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四国地方における仏像の造像圏とその形成過程に関する研究

この一体は比較的年代の下る時代(14世紀後半頃)まで一木造りが積極的に行われていたことや、板光背を備える作品が多く見られることが特色と言える。和歌山・法音寺十一面観音像と高知・名留川観音堂十一面観音像にみる頭体より台座まで一木で仕上げ、またずんぐりとして、肩をいからせたような造形の志向はこの地域でしばしば確認された。また徳島・龍光寺仏像群と高知・豊楽寺、定福寺、金林寺(いづれも如来像の比較)といった仏像の類似は、平安時代中期から後期にかけて四国中山間地域における独自の造像圏の存在を窺わせるものであった。一方、豊後水道を挟んだ、九州東南部においては廃仏毀釈の影響もあって、比較対象すべき作例が少ないが、大分・龍ヶ鼻石仏群、堂ヶ追石仏などは従来行われてこなかった平安時代後期の木彫像との比較を試みるべき作例と考えられる。またこれらの石仏祭祀の問題は民俗学的な見地からも興味深いものがある。また鹿児島県清水町石仏群、本高城集落仏像群、宮崎県綾町、国富町、福岡県南阿蘇村周辺の調査を行った。これらは逐次、調査報告も交えて成果発表していきたい。当初、遼東半島周辺の調査を目指していたが、震災などにより日程調整ができず、本年中には是非行いたいと思う。24年度が最終年度であるため、記入しない。仏教に関わらず人々の信仰に関わる文化の研究は今後、社会学、歴史学、民俗学なども含めてより広範な学際領域を網羅したものとして進展すべきと思われる。大学や研究分野の敷居を、自他ともに下げたところであらたな対話の機会を作ってゆきたい。
不斉炭素資源の高度利用を指向する高選択的プロセスの開発

アセタールテンプレートを用いる不斉誘導はその高い誘導率のため現在有機化学の中で重要な手法となっている。その機構に関してはSn2型協秦反応であると提唱させている。しかし、そのためにはアセタールの結合開製と求核剤(Nu)とアセタール炭素との間に新たに生成する結合生成とのタイミングが全く同時である必要がある。従って、用いるルイス酸(MXn)の酸性強度およびNuの求核性の程度等々によって、不斉誘導率および不斉誘起の方向などが支配されるはずである。今回、その様な知見を初めて得ることが出来これを利用してステロイド側鎖の立体選択的合成に成功した。ステロイダルアルデヒドと(2R,4R)-(-)-ペンタンジオールから合成したキラルなステロイダルアセタール(S-R,R体)をアリルシランと四塩化チタン存在下に反応させ、常法に従って処理すると(S-S体)のアルコールが圧倒的に得られた。一方、S-S,S体のステロイダルアセタールとアリルシランを同様に反応させたところ、(S,S)体と(S,R)体のアルコールの混合物を9:1の割合で生成した。従来、SSアセタールはRキラリティを誘起することが知られており、この場合(S,R)体を与えるべきであるが予想に反して(S,S)体を主生成物として与えた。一方、(S-S,S体)のステロイダルアセタールとアリルスズの反応は予想通り(S,R)体のアルコールを高選択的に与えた。結局、求核性の強いアリルスズはアセタールテンプレートの指示する方向で不斉誘起を行なうが、求核性の弱いアクルシランでは反応性が低いためアセタールの結合開裂が先に起こってしまい、不斉誘導はアセタールテンプレートによっては支配されず、ステロイド側鎖のメチル基等々のクラム則によって決定されることが判明した。すなわち、結合開裂と結合生成のタイミングが不斉誘導に重要であることが判った。これを利用してブラシノリドやα-エクダイソンの合成を行なった。
胃癌診断血清マーカー実用性評価システムの構築

平成6年12月末現在753例の胃癌症例と、1005例の対照について、自記式アンケートと血清が収集され、血清ペプシノーゲンI(PGI)・II(PG2)と抗ヘリコバクター・ピロリIgG抗体の測定が終了した。残血清は、-80°Cで凍結保存されている。ROC曲線を描いてこれらの血清検査の最適の判定基準と(敏感度%、特異度%)を分析したところ、60歳代で男:PG2/13.4(57.6,55.1)、女:PG1<PG2<2.5(63.8,60.9)であり、若い年代ほど高い値が得られたが、間接X線に替わって胃癌検診の一次スクリーニングに用いるには十分な値でなかった。この分析には、進行癌で既に救命不能となっている症例も含まれていることから、最終的な実用性の判定には、救命可能な胃癌に限った分析を実施する必要が、また血清検査を併用して判定する方法についても検討する必要がある。血清検査の併用に関しては目下のところ、考えられる総ての条件について敏感度・特異度を計算する「総当たり法以外に適当な方法がないという結論であるが、他の方法や総合当たり法に測定誤差などを加味した方法についてなお検討を続けている。ヘリコバクター・ピロリが胃癌の発がんに関与していることが疑われているが、本研究のデータで胃癌と抗ヘリコバクター抗体陽性の関連性のオッズ比を年齢別に計算し、20歳代で23.1、30歳代で11.0、40歳代9.6、50歳代3.3、60歳代1.6と年齢と共に低くなるという結果を得た。これは胃癌症例の陽性率が87.7%から91.9%と年齢でほとんど変わらないのに対して、対照では20歳代28.0%から60歳代82.0%と、年齢の上昇に伴って陽性率が上昇するためであった。平成5年12月末現在、症例330例、対照987例が収集され、血清ヘリコバクター抗体、血清ペプシノーゲン値IおよびIIの測定、生活習慣(飲酒、喫煙)、既往歴に関する自記式アンケートの回収・コンピューター入力、残血清の-80°Cでの凍結保存が終了している。対照を使った分析において、(1)ヘリコバクター抗体とペプシノーゲンI、IIの間に正の相関関係がみとめられること、特にペプシノーゲンIIとの相関が強いこと(いずれも年齢補正後、統計学的に有意)を明らかにした。(2)飲酒、喫煙とヘリコバクター抗体の間には関係は認められなかった。(3)内視鏡がヘリコバクターを媒介する可能性が心配されているが、胃疾患の既往、自覚症状の影響を除いた分析においては、内視鏡検査歴とヘリコバクター抗体陽性の間には関連を認めなかった。(4)湿疹の既往とヘリコバクター抗体陽性の間に関連性を認めた(年齢補正後、統計学的に有意)が、現在その意義づけについて検討している。(5)健診受診者に関して、ヘリコバクター抗体陽性率は20代28%、30代43%、40代54%、50代71%、60代85%と年齢とともに高率となった。(以上のうち(1)、(5)については第4回日本疫学会総会で発表)平成6年12月末現在753例の胃癌症例と、1005例の対照について、自記式アンケートと血清が収集され、血清ペプシノーゲンI(PG1)・II(PG2)と抗ヘリコバクター・ピロリIgG抗体の測定が終了した。

残血清は、-80°Cで凍結保存されている。ROC曲線を描いてこれらの血清検査の最適の判定基準と(敏感度%、特異度%)を分析したところ、60歳代で男:PG2>13.4 (57.6,55.1)、女:PG1/PG2<2.5(63.8,60.9)であり、若い年代ほど高い値が得られたが、間接X線に替わって胃癌検診の一次スクリーニングに用いるには十分な値でなかった。この分析には、進行癌で既に救命不能となっている症例も含まれていることから、最終的な実用性の判定には、救命可能な胃癌に限った分析を実施する必要が、また血清検査を併用して判定する方法についても検討する必要がある。血清検査の併用に関しては目下のところ、考えられる総ての条件について敏感度・特異度を計算する「総当たり法」以外に適当な方法がないという結論であるが、他の方法や、総当たり法に測定誤差などを加味した方法についてなお検討を続けている。ヘリコバクター・ピロリが胃癌の発ガンに関与していることが疑われているが、本研究のデータで胃癌と抗ヘリコバクター抗体陽性の関連性のオッズ比を年齢別に計算し、20歳代で、23.1、30歳代11.0、40歳代9.6、50歳代3.3、60歳代1.6と年齢と共に低くなねという結果を得た。これは胃癌症例の陽性率が87.7%から91.9%と年齢でほとんど変わらないのに対して、対照では20歳代28.0%から60歳代82.0%と、年齢の上昇に伴って陽性率が上昇するためであった。
顔に変形を有する児童に対する発達臨床的支援プログラムの開発とその実践的活用

2006年度に引き続き、医療機関・学校・家族らと協同しての支援が行えるような発達臨床的支援の実践として、支援プログラムの作成のためのパイロットケースとして、東北大学歯学部付属病院において,継続して児童期後期から思春期に移行する口唇裂口蓋裂児の面接を行なった。また2005-2006年度に行った成人期口唇裂口蓋裂者への面接調査、および先行研究の文献検討から見いだされた顔に変形を有する人々の各発達期における心理社会的問題と支援のモデルについての論文が、心理学研究に採択された。これを元にして実践を継続して行い、今後、より充実した支援プログラムを作成する予定である。また、顔の変形の問題は、単に顔に変形を有する人々の問題だけではなく、それを取り巻く社会の問題でもあるため、冊子の作成などの情報支援,また子どもが孤立無援になりがちな学校における支援ニーズを教師に伝える資料作成も今後の課題である。また、8月には,前年度までに見いだした各発達期のモデルを国内外の学会や研究会で発表・情報収集を行うために、ドイツで行われた第13回ヨーロッパ発達心理学会において、思春期の口唇裂口蓋裂者の自己形成についての発表を行って、海外の研究者とも積極的に意見交換をするとともに、そこで得た知見をもとに、顔に変形を有する人々の心理社会的問題と支援のモデルの精緻化を行った。さらに、こうしたモデルについての研究上、顔の変形を有する人々の発達に関する問題が、実は脳性まひ児などの身体障害者の発達と可視性(見た目)という観点で共通する部分があることが考えられた。このため、日本発達心理学会第19回大会において脳性まひ児の研究を行っている心理学者との自主シンポジウムを開催した。これによって顔の変形の問題が単にこの問題だけにかぎらず、身体障害などいわゆる障害の領域とも共通する問題であることが明確になった。顔に変形を有する児童に対する発達臨床的支援プログラムを開発するために,本年はその実態調査を行ない,その報告を学会発表や論文投稿によって行った。調査については,特に発達的な影響が大きいと考えられる先天的な変形のうち,比較的発生率が高い口唇口蓋裂を有する人々を対象として,実態調査を行った。調査に際しては,特に,発達早期からの養育者と顔に変形をもつ子どもとの関係性の構築等の家族環境、友人との関係性,就学前後からの他者に対するコーピングスキルの獲得、児童期など各発達段階における発達レベルにふさわしい顔の変形の認知などが患者の心理的適応にどのように影響しているかを調査した。調査協力者は,形成外科・口腔外科を退院後の20-30代口唇口蓋裂患者24名であり,東北大学歯学部付属病院外来において、2005年7月から2006年1月まで、継続的に面接調査を行なった。実態調査の結果は、各発達段階ごとの患者の発達的特徴と課題,および心理的支援のモデルを提起する形でまとめられ、発達心理学会で一部を発表後,東京大学紀要に「口唇口蓋裂が患者の適応に与える影響-患者の発達的支援モデルへ向けて-」という形で,投稿(現在印刷中),さらに発達心理学研究に「口唇口蓋裂患者の心理的苦痛と転機:探索的インタビューに基づく仮説的発達移行モデルの構築」という形で投稿した(審査中)。あわせて心理学研究にも先行研究についてのレビューを投稿中である(「Visible Differenceにまつわる心理的問題:その発達的理解と支援モデルの構築」)。また,7月に9th European Congress of Psychology(スペイン)において、研究成果を報告し、さらにイギリスチャリティChanging FacesおよびUniversity of West Englandにおいて世界の研究動向について知見を収集した。初年度におこなった病院外来での成人期口唇裂口蓋裂患者の面接からの知見をもとに,児童期前期中期,児童期後期,思春期,青年期後期の各発達期の心理社会的問題を明らかにし,さらにそれが各発達期の口唇列口蓋裂者の自己の中でどのような意味づけがなされているのかについて,モデルを構築する作業を行った。この結果,今後は児童期から青年期までの発達的支援を行う際に,一定の指針が出来たと考えられる。今年度は初年度に構築したこのモデルをもとにして,T大学歯学部付属病院において,継続して児童期後期から思春期に移行する口唇裂口蓋裂児の面接を行って,支援モデルに基づいた実践を行った。この支援においては,単に病院外来において面接による支援を行うだけでなく,病院医師や他の心理学者,児童の両親,学校と緊密な連絡をとるリエゾンコンサルテーション的な支援を積極的に進めている。また,口唇裂口蓋裂等,可視的変形を有している者は,他者・社会の反応に大きな影響を受ける。このため,顔の可視的変形に対する社会の側の理解促進が,支援の重要な側面である。この他者・社会への理解促進のために,9月には日本社会心理学会学会企画シンポジウムにて企画・発表を行って,多くの人々の理解に向けて討議を行った。さらに,2月には,この領域の先進的な研究・実践活動を行っているイギリスチャリティChanging Facesを訪問して世界の研究動向について知見を収集すると共に,当該領域の国際比較研究の可能性について活発な意見交換を行った。実態調査及び支援モデルについては,論文にまとめられ学会誌(発達心理学研究,心理学研究)に投稿して現在審査中である。

また2005-2006年度に行った成人期口唇裂口蓋裂者への面接調査、および先行研究の文献検討から見いだされた顔に変形を有する人々の各発達期における心理社会的問題と支援のモデルについての論文が、心理学研究に採択された。これを元にして実践を継続して行い、今後、より充実した支援プログラムを作成する予定である。また、顔の変形の問題は、単に顔に変形を有する人々の問題だけではなく、それを取り巻く社会の問題でもあるため、冊子の作成などの情報支援,また子どもが孤立無援になりがちな学校における支援ニーズを教師に伝える資料作成も今後の課題である。また、8月には,前年度までに見いだした各発達期のモデルを国内外の学会や研究会で発表・情報収集を行うために、ドイツで行われた第13回ヨーロッパ発達心理学会において、思春期の口唇裂口蓋裂者の自己形成についての発表を行って、海外の研究者とも積極的に意見交換をするとともに、そこで得た知見をもとに、顔に変形を有する人々の心理社会的問題と支援のモデルの精緻化を行った。さらに、こうしたモデルについての研究上、顔の変形を有する人々の発達に関する問題が、実は脳性まひ児などの身体障害者の発達と可視性(見た目)という観点で共通する部分があることが考えられた。このため、日本発達心理学会第19回大会において脳性まひ児の研究を行っている心理学者との自主シンポジウムを開催した。これによって顔の変形の問題が単にこの問題だけにかぎらず、身体障害などいわゆる障害の領域とも共通する問題であることが明確になった。
カントの人間哲学の総合的理解の試み

『純粋理性批判』の摘要の作成、『道徳形而上学の基礎づけ』『天界の一般自然史と理論』「嘘論文」などカントの主要著作の精読を通して、自分のこれまでのカント研究の成果を「カントの人間思想に関する十の仮説」としてまとめた。これをこの三年間に研究会、学会、大学の講義、講演等で口頭発表したが、今後数年間のうちに上梓したい。本仮説の主軸は、「人間の自己対象化的性格の剔抉」がカントの全哲学的営為を貫いていたと把握することができる、というものである。これがカントの認識論、実践論、目的論、宗教論、政治論、大学論などを串刺しにしている、という視点を今後国際カント研究の世界にも発信していく。○私が主催する少人数の研究会で『道徳形而上学の基礎づけ』を精読した。カントの思想的特質のうち、イエスの黄金律に帰着する幸福主義的な道徳観を他律として批判することを通じて、キリスト教の神から戴いた道徳律をも同じく他律として退ける、という戦略が鮮明となった。○論文「人間愛から嘘をつく権利と称されるものについて」を精読した。その結果ようやく、当初の仮説どおり、この論文にもカント特有の二枚舌が隠されていることを発見した。この収穫は大きかった。(→H.25年度に口頭発表の予定)○『純粋理性批判』前半(「原則論」まで)の詳細な摘要を作成した。この作業によって、例えば、「物自体」と「超越論的客観」とのカント超越論における身分の同一性と差異性が鮮明になった。これによって、従来の私の「カントにおける四極構造」のうちのDにあたる極の解釈がよりいっそう立体的なものになった。○昨年度に引き続き、二つの有力大学で非常勤講師として「カント人間思想の総合的把握」と題して講義を受け持った。これにより、10の仮説からなる私の複合的なカント仮説をブラッシュ・アップすることができた。○研究協力者のウィーン大学ペルトナー教授の著書『哲学的美学』の翻訳を通して、カントの美学に潜む存在論的含意を学ぶことができた。●年度後半に、ライフ・ワークとなるカント研究の著作の執筆に取り掛かる予定であったが、上記翻訳に集中したため、果たすことができなかった。(→H.25年度に果たす)この三年間に本科研費補助金を活用して以下の研究活動をなした。(1)カントの著作等としては『純粋理性批判』(1781,1787)『道徳形而上学の基礎づけ』(1785)『天界の一般自然史と理論』(1755)「人間愛から嘘をつく権利と称されるものについて」(1797)の四点を精読した。(2)これまでの自分のカント研究の全成果を「カントの人間思想に関する十の仮説」(仮、概要)にまとめた(最終年度も改訂を重ねる)。(3)これを「特殊講義」として、東京の二つの有力大学の文学部哲学科等でH.23、H.24年度の二年にわたって講義した。(4)三年間に学会等の機会に全部で五回、(1)(2)の成果を口頭発表した(うち一回最終年度)。(5)研究協力者のペルトナー教授をウィーンに三回訪ね、意見交流した。(6)ペルトナー教授の著書『哲学としての美学』を四人の共訳者と共にほぼ全訳した(最終年度)。(7)ペルトナー教授を日本に招聘し、カントの美学を中心に二回の講演を開催した(最終年度)。(8)『人間学』に関するM.フーコーの研究書の邦訳の書評を学会誌に寄せた。(9)カントの人間思想に関係する講演を一回話し、随筆を一本書いた(最終年度も含む)。以上の活動から得られた主な研究成果は以下の通りである。1カントの人間思想の随一の特質を「人間の自己対象化的性格」に見ようとする仮説に一層の確信が得られた。2カントが生涯を通じて一方で哲学的に厳密な議論を展開しながら、他方で時の権力・宗教界の目をごまかすために二枚舌等の文章術を駆使していたことが判明した(最終年度)。今後の研究の展開:この研究成果を基にして、a)今後二年間のうちに『カントの人間思想に関する十の仮説』(仮)を上梓する。b) H.27年9月にウィーン大学で開催される第12回国際カント学会において口頭発表する。c)上記(6)をH.26秋に出版する。○これまで未読であったカント『天界の一般自然史と理論』を読み、改めてカントの天文学的知見の深さと発想の現代性を認識した。『純粋理性批判』を「原則論」まで読み直した。

ハイデッガーのカント書を再読し、彼のカント解釈の斬新さと問題点を確認した。○カントの人間思想を総合的に把握するために、自分独自の「カント仮説」を10立て、それぞれに下位仮説を311設けた。これをこのあとの著作執筆の基盤とする。これが今期の一番の成果である(現在、ヴァージョン13まで改訂)。○ある有名大学から非常勤講師を依頼された機会を活かし、前・後期を通して上記の「カント仮説」のうち4つを選んで学生に講義を施した。これを通して仮説の説得性を確かめ、弱点を見出した。○H.24年1月にウィーン大学のペルトナー教授を訪ね、上記の仮説の説得性について率直な批判を仰いだ。教授は長年の研究連携の実績からくる信頼のうえに立って、親身に批評を下さった。○H.23年8月末から9月にかけてカント研究の友人の主催するカント研究合宿に参加し、本研究について中途報告する機会を得た。私以外の参加者14人から率直な批評を受け、たいへんに刺激になった。また10月に慶應義塾三田哲学会、11月に日本カント協会のそれぞれの学会の機会に、本研究について口頭発表する機会を得た。H.24年3月末に京都で開催されたカント研究会京都例会における著名なカント研究者の書評会に出席し、発言する機会を得た。これらの機会を通して本研究の説得性を高めることができた。▼これまでの自分のカント関係の論文(約20本強)を読破する作業は進まなかった。H.24年度の最重点課題とする。*カントの綜合的把握を構造的に表す仮説群を確立する、カントの主要著作を改めて精読する、等の研究作業ははほぼ順調に進んでいるが、他方、1先行する主要カント研究の読破が遅れていること、2本研究によるカント研究の執筆にまだ取り掛かっていないこと、の二点から、(3)とした。上記「研究実績の概要」にあるように、過去の自分のカント関係論文を読破する作業を除いて、他の研究計画をほぼ達成したうえに、当初念頭になかった自分独自の「カント仮説」を立てることの意義が大きいので、(2)と判断する。○10のカント仮説をさらにブラッシュ・アップして、著作とする。○国際カント協会の学会(2015年ウィーン大学)で口頭発表する。○国内の学会で口頭発表する。○「カント仮説」をさらにブラッシュ・アップする。これを基にして、カント研究のモノグラフィを出版するべく、章建てをする。これとは別に、過去の自分のカント関係論文(20本以上)を読破し総点検して、上記の章建てに基づいて活かせる箇所を確定する。○内外の永年の研究協力者に引き続き批判を仰ぎつつ構想を練り上げる。○『判断力批判』等、これまで研究が薄かった領域について重点的に研究を補足する。また、カント思想の体系的な把握を試みた内外の先行研究書を集中的に読破し、自分の研究視角の特徴と独自性をさらに明確にする。○紀要論文の執筆、内外の関連学会、研究会での口頭発表等の方途を活かす。○最後に、本研究を一冊の本としてまとめるべく、執筆する。該当なし○カント思想の体系的な把握を試みた内外の先行研究書、新刊を購入する。[図書購入費]○ウィーン大学のカント哲学の共同研究者G.ペルトナー教授を再度訪問するか、招聘して、じかにカント哲学を総合的に把握するさいの留意点などの教示を受ける。[外国出張旅費]○永年交流の深い国内のカント研究者に会って、彼らの独自なカント解釈の真意をじかに聴きながら、自分のカント把握の構想について批評を仰ぐ。[国内出張旅費]○耐用年数が過ぎた研究用のノート型パソコンを買い替える。[設備備品費]
キラルリン酸触媒を用いる不斉反応の立体制御因子の解明と遷移状態のデータベース化

キラルリン酸触媒を用いるイミンとアセチルアセトンのMannich反応について、遷移状態構造を計算により求めた。しかし、高い選択性の得られるキラルリン酸には多数の配座異性体が存在し多数の遷移状態構造があることが分かった。実際そのほとんどを計算したが、立体制御因子の解明には至らなかった。そこで、触媒構造の自由度の小さい系での研究を行なうこととし、キラルロジウム2核錯体を用いるα-アルキル-α-ジアゾエステルとフェニルアセチレンの不斉シクロプロペン化反応の立体選択性に関する研究を行なった。触媒はハロゲン結合のために唯一つの形に固定されいることが分かった。触媒とα-アルキル-α-ジアゾエステルから得られるカルベン錯体とフェニルアセチレンとの反応の遷移状態を計算し4つの遷移状態構造を得た。不斉炭素のため触媒はらせん構造をとり、アセチレンの近づく向きにより大きなエステル部分との立体障害により立体が決まっていることが分かった。キラルビナフトールから得られるリン酸触媒のうち立体選択性をほとんど示さない(44:56)触媒1(R=H,Rは3,3'位置換基)、中程度(78:22)の触媒2(R=Ph)、および高い選択性(95:5))を持つ触媒3(R=1-Binaph)を用いるイミン4とアセチルアセトン5の不斉Mannich反応について反応の経路計算をHF/3-21G*、B3LYP/6-31G*、B3LYP/6-31+G*、oniom(B3LYP/6-31+G*:HF/3-21G*)、oniom(MP2/6-31+G*:HF/3-21G*)レベルで行なった。その結果、キラルリン酸触媒では3,3'位置に置換基がないと立体選択性がほとんどないことが明らかとなり、さらに3,3'位置にフェニル基がついた場合は反応系をすっぽり包むには足らず、長く伸びたビフェニル基をつけることにより高い立体選択性を実現していることもわかった。しかし、触媒3ではビフェニル基とビナフチル部分との2面角により4つのコンフォマーが可能で反応基質の組み合わせにより32個もの遷移状態構造が可能であることが分かった。それら全てを計算しており、実験で得られる立体選択性は計算によりほぼ再現されてはいるが、立体制御因子の解明には至っていない。上記計算結果から計算方法としては高いレベルのniom法を用いるよりはB3LYP/6-31G*で行なう方が実験結果と一致するエネルギー差が得られ、かつ多くのコンフォメーション解析を行なうのに計算時間の点から適していることが分かった。また、上記以外の触媒を使った計算も行ない、ビナフチル基のなす2面角が立体選択性に大きくかかわっていることが分かった。このような比較により新たな触媒のデザインに向けた基礎的知見が得られた。また、インドールとの不斉Friedel-Crafts反応についても一部計算を行なった。インドールとイミンとのFriedel-Crafts反応は3,3'-p-NO_2Ph置換ビナフトールから得られるキラルリン酸1aにより触媒され、トルエン中室温10分でR体が96:4 (92%ee)の選択性で得られている。この反応の反応機構を明らかにするために分子軌道計算(B3LYP/6-31G*)を行なった。触媒のコンフォメーション解析を行なったところ、オルト位のAr基の向きに関して4つのコンフォメーションが可能であった。一方のAr基はその芳香環プロトンがリン酸のP=O部分と水素結合しているのが安定で、もう一方のArはビナフトール酸素と水素結合している方が安定であった。イミンのプロトン化反応は自発的に起こる過程であり、その後インドールとC-C結合形成をおこしてσ錯体が生成する。イミンのプロトン化でプロトンを失った触媒のリン酸アニオンがσ錯体からプロトンを取り去り生成物を与え、触媒は再生される。反応の律速段階はC-C結合の生成であった。最も安定なR体を与える遷移状態構造TS1aの触媒部分はAの形を取っており、最も安定なS体を与える遷移状態構造TS1bの触媒部分はBの形であることが分かった。2つの遷移状態構造のエネルギー差1.41kcal/molからBoltzmann分布から生成物のR:Sを計算すると92:8となり、実験で得られた92%ee(96:4)とだいたい一致していることが分かった。反応の活性化

エネルギーは9.26kcal/molで、室温10分で容易に起こる反応に対応している。触媒1aを用いるこの反応の立体制御機構を明らかにするために触媒1b(R=H)について現在検討を行なっている。触媒1bを用いると反応は室温で進行するものの反応時間が4時間と長くなり、立体選択性は失われる。パラ位ニトロ基の影響によると考えられる。今後、触媒1aと1bの比較により立体制御因子の解明を行なっていく予定である。3,3'-ジアリールビナフトールから得られるキラルリン酸触媒を用いるイミンとアセチルアセトンのMannich反応について、遷移状態構造を計算により求めた。しかし、高い選択性の得られる3,3'-ビスビフェニルビナフトールから得られるリン酸には多数の配座異性体が存在し多数の遷移状態構造がありうることが分かった。実際そのほとんどを計算し、62個の遷移状態構造を得た。選択性は実験結果と良い一致を示したが、立体制御因子の解明には至らなかった。これら分子触媒と反応基質との相互作用が特定の部位に限定されず、いろいろな部位での相互作用も起こるため単純には説明できないことが分かった。そこで、触媒構造の自由度の小さい系での研究を行なうこととした。最近キラルロジウム2核錯体を用いる不斉反応が注目されているため、そのカルボキシレート触媒を用いるα-アルキル-α-ジアゾエステルとフェニルアセチレンのシクロプロペン化反応の立体選択性に関する研究を行なった。触媒構造について調べたところ4つのテトらブロモフタロイルアミド部分がall upのものが1つだけdownのものに比べ7.03kcal/mol安定で、その安定性は4つのハロゲン結合(Brとアミド酸素とのBr-O)のためであることが分かった。触媒とα-アルキル-α-ジアゾエステルから得られるカルベン錯体とフェニルアセチレンとの反応の遷移状態を計算したところ、4つの遷移状態構造が得られた。不斉炭素のためにフタロイルアミド基は傾いた形をしており、4つのフタロイルアミド基はゆるいながらもらせん形をしている。そのため、アセチレンの近づく向きにより大きなt-Bu基がフタロイル基と接近してしまうためR体プロペンが生成することが分かった。また、分子軌道計算に基づいた5配位アンチモン化合物の熱異性化の反応が、turnstile rotationで起こることを初めて明らかにすることにも成功した。
ヒト・ジヒドロリポアミド・サクシニル転移酵素遺伝子と類似遺伝子の単離と構造解析

ジヒドロリポアミド・サクシニル転移酵素はα-ケトグルタル酸脱水素酵素複合体(α-KGDH)を構成する一成分酵素である。α-KGDHは生物のエネルギー生産系のなかで重要な役割を果たす。生体エネルギーの生産・調節機構の問題は生命の中心的な課題であるが、最近、生体エネルギーの生産は脳の老化、記憶、神経細胞死、神経伝達等と密接な関係があることが示唆され、生命の高次機能発現と言う新たな課題に発展しつつある。本研究の目的はヒト・ジヒドロリポアミド・サクシニル転移酵素の遺伝子及び偽遺伝子の単離と構造解析である。この目的のためにまず、ヒト・ジヒドロリポアミド・サクシニル転移酵素のcDNAを単離し、その構造を明らかにした。cDNAを使用して、ヒト染色体マッピングを行なったところ、ジヒドロリポアミド・サクシニル転移酵素の遺伝子は14q24.2-q24.3に存在し、偽遺伝子は1p31に存在することが発見された。この部位には早発型の家族性アルツハイマー病の原因遺伝子が存在することが知られているが、その原因遺伝子は同定されていない。更に、本研究のなかでヒト・ジヒドロリポアミド・サクシニル転移酵素のcDNAを用いてヒト・ジヒドロリポアミド・サクシニル転移酵素の遺伝子及び偽遺伝子が単離され、それらの全構造が解明された。現在のところ、ジヒドロリポアミド・サクシニル転移酵素はアルツハイマー病の最も有望な原因遺伝子であると注目されている。この構造に関する情報をもとにして、近い将来、ジヒドロリポアミド・サクシニル転移酵素とアルツハイマー病との関わりが解明されるものと期待される。当初の計画通り、平成5年度はヒト遺伝子ライブラリーからジヒドロリポアミド・サクシニル転移酵素の遺伝子と類似遺伝子を単離し、それらの構造の解析を行った。1.本遺伝子は約23kbほどの長さであり、15個のエキソンからなることが判明した。2.エキソン-イントロン・スプライスィング・ジヤンクションはすべてag-gtルールに従った。3.哺乳類のジヒドロリポアミド・サクシニル転移酵素はE1/E3結合ドメインを欠いているが、遺伝子レベルにおいてもその配列に対応するエキソンは認められなかった。E1/E3結合ドメインに対応するエキソンは進化の過程のなかで隣接するイントロンと共に欠落したものと思われた。類似遺伝子はcDNAとほぼ同じ長さであり、90%の相同性を持つプロセスド型の偽似遺伝子で会った。進化のごく最近に1p31に転座したものと思われた。本遺伝子はヒト染色体14q24.2-14q24.3にあり、擬似遺伝子は1p31に存在した。従来、知られている染色体21番と19番以外に、最近新たに家族性アルツハイマー病の原因遺伝子座として14q24.3が報告されている。大部分の家族性アルツハイマー病は14q24.3と連鎖する。今後、本遺伝子とアルツハイマー病との関連を追及していきたい。α-KGDHは生物のエネルギー生産のなかで重要な役割を果たす。この目的のために昨年度はまず、ヒト・ジヒドロリポアミド・サクシニル転移酵素のcDNAを単離し、その構造を明らかにした。

このcDNAを使用して、ヒト染色体マッピングを行なったところ、ジヒドロリポアミド・サクシニル転移酵素の遺伝子は14q24.2-q24.3に存在し、偽遺伝子は1p31に存在することが発見された。この部位には早発型の家族性アルツハイマー病の原因遺伝子が存在することが知られているが、その原因遺伝子は同定されていない。本年度はヒト・ジヒドロリポアミド・サクシニル転移酵素のcDNAを用いてヒト・ジヒドロリポアミド・サクシニル転移酵素の遺伝子及び偽遺伝子が単離され、それらの全構造が解明され、本研究の目的は完遂された。現在のところ、ジヒドロリポアミド・サクシニル転移酵素はアルツハイマー病の最も有望な原因遺伝子であると注目されている。この構造に関する情報をもとにして、近い将来、ジヒドロリポアミド・サクシニル転移酵素とアルツハイマー病との関わりが解明されるものと期待される。
Ｂ型肝炎ワクチンに対する初期および記憶免疫応答に関する研究

1. B型肝炎(HB)ワクチンに対する初期免疫応答HBワクチン接種後、抗原が抗原提示細胞に取り込まれ分解産物とHLAが細胞表面に提示され、CD4+T細胞が活性化される。また、抗原自体がB細胞レセプターに認識され、初期にはIgM抗体が分泌されるが、その後、活性化CD4+T細胞の補助を受けた活性化B細胞が形質細胞に分化し、IgG抗体が産生されるとされている。今回、HBワクチンに対するT細胞の初期免疫応答についてHBs抗体価獲得と関連する因子であるHLA、T細胞受容体β鎖(TCRβ)を初回HBワクチン接種者5例で検討した。同時にB細胞受容体IgG重鎖(BCR IgG H chain)についても検討を行なった。その結果、(1) 5例全例がHBs抗体を獲得したため、HLAとの明らかな関係は見いだせなかった。(2) HBs抗体価は、HBワクチン2回接種後10mIU/mL未満であったが、3回接種後10mIU/mL以上であった。(3) HBワクチン2回接種後にTCRβレパトアは上昇、BCR IgG H chainレパトアは低下していた。(4)以上より、HBs抗体獲得者においてはHBワクチン2回接種後HBs抗体価は10mIU/mL未満ではあるが、TCRβレパトア、BCR IgG H chainレパトアに変化が起きおり、それらがHBs抗体獲得のサロゲートマーカーとなる可能性が示唆された。2. HBワクチン接種後のB細胞の免疫記憶HBワクチン3回接種後のHBs抗体価は、個人差があり、経時的に低下するが、HBs抗原特異的memory B細胞の機能と反応性が確認できれば、追加接種を減らすことが可能性となる。HBワクチン接種後およびHBワクチン未接種者の末梢血単核球(PBMCs)を分離後、マイクロビーズを用いて分離したB細胞に標識付CD19, CD14, CD27抗体を加え、さらにHBs抗原および標識付HBs抗体を添加した前後でFlow cytometryを用いて解析を行なった。その結果、memory B細胞は末梢血中に僅かに存在するが、HBs抗原特異的であるかの検討が必要と考えられた。母子感染防止事業がより、現在、乳幼児のHBs抗原陽性率は0.05%未満まで減少しているが、成人でのHBV感染は減少していないこと、乳幼児期の感染は年少児ほど持続感染へ移行する可能性が高いこと、HBs抗原陰性、HBs抗体陽性といった臨床的治癒の状態でも免疫が弱まるとHBVの再活性化が起こるといった問題があるため、B型肝炎ワクチン(HBワクチン)の投与により感染を未然に防ぐことが望まれている。しかし、HBワクチンに対する免疫応答についての詳細は不明な点も多い。そこで、HBワクチンに対する初期免疫応答および記憶免疫応答とその有効性を明らかにすることを目的として本研究を立案した。本年度は、HBワクチン接種後の記憶免疫応答を明らかにするため、少数例の末梢血単核球を分離後、B細胞を分離した。そして、B細胞とメモリーB細胞をHBs抗原で刺激して活性B細胞およびHBs抗原特異的メモリーB細胞のHBs抗体分泌能をELISPOT法により測定すると同時にそれらの細胞内伝達シグナル(PI3K/AKT/mTOR/Foxo1/Bach2)をウエスタンブロット法で測定する系を確立中である。また、B細胞にPE標識HBs抗体を結合させたHBs抗原、FITC標識抗CD27抗体、PreCP標識抗CD14抗体、APC標識抗CD19抗体を加え、HBs抗原特異的メモリーB細胞をフローサイトメトリーで測定する系も確立中である。ELISPOT法による活性B細胞およびHBs抗原特異的メモリーB細胞のHBs抗体分泌能を測定する系、それらの細胞内伝達シグナル(PI3K/AKT/mTOR/Foxo1/Bach2)をウエスタンブロット法で測定する系およびHBs抗原特異的メモリーB細胞をフローサイトメトリーで測定する系を確立中であるため。(1) B型肝炎(HB)ワクチン接種後のB細胞の免疫記憶HBワクチン3回接種後のHBs抗体価は、個人差はあるが、経時的に低下する。しかし、免疫学的記憶が残存するため、HBワクチンは長期にわたって有効性を示すとされている。だが、免疫学的記憶を確認する方法としては、boosterをかける必要がありHBワクチンの追加接種が必要となる。もし、HBワクチン接種後のHBs抗原特異的memory B細胞の機能と反応性が確認できれば、免疫学的記憶が残存している可能性があり、追加接種を減らすことが可能となる。HBワクチン接種後およびHBワクチン未接種者の末梢血から末梢血単核球(PBMCs)を分離後、PBMCsより、マイクロビーズを用いてB細胞を分離した。分離したB細胞に標識付CD19、CD14、CD27抗体を加えたうえにHBs抗原および標識付HBs抗体を添加し前後でFlowcytometryにて解析を行なった。結果、memory B細胞は末梢血中に極僅か存在していたが、HBs抗原特異的であるかの検討が必要と考えられた。同時に、B細胞にHBs抗原を添加した前後での細胞内シグナルについても測定中である。(2) HBワクチンに対するT細胞の初期免疫応答HBワクチンに対するT細胞の初期免疫応答については、関連する因子(TCRVβ、細胞内シグナル、HLAなど)を検討するため、HBワクチン接種前の検体を収集中である。HBワクチン接種後のB細胞の免疫記憶:HB

ワクチン接種後、HBワクチン未接種者についてFlowcytometryにて解析を行なった結果、memory B細胞は末梢血中に極僅かに存在していた。しかし、HBs抗原特異的memoryB細胞を検出するにはさらにマイクロビーズでセレクションし、ELISPOT法で検討する必要があると考えられた。また、細胞内シグナルを検討するためWestern blot、cell signaling assay、PCR法を検討中である。HBワクチンに対するT細胞の初期免疫応答:HBワクチン接種前の検体を収集中である。(1)B型肝炎(HB)ワクチン接種後のB細胞の免疫記憶HBワクチン3回接種後のHBs抗体価は、個人差があり、経時的に低下する。しかし、免疫学的記憶が残存するため、HBワクチンは長期間有効であるとされている。だが、免疫学的記憶を確認するにはHBワクチンの追加接種が必要となる。もし、HBワクチン接種後のHBs抗原特異的memory B細胞の機能と反応性が確認できれば、免疫学的記憶が残存している可能性があり、追加接種を減らすことが可能性となる。HBワクチン接種後およびHBワクチン未接種者の末梢血単核球を(PBMCs)を分離後、PBMCsよりマイクロビーズを用いて分離したB細胞に標識付CD19, CD14, CD27抗体を加え、さらにHBs抗原および標識付HBs抗体を添加した前後でFlow cytometryを用いて解析を行なった。その結果、memory B細胞は末梢血中に僅かに存在するが、HBs抗原特異的であるかの検討が必要と考えられた。同時に、B細胞にHBs抗原を添加した前後での細胞内シグナルについても測定中である。(2)HBワクチンに対するT細胞の初期免疫応答本研究の(2)については、2017年12月に福岡で行われた第21回日本ワクチン学会学術集会において口頭発表を行った。研究遂行に想定以上の時間を要した。HBワクチン接種後のB細胞の免疫記憶:HBワクチン接種後およびHBワクチン未接種者についてFlow cytometryを用いて解析を行なった結果、memory B細胞は末梢血中に僅かに存在していた。しかし、HBs抗原特異的memoryB細胞を検出するにはさらにマイクロビーズでセレクションをし、ELISPOT法で検討する必要があると考えられた。HBワクチンに対するT細胞の初期免疫応答:HBワクチン接種前後の検体を収集し測定を行ない、学会発表および情報収集を行なった。1. B型肝炎(HB)ワクチンに対する初期免疫応答HBワクチン接種後、抗原が抗原提示細胞に取り込まれ分解産物とHLAが細胞表面に提示され、CD4+T細胞が活性化される。また、抗原自体がB細胞レセプターに認識され、初期にはIgM抗体が分泌されるが、その後、活性化CD4+T細胞の補助を受けた活性化B細胞が形質細胞に分化し、IgG抗体が産生されるとされている。
亀裂の時代におけるプライバシーの権利：ウォーレン・コートの　アメリカ

今年度はウォーレン・コート下に成立したプライバシー権を法的根拠とした1976年のカリフォルニア州自然死法を中心に研究した。カリフォルニア州自然死法は全米で初めて末期患者の生命維持装置の不使用または取り外しに関する指示書に法的権限を与えた。この法律を支えたのが、身体に関する決断の自由はプライバシー権によって保障されている、という考えであった。今年度の研究活動は主に修士論文の総括を中心に行った。修士論文ではカリフォルニア州自然死法と人間の尊厳のつながりを検討し、その研究成果を「死ぬ権利と人間の尊厳ーカリフォルニア州自然死法を事例にー」という題目で4月の日本アメリカ史学会修士論文報告会で発表した。この報告は、カリフォルニア州自然死法をめぐる論争における「人間の尊厳」の概念に着目し、法律の賛成派と反対派が異なる尊厳の解釈を用いて議論を進めていたことを明らかにした。報告会では今後の研究につながるコメントをいただくことができた。また、当初の計画通り、『アメリカ太平洋研究』(査読有り)に投稿する論文(英語)を執筆することもできた。この論文ではカリフォルニア州自然死法の成立を可能にした1970年代のアメリカ社会に重点を置いて法律の意義を検討した。自然死法の成立には、医療技術の進歩や公権力に対抗したプライバシー権が大きな影響を与えたことを指摘した。今年度はカリフォルニア州自然死法とプライバシー権利のつながりを中心に研究を進めてきたため、最高裁判所のリベラル派判事の思想に関する二次文献の収集・分析はやや遅れている。しかし、カリフォルニア州自然死法を事例に研究を進めたことによってなぜプライバシー権が身体をめぐる問題の解決策として利用されたのか、なぜ文化的な価値観の衝突を調停するために法や裁判という公的な手段を用いたのか、という大きな問いについて考察することができた。27年度が最終年度であるため、記入しない。
プロトンポンプ阻害薬の視覚障害惹起可能性の検証

本研究の目的は,プロトンポンプ阻害薬オメプラゾールの視覚障害惹起可能性を検証するため,ウサギ毛様体非色素性上皮細胞にH,K-ATPase様蛋白が存在しているという過去の報告を追試し,毛様体非色素性上皮細胞におけるH,K-ATPase様蛋白の機能,およびそのオメプラゾールによる抑制が観察されるかどうかを検討することであった.ウサギ胃粘膜からH,K-APTaseを精製し,多くのマウスを免疫してポリクローナル抗体を作成し,更にこれらのマウスの脾細胞をミエローマと融合させて,モノクローナル抗体を作成した.いずれのポリクローナル抗体も,H,K-ATPaseのα・βサブユニットを認識したが,モノクローナル抗体は,H,K-ATPaseのαサブユニットのみを認識した.しかしながらFainらの報告と異なり,いずれの抗体も,ウサギ毛様体上皮細胞を特異的に免疫染色することはなく,ウェスタンブロット解析によっても,抗体陽性のバンドは認められなかった.ただし,毛様体上皮細胞の可溶性画分中,H,K-ATPaseのα・βサブユニットとは異なる,約70kDaのバンドを認識する抗体が1種のみ得られた.これは毛様体上皮細胞に,H,K-ATPaseとエピトープが共通する蛋白が存在する可能性を示し,現在この蛋白の一次構造を解析中である.毛様体上皮細胞に機能的H,K-ATPase様酵素が存在する可能性を探るため,急性単離したウサギ毛様体上皮細胞にpH感受性色素BCECFをロードし,Argus-50画像解析装置を用いて細胞内pHを測定した.毛様体上皮細胞は,塩化アンモニウム負荷や炭酸脱水酵素阻害薬で細胞内pHが低下したが,オメプラゾールによっては変化がなく,毛様体上皮にオメプラゾール感受性眼房水分泌があることを示唆する結果は得られなかった.糖尿病モデルラットを用いる実験の基礎検討として,ラットよりH,K-ATPaseを精製し,モノクローナル抗体を作成したが,ポリクローナル抗体の段階でも,毛様体上皮中の蛋白を認識しなかった.以上のことから,プロトンポンプ阻害薬オメプラゾールが視覚障害を惹起する可能性があるとしても,毛様体上皮細胞が作用点である可能性は薄いと考えられた.本研究の目的は,プロトンポンプ阻害薬オメプラゾールの視覚障害惹起可能性を検証するため,ウサギ毛様体非色素性上皮細胞にH,K-ATPase様蛋白が存在しているという過去の報告を追試し,毛様体非色素性上皮細胞におけるH,K-ATPase様蛋白の機能,およびそのオメプラゾールによる抑制が観察されるかどうかを検討することであった.ウサギ胃粘膜からH,K-APTaseを精製し,多くのマウスを免疫してポリクローナル抗体を作成し,更にこれらのマウスの脾細胞をミエローマと融合させて,モノクローナル抗体を作成した.いずれのポリクローナル抗体も,H,K-ATPaseのα・βサブユニットを認識したが,モノクローナル抗体は,H,K-ATPaseのαサブユニットのみを認識した.しかしながらFainらの報告と異なり,いずれの抗体も,ウサギ毛様体上皮細胞を特異的に免疫染色することはなく,ウェスタンブロット解析によっても,抗体陽性のバンドは認められなかった.ただし,毛様体上皮細胞の可溶性画分中,H,K-ATPaseのα・βサブユニットとは異なる,約70kDaのバンドを認識する抗体が1種のみ得られた.これは毛様体上皮細胞に,H,K-ATPaseとエピトープが共通する蛋白が存在する可能性を示し,現在この蛋白の一次構造を解析中である.毛様体上皮細胞に機能的H,K-ATPase様酵素が存在する可能性を探るため,急性単離したウサギ毛様体上皮細胞にpH感受性色素BCECFをロードし,Argus-50画像解析装置を用いて細胞内pHを測定した.毛様体上皮細胞は,塩化アンモニウム負荷や炭酸脱水酵素阻害薬で細胞内pHが低下したが,オメプラゾールによっては変化がなく,毛様体上皮にオメプラゾール感受性眼房水分泌があることを示唆する結果は得られなかった.糖尿病モデルラットを用いる実験の基礎検討として,ラットよりH,K-ATPaseを精製し,モノクローナル抗体を作成したが,ポリクローナル抗体の段階でも,毛様体上皮中の蛋白を認識しなかった.以上のことから,プロトンポンプ阻害薬オメプラゾールが視覚障害を惹起する可能性があるとしても,毛様体上皮細胞が作用点である可能性は薄いと考えられた.
ｍＴＯＲを分子標的としたバイパス開存率向上の研究

ラパマイシンはmTORを抑制することにより内膜肥厚を抑制する。今回このメカニズムをバイパス吻合部に応用することを考えた。吻合部となる平滑筋細胞(冠動脈、大動脈)に対してsiRNAを使用してmTORの発現を抑制した。mTORの一つ下流にあたるp70S6kinaseで比較するとsiRNA群でリン酸化が抑制された。また、実際のバイパス吻合部を観察すると狭窄、閉塞部位で石灰化を伴っていることが多い。石灰化も狭窄、閉塞をもたらす原因の一つと考えられる。石灰化を引き起こすリスクを検討すると糖尿病、透析で石灰化を促進する傾向を認めた。そのシグナリングを解明することが開存率上昇につながると思われる。最近silorimus(rapamycin)が薬物溶出性ステントに使用されており、冠動脈へステント留置後、再狭窄抑制作用が有効であることが示されている。rapamycinはmTOR(mammalian Target Of Rapamycin)を抑制し細胞増殖、遊走の抑制、アポトーシスを促進し冠動脈内の内膜肥厚を抑制する。このことにより冠動脈ステントの開存率が改善されてきた。しかし、下肢のバイパスや冠動脈バイパス手術においてグラフト閉塞の原因となる内膜肥厚に対し、抗凝固剤投与等行われてきたが効果が少なく、現在まで内膜肥厚の抑制法は確立されていない。今回、われわれは、silorimus(rapamycin)のターゲットであるmTORに注目し、グラフト吻合部でこの活性を抑制することにより内膜肥厚を抑えることを目標とした。われわれは以前よりsiRNA mTORのtransfectionの条件を検討し実際にその条件で大伏在静脈の平滑筋細胞に導入すると、観察細胞数が著しく低下することを確認している。ラパマイシンによりmTORの活性を抑制することにより細胞のアポトーシスを誘導することからsiRNAによりmTORの活性化が抑制され培養細胞が減少したと考えている。前年度はバイパス吻合部となる動脈への効果を検討した。さらに、今回,mTORを抑制した状態を確認するために、mTORより一つ下流に当たるp70 S6kinaseにおいても検討することとし、p70 S6kinaseの発現については、ELISAキットを使用して蛋白発現、リン酸化の評価する方針とした。また、糖尿病、高脂血症、透析などの動脈硬化性病変の強い大伏在静脈でどの因子がmTOR, S6kinaseが活性化しているかDNAマイクロアレイで評価する準備を進めている。前年度より、血管壁の石灰化も、吻合部で狭窄の原因となることに注目した。最近の文献の報告例ではmTOR活性化により血管壁の石灰化に促進することが報告されている。、高度な大動脈石灰化を伴う大動脈弁狭窄症症例において、その石灰化を起こすリスクファクターの検討もおこなった。その結果、透析、糖尿病のもとでは動脈壁の石灰化が進行させることが予測された。文献上、糖尿病存在下ではmTORを活性化することが示されている。吻合部での石灰化を伴った内膜肥厚にもmTORの制御が有効ではないかと注目し今後検討していく予定である。

今回、われわれは、silorimus(rapamycin)のターゲットであるmTORに注目し、グラフト吻合部でこの活性を抑制することにより内膜肥厚を抑えることを目標とした。われわれは以前よりsiRNA mTORのtransfectionの条件を検討し実際にその条件で大伏在静脈の平滑筋細胞に導入すると、観察細胞数が著しく低下することを確認している。ラパマイシンによりmTORの活性を抑制することにより細胞のアポトーシスを誘導することからsi RNAによりmTORの活性化が抑制され培養細胞が減少したと考えている。今年度は次のステップとして吻合部で内膜肥厚を起こす部位は大伏在静脈だけでなく、宿主の動脈に対しても起こりうるため、前述のsiRNAが大動脈由来の平滑筋細胞へtransfectionを行ってきた。現在までのところさまざま条件を行いtransfectionの効率をあげるため検討を行っている。食生活の欧米化、高齢化社会により動脈硬化症による動脈閉塞、狭窄症は増加傾向にある。そのため冠動脈、下肢バイパス術など血行再建手術は増加傾向にある。その一方で、静脈グラフトを使用したバイパス術は、吻合部での血管内膜肥厚が原因で10年間に約60%は閉塞すると報告されている。内膜肥厚を引き起こされる原因はRossらによると血管平滑筋の遊走能、増殖能の亢進、細胞外基質の堆積、アポトーシスの抑制であると報告されている。われわれは、いままでその起序をコントロールする手段として薬剤溶出ステントで使用されているラパマイシンのターゲットであるmTORの活性の抑制に注目してきた。代表研究者は、ラパマイシンが増殖因子(EGF,PDGF等)の刺激だけではなく、細胞外基質の刺激(コラーゲン、フィブロネクチン、ラミニンなど)による、細胞遊走を強力に抑制することを現在までに明らかにしてきた。このことはバイパス術後内膜肥厚を起こすcell signalingの重要な役割の一つであると考えられる。mTORのsignaling抑制のためsiRNAを使用し検討をおこなっており、大伏在静脈、大動脈の平滑筋細胞を使用してきた。本年度は冠動脈細胞の平滑筋細胞での検討を行った。さらにグラフト閉塞部を検討すると、吻合部において内膜肥厚に加え、石灰化を伴っていることが多く、血管壁の石灰化もグラフト閉塞の原因の一つと推察される。特に糖尿病を合併した患者では石灰化が著しく、グラフト閉塞率が高い。われわれの検討では糖尿病を併存する重症大動脈弁狭窄症患者の上行大動脈の石灰化を検討したところ重度石灰化群では糖尿病合併を32.0%、非石灰化群では19.6%であった。このことは石灰化と糖尿病に強い関連があることを示し、そのメカニズムを今後検討し、そのシグナリングを制御することも新たなグラフト開存率を向上させる方法につながると考えられた。心臓血管外科昨年に続き、正常ヒト大動脈平滑筋細胞、大伏在静脈平滑筋細胞にコントロールsiRNA (GFP)をtransfectionし効率のよい条件を検討しつつ、siRNA transfectionを行っているが安定ししたデーターをとることに難渋している。研究が遅れている状況なので、mTORだけでなく合わせてその下流であるp70 S6kinaseなどにも広げる方針としている。血管平滑筋細胞に遺伝子を導入し正常ヒト