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東日本大震災後のエネルギー環境教育のあり方に関する基礎的研究－教材開発の視点から

最終年度にあたる平成26年度(2014年度)は研究代表者が国立教育政策研究所「環境教育指導資料」作成協力者会議のメンバーとして研究成果を「指導資料」改定作業に反映させるとともに(2014年11月刊行)、日本環境教育学会編『環境教育とESD』(東洋館出版社、2014年9月)にも成果の一部を公表した。また、3年間の研究成果のまとめとして『ESD研究』(別冊、2015年3月)を刊行した。教育学授業案作成チームの研究成果の公表が予定より早く進んでいるものの、作成した授業案を用いた授業実践の一部及び評価が2014年度にずれ込んでいる。また、研究分担者が年度途中で任期満了によって失職した(研究分担者を外れた)ことで、カリキュラム・チームが予定していたエネルギー環境教育の動向分析等が2014年度にずれこんでいる。授業案作成チームの研究が当初の予定より早く進んでおり、その結果として「授業案2」が2011年度中に刊行されてことを受けて、シュミレーション教材「海辺村の未来は?」の作成に取り組んだ。また、環境教育学会との協力のもとに学会年報『東日本大震災後の環境教育』に研究成果の一部を公表した。授業案作成チームを中心とした定例研究会は順調に進められており、当初の予定を上回る成果をおさめている。授業案作成チームとしてJSEE-WGが作成した授業案「原発事故のはなし」を活用した授業実践を広げるとともに、その効果と課題を明らかにするためのフォローアップ調査を実施する。他方で、カリキュラム・チーム(研究協力者との共同)を中心に、エネルギー環境教育の批判的検討(1震災以前の放射線教育、2震災後の放射線教育、3多様化する放射線教材、4求められるエネルギー環境教育)にもとづくESD型エネルギー環境教育の構想をまとめる。JSEE-WGとして作成した「原発事故のはなし」授業案(完成版)を日本環境教育学会の会員をはじめとした環境教育関係者に広く活用してもらい、その効果と課題を明らかにするためのフォーアップ調査を実施する。その調査結果の分析を踏まえて、エネルギー環境教育における「原発事故のはなし」授業案の位置づけを明確にするとともに、その延長上に位置づけられる「防災に関する学習指導要領の項目」の授業案づくりにも着手する。小学校に例にみると、社会科「地域社会における災害及び事故の防止」「国土安全の保全及び自然災害の防止」「災害復旧の取り組みを調べる」、理科「流水の浸食・運搬・堆積作用」「増水における土地の変化」「台風の進路における天気の変化や降水との関係」、生活科「安全な登校ができる」「安全な生活することができる」、体育「けがの防止」「的確な判断・安全な行動」、総合「地域の人々の暮らしに応じた課題」、特別活動「心身ともに健康で安全な生活態度の形成」「安全な行動や規律ある集団行動の体得」などが考えたれる。当初の予定にあった授業案の一部の実施が翌年度にずれ込んでいるため、その経費を翌年度に残した。授業案の実施に伴う経費として使用する予定である。平成25年度の研究費使用計画:物品費:60,000円、旅費1,000,000円、人件費・謝金180,000円、その他60,000円、計1,300,000円間接経費:390,000円
ユビキチンリガーゼFbw7の炎症反応調節機能

SCF-Fbw7ユビキチンリガーゼの分解標的であるc-Mybは、B細胞およびT細胞の分化に関与し、生体での正常な免疫反応の為にc-Myb自身が量的質的制御を受けていると考えられる。その機構へのFbw7の関与を調べるには、Fbw7の結合部が消失して分解抵抗性を獲得したc-Myb T572Aノックイン(KI)マウスが有用と考えた。ホモ変異型では肺に炎症反応によって惹起されたと考えられるB細胞を主とするリンパ球浸潤による臓器障害の発生例が認められた。これはダニ粉吸引による喘息発症モデルで起こった障害像と近似し、浸潤部では複数種の免疫細胞の一部がc-Myb陽性を示した。樹状細胞やTfh細胞はB細胞の走化因子であるCXCL13を発現するが、CXCL13遺伝子プロモーター上にc-Myb応答配列が存在したため、c-Mybが転写活性化する可能性を考えた。そこでPromoter assayの系で検討した結果、c-MybはCXCL13転写の活性化能を持つ事がわかった。さらにc-MybはFbw7の別の分解標的であるGATA3と相乗的に、CXCL13の転写活性能を増強した。c-MybとGATA3の転写活性化における相乗作用はIL-13発現に対しても認められることが過去に報告されており、IL-13の発現調節にもFbw7が二種類の転写因子の量的調節を介して間接的に寄与している可能性がある。T細胞特異的なFbw7ノックアウトマウスを対象にした検証より、Fbw7の欠損はT細胞の分化増殖阻害を発生させ、その一因としてGATA3の分解阻害による蓄積が考えられることはすでに報告したが、今回得られた知見より、分化後の免疫細胞においても、Fbw7が複数の転写因子の量的調節を介して複数のサイトカインの産生を制御し、組織での炎症に対する適正な生体反応に寄与している可能性が示唆された。造血幹細胞(HSC)は炎症・免疫反応を制御する多彩な細胞集団に分化する能力を持つ。幹細胞の温存の為には、静止状態と未分化性を維持する事が重要で、そのために機能するタンパク質は転写レベルと翻訳後修飾によって量的調節を受けている。Fbw7はこれまでに複数の転写因子を分解の基質としている事が報告されており、それらにはHSCの転写制御能を持つものも含まれている。また多くの既知のFbw7の基質に共通する特徴の1つとして、CDC4 phospho degron (CPD)と称される、主にGSK3キナーゼによるリン酸化修飾を受けたアミノ酸を含むコンセンサス配列をFbw7との結合部位としている事が挙げられる。我々は過去にFbw7の新規標的因子としてGATA3を同定したが、この基質もCPDをFbw7との結合部位としていた。GATAはType1-6でfamilyを形成する転写因子で、その中でGATA3はGATA2とアミノ酸の相同性が最も高い。GATA3のCPD配列はGATA2でも相当位置に保存されており、さらにGATA2はHSCで機能する転写因子であることから、GATA3のみならずGATA2もFbw7の標的となっているのではないかと考え、検討を進めた。その結果、Fbw7はGATA2に対してCPDを介して結合し、分解を誘導することが明らかになった。またCPDのリン酸化が一連のイベントに必要で、培養細胞では細胞周期のM期にCyclinB-CDK1が寄与することが示された。さらにFbw7をコンディショナルノックアウトしたマウスの骨髄では、GATA2タンパク存在量の増大と未分化な細胞集団の存在率の低下が相関しており、Fbw7を介したGATA2タンパク量の適正化が損なわれると、HSCの分化抑制能に影響が及ぶ可能性が示唆された。自然発生した皮膚炎症について、組織標本のHE染色および免疫組織染色像から病理所見を得た。その結果、腎臓、肺および脾臓など複数の組織で形質細胞の悪性腫瘍の浸潤またはB cells系の異常活性化が発生している可能性が認められた。cMybはB細胞の分化過程で機能している転写因子であるため、分化途中でのcMybタンパク量の増大が観察された異常を引き起こした可能性があり、さらに詳細な組織解析を進める。炎症惹起モデルでの解析は、マウスの増殖が予定よりも遅れた為、次年度以降で必要匹数を確保した上で行なう。SCF-Fbw7ユビキチンリガーゼは造血幹細胞やリンパ球等血球系細胞の分化増殖を制御する多種の転写因子を分解の標的としている。我々はこれまでに血球系細胞の増殖・分化に重要な転写因子であるGATA2,GATA3およびc-Mybが、特定部位のリン酸化がFbw7との結合の引き金となってユビキチン依存的分解を受けることを見いだし、Fbw7コンディショナルノックアウトマウスの解析により、それらの量的調節が血球細胞の正常な分化に重要であることを明らかにしてきた。本研究では炎症発生に伴う血球系細胞の機能制御における、Fbw7の基質分解を介した役割を明らかにする事を目的としている。Fbw7の基質リン酸化に依存的な分解機構の特性に注目し、Fbw7依存的なc-Mybの分解の生理的意義の解明には、c-MybだけがFbw7による分解に対して耐性となるc-Myb T572Aノックイン(KI)マウスの作製と、表現型の解析が有用と考えた。

KIマウスは通常飼育環境下で生育可能であることが確認されたが、ホモ変異型では長期飼育によって肺、肝臓に炎症反応によって惹起されたと考えられるリンパ球浸潤による臓器障害が高頻度に認められた。組織免疫染色(IHC)解析により、この浸潤部にはB細胞を中心としたリンパ球の集積とともにc-Mybを発現する細胞が確認され、さらにc-Myb発現は集積細胞集団の増殖に寄与している可能性も見出された。一方LPS投与による自然免疫感作モデルマウスではc-Myb発現亢進が腹腔内B細胞に認められ、これらはKI高齢マウスで認められた異所性のc-Myb発現細胞と共通性があることがわかってきた。このことから自然免疫が関与する炎症反応に、c-MybがFbw7による量的調節を受けて関与している可能性があり、次年度はさらに検証を重ねる予定である。モデル動物を用いた本実験により、Fbw7によるc-Mybタンパク質の量的制御が炎症シグナルに関連したリンパ球の挙動を制御する可能性を示唆するものであることが明らかにされつつある。またc-Mybが関わる炎症反応は、炎症惹起モデル実験より、自然免疫が関与する類いである可能性も示唆されている。これらの結果はc-Mybが炎症反応の惹起、進展において一定の役割を果たす因子であることを示すものでもある。c-Mybはリンパ球の分化成熟過程の調節因子であることはすでに明らかにされているが、炎症発生以後の機能に関しては不明の点が多く、本研究で得られつつある知見は新規性が高い。SCF-Fbw7ユビキチンリガーゼは血球系細胞の分化増殖の制御因子の多くをその分解標的にしていることがわかっている。我々が見出した分解標的のひとつであるc-Mybもその因子に属するものである。c-MybはB細胞およびT細胞の分化に関与するが、免疫反応で重要な役割を担うこれらの因子を制御するために、c-Myb自身が量的質的制御を受けていると考えられる。その機構を明らかにするには、Fbw7の結合が回避されることで分解に抵抗性を獲得するように遺伝子改変させたc-Myb T572Aノックイン(KI)マウスの表現型を解析することが有用と考えた。ホモ変異型では長期飼育によって肺、肝臓に、炎症反応によって惹起されたと考えられるBリンパ球を主とするリンパ球浸潤による臓器障害を発生する例が認められた。これはダニ粉吸引による喘息発症モデルで起こった障害像と近似し、浸潤部では樹状細胞(DC)を含めた複数種の細胞が部分的にc-Myb陽性であった。DCやTfh細胞はB細胞の走化因子であるCXCL13を発現するが、CXCL13遺伝子プロモータ上にc-Myb応答配列が存在したため、この転写活性化にc-Mybが寄与する可能性がでてきた。そこでPromoter assayの系で検討したところ、c-MybはCXCL13転写を活性化する能力を持つ事がわかった。このことはc-Mybがリンパ球の分化増殖に寄与するのみならず、炎症発生時のリンパ球の機能も制御している可能性を示唆するものである。Fbw7による分解抵抗性を獲得したc-Myb T572A KIマウスの炎症惹起時の表現型を解析する中で、c-MybはCXCL13を新規下流因子として、その転写活性化を介して樹状細胞の機能に関与している可能性が見出された。そこで組織像の解析と共にc-Mybの新規下流因子への転写活性化のメカニズムの解析を進めている。
脱アメリカ化する現代アメリカ文学の諸相

本研究は、21世紀のアメリカ文学が「アメリカとは何か」という伝統的な問いから離れ、脱アメリカ化しつつあるという新たな方向性を論じることを目的とした。具体的には、(1)1980年代から1990年代にかけてのアメリカ小説においては、「外部」を自由の場とみなす表現が支配的であったこと、(2)2000年代に登場したアメリカ作家たちの特徴が「寓話性」であり、無国籍な作風を中心としていること、(3)非英語圏出身の作家たちがアメリカ文学に参入することで、「アメリカ」という枠組みそのものが無効化されつつあること、の三点を中心に書籍・論文を発表し、翻訳も合わせて行った。平成25年度の研究実績としては、次のものが挙げられる。(1)英語での単著『Oustide America: The Temporal Turn in ContemporaryAmerican Fiction』(Bloomsbury, 2013)の出版、および日本語論文「十字路とアメリカ:リチャード・パワーズと多和田葉子における「交点」の文学について」(『れにくさ』)の発表による、21世紀のアメリカ文学が次第に「アメリカ」へのオブセッションを失っていく現象の記述。(2)10月にアメリカ合衆国ニューオーリンズで開催された学会American Literature Associationにおける研究発表を通じた、新世紀のアメリカ文学を定義する「寓話性」という概念の探求、および、日本アメリカ文学会関西支部フォーラムでの研究発表、東京大学言語情報科学専攻シンポジウムでの講演での、文学研究の視座としての「翻訳」の重要性の探求。(3)アメリカ作家ロン・カリー・ジュニア『神は死んだ』、および文芸誌『文學界』『新潮』『Granta Japan with早稲田文学』におけるアメリカ作家の短篇の翻訳。(4)京都新聞でのコラム執筆を通じたアメリカ文学を取り巻く現状の紹介。とりわけ(1)と(2)を通じて、現代アメリカ文学における「脱アメリカ化」の現象はかなりの具体性と説得力をもって記述しうるものになった。当該年度の研究は、1現代アメリカ文学における中心的なパラダイムである「外部」という概念についての整理を行うこと、2そのパラダイムから積極的に離脱しようとする、21世紀の文学・作家についての考察および紹介を行うこと、を中心として行われた。1に関しては、前年度までの研究成果をまとめ、単著『Outside, America: The Temporal Turn in Contemporary American Fiction』(Bloomsburyより2013年4月刊行)の原稿を完成させるという作業が中心となった。それ以外にも、「災害」を主題とした2012年度アメリカ学会年次大会部会(D)において、現代アメリカ小説における災害表象を考察したことで、さらに平成25年度にも継続して研究を進める準備を整えた。2については、21世紀のアメリカ文学を世界文学の一つとして、すなわち「脱アメリカ化」した様態においてとらえるという視点の確立を目指した。2012年6月にフランスおトゥールーズで行われた国際学会"Crossroads"に参加し、すぐれてアメリカ的モチーフである「ロード」から象徴性をはぎ取る形で物語が構築されている例として、Richard Powersと多和田葉子の小説を論じた。2013年3月には、東京大学で開かれた国際研究集会『グローバル化時代の世界文学と日本文学』に報告者として参加し、21世紀アメリカ文学が、「アメリカとは何か」という問いから離脱し、逆に多言語への翻訳可能性を成立条件とし始めている点を検討した。それにより、次年度以降に展開されるべき新たなアメリカ文学論の枠組みをなかば提示することができた。また、新聞や文芸誌など各種媒体にて、新世紀のアメリカ作家たちの紹介・翻訳の機会にも恵まれた。本研究は、現代アメリカ文学が21世紀に入って伝統的な「アメリカとは何か」という問いから次第に離脱し始めていることを、主に(1)アメリカの若手作家が無国籍な寓話という作風を好んで採用すること、(2)アメリカ合衆国外出身の作家たちが英語での創作を行い、かつ移民のアメリカでの経験という主題を避けていること、の二つの視点を追求したものである。そのための基盤としては、現代アメリカ文学、特に1980年代から2000年にかけての小説が、いまだに「アメリカ」という問いを中心として展開してきたことを論証する必要がある。その作業は、平成25年度に出版した英語の単著『Outisde, America』にて一つの結実を見た。Don DeLilloやRichard Powersといった作家たちにおける、物語が「外部」を中心に組み立てられていることを中心として、現代作家たちが空間や時間をアメリカ的に把握していることを論じている。それに並行し、主に2000年以降に登場した(1)の作家たちにおいては、戦争が寓話化され、「アメリカ」を問うものではなくなっていること、あるいは(2)の作家たちと呼応するように、Powersらも作風が「アメリカ」から少し離れつつある瞬間が見られることを、国内外の学会にて研究発表し、後者に関しては平成26年度に論文化した。全体として、アメリカ文学が21世紀に方向性を大きく変えつつあることを多角的に論じる研究となった。

(2)の作家たちについては、Daniel Alarcon(ペルー)やTea Obreht(旧ユーゴスラビア),Miroslav Penkov(ブルガリア)といった、アメリカの外にルーツを持つ作家たちの翻訳を同時に行うことができた。現代アメリカ文学当初の研究計画は、3年間の研究を通じ、英語による二冊目の単著に向けた理論的・概念的な整備を行うというものであった。2年目にあたるH25年度においては、「脱アメリカ化」という現象において「翻訳」という概念が重要な役割を担うことが明らかになった。それにより、文学テクストの分析に翻訳論の成果を取り入れる試みが、手法として明確にされた。その意味で、理論的な面においてはかなりの進展があったものと考えている。その一方で、英語ではなく日本語での原稿執筆の機会が増し、最終年度にあたるH26年度においてはさらに日本語原稿を多く発表する機会があることにより、日本語の単著を先にまとめる可能性が高まっている。「脱アメリカ化」した現代アメリカ文学の全体像を提示する、という研究の目的に向けて、まずは12000年前後までの現代アメリカ文学の特徴を概観する単著をアメリカ合衆国にて出版する作業を2012年度中に終えたこと、221世紀に入ってからのアメリカ作家たちの特徴を論じる機会を複数得た。それにより、第二の単著執筆を可能とするような理論的枠組みを構築する、という、研究期間内の目標に向けて、おおむね順調に進行しているものと考える。平成25年度には、単著の出版のほか、平成24年度に行った学会報告の論文化も複数予定されており、出版業績としてもまとまった量の成果につながっている。ただし、研究のもう一つの柱に挙げた、現代作家たちへのインタビューと紹介活動に関しては、発表媒体との関係もあり、当該年度に実施することはできなかった。平成25年度の活動に向けての反省材料とすべきであろう。H26年度は、NHKラジオ『英語で読む村上春樹』のテキスト版にて、アメリカ文学を取り巻く状況の紹介する連載がすでに開始されており、それを通じて、現代アメリカ文学の姿を探求すると同時に、一般の読者にも広く研究を認知してもらう機会になるものと考えている。また、「翻訳」をキーワードとした文学テクストの分析をさらに進めることで、比較文学における成果と、小説テクスト分析の手法を融合する形での文学研究のあり方を提示する必要がある。そのために、アメリカ文学にとどまらない研究者たちとの対話が重要になってくるものと思われる。今後の研究推進は、1世界文学としての現代アメリカ文学を検討するための学会での報告と意見交換、2現代アメリカ作家への取材活動、の二つを中心的な方策として行われる。1はH25年度中に国際学会にて報告することで、研究を学会にアピールすると同時に、将来的な出版の可能性を探りたい。2については、複数の作家への取材が出版されることはすでに決定している。
エイズ患者から同定した新しいヒトレトロウイルスの感染病理学的解析

エイズ患者の剖検で採取した脾臓の凍結組織を次世代シークエンサーにより、サルの内因性レトロウイルスと相当性のある遺伝子を同定した。全長約8 kbのウイルスゲノムの全長の塩基配列を決定し、系統樹解析では、ベータレトロウイルス属に分類された。本ウイルス遺伝子を検出する定量的PCR法を作成し、さまざまなヒト検体を検査したが、陽性例はなく、本レトロウイルス遺伝子が検出されることはヒト検体においては極めてまれであることが分かった。前年度までにエイズ患者の剖検例から検出されたレトロウイルスについて、全長が8kp程度であること、ウイルスゲノムには、マカク属のサルのゲノムの一部とヒヒの内因性レトロウイルスの断片と相同性のある遺伝子配列が含まれていること、gag, pol, protease, envの遺伝子が含まれていること、系統樹解析では、サルレトロウイルスに近縁のベータレトロウイルス属に分類されることが示された。本年度はgag, pol, protease, envの各領域を検出するためのreal-time PCRを作成し、エイズ関連悪性リンパ腫、バーキットリンパ腫、メトトレキサート関連リンパ増殖性疾患など、免疫不全に伴い発症した悪性リンパ腫の検体を中心に、ヒトリンパ増殖性疾患の病理検体を検索した。同時にヒト他疾患の臓器などを陰性対象とした。約50検体のパラフィン切片からDNAを抽出し、real-time PCRを施行したが、いずれの遺伝子でも全例が陰性であった。このことから、本レトロウイルス遺伝子が検出されることはヒト検体においては極めてまれであることが分かった。また、GST融合タンパクシステムを用い、血清抗体を検出するための抗原タンパクを作成し、健常者血清を用いて、ELISAの系を確立した。今後、血清銀行の血清を用い、健常者における本ウイルスの血清疫学を明らかにするとともに、その病原性、感染性を明らかにする。エイズ患者の剖検で採取した脾臓の凍結組織を次世代シークエンサーにより解析したところ、サルのゲノムの一部に相当性のある遺伝子を同定した。得られた配列情報をもとにプライマーを作成し、Long PCRで約6キロのDNA断片を増幅することができた。増幅されたDNA断片は、その中に、既知のレトロウイルスのgag, pol, protease, envと相同性のある配列を保持していた。本年度は、本症例から、そのウイルスゲノムの全長の解明を試み、両端のlong terminal repeatを含む、全長約8 kbのゲノムの塩基配列を決定した。本ウイルスゲノムには、マカク属のサルのゲノムの一部とヒヒの内因性レトロウイルスの断片と相同性のある遺伝子配列が含まれており、系統樹解析では、サルレトロウイルスに近縁のベータレトロウイルス属に分類された。なお、近年話題になっているXenotropic murine leukemiavirus-related virus(XMRV)とは全く異なる配列を持っており、マウスなど他の種からのコンタミネーションの可能性はない。サルゲノムのレトロトランスポゾン(RNAを介した可動遺伝因子)から生じた内因性レトロウイルスが、異種であるヒトに感染した例はこれまでに報告はなく、本症例は貴重な症例と考えられた。さらに、本ウイルス遺伝子を検出する定量的PCR法を作成するとともに、血清抗体を検出するための抗原タンパクを、GST融合タンパクシステムを用いて作成した。今後、これらの系を用い、ヒト検体を検索し、本ウイルスの感染性、病原性を明らかにする。エイズ患者の剖検で採取した脾臓から核酸(DNAおよびRNA)を抽出し、次世代シークエンサーにより既知、および、未知のウイルスの存在を解析した。その結果、一人の患者から、サルの内因性レトロウイルスの一部に相当性のある遺伝子が同定された。この断片から全ウイルスゲノムをlong PCRで増幅し、その産物をシークエンスすることで塩基配列の決定を行った。全長は約8kbであり、増幅された遺伝子断片は、その中にgag, pol, protease, envと相同性のある配列を保持しており、既知のサルの内因性レトロウイルスと相同性が認められた。昨年度はヒトリンパ腫検体において、本レトロウイルスの存在をPCRで検索したが、全例が陰性であった。本年度はこのレトロウイルスが日本人健常者でどの程度蔓延しているか、その血清疫学を調べた。まず、GST融合タンパクシステムを用い、本ウイルスのgag, pol, protease, envタンパクを組換タンパクとして合成した。これを抗原にELISAの系を確立し、小児血清を用いて、陰性者の抗体価の平均と標準偏差を算出し、カットオフ値を設定した。次に、血清銀行に保存されている日本人血清約1,000人分における抗体価の調査を行なった。その結果、抗体陽性者はごく少数であり、日本人における本ウイルスの感染は極めてまれであることが示唆された。疾患との関連や感染性などは今後の研究課題である。感染病理学ウイルス核酸検出のためのreal-time PCR、および、血清抗体検出用のELISAなど、ウイルスを検出するためのツールが開発され、実際に検体におけるウイルス感染の調査に着手できた。

ヒト検体については国立感染症研究所ヒトを対象とする医学研究倫理審査委員会の承認が得られ、検体の収集を行っている。各抗原に対するウサギポリクローナル抗体を評価中である。以上から、当初の研究計画に照らし、ほぼ、順調に研究計画が遂行されていると考える。今年度はウイルスの全ゲノム構造を決定することが第一の目標であり、これはほぼ達成されたものと考えられる。ウイルスを検出するためのツールの開発が第二の目標であったが、徐々に揃ってきており、核酸検出のためのreal-time PCR、血清抗体検出用のELISAが完成しつつある。各抗原に対するウサギポリクローナル抗体の作成に着手し、現在、抗体を評価中である。倫理審査委員会の承認が得られたので、大規模なヒト臨床検体(血清、病理検体)の検索を行っている。免疫不全リンパ腫に限らず、リンパ腫のサンプルを広く、検索するとともに、血清疫学では健常者における既感染率を調査する。その結果から、感染経路の検索などにつながる結果が得られることが期待される。さらに、in vitroの感染実験系を作成し、ウイルスの自然環など、ウイルスの性状について解析する予定である。とりあえずは、本研究期間にウイルスの発見と、病理検体、血清疫学のデータをまとめ、公表を目指す。ヒト臨床検体を検索するためのツールができあがりつつあり、倫理委員会の審査などを経て、実際のヒト検体(血液、病理検体)の検索を開始する予定である。これまでのデータから、リンパ腫との関連が示唆されることから、免疫不全リンパ腫を中心とした、リンパ腫のサンプルを広く、検索する。さらに、感染経路の検索や、in vitroの感染実験系を作成し、ウイルスの自然環など、ウイルスの性状について解析する予定である。平成25年度に行ったウイルス検出系の確立が予想より効率よく進み、また、平成25年度に解析可能であったヒト臨床検体の数が当初の予想より少なかったことから、残余が生じた。予定した数に足らない検体は次年度に行う予定であり、平成26年度は大規模なヒト臨床検体(血清、病理検体)の検索に多くの費用がかかることが予想される。さらに、ウイルス作成などの実験もこれからであり、平成26年度に多くの費用がかかることが予想されたため、これらの試薬購入費用を次年度に確保した。血清、病理検体からのウイルス検出(real-time PCR用試薬、DNA, RNA抽出試薬等)、血清中の抗体検出に必要な試薬(ELISAプレート、抗体、発色剤)や、病理組織学的検索などに必要な試薬、ウイルス作製に必要な遺伝子導入試薬および細胞培養用品やプラスチック製品などの理化学器材、消耗品を購入する。さらに、学会における成果発表および情報収集のため、旅費を申請する。その他、研究成果発表費用として、論文投稿料、掲載料のほか、ウイルス遺伝子の解析ソフトのバージョンアップ代などが含まれる。
狂犬病ウイルスP蛋白質アイソフォームの細胞種依存的なIFN産生抑制活性の解明

狂犬病ウイルスによるIFN産生抑制には、同ウイルスのP蛋白質アイソフォーム(P1およびtPs)が関与することが知られている。このアイソフォームをすべて発現するウイルス(Wt)、ならびにP1のみ発現するウイルス(Mt)を用いた前年度の研究により、tPsが特に筋肉細胞においてIFN産生を抑制するのに必要であり、神経細胞ではその必要性が低いことが示唆された。この現象を更に検討するため、今年度ではWtおよびMtのP遺伝子をコードする各プラスミド(pP-WtおよびpP-Mt)を用いて、発現系での解析を行った。pP-Wtからはすべてのアイソフォームが発現する一方で、pP-MtからはP1のみが発現する。これらの各プラスミドを導入した筋肉細胞に、弱毒タイプのNewcastle Disease Virusを感染させたところ、どちらの細胞においても同程度、IFN産生が抑制されていることを示唆する結果が得られた。前年度の結果では、Mtを感染させた筋肉細胞では、Wtを感染させた同細胞よりもIFN産生が強く誘起される知見を得ていたことから、上述の発現系による解析ではウイルス感染時の差を確認できないことが示された。実際に、感染細胞ではP蛋白質のみならず、複数の他のウイルス蛋白質が発現している。中でもP蛋白質は、狂犬病ウイルスのNおよびL蛋白質と結合し、ウイルス感染に必須の役割を担っている。以上のことから、各細胞種におけるP蛋白質アイソフォームの機能を発現系により検討するためには、P蛋白質アイソフォームのみではなく、他のウイルス蛋白質を共発現させた上で検討する必要があると推測された。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。本年度では細胞種ごとに異なる狂犬病ウイルスによるIFN産生抑制能の検討を行った。特にこの細胞種ごとに異なるIFN産生抑制には、狂犬病ウイルスのP蛋白質アイソフォームが関与することが考えられていた。そこで、このアイソフォームを発現するウイルス(Wt)、ならびに発現しないウイルス(Mt)を、培養神経細胞および培養筋肉細胞に感染させ、各細胞種におけるIFN遺伝子の発現量を比較した。その結果、神経細胞においては、アイソフォームの発現の有無に関わらず、同程度のIFN遺伝子の発現量が確認された。一方、筋肉細胞では、Mtを感染させた細胞において、Wt感染細胞よりも有意に高いIFN遺伝子の発現が認められた。従って、P蛋白質アイソフォームが特に筋肉細胞においてIFN産生を抑制するのに必要であることが示唆された。この現象を更に検討するため、両株をマウスの脳内および筋肉内に接種した後に、脳および筋肉内におけるIFN遺伝子の発現量を比較した。その結果、脳よりも筋肉内において、WtよりもMtがより多くのIFN遺伝子の発現を誘導していた。以上の結果は、各細胞種において異なる自然免疫の誘導機構が存在する可能性、ならびにそれにウイルスが対応するためにP蛋白質アイソフォームを発現している可能性を示している。これらのアイソフォームのIFN産生抑制機構の分子メカニズムを解明することにより、いまだ不明な点の多い狂犬病ウイルスの自然免疫回避機構の一端を明らかにすることが可能になる。アイソフォームのIFN産生抑制活性の必要性が細胞種ごとに異なる現象には、各細胞種におけるP蛋白質アイソフォームの発現パターンが影響している可能性が考えられる。一方、感染筋肉細胞におけるP蛋白質アイソフォームの検出が想像以上に難しく、試行錯誤している。筋肉細胞に対する狂犬病ウイルスの感染効率が、神経細胞と比較して非常に低いことが一つの原因と考えられる。感染細胞にこだわらず、発現系を用いたアイソフォームの発現パターンの検証を同時に現在進めている。今後は上述した各細胞種におけるP蛋白質アイソフォームの発現パターンの解析を進める。その後、発現パターンに影響を与えると考えられる宿主因子に関する検討を行っていく。
スポーツ傷害における心的外傷後成長に関する研究

本研究の目的は、スポーツ傷害における心的外傷後成長のメカニズムを明らかにすることで、受傷後のアスリートの心理的サポートをする上で有益な基礎的知見を見出すこととし、1)尺度作成、2)縦断的研究、3)事例研究の流れに沿って実施する。本年度は、1)尺度作成と2)縦断的研究を行った。1)尺度作成では、まず、尺度の項目データの収集及び作成を行い、その結果について学内研究会等で発表し、その際にいただいた意見を踏まえ、本調査を実施し、尺度の因子構造、信頼性及び妥当性を検討した。また本尺度を用いて基礎的な横断的調査を実施した。以上の内容をまとめ、体育学研究に論文投稿を行い、2018年2月にアクセプトされた(タイトル:スポーツ傷害に特化した心的外傷後成長の特徴)。2)縦断的研究では、性格特性、受傷後の認知活動、そして心的外傷後成長の因果関係を検討するために大学生アスリート約300名に対し、約1年に渡り3度の質問紙調査を実施した。Time 1では、性格特性の調査、Time 2では、受傷後の認知活動、Time 3では心的外傷後成長を測定した。研究の内容を英語でまとめ、2018年4月にInternational Journal of Sport and Health Scienceに投稿する予定である。翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。
アンジェルマン症候群モデルマウスにおける小脳機能障害の電気生理学的検討

ASにおける小脳機能障害メカニズムの解明を目的として、母性Ube3a欠失マウス(以下ASマウス)小脳急性スライスを用いた電気生理学的検討を行った。予備実験において、抑制性シナプスの抑制力を規定するクロライドトランスポーターKCC2の発現が増大していたことから、小脳顆粒細胞プルキンエ細胞におけるGABAシグナルの抑制力を検討したが、優位な差を認めなかった。しかしながら、シナプス外GABA_A受容体を介する持続抑制(tonic inhibition)を検討したところ、ASモデルマウスでtonic inhibitionが約1/3に低下していることが明らかになった。薬理学的検討,および免疫生化学的検討から、tonic inhibition低下の原因として、シナプス間隙よりGABAの再取り込みを担うGABAtransporter 1 (GAT1)の機能亢進がtonic inhibition減少の原因であること、さらにGAT1とUBE3AのHEK細胞における強制発現系および小脳ライセートを用いたdegradation asseyによる検討から、GAT1がUBE3Aのsbstrate存在することを明らかにした。シナプス外GABA_A受容体選択的アゴニストTHIPの投与により、ASの小脳機能不全がin vitro, in vivoともに改善されたことから、GAT1 degradationの機能不全によりGABA抑制,特にtonic inhibitionの低下がAS小脳機能障害のメカニズムとして重要であることが明らかになった。本研究の成果として、これまでまったくメカニズムが不明であったASの小脳機能障害について解明をおこない、全く新しい治療戦略の可能性を提示した。小脳顆粒細胞のtonic inhibitionが、病態生理として意味をもつことを疾患モデルマウスとして初めて示した。更にGABA抑制機能の調節因子として注目されるGAT1の分解,ターンオーバーについて新たな知見を加えるとともに、GABA抑制系にかかわる膜蛋白がコビキチン-プロテアソーム系により機能制御をうけることを初めて示し、新たなシナプス可塑の形を提示することで、臨床医学のみならず、基礎神経科学の分野にも一定の貢献を与えるものとなった。
脊髄内在グリア前駆細胞を利用した損傷脊髄内残存軸索再髄鞘化の試み

始めにオリゴデンドロサイトと後根神経節の共存培養を試みたが、それぞれ単独の培養は可能なものの両者の混合培養によって髄鞘を形成させる条件は完成に至らなかった。代わって、オリゴデンドロサイトの株化細胞であるCG4細胞に対し、磁石による静磁場を加えることで神経軸索に活動電流が流れた状況を模倣した。この実験系においては磁場刺激によってオリゴデンドロサイトの細胞内シグナルERKの活性低下と分化マーカーの発現上昇が観察された。この結果から、オリゴデンドロサイトは電磁場刺激によってその分化段階が変化する感受性を有していることが示唆された。また、個体レベルでの髄鞘形成誘導刺激を探索するため、健常ラットに対し経頭蓋磁気刺激を行い、脊髄に活動電位を誘発し髄鞘形成細胞にたいする影響を観察した。磁気刺激と同時に増殖細胞をラベルするBrdUを投与した実験では髄鞘細胞の前駆細胞の増殖に有意な変化は観察されなかった。今後、脊髄損傷など病的状態での刺激効果の検討が必要と考えられた。
根の側生器官発生に関わるATP結合カセット蛋白質の情報分子輸送とメリステム制御

ミヤコグサの側生器官である根粒において特異的に発現するMATE型輸送体のLjMATE1は、リンゴ酸輸送体であることを既に明らかにしていたが、RNAiによる発現抑制ラインについて表現型を調べた。結果として、安定形質転換体でLjMATE1の発現が低下していたものは1ラインのみであったが、その根粒では根組織からの鉄の転流に異常があり、感染領域における鉄含量の低下と共に、根粒の早期老化、窒素固定活性能力の減少、などが生じ、結果としてLjMATE1の低下した個体では、窒素欠乏条件下では生育の遅延が起こることを明らかにした。さらに、毛状根形質転換体を利用してLjMATE1のRNAiを導入し、同様のフェノタイプが生じることを突き止めた。LjMATE1に関しては、これらのデータを合わせ、Plant Cell Physiol.に論文として報告した。ABC蛋白質にGサブファミリーのLjABcG1があるが、タバコBY2をホストとして輸送アッセイを行ったが、ATPの存在下と非存在下で有意差のある輸送基質を同定することができなかった。そこで、この遺伝子のシロイヌナズナのホモログでは感染応答でフェノタイプが観察されることを利用して、ミヤコグサのLjABCG1がシロイヌナズナの変異体を部分的に相補できることを見いだした。この遺伝子に関しては、輸送基質未同定ではあるが、論文としてまとめることとした。根粒内の感染細胞に隣接した非感染細胞でのみ発現するというユニークな特性を示すBサブファミリーのLjABCB1に関しては、オーキシン輸送活性が認められていた。そこで、LORE挿入変異体パネルの中に挿入クローンの種子を取り寄せ、窒素十分条件をコントロールとして、窒素欠乏条件下で生育をさせ、野生型との比較を行ったが、残念ながらfix(-)のフェノタイプを観察することはできなかった。我々はミヤコグサを材料にして、側生器官である根粒と側根の形成を比較しつつ、その発達や機能分化に関わる輸送体の解析を行っている。特にこれまで、情報分子としてオーキシンを中心にそれを基質として認識する、ATP結合カセット(ABC)タイプの輸送体蛋白質の研究を主に行ってきたが、ミヤコグサ根粒の細胞タイプ特異的なトランスクリプトーム解析の結果、ABC蛋白質以外にも、MATE型輸送体が根粒形成に深く関わることを見出し、本年度はこの分子LjMATE1の解析に注力した。アフリカツメガエルの卵母細胞を用い、まずLjMATE1がクエン酸輸送性の分子であることを明らかにした。その生理的な役割を調べるためにRNAiによる発現抑制株を作製した。その解析からLjMATE1発現抑制株では、根粒感染領域の鉄の蓄積が低いこと、並びに根の維管束では逆に鉄の沈着が認められることが明らかとなった。またRNAiラインは、窒素欠乏条件下でのみ地上部の生長の遅延を示した。RNAiラインの根粒を調べてみると、植物体当たりの根粒数は大きく変化しないものの、33%程度の頻度で野生型に認められないレグヘモグロビンを持たない淡緑色の根粒が発生すること、RNAiラインでは正常根粒が減少していることが分かった。さらに詳細な解析から、LjMATE1は根粒組織でクエン酸を分泌することにより、根から根粒細胞への鉄の転流に関わっていることが示唆された。AIP結合カセット(ABC)タイブの輸送体蛋白貿の研究を主に行ってい、根粒で発現するLjABCB1について論文を発表することができた。また、ミヤコグサ根粒の細胞タイプ特異的なトランスクリプトーム解析も行い、その結果についても論文を発表することができた。さらに、トランスクリプトーム解析から新たに見出されたLjAMTE1についても研究に着手し、成果を挙げつつある。

根粒で発現するLjABCG1について、輸送基質の同定と生理的役割の解明を最優先で進める。また、LjMATE1については論文化に必要なデータをそろえ、早い段階での論文化を目指す。
リーラーマウスとSRKラット異所性錐体路ニューロンの軸索側枝の消退と安定化の機構

SRKラット(shaking rat Kawasaki)は、常染色体劣性遺伝性の神経奇形ラットで、頭を挙上し、体幹をのけぞるようにそらせたり、捩じったり、た四肢を激しく振戦させる。この奇形ラットの大脳皮質の層構築は大きく乱れ、また小脳の小葉形成がほとんどみられず、プルキンエ細胞が異所性に存在する。さらに海馬の錐体細胞の配列は乱れ、歯状回の顆粒細胞は団塊を形成し、層構造を示さない。これらの形態学的特徴は極めてリーラーマウスに類似し、いわばリーラーラットともいうべき動物である。SRKラットの形態学的特徴が、リーラーマウスに類似しているかどうかを検討するために、生後21日齢のSRKラットと対照ラットの腰髄にHRP(ワサビ過酸化酵素)を注入し、錐体路ニューロンを逆行性に標識し、リーラーマウスの錐体路細胞の分布と形態に類似するかどうかを検討した。対照ラットの錐体路ニューロンは、主に、大脳皮質の運動感覚野の下肢領域に存在した。SRKラットの錐体路ニューロンも、同じく下肢領域に分布した。一方、標識ニューロンの皮質内分布は対照ラットとSRKラットで大きく異なっていた。すなわち、対照ラットの錐体路ニューロンは、皮質の第5層に限局するが、SRKラットの錐体路ニューロンは皮質の全層に分布する。また標識された錐体路ニューロンは、対照動物では頂上樹状突起を軟膜側に伸ばす大型錐体型であるが、SRKラットのそれは、頂上樹状突起を表層に伸ばす正常錐体型に加えて、頂上樹状突起を下方に向ける逆転型、側方に向け横転型、頂上樹上突起様の突起を複数もつ双極型等の異常錐体細胞が見られる。以上の結果は、SRKラットの大脳皮質の切線方向の細胞構築(換言すれば大脳皮質の領域特性)は正常であるが、垂直方向の細胞構築(換言すれば大脳皮質の層構築)は異常であることを示している。
低酸素負荷により誘導される脳神経細胞死の神経薬理学的解析

神経細胞死の機構に、グルタミン酸が深く関与することが報告されているが、詳細は不明である。in vivo低酸素負荷モデルは、虚血とは異なる海馬CA3および歯状回に神経細胞障害を誘導する特徴を持ち、低酸素による影響を比較的純粋に検討できる。そこで、このモデルを用い、NMDA,non-NMDA型グルタミン酸受容体や一酸化窒素合成酵素(NOS)阻害薬(順にMK-801,NBQX,NNA)の作用について神経薬理学的に解析し、脳虚血による神経細胞死において低酸素がどのように関与するかを解析した。低酸素は、Fischer系雄性ラットを5%O_2,95%N_2,22°Cに保ったチャンバーに30分間放置することにより負荷した。MK-801(3mg/kg,i.p.)は負荷の30分前に、NBQX(30mg/kg×3,i.p.)は負荷の15,5分前と10分後に、NNA(0.1,1.0または10mg/kg×4,i.p.)は負荷の5分,3,6,24時間後に投与した。経時的に脳切片を作製し、異常形態を示す神経細胞をヘマトキシリン・エオジン染色により判定し、その数を神経細胞障害の指標として定量的解析を行った。その結果、低酸素により誘導される神経細胞障害は、1)MK-801の投与により低酸素負荷1日および21日後に海馬歯状回において、2)NBQXの投与により低酸素負荷3日および21日後に海馬CA3および歯状回において、3)NNAの投与によりCA3および歯状回において、いずれも有意に抑制された。これらの結果は、低酸素負荷により引き起こされる神経細胞障害の機構は、NMDAおよびnon-NMDA型受容体やNOSが複合的に関与することを示唆した。さらにNMDAとnon-NMDA型受容体阻害薬の効果が、海馬領域内で異なっていたことは、神経細胞障害の発生の機序が異なる可能性を示唆した。
ポジティブ感情とコーピング機能を操作因子とした適応への縦断的介入研究

本研究の目的は、「正の意味を見いだす(FPM)」コーピング、正感情、そして健康、これら3者の関係を調べることであった。このため、最終的に、1つの横断研究、2つの予測的研究、3つの介入研究が行われた。参加者は、大学生か大学院生、あるいは両者であった。測定尺度は、主として4つの質問紙、一般コーピング質問紙(GCQ)、正負感情スケジュール(PANAS)、一般健康質問紙(GHQ)、抑うつ尺度(CED-D)であった。予測的研究では、質問紙は5週間離れた2時点で測定された。介入研究では、正感情あるいはFPMコーピングを高める操作が5ないしは9週間実施され、介入群と統制群の結果が比較された。FPMコーピングを高める操作は、過去3日間のストレス事象に正の意味を見いだすことで、正感情を高める操作は、毎日正の出来事を書き留め、週1回それらについて15分間筆記することであった。各研究で方法が異なっていたため結果にはいくつかの不一致があったが、もっとも因果推定力の高い介入研究を中心に以下の知見が確認された。(1)FPMコーピングの高まりは正感情の高まりをもたらす。(2)正感情の高まりはFPMコーピングを高めない。(3)正感情もFPMコーピングも、抑うつと社会的活動障害の観点から健康を改善する(その効果の発揮には、FPMコーピングにおいては時間がかかる)。こうしてこれらの知見は、特に正感情が健康増進に有益であること、そしてFPMコーピングは正感情を高めるために利用できることを示唆している。ここから、今後の一次から三次予防のために、自己コントロール型の介入方法が開発された。そして最後に、本研究における問題点から、今後行うべき研究課題が示唆された。ポジティブ感情は、特定のコーピング機能、なかでもポジティブな意味をストレス事象に見いだすコーピングを通して健康に寄与することが示唆されている。本研究においては、この領域におけるこれまでの方法ならびに分析上の問題を克服した上で、ポジティブ感情の機能をコーピングと健康との関連から明らかにすることをめざした。まず、最初の研究では、この問題を横断的研究手法を用いて調べるため、男女大学生418名を対象として、ポジティブ感情と問題ならびに情動焦点型コーピンングを質問紙によって測定した。その結果、大きな性差が認められ、男性では、ポジティブ感情と問題焦点型コーピングに正の関連が認められ、女性では、ポジティブ感情と感情表出の間に正の関連がみられた。そこで次の研究では、この問題を縦断的研究で実施し、男女大学生470名を対象に、ポジティブとネガティブ感情、問題および情動焦点型コーピングを、5週間を経た2時点間(T1,T2)で質問紙によって測定した。その結果、男性においては、T1でポジティブ感情が高いほど、T2での認知的再解釈(問題焦点型コーピングの1つ)が高まり、女性においては、T1の認知的再解釈がT2のポジティブ感情を高めた。この結果は、ポジティブ感情が認知的再解釈(ポジティブな意味の発見)と因果的に結びついていることを示唆している。さらに続く研究では、同様の方法で、男女大学生525名を対象に、縦断的研究を行い、ポジティブ感情と健康ならびに生活習慣の関連を調べた。その結果、男性では、T1の低いネガティブ感情がT2の健康状態と正に関連し、女性では、T1の高いポジティブ感情と低いネガティブ感情がT2の健康状態と正に関連していることがわかった。こうして、ポジティブ感情と認知的再解釈、ならびに健康との関連についての因果関係が示唆され、次年度に展開される介入的研究での成果が期待される。昨年度(17年度)の研究においては、縦断(予測)的研究手法を用いて、コーピング、ポジティブ感情、そして健康の因果関係を検討した。

しかし、予測的研究の因果関係の予測力は高いものの、十分とは言えない。そこで、今年度の研究においては、コーピングとポジティブ感情の関係を中心に、介入的研究手法を用いて両者の因果関係をさらに精度高く推測した。まず今年度の最初の研究では、ストレス事象にポジティブな意味を発見するコーピング(以下、FPMコーピング)を積極的に育成し、ポジティブ感情ならびに健康への影響を検討した。男女大学院生57名を対象に、介入群(29名)と統制群(28名)を構成し、いずれもe-mailを通信手段とした介入を実施した。介入群は、ストレス事象とそのFPMコーピング、統制群はストレス事象のみの報告を毎週2回行い、この報告を連続5週間実施した。また、各変数の測定は質問紙を用いて、介入前後と5週間後のフォローアップに実施した。その結果、介入群は統制群と比べて、有意にFPMコーピングが増え、そこからポジティブ感情が高まったが、健康状態は両群ともに差異はなかった。さらに続く研究では、ポジティブ感情を高める介入がFPMコーピングを増進させるかどうかという逆の因果関係を検討した。男女大学生ならびに大学院生60名を対象に、介入群と統制群(各30名)を構成した。介入群は、毎日のポジティブ事象の採取、週一回のポジティブ経験についての記述、そして、週一回の贈り物授受を通じてポジティブ感情を増進する介入を連続5週間受けた。他方統制群は、毎日の中性事象の採取、週一回の中性経験についての記述を行った。各変数の測定は最初の研究と同じであった。その結果、介入群は統制群にくらべて、ポジティブ感情が高まり、そこからFPMコーピングも増進した。また、健康状態の一部で介入群の方が良好な状態となった。昨年度の研究では、正の意味を積極的に見いだす(FPM)コーピングが正感情を高めたものの、健康を増進しなかった。そこで本年度は、方法論上の問題を改善した上で、FPMコーピングから正感情ならびに心身健康への影響を検討する介入研究を実施した。その改善点は、ストレス事象の報告時に負の感情表出を禁止しないこと、さらに、介入期間を前回の5週間から9週間に延長したことであった。60名の男女成人を対象に、全9週間に及ぶ介入研究を実施した。介入は、ストレス事象に正の意味を積極的に見いだすFPMコーピングの増進を目指した。介入群と統制群を設定し、介入群では、電子メールを介して週に2回のストレス事象の報告とそれに対するFPMコーピングを行った。他方統制群では、ストレス事象の報告だけに限定した。さらに、両群とも2週に一度実験室を訪問し、課題の遂行状況を確認し、その遂行上の問題の指摘や、特に介入群では、介入操作の徹底をはかった。測定方法は、ポジティブ感情とネガティブ感情の測定に日本版PANAS、コーピングの測定にGCQを使用し、健康では、心身の健康に日本版GHQ、さらに抑うつに日本版CES-Dを使用した。これらの尺度を、介入前、介入開始後5週間、介入終了直後(介入開始後9週間)に、両群に同時実施した。その結果、介入5週の時点で、正感情は高まり、健康(社会的活動障害と抑うつ)も改善された。この結果は、介入9週後にも確認された。
野外活動用被服類のフィールドにおける被服内気候と快適性

野外活動用被服類の温熱的快適性について検討するため、3種実験を行った。実験(1)では、野外活動用被服類の各種環境条件下における観察から、フィールドにおける評価方法を検討した。実験(2)では、野外活動における衣服の濡れについて、人工降雨および自然下降雨について比較し定量化した。その上で、徐々に衣服が濡れる場合の生理・心理的影響を捉えた。実験(3)では、寒冷下での野外活動を想定し、被服類内部に発生する結露現象をモデル実験で捉えた。さらに零下15°Cにおける着用試験を実施し、生理・心理的影響について検討した。野外活動において雨衣は必要不可欠なアイテムである。雨衣の快適性を評価する際、実際の野外での着用評価が求められ、平成20年度これに着手する。実施に先立ち把握すべき事項がある。平成19年度では、1)過酷な寒冷下では衣服内気候および温冷感はどのように推移するのか、2)帽子、フード、ザック等はどのように影響するのか把握した。被験者は健康な成人女性6名であった。人工気候室は気温25,20,10 (以上RH50%)、および0,-10°C(以上湿度は成り行き)の5条件に設定した。衣服条件は環境条件にあわせ、クロー値が25,20°Cで0. 89clo、10°Cで1. 14clo、0,-10(Cで1. 37cloとした。実験は椅座位安静10分(R)、フード無作業10分(W1)、フード着用作業10分(W2)、ザック装着作業10分(W3)の順に従事した。測定項目は皮膚温7点、衣服内気候12点(1点は胸部第2層)、酸素摂取量、および主観申告(全身温冷感、局所温冷感、湿り感、不快感)とした。平均皮膚温は、条件25, 20°Cでは34°C付近でほぼ一定の推移を示し、条件10, 0, -10°Cでは漸減した。全身温冷感は前者では大きく上昇し、後者ではわずかな上昇を示した。平均皮膚温が33±1°C水準にあるとき、温冷感は中立であるとされるが、条件25, 20°Cではこれに当てはまらず、温熱的快適性を評価できない。フード装着作業W2以降、胸部の衣服内温度は25°C条件において上昇し、頭部の衣服内気候は全条件で上昇を示した。頭部の被覆による影響が、気温25°Cでは胸部にも及んだと考えられる。ザックはW3にて装着した。これにより背部の衣服内温度が増大した。これは他の部位では観察できず、背部に特異的であると言える。野外ではできるだけ少ない衣服内気候の測定箇所が望まれるが、天候や身体活動状況に応じた着用が反映される観察であることと同時に、発汗等を配慮したセンサーの工夫、測定が必要となる。平成20年度は、(1)模擬的な漸進的濡れが体温調節反応に及ぼす影響、(2)発汗モデルを用いた結露現象の観察、(3)氷点下から常温環境下における透湿性防水素材着用時の被服内気候の観察、(4)冬季野外活動時における生理・心理的影響について観察し、これまでに得られた実験の知見と比較した。(1)の結果として、降雨量が少なく、かつ衣服が軽装より長袖長ズボンで直腸温が高く、軽装では気温30°C下であっても、漸進的な濡れに伴って低下した。平均皮膚温も同様に低下が観察された。衣服内気候は、濡れ面積の増大と衣服の湿潤率増加によって、放熱量が増すことから雨量に左右される。気温30°C下であっても、漸増的濡れは中立の温冷感、快適感が得られない。(2)は発汗モデルを用い、透湿性および非透湿性防水素材の氷点下における結露現象を観察した。種々の条件設定から、後者は着用や使用が長期化するほど結露が著しく、氷点下における被服や装備として、透湿性防水素材を用いることが推奨される。(3)では(2)のモデル実験結果を得て被験者実験を遂行した。発汗を伴う作業を行わせたが、今回の実験条件では生理・心理的効果が認められなかった。この理由は検討中である。(4)の野外実験で被験者は、環境条件に対応する衣服構成を自ら選択し、寒さ感の愁訴をわずかに抑えた。衣服内温度と全身温冷感申告値の関係について、実験室実験で得た回帰式と比較した結果、冬季野外実験においては個体差およびバラツキはあるものの、第1層ではほぼ一致し、第2層では衣服内温度は低めとなった。これは、腋窩温の測定による動作および屋外の風の影響があったためと推察する。なお、第1層における衣服内湿度と発汗感には高い相関が認められた。