hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ユウロピウムを用いたスピン自由度と磁気双極子をもつボース凝縮体の基底状態相探索

得られたレーザーのパワーは150mW、線幅は30kHzであり、冷却を行うには十分な性能である。本年度は単に基底状態Euの磁気光学トラップへ向けた光源を準備するだけでなく、準安定状態Euの冷却原子の数を増やす改良を同時に行った。当初目標としていた基底状態Euの磁気光学トラップは実現出来なかったが、そのための準備は着実に進んでおり、研究はおおむね順調に進展してるといえる。私は、超弱磁場環境下でユウロピウム原子(Eu)のボース凝縮体を生成し、sipnor dipolar BECの基底状態相の探索を行うことを目指している。今年度は、Euのボース凝縮体を生成のために必要となる下記の3工程について研究を進めた。1.「準安定状態Euを基底状態へ戻す」ボース凝縮体を生成するためには磁気光学トラップされた準安定状態Euを基底状態へ戻す必要がある。私は準安定状態Euに対して波長609nm, 1204nmの2波長のレーザーを照射することで基底状態へ光ポンピングした。ポンピングにかかる時間と効率はそれぞれ100us, 80%であり、次に示す基底状態Euの磁気光学トラップの実験を行うには十分である。2.「基底状態Euに対する磁気光学トラップ」基底状態へ戻されたEu原子に対して、波長687nmの冷却レーザーを3方向から対向照射し、かつ3波長のリパンピングレーザーを導入することで、基底状態の原子に対して磁気光学トラップを実現する。私は、波長687nmの冷却レーザー、及び、3波長のリパンピングレーザーを用意した。現状では、冷却レーザーと1波長のリパンピングレーザーのみを用いて実験を行っているが、110usと予想以上に短い時間で準安定状態へ緩和していることを示す結果が得られた。今後は、照射するリパンピングレーザーの数を増やし、磁気光学トラップの詳細について明らかにしていく予定である。3.「光トラップ中での蒸発冷却」波長687nmの冷却光によって磁気光学トラップされた基底状態Eu原子を波長1.5umのレーザーによって作られた十字型光双極子トラップへ原子を移行し、蒸発冷却を行うことでボース凝縮を得る。私は、出力18W、波長1.5umのレーザーの準備と必要な光学素子の選定・購入を行った。本年度は、準安定状態Euを短時間、高効率で基底状態へ光ポンピングする、磁気光学トラップのリパンピングレーザーを用意する、といった準備を行ってきた。その結果、波長687nmの励起状態から準安定状態への緩和レートが予想以上に大きく、基底状態Euの磁気光学トラップを実現するにはリパンピングレーザーが必要不可欠であることが明らかになった。本結果は、Euのボース凝縮実現するための方策を決めるうえで、非常に有益な情報である。残念ながら当初の目標であったEuのボース凝縮体の実現は達成できなかったが、磁気光学トラップ、及び、光トラップ中での蒸発冷却の準備は着実に進んでおり、研究はおおむね順調に進んでいるといえる。本年度の研究を通して基底状態Euの磁気光学トラップを実現するための準備を行った。今後はその実現へ向けて研究を行う。その一方で、基底状態Euの磁気光学トラップを実現できたとしても冷却遷移の分枝比が大きい場合には十分な数の原子を確保できないと予想される。
薬剤耐性癌細胞の多様性に対応する至適分子標的薬選定プロセスの体系化

薬剤反応における分子レベルでの多様性は抗癌剤治療後再発の主たる原因と考えられる。本公募研究は、その多様性に寄与する因子を多角的に検証し、最終的に初期薬剤治療後の分子標的薬選定プロセスを体系化しようという試みである。初年度の進捗からより包括的な抗癌剤治療後の再発メカニズムを探り分子標的薬の選定根拠を確立するため、昨年度は下記の立案・解析を行った。(1)抗癌剤誘導性シグナル伝達:当初予定していたタンパク解析に加え、ゲノム解析、トランスクリプトーム解析を加えた。統合的オミクス解析を継続中であるが、遺伝子変異に依存する特異的薬剤反応よりも転写レベル、タンパクレベルでの薬剤反応が再発と関連することが示唆された。特に前年度までの成果で示唆した5-FUへの反応性で重要なPI3Kパスウェイに再度注目し、現在検証を進めている。(2)抗癌剤耐性細胞集団の多様性:薬剤存在下で増殖する細胞集団についてColony Lysate Array(CoLA)法を確立した。(3)異種同種移植時におけるPTENdepletionの意義:CoLA法による薬剤耐性細胞集団のプロファイルをもとにヒト胃癌細胞をマウス胃粘膜下層に移植した。腫瘍形成から転移巣にかけて、PI3Kパスウェイ活性化とともにPTENの発現がほぼ消失していた。PTENレベルの消失が胃癌悪性度の指標となるか検証中である。(4)癌治療後患者の免疫能:Helicobacter pylori(HP)の感染者では代謝拮抗剤S-1を用いた術後化学療法後の生存率が有意に上昇していた。これはHP感染で化学療法に有利な免疫状態が誘導されたことが想定される。HPのヒト健康に及ぼす影響を検証するため健常人コホートを用いた研究計画を立案した。29年度が最終年度であるため、記入しない。進行胃癌の治療後再発は、肉眼的に癌を確認できない状態で化学療法を行ったのちに見られることから、我々は抗癌剤存在下で増殖可能な癌細胞を再発の起点と考え、その最小単位(抗癌剤寛容性コロニー、DTC)を対象とした研究を行った。また、DTCを形成するために必要な抗癌剤反応性シグナル伝達経路を同定するため、タンパクの時系列データの集積を行っている。再発胃癌の治療に用いられるシスプラチン(CIS)存在でDTCを採取し、そのプロファイリングおよび特異的抑制効果のある化合物のスクリーニングを行ったところ、CIS存在下で出現するDTCは、キノコ毒に含まれRNA polymerase II阻害活性を持つα-Amanitinにより転写複合体を形成するTAF15を標的として効果的に抑制され、その肝・腎毒性はCIS同時投与により予防できる可能性も示唆された(Kume et al, Sci Rep, 2016)。さらに、胃癌術後補助化学療法での抗腫瘍活性物質である5-FU抵抗細胞株を用いた実験では、5-FU投与により、PI3Kのリン酸化が促進された細胞亜集団がその抵抗機序の中心であることを明らかにした。この結果から5-FUとPI3Kリン酸化阻害剤GDC-0941を同時投与すると、マウスを用いたヒト胃癌細胞の異種同所同組織再発モデルに対して効率的に再発を抑制することができた(Ishida et al, Sci Rep, in press)。抗癌剤投与後タンパク時系列データ解析では、現在まで細胞(8種類)×薬剤(4種類)×濃度(3段階)×時系列(5点)×反復実験(4回)=1,920サンプルを回収した。今後これらのサンプルを逆相タンパクアレイ(RPPA)に集積し、300種類以上の抗体を含むライブラリーから免疫染色を行う予定である。画像解析および統計解析についても概ねシミュレーションは完了した。先行研究から立案されたDTC解析による癌再発機構の解明を目指す過程で、技術開発を中心とした胃癌再発に重要な分子同定プロセスの体系化の可能性が示された。現在まで、胃癌の再発を想定した実験を行っているが、いったん治療を終了した癌患者の再発機序には生物学的な共通点も多いはずである。また、再発治療は標準的治療完了後のものを対象とすべきであり、今回はシスプラチンに対してTAF15と5-FUに対してPI3Kという最も使用頻度の高い抗癌剤使用後の分子標的を同定した。これらの研究に関連した特許を計4件出願中である(年度内申請はなし)。(3)異種同種移植時におけるPTEN

depletionの意義:CoLA法による薬剤耐性細胞集団のプロファイルをもとにヒト胃癌細胞をマウス胃粘膜下層に移植した。腫瘍形成から転移巣にかけて、PI3Kパスウェイ活性化とともにPTENの発現がほぼ消失していた。PTENレベルの消失が胃癌悪性度の指標となるか検証中である。(4)癌治療後患者の免疫能:Helicobacter pylori(HP)の感染者では代謝拮抗剤S-1を用いた術後化学療法後の生存率が有意に上昇していた。これはHP感染で化学療法に有利な免疫状態が誘導されたことが想定される。HPのヒト健康に及ぼす影響を検証するため健常人コホートを用いた研究計画を立案した。消化器由来の固形癌の多くは、シスプラチンや5-FUなどの細胞傷害性抗癌剤を用いた、いわゆる標準治療で治療されることが多い。一方、再発癌は標準治療への反応性は乏しいことが多く、分子標的薬や免疫療法などの積極的適応となっていくと思われる。したがって、数ある分子標的薬が投与対象となることが想定されるが、標準治療後や抗癌剤投与により誘導された分子経路を標的とする投与根拠が必要である。本研究では、初年度では抗癌剤投与により出現したDTCを対象とした分子プロファイリングおよび再発抑制効果のある化合物を、シスプラチンに対してのα-Amanitinおよび5-FUに対してのGDC-0941、と2種類同定した。次年度はどのような抗癌剤によってどのような分子経路が誘導されるか、抗癌剤間および細胞間の共通点に着目し、RPPAによる抗癌剤反応性タンパクのモニタリングとインフォマティックス技術を用いた解析により効率的な分子標的薬同定に繋げることが可能か検証する。29年度が最終年度であるため、記入しない。
トランスポーター遺伝子の組織特異的発現制御機構の解析

ルシフェラーゼアッセイの結果、HNF1α/βはOAT1及びURAT1を転写活性化することが明らかとなった。ゲルシフトアッセイにより、HNF1α/βはhOAT1、hURAT1プロモーター領域と相互作用することが示された。さらにHNF1α-nullマウス腎臓において、mOat1、mUrat1のmRNA発現量が減少していた。これらの結果から、OAT1及びURAT1遺伝子の発現にはHNF1α/βが重要であることが明らかとなった。Bisulfte sequencing法により肝臓・腎臓におけるmOat1遺伝子、mUrat1遺伝子の転写開始点近傍のDNAメチル化状態を解析した結果、両トランスポーターとも肝臓では高メチル化状態であったのに対し、腎臓では低メチル化状態であった。このDNAメチル化プロファイルは腎臓特異的なmOat1、mUrat1の発現分布と一致していた。以上の結果より、OAT1遺伝子及びURAT1遺伝子の組織特異的発現はHNF1α/βによる転写活性化とDNAメチル化による転写抑制により制御されていることが示唆された。初年度の研究成果と併せて考えると、腎臓特異的有機アニオントランスポーター群は共通のメカニズムによる発現制御を受けていることが示唆された。Human Organic Anion Transponer 3(hOAr3/SLC22A8)は腎臓近位尿細管に特異的に発現し、様々な有機アニオン化合物の尿中排泄に重要な役割を果たしている。hOAr3の組織特異的発現の制御メカニズムを明らかにするため、hOAr3のプロモーター領域を解析した。hOAr3のminimal promoterは転写開始点上流約300bpの領域に位置することが分かった。その領域には、TArAmotifおよびHepatocyte Nulcear Factor 1(HNF1)motifが存在し、これらはげっ歯類のOat3遺伝子においても保存されていた。Luciferase assayにおいて、hOAr3のプロモーター活性はHNF1αおよびHNF1βの共発現により顕著に上昇した。HNF1 motifに変異を導入することにより、HNFIα/βによる転写活性化は低下した。ゲルシフトアッセイにより、hOAr3プロモーターにはHNF1α/HNF1αhomodimerおよびHNF1α/HNF1βheterodimerが結合することが示された。また、hoAr3のプロモーター活性はDNAメチル化により抑制された。さらに、HNF1αおよびHNF1βを内因性に欠くHEK293細胞にHNF1α単独あるいはHNF1αとHNF1βの両者を強制発現させた状態でDNAを脱メチル化することにより、hOAr3の発現が新たに活性化された。この結果は、hOAr3の発現にはHNF1α/HNF1αhomodimeあるいはHNF1α/HNF1βheterodimerとDNA脱メチル化の協奏作用が必要であることを示唆する。以上の結果より、ジェネティックな因子(HNF1αおよびHNF1β)とエピジェネティックな因子(DNAメチル化)が協調することによりhOAr3の組織特異的発現を制御していることが示唆された。
新しい蛋白質修飾酵素、ペプチジルアルギニンデイミナーゼの活性中心構造の解明

ペプチジルアルギニンデイミナーゼ(以下PADaseと略記)はCa^<2+>の存在下において蛋白質のArg残基を脱イミノしCit残基に変換する新しい蛋白質修飾酵素である。筆者らは先にマウス骨格筋PADaseがSH基特異的修飾試薬によって迅速に失活することを見出したことから、このような化学修飾法によるPADaseの活性中心構造の解明を立案した。昭和62年度は、各種の修飾試薬の中でiodoacetamide(以下IAAと略記)が低濃度でかつ迅速に上記酵素を不活性化することやこの不活性化反応は基質とCa^<2+>の共存下においてのみ完全に阻止されることが判かり、IAAがPADaseの活性中心残基を修飾することが判明した。つぎにpH変化に伴うIAAの不活性化反応の動力学的検討の結果、この反応には遅い反応(R21K=0.320.75×10^2M^<-1>・min^<-1>)と速い反応(k_2/K=5.12×10^2M^<-1>・min^<-1>)が存在することを見出した。またIAA修飾および末修飾PADaseのアミノ酸分析に結果、2つのCys残基が修飾されていることが判かりPADaseにIAAに対し超反応性の2つのCys残基が活性中心部位に存在し、両残基は解離定数が異なると判断した。昭和63年度は、マウスPADaseを〔^<14>C〕1AAで標識後、還元カルボキサミドメラル化しついで真化シアンによるフラグメンテーションを行った。各フラグメントをセファデックスG-50のゲル濾過により分画した結果、約7kDaの2つのペプチドに放射活性が認められ、ついでこれらをリジルエンドペプチダーゼ水解により限定分画後Asahipak ODP-50逆相系HPLCのペプチドマッピングを行った。それぞれのペプチドマップ上に各1つの放射活性を有するペプチドが得られたことから、そのアミノ酸組成およびアミノ酸配列分析を行ない次のような結果を得た。NH_2-Ala-Ser-Trp-Thr-Trp-Gly-Pro-Asn-Gly-CmCys-(Asx3、Glx2、Arg、Ala、Pro、Val、lle、Lcu3、Phe)-Lys-CooH、NH_2-Thr-Pro-Asn-lle-Lcu-Pro-Pro-Val-Ser-Val-Val-(Asx2、Glx、CmCys4、Ser、Gly、Thr、Ala、Pro2、Val、lle、Phe2)-Met-COOHこれらがPADaseの活性中心構造と思われる。ペプチジルアルギニンデイミナーゼ(EC3.5.3.15)はCa^<2+>の存在下においてペプチド鎖中のArgの残基を脱イミノしCit残基に変換する新しい蛋白質修飾酵素である.

本研究ではこの酵素の活性中心構造に関し幾つかの新しい知見を得たので報告する.1.活性中心に対する特異的修飾試薬の選択:マウス骨格筋由来の精製酵素を用い,まず活性中心として可能性のあるアミノ酸残基それぞれを各種の試薬で修飾した.その結果, CyS残基(iodoacetamide,以下IAAと略す), His残基(diethylpyrocarbonate)およびTrp残基(N-bromasuccinimide)修飾試薬によって本酵素は著しく活性が低下した.修飾反応が活性中心に特異的である場合,その反応は基質によって妨害される.よって本研究でもこの点を検討したところ, IAAによる不活性化反応は基質(BZ-Arg-OEt)によって妨害され,それはCa^<2+>の存在下においてのみ完全であった.他の試薬ではこのような妨害作用は受けなかった.また,各種のArg誘導体の内妨害効果が高かったのはX-Arg-Y型の基質であり,これは本酵素の基質特異性と一致した.このような結果からIAAは本酵素の活性中心残基を特異的に修飾すると判断した.2.IAAによる不活性化反応の速度論的解析:本酵素に対するIAAの不活性化反応はpH6以上で認められ,その速度はpH6-7の間においてほぼ一定であり反応は偽一次的に進行した.しかし, pH7以上の条件ではその反応はより急速となるとともに速い反応と遅い反応の二相性を示した.pH6およびpH8における不活性化反応の速度論的解析結果, pH8で見られる速い反応の二次反応速度定数は, pH6での反応の約10倍と算出されたが,一方の遅い反応のそれはpH6での反応とほぼ同じであった.以上の結果より,本酵素の活性中心部位にpK値およびIAAに対する反応性の異なる複数の活性残基が存在すると判断した.昭和63年度は,これらの活性残基の同定および同残基近傍一次構造を解明する予定.ペプチジルアルギニンデイミナーゼ(以下PADaseと略記)はCa^<2+>の存在下において蛋白質のArg残基を脱イミノレCit残基に変換する新しい蛋白質修飾酵素である。本研究はPADaseの活性中心構造を明らかにすることを目的として行った。前年度の研究で筆者らは、マウス骨格筋由来のPADaseがiodoacetamide(以下IAAと略記)により迅速に失活することを見出すと共に同試薬による不活性反応が本酵素の活性中心のCys残基に特異的であることを証明した。またその反応の反応動力学的解析も行った。本年度は、上記PADaseの活性中心Cys残基を〔1-^<14>C〕IAAで標識後蛋白質化学的手法を用いて活性中心残基を含むペプチドを分画精製しその一次構造を解析した。まず、本酵素をpH8条件下でほぼ100%不活性化した場合酵素1分子当り2分子の〔1-^<14>C〕IAAが反応すること、またこの修飾酵素のアミノ酸分析により分子全体で8残基存在するCys残基のうち2残基が修飾されることを明らかにした。ついで、上記〔1-^<14>C〕IAA標識酵素を還元カルボキサミドメチル化し、臭化シアンによる断片化後、セフアデックスG-50のデル濾過法により分画を行った結果、約7KDaと2KDaの2つのペプチドに放射活性を認めた。
中間表現型にニューロイメージングを用いた自閉症スペクトラム障害の分子遺伝研究

自閉症スペクトラム障害(ASD)は、乳幼児期に顕在化する生来の発達障害であるが、その生物学的診断マーカーについては未だ解明されていない。我々は、ASDの中間表現型として、脳画像(脳形態、脳内生化学代謝)や臨床症状を用いて、疾患感受性遺伝子として想定されているセロトニン関連遺伝子との関連を調査した。その結果、(1)ASD者では右内側側頭葉(海馬-扁桃体)領域において神経発達障害を認め、この障害の程度はASD各サブタイプ間によって異なり、ASDの重症度に寄与している可能性がある、(2)ASD者では視床の萎縮を認め、この萎縮はASDの臨床症状の一つ「人との関係」に関連している、(3)5-HTTLPR遺伝子S・L多型と5-HTR1A遺伝子C(-1019)G多型はASDの様々な臨床症状に関与している可能性がある、(4)5-HTTLPR遺伝子多型は、ASD者の右内側前頭前野の神経発達障害に影響を与えている可能性があることを明らかにした。これらの遺伝子により影響を受ける中間表現型はASDの生物学的診断マーカーになり得るものと考えられた。自閉症スペクトラム(ASD)者39名、定型発達者15名の脳形態、脳内生化学代謝情報をMRI、MRスペクトロスコピー(MRS)の技法を用いて測定した。ASD者と定型発達者間での脳体積の比較では、ASD群で有意に両側視床の体積が減少していた。一方、小脳体積の比較では、先行研究に反して有意な差を認めなかった。MRSの解析では、ASD群の右内側側頭葉領域でNアセチルアスパラギン酸(NAA:成熟神経細胞の指標)の有意な低下を認めた。また、ASD者150名、定型発達者600名より、唾液DNA収集キット(Oragene)を用いてDNAを収集し解析したところ、トリプトファン水酸化酵素2(脳内のセロトニンを合成する)遺伝子(TPH2遺伝子)とASDの間に有意な関連が認められた。また、セロトニン・トランスポーター遺伝子(5-HTTLPR)、セロトニン1A受容体遺伝子(5-HTR1A)、セロトニン2A受容体遺伝子(5-HTR2A)とASD者の脳体積、脳内生化学代謝情報との関連を解析した結果、5-HTR1A遺伝子のGly272Asp多型をホモで持つ群において、両側視床の体積が有意に低下していた。また、5-HTTLPR遺伝子のS多型をホモで持つ群は、右内側前頭前野におけるNAAが有意に低下していた。小児自閉症評価尺度-東京版(CARS-TV)で測定した臨床症状と、ASD者の脳体積、脳内生化学代謝情報との関連を解析したところ、視床の体積減少と「人との関係」の障害の間、および右内側側頭葉におけるNAAの低下と「聴覚反応」の障害・全体的な重症度との間に有意な相関を認めた。上記の成果の一部を第50回児童青年精神医学会にて発表した。自閉症スペクトラム(ASD)者39名、定型発達者15名の脳形態、脳内生化学代謝情報をMRI、MRスペクトロスコピー(MRS)の技法を用いて測定し、また、ASD者150名、定型発達者600名より、唾液DNA収集キット(Oragene)を用いてDNAを収集し解析した。遺伝子解析の結果、トリプトファン水酸化酵素2(脳内のセロトニンを合成する)遺伝子(TPH2遺伝子)とASDの間に有意な関連が認められた。また、セロトニン・トランスポーター遺伝子(5-HTTLPR)、セロトニン1A受容体遺伝子(5-HTR1A)、セロトニン2A受容体遺伝子(5-HTR2A)とASD者の脳体積、脳内生化学代謝情報、臨床症状との関連を解析した結果、(5-HTR1A)遺伝子のGly272Asp多型をホモで持つ群において、両側視床の体積が有意に低下していた。さらに、5-HTTLPR

遺伝子のLアレルを持つ群は、「聴覚反応」の症状が重篤で、5-HTR1A遺伝子のAアレルを持つ群では「非言語的コミュニケーション」、「活動性の水準」が重篤であった。これらの結果は、第32回日本生物学的精神医学会にて発表した。さらに、ASD者における小脳の体積減少と5-HTTLPR児遺伝子とASD者の前頭前野の生化学代謝異常との関連については、各々Psychiatry Research : Neuroimaging誌に報告した。
癌細胞におけるGLP-1受容体発現の生物学的意義の解明

我々はヒト前立腺癌組織において、GLP-1受容体発現が癌進展度を示すGleason scoreと逆相関することを、免疫染色を用いて見出した。レンチウイルスを用いて、内因性のGLP-1受容体発現を認めない前立腺癌細胞株ALVA-41細胞にGLP-1受容体を強制発現させたところ、GLP-1受容体作動薬により細胞内cAMP濃度が上昇し、機能していることがわかった。強制発現されたGLP-1受容体はALVA-41細胞の細胞増殖を抑制するが、アポトーシスは誘導しなかった。また、GLP-1受容体作動薬は用量依存性に細胞増殖を有意に抑制していた。細胞周期を検討したところ、GLP-1受容体を発現させそれを刺激することによって、G1期からS期への移行が抑制されていることが分かった。細胞周期を制御する因子を検討したところ、SKP2の遺伝子発現が抑制されることで、p27Kip1という細胞周期の抑制因子が上昇しているとともに、細胞周期の促進因子であるCyclin D1の発現も抑制され、Rbタンパクのリン酸化が抑制されてG1アレストが惹起されていることが分かった。細胞周期に着目した検討が順調に進行し、in vitroの検討が計画以上にスムーズに進んだため。現在in vivoの検討を計画している。Xenograftモデルを用いてGLP-1受容体を強制発現させたALVA-41とコントロールベクターをトランスフェクションしたALVA-41において、GLP-1受容体作動薬の癌抑制作用を検討する。
看護師の終末期患者との心理的距離自己認識尺度の開発

死に向かう過程にある患者は、身体的苦痛、精神的苦痛、社会的苦痛、スピリチュアルペインといった全人的苦痛を抱えており、終末期患者と関わる看護師は、それらの苦痛を緩和する看護実践を求められる。終末期に看護が果たす役割は大きいが、看護師は、終末期患者とどう関わればよいかについて苦悩している。本研究では、終末期患者と関わる看護師が、患者へ形成する心理的距離を振り返り、自己の関わり方を認識する尺度を開発することにより、患者との関わりについて自己を振り返るための示唆を得ることを目的としている。本年度は、研究の方向性の確認および看護師が形成する死にゆく患者との心理的距離に関する研究等をもとに、「看護師の終末期患者との心理的距離」について構成要素を検討した。これらの研究は、一般病棟と緩和ケア病棟の看護師にインタビュー調査を行い、質的に分析したものである。一般病棟の看護師からは、患者との心理的距離を主体的に形成したり、一方では患者との距離を遮断してしまうことなどが示された。緩和ケア病棟の熟達看護師は、終末期ケアに専心して取り組んでいる特徴があり、心理的距離をどのように主体的に形成しているかという、より具体的な要素が示された。それらのデータを統合し、看護師が形成する死にゆく患者との心理的距離の構成要素について分析した。その結果、看護師が患者との心理的距離の一致度を見極めていることや、看護専門職として自己の存在の在り方を調整しながら、終末期を意識した看護行為を実践することなどが示された。これらは、本研究の尺度を構成する要素を検討するための基盤となる。本年度計画していた構成要素の検討は実施できたが時間がかかり、質問紙の作成まで終えていない状況である。次年度は、はじめに、質問項目の精選を行う。また、妥当性を検討するための関連する概念や尺度を探索する。そして、質問紙作成を行い、内容を検討したのち、近隣の医療機関1施設を対象に質問紙調査を実施する。対象者は、看護師50名程度を予定している。回収したデータを分析し、質問紙の信頼性、妥当性を検討する。その後、全国の終末期患者への看護を実践している医療機関(300床以上を予定)から無作為抽出法を用いて研究依頼施設50施設程度を抽出し、看護師1000名程度に質問紙を配布する予定である。質問紙調査が実施できず、そのために計上していた予算を執行することができなかったため残額が発生した。次年度は、妥当性を検証するために必要な関連する尺度を探索することから書籍購入や文献複写のための費用が必要である。また、近隣の医療機関への質問紙調査実施および全国への質問紙調査実施にともない、封筒等購入費、印刷費、通信費などが必要である。また、分析のためのソフトの購入やデータ入力のための人件費が必要である。
くすりの相互作用と安全性の予測を目的とした組換えヒトP450酵素の応用

併用されたくすりの相互作用により、臨床上重篤な副作用が引き起こされた医療事故が契機となり、薬物相互作用の機序とその予測に関する研究が注目を集めている。現在知られている薬物相互作用の多くは、くすりの代謝過程において、チトクロームP450酵素(以下P450又はCYP)の阻害によるものとされている。そこでP450酵素の代謝阻害と酵素誘導に焦点をしぼり、主に大腸菌に発現させた精製ヒトP450酵素を用いる再構成系を用いて研究を進め、ヒト肝ミクロゾームと対比させることにより以下の成果を得た。1.ヒト肝ミクロゾームの主要なP450分子種であるCYP3A4は、P450還元酵素、チトクロームb_5(b_5)、混合リン脂質、コール酸を用いる再構成系により、還元型グルタチオン、塩化マグネシウム存在下、HEPES緩衝液中で反応させることにより、肝ミクロゾームに相当する十分な触媒活性を示すことが明らかになった。b_5は電子伝達系に含まれるヘム蛋白であるが、そのCYP3A4触媒活性促進作用は、電子の流れを介することなく、CYP3A4とP450還元酵素のとの複合体形成にb_5が関与していると推察され、b_5を要求する他のP450分子種、例えば、CYP2E1に対する活性促進作用機序とは異なることが示唆された。2.臨床上相反する薬物相互作用に関する報告があるマクロライド系抗生物質のうち、エリスロマイシンとその誘導体のP450酵素の阻害、代謝を受ける分子種及び誘導作用について検討した。エリスロマイシンはラットとヒトのCYP3A酵素によって代謝を受け、阻害作用を示すのみならず、CYP3Aの誘導作用も合わせ持つことが判明し、この程度の違いが相反する報告の一因となることが示唆される。
学習障害児の内発的動機づけを支援する教育的手法の開発

当研究の目的は,小学校中学年期・高学年期にある学習障害児の内発的動機づけを支援する教育的手法の在り方を解明することであった。人間には三つの非常に主要な心理的欲求(すなわち,交流感,自己決定感,有能感)がある。研究組織者は,内外の動機づけ分野の専門家によって蓄積されてきた内発的動機づけに関する研究論文等を精査することをとおして開発した「内発的動機づけ支援手立て評定尺度(改訂版)」を活用することによって,これら欲求のうちの第三のもの(有能感)にも増して第一と第二のもの(交流感と自己決定感)が非常に大切であるということを見出した。さらにその上,下記のような支援手立てが重要であることを確認することができた。まず第一に,学習障害児の交流感を充足させる手立てとしては,「容認的に応対する」ことが重要である。子どもは他者からの温情と拘わり合いを必要としている。子どもを全く独りで置き去りにすることは交流感の支援ではなく,それは怠慢である。交流感の支援には,教師や親の側からの拘わり合いが必夢である。第二に,学習障害児の自己決定感を充足させる手立てとしては,余りにも容易であったり困難であったりしない「最適な課題を選定する」ことが重要である。子どもは自分の現在の能力水準をやや越えているような活動に自然に引きつけられるものである。第三に,それぞれの手立ては単独ではその効果を十分に発揮することはできない。「それぞれの手立てを連結・連動させる」ことが重要である。たいていの教育的成果というものは,交流感の支援が自己決定感や有能感の支援と関連づけて行われる時に,発生するものである。当研究の目的の一つは,小学校中学年期・高学年期にあたる学習障害児の内発的動機づけが学習困難の改善に及ぼす影響について究明することである。もう一つの究極の目的は,彼らの内発的動機づけを援助・支援する教育的手法の在り方を究明することである。具体的には,交流感・有能感・自己決定感を充足させるために大切なものだと考えている約30の手立ての内のどれが重要であるのかを究明することである。平成9年度には,4名の研究協力者(小学校の言語障害特殊学級の担当教員)及び他の7名の専門家(大学・教育センター等の研究者)と協同で,5名の学習障害児を研究対象児として特定し,彼らのための第1期授業計画を作成した。その上で,作成した授業計画に準拠して,人間化(personalization)という教育的視点に立って,学習困難に応じた第1期授業を展開し,その評価を行った。また,それぞれの第1期授業場面で各研究対象児の内発的動機づけを援助・支援するために,各研究協力者が講じた交流感・有能感・自己決定感の充足手立ては,どの程度のものであったのかという評定を行った。今後,この評定結果を統計的に処理し,小学校中学年期・高学年期の学習障害児の内発的動機づけを援助・支援するための教育的手法としては,何が重要であるのかを解明したい。なお,平成10年度にも,同様の研究過程を踏まえることで,内発的動機づけを援助・支援するための教育的手法のより一層の解明を図りたい。平成10年度には,教育実践担当の研究協力者4名(小学校の通級指導教室の担当教員など)及び指導・助言担当の研究協力者5名(大学・研究所の研究者など)と協同で,5名の学習障害児を研究対象児として特定し,彼らのための第2期授業計画を作成した。その上で,作成した授業計画に準拠して,人間化(personalization)という教育的視点に立って,学習困難に応じた第2期授業を展開し,その評価を行った。

また,それぞれの第2期授業場面で各研究対象児の内発的動機づけを支援するために,教育実践担当の各研究協力者が講じた交流感・有能感・自己決定感の充足手立ては,どの程度のものであったのかという評定を行った。今後,この評定結果を統計的に処理し,小学校中学年期・高学年期の学習障害児の内発的動機づけを支援するための教育的手法としては,何が重要であるのかを解明することにする。なお,平成11年度には,平成9・10年度の研究成果を総括することで,内発的動機づけを支援するための教育的手法のより一層の解明を図ることにする。内外の専門家によって蓄積されてきた動機づけに関する研究論文等を精査することによって,「内発的動機づけ支援手立て評定尺度(改訂版)」を開発することができた。この評定尺度は,交流感の充足手立て6項目,有能感の充足手立て6項目,自己決定感の充足手立て(間接的な手立て)9項目,自己決定感の充足手立て(直接的な手立て)16項目から構成されている。この評定尺度を活用することによって,研究対象児に特定された小学校中学年期・高学年期にある学習障害児10名の内発的動機づけを支援する教育的手法の在り方について,事例研究的技法と統計的技法を踏まえて究明している。具体的には,交流感・有能感・自己決定感を充足させるために大切なものだと考えられる全充足手立て37項目の内のどれが重要であるのかを解明している。事例研究的技法を踏まえた究明を例にあげるなら,10名の研究対象児の内から代表的な事例として抽出した3事例(「他校通級による指導の事例」「情緒障害特殊学級における個別指導の事例」「チームティーチングによる指導の事例」)に対して,この評定尺度を実地適用した授業記録を検討することによって,次のようなことが解明されている。すなわち,「交流感の充足手立ての中では『容認的に応対する』ことが重要である」「自己決定感の充足手立て(直接的な手立て)の中では『最適な課題を選定する』ことが重要である」「複数の手立てを連結・連動させることが重要である」等というのが,それである。
延髄巨大細胞性網様核の網様体脊髄路細胞の指向運動遂行時における活動様式の解析

ネコが視覚対象に対して頚を向ける指向運動の際には、上丘に入力された視覚情報が、脳幹網様体の神経回路を経て運動信号に変換される。我々は、これまでの実験で、尾側橋網様核(NRPC)とForelH野(FFH)から、指向運動遂行中に単一細胞活動の記録を行い、それぞれ、同側水平方向、垂直方向に選択性を持つことを明らかにした。今回さらにNRPCの尾側にあり、NRPCとFFHの細胞がいずれも軸索側枝を投射する延髄巨大細胞性模様(NRG)から、単一細胞活動の記録を行った。10匹のネコから、計116個の細胞を記録した。65個の細胞が指向運動に関連した活動の変化を示した。20個の細胞は同側水平方向への運動に20-100ms先行して一過性の活動の増加を示した。18個の細胞は同側水平方向への運動に先行する活動の他に、対側への運動に遅れる増加を示した。いずれのタイプの細胞も、同側への運動時の発火は、運動の振幅、最大角速度と有意な正の相関関係があった。その他、同側への運動に遅れる増加を示す細胞、対側への運動に先行する増加を示す細胞、対側への運動に遅れる増加を示す細胞などが見られた。また8個の細胞は垂直方向に特に方向選択性を示した。また4個の細胞はあらゆる方向への運動に先行する活動の増加を示した。また32/38、28/48の細胞で対側上丘、大脳脚刺激に対する短潜時の順行性の発火応答が見られた。また13個の細胞はC3頚髄刺激で逆行性に応答し、網様体脊髄路細胞と同定された。以上の結果から、NRGも指向運動に際して上位中枢からの信号を脊髄に伝える中継核として機能するが明らかになった。また一部の細胞について方向選択性をより系統的に調べたところ、多くの細胞は水平方向に選択性を持つが、垂直方向や斜めに選択性をもつ細胞も多く見られ、NRGのレベルで水平系と垂直系の統合過程の一部が行われていることが明らかになった。
近現代日本における新宗教系高等教育機関の社会的機能に関する研究

第一に、新宗教系大学が設置された理由のパターンを見出した。それは教師養成と区別された信者への教育、宗教団体が深く関わる社会活動のための専門的職業教育、信者への教育と区別された学術研究である。第二に、組織・制度における多様性を明らかにした。目的規程、教学組織とカリキュラム、管理組織、財政的支援のそれぞれにおいて教団と高等教育との関係は多様であった。第三に、新宗教における宗教専門職の特質を明らかにした。その養成の制度は宗教専門職のあり方にたいし強く影響し、さらに専門職のあり方は、当該宗教団体の社会的性格、すなわち宗教団体がどのように社会と関係しているのかということを規定するということである。本研究は、近現代日本における新宗教系高等教育機関とその宗教団体との関係性を、高等教育機関・宗教団体双方の視点・資料から、比較的・歴史的に明らかにするものである。明らかにすべきこととしては、(1)新宗教が高等教育機関を必要とした理由、(2)高等教育機関が教団にたいしてなした貢献、(3)非大学の高等教育機関の位置づけ、を設定している。平成28年度(1年目)においては、各学校・各宗教団体の資料を蒐集し整理することを行ない、平成29年度での分析の基礎を固めた。具体的には、各種先行研究(高等教育研究、宗教研究)、教団史資料(教団史や教団の雑誌など)、学校史資料(校史など)、ならびに学校の各種規則(学則や寄附行為など)の蒐集を広く行い、それらの整理を行った。交付申請書に記載した研究実施計画の通り、各種資料や先行研究は順調に蒐集できているという認識ではあるが、研究目的を達成するためには、計画した際に考えていたよりも幅広く資料を収集し分析しなければならないことが明らかになったためである。また、調査を行っていく中で、計画していたよりも多くの学校・教団を調査する必要を感じ、それらについても合わせて蒐集・整理を行ったため、「やや遅れている」とする。平成29年度(2年目・最終年度)においては、平成28年度に引き続き必要な資料をさらに収集することを通じ、得られた知見を総合し、学会発表等を行うことでその成果を社会に発信した。具体的には、(A)新宗教系高等教育機関がいかなる理由によって設置されたのかを、歴史的に宗教間の比較を通じて明らかにした。その結果、信者への一貫教育の論理、専門的職業教育の論理、学術研究の論理という、三つの設置理由のパターンを見出すことができた(上記課題の1および3に対応)。(B)また、各高等教育機関の組織と制度を宗教間で比較することによって、それら機関の多様性を示した。公的な文書における目的規程、教学組織(学校)、経営組織(学校法人)、財政的支援のそれぞれにおいて多様性があり、天理大学のような理念型に近い事例が存在することなどを見出すことができた(上記課題の1および2に対応)。(C)そして、新宗教の事例の検討を通じ、宗教専門職とその養成がいかなるものであるかを明らかにした。その結果、宗教専門職はその養成制度、および宗教団体の社会的性格と深く結びついていることが分かった(上記課題の2および3に対応)。平成29年度は、引き続き資料の蒐集を行いつつ、特定の宗教団体・学校についてインテンシブな調査を行う予定である。とくに各学校が発行している雑誌類の調査を、各学校の図書館にて行いたいと考えている。また、学会発表を少なくとも3回、論文投稿を数回行い、社会に成果を発信していく予定である。29年度が最終年度であるため、記入しない。教育社会学29年度が最終年度であるため、記入しない。
近接場紫外パルス光による有機固体表面の光化学反応・ナノメートル形状変化の解析

本研究では有機固体表面に励起光を照射した際に誘起されるナノメートルオーダーの表面形状変化と、個々の分子の形態変化との関係を明らかにするため、近接場顕微鏡を利用して局所的に励起光を照射し、蛍光特性や表面形状を100nmの空間分解能で調べ、解析した。ポリチオフェン誘導体薄膜に励起光を照射して表面形状変化を局所的に誘起し、これが個々の高分子鎖の形態変化に起因することを蛍光スペクトル解析により明らかにした。励起光照射に伴い、幅200mmの領域において試料表面が数nm程度隆起し、蛍光スペクトルを解析した結果、光熱変換に基づく温度上昇により高分子鎖のコンホメーションが変化し、試料の表面形状変化に至ったことが分かった。また個々の高分子鎖のコンホメーション変化が先に観測され、その後表面形状変化に至ることが明らかになり、コンホメーション変化による体積変化が、分子の周りの自由体積を上回る必要があるためであると考察した。このように高分子薄膜において、個々の高分子鎖のコンホメーション変化と、試料の表面形状変化が直接的に結びついていることを初めて明らかにした。さらに局所光反応の誘起には不可欠な、高強度の紫外パルス光が導入できる中空型近接場プローブを用いた近接場顕微鏡を開発した。本システムは150mJ/cm^2(尖頭値880GW/cm^2)の高強度フェムト秒パルスを直径250nmの微小領域に照射でき、空間分解能が300nmのトポグラフィー像、250nmの光学像(蛍光像)を測定できる性能を有する。本システムを用いて厚さ400nmの銀蒸着膜にフェムト秒紫外パルス光を照射し、レーザーアブレーションにより直径350nmの穴をあけることに成功した。高強度の紫外パルス光が導入できる中空型近接場プローブをピコ秒近接場分光システムと組み合わせた新しいシステムを構築し、システムの性能を評価した。具体的内容は以下の通りである。1.市販のマイクロピペット作製機のレーザー集光部を調製して、中空型プローブを再現性よく作製する技術を確立した。2.剛性の高い中空型プローブを制御できる新しいプローブホルダーを開発した。3.プローブへ励起光を導入するための光学系を設計、構築した。4.標準試料を用いてシステムの性能評価を行い、約300nmの空間分解能でトポグラフィー像、光学像が測定できることを確認した。5.本システムによる実験の前段階として、従来型のピコ秒近接場分光システムを利用して、ポリチオフェン誘導体薄膜に励起光を照射し、高分子鎖のコンフォメーション変化による蛍光スペクトル変化を局所的に誘起することに成功した。薄膜中に見られるマイクロメートルサイズのドメイン中では高分子鎖が動きやすく、蛍光スペクトル変化が大きいことも分かった。今後は開発したシステムを用いて、有機薄膜、無機薄膜の局所領域に高強度の励起パルス光を照射し、誘起された形状変化や化学反応を場所や時間、励起光強度や励起波長などの関数として調べ、そのメカニズムを明らかにする予定である。
乳児期からの縦断的検討による幼児の自己制御の先行要因の解明

本研究は、乳児の気質や愛着、家庭での養育が幼児期の自己制御能力とどのように関連するのかを解明しようとするものである。発達初期(1歳時点)の気質(Effortful Control)、養育者との愛着、養育者の養育が、その後(3歳時点)の自己制御(認知制御と情動制御)、幼児期の社会的行動、仲間関係にどのように影響するのかを、行動観察、実験的調査、生理的測定を通して、縦断研究から総合的に検討する。本年は、まず1歳児用のEffortful Controlおよび愛着関係の認知を測定する認知課題の作成を行なった。注視に基づくアニメ愛着認知課題(Jhonson,ら, 2007)、点灯パターン学習課題(Clohhesseyら, 2001)に基づいた課題を作成し、注視パターンの予備研究を行なった。また、養育者に対する質問紙による乳児のEffortful Controlについては、乳幼児の気質測定について、世界各地の研究者とのデータ集積・分析プロジェクトに参加した。多様な文化の乳幼児に共通に、Surgency, Negative AffectivityそしてEffortful Controlという3つの気質が見られ、SurgencyとNegative Affectivityには地域差があるが、Effortful Controlでは地域差はなかった。この結果はSRCD(2019.3月)で発表された。その他、本研究の前提となる幼児期の自己制御と児童期の学業や仲間関係との関係を検討した研究をISSBD(2018.7月)で発表し"Early Child Development and Care"に投稿した。また、幼児期の情動制御能力(Negative情動の沈静化)が仲間関係と関連するという研究結果と、乳児期から幼児期に至る過程を縦断的に検討する必要性を論文として本学紀要に掲載した。課題の開発や予備研究に時間を費やし、本調査への着手に遅れがある。研究費の関係で装置の購入が遅れたことも理由の一つである。本年度は機器も含めすべての体制が整うので、このまま当初の計画である1歳児のデータ収集を進めていく。アイトラッカーの見積額が170万となったため、当該年度予算で購入できなかったことから、次年度分を合わせて次年度早々に購入することとしている。(前倒し支払い請求制度があることを理解していなかったため)
小型哺乳類の毛色関連遺伝子群の進化的動態把握と系統地理マーカーの開発

日本産マウスにおいて毛色関連遺伝子Mc1rを含む1Mbおよび5Mbの2つの異なる染色体領域を標的とする核DNAハプロタイプ構造解析により、列島北部集団には、平均170kbの南アジア亜種系統Mus musculus castaneus由来断片が存在することが判明し、亜種間交雑後約800世代が経過していると算出された。西ヨーロッパの亜種Mus musculus domesticus由来の長い断片(25Mb)も観察され現代の人為的移入の可能性が示唆置換された。沖縄産クマネズミの全身黒色性はAsip遺伝子の1つの非同義置換にあり、ハプロタイプ構造解析により、沖縄島で派生した変異の可能性が示唆された。ナンヨウネズミ(R. exulans)およびクマネズミおよび(Rattus rattus species complex)を含めた動物群に着目し、Mc1rおよびAsip毛色関連遺伝子の変異性に関する調査を行った。これまでの調査の結果、ナンヨウネズミはミャンマー集団においては、多様な毛色変異が自然集団に存在することが判明し、調査した2つの毛色関連遺伝子の変異性も著しく高いことが明らかとなった。特にMc1r遺伝子のコドン34番目のアルギニンからトリプトファンへの非同義置が腹側毛色の白色性に関与する可能性が示唆された。また、Asip遺伝子の約80kbの3つの領域、(1)タンパク質をコードするExon 2, 3, 4を含む領域、(2)プロモーターExon 1A、および(3)プロモーターExon 1Bの変異を解析した結果、塩基配列の変異性が顕著に高いことが判明したが、領域間の連鎖不平衡のレベルは低く、進化的時間の中で組換が生じ、Asip遺伝子全体のハプロタイプとしてみると、多様性のレベルが高いことが判明した。一方、クマネズミは、通常アグーチパターンを示す沖縄集団において例外的に全身黒色性を示した4個体について、Asip遺伝子のアミノ酸コード領域を解析したところ、Exon 4上のコドン124番目のアミノ酸がシステインからセリンに変化する非同義置換が認められた。他の地域の個体を含め、ハプロタイプの構造を解析した結果、黒色性を示す変異は外来性ではなく沖縄島で生じた変異である可能性が示唆された。この黒色責任変異は組換体ハプロタイプ上にも存在したため、遠い過去に変異が生じたか、あるいは、組換えのホットスポットが当該領域間に存在する可能性が示唆された。今後、Asip遺伝子の組換の特異性について精査していくことで自然選択に伴う多様性消失の回避機構解明に有益な情報が得られるものと期待された。沖縄産クマネズミのAsipタンパク質のC末端システインリッチ領域のシステインが消失する変異が、黒色化を導くことを明らかにし、現在、論文執筆中である。この研究において、AsipのExon 2, 3, 4領域の解析断片を統合して系統地理学的マーカーとして活用できることを示すことができた。このハプロタイプ構造解析の結果、インド・ヨーロッパ系統と東アジア系統の2つの系統を代表するハプロタイプが検出され、その間の組換体も観察され、自然史の解明および新しい系統地理学的マーカーの開発という双方の点で進展がみられた。一方、当初予測していた組換頻度よりも高い値が得られたため、想定外ではあったが、Asipには組換頻度を高める特別な仕組みが存在する可能性も示唆するデータも得ることができ、哺乳類における毛色進化上、重要な役割を演じている本遺伝子の特性の理解に向けて大きな成果が得られたものと思われる。毛色に関しては、明度および彩度を測色計(CM700D,コニカミノルタ)を用いて定量的に調査し、軽微な毛色変異にも対応できるシステムを確立中である。実際にオニネズミ類(Bandicota属)において測色計を用いて腹側の変異において種間の違いを定量的に解析し、デンドログラムの作成を行うことで毛色グループの可視化を行うシステムを確立することができた。さらに、ハツカネズミにおいては、コード領域上流100 kbくらいに存在するinverted repeatsが、逆位を起こすことで腹部毛色の大きな変化が生じることが示唆されいるため、ゲノムデータが存在する齧歯類各種(ドブネズミ、モルモット、ハダカデバネズミなど)においても当該のinverted repeatsが存在するかどうかを現在調査中である。ハツカネズミ(Mus musculus)の野生集団を対象とし、毛色変異と2つの重要な毛色関連遺伝子との関連を調査した。毛色は分光測色計で測定し、クラスター解析でグループ分けをした。その結果、腹部毛色は“light gray"と“dark gray"の2つのグループに分けられた。Mc1rの全コード領域(948 bp)の塩基配列の解析を行ったが多様性はなく、毛色の多型性との関連性はないことが示された。Asipの遺伝的変異の解析では、アミノ酸コード領域の上流域にある2つのプロモーター領域exon 1A (317 bp)およびexon 1B (499 bp)の塩基配列変異に着目した。その結果、Asipのexon 1Aおよびexon 1B領域は、集団内で連鎖が平衡状態にあり、前者が腹側毛色変異に関連することが示唆された。ハツカネズミにおいて、Asipのexon 1Aプロモーター領域は、反復配列構造(inverted repeat, IR)の中に組み込まれ、それを含む染色体断片の逆位が起こることで腹部毛色の表現型の変化に関与する可能性が示唆されている。

今回、ハツカネズミを含む哺乳類9種(ハツカネズミ、ハダカデバネズミ、ヒトなど)を用いてAsipの非コード領域(約150 kb)の構造比較を行った。その結果、ハツカネズミのIR領域には5つのモチーフ(Conserved Noncoding Element、CNEと呼ぶ)が存在し5対のIRを形成する事が判明した。3つのモチーフについては、哺乳類の種間で塩基配列の高い相同性が維持されていた。5対のIR構造はラットとチャイニーズハムスターにおいても認められたが、他の種では一部のモチーフの配列保存性が失われ、結果、一部のIR構造が欠落する傾向を示した。同一ゲノム内での2つのモチーフ間の配列の相同性は高く、協調進化的動態の存在が示唆された。前年度解析を行った沖縄産クマネズミの論文投稿はminor revisionとして取り扱われ、現在改変論文の投稿直前という状況である。ハツカネズミの腹部の毛色変異の解析結果は、当初の想定通りAsipの1Aプロモーター領域に責任領域があることを野生集団で示すことができた。すでに論文(Sakuma et al. 2016)として発表し、連鎖不平衡の状況を含め、今回の新規発見を広く世界にアピールできた。アカネズミおよびヒメネズミのミトコンドリアDNAのハプロタイプグループの遺伝的多様性を調査し、時間的観点における集団動態を島嶼集団を含め詳細に調査した。過去14万年間に北海道、本州・四国・九州ブロックでそれぞれ地域固有の集団動態の存在が示唆された。氷期最盛期における集団の縮小と、その後の温暖化の時代に集団の二次的接触が起きていることが明らかとなった。解析結果は近日中に公開予定である(Hanazaki et al. in press)。データベース上のゲノム配列を活用したAsipのnon-coding領域の変異に関する主要な哺乳類種間の比較においては、種を超えて強く配列が保持されている領域があり、それが逆位構造構築のパーツとして使用されていることも判明した。今回用いた手法は、今後全ゲノム配列が多くの哺乳類種で開示される状況の中、基盤となる解析手法として位置づけられるものと期待している。本解析の内容については、現在論文投稿中である。また、北海道産全身白色黒目のヤチネズミの責任遺伝子の探索を現在行っており、特定が可能な状態にまで至っている。毛色関連遺伝子のMc1rおよびAsipに着目し、その進化的動態を解析したところ以下に記す成果を得ることができた。(1)日本産ハツカネズミの起源の解明:核の変異の解析において、200 kb, 1 Mb, 5 Mbの染色体領域にインターバルの異なるマーカーを設置し、ハプロタイプ構造解析を行った。北海道および東北産のゲノムの主体は北ユーラシア亜種系統(MuS)であり、平均170kbの南アジア亜種系統(CAS)の断片が挿入されていた。北日本においては数百世代前に交雑が始まったことが示唆された。これにより、約2000年前にMUSが九州に移入後、関東以南に定着後、北日本への展開は一定時間(1000年程度)を経て進出したことが示唆された。(2)黒目白毛個体の責任変異の解明:北海道で採取されたエゾヤチネズミの全身白化(黒目)個体において責任変異の探索を行ったところKit遺伝子の1塩基置換が原因である可能性が示唆された。