hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
肝炎・肝癌自然発症ラットを用いた肝発癌過程の研究

我々は最近,肝炎,肝癌を自然発症する遺伝性肝炎ラット(LECラット)を開発,樹立することに成功した.この動物は特別な誘因もなく,生後4ヶ月頃に突然重症の黄疸を発現し,約半数は亜広汎肝細胞壊死で死亡するが,残りの半数は長期生存し, 1年半を過ぎると全例に肝癌の発生をみるものである.肝細胞壊死の原因としては,ヒトのHBVのようなウィルスは検出されていないが, LECラットはヒトの劇症肝炎の発症や,肝炎から肝癌への進展に関する貴重なモデル動物である.そこで,このLECラットを用いて肝細胞障害の発生機序や,癌化機構について研究した.1)肝細胞壊死に関連して:LECラットの肝細胞壊死は,単一の遺伝子に支配され,常染色体性劣性遺伝形式に従うことが明らかとなった.肝炎発症ラットでは,組織学的に肝細胞の核と細胞質の巨大化が特徴的である.電顕的に異常な物質の蓄積はみられない.肝細胞の脱落がみられ,一方では肝細胞の細胞分裂像がみられるにもかかわらず,肝細胞が巨大化することから,肝細胞の分裂障害が推定された.そこで肝細胞を単離し, DNA量を測定したところ, 2倍体の累乗倍に増加しており,細胞分裂障害の起っていることが明らかにされた.こうした障害が肝細胞壊死とどの様な関連をもつかについて,生化学的,分子生物学的に検索しているところである.2)肝発癌に関連して:生後4ヵ月以降,肝炎を発症しても生存し得たラット肝には,化学発癌過程と同様の酵素偏倚巣が認められ,加令と共に増大する. 1年半以降では全例に肝癌の発生をみることから,このLECラットは高発癌性の系統であると考えられる.そうであるならば,短期間少量の発癌剤投与により,前癌病変,癌をより早期に,より高率に形成することができる筈である.予備実験ではこれを示唆する所見が得られており,本実験を継続中である.我々は最近,肝炎,肝癌を自然発症する遺伝性肝炎ラット(LECラット)を開発,樹立することに成功した.この動物は特別な誘因もなく,生後4ヶ月頃に突然重症の黄疸を発現し,約半数は亜広汎肝細胞壊死で死亡するが,残りの半数は長期生存し, 1年半を過ぎると全例に肝癌の発生をみるものである.肝細胞壊死の原因としては,ヒトのHBVのようなウィルスは検出されていないが, LECラットはヒトの劇症肝炎の発症や,肝炎から肝癌への進展に関する貴重なモデル動物である.そこで,このLECラットを用いて肝細胞障害の発生機序や,癌化機構について研究した.1)肝細胞壊死に関連して:LECラットの肝細胞壊死は,単一の遺伝子に支配され,常染色体性劣性遺伝形式に従うことが明らかとなった.肝炎発症ラットでは,組織学的に肝細胞の核と細胞質の巨大化が特徴的である.電顕的に異常な物質の蓄積はみられない.肝細胞の脱落がみられ,一方では肝細胞の細胞分裂像がみられるにもかかわらず,肝細胞が巨大化することから,肝細胞の分裂障害が推定された.そこで肝細胞を単離し, DNA量を測定したところ, 2倍体の累乗倍に増加しており,細胞分裂障害の起っていることが明らかにされた.こうした障害が肝細胞壊死とどの様な関連をもつかについて,生化学的,分子生物学的に検索しているところである.2)肝発癌に関連して:生後4ヵ月以降,肝炎を発症しても生存し得たラット肝には,化学発癌過程と同様の酵素偏倚巣が認められ,加令と共に増大する. 1年半以降では全例に肝癌の発生をみることから,このLECラットは高発癌性の系統であると考えられる.そうであるならば,短期間少量の発癌剤投与により,前癌病変,癌をより早期に,より高率に形成することができる筈である.予備実験ではこれを示唆する所見が得られており,本実験を継続中である.
加齢に伴う蛋白質分解活性低下の分子機構

(1)ニワトリ・リゾチームの老若マウス肝細胞における分解半減期老若マウス肝細胞に導入したニワトリ・リゾチームの分解半減期はそれぞれ約60時間、と約30時間であった。すなわち、老齢では半減期が2倍に延長していた。(2)酸化修飾リゾチームの老若マウス肝細胞における分解半減期ニワトリ・リゾチームを鉄イオン触媒によって酸化し、老若マウス肝細胞に導入して分解半減期を調べたところ若齢で約16時間、老齢で約20時間だった。すなわち、いずれの細胞でも酸化リゾチームの方が酸化していないリゾチームより速く分解された。分解は、老齢で若干遅くなっているが老若の間に有意差は見られなかった。(3)酸化蛋白質を優先的に分解する酵素の精製ラット肝臓から酸化リゾチームを非酸化リゾチームよりよく分解する酵素を精製した。精製酵素の性質を詳細に検討したところ、これは従来からインスリン分解酵素IDEとして知られているものに一致した。IDEが酸化蛋白質を優先的に分解するというのは新たな発見である。ラット肝臓ホモジネートのIDE活性(蛋白質あたり)は、酸化リゾチームを基質にした場合老若でほとんど変わらず、インスリンを基質にした場合は老齢でやや(2030%)低下していた。(4)老若ラットの大脳皮質および脳幹におけるプロテアソーム活性異常蛋白質の分解に関わっているとされているプロテアソームの活性測定法をラット脳抽出液を用いて確立し、老若ラットの大脳皮質および脳幹のプロテアソーム活性を測定したところ大脳皮質では老齢の方が30%低かったが脳幹では逆に30%ほど高かった。プロテアソームの活性で見る限り大脳皮質では加齢で異常蛋白質が蓄積しやすくなるといえる。われわれは、これまでに、肝実質細胞に導入された西洋わさびペルオキシダーゼおよび卵白アルブミン、また内在性蛋白質の分解半減期が加齢で5060%延長していることを明かにしてきた。これらはいずれも半減期が比較的長い(40100時間)蛋白質である。そこで今年度は、半減期が卵白リゾチームを同様の手法で調べた。卵白リゾチームは、プロテアソームの基質となることが示されているが、分解半減期は、若齢マウスの細胞で平均29時間、老齢では平均68時間であった。(老齢で約2.3倍の延長)。この事実は、老化動物の細胞では蛋白質分解が遅くなっていることを確認するとともに、ユビキチン依存の分解活性が低下していることを示唆している。一方、酸化修飾した卵白リゾチームを分解する活性を探索し、プロテアソームとは異なるプロテアーゼ活性を見いだした。この酵素は、従来異常蛋白質をエネルギー依存的に分解するとされているプロテアソームと違いATPを必要としなかった。この酵素をほぼ単一蛋白質にまで精製し性質を検討したところすでに報告されているインスリン分解酵素(IDE)と恐らく同一と考えられた(分子量、インスリン分解性、免疫学的交差性など)。この酵素はリゾチーム以外の蛋白質についても酸化修飾体の方をより良い基質にした。IDEが酸化蛋白質を良い基質にするというのは新たな発見である。酸化リゾチームに対する活性は老若ラット肝臓でほとんど変わらなかったが、インスリンに対する活性は老齢で2030%低下していた。(1)酸化修飾リゾチームの老若マウス肝細胞における分解半減期細胞内蛋白質異常化の原因として酸化傷害が考えられるので試験管内で酸化傷害蛋白質を作成しこれを老若肝細胞由来の細胞に導入して分解半減期を調べた。

まず、ニワトリ・リゾチームを鉄イオンを触媒に用いて酸化した。酸化の程度は、カルボニル量、アミノ酸組成分析、ビチロシンの生成によって測定した。その結果、カルボニル量の増加から約1/4、アルギニン残基数の減少から約3/4、ヒスチジンおよびリジン残基数の減少から約1/3の分子が酸化傷害を受けていることが分かった。この酸化リゾチームを老若マウス肝細胞に導入し分解半減期を調べたところ若齢で約16時間、老齢で約20時間だった。このように、老若いずれの細胞でも酸化リゾチームの方が元のリゾチーム(半減期は、それぞれ約30時間および60時間)より速く分解された。異常蛋白質は、正常なものよりも速やかに分解されるという従来の知見に一致する。異常分解は、老齢で若干遅くなってはいるが老若の間に有意差は見られなかった。(2)老若ラットの大脳皮質および脳幹におけるプロテアソーム活性異常蛋白質の分解に関わっているとされているプロテアソームの活性測定法をラット脳抽出液を用いて検討した。1040%蔗糖勾配遠心で得た分画についてATPあるいはSDSで活性化されるプロテアーゼ活性を測定したところ、それぞれ26Sおよび20S分画に存在した。この分画には抗プロテアソーム抗体を用いたウエスタンブロットで検出される複数のプロテアソーム構成蛋白質が存在した。ここで確立した方法を用いて老若ラットの大脳皮質および脳幹のプロテアソーム活性を測定したところ大脳皮質では老齢の方が約30%低かったが脳幹では逆に30%ほど高かった。プロテアソームの活性で見る限り大脳皮質では加齢で異常蛋白質が蓄積しやすくなるといえる。
腹腔鏡手術を支援する微小循環解析システムの構築

本研究課題では,Sidestream Dark Field撮影法に基づく我々のこれまでの試作機を大幅に改良し,腹部のアクセスポートから挿入可能で,かつ,取得した画像データから酸素飽和度推定,血流画像解析等が可能なシステムの構築を目指した.まずボアスコープと独自の照明機構を組み合わせた長いロッド型のプローブを試作し微小循環像が収集であることを確認した.また,酸素飽和度推定の高精度化を目指し光伝搬シミュレーションによる誤差要因の検討を進めた.さらに微小循環の血流速解析法も構築し,ラット小腸を対象とした実験を通してその有用性を確認した.細動脈,毛細血管,細静脈の総称である微小循環は,組織への酸素供給など生命維持の上で重要な機能を担っている.我々は主に舌下を対象とした微小循環撮影法を研究し,独自のデバイス開発を行ってきた.本研究では,この研究を腹腔鏡下手術支援に発展させる.Sidestream Dark Field撮影法に基づくこれまでの試作機から,光学系,機械系,電子系を大幅に改良し,腹部のアクセスポートから挿入可能で,かつ,取得した画像データから酸素飽和度推定,血流画像解析等が可能なシステムMiCALSを構築する.具体的な研究項目として,A:プローブ作成,B:酸素飽和度推定法の構築,C:血流画像解析と融合像生成,D:動物実験を挙げており,計画として25年度は,Aのうちのプローブの設計と試作を主課題としていた.実際には試作に時間を要し年度末に完成したところであり,本格的な調整や研究利用はこれからとなる.B課題は,光伝搬シミュレーション,ファントム実験,推定モデル構築であり,それぞれ一定の進展が得られた.特にシミュレーションについては成果がまとまり論文執筆中である.また,酸素飽和度推定については,微小循環そのものではないが,それらを平均的に観測する透過型計測デバイスを開発し,良好な推定結果を得ている.これらの成果は国際会議で発表予定である(採択済み).Cでは,手ブレのある動画像に対して,後処理によるぶれ補正のアルゴリズム開発を現在行っており,一定の見通しを得ている.Dは主に26年度以降の内容となっている.本研究では,我々がこれまでに開発を進めてきた舌下微小循環カメラを腹腔鏡下手術支援に発展させる.平成26年度は,これまでの試作機から光学系,機械系,電子系を大幅に改良し,腹部のアクセスポートから挿入可能なものを完成させた.ハード部分の製作は外注により実現し,代表者らは設計および改良指示を行ってきた.一方,装置に搭載する酸素飽和度推定,血流画像解析のソフトウエア部分の研究開発を進めてきた.具体的な研究項目として,酸素飽和度推定の方法の構築および誤差予測を光伝搬シミュレーションにより進め,微小循環の血管径や照明に用いるLEDの波長帯域の幅が推定精度に与える影響を明らかにした.この内容は米国光学会が発行する世界的に権威ある論文誌であるBiomedical Optics Express誌に刊行された.さらに酸素飽和度が既知の血液を用いた物理ファントム実験も行い,シミュレーションの検証や実践に向けた手法の調整等を進めている.一方,血流画像の動画像解析も進めた.試作開発中の撮影デバイスを用いてブタ小腸表面の微小循環を撮影し,その画像から流速分布の可視化を行った.前処理としてスパースモデルに基づいた強調処理が効果的であることを明らかにした.得られた流速分布マップを救急治療を専門とする連携研究者に提示したところ,非常に有用である旨のコメントが得られた.これら微小循環に関する研究の他に,よりマクロな臓器の組織酸素飽和度を推定するための透過計測技術および反射系撮影技術についても研究を進め,それぞれ学会発表を行った.細動脈から毛細血管を経て細静脈に至る血管系を微小循環と呼ぶ。微小循環の撮像技術としては、暗視野撮影法であるside-stream dark field(SDF)法が提案されているが、酸素飽和度を推定する機能はもたない。これに対しわれわれは、SDFに基づく微小循環のSO2推定、すなわちSDFオキシメトリを提唱し研究を進めてきた。複数色のLED下で被写体を約1.2μm/pixelの分解能で撮影できる装置を試作する一方で、カメラ信号からのSO2推定法を構築し、シミュレーションにより精度予測を行った。この結果10%以下の誤差でSO2推定が可能との予測を得た。また、この推定にあたっては光の散乱の特性を適切に考慮することが重要であることもシミュレーションを通して明らかにした。一方、関連研究として、疾患ラットモデルを用いた微小循環像からの疾患の程度の分析に関する研究も進めた。盲腸穿孔モデルにより敗血症を引き起こしたラットにおいて、微小循環領域での異常を画像として捉えることに成功した。また、得られる血流動画像から血流速度を推定する技術も構築できた。さらに関連研究として、透過光を利用した組織酸素飽和度の推定法およびデバイスを開発した。概ね良好は推定結果が得られることをブタ小腸を対象とした実験を通して確認した。本研究課題では,Sidestream Dark Field撮影法に基づく我々のこれまでの試作機を大幅に改良し,腹部のアクセスポートから挿入可能で,かつ,取得した画像データから酸素飽和度推定,血流画像解析等が可能なシステムの構築を目指した.まずボアスコープと独自の照明機構を組み合わせた長いロッド型のプローブを試作し微小循環像が収集であることを確認した.また,酸素飽和度推定の高精度化を目指し光伝搬シミュレーションによる誤差要因の検討を進めた.さらに微小循環の血流速解析法も構築し,ラット小腸を対象とした実験を通してその有用性を確認した.

計画ではプローブ作成,酸素飽和度推定法の構築,血流画像解析,の3つの課題を設定しており,これらのいずれの内容もほぼ予定どおり進めることができている.酸素飽和度推定法の構築については,シミュレーションとファントム実験が25年度実施の設定だったところ26年度まで費やしたが,おおよそ完了することができた.27年度が最終年度であるため、記入しない。医用画像工学プローブ作成については,計画どおり小型プローブの試作を進める.酸素飽和度の推定については,ファントム実験結果までを英文論文誌に投稿した上で,さらに動物を対象としてin-vivo実験を行い,推定酸素飽和度の妥当性の検証を行う.血流画像解析については,具体的な応用を設定してそれに向けた処理法の研究を進める.具体的には小動物を用いた薬効の効果判定などへの利用が考えられる.酸素飽和度推定法の構築については25年度中に方法構築を完了予定であったが,まだ継続する必要がある.その他のサブテーマについては順調に進んでいる.27年度が最終年度であるため、記入しない。カメラの試作費用が予想より抑えられ,18万円弱を翌年度に持ち越すこととなった.27年度が最終年度であるため、記入しない。A:プローブ作成については,ひとおとり完成した試作機を試し必要な改良を進める.B:酸素飽和度推定法の構築では,方法論を確立した上で,実験を通して検証する.C:血流画像解析と融合像生成については,具体的な動画像処理プログラムを実装していく.D:動物実験は,AからCの検証用の動物実験を実践していく.小型カメラの試作に当てる予定である.27年度が最終年度であるため、記入しない。
抗癌作用に貢献するHikeshiの細胞機能の解析

Hikeshiの機能を損なうと、様々は表現系が見られる。我々は、Hikeshiは、熱ストレスに依存したHsp70の核内輸送運搬体として同定したが、様々な表現系が見られるため、Hikeshiの輸送基質がHsp70以外にも存する可能性も検討した。しかし、Hikeshiの構造解析などの結果を合わせて考えると、Hikeshiの輸送基質はHsp70またはHsc70を含めたそのファミリー分子だけだと、今は考えている。言い換えれば、Hikeshiの機能欠損で見られる様々な表現系は、全て、Hikeshiの機能喪失に伴ったHsp70の核内機能の喪失ではないかと考えている。Hikeshiの機能解析を通して、未だ明らかになっていないHsp70の核内機能を明らかにしていきたい。CRSPR/Cas9でHikeshi遺伝子をノックアウトしたHeLa細胞を用いて、RNA seqによる遺伝子発現解析を行うと、Hikeshiをノックアウトするだけで、正常時で、HSF1のターゲット遺伝子の多くが緩やかに発現上昇することがわかってきた。HSF1は熱ストレス時に活性化して、そのターゲット遺伝子の発現を上昇させるが、ストレスを解除するとターゲット遺伝子の発現を低下させる。Hikeshiをノックアウトすると、ストレスを解除してもHSF1ターゲット遺伝子の発現は低下しない。つまり、Hikeshiをノックアウトすると、HSF1が活性化、あるいは活性抑制が阻害されると考えられる。HSF1はタンパク恒常性を司るマスター転写因子で、その活性制御の破綻は生体に広汎な影響を及ぼすと考える。本年度は、HikeshiをノックアウトするとHSF1の活性が抑制されることを細胞レベルで確認するとともに、HSF1の活性制御に核内Hsp70の機能が必須であることを証明していく。Heat shock elementを結合したリシフェラーゼ遺伝子を細胞に導入し、発現したルシフェラーゼの活性でHSF1の活性を測定した。Hikeshiをノックアウトすると、ルシフェラーゼ活性が上昇するが、このとき、同時にHikeshi遺伝子を導入すると、導入したHikeshi遺伝子の量に応じてルシフェラーゼ活性が低下する。このことから、Hikeshiの機能がHSF1転写活性抑制に必要であると確認された。HSF1が活性化すると、Hsp70などのHSF1ターゲット遺伝子の影響で、細胞のタンパク質凝集体が消失・形成阻害されることが知られている。野生型HeLa細胞と、HikeshiノックアウトHeLa細胞のそれぞれに、長さの異なるポリグルタミン酸タンパク質(polyQ19、polyQ57、polyQ81、polyQ97)を発現させ、ポリグルタミン酸凝集形成を定量した。その結果、polyQ81では、Hikeshiノックアウト細胞の凝集体形成が野生型細胞に比べておよそ50%(導入後24時間)、75%(導入後48時間)減少し、polyQ97では、およそ70%(導入後24時間)、60%(導入後48時間、導入後72時間)減少した。これらの定量結果から、HikeshiノックアウトでHSF1が活性化することが確認された。HikeshiノックアウトによるHSF1の活性亢進が、核内Hsp70の喪失によるのかを調べた。SV40T抗原NLSを付加したHsp70を発現させると、RNAseqデータから、Hikeshiノックアウト細胞では、HSF1ターゲット遺伝子の発現が野生型細胞の半分程度に低下した。また、ルシフフェラーゼアッセイの解析では、NLSを付加したHsp70を細胞に導入するとルシフェラーゼ活性の低下が見られた。これらの結果から、核内Hsp70がHSF1の活性抑制に必要であることがわかった。HikeshiノックアウトでHSF1の活性が亢進されることを、ルシフェラーゼリポーターアッセイやpolyQ凝集阻害アッセイで確認した。このHikeshiノックアウトによるHSF1の活性亢進は、SV40T抗原のNLS(核局在化シグナル)を負荷したHsp70を細胞に導入すると消える。そのため、核内Hsp70の作用でHSF1の活性が亢進が抑えられることを初めて確認することができた。今後は、核内Hsp70の作用でHSF1が活性抑制されるメカニズムを明らかにしていく。可能性として2つ考えられる。一つは、核内Hsp70が核内でHSF1と結合することによって、HSF1の活性が抑制される可能性(直接的な作用)、もう一つは、Hsp70の核内喪失によって核内プロテオスタシスが崩れるためにHSF1の活性が亢進される可能性(関節的な作用)である。HSF1とHsp70の核内結合の可視化を試みるとともに、Hikeshiノックアウトで、核内のプロテオスタシスが上昇する可能性を調べる。

CRSPR/Cas9でHikeshi遺伝子をノックアウトしたHeLa細胞を用いて、RNA seqによる遺伝子発現解析を行うと、Hikeshiをノックアウトするだけで、正常時で、HSF1のターゲット遺伝子の多くが緩やかに発現上昇することがわかってきた。HSF1は熱ストレス時に活性化して、そのターゲット遺伝子の発現を上昇させるが、ストレスを解除するとターゲット遺伝子の発現を低下させる。Hikeshiをノックアウトすると、ストレスを解除してもHSF1ターゲット遺伝子の発現は低下しない。つまり、Hikeshiをノックアウトすると、HSF1が活性化、あるいは活性抑制が阻害されると考えられる。HSF1はタンパク恒常性を司るマスター転写因子で、その活性制御の破綻は生体に広汎な影響を及ぼすと考える。本年度は、HikeshiをノックアウトするとHSF1の活性が抑制されることを細胞レベルで確認するとともに、HSF1の活性制御に核内Hsp70の機能が必須であることを証明していく。Heat shock elementを結合したリシフェラーゼ遺伝子を細胞に導入し、発現したルシフェラーゼの活性でHSF1の活性を測定した。Hikeshiをノックアウトすると、ルシフェラーゼ活性が上昇するが、このとき、同時にHikeshi遺伝子を導入すると、導入したHikeshi遺伝子の量に応じてルシフェラーゼ活性が低下する。このことから、Hikeshiの機能がHSF1転写活性抑制に必要であると確認された。HSF1が活性化すると、Hsp70などのHSF1ターゲット遺伝子の影響で、細胞のタンパク質凝集体が消失・形成阻害されることが知られている。野生型HeLa細胞と、HikeshiノックアウトHeLa細胞のそれぞれに、長さの異なるポリグルタミン酸タンパク質(polyQ19、polyQ57、polyQ81、polyQ97)を発現させ、ポリグルタミン酸凝集形成を定量した。その結果、polyQ81では、Hikeshiノックアウト細胞の凝集体形成が野生型細胞に比べておよそ50%(導入後24時間)、75%(導入後48時間)減少し、polyQ97では、およそ70%(導入後24時間)、60%(導入後48時間、導入後72時間)減少した。これらの定量結果から、HikeshiノックアウトでHSF1が活性化することが確認された。HikeshiノックアウトによるHSF1の活性亢進が、核内Hsp70の喪失によるのかを調べた。SV40T抗原NLSを付加したHsp70を発現させると、RNAseqデータから、Hikeshiノックアウト細胞では、HSF1ターゲット遺伝子の発現が野生型細胞の半分程度に低下した。また、ルシフフェラーゼアッセイの解析では、NLSを付加したHsp70を細胞に導入するとルシフェラーゼ活性の低下が見られた。これらの結果から、核内Hsp70がHSF1の活性抑制に必要であることがわかった。HikeshiノックアウトでHSF1の活性が亢進されることを、ルシフェラーゼリポーターアッセイやpolyQ凝集阻害アッセイで確認した。このHikeshiノックアウトによるHSF1の活性亢進は、SV40T抗原のNLS(核局在化シグナル)を負荷したHsp70を細胞に導入すると消える。
反復・再構成可能な描画ソフトウエアによる科学的熟考の支援

平成14年度は,次の二つのことに取り組んだ。1.単純電気回路を流れる電流に関する小学生の描画過程における思考の分析描画履歴再生機能を持つ描画ソフトウエア「脳の鏡」を使用して,小学校5・6年生を対象とした1対1の面接調査を実施した。この調査では,豆電球・導線・乾電池からなる回路中を流れる電流を,液晶型タブレットを用いてパソコン上に描くように小学生に求め,描画過程を再生しながらそのときに考えたことを説明するように求めた。その結果,描画履歴再生機能付きのソフトウエアを用いた面接調査から,従来は知られていなかったような児童の電流概念が表出されることがわかった。そして,豆電球と乾電池からなる単純電気回路を流れる電流についての児童の概念は,次の要素の組み合わせで決まることが示唆された。(1)電流の向きと経路(一方向非循環,一方向循環,二方向交差,二方向非交差(往復・停止)(2)電流の増減(乾電池→豆電球,豆電球通過,豆電球→乾電池)2.描画履歴再生機能付きの描画ソフトウエアを試作した。従来からのペイント系のものではなく,ドロー系の機能を持たせ,科学モデルの描画に最適化した機能となっている。小学生を対象として,乾電池・導線・豆電球を用いた単純電気回路を流れる電流についての面接調査を実施した。調査課題は,乾電池・導線・豆電球からなる単純電気回路の中を電流がどのように流れるのかを,パソコンの描画ソフトウエアを利用して描かせるというものである。このときに用いる描画ソフトは,描画の過程を最初からモニタ上で再生できる機能を備えている。そこで,児童が描画した後に,それを再生させながら,その時々に何を考えていたかを話すよう求め,その様子を撮影・録音して書き起こして分析した。その結果,従来はあまり知られていないような,電流に関する素朴概念が見つかった。また,紙に鉛筆で描く場合とは,異なった絵の傾向があり,概念的にも異なる傾向がある可能性が示唆された。思考過程については,今回は十分に明からにならなかったが,来年度の調査に向けての課題が明確になってきた。
経皮的後腹膜脾腎静脈短絡形成術の開発と基礎的研究

本研究は経頚静脈肝内門脈静脈短絡術(TIPS)において高率に発生する肝性脳症を予防し、同等の効果を得ることのできる新しい治療法である経皮的後腹膜脾腎静脈短絡形成術(PRESS)の開発と基礎的研究である。本法は経皮的に左腎静脈と脾静脈間にステントを用いて短絡路を作成するもので、まず、手技の確立を行うために8頭の豚を用い、専用の穿刺器具を自作し急性期実験を行った。この実験により、経皮的に脾腎静脈短絡の作成が安全に行えることが証明された。また、術前処置として行った脾静脈中枢部の塞栓により上昇した脾静脈圧は短絡形成により速やかに下降し、減圧効果も充分であることが証明された。次に、本法の長期的効果を検討するため、13頭の豚により実験を行った。短絡路は1週間後には高度狭窄し2週以降には高率に閉塞した。1頭は経過観察中に死亡し、開腹所見にて後腹膜に高度の浮腫性変化を認め、膵炎が考えられた。後腹膜に留置されたステントは一部膵実質を貫通していた。その他の豚では閉塞時に開腹されたが、ステントは後腹膜に位置し、周囲の血腫形成は軽度で、腹腔内の出血などは見られなかった。早期の短絡路閉塞の原因としては、今回の実験に用いた豚が肝硬変モデルではないため、門脈圧自体は正常であるため、脾静脈と左腎静脈の間に充分な圧較差が存在しなかったためと考えられた。本研究により、経皮的な手技において脾静脈-腎静脈短絡の作成が安全に行えることが証明されたことにより、高度な技術を要する外科的脾腎静脈短絡術が侵襲の少ない経皮的な手技により作成可能なことが証明された。豚では脾静脈と左腎静脈間にはやや距離があるが、静脈瘤を有する肝硬変患者では、脾静脈は蛇行し尾側に偏位するため、その距離は短く、しばしば接していることを臨床上経験しており、手技的にはより簡便かつ安全に行えるものと考えられた。ただ、臨床応用に際しては、短絡路の長期開存が可能であることを門脈圧亢進症モデルを用いた検討(実験)で明らかにする必要があると考えられた。研究実績の概要本年度の研究はPRESSの手技確立のための実験を行った。まず、本法に用いる穿刺道具の開発を行い、TIPS(Transjugular Intrahepatic Portosystemic Shunt)に用いられるRUPS-100 puncture setに改良を施し後腹膜を安全に進めかつ穿刺能力を高めた独自の穿刺セットを完成した。次に、留置するstent-graftを自作した。以上の実験器具の作成終了後、実験動物としてYoung swine8頭を用いて実験を行った。8頭全例で本法の目的である脾静脈と左腎静脈との間の短絡路形成に手球的に成功した。初期の例で多数回の穿刺を必要としたものが存在したが、手技の熟練とともに穿刺回数は減少し手技的には確立された。

術中に明らかなvital signの変化を認めなかった。直後の血管造影では、6頭で短絡路を通じて脾静脈より左腎静脈を介して下大静脈へむかう良好な血流が観察され、本法により経度的にも脾腎静脈短絡の作成が可能であることが確認された。術直後に行った、開腹所見の検討では、短絡路は腹腔内には全く露出することなく、全体が後腹膜に位置しており、腎静脈及び脾静脈壁穿通部に比較的少量の血腫とごく少量の腹腔内出血を認めるのみであった。明らかな、後腹膜臓器の損傷や動脈の穿通は見られなかった。以上の実験結果より、PRESSは手技的に可能であることが証明されたため、今後PRESSによる門脈減圧効果や長期的な成績について実験的検討を行う。前年度(平成11年度)にPRESSの手技確立のための実験を行い、本法に用いられる穿刺器具の作成と、これを用いた左腎静脈より脾静脈への穿刺手技の確立に成功した。本年度(平成12年度)は、前年度に短絡路として用いたbared metallic stentにかえて、より臨床に則したかたちで、両端を2個のZ-stentでsupportしたePTFE(expanded polytetra fluoro ethylene)covered stentを作成し、この中心部をsupportするWallstentとともに用いた。また、今回は門脈圧に対する効果を知るために、ドラム型をしたocclusion deviceを新たに作成し、PRESS術前に経皮経肝的に脾静脈中枢部に留置し脾静脈を閉塞させ脾静脈に関する高圧モデルを作成した(豚に関しては適当な門脈圧亢進症モデルが存在しない)。実験は6頭のyoung swineに対して行い、内5頭に対して脾腎短絡路の作成に成功した。術後の造影では、脾静脈より腎静脈へと向かう良好な造影剤の流れが観察され、明らかな後腹膜への造影剤の漏れを認めなかった。脾静脈圧は脾静脈塞栓により直後より著明に上昇し、短絡路作成により速やかに下行し、術後は脾静脈-腎静脈圧較差はほとんど認めなかった。また、本法の手技に伴う合併症は見られなかった。以上により、本法の効果と安全性が示されたことから、次年度は長期成績について検討する予定である。前年度(平成12年度),前々年度(平成11年度)の実験的検討により,経皮的な手技にて脾静脈-左腎静脈間に短経路で形成することが可能であることが判明されたことより本年度(平成13年度)は,家豚8頭を用いてこの短経路が長期的に維持可能か否かを検討する実験を行った。手技的な理由から実際に経過観察を行い得たものは5頭でこのうち最も長期的な開存が得られたものでも4週間目には閉塞をきたした。剖検にてこの短経路すなわち,金属ステントーグラフト内には著明に肥厚した内膜(新生内膜)の形成がみられ,この発生原因として血栓の付着が考えられた。実験に供した家豚は門脈圧亢進を有しない正常例であり,血栓の付着は脾静脈血流の少なさ及び門脈圧の低さによるものと考えられ,今後は何らかの手段で作成した門脈圧亢進症モデルによる実験が必要と考えられた。
多動および注意欠陥障害の医学心理学的診断に関する研究

注意欠陥・多動障害は就学とともに注目されることになる問題のひとつである。これらの問題は教師や親からの情報に基づいて判断されることになる。診断にあたって、情報提供者による評価のばらつきが生じないかは重要な問題である。ビデオテープに記録された児童の行動を、教師と臨床家が共通の評価尺度を用いて評価することによって検討した。その結果、教師は臨床家よりも高い評点を与えていたが、両者の相関は高いことがしめされた。親と臨床家の評価については臨床事例74例についてDSMIIIRにおける注意欠陥多動障害の14の基準項目からなる調査表を用いて検討した。やはり親が臨床家らり高い得点を与えていたが、強い相関が認められた。これらの基準項目は一般児童にもしばしば認められる。この障害の診断には発達的な要因が関与していることは従来から指摘されている所であり、DSMIIIRの基準を用いて検討を行った。4-12才の子ども1047人のデータを分析した結果、3つの因子が抽出された。各因子は性別により年齢に伴う変化に特徴的なパターンを示した。注意欠陥多動が年齢により変化する様相は性別により異なっており、診断に当たっては発達的な要因を加味すべきであることを示すものであった。WISCRを中心に心理テストからみたこの障害の認知構造の特徴せ捉えるために、児童精神科を受診した臨床事例について検討を行い、診断の手がかりとなり得るいくつかの下位尺度の特徴を見いだした。また臨床群の中で、障害部位を特定できる症例における行動特徴を調査し、比較検討した。又知能、言語の障害と比較し可塑性の観点からも考察した。ソーシャルワークの立場から、注意欠陥多動障害の小3の事例の検討を行った。児が学校家庭近隣社会と広範にわたって不適応を引き起こす要因を整理した。注意欠陥障害や多動症候群といった子どもに最初に出会うであろう教師群と、精神科医・小児科医・臨床心理士・ケ-スワ-カ-といった臨床家群で、その子どもの行動の観察の仕方に差異があるのかどうかを検討した.ビデオテ-プに映っている8人の子どもに対する行動評価を28項目のチェックリストを用いて行なった。どの子どもに関しても、教師群の評価点の方が臨床家群よりも高かった。(個人場面の行動に対しても集団場面の行動に対しても)が、全体のパタ-ンは類似し、教師群と臨床家群の相関は高かった。両者に差異が出る傾向があるものは、中等度に多動のある児の集団場面に対する評価においてであった。行動評価をした後で、その子どもを多動と思うかどうかを評定者に尋ね、その判断に対してどの項目が影響を及ぼしているかを検討した。対象となっている子どもによって差があるが、教師群が比較的重視している項目は「他の子ども達を突くかもしくは叩く」(集団)「他の人たちの邪魔をしたり割り込む」(集団)などである。臨床家群の方で重視しているのは「手か足をもじもじさせるか、椅子に座ってそわそわしている」(個人)などである。注意欠陥障害や多動症候群によくみられる行動の不注意、衝動性、落ち着きのなさ、破壊性などは、ある程度どの子どもにもみられる行動である。単にそれらの行動が存在するから多動とみなされるのではなく、発達的にみて不適当なほどの強度、頻度、あるいは持続時間などを考慮した評価に基づいてなされていたと思われる。この判断に関して、上記のように教師群の方が臨床家群より各々の行動があると高めに評価する傾向があったが、類似性も高いという結果であった。

多動や注意欠陥障害についての診断の基準となるような行動が、一般の子供たちの中でどの程度生じるものであるかを捉えることにより、この診断基準の明確化を検討することを目的とした。そこで、DSMIIIーRの診断基準である14のチェック項目(項目B)と、関連が深いと考えられる反抗、挑発性障害という診断基準の9項目(項目C)について、各行動の有無等についてのアンケ-ト調査を実施した。対象は小学校1年生から4年生の子供で、662名に調査票を郵送し、有効回答者(親)342名を得た。項目B、Cについて、各下位項目に該当する行動が「あり」と答えたものを1点とし、B、Cの合計得点を求めた。以下結果を列記する。1.項目Bおよび項目CのCronbachのαの係数は、それぞれ0.804、0.754であり、ともに高い信頼性(内的整合性)が認められた。2、(1)Bの合計得点の平均は、全体で2.97点・標準偏差3.12。(2)DSMIIIーRの診断基準である8点以上の子どもは32名で有効回答数(342名)の9.4%。3、(1)Cの合計得点の平均は、全体で1.89点・標準偏差2.03。(2)DSMIIIーRの診断基準である5点以上の子どもは40名で有効回答数(342名)の11.7%。4、項目BとCの合計点の相関係数はγ=0.558(P〈0.001)であり、項目Bと項目Cに関わる行動の間にかなり高い関連があることが示唆された。臨床例の小学校1年生から4年生の子供の親と担当者にも同種のアンケ-トを実施した。次年度にはこれらの分析も加え、報告する予定である。また、社会学的観点より、臨床例を対象として、その家族環境についての調査と、主な養育者である母親の精神保健に関する調査を行う予定である。小児神経学的疾患をモデルしとた、行動特徴の比較もあわせて行う予定である。多動や注意欠陥障害の診断について、DSMIIIRは14の基準項目をもうけ、その8項目以上に該当するという基準が設定されている。親が提供するこれらの項目についての情報が臨床家の判断とどのくらい一致しているかを、74例の事例について検討した。その結果、総得点では、親は臨床家よりも高い得点を与えているが、両者の評価の相関は0.70とかなり強い相関があるということができた。個々の項目別に両者の評価の相関をphi係数によって検討した。0.25から0.69にわたり、4項目では両者の評価は弱い関連にとどまっていた。昨年に引き続き一般児童における注意欠陥・多動に関連する行動の出現状況を対象年齢を4から12才に拡大して1047人についてのデーターを得た。この尺度の得点の年齢にともなう変化は性別により異なり、女子では4-6才から7-9才にかけて減少するのに対し、男子では7-9才から10-12才にかけて減少がみられた。因子分析の結果3つの因子が抽出された。第1因子は不注意、第2因子は過活動と衝動性、第3因子は過剰な言語活動である。これらの3因子は年齢による特徴的な変化がみられた。したがってこの障害の評価には年齢・性別を考慮すべきであるといえる。WISCRを中心に心理テストからみたこの障害の認知構造の特徴を捉えるために、児童精神科を受診した臨床事例について検討を行い、診断の手がかりとなり得るいくつかの下位尺度の特徴を見いだした。
女性乳がん体験者の病の体験過程およびそれに関わる要因についての心理臨床学的研究

本年度は、「若年性乳がんサバイバーが、若年性であることや周囲の人々との関係における相互作用の中で、乳がんという病を生きるプロセス」を検討するための研究を行った。具体的には、NPO法人「健康と病いの語りディペックス・ジャパン」による「健康と病いの語りデータアーカイブ」のうち、診断時35歳未満の女性乳がんサバイバー6人(診断時の平均年齢29.0歳、SD=4.00)の語りデータを用いて、修正版グラウンデッド・セオリー・アプローチ(木下,2003;2007)による分析を行った。結果、しこりや痛みという[異変に気付く]ことから【病を受け入れる過程】は始まるが、〈知識・情報の乏しさ〉などにより、往々にして受診や診断が遅れ、また、<進行の早さ・悪性度の高さ〉や〈準備のなさ〉もあり、告知は大きな衝撃となりやすい(【若年性という要因】)。治療も苛酷なものとなりやすく、乳がんは[生活・人生の転機としての病]として体験されることとなる。診断・告知後は、〈外見の変化へのショック〉や〈女性性の傷つき〉〈副作用との闘い〉など、さまざまな[治療のつらさ]に直面することになるが、〈結婚・妊娠・出産への不安〉も、若年性サバイバーならではの悩みである。そして、こうした不安や苦痛をさまざまに経験しながらも、[治療のつらさに対処]し、[治療に主体的に取り組む]ようになるのであるが、こうしたプロセスを循環しながら病を体験していく過程は、まさしく【病と共に生きる過程】であり、〈再発・転移の不安〉など[生涯続く不安]をもちつつも、[自分の存在意義]や[病の意味]を見出だし、〈希望を持って生きる〉ことを選び取っていく。こうした主体的な営みは『関係を生きる』ことと相互作用しながら進み、【関係の変化】や【関係の中で傷つく】こともありつつ【関係の中で支えられる】体験を繰り返すことで、『病を生きる過程』が促進されると考えられた。本年度は、乳がんという病の体験の様相とそれに関わる要因を量的に分析することを目的としたweb調査を行う予定であった。それが完遂できなかった点では「やや遅れている」と言えるが、これは、量的調査の前に、ライフステージの中での乳がんの体験を質的に精査する必要性を感じ、その研究を行うためであった。よって、研究全体としては、おおむね順調であると言える。なお、web調査の準備は完了し、すぐにでも実施できる状況にある。乳がんサバイバー500人を対象としたweb調査を実施するための手はずをすでに整えている。データを回収次第、その分析を行い、乳がんという病の体験の様相とそれに関わる要因を明らかにする予定である。病の体験というきわめて個別的で主観的な体験を捉える上で、体験者本人の「語り」を分析することは必要不可欠である。そこで、本年度は、乳がん体験者の「病の語り」に着目し、以下の研究を行った。1NPO法人「健康と病いの語りディペックス・ジャパン」による「健康と病いの語りデータアーカイブ」のうち、女性乳がん体験者47人の語りデータを計量テキスト分析し、多変量解析等を行うことで、乳がんという病の体験の様相について明らかにした。さらに、年代や、治療法などにより、病の体験の語りがどのように変化するのかについて比較検討を行い、病の体験に関わる要因を抽出した。2がん体験者の抱える心理的苦痛はがん種等によって異なることがわかっており、主観的に経験されている病の体験世界にも違いがあると考えられる。よって、1で得られた結果が乳がん体験者固有のものであるのかを確認するため、乳がん体験者および前立腺がん体験者の病の語りに着目し、計量テキスト分析を行って、それぞれの体験や語りにおける特徴、テーマを探索した。用いたデータは、上記アーカイブのうち、女性乳がん体験者47人および前立腺がん体験者52人の語りデータであった。結果、がんという体験をめぐり、乳がん体験者と前立腺がん体験者では懸念していることや拠りどころとしているもの等に違いがみられ、また、一回の発言に多様なテーマや情緒を織り込みながら自発的に病の体験を語る乳がん体験者に対し、前立腺がん体験者では数値やデータを用いて問答の中で語りが進められるなど、語り方にも違いが認められた。そして、具体的な語りの精査からは、がんの特徴や性別、年代等が複雑に絡まり、病の体験やその語りが形作られていることが推察された。さらに、3海外の研究動向を知るため、がん患者らの心理的苦痛に関する海外の研究の展望を行った。乳がん体験者の語りの計量テキスト分析を行うという当初の計画が順調に進行したため。

治療も苛酷なものとなりやすく、乳がんは[生活・人生の転機としての病]として体験されることとなる。診断・告知後は、〈外見の変化へのショック〉や〈女性性の傷つき〉〈副作用との闘い〉など、さまざまな[治療のつらさ]に直面することになるが、〈結婚・妊娠・出産への不安〉も、若年性サバイバーならではの悩みである。そして、こうした不安や苦痛をさまざまに経験しながらも、[治療のつらさに対処]し、[治療に主体的に取り組む]ようになるのであるが、こうしたプロセスを循環しながら病を体験していく過程は、まさしく【病と共に生きる過程】であり、〈再発・転移の不安〉など[生涯続く不安]をもちつつも、[自分の存在意義]や[病の意味]を見出だし、〈希望を持って生きる〉ことを選び取っていく。こうした主体的な営みは『関係を生きる』ことと相互作用しながら進み、【関係の変化】や【関係の中で傷つく】こともありつつ【関係の中で支えられる】体験を繰り返すことで、『病を生きる過程』が促進されると考えられた。本年度は、乳がんという病の体験の様相とそれに関わる要因を量的に分析することを目的としたweb調査を行う予定であった。それが完遂できなかった点では「やや遅れている」と言えるが、これは、量的調査の前に、ライフステージの中での乳がんの体験を質的に精査する必要性を感じ、その研究を行うためであった。よって、研究全体としては、おおむね順調であると言える。なお、web調査の準備は完了し、すぐにでも実施できる状況にある。本年度の結果をもとに、次年度は、病の体験の様相とそれに関わる要因を量的に分析することを目的に、乳がんに罹患した経験のある20代60代までの各年齢層100人ずつ計500人を対象とし、民間の調査会社を利用したweb調査を行う。乳がんサバイバー500人を対象としたweb調査を実施するための手はずをすでに整えている。データを回収次第、その分析を行い、乳がんという病の体験の様相とそれに関わる要因を明らかにする予定である。当該年度所要額として、DIPEXJAPANデータベースの利用料を計上していたが、以前から当該データベース利用していたため、本年度に限り無料で継続して利用可能であった。よって、それにかかわる経費は必要なかった。ただ、、次年度も引き続き分析を続ける予定であり、今年度に計上していた経費を来年度のデータベース利用料として使用することとしたい。本年度はweb調査を行う予定であったが、研究計画の変更により、今年度は実施しなかった。それについては次年度に実施する予定である。
進化ゲーム理論の基礎と社会物理学的課題への応用

申請者は裾野が広く様々なサブシステムの因果が複雑に錯綜する環境問題に対して社会的に有意な方策を提示するには人間ー環境ー社会システムのモデル化が必要であると主張してきた.環境問題の解決には,各物理システムを抉出して分析/要素還元的に観る従来的アプローチだけでは不十分で,物理システムたる「環境」とそれを操作する主体である「人間」,加えてマスとなった人間がまま見せる創発的自己組織化現象を捉える上での「社会」の枠組みを相互浸透的に連成系として扱う理論的フレームワークが要請される.具体的には,ヘテロなネットワークで構成された人間社会システムにおける協調行為の創発機構をサイエンスとして解明することが,省エネルギー指向ライフスタイルへの転換を誘発させる社会的応用に繋がると考える.実際,エネルギー消費行動や地球環境問題は,社会ジレンマの一つのクラスであるチキン型ジレンマを有し,有限資源の争奪により惹起される,所謂,資源割り当て問題と同相の数理構造があることが解っている.このような背景から本研究課題では,世界における進化ゲーム理論研究をリードする若手第一人者であるWang Zhen博士を招聘し,以下の研究成果を得た.すなわち,進化ゲーム理論の規定を為す2×2ゲームのジレンマ強さを評価するスケーリングファクターとして,先に導出したDgおよびDrを補完する,Dg'とDr'を新たに定義し,これによれば,Nowakの提示した5つの社会粘性システムを加味した互恵機構込みのゲームにおけるジレンマ強度を正当に評価できることを証明するとともに,広範な数値実験により演繹結果が正しいことを検証した.この成果は,物理学において権威のある論文誌Physics of Life Reviewsに掲載された.27年度が最終年度であるため、記入しない。27年度が最終年度であるため、記入しない。申請者は裾野が広く様々なサブシステムの因果が複雑に錯綜する環境問題に対して社会的に有意な方策を提示するには人間ー環境ー社会システムのモデル化が必要であると主張してきた.環境問題の解決には,各物理システムを抉出して分析/要素還元的に観る従来的アプローチだけでは不十分で,物理システムたる「環境」とそれを操作する主体である「人間」,加えてマスとなった人間がまま見せる創発的自己組織化現象を捉える上での「社会」の枠組みを相互浸透的に連成系として扱う理論的フレームワークが要請される.具体的には,ヘテロなネットワークで構成された人間社会システムにおける協調行為の創発機構をサイエンスとして解明することが,省エネルギー指向ライフスタイルへの転換を誘発させる社会的応用に繋がると考える.実際,エネルギー消費行動や地球環境問題は,社会ジレンマの一つのクラスであるチキン型ジレンマを有し,有限資源の争奪により惹起される,所謂,資源割り当て問題と同相の数理構造があることが解っている.このような背景から本研究課題では,世界における進化ゲーム理論研究をリードする若手第一人者であるWang Zhen博士を招聘し,以下の研究成果を得た.すなわち,進化ゲーム理論の規定を為す2×2ゲームのジレンマ強さを評価するスケーリングファクターとして,先に導出したDgおよびDrを補完する,Dg'とDr'を新たに定義し,これによれば,Nowakの提示した5つの社会粘性システムを加味した互恵機構込みのゲームにおけるジレンマ強度を正当に評価できることを証明するとともに,広範な数値実験により演繹結果が正しいことを検証した.この成果は,物理学において権威のある論文誌Physics of Life Reviewsに掲載された.研究初年度の本年は,研究期間が4ヶ月ではあったが,進化ゲームにおける尤もホットな話題であるネットワーク互恵に関する基礎理論解析を行い,併せて,大規模数値実験のための基本プラットフォームとなるマルチエージェントシミュレーションを理論構成した.ネットワーク互恵のenhance効果のダイナミクスを規定する要因として,初期協調エージェントのクラスターがall-defectors-stateに吸引されない強度(E_END)とその後,協調率が回復する過程でクラスターの空間伸張がどれだけ滑らかに行われるかに関する指標(E_EXP)を定義し,これらにより均衡時の最終協調率が統計的に有意なレベルで説明されることを予備数値実験の結果見いだした.次年度に向けては,この点をより詳細に明らかにする数値実験を積み重ねることで,設定課題をクリアしていく.研究計画に掲げたサブテーマに取りかかり,当初目標としていたアジェンダがほぼ達成されたため.27年度が最終年度であるため、記入しない。初年度の数値実験結果を踏まえて,理論解析,演繹を合わせたアプローチ法を適用していく.27年度が最終年度であるため、記入しない。
阻血障害肝のストレス蛋白並びにmRNA発現量からみた移植肝機能発現の予測

温阻血障害の軽度な群では、肝中心静脈周囲の鬱帯が病理組織学的に認められ、阻血障害の程度と阻血肝組織のHSP70の発現量は正の相関が示された。しかし、阻血障害の程度が高度になるに従い、肝細胞の総体としての、蛋白合成が障害されたため、HSP72-mRNAは温阻血後、強い発現をみるが、HSP70の発現量は低下傾向を示した。【目的】肝移植の分野で飢餓状態や一過性の虚血などの軽度のストレスに予め暴露する事により,高度なストレスによる組織傷害の軽減される(pre-conditioning)ことが,Heat Shock Protein(HSP)の発現によるものであると報告されてきた.これに対し,我々は,HSPの発現を組織傷害の程度の指標としてとらえ,グラフト肝のviability判定への応用の可能性につき検討した.【対象・方法】実験動物には78週齢のWistar ratを用いた.肝門部にて肝動脈及び門脈をクランプし温阻血モデルを作成した.温阻血前,阻血後15分,30分,45分そして60分にそれぞれ肝組織を採取した.HSP64並びにHSP70の検出には,間接蛍光抗体法を用いた.採取した肝組織をスライドガラスにスタンプして塗沫擦過標本を作製し自然乾燥後,95%ethyl alcoholにて固定した.1次抗体としてpolyclonal anti-HSP64並びにmonoclonal-antiHSP70(mouse IgG1,Sigma社),2次抗体としてFITC標識抗マウスIgG抗体(Sigma社)を反応させ,蛍光顕微鏡にて検鏡した.凝固前を対照とし明らかに塗沫細胞に蛍光の増強が観察されたものをHSPs陽性とした.【結果】HSP64・HSP70の発色はともに,温阻血30分後より蛍光の軽度の増強が認められ,45分及び60分後で蛍光の増強は顕著となった.【考案】肝温阻血後15分までは,蛍光の増強を認めなかったことより,肝の組織傷害の程度は軽微であると考えられる.しかし,温阻血後30分以降では明らかにHSP64・HSP70の発色を認め組織傷害が起こっているものと思われる.また,現在HSPsの発現の定量のために,Western blotting法による測定及びHSPsのm-RNAの発現についての実験を実施中である.1.目的肝におけるIschemic preconditioningに際してHSP72の関与が報告されている.我々はHSPの発現と組織傷害の程度の関係を求め,さらにHSP72およびそのmRNAの変動が肝のViabilltyの一指標となりうる可能性について検討した.2.対象・方法および結果実験動物には200300gのWistar系雄性ratを用いた.肝60%の肝動脈,門脈を遮断し温阻血モデルを作成した.温阻血前(0分),阻血後15分,30分,45分,60分にそれぞれ阻血肝組織を採取した.前年度までの研究結果より間接蛍光抗体法によるHSP64およびHSP70の検出では温阻血30分以降にはHSP70の発現が認められた.本年度はHSP72およびそのmRNAの定量化に取り組んできた.(1) RT-PCR法によるHSP72-mRNAの定量