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ムギネ酸類・ニコチアナミン分泌を介した鉄移行と鉄恒常性維持の分子メカニズムの解明

本申請研究はムギネ酸類及びNA分泌の分子機構を解明し、植物におけるムギネ酸類やNAを介した鉄移行、鉄恒常性維持機構を分子レベルで理解することを目指している。平成30年度は、ニコチアナミン排出型トランスポーターとして単離・同定したENA1の植物体内における生理的役割について解析した結果をまとめて論文投稿を行い、受理された。ENA1はアフリカツメガエルの卵母細胞を用いた輸送活性試験により、ニコチアナミンを細胞外へ排出することが示されている。プロモーターGUS解析により、ENA1は鉄十分条件ではほとんど発現が見られず、鉄欠乏状態のイネの根全体と、根と地上部が連結する部位であるディスクリムネーションセンターで発現が見られることを明らかにした。ENA1とGFPとの融合タンパク質は、タマネギの表皮細胞、イネの根細胞において主に細胞膜に局在した。一部の蛍光は細胞内の顆粒状構造に局在した。ENA1過剰発現イネとENA1ノックアウトイネを作製及び単離して、解析を行った。ENA1過剰発現・ノックアウトイネはいずれも明確な表現型は示さなかった。ENA1過剰発現イネは発芽後まもない時期には、根が短く多数の根毛が見られたが、成長するとともにこの表現型は見られなくなった。ENA1ノックアウトイネのマイクロアレイ解析により、根のクロロプラストや細胞内小胞輸送に関わる遺伝子群の発現が野生型株に比べて変化していることを見出した。さらにENA1ノックアウトイネでは鉄十分条件で鉄欠乏誘導性遺伝子の発現が誘導される一方で、鉄欠乏条件では鉄欠乏誘導性遺伝子の発現が野生型株に比べて誘導されていないことを見出した。以上の結果より、ENA1は根の細胞膜とクロロプラスト等の細胞内小器官の間を小胞輸送により巡回していること、ENA1の機能が植物の鉄恒常性維持に関与している可能性が示唆された。申請者は2015年4月より東京大学大学院農学生命科学研究科から明治学院大学教養教育センターに所属を変更した。明治学院大学は文系の大学であり、設備が十分であるとはいえないため、東京大学大学院農学生命科学研究科において研究を継続している。また申請者は2015年9月11日に長女を出産し、産後休暇10週間を取得して職場に復帰した。2017年度は国際共同研究加速基金に伴い、講義の任務を免除していただき、当研究課題をさらに発展させるためにドイツの2研究所に滞在して研究に専念した。2018年度は、ドイツで行った研究を踏まえて、日本において新しい実験系の立ち上げを行う予定であった。しかしながら4月にたこつぼ型心筋症を発症し、入院をせざるを得ない状況となった。また、本疾病は、退院後すぐに回復するものではなく、経過観察を行う必要があり、生活の見直しをする必要が生じた。さらに、7月には台湾での国際学会参加中に急な呼吸困難から救急搬送をされ、過労との診断を受けた。これらのことから、休息に十分な時間を当てる必要が生じ、当初の実験計画に大幅な遅れが生じた。申請者は当申請課題をさらに発展させるための国際共同研究加速基金に採択され、2017年度に明治学院大学において在外研究を取得した。国際共同研究加速基金においては、ドイツの2か所の研究室に滞在して、ムギネ酸類が鉄とキレートした状態としていない状態とを区別して測定する方法、および、可視化できるムギネ酸類を合成する方法を習得した。さらにドイツの2か所の研究所と協力関係を結ぶことができた。2018年度は体調不良により当初の予定を遂行することができなかったため一年間の延長を申請して受理していただいた。本申請研究の最終年度に当たる。ドイツで習得した方法を日本でも行えるように確立するとともに、ドイツで行った研究の結果とこれまで本研究課題において日本で得られた知見をまとめて発表したいと考えている。ムギネ酸類は、土壌中から鉄を獲得するためにイネ科植物の根から分泌される三価鉄キレーターである。ムギネ酸類はその前駆物質であるニコチアナミン(NA)とともに、植物体内の鉄移行を担い、鉄欠乏シグナル物質としても機能すると考えられ注目されている。平成27年度は根圏へのムギネ酸類分泌トランスポーターTOM1のホモログであるTOM2が植物体内におけるムギネ酸類の輸送を担っていること、TOM2の働きが植物の生育に必要であることを明らかにした。TOM2はアフリカツメガエルの卵母細胞において14C-デオキシムギネ酸分泌活性を示し、タマネギの表皮細胞・イネの根細胞において細胞膜に局在したことから、細胞内から細胞外へとムギネ酸類を分泌するトランスポーターであることが明らかとなった。TOM2は根から地上部への物質の通り道である中心柱や葉脈の維管束に存在し、植物体内におけるムギネ酸類の輸送に関わっていることが示唆された。また、TOM2は根の原基や登熟期・発芽時の種子の胚で強く発現し、組織形成時の金属輸送に関わっている可能性が示唆された。さらに、TOM2発現抑制イネを作出して解析を行い、TOM2発現抑制イネの生育が著しく阻害されることを見出した。TOM

2発現抑制イネでは非形質転換イネに比べて植物体全体の金属含量が高まっている傾向にあり、TOM2が植物体内での鉄の移行効率に関与し、植物の効率的な生育を促していると考えられた。申請者は2015年度4月より東京大学大学院農学生命科学研究科から明治学院大学教養教育センターに所属を変更した。明治学院大学は文系の大学であるため、設備が十分であるとはいえず、研究環境を整える労力が必要となった。東京大学大学院農学生命科学研究科においても特任研究員として研究を継続させていただけることになった。また、申請者は2015年度9月11日に長女を出産した。産前休暇を6週間、産後休暇を10週間取得したため、その間は研究を進めることができなかった。ムギネ酸類は、土壌中から鉄を獲得するためにイネ科植物の根から分泌される三価鉄キレーターである。ムギネ酸類はその前駆物質であるニコチアナミン(NA)とともに、植物体内の鉄移行を担い、鉄欠乏シグナル物質としても機能すると考えられ注目されている。本申請研究はムギネ酸類及びNA分泌の分子機構を解明し、植物におけるムギネ酸類やNAを介した鉄移行、鉄恒常性維持機構を分子レベルで理解することを目指している。平成28年度はオオムギのニコチアナミン合成酵素遺伝子HvNAS1をサツマイモに遺伝子導入してNA含量を高めることにより、オオムギの鉄欠乏耐性を増強させることに成功した。HvNAS1の発現量とNA含量は正の相関を示し、形質転換サツマイモのNA含量は非形質転換体に比べて、葉で8倍に、イモで3倍に高まった。さらにNA含量の増加に伴い、鉄、亜鉛含量がそれぞれ非形質転換体の3倍、2.9倍に高まった。サツマイモのイモの鉄染色を行った結果、鉄含量と一致して、形質転換体では非形質転換体に比べ全体的に濃い染色が観察された。また、染色はスポット上に見られたことから、鉄は維管束部を介してイモに輸送されていることが示唆された。双子葉植物であるオリーブではNAだけでなくデオキシムギネ酸が合成されており、それらがオリーブの鉄栄養の恒常性を維持することに関わっている可能性を見出した。これまでムギネ酸類を用いた鉄獲得機構はイネやオオムギなどのイネ科植物のみで行われていると考えられてきた。今回はHPLCによりオリーブの葉にデオキシムギネ酸とニコチアナミンが存在することを確認した。申請者は2015年4月より東京大学大学院農学生命科学研究科から明治学院大学教養教育センターに所属を変更した。明治学院大学は文系の大学であり、設備が十分であるとはいえないため、東京大学大学院農学生命科学研究科において研究を継続している。また申請者は2015年9月11日に長女を出産し、産後休暇10週間を取得して職場に復帰した。2016年度は明治学院大学に着任して2年目に入ったこと、長女が保育園に適応したことから、徐々に研究を進める時間を確保することができるようになったが、当初の計画からはやや遅れている。
葉緑体遺伝子の構造と発現に関する研究

タバコ葉緑体DNAに支配される遺伝子の位置をDNA上に定め、それを含むクローンからDNAを単離し、その塩基配列を決定した。ATPaseのα、β、εサブユニット遺伝子の全塩基配列を決定した。大腸菌のα、β、εサブユニットと比べそれぞれ54%、62%、27%の相同性を示した。またαサブユニット遺伝子の近傍に位置するグリシン(UCC)、アルギニン(UCU)、セリン(GCU)、グルタミン(UUG)のtRNA遺伝子の全塩基配列を決定した。そのうちグリシンtRNAのDステムに691塩基対のイントロンが存在することが、本研究ではじめてあきらかになった。さらに逆位反復配列の境界領域の塩基配列を決定し、はじめて境界点を正確に同定した。イネの葉緑体DNAの単離は困難とされていたが、その単離にはじめて成功し、それを用いて種々の制限酵素による電気泳動パターンを調べるとともに、同DNAが130kbの長さであることを明らかにした。さらにSal【I】,Pst【I】,Pvu【II】による断片の環状DNAの物理地図を作製した。ついでRubisCOのLS、ATPaseのα、βサブユニット、チトクロームf、32KDタンパク、23S、16SリボソームRNAの遺伝子などの位置をタバコ遺伝子をブローブとしてサザン法を用いて物理地図上に定めた。またイネからの葉緑体DNA単離は困難なので、イネ葉緑体DNAのBam Hl,Pst【I】,Hind【III】などの制限酵素断片をpBR322やpUC8などのプラスミドにクローニングした。これにより必要なDNA断片を容易に得ることが可能となり、位置が決定されているそれぞれの遺伝子の塩基配列の決定も出来るようになった。LSおよび32KDタンパクの遺伝子発現に関し、葉緑体中のmRNAの約1/4が翻訳されない形で存在することを見いだした。これは翻訳段階での発現調節機構の存在を示唆するものである。
妊娠動物の体液中エストロンサルフェート濃度による胎子成熟度の判定

牛やウマの妊娠診断において、胎盤性ホルモンである血中エストロンサルフェート(OS)濃度を測定し、また検査材料として材料採取が容易な乳汁や、尿、糞中濃度もあわせて測定した。供試動物として、牛とウマを用い、OS濃度の測定では、マウスモノクローナル抗体を用いたマイクロプレートによるEIAを確立し、同時に血液中プロジェステロン(P_4)濃度を測定した。その結果、妊娠牛では血中OS濃度が妊娠140日以降で1.1ng/mlとなり、非妊娠牛(0.36ng/ml)より有意に高くなった。乳中OS濃度は妊娠100日以降で236pg/mlとなり、非妊娠牛(14pg/ml)より有意に高くなった。血中P_4濃度は授精後、妊娠黄体の形成とともに増加し(>10ng/ml)、分娩後急速に1.0ng/ml以下に減少した。牛の糞中OS濃度は血中OS濃度と高い相関を示し、妊娠牛では746,500ng/gと高く、特に妊娠末期の1.5ヶ月に急増した。糞中OS濃度と胎盤停滞の関連では、正常群で妊娠270日に2,300ng/mlと胎盤停滞群947ng/gより高く、胎盤の成熟度との関連が示唆された。糞中OS濃度と新生子牛の体型では、妊娠末期の糞中OS濃度と新生子牛の鼻頭尾長および胸囲について正の相関関係がえられた。尿中OS濃度は尿中クレアチニン濃度により補正し、測定した。その結果、ウマの尿中OS濃度は、交配前(0.16μg/mgcre)に比べ、妊娠2ヶ月(0.46μg/mgcre)から有意に高くなった。また、血中OS濃度は交配前(20ng/ml)に比べ、妊娠1ヶ月(32ng/ml)から有意に高くなったが、血中P4濃度では妊娠ウマと交配前のウマに有意差は得られなかった。今回、牛とウマの妊娠診断において、体液中のOS濃度をEIAにより測定したところ、妊娠家畜では非妊娠や交配前に比べ有意に高くなった。検査材料として、血液だけでなく、材料採取が容易な乳汁や、糞、尿中OS濃度の測定も可能であり、牛で妊娠100日、ウマで妊娠2ヶ月より高くなることが明らかとなった。家畜では妊娠中期以降は妊娠経過のモニターが難しく、特に胎子の成熟度や生死判別あるいは双子診断等は困難で、分娩時における事故の多発につながる恐れがある。今回、胎盤由来とされるエストロンサルフェート(OS)の産生機構を組織内分泌学的に明らかにするため、体液中OS濃度を経時的に測定した。2000年2001年に鹿児島県内の酪農家にて飼養中の乳牛230頭(妊娠牛169頭、非妊娠牛61頭)について、乳汁中および血液中OS濃度をEIA法(Confirm, ICP, NZ)にて測定した。その結果、人工授精後100日以上の妊娠牛では平均150pg/mlとなり、非妊娠牛および人工授精後100日未満の乳牛の13.0pg/mlより有意に高くなった。また、妊娠牛のうち、28頭については毎月乳汁を採取し、妊娠経過に伴うOS濃度の変化を観察した。

その結果、OS濃度は妊娠前半は低いものの、妊娠100日で150pg/ml、160日以降で平均1000pg/ml以上を示した。一方、血液中のOS濃度では、妊娠150日以上で平均1000pg/ml以上となり、非妊娠牛の316pg/ml、人工授精後150日未満の606pg/mlより有意に増加した。今後は、例数を増やすとともに、糞中のOS濃度も合わせて検討する。また、妊娠維持ホルモンのプロジェステロン濃度についても、血液中や乳汁中濃度を測定し、OS濃度との関連を検討する。さらに、胎盤材料を入手し、組織内分泌学的に検討する。牛やウマの妊娠診断において、胎盤性ホルモンである血中エストロンサルフェート(OS)濃度を測定し、また検査材料として材料採取が容易な乳汁や、尿、糞中濃度もあわせて測定した。供試動物として、牛とウマを用い、OS濃度の測定では、マウスモノクローナル抗体を用いたマイクロプレートによるEIAを確立し、同時に血液中プロジェステロン(P_4)濃度を測定した。その結果、妊娠牛では血中OS濃度が妊娠140日以降で1.1ng/mlとなり、非妊娠牛(0.36ng/ml)より有意に高くなった。乳中OS濃度は妊娠100日以降で236pg/mlとなり、非妊娠牛(14pg/ml)より有意に高くなった。血中P_4濃度は授精後、妊娠黄体の形成とともに増加し(>10ng/ml)、分娩後急速に1.0ng/ml以下に減少した。牛の糞中OS濃度は血中OS濃度と高い相関を示し、妊娠牛では746,500ng/gと高く、特に妊娠末期の1.5ヶ月に急増した。糞中OS濃度と胎盤停滞の関連では、正常群で妊娠270日に2,300ng/mlと胎盤停滞群947ng/gより高く、胎盤の成熟度との関連が示唆された。糞中OS濃度と新生子牛の体型では、妊娠末期の糞中OS濃度と新生子牛の鼻頭尾長および胸囲について正の相関関係がえられた。尿中OS濃度は尿中クレアチニン濃度により補正し、測定した。その結果、ウマの尿中OS濃度は、交配前(0.16μg/mgcre)に比べ、妊娠2ヶ月(0.46μg/mgcre)から有意に高くなった。また、血中OS濃度は交配前(20ng/ml)に比べ、妊娠1ヶ月(32ng/ml)から有意に高くなったが、血中P4濃度では妊娠ウマと交配前のウマに有意差は得られなかった。今回、牛とウマの妊娠診断において、体液中のOS濃度をEIAにより測定したところ、妊娠家畜では非妊娠や交配前に比べ有意に高くなった。検査材料として、血液だけでなく、材料採取が容易な乳汁や、糞、尿中OS濃度の測定も可能であり、牛で妊娠100日、ウマで妊娠2ヶ月より高くなることが明らかとなった。
バセドウ病におけるTSH受容体上のTリンパ球エピトープの同定

筆者らは以前に、ヒトTSH受容体細胞外領域に相応した一連の合成ペプチドを用いて白人のバセドウ病患者におけるTSH受容体上のTリンパ球エピトープがアミノ酸158-176,207-222,343-362/357-376であることを報告した。また筆者は、白人においてバセドウ病の危険因子であると考えられているHLA-DR3分子を精製し、HLA-DR3分子とヒトTSH受容体合成ペプチドの結合を調べ、HLA-DR3分子がTリンパ球のレパートリー形成に与える影響を介してバセドウ病への罹患危険性を高めている可能性を報告した。1)ヒトTSH受容体細胞外領域をコードするcDNAを哺乳類細胞発現ベクターであるpTARGET^<TM> expression vector(Promega)に組み込んだ。3)抗DR抗体L243(ATCC)を用いたアフィニティカラムにて、ヒトTSH受容体cDNAを導入したQBL細胞からDR3-抗原ペプチド複合体を精製した。4)DR3-抗原ペプチド複合体をpH2.0にてインキュベートして抗原ペプチドをDR3から解離させ、フィルターにてDR3から分離した。以下は現在進行中。5)分離した抗原ペプチドのアミノ酸配列決定筆者らは以前に、ヒトTSH受容体細胞外領域に相応した一連の合成ペプチドを用いて白人のバセドウ病患者におけるTSH受容体上のTリンパ球エピトープがアミノ酸158-176,207-222,343-362/357-376であることを報告した。1)ヒトTSH受容体細胞外領域cDNAの哺乳類細胞発現ベクターへの組み込み今後、HLA-DR3/抗原ペプチド複合体の精製、HLA-DR3/抗原ペプチド複合体からの抗原ペプチドの分離、そして分離した抗原ペプチドのアミノ酸配列決定を行なう。以下は現在進行中。5)分離した抗原ペプチドのアミノ酸配列決定
繊維強化複合材料の剛性および減衰特性に関する多目的最適化

炭素繊維を強化材に用いたCFRPなどの複合材料の弾性パラメータおよび減衰パラメータを同定するプログラムを開発した.有限要素法固有値解析・モード減衰比算出プログラムと非線形最適化手法である準ニュートン法を併用し,各パラメータと観測値との関数の強い非線形性や低感度といった特性にも,安定でしかも収束性の高い同定を実現した.開発した同定プログラムを用いて,Adamsらが発表しているGFRPおよびCFRPの振動減衰測定値から減衰パラーメータを同定し,同研究者らが提唱しているパラメータ値よりも高い精度で観測値を満足する値を求めることができた.また同じ材料であっても繊維含有率の異なる試験片から同定される弾性・減衰パラメータは異なり,複合材料の減衰能は弾性係数と同様に繊維含有率により変化することが示された.また、対称および反対称積層されたCFRP正方形板の加振実験を行い,得られた固有振動数およびモード減衰比から弾性パラメータ・減衰パラメータを同定し,繊維含有率がほぼ等しい試験片では,積層形態によらず減衰能は一定値をとることを明らかにした.さらに,遺伝的アルゴリズムを用いて,固有振動数とモード減衰比の積を最大化する積層構成を求めるための多目的最適設計プログラムを開発した.開発したプログラムにより,対称積層長方形板および円筒構造物について最適な積層構成を求めることができた.本年度は,炭素繊維を強化材に用いたCFRPなどの複合材料の弾性パラメータ(縦弾性係数,せん断弾性係数,ポアソン比など)および減衰パラメータ(材料主軸座標系における縦ひずみ,せん断ひずみに対応する減衰能マトリックスの成分)を同定するプログラムを開発した.有限要素法固有値解析・モード減衰比算出プログラムと非線形最適化手法である準ニュートン法を併用し,各パラメータと観測値との関数の強い非線形性や低感度といった特性にも,安定でしかも収束性の高い同定手法を実現した.開発した同定プログラムを用いて,Adamsらが発表しているGFRPおよびCFRPの振動減衰測定値から減衰パラメータを同定し,同論文中で提唱しているパラメータ値よりも高い精度で観測値を満足する値を求めることができた.この同定結果から,同じ材料であっても繊維含有率の異なる試験片から同定される弾性・減衰パラメータは異なることが明らかとなった.すなわち,複合材料の減衰能は弾性係数と同様に繊維含有率により変化することが示された.また,対称および反対称積層されたCFRP正方形板の加振実験を行い.得られた固有振動数およびモード減衰比から弾性パラメータ・減衰パラメータを同定した.この同定結果から,繊維含有率がほぼ等しい試験片では,積層形態によらず減衰能は一定値をとることが明らかとなった.炭素繊維を強化材に用いたCFRPなどの複合材料の弾性パラメータおよび減衰パラメータを同定するプログラムを開発した.有限要素法固有値解析・モード減衰比算出プログラムと非線形最適化手法である準ニュートン法を併用し,各パラメータと観測値との関数の強い非線形性や低感度といった特性にも,安定でしかも収束性の高い同定を実現した.開発した同定プログラムを用いて,Adamsらが発表しているGFRPおよびCFRPの振動減衰測定値から減衰パラーメータを同定し,同研究者らが提唱しているパラメータ値よりも高い精度で観測値を満足する値を求めることができた.また同じ材料であっても繊維含有率の異なる試験片から同定される弾性・減衰パラメータは異なり,複合材料の減衰能は弾性係数と同様に繊維含有率により変化することが示された.また、対称および反対称積層されたCFRP正方形板の加振実験を行い,得られた固有振動数およびモード減衰比から弾性パラメータ・減衰パラメータを同定し,繊維含有率がほぼ等しい試験片では,積層形態によらず減衰能は一定値をとることを明らかにした.さらに,遺伝的アルゴリズムを用いて,固有振動数とモード減衰比の積を最大化する積層構成を求めるための多目的最適設計プログラムを開発した.開発したプログラムにより,対称積層長方形板および円筒構造物について最適な積層構成を求めることができた.
象牙質接着システムの構築

本研究では,セルフエッチングプライマーの加水分解安定性を検討した。すなわち,市販EDプライマーIIのLiquid Aプライマーを40°C恒温槽中に保管して変性させた後,^<13>CNMRスペクトルを測定して加水分解した2-ヒドロキシエチルメタクリレート(HEMA)の割合を算出した。その結果,プライマーの構成成分であるHEMAのエステル基が加水分解し,その副産物としてメタクリル酸,エチレングリコールが生成されることがわかった。つぎに,Liquid Aプライマーの変質が象牙質に対するレジンの接着強さおよび樹脂含浸層形成に及ぼす影響を検討した。その結果,レジンの接着強さはHEMAの加水分解の進行に伴い低下した。とくに,サーマルサイクルを施すことにより,HEMAの加水分解の程度を反映して大きな接着強さの低下が認められた。これは,レジン/象牙質接着界面に生成された樹脂含浸層の質がHEMAの加水分解の進行,すなわち副生成物の生成量の増加に伴い低下したためと考えられた。さらに,加水分解安定性の高いセルフエッチングプライマーを開発するため,10-メタクリロキシデシルポスフェート(MDP),2-メタクリロキシエチルポスフェート(MEP)または3-メタクリロキシアミノエチルポスホネート(NMEP)をメタクリロイルグリシン(NMGly)水溶液中に添加してMDP-NMGly, MEP-NMGly,およびNMEP-NMGlyプライマー水溶液を調製し,これら接着性モノマーの加水分解安定性を検討した。その結果,NMEPおよびNMGlyの加水分解は14週経過しても認められなかった。しかし,酸性モノマーであるMDPおよびMEPのメタクリロイルエステル基が加水分解し,変性することが明らかとなり,NMEP-NMGlyプライマーは加水分解安定性の優れたセルフエッチングプライマーであることがわかった。本報告では,メチレン鎖長の異なる3種のN-メタクリロイル-ω-ホスホン酸(NMωP)を合成し,NMωPをNMGly水溶液に添加したNMωP-NMGlyセルフエッチングプライマーを調整し,歯冠象牙質またはハイドロキシアパタイトをNMωP-NMGlyプライマー水溶液中に共存させ,NMωPおよびNMGlyと象牙質またはエナメル質との相互作用の詳細を^<13>C NMR法で検討するとともに,NMωP-NMGlyプライマー水溶液で処理した歯冠象牙質およびエナメル質に対するレジンの接着強さを測定して,NMωPのメチレン鎖長が象牙質およびエナメル質に対するレジンの接着強さにおよぼす影響を検討した.NMωP-NMGlyプライマー水溶液中に象牙質粉末またはハドロキシアパタイトを共存させると,NMωPの水酸基およびNMGlyのカルボキシル基が歯質成分のリン酸カルシウムを脱灰し,NMωP分子内水酸基およびNMGly分子内カルボキシル基が酸-塩基反応を起こすため,NMωP分子内α-メチレンカーボンカーボンおよびNMGlyカルボキシル基カルボニルカーボンピークは低磁場側にシフトした.このシフトの大きさから脱灰量を調べた結果,NMωPはNMGlyより強く歯質を脱灰すること,NMωP分子内メチレン鎖長が長くなると生成されるNMωPカルシウム塩の化学構造が異なることがわかった.NMωP-NMGlyプライマー水溶液で処理した象牙質に対するレジンの接着強さは約22MPaで,NMω

P分子内メチレン鎖長および接着界面に生成されるNMωPカルシウム塩の化学構造の相違に関係なく,ほぼ一定値を示した.しかし,エナメル質に対するレジンの接着強さはメチレン鎖長が長くなるにつれて上昇し,化学的に安定なカルシウムホスホネートを形成するNMPPは24MPaと高い接着強さを与えることがわかった.本研究では,N-メタクリロイルグリシン(NMGIy)水溶液にN-メタクリロイルアミノエチルホスホン酸(NMEP)を添加したNMGIy-NMEPセルフエッチングプライマーを調製し,ウシ歯根象牙質および健全ヒト歯根象牙質に対するレジンの圧縮せん断接着強さを検討し,さらに歯根象牙質コラーゲンの構造について検討した.NMGIy-NMEPセルフエッチングプライマーで処理したウシ歯根象牙質およびヒト歯根象牙質に対するレジンの圧縮せん断接着強さを測定した結果,ウシ歯根象牙質の場合,レジンの接着強さはNMGIyに対してNMEPの添加量が増加するとともに,13MPaから17MPaまで上昇した.これに対して,ヒト歯根象牙質にレジンを接着した場合には,レジンの接着強さはNMGIy水溶液にNMEPの添加してもほぼ一定値,20MPaを示した.ウシ歯根象牙質とヒト歯根象牙質とでは異なった接着強さの濃度依存性を示すこと,健全ヒト歯根象牙質に対する接着強さはウシ歯根象牙質より高いことがわかった.つぎに,接着強さにおいてウシ歯根象牙質とヒト歯根象牙質との間に差異が生じた原因を調べるため,ウシ歯根象牙質および健全ヒト歯根象牙質の固体^<13>C NMRスペクトルを測定し,コラーゲンの構造について検討した.その結果,ウシ歯根象牙質コラーゲンに由来する^<13>C NMRスペクトルパターンは健全ヒト歯根象牙質のNMRスペクトルパターンと非常に類似し,明確な差異は認められなかった.また,抜髄ヒト歯根象牙質の^<13>C NMRスペクトルを測定し,健全ヒト歯根象牙質のそれと比較した結果,カルボニル領域の^<13>C NMRピークの線幅が増大し,コラーゲンのトリプルヘリックス構造の変化が若干認められた.今後,有髄および無髄ヒト歯根,歯冠象牙質について,コラーゲンの構造解析をさらに進めていく予定である.本研究では,セルフエッチングプライマーの加水分解安定性を検討した。すなわち,市販EDプライマーIIのLiquid Aプライマーを所定時間40°C恒温槽中に保管して変性させた後,^<13>CNMRスペクトルを測定して加水分解した2-ヒドロキシエチルメタクリレート(HEMA)の割合を算出した。その結果,Liquid Aプライマーの構成成分であるHEMAのエステル基が加水分解し,その副産物としてメタクリル酸,エチレングリコールが生成されることがわかった。その生成量は保管時間が長くなるにつれて増大した。Liquid Aプライマーの変質が象牙質に対するレジンの接着強さおよび樹脂含浸層形成に及ぼす影響を検討した。その結果レジンの接着強さはHEMAの加水分解の進行に伴い低下した。とくに,サーマルサイクルを施すことにより,HEMAの加水分解の程度を反映して大きな接着強さの低下が認められた。これは,レジン/象牙質接着界面に生成された樹脂含浸層の質がHEMAの加水分解の進行,すなわち副生成物の生成量の増加に伴い低下したためと考えられた。
先天性心疾患をもつAYA世代のトランジションに向けたケアプログラムの開発と評価

2019年3月現在、「AYA世代が自立生活を送るための成人医療への移行準備性尺度の開発」(先天性心疾患用)と題して、4医療機関、1患者会の16歳30歳までの先天性心疾患を対象にアンケート調査を実施した(計206部配布)結果、回収93部(回収率45.1%)であった。同アンケート調査の構成は、同尺度30項目及び健康関連QOL尺度としてSF-36を含めており、同93部のうち、SF-36に記載のある86部を対象に先天性心疾患をもつAYA世代のSF-36におけるの3コンポーネント(身体的健康度、役割/社会的健康度、精神的健康度)・サマリースコアを算出し、国民標準値(50.0)と比較検討した。その結果、身体的健康度(PCS),精神的健康度(MCS),役割/社会的健康度(RCS)はそれぞれ50.6,50.2,47.1という結果であり、RCSを除く2つのコンポーネントは国民標準値に近い値を示したが、RCSは、低い値をしめしており、その原因としては、RCSを構成する下位尺度である日常生活機能(身体/精神)及び、社会生活機能(つきあいの減少)、全体的健康感が、先天性心疾患をもつAYA世代の人々に影響していることが示唆された。今回の86部の属性をみると、性別では43名づつ半数、16-19歳31名、20-24歳38名、25-30歳17名であった。また学生43名、就労36名非就労7名であり、82名(95.3%)が手術経験を有し、チアノーゼや不整脈等の症状のある数は51名(59.3%)、内服薬は53名(61.6%)、成人医療への移行は17名(19.8%)という結果であった。現在、本調査結果に基づくデータ分析中である。同アンケート調査は今後も継続予定(年内迄)。その後、データ分析を進め、学会等で発表、論文執筆投稿の予定である。本年度(2018年度)中に調査結果に基づいた研究成果を発表する予定であったため、当初予算とおりに執行できなかったことが次年度使用額が生じた理由である。
甲状腺ホルモン代謝酵素による細胞内T3濃度調節機構の解明

甲状腺より分泌されるT4は、iodothyronine deiodinaseによりT3に変換され、その作用を発現する。我々は、ヒト大動脈血管平滑筋細胞(HASMC)に、局所でのT3濃度調節作用を有するType 2 iodothyronine deiodinase(D2)が発現している事を明らかにした。T3は、血管内皮より分泌され血管拡張作用を有するadrenomedullinの分泌亢進など、血管系に対し種々の生理作用を有している。D2は、HASMC内のT3濃度を調節し、血管系に及ぼす種々の甲状腺ホルモン作用を調節している可能性が考えられる。平成12年度は、HASMCのD2発現調節に及ぼす、種々の生理活性物質の影響を検討した。【方法】HASMCはクラボウより購入した。HASMCを5%FBSを含む増殖培地でconfluentになるまで培養し、その後1%FBSを含む分化培地で48時間培養した。更に、分化培地に試薬を添加し、48時間まで培養した。細胞ホモジネートのD2酵素活性は、[^<125>I]T4からのI^-の放出により測定した。【結語】HASMCのD2活性は、PKAやPKCのactivator及びbFGF・PDGF等の増殖因子によりpositiveに調節される事を明らかにした。【方法】hASMCを増殖培地でconfluentになるまで培養し、その後1% FBSを含む培地で48時間培養した。更に、1% FBS培地に種々の試薬を添加した。D2酵素活性は細胞ホモジネートを、[^<125>I]T4とインクベートし、[^<125>I]T4より放出された^<125>Iをγカウンターで測定した。D2 mRNAレベルはNortherm blot法により解析した。【結果・考察】PDGF及びbFGFは、時間及び容量依存性に、hASMCに発現するD2活性及びmRNAレベルを増加した。PDGF及びbFGFによるD2 mRNAの増加は、Actinomycin D及びcycloheximideの添加により抑制された。これらの結果より、PDGF及びbFGFはヒトD2遺伝子の発現を、転写レベルで、新規の蛋白合成を介し増加させる可能性が考えられた。PDGF及びbFGFによるD2 mRNAの増加は、Erk-activating kinase (MEK)/Erk cascadeの阻害剤であるPD98059の添加により抑制された。この結果より、PDGF及びbFGFは、主にMEK/Erk cascadeを介し、D2遺伝子の転写調節をしている可能性が示唆された。
糖鎖による細胞表面生体分子の機能の調節・制御機構の解明

糖転移酵素遺伝子の欠損マウスは、多様な生物機能の異常を認める。そのメカニズムを解析する上で、糖転移酵素が標的とする糖タンパク質(糖鎖キャリア分子)を同定することは重要である。本研究ではポリラクトサミン糖鎖に着目し、グライコプロテオミクス技術によるポリラクトサミン糖鎖キャリア分子の同定を試みた。ポリラクトサミン糖鎖に特異的に結合するレクチンを用いて糖ペプチドを捕集し、これらの比較グライコプロテオーム解析を行うことにより、標的糖タンパク質候補を同定した。バイオインフォマティクス解析により、得られたキャリア分子群についての傾向性を見たところ、それらの分子性状に共通した特徴および傾向が見出された。本課題では、基幹的糖鎖構造の一つであるポリラクトサミン糖鎖合成に関与する糖転移酵素、β1,3- N-アセチルグルコサミン転移酵素2(β3GnT2)遺伝子ノックアウトマウス(B3gnt2-/-マウス)の細胞・組織を用いて、各種解析をすることによって、生合成されるポリラクトサミン糖鎖の標的分子と機能の解明を試みるものである。ポリラクトサミン糖鎖の発現に関する基礎的な知見に関しては、未だ不足していると考えられるため、まず始めにポリラクトサミン糖鎖のキャリア分子の同定を目的とした。そこで本課題では、B3gnt2-/-マウスと野生型マウスから、それぞれ糖鎖キャリア分子(糖ペプチド)をポリラクトサミン糖鎖に特異的なレクチンを用いて捕集し、これらの比較グライコプロテオーム解析を行うことにより、β3GnT2に特異的な標的タンパク質の大規模同定を進める。今年度は、ポリラクトサミン糖鎖のキャリア糖タンパク質を効率的に捕集するための系(レクチンアフィニティーなどによる捕集の系)の構築の最適化と確認を行ってきた。まず、ポリラクトサミン糖鎖に結合するレクチンを用いてアフィニティーカラムを作製し、これを用いて細胞抽出物を濃縮した。その結果、野生型マウスB細胞からは50以上の糖タンパク質分子を同定した。またマウスの脾臓でも同様に解析したところ、270以上の糖タンパク質分子を同定した。レクチン捕集あるいは溶出の効率(濃縮効率)を検討するとともに、現在も継続して系のブラッシュアップ(他のレクチンと組み合わせる系など)を行うと同時にキャリア分子の同定を行っている。また、得られたキャリア分子情報を、バイオインフォマティクス技術(KeyMolnet等)による分子の局在、性状解析を行い、その傾向性などを予備試験的に確認した。糖転移酵素遺伝子を欠損したモデル動物(マウス)は、多様な生物機能(表現型)の異常を認める。その為、種々の糖転移酵素の標的タンパク質を同定することは生体内における糖鎖の機能を理解する上で重要な情報である。本課題では、基幹的糖鎖構造の一つであるポリラクトサミン糖鎖合成に関与する糖転移酵素、β1,3- N-アセチルグルコサミン転移酵素2(β3GnT2)遺伝子ノックアウトマウス(B3gnt2(-/-)マウス)の細胞・組織を用いて、各種解析をすることによって、生合成されるポリラクトサミン糖鎖の標的分子と機能の解明を試みるものである。そこで本課題では、B3gnt2(-/-)マウスと野生型マウスから、それぞれ糖鎖キャリア分子(糖ペプチド)をポリラクトサミン糖鎖に特異的なレクチンを用いて捕集し、これらのグライコプロテオーム解析を行うことにより、β3GnT2に特異的な標的タンパク質の大規模同定を進める。今年度は、ポリラクトサミン糖鎖のキャリア糖タンパク質を効率的に捕集するための系(レクチンアフィニティーなどによる捕集の系)の構築を行ってきた。まず、ポリラクトサミン糖鎖に結合するレクチンを選択し、これを用いてアフィニティーカラムを作製した。このカラムに細胞抽出物を通した後に溶出した。当該の溶出物をレクチンブロットで確認したところ、ポリラクトサミン糖鎖を含む糖鎖構造を有する糖タンパク質群が濃縮されていると考えられた。野生型マウスB細胞からは50以上の糖タンパク質分子を同定したが、まだレクチン捕集あるいは溶出の効率が悪いと考えられるため、現在も継続して系のブラッシュアップを行うと同時にキャリア分子の同定を行っている。

本課題では、基幹的糖鎖構造の一つであるポリラクトサミン糖鎖合成に関与する糖転移酵素、β1,3- N-アセチルグルコサミン転移酵素2(β3GnT2)遺伝子ノックアウトマウス(B3gnt2 KOマウス)と野生型マウスから、それぞれ糖鎖キャリア分子(糖ペプチド)をポリラクトサミン糖鎖に特異的な結合をするレクチンを用いて捕集し、これらの比較グライコプロテオーム解析を行うことにより、β3GnT2に特異的な標的タンパク質の大規模同定を進める。昨年度までに、ポリラクトサミン糖鎖のキャリア糖タンパク質を効率的に捕集するための系(レクチンアフィニティーなどによる捕集の系)の構築、最適化と確認を行ってきた。ポリラクトサミン糖鎖を持つキャリア分子を捕集するために、レクチンを用いてアフィニティーカラムを作製し、これを用いて野生型マウスB細胞や脾臓細胞の細胞抽出物を濃縮・解析した結果、270以上のポリラクトサミン糖鎖キャリアタンパク質候補分子を同定した。また、同定されたこれらの分子がポリラクトサミン糖鎖欠損を含むかどうかについて、幾つかの分子について生化学的に確認した。得られたキャリア分子群の情報(リスト)から、KeyMolnetおよびDAVID等によるGene Ontology解析(分子の局在・性状解析、及びネットワーク解析)によって傾向性を見たところ、約7割の分子は膜タンパク質であり、細胞表面の受容体分子・細胞接着に関与する分子が多く含まれていた。また、野生型マウスとB3gnt2 KOマウスの脾臓細胞由来膜タンパク質画分を用いて、2次元電気泳動による比較解析での検討を行った結果、多くのタンパク質のバンド位置の差が認められた。このことからもポリラクトサミン糖鎖はその多くが細胞膜表面の糖タンパク質上に結合している可能性が高いことが考えられた。糖鎖生物学・細胞生物学・生化学まずは野生型マウスを用いて、グライコプロテオーム解析技術により、ポリラクトサミン糖鎖のキャリア分子を網羅的・ハイスループットに同定するための系の構築(今年度までに捕集用レクチンを選定し、このレクチンによるキャリア糖タンパク質捕集系の構築)を進めた。予備実験的に先行した解析結果では、マウスB細胞由来のポリラクトサミン糖鎖キャリア糖タンパク質は50分子以上(またマウスの脾臓において270以上の糖タンパク質分子)が同定できた。同定された分子の中には、文献上ポリラクトサミン糖鎖を持つとされているものが複数リストアップされているとともに、幾つかの分子については本課題内での生化学実験を通して確認を行った。系の改善をしつつ、再現性を含めた大規模同定を進める。また、得られる分子情報が膨大な量にのぼるため、バイオインフォマティクス技術(KeyMolnet等)を導入した。これを用いて、得られたキャリア糖タンパク質分子の解析を行ったところ、ポリラクトサミン糖鎖キャリア糖タンパク質の多くが細胞膜表面に局在すると考えられる糖タンパク質であることが予想された。そこで、予備試験的に膜タンパク質画分を調製し、電気泳動などの生化学的な解析(検証)をおこなったところ、野生型とノックアウトマウスとの間でバンドに差分が認められた。今後繰り返し解析を行うことで、キャリア糖タンパク質の候補リストの精度を上げることを試みる予定である。まずは野生型マウスを用いて、グライコプロテオーム解析技術により、ポリラクトサミン糖鎖のキャリア分子を網羅的・ハイスループットに同定するための系の構築(今年度はまずポリラクトサミン特異的なレクチンを選定し、このレクチンによる捕集系の構築)を進めた。その結果、多くの標的糖タンパク質を同定に成功したが、系自体には、まだ改善の余地があると判断している。
老年期痴呆における自動解析脳波とCTの左右差と心理テストの相関に関する研究

老年期痴呆患者の脳波を定量分析し,その左右差について頭部CT所見および心理検査所見との対比検討を行った.[対象]老年期痴呆患者79例・うち脳血管性痴呆(VD)48例,萎縮性痴呆(DAT)31例. [方法]左右の前頭,側頭,中心,後頭の計8部位の脳波を波形認識法による脳波基礎活動分析装置を用いて定量分析し, 8つの周波数帯域ごとに出現量(wave%time)を算出した.左右の対称部位で各周波数帯域の出現量の差を求め,その絶対値が5%以上の場合に左右差有りとし,徐波の出現量の多い側を脳波の障害例とした. CT所見は, VDでは低吸収域(LDA)やperiventricular lucency(PVL)の部位・程度により, 1群LDAが左側優位にあるもの(12例), 2群LDAが右側優位にあるもの(11例), 3群LDAが両側同程度にあるもの(6例), 4群LDAがなくPVLが中心であるもの(14例),皮質萎縮・脳室拡大のみを示すもの(5例)の5群に分類した.DATでCT上左右差のあるものは31例中1例のみであった. [結果](1)VDでは脳波上徐波の出現量の左右差が48例中45例(94%)に認められた.(2)VDのうちCT上でLDAを示した29例(13群)では全例が脳波上徐波の出現量の左右差を示したが,脳波の障害側はCTの障害側と一致しなかった.(3)VDを長谷川スケールの成績で高得点群(22点以上)および低得点群(22点未満)の2群に分類し検討したところ,高得点群については脳波障害側がCT障害側と一致する傾向が認められた.(4)VDのうちCT上で基底核付近にLDAを示した13例について見ると,全例で脳波の障害側とCTの基底核障害側が一致していた.(5)一方, DATでは脳波上徐波の左右差を認めたのは31例中10例(32%)であった.左右差を認めた例は長谷川スケールの低得点群に属するものが多かった.老年期痴呆患者の脳波を定量分析し,その左右差について頭部CT所見および心理検査所見との対比検討を行った.[対象]老年期痴呆患者79例・うち脳血管性痴呆(VD)48例,萎縮性痴呆(DAT)31例. [方法]左右の前頭,側頭,中心,後頭の計8部位の脳波を波形認識法による脳波基礎活動分析装置を用いて定量分析し, 8つの周波数帯域ごとに出現量(wave%time)を算出した.左右の対称部位で各周波数帯域の出現量の差を求め,その絶対値が5%以上の場合に左右差有りとし,徐波の出現量の多い側を脳波の障害例とした. CT所見は, VDでは低吸収域(LDA)やperiventricular lucency(PVL)の部位・程度により, 1群LDAが左側優位にあるもの(12例), 2群LDAが右側優位にあるもの(11例), 3群LDAが両側同程度にあるもの(6例), 4群LDAがなくPVLが中心であるもの(14例),皮質萎縮・脳室拡大のみを示すもの(5例)の5群に分類した.DATでCT上左右差のあるものは31例中1例のみであった. [結果](1)VDでは脳波上徐波の出現量の左右差が48例中45例(94%)に認められた.(2)VDのうちCT上でLDAを示した29例(13群)では全例が脳波上徐波の出現量の左右差を示したが,脳波の障害側はCTの障害側と一致しなかった.(3)VDを長谷川スケールの成績で高得点群(22点以上)および低得点群(22点未満)の2群に分類し検討したところ,高得点群については脳波障害側がCT障害側と一致する傾向が認められた.(4)VDのうちCT上で基底核付近にLDAを示した13例について見ると,全例で脳波の障害側とCTの基底核障害側が一致していた.(5)一方, DATでは脳波上徐波の左右差を認めたのは31例中10例(32%)であった.左右差を認めた例は長谷川スケールの低得点群に属するものが多かった.
ライフヒストリー法の革新－UMLによる記述－

本研究においては、私たちのグループは、UMLを用いて、宗教の体験談を図示する方法を開発した。Enterprise Architect13というソフトウェアを用いて、既に教団誌に発表された体験談や、これまでメンバーが聞き取ってきた体験談を、クラス図とステートマシン図によって示した。日本社会学会大会で、「ライフヒストリーの図式化の試み」と題して、その成果を報告した。また、学術論文としてもその成果を発表した。さらにこのUMLによる体験談の図示をもとに、宗教体験談を聞き取る項目を検討し、インタビューガイドを作成した。そのガイドに従い、インタビュー調査を実施した。平成27年度は研究分担者に加え、このテーマに関心のある研究者とも共同し、10回の研究会を開催した。検討内容は、クラス図、ステートマシン図などのUMLで、体験談が図示できるかどうかである。体験談は、いくつかの状態が移り変わるものとして定義した。いくつの段階かは難しいが、最初なので、便宜的に34段階に区別することとした。ライフヒストリー研究ではしばしば問題となる、事実と認識の違いをどのように示すか、という議論の結果、ステートマシン図は認識を扱うにしてもある時点の認識に基づいた状態の変化を示すものなので、体験談のように認識の時点が異なると、事実の認識も異なるような場合があり、またそのように異なること自体に大きな意義がある場合には、それを使用することはふさわしくない可能性が示された。そこで、認識の変化はオブジェクトのクラスの変化として示すのが適当ではないかという仮説に基づき、体験談をクラス図でとらえる方法が検討された。また、一方で体験談のテキストと信仰要素の関連を示すために、質的データの分析ソフトの利用の可能性も探究した。質的データ分析ソフトは、UMLと比べるとシンタックスが単純で、関係や操作を示すシンタックスが簡単に利用できないなど、短所があることが分かった。ただし、UMLでは記述の具体的なポイントを指し示すことが困難なため、記述の部分を示すためには質的データソフトを利用し、その結果を表形式で出力し、UMLに読み込ませて、より複雑な関係を示すようにするなど、両者を連結する利用方法もさらに探求していくこととした。27年度の研究開始当初は、宗教的な体験談をいかにしてUMLで表現できるか、ということを研究目的としていた。UMLについて学習し、UMLで表現できる方法には、目処が立ってきたと言うことで、研究は順調に進展しているが、それに加えて、質的調査データの分析において、近年取り入れられつつあるいわゆるQDAソフトを用いて、体験談を分析することも合わせて行った。その結果、QDAソフトソフトだけでは、十分に表現できない点があり、その点についてはUMLを利用した方がよいこと、一方でUMLでは、体験談のどの部分、どの記述が信仰の要素として、抽出されたり、分析されているのかが明示されにくく、その点を踏まえれば、両者の間でデータを受け渡したりした方がよいことが、わかった。また、体験談における変化の重要性が分かり、類型化、理論化に目処が立ったことなどが計画になかった予想以上に進展している理由である。平成28年度は2人の研究分担者に加え、このテーマに関心のある研究者1名とも共同して、6回の研究会を開催した。検討内容はUMLで体験談をいかに図示するかについてである。UMLにもさまざまなツールがあるが、27年度に引き続き、クラス図、ステートマシン図を中心に検討し、宗教的体験談を表すに際しては、クラス図とステートマシン図が適切であろうという結論に達した。そして、さまざまな体験談の中で、これまでの教団の発行する紙誌などに取り上げられた5つの体験談を例として、クラス図の属性、操作を絞り込んでいった。この作業を行うに際して、当初はUMLのツールをastah*community 7.0を使用していたが、より機能の優れたEntrerprise Architect12.1を購入し、これを用いて作業することとした。そのために科研のメンバーが全員で、Entrerprise Architect12の講習会に参加し、その機能について、講習を受けた。これらの経緯を経て、Entrerprise Architectでクラス図、ステートマシン図によって、宗教的体験談のモデルケースを記述できる原型を検討していった。これらの検討とともに、体験談について、何が重要であるかという議論を行ってきた。宗教的体験談については、認識や意識が変容することが重要であり、その変容のパターンを考えてきた。認識が変容することが、クラス図の属性の一部が変化することであり、どの属性の変化を捉えるべきかが議論された。また、有意味な変化はステートマシン図でどのように示されるべきかについても議論がなされ、とくにトリガーについて、検討が行われた。以上の点を踏まえて、宗教的体験談のモデル化が進められた。本研究はUMLのソフトを用いることが不可欠である。そのソフトを28年度途中にastahからEntrerprise Architectに変更したため、Entrerprise Architectの習熟に少し時間を要した。そのためにクラス図やステートマシン図に記述することに時間を要したが、研究分担者、協力者の努力により、概ね順調にUMLで記述できるようになり、研究全体もおおむね順調に進展している。平成29年度は、2人の研究分担者に加え、このテーマに関心のある研究者2名とも共同して、UMLで体験談を図示する方法を検討した。ソフトはバージョンアップされたEnterpriseArchitect13を用い、メンバー全員で上級の講習会に参加し、より高度な使用方法とデータの共有方法についての講習を受けた。

これらの成果を活かして、既に教団誌に発表された体験談、これまでメンバーが聞き取ってきた体験談をクラス図とステートマシン図による図示を行った。その成果は、日本社会学会大会で、「ライフヒストリーの図式化の試み」と題した共同報告を行い、4つの発表を行った。宗教研究に限らず、ライフヒストリー法の研究者から、まだ研究途上ながらも好意的な評価をいただいた。さらにこのUMLによる体験談の図示をもとに、宗教体験談を聞き取る項目を検討し、インタビューガイドを作成した。これまでの半構造化インタビューは、十分に構造化されておらず、そのため、多様なインタビューの比較が十分に行えないという欠点をもつ。それをカバーするために、UMLで図示し、比較検討ができるように、宗教的体験談において聞き取るべき項目を整理したものである。一方で宗教意識の特性と体験談の関連について、インターネット調査の結果に基づいて、検討した。その結果は、Pew Research CenterとSSSR大会で報告し、アメリカ人研究者3人の関心を引き、今後の研究協力について、依頼した。さらに宗教意識の研究に基づいた情報収集のためのWebサイトを開設し、このサイトを通じてインタビュー協力者を募集した。応募していただいた協力者に対して、検討したインタビューガイドを用いて、メンバー全員で9月に6人、2月に7人のインタビュー調査を実施したほか、各自でもインタビューを行った。これらのデータをUMLで図示するべく、分析を続けている。本研究においては、私たちのグループは、UMLを用いて、宗教の体験談を図示する方法を開発した。Enterprise Architect13というソフトウェアを用いて、既に教団誌に発表された体験談や、これまでメンバーが聞き取ってきた体験談を、クラス図とステートマシン図によって示した。日本社会学会大会で、「ライフヒストリーの図式化の試み」と題して、その成果を報告した。また、学術論文としてもその成果を発表した。そのガイドに従い、インタビュー調査を実施した。平成27年度はいくつかの体験談を用いて、UMLやQDAソフトで表現することを検討してきた。28年度においては、その表現形式をさらに洗練させ、より多くの体験談の事例に当てはめることが必要である。さらにそのモデルを用いた場合、宗教社会学的にどのような発見があり、どのような意義があるのかを明らかにしていく必要がある。これらの定式化ができれば、それに基づいて、インタビューを行うことは、半構造化インタビューの方法論を大きく洗練させることになる。そのことを示すために、実際にその定式化に基づいて、インタビューを実施し、定式化以前の半構造化インタビューよりも有益な、構造化された情報が得られ、モデル化できることを示すことを試みていきたい。