hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
重い希土類元素を含む充填スクッテルダイト型化合物の単結晶作製方法の確立

(a)作製された試料のTcはxの増加とともに減少し、(b)2Kでの小さな強磁性m0もxの増加とともに減少し、(c)x=0.93以上でTcとm0は消失し、(d)μeff/m0 vs Tc/T0曲線は典型的なRhodes-Wohlfarth図の曲線に一致し、(e)YbFe4Sb12の弱い強磁性はYbの欠陥の量に依存したFeの遍歴磁性が起源である、と推測できた。(論文準備中、物理学会にて発表済)(1)昨年度に引続き、YbFe4Sb12のフラックス法による単結晶試料を多数作製し、その磁気的熱的性質を実験的に調査し、更に、EPMAによるYbFe4Sb12の組成比との関係を詳細に検討した。その結果、YbFe4Sb12の磁気的熱的性質はYbの欠損の量に強く依存していることが明らかになり、YbxFe4Sb12と表記したとき、xとTc、moの間の関係が実験的に明確にされた。また、YbxFe4Sb12の磁気的性質はYbが担っているのではなく、遍歴的なFeの磁性が起源であることが明らかにされた。従来から注目されていたYbxFe4Sbl2の価数揺動振舞いの原因が明らかになり、また、強い試料依存性の原因が明らかにされたことは、この研究の初期の目的が達成されたことであり、価値があることである。この研究成果は、国際会議ICM2006(雑誌論文の7)で発表され、雑誌J.Phys.Soc.Jpn.(雑誌論文の1)に公表された。(3)広島大学の藤博士の協力により、多結晶試料YbxFe4Sb12を用いたNQRの実験を行った。SbのNQR信号から四重極周波数、非対称パラメータ等を導出した。また、TITの温度依存性および静的な磁化率(磁化)の値から、強磁性スピン揺らぎの存在が示された。これからYbxFe4Sb12においては遍歴的な強磁性配列状態が実現していると示唆された。(雑誌論文の9)(1)昨年度、YbxFe4Sb12のフラックス法による単結晶試料の作製に成功し、YbFe4Sb12の磁気的熱的性質はYbの欠損xの量に強く依存していることが明らかになり、xとTc、moの間の関係が実験的に明確にされた。従来から注目されていたYbxFe4Sb12の価数揺動振舞いの原因が明らかになり、また、強い試料依存性の原因が明らかにされたことは、この研究の初期の目的が達成されたことであり、価値があることである。この研究成果は、既に昨年度の研究実績報告書で報告し、昨年度の雑誌論文のリストに記載した。(2) Mossbauer効果の研究は、既に一部の成果は論文に公表済みであるが、実験は昨年度から引続き行われ、Ybの欠損のある場合とない場合のMossbauer効果の四重極分裂、また、アイソマーシフト中心が異なることを見出した。詳細な実験結果の検討から、逆に、Mossbauer効果の実験結果から、YbxFe4Sb12のYbの欠損量を算出することが可能であることを明らかにした。(雑誌論文の4)(3)広島大学の宇田川教授の協力により、YbxFe4Sb12のラマン散乱を実験を行い、Sb系スクッテルダイトのそれとの比較検討し系統的な振動モードを明確にした。(雑誌論文の5)(4)今年度は、新しくNdFe4Sb12の系で単結晶作成に成功し、この系でのYbFe4Sb12と同様にFeの欠損が磁性に大きな影響を及ぼしていることが明らかになった。しかし、NdFe4Sb12の磁性の担い手はFeだけでなくNdも磁性の寄与があり、遍歴的なFeと局在的なNdの磁気的相互作用がFeの欠損量に敏感に影響することを定量的に明らかにした。(雑誌論文の1)
階層間の影響を考慮した無線メッシュネットワーク技術の開発

イベントネットワークや災害時の避難所などでは、簡易に無線ネットワークを敷設することが期待されている。しかし、現在のメッシュネットワークは専門家なしに敷設することは難しい。本研究の目的は、簡単に無線メッシュネットワークを敷設するためのシステムを開発することである。特に階層の協調を重要視している。階層間のパラメータ調整はパフォーマンスの向上に必要不可欠である。本研究では、物理層からネットワーク層までのパラメータを考慮し、誰もが高性能なメッシュネットワークを構築できるシステムを提案した。本研究の目的は、物理層、データリンク層、ネットワーク層のそれぞれのパラメータを連携させた、WiFiをベースとしたメッシュネットワーク技術の開発である。2014年度は、無線干渉の通信への影響調査を中心に実施した。調査では、2ホップの無線アドホックネットワーク環境を構築し、無線区間で使用するチャンネルを変えながらスループットの計測を行った。2つの無線区間のチャネルを、同じチャネル、隣接するチャネル、離れたチャネルに設定し、2種類の無線アドホックネットワーク用機器で実験を実施した。また、片方の機器では、2つの無線区間を中継するルータの送受信機の距離も0mm、500mm、1000mm、3000mmと変化させ、送信機間の距離の影響も計測した。その結果、隣接するチャネルを使った場合、同じチャネルを使った時より性能が低下する現象が見られた。この現象は、2つの送受信機の間隔を広くすると幾分改善するが、チャンネルを大きく離した時に比べて小さな改善にとどまった。また、チャンネルを大きく離しても、送信受機が近い場合は性能の低下が見られた。以上の実験結果より、隣接するチャネルは使うべきではなく、むしろ同じチャネルを使うべきであることの知見が得られた。また、使用する機器によっては(今回の場合はコンシューマ機器)送受信機の距離が大きく影響することから、シールドが強くない機器あるいはバンドパスフィルタの性能がよくない機器を使用する場合は、中継機の物理構成にも十分注意する必要があることがわかった。2015年度は、SNRと通信速度の関係の調査および簡易なシステムの開発、シミュレータによる検証をおこなった。IEEE802.11nにはModulation Coding Scheme (MCS)と呼ばれる仕組みがあり、端末間のSNRに応じて適切な変調方式を選択できるようになっている。この仕組を使うことによって、小さい空中線電力でも遅いなりに安定した通信を実現したり、通信が増えてきた場合に速い通信に切り替えたりすることができる。そこで、無線LANのノード同士を減衰器を挟んで有線接続し、更にノイズ発生器としてシグナルジェネレータを接続した環境を構成し、計測をおこなった。その結果、SNRと適切なMCSの関係を明らかにすることができた。また、2014年に調査を行った電波干渉と通信速度の関係と上記の結果を鑑みた簡易なメッシュネットワーク構成アルゴリズムを作成し、シミュレーションによってその効果を検証した。アルゴリズムは、可能なかぎり電波干渉を軽減するようなチャネル割当を行うこととした。電波干渉やMCSを考慮したシミュレータが存在しなかったため、今回はns3上に実際に計測から明らかになったパラメータを設定したものを作成した。その結果、少しではあるが、通信性能の向上が確認できた。2014年度に実施できなかったMCSに関する実験を実施することができた。このことによってSNRと実際の通信速度の限界を関係を明らかにすることができた。これまでに調査を行った使用チャンネルによる電波干渉の状況、SNRとMCSの関係などを考慮した評価のためのシミュレーション環境を構築した。また、簡易なものではあるが、メッシュネットワーク構成のためのアルゴリズムを開発し、若干の性能向上に成功した。ここまでで、本研究の一通りの開発と検証を実施することができた。今後はより高度なメッシュネットワーク構成のためのアルゴリズム開発に取り組む予定である。メッシュネットワーク構成のためのアルゴリズムの高度化とルーティングプロトコルの考察を行った。メッシュネットワークを構成するためには、無線パラメータやMAC層パラメータを最適化する必要がある。一方で近年、無線LANのプロトコルの高度化により、パラメータ調整機能が無線LANチップの中に隠蔽化されることが進んでおり、最新の技術を使うとパラメータ調整ができない問題が発生した。このことより、MCSの設定などは無線LANチップのパラメータ調整に任せることとし、チャンネル設定およびルーティングプロトコルの最適化に注力した。無線のチャンネル設定においては、これまでの本研究において、隣接するチャネルはできるだけ使わない、送受信アンテナは一定以上の距離をあけて設置することにより劇的に性能が改善する、などの条件が明らかになっている。このことを活用し、予め設定したチャンネルからチャンネルがかぶらないように集中型でチャンネル配分をするようにした。また、ルーティングプロトコルは、OSPFなどのいわゆるMANETプロトコルではなく、ノードの移動が少ないことを考慮して、OSPFによる経路作成を行うこととした。このことにより、ルーティングプロトコルによるオーバヘッドを減らすことができ、通信効率を上げることが可能となった。以上のようなメッシュネットワーク構築手法を開発することにより、イベントや災害時などに簡易無線LANネットワークを構築する際の手間の削減と通信効率の確保を実現した。

本研究では、物理層からネットワーク層までのパラメータを考慮し、誰もが高性能なメッシュネットワークを構築できるシステムを提案した。2014年度は、無線干渉の影響調査を行うことを目標としていた。「研究実績の概要」にも記したとおり、2種の機材を用いて、使用するチャネルの影響や送受信機間の距離の影響について調査をし、知見を得ることができた。当初、1種の機材のみで実験予定であったため、この点は当初の予定より進んだ検証ができていると考える。一方、MCSと送信出力の関係についての調査は、機材の確保や実験場所の問題から、実施することができなかった。この点は当初予定より遅れている点である。今後は、実験機材の確保なども含めて早急に実施する予定である。以上の2点を鑑み、概ね順調に進展していると判断する。2015年度に開発をしたメッシュネットワーク構成のためのアルゴリズムの高度化とルーティングプロトコルの考察を行う。メッシュネットワーク構成のためのアルゴリズムの高度化では、現在のところ電波干渉を考慮した経路を構築した後に、自動でMCSの設定がなされるようなアルゴリズムとなっており、必ずしも最適な組み合わせを用いることができていない。このため、双方のパラメータを一度に考慮するようなアルゴリズムの開発が必要となる。また、ルーティングプロトコルの考察では、メッシュネットワークはモバイルアドホックネットワークと異なり、ノードの移動頻度が高くないことを利用することによって、制御トラフィックの少ないプロトコルを用いることができると考えられる。そこで、OSPFなどのより汎用性の高いプロトコルの活用について検証を行う。コンピュータネットワークまず、2014年度の実施を予定していたMCSと送信電力、通信距離の関係の調査を再度試みる。MCSを小さくした場合、安定して長距離で通信ができることが予想できるが、スループットは落ちると考えられる。エラーを前提とした場合、スループットを最適化できるパラメータを、この実験によって明らかにする。その上で、2015年度は、実際に無線メッシュネットワークシステムを構築することを目標とする。提案するシステムでは、物理層からネットワーク層までのそれぞれの階層をネットワーク制御モジュールによって制御する。このため、各階層のパラメータを制御するための制御モジュールを開発する必要がある。
スタチンによる、miRNAを介した前立腺癌増殖制御機構の解明

スタチンは前立腺癌に対して抗腫瘍効果のあることが報告されているが、まだそのメカニズムは明らかではない。今回、我々は、スタチン投与によって発現変化するmiRNAの同定、その発現変化のあったmiRNAのターゲットであるmRNAの中で、前立腺癌の進展阻害と関与するものを検討した。PC-3細胞において、シンバスタチン投与により、miR-210やmiR-375の発現は上昇し、特にmiR-210に関しては、癌と関連のあるINSIG1の発現を抑えることで、前立腺癌の進展が抑えられる可能性が示唆された。【目的】我々は、スタチン投与によって発現変化するmiRNAの同定、その発現変化のあったmiRNAのターゲットであるmRNAの中で、前立腺癌の進展阻害と関与するものを検討した。【方法】in vitroにおけるシンバスタチン投与群(5 μM)および非投与群のtotal RNA (miRNAおよびmRNA)を抽出しmiRNAマイクロアレイおよびcDNAマイクロアレイにて遺伝子発現の包括的な解析により、発現変化のあったmiRNA及びmRNAを同定した。さらには、同定されたmiRNAをPC-3へトランスフェクションし、細胞への影響、アレイで変化のあったmRNAの発現変化を確認した。【結果】シンバスタチン(5 μM)を投与して48時間後に回収したtotal RNAを用い、miRNAおよびcDNAマイクロアレイを施行したところ、miR-375;ターゲットmRNAとしてMATN3、CENPM、PDE4B等、miR-210;ターゲットmRNAとして、INSIG1、ESCO2、E2F3等、ほかのmiRNAとしては、miR-148a, miR-22等がその候補として挙げられた。さらにそれらの候補miRNAをPC-3にトランスフェクションしたところ、miR-210では、細胞増殖・遊走・浸潤抑制効果、miR-375では細胞遊走・浸潤抑制効果を認めた。次に、miR-210、miR-375をPC-3へトランスフェクションし、mRNAの変化を確認したところ、miR-210に対しては、INSIG1の発現低下を認めたものの、miR-375に対しては、ピックアップしたmRNAの発現低下が認められなかった。INSIG1のsiRNAをPC-3へトランスフェクションすることで、細胞増殖及び遊走抑制効果を認めた。【結論】前立腺癌におけるスタチンの抗腫瘍効果において、miRNAが重要な役割を果たしていることが示唆された。まずPC-3に対してシンバスタチンを投与し、細胞増殖、遊走、浸潤効果のある濃度をin vitroにて検証した(5μM)。次にin vitroにおけるシンバスタチン投与群(5μM)および非投与群のtotal RNA(miRNAおよびmRNA)をmiRNeasy Mini Kit (Qiagen)にて抽出し、そのtotal RNAを用い、miRNAマイクロアレイおよびcDNAマイクロアレイにて遺伝子発現の包括的な解析により、遺伝子の同定を行った。その結果、miR-375;ターゲットmRNAとしてMATN3、CENPM、PDE4B、HELLS、EFEMP1など、miR-210;ターゲットmRNAとしてESCO2、SCARA3、RAB3B、TMEM20など、ほかのmiRNAとしては、miR-148a, miR-22などがその候補として挙げられた。それぞれのmiRNAの発現変化は定量的PCRによって確認を行った。また、ヌードマウスにPC-3を移植し、in vivoでのスタチンの効果も検討した。ゼノグラフト作成後、シンバスタチンを連日マウスへ投与(腹腔内投与)したところ、40及び100mg/kgの濃度で抗腫瘍効果を投与4週間で認めた。シンバスタチンによって変化するmiRNAの同定を行うことが出来た。・候補miRNAによるターゲットmRNAの発現変化の確認;PC-3に候補miRNAをトランスフェクションすることで、アレイでピックアップされたターゲットmRNAが実際発現変化を起こすのかを確認する。・臨床検体における、スタチン内服がmiRNA発現に与える影響の確認;前立腺癌患者の、前立腺生検組織や前立腺全摘組織を使用し、同定されたmiRNA及びmRNAの発現を、スタチン内服群とスタチン非内服群とで、定量的PCRにより比較し、臨床検体でのスタチン内服の影響を検討する。・スタチン以外の、同定されたmiRNAの発現変化を引き起こす薬剤の探索;今回同定されるmiRNAがコレステロール低下作用に依存するものであれば、スタチン以外の高脂血症薬である、フィブラート系薬剤、プロブコール等によっても同様の遺伝子変化が起こる可能性が考えられる。そこで、まずはこれらの薬剤の抗腫瘍効果をin vitroで、MTS assayを用い検討し、またこれらの薬剤による、同定されたmiRNAの発現への影響を、定量的PCRにより検討する。

同定されたmiRNAの変化がスタチンと同様に認められた場合には、スタチンとの併用によりmiRNA変化や抗腫瘍効果の増強の有無など、in vitro及びin vivoにて探求する。さらには、高脂血症以外にも、同定されるmiRNAの発現変化を引き起こすような薬剤を検索し、スタチンおよび他薬剤との併用などによる、miRNAに関連した前立腺癌治療および予防医学への応用にも発展させたい。上記実験を行うために、試薬の購入を行う予定である。
プラスチックへの溶射高速高温粒子注入機構の解明とプラスチックの複合化表面改質

プラスチックのリサイクルを目的として、溶射により表面改質を行った。Cu粉末をプラズマ溶射した場合、プラズマのみの熱ではPET基材は溶融しないが、Cu粒子を溶射した場合、Cuから熱を受けるために、PET基材が大きく溶融した。そしてその溶融した領域に粒子が打ち込まれることが観察された。一方、粒子からの熱量が少ない場合はPET基材の上にCu粒子による皮膜の形成が認められた。ガンの送り速度が最も遅い場合に、顕著にPET内部に球形に打ち込まれることが判明しており、粒径が小さい方がより深くまで粒子が打ち込まれており、打ち込まれない場合は、基材の上に堆積する形となった。高機能化すなわち光触媒機能の付与を目的として、TiO_2粒子の溶射を行った。プラズマ溶射を行うと、PET基材内に打ち込まれる形態が顕著に観察され、粒径20-30μm程度の大きい粒子は未溶融であり、10μm以下の小さい粒子は完全に溶融していることがわかった。また500Aにおいてパス数を増加させると打ち込み粒子上に皮膜が積層するのが認められた。X線回折結果によると、400A以下において、1パスの場合ではPET基材のピークが見られるが、パス数の増加により完全な皮膜となりPET基材表面を被覆することがわかる。500Aの1パスにおいて、アナターゼTiO_2の存在比が比較的高いのは、比較的粒径の大きな未溶融アナターゼTiO_2がPET基材に打ち込まれているためである。次に生分解性プラスチック(ビオノーレ)上に高速ガスフレーム(HVOF)溶射を行うと、低温で高速注入が可能であるために、ビオノーレ上にアナターゼ100%のTiO_2溶射皮膜を形成することが可能となった。有害物質を分解するには、光触媒活性の高いアナターゼ相の存在していることが望ましいために、アナターゼ100%のTiO_2溶射皮膜が得られたことは、学術的にも工業的にも画期的な内容といえる。これらの結果より、アナターゼ相存在率の高い溶射皮膜が形成でき、溶射によるプラスチックの複合化表面改質が可能となり、その機構を明確にすることができた。本研究では、再生PET板にアナターゼTiO_2及びCu粒子の溶射を行い、飛行粒子の温度、速度及び粒度、基材の表面及び内部温度、断面及び表面組織観察などからPET板表面への溶射粒子の打ち込み及び膜形成メカニズムを検討した。アナターゼ型TiO_2をプラズマ溶射した場合、プラズマのみによって基材が溶融すると粒子の打ち込みが見られ、溶融しなければ膜形成となることが確認された。またPRTより低融点であるビオノーレを基材に用いて比較実験を行った結果、PETで膜形成が認められた溶射条件においても粒子は打ち込みが認められた。このことから粒子の打ち込みは基材の融点に大きく依存し、基材表面の溶融が大きく関与することが明らかとなった。一方、高速ガスフレーム溶射を行った場合、フレームのみでは基材温度が融点に達せず、供給される粒子も大量であり、かつ粒子速度も速いため膜形成に至ることが認められた。この場合、溶射粒子はほぼ未溶融であるためアナターゼ存在量が高いことが認められた。

Cu粉末を溶射した場合、プラズマのみでは基材表面が溶融しない条件においても、表面が僅かに溶融していることが認められた。これは基材表面がCu粒子の保有する熱を受け融点以上の温度に達したためと考えられる。さらにトラバーススピードを変化させると、同一面積に送り込まれる粒子量及び積層するCu量が変化することから基材の溶融具合が大きく影響を受けることが分かった。Cu粒子を分級し溶射を行った結果から、粒子打ち込み条件では小粒経の粒子が打ち込みに関与し、混合粒子での小粒子打ち込み現象と対応することが認められた。一般的に軟鋼基材にCu粉末をプラズマ溶射するとCu粒子の扁平積層皮膜が形成される。しかし、軟鋼基材と同じ溶射条件でリサイクル型PET(R-PET)基材にCu粉末をプラズマ溶射するとR-PET基材表面にCu粒子が表面付近に点在する状態となり、さらに粉末供給量を増すためプラズマ溶射ガンの送り速度を遅くし91.6mm/sとしてプラズマ溶射を行うとCu粒子がR-PET基材内部に液体状態で扁平せず球状に打ち込まれるという現象が認められた。また、538Kの融点を持つR-PET基材より低融点であるSn基材(融点505K)に同溶射条件でCu粉末をプラズマ溶射すると、R-PET基材にはCu粒子が前述したように基材内部に打ち込まれた。これに対してSn基材には軟鋼基材と同様に積層皮膜が形成された。以上のことから、PET板自身は熱伝導率が低く基材表面のみが溶融されこの溶融状態を保持することで、Cu粒子がR-PET基材内部に打ち込まれたと考えられる。一方、Sn基材は熱伝導率が高くプラズマフレームの熱およびCu粒子の熱をSn基材の深さ方向へすばやく移動させ基材表面に溶融状態が保持されず、積層皮膜が形成されたと推測された。現在,テフロン、PE、PET、バイオポールなどの各種プラスチックに対して溶射を行い,溶射粒子注入現象に対する基材組成の影響を検討している.プラスチックの高機能化すなわち光触媒機能の付与を目的として、溶射により生分解性プラスチックのビオノーレにTiO_2粒子の溶射を行った。プラズマ溶射を行うと、Cuで行った場合と同様にビオノーレ基材内に打ち込まれる形態が顕著に観察された。粒径2030μm程度の大きい粒子は未溶融であり、10μm以下の小さい粒子は完全に溶融していることがSEM観察より判明した。また、500Aにおいてパス数を増加させると打ち込み粒子上に皮膜が積層するのが認められた。X線回折結果によると、電流値350Aの場合では、He圧OMPa時と同様に、PET基材のピークが検出され、完全な皮膜形成には至っていなかった。400Aの場合においても1パスの場合ではPET基材のピークが検出されるが、パス数の増加により完全な皮膜となりPET基材表面を被覆することがわかった。500Aの1パスにおいて、アナターゼ型TiO_2の存在比が比較的高いのは、比較的粒径の大きな未溶融アナターゼTiO_2がPET基材に打ち込まれているためであった。また、パス数を増加させると、溶融した粒子によるルチルTiO_2の存在比の上昇が全条件において認められた。一方、高速ガスフレーム(HVOF)溶射を用いると、低温で高速注入が可能であるために、ビオノーレ上にアナターゼ100%のTiO_2溶射皮膜を形成することが可能となった。有害物質を分解するには、光触媒活性の高いアナターゼ相の存在していることが望ましいために、アナターゼ100%のTiO_2溶射皮膜が得られたことは、学術的にも工業的にも画期的な内容といえる。
造血細胞における、外来遺伝子の導入効率・発現効率の向上を目指した手法の開発

本研究では、レトロウイルス・ベクターを用いた実用可能な新たな手法を開発し、マウスのストローマ細胞株を用いて、ヒトの幼若な造血細胞をin vitroで増幅すると共に、遺伝子を導入することを試みた。マウスのストローマ細胞株とヒト臍帯血由来の造血幹細胞との共培養の系を用いて以下の結果を得た。1。ストローマ細胞株とヒト臍帯血由来の造血幹細胞との共培養の系にヒト造血因子を添加することで、CD34+/38-のマーカーを持つ細胞を数百倍以上増幅し得た。2。この培養系でヒトLTC-ICの増幅が可能であった。3。増幅された、CD34+/38-のマーカーを持つ細胞は、NOD/SCIDマウスにおいて、ヒトの造血を再構築した。この共培養系を用いて、レトロウイルスベクターによる遺伝子導入を試みた。1。ヒト臍帯血由来CD34+/38-細胞の約15%にマーカー遺伝子の発現を確認した。2。フレンド白血病ウイルス(SFFV)のLTRとMurine ES Cell Virus(MESV)ベクターのleaderの基本構造を持つベクター(FMEVタイプ)は、モロニー白血病ウイルス(MoMLV)を基本骨格としたベクターに比べて、造血幹細胞(CD34+/38-)での遺伝子発現が高かった。4。遺伝子伝導された細胞は、NOD/SCIDマウスにおいてヒトの造血を再構築した。1。2。3。1。2。4。平成10年度の本研究では、ヒト造血幹細胞への遺伝子導入効率をあげ、発現効率を向上させる、レトロウイノルス・ベクターを用いた手法の開発を目指し、以下のことをおこなった。1。ストローマ細胞を用いた、アンフォトロピック・パッケージング細胞株、および、シュードタイプ・パッケージング細胞株の樹立2。アンフォトロピック・ウイルスベクター産生細胞の作成3。各種のヒト造血細胞株でのマーカー遺伝子発現効率の比較検討以上のことから、次のような結果を得た。1。効率良い遺伝子導入を行うため、VSVG蛋白とシュードタイプ・ウイルスを作成することの有用性が確認できた。しかし、ストローマ細胞由来のパッケージング細胞では、NH/3T3胞由来のパッケージング細胞に比べて、安定したウイルス産生クローンを得るのが困難であることが、確認された。現在、GA-V(Gbon Ape Leukemia Virus)のenvを用いた、シュードタイプ・パッケージング細胞の樹立を試みている。2。既存のNH/3T3細胞由来のパッケージング細胞株を用いて、種々のレトロウィルスベクターのアンフォトロピック・ウイルスベクター産生クローンを樹立した。。3。種々のレトロウイルスベクターのアンフォトロピック・ウイルスベクターを種々の造血細胞株に遺伝子導入し、遺伝子の発現を比較検討した。SFFVpのU3領域とMESVのleader領域を持つPMEVタイプのレトロウイルスベクターが、ヒトの幼若な造血細胞株において、最も強い発現をもたらすことが見いだされた。本研究では、レトロウイルス・ベクターを用いた実用可能な新たな手法を開発し、マウスのストローマ細胞株を用いることで、ヒトの幼若な造血細胞をin vitroで増殖すると共に、遺伝子を導入することを試みた。1.ストローマ細胞株とヒト臍帯血由来の造血幹細胞との共培養の系にヒト造血因子を添加することで、CD34+/38-のマーカーを持つ細胞は、数百倍以上増幅し得た。2.この培養系で、ヒトLTC-ICの増幅が可能であった。3.増幅された、CD34+/38-のマーカーを持つ細胞は、NOD/SCiDマウスにおいて、ヒトの造血を再構築した。また、この培養系を用いて、レトロウイルスベクターにより、ヒト臍帯造血由来CD34+細胞への遺伝子を試みた。

1.CC34+/38-細胞の約15%にマーカーとして用いたマウスCD8aの遺伝子発現を確認した。2.フレンド白血病ウイルス(SFFV)のLTRとMurine ES Cell Virus(MESV)ベクターのleaderの基本構造を持つベクター(FMEVタイプ)は、モロニー白血病ウイルス(MoMLV)を基本骨格としたベクターに比べて、造血幹細胞(CD34+/38-)での遺伝子発現が高かった。3.ヒトLTC-ICへの遺伝子導入・発現が確認された。4.遺伝子導入された細胞は、NOD/SCIDマウスのおいてヒトの造血を再構築した。
在宅人工呼吸療法中の小児の両親の介護負担に関する研究

医療的ケアや絶え間のない全身管理が必要な小児の在宅人工呼吸療法(以後HMVと略)中の介護者の介護負担因子やその関係性を明確にして在宅人工呼吸療法の両親の介護負担モデルを構築することを目的とした。1.HMVを行っている小児の介護者に半構成的面接調査を行った。ラザルスのストレス認知理論を元に、ストレス認知の状況や影響を明らかにした。その結果、【困難・たいへんと認知した事象】は、小児のHMVの特殊性として母親と小児が精神的にそばから離れられない「子離れ親離れできない」ことや社会資源の不足など「医療行政・社会資源の問題」があり、それが「時間の拘束」「行動制限」を増幅していた。夫の仕事への影響やきょうだいの精神症状などの「家族への影響や気遣い」、頻回の処置や母親の高齢化の症状や子の身体的成長などによる「身体的負担」、障害児の母親像や完壁な介護への固定観念などから「精神的負担感」を生じていた。光熱費や介護の消耗晶などを「経済的負担」とし、「地域・社会との関係」などをストレスとして認知していることがわかった。【対処】は、問題焦点型は、部屋の中でできる楽しみや、必要な時聞の確保のための工夫、精神症状を起こさないための対処方法、家族会への参加や相談、夫の介護協力への諦めや子離れのための割り切りなどがあった。感情焦点型は、感情を表出したり楽観的な考えにシフトさせたりしていた。【ソーシャルサポート1は、訪間看護師や家族、友人らに支えられていたが、夫の介護協力不足を認知していた。【介護の長期的・短期的影響】は、睡眠障害、うつ症状などの精神的症状や介護への否定感、腰痛・頭痛、持病の悪化などの身体症状として出環していた。2.1の調査対象者を増やし分析を詳細に行うことと、この結果と先行研究より構成概念・介護負担モデルの検討の必要がある。
日本列島の隆起準平原の平坦化の時期-フィッション・トラック年代学からのアプローチ-

花崗岩の場合、冷却史と上昇史が一致するとは限らない〔例えば、松田他の平成6-9年度科学研究費補助金「飛騨帯を形成する地質体の接合過程」〕。冷却と上昇を分離し、上昇史に注目してそれを日本列島に広範囲に展開するために、準平原化という鍵を使って今回の研究を行った。日本列島の各地の隆起準平原の形成年代を、花崗岩質岩に含まれるアパタイトのフィッション・トラック年代と考えた。アパタイトのフィッション・トラック年代の閉鎖温度はおよそ110°Cで、各種の年代測定では最も温度が低い。この年代を求めることで、準平原化、つまり現在地表に分布している花崗岩質岩の最終的な隆起年代を決定することが出来る。この目的のための試料採取は、地域内部の密度よりも日本列島各地を出来るだけ広く行うため、北海道と九州を除く広範囲を行った。各試料のアパタイトのフィッション・トラック年代結果は次の通りである。尚、試料名を特に記さない場合は、白亜紀の花崗岩質岩の結果である。北上山地、82-100Ma。阿武隈山地、46-78Ma(大半は55-70Ma)。新潟県の五頭山、6.08Ma。飛騨地域のジュラ紀(?)花崗岩類、40-50Ma。(そのトラック長は徐冷パターン。尚、ジルコンのフィッション・トラック年代は100-140Ma。)中部地域の花崗岩類と白亜紀火山岩類、45-55Ma。中国地方の脊梁部、16-30Ma。淡路島から四国西部、28-46Ma。以上から、日本列島の花崗岩類がアパタイトのフィッション・トラック年代の閉鎖温度110°C付近まで冷却した時期は地域によって異なっていることが明らかになった。この結果は、日本列島が、白亜紀以降地域ごとに異なった上昇冷却史をたどったことを示唆している。1998年11月から1999年3月の間に野外調査を行い,試料採取をした.採取した試料は白亜紀花崗岩類である.本年度は,領家帯と阿武隈帯で野外調査を行い20試料を採取した.領家帯では主に,岐阜県から三重県にかけての中部地方と,兵庫県南部で調査を行った.阿武隈帯では北部の福島県東部で調査を行う.採取した試料は研究室で岩石薄片を作成し,偏光顕微鏡下で観察を行い,変質の程度を調べた.これまでに採取した試料は全て新鮮な試料であり,年代測定に適したものと考えられる.試料を60メッシュ以下に粉砕し,鉱物分離を行ったところ,全ての試料からアパタイト・ジルコンを得ることができ,フィッション・トラック年代の測定が可能であることが分かった.また,新鮮なカリ長石・黒雲母・角閃石を得ることができた試料もあり,K-Ar法か,Ar-Ar法でも年代を測定することができることが分かった.ジルコンのフィッション・トラック年代を測定するためには,ホットプレート上でPFAテフロンシートに埋め込み,研磨する必要がある.PFAテフロンは融点が320°Cと高温であり,ホットプレートの温度調整を細かく行うことが難しく,埋込んだシートごとに「むら」があり,後の作業に困難が伴うことがあった.しかし,新たに制作依頼した高精度の温度制御ができるホットプレートを用いることにより,テフロンシ一トへの埋め込みが容易になった.花崗岩の場合、冷却史と上昇史が一致するとは限らない〔例えば、松田他の平成6-9年度科学研究費補助金「飛騨帯を形成する地質体の接合過程」〕。

1999年7月に中部地方の領家帯,9月に北上山地,11月に北上山地と阿武隈山地,12月に近畿地方の領家帯の各白亜紀花崗岩類の野外調査を行い,試料採取をした.2000年3月中旬にも阿武隈山地の補足的な調査・試料採集を行う.また,花崗岩類の典型的な冷却史を知る目的で,11月には宮崎県大崩山バソリスの調査を行い中新世花崗岩類の採取を行った.本年度採取した試料数は60試料におよんだ.採取した試料は研究室で岩石薄片を作成し,偏光顕微鏡下で観察を行い,変質の程度を調べた.これまでに採取した試料は全て新鮮な資料であり,年代測定に適したものと考えられる.各試料から約3kgを選び60メッシュ以下に粉砕したのち,重液法と磁選法により鉱物分離を行ったところ,フィッション・トラック年代の測定に適したアパタイトを90%の試料から,ジルコンを95%の試料から得ることができた.また,新鮮なカリ長石・黒雲母・角閃石を得ることができた試料もあり,K-Ar法か,Ar-Ar法でも年代を測定する用意ができた.昨年度に採取した試料も含め,これまでに白亜紀花崗岩類について73試料からジルコンと66試料のアパタイトの分離を終了し,京都大学原子炉で熱中性子照射を行った.また,別途入手した中新世屋久島花崗岩体からの試料についてアパタイトとジルコンの中性子照射も終了した.年代測定を開始しており,これまでに中新世花崗岩類に関して,ジルコン12試料,アパタイト14試料の年代測定を終了した.アパタイトで約9Ma,ジルコンで約14Maの年代値を得ることができている.アパタイトの閉鎖温度はその中に含まれるフッ素と塩素の量比により異なるので,その測定も島根大学の協力を得て開始した.本年度は,本申請研究の最終年度である.一昨年昨年の試料を補足するために,平成12年度には阿武隈山地の調査・試料採集を行った.また,今までの試料に加えて,能登半島の飛騨帯花崗岩類,中国地方東部の山陽帯・山陰帯花崗岩類の調査・試料採取を行い,対象となる準平原面を広げた.採取した試料のほとんどは肉眼で新鮮で,風化による年代への影響は無視できると考えられる.また,領家帯や飛騨帯の花崗岩試料のいくつかを薄片観察したが,風化の影響は無視できる程度であった.また,変成作用を受けている物が認められたけれど,飛騨帯の船津型の花崗岩類を除いて今回の年代測定試料では出来るだけそれらの試料を使わなかった.花崗岩類が変成作用を受けたと思われる組織もほとんど認められなかった.これらの試料の鉱物分離と平行して,アパタイトのフィッション・トラック年代の測定を行った.これまでに,北上山地で5試料,阿武隈山地で15試料,五頭山岩体で1試料,飛騨地域で20試料,中部から四国地方の領家帯で6試料,中部地域の白亜紀火山岩類で7試料,山陰・山陽帯で6試料の年代測定が終了した.研究代表者の松田が,第42次南極地域観測隊に参加するため,平成12年度10月から国立極地研究所に移動したため,研究代表者を勤めることができなくなった.そのため,研究代表者を後藤に変更した.本研究は順調に進んでおり,研究代表者が変わることによって,研究の遂行に差し支えはない.
エストロゲン,抗エストロゲン剤のerbB-2,EGFRに及ぼす影響

ヌードマウス可移植性ヒト乳癌細胞株MCF-7(ER-positive)を用いて,17β-Estradiol(E2)またはantiestrogen(TAM)のER,PgR,erbB-2,EGFRに対する影響について検討した.MCF-7をヌードマウス24匹の両側腹部皮下に注入し,同時にE2ペレットも埋没した.5週間後に,(1)Control(E2),(2)E2除去(E2ペレット除去),(3)E2+TAM,(4)E2除去+TAMの4群に分け,4週間後に腫瘍を計測後,腫瘍を摘出した.摘出した腫瘍は一部を凍結保存し,残りを24時間ホルマリンに固定後パラフィン包埋した.各腫瘍についてerbB-2,EGFRの発現および自己リン酸化をウエスタンブロット法で,ER,PgR,erbB-2,EGFRの発現を免疫組織学的に検討した.また,細胞増殖能に関してはMIB1,PCNAの各抗体を用いて免疫組織学的手法で検討した.<結果>腫瘍重量変化はE2除去群,E2+TAM群およびE2除去+TAMでControl群に比べて有意な抗腫瘍効果を示した.ウエスタンブロット法によるerbB-2,EGFRの測定は各群とも腫瘍間のばらつきが大きく,有意差はなかった.免疫組織学的には各群でMCF-7におけるerbB-2,EGFRの発現はみられなかった.免疫組織学的にERはE2除去群で最も発現が強く,Control群で最も弱かった.E2+TAM群ではControl群よりややERの染色性が増し,E2除去+TAM群ではE2除去群よりERの染色性は低下した.PgRの発現はControl群で最も発現が強く,E2除去群ではPgRの発現はほとんどみられなかった.E2+TAM群ではControlよりややPgRの発現は減弱し,E2除去+TAM群ではE2除去群より発現が増強した.細胞増殖能の評価ではMIB1においてE2除去+TAM群で他の3群に比べ発現が低下していた.PCNAでは4群における差はなかった.今後は腫瘍増殖を細胞増殖だけでなく細胞死(apoptosis)も考え評価する実験を行う予定である.ヌードマウス可移植性ヒト乳癌細胞株MCF-7(ER-positive)を用いて,17β-Estradiol(E2)またはantiestrogen(TAM)のER,PgR,erbB-2,EGFRに対する影響について検討した.MCF-7をヌードマウス24匹の両側腹部皮下に注入し,同時にE2ペレットも埋没した.5週間後に,(1)Control(E2),(2)E2除去(E2ペレット除去),(3)E2+TAM,(4)E2除去+TAMの4群に分け,4週間後に腫瘍を計測後,腫瘍を摘出した.摘出した腫瘍は一部を凍結保存し,残りを24時間ホルマリンに固定後パラフィン包埋した.各腫瘍についてerbB-2,EGFRの発現および自己リン酸化をウエスタンブロット法で,ER,PgR,erbB-2,EGFRの発現を免疫組織学的に検討した.また,細胞増殖能に関してはMIB1,PCNAの各抗体を用いて免疫組織学的手法で検討した.<結果>腫瘍重量変化はE2除去群,E2+TAM群およびE2除去+TAMでControl群に比べて有意な抗腫瘍効果を示した.ウエスタンブロット法によるerbB-2,EGFRの測定は各群とも腫瘍間のばらつきが大きく,有意差はなかった.免疫組織学的には各群でMCF-7におけるerbB-2,EGFRの発現はみられなかった.免疫組織学的にERはE2除去群で最も発現が強く,Control群で最も弱かった.E2+TAM群ではControl群よりややERの染色性が増し,E2除去+TAM群ではE2除去群よりERの染色性は低下した.PgRの発現はControl群で最も発現が強く,E2除去群ではPgRの発現はほとんどみられなかった.E2+TAM群ではControlよりややPgRの発現は減弱し,E2除去+TAM群ではE2除去群より発現が増強した.細胞増殖能の評価ではMIB1においてE2除去+TAM群で他の3群に比べ発現が低下していた.PCNAでは4群における差はなかった.今後は腫瘍増殖を細胞増殖だけでなく細胞死(apoptosis)も考え評価する実験を行う予定である.
心筋虚血に対するSonic Hedgehogの遺伝子治療

近年、胎生期のみに存在すると考えられていた個体の発生に重要な幹細胞が、成体の骨髄中や(一部は臓器内にも)存在することが明らかになり、それら幹細胞の大量移植によって幹細胞自身が必要な細胞に分化し、組織修復や組織再生が可能であることが報告され、細胞治療にはおおきな期待がされている。こうした事実は胎生期の器官発生・分化に関与している幹細胞をとりまく様々な環境因子も、組織障害後の修復・再生においても重要な役割を果たしている可能性が考えられる。Hedgehog系は、胎生期の器官発生、分化誘導に関与する重要なMorphogenとして知られている。現在まで、胎生期の様々な器官発生を促す重要な因子として報告されているが、心臓に関してはほとんど知られていない。今回我々は、胎生期にのみ存在していると考えられていた内因性のhedgehog系(特にShh系)が、成体においても存在し、心筋の虚血部位で活性化されること、心臓線維芽細胞のみならず心筋細胞にもhedgehogの受容体である(patched-1:ptc1)受容体が発現していることを発見した。Shh遺伝子導入を行い虚血部位においてhedgehog系を過剰発現させてところptc1受容体のupregulationが生じ、ラット急性心筋虚血モデルにおいて、心筋梗塞巣の減少、リモデリング抑制効果が確認された。これらの効果は、Shhによって誘導された、様々な内因内性サイトカインに依ることがわかり、血管新生(関連サイトカイン:VEGF,Angiopoietin-1 and -2)、アポトーシスの抑制(関連サイトカイン:IGF-1)、骨髄由来の幹細胞の集積増加(関運サイトカイン:SDF-1)など様々な効果によってもたらされることが判明した。これらの結果は、この胎生期にのみ存在すると考えられていたhedgehog系が成体の心臓組織にも存在し、虚血時に直接あるいは間接的に、血管新生のみならず心筋虚血後の組織の修復再生に重要な働きをしている可能性があり従来のサイトカインの単独療法に比べ、様々なサイトカイン放出を線維芽細胞から促すためサイトカイン単独遺伝子療法よりもShh遺伝子治療は有用であると考えられる。1培養心筋線維芽細胞に対する作用。Sonic hedgehog(Shh)蛋白を添加することによる、培養心臓線維芽細胞からの種々のサイトカインの誘導を定量的PCRで検討したところ容量依存的に、血管新生に関連するVEGF、angiopoietin-1,2の増加が生じていた。他のサイトカインの検討では、抗アポトーシスを促すIGF-1さらに末梢血幹細胞を局所に集積させる作用のあるSDF-1の増加が生じていた。これらの増加は、Shhカスケードの下流にあるtranscriptional factorのGliの発現に比例しており、Shh投与によって、様々なサイトカインが心臓線維芽細胞から生じていることがわかった。2抗アポトーシス作用の検討。Vivoにおける抗アポトーシス作用の検討には、マウス心筋梗塞モデルを用いた。Shhプラスミド100μgを直接injectionしたあと4週後にactive-caspase3染色を行ったところ、borderzone領域に認められる陽性心筋領域は有意に減少しており、vivoモデルでの抗アポトーシス作用が確認された。さらに、vitroの検討ではH2O2添加による培養心筋細胞のアポトーシス誘導がShh蛋白の前処置によって抑制されるかを検討したところ、TUNEL陽性心筋細胞は有意に減少しており、Shhの抗アポトーシス効果が確認された。

3局所への幹細胞誘導の検討。Tie2/LacZキメラマウスを作成したのち、心筋梗塞を作成し、Shhプラスミドinjection後1週、4週目に骨髄由来の血管内皮前駆細胞(EPC)の集積をXgal染色で確認した。Xgal陽性細胞は、有意にShhプラスミド投与群で増加しており、虚血部位への幹細胞誘導がShh投与によって増加していることが確認された。1.遺伝子導入でもたらされた新生血管の組織学的特徴。Sonic hedgehog(Shh)遺伝子導入を行ったラット心筋梗塞モデルでは、Vascular endothelial growth factor(VEGF)-2遺伝子導入を行ったモデルに比べ、新生された血管の構造に違いがあることがわかった。αsnlooth muscle actin(αSMA)でその違いを調べたところ、Shhの新生血管はVEGF-2のそれにくらべはるかにαSMA陽性血管、すなわちより成熟した血管新生が生じていることが確認された。(この結果はAnmerican Heart Association 2004,日本循環器病学会2005で発表を行った)2.Shhの心筋細胞に対する効果。Shh遺伝子導入によって心筋梗塞巣の減少効果が認められたことが、昨年の研究で判明したが、borderzoneの心筋組織に有意に残存心筋細胞が多いこと、ShhのPtc受容体が心筋細胞に存在していることが確認されたことから、Shhの心筋細胞への効果を検討した。BrdU染色を行ったところ、コントロールに比べ、BrdU陽性心筋細胞が増加していた。このBrdU陽性細胞は、骨髄由来ではないことから、Shhの心筋への直接作用が考えられた。そのため、H9C2(心筋芽細胞)を用いてShnhのthymidine取り込みを検討したところ、Shh投与によってdose dependentにthymidineの取り込みが増加しており、Shhnによる心筋増殖作用が考えられた。さらにラットneonatal心筋細胞を用いて検討したところ、Shh投与によってBrdU陽性心筋細胞が確認された。以上から、Shhは血管新生作用だけだなく、心筋細胞に直接作用して、増殖を促すことが示唆された。(この結果はAnmerican Heart Association 2004,日本循環器病学会2005で発表を行った)
野生マウスの遺伝子プールから発掘した雑種強勢ＱＴＬの最有力候補遺伝子の同定

雑種強勢は100年以上前に発見され家畜の育種改良に必須の遺伝現象であるが、その責任遺伝子は未だにクローニングされていない。野生マウスを用いた以前のQTL研究により、体重に関与し超優性を示す雑種強勢QTLを限られたゲノム領域内に位置づけた。本研究では、サブコンジェニックマウス系統を用いた表現型解析、エクソーム解析とトランスクリプトーム解析により、体重、体長と白色脂肪組織重量に関わるQTLsを2.1-8.0 Mbのゲノム領域内に位置づけることに成功した。これらのQTLsに関する雑種強勢効果は明確ではなかったが、mRNA発現量の異なる候補遺伝子を数個発見することができた。雑種強勢は、100年以上前から家畜の育種改良に使われている必須の遺伝現象である。しかし、その責任遺伝子は未だに同定されていない。申請者は、これまでに、マウスを家畜のモデルとして、体重について雑種強勢を示す超優性QTL(量的形質遺伝子座)を21Mbのゲノム領域に位置づけた。また、予備実験の結果、体重関連形質に関わるQTLも雑種強勢を引き起こす可能性が示された。本研究では、体重とその関連形質に関与する雑種強勢QTLの候補遺伝子の同定を行う。今までに樹立したサブコンジェニック系統とレシピエント系統のC57BL/6J (B6)系統と交配し、導入ゲノム領域に関して3つのディプロタイプが分離しているF2交雑群を生産した。得られたF2個体の体重を生後1、3、6、10と14週齢に測定した。14週齢で屠殺し、肝臓、白色脂肪組織重量等の臓器重量と体長を計測した。遺伝子発現解析のための試料として、肝臓、腎臓、白色脂肪組織等の一部を採取し、超低温フリーザーに保存した。導入ゲノム領域について各ディプロタイプのF2個体の肝臓および白色脂肪組織から総RNAを抽出し、RT-PCR法によりcDNAを合成した。引き続き、次世代シークエンサーIllumina HiSeq2000を用いてmRNA-seq解析を行った。その結果、ディプロタイプ間で遺伝子発現量が2倍以上または0.5倍以下異なる遺伝子を肝臓では9個、白色脂肪組織では11個発見することができた。雑種強勢は、100年以上前から家畜の育種改良に使われている必須の遺伝現象であるが、その責任遺伝子は未だに同定されていない。本研究では、体重とその関連形質に関与する雑種強勢QTLの候補遺伝子の同定を行うことを目指す。今までに樹立したサブコンジェニック系統とそのレシピエント系統のC57BL/6Jと交配し、導入ゲノム領域に関して3つのディプロタイプが分離しているF2交雑群を生産した。14週齢で屠殺し、肝臓、白色脂肪組織重量等の臓器重量、体長、血中脂質成分量を計測した。その結果、3つのディプロタイプ間で統計学的に有意な差異があることが、12種類の体重とその関連形質において検出された。その内の1形質について雑種強勢が見られた。昨年度に次世代シークエンサーによりmRNA-seq解析を行った結果、ディプロタイプ間で遺伝子発現量の差異が2倍以上または0.5倍以下異なる遺伝子を肝臓では9個、白色脂肪組織では11個発見した。これらの結果を確認するために、mRNA-seq解析に用いた同じF2集団を用いて、肝臓と白色脂肪組織から総RNAを抽出してRT-PCR法によりcDNAを合成し、リアルタイムqPCR解析を行った。およそ半数の遺伝子について解析を行った結果、肝臓および白色脂肪組織において、3つのディプロタイプ間で統計学的に有意な遺伝子発現量の差異がある遺伝子を幾つか確認することができた。また、バイオインフォマティク解析によりタンパク質高次構造に影響を与えると考えられる非同義置換SNPsをもつ遺伝子を幾つか検出できた。昨年度に次世代シークエンサーによりRNA-seq解析を行った結果、ディプロタイプ間で遺伝子発現量の差異が2倍以上または0.5倍以下異なる遺伝子を肝臓では9個、白色脂肪組織では11個発見した。

これらの結果を確認するために、昨年度に引き続き、RNA-seq解析に用いた同じF2集団を用いて、肝臓と白色脂肪組織から総RNAを抽出してRT-PCR法によりcDNAを合成し、リアルタイムqPCR解析を行った。すべての遺伝子についてリアルタイムqPCR解析を行った。リアルタイムqPCR解析で得られた遺伝子発現量、表現型値とディプロタイプとの間で相関解析を行ったところ、白色脂肪組織重量に関わり、肝臓で発現している遺伝子を1つに絞り込むことができた。白色脂肪組織で発現している遺伝子に関しては有意な相関関係が認められなかった。この結果をまとめて、学会発表を行った。雑種強勢は100年以上前に発見され家畜の育種改良に必須の遺伝現象であるが、その責任遺伝子は未だにクローニングされていない。野生マウスを用いた以前のQTL研究により、体重に関与し超優性を示す雑種強勢QTLを限られたゲノム領域内に位置づけた。本研究では、サブコンジェニックマウス系統を用いた表現型解析、エクソーム解析とトランスクリプトーム解析により、体重、体長と白色脂肪組織重量に関わるQTLsを2.1-8.0 Mbのゲノム領域内に位置づけることに成功した。これらのQTLsに関する雑種強勢効果は明確ではなかったが、mRNA発現量の異なる候補遺伝子を数個発見することができた。昨年度の交付申請書に記載した研究実施計画のとおり、順調に研究を遂行することができた。27年度が最終年度であるため、記入しない。動物遺伝育種学平成26年度に引き続き、mRNA-seq解析結果により発現量の差異がみられたすべての遺伝子について、リアルタイムqPCR解析を完了する。F2分離集団において、リアルタイムqPCR解析で得られた遺伝子発現量、表現型値とディプロタイプ間で相関解析を行い、着目した量的形質に関与する遺伝子を絞り込む。随時結果をまとめて、学会発表等を行う。今年度の消耗品の残金。その残金は9,130円と非常に少額であるとともに、本研究課題は次年度に継続する。したがって、無理にその少額な残金を本年度中に使用する必要性が無いために次年度に繰り越した。平成25年度に引き続き、サブコンジェニック系統とB6系統間のF2交雑群の作出と表現型評価を行う。今までに、導入ゲノム領域内に存在する遺伝子のエクソン内に多くの非同義置換があることを明らかにしている。そこで、各種の公的データベスや解析ソフトを用いて、タンパク質高次構造等に影響を与えると考えられる非同義置換をもつ遺伝子や、体重・脂質代謝などに関連のある遺伝子を抽出する。平成25年度のmRNA-seq解析結果により発現量の差異がみられた遺伝子について、リアルタイムqPCR解析を行い、mRNA-seq解析の結果を確認する。随時結果をまとめて、学会発表を行う。次年度の消耗品に充てる。海外での学会発表を取りやめて別の消耗品の購入に使用したために、若干の次年度使用額が生じた。次年度の海外での学会発表に充てる。
甲状腺ホルモン脱ヨード酵素を軸とした新たな疾患概念と治療法の探索

甲状腺ホルモンは甲状腺より分泌されるホルモンであり、脳、筋肉、心臓、肝臓など全身の臓器に作用し、体全体の代謝に関わっている。甲状腺ホルモンは甲状腺から分泌後、各臓器で活性化・不活化され甲状腺ホルモン作用を発揮する。本研究は、この甲状腺ホルモンの代謝を行う甲状腺ホルモン脱ヨード酵素に着目し、酵素活性の変化による甲状腺ホルモン作用の調節という観点から、新たな病態・疾患概念の確立や臓器特異的な甲状腺ホルモン作用調節機構に基づいた創薬を目的とする。