hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
アスパラギン酸分節注入モデルによるCaspase阻害薬の脊髄保護効果の検討

30mMのアスパラギン酸溶液を2ml/minの注入速度でカテーテルから注入した。同時に腹部大動脈を左腎静脈直下で遮断、カテーテルをbifurcationで外側から締め、血流を遮断した。10分後、血流を再開、同時に注入も停止した。神経学的所見をTarlov modifiedscoreに従い、手術後、12、24、48時間後の各時点で、評価した。各群間の神経学的所見の比較は、Mann-Whitney Utestで統計処理した。手術後、HE染色したのち光学顕微鏡で病理組織学的検索を行なった。A群では,Tarlov scoreは、3.7±0.4,B群は1.0±0.7とA群でB群より有意に良好な回復を示した(p=0.0027)。病理組織学的検索では、B群では、灰白質の神経細胞の脱落および白質の障害が著明であったが、A群では灰白質のvacuolaizationのみで白質は保護されていた。アスパラギン酸虚血下分節注入による脊髄障害にたいしてDiazoxideの保護効果が認められた。胸腹部大動脈瘤手術に伴う遅発対麻痺の治療へのCaspase inhibitorの応用が期待される.【平成15年度の研究結果】対麻痺は、胸腹部大動脈瘤手術の深刻な合併症であり、いったん下肢機能が回復した後に対麻痺に陥る病態は、delayed onset paraplegiaとよばれ、約30%を占める。興奮性神経伝達物質であるグルタミン酸やアスパラギン酸のexcitatory neurotoxicityと、downstream cascadeであるnitric oxide(NO)による神経細胞の障害が、対麻痺の発生に関与するといわれる。アスパラギン酸虚血下分節注入モデルを用いて、Caspase inhibitorであるDiazoxideの効果をin vivoで評価した。New Zealand white rabbitを用い、A群,B群,C群の3群に分けた。A群では、diazoxide(4mg/kg)を術前に静脈投与した。B群はdiazoxide(4mg/kg)とNMDA受容体阻害薬MK-801(6mg/kg)を同様に投与した。C群はグルタミン酸阻害薬riluzoleを術前10日間(100mg/kg/day)経口投与させたのち、diazoxide(4mg/kg)を術前に静脈投与した。D群は、controlとして、Diazoxideの溶解液のみ注入した。New Zealand white rabbitを開腹し、腹部大動脈を腎静脈の直下およびbifurcation直上で剥離した。カテーテルを右大腿動脈から腹部大動脈にむけ挿入、その先端をbifurcationから5mm上に固定した。
遼・金・高麗における仏塔の浮彫荘厳に関する研究

遼塔および金塔の第一層塔身には、様々な浮彫モティーフが施される。これらは塔を表面から荘厳するもので、功徳の増幅を目的とし、八大霊塔、仏像、宝塔・経幢、法偈などが(法舎利として)表される。一方、塔内の天宮・地宮にも様々な宝物を納入するが、これも功徳の増幅を目的とし、仏頂尊勝陀羅尼経幢(一切の如来の全身舎利として)、高僧・王族の遺骨(僧舎利として)などである。そのような塔のあり方を保証するため、真身舎利の他に法舎利を用いても仏塔建立が可能とする『全身舎利経』および『仏頂尊勝陀羅尼経』の存在が大きい。遼塔・金塔はそれらの功徳を効率よく視覚化、顕著化し、功徳を保証する効果が期待されていたと理解できる。本年度は、中国北京市・天津市・河北省における遼・金代の仏塔および関係する仏教遺跡、美術館・博物館の調査を遂行した。本年度の研究成果は、北京市宣武区に位置する天寧寺塔について、現状における浮彫尊像の制作年代と造営背景の一端を明らかにしたことである。北京天寧寺塔の建立年代については、遼から金代にかけて、これまでに意見が提示されてきた。1991年に塔の修理時に発見された『大遼燕京天王寺建舎利塔記』により、遼代建立が決定的となったが、北京市とその周辺の遼代仏塔には、天寧寺塔のような塔身部第一層に浮彫尊像を多数あらわす例があまりないため、現状の状態すべてを遼代のものとするには違和感はぬぐえない。そこで、同地域の遼・金代の仏塔・僧塔の調査におよび、まずは地域的特徴を明らかにした上で、その成果もとに天寧寺塔の再考を行った。その結果、明らかにした天寧寺塔の沿革は次の通りである。遼の天慶十年(1120)、仏舎利、仏頂尊勝陀羅尼の効力による護国、国難の回避を目的に建立されたが、この時点において第一層塔身の浮彫尊像は施されていなかった。次に、貞元元年(1153)の金の燕京遷都により、天寧寺が金の中都城内の中心部付近に位置する主要な寺院となったことで、大定二十一年(1181)の世宗の代に重修された。この時、もともと彫刻がなかった塔身部の表面に尊像が追加された。その背景には、契丹人・漢人・渤海人など、支配下にある諸民族の懐柔の意図があり、そのため、漢民族の唐代以来の伝統的な塔モティーフ、遼寧の遼塔の要素を融合させたものとなったと推測する。現状の天寧寺塔は、さらに明代に大々的な表面の補修を受け、清および現代の修理も受けながら保たれてきた塔といえるであろう。このように、遼代・金代を通して重要な一地域である北京市周辺の仏塔・僧塔に関する調査・研究は、今後につながる成果と思われる。朝陽北塔は遼寧省朝陽市老城区に位置する。朝陽地区は、古くは燕の都が置かれた場所であり、隋・唐代には東北経営の拠点として、高句麗・渤海遺民の幽閉地とされた。遼代においても東京地区の中心地として、重要な拠点であり続けた。また、朝陽北塔は、1980年代の発掘調査により、創建からの沿革が明らかとなり、遼代重修の目的(来るべき末法への備え)も明確である。朝陽北塔に関する従来の見解は、塔身第一層に四仏をあらわすことから金剛界立体曼荼羅と理解され、同じく八大霊塔をあらわすことから舎利荘厳・舎利信仰の側面において語られてきた。しかし、それのみならず、次のような可能性が提示したい。すなわち、塔身第一層の浮彫モティーフをあらためて確認することにより、背後に遼宗室およびこの地に居住する漢民族・渤海遺民双方からみた(五台山信仰を集約した)仏頂尊勝陀羅尼信仰があり、その具現化(造形化)にあたり、『大乗本生心地観経』を用いることで両者の側面を融合させながら、最終的に末法への備えを強調することで一致・統合された可能性である。

本研究は、遼・金・高麗において建立された仏塔の第一層塔身に付された荘厳モティーフを研究対象とし、初期仏教以来の舎利信仰とは異なる、当代仏教信仰の中心であった五台山における華厳密教による新たな舎利信仰が、仏塔にどのような特徴として現れ出ているのかについて、実証的な考察を行うことが目的である。平成26年度は、遼寧省東部の遼塔・金塔の実地調査を行った。これにより、戦後報告されることがほぼ皆無であったこの地区の遼塔・金塔の現状を認識することができた。遼塔および金塔の第一層塔身には、(一定のヴァリエーションを保ちつつ)様々なモティーフが施されている。これは、塔を表面から荘厳するもので、功徳の増幅を目的とし、八大霊塔、仏像、宝塔・経幢、法偈などが(法舎利として)が表される。一方、塔内の天宮・地宮に様々な宝物を納入するが、これももちろん功徳の増幅を目的とし、仏頂尊勝陀羅尼経幢(一切の如来の全身舎利として)、高僧・王族の遺骨(僧舎利として)などが埋納される。そのような塔のあり方を保証する背景には、真身舎利の他に法舎利(経典・仏像など)を用いても仏塔建立が可能とする不空訳『一切如来心秘密全身舍利宝篋印陀羅尼経』、および、一切の如来の全身舎利のなかで仏頂尊勝陀羅尼を最尊・最勝とみなす仏陀波利訳『仏頂尊勝陀羅尼経』の存在が大きい。すなわち、遼塔・金塔とは、その立地状況も含め、それらの功徳を効率よく視覚化、より顕著化し、功徳を保証する効果的な手段としての位置づけが大いに期待されていたと理解できよう。なお、当初計画においては、この地域の実地調査は平成25年度に行う予定であったが、日中関係等の事情により不可能であった。そのため、当初の研究計画の韓国における高麗時代の仏塔の実地調査が遂行できず、言及することができなかった。高麗仏塔とあわせ、今一度総合的に考察することが、残された大きな課題である。仏教美術史・東洋美術史「遼・金・高麗における仏塔の浮彫荘厳に関する研究」と題する本研究において、前年度の朝陽北塔に続き、本年度は遼代の南京、金代の中都における代表的な仏塔について考察におよぶことができた。特に北京市の天寧寺塔について、遼代創建・金代重修期における目的を浮彫尊像から再考察することができたことは、重要な成果と思われる。また、北京市およびその周辺地域における仏塔の塔身部第一層に、東京地区(遼寧省朝陽市)および中京地区・上京地区(内蒙古自治区赤峰市寧城県・巴林左旗)とは異なる特徴が見いだされたことも、地域における仏塔信仰・建立目的の違いが浮かび上がり、大いに参考になるものであった。以上、当初の計画に照らし合わせ、おおむね順調に進展していると思われる。「遼・金・高麗における仏塔の浮彫荘厳に関する研究」と題する本研究において、まずは遼代を代表する朝陽北塔について考察に及ぶことができ、遼代重修期におけるその目的を仏塔の浮彫モティーフから再考察することができたことは、遼を受け継ぐ金の仏塔を考える際に一つの指針となる。また、遼塔に五台山信仰(仏頂尊勝陀羅尼信仰)が含まれていることが明らになったことは、同じく五台山信仰を取り入れている高麗の仏塔を考察する上で、大いに参考となるものであった。実地調査においては、本年度は中国内モンゴル自治区および遼寧省の実地調査を行い、中京大塔などの主な仏塔の調査を済ませている。以上、当初の計画に照らし合わせ、おおむね順調に進展していると考えている。次年度は、韓国における高麗時代の仏塔について実地調査を行う予定である。本研究者はかつて「韓国の浮彫形態の集合尊像(四仏・五大明王・四天王・八部衆)に関する総合調査」(科研費(基盤研究(B)(1)海外学術研究、研究代表者:武蔵野美術大学・朴亨國)に研究分担者として参加しており、その際の研究協力体制も維持されている。このように、高麗時代の仏塔については、同研究の際の成果の一部を活かし、各方面の協力を得て、確実に行っていく予定である。また、遼・金と高麗とを結ぶ重要な地域である遼寧省西部の遼塔・金塔についても、調査におよぶ必要があると考えている。しかし、同地域は日中両国の近代政治史上デリケートな地域でもあるため、夏場の実地調査が円滑に行えない可能性もある。遼寧省文物考古研究所に協力を依頼し、調査遂行のため万全を図ったうえで、可能であれば実地調査を行いたい。次年度は、中国山西省および北京市の遼・金塔についての実地調査を行う予定である。
小腸移植における骨髄由来樹状細胞門脈内投与による特異的免疫抑制の解析と臨床応用

ラット小腸移植モデルで、われわれは移入ドナー細胞が末梢血より骨髄細胞の方がドナー特異的免疫抑制の獲得効率が高く、投与経路は末梢静脈よりも門脈内投与のほうが導入効率は良い。また移植手術と同時に門脈内投与しても導入効率は低下せず、移植の妨げとなる前感作は認めないなどの利点を報告してきた。今回ラット小腸移植モデルで骨髄細胞による特異的免疫抑制獲得の効率化を図るべく、樹状細胞の骨髄からの樹状細胞の単離培養、成熟度コントロール、および移植実験を行った。小腸移植における骨髄由来樹状細胞のDAY0門脈内投与によるドナー特異的免疫抑制誘導の主たるpopulationは未熟樹状細胞であることを確認した。また、未熟樹状細胞による処置は小腸移植の移植片生着を有意に延長させるが、成熟細胞は逆に致死的GVHDを発生させるということが判明し、培養樹状細胞の分化度の維持は臨床応用における今後の課題として検討が必要と考えられた。ドナーが特定され待機手術が可能な小腸移植は、術前にドナー細胞を用いたablation therapyが可能である。今回ラット小腸移植モデルにおいて、骨髄細胞の同日投与(Day0 BMTPV)(前感作の危険を減ずるため)を行った。その投与は門脈内投与において最も効果が高く、FK506投与下でグラフト浸潤リンパ球のIFNγとIL-2の産生を、ステロイド大量併用群(5mg/kg/day)と同等に抑制し、生着延長効果もこれに匹敵した。これらのDay0BMTPVの効果を、小腸グラフト内の浸潤リンパ球そのものを解析することによって解明すべく、同じくラット同所性移植モデルを用いて解析した。グラフト浸潤リンパ球のレシピエント由来のリンパ球の総数がDay0BMTPV群においても激減しているばかりでなく、その細胞内サイトカイン産生は骨髄細胞投与群においてTh2shiftを示しており、とくに門脈内投与群は末梢静脈投与群において著しいことが証明された。したがってDay0BMTPVの効果は、ドナー骨髄細胞の門脈内投与により、グラフト浸潤リンパ球そのものの数的、サイトカイン環境的変化を来たし、ドナー特異的免疫抑制をもたらすことが証明された。次年度よりは、この骨髄細胞成分の主たるeffector cellと考えられるドナー樹状細胞(DC)に焦点をしぼり、同じく移植モデル(ラット)を用いて、DCの特異的免疫抑制に対する機能とかかわり、より効率的ablation therapyの確立を目指して研究する予定である。固型臓器移植の生存・生着率が向上している中、小腸移植の臓器移植における技術の確立はいまだ行われていないと言っても過言ではない。その原因は小腸が人体最大のリンパ組織であるに他ならず、移植小腸における強い拒絶と感染が原因であり、現在の薬剤による非特異的免疫抑制には限界があり、ドナー特異的免疫抑制の技術導入が望まれる。我々はかねてより今回ドナー特異的免疫抑制を強力に誘導する方法として、ドナー骨髄細胞の移植同時門脈内投与における効果とメカニズムについて解析を行った。ACIからLEWという高反応(ヒトアロ小腸移植想定)モデルにおいては常用量のタクロリムス(Tac)では制御不能の拒絶がおこるが、Day0の骨髄移植と常用量Tacの併用にて常用量Tac+高容量ステロイドを上まわる免疫抑制効果がえられた。骨髄移植では移植腸管内リンパ球の減少およびIFNγとIL-2のdown regulationが確認されドナー骨髄移植においてレシピエント由来のグラフト浸潤リンパ球のTh1/Th2バランスにシフトがおこっていることが判明した。また、骨髄細胞より樹状細胞(DC)を単離培養し、その分化度にしたがって未分化/分化の細胞を集積し、骨髄細胞の代わりに同系移植モデルに投与した。それにより未分化DC+Tac群で骨髄細胞投与と同等以上の生着効果がえられる一方、分化DC投与群においては過度の免疫抑制が原因と考えられるGVHRによる死亡例がみられた。以上より骨髄細胞門脈内投与は小腸移植においてドナー特異的免疫抑制により生着延長をもたらす事が判明し、またその効果は主として未分化DCによるものであることが判明すると同時に、分化DCによるGVHR誘導という側面も有することが見出された。
潰瘍性大腸炎におけるセレクチンリガンド糖鎖の硫酸化を制御する硫酸転移酵素の解析

大腸粘膜固有層のびまん性リンパ球浸潤は潰瘍性大腸炎の特徴的像であり,高内皮細静脈様血管内腔面に発現するセレクチンリガンド糖鎖とMAdCAM-1タンパクによって惹起される.本研究はMAdCAM-1タンパクのセレクチンリガンド糖鎖による翻訳後修飾が,潰瘍性大腸炎の病態形成に寄与しているか否かを明らかにすることを目的に施行され,GlcNAc6ST-1を介したMAdCAM-1タンパクの翻訳後修飾が,潰瘍性大腸炎の臨床的活動度を規定する因子として重要である可能性が示された.大腸粘膜固有層のびまん性リンパ球浸潤は潰瘍性大腸炎の特徴的像であり,高内皮細静脈様血管内腔面に発現するセレクチンリガンド糖鎖とMAdCAM-1タンパクによって惹起される.本研究はMAdCAM-1タンパクのセレクチンリガンド糖鎖による翻訳後修飾が,潰瘍性大腸炎の病態形成に寄与しているか否かを明らかにすることを目的に施行され,GlcNAc6ST-1を介したMAdCAM-1タンパクの翻訳後修飾が,潰瘍性大腸炎の臨床的活動度を規定する因子として重要である可能性が示された.大腸粘膜固有層のびまん性リンパ球浸潤は潰瘍性大腸炎の特徴的像であり,このリンパ球浸潤は高内皮細静脈様血管内腔面に発現するL-セレクチン糖鎖リガンドとMAdCAM-1タンパクによって惹起される. MAdCAM-1タンパクのL-セレクチン糖鎖リガンドによる翻訳後修飾が,潰瘍性大腸炎の病態形成および内視鏡所見発現にどのような関わりを持っているかを明らかにするため,活動期および寛解期潰瘍性大腸炎の組織切片を用いた免疫染色を行った.CD34(血管内皮細胞マーカー)陽性血管に占めるMAdCAM-1陽性血管の比率には活動期,寛解期の間で有意な差がみられなかったが, MAdCAM-1陽性血管に占めるMECA-79(L-セレクチンリガンド糖鎖を認識する)陽性血管の比率は活動期で有意に増加していた.レーザー共焦点顕微鏡を用いた解析では,活動期で出現する高内皮細静脈様血管内腔面にはMAdCAM-1とL-セレクチンリガンド糖鎖が同部位に局在しており,活動期特異的にMAdCAM-1がL-セレクチンリガンド糖鎖によって翻訳後修飾されている可能性が示された.RT-PCRによる解析では,硫酸転移酵素GlcNAc6ST-1, GlcNAc6ST-2のうち, GlcNAc6ST-1の発現が活動期に特異的にみられ, L-セレクチンリガンド糖鎖の硫酸化はGlcNAc6ST-1が主に行っている可能性が示された.培養細胞を用いた系では, GlcNAc6ST-2はコアタンパクCD34およびMAdCAM-1上のシアリルルイスX糖鎖にほぼ同様に硫酸基を転移したが, GlcNAc6ST-1はMAdCAM-1タンパク上のシアリルルイスX糖鎖に特異的に硫酸基を転移した.現在,硫酸転移酵素GlcNAc6ST-1およびGlcMAc6ST-2のペプチド抗体の特異性を検討中であり,組織におけるこれら硫酸転移酵素の局在を明らかにする予定である.大腸粘膜固有層のびまん性リンパ球浸潤は潰瘍性大腸炎の特徴的像であり,このリンパ球浸潤は高内皮細静脈様血管内腔面に発現するL-セレクチン糖鎖リガンドとMucosal Addressin Cell Adhesion Molecule l(MAdCAM-1)タンパクによって惹起される.MAdCAM-1タンパクのL-セレクチン糖鎖リガンドによる翻訳後修飾が,潰瘍性大腸炎の病態形成および内視鏡所見発現にどのような関わりを持っているかを明らかにするため,活動期および寛解期潰瘍性大腸炎の組織切片を用いた免疫染色を行った.CD34(血管内皮細胞マーカー)陽性血管に占めるMAdCAM-1陽性血管の比率には活動期,寛解期の間で有意な差がみられなかったが,MAdCAM-1陽性血管に占めるMECA-79(L-セレクチンリガンド糖鎖を認識する)陽性血管の比率は活動期で有意に増加していた.レーザー共焦点顕微鏡を用いた解析では,活動期で出現する高内皮細静脈様血管内腔面にはMAdCAM-1とL-セレクチンリガンド糖鎖が同部位に局在しており,活動期特異的にMAdCAM-1がL-セレクチンリガンド糖鎖によって翻訳後修飾されている可能性が示された。RT-PCRによる解析では,硫酸転移酵素GlcNAc6ST-1,GlcNAc6ST-2のうち,GlcNAc6ST-1の発現が活動期に特異的にみられ,L-セレクチンリガンド糖鎖の硫酸化はGlcNAc6ST-1が主に行っている可能性が示された,培養細胞を用いた系では,GlcNAc6ST-2はコアタンパクCD34およびMdCAM-1上のシアリルルイスX糖鎖にほぼ同様に硫酸基を転移したが,GlcNAc6ST-1はMAdCAM-1タンパク上のシアリルルイスX糖鎖に特異的に硫酸基を転移した.以上の結果から,高内皮細静脈様血管におけるGlcNAc6ST-1を介したMAdCAM-1タンパクの翻訳後修飾が,潰瘍性大腸炎の臨床的活動度を規定する因子として重要である可能性が示された.
ギャップ結合を介した細胞間情報伝達系の四次元解析を基盤とした病態の解析とその展開

本研究はギャップ結合に関与するコネキシン(Cx)タンパクの役割を解明するため、単にギャップ結合だけではなく、Cxタンパクそのものにも焦点を当て、Cx遺伝子の発現から、細胞膜へのインテグレート、細胞膜での挙動、ヘミチャネル、ギャップ結合に至るすべての過程を網羅的に、しかも時間的要素を含めてCxタンバクの一生を明らかにすることにより、各種疾患におけるCxの関与を明らかにすることを目的とした。その結果、1)肝ガン細胞におけるCx43と増殖・分化の関係が明らかとなった。2)細胞の分化過程において、Cx43の発現上昇が認められ、この発現を抑制することにより分化が抑制されることを明らかとした。さらに、この機序はギャップ結合非依存的で、cAMPの関与が示唆された。3)Cx43の発現調節機序に関し、細胞密度が増加するに従うCx43の発現増加は、ギャップ結合非依存的であるが、同じCx43を発現していない細胞との共存培養における高密度培養下でも増加が認められた。しかし、後者の場合には膜へのトラフイッキングは認められなかった。次にその解析を行ったところ、プロモータ領域のSpl結合領域がこの発現増加には必須であること、Sp3アイソマーが低下することが重要であることが示された。さらに、Cx43のmRNAの安定性にはIP3キナーゼーAktの経路が重要であることを明らかにした。4)Cx43タンパクを遺伝子より転写・翻訳の過程をすべてリポソーム内で行なわせることにより、Cx43で構成したコネクソンを膜にインテグレートしたリポソーム内に種々のオリゴペプチドを加え、細胞への処理を行なったところ、他の薬物導入法と比較し、短時間で高効率に細胞に取り込ませることが可能であることが明らかとなった。本研究はギャップ結合に関与するコネキシン(Cx)タンパクの役割を解明するため、単にギャップ結合だけではなく、Cxタンパクそのものにも焦点を当て、Cx遺伝子の発現から、細胞膜へのインテグレート、細胞膜での挙動、ヘミチャネル、ギャップ結合に至るすべての過程を網羅的に、しかも時間的要素を含めてCxタンパクの一生を明らかにすることにより、各種疾患におけるCxの関与を明らかにすることを目的としている。本年度は、1)ガン細胞におけるCx43発現と増殖抑制の機序の解明を行なうとともに、唯一の例外である肝ガンにおけるCx43と増殖・分化の関係を明らかにした。すなわち、通常のガンにおいては、Cx43タンパクの発現は、Skp-2の分解を促進することによりp27タンパクの安定化により増殖を抑制することを明らかにしたが、肝ガンにおいては、Cx43の発現がガン化により誘導され、Cx43発現を抑制することによりガン細胞の増殖促進・ガン化の増悪が認められた。その機序の解明を行なったところ、Cx43の増加はCx37の減少・ギャップ結合を介した細胞間情報伝達を抑制することにより、細胞増殖に促進的に働くことが明らかとなった。しかも肝ガン治療薬として注目されているビタミンK2は、その作用機序が明らかでなかったが、本研究でCx43発現を抑制することにより正常化に向かわせることが明らかとなった。2)Cx43タンパクを遺伝子より転写・翻訳の過程をすべてリポソーム内で行なわせることにより、Cx43で構成したコネクソンを膜にインテグレートしたリポソーム内に種々のオリゴペプチドを加え、細胞への処理を行なったところ、他の薬物導入法と比較し、短時間で高効率に細胞に取り込ませることが可能であることが明らかとなり、新しい薬物導入法としての開発を行なっている。本研究はギャップ結合に関与するコネキシン(Cx)タンパクの役割を解明するため、単にギャップ結合だけではなく、Cxタンパク

そのものにも焦点を当て、Cx遺伝子の発現から、細胞膜へのインテグレート、細胞膜での挙動、ヘミチャネル、ギャップ結合に至るすべての過程を網羅的に明らかにすることにより、各種疾患におけるCxの関与を明らかにすることを目的としている。本年度明らかになったことは、1)分化過程におけるCx43の役割を解明する目的で、未分化RPE細胞に対するCx43の過剰発現、分化細胞に対するsiCx43RNAの影響を調べた。その結果、他の分化促進因子の添加なしで、Cx43過剰発現細胞は分化し、また、分化条件下においてもCx43のknock downにより分化が抑制された。さらに、Cx43の分化シグナルを追求したところ、cAMPの上昇が認められた。しかも、この分化誘導にはCx43タンパクそのものの発現が重要であり、ギャップ結合非依存的であった。2)Cx43含有リポソームに加え、Cx32含有リポソームを作成し、細胞とのヘテロおよびホモのギャップ結合を検討した結果、Cx43含有リポソームはCx43発現細胞とのみギャップ結合を作り、Cx32発現細胞との間にはギャップ結合を作れなかった。この現象はCx32リポソームにおいても同様であった。以上のことは、従来考えられていたヘテロギャップ結合は特殊な条件下のみで構築され、Cx分子には各々特異性があることを意味している。3)Cx43過剰発現ホモマウスの作成に成功し、このマウスを用いてCx43の生理病理的役割に関する研究を行った。その結果、Cx43過剰発現ホモマウスはwildに比較し、体重が小さいが、その反面尾部懸垂モデルにおいて、抵抗性を示した。現在、その機序の解明を行っているが、骨芽細胞-骨細胞間のCx43を介したギャップ結合が骨細胞の機能に影響を与えている可能性が示唆されている。本年度は、コネキシン(Cx)43の発現調節に関し、多くの研究を行った。Cxの機能を調節する因子としては、膜へのトラフィッキングのための因子が重要だとされ、我々もこれまで細胞膜上でのCxタンパクの安定化に関し、これまで多くの発表を行ってきた。しかし、本研究において、Cx43遺伝子の発現調節もCxを介した機能に関与することが明らかとなった。そこで、Cx43遺伝子の発現調節、および発現に関与する因子に関し、検討を行った。その結果、ガン化に伴うCx43遺伝子の発現上昇、ビタミンK2による発現低下に加え、細胞密度がCxの発現調節に重要であることを見出した。細胞密度が増加するに従うCx43の発現増加は、ギャップ結合非依存的であるが、同じCx43を発現していない細胞との共存培養における高密度培養下でも増加が認められた。しかし、後者の場合には膜へのトラフイッキングは認められなかった。次にその解析を行ったところ、プロモータ領域のSp1結合領域がこの発現増加には必須であること、Sp3アイソマーが低下することが重要であることが示された。さらに、Cx43のmRNAの安定性にはIP3キナーゼ-Aktの経路が重要であることを明らかにした。このことは、Cx43を介した細胞機能の変化がCx43の発現調節によってもなされることを始めて証明したものである。また、細胞・組織分化におけるCxの関与を明らかにすることを目的とし、多くの分化系を立ち上げた。
作物の水利用効率の改善のための新規イメージング法を用いた蒸散と物質動態の基礎研究

植物がどのように水および養分元素を吸収するかについて、放射性同位元素を利用して調べた。水動態については、半減期が僅か2分の酸素15で標識して植物に吸収させたところ、導管から多量の水が周辺組織に漏れだしまた導管に戻るという水循環を証明することができた。養分元素についてもリアルタイムでどのように植物が吸収し体内を移行させるかを可視化解析できる装置を開発した。また乾燥耐性であるササゲを用い水保持機構について検討を行った。作物中の水動態を調べるため,ポジトロン放出核種0-15を用いて,ダイズ中の水の動態を定量的に測定できる機器をセットアップした。0-15標識水を用いた実験は半減期が短いため(2分),20分ほどしか測定できないが,同じ植物体を用いて同じ実験を繰り返すことが可能であるため,再現性のあるデータを取得することができた。ダイズ茎(最下部の茎)1cmあたりの水の吸収速度は約4μl/秒であり,測定部位が上部へと移動するに従い,茎に既に存在していた安定な0-16水により希釈されるため見かけの吸収速度は遅くなった。ダイズ下部の茎1cmは体積にして約50μlであるが,根から吸収された0-15水の量は15分ほどで40μlほどになり,新たに吸収された水が導管から漏出していることが明らかになった。そこで,この部分の茎の導管体積を測定したところ,約2μlであることから20倍の水が導管から漏れ出し周囲の水と混合してまた導管に戻っていることになる。導管から漏出した水がどのようなルートを辿っているかについては,(1)茎表面からの蒸散,(2)篩管への流入(下部の水の移動),(3)導管以外の組織による水の上部への移動,が考えられる。そこで(1)についてはワセリンを茎に塗布することによる水吸収動態測定,(2)は篩部削除をしたダイズを用いた水吸収測定を行なったところ,いずれもその可能性は極めて低いことが示された。また(3)は,導管以外の組織は細胞が詰まっているため,水移動の抵抗が高いことから可能性が低いことが考えられた。また茎断面の各組織の体積を顕微鏡下で測定したところ,0-15水の吸収動態を維持するためには木部において導管内の流速と同等の流速が必要なことが判明した。そこで,導管から漏出した水のほとんどは再び導管に戻ることが示された。植物の蒸散量が異なる場合の水動態について,湿度を変化させた場合の0-15水の動態を調べていく予定である。昨年度までに水を150で標識した水を用い、植物体内の水動態について定量的な解析結果を得ることができた。そこで、平成20年度はまず、乾燥耐性のササゲならびに乾燥感受性ササゲを用いて水利用効率の差を検討した。中性子ラジオグラフィにより、耐性種は茎における水分含有量が感受性品種よりも常に高く保持されていることが示された。そこで、葉における水分量を詳細に検討したところ、耐性種と感受性種において、乾燥ストレス下における若い葉と古い葉の水分含量の変化が大きく異なることが示された。現在、浸透圧を調製する化学物質についての動態を調べているところである。また水の動態と合わせて養分吸収についても調べるため、リアルタイムイメージング装置を改良し、植物地上部に光を照射した時にも画像が取得できるようにした。その結果、約1週間、明暗のリズムを付与しながら、RIでラベルした養分の根からの吸収動態をイメージング解析できるようになった。形状的にリアルタイムイメージングシステムに適しているミヤコグサを用いた場合には、幼植物期から種子形成過程までライフサイクル全体を通してイメージング解析を行うことができた。播種後約2週間の植物体、花芽形成期、さや形成期で根と地上部の同時イメージングを試みた。水耕液に32Pを約10kBq/molで添加した後、根から与えた。その結果、通常栽培のサンプルとリン酸欠乏サンプルでは根への蓄積に差が見られたこと、花芽やさや形成時期には通常栽培サンプルではつぼみとさやへのみ積極的に移行することなどが示されたが、リン酸欠乏サンプルでは、つぼみやさや以外に葉への移行量も高かった。各組織における特異的なリンの集積動態について画像から解析することができたので、現在、リン酸動態に関連した各組織における、トランスポーターの種類とその活性との相関についての検討を始めたところである。昨年度までは、植物の吸収する水分量の定量ならびに養分元素の吸収動のマクロおよびミクロのイメージング装置開発を行ってきた。本年度はこれらのイメージング装置を用い、リン(32-P)よりもβ線のエネルギーが低い核種、イオウ(35-S)、カルシウム(45-Ca)などのリアルタイムイメージングが行えるようになってきた。さらに、γ線放出核種である、109-Cdについてもミクロイメージング装置で可視化が可能であることが示され始めたところである。

養分元素吸収動態では、リアルタイムイメージング法により水耕栽培における養分吸収と土耕栽培における養分吸収の違いを解析することができた。その結果、イネの水耕栽培ではリン酸の吸収量が土壌栽培と比較して20倍ほど多くなることがわかり、水耕栽培では土壌栽培とは全く養分吸収動態が異なることが示された。一方、アフリカで自生のササゲ約2000種から選抜された乾燥耐性ならびに感受性ササゲを用いた水分ならびに物質の動態も調べた。水動態については、乾燥耐性ササゲ(TVu11979、TVu11986)感受性ササゲ(TVu7778、TVu9357)を用い、乾燥ストレス下における代謝様式の差を調べた。特に、感受性品種(TVu7778)は、乾燥ストレス下で上位組織への可溶糖の輸送が小さいことや、同じ感受性品種(TVu9357)と比較しても下位葉における水分保持力が低いことが示された。さらに切断した各葉自身の水分保持力を調べたところ、感受性品種(TVu7778)は、上位葉における水分保持力ならびに葉緑体保持力が最も低いという結果が得られた。
ネッタイツメガエル胚発生における転写因子ー標的遺伝子関係の揺らぎ測定

転写因子ー標的遺伝子関係の揺らぎを測定するため、まずはネッタイツメガエル胚を用いたChIP実験やRNA抽出、ゲノムDNA抽出の条件を検討した。その結果、ChIP実験には100-400個ほどの胚があれば充分であること、胚1個からRNA-seq解析に十分な量のRNAが抽出できること、精巣摘出後のオス個体からでもゲノムDNA抽出に十分な量の血液が得られることが明らかとなった。したがって、1ペアの雌雄から得た同胞胚を用いた実験でChIP-seq解析、RNA-seq解析、ゲノムリシーケンスすべてを行うことが比較的容易となり、しかもRNA-seq解析ではコントロール群と転写因子機能阻害群とで個体間の揺らぎも考慮に入れながら揺らぎを測定することが可能となった。これらの条件のもと、ネッタイツメガエルGolden系統を用いて転写因子Otx2とその標的遺伝子との関係の揺らぎを測定する実験を行った。まずは原腸胚で実験を行い、ChIP-seqライブラリとRNA-seq解析用のtotal RNAサンプル、ゲノムリシーケンス用の親個体のゲノムDNAを合計5ペア分用意し、領域内の大規模解析支援班に送付して解析を依頼した。また、ChIP-seq解析の実験誤差とペア間での揺らぎの関係を明らかにするため、異母兄弟胚を用いたChIP-seq解析も行い、大規模解析支援班からシーケンスデータを得た。神経胚・咽頭胚・オタマジャクシ幼生についてもGolden系統4-5ペア分を用いて同様の実験を行い、今後ChIP実験・RNA抽出・DNA抽出を行うサンプルを得た。2018年5月に所属研究機関を変更したため、実験環境整備に時間がかかったものの、その後実験条件の検討が順調に進み、安定してシーケンス解析用サンプルを得られるようになった。原腸胚とOtx2という最も確立されている実験系については、すでに5セット分のサンプルをシーケンス解析に回しており、今後解析を進めることで大きな発見が期待できる。他のステージでの実験条件の検討や、ネッタイツメガエルIvory Coast系統、他の転写因子の抗体などの準備も着々と進んでおり幅広い研究を展開する素地ができた。Golden系統の原腸胚を用いたOtx2に関するデータの解析を進め、ChIP-seqデータのペア間の揺らぎ、RNA-seqデータの個体間およびペア間での揺らぎを測定し、ゲノムリシーケンスデータと合わせて相互の関係を明らかにする。さらに神経胚、咽頭胚、尾芽胚のデータを加えていき、ステージ間で各揺らぎにどのような変化があるのかを明らかにする。Ivory Coast系統を用いて同様にOtx2に関する実験を行い、系統内の揺らぎと系統間の揺らぎの相関関係を調べる。系統間で揺らぎの大きい遺伝子・ゲノム領域については、アフリカツメガエルゲノムとの比較を行い、進化に影響を及ぼしているのかを検討する。Otx2と同様に胚発生を通じて発現し続けるFoxa2や、原腸胚に発現が限定されるMix1やSiaといった転写因子についても同様の実験ができれば、転写因子の種類による揺らぎの大きさに違いについても議論できるようになる。

Ivory Coast系統を用いて同様にOtx2に関する実験を行い、系統内の揺らぎと系統間の揺らぎの相関関係を調べる。系統間で揺らぎの大きい遺伝子・ゲノム領域については、アフリカツメガエルゲノムとの比較を行い、進化に影響を及ぼしているのかを検討する。Otx2と同様に胚発生を通じて発現し続けるFoxa2や、原腸胚に発現が限定されるMix1やSiaといった転写因子についても同様の実験ができれば、転写因子の種類による揺らぎの大きさに違いについても議論できるようになる。
ダブル・ペロブスカイトにおける新規機能の創出

本研究では、ダブルペロブスカイト型構造を持つ遷移金属酸化物(DP:一般式A'A"'B'B"O_<6-w>において"新しい機能"を創出することを目指し、Fe, Coを含む3種の酸化物について酸素量を含む化学組成と原子価状態、さらにそれらと物性の相関関係を調べた。以下に主な成果を示す。(1)BaSmFe_2O_<5+δ>合成のための「酸素ゲッター同時封管法」を開発した。これにより、様々なRE種の酸化物で広範囲の酸素含有量をもつ試料の作製に成功。(3)BaサイトへのSr置換、及びSmサイトへのCaや他の希土類元素(RE)による置換(化学的圧力)を用いたTvの幅広い制御に成功。これら試料の放射光X線回折を用いた構造解析の結果、RE面を挟むFe-Fe距離がTv値を支配していることを見出した。(4)RE=Dy, Y試料において、電荷整列に起因すると考えられる超格子反射を放射光X線回折と電子回折により観測。(1)高品質試料作製のための「酸素ゲッター同時封管法」の確立。(2)SFMOが混合原子価状態Fe^<11/111>を発現することを発見し、本物質のハーフメタル電子状態の理解に貢献。(3)SFMOにおいて、試料焼成条件とBサイトでのFe/Mo長距離秩序度の関係と電磁気特性への影響を解明。(4)SrサイトヘのBa, Ca置換、MoサイトヘのTa, W置換により本物質の電磁気特性・MR特性の制御に成功。Ta置換試料において、5Kで200%と高いMR値を得ることに成功。RE=Nd, Eu, Ho, Yの試料を作製し酸素量の精密制御を行った。本物質における結晶構造・磁気特性・MR特性に対する酸素不定比性の効果を解明し、本物質における巨大MR効果発現のための指針を構築した。RE=Ndの場合で、δ=^^0.46付近において、200K以上の温度では、トンネル型MR特性が観測された:ハーフメタル状態発現の可能性を示唆。以上1999-2003年に遂行した研究の成果を総括した。本研究により、ダブルペロブスカイトにおける(i)Verwey型転移などの新規機能の創出、(ii)遷移金属の価数状態とVerwey型転移、電荷整列、ハーフメタル状態などの物性との相関の解明、及び(iii)ハーフメタルなどの機能性材料における物性制御法確立のための指針を得た。ハーフメタルであることが示唆されている、"0112"ダブルペロブスカイト型構造を有する銅鉄酸化物の合成と磁気特性の観察を行った。原料粉末を金属ゲッターと共に石英管で封入、加熱することにより、BaSm(Cu_<0.5+x>Fe_<0.5-x>)_2O_<5+d>を、10-310-16barの低酸素分圧下で合成した。

この結果、x=-0.1と-0.4に固溶限界があることが分かった。X=0.0の試料をメスバウアー分光により分析したところ、200-240°C以上ではFeの価数は+2.5であるが、それ以上では+2と+3に分離することが分かった。この温度で、既知の磁化の飛びに加えて、電気抵抗率の急激な上昇がみられることが分かった。この結果から、マグネタイトのVerwey転位に似ている現象が起こっていることが分かった。酸素量5+dを変えたところ、酸素量の増加に伴い磁化の飛びがベル型に変わり、ある酸素量で最大値をもつことが分かった。これに伴い転位温度がある酸素量で最低となることが判明した。これらは微視的な歪みと係わっている可能性があるがその本質は分かっていない。BaRE(Cu_<0.5>Fe_<0.5>)_2O_<5+d>(RE=希土類元素)のREと酸素量を変えた試料を、超高酸素圧下熱処理法を用いることによって作製した。その結果最大5+d=5.45まで酸素量を増加させた試料を作製した。RE=Prの場合、200K付近での磁気異常があることがわかった。この温度以下では磁化の磁場依存性のヒステリシスと、零磁場冷却と磁場中冷却した場合磁化の差がみられ、これらは磁気異常が起こる温度でほぼ消失していた。これらはスピンのフラストレーションまたは何らかのスピンの相転移によって起こることが示唆された。本研究では、ダブルペロブスカイト型構造を持つ遷移金属酸化物において"新しい機能"を創出することを目指し、2種類のダブルペロブスカイト型Fe酸化物の電磁気特性に関する研究を行った。具体的には元素置換・酸素量制御など化学的手法を駆使した高品質試料の合成、及び得られた物質における電磁気特性の評価である。特に本研究では、メスバウアー分光法を用いてFeイオンの磁性状態を詳細に調べた点が特徴となっている。以下に主な成果を示す。(3)BaSmFe_2O_<5+w>における負のMR効果の発見、及びMR効果とVerwey型相転移の相関関係を確立。(1)金属Feを酸素ゲッターとして用いた真空封じ切り法による合成法の確立。(2)Sr_2FeMoO_<6-w>において、全ての温度領域(5-300K)でFeイオンが混合原子価状態(Fe^<2.5+>)にあることを^<57>Feメスバウアー分光法により確認。(3)Sr_2Fe(Mo,W)O_<6-w>における酸素量の決定:化学滴定法を用いて本物質の酸素欠損wがほぼ0であることを実験的に確認。Fe, Coを含む3種類のダブルペロブスカイト酸化物において、化学組成と電磁気特性の相関関係を調べた。(1)低酸素分圧(10^<15>気圧)下合成法の確立。(2)δ<0.5でのVerwey型磁気転移(Fcの原子価状態に関する転移)の発見。(3)Verwey転移温度T_v近傍での負の磁気抵抗(MR)効果の発見。(6)RE=Dyにおいて、電荷整列に起因すると考えられる超格子反射を放射光X線回折測定により確認。(1)低酸素分圧(10^<-13>気圧)下合成法の確立。(2)本物質が酸素不定比性を持たないことを実験的に確認(w0.0)。(3)Sr_2FeMoO_6におけるFeの混合原子価+2.5の発見。(4)Sr_2FeMoO_6の合成温度とBサイト(Fe/Mo)秩序度との相関を解明。(6)W, Ta置換試料において、フェリ磁性転移温度(T_c)及び反強磁性転移点(T_N)
組換えウイルスを用いた雑系動物の細胞傷害性試験法の開発

細胞傷害性T細胞(CTL)は多くのウイルスに対する感染防御に重要な役割を果たしている。しかし、通常の動物である雑系動物の感染系ではその解析は行なわれていない。細胞傷害性試験が雑系動物では困難である理由は、Target細胞作製に際して、CTL試験ではEffector細胞とTarget細胞のMHCの合致が必要なため雑系動物では同一の動物から作製しなければならないこと、また当該ウイルス抗原を細胞幕に高率に表出しつつEffector細胞から攻撃を受けるまでCPEを起こさないことが必須であり、この条件を満たすのは容易ではなかったことにある。本研究は、感染宿主域が広く、CPEを起こさない非増殖性アデノウイルスベクターを改良、応用することによってこれらの問題を解決し、近交系のない雑系動物である産業動物、伴侶動物、実験動物に普遍的に利用できる細胞傷害性試験法を開発、実用化することを最終目的として、以下の研究計画項目により行なった。1)アデノウイルスの感染宿主動物細胞域の検討。2)アデノウイルスベクターに挿入する遺伝子を高率に発現させるプロモーターの検討。3)細胞性免疫に関与する種々のウイルス蛋白の性状解析と、その遺伝子のクローニング。4)各種ウイルス蛋白遺伝子を導入した組み換えアデノウイルスの作製。5)個々のウイルスの自然感染宿主動物の細胞に、ウイルス遺伝子を組み換えたアデノウイルスを感染させ、Target細胞を作製する際の基礎条件の検討。研究成果は個々のウイルス系によって異なるが、全ての項目を達成できたものもあり、最終目標である普遍的な細胞傷害性試験法の確立に向けて明るい見通しが得られた。さらに、本研究によって数多くの重要な知見が得られ、今後の各動物種での細胞性免疫機構の解明や、アデノウイルスベクターの応用の可能性について、基礎および応用両面への貢献度は大きいと考えられた。本研究の最終目的は個々の雜系動物での細胞傷害性T細胞の機能測定法をアデノウイルスベクターを用いることにより開発することであり、本年度は基礎的に重要な問題となるアデノウイルスの感染宿主域の検討と挿入遺伝子の発現効率を挙げることを中心に研究を行ない以下の成果を得た。1)広い範囲で発現すると知られるSRαプロモーターの支配下にlacZ遺伝子を発現する組換えアデノウイルスを接種して、X-galにより青く発色させることにより、この組換えアデノウイルスの各種動物樹立細胞株(ウシ、ブタ、ニワトリ、イヌ、ネコ、ウサギ、サル、ヒト)への感染能、発現量を検索した。この結果、程度の差はあるもののアデノウイルスは検索した全ての動物種細胞に感染能を有することを明らかにした。この結果は、この系により細胞傷害性試験法が全ての動物種で確立される可能性が高いことを示唆するものであり、本研究の成果に期待が持てる。2)高い力価のアデノウイルスの精製法を確立した。また各動物細胞で最も発現効率の高いプロモーターを検索するため、LacZ遺伝子をSRα、EF1α、CAG各プロモーターの下流に組み込んだ組換えアデノウイルスを作製した。これを用いて発現効率を比較した結果、発現プロモーターとしてはSRαよりさらにEF1α、CAGプロモーターが強力であること、CAGは浮遊系細胞に対しても高い発現を示すことが明らかになった。これらプロモーターの効率や特徴を各動物種細胞で検索した結果は、今後このベクターを用いたワクチンや治療などの開発に有用な知見をもたらすと考えられた。3)オーエスキー病ウイルスの膜蛋白遺伝子gI,gII,gIII,gp50においてバキュロウイルスでの組換え蛋白発現系を用いて、細胞性免疫の関与が示唆される遺伝子部位を明らかにした。本研究の最終目的は個々の雜系動物での細胞傷害性T細胞の機能測定法をアデノウイルスベクターを用いることにより開発することである。

本年度はアデノウイルスに目的の遺伝子の組み込みを開始し、平行して細胞傷害性試験に必要な遺伝子部位の検索などの基礎的検討も行ない、以下の成果を得た。2)血球系の細胞での発現はCAGプロモーターを用いた方が効率が高いことが明らかになった。そこで、目的cDNAをクローニングサイトに挿入することによって組換えウイルスが作製できるコスミドカセットの作出を試み成功した。3)作製した組換えアデノウイルスをサルの実験系で用いるため、サルの細胞での発現効率を検討した。前年度に作製したlacZを組み込んだアデノウイルスベクターを、カニクイザルの末梢血細胞およびConA刺激した細胞に感染させたところ、67-97%の発現が認められた。この結果は、細胞傷害性試験の標的細胞として十分と考えられ、本試験に有効であると考えられた。4)gI欠損弱毒オーエスキー病ウイルスをマウスに感染させて、リンパ球を標的細胞に細胞傷害性試験を行なった。ワクシニアウイルスを用いてgII,gIIIを発現させた標的細胞では有意な細胞傷害性が認められず、アデノウイルスベクターに期待がもたれた。本研究の最終目的は近交系のない雑系動物である多くの産業動物、伴侶動物、実験動物に普遍的に用いることができる細胞傷害性試験法を、アデノウイルスベクターを用いることによって開発することにある。本年度は、以下の成果を得た。1)目的遺伝子を長期間発現持続させることを目的として、Cre/loxP系を用いることにより、目的遺伝子を発現する系を環状分子として細胞内で生成可能なアデノウイルスベクター系を開発した。予備検討系としてSV40の系を用いたため特殊であったが、今後挿入系を変えることにより持続期間を上昇させる可能性が十分期待される結果を得た。2)昨年度作出に成功した麻疹ウイルスのHおよびF遺伝子を組み換えたアデノウイルスを、カニクイザルの末梢血に接種し感染の成立を見た。感染効率を上昇させる方法として各種マイトジェンでの幼若化およびEBV感染などの条件を検討した。3)牛疫ウイルスでは、ウサギでの実験感染系と牛での組み換えワクチニアウイルス免疫系での免疫反応を検討した。両者においてT細胞の反応性が確認され、中和抗体価が低いが強力な感染防御能が認められたことより細胞性免疫の関与が強く示唆された。4)牛疫ウイルスF蛋白を発現するアデノウイルスの作出に成功した。5)牛白血病ウイルスでは、細胞性免疫の標的と推定されるenvおよびtax調節遺伝子をワクシニアウイルスおよび高度発現ベクターに組み込み、細胞株での発現を確認した。6)牛の細胞性免疫を研究する基礎として牛のMHCII抗原を発現するcDNAクローンを13種得た。その発現系での解析により、抗原提示機能発現に関与する遺伝子座を決定した。また人と異なる発現分子の存在を認め、今後牛での抗原処理課程の解析が必要であると考えられた。以上の成果は雑系動物での細胞傷害性試験法の開発の基礎として極めて有用と考られる。
小児血液腫瘍におけるDNA ミスマッチ修復異常の実態解明と化学療法戦略への応用

本研究は、メソトレキセート(MTX)、6-MPといった抗がん剤の感受性を左右するとされるDNAミスマッチ修復(DNA mismatch repair, MMR)の異常が小児血液腫瘍でどのように分布するのか、その詳細を明らかにすることを目的とした。具体的には、(1)小児血液腫瘍、とくに急性リンパ性白血病および非ホジキンリンパ腫において、MMR異常がどのように分布するかを明らかにする。また、(2)腫瘍のMMR statusとMTX、6-MP感受性との関係について、後方視的検討より両者の関係を明らかにすることを目的とした。まず、この2疾患のうち急性リンパ性白血病につき、約30例の症例の蓄積と骨髄細胞などの試料標品を集積した。腫瘍細胞におけるMMR異常は、マイクロサテライト不安定性(microsatellite instability, MSI)により解析可能であるため、これらの試料標品から染色体DNAを抽出し、MSI解析をおこなった。その結果、少ない症例数の解析にもかかわらず、MSI陽性を示唆する解析結果が少数の症例で見出されてきた。さらに詳細なMSI解析に加え、これらの症例における抗がん剤治療への反応性について解析をすすめた結果、少数の症例で見出されたMSI陽性を示唆する所見は、造血幹細胞移植による影響であることが判明した。不良な予後が予想される症例では、早期に造血幹細胞移植が施されるため、マイクロサテライトを用いた評価が困難となる。MMR蛋白質の発現を観察するなど、血液腫瘍におけるMMR異常には、MSI解析に加えて、多角的な観察が必要であることが示唆された。本研究は、メソトレキセート(MTX)、6-MPといった抗がん剤の感受性を左右するとされるDNAミスマッチ修復(DNA mismatch repair, MMR)の異常が小児血液腫瘍でどのように分布するのか、その詳細を明らかにすることを目的としている。具体的には、(1)小児血液腫瘍におけるDNAミスマッチ修復(MMR)異常(急性リンパ性白血病および非ホジキンリンパ腫において、MMR異常がどのように分布するかを明らかにする。)、(2)腫瘍のMMR statusとMTX、6-MP感受性との関係(後方視的検討より両者の関係を明らかにする。)について、研究を進める。初年度のH22年度は、このうち急性リンパ性白血病につき、約30例の症例の蓄積と骨髄細胞などの試料標品の集積を終えた。腫瘍細胞におけるMMR異常は、マイクロサテライト不安定性(microsatellite instability, MSI)により解析可能であるため、現在、これらの試料標品から、MSI解析に供するための染色体DNAの抽出を開始した。DNAの抽出を終え次第、MSI解析を開始したい。初年度のH22年度は、このうち急性リンパ性白血病につき、約30例の症例の蓄積と骨髄細胞などの試料標品の集積した。腫瘍細胞におけるMMR異常は、マイクロサテライト不安定性(microsatellite instability,MSI)により解析可能であるため、さらに、これらの試料標品から、MSI解析に供するための染色体DNAを抽出した。H23年度は、これらの標品に対してMSI解析をおこなった。大変興味深いことに、少ない症例数の解析にもかかわらず、MSI陽性、すなわちMMR異常を示唆する解析結果が少数の症例で見出されてきた。現在、これらの症例における抗がん剤治療への反応性について、解析をすすめている。本研究は、メソトレキセート(MTX)、6-MPといった抗がん剤の感受性を左右するとされる

DNAミスマッチ修復(DNA mismatch repair, MMR)の異常が小児血液腫瘍でどのように分布するのか、その詳細を明らかにすることを目的とした。具体的には、(1)小児血液腫瘍におけるDNAミスマッチ修復(MMR)異常(急性リンパ性白血病および非ホジキンリンパ腫において、MMR異常がどのように分布するかを明らかにする。また、(2)腫瘍のMMR statusとMTX、6-MP感受性との関係について、後方視的検討より両者の関係を明らかにすることを目的とした。初年度のH22年度は、このうち急性リンパ性白血病につき、約30例の症例の蓄積と骨髄細胞などの試料標品を集積した。腫瘍細胞におけるMMR異常は、マイクロサテライト不安定性(microsatellite instability, MSI)により解析可能であるため、さらに、これらの試料標品から、MSI解析に供するための染色体DNAを抽出した。H23年度は、これらの標品に対してMSI解析をおこなった。大変興味深いことに、少ない症例数の解析にもかかわらず、MSI陽性を示唆する解析結果が少数の症例で見出されてきた。最終年度のH24年度は、さらに詳細なMSI解析に加え、これらの症例における抗がん剤治療への反応性について、解析をすすめた。その結果、少数の症例で見出されたMSI陽性を示唆する所見は、造血幹細胞移植による影響であることが判明した。不良な予後が予想される症例では、早期に造血幹細胞移植が施されるため、マイクロサテライトを用いた評価が困難となる。MMR蛋白質の発現を観察するなど、血液腫瘍におけるMMR異常には、MSI解析に加えて、多角的な観察が必要であることが示唆された。非ホジキンリンパ腫について、症例の蓄積と試料標品の集積がおくれている。24年度が最終年度であるため、記入しない。診療担当者らよりの一層の協力を得、解析対象となる症例規模を拡大し、観察の普遍性を問いたい。