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ディグナーガ著『ニヤーヤ・ムカ』(因明正理門論)の本文批評と解釈

本研究の目的は、『ニヤーヤ・ムカ』(因明正理門論)の本文批評とその内容の論理学的解釈である。前者に関しては、ディグナーガの晩年の主著『プラマーナ・サムッチャヤ』自注に対するジネーンドラブッディの副注のサンスクリット写本の転写テキストから、目下のところ漢訳でしか存在しない『ニヤーヤ・ムカ』のサンスクリット断片を多数回収し、原本復元へ一歩近づくことが出来た。それらを含めたクリティカル・エディションの完成には後一年かけたいと考えている。出版可能な現代語訳は既に完成している。目下の課題としてはその英訳を行いつつある。仏教論理学の論理学的解釈に関しては、ギリシャ以来の西洋論理学の伝統に対する造詣の深い京都産業大学の林隆教授とのディスカッションから多くのものを学んだ。「帰納法」「演繹法」「アブダクション」「帰謬法」などの西洋論理学の諸概念が仏教論理学の解釈に際して有効であるが、自ずから限界のあることが分かった。本特定研究の「本文批評と解釈班」(関根代表)の本年の共通課題として旧約聖書学、インド学、中国学それぞれの本文批評と解釈の方法論について比較検討した。その際、インド学の方法論について研究発表し、最終報告書には東北大学の後藤敏文氏、北海道大学の吉水清孝氏とともに「インドにおける本文批評と解釈の方法論」について共同執筆した。その結果、インドにおいて本文批評に関する独自の方法論が生まれなかった背景に、聖典の筆写より口頭伝承を第一義的とするという文化的伝統があることを指摘できた。なお、平成14年12月にバンコックで開催された国際仏教学会で「仏教論理学」のパネルを共催し、研究成果の一部を発表した。本研究の目的は、仏教認識論・論理学に関するディグナーガの最初の体系的な論書である『ニヤーヤ・ムカ』の文献学的研究を完成させ、その読みやすい現代語訳を提供すると同時に、その内容の論理学的検討を行うことにある。同書は『因明正理門論』という漢訳でのみ現存し、サンスクリットで書かれた原文は散逸したままであるが、報告者は本年度もオーストリア学士院へ出かけ、最新のディグナーガ関係の写本研究の実状を調査し、その成果を十分に生かして、『ニヤーヤ・ムカ』のテキスト再校訂・現代語訳を行いつつある。平成13年度国際研究集会派遣研究員として、6月21日-23日ポーランドで開催された「インド論理学に関する国際セミナー」に共催者として参加し、本研究の成果の一部を発表した。9月6日-8日に一橋記念講堂で開催された本特定研究の調整班が主催する国際シンポジウムに参加し、海外の古典学研究の現状を海外からの参加者が報告するパネル・ディスカッションの司会を務めた。12月15日京都キャンパスプラザで行われた「古典学の再構築」A02「本文批評と解釈」班の研究会においてこれまでの研究成果の一部を発表し、参加した多くの異分野の研究者から貴重な提言を得たことは、領域横断的な本特定研究の一部としての本研究にとって、本年度の特筆すべき成果である。特に、中国古典の研究者からは、仏教漢文の読み方から自由な、読みやすい「漢文書き下し」を提供するよう要請され、具体的な教示を得た。アリストテレスの『レトリケ』とインド論理学の「説得の論理」との間の類似性を示唆する具体的な証拠を把握したことも、本年の大きな成果である。
mTOR阻害による寿命延長効果を応用した新規椎間板再生法の確立

本研究ではmTORシグナルの一部分を担うPI3K/Akt経路に影響を及ぼすHGF/c-Metシグナルの椎間板への効果を検討した。培養椎間板細胞において、HGF/c-Metシグナルは椎間板変性に関与する髄核細胞数の減少に有効に作用する成長因子であり、外的ストレスによって生じる髄核細胞のアポトーシスから細胞を保護し,基質分解を抑制する作用があることを示した。椎間板変性の予防および治療に対してHGF/c-Metシグナルが有効である可能性があると考えた。本研究では椎間板構成細胞にmTOR阻害剤を投与し、椎間板構成細胞に対するmTOR阻害剤の細胞寿命延長効果を検討し、われわれが確立した自家多血小板血漿とドラッグデリバリーシステムによる椎間板再生法と併用することにより、本再生法の効果持続期間を伸長させ、新規椎間板再生法を開発することを最終目的とする。生後1418週の白色家兎から髄核細胞を分離後、単層培養を行い、椎間板髄核細胞の培養系を確立した。細胞が培養皿でsub-confluenceの状態であることを確認後、一定の細胞数で培養皿に継代し、本実験を開始した。培養細胞に対して、mTOR阻害剤であるラパマイシン、オートファジー誘導剤、成長因子を各濃度で添加し、細胞増殖能を定時的に測定した。また、細胞外ストレスを与えた条件のもと、薬剤を投与し細胞増殖能の影響を評価した。薬剤投与による細胞死抑制効果を評価するため、培養細胞に対してアポトーシス誘導後、薬剤を投与し、TUNEL染色陽性細胞数の検討、ウェスタンブロッティングによるカスパーゼ3活性の評価を行った。real-time RT-PCR法を用いて各群の培養液中のaggrecan、I型コラーゲン、II型コラーゲン、X型コラーゲン、COX-2、Caspase-3などの遺伝子発現量を分析し、薬剤投与による影響を検討した。生体椎間板内の薬剤徐放化目的のためにゼラチンハイドロゲルの作成を行った。当大学に設置されている7.04T MRIを用いて生体白色家兎の脊椎MRIを行い、今後の白色家兎椎間板撮像のために調整を行った。本研究では、椎間板構成細胞にmTOR阻害剤を投与し、椎間板構成細胞に対するmTOR阻害剤の細胞寿命延長効果を検討し、われわれが確立した自家多血小板血漿とドラッグデリバリーシステムによる椎間板再生法と併用することにより、本再生法の効果寿命持続期間を伸長させ、新規椎間板再生方法を開発することを最終目的とする。白色家兎から分離、培養した髄核細胞に対してmTOR阻害剤であるラパマイシンを投与した。しかし、細胞増殖能が低下したため、他のオートファジー誘導剤や成長因子を使用し、実験を行っている。オートファジー誘導剤や成長因子を変更しており、また細胞外ストレスを与える手段についても検討を行い、時間を要しているためmTOR阻害剤は細胞老化抑制作用がある化合物として大きな注目を集めている。本研究では、椎間板構成細胞とmTOR阻害剤を共培養し、老化マーカーとテロメア長を評価することにより椎間板構成細胞に対するmTOR阻害剤の細胞寿命延長効果を検討することを目的とした。それに加え、我々が確立した自家多血小板血漿とドラッグデリバリーシステムによる椎間板再生法と併用することにより、本再生法の効果持続期間を伸長させ、新規椎間板再生法を開発することを最終目的とする。日本白色家兎から単離・培養した髄核細胞に対してmTOR阻害剤を投与したが、ラパマイシンの投与により、細胞増殖能の低下を認めたため。成長因子を併用することで実験を継続した。実験系が安定しないため、引き続き個体数を増やし検討していく必要がある。培養細胞において薬剤投与による変性抑制効果を確認後、生体椎間板における薬剤の徐放化を行う。リハビリテーションmTOR阻害剤の長期投与により細胞増殖能が低下し、mTOR阻害剤の濃度、処理時間の決定に時間を要しているため。実験計画の遅延により、当初購入を予定していた薬剤をまだ購入していないため。購入予定であった、薬剤の購入に充てる。ウェスタンブロッティング、real time RT-PCRを用いて薬剤投与による培養椎間板細胞の影響をさらに検討していく。
トリパノソーマ感染宿主細胞のアポトーシスに関する分子細胞生物学的解析

1.培養細胞を宿主細胞としたTrypanosoma cruziのin vitro感染モデル系を確立し、寄生虫感染による宿主応答の解析を行ってきた。今年度はアポトーシスを観察するのに適した宿主細胞を検索するため、種々の培養細胞についてアポトーシスの誘導法などを検討した。その結果、マウス由来線維芽細胞ではコルセミドなどの薬剤やFas抗原刺激に対してアポトーシスが起こりにくいことがわかった。また、バ-キットリンパ腫由来リンパ球系細胞株はアポトーシスは誘導しやすいが、T.cruziが感染しにくく、本実験には適さなかった。HeLa細胞、PC12細胞(クロム親和性神経様細胞)は本実験に適しており、今年度はHeLa細胞を用いることにした。2.アポトーシスのシグナルを伝達する細胞膜タンパク質としてFas抗原の存在が報告されている。そこでHeLa細胞でFasを介するアポトーシスを誘導する実験系を開発した。すなわち、抗Fas抗体(CH-11)をFasアゴニストとしてHeLa細胞に添加したところ、100ng/mlの濃度で細胞死を引き起こすことがわかった。また、HeLa細胞にT.cruziを感染させCH-11による刺激を行ったところ、感染細胞ではアポトーシスの抑制が認められた。3.Fas抗原を介するアポトーシスを誘導する実験系としてさらに確実な系を開発するため、HeLa細胞にFas抗原遺伝子をトランスフェクトして発現させることを計画していたが、すでに、その遺伝子を発現させたHeLa細胞(HF-1)を入手できたため、これを用いることにした。4.2の条件を用い、T.cruzi感染HeLa細胞(HF-1)でアポトーシス抑制が見られるか調べたが、HF-1株はFas遺伝子の保持のためネオマイシン存在下で培養するので、T.cruziが感染しにくく明確な結果は得られなかった。以上、今年度の計画はおよそ80%達成されたと考えている。
血小板由来増殖因子受容体のユビキチン化を介する情報伝達調節とその制御に関する研究

我々は、活性化されたPDGF受容体にユビキチンが共有結合することを発見し、この受容体ユビキチン化という新しい現象が、PDGF受容体の細胞内情報伝達系において抑制的に働いていることを発見し報告してきた。本研究は、我々の発見した受容体ユビキチン化の機能的意義を、より明らかにする目的で行われたものである。当該年度における研究により、さらに以下の事実を明らかにし得た。まず始めに、PDGF受容体をはじめとする殆どの受容体チロシンキナーゼ(EGF受容体、FGF受容体、CSF-1受容体など)が、リガンド刺激依存性にポリユビキチン化することを発見した。この事実は、リガンド依存性ポリユビキチン化という現象が受容体チロシンキナーゼ全般的に認められる普遍的な現象であり、したがって生物学的に極めて重要な機能を担っている可能性を示唆している。さらに、活性化しポリユビキチン化した受容体は、細胞内で26Sブロテアソームによって速やかに分解されることを発見した。この発見により、受容体ユビキチン化が情報伝達を抑制する機構が明らかとなった。以上の発見から、このリガンド依存性ポリユビキチン化とそれに引き続くプロテアソームによる活性化した受容体の分解という現象は、全く新しいタイプの受容体チロシンキナーゼの細胞内情報伝達抑制機序の一つであることを証明できた。今後は、受容体のリガンド依存性ポリユビキチン化を触媒する酵素群を同定し、その分子メカニズムを明らかにしていく予定である。本研究は、我々の発見した受容体ユビキチン化の機能的意義を、より明らかにする目的で行なわれたものである。当該年度における研究により、さらに以下の事実こ明らかにし得た。さらに、活性化しポリユビキチン化した受容体は、細胞内で26Sプロテアソームによって速やかに分解されることを発見した。この発見により、受容体いユビキチン化が情報伝達を抑制する機構が明らかとなった。以上の発見から、このリガンド依存性ポリユビキチン化とそれに引き続くプロテアソームによる活性化した受容体の分解という現象は、全く新しいタイプの受容体チロシンキナーゼの細胞内情伝達抑制機序の一つであることを証明できた。我々は、活性化されたPDGF受容体にユビキチンが共有結合することを発見し、この受容体ユビキチン化という新しい現象が,PDGF受容体の細胞内情報伝達系において抑制的に働いていることを発見し報告してきた。当該年度における研究により、さらに以下の事実に明らかにし得た。まず始めに、PDGF受容体をはじめとする殆どの受容体チロシンキナーゼ(BGF受容体、FGP受容体,CSF-1受容体など)が、リガンド刺激依存性にポリユビキチン化することを発見した。この事実は、リガンド依存性ポリユビキチン化という現象が受容体

チロシンキナーゼ全般的に認められる普遍的な現象であり、したがって生物学的に極めて重要な機能を担っている可能性を示唆している。さらに、活性化しポリユビキチン化した受容体は、細胞内で25Sプロテアソームによって速やかに分解されることを発見した。この発見により、受容体ユビキチン化が情報伝達を抑制する機構が明らかとなった。以上の発見から、このリガンド依存性ポリユビキチン化とそれに引き続くプロテアソームによる活性化した受容体の分解という現象は、全く新しいタイプの受容体チロシンキナーゼの細胞内情報伝達抑制機序の一つであることを証明できた。今後は、受容体のリガンド依存性ポリユビキチン化を触媒する酵素群を固定し、その分子メカニズムを明らかにしていく予定である。
特許権侵害訴訟における原告勝訴率の要因分析：経済的負担軽減に向けた政策研究

本研究の目的は、わが国の特許権侵害訴訟の原告勝訴率が低い要因を実証的に解明することである。特許権侵害訴訟の当事者の訴訟コストが原告勝訴率にどのような影響を与えるかを検証する。まず、特許権侵害訴訟の原告勝訴率が低い現象は、知的財産権に関する訴訟全般において見受けられるのか、それとも、特許権侵害訴訟だけに見られる特異な現象なのかを実証的に明らかにする。そして、わが国の民事訴訟や米国の訴訟の理論モデルを基礎に、仮説を導出し実証分析にて証明する。
シロアリ腸内原生生物と細菌の遺伝子水平伝播に関する研究

自然界の微生物は、ほとんどが培養困難で通常複雑な群集をなしており、自然界の莫大であるが未利用の微生物資源を利活用することが将来大変重要になっている。最近では微生物群集を丸ごと解析するメタゲノム解析が盛んであるが、メタゲノム解析だけではどの微生物種がどの機能を有しているかなどの基本的な理解には至っていない。本課題では、セルロース資源の有効利用に働くシロアリの共生原生生物を題材とし、個々の種の機能の解明とそれら難培養微生物の遺伝資源を利活用できるようにすることを目的とし、培養を介さないで、原生生物の1細胞を単離して解析する方法を開発して適用することを実施した。共生原生生物の遺伝情報を調べるにあたって、1細胞をハイスループットに単離することが有効と考え、フローサイトメータ装置を用いて、チューブリン抗体を用いて蛍光染色後に原生生物特異的に1細胞ずつを分取することができるようになった。条件検討後、蛍光染色しつつ固定した細胞から全ゲノムを増幅できるように最適化を行った。これにより全ゲノムを増幅した後にPCR法で目的遺伝子を解析することできるようになった。しかし、原生生物細胞に共生する細菌のゲノムDNAも同時に増幅されてしまうことが問題となることが判明した。原生生物の遺伝子のみを解析するために、生細胞1細胞を分取してcDNAを合成して解析することを試みた。ヤマトシロアリ(Reticulitermes speratus)の記載されている18種の原生生物について、文献情報を精査して、細胞形態で見分ける特徴を明確にした。顕微鏡下で細胞形態を確認しながらマイクロマニピュレータ装置を用いて特定種の1細胞を単離してcDNAを合成した。全18種の原生生物について、分取することができ、条件検討の結果、合成したcDNAからアクチン遺伝子をPCR増幅することに成功した。(抄録なし)自然界の微生物は、ほとんどが培養困難で通常複雑な群集をなしており、自然界の莫大であるが未利用の微生物資源を利活用することが将来大変重要になっている。共生原生生物の遺伝情報を調べるにあたって、1細胞をハイスループットに単離することが有効と考え、フローサイトメータ装置を用いて、1細胞ずつ分取ずることとした。分取のために生細胞を染色する試薬等を試したが、腸内に多く共存する細菌の混入が問題になることが判明した。そこで、チューブリン抗体を用いた蛍光染色法を適用することとした。細胞固定と蛍光染色による影響を評価した結果、RT-PCR法は適用できないことが判明した。そこで、細胞の固定法を検討し、蛍光染色しつつ固定した細胞から全ゲノムを増幅できるように最適化を行った。アクチン遺伝子のPCR増幅を確認して、全ゲノムを増幅した後にPCR法で目的遺伝子を解析することできるようになった。これにより原生生物の遺伝子の解析のためのゲノムDNAが利用できるようになったが、一方で原生生物細胞には多種の細菌が共生しており、それらの細菌のゲノムDNAも同時に増幅されてしまうことが考えられ、細菌と原生生物に共通の遺伝子や、細菌から水平伝播したような原生生物の遺伝子の解析には問題も提起された。固定していない単一生細胞からcDNAを合成して、原生生物の遺伝子のみを解析することが重要と考えられた。

アクチン遺伝子の解析において、分子系統学的な解析技術の習得が遅れており、シングルセルで分取した原生生物種の分子系統学的な同定にいたっていない。特別研究員としての期限が近づいており、次のポジションを探す活動に時間を取られていることが、習得が遅れている主な理由である。アクチン遺伝子の分子系統解析でシングルセルで分取した原生生物種の分子系統による同定を実施する。生きた細胞を分取してcDNAを合成して遺伝子を解析する方法について検討する。(抄録なし)
5×5変位筋音アレイセンサによる筋収縮様相の機能的・形態的解明

骨格筋は運動神経からの電気信号によって収縮するが,筋線維は筋原線維の集合であり,紡錘筋や羽状筋など二/三次元的な収縮様相は不明な部分が多い.そこで既開発の二次元的に計測できる5×5変位MMGアレイセンサを用い,多極筋電図と組み合わせて筋の機能的収縮様相を考察し,また超音波エコーによる筋の形態的収縮様相を計測して,筋の二次元的収縮様相を機能的・形態的視点に立って考察した.また本法をスポーツ科学分野や臨床医学分野への適用の可能性を探った.本研究の目的は既開発の5×5の変位筋音アレイセンサを用いて,筋の機能的収縮様相および形態的収縮様相を一元的に解明することであり,さらに本アレイセンサをスポーツ科学分野に適用し,さらに臨床分野への適用の可能性を探ることである.すなわち,骨格筋は運動神経からの電気信号によって収縮するが,筋線維は筋原線維の集合であり,紡錘筋や羽状筋など二/三次元的な収縮様相は不明な部分が多い.申請者らは変位筋音図(MMG)を二次元的に計測できる5×5変位MMGアレイセンサを既に開発した.本研究では,多極筋電図と組み合わせて筋の機能的収縮様相を考察し,また超音波エコーによる筋の形態的収縮様相を計測して,筋の二次元的収縮様相を機能的・形態的視点に立って解明する.また本法を筋トレーニングや筋疲労などのスポーツ科学分野に適用して収縮様相を評価し,さらに廃用症候群などの神経・筋疾患への適用の可能性を探る.平成25年度は,変位MMGアレイセンサを用い,筋の機能的収縮様相および形態的収縮様相を一元的に解明することを目的とし,新規購入した64ch多極筋電計を用いて,上腕二頭筋や大腿直筋の筋電図を測定し,二次元筋電位マップを得た.また同部位において,既に開発した5×5変位MMGアレイセンサを用いて,5×5cmの範囲の25点の変位筋音信号の,随意収縮波形や誘発筋音単収縮波形を得た.そして変位筋音図の二次元マップを求め,筋音信号がどのように筋線維方向へ伝搬するか,またその伝搬速度等を求め,これらより,筋の機能的収縮様相を同定した.本研究の目的は既開発の5×5の変位筋音アレイセンサを用いて,筋の機能的収縮様相および形態的収縮様相を一元的に解明することであり,さらに本アレイセンサをスポーツ科学分野に適用し,さらに臨床分野への適用の可能性を探ることである。すなわち,骨格筋は運動神経からの電気信号によって収縮するが,筋線維は筋原線維の集合であり,紡錘筋や羽状筋など二/三次元的な収縮様相は不明な部分が多い。申請者らは変位筋音図(MMG)を二次元的に計測できる5×5変位MMGアレイセンサを既に開発した。本研究では,多極筋電図と組み合わせて筋の機能的収縮様相を考察し,また超音波エコーによる筋の形態的収縮様相を計測して,筋の二次元的収縮様相を機能的・形態的視点に立って解明する。また本法を筋トレーニングや筋疲労などのスポーツ科学分野に適用して収縮様相を評価し,さらに廃用症候群などの神経・筋疾患への適用の可能性を探る。平成26年度は,現有の超音波エコー装置を使って,上腕二頭筋等の収縮の様子をB/Mモードで撮影した。実際に筋のどの部分で,何mm程度線維方向や側方に収縮・拡大変形しているのかを,パソコンに取り込んだ時系列画像から計測することによって,筋の形態的収縮様相を明らかにすることができた。さらに,64ch多極筋電計を用いて上腕二頭筋や大腿直筋で測定された筋電図の二次元筋電位マップと比較して,筋の二次元的収縮様相を機能的・形態的観点から解明した。本研究の目的は既開発の5×5の変位筋音アレイセンサを用いて,筋の機能的収縮様相および形態的収縮様相を一元的に解明することであり,さらに本アレイセンサをスポーツ科学分野に適用し,さらに臨床分野への適用の可能性を探ることである。また本法を筋トレーニングや筋疲労などのスポーツ科学分野に適用して収縮様相を評価し,さらに廃用症候群などの神経・筋疾患への適用の可能性を探ることである。平成27年度は,本アレイセンサに加えて,1点のみではあるがMMGとEMGを同時に測定できるように改造してスポーツ科学分野や臨床分野への適用の可能性を探った。まず上腕二頭筋や大腿直筋における等尺性筋トレーニングをalloutまで行った場合の,筋疲労を評価した。また膝伸展OKC運動を行った際の内側広筋における5×5変位MMGアレイセンサ,64チャネル表面筋電計および超音波エコーで測定し,発揮筋力と羽状角の変化等について評価した。さらにリカンベントバイクでのペダリング,また片麻痺患者が足こぎ車椅子でペダリングを行った場合についても実験を行い,本法の臨床分野への適用可能性を探った。

骨格筋は運動神経からの電気信号によって収縮するが,筋線維は筋原線維の集合であり,紡錘筋や羽状筋など二/三次元的な収縮様相は不明な部分が多い.そこで既開発の二次元的に計測できる5×5変位MMGアレイセンサを用い,多極筋電図と組み合わせて筋の機能的収縮様相を考察し,また超音波エコーによる筋の形態的収縮様相を計測して,筋の二次元的収縮様相を機能的・形態的視点に立って考察した.また本法をスポーツ科学分野や臨床医学分野への適用の可能性を探った.本研究の目的は既開発の5×5の変位筋音アレイセンサを用いて,筋の機能的収縮様相および形態的収縮様相を一元的に解明することであり,さらに本アレイセンサをスポーツ科学分野に適用し,さらに臨床分野への適用の可能性を探ることである。平成26年度は現有の超音波エコー装置を使って,実際に筋のどの部分で,どの程度線維方向や側方に収縮・拡大変形しているのかを,時系列画像を見ながら計測することで筋の形態的収縮様相を客観化することができた。また平成25年度に購入した64ch多極筋電計を用いて測定された筋電図の二次元筋電位マップと比較することができたので,当初の目的をほぼ達成することが可能であった。生体医工学最終年度は,本センサをスポーツ科学分野に適用し,さらに臨床分野への適用の可能性を探る予定である。すなわち,まず筋トレーニングを長期間行った場合の,筋収縮特性の変化を明らかにする。本アレイセンサおよび多極筋電図や超音波エコーを用いることによって,トレーニング前半でどの部分の筋線維が参画し始め,後半では形態的にどの部分が変化して,収縮様相が変わってきたのかを具体的に解明する。筋疲労の評価においても同様に,運動単位に着目し,等尺性の一過性疲労による収縮様相の変化を機能的・形態的視点で解明する。臨床分野においては,筋の不活用による廃用症候群や各種神経筋疾患へ適用する場合の問題点を明らかにし,本法の臨床分野への可能性を探る。本研究の目的は既開発の5×5の変位筋音アレイセンサを用いて,筋の機能的収縮様相および形態的収縮様相を一元的に解明することであり,さらに本アレイセンサをスポーツ科学分野に適用し,さらに臨床分野への適用の可能性を探ることである.平成25年度は,「変位MMGアレイセンサを用い,筋の機能的収縮様相および形態的収縮様相を一元的に解明する」ことを目的としていたが,比較的早期に64ch多極筋電計を購入することもでき,当初の目的をほぼ達成することができた.
都市内大規模河川(ソウル市清渓川)の復元による暑熱現象改善効果の実証

2006年まで4年間の8月中旬に、復元河道近傍および河道より100m以内の5地点で、集中的な移動・定点観測による体感温熱指標SET^*の観測(温・湿度、風速、天空放射、地物表面温度)を行った。また、サーモカメラによる地物表面温度の観測、シンチロメーターによる上向き顕熱フラックスの観測、ソウル市政府が観測している大気汚染物質濃度の時系列解析などを行ってきた。CFDモデルによる数値シミュレーションからは、復元河道上を吹走する冷気が渦を巻きながら、河道に直交する街路へ南北同時に侵入する様子が計算された。2006年夏季に超音波風向・風速計などによる集中気象観測を行った結果では、河道上および河道南側80m付近で清渓川に沿った西風(海風)の強・弱に対応して、気温の下降・上昇が見られ、河川から周辺地域への冷却効果のプロセスが実証された。そこで2007年夏季の集中気象観測では、冷気の川面から周辺市街地へ輸送されるプロセスに関して、その発生源である河道内の気象学的なメカニズムを検証することを目的として、河川真中と南北川岸において、ポールを立て、鉛直(高さ別)に気温や湿度の測定を行った。清渓川の河川水による冷却効果については、川面に近い高度ほど気温が低く、水蒸気密度(絶対湿度)が大きい傾向が見られた。また、南側の鉛直分布に関しては、北側より相対的に気温が低い傾向が見られた。また地表面に近いほど気温が低くなっている傾向が見られた。一方、北側では日中地表面に近いほど気温が高くなっているのがしばしば観測されている。それらの要因としては南側沿道の地表面には植物が繁茂しているのに対し、北側の地表面はコンクリート面がむき出しになっていることが考えられる。以上の結果から南側河岸の方に冷気層が形成されている可能性が示唆された。過去3年間の8月中旬において、復元河道近傍および河道より100m以内の5地点における、集中的な移動・定点観測による体感温熱指標SET^*の観測(温・湿度、風速、天空放射、地物表面温度)を行った。施工中期(高架道路はすべて撤去され、河道が掘削されて土壌が露出している状態)の2004年は比較的高温、施工最終年度(河道の復元が完了し、わずかに水が流れる状態)の2005年は比較的低温の条件となった。暑熱が問題となる典型日と考えられる日のデータを比較した結果、2003年に対し2004年はバックグラウンドデータとしての気象庁(江南)における気温が、着目時間帯(11時14時)で57°C高温であったのに対し、河道周辺3地点では34°C高温、SET^*ではほぼ同じレベルの値になっていた。しかし2005年は一転して涼しい夏となったものの、湿度が高かったためSET^*は微増という結果になった。なお、超音波風速計による風の移動観測により、河道に直交する街路には南北両方へ吹き出す事例も確認されている。シンチロメーター(清渓川路をはさむ約75mのパスを東大門市場付近建物屋上に確保)による上向き顕熱フラックスの観測を行っている。観測日における1315時のデータを比較すると、2003年は正味放射収が400600W/m^2に対し顕熱フラックスが300500W/m^2、2005年は前者が200400W/m^2に対し後者が100150W/m^2となり、河道復元の効果が両者の比率の変化に現れている。

ソウル市政府が復元河道近傍(清渓4街)で2001年より常時観測している大気汚染物質濃度(PMやCOなど)には、復元工事による顕著な影響は確認できなかった。工事期間中新たに生じた慢性的な渋滞(ただし路線数や交通量は大幅に減少した)や、工事により表土が露出した期間が継続したことなども影響したためと思われる。黄海より約30km内陸に位置するソウル市内には、暖候季を中心に黄海より海風が進入しており、この場合西風成分が卓越する。また、観測対象地付近の復元河道の走向はほぼ東西である。成田らなどの先行研究によれば、都市内の緑地や水体からその周辺へ冷気が供給される場合、一定以上の面積を有するものであることが必要であると考えられるが、河道の幅がわずか50m前後の清渓川では、例えば南北風が卓越する場合、地表面付近の空気が緑地面や水面と接触する時間は短く、その冷却効果が河道から離れた場所にまで及ぶことを期待するのは困難と考えられる。よって、卓越風向が河道に沿ったものである時にこそ、河道からの周辺地域への冷気の供給が期待できるのではないか、との仮説をたてた。CFD2000による数値シミュレーションからは、復元河道上を吹走する冷気が渦を巻きながら、河道に直交する街路へ南北同時に進入する様子が計算されている。以上の仮説を実証すべく、2006年8月6日13日に超音波風向風速計による観測を行った。観測期間中は連日晴天に恵まれ、復元河道上では午後から夕刻にかけて連日海風と思しき西風が卓越した。8月13日夕刻の事例では、河道上のB地点(橋の上)で西風が強まるのと同期して、北側のM6地点(建物は平均3階程度)と南側のM4地点(同2階程度)ではそれぞれ南風、北風が強まり、とりわけM4地点ではそれと同期して気温が1°C程度低下している。このような現象は、M2地点(ソウルシネマ前)では比較的不明瞭であり、清渓川路より1本北の東西道路(鐘路;ジョンノ)からと思われる北風も時折観測された。同時期に実施されたシャボン玉による移動観測の結果と照らし合わせると、清渓川の影響は南北とも河道より80m程度までは比較的明瞭であり、約140m離れたソウルシネマのあたりが反対から吹き込む風系との干渉地帯となっているものと考察される。2006年まで4年間の8月中旬に、復元河道近傍および河道より100m以内の5地点で、集中的な移動・定点観測による体感温熱指標SET^*の観測(温・湿度、風速、天空放射、地物表面温度)を行った。また、サーモカメラによる地物表面温度の観測、シンチロメーターによる上向き顕熱フラックスの観測、ソウル市政府が観測している大気汚染物質濃度の時系列解析などを行ってきた。CFDモデルによる数値シミュレーションからは、復元河道上を吹走する冷気が渦を巻きながら、河道に直交する街路へ南北同時に進入する様子が計算された。2006年夏季に超音波風向・風速計などによる集中気象観測を行った結果では、河道上および河道南側80m付近で清渓川に沿った西風(海風)の強・弱に対応して、気温の下降・上昇が見られ、河川から周辺地域への冷却効果のプロセスが実証された。そこで2007年夏季の集中気象観測では、冷気の州面から周辺市街地へ輸送されるプロセスに関して、その発生源である河道内の気象的なメカニズムを検証することを目的として、河川真中と南北川岸において、ポールを立て、鉛直(高さ別)に気温や湿度の測定を行った。清渓川の河川水による冷却効果については、川面に近い高度ほど気温が低く、水蒸気密度(絶対湿度)が大きい傾向が見られた。また、南側の鉛直分布に関しては、北側より相対的に気温が低い傾向が見られた。また地表面に近いほど気温が低くなっている傾向が見られた。
小型ピロプラズマ病発症牛における鉄および鉄結合タンパク質の動態

1.牛の脾臓からフェリチン(Ft)を、血清からトランスフェリン(Tf)を、またミルクからラクトフェリン(Lf)を高純度に精製し、それぞれの鉄結合タンパク質に対するウサギ抗血清を調製した。TfおよびLfは天然状態では免疫学的にほとんど交差反応しなかったが、変性状態では両者は明らかに交差反応した。2.アフィニティ精製抗体を用い、それぞれのタンパク質を測定するためのサンドイッチELISAを開発した。(1)健常な非妊娠雌成牛の平均血清Ft濃度は46±28ng/ml(n=69)であった。(2)ヘパリンは好中球を刺激してLfを遊離すること、また血液凝固過程で好中球からLfが遊離することから、血中Lf測定に関しては、EDTA血漿を用いる必要があった。健常な非妊娠雌成牛における平均血漿Lf濃度は169±63ng/ml(n=16)であり、平均血清Tf濃度は2.86±0.43mg/ml(n=72)であった。3.56カ月齢のホルスタイン種雌仔牛を2週間小型ピロプラズマ病汚染牧野に放牧してTheileria sergentiに自然感染させ、血清鉄および鉄代謝に関連する鉄結合タンパク質Tf、LfおよびFtの動態を調べた。(1)感染牛では貧血に伴い血清鉄濃度は250μg/dl以上に上昇するとともに、Tf飽和度は90%以上に達した。一方血清Tf濃度は減少傾向を示した。非感染牛のTfa/Tfb比が約1.0であったのに対し、感染牛のTfa/Tfb比は約2.0に増大し、貧血に伴うTfの質的変化が認められた。(2)血清Ft濃度は貧血に伴い漸増し、赤血球Ft含量はMCVの増加し始めた時期と一致して急激に増大し対照牛の200倍以上に達した。感染牛の単核細胞Ft-含量は赤血球Ft含量の上昇時期に先行して増加し、対照牛の6倍以上に達した。(3)感染牛の血漿Lf濃度は徐々に減少し、非感染牛の約1/3のレベルまで低下した。1.牛の脾臓からフェリチン(Ft)を、血清からトランスフェリン(Tf)を、またミルクからラクトフェリン(Lf)を高純度に精製した。脾臓Ftは2種類のサブユニットH鎖(分子量20,500)およびL鎖(分子量18,400)から構成され、H/L比は1.5:1であり、馬脾臓Ftで報告されているH/L比1:9と大きく異なっていた。2.それぞれの鉄結合タンパク質に対するウサギ抗血清を調製した。3.アフィニティクロマトグラフィーによりFt、TfおよびLfに対する特異抗体を精製し、それぞれの鉄結合タンパク質を測定するためのサンドイッチELISAを開発した。(1)アビジン-ビオチン複合体法を用いることにより検出限界0.1ng/mlの高感度Ft-ELISAを開発できた。血清Ft測定に際しては、血清に存在するFt結合タンパク質の影響をなくすために血清試料のイオン強度を高める必要があった。

健常な非妊娠雌成牛の平均血清Ft濃度は46±28ng/ml(n=69)であった。(2)ヘバリンは好中球を刺激してLfを遊離すること、また血液凝固過程で好中球からLfが遊離することから、血中Lf測定に関しては、EDTA血漿を用いる必要があった。Lf-ELISAシステムにおいてTfは全く反応しなかった。健常な非妊娠雌成牛における平均血漿Lf濃度は169±63ng/ml(n=16)であり、平均血清Tf濃度は2.86±0.43ng/ml(n=72)であった。4.臓器非ヘム鉄含量の測定方法を確立した。56カ月齢のホルスタイン種雌牛を2週間小型ピロプラズマ病汚染牧野に放牧してTheileria sergenti(Ts)に自然感染させ、血清鉄および鉄代謝に関連する鉄結合タンパク質トランスフェリン(Tf)、ラクトフェリン(Lf)およびフェリチン(Ft)の動態を調べた。1.感染牛では貧血に伴い血清鉄濃度は250μg/dl以上に上昇するとともに、Tf飽和度は90%以上に達した。一方血清Tf濃度は減少傾向を示した。非感染牛のTfa/Tfb比が約1.0であったのに対し、感染牛のTfa/Tfb比は約2.0に増大し、貧血に伴うTfの質的変化が認められた。2.血清Ft濃度は貧血に伴い漸増し、赤血球Ft含量はMCVの増加し始めた時期と一致して急激に増大し対照牛の200倍以上に達した。感染牛の単核細胞Ft含量は赤血球Ft含量の上昇時期に先行して増加し、対照牛の6倍以上に達した。3.感染牛の血漿Lf濃度は徐々に減少し、非感染牛の約1/3のレベルまで低下した。以上の結果から、タイレリア病発症牛においては貧血に伴い鉄輸送量に大きな亢進が見られ、これはTf濃度の上昇ではなくTf飽和度の増大により遂行されると考えられ、また、血清Ftも鉄輸送に一部関与することが示唆された。感染牛では、赤血球のみならず単核細胞のFt含量にも大きな増大が見られ、リンパ球および単球の活性化が示唆された。また、血漿Ltレベルが低下したことから顆粒球マクロファージコロニー刺激因子の産生抑制が解除され、myelopoiesisが亢進していると考えられた。
サ-モグラフィによる乳腺診断の計量化ならびに新たな臨床応用に関する研究

本研究においてはまず、サ-モグラフィ-の基礎的検討としてアンギオテンシンIIおよび冷水(静脈内投与)負荷による腫瘍の熱産生の変化を赤外線サ-モグラフィ、深部体温計を用い計測し、腫瘍部の血流および熱代謝は周囲の熱環境の変化によらず安定していることが明らかとなった。さらに乳がんにおける腫瘍部の血流、熱代謝の臨床的意義を明らかにするため、サ-モグラフィ-所見(左右の温度差:ΔΤ)と腫瘤径、病期、ERの有無、組識学的リンパ節転移などの臨床病理学的所見との関連を検封した。ΔΤが大きい症例ほど組識学的リンパ節転移が多く、さらに、ΔΤが1.5°C以上の症例においては、それ以下の症例に比べ生存率が不良で無病期間も短かい傾向を認めた。以上より、サ-モグラフィ-所見は予後因子として有用であることが明らかとなった。臨床的検討としてサ-モグラフィ-の診断成積を検討し、接触型サ-モグラフィ-(テルマンマ)は赤外線サ-モグラフィ-(サ-モビュアJTC3300)と同等の診断能を持つことが判明した。一方、テルマンマの欠点として高温域の描出には少し劣ること、テルマンマでは異常を描出できなくても赤外線サ-モグラフィ-で描出可能である症例があることなどの問題点が明らかとなったが、撮影条件をより適格なものにし、正しくプレ-トを用いることにより乳がん検診に応用することが可能であると考えられた。また、集団検診にテルマンマを応用し乳がんの高リスク群の同定に役立つことが期待された。さらにサ-モグラフィ-所見と乳がん進展範囲を検討し、高温域の広さが進展範囲の予測に有用であることが明らかとなった。以上より、サ-モグラフィ-は腫瘍部の血流、熱代謝を反映し予後因子として、有用であること、乳がんの高リスク群の同定、腫瘍の進展範囲の予測に役立つことが示唆された。1.乳がんの熱代謝特性に関する研究:アンギオテンシンII及び冷水(静脈内投与)負荷による腫瘍の熱産生の変化を、赤外線サ-モグラフィ-あるいは深部体温計を用いて計側した。乳がん患者のおいて、腫瘍部と対称的非腫瘍部を比較をすると、腫瘍部の温度変化は非腫瘍部に比べ少なく、特にその変化は深部体温計による測定において明らかであった。これらの事実は、腫瘍組織内の血液は正常部に比べ周囲の変化によらず安定しており、腫瘍熱代謝自体も宿主の熱環境の変化に影響されることなく一定の高いレベルに保たれていること示唆すると考えられた。またこの特性の違いをもとに、現在、小乳がんの診断への応用を試みている。症例数がまだ不十分で、成績を発表するに至っていないが、症例は順調に積み重なっており近々発表予定である。2.サ-モグラフィ-の乳がん集団検診への応用:平成元年度の乳がんの集団検診に接触型サ-モグラフィ-(テルマンマ)を応用し、約1000人に試みた。乳がんHigh risk groupの同定に役立つことが期待され。平成2年度の検診においてさらに多数例の応用を予定している。3.腫瘤非触知乳がんの診断への応用:サ-モグラフィ-の腫瘤非触知乳がん診断への応用のため、様々な角度から臨床的病理的に検討した。その結果、サ-モグラフィ-はマンモグラフィ-と共に、腫瘤非触知乳がんの診断にきわめて有用であることが認められた。この成績は様々な学会で発表し、また論文にても発表した。

4.サ-モグラフィ-と予後:サ-モグラフィ-所見をヒト乳がんの予後因子として使用できるかどうかを、retrospertiveに検討した。温度の高い乳がん程再発率が高くなる傾向が認められつつあり、その結果に関しては平成2年の日本癌治療学会総会で発表予定である。1.サ-モグラフィ-の診断成績に関する研究:接触型サ-モグラフィ-(テルマンマ)による乳がんの正診率78%、読みすぎ率26%で赤外線サ-モグラフィ-(サ-モビュアJTC3300)と同等であった。しかし、テルマンマの欠点として高温域の描出に少し劣ること、テルマンマでは異常を描出できなくても赤外線サ-モグラフィ-で描出可能である症例があることなどが明かとなった。原因としてはテルマンマの一色の温度幅0.4°Cが限界となっている可能性が考えられるが、撮影条件により適格なものにし正しくプレ-トを用いることにより診断率は向上した。2.サ-モグラフィ-の乳がん集団検診への応用:集団検診にテルマンマを応用し約1000人に試みた。乳がんの高リスク群の同定に役立つことが期待され、フォロ-アップに有用であると考えられた。3.サ-モグラフィ-所見と予後:サ-モグラフィ-所見(左右の温度差:4T)と悪性度として臨床病理学的因子(腫瘤径、病期、ERの有無組織学的リンパ節転移)との関連を比較検討した。腫瘤径、病期、ERの有無では相関は認めなかったが、△Tが大きい症例ほど組織学的リンパ節転移が多い傾向を認めた。また、△Tと予後との関連を検討すると△Tが1.5°C以上の症例においてはそれ以下の症例に比べ生存率が不良で無病期間も短い傾向を認め、サ-モグラフィ-所見は予後因子として重要であることが示唆された。結果は第28回日本癌治療学会総会で発表した。4.サ-モグラフィ-による乳がんの進展範囲の予測:乳がんの進展範囲の予測は乳房温存手術を施行する際に問題となるが、今回の研究によりサ-モグラフィ-での高温域の広さが進展範囲の予測に有用であることが明らかとなった。
ヒト上皮性腫瘍細胞における癌性ガングリオシド発現機構とその調節による分化誘導

前年度に引き続き、各種ガングリオシドde novo合成調節物質を用いてヒト上皮性悪性腫瘍細胞株の分化誘導活性を検討したところ、長糖鎖ネオラクト系ガングリオシド合成を抑制し、G_<M3>の合成を促進する活性を有するもの、特にマクロライド系抗生物質であるBrefeldin A (BFA)に分化誘導活性があることが判明した。本研究では、主としてBFAの各種類縁体を合成し、その効果を検討することにより、ガングリオシド発現調節と癌細胞の分化誘導との関連性をさらに追究した。その結果、今回用いた類縁体のうち、水酸基をアセチル化したもののみに分化誘導活性が認められ、4位・7位の水酸基の立体配置と2位・10位の二重結合の存在がBFAの分化誘導活性に必須であることが示された。ガングリオシドのde novo合成に及ぼす影響を解析したところ、分化誘導活性のあった類縁体にのみ、BFAと同様のG_<M3>の顕著な増加および長糖鎖ネオラクト系ガングリオシドの発現抑制が認められ、このガングリオシドパターン変化と分化誘導活性との密接な関連性が強く示唆された。BFAには、ガングリオシドde novo合成調節活性以外にも多様な活性があるので、これらの活性と分化誘導活性との関連性を追究中であるが、BFAの分化誘導活性はフォルスコリンにより阻害されなかった。このことから分化誘導活性は、BFAの持つ糖タンパク質の細胞内輸送阻害活性とは別のもので、ガングリオシド生合成調節活性に帰属することが示唆された。同様のアプローチにより、ヒト神経膠芽腫細胞株にも分化を誘導することができた。ガングリオシドの発現調節が、がん細胞の分化誘導のための有力なターゲットになる可能性が強く示唆された。
ユビキタスシステムのための目的と役割の概念を用いた同時実行制御方式の研究

本研究は,トランザクションの目的と利用者の役割の重要度を明確に定義し,複数のトランザクションをその目的と利用者の役割の重要度を基に直列化して実行する新たな同時実行制御を提案することを目的としている.平成18年度は,複数のトランザクションをその目的と利用者の役割の重要度を基に直列化して実行するスケジューラの実装およびアルゴリズムの検証を行った.平成19年度は,平成18年度に実装およびアルゴリズム検証を終えたスケジューラを従来システムで多く使用されている2相ロック方式と比較することで,性能および有用性の評価を行った.初めに,実装したスケジューラにおけるトランザクションの優先度別実行待ち時間を2相ロック方式と比較した.評価の結果,提案方式では,目的および利用者に付与された役割の重要度が高いトランザクションが優先して実行されており,優先度の高いものほど,各オブジェクト上において短い待ち時間で実行されていることが確認できた.一方,2相ロック方式では,トランザクションの優先度に関わらず,全てのトランザクションが平均待ち時間の前後で実行されることが確認できた.また,システムのスループットを評価した結果,提案手法が2相ロック方式に比べて,スループットが高いことが確認できた.以上のことから,グループウェア等の現実世界での仕事の目的と実施者の役割を反映した情報システムの構築のために提案手法が有効であるといえる.分散オブジキクトシステムでのインテグリティ制約の保証、システムのスループットの最大化、情報システムの安全性の向上のための研究として同時実行制御方式,アクセス制御方式の研究が行われている.現実世界での仕事の優先順位は,仕事の目的と実施者の役割をもとに決定されるにも関わらず,従来の同時実行制御では,「早いもの勝ち」および「トランザクションの起動時刻印の順序」でトランザクションを直列化して実行する.また,役割の概念を用いたアクセス制御方式は研究されているが,役割の概念を用いた同時実行制御方式は研究されていない.すなわち,従来方式では,現実世界での仕事の目的と実施者の役割を反映した情報システムの構築ができない.本研究は,トランザクションの目的と利用者の役割の重要度を明確に定義し,複数のトランザクションをその目的と利用者の役割め重要度を基に直列化して実行する新たな同時実行制御を提案することを目的としている.平成18年度は,現実世界での利用者の役割と仕事の目的を情報システム内のユーザとトランザクションに付与されたアクセス権の集合と定義し,アクセス権を構成するメソッドとオブジェクトの優先度を定義することで,情報システム内でのトランザクションの目的と利用者の役割の重要度を明確に定義した.システムの利用者がトランザクションを発行するとき,発行したトランザクションには,利用者に付与された役割の一部が付与される.そこで,定義したトランザクションの目的と利用者の役割の重要度を基に複数のトランザクションをその目的と利用者の役割の重要度を基に直列化して実行するスケジューラの設計および実装を行った.実装したスケジューラのアルゴリズム検証を行った結果,トランザクションの目的および利用者に付与された役割の重要度が高いトランザクションが優先して実行されていることが確認できた.本研究は,トランザクションの目的と利用者の役割の重要度を明確に定義し,複数のトランザクションをその目的と利用者の役割の重要度を基に直列化して実行する新たな同時実行制御を提案することを目的としている.平成18年度は,複数のトランザクションをその目的と利用者の役割の重要度を基に直列化して実行するスケジューラの実装およびアルゴリズムの検証を行った.平成19年度は,平成18年度に実装およびアルゴリズム検証を終えたスケジューラを従来システムで多く使用されている2相ロック方式と比較することで,性能および有用性の評価を行った.初めに,実装したスケジューラにおけるトランザクションの優先度別実行待ち時間を2相ロック方式と比較した.評価の結果,提案方式では,目的および利用者に付与された役割の重要度が高いトランザクションが優先して実行されており,優先度の高いものほど,各オブジェクト上において短い待ち時間で実行されていることが確認できた.一方,2相ロック方式では,トランザクションの優先度に関わらず,全てのトランザクションが平均待ち時間の前後で実行されることが確認できた.また,システムのスループットを評価した結果,提案手法が2相ロック方式に比べて,スループットが高いことが確認できた.以上のことから,グループウェア等の現実世界での仕事の目的と実施者の役割を反映した情報システムの構築のために提案手法が有効であるといえる.
中動物モデルを用いた横隔膜全欠損型ヘルニアに対する胎児治療の開発

我々は神経ペプチドであるボンベシン(BBS)が先天性横隔膜ヘルニア(CDH)の低形成肺にも肺成熟効果があることを確認するためにウサギ胎仔の横隔膜を人工的に切開したモデルを作成する研究を施行してきた。気管閉塞(TO)を追加したCDHモデルではCDHモデルに比べ肺成熟が確認できたが、さらにBBSを投与したモデルでは明らかな効果は認められなかった。原因として、気管内投与量が確立していないことが考えられた。我々はこれまでnitrofenを投与して作成したCDHラットモデルに対して神経ペプチドであるボンベシン(BBS)が肺成熟を促す作用があることを証明した。しかし、nitrofen投与モデルはCDHを認めなくても低形成肺をきたすと言われている。今回nitrofenによる肺低形成作用因子を除外するため、またCDH胎仔を出生させた後の呼吸状態を観察するために、ウサギ胎仔の横隔膜を人工的に切開したモデルを作成し、BBSの効果を検討する。H27年度に予定していた研究は、動物モデルとしてNew-Zealand White rabbitの妊娠ウサギ(term 31days)のpseudoglandular stageの時期に相当する妊娠23日にウサギ胎仔を子宮から取り出し、左開胸を施行し、左横隔膜の一部を切開し横隔膜ヘルニアモデル(DHモデル)を作成、これらのモデルをBBS投与群、非投与群に分け効果を判定することであった。DHモデル作成時にまず妊娠ウサギにケタミン35mg/kg、キサラジン6mg/kgを筋注、1.5%イソフルランを吸入させて全身麻酔をかけるが、ストレスに弱く、深麻酔になると呼吸抑制が強くなり、死亡することもあった。また、ウサギ胎仔の左横隔膜を切開し得たモデルも、妊娠ウサギ再開腹時に死亡しており、DHモデル作成が進んでいないのが現状である。本年度の研究はDHモデルを作成し、BBS投与群、非投与群に分けBBSの効果を検討する予定であったが、DHモデル作成に難渋している。進捗状況としては遅れており、安定したDHモデル作成ができるように作成手技を検討して行く必要がある。動物モデルとしてNew-Zealand White rabbitの妊娠ウサギ(term 31days)のpseudoglandular stageの時期に相当する妊娠23日にウサギ胎仔を子宮から取り出し、左開胸を施行し、左横隔膜の一部を切開し横隔膜ヘルニアモデル(DHモデル)を作成。H27年度は、これらのモデルにボンベシンし、投与群、非投与群に分け効果を判定することであった。H28年度に予定していた研究は、H27年度にDHモデル作成を安定化させ、その後、気管閉塞モデル(TOモデル)を作成して、ボンベシンを投与しその効果を検討することであった。現在、妊娠ウサギへの麻酔薬の投与量を調整しながらDHモデル作成を安定化させるように試みている。妊娠ウサギの麻酔は安定しつつあるが、ウサギ胎仔の左横隔膜を切開し得たDHモデルが、再開腹時に死亡していることが多く、手技を安定させる必要がある。次年度はTOモデルも順次作成して行くことにしている。本年度の研究はDHモデルを作成した後、気管閉塞モデル(TOモデル)を作成して、ボンベシンの効果を検討する予定であった。麻酔薬投与量の調整は安定してきたが、DHモデルウサギが、再開腹時に死亡していることが多く。DHモデル作成としては未だ安定していない状況である。進捗状況としては遅れているが、安定したDHモデル作成ができるように作成手技を検討し、さらにTOモデルを作成してボンベシンの効果を評価していきたい。気管閉塞(TO)モデルとして妊娠28日に胎仔の気管を結紮、BBS投与モデルではTOの際にBBSを気管内投与した。平成29年度は麻酔管理、手術手技も確立してきた。摘出肺のRAC(Radial alveolar count)にて肺の成熟を評価したが、Control群と比較するとCDH群は明らかにRACが低く(Control:8.89 vs CDH:4.7)、CDH群にTO(Tracheal Occlusion)を施行した群ではRACは7.67と上昇し、肉眼的にもCDH+TO群はCDH群よりも肺の拡張を認めた。

しかしCDH;TO群にBBSを気管内投与した群では、RACは7.3でありCDH+TO群以上の効果は確認できなかった。これはBBSの気管内投与時に漏れが会った可能性があること、BBS投与量に問題があったことが予想されるが、BBS投与群が少なく、原因を確認することは期間内にはできなかった。しかしCDH+TO群ではCDH群に比べ明らかにRACが上昇しており、臨床でも胎児治療としてTOであるFETOが生存率を向上させている所以と考える。我々はこれまでの研究でnitrofenを投与して作成したCDHラットモデルに対してBBSが肺成熟を促す作用があることを確認しているが、今回のウサギ胎仔モデルへのBBSの気管内投与量は確立しておらず、今後の課題であると考える。ウサギ胎仔モデルを用いたCDHの研究は本邦では行なわれておらず、今後も続けていきたいと考えている。我々は神経ペプチドであるボンベシン(BBS)が先天性横隔膜ヘルニア(CDH)の低形成肺にも肺成熟効果があることを確認するためにウサギ胎仔の横隔膜を人工的に切開したモデルを作成する研究を施行してきた。気管閉塞(TO)を追加したCDHモデルではCDHモデルに比べ肺成熟が確認できたが、さらにBBSを投与したモデルでは明らかな効果は認められなかった。原因として、気管内投与量が確立していないことが考えられた。DHモデル作成を安定させるために、麻酔薬投与量の調整を万全にする。また、ウサギを用いた実験に精通した研究者に問い合わせ、安定したDHモデル作成を目指す。本研究はモデル作成が安定すれば、その後の肺組織の検体から生ずるデータ解析は問題なく進めることができるため研究結果がすぐに判明することになる。そのためにも次年度ではモデル作成の安定化に焦点を当て、その後のTracheal occlusionモデル作成に繋げたいと考えている。DHモデル作成を安定させるために、麻酔薬投与量の調整を万全にし、手術手技を確立させ安定したDHモデル作成を目指す。次年度で最終となることもあり次年度前半までにDHモデル作成及びTOモデル作成の安定化に焦点を当て、研究を進めて行く予定である。医歯薬学ウサギ胎仔を用いたCDHモデルの作成が遅れており、予定していた研究が進まなかったため、今年度の使用額が減り、次年度使用額が生じることとなった。今年度の研究が滞っているため、組織学的評価に必要な抗体などの消耗品の購入がほとんどなかったこと。また、研究結果を学会で発表することもなかったことから支出が少なかった。次年度は、モデル作成が進むと考えており、その場合に免疫染色、RT PCRに必要な抗体、試薬の購入に使用する予定である。DHモデル作成が安定しつつあるため、次年度は必要な抗体などの消耗品の購入して組織学的評価を行なって、結果が出次第、学会報告をする予定であり、未使用の研究費と次年度の研究費をそれに宛てがう予定である。