hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
局所的な空間反転対称性が破れた系における新奇量子相の探索

これまでの研究により、多層系超伝導体では、パリティの局所的な破れに起因するスピン軌道相互作用により、磁場下においてペア密度波(PDW)状態が実現し、これはトポロジカル結晶超伝導状態であることを発見している。そのため、今年度は平行磁場下においてPDW状態が実現する可能性と、そのトポロジカルな性質を調べた。解析の結果、軌道対破壊効果とスピン軌道相互作用の競合により、並行磁場下においてもPDW状態が安定となることを発見した。また、並行磁場下におけるPDW波状態は、磁気鏡映対称性により守られたトポロジカル結晶超伝導であることも明らかとした。トポロジカル超伝導状態をどのように実験的に観測するか、というのが現在最大の問題となっている。そのため、トポロジカル超伝導実証へ向けた理論研究も行った。対象としたのは、スピンレスのカイラルp波超伝導体における渦糸状態である。スピンレスカイラルp波超伝導体の孤立渦糸には現れるマヨラナ粒子状態の性質を調べる事により、母体となる超伝導体のトポロジカルな特性を同定できる可能性がある。本研究では、磁場下のカイラル超伝導体に注目し、その渦糸格子状態における低エネルギー電子状態の性質を、ボゴリューボフ・ドジャン方程式に基づき考察した。渦糸格子状態では、渦糸間の粒子の飛び移りにより、ゼロエネルギー状態が空間的に広がったエネルギーバンドを構築する。また、このバンドは有限のエネルギーギャップを示し、非自明なトポロジカル数を誘起することなどが明らかとなった。さらに、ゼロエネルギー状態由来のバンドのトポロジカルな性質が磁場やフェルミエネルギーの変化に敏感であることに注目し、三次元系ではワイル超伝導となることを見出した。本研究の成果はトポロジカル超伝導実証に大きく迫るものとなり、理論・実験両研究にインパクトを与えるものとなった。27年度が最終年度であるため、記入しない。トポロジカルに非自明な構造を持つトポロジカル超伝導体には、マヨラナ粒子が現れ、量子計算への応用も含め盛んに研究が行われている。しかし、現在までのところ万人が認めるトポロジカル超伝導体の実証には至っていない。この理由の一つとして、トポロジカル超伝導体の候補物質が少ないことがあげられる。そのため、今年度はトポロジカル超伝導体の実現に向けた理論研究を行った。対象としたのは、局所的なパリティが破れている多層系超伝導体である。局所的なパリティが破れた系には、それに起因したスピン軌道相互作用が現れる。それによりペア密度波状態という新奇超伝導状態が実現することがわかってる。解析の結果、ペア密度波状態がミラー対称性により守られたトポロジカル結晶超伝導状態であることを明らかにした。この結果を重い電子系超伝導体CeCoIn5の人工超格子に応用し、この物質がトポロジカル超伝導体となることを提案した。局所的なパリティの破れた系の研究から派生して、今年度は大局的なパリティの破れた系のトポロジカルな性質も調査した。その結果、パリティの破れた二次元d+p波超伝導体がトポロジカル超伝導となることを発見した。更に、三次元d+p波超伝導体はトポロジカルな理由により保護されたノードを持つワイル超伝導体となることも明らかにした。d波超伝導状態は強相関電子系で広く実現している。そのため、本研究成果により今後トポロジカル超伝導の研究が大きく発展すると期待される。本研究により、多層系超伝導体およびパリティの破れたd+p波超伝導体がトポロジカル超伝導体の候補に加わった。

前者においては、最近の実験技術の進歩によりトポロジカル超伝導の実証が期待される。また、後者に関しては、当初の計画にはなかったものであるが、強相関電子系で広く実現するd波超伝導状態がトポロジカル超伝導の候補となった。ゆえに、トポロジカル超伝導の研究が今後大きく前進することが期待される。この結果は当初の予想を大きく超えるものである。27年度が最終年度であるため、記入しない。今後は、まずパリティの破れた系におけるトポロジカル超伝導の完全な理解を目指す。具体的には、多層系超伝導状態において磁気回転対称性等の対称性により守られたトポロジカル結晶超伝導の実現可能性を調査する。加えて、現実の物質に則したモデルに基づいた解析を行い、トポロジカル超伝導の実現へ向けた理論的提案を行う。次に、電子相関と局所的なパリティの破れの関係を調査する。電子相関を考慮できる手法を用い、ペア密度波状態等の局所的なパリティが破れた系特有の超伝導状態の安定性について調査する。
脂質ドメインを介したがん化シグナルの制御機構

Srcチロシンキナーゼは正常な細胞機能の制御に重要なタンパク質であるが、一方で様々ながん組織で活性化が認められおり、がん進展に重要なタンパク質でもある。しかしSrcの活性制御機構の全貌はわかっていない。本研究では、活性化Srcの時空間的制御を担うタンパク質Rsp1を見いだした。Rsp1は、正常細胞では脂質ラフトを発信源とするSrcシグナル伝達経路を制御しており、上皮管腔形成を誘導することが明らかになった。また、がん細胞では過剰発現しており、浸潤に関与することが明らかになった。以上の結果から、Rsp1は活性化Srcの時空間的制御を介して、Srcの細胞機能を制御していることが示唆された。がん原遺伝子産物Srcは様々ながん組織でその発現の亢進と活性化が認められ、がん化・がんの悪性化に重要なタンパク質のひとつである。本研究では、Srcの活性制御機構を空間的、時間的に理解すること、さらにがん化との関連を明らかにすることを目的としている。MDCK細胞にSrc活性化誘導システムを導入して、活性化にともなうSrcの細胞内動態を観察した。その結果、Srcは活性化後ただちに形質膜に移行することが明らかになった。この時、活性化Srcは脂質ラフト画分に急速に濃縮されることがわかった。これらの結果から、活性化Srcは脂質ラフト内に存在する未知のタンパク質によってリクルートされることが推察された。そこで脂質ラフト内でSrcと結合するタンパク質を免疫沈降法で回収し、質量分析で解析した結果、新規タンパク質Rsp1を得た。Rsp1は形質膜に限局して存在しており、Src結合部位と脂質ラフト移行シグナルを有していた。このタンパク質を過剰発現させると、活性化Srcが脂質ラフト内にトラップされた。以上の結果から、活性化SrcはRsp1によって脂質ラフト内にリクルートされることが考えられた。Rsp1が過剰発現しているMDCK細胞を三次元培養すると、一部の細胞が異常伸張していた。しかし、脂質ラフトに移行できない変異Rsp1の過剰発現では細胞伸張は観察されなかった。Rsp1-GFP発現誘導システムを構築して、Rsp1による伸張過程を観察した結果、GFP陽性細胞が基底膜を破壊しながら伸張している様子が見られた。以上の結果から、Rsp1の過剰発現によって活性化Srcが脂質ラフトに集積すると、がんの浸潤様の異常伸張が引き起こされると考えられた。前年度までに、Src活性化誘導システムを導入したMDCK細胞の解析から、活性化Srcの脂質ラフト移行を制御するタンパク質Rsp1(raft-localized Src recruiting protein1)を新たに同定した。そこで、Rsp1-GFP発現誘導システムを構築して、MDCK細胞の三次元培養した。その結果、GFP陽性細胞が基底膜を破壊し、細胞外マトリックス中に異常伸張している様子が観察された。よって、Rsp1の発現によって活性化Srcが脂質ラフトに集積すると、がんの浸潤様の細胞伸張が誘導されると考えられた。平成27年度は、Rsp1による細胞伸長の分子メカニズムを理解することを目的として、阻害剤ライブラリーを利用した網羅的解析を実施した。その結果、Rsp1-Srcの下流のシグナル伝達経路を明らかにすることができた。さらに、細胞伸長には弱い上皮間葉転換(epithelial-mesenchymaltransition:EMT)が重要であることをつきとめた。また、Rsp1はトリプルネガティブ乳がん細胞で高発現しており、乳がん患者の予後不良と関連があることを明らかにした。Rsp1の生理的機能の理解を目的として、ノックアウトマウスを作製した。1)細胞伸長メカニズムの理解:Rsp1-GFP発現による細胞伸長メカニズムの全体像をとらえることができた。阻害剤ライブラリー(新学術領域がん支援からのサポート)を利用し、Rsp1-Srcの下流のシグナル伝達経路、とくに細胞伸長に重要な転写因子を同定することができた。さらに、伸長現象には弱いEMTが重要であることをつきとめた。2)がん細胞におけるRsp1の機能解析:Rsp1はトリプルネガティブ乳がん細胞で高発現していることを明らかにした。また大規模がんゲノム情報(TCGA)の解析から、Rsp1高発現のトリプルネガティブ乳がん患者は対照群と比較して予後不良であることを確認した。3) Rsp1ノックアウトマウスの作製:Rsp1の生体における機能を解析するためにRsp1遺伝子のノックアウトマウスを作製した。現時点では、Rsp1ホモノックアウトマウスに致死性の異常は認められていない。Src活性化誘導システムを導入したMDCK細胞の解析から、活性化Srcの脂質ラフト移行を制御するタンパク質Rsp1(raft-localized Src recruiting protein1)を新たに同定した。Rsp

1発現誘導システムを導入したMDCK細胞の三次元培養したところ、Rsp1の発現によって上皮管腔形成が誘導された。またRsp1遺伝子ノックアウトによってHGF刺激による上皮管腔形成が抑制された。これらの結果から、Rsp1は活性化Srcの時空間的制御を介して上皮管腔形成に関与するタンパク質であると考えられた。さらにRsp1を長期間過剰発現させると、MDCK細胞は浸潤様の異常伸長を示した。この形態変化にはSTAT3の活性化が必要であり、上皮間葉転換が重要なイベントであることをつきとめた。また、Rsp1はトリプルネガティブ乳がん細胞で高発現しており、そのノックダウンで浸潤が抑制されることを明らかにした。これらの結果から、Rsp1の過剰発現はがんの浸潤にも重要であると考えられた。以上の結果を総括すると、Rsp1は活性化Srcの時空間的制御を担っており、通常は上皮管腔形成を制御しているが、そのシステムが異常になると浸潤になると考えられる。実際にRsp1の発現レベルは乳がん患者の予後不良と相関があることを明らかにしており、さらなる解析が重要である。Srcチロシンキナーゼは正常な細胞機能の制御に重要なタンパク質であるが、一方で様々ながん組織で活性化が認められおり、がん進展に重要なタンパク質でもある。しかしSrcの活性制御機構の全貌はわかっていない。本研究では、活性化Srcの時空間的制御を担うタンパク質Rsp1を見いだした。Rsp1は、正常細胞では脂質ラフトを発信源とするSrcシグナル伝達経路を制御しており、上皮管腔形成を誘導することが明らかになった。また、がん細胞では過剰発現しており、浸潤に関与することが明らかになった。以上の結果から、Rsp1は活性化Srcの時空間的制御を介して、Srcの細胞機能を制御していることが示唆された。1) Rsp1の同定:本研究の最優先事項である「Srcリクルートタンパク質の同定」をRsp1の発見によって達成することができた。ターゲットタンパク質が絞れたことによって、以後の研究がスムースに展開すると考えられる。すでにRsp1の機能に重要なドメインの同定に着手している。2) Srcによる細胞の異常伸張現象の発見:Rsp1の局在を変えることによって、活性化Srcの集積場所をコントロールすることが可能になり、Src活性化を空間的に制御することができるようになった。これによって、Srcが脂質ラフトに集積する場合のみ細胞が異常に伸張することが明らかになった。がん細胞の浸潤との関連も確認できている。1)細胞伸長メカニズムの理解:Rsp1-GFP発現による細胞伸長の詳細なメカニズムを生化学的に解析する。具体的には、Rsp1-Srcから転写因子へのシグナル伝達経路を明らかにする。2)がん細胞におけるRsp1の機能解析:トリプルネガティブ乳がん細胞におけるRsp1高発現の意義を解析する。具体的には、Rsp1の発現レベルと、Src活性化レベルの相関関係とがん化への寄与を解析する。
核内に存在する成熟体tRNAの生理的意義の解析II

翻訳に関わるtRNAの一部はintronを持つ。このようなtRNAの成熟化に必須であるsplicingは長らく核膜近傍で起こり、成熟体tRNAの核外輸送と共役した過程だと考えられてきた。しかし、我々は、酵母Saccharomyces cerevisiaeにおいて、このsplicingに関わるtRNA splicing endonucleaseが核に局在せず、ミトコンドリア表面にあることを明らかにしてきた。これは、tRNAが成熟化後に細胞質から核へと移行することを示唆している。今年度我々は、実際に成熟体tRNAが細胞質から核へ輸送されることを、出芽酵母のヘテロカリオンアッセイ、転写阻害剤とエネルギー生産阻害剤を組み合わせたin vivo核移行アッセイなどで証明した。この中で、tRNA核内輸送はエネルギー依存、Ran GTPaseサイクル非依存であることを明らかにした。また、3'^-末端が部分的に失われたtRNAも核内に入りうることから、核内輸送とtRNAの品質管理が関係する可能性が示唆された(投稿中)。一方、tRNAのsplicingに関わるtRNA ligaseは細胞質に積極的に保持されるシグナルを有していることを明らかにした。実際、tRNA ligaseを様々な形で細胞質のオルガネラ膜に固定化しても機能することを明らかにし、tRNAのsplicingが細胞質で起こるさらなる証拠を得た。こうした知見は、tRNAの生合成に関する今までの考え方に、大きな修正を迫るものである。本計画では、核内の成熟体プールがどのように形成され、どのような生理的意義を持つかを明らかにする目的で、酵母S.cerevisiaeを材料として以下の解析が進行中である。◆異種酵母であるS.pombeのtRNAを発現するS.cerevisiae核融合変異株を構築し、接合過程を利用したヘテロカリオンアッセイによって、S.pombe tRNAを発現する核で転写されて細胞質に輸送された成熟体tRNAが、他方の核に再輸送されるかを検討した。共焦点顕微鏡システムによるFISH観察の結果、S.pombe tRNA遺伝子を発現してない核においても、同tRNAが検出され、細胞質から核へ成熟体tRNAが輸送されていることが明かとなった。◆tRNA核外輸送因子であるexportin-5の酵母ホモログMsh5pがtRNAの核外輸送に関与するかについて検討した。Δmsn5単独では、成熟体tRNAの核外輸送、前駆体の修飾に何ら影響を与えなかったが、核外輸送因子Los1Pおよび核内でtRNAの核外輸送に関わるUtp8pとの遺伝的相互作用が明かとなり、Msn5pがtRNAの細胞内動態に関わることがわかった。◆tRNA核外輸送因子と機能的に拮抗する因子を検索するため、過剰生産時にΔlos1、Δmsn5二重欠失変異株またはΔlos1、utp8二重変異株が致死となる遺伝子を酵母多コピーライブラリーよりスクリーニングしている。現在、複数の候補クローンを得ており、含まれるORFのうちどれが現遺伝子であるかの特定を行っている。◆tRNAの細胞質から核への輸送をin vitroで再現するため、semi-intact細胞系を構築している。
アミノ酸による肝コレステロール代謝変動の解析

シスチン過剰食をラットに与えると、3-7日後に血清コレステロールが上昇する現象を解明するために、肝コレステロール合成酵素(HMG-CoA還元酵素)、肝コレステロール合成酵素mRNA、肝LDLレセプターの測定、^<125>I-LDLをラットの静脈に注射した後経時的に肝への取り込みを測定した。その結果、次のことが明かとなった。1.シスチン過剰食を3,5,7日与えると、血清コレステロールは基本食と比較すると有意に増加した。3.肝HMG-CoA還元酵素活性は3日目に増加した。4.肝HMG-CoA還元酵素mRNAは3日目に1.8倍に増加した。1日目では低下したが、2、3日目では1.6-1.7倍に増加した。6.静注した^<125>I-LDLの消失速度は見かけ上変化はないが、血清中のLDLはシスチン群で高いので、実際にはシスチン群は血清からより速く処理されていることが明らかとなった。以上の結果、シスチン摂取の後、最初にHMG-CoA還元酵素mRNAが増加する。ついで、この酵素活性が増加する。したがって、肝においてコレステロール合成が促進される。一方、血清LDL-コレステロールの消失はシスチン食群においてむしろ増加した。これらの結果を総合的にみると、血清からのコレステロール消失が増加するが、それ以上に肝においてコレステロール合成が促進していることが高コレステロール血症を形成する機構が初めて示された。シスチン過剰食をラットに与えると、37日後に血清コレステロールが上昇する現象を解明するために、コレステロール合成速度(HMG-CoA還元酵素)、分解速度の測定、肝臓HMG-CoA還元酵素mRNAの測定を行った。1シスチン過剰食を3、5、7日間与えると血清コレステロールは基本食と比較すると有意に増加した。3肝臓コレステロール合成酵素である活性型HMG-CoA還元酵素活性は3日後では有意に増加した。しかし、7日後では両群の差は小さくなった。一方、全活性も活性型と同様増加した。4肝臓HMG-CoA還元酵素mRNAはシスチン過剰食を3日間摂取すると約1.8倍に増加した。7日間摂取すると約1.3倍に増加していたが対照群との差は若干小さくなった。さらに、3日以内における変化を調べたところ、摂取後1日ではむしろシスチン摂取によって低下した。2日後、3日後では1.61.7倍に増加した。肝臓HMG-CoA還元酵素mRNAのトランスクリプション速度の測定は現在進行中である。以上の結果、シスチンの摂取による血清コレステロールの上昇は肝臓HMG-CoA還元酵素mRNAを増加させ、ついでコレステロール生合成の律速酵素であるHMG-CoA還元酵素の全活性が増加したのでこの酵素タンパク質の量が増加したと判断される。また、この酵素の活性型も増加した。したがって、シスチン過剰食による血清コレステロールの増加は肝臓におけるコレステロールの合成が促進することに基づくことをはじめて示した。シスチン過剰食をラットに与えると、3-7日後に血清コレステロールが上昇する現象を解明するために、昨年度肝コレステロール合成酵素(HMG-CoA還元酵素)、肝コレステロール合成酵素mRNAを測定した。その結果、2.肝HMG-CoA還元酵素活性は3日目に増加した。3.肝HMG-CoA還元酵素mRNAは2、3日目に1.6-1.8倍に増加した。本年度は肝LDLレセプターの測定、^<125>I-LDLをラットの静脈に注射した後経時的に肝への取り込みを測定した。2.静注した^<125>I-LDLの消失速度は見かけ上変化ないが、血清中のLDLはシスチン群で高いので、実際にはシスチン群は血清からより速く処理されていることが明かとなった。

一方、血清LDL-コレステロールの消失はシスチン食群においてむしろ増加した。これらの結果を総合的にみると、血清からのコレステロール消失が増加するが、それ以上に肝においてコレステロール合成が促進していることが高コレステロール血症を形成する機構が初めて示された。
魚類の飢餓適応における骨格筋タンパク質分解の意義

飢餓時の魚類骨格筋では「タンパク質分解が亢進するが,タンパク質はあまり減少しない」という矛盾した現象が観察される.本研究では「飢餓時の魚類骨格筋ではどのようにしてタンパク質を節約しているのか?」という学術的問いに対し,「飢餓時の魚類骨格筋では,代謝リプログラミングのためにタンパク質分解が亢進するのではないか」という仮説をもとに挑む.飢餓適応過程の魚類骨格筋から経時的に取得したメタボローム,プロテオーム,ペプチドームから各酵素の合成・分解バランスの変動に対する各代謝化合物フローの変動の寄与度を評価し,タンパク質分解と代謝リプログラミングの関係を明示する.飢餓時の魚類骨格筋では「タンパク質分解が亢進するが,タンパク質はあまり減少しない」という矛盾した現象が観察される.本研究では「飢餓時の魚類骨格筋ではどのようにしてタンパク質を節約しているのか?」という学術的問いに対し,「飢餓時の魚類骨格筋では,代謝リプログラミングのためにタンパク質分解が亢進するのではないか」という仮説をもとに挑む.飢餓適応過程の魚類骨格筋から経時的に取得したメタボローム,プロテオーム,ペプチドームから各酵素の合成・分解バランスの変動に対する各代謝化合物フローの変動の寄与度を評価し,タンパク質分解と代謝リプログラミングの関係を明示する.
2型糖尿病患者における日内血糖変動が関与する新たな動脈硬化形成機構の解明

今年度は対象者として2型糖尿病及び非糖尿病患者計100例の症例数を目標としたが、現在まで糖尿病患者3例、非糖尿病患者9例の計12例しか募集することができなかった。12症例全員に対して、日内血糖変動、臨床的動脈硬化検査を実施し、採血にて血糖、HbA1c、脂質、酸化ストレス、CRP等のバイオマーカーを測定し、糖尿病群と非糖尿病群の2群間でそれぞれの項目についてt検定、糖尿病群及び非糖尿病群において日内血糖変動と臨床的動脈硬化検査との相関関係を解析した。その結果、糖尿病群の空腹時血糖値、HbA1c、酸化ストレス度(d-ROMs)、日内の最高血糖値、日内の平均血糖値、日内の血糖値の標準偏差は、非糖尿病群の値に比べそれぞれ有意(P<0.05)に高値を示した。しかし、糖尿病群の心臓足首血管指数(CAVI)、頸動脈内膜中膜複合体厚(IMT)は非糖尿病群の値に比べそれぞれ高い傾向にあり、糖尿病群の血流(内皮)依存性血管拡張反応(FMD)は非糖尿病群の値に比べ低い傾向にあったが、有意ではなかった。また、糖尿病群において日内の血糖値の標準偏差はCAVIと有意ではないが、正の相関を示す傾向にあった。一方、非糖尿病群において日内の血糖変動と臨床的動脈硬化検査値との有意な相関はなかった。以上より、糖尿病患者では非糖尿病患者よりも日内の血糖値が高く、血糖変動幅が大きく、血管の動脈硬化が進展している傾向にあった。また、非糖尿病患者では存在しなかったが、糖尿病患者では日内の血糖変動幅が大きいと動脈硬化度が高まる傾向にあった。よって、糖尿病患者では食後高血糖により血管の動脈硬化が進展している可能性が示唆された。しかし、本研究では症例数が少ないため有意な結果は得られなかったが、今後は糖尿病患者及び非糖尿病患者の症例数を増やし、日内血糖変動と血管の動脈硬化との関連について、より詳細に検討していく予定である。空腹時血糖値が正常範囲内であっても食後血糖が高いため血糖変動が大きくなる状態をグルコーススパイク(血糖変動増大)と呼ばれている。この日内での血糖変動増大の反復により動脈硬化が促進されると考えられている。毎食前後および夜間・深夜帯の血糖変動幅等の日内血糖変動の項目は、24時間連続的に血糖値を測定できる持続血糖モニター(continuous glucose monitoring: CGM)を用いることによって評価可能である。本研究では、2型糖尿病患者および対照となる非糖尿病患者を対象とし、CGM機器を用いた日内血糖変動、血流依存性血管拡張反応、脈波伝播速度、頸動脈内膜中膜複合体厚等の動脈硬化度および動脈硬化形成に関与する血中バイオマーカーを同時に測定し、2型糖尿病患者における日内血糖変動項目のうち、どの項目が動脈硬化形成・進展と関連するかを解明し、双方に共通に関与する血中バイオマーカーを探索するために開始された。今年度は対象者として2型糖尿病患者および非糖尿病患者計100例の症例数を目標としたが、8例しか募集することができなかった。現在、8症例全員に対して、上記の日内血糖変動、臨床的動脈硬化検査を実施し、採血にて血糖、HbA1c、脂質、酸化ストレス、C反応性蛋白等のバイオマーカーを測定した。しかし、血中の1,5-anhydroglucitol(1,5-AG)、グリコアルブミン、細胞接着分子、炎症性サイトカイン、レムナント等のバイオマーカーの測定は未実施である。今年度は症例数が少ないため、統計的に2型糖尿病患者における日内血糖変動が関与する動脈硬化形成機構を解明するまでには至っていないが、来年度以降は可能な限り多くの対象者を募集し、さらに、可能な限り血中の未実施検査項目の測定を完了し、研究を遂行していく予定である。

よって、糖尿病患者では食後高血糖により血管の動脈硬化が進展している可能性が示唆された。しかし、本研究では症例数が少ないため有意な結果は得られなかったが、今後は糖尿病患者及び非糖尿病患者の症例数を増やし、日内血糖変動と血管の動脈硬化との関連について、より詳細に検討していく予定である。当大学の臨床研究倫理審査委員会への申請書の作成準備に時間を要し、承認が当初の予定より遅れてしまった。また、持続血糖モニター機器(メドトロニックiPro2、日本メドトロニック社製)の購入に時間を要し、開始が当初の予定より遅れてしまった。研究対象者数の不足については、大学内および近隣の地域への宣伝活動が不十分であったことが原因と考えられる。また、研究分担者への役割分担についての説明が不十分であったため、研究の進行が順調には進まず、遅れてしまった。研究対象者数が目標に達していないので、大学内および近隣公民館などへのポスター掲示、講演会時の宣伝、近隣の地域住民への健康教室時の宣伝等により可能な限り多くの追加の対象者を募る予定である。今年度に引き続き、追加対象者に対しても早朝空腹時に採血し、同日、日内血糖変動、臨床的動脈硬化検査を実施し、採血にて血糖、HbA1c、脂質、酸化ストレス、C反応性蛋白等のバイオマーカーを測定する。また、試薬を購入し、血中の1,5-anhydroglucitol(1,5-AG)、グリコアルブミン、細胞接着分子、炎症性サイトカイン、レムナント等のバイオマーカーの測定を行う。得られたデータの解析は、日内血糖変動として毎食前後および夜間・深夜帯の血糖変動幅、mean amplitude of glycemic excursions (MAGE;血糖の最大値と最小値の平均変動幅)、24時間の最大・最小血糖値、平均血糖値、標準偏差、変動係数等の項目と、3つの臨床的動脈硬化検査、血中バイオマーカーとの間で解析を行い、2型糖尿病患者における日内血糖変動として評価可能な項目と動脈硬化形成・進展との関連、さらに、その血糖変動と動脈硬化の形成・進展に共通に関与する血中バイオマーカーの探索を行う。
視覚障害児専用石突に関する研究

研究目的視覚障害児専用石突は現在、存在しておらず成人用を代用している。そこで、本研究においては、視覚障害児の身体負荷が少なく、耐久性の高い、メンテナンス費用がかからない白杖歩行学習に最適な石突の開発を目的とした。研究方法本研究は、以下の方法にて行った。(1)石突の具体的なサイズの選定、重量、素材の決定(2)石突の試作品の製作(3)使用評価試験(4)改良品の製作及び再評価研究成果本研究では、以下の点が明らかになった。(1)石突の操作性新規開発した石突は、従来の最も軽量な製品(ペンシル型石突)より、軽量な石突となった。また、石突の違い(ペンシル型と新規開発型)による操作側の上肢筋活動の影響を尺側手根屈筋、尺側手根伸筋、上腕二頭筋、腕頭骨筋の活動を対象に測定を行ったところ、ペンシル型の石突と比較して、尺側手根屈筋と腕頭骨筋の筋活動に関して有意に小さかった。これにより、新規開発石突は、視覚障害児の身体負荷の少ない石突であることが明らかになった。(2)石突の耐久性従来の石突は、長い期間、使用することで路面に接する片面のみが擦り減り、通常は1年から2年の間に交換する必要がある。しかしながら、新規開発石突は、路面に接する部分を回転式とすることで、石突全面が均等に磨り減ることで耐久性が向上した。(3)石突のメンテナンス容易性従来の石突は、白杖シャフトに固定されており、石突本体が破損することで全てを交換することになっていた。また、この交換は、専門業者や指導者により交換するといったメンテナンス性の悪さが指摘されていた。今回の新規開発石突は、白杖シャフト取り付け部、振動調整部、路面接地部の3つのパーツで構成され、摩耗などで破損した場合は、路面接地部のパーツのみを視覚障害児・者自身が交換できるようにした。そうすることで、石突のメンテナンス性が飛躍的に向上した。
感染症政策における患者の人権保障―日諾中法制比較調査研究

感染症対策における患者の人権保障については、2つの面から検討を進めた。1つは日本国内のハンセン病法制の制定過程や改正過程、法の運用実態を明らかにするため、通史として考察してきた。日本独自のハンセン病隔離政策の特質がいかに形成され、人権侵害をもたらし現代へ影響を与えたかを明らかにした。2つめはノルウェーを主たる対象国にハンセン病法制の制定や運用実態につき、考察してきた。「ノルウェー方式」と日本のハンセン病政策との相違を法構造と法運用実態を中心に考察してきた。本年度においては、研究成果の一部として主に四点あげらえる。第一に、研究代表者鈴木、棟居、研究協力者の井上により、研究費取得を前後した近年の成果として『人権としての社会保障ー人間の尊厳と住み続ける権利』を発刊した。第二に、鈴木が日本情報経営学会にて、「ハンセン病政策と人権保障」をテーマに招待講演を行った。学会テーマが「安心して暮らせる医療・福祉社会の実現に向けての情報経営学」であり、関連領域に対し人権保障の観点から提言等を行った。第三に、6月ノルウェーのSigurd Sandomo氏らを招き、ノルウェーにおけるハンセン病歴史研究の成果とわが国との比較研究を念頭に置いた課題に国際研究会を行った。第四に、西山、土屋、末永が、15年戦争中における医学上の人権問題についての歴史的検討を行い、また学会報告を行った。本研究目標は、国際的視点を持ち人権保障の観点から、日本における感染症政策についての法制度の多角的な検討である。この目標を達成するため、申請書において、本研究課題を3つの側面にわけ、達成目標と分担を明確にすることをあげた。それぞれ重複する部分もあることを前提にしつつ、本年度は、主に以下の研究成果を出すことができた。主要なもののみを挙げる。詳細については、研究業績を参照のこと。第三に、感染症対策における政策形成過程と患者の権利に関する研究では、研究協力者の井上が専門誌にて「ハンセン病政策と人権」連載を行っている(2015年度継続予定)。また、研究代表者の鈴木はじめ研究分担者が、関連テーマにつき学会報告等を継続的に行った。第二に、アジアにおける感染症政策形成しおよび患者の人権侵害に関する研究については、西山を中心に、科研採択前から継続して行ってきた研究成果を『戦争と医学』として公刊した。同著では、日本におけるハンセン病政策の特徴について言及している。今年度は、それぞれが本研究課題の問題意識に基づき、下記の通りに調査研究を行った。次年度はこれまでの調査や研究成果をまとめ、最終的な研究成果をあげることを目標としており、今年度はそのための準備を行った。代表の鈴木は、日本のハンセン病医療政策の特質を明らかにするため、韓国調査を実施し日本の影響と韓国独自の展開について整理した。西山は、戦前における医学博士号授与に焦点を絞り検討を重ねた。土屋は、医の倫理の観点からヘルシンキ宣言に焦点にしその意義や課題を明らかにした。末永は、歴史学の観点から、戦前のアジアにおける感染症政策について検討を行った。なお研究協力者である井上は、鈴木とともに調査研究を行い、ノルウェーを中心にハンセン病政策の国際比較に取り組み、その成果の一部を「ハンセン病と人権保障」等にて公表した。本年度においては、役割分担に基づき調査等を行い、最終年度に向けて必要な調査を行うことができた。最終年度の研究実績は、これまでの調査研究の成果を日本におけるハンセン病問題へ還元すべく学会報告を精力的に行った。2016年4月に、最高裁判所が「特別法廷」問題に関して調査報告を公表したため、国内外での議論状況を整理しつつ、この課題に焦点を当てたことが特徴である。国内状況を踏まえ、ノルウェーにおける患者の人権保障に関する研究成果は、日本社会福祉学会全国大会および民主主義科学者協会法律家部会2016年度学術総会等において報告した。特に、後者では、ハンセン病回復者藤崎陸安氏、弁護士内藤雅義氏とともに共同報告を行い、司会は連携研究者の井上が行った。藤崎氏はハンセン病回復者であり、自身の体験や患者運動の中身に触れながら、患者の命を軽んじる政策が日本のハンセン病政策の根幹であったことを明らかにした。長年にわたる人権侵害を許したのは、法律家等の専門家であり、療養所の実態を知ろうとしなかったと言及した。内藤氏はハンセン病国賠訴訟、全生園医療過誤訴訟を経て現在、家族訴訟代理人であり、法実務家の立場から、日本のハンセン病患者らに対する人権侵害が放置された要因について、国家および社会との対応のあり方から検討した。原発事故被害も視野に入れ、偏見があると「事実」が見えなくなることを指摘した。鈴木は、2名の報告を受け、日本におけるハンセン病法制に対し法学的視点からの検討の欠如していたことを批判し、ハンセン病の政策モデルの一つであるノルウェーとの比較を行った。最後に、法学界の責任の果たし方について問題提起を行った。

本年度においては、当該テーマに関する社会的背景や、国別の差異などから多面的な方向から調査研究を実施し、理論的基盤を固めるための研究を遂行することができ、おおむね順調に進展した。次年度を最終年度とし、各自がそれぞれの専門領域から、感染症政策と人権保障、倫理についての考察を深める予定である。日本においては、2016年4月に最高裁がハンセン病特別法廷問題に関する最終報告書を公表し、司法と患者の人権保障のあり方が問われ始めた。こうした点にかんがみ、歴史的検討を踏まえた考察を深めていく予定である。28年度が最終年度であるため、記入しない。社会保障法最終年度である2015年は、各自の問題意識を共有しながらこれまでの研究成果について公表するべく、各分野における研究成果と今後の課題についてまとめる。本年度においては、わが国における公衆衛生、医療政策に関する社会的背景、歴史的考察、現代的課題につき、多面的な方向から理論的基盤を固めるための調査及び研究を遂行する事ができた。予定していた海外調査が調査先の事情により延期になったため。2014年度に予定していた文献入手が遅れた。次年度に予定していた海外調査を行う。今後は、各自の問題意識を共有しながら、感染症政策とりわけハンセン病政策に関する運用の実態調査や、理論的検討を重視していく。特に、ノルウェーでの政策運用の実態調査をすることで、わが国における感染症政策の特質と課題を明らかにする。2015年に文献を購入する予定である。出張予定の変更により、旅費の執行が行われなかった。また、必要とする物品費の在庫がなかったため、年度内に入手することができなかった。今年度、調査および研究会開催のために、出張旅費を支出予定である。また、必要に応じて図書費と謝金の支出を行う。
複数分子を標的とした新薬設計手法の開発

本研究では、無限次数多重検定法(LAMP)を開発し、ヒト乳がん細胞等における制御因子の同定に適用した。形状相補性に基づくドッキング手法MEGADOCKを発展させ、キナーゼ等の標的タンパク質の網羅的解析を実施し、結果をデータベース化した。また化合物プレ・スクリーニングを行うSpressoシステムを開発した。分子動力学計算により熱揺らぎに基づく結合ポケットの変形を評価することにより、バーチャルスクリーニングの性能が向上することも見出した。(1)「化合物データベースのネットワーク解析による複数標的分子候補の列挙」に関しては、ネットワーク解析に必要となる数理統計手法の研究に関して大きな進展を得た。複数分子を標的とした薬剤を開発するためには、複数の標的が合わさった時に、有意に対象に変化が起こるのか否かの判定をするための数理統計手法が必要となる。ところが、現在までの統計手法では複合要因を発見しようとすると1つも有意な結果が現れないことが多く、複数標的薬剤の発見に結びついていなかった。そこで、既存の方法で複合要因を考えると偽陽性率の推定が甘くなることを見出し、複合要因を考えても高速かつ高精度に推定できる数理統計手法の開発を行った。(2)「形状相補性に基づくドッキング手法による分子ーキナーゼの大規模組み合わせ探索」では、数千個のタンパク質間での網羅的な相互関係の解析を実施し、MEGADOCKの機能拡張としてGPUによる高速化などの機能を実装した。またGLIDEを用いて分子ーキナーゼ間のドッキング解析を実施した。(3)「水分子を考慮した複数分子標的薬のリード化合物生成」では、タンパク質とリガンドの相互作用を正しく評価することを目的として、FMO(Fragment Molecular Orbital)法と分子動力学シミュレーションをそれぞれ用いて、特定ターゲットとの結合モードの詳細な解析などを行った。分子シミュレーションを行う際に水分子をタンパク質の回りに配してタンパク質とリガンド間の相互作用の存在確率が求めることが、相互作用の解析に重要であることを示した。(1)「化合物データベースのネットワーク解析による複数標的分子候補の列挙」に関しては、複数分子を標的として薬剤を投薬した場合に細胞内でどのような変化が起こるかに関して、ネットワークフロー解析を用いて計算機実験をする系を構築した。また、構築したプログラムを用い、単細胞生物の大腸菌の単一遺伝子破壊株で採取されたデータに適用することで、構築プログラムが動作することを確認した。さらに、既存手法では各タンパク質は有無だけが考えられ存在量が考慮されていなかったが、この点を改良し、特定のタンパク質量に制約を加えた条件下においても計算ができるようにした。これにより薬剤により完全に特定のタンパク質やパスウエイを止めるのではなく、穏やかに止めた状態での細胞表現形の変化を解析できることが見込める。また本アルゴリズムを、大腸菌のセリン欠失株、グリシン欠失株に適用することで、これらの欠失株では、利用される代謝反応系が異なる可能性があることを示唆する結果を得た。(2)「形状相補性に基づくドッキング手法による分子ーキナーゼの大規模組み合わせ探索」では、MEGADOCKソフトウェアの大幅な高速化、精度向上、および計算可能な分子種の拡張を行うとともに、大量のタンパク質群を対象としたネットワーク推定実験を実施し、年度内に3本の査読付き論文として採択された。(3)「水分子を考慮した複数分子標的薬のリード化合物生成」では、Jarzynskiの等式に基づくタンパク質とリガンド間の結合自由エネルギー計算について、CPUに加えてGPGPUのような異なるプロセッサが混在する計算環境において計算資源を十分に活かすために、プロセッサ間で計算負荷のバランスを取る機構を実装した。結果として、GPGPU向けに最適化された分子動力学シミュレーションプログラムを、さらに最大で約20%程度計算速度を向上させることに成功した。(1)「化合物データベースのネットワーク解析による複数標的分子候補の列挙」に関して、PPIネットワーク情報を事前知識とした際、どの化合物が影響を与えているかを統計的有意性を持って解析するために、新たな解析手法gLAMPを開発した[Terada PNAS 2013]。同手法を用いてゲノム情報がよく調べられている植物での計算機実験を実施したところ、光環境下での成長度を調べる形質に対し、光応答に関連した遺伝子群を抽出することができた。また、ネットワーク解析の並列化による高速化を達成したことで、収集したヒトのPPI及びパスウエイ情報に対し、ChEMBL, PubChemの情報を加えることで、薬剤とネットワークの関係を見いだせる目処が立った。(2)「形状相補性に基づくドッキング手法による分子ーキナーゼの大規模組合せ探索」では複数の対象について解析を進めた。順方向の探索では、c-Yesキナーゼを標的として、ライブラリからの阻害薬候補探索を実施し複数のヒットを得た。さらに近縁のキナーゼに対する阻害薬情報から機械学習の手法により候補を得る手法を開発した。逆方向の探索では、作用機序が未知の化合物について、逆ドッキングなどによる候補探索を進めた。またGLIDEが大きな探索ポケットに弱いことから改良案を発表した[Ban PDPTA 2014]。(3)「水分子を考慮した複数分子標的薬のリード化合物生成」に関しては、タンパク質のアミノ酸配列の保存性情報に関して、創薬標的候補となるリガンド結合部位の配列間の保存性を評価関数により評価する手法を開発し、同時に立体構造においてアミノ酸残基の配列保存性を示すVISCOを開発し公開した。また、リガンド結合部位に対して大規模にFMO法を適用することで、リガンド結合部位のアミノ酸とリガンド間の相互作用を明らかにし、結合に重要なアミノ酸を提示できることを示した。

(1)「化合物データベースのネットワーク解析による複数標的分子候補列挙」では、現在データが増加しているゲノムワイド関連解析に対し、解析の速度を高速にするためにGPGPUの利用して高速化する手法を開発した[ACM BCB 2015]。また、有意なネットワーク探索に関し、公開されているシロイヌナズナデータによる疑似実験を行って、開花速度と日照時間に関連したネットワークが抽出できることを確認できたため、薬剤反応の検出へと進める。(2)「形状相補性に基づくドッキング手法による分子ーキナーゼの大規模な組合せ探索」では、キナーゼタンパク質としてCDK2を選択し、プロテアーゼとしてデング熱ウイルスのプロテアーゼを選び、大規模なドッキングによる新規阻害化合物探索の研究を進めた。GLIDEソフトウェアを用いる際にタンパク質立体構造データの選び方によって評価値が大きく影響を受ける件については、分子動力学法等によって生成される構造アンサンブルから、どのような構造データを選ぶべきかを検討した。またGLIDEに代わる独自のドッキングソフトウェア、あるいはそれを助けるプレフィルタリング手法についての研究を進めた。(3)「水分子を考慮した複数分子標的薬のリード化合物生成」では、生体分子と水分子の系に対して分子動力学シミュレーションを行い、その熱揺らぎを考慮した蛋白質の立体構造を獲得するためにクラスタリングを行い、その代表構造を獲得する手順を開発した。この手法によって得られている代表構造が実際に創薬標的として適切かについて、さらに検討を行っていくと共に広く応用を進めていく。(1)「化合物データベースのネットワーク解析による複数標的分子候補列挙」では、当初予定していた、有意なネットワーク探索手法の実用化に向けた実験が行えた。また、データ肥大と組合せ爆発により速度が問題になる場合に対応するため、GPGPUを用いた高速化ができたため、概ね順調である。(2)「形状相補性に基づくドッキング手法による分子ーキナーゼの大規模な組合せ探索」では、分子動力学法などによって生成される多数の構造アンサンブルから、結合サイトのキャビティの容積等とスクリーニング成績の関係を調べて、ホロ体とアポ体で大きく性能が異なる点などを見出した。ただしどのような対象についてもいえる一般則とまでは言えない。一方、プレフィルタリングの併用によるドッキングの高速化のアイデア等を得た。達成度は概ね順調である。(3)「水分子を考慮した複数分子標的薬のリード化合物生成」では、PDB(Protein Data Bank)に登録されているようなrigidな構造に対するドッキングシミュレーションなどでは生体内にある水分子の影響を考慮することは難しいが、分子動力学シミュレーションとドッキングシミュレーションなどを組み合わせることで熱揺らぎを考慮したFragment Molecular Orbital(FMO)法やドッキングシミュレーションが可能になると考えている。
ネットワーク構造に対する非線形解析

3重結節点のみからなるネットワークf構造を持つ界面に対し,各弧が平均曲率流に従い,3重結節点ではヤングの法則を満たし,境界とは直交するように接している場合について,界面がどのようなダイナミクスに従うかについて研究を進めた.特に,考える領域の境界の曲率がダイナミクスに及ぼす影響について考察した.本年度は特に,3重結節点が複数ある場合について,定常解の存在条件を明らかにし,その情報から安定性を決定する方法について研究を進め,以下のような成果を上げた.まず,定常界面の安定性に関する理論的考察を元に,3重結節点が1個の場合について得られている存在条件を帰納法を用いて一般化することにより,複数個の3重結節点を持つ界面の存在条件を明らかにした.さらには,条件を境界からの寄与と内部構造からの寄与の項に分解し,境界の曲率の符号と不安定性次元の関係を明らかにした.次に,与えられた領域において,負の長さを許した場合の定常状態が存在するための条件と安定性との関わりについて調べた.これは古典的なFermat-Steiner問題と関係する興味深い変分問題であるが,境界条件の違いから自由度の高い難しい問題となる.これまでの研究により,凸領域において複数個の3重結節点を持つ界面に対して定常状態の存在が示されているが,ここでは非凸な領域についても研究を進め,変曲点で退化しない場合には定常解は退化せず,従って双曲的な性質を持つことを明らかにした.その他,ネットワーク上の領域における線形固有値問題の主固有値の最小化問題,熱方程式の解の臨界点の位置に関する研究を行い,その基本的な性質について詳細に調べた.3重結節点のみからなるグラフ的な構造を持つ界面に対し,各弧が平均曲率流に従い,3重結節点ではヤングの法則を満たし,境界とは直交するように接している場合について,界面がどのようなダイナミクスに従うかについて研究を行った.特に,考える領域の境界の幾何学的性質がダイナミクスとどう関わっているかについて考察した.本年度は特に,3重結節点が複数ある場合について,定常解の存在と安定性について調べ,以下のような成果を上げた.まず,定常界面の安定性に関する理論的考察を行った.3重結節点が1個の場合について得られいるこれまでの結果を一般化し,複数個の3重結節点を持つ界面に対して帰納法を用いて特性関数の具体形を得た.この特性関数を解析することにより,特性関数の符号と境界の曲率の符号から不安定次元を与える公式を導き,その幾何学的な意味を明らかにした.次に与えられた領域において,定常状態が存在するための条件について調べた.これは古典的なFermat-Steiner問題と関係する興味深い変分問題であるが,境界条件の違いから自由度の高い難しい問題となる.これまでの研究により,3重結節点が1個の場合については凸領域においては少なくとも1個の定常状態の存在することが示されているが,今年度はこれを拡張し,複数個の3重結節点を持つ界面に対して帰納法を用いて定常状態の存在を示した.また,存在を示す過程において,不安定次元が異なる定常状態が2個存在することが明らかになった.さらに,ヤングの法則においてある制約条件が必要となることを発見した.3重結節点のみからなるグラフ的な構造を持つ界面に対し,各弧が平均曲率流に従い,3重結節点ではヤングの法則を満たし,境界とは直交するように接している場合について,界面がどのようなダイナミクスに従うかについて研究を進めた.特に,考える領域の境界の曲率がダイナミクスとどう関わっているかについて考察した.本年度は特に,3重結節点が複数ある場合について,定常解の存在条件と安定性の関係について研究をすすめ,以下のような成果を上げた.まず,定常界面の安定性に関する理論的考察を行った.3重結節点が1個の場合について得られているこれまでの結果を帰納法を用いて一般化することによって,複数個の3重結節点を持つ界面に対する特性関数の具体形が得られていたが,ここではそれをさらに変形し,境界からの寄与と内部構造からの寄与の項に分解し,境界の曲率の符号が安定性に及ぼす影響を明らかにした.次に,与えられた領域において,定常状態が存在するための条件と安定性との関わりについて調べた.これは古典的なFermat-Steiner問題と関係する興味深い変分問題であるが,境界条件の違いから自由度の高い難しい問題となる.これまでの研究により,凸領域において複数個の3重結節点を持つ界面に対して定常状態の存在が示されているが,ここでは非凸な領域に対する研究を進め,変曲点のところで界面が接すると退化した状態になることを明らかにした.その他,ネットワーク上の反応拡散方程式の非定数定常解の存在とその安定性や,線形固有値問題の固有値分布,熱方程式の解のホットスポットについても研究を行い,その基本的な性質について明らかにした.3重結節点のみからなるネットワークf構造を持つ界面に対し,各弧が平均曲率流に従い,3重結節点ではヤングの法則を満たし,境界とは直交するように接している場合について,界面がどのようなダイナミクスに従うかについて研究を進めた.特に,考える領域の境界の曲率がダイナミクスに及ぼす影響について考察した.本年度は特に,3重結節点が複数ある場合について,定常解の存在条件を明らかにし,その情報から安定性を決定する方法について研究を進め,以下のような成果を上げた.

まず,定常界面の安定性に関する理論的考察を元に,3重結節点が1個の場合について得られている存在条件を帰納法を用いて一般化することにより,複数個の3重結節点を持つ界面の存在条件を明らかにした.さらには,条件を境界からの寄与と内部構造からの寄与の項に分解し,境界の曲率の符号と不安定性次元の関係を明らかにした.次に,与えられた領域において,負の長さを許した場合の定常状態が存在するための条件と安定性との関わりについて調べた.これは古典的なFermat-Steiner問題と関係する興味深い変分問題であるが,境界条件の違いから自由度の高い難しい問題となる.これまでの研究により,凸領域において複数個の3重結節点を持つ界面に対して定常状態の存在が示されているが,ここでは非凸な領域についても研究を進め,変曲点で退化しない場合には定常解は退化せず,従って双曲的な性質を持つことを明らかにした.その他,ネットワーク上の領域における線形固有値問題の主固有値の最小化問題,熱方程式の解の臨界点の位置に関する研究を行い,その基本的な性質について詳細に調べた.
足場非依存的増殖制御機構の解析

培養細胞の癌形質の中でも足場非依存的増殖能獲得は、浸潤や転移の必要条件となる重要な性質である。癌細胞は足場が存在しなくともG1期からS期に進行するが、正常細胞の場合には足場が存在しないとG1期に停止する。我々は増殖因子EGF存在下では癌形質、非存在下では正常形質を示すNRK(正常ラット腎線維芽細胞)を用い、この足場非依存的増殖を引き起こす癌化シグナル伝達系を解析してきた。今回この癌化シグナル伝達経路の最終ターゲットを知るべく、NRK細胞を足場存在下で増殖開始させその後浮遊させて引き続き培養し、細胞周期制御因子群を解析した。足場存在下での培養が短いと細胞はEGF無しにはS期へ進行できない。このときCdk4,Cdk6,Cdk2が活性化し、E2Fの活性化も起こっていたがCdc6はmRNA,蛋白質ともに発現していなかった。EGF存在下ではCdc6が誘導されS期に進行する。逆にCdc6を大量発現した株ではこの条件でEGF非存在下でもS期への進行が有意に増加していた。以上のことから発癌刺激による足場非依存的増殖開始を決定する要因の一つにcdc6発現誘導があることが示された。ところがCdc6高発現株においても足場非依存的増殖停止するとCdc6タンパク質が経時的に消失する。このことは足場非依存的条件下におけるCdc6発現抑制は転写レベルおよび転写後レベルで制御されていることを意味する。この転写後制御はいかなるプロテアーゼによるものかインヒビターを用いた実験を試みた結果、この分解はカルパイン様プロテアーゼによるものであった。以上癌化シグナルはCdk4,6,2の活性化とともにCdc6の発現誘導(mRNAレベルでの誘導とともにタンバク分解系の抑制により)をひきおこし、その結果足場非依存的培養条件下での増殖を誘導するものと考えられた。