hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
幹細胞から象牙芽細胞、エナメル芽細胞分化の位置情報付与法の確立

再構成歯胚の発生可能なステージは、再構成歯胚を作製する際の歯原性間葉細胞の数とES細胞の数の比率に大きな影響を受ける事を見出した。ラットの歯髄細胞をIn vivoで象牙芽細胞へと分化させる方法を確立した。本研究目的は幹細胞に適切な位置情報を付与し、象牙芽細胞やエナメル芽細胞へと分化させる事であった。本年度はその解析ツールとして必要な免疫組織学的染色、in situ hybridization法の改善を行った。その結果従来では検出不可能であったシグナルも検出可能なプロトコルを確立した。また幹細胞への位置情報付与については、従来の歯胚再構成の方法(Nakao et al.Nat Methods,2007 Mar;4(3):227-30.)に変更を加え実験を行った。具体的には再構成歯胚を作製する際に幹細胞(ES細胞)を歯原性間葉に散布し、歯原性上皮と再構成を行う事により幹細胞の適切な分化誘導を試みた。その結果、ES細胞から完全な象牙芽細胞、エナメル芽細胞への分化誘導は果たせなかったものの、この再構成体の中で幹細胞が上皮様の組織に分化する事を発見した。また、散布するES細胞数が多い場合には歯胚は形成されず、適切なES細胞数の時にのみ、歯胚は形成される事を見出した。この事は幹細胞に適切な位置情報を再構成歯胚の中で与える為には散布するES細胞の数量が一つの重要な因子になる事を意味する。更に我々はエナメル質の分化が抑制された遺伝子改変マウスも作製しており、そのマウスを用いてエナメル芽細胞の分化機構の解明にも取り組んでいる。これらの実験を更に本年度で更に発展させ、また、エナメル質形成不全のマウスの知見も合わせ、幹細胞の象牙芽細胞やエナメル芽細胞への適切な分化誘導法の開発に取り組む予定である。前年度までで、Nakaoらによって確立された、in vitroでの歯胚再構成法(Nakao et al.Nat Methods. 2007 Mar;4(3):227-30.)を用いて実験を行い、再構成歯胚の中にES細胞を撤種し、その後、再構成歯胚の組織切片を作成しGFPを指標にしてES細胞が取り込まれた部位を特定する事に成功した。しかし、ES細胞を歯種した再構成歯胚は発生段階が途中で停止してしまうという問題点が残っていた。本年度はその問題点を解決すべく、撤種するES細胞の数量の違いにより、再構成歯胚がどの様に発生するかの検討を行った。その結果、ES細胞を撒種した再構成歯胚の発生可能なステージは、再構成歯胚を作製する際の歯原性間葉細胞の数とES細胞の数の比率に大きな影響を受ける事を見出した。具体的には歯原性間葉細胞10^6個に対して、ES細胞2000個以下であれば成熟した再構成歯胚が発生するが、ES細胞がそれ以上であると再構成歯胚の発生が途中で停止してしまう事が解った。しかし、成熟した再構成歯胚においてもES細胞が象牙質やエナメル質に分化している像は認められなかった。そこで、現在はES細胞の様な完全に未分化な細胞(胚性幹細胞)ではなく、歯髄等に存在するある程度分化した体性幹細胞を象牙芽細胞に分化させる新たな試みを始めており、現在ラットの歯髄細胞をIn vivoで象牙芽細胞へと分化させる方法を確立しつつある。具体的には過去の我々の研究で象牙芽細胞の分化誘導に重要な役割を果たす事が解っている、Wnt signalingを人工的にラット歯髄の幹細胞において亢進させることにより、象牙質新生を促進する事に成功している。これらの知見をより深めていく事により、臨床に近い歯の再生医療の為の基盤となる事が期待される。
イメージング技術が切り拓く、化学物質と自己免疫性疾患との関連性の解明

現在、数多くの化学物質が開発されている。それらの殆どは、我々にとって生体異物(Xenobiotics)であり生体への影響が懸念される。個々の物質は厳密な安全性試験をクリアしているが、それらが体内のどこに蓄積され、種々の代謝を受けた場合、どのような影響を受けるのかについては十分に分かっていない。意図せずに生体異物に接触、摂取し、それが原因で内臓疾患を引き起こす恐れがある。本申請では、こういった生体異物暴露後の侵入経路・体内動態を「ナノ微粒子イメージング質量分析」という新しい手法で「見る」ことによって、疾病機構解明、化学物質の安全性評価に貢献することが目的である。2年間で身体に悪影響を及ぼす生体物の動態を解明することができた。3年目は、様々な生体異物投与で結果が異なるかを調べた。還元型コエンザイムQ10は(以下、CoQ10)は、我々が生きるエネルギーとして使用するアデノシン三リン酸(ATP)を産生する補酵素であり、健康サプリメントとして名高い。また、脳機能改善効果が報告されている。CoQ10摂取後のマウス脳をイメージング質量分析で解析したところ、記憶、行動といった部位でCoQ10が増加していることを明らかにしている。パーキンソン病で犯される「黒質」部位では、摂取後にCoQ10が4倍増加していた。これは、増加部位でのATP産生が増加することを示唆しており、すなわち、その部位の細胞が活性化することを示している。(S.Tairaet al. Scientific Reports(Nature出版社)(2017))。マウスの皮膚に2-OAmを塗布後、肝臓のNano-PALDIイメージングMSを行った。長期塗布群と、単回塗布群のマウス肝臓を採取後、凍結切片を作製し、画像解像度20um、ポジティブモードでMSIを行った。イオン化法は低分子測定に適したNano-PALDI法を採用した。長期塗布群の肝臓に2-OAmが蓄積していることが視覚的に分かった。また、単回塗布群では、皮膚に塗布してから6時間後に肝臓に2-OAmが確認され、24時間後にはほぼwash outしていることがわかった。次に、2-OAmを皮膚に長期間塗布したマウスの肝臓を用いて、2-OAmの蓄積部位を検討した。その結果、肝細胞に加えて、胆管にも2-OAmの蓄積がある事がわかった。この事から、2-OAmの胆管への異常蓄積がミトコンドリア抗体の出現と胆管の選択的破壊の双方に関与している可能性が示された。普段、使用する化粧品などの含有物質であり基礎科学・実学共に重要な知見である。当初、実験条件を決定するのが困難と思われた、生体異物(2-オクチン酸)がnano-PALDI法のより検出ができたことで当初よりも時間的な余裕ができた。その為、動物実験もスムーズに運び、肝臓の何処(胆管付近)というこまで視覚的に解明できた。ここまでを論文発表できた。.疾病との関連解明我々は、日常より多くの生体異物に日々囲まれて生活している。勿論、病気になった際の治療に必要な薬剤もあるが、意図せずに接触、摂取している生体異物がある。それらが体内のどこに蓄積され、種々の代謝を受けた場合、どのような影響を受けるのかについては十分に分かっていない。既存法では検査に3日以上要する。今回、染毛剤や化粧品の中には安定剤として2-オクチン酸メチル(2-OAm: Mw 154))と呼ばれる成分が含有している。ある肝臓疾患患者を調べてみると、主に女性か毛染めをした方が多かった。肌に直接塗布する化粧品類に含まれる化学物質が、経皮吸収するのか、吸収したならば「どこ」に移動し生体に影響を及ぼすのかNano-Particle assisted laser desorption/ionizationイメージング質量分析法により視覚的に解析した。これにより、以下の仮説を立てることができる。2-OA皮膚塗布→経皮吸収による肝臓への薬剤送達→長期塗布による肝臓(胆管)への蓄積→抗原と認識→アポトーシス→炎症。生体異物が臓器炎症のトリガーとなることを視覚的に示す事に成功した。動物実験も計画通り進行しており、計画書に記載したスケジュールで研究が進んでいるため。

意図せずに生体異物に接触、摂取し、それが原因で内臓疾患を引き起こす恐れがある。本申請では、こういった生体異物暴露後の侵入経路・体内動態を「ナノ微粒子イメージング質量分析」という新しい手法で「見る」ことによって、疾病機構解明、化学物質の安全性評価に貢献することが目的である。2年間で身体に悪影響を及ぼす生体物の動態を解明することができた。3年目は、様々な生体異物投与で結果が異なるかを調べた。還元型コエンザイムQ10は(以下、CoQ10)は、我々が生きるエネルギーとして使用するアデノシン三リン酸(ATP)を産生する補酵素であり、健康サプリメントとして名高い。また、脳機能改善効果が報告されている。CoQ10摂取後のマウス脳をイメージング質量分析で解析したところ、記憶、行動といった部位でCoQ10が増加していることを明らかにしている。パーキンソン病で犯される「黒質」部位では、摂取後にCoQ10が4倍増加していた。これは、増加部位でのATP産生が増加することを示唆しており、すなわち、その部位の細胞が活性化することを示している。(S.Tairaet al. Scientific Reports(Nature出版社)(2017))。今後、再現をとり、疾病の機序解明を行う。マウスサンプル切片をCD8染色し、炎症の有無、その局在を調べる。予備的知見として、2-OAを長期塗布したマウス肝臓の胆管は炎症(CD8(+))を起こしており、HE染色像では、胆管自体がつぶれて観察できない。→2-OAの局在が肝臓内の血管、胆管で一致するか、イメージングMSを用いて明らかにする。計画書にあるとおり、他の生体異物が生体へどのような影響を与えるのか、疾病を引き起こす場合とそうでない場合の閾値はどこにあるのかなども解析していく。動物実験が当初の計画よりも進み、データも取得でき、論文発表まで行った。その為、当初使用匹数よりも少なく済んだため。動物実験が必要最低限数で実施でき、2-OAmが炎症のトリガーとなっていることをたため予算を次年度へ繰り越し、2018年度の実験費に宛てることとした。次年度の疾病機序解明の研究に動物実験のn数を増やすことに使用する。
Muse細胞移植併用門脈塞栓術による大量肝切除適応拡大への挑戦

70%を超える肝切除は術後肝不全に陥る危険性が高いとされている.実際の臨床では肝切除後に残肝容積が不十分となる可能性が高い症例においては,術前に経皮経肝的門脈塞栓術が広く施行されており約2030%の非塞栓肝容積増大が期待できる.Muse細胞は,非腫瘍形成性の多能性成体幹細胞である.Muse細胞にはNanog, Oct3/4, Sox2等の多能性幹細胞マーカーの発現が確認されており,骨髄,真皮,末梢血等より採取できる.Muse細胞は遺伝主導入を施行せず間葉系細胞から単離するのみのため,臨床応用しやすいといった利点がある.門脈塞栓術にMuse細胞移植療法を併用することにより,残肝容積のさらなる増大や肝予備能の改善が得られるか検討することを目的とした.モデルにはC.B-17/IcrHsd SCIDマウスを使用し,全身麻酔下で開腹し,門脈右枝分岐直後の左枝本幹を結紮する.Muse細胞,ヒト骨髄間葉系幹細胞を,経門脈的に投与する.なお,コントロール群は同量の生理食塩水を投与する.術後14日で組織固定し,肝重量,採血,組織学的評価を行い有意差が得られるか検討した.当初、マウス門脈結紮モデルの作成に難渋したが、マウス門脈結紮モデルの安定した作成に成功し,コントロール群6例,ヒト骨髄間葉系幹細胞投与群11例の手術を施行した.各群の評価は統計学的評価として肝重量,採血項目(T-Bil., AST, ALT, Alb, NH3),術前後の体重変化を施行している.全体としてヒト骨髄間葉系幹細胞移植群がコントロール群と比較して良好な結果が得られる傾向にはあるものの、統計学的な有意差は得られなかった.Hematoxylin & Eosin染色, Masson trichrome染色においても各群間で明瞭な変化はなかった.今後、Muse細胞移植群を作成し各群の評価を行っていく.我々は現在、マウス門脈枝結紮モデルに対するMuse細胞の非結紮肝への経門脈的投与の有効性の検討というテーマで実験を進めている。現在のところマウス門脈枝結紮モデルの確立とヒトMuse細胞の単離を主に行なっている。マウス門脈枝結紮モデルは当教室で確立されたモデルではあるが、非常に繊細かつ精密な技術が必要とされるモデルである。当初、術後に死亡するマウスが多く、安定してマウス門脈枝結紮モデルを作成することに難渋していた。徐々に安定してきており移植実験に取り掛かる予定である。一方でヒトMuse細胞の調整は順調に行なっている。ヒトの骨髄間葉系幹細胞からSSEA3陽性細胞をFACSで単離しMuse細胞を調整し、移植実験用に細胞を保存している。マウス門脈枝結紮モデルは徐々に安定して作成できるようになってきており、細胞移植を行わない生食投与群の作成を開始する予定である。このモデルが安全に作成できるようであれば移植実験を開始する。尚、この生食投与群は本実験においてコントロール群となるため、n=5作成する予定であり、1週間で屠殺する群と2週間で屠殺する群と作成する予定である。それぞれの血液検査(総ビリルビン値,総蛋白値,総アルブミン値,AST, ALT,γGTP,NH3,PT-INR,血小板)、屠殺時の肝重量、組織学的な評価(移植細胞の生着・分化、肝壊死の評価など)を評価する予定である。これが終了した後に実際にMuse細胞移植を行う群を作成する。マウス門脈枝結紮モデルの確立・細胞移植の技術の習得に時間を要した。70%を超える肝切除は術後肝不全に陥る危険性が高いとされている.実際の臨床では肝切除後に残肝容積が不十分となる可能性が高い症例においては,術前に経皮経肝的門脈塞栓術が広く施行されており約2030%の非塞栓肝容積増大が期待できる.Muse細胞は,非腫瘍形成性の多能性成体幹細胞である.Muse細胞にはNanog, Oct3/4, Sox2等の多能性幹細胞マーカーの発現が確認されており,骨髄,真皮,末梢血等より採取できる.Muse細胞は遺伝主導入を施行せず間葉系細胞から単離するのみのため,臨床応用しやすいといった利点がある.門脈塞栓術にMuse細胞移植療法を併用することにより,残肝容積のさらなる増大や肝予備能の改善が得られるか検討することを目的とした.モデルにはC.B-17/IcrHsd SCIDマウスを使用し,全身麻酔下で開腹し,門脈右枝分岐直後の左枝本幹を結紮する.Muse細胞,ヒト骨髄間葉系幹細胞を,経門脈的に投与する.なお,コントロール群は同量の生理食塩水を投与する.術後14日で組織固定し,肝重量,採血,組織学的評価を行い有意差が得られるか検討した.

当初、マウス門脈結紮モデルの作成に難渋したが、マウス門脈結紮モデルの安定した作成に成功し,コントロール群6例,ヒト骨髄間葉系幹細胞投与群11例の手術を施行した.各群の評価は統計学的評価として肝重量,採血項目(T-Bil., AST, ALT, Alb, NH3),術前後の体重変化を施行している.全体としてヒト骨髄間葉系幹細胞移植群がコントロール群と比較して良好な結果が得られる傾向にはあるものの、統計学的な有意差は得られなかった.Hematoxylin & Eosin染色, Masson trichrome染色においても各群間で明瞭な変化はなかった.今後、Muse細胞移植群を作成し各群の評価を行っていく.マウス門脈枝結紮モデルが徐々に安定して作成できるようになってきており、コントロール群(生食投与群)の作成を行なった後、移植実験に移る予定である。移植実験を行い、各個体の肝重量・血液検査・組織学的評価などを評価していく予定である。マウス門脈枝結紮モデルが安定しなかったため、移植実験を開始することができず、移植細胞の調整や学会参加費として予定していた予算を次年度に使用することとした。
抗体産生不全症における分子病態:修復酵素の異常と免疫グロブリン定常部領域の異常

先天性免疫不全症の病因遺伝子の解明はこの10年で大きく進歩した。多くの疾患遺伝子が明らかになったが、そのいくつかは不明のまま、残されている。その一つがIgA欠損症の病因遣伝子である。IgA欠損症は欧米では最も頻度の高い先天性免疫不全症である。臨床症状は感染を繰り返すものから、ほとんど易感染を認めないものまでさまざまである。IgA欠損症の病因を明らかにすることは、診断ならびに新規治療法の開発に有用であるのみでなく様々な病態により生じる二次性の免疫不全症の治療にも有効と考えられる。2005年にTNF-αのリセプターファミリーのTACIが一部のIgA欠損症およびcommon variable immunodeficiency(CVID)の病因遺伝子であることが報告された。そこで、本邦のIgA欠損またはIgA低下症、CVIDのTACIおよびそのリガンドの遺伝子変異の有無について検討した。さらに、IgAのサブクラスIgA1,IgA2についても特異的に発現を検出する系を作成し病態の解析を試みた。8名の低IgA血症患者、3名のCVID患者より末梢血を採取した。末梢血好中球よりゲノムDNAを抽出し各エクソンにプライマーを設定しダイレクトシークエンスをおこなった。末梢血単核球よりRNAを抽出し、cDNA合成後、IgA1,IgA2の共通の領域にプライマーを設定しRT-PCRを行い、4%アガロースゲルに電気泳動し、サイズの違いでIgA1,IgA2の遺伝子発現を特異的に検討した。TACI,APRIL,BAFF,BCMAに関して塩基配列を検討したが、病因となる遺伝子変異は検出できなかった。本邦のIgA欠損症、CVIDにおけるTACI遣伝子変異の頻度はそれほど高くない可能性が示唆された。IgA欠損症ではクラススイッチに先立って発現するalpha germline transcript, circle transcriptの発現低下が認められた。さらに、IgA1,IgA2の発現をサイズの違いにより半定量的に検出する系を確立した。健常人の末梢血単核球のIgA1:A2の発現の比率は約7:3前後であった.この系を用いてIgA欠損症のなかにIgA1単独欠損またはIgA2単独欠損といった病態が存在しないかをスクリーニングすることが可能であり、IgA欠損症、CVIDのさらなる病態解明に有用と考えられる。1)日本人Bloom症候群におけるcommonなBLM遺伝子変異の同定Bloom症候群(BS)は小柄な体型、日光過敏性紅斑、免疫不全さらには高率に癌腫を合併する常染色体劣性の遺伝性疾患である。病因遺伝子BLMはhelicase活性を有し、DNAの複製・修復に関与すると考えられている。BSの診断はsister chromatid exchangeの増加が参考になるが、他の染色体脆弱症候群との境界例も存在し診断に苦慮する場合も少なくない。そこで、BSのBLM遺伝子変異について解析した。5症例のうち3症例が631delCAAのhomozygousであった。1症例が631delCAAと1610insAのcompound heterozygous、1症例が631delCAAと735delCAAのcompound heterozygousであった。

631delCAAを簡便に検出する方法で日本人の健常人200allelleについて検討したが、631delCAAは存在しなかった。今回検討したBS症例10alleleのうち、8alleleが631delCAAであり、日本人に比較的共通した変異であると考えた(Kaneko et al.,Int J Mol Med 2004)。2)IgA欠損症の分子病態先天性免疫不全症の病因遺伝子の解明はこの10年で大きく進歩した。多くの疾患遺伝子が明らかになったが、そのいくつかは不明のまま、残されている。その一つがIgA欠損症の病因遺伝子である。IgA欠損症は欧米では最も頻度の高い先天性免疫不全症である。臨床症状は感染を繰り返すものから、ほとんど易感染を認めないものまでさまざまである。IgA欠損症の病因を明らかにすることは、診断ならびに新規治療法の開発に有用であるのみでなく様々な病態により生じる二次性の免疫不全症の治療にも有効と考えられる。2005年にTNF-αのリセプターファミリーのTACIが一部のIgA欠損症およびcommon variable immunodeficiency (CVID)の病因遺伝子であることが報告された。そこで、本邦のIgA欠損またはIgA低下症、CVIDのTACIおよびそのリガンドの遺伝子変異の有無について検討した。さらに、IgAのサブクラスIgA1,IgA2についても特異的に発現を検出する系を作成し病態の解析を試みた。8名の低IgA血症患者、3名のCVID患者より末梢血を採取した。末梢血好中球よりゲノムDNAを抽出し各エクソンにプライマーを設定しダイレクトシークエンスをおこなった。末梢血単核球よりRNAを抽出し、cDNA合成後、IgA1,IgA2の共通の領域にプライマーを設定しRT-PCRを行い、4%アガロースゲルに電気泳動し、サイズの違いでIgA1,IgA2の遺伝子発現を特異的に検討した。TACI,APRIL,BAFF,BCMAに関して塩基配列を検討したが、病因となる遺伝子変異は検出できなかった。本邦のTACI遺伝子変異の頻度はそれほど高くない可能性が示唆された。IgA1,IgA2の発現をサイズの違いにより半定量的に検出する系が確立できた。健常人の末梢血単核球のIgA1:A2の発現の比率は約7:3前後であった.今後、IgAのサブクラスを特異的に検出する系を用いてIgA欠損症のなかにIgA1単独欠損またはIgA2単独欠損といった病態が存在しないかをスクリーニングする。さらに、IgA1,A2単独欠損症のA1,A2定常部領域の塩基配列を解析し、病因となる変異の有無につき検討する。
両生類初期胚における「調整」の具体像の解明

動物卵あるいは胚の一部が失われた場合でも、あるいは一部の重複や交換がおこった場合でも、正常な個体の形成が可能であることが知られており、このような現象は調整あるいは調節とよばれている。この調整はどのようにしておこっているか。たとえば胚から失われた細胞が本来つくるべき体の部分は、他の細胞によってつくられるのであろうか。あるいは代わりをする細胞がないこともあるのか。また、代わりに移植された細胞は、どの程度に代わりをすることができるのか。調整の過程を理解するためには、これらの点が明らかにされる必要がある。この研究においては、アフリカツメガエル8細胞胚の移植胚および欠損胚を作製し、それらの発生過程をしらべた。さらに、それらの移植胚や欠損胚から発生してきた正常な形の胚の連続切片を作製して顕微鏡観察をおこない、脊索や体節の細胞数を計測した。なお、移植胚の場合には核マーカーをもちい、欠損胚の場合には蛍光色素による染色によって、特定の細胞の追跡をおこなった。得られた成果は、おゝよそ次のとおりである。腹側細胞は、背側細胞の代わりに移植されたとき、その発生運命を大幅に変更し、本来背側細胞がつくる構造をつくる。背側細胞の半数を除去した欠損胚においては、この場合にも、腹側細胞がその代わりをする。各種の感覚器官、神経管や体節の一部が腹側細胞によってつくられる。ただし、脊索の形成に対しては、腹側細胞は少なくとも認められるほどの貢献をすることはできないらしい。このように、外見上ほぼ完全な調整がおこっているとおもわれるときにも、細胞数のレベルでは必ずしも完全ではない。特に組織・器官によって、回復の程度はかなり異なっている。アフリカツメガエル8細胞胚から特定の組み合せで細胞を除去しても,得られる欠損胚は外見上正常に発生することが知られている.そのときに起こる「調整」を詳細に研究するため,右背側細胞(動物半球と植物半球の2細胞.以下通じ)を除去した欠損胚をつくった.これらの80%は,期待どおり正常に発生した.欠損胚由来の正常胚(尾芽期)のクロスセクシュンをつくり,顕微鏡観察をした.背側細胞クローンが形成するもののなかで,特に眼,耳のように左右に一つずつある器官や,胚の正中面を走る中軸器官に注意して観察を行った.その結果,内部形態も正常であることが明らかになった.脊索については,さらに詳しく調べた.体積は,対照胚と欠損胚の間で差がなかったが,細胞数は欠損胚で約25%減少していた.他方,右腹側細胞欠損胚では,全体的な内部形態はもとより,脊索の細胞数の点でも正常であった.「調整」の過程で各々の細胞が果す役割を知るため,上記の右背側細胞欠損胚の右腹細胞をローダミンで染色した.この欠損胚の発生過程において,染色された細胞を追跡した.そして,この細胞が胚の発生過程において,染色された細胞を追跡した.そして,この細胞が胚の正中面の右側の大部分を形成していることを明らかにした.胚が尾芽期に達したときクロスセクションをつくり,内部形態と染色された細胞の分布を調べた.その結果,本来な3背側細胞が形成する中軸器官を含む体の右半分を腹則細胞がつくっていることが分かった.右背側細胞欠損胚の左背側細胞を染色して,上記の結果と相補的な結果を得た.以上の結果から,「調整」の過程で腹側細胞が背側細胞に転換すること,そして失われた細胞は,細胞数からみて必ずしも完全に補償されるのではないことなどが明らかになった.

アフリカツメガエル胚における調整(調節)、特に中軸器官(神経管脊索、体節)の調整を研究するため、8細胞胚から動物半球および植物半球の右背側細胞を除去し、得られた欠損胚を対照が尾芽胚になるまで発生させた。欠損胚から生じた胚の80%は、正常あるいは正常に近い形の胚に発生した。これらの胚の右半分は、左半分と同様に正常であり、発生過程にも異常は認められなかった。すなわち、外観に関するかぎり調整はほぼ完全であるようにみえた。さらに、得られた正常胚の連続切片を観察した結果から、胚の内部構造も正常であることが分かった。ただし中軸器官のなかから脊索と体節を選んで、それらの細胞数をかぞえたところ、前者の細胞数は対照胚のそれの約70%であり、後者のそれは約90%であった。このように、脊索の回復の度合は著しく低いことが明らかになった。この欠損胚の右腹側細胞あるいは左背側細胞をテトラメチルローダミンイソシアネイトで染色し、それらの子孫細胞を発生過程を追って追跡し、さらに尾芽胚期に連続切片を作製してそれらの分布を調べた。その結果、次のことが明らかになった。まず脊索についていうと、本来脊索をつくるべき背側細胞の数が半分に減っているこの欠損胚においても、腹側細胞が脊索形成に貢献することはない。このため、脊索細胞数が十分に回復しないのである。他方、正常発生においては、体節は背側細胞と腹側細胞によって半分ずつつくられるのであるが、この欠損胚では背側細胞がつくるべき部分の体節も腹側細胞がつくることによって、体節は細胞数の点でもほぼ完全に回復した。調整が外見的に完全であるようにみえても、細胞数のレベルでは必ずしもそうではなく、調整の度合いは組織・器官によって異なる。
痩身モデルが痩身願望におよぼす社会心理学的影響―社会的比較理論の導入―

本研究の主目的は,痩身願望を支える心理学メカニズムの解明にあった。とりわけ社会的比較の観点から研究を立案・実施した。女子大学生を対象とした一連の研究によって,「対同性同輩比較→痩身理想像内在化→痩身願望」という影響経路が一貫して認められた(守安ら, 2011; 2012など)。また,次のことも明らかになった。1身近な他者のうち親友との体型比較が最も影響力をもつ(守安ら,2012),2身体全体よりも顔部位の比較が重要となる可能性がある(諸井,2014印刷中)。今後の研究の方向として,体型比較の文化的意味をさらに実証的に検討する必要があることが明らかになった。先行研究(守安・諸井, 2012; 2013)まででの研究で扱った体型比較測定における「体型」という用語は,身体の全体的な印象を指しているのか特定の部位を示しているのか曖昧であった。つまり,測定のための質問項目では,身体全体での比較が意図したが,回答者側は実際には特定の部位での比較を行っている可能性が考えられた。そのため,今回の研究では,このことを確認するため,同志社女子大学学生を対象とした質問紙調査が実施された(N=190,平均年齢19.91歳)。質問紙調査のために,身体の詳細な部位を比較する尺度が新たに作成され,同時に身体の部位ごとの満足感も測定された。主成分分析および重回帰分析によって,同性同輩との体型比較で回答者が実際に想定していたのは身体の全体的な印象ではなく身体の特定の部位だったことが明らかになった。ただし,痩身願望に関する重回帰分析では身体の全体的な印象も影響していた。したがって,身体の詳細な部位ごとに対同性同輩比較を行わせたことに一定の意義が認められたが,どのような特定部位が体型比較に強く関わるのかや,全体的な体型比較と痩身願望の関係における差異などの問題点が残された。また,「同性同輩比較⇒痩身理想像内在化⇒痩身願望」という前研究でも見られた影響経路が本研究でも得られた。先行研究と本研究を通して痩身願望の心理学的メカニズム解明に寄与する有益な諸知見が得られた。しかしながら,種々の問題点も指摘され,これらの問題点を今後も引き続き検討すべきといえる。社会的比較の観点から痩身願望の基底にある心理的メカニズムを引き続き検討した。前研究では(守安・諸井, 2012)比較他者を細かく設定したが,今回の研究では「同性同輩」を比較他者とした。本研究の主目的は,先行研究で痩身願望の影響因として認められた対同性同輩比較が身体全体の比較を指すのか,身体の特定部位比較の反映であるかを明らかにすることであった。女子大学生を対象に質問紙調査を実施した(N=190)。今回の研究では,回答者に詳細な身体部位比較と部位全体の比較(単一項目評定)を求めた。詳細な部位比較については因子分析に基づいて下位尺度を構成した。一連の重回帰分析によると,容姿,体つき,装い,外見,体型という言葉を用いて測定した対同性同輩比較は,顔部位の比較にかなり依存していた。対同性比較尺度の作成意図は,身体全体の比較の測定であった。下位尺度得点を対象とした分析では,身体全体比較の影響力は顔全体・胸比較とほぼ同等でしかなく,単一項目評定による分析では身体全体の影響は認められなかった。これらの結果は,容姿,体つき,装い,外見,体型という言葉を用いて同輩の女子学生との比較を求めると,回答者は自分自身と同輩の女子学生の顔部位の様相を思い浮かべながら回答していることを示している。身体の詳細な比較は,1対同性同輩比較との比較,2比較対象が身体という点から,他者との一般的な比較傾向を表す社会的比較志向性よりも,対同性同輩比較と強い関連を示すはずである。単一評定項目ではこの予測が支持されたが,下位尺度得点で分析した場合には支持されなかった。さらに,平均値比較で,2種類の得点ともに(単一評定項目:脚全体,下位尺度得点:腿),脚部は最も比較対象とされる部位であった。この部位は,重回帰分析においても対同性同輩比較の有意な規定因であった。以上の結果についても今後精緻に検討すべきであろう。申請研究の主目的である社会的比較と痩身願望,メディアに登場する痩身モデルとの比較,同性同輩との比較,および痩身理想像内在化の間の関係が検討された。これらを測定するための諸測度が女子大学生に実施された(N=247)。諸測度間の関係パターンを検討するために,共分散構造分析(Amos7.0)が用いられた。

痩身願望は,メデイアに登場する女性モデルよりも同性同輩との比較によって影響されていた。また,この関係は,痩身理想像内在化によって仲介されていた。本研究の意義が,社会的比較理論の観点から論議された。さらに,続く研究では,女子大学生を対象として(N=260),身近な同性他者として同性親友,母親,同性きょうだいとの体型比較も行わせ,痩身願望に対する影響を検討した。「同性同輩との比較→痩身理想像内在化→痩身願望」の影響経路は再び得られ,身近な他者との比較の相対的影響については,現在解析中である。痩身願望の問題を身体の装いに関する意識・行動の観点から扱い,次の質問紙調査を実施した。女子大学生が抱く化粧リスク懸念を測定するための尺度が作成された。先行研究に基づき作成された38項目から成る化粧リスク懸念尺度が他の尺度ともに女子大学生に実施された(N=253)。主成分分析により,5主成分(「自己顕示懸念」,「品質・性能懸念」,「化粧規範からの逸脱懸念」,「流行性懸念」)が抽出された。これらの主成分は,化粧意識(平松・牛田, 2004)や女性ファッション誌接触傾向(諸井・花高・尾鳥, 2010)と有意な関係を示した。化粧リスク懸念研究の意義が論議された。この研究知見を基にして,化粧リスク懸念と他の個人的傾性(独自性欲求,セルフ・モニタリング傾向,対異性不安)を検討した。現在解析中である。「おおむね順調に進展している」と判断した理由は以下の通りである。1今回の質問紙調査でも,「同性同輩との体型比較⇒痩身理想像内在化⇒痩身願望」の影響経路を堅守することができ,痩身願望を支える基本システムが再度同定された。2今回試みた身体部位ごとの体型比較によって,回答者にとっての「体型」の意味が必ずしも身体全体を指すのではなく,特定の部位比較を意味することが明らかになった。以上の知見から,「体型」に関する社会的比較の過程について,1で言及=同定されたマクロな過程と,今回の調査で明らかになったミクロな比較過程の両方を加味した痩身願望に関わるモデルの構築の重要性が示唆された。「おおむね順調にしている」と判断した理由は以下の通りである。(1)女子大学生を対象とした質問紙調査で,「同性同輩との比較→痩身理想像内在化→痩身願望」の影響経路が得られ,さらに続く調査でも同様の影響経路が抽出された。つまり,痩身願望を支える基本システムが同定された。(2)痩身願望の問題を身体の装いに関する意識・行動の観点から扱った化粧リスク懸念に関する質問紙調査においても,化粧という仕方で身体=顔を装うことの心理的意味に関する知見が得られた。(3)身体に関する文献を収集し,痩身願望の問題を総合的に捉える観点の整理ができた。以上のことから,申請研究はほぼ順調に進展していると判断できよう。1先行研究と今回の研究で示唆された「社会的比較⇒痩身願望」の影響経路に関するマクロな比較過程とミクロな比較過程を力動的に捉える質問紙調査を実施する。2身体自体の知覚(痩身性)の問題とともに,身体とりわけ顔の装いである化粧の問題についても再度取り組む。たとえば「小顔」は最近の化粧における重要な「目標」でもあるが,顔部分の痩身性=「小顔」がどのように知覚されるかの過程についても解明する。(1)痩身願望と社会的比較を軸にした質問紙調査では,身体部位の比較と満足感の測定を導入する。つまり,1年目の研究では,体型に関する全体的比較をさせたが,今年度では身体部位を細かく設定し,どのような部位の比較が痩身願望に結びついているかを明らかにする。
リン酸化信号伝達系を調節する中分子の設計と細胞機能の制御

低分子標的が枯渇した現代医療において、合成中分子を基盤としたたんぱく質間相互作用創薬が広く期待されている。しかし化合物の低い細胞移行性が常に中分子創薬の問題となっており、これらの課題を解決するための斬新な方法論の検討と分子技術開発が求められている。本研究では、リン酸化信号伝達系の調節に関わる標的たんぱく質のPPI作用面を鋳型とし、反応性低分子間のライゲーション反応により中分子を発生させる手法を開発した。本研究ではまず、天然物フシコクシンとH+-ATPase C末端のペプチド鎖を化学修飾し、14-3-3を鋳型とするオキシム生成反応を検討した。その結果、等量の14-3-3存在下で両者間のオキシム生成反応は顕著に加速して収率90%でオキシム誘導体の生成が確認された。この反応は細胞内で進行し、細胞内で生成したオキシム誘導体が内在性14-3-3の相互作用を阻害して顕著に細胞増殖を阻害することが明らかになった。次に、より生物直交性に優れたクリック反応の応用を目指し、アジド誘導体および環状アルキン含有ペプチド誘導体を設計合成した。14-3-3存在下でクリック反応を検討した結果、クリック反応由来の二つの異性体が18:1の比で検出された。一方、14-3-3非存在下では加熱が必要であり、14-3-3の鋳型効果により位置異性体選択的に反応が進行するという興味深い知見を得た。このことは、14-3-3が近接効果によってどちらか一方の反応遷移状態を安定化することを示唆しており、有機合成化学的に有用な反応と考えられる。以上より、中分子PPI阻害剤の新規なプロドラッグ戦略の可能性を示すことに成功した。29年度が最終年度であるため、記入しない。低分子創薬が難しいたんぱく質間相互作用(protein-protein interactions; PPIs)に対しては広い作用面の構築に好都合な中分子の応用が注目されているが、一般に細胞膜透過性が低く、細胞内デリバリ技術の開発が求められている。本研究では、反応性低分子間のライゲーション反応により細胞内で中分子を発生させ、リン酸化信号伝達系の調節に関わるたんぱく質間相互作用を制御する手法を開発する。具体的には、標的たんぱく質14-3-3の結晶構造を基に低分子反応性モジュールを合理設計もしくはライブラリ化し、遺伝子組換えたんぱく質を鋳型とするライゲーション反応のin vitro評価、細胞内中分子合成と標的PPIの阻害評価および細胞増殖阻害活性試験を実施し、中分子PPI阻害剤の新たな分子戦略の提案に結び付けることを目的とする。天然物フシコクシン(FC)は、植物14-3-3たんぱく質とH+-ATPaseの複合体の疎水性間隙に結合し、安定な三者複合体を形成して14-3-3とH+-ATPaseのPPIを安定化することが知られている。14-3-3は真核細胞に普遍的に高発現するリン酸化信号系制御因子であるが、14-3-3機能の変調ががん等の疾病と関連することが明らかにされており、14-3-3阻害剤は創薬シーズとしての可能性が期待されている。そこで、細胞内内在性14-3-3を鋳型とするFCとペプチドフラグメント間のライゲーション反応による細胞内中分子合成と14-3-3信号伝達系の制御を検討した。その結果、アルデヒド含有FC誘導体とペプチド誘導体間のオキシム生成反応により細胞内で14-3-3阻害剤を合成して14-3-3PPIsを阻害し、細胞増殖を抑制することに成功した。本研究の成果は、細胞内中分子合成による中分子PPI阻害剤のプロドラッグ化の可能性を示唆するものと考えられる。遺伝子改変型FC生産系を用いて生合成中間体FC-Jを大量生産し、FC-Jの12-位水酸基の化学修飾によるo-ホルミルベンジル基含有FC-Jを合成した。一方、植物H+-ATPaseのC末端14-3-3結合モチーフのC末端カルボキシル基をアミノオキシ基に、リン酸化トレオニンをアスパラギン酸残基に置換したペプチドを合成した。in vitroにおいて、緩衝液中における両者のオキシムライゲーションに与える遺伝子組換え型14-3-3の効果をHPLCによる反応追跡実験により評価したところ、等量の14-3-3存在下で両者間のオキシム生成反応は顕著に加速し、24時間後には収率90%でオキシム誘導体が生成することが確認された。HEK細胞を用いた実験により、オキシム誘導体は細胞内においてもおよそ40 %程度の収率で生成し、顕著な細胞増殖阻害活性を示すことがわかった。一方、オキシム反応の原料であるFC誘導体とペプチド誘導体、もしくは化学的に合成したオキシム誘導体はいずれも不活性であり、増殖阻害活性が細胞内オキシム生成反応に起因することが裏付けられた。FLAG-14-3-3安定発現株を用いたpull-down実験を行い、オキシム誘導体が14-3-3-cRaf相互作用を顕著に阻害することを見出した。また本系をより生物直交型の反応系として銅触媒を用いないクリック反応による中分子合成に展開する目的で、プロパギル基含有FC誘導体とC末端アジド含有ペプチドを設計し、合成を検討した。FC-JをMSおよびカンファースルホン酸存在下、無水DMF中で4等量の2ーメトキシプロパンを40度でゆっくり反応させ、FC-Jのビスアセトナイド保護体を収率61%で得た。

保護体に対し、種々の存在下で12位水酸基へのプロパギル基導入を試みたが反応は進行しなかった。現在アジド含有ベンジル基の導入を検討中である。低分子標的が枯渇した現代医療において、合成中分子を基盤としたたんぱく質間相互作用創薬が広く期待されている。しかし化合物の低い細胞移行性が常に中分子創薬の問題となっており、これらの課題を解決するための斬新な方法論の検討と分子技術開発が求められている。本研究では、リン酸化信号伝達系の調節に関わる標的たんぱく質のPPI作用面を鋳型とし、反応性低分子間のライゲーション反応により中分子を発生させる手法を開発した。本研究ではまず、天然物フシコクシンとH+-ATPase C末端のペプチド鎖を化学修飾し、14-3-3を鋳型とするオキシム生成反応を検討した。その結果、等量の14-3-3存在下で両者間のオキシム生成反応は顕著に加速して収率90%でオキシム誘導体の生成が確認された。この反応は細胞内で進行し、細胞内で生成したオキシム誘導体が内在性14-3-3の相互作用を阻害して顕著に細胞増殖を阻害することが明らかになった。次に、より生物直交性に優れたクリック反応の応用を目指し、アジド誘導体および環状アルキン含有ペプチド誘導体を設計合成した。14-3-3存在下でクリック反応を検討した結果、クリック反応由来の二つの異性体が18:1の比で検出された。一方、14-3-3非存在下では加熱が必要であり、14-3-3の鋳型効果により位置異性体選択的に反応が進行するという興味深い知見を得た。このことは、14-3-3が近接効果によってどちらか一方の反応遷移状態を安定化することを示唆しており、有機合成化学的に有用な反応と考えられる。以上より、中分子PPI阻害剤の新規なプロドラッグ戦略の可能性を示すことに成功した。予備実験により、FCの12位水酸基に対するベンジル化反応が進行することを確認したので、H29年度はortho-アジドベンジル基の導入によるクリック反応モジュールの合成を検討する。ペプチドモジュールとしてはダンシル基含有QSYDVペンタペプチドのC末端にプロパギルアミンを縮合した誘導体を合成する。大腸菌から発現精製した組換え型14-3-3たんぱく質を鋳型に用い、両者のクリック反応をHPLCを用いて定量的に評価する。ライゲーション生成物の14-3-3に対する結合親和性をITCと蛍光偏光により定量的に評価し、モジュール構造をチューニングしながらnMレベルの親和性を持つ中分子を得る。良好な結果が得られた場合には、細胞実験に移行し、細胞増殖阻害活性の評価、pull-downアッセイによる14-3-3PPIs阻害評価を検討する。一方、リン酸化信号伝達系制御の要のひとつである脱リン酸化酵素に対する中分子阻害剤の合理設計を開始する。脱リン酸化酵素の浅い活性ポケットと標的たんぱく質とのPPI作用面を認識する化合物の創製に取り組む。具体的にはセリン・トレオニン脱リン酸化酵素であるcdc25Bに着目する。29年度が最終年度であるため、記入しない。
ヒト免疫不全ウィルスの持続感染機構及びAIDS発症機構に関する基礎的研究

HIVの感染を受けてからAIDS発症までの期間は極めて長く、この期間(AC)、HIVは活発な増殖を繰り返さない状態で、持続感染細胞として存続すると考えられる。この状態から、活発なHIV増殖を行っている状態と考えられるAIDS発症期へと変化する機構を明らかにすることは、AIDS発症予防法を見いだす上でも極めて重要な課題である。私達は、MTー4細胞を用いることにより、HIV持続感染機構を解析してきた。その結果、HIVの調節遺伝子変異との密接な相関性のあることを見いだした。即ち、vif、vpu、またはvpr遺伝子に変異を伴ったHIV感染では、感染後に生き残る細胞が現れた。この生き残り細胞より得られたクロ-ン細胞の解析から、これらの生き残り細胞は、AC期から分離されるHIVの性状、即ち低増殖性、低細胞傷害性などの性状を持つHIVの産生細胞であることが明らかになった。一方、nef遺伝子変異HIVでの感染では、野生型HIVと同様に、生き残り細胞を許さなかった。そこで、これらのウイルスをMTー4細胞における継代培養を重ねた後に感染実験を行った結果、野生型HIVでは少なくとも12代以上、nef遺伝子変異HIVでは少なくとも50代以上の継代を重ねたもののみが一部のMTー4細胞に生き残り細胞を許すことが明らかになった。従って、逆転写過程における遺伝子変異がHIV持続感染と関連しており、その際、vif、vpu、vprなどの遺伝子ではこの変異を抑制する機構、反対にnef遺伝子ではこの変異を亢進する機構のあることが示唆された。次に、ACとAIDS期から分離されるHIVの性状が異なっている機構を理解する為、HIV重感染実験を行った。その結果、非感染性のHIV産生細胞から高細胞傷害性の感染性粒子の産生細胞へ変化し、しかも重感染を受けた細胞は傷害を受けずに感染性粒子を産生し続ける現象が認められた。この重感染は、HIV初感染とは異なるCD4ーCDR3関連領域を介して成立しており、CD4ーCDR2関連領域におけるinterferenceが観察されることが明らかになった。
"柔らかい"界面における高分子修飾微粒子膜の構造とダイナミクスの評価

本研究課題は、自由界面における高分子グラフト微粒子の科学を解明しようとするものである。高分子修飾微粒子の2次元集合体の気液界面から液液界面への展開を行い、液/液界面系におけるπ-A測定方法を確立した。油相の選択・精製、装置の改造等、気/水界面に比べて多くの課題が伴ったが、これらを克服し再現性のある測定を行うことが可能となった。高分子をグラフトした微粒子系を用いて測定を行い、油相の種類、粒子にグラフトした高分子の種類等による影響を調査し、新たな知見を得た。気水界面での単分子膜の構造・特性は詳細に調査されているが、それに比して、液-液界面における研究は評価の困難さから報告例が圧倒的に少ない。しかし、液-液界面は、気水界面よりもはるかに多様であり、生体反応、分離・抽出反応など、液-液界面がかかわる事象は非常に多い。そこで、本研究では、これまで行ってきた気水界面での高分子グラフト粒子膜系を液-液界面に発展させ、その評価を試みた。液-液界面の表面張力を正確に評価するためには、水平な界面を形成させることが必須となるが、一般的なトラフを使用した場合には、濡れ性の問題により油層と水層の均一な界面を形成させることが難しい。そこで、一般的なLangmuirトラフを改良し、周囲に溝をもつ液-液界面用トラフを作製し、実験に用いた。油層としてデカンを用いポリメタクリル酸メチル(PMMA)グラフトポリスチレンラテックスを用いて、気水界面および液-液界面での挙動を比較した。気-水界面、油-水界面いずれの場合にも、グラフト鎖の分子量の増加に伴い、表面圧上昇の始まる面積が大きくなる傾向が見られた。しかし、グラフト鎖の分子量が大きいものほど、気-水界面とデカン-水界面におけるπ-A等温線の差が大きく、気-水界面上よりもデカン-水界面におけるπ-A等温線の初期勾配が緩やかになり、より広い面積から表面圧が上昇することを確認した。今後、上記のような分子量依存性を詳細に検討するとともに、油層側の液体として様々な種類の液体を用いることにより、液-液界面の表面張力が粒子膜に与える効果を評価したい。さらに、これまでに合成を行った種種の高分子鎖を有する高分子グラフト微粒子を用いることにより、系統的に液-液界面系での粒子膜の構造を調査する予定である。本研究課題は、以前の課題(課題名:「気水界面における高分子修飾微粒子膜の構造評価と界面固定化によるナノ材料の創製」)を発展させたものであり、高分子グラフト微粒子の科学をより詳細に解明しようとするものである。本研究課題では(1) in situ分光学的手法を用いた粒子膜の評価方法の確立と、(2)高分子修飾微粒子の2次元集合体の気液界面から液液界面への展開を目標としている。(1)に関しては、固体面と異なり液面は曲率を持つため、より試料まわりの工夫が必要であると考え、今年度試料ホルダーを新たに作成し、調整を行った。(2)については、液/液界面系におけるπ-A測定は、油相の選択、装置の改造等、気/水界面に比べて多くの課題が伴ったが、昨年度我々はこれらを克服し、再現性のある測定を行うことが可能となった。今年度は、油相の種類、粒子にグラフトした高分子の種類を変化させて測定を行った。その結果、主に以下のような知見が得られた。(1)デカン/水、およびジブチルエーテル/水界面におけるポリメチルメタクリレート(PMMA)グラフトポリスチレンラテックスのπ-A等温線を測定したところ、液液界面では気水界面に比べ2割程度広い占有面積から表面圧が上昇し、その傾きも緩やかであることが明らかになった。π-A等温線の傾きは膜の弾性率に相当し、液液界面で形成される粒子膜の方がやわらかいことが示唆された。(2)高分子の熱的性質の大きく異なるn-ブチルメタクリレート(n-BMA)をグラフトした微粒子を合成し、測定を行った。この系においても気水界面と液液界面での挙動は、PMMA系と同様な傾向を示した。また、PMMA系に比べ、n-BMA系の方がπ-A等温線の傾きが緩やかで、柔らかい膜を形成していることが明らかになった。以上のように、本研究によりこれまで未知であった液液界面における高分子鎖に関する情報が得られ、総括的な議論が可能になった。
アルコキシドを配位子とする新規二価ランタノイド錯体の合成、構造及び反応性の研究

(C_5Me_5)Sm(OAr)(HMPA)_2はフルオレノンと反応すると不均化せず対応するケチル錯体(C_5Me_5)Sm(OAr)(ketyl)(HMPA)を与え、混合型配位子をもつ一電子還元剤としての有用性を示した。また、これらのアリ-オキシド配位子含有新規Sm(II)錯体はカテコールボランによるオレフィンのビドロボレーション、エチレンやスチレンなどの重合反応において(C_5Me_5)_2Sm(THF)_2の場合に見られない高い触媒活性を示した。その他、サマリウム金属と三当量のフルオレノンとの反応により初めてのトリス(ケチル)錯体を単離しその構造を明らかにすると共に反応性を検討した。
季節循環とProduction Smoothing

昨年、一昨年は景気循環の中でも在庫変動の役割に注目した研究を行ってきたが、本年度は特定の需要項目に注目せず景気循環全体に関する政策課題としての金融政策を中心に研究を進めてきた。80年代以降の日本経済の動向にとり金融政策が非常に大きな影響力を持ったことは数多くの論者により指摘されている。90年代、特にその後半のデフレ期に至ってその重要性はさらに増しているといえるだろう。実証的なアプローチでは80年代以降の日本経済に関し、信用乗数の変化、為替レートを通じての金融政策の波及が期待インフレ率に大きく依存することがわかった。両研究「信用乗数の変化はいかにして説明されるか」(飯田泰之・原田泰・浜田宏一)、「金融政策の波及チャネルとしての為替レート」(寺井晃・飯田泰之・浜田宏一)は2月に内閣不経済社会総合研究所で報告し、3月末にDiscussion Paperとして同研究所より発行される。また、90年代の日本経済を考えると言うことはデフレーションと失業の問題を考えることに他ならない。前者の「デフレ経済」に関しては戦後の事例が無く、その特性を確かめるためには戦前期、特に昭和恐慌期にさかのぼる必要がある。そこで、1920年代の市況等に関し新聞データを用いた再現を交えながら同時期の期待インフレ率を推計した。本研究「戦前期日本経済の期待インフレ率推計」は昭和恐慌研究会(於東洋経済新報社)での発表へのコメントなどをうけて現在改稿を進めている。後者の、失業の問題に関しては労働者の部門間移転を容易にする賃金体系はなにか、という問題意識を元にサーチ理論を用いたモデル化を試みた。本研究は論文「産業構造の変化と労働力配分のrestructuring-Search理論によるモデル化」(飯田泰之・寺井晃)にまとめられ、2002年度日本経済学会秋季大会にて報告し、現在投稿準備中である。
核内レセプターによる胆汁酸代謝調節機構の解明

核内レセプターによる胆汁酸代謝調節機構の解明を目的として、胆汁酸代謝系と脂質及び脂溶性ビタミンの代謝系のクロストークという観点から研究を行い次の成果を得た。1.新規リガンドの同定(1)胆汁酸、脂質及び脂溶性ビタミンに応答する核内レセプターに対する新規リガンドの探索を行い、植物ステロールの誘導体がLXRのリガンドとして作用することを見いだした。エルゴステロールの誘導体が効果的にLXRα及びLXRβを活性化し、マウスにおいて小腸選択的に作用することを明らかにした。(2)VDRとリトコール酸との構造活性相関の解析の結果、リトコール酸よりも30倍以上効果的にVDRを活性化する誘導体リトコール酸アセテートを見いだした。この誘導体はFXRやPXRにほとんど作用せず、VDRに選択的な胆汁酸であった。(3)胆汁酸に反応する核内レセプターの活性化調節機構の解析において、二次胆汁酸によるVDRの活性化が、膜Na^+,K^+-ATPase阻害剤によって促進されることが明らかになった。膜シグナルと胆汁酸受容体との機能連関を示している。(4)胆汁酸受容体のヘテロ二量体パートナーであるRXRのリガンド反応性を様々な合成リガンドを用いて検討した結果、ヘテロ二量体特異的なリガンドが存在することが明らかになった。未同定のRXRリガンドが生体内で胆汁酸受容体の機能を調節する可能性を示唆している。2.標的遺伝子の発現変化の解析胆汁酸代謝に関連する核内レセプターの他の転写因子系に対する効果を検討した結果、LXRが、腸管粘膜細胞の増殖やがん化と関連するβ-カテニンの転写誘導活性を抑制することが明らかになった。食事性脂質と細胞増殖シグナルとの機能連関を示している。総胆管結索による胆汁うっ滞モデルマウスを作成し、各種臓器における胆汁酸受容体の標的遺伝子発現を解析した。腎臓における骨代謝関係のVDR標的遺伝子RANKLの発現増加など、胆汁うっ滞の病態との関連性を示唆する所見が得られた。核内レセプターが、脂質や脂溶性ビタミンの吸収に必要な成分である胆汁酸に反応し、胆汁酸代謝を調節していることが明らかになった。核内レセプターによる胆汁酸代謝調節機構を解明するために、胆汁酸に応答する核内レセプターFXR、PXR及びVDR、脂質及び脂溶性ビタミンに応答するLXR、PPAR、RAR及びRXRに対する新規リガンド化合物の探索を行った。核内レセプターのリガンド依存性転写誘導活性を評価するために、(1)全長核内レセプターとコンセンサス結合領域を含んだルシフェラーゼレポーターを用いる系、(2)GAL4-キメラレセプターを用いるmammalianone hybrid系、(3)GAL4-コファクターとVP-16-核内レセプターを用いるmammaliantwo hybrid系を構築した。上記の系を用いて、胆汁酸によって消化吸収が制御されている植物ステロールの核内レセプターに対する効果を検討した。その結果、エルゴステロールの誘導体にLXRを活性化する作用のあることを見出した。このエルゴステロール誘導体をマウスへ経口投与したところ、小腸選択的にLXRの標的遺伝子であるATP結合カセットトランスポーターの発現を誘導して、コレステロールの吸収を抑制した。