hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
インターフェロンIRFファミリー転写因子活性化の役割の解析

IFN-α/βによる抗ウイルス応答の発現メカニズム及び病原体認識受容体であるToll-like receptor (TLRs)下流でのIFN遺伝子誘導へ至るシグナル伝達経路の解明に焦点を合わせ,特にこれまでウイルス感染によるIFN-α/β産生に関与することが知られているIRF (interferon regulatory factor)ファミリー転写因子との関連性に着目し,IFN-IRF系の役割を検討すること目的とした.その結果,まず,IFN-α/βによってISGF3転写複合体を介してp53遺伝子が発現誘導されることを見出し,ストレス刺激に対するp53応答を有意に増強させることが明らかとなった.この結果は,従来癌抑制因子として知られているp53がウイルス感染によってリン酸化を受け,活性化され,抗ウイルス免疫応答において重要な役割を果たしているという,感染防御での新たな局面を見出した.一方では,各種IRF転写因子の遺伝子欠損マウスを用いた解析により,pD CsにおけるTLR9サブファミリーメンバーを介するシグナルにおいて,IRF-7を介した新らたなMyD88依存性のIFN産生誘導経路を見出した.また,TLR9リガンドの細胞内挙動とIFN産生性との関連において,MyD88-IRF-7シグナルが時空間的制御を受けることが,pDCsのIFN高産生性を説明する制御機構の1つであることを示唆する結果が得られた.これに加え,新たに,MyD88との会合を示すIRF-5を介した炎症性サイトカイン産生誘導経路の存在を見出した.さらにIRF-5が実際のウイルス感染で活性化を受け,ウイルス感染によるアポトーシス誘導に関与しているという結果が得られた.一方,別のIRF転写因子であるIRF-4が.IRF-5に対して競合阻害を示す抑制因子として,IRF-5経路の負の制御をしていることも明らかとなった.このようにTLR下流において多くのIRF転写因子が重要なメディエーターとして働き,自然免疫応答活性化を制御していることが示された.IFN-α/βによる抗ウイルス応答の発現メカニズム及び病原体認識受容体であるToll-like receptor (TLRs)下流でのIFN遺伝子誘導へ至るシグナル伝達経路の解明に焦点を合わせ,特にこれまでウイルス感染によるIFN-α/β産生に関与することが知られているIRF (interferon regulatory factor)ファミリー転写因子との関連性に着目し,IFN-IRF系の役割を検討すること目的とした.その結果,まず,IFN-α/βによってISGF3転写複合体を介してp53遺伝子が発現誘導されることを見出し,ストレス刺激に対するp53応答を有意に増強させることが明らかとなった.この結果は,従来癌抑制因子として知られているp53がウイルス感染によってリン酸化を受け,活性化され,抗ウイルス免疫応答において重要な役割を果たしているという,感染防御での新たな局面を見出した.一方では,各種IRF転写因子の遺伝子欠損マウスを用いた解析により,pD CsにおけるTLR9サブファミリーメンバーを介するシグナルにおいて,IRF-7を介した新らたなMyD88依存性のIFN産生誘導経路を見出した.また,TLR9リガンドの細胞内挙動とIFN産生性との関連において,MyD88-IRF-7シグナルが時空間的制御を受けることが,pDCsのIFN高産生性を説明する制御機構の1つであることを示唆する結果が得られた.これに加え,新たに,MyD88との会合を示すIRF-5を介した炎症性サイトカイン産生誘導経路の存在を見出した.さらにIRF-5が実際のウイルス感染で活性化を受け,ウイルス感染によるアポトーシス誘導に関与しているという結果が得られた.一方,別のIRF転写因子であるIRF-4が.IRF-5に対して競合阻害を示す抑制因子として,IRF-5経路の負の制御をしていることも明らかとなった.このようにTLR下流において多くのIRF転写因子が重要なメディエーターとして働き,自然免疫応答活性化を制御していることが示された.本年度において,我々は,TLR9ファミリーであるTLR7およびTLR9下流でIFN遺伝子誘導につながる新しい経路を見出した.TLR7およびTLR9下流でのIFN産生誘導機構に関してはMyD88依存性であること以外は明らかにされていなかった.まず,我々は,このTLR7およびTLR9下流でのIFN遺伝子誘導において,従来ウイルス感染によるIFN遺伝子誘導に必須であることが知られているIRF-3およびIRF-7転写因子の関連性について検討を行った.その結果,FRET(fluorescence resonance energy transfer)解析により,細胞質においてIRF-7がMyD88と会合することを見出した.一方IRF-3はMyD88とは会合しないことが示された.また,luciferase reporter assayやCpG-A ODN(oligodeoxynucleotides)刺激による核移行の解析の結果,MyD88依存性にIRF-7が活性化され,核移行することも明らかとなった.様々なMyD88の変異体を用いた実験により,このIRF-7の活性化にはMyD88のdeath domain(DD)が必須であった.さらにIRF-7はTRAF6がIRF-7と会合し,その活性化に関与することも見出した.従来,IRAK4はMyD88のDDと会合し,下流のNF-kB活性化につながる必須の分子であることが知られていたが,今回MyD88欠損マウス由来のPDCsと同様にIRAK4欠損マウス由来のpDCsにおいてCpG-A ODNおよび一本鎖RNA刺激によるIFN-α産生誘導が全く消失することもわかり,TLR9-MyD88

下流におけるIRF-7の活性化にIRAK4が関与していることも示唆された.一方,IRF-5転写因子が様々なTLRs下流においてMyD88依存的に活性化される新しい調節因子であることも見出した.活性化されたIRF-5はIFN遺伝子誘導ではなく,炎症性サイトカインであるTNF-αやIL-6,IL-12の遺伝子発現誘導に関わっていることを明らかにした.今年度の各種遺伝子欠損マウスを用いた解析により,pDCsにおけるTLR9サブファミリーメンバーを介するシグナルにおける各種IRF因子の役割を明らかにした。IRF-7欠損マウス由来の形質細胞様樹状細胞(pDCs)においてはTLR9/7リガンドによるIFN-α産生は全く障害されるも,IRF-3欠損マウス由来のpDCsでは,野生型pDCsと同等のIFN産生を認めた.一方で,ウイルス感染時による胎仔線維芽細胞やマウス個体におけるIFN産生および応答はMyD88非依存性であり,IRF-7が優位な役割を担っていることが示された.次に,TLR9リガンドの細胞内挙動を検討した結果,pDCsにおいてIFNを高産生するCpG-Aはエンドゾームに長時間停滞する一方,IFNを高産生しないCpG-Bは,速やかにリソゾームに移行することを見出し,MyD88-IRF-7シグナルの時空間的制御がpDCsのIFN高産生性を説明する制御機構の1つであることが示唆された.一方,IRF-5遺伝子欠損マウスの解析により,IRF-5はMyD88やTRAF6と会合し,MyD88-TRAF6経路によって活性化されることで各種TLRリガンドによる炎症性サイトカイン(IL-12,IL-6,TNF-α)の誘導に関与する転写因子であることが示された.さらに,IRF-4はTLR刺激により発現誘導され,IRF-5経路に対して負の制御因子として作用していることが明らかとなった.IRF-4はIRF-5会合領域を介してMyD88と競合的に会合することでIRF-5活性化を負に制御していることが明らかとなった.
ベトナムの移動をめぐる都市人類学的研究

本研究は、グローバル化を前提に移動による急速な生活圏の拡大がもたらす諸問題への民衆的適応が生み出す文化・共同性創出の動態を、ベトナムー日本・アジア・世界の関係系に着目し、都市民衆の生活動態から解明するため、ベトナムをめぐる移動の実態に関する調査を多面的に実施した。最終年度の平成30年度、代表者・大橋は、ベトナム・ニャチャンにおける旧ソ連を媒介とした社会主義ネットワークを背景に形成された観光エンクレーブに関する実態解明と分析をさらに進めるため、ベトナム・ニャチャン、ロシア・モスクワにおいて現地調査を実施した他、ロシアからの観光移動が顕著であるタイ・プーケット及びパタヤにおいて比較分析のための現地調査を実施し、ベトナム・ニャチャンをめぐる人の移動と場所への意味付け、そこを媒介に展開するネットワークの特徴を明らかにした。また、その成果の一部をロシア・モスクワ国際関係大学、タイ・マヒドン大学での国際会議で発表した。分担者・和崎は、ベトナム・ハノイ及び近郊において現地調査を実施し、日本ーベトナム間に展開する移動の実態を特に工芸品商人やエネルギー企業等の商業・企業活動を中心に把握し、日本ーベトナム間の移動の往復的・反復的動向を明らかにした。分担者・長坂は、ベトナム・ハノイ及びホーチミン、台湾・台中において現地調査を実施し、ベトナム人の国際労働移動及び移動先社会でのコミュニティ形成の実態を解明し、村落・都市・国外を結ぶ移動の連続性、国内移動と国際移動の相互連関を明らかにした。研究期間全体を通して本研究は、現代世界の移動の重要な結節であるベトナムをめぐって、多様な方向と形態をもった多様な移動が展開し、その錯綜性の中に都市民衆が移動性を織り込んだ生活戦略を創出していることを明らかにした。この成果は、移動性を高める現代の社会文化の動態的理解への寄与において重要な意義をもつものと言える。現代世界のグローバル化を前提として「移動」による急速な生活圏の広がりがもたらす諸問題への民衆的適応が生み出す文化創造と共同性創出の動態を、ベトナムー日本・アジア・世界の関係系に着目し、ベトナム都市民衆の生活動態から解明するため、ベトナムをめぐる「移動」に関する歴史的・理論的研究およびその実態に関するフィールド調査を実施した。平成28年4月には本研究の理論枠組の検討および研究調査計画の打ち合わせを行なうため研究会を開催し、その上で代表者および分担者が各地においてフィールド調査を実施した。代表者・大橋は、ベトナム・ホーチミン市および中国・香港でフィールド調査を実施し、ベトナム都市民衆の「移動」経験の資源化について知見を蓄積すると共に、ベトナムをめぐる「移動」の歴史およびその理論枠組についての文献調査とその検討作業を行なった。分担者・和崎は韓国・ソウルでアフリカ人およびベトナム人移動者の生活戦略比較に関して、ベトナム・ハノイでスポーツ界におけるアフリカ人移動者の活躍に関してフィールド調査を実施し、グローバル化する都市社会におけるベトナムーアフリカ間の接触と交流の実態を把握した。分担者・長坂は、ベトナム・ハノイ、韓国・ソウル、台湾・桃園においてベトナム人移動労働者に関するフィールド調査を実施し、ベトナム人移動労働者のコミュニティ形成の特徴を解明した。これらの調査研究作業を通して、本研究が解明すべき問題の焦点がさらに具体的に明確化され、次年度以降の調査研究作業の見通しを得ることができた。平成29年2月にはこれらの作業から得られた成果の一部をシンポジウムにおいて発表した。本研究の目的に掲げた「移動」への民衆的適応が生み出す文化創造と共同性創出の動態の解明という課題について、本年度はベトナム、韓国、台湾、中国(香港)の各地で実施したフィールド調査によって具体的な多くの知見を蓄積することができ、また、文献研究を通して世界的な研究動向の中での本研究のポジションを確認し、その先端性を意識しながらさらなる理論的検討を進めることができたため、本研究はおおむね順調に進展していると認識している。一部、当初の研究実施計画で予定した調査対象フィールドを研究の進捗に応じて変更したが、これは研究課題の明確化と研究内容の深化を図るための措置であり、これにより主要調査研究フィールドにおける調査への注力がさらに可能となり、より詳細な成果を得ることができた。現代世界のグローバル化を前提として「移動」による急速な生活圏の広がりがもたらす諸問題への民衆的適応が生み出す文化創造と共同性創出の動態を、ベトナムー日本・アジア・世界の関係系に着目し、ベトナム都市民衆の生活動態から解明するため、ベトナムをめぐる「移動」の実態に関するフィールド調査を多面的に実施した。代表者・大橋は、ベトナム・ハノイおよびニャチャン、ロシア・モスクワおよびハバロフスクにおいてフィールド調査・資料収集を実施し、平成28年度の研究成果から導かれたベトナムをめぐる「移動」における社会主義ネットワークの重要性とその実態解明という課題について本格的に知見を蓄積する中で、ベトナム・ニャチャンで展開する観光現象に旧ソ連を中心とした「移動」の社会主義ネットワークの作動状況の動態を発見し、その実態の解明と分析を行なった。またその成果の一部を国際会議において発表した。分担者・和崎は、英国・ロンドン、タイ・バンコク、日本・京都、ベトナム・ハノイおよび近郊においてフィールド調査を実施し、ベトナム人の「移動」による急速な生活圏拡大が生み出す生活戦略と共同性創出の動態を多面的に把握した。分担者・長坂は、台湾・桃園および台中、タイ・バンコク、ベトナム・ハノイおよび近郊においてフィールド調査を実施し、ベトナム人労働者・留学生等の「移動」に伴う生活戦略とコミュニティ形成の実態を明らかにした。これらの調査研究活動を通して、平成28年度の調査研究成果に加えて本研究課題に関する具体的データの蓄積がさらに進展し、最終年度である平成30年度における研究成果の総合化とそのとりまとめへの見通しを得ることができた。

本研究の目的に掲げた「移動」への民衆的適応が生み出す文化創造と共同性創出の動態の解明という課題について、平成29年度は、ベトナム、台湾、タイ、ロシア、英国、日本の各地で実施したフィールド調査によって具体的なより多くの知見を蓄積することができたため、本研究はおおむね順調に進展していると認識している。一部、当初の研究実施計画で予定した調査対象フィールドを研究の進捗に応じて変更したが、これは研究課題の明確化と研究内容の深化を図るための措置であり、これにより研究課題の焦点化とより詳細な研究成果の獲得が可能となった。本研究は、グローバル化を前提に移動による急速な生活圏の拡大がもたらす諸問題への民衆的適応が生み出す文化・共同性創出の動態を、ベトナムー日本・アジア・世界の関係系に着目し、都市民衆の生活動態から解明するため、ベトナムをめぐる移動の実態に関する調査を多面的に実施した。最終年度の平成30年度、代表者・大橋は、ベトナム・ニャチャンにおける旧ソ連を媒介とした社会主義ネットワークを背景に形成された観光エンクレーブに関する実態解明と分析をさらに進めるため、ベトナム・ニャチャン、ロシア・モスクワにおいて現地調査を実施した他、ロシアからの観光移動が顕著であるタイ・プーケット及びパタヤにおいて比較分析のための現地調査を実施し、ベトナム・ニャチャンをめぐる人の移動と場所への意味付け、そこを媒介に展開するネットワークの特徴を明らかにした。また、その成果の一部をロシア・モスクワ国際関係大学、タイ・マヒドン大学での国際会議で発表した。分担者・和崎は、ベトナム・ハノイ及び近郊において現地調査を実施し、日本ーベトナム間に展開する移動の実態を特に工芸品商人やエネルギー企業等の商業・企業活動を中心に把握し、日本ーベトナム間の移動の往復的・反復的動向を明らかにした。分担者・長坂は、ベトナム・ハノイ及びホーチミン、台湾・台中において現地調査を実施し、ベトナム人の国際労働移動及び移動先社会でのコミュニティ形成の実態を解明し、村落・都市・国外を結ぶ移動の連続性、国内移動と国際移動の相互連関を明らかにした。研究期間全体を通して本研究は、現代世界の移動の重要な結節であるベトナムをめぐって、多様な方向と形態をもった多様な移動が展開し、その錯綜性の中に都市民衆が移動性を織り込んだ生活戦略を創出していることを明らかにした。この成果は、移動性を高める現代の社会文化の動態的理解への寄与において重要な意義をもつものと言える。次年度以降は、本年度の調査研究から得られた成果を踏まえ、さらなる研究内容の深化を図るため、以下の調査研究を推進し、知見を蓄積する。代表者・大橋は、本年度の成果から、関連する世界的研究動向を踏まえた本研究の先端性を追究しうる今後取り組むべき課題としてベトナムをめぐる「移動」における社会主義ネットワークの重要性を導き出した。これを踏まえて、ロシアおよびベトナムでのフィールド調査を本格化させる。
機能性RNAネットワーク解析に基づく腎癌低酸素耐性機構の解明

癌遺伝子MYCはmiR-135aにより直接制御されることが明らかになった。さらにmiR-1291は解糖系に関わる重要なグルコース輸送タンパクであるglucosetransporter 1 (SLC2A1/GLUT1)を制御した。またmiR-143/miR-145クラスター癌抑制型マイクロRNAであるが、共通して解糖系の重要な酵素であるhexokinase 2 (HK2)を制御した。腎癌細胞ではmiR-135a、miR-1291、miR-143、miR-145の発現を抑制することで低酸素環境下でも解糖系によるATP産生を維持し、分子標的薬による耐性を獲得している可能性が示唆された。本研究では、低酸素状態における腎癌のマイクロRNA発現プロファイルを作成し、発現変動するマイクロRNAを基点とした分子ネットワークの解明を目指している。低酸素培養条件化の腎癌細胞株からマイクロRNA発現プロファイルの中でmiR-23b/27bクラスターmiRNAに着目し、その機能解析と標的遺伝子の探索を行った。腎細胞癌(淡明細胞癌)61検体と正常腎組織61検体においてmiR-23b/27bの発現を測定した。また臨床病理学的所見や予後と、miR-23b/27bの発現の関連について解析を行った。miR-23b, miR-27b導入腎癌細胞株を用いて細胞機能解析を行った。in silico解析にてmiR-23b/27bの標的遺伝子の探索を行った。miR-23b/27bの発現は、正常腎に比べ、癌組織で有意に低下していた(P < 0.0001, P < 0.0001)。深達度がpT3以上であった群はpT2以下であった群に比べ(P = 0.0241, P = 0.0241)、異型度(grade)がG3の群ではG2以下の群に比べ(P = 0.0233, P = 0.0233)、それぞれmiR-23b/27bの発現が有意に低値であった。miR-23b/27bの発現が高値であった群は低値であった群に比べ、有意な全生存期間の延長が認められた(P = 0.0183, P = 0.0253)。miR-23b, miR-27bを腎癌細胞株に核酸導入すると、増殖・遊走・浸潤能の抑制効果を認めた。in silico解析にてmiR-23b, miR-27bは、いずれもcytokine-cytokine receptor interaction pathwayに属する遺伝子群に強く関与することが明らかとなった。このpathwayに含まれるmiR-23b, miR-27bの共通の標的候補遺伝子には、EGFR・METなどのがん遺伝子が含まれていた。miR-23b/27bクラスターは、腎細胞癌で発現が抑制されており、癌抑制的microRNAとして機能することが示唆された。また、これらのmicroRNAの発現測定は腎細胞癌予後予測因子として有用である可能性が示された。本研究は、腎細胞癌患者で発現が低下しているmiRNAを指標にして、低酸素環境下における腎癌の耐性機構の解明を目的としている。我々は臨床腎細胞癌と正常腎組織検体におけるマイクロRNA発現プロファイルを作成し、このプロファイルに基づいて癌抑制型マイクロRNAの研究を行ってきた。候補となるマイクロRNAの発現はPCR法により腎癌細胞株と臨床腎細胞癌検体において測定された。またこれらの発現導入細胞株を用いて、細胞増殖・遊走・浸潤・アポトーシス・細胞周期アッセイなどの細胞機能解析を行った。ルシフェラーゼアッセイは標的遺伝子の3末側非翻訳領域にマイクロRNAの結合サイトが実在するかどうかを確認するために行われた。我々は腎細胞癌においてマイクロRNAが主導するcancer pathwaysに注目した。我々はmiR-135a、miR-143、miR-145、miR-1291などは重要な癌抑制型マイクロRNAであり、Warburg効果(GLUT1、HK2、MYC)に関わる遺伝子を制御していることを見出した。これらの癌抑制型マイクロRNAの発現低下はWarburg効果を活性化して低酸素環境下の癌の進展・転移に関わる重要なプロセスとなり得ることが示唆された。低酸素培養条件化の腎癌細胞株におけるマイクロRNA発現プロファイルから癌抑制microRNAを見出し、論文化することができた。泌尿器癌miRNA-mRNAの分子ネットワークから低酸素環境下で浸潤・転移に関わる標的分子を選択し、低酸素下腎癌の新たなシグナル伝達を明らかにすることで、活性化されているシグナル伝達を遮断するマイクロRNAを選別していく。

効果的なシグナル伝達遮断部位を探索し、分子標的薬や既存の薬剤でそのターゲット遺伝子(シグナル伝達遮断部位)を阻害するものがあれば併用効果を確認する。細胞株における抗腫瘍効果を確認後に、in vivoで複数の腎癌細胞株への添加実験を目指す。
e-ラーニングとシミュレーションを組み合わせた呼吸器看護アクティブラーニング開発

本研究は、呼吸器外科看護に焦点を当てたアクティブラーニング型教材の開発を目的とし、次の5点を実施した。1国内外の研究論文を調査し、新人看護師に求められる臨床判断能力を分析した。2新人看護師10名および教育担当看護師10名に面接調査し、新人看護師の学習課題を抽出した。31と2より、シミュレーション教育と、eラーニング教材で共有するシナリオを作成した。eラーニング教材は、シミュレーション教育の効果を高める事前課題型とした。4国際基準に準拠するWEBプラットフォームを用い、eラーニング教材を開発した。52大学の看護学3、4年生を対象にアンケート調査しeラーニング教材の有用性を検討した。本研究は、呼吸器看護に焦点を当て、新人看護師が実践する臨床判断を特定し、アクティブラーニング型教材を開発することを目的とした。アクティブラーニング型教材は、学習者が主体的に取り組むe-ラーニングプログラムと、現場に近い状況を再現し、少人数で学習するシミュレーション教育を組み合わせたプログラムとした。平成27年度は、プログラムの軸となる新人看護師の学習課題抽出を目標とした。首都圏に位置する3施設において、呼吸器領域に該当する4病棟で調査した。調査は新人看護師10名と新人教育担当看護師10名を対象とした。新人看護師との面談では、新人看護師が担当した患者の状態や、観察・対処・報告したことに加えて、判断の助けになったこと等について調査した。また、新人教育担当看護師との面談では、新人看護師と共に実施したことや新人看護師に伝えたこと、新人看護師指導の際に意識することや使用するツール等を調査した。調査の際は、新人看護師が着任した当初と、夜勤を一人で実施するようになった時期に分けて尋ねた。加えて、平成28年度実施予定であったシミュレーション医療教育の開発・実施に必要なスキルと能力開発の研修としてiSIM-Jを今年度修了した。この研修では、シミュレーションにおける学習目標を明確に設定する方法や測定可能な学習目標の作成、およびシミュレーションを構成する基本的な要素について学び、プログラム作成の演習を行った。これにより本プログラム開発のための示唆を得た。面接調査の対象者のリクルートが平成27年度後半に集中したこと、および平成28年度に予定していたプログラム開発のための研修が時期を早めて受講できた。そこで、平成27年度予定していた文献検討と平成28年度予定していた研修の受講を、時期を入れ替えて実施した。平成28年度は文献検討と、プログラム開発を計画しており、おおむね順調に進展していると判断している。本研究は、呼吸器看護に焦点を当て、新人看護師が実践する臨床判断を特定してアクティブラーニング型教材を開発することを目的とした。アクティブラーニング方教材は、学習者が主体的に取り組むe-ラーニングプリグラムと、現場に近い状況を再現して少人数で学習するシミュレーション教育を組み合わせてプログラムとした。平成27年度は、プログラムの軸となる新人看護師の学習課題抽出を目標とし、3施設4病棟で調査した。加えて、iSIM-Jを修了しシミュレーションにおける学習目標を明確に設定する方法や、測定可能な学習目標の作成、およびシミュレーションを構成する基本的な要素など、プログラム開発の示唆を得た。平成28年度は、医療シミュレーション教育や呼吸器看護教育方法および臨床判断能力育成に関し、国内外の文献調査を行い、プログラム作成に着手することを目標とした。平成28年度は、医療シミュレーション教育や呼吸器看護教育方法および臨床判断能力育成に関し、国内外の文献調査を行い、プログラム作成に着手することを目標としていた。プログラム作成の前に、学習課題について国内外の研究者に学習評価の方法について意見を求める必要性を感じ、平成27年度の調査をもとに国際学会(アジア開催)に参加した。また、国内外の文献検討を元に新人看護師の課題について欧米との差に着目するために国際学会(米国開催)に参加した。これにより、学習課題の再検討を行い、当初予定していたプログラム着手に至っていない。このため、やや遅れていると判断している。最終年度である平成29年度は、シミュレーション教育の事前課題に用いるeラーニング教材と、解説用動画を作成した。事前課題に用いるeラーニング教材は、臨床場面を想定し「情報収集」「看護ケアの実施」「報告」の3構成とした。また、2校の看護学部3、4年生を対象に研究参加を依頼し、教材の有用性を調査した。調査方法は研究参加者が個別にアクセスできるWeb形式とした。学習者のへのフィードバックは、回答毎の正誤表示と解説用動画とした。調査の結果、研究参加48名の同意が得られ、学習者が臨床で実際に行われる状況を想定しながら、既習得の知識の用い方を学習していることが示された。また、教材活用の時期として、実習前を期待していることも示された。これにより、学習者を臨床での学びに導く教材開発という本研究の企図が反映されたと考査した。

52大学の看護学3、4年生を対象にアンケート調査しeラーニング教材の有用性を検討した。平成28年度は、医療シミュレーション教育や呼吸器看護教育方法及び臨床判断育能力育成に関し、国内外の文献調査を行う。平成27年度に実施した新人看護師および教育担当者への面接調査の分析結果とあわせてシナリオの軸となる学習課題を決定し、プログラムを開発する。今年度、本研究はプログラム開発を遂行する段階にある。この開発がやや遅れていると感じるため、成人看護領域で教育プログラム開発に多くの実績がある研究者を分担者に迎えた。今後は全分担者と協力することで、遅れを取り戻すことが可能と考える。臨床看護面接調査の対象者のリクルートが平成27年度後半に集中したため、一部平成28年度の計画と入れ替えて実施した。そのため、データ入力費および物品費に一部未使用額が生じた。平成28年度9月に所属していた教育施設を異動し、使用を予定していた学習支援システムが変更した。また、プログラムの学習課題決定が遅れたため、ソフトウエアを購入するに至らなかった。平成27年度に未使用となったデータ入力費および物品費は、平成28年度に変更した文献検討及び成果発表に使用する。平成29年度にe-ラーニングプログラム開発に必要なソフトウエアを購入する。
フライトシミュレータを用いたミツバチの餌場学習の神経基盤の解明

多くの昆虫は経路積算によるナビゲーションを行う、経路積算には、移動中に「方向」と「距離」を検出していく必要があるが、このうち天空の偏光による方向検出の神経機構に関しては、すでに多くの知見が蓄積されている。一方、距離検出および方向情報ときょり情報の統合機構については未解明な点が多い。そこで本研究では、ミツバチの採餌飛行を実験室内で再現するフライトシミュレータを構築し、仮想空間内で特定の方向と距離にある疑似餌場を学習させる実験系を確立することを目指している。今年度は、昨年度までに構築したフライトシミュレータとフライトシミュレータ内での飛行行動の画像解析技術を用い、事前の採餌経験に基づいて飛行軌跡がどのように変化するかについて解析を行った。フライトシミュレータは、ミツバチに距離を知覚させるオプティックフロー刺激と、方向を知覚させる偏光刺激を与えられるように設計し、シミュレータ内でのミツバチの挙動は側方および後方からのカメラで撮影し、その飛行姿勢の映像から実際の飛行軌跡を推定した。野外で採餌訓練を行った個体に対して、餌場から帰巣する際の飛行軌跡を解析した結果、上方からの偏光情報に基づいて往路と同様な軌跡を描くことが確認され、長距離の採餌には経路積算が優位に利用されることが明らかとなった。また、複数の偏光パターンを組み合わせて訓練することにより、加算されたベクトル方向への学習を成立させることに成功した。当初計画していたフライトシミュレータによる飛行軌跡の評価とそれを利用して偏光情報に基づく餌場学習を確認することができた。現在、これらのデータを論文化する作業を行っている。得られた成果の論文化のために、研究期間を延長した。今後は、データのさらなる解析を行い、論文を完成させることで課題を完了する。多くの昆虫は経路積算によるナビゲーションを行う。経路積算には、移動中に「方向」と「距離」を検出していく必要があるが、このうち天空の偏光による方向検出の神経機構に関しては、すでに多くの知見が蓄積されている。一方、距離検出および方向情報と距離情報の統合機構については未解明な点が多い。そこで本研究では、ミツバチの採餌飛行を実験室内で再現するフライトシミュレータを構築し、仮想空間内で特定の方向と距離にある疑似餌場を学習させる実験系を確立し、学習行動中の神経活動を脳の局所破壊や慢性埋め込み電極による記録を使って明らかにすることを目指している。本年度は、ミツバチ用のフライトシミュレータを構築し、シミュレータ内での拘束ミツバチの飛行行動を観察する画像取得法およびその解析法を確立した。フライトシミュレータは、ミツバチに距離を知覚させるオプティックフロー刺激と、方向を知覚させる偏光刺激を与えられるように設計し、シミュレータ内でのミツバチの挙動は側方および後方からのカメラで撮影する。撮影した画像から飛行中のミツバチの姿勢を解析することにより、個体の飛行軌跡を推測することができる。実際に飛行中のミツバチの発生するトルクとその時の個体の腹部の挙動とを同時記録することで、画像解析のみで左右方向へのターンが再現よく推測できることを確かめた。さらに、野外で特定の餌場を学習したミツバチ個体を用いてフライトシミュレータ内での飛行軌跡を解析したところ、学習した目的地への定位飛行を発現することを明らかとした。現在は、フライトシミュレータ内での条件付けを行うための装置改良と条件検討を行っている。今年度は、フライトシミュレータを構築してミツバチの採餌行動を実験室内で観察する方法を確立することができた。当初予定していた、自動的に条件付けを行うための給餌装置は未設定であるが、その代わりに野外で学習した個体を用いて、目的地への定位行動が発現することを確認した。以上をふまえて、おおむね順調に進展していると判断した。本年度は、昨年度までに構築したフライトシミュレータとフライトシミュレータ内での飛行行動の画像解析技術を用い、事前の採餌経験に基づいて飛行軌跡がどのように変化するかについて解析を行った。フライトシミュレータは、ミツバチに距離を知覚させるオプティックフロー刺激と、方向を知覚させる偏光刺激を与えられるように設計し、シミュレータ内でのミツバチの挙動は側方および後方からのカメラで撮影し、その飛行姿勢の映像から実際の飛行軌跡を推定できるようになっている。野外で採餌訓練を行った個体に対して、餌場から帰巣する際の飛行軌跡を解析した結果、上方からの偏光情報に基づいて往路と同様な軌跡を描くことが確認された。今後は、フライトシミュレータ内での採餌訓練を効率良く行うための条件検討を引き続き行っていく予定である。今年度は、昨年度確立したフライトシミュレータを用いて、採餌経験に基づく飛行軌跡の変化を解析できた。当初予定していたシミュレータ内での採餌訓練についてはまだ条件検討の段階であり、効率良い学習成功率を挙げることができていないが、その代わりに野外で種々の視覚刺激を用いた訓練を行うことができている。以上を踏まえて、おおむね順調に進展していると判断した。

多くの昆虫は経路積算によるナビゲーションを行う、経路積算には、移動中に「方向」と「距離」を検出していく必要があるが、このうち天空の偏光による方向検出の神経機構に関しては、すでに多くの知見が蓄積されている。一方、距離検出および方向情報ときょり情報の統合機構については未解明な点が多い。そこで本研究では、ミツバチの採餌飛行を実験室内で再現するフライトシミュレータを構築し、仮想空間内で特定の方向と距離にある疑似餌場を学習させる実験系を確立することを目指している。今年度は、昨年度までに構築したフライトシミュレータとフライトシミュレータ内での飛行行動の画像解析技術を用い、事前の採餌経験に基づいて飛行軌跡がどのように変化するかについて解析を行った。フライトシミュレータは、ミツバチに距離を知覚させるオプティックフロー刺激と、方向を知覚させる偏光刺激を与えられるように設計し、シミュレータ内でのミツバチの挙動は側方および後方からのカメラで撮影し、その飛行姿勢の映像から実際の飛行軌跡を推定した。野外で採餌訓練を行った個体に対して、餌場から帰巣する際の飛行軌跡を解析した結果、上方からの偏光情報に基づいて往路と同様な軌跡を描くことが確認され、長距離の採餌には経路積算が優位に利用されることが明らかとなった。また、複数の偏光パターンを組み合わせて訓練することにより、加算されたベクトル方向への学習を成立させることに成功した。当初計画していたフライトシミュレータによる飛行軌跡の評価とそれを利用して偏光情報に基づく餌場学習を確認することができた。現在、これらのデータを論文化する作業を行っている。フライトシミュレータを用いて、学習個体に種々の視覚刺激を与えた時の飛行軌跡の解析をすすめる。また、砂糖水給餌システムを追加することで、シミュレータ内での餌場学習実験へと発展させる予定である。具体的には、オプティックフロー刺激と偏光刺激の併用により、任意の方向と距離にある餌場を学習させることができるかどうかを確かめる。行動実験に関しては、引き続きフライトシミュレータ内での採餌訓練に関する条件検討をすすめるとともに、野外の様々な条件下で餌場学習した個体の軌跡解析についてもデータを蓄積してゆく。さらに、飛行中の脳内の神経活動記録についても実験を開始する。飛行中の記録が困難な場合には、野外で訓練した個体を用いて、固定した状態での記録への方針変更も視野に入れ、学習行動の神経基盤の解明を目指す。得られた成果の論文化のために、研究期間を延長した。今後は、データのさらなる解析を行い、論文を完成させることで課題を完了する。フライトシミュレータ内で採餌学習を行わせるための砂糖水給餌システムの設計が終わらず、部品の購入を延期したため。フライトシミュレータに関する共同研究グループであるオーストラリアの研究室に赴き、シミュレータの改良と予備実験を行う予定であったが、先方の都合により訪問が中止になったため、訪問を次年度に延期し、その分の経費を繰り越した。よって次年度に予定通り経費を支出する見通しである。
地域圏統合型医療情報データベースを用いた抗菌薬適正使用の評価に関する研究

薬剤耐性(AMR)対策の一環として抗菌薬適正使用の在り方を検討する上で、抗菌薬適正使用支援チーム(AST)による各種活動の成果について、抗菌薬使用量や薬剤耐性菌の発生状況などの指標に加え、患者予後、医療経済的視点で評価を行うことが本研究の一つ目の目的である。また、AMR対策は一つの病院で完結できるものではなく、地域の病院との連携の中で進めていく必要がある。今後開始される「三重地域圏統合型医療情報データベース(Mie-LIP DB)」を用いて、三重県内の中核病院における感染症関連データを集計・分析し、病院間比較や地域全体の感染症の動向を把握することが本研究の二つ目の目的である。
歯根膜線維芽細胞の形質発現におけるエピジェネティック制御の解明

歯根膜組織、歯肉組織のエピゲノム解析を遂行した。ヒストンH3k9me1、H3k9me2に違いがみられ歯根膜線維芽細胞で強いモノメチル修飾が観察された。メチル化酵素発現については遺伝子レベル、タンパク質レベルともにGlpとG9a発現に差を認め、どちらも歯肉に比較して歯根膜で高い発現が観察された。ヒト歯肉、歯根膜線維芽細胞セルラインを用いたin vitroでの比較解析でも歯肉線維芽細胞に比較して歯根膜線維芽細胞でGlpとG9aの高い発現を確認した。遺伝子発現マイクロアレイ解析で発現が大きく異なる遺伝子のうち転写因子に着目して10遺伝子まで絞り込みを行った。本研究ではヒストン(H3)リジン(K9)metyltransferases(H3K9MT)発現をラット臼歯部歯根膜線維芽細胞と歯肉線維芽細胞と骨膜骨芽細胞で免疫組織学的ならびにRTーPCR手法を用いて検討することとした。metyltransferasesにはH3k9me1(モノメチル化)、H3k9me2(ジメチル化)とH3k9me3(トリメチル化)の3酵素があり、その3種について検討した。1)H3k9me1(モノメチル化)酵素は歯根膜線維芽細胞、骨膜骨芽細胞にその局在が観察されたが、歯肉線維芽細胞にはほとんど認められなかった。2)H3k9me2(ジメチル化)酵素はやはりH3k9me1(モノメチル化)と同じく歯根膜線維芽細胞、骨膜骨芽細胞にその局在が観察された。しかし歯肉線維芽細胞にはほとんど認められなかった。3)H3k9me3(トリメチル化)酵素は歯根膜線維芽細胞、骨膜骨芽細胞ならびに歯肉線維芽細胞にわたって観察された。以上から、免疫組織学的観察では、歯根膜線維芽細胞、骨膜骨芽細胞ならびに歯肉線維芽細胞ではH3k9me1、H3k9me2酵素の局在に違いがみられ、両者の細胞のエピジェネティックな違いがあることが明らかとなった。しかし、残念ながら、RTーPCR等の研究までにはいたらず、これから研究する予定である。現在までのところ研究の進行は少し遅れている。H3k9me1、H3k9me2、H3k9me3の免疫組織学的検討に時間がかかってしまい、分子生物学的な検討には至らなかった。現在、歯根膜の凍結切片を作成し、レーザーキャプチャーマイクロダイセクション法により、歯根膜線維芽細胞、歯肉線維芽細胞と骨膜骨芽細胞を採取し、RT-PCR法により検討中である。本研究ではH3K9のメチル化に関与するといわれている酵素、G9a, Glp, Suv39h1, Suv39h2, Prdm2, Setdb1についてその遺伝子発現をreal-time PCR(RTーPCR)にて検討した。まず最初に、ラット第一臼歯の歯周組織を含む凍結連続切片をスーパーハードナイフを使用して作製し、その凍結切片からレーザーキャプチャーマイクロダイゼクション法を用いて歯根膜と歯肉の結合組織の採取した。そして、それらの資料を用いてG9a, Glp, Suv39h1, Suv39h2, Prdm2, Setdb1の遺伝子をRTーPCR結果、GlpとG9aに発現を認めた。両者の発現の強度はGlpの方がG9aよりも強発現しているものと考えられた。一方、その他の酵素の遺伝子発現については認められなかった。次にGlpとG9aについて、その歯周組織内での発現局在について、免疫組織学的に検討した。すなわち、上述した凍結切片を用いて、歯根膜と歯肉結合組織におけるGlpとG9aの局在を調べた。その結果、昨年のH3K9のメチル化の発現と同様に、GlpとG9aともに骨芽細胞と血管内皮細胞にその強い発現が認められた。そこでGlpとG9aの免疫染色の定量化を試みたところ、Glpでは歯肉よりも歯根膜で有意に強い染色性が認められた。G9aも歯根膜で歯肉よりも強い染色傾向を示した。以上から、歯根膜でのH3K9のメチル化にはGlpとG9aが関与していることが示唆された。本研究を遂行するには歯と歯槽骨という硬組織の間に存在する歯根膜をintactのままで採取し、遺伝子発現等の試料にする必要がある。この歯根膜の採取に不可欠な機器(レーザーキャプチャーマイクロダイゼクション装置)が故障してしまった。そこで現在、他施設(横浜市大医学部)の協力を得て研究を遂行している。転写活性が低い閉鎖型クロマチンと関連しているヒストンH3k9のメチル化およびメチル化酵素発現を比較した。免疫組織学的観察では、H3k9me1(モノメチル化)は歯根膜線維芽細胞、骨膜骨芽細胞にその局在が観察されたが、歯肉線維芽細胞にはほとんど認められなかった。H3k9me2(ジメチル化)はやはりH3k9me1と同じく歯根膜線維芽細胞、骨膜骨芽細胞にその局在が観察されたが歯肉線維芽細胞にはほとんど認められなかった。H3k9me3(トリメチル化)は歯根膜線維芽細胞、骨膜骨芽細胞ならびに歯肉線維芽

細胞にわたって観察され、歯根膜線維芽細胞ならびに歯肉線維芽細胞で比較を行うと、ヒストンH3k9me1、H3k9me2に違いがみられ歯根膜線維芽細胞で強いモノメチル修飾が観察された。次に、メチル化酵素発現の解析を行った。H3K9のメチル化に関与するといわれている酵素群についてその遺伝子発現をreal-time RT-PCRにて検討した。また特異抗体を用いた免疫蛍光組織染色も併用し、タンパク質レベルの発現解析を行った。遺伝子レベル、タンパク質レベルともにGlpとG9a発現に差を認め、どちらも歯肉に比較して歯根膜で高い発現が観察された。更なる分子生物学的解析を進めるため、ヒト歯肉、歯根膜線維芽細胞セルラインを用いてin vitroでの比較解析を行うこととし、ラットで得られたデータの再現性があるかを確認した。ヒト歯肉に比較して歯根膜線維芽細胞でGlpとG9aの高い発現を確認した。歯肉セルラインと歯根膜線維芽細胞セルラインの遺伝子発現マイクロアレイ解析から、発現が大きく異なる遺伝子のうち転写因子に着目して10遺伝子まで絞り込みを行った。今後これら10遺伝子についてクロマチンの状況とヒストンメチル化の相関について解析を行う予定である。歯根膜組織、歯肉組織のエピゲノム解析を遂行した。ヒストンH3k9me1、H3k9me2に違いがみられ歯根膜線維芽細胞で強いモノメチル修飾が観察された。メチル化酵素発現については遺伝子レベル、タンパク質レベルともにGlpとG9a発現に差を認め、どちらも歯肉に比較して歯根膜で高い発現が観察された。ヒト歯肉、歯根膜線維芽細胞セルラインを用いたin vitroでの比較解析でも歯肉線維芽細胞に比較して歯根膜線維芽細胞でGlpとG9aの高い発現を確認した。遺伝子発現マイクロアレイ解析で発現が大きく異なる遺伝子のうち転写因子に着目して10遺伝子まで絞り込みを行った。研究計画に沿って進めて行く予定である。1.歯根膜の凍結切片を作成し、レーザーキャプチャーマイクロダイセクション法により、歯根膜線維芽細胞、歯肉線維芽細胞と骨膜骨芽細胞を採取し、RT-PCR法により検討中である。2.現在までの研究結果を基にして、in vitroでも歯根膜線維芽細胞、歯肉線維芽細胞と骨膜骨芽細胞について、同様の研究手法を用いて検討する予定である。平成28年度に引き続き、平成29年度も横浜市大医学部の協力を得て、レーザーキャプチャーマイクロダイゼクション装置を借用できることになり研究を進めている。これからの研究としては、歯を移動した際の歯根膜におけるG9a, Glp, Suv39h1, Suv39h2, Prdm2, Setdb1についてその遺伝子発現とその局在を検討していく。特にGlpとG9aの発現とその局在部位のついて検討していく予定である。歯科矯正学研究の進行が少し遅れているため、一部繰り越し金とした。研究の進捗状況は回復傾向にある。研究の遂行にはレーザーキャプチャーマイクロダイゼクションという機器が必須であるが、それが故障してしまい、研究が少し遅れてしまったため、次年度使用額が生じた。前年度の旅費等の余った費用については、研究に必要な物品等(研究用薬剤)の購入に充当する予定である。レーザーキャプチャーマイクロダイゼクションという機器を他施設で借用することが可能となり、着実に研究を進めていく予定である。
単一遺伝子病における組織特異的発現異常の研究

遺伝子病における遺伝子の組織特異的な発現異常の機構を明らかにするために主に赤血球を病態の場とする疾患に関わるグロビン遺伝子、NADHcytochoromeb5還元酵素(b5R)遺伝子、さらband4.2遺伝子を対象に研究を行なっているが、今年度は主に遺伝性メトヘモグロビン血症について解析を行なった。本疾患はb5Rの欠損で起きる常染色体劣性の疾患であり、赤血球のみで欠損が見られチアノ-ゼを伴うtypel、そして種々の組織で欠損が見られ精神発達遅延を来たすtypeII,そして血球でのみ欠損が見られるtypeIIIが知られている。まずtypeIIについてはcosmid vectorで全遺伝子を運ぶクロ-ンを単離して解析を行ない、codom127にTーC置換(SerーPro)を認めた。この変異によるNADHへの結合能の低下が推測された。typeI,typeIIについてはPCRによるdirect sequencingおよびdirect cloningによる解析を行なった。その結果typeIではコドン57にGーA置換(ArgーG1n)を認めた。typeIIIではコドン148にTーC置換(LeuーPro)が見られた。typeIではresidue32はαーhelixとβーsheetとの間に位置しており、置換でenzymeのconformationが変化しinstabityを来たすのではないかと考えられる。typeIIIではprolineへの置換のためにβーsheetの破壊が考えられるが、これまで報告されているFADーやNADH結合motifの領域から外れており、この置換ではmildな機能変化にとどまり、神経細胞における障害が軽微なのではないかと考えられた。今後各種細胞へ遺伝子を導入し、変異酵素の振る舞いを検討する予定である。
悪性黒色腫におけるＣＤ１０発現の生物学的意義と新規治療法の開発

CD10は蛋白分解活性によって細胞外における様々な生理活性物質の活性を制御している。我々は悪性黒色腫患者においてCD10を高発現する症例では予後が悪いことを報告した(J Am Acad Dermatol 65; 1152, 2011)。その生物学的メカニズムを検討する目的で,CD10陰性のヒト悪性黒色腫細胞株A375にCD10遺伝子およびそのベクターのみを導入したCD10-A375とmock-A375を作成し,CD10-A375がmock-A375に比較して,in vitroでの増殖能が高いこと,抗癌剤によるアポトーシス抵抗性が高いこと,in vivoで有意に腫瘍発育が早いことを観察した。今年度は以下のことを明らかにした。1CD10の酵素活性阻害薬phosphoramidonを腫瘍接種前に投与したところ,CD10-A375で阻害薬投与群のほうが非投与群に比べ有意に腫瘍の増殖が遅延していた。一方,mock-A375においては阻害薬投与の有無で腫瘍増殖に差を認めなかった。2CD10-A375, mock-A375,及びwild type A375の3種類の細胞の遺伝子発現をDNAマイクロアレイで比較した。CD10導入によって有意な発現変化を認めた遺伝子は多数あり,その中でも血管新生,細胞増殖,アポトーシス抵抗性を促進する遺伝子,細胞接着や遊走を抑制する遺伝子の発現の有意な上昇が認められた。3CD10-A375及びmock-A375の細胞移動能を評価したが,CD10-A375はmock-A375に比べて移動するスピードが遅かった。細胞増殖能の影響を除くためにマイトマイシンCを加えても,結果は同様であった。in vivoの動物実験でより正確な解析を行うために,マウス悪性黒色腫細胞株のB16F10にマウスCD10遺伝子の導入を試みているが,現在まで成功には至っていない。CD10を安定導入した悪性黒色腫株を作成,維持できており,以降の実験を滞りなく進行できている。当初の想定通り,CD10導入によりおおむね腫瘍の悪性度が増強されることが,臨床結果だけではなく,in vivo,in vitroの実験でも明らかとなっており,現在はその生物学的メカニズムを検討する段階にきている。しかし,細胞浸潤能においては相反する結果を得ている事から,更に詳細に検討する必要があると考えている。その点でも,DNAマイクロアレイによる解析で,CD10導入による遺伝子発現変化の動向が明らかとなったので,その結果をもとにある程度標的を絞った解析,以降の実験が可能となってきた。CD10の阻害に関しても,市販の特異的酵素活性阻害剤phosphoramidonもしくはthiorphanが使用可能である事が判明し,今後の実験にきわめて有用である。上記の成果から,おおむね順調であると考えられる。in vitroにおいては,CD10特異的酵素阻害剤の効果を増殖能,アポトーシス抵抗性,細胞移動能について,CD10-A375,mock-A375で比較検討する。可能であれば,もう一つのCD10特異的酵素阻害剤であるthiorphanも用いて,実験結果をより確かなものにする。また,これら特異的酵素阻害剤が確実に作用しているかどうかの作用確認実験を施行する必要がある。in vivoの増殖実験において,CD10特異的酵素阻害剤の有無による違いを更に詳細に検討する。DNAマイクロアレイによる解析で明らかになった発現が変動した遺伝子のうちのいくつかのものに注目し,RT-PCR,免疫染色などで発現の確認実験を行う(CTLA-4, IL-1α, NCAM-1, caveolinなど)。またCD10を高発現している細胞株をヌードマウスに摂種して特異的酵素阻害剤の効果を検討し,さらに,特異的酵素阻害剤を治療スケジュールで投与してその効果を検討する。可能であれば、in vivo実験でより正確な解析を行うため、また今後の実験の展開のために,マウス悪性黒色腫細胞株へのマウスCD10遺伝子の導入をさらに試みたい。基本的に今までの実験を繰り返して,その再現性を確認する。ヒト細胞株のin vivoでの実験を行うため,免疫不全マウスであるヌードマウスを使用するため,その購入,維持に資金が必要となる。特に特異的酵素阻害剤による治療実験は,是非実施したいと考えている。その他,基本的に機器はそろっており,単価少額の消耗品での支出となる予定である。

2CD10-A375, mock-A375,及びwild type A375の3種類の細胞の遺伝子発現をDNAマイクロアレイで比較した。CD10導入によって有意な発現変化を認めた遺伝子は多数あり,その中でも血管新生,細胞増殖,アポトーシス抵抗性を促進する遺伝子,細胞接着や遊走を抑制する遺伝子の発現の有意な上昇が認められた。3CD10-A375及びmock-A375の細胞移動能を評価したが,CD10-A375はmock-A375に比べて移動するスピードが遅かった。細胞増殖能の影響を除くためにマイトマイシンCを加えても,結果は同様であった。in vivoの動物実験でより正確な解析を行うために,マウス悪性黒色腫細胞株のB16F10にマウスCD10遺伝子の導入を試みているが,現在まで成功には至っていない。今までの研究の結果、悪性黒色腫患者において原発病巣でCD10を高発現する症例では,そうではない症例に比較して予後が悪いことが判明した(J Am Acad Dermatol 65; 1152, 2011)。その生物学的メカニズムを検討する目的で、CD10をほとんど発現していないヒトメラノーマ細胞株A375にCD10遺伝子およびそのベクターのみをトランスフェクトしたCD10-A375とvec-A375を作成した。この2系列の細胞株について各種生物学的検討を行った。(1)in vitroでの増殖能の比較:MTTアッセイによってCD10陽性A375細胞の方がCD10陰性A375細胞よりも有意に増殖能が高いことが判明した。(2)抗癌剤によるアポトーシス誘導:etoposideによる誘導ではCD10-A375の方がAnnexin V陽性細胞数が少なく、(抗癌剤の細胞毒性に対する)アポトーシス抵抗性が高いと思われた。gemcitabineでも同様の結果であった。(3)ヌードマウスにおけるin vivoでの腫瘍増殖能:CD10-A375の方がvec-A375よりも有意に腫瘍発育が早いことが観察された。さらにCD10-A375には潰瘍形成傾向があった。また,予備実験ながらCD10の酵素活性阻害薬:phosphoramidonを担癌ヌードマウスへ投与したところ、CD10-A375で阻害薬投与群のほうが阻害薬非投与群に比べ腫瘍の増殖が遅延していた。CD10を安定導入した悪性黒色腫株を作成,維持できており,以降の実験を滞りなく進行できている。当初の想定通り,CD10導入によりおおむね腫瘍の悪性度が増強されることが,臨床結果だけではなく,in vivo,in vitroの実験でも明らかとなっており,現在はその生物学的メカニズムを検討する段階にきている。しかし,細胞浸潤能においては相反する結果を得ている事から,更に詳細に検討する必要があると考えている。その点でも,DNAマイクロアレイによる解析で,CD10導入による遺伝子発現変化の動向が明らかとなったので,その結果をもとにある程度標的を絞った解析,以降の実験が可能となってきた。CD10の阻害に関しても,市販の特異的酵素活性阻害剤phosphoramidonもしくはthiorphanが使用可能である事が判明し,今後の実験にきわめて有用である。