hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
カルコゲナイドガラスの低エネルギー励起のラマン散乱・テラヘルツ電磁波分光

本年度は,ラマン散乱・テラヘルツ電磁波分光によるカルコゲナイドガラスの低エネルギー励起の研究を行った.●他成分カルコゲナイドガラス試料の作製溶融状態からのクエンチ、真空蒸着、ガス中蒸着、気相成長などの種々の成長法に様々な温度での熱処理を組みあわせて、バルクガラス、アモルファス薄膜、単結晶、微粒子などの様々な形態を持つGe-Se,Ge-Bi-Se, Ge-Sb-Se試料を作製し、ラマン分光、フーリエ分光、テラヘルツ電磁波分光測定用に仕上げた。●低波数ラマンスペクトルとフラジリティとの関係前年度の研究成果を踏まえて、様々なネットワークガラスにおけるネットワークの結合性とガラスのフラジリティとの関係を明らかにした。●フロッピーモードの構造的な解釈局所構造の振動モードの温度変化の研究成果から、ネットワーク中のフロッピーモードが空間自由度を持つ構造ユニットに局在し、フロッピー領域のネットワーク全体への浸透は、ガラスのマクロなフロッピー的な振る舞いを決定することを見いだした。●研究成果発表研究成果を国内の学会、研究会での発表したことと共に、外国の大学研究機関との交流や計3件の招待講演、16件の論文発表を行った。本年度は,ラマン散乱によるカルコゲナイドガラスの低エネルギー励起の研究を行った.・他成分カルコゲナイドガラス試料の作製溶融状態からのクエンチ、真空蒸着、ガス中蒸着、気相成長などの種々の成長法に様々な温度での熱処理を組みあわせて、バルクガラス、アモルファス薄膜、単結晶、微粒子などの様々な形態を持つGe-Se,Ge-Bi-Se,Ge-Sb-Se試料を作製し、ラマン分光、フーリエ分光、テラヘルツ電磁波分光測定用に仕上げた。・低波数ラマンスペクトル測定法の確立レーザー部品、検出システム関連のソフトを購入するより、ラマン測定システムが最適な条件での使用ができた。3cm^<-1>からのラマンスペクトルを系統的に研究できることは当システムの特徴である。・低波数ラマンスペクトルとフラジリティとの関係・低波数ラマンスペクトルから、ガラスのフラジリティに関係する量を見出し、ガラス力学特性の研究について新たな切り口を開けた。・研究成果発表・研究成果を国内の学会、研究会での発表したことと共に、外国の大学研究機関との交流や「第18回アモルファスおよび微結晶半導体国際会議」で発表した。
胆道閉鎖症に対する新しい治療法としての胆管細胞移植の研究

【目的】胆道開鎖症の総胆管の内腔は肥厚し、肉眼的には閉塞しているが、肥厚線維化した胆管上皮細胞が増殖能を有するのか、また、正常な胆管上皮細胞と比べて変化していないかどうかについて検討した。【方法】胆道閉鎖症3例に対し、手術中に採取した肝外胆道索状物組織を採取後直ちにHanks液(pH7.2)に浮遊、洗浄して1mm以下の砕片とし、4型collagenでcoatingした35mm培養皿に静置して10%Nuserumを含んだDulbecco's modified Eagle medium(DMFM)とHamF-12mediumにepidermal growthfactorとinsulin、forskolinを添加した培養液で、37°Cに保たれたCO2インキュベーターでprimary cultureを行った。隔日に培養液を交換し、primary culture後20日目に胆管上皮細胞がコロニーを形成している部分のコラーゲンを切離して1型コラーゲンでcoatingした培養皿に単層培養した。継代後7日目にcytokeratin 7(CK7)抗体で免疫細胞化学染色を行い、CK7陽性細胞の形態を観察してコロニーが何個存在するかカウントした。【結果】全例から胆管上皮様の細胞が出現し、コロニーを形成した。コロニー数は3例に差はなく、400倍視野で平均1.2±0.07群であった。胆管上皮様の細胞はCK7抗体による免疫細胞染色で陽性となり、この細胞が胆管上皮であることが示された。また、継代した細胞は位相差顕微鏡による形態観察で胆管上皮細胞であった。【総括】1.胆道閉鎖症の肝外胆道索状物から胆管上皮細胞が培養でき、培養された上皮細胞は継代を3回繰り返した後も増殖能が保たれている正常細胞であった。2.培養した胆管上皮細胞はCK7陽性細胞であり、胆道閉鎖症は何らかの外因により胆管の構造が破壊されたものであると考えられた。初代培養後3週目に胆管上皮細胞がコロニーを形成している部分のコラーゲンを切離し、新しい培養皿に移して継代培養する予定であったが、細織学的検索を行ったところ、残念ながらいずれも培養途中で細胞が死滅してしまい、線維化を生じていた。その原因として考えられるのは、上皮細胞増殖因子(EGF)、またはinsulinのいずれかに問題があると考えられたため、本年度はこれらを各種変更しながら再度挑戦する予定である。
肺癌特異的αβT細胞受容体遺伝子を導入したγδT細胞を用いた肺癌のCTL治療

免疫療法は新たな治療法のひとつとして期待されているが、現状では十分な効果を得るには至っていない。肺癌患者において、腫瘍抗原に対するアビディティの高いCTLを樹立することは非常に困難であることが知られている。アビディティの高いCTLからTCR遺伝子をクローニングして、レトロウイルスベクターを用いて患者の末梢血のリンパ球に導入して腫瘍特異的CTLを作製し、細胞移入治療を実現することを目的として本研究を実施した。肺癌患者の腫瘍組織から肺癌細胞株F1121Lを樹立し、手術時に採取・凍結保存していた自己のリンパ節リンパ球と共培養を繰り返すことにより癌精巣抗原であるKK-LC1をHLA-B15拘束性に認識するCTLクローンH1/10を樹立した。TCRα鎖およびβ鎖をクローニングし、翻訳効率の高いlinkerである2AでTCRα鎖(Vα1)とTCRβ鎖(Vβ19)をつなぎ、PHXレトロウイルスベクターに組み込んだ。末梢血からPBMCを採取しゾレドロン酸とIL-2で刺激してγδT細胞を増殖させ、これに上記TCRαβ遺伝子のみを導入した。KK-LC1陽性のF1121LおよびをKK-LC1ペプチドをパルスしたF1121-EB-virus transformedB cellに特異的に傷害活性とサイトカイン産生を示し、この反応は抗MHC class I抗体添加により阻害された。さらにSCID mouseを用いて、TCRαβ-CD8移入γδT細胞の養子免疫モデルを作成し、抗原特異的なin vivoでの腫瘍増殖抑制効果が得られた。肺癌患者末梢血からPBMCを採取し、5μMのゾレドロン酸と1000IU/mlのIL-2を用いてγδT細胞を培養し、15名の肺癌患者にγδT細胞移入治療を実施した。この研究成果をもとに、今後肺癌特異的CTL由来のTCRを患者末梢血γδT細胞に導入し、肺癌に対する細胞治療法を開発する。
社会恐怖の医学思想史に向けて―20世紀の日仏比較研究

本研究の目的は、20世紀初頭に西洋精神医学に導入された「社会恐怖」の概念の歴史と発展を、精神医学史的および概念史的方法により比較・検証することである。半期だけの取り組みとなった平成23年度には、「恐怖」および「不安」の医学的・社会的表象の変遷を跡づけるコーパスの構築に着手するとともに、とりわけ、申請者(立木康介)と研究分担者(DELILLE, Emmanuel)のそれぞれが相手と共有すべき知識・情報を増やすことを最優先課題とした。そのため、申請者は、伝統あるフランス精神医学のなかでも、研究分担者にとってとりわけ重要な参照項であるアンリ・エーおよびアンリ・エレンベルガーの業績を繙き、本研究テーマにかんする資料を収集すると同時に、研究分担者と協力関係にあるフランス国立学術研究センター教授、ピエール=アンリ・カステル氏と学術交流・意見交換を行った。他方、研究分担者は、日本の精神医学史の全体像の理解に向けて旺盛に調査を開始し、精神医学史、民族精神医学(文化横断的精神医学)、恐怖症研究、ひきこもり研究、ならびに仏教思想研究の専門家らと学術交流を重ね、それらの専門家のもとで学術報告を行った。またそのなかで、精神病理現象の日本的な現れとして日本精神医学史の重要テーマのひとつである「憑狐き」(動物憑依)にとくに注目し、文献の収集を開始した。これらの手続きは、本研究の全体、さらには、その上に長期にわたって築かれていく可能性のある先駆的な諸研究(「社会恐怖」の日仏比較研究は精神医学史に前例のない試みである)を支える堅固なコーパスを構築するために不可欠な作業であり、本研究は順調に滑り出したと言える。研究分担者が報告者の予想以上に精力的に研究活動・研究交流を進めたため。研究分担者の就職により、学術振興会の助成を受けての本研究の遂行は、平成24年度4月をもって中断せざるをえない。しかし、これまでの成果をもとに、今後も同じテーマでの研究を研究分担者と共同で進めてゆく予定である。
イカ類の他者認知と社会構築に関する行動学的研究

本研究では、イカ類の他者認知と社会構築を、アオリイカを主対象に行動学的に読み解くことを試みた。その結果、アオリイカが自種に強い関心を示すこと、同種個体を識別していること、摂餌行動など他個体の振る舞いを注意深く観ていることなどを確認した。また、自種に対する嗜好性や他者を見る視覚能力は孵化後の時間経過に伴い強化、発達することを確認した。さらに、種間比較の観点からトラフコウイカを調べ、他者認知と関連して視覚能力が孵化後に整えられて行くことを確認した。本研究は、イカ類に見られる高次脳機能が社会性に関連して発達したとの発想のもと、同種個体より成るイカ類の複雑な群れの社会について、同種個体を見わける能力、すなわち他者認知をソーシャルブレインズ(社会脳)の視点を導入し、「心の理論」や視覚発達にも注目しつつ読み解くことを目的とした。この目的達成のため、平成24年度は他者認知の発達過程について、前年度の成果も踏まえてアオリイカを対象に調べた。初めに、他者認知の発達について探るため、アオリイカを孵化時より飼育し、経時的に自種および他種であるトラフコウイカを提示して、自種への嗜好性、すなわち種認知の発達過程を観察した。その結果、30日齢より自種に対する接近距離が他種であるトラフコウイカよりも短くなる傾向が見られ始め、種認知が生後発生的に発現する様子が示唆された。次に、他者認識と視線注視の発達について探るため、集団内におけるアオリイカの挙動を経時的に追跡したところ、摂餌場面において、他個体の捕食行動に同調して捕食行動を開始する様子が孵化後初期から認められたことから、他者認識と視線注視が生後の比較的早い段階から発現することが示唆された。さらに、他者認知の基盤となる視覚とそれに関わる脳領域の発達を探るため、孵化後のアオリイカについて、眼と脳を経時的に採集して組織標本を作成し、解剖学的な検討を加えた。その結果、孵化後の時間経過に伴い、レンズ径が増すとともに、視細胞である感悍が伸長し、視精度が高くなって行く様子、視葉が容積を増して行く様子が観察されたことから、視覚能力が生後の時間経過に伴い整えられて行くことが示された。この目的達成のため、平成25年度は他者認知の種間変異について、アオリイカと比べて社会性レベルが低いコウイカ科のトラフコウイカを対象に調べ、得られた結果をアオリイカと比較した。初めに、他者認知の有無と程度について探るため、トラフコウイカを孵化時より集団飼育し、行動を観察した。その結果、本種は孵化後初期の段階から、同種個体と近接するかたちで静座、分布するなど、同種個体に対して強い嗜好性を示す、すなわち、種認知の能力が示唆された。さらに、孵化後の時間経過にともない、静座に際しての同種個体との距離が伸びるなど、同種への嗜好性に変化も認められ、アオリイカとは異なる側面が見られた。さらに、他者認知の基盤となる視覚能力について探るため、トラフコウイカを孵化時より飼育し、餌生物の視認を基準とした視認距離の測定を行うとともに、眼の網膜について解剖学的検討を加えた。その結果、トラフコウイカは30日齢から110日齢にかけて視認距離が増加すること、それに呼応するように、網膜に分布する視細胞の密度も増加すること、さらには、視細胞の密度分布に局所的な相違が見られることなど、本種の視覚能力が孵化後の時間経過に伴い発達することが示された。この目的達成のため、平成23年度は他者認知の機構を、アオリイカを対象に調べた。初めに、自種への嗜好性、つまり種認知について探るため、アオリイカに自種および他種であるコウイカ類とタコ類を提示し、行動を観察した。その結果、アオリイカは自種に対して高い関心を示し、種認知の能力があることが示唆された。次に、アオリイカが群れ内の同種個体を見分けることができるのか調べるため、任意個体の組み合わせによる対面実験を行った。その結果、同一個体に対して時間経過と共に関心が低くなる一方で、新規個体に対しては関心が高くなるという、馴化・脱馴化の過程が観察されたことから、本種が同種個体を識別している可能性が示された。

また、アオリイカが自種の行動に関心を払い、注視しているのか検証するため、集団状態における摂餌場面を観察した。その結果、アオリイカは集団中の他個体の摂餌行動に触発される形で摂餌が活発する様子、すなわち自種の行動を注意深く観ている様が観察された。さらに、社会的順位といった個体の属性に応じて、アオリイカが自身の行動を変えるのか、「心の理論」に基づく摂餌を巡る対面実験を行った。その結果、自身よりも優位な個体に対峙した時と劣位の個体に対峙した時では、摂餌の抑制と非抑制が見られ、本種が個体属性を踏まえて行動を調整している可能性が示された。当初の年度計画通り、アオリイカの他者認知の発達過程、他者認識に関わる視覚と脳の形成の各項目について、実験、観察を遂行し、相応の成果を得ることができた。また、何れの課題においても、アオリイカの長期間にわたる飼育が必要であったが、これも滞りなく遂行することができた。研究遂行の過程で、研究課題の改変を要するような事態が生じることはなく、研究費もほぼ予定通り執行した。以上より、研究はおおむね順調に進展したと評価できる。当初の年度計画通り、アオリイカの種認知、アオリイカの他個体認識、アオリイカの視線注視、「心の理論」の各項目について、実験、観察を遂行し、相応の成果を得ることができた。研究遂行の過程で、研究課題の改変を要するような事態が生じることはなく、主要な物品であるイカ幼体行動装置の購入を含め研究費もほぼ予定通り執行した。前年度の成果を踏まえ、平成25年度は他者認知の種間変異を主な課題として研究を進める。具体的には、熱帯性イカ類における他者認知の実態を解明すべく、アオリイカに比べて社会性レベルが低いトラフコウイカを対象として、他者認知の有無を平成23年度の研究手法に準じて調べる。さらに、他者認知の多様性と進化について解析すべく、前述のトラフコウイカで得られた結果と前年度までに得られた結果を対応、分析して、社会構築に関わる認知機構の種間変異とそれらが生じた進化的背景、熱帯海域での異種共存などについて総合的に考察する。また、アオリイカおよびトラフコウイカのバイオロジカルモーションに対する反応と、視覚制御に関わる脳部位である視葉の神経ネットワーク形成についても検討を加える。前年度の成果を踏まえ、平成24年度はアオリイカにおける他者認知の発達過程を主な課題として研究を進める。具体的には、他者認知の発達過程について、孵化後のアオリイカに自種を含む複数のイカ類の画像を提示し、これらへの接近、蝟集の有無に基づき同種を識別、認識する過程を明らかにする。また、これと平行し、同種のバイオロジカルモーションをアオリイカ若齢個体に提示し、提示刺激に対する反応から自種に関わる要素を視認し始める時期を特定する。さらに、他者認識に関わる視覚と脳の形成過程を調べるため、孵化後のアオリイカを定期的に採集して、眼および脳の組織標本を作成して観察する。これに基づき、他者認知に寄与する視覚と情報処理について明らかにする。平成25年度の研究費は、実験個体の飼育、行動観察、眼と脳の組織学的観察などに要する物品費、学会参加に伴う旅費、実験補助に要する謝金などに、当初の予定通り配分して使用する。平成24年度の研究費は、実験個体の飼育、行動観察、眼と脳の組織学的観察などに要する物品費、学会参加に伴う旅費、実験補助に要する謝金などに、当初の予定通り配分して使用する。
ラット尿細管基底膜側細胞膜(BLM)を用いたエンドセリンのNa・水利尿作用の検討

エンドセリン(ET)の水・Na利尿作用に関して、Oishiらは、AVPにより刺激された水透過性亢進がETにて阻害されるが、ET自体の水透過性に対する作用を否定した。Nadlerらは、ETによるAVPの作用の阻害はPre cAMP siteでPKCとGi蛋白を介して働くと考えた。我々は、Scaleraらの変法を用いて単離したラット腎尿細管基底膜側細胞膜(BLM)を用い、アデニレートシクラーゼ(AC)系に対するETの作用をみた。方法・結果)BLM,Assay Mixture,AVP10^<-8>molにて、十分刺激されたAC系に対し、ETを10^<-5>10^<-12>molの濃度で加え、産生されたcAMPの測定をおこなった。なお反応は37°C、10分間、反応停止は3分間の煮沸にて行い、上清を用いヤマサの測定キットによりcAMPを測定した。ET-1、ET-3の上記濃度内では、ET無添加のものとのcAMP産生量に有意な差はなく、AVPにて刺激されたAC系に対しての抑制作用は認められなかった(下表)。次に同様の方法でETのAC系への直接作用をみたところ、ET-1にては、cAMP産生量に有意な差はみられなかった。考案)今回、AVP刺激下のAC系に対し、ETの作用はみられなかった。我々のBLMでは、PKCが含まれていない可能性が強いことより、この結果は、ETはPKCを介してAC系に作用するというNadlerらの意見を間接的に示唆していると考えられる。また、ETのAC系への直接作用についても、否定的であった。
葉緑体のレドックス代謝を駆動する蛋白質群の弱い分子間相互作用の包括的解析

光合成電子伝達鎖の末端に位置するフェレドキシン(Fd)は、葉緑体の還元同化反応を司る多様な酵素群への電子供与体として働いている。電子授受のパートナーとなる酵素蛋白質群と過渡的な複合体を形成し、分子間電子伝達の速度や収量が優れた生体反応のプロセスに寄与している。この作動原理を理解するために、Fd側と酵素側にどのようなレドックス特性と蛋白質ー蛋白質間相互作用の機能構造要因が備わっているのかを、植物生理学、生化学、構造生物学、生物物理学の観点から明らかにした。得られた知見は、Fdが葉緑体内で多機能の電子伝達蛋白質として生理機能を営むための包括的な理解を与えるものであった。本研究課題で策定した研究を行うための陣容が整い、初年度研究が順調にスタートした。現時点での研究状況を以下にまとめる。1)グルタミン酸合成酵素(GOGAT)とFdの電子伝達複合体の構造解析はほぼ完了した。GOGATの相互作用領域の改変体群を作製してFdとの相互作用力の変化を系統的に調べることにより、この複合体構造の評価を生化学的に進行中である。2)亜硝酸還元酵素(NiR)とFdの電子伝達複合体構造解析はまだ共結晶が得られていないので、条件設定等をさらに精査し、構造解析に結び付ける。大腸菌発現系で生じるFdtono相互作用力が異なるNiRの2成分は、シロヘムへの配位構造の違いによるものであることを示唆する結果が得られている。配位構造の差異がFdとの相互作用力の強弱をもたらす可能性は新しい着想であり、今後この点の検討を深める。3)SiRとFdの電子伝達複合体の構造解析は終了した。SiRの変異体を活用した結晶構造の妥当性を生化学的、生物物理学的に検証している。この一つとしてITCによる分子間相互作用の熱力学解析に着手した。4)Fdからの電子を受容する機能が著しく低下したSiR変異体が数種類得られ、Fdとの溶液状態での相互作用研究をNMR測定で詳細な解析を開始した。5)新奇Fdの立体構造解析に着手した。アポ蛋白質として大腸菌内で大量に蓄積する発現系が完成したので、鉄硫黄クラスターを化学的に再構成する試みを今後行う。6)Fdアフィニティクロマトグラフィーを適用して、Fd:NADPH酸化還元酵素がNADP+の存在により親和性が減少することを見出した。この相互作用低下を引き起こすNADP+の濃度は、葉緑体ストロマの濃度と同レベルのものであり、生理的に重要な現象である可能性が高い。葉緑体のストロマ画分の生理的条件を念頭に入れた解析系統的に行う。本研究課題で策定した2年目の研究状況と実績を以下にまとめる。1)フェレドキシン(Fd)と亜硝酸還元酵素(NiR)との静電的および非静電的相互作用力を変化させたとき、亜硝酸とNH2OHを基質としたときのNiRの酵素反応特性が異なることを見出した。種々の解析を進めて、FdとNiR分子間相互作用は分子間電子伝達反応の効率だけではなく、NiR基質認識の特性を決める要因の一つにもなり、特に酸化還元中心近傍の非静電的相互作用部位の寄与が主要なものであるとの仮説を提案した。2)Fdと亜硫酸還元酵素(SiR)の電子伝達複合体の構造や物性を生化学的、生物物理学的な研究を進めた。ITCによる分子間相互作用の熱力学解析により、エンタルピーとエントロピー変化の両方が寄与していることが明らかになった。また、この相互作用は溶液中の塩濃度で大きな影響を受けることが判明した。この現象を、NMRによるFdのHSQCスペクトル解析によりアミノ酸残基レベルでの検証を進めている。Fdからの電子を受容する機能が低下したSiR変異体においては、この相互作用力が著しく減少していることが確認された。3)高等植物に存在する新奇Fdの構造や機能の研究を進めるため、大腸菌発現系を構築したが、アポ蛋白質として調製された。これに、鉄硫黄クラスターを化学的に再構成する試みを種々の条件で行ったが、まだ良好な結果は得られていない。このFdのホモログは好熱性ラン藻類にも存在するので、その安定性の高い分子種を代替えする準備を進めている。4)Fd:NADPH酸化還元酵素(FNR)とFdとの親和性が、NADP(H)の存在により数十分の一に減少する。この現象をNMR測定により解析し、FdとFNRの接触面を中心とした相互作用の変化があることを突き止めた。ピリジンヌクレオチドによりFNRの接触面の構造変化が起こると推定している。(1)フェレドキシン(Fd)と亜硫酸還元酵素(SiR)の分子間相互作用には、これまで明らかにしてきた静電力によるものに加えて、非電荷アミノ酸残基が関与する部分も相当あることが分かった。特に、SiR側のFdとの相互作用領域に存在する疎水性アミノ酸の置換体の解析からFdとの相互作用力は維持しつつ、酵素反応特性が変化する場合があることが実験的に示された。Fdからの電子の授受が何らかの形で酵素反応における基質認識に関与する可能性が考えられた。(2)FdとFd:NADPH酸化還元酵素との分子間相互作用にも、Fd側の非荷電性のアミノ酸領域が重要な役割を果たしていることを、Fdの系統的変異体を用いて示した。

特に、熱測定やNMR解析によい、非静電的相互作用の熱力学的理解が進んだ。この成果は論文投稿中である。(3)FNRの基質であるFdとNADP(H)は、互いに負の協働性を有しており、一方の濃度が高まりFNRと強く結合すると、他方とFNRの結合力は弱まる関係にある。この負の協働性を詳しく解析し、その現象が生じるFdとFNRの濃度は生理的な濃度域にあり、葉緑体内でのこの現象が起こる可能性を示した。FNRの各種の部位特異的変異体を用いて、NADP(H)の2'5'ADPのリン酸が結合する部位のFNR変異体が負の協働性を大きく損なわれることを見出した。これはNADP(H)の2'5'ADPのリン酸がFNRに結合すると、そこから遠く離れたFdとの相互作用部位に何らかの構造変化を誘起するアロステリック効果のような現象が起こるのではないかと想定される。(4)Fdファミリーに属するFdC2分子の緑葉内での発現や分布を詳しく解析し、この分子は葉緑体の分化・発達が盛んな部位で多く蓄積することを見出した。この結果は、FdC2ha光合成の電子伝達に直接かかわるよりは、葉緑体の生合成に関与する可能性を示唆するものである。フェレドキシン(Fd)は、[2Fe-2S]クラスターをもつ電子キャリアータンパク質であり、葉緑体の還元同化反応を司る多様な酵素群への電子供与体として働いている。Fdとこれらの酵素群との間では効率的な電子の授受が行なわれており、これは両者が電子伝達複合体を形成して分子間の電子移動に適した分子環境を作り出しているためである。これまでFd:NADPH酸化還元酵素(FNR)及び亜硫酸還元酵素(SiR)とFdとの2種の電子伝達複合体の立体構造を決定したので、最終年度は酵素活性や複合体形成の物理化学的特性を包括的な理解に注力した。結果を以下に記す。1)複合体中ではFdの[2Fe-2S]クラスターは、FNRのフラビンおよびSiRの[4Fe-4S]クラスターとの距離が6から10オングストローム程度に近接しおり、電子移動の媒体になるような構造は認められないので、トンネル効果による電子移動が主要であると結論した。2)FdとFd-依存性酵素との分子間相互作用に着目して、部位特異的変異体の生化学的解析を行った。Fd側の酸性残基群と酵素側の塩基性残基群の網羅的改変により静電力の寄与の重要性を確認し、特に酵素側の改変が電子授受の大きな低下を引き起こすことが判明した。3)Fdと酵素の接触部位に存在する非荷電性残基や疎水性残基の改変では、一律的な酵素反応の変化や複合体の親和力の低下は認められず、非静電的な相互作用力は複合体の最適構造の形成に寄与する微調整の役割を果たしていることが示唆された。4)等温滴定熱測定法で複合体形成の熱力学的パラメーターを求めたところ、Fd/FNRとFd/SiRいずれの場合も自由エネルギーが減少するが、前者は吸熱反応後者は発熱反応であり、複合体形成の熱力学特性に違いがあることが判明した。複合体形成時にFNRの場合は構造変化が誘起され、一方SiRの場合は大きな変化はないことが、この観察と関連するものと現時点では推察できる。光合成電子伝達鎖の末端に位置するフェレドキシン(Fd)は、葉緑体の還元同化反応を司る多様な酵素群への電子供与体として働いている。電子授受のパートナーとなる酵素蛋白質群と過渡的な複合体を形成し、分子間電子伝達の速度や収量が優れた生体反応のプロセスに寄与している。
正則ヒルベルト空間の巡回ベクトルの研究

本研究課題では、解析関数空間の巡回ベクトルの性質について研究を行い、評価のしやすい条件下での特徴付けを行うことを目的としている。(1)多変数フォック型空間の巡回ベクトルについて研究した。フォック型空間は整関数からなるバナッハ空間で、ベルグマン空間と同様に、体積測度を用いたノルムで定義された空間である。その中で、比較的に緩く減少する関数を荷重に持つ測度で定義される多変数フォック型空間の巡回ベクトルを完全に特徴付けることが出来た。得られた結果は零集合を持たない関数の大部分が巡回ベクトルになるというものである。これらの性質はハーディ空間やベルグマン空間とは大きく異なる。しかし、この結果から、測度の荷重がより強く減少する関数であれば、ベルグマン空間と同じような性質が現れることが推測できる。このケースについては、これから研究を進めていく予定である。(2)多重単位円板上のハーディ空間の巡回ベクトルを考える上で、座標関数の掛け算作用素における不変部分空間の構造解明することは重要な手掛かりとなりうる。そのため、本研究課題を進めるためにも、不変部分空間の構造を解明することは重要である。その中で、Rudin型不変部分空間のランクについて研究を行い、ある条件下でフリンジ作用素におけるランクを決定した。フリンジ作用素におけるランクは不変部分空間のランクと関連しており、そのランクの決定に向けた大きな前進といえる。この結果について、アメリカ数学会で発表を行った。解析関数空間の巡回ベクトルの研究に加え、多変数Hardy空間の不変部分空間についての研究についても十分な結果が出ているため、着実に進展していると考える。今後は、より一般的なフォック型空間の巡回ベクトルの研究を行う。また2重単位開円板上のハーディ空間の不変部分空間、Rudin外部関数の性質について研究を進める。予定していた出張が都合により延期されたこと、および一部物品の購入を2019年度に延期したために繰り越しが生じた。2019年度支払い請求した分と合わせ、当初の予定通りに使用する。
上皮増殖因子レセプタ-の産生制御に関与する細胞内情報伝達機構

1.レセプタ-の産生変異株を用いた解析EGFレセプタ-の発現制御は発現のONーOFFを決定する制御と、EGFや発癌プロモ-タ-TPAなどにより促進される“誘導的"制御機構がある。我々はEGFR遺伝子の発現が見られない肺小細胞癌(SCLC)の細胞株(Lu134)とそれから分離したレセプタ-産生変異株(AD320)を用いてEGFR遺伝子の発現制御の機構を解析した。Lu134をTPA処理するとcーfos、cーjun mRNAの増加が見られたがEGFR mRNA、cーmyc mRNAは検出されなかった。AD320ではEGFR mRNA、cーmyc mRNAともに他のレセプタ-産生細胞と同程度に検出され、EGFやTPAで処理するとEGFR mRNAは約2倍に、またcーjun、cーfos、cーmyc mRNAは数倍以上に増加した。従って、SCLC変異株ではEGFR遺伝子の発現に伴いEGFやTPAによる“誘導的"発現制御系が活性化された。2.PKC阻害剤を用いた解析EGFレセプタ-の産生を制御する情報伝達系へのPKCの関与を検討するために、PKCの調節ドメインに結合しPKC活性を光依存的に阻害するCalphostinーcを用いてEGFレセプタ-リン酸化やEGFが誘導する遺伝子発現への影響を調べた。細胞をCalーc処理すると光依存的にEGFレセプタ-のトレオニン・セリンリン酸化が促進された。特にセリン残基のリン酸化が特徴的に促進された。従って、Calーcはセリンキナ-ゼを活性化し、EGFやTPA処理と異なる作用機作でレセプタ-リン酸化を促進する可能性が示唆された。また、Calーcはレセプタ-のEGF親和性に変化を与えないが、レセプタ-の細胞内取り込みを促進した。Calーcはcーfosやcーjun等の増殖初期応答遺伝子mRNAの顕著な蓄積を誘導した。さらに、核ラン・オン分析により、Calーcは初期応答遺伝子の転写を促進することが示された。Calーcの誘導するリン酸化は、EGFやTPAの誘導するレセプタ-リン酸化とは異なる機作によると考えられるが、どのようなキナ-ゼによるのか、EGFレセプタ-特異的か、PKCが関与するかは明らかではない。このリン酸化促進に伴うcーfosなどの初期遺伝子の発現誘導の機構も明らかでないが従来知られていた情報伝達系とは異なる可能性がある。EGFレセプタ-(EGFR)の発現制御は発現のONーOFFを决定する制御と、EGFや発癌プロモ-タ-TPAなどにより促進される“誘導的"制御がある。EGFRを細胞当り1x10^5個持つヒト肺腺癌細胞株A549を用いてEGFやTGFβTPAが誘導するEGFR遺伝子の発現促進の機構をノ-ザンブロット法により解析した。

A549細胞を30分間TPA(20ng/ml)で処理するとその後3ー5後間でEGFR mRNAは対照の数倍に増加し、24ー48時間後に対照レベルに復帰した。また、EGF(50ng/ml)で30分間処理するとその後約3ー4時間でEGFR mRNAは約2倍に増加し、8時間後には対照レベルに復帰した。一方、TGFーβ(1ng/ml)は4時間の処理でEGFR mRNAを約1.5倍に増加させた。TGFーβはEGFと共存すると相剰的にEGFR mRNAを増加させた。TPAとEGFの添加後30分にはcーfosとcーjun mRNAの顕著な増加が検出されたが、TGFーβはcーjun mRNAのみを増加させた。従って、TGFーβはEGFやTPAとは異なるシグナル伝達経路を介してEGFR遺伝子の転写を抑制する可能性が示唆された。また、我々はEGFR遺伝子の発現が見られない肺小細胞癌(SCLC)の細胞株(Lu134)からレセプタ-を産生する変異株(AD320)を分離した。この変異株を用いてEGFR遺伝子の発現やcーfos、cーjun、cーmyc遺伝子の発現について検討した。Lu134ではEGF処理によるcーfos、cーjun mRNAの変化は見られなかったが、TPA処理ではcーfos、cーjun mRNAの増加が見られた。EGFRmRNA、cーmyc mRNAはTPA、EGF処理後も検出されなかった。AD320ではEGFR mRNAは他のレセプタ-産生細胞と同程度に検出され、cーmyc mRNAも検出された。AD320ではEGFR mRNAはEGFやTPAで処理すると約2倍に、またcーjun、cーfos、cーmyc mRNAは数倍以上に増加した。従って、SCLC方異系が活性化されることが明らかになった。カルホスチンC(Calーc)は藻類Cladosporiumcladosporioides由来のペリレンキノリン環をもつ物質で、蛋白キナ-ゼC(PKC)の調節ドメインに結合し、in vitroでその活性を光依存的に阻害することが知られている、我々は、上皮増殖因子(EGF)レセプタ-の産生を制御する情報伝達系へのPKCの関与を検討するためにCalーcのEGFレセプタ-リン酸化やEGFが誘導する遺伝子発現への影響を調べ、Calーcが一連のユニ-クな細胞応答を誘導することを見出した。ヒト腺癌細胞はA549及びEGFレセプタ-を重剰産生するヒト扁平上皮癌細胞NAをCalーcで処理すると添加30分後をピ-クに光依存的にEGFレセプタ-のリン酸化が促進された。遮光条件下ではEGFレセプタ-リン酸化は観察されなかった。リン酸化レセプタ-を酸分解しホスフォアミノ酸分析を行なったところEGF処理ではホスホチロシンが検出された。PKCの調節ドメインに結合しPKCを活性化する発癌プロモ-タ-TPA処理ではホスホセリンとホスホトレオニンが検出された。Calーc処理でもホスホセリン/ホスホトレオニンが検出された。またリン酸化レセプタ-をトリプシン分解しHPLCによるホスホペプチド分析を行なった。EGF処理ではトレオニン669とセリン1046/1047のリン酸化、またTPA処理ではトレオニン654とトレオニン669のリン酸化が顕著に促進された。Calーc処理ではトレオニン669とセリン1046/1047、及びトレオニン669ペプチドを含む分画でのセリン残基のリン酸化が顕著に促進された。従って、Calーcはセリンキナ-ゼを活性化し、EGFやTPAとは異なる部位もリン酸化する可能性が示唆された。
神経系の発生分化に関係する新しい核蛋白質のクローニング

Necdinはニューロン特異的に発現している約45kDaの核蛋白質である。そのcDNAクローンはニューロンへの分化誘導を行ったP19細胞のcDNAライブラリーから得られた。Necdin cDNAをNIH3T3細胞に導入して強制発現させると、細胞増殖が強く抑制される。一方、細胞増殖抑制作用を持つ癌抑制遺伝子産物Retinoblastoma gene product(pRb)やp53は共にDNAウィルス由来のoncoproteinであるSV40 largeT抗原と結合することが知られている。本研究では、まずnecdinの細胞増殖抑制機構をSV40 largeT抗原との結合能を指標にして解析した。COS-1細胞はSV40でtransformされた細胞でlargeT抗原を恒常的に発現している。そこでCOS-1細胞にnecdin cDNAを導入して発現させ抗necdin抗体で免疫沈降を行ったところ、largeT抗原が共沈された。さらに、Two-Hybrid法およびin vitro bindingで両者の結合を確かめてみた。その結果、necdinはlargeT抗原のtransform活性ドメイン依存的に結合することが明らかになった。またTwo-Hybrid法を用いたnecdinのdeletion analysisから、necdinの塩基性アミノ酸領域とそれに続くhydrophobic heptadrepeatを含む領域がlargeT抗原との結合に必要であることも明らかになった。次に、生理的なnecdin結合蛋白質がニューロンあるいはその発生過程で発現しているかをTwo-Hybrid法を用いたスクリーニングで検討した。得られた2種のクローンの一次構造を決定したところ、既に報告されているNEFA及びnucleobindinであることが判明した。これらの蛋白質はHelix-Loop-HelixとLeucine-zipperを含むDNA結合蛋白質であり、これらの蛋白質とnecdinの複合体が生理的なニューロン分化時における細胞周期に関連した遺伝子転写の制御機構に関与している可能性がある。
脳内環境：恒常性維持機構とその破綻

年2回の総括班会議を開催し、領域研究の方向付けの確認、研究者間の情報交換、リソースの共有、共同研究の推進を行った。領域ホームページの開設、ニュースレターを発行して、領域の研究成果の発信につとめた。また、領域研究の取り組み、成果を「脳内環境マップ」を作成した。さらに研究成果について意見交換する場として「脳内環境フォーラム」を開設した。ワークショップ(4回)、国際シンポジウム(4回)を開催し、若手研究者の渡航支援、さらに一般、学生に様々なアウトリーチ活動を推進した。総括班の審査により選定された公募班員4名からの研究提案に対して遺伝子改変マウス作製、抗体作製への支援を行った。平成23年度には、まず8月に領域のホームページを立ち上げ、公開した。また総括班の事務を行うスタッフ1名を雇用した。平成23年10月にキックオフシンポジウムおよび公募説明会を京都で開催した。さらに、平成24年1月には第一回の領域班会議を、一泊二日で熱海で開催した。この班会議には計画班員とその研究室構成員が参加し、すべての計画班員が口頭発表を行った。さらに国際領域アドバイザー2名、学術担当官1名をお迎えし、領域運営と今後の領域推進の方向性について貴重なアドバイスを頂戴した。それに基づき、計画班員全員が総括班の活動に参加することを決定し、役割分担を決め、領域の組織体制を確立した。以下、平成24年度に繰り越した400万円の使途について記載する。当初平成23年度に予定していた国際シンポジウムを、平成22年度採択の領域「シナプス病態」、平成23年度採択の領域「思春期の人間形成支援学」との3領域合同の国際シンポジウム開催(平成24年7月仙台で開催、外国人講演者は同時に開催した夏の班会議でも講演)、第35回日本神経科学大会での共催国際シンポジウム(平成24年9月名古屋で開催)、若手中心の国際シンポジウム(平成24年11月京都で開催)に延期、さらに拡大して実施した。また平成23年度は東日本大震災後の電力使用制限等により、計画班がリソース作製支援に対応できなかったため、実施を平成24年度に延期し、4名の公募班員の研究を支援することになった。班会議・シンポジウム関係では平成25年度夏の班会議を領域アドバイザー、学術調査官、計画班員、新公募班員参加のもとに平成25年8月29日30日、京都市の京都大学芝蘭会館(稲盛ホール・山内ホール)で開催した。一日目は総括班会議、全体会議、公募班員のうち田中、大倉、檜山、富永、富田の5名の研究代表によるワークショップと、特別講演1が行われ、2日目は公募班より柿澤、林、米田、岡村、野中の5名の研究代表、計画班より樋口、内山、高橋の3名の研究代表によるワークショップと特別講演2が行われた。特別講演1は大阪大学山下俊英教授より、特別講演2は東京大学水島昇教授の2名の招聘研究者により行われ、専門領域における最先端の知見をご紹介いただき、闊達なディスカッションが行われた。領域内研究者の今後の活動に大いに動機づけを与えて頂き、大変有意義なワークショップとなった。平成25年度冬の班会議は、平成26年1月8日9日の二日間にわたって、東京都文京区東京ガーデンパレスで開催された。一日目に総括班会議、全体班会議を行い、2日間で57名の班員が口頭発表を行った。アウトリーチ活動として、学会やシンポジウム活動として第35回日本神経科学会大会(2012年9月20日、高橋、木山)、第86回日本薬理学会(2013年3月2123日、山田、中川)、Neuro2013企画シンポジウム(2013年6月20日、山中、樋口)での発表やオーガナイズ、一般向け活動として、高校生の研究室訪問と講義(服部)、中学生への出張講義(服部、木山)、高校生向け講義(高橋、山中)を行った。研究リソースの支援を受けた4名の公募班員について、進捗を評価し適切に領域活動に生かされていることを確認した。ホームページでは11件のプレリリースされた研究成果を掲載し、班員同士の議論の場である脳内環境フォーラムには35件の投稿があった。班会議・シンポジウム関係では平成26年度夏の班会議を領域アドバイザー、学術調査官、計画班員、新公募班員参加のもとに平成26年7月24日25日、名古屋市のウインクアイチで開催した。一日目は総括班会議、全体会議、公募班員によるワークショップ、自然科学研究機構・生理学研究所池中一裕教授による特別講演が行われた。二日目は公募班員及び東京医科歯科大学・難治疾患研究所清水重臣教授の特別講演を行った。12月11日には包括脳ワークショップとして、精神神経疾患の関連する岡澤、門松、喜田、高橋、池中班の5領域で「精神神経疾患に対するアプローチ:各領域の取り組み」と題した合同シンポジウムが開催され、当領域は「脳内環境の解明と神経疾患克服への道」と題した発表を高橋、樋口、山中より行った。平成26年度冬の班会議は、平成27年1月8日9日の二日間にわたって、広島大学応仁会館で開催した。一日目に総括班会議に続き、第2回若手シンポジウムを開催、公募半に属する4名の若手研究者による研究発表が行われた。引き続き全体班会議を行い、2日間で30名の班員が口頭発表を行った。

また若手研究者の国際学会への参加を助成するTravel Awardに金沢大学医学系大学院生干場義生氏(河崎洋志研究代表)が選出され、北米神経科学学会で発表した。研究リソースについては計画班と公募班で新たに、情報を提供しデータベースを作成した。ホームページでは10件のプレリリースされた研究成果を掲載し、班員同士の議論の場である脳内環境フォーラムには27件の投稿があった。班会議・シンポジウム関係では平成27年度夏のワークショップを領域アドバイザー、学術調査官、計画班員、公募班員参加のもとに平成27年9月24日25日、軽井沢プリンスウェストで開催した。一日目は総括班会議、全体会議、公募班員による研究成果の発表に加え、京都大学大学院理学研究科森和俊教授による特別講演を開催した。二日目は、公募班員の発表、東京大学大学院医学系研究科岡部繁男教授に特別講演をいただいた。二日にわたり、全班員によるポスター発表も行った。平成27年度冬の班会議は、平成28年1月7日8日の二日間にわたって、京都大学医学部芝蘭会館で開催した。一日目は、総括班会議に続き、第3回若手国際シンポジウムを公募班に属する4名の若手研究者の研究発表により行い、加えて外部アドバイザーであるカナダ・ラバル大学Jean-Pierre Julien教授による基調講演会を開催した。二日目は一日目に引き続き班会議を行い、2日間で33名の班員が口頭発表を行った。班会議の閉会に際して、Julien教授による研究発表の総評と、脳内環境領域に対する高い評価を頂いた。年2回の総括班会議を開催し、領域研究の方向付けの確認、研究者間の情報交換、リソースの共有、共同研究の推進を行った。領域ホームページの開設、ニュースレターを発行して、領域の研究成果の発信につとめた。また、領域研究の取り組み、成果を「脳内環境マップ」を作成した。さらに研究成果について意見交換する場として「脳内環境フォーラム」を開設した。ワークショップ(4回)、国際シンポジウム(4回)を開催し、若手研究者の渡航支援、さらに一般、学生に様々なアウトリーチ活動を推進した。総括班の審査により選定された公募班員4名からの研究提案に対して遺伝子改変マウス作製、抗体作製への支援を行った。班会議・シンポジウム関係では平成24年度夏の班会議を、領域アドバイザー、学術調査官、計画班員、新公募班員参加のもとに平成24年7月23日24日、仙台市のTKPガーデンシティ仙台で開催した。一日目は総括班会議、全体会議、公募班員によるワークショップが行われた。二日目は公募班員及びスタンフォード大学のTony Wyss-Coray教授の特別講演を行った。7月25日には包括脳ワークショップとして、「脳内環境」「シナプス病態」「自己制御精神」による脳疾患関連3領域合同国際シンポジウムが開催された。9月20日には第35回日本神経科学大会において共催シンポジウムとして「脳内環境警戒管制システムを担うミクログリア-その破綻による精神・神経疾患-」を海外領域アドバイザーのロンドン大学Gennadij Raivich教授を招聘して開催した。平成24年度冬の班会議は、平成25年1月16日17日の2日間にわたって、京都大学医学部芝蘭会館で開催した。一日目に総括班会議、全体会議を行い、2日間で58名の班員が口頭発表を行った。若手育成プログラムとして、平成24年11月17日に京都平安ホテルにおいて、「脳内環境」の第1回若手国際シンポジウムを開催した。
里親不調により里子との離別を体験した里親のメンタルヘルスとそのケアに関する研究

里子との離別という喪失を体験した5名の里親の「負担感」を質的に分析した結果、里親は【児童養護のシステムに対する失望】に下支えされた【里子との離別による激しい情動体験】【痛みを伴う自己洞察による喪失体験の継続的な問い直し】【痛みを伴う自己洞察による喪失体験の受けとめ】【生きる力の再生のための人との繋がりの希求】という一連の「悲嘆のプロセス」を体験しており、「機能不全を起こすリスクの高い小さな共同体としての里親家庭」、「機能不全を起こしている児童養護のシステム」および、「里親をマイノリティとして扱う文化的・社会的力学」の三重構造の中に「マイノリティーである生活者」として置かれていることが示された。里親不調による里子との離別を余儀なくされた5名の里親を対象としたインタビュー内容が質的記述的に分析され、里親の体験の構造を踏まえた「負担感」の支援の要点が以下のごとく明らかとなった。里親不調による里子との離別という大きな喪失体験を余儀なくされた里親の措置変更前後の「負担感」は【児童養護のシステムに対する失望】に下支えされる形での【里子との離別による激しい情動体験】【痛みを伴う自己洞察による喪失体験の継続的な問い直し】【痛みを伴う自己洞察による喪失体験の受けとめ】【生きる力の再生のための人との繋がりの希求】という一連の「悲嘆のプロセス」によってある程度説明が可能であり、里親はそれらを通して傷つき翻弄されるに任せるだけではなく人間として成長し「生きる力の再生」を体験していることが明らかとなった。したがって里親が体験している「負担感」を支援するための要点は、里子との離別に伴う正常な「悲嘆のプロセス」が安全におこなえるような環境や人的資源が提供されることである。また、里親を取り巻く状況と不調による措置変更前後のプロセスを「平和学」で提唱される「直接的暴力」「構造的暴力」「文化的暴力」の概念によって検討した結果、里親の「負担感」を取り巻く構造には「機能不全を起こすリスクの高い小さな共同体としての里親家庭」「機能不全を起こしている児童養護のシステム」および「里親をマイノリティとして扱う文化的力学・社会的要因」の三重の構造があることが示唆された。里親不調による里子との離別という大きな喪失体験を余儀なくされた里親の「語り」を、「負担感」に焦点を当てながら質的記述的に分析し、その体験の構造を検討した。また、里親が社会の中でどのような構造の中に置かれているかを検討しながら、里親の「負担感」の支援に関する要点を整理した。1.里親不調により里子との離別を体験した里親の措置変更前後の「負担感」は「悲嘆のプロセス」によって説明が可能であった。したがって、「負担感」の支援の要点は、離別(喪失)に伴う正常な「悲嘆のプロセス」が安全に行なえるような環境や人的資源が提供されることである。2.里親を取り巻く構造を、「平和学」で提唱される「直接的暴力」「構造的暴力」「文化的暴力」の概念により検討した結果、「機能不全を起こすリスクの高い共同体としての里親家庭」「機能不全を起こしている児童養護のシステム」「里親をマイノリティとして扱う文化的力学・社会的要因」の三重構造があり、特に配慮を欠いた措置変更がおこなわれた場合、里親はそれを児童相談所からの可視的な「直接的暴力」として体験しやすい。そのような「直接的暴力」を下支えする不可視的な「構造的暴力」および「文化的暴力」の力学が、里親が子どもの養育に際して体験する日常の「負担感」に色濃く影響を及ぼし続けていた。3.里親不調により措置変更を経験している里親の「負担感」は、里親が我が国ではマイノリティな存在であるという「環境因子」によって被る「障害」により体験させられているという側面も併せ持っており、措置変更による里子との離別に至る経過の途中もしくは、そのプロセス全体にわたって侵害されているのは、里親の「生活者としての権利」と「生きる力」であった。この様な状況下において、まさに里親はマイノリティとして味わう普遍性のある苦しみを「負担感」として体験しているという認識が支援する側には不可欠である。本研究の目的は、(1)里親不調により里子との離別を余儀なくされた「里親」の「語り」の分析をおこなうことにより、里親の負担感に関する体験の構造を明らかにし、(2)子どもにとっての安全な養育環境の大前提である里親のメンタルヘルスとそのケアに関する要点を検討することにある。H23年度は、以下3点について実施した。1.里親不調を体験した里親の手記および全国調査資料を対象としたテキストマイニングによる分析:当事者の主観的体験の構成概念を探索的に検討し、半構成的インタビューの際の妥当な質問項目の検討をおこなった。

2.研究対象者の選択:研究者が関与する当事者団体である里親会、全国ファミリーホーム連絡協議会の会員、児童養護関連学会の参加者である養育里親(専門里親含む)のうち、「里親不調による措置変更を体験していることを、全国大会(学会)や地方の当事者団体、児童養護、福祉関係の研究会、ワークショップ等で等で自ら公表している者」で、それら学会や研究会のセッション終了後の会場において本研究の趣旨および概略を直接口頭で説明し、研究協力を依頼した。その際、里親不調による措置変更を体験後3年以上経過し、措置解除・変更にいたるプロセスやその当時の思いをある程度冷静に言語化でき、家族や養育中の里子にも悪影響がないと本人が判断していることを確認後、「後日研究協力依頼書および同意書を郵送する旨」を伝え、名刺等の交換をおこない連絡先を把握し、最終的に里親4名よりインタビューの承諾を得た。3.実施した文献検討および里親、小規模居宅型児童養護施設運営者、児童擁護関係団体の役員および、研究者とのディスカッションによる課題の抽出と整理の結果を関連雑誌に投稿した(児童養護とファミリーホーム、vol.2, pp88-93,pp133-139)。里親不調に伴う措置変更を体験した里親へのインタビューに際して、被験者は里子との離別という大きな喪失体験を抱えている上に、マイノリティーとして心理社会的にも傷つき、社会や対人関係から退却的になっている事が当初から予想されていた。そのため、インタビュー自体が新たな外傷体験とならないように、インタビュー手順および倫理的配慮について慎重に検討し、以下の手順を踏んだ。1.一般の人が比較的容易に入手、アクセス可能な里親に関する図書、手記、里親および、ファミリーホーム開設者や行政機関が設置したHP、ブログなど電子媒体の内容を分析した。2.発達障害や知的障害児など、いわゆる育てにくい子どもの養育をおこなっている里親がどのような主観的体験とともに「負担感」を体験しているのかを知るために、日本グループホーム学会が実施し平成21年度独立行政法人福祉機構助成事業の報告書として出版した「障害児の里親促進のための基盤整備事業報告書」の中の養育里親の体験に関する自由記述データ(n=839;163034字)をテキストマイニングの手法により探索的に分析し、発達障害児と身体障害児と健常児では自由記述にどのような質的な違いがあるのかを明らかにした。テキストマイニングの結果を踏まえながら、調査対象とすべき被験者の範囲および、収集すべきデータの質について検討し、里親にとって非侵襲的なインタビューガイドを作成した。研究者が長い専門里親歴があったため、共感的なスタンスで被験者の語りを妨げることなく聴取することが可能であったこと、また里子との離別から時間が経過し、被験者が苦しい胸の内を具体的に語ることが可能な状態に至っていたこと、そして事前に考慮期間を設けていたことや、夫婦一緒の聴取をおこなった結果、リラックスした中でそれぞれの思いが語られたことなどが良質のデータを得ることに繋がった可能性がある。