hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
多民族国家・中国における民族関係についての総合的研究

それぞれの研究内容は、中国の民族関係史の理論的かつ実証的研究、内蒙古・甘粛・雲南・チベットなどの多民族が共住する地域社会の民族関係に関する研究である。3名が滞在中に国立民族学博物館において、日本側研究者も参加して総括的な研究集会が開催された。おもな論点となったのは、中国では漢民族が強大な勢力を持ち中心的存在であったが、しかし少数民族をも含む多民族が共存し得る政治体制が歴史的に形成されてきたこと、また「民族」の含義について以前は境界が流動的で多様なレベルの集団を包括するものであったが、近現代において国家統合の進展に応じて政治的な存在となってきたこと、さらに現在の雲南やチベットなどの多民族社会における民族関係の実態などである。全体として民族関係に関する見直しをふまえて新たな理論的展望を開くような高いレベルの討議がなされ、また現実の諸問題について人口移動や経済発展・民族教育の普及などすぐれて現代的な問題をも視野に含めて、問題の解決のための糸口をも探究しつつ詳細な討議がなされた。加えて、西北部の草原地帯と西南部の山岳地帯とでは、民族関係も生態環境・生業様式の相違に応じて様相を異にすること、両者を比較しながら研究を進めて行く視点が有効であることが再確認された。1997年3月に8日間の予定で、四川省の民族学の権威として知られる研究者1名を招へいした。四川省の彝族を中心とする民族関係の現実が討議され課題の理解をより全面的なものにするための鍵となる有益な討議がなされた。なお、研究成果の取り纏め計画として、この3年間に招へいした中国側研究者と日本側研究者の論文とを日本で論文集にまとめて出版することが提案されて合意を見、その構成や内容の詰めもなされた。ついで、日本側研究者の中国各地での現地調査については、のべ9名が1996年4月から1997年1月までの間に、雲南省西部・貴州省西部・チベット自治区、さらに江蘇省などの地域で、それぞれ約1週間から2週間ほどの期間で、中国側の全面的な協力のもとで、聞き取り調査や文献調査など調査を行った。なお、このうち6名が現地討議を行ったが、それは問題点を最終的に検証し解明するという目的に沿うものである。以上の研究活動を通じて、本研究の目的が達成されるとともに、民族関係に関する事実に即した研究が、激動の今日において民族間の相互理解を深めるためにも有効であることが、日中の研究者の間で共通の認識として確認された。本年度は初年度に当たり、中国における民族関係についての研究の現状と課題とについて、その概要を明確に把握し、問題点を整理することに重点を置いた。経過は以下のとおりである。まず、中国側共同研究者を短期と長期の2グループに分け、短期の4名は1995年2月に8日間、長期の2名は同年1月3月の間にそれぞれ約1ケ月間滞在し、日本側研究者と共同研究を行なった。短期の研究者が滞在中に国立民族学博物管にて日本側研究者をまじえて研究集会を開催した。そこで、居住地のさまざまな条件の相違に応じた民族関係の特徴と同化・異化現象、改革開放政策の下での民族自治と民族法制、経済発展にともなう都市化傾向のなかでの民族関係の変化、チベットと中国中央との関係史などが論点となった。また、長期滞在者は、それぞれ美術史の視点からのチベットの民族関係、内蒙古自治区のダフ-ル族をめぐる民族関係史について共同研究を行ない、最新の情報を日本側研究者に提供した。ついで日本側研究者は、1994年8月から1995年3月の間に、のべ8人が中国側の全面的協力の下に民族関係についての現地での実態調査を行なった。すなわち西北部の遼寧省・内
LINEにおける待遇表現ストラテジーの計量的研究

■本年度行った研究発表,研究成果は以下の通りである。1宮嵜由美(2018,a)「LINEデータベースの設計と属性情報付与の現状について」『言語資源活用ワークショップ発表論文集』3巻pp.176-184国立国語研究所学術情報リポジトリ(http://doi.org/10.15084/00001651)言語資源WS2018.於国立国語研究所2宮嵜由美(2018.b)「LINEデータベースからみるコミュニケーションネットワーク形成と言語行動ーある50代女性のモバイル・ライフの視点からー」第26回ひと・ことばフォーラム.於東洋大学3宮嵜由美(2019)「流動する属性と関係性:『M-ZAK LINEデータベース』からの報告」シンポジウム『日常会話コーパス』IV.於国立国語研究所■本科学研究費研究計画に記載の“関連するプロジェクト"における本年度研究発表は以下の通りである。1山崎誠,宮嵜由美,柏野和佳子(2018)「BCCWJ小説会話文への発話者情報の付与と計量的分析」計量国語学会第六十二回大会.計量国語学会.於京都教育大学●宮嵜執筆担当箇所:第3章pp.13-17/全4章(pp.13-18)中2故加藤安彦氏監修の「KYメイルコーパス」の公開に向けたデータ整備作業と学会発表に向けた検討作業(三宅和子氏,田中ゆかり氏,林直樹氏との共同作業)■以下は本研究成果を元に行った国立国語研究所広報の記事執筆である。国語研究所「ことば研究館」ポータルサイトhttps://kotobaken.jp/qa/yokuaru/qa-67/および,公式ツイッターhttps://twitter.com/kokugoken(2019年3月アップロード)申請時記載の通り「話し言葉的書き言葉」について,1LINEデータベース構築と待遇表現研究を中心に2小説の中の会話コーパスへの属性付与と比較,3ケータイメールコーパスの構築と比較を行った。それぞれの2016年度の進捗状況と成果は下記の通り。<2016年度>1LINEデータ収集のためのケーススタディとして行った自身の過去の調査を再考し,大量のデータ収集の方法とデータベース化を精査した。<論文1> 2また,書き言葉にける話し言葉について(対象としたのは『現代日本語書き言葉均衡コーパス』収録の小説),そのアノテーション情報付与方法の構築を検討し,情報付与作業を行った。そこから,実際のデータ整備からみえてくる「人」がどのように「会話」を同定しているかという思考過程についても考察した。<論文2,3> 3さらに,LINEデータとの比較も視野に,携帯メールデータコーパス(加藤安彦氏監修)公開に向け,三宅和子氏,田中ゆかり氏,林直樹氏とともに具体的な処理方法の検討と修正作業を行っている。<現在整備中>◆◆◆<論文1>宮嵜由美(2017)「LINEを使用した依頼:2者間・3者間での受け手のフォローと共話性」第21回ひと・ことばフォーラム<論文2>宮嵜由美・柏野和佳子・山崎誠(2017)「『現代日本語書き言葉均衡コーパス』収録の小説を対象とした話者属性情報付与の検討」国立国語研究所シンポジウム日常会話コーパスII<論文3>宮嵜由美・柏野和佳子・山崎誠(2017)「発話文への発話者情報付与の基本設計-『現代日本語書き言葉均衡コーパス』収録の小説を対象に-」国立国語研究所言語資源ワークショップ2016 pp.38-48◆◆◆2016年度末現在,1LINEデータの収集方法の検討を,ケーススタディを通して行い,データ収集開始に向け倫理審査を行っている。また,LINEデータとの比較を行うための次の2,3についてのデータ整備を行っている。2『現代日本語書き言葉均衡コーパス』に収録された小説における会話文のアノテーション情報整備に向け,会話として認定できる範囲の検討やコーパスへの反映,付与すべき属性の選択やコーディング,公開時のインターフェイスを想定したコーパス構築設計の検討を行い,研究発表を行った。その際得られた,「小説」という書き言葉媒体特有の属性付与に関わる知見や,人工知能開発に役立つと想定される,「人間がどのように“会話"を同定するか」といった認知過程について研究発表を行った。3『携帯メールコーパス』公開に向けたのデータの整備を行うため,携帯メール特有の文字コード整備の方法や,コーパス利用研究時に視覚的に役立つ情報提供の為の方法について検討を行った。今回の科学研究費申請内容の大きな柱となる「話し言葉のような書き言葉」について,具体的には1LINE,2小説の会話文,3ケータイメールの3つの媒体における「話ことばのような書き言葉」の再現性の高いデータベース化と属性付与について,今年度は下記のような検討と作業,研究発表を行った。<2017年度>1LINEデータベース構築の為,昨年度検討した収集方法やデータベース構築規則に基づき,データ収集を行っている。2また,書き言葉における話し言葉として,『現代日本語書き言葉均衡コーパス』収録の小説を比較対象として,2016年度研究発表から得られた意見や,情報付与作業から,さらに発話箇所認定規則の更新行った。

3さらに,LINEデータとの比較も視野に,携帯メールデータコーパス(加藤安彦氏監修)公開に向け,三宅和子氏,田中ゆかり氏,林直樹氏とともに2016年度行ったデータ入力修正規則をもとにデータ入力修正の外注作業を行い,その確認,修正作業を行っている。公開まで最終段階に入っている。■宮嵜由美・柏野和佳子・山崎誠(2018)「『現代日本語書き言葉均衡コーパス』収録の小説における発話箇所認定について」シンポジウム「日常会話コーパス」III2017年度末現在,12016年度に検討したLINEデータの収集方法の元,LINEデータ収集を行っている。2一部テキスト化が必要なデータの整備はほぼ完了している。3さらに,再現可能なデータとして,データベース化の作業も順調に行っている。2『現代日本語書き言葉均衡コーパス』に収録された小説における会話文のアノテーション情報整備に向け,2017年度の作業や研究成果から,会話として認定できる範囲の再検討やコーパスへの反映,付与すべき属性の選択やコーディング,公開時のインターフェイスを想定したコーパス構築設計の検討を行っている。2018年度末の完成に向け,作業対象も広げたうえで,完成を目指している。3『携帯メールコーパス』公開に向け,データの整備の為に検討した方針に基づき,作業の外部発注を行い,その確認作業を行っている。2018年度にはデータベース公開の為の研究発表を予定している。■本年度行った研究発表,研究成果は以下の通りである。1宮嵜由美(2018,a)「LINEデータベースの設計と属性情報付与の現状について」『言語資源活用ワークショップ発表論文集』3巻pp.176-184国立国語研究所学術情報リポジトリ(http://doi.org/10.15084/00001651)言語資源WS2018.於国立国語研究所2宮嵜由美(2018.b)「LINEデータベースからみるコミュニケーションネットワーク形成と言語行動ーある50代女性のモバイル・ライフの視点からー」第26回ひと・ことばフォーラム.於東洋大学3宮嵜由美(2019)「流動する属性と関係性:『M-ZAK LINEデータベース』からの報告」シンポジウム『日常会話コーパス』IV.於国立国語研究所■本科学研究費研究計画に記載の“関連するプロジェクト"における本年度研究発表は以下の通りである。1山崎誠,宮嵜由美,柏野和佳子(2018)「BCCWJ小説会話文への発話者情報の付与と計量的分析」計量国語学会第六十二回大会.計量国語学会.於京都教育大学●宮嵜執筆担当箇所:第3章pp.13-17/全4章(pp.13-18)中2故加藤安彦氏監修の「KYメイルコーパス」の公開に向けたデータ整備作業と学会発表に向けた検討作業(三宅和子氏,田中ゆかり氏,林直樹氏との共同作業)■以下は本研究成果を元に行った国立国語研究所広報の記事執筆である。国語研究所「ことば研究館」ポータルサイトhttps://kotobaken.jp/qa/yokuaru/qa-67/および,公式ツイッターhttps://twitter.com/kokugoken(2019年3月アップロード)1LINE自然データの収集を開始する。対象は10代から60代の男女を予定。
非晶質シリコン半導体の光電流増倍現象に関する研究

1.目的C_2H_2を炭素源とするa-SiC:Hを用いたSno_2/a-SiC:H/Auの簡単なセル構造において、外部量子効率が1を越え100程度まで到達する現象を見い出した。この現象は、a-SiC:Hとの界面に起因すると考えている。本研究の目的は、界面における局在準位の光電子増倍機構への寄与を調べ、その機構を明らかにすることである。2.実験プラズマCVD法により不純物添加量[PH_3]を変化してa-SiC:Hセルを製作した。定常特性として温度、印加電圧、光量を変化し、その光電流を測定した。更に、同様の依存性を過渡応答[現有]および周波数特性および位相特性[新規購入、ロックインアンプ]について測定を行った。3.結果と検討(1)定常状態光電流増倍が起こる閾値電圧は不純物添加量の増加と共に減少する。光電流-電圧特性、光量依存性より倍増が生じる範囲とそうでない範囲では、その振る舞いが異なり2つの領域に分かれる。これは、後で述べるモデルと矛盾しない。(2)過渡特性過渡特性は温度にほとんど依存しない。通常、光電流の過渡特性は光生成キャリアのトラップとの相互作用によって決定される。従って、増倍下ではその相互作用に温度の項を含まないと考えられる。また、その他の実験結果はモデルと矛盾しない。4.モデル光電流像倍のおこる電極はショットキー接触である。この空乏層中に光生成正孔が蓄積され障壁の電界が暗状態よりも強くなる。この電界によって障壁を電子がトンネルし光電流増倍が起こる。過渡特性を支配する空乏層中の正孔は、トラップから直接価電子帯ヘトンネルし放出されると考えると、実験結果を説明できる。
三次構造からタンパク質の構造変化を予測するための理論の確立

本研究ではイオンチャネル型グルタミン酸受容体の結晶構造を用い,この受容体のリガンド認識および活性化のダイナミクスを理論的に解析した.まずは,グルタミン酸受容体のアゴニストおよびアンタゴニストの静電ポテンシャルおよび受容体リガンド結合ドメインの静電ポテンシャルを,量子化学計算によって調べた.全てのリガンドは,分子の両端に負の静電ポテンシャルを形成している一方,受容体リガンド結合部位は,Arg485を中心に正の静電ポテンシャルを形成していた.これらのリガンド・受容体間の静電ポテンシャルの相補性から,グルタミン酸受容体のリガンド認識には,静電気力が中心的な働きをしていることが明らかにされた.また,リガンドの結合は,まずArg485への結合から始まることも示唆された.受容体活性化メカニズムの解明のために,リガンドおよび受容体の基準振動を調べ,アゴニストとアンタゴニストの結果を比較したところ,アゴニストが共通に持っているもののアンタゴニストは持っていない振動モードが,受容体と水素結合を介して振動相互作用することをつきとめた.そこで,この振動モードがアゴニストとArg485との間の衝突によって振動励起する確率を量子力学的に計算した.その結果,サブピコ秒の時間オーダーでこれら2つの振動モードは励起することがわかった.この振動励起のエネルギー源は,静電相互作用によって加速されたアゴニストの運動エネルギーであった.最後に,受容体リガンド結合ドメインにおけるArg485の振動励起エネルギーの移動過程を,分子動力学シミュレーションによって調べたところ,約3ピコ秒でJヘリックスの原子にサブÅの変位が起こることがわかった.Jヘリックスは,サブユニット間の結合部位に位置している.サブユニット間の結合部位に起こる原子変位は,サブユニット間の会合に摂動を与え,イオンチャネルを開口へと導くのであろう.本研究ではイオンチャネル型グルタミン酸受容体の結晶構造を用い,この受容体のリガンド認識および活性化のダイナミクスを理論的に解析した.まずは,グルタミン酸受容体のアゴニストおよびアンタゴニストの静電ポテンシャルおよび受容体リガンド結合ドメインの静電ポテンシャルを,量子化学計算によって調べた.全てのリガンドは,分子の両端に負の静電ポテンシャルを形成している一方,受容体リガンド結合部位は,Arg485を中心に正の静電ポテンシャルを形成していた.これらのリガンド・受容体間の静電ポテンシャルの相補性から,グルタミン酸受容体のリガンド認識には,静電気力が中心的な働きをしていることが明らかにされた.また,リガンドの結合は,まずArg485への結合から始まることも示唆された.受容体活性化メカニズムの解明のために,リガンドおよび受容体の基準振動を調べ,アゴニストとアンタゴニストの結果を比較したところ,アゴニストが共通に持っているもののアンタゴニストは持っていない振動モードが,受容体と水素結合を介して振動相互作用することをつきとめた.そこで,この振動モードがアゴニストとArg485との間の衝突によって振動励起する確率を量子力学的に計算した.その結果,サブピコ秒の時間オーダーでこれら2つの振動モードは励起することがわかった.この振動励起のエネルギー源は,静電相互作用によって加速されたアゴニストの運動エネルギーであった.最後に,受容体リガンド結合ドメインにおけるArg485の振動励起エネルギーの移動過程を,分子動力学シミュレーションによって調べたところ,約3ピコ秒でJヘリックスの原子にサブÅの変位が起こることがわかった.Jヘリックスは,サブユニット間の結合部位に位置している.サブユニット間の結合部位に起こる原子変位は,サブユニット間の会合に摂動を与え,イオンチャネルを開口へと導くのであろう.
ショウジョウバエを用いた細胞間相互作用の分子的研究

生物の発生や再生過程でのパタ-ン形成形を説明するため、位置情報の概念が提唱されて久しいがいまだにその分子像はほとんど明らかでない。それらの分子をコ-ドする遺伝子群を同定しその機能を明らかにするため、ショウジョウバエ(Drosophila melanogaster)の成虫原基(Imaginal disc)の形成に着目した。ショウジョウバエの成虫原基はその再生現象の詳しい解析などから、細胞間相互作用の観点から位置情報の分子像に迫るのに適した材料と思われる。第三染色体上の致死変異系統のコレクション(292株)から、成虫原基のパタ-ン形成に著しい異常を生ずる系統を7株分離した。そのうち4系統の変異株で、以下に述べる異常のいずれかが高い頻度で検出された。(1)成虫原基組織全体の腫瘍化。(2)部分的な構造の重複(Duplication)。(3)局所的な細胞の異常増殖。(4)細胞層の折れたたみの異常。各系統の表現型を、組織切片の作製やコンパ-トメント特異的なマ-カ-を用いた染色などにより検討している。表現型の解析を進めつつ並行して遺伝子のクロ-ン化を開始した。各変異株はゲノム中に転移因子が1コピ-挿入されており、その挿入位置近傍に求める遺伝子が存在することが期待される。2系統についてはすでに挿入位置近傍のゲノムDNAを単離しており、その領域から作られる転写産物を同定しようとしている。本研究ではまず変異株を分離しているので、正常なパタ-ン形成に必要な遺伝子を対象にしていることは約束されている。これらの遺伝子群が再生にも関与することが期待される。今後クロ-ン化した遺伝子を用いた研究を通して、遺伝子産物の分子機能に迫りたい。
霊長類(人類を含む)の社会構造

1.ニホンザルを中心とするサルグループ:(1)採食生態学的解析、個体同士は食物種も違えて競争を回避しているが、一方個体には社会的属性を消去する伴食許容空間があり、また食物が集中したり貧困な所では順位や血縁が採食行動に影響する。(2)群れの統合における血縁制、家系長の雌、リーダー等の役割の解明。(3)小群が集中し地域社会を形成している屋久島では社会性比がほぼ1に近く、交尾期の雄の移動が激しく、雄の順位と繁殖成功度の相関は低いが、孤立群では社会性比が小さく、交尾行動と順位や個体の経歴は相関しており、雄の繁殖成功度は社会構造によって決まる。雌については、出産率、死亡率、出産間隔、初産年齢などを家系に従って解析した結果、繁殖成功度と家系順位は必ずしも相関しない。(4)餌付け群で給餌量と個体群動態との関連を調べ、生命表が作製された。(5)個体群維持の内部要因としての寄生虫、細菌性疾病、生体の防御機構等の研究。(6)個体関係の発達、遊び、母親のケアと赤ん坊の行動等を順位と出産経験等から分析。Allomotheringを血縁淘汰と利他行動の両面から分析。(7)文化的行動における劣位者の新行動の獲得と伝播における役割の確認。(8)チンパンジーの道具使用と製作に関する実験的分析。2.ヒトグループ:(1)養蜂や漁撈、山村の焼畑耕作など伝統的生業の実体の把握と都市化による変容過程の分析と共に個人及び集団の生存戦略の考察。(2)日本海中部地震の人々の反応の人類学的分析から伝承に支えられた地域共同体の基底文化の重要性の指摘。(3)島という閉鎖空間での対人葛藤の調整機構を血縁、性、年齢などの生物的諸要素と宗教などとの関係から分析。自然、社会、文化の一体化した系として把えた人間社会の特質は、社会生物学的視点からだけでは説明できない。(4)生業活動と共同体維持機構の問題、対人関係の調整や葛藤の解消のための行動の規範、宗教の分析的研究。
OLプロトカドヘリンの発現と機能の解析

プロトカドヘリンは、神経系に特異的に発現する細胞接着分子である。特に、OLプロトカドヘリンでは嗅覚系や大脳辺縁系で特徴的な発現がみられ、これらの神経回路形成にかかわっているのではないかと想像されている。プロトカドヘリンについて、本年度は以下の研究を行った。まず、プロトカドヘリン2Aの発現をマウスの脳で調べた。そして、生後脳ではごく限られた神経核と上衣細胞などで特徴的に発現がみられ、成体脳ではプルキンエ細胞に特異的に発現していることを明らかにした。つぎに、マウスの生後の脳においてOLプロトカドヘリンの発現を免疫組織化学を用いて詳細に解析した。その結果LOT-st pathwayなど局所的な神経回路にそって蛋白が分布していることがわかり、このような神経回路形成に関わっていることが示唆された。また、ストリオソームなどでの局在から、これが細胞選別などに関与していることが示唆された。また、前年から引き続いて行っているノックアウトマウス作製については、欠失変異となるようなコンストラクトを作製し、ES細胞を樹立した。今後は、これをインジェクションして、変異マウスを作製するところである。トランスジェニックマウスについては、Cre-lox PによってOLプロトカドヘリンが制御されるコンストラクトを作製した。これをインジェクションし、現在数匹のトランスジェニックマウスが得られている。今後は、実際にOLプロトカドヘリンが過剰に発現するかを検討する予定である。OLプロトカドヘリンは、カドヘリンファミリーに属する細胞接着分子で、発生初期には鰓丘などで発現し、発生後期には臭覚系や大脳辺縁系などの特定の神経系で発現している。発現パターンから、神経回路形成に関与していることが予想されるが、その実証はされていない。本年はまず、ニワトリのOLプロトカドヘリンアイソフォームのcDNAクローニングを行った。その結果、細胞内領域に他のプロトカドヘリンとの共通配列が見つかった。つぎに、細胞外領域EC1部分のGST融合タンパクを用いて、モノクローナル抗体3A5を作製した。そして、現在ニワトリにおけるOLプロトカドヘリンの発現パターンを解析している。例えば小脳では、マウスとは異なるパターンで縞状の発現を示していた。培養細胞にトランスフェクションしたところ、ウエスタンブロットでは脳と同じ分子量を示すタンパクができていたが、免疫染色では局在がはっきりしなかった。おそらく、ベクター作製過程での変異によるのではないかと考えられる。次に、OLプロトカドヘリン変異マウスの作製のために、ゲノムDNAのスクリーニングを行い1つのBACクローンを得た。その構造を調べてみると、これまでにオリジナルフォームは1つのエクソンにコードされ、アイソフォームはその途中からオルタナティブスプライシングによって4つ以上のエクソンが加わっていることがわかった。現在必要な領域のサブクローニングを行っている。
機械翻訳活用のための前編集手法の体系化と段階的編集支援ツールの開発

近年、機械翻訳の性能が大幅に向上し、様々な情報流通場面での利用が期待されている。これまで入力文の書き換えにより翻訳結果を改善する「前編集(プリエディット)」という手法が注目されてきた。しかし、最新の機械翻訳方式における手法の有効性と全体像は明らかではなく、前編集用のツールも整備されていない。本研究では、機械翻訳向け前編集事例を広範囲で収集・分析し、人間にとって読みやすく機械でも処理しやすい日本語表現を作成するための前編集ルールの体系を構築する。さらに、前編集ルールを効率的に適用するためのツールを開発する。
看護職者が行う夫婦を対象とした親への移行プロセス支援プログラムの開発

本年度の研究は、1.初めての親になることが夫婦にとってどのような体験であるのかを明らかにする.2.夫婦としての親への移行を起こさせた影響要因を明らかにする.3.夫婦の親になるプロセスを支援するための看護職者の役割について明らかにする.4.夫婦を対象とした親への移行プロセス支援プログラムを作成する.研究プロセスとしては、以下の内容を実施した。1.対象者の選定並びにインタビューの実施2.データの分析と考察3.夫婦の親になるプロセスを支援するための看護職者の役割について明らかにすると共に、夫婦を対象とした親への移行プロセス支援プログラムを作成する.本研究の本年度の成果夫婦の親になるプロセスには、新たな親役割の取得、夫婦の関係性の再構築、家族としての新しい生活の構築、社会との新たな関係構築の模索などが同時に進行する。そして、それらは家族成員の幸福と家庭の安定性・継続性に影響を与える。そこで、本研究では、夫婦の関係性の再構築に必要なスキルやセルフコントロール、親役割としての育児技術、生活変化に対処する為の情報やスキルの提供などについて周産期に関わる看護職者が具体的に支援することにより、出産前には夫婦としての心がまえを促し、子育て中には実際の問題解決を促すことになるのではないかという結果が導き出された。本年度の研究は、1.初めての親になることが夫婦にとってどのような体験であるのかを明らかにする。2.夫婦としての親への移行を起こさせた影響要因を明らかにする3.夫婦の親になるプロセスを支援するための看護職者の役割について明らかにする。以上を明らかにすることであった。研究プロセスとしては、以下の内容を実施した。1.データ収集の前準備として、テーマに関連する文献検討や情報収集、尺度製作者への使用許可をもらうなどの作業を進め、使用する尺度の再検討をおこなった。2.本研究の対象は、鹿児島大学医学部・歯学部附属病院に通院する方々とするため、調査開始準備として鹿児島大学医学部・歯学部附属病院の臨床研究倫理審査に本研究を申請し、承認を得た。3.対象の選定並びにインタビューを実施中である。本研究の本年度の成果調査開始準備として5月には鹿児島大学医学部・歯学部附属病院の臨床研究倫理審査に本研究を申請したが、審査結果を受け取ったのが11月末という結果になってしまった。そのため、実際の調査開始は、1月からとなり、現在、対象の選定並びにインタビューを行っているところである。現在、調査を実施している妊娠後期にある3組の夫婦のインタビュー内容は、以下に示す通りである。妻たちは、妊娠を知って戸惑いや喜びなど複雑な思いを抱きながらも、新しい家族要因である子どもを迎えるために、子育てのパートナーとなる夫に父親としての変化を求め、実際に両親学級への参加を促すなどの行動をとっていた。夫たちは、妻の妊娠が判っても、自分の子どもが生まれるとか、妻のお腹に子どもが宿っている等の実感が持てず、妻が求める両親学級などへの参加は自主的というよりも求められてという受動的な行動をとっていた。
アフェクティブ・テクノロジーの概念と方法論の確立

本研究は、「ユーザに感情反応を引き起こす技術製品・サービス」をアフェクティブ・テクノロジーと定義し、その概念および方法論を確立することを目的とした。まず概念を定義した後、製品・サービス側の要因(原因系)とユーザの感情反応(結果系)それぞれについて要因を分類・体系化するとともに測定方法を確立した。さらに原因系・結果系の両要因の関連を明らかにし、実際にアフェクティブ・テクノロジーを造り出すための方法論を提案した。また造り出す組織に求められる資質やその評価方法について明らかにした。本研究では「ユーザにpositiveまたはnegativeな感情反応を引き起こす技術製品・サービス」をアフェクティブ・テクノロジー(affective technology)と定義し、その概念および実際にそれらを造り出すための方法論を確立することを目的としている。平成21年度は下記の4点について活動をおこなった。1:アフェクティブ・テクノロジーの概念の定義まず本研究の対象となるアフェクティブ・テクノロジーの概念について心理学、人間工学、マーケティングなどの関連研究を精査し、また産業界での事例も研究した上で概念を整理し、上記の様な定義を与え、さらに周辺分野との関連を明らかにし体系化した。2:アフェクティブさの要因の分類と体系化技術を用いた製品・サービスのどのような属性がユーザの感情反応につながりうるかを調べ、さらに技術製品・サービスを利用するという文脈でそれらを分類・体系化した。基本感情だけでなく個人の価値観や自己実現に関わるもの、記憶や共感など高次の反応も含めた体系を得た。3:感情の定量化手法技術製品・サービスが利用者に引き起こす感情を定量化する手法について、既存文献を精査し、唾液アミラーゼを用いた評価手法の検討を行った。また、高齢者が健康増進器具を用いる際の行動観察データならびにインタビューデータに基づき、使用する器具の使いやすさが最終的な選考基準や印象にどのように影響を与えるかを分析した。4:研究成果の公表とフィードバック国際会議(HCI International 2009)でアフェクティブ・テクノロジーのセッションを開催して内外の研究者に概念を提唱し、フィードバックを得た。本研究では「ユーザにpositiveまたはnegativeな感情反応を引き起こす技術製品・サービス」をアフェクティブ・テクノロジーと定義し、その概念および実際にそれらを造り出すための方法論を確立することを目的としている。平成22年度は下記の4点について活動をおこなった。(1)技術製品・サービスの評価手法の開発技術製品・サービス側の要因を評価し定量化するための手法を開発した。さまざまな製品・サービスのどのような要因が感情反応に結びつくかを網羅的に明らかにし、因子として抽出した。また製品やサービスをアフェクティブ度合いで評価するチェックリストを提案し、実際の事例に適応して有効性を検証した。(2)感情反応(結果系)の観測手法技術製品を手にした人間の感情反応について観測する手法を開発し、実際にそれを応用して人間が技術製品を受容するプロセスを観測した。新しい技術として携帯ゲーム機やタブレット端末を取り上げ、高齢者と若年齢者の感情反応の変化を測定するとともに、その過程に影響する要因について実験的に明らかにした。(3)感情反応のモデル化基本感情以外の高次の感情反応なども含む包括的な感情反応を捉える方法について検討した。特に美や価値の認識が関わる審美感情を中心に、ある感情を構成する認知要素をオントロジーの形でまとめるというアプローチを採用し、オントロジー構築の各種手法を試行するとともに言語テキストからのオントロジー抽出手法を試行した。さらに感情の発生的起源についての研究では、乳幼児における「笑い」行動を随伴する各種の指標で特徴づけ笑いオントロジー構築の基礎データとした。本研究では「ユーザに感情反応を引き起こす技術製品・サービス」をアフェクティブ・テクノロジーと定義し、その概念および実際にそれらを造り出す方法論を確立することを目的とする。本年度は下記の4点について活動をおこなった。(1)技術の設計要因と感情反応・技術受容の関連づけ技術製品・サービスのどのような要因がユーザの感情反応と関連するかを明らかにした。感情経験を引き起こす8因子を特定し、感情反応との相関を検証した。さらに実際の製品・サービスをこれら8因子を用いて評価・比較し特徴の違いを明らかにした。また感情反応が技術製品・サービスの受容プロセスに与える影響について明らかにした。高齢者がタブレット端末を受容するプロセスを分析し、親しみのあるものだけでなく話題性の高いものにも興味を向けること、使いやすいインターフェイスであれば新奇なものも受容することを示した。(2)感情反応プロセスの観測手法人の感情的反応を観測する方法について研究を行った。まず小説体験が物語理解、帰属推論、記憶想起に加え対人感情や審美感情をはじめとするアフェクティブな反応喚起が関連し合いながら進行する統合的な認知過程であることを明らかにした。テキスト構造の計量分析による特徴づけをおこない、小説体験の認知モデル構築の基礎づけをおこなった。次に審美感情のひとつである「かわいい」概念について日本語と中国語の比較分析をおこない、アフェクティブ・オントロジーの多言語化の試みとしての成果を得た。さらに乳幼児における「笑い」行動を時間的、空間的に近接した手がかりで分類するシステムを改善し、感情の発生的起源についてモデルを構築した。

(3)アフェクティブ・テクノロジーを生み出す経営アフェクティブな技術製品・サービスを生み出す企業に必要とされる経営の要因を抽出した。さらにこれを評価するためのツールの開発を行なった。本研究では「ユーザに感情反応を引き起こす技術製品・サービス」をアフェクティブ・テクノロジーと定義し、その概念および実際にそれらを造り出す方法論を確立することを目的とする。本年度は下記の5点について活動をおこなった。1.ユーザが製品やサービスに関して経験するポジティブな感情経験、ネガティブな感情経験の事例を分析してその構造を分析する方法を提案した。そしてその結果および前年度までの成果に基づき、感情経験をもたらす技術製品・サービスを設計する実践的な方法を提案し、その有効性を検証した。2.ユーザがさまざまな製品やサービスに関して感情的・合理的な評価をおこなう結果にどのような個人差が影響するかについて検証した。その結果いくつかの個人特性が感情的関与を通じて評価に影響する構造を明らかにした。さらに感情経験について年齢間や文化間でどのような違いが見られるのかについても比較研究をおこなった。3.アフェクティブ・テクノロジーの概念を具現化した実例を示し、その有効性を検証するために、感情経験をもたらす技術製品のプロトタイプを文献調査、ユーザ調査などを踏まえて設計・実装し、実際にユーザによる評価をおこなってその有効性を検証した。4.前年度までに明らかにした、アフェクティブな技術製品やサービスを提供する企業に必要とされる経営面の要因について、経営陣以外のステークホルダーによる評価指標を開発しその有効性を検証した。さらに前年度までに提案したものも含めこれらの評価指標と実際の企業の経営パフォーマンス指標との比較をおこなった。その結果、評価指標といくつかの経営指標との間に正の相関が見られ、アフェクティブな経営を行なっている企業は実際の経営パフォーマンスも良い傾向にあることが示された。5.本研究課題の最終年度として研究成果をとりまとめるとともに、国際会議や論文誌で研究成果を発表した。交付申請書に記載した「研究計画・方法」のPhase3まで順調に達成し、最終年度のPhase4を残すのみとなっている。さらにアフェクティブ・テクノロジーをつくり出すための経営に必要な視点として「アフェクティブなマネジメント(経営)」という概念を新たに提案し、このテーマについての研究も進め結果を得つつある。24年度が最終年度であるため、記入しない。本年度は本研究課題の最終年度として、前年度までに得られた成果に基づいて(1)アフェクティブ・テクノロジーの設計方法の構築と提言、
セマフォリンを介した神経・免疫クロストークによるアレルギー性鼻炎制御

アレルギー性鼻炎モデルマウスにおいて、SEMA3Aは神経伸長を抑制することでマウスにおけるアレルギー性鼻炎を改善するという報告があり、患者さんへの投与を想定してSEMA3Aの受容体を刺激する実験を行ったが、十分な結果が得られなかった。一方で、SEMA4Aは免疫学的にアレルギー性鼻炎において重要と考えられた。SEMA4Aを欠損したマウスでの実験の結果はややばらつきがあり、今後も実験を行っていくこととなった。まず、アレルギー性鼻炎モデルの再現性確認確認を行った。アレルギー性鼻炎モデルについては、オブアルブミンにAlumを加えて感作を行い、boostしたうえで刺激を加えている。過去の報告でも種々の刺激日程が報告されており、それらに基づき、今回の実験に適切な刺激日程を検討した。また、評価方法についても確認を行い、これについても過去の報告に基づき、くしゃみや鼻かき回数などの臨床症状でまず評価を行ったうえで、さらに血清IgEや病理組織で評価を行うこととした。病理組織については免疫組織染色での検討も考慮している。つづいて、セマフォリン・プレキシン抗体の作用の確認を行った。vitroでの作用の確認は製造元にて済んでいたため、野生型マウスでアレルギー性鼻炎モデルを作成し、投与を行った。現在投与量および投与日程を調整しているところである。セマフォリン3Aの受容体としてはプレキシンA1のみならずニューロピリン1も知られており、プレキシンA1関連抗体の投与での検討のみでは不十分と考えられ、現在ニューロピリン1関連抗体についても投与開始している。また、ヒトの検体についても検討を行っており、血清についてはELISAの系で検討しており、また、組織については免疫染色などでの検討を行っている。今後臨床的プロファイルとの関連を検討していく予定である。CTでの評価も可能であることを確認した。今後日内変動などへの応用が可能か検討していく。まず、アレルギー性鼻炎モデルの確認実験を施行した。オブアルブミン(OVA)およびAlumを用いた系で、まず、OVAおよびAlumで免疫し、OVAを経鼻投与して感作することでアレルギー性鼻炎モデルを作成した。期待通りくしゃみ・鼻漏といった臨床症状に加えて、血清IgE値の上昇を認めた。さらに、Sema3Aの受容体としてはプレキシンA1・ニューロピリン1が知られており、セマフォリン・プレキシン抗体での刺激実験も施行している。プレキシンA1およびニューロピリン1関連の抗体投与を施行した。これらで十分な表現型は未だ得られていないが、これについては投与量やマウスでのそもそものモデルの投与の日程やオブアルブミンなどの投与量についても検討が必要と考えられ、現在施行している。Sema4Aの受容体についてはPlexinBやTim-2などが知られているが、これらについては免疫染色に優れた抗体が無いため、下鼻甲介粘膜からcDNAを作成し、RT-PCRでmRNAの発現でもって比較することを計画し、現在primerなどを準備している段階である。血清ではELISAの系でSema3A・Sema4Aについて評価している。コントロール疾患との比較や、舌下免疫療法などへの反応性などについても検討予定である。また、病理組織についても検討を加えており、神経伸長との関連としてはCfiberを明視化できるPGP9.5の免疫染色との局在比較も行っている。オブアルブミン(OVA)およびAlumを用いた系で、まず、OVAおよびAlumで免疫し、OVAを経鼻投与して感作することで、アレルギー性鼻炎モデルマウスを作成した。また、SEMA3Aの受容体としてはPlexinA1およびNeuropilin-1が知られており、これらのAgonist/Antagonist抗体での刺激実験も施行した。当初は予備データが豊富な腹腔内投与で施行していたが、投与に伴う表現型の変化を認めなかった。過去の報告でSEMA3Aリコンビナントを経鼻投与することでアレルギー性鼻炎モデルマウスの症状が軽快したということであったため、その後経鼻投与を施行したが、やはり表現型の変化を認めなかった。投与量を検討しつつ今後とも実験を続けていく予定である。一方、SEMA4Aの受容体としてはPlexinB1,PlexinB2,Tim-2などが知られているものの、これらについてまず免疫染色法で検討を試みたが、市販されている抗体でヒトにおいてreasonableな結果が得られる抗体が乏しかった。そこで、cDNAを作成し、mRNAの発現を検討することにしたが、十分な再現性が得られず、definitiveな結論を導くに至らなかった。今後も検体採取方法を検討しつつ実験を続ける予定である。in vivo実験でのノックアウトマウスの増殖が意外と遅かったこと、モデル動物での日程検討など、また、ヒト検体準備のために予定よりやや遅れている。

耳鼻咽喉科やや遅れているものの、徐々に確実に進展してきており、現状の進捗であれば修正予定以内で完遂できると考えられる。進捗状況としては当初の計画通り実験が進んでいるため。in vivo実験でのノックアウトマウスの増殖が意外と遅かったこと、モデル動物での日程検討など、また、ヒト検体準備のために予定よりやや遅れている。得られた表現型について引き続き検討していく。引き続きマウスや抗体などに費用が必要である。また、学会参加費についても計上している。病理組織検討など3月までに納入予定のものが遅れているため。また、旅費についても次年度での使用に持ち越されたため。当初一年目に使用すると予定していた内容で2年目に使用予定。
モノクローナル抗体が認識するラット樹状細胞特異抗原に関する分子生物学的研究

樹状細胞(DC)は、抗原情報の提示に中心的な役割を果たす細胞群である。所属講座の作成した抗DC抗体であるKO3は、胸腺や顎下リンパ節などの傍皮質領域に存在する樹枝状の細胞と反応し、その分布は、MHCクラスII抗原を強く発現する細胞の分布と一致した。また,KO3が認識する蛋白質(以下KO3抗原という)は、35kDaの蛋白質であった.さらに外来抗原(オボアルブミン:OVAやリポポリサッカライド:LPS)を経口投与した際、その所属リンパ器官でKO3抗原量が増加したことから、KO3は、抗原の侵入によって分泌が促進される樹状細胞の細胞質に選択的に存在する蛋白質である可能性が考えられた.そこで.KO3抗原を解析するため,KO3抗原をコードする遺伝子とタンパク質の分離,精製を試みた.遺伝子の単離では,KO3抗原の発現量の高い臓器(胸腺,リンパ節など)からmRNAを抽出し、cDNAライブラリーを作製した.そのcDNAライブラリーをベクターのβ-ガラクトシダーゼとの融合蛋白質として発現させ,KO3を用いてKO3抗原遺伝子の単離を試みた.この結果は,KO3抗原mRNAの発現量が低く,またライブラリーの作成効率がよくなかったため,KO3抗原遺伝子を単離することはできなかった.そこで次に,KO3抗原の発現量の多い臓器からDCを単離し,KO3mRANを濃縮しようと考えた.KO3抗原の分離,精製では,胸腺やリンパ節の組織破砕液を等電点電気泳動とSDS-グランジエント二次元電気泳動を行ない,KO3が認識する35kDaの蛋白質の分離、精製を試みた.その結果,免疫沈降反応と二次元電気泳動を用いてKO3抗原の回収を試みたが,免疫沈降による沈殿物が微量であったため,十分な量のKO3抗原の回収ができていない.現在,沈殿物の回収量を増加するため,材料の組織量を増やして増加している.樹状細胞(DC)は、抗原情報の提示に中心的な役割を果たす細胞群である。また,KO3が認識する蛋白質(以下KO3抗原という)は、35kDaの蛋白質であった.さらに外来抗原(オボアルブミン:OVAやリポポリサッカライド:LPS)を経口投与した際、その所属リンパ器官でKO3抗原量が増加したことから、KO3は、抗原の侵入によって分泌が促進される樹状細胞の細胞質に選択的に存在する蛋白質である可能性が考えられた.そこで.KO3抗原を解析するため,KO3抗原をコードする遺伝子とタンパク質の分離,精製を試みた.遺伝子の単離では,KO3抗原の発現量の高い臓器(胸腺,リンパ節など)からmRNAを抽出し、cDNAライブラリーを作製した.そのcDNAライブラリーをベクターのβ-ガラクトシダーゼとの融合蛋白質として発現させ,KO3を用いてKO3抗原遺伝子の単離を試みた.この結果は,KO3抗原mRNAの発現量が低く,またライブラリーの作成効率がよくなかったため,KO3抗原遺伝子を単離することはできなかった.そこで次に,KO3抗原の発現量の多い臓器からDCを単離し,KO3mRANを濃縮しようと考えた.KO3抗原の分離,精製では,胸腺やリンパ節の組織破砕液を等電点電気泳動とSDS-グランジエント二次元電気泳動を行ない,KO3が認識する35kDaの蛋白質の分離、精製を試みた.その結果,免疫沈降反応と二次元電気泳動を用いてKO3抗原の回収を試みたが,免疫沈降による沈殿物が微量であったため,十分な量のKO3抗原の回収ができていない.現在,沈殿物の回収量を増加するため,材料の組織量を増やして増加している.
プレイジャリズムに対する意識改革と文献引用能力を養うeラーニングシステムの構築

本研究では、日本人学生の英語での文章能力向上を目的とし、プレイジャリズム(盗用・剽窃)に関する知識と、その知識を活用するスキルを養うためのeラーニングシステムを開発を行った。国外、特に欧米諸国の高等教育機関では、学術的誠実さは非常に重んじられてきた。日本でも近年その重要性が強調されるようになっており、学士課程教育において、学生に必要な知識とスキルを身に着けさせることは喫緊の課題である。プレイジャリズムを避けるためには、適切な文献引用方法の知識と、それを実際に使いこなす技能が必要となるが、まだ英語論文に関して具体的・明示的に引用の仕方やプレイジャリズムについて訓練を受けている学生は少ない。そこで、本研究では、演習問題を提供し、解答例を示すことで、訓練を行うシステムの開発を目指した。具体的には、盗用・剽窃に関する知識を身に着けさせるセクション、引用方法を学ぶセクション、パラフレーズ(言い換え)を学ぶセクション、要約を学ぶセクション、文献を引用したエッセイを書くセクションなどを作成した。利用者は、点数もしくは解答例と解説を演習問題を終了後、閲覧することができる。解答例は、上級レベルの英語学習者の作成したものを、研究代表者が修正することで作成した。○×問題や多肢選択問題、記述問題などの形式を採用している。解答例には、これらのセクションに問題をさらに追加していき、さらに内容を充実させる予定である。盗用・剽窃の問題は、日本国内では最近まであまり注目をされてこなかった問題であるが、ここ数年でSTAP細胞問題などにより、研究倫理教育の重要性が取りだたされるようになってきた。特に欧米の大学では、以前から盗用・剽窃は非常に深刻な問題と見なされており、学術的誠実性を裏切った学生は退学処分等の厳しい処置を受けている。そのような流れを受け、日本でも大学生に対する学術的誠実性に関する教育が求められるようになってきている。本研究はそのような研究倫理教育の発展に寄与することを目的として行うものである。大学入学後から学術論文やレポートの提出を求められるようになった学生にとって、どのような行為がルール違反となるのかわかりにくいことが予想される。さらに、英語でのライティングとなると、その作法に馴染みがない学生がほとんどである。従って、学生の研究倫理教育においては、まず盗用・剽窃とは何かを理解させる必要がある。そして、英語で学術的論文・レポートを書く際のルールや引用作法に関する基礎的知識を身につけさせねばならない。そのような教育をeラーニングプログラムとして体系的に行うことを目指したのが本研究である。本研究では、eラーニングプログラムの構成を6セクションに分けた。当該年度では、「プレイジャリズムに対する認識の深化」と「文献引用スキルの訓練」の二つのセクションの開発を中心に行い、サンプル問題を作成した。そのために、プレイジャリズムに関する知識・引用の作法をリスト化、レベル分けし、引用マニュアル等の資料を基に引用の状況を整理した。また、引用マニュアル等の資料を研究するだけでなく、学生が遭遇すると思われるライティングの状況を想定した。システムを使用する学生が、システムを使う際に、実際の状況を思い浮かべて、どのように行動すべきか考えられるよう問題を作成した。eラーニングプログラムの各セクションの詳細な構成を決定した。エッセイライティングの際に参照するパッセージの選定基準を設定し、現在選定を行っている。さらに、セクション1から3に関しては問題数、出題形式、解答の表示方法を決定した。さらに、サンプル問題を設置し、動作確認を行った。また、モデルエッセイとして使用するエッセイを収集するため、1)日本語母語話者であること、2)英語運用能力が英検2級程度以上、3)英語アカデミックライティングの経験があり、引用作法をある程度知っていることを条件に、研究協力者の募集を行った。28年度は募集した中級の英語学習者を対象に、思考発話法を用いたエッセイライティングとインタビューを行う予定である。さらに、29年度に向け、上級者用のエッセイトピックと、引用のためのリーディングパッセージの選定を行う。同時に、各セクションの問題を作成する。

当該年度では、本研究が対象とする英語運用能力と英語ライティング経験のある学生の募集を行ったが難航し、予定の時期にデータ収集を行うことができなかった。そのため、来年度、当該年度に行うことを予定していたデータ収集を行う必要があるため、次年度使用額が発生した。次年度では、データ収集のための旅費、被験者への謝金、プログラム作成料を中心に使用する予定である。現状では2セクションまで開発中であるが、残り4セクションのプログラミングを行うため、前年度より、より多くの費用が発生する予定である。
一本鎖DNAを用いた高効率ノックイン法とそれによるモデル動物の作製

本研究では、独自のssDNA合成法(ivTRT法)を用いたノックインマウス作製法の有用性を示すため、これまでよりも長いssDNA(約数キロ)の合成に挑戦し、レポーターノックインマウスやコンディショナルノックアウトマウス作製への応用を目指した。また、より簡便なssDNA合成法やそれを用いたノックイン法の可能性についても検証を行った。最終的に1-2キロ程のssDNA合成に成功し、肝線維化解析に有用なレポーターマウスや、複数のコンディショナルノックアウトマウス作製に活用することができた。本ノックイン手法はEasi-CRISPR法と命名し、本研究成果と方法についてそれぞれ論文として公開した。本研究では、独自の長鎖一本鎖DNA合成法(ivTRT法)を、これまでの我々の報告よりも更に長い一本鎖DNAの合成に応用し、それを用いた複数種類のノックインマウス(レポーター遺伝子挿入マウス、及びflox配列挿入によるコンディショナルノックアウトマウス[CKO])作製を行った。また、ivTRT法より簡便な一本鎖DNA合成法の開発についても検討した。レポーター遺伝子挿入マウスに関しては、T2A-蛍光遺伝子(約1-2kb程度)の一本鎖DNAを合成し、肝繊維化に伴い発現が上昇することで知られているアルブミン、Mmp9、Mmp13遺伝子の下流にノックインを行った。また、Ambra1、Pitx1のコンディショナルノックアウトマウスの作製も同様の方法で行った。その結果、約@-@%の高効率でノックイン個体を作製できることが明らかとなった。またそれらのマウスから次世代を得ることができ、系統として樹立することができた。特にコンディショナルノックアウトマウスの作製では、loxP配列を単独で2カ所に挿入するといった既存の方法も試みたものの成功はしなかったが、本手法を用いることで作製することができた。新たな一本鎖DNA合成法に関しては、φ29DNAポリメラーゼ、λエキソヌクレース、エキソヌクレースIの3種類を用いた方法を試みた。期待通りの一本鎖DNAが得られたのはλエキソヌクレースを用いた時のみであった。しかしながら、本法では二本鎖を一本鎖にする分解系を用いているため、合成したい一本鎖DNAの長さによってその都度条件検討を行う必要があるなど、課題も残されている。本年度は研究計画通り、あるいは予定以上に進んでおり、上述した内容(研究実績の概要に記述したノックインマウス、コンディシナルノックアウトマウスの作製)を含んだ論文を既に投稿済みである。本研究では、独自のivTRT法で長鎖一本鎖DNAを合成し、それを用いて複数種類のノックインマウス(レポーター遺伝子挿入マウス、及びflox配列挿入によるコンディショナルノックアウトマウス[CKO])の作製、及びそれらマウスの解析を行った。2017年度は主に、作製したマウスの解析(共同研究者らが行う)と、確立した新手法(Easi-CRISPR法)の標準化プロトコルの作成を行なった。作製したマウスの解析に関しては、以下1)-3)の結果が得られている。1)Mmp9レポーターノックインマウスに四塩化炭素( CCl4)を反復投与することで線維肝を誘導し、レポーター遺伝子発現の確認を行った。その結果、レポーター発現陽性細胞を顕微鏡下で確認することができた。またFACS解析においても、血球細胞のMmp9陽性細胞と考えられる細胞分画中に、蛍光遺伝子を発現する細胞集団を見出すことができた(共同研究者の稲垣豊教授、柳川亨世研究員ら)。2)iRFPノックインマウスの解析に関しては、IVISを用いた条件検討を行い、実際に生きたままのマウス肝臓での蛍光検出に成功している。3)作製した複数種類のCKOマウスのうち、Ambra1コンディショナルノックアウトマウスに関して解析を行った。CD4-Creマウスとの交配により得られた仔において、一部の血球細胞でflox配列が除去されていることが確認できた(共同研究者の佐藤健人准教授ら)。現在も引き続き共同研究者らによって機能解析が進められている。更に本年度は、本研究計画の最終年度であるため、学術誌への投稿(2報)を行い、研究論文としてGenome Biology誌に、確立した手法のプロトコル論文としてNature Protocol誌にて発表することができた。今後は、本手法を利用してさらなるマウスの作製とその解析を進めていく。特に1年目に作製したコンディショナルノックアウトマウスに関しては、実際にCreマウスを交配することによってfloxed配列が除去されること(KOできること)を確認する。またアルブミン遺伝子にiRFPをノックインしたマウスに関しては、IVISを用いて蛍光検出できるかを検討する。Mmp9、Mmp13遺伝子へのレポーターノックインマウスに関しては四塩化炭素(CCl4)を反復投与することで線維化を誘導後、蛍光が検出できるかを検討する。

遺伝子工学多くの条件検討を見込んで使用額を見積もっていたが、当初の予定よりも少ない実験で条件を決定することができたため、今年度の使用額の減少に繋がった。一方で、早めに本実験を開始でき、予定よりも多くのマウスを作製した。そのため、次年度にそれらのマウスの維持、繁殖、解析等の経費に回したいと考えている。本年度の研究計画遂行のためには、実験動物の作製、維持、繁殖、解析に必要な経費、および核酸関連試薬の経費を要する。また結果が出次第、研究発表、論文投稿に経費を使用したい。具体的には、本手法を利用した更なるマウス作製費用(30万円)、IVIS測定のためのマウス特殊試料(15万円)、実験用動物施設の利用経費(Alb、Mmp9、Mmp13、Ambra1、Pitx3、Creマウスなど)ケージチャージ45円として70万円、核酸関連試薬として20万円、学内共同施設利用料20万円、学会発表、論文投稿等に30万円程度を使用したい。