hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
自閉スペクトラム症の親に対するスマートフォンによる問題解決療法の開発と効果検証

自閉スペクトラム症の親はストレスが高いことが知られている。こうした親に対して、日常生活上の問題点の解決を通して心理的苦痛の軽減をはかる問題解決療法も行われている。問題解決療法は、構造化された問題解決スキルを用いて日常生活上の問題点を自分自身で解決できるようにすることを目的とした簡便な心理療法である。これまでに、問題解決療法を自閉スペクトラム症と診断された子どもの母親に行ったところ抑うつ症状が軽減したという報告や、親の陰性感情を減らし、問題解決技能が向上したとの報告がある。一方で問題解決療法は比較的簡便な治療法ではあるが、標準的には1セッション11.5時間×1012回程度の対面治療が必要で、トレーニングを受けた人材と時間とを要する治療であるために、十分普及しているとは到底言えないのが現状である。毎年多くの患者が、自閉スペクトラム症と新たに診断され、その親に対して日々の問題行動や将来への不安を緩和するニードが存在する。こうしたことを鑑み、我々はInformation and communication technologyとしてのスマートフォンを用いて問題解決療法を行うことに着目した。実際、コンピュータやスマートフォンを用いた認知行動療法がオーストラリア、イギリス、オランダ、スェーデンなどで行われており、その有用性が示されている。莫大な患者数の割に少ない治療者を考えると、新しい情報通信技術、中でも携帯性のあるスマートフォンを使用した問題解決療法を開発することが今後の自閉スペクトラム症の子どもを養育する親の気分プロフィールの改善や育児ストレス軽減の一助となると考えられる。以上のような背景から、今回我々はスマートフォンを用いた問題解決療法を開発し、本法が自閉スペクトラム症の子どもを養育する親の生活の質の改善に有用性を示すか否かを予備的に検証するための臨床試験を計画した。今年度は研究方法を具体化し研究プロトコールを作成した。具体的には、対象者の基準を、16歳から15歳の自閉スペクトラム症と診断されている実子を養育している24歳以上60歳未満の親、26歳から15歳の自閉スペクトラム症と診断されている実子と同居している、36歳から15歳の自閉スペクトラム症と診断されている実子は同意時に、名古屋市立大学病院こころの医療センターか、三重県立子ども心身発達医療センターに通院している、4本人がスマートフォン問題解決療法を希望している、5スマートフォンの操作に慣れている、6データ欠損に際しての電話による評価に協力可能である、と定めた。評価項目を検討しPOMS2、K6、PSI、Brief COPEに確定した。対象者をエントリーする機関については当初予定していた名古屋市立大学病院こころの医療センターに加え、三重県立小児心身発達医療センターにも協力を依頼し承諾を得た。評価期間は8週間とし、0週、4週、8週の3回で測定することとした。エントリー目標症例数は、第0週から第8週への前後比較で相関係数を0.5、効果サイズ0.5と仮定し、有意水準両側5%、検出力90%と想定してpaired t-testで計算すると44名程度が必要になる。2割程度の脱落を考慮し目標症例数を55名と設定した。また介入が終了した対象者から、協力可能な5名程度を対象に、アプリケーションのどういった内容が援助になったかを面接調査するといった質的検討も計画した。これらをまとめたプロトコールを作成し、2019年3月6日に名古屋市立大学大学院医学研究科の倫理委員会に提出し、同年4月6日に承認を得た。自閉スペクトラム症の子どもを養育する親に対して用いる問題解決療法「解決アプリ」は既に準備ができているが、他の研究と相互にデータを比較できるようにするためアプリを一般成人向けに適応できるよう改変することを計画している。また同時に評価項目についても他の研究とデータを比較できるように評価項目を統一することも検討している。これらは当初郵送で行う予定をしていたが、研究をよりスムーズに進めるためにインターネット上で入力できるシステムを開発することを計画している。さらに、対象者の同意取得をインターネット上で行うシステムを開発して用いる計画も立案し、準備を進めている。このため他の研究責任者と定期的に会合を開催し準備を進めていく予定である。また問題解決療法「解決アプリ」を委託し共同開発しているLife2Bits株式会社との定期的な打ち合わせも予定している。これらの改変に伴いプロトコールも改変が必要となるため、準備が整い次第、倫理委員会に再提出を行う予定である。

実際、コンピュータやスマートフォンを用いた認知行動療法がオーストラリア、イギリス、オランダ、スェーデンなどで行われており、その有用性が示されている。莫大な患者数の割に少ない治療者を考えると、新しい情報通信技術、中でも携帯性のあるスマートフォンを使用した問題解決療法を開発することが今後の自閉スペクトラム症の子どもを養育する親の気分プロフィールの改善や育児ストレス軽減の一助となると考えられる。以上のような背景から、今回我々はスマートフォンを用いた問題解決療法を開発し、本法が自閉スペクトラム症の子どもを養育する親の生活の質の改善に有用性を示すか否かを予備的に検証するための臨床試験を計画した。今年度は研究方法を具体化し研究プロトコールを作成した。具体的には、対象者の基準を、16歳から15歳の自閉スペクトラム症と診断されている実子を養育している24歳以上60歳未満の親、26歳から15歳の自閉スペクトラム症と診断されている実子と同居している、36歳から15歳の自閉スペクトラム症と診断されている実子は同意時に、名古屋市立大学病院こころの医療センターか、三重県立子ども心身発達医療センターに通院している、4本人がスマートフォン問題解決療法を希望している、5スマートフォンの操作に慣れている、6データ欠損に際しての電話による評価に協力可能である、と定めた。評価項目を検討しPOMS2、K6、PSI、Brief COPEに確定した。対象者をエントリーする機関については当初予定していた名古屋市立大学病院こころの医療センターに加え、三重県立小児心身発達医療センターにも協力を依頼し承諾を得た。評価期間は8週間とし、0週、4週、8週の3回で測定することとした。エントリー目標症例数は、第0週から第8週への前後比較で相関係数を0.5、効果サイズ0.5と仮定し、有意水準両側5%、検出力90%と想定してpaired t-testで計算すると44名程度が必要になる。2割程度の脱落を考慮し目標症例数を55名と設定した。また介入が終了した対象者から、協力可能な5名程度を対象に、アプリケーションのどういった内容が援助になったかを面接調査するといった質的検討も計画した。これらをまとめたプロトコールを作成し、2019年3月6日に名古屋市立大学大学院医学研究科の倫理委員会に提出し、同年4月6日に承認を得た。自閉スペクトラム症の子どもを養育する親に対して用いる問題解決療法「解決アプリ」は既に準備ができているが、他の研究と相互にデータを比較できるようにするためアプリを一般成人向けに適応できるよう改変することを計画している。また同時に評価項目についても他の研究とデータを比較できるように評価項目を統一することも検討している。これらは当初郵送で行う予定をしていたが、研究をよりスムーズに進めるためにインターネット上で入力できるシステムを開発することを計画している。さらに、対象者の同意取得をインターネット上で行うシステムを開発して用いる計画も立案し、準備を進めている。このため他の研究責任者と定期的に会合を開催し準備を進めていく予定である。
肝動脈塞栓術による肝亜区域硬化療法に関する実験的研究

小肝細胞癌に対する肝動脈亜区域塞栓術の治療効果を向上させるためには,動脈側からの注入でperibiliary venous plexus (PBP)を介して門脈に流入し,門脈血流も一時的に遮断できる塞栓物質が望ましい。この目的ではLipiodolが優れていることが知られているが,Lipiodol単独ではその効果は一時的で十分ではない。今回Lipiodolの種々の他の塞栓物質との混合物の中でこの目的に最も適したものを検討する目的で実験的検討を行った。成犬を用い,Lipiodol単独,Lipiodolとヒストアクリルの種々の割合の混合液,Lipiodolとabsolute ethanolの混合液,LipiodolとGelfoam powderの混合液を肝動脈から注入直後および10日後に,軟線撮影とLipiodol染色で,Lipiodolの肝内での分布を組織学的に検討した。その結果LipiodolとGelfoam powderの混合物でPBPと門脈に最も強くLipiodolの残存が認められ,また肝の区域性の壊死も強度であった。以上の結果より,現在使用可能な塞栓物質の中ではLipiodolとGelfoam powderの混合物が小肝癌に対する亜区域塞栓術の塞栓物質として有用であると考えられた。また,これらの塞栓物質の肝内での動態をin vivoで観察し,新たな有効な塞栓物質を開発する目的で生体顕微鏡下に肝内血流を観察するシステムを構築し,現在in vivoでのLipiodol等の動態研究を開始したところである。
明治太政官文書に関する基礎的研究

日本近代史研究にとって必須の研究課題である明治太政官制の解明は、従来必らずしも充分になされてこなかった。本研究では、そのような研究の現状を打破するため、主として太政官の残した公文書に着目し、史料論的アプローチからの究明を行った。具体的には、゙青表紙文書′′と命名した太政官中枢の文書群に初めて注目し、形態的観点から分析を加え、また太政官期の閣議書について、様式的な変遷を辿る研究をまとめることができた。これらは、明治太政官制の全体構造に迫るための基礎的研究であるが、本研究によって着実にその端緒を得ることができたと考えている。さらに、今回は残念ながら具体的成果を挙げられなかった「官符原案」をはじめ、新たな課題を発見することができた。
心臓ペースメーカー細胞の成熟および性質維持機構の解明

<研究の目的>本研究では、分化した洞房結節の細胞がどのようにしてペースメーカーとしての機能を維持し続けるのか、その生理学的メカニズムを明らかにするべく、洞房結節特有の代謝経路・物質の同定、洞房結節の幼若-成熟化の存在および機能維持メカニズムの解明を目的としている。<研究成果>これまでに、MALDI-IMSを用いて代謝産物Zが生体マウスの洞房結節に特に多く局在することを見いだした。成体および新生仔Hcn4-GFPマウスを用いてGFP領域を採取し、RNA-seqおよびMS解析により比較解析を進める予定でいたが、生体マウスの洞房結節は非常に細胞数が限られている上、他の細胞種の混在による正確な解析が困難と判断した。そこで、組織がわかりやすく比較的細胞数が得られると予想される固有心筋(心房筋、心室筋)における代謝比較を行い、特異な代謝経路を同定した上でどのようにして各心筋を特徴づけ、機能を維持し続けるのか研究を遂行した。生体マウスを用いたMALDI-IMSおよびMS解析により心室筋はミトコンドリアによる酸化的リン酸化経路、心房筋はミトコンドリアに依存しない解糖系により依存した代謝を行うことが示唆された。生体では心筋の他に線維芽細胞が混在が懸念されることから、より正確な各心筋の代謝を解明し特異な代謝が生物種間で保存されているか明らかにするためヒトiPS細胞を用いて心房筋・心室筋分化を試みた。当研究室でこれまでに確立した誘導法ではほぼ心室筋であるため、心房筋誘導法の検討し誘導60日目の各誘導心筋をFACSおよび細胞染色を行った結果、既存の誘導法に比べて遥かに誘導効率が高く誘導した心筋の90%以上がMLC2A陽性の心房筋様の細胞であった。また、microarrayにより遺伝子発現解析を行った結果、既知の報告される遺伝子プロファイルと酷似していることが明らかとなった。これまで行われてきた心臓の代謝解析は外科的に組織を採取し解析を進める方法であり、組織の局在を失うことなく正確な代謝解析を行うことは困難であった。本研究はMALDI-IMSを用いることにより組織の局在を維持した状態でMS解析を行い、心室筋は酸化的リン酸化に依存し、心房筋は解糖系に依存していることを明らかにした。また、MS解析においても同様の結果が得られておりMALDI-IMSを用いた解析法が正確であることを証明した上、今後心臓のみならず他の臓器・組織の代謝解析に有用である事を示した。そして、マウス心臓を用いて得られた代謝解析の結果がヒト心筋においても保存されているのか明らかにするためにヒトiPS細胞から心房筋と心室筋をそれぞれ誘導することを試みた。高効率の心室筋誘導に関しては既に当研究室で確立されていたが、心房筋誘導に関しては既知の方法では効率が低いことが問題であり、それゆえ抗体を用いた心房筋のみの選別等が必要であることが考えられた。また、代謝は細胞の状態で大きく変動してしまうことから、抗体や色素を用いた選別後では正確な代謝解析は困難である。そこで、申請者は高効率の心房筋誘導法の確立を目指し検討を行った結果、非常に心房筋誘導効率の高い手法を見いだすことができ、これは次年度のiPS由来の心房筋・心室筋を用いた代謝解析において望ましい結果である。その上、心筋の誘導効率自体も低下していないことから、今後の代謝解析を滞り無く遂行することが可能である。以上の理由により、おおむね順調に進展していると考える。今後はこれまでに確立した心室筋誘導法と本研究で確立した心房筋誘導法を用いて各心筋を誘導し、実際にマウスと同様の代謝を行うのか明らかにするため、MS解析を行う。また、実際にどのような経路で代謝されているのか明らかにするためにグルコースの安定同位体を用いて代謝のトレーシングを行う。興味深いことに、本研究のMS解析により心房筋では最終産物の乳酸が心室筋に比べて多く蓄積されていた。この結果から、心房筋では解糖系を介して得られたピルビン酸を乳酸に変換し、一方で心室筋ではピルビン酸をアセチルCoAに変換、もしくは一度産生した乳酸をLactate Dehydrogenase Bによって再びピルビン酸に変換している可能性が示唆された。そこで乳酸の安定同位体を用いた代謝トレーシングも行い、乳酸がどのように代謝されているのか解明する。代謝トレーシングに加えて、フラックスアナライザーを用いて主要な呼吸基質であるグルコース、脂肪酸、グルタミンの各々の利用率を解析し、各心筋でどのような代謝に依存してエネルギー(ATP)を産生しているのか明らかにする。さらには、各心筋の特異な代謝が性質・機能の維持にどのように関わっているか明らかにするためにMS解析で得られる主要な代謝経路の産物を除去した培地を作製し、各細胞に曝露する。細胞の生存評価、遺伝子発現解析、細胞染色を行い、代謝が細胞に及ぼす影響を解析する。

成体および新生仔Hcn4-GFPマウスを用いてGFP領域を採取し、RNA-seqおよびMS解析により比較解析を進める予定でいたが、生体マウスの洞房結節は非常に細胞数が限られている上、他の細胞種の混在による正確な解析が困難と判断した。そこで、組織がわかりやすく比較的細胞数が得られると予想される固有心筋(心房筋、心室筋)における代謝比較を行い、特異な代謝経路を同定した上でどのようにして各心筋を特徴づけ、機能を維持し続けるのか研究を遂行した。生体マウスを用いたMALDI-IMSおよびMS解析により心室筋はミトコンドリアによる酸化的リン酸化経路、心房筋はミトコンドリアに依存しない解糖系により依存した代謝を行うことが示唆された。生体では心筋の他に線維芽細胞が混在が懸念されることから、より正確な各心筋の代謝を解明し特異な代謝が生物種間で保存されているか明らかにするためヒトiPS細胞を用いて心房筋・心室筋分化を試みた。当研究室でこれまでに確立した誘導法ではほぼ心室筋であるため、心房筋誘導法の検討し誘導60日目の各誘導心筋をFACSおよび細胞染色を行った結果、既存の誘導法に比べて遥かに誘導効率が高く誘導した心筋の90%以上がMLC2A陽性の心房筋様の細胞であった。また、microarrayにより遺伝子発現解析を行った結果、既知の報告される遺伝子プロファイルと酷似していることが明らかとなった。これまで行われてきた心臓の代謝解析は外科的に組織を採取し解析を進める方法であり、組織の局在を失うことなく正確な代謝解析を行うことは困難であった。本研究はMALDI-IMSを用いることにより組織の局在を維持した状態でMS解析を行い、心室筋は酸化的リン酸化に依存し、心房筋は解糖系に依存していることを明らかにした。また、MS解析においても同様の結果が得られておりMALDI-IMSを用いた解析法が正確であることを証明した上、今後心臓のみならず他の臓器・組織の代謝解析に有用である事を示した。そして、マウス心臓を用いて得られた代謝解析の結果がヒト心筋においても保存されているのか明らかにするためにヒトiPS細胞から心房筋と心室筋をそれぞれ誘導することを試みた。高効率の心室筋誘導に関しては既に当研究室で確立されていたが、心房筋誘導に関しては既知の方法では効率が低いことが問題であり、それゆえ抗体を用いた心房筋のみの選別等が必要であることが考えられた。また、代謝は細胞の状態で大きく変動してしまうことから、抗体や色素を用いた選別後では正確な代謝解析は困難である。そこで、申請者は高効率の心房筋誘導法の確立を目指し検討を行った結果、非常に心房筋誘導効率の高い手法を見いだすことができ、これは次年度のiPS由来の心房筋・心室筋を用いた代謝解析において望ましい結果である。その上、心筋の誘導効率自体も低下していないことから、今後の代謝解析を滞り無く遂行することが可能である。以上の理由により、おおむね順調に進展していると考える。今後はこれまでに確立した心室筋誘導法と本研究で確立した心房筋誘導法を用いて各心筋を誘導し、実際にマウスと同様の代謝を行うのか明らかにするため、MS解析を行う。また、実際にどのような経路で代謝されているのか明らかにするためにグルコースの安定同位体を用いて代謝のトレーシングを行う。興味深いことに、本研究のMS解析により心房筋では最終産物の乳酸が心室筋に比べて多く蓄積されていた。
宇宙背景放射の偏光観測を通した超高エネルギー物理の研究

本年度は宇宙背景マイクロ波(CMB)偏光観測における、ワイヤーを用いた検出器のアンテナの角度較正を行うための計画と装置の開発に主に取り組んだ。ワイヤーを用いた角度較正とは、ワイヤーの反射光がワイヤーの方向に沿った直線偏光を持つという特性を利用して、この反射光を検出器のアンテナの角度(検出するCMB偏光角)の較正光源として用いようというものである。この角度較正をチリで本年度からの観測を計画していたSimons Array(SA)実験というCMB実験の望遠鏡に搭載して角度較正を実施し、世界最高感度でのCMB偏光観測をして宇宙初期にインフレーションが起こったかの検証を目指している。このワイヤーを望遠鏡の検出器に向けて張る治具を本年度の秋頃作製して、年末にチリのサイトに輸送した。輸送も滞りなく行われ、治具は無事にチリに到著した。本研究員も年明けの1月に1ヶ月間チリのサイトに滞在し、望遠鏡の試運転をサイトリーダーとして行いつつ、作製したワイヤーの治具を実際に望遠鏡に搭載できることの確認とワイヤー信号の観測を行った。ワイヤーによる角度較正に必要な別の機器が予定より遅れており搭載されていなかったので、今回は模擬テストを行い検出器で観測することに取り組んだ。観測結果としては、ワイヤーの直線偏光の信号がノイズに比べて十分大きいことを確認できた。本年度はSA実験とは別にSimons Observatory(SO)実験と呼ばれる次世代実験にも取り組んだ。この実験は今まさに望遠鏡の設計・開発フェーズにある。また、SO実験の望遠鏡は今のSA実験の望遠鏡よりコンパクトで円筒型の望遠鏡を空に向けてCMBを観測させる形をとっており、望遠鏡の上にワイヤーを張ることが容易になっている。この円筒型望遠鏡の上部でワイヤーの張られたリングが検出器の前面にモーターで出し入れできる構造を考えており、そのようなワイヤー較正装置の大まかな設計も行った。本研究をスタートする前の当初の計画では、本研究のメインであるワイヤーを用いた検出器のアンテナ角度の較正を望遠鏡の上に張ったワイヤーで行うことを考えていた。本研究員は今年度からSimons Array(SA)実験に参加したことやSA実験自体の進捗が順調に進んでいたこともあり、この方法で用いるワイヤーを張る巨大な固定器具(望遠鏡の高さが10mほどであるため)の設置が、望遠鏡の観測開始に間に合わない可能性がでてきた。そこで本研究員は柔軟に計画を変更して、ワイヤーを望遠鏡の上部ではなく、望遠鏡内部のミラーと検出器の間に置くことで、ワイヤーの設置をより容易なものに変更した。この柔軟な変更もあり、順調にワイヤーの固定治具の設計・開発を進め、望遠鏡のあるチリにワイヤー固定治具を持っていき、実際にワイヤーの信号を望遠鏡で捉えることに成功した。実際の角度較正には他大学が担当している別の機器と同時に動かすことが必要であり、これが望遠鏡にインストールされればすぐに較正を行うことができるので、来年度初頭には角度較正が行えると期待できる。また、本研究員はSA実験のワイヤーによる検出器の角度較正にとどまらず、Simons Observatory実験というSA実験の次世代実験でのワイヤーによる角度較正装置の開発にも取り組み始めてそのイニシアチブをとっている。その意味で期待以上の研究の進み具合と言える。SA実験は、2019年度にはワイヤーの角度較正に必要な別の機器が搭載され、夏頃に望遠鏡の本観測が開始される予定である。そこで、夏前に再度ワイヤーの信号を測定し、そのデータを解析することで検出器の角度較正を行う予定である。そのデータ解析と並行して、光学シミュレーションの実施も行っていく予定である。測定データと光学シミュレーションの結果の解析によって今のワイヤーの治具の設置方法で起こりうる系統誤差を精査して、今の方法での系統誤差の導出と今後のワイヤーによる角度較正での系統誤差の削減のための方策を熟考していく。SA実験では3台の望遠鏡があり、現在設置されているものはそのうちの1台目である。今年度の1台目でのワイヤーの角度較正における課題や主要な系統誤差などを整理して2台目以降での角度較正にフィードバックをかけていく。SO実験では、2019年度にはワイヤー較正機器の機械的な設計を更に詰めていき、実際に作製をしていく計画である。また、こちらのワイヤー機器にはモーターやその動作を検知する検知器などのエレクトロニクスが搭載されるので、それらのコントローラーの作製や動作試験なども行っていく。

本研究員も年明けの1月に1ヶ月間チリのサイトに滞在し、望遠鏡の試運転をサイトリーダーとして行いつつ、作製したワイヤーの治具を実際に望遠鏡に搭載できることの確認とワイヤー信号の観測を行った。ワイヤーによる角度較正に必要な別の機器が予定より遅れており搭載されていなかったので、今回は模擬テストを行い検出器で観測することに取り組んだ。観測結果としては、ワイヤーの直線偏光の信号がノイズに比べて十分大きいことを確認できた。本年度はSA実験とは別にSimons Observatory(SO)実験と呼ばれる次世代実験にも取り組んだ。この実験は今まさに望遠鏡の設計・開発フェーズにある。また、SO実験の望遠鏡は今のSA実験の望遠鏡よりコンパクトで円筒型の望遠鏡を空に向けてCMBを観測させる形をとっており、望遠鏡の上にワイヤーを張ることが容易になっている。この円筒型望遠鏡の上部でワイヤーの張られたリングが検出器の前面にモーターで出し入れできる構造を考えており、そのようなワイヤー較正装置の大まかな設計も行った。本研究をスタートする前の当初の計画では、本研究のメインであるワイヤーを用いた検出器のアンテナ角度の較正を望遠鏡の上に張ったワイヤーで行うことを考えていた。本研究員は今年度からSimons Array(SA)実験に参加したことやSA実験自体の進捗が順調に進んでいたこともあり、この方法で用いるワイヤーを張る巨大な固定器具(望遠鏡の高さが10mほどであるため)の設置が、望遠鏡の観測開始に間に合わない可能性がでてきた。そこで本研究員は柔軟に計画を変更して、ワイヤーを望遠鏡の上部ではなく、望遠鏡内部のミラーと検出器の間に置くことで、ワイヤーの設置をより容易なものに変更した。この柔軟な変更もあり、順調にワイヤーの固定治具の設計・開発を進め、望遠鏡のあるチリにワイヤー固定治具を持っていき、実際にワイヤーの信号を望遠鏡で捉えることに成功した。実際の角度較正には他大学が担当している別の機器と同時に動かすことが必要であり、これが望遠鏡にインストールされればすぐに較正を行うことができるので、来年度初頭には角度較正が行えると期待できる。また、本研究員はSA実験のワイヤーによる検出器の角度較正にとどまらず、Simons Observatory実験というSA実験の次世代実験でのワイヤーによる角度較正装置の開発にも取り組み始めてそのイニシアチブをとっている。その意味で期待以上の研究の進み具合と言える。SA実験は、2019年度にはワイヤーの角度較正に必要な別の機器が搭載され、夏頃に望遠鏡の本観測が開始される予定である。そこで、夏前に再度ワイヤーの信号を測定し、そのデータを解析することで検出器の角度較正を行う予定である。そのデータ解析と並行して、光学シミュレーションの実施も行っていく予定である。測定データと光学シミュレーションの結果の解析によって今のワイヤーの治具の設置方法で起こりうる系統誤差を精査して、今の方法での系統誤差の導出と今後のワイヤーによる角度較正での系統誤差の削減のための方策を熟考していく。SA実験では3台の望遠鏡があり、現在設置されているものはそのうちの1台目である。今年度の1台目でのワイヤーの角度較正における課題や主要な系統誤差などを整理して2台目以降での角度較正にフィードバックをかけていく。SO実験では、2019年度にはワイヤー較正機器の機械的な設計を更に詰めていき、実際に作製をしていく計画である。
発話との関連性/非関連性に基づく自然で面白みのあるキャラクタ動作の生成法

アニメキャラクタの動作を設定するとき、これまでは発話と関連付けて設定されてきた。これに対し、最近の演劇理論では、「台詞と無関係な動作を俳優に演じさせると、スリリングで面白みのある演技が生まれる」とされている。実際に、ヒトの発話動作を観察すると、発話の前に動作が行われる場合が見られる。勿論、明らかに発話内容と連動していると思われる動作も存在する。キャラクタの動作を発話と関連付けるべきなのか、それとも無関係に自由に作成すべきなのか?すでに予備実験で、同じ動作に対し「動作に関連のある会話」と「動作に関連のない会話」のアニメーションを制作し、どちらが自然に見えるかを検証した。制作したアニメは、自動車の「運転」、「卓球」の対戦、「体感型ゲーム」の3種類である。それぞれ2名のキャラクタに、動作に関係のある台詞と動作に関係のない台詞を用意し対話させた。一般人を対象に、動作に関係のある会話と関係のない会話のアニメについてどちらが自然に見えるかアンケートにより評価した。この結果、「運転」では「昼食先を相談している会話」、すなわち運転動作に関係のない会話の方が自然に見えた。一方、「卓球」では「技の自慢」、「体感型ゲーム」では「ゲームの攻略法」など動作に関係のある会話の方が自然に見えた。ここから、動作とのつながりが弱い対話では対話内容との関連性の弱い動作でも良く、動作とのつながりが強い対話では動作は対話内容と強く関連付ける必要がある、ことが見えてくる。しかし、僅か3例に基づく結論である。この結論を仮説とし、事例を増やし仮説を補強するとともに、仮説が成り立つための条件を明らかにする。そのためには。モーションキャプチャの整備を行うとともに、幾つかの動作の測定を行った。本研究代表者は本研究開始年度当初に、これまで所属していた国立大学から私立短期大学に異動した。それに伴い研究環境の再構築から取り掛かった。使用可能なモーションキャプチャは、Kinect1, Kinect2及び研究代表者のグループがこれまで開発してきた多視点モーションキャプチャと単眼カメラからのモーションキャプチャである。このうち多視点モーションキャプチャが最も精度が良いのだが、広いスタジオが確保できなかったため、Kinectと単眼モーションキャプチャを使用した。日常の動作のうち、「掃除をする」、「テレビを見る」動作の測定を行った。モーションキャプチャのKinectは、Clip Studio Animationと呼ばれるソフトウェアと連動している。動作はリアルタイムで記録され、動作の修正はオフラインで行われる。Kinectの測定精度があまり良くないことと、身体が寝そべっている場合など測定できない姿勢がかなりあるのが問題である。一方、単眼モーションキャプチャはリアルタイムでは測定できず、記録されたビデオ映像からオフラインで測定する。ただし、この測定は身体像とモデルとの自動照合ではあるが、キーフレームでは手動による照合であり、かなり手間を要し使い辛いソフトである。したがって、多視点モーションキャプチャを稼働させるための環境整備を行うとともに、人工知能を援用した照合の自動化を図りたい。さらに動作データの蓄積を行い、仮説の検証を進めるとともに、発話に最もふさわしい動作の条件を明らかにする。そのためには。

動作はリアルタイムで記録され、動作の修正はオフラインで行われる。Kinectの測定精度があまり良くないことと、身体が寝そべっている場合など測定できない姿勢がかなりあるのが問題である。一方、単眼モーションキャプチャはリアルタイムでは測定できず、記録されたビデオ映像からオフラインで測定する。ただし、この測定は身体像とモデルとの自動照合ではあるが、キーフレームでは手動による照合であり、かなり手間を要し使い辛いソフトである。したがって、多視点モーションキャプチャを稼働させるための環境整備を行うとともに、人工知能を援用した照合の自動化を図りたい。さらに動作データの蓄積を行い、仮説の検証を進めるとともに、発話に最もふさわしい動作の条件を明らかにする。次年度使用額と次年度予算を合算して高性能パソコンを購入するため。
中枢神経ゲノムでのCNR分子体細胞レトロトランスポジションの解析と生成機構の解明

脳内神経細胞シナプスで多く発現しているカドヘリン型接着分子ファミリーの一つであるCNR分子は、ゲノム構造の解析の結果、14個の細胞外領域をコードする「可変領域エキソン」と細胞内領域をコードする「定常領域エキソン」が繋ぎ変わることで14種類の分子種を作り出していることを我々は明らかにした。このような構造は免疫系以外では初めての知見である。そこで染色体上でのCNR分子の組み替え体の検索と解析を行い、脳における接着分子群の多様性獲得のメカニズムを明らかにする目的でこの仕事に着手した。脳組織を用いたゲノミックPCRと、脳組織由来のゲノミックライブラリーのスクリーニングの結果、イントロンを欠くcDNA様のCNR遺伝子構造体を単離できた。その隣接塩基配列からゲノム中に逆転写再挿入(レトロトランスポジション)していることを明らかにした。14種類の全てのCNRがイントロンレスCNRとして単離された。さらにショ糖密度勾配遠心分離法により、多くの逆転写したイントロンレスCNRは、環状構造をとり、ゲノムに挿入される頻度は低いことも明らかにした(Sugino et al 2004)。最近になり哺乳類のゲノムに多数存在するLINE配列がコーディングする逆転写酵素が、自身のみならず、他のmRNAをもゲノムに逆転写再挿入させることが培養細胞の系で報告された。そこで脳各組織由来のRNAを用いたRT-PCRとノーザンプロットを行ったところ、LINE1が脳組織で強く発現していることを見い出した。発現しているLINE1は強い逆転写活性を持つとされるL1Md-Tf型であった。またin-situハイブリダイゼーションの結果から海馬(CA13,DG)、大脳皮質(23層)、小脳(顆粒細胞層)での高発現を見出した。この発現分布はCNRの発現分布と一致する。さらに、脳組織由来のcDNAライブラリーをスクリーニングしたところ、全転写産物のうちおよそ0.05%が全長鎖を有するLINE1であった。これらのことより、LINE1による他の発現遺伝子に対する、新たなる機能獲得付与の可能性が示唆された。
生体反応促進を利用したサイトカイン椎間板内注入療法の開発

椎間板ヘルニア周辺形成される炎症性組織において、マクロファージの浸潤を促進させる走化性サイトカインであるMCP-1(Monocyte Chemotactic Protein-1)が発現している各種細胞が多数認められるが、MCP-1が椎間板ヘルニアの自然退縮過程においてどの様な作用をしているのかは明確ではなかった。そこで、MCP-1の経時的な発現を知るために、腰椎硬膜外腔に尾椎の椎間板組織を移植するヘルニアモデルを作成し、免疫組織学的検討ならびにcompetitive PCR法にて定量化した。MCP-1陽性細胞は椎間板組織移植後4週間は発現していたが、最初の1週目でMCP-1陽性細胞数が最高であった。MCP-1mRNAの経時的定量でも、移植後4週間は発現していたが最初の1週目での発現量が最高であった。次に、臨床応用を前提としてMCP-1の投与がヘルニア退縮を促進させるかどうかを検討するために、尾椎の椎間板組織を腹壁皮下に移植し、経時的に大きさを測定していった。移植後5日間連続的にMCP-1を投与した群は、コントロール群やMCP-1を移植時にのみ投与した群と比較して優位に早い縮小傾向が認められた。以上の結果より、ヘルニアの自然退縮過程の比較的早い時期において、MCP-1はマクロファージの浸潤を促進することにより、ヘルニア退縮を促進していることが考えられ、MCP-1が極めて安全な椎間板内注入療法の薬剤となりうる事が考えられた。しかし、ヘルニア発症初期に椎間板内にMCP-1を連続投与をする必要があり、臨床応用にはまだ解決すべき問題が残っている。初年度は、ウイスターラットを用いて尾椎椎間板の髄核を同一ラット腹部皮下に移植する脱出型ヘルニアモデルを作成し、ヘルニア周囲に形成される炎症巣に発現しているサイトカインを同定した。同じモデルを用い、先の実験で同定された走化性サイトカインをラット移植髄核に皮下注入することにより、サイトカイン未注入群と形態学的変化や組織学的変化を比較し有効性を検討した。結果2:サイトカイン注入群ではMCP-1を用い、移植後5日間連続投与群と、移植同日だけ投与した群を作成した。コントロールとしてはPBSだけを同量投与した。engineer′s caliperを用いた体外計測で見ると、コントロールでは移植髄核は漸次縮小していき、4週変化が無くなった。移植同日にだけMCP-1を投与した群では、1週目・2週目の計測ではコントロールより縮小は著しかったが、統計学的有意差はなかった。5日間投与群では、1週目・2週目以降は優位に縮小し、、以後は大きさの変化は少なかった。以上の結果から、走化性サイトカインがヘルニア周囲に形成される炎症巣形成に関与していることは間違いなく、連続注入でヘルニア縮小を促進することが明確となった。次年度は、RT-PCR法を用い浸潤細胞内でのm-RNAレベルのMCP-1発現を検討し、competitive PCR法で経時的な発現量を測定する予定である。昨年度の研究で、移植髄核周辺でおこる炎症巣の形式に走化性サイトカインが関与していることが明らかになった。しかし、大きさの変化を見るために移植部位を皮下組織内にせざるを得なかったため、臨床で見られる硬膜外腔に脱出した椎間板ヘルニアでも同一の事が起こっているかどうか断定できなかった。そこで、本年度はラットの第5・第6腰椎の左側椎弓切除を行い、尾椎から採取した髄核組織を神経根周辺の硬膜外腔に移植した。術後14週間に移植髄核を摘出し凍結し、AGPC法にて抽出された一定量のtotal RNAからReverese transcriptase法にてcDNAを合成した。

合成された一定量のcDNAを用いてMCP-1の特異的primer存在でMCP-1を増幅し測定した。さらにmRNAの定量化をするためにcompetitive PCRも行った。対照としては尾椎椎間板から摘出した髄核組織の残りを用いた。結果: MCP-1のmRNAは手術後1、2週の標本で認められた。competitive PCRによる定量では、手術後1週間での発現量が最高であった。対照とした尾椎正常椎間板にはMCP-1の出現は認められなかった。以上検討によるmRNAレベルにおけるMCP-1発現時期は、昨年度の皮下に移植したモデルでのMCP-1陽性細胞の比率の結果と同一であり、移植髄核周辺におこる炎症巣形成の早期にMCP-1が強く関与していることが明らかになった。次年度は、MCP-1投与によっておこる炎症の促進によって神経組織に損傷が加わらないかどうかを検討し、臨床応用の可能性を確認する予定である。(昨年までの実績)2年間の研究結果から、5日間のMCP-1の連続注入で椎間板組織の縮小を促進することが明確となった。さらに、硬膜外腔移植モデルにおいても、m-RNAレベルでのMCP-1発現を確認し、移植後1週後という比較的早期に最高に達していることがわかった。従って、ヘルニア発症の比較的早い時期にMCP-1を連続的に投与することによりヘルニアの自然治癒を促進することが可能と考えられた。(今年度の実験内容)今年度は、MCP-1投与によって炎症反応が促進されることが、近傍にある神経根の麻痺を引き起こす可能性があるかどうかを検討した。ウイスターラットを用い、第5・第6腰椎の椎弓を左側だけ切除し、第5腰神経根と硬膜の境界部にMCP-1をしみこませたゲルホームを神経根に障害を加えないように設置した。第6腰神経根には処置を加えずシャム群とした。術後4週に、反対側の第5・第6腰神経根を露出し、左右の神経伝導速度を計測した。計測は、経頭蓋電気刺蔽による運動神経系の伝導速度と、神経根の直接刺激により第1腰椎高位の硬膜外腔から導出される知覚神経系の伝導速度を計測した。(結果)実験したウイスターラットで、明らかに歩様の異常を示したものはなかった。伝導速度に関しては、運動神経系も知覚神経系の伝導性は初回手術側である左側の若干の遅延が認められたが、第5腰神経根と第6腰神経根の間には伝導性の差は認められなかった。(考察)左側の伝導速度の遅延は、手術によって形成された瘢痕を2回目の手術時に剥離する際に神経を損傷してしまった可能性も考えられる。本研究結果で得られた所見からは、少なくともMCP-1の投与によって、炎症が惹起され神経根の損傷が加速されると言うことは認められなかったので、硬膜外腔への連続投与は臨床応用が可能と考えられた。
リアルタイムＰＣＲを用いたＤＮＡ脱メチル化部位を指標とする精液鑑定法の確立

精液特異的な脱メチル化領域として報告されているDACT1遺伝子領域について,バイサルファイトシークエンス法により,各種陳旧体液斑のメチル化状態の解析を行ったところ,陳旧によっても精液特異的な脱メチル化状態が保存されていることが確認され,法医学的精液検査の指標としての有用性が示唆された.さらに,実務を想定したより簡便な検査法として,TaqManプローブを用いたリアルタイムPCRによる,本領域のメチル化状態の検出系を確立した.本検査法は,精液証明の補助的検査法として,特に陳旧化した試料からの精液証明に有効な検査法となることが期待される.精液特異的な脱メチル化が報告されているDACT1遺伝子領域について,各種体液(精液,血液,唾液,膣内容物)及び陳旧体液斑(精液斑,血痕)からDNAを抽出し,バイサルファイトシークエンスによるメチル化状態の解析を行った.その結果,精液試料では極めて低いメチル化率,それ以外の体液試料では,高いメチル化率を示し,精液証明に有効な指標であることが示唆された.さらに,陳旧斑痕においても,メチル化状態が安定的に保存されていた.特に,陳旧により従来の精液検査で陰性となった精液斑でも脱メチル化状態が保存されており,精液証明における有用性が示された.一方で,高度に陳旧化した試料においては,メチル化解析に過剰なPCR増幅が必要であり,バイサルファイト反応の副作用として知られるDNA分解の影響が原因として考えられた.実務を想定した場合,検査の手間やコンタミネーションの危険性等の観点から,よりDNAへの影響の少ない,簡便で高感度な検査法の確立が必要であると考えられた.そこで,TaqManプローブを用いたリアルタイムPCRによる検出系の確立を試みた.DACT1遺伝子領域における特定のCpGサイトのメチル化及び非メチル化状態に対応するプローブを設計し,リアルタイムPCRでバイサルサイト処理した各体液及び陳旧体液斑由来のDNAを解析したところ,本検査法により高感度で簡便な精液DNAの判別が可能であることが示唆された.精液特異的な脱メチル化領域として報告されているDACT1遺伝子領域について,バイサルファイトシークエンス法により,各種陳旧体液斑のメチル化状態の解析を行ったところ,陳旧によっても精液特異的な脱メチル化状態が保存されていることが確認され,法医学的精液検査の指標としての有用性が示唆された.さらに,実務を想定したより簡便な検査法として,TaqManプローブを用いたリアルタイムPCRによる,本領域のメチル化状態の検出系を確立した.本検査法は,精液証明の補助的検査法として,特に陳旧化した試料からの精液証明に有効な検査法となることが期待される.精液特異的脱メチル化領域として報告されていた、DACT1遺伝子の近傍領域に存在するCpGアイランドについて、各種体液試料を用いてその体液特異性を再検証した。精液、血液、唾液、膣液由来のゲノムDNA各100ng(各5検体の混合試料)を用いて、バイサルファイトシークエンス法により各CpGサイトのメチル化様態について解析を行ったところ、精液DNAにおいて全体の約5%のCpGサイトがメチル化されていた一方で、その他の体液由来DNAでは、いずれも95%以上のCpGサイトがメチル化されており、報告通り精液特異的な脱メチル化が観察された。さらに、現場試料で想定される陳旧化した試料については、DNAメチル化を指標とした精液証明が同様に可能か、これまでの知見ではほとんど検証されていなかったことから、作製後約2年経過した精液斑及び約1.5年経過した血痕からそれぞれDNAを抽出し、各DNAについて、バイサルファイトシークエンスによりDACT1近傍領域のCpGアイランドの解析を行った。その結果、精液斑由来DNAでは多くのCpGサイトにおいて脱メチル化が観察された一方で、血痕由来DNAではほぼすべてのCpGサイトにおけるメチル化が観察され、新鮮な液体試料を用いた際の結果と同様の結果となった。これらの結果から、法科学分野で通常解析対象となる陳旧化した試料においても、メチル化を指標とした精液証明が可能であることが示唆された。当初の予定どおり、DACT1近傍領域についてバイサルファイトシークエンスによる各体液間でのメチル化状態の比較を行い、リアルタイムPCRに用いるプライマー及びプローブ設計のための基礎的データを得ることができた。しかしながら、もうひとつの精液特異的脱メチル化領域として報告されているUSP49遺伝子近傍については、解析が完了しておらず、次年度に引き続いて行っていく予定である。また、リアルタイムPCRによる検出系の確立にはまだ至っていないものの、次年度に検証予定であった陳旧化試料からの検出可能性についての検討を繰り上げて行うことができた。以上のように概ね順調に進展していると考えられる。前年度に行ったバイサルファイトシークエンスの結果をもとに、精液特異的脱メチル化領域であるDACT1遺伝子近傍領域中のCpGサイトを指標としたリアルタイムPCRによる検出系の確立を行う。さらに、USP49遺伝子近傍領域についても、バイサルファイトシークエンスによる精液特異性の再検証を進め、その後リアルタイムPCRによる検出系の確立を目指す。また、陳旧化試料からの検出についても、斑痕形成からより時間の経過した試料を用い、他の検査法との比較とともに本検査法の有効性について検証を行う。さらに、実際の捜査試料では、斑痕の存在部位の検出のため、紫外線などの光源の照射や、さまざまな試薬が噴霧されている可能性もあることから、これらの予備検査に対するDNAメチル化状態の安定度についても検証を行う。

24年度に予定していたUSP遺伝子近傍領域のバイサルファイトシークエンスを行うため、24年度分の残りの研究費を25年度分に組み込み、次年度の研究計画を遂行していく予定である。また、実験以外にも、論文投稿のための英文校閲料や学会発表のための出張費等の諸費用も25年度の研究費から使用する予定となっている。
脱神経筋および損傷筋モデルにおける神経栄養因子の発現解析

平成17年度は、損傷筋の修復過程で筋肉内に増加したNeuregulinの局在の変化を経時的に調査することにより、Neuregulinが筋の再生過程でどのように作用するかにっいて検討を行った。さらに、眠れる筋芽細胞として筋肉の再生に重要な役割を果たすとされる筋衛星細胞(satellite cell)との関連性についても検証した。10週齢のWistar系雄ラットを使用し、前脛骨筋に塩酸ブビバカインを注入して筋損傷モデルを作製した。手術1,2,4,6,10,および14日後に手術側の前脛骨筋およびその支配神経領域である腰髄を摘出し、凍結切片を作成した。筋損傷後の修復過程を静止期、増殖期、分化期に分類し、各時期において、FITCおよびRhodaminの蛍光抗体を使用した二重染色法を用い、NRGの局在を観察した。筋肉内のNRG蛋白およびNRG mRNAは損傷後一旦減少するものの、徐々に増加することは前回報告したとおりである。蛍光染色では、静止期においてNRGの発現は、AChRと一致していたが、satellite cellのマーカーであるC-Metとは局在が必ずしも一致しているわけではなかった。一方、増殖期では増殖幹細胞のマーカーであるPCNAやBrdUと局在が一致していた。分化期ではsatellite cellのマーカーであるMyogeninと局在が一致するNRGの免疫活性の増加を確認することができた。以上の結果から、正常状態において神経筋接合部(NMJ)に存在するNRGは筋組織が一旦損傷されると、活性化され増殖し、筋細胞の核として働くsatellite cellと関係しながら修復、再生に重要な役割を果たしていると推察した。平成16年度は、Neuregulinが筋損傷後の筋肉内でどのように発現するかまた、脊髄神経細胞でのNeuregulinの発現変化を調査することにより、筋肉内でのNeuregulinの変化が中枢の脊髄神経細胞体に影響をもたらすのかどうかについて検討を行った。さらに、筋修復時に発現するNeuregulinとその受容体であるErbB2の局在の相同性について蛍光顕微鏡を用いて検証を行った。Western blot法では、筋肉内のNeuregulin蛋白は損傷後1日目に減少し、4日目で最も減少した後に14日目まで徐々に増加した。脊髄でも同様にNeuregulin蛋白は筋損傷後徐々に増加した。免疫沈降法の結果からErbB2のリン酸化活性は損傷12時間後に最も高かった。免疫組織染色においては損傷筋の再生過程において発現が増加していることを確認できた。また、脊髄においては損傷側の脊髄前角細胞にNRGの免疫活性の増加を確認することができた。蛍光抗体を用いた2重染色でNeuregulinとAChR、ErbB2のcolocalizeを確認することができた。NRG mRNAにおいては筋肉内では損傷後2日目から6日目にかけて増加を認めたが、脊髄では経時的な変化は認めなかった。これらの結果は筋損傷後の修復過程とNRGに密接な関係のあること、および再生筋内に発現したNRGは神経細胞体に運ばれる可能性があると推察した。平成17年度は、損傷筋の修復過程で筋肉内に増加したNeuregulinの局在の変化を経時的に調査することにより、Neuregulinが筋の再生過程でどのように作用するかについて検討を行った。10週齢のWistar系雄ラットを使用し、前脛骨筋に塩酸ブピバカインを注入して筋損傷モデルを作製した。

筋損傷後の修復過程を静止期、増殖期、分化期に分類し、各時期において、FITCおよびRhodaminの蛍光抗体を使用した二重染色法を用い、NRGの局在を観察した。筋肉内のNRG蛋白およびNRG mRNAは損傷後一旦減少するものの、徐々に増加することは前回報告したとおりである。蛍光染色では、静止期においてNRGの発現は、AChRと一致していたが、satellite cellのマーカーであるC-Metとは局在が必ずしも一致しているわけではなかった。一方、増殖期では増殖幹細胞のマーカーであるPCNAやBrdUと局在が一致していた。分化期ではsatellite cellのマーカーであるMyogeninと局在が一致するNRGの免疫活性の増加を確認することができた。以上の結果から、正常状態において神経筋接合部(NMJ)に存在するNRGは筋組織が一旦損傷されると、活性化され増殖し、筋細胞の核として働くsatellite cellと関係しながら修復、再生に重要な役割を果たしていると推察した。
ストレス感受性の個性創発の分子神経基盤解析

本研究は、遺伝・環境相互作用に起因する精神疾患発症脆弱性の個体差を“個性"の現れ方の1つと捉え、精神疾患の発症リスクと想定されているストレス感受性の個体差の創発基盤を明らかにすることである。ストレス感受性の個体差・性差形成が、いつ・どこで・どのようなメカニズムで構築されているのかについて、その分子・神経メカニズムの解明に挑む。本提案課題により、うつ病などのストレス性精神疾患発病脆弱性の「個性」を創発する分子・神経基盤の解明が期待できる。得られた成果は、精神疾患の発病機序の解明ならびに新たな予防法・治療法の確立が期待できる。
高齢期における配偶者との死別に関するパネルスタディ

本研究では死別後の生活の再構成の過程や適応、死別後に生じる生活上の問題を明らかにすることを目的として、縦断研究を行ってきた。平成元年2-3月に死別後1年-1年6ケ月を経た55歳以上の男女228人にたいする調査、平成3年9-10月に死別後3年7ケ月4年1ケ月の同一対象者に第2回目の追跡調査の調査を行ない110人の回答を得た。7年11月には死別後7年8ケ月8年2ケ月の経過した者に第3回目調査を行った。調査項目は、平成元年2-3月に実施した死別後1-1年6ケ月を経た人々を対象にした調査票に基づいて、今回の死別後7年6ケ月-8年を経た同一対象者に対する質問項目を検討し、再度質問する項目と、省略する項目、新たに加える項目に分けて、調査票を作成してプリテストを行った。その結果83人の回答を得た。不能票27人の内訳は、死亡6人、病気2人、入院1人、転居1人、拒否8人、不在4人、再婚1人、多忙4人である。現在、調査結果は分析中であるが、おもな結果を一部述べると、第2回調査の時点ですでに死別からの回復がみられたが、今回においても同様であった。さらに、質的研究のための質問項目についても検討し、作成した。その内容は、生前の夫婦関係が、その後の親子や親族や友人などの人間関係にどのような影響を与えるか、配偶者に死別して、一人で生きて行く上でどのようにアイデンテイテイを確立したのか、配偶者の死を経験して死に対する意識が変化したかなどを知ることにより、大量調査を補足した。対象者の多くは、配偶者との死別をショックであり、とても寂しいと話しているが、死別前の夫婦関係については、夫中心の生活でがまんを強いられることが多く、結婚生活について必ずしも満足をしていなかった。そして、死別後の現在の生活が自由であることを述べていた。
ミトコンドリア電子伝達系酵素欠損症における遺伝子の発現とその異常

ミトコンドリアのエネルギー産生系は核DNAとミトコンドリアDNAにより遺伝的に二重支配を受けている。電子伝達系酵素欠損症における遺伝子の発現とその異常を解明するために、研究代表者らは酵素サブユニットの免疫化学的分析、ミトコンドリアDNAの分子遺伝学的解析などの多面的アプローチにより次のような研究成果を挙げた。1)電子伝達系複合体欠損症における分子構築異常の解析:骨格筋に限局した複合体IV欠損症の患者で、複合体IVのサブユニットのうちミトコンドリアDNAでコードされたサブユニット2が特異的に欠損していること、同時に複合体Iおよび複合体IIIのサブユニットが減少していることを明らかにした。また、MILASと呼ばれる脳卒中様発作を特徴とする脳筋症の原因が複合体Iのサブユニットの欠損にあることを明確にした。またEIPRスペクトルによる解析によっても、複合体Iの鉄ーイオウクラスターの不均等な減少を明らかにした。これらの実験事実から、ミトコンドリアDNAの異常が原因となって複合体のサブユニット異常・分子構築異常が生じているものと推定された。2)ミトコンドリア複合体I欠損症が肥大型心筋症の病因となることの発見:研究代表者らは肥大型心筋症により死亡した患者においてミトコンドリア電子伝達系複合体Iのサブユニット欠損を見出した。3)ミトコンドリア遺伝子異常の母系遺伝の実証:研究代表者らは、KearnsーSayre症候群の原因がミトコンドリアDNAの欠失の母系遺伝によることを証明した。すなわち本症候群の不全型である慢性進行性外眼筋麻痺の母娘例において、ミトコンドリア遺伝子の欠失が母親から娘に遺伝し、それが本症候群の原因となっていることを、世界で初めて明らかにした。このように、ミトコンドリア遺伝子の変異が様々な疾患の病因となっていることが明らかになった。そこで、最近開発されたPCR法を利用し、ミトコンドリアDNA変異の解析を進めている。1.ミトコンドリア脳筋症におけるサブユニット異常の解析1)脳卒中様発作を伴う病型(MELAS)の4症例の生検骨格筋ミトコンドリアを分析した結果,その全例において複合体Iの活性とサブユニット含量の低下を見出した.特に鉄-イオウ画分中の75KDaのサブユニット,フラヒン蛋白質画分中の51KDaのサブユニット,および疎水性蛋白質画分中の数種のサブユニットの減少が他のサブユニットに比べて顕著であった.さらにEPRスペクトル分析の結果,複合体IのN2およびN3鉄-イオウクラスターの減少が他に比べて著しく,複合体Iの構築異常が証明しえた.別の患者では複合体Iの欠損に加えて,複合体IVあるいは複合体Vの欠損も見出された. 2ミオクロヌス癲癇を伴う病型(MERRF)では複合体IVの欠損のみならず複合体I,複合体III,あるいは複合体Vに欠損が認められた.これに対し,複合体IIあるいはcitrate.synthaseの活性の低下は見られず,ミトコンドリアDNA自身の変異がその原因として第一義的に考えられた.3)致死性乳児型ミオパチーの家系において酵素サブユニットの広範な欠損が見出された.同時に複合体Iと免疫交差性を示す異常蛋白質が蓄積していることが明らかになり,複合体Iの高分子量のサブユニットの1つに対する遺伝子の異常が推定された.2.ミトコンドリアDNA異常の解析:各組織から全DNAを抽出し,ヒトmtDNAおよびその断片をプラスミドpUC19にクローン化したものをプローブとしてサザンブロット法によって, mtDNAの部分的欠失などの変異の分析を現在行っている.