hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
青果物における流通段階別競争構造と価格差形成要因に関する実証的研究

1.まづ、青果物市場における競爭を説明するための理論を、競爭構造論的立場から整備することを試みた。それは、各経済主体のとる市場行動がその経済主体のおかれている市場の競爭構造により規制され、それら市場行動の結果としてある市場成果が達成されるという論理構造である。その場合、競爭構造を、純粋競爭から純粋独占に至る競爭・独占両要因の混在する連続的移行過程として把え、基本的には非可逆的過程として特徴づけている。2.次に、青果物流通のかなめである卸売市場段階での競爭構造の実態を考察した。最近における青果物流通量の全国的拡大傾向の中で、この段階での競爭構造は卸売市場間の競爭の観点から考察されるべきであるとして、以下のような特質を指摘している。県荷・分荷の両面にわたって卸売市場流通の重層化傾向が強まっており、各卸売市場の荷受会社がそれ々の部分市場での需要独占者であったとするこれまでの状況に著しい変質がみられるとしている。3.需要停滯・構造的供給過剰の需給調整の基礎となる需給の価格反応に関する計測的研究を次に行った。需給モデルとしてリカーシブなテクニカル・アジャストメント・モデルを設定し、東京中央卸売市場の月別データを用いて計測した。そして計測結果から課題を檢討し、その政策的含意に言及している。4.最後に、青果物の品質と価格に関する理論を展望した後、品質別価格差の実態をふまえて各流通段階毎の価格差形成要因を明らかにしている。即ち、産地段階での規格化基準は品質より外観・包装等により設定されており、卸売市場段階では需給関係を基本とするが、等級要素よりブランド要素が強い傾向がある。そして、小売市場では等級による影響は縮少するがブランドの影響はなお残存しているとしてる。
甲状腺濾胞性腫瘍の術前細胞診診断における53BP1核内フォーカスの有用性の検討

腫瘍断面から細胞を採取する捺印細胞診、腫瘍を針で刺す針細胞診、刺した針を洗浄する液体細胞診を用いて53BP1核内フォーカスを評価した。全体的に癌細胞以外の反応が多く、細胞の重なりが少ない液体細胞診以外では評価が難しかった。液体細胞診でも重なりがない部分に限って組織標本と同様の核内フォーカスを確認できた。良性疾患より悪性疾患に核内フォーカスが多い傾向があったが、症例毎のばらつきが大きかった。以上より、細胞診検体での核内フォーカスを用いた良悪性の鑑別は難しかったが、今後も研究を継続する。甲状腺濾胞癌の術前診断は従来の細胞診ではほぼ不可能であり、ゲノム不安定性に注目した術前診断の可能性を検証している。ゲノム不安定性には様々な指標があるが、平成26年度は1FFPE(組織標本)を用いた53BP1蛍光免疫染色の検討、2FFPE(組織標本)を用いたDNA抽出・aCGH(マイクロアレイ比較ゲノムハイブリダイゼーション)解析を計画し、以下にその成果を示す。1FFPEを用いた53BP1蛍光免疫染色27例の濾胞腺腫(FA)、28例の微少浸潤型濾胞癌(MFC)、14例の広範浸潤型濾胞癌(WFC)の組織標本に対して53BP1の免疫染色を行った。核内フォーカスが2個以下を低DNA損傷応答型、核内フォーカス3個以上または短径1.0μm以上の大型フォーカスを高DNA損傷応答型と定義した。総フォーカス出現率はFA 20.7%、MFC 27.8%、WFC 36.4%であり、悪性度に比例して総フォーカス出現率も有意に高くなっていた。高DNA損傷応答型の出現率は、FA 4.3%、MFC 6.4%、WFC 9.9%と更に各群の差は有意に大きかった。2FFPEを用いたDNA抽出・aCGH解析12例のFA、12例のMFC、9例のWFCの組織標本からDNAを抽出し、8例のFA、10例のMFC、9例のWFCに対してaCGHを行った。コピー数変化はFA 25.7Mb、MFC 32.2Mb、WFC 120.8Mbと平均では各群に有意差があるように思えたが、各群内の差が大きいため有意差は認められなかった。以上より、甲状腺濾胞癌の術前診断においてはaCGHよりも53BP1蛍光免疫染色が有用である可能性が示唆された。ゲノム不安定性には様々な指標があるが、FFPE(組織標本)を用いた53BP1蛍光免疫染色がaCGH(マイクロアレイ比較ゲノムハイブリダイゼーション)より濾胞癌の診断に有用である可能性が示唆された。平成27年度は、53BP1蛍光免疫の細胞診への応用を試み、以下にその成果を示す。既存の術前診断で使用されたアルコール固定のパパニコロウ染色検体のカバーグラスを除去して、再度53BP1蛍光免疫染色を試みたが、FFPEのような核内フォーカスを検出出来なかった。染色条件を変えてみるも、改善を認めなかった。細胞の重なりやパパニコロウ染色既染色などの検体の問題が原因と思われ、最近細胞診検体での免疫染色で有用とされるliquid-based cytology(穿刺した針を洗浄し、その中に含まれる細胞を利用する)検体を用いた蛍光免疫染色を試みる。浸透圧の影響で細胞がやや膨化するが、細胞の重なりが軽微であり、染色と核内フォーカス観察に適していると考えられる。通常のパパニコロウ染色検体を再染色する事で核内フォーカスが評価できると思われたが、実際は評価不能であった。細胞診検体における蛍光免疫染色のmethodologyを確立できていない。ゲノム不安定性には様々な指標があるが、FFPE(ホルマリン固定パラフィン包埋組織標本)を用いた53BP1蛍光免疫染色がaCGH(マイクロアレイ比較ゲノムハイブリダイゼーション)より濾胞癌の診断に有用である可能性が示唆された。これを基に平成28年度は、53BP1蛍光免疫染色の細胞診への応用を試み、以下にその成果を示す。検体は組織検体をスライドグラスに接触させて細胞を採取する捺印細胞診と、腫瘍を針で穿刺してスライドガラスに吹き付けた針細胞診検体、穿刺した針を洗浄して得られる細胞を用いるLBC(liquid Based Cytology)を用いた。また、腫瘍は良性の濾胞腺腫、悪性の濾胞癌、乳頭癌、髄様癌を用いて評価を行った。結果として、全体的に非特異的反応が多く、特に細胞の重なりが多いLBC以外の検体では評価が難しかった。LBCでも細胞の重なりが多い部分では非特異的反応が大きいため評価に適さず、重なりのない細胞ではFFPE組織標本と同様な核内フォーカスを確認できた。また、良性疾患と比較して悪性疾患、特に乳頭癌に関しては核内フォーカスが多い傾向が観察されたが、評価対象のばらつきが大きく正確な評価は難しかった。以上より、仮説の検証は一部可能であったが、今後に課題を残す状況である。

原因としては、隈病院からの検体確保が出来ず濾胞癌LBC検体の採取が難しかった事と、細胞の重なりのない検体を作る方法を確立できなかった事が考えられる。今後も大学院生の研究課題として実験を継続したい。腫瘍断面から細胞を採取する捺印細胞診、腫瘍を針で刺す針細胞診、刺した針を洗浄する液体細胞診を用いて53BP1核内フォーカスを評価した。全体的に癌細胞以外の反応が多く、細胞の重なりが少ない液体細胞診以外では評価が難しかった。液体細胞診でも重なりがない部分に限って組織標本と同様の核内フォーカスを確認できた。良性疾患より悪性疾患に核内フォーカスが多い傾向があったが、症例毎のばらつきが大きかった。以上より、細胞診検体での核内フォーカスを用いた良悪性の鑑別は難しかったが、今後も研究を継続する。当初の計画通りに実験が終了し、その結果を論文に投稿中である。通常の免疫染色に適しているとされるLiquid-based cytologyでの染色を行い、methodologyを確立する。確立後は当院と隈病院の細胞診検体を用いて濾胞性腫瘍の術前診断における有用性を検討する。乳腺内分泌外科学術前診断への応用には、53BP1蛍光免疫染色を細胞診検体で行う事が重要である。FFPEとは異なる細胞診検体の蛍光免疫染色であるため、まずmethodoogyを確立する事を目標とする。国際的な当該分野の進行状況を把握するために学会に参加する必要があった。また蛍光免疫染色のための消耗品購入に費用を有した。物品費などが計画よりも安価に購入可能であったため。次年度は論文作成にあたり、投稿費用などでの使用を計画している。平成27年度も物品費や発表にかかる経費に使用予定である。
あいまいさ回避及び不正確さ回避をもたらす主観的確率分布関数の実験経済学による検証

2006年度は、静学的な不正確さ回避の計測を行った。まず我々は主観的確率形成について、見通し(prior)を直接対象にしていては検証不可能との考えから、「不正確さ回避」の概念を導入した。そこでは客観的だが不正確な情報とそれに基づく主観的な各人の自信を分けることが可能であるため、実験による検証が可能となった。実験では不正確な情報で作られる箱と正確な確率(リスク)の箱についてどちらかを選んで賭けてもらう方法で、個人に固有な不正確さのレベルを測定した。特筆すべき点は「不正確さの箱」の作成方法にある。実験者による操作が不可能で、被験者と実験者の間で何が不正確なのかについて情報を共有できる箱を作る必要があった。そこで我々は、事前に被験者以外の学生から、複数の色で100個入った箱の中身の作り方について自分ならどう分けるかのアンケートを180人から集め、そこから1枚を実験後に選んでその結果に基づいて被験者の目の前で箱を作るという方式を開発した。この実験によって(1)個人によって不正確さ回避(または自信)の程度には個人差がある。(2)人々の主観的確率の形成は、α-maxminモデルのように、最悪のケースと最良のケースを線形でつなぐものでなく、より空間的であり、3次元以上の情報にも対応している。という結論を得た。まず,リスク下または不確実性下での動学的な個人の意思決定を検証した.これは,アセットアロケーションが通常,将来を見越した異時点間の意思決定でなければならないことによっている.検証すべきモデルとして,Epstein and Zin(1989)による一般化期待効用仮説を選んだ.我々は,2回にわたる金銭の受け取りについての実験を,敬愛大学の学生に対して報酬つきで行い,(1)リスク態度(2)時間選好率に加え,(3)異時間点の代替率を分離して計測することに成功した.従来こうした研究はアンケートによるものが大半であったが,補助金の助成を受けて,報酬を伴うActual Choiceの実験をすることが可能になった.人々の動学的な意思決定は期待効用仮説に従わず,リスク態度と代替性の程度は同一でないことが検証された.(敬愛大学研究叢書68号に掲載.またSpringerから発行予定の論文集に収録)次に,より現実的な問題設定を考えるため,客観的な期待値が確率分布によって得られる状況下にないとき,すなわちあいまいさの下で,主観的な確率分布を人々がどのように形成するのかを,実験により検証した.検証すべき理論としては,Epstein and Schneider(2005)による,動学的Multi-prior理論を採択した.この仮説は,ニュースが,どの程度あいまいなのかがわからないときに,人々が最悪の事態を想定して,効用の最大化をはかるというものである.彼らは株式市場において人々がニュースを受け取ったとき,ベイジアンの主観的確率分布には従わず,人々が良いニュースよりも悪いニュースを深刻に受け取ると主張しており,この仮定について実験によって検証した.敬愛大学と慶應義塾大学の学生たちを対象に実験を行い,あいまいさ回避を裏付けるニュースへの非対称的な反応を観察した.(敬愛大学研究叢書39号に掲載)2006年度は、静学的な不正確さ回避の計測を行った。という結論を得た。
安全な看護ケアを行うために必要な看護師数の算出方法に関する基礎的研究

本研究は、医療が変化する中より安全にケアを行なうことが求められていることから、看護判断に基づく安全なケア提供のための人員配置に関する新たな指標を作成するための基礎的な資料を得ることを目的とした。中でも患者の数の増加とともに制度としても整えてきている『がん』に焦点をあて、外来化学療法を行なう治療室を対象として研究を行なった。目的:外来化学療法を安全に提供するために必要な看護師数の算出方法を見出すために、外来化学療法室における看護師の業務実態および業務環境の実態を明らかにする。方法:「外来化学療法室」に勤務する看護師を対象としてタイムスタディ調査及びスタッフからの聞き取りと見学により治療室に関する基礎的データを得た。調査は本学倫理委員会の承認を得た後に、医療機関の管理者および治療室内のスタッフに承諾を得た上で行なった。患者に対しても協力依頼について書面および口頭にて説明を行った。データは統計的に処理を行なった。結果:外来化学療法実施前には、医師の診察結果を受けて薬剤部での抗がん剤のミキシングおよび治療室内での準備が開始されており、役割分担と連携体制、情報の共有がなされていた。外来化学療法室内での看護師の業務は「職員間の連絡・指示・調整」「情報収集・カルテ確認」「記録」「ケア関連会議」「輸液薬と指示の確認」の順であった。治療方法別ではCEFのほうがPTXよりも「助言・指導」「輸液の実施」「患者の状態の確認・観察」に時間をかけており、「輸液の実施」「滴下の確認」「患者の状態確認・観察」の回数が多い傾向だった。輸液管理のアルゴリズムを用いた分析では、頻度、時間ともに「輸液薬と指示の確認」が多く、次いで「患者の状態の確認・観察」「巡視・観察」「ポンプアラーム対応」であった。今後は調査を重ね、治療法毎に要する時間・回数をさらに分析し、必要な人員数の算出につなげる必要性があると考えている。医療技術の高度化や在院日数の短縮化に伴い、対象者の状態が急性化、重症化、複雑化している。このような対象者へのケアはより安全性を重視する必要があり、ケアの実施に際しては、1つの看護行為に複数の看護師が関わることが多く、ケアの提供が複層化している。しかし、看護の人員配置は従来から診療報酬の算定要件としての入院患者と看護職員との比率が用いられており、医療の状況が変化した現在も変わっていない。そこで、本研究では、看護判断に基づいた、安全にケアを提供するための人員配置に関する新たな指標を作成のために必要な基礎的な資料を得ることを目的として進めているところである。【方法】(1)看護師がケア提供のために行っている必要看護師数に関する判断について症例を用いて把握する。(2)その判断の過程、安全なケア提供に必要とされる看護師数、その判断の根拠と対象者の状態に基づき、安全なケア提供のための人員配置に関する基礎的指標の作成を試みる。本年度は、看護判断、安全なケアに関する文献収集と内容の検討、典型的な症例と調査票の項目と内容の検討を行った。【活動内容】人員配置に関連した文献、および看護必要度に関する研究報告書等の資料を収集し、人員配置の計算の方法、ICUに入室中の患者の状態、看護の必要量の状況についての知見を得た。また、急性期および長期療養を必要とする患者または療養者に対する看護実践経験を持つ看護師より、看護ケア実施時に複数の看護師を必要とする患者の状態について聴き取りを行い、調査票作成のための準備を行った。現在、調査票作成に向け作業を行っているところである。

今後は、調査票および調査のための症例を作成し、全国数カ所の医療機関に協力を得て、看護ケア提供のために必要な看護師数に関する判断についての調査を行う予定である。医療制度改革,規制緩和および医療技術の高度化や医療器機類の精度の向上に伴い、医療機関内における対象者の状態は急性化、重症化、複雑化していることから、提供されるケアはより安全性を重視する必要がある。ケアの実施には複数の看護師が関わることが多くケアの提供が複層化しているが、看護の人員配置は診療報酬の算定要件としての入院患者と看護職員との比率が用いられており、医療の状況が変化した現在も変わっていない。そこで、本研究は看護判断に基づいた安全なケア提供のための、人員配置に関する新たな指標作成に必要な基礎的資料を得ることを目的として進めているところである。【方法】(1)看護師がケア提供のために行っている必要看護師数に関する判断について把握する。(2)その判断の過程、安全なケア提供に必要とされる看護師数、その判断の根拠と対象者の状態に基づき、安全なケア提供のための人員配置に関する基礎的指標の作成を試みる。【本年度の活動内容】本年度は、調査表作成段階において重要であると考えられる看護管理者の人員配置に対する考え方について調査を行い、その結果を基に実態の調査を行うための調査表の作成を行うこととした。(1)看護管理者への調査:看護管理者の人員配置に対する判断の実際を明らかにすることを目的とした。対象は都内大規模病院の看護管理者、調査方法は調査用紙(別紙)に基づく面接調査とした。調査内容は、医療機関の概要(病院の特徴,病床・病棟数,ICUの有無,看護師数,病棟の看護配置)、人員配置に関する事項(人員配置の考え・方法,現行の基準に対する考え,経営的考え)とした。面接調査については倫理面に留意してすすめた。(2)今後に向けて、看護管理者の面接調査の結果を基に配置を厚くする病棟の特徴等の情報を含めた調査表を作成し、全国数カ所の医療機関に協力を得て、患者の状態と看護ケア提供の人数等に関する調査を行う予定である。【研究目的】外来化学療法を安全に提供するために必要な看護師数の算出方法を見出すために必要な、外来化学療法における看護師の業務実態および業務環境の実態を明らかにすることを目的とした。【研究方法】「外来化学療法」を実施している医療機関の「外来化学療法室」に勤務する看護師を対象として、タイムスタディ調査を行った。スタッフからの聞き取り、治療室内の見学により治療室に関する基礎的データを得た。調査は本学倫理委員会の承認を得た後に、医療機関の管理者および治療室内のスタッフに承諾を得た上で行なった。患者に対しても協力依頼について書面および口頭にて説明を行った。データは統計的に処理を行なった。【結果】(1)外来化学療法実施前には、医師の診察が行われた結果を受けて薬剤部での抗がん剤のミキシングおよび治療室内での準備が開始され、それぞれの役割分担とその連絡体制、情報の共有化がなされていた。(2)外来化学療法室内で行われている看護師の業務では「職員間の連絡・指示・調整」が最も多く、次いで「情報収集・カルテ確認」「記録」「ケア関連会議」「輸液薬と指示の確認」の順であった。
噴流撹拌固液分離槽と高効率回転生物膜接触・沈殿装置を組み合わせた下水処理システム

昨年に引き続き宮崎市木花下水処理場に設置した処理能力100m^3/日のパイロットプラントによる実験的研究を行った。本年度は最初沈殿池を省いて,沈砂池流出水を直接噴流撹拌固液分離槽に流入させるフローにおけるシステムの処理効率を調べた。回転生物膜接触・沈殿装置(RBC)のカバーに太陽光発電パネル(表面積8m^2)を取付けそこでの発電電力によってRBCを稼働させる実験を行った。冬期間ではあったが晴天時には1日に8時間程度の稼働が可能であった。以下に,本年度に得られた成果を記す。1)処理流量100m^3/日,接触体回転速度2rpm,Al添加量5mg/L,固液分離槽滞留時間45分の条件において処理水のSS濃度は5mg/L,BODは8mg/L程度であった。2)固液分離槽に多孔板を挿入した場合としない場合の実験により,多孔板の通過噴流速度が10cm/s,間隔が20cmにおいて最大のSS除去率が得られることを確認した。3)Al添加濃度が高くなる程固液分離槽でのリン除去率は高いが,Al添加濃度が2.5mg/Lと低い場合でも,微細な不溶解化リンがRBC生物膜に付着除去され65%程度のリン除去率が得られた。4)固液分離槽でSSの90%近くが除去された。分離汚泥の濃縮性は良好で,脱水比抵抗も通常の最初沈殿池汚泥と同等の10^9S^2/gのオーダであった。実容量3.4m^3の噴流攪拌固液分離槽(JMS)と8角形のステンレス網メディア(直径2m)を持つ処理能力100m^3/日程度の高効率回転生物膜接触・沈殿装置(RBC)を宮崎市木花下水処理場に設置し,最初沈殿池流出水を原水とした実験を行い,以下の結果を得た。(1)JMSの処理能力についてAl添加率5mg/l,水理学的滞留時間1時間の条件では,SSとBODの除去率はいずれも50%程度であった。同条件における濁度除去率は90%近く,コロイドレベルの汚濁物が有効的に凝集沈殿除去された。(2)RBCの処理能力と動力消費について水温20°C前後で,接触体回転速度2rpmの条件において,水量負荷を70l/m^2/日とした場合,処理水のTOC濃度は約10mg/l,DOC濃度は約5mg/l,NH_<4->N濃度は34mg/lとなり,極めて良好な処理水質となった。この時の単位処理水量当りのRBC駆動電力は0.1KWH/m^3であった。この事から本RBCは極めて省エネ型の処理装置であることがわかった。本RBC付着生物膜へのNH_<4->NFluxを求めた結果,先にベンチスケールのRBCの実験により予測した値に近い値を得て,徴細突起の効果を確認した。(3)JMSとRBCを組み合わせたシステムについてJMSの水理学的滞留時間1時間,Al添加率2.5mg/l,RBCの水量負荷60l/m^2/日での実験では,次の結果を得た。(a)JMS流出水のTOC濃度は40mg/l程度,RBC1段では15mg/l,2段では5mg/l位となり,2段目で処理が完了し,(b)JMS流出水の濁度は25度,RBC1段では10度,RBC2段では7度位になった。この結果,わずかの凝集剤添加によって,システムの効率が大巾にアップすることがわかり,ベンチスケール実験の結果を確認できた。

本年度は最初沈殿池を省いて、沈砂池流出水を直接噴流攪拌固液分離槽に流入させるフローにおけるシステムの処理効率を調べた。回転生物膜接触・沈殿装置(RBC)のカバーに太陽光発電パネル(表面積8m^2)を取り付けそこでの発電電力によってRBCを稼動させる実験を行った。冬期間ではあったが晴天日には1日に8時間程度の稼動が可能であった。以下に本年度に得られた成果を記す。(1)処理流量100m^3/日、接触体回転速度2rpm、Al添加量5mg/l、固液分離槽滞留時間45分の条件において処理水のSS濃度は5mg/l、BODは8mg/l程度であった。(2)固液分離槽に多孔板を挿入した場合としない場合の実験により、多孔板の通過噴流速度が60cm/s、間隔が20cmにおいて最大のSS除去率が得られることを確認した。(3)Al添加濃度が高くなる程固液分離槽でのリン除去率は高いが、Al添加濃度が2.5mg/lと低い場合でも、微細な不溶解化リンがRBC生物膜に付着除去され65%程度のリン除去率が得られた。(4)固液分離槽でSSの90%近くが除去された。分離汚泥の濃縮性は良好で、脱水比抵抗も通常の最初沈殿池汚泥と同等の10^9S^2/gのオーダーであった。
１細胞レベルにおける宿主植物-一次寄生菌-二次寄生菌3者系相互作用の分子機構解明

絶対寄生菌であるムギ類うどんこ病菌は、コムギとオオムギに高度に適応した結果、生命活動の維持にこれら宿主植物が無くてはならない。ムギ類うどんこ病菌は、宿主植物の防御応答を抑制しながら、吸器という器官を通じて栄養を搾取している。感染できるうどんこ病菌(親和性菌)によって宿主植物の防御応答を抑制され、感染できないうどんこ病菌(非親和性菌)が感染できる状態を受容性といい、逆に非親和性のうどんこ病菌によって防御応答が誘導され、親和性のうどんこ病菌が感染できない状態を拒否性という。しかし、受容性と拒否性の分子機構については殆ど解明されていない。そこで本研究では、これらの分子機構に迫るため、1細胞レベルで網羅的遺伝子発現解析を可能にするムギ類に適応したSingle cell RNA sequencing技術と、レーザーインジェクション技術による受容性と拒否性を誘導するタンパク質分子を任意の表皮細胞で発現させる手法の開発に取り組んでいる。平成30年度中に、マイクロキャピラリーと呼ばれるガラス針を利用して、ムギ類うどんこ病菌が感染したパンコムギとオオムギの単一細胞層の核からmRNAを抽出する手法を確立した。さらに、抽出したmRNAからライブラリーを作成し、次世代シーケンサーによるRNA sequencingを実施できるようにした。サンプルを識別するバーコード配列と1分子RNAそれぞれを識別するバーコード配列をライブラリーに組み入れることで、ライブラリー作成時に入るエラーを補正することができ、正確に1細胞における遺伝子発現量を推定することができた。また、針作成機を用いて、細胞ダメージが少なくなるようマイクロキャピラリーの先端を加工し、細胞を殺すことなく蛍光標識物質等をインジェクションすることに成功することができた。マイクロキャピラリーを利用して、パンコムギとオオムギの単一細胞層の核を抽出する手法を確立した。一細胞から得られたRNA量が非常に少ないためcDNAに逆転写後、PCRによる増幅を実施した。それによる増幅バイアスを減少させるために、逆転写時にランダムな塩基配列( Unique Molecular Identifier : UMI )をcDNA末端に付与した。次世代シークエンサーMiSeqでcDNA配列とUMI配列を決定し、同じUMI配列を持ったcDNA配列群は一つのmRNA分子とみなし、遺伝子発現量を推定した。異なるUMI配列を持つリードは、別のmRNA由来と見なすことが出来、UMIが何種類あるか数えることによって、mRNAの分子数、すなわち遺伝子発現量を正確に推定できる。また、定量性を確認をするために、濃度の分かっている92種類のRNAを用いた。このRNAでは、それぞれ濃度が異なっており、濃度とリードのカウント数が正の相関を示すかどうかで定量性を確認できる。本研究で得られたデータでは、相関係数が0.9以上あり、定量性があることを確認できた。レーザーインジェクション技術によるタンパク質分子を細胞へ導入する技術開発では、当初、インジェクション針作成機を購入する予定であったが、デモ機による作製の訓練を重ねた結果、成功率が極めて低く、先端径を細くできなかった。より細い針を作製可能で十分に実績が報告されているより価格の高いインジェクション針作成機である次世代マイクロピペッター(SUTTER製)を使う必要がわかった。そこで、本年度は、既存の針作成機を用いて、細胞ダメージが少なくなるようマイクロキャピラリーの先端を加工する方法を検討した。様々な条件検討した結果、細胞を殺すことなく蛍光標識物質等をインジェクションすることに成功することができた。平成31年は、以下の3項目について研究を推進して行く予定である。1.1細胞レベルにおける宿主植物-一次寄生菌-二次寄生菌3者系相互作用を評価するために、マイクロマニュプレーターを駆使して、親和性菌を事前接種した細胞に非親和性菌を接種する技術、非親和性菌を事前接種した親和性菌を接種する技術を確立させる。2.平成30年度中に確立したうどんこ病菌とムギ類の相互作用系におけるSingle cell RNA sequencingを利用して、受容性が誘導される時期とその前後の時期に付着器下の宿主1細胞と周辺細胞からそれぞれRNAを抽出し、Single Cell RNA sequencing法によるトランスクリプトーム解析を実施する。3.レーザーインジェクション技術による宿主細胞核又は細胞質へのタンパク質分子の導入を試み、平成31年度中の確立を目指す。GFPなどの蛍光タンパク質を合成し、オオムギの子葉鞘細胞から作成された単一細胞層からなる内側表皮組織に、昨年度購入したレーザーマイクロインジェクターLTM-1000を用いて細胞内に導入する。次世代マイクロピペッター(SUTTER製)を購入し、植物細胞の損傷を最小限にするマイクロキャピラリーをさらに効率良く作成できるようにする。上記の研究を通じて、確立した技術については、植物病理学会等で発表を行う予定である。

そこで本研究では、これらの分子機構に迫るため、1細胞レベルで網羅的遺伝子発現解析を可能にするムギ類に適応したSingle cell RNA sequencing技術と、レーザーインジェクション技術による受容性と拒否性を誘導するタンパク質分子を任意の表皮細胞で発現させる手法の開発に取り組んでいる。平成30年度中に、マイクロキャピラリーと呼ばれるガラス針を利用して、ムギ類うどんこ病菌が感染したパンコムギとオオムギの単一細胞層の核からmRNAを抽出する手法を確立した。さらに、抽出したmRNAからライブラリーを作成し、次世代シーケンサーによるRNA sequencingを実施できるようにした。サンプルを識別するバーコード配列と1分子RNAそれぞれを識別するバーコード配列をライブラリーに組み入れることで、ライブラリー作成時に入るエラーを補正することができ、正確に1細胞における遺伝子発現量を推定することができた。また、針作成機を用いて、細胞ダメージが少なくなるようマイクロキャピラリーの先端を加工し、細胞を殺すことなく蛍光標識物質等をインジェクションすることに成功することができた。マイクロキャピラリーを利用して、パンコムギとオオムギの単一細胞層の核を抽出する手法を確立した。一細胞から得られたRNA量が非常に少ないためcDNAに逆転写後、PCRによる増幅を実施した。それによる増幅バイアスを減少させるために、逆転写時にランダムな塩基配列( Unique Molecular Identifier : UMI )をcDNA末端に付与した。次世代シークエンサーMiSeqでcDNA配列とUMI配列を決定し、同じUMI配列を持ったcDNA配列群は一つのmRNA分子とみなし、遺伝子発現量を推定した。異なるUMI配列を持つリードは、別のmRNA由来と見なすことが出来、UMIが何種類あるか数えることによって、mRNAの分子数、すなわち遺伝子発現量を正確に推定できる。また、定量性を確認をするために、濃度の分かっている92種類のRNAを用いた。このRNAでは、それぞれ濃度が異なっており、濃度とリードのカウント数が正の相関を示すかどうかで定量性を確認できる。本研究で得られたデータでは、相関係数が0.9以上あり、定量性があることを確認できた。レーザーインジェクション技術によるタンパク質分子を細胞へ導入する技術開発では、当初、インジェクション針作成機を購入する予定であったが、デモ機による作製の訓練を重ねた結果、成功率が極めて低く、先端径を細くできなかった。より細い針を作製可能で十分に実績が報告されているより価格の高いインジェクション針作成機である次世代マイクロピペッター(SUTTER製)を使う必要がわかった。そこで、本年度は、既存の針作成機を用いて、細胞ダメージが少なくなるようマイクロキャピラリーの先端を加工する方法を検討した。様々な条件検討した結果、細胞を殺すことなく蛍光標識物質等をインジェクションすることに成功することができた。平成31年は、以下の3項目について研究を推進して行く予定である。
日本人および在米日系人のLDLレセプター活性の比較検討

近年日本においても動脈硬化性心疾患による死亡率が急増し、その原因の一端が食生活の欧米化に伴う血清コレステロール(SCH)値の上昇にある事が推定されている。しかし欧米型食生活がどのてような機構でSCHを上昇せしめるのかは明らかにされていない。そこで本研究では、日本人に比し約2倍動物性脂肪の摂取量が多い在米日系人と日本人の血清脂質値、アポ蛋白濃度、インスリン濃度、LDLレセプター活性の比較検討を行い、欧米型食生活のSCH上昇機構の検討を企図した。〔成績〕1.在米日系人では日本人に比しSCHが各年令層において約30mg/dl高値であった。また血清TG値も2050mg/dl日系人が高値であった。2.SRID法で測定した血清ApoAI、B、E濃度は日本人と在米日系人で近似していた。従って日本人と日系人ではリポ蛋白組成が異なる可能性が示唆された。3.肥満度、血糖を一致させて比較しても糖負荷時の血清インスリン反応は日本人に比し日系人が高値であった。4LDLレセプター活性はLip sky5のリンパ球PHA反応を利用した系を用いた。リンパ球培養液中のLDL濃度34μg protein/ml時のpHA反応阻害率でリンパ球LDLレセプター活性を比較した。日本人3名と検診のため一時帰国した在米日系人4名で比較したが両群間におけるLDLレセプター活性の差は明らかではなかった。〔考察〕日本人に比し食生活の欧米化が進んだ在米日系人ではSCHが高値であり、その機序として高インスリン血症によるVLDL(LDLのprecursor)過剰産生、LDL組成の変化によるLDLレセプター結合への変化等が推測されたが、今回小数例による検討ではLDLレセプター活性の変化を明らかにすることはできなかった。これは今回対象とした日系人が短期間とはいえ日本の食生活環境下にあった事が影響しているとも考えられる。本年度の在米日系人検診において、現地で本法を用いたLDLレセプター活性の測定を行い最終的結論を得る予定である。
高等植物における遺伝子突然変異解析システムの開発と変異スペクトルの特性

活性酸素、紫外線、電離放射線、化学物質などはDNAに傷害をもたらす。DNA傷害は遺伝子発現や細胞増殖の際のDNA合成を阻害するばかりでなく、誤ったDNA合成を誘発し、突然変異として現れる。変異誘発機構やDNA修復機構の研究は、豊富な変異株のある微生物で進み、さらに標的遺伝子を導入したマウス個体でも行われ、変異の知見の集積が著しい。変異の頻度や型を調べることは、生物の代謝特性さらに環境要因に対する応答機構を調べる上で重要である。太陽紫外線を連続的に浴び活性酸素を大:量に発生している植物では遺伝子レベルの傷害が多量に発生していると推測されるが、特定の遺伝子内での変異は塩基レベルでほとんど知られていない。植物は地球環境の調節作用だけでなく食料資源の源として地球生命系の維持機能を果たしている。植物生理作用の研究の一つとして高等植物に生じた変異を容易に解析できる系の開発を行った。大腸菌rpsL遺伝子は変異を起こすストレプトマイシン耐性となり抗生物質でポジティヴ選抜ができるので標的遺伝子として用いた。当初はタバコに標的遺伝子を組み込む系を試みたが、形質転換効率はよいが、葉が厚く色素成分を多く含むので材料として適当でないことが分かり、モデル植物であるシロイヌナズナに切り替え使用可能な系を作製した。変異遺伝子の回収はプラスミドレスキューによった。EMS誘導変異を調べた。「結果」変異頻度はEMS処理では自然変異に比べて10倍高かった。自然変異では塩基置換以外にframeshifts,欠失,配列置換などがにられ、EMS処理ではほとんど全てがGC対での塩基置換GC→ATであった。塩基置換Gの5'側がAであるという規則性がみられた。配列置換は大腸菌、マウス、サカナではみられず、他生物と際立った変異特性であった。細胞分裂の際に親のDNA塩基とは相補的でない塩基が取り込まれそのまま修正されずにDNA合成が進むことがある。突然変異である。これは、活性酸素、紫外線、放射線、塩基修飾化学物質などによってDNAに傷害がある場合に頻度が上昇する。正常細胞ではDNA修復機構によって変異発生は抑制されているが、修復欠損細胞では変異頻度が著しく上昇する。DNA修復機構や変異誘発機構の研究は、豊富な変異株を用いて微生物で進み、さらに標的遺伝子を導入したトランスジェニックマウスやラットを用いて動物個体でも行われている。変異の型や発生頻度を調べることは、生物の代謝特性さらに環境要因に対する応答機構を知る上で重要である。一方、太陽光を連続的に浴び活性酸素を多量に発生している植物では遺伝子レベルの傷害が多量に発生していると推測されるが、特定の遺伝子内での変異は塩基レベルではほとんど知られていない。そこで、高等植物で生じた変異を塩基配列レベルで容易に解析できる系の開発を行った。大腸菌rpsL遺伝子を組み込んだタバコBY-2の作製に取り組んだ。野性型rpsL遺伝子をストレプトマイシン耐性大腸菌に導入すると感受性になるが、変異型rpsL遺伝子を導入した場合はストレプトマイシン培地で生育する。変異をポジティヴセレクションできる。この遺伝子を植物ベクターに組み込み、アグロバクテリウムに導入後、タバコ葉切片に感染させ、薬剤選抜ののち分化させてタバコ個体を得た。これから得れた種子をさらに薬剤選抜し、変異誘発実験に用いた。自然変異をみるため、誘導をかけないタバコからDNAを回収しPCRによって増幅したのち自己環状化させてアッセイ大腸菌でストレプトマイシン耐性クローンの出現をみた。現在のところ、塩基置換と1塩基欠失のフレームシフトなどがみいだされている。本システムのさらなる改良行っているところである。活性酸素、紫外線、電離放射線、塩基修飾化学物質などはDNAに様々な傷害をもたらす。

このような傷害は遺伝子発現を阻害したり細胞増殖の際のDNA合成を阻害するばかりでなく、誤ったDNA合成を誘発することがある。突然変異である。正常細胞ではDNA修復機構によって変異発生は抑制されているが、修復欠損細胞では変異頻度が著しく上昇する。DNA修復機構や変異誘発機構の研究は、豊富な変異株を用いて微生物で進み、さらに標的遺伝子を導入したトランスジェニックマウスやラットを用いて動物個体でも行われている。変異の型や発生頻度を調べることは、生物の代謝特性さらに環境要因に対する応答機構を知る上で重要である。一方、太陽光を連続的に浴び活性酸素を多量に発生している植物では遺伝子レベルの傷害が多量に発生していると推測されるが、特定の遺伝子内での変異は塩基レベルではほとんど知られていない。そこで、高等植物で生じた変異を塩基配列レベルで容易に解析できる系の開発を行った。16年度は、標的として遺伝子として大腸菌rpsL遺伝子を組み込んだタバコを開発し変異の解析を試みた。野性型rpsL遺伝子をストレプトマイシン耐性大腸菌に導入すると感受性になるが、変異型rpsL遺伝子を導入した場合はストレプトマイシン培地で生育する。変異をポジティヴセレクションできる系である。タバコは形質転換が比較的容易だが、葉が厚く色素成分などを多く含むので、DNA抽出精製が困難でアッセイ系として適当でないことが分かった。そこで、これらの問題点を解決するために17年度には新たにモデル植物のシロイヌナズナでアッセイ系を開発し直した。自家受精を繰り返してホモ形質転換体を得た。rpsL遺伝子が組み込まれていることを確認した。染色体中rpsL遺伝子の回収はPCRではなくプラスミドレスキューに切り替えた。「結果」自然変異ではGC->AT, GC->TA, AT->CGの塩基置換やframeshiftが見られたが、シロイヌナズナ種子をethylmethanesulfonate (EMS)で処理した場合には、ほとんど全てがGC->AT塩基置換であった。アルキル化グアニンの不適正対合が原因と考えられる。
移民文学のリゾーム性-ドイツのポーランド作家による現代文学

今年度は、博士論文の執筆に費やした。私の博士論文(題目『私の神話、私たちの神話』)は、1980年代にドイツ連邦共和国へ移住した3人のポーランド人作家の文学を、「神話とくわたし語り」」という観点から論じるものである。彼らは皆、1960年代にドイツ=ポーランド国境地帯に生まれた人々で、体制転換以後もドイツで暮らしている。ポーランド語作家ヤヌシュ・ルドニツキや、ドイツ語とポーランド語のバイリンガル作家ダリウシュ・ムッシャーは、国家、地域、歴史、民族的文化的アイデンティティをめぐる様々なディスクールを、移動する一人称語り手の視点から、鋭く脱神話化しつつ、個人とそれらのディスクールとの不安定な関係を描き出している。他方、ポーランド語作家のナタシャ・ゲルケは、ドイツやポーランドといった具体性を一切持ち込まない、寓話的なポストモダン小説を書くことによって、1990年代のポーランド国内で流行する脱神話化傾向と一線を画している(ゲルケの文学については、東京大学現代文芸論紀要『れにくさ』へ寄稿)。さらに、前年度末、ドイツのパッサウ大学で開かれた国際学会での報告内容を、報告集用に書き直した(20枚程度の論文)。国際的なイベントと言えば、2009年11月、名古屋市立大学で2日間にわたり、ドイツ語を執筆言語とする(ないし執筆言語の一つとする)作家5人を招いて、国際シンポジウム「アィデンティティ、移住、越境」(主催は土屋勝彦教授を代表者とする科研費研究グループ)が開催された。パネリストの中には、旧ソ連出身のユダヤ系作家が二人(ヴラディーミル・カミーナー氏、ヴラディーミル・ヴェルトリープ氏)が含まれており、私の研究対象であるポーランド人作家ムッシャーと比較することができた。また、多和田葉子氏や、その他のトルコ系の作家による報告も、「今日のドイツ語文学」について考察する上で、大変参考になった。名古屋市立大学訪問の後、ヴェルトリープ氏の講演について報告を頼まれ、そのテキストは東京大学文学部スラヴ語スラヴ文学研究室のHPにアップされた。さらに、2009年6月、北海道大学スラブ研究センターを訪問し、博士論文の一部を報告した。2010年3月には、再びスラブ研究センターを訪問し、私が論じている移民作家の文学と、ドイツ=ポーランド国境地帯の「地域文学」との共通点と差異について考察し、資料収集にあたった。「ドイツ・ポーランドにまたがる越境的文学研究」という私の専門分野は、日本で先行研究者のいない、未踏の沃野であるが、私の研究は、理論的な応用可能性と普遍性をもち、異文化接触や越境文化論に大きな貢献をする可能性を秘めている。この研究を一日も早く、形にしたい。私は、1980年代にポーランドから西ドイツへ移住した作の文学を創作言語によって分けて論じるのでなく、その生成・発展過程に注目して論じたいと思っている。私が注目する作家たちは、ベルリンの壁の崩壊に始まる一連の変化とともに、故国喪失者から越境者となった人々であり、ドイツ永住を決断した場合でさえ、静態的・固定的な定住としての移住生活を送るわけではない。彼らは90年代以降、狭義の移民像からの脱却を試み、今日では生まれ故郷とも移住地とも関係を保ちながら執筆活動を続けている。移住時期に成人していた彼らが、母語で創作することは不思議なことではないが、彼らが90年代以降、もはや「移民文学」「国外のポーランド語文学」といった独自のジャンルを形成しようとしなかったことは注目に値する。彼らの作品は、テーマ・形式・プロットの統一の断念、あからさまな剽窃、パフォーマンスといった、90年代のポーランド語文学に共通する特徴を持っている。それらの特徴は、文学とそれ以外のテクストを区別する慣習を放棄し、文学に対する系譜学アプローチや、現実/仮象という対立を無効にした。こうした「混淆の文学」において、唯一「当座の秩序」をもたらすのは一人称語り手の存在である。1976年から80年代にかけて書かれた、一人称形式の語りによるポーランド語文学と、90年代以降のメタフィクションでは、一人称形式の語りがもつ方向性は全く逆である。ハンブルク在住のポーランド人作家ルドニツキは、ドイツ・ポーランド間を頻繁に行き来する作者と同姓同名の一人称語り手を用いて、評論ともエッセイとも言えないテクストを執筆する作家である。彼の名を知らしめたのは、「ハンブルクからの手紙」と題された連載であった。「手紙」という題名や、処女作「人生なんてこんなもの」で用いられるテープレコーダーに録音された物語という設定が目指すものは、単なるリアリズムではなく、「〈わたし〉語り」の客体化である。すなわち、ルドニツキの文学は、「証言」「記録」として読もうとする読者のまなざしを語りへ内在化するメタフィクション文学である一方で、われわれ読者が見知らぬ移民の物語を「盗み聞く」状況を演出することで、「不在の他者」の物語としての「〈わたし〉語り」を展開しているのである。やり方は異なるものの、「不在の他者」による物語は、80年代後半ポーランド文学のトポスとなった、ドイツ=ポーランド国境地帯の文学にしばしば見られる手法である。第二次世界大戦後のグダニスクやシチェチンを舞台にしたそれらの小説において、テクストとは、一人称語り手個人の記憶の糸を紡ぐことによって生成されると同時に、歴史の現在として生きられる記憶そのものである。たとえば、グダニスクの作家ヒュレの処女作「ヴァイゼル・ダヴィデク」は、ポーランド人の一人称語り手が、生まれ故郷グダニスクで起こった、ひと夏の出来事を回想する物語である。

ユダヤ人の少年ヴァイゼルとともに過ごしたその夏、見慣れているはずの土地は未知なる世界へ変貌する。夏の終わり、忽然と姿を消したヴァイゼルは、記憶が語られる現時点においては、「不在の他者」として回想という行為に加わっており、「ヴァイゼルが僕らをどこかで操っているような気がしてならない」という、おそれに似た感情を、一人称語り手の中に呼び起こす。肝心なことを思い出せなかったり、つじつま合わせのために嘘をついてしまったりする一人称語り手は、記憶を「欠陥の集合体」として語ることによって、「現在を生きるわたし」という、単一の視点から過去を物語ることの限界を指し示す。このように、物語の中で繰り返し語り直されるグダニスクは、現存する地域としてのグダニスクではなく、多層的な語りのテクスト(パランプセスト)となっていく。今年度は、博士論文の執筆に費やした。私の博士論文(題目『私の神話、私たちの神話』)は、1980年代にドイツ連邦共和国へ移住した3人のポーランド人作家の文学を、「神話とくわたし語り」」という観点から論じるものである。彼らは皆、1960年代にドイツ=ポーランド国境地帯に生まれた人々で、体制転換以後もドイツで暮らしている。ポーランド語作家ヤヌシュ・ルドニツキや、ドイツ語とポーランド語のバイリンガル作家ダリウシュ・ムッシャーは、国家、地域、歴史、民族的文化的アイデンティティをめぐる様々なディスクールを、移動する一人称語り手の視点から、鋭く脱神話化しつつ、個人とそれらのディスクールとの不安定な関係を描き出している。他方、ポーランド語作家のナタシャ・ゲルケは、ドイツやポーランドといった具体性を一切持ち込まない、寓話的なポストモダン小説を書くことによって、1990年代のポーランド国内で流行する脱神話化傾向と一線を画している(ゲルケの文学については、東京大学現代文芸論紀要『れにくさ』へ寄稿)。さらに、前年度末、ドイツのパッサウ大学で開かれた国際学会での報告内容を、報告集用に書き直した(20枚程度の論文)。国際的なイベントと言えば、2009年11月、名古屋市立大学で2日間にわたり、ドイツ語を執筆言語とする(ないし執筆言語の一つとする)作家5人を招いて、国際シンポジウム「アィデンティティ、移住、越境」(主催は土屋勝彦教授を代表者とする科研費研究グループ)が開催された。パネリストの中には、旧ソ連出身のユダヤ系作家が二人(ヴラディーミル・カミーナー氏、ヴラディーミル・ヴェルトリープ氏)が含まれており、私の研究対象であるポーランド人作家ムッシャーと比較することができた。また、多和田葉子氏や、その他のトルコ系の作家による報告も、「今日のドイツ語文学」について考察する上で、大変参考になった。名古屋市立大学訪問の後、ヴェルトリープ氏の講演について報告を頼まれ、そのテキストは東京大学文学部スラヴ語スラヴ文学研究室のHPにアップされた。さらに、2009年6月、北海道大学スラブ研究センターを訪問し、博士論文の一部を報告した。2010年3月には、再びスラブ研究センターを訪問し、私が論じている移民作家の文学と、ドイツ=ポーランド国境地帯の「地域文学」との共通点と差異について考察し、資料収集にあたった。
大腸癌における癌幹細胞様遊離癌細胞検出による再発予測診断と臨床応用

大腸癌症例における血液中循環癌細胞と腹腔遊離癌細胞の臨床的意義を明らかにするため、CEA・CK19・CK20mRNAに癌幹細胞様マーカーCD133mRNAを加えたmultiple genetic markerを用い、再発および予後予測因子としての有用性を検討した。その結果、末梢血および腫瘍還流血中CEA, CK, CD133 mRNA値は、Dukes' stage BおよびCにおける再発・予後予測因子として有用であることが判明した(JCO 2011, Ocol Rep 2012)。さらに腹腔洗浄液中CEA, CK, CD133 mRNA値も、腹膜再発予測および予後因子として有用であることが明らかとなった(Oncology 2010)。大腸癌における血中および腹腔遊離癌細胞(isolated tumor cells : ITC)は、従来の病理学的因子を凌ぐ転移・再発および予後予測因子として、癌治療効果のバイオマーカーとして注目されている。また近年、多分化能と自己複製能を持つ癌幹細胞が、転移において重用であることが報告された。さらに宿主側の要因も転移形成に重要な役割を果たすとの報告もあり、ITCと転移形成に関する新たな局面が展開されつつある。我々はこれまで、CEA,CK20といった一般的腫瘍マーカーおよび上皮系マーカーを指標として、血中および腹腔洗浄液中ITCを分子生物学的手法で検出し、再発予測因子としての有用性を報告してきた(Iinuma H et al.Int J Oncol 2006 ; 28 : 297, Hayama T, Iinuma H, Watanabe T.Oncol Rep.18 : 779, 2007)。本年度はまず、DNAアレイを用いて、大腸癌の肝転移に関連した新たな遺伝子をスクリーニングした。次に、大腸癌患者約500例を対象に、これらの転移関連遺伝子に癌幹細胞および宿主側関連分子などを含めたmultiple markerを用いて、血中の転移能を有したITCを検出し、転移再発・予後予測因子として有用性を検討した。Kaplan Meier生存曲線やCox比例ハザードモデルによる多変量解析の結果、これらのmultiple markerを測定することにより、癌再発および予後の予測診断が可能であることが明らかとなった。消化器癌における血中の循環癌細胞(Circulating tumor cells : CTC)および腹腔内遊離癌細胞(Isolated tumor cells : ITC)は、新たな再発および予後予測因子として注目されている。さらに近年、悪性度の高いことで知られている癌幹細胞が、転移・再発において重用であることが報告され、CTCおよびICTとの関連性が注目されている。我々は、従来の大腸癌や胃癌のマーカーであるCEA、CK19、CK20に癌幹細胞マーカー(CD133、CD44)を加え、大腸癌および胃癌の再発および予後予測マーカーとしての有用性を検討した。まず、大腸癌735例を対象に、CEA, CK19, CK20, CD133といったmultipleな遺伝子マーカーを用い、血液中のCTCが再発および予後予測因子として有用なマーカーであるかどうかを検討した。その結果、これらのマーカーは独立した再発および予後予測因子であることが明らかとなった。さらに、癌のステージ別に検討したところ、これらの遺伝子マーカーによって検出されたCTCは、Dukes stage BとCにおいて、有意な再発および予後予測因子であることが判明した。次に、胃癌症例を対象に、腹腔内ITCの腹膜再発因子としての有用性を、CEA, CK20、CD44といったmultipleな遺伝子マーカーを用いて検討した。その結果、これらのマーカーによって認識されるITCは、独立した腹膜再発因子および予後予測因子であることが明らかとなった。また、進行大腸癌40例を対象に、分子標的薬と化学療法剤の併用療法における、治療効果予測因子としての血液中CTCの意義を検討した。BevacizumabとFOLFOX6の治療前と治療後のCTCを比較したところ、治療効果の認められた症例は、治療効果の認められなかった症例に比較し、CTCの数に低下することが判明した。現在、さらに症例数を加え、治療効果予測マーカーとしての有用性を検討している。大腸癌症例における、循環癌細胞(Circulating tumor cell:CTC)は、血行性転移および予後予測のバイオマーカーとして注目されている。我々はこれまで、CTCの遺伝子マーカーとして、CEA mRNAやサイトケラチン(CK19,CK20)mRNAといった従来のマーカーに癌幹様細胞マーカーCD133 mRNAを加え、癌の再発および予後予測因子としての有用性を、training setを用いて明らかにしてきた。本年度はさらにvalidation setを用いて、これまでの結果の再現性をKaplanMeier生存曲線およびCox比例ハザードモデルで解析した。

その結果、training setでの検討と同様に、CTC陽性症例は陰性症例に比べて、有意に予後不良であることが明らかとなった。さらに、stage別の検討において、Dukes'stage BおよびDukes'stage C症例で、CEA/CK19/CK20 /CD133 mRNAは独立した再発および予後予測因子となることが証明された。Dukes'stage B症例における補助化学療法は、標準的治療法として十分なエビデンスを得ていないことから、このような再発高危険群選択のバイオマーカーは有用と考えられた。また、Dukes'stage B症例において、CD133単独およびCEA/CK19/CK20ではその有用性は得られず、癌幹細胞を含めたmultimarkerによる検討の重要性が明らかとなった。さらに、大腸癌原発巣のdrainage veinの腫瘍還流血を用いて、血中CTCの有用性を検討したところ、末梢血と同様にDukes'stage B,Dukes'stage Cの再発予測および予後予測因子となることが証明された。このように、癌原発巣からdrainage veinを経て末梢血中に流入したCTCは、還流血とほぼ同じ機能を維持し、再発および予後に関与している可能性が示唆された。次に、大腸癌腹腔洗浄液中遊離癌細胞(ICT)の、腹膜再発予測因子としての有用性を、CEA,CK19,CK20,CD133 mRNAによるmultimarkerを用いて検討した。その結果、このmutimarkerは、独立した腹膜再発および予後予測因子となることが明らかとなった。また、CTCの化学療法剤による治療効果早期診断のバイオマーカーとしての有用性を検討した。化学療法剤として、FOLFOX6とFOLFILIを使用した。CTCは、CEA/CK19/CK20/CD133 mRNAによるmultimarkerにより測定し、治療効果は評価可能病変をRECISTにより判定した。その結果、治療前の末梢血中CTC高値群は、低値群に比べて有意に予後不良であることが明らかとなった。CEA/CK19/CK20/CD133 mRNAによる血中CTCは、独立した再発予測・予後予測および治療効果予測のバイオマーカーとして有用であることが明らかとなった。