hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
超多色蛍光イメージング法によるマウス脾臓内抗原情報伝達経路の組織学的研空

本研究課題本来の目的を達成するためには、現在蓄積されている脾臓の構造に関する知見が極めて不十分であり、特に、種々の免疫担当細胞の移行(trafficking)ルートに関してはほとんど解明されていないことが明らかとなった。このような問題点を踏まえ、まず脾臓の構造の検索、特に3次元的な構成の理解に結びつく検索を行い、それと超多色蛍光イメージング法を結びつけ、理解の精密化を図ることとした。1走査電鍵上、動脈・静脈に相当するものはあるが、それらは細い管腔が束上になって並走しつつ、分岐しながらやがて細い紐状となり、全体で網目構造を形成する。白脾髄へ流入する動脈は必ずしも中心動脈だけでなく、漏斗状の動脈も関与する。静脈に相当する脈管構造が白脾髄より流出する。2.組織蛍光免疫法による、脈管系の構造の探索は電顕による知見と一致する。壁内へ移行するリンパ球、マクロファージ、デンドリティックセルが顕著である。4.LPS負荷時、デンドリティックセルはmarginal bridging channelからPALSへ移行する以外に中心動脈を介した経路が存在する。5.マージナルメタロフィリックマクロファージの前駆細胞は動脈の基部、red pulp中の動脈より遊走し、クラスターを形成しつつ、marginal sinus近傍へ移行しそこでマージナルメタロフィリックマクロファージとなる。本プロジェクトの目的は、マウス脾臓内の免疫担当細胞各subsetsの同定、組織学的分布、相互作用を含めた機能解析を通して、どのような原理に基づきTh1、Th2応答が決定されるかを明らかにすることである。この目的を達成するために今年度は以下のことを行った。(3)DC各subsetsにおけるToll like receptor(TLR)の発現の検索。現在報告されている、マウスTLR19について、TLR5を除きPCRで発現を検出できるようにした。さらに、脾臓内DC各SubsetsをFACSでsortし、各々におけるTLRの発現を調べた。画像分光に基づく、7色8色の組織蛍光イメージング法を開発し、ラベル化抗体ライブライリーを整備する事により、免疫担当細胞各サブセットの同定及び詳細な表現型の組織学的検索が可能となった。特に、マウス脾臓内のマクロファージ、樹状細胞に関して、その異同及び表現型を詳細に検索した。ラベル化KLH、ラベル化Zymosan、GFP化E.coliを静注し、経時的な組織標本を作製、それらを取り込む細胞を同定した。これらのラベル化抗原を取り込む効率はかなり低く、現時点で統計学的な処理に耐えるデータを得るに至っていない。一部のマクロファージ、樹状細胞に見られる自発蛍光がphagocytosisに特異的であることをスペクトルの特性より明らかにした。このスペクトルを持つ自発蛍光を調べることにより、その細胞の貪食能が評価し得ることになる。抗原を取り込んだこれらの細胞及びそれらの細胞と相互作用を行う細胞が産生するサイトカイン、ケモカインについて、免疫染色およびIn situ hybridizationにより検索を試みた。サイトカイン・ケモカインについての組織免疫染色はartifactが極めて起こりやすいことが報告されているが、IL-1(P40)に関してはほぼ信頼しえる免疫染色法が確立できた。in situ hybridizationに関してはいくつかのサイトカイン・ケモカインについて単色でのsignal生成は可能となったが超多色染色を同時に行った場合には、signalの再現性が十分でない。これは、込み入った超多色染色の操作中にRNAse freeの環境が十分に保たれてないことによるものと思われる。アポトーシスを起こした細胞を取り込み、脾臓内でそれらに関する抗原情報を提示することはCD8陽性樹状細胞に特異的な機能である、との報告がなされているが、CD11b陽性樹状細胞も取り込むことを示す組織像を得ている。
神経科学的手法を用いた音素獲得メカニズムの解明

音素獲得のメカニズムは音声の音響音声的情報の処理と音素のカテゴリー情報の処理が相互に関連していると言われる。本研究では、fMRI課題に日本語に存在しないハンガリー語の2種類の母音の弁別課題を用いて、これらの機能が音素獲得で如何に働くか、そのメカニズムを明らかにする。被験者にはタブレットで行える音素学習課題を2週間家庭で行ってもらい、学習前、1週間後、2週間後にfMRI実験に参加してもらった。その結果、学習前に比べ学習1週間後で両側上側頭回の有意な賦活を認めた。学習成績も1週間後で上昇を認めた。以上の結果から、音素の学習中期には音響音声的情報が優位に機能していることを示唆された。平成27年度は、まず学習課題に用いる刺激を作成し(録音、音声ファイルの切り出し)、行動実験とfMRI実験の課題作成を行った。それを用いて行動実験とfMRIの予備実験を実施した。学習課題の刺激にはハンガリー語の単音節無意味語を用いた。無響室にて、ハンガリー母語話者4名(男性2名、女性2名)に単音節無意味語を読み上げてもらい、録音を行った。上記の刺激を用いて音素学習課題を作成し、右利きの日本語母語話者9名(男性4名、女性5名)を対象に2週間の家庭学習と学習前、1週間後、2週間後の学習成績評価を行ったところ、2週間で学習が可能であることが分かった。これに従いMRIの実験デザインを策定し、MRI予備実験を2名(女性)に行い、学習前と比較し学習2週間後に音響的処理をしている左上側頭回とカテゴリー処理をしているとされる左下前頭回に賦活を認めた。研究協力体制が整っており、おおむね予定でおおりに研究を進められている本研究は、fMRIを用いて第二言語の音素獲得時の神経メカニズムを解明するものである。平成28年度は、fMRIの本実験を進めた。fMRI課題は、日本語に存在しないハンガリー語の2種類の母音の弁別課題とした。この2種類の母音は日本語母語話者にはともに/u/と認識されることの多い母音である。本課題を用いて、第二言語の音素を学習し弁別できるようになる際の神経メカニズムを明らかにしようとした。コントロールには1kzの純音を使用した。被験者にはタブレットで行える音素学習課題を2週間家庭で行ってもらい、学習前、学習中期(1週間後)、学習後(2週間)にfMRI実験に参加してもらった。本年度は12名の撮像を行い、10名の解析可能データを収集することができた。予備解析として、2種類の母音と純音をregressorとして立て、学習前、学習1週間後、学習2週間後を比較する賦活解析を個人レベルで行った。その結果、純音に反応する時に比べ母音弁別を行っている際には学習2週間後において左下前頭回から島前部にかけ学習前より優位な賦活を認めた。行動データにおいても2週間後に弁別課題の成績が上昇した。これらの結果から、学習後期において、音素のカテゴリー情報に関わるとされる下前頭回が機能すると考えられた。予備解析では、音声の音響的分析に関わる上側頭回の機能の学習段階の差異はまだ解明できなかった。今後、さらなる賦活解析を進めるとともに、機能的結合の解析を行うため、解析プログラムを作成している。昭和大学発達障害医療研究所では多くのfMRI研究を行っており、fMRIのデータ収集に時間を要するため。本研究は、fMRIを用いて第二言語の音素獲得時の神経メカニズムを解明するものである。平成29年度は、収集したfMRIデータの解析を行った。10名の解析可能データのうち、5名の個人解析を行った。これらの結果から、予備解析で得られた結果と同様に、学習後期において、音素のカテゴリー情報に関わるとされる下前頭回が機能すると考えられた。音声の音響的分析に関わる上側頭回の機能の学習段階の差異はまだ解明できなかった。以上より、第二言語の音素獲得には音素のカテゴリー情報が有効に働いていることが示唆された。平成29年度の解析では機能的結合の解析までは至らなかった。MRI本実験にて20名を目標にデータ収集を行う。賦活研究に加え、得られた領域のeffective connectivityを解析し、領域間の関連を明らかにすることで音素獲得に関わる音声、調音、音素のカテゴリー情報の働きを明らかにする。得られたfMRIデータの解析を行う。

賦活研究に加え、機能結合の解析も行うことで音素獲得に関わると考えられる音声処理、調音の運動情報、音素カテゴリーの情報の働きを明らかにする。言語学神経科学次年度はfMRIの本実験を開始するため、その実験参加者への謝礼として使用するため。昭和大学発達障害医療研究所では多くのfMRI研究を行っているため、データ収集に時間を要し、予定していた被験者への謝礼への予算使用が遅れた。そのため、国際学会での発表が困難となり、旅費の使用が滞った。家庭学習を伴うMRI実験は2週間の時間を要するため、実験参加者への謝礼を中心に研究費を使用する。また、中間結果をまとめ国際学会で発表する際の出張費として使用する。主に国際学会、国内学会への出張旅費として使用する。
ビブリオの徘徊運動

海洋細菌、Vibrio alginollyticusおよびいくつかの菌のガラス板上への付着プロセスを定量的に解析するとともに、付着した菌の構造的な特徴を主に原子間力顕微鏡を用いて観察した。原子間力顕微鏡は、これまでこのような目的で細菌の微細構造を解析するために使われたことは殆どなく、本研究では方法論の開発に大部分の時間と研究費が投じられた。その結果明らかになったのは、以下の通りである。第一に、固体表面に付着させた菌、あるいはフィルター上に濃縮した菌を原子間力顕微鏡で観察するための最適条件を探った結果、固体としては雲母を、またフィルターとしてはIsopore Filter(Millipore)を用いることにより最善の結果が得られた。第二に、こうして調整した菌を原子間力顕微鏡で測定したところ、菌は主に脱水のために高さ方向に著しく変形していることが明らかになった。これは原子間力顕微鏡を用いて始めて明かにされた事実である。第三に、付着細菌の殆どが、菌体周辺に密集した繊維状の構造物を有し、かつその周囲に球形状の物質が存在することが確認された。繊維状の構造物はいわゆる線毛と考えられるが、その組成などは不明である。また、球状の物質は、対外分泌酵素と判断されるが、今後の検討が必要である。原子間力顕微鏡がいわば干物になった菌体を観察しているため、このような付着を行っている菌の徘徊の状態は必ずしも明瞭にならなかった。しかし、固体表面上の菌体の微細構造についてこれまで得られたいなかった詳細な解析を行うことができた。海洋細菌、Vibrio alginolygicusは2種類のべん毛を持つ。恒に発現されている一本の極毛、さらに菌が固体表面上などに置かれた時にのみ発現する多数の側毛である。徘徊運動とは、この側毛によって菌が固体の上を動き回ることを称する。この徘徊運動の意義は、有機物の分解、共生系の確立、などいろいろなものが考えられるが、はっきりしていない。本研究はこの徘徊運動の生態的意義を見出すことを最終的な目的としている。V.alginolyticusが徘徊運動を始めるまでには、菌の水の中での遊泳、固体表面への近接、固体への付着、側べん毛の生合成などのステップがある。特定の固体表面上で徘徊する菌の系を作りだすには、これらのステップの理解が必要である。そこで、平成11年度は、V.alginolyticusが固体表面に接近するプロセスを物理化学的に記述することを目的とした。この接近は従来はいわゆるDLVO理論によって説明されてきた。つまり、菌体をコロイド粒子として扱い、固体と菌体表面との電気化学的な相互作用を解析する方法である。本研究では、菌体の近接が実際には従来のDLVO理論とは逸脱すること、これは菌体表面の生体高分子層の存在を想定してこなかったためであることを明らかにした。さらに従来とは異なる理論から菌体の近接の新たなモデルを作り出した。この結果、徘徊の前段階の様相が明らかになり、近接と付着を定量的かつ理論的に扱うことが可能になった。これらの結果を基にして、徘徊の実験系が設定された。
合金中のナノ欠陥定量解析システムを目指した新たなX線散乱測定システムの構築

金属組織に塑性変形を加えると、転位の導入により結晶格子に歪みが生じ、また、転位の配列により小傾角粒界、セル構造などが発達する。このような転位による結晶歪みやそれに伴うドメイン構造をX線回折パターンからとらえると、回折指数に応じた特徴的な形状が現れる。その形状解析がラインプロファイル解析と呼ばれる。本研究では、ラインプロファイル解析に最適化した装置開発を行い、鉄合金、銅合金などの実用合金への応用を行い、双晶誘起塑性や時効析出などの諸現象と転位の相互作用を明らかにした。合金中の転位、小傾角粒界、セル構造を定量的に解析する高輝度・分解能可変型X線散乱測定システムを開発した。このシステムの特徴は、ナノオーダーの結晶欠陥(転位、積層欠陥、双晶等)をメートルオーダーの視野で迅速かつ定量的に解析できる点にある。平成22年度は装置開発と性能評価からスタートし、「課題1:低積層欠陥エネルギーを持つ合金の加工に伴う組織変化」、「課題2:析出強化型合金における析出物形成と転位の関わり」をテーマとした研究を進めた。課題1:合金の積層欠陥エネルギーに対する加工組織への影響を定量的に解析した。特に高マンガンオーステナイト鋼およびCo-Cr系合金を対象試料とした。これら合金は低い積層欠陥エネルギーにより双晶形成が進展しやすく、同時に合金組成により積層欠陥エネルギーを変えることができる。圧延、引張変形に伴う転位密度や積層欠陥の形成頻度の変化とそれらに対する積層欠陥エネルギー依存性に関する知見が得られつつある。また、加工により複数の集合組織成分が形成されるが、極点図測定を組み合わせたラインプロファイル測定により個々の集合組織ごとの転位密度、セルサイズの変化を解析することが実現した。課題2:析出強化型銅合金を対象に、転位が与える析出物形成・成長への効果を探った。時効に伴う母相の回復現象は、結晶方位ごとに異なり、通常のラインプロファイル解析ができない。そこで、特定の結晶粒群だけの回折を抽出する測定を行った。その結果、結晶中の転位による歪み関数を導出することに成功し、時効に伴う転位の再配列挙動を定量的に解析することに成功した。以上の研究成果は材料組織解析の基盤技術の進展に貢献し、同時に、新たに得られた知見から、先端的な合金材料に対する材料開発指針につなげられた。本研究は合金組織における転位密度、配列状態の定量化を目指すX線回折系の構築と試料系に最適化した測定系の開発とその応用を目的とする。平成22年度までに、実験室系のX線回折測定システムを開発し、いくつかの実用合金への適用を試みた。平成23年度は、開発した装置を用い実用合金へのさらなる展開を目指し、積層不整を伴う金属組織、および熱処理に伴う不均一な部分回復・再結晶を伴う金属組織への応用を進めた。平成23年度に実施した具体的な研究内容を以下に記す。1)双晶誘起塑性(TWIP)鋼の積層欠陥エネルギーと変形組織の相関解析: TWIP鋼はMn、C、Alなどの合金元素により積層欠陥エネルギーは敏感に変化し、それに応じた双晶誘起塑性が生じる。この変形様式の特徴を探るため、転位密度、転位配列状態、積層欠陥の出現頻度をX線回折ラインプロファイルから解析した。この研究から、転位密度、配列状態が積層欠陥エネルギーとの相関は弱いことが明らかになった。一方、結晶子微細化は積層欠陥の出現頻度と一定の関係を持つが、その関係は積層欠陥エネルギーと相関を持たないことが明らかになった。また、強加工組織における集合組織成分ごとの転位密度の分布解析を行った。この解析のためにマイクロビームX線回折装置と二次元検出器による測定系を構築し、集合組織成分ごとの転位密度の分布の解析に成功した。2)析出強化型銅合金の時効処理に伴う転位再配列解析:銅は微量の添加元素により析出物を形成し、高強度・高導電性が実現される。その析出過程には合金元素-転位の相互作用が強く関わり、特に高温の時効プロセスでは転位の回復現象が合金元素と強い相関を持ちうる。本研究では、時効に伴う個々の合金元素の局所構造変化をXAFSにて追跡し、同時にX線回折ラインプロファイルを用い転位の挙動を解析した。時効に伴う転位再配列は溶質元素種ごとに異なる影響があり、その結果、析出物の成長速度に影響をもたらすことを明らかにした。
Best practices in ADR in EU and Japan: an assessment for future legislation

本研究では、EU及び日本に於ける裁判外紛争解決手続(ADR)の成功の違いの背後にある主要な原因を十分に特定することができた。とりわけ、私的に運用されつつ国家に監督されるADRが発展するかについての明確なパターンを特定した。EUでは立法的手段(例えば合意の執行可能性)及び非立法的手段(例えば、ADRに関する教育活動を通じてADRが強力に推進されている一方、日本は、とりわけ立法的措置が関わる場合には、ヨリ注意深い政策を採っているといえる。最近2015年の展開では、日本は私的に運用されるADRを強化することに関心を示していないことが確認され、また法制度の改正に関わる議論にもその方針が反映されている。比較私法
口腔癌の骨浸潤に対するオステオポンチンの影響

口腔癌患者の術前後の血中オステオポンチン濃度の解析を行うことによってオステオポンチンを腫瘍マーカーとして応用する。また下顎歯肉癌の骨への浸潤の解析を行い、下顎歯肉癌患者の術前の画像診断により早期の適切な臨床診断、治療方針の決定に寄与すると考えた。現在、口腔癌の血漿マーカーはSCCやCEAなど存在するが、確実性が高いものではない。オステオポンチンは乳がんの転移に関わっているという報告があり、口腔癌でのバイオマーカーとしての有用性を期待できると考えられる。今回健常人と患者の血漿のサンプルを収集し、血漿中のオステオポンチンの濃度を測り、健常人での男女の比較、健常人と口腔癌患者、口腔癌患者の術前と術後の比較を行った。健常人と比較して口腔癌患者では血漿中のオステオポンチンの濃度が高い傾向にあることがわかった。また術後1週間では血漿中のオステオポンチン濃度が3倍以上となり、高値を示した。しかし手術侵襲による上昇が考えられるため、術後1ヶ月でのデータを必要と考え、現在検査中である。また癌に関与するとの報告のあるタンパク質との相関関係を解析するために、MMP2の血漿中のタンパク濃度を解析した。健常人と比較して口腔癌患者では1.5倍程度の高値を示した。現在オステオポンチンとMMP2の他にEGFやVEGFのタンパク濃度も測定中であり、健常人15サンプル、口腔癌患者術前、術後1週間、術後1ヶ月のそれぞれ10サンプル程度解析を進めている。今後もっと多くのデータを集めることにより、腫瘍の悪性度、転移しやすさ、また転移の早期発見のマーカーとなることを期待して継続して研究を続ける予定である。口腔癌の骨浸潤に関しては圧迫型の骨吸収と浸潤型の骨吸収の解析をおこなった。X線診断では両者を分け、比較することが可能であったが、病理組織学的に皮質骨の吸収様式で分けることが困難であった。今後破骨細胞の関与、免疫染色などで、比較し、さらにはオステオポンチンの関与を解析する予定である。今回の研究の目的はオステオポンチンの発現を口腔癌で骨へ浸潤しないタイプと浸潤するタイプとで比較することにより、骨への浸潤メカニズムの解明と診断の向上、治療への応用をねらうことである。第一に当科を受診した下顎歯肉癌で骨への浸潤を認めかつ、歯牙が介在していない症例を解析した。過去10年間で上記に該当する症例は9例であった。画像所見、病理所見を照らし合わせ、圧迫型の骨吸収と、平滑型の骨吸収を比較検討した。今後ヘマトキシリンエオジン染色による比較だけでなく、オステオポンチンによる免疫染色を用い、オステオポンチンタンパクの口腔癌の腫瘍浸潤への機能解析を行う予定である。またその他骨関連タンパクの免疫染色も行う予定である。骨への腫瘍の浸潤した部位からRNAを抽出し、オステオポンチンのRNA量を比較することによりタンパクだけでなく、RNAレベルでの裏づけ解析も行う。次にオステオポンチンを口腔癌のバイオマーカー(血液中のオステオポンチンを測定することによって口腔癌の悪性度や、進行度の指標とすること)とする目的のため、口腔癌患者の血中オステオポンチン濃度を計測し、健常者との比較を行った。また手術前、手術後の口腔癌患者の血中オステオポンチンを用いて、比較も行った。データにばらつきはあったものの、口腔癌患者の血中オステオポンチン濃度は高値を示す傾向にあった。また術後血中オステオポンチン濃度は下がる傾向にあった。今後症例を集め、臨床応用を検討したい。
新規結核菌受容体ＭＣＬが誘導するＭｉｎｃｌｅとは異なる獲得免疫活性化機構の解明

自然免疫応答はC型レクチン受容体などの認識受容体によって惹起される。多くのC型レクチン受容体はマクロファージなどのミエロイド系細胞に発現し、外来病原菌由来分子を認識する。一方、異常自己の認識に寄与することも報告されているが、内因性リガンドの同定は遅れている。C型レクチン受容体Dectin-2は病原体由来α-マンナンを認識するが、内在性リガンドに関する報告はない。そこで、リガンドの認識をGFPの発現でモニターできるレポーター細胞を作製し、様々な細胞と共培養したところ、骨髄由来樹状細胞共存下で強くGFP発現が誘導されることを見出した。このレポーター活性は、高濃度のマンノースの添加及びDectin-2のマンノース結合配列への変異の導入によって消失した。次に、Dectin-2と結合する分子を同定するため、ヒト免疫グロブリンのFc領域とDectin-2の細胞外領域を融合させたキメラタンパク質を作製し結合する分子を精製した。すると、70 kDa付近にDectin-2に特異的に結合する分子の存在が示唆され、質量分析法によってこの分子がβ-glucuronidaseであることが判明した。HEK293T細胞に強制発現させたβ-glucuronidaseでも、Dectin-2と結合することを証明し、この結合はβ-glucuronidaseに存在するN型糖鎖修飾配列に変異を導入すると顕著に低下した。また、マクロファージ細胞株でβ-glucuronidaseを強制発現させることで、Dectin-2レポーター細胞の活性が増大した。以上の結果より、Dectin-2は内在性リガンドの一つとしてβ-glucuronidaseを認識することが明らかとなり、C型レクチン受容体が内在性タンパク質の糖鎖の状態をモニターし、異常な自己細胞の感知に寄与している可能性が強く示唆された。28年度が最終年度であるため、記入しない。MincleとMCLは非常に類似した分子であるが、「発現パターン」と「リガンド親和性」が異なる。MCL固有の機能を担う要因として上述のどちらが重要であるかを明らかにすることは、新たな獲得免疫活性化機構を解明する上で重要であるが、現状の遺伝子欠損マウスではMCL分子そのものが欠損しているため、この二つの要因を検証することは不可能であった。MCLはMincleよりも獲得免疫応答を優位に誘導できるというユニークな特徴を持つが、この特性がMCLの「発現パターン」「構造的特徴」の何れに起因するのかは不明である。このMCL固有の機能を担う要因を検証する為に、MCL遺伝子座のpromotor領域の後ろにMincleを挿入した遺伝子改変マウスを作製し、獲得免疫応答において、MCLの機能が、「恒常的に発現するMincle」で代替可能か、MCLの「構造」が不可欠であるかを明らかにすることを目的とした。MCLのpromotor領域の後ろにMincle cDNAを挿入したtargeting vectorを作製し、遺伝子改変ES細胞の樹立、マウスの作製を行った。MCL特異的抗体を用いて、MCLの発現パターンを骨髄細胞を用いて検討を行った。MCLのmRNAは恒常的に発現しているにもかかわらず、細胞表面にはLPS刺激を与えた時に発現が誘導されることが明らかとなった。以上のことより、タンパク質レベルではMCLも誘導的に発現している可能性が示唆された。1) MCLが誘導するMincleとは異なる獲得免疫活性化機構の解明:MincleとMCLは非常に類似した分子であるが、「発現パターン」と「リガンド親和性」が異なる。MCL固有の機能を担う要因として上述のどちらが重要であるかを明らかにする為、MCL遺伝子座のpromotor領域の後ろにMincleを挿入した遺伝子改変マウスを作製し、獲得免疫応答において、MCLの機能が、「恒常的に発現するMincle」で代替可能か、MCLの「構造」が不可欠であるかを明らかにすることを目的とし,MCL promotor領域の後ろにMincle cDNAを挿入した遺伝子改変マウスを作製した。このマウスの骨髄由来細胞、腹腔浸出液を採取し、MincleとMCLの発現を解析した。その結果、MCLはどちらの細胞種でもzymosanで刺激後に発現が上昇することを見出した。この結果は、MCLはmRNAレベルでは恒常的に発現しているにもかかわらず、細胞表面に発現するためには、何か他の要因が必要であることが示唆された。2) C型レクチン受容体Dectin-2の新規内在性リガンドの同定:Dectinー2は病原性真菌を認識し、免疫応答を誘導する受容体として知られている。申請者は研究の過程において、Dectin-2レポーター細胞がミエロイド系の細胞に反応することを見出した。次に、このリガンドを同定するために、Dectin-2のIg-fusionタンパク質を作成し、骨髄細胞より誘導した樹状細胞のlysateからこのIg-fusionタンパク質を用いてリガンドを共沈させた。Dectin-2のIg-fusionタンパク質で共沈してきたものを銀染色で確認すると、分子量約70kDaのバンドが得られた。以上よりDectin-2はミエロイド系細胞上に存在するタンパク質を内因性のリガンドとして認識していることが示唆された。申請者はC型レクチン受容体によって引き起こされる免疫応答やそのリガンド探索を行っており、結核菌受容体MCL遺伝子座のpromotor領域の後ろにMincleを挿入した遺伝子改変マウスの作製を行った。また、実験の過程において、同じくC型レクチン受容体に属するDectin-2が内在性リガンドを認識することを見出しその生理学的意義を検討している。

以上のように、当初の計画とは少し異なるもの、今後の研究の進展が期待され、順調に研究が進展していると考えられる。また、昨年度九州大学生体防御医学研究所リトリート研究発表会においてDectin-2が内在性リガンドに関する研究内容を研究室を代表して英語で口頭発表を行い、優秀口演賞を受賞した。自然免疫応答はC型レクチン受容体などの認識受容体によって惹起される。多くのC型レクチン受容体はマクロファージなどのミエロイド系細胞に発現し、外来病原菌由来分子を認識する。一方、異常自己の認識に寄与することも報告されているが、内因性リガンドの同定は遅れている。C型レクチン受容体Dectin-2は病原体由来α-マンナンを認識するが、内在性リガンドに関する報告はない。そこで、リガンドの認識をGFPの発現でモニターできるレポーター細胞を作製し、様々な細胞と共培養したところ、骨髄由来樹状細胞共存下で強くGFP発現が誘導されることを見出した。このレポーター活性は、高濃度のマンノースの添加及びDectin-2のマンノース結合配列への変異の導入によって消失した。次に、Dectin-2と結合する分子を同定するため、ヒト免疫グロブリンのFc領域とDectin-2の細胞外領域を融合させたキメラタンパク質を作製し結合する分子を精製した。すると、70 kDa付近にDectin-2に特異的に結合する分子の存在が示唆され、質量分析法によってこの分子がβ-glucuronidaseであることが判明した。HEK293T細胞に強制発現させたβ-glucuronidaseでも、Dectin-2と結合することを証明し、この結合はβ-glucuronidaseに存在するN型糖鎖修飾配列に変異を導入すると顕著に低下した。また、マクロファージ細胞株でβ-glucuronidaseを強制発現させることで、Dectin-2レポーター細胞の活性が増大した。以上の結果より、Dectin-2は内在性リガンドの一つとしてβ-glucuronidaseを認識することが明らかとなり、C型レクチン受容体が内在性タンパク質の糖鎖の状態をモニターし、異常な自己細胞の感知に寄与している可能性が強く示唆された。当初の計画通り、初年度にマウスを樹立することができた。今後はこのマウスを用いて解析を行い、MCLとMincleの機能的差異の原因について検討していく。Dectin-2のIg-fusionタンパク質で共沈して得られた約70kDaの分子をマススペクトロメトリーで解析し、この分子の同定を行う。また、この分子が同定できたら、以下の実験を行いDectin-2が内因性リガンドを認識する意義や状況等を検討する。A)CRISPRを用いて、Dectin-2のリガンド欠損マウスを作成し、生理学的意義を検討する。B)Dectin-2はリガンドのどの部位を認識しているのかを、免疫沈降法や遺伝子変異導入などを用いて検討を行う。28年度が最終年度であるため、記入しない。
I型糖尿病ラット(KDP)における原因遺伝子の同定

本研究では、KDPラットにおけるI型糖尿病原因遺伝子Iddm/kdp1の同定を目的として、ポジショナルクローニングおよびポジショナル候補遺伝子アプローチによる研究を遂行している。これまでに、当該遺伝子座をラット第11染色体上の約3cMの領域内にマッピングし、またマウス第16染色体上の相同領域における精密連鎖地図を作製した。さらに、マウスBACクローンを用いて、当該遺伝子座領域の一部を包含する物理地図を構築した。今年度は、ラットYACおよびBACクローンによる物理地図の構築と当該遺伝子の同定を行った。1.ラットYACおよびBACクローンを用いて当該領域全てを包含する物理地図を構築した。2.物理地図を用いて、塩基配列の決定により複数の遺伝子を同定した。同時に比較遺伝子地図の情報を用いて、相同なヒトゲノム領域から遺伝子およびESTを選択し、物理地図上にマッピングした。3.これらの遺伝子およびESTについて、ノーザンブロット解析、RT-PCR解析、サザンブロット解析、塩基配列の決定等によりKDPラットにおける変異を検索した。その結果、Iddm/kdp1の候補遺伝子を見出し、KDPラットにおいて特異的な変異を同定した。今回同定した候補遺伝子にKDPラット特異的な変異が存在することから、当遺伝子がIddm/kdp1であることが強く示唆される。今年度は、当該遺伝子座を精密連鎖地図および比較遺伝子地図上ヘマッピングし、当該遺伝子座領域を包含する物理地図の作製を行った。1.現在までに、(TM×KDP)F1×KDPの交配系から約200匹の戻し交雑仔を作出し、65匹の糖尿病発症個体を得ている。これらの糖尿病発症個体を用いた連鎖解析の結果、当該遺伝子座をラット第11染色体上の約3cMの領域内にマッピングした。2.次に、すでに作出している1600匹超のマウス戻し交雑仔(ALY×MSM)F1×ALYによるマッピングパネルを用いて、マウス第16染色体上の相同領域における精密連鎖地図を作製した。その結果、マウス相同領域は約3cMであることが明らかになった。3.さらに、マウスBACクローンを用いて、当該領域を包含する物理地図の構築を行った。その結果、当該領域の一部を包含する物理地図が得られた。また、得られたBACクローンの塩基配列を決定することによって複数の転写単位を同定することができた。今後、物理地図の拡張と平行して詳細なゲノム解析を行い、当該遺伝子を同定する予定である。
一様電界形成用電極形状の開発

一様電界形成用電極はこれまで多数提案されているが、その相違点を総合的に比較し、さらに電極かどの電界を評価するための三次元計算法を開発した。その結果、以下のことがわかった。1.高電圧工学レーザー工学で用いられる10種類の一様電界形成用電極について、電荷重畳法を用いて数値計算で比較した。回転対称配置の瑞部の電界はすべて中心の値より大きく、その最大電界は2次元配置より常に大きくなる。このことに関して電気学会論文誌に2件投稿中である。2.正方形、長方形電極のかどの電界を計算するため、円孤電荷配置の電荷重畳法を用いた三次元電界計算法を開発した。正方形電極の場合、最大電界は対角線上に生じ、この最大電界はどの(局所的な)回転半径と等しい回転対称配置の電界に近い。長方形電極も、かどの形状が同じなら最大電界は正方形とほとんど同じである。なお、電極かどの三次元計算法に関して電気学会論文誌に発表した。次に実際のChang型電極をベースとした3個のエキシマレーザー用電極形状について、電界の数値計算と実験とを比較した。1.XeClエキシマレーザーの場合、電極表面電界は電極瑞部で大きな電界上昇を生じるが、放電は電極中心で起きる。これはTownsendの電離係数alphaの電気力線に沿う線積分である電子贈倍の関係により、電子なだれからストリーマに移行する電圧が中心により端に行くに従って大きくなるからである。2.レーザーのビーム幅は最大電界よりはむしろ平均電界に対応し、中心の約98%の平均電界に対応している。
グローバルな正義論におけるローカルな責任―重層的な法哲学理論の構築

本研究の目的は、グローバルな正義をローカルな責任と関連づけつつ概念的・原理的観点から分析した上で、具体的な制度論・担い手論を提示することにあった。1概念的・原理的分析としては、グローバルな生存権論の深化、シンボリック・ネットワークの考究、センのグローバルな正義論の考察、消極的義務論の批判と地球正義論の提案を、また2制度論・担い手論としては、移民規制の正当化論の批判的検討、搾取概念による南北間自由貿易の解明、グローバル・フードシステムの問題点の析出、多国籍企業の責任の考察をそれぞれ行った。本研究の目的は、グローバルな正義を、ローカルな責任と密接に連結しつつ考察することにある。途上国の貧困問題への学問的応答である地球規模の分配的正義に関する国際的研究において、先進国市民の加害自制責任と正義実現の責任主体とに関して、考察が近年急速に進展しているという最新の研究動向を踏まえ、本研究は、グローバルな正義の理論分析と実施制度の構想の両面においてローカルな責任論を展開する。上記の研究目的を効果的に達成するため、正義班・責任班・多文化班を設けて、班単位でサブ・テーマに特化した研究活動を遂行した。また、それと並行して全体会合を開催することにより、各班の成果の共有・統合化を推進した。その上で、3ヶ年度の研究計画全体のなかで<基礎作業段階>として位置づけられた本年度には、(1)文献の収集・分析による学問的蓄積の共有化、(2)現在の研究状況の把握、(3)法哲学的論点の析出、(4)海外研究者との協働等による先端的研究の把握を行った。その結果、まず班単位および全体の研究会合を通じて、(1)正義思想史の蓄積の共有化と(2)グローバル正義論の研究状況の把握ができた。また、(3)に関連して、宇佐美によるグローバルな正義と人権の考察、森村による法概念の根本的考察、吉原による搾取の経済学的分析、瀧川によるドゥオーキン平等論のグローバルな拡張など、数多くの予備的研究成果を生み出すことができた。(4)については、本研究会が、グローバルな正義とナショナリティに関する国際セミナーや、カタストロフィと正義に関する国際会議を後援し、長谷川・後藤・神島らが研究報告等を行って、国内外の有力な研究者との意見交換を重ねた。本研究の目的は、グローバルな正義論をローカルな責任論と連結しつつ、グローバルな正義の基本原理の分析と法制度や担い手の構想との両面について多角的考察を行うことにある。この目的を効果的に達成するため、正義班・責任班・多文化班を設けてサブ・テーマに特化した研究活動を遂行するとともに、全体会合をたびたび開催して各班の成果の共有・統合を推進した。その上で、3ヶ年度の研究計画のなかで〈総合・完成段階〉として位置づけられた本年度には、次の4つの研究作業を行った。(1)前年度以来の共同討議を通じた理論彫琢の継続、(2)中間成果の個別的発表の継続、(3)各研究成果の有機的統合、(4)最終成果の組織的発表である。(1)としては、研究会合において、各メンバーの中間成果の発表、最終成果の暫定版の発表、これらに関する共同討議を重ねた。(2)の主要な中間成果・関連業績には、宇佐美によるグローバルな正義と人権の考察、長谷川によるグローバルな正義に向けたナショナルな責任論、森村による根本規範概念の批判的検討、後藤による大災害をめぐる互酬性としての正義論、吉原による搾取の公理論的解析、瀧川によるコスモポリタニズムと制度的分業の構想、神島によるビジネスを通じたグローバル正義論などが含まれる。(3)については、各メンバーの最終成果を取りまとめて統合化する作業をほぼ完了している。(4)の邦語論文集を2014年秋頃には公刊できる見込みである。研究目的を効果的に達成するため、正義班・責任班・多文化班に分かれてサブ・テーマに特化した研究活動を遂行した。また、それと並行して全体会合を重ねることにより、各班での成果の共有・統合化を推進した。その上で、3ヶ年度の研究計画全体のなかで〈構築・展開段階〉として位置づけられた本年度には、次の4つの研究作業を実施した。すなわち、(1)最先端の研究状況の把握、(2)法哲学的・政治哲学的・経済学的な理論構築、(3)班会合・全体会合での共同討議を経た理論彫琢、(4)国内外の学会大会・研究会合等における中間成果物の個別的発表である。その結果、研究代表者や各研究分担者が担当する個別テーマについて、理論の構築および彫琢が大きく進展した。来年度に公刊予定の最終成果物の論文集についても、全体構成や作業日程の目途がすでに立っている。

中間成果物の刊行物には、宇佐美誠の共編著による法思想史論文集、長谷川晃の編著による法のクレオール研究論文集、森村進のリバタリアニズムの包括的論文集、後藤玲子による正義と大惨事や他の関連テーマに関する諸論考、吉原直毅による福祉社会論・搾取分析等の多数の論文、瀧川裕英のコスモポリタニズムの論文、神島裕子のヌスバウムに関する著書が含まれる。中間成果物の口頭発表には、宇佐美・後藤・吉原による国内外での多数の研究報告や、瀧川・神島による全国学会等での報告が含まれる。研究会合や文献収集を通じた研究状況の把握や論点の析出などに加えて、当初の計画を上回る多数かつ多様な予備的研究成果や関連する研究成果を、論文・国際会議報告等で公表することができた。また、海外研究者との協働としては、二件の国際会議等を後援して活発な意見交換を行えた。25年度が最終年度であるため、記入しない。当初の予定を上回る量の中間成果物を生み出すことができた。主な刊行物には、宇佐美誠の共編著による法思想史論文集、長谷川晃の編著による法のクレオール研究論文集、森村進のリバタリアニズムの包括的論文集、後藤玲子による正義と大惨事や他の関連テーマに関する諸論考、吉原直毅による福祉社会論・搾取分析等の多数の論文、瀧川裕英のコスモポリタニズムの論文、神島裕子のヌスバウムに関する著書が含まれる。研究計画の<基礎作業段階>である今年度における大きな研究成果を生かしつつ、<構築・展開段階>の来度には、グローバル正義の理論構築とその彫琢を中心として、いっそう精力的に研究活動を推進する。3ヶ年度の研究計画のなかで〈総合・完成段階〉として位置づけられた来年度には、次の4つの研究作業を推進する。(1)共同討議を通じた理論彫琢の継続、(2)成果の個別的発表の継続、(3)各研究成果の有機的統合、(4)最終成果の組織的発表である。(4)として論文集を公刊する予定であり、すでに準備を進めている。
ストローマ細胞を基とした,レトロウイルスベクター・パッケージング細胞の作成

本研究では、レトロウイルス・ベクターを用いた実用可能な新たな手法を開発し、マウスのストローマ細胞株を用いて、ヒトの幼若な造血細胞をin vitroで増幅すると共に、遺伝子を導入することを試みた。マウスのストローマ細胞株とヒト臍帯血由来の造血幹細胞との共培養の系を用いて以下の結果を得た。1。ストローマ細胞株とヒト臍帯血由来の造血幹細胞との共培養の系にヒト造血因子を添加することで、CD34+/38-のマーカーを持つ細胞を数百倍以上増幅し得た。2。この培養系で、ヒトLTC-ICの増幅が可能であった。3。増幅された、CD34+/38-のマーカーを持つ細胞は、NOD/SCIDマウスにおいて、ヒトの造血を再構築した。この共培養系を用いて、レトロウイルスベクターによる遺伝子導入を試みた。1。ヒト臍帯血由来CD34+/38-細胞の約15%にマーカー遺伝子の発現を確認した。2。フレンド白血病ウイルス(SFFV)のLTRとMurine ES Cell Virus(MESV)ベクターのleaderの基本構造を持つベクター(FMEVタイプ)は、モロニー白血病ウイルス(MoMLV)を基本骨格としたベクターに比べて、造血幹細胞(CD34+/38-)での遺伝子発現が高かった。4。遺伝子導入された細胞は、NOD/SCIDマウスにおいてヒトの造血を再構築した。1。2。3。1。2。4。本研究では、このFMEVタイプのベクターを、効率良くヒト造血幹細胞(CD34+/CD38-)へ導入することを目的として、以下のことを行う。(1)ストローマ細胞株を用いた、新たなアンフォトロピック・パッケージング細胞株を樹立する。また、水泡性口内炎ウイルス(VSV)G蛋白やギボン白血病ウイルス(GALV)のenv蛋白とのシュードタイプ・ベクターを産生するパッケージング細胞株を樹立する。これらの細胞を用いて、ヒト造血幹細胞(CD34+/CD38-)への外来遺伝子導入効率を検討する。(2)上記の方法を用いて、ヒトSP細胞に外来遺伝子導入を試みる。平成11年度には、以下のことを行った。1)VSVG蛋白の一過性誘導型発現ベクターのプラスミドを、gag/pol遺伝子を高発現するストローマ細胞のクローンに遺伝子導入した。2)GALVのenvのcDNAを、gag/pol遺伝子を高発現するストローマ細胞のクローンに遺伝子導入するための発現ベクターを作成した。これを、gag/pol遺伝子を高発現するストローマ細胞のクローンに遺伝子導入し、ストローマ細胞由来のパッケージンク細胞を作成中である。3)マウスNIH3T3細胞由来のアンフォトロピック・パッケージンク細胞、上記のストローマ細胞由来のパッケージング細胞に、ウイルス・ベクターのプラスミドを導入し、ウイルスベクターの産生細胞を作成中である。FMEVタイプのベクターを、効率良くヒト造血幹細胞へ導入できることを確認するために、以下のことを行った。(1)ストローマ細胞株を用いた、新たなアンフォトロピック・パッケージング細胞株を樹立した。また、ギボン白血病ウイルス(GALV)のenv蛋白とのシュードタイプ・ベクターを産生するパッケージング細胞株を樹立した。水泡性口内炎ウイルス(VSV)G蛋白とのシュードタイプ・ベクターを産生させるために、水泡性口内炎ウイルス(VSV)G蛋白の発現ベクターを作成した。(2)ヒト臍帯血よりCD34+/CD38-分画を調整し,この造血細胞の亜分画を標的細胞として、ストローマ細胞を用いた方法で、外来遺伝子を導入した。遺伝子導入後、抗ヒトCD34モノクローナル抗体、抗ヒトCD38モノクローナル抗体、抗マウスCD8 (Lyt-2.2)モノクローナル抗体での三重染色をし、CD34+/CD38-分画での、マーカー遺伝子、マウスCD8、の陽性細胞の出現頻度を測定した。

(3)SRC(SCID-mouse repopulating cell)への遺伝子導入を確認するため、上記のごとく遺伝子導入した細胞をNOD/SCIDマウスに移植した。移植後15週で、ヒト造血細胞がマウスにて再構築されていること、および、これらのヒト由来の細胞に導入遺伝子であるマウスCD8が発現していることを、抗ヒトCD45モノクローナル抗体、抗マウスCD8(Lyt-2.2)モノクローナル抗体での2重染色にて確認した。
コンポジットレジンの仕上げ研磨法に関する総合的研究

仕上げ研磨法の適否は修復物の予後を左右する重要な因子である.現在市販されている修復用コンポジットレジンは,製品によってその組成は多岐にわたり,単にベースレジンが異なるだけでなく,種類や粒度分布の異なるフィラーが配合されているため,それらの各種コンポジットレジンそれぞれについて適切かつ能率的な研磨法は確立されていない.かような観点から本研究は,これらの種々のコンポジットレジン材料について,それらの組成に対応した適切かつ能率的な仕上げ研磨法を確立することを目的として計画された.各種コンポジットレジンの中から比較的研磨が困難とされてしるSemi-hybrid型レジン1種,および比較的容易とされているHybrid型1種,並びにSFR型2種を選び,これらについて現用の各種回転研磨用具を用いて研磨を行い,表面粗さ値と研磨面の走査型電顕観察の両者から検討を試みた.その結果, 0.20.3μmのサブミクロンフィラーが密に一様に充填されているSFR型レジンでは,従来から行なわれてきた粗さの違うジスクやポイントをシリーズで順次用いる方法をとらなくても,スーパーファインのダイヤモンドポイント仕上げ後に,比較的目の細かい研磨用具を直接使用しても,容易に滑沢な面に研磨することが出来,従来の術式の簡易化が可能となった.これに対してHybrid型レジンの製品では,フィラーにも硬軟があり,流水下で研磨用ジスクをシリーズで用いたり,シリコンポイントのブラウンとブルーを順次用いることにより, SFRほどではないが滑沢な面が得られた.今回使用した中で最も研磨が困難とされたSemi-hybrid型レジンでは,従来硬質金属の仕上げ研磨に用いられていたシリコンポイントを使用することにより,従来の研磨法では得られなかった粗さ値で1μm内外の滑沢な研磨面が得られた.仕上げ研磨法の適否は修復物の予後を左右する重要な因子である.現在市販されている修復用コンポジットレジンは,製品によってその組成は多岐にわたり,単にベースレジンが異なるだけでなく,種類や粒度分布の異なるフィラーが配合されているため,それらの各種コンポジットレジンそれぞれについて適切かつ能率的な研磨法は確立されていない.かような観点から本研究は,これらの種々のコンポジットレジン材料について,それらの組成に対応した適切かつ能率的な仕上げ研磨法を確立することを目的として計画された.各種コンポジットレジンの中から比較的研磨が困難とされてしるSemi-hybrid型レジン1種,および比較的容易とされているHybrid型1種,並びにSFR型2種を選び,これらについて現用の各種回転研磨用具を用いて研磨を行い,表面粗さ値と研磨面の走査型電顕観察の両者から検討を試みた.その結果, 0.20.3μmのサブミクロンフィラーが密に一様に充填されているSFR型レジンでは,従来から行なわれてきた粗さの違うジスクやポイントをシリーズで順次用いる方法をとらなくても,スーパーファインのダイヤモンドポイント仕上げ後に,比較的目の細かい研磨用具を直接使用しても,容易に滑沢な面に研磨することが出来,従来の術式の簡易化が可能となった.これに対してHybrid型レジンの製品では,フィラーにも硬軟があり,流水下で研磨用ジスクをシリーズで用いたり,シリコンポイントのブラウンとブルーを順次用いることにより, SFRほどではないが滑沢な面が得られた.今回使用した中で最も研磨が困難とされたSemi-hybrid型レジンでは,従来硬質金属の仕上げ研磨に用いられていたシリコンポイントを使用することにより,従来の研磨法では得られなかった粗さ値で1μm内外の滑沢な研磨面が得られた.仕上げ研磨法の適否は修復物の予後を左右する重要な因子であり、とりわけ無機質フィラーと有機質レジンの複合体であるコンポジットレジンにおいては、その後の変色や着色の発現に大きく関与している。そこで、本研究は種々な組成を有する修復用コンポジットレジン材料について、能率的かつ汎用な仕上げ研磨法を総合的に検討確立するために計画された。1.各種コンポジットレジンをSEMで観察分析したところ、そのフィラーの組成と配合形式とにより、マクロフィラー配合レジン、MFR型レジン,SFR型レジン,ハイブリッドレジン,ハイブリッド型レジン,高密度充填型レジンの7種に分類することが出来た。2.これらのレジンについて仕上げ研磨の時期を検討したところ、いずれの場合も硬化反応の安定した時期に行なう方法(すなわち次回研磨)が良いことが判明した。これは填塞当初から重合度が高いと言われている光重合レジンについても同様であった。3.光重合レジンは照射時間を延長するにつれ、直後研磨の着色試験では着色変が低下した。しかし、照射時間を過度に延長しても、次回研磨の成績には及ばなかった。4.サブミクロンフィラーよりなるSFR型レジンでは、スーパーファインのダイヤモンドポイントによる仕上げ後、直ちにシリコンポイント青(松風),シリコンポイントグレイ(GC)或はスーパースナップジスク赤(松風)による湿式研磨により最も滑沢な研磨面が得られた。5.コンポジットレジンの色調変化に関しては、特に光重合レジンは重合に伴う色調変化が大きく、化学重合レジンと異なり、硬化後も若干の変化があるため、仕上げ研磨法の変色に対する影響を調べるためには、ベースラインの設定が必要であることが判明した。
算数協同学習における対話的学びの変容プロセスの質的研究

算数協同学習における子どもどうしの相互作用による対話的学びの様相を分析して、グループ学習の成立条件を明らかにするとともに、抽出児の学びの姿を3年間継続して追跡し、数学的な見方・考え方の視点から対話的学びの変容プロセスを捉えることを目的とする研究である。研究1では「発表討議型」と「解法探索型」の2タイプのグループ学習の特徴を明らかにする。研究2では2タイプのグループ学習を算数授業に効果的に取り入れるための条件を明らかにする。研究3では同一抽出児を第4学年、第5学年、第6学年の3年間継続して追跡し、グループ学習や全体の話し合い場面の発話分析から対話的学びの変容プロセスを質的に明らかにする。
作業者の聴力損失(PTS)の測定ならびにPTSと言語聴力障害との関連

騒音作業に従事する現場作業者510名の聴力を測定するとともに、各作業者の騒音暴露量を測定した。また、騒音に暴露されていない被験者325名の聴力をも測定した。許容基準の作成にあたって、必要となる純音聴力損失と言語聴力障害との関係を得るため、騒音性難聴者を被験者として語音聴力検査を実施した。現在、日本産業衛生学会の勧告する許容基準は、上記関係に関しては日本語を用いた成績によっては定められていないので、この種の成績を蓄積することが騒音性聴力損失の評価を行う上で必要とされる。検査に用いた語音は、単音節と3連音節であり、検査条件は、静穏状態、騒音負荷、残響状態である。その結果、単音節明瞭度試験によっては、健常者と難聴者の聴力の差を検出することがむずかしいこと、3連音節明瞭度試験では残響状態で明瞭度が低下し、その程度は難聴者ほど著しいことが明らかとなった。また、その成績を用いて騒音性難聴者の語音の異聴について検討したところ、難聴者は健常者以上に知っている単語に聴き違える傾向が強いこと、大脳半球の優位性に関する言語優位耳の方が劣位耳に比べて知っている単語に聴き違いやすい傾向が認められた。さらに、感音性難聴者に特徴的にみられるリクルートメント現象をシミュレートする非線型ディジタルフィルタのプログラムを作成した。これを用いて歪語音を作製し、単音節語音聴力検査を行った結果、歪語音を用いた健常者の成績と歪んでいない語音を用いた難聴者の成績がよい一致を示した。騒音性難聴に関する資料を収集し、コンピュータに格納したが、データベース化するには至らなかった。聴力保護のための騒音の許容基準をA特性の騒音レベルで設定するために,以下の3点につき研究を遂行した.(1)騒音暴露と聴力損失との量一効果,量一反応関係の資料の集積.この点については,約400名の騒音作業従事者の聴力検査を実施し,あわせて過去の騒音暴露歴・既往症について問診した.また,騒音作業従事者の騒音暴露量を精密に測定するため, 80名の作業者に環境・作業騒音測定装置を携帯した状態で作業に従事してもらった.騒音に暴露されていない青年男子145名,女子180名の聴力を測定した.(2)既往の衝撃音の許容基準が定める衝撃音の測定方法によって得られる測定値と騒音計で測定したA特性の騒音レベルとの関係の検討.この点については,騒音計を一次遅れ系とみなし,衝撃音の音圧波形を数式で近似して系の入力とした場合のメータの指示値を理論的に算出した.衝撃音の音圧波形のパラメータを種々に変えたときの騒音計の指示値を求めて,両者の測定値の関係を検討した.(3)騒音性聴力損失を有する被験者を対象にした語音聴力検査の実施.この点については, 11名の騒音性聴力損失を有する被験者につき,無意味3連音節せ用いた明瞭度試験を実施した.試験は,バブルノイズ負荷,残響負荷の状態でも実施し,かつ健常者にも同様の試験を実施した.以上の研究を来年度も引続き実施する予定である.騒音作業に従事する現場作業者110名の聴力を測定するとともに、各作業者の騒音暴露量を測定した。また、騒音に暴露されていない被験者30名の聴力をも測定した。許容基準の作成にあたって必要となる純音聴力損失を言語聴力障害の関係を得るため、騒音性難聴者を被験者として語音聴力障害検査を実施した。

検査に用いた語音は、単音節を3連音節であり、検査条件は、静穏状態、騒音負荷、残響状態である。その結果、単音節明瞭度試験によっては、健常者と難聴者の聴力の差を検出することがむずかしいこと、3連音節明瞭度試験では残響状態で明瞭度が低下し、その程度は難聴者ほど著しいことが明らかとなった。また、その成績を用いて、騒音性難聴音の語音の異聴について検討したところ、難聴者は、健常者以上に、知ったいる単語に聴き違える傾向が強いこと、大脳半球の優位性に関する言語優位耳の方が劣位耳に比べて、知っている単語に聴き違えやすいとの傾向が認められた。さらに、感音性難聴者に識特微的にみられるリクルートメント現象をシミュレートする非線型ディジタルフィルタのプログラムを作成した。これを用して歪語音を作製し、単音節語音聴力検査を行った結果、歪語音を用いた健常者の成績と歪んでいない語言を用いた難聴者の成績によい一致を認めた。騒音性難聴に関する資料を収集し、われわれの測定成績とあわせて、コンピュータに格納したが、データベース化するには至らなかった。
牛の嚢腫様卵胞に共存する小卵胞由来卵子を用いた体外受精技術の応用

本研究は牛卵巣における卵胞嚢腫の存在および嚢腫卵胞液中のステロイドホルモン濃度の違いが共存する直径1-7mmの小卵胞由来卵子の回収率、形態および体外成熟培養後の成熟率に与える影響を検討した。屠場より左右卵巣表面に黄体が存在せず、直径が3cm以上でかつ卵胞液量が10ml以上の嚢腫卵胞が1個以上存在する牛26頭の左右卵巣ペアを採取した。嚢腫卵胞より卵胞液を採取してプロジェステロン(P4)およびエストラジオール17β(E2)の測定を行った。得られた卵巣を嚢腫卵胞が存在するものとしないものとに分け、各卵巣の小卵胞より卵巣毎に卵子を吸引採取して、卵子の細胞質および卵丘細胞の付着状況により5グループに分類した。卵子は体外成熟培養を行った後に固定、染色して卵核胞が崩壊しているものを成熟進行卵、極体の放出が観察されたものを成熟卵として成熟の度合いを調べた。結果は2つの評価方法を用いて比較検討した。1.嚢腫卵胞の存在の有無により卵巣を分類した場合...採取できた卵子数、卵子の形態および体外成熟培養後の成熟率において、両卵巣群の間には有意差は見られなかった。さらに嚢腫卵胞が存在した卵巣において、嚢腫卵胞液中のP4とE2濃度から算出したP4/E2値によってP4-dominant,E2-dominantおよび両者の共存する卵巣に区分した場合においても卵子数、卵子の形態および成熟率には有意差は見られなかった。2.各個体毎に得られた左右卵巣ペアにおいてE2-dominantの嚢腫卵胞の存在の有無により牛を分類した場合...左右卵巣から得られた総卵子数、卵子の形態および体外成熟培養後の成熟率には有意差は見られなかった。以上の結果から牛卵巣において、嚢腫卵胞の存在および卵胞液中ステロイドホルモン活性の違いは共存する他の小卵胞の数、卵胞内卵子の形態および卵子の成熟に係わる機能に影響をおよぼさないことが判明した。