hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
地域における高齢者の耐性菌サーベイランス-医療・福祉施設在宅・在宅の包括的見地より〜

病院の在院日数の短縮化により、経管栄養管理などの医療依存度の高い患者が、地域の他医療・介護施設へ転院していく傾向にあり、MRSAや多剤耐性緑膿菌などの薬剤耐性菌や、病原性細菌を保菌した患者を介して施設問で病原性細菌が伝播する可能性がある。本研究では地域医療支援病院と他の医療・介護施設における感染症サーベイランスにより細菌保菌状況把握し、医療・介護施設の感染対策の再検討、施設間共通の感染対策を立案する基礎資料を得る。中核病院サーベイランスを実施した結果、検体総数は1737、同定された菌種数は延べ2650種であった。検体別延べ検出菌種数は静脈血330検体65種、動脈血149検体48種、IVH91検体52種、創部54検体79種、カテーテル16検体11種、尿126検体114種便340検体781種、喀痰631検体1500種で検出菌の約半数が75歳以上の高齢者由来であった。また、リハビリテーション病院慢性期病棟に入退院を繰り返す患児のPseudomonas aeruginosaの保菌状態を継続調査し、その変遷をSpeI-PFGEにて解析した。対象患者の2004年から2007年まで診断検体よりP.aeruginosaとした。調査期間中分離菌株数は、14株、12株、12株でプラグを作成し、SpeIで制限酵素処理後、電気泳動し、フィンガープリントデータ解析はBioNumeric ver.4.6により得られたfingerprints2株の相似値をDiceCoefficientで算出、系統樹解析はUPGMA(unweight pair-group method with arithmetic averages)によった。SpeI-PFGEの解析結果、大2グループに分類された。これら2グループ間のsimilarity valueは50%以下であり、カテーテル挿入後に新たな株が定着したと考えられたSpeI-PFGEの解析結果では、similarity valueが85%以上と類似性が高く長期間の保菌中に変異したものと考えられた。施設、グループホーム、在宅、訪問入浴などにおいても耐性菌の保菌が見られ、さらに今後の大規模な地域包括的感染対策が必要である。わが国では未曾有の高速度の高齢化によって、高齢者は病院から介護老人(保健)施設を経由し、在宅や老人ホーム等の福祉施設あるいは、病状の変化によって病院に戻るという繰り返しを日常とする例が多くなっている。一方、市中病院におけるMRSA等の薬剤耐性菌は、その出現頻度が個々の病院により大小の差はあるものの、入院患者数の数パーセントから数十パーセントにも至るという報告が見られる。また、高齢者は急性期を経過して病院より施設へあるいは在宅へと戻るが、施設等における薬剤耐性菌に関する報告は少ない。しかしながら、高齢者は細菌感染症や、特に冬季にはウィルス感染症の集団発生によって死亡するケースも少なくない。本研究では、高齢者をとりまく療養環境の変化あるいは移動に伴い、保菌した薬剤耐性菌がどのように地球の中に汚染、分布して行くかについて、市中病院-介護施設-在宅を通して細菌学的に横断的、縦断的に実態調査し、分子疫学的手法によって耐性菌サーベイランスをおこなう。

その結果包括的見地より、地域における高齢者感染対策の一方法論を提示実施し、高齢者の療養環境の改善、QOLの向上に寄与することを目的とした。茨城県つくば市にある地域医療支援病院において培養検体のデータから感染症起因菌の検出状況を調査した.調査には2005年1月12月までに診断・治療のために採取された入院患者の検体を対象とし、外部検査機関によって同定され、病院に報告された細菌のデータを使用した。その結果、75歳以上の後期高齢者、外科、創部・カテーテル検体、慢性期病棟等において、S.aureus、P.aeruginosaの検出率が高かったことが明らかになった.今後はこれらの日和見感染症起因菌に関して、薬剤耐性の有無を調査し、他の医療・介護施設と比較していく。現在その予備実験を行っている。地域医療に共通の背景を持つ感染対策について、地域医療支援病院および連携施設を対象に、診断治療のために患者検体より同定されたデータを原資としてサーベイランスを行い、菌株を分離・感染対策を構築する。現段階で過去における分布状況が把握されたので、今後、実際に即してサーベイランス、分析を行い、医療現場の感染対策に資する予定である。病院の在院日数の短縮化により、経管栄養管理などの医療依存度の高い患者が、地域の他医療・介護施設へ転院していく傾向にあり、MRSAや多剤耐性緑膿菌などの薬剤耐性菌や、病原性細菌を保菌した患者を介して施設間で病原性細菌が伝播する可能性がある。本研究では地域医療支援病院と他の医療・介護施設における感染症サーベイランスにより細菌伝播状況把握し、医療・介護施設の感染対策の再検討、施設間共通の感染対策を立案する。今回包括的サーベイランスを実施した結果、採取検体の総数は1737、同定された菌種数は延べ2650種であった。検体別延べ検出菌種数は静脈血330検体65種、動脈血149検体48種、IVH91検体52種、創部54検体79種、カテーテル16検体11種、尿126検体114種、便340検体781種、喀痰631検体1500種で検出菌の約半数が75歳以上の高齢者由来であった。
［金属イオン－配位子］カクテルを用いた新規なキラル配位子交換法の開発

1種類の配位子と2種類の金属イオンから成る泳動緩衝液を用いた配位子交換キャピラリー電気泳動法により、リンゴ酸、酒石酸およびイソクエン酸の光学異性体分析法を検討した。配位子にD-キナ酸を、金属イオンにCu(II)イオン単独で用いると、酒石酸だけが学分割され、リンゴ酸とイソクエン酸は光学分割されなかった。しかし、金属イオンとして銅(II)イオンにSc(III)イオンを混合すると、3種類のα-ヒドロキシ酸はすべて光学異性体分離され、また、クエン酸も同時に分析できることが分かった。この配位子交換法はジュース中のα-ヒドロキシ酸光学異性体分析に適用できた。有機酸の中には光学異性体構造を有するものがあり、生体中の代謝物として重要な役割を果たしている。また、有機酸は食品の主要成分である他、添加物としても利用されている。これまで実試料分析可能な有機酸類の光学異性体一斉分析法は報告されていない。今年度は、多種類の有機酸類を一斉に光学異性体分析するできる方法を確立することを目的とした。その手段として多種類の金属イオンやキラル配位子を混合した〔金属イオンー配位子〕カクテルを泳動緩衝液としたキラル配位子交換キャピラリー電気泳動法について検討した。前年度に得られた結果から、キラル配位子としてD-キナ酸を、2種類の金属イオンのうち1つは銅(II)イオンを用いることとし、もう一方の金属イオンについてリンゴ酸、酒石酸及びイソクエン酸の光学異性体分離を検討した。用いた金属イオンはAl(III)、Mn(II)、Fe(III)、Co(II)、Ni(II)、Zn(II)イオンの6種類である。その結果、Cu(II)イオンとAl(III)イオンの2種類の金属イオンを組み合わせた系でのみ、上記3種類の有機酸を一斉に光学異性体分析できることが分かった。本分析系に関しては、酒石酸ではCu(II)錯体が、リンゴ酸とイソクエン酸ではAl(III)錯体が光学異性体分離に関与していることが推定された。また、Al(III)イオンの変わりに同族のGa(III)イオンを用いた泳動緩衝液(Cu(II)ーGa(III)ーD-キナ酸系)でも、3種類の有機酸を一斉に光学異性体分離できることも分かった。ただし、本分析法では泳動緩衝液のpHが5.0のときに有効であり、pHのずれは光学異性体分離のみならず、ピーク形状の悪化につながることも分かった。本分離のメカニズムについても検討を行っている。また、有機酸は食品の主要成分であり、添加物としても利用されている。これまで実試料分析可能な有機酸類の一斉分析法は報告されていない。昨年度は、キャピラリー電気泳動法の泳動緩衝液に2種類の金属イオン(Cu(II)及びAl(III)イオン)とD-キナ酸を用いた配位子交換法により、リンゴ酸、酒石酸及びイソクエン酸を一斉に光学異性体分析できる方法を開発した。今年度はこの配位子交換法をジュースの分析に適用することを試みた。これまで、リンゴ酸、酒石酸、イソクエン酸の光学異性体分離に注目してきたが、クエン酸もジュース中の主要な有機酸であるためピークの確認を行った。その結果、クエン酸は酒石酸とイソクエン酸のピークにまたがるようなブロードなピーク形状を示した。そこで、2種類の金属イオンの組み合わせを再検討し、Cu(II)とSc(III)イオンの組み合わせにより4種類の有機酸およびその光学異性体をすべて分離できることが分かった。この分析系ではシュウ酸とマロン酸のピークも良好に検出できたが、乳酸などの1価の有機酸は検出されなかった。また、コハク酸、マレイン酸やフマル酸のピークも検出できなかった。これは検出に必要な安定な錯体形成が起こりにくいためと推定された。すなわち、検出された有機酸はCu(II)イオンと5員環あるいは6員環キレートを有する錯体を形成するのに対し、コハク酸やマレイン酸は不安定な7員環キレートとなり、フマル酸はキレートを形成できないためと考えられる。本法を用いてリンゴ、ブドウおよびオレンジジュースなどの分析を行った。試料は水で希釈し、遠心分離した上清のろ液を用いた。その結果、これらジュース類中の有機酸を良好に分析できることが分かった。ブドウジュース1件からD-リンゴ酸が検出された。キャピラリー電気泳動法の泳動間緩衝液として、多種類の金属イオンと多種類のキラル配位子を混合した〔金属イオンー配位子〕カクテルを用いて、有機酸類の光学異性体分析法の確立を目的とする。1キラル配位子交換の分離メカニズムの検討

これまでの研究でD-キナ酸/Cu(II)イオンの濃度比の増加に伴ってD-酒石酸とL-酒石酸の泳動時間が逆転する現象をみつけている。この光学異性体分離のメカニズムについて、円二色性及び吸収スペクトル分析、分子軌道計算を用いて解析した。その結果、D-キナ酸/Cu(II)イオンの濃度比(1:13:1)が低いときにはD-キナ酸ーCu(II)イオン複合体(1:1)にD-酒石酸が優先的に結合し、D-キナ酸ーCu(II)イオンーD-酒石酸(1:1:1)が生成しやすいのに対し、D-キナ酸/Cu(II)イオンの濃度比(8:112:1)が高いときにはD-キナ酸ーCu(II)イオン複合体(2:1あるいは3:1)にL-酒石酸が優先的に結合、あるいは配位子交換し、D-キナ酸ーCu(II)イオンーL-酒石酸(2:1:1)が生成しやすいことを明らかにした。2〔金属イオンー配位子〕カクテルの予備検討配位子をD-キナ酸に固定し、金属イオン種(Al(III)、Mn(II)、Fe(III)、Co(II)、Ni(II)、Cu(II)及びZn(II)イオン)を変えて、リンゴ酸、酒石酸、イソクエン酸の泳動時間、光学分割能、及びピーク形状などを検討した。その結果、Cu(II)イオンを中心イオンとした場合、酒石酸だけしか光学分割されなかったが、他の金属イオンに比べてピークがシャープであり、泳動時間が短かった。以上の結果から、1種類目の金属イオンとしてCu(II)イオンを選択することとし、現在、Cu(II)イオンと組み合わせ可能な金属イオン種を検討中である。1金属イオンとキラル配位子の種々の組合せについて前年度に得られた研究成果から、キラル配位子としてD-キナ酸を、2種類の金属イオンのうち1つは銅(II)イオンを用いることとし、もう一方の金属イオンについてリンゴ酸、酒石酸及びイソクエン酸の光学異性体分離を検討した。用いた金属イオンはAl(III)、Mn(II)、Fe(III)、Co(II)、Ni(II)、Zn(II)イオンの6種類である。その結果、Cu(II)イオンとAl(III)イオンの2種類の金属イオンを組み合わせた系でのみ、上記3種類の有機酸を一斉に光学異性体分析できることをみいだした。これまでのキラル配位子交換法では1種類の金属イオンと1種類のキラル配位子を用いた分析系が用いられてきた。しかし、本研究では複数の金属イオンを用いたキラル配位子交換法を複数の光学異性体に初めて適用したものであり、論文にも掲載された。このため、本研究課題は予定どおりの進捗状況である。2キラル配位子交換の分離メカニズムについて上記のように、Cu(II)イオンとAl(III)イオンを組合わせて2種類の中心イオンとした分析系では、Cu(II)錯体が酒石酸の光学異性体分離に、Al(III)錯体がリンゴ酸とイソクエン酸の光学異性体分離に関与していることが推定された。D-キナ酸とCu(II)イオンを用いた系での酒石酸の光学異性体分離のメカニズムについてはすでに解明しており、D-キナ酸とAl(III)イオンを用いた系での分離のメカニズムを検討しており、予定どおりの進捗状況である。1金属イオンとキラル配位子の種々の組み合わせについて複数の有機酸を光学異性体分析可能な〔金属イオンー配位子〕カクテル組成を検討する予備試験として、金属イオン:配位子の1:1の組み合わせについて光学分割能を検討した。
遮光布によるアトリウム空間の温熱環境調整計画に関する研究

1実測結果のまとめと各遮光布,遮光方法の比較(1)白の垂直遮光:白色の布は日射吸収率が低いため,日射が当たっても布温度が上昇しない.そのため遮光効果によって居住域温度を下げることはできたが,頂部の温度は変化しない.(2)青の垂直遮光:白色の垂直遮光と同様に,居住域の温度を下げることができた.しかし頂部では,布が日射を吸収したため,布温度が上昇し,遮光したB棟の温度の方が上がってしまった.(3)白の水平遮光:遮光したB棟において,居住域の温度を下げることができたが,頂部の温度は上がってしまった.この原因は水平に設置された白い布が反射板となり,日射が反射され,周辺の温度を上昇させたためと考えられる.(4)青の水平遮光:居住域,頂部とも遮光したB棟の温度の方が上昇してしまった.空間内の上下温度差が大きくなるので,頂部の温度と外気温の差を動力とした自然換気の計画の際に有利になる.(5)透過率の高い布:日射透過性の高い布を使用すると,床面や壁面の日射受熱量をあまり減らすことができないため,他の布と比較すると,下部を涼しくすることができない.2遮光布の短波長に対する性状把握実験アトリウムの壁面への入射日射量の計算のために,数種類の布の光学的な性状を把握するための実験を行い,数値計算用にモデル化を行った.透過・反射成分の分布は,CGで用いられる表現技法を使用したモデル化から推定した[拡散性透過(反射)の様子⇒Lambert Model,指向性透過の様子⇒Phong Model,入射角毎の透過率,反射率,吸収率⇒フレネルの式]3数値計算による日射受熱量分布の把握モンテカルロ法による数値計算によって,遮光布を設置したアトリウム空間[10M×10M×10M]の日射受熱量分布[7/1,13:00]を把握した.その結果,遮光を行っていないケースと他のケースを比較すると,高さ6m以下において,日射受熱量が減少した.これは遮光布の設置によって日射が拡散反射,透過され,空間下部に直接日射が届かなくなったためである.また垂直遮光よりも水平遮光の方が,下部の日射受熱量は減少した.これは太陽高度が高いため,垂直遮光よりも水平遮光の方が,遮光面積が大きくなったためである.また日射反射率が高い布を水平に使用した場合,頂部の日射受熱量が非常に多くなった.布面での反射成分が頂部付近の壁面へ多く入射,吸収したためと考えられる.これらのシミュレーションの結果は実測調査結果ともおおむね一致している.1.実験による遮光布の効果の把握札幌市立高等専門学校の同規模,同形状の二棟(A棟,B棟)のアトリウムを用いて,片方のアトリウムに遮光布を設置した状態で二棟の環境測定を行った.4種(布種類)×2形状(遮光方法)=8ケースの実験を行い,アンケート(意匠面への影響),上下温度分布の測定,照度分布の測定等を実施し,相互のアトリウムに生じた同時刻データの差から遮光布の光・温熱環境への効果を把握した.その結果,アトリウムの光・熱環境調整手法として遮光布を使用する場合,遮光方法や布の色によって効果が変わってくることが分かった.1)白の垂直遮光:白色の布は日射吸収率が低いため,日射が当たっても布温度が上昇しない.そのため遮光効果によって居住域温度を下げることはできたが,頂部の温度は変化しない.2)青の垂直遮光:白色の垂直遮光と同様に,居住域の温度を下げることができた.しかし頂部では,布が日射を吸収したため,布温度が上昇し,遮光したB棟の温度の方が上がってしまった.3)白の水平遮光:遮光したB棟において,居住域の温度を下げることができたが,頂部の温度は上がってしまった.この原因は水平に設置された白い布が反射板となり,日射が反射され,周辺の温度を上昇させたためと考えられる.4)青の水平遮光:居住域,頂部とも遮光したB棟の温度の方が上昇してしまった.2.数値解析手法の検討入射日射量の分布計算と,その分布を元に温度・空気移動量を計算する数値解析手法の開発を行った.日射受熱量の分布が生じやすい,アトリウム内の日射受熱量計算に関して,汎用性の高いオブジェクト指向言語を用いてコードの開発を行った.今後は自然換気と遮光の関係を計算によって明らかにしていく.3遮光布の短波長に対する性状把握実験入射日射量の分布計算へのデータ入力を前提に,数種類の布の光学的な性状を把握するための実験を行った.1実測結果のまとめと各遮光布,遮光方法の比較(1)白の垂直遮光:白色の布は日射吸収率が低いため,日射が当たっても布温度が上昇しない.そのため遮光効果によって居住域温度を下げることはできたが,頂部の温度は変化しない.(2)青の垂直遮光:白色の垂直遮光と同様に,居住域の温度を下げることができた.しかし頂部では,布が日射を吸収したため,布温度が上昇し,遮光したB棟の温度の方が上がってしまった.(3)白の水平

遮光:遮光したB棟において,居住域の温度を下げることができたが,頂部の温度は上がってしまった.この原因は水平に設置された白い布が反射板となり,日射が反射され,周辺の温度を上昇させたためと考えられる.(4)青の水平遮光:居住域,頂部とも遮光したB棟の温度の方が上昇してしまった.空間内の上下温度差が大きくなるので,頂部の温度と外気温の差を動力とした自然換気の計画の際に有利になる.(5)透過率の高い布:日射透過性の高い布を使用すると,床面や壁面の日射受熱量をあまり減らすことができないため,他の布と比較すると,下部を涼しくすることができない.2遮光布の短波長に対する性状把握実験アトリウムの壁面への入射日射量の計算のために,数種類の布の光学的な性状を把握するための実験を行い,数値計算用にモデル化を行った.透過・反射成分の分布は,CGで用いられる表現技法を使用したモデル化から推定した[拡散性透過(反射)の様子⇒Lambert Model,指向性透過の様子⇒Phong Model,入射角毎の透過率,反射率,吸収率⇒フレネルの式]3数値計算による日射受熱量分布の把握モンテカルロ法による数値計算によって,遮光布を設置したアトリウム空間[10M×10M×10M]の日射受熱量分布[7/1,13:00]を把握した.その結果,遮光を行っていないケースと他のケースを比較すると,高さ6m以下において,日射受熱量が減少した.これは遮光布の設置によって日射が拡散反射,透過され,空間下部に直接日射が届かなくなったためである.また垂直遮光よりも水平遮光の方が,下部の日射受熱量は減少した.これは太陽高度が高いため,垂直遮光よりも水平遮光の方が,遮光面積が大きくなったためである.また日射反射率が高い布を水平に使用した場合,頂部の日射受熱量が非常に多くなった.布面での反射成分が頂部付近の壁面へ多く入射,吸収したためと考えられる.これらのシミュレーションの結果は実測調査結果ともおおむね一致している.
ドイツ語圏１６、１７世紀文献にみる西洋初期版画

本研究は、ヨアヒム・フォン・ザントラルトの『ドイツのアカデミー』(1675)とそれ以前のドイツ語圏文献において初期版画がどのように記述されているかを検証するものである。ザントラルトは、ジョルジョ・ヴァザーリの『芸術家列伝』(1568)での版画論に反駁し、版画芸術の発明はイタリア人ではなくドイツ人によるものであると具体的に主張した。ドイツ語圏では、16、17世紀のヤーコプ・ヴィンフェリンク、ヨハネス・ブツハッハ、ヨハン・フィシャルト、マティアス・クアトによる文献においても初期版画について記されていることなどから、ドイツ人が自国の芸術としての版画に強い関心と誇りを持っていたことが明らかになった。本研究の2年目である25年度は、関連文献の収集とともに、現地調査、ザントラルトの『ドイツのアカデミー』およびすでに収集したテクストの読解を行った。現地調査(9月15ー30)では、まずミュンヘンの中央美術研究所において、文献資料収集を行った。さらに昨年度行う予定であったバーゼルでの調査を後半に行った。バーゼルでは、バーゼル美術館版画素描室において、アマーバッハのコレクション目録の調査を中心に行った。非常に状態が悪いため、通常は閲覧することができないところを、主任学芸員クリスチャン・ミュラー博士のご厚意により、確認することができた。また、現在はバーゼル大学の一部である薬学博物館は、かつてアマーバッハ家が所有しており、公衆浴場を営んでいたこともわかった。アマーバッハのコレクションは美術館のみならず、歴史博物館にも多く所蔵され、その規模の大きさを実感した。ザントラルトの『ドイツのアカデミー』については、イスラエル・ファン・メッケネムの項目に初期版画に関する記述がある。この部分は試訳を行った。本年度は、研究の初年度として、基礎文献の収集に努めるとともに、現地調査およびザントラルトの『ドイツのアカデミー』のテクスト読解を中心に行なった。現地調査(8/26-9/21)は、まずミュンヘンの中央美術史研究所で基礎資料収集を集中的に行うとともに、バイエルン州立図書館において原典資料を、同州立版画素描館において初期版画作品調査を行なった。当初計画していたバーゼルの調査が先方の都合で不可能になったため、そのかわりにベルリン国立美術図書館において資料収集、同版画素描館においてニュルンベルクのパウル・べハイムの版画コレクション目録(1618年)を閲覧した。この目録は、作家別にまとめられている点に特徴がある。ザントラルトも記している初期のモノグラミストが記載されていることを確認した。また、ドレスデン州立美術館版画素描室においても初期版画の調査を行なった。しかしながら、一部の初期版画が展覧会で展示中だったため、直接調査することができないものがあった。ザントラルトの『ドイツのアカデミー』については、まず全体でどのような版画の記述があるかを確認した。分担者となっている科研研究報告書に1675年刊の『ドイツのアカデミー』第1主要部、第1部、第2書「彫刻」、第6章「直彫り法と腐蝕法について」を訳出し、この章にかんする論文を執筆した。この章は初期版画に直接関連するものではないものの、ザントラルトのテクストにおける版画という問題を考察する際には鍵となる重要な部分であると考えられる。本研究は、17世紀のヨアヒム・フォン・ザントラルトおよびそれ以前のドイツ語圏の文献にみられる初期版画についての記述を検証するものである。ザントラルトは、1675年刊行の『ドイツのアカデミー』第一主要部において、ヴァザーリによって主張されたイタリア人による版画技法の発明に対して具体的に異議を唱えた。本研究では、まずザントラルトの議論の該当箇所、第2部第2書「イタリアの芸術家」第23章「ボローニャの銅版画家マルカントニオ」の冒頭、および「ネーデルラントおよびドイツの芸術家」第2章ミヒャエル・ヴォルゲムート、イスラエル・フォン・メッヒェルンおよびその他3人の芸術家」X「イスラエル・フォン・メッヒェルン」を訳出した。さらに、16、17世紀の初期版画についての記述を、主にヤーコプ・ヴィンフェリンク、ヨハネス・ブツバッハ、ヨハン・フィッシャルト、マティアス・クアドの著作および、バシリウス・アマーバハとパウル・ベハイムの版画コレクション目録から検討するとともに、実作品において検証した。その結果、ドイツ語圏においては、きわめて早くから版画についての記述を見いだされた。ヴァザーリが最初の版画史を著わしたことは事実であるものの、ドイツにおいてその反論はすぐにも行われており、多くのモノグラミストたちのことにも言及されていた。本研究により、16、17世紀のドイツ人がいかに自国の芸術としての版画を尊重していたのか、ということが明らかになったといえる。西洋美術史、版画史今年度の現地調査では、バーゼルにおいてアマーバッハのコレクション目録を確認できたことは大きな収穫であった。

アマーバッハのコレクション目録は、ドイツ語圏に於ける初期のコレクション目録としてきわめて重要である。この目録には様々な品が含まれており、版画はその一部である。この目録の版画の記述について注目すべきは、逸名の版画家やモノグラミストの版画であり、その中に初期版画が含まれている。それかがどのように記述されているか、を確認することができたことは、本研究においてたいへん意義深かった。また、ミュンヘンの中央美術史研究所では、最新の研究論文の収集を行うことができた。本研究の出発点と言えるザントラルトの初期版画にかんする部分の試訳を終えると同時に、他のテクストの確認も行うことができた。ミュンヘンの中央美術史研究所において、本研究の基礎文献となる資料を集中的に収集することができたのは、大きな収穫であった。調査研究のためのリストを大幅に充実させることができた。しかしながら、そのためにミュンヘンにおいてはバイエルン州立図書館での調査の時間を十分にとることができなかったので、今年度にそれを行いたい。バーゼルの調査のかわりに、ベルリンの国立版画素描館において、パウル・べハイムの版画コレクション目録を調査できたことは収穫であった。この目録についての博士論文が刊行されているとのことだがまだ未見である。ザントラルトの『ドイツのアカデミー』の記述については、全体の検討を行い、一部の試訳を行った。先行する、ヴァザーリやファン・マンデルとの比較も視野に入れていく必要性があることを認識することができた。来年度は、ベルリン、ミュンヘン、ウィーンを中心に海外調査を行う予定である。海外協力者である、アド・ステインマン博士の来日に際して、意見交換を行う。またベルリン国立版画素描室のホルム・ベーヴァース博士とは現地で意見交換を行う予定している。ウィーンでは、アルベルティーナ版画素描館に所蔵される、ショーンガウワーの銅版画をオルミュッッがコピーした作品に書かれた同時代の記述を確認する。ザントラルトおよびその他のテクストの読解を進める。ザンドラルトの『ドイツのアカデミー』は先行するヴァザーリやファン・マンデルの影響を受けており、参照する必要があるが、年度末に両者の新たな邦訳がでたため参考にしたい。ザントラルトについては翻訳を精査し、その他のテクストの翻訳作業を進める。これらの調査および文献研究の成果をまとめて報告書を作成する。当初の計画に従って、昨年度さらに精査したリストに基づき一次資料の海外調査、初期版画作品の海外調査、関連する基礎資料収集の充実、原典資料の読解を中心に研究を行う。海外協力者であるアド・ステインマン博士の来日に際して、意見交換を行う。ベルリン国立版画素描館ホルム・ベーヴァース博士からは、各調査機関についての情報を得る予定である。本年度は、バーゼルとミュンヘンで調査を行う予定である。バーゼルでは、バーゼル美術館版画素描室において、バシリウス・アマーバハ目録および関連作品の調査を行う。
レーザー蒸発/超音速分子流法による生体・合成高分子の多光子イオン化質量分析の研究

本研究では、反射型飛行時間型質量分析装置の改良により、含塩素化合物に適用した場合には、塩素の同位体存在比に比例する分子イオンを正確に検出できるようになった。またイオン化室を液体窒素で冷却することにより、バックグラウンドを低下させ、感度を改善した。また広域波長可変レーザーである光パラメトリック発振器の第二高調波及びその誘導ラマン光を利用して真空紫外レーザー光を発生させ、これを光源とする超音速分子ジェット分光分析装置を完成した。加熱法並びにレーザー蒸発法を用いて高分子を分解する方法について検討し、両者を比較検討した。その結果、レーザー蒸発法はモノマーの親分子イオンが顕著に観測されるのに対し、熱分解法は数個のモノマー分子が結合した分子のイオンが観測されることがわかった。最近、発泡スチロールなどの合成高分子の環境汚染が新聞等でも数多く報道されるようになった。そこで発泡スチロールを熱分解して生成したオイルを分析した結果、スチレン、トルエン、ベンゼンなどの典型的な低分子化合物が検出されることがわかった。また、多光子イオン化にフェムト秒エキシマーレーザー(500fs、248nm)を利用する方法について研究を行ったところ、ナノ秒レーザーパルスを用いた場合と比較して、イオン化効率が格段に向上した。さらに親分子イオンをより選択的に生成することも判明した。生体高分子である核酸の塩基の一種であるアデニンのイオン化にもフェムト秒レーザーを利用したところ、親分子イオンに基づく顕著なイオンが観測され、合成高分子と同様の結果が得られた。実試料を分析するには、まず帰属のための手法を確立する必要がある。本研究では、レーザー波長を有効数字5桁以上の精度で求められるウエーブメータを利用してデータベースを作成する方法及びスペクトルデータの類似性から試料分子を同定する方法についても検討した。本研究では、まず反射型飛行時間型質量分析装置を開発することにより、質量分析の分解能を格段に向上させた。またイオン化室の器壁を液体窒素で冷却することにより、バックグラウンドを低下させ、感度を改善することができた。一方、光パラメトリック発振器と誘導ラマン効果と組み合わせることにより、全紫外・可視域における波長可変レーザーを開発した。試料として合成高分子を用いる場合は、加熱法並びにレーザー蒸発法を用いて分解する方法について検討し、両者の差異を比較検討した。その結果、レーザー蒸発法はモノマーの親分子イオンが顕著に観測されることが分かった。しかし、熱分解法はモノマーが数個結合した大きな分子のイオンが観測され、ポリマーの高次構造を調べる上では有益であることが分かった。一方、多光子イオン化にフェムト秒エキシマーレーザー(500fs、248nm)を利用する方法について研究を行った。その結果、ナノ秒レーザーパルスを用いた場合と比較して、イオン化効率が格段に向上することが分かった。さらにフェムト秒レーザーを用いる方法は、親分子イオンをより選択的に生成することが判明した。生体高分子である核酸(DNA)の塩基の一種であるアデニンのイオン化にもフェムト秒レーザーを利用したところ、親分子イオンに基づく顕著なイオンが観測され、合成高分子と同様の結果が得られた。本研究では、まず質量分析装置の分解能の改善を行った。その結果、1質量ユニットを明確に区別できるようになり、含塩素化合物に適用した場合には、塩素の同位体存在比に比例する分子イオンを検出できるようになった。また光源に広域波長可変レーザーである光パラメトリック発振器の第二高調波及びその誘導ラマン光を利用することにより、180nm付近の真空紫外域のレーザー光を発生させ、これを光源とする超音速分子ジェット分光分析装置を完成した。

核酸関連化合物について詳細に検討した結果、超音速分子ジェット特有の鋭い励起スペクトル及び多光子イオン化スペクトルを示さないことがわかったので、これについては昨年以上の検討は行わなかった。一方、現在では発泡スチロールなどの合成高分子の環境汚染が新聞等でも数多く報道されるようになった。そこでレーザー蒸発法だけでなく熱分解法による方法についても研究を行った。発泡スチロールを加熱分解して生成したオイルを本分析装置で分析した結果、スチレン、トルエン、ベンゼンなどの典型的な低分子化合物が検出されることがわかった。今後微量成分についても検討したいと考えている。実試料を分析するには、測定装置の開発だけでなく、帰属のための手法を確立する必要がある。本研究では、レーザー波長を有効数字5桁以上の精度で求められるウエーブメータを利用してデータベースを作成する方法とともに、得られたスペクトルデータの類似性から試料分子を同定する方法についても研究を行った。
先天性肝疾患に対する乳歯歯髄幹細胞を用いた肝立体構造体による新規治療法の開発

ヒト乳歯幹細胞(SHED)から肝細胞への分化誘導法を確立し、拒絶反応が起こりにくい細胞であることを明らかにした。四塩化炭素投与肝障害モデルマウス肝臓に対して非免疫抑制下にSHED由来肝細胞を移植し、肝臓への生着と肝障害・線維化および生命予後の改善がえられた。また、バイオ3Dプリンターを用いてヒト初代肝細胞・臍帯静脈内皮細胞・骨髄由来間葉系幹細胞を含む立体肝組織の作製に成功し、組織学的に生体肝に類似した構造を有し、肝臓の機能発現をすることを確認した。さらに、SHED由来肝細胞を用いて立体肝組織の構築に成功した。今後これを移植することによる肝再生療法の開発に発展することが期待される。1)Wilson病モデルラットを用いたSHEDおよびSHED由来肝細胞の効果の検討疾患モデル動物に対す非臨床試験として代謝性肝疾患の一つであるWilson病ラットに対し、SHEDおよびSHED由来肝細胞を経脾臓的に投与し、有効性に比較検討を行った。SHED投与群およびSHED由来肝細胞投与群いずれにおいても、疾患モデル動物の生命予後の有意な延長を認めた。また、SHED投与群およびSHED由来肝細胞投与群いずれにおいても血液生化学的検査にて黄疸、肝機能障害の改善を認め、病理学的検討では肝線維化の改善と銅沈着の軽減を認めた。さらに、SHED投与群およびSHED由来肝細胞投与群の比較検討では、生命予後、肝機能障害、肝線維化の改善や銅沈着いずれにおいてもSHED由来肝細胞投与の効果が優れるていることを確認した。2)立体的肝細胞構造体の作成ラット初代肝細胞、正常ヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)、骨髄由来間葉系幹細胞のヘテロスフェロイドをバイオ3Dプリンターを用いて立体的に積み上げることで立体的肝細胞構造体の作成を行った。培養1週間で、内部に内皮細胞で被覆された毛細血管様の構造が構築された。また、手術器具でつかんだり、切ったり、縫うことができる高い強度を有する構造体の作成に成功した。これを腸間膜や肝臓内に移植し、細胞の生着を確認中である。また、ヒト肝細胞を用いて、同様の手法で立体的肝細胞構造体の作成を行った。1)乳歯歯髄幹細胞(SHED)から肝細胞への分化誘導SHEDの肝細胞への分化誘導法を確立した。分化した細胞は形態的に肝細胞と類似し、アルブミン、第VIII因子,尿素の産生などの肝特異的特性を有していることを確認した。さらに、このSHED由来肝細胞をヌードマウスの肝臓内に径門脈的に投与しすることで肝臓内に生着し、アルブミン、第VIII因子などを産生することを確認した。2) SHEDおよびSHED由来幹細胞の免疫寛容性の検討SHED由来肝細胞をヒトT細胞と共培養すると、HLAの発現が低いために非自己として認識されないだけでなく、T細胞の増殖抑制ならびにアポトーシス誘導効果があることを見出し、免疫寛容性が非常に高いことが示唆された。肝硬変モデルラット(正常免疫)に対してSHEDおよびSHED由来肝細胞を脾臓内投与すると、拒絶されることなく肝臓内に生着することを確認した。2)立体的肝細胞構造体の作成ラット初代肝細胞、正常ヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)およびヒト脂肪由来幹細胞(hADSC)を共培養してヘテロスフェロイドを作製することで肝細胞単独よりスフェロイドの形成が早く、機能が向上ことを突き止めた。このヘテロスフェロイを積み上げて1cm3ほどの立体的肝細胞構造体の作製に成功した。特にHUVECを内核に肝細胞、hADSCを外層に配置する二層性ヘテロスフェロイドを作製し用いることで、構造体の機能がより向上することを突き止め、このスフェロイド作成法に関し特許出願を行った(出願番号:特願2013-056835出願日: 2013/3/19)。作製した構造体は2週間in vitroで培養すると、正常の肝臓と類似した肝細胞の索状配列や類洞構造が見られることを確認した。機能的にもアルブミンの産生が維持されており、CYP3A4などの肝特異的蛋白の発現を確認した。これまでに、ヒト乳歯歯髄幹細胞(SHED)から肝細胞への分化誘導法を確立し、この誘導肝細胞はHLA発現に乏しいだけでなく、Tリンパ球の増殖抑制やアポトーシス誘導を示すことから拒絶反応が起こりにくいことを明らかにし、マウスへの異種移植で免疫抑制剤なしでも細胞が拒絶されないことを確認した。

さらには四塩化炭素投与肝障害モデルラットに対して非免疫抑制下に細胞移植したところ、移植細胞の肝臓への生着と肝障害・線維化および生命予後の改善がえられることを確認した。また、バイオ3Dプリンターを用いてヒト初代肝細胞・臍帯静脈内皮細胞・骨髄由来間葉系幹細胞を含む細胞凝集塊を積層し、立体的肝細胞組織の構築に成功し、組織学的に肝細胞の索状配列や血管内皮細胞のネットワークを認めた。また、アルブミンの産生能が高く維持されることを確認した。本年度はまず最適な移植部位や方法の検討を行った。具体的には、肝臓内に埋植する方法と断端に移植する方法で比較し、手技的実現性、機能や細胞生存の面で最適な構造体の形状の検討を行った。また、SHED由来肝細胞より立体的肝細胞構造体を作成するためのスフェロイド作成の最適化を行った。具体的には、ヒト歯髄幹細胞より分化誘導した肝細胞を段階的に細胞数を変えてスフェロイドを作成。スフェロイド形成期間、スフェロイドサイズ、および低酸素マーカー(HIF1-α)の染色、TUNNEL染色による細胞生存率を解析し、最適なスフェロイド作成条件を解析した。さらにその結果をもとに立体構造体の作製に成功した。再生医療疾患モデル動物を用いてSHED由来肝細胞移植による肝再生効果が確認できたことは大きな進歩である。しかし、ラット初代肝細胞を用いた立体的肝細胞構造体の作成が安定しておらず、SHED由来肝細胞を用いた立体的肝細胞構造体の作成に着手できていない点でやや遅れていると考える。現在ヒトの初代肝細胞を用いて検討も行っているが、腫によらず初代肝細胞はスフェロイド形成が遅く、細胞自体が脆弱であることが問題であることが分かっている。一方でSHED由来肝細胞ではスフェロイド形成は容易で、長期間機能維持可能であることを確認しており、本年度はすぐにSHED由来肝細胞を用いた立体的肝細胞構造体の作製に着手する予定である。研究計画通り、乳歯歯髄幹細胞(SHED)から肝細胞への分化誘導法を確立し、in vitoro,in vivoいずれにもいても肝特異的機能を有することを確認し、SHEDが細胞移植療法に応用可能な細胞ソースであることを確認した。さらには、SHEDおよびSHED由来肝細胞は免疫寛容性が非常に高く、同種のみならず異種移植においても拒絶されず、安全性が非常に高いことが示唆された。これらの点からSHEDは臨床応用に有用な細胞であると考えられ、疾患モデル動物を用いたSHED細胞移植療法の前臨床試験の準備に入っている。また、ラットの肝細胞を用いて、肝臓に類似した構造と肝特異的機能を持つ1cm3ほどの立体構造体の作製に成功し、我々独自の方法として特許申請を行った。H25年度はSHED由来肝細胞を用いた立体肝細胞構造体を作製し、これを用いた肝再生療法の開発研究を行う予定である。1)ヒト乳歯幹細胞由来肝細胞を用いた立体肝組織の最適化ヒト歯髄幹細胞由来肝細胞よりバイオ3Dプリンターを用いて、立体肝組織を作製する。立体肝組織の細胞の生存率及びアンモニア代謝やアルブミン産生などを指標に肝組織の規格決定(細胞数、形状最適化)を行う。2)ミニブタを用いた立体肝組織移植の有効性評価:ヒト乳歯幹細胞を用いた立体肝組織を同種四塩化炭素誘導性肝障害モデルミニブタに対し腹腔鏡を用いて肝臓内に埋没移植する。合併症等を検討し、安全な移植手技を確立する。
Eu諸国における入国管理/移民政策のパラダイム・チェンジ

2年目は、引き続きEU主要諸国の入国管理/移民政策の新たな動向を示唆する最近の文献を集中的に入手し、その検討に作業の大半を費やした。1年目に確認した諸傾向に加えて、新たな知見としては、次のような点があげられる。東欧諸国のEU加盟によって緊張がより東方へと移動し、ロシア、ベラルーシ、ウクライナ等との境界を通過する人や車が増大し、経済的拡大が見られた。しかし、人の移動に関しては短期間の往来の形をとる行商人等が多く、外国人の入国が定住化につながるという傾向はみられない。他方、南からEUへと移動しようとする外国人が多く、スペインやジブラルタル海峡が新たな緊張の場となり、EU諸国は、とりわけけサハラ以南からの外国人の入国を阻止すべく、中継地であるモロッコとの間で政策協議に入った。スペインに属するカナリー諸島やモロッコ内の飛び地にまず入り、その後、スペイン、さらにはEU主要諸国を目指す新たな移民が増加した。ジブラルタル海峡では、厳しい入国管理が行われており、南の緊張地帯となっている。また、EU諸国内部で、国によって入国政策が異なっており、例えば、非正規の農業労働者が多数スペインに入っている。また、新自由政策をとるイギリスには非正規の労働を利用しようという傾向がみられ、これらの国への非正規外国人の入国が目立っている。このように、EU主要諸国間で入国管理政策・移民政策の食い違いがみられ、新たな問題となっている。他方、定住外国人の問題はフランス等で大きな問題となり、彼らの社会経済的統合が火急の問題となっている。05年11月に発生した移民を含む若者たちの暴動は、その端的な表れである。1年目は、EU主要諸国の入国管理/移民政策の新たな動向を示唆する最近の文献を集中的に入手し、その検討に作業の大半を費やした。当初、入国管理の専門家へのインタビューも一部予定していたが、健康上の理由で次年度以降に回した。インタビュー候補者の一人であるP・ヴェィユ(CNRS、フランス)が日本を訪問したので、この機会を利用して入国管理政策の変化について意見を交換した。研究サーベイの結果得られた知見は、以下のとおりである。(1)IT技術者等の受け入れに見られるように、従来の完全締め出しから選択的受け入れへの傾向が認められる。(2)定住移民については多文化主義的な政策から統合政策への転換を示す国が多く、政策の「保守化亅の傾向が顕著となっている。(3)EU統合による拡大の一方で、非正規の入国者への厳しい入国制限が認められる。それに伴って、モロッコ等の北アフリカ諸国からの非合法移民が多く、移動に伴う悲劇も多い。(4)EUの25カ国への拡大(いわゆる東方拡大)は、人の自由な国際移動を伴っていないケースが多く、入国管理という点で大きな変化は認められないが、企業や資金の移動に伴って、今後の変化が注目される。(5)同じ民族的出自の外国人の受け入れが、スペイン、ドイツ等で続いている。特に同じスペイン語圏に属する南米諸国からのスペイン等への帰還が認められる。(6)EUに加盟した25カ国のさらに東方に位置する国々を中心にして、周辺の発展途上諸国からのスマグラーと呼ばれる仲介者を利用しての非合法な入国が続いており、こうしたスマグリングに必要とされる費用も高騰している。(7)規制緩和の進んだ国(イギリス等)と社会民主主義的規制の強い国(北欧諸国等)との差がめだち、規制緩和は人の移動を促進し、安価な価格の外国人労働力市場を作り出している。こうした知見を基礎にして、次年度以降の本格的な研究に進む予定である。
精神分裂病における病因候補遺伝子の検索・同定

Albert Einstein大学のグループが作成したtransgenic mouseは、統合失調症関連行動とVCFS様のanomalyを示した。彼らの導入したBACクローンの22q11領域200kbには、PNUTL,GP1Bβ,WDR14,TBX1の4遺伝子が位置していた。そこで、4遺伝子についてmutationscreeningを行った。PNUTLで1箇所、GP1Bβに3箇所、WDR14に4箇所、TBX1に16箇所で多型を同定した。200例の統合失調症と199例の対照をもちいてこれら全ての多型について、case-control studyを行った。その結果、TBX1において-85C>G(P=0.0074,Odds ratio=1.57,95%CI:1.08-2.32),928G>A(P=0.019,Odds ratio=0.36,5%CI:0.04-0.77)の2つの多型がそれぞれ正と負の関連を示した。両多型の野生型と変異型のホモ接合体について、統合失調症の発症年齢を比較した。-85C/C,G/Gでそれぞれ30.07+2.27歳、25.26+1.67歳と有意に変異型で発症年齢が低かった(P=0.05)。928G/G,A/Aでは、25.43+0.91歳、28.17+6.35歳と変異型で発症年齢が高かった(P=0.24)。これらから、TBX1遺伝子の-85C>Gは、統合失調症に発病促進的に関連することが示唆された。TBX1は前頭葉で発現しているので、松沢病院入院患者25例にWCSTを行い、-85C>Gの野生型と変異型のホモ接合体で前頭葉機能を比較した。その結果、-85C/Cと-85G/GにおいてMilner法による誤反応数がそれぞれ3.28+0.89、9.25+2.88と有意に変異型で高い値を示した(P=0.04)。以上から、TBX1は統合失調症の遺伝的リスクファクターで、risk allele -85Gは前頭葉機能の低下にも関連することが示唆された。4番染色体短腕と13番染色体長腕の均衡転座t(4p,13q)(16.1;21.31)と、9番染色体腕間逆位inv(9)(p11,q13)の症例を同定した。t(4p,13q)(16.1;21.31)は、39歳発症の妄想型統合失調症と発症年齢が非典型であり、また多発性嚢胞腎、珊瑚状腎結石を合併していたため染色体検査を行い転座を同定した。両親も染色体検査を実施したところ転座はなく、de novo translocationであることが明らかとなった。この家系では、父親の8同胞と父方祖父母、母親の6同胞と母方祖父母に精神疾患の既往はなく、症例の兄も健常者だった。また、4p16.1は60%に精神障害を合併するWolfram syndromeのWFS1遺伝子の座位であり、13q21.31は統合失調症と連鎖が報告されている。そこで、この家系で唯一の統合失調症である発端者において、de novo転座部位の遺伝子断裂が発症に関与した可能性が示唆された(Itokawa et al.Psychiatry Clin.Neurosci.)。現在、転座断端の遺伝子をクローニングするために、FISH法による転座部位の詳細な位置を検索中である。inv(9)(p11,q13)は、3人同胞全員と母親が統合失調症という多発家系において同定された。松沢病院へ入院中の同胞2名の染色体検査を実施し2名ともに腕間逆位を同定した。母親は、松沢病院に入院中身体合併症にて死亡している。現在、残る1同胞(都内の精神科入院中)を調査中であり、同胞全員が同染色体異常を共有していた場合、さらに母親の同胞の調査を計画している。

928G/G,A/Aでは、25.43+0.91歳、28.17+6.35歳と変異型で発症年齢が高かった(P=0.24)。これらから、TBX1遺伝子の-85C>Gは、統合失調症に発病促進的に関連することが示唆された。TBX1は前頭葉で発現しているので、松沢病院入院患者25例にWCSTを行い、-85C>Gの野生型と変異型のホモ接合体で前頭葉機能を比較した。その結果、-85C/Cと-85G/GにおいてMilner法による誤反応数がそれぞれ3.28+0.89、9.25+2.88と有意に変異型で高い値を示した(P=0.04)。以上から、TBX1は統合失調症の遺伝的リスクファクターで、risk allele -85Gは前頭葉機能の低下にも関連することが示唆された。4番染色体短腕と13番染色体長腕の均衡転座t(4p,13q)(16.1;21.31)と、9番染色体腕間逆位inv(9)(p11,q13)の症例を同定した。t(4p,13q)(16.1;21.31)は、39歳発症の妄想型統合失調症と発症年齢が非典型であり、また多発性嚢胞腎、珊瑚状腎結石を合併していたため染色体検査を行い転座を同定した。両親も染色体検査を実施したところ転座はなく、de novo translocationであることが明らかとなった。この家系では、父親の8同胞と父方祖父母、母親の6同胞と母方祖父母に精神疾患の既往はなく、症例の兄も健常者だった。また、4p16.1は60%に精神障害を合併するWolfram syndromeのWFS1遺伝子の座位であり、13q21.31は統合失調症と連鎖が報告されている。そこで、この家系で唯一の統合失調症である発端者において、de novo転座部位の遺伝子断裂が発症に関与した可能性が示唆された(Itokawa et al.Psychiatry Clin.Neurosci.)。現在、転座断端の遺伝子をクローニングするために、FISH法による転座部位の詳細な位置を検索中である。inv(9)(p11,q13)は、3人同胞全員と母親が統合失調症という多発家系において同定された。松沢病院へ入院中の同胞2名の染色体検査を実施し2名ともに腕間逆位を同定した。母親は、松沢病院に入院中身体合併症にて死亡している。現在、残る1同胞(都内の精神科入院中)を調査中であり、同胞全員が同染色体異常を共有していた場合、さらに母親の同胞の調査を計画している。-485C>Tはプロモーター領域に位置するので、-485C>Tを含む786bpを導入したpGL3basicをIMR-32とCOS-1へトランスフェクションしてルシフェラーゼ・アッセイを行ったところ、神経細胞由来のIMR-32では-485Cを含むコンストラクトはコントロールの約2倍の転写活性を示し、-485Tは-485Cのおよそ40%を示した。-485Tと-485Cの転写活性には有意な差が認められた(P=0.02)。非神経細胞由来のCOS-1では、-485T,-485Cともにコントロールの約半分の活性を示し、両者間に有意な差は認められなかった。100名の患者にPANSSを用いて重症度を評価し、-485Cと-485Tのそれぞれのホモ接合体患者を比較したところ、陽性症状ではP1の妄想(P=0,01)とP5の誇大性(P=0.02)でTのホモ接合体患者がCのホモ接合体患者より有意に得点が高かった。陰性症状ではN6の会話の流暢性欠如でT/Tの患者がC/Cの患者より有意に得点が低かった(P=0.04)。以上の結果は、NPYの低下が統合失調症の病態に関与することを分子遺伝学的に支持した初めての証拠であり、-485Tは統合失調症のリスクファクターであることが示唆された。
新規NF-κB制御分子ヌクリングの脂肪性肝障害発症への作用機序の解明

本研究は、新規NF-κB制御分子ヌクリング(Nucling)のヒト生体内における生理機能と病態における意義の解明を目標として、ヌクリングKOマウスにおける非アルコール性脂肪性肝障害(NAFLD)を中心とした代謝異常症の発症病態を詳細に検討した。その結果、我々は高インスリン血症を来す一因となり得るインスリンの発現制御異常が、NAFLDの発症要因となることを見出した。これはインスリン発現制御異常とNAFLDがフィードバックループにより病態の増悪をもたらすことを示唆する。ヌクリングは無刺激状態におけるインスリン発現制御に重要であり、その制御不全が代謝異常を引き起こすと考えられた。本研究は新規NF-κB制御分子ヌクリング(Nucling)のヒト生体内における生理機能と病態における意義の解明を目標としている。本年度はヌクリングKOマウスにおける非アルコール性脂肪性肝障害(NAFLD)を中心とした代謝異常症の発症病態を詳細に検討した。NAFLDは肝臓におけるアルコール非依存の脂肪蓄積異常として特徴付けられ、インスリン抵抗性や高インスリン血症といったメタボリック症候群に関係する兆候を示す。NAFLDと高インスリン血症がどのようにして結びついているのかはあまりよく分かっていないが、NAFLDは肝臓だけで無く、膵臓、脂肪組織、筋肉などの機能にも影響を及ぼし、それら臓器の炎症反応へ至ることが分かっているため、高インスリン血症もNAFLDの結果であろうと一般に考えられている。我々は高インスリン血症を来す一因となり得るインスリンの発現制御異常が、NAFLDの発症要因となることを見出した。これはインスリン発現異常とNAFLDがフィードバックループにより病態の増悪をもたらすことを示唆する。インスリンの遺伝子発現は膵内分泌腺のβ細胞に於いて緻密に制御されている。この制御の破綻は容易に糖尿病などの異常を引き起こす。栄養素やホルモン刺激によるインスリン発現誘導機構は精力的に研究されてきたが、そのような刺激が無い状態におけるインスリンの発現制御機構に関する研究はほとんど報告が無い。我々はヌクリングの発現不全が、無刺激状態におけるインスリン及びその上流分子であるPdx-1の発現異常を来すことを、膵臓組織及び膵培養細胞系で確認した。またヌクリングノックアウトマウスでは糖代謝異常と共にNAFLD様所見が確認された。以上より、ヌクリングは無刺激状態におけるインスリン発現制御に重要であり、その制御不全が代謝異常を引き起こすと考えられた。以上の成果は第86回日本生化学会大会にて報告した。本年は、ヌクリングの生理機能の解析として、出産後マウスの離乳後乳腺退縮現象(mammary gland involution)におけるヌクリングの関与について検討した。離乳後乳腺退縮現象にはアポトーシス細胞死が深く関与していることが知られている。これにより哺乳動物は出産・離乳後に不要となる乳汁分泌が抑制される。ヌクリングKOマウスではこの離乳後乳腺退縮現象の遅延が疑われたために、以下の実験を行った。まずヌクリングの乳腺における遺伝子発現様式を検討した。その結果、ヌクリング遺伝子は乳腺の発達時に発現誘導され、さらに退縮時にはより強く発現が惹起されることを確認した。次に、ヌクリングKOマウスにおける乳腺細胞の離乳前後の細胞死現象を野生型と比較検討した。その結果、ヌクリングKOマウスの乳腺ではアポトーシス異常がみられ、退縮現象が遅延していた。分子レベルの解析では野生型でみられるNF-κB及びStat3の活性化が同KOマウスの乳腺では抑えられていることを見出した。これらのシグナルは乳腺退縮に重要な役割を担っていることが知られている。以上より「ヌクリングは乳腺退縮(mammary gland involution)時のアポトーシス誘導現象に重要な働きを担っており、それはNF-κB及びStat3の活性化を制御することによりもたらされる」ことが強く示唆された。本研究は、新規NF-κB制御分子ヌクリング(Nucling)のヒト生体内における生理機能と病態における意義の解明を目標としている。ヌクリングKOマウスにおける炎症性疾患の自然発症率上昇における細胞性免疫の寄与を検討するために、細胞性免疫が障害されているヌードマウスを遺伝的背景に持つヌクリングKOマウス(ヌクリングKOヌードマウス, Nucl-/-nu)を作成し、炎症性疾患発症率を調べた。その結果、ヌクリングKOヌードマウスでは、C57black6/J背景のヌクリングKOマウスでは認められなかった乳がんの発症例が散見されるようになった。また出産後の乳腺退縮減少の遅延が確認された。去年度報告の研究の続きとして、出産後マウスの離乳後乳腺退縮現象におけるヌクリングの関与について検討を進めた。まずヌクリングは乳腺の発達時に発現誘導され、さらに退縮時にはより強く発現が惹起されることを確認した。またヌクリングノックアウト(KO)マウスの乳腺ではアポトーシス異常がみられ、退縮現象が遅延していた。分子レベルの解析では野生型でみられるNF-&#61547;B及びstat3の活性化が同KOマウスの乳腺では抑えられていることを見出した。以上より「ヌクリングは乳腺退縮(mammary gland involution)時のアポトーシス誘導現象に重要な働きを担っており、それはNF-κB及びstat3の活性化を制御することによりもたらされる」ことが強く示唆された。