hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
食事性フラボノイドによる消化管吸収制御を介した薬物相互作用の臨床的意義

本研究では、緑茶カテキンなどある種の食事性フラボノイド類は水溶性薬物と併用した場合、薬物の小腸上皮における細胞膜透過を制御することによって薬食相互作用を引き起こすとの仮説を立て、基礎実験ならびに臨床試験からなるトランスレーショナルなアプローチによりこの仮説を検証するとともに、食事性フラボノイドと水溶性薬物との相互作用の臨床的意義を評価すること、およびその評価法を確立することを目的とする。本年度は被験水溶性薬物としてナドロールに加えて、ACE阻害薬リシノプリル、抗ヒスタミン薬フェキソフェナジンおよびアドレナリン作動薬プソイドエフェドリンを対象とし、緑茶カテキンの併用による体内動態の変動を評価するため臨床試験を実施した。リシノプリル、フェキソフェナジン、プソイドエフェドリンを被験薬物とした緑茶との相互作用臨床試験は完了し、血中および尿中薬物濃度の測定ならびに薬物動態の解析を遂行中である。興味深いことに、これらのうちいくつかの薬物については緑茶との同時投与によって対照群と比較し、血漿中濃度および尿中排泄量が著しく変動する結果が得られている。これまでに実施した臨床試験におけるデータ解析を進め、研究成果の発表を行うとともに、今回明らかとなった新たな緑茶ー薬物相互作用のメカニズムを解明するための細胞実験を計画する。食事性フラボノイドについては緑茶カテキンに加えてケルセチンやナリンジンを候補に加え薬食相互作用の解明に向けて研究を推進する。本研究は、緑茶カテキンを含む食事性フラボノイドが水溶性薬物の小腸上皮細胞における膜透過を制御することにより相互作用を起こすとの仮説に基づき、基礎実験ならびに臨床試験を実施し多角的なアプローチにより検証を試みるとともに、食事性フラボノイドと水溶性薬物との相互作用の臨床的意義を評価すること、およびその評価法を確立することを目的とする。これまでの研究から、エピガロカテキンガレート(EGCG)は緑茶と水溶性アドレナリンβ受容体遮断薬ナドロールの薬物動態学的相互作用に関与しており、健常人においてEGCGまたは市販の茶葉から煎れた緑茶は単回併用時においてもナドロールの血中濃度を有意に低下させることが示された。一方、EGCGはナドロールの腎排泄に影響しなかったことから、相互作用の機序として緑茶およびEGCGによるナドロールの消化管吸収抑制が示唆された。興味深いことに、緑茶を飲用した後、1時間はナドロールの体内動態への緑茶の影響が持続することが明らかとなった。さらにEGCGの摂取量が市販されている通常のペットボトル緑茶に含まれる量であってもナドロールの体内動態に影響することから、少なくともナドロールを用いた薬物治療中において緑茶の摂取は避けるべきであると考察された。本年度の研究計画のうち、EGCGと水溶性薬物の相互作用を調べる臨床研究は2つの臨床試験について試験を完了した。現在、そのうち1つについては論文執筆中であり、もう1つについては薬物血中濃度を解析中である。In vitro薬物輸送実験についてはナドロールに加えて新たな候補薬物を選定するとともに、対象とする薬物トランスポーターを決定し予備検討を始める予定である。食事性フラボノイドの血中および尿中濃度を測定し、これらの体内動態すなわちニュートリキネティクスを明らかにする研究計画については、現在までにEGCGの血中濃度測定法は確立し、ケルセチンについては検討中である。またこれらの臨床試験については現在試験計画を策定しているところである。前年度までに終了した臨床試験について、薬物血中濃度の測定およびデータの解析を完了させるとともに研究成果の学会および論文発表を目指す。また相互作用のメカニズムを解明するためのin vitro実験を実施する。さらに、相互作用を調べる水溶性薬物としてフェキソフェナジンを追加し、緑茶やEGCGと相互作用について基礎および臨床試験により検討する。食事性フラボノイドについてはEGCGに加えてケルセチンを、また食事性アルカロイドとしてピペリンを研究対象としてこれらによる薬食相互作用の可能性を検証することとする。本年度は生体サンプルの薬物濃度の測定法を構築するために想定以上の時間を要したため、実検体の測定をすべて完了するに至らなかったことが次年度使用額が生じた主な理由である。
細胞風呂敷による異種細胞集塊複合構造体の形成と機能評価

本研究では、酵素反応を介した酸化還元応答型ハイドロゲル形成を利用し、異なる形態と次元を有する細胞集塊からなるミニ組織構造の形成を目標とする。昨年度の実績を踏まえ、当初の目標であった異次元細胞集塊からなる異種細胞複合構造の形成を試みた。まず、シート状細胞構造体(細胞シート)の形成について、最適なチオール化ゼラチンとヘパリンの組み合わせを精査したところ、ゼラチンの前処理の違いがヘパリンとのハイブリッドゲルの形成において極めて重要なことを見出し、結果として、複数の増殖因子の包括固定と徐放を同時に達成することに成功した。これにより、NIH3T3線維芽細胞ならびにヒト臍帯静脈内皮細胞HUVEC細胞からなるシート形成の促進に成功した。次に、ハイドロゲル内部でのヒト肝癌由来HepG2細胞からなるスフェロイドの形成と、ハイドロゲル上部での細胞シート形成を同時に進行させることは可能なことを確認できたが、細胞シートの足場となるゲルの崩壊により、スフェロイドと細胞シートを融合することは困難であった。そこで、別途作製したスフェロイドを、ゲル上に接着・伸展しながら形成する細胞シートの上部に添加し、適当な条件下で足場を崩壊させるという新たなアイデアを検証したところ、目標とした細胞シートでスフェロイドをラッピングすることが可能なことを見出し、概念実証が可能な系であることを確認した。また、任意のペプチド・タンパク質成分を捕捉可能な部位として設計した融合タンパク質が導入された新規ハイドロゲルを足場として用いた細胞培養系を確立し、増殖因子と細胞接着ペプチドの同時導入による細胞増殖の高効率化を達成した。さらに新しい細胞培養の場としてリキッドマーブルを取り上げ、その内水相での生化学反応の進行ならびにハイドロゲル化の同時進行が可能なことを確認し、細胞培養の場としての可能性を評価した。1)異次元細胞集塊の同一反応場における形成と細胞集塊のラッピングチオール基修飾4分岐型ポリエチレングリコールと、チオール基修飾ゼラチンならびにヘパリンからなるハイブリッドゲルを調製し、その物理化学的特性を評価した。その結果、前処理方法の異なるゼラチンがヘパリンとのハイブリッドゲル形成と物理化学特性に多大な影響を与えることが明らかとなった。最適化されたハイブリッドゲルに、複数の増殖因子を包括固定し、ゲル上でNIH3T3線維芽細胞ならびにヒト臍帯静脈内皮細胞HUVEC細胞を培養したところ、2次元状の細胞シートの形成速度は足場となるゲルの特性と増殖因子の有無により大きく異なり、シート形成を効果的に促進可能な条件を決定することができた。その上で、市販のスフェロイド形成用プレートで作製したヒト肝癌由来HepG2細胞からなるスフェロイドを上述の細胞シート上に播種し、伸展した細胞シートの足場を還元条件下で崩壊させたところ、シートの収縮に伴い、スフェロイドが包括ラッピングされる様子が観察され、概念実証が可能なことを確認した。2)異種細胞増殖因子の捕捉・徐放が可能なハイドロゲルの設計と評価SpyTag融合塩基性線維芽細胞増殖因子とビオチン化細胞接着促進ペプチドを捕捉可能な新規融合タンパク質を設計し、これが導入された新規ハイドロゲルを足場として用いた細胞培養系を確立した。さらに細胞ラッピングをより簡便に実行するための場としてリキッドマーブルを選択し、その内水相での生化学反応とハイドロゲル化反応の同時進行が可能なこと、内水相での細胞培養が可能なことを確認した。これまでに得られた成果に立脚し、異次元細胞集塊からなる異種細胞複合構造の形成を試みる。シート状細胞構造体形成に対しては、最適化されたチオール化ゼラチンとヘパリンからなるハイブリッドゲルを有効に活用し、ヒト臍帯静脈内皮細胞HUVEC細胞からなる細胞シートによりヒト肝癌由来HepG2細胞からなるスフェロイドをラッピングすることで、スフェロイド機能が向上することを確認する。この時、ヘパリンによる多様な増殖因子の捕捉が、最終的に得られる高次の細胞集塊の高機能化に与える影響を検証する。さらに、本研究で確立された概念をリキッドマーブルの系へと展開する。特に、その内水相のハイドロゲル化と連動させることで、マーブルの中で形成されたスフェロイドを、マーブルを覆った細胞シートでラッピングする系へと展開することを試みる。このようにして、本研究の成果をよりハンドリングの容易な細胞ラッピング系へと展開し、本概念の一般化と社会実装を目指した検討を通して、3次元組織構造形成に対する新たな選択肢を提案することを最終目標とする。

そこで、別途作製したスフェロイドを、ゲル上に接着・伸展しながら形成する細胞シートの上部に添加し、適当な条件下で足場を崩壊させるという新たなアイデアを検証したところ、目標とした細胞シートでスフェロイドをラッピングすることが可能なことを見出し、概念実証が可能な系であることを確認した。また、任意のペプチド・タンパク質成分を捕捉可能な部位として設計した融合タンパク質が導入された新規ハイドロゲルを足場として用いた細胞培養系を確立し、増殖因子と細胞接着ペプチドの同時導入による細胞増殖の高効率化を達成した。さらに新しい細胞培養の場としてリキッドマーブルを取り上げ、その内水相での生化学反応の進行ならびにハイドロゲル化の同時進行が可能なことを確認し、細胞培養の場としての可能性を評価した。1)異次元細胞集塊の同一反応場における形成と細胞集塊のラッピングチオール基修飾4分岐型ポリエチレングリコールと、チオール基修飾ゼラチンならびにヘパリンからなるハイブリッドゲルを調製し、その物理化学的特性を評価した。その結果、前処理方法の異なるゼラチンがヘパリンとのハイブリッドゲル形成と物理化学特性に多大な影響を与えることが明らかとなった。最適化されたハイブリッドゲルに、複数の増殖因子を包括固定し、ゲル上でNIH3T3線維芽細胞ならびにヒト臍帯静脈内皮細胞HUVEC細胞を培養したところ、2次元状の細胞シートの形成速度は足場となるゲルの特性と増殖因子の有無により大きく異なり、シート形成を効果的に促進可能な条件を決定することができた。その上で、市販のスフェロイド形成用プレートで作製したヒト肝癌由来HepG2細胞からなるスフェロイドを上述の細胞シート上に播種し、伸展した細胞シートの足場を還元条件下で崩壊させたところ、シートの収縮に伴い、スフェロイドが包括ラッピングされる様子が観察され、概念実証が可能なことを確認した。2)異種細胞増殖因子の捕捉・徐放が可能なハイドロゲルの設計と評価SpyTag融合塩基性線維芽細胞増殖因子とビオチン化細胞接着促進ペプチドを捕捉可能な新規融合タンパク質を設計し、これが導入された新規ハイドロゲルを足場として用いた細胞培養系を確立した。さらに細胞ラッピングをより簡便に実行するための場としてリキッドマーブルを選択し、その内水相での生化学反応とハイドロゲル化反応の同時進行が可能なこと、内水相での細胞培養が可能なことを確認した。本研究では、酵素反応を介した酸化還元応答型ハイドロゲル形成を利用し、異なる形態と次元を有する細胞集塊からなるミニ組織構造の形成を目標とする。本年度は、3次元球状細胞集塊スフェロイド形成と、2次元細胞シート形成を、同一足場材料を用いて実現するための基礎検討を実施した。細胞接着能を有するゼラチン数種類に対し、化学修飾によりチオール基を導入し、これが導入されたハイブリッド型酸化還元応答ハイドロゲルを調製した。このハイドロゲル内で包括培養したヒト肝癌由来HepG2細胞はスフェロイドを形成したことから、基材との接着を抑制しつつ、細胞増殖に必要な栄養成分やタンパク質因子は通過するハイドロゲルの設計が可能であることを明らかにした。
「幹細胞工学→再生医療」における、病理組織学的ナノ・トレースシステムの創製

現在、諸外国に対し日本が競争力を有す分野であるナノテクノロジーとバイオテクノロジーを融合させた国家戦略としてのグランドデザインを必要としている。しかしながら現状の問題点としてバイオ・ナノテクノロジー融合領域に対するグランドデザインの欠如、両領域に精通する人材の不足、異分野融合を発展する体制の不備が挙げられている。これまで骨髄間葉系細胞無機人工骨を用いての骨再生に多くの知見を有し,医薬品GCP基準に合致する施設の立ち上げを既に終了しており、ヒト細胞を用いた臨床応用をする準備はできている。ヒト細胞の増殖をコントロールし移植への系を確立することは移植医療の新たなパラダイムの獲得につながると考えられている。ここまで述べてきたことは現段階での再生医学における最先端の事項であり,より汎用性のある骨髄間質細胞を用いた再生医療と,その成果に関する病理学的な評価システムの構築を目指している。成体体性幹細胞の臨床応用を実現するために、1)成体骨髄由来の多分化能体性幹細胞の株化、2)多様な幹細胞を識別するためのマーカー分子の同定と各幹細胞を効率的に分離する技術の確立、3)多分化能体性幹細胞から特定の細胞を分化誘導するための分化因子の同定を目指し、再生医療に対する基盤技術を確立した。幹細胞内に蓄積しやすい比較的大きな分子として留まる。本研究においてSPIOによるMRI造影剤の可能性を追求し、再生医療にむけてナノテクノロジーを用いた新素材を応用することにより、医療面における安全性を保持したままで、移植後,数時間から1日といった治療後極めて早期に、MRIにより検証できる。これらの技術を用いて極めて低侵襲の,再生医療に対する検証システムを開発する。間葉系幹細胞は、試験管内においても生体内においても既に分化形質を明瞭に示すことが可能となっている。また、間葉系幹細胞を生体外で培養することで増殖させることに成功しており、分離同定するための条件は揃っているが、これらの細胞も通常の培養では、その細胞増殖には限界があり細胞治療への応用までは至っていない。本研究では、細胞治療の臨床応用に向け、細胞の生着率、分化効率などの評価を生体内で追跡し、治療にフィードバックする系を確立することおよびその成果に関する病理学的な評価システムの構築を目標とした。1.再生医療に用いる組織幹細胞の分化誘導系の確立成体骨髄由来の多分化能体性幹細胞の株化、多様な幹細胞を識別するためのマーカー分子の同定、各幹細胞を効率的に分離する技術の確立、間葉系幹細胞を安全かつ効率的に培養する技術の確立、間葉系幹細胞から多分化能体性幹細胞を誘導するための脱分化技術の確立、多分化能体性幹細胞および間葉系幹細胞から特定の細胞を分化誘導するための分化因子の同定、を行った。2.生分解性を有する、組織に特異的な足場の開発本申請においては,近年注目を集めているスーパーパラマグネティック・鉄オキサイド粒子(スパイオ)を用いることで、これにより幹細胞内に蓄積しやすい分子として留まることが可能か、また、細胞の追跡マーカーとして十分に機能するかどうかを検討した。日常の診断検査に有用であることを特に念頭におき、再生医療・細胞移植における磁気共鳴画像診断装置(MRI)で撮影する際の造影剤としてスーパーパラマグネティック・鉄オキサイド粒子を、移植する細胞のトレーサーとして用いた。従来の磁気共鳴画像造影剤であるスーパーパラマグネティック・鉄オキサイド粒子を目的の細胞に試験管内にて導入する。細胞移植後、スーパーパラマグネティック・鉄オキサイド粒子よる磁気共鳴画像造影剤を用いることで、細胞移植の妥当性を検討した。幹細胞内に蓄積しやすい分子として留まることが可能となり、細胞の追跡マーカーとしての機能は十分である。我々は細胞移植の妥当性については、移植された組織を採取することにより、病理組織学的に検討をすすめてきた。本研究においてスーパーパラマグネティック・鉄オキサイド粒子による磁気共鳴画像造影剤の可能性を追求し、再生医療にむけてナノテクノロジーを用いた新素材を応用することにより、医療面における安全性を保持したままで、移植後,数時間から1日といった治療後極めて早期に、MRIにより検証できた。このことは、極めて低侵襲性の,再生医療に対する検証システムが開発されることを意味する。

本研究においてSPIOによるMRI造影剤の可能性を追求し、再生医療にむけてナノテクノロジーを用いた新素材を応用することにより、医療面における安全性を保持したままで、移植後,数時間から1日といった治療後極めて早期に、MRIにより検証できる。これらの技術を用いて極めて低侵襲の,再生医療に対する検証システムを開発する。
低速陽電子ビームによる高分子薄膜材料中のナノ空隙評価

高分子の諸特性は原子レベルの大きさのナノ空隙と深く関係があると考えられる。一方、高分子薄膜の表面・界面における性質を明確にすることは、保護膜、高品質複合材料、マイクロエレクトロニクス用の高分子薄膜など、多くの応用面において重要であるが、界面などに存在する空隙を直接測定することにより材料評価を行なうことはこれまでほとんど行なわれてきていない。そこで、材料の諸特性がナノ空隙に帰属すると考え、その関係を明らかにすることを目的とした、高分子多層膜における界面研究を行なった。係数率を向上させるため、シミュレーションおよび実測データに基づき電極や機器類の検討、調整を行い、ドップラーブロードニングエネルギー拡がり測定を行うためのビームラインの実用化に成功した。構築した装置を利用し、poly(methylphenylsilane)、poly(methyl-n-propylsilane)高分子薄膜の測定、および、その2つのサンプルに金を蒸着させることによってできた金-高分子界面の研究を行なった。実験はサンプル内にて放出されたγ線の検出された時刻と、陽電子の入射時刻に関わるチョッパーのタイミングとの時間差からサンプル内における陽電子寿命を測定し、表面からバルク、そして界面というように深さ方向に対する寿命測定を行い評価された。解析により、金蒸着過程によってpoly(methylphenylsilane)層における層の構造に変化が生じることを明らかにした。また、フェニル置換ポリシランは金蒸着過程により、特に影響が及ぼされることが明らかになった。一方、高分子薄膜の表面・界面における性質を明確にすることは、保護漠、高品質複合材料、マイクロエレクトロニクス用の高分子薄膜など、多くの応用面において重要であるが、界面などに存在する空隙を直接測定することにより材料評価を行うことはこれまでほとんど行われてきていない。そこで、材料の諸特性がナノ空隙に帰属すると考え、その関係を明らかにすることを目的とした高分子多層膜における界面研究を行った。まず、放射線源より放出される陽電子を材料研究に応用するために低速陽電子ビームラインの構築を行った。構築した装置を利用し、poly(methylphenylsilane)(PMPS)/poly(vinyl alcohol)(PVA)高分子多層膜の界面研究を行った。実験はサンプル内にて放出されたγ線のスペクトル解析により得られるSparameter、Wparameterの2つのパラメーターによって評価した。また、金をPMPS上に蒸着することにより、バルク内部の空隙量変化を生じさせることができるため、金蒸着を行ったサンプルを比較として測定した。解析により、金蒸着過程によってPMPS層における層の構造に変化が生じる明らかにした。また、PMPSバルク層と界面付近の層とで構造変化があることが示唆された。この実験により高分子多層膜に対してドップラーブロードニング測定を行いSparameter-Wparan eter曲線をプロットすることで、陽電子のトラッピングサイトの追跡を行うことができ、それは高分子多層膜の界面研究において有効であることを示すことができた。
痙攣性疾患における神経伝達物質の動態に関する組織化学的研究

本研究の目的は痙攣の病態における神経伝達物質の動態を形態学的に追究することであった。本研究では神経伝達物質として、すでに研究代表者によってその免疫組織化学法が確立されているセロトニンをとりあげ、疫攣重積状態の実験モデルとして高温負荷による疫攣マウスおよびピロカルピン(コリンのアゴンスト)投与による疫攣マウスを用いた。セロトニンニュ-ロン系の動態を組織化学的により客観的に評価するために、MOPシステムを利用した画像解析を導入し、セロトニン線維の分布密度について統計学的に検討した。この結果、下記のように線条体において著しい変化がみられた。1.対照群のマウスの線条体で、セロトニン線維が不均一に分布する。2.高温負荷により、尾側部を除く線条体でセロトニン線維の増加(セロトニン免疫染色性の増強)がみられる(p<0.01)。3.高温負荷による疫攣群では、線条体のすべての領域で、セロトニン免疫染色性の著減が認められ(p<0.01)、対照群の2030%に減少する。4.ピロカルピン投与による痙攣群でも、セロトニン免疫染色性は吻側および尾側の線条体で減少するが、減少の程度は高温負荷による疫攣群の方が有意に著しい(p<0.01)。5.一方、高温群、高温負荷による痙攣群、ピロカルピン投与による疫攣群の新皮質におけるセロトニン免疫染色性には、対照群と比較して有意差を認めない。以上より、痙攣の病態には線条体が大きな役割を有していること、さらに線条体における分布密度が低く余り注目されていなかったセロトニンが、高温にともなう痙攣(臨床的には脳症、てんかん、熱性痙攣)において重要な機能をはたしている可能性が示唆された。実験動物としてはマウスを用い、高熱によって痙攣を誘発させ、痙攣直後のセロトニンニューロン系の形態学的変化を高感度の免疫組織化学法を駆使して検索した。具体的には、生後12週、同腹の雄マウス(JclーICR)を50°Cの高温環境下に置き痙攣を誘発させる(痙攣群)。痙攣直後に左心室より4%パラホルムアルデヒド溶液を用いて灌流固定し、セロトニンの免疫組織化学法をほどこし脳の連続切片標本を作製する。高温負荷をかけ痙攣を起こさないマウス(高温群)、高温負荷をかけないマウス(対照群)についても同様に免疫組織標本を作製する。線条体に焦点をあて光学顕微鏡的観察の結果、以下の新知見が得られた。1.対照群のマウスの線条体でセロトニン線維の分布に不均一性があり吻側より尾側、背側より腹側、内側より外側で分布密度が高い。2.高温群では対照群に比し、尾側部を除いて線条体におけるセロトニン線維の増加(免疫染色性の増加)が認められる。3.痙攣群では線条体のすべての部位で、セロトニン線維の免疫染色性が著減する。4.一方、新皮質や淡蒼球では、対照群・高温群・痙攣群の各群でセロトニン線維の分布密度に変動は認めない。以上の結果より、セロトニンニューロン系は高温一痙攣の過程で、極めてダイナミックに変動し、とくに線条体におけるセロトニンの役割が重要と考えられる。さらに、線条体内でもセロトニンニューロンの態度は著しく異なり、現在MOPシステムを利用した組織化学的定量法により詳細な検討を加えている。今後、他の痙攣モデルマウス(ピロカルピン負荷など)について、同様の免疫組織化学的研究を行ない、痙攣の病態におけるセロトニンの動態および役割を追及する予定である。本研究の目的は痙攣の病態にとける神経伝達物質の動態を形態学的に追究することであった。

本研究では神経伝達物質として、すでに研究代表者によってその免疫組織化学法が確立されているセロトニンをとりあげ、疫攣重積状態の実験モデルとして高温負荷による疫攣マウスおよびピロカルピン(コリンのアゴニスト)投与による疫攣マウスを用いた。セロトニンニュ-ロン系の動態を組織化学的により客観的に評価するために、MOPシステムを利用した画像解析を導入し、セロトニン線維の分布密度について統計学的に検討した。この結果、下記のように線条体において著しい変化がみられた。1.対照群のマウスの線条体で、セロトニン線維が不均一に分布する。2.高温負荷により、尾側部を除く線条体でセロトニン線維の増加(セロトニン免疫染色性の増強)がみられる(P<0.01)。3.高温負荷による疫攣群では、線条体のすべての領域で、セロトニン免疫染色性の著減が認められ(P<0.01)、対照群の2030%に減少する。4.ピロカルピン投与による痙攣群でも、セロトニン免疫染色性は吻側および尾側の線条体で減少するが、減少の程度は高温負荷による疫攣群の法が有意に著しい(P<0.01)。5.一方、高温群、高温負荷による痙攣群、ピロカルピン投与による疫攣群の新皮質におけるセロトニン免疫染色性には、対照群と比較して有意差を認めない。以上より、痙攣の病態には線条体が大きな役割を有していること、さらに線条体における分布密度低く余り注目されていなかったセロトニンが、高温にともなう痙攣(臨床的には脳症、てんかん、熱性痙攣)において重要な機能をはたしている可能性が示唆された。
マイクロマシン材料の機械的特性とそのスケール効果の研究

(1)マイクロマシン用薄膜を対象とする引張り試験チップの構造設計,および荷重・変位測定系の機構設計を行い,準静的引張り試験システムならびに引張モードの疲労試験システムを実現した.(2)単結晶シリコン(任意方位),多結晶シリコン,シリコン酸化膜,シリコン窒化膜についてそれぞれ試験チップの製作プロセスを確立し,それぞれについて引張り試験を実施した.(3)オンチップ引張試験法の有用性を実証するため,標準材料として単結晶シリコン薄膜の3方位に対して引張試験を行い,各方位のヤング率と破断ひずみを測定した.一方,バルク材に対して3点曲げ試験を行い,両試験から得たヤング率の比較からオンチップ引張試験法の精度を検証した.オンチップ試験法ではいずれの結晶方位に対しても単軸引張りによる伸びひずみの値はほぼ5%に達し,3点曲げ試験よりはるかに大きい値を得た.またオンチップ試験法においても試験片の寸法が小さいと破断ひずみが大きくなることが判った.これは,破断を決める最大寸法の欠陥の存在確率が試験片長さに依存するからだと考える.(4)単結晶シリコン試験片に対して繰り返し荷重試験を行った結果,加えたひずみレベルが大きいと破壊寿命が小さくなる傾向を見いだした.繰り返し荷重環境下における単結晶シリコンの破壊メカニズムを考察した.(5)きわめて高い引張り応力のもとで破壊に至るシリコン単結晶試験片の亀裂付近の挙動をカーボンナノチューブをプローブ先端に付けたAFMによりin-situ計測し,室温下での塑性変形の存在の可能性を見いだした.(6)シリコン窒化膜では厚さ0.1ミクロンの膜の単軸引張り試験を実現したが,さらに薄い膜では表面エネルギの効果が機械的特性に影響する可能性があるので,今後,厚さが1桁小さい0.01ミクロンオーダーの極薄膜の引張り試験を実施すべく,新しい装置を設計した.(1)マイクロマシン用薄膜を対象とする引張り試験チップの構造設計,および荷重・変位測定系の機構設計を行い,準静的引張り試験システムならびに引張モードの疲労試験システムを実現した.(2)単結晶シリコン(任意方位),多結晶シリコン,シリコン酸化膜,シリコン窒化膜についてそれぞれ試験チップの製作プロセスを確立し,それぞれについて引張り試験を実施した.(3)オンチップ引張試験法の有用性を実証するため,標準材料として単結晶シリコン薄膜の3方位に対して引張試験を行い,各方位のヤング率と破断ひずみを測定した.一方,バルク材に対して3点曲げ試験を行い,両試験から得たヤング率の比較からオンチップ引張試験法の精度を検証した.オンチップ試験法ではいずれの結晶方位に対しても単軸引張りによる伸びひずみの値はほぼ5%に達し,3点曲げ試験よりはるかに大きい値を得た.またオンチップ試験法においても試験片の寸法が小さいと破断ひずみが大きくなることが判った.これは,破断を決める最大寸法の欠陥の存在確率が試験片長さに依存するからだと考える.(4)単結晶シリコン試験片に対して繰り返し荷重試験を行った結果,加えたひずみレベルが大きいと破壊寿命が小さくなる傾向を見いだした.繰り返し荷重環境下における単結晶シリコンの破壊メカニズムを考察した.(5)きわめて高い引張り応力のもとで破壊に至るシリコン単結晶試験片の亀裂付近の挙動をカーボンナノチューブをプローブ先端に付けたAFMによりin-situ計測し,室温下での塑性変形の存在の可能性を見いだした.(6)シリコン窒化膜では厚さ0.1ミクロンの膜の単軸引張り試験を実現したが,さらに薄い膜では表面エネルギの効果が機械的特性に影響する可能性があるので,今後,厚さが1桁小さい0.01ミクロンオーダーの極薄膜の引張り試験を実施すべく,新しい装置を設計した.(1)薄膜材料の機械的特性評価のため開発したオンチップ引張試験で,単結晶シリコンの3方位について準静的な引張試験を実施しヤング率を求めた.厚さ1421μm,幅80μm,長さ400μmの単結晶シリコンのヤング率の平均値は,〈100〉〈110〉〈111〉方向でそれぞれ120,157,180GPa.であった.これとは独立して実施した厚さ400μmの単結晶シリコンの3点曲げ試験の結果は,それぞれの方位に対して131,170,181GPa,であった.両者を比較した結果その差は数%であり,オンチップ引張試験における応力,ひずみの測定精度が検証できた.(2)シリコン化合物についてオンチップ引張試験を実施するため,シリコン酸化膜,窒化膜についてそれぞれの試験チップを作成する加工プロセスを研究した.前者は,一旦シリコン単結晶試験片を製作した後,これを熱酸化する方法,後者は,予め表面に形成した窒化膜を試験片形状にエッチングした後,試験片を保護しながら他の機構部分を製作する方法をとった.1回のRIEと2回の結晶異方性エッチングからなる加工プロセスを開発し,いずれの試験片も作成できる見通しが得られた.(3)これまでの準静的な試験に加え,動的試験,疲労試験などの様々な負荷形態を実現する試験システムを設計し製作した.最小荷重分解能は0.1grf,試験可能周波数は0.00150Hz,負荷速度は1μm/時間500mm/秒であり,オンチップ引張試験に適用した場合,最大ひずみ速度200/秒が得られる.(1)シリコン化合物薄膜の機械的特性測定にオンチップ引張試験を適用した。シリコン酸化膜、窒化膜について、それぞれ試験チップを作成する加工プロセスを開発し、引張試験を実施した。

湿式熱酸化法で形成した膜厚2μmのシリコン酸化膜は破断応力1.9GPa、破断歪み2.5%、ヤング率74GPaを示し、一方、LPCVD法で形成したシリコン窒化膜は破断応力13.9GPa、破断歪み3.8%、ヤング率370GPaを示した。例えばバルク材の窒化シリコンの破断応力0.170.375GPaに比べて、薄膜材の強度が高いことが実証された。(2)準静的な試験に加え、動的試験、疲労試験などの様々な負荷形態を実施する試験システムを製作し、シリコン単結晶試験片を使って疲労試験を開始した。(3)単結晶シリコンで膜厚が1μm以下の極薄膜ダイヤフラムを製作する加工プロセスを研究し、膜厚0.30.9μmのダイヤフラムを形成した。これに差圧を負荷して内部応力ならびにヤング率を求めた結果、膜厚0.5μm以下のダイヤフラムでは膜厚が大きいものに比べて、ヤング率の低下が認められた。(4)機械的特性のスケール効果を引張試験で評価する目的で、膜厚0.5μm以下の極薄膜の引張り試験を行うための超低荷重用ロードセルを設計した。これは天秤と電磁アクチュエータからなる熱分析用バランスの原理を応用したもので、測定荷重レンジ±2g、荷重分解能1μgの達成を目指す。(1)オンチップ引張試験法の有用性を実証するために,標準材料として試験片の寸法が異なる単結晶シリコン薄膜の引張試験を行い,破断ひずみを測定した.これと並行して,バルク材に対しては3点曲げ試験を行って試験の結果を比較した.オンチップ引張試験法では単軸引張りによる伸びひずみの値は5%に達した.他方,バルクの3点曲げ試験の結果は1%以下に留まり,オンチップ法では試験片に大きなひずみを加えられることを実証した.また,オンチップ試験法においても試験片の寸法が小さいと破断ひずみが大きくなることが判った.これは,破断を決める最大寸法をもつ欠陥の存在確率が試験片長さに依存するからだとえる.(2)単結晶シリコン試験片に対して繰り返し荷重試験を行った結果,加えたひずみレベルが大きいと破壊寿命が小さくなる傾向を見いだした.これまでの研究では,シリコンは疲労現象を示さないといわれているが,実験結果は現象的にこれに反している.試験環境の大気に存在する水が亀裂の拡大に寄与(応力腐食)した可能性が考えられるが,次項(3)の結果から,真の疲労現象の可能性も捨てきれない.(3)高い引張り応力のもとで破壊に至るシリコン単結晶試験片の亀裂付近の挙動を観察するため,AFMプローブの先端にカーボンナノチューブを取り付けて,亀裂のプロフィルの時間変化をin-situ計測した.この結果から,室温下での塑性変形の存在の可能性を見いだした.今後,慎重にその裏付けをする必要がある.以上の結果のうち,(2)(3)は,単結晶シリコンは常温では(少なくとも600°C以下では)引張り負荷モードで塑性変形,ならびに疲労を示さないという従来の常識に反するものである.今後の慎重な裏付け作業を必要とするが,微小材料にたいしてこれまでになく高いレベルの制御された応力を加えられる本試験法の特徴を生かして,新現象の追求にあたりたい.
超分子Gd(III)錯体の自発的形成を用いる高緩和性MRIコントラスト剤の創製

高緩和性MRIコントラスト剤創製に向け,前年度に引き続き1.超分子Gd(III)錯体の構造解析,および新たに2.速度論的安定性の評価を行った.2.超分子錯体の速度論的安定性は,MRI造影剤への応用の前提となる.前年度その存在を明らかにしたAg^I_2・Tb^<III>・TCAS_2錯体について,キャピラリー電気泳動反応器により加溶媒分解反応速度定数k_dを3.1×10^<-3>s^<-1>と決定した.これは半減期t_<1/2>=3.8分に相当し速度論的安定性の向上が必要であった.そこでAgリンカーを用いないランタニド-TCAS二元系について種々検討した結果,Tb^<III>過剰の条件でTb^<III>_3・TCAS_2錯体を得た.k_dを決定したところ5.5×10^<-4>s^<-1>(t_<1/2>=21分)となり,安定性の向上に成功した.また配位水分子数は2.2となり,Gd^<III>_3・TCAS_2錯体の高緩和性が示唆された.当年度は高緩和性MRIコントラスト剤創製に向け,(1)超分子Gd(III)錯体の自発的形成条件の精査と構造解析,(2)チアカリックスアレーン(TCAS)リンカーの探索を行った.(1)モデルとなるAg-Tb-TCAS系の錯形成条件を検討した.pH6.0で発光性錯体を生成し,ES-MS解析の結果組成をAg_2・Tb_2・TCAS_2と決定した.これは2個のTCASが2個のAg(I)イオンでリンクされたdouble cone型構造をしており,2個のTb(III)は上下のTCASからO,S,O配位を受けている構造であると推定した.発光寿命解析により配位水分子数を2.4と決定した.これは高緩和性の要件の一つ,ランタニド中心に配位水を多数持つことを満足する.次いで同条件下でAg-Gd-TCAS系について錯体の組成を解析した.生成した錯体の組成はAg_3・Gd・TCAS_2となり,Ag_2・Tb_2・TCAS_2のTb(III)サイトの一つをAg(I)で置換した構造であると推定した.Tb(III)とGd(III)とはイオン半径はわずかに0.02Å異なるに過ぎないが,超分子構造形成において高度なイオン半径認識が行われていることがわかる.なお,Ag-Tb-TCAS系ではpH10.0において超分子錯体Ag_2・Tb・TCAS_2を形成したが,Ag-Gd-TCAS系ではAg_3・Gd・TCAS_2とAg_2・Gd_2・TCAS_2とが混在していることがES-MSの結果確かめられた.高緩和性MRIコントラスト剤創製に向け,前年度に引き続き1.超分子Gd(III)錯体の構造解析,および新たに2.速度論的安定性の評価を行った.2.超分子錯体の速度論的安定性は,MRI造影剤への応用の前提となる.前年度その存在を明らかにしたAg^I_2・Tb^<III>・TCAS_2錯体について,キャピラリー電気泳動反応器により加溶媒分解反応速度定数k_dを3.1×10^<-3>s^<-1>と決定した.これは半減期t_<1/2>=3.8分に相当し速度論的安定性の向上が必要であった.そこでAgリンカーを用いないランタニド-TCAS二元系について種々検討した結果,Tb^<III>過剰の条件でTb^<III>_3・TCAS_2錯体を得た.k_dを決定したところ5.5×10^<-4>s^<-1>(t_<1/2>=21分)となり,安定性の向上に成功した.また配位水分子数は2.2となり,Gd^<III>_3・TCAS_2錯体の高緩和性が示唆された.
チリ、イースター島住民にみられる重金属汚染の健康影響に関する研究

イースター島島民の毛髪中重金属濃度(アルミニウム(Al)、鉛(Pb)、水銀(Hg)、ニッケル(Ni)、銀(Ag)が高いことが我々のpilot studyで判明し、昨年度インフォームド・コンセントが得られた健常な島民68人(男性21人:平均年齢30.0±12.55歳、女性47人:34.7±14.07歳;有意差なし)の毛髪中重金属及びその他の元素濃度分析を高周波誘導結合プラズマ質量分析法を用いて行った。その結果Al、Pb、Hg及びAgは依然高値を示す島民が認められ、またマグネシウム(Mg)、カリウム(K)、ヨード(I)及びチタン(Ti)も正常値より高いことが確認された。今年度は、イースター島島民の毛髪中濃度にどのような因子が関与しているか、特に食事因子に注目して調査した。個人面接によって、昨年度と同じ健常な島民68人からライフスタイルについて情報を得た。特に食事内容について詳細に調査した。このライフスタイル調査結果と毛髪中重金属及びその他の元素濃度分析結果との関連を分析検討した。まず、性差が認められたのは、砒素(As)、ナトリウム(Na)、ホウ素(B)及びジルコニウム(Zr)であった。年齢との間に正の相関関係が認められのは、ルビジウム(Rb)とKであった。負の相関関係はストロンチウム(Sr)、Mg、バナジウム(V)、カルシウム(Ca)に認められた。Rb、クロム(Cr)及びKに喫煙係数と正の相関関係が認められた。Ethnic group間や毛髪美容による有意な差は認められなかった。また、飲料水源による差も認められなかった。食事因子と相関係数rが0.3以上有意に認められた元素は、Hg、硫黄(S)、Ni、カドミウム(Cd)、リン(P)及びRbであった。そのうち、Hgと食事因子との関連が最も強く認められた。Hgは「fish」摂取(r=0.540,p=0.000)と強い相関(r=0.540,p=0.000)が認められた。その種類ではKokomas(r=0.435)とPisisigue(r=0.404)が有意であった。また、「meat」とも有意な相関(r=0.369)が認められた。重回帰分析の結果、「fish」との関連が最も強かった。Niは「spagetti」とCdは「cereals」と有意な相関を認めた。SとPは缶詰食品との関連を認めた。今後結果の再現性を確認し、島民の健康調査を行う必要がある。毛髪中の元素濃度は栄養状態の指標として、また臨床症状出現前のスクリーニングとして注目されていることから、昨年イースター島において島民60人の毛髪を採取し含有微量元素の分析を行った。その結果、アルミニウム(Al)、鉛(Pb)、水銀(Hg)、ニッケル(Ni)、銀(Ag)の毛髪中濃度が極めて高い島民の多いことが判明した。今年度は、この結果を確認し、人種等の影響があるか検討した。イースター島の島民71人から本調査に対するインフォームド・コンセントが得られ、その内68人(男性21人:平均年齢30.0±12.55歳、女性47人:34.7±14.07歳)から後頭部付近の頭皮から約3cm部分の毛髪を0.5g採取できた。毛髪試料はLAEA法にて洗浄、乾燥し、濃硝酸と濃塩酸で分解し、Erlenmeyer flaskに入れ、非イオン水5mlにて希釈した。重金属を含む39元素濃度の測定は、高周波誘導結合プラズマ質量分析法を用いて実施した。その結果、AL、Pb、Hg及びAgは依然高く、チタン(Ti)も非常に正常値より高いことが確認された。また、生体必須元素濃度の多くが正常値より高く、重金属汚染と共に必須元素が豊富である事が認められた。性、年齢、ethnic group間、また毛髪美容による有意な差は認められず、その他のライフスタイルの影響が大きいと推察された。そのため、来年度は問診票を用いて、基礎疾患や薬剤の投与の有無及びライフスタイルなどについて質問し、元素濃度との関連を調べる。特に食事内容については、島原産の食物を中心とする食事或いはチリ本国から輸入した食品を多く摂取するか、また海産物を主とするか否かについて特に詳細に調査する。飲料水については、水源の種類、位置、使用状況について調査する。

このライフスタイル調査結果と毛髪中重金属及びその他の元素濃度分析結果との関連を分析検討した。まず、性差が認められたのは、砒素(As)、ナトリウム(Na)、ホウ素(B)及びジルコニウム(Zr)であった。年齢との間に正の相関関係が認められのは、ルビジウム(Rb)とKであった。負の相関関係はストロンチウム(Sr)、Mg、バナジウム(V)、カルシウム(Ca)に認められた。Rb、クロム(Cr)及びKに喫煙係数と正の相関関係が認められた。Ethnic group間や毛髪美容による有意な差は認められなかった。また、飲料水源による差も認められなかった。食事因子と相関係数rが0.3以上有意に認められた元素は、Hg、硫黄(S)、Ni、カドミウム(Cd)、リン(P)及びRbであった。そのうち、Hgと食事因子との関連が最も強く認められた。Hgは「fish」摂取(r=0.540,p=0.000)と強い相関(r=0.540,p=0.000)が認められた。その種類ではKokomas(r=0.435)とPisisigue(r=0.404)が有意であった。また、「meat」とも有意な相関(r=0.369)が認められた。重回帰分析の結果、「fish」との関連が最も強かった。Niは「spagetti」とCdは「cereals」と有意な相関を認めた。SとPは缶詰食品との関連を認めた。今後結果の再現性を確認し、島民の健康調査を行う必要がある。
有向グラフへの大域解析的アプローチ

コンパクト多様体M上に余次元1葉層Fがあるとき,(M,F)に有向グラフGをある意味で一意的に対応させることが出来る.更に,得られたGをMに「うまく」埋め込むことができ,これによりMとGの幾何学的な情報を対応させることができる.例えば,GからMへの埋め込みから誘導される基本群の準同型写像は1対1になることがわかる.これと,良く知られたNovikovのコンパクト葉の存在定理から,3次元球面上の滑らかな余次元1葉層に対応するグラフは全てTreeになっていることがわかる.また,逆に,任意の有限な有向グラフGに対して,それに上記のような関係にある余次元1の葉層構造(M,F)を構成することが出来る.従って,GからMへの「うまい」埋め込みを通して,多様体M上のいろいろな概念をGに導入することが可能になる.今回の研究では,(M,F)の平均曲率関数に関した部分について特に詳しく調べてみた.これにより,以前定義した,有向グラフ上の「許容関数」と葉層化多様体上の「許容関数」は基本的には同じ事が示された.その過程で,多様体のリーマン計量,関数,体積要素,境界,(+)-fcd等の概念を有向グラフ上の概念に移し変えることができた.これによって,最近グラフ理論の中で活発に研究されている,所謂,ラプラシアンについてももう少し精密化できて,境界作用素の双対としてのコバウンダリ-作用素の定義や,それに伴って,Stokesの公式タイプのものも得ることが出来た.以上のような結果については,現在論文としてまとめ,投稿中である.これらの結果を実際に有効グラフに応用することについては,残念ながらまだこれという結果は得ていない.コンパクト多様体M上に余次元1葉層Fがあるとき,(M,F)に有向グラフGをある意味で一意的に対応させることが出来る.更に,得られたGをMに「うまく」埋め込むことができ,これによりMとGの幾何学的な情報を対応させることができる.例えば,GからMへの埋め込みから誘導される基本群の準同型写像は1対1になることがわかる.これと,良く知られたNovikovのコンパクト葉の存在定理から,3次元球面上の滑らかな余次元1葉層に対応するグラフは全てTreeになっていることがわかる.また,逆に,任意の有限な有向グラフGに対して,それに上記のような関係にある余次元1の葉層構造(M,F)を構成することが出来る.従って,GからMへの「うまい」埋め込みを通して,多様体M上のいろいろな概念をGに導入することが可能になる.今回の研究では,(M,F)の平均曲率関数に関した部分について特に詳しく調べてみた.これにより,以前定義した,有向グラフ上の「許容関数」と葉層化多様体上の「許容関数」は基本的には同じ事が示された.その過程で,多様体のリーマン計量,関数,体積要素,境界,(+)-fcd等の概念を有向グラフ上の概念に移し変えることができた.これによって,最近グラフ理論の中で活発に研究されている,所謂,ラプラシアンについてももう少し精密化できて,境界作用素の双対としてのコバウンダリ-作用素の定義や,それに伴って,Stokesの公式タイプのものも得ることが出来た.以上のような結果については,現在論文としてまとめ,投稿中である.これらの結果を実際に有効グラフに応用することについては,残念ながらまだこれという結果は得ていない.
HTLV-I関連リンパ節病変の進展とウイルスの役割

ATLL(成人性T細胞性白血病、リンパ腫)のウイルスの関与と遺伝子変化を臨床分子病理学的に検索した。欧米では、非ホジキン悪性リンパ腫の多くのものがB細胞性リンパ腫であるが、本邦、特に九州では、T細胞性リンパ腫が多く、ATLLが多いためと考えられている。572例のリンパ節性のT細胞性リンパ腫のHTLV-Iプロウイルスの検索で、3群に分けられた。(A)クローナルなHTLV-Iブロウイルスのみられる、いわゆるATLL(adult T cell leukemia/lymphoma)(247例)、(B)ATLA陽性もしくはPCR法によりHTLV-Iウイルスが陽性だが、クローナルなHTLV-Iプロウイルスはみられない、いわゆるHTLV-Iキャリアに発生したと考えられるT細胞性リンパ腫(66例)、(C)ATLA陰性もしくは、PCR法によりHTLV-Iウイルスが陰性の、HTLV-Iと関係のないT細胞性リンパ腫(259例)に分けられた。明らかにA群は予後不良であった(Br J Haematol 1998,101:703-11)。HTLV-Iの組込み部位をInverse-PCRとFISHを用い確認した。組込み部位はランダムであった。18例中15例のATLLで、HTLV-Iの組込みのある染色体に異常が見られた。とくに単純な染色体異常しかない症例2例では、HTLV-Iの組込みはこの単純な異常を示す染色体に見られ、HTLV-I組込みと染色体異常に関連がみられる傾向があった(Cancer Letters1998,132,203-12)。腫瘍の免疫逃避機構の一部として、FasLに結合するDcR3(decoy receptor 3)が発見されている。HTLV-IおよびEBV(Epstein-Barr virus)ウイルス関連リンパ腫で検索したところ7例のATLLでDcR3の遺伝子増幅、発現が見られた。またEBV関連リンパ腫でもDcR3の遺伝子増幅、発現が見られた。一方コントロールと使用した反応性リンパ節、およびウイルスの関与していないB細胞性リンパ腫では、DcR3の遺伝子増幅、発現はほとんど見られなかった(Cancer Letter,2000,160,89-97)。チェックポイント異常と発癌との関係をみるため、RT-PCRを使用しチェックポイント蛋白のBUB-1のポイントミュテーションで遺伝子配列を決定し検索した。hBUB1,hBUBR1のミュテーションが10例中5例のATLLみられた。一方、B細胞性リンパ腫6例では1例にnon-sense mutationがみられたのみであった。また遺伝子不安定性を検索するため、Bax遺伝子、TGF-βII遺伝子の繰り返し配列の数の異常も検索したが、異常は見られなかった。(Cancer Lctters,2000,158,141-50)ATLL(成人性T細胞性白血病、リンパ腫)のウイルスの関与と遺伝子変化を臨床分子病理学的に検索した。

また遺伝子不安定性を検索するため、Bax遺伝子、TGF-βII遺伝子の繰り返し配列の数の異常も検索したが、異常は見られなかった。(Cancer Lctters,2000,158,141-50)組織診断、細胞診断、免疫染色にてリンパ腫の診断を確定し、HTLV-Iプロウイルスのクローナルな組み込みをSouthernblot法により検索したATLL(成人性T細胞性白血病、リンパ腫)10例、コントロールとしてB細胞性リンパ腫6例を使用し、チェックポイント異常と発癌との関係をみるため、RT-PCRを使用し、チェックポイント蛋白のBUB-1のポイントミュテーションを遺伝子配列を決定し、検索した。hBUB1,hBUBR1のミュテーションが10例中5例みられた。この5例の内訳は、missense mutationが3例、non-sense mutationが1例、47bp欠損が1例であった。一方、B細胞性リンパ腫6例では1例にnon-sense mutationがみられたのみであった。また遺伝子不安定性を検索するため、複製エラーの有無を見るためのBax遺伝子のPCRによりGの繰り返し数の異常をみる。また、TGF-βII遺伝子の繰り返し配列の数の異常も検索したが、繰り返し配列の異常は見られなかった。(英文誌に投稿中)最近、腫瘍免疫における腫瘍の免疫逃避機構の一部として、FasLに結合するDcR3(decoy receptor 3)が発見されている。DcR3はFasLに結合しFasLを介するアポトーシスの系を抑制すると考えられている。この機構をウイルスが腫瘍を発生させる上で関連している可能性がないか、HTLV-IおよびEBV(Epstein-Barr virus)ウイルス関連リンパ腫で検索した。7例のATLL(adult T-cell leukemia/lymphoma),17例のEBV関連リンパ腫(NK cell lymphoma 10例、pyothorax-associated B-cell lymphoma,PAL7例)にて、DcR3の遺伝子増幅、発現を検索したところ、ATLLではDcR3の遺伝子増幅、発現が見られた。またEBV関連リンパ腫でもDcR3の遺伝子増幅、発現が見られた。一方コントロールと使用した反応性リンパ節、およびウイルスの関与していないB細胞性リンパ腫では、DcR3の遺伝子増幅、発現はほとんど見られなかった。以上のことより、HTLV-IおよびEBVは、リンパ腫発生の過程で、腫瘍の免疫逃避機構の一部として、FasLに結合するDcR3(decoy receptor 3)を使用している可能性が考えられた。2001年夏に悪性リンパ腫のWHO分類が改定された。しかしながら、間題点として、WHO分類が欧米の血液病理学者が主体で、経験する症例の多くはB細胞性のリンパ腫であり、T/NK細胞性リンパ腫は全体の一割弱しかなく、治療方針、予後の把握が困難であることも挙げられる。現在のところ、抹消性T細胞性リンパ腫は、臨床的には疾患単位としての分類は困難であり、臨床的態度の違いからは、抹消性T細胞性リンパ腫は、節性、節外性に分けられている。
高等植物の光形態形成現象の作用機構に関する分子発生生物学的研究

1)近赤外光・高感受性突然変異体の単離:フィトクロムAの情報伝達機構の構成員で、従来のスクリーニング法では同定できなかったものを単離するために、弱い近赤外光照射で伸長阻害を起こす、近赤外光・高感受性変異体を2万個のEMS処理した種子の中から探索した。その結果、光による伸長阻害とアントシアニンの蓄積に関して野性型と性質が大きく異なる7個体を得、更に詳しく表現型を調べた。これら突然変異体はいずれも劣性で、少なくとも3種類の遺伝子座に属すことが分かった。いずれの変異体も、暗所で育てたときの胚軸と、白色光下の花茎との伸長が野性型より阻害されていて、アントシアニンの蓄積が野性型より促進されていた。胚軸の伸長阻害は近赤外光特異的ではなく、赤色光と青色光によっても引き起こされた。この内の少なくとも1個体は、暗所でのフィトクロム量が野性型の約2倍に増えていた。また、他の1個体はフィトクロム量や光による伸長阻害程度が野性型に近く、かつアントシアニンが蓄積しているので、これは従来より知られている高色素型突然変異体であると考えられる。高色素型突然変異体を除くこれら変異体は今までに記載のない変異体であり、フィトクロムの情報伝達機構に関する新しい変異体である可能性がある。オハイオ州立大学のT-DNAタッギングされた個体のコレクションには、これらの突然変異体は含まれていなかった。2)フィトクロム信号伝達系に対する糖の効果:5年度に単離したフィトクロムA信号伝達系に関する突然変異体fhy3の近赤外光下の胚軸伸長阻害は、庶糖の添加によって減少することを発見した。このことから、フィトクロムAから発する胚軸伸長を制御する信号伝達系は並列に2系統あり、その内の一つが庶糖の有無によって制御されていることが分かった。1.フィトクロムの高照射エネルギー反応(HIR)を示さない突然変異体の単離:同突然変異体を10個以上単離した。遺伝学的解析によって、これらの変異体は二つの遺伝子座の突然変異に由来することが分かった。その内の一つ、hy8はフィトクロムAの構造遺伝子で、報告者以外の三つの研究グループによって1993年にその存在が報告された。他方の遺伝子座FLU1はフィトクロムの構造遺伝子ではなく、多分、光シグナル伝達機構を構成する成分をコードしている遺伝子であると想像される。flu1はT-DNAタッギングによって作出されたものであるが、マーカーの薬剤耐性遺伝子も、T-DNAの右側繰り返し配列も持っていなかった。hy8、flu1、hy3(フィトクロムB欠損突然変異体)、野性型について、種々の光生理反応を測定、比較し、フィトクロム依存生理反応におけるそれぞれの遺伝子の役割を考察した。2.T-DNAタッギングによる突然変異体の作出:約50個の独立した突然変異体を製作した。これらの変異体の表現型はまだ観察中であるが、少なくとも一個の形態形成に関する変異体が含まれていることが分かった。3.近赤外光に対する高感受性突然変異体の単離:第1項で明らかにできた遺伝子座が少なかったので、フィトクロムが光受容体となる光生理現象に関する突然変異体を別のスクリーニング法で更に単離することを試みた。すなわち、より微弱な近赤外光にHIR反応を示す候補の個体を約20個分離した。これらの変異体の表現型は現在解析中であるが、少なくともその中の一つは、目的とする突然変異体であると思われる。