hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
地域型ＮＰＯの活動領域間のつながりに着目した地域空間マネジメントの見える化

地域型NPOとして「まちづくり活動」に取り組んでいる7団体のうち事例として、さかいhill-front forum(以下さかいHFF)、Fusion長池を対象とし、活動領域の広がりと連携状況、ならびに広がりのプロセスを明らかにした。さかいHFFが指定管理者として東文化会館の拠点を獲得することで地域の連携形成の中心的組織となっていることを明らかにした。Fusion長池の事例からは当初は活動領域が総合的に広がっていたが、時間の経過とともに特定領域の他団体への分離・独立、他団体との新たな連携を通じて総合的な領域をカバーしていることが明らかになった。本研究は、特定テーマを超えて地域空間の総合的課題を扱う地域型NPOの地域空間のマネジメントを「見える化」することで、縮減時代における地域空間マネジメントの新たな計画理論を構築することを目的としている。平成24年度は以下のことを明らかにした。1)地域型NPOの事例として、大阪府堺市東区を中心に活動するさかいヒルフロントフォーラムを対象に継続的な参与観察を行った。さかいヒルフロントフォーラムの活動を基盤として、町会連合会の活動、区民会議など行政との連携活動など、多様な領域に活動が広がっていることを明らかにした。特に区民会議を中心とする活動では、落書き消し、クリーンアップ作戦、まちあるきマップ作成による環境整備へと領域が広がり、住民間の連携の機会となっていることを確認した。2)先進事例調査として、Fusion長池の活動視察、代表者インタビューを実施した。当団体は1999年の設立から14年目に当たり団体代表者の世代交代の時期にあること、当初は活動領域が総合的に広がっていたが、時間の経過とともにある領域の他団体への分離・独立、他団体との新たな連携を通じて、すべてを一団体で担うのでなく複数団体の連携によって総合的な領域をカバーしていることが明らかになった。3)地域空間マネジメントの見える化に関する調査として、景観まちづくりを基点とした地域空間マネジメントに取り組んでいる千葉県浦安市・うらやす景観まちづくりフォーラムなどのまちづくり団体へのインタビューを実施し、まちづくりプロセスの記述を試みた。地域空間マネジメントにおけるまちづくり戦略とまちづくり活動の関係が見える化のポイントであることを確認することができた。本研究は、特定テーマを超えて地域空間の総合的課題を扱う地域型NPOを対象に、地域空間のマネジメントを「見える化」することで、縮減時代における地域空間マネジメントの新たな計画理論を構築することを目的としている。平成25年度は以下を実施した。2)地域空間マネジメントの見える化に関する調査として、景観まちづくりを基点とした地域空間マネジメントに取り組んでいる千葉県浦安市・うらやす景観まちづくりフォーラムなどのまちづくり団体の活動プロセスの記述を昨年度に引き続き実施した。3)先進事例調査として、秋田県三種町、福島県二本松市、和歌山県紀美野町、広島県尾道市のNPOへインタビューを行った。各NPOが主題としている移住者支援、地域の作業づくり、空き家再生といった特定テーマを入り口としつつ、地域型NPOとして生活問題全般を扱う領域に活動を広げていることを確認した。4)井庭(慶応大学)らとの議論により、地域空間マネジメントの見える化の手法として、パタンランゲージの可能性を改めて知ることができた。井庭は、C.Alexanderのパタンランゲージを用いて、学習・プレゼンテーション・コラボレーションといった「人々の行為」を記述し、人々に共有可能にするワークショップ手法を開発している。かつてパタンランゲージは「空間の質」を記述し、専門家・非専門家を架橋するツールとして開発されたが、近年は実践知を共通言語化する方法として他分野で再評価されている。これらは地域空間マネジメントの見える化にも応用可能である。現在、上記、1)、2)の成果をパタンランゲージを用いた記述により、とりまとめており、平成25年夏には出版できる予定である。平成23年度は以下の2点を明らかにした。1.地域型NPO抽出の手がかりとして指定管理者制度に着目した。日本経済新聞社・日経産業消費研究所(2006):「自治体における指定管理者制度導入の実態」によって、地域型NPOの状況を確認、整理した結果、NPO法人による指定管理者438団体のうち、「まちづくりの推進を図る活動」分野は250団体、そのうち3大都市圏にあるのは84団体、活動範囲の全ての住民を対象としているのは28団体存在していることがわかった。それらの活動内容は6種類に分類されるが、地域型NPOとしては特にテーマを限らずまちづくり活動に取り組んでいる7団体が注目される。現在、先進事例調査の対象となりうるような地域型NPOの候補を検討している。

2.地域型NPOの事例として、大阪府堺市東区を中心に活動するさかいHFFを対象に、関係者へのインタビュー調査を実施した。地域型NPOの活動領域の広がりと連携状況、ならびに広がりのプロセスを明らかにした。当初は現在の活動につながる連携は1件しか確認できなかったが、さかいHFFの前進となるとみおかHFFの発足(2000年)後には、とみおかHFFが中心となり住民組織、地縁・行政組織との間で連携が生まれていること、さかいHFFの発足(2005年)後には、住民組織が主体的となりさかいHFFが客体として支援する形態の連携が生まれ、主体・客体双方向の連携が生まれていることが確認できた。指定管理者制度を手がかりにした地域の連携形成の中心的存在となっていることがうかがえる。先進事例調査は進捗しているが、アンケート調査は若干遅れている。25年度の研究計画を見直し、研究内容を遂行する。補助金の執行が遅れた影響が懸念されたが、先進事例調査、アンケート調査の設計とおおむね当初の計画通りに進んでいるといえる。引き続き、研究目的である1)全国の地域型NPOの動向、2)インタビュー調査による地域型NPOの活動領域の広がりと連携状況を明らかにする。1)全国の地域型NPOの動向:これまでの知見をふまえて前年度から進めているアンケート調査の設計を再検討し、地域型NPOへのアンケート調査を実施する。研究計画の進捗を勘案し、対象事例を精査することで25年度内に成果を出す。2)地域型NPOの活動領域の広がりと連携状況の把握:これまでの研究実績をふまえて引き続き先進事例となる団体へのインタビュー調査を行う。インタビュー結果とアンケート調査結果が連動するように、アンケート調査を検証する。1)全国の地域型NPOの動向:これまでの知見をふまえて前年度から進めているアンケート調査の設計を行い、地域型NPOへのアンケート調査を実施する。分析にはアルバイトの協力を得る。また、前年度、地域型NPO抽出の参考とした文献は若干年数が経っているため、最新の資料がないかどうか継続して調査する。2)地域型NPOの活動領域の広がりと連携状況の把握:これまでの研究実績をふまえて2団体へのインタビュー調査を行う。インタビュー結果をもとにアンケート調査を改善するとともに、アンケート調査結果の仮説的結論を検証する。次年度使用額が約150千円生じてしまったのは、アンケート調査を遂行できなかったためである。次年度計画は、当初の計画である先進事例調査の旅費交通費、インタビュー結果テープ起こし、アンケート結果入力・分析アルバイト謝金、アンケート郵送費等の支出を予定している。次年度使用額が約10千円生じてしまったが、研究計画の大きな変更があったわけではなく、おおむね順調に進展している。
日・中・韓国における消化管がんの比較疫学的研究

アジア太平洋地域におけるがんの予防対策の推進に資するため、北東アジア三国(日・中・韓国)の6研究施設が協力し、消化管がんの各国・地域における共通要因と特異的要因を探索する民族疫学研究を平成12年度から5年計画で展開してきた。第一に、全6地域の中核病院において地域特異性を考慮した半定量的食物摂取頻度調査票(SQFFQ)の開発し、消化管がんの症例対照研究への実用化を図った。第二に、日本の名古屋市、韓国のソウル市、中国の南京市と重慶市の4地域において大腸がんの症例対照研究による食・生活習慣など関する資料収集を終了し、要因探索のための解析を実施している。第三に、一般的な食・生活習慣と宿主特性の交互作用を検索するため、各種遺伝子型の検索に必要なDNA材料、および生化学的検索のための血漿なども合わせ収集し、解析中である。平成16年度における解析結果から、日本人集団では大腸がんのリスクと結びつく食・生活習慣を明示することはできなかったが、中国や韓国では獣肉の頻回摂取など欧米型食嗜好習慣が大腸がんの危険要因に、一方では緑葉野菜、特に葉酸摂取が防御要因に結びついている可能性が示唆された。また、分子疫学的解析結果から、日本人のCD36遺伝子のA52C多型が頻回獣肉摂取によるリスク上昇を高める交互作用が見られた。なお、脂質代謝に関連した酵素、解毒酵素、修復酵素などの遺伝子多型に焦点をあて、分子疫学的解析をさらに進めながら、三国間で大腸がんの要因に関する生活習慣と遺伝子多型の交互作用について比較検討を試みる。北東アジアの近隣三国(日・中・韓国)が難敵がんと戦うため、共通研究課題のもとで民族疫学研究を実施していくことにより、これまで同一集団内では検出できなかった新しいがん関連要因の探索を可能にすると考え、大腸がんを対象に三国共同民族疫学的研究を開始した。平成12年度は三国における各研究者の中核病院、愛知県がんセンター病院、江蘇省腫瘤院病院、四川省第三軍医大付属病院、遼寧省本鋼総合病院、ソウル国立大付属病院、などを中心に標準的な半定量的食物摂取頻度調査票(SQFFQ)を作成した。第一位、国民栄養調査方法に準じ200所帯を対象に3日間の秤量法による栄養摂取量の調査、第二に、栄養摂取量の90%以上を把握できるSQFFQ原案を作成、第三に、50所帯を対象にSQFFQの妥当性の検討、などの調査を実施した。それらの調査段階を経て作成されたSQFFQを用いて、三国五カ所で大腸がんの症例対照研究、1)一般的な生活習慣に関する情報収集、2)各種食物栄養素の摂取量の測定、3)血清脂質をはじめとした生化学的検索、4)DNAの採取と遺伝的多型の検索、などを計画実施している。今年度までに、愛知県、中国江蘇省、韓国ソウル市ではSQFFQを完成し、すでに大腸がんの症例対照研究を開始した。中国の重慶市と本渓市ではSQFFQ原案を作成し、現在は妥当性を検討するための準備を進めており、平成13年度の夏までにSQFFQを完成し、大腸がんの症例対照研究を開始する。これらの研究と並行しながら、1)愛知県がんセンター病院では10年以上継続実施してきた大規模な病院疫学研究の進展を計り、日本人の主要ながんの危険・防御要因に関する分子疫学的情報の構築に努め、2)中国江蘇省では5年前から実施してきた胃・食道がんの高・低率地域における比較疫学研究を継続実施し、消化管がんの危険・防御要因に関する総合的情報の構築に努めている。北東アジア三国(日・中・韓国)の5研究施設が三国共同による民族疫学研究に集結し、各所属地域(愛知県、江蘇省、四川省、遼寧省、ソウル市)を背景に、これまで単一地域では検出できなかったがんの特異的要因、および三国の各地域に共通した要因を探索することは、アジア地域におけるがん予防を推進していくために意義あることと考える。本研究の中心的課題は、アジア地域でがん対策を構築する上で最も重要な消化管がん、特に同地域で増加しつつある大腸がんの要因解明に焦点を当てた比較疫学研究である。昨年度(初年度)は三国5地域の各中核病院において、地域特異性を考慮した半定量的食物摂取頻度調査票(SQFFQ)の原案を作成し、今年度は50所帯を対象にそれらの調査票原案の妥当性を検討し、疫学調査に利用可能なSQFFQを完成した。現在はそれらのSQFFQを用いて、大腸がんを中心とした症例対照研究、1)一般的な生活習慣に関する情報の収集、2)血清脂質をはじめとした生化学的検索と遺伝的多型を検索するための生体材料の収集、などを継続実施している。今年度までに、愛知県では県がんセンター病院の初診患者3,500名分(700例のがん患者を含む)、韓国のソウル国立大付属病院では大腸がん患者群150例と比較対照患者群300例、中国の江蘇省では腫瘤院病院と准安市立病院を中心に大腸がん症例群と同地域に居住する性、年齢をマッチングさせた比較対照群の150対について調査が終了している。また、中国の四川省と遼寧省ではSQFFQ原案の妥当性に関する調査に時間を要したためSQFFQの完成が遅れ、2001年11月から症例対照研究を開始した。一方、これらの研究と並行させながら、中国江蘇省で過去5年間に実施してきた胃・食道がんの高・低率地域における比較疫学研究において収集された生体材料を用い、遺伝子・生活習慣交互作用に関する情報構築に努めている。

アジア地域における消化管がんの予防対策の推進に資するため、北東アジア三国(日・中・韓国)の6研究施設(今年度から中国広東省の一施設を追加)が協力し、消化管がんの各国・地域における共通要因と特異的要因を探索する民族疫学研究を1999年度から5年計画で展開している。昨年度に引き続き今年度も三国5地域の中核病院において、地域特異性を考慮した半定量的食物摂取頻度調査票(SQFFQ)を用いた大腸がん、および胃がんの症例対照研究を継続実施している。そこでは一般的な食・生活習慣に関する情報収集、遺伝子多型を検索するためのDNA材料、および血清脂質をはじめとした生化学的検索のための血漿、などを収集している。今年度までに収集した症例・対照数の達成度は、1)愛知県:県がんセンター病院の初診患者約7,000名分(1,300例のがん患者以外が比較対照群)の中で胃がん患者は363例、大腸がん患者は313例で目標数400例の8割達成、2)韓国:ソウル国立大付属病院では大腸がん患者群230例と比較対照患者群450例で大腸がんについては目標数の約8割達成、3)中国:江蘇省では腫瘤院病院と准安市立病院を中心に大腸がん症例群と同地域に居住する性・年齢をマッチングさせた比較対照群の目標値300対について調査終了、四川省重慶市の第三軍医大学では目標値の5割達成、遼寧省では研究開始が遅れており約3割の調査終了となり、来年度までに達成できた対象を用いて当初目的の解析を行い報告する予定である。一方、今年度は中国の南京市と韓国ソウル市で開発したSQFFQ、およびその妥当性などに関する基礎的情報を報告した。さらに、日本で並行実施している胃がん、大腸がんの分子疫学的研究の成果、特に胃がんの主要な原因と考えられているヘリコバクターピロリ菌感染や喫煙習慣など生活習慣要因と種々の遺伝子多型との交互作用などについて明らかにしてきた。アジア地域における消化管がんの予防対策の推進に資するため、北東アジア三国(日・中・韓国)が協力し、消化管がんの各国・地域における共通要因と特異的要因を探索する民族疫学研究を1999年度から5年計画で展開している。今年度まで三国6地域(日本、韓国、中国4地域)の中核病院において各国・地域で開発した半定量的食物摂取頻度調査票(SQFFQ)を用い、大腸がん・胃がんの症例対照研究のための資・試料収集中である。そこでは、一般的な食・生活習慣に関する情報収集、遺伝子多型を検索するためのDNA材料、および血清脂質をはじめとした生化学的検索のための血漿・赤血球などを収集している。今年度までの各地域における研究達成度は、1)愛知県:県がんセンター病院の初診患者約10,000名分(2,000例のがん患者以外が比較対照群)の中で目標値の胃がん、大腸がん患者各400例の調査を終了、2)韓国:ソウル国立大付属病院では大腸がん患者群500例と同数の性・年齢をマッチングさせた比較対照患者群、3)中国:江蘇省で大腸がん症例群と同地域に居住する比較対照群300対、四川省重慶市の第三軍医大学で大腸がんの症例・対照群を各300対、遼寧省では研究開始が遅れたので症例・対照群を各200例、広東省汕頭市の大学病院では調査を開始した。来年度は調査を終了した各地域で疫学的解析を開始するが、日本で前解析した大腸がんの分子疫学的研究の成果によると、大腸がんの危険要因として獣肉類の頻回摂取と多量飲酒習慣、防御要因として健康のための定期的運動が上げられた。
勤労中高年女性の健康体力の保持・増進に関する研究

【目的】本研究の目的は(1)勤労中高年女性の食生活を評価すること,(2)近年、社会問題となりつつある骨粗鬆症との関連で、本対象者の腰椎および大腿骨頸部の骨密度の概要を明らかにすること,(3)身体運動トレーニング(スイミング及び水中運動)が勤労中年女性の持久性体力及び血中脂質に与える影響を明らかにすることであった。【結果】各年代とも、エネルギー摂取量はそれぞれの年代の所要量とほぼ同水準であった。栄養素は、それぞれの年代の女性の所要量を上回る摂取量であった。たんぱく質は所要量より30%多く、脂質も所要量より約10%多めであった。カルシウムはの摂取量は所要量より16%多かった。次にアルコール摂取量はビールをコップ1杯程度であったため、アルコールのエネルギー比率はわずか2%であった。腰椎及び大腿骨頸部の骨密度は年齢とともに低下した。骨密度には個人差が大きかったが、平均的には一般人女性よりも、僅かに高い価であった。水泳トレーニングへの平均出席回数が週当たり1.5回以上の群では、持久性体力の指標である乳酸性作業閾値は24.2±2.2ml/kg/minから26.4±2.4ml/kg/minへ1.6±2.8ml/kg/min有意に増加した(p<0.05)。一方、平均出席回数が週当たり1回以上の群では乳酸性作業閾値とも有意な変化は見られなかった。血中脂質濃度の変化をみると、いずれのグループともトレーニング前後で血中トリグリセリド濃度に変化はみられなかった。また、総コレステロール、LDL-コレステロール濃度はいずれのグループとも上昇する傾向が認められたが、とくに水泳トレーニングにほとんど出席しなかったCグループの被検者の上昇が顕著であった。しかし、いずれのグループもHDL-コレステロール濃度には大きな変化がみられなかった。【まとめ】本研究の結果より、週1.5回以上身体トレーニングを行うと、持久性体力が向上し、さらに血中脂質プロフィールが改善されることが明らかになった。本研究の目的は、比較的日常の活動量の多いと考えられている勤労女性を対象に持久性体力及び骨塩量を測定し、それと日常活動との関係を明らかにすることであった。被験者は年齢57±7歳(41歳72歳)の勤労女性48名であり、体重は56.3±7.2kgであった。1日の歩数の平均値は40歳代で12982歩,50歳代では10861歩,60歳代では9906歩であり、同年代の一般主婦よりも明らかに多い値であった。また、一日の歩数と年齢には有意な相関関係はみられず、加齢しても、これらの女性が活動レベルを維持していることを示している。トレッドミル歩行による乳酸性作業闘値(2mM)は平均で24.4ml/kg/minであった。乳酸性作業闘値(2mM)が年齢と相関がないこと、および血中乳酸濃度2mM時の酸素摂取量の酸素摂取量と一日の歩数に有意な相関関係が見られたこと、さらに、これらの女性が日常特別なスポーツ活動に参加していないことを考えると、これらの女性の最大下の機能的持久性は日常の活動量に大きく影響されていることが示唆された。さらに、乳酸性作業闘値は日常活動量を維持すれば、高齢化しても維持される可能性が示された。最高酸素摂取量は平均で30.8ml/kg/minであった。最高酸素摂取量と年齢には有意な相関関係が観察され、年齢と最高酸素摂取量の回帰式は一般女性を対象とした先行研究で報告されているものとほぼ同じであり、勤労女性の最高酸素摂取量は一般女性とほぼ同じであることが明らかになった。腰椎および大腿骨頸部の骨塩量を測定したところ、一般女性に比べて、腰椎の骨塩量が約8%高いという結果が得られた。身体運動は骨密度を増加・維持する効果があるということが報告されているが、これも日常活動の多さによるものであると考えられる。

一方、平均出席回数が週当たり1回以上の群では乳酸性作業閾値とも有意な変化は見られなかった。血中脂質濃度の変化をみると、いずれのグループともトレーニング前後で血中トリグリセリド濃度に変化はみられなかった。また、総コレステロール、LDL-コレステロール濃度はいずれのグループとも上昇する傾向が認められたが、とくに水泳トレーニングにほとんど出席しなかったCグループの被検者の上昇が顕著であった。しかし、いずれのグループもHDL-コレステロール濃度には大きな変化がみられなかった。【まとめ】本研究の結果より、週1.5回以上身体トレーニングを行うと、持久性体力が向上し、さらに血中脂質プロフィールが改善されることが明らかになった。【目的】本研究の目的は(1)勤労中高年女性の食生活を評価すること,(2)近年、社会問題となりつつある骨粗鬆症との関連で、本対象者の腰椎および大腿骨頚部の骨密度の概要を明らかにすること,(3)身体運動トレーニング(スイミング及び水中運動)が勤労中年女性の持久性体力及び血中脂質に与える影響を明らかにすることであった。【結果】各年代とも、エネルギー摂取量はそれぞれの年代の所要量とほぼ同水準であった。栄養素は、それぞれの年代の女性の所要量を上回る摂取量であった。たんぱく質は所要量より約30%多く、脂質も所要量より約10%多めであった。カルシウムはの摂取量は所要量より16%多かった。次にアルコール摂取量はビールをコップ1杯程度であったため、アルコールのエネルギー比率はわずか2%であった。腰椎及び大腿骨頚部の骨密度は年齢とともに低下した。骨密度には個人差が大きかったが、平均的には一般人女性よりも、僅かに高い価であった。水泳トレーニングへの平均出席回数が週当たり1.5回以上の群では、持久性体力の指標である乳酸性作業閾値は24.2±2.2ml/kg/minから26.4±2.4ml/kg/minへ1.6±2.8ml/kg/min有意に増加した(p<0.05)。血中脂質濃度の変化をみると、いずれのグループもトレーニング前後で血中トリグリセリド濃度に変化はみられなかった。
質量分析の新技法を用いたベンゾジアゼピン系薬物分析法の再構築

当課題は「質量分析の新技法を用いたベンゾジアゼピン系薬物分析法の再構築」を目指すものであるが,実際に研究を進めていくに従って,多剤併用薬物中毒症例にはベンゾジアゼピン系薬物以外の薬物も多く含まれ,これらの高濃度を示す薬物の影響について見直すことが重要と思われたので,法医中毒学的薬物分析に重要な中枢性薬物を追加,精密質量データベースの拡充をはかるなど,当初の研究目的は十分な成果をあげ,予測を超えた研究到達を果たした.研究成果としては,(1)飛行時間型LC-TOF-MSを用いて,ベンゾジアゼピン系薬物の未変化体及び代謝物ならびに法中毒学的薬物分析に重要と思われる中枢性薬物を追加,合計264種類の精密質量データベースを作成,法医剖検事例,CCMC収容の多剤併用薬物中毒症例の解析に応用し,精密質量を用いたTOF-MS薬物スクリーニングの有用性を検討した.(2)Q-TOF薬物スクリーニングは,精密質量データベースに加えて個々の薬物におけるproduct ionとMRMクロマトグラムを用いたTARGET ANALYSISによる高感度な定量分析が可能であった.精密質量によるNON-TARGET ANALYSISも併せて実施することが可能であり,Q-TOF薬物スクリーニングが有効であることが示唆された.(3)GC/MS用相対定量・迅速一斉分析ソフトウェア(NAGINATA)を用いたベンゾジアゼピンスクリーニングを検討した.calibrationrocking databaseを用いたNAGINATAスクリーニングでもベンゾジアゼピン系薬物に加え法中毒学的薬物分析に重要と思われる中枢性薬物を追加し,法医中毒学的試料への実用性が確認された.ベンゾジアゼピン系薬物は,微量で薬効を示し,血中濃度は数ng/mlと著しく低濃度であること,国内では約30種類が使用されているが,類似の化学構造や近似な分子量を有し,不分離ピークや類似なマススペクトルを示すことなどから,各薬物の識別が難しく,現在,法医中毒領域で生体試料からの分析が最も困難とされている薬物で,質量分析の技法が必須とあれている.一方,最近の質量分析の進展はめざましく,複雑なマトリックス中から目的物質のみを高選択的に精密質量分析できる飛行時間型質量分析計(LC-TOF)や定量イオンと確認用イオンを別々に設定することのできる高感度なLC三連四重極質量計(LC-MS-MS), GC/MS用相対定量・迅速他成分一斉分析ソフトウェア(NAGINATA),超微粒子技術に基づくUltra performance LC(UPLC)などが有力な手段となりうる.しかしながら,これらの高機能精密機器は高価で,現状の法中毒学分野の単一機関で維持できるものではない.当課題では,日本医大,福島県立医大,東邦大,九州大の各法医学教室と機器メーカーの協力で本研究を立案した.当課題は「質量分析の新技法を用いたベンゾジアゼピン系薬物分析法の再構築」を目指すものであるが,実際に研究を進めていくに従って,多剤併用薬物中毒症例にはベンゾジアゼピン系薬物以外の薬物も多く含まれ,これらの高濃度を示す薬物の影響について見直すことが重要と思われたので,法医中毒学的薬物分析に重要な中枢性薬物を追加,精密質量データベースの拡充をはかるなど,当初の研究目的は十分な成果をあげ,予測を超えた研究到達を果たした.研究成果としては,(1)飛行時間型LC-TOF-MSを用いて,ベンゾジアゼピン系薬物の未変化体及び代謝物ならびに法中毒学的薬物分析に重要と思われる中枢性薬物を追加,合計264種類の精密質量データベースを作成,法医剖検事例,CCMC収容の多剤併用薬物中毒症例の解析に応用し,精密質量を用いたTOF-MS薬物スクリーニングの有用性を検討した.(2)Q-TOF薬物スクリーニングは,精密質量データベースに加えて個々の薬物におけるproduct ionとMRMクロマトグラムを用いたTARGET ANALYSISによる高感度な定量分析が可能であった.精密質量によるNON-TARGET ANALYSISも併せて実施することが可能であり,Q-TOF薬物スクリーニングが有効であることが示唆された.(3)GC/MS用相対定量・迅速一斉分析ソフトウェア(NAGINATA)を用いたベンゾジアゼピンスクリーニングを検討した.calibrationrocking databaseを用いたNAGINATAスクリーニングでもベンゾジアゼピン系薬物に加え法中毒学的薬物分析に重要と思われる中枢性薬物を追加し,法医中毒学的試料への実用性が確認された.ベンゾジアゼピン系薬物は,微量で薬効を示し,血中濃度は数ng/mlと著しく低濃度であること,国内では33種類が使用されているが,類似な化学構造や近似な分子量を有し,不分離ピークや類似なマススペクトルを示すことなどから,各薬物の識別が難しく,現在,法医中毒領域で人体試料中からの分析が最も困難とされている薬物で,質量分析の技法が必須とされている.一方,最近の質量分析の進展はめざましく,複雑なマトリックス中から目的物質のみを高選択的に精密質量分析できる飛行時間型質量分析計(LC-TOF)や定量用イオンと確認用イオンを別々に設定することのできる高感度なLC三連四重極質量計(LC-MS-MS),GC/MS用相対定量・迅速多成分一斉分析ソフトウェア(NAGINATA),超微粒子技術に基づくUltra performance LC(UPLC)などが有力な手段となりうる.しかしながら,これらの高機能精密機器は高価で,現状の法中毒学分野の単一機関で維持できるものではない.今回は,日本医大,福島県立医大,東邦大,九州大の各法医学教室と機器メーカーの協力で本研究を立案した.初年度は,1)UPLC,2)LC-TOFを用いたスクリーニングについて検討した.1)UPLC T3

カラムを用いて,ベンゾジアゼピン系薬物の未変化体及び代謝物43種類について,0.5%ギ酸アセトニトリルグラジエント法,検出器はPDAを用いて最適化を行ったところ,溶出時間あるいはスペクトルによって分離が可能であった.2)LC/TOF精密質量データベースを作成し,人体試料への応用を検討した.いずれも,救命救急センター入室のベンゾジアゼピン系薬物が関与していると思われた中毒症例の分析に適用し,複数のベンゾジアゼピン系薬物を効率よく分離,定量できることが示された.1)H19年度に引き続き43種類のベンゾジアゼピン系薬物の精密質量データベースの検討を行った.救命救急センター入室のベンゾジアゼピン系薬物が関与していると思われた中毒症例の分析に適用し, Molecular Feature Extraction法を用いて,複数のベンゾジアゼピン系薬物を効率よく分離・定量できた.しかしながら,代謝物の水酸化体を互いに識別することは困難であったので,タンデム質量分析LC-MS-MSによる識別と定量について検討した.トリアゾラムとエチゾラムのprecursor ionはいずれもm/z343,トリアゾラム1位水酸化体,4位水酸化体,エチゾラム1位水酸化体,8位水酸化体のprecursorionはいずれもm/z359であるが, product ionはm/z308[M-35],314[M-29,176[M-183],286[M-72],273[M-85],315[M-44]で帰属を明確にすることが可能だった.これらのionを用いてMRM定量を行ったところ1-1000ng/mlの範囲で直線性,回収率,再現性ともに良好であった.エチゾラム及びトリアゾラムの常用量を服用している精神科外来患者尿を用いて定量試験を行ったところLC-MS-MSでは未変化体や代謝物の識別が可能で,類似構造を有する同重体や代謝物の多いベンゾジアゼピン系薬物の高感度定量に有用であった.2) GC/MS用相対定量・迅速多成分一斉分析ソフトウェア(NAGINATA)を用いたベンゾジアゼピンスクリーニングを検討した.calibration rockingdatabaseを用いたNAGINATAスクリーニングでは10-5000ng/mlの範囲で直線性,回収率,再現性ともに良好であった.H19-20年度に引き続き,(1)飛行時間型LC-TOF-MSを用いて,ベンゾジアゼピン系薬物の未変化体及び代謝物43種類の精密質量データベースを検討した.この方法では,従来のLC-MSでは同定が困難であった,類似のクロマト溶出挙動を示す同重体を識別できるなど有効であることが確認された.しかしながら,救命救急センター(CCMC)でみられる多剤併用薬物中毒症例の試料には,ベンゾジアゼピン系薬物以外の薬物が多く含まれ,これらの高濃度を示す薬物の影響についても見直すことが重要と思われたので,法中毒学的薬物分析に重要と思われる薬物を追加,合計142種類の精密質量データベースとして拡充した.CCMC収容の多剤併用薬物中毒症例の解析に応用し,精密質量を用いたTOF-MS薬物スクリーニングの有用性を検討した.
歯胚および歯原性腫瘍の分子生物学的解析

本研究では歯原性腫瘍の生物学的性状及び歯胚の発育・細胞分化について明らかにすることを目的として分子生物学的解析を行った。1.エナメル上皮腫におけるAmelogenin遺伝子の発現様式は歯牙発生時と異なっており,腫瘍化に伴う性染色体のエピジェネティクスな変化が,Amelogenin遺伝子の制御に影響を及ぼした可能性が示唆された。2.良性および悪性歯原性腫瘍において基底膜の構成成分であるIV型コラーゲンα1α6鎖の局在を免疫組織化学的に検討した結果、良性では歯胚への分化と相関し、悪性ではその局在において特異性を示すことを明らかにした。3.歯胚発生におけるNotch signaling pathwayの機能解析を行うため、マウス臼歯でのNotch1,ligandであるJagged2,ターゲット遺伝子であるHes5,また、Hesによりinhibitされる分化因子Math1のmRNAの発現をin situ hybridizationにより検索した。Jagged2とMath1は歯胚の進んだ段階で、エナメル芽細胞や象牙芽細胞の分化の調整に関わっていると考えられた。Math1は、歯胚発生において細胞分化を誘導するNotch1シグナリングカスケードと密接に関与することが示された。生後段階でのエナメル芽細胞や象牙芽細胞の分化におけるNotch1の一時的な発現は、Notch1がシグナルを通しての細胞分化に特異的で短期間に機能することを示唆していると考えられた。4.良性および悪性歯原性腫瘍におけるヘパラナーゼの発現に加え,ヘパラナーゼが特異的に分解するヘパラン硫酸およびヘパラン硫酸結合性サイトカインであるBMP-4について検討した。ヘパラナーゼは歯原性腫瘍において特異的な発現を示し,ヘパラン硫酸とヘパラン硫酸結合性サイトカインの調節により,その浸潤や細胞の分化に関与する可能性が示唆された。Amelogeninはエナメル質を形成する代表的な基質蛋白であるが,歯原性腫瘍におけるAmelogenin遺伝子発現に関する詳細は不明である。そこでエナメル上皮腫におけるAmelogenin遺伝子発現について,RT-PCR法によりAmelogenin遺伝子発現の検索を行った。エナメル上皮腫全例(19例)でAmelogenin遺伝子の発現が認められた。また,Amelogenin遺伝子の発現は,歯胚発生過程と異なり,女性患者より男性患者で高い傾向が認められた。以上の結果からエナメル上皮腫におけるAmelogenin遺伝子の発現は歯牙発生時と異なっており,腫瘍化に伴う性染色体のエピジェネティクスな変化が,Amelogenin遺伝子の制御に影響を及ぼした可能性が示唆された。歯胚発生段階における,基底膜と形態形成因子,細胞分化との関連を明らかにすることを目的に,マウス歯髄由来MDPC-23培養細胞を用いてin vitoroおよびin vivo条件下で実験を行なった。MDPC-23細胞は培養条件下で恒常的にBMP-4およびCbfa1遺伝子発現が認められたがBMP-2の発現は認められなかった。しかし,高石灰化条件培地(含beta-glycerophosphate)ではBMP-2遺伝子発現が誘導された。また,MDPC-23細胞は脱灰象牙質上での培養条件下で象牙細管様の細胞突起の形成を認めた。実験動物への移植実験ではMDPC-23細胞は移植後4週間で石灰化を示した。以上の結果からMDPC-23細胞は,歯髄細胞の性格を有しており,歯牙形成における遺伝子発現の検索に有用であると考えられた。現在,基底膜様物質存在下(コラーゲン)での細胞分化,遺伝子発現について検索中である。歯原性腫瘍の機能分化に上皮一間葉相互作用が存在し、基底膜が重要な役割を果たすことが示唆されてきた。

そこで今回基底膜の主要な構成成分であるIV型コラーゲンのα1α6鎖に対する抗体を用いて、良性および悪性歯原性腫瘍を免疫組織化学的に検討し、ヒト歯胚との類似性を検討した。ヒト歯胚ではすべての歯原性上皮基底膜部位に一致してα1、α2、α5、α6鎖が認められ、α4鎖は内エナメル上皮のみに認められた。良性歯原性腫瘍では歯胚と類似したα鎖の染色結果が得られた。エナメル上皮腫ではα1、α2、α5、α6鎖が断続的にあるいは連続的に線状の陽性所見を示し、α4鎖は陰性であった。腺様歯原性腫瘍では上皮胞巣内の腺管様構造ではα1、α2、α4、α5、α6鎖が陽性を示し、上皮胞巣周囲の立方形細胞が索状に増殖している部位、および石灰化物周囲の扁平上皮様細胞の基底膜ではα1、α2、α5、α6鎖が陽性を示し、α4鎖は陰性であった。歯原性間葉を伴う腫瘍(歯牙腫、エナメル上皮線維腫)ではα1、α2、α4、α5、α6鎖が陽性であった。一方、悪性歯原性腫瘍においては、エナメル上皮線維肉腫はα1、α2、α5、α6鎖が弱陽性を示し、α4鎖は限局的な陽性反応を示した。悪性エナメル上皮腫ではα5、α6鎖が不連続、線状の陽性所見が観察され、部位により幅の広い線状、顆粒状物質として認められた。α1、α2、α4鎖は陰性であった。原発性骨内癌ではα1、α2鎖は不連続、線状の弱陽性反応を示した。α5、α6鎖はα1、α2鎖と比較し明瞭な陽性を示す傾向がみられ、α4鎖は陰性であった。以上の結果から、歯原性腫瘍基底膜におけるIV型コラーゲンα鎖の局在は良性では歯胚への分化と相関し、悪性ではその局在において特異性を示すことから、他の腫瘍と歯原性腫瘍の鑑別解析に有用な所見と考えられた。Notchは幹細胞の増殖・分化に関与し、多くの臓器の発生における重要な因子の一つである。歯胚においてもその遺伝子発現が認められ、エナメル芽細胞への分化に関与することが報告されている。Notch蛋白は膜受容体であり、ligandと結合することによりNotch signaling pathwayを経て核内のターゲット遺伝子bHLHを活性化するという。今回我々は、歯胚発生におけるNotch signaling pathwayの機能解析を行うため、マウス臼歯でのNotch1,ligandであるJagged2,ターゲット遺伝子であるHes5,また、Hesによりinhibitされる分化因子Math1のmRNAの発現をin situ hybridizationにより検索した。胎生13日では、Notch1は上皮中央部のみに弱い発現を認め、歯原性間葉細胞に接する基底細胞には発現は認められなかった。Hes5も同様であった。Jagged2,Math1の発現は上皮、間葉細胞ともにみられなかった。生後1日では、Notch1は中間層に強く発現しているが、前エナメル芽細胞や前象牙芽細胞には発現は認められなかった。Jagged2とMath1の発現は咬頭部の象牙芽細胞に認められた。
ゼブラフィッシュ遺伝子機能抑制系を用いた新規な分泌性形態形成因子遺伝子の探索

GenBankなどのDNAデータベースにあるヒト/マウス/ゼブラフィッシュの機能不明な遺伝子がコードしていると期待されるアミノ酸配列を無作為に選択し、PSORTなどのアミノ酸配列ソフトを活用し、新規な分泌性因子遺伝子を探索した。さらに、これらの遺伝子の内、homology解析をし、酵素遺伝子である可能性のある遺伝子は除くとともに、ヒト/マウス/ゼブラフィッシュに共通に発現している遺伝子を同定した。上記により同定された遺伝子が実際に発現しているかを確認するため、ヒト/マウス/ゼブラフィッシュcDNAを鋳型にし、PCRで遺伝子を増幅し、その遺伝子の配列を確認するとともにベクターDNAを用いてクローニングした。様々な発達段階にあるマウス/ゼブラフィッシュ胎児における分泌性因子遺伝子の発現をwhole mount in situ hybridizationやsection in situ hybridization法により調べた。その発現様式から、興味深い発現様式を示す遺伝子の絞り込みを進めた。上記の研究で、興味深い発現様式を示す遺伝子の機能を抑制したゼブラフィッシュ胚を作成し、その後の発生過程を顕微鏡下で観察した。これまで、新規な分泌性遺伝子を二つ同定し、それぞれをneucrin, brorin-likeと命名した。いずれの遺伝子も培養細胞を用いた強制発現法により、その翻訳産物の分泌性を確認した。neucrin, brorin-likeのいずれもは脳・眼予定領域に発現していた。neucrin, brorin-like機能抑制ゼブラフィッシュ胚は脳・眼の形成不全が観察された。これまで、新規な分泌性遺伝子を二つ同定し、それぞれをfibin, brorinと命名した。fibinは胸ビレ予定領域と前脳予定領域に発現していた。fibin機能抑制ゼブラフィッシュ胚は胸ビレの欠損と前脳の形成不全が観察された。一方、brorinは脳形成予定領域に特異的に発現していた。brorin機能抑制ゼブラフィッシュ胚は脳の形成不全が観察された。
レーザー照射による金属および半導体の溶融蒸発過程の研究

穴あけ,切断などのレーザ加工では,プラズマや超微粒子が生成するなど,複雑な溶融・蒸発現象を伴う.これらの現象を明らかにするには,原子オーダーで直接観察できないため,実験以外の微視的解析も必要である.一つの試みとして,昨年度は,結晶のレーザ光吸収モデルを提案し,fcc金属を対象として分子動力学シミュレーションを行った.そして,溶融・蒸発時の原子挙動と応力状態,衝撃波の伝播,蒸発粒子の形態と生成過程などを明らかにした.本年度は,Nd: YAGレーザ4次高調波を照射した際の,Si単結晶の溶融・蒸発過程を分子動力学シミュレーションした.また,自由電子による熱伝導を考慮しながら分子動力学計算を進める改良型分子動力学法を提案し,その妥当性を検討した.得られた結論を要約すると,以下のようになる: I. Siの溶融・蒸発について(1)熱衝撃波速度はレーザのパワー密度によらず一定で,fcc金属の場合と同様,材料の弾性波速度に等しい.(2)穴あけ加工では,フルエンスが比較的小さいときは,穴の深さや除去量はフルエンスにほぼ比例するが,フルエンスが大きくなると比例しなくなる.フルエンスが同じ場合は,エネルギー密度が高い方が除去量は多い.(3)加工穴周囲にはうずたかい盛上りが生じる.これは蒸発原子が堆積したものである.(4)加工痕表面は凹凸が激しく,加工表面近傍に空孔などの格子欠陥が顕著になる. II.改良型分子動力学法について(1)改良型分子動力学法で算出した金属の熱伝導率は,文献値とよく一致する.(2)したがって,本方法は従来型分子動力学法より金属の熱伝導現象をよくシミュレートできる.(3)金属のレーザ加工における除去深さや溶融凝固層深さなどは,改良型分子動力学シミュレーションによって推定する方がよい.(4)熱衝撃現象や蒸発形態については,従来型分子動力学シミュレーションでもほぼ妥当な結果が得られる.穴あけ,切断などのレーザ加工では,プラズマや超微粒子が生成するなど,複雑な溶融・蒸発現象を伴う.これらの現象を明らかにするには,原子オーダーで直接観察できないため,実験以外の微視的解析も必要である.一つの試みとして,昨年度は,結晶のレーザ光吸収モデルを提案し,fcc金属を対象として分子動力学シミュレーションを行った.そして,溶融・蒸発時の原子挙動と応力状態,衝撃波の伝播,蒸発粒子の形態と生成過程などを明らかにした.本年度は,Nd: YAGレーザ4次高調波を照射した際の,Si単結晶の溶融・蒸発過程を分子動力学シミュレーションした.また,自由電子による熱伝導を考慮しながら分子動力学計算を進める改良型分子動力学法を提案し,その妥当性を検討した.得られた結論を要約すると,以下のようになる: I. Siの溶融・蒸発について(1)熱衝撃波速度はレーザのパワー密度によらず一定で,fcc金属の場合と同様,材料の弾性波速度に等しい.(2)穴あけ加工では,フルエンスが比較的小さいときは,穴の深さや除去量はフルエンスにほぼ比例するが,フルエンスが大きくなると比例しなくなる.フルエンスが同じ場合は,エネルギー密度が高い方が除去量は多い.(3)加工穴周囲にはうずたかい盛上りが生じる.これは蒸発原子が堆積したものである.(4)加工痕表面は凹凸が激しく,加工表面近傍に空孔などの格子欠陥が顕著になる. II.改良型分子動力学法について(1)改良型分子動力学法で算出した金属の熱伝導率は,文献値とよく一致する.(2)したがって,本方法は従来型分子動力学法より金属の熱伝導現象をよくシミュレートできる.(3)金属のレーザ加工における除去深さや溶融凝固層深さなどは,改良型分子動力学シミュレーションによって推定する方がよい.(4)熱衝撃現象や蒸発形態については,従来型分子動力学シミュレーションでもほぼ妥当な結果が得られる.
フラーレン・GaAsヘテロ構造の結晶成長とその応用

フラーレンC_<60>のMBE法によるエピタキシャル成長およびC_<60>を添加したGaAs、AlGaAsの物性について研究を進めた。C_<60>と基板結晶の格子不整合は大きいが,得られた結晶は極めて良く、C_<60>/GaAsヘテロ界面のRHEED振動観察によって、C_<60>成長初期層が基板表面再構成とC_<60>分子の立体構造で決まることを発見した。低温MEE法を用いてC_<60>-doped GaAsを作製した。C_<60>分子は分解されずに添加され,深い電子トラップとして機能することがわかった。この電子トラップは電界を印加すると電子を放出し,AlGaAs中でも同様に機能することがわかった。有機半導体デバイスは軽量や大面積化が容易などの多くの利点を持ち、さらなる発展が期待されている。しかし、結晶成長技術などのデバイス実現に至る要素技術は、無機半導体と比べ未熟である。本研究の目的は、無機半導体で培われた結晶成長技術、その場観察技術を有機材料に応用し、有機半導体高品質化技術を確立すること、フラーレンC60を用いた新規デバイスの創出をすることである。そこで結晶成長法としてMBE法を用い、基板結晶としてGaAsを使用した。本年はGaAs結晶中にC60分子を添加し、その結晶学的特性と電気的特性について鯖力的に調査した。これまでにGaAs結晶中にC60分子をドーピングすると結晶品質を損なうことなく、電子トラップ準位が形成されることわかつており、今回、Eleotrochemical Capaoitance-Voltage(ECV)測定によって、電子トラップ準位より電子が放出されることがわかった。MBE法によりn型GaAs(001)基板上に、基板温度580°Cにてn型GaAs層を1um成長し、その後基板温度400°Cにて単一分子面のみC60をドーピングし、その後基板温度580°Cにてn型GaAs層を1um成長させた。ECV測定により試料のキャリア濃度の深さ方向分布を求めたところ、表面からの深さ0.5umのキャリア濃度はSi濃度と一致するが、深さ0.6umからキャリア濃度が減少し、深さ1.3umにてキャリア濃度のスパイクが現れた。キャリア濃度が減少する理由として、C60ドーピングによって形成された準位に電子がトラップされたためであり、深さ1.3umにて現れるスパイクは、電界が印加されるとトラップから電子が解放されるためといえる。この現象はC60ドーピングによって電子を蓄積・解放できる準位が形成できることを示しており、今後この現象を使用したデバイス製作を図る。有機半導体薄膜は軽量・大面積化が容易・低コストなどの多くの利点を持ち、発光素子や薄膜トランジスタなどのデバイスに応用され、ますますの発展が期待されている。しかし、結晶成長技術をはじめ微細加工技術などの、デバイス実現に至る各種要素技術は無機半導体と比べ未熟であるといえる。本研究の目的は、無機半導体で培われた結晶成長技術を有機薄膜材料に応用し、フラーレンC60を用いた新規デバイスの創出を行うことである。C60分子内の炭素間の結合は共有性の強い結合であり安定性は極めて高い。このため、C60の結晶成長において、無機材料と同様に扱えるといえる。そこで、結晶成長法として分子線エピタキシー法を用い、基板結晶としてGaAsを使用し、C60結晶とGaAs基板のエピタキシャル関係を明らかにした。本年はBe-GaAs結晶中にC60分子を添加し、その結晶学的特性と電気的特性について精力的に研究活動を行った。結晶学的特性として、低温MEE法にてC60分子をδドープした試料を透過電子顕微鏡にて観察し、C60分子が添加されたGaAs結晶には結晶欠陥が一切存在しないことがわかった。これは無機半導体中に様々なクラスターを無転位で添加できることを示しており、非常に興味深いと言える。P型C60 delta-doped GaAsのElectrochemical CV測定を行ったところ、C60ドーピング層周囲にキャリア濃度のdipが現れ、その後にキャリア濃度のスパイクが確認できた。これは、Si-doped GaAs薄膜中のC60添加によるトラップセンターの挙動と同一であり、C60添加によるトラップセンターはホールに対しても有効であることがわかった。電子に対するトラップセンターとの違いは、トラップセンターからキャリアが放出される電界強度であり、アクセプタ型トラップであることがわかった。本研究の目的は、有機半導体にIII-V族化合物半導体で培われた結晶成長・評価技術を応用することによって、C60結晶を用いた有機半導体結晶のカイネティクスのモデル化、C60添加GaAsを用いた新規メモリの開発を行うことである。最終年度である本年度はC60添加GaAsの電気的特性の評価を中心に展開した。

AlGaAs結晶はAl濃度を変えることでバンドギャップを制御できる。そこで、AlGaAs結晶中にC60分子を添加し、形成される電子トラップの活性化エネルギーを求めたところ、Al濃度が増えると活性化エネルギーも増大し、真空準位からのエネルギー差がC60分子のLUMOレベルと一致することを確認した。つまりこの電子トラップがC60分子由来であり、III-V族化合物半導体中にて量子ドットとして機能していることがわかる。本研究の成果は、国際会議の招待講演にて発表し、国内学会誌と国際論文雑誌、著書として発表した。次に、C60を一様に添加したGaAs薄膜を作製した。この薄膜はX線回折によって結晶品質が良いことがわかり、電気的特性として低温時に光を照射すると電子濃度が減少し、移動度が飛躍的に向上することがわかった。この特異な特性はGaAs吸収端よりも長波長の光を照射しても確認でき、C60電子トラップ由来であるといえる。この特性のモデルとして、光照射下にて、C60電子トラップに電子が励起され、さらにその電子がGaAsの伝導帯に励起され、残留ドナーを補償し、電子の移動度が向上すると考えられ、C60分子が中間レベルとして機能していることを示唆している。有機薄膜の結晶成長として、GaAs結晶上にCuフタロシアニン(CuPc)薄膜を成長させ、As極性面上にはCuPc分子が垂直に配向するが、Ga極性面上にはCuPc分子が水平に配列し、GaAs表面再構成上に、周期的に配列することがわかった。
宿主・がん統合ゲノム解析による早期肺腺発がん機構の解明

以下三つのテーマについて研究を遂行した。テーマA)早期の肺腫瘍増大速度に影響する遺伝子の同定:肺腺腫を経て形成した肺腺がん手術検体のCT画像陰影径データを用い、継時的な腫瘍体積変動をグラフ化し、各例の腫瘍増大速度を算出した。また、摘出標本のKi67染色を行い、増殖細胞の割合を算出した。Ki67染色割合は一般的な肺腺がんよりも低く、ゆっくりとした腫瘍増大を説明するものであった。この結果は、肺腺腫を経て形成した肺腺がんは、一般的な肺腺がんと比べて増殖が遅いことが示唆された。本結果は、腺腫を経て形成した肺腺がんは、一般的な肺腺がんと比べて増殖が遅いことを示すものである。テーマB)早期がん形成を担う変異シグネチャーの同定:上皮内がんとStageI-IIIA肺腺がんの解析の変異signatureの比較解析を行った。その結果、上皮内がんでは、一般肺腺がんでみられた変異シグネチャーが観察されたものの、喫煙に関連したシグネチャーが低頻度であり、非喫煙者肺がんで見られるシグネチャーの割合が高かった。上皮内がんでは、変異数が少ないことから正確な変異シグネチャーの推定が難しい。そのため、全ゲノムシークエンス解析の重要性が示唆された。テーマC)早期がん形成に関わるドライバー遺伝子、併発するがん関連遺伝子の同定:一般肺腺がんと上皮内がんの遺伝子変異の特徴を、解析症例を追加して比較した。その結果、上皮内がんでは、TP53等のがん関連遺伝子の変異割合が低いことが再確認された。これは、過去の上皮内がんの報告と合致するものであり、TP53遺伝子の失活はがん細胞の浸潤能の増大に寄与することが示唆された。一方、ドライバー遺伝子異常としては、EGFR遺伝子の活性化変異が肺発がんに中心的な役割を果たしていることが明らかになった。計画通りに解析が進行しているため。研究計画のとおり、遂行する。テーマA)早期の肺腫瘍増大速度に影響する遺伝子の同定:肺腺腫(GGO)を経て形成した肺腺がん手術検体107例の次世代シークエンサーを用いた50-150遺伝子のターゲットシークエンスやnCounter assayを行い、ドライバー遺伝子およびドライバー遺伝子異常との併発が知られるがん関連遺伝子の変異情報を取得した。当該検体では、FFPE試料から得られるゲノムDNAの質が低い傾向にあり、変異アレル頻度を考慮しながら確定を行った。結果としては、一般肺腺がんよりもEGFRなどのドライバー変異の頻度が低い傾向にあった。また、当該例の血液DNAをNCCバイオバンクより払い出し、肺腺がん感受性遺伝子座の多型の遺伝子型を決定した。今後、リスクとの関連解析を行う予定である。テーマB)早期がん形成を担う変異シグネチャーの同定:肺腺腫から肺腺がんに移行した凍結検体および上皮内がん(CIS)の全エクソームシークエンス解析を行い、体細胞遺伝子変異を検出するとともに、変異signature解析を行った。その結果、上皮内がんでは、遺伝子変異数が少なく(< 1 mutation/Mb)、また、これまでの一般肺腺がんでみられた変異シグネチャーが観察されたが、喫煙に関連したシグネチャーが低頻度であることが明らかになった。テーマC)早期がん形成に関わるドライバー遺伝子、併発するがん関連遺伝子の同定:一般肺腺がんと上皮内がんの遺伝子変異の特徴を比較した。その結果、上皮内がんでは、遺伝子変異数が少なく、TP53等の遺伝子変異が低頻度であることを明らかにした。一方、ドライバー遺伝子異常は、全体の75%にみられ、当該遺伝子異常が肺発がんに中心的な役割を果たしていることを再確認した。当初の計画通り、進捗しているため。

これは、過去の上皮内がんの報告と合致するものであり、TP53遺伝子の失活はがん細胞の浸潤能の増大に寄与することが示唆された。一方、ドライバー遺伝子異常としては、EGFR遺伝子の活性化変異が肺発がんに中心的な役割を果たしていることが明らかになった。計画通りに解析が進行しているため。研究計画のとおり、遂行する。