞株がとるがん状態と分化状態との間の可逆的遷移を解析し、Oct-3因子の発現が、がん状態をもたらす引き金になること、がん状態から神経細胞への分化においてOct-3からBrn-2へのPOUファミリー内での切り換わりが必須であることを明らかにした。丹羽班員はMo-MuLVのLTRを抑制する因子ELPがそれ自体で抑制効果を持つだけでなく、レチノイン酸結合因子に対して競合的に作用すること、ELPをはじめとした複数種の抑制機構の協同効果としてLTRが完全に抑制されることを明らかにした。上記のほか、がん状態から分化状態への遷移に対応して発現される新たな増殖因子群(Miakineファミリー)の研究(村松)、ホモ突然変異(double knockout)ES細胞を用いたキメラ解析によるN-mycの制御機能の分析(近藤)、胚性腫瘍から幾段階かの分化の進行をへた体細胞系幹細胞株の樹立(渥美)などに大きな進展が見られた。全体的に、がん状態と分化状態との間での転写制御の切り換わりに関する研究と、増殖因子や細胞そのものに関する研究とが急接近し、研究が重なり合ってきたことが特記される。胚性腫瘍におけるがん状態とは何かという基本問題への一つの解答が遠からず与えられると期待される。
不登校児における睡眠覚醒リズム障害の研究

不登校の問題は、保護者、教育者など多くの人々が、その改善策を模索して苦悩している。本研究では、不登校児の多くに睡眠覚醒リズムの乱れがみられることから、生物学的な生体リズムの障害が、不登校の発現やその遷延にどのように関連しているかを明らかにすることを目的とした。本年度は、前年度に引き続き、主に医療機関に来院した不登校児、本人の来院は困難なことが多いので来院した保護者の協力を得て、を対象としてアンケートによる実態調査を行った。又、可能な事例においては、携帯型体動計やポリグラフ検査などによる客観的データの収集を行った。最終年度でもあるので、得られたデータについてコンピュータを用いて解析・検討を加えた。アンケート調査で、睡眠表を含めて十分な情報の得られた不登校児は40例であった。得られたデータに基づき、睡眠覚醒リズム障害の分類をすると、15例は睡眠相遅延症候群であり、7例は非24時間睡眠覚醒症候群であり、3例が非定型な睡眠覚醒リズムの障害であった。6例については携帯型体動計による客観的な活動リズムの測定と、携帯型体温ロガーによる生理学的計測を行った。その結果、行動観察とほぼ一致した所見が得られるが、概して生理学的所見の方が正常に近い傾向を示した。このことは、不登校児にみられる睡眠覚醒リズムの障害は、行動だけから観察される所見より生物学的には軽度のことが多いことを示唆していると考えられる。このことは、又、睡眠覚醒リズム障害を持つ不登校児については、医学的な時間療法や薬物療法、および光療法を試みる必要と共に、学校や家庭における適切な環境の調整や指導により改善が得られる可能性を示している。1.文献収集・検討:不登校児における国内外の文献を収集し、研究代表者と分担研究者でそれぞれ検討した。その結果不登校児における睡眠覚醒リズムの障害についての報告は、概略次のようにまとめられた。すなわち、不登校児における睡眠覚醒障害の発生率は数%から数十%と報告による差異が大きく、正確な発生率はまだ十分に明らかになっていない。また、不登校ではない健常な児童における睡眠覚醒リズムの実態が十分には明らかになっていない。これは正確な対象群を得るためには本研究で必要なことであり、次年度にこのデータの収集が必要であることが明らかになった。不登校児の特徴および睡眠覚醒リズム障害の基礎資料を知るためのアンケート用紙の原案作成を行った。不登校児において睡眠覚醒リズム障害の原因となりうる要素を抽出できるように、その成因、環境、心理的背景などを調べられるようにした。また、睡眠覚醒リズム障害がどの程度不登校から抜け出すことの障害になっているかについても調べられるようにした。不登校児の睡眠覚醒リズムについて調べるための睡眠表を作成した。また、これを実際に用いて児童精神科病院に受診中の不登校児16例における睡眠覚醒リズムを調べた。その結果、これらの不登校児にみられる睡眠覚醒リズム障害は睡眠相遅延症候群であったが、その一部、2例に非24時間睡眠覚醒リズム障害の傾向がみられることが分かった。非24時間睡眠覚醒リズム障害のみられた例の方が、そのリズムの固定化が強く、家族など周囲からの働きかけに対する抵抗性が強く、固有の非24時間のリズムが持続する傾向があった。本年度は不登校児における睡眠覚醒リズム障害について、前年度に行った先行研究のまとめに基づき、主に医療機関に来院した不登校児に対してアンケートによる実態調査と携帯型体動計やポリグラフィ検査による客観的データの収集を行った。1.不登校と睡眠覚醒リズム障害との関係:不登校児の約半数において睡眠覚醒リズム障害が認められた。1例においては、睡眠相遅延症候群と診断されたが、それが発症する以前には全く不登校の兆候はみられず、この原発性の睡眠覚醒リズム

障害のみが原因と考えられた。この事例については、行動療法的な時間療法を行って経過を観察中である。その他の例においては、睡眠覚醒リズム障害が原発性か二次性かはなお検討を要する。しかし、いづれにいても、いったんこの障害が発症すると慢性化する傾向があり、それが不登校を遷延化する主要な要因のひとつであることが推定されてきている。2.素因的要素について:不登校児で睡眠覚醒リズム障害を呈する事例では、何らかの睡眠障害の既往を持つと推定されるものが多い。それらは、しつけ不足睡眠障害、睡眠開始関連障害、食物アレルギー性不眠などである。しかし、過去の既往歴に基づく診断であるので、なお慎重な検討を要する点である。3.睡眠覚醒リズムの発達段階との関連:24時間の単相性の睡眠覚醒リズムは発達段階と密接に関連し、学童期の後半に確率されるのが一般的とされている。この点をより明らかにするため、2例について乳児期から経時的に携帯型体動計による睡眠覚醒リズムの計測を開始した。不登校児の問題は、保護者、教育者などの多くの人々が、その改善策を模索して苦悩している。本研究では不登校児の多くに睡眠覚醒リズムの乱れが見られることから、生物学的な生体リズムの障害が、不登校の発現やその遷延にどのように関連しているかを明らかにしていくことを目的とした。本年度は、前年度に引き続き、主に医療機関に来病した不登校児に対してアンケートによる実態調査と携帯型体動計やポリグラフィ検査による客観的データの収集を行い、コンピュータを用いて解析・検討を加えた。アンケート調査で、睡眠表を含めて、比較的十分な情報の得られた不登校児の事例は40例であった。得られたデータに基づき、睡眠覚醒リズムの障害の分類をすると、15例は睡眠相遅延症候群であり、7例は非24時間睡眠覚醒リズム障害であり、3例が非定型睡眠覚醒リズム障害であった。少数例ではあったが、携帯型体動計による、客観的な活動リズムの測定と、携帯型深部体温ロガーによる生理学的計測を行った。その結果、行動観察による睡眠覚醒リズムの障害とほぼ一致した所見を呈することが多いものの、客観的なデータと一致しない場合があり、それらの事例では不登校発現の機序が多要因で複雑であることが推測された。不登校児の場合、本人が定期的な通院をすることが困難なことが少なくなく、治療的関与に困難を伴う場合多いが、保護者の協力を得て、時間療法や薬物寮法、および光療法などを試み、学校や家庭における環境調整などと効率的に組み合わせることで、改善が得られる可能性が高くなると考えられた。
異常超伝導を示す擬一次元有機導体の高圧力下におけるスピンと電荷の秩序

(TMTTF)_2SbF_6は常圧で電荷秩序(T_<CO>=154K)と反強磁転移(AF:T_N =8K)を示し、約6GPaの超高圧力下で超伝導(SC)転移(T_C=2.8K)を示す。(TMTTF)_2SbF_6は圧力下で多彩な相変化を起こし、高圧力下電気抵抗測定から推測された圧力相図では、圧力増加と供に低圧側でスピン状態がAF(I)相-スピンパイエルス(sP)相又はスピンギャップ(SG)相-AF(II)相(整合SDW)と変化する。我々は(TMTTF)_2SbF_6のAF相の詳細な性質や圧力誘起のSG相の起源を、NMRとは異なるプローブから解明することを目的とし、有機物質等の磁化の小さい物質のための磁化率測定用圧力発生装置の開発を行い、1GPaまでの圧力下磁化測定を試みた。圧力増加とともに、(TMTTF)_2SbF_6の反強磁性転移温度が減少する事を確認した。また、量子臨界点近傍とされる0.6GPa付近で(TMTTF)_2SbF_6の反強磁性がほぼ消失する事を確認した。近年、我々は(TMTTF)_2SbF_6(基底状態:電荷秩序転移温度T_<CO>=154K,反強磁性転移(AF)T_N=8K)の超伝導相を確認し(T_C=2.7K@6GPa)、過去に報告されたTM系の圧力相図を基に、(TMTCF)_2Xの最終圧力相図を提案した。この圧力相図では、(TMTTF)_2SbF_6の反強磁性相が消失した後(TMTTF)_2PF_6および(TMTTF)_2AsF_6の常圧下基底状態にあたるスピンパイエルス相が圧力下で存在する事が予想されている。(TMTTF)_2SbF_6の低圧力下のスピン状態の変化は、過去に圧力下NMRにより調べられ、反強磁性転移温度および電荷秩序転移温度が圧力によって抑えられる事が報告されている。しかし、スピンパイエルス相の存在および圧力下のスピン状態をより明確にするには圧力下NMRの他に更なる測定が必要である。そこで本研究では、この物質における圧力下基底状態の変化を磁化率をはじめとする測定法から検証し、圧力下におけるスピンと電荷の秩序を明らかにすることを目的としている。本年度は、(TMTTF)_2SbF_6の圧力下のスピン変化をDC磁化率測定から割り出すため、圧力下磁化率測定を試みた。(TMTTF)_2SbF_6の磁化は大変小さく、バックグラウンドの大きい圧力セルを用いた測定は困難を極めたが、測定法の改良を重ねた結果、0.4GPaまでの磁化率測定を行うことが出来た。(TMTTF)_2SbF_6の磁化は、高温側では一次元反強磁性の特徴的な挙動を示し、低温約8Kで最小値を示した後、急激に上昇した。圧力下では、反強磁性転転移温度(磁化率の極小)が、圧力印加とともに低温側に抑制された。実験から得られた圧力温度相図は、圧力下NMRと非常に良い一致を示した。来年度は、0.4GPa以上の圧力を発生させる為の圧力セルの開発を行い、更なる圧力下での磁化挙動から(TMTTF)_2SbF_6高圧力下スピン状態の解明を目指す。本研究では、最近研究代表者らが発見した(TMTTF)_2SbF_6の圧力下における異常超伝導相の起源を明確化するために、我々が提唱した擬一次元有機導体(TMTCF)_2X(C=Se,S ; X^<-1>:一価の陰イオン)の庄力相図を実験的により具体化する事を目的とした。(TMTTF)_2,SbF_6は常庄で電荷秩序(T_<co>=K)と反強磁転移(AF : T_N=8K)を示し、約5.5GPaの超高圧力下で超伝導(SC)転移(T_c=2.8K)を示す。^<13>

C-NMRの測定では、この物質は低温で圧力印可とともに、基底状態が反強磁性(AF)相→スピンギャップ(SG)相→AF相(整合SDW)と移り変わると報告されている。本研究代表者は、より詳細な圧力下のスピン状態の変化を圧力下磁化率測定よりとらえるため、前年度に引き続き磁化の小さい物質の為の磁化率用圧力発生置の開発・改良を行い、約0.9GPaまでの(TMTTF)_2SbF_6の圧力下磁化率測定を行った。今回はSQUIDから得られたシグナルから圧力セルのバックグラウンドシグナルを差し引くためのプログラムを作成し、精密に解析する事により、信用度の高い結果を得ることができた。その結果、圧力を印可すると、低温で反強磁性転移による磁化率の上昇は抑えられ、圧力増加とともに反強磁性転移温度が減少する事を確認した。圧力下における反強磁性温度の変化は^<13>C-NMR測定による報告と大変よい一致を示した。また、量子臨界点近傍とされる0.6GPa付近で(TMTTF)_2SbF_6の反強磁性が完全に消失し、低温で磁化率が減少する事を確認した。
エンベロープウイルス侵入機構の解明と新規阻害剤の開発

エンベロープウイルスの細胞内侵入機構を明らかにするため、へルペスウイルスの膜融合で中心的役割を果たすと考えられているgB糖蛋白の機能を解析した。仮性狂犬病ウイルス(PRV)のgBは宿主細胞の蛋白分解酵素によって開裂する。動物細胞が普遍的に有する蛋白分解酵素フリンを欠失するLoVo細胞にPRVを感染させたところ、細胞融合を起こすことなく増殖した。感染細胞中のgBは開裂していなかったことから、PRVの増殖にはgBの開裂は必須ではないことがわかった。フリンを恒常的に発現するLoVo細胞を樹立してPRVを感染させたところ、gBは開裂し、細胞融合を伴って増殖した。非開裂型gBを有するウイルスの細胞への侵入効率は開裂型gBを有するウイルスのそれと同等であった。以上の成績から、gBの開裂は細胞間の膜融合には重要な役割を果たすが、ウイルスエンベロープと細胞膜との融合には関与しないものと考えられる。ウマへルペスウイルス1(EHV1)感染馬は、呼吸器症状ならびに流産の他、しばしば神経症状を呈する。そこで、EHV1の向神経性機序を解明するためウマ脳血管内皮細胞(EBMECs)への侵入過程を超微形態学的に解析した。その結果、エンベロープを被ったウイルス粒子が細胞内空胞中に認められた後、ヌクレオカプシドが核膜孔付近に移動することがわかった。EHV1はEBMECsに吸着後エンドサイトーシスによって取り込まれ、細胞内空胞の膜とエンべロープが融合することによって侵入するものと考えられる。通常、へルペスウイルスはレセプターに吸着後、細胞表面で膜融合を起こして侵入するとされている。EHV1は特異な機構によりEBMECsへ侵入するのかもしれない。エンベロープウイルスの細胞内侵入機構を明らかにするため、ヘルペスウイルスの膜融合で中心的役割を果たすと考えられているgB糖蛋白の機能を解析した。gBにはαヘリックス構造をとるヘプタドリピート領域が2ヶ所(HR1およびHR2)存在し、膜融合時にはHR1とHR2が会合するものと推定されている。本研究では、HR1あるいはHR2を欠失するウシヘルペスウイルス1(BHV1)gBを恒常的に発現する細胞を樹立してBHV1を感染させ、ウイルス産生量を調べた。その結果、HR1欠失gBを発現する細胞およびHR2欠失gB発現細胞それぞれ3株においてウイルス産生量が対照に比べ1/100以下に減少していた。変異gBがHR1とHR2の会合を阻害し、ウイルス産生を抑制しているものと考えられる。現在、HR1およびHR2のみを発現する系を確立中である。エンベロープウイルスは宿主細胞表面のレセプターに吸着後、エンベロープと細胞膜との膜融合によって細胞内に侵入する。ヘルペスウイルスの膜融合ではgB糖蛋白が中心的役割を果たす。gBにはαヘリックス構造をとるヘプタドリピート

領域が2ヶ所(HR1およびHR2)存在し、HR1とHR2の会合が膜融合のための構造変化と密接に関わっていると考えられている。本研究では、仮性狂犬病ウイルス(PRV)のHR2領域のみをコードする遺伝子を合成して発現ベクターを構築し、HR2を細胞表面上に恒常的に発現する細胞を樹立した。これにPRVを感染させてウイルスの増殖を調べたところ、ウイルス産生量はHR2発現細胞と対照間でほとんど差が認められなかったものの、HR2発現細胞においてはウイルスによるプラック径が著しく減少した。本成績は、(1)細胞表面上のHR2がPRVの吸着および侵入には影響を及ぼさないこと、(2)細胞表面上あるいは合成・輸送途中のHR2が隣接細胞への感染を抑制することを示している。内因性HR2がgB分子内におけるHR1とHR2の会合を阻害し、隣接細胞への感染に与る膜融合を抑制したものと考えられる。ウマヘルペスウイルス1(EHV1)感染馬は、呼吸器症状ならびに流産の他、しばしば神経症状を呈する。そこで、EHV1の向神経性機序を解明するためウマ脳血管内皮細胞(EBMECs)への侵入過程を超微形態学的に解析した。その結果、エンベロープを被ったウイルス粒子が細胞内空胞中に認められた後、ヌクレオカプシドが核膜孔付近に移動することがわかった。EHV1はEBMECsに吸着後エンドサイトーシスによって取り込まれ、細胞内空胞の膜とエンベロープが融合することによって侵入するものと考えられる。通常、ヘルペスウイルスはレセプターに吸着後、細胞表面で膜融合を起こして侵入するとされている。EHV1は特異な機構によりEBMECsへ侵入するのかもしれない。
遺伝子改変マウスを用いたナトリウムポンプ病－家族性片麻痺性片頭痛２型－の病態解明

Naポンプα2サブユニットは脳(アストロサイトと海馬の錐体細胞)に高発現し,家族性片麻痺性偏頭痛2型(FHM2)の原因遺伝子である。常染色体優性遺伝形式のFMH2は痙攣や小脳症状を合併する。研究代表者はその病態解明と新しい治療法・治療薬の開発を目指し,α2サブユニット遺伝子ノックアウトマウスを用いて解剖・組織学的解析,電気生理学的解析を行った。ノックアウトマウスでは皮質拡延性抑制(CSD)の誘発閾値が低い傾向が観察された。また,ヒトで見つかる遺伝子変異をマウス相同部位に導入したトランスジェニックマウス3種類の作成と,疾患モデルマウスとしてのスクリーニングを行い,今後の研究の基盤作りを試みた。本研究はナトリウムポンプ病のうち,優性突然変異として発症する,「家族性片麻痺性片頭痛2型(FHM2)の病態解明」を最終目的とする。FHM2はナトリウムポンプα2サブユニット遺伝子ATP1A2に変異が入ることによっておこる。相同遺伝子改変マウス(Atp1a2ヘテロノックアウトマウスや点突然変異を有するトランスジェニック(Tg)マウスを用いて,欠失または変異によって脳神経系(神経回路の動作様式や素子としての神経細胞の特性)に及ぼす影響,すなわち機能的変化(差異)を明確にする。FHM2では,熱性けいれんやてんかんを伴う症例の報告があることから,病態の基盤となる変化は発達段階で生じている可能性があるため,発達段階を追って解析も行うこととした。今年度は以下の3つを行った。1、皮質拡延性抑制(Cortical spreading depression, CSD)では野生型とヘテロノックアウトマウスで差異が見られたことから,CSDに関与する回路(明らかになっていない)と差異を産み出す脳部位同定を数種類の抗体を用いて免疫染色を行った。予備的結果からは,ヘテロマウスの方が神経細胞の興奮性が増している傾向にあった。2、発達段階を追ってα2サブユニットのmRNAの発現を観察した。脳の領域特異的に発現すること,限られた細胞種に発現すること,さらにアイソフォームスイッチが発生段階の数時間の間でダイナミックにおこることを見出した。3、Tgマウスを樹立し,順調にバッククロスを進めた。通常飼育下では痙攣・異常行動は観察されていない。予備的な行動実験から,野生型との差異がある変異Tgマウスの存在が明らかになった。ナトリウムポンプはほぼすべての形質膜に存在するαサブユニットとβサブユニットからなる能動輸送酵素で細胞の生存に必須である。哺乳類の脳にはα2とα3のアイソフォームが主として存在し,神経活動に重要な役割を果たす。近年α2とα3サブユニットをコードする遺伝子変異が原因となっている神経疾患が次々に発見された。本研究では,α2サブユニット機能欠失をひきおこす遺伝子変異によってひきおこされる家族性片麻痺性片頭痛TypeIIについて,病態モデルマウスを使ってナトリウムポンプの生体の神経系における役割を個体レベルで明らかにし,モデル動物としての有用性の検定と同時に片頭痛の病態解明・新規治療法の開発につなげることを目的とした。当該年度(平成27年度)は平成26年度に引き続き以下を成果を得た。1.遺伝子欠損ヘテロマウスを使った実験(1) α2サブユニット遺伝子欠失ヘテロマウス(Atp1a2+/-)から調製した小脳スライス標本による電気生理学的実験を行い,抑制性シナプス伝達効率を調べた。同腹野生型兄弟マウスと比較したが,有意な差は認められなかった。(2)片頭痛の前兆の病態を説明するCSDは,大脳皮質に刺激を加えた際に,一過性の脱分極に引き続いて生じる神経細胞とグリアの電気活動の抑制が,遅い速度(2-6mm/min)で後頭葉から前頭葉に伝播していく現象である。Atp1a2+/-と野生型を用いてCSD誘発実験を行ったところ差異が認められた。2.ヒトで報告された変異相同部分に変異を有する新たなトランスジェニック(Tg)マウスを3系統樹立した。2系統で行動異常が観察されたが,すべての系統において明らかな形態学的な異常は認められなかった。1. α2サブニット遺伝子欠失ヘテロマウス(Atp1a2+/-)を使った解析.(1)スライス標本(小脳)を用いた電気生理学的手法による解析:小脳症状が付随する家族性片麻痺性片頭痛2型(FMH2)があること,小脳のプルキンエ細胞とバーグマングリアにAtp1a2が発現していること,グルタミン酸トランスポーターをコードし,バーグマングリアに発現するEAAT1の変異で片麻痺性片頭痛が報告されていることから,小脳を解析に用いる。小脳スライス標本の電気生理学的手法により,欠失変異を有するマウスの小脳の神経回路や神経素子(神経細胞)の特性が野生型とどのように違うかを調べた。(2) CSDの測定:野生型と比較したとき,Atp1a2+/-で反応が変化しているかどうかを調べた。CSD後に発火する神経系の細胞を免疫組織学的に解析した。(3)発達段階を追った神経系各部位における組織学的解析:α2アイソフォーム遺伝子とのクロスハイブリの可能性があったので,プローブを作り直した。2.ナトリウムポンプα2サブユニット遺伝子に変異を有する,新たなトランスジェニック(Tg)マウス3系統の作成と解析.ヒトでは変異タンパク質がドミナントネガティブに働いて片頭痛の発症につながる可能性が示唆されている。

α2サブユニット遺伝子に点突然変異(ヒトで見つかる変異を,マウス遺伝子の相同部位に入れる)を有する新たな3系統のTgマウスのコンストラクトをBACクローンを用いて作成,個体化できた。通常飼育下でのTgマウスの以下の行動学的解析を行った。通常の飼育下で,てんかん発作を起こすか,情動行動の変化(オープンフィールド,高架十字迷路,強制水泳等),痛みを感じたときの行動をおこすか(じっとうずくまる,そのときの顔の表情),体重の増減。ナトリウムポンプ病の家族性片麻痺性片頭痛の原因遺伝子であるα2サブユニットの解析に焦点をしぼり,片頭痛の病態解明とα2サブユニット遺伝子の新機能の解明を目指した。1.野生型での発達段階を追った脳の各部位での単一細胞レベルでのα2サブユニット発現パターンの同定を目的とした。成体脳では各種グリア細胞と一部神経細胞での発現が、胎児脳では脳室上衣層に発現していることを同定した。なお成体脳は抗体染色で、胎児脳はmRNAの発現により解析を行った。2.神経細胞や神経回路の動作様式について、小脳スライス標本を用いた電気生理学的手法にて、プルキンエ細胞への抑制性シナプス伝達・LTDの形成を解析した。片頭痛モデルマウスのα2サブユニットヘテロマウス(Atp1a2+/-)と同腹野生型の間で有意な差異は観察されなかった。扁桃体スライス標本を用いたシナプス伝達特性でもEPSCやIPSCのペアパルス比に有意差は認められなかった。現在その他の脳領域や異なる発生段階にも検討対象を広げ、変異の有無を精査している。3.片頭痛の前兆の病態を反映する皮質拡延性抑制(CSD)を野生型とAtp1a2 +/-それぞれで誘発し、誘発閾値および血管の収縮性について調べた(慶応大学神経内科畝川先生・鈴木教授との共同研究)。種々の指標でgenotype間での有意な差が観察された。CSD後の脳の発火部位をc-Fos抗体染色にて調べた。現在論文投稿中である。4. α2サブユニットの点突然変異(マウス相同部位にヒトで見つかる変異を入れる)を有する新たなα2トランスジェニック(Tg)マウス3系統を作成・解析した。通常飼養下ではその行動に変化は観察されないが、1系統においてけいれん易誘発性を観察した。切片作成を行い、発火部位の同定を行った。偏頭痛の前兆とされる皮質拡散性抑制(CSD)誘発時の差異を同定するための実験を開始した。Naポンプα2サブユニットは脳(アストロサイトと海馬の錐体細胞)に高発現し,家族性片麻痺性偏頭痛2型(FHM2)の原因遺伝子である。常染色体優性遺伝形式のFMH2は痙攣や小脳症状を合併する。研究代表者はその病態解明と新しい治療法・治療薬の開発を目指し,α2サブユニット遺伝子ノックアウトマウスを用いて解剖・組織学的解析,電気生理学的解析を行った。ノックアウトマウスでは皮質拡延性抑制(CSD)の誘発閾値が低い傾向が観察された。また,ヒトで見つかる遺伝子変異をマウス相同部位に導入したトランスジェニックマウス3種類の作成と,疾患モデルマウスとしてのスクリーニングを行い,今後の研究の基盤作りを試みた。動物施設の関係,海外からの試薬調達,動物出産の関係で,申請者が前年度までに作成し,世代をすすめたα
横結合型色変換方式を用いた照明用高効率白色有機EL素子とその光学理論の研究

青色系有機EL素子と赤色系色変換材料を組合せ、薄膜内を伝搬する導波モード光を効率良く外部に取り出す"横結合型色変換方式"に基づく白色有機ELの高性能化を進めると共に、同素子内部の光伝搬現象、光学モード分布を定量化するための独自の光学解析ソフトウェアを開発した。同素子の構造設計を光学解析に基づいて最適化した結果、発光効率39-lm/W、外部量子効率19%、色度座標(0.29,0.41)の白色発光が得られた。本研究では、主として光学的視点から白色有機ELの高効率化を目指しており、(1)基礎検討、(2)展開研究、(3)応用研究の順に約3年間の計画を推進している。本年度はまず、燐光材料を用いた青色低分子系有機ELの高効率化を図ると共に、"横結合型色変換方式"を用いた白色有機ELの基礎検討として、フレネル理論に基づく光学解析アルゴリズムの作成および複数の発光源を含む白色有機EL光学解析シミュレータの開発を進めた。それらの研究成果は以下のようである。(1)青色燐光有機EL素子の高効率化"横結合型色変換方式"の光源部を構成する青色有機ELの特性改善を図るため、燐光材料(FIrpic)を添加した高分子/低分子複合構造の電気的および光学的な構造設計を実施した。有機材料、膜厚構成、作製技術などを最適化した結果、発光開始電圧3.5V、発光効率20-lm/W、外部量子効率15%、色度(0.15,0.37)の青色発光を示し、白色発光用励起光源の要求仕様を満足する基本特性が得られた。(2)フレネル理論に基づく白色有機EL用の光学解析手法の開発複数の発光源を含むナノサイズの誘電体多層膜からの発光出力解析を目的とし、有効フレネル係数と特性マトリクス計算を組み合わせた独自の光学計算ソフトウェア(略称:FROLED)を白色EL用に開発した。同ツールを上記の青色有機ELの光学設計に利用し、実験結果との一致を確認すると共に、二波長型白色有機ELの光学シミュレーション解析に使用できる段階に達した。本研究では光学的視点から白色有機ELの高効率化を目指し、(1)基礎検討、(2)展開研究、(3)応用研究の順に約3年間の計画を推進している。今年度は青色燐光材料と色変換材料を組合せた白色有機ELの高効率化を図ると共に、複数の光学理論を統合化した独自の解析手法を提案し、燐光有機ELの更なる高効率化を検討した。得られた研究成果は以下のようである。(1)二波長型白色有機ELの高性能化昨年度に開発した青色燐光材料と横結合型色変換方式を組み合わせ、同時に薄膜設計に基づく弱いマイクロキャビティ効果を導入した白色有機ELを試作した。発光特性の積層構造依存性から、有機材料、膜厚構成、作製技術などを最適化した結果、発光開始電圧3.7V、発光効率39-1m/W、外部量子効率19%、色度座標(0.29,0.41)の青白色発光が得られた。(2)マルチスケール光学解析手法の開発と有機EL構造への適用光学解析の高精度化を図るため、電磁光学、波動光学、光線光学を統合化したマルチスケール光学解析手法の基本アルゴリズムを開発し、光学モード計算を実施した。薄膜構造の最適化により、外部量子効率は約35%まで向上し、基板や封止層を含めた光学定数の最適化により、従来比2倍以上の高効率化が可能であることを計算により明らかにした。(3)高屈折率基板を利用した燐光有機ELの高効率化および光学解析前述(2)の光学計算に基づき、低分子系燐光有機EL(緑色)に高屈折率基板および光取り出し層を組合せた独自の有機EL構造を試作し、発光効率210-1m/W、外部量子効率57%の高効率が得られた。この値は従来比約2.3倍であり、最終年度の目標達成に有効な要素技術と考えられる。本研究では光学的視点から白色有機ELの高効率化を目指し、(1)基礎検討、(2)展開研究、(3)応用研究の順に約3年間の計画を推進した。最終年度は有機EL材料と色変換材料を組合せた白色有機ELの高効率化を進めると共に、光学理論を統合化した独自の解析手法を開発し。(1)三波長白色有機EL素子の高効率化昨年度に開発した二波長型白色有機EL素子において、青色有機材料を青緑色材料に代え、橙色変換材料を赤色色素に変更することで、三波長型の白色発光を試作した。また、素子にマイクロキャビティ構造を付加することで光学モード分布最適化した。その結果、三波長型白色有機EL素子において高い発光効率が得られた。(2)近接場光学に基づくマルチスケール光学解析手法の開発と有機EL光学解析への適用光学解析の高精度化を図るため、従来の電磁光学、波動光学、光線光学に加えて近接場光学を統合化したマルチスケール光学解析手法を開発し、双極子放射場周辺のエバネッセントモードのパワースペクトルを計算した。

同ソフトウェアにより金属電極近傍での表面プラズモン損失の影響を定量化することが可能となり、光取り出し効率の計算精度を更に改善できた。(3)高効率有機ELパネルの試作と有機EL照明への応用高屈折率基板を用い、低分子系燐光有機EL素子およびマイクロレンズ構造を組合せた独自の有機EL照明パネルを試作し、発光効率200-lm/W、外部量子効率50%以上の高効率が再現できることを確認した。この値は従来比約2倍以上であり、今後の有機EL照明開発に寄与できる研究成果と考えられる。
心臓の心室筋の分化・成熟のメカニズムの解明

Hey2は心臓の心室に特異的に発現している転写因子である。申請者を含む内外の研究により、左心室から心房の性質を取り除き、左心室筋の正常な分化・成熟に関与している遺伝子であることが明らかになっている。しかしHey2単独では、心室筋の分化・成熟を保証するマスター遺伝子としての機能はない。つまりHey2の生理活性を調整している他の転写因子群の存在が予想される。本研究ではHey2の活性を制御する遺伝子を同定し、その機能、発現パターンを解析することによって心室筋の分化・成熟のメカニズムの解明を目指すことである。昨年度から引き続き候補遺伝子の探索を行った。それらの中から、Hey2の生理活性を制御していると思われる遺伝子を見つけた。特にin situ hybridizatinで発現パターンを検討した結果、発現時期がHey2の生理活性つまり左心室から心房の性質を取り除く時期と位置が一致していた。現在は、その候補遺伝子の全長をクローニングし、発現ベクターを作成し、心室筋を培養して候補遺伝子の強発現およびノックダウン実験を行い、実際に心室筋の分化・成熟のメカニズムに関与しているのかを検討しているところである。特に心房に特異的に発現している遺伝子の発現をHey2と協調して抑制する活性があるのかを検討する。さらにはCRISPER-Cas9によるゲノム編集技術を使って、ノックアウトマウスの作成も行う予定である。それらを使いさらに詳細な検討を行う予定である。当初絞り込んだ候補遺伝子を心室筋を培養して強発現およびノックダウン実験を行い、実際に心室筋の分化・成熟のメカニズムに関与しているのかを検討した。しかし、いずれもHey2の活性を調整することはなかった。そのため、もう一度DNA CHIPのデータを解析しなおし、新たに候補遺伝子を見直す作業をおこなった。そのため、やや実験の進行が遅れてしまった。今後は、心室筋を培養して候補遺伝子の強発現およびノックダウン実験を行い、心室筋の分化・成熟のメカニズムに関与しているのかを確認する予定である。さらにノックアウトマウスを用いて、詳細な解析を行う予定である。本年度は主にマウス胎児の左心室から抽出したmRNAを用いたDNA Chipのデータをもとに目的遺伝子であるHey2の活性調節遺伝子の同定を試みた。Hey2は左心室から心房の性質を取り除き、左心室筋の正常な分化・成熟に関与している遺伝子である。その作用は妊娠13.5日目から始まる。そこで妊娠13.5日目以前と以後とで左心室において発現が上昇している遺伝子をDNA Chipのデータを用いて検討した。その結果、約60の候補遺伝子が見つかった。それらをrealtime PCRを行って、実際に左心室で妊娠13.5日目から発現が上昇しているのかどうかを確認した。その検討の結果、約30までに候補遺伝子が絞れた。さらに左心室の細胞を心室筋と繊維芽細胞および血管内皮細胞に分離して、心室筋で実際に発現が上昇しているかをrealtime PCRを行い検討した。その結果、11までに候補遺伝子が絞れた。それらの遺伝子が実際に左心室の心室筋でHey2の役割と対応した発現パターン、つまり左心室から心房の性質を取り除く作用に関与している発現パターンを示しているのかをin situ hybridizationで確認する実験の着手し始めた。以上のように本年度は、少なくともHey2の活性調節遺伝子の候補を11個ほどまでに絞り込むことができた。また、それらの候補遺伝子は妊娠13.5日目から発現が上昇しおり、さらに左心室の心筋で発現していることを確認することができた。当初は細胞培養を用いた実験系を予定していたが、震災により細胞培養用のインキュベーターなどが破損して使用不能になってしまった。そこでmRNAを用いたDNA Chipのデータをもとに実験を進めることにした。そのため、予定外であるmRNAの抽出などに時間がかかってしまった。申請者を含む内外の研究により、心室筋の分化・成熟を支配していており、心臓の正常な形成に必須な遺伝子の一つであることが明らかとなっている。本研究目的はHey2と協調して作用する転写因子群を明らかとし、その機能、発現パターンを解析することによって心室筋の分化・成熟のメカニズムの解明を目指すことである。Hey2会合遺伝子の探索のため、妊娠12.5日後、妊娠13.5日後、妊娠14.5日後、妊娠15.5日後等の異なる時期の心室から抽出したmRNAを用いたDNA Chipの解析で網羅的に時期の違いによる遺伝子の発現の変動パターンのデータを得た。それらのデータをもとに妊娠13.5日後から上昇している遺伝子の探索を行った。まず、候補となる遺伝子の発現の変動をrealtime PCRを行い、実際に妊娠13.5日後から発現が上昇しているのかを確認した。さらにin situ hybridizationを行い、異なる時期での心室での発現パターンの確認を行った。それらの結果、3つの候補遺伝子を得ることができた。今後は、心室筋を培養して候補遺伝子の強発現およびノックダウン実験を行い、実際に心室筋の分化・成熟のメカニズムに関与しているのかを確認する予定である。2年前の地震のにより実験機器が破損して、当初予定していたタンパク質からの解析からmRNAを用いた解析に切り替えた。

29年度も引き続き、mRNAを用いた解析を行った。心室から抽出したmRNAを用いたDNA Chipで解析で網羅的な時期の違いによる遺伝子の発現の変動パターンのデータを得た。それらをもとに妊娠13.5日後から上昇している遺伝子の探索を行った。まず、候補となる遺伝子の発現の変動をrealtime PCRを行い、実際に妊娠13.5日後から発現が上昇しているのかを確認した。さらにin situ hybridizationを行い、心室での発現パターンの確認を行った。それらの解析の結果複数の候補遺伝子を得ることができた。Hey2は心臓の心室に特異的に発現している転写因子である。申請者を含む内外の研究により、左心室から心房の性質を取り除き、左心室筋の正常な分化・成熟に関与している遺伝子であることが明らかになっている。しかしHey2単独では、心室筋の分化・成熟を保証するマスター遺伝子としての機能はない。つまりHey2の生理活性を調整している他の転写因子群の存在が予想される。本研究ではHey2の活性を制御する遺伝子を同定し、その機能、発現パターンを解析することによって心室筋の分化・成熟のメカニズムの解明を目指すことである。昨年度から引き続き候補遺伝子の探索を行った。それらの中から、Hey2の生理活性を制御していると思われる遺伝子を見つけた。特にin situ hybridizatinで発現パターンを検討した結果、発現時期がHey2の生理活性つまり左心室から心房の性質を取り除く時期と位置が一致していた。現在は、その候補遺伝子の全長をクローニングし、発現ベクターを作成し、心室筋を培養して候補遺伝子の強発現およびノックダウン実験を行い、実際に心室筋の分化・成熟のメカニズムに関与しているのかを検討しているところである。特に心房に特異的に発現している遺伝子の発現をHey2と協調して抑制する活性があるのかを検討する。さらにはCRISPER-Cas9によるゲノム編集技術を使って、ノックアウトマウスの作成も行う予定である。それらを使いさらに詳細な検討を行う予定である。当初絞り込んだ候補遺伝子を心室筋を培養して強発現およびノックダウン実験を行い、実際に心室筋の分化・成熟のメカニズムに関与しているのかを検討した。しかし、いずれもHey2の活性を調整することはなかった。そのため、もう一度DNA CHIPのデータを解析しなおし、新たに候補遺伝子を見直す作業をおこなった。そのため、やや実験の進行が遅れてしまった。mRNAを用いたDNA Chipのデータをもとに実験を進めているが、やや遅れ気味ではあるが良好な成果が出始めている。このまま、進める予定である。今後は、心室筋を培養して候補遺伝子の強発現およびノックダウン実験を行い、心室筋の分化・成熟のメカニズムに関与しているのかを確認する予定である。さらにノックアウトマウスを用いて、詳細な解析を行う予定である。
過重労働者の疲労を客観的に評価するバイオマーカーの確立

本研究では、いくつかのバイオマーカーを用いて長時間の時間外労働者の疲労状況を客観的に把握し、問診票を用いた臨床症状による評価との関連を検討した。その結果、ECGや加速度脈波を用いた自律神経系機能評価が、自覚なき疲労とともにメンタルヘルス障害の早期発見につながること、病態の確認にはアクティグラフを用いた睡眠・覚醒リズム解析が望ましいことが明らかになった。さらに、酸化ストレス/抗酸化力を評価することは、疲労病態の有無の判断とともに、疲労の質的な違いをも反映しており、疲労の客観的な評価法の1つとなりうることも判明した。某企業の従業員(280名)を対象に疲労質問表を用いた主観的疲労度チェック(身体疲労、精神疲労、総合疲労)、労働時間、睡眠時間、疲労による生活活動低下の有無を調査するとともに、脈拍変動解析による自律神経機能評価、交感神経緊張の指標といわれる唾液アミラーゼ計測を行った。その結果、(1)身体疲労得点と精神疲労得点の相関を見ると、Pearson相関係数でR=0.713(p<0.001)と高い相関を示し、総合疲労得点が各個人の疲労状態の代表値と考えてよいことが判明した。(2)脈拍変動解析から得られる交感神経緊張の指標LF/HF比は、年齢に弱い正の相関がみられた。(3)唾液中α-アミラーゼ活性も年齢と弱い正の相関がみられ、疲労が認められない健常コントロール群(88名)と比較して有意な増加が認められた(p<0.01)。(4)しかし、主観的評価である疲労質問表結果と自律神経機能LF/HF比、あるいは唾液アミラーゼ活性には明確な相関はみられなかった。(5)残業時間によって群分けを行い、疲労得点・LF/HF比・睡眠時間・唾液中アミラーゼ活性評価を行うと、LF/HF比においてのみ残業時間依存性に交感神経緊張が亢進する傾向が認められた。(6)主観的疲労度チェックでは全く疲労がないと回答していた114名の職員のうち、LF/HF比25の相対的交感神経緊張状態が33名(28.9%)、LF/HF比5以上と極めて交感神経系の緊張状態にあるものが14名(12.8%)存在した。そこで、LF/HF比5以上の14名を対象にアクティグラフを用いた睡眠・覚醒リズム解析を行ったところ、多くの被験者で中途覚醒、睡眠効率の低下などの睡眠の質の低下が見出され、潜在的な疲労病態の存在が明らかになった。したがって、労働者の中には疲労を自覚していない自律神経系のバランス異常が存在しており、過労死やメンタルヘルス障害の発生に関与している可能性がある。現在、IT産業の従業員、および家族を対象にした大規模な産業疲労簡易検診を進めており、より明快な相関関係が明らかになると確信している。過重労働者の疲労を客観的に評価するバイオマーカー候補の1つに酸化ストレスが考えられている。そこで、平成21年度は山口大学医学部野島順三教授の協力を得て、健常者312名の酸化ストレス(d-ROM)を各年代別(20歳代、30歳代、40歳代、50歳代)に調べたところ、d-ROM値は有意に高齢者ほど高く、加齢と酸化ストレスは有意に関連していることが確認された。また、病的な慢性疲労の代表疾患であるCFS患者189名と年齢の一致する健常者312名の酸化ストレス(d-ROM)を比較検討したところ、CFS患者は338.5±85.6 CARR Uと健常者の286.9±50.1 CARRUと比較して統計学的に有意に高く、病的な慢性疲労と酸化ストレスが関連していることが判明した(p<0.001)。さらに、健常者の疲労と酸化ストレスとの関係を調べる目的にて、2日間健常者12名にコンピュータ化したクレペリン試験を3時間負荷し、その前後でのd-ROM値を調べたところ、健常者においても精神作業付加に伴う疲労によって2日とも酸化ストレスが有意に増加していた(p<0.01)。したがって、d-ROMを用いた酸化ストレスの評価はCFSのような病的な慢性疲労だけでなく、過重労働などの生理的な疲労病態においても関連している可能性が考えられる。また、休憩に伴う酸化ストレスの変化を調べる目的にて、2時間の休息(都市環境下もしくは森林環境下、クロスオーバー法にて実施)を与え前後の変化を調べたところ、都市環境下での休息では酸化ストレスの回復はみられなかったが、森林環境下では有意な回復がみられることが判明、精神作業に伴う疲労の回復には、休息を取る環境整備も重要であることが示された。平成22年度は、企業の疲労検診において、自覚症状調査、自律神経機能評価とともに酸化ストレスについても検討し、過重労働者の疲労を客観的に評価するバイオマーカーの確立を目指す予定である。平成22年度は、4社の従業員896名に対して疲労検診を実施した。

疲労質問表を用いた主観的疲労度チェックでは、疲労がみられない安全群491名(54.9%)、軽度の疲労がみられる要注意群163名(18.2%)、強い疲労がみられる危険群241名(26.9%)であり、約1/4の従業員が強い疲労を自覚しており、特にシフト勤務がみられる職場で強い疲労がみられることが明らかになった。また、心拍変動解析を用いて安静閉眼時における自律神経系機能解析を行ったところ、トータルパワー値は年齢と有意な逆相関が認められ(r=-0.359、P<0.001)、トータルパワー値を調べることにより自律神経年齢を評価することが可能であることや、強い疲労状態の従業員の中にトータルパワー値の低下が顕著であるものが散見されることが判明した。さらに、疲労安全群491名中23名(14.1%)がLF/HF比5.0以上と交感神経系の過緊張状態であり、疲労の自覚がないにもかかわらず安静時も自律神経系のバランスが崩れている労働者が1割程度存在することも明らかになった。我々は、慢性疲労症候群患者の検討より、このような自律神経系のバランス異常は睡眠の質の低下に結びつき、疲労の悪循環に陥ることを確認してきており、過労死やメンタルヘルス障害の発生に関連した徴候であり、重要な疲労検診所見の1つであると思われる。尚、平成23年3月11日に発生した東日本大震災の被災地調査も行ったところ、極めて強いストレス下にある人々の自律神経系バランス(LF/HF比)はあまり崩れていないが、トータルパワー値の低下が顕著であるものが数多く認められた。これまでは個人差が大きいことより自律神経系機能におけるトータルパワー値の評価はあまりなされていなかったが、本臨床研究により数多くの被験者の自律神経機能評価を行った結果、脳年齢や疲労病態との関連が明確になってきており、トータルパワー値の評価が自律神経系のバランス(LF/HF比)とともに大切な健康状態を表す指標の1つであると考えている。