hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
BEPを基盤としたO-結合型糖タンパク質のグライコプロテオミクスによる同定法

ピラゾロン共存下でβ脱離反応(BEP法)は、O-結合型糖鎖の切断と標識、脱グリコシル化ペプチドの糖鎖結合部位へのマイケル付加を同時に行うことができる。本研究ではO-型糖タンパク質の解析法の確立を目的として、セリンおよびスレオニン残基にムチン型糖鎖が付加している糖ペプチドを用いて詳細な反応条件の検討を行った。その結果、セリン残基には糖鎖のβ脱離反応と同時にピラゾロン試薬によるマイケル付加が良好に進行する一方で、スレオニン残基は脱糖鎖後もマイケル付加反応が進行せず、デヒドロ体として検出されることが明らかとなった。またBEPによるO-結合型糖鎖の切断効率を検討したところ、セリン残基ではほとんど全てのO-結合型糖鎖の切断とピラゾロン標識が進行するが、スレオニン残基では同条件では糖鎖へのピラゾロン標識は進行するが、糖ペプチドからの糖鎖の切断が3%程度であることが判明した。そこでBEP法の塩基条件や試薬濃度を検討した結果、両アミノ酸に付加しているO-結合型糖鎖を切断できる条件を見出した。この発見は、網羅的なO-結合型糖鎖の解析へと繋がることが考えられる。また、昨年度に引き続き、シアル酸結合様式特異的誘導体化法を詳細に検討し、分子内ラクトン環を開環と同時に直接アミド化するaminolysis-SALSA法を開発した。さらに、糖ペプチドへの適用について検討した結果、シアリル化糖鎖に含まれるα2,3-結合のシアル酸のカルボキシル基を選択的に標識する手法を開発した。O-結合型糖鎖の解析については構造非依存的に切り出す酵素がないため、糖鎖の遊離は化学手法に依存しているのが現状である。申請者が開発を進めているBEP法は、ピラゾロン共存下でβ脱離反応を行う方法であり、糖タンパク質からのO-結合型糖鎖の切断と標識を同時に行う解析法である。さらにBEP法ではβ脱離・マイケル付加反応による化学修飾法(BEMA法)と同様の作用機序で脱グリコシル化ペプチドにピラゾロン試薬をマイケル付加できるため、糖タンパク質のO-結合型糖鎖結合部位の同定に応用することが可能である。しかし、リン酸化を受けたタンパク質もβ脱離・マイケル付加反応によりピラゾロン試薬で標識されるため、グリコシル化やリン酸化を区別する手法が必要となる。本研究では、まずプロテインフォスファターゼ処理によるリン酸基の除去について検討した。プロテインフォスファターゼによりリン酸基を加水分解した後、界面活性剤除去カラムにより精製し、MALDI-TOF MSにより確認したところ、脱リン酸化が効率的に進行していることが明らかとなった。次にO-結合型糖ペプチドおよびリン酸化ペプチドの混合物をプロテインフォスファターゼ処理を行い、続いてBEP反応を行なった結果、脱グリコシル化ペプチドが選択的にピラゾロン標識できることが明らかとなった。さらにモデル糖タンパク質を還元アルキル化処理を行い、プロテインフォスファターゼの有無によるO-結合型糖鎖に違いがないことを確認している。現在は、トリプシン消化などを行なった糖ペプチドについて検討中である。プロテインフォスファターゼによるリン酸化とグリコシル化の識別については良好な結果が得られ、さらに界面活性剤の除去やペプチド同定の際に汎用されるシステインの還元アルキル化処理についても検証し、糖タンパク質の前処理法の検討までは終了している。今後は、この前処理を行なったタンパク質のエンリッチ法や糖鎖結合部位の解析について検討していく。またシアル酸の結合様式については、シアリダーゼによる選択的な切断を検討したが、ピラゾロン誘導化糖鎖では良好な結果が得られなかった。今後はラクトン化について検討することを計画している。また、選択的なアミド化法が西風らによって報告されており、O-結合型糖鎖への適用について検討を進めていく。リン酸化を受けたタンパク質もβ脱離・マイケル付加反応によりピラゾロン試薬で標識されるため、昨年度は、プロテインフォスファターゼ処理を行い、続いてBEP反応を行なった結果、脱グリコシル化ペプチドが選択的にピラゾロン標識できることが明らかとなった。今年度はプロテオミクス解析で一般的に用いられている還元アルキル化やトリプシン消化によるサンプル調整法を検討する。また、N-結合型糖鎖のシアル酸の結合様式を判別するための方法として、シアル酸結合様式特異的誘導体化法(SALSA法)が報告されているが、本研究ではO-結合型糖タンパク質解析への適用について検討を進め、シアル酸の誘導化による結合様式の識別について検討した。血清の糖タンパク質/ペプチドの調整を行うにあたり、プロテオミクスで一般的に行われている還元アルキル化について検討を行った。還元アルキル化後にエタノール沈殿法によりタンパク質を回収しBEP法を行った結果、O-結合型糖鎖が効率よく回収できることが明らかとなった。

エタノール沈殿により固相抽出カラムによる還元アルキル化剤をすることなく回収タンパク質をトリプシン消化でき、LCMS解析が可能になった。またSALSA法にについてもエタノール沈殿法によりアミド化試薬を効率よく除去することができ、70%程度がアミド化修飾できることが明らかとなった。最終年度は反応収率の向上について検討する。ピラゾロン共存下でβ脱離反応(BEP法)は、O-結合型糖鎖の切断と標識、脱グリコシル化ペプチドの糖鎖結合部位へのマイケル付加を同時に行うことができる。本研究ではO-型糖タンパク質の解析法の確立を目的として、セリンおよびスレオニン残基にムチン型糖鎖が付加している糖ペプチドを用いて詳細な反応条件の検討を行った。その結果、セリン残基には糖鎖のβ脱離反応と同時にピラゾロン試薬によるマイケル付加が良好に進行する一方で、スレオニン残基は脱糖鎖後もマイケル付加反応が進行せず、デヒドロ体として検出されることが明らかとなった。またBEPによるO-結合型糖鎖の切断効率を検討したところ、セリン残基ではほとんど全てのO-結合型糖鎖の切断とピラゾロン標識が進行するが、スレオニン残基では同条件では糖鎖へのピラゾロン標識は進行するが、糖ペプチドからの糖鎖の切断が3%程度であることが判明した。そこでBEP法の塩基条件や試薬濃度を検討した結果、両アミノ酸に付加しているO-結合型糖鎖を切断できる条件を見出した。この発見は、網羅的なO-結合型糖鎖の解析へと繋がることが考えられる。また、昨年度に引き続き、シアル酸結合様式特異的誘導体化法を詳細に検討し、分子内ラクトン環を開環と同時に直接アミド化するaminolysis-SALSA法を開発した。さらに、糖ペプチドへの適用について検討した結果、シアリル化糖鎖に含まれるα2,3-結合のシアル酸のカルボキシル基を選択的に標識する手法を開発した。現在まで、リン酸基の除去法を検討しBEP法に適用できることを明らかとしている。今後は前処理済みの糖タンパク質を使用し、トリプシンなどの酵素消化により調製された糖ペプチドを用いて糖鎖結合部位の同定を行なっていく。さらに解析の結果を踏まえて、エンリッチ法やN-結合型糖鎖の除去などを取り入れて網羅的な糖ペプチドの解析法の開発を目指す。もう一つの課題であるシアル酸の結合様式については、ラクトン化などの化学的修飾法について検討することを計画している。最終年度は、調整した糖ペプチドの解析を進めて行くが、一つの課題はシアル酸の結合様式を識別するアミド化の収率向上が挙げられる。本研究室ではマイクロ波支援BEP反応を開発するにあたりマイクロ波発生有機合成装置を保有しており、本反応においてもマイクロ波の効果について検討などを行い、O-結合型糖鎖におけるSALSA法の最適化を行なっていく。またシアル酸含有糖ペプチドのエンリッチについてレクチン等の使用を計画していたが、選択的な化学修飾による回収法についての検討を行う予定である。お茶の水女子大学の三浦信明先生と研究打ち合わせを計画していたが、日程が調整できなかった。研究を行うにあたり当初糖ペプチドのエンリッチを目的として使用を予定していたレクチンを使わずに、化学的修飾による糖ペプチドの回収を行う研究方針の変更があったため、購入する試薬が決定できなかった。今年度はビオチン導入タグなどを購入し研究を遂行する予定である。
cdc2活性阻害因子による分裂期開発制御の解析

1)Vprタンパク質によるCdc2活性阻害とG2期停止機構の解析HIV1アクセサリータンパク質VprのG2期停止機構を解析するため,誘導剤添加によりVprの発現を誘導出来る細胞を樹立した.Vprの発現によりCdc2の活性が抑制され,細胞はG2期で停止したが,その後Cdc2は活性化し細胞はM期に進行した.しかし中心体複製はG2期停止中にも起こり,M期に進行した細胞は異常な多極の紡錘体を形成し分裂期から出ることが出来なかった.これがHIV1感染による細胞死の一つの原因であると考えられた.2)新規Wee1タンパク質遺伝子の単離と活性解析ゲノムデータベース上に登録されたWee1Huと類似の配列を有するヒト新規Wee1遺伝子cDNAを単離した.また,その活性をサイクリンCDK複合体を基質に測定し,Wee1Huと同様Cdc2,Cdk2の15位のチロシンをリン酸化することを明らかにした.3)Wee1Hu(Wee1A)タンパク質の間期における分解機構の解析プロテアソーム活性阻害剤による解析によりWee1Huの細胞周期を通じた分解はプロテアソーム依存に行われていることを明らかにした.欠失変異を有するWee1を導入する解析により,プロテインキナーゼ触媒領域(catalytic domain)のN端側の外側のアミノ酸配列がプロテアソーム依存分解に必要であることを明らかにした.さらにこの領域に存在するリジンをアルギニンに変異させると,Wee1Huのユビキチン化が著しく減少し,LLnLによるWee1タンパク質量の増大が起こらなくなったことから,この領域のリジンのユビキチン化が間期におけるWee1の分解に必須であることを明らかにした.1)Vprタンパク質によるCdc2活性阻害とG2期停止機構の解析HIV1アクセサリータンパク質VprのG2期停止機構を解析するため,誘導剤添加によりVprの発現を誘導出来る細胞を樹立した.Vprの発現によりCdc2の活性が抑制され,細胞はG2期で停止したが,その後Cdc2は活性化し細胞はM期に進行した.しかし中心体複製はG2期停止中にも起こり,M期に進行した細胞は異常な多極の紡錘体を形成し分裂期から出ることが出来なかった.これがHIV1感染による細胞死の一つの原因であると考えられた.2)新規Wee1タンパク質遺伝子の単離と活性解析ゲノムデータベース上に登録されたWee1Huと類似の配列を有するヒト新規Wee1遺伝子cDNAを単離した.また,その活性をサイクリンCDK複合体を基質に測定し,Wee1Huと同様Cdc2,Cdk2の15位のチロシンをリン酸化することを明らかにした.プロテアソーム活性阻害剤による解析によりWee1Huの細胞周期を通じた分解はプロテアソーム依存に行われていることを明らかにした.欠失変異を有するWee1を導入する解析により,プロテインキナーゼ触媒領域(catalytic domain)のN端側の外側のアミノ酸配列がプロテアソーム依存分解に必要であることを明らかにした.さらにこの領域に存在するリジンをアルギニンに変異させると,Wee1Huのユビキチン化が著しく減少し,LLnLによるWee1タンパク質量の増大が起こらなくなったことから,この領域のリジンのユビキチン化が間期におけるWee1の分解に必須であることを明らかにした.
ロシア演劇におけるアヴァンギャルド・パラダイムの総合的研究

19世紀末から第二次大戦までの時期のヨーロッパ文化はモダイズムとよばれ、20世紀パラダイムの確立期として近年文化研究での再評価が進んでいる。ロシア・アヴァンギャルドもそのような社会変革の機運を背景に「新しい社会の創造」と「新しい芸術表現の構築」を一体化させる運動であったことはすでに多くの研究によって明らかにされている。しかし、あまりにもその革新性・前衛性ばかりが強調されてきた。また、アヴァンギャルド運動を担った当時の芸術家のおかれた状況を美化しすぎたり、芸術家の発言を検証することなく、そのまま肯定してきてしまった面がある。近年、このような短所に注意を払い、ロシア帝政およびソ連時代の政治社会システムを包括的に分析し、その社会状況の中にアヴァンギャルド(もしくはロシア文化の変容といてもよい)を位置づけようとする動きが定着しつつある。それでもなおかつ、ロシア/ソ連を特異領域として強調してしまうエリアスタディーの領域にとどまっているのは演劇・文学研究の今後の課題を逆に明確にしていると思う。ソ連の政治・社会システムがロシア独特の歴史的要素を持っているとはいえ、あくまで19世紀に顕在化したヨーロッパ近代社会のグローヴァル化が、周縁であるがゆえに先鋭化したものであることは考慮されるべきである。本研究の過程でロシア・アヴァンギャルドを他のドイツ、イタリア、フランスなどの芸術活動とは別個に語ってきた従来の方法は、やはりロシアに対するヨーロッパ的なエキゾチズム=オリエンタリズムの視点だったことが明らかになってきた。1917年のロシア革命を、絶対的な断絶点とする考え方は見なくなってきたものの、あくまで国境によって区切られた空間を芸術表現の文化圏と一体化させる考え方が主流である。しかし、本研究の関心の中心的存在であるメイエルホリドも、ドイツ語を自由に解し当時の先端の演劇情報や戯曲をフランス・ドイツから取得し、ダイレクトに実践していたことは、レパートリーにメーテルリンクやクロムランク、ハウプトマンらが名を連ね、演劇論はニーチェ等に依拠していることからもわかる。また、人的交流としては、1910年にすでにディアギレフがロシア・バレエの斬新さでパリに衝撃を与え、シャガールはパリへと絵の修行に出かける。そのパリにはピカソなどがスペインから来ていたことを考えれば、ヨーロッパ大陸はひとつの大きな芸術領域であったことがわかる。アヴァンギャルド運動を考察する際、この時期が現在の演劇概念の基礎となる近代劇が確立した重要な時期であることも考慮すべきである。ヨーロッパ社会が近代化されるに連れ、思想も表現も大きな変化を遂げた。演劇でも、劇作家ではイプセン(ノルウェー)やチェーホフ(ロシア)等が、演出家ではスタニスラフスキー(ロシア)が日常生活を演劇のテーマとして取り上げ、市民社会への移行期にあって新しい観客を獲得した。このような規範の確立が、同時に近代への反発として新しい芸術手法の探求という欲求を生み、実験的なアヴァンギャルド演劇が展開される。これらも、従来はアンチ・リアリズムという固定的なカテゴリーの中にとどめられていたが、今後はリアリズムもまた「新しい社会の表現」であることに留意し、逆にアヴァンギャルドもまた近代批判でありながら、結局は進歩主義的、科学主義的パラダイムという近代の枠組みの中にとどまらざるを得なかったことを両方の手法の展開を統合するような総合的な分析によって明らかにすべきだと思う。本年度はロシア・アヴァンギャルド揺籃の地、ペテルブルグについての考察を中心にパラダイム考察の土台構築を行った。2003年5月23日北大スラブ研究センターにおいて、また2004年1月14日神戸大学国際文化学部において「文化都市ペテルブルグの劇的特性について」と題し発表を行った2003年11月1日にはペテルブルグ建都300年を記念した日本ロシア文学会のシンポジウム「若き人工都市サンクト・ペテルブルグはいかにして学術・文化情報の発信地となりえたか」に参加、演劇を含め、ペテルブルグのアヴァンギャルド性とロシア文化における特異な位置付けについてコメントを行った。2003年8月大阪の芸術メッセにおいて「モスクワの芸術創造の現状と展望」と題し、発表を行った。現在、モスクワは石油好況を背景に社会が安定し、多彩な芸術運動が活発化している。なかでも演劇におけるアヴァンギャルド系小劇場の活躍はめざましく、国家管理型社会主義体制の崩壊後、社会混乱を乗り越え、ロシア・アヴァンギャルドの伝統が自覚的に再生され、新たな展開をみせようとしている。その意味でも、当研究は予想以上にロシア文化の現況にアクチュアルな問題設定であることが明らかになりつつある。実地には、2004年2月10日25日にロシア・モスクワの劇場事情を調査した。特に「戯曲・演出センター」において上演演目の記録を行い、若手演劇人を中心とした新しい演劇潮流を調査した。当劇団では、新たな演劇表現を戯曲・演出・演技の各方面から実験的に取り組み、心理主義的なロシア演劇の伝統に新たな可能性を開こうとしている。アングラ芸術にありがちな一方的な発散型表現ではなく、アヴァンギャルドを批判的に再評価・再構築し、新たな指標を生み出そうとしているところに新しさがある。特に現代ドイツ演劇から戯曲および様式を学ぶ傾向が見受けられることについて劇団を主催するカザンツェフ氏と議論を重ねた。帰路、フランクフルトにおいても劇場に関する情報を収集し、ドイツにおける調査の手がかりとしたいと考えている。

自然主義的、心理主義的リアリズム演劇の祖とされながら、実はアヴァンギャルド演劇の手法を生み出す土台となった劇作家チェーホフに注目し、彼の劇構造が有する、世界システムのモデル化するような特徴こそが、文化や歴史の違いを超えて普遍的な演劇作品として世界中で受容されている原因であることを明らかにし、とくに1世紀という時間を経た現在においても、日・露・韓をはじめとして各国で上演されている現状に注目し、それぞれの作品を比較・考察した。具体的にはユーラシア協会大阪府連国際チェーホフ没後100年記念シンポジウム「チェーホフと現代」(2004.5.8.)では日本の劇作家別役実とロシアの演出家ポグレヴニチコを招き、ポスト・ベケット時代のチェーホフの新しい読みについて、論じた。また、チェーホフ没後100年記念国際シンポジウム「21世紀のチェーホフ」(2004.9.24.)をコーディネートし、ロシア演劇の強い影響下、活動を続ける韓国の劇団の上演をふまえ、多和田葉子など、多文化の中にチェーホフを読み直す可能性について、論じた。現代ロシアにおけるアヴァンギャルド演劇の継承例として、アナトリー・ヴァシリエフの『オネーギン』をとりあげ、古典文学・芸術のテクストを素材とするポストモダニズム手法の展開を論じた。ロシア・アヴァンギャルドは、芸術によって世界・政治を変えようとした運動ながら、20世紀的普遍主義のパラダイムに純化するあまり、ソ連において全体主義の確立に加担したことは否めない。しかしながら、常に革新を求めるディシプリンにより、独裁制とは対立し、抑圧、粛清されていく。同時に第二次大戦に対する国民に祖国防衛を呼びかけ、当時の政策を正当化する宣伝の役割を演劇は担っていった。ロシア文学会では「大祖国戦争と演劇における祖国防衛のテーマ-アレクサンドル・コルネイチュク作『前線』」と題し、ナショナリズムと演劇の関わりを論じた(2004.10.2.)。現代における演劇のもつ意味を検討する観点から、日本国際文化学会では「多文化共生と文化政策」と題する共通論題で、言語・伝統芸能など文化の伝承と多文化社会について考察を行った(2004.7.4.)。19世紀末から第二次大戦までの時期のヨーロッパ文化はモダイズムとよばれ、20世紀パラダイムの確立期として近年文化研究での再評価が進んでいる。ロシア・アヴァンギャルドもそのような社会変革の機運を背景に「新しい社会の創造」と「新しい芸術表現の構築」を一体化させる運動であったことはすでに多くの研究によって明らかにされている。しかし、あまりにもその革新性・前衛性ばかりが強調されてきた。また、アヴァンギャルド運動を担った当時の芸術家のおかれた状況を美化しすぎたり、芸術家の発言を検証することなく、そのまま肯定してきてしまった面がある。近年、このような短所に注意を払い、ロシア帝政およびソ連時代の政治社会システムを包括的に分析し、その社会状況の中にアヴァンギャルド(もしくはロシア文化の変容といてもよい)を位置づけようとする動きが定着しつつある。それでもなおかつ、ロシア/ソ連を特異領域として強調してしまうエリアスタディーの領域にとどまっているのは演劇・文学研究の今後の課題を逆に明確にしていると思う。
AFLP法を用いたニホンウズラの連鎖地図構築

本研究は最小の家禽であるニホンウズラ(Coturnix japonica)の連鎖地図を構築することを目的とした。AFLP法の日本ウズラに対して最も効率のいい条件をいくつかの制限酵素に対して検討した。制限酵素は、Rare cutterとしてEcoRI、Frequent cutterとしてMseIおよびTaqIの組み合わせで良好な多型バンドが得られることを確認した。本研究に供する連鎖地図作成のためのニホンウズラ標準家系は、(財)日生研で維持されているLWC系とQuv系のF1世代を作成し、このF1世代にQuv系を戻し交雑して構築する標準家系を用いた。分析した交雑個体数は50とした。AFLPプライマーセット377について多型解析を行ったところ、合計1281バンドが多型を示した。これらに対し、連鎖解析を行ったところ同じ遺伝子座に重複するバンドが数多く検出され、実質的なマーカーとしては504バンドが相当した。連鎖群は59群が構築され、連鎖地図の全長は2464cMとなった。また、機能遺伝子に由来するマイクロサテライトマーカーの開発では、ウズラの心臓と胚のcDNAライブラリーを構築し、(GT)nプローブを用いてスクリーニングを行った。その結果、合計25の機能遺伝子マイクロサテライトマーカーの開発に成功した。上述の家系に対して多型解析と連鎖解析を試みた結果、6つの遺伝子で多型を示し、それぞれの連鎖群に位置付けることができた。これらクローンは、連鎖地図の機能遺伝子ランドマークとして非常に有用なマーカーとなと考えられた。この様に機能遺伝子マーカーを含む日本ウズラの連鎖地図構築が成功したが、より詳細な連鎖地図を構築し、生物種間での比較染色体地図構築にはより多くのAFLPマーカーの開発と機能遺伝子を位置付けることの必要性が示唆された。本研究は最小の家禽であるニホンウズラ(Conturnix japonica)の連鎖地図を構築することを目的としている。AFLP法は、バンドがスメアにならず、かつ最も良く多型が検出できる制限酵素を選択することが重要となるため、日本ウズラに対して最も効率のいい条件をいくつかの制限酵素に対して検討した。現在のところ制限酵素はニワトリ同様、EcoRIおよびMseIの組み合わせで良好な多型バンドが得られることを確認した。制限酵素についてはその他有用なものがあるか検討を続ける。本研究に供する連鎖地図作成のためのニホンウズラ標準家系は、(財)日生研で維持されているLWC系とQuv系のF1世代を作成し、このF1世代にQuv系を戻し交雑して構築する標準家系を用いる。この家系は平成12年度内に構築が完了する予定であったが、十分な数の戻し交雑個体が得られなかったため、平成13年度にも再構築を行っている。本年度は分析に十分な数の家系が得られている。このような背景から平成13年度は、機能遺伝子マーカーの開発に重点をおいた。日本ウズラの心臓cDNAライブラリーを構築し、(GT)nマイクロサテライトプローブを用いてスクリーニングを行った。合計37のポジティブクローンが得られ塩基配列の決定を行ったところ、13の遺伝子が確認された。これらクローンはGTマイクロサテライトを含んでいるので、連鎖地図の機能遺伝子ランドマークとして非常に有用なマーカーとなる。平成14年度は機能遺伝子マーカーの開発を続けると共に、構築した家系に対してAFLP解析を重点に行い、数百程度の遺伝的マーカーからなる連鎖地図を構築する予定である。
ソ連・東欧諸国の環境保全型市場経済化と世界資金循環の相互関係に関する総合的研究

旧ソ連については,環境保全型市場経済化と資金源泉の動向をみるために,ロシアを中心として産業構造,投資構造,貿易構造の現状を詳しくフォローアップし,局時に金融・財政政策の有効性,為替レートの変動,民営化の進捗状況を円念に調査した。ロシアについてはマクロと産業部門別の研究だけでなく,構成地域別にも以上の調査を行った。ロシア,東欧経済の産業連関分析を実行し,それと環境分析とをリンクさせる準備を整えた。ロシアの債務返済能力を判定する場合の決め手となる対第三国貿易ならびに対旧ソ連との間の貿易を分析した成果としては,「ロシアの1992年貿易実績」Discussion Paper Series A,No.244,1993,ならびに「旧ソ連から第三国へ....外を向くロシアの貿易」(『エコノミスト』1993年6月22日)を発表した。より総合的な現状分析としては,「新生ロシアの500日」(『ロシア研究』No.17,1993)ならびに「ロシア経済の現状」(日本輸出入銀行海外投資研究所『CIS研究会報告書』1994年)を成果として挙げることができる。また,より専門的な産業構造と貿易構造の分析ならびに価格構造分析を行った成果として,“Output and PriceStructure of the Russian Economy,“Economic Systems Research,Vol.5,No.2,1993を発表した。さらに,ロシアの工業生産構造とロシア極東とについて生産分析と産業連関分析を総合的に行ったものとして,「ロシアの経済成長と産業構造の変化」(環日本海交流圏新潟国際フォーラム,1994年2月18日)を発表した。さらに,ウクライナなどの分析も含むものとして,「ロシア経済の構造:1990-1993年」(『経済研究』第45巻第2号,1994年4月)が公表される。(1)ソ連が91年末に崩壊したので,その後継者であるロシア連邦に焦点を定めて,環境保全型市場経済化の初期条件を産業構造とその双対体系である価格構造に関して明らかにすることを試みた。利用した基本資料は未公刊の1989年・1990年ロシア連邦産業連関表である。また,国際的連関の中で問題を考察するために,貿易構造と貿易価格とにリンクさせて産業構造と価格構造を分析した。さらに,ロシアと旧ソ連以外の第3国との貿易ばかりでなく,ロシアと旧ソ連構成共和国との貿易問題にもメスを入れた。部門別国内(域内)価格と部門別国際(貿易)価格との連関をはじめて明らかにすることに成巧した。さらに,国際競争を無視して合現的価格体系を算定する場合と,国際競争力を考慮した価格体系との間に一定のトレードオフ関係がみられることを明らかにした。(2)新生ロシアの第1年度目にあたる1992年の経済状況を貿易構造について詳細に調べ,外需依存,輸入依存の度合がいかに高っているか,対外債務返済の決め手の1つになるドル建貿易収支ならびに貿易収入がいかなる状況にあるかを利用可能な統計をすべて検討する中で調査した。一般物価上昇とそれを上回るハイスピードのルーブル安進行の状況もこうした考察の一部に位置づけて行った。(3)旧ソ連諸国間取引のハードカレンシー決済の可能性をヨーロッパの戦後の支払同盟等の経験も考慮に入れて分析した。(4)旧ソ連・東欧への西側からの資源移転の可能性を計量的に分析するための準備作業を行った。この場合,先進工業国,途上国,旧ソ連・東欧(東ドイツを除く)という3者連関の中で問題を考察した。また計量モデルは先進国,途上国のみに適用し,旧ソ連・東欧については定性分析の積み上げによって必要資金移転額,キャピタルフローの総額を明らかにするようにし,この結果を計量モデル分析と突き合わせ,調整した。

ロシアを中心として旧ソ連の環境保全型市場経済化と資金循環の動向をみた。具体的には,ロシア・ウクライナの産業構造,貿易構造,投資構造の現状を詳細にフォローアップし,同時に金融・財政政策の有効性,為替レートの変動,民営化の進渉状況を丹念に調査した。同様のことを免契についても実施した。ロシアの債務返済能力を判定する場合の決め手となるところの貿易構造については,「ロシアの1992年貿易室:続」(Discussion PaperSeries A,No.274,1993)ならびに「旧ソ連から第三国へ」(『エコノミスト』1993.6.22)を発表した。より総合的な現状分析としては,「新生ロシアの500日」(『ロシア研究』No.17,1993),「ロシア経済の現状」(日本輸出入銀行海投研報告集,1994)を発表した。また,より立ち入った産業構造・貿易構造・価格構造分析は,“Output and Price Structure,"Economic Systems Research Vol.5.No.2 1993,「ロシア経済の構造:1990-1993年」(『経済研究』第45巻第2号,199年4月予定)として公表済ないし公表予定である。さらに極東ロシア等を含む分析として「ロシアの経済成長と産業構造の変化」(環日本海交流圏新潟国際フォーラム,1994年2月18日)を発表した。
クロマチン形成複合体と細胞核の機能構造解析

本研究はヒストン複合体をはじめとするクロマチン制御複合体解析を通してクロマチン形成、維持、変換の詳細な分子機構およびそのダイナミクスの解明を目指したものである。申請者が独自に確立したエピトープタグを利用した各種ヒストン挿入装置複合体精製法を駆使することにより、クロマチン制御因子を網羅的に同定すると同時に複合体同士の機能的ネットワークとクロマチン形成のダイナミクスについて焦点を絞って以下の解析を行った。現在までに、出芽酵母、分裂酵母において、FLAG/HAエピトープタグを付加したヒストン遺伝子株を構築し、各種ヒストン複合体を精製することに成功した。驚いたことに、出芽酵母、分裂酵母、ヒトでヒストンH3/H4複合体の構成因子が異なることを見いだした。細胞周期制御やタンパク量制御に焦点を当てて機能解析を進めた結果、クロマチン形成の共通の分子基盤と戦略のバリエーションについて明らかとなりつつある。特に、分裂酵母ヒストンH3複合体の主要構成因子の1つとして同定したMlo2は大量発現により染色体分配異常を引き起こす機能不明のタンパク質であったため、現在解析を進めている。さらに、細胞周期に依存したヒストン複合体の動的変換について調べるために、cdc10温度感受性変異株にタグを付加したヒストンH3を導入し、同調培養条件でのヒストン複合体精製を行ったが、顕著な違いは見られなかった。しかし、その過程でヒストン遺伝子の3'UTR領域の新たな機能を見出した。また、大量発現による複合体形成異常など複合体解析の技術的な問題点が明らかとなってきた。今後、それらの問題を解決するとともに、複合体構成因子を欠失させた時に各ヒストンの核内での挙動や複合体構成因子自身のダイナミクスについて免疫染色/GFP融合ヒストンによるイメージングおよびChIP法などの生化学的手法を組み合わせることによりさらに解析を進める予定である。本研究はヒストン複合体をはじめとするクロマチン制御複合体解析を通してクロマチン形成、維持、変換の詳細な分子機構およびそのダイナミクスの解明を目指したものであり、平成17年度は以下の解析を重点的に行った。出芽酵母、分裂酵母において、FLAG/HAエピトープタグを付加したヒストン遺伝子株を構築し、各種ヒストン複合体を精製することに成功した。驚いたことに、出芽酵母、分裂酵母、ヒトでヒストンH3/H4複合体の構成因子が異なることを見いだし、現在、これらの違いからクロマチン形成の共通の分子基盤と戦略のバリエーションについて、細胞周期制御やタンパク量制御に焦点を当てて機能解析を進めているところである。具体的にはcdc10温度感受性変異株にタグを付加したヒストンH3を導入し、同調培養条件でのヒストン複合体精製や、ヒストン過剰発現と染色体観察を行っている。また、タンパク質総量としてはほとんど同じにもかかわらず、細胞抽出液から精製されるヒストンH2A-H2B量は、H3-H4に比較して10倍以上多いことが明らかとなった。さらに、出芽酵母H2A-H2B複合体にはヒストンシャペロンNap1以外にFACT(Spt16、Pob3)が含まれることが明らかとなった。FACTはもともとクロマチン転写伸長を促進する因子として同定されたが、最近ヒストンH2A-H2Bをヌクレオソームから除くことが示唆されている。今後、複合体構成因子を欠失させた時に各ヒストンの核内での挙動や複合体構成因子自身のダイナミクスについて免疫染色/GFP融合ヒストンによるイメージングおよびChIP法などの生化学的手法により解析する。
骨髄由来平滑筋細胞を標的とした病的血管リモデリングに対する遺伝子治療

骨髄由来平滑筋前駆細胞を標的とし超音波・遺伝子封入ナノバブル法を用いて、病的血管リモデリングに対する遺伝子治療効果を実験的に検討した。in vitroにおける遺伝子導入および発現実験として、GFP遺伝子をin vitroにて超音波遺伝子導入法によりCOS細胞へ導入し、その遺伝子発現をELISA法、蛍光顕微鏡下で確認した。またin vivoでの効果・発現実験としてラット頚動脈へ導入し、その遺伝子発現を蛍光顕微鏡下で確認した。今後、遺伝子封入ナノバブルの作成および同方法による機能性遺伝子を用いた効果・発現実験を行う予定である。本研究は、骨髄由来平滑筋前駆細胞を標的とし、超音波・遺伝子封入ナノバブル法を用いて、病的血管リモデリングに対する遺伝子治療効果を実験的に検討することを目的とした。具体的には、血管形成における主要な分子メカニズムであるアンギオポイエチン-1/チロシンキナーゼ型レセプターシステム(以下、Ang-1/TIE2)を標的とし、超音波造影剤に含まれるナノバブルの内部へ遺伝子工学的に作成したTIE2-Ig遺伝子を封入したものを目的部位へリリースし、超音波のキャビテーション作用によりバブルを破壊することで血管内腔から血管内皮細胞へ効率的に遺伝子導入を行う。遺伝子導入された血管内皮細胞がその部位でTIE2-Igタンパクを高発現・高分泌させることで、骨髄由来の平滑筋前駆細胞から産生されるAng-1を競合的に阻害し、病的血管リモデリングを制御できるか否かを検討することである。本研究は、血管形成術後再狭窄、バイパス術後グラフト狭窄などの病的血管リモデリングの根本的な予防および治療法につながるものでると考えられる。本年度は、in vitroにおける遺伝子導入および導入遺伝子発現の確認を行った。既存のGFP遺伝子をin vitroにて超音波遺伝子導入法によりCOS細胞へ導入し、その遺伝子発現をELISA法、蛍光顕微鏡下で確認した。現在、TIE2-Ig,TIE2-GFP遺伝子の構築およびナノバブル内への遺伝子封入・作製に関し検討中であり、また今後はin vivoでの効果・発現実験を行う予定である。本研究は、血管形成術後再狭窄、バイパス術後グラフト狭窄などの病的血管リモデリングの根本的な予防および治療法につながるものであると考えられる。またin vivoでの効果・発現実験として、ラット血管内(頚動静脈)へ導入し、その遺伝子発現をELISA法、蛍光顕微鏡下で確認した。
特別支援を必要とする教育領域におけるコンピュータ・カウンセリング・システムの構築

障害児教育領域(渡部・熊井・三石・為川)カウンセリングシステムの試験運用を継続した結果、1)発達・障害の診断・評価(過誤を避けるため対面が原則)、2)一般的知識の提供、3)主訴の明確化・深化等の類型に加え、2)にはa)発達・障害への理解促進、b)発達・障害への理解・受けとめの準備促進、c)発達・障害への誤解・自己流解釈の予防・解決という下位類型が見出された。c)のための、利用者の既有知識・心理状態に合わせて相談を実施し、知識を提供する仕組みとして、「暗号化通信による個別相談機能」と「会議室機能」が実装された。伝統芸能の伝承教育領域(生田・三石)これまで進めてきた[わざ]の伝承についての研究を踏まえて、伝統文化の伝承というきわめてアナログな事象がいかに、そしてどの程度デジタル化することが可能か、秋田県田沢湖にある「わらび座」で進められている実践と比較しながら検討した。その試みの成果が2004年11月13日に行ったシンポジウムである。当のシンポジウムのテーマは、「わざ」の伝承:アナログか、デジタルか?であったが、その主旨は、これまでの研究で明らかになった「わざ」の伝承おける不可欠な要素が、どこまで「質」を変えずにデジタル化できるのか、また後継者不足や伝承者の高齢化の時代にあって、どのような効率化が図れるのかという点にあった。結果、アナログとデジタルの双方が相互理解を進めることによって、新たな伝統文化の伝承のあり方を積極的に探ることができた。スポーツ教育領域(北村・三石)コンピュータを利用したカウンセリングシステム構築の実現に向け、これまでの研究で明らかにされたカウンセリング構図である1)関係構築、2)自己受容、および3)パフォーマンスの3つのカテゴリーの下位階層を構築するサブカテゴリー全体の構造化をはかった。その結果、心的距離、目標の共有、相互応答、課題認知、自己認知、マネジメントおよびコーチングの7つがサブカテゴリーとして得られた。これらがカウンセリングシステム全体構造の階層構造として整備された。1教育専門領域(伝統芸能の継承教育)に関する調査と分析今年度は「学校教育と民俗芸能」の関係の研究枠組みを探るために、現在実施されている2つの「神楽」の伝承実践の実地調査を試みた。一つは八戸市にある法霊神社での「神楽」伝承と、もう1つは岩手県宮古市にある亀岳中学校での「神楽」伝承の事例である。2教育専門領域(スポーツ教育)に関する調査と分析スポーツの指導場面で求められるカウンセリングの内容、対象、方法等の調査・分析を実施した。指導者は、(1)生涯スポーツの指導者、(2)学校教育での競技スポーツの指導者、および(3)学校教育以外の場での競技スポーツ指導者、を対象とし、それぞれが、指導対象者との関わりの中でどのような心理的支援を求められているのかについて、インタビューによる調査とかかわり場面の観察による実態の把握を行った。3障害児教育領域のカウンセリング分析特別支援を必要とする障害児教育領域の専門知識やカウンセリングの実態を調査・分析するために、時間・場所の制約から解放されるウェブを利用し、かつ双方向性をもったカウンセリングシステムを構築した。カウンセラと利用者の双方向のやりとりのログは電子データとして記録・保管されるため、キーワード及び全文検索によりその場でカウンセリングを利用した人以外の利用者が必要なときに再利用できる。

ログを資料に、初回カウンセリング時の主訴、継続カウンセリングで明らかになった真の相談内容、利用者特性に合わせた受容と情報提供の技術、ログの再利用数について分析を行っている。障害児教育領域のコンピュータ・カウンセリングシステムの評価と改善(渡部・熊井・菅井・三石)障害児教育領域のカウンセリング結果は、主訴、継続実施による深化等により、4種に類型化された。1)発達・障害の診断・評価:障害の有無、種類等の判断を求めての利用であるが、実際の子どもの状態を診ることなく判断はできないため対面カウンセリングに引き継ぐタイプ。2)一般的知識の提供:障害の遺伝に関する一般的知識など、コンピュータを介した対応が可能・効率的なタイプ。3)継続による訴えの深化:初期主訴「ことばの遅れ」等から、継続により「親自身・夫婦の心の問題」等の吐露などカウンセリングが深層へ移行・発展するタイプ。4)その他。伝統芸能の継承教育のコンピュータ・カウンセリングシステムの構築(生田・三石)昨年度に引き続き、「伝統芸能の継承教育」に関する調査及び分析を試みた。具体的には、八戸市法霊神社の「神楽」の伝承実践の調査と神楽士たちへのインタビューを行い神楽の「わざ」伝承の理論的分析を進めた。成果の一部を、都市防災研究所(財)主催の研究会(15年7月)と野間教育研究所主催の研究会(15年12月)で報告した。また、コンピュータによる支援の可能性についても「神楽士たち」を交えて検討しつつあり、成果の一部を「わざの伝承:アナログか?デジタルか?研究会」のHP上でも公開した。スポーツ教育のコンピュータ・カウンセリングシステムの構築・(北村・三石)今年度はコンピュータを利用したシステム構築を視野に入れながら,指導者,選手,親それぞれの間の心理的なかかわり行動の調査を行った.具体的には,スポーツ競技選手,指導者,親を対象とした継続的なカウンセリングを,練習・試合及び日常生活場面での直接・遠隔面接カウンセリングにより実施した.今後は分析によって得られたカテゴリーを構造化し,システム構築に向け,より内容を整備していく計画である障害児教育領域(渡部・熊井・三石・為川)カウンセリングシステムの試験運用を継続した結果、1)発達・障害の診断・評価(過誤を避けるため対面が原則)、2)一般的知識の提供、3)主訴の明確化・深化等の類型に加え、2)にはa)発達・障害への理解促進、b)発達・障害への理解・受けとめの準備促進、c)発達・障害への誤解・自己流解釈の予防・解決という下位類型が見出された。c)のための、利用者の既有知識・心理状態に合わせて相談を実施し、知識を提供する仕組みとして、「暗号化通信による個別相談機能」と「会議室機能」が実装された。伝統芸能の伝承教育領域(生田・三石)これまで進めてきた[わざ]の伝承についての研究を踏まえて、伝統文化の伝承というきわめてアナログな事象がいかに、そしてどの程度デジタル化することが可能か、秋田県田沢湖にある「わらび座」で進められている実践と比較しながら検討した。その試みの成果が2004年11月13日に行ったシンポジウムである。当のシンポジウムのテーマは、「わざ」の伝承:アナログか、デジタルか?
ビジネスレジスターによる企業動態統計の開発

イギリス、フランス、イタリア、フィンランド統計局、米国センサス局など先進国の統計機関を訪問しインタビュー調査を実施、あるいはそれらの統計機関から専門家を日本へ招聘して国際ワークショップを開催、各国のビジネスデモグラフィー及びその基礎となるビジネスレジスターに関する最新の動向について情報を得た。事業所・企業統計調査および経済センサス-基礎調査のミクロデータを用いて日本のビジネスデモグラフィーを試算し、英国と比較を行った。さらにフィンランド統計局のビジネスレジスターのミクロデータを用いて、プロファイリング対象の選定の実験、補完実験、観光統計への応用を試みた。本年度は国際学会での発表を1回、国際ワークショップを2回、海外調査を1回、国内研究集会を2回開催した。1香港で開催された国際統計学会(ISI)において菅幹雄が日本の労働力調査のミクロデータのオーダーメード集計によって作成したビジネスデモグラフィーについて報告を行った。2イギリス統計局のアンドリュー・セイジ氏およびフランス統計局ブライオン・フィリッペ氏を招聘し、ビジネスレジスターに関する国際ワークショップを2013年7月22日に法政大学市ヶ谷キャンパスにおいて開催した。次にアメリカセンサス局のシリン・アーメド氏、ブランディー・ヤーボロー氏、ジェニー・トーマス氏を招聘し、経済センサス、ビジネスレジスター、エディット・アンド・インピュテーションに関する国際ワークショップを2014年2月18日に法政大学市ヶ谷キャンパスにおいて開催した。39月にはイタリア統計局に対するインタビュー調査を実施した。調査には菅幹雄、森博美、宮内環が同行した。その結果、イタリア統計局におけるビジネスデモグラフィー構築が欧米諸国でも最も進んでいることを知り、大変に驚くとともに、その具体的な方法をより詳細に明らかにすることが有益であると思われた。4実証研究については、宮内環が中心となり、フインランド統計局より入手したビジネスレジスターのミクロデータの解析が進められた。非常にきれいなデータであることが確認され、宮内環がインピュテーション、菅幹雄が企業組織構造、宮川幸三が緯度経度情報と各自分担して解析を進めていった。また、菅幹雄、森博美は総務省統計局と共同で統計研修所において、事業所・企業統計調査及び経済センサス基礎調査のミクロデータから愛知県のビジネスデモグラフィーの試算を行った。さらには森博美は八王子市のタウンページを用いた、ビジネスレジスターを構築し、それを用いたビジネスデモグラフィーの分析を行った。1.欧米諸国のビジネスデモグラフィー統計の実情を直接インタビューするために研究分担者である森博美氏を中心としてOECD、ドイツ連邦統計局、フランスINSEE、イギリス統計局でインタビュー調査を実施した。OECDの担当者であるルナーティ女史は日本のビジネスデモグラフィー統計について高い関心と期待を示した。ドイツ、フランス、イギリスのビジネスデモグラフィーについては、各国それぞれの事情があることが判明したが、フランスの登記情報を用いた速い公表、イギリスの手堅いビジネスデモグラフィー統計の作成方法が大いに参考になった。2.フィンランド統計局とは、ビジネスレジスターのミクロデータの使用について交渉を行った結果、入手することに成功した。企業のファイルと事業所のファイルから構成されており、事業所と企業の関係をどのようにビジネスレジスター上で描いているのか等、わが国のビジネスレジスター構築の上で参考になる。現在、研究分担者である宮内環氏及び宮川幸三氏がフィンランド語から和訳しながら、内容の詳細な吟味を行っている。3.ビジネスデモグラフィー統計の研究を進めるうち、労働力調査を用いた自営業のビジネスデモグラフィー統計の作成可能性が提案されたので、総務省統計センターに依頼し、労働力調査のオーダーメード集計を依頼し、その結果を入手した。現在、代表者の菅幹雄が中心となって内容の吟味を進めている。4.研究分担者である宮川幸三氏が中心となり、起業家精神指標の定義についての整理を行った。菅幹雄と森博美は総務省統計研修所と共同で日本についてビジネスデモグラフィーの試算を行い、その結果を英国と比較した。そして、その内容を英文論文にまとめ、英国統計局のアンドリュー・アレン氏に送り、貴重なコメントを得た。さらにフィンランド統計局から提供されたミクロデータを用いて菅幹雄は「ビジネスレジスターを用いたプロファイリング対象の選定の実験」、宮内環は「ビジネスレジスターの補完実験」、宮川幸三は「ビジネスレジスターの観光統計への応用」を実施した。そしてフィンランド統計局のユッカ・パコラ氏およびオッシ・ヌルミ氏を東京に招聘し、法政大学市ヶ谷キャンパスにおいて11月18日に研究成果検討会を開催し、両氏から高い評価を得た。さらに11月19日には国際ワークショップを開催し、研究成果を発表するとともに、両氏からフィンランド統計局のビジネスレジスターについて最新の情報を提供された。またイタリア統計局のカテリーナ・ヴィヴィアーノ氏とパトリツィア・チェラ氏を東京に招聘し、3月に法政大学市ヶ谷キャンパスで国際ワークショップを開催し、イタリア統計局のビジネスレジスターであるASIAについて、さらにそれを用いて作成されたビジネスデモグラフィーについて講演してもらい、EU諸国でも進んでいるイタリアの最新の動向について情報を得た。

以上の研究により、国際比較可能なビジネスデモグラフィー構築のためには、統計単位や産業分類などの統計概念の共通化だけでなく、行政記録情報のエディット・アンド・インピュテーション(審査・補完)が重要であることが判明し、今後のビジネスレジスター及びビジネスデモグラフィーの整備の方向性が明らかとなった。経済統計当初の計画通り、国際ワークショップ及び海外調査を順調に開催し、欧米諸国のビジネスデモグラフィー及びその基盤となるビジネスレジスターの情報を詳細に入手できている。実証研究については、フインランド統計局より入手したビジネスレジスターのミクロデータの解析、事業所・企業統計調査及び経済センサス基礎調査のミクロデータから愛知県のビジネスデモグラフィーの試算が進められた。また香港で開催された国際統計学会で報告するなど、成果の公表も進めた。1)欧米諸国のビジネスデモグラフィーの調査については、ドイツ、フランス、イギリスの主要国の統計機関に対するインタビュー調査が実現し、実情を把握することができた。またOECDを訪問しルナーティ女史との連携が確認でき、OECDにおけるビジネスデモグラフィーの整備の方向性も確認できた。2)幸いにもフィンランドを訪問することなしに、旧知のマルコ氏を通じ、同国のビジネスレジスターデータを入手することができ、その内容の吟味にとりかかれた。3)労働力調査のオーダーメード集計によって、日本についても自営業のビジネスデモグラフィー統計が構築できる見通しがたった。4)起業家精神指標の定義についての整理を行った。1.欧米諸国で最も進んでいることが判明したイタリア統計局のビジネスデモグラフィーを明らかにするために、イタリア統計局員を日本に招聘し、国際ワークショップを開催する。2.フィンランド統計局のビジネスレジスターのミクロデータを用いた分析結果をまとめ、フィンランド統計局員との研究会を開催する。3.事業所・企業統計調査及び経済センサス基礎調査、活動調査のミクロデータから日本全体のビジネスデモグラフィーの試算を進める。1)まだインタビューを行っていないイタリア統計局、アメリカ・センサス局、カナダ統計局に対するインタビューを実施し、主要国のビジネスデモグラフィー統計の進展具合を網羅的に把握する。2)フィンランドのビジネスレジスターのミクロデータを用いた実験的分析を進める。統計単位の定義を変更した場合に、企業動態統計の指標がどのように変わるかという実験である。3)起業家精神指標の作成・分析に関する研究を進め、わが国の実情にあった指標を提案する。4)労働統計を用いて自営業に関するわが国のビジネスデモグラフィー統計を構築する。あごの中の腫瘍を摘出する手術を昨年夏に行った。その療養に時間がかかったため、購入する資料の選定を行う時間がなかったため。
膀胱癌における抗アンドロゲン療法の作用メカニズムの解明

膀胱癌は男性に3-4倍多く発生し、基礎研究でアンドロゲンレセプター(AR)シグナルの関与が報告されてきた。我々は前立腺癌に対する抗アンドロゲン療法(ADT)が膀胱癌の再発を抑制することを世界で初めて報告(Oncotarget. 5, 12665-74)した。臨床的にも我々の報告につづき、膀胱癌の発生、再発についての後ろ向き研究で抗アンドロゲン療法の有効性が複数報告されてきている。このような背景から、前立腺癌で確立している安全性の高い抗アンドロゲン療法の膀胱癌へのドラッグリポジショニングを目指し、前向き臨床試験を検討している。一方、膀胱癌におけるARの作用メカニズムの解明を目指し、同一患者で抗アンドロゲン療法前後に再発した膀胱腫瘍の手術検体からRNAを抽出し、マイクロアレイによりTranscriptomeを解析、転写因子であるARの標的分子を網羅的に探索した。この中からいくつかの候補遺伝子を抽出し、膀胱癌細胞株を用いてそれらの候補遺伝子の確認を行っている。AR発現している膀胱癌細胞株、同細胞株のARノックアウト細胞株、AR陰性でARを強制発現させた細胞株等を用いて遺伝子XがARシグナルによって発現制御されていることが分かってきている。今後、遺伝子Xについてマウスを用いて機能解析を行うことで、膀胱癌におけるARシグナルの標的分子であることを確認されれば、新たな膀胱癌の治療標的となることが期待される。前年度までに細胞株実験を終えて、マウス実験に移行する予定であったが、細胞実験の結果が出ず、新規のターゲットの絞り込みを行っているため網羅的探索で抽出した膀胱癌におけるAR標的分子に関して細胞実験で予想通りの結果が出なかったため、他の候補遺伝子についての解析を行っていく。明らかなフェノタイプが確認できた場合にはマウス実験によってより詳細な機能解析を行っていく。この中から現在いくつかの候補遺伝子を抽出し、膀胱癌細胞株を用いてそれらの候補遺伝子の確認を行っている。現在までに、遺伝子XがARシグナルによって発現が増加することをPCR、Western blotで確認した。さらに、手術検体における発現を免疫染色で確認を行っている。今後、膀胱癌細胞株、マウスを用いて遺伝子Xの機能解析を行うことで、膀胱癌におけるARシグナルの標的分子であることを確認されれば、新たな膀胱癌の治療標的となることが期待される。同一患者で抗アンドロゲン療法前後にTURBTを行っている症例のホルマリン検体からRNAを抽出し、マイクロアレイによりTranscriptomeを解析、転写因子であるARの標的分子を網羅的に探索した。また、膀胱癌細胞株を用いて標的分子の発現がARシグナルで増加することを確認した。標的分子の選定に時間がかかり、機能解析に至っていない。前年度までに細胞株実験を終えて、マウス実験に移行する予定であったが、細胞実験の結果が出ず、新規のターゲットの絞り込みを行っているため標的遺伝子の機能解析を膀胱癌細胞株、動物実験を用いて行っていく。網羅的探索で抽出した膀胱癌におけるAR標的分子に関して細胞実験で予想通りの結果が出なかったため、他の候補遺伝子についての解析を行っていく。標的遺伝子の絞り込みが遅れたため、機能解析を行うことができなかったため。今後、膀胱癌細胞株、マウスを用いた機能解析を予定する。

当初の予定では候補遺伝子の絞り込み、マウス実験、プロテアソーム解析等の機能解析に進んでいる予定であったが、これが遅れたため。今後複数の候補遺伝子を同時に検討していき、ターゲットを絞り込んでいく予定。