hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
翻訳研究（トランスレーション・スタディーズ）のアプローチによる英米文学受容研究

「円本」が一般読者の文学受容を拡大したことは事実であるが、外国文学の「円本」においては、実際には一般読者の興味・関心を第一義的に重視したわけではなく、明治後半から大正期にかけて確立されていた学問的な文学受容態度や大衆をそれによって啓蒙しようとする姿勢が、月報や広告に現れた文学論や翻訳論には明らかに書き込まれている。この分析について英米文学と翻訳研究の学会で研究発表・シンポジウム発表を行い、両分野の視点から有益なフィードバックを得ることができた。また、今年度の二つの国際学会にも応募して既に発表採択済みである。今年度はさらに「円本」前後の英米文学翻訳受容との比較へと考察を拡大する予定である。大正・昭和前半における翻訳による英米文学受容の全体像の把握につなげていく上で、受容の意識と状況の転換点と推測できる「円本」の翻訳受容を考察したのは一つの重要な成果と考えており、今後の研究に向けた基礎となるものである。本研究は、翻訳研究(トランスレーション・スタディーズ)の視座から英米文学研究にアプローチするものである。考察対象を大正から昭和初期に設定し、当時の翻訳のコンテクストとの関連という新たな視点から日本独自の英米文学の翻訳受容を再検討するとともに、日本の英米文学研究の視座拡大の一助となることを目指すものである。23年度に若干計画修正を行い、大正末昭和初期の外国文学の円本全集の考察を中心に翻訳受容の整理と翻訳出版コンテクストおよびその背後にある英米文学翻訳観を分析することとした。24年度はそれに基づく考察の継続、研究成果の発表、および、世界文学の視座も接合する考察を追加しながら、研究を進めてきた。交付申請時から若干の研究の推進手順の変更はあったものの、大正昭和初期の翻訳受容史の整理と翻訳のコンテクストや翻訳観の分析、および英米文学研究の視座拡大という目的から逸脱するものではない。これまで、トランスレーション・スタディーズと文学研究の各分野における研究発表を行い、両者の接合については方法論としての妥当性と新たな視点の提供ができる方向性を一定程度見いだしている。したがって、当初より25年度に想定していた研究論文の執筆も十分可能と考えており、現在のところ当初計画からの大きな逸脱や遅延はないと認識している。本研究は、翻訳研究(トランスレーション・スタディーズ)の視座から英米文学研究にアプローチし、翻訳のコンテクストとの関連という新たな視点から日本独自の英米文学の翻訳受容を再検討することを目的としている。その一例として、大正昭和前半の時期を取り上げ、当時の翻訳受容の整理と翻訳出版のコンテクストおよびその背後にある英米文学翻訳観を分析するものである。平成25年度に研究成果全体を論文としてまとめるために、当初は23年度を大正期、24年度を昭和前半と便宜的に通時的考察を計画していたが、この時期の転換点と推測できる昭和初期の「円本」をめぐる状況を先に考察し、次にその前後の時期との比較考察を通じて分析を拡大するように計画を修正した。このように研究の推進手順は多少変更したものの、大正昭和前半の翻訳受容史の整理と翻訳のコンテクストや翻訳観の分析から逸脱するものではない。この計画修正にしたがって、23年度は「円本」出版時期についての考察を概ね順調に進められた。
回転成層流体における乱流場の振舞い

今年度は、昨年度までに開発した数値モデルを用いて、三次元Boussinesq系での成層流体中の強制乱流の数値実験を行った。まず、渦粘性係数を固定したときにエネルギーカスケードが成層にどのように依存するかを調べ、成層を含む場合にエネルギーカスケードとエネルギー逆カスケードのどちらが観測事実を理解する上でより妥当であるかを検討した。その結果、成層が強いほどエネルギー逆カスケードがより起こりやすいものの、観測結果を説明するには不十分であることが明らかとなり、Lilly(1984)の提唱した成層乱流の理論は観測を説明するには至らないことが分かった。一方、エネルギーカスケードについても成層度に大きく依存し、成層が強くなるほど小スケールへのエネルギー輸送は小さくなることが分かった。固定した渦粘性係数を与える限りにおいては、強制を十分に強くしない限り観測されるべき乗則は得られず、観測される振幅よりも大きな振幅しか得られなかった。そのため、観測事実を説明するにはまだ矛盾が生じていることになる。しかしながら、エネルギー収支を調べたところ、成層を含む場合にはエネルギーが高波数側に輸送された後に高波数側で散逸が起こるという期待される形になっていないことが分かった。つまり、渦粘性係数を固定したままでは適切な散逸過程が表現できないことになる。ここまでの結果を気象学会2002年秋季大会で報告した。さらにLESを用いた数値実験を行い、成層乱流中のより適切な散逸過程が表現できるかを検討した。エネルギー収支としては、定性的にはエネルギー輸送が増大し、高波数側での散逸が増えるという点や低波数域でのエネルギースペクトルが観測に近いものとなっている点で改善が見られたが、高波数側の散逸が不十分でここでのエネルギーが過大評価されている問題も明らかとなった。これらの結果については今後の学会で報告する予定である。
地球物理・地球化学的複合アプローチによる火山噴火準備過程の解明

三宅島において比抵抗構造探査(MT探査)を実施し、現在の火山地下構造、特に、マグマや熱水などの火山性流体の空間分布の把握を行う。また、これまでに実施された比抵抗探査の結果と比較することで火山活動に伴う地下構造の時間変化を検出する。さらに、自然電位や火山ガス観測など多項目の観測結果や混相熱水流体シミュレーションの数値解析と統合することで、推定された地下構造との物理的・化学的整合性をとり、今後の時間発展および将来の火山噴火予測に資する研究を行う。
非線形赤外分光を用いて溶媒-溶質間の相互作用強度を測定可能にする物理的原理の開発

DNA二重らせん鎖の電子励起状態のダイナミクスは紫外線によるDNA損傷のメカニズムを解明するためにも重要なテーマである。我々はDNA二重らせん鎖の励起子のダイナミクスの理論を提案した。具体的には、DNA二重らせん鎖の非局在化した励起子に関するハミルトニアンを構成し、その励起子状態の輸送を表現するグリーン関数のノンマルコフな時間発展式を解くことで、励起子のダイナミクスを求めた。DNAの電子励起状態ダイナミクスを非局在化した励起子の描像でとらえたのは、本研究がはじめてである。ハミルトニアンには各baseの励起エネルギーやbase間カップリングのdisorderの効果、そしてexciton-phononカップリングの影響を取り入れた。さらにグリーン関数で励起子輸送を表現したことで励起子ダイナミクスの効果をphoton echo peak shiftや二次元スペクトロスコピーなどの非線形スペクトロスコピーの観測量として表現することに成功した。その結果、非線形スペクトロスコピーの測定結果が励起子ダイナミクスに関して重要な情報を与えることが示唆された。具体的には、励起子に関する密度演算子のコヒーレンス輸送がDNAの励起された初期状態に関する記憶を超高速で消失させる効果があり、しかもその過程で、特定のpathを通った励起状態輸送が行われることが示唆された。これはDNA二重らせん鎖が紫外線の影響に対してかなり効率的な回避機能を持っていることを示す重要な一例である。本年度の研究では、多次元赤外スペクトロスコピーの実験結果に解釈を与える理論的枠組みを提案し、多次元赤外スペクトロスコピーの持つ新たな可能性を提示することを目的とした。タンパク質などの生化学分子や二量体分子の多くでは、双極子-双極子相互作用と双極子-誘起双極子相互作用という二種類の本質的な双極子相互作用が働いている。これらの相互作用の強さは相互作用距離の三乗に反比例する。この事実は、もし二つの相互作用の効果を単独で検出できたならば、分子構造に関する情報をfsやpsオーダーの時間分解能で直接得ることができることを示唆している。本研究により、多次元赤外スペクトルにおいて、二つの双極子相互作用・分子振動ポテンシャルの非調和性・双極子と分極率の非線形性の4つの主要な効果の大きさを見積もることが可能となった。また4つの効果が同程度に出現するような複雑な分子モデルにおいて、多次元赤外スペクトルは双極子-双極子相互作用と双極子-誘起双極子相互作用、そして分子振動ポテンシャルの非調和性をそれぞれ独立に検出できることが可能であることが示された。特に、双極子-双極子相互作用と双極子-誘起双極子相互作用がそれぞれ単独で検出できたことで、それらのピーク強度から分子構造に関する情報をfsやpsオーダーの時間分解能で直接得ることができる。また実験やシミュレーションの簡便な解析ツールとして、本プロジェクトで得られた理論的な表式を基に開発した無償プログラムをweb上で公開している。紅色光合成細菌などの光合成アンテナ系では、様々な電子励起状態の超高速輸送を示す。これらの超高速な輸送は、太陽光エネルギーによって励起された電子エネルギーが失活する前にLH1アンテナ中心にあるReaction Centerまで運ばれるために実現されたものと思われる。重要なことは、これらの超高速輸送が従来のスタンダードな励起エネルギー輸送方程式であるForster理論では記述できないという事実である。すなわち、超高速輸送は新しい輸送方程式の存在を示唆していると言える。我々は超高速輸送の中でももっとも速い時定数(100fs-200fs)を持つLH2アンテナ内の超高速輸送に注目した。LH2アンテナは18個のB850クロロフィルが強くカップルした分子凝集体である。このような分子凝集体では、電子励起は凝集体全体に対して(LH2ではリング全体に対して)起きる。そのような電子励起状態をexcitonと呼ぶ。我々はこのexcitonの超高速な輸送がどのように起こっているかを理解すべく、その輸送方程式/時間発展式を導出した。また、excitonの超高速輸送の効果を近年目覚しい進歩を遂げている非線形レーザースペクトロスコピーで実験的に観測可能な物理量として取り出すことに成功した。非線形スペクトロスコピーでは試料に複数回の電場パルスをあて、その非線形応答関数を観測する。非線形応答関数には、線形吸収スペクトルよりもより豊富な試料中の分子に関する情報が含まれており、より詳細に分子の性質を調べるのに適している。我々が今回注目したexciton輸送はcoherent状態にあるdensity matrixのという輸送、すなわちdensity matrixのoff-diagonal partの輸送である。このexciton-excitoncoherent transfer(EECT)は、psオーダーの時間領域では終了しているとされ、これまで注目されてこなかったが、今注目しているfsオーダーの超高速な時間領域では有意に効いてくることが予想される。実際、今回計算したEECTの効果を含む場合と含まない場合とで、非線形応答関数に如実な違いが出ることがわかった。そして、EECTはfsオーダーでの超高速decoherenceを引き起こす重要な役割を担っていることがわかった。量子coherenceの消失が通常はpsオーダーで起こることを考えると、これはultrafast memory lossとでも言うべき現象である。

具体的には、DNA二重らせん鎖の非局在化した励起子に関するハミルトニアンを構成し、その励起子状態の輸送を表現するグリーン関数のノンマルコフな時間発展式を解くことで、励起子のダイナミクスを求めた。DNAの電子励起状態ダイナミクスを非局在化した励起子の描像でとらえたのは、本研究がはじめてである。ハミルトニアンには各baseの励起エネルギーやbase間カップリングのdisorderの効果、そしてexciton-phononカップリングの影響を取り入れた。さらにグリーン関数で励起子輸送を表現したことで励起子ダイナミクスの効果をphoton echo peak shiftや二次元スペクトロスコピーなどの非線形スペクトロスコピーの観測量として表現することに成功した。その結果、非線形スペクトロスコピーの測定結果が励起子ダイナミクスに関して重要な情報を与えることが示唆された。具体的には、励起子に関する密度演算子のコヒーレンス輸送がDNAの励起された初期状態に関する記憶を超高速で消失させる効果があり、しかもその過程で、特定のpathを通った励起状態輸送が行われることが示唆された。これはDNA二重らせん鎖が紫外線の影響に対してかなり効率的な回避機能を持っていることを示す重要な一例である。
中世及び近世における寺社諸堂の規模決定技法に関する研究

研究2年度目であることから資料の収集・整理を継続しておこなうとともに、実際の事例の検討を数多くおこなった。その結果の一部は日本建築学会に査読論文1編を投稿し掲載された。資料の収集・整理の具体的活動は以下のとおり。6月に都立中央図書館にて林家文書資料集、山口県公文書館にて門井家文書資料収集、周防大島文化交流センター宮本常一記念館にて長州大工資料収集、9月は広島県の重要文化財浄称寺本堂、同観音堂、同鐘撞堂、堂大門修理現場にて現場調査、愛媛県の重要文化財本山寺本堂、同仁王門、県指定鎮守社にて現場調査、11月は山形県鶴岡市立図書館小林家文書、富山県立図書館松井家文書、3月は愛媛県の重要文化財石手寺本堂、同三重塔、同護摩同、同鐘楼、高知県にて重要文化財鳴無神社本殿、同拝殿・幣殿の現地調査を実施した。資料の検証を神社についておこない、それを日本建築学会に投稿し技術報告集第25巻第59号2019年2月(査読論文)に掲載された。引続き次年度に寺院編をまとめて投稿を予定している。また研究成果の共有や研究協力者との意見交換のために、9年前から技術史研究会を立上げ年45回程度の勉強会を実施しているが、本年度は以下の5回を開催した(回数はこれまでの延べ回数)。5月(第16回)「安楽寺多宝塔の解体修理(和歌山県文化財センター結城)/柱寸法の決定方法について(大上)」、7月(第17回)「大工技術としての和算(名古屋工業大学教授麓和善)/松殿山荘見学」、9月(第18回)「文献からみた魯班尺(竹中大工道具館安田徹也)/禅宗様仏堂の主要寸法(大上)」、12月(第19回)「天井細見(元和歌山県文化財センター鳴海祥博)/襷墨による軒の高さの決定方法について(大上)」、2月(第20回)「古代の木造建築における柱配置の方法とその伝統(東洋大名誉教授太田邦夫)」。社寺のうち神社については査読論文を1編投稿し日本建築学会技術報告集(査読付)に掲載されたことから概ね予定とおりである。この論文で研究の取り纏め方法を確立することができ、また今年度中に寺院建築の事例も検討を進めていることから、研究は計画とおり進捗していると考えられる。神社については考察を完了したので、取りまとめかたや図面の表現などの研究フォーマットは完成しているので、今後は寺院のケースをさらに検討を加えて論文として取りまとめ日本建築学会に査読付き論文として投稿する予定である。研究初年度であることから研究に必要な資料の収集・整理を重点的におこないつつ、社寺諸堂の表の間の決定技法の検討をはじめた。具体的に資料収集をおこなったものとしては、群馬県立図書館蔵大工文書、福島県田村市の横田家大工文書、奈良国立文化財研究所蔵木奥家文書、香川県丸亀市塩飽大工文書について現地に赴き複写等資料を収集したことがあげられる。また実際の歴史的建造物については、金剛寺、春日大社、法隆寺のほか、尾道市で現在修復中の重要文化財常称寺本堂現場の調査をおこない同市の西国寺山門も実測調査を実施した。さらに高知市の重要文化財土佐神社の社殿と楼門の規模の関係を探るために楼門の実測をおこなった。その他高知県内の山間部で幕末から明治期に盛んに建立された所謂長州大工による社寺建築についても調査をおこなった。また福島県会津地方に集中して残る三間堂12棟や社殿が5棟横に並ぶという特異な社殿配置である秋田市赤神神社五社堂も研究資料に資するため現地調査をおこなった。その他、調査結果の検討と研究協力者等との情報交換のため4年前から立ち上げている技術史研究会の勉強会を大阪市立大学において3回開催した。今年度の初回(通算13回目)は7月に「教王護国寺御影堂の概要と小屋組みについて」(京都府文化財保護課技師)、「日本建築の五原則」(大上)というテーマでおこない、第2回(通算14回目)は9月に「我が国における鋸の文明史」(渡邉晶)、「1枝寸法と垂木の関係について」(大上)というテーマでおこなった。第3回(通算15回目)は12月に「佐渡の近世社寺建築にみられる組物の架構技法について」(赤石憲祐)、「法隆寺建築の設計技法」(大上)というテーマでおこなった。毎回10数名の参加者があり研究課題にとどまらず幅広く日本建築技術史について熱心な議論が交わされた。今年度は基礎資料である大工文書の収集に努めたがまだ十分ではなく今後も埋もれた資料を発掘する努力が必要である。また文化財建造物の図面についてはかなりの枚数を収集したがこれも継続する必要がある。なお公式の図面のない建造物については現地調査が必要であるが十分おこなわれなかった。他方これまで収集した資料を基に順次図面を作成し建物規模の相互の関係性について検討をはじめているが、今年度は特に古代寺院である法隆寺の諸堂の関係を検討した結果、比例関係は中世より古代のほうが支配的である可能性が高いことがわかってきたので、本研究の意義はより高くなったのではないかと期待される。

6月に都立中央図書館にて林家文書資料集、山口県公文書館にて門井家文書資料収集、周防大島文化交流センター宮本常一記念館にて長州大工資料収集、9月は広島県の重要文化財浄称寺本堂、同観音堂、同鐘撞堂、堂大門修理現場にて現場調査、愛媛県の重要文化財本山寺本堂、同仁王門、県指定鎮守社にて現場調査、11月は山形県鶴岡市立図書館小林家文書、富山県立図書館松井家文書、3月は愛媛県の重要文化財石手寺本堂、同三重塔、同護摩同、同鐘楼、高知県にて重要文化財鳴無神社本殿、同拝殿・幣殿の現地調査を実施した。資料の検証を神社についておこない、それを日本建築学会に投稿し技術報告集第25巻第59号2019年2月(査読論文)に掲載された。引続き次年度に寺院編をまとめて投稿を予定している。また研究成果の共有や研究協力者との意見交換のために、9年前から技術史研究会を立上げ年45回程度の勉強会を実施しているが、本年度は以下の5回を開催した(回数はこれまでの延べ回数)。5月(第16回)「安楽寺多宝塔の解体修理(和歌山県文化財センター結城)/柱寸法の決定方法について(大上)」、7月(第17回)「大工技術としての和算(名古屋工業大学教授麓和善)/松殿山荘見学」、9月(第18回)「文献からみた魯班尺(竹中大工道具館安田徹也)/禅宗様仏堂の主要寸法(大上)」、12月(第19回)「天井細見(元和歌山県文化財センター鳴海祥博)/襷墨による軒の高さの決定方法について(大上)」、2月(第20回)「古代の木造建築における柱配置の方法とその伝統(東洋大名誉教授太田邦夫)」。社寺のうち神社については査読論文を1編投稿し日本建築学会技術報告集(査読付)に掲載されたことから概ね予定とおりである。この論文で研究の取り纏め方法を確立することができ、また今年度中に寺院建築の事例も検討を進めていることから、研究は計画とおり進捗していると考えられる。大工文書や図面の収集、現地調査は継続して実施するが、それら資料の分析や検討を研究の中心課題としなければならず、そのため多くの作図が今後は必要である。また表の間という平面的な関係に着目してきたが、高低差という高さの関係についても重要である可能性が出てきたためそれを研究のなかでどのように反映するかが目下の課題である。現在までの考察で法隆寺諸堂についての論文はすでにできているが推敲を進めて近日中に投稿する予定である。神社については考察を完了したので、取りまとめかたや図面の表現などの研究フォーマットは完成しているので、今後は寺院のケースをさらに検討を加えて論文として取りまとめ日本建築学会に査読付き論文として投稿する予定である。研究初年度である今年は全体に資料収集を中心におこなったが、図面資料は購入ではなくできるだけ複写をしたことにより物品費が節約できたためであり、旅費は資料収集のための調査出張を選別したことにより減が生じた。これらは次年度に研究協力者の協力を得て執行する予定である。人件費・謝金は特に社寺建築図面のCAD入力を依頼できる方が確保できなかったためで、次年度は確保できる見通しであり作図が進む予定である。その他は論文投稿料等を見込んでおり次年度に執行する予定である。査読論文を1編投稿するなど研究考察は進んでいるが、資料図面のCAD入力作業が十分に進めることができておらず人件費に次年度使用額が生じた。これは社寺建築のCAD入力を依頼する人物が年度中頃まで見つからなかったためであった。ただ年度の後半は依頼することができる体制が整ったことから次年度に向けてCADによる図面化が進むことが期待される。
液晶バックライトの発光効率向上と低電圧化の基礎研究

2007年度および2008年度を通して液晶バックライトに用いる冷陰極蛍光ランプの電極応用としてダイヤモンド基板上にMgOを成膜した複合電極の可能性を検討した。研究成果の概要を以下に列記する。(1)ダイヤモンド電極上に成膜するMgO薄膜の堆積条件(スパッタリングガスの混合比、基板温度、MgO膜厚)を変えて、製作したMgO薄膜の二次電子放出係数を明らかにし、成膜の最適条件を確立した。(2)複合電極の下地として用いるダイヤモンド電極の放電特性への電極表面粗さの影響を検討した結果、表面を粗くすることにより二次電子放出係数が大きくなることを見出した。(3) Ne/Xe混合ガスプラズマからのXe原子の共鳴線147nmの真空紫外発光強度はXeガスを30%添加で最大となることがわかった。本研究は液晶バックライト用無水銀蛍光ランプの高輝度化に向けて、耐スパッタ性電極の高電子放出化と真空紫外発光の高効率化を目的としている。特にダイヤモンド膜とMgO膜を用いた複合電極の可能性と真空紫外発光について検討することが主たる目標である。本年度はMgO薄膜の堆積条件を変えて作製したMgO薄膜電極と二次電子放出係数γ値との関係を検討した。サンプル電極としてのMgO薄膜の作製に使用したRFマグネトロンスパッタリング装置は、アノード直径40mm、カソード直径80mm電極間距離50mmである。ターゲットにはMgO焼結体、基板には石英ガラス板(10mm角、厚さ0.3mm)を使用した。成膜条件はRF100W、ガス圧力0,5Pa、ガス流量5sccm一定とした。スパッタリングに用いたガスはAr/O_2混合ガスを使用した。電極用サンプルの膜厚は500nmとした。放電開始電圧はVQリサジュー図形法を用いて測定した。Neガス放電中でAr/O_2混合比を変化させて形成したMgO薄膜電極について放電開始電圧とpd(ガス圧力×電極間距離)値との関係(パッシェン曲線)を測定した。この放電開始電圧を用いてタウンゼントの火花条件式により、二次電子放出係数(γ値)を決定した。この結果、Arに20%O_2以上の混合ガスで成膜されたMgO電極のγ値はAr単ガスで成膜されたMgO電極のものより約2倍増加することがわかった。MgO薄膜断面をSEMで観測した結果、O_2添加により断面の柱状構造が明瞭になっていることがわかった。この高密度な柱状構造によりγ値が増加したものとみられる。今後、目標としているMgOとダイヤモンドとの複合電極を用い、より低電圧化への可能性とNe/Xeプラズマ中の真空紫外発光強度の最適化を探る。本研究は液晶バックライト用無水銀蛍光ランプの高輝度化に向けて、耐スパッタ性電極の高電子放出化と真空紫外発光の高效率化を資的としている。特にダイヤモンド膜とMg0膜を用いた複合電極の可能性と真空紫外発光について検討することが主たる目標である。平成20年度はMg0薄膜電極の二次電子放出係数γ値と基板温度及びMg0膜厚との関係を検討した。またダイヤモンド電極の二次電子放出に与える電極表面の粗さの影響について検討した。Mg0薄膜の作製にはRFマグネトロンスパッタリング装置を用いた。ターゲットにはMg0焼結体、基板には石英ガラス板を使用した。成膜条件はRF100W、ガス圧力0.5Pa、ガス流量5sccm一定とした。スパッタリングに用いたガスはAr/20%0_2混合ガスを使用した。放電開始電圧はVQジサジュー図形法を用いて測定した。Neガス放電中で基板温度を200°Cから700°Cまで変化させて作製したMg0薄膜電極と基板温度を一定とし、Mg0膜厚を10nmから500nmまで変化させて作製したMg0薄膜電極について放電開始電圧とpd(ガス圧力×電極間距離)値との関係(パッシェン曲線)を測定した。この放電開始電圧を用いてタウンゼントの火花条件式により.二次電子放出係数(γ値)を決定した。この結果、γ値は基板温度500°Cで成膜した電極で最大を示し、またMg0膜厚が約20nmで最も高い値が得られることがわかった。γ値の増加は、基板温度変化の場合では結晶性の変化によりMg0薄膜の仕事関数が低下したと考えられる。複合電極の下地としてCVDダイヤモンドの電極について、表面研磨面のものと酸素プラズマで粗さを形成した面のものを用いた。

ダイヤモンドの酸素プラズマで形成した面電極でのγ値は表面研磨面のものより2倍増加することがわかった。以上の結果からダイヤモンドとMg0薄膜からなる複合電極の製作でダイヤモンド表面上にMg0薄膜を堆積するための最適条件を確率することができ、下地に粗さを形成したダイヤモンドを用いた方がよいことがわかった。
猫ひっかき病急性期診断のための特異IgM抗体検出高感度ELISAの確立と病態解明

猫ひっかき病(CSD)の原因菌はBartonella henselaeである。本菌の分離は極めて困難なため、CSDの診断は血清学的診断法が有用であり、本研究の第一目標はELISA法による特異B. henselae IgM抗体価測定法を確立することである。研究1年目では独自に改良したウエスタンブロット(WB)のCSD患者血清と健常人血清について解析を行った結果、8-10kDa,31-35kDa, 70kDaが主要なバンドであり、その半数は8-10kDaであることが判明した。その8-10kDaについてMALDI/TOFMSを用いた質量分析法解析より、遺伝子(6種類)を同定した。研究2年目では同定遺伝子を解析後、大腸菌による蛋白質作製を行い、患者血清との反応(IgM-WB)を試みたがいずれも不成功に終わった。そこで再度8-10kDaの解析を行ったところ、12種類の遺伝子の候補が得られ、うち8種類の遺伝子( 8, 9, 10, 20, 26, 38, 44, 58kDa)が抽出できた。これらを解析後、今回は無細胞蛋白質合成を行い、患者血清との反応を試みたが今回も反応は認められなかったが蛋白合成手法の改良により同定が期待される。WBの主要バンド8-10kDaの蛋白解析に多大な時間を要した。またその合成蛋白質が患者血清と反応が見られず、その理由が未だ判明していない。1)8-10kDaの遺伝子候補のうち、再度蛋白質の合成を試みると同時に未同定の蛋白質の同定も行い、その合成を試みる。2)残りのCSD特異バンド31-35kDa,70kDaについて、蛋白質抽出後、同様に蛋白質同定を行う。3)同定された新たな蛋白質をクローニング後、大腸菌あるいは無細胞蛋白質合成法で蛋白質を作製し、これら発現蛋白質の抗原性をIgM-WBで確認する。研究1年目である本年度はウエスタンブロット法(WB)で特異B. henselae IgM抗原蛋白質の検出および同定を試みた。すなわち独自に改良したWBでB. henselae ATCC49882株抗原を使用して、臨床的にCSDが疑われた患者62例と健常人50例の各血清について、IgM-WB解析を行った。その結果、健常人ではいずれも反応する明らかなバンドは認めなかったが、患者血清では34例(55%)に反応バンドが認められた。これらバンドはすべての患者に共通したバンドは認めなかったが、8ー10kD, 31ー35kD, 70kDが主要バンドで、その半数は8ー10kDであることが判明した。予想以上にCSD患者と健常人血清のIgM-WB解析に時間を要した。また主要なCSD特異バンドのうち、8ー10kDから9種類の蛋白質が検出されたが、残りの3種類同定、および31ー35kD, 70kDの解析は未だ行われていない。この一因はMALDI/TOFMS質量分析機器の不調にもよる。1)CSD特異バンド8ー10kDの9種類の蛋白質のうち、未同定3種類蛋白質の同定を試みる。2)残りのCSD特異バンド31ー35kDおよび70kDについて、蛋白質を抽出後、同様にMALDI/TOFMSを用いて蛋白質同定を行う。3)特異抗原の組み換え蛋白質の作成:同定された各種蛋白質の遺伝子をクローニング後、大腸菌に発現させ、蛋白質を作成させる。さらにこれら発現蛋白質の抗原性をCSD患者血清を使用したIgM-WBで確認する。

3)同定された新たな蛋白質をクローニング後、大腸菌あるいは無細胞蛋白質合成法で蛋白質を作製し、これら発現蛋白質の抗原性をIgM-WBで確認する。当初の研究計画より、研究がやや遅れている分、若干の経費余剰が生じた。上記今後の推進方策の実施を目指し、有効利用したい。当初の計画より、研究が遅れている分、若干の経費余剰が生じた。
cdk inhibitorがもたらすサードピークとapoptosisの解明

3種類の非同期化ヒト前立腺癌培養細胞株にBityrolactone I(以下BL)を作用させ、DNAブロイディ分析による細胞周期解析および二重蛍光測定による細胞周期特異的な各種cyclinの発現レベルの解析を行った。実験結果:(1)細胞周期をシンクロナイズしない通常の培養条件下でBLの効果発現至適濃度はMTT法にて70μM100μMであり、FCMにて細胞増殖活性の抑制、G2/M期の増加、第三ピークの出現、G2/M期に特異的なcyclin B1の増加が全て明瞭に認められた。(2)ヒト前立腺癌培養細胞株の検討で、BLの作用により著明なG2/M期の上昇、及び第三ピークの出現が見られた。(3)BLの添加によりG2/M期にcyclinB1の発現を認めた。BLによりCdc2キナーゼ活性が阻害されるため、cyclin Bが分解されずに蓄積するものと考えられた。(3)BLは選択的CDK阻害物質であるので、本研究により第三ピークの誘導は、protein kinaseの中でCDKの阻害によるが初めて明らかにされた。BLにより、多核細胞が誘導されたという報告はない。これまでにprotein kinase inhibitorであるK-252aにより、4C以上の核が誘導されたUsuiらの報告がある。K-252aはprotein kinaseの中でPKC・A kinase・MAP kinase・Cdc2 kinaseを同程度阻害するため4C以上のDNAの誘発がどのprotein kinaseの阻害に起因するか不明であった。本研究により4C以上のDNAの誘導はprotein kinaseの中でCDKを阻害したためであるということが強く示唆された。通常の細胞周期ではDNA再複製ブロックを有していると考えられるので、BLによってこの機構が解除されたことになる。
ホスト機能ストラプトテトラアザ[14]アヌレン及びその金属錯体の合成と分子認識

(1)テトラアザ[14]アヌレン及びその金属錯体の合成-1,2-ジアミノベンゼン、2,4-ペンタンジオンと酢酸ニッケルより、テトラアザ[14]アヌレンニッケル(II)錯体(1-Ni)を得た。これを酸処理し、テトラアザ[14]アヌレン(1)を得、酢酸銅と反応させ、その銅(II)錯体(1-Cu)を得た。他の金属錯体も同様にして得た。(2)ピケットフェンス型テトラアザ[14]アヌレン金属錯体の合成-1-Ni又は1-Cu錯体とパラ置換塩化ベンゾイル(2)又はパラ置換ベンジルブロミド(3)を、トリエチルアミン存在下加熱還流し、目的錯体(2-Ni、2-Cu、3-Ni)を得た。(3)ストラプト基の合成-3-ヒドロキシ安息香酸とジブロミド(Br-R-Br)よりジカルボン酸を得、これを塩化チオニルで処理し、酸クロリド(4)を得た。(4)ストラプト型テトラアザ[14]アヌレン金属錯体の合成-1-Niと酸クロリド(4)をトルエン中トリエチルアミン存在下加熱還流し、目的錯体(5-Ni)を得た。同様にして、大環状化合物(5)とその銅(II)錯体(5-Cu)や他の金属錯体も得た。これらは、質量、電子、IRとNMRスペクトルや元素分析等より生成を確認した。(5)ホスト機能テトラアザ[14]アヌレン金属錯体による分子認識-2-Ni、2-Cu、3-Ni,5-Niと5-Cu錯体のキャビティーサイズ等を利用し、有機分子を系統的に変化させ、NMRやIRスペクトル等より包接能を検討し、5-Niと5-Cu錯体で架橋位がポリエーテル鎖の物が包接能が強く、分子認識能も優れていることが分かった。従って、これらのことより当初の目的はほぼ達せられたものと考えられる。1.テトラアザ[14]アヌレン及びその金属錯体の合成ο-フェニレンジアミン、アセチルアセトンと塩化ニッケルより、ニッケル(II)イオンの鋳型反応を利用して、テトラメチルテトラアザ[14]アヌレンニッケル(II)錯体(1-Ni)を約50%の収率で合成した。この錯体を、無水エタノール中で塩化水素ガスを吹き込み、テトラメチルテトラアザ[14]アヌレン(1)を約40%の収率で合成した。機能性の置換基を有するο-フェニレンジアミンと2-エトキシアクロレインとの縮合反応より、ジエチルテトラアザ[14]アヌレン(2)を約25%の収率で合成した。1と酢酸銅より、その銅(II)(1-Cu)を合成した。その他同様にして、2のオキソバナジウム(IV)(2-VO)やオキソクロム(IV)(2-CrO)錯体も合成した。2.ストラプト基の合成m-ヒドロキシ安息香酸とジブロミド(Br-R-Br)を、水酸化ナトリウム存在下の縮合反応よりジカルボン酸を得、これを塩化チオニルで処理して、ジカルボン酸の酸クロリド(3)を合成した。架橋位のR=(CH_2)_nは、n=4、6、8、10の4種類を約50%の収率で得た。

3.ホスト機能ストラプトテトラアザ[14]アヌレン金属錯体の合成1-Niと酸クロリド(3)をトルエン中トリエチルアミン存在下、3-6日間加熱還流し、ホスト機能を有するストラプトテトラアザ[14]アヌレンニッケル(II)錯体(4-Ni)を30-50%の収率で4種類合成した。また、同様にして1-Cuと3よりその銅(II)錯体(4-Cu)も4種類得た。これらの化合物は、質量、電子、IR、NMRのスペクトルや元素分析等よりその生成を確認した。1.ホスト機能テトラアザ[14]アヌレンニッケル(II)及び銅(II)金属錯体の合成3種類のポリエーテル鎖(-CH_2CH_2OCH_2CH_2-,-CH_2CH_2OCH_2CH_2OCH_2CH_2-,-CH_2CH_2OCH_2CH_2-OCH_2CH_2OCH_2CH_2-)を有するジカルボン酸の酸クロリドを合成した。これとテトラアザ[14]アヌレンニッケル(II)(1-Ni)および銅(II)(1-Cu)錯体をトルエン中トリエチルアミン存在下加熱し、各々のストラプト型ニッケル(II)(3-Ni)及び銅(II)(3-Cu)錯体を30-60%の収率で合成した。これらの錯体は質量、電子、IR及びNMRのスペクトルや元素分析等よりその生成を確認した。2.ホスト機能テトラアザ[14]アヌレンニッケル(II)及び銅(II)金属錯体のスペクトル昨年度合成したポリメチレン鎖のみのニッケル(II)(2-Ni)及び上で合成した(3-Ni)錯体のNMRスペクトルは、非ストラプト型(1-Ni)のそれと類似している。また、銅(II)錯体(昨年度合成した2-Cu,3-Cu)もESRスペクトルのスピンハミルトニアンパラメータが、非ストラプト型(1-Cu)のそれに類似している。従って、この様な長さのストラプト基を付けつても、テトラアザ[14]アヌレン環には殆ど歪みを与えないことが分かった。さらに、中心金属の電子状態や共役系の広がりもほぼ非ストラプト型(1-Ni,1-Cu)錯体のそれに類似していると考えられる。3.ホスト機能テトラアザ[14]アヌレンニッケル(II)及び銅(II)金属錯体による分子認識(2-Ni,2-Cu,3-Ni,3-Cu)錯体のキャビティーを利用し、脂肪族分子の形状やヘテロ原子の置換位置を系統的に変化させ、NMRやIRスペクトルより検討し、架橋位がポリエーテル鎖錯体の方がポリメチレン鎖のみの場合より分子包接能が強く、分子認識も優れていることが分かった。
無細胞プロテインアレイによるHCVプロテアーゼにより切断される新規宿主因子の探索

HCVはC型肝炎の原因ウイルスとして知られ、世界で1億8000万人以上の感染者が存在するとされる。本研究ではHCVの持つプロテアーゼによって切断されるヒトタンパク質を網羅的に選抜することで、HCV治療のターゲットとなりうる新たな宿主タンパク質を同定することを目的とした。その結果、HCVプロテアーゼによって切断される新たなヒトタンパク質を同定し、培養細胞を用いた解析から、これらのタンパク質がHCVの感染・増殖に関わる因子であることが明らかになった。HCVはC型肝炎ウイルスの原因ウイルスとして知られ、世界で1億8000万人以上の感染者が存在するとされる。感染後、その一部は肝硬変を経て肝がんへと進行し、国内だけで年間3万人以上が死亡する肝臓がん患者の8割以上に感染が認められる。そのため、有効な治療法の開発が求められている。HCVの感染・増殖には様々な宿主タンパク質が関与していることが知られているが、最近になって、HCVの持つプロテアーゼが宿主の免疫系に関わるいくつかのタンパク質を切断し不活化することが報告された。このことは、HCVが自らの持つプロテアーゼを用いて細胞内環境を積極的に改変している可能性を示唆するものである。そこで本研究では、コムギ無細胞タンパク質合成技術を用いウイルスプロテアーゼによって切断される宿主タンパク質を網羅的にスクリーニングすることで、HCV治療のターゲットとなりうる新たな宿主タンパク質を同定するとともに、HCVによる細胞内環境の改変についての新たな知見を得ることを目的とする。26年度は主に、本研究において選抜された切断基質候補タンパク質を恒常的に発現する細胞株の作成、およびそれらの発現がHCVの感染・増殖に与える影響の解析を行った。細胞株の作成はレンチウイルスを用いて行い、本研究において同定された切断サイトの情報をもとに、野生型もしくは非切断型変異体を発現する細胞株をそれぞれ作成した。これまでに、候補タンパク質であるsTMP2, 15, 16, 18について恒常発現株を作成し、HCVを感染させ、一定時間経過後の細胞内ウイルス量をウェスタンブロットによって定量したところ、sTMP2、15を発現させた細胞株では、野生型、変異体のいずれかにおいてウイルス量の減少がみられた。このことから、これらの候補タンパク質がHCVの感染・増殖に関わっている可能性が示唆された。HCVの感染・増殖には様々な宿主タンパク質が関与していることが知られているが、近年になって、HCVの持つプロテアーゼが宿主の免疫系に関わるいくつかのタンパク質を切断し不活化することが報告された。そこで本研究では、コムギ無細胞タンパク質合成技術を用いウイルスプロテアーゼによって切断される宿主タンパク質を網羅的にスクリーニングすることで、HCV治療のターゲットとなりうる新たな宿主タンパク質を同定するとともに、HCVによる細胞内環境の改変について新たな知見を得ることを目的とした。本研究ではまず、無細胞タンパク質合成技術によって合成したヒト膜タンパク質およびHCVプロテアーゼを用いて切断基質候補タンパク質を選抜し、更にそれぞれのタンパク質における切断部位の同定を行った。その後、切断基質候補タンパク質のノックダウン、過剰発現を行った細胞にHCVを感染させることで、実際にHCVの感染・増殖に関与するタンパク質をスクリーニングした。これらに基づき、各候補タンパク質およびその切断がHCVの感染・増殖において果たす機能について解析を試みた。これらの結果は、新たなHCV治療薬の開発や、現在HCV感染治療薬として臨床応用されているプロテアーゼ阻害剤の改良だけでなく、HCVと同様に自身のプロテアーゼを持つHIVなどの他のウイルスの研究への応用にも繋がると期待される。26年度には、候補タンパク質の恒常発現細胞株の作成、それらを用いたHCVの感染・増殖能解析、および候補タンパク質の切断サイトの同定を予定していた。恒常発現株の作成および感染・増殖能解析については予定通りに進行しているが、切断サイトの同定が完了していないため、全体としてはやや遅れている。ウイルス学1)候補タンパク質恒常発現株、ノックダウン細胞株の作成および感染実験26年度から進行中の本項目について継続して行う。各候補タンパク質の恒常発現株およびノックダウン細胞株を作成し、それらにおけるHCVの感染・増殖能の変化を検証することで、各候補タンパク質の機能についての情報を得る。現在、レンチウイルスベクターを用いて各細胞株の作成を行っているが、スループット性の向上のため、ノックダウン細胞株については一部siRNAによるノックダウンに切り替えることを検討している。2)切断サイトの同定26年度から進行中の本項目について継続して行う。各候補タンパク質について、予測される切断サイトを改変した変異型タンパク質を合成し、プロテアーゼによる切断を確認することで切断サイトを同定する。

3)候補タンパク質の機能解析各候補タンパク質のHCVの感染・増殖における役割について解析を行う。恒常発現株、ノックダウン細胞株を用いた感染実験の結果、および各タンパク質の配列情報から、機能解析を行う。一部計画を完遂できなかった実験が発生したため、購入を予定していた物品について費用を27年度へ繰り越した。また、26年度中に国際学会への参加を予定していたが、27年度4月に開催された学会への参加へ切り替えたためその費用を繰り越した。申請書に記載した実験を遂行することで、次年度使用額も含め、請求した助成金を予定通りに使用する。また、一部実験手法の変更を計画しているが、請求額内で遂行可能である。
スウェーデンの家族福祉政策と家族関係の関連性についての研究

国とヨーテボリ市の家族福祉政策の行政責任者や、さらに保育事業や高齢者福祉事業に関連する機関・施設を視察して家族福祉サービスの実際の提供者である現場の担当者にヒヤリングを行った。また、子育て中の父母と要介護の老親をもつ家族にインタビューを実施。その結果、スウェーデンの家族福祉政策の内容を具体的に理解し、その政策の家族関係や家庭生活に及ぼす影響や現在の政策が抱える問題点を捉えることができ、日本の今後の家族福祉政策については以下の点に留意することが重要であることがわかった。<児童福祉政策>1.育児休業の取得を徹底させ、休業上の所得保障を現段階より増やし、取得の仕方には柔軟性をもたせる。2.養育上必要な休業保障(病気の時、学校行事参加など)と所得保障の法的整備。3.公共保育所を一層充実させるとともに、その運営には保育所単位で柔軟性をもたせる。4.個々の家庭の育児援助のために、多領域にわたる公的援助体制を整える。それには、現在の保健所の体制では不十分であり、保健所内に専門部門を独立させるか、外部に違った機関を作る。<高齢者福祉政策>1.介護する家族の有無にかかわらず、高齢者が自立した生活を送れるような在宅福祉サービスの充実。2.スウェーデンの「介護の付いた特別住宅」のような住宅の整備。3.日常生活を援助する鯛時間体制のホームヘルプサービス。4.家族介護の場合でも、家族手当を支給するか、家族をヘルパーとして雇用し家族介護を金銭的に評価する。5.介護する家族を精神的に支えるサポートシステムの確立。たとえば、行政の介護スタッフによる家族相談、訪問看護婦による頻繁な訪問での高齢者と家族の様子のチェックなど。〈児童福祉政策〉1.育児休業の取得を徹底させ、休業上の所得保障を現段階より増やし、取得の仕方には柔軟性をもたせる。〈高齢者福祉政策〉1.介護する家族の有無にかかわらず、高齢者が自立した生活を送れるような在宅福祉サービスの充実。3.日常生活を援助する24時間体制のホームヘルプサービス。
実時間3次相関およびバイスペクトル解析器に関する研究

まず、実時間3次相関解析器を構成するために、高周波発振器、振幅変調器、高周波電力増幅器よりなる超音波振動子駆動回路、および光学ガラスで作った水槽を用い、超音波回折格子が理論通り得られることを確認した。この超音波回折格子にヘリウム・ネオン・レーザ光を入射し、ラマン・ナ-ス回折光のうち3次回折光をピンホールで選択的に取り出すことにより、実時間で3次相関像を観測することができた。ここで得られた結果を以下に示す。1)高周波発振器に可変容量ダイオートを用い、発振周波数を電圧で制御できる構成とした。これにより、超音波振動子をその共振周波数で駆動でき、回折効率を上げることが可能であることがわかった。2)ラマン・ナ-ス回折で得られる3次回折光は、強度が非常に弱いため、ピンホールを通ったわずかな0次光およぴ他の回折光、すなわち背景光の影響で、コントラストが低下する。コンピュータに取り込んだ3次相関像から背景光による画像を減算処理することにより、コントラストを改善できることを確認した。次に、液晶を用いた2次元フーリエ変換光学系を用い、バイスペクトル回折器構成のための予備実験を行った。この結果、以下のことが明らかとなった。1)当初予想した通り、液晶面内に存在する電極構造を反映した空間スペクトルが観測される。しかし、液晶に入力される3次相関像が高次の空間スペクトルを有していないことを考慮すれば、電極構造による空間スペクトルの影響は無視し得る。2)液晶に入力される3次相関像によって生成された空間スペクトルの分布はは0次光付近に出現するが、非常に強い0次光にマスクされ、実時間バイスペクトル像の観測を行うことはできなかった。今後、0次光の影響を除去する方法を検討する必要がある。
心拍、血圧変動の低周波数ゆらぎに及ぼすアンジオテンシン変換酵素遺伝子多型性の影響

心拍、血圧変動の低域周波数成分(LF)は、レニン・アンジオテンシン系を介した交感神経系と副交感神経系の2重支配により形成されると報告されている。本研究では特に心拍変動のLF成分に注目して、アンジオテンシン変換酵素(ACE)遺伝子多型との関連から検討してきた。対象患者は、難治性慢性疼痛疾患の代表であるComplex Regional Pain Syndrome(CRPS)患者とした。心拍変動を測定し、同時にACE遺伝子多型を解析した。CRPS患者では疼痛部位での末梢血管収縮が著明であり、強力な血管収縮を生じるレニンアンジオテンシン系が末梢血管で機能亢進している可能性があると考えられるからである。ACE遺伝子多型は490bp(II型)、490および190bp(ID型)、190bp(DD型)の3種類に分類した。この結果ACE遺伝子多型のなかでDD型遺伝子は約1/3の患者で観察された。日本人におけるDD型は18%前後と報告されており、きわめて高頻度で観察されたことになる。またDD型を示した患者ではACE活性が他の二つの遺伝子群に比較して優位に上昇していた。カテコールアミン3分画、血漿レニン活性、アンジオテンシ1および2の測定結果では、DD群、II群およびID群とでは有意差は生じていなかった。Complex regional pain syndrome患者では交感神経機能が亢進していることはよく知られており、DD型の多いComplex regional pain syndrome患者では何らかの遺伝的な素因も疼痛発症機序に関与しているものと推察され、発症予測や有効な治療法選択への応用が考えられた。また心拍変動の周波数解析結果では、LF成分とHF成分との構成にACE遺伝子多型性との有意な関連性は認められなかった。同意が得られた予定手術患者で観血的動脈圧測定が必要と判断された症例を研究対象にした。1.ACE遺伝子多型(II型、ID型、DD型)の測定麻酔前に採血された静脈血5mlからDNAを調製し4°C保存する。遺伝子増幅法(PCR)により得られたACE遺伝子を電気泳動させ、紫外線下にPCR産物の泳動パターンをポラロイドで撮像した。ACE遺伝子は490bp(II型)、490および190bp(ID型)、190bp(DD型)の3種類に分類した。2.心拍、血圧変動測定心拍変動はR液検出装置を介して心電図PR間隔を1msecの精度で測定し約5分間記録する。de Boerの方法により瞬時心拍数に換算し、250msec毎に心拍数を求める。128秒間毎に高速フーリエ変換してパワースペクトルを求め、0.040.15HzまでをLF成分、0.150.4HzまでをHF成分とする。血圧変動は、麻酔前はトノメトリ法による血圧信号を、麻酔後は動脈穿刺による動脈圧信号を、AD変換ボードにて250msec毎に平均動脈圧を求める。周波数解析の信号処理は心拍変動と同様にする。これらの信号処理はすべて今回新たに作成したプログラムにておこなった。この結果、(1)ACE遺伝子は手術患者の約15%でみられたが、術中、術後の合併症の発生との相関については対象症例数がまだ少数であり、現在検討中である。(2)心拍、血圧変動は今回作成したAD変換によるRR間隔測定法は、ノイズ存在下でも、きわめて正確に測定し得た。アンジオテンシン変換酵素(ACE)遺伝子多型(II型、ID型、DD型)の測定は前年度と同様に静脈血5mlからDNAを調整し4°C保存した。

遺伝子増幅法(PCR)により得られたACE遺伝子を電気泳動させ、紫外線下にPCR産物の泳動パターンをポラロイドで撮像し、ACE遺伝子を490bp(II型)、490および190bp(ID型)、190bp(DD型)の3種類に分類した。今年度は研究対象を特に自律神経異常をきたすとされている慢性難治性疼痛疾患の代表であるComplex regional pain syndrome患者を対象として測定解析した。この結果ACE遺伝子多型のなかでDD型遺伝子は約1/3の患者で観察された。日本人ではDD型は18%前後と報告されており、きわめて高頻度で観察されたことになる。またこれらの患者ではACE活性が他の二つの遺伝子群に比較して優位に上昇していた。カテコールアミン3分画、血漿レニン活性、アンジオテンシ1および2の測定結果では、DD群、II群およびID群とでは有意差は生じていなかった。Complex regional pain syndrome患者では交感神経機能が亢進していることはよく知られており、DD型の多いComplex regional pain syndrome患者では何らかの遺伝的な素因も疼痛発症機序に関与しているものと推察され、発症予測や有効な治療法選択への応用が考えられた。平成10年度と同様にアンジオテンシン変換酵素(ACE)遺伝子多型(II型、ID型、DD型)の解析をおこなった。静脈血5mlからDNAを調整し、遺伝子増幅法(PCR)により得られたACE遺伝子を電気泳動させ、紫外線下にPCR産物の泳動パターンをポラロイドで撮像し、ACE遺伝子を490bp(II型)、490および190bp(ID型)、190bp(DD型)の3種類に分類した。研究対象は昨年に引き続き、特に自律神経異常をきたすとされている慢性難治性疼瘍疾患の代表であるComplex regional pain syndrome(CRPS)患者と、さらにニューロパシックペインの代表的疾患である帯状庖疹後痛患者を対象として測定解析した。またアンジオテンシノーゲン遺伝子多型解析も開始した。日本人のDD型は18%前後と報告されており、きわめて高頻度で観察されたことになる。また神経損傷の認められないCRPSI型の方が、神経損傷が明らかに認められるCRPSII型よりも有意にDD型の占める割合が高く、CRPSI型ではレニン・アンジオテンシン系が特に関与しているものと推測された。また心臓の自律神経活動を反映している心拍変動の解析では、3群間では特に有意差は認められなかった。
胎盤機能不全に対する胎児型Fc受容体を利用した新治療法開発のための萌芽研究

近年、胎児型Fc受容体が、IgGだけでなくアルブミンとも結合し、生体において、その異化から保護する作用があることが示唆されている。ヒト胎盤絨毛の栄養膜には胎児型Fc受容体が発現しており、母体血を介してアルブミンならびにIgGを担体として、選択的に胎盤への物質輸送が可能である。この研究にて、胎児型Fc受容体によるトランスサイトーシス機能を介した新規胎盤治療法開発を展開するために、先ずヒト初期胎盤を用いて胎児型Fc受容体のアルブミン保護作用を検討した.IgGとアルブミンの初期胎盤絨毛組織における詳細な局在解析を進めるために、光顕レベルで電子顕微鏡の解像力に迫る、独自に開発した超高分解能蛍光顕微鏡法でさらに解析した。母体血に接する栄養膜合胞体内には、IgGの局在を示す、たくさんの大小顆粒状の蛍光を認めた。栄養膜細胞内にはIgGは観察されなかった。しかし、隣接する栄養膜細胞間にIgGの存在を示す蛍光が観察された。栄養膜を越えて絨毛内間質にもIgGが検出された。初期胎盤絨毛組織において、栄養膜細胞層は、母児間IgG輸送の物理的バリアとはなっておらず、栄養膜合胞体においてトランスサイトーシスされたIgGは、栄養膜細胞間腔を通過し、絨毛間質へ既に到達することが明らかとなった。GFP融合胎児型Fc受容体ベクターを作製、絨毛癌細胞株(BeWo等)へ導入し、バイオイメージング解析を行った。解析を効率よく進めるためのGFP発現安定株の作製、霊長目を用いたin vivo実験は課題として残された。今回の研究から、従来の定説とは異なる。初期絨毛での胎盤関門に関する新知見を得ることができた(投稿準備中)。さらに、IgGのみならずアルブミンをキャリアーとして、初期胎盤絨毛組織内へ効率よく治療薬分子を投与することが可能であることを強く示唆する結果を得た。この研究にて、胎児型Fc受容体によるトランスサイトーシス機能を介した新規胎盤治療法開発を展開するために、先ずヒト初期胎盤を用いて胎児型Fc受容体のアルブミン保護作用を検討した.倫理委員会の承認を得、患者さんより同意を得た後、ヒト初期胎盤絨毛組織を採取し、局在解析として抗IgG抗体、抗アルブミン抗体を用いた免疫組織化学、胎児型受容体、アルブミンのmRNA発現を調べるためリアルタイムPCR解析、蛋白レベルの発現解析として、絨毛組織の間質部分のみを切り出し,アルブミン成分に関するWestern blot解析を行った。アルブミンに関しては,妊娠初期から絨毛間質内にアルブミンとIgGの存在を示す強い蛍光を免疫組織化学で確認した。レーザーマイクロダイセクション法により切り出された絨毛間質部分におけるアルブミンのWestern blotは、約70kDaの単一バンドとして認められ、異化による分解したアルブミンのバンドは観察されなかった。ヒト初期絨毛組織において、胎児型Fc受容体mRNAの発現を認めたが、アルブミンmRNAの発現はreal-time PCRで陰性であった。以上の成果から、アルブミンを産生していないヒト初期胎盤において、アルブミンとIgGは母体由来としてトランスサイトーシス機能によって(胎児型Fc受容体を介して栄養膜を通過し)、胎盤組織内(絨毛間質)に運ばれていることが示された。また、現在、GFP融合胎児型Fc受容体ベクターを作製し、メージング解析の準備を進めている。

さらに、IgGのみならずアルブミンをキャリアーとして、初期胎盤絨毛組織内へ効率よく治療薬分子を投与することが可能であることを強く示唆する結果を得た。