hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
劣調和関数の確率論的解析と値分布論への応用

竹腰は、完備リーマン多様体上のp-ラプラシアンと平均曲率作用素に対する最大値原理を、ある体積の増大度の条件の下、確立し、リッチ曲率が非負な計量の共形変形、ガウス写像の調和性、部分多様体の極小性、定曲率双曲空間上のグラフの平均曲率の挙動等に関する微分幾何的応用を得た。金子は、グリーンの公式が局所性を持つディリクレ空間で確立される事を指摘した。これはへリンガー積分とあわせる事で再帰性を判定するために有効に用いられる。これを用いて、p進体の上のランダムウオークの再帰性の判定が可能な事を示した。また,ディリクレ空間の上のグリーンの公式は、逆問題の一意性問題で領域の境界の滑らかさを弱い条件に置き換えるためにも有用であることがわかった。以下に各分担者の今年度の成果を記す。厚地:多様体上の劣調和関数のブラウン運動の道に沿った漸近的性質を利用して、極小曲面の非存在条件について考えた。これにより、Jorge-Xavier等の結果を一般化することができた。また、確率的完備でGauss写像の値分布が、完備な計量を持つときとまったく異なるような極小曲面を構成した。小谷:ブラウン運動あるいは拡散過程のいろいろな汎関数の極限定理、あるいは期待値の漸近的性質について研究している。ブラウン運動の符号が変わる加法的汎関数の最大値の分布の末尾の漸近的性質について、解析的な方法とexcursion測度を援用する確率論的な方法とを組み合わせることにより、Sinaiの結果を拡張する形で結果を得た。竹腰:完備リーマン多様体の体積の増大度による最大値原理の応用としてグラフの平均曲率に関するTkachevの結果を一般化し、負なスカラー曲率を保存する共形変換の等長性に関するYau,Rigoli-Setti-veron達の結果をも一般化することに成功した。小松:強擬凸領域のベルグマン核と不変なゼゲー核を位数s/2のソボレフ・ベルグマン核とみなす.s=0,1のとき特異性に不変量が含まれる様子は相当具体的に判った.sが整数のとき,内積を忘れて超幾何函数の型の特異性を考えると,不変性より0【less than or equal】s【less than or equal】n+1となり,逆もある意味で正しい.sが負のときの様子はいま書いている.金子:以前より,ディリクレ形式の理論とp-進体の上の確率過程に興味があり,一編の論文を用意していたが,さらに論文の内容を進展させる事ができた。さらに,p-進体の上の確率微分方程式の理論も構築する事ができた。科研費で購入したソフトウェアが,これらの研究活動の中で大変役立った。厚地:劣調和関数の確率解析的方法の応用として、極小曲面の関数論的性質の研究を行った。まず、ユークリッド空間内の極小部分多様体上のブラウン運動について考察した。その結果、複素ユークリッド空間内の複素部分多様体上の有理型関数については、もしそれが超越的ならば(これはユークリッド空間の時と同じように特性関数を使って定義する)、除外点は高々2個でであることを示した。よって、非超越的('代数的')な関数がどのような振る舞いをするかが次の問題となる。また、劣調和関数の解析を通じて、ブラウン運動が再帰的である多様体からアダマール多様体への調和写像のある種のリュービル型定理も得た。これらの研究結果は現在執筆中である。
高齢化社会に向けての修復材料の開発-光硬化型グラスアイオノマーの試み-

市販品を用いて辺緑封鎖性の向上を目的に、研磨時期による影響について検討した結果、以下の成果を得た。1.充填用光硬化型グラスアイオノマー(以下、光硬化型)の窩洞辺緑に対する適合性を考察する目的で、充填用従来型グラスアイオノマー(以下、従来型)と比較しながら、円形窩洞(入歯エナメル質及びテフロン)辺緑部との間に生じる間隙、吸水膨張、人歯に対する接着強さを測定した。光照射直後には、光硬化型、従来型ともにエナメル質窩洞の場合約0.4%の間隙(窩洞直径に対する割合)を生じたが、1日間浸水させることにより有意に減少し、光硬化型の場合には間隙は消滅した。吸水膨張、接着強さが増加することから考えて、これらが間隙の減少に大きく関与しているものと思われた。2.光硬化型3種、対象として類似品1種、従来型1種,光重合型コンポジットレジン1種を用いて、光照射(硬化)直後に研磨した場合と1日浸水後研磨した場合について、円形窩洞辺緑部と充填物の間に生じた間隙の最大部分の幅径を計測した。光照射(硬化)直後に研磨した場合、すべての材料で人歯洞辺緑部との間に間隙を認め、どの修復材についても1日間浸水後に研磨した方が有意(p<0.05)に減少することがわかった。これは、吸水膨張、物性の向上やそれに伴う歯質接着性が大きいことによると想像された。3.光硬化型1種、その類似の新製品1種、従来型1種を用いて、光照射直後に研磨した場合と1日浸水後に研磨した場合の人歯V級窩洞の全周にわたる間隙を測定した。その結果、いずれの修復材についても光照射直後に研磨した場合に比べて1日浸水後に研磨した方が間隙の発生が少なく、より好ましい臨床結果が得られるのではないか、と考えられた。修復用光硬化型グラスアイオノマーがまだ我国に市販されていなかったため、平成4年当初度には裏層用光硬化型グラスアイオノマーを利用して、修復用として活用するため、粉液比の増加が窩洞(人歯象牙質およびテフロン製)辺縁部と充填物の間に生じる間隙、人歯象牙質に対する接着強さに及ぼす影響を検討し、修復用として適切な粉液比を類推し、充填用に流用しようと試みた。その結果、窩洞辺縁部と充填物の間に発生する間隙は、象牙質の場合には粉末量を増加しても有意に減少しない(p>0.10)が、テフロン窩洞の場合には有意に減少した(p=0.05)。すなわち、粉液比とテフロン窩洞間隙の間には高度に有意な関係(Fuji Lining LC:GC社の場合、r=-0.985、p<0.001; Vitrebond:3M社の場合、r=0.988、p<0.001)があった。象牙質に対する接着強さは、Fuji Lining LC、Vitrebond共に粉液比が0.92.4g/1.0gの範囲内では粉末量の増加に伴い有意に増加した(p=0.05)。上述の結果から、平成4年度の計画である裏層用光硬化型グラスアイオノマーを充填用として流用する場合の粉液比として粉液比=2.42.9g/1.0gの範囲が適当であると判断した。しかし、修復用として気掛かりな辺縁部の間隙は、この範囲の粉液比でも裏層用の粉液比と比較してなんら有意な減少はみられなかった(p=0.05)。

その理由として、まず粉末量の増加に伴い象牙質に対する"濡れ"が悪くなったため。また、硬化途中、グラスアイオノマーが象牙質と接着するため、グラスアイオノマー自身の硬化収縮により、練和泥が充填時と比較して、より象牙質壁に流動して間隙発生を最小限に留めるようとするが、この流動性が鈍くなったため、グラスアイオノマー自身の硬化収縮は減少するが、結局は間隙の減少にはなんら影響しなかったのではないかと考えた。次の実験として、修復用光硬化型グラスアイオノマー(Fuji II LC:GC社)が市販されたため、この材料の適切な術式について検討した。まず、硬化直後に発生する辺縁部間隙について測定した。その結果、約0.4%(窩洞直径に対する比率)の間隙が発生することが判明した。そこで、間隙発生の防止策として、研磨時期を遅らせた場合の効果について、現在実施中である。市販品を用いて辺縁封鎖性の向上を目的に、研磨時期による影響について検討した結果、以下の成果を得た。1.充填用光硬化型グラスアイオノマー(以下、光硬化型)の窩洞辺縁に対する適合性を考察する目的で、充填用従来型グラスアイオノマー(以下、従来型)と比較しながら、円形窩洞(人歯エナメル質及びテフロン)辺縁部との間に生じる間隙、吸水膨張、人歯に対する接着強さを測定した。光照射直後には、光硬化型、従来型ともにエナメル質窩洞の場合約0.4%の間隙(窩洞直径に対する割合)を生じたが、1日間浸水させることにより有意に減少し、光硬化型の場合には間隙は消滅した。吸水膨張、接着強さが増加することから考えて、これらが間隙の減少に大きく関与しているものと思われた。2.光硬化型3種、対象として類似品1種、従来型1種、光重合型コンポジットレジン1種を用いて、光照射(硬化)直後に研磨した場合と1日浸水後研磨した場合について、円形窩洞辺縁部と充填物の間に生じた間隙の最大部分の幅径を計測した。光照射(硬化)直後に研磨した場合、すべての材料で人歯窩洞辺縁部との間に間隙を認め、どの修復材についても1日間浸水後に研磨した方が有意(p<0.05)に減少することがわかった。これは、吸水膨張、物性の向上やそれに伴う歯質接着性が大きいことによると想像された。3.光硬化型1種、その類似の新製品1種、従来型1種を用いて、光照射直後に研磨した場合と1日浸水後に研磨した場合の人歯V級窩洞の全周にわたる間隙を測定した。その結果、いずれの修復材についても光照射直後に研磨した場合に比べて1日浸水後に研磨した方が間隙の発生が少なく、より好ましい臨床結果が得られるのではないか、と考えられた。
末梢循環不全を改善するための研究-足浴ブーツの考案とその効果-

今年度は,昨年度考案した足浴ブーツを、高齢者施設において実際に使用し,深部体温の上昇や末梢循環の促進効果が得られるか否かを検討した。研究方法は,以下の通りである。対象者:特別養議老人ホーム入所中の後期高齢者15人方法:入眠直前に3040分間の足浴ブーツによる下肢温罨法を実施する。1)実施前後に,赤外線熱画像装置(Avio Thermography)を用いて四肢末梢からの熱放散の有無を撮影する2)入眠前の足浴ブーツ使用を約2ヶ月間に渡り毎日実施。唾液中のメラトニンリズムアクチウォッチによる睡眠覚醒リズムアンケートによる主観的睡眠感を比較検討し,睡眠活動リズムへもたらす変化も同時に検討する。本研究において考案した足浴ブーツは高分子吸収体を素材としており,どのような形態にでも加工可能である。現在,本研究で得られたデータの解析中であるが,このような素材での下肢温罨法で,末梢循環促進効果が明らかとなれば,いつでも,どんな体位でも,安静臥床を強いられる患者の緊張や不安,入眠困難といった苦痛を緩和することが可能となろう。また,足浴と比較しても,足浴ブーツによる温罨法はより簡便な方法であり,術後患者に安楽や爽快感を提供する際に,より迅速で適切なケアを実施することが可能となる。また,施設入所中の高齢者へ入眠を促す際に行われる,夜間入浴や夜間足浴に匹敵するケアとしても,足浴ブーツによる温罨法は,極めて有効なケアになり得るだろう。本年度の実績は以下の2点である。1.「片足足浴による対側への循環促進効果」について足浴ケアは保清目的の他、温熱作用、循環促進作用など、多くの優れた効果を期待して行われる。しかし、疾患により片足にしか実施できない場合、生理作用は不明な点が多く、専ら保清の為に行われることが多い。本年度は、足浴が片足にしか実施できない場合、その効果は反対足にまで波及するのか否かを明らかにすることを目的として、成人女性10名に対して、一定条件下で片足に足浴を50分間行い反対側の膝部内側・足背・第一趾背部における皮膚血流量・皮膚表面温度・皮下温度の変化を経時的に調べた。その結果、足浴実施側においても対側においても、皮膚血流量の増加、皮膚表面温度および皮下温度の上昇が認められた。即ち、片足足浴が対側に、温熱・循環促進効果をもたらしたと考えられる。これにより、牽引やギプスなどの制限を受ける患側下肢にも、健側への足浴により血流促進効果を得られることが明かとなった。2.「足浴ブーツによる循環促進効果」1.の結果を踏まえて、安全・安価・簡便な温器法の材料として、高分子吸収体が最も適している高分子吸収体を原料としたホットパックを用いて「足浴ブーツ」を新たに作成し、成人女性7名に対して片足への温羅法を行った。反対側の膝部内側・足背・第一趾背部における皮膚血流量・皮膚表面温度・皮下温度の変化を経時的に調べ、足浴による変化と比較検討した結果、「足浴ブーツ」にも足浴と同様の温熱・循環促進効果が認められた。これにより、足浴に代わる簡便かつ安価な方法として「足浴ブーツ」を看護技術に応用できる可能性が示唆された。
S.mutans,S.sobrinusを選択的に溶解する溶菌酵素の研究

昨年度の研究により、Streptococcus mutantsの産生する分子量107kDaの溶菌酵素をコードする遺伝子のクローニングおよび遺伝子欠損株の作製を行った。今年度では、His-tag融合したリコンビナントタンパクを大腸菌の系を用いて大量発現させ、目的の酵素の大量精製を試みた。その結果、大腸菌の菌体破砕画分からNi-NTAレジン精製後、疎水(Phenyl)クロマトグラフィーを行うことによりクマシーブルー染色で単一のタンパクバンドを得ることができた。収量も1リットルの培養液からおよそ10mgの標品が得られ、大量に精製を行う系が確立できた。また、得られた精製酵素を用いてS.mutansの精製ペプチドグリカンを消化し、消化産物についてアミン末端の増加および還元糖の増加を検討したところ、還元糖の増加が認められた。また、ペプチドグリカンの糖の構成成分であるN-acetylglucosamineとN-acetylmuramic acidの還元糖の増加を検討した結果、N-acetyl-muramic acidの増加が認められたことから、この溶菌酵素はmuraminidaseであることが明らかになった。この酵素の溶菌活性の至適条件を検討した結果、リン酸緩衝液中でpHが6前後でかつ100mM NaClおよび75mM CaCl_2存在下で最大の活性を持つことが明らかになった。得られた精製酵素を用いて種々の口腔レンサ球菌に対する溶菌活性を比較検討した結果、S.mutansおよびS.sobrinusに対しては強い活性を示したが、その他のレンサ球菌(S.sanguis, S.salivarius, s.mitis)にはほとんど活性が認められなかった。Streptococcus mutans菌体を含有するアクリルアミドゲルを用いた溶菌酵素の検出法により、Streptococcus mutans MT703R株菌体より4%SDSで抽出した画分に溶菌活性を認める分子量約100kDaと80kDaのタンパクバンドを2本検出した。4%SDS抽出画分を濃縮したサンプルを電気泳動後PVDF膜に転写し溶菌活性の認められた2本のバンドのN末端シーケンスを行った。得られたN末端シーケンスの結果を用い、現在公開されているS. mutansのゲノム情報よりこのアミノ酸配列をコードする遺伝子を得た。この遺伝子のコードするタンバクは979個のアミノ酸からなり分子量107kDaであった。相同性検索の結果、このタンパクのC末端半側はlysozymeやmuramidaseと相同性が認められ、N末端半側は種々の溶菌酵素の細胞壁結合ドメインと相同性を認めた。得られた遺伝子から予想されるアミノ酸配列の結果により2本の溶菌バンドは同じタンパク由来であることが示唆された。この遺伝子を用いてHis-tag融合リコンビナントタンパクを作製、精製したところS. mutansに対して溶菌活性を示した。また、この遺伝子を不活化した変異株を作製したところ、親株で認められる2本の溶菌活性を示すバンドは消失した。得られた変異株は親株に比べて長い連鎖を示したことからこのタンパクはS. mutansの細胞分離に関与していることが示唆された。
脳の高次機能解析のための神経細胞内局所翻訳型ウイルスベクターの開発及び応用

神経細胞は局所翻訳と呼ばれる、mRNAの神経突起内輸送・翻訳を行っており、脳の高次機能を制御すると考えられているが、その機序は殆ど不明である。本研究では、ウイルスRNAによる局所翻訳利用に着目し、解析することでウイルスエレメントを利用した局所翻訳特異的な発現ベクターを構築し、局所翻訳が関与する脳の高次機能の全容解明のための基盤情報を得る神経細胞は局所翻訳と呼ばれる、mRNAの神経突起内輸送・翻訳を行っており、脳の高次機能を制御すると考えられているが、その機序は殆ど不明である。本研究では、ウイルスRNAによる局所翻訳利用に着目し、解析することでウイルスエレメントを利用した局所翻訳特異的な発現ベクターを構築し、局所翻訳が関与する脳の高次機能の全容解明のための基盤情報を得る
CBC検査の白血球粒度分布パターンを用いた感染制御支援システムの構築

「MRSA感染症における白血球粒度パターンを用いた抗生剤迅速効果判定法」MRSA感染患者への抗生剤の効果判定には、CBCスキャッタグラムのパターンの差分変化量を見ることで投与後1日目に迅速に判定することが可能となった。「CBC検査の白血球粒度分布パターンを用いたインフルエンザパンデミックの事前検知」インフルエンザに罹患しやすい患者は白血球スキャッタグラムのパターンにより分類可能で、さらに、膨大な非発症集団の白血球スキャッタグラムパターンの変化により、パンデミックの予測が可能となり、効率的な事前予防対策に力を注ぐことが可能となった。データ解析環境の整備の課題では、大容量メモリを搭載したワークステーションにCBC検査から得られた計測生データと投薬歴データおよび細菌検査データを結合したデータベースを作成し、連結不能匿名化処理を行った。CBC計測生データの精度は、季節変動と感染流行時に変動する領域を避けて、全データを対象としたトランケーション平均を評価する方法で、計測精度が保たれていることを確認した。投薬クールイベントの検出アルゴリズムの開発課題では、薬歴と特定の細菌の検出期間を動的かつ高速に検索できる方法を考案し、データベースサーバに実装を行った。薬歴の場合は、休薬期間の長さ、細菌検出期間の導出の場合は、未検出期間を入力パラメータとして、考案したアルゴリズムで解くことにより、短時間で各種イベント情報を高速に得ることができた。これにより、投薬あるいは細菌感染が始まった日を基準に、検査値の変化を調べる解析が容易となった。高知大学の過去33年間の抗癌剤182薬剤、および、抗生剤268薬剤を対象とした投薬クールの検出の事例では、1薬剤あたり、中央値98ミリ秒となり、細菌データのイベント検出の事例では、1菌種あたり中央値488ミリ秒と実用的な検出スピードを得ることができるようになった。このシステム基盤を元にして、本研究の主テーマとなる、白血球粒度パターンの解析について、感染症に罹患しやすいパターンの導出と抗生剤治療効果の迅速判定について解析を開始した。MRSAの初回菌検出日と抗生剤治療開始日を基準として、相対的な白血球粒度パターンの変化を抗生剤毎に解析し、その結果を評価した。この結果、抗生剤投薬後1日以内のCBC粒度パターンの変化で、効果判定ができることが判明した。また、インフルエンザのテーマでは、事前に発症しやすい白血球粒度パターンを持つ患者を検出することが可能であることが示された。MRSAに感染し、その直後に抗生剤治療を行った症例に対して、選択薬剤種別ごとにパターンの変化を評価した。抗生剤は、薬剤選択成功群として、抗MRSA薬であるLZD、VCM、TEIC、ABK、DAP、そして、薬剤選択失敗群として、MEPM、SBT/ABPCについて、時系列差分パターンの比較を行った。血球計数検査(Sysmex XE-2100)から得られた計測生データを用い、MRSAが14日以内で連続検出された最初の検出イベント日から、7日以内に抗生剤治療のクールが開始された事例を対象とし、抗生剤治療前と治療後12時間後、1日後、2日後、8日後の直前CBC検査の白血球粒度データを用いて、パターンの変化を解析した。菌検出イベントおよび、薬剤投薬開始イベントの検出は、昨年度開発した、動的クールイベント検出法のアルゴリズムを用いた。血球計数検査が投薬開始前後に測定され、VCMが選択された335例、LZDが選択された121例、TEICが選択された6例、そして、MEPM、159例、SBT/ABPCを選択された58例について、パターンの変化の差分比較とROC分析を行った。各抗生剤投与12時間後に、VCM、LZDは共通して、好中球領域の上方の幼若顆粒球から好中球領域(DIFFチャンネルSCC=144、SFL=168付近)に細胞数の増加が認められた。TEICは、単球の増加傾向が認められた。一方、MEPMおよびSBT/ABPCでは、上記領域の細胞数増加は認められない結果が得られた。仮に、VCM選択を成功群、SBT/ABPCを選択したグループを失敗群と仮定してROC解析をしたところ、この領域のAUCは0.71となった。MRSAの抗生剤治療において、投薬開始後12時間の評価として、白血球粒度パターンの変化をモニタリングすることで、抗生剤の迅速効果判定ができる可能性が示唆された。MRSA感染直後の抗生剤治療における、治療効果の判定法として、少なくとも投薬後12時間後のCBCの差分パターン変化を見ることにより、診断可能であることが示唆された。この成果は、国際検査血液学会、および、医療情報学会連合大会発表を行った。・片岡浩巳,畠山豊,奥原義保,久原太助,松村敬久,杉浦哲朗: MRSA感染症における白血球粒度パターンを用いた抗生剤迅速効果判定法,第35回医療情報学連合大会,沖縄, 2015.なお、第35回医療情報学連合大会での発表では、優秀演題賞を受賞することとなった。CBC検査から得られた膨大な計測生データを用いた、インフルエンザの流行ならびにパンデミックを事前に検知し、院内での感染対策に対して予防的な先手を打つための、効果的な情報検知を目的とした解析を実施した。

CBC検査が実施された4年間約60万検体のビッグデータを用い、罹患しやすい患者の事前検知と、非発症集団のビッグデータのパターンの動きから流行の事前検知を行うことができることを発見した。「インフルエンザに罹患しやすい患者のスキャッタグラムパターン」の研究では、インフルエンザ迅速抗原検査陽性日を起点に7日前、3日前、当日、7日後、14日後、30日後の白血球パターンに対する検査診断特性を計算し、各パターンマトリクスのAUC値を比較した。7日以前の罹患しやすい患者群のパターンは単球および成熟好中球が少ない患者であり、抗原検査陽性日3日前から、リンパ球、単球、赤血球ゴースト、好中球領域が急激に減少する共通パターンが得られた。「インフルエンザパンデミックと非発症集団のパターン変化」の研究では、非感染集団を対象として、インフルエンザ罹患数と白血球パターンの相関性を計算し、相関の高いスキャッタ座標を特定した。WBC/BASOチャンネルのSSC=11,FSC=21座標領域(WBC/BASOチャンネルでインフルエンザの最も検査診断特性の高い領域の近傍)が最も相関性が高く、インフルエンザの発症数に同期した変化がみられる領域が確認された。インフルエンザに罹患しやすい患者は白血球パターンマッチングにより分類でき、パンデミック発生時の非感染集団での変化が認められた時は、さらなる事前予防に力を注ぐことが可能となった。「MRSA感染症における白血球粒度パターンを用いた抗生剤迅速効果判定法」MRSA感染患者への抗生剤の効果判定には、CBCスキャッタグラムのパターンの差分変化量を見ることで投与後1日目に迅速に判定することが可能となった。「CBC検査の白血球粒度分布パターンを用いたインフルエンザパンデミックの事前検知」インフルエンザに罹患しやすい患者は白血球スキャッタグラムのパターンにより分類可能で、さらに、膨大な非発症集団の白血球スキャッタグラムパターンの変化により、パンデミックの予測が可能となり、効率的な事前予防対策に力を注ぐことが可能となった。対象データのデータ連結と匿名化、および、クレンジング作業が完了し、データウエアハウスの構築ができた。さらに、薬剤および細菌領域のイベント検出を効率的に行うことができるアルゴリズムを開発し、データベースサーバに機能を実装した。MRSA感染者に対する抗生剤治療の迅速効果判定のテーマでは、最適選択薬の代表としてバンコマイシン(VCM)、そして、失敗群としてメロペン(SBT/ABPC)が選ばれた事例を元に1日後の白血球粒度パターンの変化を比較した。これにより、少なくとも1日後には、効果判定ができるパターンの存在を確認した。投薬クールイベント検出アルゴリズムに関しては、第34回医療情報学連合大会「動的クールイベント検出法の開発とその適用事例の性能評価」、そして、抗生剤治療の迅速効果判定に関しては、第61回日本臨床検査医学会学術集会「白血球粒度パターンを用いた抗生剤迅速効果判定法」で発表を行った。本研究で得られた成果の外的妥当性の評価を行う目的で、他病院でもデータ収集を開始し、解析を行う準備を進める。また、できるだけ早期に一般病院への展開する目的で、一般の検査機器でも利用可能なデータである幼若顆粒球数の時系列変動に注目し調査を実施する。また、幼若顆粒球数の分類に関しても、細分類が必要であるかを詳細に検討を実施する。また、スキャッタ座標の精度の問題がある可能性も考慮に入れ、その対策を考える。MRSA以外の他の細菌について、たとえば、耐性緑膿菌、ESBLなどについては、症例数が集まり次第解析を実施する。
ユリアヌスの宗教復興構想の形成と後期ローマ帝国におけるその受容

今年度は学位論文の完成に向けて作業を行った。7月にオーストラリア・カトリック大学メルボルン校で開催された西太平洋教父学会でキリスト教著作家から見たユリアヌス像の概要について口頭発表を行い、8月にオクスフォード大学ボードリアン図書館で資料調査を行った結果、新たな課題が明らかになった。キリスト教著作家の著作にみられるユリアヌス像については、その資料の性質と目的に応じて、彼らの理想とする「正しい宗教」から逸脱した存在としてユリアヌスが描かれていることは確かだが、「背教者」像の描かれ方には史料の目的に応じて大きな差異がある。ナジアンゾスのグレゴリオスやアレクサンドリアのキュリロスの『ユリアヌス駁論』のような著作家個人の思索を深めるための論考、ヨハネス・クリュソストモスの著作に代表される特定の教会共同体の一般信徒を聴衆に想定する講話、ソクラテスやソーゾメノスの『教会史』を代表とする歴史叙述、それぞれの叙述の特徴と5世紀までの時代的変遷を検討したが、背景についてはさらに考察が必要である。また、ユリアヌスの宗教思想に大きな影響を与えた新プラトン主義者、イアンブリコスの祭儀論の実態を検討する必要が生じた。近年の新プラトン主義研究の隆盛を背景に、ユリアヌスを「新プラトン主義的一神教徒」とする見解が主流になりつつあるが、実際のユリアヌスは都市共同体を支持基盤とする伝統的な多神教祭儀を推進したのであり、必ずしも「一神教徒」という指摘は的確ではない。イアンブリコスの祭儀輪には「宗教的熟練者の技術」と.しての神働術を称揚する秘教的な側面は確かに存在するが、一般の人々と神々の交流の手段としての伝統的多神教祭儀の存在意義をむしろ肯定している。それに加えて、イアンブリコスの祭儀論の政治的側面に注目し、ユリアヌスの儀礼論と比較する必要がある。さらに研究を深め、学位論文を来年度中に完成させる予定である。まず、ユリアヌスの宗教思想における「敬神」(eusebeia)概念の特質を検討した。ユリアヌスの考える「敬虔な信仰」は、宗教的儀礼の実践や日常生活における社会倫理の実践と密接に関連する倫理的志向の強い理念であり、全面的に新プラトン主義の影響下にある思想というよりもむしろストア主義・アリストテレス的倫理学などプラトン主義的系譜以外の諸思潮にも共通の要素を折衷した理念であることを明らかにし、Postgraduate Ancient World Conference(於ブリストル大学)と日本宗教学会、新プラトン主義協会例会で報告を行って高い評価を得た。成果を論文「ユリアヌスの『敬神』」として『新プラトン主義研究』に投稿(2004年3月現在、編集中)。さらに四世紀中葉から五世紀の史料におけるユリアヌス批判を検討し、教父・教会史家と「異教」作家の共通の関心は、ユリアヌスの宗教的党派性の是非よりもむしろ彼の「哲学(フィロソフィア、愛智)」への傾倒や「哲人皇帝」としての事績の実態にあったことを明らかにした。この課題は当時の思潮における「哲学」の意義の解明につながる。論文「帝政後期ローマの皇帝たちと太陽神」では、ユリアヌスが支持したとされる「太陽神」崇拝と帝政後期ローマの諸皇帝の関係を考察した。岩波書店から刊行された共訳書、ホプキンズ著『神々にあふれる世界』は、批判的見地からローマ宗教とキリスト教・ユダヤ教の関係を扱った第一級の基本文献であり、日本語に翻訳した功績は大きい。訳者解説論文では、日本では殆ど紹介されていない英語圏の古典学史における宗教史像を論じたものであり、共著論文「『金枝篇』序説」の第二章「『金枝篇』以前」およびその補論「フレイザーの影響圏と現代におけるその再評価の可能性」と併せて、西洋近代文学でしばしば言及されるユリアヌス像の受容史を考察する上での基礎的作業の一環とした。前年度に続き、研究計画の第1部・第2部の枢要となるユリアヌスの宗教思想における「正しい信仰」像を、先行する思潮や新プラトン主義の倫理思想とユリアヌスの著作を比較しつつ考察し、その折衷主義的傾向を明確にし、成果を論文「ユリアヌスの「敬神」」に再構成した。研究計画の第3部にあたる「ユリアヌスの宗教思想の後期ローマ帝国における受容」にかんしては、キリスト教史料側からのユリアヌス批判の形成過程に注目し、アンミアーヌス・マルケリヌスやリバニオスの著作と比較しつつ、ナジアンゾスのグレゴリオス『ユリアヌス駁論』、ヨハネス・クリュソストモス『殉教者バビュラスについて』、アレクサンドリアのキュリロス『ユリアヌス駁論』、紀元後5世紀の教会史家ソクラテスおよびソーゾメノスの『教会史』に描かれたユリアヌス像を検討した。ユリアヌスのキリスト教に対する敵意への批判と並んで、ユリアヌスの宗教復興構想そのものを、皇帝の権威を超越的に演出した古代末期においてもなお理想とされた「哲人王」の人物類型からの逸脱行為として提示することが、以上の史料におけるユリアヌス批判を支える議論の要であるとの概観を得た。第19回国際宗教学宗教史学会議世界大会では、「背教者」としてのユリアヌス像の描写の方向性を決定づけたナジアンゾスのグレゴリオス『ユリアヌス駁論』に注目して口頭発表を行った。古代末期のキリスト教と教育の問題、教義論争の社会的背景に関連して、レベッカ・ハーデン=ウィーバー「徴を読む」(「インタープリテーション日本版」掲載決定)、ポーリーン・アレン

「ある異端者の生涯--アンティオケイアのセウェロスの場合」(「パトリスティカ」掲載決定)を翻訳した。古代末期に源流をもつ宗教思想とその受容史に関連して、大貫隆他編『グノーシス陰の精神史』『グノーシス異端と近代』(岩波書店、2001年)を書評し、『宗教研究』誌上に掲載された。今年度は学位論文の完成に向けて作業を行った。7月にオーストラリア・カトリック大学メルボルン校で開催された西太平洋教父学会でキリスト教著作家から見たユリアヌス像の概要について口頭発表を行い、8月にオクスフォード大学ボードリアン図書館で資料調査を行った結果、新たな課題が明らかになった。キリスト教著作家の著作にみられるユリアヌス像については、その資料の性質と目的に応じて、彼らの理想とする「正しい宗教」から逸脱した存在としてユリアヌスが描かれていることは確かだが、「背教者」像の描かれ方には史料の目的に応じて大きな差異がある。ナジアンゾスのグレゴリオスやアレクサンドリアのキュリロスの『ユリアヌス駁論』のような著作家個人の思索を深めるための論考、ヨハネス・クリュソストモスの著作に代表される特定の教会共同体の一般信徒を聴衆に想定する講話、ソクラテスやソーゾメノスの『教会史』を代表とする歴史叙述、それぞれの叙述の特徴と5世紀までの時代的変遷を検討したが、背景についてはさらに考察が必要である。また、ユリアヌスの宗教思想に大きな影響を与えた新プラトン主義者、イアンブリコスの祭儀論の実態を検討する必要が生じた。近年の新プラトン主義研究の隆盛を背景に、ユリアヌスを「新プラトン主義的一神教徒」とする見解が主流になりつつあるが、実際のユリアヌスは都市共同体を支持基盤とする伝統的な多神教祭儀を推進したのであり、必ずしも「一神教徒」という指摘は的確ではない。イアンブリコスの祭儀輪には「宗教的熟練者の技術」と.しての神働術を称揚する秘教的な側面は確かに存在するが、一般の人々と神々の交流の手段としての伝統的多神教祭儀の存在意義をむしろ肯定している。それに加えて、イアンブリコスの祭儀論の政治的側面に注目し、ユリアヌスの儀礼論と比較する必要がある。さらに研究を深め、学位論文を来年度中に完成させる予定である。
GABA(A)受容体過剰発現マウスにおける大脳皮質側方抑制及びカラム間同期機構

大脳皮質感覚野バレル領野及び島皮質における機能カラム間の同期化及び脱同期化にGABA_A抑制系が如何に関与するかを明らかにするため、膜電位感受性色素を負荷したマウス或いはラット大脳皮質スライス標本において光学的膜電位測定を行ない、興奮伝播の時空間的パタンを解析した。バレル野では、IV層刺激によって生じた興奮は、II/III層へと伝播し、そこで水平方向へと広がり隣接カラムへ及んだが、これに対して島皮質では、IV層からII/III層及びV/VI層へと垂直に両方向へ広がり、カラム状の興奮パタンを示した。GABA_A受容体拮抗薬のbicuculline或いはGABA_A作動性Cl^-チャネル遮断薬picrotoxinを投与すると、バレル野では、II/III層における興奮め水平伝播が顕著に拡大し、それによりV/VI層にも興奮が生じたが、一方島皮質では、カラム全体の興奮強度が顕著に上昇した。この様なバレル野における水平方向の興奮伝播、及び、島皮質における垂直方向の興奮伝播に見られる同期化したニューロン活動パタンは、IV層以外の層を刺激したり、刺激強度を変化させたりしても、その特徴は一貫していた。従って、島皮質においても機能カラムが存在し、そこでは浅層-深層間のカラム内情報伝達が顕著であること、GABA_A作用はカラム内情報伝達の抑制に関与していることが明らかとなった。これに対しバレル皮質では、GABA_A作用はカラム間側方抑制に関与していた。これらの結果から、大脳皮質の各領野における機能カラム情報処理機構は、普遍的なものではないことが示唆された。大脳皮質感覚野における機能カラム間の同期化及び脱同期化にGABA_A抑制系が如何に関与するかを明らかにするため、膜電位感受性色素を負荷したマウス大脳皮質スライス標本において光学的膜電位測定を行なった。第IV層に電気刺激を与えると、カラム構造が明確なバレル野では第II/III層においてカラムをわずかに越える速い水平伝播が見られ、カラム構造が不明確な島皮質ではカラム内に限局した上下両方向への緩徐な垂直伝播が認められた。次にbicuculline存在下で同様の実験を行なうと、第II/III層における水平伝播が拡大強化されるに伴い、第V/VI層の出力細胞に興奮が生じた。従って、第II/III層錐体細胞は、抑制性ニューロンを介して隣接カラムの錐体細胞に側方抑制を与えると同時に、同一カラムの第V/VI層錐体細胞に対しても抑制を与えていた可能性がある。また、第V/VI層への興奮伝播の強化が第II/III層での興奮伝播の拡大強化の結果生じたことから、第II/III層錐体細胞の活動がカラム間で同期化することにより当該カラムの第V/VI層錐体細胞が活性化された可能性が示唆される。GABA_A受容体分子を過剰発現する、PRIP-1/2分子ダブルノックアウト(DKO)マウスのバレル野おいては、野生型に比して、皮質II/III層での水平方向の興奮伝播の範囲が限局的で、その時間経過も速かった。このことは、DKOマウスでは側方抑制が強力であることを示唆しており、実際、bicucullineの投与により、水平方向の興奮伝播の範囲は同程度或いはそれ以上にまで拡大した。
Nrf2による破骨細胞制御機構の解明と分子標的に着目した天然物リガンドの探索

破骨細胞分化におけるNrf2/Keap1の役割を調べた。Keap1遺伝子欠損破骨細胞前駆細胞ではERK, p38MAPK, JNKのリン酸化阻害とNFATc1の発現抑制により破骨細胞分化が阻害された。一方、Nrf2遺伝子欠損破骨細胞前駆細胞では、ERK, p38 MAPK, JNKの活性化とNFATc1とc-Fosの核移行促進による破骨細胞分化促進が認められた。しかし大腿骨マイクロCTの結果や、大腿骨切片のヘマトキシリン・エオジン染色の結果からは、マウス間で顕著な差は認められなかった。さらにカフェストールとカウェオール、サンギンH-6と分解産物エラグ酸の破骨細胞分化阻害効果を比較した。Nrf2遺伝子欠損マウスと野生型マウスの骨髄細胞から、M-CSFとRANKLを加えて破骨細胞形成を比較したところ、Nrf2欠損マウスでは巨大な破骨細胞が多数形成された。一方、Keap1遺伝子欠損マウスと野生型マウスの新生仔脾細胞から破骨細胞を形成させると、Keap1欠損マウスでは顕著な破骨細胞形成の抑制が認められた。破骨細胞において、ROSはMAPKを活性化し破骨細胞分化を促進することが報告されていることから、上記マウスにおける細胞内ROSの計測を行った。細胞内ROSの計測は蛍光プローブを用いてFACsで解析したところ、Nrf2欠損マウス>野生型マウス>Keap1欠損マウスの順に高いROSが認められた。さらにRANKL刺激後のMAPKの活性化をウェスタンブロットで解析した。また、破骨細胞分化に必要な転写因子の核移行を上記3種類のマウスの破骨細胞で比較した。さらに、NFATc1遺伝子上流の転写因子結合サイトへの転写因子の結合をクロマチン免疫沈降法を用いて解析した。転写因子であるcFosの核移行に関わるMAPKの解析は、各MAPK阻害剤を用いて行った。平成26年度以降に計画していた上記3種の新生仔マウスの透明骨格標本の作製と大腿骨・脛骨・頭蓋骨のマイクロCT撮影を開始した。さらに新生仔マウスの頭蓋骨由来骨芽細胞前駆細胞を採取し骨芽細胞分化の比較実験を開始した。これらの研究に加えて、植物由来ポリフェノール群の中で、ヘムオキシゲナーゼ1の発現を上昇させるポリフェノールに着目し、まず細胞毒性が少なく破骨細胞分化抑制効果の高かったsanguiin H-6による破骨細胞分化抑制機構の解析を行い、現在投稿中である。野生型およびNrf2欠損マウス・Keap1欠損マウスの骨量評価keap1欠損マウスは生後約10日で死亡するため、成長したマウスの骨は観察できない。そのため野生型、Nrf2欠損およびkeap1欠損の新生仔マウス脛骨・大腿骨を用いパラフィン切片を作成した。HE染色とTRAP染色を行いin vivoでの破骨細胞数を比較した。昨年度のin vitro実験ではNrf2欠損マウス骨髄細胞からの破骨細胞形成は有意に増加していたのに対し、Nrf2欠損マウスの骨組織では破骨細胞数の減少が見られた。Keap1欠損マウスも同様の結果が見られた。この結果はin vitroの結果から予想されるものとは異なっていたため、マイクロCTでの解析も例数を増やして解析中である。これらの結果はNrf2/Keap1が破骨細胞分化のみならず、骨芽細胞分化にも影響することを示唆しているので、マウス頭蓋骨由来骨芽細胞を用いて3種のマウスの骨芽細胞分化を比較中である。Nrf2活性化作用をもち破骨細胞分化を阻害するポリフェノールの探索天然物化合物のうちサンギン、リクイリチゲニン、コバルトプロトポルフィリン、カフェストールを用いて破骨細胞分化への影響を調べたところ、全てNrf2を活性化し破骨細胞分化抑制効果が見られた。特にリクイリチゲニン、カフェストールでは骨芽細胞分化促進作用も見られ、骨粗鬆症治療薬としての有効性が期待できる。カフェストールはコーヒー豆ジテルペン化合物であるが、同じコーヒー豆成分であるカウェオールとは構造上1本の二重結合の有無の違いのみである。両者を比較するとカウェオールはNrf2活性化効果が高いが細胞毒性も強かった。二重結合の有無はエポキシ化とKeap1への結合の差および毒性の強さに影響することが明らかになった。平成27年度はNrf2活性化作用を持ち、破骨細胞分化を阻害する作用が認められた天然物由来化合物に絞り、その破骨細胞分化抑制作用について分子メカニズムを調べた。その結果、リクイリチゲニンの破骨細胞分化抑制作用とメカニズムを明らかにし論文にした。さらに苗代イチゴ抽出物中の主成分であるサンギンにin vitroおよびin vivoにおいて非常に低濃度で破骨細胞分化抑制作用があることを見出し、そのメカニズムを明らかにした。これまでに我々は、コーヒー豆に含まれるジテルペン化合物であるカウェオールに破骨細胞分化抑制作用があることを明らかにし、そのメカニズムについて報告してきた。平成27年度は、カウェオールと同様にコーヒー豆に含まれるジテルペン化合物であるカフェストールにも破骨細胞分化阻害効果があることを見出し、その化学構造と破骨細胞分化抑制効果に関して興味深い知見を明らかにすることができた。即ち、カウェオールとカフェストールは化学構造上、1本の2重結合を除いて全く同じ化学構造であるにも関わらず、カフェストールは破骨細胞分化抑制作用が緩やかで、骨芽細胞分化促進作用を有していた。

カウェオールとカフェストールではKeap1への結合がカフェストールの方が弱く、その結果、カフェストールはカウェオールよりNrf2を弱く活性化することが報告されていた。我々の結果もそれを支持するもので、カフェストールの方がより弱く第2相抗酸化酵素群を誘導した。これらの結果より、Keap1へ強固に結合する化合物よりも、比較的自由度のある構造によりKeap1への結合が緩やかなNrf2活性化能をもつ化合物の方が、より毒性が少なく緩やかに破骨細胞分化抑制効果と骨芽細胞分化促進効果を持つ可能性が示唆された。破骨細胞分化におけるNrf2/Keap1の役割を調べた。Keap1遺伝子欠損破骨細胞前駆細胞ではERK, p38MAPK, JNKのリン酸化阻害とNFATc1の発現抑制により破骨細胞分化が阻害された。一方、Nrf2遺伝子欠損破骨細胞前駆細胞では、ERK, p38 MAPK, JNKの活性化とNFATc1とc-Fosの核移行促進による破骨細胞分化促進が認められた。しかし大腿骨マイクロCTの結果や、大腿骨切片のヘマトキシリン・エオジン染色の結果からは、マウス間で顕著な差は認められなかった。さらにカフェストールとカウェオール、サンギンH-6と分解産物エラグ酸の破骨細胞分化阻害効果を比較した。天然物化合物として用いたサンギン、リクイリチゲニン、コバルトプロトポルフィリン、カフェストールの破骨細胞への影響に関する研究結果をそれぞれ論文にまとめ投稿した。コバルトプロトポルフィリンの結果をまとめた論文は雑誌BioMetalsに受理され、その他もリバイス中である。平成26年度の段階で投稿できたことは評価できると考えた。歯科薬理学今年度はin vivoでの骨量評価に重点をおく。細胞レベルでの実験から予想されていた結果と異なる部分に関しては、硬組織の形態に詳しい森石武史博士(長崎大学大学院医歯薬細胞生物学)と城戸瑞穂博士(九州大学大学院歯学研究院口腔解剖学)に助言をいただき研究をすすめる。天然物を用いた破骨細胞分化の評価に関しては、実験の流れは確立したので、今年度はさらに50種の天然物の作用を調べる。平成25年度に実施することを予定していた研究に関しては、おおむね計画どおりに実施でき、興味深い結果を得ることができた。Fura-2を用いた細胞内カルシウム濃度の測定については、実験例数を増やし平成26年度も十分な検討をすることが必要である。しかしながら、当初平成26年度以降に行う予定にしていた骨量評価の実験や、骨芽細胞の比較実験の開始、および植物由来ポリフェノールの破骨細胞分化抑制作用の解析を平成25年度から実施を開始できたこと、加えてsanguiin H-6を用いた研究成果を投稿する段階に至ったことは評価できると考えた。天然物化合物のうち、サンギン、リクイリチゲニン、コバルトプロトポルフィリン、カフェストールを用いて破骨細胞分化への影響を調べた研究結果を論文投稿したが、英文校正と論文別刷り費用が必要となることや、骨芽細胞分化に対するNrf2、keap1の作用を解析する必要性が生じたので、次年度使用額が生じた。平成26年度に実施計画を予定していた研究を行う。平成25年度に完了することができなかった細胞内カルシウム濃度の測定を例数を増やして再検討を行う。マイクロCTによる骨量評価と新生仔マウス透明骨格
ナルコレプシー発症を支配する遺伝子に関する研究

昭和62年度の研究成果は,次の二点に要約できる.1)昭和61年度に行われたナルコレプシー患者のHLAーDQβ遺伝子の解析につづいて,昭和62年度はHLAーDQα遺伝子のDNA配列について解析を行った.健康者およびナルコレプシー患者の血液から,白血球を分離し,そこからDNAを抽出し,色々なDNA制限酵素で分解した.電気泳動で分解されたDNAを展開したあと,アイソトープで標識したDQαcDNAprobeを反応させて, probeが結合するbandを検討した.その結果TagIを制限酵素として使用した場合, DQαcDNAと結合する6.0Kbのbandがナルコレプシー患者群の100%に検出された.このbandは健康者群では53.6%に検出された.逆に6.6Kbのbandは患者群では3.6%健康者群では64.3%に検出された.2)我国ばかりでなく外国においても,ナルコレプシーとHLAーDR2の相関に関する研究が広く行われるようになるにつれて, HLAーDR2が検出されないナルコレプシー患者の存在が報告されるようになった.現在まで200名以上の患者を検査して,依然として全員DR2陽性であるという我々の結果と,これらの報告の差がどこに起因するのかが問題となる.そのうちで最大の問題点は,ナルコレプシーの診断基準である.我々は日中の低抗しがたい傾眠傾向と, Cataplexy(情動脱力発作)の二つを診断基準としている.国外ではhypnagogic hallucination,sleep paralysis,sleeponset REM(rapid eye movement)などを基準に用いている研究者が存在する.日本人ナルコレプシー患者について,上記の症状とHLAーDR2の相関を調べたところ, cataplexy以外の基準で診断するとHLAーDR2陰性の患者が出現することが示された.十字班員は研究協力者松木一雅の協力をえて、ナルコレプシー患者から白血球を分離し、それからDNAを抽出し、種々の制限酵素を用いてこれを消化分解し、これを電気泳動により展開する。これにHLA-DRα,DRβDQα,DQβ,DPα,DPβ,などのcDNAprobeを反応させ、そのパターンを解析を行っている。DQαcDNAprobeで、各HLAclass【II】抗原と相関する特定のバンドが5種類検出された。TagIで分解した場合、ナルコレプシー患者のすべてに6.0kbのバンドが検出され、Dw2陽性のDR2とこのバンドが相関することがたしかめられた。一方DW12陽性のDR2は、このバンドとは異なる6.6kbのバンドと相関することが確認された。またこのほかに2.4kbのバンドはDR1,DRw10,DRw14と相関し、4.6kbのバンドはDRw11,DRw12と相関すること、さらにDR4,DR7,DRw9が5.5kbのバンドと相関することが示された。これらの事実はDQα鎖にも、DNAレベルで遺伝的多型が存在することを意味し、このなかで制限酵素TagIで分解して、6.0kbの長さとなるバンドがナルコレプシー患者の全員に検出されたことはきわめて興味深い。今後DQβ,DRβとともにDQαもナルコレプシーの遺伝的マーカーとして意味付けをしたいと考える。本多班員はナルコレプシーと類似した疾患をHLA-DR2をマーカーとして鑑別できるかどうかを検討しているが、Essential Hypersomnioと呼ばれる疾患には、HLA-DR2の頻度が正常者に比較してやや高いことを見出した。これはナルコレプシーと遺伝的背景が同じである不全型がこの疾患のなかにまぎれこんでいるためと考えられる。浜口班員をHLA-DRα,DRβ,DQα,DQβ,DPα,DPβの糖タンパクを二次元電気泳動上のパターンによってその多型を検討している。昭和62年度の研究成果は,次の二点に要約できる.1)昭和61年度に行われたナルコレプシー患者のHLAーDQβ遺伝子の解析につづいて,昭和62年度はHLAーDQα遺伝子のDNA配列について解析を行った.健康者およびナルコレプシー患者の血液から,白血球を分離し,そこからDNAを抽出し,色々なDNA制限酵素で分解した.電気泳動で分解されたDNAを展開したあと,アイソトープで標識したDQαcDNAprobeを反応させて, probeが結合するbandを検討した.その結果TagIを制限酵素として使用した場合, DQαcDNAと結合する6.0Kbのbandがナルコレプシー患者群の100%に検出された.このbandは健康者群では53.6%に検出された.逆に6.6Kbのbandは患者群では3.6%健康者群では64.3%に検出された.2)我国ばかりでなく外国においても,ナルコレプシーとHLAーDR2の相関に関する研究が広く行われるようになるにつれて, HLAーDR2が検出されないナルコレプシー患者の存在が報告されるようになった.現在まで200名以上の患者を検査して,依然として全員DR2陽性であるという我々の結果と,これらの報告の差がどこに起因するのかが問題となる.そのうちで最大の問題点は,ナルコレプシーの診断基準である.我々は日中の低抗しがたい傾眠傾向と, Cataplexy(情動脱力発作)の二つを診断基準としている.

国外ではhypnagogic hallucination,sleep paralysis,sleeponset REM(rapid eye movement)などを基準に用いている研究者が存在する.日本人ナルコレプシー患者について,上記の症状とHLAーDR2の相関を調べたところ, cataplexy以外の基準で診断するとHLAーDR2陰性の患者が出現することが示された.
実験動物スンクスを用いた歯の代生と加生の分子メカニズムの探究

哺乳類における歯の交換は、乳歯が一生の間に一度だけ永久歯に生えかわる二生歯性を特徴としている。マウスには歯の交換が一切見られないので、乳歯列が歯の代生と加生によって永久歯列に置き換わる交換のメカニズムを明らかにするために、本研究では実験動物スンクス(Suncus murinus)の歯列の発生を調べた。スンクスの全ての歯胚の発生順序を調べると、隣接する歯胚は同時には形成されず、形成時期に一定のずれがあることが分かった。この歯の交換様式は、先行して形成された歯胚が近傍に抑制因子を分泌して後続歯の発生位置と発生時期を決定している、と考えると上手く説明できる。ヒトは乳歯と永久歯を持つが、永久歯のうち、切歯、犬歯、小臼歯は乳歯が生え代わった代生歯であり、大臼歯は乳歯の遠心に付け加わった加生歯である。本研究の目的は、全ての歯種が揃っている実験動物スンクスの歯列の発生を調べることによって、歯の代生と加生を制御する分子メカニズムを明らかすることである。本研究では、「歯の代生と加生は、間葉からの誘導因子と、先行歯からの抑制因子のバランスによって進行する」という仮説を立てた。この仮説を証明するために、まずスンクスにおける歯の発生を詳細に記載し、次にスンクスの歯胚の器官培養を利用してこの二つの因子を同定する、という研究計画を立てた。平成21年度は、次の二つのことを行った。1. Shhを使ったスンクスの歯胚の発生順序の解析:スンクスの上顎における全ての歯胚の発生順序を、Shhの遺伝子発現をマーカーとして調べた。その結果、隣接する代生歯や加生歯は同時には発生が進行せず、帽状期のエナメル結節の形成時期をずらしていることが分かった。これにより、先行して発生する歯胚からの抑制因子はエナメル結節から分泌されることが示唆された。この研究結果は論文として投稿し、受理された(Yamanaka et al., 2010)。2.スンクスの歯胚の器官培養法の確立:スンクス胚から、実体顕微鏡下で歯胚を切り出し、無菌下で器官培養を行った。培養は、気相-液相間でのTrowell法を採用し、CO_2インキュベータ内で行った。1.で得られた歯胚の正常発生と比較して培養歯胚のステージングを行った。平成22年度は、歯胚の器官培養を利用して、遺伝子発現の抑制実験を行い、上記の仮説の誘導因子と抑制因子を同定する実験を行う予定である。ヒトを含め哺乳類の歯列には乳歯と永久歯の二世代の歯が存在する。永久歯のうち、切歯、犬歯、小臼歯は乳歯が生え代わった代生歯であり、大臼歯は乳歯の遠心に付け加わった加生歯である。歯の代生と加生を制御する発生メカニズムに関してはまだよく分かっていない点が多いが、これはマウスなどの実験動物の歯列が非常に特殊化していることが原因となっている。本研究は、全ての歯種が揃っている実験動物スンクスの歯列の発生を調べることによって、このメカニズムを明らかにすることを目的とした。本研究では、まずスンクスの上下顎における全ての歯胚の発生順序を調べた。スンクスでは、乳歯胚が発生の過程で退縮してしまい、顎内で代生歯胚との交換が行われる。連続組織切片からの3次元再構築像と、歯胚上皮のマーカーであるShhのmRNAの発現を詳細に調べることにより、全ての乳歯胚、代生歯胚、加生歯胚の発生順序が明らかになった。その結果、隣接する歯胚は同時には発生が進行せず、帽状期の1次エナメル結節の形成時期をずらしていることが分かった。これにより、先行して発生する歯胚のエナメル結節から抑制因子が分泌され、周囲に新たな歯胚が形成されるのを遅らせていることが示唆された。これが本当なら、代生歯は同歯族の先行歯ではなく、一つ隣の先行歯によって発生が抑制されていることになり、歯の加生を制御するメカニズムと同じメカニズムが歯の代生においても働いていると考えられる。これらの研究成果は2本の論文に公表された(Yamanaka et al.,2010;Yamanaka&Uemura,2010)。