hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
改良型ＴＲＥＣＫマウスを用いた細胞移植系の確立

改良型毒素受容体が有用であるかどうかの比較検討のため、野生型ヒトHB-EGFとTR6(改良型毒素受容体)両方を用いたトランスジェニックマウスの作製を行った。野生型ヒトHB-EGFでは全身発現させると生まれないという報告があるため、それぞれ100匹程度ずつのマウスが誕生するまで、C57BL/6J ×C57BL/6Jの受精卵へトランスジーンのインジェクションを行う予定である。さらに、ルシフェラーゼcDNAをチキンβアクチンプロモーターの下流に接続し、トランスジェニックマウスを作製した(CAG-Luc)。ルシフェラーゼ遺伝子をもったマウスからドナー細胞を採取し、このドナー細胞が移植後レシピエントマウスの体内でルシフェラーゼを産生すれば、IVIS System (Xenogen社)という化学発光を捉える機器で非侵襲的にモニターすることができる。作製したCAG-TR6と、CAG-Lucと掛け合わせれば、その子どもたちはすべての細胞でTR6とルシフェラーゼ遺伝子を持つことになり、ドナー細胞として利用するのに非常に有用である。様々な組織からの細胞採取ができるように、すべての組織でルシフェラーゼが発現するマウスを得ることを目的とし、得られた複数のトランスジェニックマウスラインにおいて、各組織の発現解析を行った。計画予定であったROSA-TR6/GFPの作製は、ベクターの作製、ES細胞へのインジェクション、胚盤胞へのインジェクションは行ったがキメラ率のよいキメラマウスが得られず、まだジャームライントランスミッションの起こったマウス作製には至っていない。しかし、ドナー細胞に用いる予定であるCAG-Luc, Ins-Venusの作製およぼそれらの発現解析は行い、使えるマウスラインを確立には成功している。改良型毒素受容体の有用性についても、着々とマウスを得て、それぞれの発現解析を行っているところである。改良型TRECK糖尿病モデルマウスに関しては、毒素投与により糖尿病を発症するラインを維持している。しかし発現量の少なさのためか、改良型にしたことによる毒素感受性の低下のためか、従来の野生型ヒトHB-EGFを用いた糖尿病モデルマウスよりも、毒素に対する感度が悪いことがわかった。そのため、ホモ個体を作製して解析に用いることとし、掛け合わせを行っている。また、さらにもう一度インジェクションから行うことも検討している。トランスジェニックマウスの作製に関しては、予定通りCAG-TR6とCAG-Lucの作製を行った。現在、CAG-Lucに関してはラインの選定中である。ターゲティングマウスは、ベクターが導入されたES細胞がとれなかったため、引き続きES細胞へのターゲティングベクターの導入からやり直しているところである。インスリンプロモーター制御下で異種タンパク質を発現させると、形態や耐糖能に異常が出るということは知られている。実際インスリン発現細胞でVenusという蛍光タンパク質を発現させたマウスは、10ライン以上のトランスジェニックマウスを解析したがインスリン産生細胞でVenus蛍光を発するラインは1割程度しか得られず、またインスリン産生細胞が100%Venus蛍光を発してはいない。今後さらにどれくらいの割合で、インスリン産生細胞がVenus蛍光を発するのか、インスリン産生細胞以外での細胞でVenus蛍光は認められないか、を詳しく調べる予定である。
ハイリスク状態におけるクリプトコックスに対する易感染性の免疫機序の解明

HIV陰性者において、糖尿病やステロイド投与などがクリプトコックス症の主なリスク因子と考えられている。これらは宿主の免疫不全状態が原因であると考えられているが、クリプトコックス症においてこれらリスク因子が免疫応答に与える直接的な影響は解明されていない。本研究では、クリプトコックスを認識し、感染防御免疫のトリガーとして働くパターン認識受容体及びその下流のシグナル伝達機構や免疫応答に着目し、培養細胞や動物モデルを用いた解析を通して、ハイリスク状態におけるクリプトコックスに対する易感染機序を解明し、クリプトコックス症の発症予防法の開発を目指す。
高磁束密度を使ったローレンツ浮上モータの開発と応用

(1)モータと磁気軸受を一体化する浮上モータで、浮上性能と回転性能の両立するローレンツ型を研究してきた。今回はこれに磁束集束技術を応用し、きわめて高性能なセルフベアリングモータを開発した。(2)応用としては、非接触型の人工心臓ポンプと、歩行補助ロボットなど小型で高トルクモータをターゲットに開発した。今回はこれに磁束集束技術を応用し、高性能化を目指して開発する。(2)応用としては、非接触型の人工心臓ポンプと、歩行補助ロボットなど小型で高トルクモータをターゲットに開発を行う。ローレンツ磁気浮上モータの高性能化のためには、磁束密度を高く設計する必要がある。この目的のために、磁束集束永久磁石配列ロータ1個とハルバッハ配列ロータ2個を設計・製作した。ハルバッハ磁石ロータはバックヨークにアルミと鉄を用いた2種で、性能比較を行った。また薄いスロットレス巻き線を高密度(90%以上の線密度)で配置できる、平角線をプレス成形する技術を用いたステータを製作した。これらを使って実験した結果、従来の2-3倍の浮上力と回転トルクが発生できることを確認した。従来製作していた面着磁ロータでは、磁束密度の高調波成分で浮上力や回転トルクに脈動を発生するが、今回開発した浮上モータでは基本波成分が大きいので、そのような問題が発生しないことも確認できた。また製作した3種類の高磁束密度ロータの中では、鉄バックヨークのハルバッハ配列ロータが最も良好な性能を示した。しかし磁束密度をあまりに強くしすぎたために、磁気吸引力が強すぎて実験が困難となることも多かった。そのために完全磁気浮上回転までには至っていない。新年度早々に実験装置の手直しを行い、完全磁気浮上回転を実現して詳しい実験データを採取する予定である。これと平行して、磁束を強くするだけではなく、ロータを軽量化しながら強い磁界を作り出す方式を研究し、第2の実験装置を設計・製作する予定である。このモータは、人工心臓応用に適した構造で設計し、回転型人工心臓の高性能化に貢献する。昨年度は、磁束集束永久磁石配列ロータ1個とハルバッハ配列ロータ2個(バックヨークにアルミと鉄)を製作し、性能比較を行った。また薄いスロットレス巻き線を高密度で製作できる、平角線をプレス成形する技術を用いたステータを製作した。製作した3種類の高磁束密度ロータの中では、鉄バックヨークのハルバッハ配列ロータが最も良好な性能を示した。しかし磁束密度が強すぎ、負バネ係数が高くなり実験が困難であった。本年度は昨年困難であった実験装置の手直しを行い、強い浮上特性と浮上回転特性の測定に成功し、学会発表と論文集投稿を行った。この結果から、磁束を強くするだけではなく、ロータを軽量化しながら強い磁界を作り出す必要性が分かったので、それらを考慮した人工心臓用の小型浮上モータを設計・製作した。このモータは浮上回転に成功し、基本特性を測定した。小型の割には、強い浮上力と回転トルクを確認した。しかしモータとしては同期モータ制御しかしていないため、回転位置が不安定で充分な性能が出ていない。現在、回転角を検出してサーボモータ制御をするための方式を検討している。新年度はこの改造を行い、安定度の高い状態で浮上特性と回転特性を測定し、学会等の発表・論文投稿を行いたい。また初年度の実験装置で確認した強いトルク特性を生かせる、ロボット用の超高トルクモータの開発も行っていきたい。昨年度までの結果から、磁束を強くするだけではなく、ロータを軽量化しながら強い磁界を作り出す必要性が分かったので、それらを考慮した人工心臓用の小型浮上モータを設計・製作した。本年度は、回転角を検出してサーボモータ制御をする方式を取り入れ、安定度の高い状態で浮上特性と回転特性を測定した。埋め込み可能な大きさの人工心臓として使用可能なように、ホール素子を使った角度検出を取り入れ、9000rpmを越える安定な浮上回転に成功している。23年度(繰り越し分)磁気浮上モータを血液ポンプ用に製作し直して遠心ポンプを製作し,目標とした人工心臓ポンプを開発している。23年度の残りの期間で,ポンプとしての性能を確認する予定である。ロボット用モータの開発に関しては,従来効率の悪化や信頼性の問題を解決するため,超高トルクモータを開発する必要があった。磁界解析を使って磁束集束と扁平なアウターロータモータを設計し,歩行補助に使える(足の関節に付けられる)20Nmの高トルク

モータを設計した。内部に1/6の遊星歯車減速機を持たせることを前提に,歩行に充分なトルクを得られる見通しを得た。このモータ部分のみを設計して発注し終えている。昨年度までの結果から、磁束を強くするだけではなく、ロータを軽量化しながら強い磁界を作り出す必要性が分かったので、それらを考慮した人工心臓用の小型浮上モータを設計・製作した。このモータは浮上回転に成功し、基本特性を測定した。小型の割には強い浮上力と回転トルクを確認し,サーボモータ制御を適用して9000rpmを越える安定な浮上回転に成功した。本年度は、磁気浮上モータを血液ポンプ用に製作し直して遠心ポンプを製作し,目標とした人工心臓ポンプを開発した。昨年度開発した浮上モータを基本として,非接触回転可能な人工心臓ポンプを製作した。遠心ポンプとして性能を確認したが,人工心臓ポンプとしては充分な性能を確認することが困難であった。最大の理由は,モータステータとロータ間で血液の入るギャップが不足しており,早急に改良して最終性能を確かめる予定である。ロボット用モータの開発に関しては,従来はハーモニックドライブのような高減速機構を使ったために,効率の悪化と信頼性が悪い問題があった。これらの問題を解決するため,超高トルクモータを開発する必要がる。まず,磁界解析を使って磁束集束と扁平なアウターロータモータを設計し,歩行補助に使える(足の関節に付けられる)大きさで,20Nmの高トルクモータを試作した。内部に1/6の遊星歯車減速機を持たせることを前提に,歩行に充分なトルクを得られるモータである。このモータ部分のみを設計・製作したところ,回転トルクは設計値に近い値が得られていることを確認した。しかし思った以上にトルクリップルが大きく,充分な性能確認が出来ていなかった。
一分子生理学の立ち上げ:一個の分子機械の機能と構造変化の直接観察

ATP駆動の回転分子モーターであるF1-ATPase(以下F1)は、回転子であるγサブユニットを外力により逆回転させると、ADPと燐酸からATPを合成する。すなわち、化学エネルギー(ATP加水分解により得られる自由エネルギー)と力学エネルギー(回転に伴う力学的仕事)をどちら方向にも変換できる、可逆なエネルギー変換分子機械である。ATP分解のほうがどのように回転を生み出すかにかんしては、かなり分かってきたが、合成のほうはまだ基礎データもほとんどない。我々は、合成機構に迫るため、γサブユニットに1μm程度の磁気ビーズを結合させ、電磁石によりビーズを自在に回転させる系を開発した。磁力が強いときは、正逆どちらの方向にもビーズ(従ってγ)を何回転でも回転させることができ、この操作でF1は壊れない。ところが磁力を弱めていくと、溶液条件により回転させられる場合とできない場合があることを発見した。逆回転(ATP合成方向)の場合、溶液中にADPと燐酸が両方存在するとき、弱い力でも回転させられる。正方向の場合は、ATPの存在が回転を容易にする。当たり前のようであるが、これらの結果は、F1の中にスイッチが内蔵されていて、必要な基質を溶液中から結合できたときに始めてスイッチがオンになって先に進める(回転を続けられる)仕掛けになっていることを意味する。効率よいエネルギー変換のためには(空回りを防ぐには)スイッチが必要なことは予想されていたが、実験的証明は初めてと思われる。F1の構造から、各スイッチ(基質ごとに異なると予想)は120度おきに3個あると考えられるが、実際にそれを示唆するデータが得られた。たんぱく質分子に力を加え、あるいはたんぱく質分子の出す力を測定するため、磁気ピンセットシステムを構築している。従来のシステムは、磁力が弱くかつ高速回転ができなかったので、電気系を作り直し、1μm程度の磁気ビーズを10Hz以上で確実に回せるようにした。また、等速回転だけでなく、回転角度を自在にプログラムできるシステムも構築した。磁気ピンセットシステムは、磁気ビーズを用いてたんぱく質分子に引力ないし回転力を印加するものだが、市販の磁気ビーズは大きさ・形・磁気的性質などが不揃いで、きちんとした分子操作ができない。均一なビーズを調製するため、セルソーター、沈殿法、フィルター法など種々試みているが、まだ満足いく結果が得られていない。たんぱく質分子の出す力の計測には、現状では、ビーズ1個1個につき較正が必要となる。回転力に関し、ブラウン運動を利用した較正法を開発した。上記のシステムを用い、F1-ATPaseを強制逆回転させ、合成されるATP量をきちんと測定することを試みている。磁気ピンセットの力が強くなったおかげで、大きめのビーズも磁場に追随するようになり、見かけの合成効率が向上した(本来の合成効率に近い値が得られるようになったと解釈している)。まだビーズの不均一性の問題が完全に解決していないが、基質(ADPおよび燐酸)濃度依存性、回転速度依存性などの予備的測定を開始した。ATP合成を最初に証明した報告における条件は、十分基質濃度が高いものと考えていたが、実際には、基質濃度をさらに上げることにより合成効率が上がる傾向があるようである。ATP駆動の回転分子モーターであるF1-ATPase(以下F1)は、外力により逆回転させることによりATPを合成するが、この力学-化学エネルギー変換の仕組みの解明を目指して努力を続けている。一回転あたり何個のATPが合成されるのかを種々な条件下で定量するのが目標だが、定性的証明だけに7年を要した困難なテーマであり、やっと見通しが立ちつつある段階である。逆回転させるには、F1の回転子であるγサブユニットに磁気ビーズを結合させ、これを磁気ピンセット(電磁石)で回転させる。これまで、磁気ビーズの不均一性が大きな問題であった。市販・自作を含めて多種のビーズを試した結果、Seradyn社のビーズを軽く遠心して使うのがよいことが分かった。多くのビーズを、毎秒10回転で回転させられる。観察用チェンバーは、背景光(下記)を減らすためできるだけ薄く、またF1が床面側だけに結合して天井面につかないことが必要である。チェンバーの厚みの制御には大きめのビーズを用い、天井への非特異吸着を防ぐにはあらかじめガラス面をシラン化しておくのがよいことが分かった。ATP合成はルシフェラーゼの発光を利用して検出するが、合成に必要なADPの中にATPが混入して背景光を生じるのが最大の問題である。精製法を工夫し、検出不可能(7桁以上)な所まで混入量を減らすことに成功した。以上のような努力により、磁石による強制逆回転のとき正回転に比べてルシフェラーゼの発光量が大きいという期待通りの結果が出つつあるが、今のところまだ再現性がよいとはいえず定性的な結果にとどまっている。なお、磁力を弱くするとF1の出すトルクを見積もれるが、燐酸はトルクに影響を与えない、などの予備的結果が得られている。

我々は、合成機構に迫るため、γサブユニットに1μm程度の磁気ビーズを結合させ、電磁石によりビーズを自在に回転させる系を開発した。磁力が強いときは、正逆どちらの方向にもビーズ(従ってγ)を何回転でも回転させることができ、この操作でF1は壊れない。ところが磁力を弱めていくと、溶液条件により回転させられる場合とできない場合があることを発見した。逆回転(ATP合成方向)の場合、溶液中にADPと燐酸が両方存在するとき、弱い力でも回転させられる。正方向の場合は、ATPの存在が回転を容易にする。当たり前のようであるが、これらの結果は、F1の中にスイッチが内蔵されていて、必要な基質を溶液中から結合できたときに始めてスイッチがオンになって先に進める(回転を続けられる)仕掛けになっていることを意味する。効率よいエネルギー変換のためには(空回りを防ぐには)スイッチが必要なことは予想されていたが、実験的証明は初めてと思われる。F1の構造から、各スイッチ(基質ごとに異なると予想)は120度おきに3個あると考えられるが、実際にそれを示唆するデータが得られた。
養育期の家族における家族機能と祖父母の心理的発達に関する縦断研究

本研究は、3つの調査より構成された。孫の母親の就業の有無によって祖父母と孫の関わりは異なり、孫の母親が就業している祖父母では、孫育てを担っており、孫は日常生活のなかに存在し、孫を育てる役割のなかで孫との関係性を創造していた。また、孫との接触やかかわりが多いほど、祖父母の心理的well-being得点は高く、それらの因子が高得点の場合、精神的健康得点、主観的健康感も高く評価された。孫の誕生・成長を介して、養育期世代と祖父母世代が相互の役割を尊重しながら、遂行していくことがお互いの発達を促し、家族機能をより促進させることにつながることが示唆された。新しい家族メンバーを迎え、お互いの役割を調整し家族関係を拡大するというダイナミックな発達課題と向き合う養育期初期の家族において、母親就業率が半数に及ぶ現代、養育期の家族の家族機能と最も近い内的な子育て支援者である祖父母の心理的発達との関連を調査し、母親就業や祖父母の支援の違いによる家族機能の変化や特徴および影響因子を明らかにすることは重要と考え、本研究の目的とした。本年度は、養育期の家族の家族機能の様相を明らかにするための分析枠組みについて、母子看護の専門家よりスーパーバイズを受け再検討を行った。また「祖父母となることの発達」を構成する因子として、先行研究により明らかとなった「社会・文化的関心の拡大」「世代間の親和」「精神的柔和・安定」「未来継承性・自己存在感の確認」「配偶者との親和」「衰えの実感」の6因子を基盤に幼児期の孫をもつ祖父2名・祖母2名(夫婦2組)にインタビューを実施し、孫との関わりや孫支援に関する自身の心理的発達について質的帰納的に分析を行った。孫の母親が就業していない祖父母と孫の関わりは、世話役割より遊びでの関わりが多く、遊びを中心とした関わりのなかで孫との関係性を発達させていく傾向がみられた。一方、孫の母親が就業している祖父母では、孫育てを担っており、孫は日常生活のなかに存在し、孫を育てる役割のなかで孫との関係性を創造していた。また、祖父と祖母は孫育てのなかでの協同作業を通して新たな面の再発見を体験し、お互いの衰えを認め合い協力して孫育てと向き合う姿が浮き彫りとなり、孫育てを通して、関係性の再構築を行っていた。次年度は、本年度の調査結果を踏まえ、養育期家族の家族機能と祖父母の心理的発達に関する縦断調査を実施する予定である。今年度は、祖父母になる過程における「祖父母の心理的発達」の変化と成人した子と親(祖父母)との関係を検討するために昨年度から検討してきた分析枠組みを基に予備調査を祖父母に行った。しかし、予備調査で使用した「祖父母となることの発達」尺度の構成因子(下位尺度)「社会・文化的関心の拡大」「世代間の親和」「精神的柔和・安定」「未来継承性・自己存在感の確認」「配偶者との親和」「衰えの実感」だけでは、はじめて孫を持ち、祖父母になる過程の前後の変化を全て明らかにできない可能性があることが明らかとなった。壮年期老年期世代の高齢者にとっては、様々な心身の変化や社会環境の変化が訪れ、それらに適応しながら、さらに豊かな老年期を送ることを希望する。このような社会文化的生活におけるWell-Beingには、個人の加齢パターンや社会的活動と人生に対する満足度の関係などが影響し、従ってそれらを質問項目に追加する必要があることが示唆された。また、成人した子と親(祖父母)との中期親子関係においては、「母親ー娘」間の親密な関係だけでなく、「父親ー息子」関係が見出され、また、孫の親の就労・家族形態が「一人親家庭」の場合、親子関係満足度は低く、そこには媒介する孫とのかかわり方の影響が示唆された。次年度は、これらの項目を追加し、縦断調査を行う予定である。本研究の目的は、妊娠期から乳児期に至る家族の家族機能と祖父母の心理的発達の関連性を明らかにし、母親就業や祖父母の支援の違いによる家族機能の特徴と影響因子を明らかにすることである。今年度は、調査対象者を第一子を妊娠している妊婦とその実父、実母とし、出産前の妊娠89ヶ月時、児が誕生後12ヶ月時に焦点をあて、前方視的に追跡調査をし、祖父母の支援の違いによる家族機能の特徴と影響因子を明らかにした。調査時期は産後の母親の不安が最も高いと指摘されている産後1か月(生後1か月)頃を設定した。養育期(母親)の家族が共働きの場合、祖父母家族と同居もしく近距離の場所に居住しする割合が高かった。祖父母と孫とのかかわりや孫の世話頻度が高いほど、産後1ヵ月時点の養育期(母親)家族の家族機能は高く、また、産褥育児生活肯定感も高い結果が得られた。

また、孫との接触やかかわりが、祖父母の心理的well-being尺度の「人生における目的」因子、「自己受容」因子に影響を与えており、またそれらの因子が高得点の場合、精神的健康とともに主観的健康感も高く評価されていた。孫の誕生や孫との接触、かかわりは、祖父母世代の心理的well-beingに影響を与える重要な因子であることが改めて明らかとなった。孫の誕生・成長を介して、養育期世代と祖父母世代が相互の役割を尊重しながら遂行し、発達を遂げることが、家族機能をより促進させることにつながることが提示された。当初の予定では、予備調査後に本調査に入る予定であったが、予備調査に使用した尺度だけでは、本研究の中心となる概念である「祖父母の心理的発達」の様相を明らかにできない可能性があることが判明したため、母子看護の専門家にスーパーバイズを受けたところ、研究内容と方法を見直す必要性が生じたため、時間をかけて再検討を行い、当初の予定より遅延した。25年度が最終年度であるため、記入しない。今後、今年度の「祖父母の心理的発達」の調査項目および中期親子関係の検討結果を踏まえて、妊娠後期の妊婦とその実父母に対し、家族機能と祖父母の心理的発達に関する項目を調査し、その後、出産後4ヶ月時点で再度調査を行い、養育期初期の家族機能と祖父母の心理的発達の関連を縦断的に明らかにする予定である。
アラインの多成分連結反応を基盤とする芳香環オルト位ダブル官能基化

極めて高い反応性,および求電子性を有するアラインに,アミンやアミノシラン等の飽和型中性求核剤を作用させて発生させた双性イオンを鍵中間体とし,そのアニオン部位をカルボニル化合物や二酸化炭素等の求電子剤で捕捉することで,アラインを反応母体とする新しい三成分連結反応を開発した.これらの反応を基盤とし,芳香環オルト位を一挙にダブル官能基化するための新しい手法を確立するとともに,多様な置換芳香族化合物の直截的合成を達成した.極めて高い反応性,および求電子性を有するアラインに,アミンやアミノシラン等の飽和型中性求核剤を作用させて発生させた双性イオンを鍵中間体とし,そのアニオン部位をカルボニル化合物や二酸化炭素等の求電子剤で捕捉することで,アラインを反応母体とする新しい三成分連結反応を開発した.これらの反応を基盤とし,芳香環オルト位を一挙にダブル官能基化するための新しい手法を確立するとともに,多様な置換芳香族化合物の直截的合成を達成した.アラインが極め高い求電子性を有することを基盤として,アラインを反応母体とした新規成分連結反応を開発することを目的とした.特に飽和型の有機ケイ素化合物を求核剤とした反応開発に焦点を絞り,芳香環の新しいオルト位ダブル官能基化法を創出することを目指した.まずアミノシランを求核剤として採用し,アラインへの付加で生じる双性イオンのアリールアニオン部をアルデヒドで捕捉することで,芳香環オルト位にアミノ基とヒドロキシメチル基を同時導入する新反応を開発した.反応には種々の芳香族アルデヒドが適用可能で,その電子状態・立体的環境によらず高収率で三成分カップリング体を得ることができた.また,反応の官能基許容性も高く,シアノ基・エステル基を有する芳香族アルデヒドとの反応では,それら反応性官能基を損なうことなく生成物を与えた.アミノシランの適用範囲もに同様に広く,多様なオルトアミノベシズヒドロール誘導体の一段階含成を達成した.非対称アラインを用いた際の位置選択性は置換基の電子的・立体的影響によって制御され,4-メトキシベンザインでは等しい比の位置異性体混合物を与えたのに田対し,3-メトキシベンザインではメトキシ基から離れた位置にアミノ基が導入された生成物のみが選択的に生じた.さらに,エステル基をホルミル基のオルト位に導入した芳香族アルデヒドを求電子剤として用いることで,三成分カップーリングで生じたヒドロキシル基とエステル基との間の分子内環化を誘発し,ラクトン骨格を構築する反応も開発した.本研究では,反応性中間体アラインを反応母体とする新しい三成分連結反応を開発し,芳香環オルト位を一挙にダブル官能基化するための新しい手法として確立することを目的とした.具体的には,極めて高い求電子性を有するアラインに,飽和型中性求核剤を作用させて発生させた双性イオンを鍵中間体とし,そのアニオン部位を任意の求電子剤で捕捉することで目的達成を図った.昨年度同様,飽和型中性求核剤にはアミノシランを採用し,アセトフェノンやベンゾキノンのようなケトン類を用いた三成分連結反応を新しく開発することに成功した.既にアルデヒドを求電子剤として用いる反応は達成済みであったが,これにより,より広範だカルボニル化合物が本三成分連結反応に適用可能であることを明らかにずるとともに,多様なアミノ基・ヒドロキシメチル基を芳香環オルト位に同時導入できることを実証した.また,カルボニル化合物のみならず,スルホニルイミン類も本反応における求電子剤として利用可能であることを新たに発見した.反応には種々の芳香族アルドイミンが適用可能で,中程度の収率であったがイミンの電子状態によらず三成分カップリング体を得ることができ,アミノ基とアミノメチル基で芳香環オルト位を同時に官能基化する手法を開拓できた.一方,メシチル基のような嵩高い置換基を有するスルホニルイミンの反応は定収率に留まった.さらに,カルボニル化合物類縁体と見なすことができる二酸化炭素を求電子剤とし,二酸化炭素をC1源として活用する三成分連結反応の開発にも成功した.興味深いことに本反応では飽和型求核剤としてアミンを利用することができ,アミノシランを必要とする上記反応に比して合成的利便性は格段に向上している.本手法により,芳香族アミノ酸(アントラニル酸)誘導体の多様性指向型合成法を確立できた.
カルシニューリンのアポトーシス誘導能を利用した顎関節症の治療

タクロリムスやその構造類似体が、神経細胞死を抑制することが数多く報告されている。その作用機序としては免疫系でのシクロスポリン等の研究とのアナロジーからカルシニューリン活性の抑制によるとされてきた。しかしながら、タクロリムスの細胞死抑制作用とカルシニューリンの活性が必ずしも相関しないことが明らかになりつつある。われわれはカルシニューリンAの制御因子として研究されてきたカルシニューリンBが単独で細胞死に関与するという全く新しい作用を見出した。この細胞死制御メカニズムを解明することが本研究の目的である。われわれのこれまでの研究で、カルシニューリンがカスパーゼを活性化し、アポトーシスを誘導することが明らかになった。この結果を破骨細胞において詳細に検討することにより、顎関節症などにおける過剰な炎症反応をコントロールし、難治性の本疾患の基本療法となる可能性が予想される。東京大学の加藤茂明教授らのグループは女性ホルモンのエストロジェシが破骨細胞にアポトーシスを誘導することを見出し、更年期のエストロジェン減少が骨粗鬆症を引き起こすメカニズムについて発表している(CELL130,811-823,2007)。このように、破骨細胞のアポトーシスは生理的にも非常に重要であると考えられ、そのコントロールは顎関節症のみならず多くの骨疾患の予防や治療につながると考えられる。実際に破骨細胞を用いた研究にまでは至らなかったが、この結果は、今後骨吸収を抑制する薬剤の開発につながると考えられ、われわれの成果が顎関節症などの骨吸収性疾患の治療に役立つことが期待される。カルシニューリンによるアポトーシス誘導メカニズム解明の途上で新規タンパク質(GenBank No.AK056303)を発見し、Monadと命名した。以後、われわれの研究はこの新規タンパク質Monadの研究とそれまでのカルシニューリンの研究の継続発展とに大別されたが、その双方についてこれまで得られた成果を概説する。MonadはWD40リピートを2個持つ以外には既知のドメインやモチーフ構造を持たない。定量的RT-PCR法にて、ヒト組織中のMonadのmRNA分布を検討したところ、精巣を始め心、腎、膵、胎盤、脳などに広く分布していた。HEK293細胞にMonad遺伝子を過剰発現させた細胞に、TNF-αとシクロヘキシミドを作用させたところ、アポトーシスを起こした細胞数が約5倍に増加した。この細胞死誘導はカスパーゼの阻害薬で抑制された。また、Monad発現細胞ではTNF-α刺激濃度に依存して、前駆体のプロカスパーゼ-3が減少すること、カスパーゼ分解産物のPARPが増加することを確認している。以上より、Monadによる細胞死刺激時のアポトーシス促進機構は、カスパーゼ活性化を介した機序であることが示唆された。顎関節症などにおいて、その症状の増悪には、TNF-αなどの炎症性サイトカイン刺激による炎症反応が重要な役割を果たしている。このTNF-αが潜在的に持つアポトーシス誘導能を利用して炎症細胞にアポトーシスを起こすことができれば、結果的に炎症の抑制につながると考えられる。今後、Monadのアポトーシス誘導能を詳細に検討することにより、顎関節症などにおける過剰な炎症反応をコントロールし、難治性の本疾患の基本療法となる可能性を追求したい。また、顎関節症における破骨細胞活性化の重要性に注目し、マウス骨髄細胞からの破骨細胞分化の系を確立し、破骨細胞分化におけるカルシニューリンの関与について報告した(第79回日本薬理学会年会)。カルシニューリンは触媒サブユニットのカルシニューリンAと調節サブユニットのカルシニューリンBからなる。免疫抑制剤であるタクロリムスが、細胞死を抑制することが報告されているが、その作用機序としてはカルシニューリン活性(ホスファターゼ活性)の抑制によるとされてきた。カスパーゼ3はアポトーシスの最終段階で中心的な役割を果たしている。

われわれはカスパーゼ3を調節する分子の探索を行い、カスパーゼ3を活性化するタンパク質としてラット大脳皮質よりカルシニューリンBを精製した。われわれはカルシニューリンAの制御因子として研究されてきたカルシニューリンBが単独でアポトーシスに関与するという全く新しい作用を見出した。カルシニューリンBがカスパーゼ3の活性化を調節する機構の解明を目的として行われたこの研究はJournal of Biological Chemistryに発表された。この分野の基本文献としては、Wang, et. al. Science284,339-343(1999)があるが、彼らはカルシニューリン活性(ホスファターゼ活性)がアポトーシス誘導に重要との立場に立っている。われわれは彼らの実験結果の一部を確認しつつ、カルシニューリンがアポトーシスに重要ではあるが、その作用はホスファターゼ活性非依存性であるとの結果を得ており、この点がわれわれのオリジナルな点である。このシグナル伝達経路を詳細に検討することにより、顎関節症などにおける過剰な炎症反応をコントロールし、難治性の本疾患の基本療法となる可能性をさらに追求していきたい。
希土類磁石材料の表面収着処理による微構造制御と磁気特性の改善

NeFeB系磁石材料はNd_2Fe_<14>Bを磁石相とする高保持力を有する材料であるが、耐食性および残留磁化の時間劣化など解決すべき課題も多い.そこで、まず耐食性を賦与することを目的としてZn蒸気雰囲気で処理(Zn収着処理)したところ、耐食性が飛躍的に上昇し,材料磁化の時間劣化も抑制でき,しかも再磁化により初期値に回復するなどの目覚しい効果があった。本研究課題では主にSEMとTEMによるナノ構造解析を行い、耐食性向上と磁気特性改善の機構を検討した。その結果、次のような事が明らかになった。2,Zn収着処理を施していないHDDR-NdFeB試料では腐食により磁石粉末表面およびNd_2Fe_<14>B結晶粒界にh-Nd_2O_3とともにα-Feが生成する。3,Zn収着処理を施していないHDDR-NdFeB試料で磁気特性が経時変化により劣化した後に再着磁で初期値に戻らないのはこのα-Feの生成に起因する。4,Zn収着処理を施したHDDR-NdFeB試料(Zn/HDDR-NdFeB)では腐食によりZnOやh-Nd_2O_3は生成するが、α-Feはほとんど生成しない。5,Zn/HDDR-NdFeB試料ではα-Feが残留していないので、再着磁により時残留磁化の強さはほとんど初期値に近い数値にまで回復する。6,以上のことから、Zn収着処理がHDDR-NdFeBボンド磁石に対して、耐食性と磁気特性向上に大きな効果があることを明らかにし、それらの特性向上の機構を解明した。電子機器の小型化・軽量化のニーズから高い磁気特性を有するNdFeB系ボンド磁石の開発が望まれており、その原料となる磁石粉末の性能向上を目指した微細組織制御法が盛んに研究されている。しかし、NdFeB磁石はキュリー温度が低く、耐食性も悪いという欠点がある。さらに、高温使用において減磁量が大きいという問題がある。本研究では、NdFeB磁石粉末の表面にZn収着処理を行い、耐食性と磁気特性の向上を図ることを目的とした.本年度では、亜鉛収着による防食機構を明らかにするために、透過電子顕微鏡を用いて、微構造の詳細な解析を行った.NdFeB結晶粒が数百nmのHDDR磁石粉末では、350°Cで3hrのZn収着処理を施すと、粉末表面に約1□m厚の表面被覆層が形成されており、さらに粉末表面から約4nmまでの領域にあるNd_2Fe_<14>B結晶粒界部に約40nm幅の粒界被覆層が均一に形成されていた.表面被覆層と粒界被覆層はいずれも10nm程度のFe_<11>Zn_<40>とNdZn_5微結晶粒が混在したものからできており、これが粉末表面やNd_2Fe_<14>B結晶粒界部の腐食を抑制し、耐食性を著しく向上させていると思われる。実際にZn収着HDDR磁石粉末に対して腐食実験を行った結果、微細組織にはほとんど変化が観察されず、高い耐食性を示すことが確認できた。このようにZn収着処理では、粒界に沿って粉末内部に進行していく腐食反応を極めて微量の粒界被覆層形成により効果的に防いでおり、これが磁気特性を低下させない要因である。さらに微細な30100nm程度のNd_2Fe_<14>B粒からなる液体急冷MQPB磁石粉末に、同様な条件でZn収着処理を施しても、粉末表面に薄い表面被覆層が形成されるが、粒界被覆層は出現しなかった。

このようなMQPB磁石の高温減磁はあまり改善されないことから、粒界被覆層が重要な役割演じることが明らかになった。NdFeB系磁石合金は、近年の電子機器および自動車工業において特に注目されている材料で,既に広く実用化されてきている。しかしながら、NdFeB磁石材料は耐食性に乏しいという欠点があり、それをどのように克服するかが重要である。本研究では、真空雰囲気内において亜鉛で被覆する(亜鉛収着)技術をさらに発展させるために,収着処理を施した材料での酸化過程を主に透過型電子顕微鏡で研究した。酸化処理後の微細構造は次のようになっていることが確かめられた。磁石合金粉末表面は酸化亜鉛(ZnO)層に覆われている。内部は、Nd_2Fe_<14>B結晶粒界にそって、ほとんどアモルファスに近い状態のネオジム酸化物(Nd_2O_3)と酸化亜鉛相の混合層が形成している。酸化処理後期になって、鉄粒の生成が認められるようになる。これに対して、亜鉛収着処理を施していない材料では激しく酸化腐食され,鉄(Fe)粒の形成が認められる.有磁性の鉄が発生すると、そこが新たな磁区の発生の元になり、残留磁化率の経年低下(減磁)の原因となることが考えられる.実際、亜鉛収着処理を施した材料では減磁率が低く,再着磁によりほとんど回復する。これらの改善は、亜鉛収着により形成された亜鉛表面層とNdFeB結晶粒界でのFe-Zn金属間化合物相により金属鉄相の生成が抑制されたことによることが今回初めて明らかになった.しかしながら、亜鉛収着処理は,長期にわたっての防食能力は余り大きくない。その原因は、表面の酸化亜鉛層があまり強固でないことと、酸化後期にはNdFeB粒界層での金属鉄の形成が抑えきれないことにある。これには、収着材料として亜鉛の他に第3元素を添加することによって、亜鉛酸化物、ネオジム酸化物をそれぞれ複合酸化物となるようにする手段が挙げられる。NeFeB系磁石材料はNd_2Fe_<14>Bを磁石相とする高保持力を有する材料であるが、耐食性および残留磁化の時間劣化など解決すべき課題も多い.そこで、まず耐食性を賦与することを目的としでZn蒸気雰囲気で処理(Zn収着処理)したところ、耐食性が飛躍的に上昇し,材料磁化の時間劣化も抑卸でき,しかも再磁化により初期値に回復するなどの自覚しい効果があった。本研究課題では主にSEMとTEMによるナノ構造解析を行い、耐食性向上と磁気特性改善の機構を検討した。その結果本年度では、次のような事が明らかになった。1,Zn収着処理を施したHDDR-NdFeB試料(Zn/HDDR-NdFeB)では腐食によりZnOやh-Nd_2O_3は生成するが、α-Feはほとんど生成しない。2,Zn/HDDR-NdFeB試料ではα-Feが残留していないので、再着磁により時残留磁化の強さはほとんど初期値に近い数値にまで回復する。3,以上のことから、Zn収着処理がHDDR-NdFeBボンド磁石に対して、耐食性と磁気特性向上に大きな効果があることを明らかにし、それらの特性向上の機構を解明した。さらに、本年度は、NeFeB系磁石材料のリサイクルを念頭に、参加処理により電波吸収材への応用を試みた。その結果,HDDR-NdFeB磁石では、微細なFe粒子が分散した状態になっており、内部微細組織と吸収周波数帯とが強く関連していることが確かめられた。これらの結果は、酸化処理条件によりFe粒径分布を割御することにより、携帯電話などのギガヘルツ帯を広くカバーする吸収材料の開発に寄与する。
虚血による海馬神経細胞の細胞死に関する実験的研究

短時間の脳虚血によって脳の一定の部位の神経細胞は不可逆的な損傷を受ける。この虚血に対する脆弱性を、虚血前の操作によって修飾することが可能であろう。ごく短時間の神経細胞壊死をおこさない程度の虚血負荷は、虚血に脆弱な神経細胞に強いストレス応答を発生させる。他の細胞系を用いた実験系では、ストレス応答をおこした細胞が2回目のストレスに対して耐久性になることが知られている。このことから、動物に軽い虚血負荷を加えた上で、2回目の虚血を加えてみる実験を行なった。砂ネズミに2分間の虚血を加え、その1,2,4,7日後に再び虚血を負荷した。2回目の虚血は5分間とし、2回目の虚血の際には体温と側頭筋温(脳温度を反映する)をモニタ-した。対照群としては1回目に偽手術を加え虚血にはしない群を用いた。対照群にも全く同一の5分間虚血を加えた。5分間虚血の7日後に動物を潅流固定し、パラフィン標本を作製した。この標本から、背側海馬CA1領域の長さ1mmあたりの神経細胞密度を計測した。神経細胞密度は正常で254.7±18.6(SD),対照群では10.9±27.4と著明に低下した。一方,2分間虚血の1日後に5分虚血を負荷した群では103.4±93.1,2日目に5分虚血を加えた群では、176.2±93.7,4日目の群では254.7±18.6,7日目の群では98.6±47.6であった。いずれも有意な耐久性を示した。耐久性を示す時期に、代表的なストレス蛋白であるhsp72の抗体による免疫染色を行なうと、耐久性を示す時期に著明な発現が観察された。以上の結果により、ごく短時間の虚血は一過性に神経細胞を耐久性にすることが明らかとなった。この耐久性は虚血後数日間持続するものであった。同時期にストレス蛋白の発現が認められることから、耐久性の獲得なストレス応答を介するものであると考えられた。
高分解能原子核乾板NITによる宇宙暗黒物質探索実験

本研究は、これまで世界でアイディアのなかった、固体検出での暗黒物質の方向性検出を目指した、研究開発が主たる目的である。特に、ここではこれまでの原子核乾板実験で不可能であった1μm以下の飛跡を以下に自動で高速に読み出せるかという研究開発を中心に行ってきた。本年度において、これまで開発してきた原子核乾板の引き伸ばしによって1μm以下の飛跡を読み出すコンセプトを発展させ、原子核乾板に対し水平方向に入った飛跡に関して、原子核乾板を非常に等方的に引き伸ばすことのできる技術開発におけるブレイクスルーによって、光学的な飛跡認識手法を確立することができた。また、この手法における飛跡に認識における定量ほ評価を行うと同時に、自動飛跡認識用画像処理システムを開発し、150nm以上の飛跡に関して90%近い効率で読み出せるシステムを構築することができた。そして、最終的に最も実用的な実験である中性子による反跳核の飛跡解析を行い、初めて中性子によって反跳された原子核における100nmオーダーの飛跡を自動で認識し、前方散乱角度分布の測定に成功した。さらに、新たな読出しシステムとしてX線顕微鏡システムの開発を行い、光学顕微鏡解析後の詳細解析ツールとしてのX線顕微鏡の有効性を実証した。本年度は特に、WIMPによる反跳原子核の飛跡の高速読み出しのための研究、およびバックグラウンド(electron,γ線)の除去手法の開発に重点を置いた。反跳原子核の飛跡は、原子核乾板中では数100nmしか走らないため、光学顕微鏡での観察は不可能であるが、暗黒物質のような相互作用の弱い反応の探索においては大質量の検出器が必要なため、光学顕微鏡での飛跡の読み出しが必要である。この解决手段として、NITを引き伸ばす技術開発を行い、飛跡が数μmとなり、光学顕微鏡での飛跡認識を可能にした。さらに、引き伸ばされた飛跡を自動飛跡読み取り装置による自動認識のR&Dを行った。NITを読み出すために、既存の読取装置を改良し、光学的なカットのみで認識効率が80%以上出せることを示した。飛跡として認識されるものは、銀粒子が2つ以上近接したものである。この際光の共鳴波長が単独の銀粒子の場合に対しシフトすることがシミュレーションで示された。これにより、引き伸ばす前に散乱光のみで高速に飛跡候補を選びだすことができることが示された。次年度において実用化に向けた開発を行っていく。バックグラウンドの除去に関して、NIT自身の感度調整を行うためにハロゲンアクセプター増感処理を開発し、感度の調整を可能にした。これによって電子のバックグラウンドを5桁以上除去することが可能であることを示した。また、速度の遅い反跳原子核とバックグラウンドでは現像の種になる潜像核の形成場所が異なることがわかってきており、バックグラウンドに対して感度が低いが、反跳原子核に対しては感度が高い現像が可能であるがわかった。これにより、大幅なバックグラウンドの除去が期待できる。本課題は、現在の自然科学において最も解決すべき課題の一つである暗黒物質探索のための高分解能原子核乾板NITの開発である。これは地球に到来する暗黒物質の方向を検出することができる唯一の固体飛跡検出器であり、世界の他の検出器が見ることができない領域の情報を見ることが可能である。本年度の主な開発要素として、NITの中に残す暗黒物質によって反跳された原子核の飛跡は1μm以下であり、この光学分解能を超えた飛跡を光学顕微鏡でいかに効率的に読みだすかが非常に重要である。本年度、これまでの開発、具体的には飛跡を引き伸ばすことによる飛跡認識手法を発展しつつ、発想を転換することで、今後の実験開始に向けた非常に現実的な手法の開発を行うことができた。これは、2倍程度引き伸ばすだけで、飛跡を構成している銀粒子の形状の変化を捕える手法であり、非常にシンプルな画像処理によって、90%以上の効率で飛跡を選び出すことができた。今後、自動ステージによる画像取得システムの構築によって、実際のバックグラウンドスタディを行っていく。また、これまでNITなど原子核乳剤は企業が開発してきたが、さらなる乳剤開発の発展と低コストでの定常的な乳剤製造のために、これまでNITを現場で開発されていた企業のOBおよび製造装置を第一線で開発してきた方と全面的な協力をし、原子核乳剤ファシリティを構築した。これにより、さまざま開発が効率的に行えるようになると同時に、暗黒物質の方向検出実験を低コストでスピーディに行える体制ができたことになる。次年度で、読み出しシステムの開発、および定常的なNITの製造体制を構築し、プロトタイプによるテスト実験の開始を目指していく。

そして、最終的に最も実用的な実験である中性子による反跳核の飛跡解析を行い、初めて中性子によって反跳された原子核における100nmオーダーの飛跡を自動で認識し、前方散乱角度分布の測定に成功した。さらに、新たな読出しシステムとしてX線顕微鏡システムの開発を行い、光学顕微鏡解析後の詳細解析ツールとしてのX線顕微鏡の有効性を実証した。
ロンドン・タイムス特派員フランク・ホーレーの日本報道と自筆原稿の情報化研究

1.【資料の整理】前年度にデーター化した記事の不備を補い、必要に応じて再度撮影・スキャニング・CDROM化の作業をおこなった。2.【記事見出しのデーター化】前年度に整理・分類した新聞記事の英文見出し(Head Line)を、データー化し、収集原文記事との対応化に着手した。3.【論文執筆】論文「戦前宝玲文庫」の成立について(その一)」を大学『生活文化研究所年報』第17輯に掲載した。著書『書物に魅せられた英国人;フランク・ホーレーと日本文化』を吉川弘文館より刊行。本研究成果の一部とした。4.【国内邦字新聞記事との対応化についての問題の発生】・国内邦字新聞とザ・タイムズ記事との対応化実態を検討する中で、必ずしもザ・タイムズ記事が国内記事となっていないことが判明した。しかも、見出しの形式に差異があり、容易に対応化できないことが判明した。これは、研究計画年度を終了した後の課題として作業を継続する。1.【資料の整理】筆者が収集したフランク・ホーレー遺品の打電記事(ホーレー談:約3000件)原稿と、残された切り抜き記事を編年順・記事の種類別に整理し、それぞれにバーコードを含めた個別番号を付した。ポジカラーフィルムに撮影し、スキャニング(Nikon Cool scan4000使用)及び転換サービスを利用して、画像(2600駒)をCDR化し、さらにDVD-RAMに一元化した。2.【当該年度(1945/52)ロンドン・タイムス記事の索引の作成】掲載記事と切り抜き記事との照合を行なうために、索引データーベース(キーワード:東京・日本・マッカーサー)8,626件を作成した。これをノートパソコン(MC-R700>に組み込み、マイクロフィルムの当該記事を見出し得る環境を構築した。3.【米国在住フランク・ホーレー遺族・ハワイ大学図書館への調査訪問】カリフォルニア・バークレー在住の息子ジョン・ホーレーを尋ね、筆者の今後への研究協力を依頼した。さらに、ハワイ大学図書館[坂巻・ホーレーコレクション]における、調査を行なった。4.【論文執筆】論文「ロンドン・タイムス特派員としてのフランク・ホーレー」を大学『生活文化研究所年報』第15輯に掲載した。1.【資料の整理】前年度に整理した打電記事(ホーレー談:約3000件)原稿と切抜記事に加えて、新たな資料(分類「Mailer」200件)の発見があった。これらそれぞれにバーコードを含めた個別番号を付し、ポジカラーフィルムに撮影し、スキャニング(NikonCoolscan4000使用)及び転換サービスを利用して、画像をCDR化し、さらにDVD-RAMに一元化した。2.【前年度作成資料の全文印刷】掲載記事と切り抜き記事との照合作業を行なうために、全文資料の冊子版を作成した。3.【国内邦字新聞の確保整備】国内邦字新聞との比較を行なうために、当該年度(194652年)朝日新聞を確保し、環境準備を行なった。4.【論文執筆】論文「ロンドン・タイムス特派員としてのフランク・ホーレー(その2)」を大学『生活文化研究所年報』第16輯に掲載した。著書『書物に魅せられた英国人:フランク・ホーレー』を著述し、吉川弘文館より9月に刊行予定である。3.【論文執筆】論文「戦前「宝玲文庫」の成立について(その一)」を大学『生活文化研究所年報』第17輯に掲載した。4.【国内邦字新聞記事との対応化についての問題の発生】国内邦字新聞とザ・タイムズ記事との対応化実態を検討する中で、必ずしもザ・タイムズ記事が国内記事となっていないことが判明した。
筋萎縮性側索硬化症 (ALS) 発症機序の解明並びにその治療薬の探索

1.VGF遺伝子導入マウスの作製本マウスを作製することにより、様々な研究へ応用していく事を目的として実施した。今年度は、VGFトランスジェニックマウスの繁殖を行い、高発現ラインの絞り込みをすることに成功した。今後は、VGFマウスの大量繁殖・維持そしてALSマウスとの交配によりダブルトランスジェニックマウスを作製し、VGFのALS病態に対する作用をin vivoで検討していくことが課題である。2.アストロサイトからのGPNMBの分泌SOD1^<G93A>マウス脊髄において運動ニューロン同様GPNMBタンパク質を発現していたアストロサイトに注目した。MockおよびSOD1^<WT>発現細胞両群間では培養上清中のGPNMB含有量に差が認められなかったが、SOD1^<G93A>発現細胞では他の二群に比べ有意(P<0.01)に増加していた。さらに、培地中のGPNMB量増加に伴い、有意(P<0.05)なMMP3タンパク質の活性化(active-MMP3)およびMMP9(pro-MMP9)タンパク質の発現量の増加が認められた。このことから、in vivoで認められたGPNMBの増加はアストロサイトより分泌されたGPNMBに起因することが示唆された。3.ALS病態に対するGPNMBの作用(G93A/GPNMBマウス)を作製した。V5標識GPNMBタンパク質は、G93A/GPNMBマウス脊髄中で顕著に増加していた。GPNMBの過剰発現により、ローターロッドの保持時間および発症の有意(P<0.01)な遅延が認められた。(1)VGF遺伝子導入マウスの作製本マウスを作製することにより、様々な研究へ応用していく事を目的として実施した。現在、F1マウスまで作製することができている。今後は、RT-PCR法およびウェスタンブロット法を用いて、各臓器へのVGFの発現量の比較を行い、VGF/SOD1^<G93A>ダブルトランスジェニックマウスの作製に注力していく。1)SUN N8075は、SODI^<G93A>誘発運動神経細胞死に対して保護作用を示さなかった。原因として、NSC-34細胞がSUN N8075に対して感受性が低いこと、またSUN N8075のVGF誘導率が低いことなどが考えられる。保護作用を示さない原因を追求していくこと、およびその原因に付随した本薬剤の改良がこんご求められる。2)一方、SOD1^<G93A>誘発細胞死に対するVGFペプチドの保護作用は0.01μMより認められた。さらに、VGFペプチドを添加することにより、細胞死は認められないが細胞の増殖能の低下が観察された。本データは、VGFの神経細胞保護作用を示唆するのみならず、細胞の増殖抑制・分化促進に関与していることを示した、新たな知見である。今後は、VGFペプチドの神経細胞保護作用メカニズムの解明を行うと同時に、分化に対する作用も検討していく。(3)運動神経細胞死に対するGPNMBの作用GPNMBのN末端部分ペプチドを添加すると、0.25μg/mLよりSOD1^<G93A>誘発運動神経細胞死を抑制することが明らかとなった。過去の報告より、細胞外GPNMBペプチド断片は、ERK1/2およびp38のリン酸化を亢進することが明らかとなっている。これらの知見より、GPNMBの受容体が存在することが推測される。さらにGPNMBノックダウンにより脊髄運動神経細胞(NSC-34)の増殖能および生存率が減少する事を確認した。(現在論文投稿中)1.VGF遺伝子導入マウスの作製本マウスを作製することにより、様々な研究へ応用していく事を目的として実施した。当初の目標であるVGFトランスジェニックマウスは、現在F1マウスまで作製することができており、予定通りに進んでいると言える。また、NSC-34細胞を用いることにより、VGFの神経保護作用を示すことができたこと、さらにVGFが増殖抑制・分化促進に関与している新たな知見を示したことより、計画以上に進展していると判断した。申請時に示した研究年次計画に基づき、(1)VGF/SOD1^<G93A

>ダブルトランスジェニックマウスを用いた経時的脊髄組織の変化の観察(2)NSC-34細胞を用いたVGFの機能解析を検討する。また、本年度に得られた成果を基に、新たに示されたVGFの分化誘導作用を明らかにする試験を同時に並行して検討する。最終的に、VGFが運動神経をはじめ、神経細胞の分化誘導そして生物の発生に関与しているのか否かを突き止めていきたい。
ファジィ理論に基づく意思決定の心理的支援の研究

人間は、個人および集団の意思決定において、漠然とは意識してはいるが、明確には問題構造をとらえられないことが多く、それがしばしば心理的、社会的な問題を引き起こす。そのような意思決定過程においては、漠然と意識している問題を、その個人の主観性を最大限に生かしながら、構造化して呈示してやることが有効な心理的支援となり得ると考えられる。そこで、本研究は、意思決定の支援に、人間の判断の主観性やあいまい性を定量化するファジィ理論を導入することを試み、その有効性を探り、さらにはコンピュータを用いた対話形式の意思決定支援システムを作成することを目的として行なわれた。具体的な問題としては、高校、大学卒業時の進路選択に対する意思決定を取り上げた。まず、生徒、学生に対して質問紙調査を行い、それに基づいてファジィ推論による意思決定モデルを展開した。さらに、モデルの予測と実際の進路選択との比較から、モデルの有効性を確認した。現在は、そのモデルを用いたコンピュータによる対話形式の意思決定支援システムの作成を進めている。今後は、どのような形式で意識構造をフィードバックすることが有効な心理的支援になるかを探っていく予定である。現在のところ、ファジィ構造モデル、ファジィグラフなどにより、構造化して呈示するシステムを考えている。また、ますます重要になるであろうパソコン・ネットワークによる協同作業課題も本研究で試みた手法で意思決定支援が可能であると考えられるので、今後は、集団意思決定に関する応用を探る予定である。