hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
運動負荷による細胞外ATPを介した変形性関節症発症メカニズムの解明

変形性関節症(OA)で軟骨変性を引き起こすシグルナル経路は明らかにされていない。今回、我々は外科的OAモデルマウスまたはFluid Flow Shear Stress (FFSS)が軟骨細胞で細胞外ATP受容体P2X7を介したシグナルが活性酸素(ROS)を産生することを明らかにした。OAモデルマウスでは関節軟骨でP2X7シグナルを活性化してNADPH依存性にROSが産生される。ROSはERKとp38MAPKを活性化することでMMP13の発現を促進し軟骨変性を引き起こす。本研究は、細胞外ATP/P2X7シグナルがROS産生依存的にMMP13の発現を促進することがOAの原因であることが示唆された。運動刺激による変形性関節症の発症メカニズムについて、細胞外ATP着目した。in vitro in vivo共に運動刺激/fluid flow shearstressによって軟骨細胞/軟骨から細胞外ATPが分泌すされ、細胞外ATPは軟骨細胞内で活性酸素の産生を介してMMP13の発現を促進することを確認した。In vivoでは、野生型マウスと細胞外ATP受容体P2X7ノックアウトマウスを使用して、膝靭帯切除変形性ひざ関節症マウスモデルを使用して、変形性関節症におけるP2X7の役割を調べた。P2X7ノックアウトマウスは野生型と比較して変形性関節症の重症度は低かったが完全に抑制しなかった。P2X7はルブリシン発現も制御しているため、P2X7ノックアウトマウスはMMP13の発現も低下させるがルブリシンも低下するため変形性ひざ関節症を完全に抑制することができないと考えられた。【目的】関節不安定性による軟骨への過剰なメカニカルストレスは変形性関節症(OA)の原因の一つである。Matrix metalloproteinase 13 (MMP13)は軟骨変性において中心的役割を果しているため、その発現制御機構の解明は新たな治療法の開発おいて重要である。本研究の目的は、メカニカルストレスが軟骨細胞においてMMP13発現を促進するメカニズムを明らかにすることである。【方法】マウス初代軟骨細胞を培養しメカニカルストレスとしてfluid flow shear stress(FFSS)を与えMMP13の発現を促進し、この実験系で低分子化合物や遺伝子発現を操作するgenetic toolを使用してMMP13発現を制御するシグナル経路を探索した。関節不安定性OAモデルマウスにおいて細胞実験で同定したMMP13発現の制御シグナル関連分子及び軟骨変性を評価した。【結果】FFSSは軟骨細胞から細胞外ATPを分泌させ細胞外ATP受容体P2X7を介して活性酸素産生とEGFRシグナルを活性化し、ERKとp38 MAPKのリン酸化、更にこれらよりリン酸化されたJunがMMP13の発現を促進した。野生型マウスとは対照的に、P2X7ノックアウトマウスは軟骨変性に抵抗性を示した。また、細胞実験で示唆されたメカニカルストレスによるMMP13の発現促進及びその関連分子(細胞外ATP、TGFα、活性酸素、MAPK等)に関しても、マウス関節軟骨において同様の変化が確認された。【考察および結論】メカニカルストレスは細胞外ATP-P2X7受容体-活性酸素経路を介してMMP13の発現制御、さらに軟骨変性に関与していることが示された。OA患者や高齢者の関節軟骨では活性酸素が増加していることが報告されており今回の結果を支持するものである。本研究で明らかとなったMMP13発現シグナル経路に関与する分子はOAの治療標的の候補になりうる。これまでに研究の輪郭となる運動刺激によって軟骨細胞から細胞外ATPが放出されることでMMP13の発現が促進されるという実験結果が概ね得られた。27年度が最終年度であるため、記入しない。整形外科本研究は最終段階にあるが、運動刺激による変形性関節症の発症メカニズムをより深く理解するために、当初の計画にある細胞外ATPに着目することから、さらに範囲を広げてMMP13の発現のみならずその他の遺伝子の発現変化にも踏み込みたい。この点を平成27年度前半には終了し、中旬には論文投稿する予定。
特異抗体によるがんの標的医療(画像診断と同時治療法)の開発

本研究は、がん組織に特異的に集積し、生体イメージングによる高感度な診断と効率良い薬剤送達を同時に行える新規医療"Immuno-Theranostics"の開発をめざして行った。がん分化抗原であるメソセリン(MSLN)に対する抗MSLN抗体のヒト化、低分子化を進め臨床応用に向けて一歩前進できた。マウス抗MSLN抗体Fabを64Cu標識し、担がんヌードマウスに投与して体内動態をポジトロン断層撮影法(PET)により解析し、抗体低分子化の影響を確認した。ヒト化抗メソセリン抗体IgGを結合し近赤外蛍光標識したリポソームを調製しMSLN陽性がん細胞培養に抗体依存的に取り込まれることを観察した。がんの診断と治療が同時に実施できる新規医療“Immuno-Theranostics"の開発をめざし、以下のように研究を進めることができた。昨年度、がん分化抗原であるメソセリン(MSLN)に対するマウスIgGモノクローナル抗体のヒト化を行ったが、今年度はこのヒト化抗体を用いて培養がん細胞への組織染色を行い、メソセリン陽性がん細胞に特異的に結合することを確認した。また、ヒト化抗体のscFv作製を開始した。研究協力者の支援のもとに、抗体重鎖および軽鎖の可変領域のDNA配列をリンカーを介して結合し、発現ベクターを作製した。4種類の候補scFvコンストラクトを大腸菌で分泌発現させ、培養上清を回収し、濃縮した。ELISAにてこれらの候補scFvのMSLNに対する結合を確認した。抗体の酵素処理による低分子化への試みとして、MSLNに対するマウスIgGモノクローナル抗体をペプシン処理したところ、F(ab')2でなくFabを主に生じた。Fabの最適調製条件を検討し、精製したMSLN抗体FabのMSLNへの反応性をELISAにより評価した。IgGの場合より親和性は低下したがMSLNへの結合を確認した。このFabをキレート剤DOTAで修飾し、64Cuによる標識を行い、MSLN発現陽性および陰性のがんを移植したヌードマウスに投与して、in vivo PETイメージングを行った。MSLN抗体Fabは投与6時間後から、MSLN発現陰性腫瘍に比較して陽性腫瘍に有意に高い集積を示した。近赤外蛍光色素Cy5.5で標識し、ヒト化抗MSLN抗体(IgG)を結合したリポソームを調整し、MSLN陽性培養がん細胞との結合を観察した。本研究は、がんの診断と治療が同時に実施できる新規医療"Immuno-Theranostics"を、分子イメージング技術、抗体工学、DDS技術、光線力学(PD)療法のシナジー的融合により開発検討することを目的とする。具体的には、がん分化抗原であるmesothelin(MSLN)をモデル分子に選び、MSLNに対するマウスモノクローナル抗体をヒト化・低分子化する。さらに、ヒト化抗体ペプチドで被覆し、光力学的(PD)薬剤を組み込んだマイクロキャリア(抗がん剤内包リポソーム)に近赤外蛍光標識あるいは64Cu標識したImmuno-Theranostics用マイクロキャリアを開発する。腫瘍特異的に集積し、生体イメージングによる高感度な診断と効率良い薬剤送達を同時に行えるキャリアの作製をめざす。今年度は抗体のヒト化を実施するとともに、その抗体の免疫化学的評価を行った。具体的には、マウス抗体の遺伝子配列情報を基に、データベースからマウス抗体のフレームワークと最も近いヒト抗体のフレームワークの配列を選んだ。選んだヒト抗体のフレームワークとマウス由来CDR領域を組み合わせて、発現ベクターを構築しCHO細胞で導入発現した。高産生株を選択し培養上清中に分泌された抗体をprotein Aカラムで精製した。得られたヒト化抗体をMSLN陽性・陰性膵臓がん細胞培養系で免疫染色し、MSLN陽性細胞への結合を確認した。また、マイクロキャリアの脂質組成および調製法を検討し、薬剤封入効率の向上を図った。平成23年度の実施計画のうち、MSLNに対するモノクローナル抗体のヒト化を研究協力者の支援のもとに行いその抗原特異性を評価した。その結果、ヒト化抗体は元のマウス抗体と同等の抗原に対する活性を有していることが明らかとなった。抗体の低分子化は現在、継続して検討中である。リポソームの薬剤封入効率については検討を行った。1)MSLNに対するヒト化抗体の低分子化を行い、そのMSLNへの特異性、親和性をMSLN発現がん細胞の免疫染色により評価する。2)光力学的薬剤および抗がん剤を封入したマイクロキャリア(リポソーム)を調製し、これにヒト化抗体あるいは低分子化抗体を結合させる。このリポソームを近赤外蛍光あるいはキレート剤を介して64Cuで標識する。3)近赤外蛍光標識した2)項のマイクロキャリアの標的性、細胞内外での局在、薬効等を培養がん細胞の系で評価する。4)64Cu標識した

2)項のマイクロキャリアを担がんモデルマウスに投与し、マイクロキャリアの目的病巣への到達度、薬物動態をPETにより解析する。直接経費は、抗体の低分子化と精製、リポソームの調製、がん細胞培養および免疫染色の試薬および器具の購入、動物生体イメージング実験費用に充てる。また資料収集のための海外学会参加費用1回分を支出する予定である。
JCウイルス蛋白による脱髄のモデル作製と治療法の開発

本研究は細胞側因子と相互作用し、細胞内の物質輸送に影響を与えるJCウイルス(JCV)のagnoproteinがオリゴデンドロサイトの機能障害を惹起させる。」という作業仮説を立て、agnoproteinを中枢神経に発現させるトランスジェニックマウスを作製し、JCV感染によって生じる、多発性硬化症とは異なった機序で発症する非炎症性の脱髄のモデルを確立し、ウイルス感染後の脱髄病変の形成過程の機序を詳細に検討することを目的として以下の実験を行った。平成20年度はマウスのスクリーニングを行うにあたり、従来行われていたSouthern blottingによる解析ではなく、mouseの血液から直接、導入遺伝子を検出するFTA paperを用いたPCRの系を使ってsample採取当日に結果を得ることの出来る系を構築した。作製したスクリーニングの系を用いて、agnoproteinおよびlate proteinのトランスジェニックマウスの子孫およびタモキシフェン反応性のCreリコンビナーゼを発現しているトランスジェニックマウスを交配させ、タモキシフェン投与によりJCウイルスのagnoproteinもしくはlate proteinをオリゴデンドロサイトに発現させるダブルトランスジェニックマウスを作製した。今後はタモキシフェン投与法の条件を決定し、タモキシフェン投与により脳のオリゴデンドロサイトにagnoproteinを発現するマウスの臨床症状を観察し、最終的に病理学的解析、生化学的解析を行い、オリゴデンドロサイトの機能障害による脱髄がJCウイルスのagnoproteinもしくはlate proteinにより生じるかどうかを検証する予定である。本研究は細胞側因子と相互作用し、細胞内の物質輸送に影響を与えるJCウイルスのagnoproteinがオリゴデンドロサイトの機能障害を惹起させる。」という作業仮説を立て、agnoproteinを中枢神経に発現させるトランスジェニックマウスを作製し、JCウイルス感染によって生じる、多発性硬化症とは異なった機序で発症する非炎症性の脱髄のモデルを確立し、ウイルス感染後の脱髄病変の形成過程の機序を詳細に検討することを目的として以下の実験を行った。平成19年度は北海道大学においてJCウイルスagnoproteinもしくは後期蛋白質をloxP配列と共に全身臓器に発現させるコンストラクトであるpCALNL5-AgnoもしくはpCALNL5-JClateを作成し、これらのコンストラクトからベクター部分を切り離したDNAを作製した。国立循環器病センター・バイオサイエンス部・室長の荒井博士はこのDNAを、マウスの前核期受精卵にマイクロインジェクションし、その後偽妊娠しているレシピエントマウスの卵管へ胚移植を行い、自然分娩により出産させた。マウスのスクリーニングは北海道大学にて行い、最終的にagnoproteinのFOトランスジェニックマウスが3系統、late proteinのFOトランスジェニックマウスが4系統樹立された。現在北海道大学にてそれらの子孫を作製して、スクリーニングを行っている。またタモキシフェン反応性のCreリコンビナーゼを発現しているマウスも米国から入手し、現在子孫を作製している。
アテトイド型頚部不随意運動に対する筋不随意運動選択的抑制法の研究

[対象]Athetoid型脳性麻痺患者6名(男5女1 34-55歳)で、頚椎症性脊髄症をきたし,はじめ筋解離術を行い,その後,脊髄管拡大術を行い,術前後の経過が明らかなものである.[方法]1.術前,頚部の運動のVHSビデオ記録と,頚部筋からの表面筋電図および等尺性筋力測定を,同時に行った.坐位安静時のビデオ記録で,眉間の1秒間の移動距離から運動強度を分類した.更に,1%リドカインによる神経ブロックを副神経の各筋枝に行って,被ブロック筋の発火様式の変化から不随運動を生じている主動筋の同定を試み,術後を予測し,被解離筋への筋解離術よる安全性を確かめた.術後は,筋の発火様式を上記検査で経時的に追跡した.2.術式は後頭部に馬蹄鉄型皮切で進入し,胸鎖乳突筋,僧帽筋,頭板状筋,頭半棘筋を後側頭骨から骨膜下に解離した.[結果]1.全症例において,術前の全ての神経ブロックで,胸鎖乳突筋と僧帽筋の坐位安静時不随意性発火は減少したのに対し,坐位運動時随意性発火および筋力は保たれた.2.各筋枝への神経ブロックによる差から,主動筋を同定できなかった.3.全症例において,術前の神経ブロック効果と筋解離術後の変化は類似し,随意筋力は20%程度の減少に留まった.[考察]不随意運動減少効果は,筋解離術,神経ブロック共に,アルファ運動ニューロンへの末梢性入力の低下をきたすことから,アルファ運動ニューロンの興奮性が変化し、中枢性入力に対する反応が変わるのではないかと考察している.随意運動保持効果については明かでない。[結論]筋解離術により,Athetoid性頚部不随運動を減少させ,随意性を保つという結果が得られた。筋解離術は,神経機構および筋自体を保ちながら,不随意運動を減少させる方法である.Athetoid型頚部不随意運動以外の頸部不随意運動にも不随運動の制御可能と思われ,今後も解析を続けていく予定である.[対象]Athetoid型脳性麻痺患者6名(男5女1 34-55歳)で、頚椎症性脊髄症をきたし,はじめ筋解離術を行い,その後,脊髄管拡大術を行い,術前後の経過が明らかなものである.[方法]1.術前,頚部の運動のVHSビデオ記録と,頚部筋からの表面筋電図および等尺性筋力測定を,同時に行った.坐位安静時のビデオ記録で,眉間の1秒間の移動距離から運動強度を分類した.更に,1%リドカインによる神経ブロックを副神経の各筋枝に行って,被ブロック筋の発火様式の変化から不随運動を生じている主動筋の同定を試み,術後を予測し,被解離筋への筋解離術よる安全性を確かめた.術後は,筋の発火様式を上記検査で経時的に追跡した.2.術式は後頭部に馬蹄鉄型皮切で進入し,胸鎖乳突筋,僧帽筋,頭板状筋,頭半棘筋を後側頭骨から骨膜下に解離した.[結果]1.全症例において,術前の全ての神経ブロックで,胸鎖乳突筋と僧帽筋の坐位安静時不随意性発火は減少したのに対し,坐位運動時随意性発火および筋力は保たれた.2.各筋枝への神経ブロックによる差から,主動筋を同定できなかった.3.全症例において,術前の神経ブロック効果と筋解離術後の変化は類似し,随意筋力は20%程度の減少に留まった.[考察]不随意運動減少効果は,筋解離術,神経ブロック共に,アルファ運動ニューロンへの末梢性入力の低下をきたすことから,アルファ運動ニューロンの興奮性が変化し、中枢性入力に対する反応が変わるのではないかと考察している.随意運動保持効果については明かでない。筋解離術は,神経機構および筋自体を保ちながら,不随意運動を減少させる方法である.Athetoid型頚部不随意運動以外の頸部不随意運動にも不随運動の制御可能と思われ,今後も解析を続けていく予定である.
脂肪肝におけるＴｏｌｌ－ｌｉｋｅ　Ｒｅｃｅｐｔｏｒを介した肝癌促進機構の解明

肥満は糖尿病や心筋梗塞だけでなく、様々な癌を促進することが指摘されている。申請者はHras遺伝子に活性化型変異を入れる化学発癌剤、DMBAを用いた全身性発癌モデルマウス実験により、肥満したマウスにおいて肝がん発症が著しく促進されることを見出した。そして2次胆汁酸である、デオキシコール酸(DCA)を産生するグラム陽性菌が肥満により増加することで、体内のDCA濃度が上昇し、腸肝循環により肝臓に運ばれたDCAが肝臓の間質に存在する肝星細胞の細胞老化を誘導し、様々な炎症性サイトカイン等の分泌を促進することで、肝がん促進的ながん微小環境を形成することを見出した。しかし、細胞老化を起こした肝星細胞が一体どのような機構を介して肝癌の発症を促進するのかについてはまだ十分には明らかになっていない。申請者は、肥満により増加したグラム陽性菌の外膜成分であるリポタイコ酸(LTA)が、肝臓に輸送されることにより、がん形成に有利な微小環境が形成されることで、肝がんの発症を促進することを見出した。LTAは、細胞老化を起こした肝星細胞のToll-like receptor 2 (TLR2)を介して、細胞老化随伴分泌(SASP)因子とシクロオキシゲナーゼ2 (COX2)の発現を誘導する。更に、COX2により産生されたプロスタグランジンE2(PGE2)が、免疫細胞のEP4レセプターを介して抗腫瘍免疫応答を抑制することで、肝がんの形成が進展することが分かった。さらに、線維化の少ないヒトの非アルコール性脂肪肝炎(NASH)を素地とする肝臓の腫瘍部における肝星細胞では、COX2の発現ならびにPGE2の産生が著しく増加していたことから、ヒトでも同様のメカニズムが生じている可能性が強く示唆された。28年度が最終年度であるため、記入しない。近年、日本のみならず世界的に肥満人口が増加している。多くの研究から肥満癌のリスクファクターでもあることが示されているが、そのメカニズムについては十分に明らかになっていない。申請者はすでに肥満による肝癌発症モデルで、腸内細菌叢からの代謝産物が腸管循環によって肝臓に到達し、肝臓Stellate細胞にDNA損傷を伴う細胞老化を起こし、SASP(Senescence Associated Secretory Phenotype)によって肝腫瘍形成が促進されたことを明らかにした。しかし、それらのSASP因子の発現はどのような機構を介して制御され、癌の発症に寄与しているのかについてまだ不明である。申請者は肝臓Stellate細胞における炎症シグナル活性化のメカニズムとして、Toll-like Receptors (TLRs)を介するシグナルに着目した。TLRsは一般的に様々な病原体の外膜成分などの病原関連分子パターンや宿主由来の内在性因子の分子パターンを認識し、免疫反応を活性化する際に重要な役割を担っていることが知られている。申請者は脂質を認識する可能性のあるTLR2KOマウスを用いて、肥満による肝癌誘発実験を行った。その結果、野生型のマウスに比べてTLR2KOマウスにおいては肝腫瘍形成が著しく抑制された。そこで本研究ではTLR2が脂肪肝の環境下で、どのようなリガンドを認識しどのような機構で肝腫瘍の形成を促進するのかを解明することを目的とする。平成26年度では、申請者はTLR2の発現細胞は肝臓Stellate細胞であることを証明した。更にTLR2と複合体を形成するTLR1またはTLR6のノックアウトマウスを用いて同様の肝がん誘発実験を行った。また、申請者もリガンド探索実験により、脂肪肝の環境下に何種類のTLR2の新規リガンドとなる物質を同定することに成功した。申請者は肝臓Stellate細胞における炎症シグナル活性化の機構として、Toll様受容体(TLRs)を介するシグナルに着目し、TLR2KOマウスを用いて、肥満による肝癌誘発実験を行った。その結果、TLR2KOマウスにおいては肝腫瘍形成が著しく抑制された。そこで本研究ではTLR2が脂肪肝の環境下でどのような機構で肝腫瘍の形成を促進するのかを解明することを目的とする。平成26年度では、申請者は肥満誘導性肝癌においてTLR2がStellate細胞に発現していることを見出した。更に肝臓の腫瘍部における炎症シグナル経路の活性化と炎症性サイトカインの発現を調べた結果、TLR2KOマウスでの炎症シグナル経路の活性化マーカーの発現と炎症性サイトカインの発現が低下していることが観察された。平成27年度では、このTLR2よる炎症性サイトカインの誘導が細胞老化を起こしたStellate細胞において増幅されるのかを検討した。申請者らの先行研究において、肥満誘導性肝癌の癌部において、腸内細菌の代謝物DCA(デオキシコール酸)が肝臓に多く蓄積していることを見出していた。そこで、申請者はDCAが肝臓Stellate細胞の細胞老化を誘導する可能性があると考えた。このことを検証するために、申請者はStellate細胞を単離し、DCAを添加した培地で8日間培養した。その結果、DCA含有培地で培養したStellate細胞において細胞老化マーカーであるp21とp16の発現が上昇し、更にTLR2の発現も上昇することが確認された。そこで、細胞老化誘導したStellate細胞にTLR2のリガンドを投与したところ、炎症性サイトカインの発現がより強く誘導されることを見出した。

このことから、恐らく肥満誘導性肝癌において、DCAにより細胞老化が誘導されたStellate細胞ではTLR2が高発現し、TLR2シグナル経路を介して炎症性サイトカインの遺伝子発現が誘導され、その結果、肝腫瘍の形成を促進する可能性が考えられた。申請者は肝臓Stellate細胞における炎症シグナル活性化のメカニズムとして、Toll-like Receptors (TLRs)を介するシグナルに着目し、TLR2KOマウスを用いて、肥満による肝癌誘発実験を行った。その結果、野生型のマウスに比べてTLR2KOマウスにおいては肝腫瘍形成が著しく抑制された。そこで本研究では1TLR2が脂肪肝の環境下で、どのようなリガンドを認識し炎症シグナルカスケードを活性化するのか、さらに2その活性化された炎症シグナルや分泌されたサイトカインがどのような機構で肝腫瘍の形成を促進するのかを解明することを目的とする。平成26年度では、申請者はTLR2の発現細胞を同定し、更にTLR2がTLR1と複合体を形成しが肝腫瘍の形成及び成長に起用していることを見出した。また、申請者もTLR2の新規リガンドとなる候補物質を絞り込んだ。そして平成27年度では、申請者はTLR2が脂肪肝の環境下での肝腫瘍発症促進機構を解明するために、肝癌部の微小環境における肝臓Stellate細胞の役割に着目した。申請者はマウスの肝臓から肝臓Stellate細胞を単離した後、肥満誘導性肝癌の癌部において蓄積する腸内細菌の代謝物DCAを培地に添加し、8日間培養した。その結果細胞老化が誘導された肝臓Stellate細胞はTLR2のリガンドに強く反応し、炎症シグナルが活性化した。これらの結果により、脂肪肝においてで増加した代謝物とTLR2が肝腫瘍の発症に関わっていることを見出した。肥満は糖尿病や心筋梗塞だけでなく、様々な癌を促進することが指摘されている。申請者はHras遺伝子に活性化型変異を入れる化学発癌剤、DMBAを用いた全身性発癌モデルマウス実験により、肥満したマウスにおいて肝がん発症が著しく促進されることを見出した。そして2次胆汁酸である、デオキシコール酸(DCA)を産生するグラム陽性菌が肥満により増加することで、体内のDCA濃度が上昇し、腸肝循環により肝臓に運ばれたDCAが肝臓の間質に存在する肝星細胞の細胞老化を誘導し、様々な炎症性サイトカイン等の分泌を促進することで、肝がん促進的ながん微小環境を形成することを見出した。しかし、細胞老化を起こした肝星細胞が一体どのような機構を介して肝癌の発症を促進するのかについてはまだ十分には明らかになっていない。申請者は、肥満により増加したグラム陽性菌の外膜成分であるリポタイコ酸(LTA)が、肝臓に輸送されることにより、がん形成に有利な微小環境が形成されることで、肝がんの発症を促進することを見出した。LTAは、細胞老化を起こした肝星細胞のToll-like receptor 2 (TLR2)を介して、細胞老化随伴分泌(SASP)因子とシクロオキシゲナーゼ2 (COX2)の発現を誘導する。更に、COX2により産生されたプロスタグランジンE2(PGE2)が、免疫細胞のEP4レセプターを介して抗腫瘍免疫応答を抑制することで、肝がんの形成が進展することが分かった。
強レーザー場による溶液中のイオン励起と巨大クラスター生成の分子動力学研究

強い電場が荷電多粒子系の構造形成、クラスター形成に与える効果を、分子動力学シミュレーション法を用いて次の2つのテーマについて研究した。[A.]電解質溶液中での、強い静電場による粒子クラスター生成過程複数のマクロイオンとそれを電気的に中和する対イオン、その追加成分として、価数Z:1の電解質塩イオンを添加する。(1)塩イオン(電荷逆転を支える対イオン)が無い場合:同符合電荷をもつマクロイオンどうしは、多価(2価以上)の対イオンの介在により、静電引力で安定に物理結合して粒子クラスターを形成する。これは静電エネルギー最小状態であり、同符号コロイド粒子融合という特異な現象を説明する機構である。この物理結合には顕著な対イオン価数への依存性があり、1価対イオンではマクロイオンの結合は起きない。(2)多価の電解質塩を加えると、各マクロイオンは多数の対イオンの凝縮を受けて電荷逆転を起こす。少量の塩添加のときは安定な結合が生じる。添加塩イオン濃度が0.5mol/l以上でこの物理結合は不安定となり、クラスターは崩壊する。(3)強い電場を印加すると、マクロイオンどうしは運動エネルギーを得て衝突し、マクロイオン間にある静電的バリアー超えて結合し、クラスターが生成される。ただし、マクロイオンの電荷が小さいとき、このクラスターは準安定で、結合と崩壊を繰り返す。ここでも(1)の過程と同様に、多価の対イオンはマクロイオンをつなぐ糊の役割をしている。[B.]電解質溶液中における、強い印加電場によるイオン分子の移動と回転配向電荷逆転現象は強い静電気力による構造形成、自己組織化現象である。生体系のロッド形状分子であるDNAを想定して、表面電荷密度が小さい場合に焦点をあてて研究を行った。系には電荷逆転を起こす十分な濃度の電解質塩イオンを添加する。電場は系に対称性を与え、対イオンは電場方向のロッド先端に凝縮し、共イオンは電場反対方向のロッド先端に集まる。つまりイオン凝縮によりロッドに誘電分極が起きる。この過程で静電エネルギーを最小にするためロッドが回転し、ロッド軸が電場に沿う向きに配向する。ただし、この回転を起こすための静電場は10^5V/mとかなり大きい。ただし滑らかな一様表面電荷では、対イオンが滑るためマクロイオン上に安定に凝縮しない。この回転配向を利用して、長さの異なるDNAなどのロッド形状高分子の選別できる可能性がある。
頭頸部癌におけるCap43.mina53遺伝子の発現と転移抑制における臨床的煮義

59人の口腔舌癌(Stage IIV)においてCap43の発現を検討した。症例の背景はT1,2が31例、T3,4が28例、リンパ節転移陽性例が33例、遠隔転移が3例、局所再発例が11例、予後は生存が36例、死亡が23例である。方法はホルマリン固定された標本を切片標本としCap43抗体を用いて免疫組織染色を行った。判定は標本を検鏡し、任意の視野での核、細胞質、細胞膜での染色度を判定した。各項目の有意差はx2検定により検討し、以下のような結果を得た。1. 59人の舌癌患者の58人(98.3%)にCAP43の発現を認めた。2. CAP43の発現した細胞は一定の視野内に平均64.6%認めた。3.細胞内のどの部分にCAP43が発現するかの検討では核が50/59例(84.7%)、細胞質が(++)56/59例(94.9%)、(+)2/59例(3.4%)であった。臨床データとの比較では局所再発(p<0.05)と遠隔転移(p<0.01)とについて有意な関係を認めた。現在、免疫組織学的検討と臨床データとの評価を行なっており、CAP43の細胞質の染色度が強度であると遠隔転移・局所再発を防ぐ可能性があるのではないか、CAP43の細胞膜への染色密度が高いと局所再発を防ぐ可能性があるのではないか、などが示唆されている。そこでこの評価方法を模索しリンパ管浸潤についてCD34、脈管浸潤についてD2-40を免疫染色した。現在このデータを解析中である。1)59人の口腔舌癌(StageIIV)においてCap43の発現を検討した。各項目の有意差はX2検定により検討し、以下のような結果を得た。1.59人の舌癌患者の58人(98.3%)にCAP43の発現を認めた。2.CAP43の発現した細胞は一定の視野内に平均64.6%認めた。3.細胞内のどの部分にCAP43が発現するかの検討では核:50/59例(84.7%)、細胞質:(++)56/59例(94.9%)、(+)2/59例(3.4%)であった。また、臨床データとの比較では局所再発(p<0.05)と遠隔転移(p<0.01)とについて有意な関係を認めた。そこでこの評価方法を模索しており、他の因死(CD34:リンパ管浸潤、D2-40:脈管浸潤)もあわせた検討が必要ではないかと考えている。
「知的障害者との共同生活」運動における多元的「宗教性」のケア学への貢献可能性

<ラルシュ>共同体の4つの側面ついて、おもに欧米のキリスト教とは異なる宗教伝統の共同体を対象に調査し、欧米を基準になされてきた議論を批判的に参照しながら、次の点を明らかにする。1自他の「弱さ」を核心とする「依存関係の場」でありつつ、「弱さが暴力を生む場」という自覚と問題意識をもっていることの意義(内なる暴力性の問題)。2「女性的」とされる家庭的ケア領域に、特に若い男性が市民貢献活動として参加することの意義(「公/私」の領域区分の見直し)。3「ディスポニーブル」というキリスト教的倫理規範の通文化性。4諸宗教伝統に根差した祈りの共同体としての意義(宗教間対話とは異なる、宗教間交流の可能性)。
第2次大戦の終結と朝鮮社会-朝鮮分断の過程

本年度は主として、北朝鮮における大戦の終結について研究した。ソ連軍は一般に言われるほど、参戦当初において、破竹の勢いで北部朝鮮に進撃したのではなかった。日本軍の抵抗は根強く、日本が降伏した8月15日の時点で、ソ連軍は成鏡北道で足踏み状態であった。しかし、戦争が終結し各地において戦闘が停止すると、その先遣隊は順調に南下を始めた。そして、8月24日には平壤に進出した。8月30日までには北朝鮮のほぼ全域を制圧するに至った。ソ連軍の進駐と同時に日本軍の武装解除が行なわれ、北朝鮮の各地はソ連軍の占領状態に入った。日本の植民地行政機関はソ連軍によって接収され消滅したが、それに取って代わり、朝鮮民衆の自治機関が占領軍当局の力によって新たな権力機関として誕生した。確かに、ソ連軍は、米軍とは異なり、表面的には朝鮮民衆の自発的な行動を認め、間接的な占領統治体制を施いた。長年民族の独立を希求してきた朝鮮民衆は、こうしたソ連軍を解放軍として歓迎したのである。しかし、ソ連軍は社会主義者を中心に「人民政治委員会」を樹立し占領政策に臨んで行った。それは朝鮮民衆の反発をかうものとなった。
卵の成熟と受精卵発生の調節因子の作用機序に関する研究

卵の成熟と受精卵発生の調節機構を知るためprostaglandin(PG)とprogestrone(P_4)の作用機序を検討し、以下の成績をえた。まず卵核崩壊、第1極体形成を卵の核の成熟の指標にし、また酵素的サイクリング法より測定した卵のphosphofructokinase活性を卵の細胞質の成熟の指標とし、幼若ラットのin vivo,in vitroにおける卵成熟過程と、それに対するPGの関与について検討した。(1)PG合成酵素阻害剤であるindomethacinによる排卵の抑制はPGE_2、PGF_2α.PGI_2により回復した。一方、indomethaninによる卵の成熟の抑制はPGF_2、GPGF_2αにより回復し、PGI_2は無効であった。すなわちLHsurge後の排卵および卵の成熟はPGにより仲介されることが示唆された。(2)A-kinase系の賦活化により卵の成熟が抑制されている条件下で、PGE_2、PGF_2α、hcGは卵のPFK活性を直接的に亢進させた。以上の結果らか、PGは卵に対し直接的に、あるいは成熟抑制因子の卵への移行を遮断し間接的に作用することにより、LHsurge後の卵成熟過程を仲介すると考えられる。マウス着床前初期胚のもつ酵素活性を酵素的サイクリング法を用いて測定し、hexokinase(HEX)活性を生化学的な指標として、初期胚の分化に及ぼすP_4の意義を検討した。ステロイド産生酵素3β-OH steroid dehydrogenaseの特異的阻害剤であるtrilostaneを培養液中に添加し、初期胚自身によるP_4産生を抑制したところ初期胚自身の産生に対するP_4がHEX活性の上昇に何等かの形で関与している可能性が示唆された。P_4初期胚が産生しP_4は、培養液中に分泌されることなく、そのまま初期胚内部で直接利用されていることが推測された。マウス初期胚は自らP_4を産生すること、そのP_4はそのまま核内に移行しHEXをコ-ドするDNAからmRNAへの転与を促進し得ること。その結果HEX酵素蛋白の合成が誘導され、HEX活性の上昇に寄与していること、が示唆されたと考えられる。両生類の卵の成熟および胚の発生にプロジェステロンが重要との知見がえられているが,哺乳類の卵および胚での作用については必ずしも一致した成績はない.我々はその点を明らかにするためにマウス初期胚を用いてin vitroの実験を行った.卵成熟の指標としてはグルコースをグルコース6燐酸に代謝し,グルコース分解の律則酵素と考えられているヘキソキナーゼの活性をサイクリング法で測定した.まず3βOHステロイドデヒドロゲナーゼの阻害剤であるトリロスタンをin vitro培養中の初期胚に添加すると用量反応的にヘキソキナーゼの活性が抑えられ,さらに外因的にプロジェステロンを添加するとその活性が回復することから内因性プロジェステロンが初期胚の発生に働いていることが明らかになった.次いで初期胚の培養液にプツジェステロンを添加し,内因性のプロジェステロンの作用を相加的に増強するかを検討したところ,ヘキソキナーゼの活性には変化がみられなかった.

他方プロジェステロンの作用機序を検索する目的でプロジェステロンの変容体部位で競合的にその作用を抑制するRU38486を初期胚培養液に添加したが,ヘキソキナーゼの活性は抑えられなかった.しかしトリロスタン添加で内因性のプロジェステロン産生を抑制し,外国的にプロジェステロンとRU38486を添加すると添加したプロジェステロンのヘキソキナーゼ活性化作用がRU38486で抑えられた.これらの成績から初期胚の発生には内因性プロジェステロンが必要でその作用としてantacrine機構が関係することが示唆された.哺乳類の成熟に関与する因子は多くのものが知られているが、細胞機能の調節因子の一つとして注目されているprostaglandin(PG)について検討し以下の結果を得た。〔方法〕Wistar系幼者雌ラットにPMS、bCGを投与し過排卵を起こし、その卵を用いて実験を行った。卵の成熟の指標としては卵核崩壊と極体の放出、さらに卵細胞質内のphosphofructokinase(PFK)の活性化を用い、PFK活性測定にはサイクリング法を応用した。〔結果〕1)LH surge前の卵胞内細胞に核の成熟はみられないが、細胞質の成熟はestrogenにより促進された。2)LH surge後は、卵の核の成熟と細胞質の成熟は平行して進行した。3)PG合成酵素阻害剤であるindomethacinによる排卵の抑制はPGE_2、PGF_<2α>、PGI_2により回復した。一方、indomethacinによる排卵の抑制はPGE_2PGF_<2α>により回復し、PGI_2は無効であった。すなわちLH surge後の排卵および卵の成熟はPGにより仲介されることが示唆された。4)A-kinase系の賦活化により卵の成熟が抑制されている条件下で、PGE_2、PGF_<2α>、hCGの卵のPFK活性を直接的に亢進させた。5)adenylate cyclaseの賦活剤であるforskolinを用い、_cAMPなどによる卵の成熟抑制が解除される機構について検討を加え、卵の成熟停止状態が維持されるためにはcAMPが卵周囲の顆粒膜細胞から卵へ持続的に供給されることが必要であることを明らかにした。以上の結果から、PGは卵に対し直接的に、あるいは成熟抑制因子の卵への移行を遮断し間接的に作用することにより、LH surge後の卵成熟過程を仲介すると考えられる。受精卵発生の調節機構を知るためProgesterone(P_4)の作用機序を検討し、以下の成績をえた。マウス着床前初期胚のもつ酵素活性を酵素的サイクリング法を用いて測定し、hexokinase(HEX)活性を生化学的な指標として、初期胚の分化を及ぼすP_4の意義を検討した。ステロイド産生酵素3βーoH Steroid dehydrogenaseの特異的阻害剤であるtrilostaneを培養液中に添加し、初期胚自身によるP_4産生を抑制したところ初期胚自身の産生に対するP_4がHEX活性の上昇に何等かの形で関与している可能性が示唆された。P_4初期胚が産生したP_4は、培養液中に分泌されることなく、そのまま初期胚内部で直接利用されていることが推測された。マウス初期胚は自らP_4を産生すること、そのP_4はそのまま核内に移行しHEXをコ-ドするDNAからmRNAへの転写を促進し得ること。その結果HEX酵素蛋白の合成が誘導され、HEX活性の上昇に寄与していること、が示唆されたと考えられる。
コットンラット：複数疾患を具有する実験用齧歯目のヒト併存症モデルへの応用

高齢化社会は「複数疾患を併発する(併存症)」患者を増加させた。ヒトの併存症を再現する実験動物は、その原因究明や治療法開発に極めて有用である。本研究では、ヒト病原体に感受性を持ち複数疾患を発症する実験用齧歯目、コットンラットがヒト併存症を模倣する可能性に着目し、下記2点を明らかにすることを目的とした。1解剖学的、組織学的及び血液学的特徴を網羅的に解析することで、コットンラットが具有する疾患の相互作用,増悪因子を同定する。2分子形態学的及び遺伝学的手法を用いて併存症の根幹をなす原因遺伝子を同定する。2018年度は、交系雌雄コットンラットの全身諸臓器について肉眼的,組織学的及び血液学的な背景データを収集するとともに、異常を呈した臓器を精査した。その結果、コットンラットは通常食摂食下でインスリン抵抗性等の代謝性疾患を呈し、それは内臓脂肪蓄積に加え、膵臓外分泌部への異所性脂肪蓄積と関連した。これまで、我々は雌性コットンラットが尿細管間質病変を主徴とする慢性腎臓病を発症することを報告してきた。加えて、加齢雄性コットンラットが糸球体病変を主徴とする慢性腎臓病を呈することを見出した。以上のように、コットンラットはヒトで罹患率が上昇しているメタボリックシンドローム及び慢性腎臓病の素因を有し、ヒト併存症を模倣する可能性が更に高まった。更に、コットンラットの表現型には性差があり、雌で重篤な傾向を示す。性ホルモンが各疾患へ与える役割を証明するため、性腺摘出術を施した解析が進行中である。2018年度は雌雄コットンラットの全身諸臓器について肉眼的,組織学的及び血液学的な背景データを収集することで、ヒトで問題となる多数の表現型を発見し、それらのうちメタボリックシンドローム、慢性腎臓病の病態を詳細に解析した。性腺摘出術を施す等、これらの原因を解明するための研究が進行中である。2019年度は下記の事項を解析する。12018年度に見出したコットンラットの表現型を更に精査する。2コットンラットの表現型には性差があり、雌で重篤な傾向を示す。3ヒトにおいて、多臓器に疾患が併存する一因として全身性の慢性炎症が疑われている。コットンラットも自己免疫疾患傾向を示すことから、コットンラットの免疫異常の原因を調査する。4腎臓にターゲットを絞り、トランスクリプトーム解析を行うことで発現遺伝子種を同定し慢性腎臓病の候補遺伝子を検索する。
ICTを活用した小児1型糖尿病患者への糖尿病自己管理教育支援の効果

1小児糖尿病サマーキャンプにおけるICTを用いた糖尿病教育支援の実施。小学生から高校生の1型糖尿病患者28名を対象に、e-SMBGを改訂したe-SMBG子どもモードとタブレット型携帯端末を活用し、血糖値、インスリン注射量、食事単位、運動量を4日間入力し、血糖値の変動に影響する要因を考える教育支援を行なった。ICTシステムを活用することで、血糖値の変化がグラフ化され「食事や運動量に関係した血糖値の変動の理解」が促進された。2ICTを活用した継続支援の長期効果ICT活用の有用性と教育効果を明らかにすることを目的に、コントロール群を用いた比較試験を、平成29年10月より開始した。中学生から高校生までの1型糖尿病患者15名を、ICT活用群(10名)とICT非活用群(5名)に分類し、ICT活用群に3か月間の介入を行った。ICT活用群はタブレット携帯型端末に、1血糖値、2食事・補食内容、3インスリンの投与量と種類、4活動量、5その日の振り返りを入力した。研究者は患者から送信されたデータや振り返りに対して、フィードバックを送信し、自己管理行動に対して動機づけが高まる教育支援を継続した。ICT活用群の属性は、年齢14.7±1.56歳、発症年齢8.2±3.82歳、ICT非活用群の年齢は14.0±1.58、発症年齢は6.6±5.02歳であった。ICT活用の評価として、HbA1c値、小児QOL尺度得点、小児・思春期糖尿病セルフケア尺度得点の変化を、対応のあるt-検定又はWilcoxonの符号付順位検定を用いて分析した。ICT活用群では、活用後にHbA1c値が8.1%から7.2%と有意に低下した(t=2.38, P>0.05)。また、QOL総得点も、75.5点から78.0点に有意に上昇した(Z=-1.94, P>0.05)。しかし、セルフケア得点については、有意な得点の上昇はみられなかった。本研究の目的は,小児1型糖尿病患者の自己管理行動の確立を目的とし,タブレット型携帯端末等の情報通信技術(ICT)を用いた小児糖尿病教育支援システムをより活用可能なものに発展させることである。平成28年度は,以下の3点について計画し研究を進めた。1)ICTを活用した糖尿病自己管理教育システムに活用可能なアプリケーションの検討:海外・国内の先行研究を基盤に,ICTを活用した糖尿病自己管理教育システムに活用可能なアプリの種類,目的,エビデンスなどの医学的評価と有用性について文献検討した。海外では、思春期1型糖尿病患者を対象にICTを活用したコーピングスキルトレーニング(TEENCOPE)やSKYPEを活用した療養支援をおこない、療養行動とHbA1c値への影響を検討しており、ICTを活用した療養支援の効果が期待されることが明らかになった。次に、現在,糖尿病患者が利用できる日本で開発されている糖尿病の療養管理アプリケーションについてWEB上で検索した。ダウンロード件数が4万人と多く、医学的評価も高い「スマートe-SMBG」が活用可能と判断した。e-SMBGの開発者から協力を得て,スマートe-SMBGに「こどもモード」を搭載し,糖尿病サマーキャンプで実際にアプリケーションの試用を行った。2)タブレット型携帯端末に装備するe-糖尿病手帳及びデジタル教材の開発:小児糖尿病患者の自己管理行動の確立に必要となる糖尿病の病態,インスリン注射,血糖測定,食事療法,学校生活を送るうえで必要となる知識や技術に関する内容を検討し,子どもの発達段階に合わせた「小児用e-糖尿病手帳」として活用可能なデジタル教材について検討した。今年度は,インスリンの注射手技や血糖測定方法について,ビデオ教材の開発を行った。これまでに開発した糖尿病自己管理支援システム用の専用ホームページは、開発者の逝去に伴い、継続使用が困難となった。したがって、今回の研究で活用する専用ホームページは、ソフトの不具合やウイルス対策、また、新しい携帯や端末の機種にも適用できるようソフトウエアのバージョンアップに随時対応している、アークレイ社の「糖尿病管理e-SMBGクラウド」を活用することにした。このシステムは、患者がスマートフォンやタブレット型携帯端末から、血糖値、インスリン量、食事量、運動量などをe-SMBGから随時入力すると、患者と医療者双方が、グラフ化されたデータをホームページ上で閲覧・集中管理できる医療クラウドである。医療データを取り扱うためのセキュリテイ対策も取られており、安全が確保されている。今回、新たに搭載された「こどもモード」をサマーキャンプで、小学生から高校生に試用してもらったが、大変好評であり「入力のしやすさ」「画面のみやすさ」ともに、5段階評価で4段階以上の評価を得た。また、タブレット型携帯端末画面上で見れる血糖値のグラフを活用することで、血糖値の変動を視覚的に子ども自身が学習できるため、自分の血糖値管理に興味を示すことが可能になった。今後、e-SMBGの「こどもモード」の本格的な活用と合わせて、タブレット型携帯端末に装備するe-糖尿病手帳及びデジタル教材の開発を進めていきたい。本研究の目的は、小児1型糖尿病患者の自己管理行動の確立を目的とし、ICTを用いた小児糖尿病教育支援システムを活用可能なものとして発展させ、その効果を検証することである。平成29年度は以下の2点について研究を進めた。

小学生から高校生の1型糖尿病患者14名を対象に、アークレイ社が開発したe-SMBG子どもモードとタブレット型携帯端末iPad-miniを活用し、サマーキャンプ中の血糖値、インスリン注射量、食事の単位、運動量を4日間入力し、血糖値の変動に影響する要因を、子どもと共に考える教育支援を行なった。システムの評価項目で最も得点が高かったのは、「食事や運動量に関係した血糖値の変動の理解」であった。本システムを活用することで、グラフ化された血糖値の変動を子ども自身がとらえ、その影響要因を自ら考えることが可能になった。2ICTを活用した継続支援の提供による自己管理行動の確立。小児1型糖尿病患者のICT活用の有用性と教育効果を明らかにすることを目的に、コントロール群を用いた比較試験を、平成29年10月より開始した。まず、インスリン治療を行っている中学生から高校生までの小児1型糖尿病患者を対象に、ICT活用群(5名)とICT非活用群(5名)の合計10名を対象に、3か月間の介入を行った。ICT活用群には、タブレット携帯型端末を用いて、1血糖値、2食事・補食内容、3インスリンの投与量と種類、4活動量、5その日の振り返りや評価コメントなどを入力してもらった。研究者は小児糖尿病患者から送信されたデータやコメントに対して、フィードバックを送信し、患者の自己管理行動に対して動機づけが高まる教育支援を継続した。平成30年3月より、新たにICT活用群5名を追加し、現在も継続支援を実施している。自己管理行動の確立に向けた継続的な介入支援期間については、当初、半年から1年という長期間を予定していたが、対象者の負担を考慮し、3か月間の介入期間に変更し、少人数グループでの介入を数回に分けて行うことに変更した。平成29年度末で研究対象者数は、計画していた人数を現時点では満たしていないが、平成30年度にも新たな参加者を募集する予定である。1小児糖尿病サマーキャンプにおけるICTを用いた糖尿病教育支援の実施。小学生から高校生の1型糖尿病患者28名を対象に、e-SMBGを改訂したe-SMBG子どもモードとタブレット型携帯端末を活用し、血糖値、インスリン注射量、食事単位、運動量を4日間入力し、血糖値の変動に影響する要因を考える教育支援を行なった。ICTシステムを活用することで、血糖値の変化がグラフ化され「食事や運動量に関係した血糖値の変動の理解」が促進された。2ICTを活用した継続支援の長期効果ICT活用の有用性と教育効果を明らかにすることを目的に、コントロール群を用いた比較試験を、平成29年10月より開始した。中学生から高校生までの1型糖尿病患者15名を、ICT活用群(10名)とICT非活用群(5名)に分類し、ICT活用群に3か月間の介入を行った。ICT活用群はタブレット携帯型端末に、1血糖値、2食事・補食内容、3インスリンの投与量と種類、4活動量、5その日の振り返りを入力した。研究者は患者から送信されたデータや振り返りに対して、フィードバックを送信し、自己管理行動に対して動機づけが高まる教育支援を継続した。ICT活用群の属性は、年齢14.7±1.56歳、発症年齢8.2±3.82歳、ICT非活用群の年齢は14.0±1.58、発症年齢は6.6±5.02歳であった。ICT活用の評価として、HbA1c値、小児QOL尺度得点、小児・思春期糖尿病セルフケア
問質細胞の平済筋型αアクチンの発現低下を惹起する卵巣癌由来の因子に関する研究

1、ヒト卵巣癌細胞の培養上清および悪性卵巣腫瘍内容液が引き起こした線維芽細胞におけるα-SNAの発現低下は悪性度に依存した現象なのか否かについて検討するために、3Y1線維芽細胞の培養上清に手術時得られた良性ないしは悪性の卵巣腫瘍内容液を添加し、線維芽細胞におけるα-SMAの発現変化をウエスタンブロット法を用いて両者間で比較した。悪性卵巣腫瘍内容液はα-SMAの発現低下を引き起こし、その低下は血小板由来成長因子(PDGF)の中和抗体添加により、ほぼ全例で濃度依存性に回復した。一方、良性卵巣腫瘍内容液はα-SMAの発現を低下させず、かつPDGF中和抗体を加えても変化なかった。2、線維芽細胞のα-SMAの発現低下を惹起する卵巣癌由来の因子としてPDGFが考えられたため、10株のヒト卵巣癌細胞株の培養上清中のPDGFの有無をELISAを用い検討したところ、1株の非表層上皮性卵巣癌株を除く9株の表層上皮性卵巣癌株全ての培養上清で検出された。更に、良性腫瘍の内容液ではほぼ全例でPDGFを検出できなかったのに対し、悪性腫瘍由来の内容液では高頻度に高濃度のPDGFが検出された。以上より卵巣癌が放出するPDGFが周囲の間質細胞におけるα-SMAの発現低下に関与していると考えられた。sis癌遺伝子の産物はPDGFであるが、この産生が癌特異的であったことは、PDGF産生能の獲得が卵巣腫瘍の癌化に関わっている可能性を示唆した。本年度得られた以上の結果はすでに平成8年10月の第55回日本癌学会総会で発表し、更にきたる平成9年4月の第6回がん転移研究会総会および第49回日本産婦人科学会総会において発表した。また現在、論文投稿に向け執筆中である。α-SMAは線維芽細胞のみならず血管壁構築細胞にも強く発現しているが、癌由来のPDGFによるこの発現低下は骨格蛋白の変化を介して癌細胞の間質浸潤をより容易にしている可能性が考えられ、現在検討中である。1)ヒト卵巣癌細胞の培養上清および悪性卵巣腫瘍内容液が引き起こした線維芽細胞におけるα-SMAの発現低下は悪性度に依存した現象なのか否かについて検討するために、3Y1線維芽細胞の培養上清に手術時得られた良性ないしは悪性の卵巣腫瘍内容液を添加し、線維芽細胞におけるα-SMAの発現変化をウエスタンブロット法を用いて両者間で比較した。一方,良性卵巣腫瘍内容液はα-SMAの発現を低下させず,かつPDGF中和抗体を加えても変化なかった。2)線維芽細胞のα-SMAの発現低下を惹起する卵巣癌由来の因子としてPGDFが考えられたため、11株のヒト卵巣癌細胞株の培養上清中のPDGFの有無をELISAを用い検討したところ、1株の非表層上皮性卵巣癌株を除く10株の表層上皮性卵巣癌株全ての培養上清で検出された。更に、良性腫瘍の内容液ではほぼ全例でPDGFを検出できなかったのに対し,悪性腫瘍由来の内容

液では高頻度に高濃度のPDGFが検出された。以上より、卵巣癌が放出するPDGFが周囲の間質細胞におけるα-SMAの発現低下に関与していると考えられた。sis癌遺伝子の産物はPDGFであるが,この産生が癌特異的であったことは,PDGF産出能の獲得が卵巣腫瘍の癌化に関わっている可能性を示唆した。本年度得られた以上の結果はすでに平成8年10月の第55回日本癌学会で発表し、更にきたる平成9年4月の第6回がん転移研究会および第48回日本産婦人科学会において発表する予定である。また現在、論文投稿に向け執筆中である。α-SMAは線維芽細胞のみならず血管壁構築細胞にも強く発現しているが,癌由来のPDGFによるこの発現低下は骨格蛋白の変化を介して癌細胞の間質浸潤をより容易にしている可能性が考えられ、現在検討中である。1、ヒト卵巣癌細胞の培養上清および悪性卵巣腫瘍内容液が引き起こした線維芽細胞におけるα-SMAの発現低下は悪性度に依存した現象なのか否かについて検討するために、3Y1線維芽細胞の培養上清に手術時得られた良性ないしは悪性の卵巣腫瘍内容液を添加し、線維芽細胞におけるα-SMAの発現変化をウェスタンプロット法を用いて両者間で比較した。悪性卵巣腫瘍内容液はα-SMAの発現低下を引き超こし、その低下は血小板由来成長因子(PDGF)の中和抗体添加により、ほぼ全例で濃度依存性に回復した。一方、良性卵巣腫瘍内溶液はα-SMAの発現を低下させず,かつPDGF中和抗体を加えても変化なかった。2、線維芽細胞のα-SMA発現低下を惹起する卵巣癌由来の因子としてPDGFが考えられたため、10株のヒト卵巣癌細胞株の培養上清中のPDGFの有無をELISAを用い検討したところ、1株の非表層上皮性卵巣癌株を除く9株の表層上皮性卵巣癌株全ての培養上清で検出された。更に、良性腫瘍の内容液ではほぼ全例でPDGFを検出できなかったのに対し、悪性腫瘍由来の内容液では高頻度に高濃度のPDGFが検出された。sis癌遺伝子の産物はPDGFであるが,この産生が癌特異的であったことは、PDGF産生能の獲得が卵巣腫瘍の癌化に関わっている可能性を示唆した。本年度得られた以上の結果はすでに平成8年10月の第55回日本癌学会総会で発表し、更にきたる平成9年4月の第6回がん転移研究会総会および第49回日本産婦人科学会総会において発表した。