hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
精神障害当事者のためのソーシャルサポート質問紙の段階的開発

また、居住環境も変わり、単身赴任の状態になり、慢性的な不眠を抱えることとなった。どのため、メンタルな面で集中力の低下をきたした。この点については雇用者と調整し、次年度以降、勤務形態を非常勤に変え、疲労が重ならない勤務をすることと、単身赴任先から勤務するのでなく、本宅からの移動も含め、考慮してもらう勤務体制に変えて頂いた。一方で、情報収集は続けてきており、当事者や当事者の家族との活動を通じて、ソーシャルサポートが生活の中でどのように作用しているのか、把握し、深めることができている。現在は感情調節困難な方を家族メンバーにかかえる方々と定期的に活動し支援のありかたをともに学んでいるところである。質問紙によるソーシャルサポートネットワークの規模を測定するにあたり、従来の質問紙による電話の頻度等の質問項目をSNSに置き換える内容の検討を昨年度に引き続き行った。現代社会におけるSNSの一つは実体を持った知友とのコミュニケーションツールとしてのものである。現在では家族内の意思伝達の手段としてLINE等を用いたコミュニケーション手段として存在しており、対面した会話よりも、SNSを用いたコミュニケションの方が頻度、時間数も多いことがしばしば見られた。また、電話機による会話は減少し、携帯電話(スマートフォンを含む)を用いた会話が増え、遠隔でのコミュニケーション手段が変化している。また、手紙という紙媒体を用いた伝達は減少し、SNS等のメールを用いたコミュニケションに変化している。もう一つの存在はバーチャルコミュニティーにおける知友の存在であり、特定のSNSの中で、知り合い、OFF会等に参加しなければ、実体を持たない知友として存在する。以上のSNSの存在を前提にソーシャルサポートネットワークの規模の質問項目を作成し次に、ノーバックのNSSQを参考にしながら、ソーシャルサポートを受ける対象者をNSSQでは一人一人思い浮かべて回答しているが、多くの人々がソーシャルサポートを得ることについて、その内容ごとに対象者をソーシャルサポートネットワークから選択している実態を踏まえ、階層化した質問紙を検討する段階に至った。また、感情調節に問題のある精神障害者の家族との支援活動を通して、家族個々の日常は孤立しており、ピアの会合に参加することが家族自身の堪えている心情の吐露の場ともなり、情緒的支援、情報的支援を与えて居ることの実態が理解できた。上記のことも含め、質問紙の妥当性について検討しているところである。平成29年度は原則週3日勤務の非常勤雇用の特任教授として勤務し、約役300Km、片道5時間をかけ移動し、ホテルに3泊する状態が続いていた。学部の授業、修士課程の授業、研究指導に60%強のエフォートを使い、大学院の高度実践看護師の更新や大学院の学務、学部の領域長としての学務に40%のエフォートを使ったため、ほぼ研究に傾注する時間が取れなかった。
サイトカイン遺伝子導入による自己免疫疾患の治療法の開発

(1)MBP特異的Tcell lineの樹立:ルイスラットをミエリン塩基性蛋白(MBP)ペプチド(68-88)で免疫し、9日後に所属リンパ節よりリンパ節細胞を採取した。このリンパ節細胞を、MBPによる抗原刺激と、IL-2による刺激を交互に繰り返しながら培養することによって、MBP特異的T cell lineを樹立した。さらに、このT cell lineを同系マウスに移入して、実際に脳炎惹起性であること、すなわち生体内でも脳組織に特異性があることを確認した。(2)サイトカインの遺伝子の発現ベクターの作成:ラットIL-4、ヒトIL-10、ヒトTGFbetaの各遺伝子をシグナル配列とともにレトロウイルスLTRプロモーターを持つベクターに組み込んだ。TGFbetaは通常潜在型として産生され、細胞外で活性化されるが、あらかじめ遺伝子の2カ所に点変異を挿入することによって常に活性型とすることが可能なことが知られているため、PCR法を利用してこの変異体も作製した。次に、これらのベクターをCos細胞にトランスフェクトし、その培養上清中に各サイトカインが発現することをELISA法にて確認した。さらに、各サイトカインを含む培養上清をMBP特異的Tcell lineに添加したところ、変異型TGFbeta、酸処理TGFbetaはT細胞の増殖を強力に抑制した。T cell lineへの遺伝子導入:サイトカインベクターのTcell lineへの遺伝子導入の予備的検討として、高力価のreporter gene発現ウイルスを用いて実験を行った。ecotropic envelope、amphotropic envelopeのどちらのレトロウイルスベクターも効率よくマウス3T3細胞に感染することを確認しているが、T cell lineへの感染効率は悪く、現在遺伝子導入方法について検討を重ねている。(1)MBP特異的T細胞株の樹立:SJLマウスをMBペプチド(68-88)で免役し、9日後に所属リンパ節よりリンパ節細胞を採取、これをMBPとIL-2で交互に刺激することによってMBP特異的T細胞株を樹立した。そして、このT細胞株は同系マウスに移入すると特異的に脳炎を惹起することが確認された。(2)サイトカイン遺伝子ベクターの作成:ラットIL-4,ヒトIL-10,ヒトTGFβ各遺伝子をシグナル配列と共にレトロウイルスLTRプロモーターを持つベクターに組み込んだ。また、TGFβ遺伝子にGene Soeingにより2ヶ所の点変異を挿入することにより、常に活性型となるTGFβ変異遺伝子を作成した。そして、これらのベクターをCOS細胞にトランスフェクトし、その培養上清中に当該のサイトカインが産生されていることをELISA法により確認した。またTGFβ変異遺伝子の遺伝子産物は、酸あるいは熱処理を必要とせずに活性型となっており、MBP特異的T細胞株の増殖を強く抑制することが確認された。これらのサイトカイン遺伝子ベクターは広範囲の細胞で作用を発揮するため、他の細胞をターゲットとした遺伝子療法にも有用なものと思われる。

TGFbetaは通常潜在型として産生され、細胞外で活性化されるが、あらかじめ遺伝子の2ヵ所に点変異を挿入することによって常に活性型とすることが可能なことが知られているため、PCR法を利用してこの変異体も作製した。次に、これらのベクターをCos細胞にトランスフェクトし、その培養上清中に各サイトサインが発現することをELISA法にて確認した。さらに、各サイトカインを含む培養上清をMBP特異的Tcell lineに添加したところ、変異型TGFbeta、酸処理TGFbetaはT細胞の増殖を強力に抑制した。(3)Tcell lineへの遺伝子導入:サイトカインベクターのTcell lineへの遺伝子導入の予備的検討として、高力価のreporter gene発現ウイルスを用いて実験を行った。ecotropic envelope、amphotropic envelopeのどちらのレトロウイルスベクターも効率よくマウス3T3細胞に感染することを確認しているが、T cell lineへの感染効率は悪く、現在遺伝子導入方法について検討を重ねている。
レーザーによるCa-48の高濃縮技術の研究

ニュートリノ物理学の分野で行われている、ニ重ベータ崩壊実験研究のために純度の高いCa-48同位体が必要である。しかしCa-48の天然存在比が0.187%と小さいため、本研究ではレーザーによるCaの同位体濃縮技術の開発を行った。真空中でCaの原子ビームを発生させ、側面から半導体レーザーを照射することにより、特定の同位体の進行方向を変えることで、原子ビームから取り出す方法についてその実現性を調べた。その結果、原子ビームから高濃度(10%以上)のCa-48が高い回収効率(20%以上)で取り出せることが分かった。ニュートリノのマヨラナ粒子性の検証のために、世界各国で二重ベータ崩壊実験研究が行われている。二重ベータ崩壊核種のうちでCa-48は、崩壊エネルギーが大きいためバックグラウンドノイズの影響を受けにくいとされているが、同位体の天然存在比が0.187%と小さいためその濃縮が期待されている。本研究では、Ca原子ビームにレーザーを照射することにより特定の同位体のみを偏向させ、原子ビームから取り出す方法に着目し、実験的研究を進めた。Ca原子ビームの発生:Caをヒータ加熱により550°Cに加熱し蒸発させたのち、直径1mmのアパーチャを2枚設置することにより、垂直方向に原子ビームを形成した。原子ビームの広がり角は、以下に記す方法による原子分布の測定と、加熱温度から推測される原子ビームの速度から4.7mradと見積もられた。原子密度分布の測定:原子ビーム上方でパルス発振Nd:YAGレーザーの第2高調波照射によるイオン化と飛行時間式質量分析を組み合わせ、YAGレーザーの照射位置を変化させることで各同位体の水平方向の分布をモニターできるようにした。原子ビーム偏向実験:波長422nm近傍で発振するcw半導体レーザーをCa-40の吸収波長に性格に同調し、原子ビーム全体に照射し、Ca-40の水平方向の分布を調べた。半導体レーザー光の照射時、遮断時に、原子ビームの片側ではCa-40の減少し、反対側で増加する様子が確認できた。この分布の変化を詳細に解析することにより、Ca-40のビームが3.75mrad偏向されたと見積もられた。Ca-40については、特に変化は見られなかった。このことは、この手法によって、特定の同位体が選択的に偏向させることができることを示している。また、原子ビームの広がり角はさらに小さくするか、半導体レーザーの照射条件を工夫することで高い濃度で同位体が回収できると考えられる。当初の実施計画では1レーザー照射によるCa原子の偏向実験および2同位体分離実験の2つを掲げていた。そのために、半導体レーザーの準備、同位体分析系の整備が必要であったがすべて順調に準備でき、特に半導体レーザーに関しては、新たに出力の大きい装置を導入することにより実験が容易となった。1の項目についてはクリアでき、2についても偏向の同位体選択性が確認された。ニュートリノのマヨラナ粒子性の検証のために、世界各国でニ重ベータ崩壊実験研究がおこなわれている。ニ重ベータ崩壊核種のうちでCa-48は崩壊エネルギーが大きいため、バックグラウンドの影響を大きく受けることなく信号の測定ができるとされているが、Ca-48同位体の天然存在比が0.187%と小さいためその同位体濃縮が期待されている。本年度も昨年度に引き続き、真空中で発生させたCaゲンシビームに、直角方向から青色(波長422nm)半導体レーザーを照射することにより特定の同位体のみを原子ビームから偏向させる実験を進めた。昨年度はレーザーイオン化法を用いて原子ビームプロファイルを上方で測定することにより半導体レーザーによる原子ビームの偏向が実験的に確認したが、本年度は偏向用レーザーとは別に準備した半導体レーザーを用いて原子ビームの吸収スペクトルを測定する方法を試みた。つまり、原子ビームが偏向されるとドップラー効果により吸収スペクトルがシフトすることを利用してへんこうの程度を評価しようとする試みである。実験の結果、1吸収スペクトルは存在比の小さいCa-48のピークもSN比よく測定できること、2偏向用レーザーを特定の同位体(例えばCa-44)に同調した場合、吸収スペクトルシフトはCa-44にのみ現れ、3他の同位体ではシフトが観測されなかったことが確認された。このことから、本観測手法により選択的な同位体の偏向(同位体分離)が確認され、また感度のよいことから標的同位体であるCa-48の分離実験観測や分離性能の直接的なモニター法として利用できることが分かった。当初の計画は1Ca原子の偏向実験、および2同位体分離実験の2つを掲げていた。1については初年度末に行った実験、つまり偏向用レーザー照射時、非照射時における原子ビームのプロファイルを測定、比較することにより確認された。2については昨年度実験に導入した偏向原子ビームのドップラーシフトを観測することにより明確に同位体選択的な原子ビームの偏向が確認された。ニュートリノのマヨラナ粒子性を検証するために、二重ベータ崩壊実験研究が世界各国で行われている。二重ベータ崩壊核種のうちでCa-48は崩壊エネルギーが大きいため、バックグラウンドの影響を大きく受けることなく信号の測定ができるとされているが、Ca-48の天然存在比が0.187%と小さいため、その同位体濃縮技術の開発が切望されている。

本研究ではCaの原子ビームに標的同位体だけに共鳴するレーザー光を照射することにより、この同位体に光子の運動量を付与し、選択的に原子ビームから偏向させ濃縮同位体を回収する手法が可能であり、有効であると考え、その性能を評価する目的で実験を実施した。実験装置の概要は以下の通りである。真空チャンバー内でCaをヒータ加熱で550°Cに加熱しCa原子蒸気を発生させ、2つのアパーチャでコリメートして原子ビームとした。Caの422.7nmの共鳴ライン近傍で同調可能な連続発振半導体レーザーを偏向用レーザーとして用い、Ca原子ビームと直角に交差させた。これに共鳴する同位体はレーザー光の伝搬方向に運動量を得て偏向する。偏向用レーザー照射領域の上方で各同位体の蒸気密度プロファイルを調べた。これにはQスイッチNd:YAGレーザーの第2高調波の集光、照射によるイオン化と飛行時間型質量分析の手法を用いた。これらにより、レーザー照射領域の幅、レーザーパワー密度等を変化させ、実験を行った結果、次のようなことが明らかになった。1レーザー照射による原子ビームの偏向には明瞭な同位体選択性がある。2本実験での範囲で得られた最大の偏向角は12mradであった。3一連の実験結果は開発したシミュレーションコードによる計算で(その精度は改善の余地があるが)ある程度説明ができた。2、3と関連して本実験装置の範囲で発生したCa-48のうちの23%を濃度11%の濃縮Caとして回収できる見積もりが得られた。ニュートリノ物理学の分野で行われている、ニ重ベータ崩壊実験研究のために純度の高いCa-48同位体が必要である。しかしCa-48の天然存在比が0.187%と小さいため、本研究ではレーザーによるCaの同位体濃縮技術の開発を行った。真空中でCaの原子ビームを発生させ、側面から半導体レーザーを照射することにより、特定の同位体の進行方向を変えることで、原子ビームから取り出す方法についてその実現性を調べた。その結果、原子ビームから高濃度(10%以上)のCa-48が高い回収効率(20%以上)で取り出せることが分かった。当初の計画通り、1Ca原子の偏向実験、および2同位体分離実験は引き続き行い、レーザー照射による原子ビームの偏向特性並びに同位体選択性について知見を深め、分離装置の概念設計のための基礎データとする。具体的には、以下の計画に従う。1Ca原子の偏向実験:偏向用半導体レーザーの照射条件(原子ビーム方向の照射幅、パワー密度等)による偏向の度合いを明らかにし、最適な照射条件を検討する。この測定を行うために質量分析に加えて、吸収スペクトルのドップラーシフトを測定する方法も新たに試みる。2同位体分離実験:予想が示す通り、同位体の選択性が高いことを実験的に明確に示す。上の1、2に加えて、大量分離を考えたときに考慮しなければならない問題についても検討する。当初の計画通り、1Ca原子の偏向実験、および2同位体分離実験を引き続き行い、分離に最適な条件を明らかにしていく。とくに分離実験においてはCa-48の濃縮を中心に置いた実験をしていきたい。また、大量分離を考えたときの問題についても検討していく。レーザー分光、量子エレクトロニクス28年度の実験的研究においては、主として強度の小さい半導体レーザーを用いた実験の頻度が多く、レーザー光折り曲げ用ミラーや集光用レンズ等の光学部品の損耗が少なかったので、光学部品費が節約できた。
鋳型内サイクロンによる凝固組織制御を利用した高強度精密ダイカスト法の開発

ダイカスト時にスリーブ内に溶湯を注湯する際の温度を適切に制御することで,スリーブ内にて半凝固状態を保持できることがわかった.また初晶晶出の余地を適切に残すことで,射出後の金型内での凝固も制御することができ,従来ダイカスト法では実現できなかった超微細初晶組織を得ることができることがわかった.薄肉部の流動性や寸法精度についても従来ダイカスト法と比較し改善可能であることがわかった.本研究は,ダイカストマシンを単なる大量生産手段としてではなく,高圧・高速および強冷却が得られるという特徴を積極的に利用することで,より微細かつ均一な組織が得られる手法の開発を行おうというものである.従来の半凝固ダイカスト法では,通常外部で半凝固スラリーを作製した後ダイカストマシンに投入し,鋳造を行う.一方本研究ではダイカストプロセスにおける高い流速と強冷却を利用し,超微細・均一な組織を有するスラリーをダイカスト成形プロセス中に生成可能な射出条件検討を行う.そして高精度・高強度成形を行うための基礎研究を行い,さらなる高強度が見込める展伸材への展開を目指すものである.26年度は金型内における溶湯の冷却挙動と,その解析手法確立を目指した.まず,溶湯の冷却挙動についてはAl合金をスリーブに注湯した際の温度変化を測定し,注湯温度と冷却挙動の関連を調べた.その結果,必ずしも注湯温度が低いほどその後の冷却が早くなるとも限らず,初期凝固殻によるエアギャップ生成,およびそれが熱伝達係数に及ぼす影響を適切に考慮することが重要であることが示唆された.続いて鋳造シミュレーションソフトによりサイクロンを想定した形状の湯流れ・伝熱解析を行い,サイクロン部における流動・冷却挙動を検討した.その結果,本手法において最も重要なのはサイクロンの入り口および出口の位置の設定であることがわかった.上記実験結果と合わせると,解析時は材料,注湯温度によって熱伝達係数を適切に設定する必要があることがわかった.また流速によっても伝熱状況は変わってくることが想定される.本研究は,ダイカストマシンを単なる大量生産手段としてではなく,高圧・高速および強冷却が得られるという特徴を積極的に利用することで,より微細かつ均一な組織を得ることが出来る手法を目指して研究・開発するものである.従来の半凝固ダイカスト法では,通常外部で半凝固スラリーを作成した後ダイカストマシンに投入し,鋳造を行う.一方本研究ではダイカストプロセスにおける高い流速と強冷却を利用し,超微細かつ均一な組織を有するスラリーをダイカスト成型プロセス中に生成することで,余計な装置を不要とし,さらにそれによる頻繁な小トラブルの削減を目指す.従来のダイカスト法と変わらない設備を用い,注湯・射出条件および金型の設計のみで従来の半凝固鋳造と同等以上の性能を可能とする条件の検討を行うことで,高精度・高強度成型を行うための基礎検討を行い,さらなる高強度が見込める展伸材への展開を目指すものである.初年度は金型内における溶湯の冷却挙動と,その解析手法確立を目指した.その結果,鋳型内にサイクロンを設置して冷却・撹拌制御するためには,最も重要なのは装置の入口および出口の位置であることがわかった.ダイカストの金型にて適切な入口・出口位置を設置するための設計技術確立は困難なため,2年度は入口部分における溶湯制御により,解決を試みた.その結果,ダイカスト時にスリーブ内に溶湯を注湯する際の温度を適切に制御することで,スリーブ内にて半凝固状態を保持できることがわかった.また初晶晶出の余地を適切に残すことで,射出後の金型内での凝固も制御することができ,従来ダイカスト法では実現できなかった超微細初晶組織を得ることができることがわかった.薄肉部の流動性や寸法精度についても従来ダイカスト法と比較し改善可能であることがわかった.展伸材の成型も可能であったが,特性については今後の課題である.ダイカスト時にスリーブ内に溶湯を注湯する際の温度を適切に制御することで,スリーブ内にて半凝固状態を保持できることがわかった.また初晶晶出の余地を適切に残すことで,射出後の金型内での凝固も制御することができ,従来ダイカスト法では実現できなかった超微細初晶組織を得ることができることがわかった.薄肉部の流動性や寸法精度についても従来ダイカスト法と比較し改善可能であることがわかった.本研究においてはサイクロン部における溶湯の強撹拌と温度の均一化,そしてその溶湯を製品部にスムーズに射出することができる条件設定が重要である.26年度は解析のための取得および基礎的な解析条件検討を行った.その結果,材料の種類に加え,注湯温度が伝熱条件に大きく影響を及ぼすことがわかった.また鋳型形状設計においても,サイクロンそのものの形状よりも,入り口と出口の位置の設定が重要であることがわかった.最終年度である27年度はこれらの知見をもとに実際に金型を作成し,成形実験を行うものであり,26年度はそのための基礎技術開発がおおむね順調に行われたと考えられる.金属生産工学27年度では,26年度に得られた知見をもとに,より具体的な設計を行い,実際に金型を作成する.金型には組織制御部,強度試験片および精度試験片を設置する.材料を一般的なダイカスト用合金ADC12のほか,高強度アルミニウム合金である2000系や7000系合金についても試験を行うことで,本成形法による高精度化・高強度化の確認を行う.
ヒト人工染色体の受精卵への直接導入によるHAC保有マウス迅速作成技術の開発

近年開発されたヒト人工染色体HAC(Human Artificial Chromosome)は、哺乳類細胞あるいは哺乳類動物個体における新しいタイプの巨大遺伝子クローニングベクターとして注目されている。HACは染色体に組み込まれることなく独立に存在し、安定に維持されるので、HAC上の遺伝子群は本来の染色体上に存在する時とまったく同様に組織特異的かつ時期特異的な発現を示すことが明らかにされており、これがHACの大きな利点となっている。このように優れた特徴を持ち、将来の発展が期待されるHACではあるが、現在の技術では、任意の系統のマウスへ迅速にHACを導入するまでには至っていない。本研究においては、あたかも大腸菌宿主-ベクター系におけるプラスミドベクターと同様にHACを任意のマウス系統に自由自在に導入するための新規技術の開発を目指した。HACを保有するマウスES細胞TT2Fを培養し、コルセミド処理により分裂中期染色体を調製するための諸条件を検討した。また、調製した染色体全体から、約2Mbと推定されるミ二染色体であるHACをそれ以外のマウス染色体とサイズの違いに基づいて分離精製するために、ショ糖密度勾配遠心法による分画の諸条件を検討した。また、このようにして得られたHAC画分の精製、濃縮法を検討した。顕微鏡下で1本1本HACを採取して、マウス受精卵の核へのマイクロインジェクションで注入するというのは、非常に困難であることが分かり、インジェクションに供する液量に合わせてHACの濃度を調整するのが、現実的と考えた。1.染色体分画法の検討ヒト人工染色体HAC(Human Artificial Chromosome)を保有するマウスES細胞TT2Fを培養し、コルセミド処理により分裂中期染色体を調製するための諸条件を検討した。また、調製した染色体全体から、約2Mbと推定されるミニ染色体であるHACをそれ以外のマウス染色体とサイズの違いに基づいて分離精製するために、ショ糖密度勾配遠心法による分画の諸条件を検討した。このようにして得られたHAC画分は、マウス受精卵の核にマイクロインジェクションで注入する目的を達成するためには、まだまだ純度、密度共に、不十分であり、さらなる精製・濃縮法の開発が必要であることが判明した。今後は、抗クロマチン抗体を用いたアフィニティー精製など、精製・濃縮法の開発を試みる。また、顕微鏡観察下でHACを1本1本採取して、受精卵へのマイクロインジェクションに供するために必須の非侵襲的な染色体の可視化法の開発も検討する。2.HACDNA分画法の検討HAC保有マウスES細胞TT2Fをアガロースゲルブロックに封入し、そこから常法に従い調製した超高分子量染色体DNAをパルスフィールドゲル電気泳動にかけ、HACのDNAを分離した。しかし、マイクロインジェクション用に精製したHACDNAは、精製の過程で機械的勇断力により容易に切断されてしまうため、今回の目的に供することは困難であると判定した。今後は、染色体調製法に標的を絞って、HAC保有マウス迅速作成技術の開発に挑む。
家庭用防虫・防臭剤パラジクロロベンゼンの肝毒性に関する研究

1.家庭用の防虫・消臭剤として大量に使用されているパラジクロロベンゼン(PDCB)は,マウスに単独で投与したときは,きわめて弱い急性毒性しか示さない。しかし,あらかじめグルタチオンの生合成阻害剤であるブチオニンスルフォキシイミン(BSO)を投与して組織のグルタチオンレベルを低下させたマウスに,PDCBを経口投与すると激しい肝障害が発生することを見いだした。2.PDCBによる肝障害は,小葉中心性壊死,血清GPT値の上昇,および肝中カルシウムイオンの上昇などによって特徴づけられることを明らかにした。3.PDCBによる肝障害は,マウスを薬物代謝酵素阻害剤で前処理するとその発現が抑制されることを見いだし,この肝毒性の発現にPDCBの代謝的活性化反応が関与していることを明らかにした。4.マウスにグルタチオンの生合成阻害剤ブチオニンスルフォキシミン(BSO)を単独で投与したときと,BSOとパラジクロロベンゼンを組み合わせて投与したときの,肝中グルタチオン,プロテインチオール,過酸化脂質濃度の変化を経時的に追跡し,肝細胞壊死の発生に先だつプロテインチオール濃度の低下や過酸化脂質濃度の上昇は認められないことを明らかにした。5.パラジクロロベンゼンのフェノール・キノン型代謝物をBSOと組み合わせて投与する実験をおこないパラジクロロベンゼンとBSOの組み合わせ投与によって発生する肝障害にはこれらの代謝物の関与は少ないことを明らかにした。本年度の研究によって次のような成果をあげることができた。1.家庭用の防虫・消臭剤として大量に使用されるパラジクロロベンゼン(PDCB)は、マウスに単独で投与したときは、きわめて弱い急性毒性しか示さない。しかし、あらかじめグルタチオンの生合成阻害剤であるブチオニンスルフォキシイミン(BSO)を投与して組織のグルタチオンレベルを低下させたマウスに、PDCBを経口投与すると激しい肝障害が発生することを見いだした。2.PDCBによる肝障害は、小葉中心性壊死、血清GPT値の上昇、および肝中カルシウムイオンの上昇などによって特徴づけられることを明らかにした。3.PDCBによる肝毒性の時間的経過およびPDCBの用量との関係を明らかにした。4.PDCBによる肝障害は、マウスを薬物代謝酵素阻害剤である二硫化炭素、メトキサレン、ピペロニルブトキサイドなどで前処理するとその発現が抑制されることを見いだし、この肝毒性の発現にPDCBの代謝的活性化反応が関与していることを明らかにした。5.本年度に購入した分光光度計は主として肝毒性の生化学的指標である血清GPT値、肝中カルシウム値の測定のために使用した。パラジクロロベンゼンは衣料用防虫剤や防臭剤として大量に消費される家庭用化学薬品のひとつである。われわれは,昨年度までの研究によって,組織のグルタチオンレベルが低下したマウスでは比較的低用量のパラジクロロベンゼンによって著しい肝障害が発生することを見いだし,この肝障害の発現様式について詳しく検討した。今年度はさらに進んで,この肝障害の発現機構を明らかにするための端緒として次のような研究を行った。1.マウスにグルタチオンの生合成阻害剤ブチオニンスルフォキシミン(BSO)を単独で投与したときと,BSOとパラジクロロベンゼンを組み合わせて投与したときの,肝中グルタチオン,プロテインチオール,過酸化脂質濃度の変化を経時的に追跡し,肝細胞壊死の発生に先だつプロテインチオール濃度の低下や過酸化脂質濃度の上昇は認められないことを明らかにした。2.パラジクロロベンゼンのフェノール・キノン型代謝物をBSOと組み合わせて投与する実験をおこないパラジクロロベンゼンとBSOの組み合わせ投与によって発生する肝障害にはこれらの代謝物の関与は少ないとの結論を得た。
捕食回避形質の進化的喪失と再獲得の進化発生学的研究

自然選択圧の変化に対応した適応形質の進化的喪失と再獲得の歴史が当該形質の発生過程に刻印されているとの作業仮説を立て、伊豆諸島と伊豆半島に固有なオカダトカゲの色彩パタンの進化をシマヘビの捕食を回避する形質として比較研究した。その結果、オカダトカゲの不明瞭なストライプと不鮮明な尾部の青色パタンはまずシマヘビのいない状態で先に進化し、シマヘビが伊豆諸島に後から侵入して、色彩パタンの明瞭化が進化したことがわかった。本研究では、選択圧の変化に対応した適応形質の進化的喪失と再獲得の歴史が発生過程に刻印されているとの作業仮説を立て、伊豆諸島と伊豆半島に固有なオカダトカゲの色彩パタン(ストライプ模様と青い尾)の進化をシマヘビに代表される捕食者への適応形質としてその進化過程を検証するため、以下の3点について研究した。1)オカダトカゲの色彩パタンの地理的変異を色素細胞のレベルでの記載。2)色素細胞の胚発生過程を、色彩パタンの異なる集団間での比較3)伊豆諸島におけるオカダトカゲの主要な捕食者であるシマヘビの系統地理学的解析その結果、以下の成果を得た。1)色彩パタンの地理的変異を、ストライプの明瞭さと尾の青さが尾の全長占める割合の2つの面から解析した。ストライプの明瞭さは、胚発生の過程で他の色素胞に先行して分化する黒色素胞による縦列トライプの境界が明瞭に形成されるか否かによって決まっていることが明らかにされた。一方、尾部の青色は虹色素胞と黒色素胞で構成され、青色の部分の虹色素胞は茶色を呈する位置の虹色素胞よりも光を反射する小板が薄く、虹色素胞の2タイプの境界位置のずれが青色部分の長さにみられる地理的変異に対応していることが明らかになった。2)ミトコンドリアのチトクロームb遺伝子の役1000塩基対を用い、捕食者シマヘビの分子系統樹を予備的に作成した結果、伊豆諸島のシマヘビは、本土の集団から少なくとも2度独立に侵入したことが示された。すでにオカダトカゲ伊豆諸島と伊豆半島の集団が1つの単系統を形勢し、ニホントカゲとははっきりと区別されることが分かっているため、オカダトカゲの不明瞭なストライプと不鮮明な尾部の青色パタンはまずシマヘビのいない状態で先に進化し、シマヘビの捕食圧が加わって色彩パタンの明瞭化が進化したことが示唆された。本研究では、選択圧の変化に対応した適応形質の進化的喪失と再獲得の歴史が発生過程に刻印されているとの作業仮説を立て、伊豆諸島と伊豆半島に固有なオカダトカゲの色彩パタン(ストライプ模様と青い尾)の進化をシマヘビへの適応形質として、以下の3点から研究し、以下の結果を得た。2)色素細胞の胚発生過程を、色彩パタンの異なる集団間での比較3)伊豆諸島におけるオカダトカゲの主要な捕食者であるシマヘビの系統地理学的解析それにより、以下の結果を得た1)色彩パタンの地理的変異を、主として尾の青さが尾の全長に占める割合から解析した。尾部の青色は虹色素胞と黒色素胞で構成され、青色の部分の虹色素胞は茶色を呈する位置の虹色素胞よりも光を反射する小板が薄く、虹色素胞の2タイプの境界位置のずれが青色部分の長さにみられる地理的変異に対応していることが明らかになった。2)ミトコンドリアのチトクロームb遺伝子の役1000塩基対を用い、捕食者シマヘビの分子系統樹を予備的に作成した結果、伊豆諸島のシマヘビは、本土の集団から少なくとも3度独立に侵入したことが示された。
単同位体化DNAを用いた分子病解析

一酸化窒素(NO)は血管平滑筋の拡張をはじめ、アポトーシスの制御及び免疫応答といった多くのはたらきを有する分子である。NOがタンパク質のチオール基と結合したS-ニトロソ化タンパク質はこれらの作用発揮に関与する重要な翻訳後修飾分子である。現在までにヘモグロビンやカスパーゼなどがS-ニトロソ化されているという報告がある。S-ニトロソ化タンパク質の検出法としては従来、化学発光法やジアゾカップリング法が用いられていたが、これらはS-NOの結合を切断し、遊離したNOを定量する手法であるため、修飾タンパク質に関する情報(どのタンパク質のどのシステイン残基にどの程度)を得ることができない。以上の理由で、翻訳後修飾の直接検出に有効な質量分析法を用いて、実験を行った。結果:1.エレクトロスプレーイオン化(ESI)を用いてS-ニトロソ化を検出することができたが、ノズル電圧を上げることでNOの脱離が起こるため、定量的解析には最小のノズル電圧を用いることが必要である。定量的解析ができているか判断するには、それぞれの多価イオンについてS-ニトロソ化イオンと非修飾イオンの量比を比べ、差がなければよい。2.マトリックス支援レーザー脱離イオン化(MALDI)では、S-ニトロソ化イオンは全く検出されず、NO脱離の後にマトリックス分子などから水素を獲得し、還元されることがわかった。脱離のメカニズムはまだ未解明であるが、S-ニトロソ化合物由来の吸収がない赤外波長のレーザーを用いても同様の結果だったことより、共鳴吸収によるものではないと考えられた。3.高速原子衝撃(FAB)では、S-ニトロソ化イオンは一部残存するが、残りはNO脱離及び還元されることがわかった。以上のことより、S-ニトロソ化の定量的検出にはESI法を用いることが必要で、しかもノズル電圧は最小に抑えなければならないということが判明した。
生殖内分泌系における生殖腺刺激ホルモン受容体の発現調節に関する研究

脊椎動物の生殖内分泌系におけるペプチドホルモンの受容体の標的器官における発現調節とホルモンと結合した受容体の標的細胞内での挙動を解明することを目的に本研究を開始し、本年度には次のような成果が得られた。1)ホルモン産生細胞の分化初期の胎児期の下垂体にGnRHを与えて、ホルモン産生能の変化を調べた。その結果GnRHの分化初期処理によりホルモンの産生能は変わらないがGnRHに対する反応性の増加が現れることを明らかにした。2)ラットの生殖腺刺激ホルモン放出ホルモン受容体のcDNAをクローニングし、その塩基配列を明らかにした。そしてこのcDNAをプローブにし、生殖周期と卵巣摘出による脳下垂体内GnRH受容体遺伝子の発現変化を調べた。脳下垂体では前葉のLH・FSH産生細胞に特異的に現れた、これらのGTH産生細胞におけるGnRH受容体mRNAの発現は生殖周期の中で発情期には低かった。卵巣摘出の4日後に発現が有意的に上がり、17日間維持された。3)生殖腺特に卵巣でのGnRH受容体の発現様式を調べた。卵巣内でのGnRH受容体を発現は未成熟の濾胞には見られず、主に成熟した濾胞の顆粒膜細胞と閉鎖を起こしている濾胞にも強く現れ、濾胞の成熟と顆粒膜細胞の分化にも重要な役割をしていることを明らかにした。4)鳥類と爬虫類の濾胞刺激ホルモンと黄体形成ホルモン受容体蛋白質のN-末端部位のcDNA配列を明らかにし,脊椎動物における生殖腺刺激ホルモン受容体の進化とこの進化におけるホルモンとの関りを調べた。5)片側潜伏睾丸を実験モデルにしてラットの精巣で精巣内温度による濾胞刺激ホルモンと黄体形成ホルモン受容体のmRNAの発現様式の変化をnorthern blotで調べた。腹内睾丸では両受容体共に陰嚢内睾丸と比べて、潜伏睾丸手術4週間後には顕著に増加すると共に、黄体形成ホルモン受容体のmRNAの分子サイズの多様性の変化であった。1)性成熟したC57BL系統マウスの精巣ではFSHの受容体が正常な状態でもdown regulateされ、血中ホルモン濃度に非常に敏感にdown regulationされている。この現象は他の動物ではあまり見られないことであるので、マウス全般で起こる現象であるかをBALB/cとICR/Jc1系統で調べた結果、ICRではC57BLと同様にdown regulationが観察されたが、BALB/cでは見られなかった(論文公表済み)2)ラットの生殖腺刺激ホルモン放出ホルモン受容体のcDNAをクローニングし、その塩基配列を明らかにした。雌ラットを用い生殖周期または卵巣摘出後下垂体の中で本受容体の発現の変動を調べた(論文公表済み)。3)ウズラの生殖腺のLH受容体の内,ホルモンと結合に最も重要なドメインをRT-PCRを用いその塩基配列を調べた。これらの塩基配列を哺乳類のものと比較した結果,ホルモンと受容体の共進化の様子が予想されるようになってきた(投稿中)。4)ラットの生殖腺刺激ホルモン受容体の細胞外ドメインをRT-PCRにより増幅させ大腸菌で蛋白質として発現させた。発現された融合蛋白質から目的受容体蛋白質を精製し、単クローン抗体の作成を現在行っている。

脊椎動物の生殖内分泌系におけるペプチドホルモンの受容体の標的器官における発現調節とホルモンと結合した受容体の標的細胞内での挙動を解明することを目的に本研究を開始し、本年度には次のような成果が得られた。1)生殖腺刺激ホルモン産生細胞の分化に及ぼすGnRHの作用を究明するため胎児期でホルモン産生細胞の分化初期にのみGnRHを与えて,ホルモン産生能の変化を調べた.その結果GnRHの分化所期処理によりホルモンの産生能は変わらないがGnRHに対する反応性の変化が現れた.2)鳥類と爬虫類の濾胞刺激ホルモンと黄体形成ホルモン受容体蛋白質のN-末端部位のcDNA配列を明らかにし,脊椎動物における生殖腺刺激ホルモン受容体の進化とこの進化におけるホルモンとの関りを調べた.3)生殖周期と卵巣摘出による脳下垂体内GnRH受容体遺伝子の発現変化をin situハイブリダイゼイションにより調べた.脳下垂体では前葉に特異的に発現し,主にLH・FSH産生細胞に現れたが,TSH・プロラクチン産生細胞からは検出去れなかった.GTH産生細胞におけるGnRH受容体mRNAの発現は生殖周期の中で発情期には低かった.卵巣摘出の4日後に発現が有意的に上がり,17日間維持された.4)生殖腺特に卵巣でのGnRH受容体の発現を調べた.卵巣内でのGnRH受容体を発現は未成熟の濾胞には見られず,主に成熟した濾胞の顆粒膜細胞であり,GnRHが排卵に関っていることを示唆していた.一方GnRH受容体の発現は閉鎖を起こした濾胞にも強く現れ,濾胞の成熟と顆粒膜細胞の分化にも重要な役割をしていることを明らかにした.脊椎動物の生殖内分泌系におけるペプチドホルモンの受容体の標的器官における発現調節とホルモンと結合した受容体の標的細胞内での挙動を解明することを目的に本研究を開始し、本年度には次のような成果が得られた。1)片側潜伏睾丸を実験モデルにしてラットの精巣で精巣内温度による濾胞刺激ホルモンと黄体形成ホルモン受容体のmRNAの発現様式の変化をnorthern blotで調べた。腹内睾丸では両受容体共にその発現量が陰嚢内睾丸と比べて、潜伏睾丸手術4週間後には顕著に増加していた。特に、興味深いことは、黄体形成ホルモン受容体のmRNAの分子サイズの多様性の変化であった。陰脳内睾丸ではmRNAのサイズの多様性は卵巣の物とは異なっているが、腹内睾丸ではその分布様式が卵巣の様式に変わっていた。片側潜伏睾丸ラットでは陰脳内睾丸と腹内睾丸は同じ内分泌的環境に接しているので、精巣での核細胞同士の相互関係によって現れる現象であることが示唆される。(現在論文投稿中)2)脳下垂体のあらゆるホルモン分泌細胞に分化し続けるラットの脳下垂体腫瘍細胞(RC-4B)の生殖腺刺激ホルモン産生細胞の研究モデルとしての可能性を調べるため、本細胞の細胞特性を調べると共に分化したホルモン産生細胞の株化の可能性をクロニングで調べている。現在約13個のクロンが得られその細胞特性を調べているが、ほとんどがプロラクチン産生細胞であったが、引き続きクロニングを行い、生殖腺刺激ホルモンまたはGnRH受容体を発現する安定した株を確立を試みる。
ポリオレフィンブレンドの相分離と結晶化の制御

ポリオレフィンブレンドの中でも重水素化物と軽水素化物を用いて、構造形成過程をその場小角中性子散乱法やその場小角X線散乱法、DSC測定により明らかにすることを試みた。特に、外場中での構造形成機構に着目し、いわゆるシシケバブ構造形成プロセスを明らかにすることに成功した。本年度は,数種類のポリエチレンブレンドに対して顕微鏡及び小角X線散乱測定を用いて構造形成過程を観測した.まず,結晶性ポリエチレンと非晶性ポリエチレンを混合させたブレンドサンプルについて述べる.結晶化温度での結晶成長過程を光学顕微鏡で観測した.特に,相分離を引き起こす融点よりも十分高い温度での熱処理による変化に着目して行った.その結果,顕微鏡でも観測可能なミクロンオーダーの球晶の核の数が融点よりも高い温度の熱処理によって減少していることを示した.そこで,高エネルギー加速器研究機構・放射光研究実験施設の小角X線散乱装置(BL10C)を用いて,ナノメートルスケールのラメラ晶の成長過程を時分割で観測した.熱処理によって相分離させると,熱処理しない場合に比べて結晶化度が非常に小さくなり,さらに熱処理時間を長くすれば結晶化度はより小さくなっていることを示した.このことから,相分離によって結晶成長,特にラメラ晶の成長が阻害されていることを示した.一方,相分離が起きないような系では,同じ温度条件で熱処理させてもほとんど依存性がないことを示した.さらに,分子量を変えたポリエチレンブレンドサンプルについて,流動印加時における構造形成過程を時分割小角X線散乱や光散乱測定を用いて測定した.本実験では,特に分子量が高い成分が結晶成長過程に対する流動(外場)の影響に着目して測定を行っている.そのような場合,分子量が高い成分は流動印加によって分子鎖が伸び,配向構造が作りやすくなっていることを示した.ポリオレフィンブレンドの中でも重水素化物と軽水素化物を用いて、構造形成過程をその場小角中性子散乱法やその場小角X線散乱法、DSC測定により明らかにすることを試みた。ポリオレフィン系の相分離を温度条件で制御しながら、結晶化プロセスを観測することで、延伸方向に引き伸ばされた伸長鎖晶であるシシ構造の形成機構およびシシ構造の周りにエピタキシャル的に成長したケバブ構造の発展を観測した。まず、延伸を印加する前の構造について、精密に解析を行い、小角中性子散乱について、密度揺らぎに起因する散乱と、重水素=軽水素による成分揺らぎに分離することに成功し、Orstein-Zernike型の揺らぎで記述できることを示した。また、延伸過程においては、徐々にラメラが引き伸ばされ、引き伸ばされたラメラ晶が割れるプロセスを観測した。さらに、いったん形成したケバブ構造がさらに延伸すると消失していることを示した。このことは、延伸によってケバブ構造が引き伸ばされ伸長鎖構造すなわちシシ構造に変化していることを示した。さらに、シシ構造の形成機構についても現在解析を行っている。シシ構造は延伸により徐々に数密度の増大を散乱法により示した。また、逆に直径は若干ながら細くなっている、すなわち延伸によって伸長鎖結晶が増大していることを示した。また、そのほかのオレフィンブレンド系についても基礎的な実験を行った。たとえば、超分子量成分の濃度が異なるアイソタクチックポリプロピレンに対してせん断流動測定を行い、超高分子量成分が3%程度存在する場合、結晶化が非常に促進されるが、5%を超えるとむしろ結晶化の阻害要因になることを実験的に示すことに成功した。
非定形節の格フレームの通言語的研究

本研究は不定詞補部の格フレーム,特に不定詞補部の主語の格標示の通言語的変異を,役割指示文法(Van Valin 2005)の文の層状構造と層状構造を踏まえた複文構造の類型論,格付与制約群,格標識の有標性階層及び格付与領域を前提として解明した。具体的には,まず,ロシア語とアイスランド語のコントロール構文の不定詞補部の主語の格標示(与格⇔主格)を両言語の格付与領域(ロシア語=節,アイスランド語=中核)と格標識の有標性階層から導いた。次に,日本語の願望構文の不定詞補部の主語の格交替(主格⇔与格)を,願望構文が伴う複文構造の相違(中核従位接続⇔中核等位接続)と日本語の格付与領域(中核)から導いた。本研究の目的は不定詞補部の格フレーム,特にコントロール構文に生じる不定詞補部の主語の格標示の通言語的変異を,主格標識付与規則の適用領域及び格標識の有標性に基づいて統一的に説明することである。今年度はロシア語、アイスランド語のコントロール構文(主語コントロール構文、目的語コントロール構文)が伴う不定詞補部の意味上の主語の格標示に焦点を当てた。両言語の非主語(目的語)コントロール構文の不定詞補部の意味上の主語はロシア語が与格標示、アイスランド語が主格標示である。このコントラストを。1格付与領域の相違(役割指示文法の節の成層構造において、ロシア語は節を格付与領域に指定し、アイスランド語は中核を格付与領域に指定している)、2格標識の有標性階層(主格>与格>対格>属格)、から導くことができた。具体的には、ロシア語では格付与領域が節であるため、中核に相当する不定詞補部の意味上の主語には主格標識を与えることができない。このため、格標識の不在を避けるため、最後の手段として主格に次いで無標的な格標識である与格標識が不定詞補部に与えられる。これに対して、アイスランド語では、格付与領域が中核であり、目的語コントロール構文における不定詞補部も中核に相当するため、不定詞補部の意味上の主語も節全体の主語と同様に主格標示を受ける。また、ロシア語、アイスランド語と同じ印欧語に属する現代ドイツ語の代名詞パラダイムが伴う目的語上の格交替(対格/与格/主格)に注目し、代名詞パラダイムに目的語の意味上の有標性と格標識の有標性が対応する有標性同化が見られることを指摘し、格階層の有効性(与格標識が主格標識より有標的であるが、対格標識より無標的であること)を再確認した。今年度は(昨年度に引き続き)ロシア語及びヒンディ語の不定詞構文に注目した。ロシア語では,伝統的に具格が最も無標的な斜格とされている(Jakobson 1936)。これに対して,海外学会での発表では,具格は意味的には与格より無標的であるが,形態的には与格より有標的であることを示した。昨年度はロシア語の不定詞構文の意味上の主語が与格標示を受ける理由を,1ロシア語で主格標識を付与する制約の適用が時制を持つ節に限定されること,2主格に次いで無標的な格標識が与格であることに求めたが,その結論の妥当性を示した。また,ヒンディ語では、不定詞構文に生じる他動詞の主語のみが主格標示を受け,自動詞の主語及び他動詞の目的語は属格標示を受けるが,格標識の有標性階層はロシア語と同様であることを確認した。ロシア語の不定詞構文の格フレームの研究(与格標識と具格標識の関係等)に予想以上に時間を取られたため、当初予定していたフィンランド語(不定詞構文の意味上の主語は属格標示を受ける)、エストニア語(不定詞構文の意味上の主語は分格標示、又は接格標示を受ける)への拡張及び格階層を用例依存的に導く作業を行うことができなかった。本研究の目的は不定詞補部の格フレーム,特にコントロール構文に生じる不定詞補部の主語の格標示の通言語的変異を,役割指示文法(Van Valin 2005)の文の層状構造(内核⇔中核⇔節)と層状構造に基づく複文構造の類型論,格付与制約群,格標識(形態的格)の有標性階層及び格付与領域(格付与制約の適用領域が「中核」と「節」に分かれること)を前提として,以下の2点を示した。まず,ロシア語とアイスランド語のコントロール構文における不定詞補部の意味上の主語の格標示(与格⇔主格)を両言語の格付与領域の相違(ロシア語の格付与領域=節,アイスランド語の格付与領域=中核)及び格標識の有標性階層から導いた(アイスランド語のコントロール構文・繰り上げ構文の不定詞補部の主語を修飾する数量詞/叙述補部の格交替は不定詞補部の主語と主節のコントローラーの構造共有の有無から導く)。次に,日本語の願望構文における不定詞補部の主語の格交替(主格⇔与格)を,願望構文が伴う複文構造の相違(中核従位接続⇔中核等位接続)及び日本語の格付与領域(中核)から導いた。

最後に,与格標識を持たないエストニア語の不定詞補部の意味上の主語の格標示の漸次的推移(分格⇒接格)については,接格の(他言語の与格に通じる)デフォルト的性格を指摘した国内の先行研究(例:松村1992, 2011)を踏まえて,上述の変化を近年のエストニア語における分格/接格の相対的有標性の変化により説明することを構想していたが,実現には至らず,将来の研究課題として残った。本研究は不定詞補部の格フレーム,特に不定詞補部の主語の格標示の通言語的変異を,役割指示文法(Van Valin 2005)の文の層状構造と層状構造を踏まえた複文構造の類型論,格付与制約群,格標識の有標性階層及び格付与領域を前提として解明した。具体的には,まず,ロシア語とアイスランド語のコントロール構文の不定詞補部の主語の格標示(与格⇔主格)を両言語の格付与領域(ロシア語=節,アイスランド語=中核)と格標識の有標性階層から導いた。次に,日本語の願望構文の不定詞補部の主語の格交替(主格⇔与格)を,願望構文が伴う複文構造の相違(中核従位接続⇔中核等位接続)と日本語の格付与領域(中核)から導いた。予定していたロシア語とアイスランド語の不定詞補部の意味上の主語の格標示の相違(ロシア語の非主語(「目的語」)コントロール構文が伴う不定詞補部の意味上の主語の格標示が与格であるのに対して、アイスランド語の同構文の不定詞補部の意味上の主語の格標示が主格であることを、両言語の格付与領域の相違(ロシア語=節、アイスランド語=中核)及び格階層が規定する格標識の形態的有標性から導くことができた。また、格標識の形態的有標性(格階層)の印欧語における妥当性を、ドイツ語の代名詞パラダイムにおける目的語上の格交替を説明する論文により、確認することができた。今年度はフィンランド語とエストニア語の不定詞構文の格フレームを考察すると共に、意味上の主語の格標示を決定する要因の一つである格の有標性階層を用例依存的に導く作業に着手する。言語学これまで考察対象とした言語は、アイスランド語、ロシア語、ドイツ語であったが、考察対象を印欧語の外部、具体的には、フィン・ウゴル諸語(例:フィンランド語、ハンガリー語、エストニア語)に移す。現代のフィンランド語、エストニア語には与格に相当する格標識が存在しないが、フィンランド語では属格標識、エストニア語では分格標識/接格標識が不定詞補部の意味上の主語を標示することが知られている。これらの言語の不定詞補部の格標示を導くためには、格階層を相対化(たとえば、主格に次ぐ無標的な格標識を与格標識に固定するのではなく、主格に次いで無標的な格標識と規定する)すると同時に、格階層を用法基盤的に導く必要がある。購入を予定していた書籍が入手できなかったため。次年度に購入予定。
急性腎障害からの遠隔臓器障害に対する善玉経路としての神経免疫応答の検証

急性腎障害(acute kidney injury : AKI)の生命予後が不良なのはAKIからのリモート作用で遠隔臓器に障害をきたすことが一因である。炎症性サイトカインが悪玉因子として血液を介して遠隔臓器に到達し障害をきたす。近年神経伝達経路が免疫応答を制御すること、さらに迷走神経刺激によって炎症性サイトカインが抑制されることが明らかとなってきた。以上よりAKIからのリモート作用は悪玉因子を運ぶ血液と善玉因子を運ぶ神経が拮抗しそのバランスで決定されること、迷走神経を刺激して抗炎症作用を強めることでAKIによる遠隔臓器障害が軽減し、生命予後が改善されるという仮説を立て立証する。
植物の転写因子HBP-1aの転写活性化ドメインの機能解析

コムギヒストンH3遺伝子のS期特異的転写を規定するシス配列タイプIエレメントは、ヘキサマー配列とオクタマ-配列というそれぞれ転写に正に働く2つの独立したシス制御配列から構成されている。このヘキサマー配列に結合する転写因子HBP-laのアミノ酸1-115の領域をGAL4のDNA結合領域につないで活性を調べると、リポーター遺伝子の発現を抑制するが、この領域を2分割したN末側[5-56]およびC末側[58-115]のそれぞれの領域はプロモーター活性を上昇させる。この領域はプロリン残基に富み、植物の転写因子のひとつであるGBF1の転写活性化領域と比較的良く似ている。そこで両転写因子の転写活性化領域に共通して存在するアミノ酸配列に注目し、その中のプロリン残基の幾つかを他のアミノ酸に置換して、この領域の機能に与える影響を調べた。また、リン酸化の標的になり得るセリン残基やスレオニン残基の幾つかについても同様に他のアミノ酸に置換し、その変化が及ぼす影響を調べた。以下に結果の概要を示す。1)アミノ酸[5-56]領域はプロモーター活性を上昇させることがすでに分かっていたが、この領域を更に2分割した[5-29]と[30-56]のそれぞれの領域が、単独でプロモーター活性を上昇させ得ることが分かった。その活性化能は、それぞれ[5-56]領域の約半分の活性であった。2)様々なアミノ酸変異体を作製してその活性を調べたが、プロモーター活性化(或は抑制化)に重要な関わりを持つアミノ酸を同定することは出来なかった。本研究の当初の目的であった転写因子の機能に関わるアミノ酸モチーフの同定に関しては、上記2)で述べた様にその目的が達せられなかったが、この結果および上記1)の結果から、転写因子HBP-laの転写調節機能ドメインは構造的に柔軟性に富んでおり、また、機能的にredundantな複数のmoduleによって構成されていることが示唆された。
中学生対象ものづくり体験事業 新テーマの立ち上げ「親指ピアノを作ろう!」

【研究目的】本学技術グループで行っているものづくり事業では、電気や機械系のテーマが圧倒的に多く、これまでのテーマ総数32のうち、音楽に関連するテーマは、わずかに1テーマであった。テーマの偏りからもわかるように、ものづくりというと電気や機械系のテーマがまず思い浮かぶが、中学生の身近にある音楽を通して、ものづくりの楽しさを学んでもらいたいと考えた。そこで楽器を製作するテーマを立ち上げ、中学生が楽器を製作・演奏し、音について学ぶことで、音楽を始めとして日常生活において「理科はごくごく身近に存在することに気づいてもらう」ことがねらいである。【研究方法】(1)構造が単純で、(2)音の調整が容易で、(3)簡単に演奏できる親指ピアノを製作する。音をチューナーを使ってドレミファソラシドに調整し、オシロスコープを使って音の振動を視覚化し、目で見て確認させる。最後に全員で合奏を行う。【研究成果】全員が集中して楽器を完成させることができた。オシロスコープを使って音が波であることを目で見て確認することで、身近に存在する理科を体験することができた。また、全員で演奏を楽しむことで、ものづくりに興味を持つきっかけも作れた。満足度の高いアンケート結果からもそのことがうかがえる。この研究成果は、2010年度熊本大学総合技術研究会においてポスター発表を行い報告した。