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児童福祉施設における青少年支援の再検討－遊び・スポーツ等を通した支援を中心に－

本研究は、児童福祉施設における青少年支援、とりわけ遊びやスポーツ、レクリエーションを通した支援の再検討を行うことを目的としている。児童福祉施設における支援は、「自立」に向けた生活支援を中心に学習や進路に重きがおかれている。しかしレクリエーション等に関しては、安全面の配慮はされていても、その内容について科学的な根拠に基づいた活動が提供されてはいない。そこで、1日本の児童福祉施設におけるレクリエーション等の実態を把握し、2アメリカオハイオ州立大学において貧困家庭への予防的プログラムを提供しているLiFEsports実践の協力も得て、日本における支援プログラムを検討する。
麻痺性貝毒化学分析の標準化と自動化に関する研究

世界各地で麻痺性貝毒による二枚貝の毒化が食品衛生のみなならず水産業にとっても大きな脅威となっている。現在、麻痺性貝毒に対する安全性検査はマウス毒性試験によって行われているが、特異性および精度が低いこと、多数の実験動物の管理に膨大な経費がかかる等の問題があり物理化学的方法への転換が世界的に強く求められている。本研究は麻痺性貝毒のHPLCによる化学分析の自動化と標準化をはかり、公定法として採用されるために必要な基礎的データを蓄積して、生産現場あるいは食品検査機関で容易に導入できる信頼性ある分析法の確立をめざした。研究成果を以下に箇条書きで示す。(1)基本クロマトグラフィー条件に改良を加え、反応液に中に生ずる沈殿等技術的問題を解決した。(2)二枚貝、プランクトンからの毒の抽出法と検液の予備精製法について毒の安定性の面から検討を加え、最終的なプロトコールを作成した。また、海水中にふくまれる微量の毒を濃縮して分析する方法を開発した。(3)標準毒調製法に関する研究として、低毒力試料からの効率的な抽出、精製法を開発した。入手困難な成分については酵素的、化学的変換によるの調製法の明らかにした。さらに元素分析による窒素の定量を基本とした標準溶液濃度の決定法を開発し、分析に最適な標準液のデザインを行った。(4)装置の自動化について検討し、コンピューター制御による溶離液およびカラムスイッチングによる完全自動システムを構築して多試料の効率的分析を可能にした。(1)クロマトグラフィーの技術的改良:反応液緩衝液を燐酸カリウムに変更することにより分析の障害となっていた不溶物の生成の問題を解決した。(2)検液調製法の検討:逆相分配型カートリッジカラムを用いる予備精製法を確立して二枚貝中の妨害ピークの除去に成功した。(3)標準毒大量調製法の検討:活性炭カラムの導入により、低毒力二枚貝から効率的に毒を精製することができた。また、BioGel-P4カラムを用いることにより、これまで困難であったゴニオトキシン1と3を効率的に分離できることを明らかにした。(4)標準液定量法の比較検討:麻痺性貝標準溶液の濃度決定法として、クエン酸を内部標準とする定量^1H NMR法を検討した。これまで行ってきた元素分析による窒素定量法と良く一致する結果を得た。(5)HPLC用標準溶液のデザイン:互変異性する11位硫酸エステル異性体の最終平衡到達濃度を実験的に調べ、GTX1:GTX4=2.9:1,GTX2:GTX3=2.9:1,C1:C2=4.5:1であることを明らかにし、標準混合液調製の際の濃度比を決定した。(6)サキシトキシン代替標準毒の検討:平成7年度に施行された法律により使用が困難となったサキシトキシンに代わるHPLC分析のための検討を行い、デカルバモイルサキシトキシンが同定、定量ともに外部標準となりうることを明らかにした。(7)装置の自動化:コンピューター制御下にバルブ切り替えを行う自動カラムスイッチングシステムをHPLCに導入し、自動的に3クロマト条件で分析するシステムを構築した。世界各地で麻痺性貝毒による二枚貝の毒化が食品衛生のみならず水産業にとって大きな脅威となっている。

(2)二枚貝、プランクトンからの毒の抽出法と検液の予備精製法について毒の安定性の面から検討を加え、最終的なプロトコールを作成した。また、海水中にふくまれる微量の毒を濃縮して分析する方法を開発した。(3)標準毒調製法に関する研究として、低毒力試料からの効率的な抽出、精製法を開発した。入手困難な成分については酵素的、化学的変換によるの調製法の明らかにした。さらに元素分析による窒素の定量を基本とした標準溶液濃度の決定法を開発し、分析に最適な標準液のデザインを行った。(4)装置の自動化について検討し、コンピューター制御による溶離液およびカラムスイッチングによる完全自動システムを構築して多試料の効率的分析を可能にした。
FIB/SEMを用いたヌクレオソームトモグラフィーによる染色体内部構造の解明

3世紀に渡って謎のままである染色体の内部構造について、ヌクレオソームの位置を可視化することにより明らかにすることを試みた。その為、イオンビームを用いて染色体のスライスを作製し、その断面像を画像解析した。その結果、ヌクレオソームの配列に規則性は見出せず、染色体内部でヌクレオソームはほぼランダムに分布していると考えられた。同時に行った染色体軸の解析では、複数のタンパク質の軸が互いに絡み合っていることを見出し、剛性と柔軟性を共に兼ね備えた構造であることを明らかにした。本研究においては、19世紀に発見された遺伝情報の担体である染色体の内部構造が現在に至るも解明されていない現状に鑑み、その最終的な解決を図ることを目的とした。申請者らはそのため、従来の染色体の構造解析研究では基本的には全てが電子顕微鏡、原子間力顕微鏡などを用いたクロマチン繊維の可視化によるアプローチがとられていたところに注目し、それとは全く別の新しいアプローチを採用することとした。すなわち、染色体内部の全ヌクレオソームの可視化・さらには3次元空間へマッピングすることから染色体の内部構造解析を行う。そのため2013年度には、染色体内のヌクレオソームの可視化のために収束イオンビーム/走査電子顕微鏡(FIB/SEM)トモグラフィー法を用いた新しい種々の実験方法を検討し、アモルファス化を伴うダメージ層の生成、汗かき効果、Ga+イオンの埋め込み効果などがヒトおよびオオムギ染色体を用いた場合にはどのように生成しデーターに影響するのかを検討した。さらに、従来から進めてきたFIB/SEMトモグラフィーおよび構造化照明顕微鏡(SIM)を用いて染色体の内部構造に関する結果を取りまとめたところ、染色分体中央部のタンパク質の骨格をなす、クロモソームスキャッフォールドとよばれる構造が2重らせん構造を取っていることを明らかにした。また、その為の染色体試料の作成には常温常圧下では液体状態で存在する塩であるイオン液体を用いた。イオン液体は塩であることから高真空中でも揮発することがない。かつ塩であることから導電性でイオン電導度は10-510-2 S cm-1程度もの値が報告されている。さらに耐熱性が高く400度でも物性変化が少ないことが知られている。親水性のイオン液体を用いれば生物試料に対しても親和性が高いコーティング剤として利用可能であり、今後の研究に有用であることを明らかにした。本研究においては、19世紀に発見された遺伝子の担体であり染色体の内部構造が現在に至るも解明されていない現状に鑑み、その最終的な解決を図ることを目的としている。申請者らはそのため、従来の染色体の構造解析研究では基本的には全てが電子顕微鏡、原子間力顕微鏡などを用いたクロマチン繊維の可視化によるアプローチがとられていたところに注目し、それとはまったく別の新しいアプローチを採用することとした。すなわち、染色体内部の全ヌクレオソームの可視化・さらには3次元空間へマッピングすることから染色体の内部構造解析のわり出しを行う。そのため2014年度には染色体内のヌクレオソームの可視化のために収束イオンビーム/走査電子顕微鏡(FIB/SEM)および電顕トモグラフィー(STEM)法を用いた新しい種々の実験方法を検討し、さらに従来から進めてきたFIB/SEMトモグラフィーおよび構造化照明顕微鏡(SIM)を用いて染色体の内部構造に関する結果を取りまとめたところ、染色分体中央部のタンパク質の骨格をなす、クロモソームスキャッフォールドとよばれる構造が2重らせん構造を取っていることを明らかにし、論文投稿した。また、その為の染色体試料の作成には常温常圧下では液体状態である塩であるイオン液体を用いた。かつ塩であることから導電性でイオン電導度は10-510-2 Scm-1程度もの値が報告されている。またFIB/SEMの断面の画像に見られる白斑はヌクレオソームと考えられるがその実験的再現性を得ることに成功した。本研究においては、19世紀に発見された遺伝子の担体である染色体の内部構造が現在に至るも解明されていない現状に鑑み、その最終的な解決を図ることを目的としている。そのため、申請者らは従来の染色体の構造研究では基本的にはすべてが電子顕微鏡や原子間力顕微鏡等を用いたクロマチン繊維の可視化によるアプローチが取られていたところに注目し、それとはまったく別の新しいアプローチを採用することとした。この新たなアプローチでは、染色体内部の全ヌクレオソームを可視化し、さらには3次元空間へマッピングすることで、染色体内のクロマチン構造をシミュレーションする。2015年度は、昨年度に引き続き、収束イオンビーム/走査電子顕微鏡(FIB/SEM)および走査型透過電子顕微鏡(STEM)法を用いた手法に加え、ネオンビームによる染色体加工の検討、ヘリウムイオン顕微鏡(HIM)の使用、およびFIBで作製した超薄切片の透過型電子顕微鏡(TEM)観察も開始した。特に、超薄切片の観察ではEDS分析を行うことで、染色体内部に明らかに白金原子が多く存在することを確認できた。

これは、染色体をDNAに結合する白金ブルーにより染色しているためと考えられ、染色体内部から検出される白斑が白金に由来することを支持する結果である。また、ネオンビームを用いた染色体加工では、現在までの結果では従来用いられてきたガリウムイオンを用いた加工との差は見られていないが、ビーム照射条件の検討を重ねることで、分子量が小さいネオンビームを用いることでより精度の高い染色体加工が可能となり、染色体の微細構造の検出が捉えられることを期待している。こうした、染色体内のヌクレオソームを可視化する手法の検討に加え、検出されたヌクレオソームを一本の繊維に繋げるためのソフトウェアの開発にも着手し、そのプロトタイプを作製した。これまで、染色体内部から白斑構造が検出されているが、この構造が染色体断面作製時にガリウムイオン等が付着することで生じる人工的なものなのか、それとも染色体の構造を反映したものなのかが不明である。本年度に行った、染色体超薄切片の作製とEDSを組み合わせた観察により、染色体断面からはガリウムイオンはほとんど検出されず、プラチナブルー染色によりDNAに結合したと考えられる白金が多く検出された。このことは、白斑構造が白金に由来する可能性を強く示唆しており、染色体内部構造の解析において重要な情報を入手することができた。研究成果については、随時論文化を進めており、昨年度に行った構造化証明顕微鏡とFIB/SEMを用いた染色体スキャフォールド構造の決定を行った論文はScientific reportsに受理された。また、臨界点乾燥を用いた染色体試料作製が染色体構造内に空洞構造を発生させることを示した論文と、イギリスのグループと共同で進めているX線を用いた染色体構造解析に関する論文も出版した。本研究は細胞分裂中期に細胞内に出現する染色体の内部構造を従来に無い方法を開発しつつ明らかにしようとするものである。染色体自体は19世紀半ばに発見された細胞内小器官であり、遺伝子の担体として極めて重要な役割を有しているが、その内部構造に関しては多くの研究がなされてきたにも拘らず、現在もなお不明である。本研究ではFIB/SEM(収束イオンビーム/走査電子顕微鏡法)など、最近著しい発展がみられるナノテクノロジーを生物試料用に新しい試料作製法などを自ら開発しつつ適用し、3世紀に渡る長期間不明であった染色体の内部構造に関しての知見を得ることを目的とした。ここでは染色体を構築する上での2つの重要な構造体である、DNAを主軸とするクロマチン線維とタンパク質からなる染色体軸のうち、後者について通常の光学顕微鏡の解像度の限界を超える構造化照明顕微鏡法を用いてここ数年にわたる解析を行ってきた。そのため、蛍光色素と金ナノ粒子により2重標識した抗体を用いてヒト染色体軸を染色し、その構造について光学顕微鏡の解像度を超えた高精細画像を獲得し、それぞれの染色分体の中心部にある染色体軸の構造について詳細に検討した。その結果、染色体軸は従来から言われていたように一本の軸からなるのではなく、2本のタンパク質の軸が相互にらせん状に絡まりあった構造をしていることが明らかにした。この点をさらにFIB/SEMを用いた染色体の断面像の解析により検討したところ、それぞれの染色分体の中心部に2か所のタンパク質のシグナルを見出したことから2本の軸からなるという構造化照明顕微鏡法での結果が正しいものと裏付けられた。
キメラブロモウイルスの適応多様性を利用した移行タンパク質遺伝子の機能解析

ブロムモザイクウイルス(BMV)の3aタンパク質を発現する遺伝子組換えササゲクロロティックモトルウイルス(CCMV)はササゲを全身感染宿主としない。一方で組換えCCMVを接種したササゲでは、全身感染能を獲得した突然変異体の出現が観察されていた。これらの突然変異体を解析することにより、3a遺伝子の特定の5カ所のコドンのいずれかに塩基置換が起こっていること、それにともなうLysかArgへのアミノ酸変異(適応変異)が突然変異体の出現に関与していることを明らかにした。また、組換えCCMVはBMV同じく細胞間移行に3aタンパク質だけでなく外被タンパク質も必要とするという特徴をもつ。この外被タンパク質要求性が適応変異によりどのように変化しているのかについて、外被タンパク質遺伝子を緑色蛍光タンパク質遺伝子に置換した変異体ウイルスを用いることにより調べた。その結果、適応変異を起こした組換えCCMV変異体は外被タンパク質非依存的に移行できることが分かった。同様に適応変異を起こしたBMV変異体も外被タンパク質に依存せずに細胞間移行できることが分かった。このことから適応変異により3aタンパクと外被タンパク質との相互作用が変化していること、そして変異の位置しているタンパク質の中央領域がその相互作用に関与する領域であることが示唆された。一方で、自然発生的な適応変異はアミノ酸特異的であることを示唆されていた。そこで、適応変異の見られた5カ所のコドンに人工的に塩基置換を導入し、LysあるいはArgのアミノ酸変異がササゲへの全身感染にどのように影響するかを調べた。その結果、LysあるいはArg以外のいくつかのアミノ酸への変異によっても組換えCCMVがササゲに全身感染できるようになることが分かった。この結果により、適応変異の出現に対して塩基置換あるいはタンパク質レベルで自然選択圧が働いていることが示唆された。
ジョルジョ・ヴァザーリ研究

本研究は、美術史学の「父」とも言うべきイタリア16世紀の芸術家にして著作家ジョルジョ・ヴァザーリを、主に文献学的な観点から考察しようとしたものである。そのため、本研究では主に次の5点を明らかにしようと試みた。まず、代表的著作である『芸術家列伝』の第一版(1550年)と第二版(1568年)を比較検討し、両版のあいだの相違を、特に当時の宗教的状況との関係において考察した。次に、ヴァザーリの芸術観や歴史観に対する批判者たちの言説を、とりわけジャン・パオロ・ロマッツォの著作である『絵画の神殿のイデア』(1590年)を中心に跡づけた。三番目に、「奇矯(ビザッロ)」というヴァザーリの批評言語に注目し、いかなる画家やいかなる様式が「奇矯」とか風変わりとみなされているかを、具体的に『列伝』の記述と作品の分析によって跡づけた。四番目に、ヴァザーリにおける「マニエラ」概念や、「人工的なもの(アルティフィチアーレ)」と「自然なもの(ナトゥラーレ)」の関係という問題を、同時代の他のテクストや作品との比較において考察した。そして最後に、ヴァザーリの著作『議論集』と、ヴァザーリが手掛けたパラッツオ・ヴェッキオの室内装飾との関係を、図像学とは異なる受容美学的な観点から考察した。これらの成果はそれぞれ各章として科学研究費補助金成果報告書に収録されている。今年度は、初年度として主に、ジョルジョ・ヴァザーリの主著である『芸術家列伝』の第1版(1550年)と第2版(1568年)の比較検討を中心に研究を進めた。具体的には、序文、「チマブーエ伝」「ジョット伝」「マザッチョ伝」「ベアト・アンジェリコ伝」「パオロ・ウッチェッロ伝」「ジョルジョーネ伝」「ピエロ・ディ・コジモ伝」等々である。両版を比較する基準として、作品や史実に関する情報量、作品記述(エクフラシス)の手法や価値判断、作品を批評する言語、修復や保存への見解等を設定し、これらの観点から第1版と第2版の詳細な比較検討を行った。さらにそのうえで、両版の差異を、それらが著された時期の文化的、社会的、政治的コンテクストのなかに据えることによって、その差異の意味を明らかにしていこうと試みた。ここでその内容を逐一述べることはできないが、両版の比較を通じて主に以下の点が明らかになりつつある。1.古代美術や13-14世紀のイタリア美術に関する情報は第2版で大幅に増大している。これは、両版の間にヴァザーリが各現地を旅行したこと、ユマニストたちとの交流を深めたことと無関係ではない。2.ヴァザーリ自身がメディチ家との関係を深めていったことが、第2版の記述に影響している。3.それに加えて、素描アカデミーの設立もまた両版の間に挟まれるが、この出来事は、作品を評価する基準や言語に影響している(より公式的でアカデミックになる傾向性)。4.第2版には、対抗宗教改革の影がより色濃くでている。これらを踏まえたうえで来年度はさらに、『列伝』の残りの部分についても比較検討を進めていきたい。初年度に引き続き二年目にあたる今年度も、ジョルジョ・ヴァザーリの主著『芸術家列伝』の第1版と第2版の比較検討を中心に研究を進めた。これに加えて、「奇矯(ビザッロ)」「気まぐれ(ギリビッツィ)」「奇妙さ(ストラネッツァ)」「風変わり(ストラヴァガンツァ)」といった批評の用語が、『芸術家列伝』のなかでどのように使われているかについて、詳細な検討をおこなった。アカデミックな芸術批評と発展史的な歴史記述の創始者とされるヴァザーリが、どのような画家や絵画を、いわば異常なものとして捉えていたかを明らかにするためである。具体的には、パオロ・ウッチェッロ、ピエロ・ディ・コジモ、ポントルモ等に関する記述を検討した。この問題においても、第1版と第2版とでは、微妙な評価の違いを見せている。

ヴァザーリにおいて、「奇矯」なるものは、たしかに理性によって囲い込まれ、「他者」として悪魔払いされる傾向を示しはじめている。しかし、ミシェル・フーコーが古典主義時代の「狂気」について述べているように、理性と狂気の双方から干渉しあい、交叉しあう世界はなおも生き続けていた。ヴァザーリの芸術観からも、そのことを跡づけることができる。この研究の成果は、「ジョルジョ・ヴァザーリと表象の病-〈奇矯〉なるものをめぐって」と題されて、『美学と病理学』(科学研究費成果報告、代表者岩城見一)に発表された。本年度は主に、ヴァザーリの批評言語における用法と意味に焦点を合わせて研究をすすめた。たとえば、ヴァザーリはしばしば「奇矯」(ビザッロ)とか「綺想」(カプリッチョ)という用語を用いて、画家やその作品を批評する。ヴァザーリにとっていったい何が「奇矯」あるいは「綺想」な表現とみなされていたのか。どんな行動や性格を示す画家が「奇矯」な画家とされ、どんな図像や様式の絵が「綺想」と評価されていたのか。こうした点を『芸術家列伝』のなかに具体的に検討することによって、必ずしも否定的とばかりはいえない「奇矯」や「綺想」の両義的な性格を明らかにした。画家の名前でいうなら、パオロ・ウッチェッロ、ピエロ・ディ・コジモ、ヤコポ・ポントルモらがその対象となる。一方、この用語はまた、19世紀以後の精神医学において、精神病(と診断された)患者の言動や絵の「異常性」を示すためによく使われたものである。こうした近代における「奇矯」の用法と比較することによって、ヴァザーリ(とその時代)における「奇矯」や「綺想」という言説の意味を浮かびあがらせることができる。本年度は最終年度にあたるため、報告書の構成を念頭において研究を深めた。報告書は以下のような章立てと内容になる予定である。第1章「マニエラ」と「リフォルマ」の狭間で。ここでは、16世紀後半いおける対抗宗教改革の高まりが、『芸術家列伝』の第1版と第2版にいかなる影を落としているか、また晩年の作品の様式や図像にどう作用しているかを考察した。第2章ヴァザーリの眼差し。この章では、過去の絵を観察し評価するヴァザーリの眼差しが、従来言われてきたような、ユマニスム思想やアカデミー理論とのつながりにおいてばかりでなく、もっと自由で、ときに感情的・身体的なリアクションを示したり、またときには絵の意外な細部にこだわって記述するヴァザーリのもうひとつの側面に焦点が当てられる。第3章「だが君、それをどう我々の意味に当てはめるつもりかね」。この章では、神話画の「意味」とは何か、いつどこでそれはつくられるのか、誰にとっての「意味」なのかといった問題が、「イコノロジー」の批判的再考を射程に入れつつ考察される。第4章ヴァザーリと「奇矯(ビザッロ)」なるもの。ヴァザーリはしばしば「奇矯」という用語で画家や作品を批評するが、それはいったい何を意味していたのかをテクストに即して具体的に考察した。第5章ヴァザーリの沈黙。この章ではヴァザーリがあえて口にしていない画家や作品やジャンルについて考察することで批評家・歴史家としてのヴァザーリを逆照射した。
CJD感染因子の軸索内輸送と濾胞樹状細胞の役割

(1)組織中のプリオン蛋白を検出するため、免疫組織染色に用いる抗マウスプリオン抗体を作成した。すなわち、マウスプリオン蛋白のN-末25個のアミノ酸からなるポリペプチドを合成し、ウサギに免疫した後全採血し抗血清を得た。この血清は、精製後、クロイツフェルト・ヤコブ病(CJD)の感染因子のマウス順化株である福岡1株(F1株)を接種後発症したマウスの脳および脾臓、リンパ節の濾胞樹状細胞(FDC)に沈着する異常マウスプリオン蛋白と特異的に反応することを確かめた。(2)NZW/Sea(以下NZW)マウス812週齢♀にコルヒチン(和光純薬、大阪)を1mg/kgを尾静脈内に注射し、4時間後にF1株の1%マウス脳乳剤上清を0.05mlを腹腔内に接種した。(3)NZWマウスにbeta、beta'-イミノジプロピオニトリル(IDPN、和光純薬)1g/kgを腹腔内に接種、24時間後に(1)と同様にCJD、F1株の1%マウス脳乳剤上清を0.05ml腹腔内に接種した。週齢を合わせたマウスに生理食塩液を(2)では尾静脈内に、(3)では腹腔内に接種後、F1株1%マウス脳乳剤を0.05ml、腹腔内に接種し対照とした。NZWマウスはCJD、F1株に最も感受性が高い系統であるが、腹腔内接種後から発症に至までの潜伏期間は240日必要であり、現在、観察飼育中である。他方、CJD、福岡2株-F1株と異なった患者由来のマウス順化株で潜伏期間はほぼF1株と同じ-を右眼球内に接種して異常プリオン蛋白の沈着を調べた結果、反対側の左の上丘、外側膝状体、大脳皮質視覚領野など視覚中枢に異常プリオン蛋白の強い沈着を認めた。すなわち、異常なプリオン蛋白がトランスシナプティックに侵潤増殖、沈着することが明らかになった。このことは、プリオン蛋白の侵潤が軸策内輸送によることを示唆するものであり、(2)、(3)の結果が待たれる。
白血病性幹細胞の増殖・分化異常の分子機構と白血病性形質発現の分子レベルの解析

白血病の病態は他の癌腫と同様、各々を特徴付ける腫瘍細胞の無限増殖と分化の停止/異常、即ち正常機能を脱落し癌形質を発現した幼弱細胞の蓄積、に基づく。本研究では白血病細胞の増殖動態と分化異常を、細胞質内/外部環境に産生される増殖因子の活性発現、正常血液細胞の増殖分化動態との相異、白血病細胞が表現する癌形質、等から解析した。1)正常ヒト臍帯血及び慢性骨髄性白血病慢性期末梢血の単核球にEIA遺伝子を導入、無限増殖可能な永代培養株を樹立した。EIAはヒトmyc遺伝子と同様に幹細胞や腫瘍細胞の不死化に密接に関連している。2)無刺激でIL-1を常時産生している単球系細胞株JOSK-IではIL-1が造血因子GM-CSFと協調して自律増殖因子となっている。IL-1は単球系白血病の病態との密接に関連する。3)マウス白血病細胞株NFS-60は増殖因子IL-3に依存して増殖するが、同時に幾つかのポピュレーションは顆粒球・マクロファージに、またエリトロポエチン存在下で赤芽球に、分化する。この細胞にIL-3遺伝子を導入、IL-3非依存性で自律増殖能を獲得した10株のクローンを分離した。IL-3産生能はクローンにより様々であるが、増殖カーブにはほとんど差異がなかった。各クローンにはIL-3遺伝子が1コピーのみ導入されているが、IL-3mRNAの発現寮に10倍以上の差異を認めた。細胞内IL-3活性には分泌量程の差異が認められない。従ってNFS-60細胞の自律増殖には微量の細胞内IL-3が重要であることが示唆された。正常骨髄細胞長期培養で樹立されたマウス細胞株FDC-P2もIL-3依存性であるが、IL-3遺伝子導入で、2株のIL-3非依頼性クローンが樹立できた。1株には1コピー、他方には2-3コピーのIL-3遺伝子が導入されており、IL-3のmRNA発現、培養液中へのIL-3分泌、ヌードマウス皮下接種による腫瘍造成が見出だされた。この事実は、増殖因子の自己生産造腫瘍性発現(悪性転換)の重要な要因であることを示唆している。4)白血病細胞には系統特異的なシアロ糖脂質の発現不全があり、これが分化の停止、分化異常と密接に関連している。白血病・悪性リンパ腫の典型的病態は他の悪性腫瘍と同様,各々を特徴付ける腫瘍細胞の無制限増殖と分化の停止或いは異常,即ち正常機能を脱落し癌形質を発現した幼弱細胞の蓄積,に基づく.本研究では無制限増殖能を有する白血病幹細胞の増殖動態と分化異常を,細胞質内或いは外部環境に産生される増殖因子及び増殖阻止因子の発現並びに活性化様式の側面から分子レベルで解析し,正常造血幹細胞の増殖・分化動態との相異ならびに白血病細胞が表現する癌形質の本体を究明することを目的とし,本年度は以下の諸点を明らかにした.白血病細胞(株)の無限増殖:

1)培養系では無限増殖が不可能な正常ヒト臍帯血及び慢性骨髄性白血病慢性期末梢血の単核球にE1A遺伝子(gAE1Aプラスミド)をプリッキング法で導入し,無限増殖可能な永代培養株を樹立した.E1A遺伝子はヒトmyc遺伝子と同様に幹細胞や腫瘍細胞の不死化(Emmotalization)に密接に関連した遺伝子と考えられ,その産物と無限増殖との関連を解析中である.2)また最近樹立成功した単球系細胞株JOSKーl細胞において無刺激で常時産生されているインターロイキン1(|Lーl)が造血因子GMーOSFの産生を促し,これと協調してJOSKーl細胞自身の自律(Autocrine)増殖因子となっている事実を見出した.単球系白血病の病態との密接な関連が予想される;3)インターロイキン3(|Lー3)依存性マウス白血病細胞株NFSー60細胞に|Lー3遺伝子をエレクトロポレーション法で導入したところ,自律増殖能を獲得して|Lー3非依存性となり, |Lー3産生能の異なる幾つかの亜細胞株が得られた.各亜株の増殖動態と表現型との相関を解析中である.白血病性形質(癌形質):表面膜構成因子(膜脂質,膜蛋白)に着目し,その物質的異常を化学的分析及び特異抗体を使った免疫化学的方法で解析した.白血病細胞には系統特異的なシアロ糖脂質の発現不全があり,これが分化の停止,分化異常と密接に関連していることが判明した.当初の研究計画のうち本年度は以下の諸点を明らかにした:1)マウス骨髄単球性白血病細胞株NFS-60細胞はレトロウイルスで誘導された白血病細胞から分離され、増殖因子のインターロイキン3(IL-3)に依存して増殖するが、同時に幾つかのポピュレーションは顆粒球やマクロファージに、またエリトロポイチン存在下で赤芽球に、分化することがメチルセルロースを使ったコロニー形成法で明らかになった。また腫瘍の自律増殖機構を明らかにする目的で、この細胞株にIL-3遺伝子をエレクトロポレーション法で導入した。このトランスフェクタントからIL-3非依存性となって自律増殖能を獲得した10株のクローンが分離できた。IL-3産生能は10単位以下から280単位/mlまで、クローンにより様々であるが、増殖カーブには殆ど差異がなかった。サザン・ブロット分析で各クローンにはIL-3遺伝子が1コピーのみ導入されていることが判明した。一方、ノザン・ブロット分析ではIL-3のmRNAの発現量に10倍以上の差異を認めた。これらの事実と細胞内のIL-3活性には分泌量程の差異が認められないことを考え合わせると、NFS-60細胞の自律増殖機構には極めて微量の細胞内IL-3が重要な役割を演じていることが示唆される。2)一方、正常骨髄細胞の長期培養によって樹立されたマウス骨髄芽球細胞株FDC-P2細胞もIL-3に依存して増殖するが、IL-3遺伝子を導入することによって、2株のIL-3非依存性のクローンを樹立することができた。サザン・ブロット分析によると1株には1コピー、他方には2-3コピーのIL-3遺伝子が導入されており、またIL-3のmRNAの発現、培養液中へのIL-3の分泌、ヌードマウスへの皮下接種による腫瘍造成が見出された。この事実は増殖因子を自己生産することが造腫瘍性発現(悪性転換)の重要な要因であることを示唆している。
統合失調症患者に特異的に認められるエピジェネティックな影響を受ける遺伝子の探索

統合失調症の発症要因には遺伝要因が大きく関与しているが、一卵性双生児であっても発症の一致率は50%であり、遺伝要因のみでは発症は決定されず、環境あるいは偶然による要因も関与している。発現調節はゲノムの変異にも影響されるがその他に遺伝子ゲノムのメチル化機構によるものがある。本研究は統合失調症患者およびコントロールの死後脳のDNAを材料にメチル化の違いをスクリーニングして、統合失調症に関連するDNAのメチル化部位をスクリーニングし、統合失調症の発症に脳のDNAのメチル化が関与しているか否か、関与している場合はその遺伝子を同定することを目指した。死後脳のDNAをメチル化結合タンパク質のカラムを通過させることによりメチル化しているDNA領域を濃縮した。さらにその中から遺伝子領域にあるDNA領域をDNAチップでスクリーニングし、30の遺伝子が同定された。そのうちの一つの遺伝子ではプロモーター領域のCpGアイランドに患者・コントロール間でメチル化の違いが見られ、かつ、死後脳の患者・コントロール間で遺伝子発現に差があった。この遺伝子はグルタミン酸受容体のひとつであり、発現量の違いはグルタミン酸神経系のシグナル伝達の変調に関わっている可能性が考えられた。さらに、ゲノム解析により、メチル化に影響を与える分子が、統合失調症に関連しており、この遺伝的背景がエピジェネティックな機構に関わっていることを示唆する研究成果を得た。これらの結果は、統合失調症の発症がジェネティック、エピジェネティックの機構が関わっている複雑な病態であることを示している。このように統合失調症患者に特異的に認められるエピジェネティックな影響を受ける遺伝子の同定は終了し、研究目的は達成されたが、論文として公表するためには統合失調症に関連するその機構を解明する必要があり、研究期間中には具体的に遺伝子名を公表するまでには至らなかった。本研究は統合失調症患者およびコントロールの死後脳のDNAを材料にメチル化の違いをスクリーニングして、統合失調症に関連するDNAのメチル化部位をスクリーニングし、統合失調症の発症に脳のDNAのメチル化が関与しているか否か、関与している場合はその遺伝子を同定することを目指している。そのうちの一つの遺伝子では遺伝子エクソン内のCpGアイランドにあり、メチル化の違いが患者と死後脳の間で見られることをクローニング法により確認した。また、メチル化に応じて遺伝子の発現が落ちており、コントロールに比べて、患者では約1/10の量の遺伝子発現になっていた。この遺伝子はシナプスのNMDA受容体の機能に影響しており、発現量の違いはNMDA受容体の密度の低下につながっている可能性が考えられた。これらのことより、遺伝的要因のみならず、エピジェネティックな機構による統合失調症の発症機構の一部が明らかになりつつある。

本研究は統合失調症患者およびコントロールの死後脳のDNAを材料にメチル化の違いをスクリーニングして、統合失調症に関連するDNAのメチル化部位をスクリーニングし、統合失調症の発症に脳のDNAのメチル化が関与しているか否か、関与している場合はその遺伝子を同定することを目指している。死後脳のDNAをメチル化結合タンパク質のカラムを通過させることによりメチル化しているDNA領域を濃縮した。さらにその中から遺伝子領域にあるDNA領域をDNAチップでスクリーニングし、30の遺伝子が同定された。そのうちの一つの遺伝子ではプロモーター領域のCpGアイランドに患者・コントロール間でメチル化の違いが見られ、かつ、死後脳の患者・コントロール間で遺伝子発現に差があった。この遺伝子はグルタミン酸受容体のひとつであり、発現量の違いはグルタミン酸神経系のシグナル伝達の変調に関わっている可能性が考えられた。さらに、ゲノム解析により、メチル化に影響を与える分子が、統合失調症に関連しており、この遺伝的背景がエピジェネティックな機構に関わっていることを示唆する研究成果を得た。これらの結果は、統合失調症の発症がジェネティック、エピジェネティックの機構が関わっている複雑な病態であることを示している。
心筋内中性脂肪測定法を用いた新規運動プログラム評価法の確立と臨床応用

本研究の目的は、1H-magnetic resornancespectroscopy(MRS)法により心筋内中性脂肪(TG)量を測定し臨床応用することである。健常人の心筋TG量は平均0.85 %であった。心筋TG量は、体脂肪率や血中TG値と正相関、嫌気性代謝閾値や左室収縮末期容積と負の相関を認めた。高血圧性心疾患の心筋TG量は、肥大型心筋症例に比し有意に高値であり、左室容積と高血圧性心疾患または肥大型心筋症の診断は心筋TG量の独立した因子であった。さらに、心臓リハビリテーションは心筋TG量を低下させる可能性が示唆された。以上より、MRS法による心筋TG量測定は有用であることが示唆された。本研究の目的は、研究代表者らが本邦において初めて確立した1H-magnetic resornancespectroscopy(MRS)法を用いて心筋内中性脂肪(TG)量を非侵襲的に測定し、異所性脂肪蓄積に対する新規評価法を運動プログラムも含めた治療介入の効果判定に応用することである。本年度は、健常人、肥大型心筋症、高血圧性心疾患例に対し1H-MRS法を用いて心筋TG量を測定し、その臨床的意義を検討した。心筋TG量は0.85 ±0.40%(平均±SD)であった。心筋TG量は、体脂肪率や血中TG量と有意な正相関、嫌気性代謝閾値や左室収縮末期容積と有意な負の相関を認めた。肥大型心筋症例の心筋TG量は1.09 ±0.72%、高血圧性心疾患例は2.14 ±1.29%であり、高血圧性心疾患例の心筋TG量は肥大型心筋症例に比し有意に高値であった(P<0.005)。肥大型心筋症例の心筋TG量は左室重量と有意な負の相関、高血圧性心疾患例の心筋TG量は左室駆出量と有意な負の相関を認めた。肥大型心筋症や高血圧性心疾患例は共に左室肥大を呈する疾患であるが、心筋TG量は有意に異なり、心形態や心機能との関連も異なることから、心筋における脂肪酸代謝やその蓄積に疾患特異性が存在することが示唆される。現在、心筋内TG量と、脂質・糖代謝関連指標との関連、骨格筋及び肝臓内TG量の同時測定を継続している。基礎研究では、高脂肪負荷およびアンジオテンシンII投与による心肥大代謝異常モデルマウスを作成し、心筋TG量と脂質・糖代謝関連指標、心機能との関連について検討を継続している。今後は、運動療法による心筋TG量の変化、運動強度・種類・期間との関連、モデルマウスにおける運動介入による心筋内TG量の変化、介入効果を基礎的に検証する予定である。本研究の目的は、研究代表者らが本邦において初めて確立した1H-magnetic resornancespectroscopy(MRS)法により異所性脂肪蓄積の一つである心筋内中性脂肪(TG)量を非侵襲的に測定し、運動プログラムや治療介入の効果判定に応用することである。本年度は、肥大型心筋症25例、高血圧性心疾患10例に対し1H-MRS法を用いて心筋TG量を測定した。高血圧性心疾患例の心筋TG量は、肥大型心筋症例に比し有意に高値であった(2.14 ±1.29 vs 1.09 ±0.72%, P<0.005)。高血圧性心疾患例ではガドリニウムによる遅延造影は認めなかったが、5例の肥大型心筋症に遅延造影を認めた。心筋TG量は、遅延造影の有無による有意な差を認めなかった(1.22 ±0.72 vs. 0.64 ±0.49%, NS)。心筋TG量は、肥大型心筋症において左室重量と有意な負の相関(r = -0.41, P < 0.04)、高血圧性心疾患において心拍出量と有意な負の相関(r = -0.64, P < 0.05)を認めた。多変量解析において、BMIと左室重量は心筋TG量の独立した規定因子であった。心筋TG量は、心形態や心機能との関連を示し、心筋における脂肪酸代謝やその蓄積に疾患特異性が存在することが示唆される。現在、心筋内TG量と骨格筋や肝臓内TG量の同時測定を行っている。また、心臓リハビリテーション前後の心筋TG量の変化、運動強度・種類・期間との関連について検討中である。基礎研究では、高脂肪負荷およびアンジオテンシンII投与による心肥大モデルマウスを作成し、心筋TG量と脂質・糖代謝関連指標、心機能や運動耐容能との関連について検討している。1H-MRS法を用いて肥大型心筋症と高血圧性心疾患例における心筋TG量測定を行った。その結果、高血圧性心疾患例の心筋TG量は肥大型心筋症例に比し有意に高値であった。これらの結果を英文誌に発表した。さらに、1H-MRS法を用いて心筋内TG量、骨格筋TG量、肝臓内TG量を同時測定し、種々の血液生化学マーカーとの関連に特徴を有することを見出し、現在詳細な検討を継続している。基礎研究に関しては、心肥大代謝異常モデルマウスを用いて、解析を継続している。本研究の目的は、研究代表者らが本邦において初めて確立した1H-magnetic resornance

spectroscopy(MRS)法により異所性脂肪蓄積の一つである心筋内中性脂肪(TG)量を非侵襲的に測定し、運動プログラムや治療介入の効果判定に応用することである。本年度は、前年に引き続き虚血性心疾患、肥大型心筋症、拡張型心筋症、高血圧性心疾患、大動脈弁狭窄症等の心血管疾患症例に対し、心筋MRS法を用いて心筋内TG量を測定した。高血圧性心疾患例の心筋TG量は、肥大型心筋症例に比し有意に高値であり、心筋TG量は、肥大型心筋症において左室重量と有意な負の相関、高血圧性心疾患において心拍出量と有意な負の相関を認めた。多変量解析では、BMIと左室重量が心筋TG量の独立した規定因子であった。一部の心筋疾患では心筋内TG量が高値であり、種々の病態との関連が示唆された。経カテーテル大動脈弁植え込み術施行例は、高率にfrailtyを有しているが、外来心臓リハビリテーションプログラムの継続により、基本チェックリストスコア、抑うつ項目、MMSEスコアが有意に改善することを確認した。今後も、心筋TG量の関連について検討を継続する。マウス心筋梗塞モデルに対する早期からの自発運動は、抗炎症作用を介して心筋リモデリングの抑制に有用であること、angiotensin IIが誘導する酸化ストレスは、Nox4を介して骨格筋萎縮に関与することを明らかにした。心筋や骨格筋にける脂肪酸代謝との関連も含め検討を継続している。本研究の目的は、1H-magnetic resornancespectroscopy(MRS)法により心筋内中性脂肪(TG)量を測定し臨床応用することである。健常人の心筋TG量は平均0.85 %であった。心筋TG量は、体脂肪率や血中TG値と正相関、嫌気性代謝閾値や左室収縮末期容積と負の相関を認めた。高血圧性心疾患の心筋TG量は、肥大型心筋症例に比し有意に高値であり、左室容積と高血圧性心疾患または肥大型心筋症の診断は心筋TG量の独立した因子であった。さらに、心臓リハビリテーションは心筋TG量を低下させる可能性が示唆された。以上より、MRS法による心筋TG量測定は有用であることが示唆された。健常人、肥大型心筋症、高血圧性心疾患例に対する1H-MRS法による心筋TG量測定を行い、健常人における解析結果は英文誌に発表した。さらに、肥大型心筋症と高血圧性心疾例に関する解析結果は学会において発表し、現在論文作成中である。基礎研究に関しては、心肥大代謝異常モデルマウスを作成し、解析を継続している。現在のところ、研究計画の大幅な変更や研究遂行のための大きな問題等はない。今後も、1H-MRS法を用いた心筋内TG量、骨格筋TG量、肝臓内TG量を同時測定したデータを詳細に解析する。その結果を、国内・海外学会で報告することにより国内外の研究者と意見交換を進め論文作成・投稿を行う。心血管疾患症例に対して運動介入を行い、心筋TG量の変化と運動強度・種類・期間との関連について検討を行う。基礎研究に関しては、心肥大代謝異常モデルマウスを作成し解析を進め、さらに運動介入による心筋内TG量の変化、介入効果を基礎的に検証する。循環器病学肥大型心筋症と高血圧性心疾例に関する解析結果を国内・海外学会で報告し、国内外の研究者と意見交換を進め論文投稿を行う。これらの疾患に対して運動介入を行い、心筋TG量の変化と運動強度・種類・期間との関連について検討を行う。平成27年11月での国際学会で研究内容の報告を行い、海外研究者との意見交換を行う予定であったが、日程調整が最終的につかず出張を断念した。この学会参加費に計上する予定の予算分を、次年度に繰り越した。
唾液腺・膵外分泌腺におけるＭＡＲＣＫＳリン酸化を共通とした開口分泌機構の解明

外分泌腺開口分泌機構の解明を目指して、唾液腺および膵外分泌腺アミラーゼ分泌におけるMyristoylated alanine-rich C kinase substrate (MARCKS)のリン酸化の関与について検討した。ラット耳下腺腺房細胞および膵外分泌腺腺房細胞を用いた実験により、PKCδによるMARCKSのリン酸化が、耳下腺アミラーゼ分泌においても膵外分泌腺アミラーゼ分泌においても、関与していることが示唆された。さらに膵外分泌腺においては、脂質ラフトからMARCKSが離れることが、SNAREタンパク質の制御を介して、開口分泌に関与している可能性が考えられた。ラット耳下腺腺房細胞および膵外分泌腺腺房細胞を用いた実験により以下の内容を両腺房細胞に共通して起こる現象として得た。a)分泌刺激剤であるイソプロテレノールまたはコレシストキニンを耳下腺腺房細胞または膵外分泌腺腺房細胞にそれぞれ作用させると、MARCKSはリン酸化し、リン酸化したMARCKSは細胞内局在が細胞膜から細胞質へと変化した。b) PKC阻害剤であるビスインドリルマレイミドを作用させると、分泌刺激剤によるMARCKSのリン酸化が抑制された。c) MARCKSの細胞内局在変化を阻害するMANSペプチドを作用させると、分泌刺激剤によるアミラーゼ分泌が抑制された。d) PKCδ阻害剤であるロテレリンを作用させると、分泌刺激剤によるMARCKSのリン酸化およびアミラーゼ分泌が抑制された。e)分泌刺激剤を作用させると、PKCδが活性化した。f)MANSペプチドを作用させても、PKCδの活性化に影響しなかった。これらの結果、PKCδによるMARCKSのリン酸化とそれに続く細胞内局在変化が、耳下腺アミラーゼ分泌においても膵外分泌腺アミラーゼ分泌においても、制御機構として働いていることが明らかになった。MARCKSをリン酸化させるPKCのアイソザイムまでもが共通していることは非常に興味深い。次年度は、MARCKSリン酸化と局在変化の開口分泌における役割の解明に進むが、MARCKSとPKCδの両者が共通の制御機構であることより、脂質ラフトの機能調節の可能性から探る。今年度は、MARCKSによる脂質ラフトの機能調節の可能性を探るために、ラット耳下腺腺房細胞および膵外分泌腺腺房細胞を用いた実験を行い、以下の内容を得た。a)耳下腺腺房細胞および膵外分泌腺腺房細胞において、MARCKSの一部が細胞膜脂質ラフトに局在していた。b)分泌刺激剤であるイソプロテレノールまたはコレシストキニンを耳下腺腺房細胞または膵外分泌腺腺房細胞にそれぞれ作用させると、両腺房細胞の細胞膜脂質ラフトにおいてMARCKSの局在がほとんど認められなくなった。c)膵外分泌腺腺房細胞において、MARCKSの局在する細胞膜脂質ラフトと同じ膜ドメインから、SNAREタンパク質であるシンタキシン2が検出された。また前年度より、d)分泌刺激剤を両腺房細胞にそれぞれ作用させるとMARCKSはリン酸化し、リン酸化したMARCKSが細胞膜から細胞質へ局在変化すること、e)MARCKS阻害ペプチドを作用させると、分泌刺激剤によるアミラーゼ分泌が抑制されること、これらが明らかになっている。以上より、MARCKSは細胞膜脂質ラフトを介してアミラーゼ分泌に関与していることが示唆された。さらに膵外分泌腺腺房細胞においては、分泌顆粒膜と細胞膜との膜融合に重要な役割を果たすSNAREタンパク質の一つであるシンタキシン2が、MARCKSの脂質ラフト機能調節におけるターゲットの一つである可能性が考えられた。生理学MARCKSリン酸化のアミラーゼ分泌への関与が耳下腺腺房細胞および膵外分泌腺腺房細胞に共通したものである、という本研究の主要点を明らかにした。また、興味深いことにMARCKSをリン酸化させるPKCのアイソザイムが共通していることを見出した。この成果は今後の研究展開に重要な現象であると考えられる。MARCKSはN末端がミリスチル化しており、ミリスチル化タンパク質は脂質ラフトへ輸送されることが示唆されていること、またPKCが脂質ラフトを足場として基質をリン酸化する報告があること、PKCδによるMARCKSリン酸化が両腺房細胞アミラーゼ分泌の共通機構であることから、まず耳下腺および膵外分泌腺腺房細胞の脂質ラフトにMARCKSが存在するか検討し、MARCKSが脂質ラフト機能調節を担っている可能性を探る。その後、細胞骨格の再構成や分泌顆粒の細胞内輸送への関与についても検討し、唾液腺および膵外分泌腺アミラーゼ開口分泌の細胞内シグナルにおけるMARCKSの役割について明らかにする。

MARCKSをリン酸化させるPKCを検索する上で、耳下腺および膵外分泌腺腺房細胞で同じアイソフォームのPKCδを早い段階で同定できたことにより、使用する動物数を大幅に減らすことができた。また、各アイソフォームに対応する抗体や阻害剤等の物品費を減らすことができた。そのため、次年度使用額が生じた。実験動物より採取した試料を用いて直ちに実験を行うため、試料を一度に多く確保することは難しい。よって実験動物のラットは100頭購入する(100頭x2,500円)。EDペプチドとMANSペプチドのタンパク合成を委託する(2種類x250,000円)。超遠心機用のチューブを購入する(150,000円)。HRP-conjugated CTBを購入する(140,000円)。免疫沈降キットを購入する(60,000円)。免疫組織化学用の消耗品、ピペットやチューブ等のプラスチック器具を購入する(190,000円)。旅費はInternational Association for Dental Research (2014年6月、南アフリカ)と国内学会へ参加するために計上している(430,000円)。
大乗佛教起源論のための佛教美術史的基礎研究

インド佛教美術史における「佛像の出現」という根本問題とインド佛教思想史における「大乗佛教の起源」という根本問題は、従来までの多数の学者による研究の蓄積にもかかわらず、未解決な難問であった。本研究は、これら二つの革新運動の根本には「三昧のエクスタシーにおいて諸佛に直々にま見える」という宗教体験があるのであり、それらは,この「不退転」「無生法忍」ともよばれる宗教体験を体得しようとする宗教運動の二側面だ、という作業仮説を提案することによって解決することを試みた。この作業仮説は、佛教考古学・美術史の遺跡・遺物史料によって十分に証明されることを示した。また、新発見の佛教遺跡「カンガンハリ大塔」を調査して、写真資料と平面図を、世界の学界に提供した。このたび平成21年2月12日から26日までの15日間にわたって、研究協力者3名とともに中・南インド佛教遺跡調査旅行を実行することができた。主な調査地は、マトウラー博物館・サンチー佛塔・アジャンタ前・後期窟・新発見のカンガンハリ佛塔・ナーガールジュナコンダ博物館・アマラーヴァテイー博物館・チェンナイ博物館などであった。わたくしの「大乗佛教起源論」仮説の四項目のテーゼについて、つぎのような事実を確認することができた。1、「大乗佛教運動は、すでに始まっていた初期ヒンドウイズム運動と一体化した運動であった」-マトウラー近郊のソンク遺跡に確認される初期ヒンドウイズム、シヴァ派のナーガ信仰が、カンガンハリ佛塔・ナーガールジュナコンダ佛塔・アマラーヴァテイ前期佛塔基壇正面の巨大なナーガ像に伝承されていることを確認した。2、「佛塔を中心とする佛教文学・美術運動は、原始佛教の諸部派全体に及ぶ運動であった」及び3、「原始佛教の諸部派全体に及ぶ芸術運動は、新しい芸術的なしかたで佛を直接、体験しようとした」---諸部派の佛塔において「帝釈窟説法」「三道宝階」「舎衛城神変」の場面が彫刻されていて、それが「佛像出現」以前にも、以後にも確認される。それらの説話は、佛不在の後に佛が出現し説法することをテーマとする故、佛を新しいしかたで体験することを表現している。4、「『大乗佛教の起源』と『佛像の出現』は、新しい芸術的なしかたで体験される宗教体験「不退転」「無生法忍」に由来するのであり、三昧において諸佛に直接、ま見えるところから始まった」---『八千じゅ般若経』の梵天と帝釈は「三道宝階」に由来し、『華厳経』の蓮華座上の諸佛は「舎衛城神変」に由来する。平成20年度の北インドから南インドへかけて主要佛教遺跡の全般的調査の段階では調査するだけで、写真撮影することが許可されなかった新発見のカンガンハリ佛塔について、平成21年度は、インド考古局から新たに入手することができた写真撮影許可証にもとづいて再調査し、ほぼ完全に写真撮影することができた。佛塔の本体部分にトレンチが掘られたままであり、佛塔周辺の右遶道の立体構造も発掘されたままに露出し、しかも佛塔表面に貼りつけてあった60数枚のジャータカ・佛伝図石彫板が、可能な限り復元されて地表に並べられている状態で写真撮影することができたのであるから、きわめて貴重な記録写真を確保することができたと信ずる。今回は、新学年早々の平成21年4月4日から9日まで、世界的なインド佛教美術史家であるミュンヘン大学教授Monika Zin博士に急遽、研究協力者になっていただき、従来からの研究協力者中西麻一子及び研究代表者荒牧の三人で、写真撮影を主とする現地調査を行った。Zin博士とともに現地で現物を前に調査したことによって、新発見のカンガンハリ佛塔が、まさしくアジャンタ前期窟とアマラヴァティー前期佛塔(これは実在しないが、後期佛塔から推定される)をつなぐmissing lingであることを確認することができた。また、Zin博士から、平成12年に発掘されたばかりの段階の写真資料を提供していただいたことによって、今回、撮影した写真と対比させながら、カンガンハリ佛塔の本来の原初形状を復元することが可能になった。かくしてカンガンハリ佛塔という大乗佛教起源及び佛像出現の直前段階の実物資料にもとづいて、本研究の目的である大乗佛教起源と佛像出現が同一の宗教体験にもとづくことを論証する道が開かれたのであった。

本研究「大乗佛教起源論のための佛教美術史的基礎研究」の第三年、最終年度、にあたっては、これまでの研究成果を、小冊子「研究成果報告書」へ要約して公表するための準備作業に集中した。研究代表者荒牧は、「第一年度北・中・南インド佛教遺跡調査旅行-予備報告」を書いて、本研究の前提となった五項目の作業仮説を提言した上で、その作業仮説が、現地調査によって、どのように、どこまで検証されたか、を概説した。あわせて英文論文"Apropos of the Three Legends of Buddha's Dis- and Re-appearance"を書いて、佛塔を中心とする佛教文学と佛教美術の発達が、どのように三説話「帝釈窟説法」「頭髪供養(即ちマハーゴーヴィンダ大臣物語)」「三道宝階」を介して原始『般若經』の起源と佛像の出現へと展開するか、を解明した。以上、あわせて「大乗佛教起源論」の新しい可能性を証明することができたのではないか、と考える。今後、かくして『般若經』とともに始まった大乗経典運動が、どのように南インド、アマラーヴァティー大塔において『華厳經』などを発達させ、北西インド、ガンダーラにおいて、『阿〓佛国經』『無量壽經』などを発達させるか、を究明していきたい、と考えている。他方、研究協力者中西痲一子は、第二年度に調査した新発見の佛教遺跡「カンガンハリ大塔」の従来までの発掘の経過と欧米研究者による予備報告を総括するとともに、インド考古局の許可書にもとづいて撮影してきた59枚の大型説話パネルの写真集成及びそれらのパネルに石刻された碑文集成を作成した。これらは、インド考古局による正式報告書の公刊までの間、この重要な佛教遺跡を研究するための基礎史料となるものである。