hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
３次元超音波ガイド下ロボット肝切除に関する基礎的研究

肝切除術は複雑な脈管解剖を術前画像を頼りに行う難易度の高い術式である。本研究は、手術用ロボットを利用してリアルタイムに肝臓の構造を超音波で確認しながら安全に切除するという新しい術式の基礎研究である。超音波画像を常時描出するため腹水中で腹腔鏡下手術を行うことを考案した。腹水中手術は今までにない革新的な方法である。まず、動物実験を用いて腹水中肝切除が安全に施行可能であることを示した。次に水中で複雑な縫合手技を手術用ロボットを用いて施行することが可能であることを示した。以上より、今後既存のロボット用超音波装置を装着して3D画像をモニターに投影することで、新術式を施行する基礎的なデータが得られた。本年度は、昨年度のドライラボ実験を踏まえて、実際の腹水中腹腔鏡下手術を生体動物を用いて行った。当初の計画では豚を予定していたが、動物個体費用、実施上の制約として鉗子の大きさ、エネルギーデバイスの有効長、大量の生食の消費などの問題が出現したため、当初の目的を損なわない代替動物としてウサギの実験に変更した。具体的な研究内容は、ウサギを全身麻酔下に小開腹を行い腹腔鏡用のポートを装着、その上で温生食を腹腔内に注入し腹水中腹腔鏡下手術を行った。肝切除にはオリンパスのレゼクトスコープを用いて実際に水中肝部分切除を行う実験系を確立した。水中での肝切除は視野の展開、エネルギーデバイスの有効性を含めて実施可能性が示唆された。続いて、ウサギを6羽ずつ通常の気腹下の通常の腹腔鏡手術群と腹水中手術群を行った群に分けて肝切除実験を行った。それぞれの群において生理学的変化、生化学的変化、病理組織学的検査を施行し比較を行った。いずれの結果でも有意差をみとめなかった。腹水下での手術を確立したことは、今までの報告にない研究である。また視野の展開や他目的のエネルギーデバイスで実際に肝切除に使えるかどうかが懸案であったが、安全に施行できることが証明された。試験的に腹水下の手術を動物実験で行った報告はあるが、実際の研究として比較実験を行ったものはなく、エビデンスとして重要な研究と考える。生体動物実験において腹水中肝切除が安全に行えることが証明されたことは、本術式をヒトに応用するのに大きな前進となる。本研究の最終目標となるロボット水中肝切除への準備として十分なものとなった。本研究は、腹水中の腹腔鏡手術を手術用ロボットを用いて肝切除を行うという新規手術環境の予備的研究である。まず、水中でのロボット手術を可能にするためにエネルギーデバイスの選択実験を行った。その結果、前立腺手術に用いられるオリンパス製のレゼクトスコープを用いることとした。つづいて、うさぎを用いて腹水下腹腔鏡手術モデルをつくり腹腔鏡下での腹水中肝切除術を施行した。安全な実験モデルを構築し、生存モデルも作成した。最終年度は、追加実験として手術用ロボットを用いて水中縫合実験を行った。腹腔鏡手術では困難な縫合手技をタスクとし、手術用ロボットで水中と通常の空気中での作業を比較評価した。ここで、水中での手術用ロボットの操作性は空気中環境と同様に有用であることが示された。また、これらの成果を学会にて発表した。腹水中での腹腔鏡下うさぎ肝切除術は第113回日本外科学会定期学術集会にて発表した。また、ロボットを用いた水中の縫合手技実験は第59回国際外科学会日本部会総会にて発表した。当初の計画との相違は、手術用ロボットを用いた3Dエコーによる肝切除が出来なかったことである。腹腔鏡下腹水中肝切除という目的は達したものの、研究費外の実験資材として想定していたロボット用3Dエコーが使用困難となったこと、またロボットに装着できる水中切除用エネルギーデバイスがなかった。手術用ロボットの改造は本研究の範疇を超えるため水中肝切除は断念した。追加実験となった水中縫合手技実験に成功したことから、ロボット用の水中デバイスが使用可能であれば十分に実現可能と考えられた。手術用ロボットを用いた腹水中手術は未開拓領域である。本研究の成果は手術環境としての実現に一歩前進した。ロボットによる腹水中手術は宇宙空間での手術へも応用が期待される。本年度は、腹水中腹腔鏡下手術を実行するために、予備実験となるドライラボ実験に取り組んだ。実験用の水槽を設置し、内部に生食水を充満させ、水槽上部に腹腔鏡手術用のポートを設置した。この水槽内に豚の肝臓組織を浸漬させ、腹腔鏡を用いて観察した。

その後、HEサージャリーシステム(オリンパス)、超音波凝固切開装置(エチコン、オリンパス)を用いて実際に水中での組織切除が可能か視認性についての評価を行った。前者は、泌尿器科用の前立腺手術時に生理食塩水中で使用することを目的につくられたものであり、水中使用に問題はなかったが実際の手術に使うには柄を長くする必要があった。一方、後者は気腹状態での使用を目的として開発されたもので水中での使用の評価はされたことがないものであり、実用性への検証が主眼となった。気腹状態では水分の多い組織切離はミストがとび極めて視認性が悪くなることが知られている。水中での使用では、予想された視野の悪化は見られなかった。本実験の結果、ドライラボでは上記のいずれのエネルギーデバイスを用いても生理食塩水中の組織切除を行うことが可能であることが確認された。また、組織切離中に生食水汚染による視認性の低下を防ぐため、生食灌流装置を付加した。これは、従来の二酸化炭素排出型の気腹装置に比べ資源を有効利用ができ、より実用性のある手術にするために有用な装置と考えた。本実験の結果をもとに生体動物における腹水中手術を行う際の基礎的な手術環境が整えられた。当初の計画通り、生体動物を使用して腹水中での肝切除術を施行した。実際の実験系を確立したことで今回の研究の主要な目的である腹水中手術と気腹下手術の比較実験を施行した。目的動物が、豚からウサギになったが、本研究の実験目的に照らして大きな変更にはならないと考えている。当初の計画に従ってドライラボにおける生食水中手術は実現可能性が示された。生食水中での手術を行うには、基本手技である切離、縫合、結紮が不可欠である。そのうちで、もっとも困難であると考えられるの安全な切離、出血のコントロールであると考えられる。これを実現させるために、エネルギーデバイスの評価および視認性の検証を行った。今回行った水槽実験では高度な視認性を損なうことなく組織切離を安全に行うことが実証された。以上、初年度の実験計画は予定通りに実施できた。次年度は、実際に手術用ロボットを用いて腹水中手術の実効性を明らかにする。また超音波検査装置を用いて術中のリアルタイムな検査を実際に行う。同時に本年度の研究成果である腹水中手術の動物実験結果は、学会発表や論文発表を行い広く示していく予定である。次年度は、実際の生体豚を用いて腹水中手術を施行する。生理食塩水中での手術という腹腔鏡手術の新しい分野において気腹手術との違いを検証し安全性を確かめる必要がある。この際に問題になるのは腹水中での生理学的な変動の有無、腹水内でのエネルギーデバイスの使用が生体に与える影響であり、客観的な評価を行う必要がある。つづいて、実際の手技において安全な手技が施行可能であるか、また出血コントロールなど偶発症発生時の生体反応や縫合、結紮など手技上の実現性もあわせて検討を行う。次年度は、研究の最終的な目的であるロボット手術、超音波検査を併用した手術を行なっていく。消耗実験資材に加えて、学会発表や論文発表を行う。とくに国際発表目的に英文校正、査読の費用を必要とする。尚、今年度の未使用額¥8,001については効率的な予算執行により端数が生じ、未使用額となった。23年度の研究費は、効率的執行により端数が生じ僅かに未使用額が出てしまった。次年度は、実際の生体豚を使用して腹水中腹腔鏡下手術を施行する。
米国における企業結合会計基準設定過程の研究

本研究は,米国財務会計基準審議会(FASB)が国際会計基準審議会(IASB)との協調を謳いながら異なる会計基準を設定した理由を明らかにすることを目的とした。そこでは,FASBが国内的な会計不信の払拭およびIASBの台頭を受け高次の組織存続に対する危機を認識し,そのためにFASB(FAF)は,価値観の共有化されたメンバーの下,ビッグ・プロジェクトを内容およびタイミングの両面においてIASBの機先を制し,自身のプレゼンスを高める戦略を採っている可能性のあることが明らかになった。本研究は, FASBとIASBとの共同プロジェクトであった企業結合プロジェクトにおいて,ある種のダイバージェンスが生じることとなった原因,すなわちFASBが「理論的正しさ」を全面に打ち出した基準設定活動を行った原因が, FASB自身による「組織存続の危機」に対する認識によるものではないか,という仮説を定性的および定量的な観点から検証することとを目的としたものである。本研究における定性分析は,当該基準設定にあたり, FASBのボード・ミーティングにおいてどのような論理が展開され,どのように意思決定が行われたのか等の議論プロセスを,議事録等を辿る手法で明らかにする。また,定量分析は,当該議事録をもとに,社会ネットワーク分析の手法を用いて, FASBメンバー間のネットワーク構造を明らかにする。かかる手法により,当該プロジェクト全体のネットワーク構造および通時的分析によるネットワーク構造の変化を明らかにすることを目的としている。当初の計画では,平成20年度に, FASBに出張し,入手されていない資料の収集およびFASBメンバーないしスタッフへのヒアリング調査の実施さらには資料整理と当該プロジェクトの全体像の把握に努めることを予定していた。当該年度の実績としては,平成20年9月に渡米し,資料収集およびFASBの計画・支援DirectorであるBielstein氏へのヒアリング調査を行うとともに,当該年度以降実施する予定である定性分析および定量分析のための資料整理を行った。この資料にもとづき平成21年度では,学会報告(採択済み)および学会誌への投稿を予定している。また,平成20年8月には,本研究の仮説,すなわち会計基準設定機関は「組織存続の危機」に対する認識によって異なる基準設定行動を採る可能性がある,ことをFASBとIASBの全部暖簾法の策定議論に焦点を当てて示した学会報告を行った(学会報告後,学会誌への投稿を行い,採択済みの連絡を受けた。発行年月日等は不明)。本研究は,FASBとIASBとの共同プロジェクトであった企業結合プロジェクトにおいて,ある種のダイバージェンスが生じることとなった原因,すなわちFASBが「理論的正しさ」を全面に打ち出した基準設定活動を行った原因が,FASB自身による「組織存続の危機」に対する認識によるものではないか,という仮説を定性的および定量的な観点から検証することとを目的としたものである。本研究における定性分析とは,当該基準設定にあたり,FASBのボード・ミーティングにおいてどのような論理が展開され,どのように意思決定が行われたのか等の議論プロセスを,議事録等を辿る手法で明らかにすることを指す。また,定量分析とは,当該議事録をもとに,社会ネットワーク分析の手法を用いて,FASBメンバー間のネットワーク構造を明らかにすることを指す。その上で,当初,平成21年度において,前年度に実施した米国でのヒアリング調査および入手した資料のデータ整理とともに,プロジェクト全体に対する定量分析の実施を予定していた。平成21年度の実績としては,定量分析の一環をなすプロジェクト全体のネットワーク分析に関する学会報告(International Symposium of AROB)を行うとともに,現在,同学会学会誌(AROB Journal)に投稿中である。また,定量分析の一環をなす通時的分析に関する学会報告(日本IR学会)を行うとともに,学術雑誌(『企業会計』)に投稿した(近刊)。本研究は,FASBとIASBとの共同プロジェクトであった企業結合プロジェクトにおいて,ある種のダイバージェンスが生じることとなった原因,とりわけFASBが「理論的正しさ」を全面に打ち出した基準設定活動を行った原因が,FASB自身による「組織存続の危機」に対する認識によるものである,という仮説を定性的および定量的な観点から検証することとを目的としたものである。平成22年度においては,ネットワーク構造の変化を明らかにするために,入手した資料のデータ整理およびプロジェクト全体における定量分析を実施する予定であった。

平成22年度の実績としては,定量分析の一環をなす,当該プロジェクト全体におけるFASBメンバーの投票行動にもとづくネットワーク分析および同メンバーの発話回数にもとづくネットワーク分析を実施し,一部は掲載され(投票行動については『企業会計』に,発話回数については『AROB Journal』に掲載),一部は学術雑誌に投稿を予定している。
大気中の微小粒子状物質による心血管毒性のリスク評価

疫学調査では大気中の微小粒子状物質による呼吸器疾患・心疾患による死亡率の増大が危惧されている。大気中の微小粒子状物質を構成する粒子は、大きいもので約10 μm、小さいもので100 nm以下であり、心血管毒性は粒径が小さいほど強いと考えられている。そこで本申請課題は、シリカ粒子と酸化亜鉛粒子をモデル材料として用いた解析により、以下2つの新知見を見出すことに成功した。シリカ粒子を用いた解析では、直径70 nm以下の粒子がPI3Kシグナルを介し血管を弛緩した。酸化亜鉛ナノ粒子を用いた解析では、直径100 nmの粒子がレニン-アンジオテンシン系を介し高血圧を惹起した。本申請課題は、大気中の微小粒子状物質による心臓や血管への影響とその作用メカニズムの解明を目的に、初年度においては心臓や血管の生理機能への影響を中心に解析した。具体的には、血圧・心拍・血管の弛緩・収縮への影響をマウス及びラット胸部大動脈を用い解析した。また本解析に用いた微小粒子状物質の種類は、酸化亜鉛ナノ粒子及び非晶質シリカナノ粒子である。これらは、化粧品や工業品などに含まれており、その使用料や製造量は年々増加し、様々な経路から自然界への放出・暴露が危惧される。初年度は、これらのナノ粒子が一定の曝露濃度を超えることで心臓や血管への影響を発現することに成功した。本解析では、まず酸化亜鉛ナノ粒子と非晶質シリカナノ粒子による血管の収縮作用について解析した。その結果、最大300ug/mLの曝露濃度においても、血管収縮は観察されなかった。次に、血管の弛緩作用について解析した。その結果、非晶質シリカナノ粒子のみに、血管の弛緩作用が観察され、これら作用は10ug/mLの曝露濃度を超えることで惹起されることが明らかとなった。血管の弛緩は、血圧低下の原因になることが知られており、非晶質シリカナノ粒子では心機能のみを評価することが困難である。そこで、心機能の評価は酸化亜鉛ナノ粒子のみについて評価した。また、臓器毒性などの炎症反応では、種々サイトカインが産生され、心筋細胞・血管内皮細胞に作用し血圧や血流量が調節される。これら反応は、正常な生理機能であるものの、化合物による心機能を評価する際に問題となる。そこで本解析では、血液生化学検査により肝毒性・腎毒性・心毒性の発現しない投与量を決定した。次に、臓器毒性の発現しない量の酸化亜鉛ナノ粒子をマウスに投与し、継時的な血圧の変化を解析した。その結果、24時間、48時間後に血圧の増加が観察された。以上より、大気中に存在する微小ナノ粒子は心機能や血管機能に影響することが明らかとなった。疫学研究では、大気中の微小粒子状物質の増加が「心血管毒性を惹起し心疾患による死亡率の原因になる」と報告されている。一方、これら毒性発現の原因成分(微小粒子状物質の構成因子)は不明であり、リスク評価法も確立されていない。そこで本申請課題は、大気中の微小粒子状物質による心臓や血管への影響とその作用メカニズムの解明を目的に、最終年度においては非晶質シリカナノ粒子による血管弛緩反応の作用メカニズムと酸化亜鉛ナノ粒子による血圧増加のメカニズムの解明を推進した。前者においては、血管弛緩反応の主要なシグナル経路として知られているPI3Kシグナル、PGIシグナル、Ca2+シグナルの3経路との関連を種々シグナルの特異的阻害剤を用いて解析し、非晶質シリカナノ粒子がPI3Kシグナルを介し血管弛緩を惹起することを見出した。さらに、ウシの血管内皮細胞を用いた解析により、非晶質シリカナノ粒子はPI3Kシグナル下流のAkt-eNOS経路を活性することが明らかとなった。後者においては、酸化亜鉛ナノ粒子により血圧が増加したマウスの血清を用い、レニン-アンジオテンシン系との関連を解析した。その結果、血清中のレニン活性およびナトリウム濃度の増加を見出した。以上より、化粧品や工業品に含まれるナノ粒子は、従来素材であれば想定されなかった心血管系への作用・毒性を惹起することが明らかとなった。一方で、ナノ粒子による心血管系への作用メカニズムは、ナノ特異的なものではなく、既知のシグナル系を介するものであったことから、心血管でのナノ毒性の予測や評価には、既知の評価系やマーカーが有用であると示唆された。最終年度は、非晶質シリカナノ粒子による血管弛緩反応の作用メカニズムと酸化亜鉛ナノ粒子による血圧増加のメカニズムの解明を推進する。前者においては、血管弛緩反応に関わるシグナル経路の特異的阻害剤を用いて作用メカニズムを解明する。

具体的には、PI3Kシグナル、PGIシグナル、Ca2+シグナルの3経路について解析を進める。後者は、高血圧の原因である、血中のナトリウム、アルドステロン、レニン、アンジオテンシンへの影響を解析する。さらに、非晶質シリカナノ粒子及び酸化亜鉛ナノ粒子の曝露により血中で特異的に産生される物質を探索し、微小粒子状物質による影響を評価するためのバイオマーカーを同定する。ナノ毒性学当初の想定以上に微小粒子状物質による影響が特異的な反応であったため、実験の再現性が容易に実現したため、次年度への繰越金が生じた。当初の想定以上に様々な成果を得ることができたため、論文投稿・校正費または学会発表の為の旅費に使用。
大規模ナラティブコーパスによる日本人英語学習者の「話す力」「書く力」の実証研究

本研究では、日本人英語学習者の「話す力」と「書く力」の解明を目的とし、文字のない絵本を用いた口頭と筆記のナラティブを収集して話し言葉と書き言葉の学習者コーパスを構築し、代表的な第二言語習得理論の一つである処理可能性理論およびヨーロッパ言語共通参照枠を基に文法と語彙の使用を分析した。文法使用については、処理可能性理論が予測する普遍的発達段階を概ね支持する結果が得られたが、ヨーロッパ言語共通参照枠に基づく語彙使用との関連については更なる調査が必要である。本研究は、日本人英語学習者の話し言葉と書き言葉の大規模コーパスを構築し、処理可能性理論で予測される普遍的発達段階及びCEFRレベルを用いて文法と語彙の分析を行い、「話す力」と「書く力」を多角的に解明することを目的とする。具体的には、総合大学に所属する様々な学部・学科の日本人大学生による文字のない絵本を題材とした口頭と筆記のナラティブデータの収集を行い、録音した口頭ナラティブは文字化し、筆記ナラティブと共にコンピュータに入力して大規模コーパスを構築する。処理可能性理論(Processability Theory, Pienemann, 1998)で予測される普遍的発達段階及びCEFRレベルを用いて話し言葉と書き言葉における文法と語彙の使用を分析する。英語学習歴に関するアンケート調査及び英語圏在住の日本人留学生及び英語を母語とする大学生の口頭と筆記のナラティブコーパス構築も行い、国内で学ぶ日本人学習者の話し言葉と書き言葉における文法と語彙との違いを分析する。2015年度は、口頭および筆記ナラティブの収集、文字化、コンピュータへの入力を行い、コーパス構築を進めた。コーパスの一部については処理可能性理論を用いた文法習得段階や語彙使用の分析などを行い、初期段階のデータ分析結果として国内学会にて発表し、学会誌への論文投稿を行った。査読者からのフィードバックを基に論文の修正を行い、新たな分析結果を加えた研究成果を2016年に開催される国際学会にて発表する予定である。研究初年次における主な目的は、データ収集およびコーパス構築であり、日本人英語学習者の「話し言葉」「書き言葉」のナラティブコーパスファイルの作成をほぼ予定通り進めることが出来た。初期段階のデータ分析結果は国内学会にて発表し、論文執筆へと繋げた。本研究は、日本人英語学習者の話し言葉と書き言葉の大規模コーパスを構築し、処理可能性理論(Processability Theory, Pienemann, 1998)が予測している第二言語習得における普遍的発達段階およびヨーロッパ言語共通参照枠(Common European Framework of Reference for Languages, CEFR, Council of Europe, 2001)を基に、文法と語彙の分析を行い、日本人大学生の「話す力」と「書く力」を多角的に解明することを目的とする。英語学習歴に関するアンケート調査の実施、英語圏在住の日本人留学生や同世代の英語ネイティブスピーカーの話し言葉と書き言葉のデータ収集も行うことによって、海外経験の有無が日本人英語学習者の文法や語彙の使用にどのような影響を及ぼしているか、英語圏在住の日本人留学生や英語ネイティブスピーカーとの違い、などについての分析も試みている。2016年度は、引き続き、口頭および筆記のナラティブデータの収集、口頭データの文字化、コンピュータへの入力を行い、コーパスの拡大を試みつつ、前年度までに構築したコーパスを基に、処理可能性理論を用いた文法習得段階の分析をまとめ、2つの国際学会における研究発表、学会論文集、学内論文集、専門ジャーナルへの投稿に向けた論文執筆を行った。CEFRを用いた学習者の語彙使用については、初期段階の分析が行ったが、さらに分析を進め、処理可能性理論における文法発達段階とCEFRレベルの比較分析の結果について、2017年に開催される国際学会にて発表する予定である。研究2年次においては、1年次に構築した日本人英語学習者の口頭および筆記のナラティブコーパスを更に拡大するためのデータ収集を行い、初期段階のコーパスをもとにした分析結果を国際レベルの学会にて発表すること、が主な目的であったが、予定通りコーパス構築を進め、2つの国際学会にて発表することができた。本研究は、日本人英語学習者の話し言葉と書き言葉の大規模コーパスを構築し、近年注目されている第二言語習得理論の一つである処理可能性理論(Processability Theory, Pienema nn, 1998, 2005; Bettoni & Di Biase, 2015)が予測している第二言語習得における普遍的発達段階および英語教育現場において広く取り入れられているヨーロッパ;言語共通参照枠(Common European Framework of Reference for Languages, CEFR, Council of Europe, 2001)を用いて、文法と語彙の分析を行うことによって、日本人大学生の「話す力」と「書く力」を多角的に解明することを目的とする。英語学習歴に関するアンケート調査、英語圏在住の日本人留学生や同世代の英語ネイティブスピーカーの話し言葉と書き言葉のデータ収集も同時に行い、海外経験の有無が日本人英語学習者の文法や語彙の使用にどのような影響を及ぼしているか、英語圏在住の日本人留学生や英語ネイティブスピーカーとの違い、などについての分析も試みた。2017年度は、前年度に行なった英語形態素使用についての分析をまとめた論文執筆および専門ジャーナルへの投稿を行いつつ、新たに英語統語使用についての分析も行い、処理可能性理論に基づく統語発達段階とCEFRレベルを用いた語彙使用の関連性についての分析結果については、2つの国際学会において研究発表を行った。また、研究代表者は、国立国語研究所が主催する「学習者コーパス・ワークショップ」における招待講演者として、学習者コーパスによる第二言語習得理論の検証をテーマとして、本研究によって得られた研究成果を紹介しながら講演を行った。

本研究では、日本人英語学習者の「話す力」と「書く力」の解明を目的とし、文字のない絵本を用いた口頭と筆記のナラティブを収集して話し言葉と書き言葉の学習者コーパスを構築し、代表的な第二言語習得理論の一つである処理可能性理論およびヨーロッパ言語共通参照枠を基に文法と語彙の使用を分析した。文法使用については、処理可能性理論が予測する普遍的発達段階を概ね支持する結果が得られたが、ヨーロッパ言語共通参照枠に基づく語彙使用との関連については更なる調査が必要である。研究計画に従って、研究二年次にあたる2016年度は、初年次に構築した学習者コーパスについて、処理可能性理論(Processability Theory Pienemann 1998)、CERFと照らし合わせながら文法、語彙の習得についての分析を進めていく。海外にて英語を長期的に使用した経験のある日本人学習者の「話し言葉」「書き言葉」のデータを更に収集することによって、日本国内のみで学習してきた英語学習者との比較を試みていきたい。研究計画に従って、研究3年次にあたる2017年度は、これまでに構築した日本人英語学習者コーパスを基に、処理可能性理論(Processability Theory, Pienemann, 1998)およびCEFRを用いた文法と語彙の使用についての分析をまとめ、処理可能性理論において予測されている普遍的発達段階とCEFRレベルの比較を試みていきたい。外国語教育、第二言語習得初年度は、国内学会および国際学会にて1件ずつ発表を行う予定としていたが、研究代表者、研究分担者の予定調整により、国内学会における発表のみを行ったため、外国旅費および学会参加費を繰り越すこととなった。2016年度は2回の国際大会にて研究発表を行ったが、どちらも中央大学多摩キャンパス(東京都)が会場であり、自宅より日帰りで通うことが可能であったため、旅費の支出が抑えられた。次年度は、繰り越した分の予算を国際学会参加のための旅費および参加費に使用する予定である。2017年度は、ヨーロッパで開催される国際学会において研究発表を行い、前年度から繰り越された分を旅費ととして使用する予定である。
ラベンダーの低温要求性制御機構の解明

ラベンダー(Lavandula ×intermedia)の低温要求性に関して、1.花芽分化は低温遭遇温度、期間および低温遭遇後の日長により決定される。2. GAメタボロームは早期13位水酸化経路のみであり、花芽分化にはGAの発現が必要である。3. GAは低温遭遇不足株においては花芽分化促進効果を有するが、低温遭遇充足株においては花芽分化促進効果を示さない。4. GA生合成遺伝子とGA受容体遺伝子を単離し、部分塩基配列を決定したが、GA関連遺伝子と低温要求性の関連は確認できなかった。5.花芽分化を期待するには5°C、12週間以上の低温遭遇および12時間以上の日長と温暖条件が必要である。実験1.低温要求性獲得機構の解明:開花後の腋芽に短日条件化において0、6、9、12、15週間5°Cの低温処理を施すことにより、開花のための低温要求量について調べた。低温後の開花条件は、23°C、816時間日長とした。その結果、開花のための低温要求性獲得機構には12週間以上の低温遭遇が、開花には9時間以上の日長が必要であることが明らかになった。実験2.低温要求性獲得時および解除時におけるジベレリン(GA)メタボロームの解析:ラベンダーのGAメタボロームマップは活性GA1に至るGA53→(GA44)→GA19→GA20→GA1であることを明らかにしている。それらの動態について、GA53は低温処理9週目より減少し15週目まで減少すること、他のGA類は低温開始から低い値を維持したが、GA19およびGA20は低温15週終了後6日目から、GA1は21日目から増加し始め開花時には最高値を示した。以上から、低温15週間を経過した植物体では、その後の温暖条件下でGA19→GA20→GA1の代謝系が活性化することで活性GA1量が増し開花に至ると判断した。実験3.GA生合成酵素遺伝子およびGA受容体遺伝子の単離:GA生合成酵素遺伝子のうちGA20oxの部分配列の1425塩基を、GA3oxの部分配列の628塩基を、GA2oxの部分配列の596塩基を、GA受容体遺伝子GID1の部分配列の354塩基を同定した。GA20oxおよびGA3oxはトレニアと、GA2oxはアサガオと、GID1はタルウマゴヤシと高い相関性を示した。実験1および実験3は平成25年度に終了。実験2.低温要求性獲得時および解除時におけるジベレリン(GA)メタボロームの解析(前年度からの2年間):前年度にGAメタボロームマップは活性GA1に至る早期13位水酸化経路GA53→(GA44)→GA19→GA20→GA1であること、活性GA1量は低温後の温暖条件で増加することを明らかにしているが、今年度においても活性GA1の前駆体であるGA53は低温6週目より減少すること、それに伴い、GA19は低温9週目、GA20およびGA1は低温12目より生合成され始め、その動きは低温週終了後1週目から活発になることにより、GA1が増加し開花に至ることを確認した。したがって、GA生合成の活発化が開花に繋がると判断できる。実験4.低温要求性獲得時および解除時におけるGA生合成酵素遺伝子とGA受容体遺伝子の発現解析(次年度までの2年間):前年度に単離したGA生合成酵素遺伝子、GA20ox、GA3ox、GA2oxは低温週終了後から発現が認められ、特に、活性GA1を生成するGA3oxの発現は発雷時に最も高く発現し花芽分化に同調した。これは、実験2の結果を裏付けるものである。一方、受容体遺伝子GID1の発現は低温開始時に高く推移したがその後の活性は低く低温週終了後も同様であった。これは、GID1の発現に用いた試料が低温終了後の温暖条件でも未分化であったことに起因していると思われた。実験5.低温要求性とGA感受性の解明(次年度までの2年間):GID1発現に用いた試料に対し低温終了後の温暖条件でGA処理を試みたが、十分量の低温蓄積量にも関わらず花芽分化しなかった。これは、GID1発現が十分でなければGAの効果がないことを表している。今回、十分な低温蓄積量にも関わらず花芽分化をしなかった理由として日長量の不足が考えられた。十分な低温期間遭遇後に10時間日長以上の長日条件下で発蕾に至るラベンダー植物体と、10時間日長以下の短日条件下で発蕾に至らない植物体のGAメタボロームを比較したところ、発蕾株では内生GAメタボロームであるGA19⇒GA20⇒GA1の代謝系が活性化することで、量的には、それぞれ代謝経路に沿ってGA19およびGA20では最大50pmol/gf.w.、GA1では10pmol/g f.w.まで増加し発雷後には消失するのに対し、未発蕾株ではGA19、GA20およびGA1の発現が全く認められなかった。これは、発蕾株でのGA1増加に関連してGA3oxの発現が花芽分化の開始に同調することを示している。一方、GA1の受容体遺伝子であるGID1の発現量は発蕾株において花芽分化に沿うように増加する傾向が見られたが、対照タンパク質としたアクチンの発現振れが大きく、GA1量の増加に対してGID1発現量が同調するとの確証は得られず、今後の課題として残った。

一方、ラベンダーの開花促進技術において、腋芽増殖苗に対して12週間以上の低温遭遇を受けた上での10時間以上の日長が必要であることを、再度確認した。また、GA処理による開花促進効果は少なくとも6週間以上の低温遭遇を受けた苗においてのみ発現し、その促進効果は十分量の低温遭遇を受けることで消失すること確認した。GA処理は花芽分化促進の有無にかかわらず、ラベンダーに対し茎伸長促進効果を示し著しく鑑賞性を損なうことから、観賞用としてのGA処理は不適であると思われた。以上から、開花促進を目指したラベンダーの苗生産技術を考えた場合、腋芽増殖苗に対して12週間以上の低温遭遇を与えること、その後に12時間以上の日長と温暖条件を与えることで、低温遭遇後の約1ヶ月後には開花が期待できる。以上のように、平成27年度の研究実施計画を計画通りに実施した。ラベンダー(Lavandula ×intermedia)の低温要求性に関して、1.花芽分化は低温遭遇温度、期間および低温遭遇後の日長により決定される。2. GAメタボロームは早期13位水酸化経路のみであり、花芽分化にはGAの発現が必要である。3. GAは低温遭遇不足株においては花芽分化促進効果を有するが、低温遭遇充足株においては花芽分化促進効果を示さない。4. GA生合成遺伝子とGA受容体遺伝子を単離し、部分塩基配列を決定したが、GA関連遺伝子と低温要求性の関連は確認できなかった。5.花芽分化を期待するには5°C、12週間以上の低温遭遇および12時間以上の日長と温暖条件が必要である。ラベンダーのGAメタボロームマップは活性GA1に至る早期13位水酸化経路であること、活性GA1量の増加により花芽分化に至ることを明らかにした。GA生合成酵素遺伝子、GA20ox、GA3ox、GA2oxは低温週終了後から発現が認められ、特に、GA3oxの発現は花芽分化に同調することを明らかにした。また、GID1の発現が十分でなければGAの花芽誘導効果が現われないことを明らかにした。以上のように、平成26年度の研究実施計画を計画通りに進捗している。園芸学実験4、実験5および実験6を実施する。実験4.低温要求性獲得時および解除時におけるGA生合成酵素遺伝子とGA受容体遺伝子の発現解析(平成27年度までの2年間):実験3で単離したGA生合成酵素遺伝子およびGA受容体遺伝子をプローブとして用い,低温要求性獲得時および解除時におけるこれら遺伝子の発現解析を行い,実験2での内生GAの動態とあわせて花芽分化との関わりを考察する。実験5.低温要求性とGA感受性の解明(平成27年度までの2年間):これまでの研究から低温蓄積量不足株ではGA処理による低温の補完が可能であるが,低温蓄積量充足株ではGA処理の効果が認められないことから,GAに対する細胞感受性が変化するものと考えた。そこで,内生GAメタボロームの解析(実験2)とGA生合成遺伝子およびGA受容体遺伝子の発現解析(実験4)から,GA処理および低温処理により花芽を誘導するGA量およびGA受容体量の閾値について明らかにする。実験6.低温要求性制御による開花促進技術の検討(平成27年度)先の2年間でラベンダーの花芽誘導促進に直接的に関わる低温要求性獲得および抑制機構とGAメタボロームおよびGA受容体とその閾値が明らかとなっていることから,環境調節やGA誘導体あるいはGA生合成酵素活性阻害剤を用いてGA感受性を制御することにより,花卉生産現場での利用を想定した開花調節技術の開発を試みる。
食物繊維による健康長寿への可能性

研究代表者らは、食物繊維摂取減少に着目して研究を遂行する。食物繊維の摂取は野菜におっている事が多いが、その1日摂取量は目標量の350gを超えない状態が続いている。特に若年層での摂取不足が顕著である。本研究では各世代の実態調査をして摂取量減少の理由等を明らかにし、食物繊維摂取量の実態を調査する。さらに本研究では、加齢や生活習慣病と、食物繊維による腸内細菌叢の変動の血中サイトカイン量、及び臓器障害に対する交絡や健康寿命の観点から検討を行う。以上のように、生化学・生物学的な手法に加えて統計学的手法を用い、食物繊維量摂取の視点から健康寿命延伸をするための新たな可能性の提案を行うものとする。
コアクチベーターCBPレベルでの転写制御法の開発と動脈硬化治療法への応用

CREB binding protein(CBP)を初めとする転写コアクチベーターは,1)そのリジン残基のε位へのアセチル基転移酵素として,また2)RNA polymerase IIを始めとする基本転写因子群との結合を介して種々のシグナル伝達特異的・細胞分化特異的転写を統合的に調節している.わたしたちは血管平滑筋細胞(VSMCs)での転写コアクチベーター機能を解析し,その細胞生物学的特徴を明らかにすることを目指している.本年度は上記1),2)に関して以下の解析を重点的に行った.1)核内アセチル化に関して.1-1.抗アセチル化リジン抗体(α-AK)の作成:α-AKは試験管内でアセチル化したヒストンを検出,免疫染色により核をのみ認識した.また,これらの所見はε-acetylated lysineにより特異的に阻害された.1-2. α-AKの動脈硬化巣への応用:動脈硬化巣の中膜平滑筋細胞の核が強くα-AKに反応した.1-3. α-AKのVSMCsへの応用:トロンビンなどにより培養血管平滑筋細胞の核内アセチル化の亢進が認められた.2)シグナルコアクチベーターCBPのVSMCsに対する効果に関して.本研究により,(トロンビン)受容体シグナル伝達が核内因子アセチル化へと至る可能性が示された.また,Antが血管平滑筋細胞への導入に有効であること.またCBPの血管平滑筋細胞の増殖への関与が示された.CREB binding protein(CBP)を初めとする転写コアクチベーターは,1)そのリジン残基のε位へのアセチル基転移酵素として,また2)RNA polymerase IIを始めとする基本転写因子群との結合を介して種々のシグナル伝達特異的・細胞分化特異的転写を統合的に調節している.わたしたちは血管平滑筋細胞(VSMCs)での転写コアクチベーター機能を解析し,その細胞生物学的特徴を明らかにすることを目指している.本年度は上記1),2)に関して以下の解析を重点的に行った.1)核内アセチル化に関して.1-1.抗アセチル化リジン抗体(α-AK)の作成:α-AKは試験管内でアセチル化したヒストンを検出,免疫染色により核をのみ認識した.また,これらの所見はε-acetylated lysineにより特異的に阻害された.1-2. α-AKの動脈硬化巣への応用:動脈硬化巣の中膜平滑筋細胞の核が強くα-AKに反応した.1-3. α-AKのVSMCsへの応用:トロンビンなどにより培養血管平滑筋細胞の核内アセチル化の亢進が認められた.2)シグナルコアクチベーターCBPのVSMCsに対する効果に関して.本研究により,(トロンビン)受容体シグナル伝達が核内因子アセチル化へと至る可能性が示された.また,Antが血管平滑筋細胞への導入に有効であること.またCBPの血管平滑筋細胞の増殖への関与が示された.
ホルモンおよびフェロモンによる生殖の調節

我々は主としてアカハライモリ(Cynops pyrrohogaster)の生殖行動に関与するホルモンおよびフェロモンの同定、およびはたらきに的をしぼって研究を行った。その結果以下のような結果を得た。生殖期に雄イモリは生殖可能な雌イモリの前で尾をさかんに振りフェロモン(ソデフリン)を放出し、精子塊を放出してそれを雌の総排泄口よりとり込ませて体内受精をさせる。尾をさかんに振る行動はプロラクチン(PRL)とアンドロゲンでひきおこされることがわかった。この場合PRLは中枢、おそらくpreoptic recess organおよび/またはnucleusinfundiblaris dorsalisに作用することが脳室内投与およびプロラクチン受容体の免疫組織学的研究より明らかになった。一方アルギニンヴァソトシン(AVT)は上記求愛行動の発現をたかめることが明らかにされた。この場合AVTはVlaレセプターを介することが薬理学的実験からわかった。一方イモリの求愛フェロモン(ソデフリン)には前駆体タンパクが存在することがソデフリンをコードするcDNAのクローニングによりわかった。更にこのタンパクのmRNAレベルはPRLとアンドロゲンによりたかめられることもわかった。一方雌のソデフリンに対する反応に関する研究では、ソデフリンは主として雌の鋤鼻上皮で受容されること、ソデフリンに対する雌の鋤鼻上皮の反応性はPRLとエストロゲンにより支えられていること、雄鋤鼻上皮も上記ホルモンによって反応性がたかまるが雌のそれにくらべてはるかに低いことが明らかにされた。アカハライモリと同族異種のシリケンイモリ(C.ensicauda)雄もソデフリンに相当する10箇のアミノ酸残基よりなるペプチドフェロモン(シリフリン)を有することがわかった。しかし両フェロモンはそれぞれ同種の雌にしか有効でなく、種特異性があり、おそらくこれが生殖隔離に寄与していることが示唆された。今後フェロモン受容体の特定をめざす。我々は、シリケンイモリ腹腺のcDNAライブラリーよりアカハライモリの雌誘引フェロモン、ソデフリンに相当する分子をコードする遺伝子のクローニングを行い、シリケンイモリはアカハライモリのソデフリンとアミノ酸2残基を異にするフェロモンを有することを推定した。本年その物質の単離を試み、成功した。同物質はシリケンイモリ雌に対して誘引活性を示すが、アカハライモリに対しては誘引活性を持たぬことも証明され、生殖隔離現象にフェロモンも関与していることが示唆された。同物質はシリフリンと命名され、合成シリフリンを用いて抗体の作製と、ラジオイムノアッセイ系が確立された。それを用いてシリフリン含量の測定を行い、プロラクチンと雄性ホルモンの投与により腹腺中の含量が増加すること、シリフリン前躯体cDNAをプローブとしてノーザン解析とin situハイブリダイゼーションを行い、上記ホルモンにより腹腺中のシリフリン前躯体mRNAのレベルが顕著に上昇することを示した。このことからシリフリン合成にプロラクチンと雄性ホルモンの関与が明らかとなった。一方ソデフリンを嗅上皮に作用させて得られた嗅電図の解析から、鼻孔側室をとりまく上皮の一部が特にソデフリンに対して高い反応を示すことが明らかにされた。更にこの部分の細胞を酵素処理により解離し、ソデフリンを作用させ細胞内カルシウムの増加を指標としてソデフリンに反応する細胞が存在するか否かを調べた結果、一部の細胞にのみソデフリンにより細胞内カルシウムの増加が起こることが確かめられ、ソデフリン受容体を有する細胞の存在が示唆された。

求愛行動の発現に関してはアルギニンヴァソトシンが発現頻度を高めるが、腹腔内投与によるより脳内投与の方がより微量で効くことを確かめ、同ホルモンが中枢に作用している可能性も示された。雌アカハライモリ鋤鼻器官の上皮細胞を解離し、それらにソデフリンを作用させた際の細胞内のCaイオン濃度の変動をfura-2を用いて調べたところ、特定の細胞で細胞内Caイオン濃度が上昇したことから、ソデフリンの情報伝達にはCaイオンが関与していることが示唆された。さらに様々な情報伝達物質阻害剤の存在下でソデフリン応答が抑制されるか否かを調べたところ、異なる情報伝達系をもつソデフリン応答細胞が少なくとも2種類、すなわちフォスフォリパーゼCおよびプロテインカイネースCを介するもの、が存在することがわかった。これまでにプロラクチンと雄牲ホルモンによって雄イモリの求愛行動の発現が促進されることを明らかにしたが、プロラクチンの腹腺内投与と脳室内投与を行って効果を比較したところ脳室内投与の方がはるかに少量で有効であることが明らかになった。また自然界で求愛行動をしているイモリの脳室内および腹腔内にイモリプロラクチンに対する抗体を投与して行動発現を調べたところ脳室内投与の方が少量で行動の発現を抑制することがわかった。このことからプロラクチンは中枢にはたらいて求愛行動の発現を促進していることがわかった。アルギニンヴァソトシン(AVT)はプロラクチンと雄性ホルモンによってひきおこされる求愛行動の発現を高めるはたらきのあることがこれまでの研究で明らかにされた。この場合にもAVTは腹腔内投与より脳室内投与の方が少量で有効であった。また野外で行動を発現している雄にV1リセプターのアンタゴニストを投与すると行動発現の抑制がみられ、V2リセプターのアンタゴニストは無効であること、脳室内にV1リセプターアンタゴニストを投与すると、少量で行動を抑制することもわかった。プロラクチンによる求愛行動の発現に中枢が関与していることは、脳室内投与の方が腹腔内投与よりはるかに微量で有効なことからうかがえた。イモリプロラクチン受容体のcDNAより予測されるアミノ酸配列を参考としてプロラクチン受容体に対する抗体を作製し、イモリ脳の免疫染色を行ったところ、preoptic recessorganとnucleusinfundibularis dorsalisのニューロンが免疫陽性であることから、求愛行動発現に関与するプロラクチンの作用部位は上記のいずれかあるいは両者と考えられた。Triturus cristatusの肛門腺よりCynops pyrrhogasterのソデフリン前駆体に相当するタンパク質をコードするcDNAを得、ソデフリンと相同性をもつアミノ酸配列のペプチドを合成しその抗体を得、肛門腺腹腺を免疫染色したところ、上皮細胞の腺腔に面する側が陽性であることを確かめた。以後、ソデフリン様物質を単離するのにこの抗体を用いてモニターしていく方針が決定した。ソデフリンが雌鋤鼻上皮に作用して全細胞のうちその数パーセントにカルシウム濃度の上昇を促すことがわかった。更に、雄の鋤鼻
希少疾患解析に基づく視床下部ー下垂体ー性腺系調節機構の解明

生殖機能異常症患者の網羅的シークエンスおよびゲノムコピー数解析を行い、疾患に関連すると推測される遺伝学的異常を同定した。重要な成果は下記のとおりである。1)ゴナドトロピン欠損症や男性外性器異常発症における既知遺伝子変異の寄与の程度を明確とした。2)FGF8異常症の新規合併症を見出した。3)原因不明の性分化疾患患者における微小ゲノム構造異常を同定した。4)まれな性成熟疾患であるアロマターゼ過剰症(AEXS)の原因となる染色体構造異常の発生機序を解明した。5)AEXS患者の解析から、本症の性腺機能障害が主としてエストロゲンネガテイブフィードバックによるFSH分泌障害であることを明らかとした。本研究の目的は、生殖機能異常を招く希少疾患患者の解析とそのデータに基づいたin vitro/in vivo解析によって、ヒトの生殖機能を支配する視床下部-下垂体-性腺系のホルモン制御機構を明らかにすることである。本年度は、下記の成果が得られた。1.POR発現調節機構の解明:POR遺伝子翻訳領域に変異を有さない患者3例のアレイCGH解析を行い、全例で微細欠失を同定した。3例の共通欠失のバイオインフォマティックス解析とレポーターアッセイによって、非翻訳エクソン1直前の3つのSPI結合配列がPORの広範性発現に必須であることを見出した。2.ゴナドトロピン欠損症患者の病態の解明:TACR3異常症女性患者の臨床症状と細胞実験から、TACR3が視床下部におけるGNRH分泌制御に関与することを明確とした。また、FGFGR1遺伝子異常が、従来知られているゴナドトロピン単独欠損症のみならず、複合型下垂体機能低下症の病態を招くことを明確とした。3.エストロゲンが男性ホルモン産生低下を招く機序の解明:CYP19A1遺伝子過剰発現に起因するアロマターゼ過剰症(AEXS)患者の臨床解析から、エストロゲンの視床下部-下垂体-性腺系に対するネガティブフィードバックの主体が、下垂体レベルでのFSHの選択的抑制であることを見出した。さらに、比較的少量の血中エストロゲン量の増加によってFSHが抑制されること、男性の妊孕性にFSH低下の及ぼす効果がわずかであることを明確とした。また、AEXS患者の臨床像の重症度が、当該患者のキメラ遺伝子形成に関与するプロモーターの活性に依存することを見出した。本年度は第一に、まれな性成熟疾患であるアロマターゼ過剰症(AEXS)1家系において新たな15番染色体微細構造異常を同定した。これによって、本症の発症に染色体組換え異常とDNA複製エラーに起因するさまざまなゲノム再構成が関与することを明確とした。また思春期前AEXS患者の臨床像と内分泌学的データから、小児患者におけるエストロゲンの基質として、副腎由来アンドロゲンの関与が大きいことを明らかとした。第二に、次世代シークエンサーを用いたアンプリコンシークエンスによって、ゴナドトロピン分泌不全症患者の変異スクリーニングを行った。多数の患者において病的変異を同定した。重要な成果として、男性患者1例においてはじめてFGF8フレームシフト変異を同定し、FGF8機能喪失がゴナドトロピン欠損のみならず先天性甲状腺機能低下や心奇形の発症に関与する可能性を見出した。またマウスを用いた実験から、FGF8変異が視床下部ー下垂体機能異常と陰茎伸展障害を介して重度の外性器男性化不全を招くことを見出した。第三に、さまざまな遺伝子異常症の病態を明確とした。特記すべき成果として、性分化におけるGSTA遺伝子群の機能、CYP21A2異常症の表現型スペクトラムを明らかとした。さらに、性分化疾患発症における潜在性ゲノムコピー数異常の寄与を明確とした。本年度は、第一に、まれな性成熟疾患であるアロマターゼ過剰症(AEXS)の原因となる15番染色体染色体微細構造異常の発生機序を解明した。すなわち、本症の発症にNon-B配列などの既知染色体再構成誘導モチーフに依存しないDNA複製エラーとnon-homologous end joining、および反復配列依存性に生じる非対立遺伝子間相同組換えが関与することを見出した。さらに、新たな患者を同定し、本症の性腺機能障害が主として視床下部におけるエストロゲンネガテイブフィードバックによるFSH分泌障害であること、エストロゲン過剰が男性妊孕性を阻害しないこと、本症の内分泌異常の改善にアロマターゼ阻害剤が有効であることを明確とした。また、乳がんの発症にアロマターゼ遺伝子周辺の体細胞性ゲノム構造異常の関与が少ないことを明らかとした。

第二に、アレイcomparative genomic hybridization (CGH),次世代シークエンサーを含む新規分子遺伝学的解析技術を組み合わせた性成熟疾患と性分化疾患の効率的遺伝子変異スクリーニングシステムを構築した。これにより、原因不明の性分化疾患患者4例における微小欠失を同定し、性分化疾患発症におけるゲノム構造異常の寄与を明確とした。また、20番染色体に新規性分化疾患関連遺伝子が存在する可能性を見出した。第三に、原因不明の複合型下垂体機能低下症患者においてFGFR1を含むヘテロ接合性微小欠失を同定し、FGFR1機能喪失がゴナドトロピン分泌障害のみならず、下垂体前葉形成の異常を招く可能性を見出した。この成績は、視床下部ー下垂体系の形成におけるFGFR1-FGF8を介した新たな遺伝子相互作用の可能性を示唆する。11月末の追加採択であったため、研究期間が短期間であった。しかし、おおむね計画通りの進展がみられた。とくにゴナドトロピン分泌制御に関しては、FGFR1異常症の新たな表現型の解明など、当初の計画以上の成果が得られた。25年度が最終年度であるため、記入しない。POR異常症に関しては初年度に計画の大部分が達成されたため、本年度はAEXSと性成熟疾患、性分化疾患に焦点を当てて研究を推進した。初年度の成果に基づき、24年度はとくにゴナドトロピン分泌制御に関する遺伝子相互作用の解明とAEXSの病態の解明を中心として研究を展開する。1.ゴナドトロピン分泌制御に関する遺伝子相互作用の解明:ゴナドトロピン分泌異常を呈する患者を対象として既知遺伝子および候補遺伝子の網羅的変異解析を行う。本研究では、次世代シークエンサーを用いることにより、効率的変異スクリーニングを行う。また、変異遺伝子の機能を細胞実験等で解明する。これにより、ゴナドトロピン分泌異常症のようなoligogenic disorderにおける個々の遺伝子異常の意義を明確とし、ゴナドトロピン分泌制御に関与する新規遺伝子ネットワークを解明する。2.AEXSの病態の解明:新規に集積された重房腫大患者のCYP19A1解析を行い、遺伝子過剰発現を招く新規ゲノム異常を解明する。また、AEXS患者の内分泌学的所見および治療への反応性を検討し、疾患重症度決定因子を解明する。最終的に、エストロゲン過剰が生体とくに男性生殖機構に与える効果を明確とする。H25年度には、これまでの成果を発展させ、新たな疾患発症機序の解明、疾患重症度決定因子の同定等を行う。これまでの研究からアレイCGHや次世代シークエンサーを用いたアンプリコンシークエンス・ターゲットエンリッチメントが多数の性成熟疾患患者の効率的解析にきわめて有用であることが明確となったため、これらを積極的に活用する。また、患者のステロイド代謝産物測定などにより視床下部ー下垂体ー性腺系のフィードバックに関与する新規因子を同定する。最終的にこれまでの成果の総括を行い、性成熟疾患・性分化疾患の原因となる新規遺伝子異常の同定と発症機序の解明、変異陽性患者の遺伝子型ー表現型解析、新規男性ホルモン産生経路backdoor pathwayの疾患への関与および生理的意義の解明を目指す。