hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
グラフトフロム法による高密度環状グラフト共重合体の創製

グラフトフロム法を用い、環状高分子と分岐高分子の融合である環状グラフト共重合体合成技術の開発を行った。アニオン重合と原子移動ラジカル重合の両面からグラフト重合を検討した結果、特にアニオン重合を用いることで、簡便な環状グラフト共重合体合成技術を開発に成功した。さらに環状グラフト共重合体の原子間力顕微鏡による一分子観察より、サイズの揃った環状グラフト共重合体に基づくドーナツ状分子の観察を実現し、また本手法の拡張による種々の特殊高分子への応用を確立した。次世代の科学技術を支えるボトムアップ型ナノテクノロジーを目指したgraft-from法による環状グラフト共重合体の合成において、環状グラフト共重合体の主鎖骨格となる環状高分子開始剤の合成を設計し、合成を行った。graft-from法における側鎖の重合において、アルコールを開始末端とするε-カプロラクトンの開環重合は非常に有効な手段である。そこで、水酸基を持つモノマーとして2-ヒドロキシエチルアクリレートに着目し、原子移動ラジカル重合(ATRP)を用いてメチルアクリレートと共重合し、水酸基を持つ直鎖状高分子を合成し、続いてその両末端をアリル化し、希薄条件にて高分子両端での閉環メタセシス反応(RCM)を行うことにより、環状高分子開始剤の合成を検討した。得られるポリマーの溶解性に問題があるため、種々の保護基を用いて直鎖型高分子および環状高分子の合成を検討した。その結果、モノマーの水酸基をトリメチルシリル基で保護した場合、ATRPおよび両末端アリル化反応により、両末端アリル型直鎖テレケリックポリマーが狭い分子量分布で得られたが、閉環メタセシス反応による環化反応中に保護基が外れ、GPCによる環化の評価ができないことが明らかになった。そこでモノマー水酸基のベンジル基保護を行ったところ、ATRP、アリル化、閉環メタセシス反応の全ての段階で保護基が外れることなく、効率よく環状高分子の合成に成功した。また、メチルフェニル基はテトラメチルエチレンジアミン存在下でのブチルリチウムによるリチオ化により、アニオン重合の開始剤となりうる。そこでアニオン重合の環状高分子開始剤となりうる、繰り返し単位にメチルフェニル基を持つ環状ポリパラメチルスチレンの合成検討を行った。次世代の科学技術を支えるボトムアップ型ナノテクノロジーを目指したグラフトフロム法による環状グラフト共重合体の合成において、環状グラフト共重合体の主鎖骨格となる環状高分子開始剤の合成を設計し、合成を行った。メチルフェニル基はテトラメチルエチレンジアミン存在下でのブチルリチウムによるリチオ化により、アニオン重合の開始剤となりうる。そこでアニオン重合の環状高分子開始剤となる、繰り返し単位にメチルフェニル基を持つ環状ポリp-メチルスチレンを用いた太陽型高分子の合成検討を行った。ナトリウムナフタレンを開始剤に用いたp-メチルスチレンのアニオン重合の停止剤に、5-プロモ-1-ペンテンを用い、両末端に二重結合を有するテレケリックポリp-メチルスチレンを得た。続いて得られた高分子をジクロロメタン中高希釈条件下で第一世代グラブス触媒を添加することにより、閉環メタセシス反応を行い、効率的に環状ポリp-メチルスチレンを得た。得られた環状高分子にs-ブチルリチウムおよびテトラメチルエチレンジアミンを加え、ペンダントトリル基のリチオ化を行い、環状高分子開始剤を得た。得られた環状高分子開始剤にスチレンモノマーを加え、リビングアニオン重合を行うことで、グラフトフロム法による環状グラフト高分子の合成に成功した。得られた高分子はGPCおよび^1H-NMRにて同定した。また、2-ヒドロキシエチルアクリレートの水酸基をベンジル基で保護した後、原子移動ラジカル重合(ATRP)を用いて重合し、続いてその両末端をアリル化することで、テレケリックポリマーを合成した。続いて高希薄条件下にて高分子両端での閉環メタセシス反応(RCM)を行うことにより、環状高分子開始剤の合成に成功した。次世代の科学技術を支えるボトムアップ型ナノテクノロジーを目指したグラフトフロム法による環状グラフト共重合体の合成において、環状グラフト共重合体の合成を行い、原子間力顕微鏡による一分子観察を行った。環状グラフト共重合体は、繰り返し単位にトリル基を持つ環病ポリp-メチルスチレンのメチル基を選択的にリチオ化し、続くモノマーの重合を行うことで、環状マクロイニシエーターからのグラフトフロム法により合成した。具体的には、ナトリウムナフタレンを開始剤に用いたp-メチルスチレンのアニオン重合の停止剤に、5-プロモ-1-ペンテンを用いて、両末端に二重結合を有するテレケリックポリp-メチルスチレンを合成し、続いて得られた高分子をジクロロメタン中高希釈条件下で閉環メタセシス反応を行い、効率的に環状ポリP-メチルスチレンを得た。得られた環状高分子にs-ブチルリチウムおよびテトラメチルエチレンジアミンを加えてペンダントトリル基のリチオ化を行い、環状ポリアニオンとした。ここにスチレンモノマーを加え、リビングアニオン重合を行い、グラフトフロム法による環状グラフト高分子の合成に成功した。

光散乱法による絶対分子量測定結果より、約50%のトリル基からのグラフト化が確認され、比較的高密度の分岐構造が得られたことが明らかになった。得られた環状グラフト共重合体をマイカ基板にキャストし、原子間力顕微鏡による一分子観察を行ったところ、サイズの揃った、環状グラフト共重合体に基づくドーナツ状分子が確認されたことから、高い分岐密度による、安定した環状構造が達成されたことが示唆された。以上の結果より、本手法によるグラフトフロム型の高密度環状グラフト共重合体の合成法を確立した。
メタボリックシンドロームにおけるエネルギー代謝調節因子の探索とその機能解析

カロリー特に脂質の過剰摂取は肥満,メタボリックシンドローム、糖尿病の発症要因として国民の健康を脅かしている。また脂肪酸の質の違いにより代謝にもたらす影響が異なることもよく知られている。われわれは,このように過栄養が生活習慣病をもたらす分子病態メカニズムの解明を目標に、栄養シグナルが脂肪酸合成を誘導する分子機構を生理、病態両方の視点で解析してきた。特に脂肪酸合成の転写調節に焦点をあてた研究を展開し、SREBP-lcが栄養状態によって変動する倹約遺伝子であり、脂肪酸合成における主要な制御因子であることを生体において明かにしてきた。また肝やβ細胞の脂肪毒性病態において、SREBP-1cの活性化が関与していることを示してきた。従来より個体としてのエネルギー過剰が、エネルギー代謝の破綻を通じて、高脂血症、糖尿病などの生活習慣病を引き起こすというコンセプトのもと、主にマウスを用いた実験を通じてこの脂質合成転写因子SREBP-lcがインスリンシグナルやインスリン分泌に直接影響し、メタボリックシンドロームや糖尿病の病態の発症や悪化に関連していることを示した。さらにSREBP-1cの標的遺伝子として,炭素数12-16の飽和および一価不飽和脂肪酸の鎖長伸長反応をつかさどり、炭素数18以上の長鎖脂肪酸の合成に重要な役割を果たしている酵素Elov16をクローニングし、その機能を解析した。Sterol Regulatory Element-binding protein (SREBP)はLDL受容体遺伝子のプロモーター上のステロール制御部位に結合しその遺伝子発現を活性化する転写因子として発見され細胞内の脂質合成、特にステロール制御の調節因子として確立している。SREBPは、SREBP-1a,-1c,-2の3つが知られ、ファミリーを形成しており、各メンバーによって制御する脂質、その制御の様式、生理的意義が異なる.SREBP-2が元来のコレステロール代謝制御を担う一方、SREBP-1cは、脂肪酸、トリグリセリド合成(リポジェネシス)系の酵素群の転写活性化能を有し、エネルギー代謝臓器において栄養状態に応じてリポジェネシスを支配する。組織における過剰な脂肪酸やトリグリセリドの蓄積は、たとえば、肥満、脂肪肝、高脂血症など脂質代謝異常のみならず、脂肪毒性といわれるように細胞内のインスリン作用の障害を惹起させて糖尿病の病因につながるとして注目されている。我々は,この機序について従来の細胞外からの脂肪酸流入による機転のみならず、SREBP-1cを介した内因性脂肪酸合成も関連しているという仮説のもと、肝臓,β細胞をはじめ各臓器での脂肪毒性を、SREBP-1cの視点から検討を続けている。今回動物モデルをもちいた実験を通じてこの脂質合成転写因子SREBP-1cがインスリンシグナルやインスリン分泌に直接影響し、メタボリックシンドロームや糖尿病の発症に関連することが明らかとなった。特に脂肪酸合成の転写調節に焦点をあてた研究を展開し、SREBP-1cが栄養状態によって変動する倹約遺伝子であり、脂肪酸合成における主要な制御因子であることを生体において明かにしてきた。従来より個体としてのエネルギー過剰が、エネルギー代謝の破綻を通じて、高脂血症、糖尿病などの生活習慣病を引き起こすというコンセプトのもと、主にマウスを用いた実験を通じてこの脂質合成転写因子SREBP-1cがインスリンシグナルやインスリン分泌に直接影響し、メタボリックシンドロームや糖尿病の病態の発症や悪化に関連していることを示した。
農村勤労者の社会的孤立と居場所づくりに関する研究

農村勤労者の孤立の背景となる要因分析を、中山間地域、都市近郊地域でヒアリング調査を行い、定性的に、明らかにすることができた。また、中山間地域、都市近郊地域、小都市中心市街地、大都市既成市街地においてアンケート調査を行い、農村勤労者の孤立の実態を定量的に明らかにすることができた。中山間地域では、個人で余暇を過ごす傾向は見られたものの共同的連帯性は残存していた。一方、都市近郊地域では、大都市地域、小都市地域ほどではないが、個人的に余暇を過ごし、地域と関わらない層の存在が確認され、一定の精神的都市化が確認された。本研究は都市近郊農村地域、中山間地域、大都市地域、小都市地域において、余暇生活の個人化と孤立の程度がどの程度進行しているかを定量化し、無縁社会と言われる昨今、コミュニティの再生や見守りの施策に資する基礎資料となるべき方法論を提示しようとするものである。前年度までは、都市近郊農村におけるヒアリング調査および上記、各地域におけるアンケート調査を実施し、各地域における上記テーマの定量化および都市近郊農村地域における問題の構造化を行った。本年度は、中山間地域および大都市地域における問題の構造化を行うべく、松戸市市街地、札幌市市街地、静岡市山間部においてヒアリング調査を行った。中山間地域においては、余暇の広域化を都市近郊農村と同様に明らかにでき、また高齢者の地域組織での活動のみにつきあいが縮小していること、若年層の地域組織に属しながらも若年層同士で個人的つきあいに余暇の中心があることを明らかにした。大都市市街地においては、高齢者中心のデータとなるが、徒歩圏、広域圏に余暇・つきあいの範囲を分けることができ、高齢化に伴い、徒歩圏へとその圏域が縮小していることが分かった。またその中で徒歩圏でのつきあいが元々少ない層は広域圏でつきあいがあったとしても高齢化により孤立化する可能性を指摘できた。同時に広域における趣味・仕事仲間とのつきあい、徒歩圏における近隣関係のつきあいに大別され、こうしたつきあいを複数持っている層が孤立の可能性が低いと推察された。昨年度までは、都市近郊地域、中山間地域、都市的地域の勤労者の余暇と孤立の状況を分析し、比較研究を行った。しかし、今年度から被災地における本テーマの展開を調査することとした。つまり、仮設住宅においても、農村勤労者の社会的孤立と居場所づくりは極めて重要な課題であり、一般地区以上に深刻な形で課題が析出していると考えたからである。具体的には、仮設住宅(大船渡市平林仮設団地)にてヒアリング調査を実施し、社会的孤立とコミュニケーションの課題を整理した。その結果、仕事、体の健康、心の健康、余暇、移動手段等の事情により、社会的孤立に関わる諸相が説明できた。また同時にその孤立度の差異が顕著に観察できた。また、1仮設住宅と旧集落との物理的距離、2仮設住宅の構造(客間等がない)、3被災者と非被災者の環境条件のギャップによる意識の差がコミュニケーションの阻害要因となり孤立を生んでいた。また仮設住宅における各種支援団体による活動は、必ずしも孤立の解消につながっていないことも明らかにできた。さらに、復興まちづくりにも参与する中で、復興まちづくりはどちらかというと合意形成に力点がおかれ、こうした孤立等の生活格差に関する課題への目配りが足りないことも指摘できた。今後は復興まちづくりの中で、参与観察的にこうした孤立等の解消を行っていきたい。日本建築学会等での発表、農村計画学会誌等への寄稿は今年度行ったが、学術論文の投稿は次年度に行う予定である。本研究は都市近郊農村、中山間地域、大都市地域、小都市地域において、余暇生活の個人化と孤立の程度がどの程度進行しているかを定量化し、無縁社会といわれる昨今、コミュニティの再生や見守りの施策に資する基礎資料となるべき方法論を提示しようとするものである。本年度はアンケート調査を静岡県梅ケ島地区、松戸市三矢小台地区、札幌市金山地区において実施し、農村勤労者の孤立や個人化の状況を大都市地域と比較しながら明らかにすることができた。なおアンケートは複数の自治会よりなる連合自治会を単位として、10002000世帯による地域を選定し、可能な地域では連合自治会の協力を得て、配布と回収をお願いすることとした。協力が得られない地域では、ポスティングにより配布し、郵送の回収を行うこととした。大都市においても首都圏地域と地方圏地域では値が大きく異なり、中山間地域では大都市とは相当異なる値が観察できた。また大都市では若年層の地域組織への不参加が目立つが、中山間地域では逆に若年層の方が地域組織への参加が積極的であった。またデータの取り方について具体的には地域組織、地域のつきあい、近所つきあい、地域外組織、地域外のつきあいの各項目における活動頻度の合計から、各サンプルの孤立や個人化の状況を把握するとともに、地域内孤立、社会孤立、親戚での孤立、世帯としての孤立を全体の割合から数量化することができた。

これは今後深刻となる孤立死対策などに援用可能な手法と言える。次年度以降ではヒアリング調査によりその要因分析を進め、都市近郊農村での比較研究を進めることとしたい。スコットランドの島嶼部におけるコミュニテイ調査を行い、農村勤労者の孤立に関わる課題を聞き取り、コミュニテイ活動による居場所づくりを明らかにした。わが国とは孤立に関わる概念が異なるが、個人の自立が前提である英国においては、居場所づくりや居場所への積極的アクセスがないと容易に孤立に至るとの背景があると考えられる。実際、孤立に至る若者が犯罪に走ることもあり、若者の失業対策とともにコミュニティへの包摂は社会的企業の大きなテーマにもなっている。また、本年度で研究の総括を行った。わが国では農村勤労者の孤立について、都市近郊地域では、新住民に関しては大都市と同程度の指標を示し、旧住民についても、大都市ほどではないにしても中山間地域より顕著に孤立が進行していることを明らかにできた。農村計画中山間地域1か所、大都市市街地で2か所ヒアリング調査を行い、標記テーマの構造化を行うことができたため学会等で発表したところ、コミュニケーションの原論という点で、海外事例との比較が必要ではないかとの指摘があり、海外調査における追加調査を行うため、研究期間の延長申請を行った。本来の研究計画の進捗としては順調に推移しており、学術論文についても次年度に投稿予定である。アンケートは中山間1か所、大都市地域2か所で順調に回収でき、相当なサンプルが回収できたため。平成25年度は、研究申請時にはなかったが、東日本大震災における農漁村集落の津波被害が起き、当該テーマをさらに深度化するべく、被災地の仮設住宅を中心に農漁村集落において、コミュニケーションの変化や孤立が、被災とどのような関係で起きているか、被災前の状況から説き起こし明らかにしたい。イギリス・スコットランド島嶼部地域は、比較的土着的コミュニティが残存しており、東アジアとの共通性もありながら、日本のように近代化による変容も経験しているという点で比較対象として適切であると思われる。同時にNPO等昼間支援組織の活動が活発であり、孤立対策の先進地でもある英国において調査をすることは我が国の社会的孤立を考える上で意義があると考える。次年度は、中山間地域、大都市地域において、ヒアリング調査を進め、各地域数十件のサンプルを取り、各階層、つまり高齢層、地域外勤労層、地域内勤労層、主婦層、男女毎に聞き取りを行い、各個人化・孤立化の指標を聞いたうえで、この要因となる状況を詳細に明らかにしることを目的とする。基本的には昨年度対象地の地区関係者に現在、ヒアリング調査の打診を行っている状態であり、不幸にして協力が得られなかった場合には新たな対象地を選定し、ヒアリングの交渉を行う予定である。基本的にはその場合でもアンケート対象地域に近い同一の地帯区分である中山間地域、大都市地域を考えている。該当なし本来の研究計画が順調に推移し、ヒアリング調査等の日数は当初予定より少なく済んだ。一方、本テーマについて学会等で発表したところ、コミュニケーションの原論という点で、海外事例との比較が必要ではないかとの指摘があり、海外調査における追加調査を行うため、次年度の研究期間の延長申請を行った。
核磁気共鳴顕微鏡法による細胞死の生体内解析

磁気共鳴顕微鏡による生体内構造の観測条件についてマウス成熟個体での検討を行った。測定中の対象の移動が画像に顕著に影響したため、運動の少ない雄性生殖器官(主に精巣)を観測対象とし、2次元および3次元フーリエ変換スピンエコー法により麻酔下に断層画像を観測した。2次元像の組織コントラストは、プロトン密度強調像では骨組織は低信号でその他の組織は中高信号であったのに対し、T2強調像では精巣、脂肪組織、精巣上体の一部、および疎生結合組織と推定される領域、T1強調像では脂肪組織が相対的に高信号でそれ以外の部分は低信号となった。3次元観測は観測マトリックス数が増加するため通常のスピンエコー法では繰り返し時間が短いT1強調像のみが妥当な時間内に観測できたが、大部分の組織は低信号で十分なコントラストが得られなかった。そこで励起パルスを90°より大きい角度としたフリップバック-スピンエコー法を用いたところ、T1強調と同じ測定時間でプロトン密度強調像およびT2強調像と同様な画像が観測できた。さらに観測領域の制限等を併用することで測定時間を短縮した。これらの方法でマウスの生体内画像観測が可能となったが、死細胞の特異的標識法の確立には至らなかった。また、細胞のエネルギー代謝の指標となるリンの生体内スペクトル観測では、比較的弱い傷害の例としてマウスにエストロゲン様化合物を投与した場合の雄性生殖器への傷害の検出について検討したところ、投与個体の一部でフォスフォジエステルのシグナルの低下が観察された。これらの個体の精巣組織においては変性細胞が散見され精細管内腔の精子が減少する傾向が認められた。血流停止時の観測等から予測されたATPの信号低下と無機リンの信号増強は観察されなかったが、NMRスペクトル法によりマウスの雄性生殖器系へのエストロゲン様化合物の影響が非侵襲的に解析できる可能性が示された。核磁気共鳴(NMR)顕微鏡による生体内構造の観測条件を決定するため、マウス胎子標本の観測およびマウス未成熟個体の麻酔下生体観測を行った。胎子標本の観察ではレチノイン酸誘発発生異常モデルを使用し、胚を採取し固定後、NMR顕微鏡観測を行った。観測は、2次元および3次元スピンエコー法により行った。2次元像の組織コントラストは繰り返し時間、エコー時間、および発生段階によって変化した。2次元ならびに3次元像において骨格ならびに軟組織の形成異常が観察された。この実験での条件に基づき生体内観測を行ったところ、2次元スピンエコー像では固定標本と比較して低信号であり、ノイズの低い画像を得るためには繰り返し時間の延長と観測ボクセルの拡大が必要であった。プロトン密度強調像において、骨組織および消化管内腔は低信号で、その他の軟組織はほぼ均質な中程度の信号を示した。T1強調像では脂肪組織が高信号を示し他は低信号であった。3次元観測では麻酔維持時間からT1強調観測のみが可能であったが、軟組織は低信号でコントラストが得られなかった。短時間のT1強調観測で良好な信号を得るために、緩和促進作用のあるGadopentetic acidの投与後に観測したT1強調像では信号強度が上昇したが、特に強い信号は腎盂および膀胱において観察され、血中および組織内からは比較的急速に排出されると考えられた。現在、死細胞標識との組み合わせについて検討している。また、細胞のエネルギー代謝の指標となるリンの生体内スペクトル観測について検討した。マウス肝および精巣近傍で表面コイルを用いて観測したリンのNMRスペクトルではATP、無機リン、リン酸エステルおよびクレアチンリン酸の信号が判別された。死亡した個体や生存個体でも組織傷害が生じた場合、ATPの信号が急速に消失し無機リンの信号が増強した。この変化の画像観測について現在検討を行っている。

血流停止時の観測等から予測されたATPの信号低下と無機リンの信号増強は観察されなかったが、NMRスペクトル法によりマウスの雄性生殖器系へのエストロゲン様化合物の影響が非侵襲的に解析できる可能性が示された。
膵胆道系悪性腫瘍に対する早期診断および術前診断体系の確立を目指して

テロメラーゼ活性は、各種の癌で高頻度に認められることが報告されている。これまでに私たちは、切除膵癌の95%にテロメラーゼ活性を認め、膵良性腫瘍性病変や慢性膵炎では認めないことを報告してきた(Cancer Res.57:326-331,1997)。また、膵管ブラッシング細胞診で得られた細胞に対してp53の免疫染色を行い、陽性例のp53遺伝子については、コドン273の変異が膵癌の浸潤に関与していることを報告してきた(Cancer,82:1487-1494,1998)。1.膵液中テロメラーゼ活性の検討による膵癌の早期判断さらに私たちは、テロメラーゼ活性を膵癌の術前診断に応用するため、内視鏡内逆行性膵管造影下に採取した膵管上皮細胞のテロメラーゼ活性を測定した。膵癌の診断率は80.8%で、細胞診の50.0%よりも有意に高く、特に、画像診断では確定診断が困難であった上皮内癌および小膵癌の診断において非常に有効であった(胆と膵.20(9)765-769,1999)。2.テロメラーゼ活性を用いた粘液産生膵腫瘍の悪性度診断粘液産生膵腫瘍の切除検体を用いて、k-rasとp53異常、テロメラーゼ活性を測定し癌化との関連を検討した。過形成や腺種ではk-rasに変異、非浸潤性粘液産生膵癌ではテロメラーゼ活性、浸潤性ではp53の異常が認められた。粘液産生膵腫瘍の早期診断においてもテロメラーゼ活性が重要であることを初めて示した(DDW-Japan,1999)。以上より、私たちは、1.膵癌の確実な早期診断法として、膵液細胞診を用いたテロメラーゼ活性の測定法を確立するとともに、2.粘液産生膵腫瘍の悪性度診断においてもテロメラーゼ活性の有用性を示した。今後も、膵担道系腫瘍の早期診断と診断体系の確立を目指して、症例を重ねて検討を行っていく予定である。1.膵癌症例に対する内視鏡的逆行性膵管造影(ERP)下細胞診ならびにp53免疫染色の検討私たちは、これまでにERP下膵管ブラッシング法を開発し、膵癌症例より得られた膵管上皮細胞のp53免疫染色が、診断に有効であることを明らかにし報告してきた。今回は、その検討を遺伝子のレベルまで深く追求した。方法は上述した手法で採取した細胞よりDNAを抽出し直接塩基配列決定法で検討した。結果は、p53免疫染色が陽性であった症例のうち86%がその遺伝子にも変異を認め、さらに興味深いことに手術不可能な症例の67%にコドン273の塩基がCGT→CATに変異していた。このことより、p53遺伝子ではコドン273の変異が膵癌の浸潤・転移に関与している可能性が示唆された。2.膵液細胞のテロメラーゼ活性の検討細胞の不死化に関与するテロメラーゼは、近年各種癌においてその活性を検出されることが報告され注目されている。私たちも、膵癌術前診断への応用を検討するため、1と同様の方法で採取した細胞のテロメラーゼ活性を測定した。結果は、膵癌症例中95%にテロメラーゼ活性を認めた。また、術前の細胞診で良性と診断されテロメラーゼ活性を認めた症例には手術を施行し全例癌(33%は小膵癌であった)であった。1・2より、私たちが開発したERP下膵液採取法で得られた細胞を用いた細胞診、p53免疫染色法そしてテロメラーゼ活性測定を行うことで、膵癌の術前診断の向上と小膵癌の発見さらには、膵癌における浸潤・転移の推定に有効な方法であることを明らかにした。今後も、引き続き症例を重ねて検討をおこなって行く。

粘液産生膵腫瘍の早期診断においてもテロメラーゼ活性が重要であることを初めて示した(DDW-Japan,1999)。以上より、私たちは、1.膵癌の確実な早期診断法として、膵液細胞診を用いたテロメラーゼ活性の測定法を確立するとともに、2.粘液産生膵腫瘍の悪性度診断においてもテロメラーゼ活性の有用性を示した。今後も、膵担道系腫瘍の早期診断と診断体系の確立を目指して、症例を重ねて検討を行っていく予定である。
マルチプレックス分析を応用した虚血再灌流障害形成機序の神経化学的解明

実験1ペプチドYY及びαーアミリンは投与後0.5時間に増加ピークを示し以後減少した。グルカゴンとレシチジンの変化は認められなかった。実験2視床下部外側野灌流液中のグレリン、レプチン量変化に有意差は認められなかった(検出限界)。実験3血漿レプチン量は4VO時及び断頭時直後に有意に増加した。4Wistar系ラットへ2 g/kgi.p.アルコール投与し、30, 60, 90及び120分後の血漿グレリンをELISA法で測定した。投与後60分に最大値を示しその後減少した。血漿βーアミロイドは、アルコール投与により投与後60分後に最高値を示した。120分には投与前の値に減少した。実験動物(特にマウスC57BL/6J)の血漿または脳灌流液試料中の各種ペプチド同時分析予備実験1グルカゴン(血糖上昇膵臓ホルモン、肝臓グリコーゲン分解とアミノ酸からの糖新生を促し血糖上昇させる)2インスリン(血糖値を下げる膵臓ホルモン、β細胞分泌)3レプチン(脂肪細胞分泌、エネルギー消費促進ペプチドホルモン)4PYY(ペプチドYY、NPYを調節する膵臓ポリペプチド、食欲抑制作用もある)5レシチジン(アディポカイン、レプチンを含むサイトカイン)6アミリン(膵臓β細胞分泌、インスリン類似作用)の6種を選択し、アルコール投与後の変動を同時分析した。方法:アルコール2g/kg,i.p.投与2時間後心臓血を採取し、遠心分離後血漿を得た。6種類抗体結合ビーズを加え、混合攪はん後遠心分離した。上清をマルチプレックス分光分析器にて迅速同時分析した。ペプチドYY,レプチンは有意に増加した。他の4ペプチド濃度に変化は認められなかった。Wistarラットにおいて両側椎骨動脈を電気焼灼し完全に血管を凝固させた。その後(2448時間)総頚動脈を目視同定し、虚血クリップにより30分間結索し虚血モデル動物を作成した。プルシネリの4VO法の改良である。虚血時ラット(Wistar)視床下部グレリンは増加傾向を認めたが今回有意差は見られなかった。虚血動物は実験終了後脳組織学的検索を行い、神経細胞(海馬、側坐核等)の萎縮好エオジン染色を確認した。実験手技、設備備品の使用性能を確認し次年度の虚血時における脳腸ペプチド同時分析研究を申請する。設備機器、手技の確立に時間を要したが、最終的には6種類のペプチド同時分析が可能となり、また虚血4血管結索法の手技を確立した。今年度虚血負荷動物モデルを作成し、脳内ペプチド微小透析膜法を応用し虚血再灌流後における視床下部外側野の神経活動の抵抗性変化について比較検討した。体重280ー310gのWistar系雄ラットを用いた。脳内ペプチド微小透析膜用ガイドカニューレを視床下部外側野に挿入しデンタルセメントで固定した。手術回復2ー3日後脳虚血処理を施した。ガイドカニューレを挿入したラットに麻酔を施し、脳定位固定装置に再度固定した。4血管閉塞(4VO)法に準じ第一頸椎翼状孔に電気メスチップを接触固定させ両側椎骨動脈の電気的焼灼を行った。処理良好なラットについて、同時に両側総頚動脈を露出し、マイクロ血管クリップで両側総頚動脈を30分間閉塞した。その後総頚動脈を再灌流させた。なお両側椎骨動脈の電気的焼灼のみを行い総頚動脈を露出したのみの非虚血群をSham対照群とした。脳微小ペプチド用脳透析膜プローブをガイドカニューレに沿って視床下部外側野へ挿入し人工脊髄液灌流し灌流液をマイクロ遠沈管に1時間間隔で回収(1uL/min)した。視床下部外側野灌流液のペプチドについてELISA法を応用したβアミロイド測定キット(Aβδ1-42)により半定量を行った。視床下部外側野灌流液における4VO群のβアミロイド放出量は、Sham対照群に比較して一部増加傾向を示したが個体数が少なく、個体差も大きく統計的有意差は認められなかった。一方エタノール投与群(2g/kgi.p.)の血漿βアミロイド量は、Sham群と比べて4VO群に増加が認められた。4VO虚血処理によるイオンポンプ異常=カルシウムイオンの細胞流入増加とグリア細胞を含む神経細胞系由来のiNOS、活性酸素増加による神経系賦活とそれらに誘導された神経細胞膜貫通型タンパク質アミロイド前駆体物質(APP)の代謝に関連するアミロイド変換酵素とγセクレターゼの活性が示唆された。総頸動脈(CCA)を結索し、迷走神経に注意して内頸動脈(ICA)と外総頸動脈(ECA)を分離し直後ECA間を切断する小動物(マウス)一過性中大動脈閉塞(tMACO)の術後成功は、動物のエージング(体重変化)と麻酔効果に大きく影響され死亡例が多くマウス特異性のあるペプチド定量のための検体数が確保できずモデル動物作成変更を強いられ実施計画がやや遅れた。以後4血管閉塞・結索法の確立後、視床下部外側野灌流液中の各種ペプチド、特にグルカゴン、ペプチドYYの定量に集中し新規のペプチドアミロイドβの半定量測定に移行する時間が短縮された。結論的にはin vivo状態での視床下部外側野におけるグルカゴン、ペプチドYYは検出感度限界に近い放出量をであることが確認できた。

薬物、特に急性アルコール単回投与及び虚血処置によるグレリンを含む各種ペプチド及びβーアミロイドの経時的変化について検討した。実験I-1:急性アルコール単回投与によるマウス脳側坐核灌流液中各種ペプチド変動:ペプチドYY及びαーアミリンは投与後0.5時間に増加ピークを示し以後減少した。グルカゴンとレシスチンの変化は認められなかった。実験I-2:急性アルコール単回投与によるラット血漿グレリン変動:Wistar系ラットにアルコール2 g/kg i.p.投与した。0.5, 1, 2, 4及び8時間後のグレリン量をELISA法で検討した。投与後2時間に最低値を示し8時間後に回復した。実験II:ラット虚血モデルにおけるレプチン変動:プルシネリ法に準じて虚血負荷動物モデルを作成した。脳内ペプチド微小透析膜法を応用し虚血時の視床下部外側野の神経活動の抵抗性変化及び血漿中のレプチン量を比較検討した。視床下部外側野灌流液中のグレリン、レプチン量変化に有意差は認められなかった(検出限界)。血漿レプチン量は4VO時及び断頭時直後に有意に増加した。実験III:急性アルコール単回投与及び虚血時のβーアミロイド(Aβδ1ー42)の変動: Wistar系ラットへ2 g/kgi.p.アルコール投与し、30, 60, 90及び120分後の血漿グレリンをELISA法で測定した。投与後60分に最大値を示しその後減少した。4VO群の視床下部外側野灌流液βアミロイド放出量は、Sham対照群に比較して一部増加傾向を示したが個体数が少なく、個体差も大きく統計的有意差は認められなかった。血漿βーアミロイドは、アルコール投与により投与後60分後に最高値を示した。急性アルコール単回投与及び虚血時の各種ペプチド及びβーアミロイドの経時的変化を検討した。高次脳機能障害に関与するβーアミロイドのアルコール誘導を認めた。実験1ペプチドYY及びαーアミリンは投与後0.5時間に増加ピークを示し以後減少した。グルカゴンとレシチジンの変化は認められなかった。実験2視床下部外側野灌流液中のグレリン、レプチン量変化に有意差は認められなかった(検出限界)。実験3血漿レプチン量は4VO時及び断頭時直後に有意に増加した。4Wistar系ラットへ2 g/kgi.p.アルコール投与し、30, 60, 90及び120分後の血漿グレリンをELISA法で測定した。120分には投与前の値に減少した。4血管結索モデルの再灌流障害発生機序とその時点での複数の脳ペプチドの迅速同時分析を行う。1グルカゴン2グレリン3インスリンは昨年のデータを参考に中心的に検討する。一方、新規のペプチドの発現増減の可能性もあり、MS-HPLC分析の検討も加味する予定である。4血管閉塞・結索法を用いて食中枢である視床下部外側野と脳報償系の中心核の側坐核でのペプチド(ホルモン)の放出をin vivo条件下で放出変動を検討する。前回の科研費での側坐核モノアミン、DAと5-HT、の放出増加の結果を合わせ、総合的に研究を実施し、国際誌への投稿を準備する。法医学初年
アラキドン酸リポキシゲナーゼの分子病態学的研究

不飽和脂肪酸のアラキドン酸を材料として、プロスタグランジンやロイコトリエンのような生理活性物質を作るシクロオキシゲナーゼと5-リポキシゲナーゼの生理的意義は明らかである。これに対して、12-リポキシゲナーゼと15-リポキシゲナーゼは、種々の断片的知見が報告されてはいるが、多くの動物種を通じて一般的知見に基づく生理的役割は確立していない。私達のグループとドイツのフンボルト大学のHartmut Kuehn教授のグループでは、それぞれ12-リポキシゲナーゼと15-リポキシゲナーゼの生化学的ならびに分子生物学的研究の多くの成果の蓄積があり、これら2つのリポキシゲナーゼに共通した性質が見出されている。さらに、ドイツのベルリン自由大学のSantosh Nigam教授のグループでは子宮頚部の12-リポキシゲナーゼの研究をしている。3つのグループの共同研究によって、生化学的分子生物学的基礎研究の上に、種々の共通点のある2つのリポキシゲナーゼの病態生理的役割を解明する事を、本研究計画の目的として、以下の成果を得た。1)リポキシゲナーゼ遺伝子の発現調節機構:ヒト赤白血病細胞の12-リポキシゲナーゼ遺伝子の5 ́上流領域には、典型的なTATAやCAATボックスは存在しないが、GATAボックス、AP2結合配列、NFκB結合配列、C/EBPβ結合配列などのコンセンサス配列が存在する。これらの領域をルシフェラーゼ遺伝子をレポーターとして調べると、NFκB結合配列(-539-530bp)の役割が注目された。NFκB結合配列を含むオリゴヌクレオチドを用いてゲルシフト法を行った結果、2本のバンドがシフトし、これらのバンドはさらにNFκBのサブユニットのp50、p65、c-Relの抗体によって、スーパーシフトした。フットプリント法によってNFκB結合配列はDNaseIから保護された。このようにヒトヒト赤白血病細胞において、12-リポキシゲナーゼ遺伝子の発現はNFκB (p50とp65、p50とc-Relの2つのヘテロダイマー)によって転写を負に調節されているものと思われる。2)リポキシゲナーゼの自殺失活の機構:12-リポキシゲナーゼには血小板型と白血球型の2種類のアイソザイムがある。これらの酵素をアラキドン酸と反応させると、血小板型酵素は少なくとも20分間ほぼ直線状に反応が進行するが、白血球型酵素は反応開始後直ちに失活し始め、3-5分間でほぼ完全に失活する。しかし、このような自殺的失活の機構は未だ明らかでない。そこでリピキシゲナーゼの反応生成物でそれ自体反応性に富むヒドロペルオキシ酸(HPETE)が、ブタ白血球12-リポキシゲナーゼと反応する際にどのようなことが起こるかを、ヒト血小板の酵素と比較しつつ検討した。白血球の酵素は反応生成物として12-HPETEの他に部分的に15-HPETEを生じ、後者は酵素がなくとも同じ酵素によってさらに14,15-エポキシ酸に変換することがわかっている。血小板の酵素のこのような活性ははるかに低い。15S-HPETEを酵素に作用させると、白血球型の酵素は2分以内で80%以上失活したが、血小板型の酵素では3分で30%しか失活しなかった。さらに[1-^<14>C]15S-HPETEとブタ白血球12-リポキシゲナーゼを好気あるいは嫌気条件下で反応させると、いずれも放射活性が数分間で速やかに酵素蛋白にほぼ1:1の比で取込まれた。他のHPETEやHETEでは緩徐な取込みが見られた。15S-HPETEと反応させた酵素蛋白をレーザーイオン化質量分析法で測定した結果、ほぼ定量的に共有結合で15S-HPETEあるいはその誘導体が分子内に取込まれていることが推定された。このような実験結果を基にして、白血球12-リポキシゲナーゼではアラキドン酸から15-HPETEを経て生成した14,15-エポキシドが定量的に酵素蛋白に取込まれて、自殺失活をおこすものと考えられたが、14,15-エポキシド自体を使った実験を計画している。また、フンボルト大学のKuehn教授が平成8年3月中旬に来学して、15-リポキシゲナーゼでこの課題を検討することになっている。3)ヒト子宮頚部の12-リポキシゲナーゼ:ベルリン自由大学のNigamらはヒト子宮頚部に12-リポキシゲナーゼが存在し、その活性が癌細胞で低下していることを報告している。平成7年11月に上田がベルリンを、また、平成8年2月にKumarが徳島を訪れ、それぞれ子宮頚部の12-リポキシゲナーゼの性質を生化学的実験で検討した。子宮頚部ホモジネートを遠心分画すると、酵素活性は可溶性画分とミクロソーム画分に探知された。前者の酵素は抗ヒト血小板12-リポキシゲナーゼ抗体を用いると免疫沈降し、また、同じ抗体を使ってウエスタンブロット法で12-リポキシゲナーゼと思われるバンドを認めた。さらに、基質特異性を調べると、アラキドン酸の活性に比べてリノール酸はほとんど不活性であった。このような知見を基にして、ヒト子宮頚部の12-リポキシゲナーゼは血小板型と考えられる。

不飽和脂肪酸のアラキドン酸を材料として、プロスタグランジンやロイコトリエンのような生理活性物質を作るシクロオキシゲナーゼと5-リポキシゲナーゼの生理的意義は明らかである。これに対して、12-リポキシゲナーゼと15-リポキシゲナーゼは、種々の断片的知見が報告されてはいるが、多くの動物種を通じて一般的知見に基づく生理的役割は確立していない。私達のグループとドイツのフンボルト大学のHartmut Kuehn教授のグループでは、それぞれ12-リポキシゲナーゼと15-リポキシゲナーゼの生化学的ならびに分子生物学的研究の多くの成果の蓄積があり、これら2つのリポキシゲナーゼに共通した性質が見出されている。さらに、ドイツのベルリン自由大学のSantosh Nigam教授のグループでは子宮頚部の12-リポキシゲナーゼの研究をしている。3つのグループの共同研究によって、生化学的分子生物学的基礎研究の上に、種々の共通点のある2つのリポキシゲナーゼの病態生理的役割を解明する事を、本研究計画の目的として、以下の成果を得た。1)リポキシゲナーゼ遺伝子の発現調節機構:ヒト赤白血病細胞の12-リポキシゲナーゼ遺伝子の5 ́上流領域には、典型的なTATAやCAATボックスは存在しないが、GATAボックス、AP2結合配列、NFκB結合配列、C/EBPβ結合配列などのコンセンサス配列が存在する。これらの領域をルシフェラーゼ遺伝子をレポーターとして調べると、NFκB結合配列(-539-530bp)の役割が注目された。NFκB結合配列を含むオリゴヌクレオチドを用いてゲルシフト法を行った結果、2本のバンドがシフトし、これらのバンドはさらにNFκBのサブユニットのp50、p65、c-Relの抗体によって、スーパーシフトした。フットプリント法によってNFκB結合配列はDNaseIから保護された。このようにヒトヒト赤白血病細胞において、12-リポキシゲナーゼ遺伝子の発現はNFκB (p50とp65、p50とc-Relの2つのヘテロダイマー)によって転写を負に調節されているものと思われる。2)リポキシゲナーゼの自殺失活の機構:12-リポキシゲナーゼには血小板型と白血球型の2種類のアイソザイムがある。これらの酵素をアラキドン酸と反応させると、血小板型酵素は少なくとも20分間ほぼ直線状に反応が進行するが、白血球型酵素は反応開始後直ちに失活し始め、3-5分間でほぼ完全に失活する。しかし、このような自殺的失活の機構は未だ明らかでない。そこでリピキシゲナーゼの反応生成物でそれ自体反応性に富むヒドロペルオキシ酸(HPETE)が、ブタ白血球12-リポキシゲナーゼと反応する際にどのようなことが起こるかを、ヒト血小板の酵素と比較しつつ検討した。白血球の酵素は反応生成物として12-HPETEの他に部分的に15-HPETEを生じ、後者は酵素がなくとも同じ酵素によってさらに14,15-エポキシ酸に変換することがわかっている。血小板の酵素のこのような活性ははるかに低い。15S-HPETEを酵素に作用させると、白血球型の酵素は2分以内で80%以上失活したが、血小板型の酵素では3分で30%しか失活しなかった。さらに[1-^<14>C]15S-HPETEとブタ白血球12-リポキシゲナーゼを好気あるいは嫌気条件下で反応させると、いずれも放射活性が数分間で速やかに酵素蛋白にほぼ1:1の比で取込まれた。他のHPETEやHETEでは緩徐な取込みが見られた。15S-HPETEと反応させた酵素蛋白をレーザーイオン化質量分析法で測定した結果、ほぼ定量的に共有結合で15S-HPETEあるいはその誘導体が分子内に取込まれていることが推定された。
アレンと不活性結合を反応成分とする触媒的環化付加反応の開発

1アルキン-アレニルシクロペンタンを用いた分子内[7+2]環化付加反応アレンの末端にシクロペンタンを有するアレニルシクロペンタンとアルキンとのRh(I)触媒による分子内[7+2]環化付加反応では、環歪みエネルギーの殆ど無い単純なシクロペンタンが速やかに開環し、二環性のbicyclo[7.4.0]化合物が効率よく得られることを見出した。本反応は前例の無いものであり、C-C bond activationに新たな展開を提供したものである。2アレニルシクロプロパンとアルケンとの分子内環化異性化反応アレン末端に3員環を導入したアレニルシクロプロパンとアルケンとの反応では、連続する3つの相対立体配置が完全に制御されたbicyclo[4.3.0]誘導体が得られる新規反応を開発した。また、反応部位である二重結合の位置を変更した場合にも、二重結合の異性化を伴って同様の環化成績体が高立体選択的に得られることも見出した。3アレン-ニトリル体を用いた分子内Pauson-Khand型反応(PKTR)の開発側鎖をベンゼン環で固定したアレン-ニトリル体をRh(I)触媒と処理すると、分子内Pauson-Khand型反応(PKTR)が進行して、ベンツオキシインドール誘導体が効率よく得られた。これは不活性なニトリルをPKTRに利用した最初の例である。現在、ベンゼン環のテンプレート効果が無い基質においても反応が進行することを予備的検討で見出した。24年度が最終年度であるため、記入しない。我々はこれまでに、アレンと多重結合(アルキン、アルケン、アレン)を反応成分とする各種分子内環化付加及び環化異性化反応を開発している。最近、本研究の一環として、アレン末端にシクロプロパンを直結させ、3原子から成るアルキル直鎖でアルキン部と連結させたアルキン-アレニルシクロプロパンを基質とする[5+2]型環化付加反応を検討した結果、ジクロロエタン中10mol%の[RhCl(CO)_2]_2又はトルエン中[RhCl(CO)dppp]_2存在下で効率良く進行し、ビシクロ[5.4.0]骨格が収率良く得られることを見出した。今回、本反応の適用範囲をアルキン-アレニルシクロブタンに拡張することを目的として研究を行った。各種ロジウム(I)錯体を用いて反応条件を検討した結果、ジオキサン中5mol%のRhCl(dppp)_2存在下で所望の[6+2]型環化付加反応が進行し、ビシクロ[6.4.0]骨格を収率良く与えることが判明した。本反応は、シクロブタンが結合した側のアレンの二重結合とアルキンがロジウム錯体とメタラシクロペンテン中間体を形成し、シクロブタンの開裂に伴うメタラシクロノナジエンの生成と続くロジウムの還元的脱離を経て進行すると考えている。本反応で特筆すべき点は、シクロブタン上に官能基を持たない基質で反応を行っていることである。遷移金属によるシクロブタンの開裂では、一般に環上の官能基の存在が不可欠である。例えば類似の反応として、アルケン-ビニルシクロブタノンの[6+2]型環化付加反応がWenderらにより報告されているが、この場合は、単なるシクロブタンでは全く八員環生成物が得られない。従って、本反応は単純なシクロブタンの不活性炭素-炭素結合を開裂させる稀な例であり、ビシクロ[6.4.0]骨格を有する化合物の簡便合成法としてのみならず、反応機構の面からも興味深い。アルキン-アレニルシクロブタンの分子内[6+2]型環化付加反応が首尾よく進行する条件を比較的早期に見出すことができたため。既に、研究成果を論文等で公表している。

また、アレン-ニトリルの分子内[2+2+1]型環化付加反応においても、ベンゼン環で両官能基を連結した単純な基質において良好な収率で目的物が得られており、現在基質一般性を検討中である。24年度が最終年度であるため、記入しない。1)アルキン-アレニルシクロブタンの分子内[6+2]型環化付加反応で得られた知見に基づき、シクロブタン部位をより歪みの小さなシクロペンタンに環拡大した基質を用いて、分子内[7+2]型環化付加反応の検討を行う。2)アレン-ニトリルの分子内[2+2+1]型環化付加反応の基質一般性を調査する。また1)、2)のいずれにおいても、反応機構を解明すべく反応系を設計し、結果の解析を行う。
ペルー北海岸の先史時代における生業と世界観の形成

本年度は、ペルー北海岸のクルス・ベルデ遺跡で本格的な発掘調査を実施した。この調査によって、同遺跡に位置するマウンド状遺構が、小規模な漁撈民の集団的実践によって継続的に積み上げられた墳丘であったことが明らかになった。とくに、この建設活動にともなって、海産資源を中心とした食料残滓の廃棄活動や埋葬が同地点で行われていたことは興味深い。すなわち、この墳丘は食料残滓の廃棄場や埋葬施設といった複合的な性格を持ち、様々な集団的実践の痕跡が埋め込まれた初期のモニュメントであったといえる。そうした集団的実践は、そこに参加する定住集落の構成員をマウンドに結び付け、社会集団を形成、維持する紐帯となっていた。また、これまでの調査で獲得した様々な考古遺物の分析を実施した。例えば、マウンドから出土した埋葬人骨の分析によって、性別や年齢、骨病変の有無などが明らかになり、マウンドに埋められた人骨が成人男性を中心としていたことや、漁撈民に特有の潜水病を有していることが確認できた。また、動物骨についても分析を行い、海獣や海鳥を中心とした海産資源利用の傾向が明らかになるなど、様々な成果を得ることができた。さらには、発掘調査によって採取した炭化物資料の年代測定を行い、このマウンドが紀元前4000年紀元前3700年頃にかけて建設されたものであることを確認した。以上のように、クルス・ベルデ遺跡は、アンデス文明初期の定住漁撈民が集団的に建設・利用した初期のモニュメントであったことがわかり、その建設過程とそれに伴う様々な集団的実践の存在が明らかとなった。こうした研究成果は、政治・経済・祭祀の中心であり、アンデス文明の興亡に深く関わってきたモニュメントの出現過程に迫るものであり、その研究上の意義は大きい。また、モニュメントと複雑社会をめぐるこれまでの研究を相対化しうる点でも重要といえる。29年度が最終年度であるため、記入しない。本調査研究の目的は、ペルー共和国の北部海岸地域に成立した、先史時代の海岸定住社会を対象に、漁撈活動に従事した人々の世界観および社会集団の形成過程を明らかにすることにある。その具体的な手段となるのが、ペルー共和国、ラ・リベルタ州に位置するクルス・ベルデ遺跡の発掘調査および考古遺物の分析作業である。本年度は、これまでに行ってきた、調査対象遺跡の選定と地形測量などの予備調査の成果をふまえ、クルス・ベルデ遺跡において考古学的な発掘調査を実施した。この発掘調査は、約1か月間、発掘作業員11名、ペルー人の考古学者3名、学生3名の協力を得て行われた。この発掘調査によって、クルス・ベルデ遺跡は、定住漁撈民の小集落であったことが確認されたほか、その近辺につくられた小規模な公共建造物の存在とその建設過程が明らかになった。とくに、この小規模な公共建造物は、複数の埋葬遺体を埋め込みながら重層的に繰り返し建設された基壇であったことがわかり、その利用は先土器時代に遡る。こうした点は、公共建造物を含む漁撈集落の形成過程を考えるうえでも興味深いデータであるといえ、大きな成果となった。また、こうした発掘調査によって、多くの考古遺物を収集することができたことも重要な成果といえる。これらの考古遺物として、土器や石器、骨角器などの人工遺物や、利用された動植物の残滓である動植物遺存体、絶対年代値を測定するための炭化物などが挙げられる。これらは、専門的な知識や技術、設備を要する発展的な分析過程を経ることで、往時の人々の物質文化や遺跡間・地域間交流、動植物利用と生業活動、それらの通時的な変化と絶対年代などが明らかになる。そのため、この遺跡で行われた活動を復元するうえで必要となる基礎資料を得ることができたといえる。これらは本研究課題の根幹をなす研究データといえ、研究計画の中でも最も重要なものとして位置づけられる。今年度は、これまでの予備調査の成果をふまえ、ペルー共和国、ラ・リベルタ州のクルス・ベルデ遺跡において考古学的な発掘調査を実施した。この調査によって、クルス・ベルデ遺跡は、定住漁撈民の小集落であった可能性が高いことが確認され、その近辺につくられた小規模な公共建造物の存在とその建設過程が明らかになるなど、期待通りに多くの成果がもたらされた。こうした考古学調査の実現は、考古遺物や遺構など、本研究課題の根幹をなす研究データを収集するうえで欠かせない作業であり、研究計画の中でも最も重要なものとして位置づけられる。さらに、こうした調査データの整理作業を通じて、ペルー文化省に提出する2冊の報告書をスペイン語で書き上げた。この報告書は、調査成果を調査地へ公開・還元するという点で重要である。また、調査成果をふまえて、日本国内の研究会での研究発表を行い、その成果について多くの研究者と意見を交わすこともできた。以上の研究状況に基づき、本研究計画は期待通りに進捗していると評価できる本年度は、ペルー北海岸のクルス・ベルデ遺跡で本格的な発掘調査を実施した。

すなわち、この墳丘は食料残滓の廃棄場や埋葬施設といった複合的な性格を持ち、様々な集団的実践の痕跡が埋め込まれた初期のモニュメントであったといえる。そうした集団的実践は、そこに参加する定住集落の構成員をマウンドに結び付け、社会集団を形成、維持する紐帯となっていた。また、これまでの調査で獲得した様々な考古遺物の分析を実施した。例えば、マウンドから出土した埋葬人骨の分析によって、性別や年齢、骨病変の有無などが明らかになり、マウンドに埋められた人骨が成人男性を中心としていたことや、漁撈民に特有の潜水病を有していることが確認できた。また、動物骨についても分析を行い、海獣や海鳥を中心とした海産資源利用の傾向が明らかになるなど、様々な成果を得ることができた。さらには、発掘調査によって採取した炭化物資料の年代測定を行い、このマウンドが紀元前4000年紀元前3700年頃にかけて建設されたものであることを確認した。以上のように、クルス・ベルデ遺跡は、アンデス文明初期の定住漁撈民が集団的に建設・利用した初期のモニュメントであったことがわかり、その建設過程とそれに伴う様々な集団的実践の存在が明らかとなった。こうした研究成果は、政治・経済・祭祀の中心であり、アンデス文明の興亡に深く関わってきたモニュメントの出現過程に迫るものであり、その研究上の意義は大きい。また、モニュメントと複雑社会をめぐるこれまでの研究を相対化しうる点でも重要といえる。平成28年度の成果をふまえた来年度の調査計画では、クルス・ベルデ遺跡を対象とした考古学調査と分析を引き続き遂行していく。とくに、平成28年度の発掘調査で得られた考古遺物の整理・分析作業を進め、当時の物質文化や公共建造物で行われていた諸活動を明らかにする。また、動植物遺存体や炭化物は、専門機関にその分析を依頼し、データの充実を図る。さらに、同遺跡において平成29年度の8月に約1か月間の発掘調査を実施する。公共建造物を対象とした本年度の発掘区を拡張して、その建築プランや基壇上での活動の痕跡を捉えるとともに、そこから200mほど離れた場所に位置する別のマウンド群の発掘調査を行う。このマウンドは、先土器時代の住居址や生活残滓が積み重なって形成されたものと想定できるが、その実態や前述の公共建造物との関係性は明らかでない。このマウンド群形成過程を明らかにし、公共建造物との関係性に迫ることで、公共建造物と住居址双方の空間の活動の相互関係を明らかにし、先史漁撈民の世界観と社会集団の形成過程を解明する。加えて、平成28年と平成29年の研究成果をもとに、学会発表や雑誌論文の投稿を行う。これらの成果公開は、遺跡から出土した炭化物の年代測定を待ってから公表必要がある。そのため、5月にペルーから日本への試料の輸出を行い、6月に分析を依頼する。平成29年度の8月にペルーで行われる国際学会で発表するほか、国内雑誌の『古代アメリカ』や、ペルーで発行される国際雑誌『Andean Past』などへの投稿を予定している。29年度が最終年度であるため、記入しない。