hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
現代中国における農村医療・衛生事業に関する歴史研究

本研究は、1950年代から70年代における中国における日本住血吸虫症対策に関する歴史資料の分析およびインタビュー調査などを通して、現代中国における農村医療・衛生事業の歴史的展開を実証的に把握することを目的とするものである。本研究では、(1)中国農村医療制度の歴史的展開と雲南省におけるその実態の把握,(2)中国農村医療システムの同時代における国際的評価の変遷、(3)雲南省における日本住血吸虫症対策の実態について検討した。本研究は、1950年代から70年代の中国における日本住血吸虫症対策に関する歴史資料の分析およびインタビュー調査などを通して、建国期から改革開放以前の中国における農村医療・衛生事業の歴史的展開とその地域社会における実態を把握することを目的とする。平成24年度は、1中国農村医療に対する同時代の国際社会の認識、2近代以降の雲南省における農村医療衛生事業の展開、3雲南省大理自治州(専区)を中心とした1950年代の農村医療サービス導入の実態、について研究を進めた。1については、WHOによる刊行物などを中心に調査を進め、1970年代に中国の農村医療システムが国際的に注目を浴びた背景について考察を進めた。その結果、当該時期の「適正技術」に対する世論の注目を背景に、医療衛生分野においてもコミュニティを基盤とした簡便な保健サービスが追及されるようになったことを明らかにした。2については、雲南省の各地域の『(新編)地方志』、1960年代社会科学院などによって実施された民族調査報告書、インタビュー調査などから得られたデータを分析し、雲南省においては、日中戦争期の1940年代前半、上海や広東といった沿岸部からの専門家や専門機関、大学の内遷により各地に医療機関が整備されるなどしたが、日中戦争の終結に伴うこれらの再移動、および戦後内戦期のインフレや社会的混乱により中華人民共和国建国当時には、県レベルの医療衛生機関の再編が必要とされていたことを明らかにした。3については、大理専区の衛生档案の分析を通じて、1950年代前半の土地改革衛生工作隊による基層衛生人員の訓練配置の実態を明らかにした。土地改革衛生工作隊は各地で貧農青年を中心に訓練を行い、郷レベルでの医療サービス普及に努めたが、中級レベルの人員不足や訓練生の質の問題、「半農半医」の彼らへの待遇問題など様々な課題に直面していた。本研究は、1950年代から70年代の中国における日本住血吸虫症対策に関する歴史資料の分析およびインタビュー調査などを通して、建国期から改革開放以前の中国における農村医療・衛生事業の歴史的展開と、その地域社会における実態を把握することを目的とする。平成25年度は、平成23・24年度の研究成果を踏まえ、戦前戦後における日本の住血吸虫症対策との比較の上で、中国における日本住血吸虫症対策、農村における医療サービスの普及のあり方の特徴を中心的に検討した。日本では住血吸虫症対策は、戦前からの細菌学の発展という基礎の下、専門家を軸に進められ、また戦後は経済発展を背景に、中間宿主の生息地の大規模なコンクリート固化という環境改変を中心に進められた。これに対し、戦後中国では、日本に比べ医療専門家の質量および経済力が不足していた。そのため、地域社会の資源を利用して、対策人員(血防員など)の養成・配置から、中間宿主の撲滅対策、環境改変といった一連の対策を進めざるを得なかった。また、それは度々の政治的・経済的変動に大きく影響され、継続性に乏しく、改革開放以前において日本住血吸虫症自体は撲滅にはいたらなかった。しかし、こうした地域社会全体の動員は、住民に対する一定程度の教育的効果を持ちえたとも考えられる。中国での農村医療の特徴である大衆動員が最も盛んに行われた1970年代、中国と西側諸国との関係改善もあり、中国のユニークな農村医療が国際的に宣伝され、プライマリ・ヘルスケアのモデルの一つとして賞賛されるにいたる。本研究では、従来英雄的に語られてきた中国農村医療の展開を、寄生虫病対策という具体的事例に即して、その限界や制約要因も踏まえつつ考察し、中国医療史に新たな知見を加えることができた。本研究は、1950年代から70年代の中国における日本住血吸虫症対策に関する歴史資料の分析およびインタビュー調査を通して、農村医療・衛生事業の歴史的実態を検討し、現代中国における農村医療・衛生事業の歴史的展開を実証的に把握することを目的とする。平成23年度は、(1)195070年代の中国における農村医療制度の歴史的展開と同時代の国際社会における中国農村医療体制への認識、(2)雲南省における日本住血吸虫症対策の展開とその農業・農村政策との連関について研究を進めた。(1)については、(1)195060年代の農村医療制度の導入と普及過程について、雲南省における日本住血吸虫症対策の展開を事例に、県ー郷ー村の三級において農村医療・防疫組織、人員が配置されていく過程を明らかにした。とりわけ、郷、村レベルにおける半農半医の農村保健員・衛生員の育成のありようを重点的に検討した。(2)同時代の中国の農村医療に対する国際認識に関しては、以下のような研究を行った。

すなわち、1978年WHOとUNICEFによるアルマ・アタ会議において中国農村医療はプライマリ・ヘルスケアの一つのモデルとして国際的に賞賛されたが、これに至るまでの西側諸国の中国の農村医療への認識、言説を、LancetやInt.J.of Health Serviceなどの医学、公衆衛生学の国際誌および『農村医学』などから抽出し、60年代以降中国の農村医療システムが、西側諸国にとっても一つのモデルとして認識されていくようになる過程を明らかにした。(2)については、雲南省における日本住血吸虫症対策における糞便管理の問題を事例として研究を進め、195060年代を通して、愛国衛生運動や大躍進運動など食糧増産政策の一環として「増産積肥」運動が行われたが、これが住血吸虫症対策とも大きく関連していたことを明らかにした。平成24年度は、平成23年度に進めた研究を基礎として、雲南省大理自治州(専区)の農村社会をメインフィールドとして現代中国の農村医療制度とその実態について研究を進めることを主たる目標としていた。そのため、本年度は国内では国立国会図書館、東洋文庫などで、また国外では雲南大学、昆明医科大学、上海図書館などで関連資料の調査収集を行うと同時に、平成23年度およびそれ以前に収集した大理専署衛生科档案などの公文書の分析を進めた。さらに平成23年度に実施した雲南省でのかつての寄生虫対策従事者、「はだしの医者」、現郷村医、村落住民へのインタビューデータの分析も行った。これらの作業により得られたデータをもととして、本年度は「建国初期中国雲南省における農村医療サービスの展開:雲南省大理専区を主たる事例として」(「建国初期中国雲南省農村医療服務的発展:以雲南省大理専区的情況為主要事例」(中国語)李玉尚・飯島渉ら編『環境変化與血吸虫病』上海:上海交通大学出版社、2013年刊行予定)を執筆した。尚、本年度は雲南省におけるかつての「はだしの医者」、日本住血吸虫症対策に従事した専門職員、村落住民に対するインタビュー調査の実施を計画していたが、日中関係の悪化により一部実施できなかった。しかし、本研究の協力研究機関である雲南大学、上海交通大学、雲南省健康與発展研究会などの協力を得て、関連する多くのデータを得ることができたため、本研究は、本来の研究計画通りに、おおむね順調に進んでいるといえる。本年度は、現代中国の農村医療・衛生事業の歴史の制度的展開、同時代の国際社会の中国の農村医療に対する認識の変遷を、内外の政治・経済・社会的変化を踏まえながら把握することを目的に研究を遂行した。そのために本年度は、国内では国立国会図書館、東洋文庫などで、また国外では雲南省図書館、上海図書館などで関連資料の調査収集を行った。公文書資料についても、本研究の協力機関である上海交通大学、雲南大学の協力を得て調査収集を行った。本年度は、5月と11月に雲南省において、かつて感染症対策に従事していた人々、およびいわゆる「はだしの医者」として農村医療に携わった人々のインタビュー調査も行った。
低分子量Gタンパク質Rhoの挙動の時間的空間的解析

1.まず、Rhoの局在の可視化のための、抗体と固定法の組み合わせのスクリーニングを行ない、市販の抗体、自作の抗体を含め、Rhoの正確な細胞内局在を示す、組み合わせを決定したTCA固定が非常に有効であった。このスクリーニングには、Myc-RhoAを発現している培養細胞を、Mycに対する抗体と、Rho対する抗体とで、二重染色をするという方法を用いた。Rhoの正確な局在が示される場合には、Mycの像とも確実に重なることが予想される。2.確立した抗体、固定法の組み合わせを用いて、Rhoの細胞内局在を決定した。上皮細胞において、Rhoが細胞と細胞の接着面(lateral membrane)上に濃縮していることが明らかになった。Rhoの機能が細胞接着に必須であるという報告があることから、この分布は興味深い。非上皮細胞においては細胞膜への濃縮は弱く、細胞質にほぼ均一に分布していた。しかし、細胞分裂時にはほとんどのRhoが分裂溝へ濃縮し、それは上皮細胞でも同様だった。さらに、マウスの組織のホルムアルデヒド固定後の凍結切片を用いて、Rhoの分布を可視化した。上皮組織については、微絨毛という、突起の構造への濃縮が目立った。微絨毛の発達していない組織では、細胞質に均一に分布している場合もあった。気管の繊毛、膀胱上皮など、特に強い発現を見せる部分もあるが、Rhoとそれらの機能との関連は全くついていないので、今後の研究の進展が期待できる。3.Rhoが活性化すると細胞膜へと移行することの生化学的な証拠が報告されていたが、それを細胞レベルで可視化して確認した報告はない。今回、神経系のN1E115細胞と上皮系のA431細胞とにそれぞれ、LPAとEGFとを作用させ、Rhoを活性化させた。それぞれに細胞において、刺激後数十秒以内にRhoが細胞質から細胞膜へと移行することが初めて示された。I: RhoAの局在の可視化のための、抗体と固定法との組み合わせのスクリーニング抗体は数社から市販されているRho抗体をまず利用してみた。培養細胞を標準試料として蛍光抗体法を行い、固定法には、ホルムアルデヒド固定、メタノール固定、TCA固定を試した。その結果、複数の市販の抗体に対して、TCA固定にて最も強い染色が見られた。ホルムアルデヒド固定もかなり強い染色を示した。II:候補となった抗体、固定法の組み合わせの再検討確実にRhoAの分布が見られる系として、エピトープタグ付きのRhoAを発現させた培養細胞を使い、タグを認識する抗体とRhoAに対する抗体とを用いて、蛍光抗体法を行った。正しい抗体、固定法の組み合わせであれば、タグを認識する抗体による染色像とRhoAを認識する抗体による染色像がほぼ重なると考えられる。もしも、RhoAを認識するはずの抗体がタグ付きのRhoAを認識しないのであれば、その染色像は信頼できない事になる。この実験の結果、ホルムアルデヒド固定では、二つの染色像は必ずしも一致せず、一方、TCA固定では両者は常に一致した。しかし、ホルムアルデヒド固定に耐える抗体も、電子顕微鏡レベルの局在の情報のためには必要なので、新たにモノクロナル抗体をラットから作ることを試みた。その結果、ホルムアルデヒド固定でも正確に分布を示すことのできるモノクロナル抗体lulu51を得た。III:培養細胞におけるRhoAの局在の決定培養

上皮細胞を例にあげると、RhoAは細胞同士が接する、lateral membraneに濃縮が見られ、細胞質にもある程度存在していた。これはRhoAの生化学的性質をよく反映していると思われた。また、細胞質分裂時には強く分裂溝に濃縮した。Rhoの機能を阻害すると細胞質分裂が阻害されることが知られているが、分布もまたその機能の重要性を示しているように見える。前年度開発した抗体、固定法を用いて、Rhoの局在を可視化した。1.培養細胞上皮細胞において、Rhoが細胞と細胞の接着面(lateral membrane)上に濃縮していることが明らかになった。Rhoの機能が細胞接着に必須であるという報告があることから、この分布は興味深い。非上皮細胞においては細胞膜への濃縮は弱く、細胞質にほぼ均一に分布していた。しかし、細胞分裂時にはほとんどのRhoが分裂溝へ濃縮し、それは上皮細胞でも同様だった。2.生体組織マウスの組織のホルムアルデヒド固定後の凍結切片を用いて、Rhoの分布を可視化した。上皮組織については、微絨毛という、突起の構造への濃縮が目立った。微絨毛の発達していない組織では、細胞質に均一に分布している場合もあった。神経組織では、神経細胞の細胞体にRhoの発現が少ないのが顕著だった。筋肉組織には一般に発現が少なかった。気管の繊毛、膀胱上皮など、特に強い発現を見せる部分もあるが、Rhoとそれらの機能との関連は全くついていないので、今後の研究の進展が期待できる。3.Rhoの活性化と細胞膜への移行の可視化Rhoが活性化すると細胞膜へと移行することの生化学的な証拠が報告されていたが、それを細胞レベルで可視化して確認した報告はない。今回、神経系のN1E115細胞と上皮系のA431細胞とにそれぞれ、LPAとEGFとを作用させ、Rhoを活性化させた。N1E115細胞では、細胞が突起を短縮させる反応を起こす時に、Rhoが細胞質から細胞膜へと移行していた。また、A431細胞においては、EGF刺激によってRho活性に依存して数十秒以内に微絨毛が伸長してくるが、その微絨毛にRhoが濃縮してくることが示された。このように、Rhoの活性化と膜への移行、細胞の形態形成とが時間的空間的に理解される基盤が整ってきた。
ウナギの耳石日周輪の証明と日令査定

本年度予定した研究計画はほぼ完遂された.その結果の概要は以下の通り.(1)耳石成長輪の形成周期シラスウナギを塩酸テトラサイクリン200mg/lに24時間浸漬して耳石上に時刻描記を行った.その後3060日間,水温12, 19, 25°Cで,給餌あるいは無給餌で飼育した.魚をエタノールで固定後,耳石(扁平石)上の黄色蛍光マークの外側の輪紋を計数した所, 19°Cと25°Cで給餌した実験区のものについては飼育期間とほぼ一致する輪紋数が認められた.一方,無給餌区あるいは,給餌区でも12°C区は飼育日数よりはるかに少ない(約1/3以下)輪紋数しか認められなかった.このことより,シラスウナギは19°C以上で餌のある環境下では耳石に日周輪を刻むことがわかった.(2)第一輪の形成時期人工孵化したウナギ仔魚の耳石を観察した所,孵化直後の扁平石は直径83μmで日周輪様構造は認められなかった.しかし孵化後2, 4, 6日目の仔魚の耳石にはそれぞれ,約2, 4, 6本の輪紋が認められた.このことは本種の孵化後第1日目に形成される輪紋が第1輪であり,その後規則正しく, 1日1本の割合で日周輪が形成されることを示している.(3)日令査定法フィリピン沖で1986年9月に採集されたウナギレプトケファルスおよび日本沿岸でとれたシラスウナギの耳石中心部には直径約10μmの明瞭な暗帯(check)が認められた.この径は人工孵化仔魚の孵化直後の耳石よりやや大きいものの,その変異は大きく重なる.ウナギは孵化時の生理的ショックでこのcheck孵化輪)を作るものと考えられた.以上のことから本種の日令査定にあたっては,耳石中心部にみられる直径約810μmの孵化輪の外側の輪紋計数すればよいことがわかった.本年度予定した研究計画はほぼ完遂された.その結果の概要は以下の通り.(1)耳石成長輪の形成周期シラスウナギを塩酸テトラサイクリン200mg/lに24時間浸漬して耳石上に時刻描記を行った.その後3060日間,水温12, 19, 25°Cで,給餌あるいは無給餌で飼育した.魚をエタノールで固定後,耳石(扁平石)上の黄色蛍光マークの外側の輪紋を計数した所, 19°Cと25°Cで給餌した実験区のものについては飼育期間とほぼ一致する輪紋数が認められた.一方,無給餌区あるいは,給餌区でも12°C区は飼育日数よりはるかに少ない(約1/3以下)輪紋数しか認められなかった.このことより,シラスウナギは19°C以上で餌のある環境下では耳石に日周輪を刻むことがわかった.(2)第一輪の形成時期人工孵化したウナギ仔魚の耳石を観察した所,孵化直後の扁平石は直径83μmで日周輪様構造は認められなかった.しかし孵化後2, 4, 6日目の仔魚の耳石にはそれぞれ,約2, 4, 6本の輪紋が認められた.このことは本種の孵化後第1日目に形成される輪紋が第1輪であり,その後規則正しく, 1日1本の割合で日周輪が形成されることを示している.(3)日令査定法フィリピン沖で1986年9月に採集されたウナギレプトケファルスおよび日本沿岸でとれたシラスウナギの耳石中心部には直径約10μmの明瞭な暗帯(check)が認められた.この径は人工孵化仔魚の孵化直後の耳石よりやや大きいものの,その変異は大きく重なる.ウナギは孵化時の生理的ショックでこのcheck孵化輪)を作るものと考えられた.以上のことから本種の日令査定にあたっては,耳石中心部にみられる直径約810μmの孵化輪の外側の輪紋計数すればよいことがわかった.
胡適〓案資料による工読互助団の社会文化史的研究-読者組織の視点から-

胡適〓案資料(中国社会科学院近代史研究所所蔵)の複製(影印版)『胡適遺稿及秘蔵書信』を主な対象として、さらに上海の日刊紙『時事新報』の副刊『学燈』、北京『京報』紙を調査することにより、工読互助団と胡適との関わりについて分析を行った。この作業により、従来ほとんど未解明であった胡適と工読互助団との具体的な関わり、及び工読互助団に参加した団員の実際生活の細部がかなり明快に浮かび上がってきた。とりわけ、団の内部における男女関係=自由恋愛の実態が大きくクローズアップされ、それと胡適の思想(特にイプセン主義)とが緊密に結びついていたことが明らかになった。工読互助団については従来、政治思想史の側面から、特に共産党中心史観に立って、いわばその後の共産党の路線形成における反面教師として、これを否定的に位置づけるものがほとんどであったが、これに対し本研究では、新たに公刊された〓案資料を駆使することで、当事の実際の参加者=学生層の視点に可能な限り近づき、団の実相を、従来に比してずっと鮮明に浮き彫りにすることができたと確信している。これはまた、上からの政治史的裁断ではなく、いわば下からの、等身大の「社会文化史」的アプローチを採用した本研究の有効性を示すものと評価できよう。また、工読互助団という、共同生活を営みながら書物を読み/書きする一つの共同体において、中国における近代的国民国家の創出をめざす宣言文とも評される胡適の「イプセン主義」が深い影響を与えていたことは、読者組織(文学結社、読書サークル等)と国民国家形成の問題系を考えていく上で重要な示唆を含んでいる。今後これを一つのケーススタディとして、読書行為をめぐるより広汎な視座から、近代中国の国民国家形成過程における〈個と共同性〉の聯関とその思想的位置づけについて考察を進めることが課題として確認された。
リキッドバイオプシーによる口腔がんの免疫チェックポイント阻害薬効果予測法の確立

口腔がんで利用できる分子標的治療として免疫チェックポイント阻害療法(ニボルマブ、抗PD-1抗体)が認可されたが、効率性や医療経済性の観点から奏効群に対する優先的投与が望まれている。免疫チェックポイント阻害効果と遺伝子異常総量(TMB)と相関することが示唆されてきている。実際、頭頸部がんではTMBが高く、免疫チェックポイント阻害の有効性が臨床試験で確認されている。ニボルマブ投与患者のCTCやctDNAから単離したDNAから腫瘍細胞が持つ個性と薬剤奏効性との相関を明らかにし、少ない侵襲で頻回モニタリングが可能な患者層別化に資するバイオマーカーを開発する。
メラニン凝集ホルモン受容体と摂食行動-脳における情報伝達機構の解明

メラニン凝集ホルモン(melanin-concentrating hormone : MCH)は摂食調節機構の下流に位置する特に重要な"食欲誘起ホルモン"と考えられている。その受容体はオーファンGタンパク質結合型受容体MCH1R(SLC-1)及びMCH2Rであることが同定された。MCH1Rの研究はノックアウトマウス及び特異的アンタゴニスト作成により急速な展開を見せ、摂食・エネルギー代謝に非常に重要な機能を持つことが一層明らかになってきた。私達はMCH1R構造活性相関の情報が創薬にも役立つと考え、これまで細胞外N末端における様々な変異体を作成し、詳細な解析を行ってきた。今年度は細胞内C-tailのN末端に存在するdibasicアミノ酸(Arg^<319>Lys^<320>)がhelix 8の重要な機能構造を形成し、情報伝達に深く連関することを見出した。さらにバイオインフォマティクスの活用により、dibasicアミノ酸のC-tailにおける位置が多くのGPCR(ヒトマウスそれぞれ231遺伝子を解析)で保存されていることも解明した。すなわち、GPCRにおける新規モチーフの発見である。その一方、C-tailのC末端部分リン酸化にプロテインキナーゼCが関与し、受容体internalizationに必要であることを見出すことができた。さらにドミナントネガティブ変異体を用いることにより、MCH1Rのinternalizationにはベータアレスチン及びダイナミンも深く関与することも明らかにした。私達の研究によりMCH1Rの細胞内C-tailはC末端側とN末端側とで機能が異なる事実が初めて明らかになった。以上の結果はPeptides及びEndocrinologyに発表した。そのほかMCH1Rに関する邦文・英文の総説を計4報発表した。メラニン凝集ホルモンMCHは摂食調節機構の下流に位置する特に重要な"食欲誘起ホルモン"と考えられている。その受容体はオーファンGタンパク質結合型受容体(GPCR)MCH_1R(SLC-_1)及びMCH_2Rであることが近年同定された。MCH_1Rはノックアウトマウスの解析により摂食に非常に重要な受容体であることが明らかになった。MCH_1Rの第3細胞膜貫通ドメインに存在するアルギニン_<123>がMCHとの結合に欠かせないアミノ酸であることは既に報告されている。一般的には第3細胞内ループにGタンパク質が結合することが知られているものの、他のどの部分のアミノ酸がMCH_1Rを介した情報伝達や膜移行に必要なのかは未だ不明である。そこでsite-directed mutagenesisにより受容体変異体を作成し、細胞にトランスフェクション後、種々の機能アッセイを行った。その結果、以下の点を世界に先駆けて明らかにした。(1)MCH_1Rにおいて、グリコシレーションに関係する細胞外アスパラギン残基(N_<23>)が受容体の膜移行及びcalcium influxを経る情報伝達経路に特に重要な役割を果たす。(2)MCH1R細胞内C末端における2つの塩基性アミノ酸(R319,K320)が情報伝達において特に重要な機能を果たし、この2つの塩基性アミノ酸は多くのGPCRにおいて保存されている。(3)MCH1Rのinternalizationはリガンド添加直後から開始し、40分以内にピークに達する。その過程にはアレスチン2、プロテインキナーゼC(PKC)、ダイナミンが関与する。細胞内C末端に存在する3つのアミノ酸(T317,S325,T342)はPKCによるリン酸化部位と考えられる。

MCH1Rの研究はノックアウトマウス及び特異的アンタゴニスト作成により急速な展開を見せ、摂食・エネルギー代謝に非常に重要な機能を持つことが一層明らかになってきた。私達はMCH1R構造活性相関の情報が創薬にも役立つと考え、これまで細胞外N末端における様々な変異体を作成し、詳細な解析を行ってきた。今年度は細胞内C-tailのN末端に存在するdibasicアミノ酸(Arg^<319>Lys^<320>)がhelix 8の重要な機能構造を形成し、情報伝達に深く連関することを見出した。さらにバイオインフォマティクスの活用により、dibasicアミノ酸のC-tailにおける位置が多くのGPCR(ヒトマウスそれぞれ231遺伝子を解析)で保存されていることも解明した。すなわち、GPCRにおける新規モチーフの発見である。その一方、C-tailのC末端部分リン酸化にプロテインキナーゼCが関与し、受容体internalizationに必要であることを見出すことができた。私達の研究によりMCH1Rの細胞内C-tailはC末端側とN末端側とで機能が異なる事実が初めて明らかになった。以上の結果はPeptides及びEndocrinologyに発表した。
細胞融合による新種ル-メン細菌の育種と飼料消化の促進

本研究は、細胞融合法や遺伝子導入法で家畜に定着する微生物の機能を改良することにより、家畜の飼料消化能を高め、家畜の生産効率を高揚せしめることを終局の目的としている。その手始めとしてRuminoeoccus albus Clostridium josui等のセルロ-ス分解菌やStaphylococcus warneri,Protaminoやbacter ruberあるいはEscherichia coli等の好気性菌を用いて電気パルス法による細胞融合やプラスミドの細胞内への導入を試みた。電気パルス法による細胞融合を行うためには、いわゆるパ-ルチエインを形成する必要がり、そのためにはまず親株の細胞をプロトプラスト化する必要があり、その条件設定をほゞ完了した。すなわち、対数増殖初期のR.albusやC.josuiの細胞にリゾチ-ムあるいはムタノリシンをNacl存在下で37°C、30分間保温することで90%以上の細胞をプロトプラスト化するのに成功している。一方、S.warneriやE.josuiのプロトプラスト化には、対数増殖期初期にペニシリンを添加してあらかじめ不完全な細胞壁を持つ細胞を捕集し、これにリゾチ-ム処理を行うとプロトプラスト化が可能になった。現在は、これらプロトプラスト化にかける電場の強さを検討し、融合条件の確立を急いでいる。また、エレクトロポレ-ションによるプラスミドの導入実験の結果、P.ruberへのプラスミド(pLA2917)の導入は、印加電圧:14KV/cm、パルス幅:100useeのパルスを10回課すことにより3×10^2の形質転換細胞数/ugDNAが得られた。以上、本研究補助金により購入した島津細胞融合装置SSH-2型により、細胞融合や遺伝子導入に関し、ほぼ初期の目的を達成することができた。
Stem Cell Agingを誘導するp16遺伝子発現上昇メカニズムの解明

本研究は、"組織幹細胞の老化(Stem Cell Aging)"及び癌抑制機構である"細胞老化"について、細胞老化誘導に重要なp.16^<INK4a>遺伝子の発現をモニターするイメージングマウスを用いることにより、加齢に伴う組織幹細胞の老化や、様々な発がんストレスに対するがん幹細胞の発生などの分子機構を明らかにすることを目的とする。昨年度までに、高齢マウスの精巣における精細胞の前駆細胞においてp16^<INK4a>遺伝子発現上昇を伴う細胞老化が生じることを確認した。平成24年度は、p16^<INK4a>遺伝子の精巣におけるStemCellAgingへの関与とその役割についてさらに明らかにするために精巣の再生実験を行った。p16^<INK4a>遺伝子が精巣の精子前駆細胞の増殖を制御する重要な因子であるなら、p16^<INK4a>遺伝子を欠損したマウスの精巣では再生実験において精子前駆細胞の増殖がWTマウスよりも活発になり、成熟精細胞の再生が盛んになるのではないかと考えられた。そこで、WTマウスとp16^<INK4a>遺伝子を欠損したマウスにBusulfanという精巣の精子幹細胞に特異的にアポトーシスを誘導する試薬をマウスに投与し、35日後、70日後に精子前駆細胞数や精子数を調べた。35日後の精子数はp16^<INK4a>ノックアウトマウスの方が野生型よりも多く認められたものの、興味深いことに70日後にはp16^<INK4a>ノックアウトマウスの精子数は野生型よりも減少していた。これらの結果から、,p16^<INK4a>遺伝子が欠損していると、短期的には増殖した前駆細胞が供給され精子が数多く産生されるが、長期的には精子が枯渇傾向になることが明らかになり、精巣におけるp16^<INK4a>の発現は精子の枯渇を防ぐ働きもあることが示唆された。本研究は、"細胞老化"について、細胞老化のイメージングマウスを用いることにより、加齢に伴う組織幹細胞の老化や、発がんストレスに対するがん幹細胞の発生などの分子機構を明らかにすることを目的とする。これまでに精巣の精子幹細胞におけるStem Cell Agingにp16^<INK4a>遺伝子が関与することを強く示唆する結果が得られている。さらに、p16^<INK4a>遺伝子は精子幹細胞の枯渇を防ぐ働きがあるという新しい知見を得ることができ、当初の計画以上の発展を見せていると思われる。今後は、精子幹細胞における細胞老化の誘導機構を分子的に明らかにする予定である。具体的には、加齢マウスや精子幹細胞の培養細胞などを用いてマイクロアレイ解析を行い、細胞老化を誘導する因子をエピジェネティックな因子も含めて網羅的に解析する。また精巣以外にもターンオーバーが早い小腸などの組織についてもp16^<INK4a>遺伝子が関与している可能性があるので調べる予定である。本研究は、"幹細胞の老化(Stem Cell Aging)"を誘導する細胞老化誘導因子p16^<INK4a>遺伝子の生体内における発現制御機構を明らかにし、加齢に伴う組織幹細胞の老化の分子機構を明らかにすることを目的とする。受入研究室にて作成された生体内で誘導される細胞老化をリアルタイムに可視化できるp16^<INK4a>遺伝子発現イメージングマウスを用いて、p16^<INK4a>遺伝子の発現が高い精巣に注目して解析を行った。精巣では精子幹細胞を含むと考えられているSpermatogoniaと呼ばれる生殖細胞群が存在しており、加齢に伴いその細胞数が減少することが報告されている。その結果精巣における精子形成能が低下し、精子数が減少すると考えられているが、詳細な分子機構は明らかにされていない。まず、精巣のHE染色を行った所、老齢マウスの精巣において精細胞が明らかに減少し、精巣上体尾部における成熟精子の減少も観察された。また、SpermatogoniaのマーカーPLZFの免疫染色により、加齢に伴ってPLZF陽性細胞数が減少することが示された。そこでp16^<INK4a>遺伝子の発現細胞を特定するため、連続切片を用いてp16^<INK4a>遺伝子のin situ hybridizationとPLZFの免疫染色を行った所、p16^<INK4a>遺伝子は幹細胞性の高いPLZF陽性細胞ではなく、精細胞の前駆細胞と思われる細胞で加齢に伴い発現が上昇する可能性が示唆された。さらに興味深いことに、p16^<INK4a>遺伝子欠損の老齢マウスの精巣では、同じ週令のWTの老齢マウスの精巣に比べ精細胞が多く存在していることが明らかになり、精巣においてp16^<INK4a>遺伝子は前駆細胞の細胞増殖を抑制することで成熟精細胞の減少を誘導している可能性が考えられる。本研究は、"幹細胞の老化"やがん抑制機構のひとつ"細胞老化"の誘導因子p16遺伝子の生体内における発現制御機構を明らかにし、加齢に伴う組織幹細胞の老化や、様々な発がんストレスに対するがん幹細胞の発生などの分子機構を明らかにすることを目的とする。近年、肥満は様々ながんを誘導する強力なリスクファクターとされている。

しかし、高脂肪食を30週間与えて肥満を誘導したマウスにはがんは形成されず、高脂肪食だけでは発がんを誘導しないことが示された。一方、我々はたばこの煙やアルコールなど様々な発がん物質にさらされている。そこで、出生後45日目のマウスにがん遺伝子HRasを活性化させる化学発癌物質DMBAを塗布し、普通食もしくは高脂肪食を30週間与えたところ、普通食投与群では多くのマウスに腫瘍が形成されなかったのに対し、高脂肪食投与群では全てのマウスに大きな肝腫瘍が形成された。この肝腫瘍形成における細胞老化の誘導について調べるため、生体内での細胞老化をリアルタイムに可視化できるイメージングマウスを用いて同様の実験を行った所、細胞老化の誘導因子p16,p21遺伝子の発現が肝腫瘍部で上昇し、細胞老化が誘導されていることが示唆された。p16,p21遺伝子は腫瘍部の悪性化した肝実質細胞ではなく、間質系のStellate細胞に発現していた。腫瘍部ではStellate細胞が多く含まれており、活性化Stellate細胞のマーカーSmooth Muscle Actinを高発現していた。さらに、Stellate細胞において様々な細胞老化マーカーも観察された。細胞老化を起こした細胞からはSASP(Senescence Associated Secretary Phenotype)と呼ばれる現象により炎症性サイトカインやプロテアーゼが放出される。これらのSASP因子は周囲の細胞に細胞老化を誘導する一方で、悪性化した細胞に対してはがん化を促進する。実際に肝腫瘍部のStellate細胞においてSASP因子IL-6,Gro-α(IL-8のマウスホモログ)の発現が観察された。以上のことから、細胞老化を起こしたStellate細胞からのSASP因子が腫瘍形成を促進している可能性が示唆された。本研究は、"組織幹細胞の老化(Stem Cell Aging)"及び癌抑制機構である"細胞老化"について、細胞老化誘導に重要なp.16^<INK4a>遺伝子の発現をモニターするイメージングマウスを用いることにより、加齢に伴う組織幹細胞の老化や、様々な発がんストレスに対するがん幹細胞の発生などの分子機構を明らかにすることを目的とする。昨年度までに、高齢マウスの精巣における精細胞の前駆細胞においてp16^<INK4a>遺伝子発現上昇を伴う細胞老化が生じることを確認した。平成24年度は、p16^<INK4a>遺伝子の精巣におけるStemCellAgingへの関与とその役割についてさらに明らかにするために精巣の再生実験を行った。p16^<INK4a>遺伝子が精巣の精子前駆細胞の増殖を制御する重要な因子であるなら、p16^<INK4a>遺伝子を欠損したマウスの精巣では再生実験において精子前駆細胞の増殖がWTマウスよりも活発になり、成熟精細胞の再生が盛んになるのではないかと考えられた。そこで、WTマウスとp16^<INK4a>遺伝子を欠損したマウスにBusulfanという精巣の精子幹細胞に特異的にアポトーシスを誘導する試薬をマウスに投与し、35日後、70日後に精子前駆細胞数や精子数を調べた。35日後の精子数はp16^<INK4a>ノックアウトマウスの方が野生型よりも多く認められたものの、興味深いことに70日後にはp16^<INK4a>ノックアウトマウスの精子数は野生型よりも減少していた。これらの結果から、,p16^<INK4a>
稲作を土台とした地域通貨流通の社会実験による地域活性化効果の検証

本研究は、ボランティアによって生産された天日干し農薬不使用のお米の販売収益を基本的財源の一つとする地域通貨を、新潟県柏崎市において実際に発行・流通させ、地域経済・コミュニティーに与える効果を検証するものである。平成30年度中に実施した事業は、基本的には29年度と同様、地域通貨の発行・流通の社会実験を中心に、通貨流通の基本的財源の一つとなるボランティアによるお米づくり、地域通貨先進実施地への視察、現状の地域通貨流通制度の検証・改良のための市民対象の「地域通貨ゲーム」の実施、柏崎市民の消費動向や地域通貨への理解・関心に関するアンケート調査、地域通貨の市民向け広報を目的としたWEBページの整備を行った。これらの実施項目のなかの主なものについて以下に簡潔に報告する。まず、地域通貨流通量拡大のための課題となっていた外部団体との協力体制の構築については、本事業を展開する柏崎市に所在する夢の森公園の管理者の協力を得て、ボランティアによって生産したお米(もち米)を使用した市民向け餅つき大会を11月に実施することができた。そのイベント会場では風輪通貨流通活動の紹介パネルを展示し、市民への広報活動ができた。また、実質的な配布枚数を増やすために柏崎市健康推進課に協力してもらい市民健康ポイント制度の賞品として風輪通貨を採用していただいた。この取り組みは次年度以降も継続され、健康ポイント用の特別版の風輪通貨を爬行する予定である。このように、外部団体の資金を活用しながら風輪通貨を配布する仕組みづくりを推進することができた。また、29年度中に作成した地域通貨ゲームにおいて、地方の消費行動における囚人のジレンマのメカニズムを体験できるようバージョンアップし、市民に体験してもらった。市民向けおよび風輪通貨協力店向けアンケート調査も前年度同様実施し経年変化の検証も行っている。本研究の目的は農業振興を目的の一つとした地域通貨流通システムの構築である。そのために初年度から継続してお米の生産をボランティアによって実施し、それに付随して得られた収入を活動資金として地域通貨を発行流通させている。このように実際に地域通貨を流通させ、その協力店や市民(地域通貨の使用者、未使用者とも)に、消費動向や地域社会に関するアンケート実施をして、地域の現状把握をしながらより望ましい地域通貨流通制度の構築を目指している。以上のお米づくりと市民アンケート調査は予定どおり実施することができている。アンケートに関しては各年度に結果を集計し結果を学会等で発表することができた。また、事業計画にある地域通貨ゲームの作成と市民向け体験会も予定通り実施できており、体験者からは地域通貨の地域経済に与える影響が実感として理解することができたとの声をいただいている。3年を期間とする本研究では最終的に補助金に頼らない独立した地域通貨流通制度の構築を目指している。この点はすでに小規模ではあるが(年平均20万円分の地域通貨)、を科研費とは独立して、市内協力店や外部団体の協力により発行・流通させることができるようになっており、ある程度の成果といえる。しかし、市内商店街の活性化という意味ではこの流通規模ではほとんど意味をなさない。今後は流通規模拡大のための仕組みづくりをさらに進める必要がある。また、これまでの調査により、農業振興においては生産の問題よりも生産後の販売先の確保の問題が重要であることが明らかになっている。今後は直接消費者に販売し安定した収入が得られる流通システムを考える必要がある。この流通システムに地域通貨を活用したいと考えている。3年計画で実施している本事情は2年が終了した。これまでに基本的な地域通貨流通制度を確立し、新潟県柏崎市において流通実験を行なっている。この実験により地域通貨による地元商店活性化における課題も見えてきている。まず、流通規模が小さいうちは商店側のメリットがほとんど見えないところである。そのため現状では、商店主は学生の活動に協力してやっているという意識での参加者が多い。また、地域通貨を使用し買い物をする市民側においても、その期待される地域経済への効果を理解していない人が多い。そのため今後の研究においては、地域通貨流通が地域経済に与える影響をわかりやすく理解してもらうための広報活動や、地域通貨ゲームの更なる改良と市民への体験会を通じての啓蒙活動に力を入れたい。そこで、地方経済における個人消費者の合理的行動(品数豊富で低価格な大型ショッピングセンター、さらにはインターネットショッピングでの購買行動)が地域資本の流出を招き、地域経済の衰退を引き起こしていることを理解してもらう。ここで、地域経済衰退と消費行動の関係を理解しても、現実的に消費行動を変化させることは困難である。そこで、地域通貨の導入が消費者の合理的行動と地域社会の活性化を同時に達成できる制度設計を本研究では目指す。ここでいう地域経済の問題は世界共通の問題と言える。経済のグローバル化による地域経済の衰退への処方箋としての地域通貨流通制度の構築について、理論と実践の両面から研究していきたい。そのため、地域通貨流通の社会実験を継続しながら、アンケート調査を実施し市民意識の変化を検証するとともに、本研究中には難しいかも知れないが、地域通貨流通による地域資金循環の拡大を検証できるよう流通規模の拡大を目指す。

平成29年度では、地域通貨の発行・流通の社会実験を中心に、通貨流通の基本的財源の一つとなるボランティアによるお米づくり、地域通貨研究の専門家を招いての勉強会、地域通貨先進実施地への視察、現状の地域通貨流通制度の検証・改良のための市民対象の「地域通貨ゲーム」の実施、柏崎市民の消費動向や地域通貨への理解・関心に関するアンケート調査、地域通貨の市民向け広報を目的とした「地域通貨デザインコンテスト」及びWEBページの整備を行った。これらの実施項目のなかの主なものについて以下に簡潔に報告する。まず、地域通貨の流通では、492枚(1枚100円相当)を各種ボランティア参加者に配布した。配布基準としては、1時間のボランティア参加に1枚配布を基本とした。ボランティア活動としては、清掃活動、農作業、森林整備、各種イベント補助などを実施した。492枚の配布に対し、市内協力店での使用枚数は118枚であり、使用割合は約24パーセントと低く、この向上は今後の本研究の課題といえる。地域通貨ゲームについては、地域通貨を研究している講師を招いた勉強会の開催後、29年11月に実施した。タイトルは「柏崎を元気にするお金、地域通貨を体験してみよう!」であり、当日の参加者は30名であった。参加者にはゲームの後にアンケートに回答してもらい、地域通貨についての意識調査も行った。市民の消費動向および地域通貨に関するアンケート調査は平成30年2月に市内800世帯に配布し、3月に郵送で回収した。また、地域通貨受入協力店舗29件に対してもアンケート調査を実施した。アンケート結果の分析は平成30年度に行う。平成29年度中に実施を計画していた、(1)地域通貨「風輪通貨(ふうりんつうか)」の発行と流通、(2)風輪通貨流通促進のための効果的な広報活動の実施と検証、(3)市民アンケート等を通じた風輪通貨流通システムの検証と改良、について概ね予定どおりに実施することができた。ただし個別には、計画どおりには進まなかったり、逆に、予定よりも早まって実施したものもあり、この点を以下に報告する。まず、風輪通貨の29年度分の発行枚数は、当初2000枚(20万円相当)を予定していたが、地域通貨流通に際しての法律問題の調査に時間がかかったため、実際の流通が秋以降となったため、本年度の発行枚数は492枚となった。また、法的問題をクリアするために、次年度から流通期間を6ヶ月以内とし、年2回の発行体制とすることになった。このように発行枚数は予定の約4分の1規模となったが、市民への消費動向調査や地域通貨に関する意識調査、そして、地域通貨受入協力店へのアンケート調査は全て予定どおり実施することができた。風輪通貨流通促進のための効果的な広報活動の実施と検証に関しては、今年度は活動紹介パンフレットの作成とWEBページの立ち上げを行ったが、効果的な方法の検証については次年度以降の研究課題となる。また、流通制度の検証・改良を目的とするとともに広報の一環として実施した地域通貨ゲームについても、次年度以降も引き続き実施し、分析を進める予定である。計画を1年前倒しで実施したものに、風輪通貨のデザインコンテストがある。
企業異質性の実証空間経済学

本研究課題の目的は,経済活動の空間的構造を,特に企業の生産性がそれぞれ異質であるという,より現実的な仮定の下で実証的に明らかにすることであった.戦前期の製糸業についての個票データと,新たに開発した理論モデルによって,単一産業に特化した集積地における企業生産性上昇は,集積の外部効果ではなく,生産性が低い企業が淘汰されることによるものであったことを示した.これまで異質な産業が集中する都市のケースでは,集積の外部効果が生産性上昇の大部分を説明することがいわれていたため,本研究課題の成果は,この分野の研究における新たな発見といえ,極めて重要な成果であるといえる.本研究課題の目的は,経済活動の空間的構造を,特に企業の生産性がそれぞれ異質であるという,より現実的な仮定の下で実証的に明らかにすることであった.戦前期の製糸業についての個票データと,新たに開発した理論モデルによって,単一産業に特化した集積地における企業生産性上昇は,集積の外部効果ではなく,生産性が低い企業が淘汰されることによるものであったことを示した.これまで異質な産業が集中する都市のケースでは,集積の外部効果が生産性上昇の大部分を説明することがいわれていたため,本研究課題の成果は,この分野の研究における新たな発見といえ,極めて重要な成果であるといえる.21年度は本研究課題に必須である高性能のパソコンと統計・数値計算・GISソフトウェアを購入し,日本の近代製糸工場個票データの整備を行った.そのうえで独占的競争のモデルを基礎として,生産性が異質な企業の立地構造についてのモデル化を行い,集積地における生産性上昇を,技術的外部性によるものと,競争激化による工場の淘汰・峻別によるものとを識別しうる理論モデルを構築した.この理論モデルに基づいて実証分析を行った結果,日本の近代製糸業において,集積地での工場生産性上昇の多くが競争激化による工場の淘汰・峻別によって説明できるとの暫定的結果を得た.上記の成果は3回の査読付国際学会,1回の査読付国内学会及び5回の招待セミナーで報告された.最終年度となる来年度は以上の暫定的結果を基礎として,より現実に近いモデルの検討や,実証分析の手法の改善などによって,より詳細な分析を行う予定である.21年度は上記研究と平行して,人口移動に注目した研究も行った.つまり企業の空間的構造には,そこで働く従業者の移動がかならず伴われ,その労働者のスキル・選好も異質である.異質な労働者の選好を基礎として,推定可能な人口移動モデルを構築し,長期の日本の人口移動データを用いて地域間の効用格差を分析した.その結果,1950年代から70年代にかけて日本の地域間効用格差が劇的に解消されたことを示した.この成果は英文査読誌に採択された.平成22年度は平成21年度時点で中間的な結果を導いていた,戦前期製糸業のミクロデータを用いた,企業異質性空間経済学の実証研究について精緻化を進めた.特に平成22年度は,平成21年度の時点では暫定的なものであった,理論モデルについての再検討について最も重点的に取り組んだ.その結果,当時の産業の実態をより正確に描写することのできる理論モデルを作成することができ,それを基礎として,より詳細な実証分析を行うことが可能になった.また,同時に当時の産業の実態についても調査を進め,本研究の主要目的である,異質な企業が存在するもとでの集積の経済の効果について実証的検討を進めることができた.その結果,製糸業の集積地のように,単一産業の集積地における生産性上昇は,いわゆるマーシャル的な集積の経済ではなく,低生産性企業の淘汰によって大部分を説明できることがわかった.これは,多様な産業の集積地としての大都市を対象とした先行研究とはまったく逆の結果であることが極めて重要な発見であるといえる(大都市における生産性上昇は,企業淘汰ではなく,マーシャル的集積効果によって大部分を説明できることが近年発見された).本研究の結果は,企業異質性の観点を通じた分析を行うことで,大都市における多様産業の集積と,製糸業などの単一産業の集積との間には,その効果の経路について大きな違いがあることを浮き彫りにしたものであり,極めて興味深い結果であるといえる.この成果はパリにおいて開催された国際学会において報告された.また,論文としてまとめられたものは,一橋大学経済研究所附属制度センターのディスカッションペーパーとして公開され,現在国際英文査読誌に投稿中である.
ヒトのコーディング領域トリプレットリピートの進化的意義

コーディング領域トリプレットリピートはタンパク質の構造中、不確定領域を形成する事が知られ、そのような領域は進化速度が速いと言われていた。本研究でトリプレットリピートの進化とタンパク質の構造の関連を調べた結果、霊長類における進化では、これまで言われていた事とは逆の、不確定領域になりにくいトリプレットリピートの進化速度が速い事が示され、霊長類特異的な進化の特徴が明らかにされた。本研究では、脊椎動物ゲノム中のコーディング領域におけるトリプレットリピート(アミノ酸リピート)の進化的背景を明らかにする事を目的としている。このようなリピートはヒトの遺伝病の原因遺伝子に含まれ、リピートの異常な長さが病気を起こす事が知られている。病気の原因となるような形質をなぜ高等脊椎動物、あるいは特にヒトは持つようになったか?と言う点を、ダーウィン医学的な視点から明らかにしたい。今年度はヒトと他の霊長類、マウスやラットなどの他のほ乳類のアミノ酸リピートを含む遺伝子の比較を行った。ここでは、遺伝子が作るタンパク質の立体構造に着目し、不確定領域を呼ばれる不安定な構造をつくるリピートとそうでないリピートとを区別した。これまでの先行研究では不確定領域の部分の進化が早い事が示されたが、本研究では霊長類において不確定領域を作らないリピートを持つ遺伝子の進化が早い事が示され、リピートの進化に霊長類特異的な特徴がある事を明らかにした。この成果は国際誌Molecular Biology and Evolutionに掲載された。また、今年度は熱帯ツメガエルゲノム中よりアミノ酸リピートを持つ遺伝子を抽出し、ヒトの同様な遺伝子と相同であるか、1つ1つの遺伝子について精査した。これまでに、ヒトと熱帯ツメガエルで相同であると考えられる遺伝子でリピートを持つのが約200個同定された。今後はこれらの遺伝子を用いて、ほ乳類と両生類のリピートの進化の違いを明らかにしたい。昨年度までにヒトと他の霊長類、マウスやラットなどの他のほ乳類に加え、両生類の熱帯ツメガエルゲノム中よりアミノ酸リピートを持つ遺伝子を抽出し、ヒトの遺伝子と相同である203個の遺伝子を同定した。今年度はこれらの遺伝子について解析を行った。熱帯ツメガエルの203個の遺伝子に含まれるリピートは239個であった。特にアラニン、グリシン、グルタミン、リシンのリピートはリピート長が長くなる傾向がある事が分かった。ヒト、マウス、熱帯ツメガエルの3種の比較では239個のリピートのうち、三種全てにリピートが見られた、あるいはリピートの元となるアミノ酸が見られたものは136個、哺乳類であるマウスとヒトのみにリピートが見られるものは91個、そしてヒトのみに存在するリピートは12個であった。三種間で共通に見られるリピートのうち、熱帯ツメガエル、マウス、ヒトの順にリピート数が増加している配列は41個であり、約1/3を占める。これらの配列をアミノ酸別に分類してみると、グルタミン酸とグリシンが約半数を占めることがわかる。熱帯ツメガエル・ヒト間ではヒトの方が熱帯ツメガエルより長いという配列がほとんどで、リピート数が保存されている配列は少ない事が分かり、脊椎動物の進化の過程でアミノ酸リピートが大きく変化している事が分かった。本研究では、脊椎動物ゲノム中のコーディング領域におけるアミノ酸リピートの進化的背景を明らかにする事を目的としている。このようなリピートはトリプレットリピート病と呼ばれるようなヒトの遺伝病の原因遺伝子に含まれ、リピートの異常な長さの変異が病気を起こす事が知られている。病気の原因となり得るような進化的に不利なリピートを獲得するに至った背景をダーウィン医学的な視点から本研究で明らかにしたい。今年度は昨年度までに同定した熱帯ツメガエルの203個のヒト相同遺伝子遺伝子の進化速度の解析と、トリプレットリピート病の原因遺伝子の1つであるAtaxin-1遺伝子の機能的な解析の一部を行った。熱帯ツメガエルのリピートを持つ遺伝子群について、ヒト-熱帯ツメガエル間の進化速度(非同義置換率÷同義置換率)を求めたところ、全ての遺伝子が負の自然選択が作用している状態で、リピートを持たない遺伝子と同じように機能的制約が強い事が分かった。また、リピートを作っているアミノ酸の種類によって進化速度が異なる事が同時に示された(ANOVA, p < 0.005)。Ataxin-1遺伝子の解析ではヒト遺伝子とマウス遺伝子の比較を行った。ヒトは"QQQQQQQQQQQ"というリピートを持つのに対して、マウスは相同な部分が"QQPQQPPPPQQ"という配列になっている。このリピートの組成の違いが、ヒトとマウスにおけるAtaxin-

1遺伝子のPQBP-1タンパク質への結合能の違いを担っている可能性が示された。本研究の初年度で得られた成果から、ヒトのリピートはタンパク質の立体構造中で不確定領域になっており、マウスの相同な部分は不確定領域になっていない事が期待された。ヒトとマウスのAtaxin-1遺伝子のタンパク質の立体構造を予測したところ、不確定領域には差異がみられず、期待された結果とは反対の結果となった。脊椎動物ゲノムからのアミノ酸リピートを含む遺伝子の抽出に時間がかかったため、当初の目標としていた新しいアミノ酸リピート進化モデルの構築が進んでいないため。しかし、ほ乳類以外の脊椎動物の遺伝子の解析結果から、よりヒトのアミノ酸リピートの進化の傾向がはっきりして来たので、全ゲノム塩基配列の比較からヒトの進化を明らかにする点では、期待以上の研究の成果を得ている。24年度が最終年度であるため、記入しない。これまで全ゲノム塩基配列が得られていなかったゴリラ等の新しいゲノムデータベースが公開された。今後はこれらの新情報を使い、ゲノム中の塩基配列の組成とリピート遺伝子の関係をより詳細に検討する。この結果により、新しいアミノ酸リピートの進化モデルに対して、「ゲノム中の塩基配列の組成の変化」をモデルに組み込む事が可能になるため、これに挑戦して、より詳細な進化モデルの構築を試みる。