hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
透析患者におけるシュウ酸代謝の検討

シュウ酸は尿毒症物質であり、透析患者で高シュウ酸血症が長期持続すると臓器や組織にシュウ酸カルシウムが沈着する。透析患者は、動脈硬化も早く、高血圧、心疾患、脳血管障害などの危険も高い。高シュウ酸血症は血管の内皮傷害を惹起し、動脈硬化の原因となる。透析患者は尿毒症のため過酸化状態であり、ビタミンC投与は過酸化状態を改善し、発癌などの悪循環を断ち切るなど多大の恩恵をもたらす。しかし、ビタミンCを大量投与すると透析患者の血中シュウ酸値は高くなり、オキサローシスとなる。1腎不全患者の血中シュウ酸をキャピラリー電気泳動で初めて測定し、約6年が経過する。約452名の腎不全患者を対象に血清中のシュウ酸前駆物質を測定し、血清シュウ酸とアスコルビン酸とは関連性が強く、ビタミンC投与が高シュウ酸血症の原因となることを示した。エリスロポエチン抵抗性の腎性貧血の際にビタミンCにより、鉄の利用度を増し、貧血を改善する。その際にビタミンC投与により、エリスロポエチン投与量を減少することを発見し、その最適の投与量は100mg/日と考えている。組織の石灰化に関しては、リン酸カルシウムの沈着がほとんどであるが、シュウ酸濃度が100μM以上であると不安定過飽和状態となり、シュウ酸カルシウム沈着の危険が高まる。常にこの値を超えるのは原発性過シュウ酸尿症の場合である。副甲状腺機能亢進症症例における腎性骨症に関して、経時的な組織の変化を報告したが、副甲状腺全摘前後の骨代謝パラメータとシュウ酸とは有意な相関は見られなかった。2グリオキシル酸の解毒機構として、AGT(アラニングリオキシル酸アミノ転移酵素)が肝細胞のペルオキシゾームに局在し、グリコール酸より代謝されるグリオキシル酸をペルオキシゾームにおいて解毒する。また、肝細胞の細胞質と他の臓器にもグリオキシル酸還元酵素が存在し、シュウ酸産生を最小限に抑える。AGTの補酵素であるビタミンB6欠乏もオキサローシスの原因であり、透析患者では水溶性ビタミンが欠乏しがちである。ビタミンB6欠乏ラットで、グリオキシル酸、グリコール酸、ハイドロキシプロリン、ハイドロキシピルビン酸、キシリトールなどがシュウ酸産生を増加することを示した。これらの前駆物質の摂取を透析患者では制限する必要がある。この食事制限はオキサローシスの治療上非常に重要な示唆である。3キャピラリー電気泳動に質量分析器を装着して、シュウ酸関連物質を測定し、測定感度を数倍上げることが可能となり、血清シュウ酸とグリコール酸の測定法を改良することが出来、また、従来の測定がそれぞれ正しいピークを測定していたことを確認できた。これは大きな収穫であり、シュウ酸に関しては更に数十倍の感度で測定できる方法に辿り着きそうである。

3キャピラリー電気泳動に質量分析器を装着して、シュウ酸関連物質を測定し、測定感度を数倍上げることが可能となり、血清シュウ酸とグリコール酸の測定法を改良することが出来、また、従来の測定がそれぞれ正しいピークを測定していたことを確認できた。これは大きな収穫であり、シュウ酸に関しては更に数十倍の感度で測定できる方法に辿り着きそうである。シュウ酸は尿毒症物質であり、臓器や血管にシュウ酸カルシウムとして沈着するため、透析患者のモニターが必須である。測定が困難で、十分な研究がなされていない。腎不全患者で全身にシュウ酸結晶が沈着する場合、原発性か続発性オキサローシスかの鑑別のために、血清シュウ酸とグリコール酸の測定法を確立した。腎不全での高シュウ酸血症、その予防、その組織沈着に関して検討している。1腎不全患者の血中シュウ酸をキャピラリー電気泳動で初めて測定し、約5年が経過する。約452名の腎不全患者を対象とし、血清中のシュウ酸前駆物質との関係を検討した。血清シュウ酸とアスコルビン酸とは関連性が強く、ビタミンC投与患者で高シュウ酸血症が多かった。エリスロポエチン抵抗性の腎性貧血の際にビタミンC投与により、鉄の利用度が増し、貧血が改善する。ビタミンCにより、エリスロポエチン投与量を減少させうることを示した。しかし、最適の投与量と方法を決定するに至っていない。組織の石灰化に関しては、リン酸カルシウムの沈着の際の、リンとカルシウム積と同様に、血中飽和度をその組織沈着の指標として検討した。その飽和度と血清シュウ酸濃度とは関連しており、シュウ酸濃度が100μM以上であると不安定過飽和状態となり、シュウ酸カルシウム沈着の可能性が高まる。種々の臓器(血管、腎、骨髄など)のシュウ酸カルシウムの濃度はこれからの研究課題である。副甲状腺機能亢進症症例における腎性骨症に関して、経時的な組織の変化を報告している。副甲状腺全摘前後の骨代謝パラメータとシュウ酸とは有意な相関は見られていない。2キャピラリー電気泳動に質量分析器を装着して、シュウ酸関連物質を測定し始めているが、測定感度を10倍以上上げるレベルにまだ到達していないが、グリオキシル酸はかなり良好に測定でき、これからのメタボローム解析研究に期待が持てる。腎不全患者においてシュウ酸は尿毒症物質であり、臓器および血管にシュウ酸カルシウムとして沈着し、重篤な病態を呈する。全身、特に骨髄にシュウ酸カルシウム結晶が沈着する場合、原発性オキサローシスか続発性かの判断が困難であり、そのために血中シュウ酸とグリコール酸の測定法を確立した。腎不全で血中シュウ酸が何故上昇するか、予防は出来ないか、組織の石灰化に関与するかなどの疑問を解決するために、シュウ酸の前駆物質であるグリコール酸とビタミンCなどとシュウ酸の関係を透析患者において検討した。シュウ酸の前駆物質(グリコール酸、グリオキシル酸、ハイドロキシピルビン酸、ハイドロキシプロリン、アスコルビン酸など)が内因性に代謝され、シュウ酸が過剰産生される。このシュウ酸産生を増幅する病態として、ビタミンB6欠乏(グリオキシル酸解毒酵素AGTとGRHPRの機能不全)があり、腎不全患者は水溶性ビタミン不足で、特にビタミンC(65%以上)とB6は欠乏状態であった。質量分析計を備えたキャピラリー電気泳動装置にて測定し、シュウ酸、グリコール酸、グリオキシル酸などに関しては、0.51μmol/lの測定限界が得られ、再現性も良好で、安定した測定ができた。腎不全患者452名において、血清シュウ酸と相関するのは、血清クレアチニン、アスコルビン酸、グリコール酸などであった。
神経細胞の極性輸送を制御するキナーゼLRK-1の解析

LRK-1はシナプス小胞蛋白質SNB-1(VAMP2の線虫ホモログ)やSNG-1(シナプトギリンの線虫ホモログ)のシナプス特異的な局在を制御する新規キナーゼである。LRK-1の神経細胞における細胞内局在を調べたところ、主にゴルジ体に局在していることが判明した。このことからlrk-1はゴルジ体で機能すると思われる。それをさらに確かめるため、レーザー共焦点顕微鏡を用いたライブイメージング解析を行った。その結果、unc-104変異で通常のシナプス小胞輸送を止めると、細胞体から樹状突起先端へのSNB-1の輸送は消失した。しかし、さらにそこにlrk-1変異を導入すると、細胞体から樹状突起への輸送が観察されるようになった。このことから、LRK-1は神経細胞のゴルジ体においてSNB-1やSNG-1の選別輸送を制御する因子として機能することが示唆された。また、LRK-1と同様なシナプス小胞蛋白質の局在異常の表現型を示す変異体の探索を行った。その結果、シャペロン調節蛋白質BAG-2の線虫ホモログUNC-23の変異体が、lrk-1変異体と同様の局在異常の表現型を示すことを新たに見いだした。さらに、unc-23変異体で見られる表現型はユビキチンリガーゼCHIPの線虫ホモログCHN-1の変異により抑圧された。従ってUNC-23はCHN-1を負に制御することにより、LRK-1と同様にシナプス小胞蛋白質の局在を制御していると考えられる。LRK-1はシナプス小胞蛋白質SNB-1(VAMP2の線虫ホモロ=グ)やSNG-1(シナプトギリンの線虫ホモログ)のシナプス特異的な局在を制御する新規キナーゼである。これまでの解析から、LRK-1は神経細胞の細胞体にあるゴルジ体で機能することにより、それらの蛋白質の局在を制御する可能性が示されていた。そこで、、LRK-1の神経細胞における細胞内局在を調べたととろ、ジナプス領域に局在するSAD-1やSYD-2とは異なり、主にゴルジ体に局在していることが判明した。1rk-1がゴルジ体で機能するというこれまでの見解と合致するものである.それをさらに確かめるため、レーザー共焦点顕微鏡を用いたライブイメージング解析を行った。しかし、さらにそこ1rk-1変異を導入すると、細胞体から樹状突起への輸送が観察されるようになった。最近、線虫のプロテインキナーゼSAD-1およびシナプス領域でのスノキャプォールド蛋白質のひとつであるSYD-2も、1rk-1変異体と同様にシナプス小胞蛋白質の局在を制御することが報告された。そこで、これらの因子とLRK-1との関係を遺伝学的に検証したところ、LRK-1はSAD-1やSYD-2とは異なる別の経路で機能することが示唆された。以上のことから、LRK-1は神経細胞のゴルジ体においてSNB-1やSNG-1の選別輸送を制御する因子として機能すると考えられるLRK-1はシナプス小胞蛋白質SNB-1(VAMP2の線虫ホモログ)やSNG-1(シナプトギリンの線虫ホモログ)のシナプス特異的な局在を制御する新規キナーゼである。しかし、LRK-1の周辺で機能する因子についてはまだよくわかっていない。そこで今回、LRK-1と同様なシナプス小胞蛋白質の局在異常の表現型を示す変異体の探索を行った。その結果、シャペロン調節蛋白質BAG-2の線虫ホモログUNC-23の変異体が、lrk-

1変異体と同様の局在異常の表現型を示すことを新たに見いだした。これまでの解析から、lrk-1変異体でみられる表現型は、クラスリン結合蛋白質AP1の線虫ホモログUNC-101の変異によって抑圧されることが分かっている。unc-23変異体でもunc-101変異によって同様な抑圧がみられたことから、UNC-23はLRK-1と同様なシステムの異常によりシナプス小胞蛋白質の局在異常を引き起こすと考えられる。さらに、unc-23変異体で見られる表現型はユビキチンリガーゼCHIPの線虫ホモログCHN-1の変異により抑圧された。一方、lrk-1変異はchn-1変異では抑圧されなかった。これまでの研究では、哺乳動物BAG-2はCHIPのユビキチンリガーゼ活性を負に制御することが示されている。従って、線虫においてもUNC-23がCHN-1を負に制御することにより、おそらくLRK-1を介してシナプス小胞蛋白質の局在を制御していると考えられる。
ソルボサーマル法による新規超伝導体の創製

コインターカレーションとは、金属と有機分子を、層状物質の層間に同時にインターカレート(共挿入)する手法である。このコインターカレーションで用いられる有機分子はアンモニアであったが、我々は直鎖系有機分子を挿入することに成功した。これにより、層間長(次元性)とキャリア濃度を同時に制御できることから、新規超伝導体合成手法として有望と考えて実験を行っている。本研究は、この手法をFeSeやPdX2 (X = Se, Te)の多くの層状物質に施し、新規超伝導体を合成し、種々の特性を測定するものであるコインターカレーションとは、金属と有機分子を、層状物質の層間に同時にインターカレート(共挿入)する手法である。本研究は、この手法をFeSeやPdX2 (X = Se, Te)の多くの層状物質に施し、新規超伝導体を合成し、種々の特性を測定するものである
心臓旋回性興奮停止のための通電刺激条件の解明および臨床応用に向けた検討

本研究では,効果的な除細動治療の実現に向けて,心臓旋回性興奮(SW)停止のための効果的な点通電刺激条件を明らかにする事を目的として,光学マッピングを用いた動物実験と,コンピュータシミュレーション実験を行い,点通電刺激がSWに与える影響を定量的に解析した.昨年までに、通電刺激の影響を評価するための客観的なSW中心の挙動解析手法として、位相分散解析を用いる新たな解析手法を提案した.さらに本年度は,以下の事を行った。■点通電刺激実験:ウサギ摘出心標本を用いて,誘発したSWに対し様々な位置,タイミングで点通電刺激を与える動物実験を行った.位相分散解析によるSW中心の挙動解析の結果,点通電刺激によりSWの興奮後面に複数のSW中心が発生し,それらが興奮後面に沿って移動し衝突する事による,SW中心位置の移動原理が明らかとなった.またこのようなメカニズムから,SWシフトを誘発する上で,SW興奮後面の通過直後への通電刺激が最も効果的である事が示唆された.■心臓電気シミュレーションモデル:効果的な点通電刺激パターンを検討するため,心臓電気シミュレーションモデルを構築した.SWに対する効果的な通電刺激パターンの仮説として,線状の連続点通電刺激プロトコルを提案し,心臓電気生理バイドメインモデル上で誘発したSWに対する点通電刺激実験によって有効性を検証した.SW中心が興奮後面に沿って解剖学的ブロックラインまで移動し,SWの停止に成功した.以上の検討結果から,本研究を通じて,SW中心から興奮後面が解剖学的ブロックライン方向に伸びているタイミングでの,興奮後面への選択的な点通電刺激によって,SW中心を興奮後面に沿って解剖学的ブロックラインまで移動させ,SWを効果的に停止させる点通電刺激プロトコルの可能性を示した.28年度が最終年度であるため、記入しない。28年度が最終年度であるため、記入しない。本研究の目的は、点通電刺激による心臓SW(旋回性興奮)制御および除細動の実現であり、(a)SW制御のための通電刺激条件の解明(b) SW制御によるSW停止プロトコルの検討(c)低侵襲なSW解析手法の検討を目標とする。本年度、(a)SW制御のための通電刺激条件の解明にむけ、定量的SW解析手法として、位相分散解析と名付けた新たな手法を考案した。SWの生成・持続・消滅を同手法によって解析した結果をまとめ、国際論文誌にアクセプトされた。開発した位相分散解析を用いて、通電刺激がSWを停止に導くメカニズムを検証した。その結果、SWと通電刺激由来の興奮波の相互作用が位相分散解析によって解析可能である可能性が示唆され、現在投稿準備中である。また本年度は、(b) SW制御によるSW停止プロトコルの検討最適な通電刺激シーケンスの探索にむけて、通電刺激シミュレーション・モデルを構築した。シミュレーション・モデル上で異なる方向から通電刺激を加えてSWを誘発し、心臓表面に配置した仮想的な点電極から点通電刺激を印加するシミュレーションを実装した。さらに、通電刺激の効果を前述の位相分散で評価し、機会学習により通電刺激プロトコルを最適化するため、強化学習エージェントプログラムとシミュレーションプログラムとの接続が完了した。(c)低侵襲なSW解析手法の検討に向けては、心房細動のカテーテル治療においても実際に用いられるマッピング用カテーテル電極を用いて、光学マッピングと多点電極計測の同時マッピングシステムを開発した。スパイラルカテーテルの電極配置を模した光学・電極同時マッピング用電極を作成した。光学マッピングによるSW制御実験のためのリアルタイム画像処理ソフトウェアの実装を行った。GPUによる並列演算を用いて、先述の位相分散解析を500fpsで行うフィードバック刺激のための画像処理速度を達成した。旋回興奮の新たな解析法である位相分散解析を考案したことにより、通電刺激によるSW停止のメカニズムの解明において大きな進展があった。さらに、通電刺激のコンピュータシミュレーションモデルを構築したことにより、さまざまな通電刺激の効果をシミュレーションモデル上で検討するための環境が整備された。これらにより、メカニズムに基づいた最適通電刺激と、探索的な最適通電刺激の両面で、SW制御プロトコルの検討環境が整った。さらに、GPUを用いたリアルタイムのフィードバック通電刺激システム構築、また電極・カメラの同時マッピングシステムの構築もほぼ完了しており、SW制御を実験的に実証するためのシステム構築が整備された。これらの進捗状況はおおむね計画どおりである。

さらに、通電刺激の効果を前述の位相分散で評価し、機会学習により通電刺激プロトコルを最適化するため、強化学習エージェントプログラムとシミュレーションプログラムとの接続が完了した。(c)低侵襲なSW解析手法の検討に向けては、心房細動のカテーテル治療においても実際に用いられるマッピング用カテーテル電極を用いて、光学マッピングと多点電極計測の同時マッピングシステムを開発した。スパイラルカテーテルの電極配置を模した光学・電極同時マッピング用電極を作成した。光学マッピングによるSW制御実験のためのリアルタイム画像処理ソフトウェアの実装を行った。GPUによる並列演算を用いて、先述の位相分散解析を500fpsで行うフィードバック刺激のための画像処理速度を達成した。旋回興奮の新たな解析法である位相分散解析を考案したことにより、通電刺激によるSW停止のメカニズムの解明において大きな進展があった。さらに、通電刺激のコンピュータシミュレーションモデルを構築したことにより、さまざまな通電刺激の効果をシミュレーションモデル上で検討するための環境が整備された。これらにより、メカニズムに基づいた最適通電刺激と、探索的な最適通電刺激の両面で、SW制御プロトコルの検討環境が整った。さらに、GPUを用いたリアルタイムのフィードバック通電刺激システム構築、また電極・カメラの同時マッピングシステムの構築もほぼ完了しており、SW制御を実験的に実証するためのシステム構築が整備された。これらの進捗状況はおおむね計画どおりである。本研究では,効果的な除細動治療の実現に向けて,心臓旋回性興奮(SW)停止のための効果的な点通電刺激条件を明らかにする事を目的として,光学マッピングを用いた動物実験と,コンピュータシミュレーション実験を行い,点通電刺激がSWに与える影響を定量的に解析した.昨年までに、通電刺激の影響を評価するための客観的なSW中心の挙動解析手法として、位相分散解析を用いる新たな解析手法を提案した.さらに本年度は,以下の事を行った。■点通電刺激実験:ウサギ摘出心標本を用いて,誘発したSWに対し様々な位置,タイミングで点通電刺激を与える動物実験を行った.位相分散解析によるSW中心の挙動解析の結果,点通電刺激によりSWの興奮後面に複数のSW中心が発生し,それらが興奮後面に沿って移動し衝突する事による,SW中心位置の移動原理が明らかとなった.またこのようなメカニズムから,SWシフトを誘発する上で,SW興奮後面の通過直後への通電刺激が最も効果的である事が示唆された.■心臓電気シミュレーションモデル:効果的な点通電刺激パターンを検討するため,心臓電気シミュレーションモデルを構築した.SWに対する効果的な通電刺激パターンの仮説として,線状の連続点通電刺激プロトコルを提案し,心臓電気生理バイドメインモデル上で誘発したSWに対する点通電刺激実験によって有効性を検証した.
神経成長因子によって発現誘導される転写活性化因子TIS11の機能的役割

TIS11遺伝子の翻訳産物であるTIS11蛋白質は特異なZn^<2+>フィンガー構造を有しており,申請者はTIS11蛋白質の生理機能について解析を進め,TIS11の一次構造上に核内移行シグナル領域ならびに核外移行シグナル領域を同定し,TIS11が核-細胞質間をシャトルしていること,また,TIS11が核内へ移行して基本転写活性を増大させる転写活性化因子として機能すること等を報告している.また,海外の研究グループは,TIS11がTNF-αやIL-3などのmRNAの3'側の非翻訳領域に存在するAU-richエレメントに結合し,mRNAを不安定化させる因子であることを報告している.したがって,TIS11は多機能性Zn^<2+>フィンガー蛋白質であることが想定される.最近,申請者はCOS-7細胞にTIS11を持続的かつ過剰に発現させると,アポトーシスが起こることを見出しており,TIS11が細胞を死滅させる「負の調節因子」として機能することを明らかにした.多くの癌で高頻度に変異が認められる癌抑制遺伝子p53は,転写因子として機能し,いくつかの標的遺伝子ゐ発現を制御して,その生理機能を発揮する.その中でも,アポトーシス誘導活性は癌化および癌細胞の進展の抑制に関わっていると考えられており,p53によって発現誘導されるアポトーシス制御遺伝子の解析は極めて重要な研究課題である.ごく最近,申請者は,細胞にp53依存性のアポトーシスを引き起こすと,TIS11が発現誘導されることを見出しており,TIS11がp53によるアポトーシスの誘導に関与している可能性を提唱した.これまでに神経成長因子(NGF)によって誘導される初期応答遺伝子として転写因子やサイトカイン類などをコードする遺伝子が報告されているが,申請者らはホルボールエステル(TPA)で誘導されることが知られているTIS(TPA-Induced Sequences)遺伝子群の一つであるTIS11もNGF刺激時の初期応答遺伝子の一つであることを報告している.さらに,申請者は,TIS11遺伝子の翻訳産物であるTIS11蛋白質の機能解析についても研究を進め,ごく最近,TIS11蛋白質が基本転写活性を増大させる転写促進因子であることを報告している.また,TIS11が核と細胞質間をシャトルしていることも見出しており,TIS11の一次構造にて核内移行および核外移行に必要となるアミノ酸領域を同定している.この研究過程で,熱ストレスを与えた細胞の細胞質において,TIS11が顆粒状に分布することを発見したので,本年度は,ストレス条件下におけるTIS11の細胞内局在の解析を試みた.これまでに細胞に熱,酸化,高浸透圧,UV等のストレスを与えると,ストレス顆粒(stress granule:SG)と呼ばれる凝集体が細胞質に形成されることが報告されており,このSGはRNA結合蛋白質(TIA-1,TIAR,HuR),リボゾーム,mRNAなどから構成されていることが明らかにされている.SGの大きさと形状がTIS11陽性の凝集体とよく似ていたことから,TIS11がSGに局在して顆粒状に分布した可能性が考えられた.そこで、SGの構成分子であるTIA-1の局在を指標にして,熱ストレス条件下におけるTIS11の細胞内局在について解析を行ったところ,熱ストレス条件下においてTIS11はSGに局在することが判明した.TIS11遺伝子は神経栄養因子によって誘導される初期応答遺伝子として同定されており,その翻訳産物であるTIS11蛋白質は,Cys-Cys-Cys-His型Zn^<2+>フィンガー構造を有している.最近,私共は,TIS11蛋白質が,その一次構造内に存在する核内移行シグナルおよび核外移行シグナルを介して核-細胞質間をシャトルすることを報告した.この研究の過程にて,ストレス条件下においてTIS11が細胞質に顆粒状に分布することを見出したので,今回,熱ストレス条件下におけるTIS11の細胞内局在について検討した.その結果,細胞に対して熱や酸化などのストレスを与えると,ストレス顆粒(stress granule : SG)と呼ばれる凝集体が細胞質に形成されることが報告されており,TIS11は熱ストレス条件下においてSGに局在することが判明した.また,TIS11のアミノ酸配列をN末端領域(1-101),Zn^<2+>フィンガードメインを含む中央領域(76-189),C末端領域(176-320)の3つの領域に分け,それぞれの領域のSGへの移行を解析したところ,Zn^<2+>フィンガードメインを含む中央領域においてSG移行活性が認められた.さらに,Zn^<2+>フィンガードメインにおいてZn^<2+>とキレートを形成するCys残基をAlaに置換した変異体はSGへは移行しなかった.以上のことから,TIS11がSGへ移行するためには,Zn^<2+>フィンガードメインにおいてZn^<2+>とのキレート配位が必要であることが示唆された.TIS11遺伝子の翻訳産物であるTIS11蛋白質は特異なZn^<2+>フィンガー構造を有しており,申請者はTIS11蛋白質の生理機能について解析を進め,TIS11の一次構造上に核内移行シグナル領域ならびに核外移行シグナル領域を同定し,TIS11が核-細胞質間をシャトルしていること,また,TIS11が核内へ移行して基本転写活性を増大させる転写活性化因子として機能すること等を報告している.

また,海外の研究グループは,TIS11がTNF-αやIL-3などのmRNAの3'側の非翻訳領域に存在するAU-richエレメントに結合し,mRNAを不安定化させる因子であることを報告している.したがって,TIS11は多機能性Zn^<2+>フィンガー蛋白質であることが想定される.最近,申請者はCOS-7細胞にTIS11を持続的かつ過剰に発現させると,アポトーシスが起こることを見出しており,TIS11が細胞を死滅させる「負の調節因子」として機能することを明らかにした.多くの癌で高頻度に変異が認められる癌抑制遺伝子p53は,転写因子として機能し,いくつかの標的遺伝子ゐ発現を制御して,その生理機能を発揮する.その中でも,アポトーシス誘導活性は癌化および癌細胞の進展の抑制に関わっていると考えられており,p53によって発現誘導されるアポトーシス制御遺伝子の解析は極めて重要な研究課題である.ごく最近,申請者は,細胞にp53依存性のアポトーシスを引き起こすと,TIS11が発現誘導されることを見出しており,TIS11がp53によるアポトーシスの誘導に関与している可能性を提唱した.
転写調節因子およびプロモーター構造に特異的な転写開始機構

RNAポリメラーゼII(RNAP II)により転写される遺伝子の転写調節は、基本転写因子(TFIID,TFIIB,TFIIE,TFIIFとTFIIH)、転写調節因子、それらの間を仲介する仲介因子(メディエーター)の相互作用により制御されている。転写開始から伸長への移行過程で、RNAPIIのCTD(carboxy-terminal domain)はTFIIHのCTDキナーゼ(Kin28タンパク)によりリン酸化される。最近酵母において、いくつかの遺伝子の転写には、TFIIE、Kin28およびCTDが必要ないことが示されている。本研究では、このようなTFIIEとCTD/Kin28に対して非依存的な遺伝子が、どのように転写されるかについて検討した。CTD/Kin28は、heat shock遺伝子およびCUP1(銅メタロチオネイン)遺伝子の転写活性化には必要ない。TFIIEはHsf1(heat shock factor)によるheat shock遺伝子の転写活性化には必須であったが、銅によるCUP1の活性化には不要であった。CUP1の転写には、Hsf1とAce1(銅による活性化因子)の2つが関与しているが、TFIIE非依存的になるのは、両方の活性化因子が存在する時に限られた。つまり、CTD/Kin28非依存的なHsf1による転写活性化において、TFIIEはCTDのリン酸化以外の過程に必須であり、このTFIIE要求性もAce1により回避されると考えられる(BBRC,261:734-739)。heat shock遺伝子のKin28非依存的な転写活性化の機構について検討した結果、Hsf1のC-末端付近にある転写活性化ドメインが、非依存的な転写を担っていることが明らかになった。また、heat shock遺伝子とCUP1遺伝子の転写活性化に必要な仲介因子を検索した結果、メディエーターの構成タンパクであるGa111,Med2,Pgd1およびSin4が、仲介因子として機能していることが示唆された(論文準備中)。今後、このメディエーターを介したTFIIE/Kin28非依存的な転写開始複合体形成の機構と、転写の開始から伸長反応への移行制御について、さらに検討が必要である。
肝癌幹細胞発生に関わるゲノム異常の網羅的解析

肝細胞癌の再発、転移など、難治性に関わる重要な細胞集団として癌幹細胞が知られている。本研究ではEpCAM陽性癌幹細胞における遺伝子変異を全エクソンレベルで網羅的に解析した。EpCAM陽性癌幹細胞を有する肝癌では癌抑制遺伝子であるTP53の変異が認められ、さらに個体特異的にARIDやCDKNなど癌の未分化性、細胞周期に関わる遺伝子に変異が認められ、肝癌の難治性を克服する上で重要な分子標的と考えられた。肝細胞癌の細胞起源、発癌の鍵となる遺伝子異常の同定ならびに進行肝細胞癌に対する新規治療法開発を目指し、本研究では肝硬変組織における肝前駆細胞と肝細胞ならびに肝細胞癌における癌幹細胞を分離、次世代シークエンサーを用いた遺伝子異常の解析およびマイクロアレイを用いた転写制御異常の解析を網羅的に行うことを目的としている。本年度においては、昨年度にMACSにより分離精製した肝細胞癌における癌幹細胞および非癌幹細胞からDNA, RNAを抽出しクオリティを確認した。また、非癌部の肝硬変組織からDNA, RNAを、末梢血単核球からはDNAを抽出しgermline由来のDNAとした。肝癌2症例につきコラゲナーゼ処理を行い抗EpCAM抗体、抗CD133抗体を用いて分離、5 microgramのDNA、RNAが得られreal-time RT-PCR法を用いて分離は十分であると評価した。また、癌幹細胞の高い腫瘍形成能力の違いはNOD/SCIDマウス皮下移植モデルで確認した。そこでIllumina HiSeq2000およびAgilent Sure Select Target Enrichment Systemを用いてWhole exome解析を行い、各サンプルで60ー80程度のframeshift mutation、missense/nonsense mutationを同定した。その中にはTP53やARID1A/2のようなすでに報告された遺伝子変異が含まれていたが、未知の遺伝子変異も多く含まれており、今後の機能解析の結果により癌幹細胞特異的な治療法確立への貢献が期待された。これまでにMACSにより分離精製した肝細胞癌における癌幹細胞および非癌幹細胞からDNAを抽出しクオリティを確認、非癌部の肝硬変組織、末梢血単核球からはDNAを抽出しIllumina HiSeq2000およびAgilent Sure Select Target Enrichment Systemを用いてWholeexome解析を行った。昨年度までに各サンプルで60ー80程度のframeshift mutation、missense/nonsense mutationを同定、その中にはTP53やARID1A/2のようなすでに報告された遺伝子変異が含まれていたが、未知の遺伝子変異も多く含まれていた。最終年度においては、EpCAM陽性肝癌細胞で特異的にフレームシフト変異を起こしているPCDH18について解析を行い、肝癌60例中4例で変異が生じていることを確認した。また、興味深いことに肝癌培養細胞株においてはEpCAM陽性肝癌細胞で発現低下が認められた。本研究により肝癌幹細胞においては癌幹細胞特異的な遺伝子変異が生じ、機能消失が癌幹細胞形質に影響を与えている可能性が示され、今後の癌幹細胞特異的な治療法確立への貢献が期待された。本年度においては、肝細胞癌における癌肝細胞および肝硬変組織における幹前駆細胞の分離をMACSにより行う方法の確立のため、ヒト肝癌切除標本を用いて癌部、非癌部のコラゲナーゼ処理後単一浮遊細胞液を作製、MACSによる分離精製の純度をFACS及びreal-time RT-PCR法を用いて評価を行った。さらに、MACSによる分離が困難な場合に備えて、免疫染色とLaser Capture Microdisectionを組み合わせて幹前駆細胞分画と肝細胞分画、癌幹細胞と非癌幹細胞の分離し、得られたサンプルのDNA、RNAのクオリティにつき評価を行った。2症例につきコラゲナーゼ処理を行い抗EpCAM抗体、抗CD133抗体を用いて解析を行ったところ、癌部についてはMACSにより5 microgramのDNA、RNAが得られ解析が可能と考えられたが、非癌部についてはEpCAM陽性もしくはCD133陽性細胞は2X104程度しか得られず、次世代シークエンスに十分なサンプル量は得られなかった。

一方、Laser Capture Microdisectionを用いた検討ではEpCAM陽性、陰性細胞の分離は可能であったがCD133による免疫染色はHuH7を用いた陽性コントロールが動かず、得られたサンプル量も500 nanogram程度と少量であり、RNAのクオリティもマイクロアレイ解析には不十分であった。本研究ではヒト肝癌幹細胞および非癌部における肝幹細胞、肝細胞の遺伝子異常を解析、肝癌幹細胞の細胞起源と遺伝子異常の蓄積過程を推定し、さらに同定された癌幹細胞における遺伝子異常、転写制御異常が癌細胞形質に及ぼす影響を明らかにすることを目的としている。この目的を達成するために、本年度は肝細胞癌患者の末梢血単核球,背景肝組織における幹細胞および肝細胞,肝細胞癌組織における癌幹細胞を分離精製した後にDNA, RNAを抽出、DNAについては全遺伝子のexon領域における遺伝子変異や欠失挿入を次世代シークエンサーで解析、RNAについてはマイクロアレイによる遺伝子発現解析を行い、ゲノムにおける遺伝子異常の頻度および転写制御異常を肝癌幹細胞と非癌幹細胞で比較した。本年度の次世代シークエンスの結果から癌幹細胞と非癌幹細胞ともに多くの共通した遺伝子変異が認められることを同定、当初の計画通りに癌における遺伝子変異を網羅的に解析することに100%成功した。さらに、一部の変異は癌幹細胞特異的な変異である可能性が示唆された。次年度には同定された癌幹細胞特異的な遺伝子変異のvalidationを多数例で行う予定であり、本年度に予定していた検討項目については100%達成できたものと考える。この目的を達成するために、本年度は肝細胞癌患者の末梢血単核球,背景肝組織における幹細胞および肝細胞,肝細胞癌組織における癌幹細胞を分離精製した後にDNA, RNAを抽出、DNAについては全遺伝子のexon領域における遺伝子変異や欠失挿入を次世代シークエンサーで解析、RNAについてはマイクロアレイによる遺伝子発現解析を行い、ゲノムにおける遺伝子異常の頻度および転写制御異常を肝幹細胞と肝細胞、肝癌幹細胞で比較する予定であった。しかしながら本年度の研究から、非癌部の肝幹細胞と肝細胞を現在有している技術であるコラゲナーゼ処理+MACS分離システム、もしくは免疫染色+Laser CaptureMicrodisectionを用いて高い純度でかつ解析に十分なサンプル量を得るのは困難であると判断した。一方癌部における癌幹細胞と非癌幹細胞については純度90%で約5 microgramのサンプルを2例について得ており、末梢血のゲノムも併せて次世代シークエンスを用いて比較解析は十分可能と考えられる。次年度の早期にこれらのサンプルの次世代シークエンスおよびマイクロアレイ解析を終了することは可能であり、本年度に予定していた検討項目については約80%程度達成できたものと考える。
「伝統生活文化」を中核とした総合的学習の構想と展開

本研究の目的は、子どもの社会性や人間性を育むために、「伝統生活文化」を中心教材に据えたカリキュラムの在り方を構想し、実践することである。本研究の成果は、以下のとおりである。1.戦後教育における「伝統生活文化」学習の位置・役割・意義を明確にした。取り上げた内容は、(1)民俗学の成果の活用と生活文化学習(成城学園初等学校の社会科プラン、柳田國男・和歌森太郎の社会科教育論)、(2)中核教材による総合的学習論(富士山学習と琵琶湖学習)、(3)秋田の「ふるさと教育」である。2.上記の「民俗学の生活文化」「中核教材」「ふるさと教育」の視点から、「荒川流域の伝統生活文化学習」の教材を開発した。そのテーマは、(1)荒川水系の新河岸川の舟運・水運、(2)伝統漁業と農業(川魚料理とわさび栽培)、(3)治水と水防の知恵(水害・洪水・堤防)、(4)祭り(祭りと地形・地名)、(5)水神信仰の5つである。また、授業素案・略案を作成するとともに、子どもに期待する学習活動(祭り・遺跡・石碑の調査、マップ作成など)の内容を整理した。3.羽生の「藍染」、桶川の「紅花栽培」、草加の「煎餅」、三芳の「さつまいも栽培」を教材とする小・中学校社会科の実験授業を行い、「伝統生活文化」の有効性と課題について分析した。4.ドイツ・バイエルン州の学習指導要領を中心に分析し、民主主義社会における共同生活の基礎を培う「政治・社会学習」の意義と内容とともに、「政治教育」のカリキュラム構成原理を明確にした。本研究の目的は、子どもの社会性や人間性を育てるために、教科の統合・再編を含めた「社会認識の形成」を目指す教育、特に、「伝統生活文化」を中心教材に据えたカリキュラムの在り方を構想し、実践することである。本年度の研究成果は、以下のとおりである。1.平成5年度から現在まで実践されている秋田県の「ふるさと教育」の実地調査及び資料の収集分析を行った。秋田県では、「ふるさと教育」をすべての学校で郷土の自然や文化、先人の生き方などを学ぶものと捉え、この教育を学校教育の共通実践課題として位置づけた各学校のカリキュラムを意図的・計画的に編成している。現在、「ふるさと教育」を生かした総合的な学習の在り方に関する研究開発が行われている。2.埼玉県羽生市の「藍染」を教材とする小学4年の社会科授業を実践した。「伝統生活文化」を子どもたちに身近なものとして把握させるためには、歴史的・地理的な背景・要因を知るとともに、体験的、作業的な活動を取り入れることが不可欠である。3.ドイツの「郷土教育(Heimatkude)」及び「社会的学習(Soziales Lernen)」の理論と実践に関する文献・諸資料を収集し、若干の分析を行った。ドイツの基礎学校では、「社会的な人格形成」「相互行為」としての「社会的学習」の必要性が叫ばれている。その中心教科が「事実教授(Sachunterricht」である。4.「事実教授」の改革も進行中であり、その一つの方途が5つの観点(社会・文化、空間、自然、技術、歴史)による再構成であり、「郷土教育」の復権である。本研究の日的は、子どもの社会性や人間性を育むために、「伝統生活文化」を中心教材に据えたカリキュラムの在り方を構想し、実践することである。2年日の今年度の研究成果は、以下の通りである。取り上げた内容は、(1)民俗学の成果の活用と生活文化学習:成城学園初等学校の社会科プラン、柳田國男・和歌森太郎の社会科教育論、(2)中核教材による総合的学習論:富士宮市の「富士山学習」、滋賀県の「琵琶湖学習」、(3)秋田県の「ふるさと学習」である。

2.上記の「民俗学の生活文化」「中核教材」「ふるさと」の3つの視点から、「荒川流域の伝統生活文化学習」の教材を開発した。そのテーマは、(1)荒川水系の新河岸川流域の舟運・水運、(2)伝統漁業と農業:川魚料理(食文化)と「わさび栽培」、(3)水害・洪水・堤防:治水と水防の知恵、(4)祭り:祭りと地形・地名との関係、(5)信仰:水神信仰の5つである。3.江戸時代の「紅花栽培」を教材とした中学校社会科の実験授業を行った。身近な地域教材を活用した歴史学習の有効性と来年度実施する検証授業の可能性を探った。4.2000年改訂のドイツ・バイエルン州の学習指導要領を分析し、郷土教育の復権、民主主義社会における共同生活の基礎を培う「社会的学習」の意義と内容を明らかにした。また、学校教育全体を通して、子どもが責任感のある、自立した市民の役割を十分に果たすように成長することを目指す「政治的・社会的学習」の授業構成を究明した。本研究の目的は、子どもの社会性や人間性を育むために、「伝統生活文化」を中心教材に据えたカリキュラムの在り方を構想し、実践することである。最終年度の研究成果は、以下のとおりである。1.前年度の開発した「荒川流域の伝統生活文化学習」の教材を授業化するために、授業素案・略案を作成した。また、子どもに期待する学習活動(祭り、遺跡、碑の調査、マップの作成など)の内容を整理した。2.埼玉県内の「伝統工業」の一つである「草加せんべい」を教材とした小学校4年の社会科授業、子どもたちが「富の川越芋」栽培を「伝統」ととらえた小学校3年の社会科授業を分析検討し、小学校における「伝統生活文化」学習の有効性と可能性を探った。4.「政治教育」を担うカリキュラムの構成原理は、子どもの興味・関心・問題意識(子ども志向)と科学・学問の内容と方法(事実・科学志向)であり、この2つの原理によりながら、学習内容・対象は、子どもの周囲である「世界(Welt)」から選択されている。その際、その「世界」にどのように対峙させるのかは、その時代・社会が要請する望ましい市民像・人間像に依拠する。ドイツの場合、その市民を育成する教育は、現体制の法治国家・社会市場経済の保守を志向している。しかも、社会、自然、環境、次世代に対する「責任意識」の育成が教育の根底を支えている。
小学校英語が児童の認知に与える影響に関する研究

本研究の目的は、英語学習による児童の認知上の質的変容を探ることである。英語学習経験量に差のある3群に2つの認知タスクを与えた結果、いずれのタスクにおいても群間に有意差が認められ、学習経験量が増加するほど英語母語話者の認知反応に近づき、反応速度も速くなることが明らかになった。たとえ週1、2時間というわずかな学習経験であっても、小学校英語は児童の認知に少なからず影響を与える可能性があると結論づけた。平成20年度は、調査研究の基礎を構築するため、主として以下の3つについて調査研究を行った。まず、第二言語習得研究や認知科学に関する文献文献のリサーチを行い、言語が認知に与える影響(言語相対仮説を含む〉やV.CookのMulticompetenceモデルにもとづく第二言語習得の研究文献の文献リスト(83件)を作成した。その上で、本研究の研究基盤となるMulticompetenceモデルの起源とその理論的背景、発展経過、今後の課題について1つの論考(雑誌論文参照)にまとめて発表した。その最終原稿をV.Cookに送付し助言を求めたところ、彼のモデルの理論背景や発展経緯がみごとにまとめられていると高く評価してくれた。続いて、Multicompetenceモデルにもとづく第二言語習得研究を進める研究グループメンバーが例年研究発表を行うEUROSLA(The European Second Language Association)の年次大会(第18回フランス大会、エクサンプロバンス)に参加して、12の研究発表を聞くと同時に、同学会に参加していたV.Cookからも、小学生を被験者とした場合のデータ収集の方法に関すること等について直接指導を受ける機会を得た。さらに、国内におけるこの分野の第一人者である笠井千勢氏(岐阜大学)と佐々木美帆氏(慶応義塾大学)にも実験手法やデータの処理について直接助言を受けることができ、予備実験に入る準備ができた。さらに、実験タスクで被験者の反応速度を測定するE-Prime(心理実験ソフト)を購入し、パソコンにインストールしたうえで、レスポンス装置を設置し、試作のサンプルタスクで動作確認を行った。研究2年次となる平成21年度は,EUROSLAの年次大会(第19回アイルランド大会)への参加や文献研究を通した情報の収集を行いながら予備実験を実施した。予備実験では,まず,形状・物質の区分タスクとカテゴリー・テーマに基づくグルーピングタスクで使用する用具を実験対象となる小学生(5・6年生)に適合するように改良を加えて作製した。予備実験の実施にあたっては,関係機関に対して実験調査の主旨や調査の概要について説明を行い,高知市周辺の2つの小学校から調査協力を得ることができた。研究の最終年度は、実験データの追加とともに、すべての実験データの分析と考察を行い、研究成果として、国内外の学会(全国英語教育学会大阪研究大会及びEUROSLA(イタリア大会))において口頭発表を行うとともに論文及び研究成果報告書として発表した。県内公立小学校の協力を得て、英語学習経験の異なる小学生グループ(例:年間数時間グループ、年間35時間グループ、年間70時間グループ)に「形状と物質の区分タスク」と「カテゴリーとテーマに基づくグルーピングタスク」という2つのタスクを与えてデータを収集した。前者のタスクでは、参加者に、コルクでできた小型のピラミッドを見せて、現実にはない「ムハバ」などという名詞を刺激語として与えた後で、プラスチック製のピラミッドとコルク製の板を見せて「どちらがムハバですか」と尋ねた。また、後者のタスクでは、参加者に標準物と2つの対象物が描かれたカード、24セットを提示し、2つの対象物のうち、標準物と結びつき(グルーピング)の強いのはどちらかを判断させた。また、両タスクにおいて、判断に要した時間、反応速度も測定した。その結果、1)両タスクの反応においても英語学習経験量に差のあるグループ間に有意差があること、2)英語学習経験が増加するほど英語母語話者の反応に近づくこと、3)学習経験が増加すれば両タスクの反応速度が速くなること、などが明らかになった。たとえ週1、2時間という僅かな学習経験であっても、小学校英語は児童の認知に少なからず影響を与えている(Multi-cognition構築の)可能性があると結論づけた。
インド近代におけるヨーロッパ宣教師の布教活動とインド思想との交流

ヨーロッパの学者が南インド・タミルナードゥとはじめて接触をもったのは、ロベルト・デ・ノビリのような宣教師が来到した紀元後16世紀に遡る。イギリス東インド会社がタミル地域に足場を固めるや、この地域は、その後継続的に2世紀の間、ヨーロッパから宣教師や植民地支配の当事者たち(行政官)を受け入れていくことになる。土地の人々に教えを根付かせようとする彼らの試みと、効率的な植民地支配は、土地の言語であるタミル語やその文学の研究を必然的に内包するものであった。彼らはこの方面でたゆまない努力を傾けた。努力の賜として、いま我々は、多くの翻訳文献、辞典、文典を有している。これらは本来宣教師たちのためのものであり、タミル語話者のために作られたものではなかったが、タミル人たちの意識に新しい地平をもたらし、新しい意思疎通の道具としてのタミル語の可能性を切り開くものだったのである。文学的な展開の一方で、宗教的な方面においても、宣教活動による文化変容が顕在化しつつあった。新しい宗教を彼らの社会に迎えることは、その宗教を、もとからあった宗教概念や理念を用いてアイデンティファイすることを意味していた。これは必然的に語の用法の変化をも随伴していた。宗教的に重要な事項を表す単語も新たに作られるなど、タミル語は豊かさを増していくことになる。本研究プロジェクトでは、研究活動の基礎として、世界中に散逸している基礎資料の収集に特別の配慮が払われた。次に、カトリック教会所属の宣教師たちによる黎明期の文学活動について詳細な検討が為された。具体的には、イエズス会初期マドゥライミッションに属するエンリケスやデ・ノビリの事績に焦点を絞って研究が行われた。この研究によって、タミル・キリスト教文学の初期段階がつまびらかになり、キリスト教とヒンドゥー教の最初期の思想交流と宗教間対話の黎明期の事情が明らかになった。本研究は、中世から近代のインドにおいて、西洋のキリスト教宣教師たちが文化交流と異文化理解に果たした先駆的役割と近代インド思想の形成に対する貢献について、文献資料を中心に論じようとするものである。本年度は、研究計画の初年度として、次年度以降の当該研究に必須な資料の所在をつきとめ、かつそれらの収集とを行った。収集に当たっては、本学(東北大学)の附属図書館のほか、上智大学図書館と同大学キリシタン文庫にて検索と収集に当たり、また海外においては、ヴァティカン市国のヴァティカン図書館(ビブリオテーカ・ヴァティカーナ)、教皇庁立ウルバニアーナ大学図書館、イエズス会歴史研究所図書館および古文書館、さらにローマ市のカトリック・プロパガンダフィーデを訪れ、資料の検索を行うとともに、文献資料の複写・製本を行い、次年度からの分析に万全の準備を整えつつある。資料収集と並行して、各図書館・研究所で学者・専門家と意見交換し、また助言を頂いた。それには、ウルバニアーナ大学図書館のM・ロストコウスキ館長、イエズス会歴史研究所図書館のH・ストルニ司書、同古文書館のT・レッディ館員、プロパガンダフィーデのクンニャ館員らが含まれる。以上の収集活動によって、とりわけイタリア出身のイエズス会士で南インドにわたり宣教活動に生涯を捧げたロベルト・デ・ノビリに関係する先行研究や一時資料を数多く入手することができ、現在、収集した資料の分析に取り着手しつつある。本研究は、中世から近代のインドにおいて、西洋のキリスト教宣教師たちが文化交流と異文化理解に果たした先駆的役割と近代インド思想の形成に対する貢献について、文献資料を駆使して論じようとするものである。

本年度は、研究計画の第2年目として、来年度の研究プロジェクトの締めくくりのために、当該研究に必須な資料を整え、資料の具体的分析にとりかかった。必要な資料は、上智大学図書館、同カトリック文庫、ドイツ・ミュンヘン市のバイエルン州立図書館、オーストリアのウイーン市のウイーン大学中央図書館と同大学インド学図書館から主として収集した。昨年度に引き続き、ヴァティカン図書館(ビブリオテーカ・ヴァティカーナ)、教皇庁立ウルバニアーナ大学図書館などのお世話にもなった。このように、最終年度における分析作業に万全の準備を整えつつある。資料収集と並行して、各図書館・研究所で学者・専門家と意見交換し、また助言を頂いた。以上の収集活動によって、とりわけイタリア出身のイエズス会士で南インドにわたり宣教活動に生涯を捧げたエンリケ・エンリケス、ロベルト・デ・ノビリ、ジウゼッペ・ベスキらに関係する先行研究や一時資料を、昨年度に続いて数多く入手することができ、収集した資料の分析に着手しつつある。また、収集した資料をもと、カトリック・イエズス会のマドゥライ・ミッションの事積について、詳細な分析を進めつつある。次年度は、これらの基礎作業をもとに、南アジア地域において、インドの中世から近代初期にかけて交わされた思想的・文化的交流の足跡について、新たな視点から明らかにしたい。本研究は、中世末から近代初頭にかけての南アジアにおいて、ヨーロッパからのキリスト教宣教師たちが思想交流と異文化理解に果たした先駆的役割、および近代インド思想の成立に及ぼした貢献について、文献資料を駆使して究明するものである。本年度は、研究計画の最終年度として、研究の一応の締めくくりのために、当該研究に必須な資料を吟味し、資料の具体的分析を進めた。資料としては、上智大学図書館、ドイツ・バイエルン州立図書館、オーストリア・ウイーン大学中央図書館と同大学インド学図書館から主として収集したものを用いた。今年度も引き続いて、ヴァティカン図書館(ビブリオテーカ・ヴァティカーナ)、教皇庁立ウルバニアーナ大学図書館などの便宜も得た。ミュンヘンでは、オブライト会所属のウィリ・ヘンケル博士と会い、文書館での検索にご協力いただき、書誌学的なアドバイスも受けることができ、収穫だった。このように、最終年度における分析作業は順調に推移した。資料収集と並行して、ヘンケル博士のみならず、各図書館・研究所で学者・専門家と意見交換し、また助言を頂いた。以上の収集活動によって、とりわけイタリア出身のイエズス会士で南インドにわたり宣教活動に生涯を捧げたロベルト・デ・ノビリとギウゼッペ・ベスキの事績についての研究資料を充実させることができ、今回の研究計画に限らず、将来的にも当該分野の研究活動に資することができると確信している。本研究の成果は、一部を講談杜新書メチエの新刊『ヒンドゥー教-その過去と現在-』(単著)に活かすことができた。
ジストロフィン欠損筋におけるマトリックスメタロプロテアーゼに関する研究

Matrix metalloproteinases (MMPs)は細胞外マトリックス成分の分解の主役を担う酵素群であり、組織のremodellingにおいて重要な役割を果たす一方、癌や拡張型心筋症などにおいて活性調節機構が破綻していることが報告されている。我々はこれまでに、ジストロフィン欠損マウス(mdx)の骨格筋でMMP-9が高発現していることを報告した(Nakamura et al.,BBA2005)。また、正常筋における実験的壊死・再生系においてもMMPの発現が増加していることから、これらの分子がジストロフィー変化や筋壊死・再生の機序に関与している可能性について検討を行ってきた。筋ジストロフィー犬の骨格筋を用いた検討では、MMP-2、MMP-9およびこれらの活性調節分子であるMT1-MMP、MMPの内因性阻害因子であるTIMP-1、TIMP-2のmRNAレベルの増加が見られた。また、ゼラチンザイモグラム法を用いた検討では、筋ジストロフィー犬の骨格筋におけるMMP-2、-9の活性が正常対照群と比較し著しく高いことや、in-situザイモグラムにおけるMMP-2、-9の局在は、壊死・再生部位と一致していることを明らかにした。免疫組織化学法ではMMP-9は浸潤炎症細胞と共局在を示し、炎症反応との関連が示唆されたものの、MMP-2の局在は筋ジストロフィー犬では抗体の反応性等の問題があり検討は困難であった。そこで、正常マウスにおける実験的壊死・再生系およびmdxマウスの骨格筋において検討したところ、再生線維周囲の間葉系線維芽細胞と考えられる細胞に局在していることが明らかになった。さらに、MMP-2陽性細胞の性格を明らかにするため、Fluorescence achvated cell sorting (FACS)によって分取したマクロフォージ、筋衛生細胞およびCD31 (-) CD45 (-)sidepopulation細胞(SP細胞)を用いてRT-PCRによる解析を行ったところ、MMP-2はCD31(-) CD45 (-) SP細胞にのみ発現していたことが明らかになった。CD31(-) CD45 (-) SP細胞が筋再生を促進する役割を有すると考えられていることから、MMP-2が筋再生における細胞がマトリックスのremodelingに関与している可能性が考えられた。Matrix metalloproteinases (MMPs)は細胞外マトリックス成分分解の主役を担う酵素群であり、発生,創傷治癒等における組織のremodelingにおいて重要な役割を果たす一方,癌の浸潤・転移,動脈瘤,関節炎,拡張型心筋症など種々の病的状態において活性の調節機構が破綻して病態を促進していることが報告されている.またマウスの実験的筋壊死再生モデルやmdxの骨格筋におけるMMP-2,-9(gelatinase-A,-B)の発現・活性の上昇,MMPのβ-dystroglycanのプロセシングへの関与など,筋ジストロフィーの病態への関与も示唆されている.