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「琉球王国評定所文書」及び近世先島地方公文書の料紙に関する基礎的研究

また、文献史料による成果として、近世琉球の文教機関である「系図座」が監督した、公的な記録である士族層の「家譜に」ついて検討を行い、その家系継承において中国的儒教的論理とは異なる性格を見いだし、論文として公表した。現在、料紙研究のための基盤整備を進めており、史料編纂所における「琉球王国評定所文書」や宮古島市・多良間村における文書・典籍の調査を計画している。先島での調査においては、青雁皮紙製用紙の存在について特に重視し、沖縄と先島地方との公文書文化の差異の有無についても検討する。平成27年度から昨年度にかけて、公的機関の作業部会員に任じられ、頻繁に上京せざるを得なくなり、当初のエフォートが確保できなかった。「琉球王国評定所文書」については、東京大学史料編纂所の所蔵分について調査を行った。透過光による顕微鏡観察により、この料紙は「百田紙」とされているが、土粉など填料が含まれていないという暫定的所見を得た。両先島地方の地方文書と典籍類については、宮古島市総合博物館の協力を得て、未整理資料を調査することができた。そのなかから、全体が雑誌用紙で綴じられて保存状態の良くない、「勤書」と家譜を選択し、前者の修復事業を実施した。その結果、「勤書」の内容・様式・作成など古文書学的な所見を得ることができた。本文書は耕作筆者という最末端の地方役人に関するものであり、現存するなかでは最も古い年代とみられ、その史料的価値の高さを示すことができた。料紙についても、修復前に紙片を摘出して、C染色液による染色と未染色のスライドを作成して所属大学の研究基盤センターにて顕微鏡写真を撮影することができた。分析の結果、「勤書」の料紙は副材料や填料が配合されていない楮紙系の紙であることが判明した。八重山地方に関しては、所属大学附属図書館所蔵の「宮良殿内文庫」を中心に調査を進め、その中から『太上感応篇大意』と『遺老説伝』について保存状態の予備調査と修復事業に伴い摘出された紙片を試料として顕微鏡撮影を行った。その分析の結果として、後者の料紙は楮紙とされていたが、アオガンピとの配合紙であることが判明した。さらに、石垣市立八重山博物館での収蔵状況調査を行い、翻刻済み文献の実物資料の保存状態や新規受託の文書群などに関する情報を収集することができた。これまでの成果により、竹紙、楮紙、芭蕉紙に加えてカジノキと青雁皮や藁などとの混合紙もまた近世琉球とりわけ先島地方の文書・典籍用紙として注目すべきであることが指摘できる。なお、近世琉球史の諸相として、円覚寺と崇元寺における王家と王府の祭祀に関して論考を発表した。本年度は昨年度と異なり、研究活動のエフォートが確保できた。ただし、日程調整や体調の関係で頻繁に上京できなかったので、国立公文書館での「琉球王国評定所文書」調査の推進が課題となっている。近世の両先島とりわけ宮古島の研究に特化した。宮古島市総合博物館寄託の染地氏(砂川家)の「勤書」および「系図家譜」の2点の修復を行い、料紙の計測や試料の摘出・顕微鏡観察(分析・撮影)を行った。これにより、料紙の坪量や密度などのデータを得ることができ、料紙原料がコウゾであり混合紙ではないことが分かった。また、修復後のデジタル撮影により、鮮明な印判や裏面、綴じ中の文字を実見することができた。「勤書」は写しではなく原本であり、蔵元上層の印判について所有者を確定することができた。この「勤書」が八重山を含め現存するものとして最古のものであり、19世紀後半の宮古島・多良間島のものと比較することにより、宮古島の蔵元において、「勤書」の様式に大きな変化がないことを確認できた(「18世紀の宮古島一地方役人の“履歴書"ー「染地氏六世勤書」の料紙と様式ー」と追加調査による)。
リチウム及び銅スピネル化合物のソフト化学的合成と性質、二次電池への応用

スピネル構造はイオンの移動しやすい構造である。我々は、リチウムまたは銅を含むその様なスピネル化合物をソフト化学的に合成する事を試み、リチウム電池または銅固体電池の電極としてどの様な特性があるかを検討した。LiM_2O_4として知られているスピネル酸化物は、M=Ti,V,Niが知られているが、我々はまだ知られていないFeやCoについての合成を試みた。このうち、Feに関しては、層状岩塩構造のNaFeO_2をLi塩中でイオン交換すれば、層状のLiFeO_2が得られ、200-300°Cで処理すると、一部スピネル型に変化する。Liのデインターカレートを試みているが今の所わずかにしか抜けない。一方、NaFeO_2からは簡単にNaが抜け、Na_<0.5>FeO_2が得られる。これには簡単にLiが挿入出来る。Li/NaFeO_2の電池をつくるとかなり良好な二次電池が得られる。LiCoO_2に変わるリチウム二次電池の正極としてLiNiO_2が注目されているが、Liが抜けたときの相変化は複雑である。Li_<1-x>NiO_2を200°C付近で熱処理してスピネル構造に変化する様子を詳しく見た。スピネルに変換した後も、組成により立方晶(x>0.9)と六方晶(x<0.9)の領域があり、これは層状岩塩構造とスピネル構造の中間的なイオン分布を持つ化合物であることを示している。この様にして得られたスピネルLi_<1-x>NiO_2にLiをインターカレートするとLiNiO_2が得られるがそれは層状のLiNiO_2とは異なる構造をとる。硫化物銅スピネルCuTi_2S_4から銅を化学的に抽出すると、欠陥型のスピネルCu_<0.1>Ti_2S_4は大電流で充放電可能な銅電池の電極ばかりでなく、優れたリチウム二次電池の電極としても有望であることがわかった。しかし、さらに優れた性能が期待できたCuCr_2S_4からは、銅を抜くことが出来ず、残念ながら電極としての可逆性に問題があった。
地域のベテラン里親を中心としたネットワークが措置の安定と養育の質に与える影響

本研究では、地域ネットワークを活用した新しい里親家族支援に関する調査研究を行う。1年目は、初年度なので主に3か年の研究の準備期間とする。具体的には、関係者に対するインタビュー調査の実施の準備をしたり、参与観察したり、地域の基本データを収集し、既存の里親支援のあり方について情報収集する。2年目は、本格的に調査を開始する。具体的には、各グループのレスパイト・活動・相談等の状況について、分析を行う。3年目は、さらに研究を進め、成果を検証する。
高機能性バリウムフェライト薄膜創製における活性化酸素の結晶化温度におよぼす影響

高密度垂直磁気記録媒体や高周波薄膜デバイスとして有望な六方晶バリウムフェライト薄膜の、スパッタ法による低温形成法の確立を主目的として研究を行った。具体的には低温形成に効果的な添加元素の決定ならびに放電ガスの反応性促進効果の検討を行った。添加元素としては六方晶フェライトの構成元素の一つである鉛を選んだ。他の候補としてはストロンチウムなども検討したが、安定性の問題があった。ターゲット上の鉛片の個数を変化することにより最適組成すなわち化学量論組成の薄膜を形成することができた。しかしながら、鉛の組成は薄膜形成中の酸素ガス圧ならびに基板温度に極めて敏感であり、低温度そして高い酸素分圧ほど鉛が入りやすいことが明らかになった。これまでの申請者らの研究ではバリウムフェライトの結晶化温度は約620°C程度であったが、この鉛を添加することで550°Cに低下することが明らかになった。次に、本研究の主題でもある活性化酸素の効果について検討した。活性化酸素はN2Oガスとアルゴンガスの放電により形成できると考え、特に酸素原子励起種に対応した励起線に注目してプラズマ分光を行った。通常の反応性スパッタでこれまで申請者らが用いていたアルゴンと酸素の混合ガスのみのプラズマでは反応性推進種と考えられる活性化酸素に対応する励起線は観察できなかったが、N2Oガスを混合することにより波長が437nm近傍に活性化酸素に起因すると思われる微弱な励起線が観察されることが明らかになった。このN2Oガスを導入することにより、基板温度が520°C付近でも結晶性に優れたバリウムフェライト薄膜を創製できることが明らかになった。すなわちこれは活性化酸素の酸化物薄膜作成時の基板温度の低減効果と見なすことができる。今後、酸素原子の励起方法も含めて、さらに結晶化温度の低減のための研究を展開する必要がある。
並行動作順序回路システムの設計と検証に関する研究

1.並行動作順序回路としてきわめて有用な,あるクラスのout-of-order型パイプラインCPUに対する設計検証法を整理し,論文にまとめた.2.時間制約付きで複数の並行動作回路を記述できるモデルとして,Alurの時間オートマトンを大域変数付きに拡張したモデルTASVを提案し,TASV上でのデッドロックフリー性を効率よく判定する判定手法を考案した.この手法を国際会議で発表した.また,それを理論的に整理して論文としてまとめ,論文誌に投稿した.3.拡張有限状態機械(EFSM)の動的性質(望みどおりの要求性質を満たす状態にいつかは必ずたどりつける,デッドロック状態に陥ることはない,など)を自動検証できるように,単体のEFSMに対する動的性質の検証アルゴリズムを考案した.自動検証を可能にするための十分条件も定めた.任意桁の整数レジスタを扱えるようプレスブルガー文真偽判定ルーチンを有効に使う工夫も行った.その結果をワークショップで発表した.4.さらにEFSMを複数個に拡張したモデルを考案し,それに対する動的性質の自動検証アルゴリイムを考案した.提案するモデルでは,各EFSM間の同期,非同期が自由に指定できる.評価のための例題としてオークションシステムをとりあげ,動的性質をPC上で数分以内に検証可能であることを確かめた.結果を研究会などで発表した.5.CPU高位設計の自動検証作業を経験させるために,学部学生の設計実験において,本研究室で開発した自動検証ツールを3年前より導入している.この学生実験では,最終的に,複数の順序回路で表現されたCPU制御部を作成する.学生の作業履歴や設計CPUを調べた結果,検証ツールが誤りのない設計を行うのには特に有効であることを確認し,論文2編にまとめた.1.並行動作順序回路としてきわめて有用な,あるクラスのout-of-order型パイプラインCPUに対する設計検証法を整理し,論文にまとめた.2.時間制約付きで複数の並行動作回路を記述できるモデルとして,Alurの時間オートマトンを大域変数付きに拡張したモデルTASVを提案し,TASV上でのデッドロックフリー性を効率よく判定する判定手法を考案した.この手法を国際会議で発表した.また,それを理論的に整理して論文としてまとめ,論文誌に投稿した.3.拡張有限状態機械(EFSM)の動的性質(望みどおりの要求性質を満たす状態にいつかは必ずたどりつける,デッドロック状態に陥ることはない,など)を自動検証できるように,単体のEFSMに対する動的性質の検証アルゴリズムを考案した.自動検証を可能にするための十分条件も定めた.任意桁の整数レジスタを扱えるようプレスブルガー文真偽判定ルーチンを有効に使う工夫も行った.その結果をワークショップで発表した.4.さらにEFSMを複数個に拡張したモデルを考案し,それに対する動的性質の自動検証アルゴリイムを考案した.提案するモデルでは,各EFSM間の同期,非同期が自由に指定できる.評価のための例題としてオークションシステムをとりあげ,動的性質をPC上で数分以内に検証可能であることを確かめた.結果を研究会などで発表した.5.CPU高位設計の自動検証作業を経験させるために,学部学生の設計実験において,本研究室で開発した自動検証ツールを3年前より導入している.この学生実験では,最終的に,複数の順序回路で表現されたCPU制御部を作成する.学生の作業履歴や設計CPUを調べた結果,検証ツールが誤りのない設計を行うのには特に有効であることを確認し,論文2編にまとめた.本年度は以下の研究を行なった。1.並行動作順序回路としてきわめて有用な、あるクラスのout-of-order型パイプラインCPUに対する設計検証手法をいままでに提案してきたが、この手法を整理した。2.時間制約付きで複数の並行動作回路を記述できるモデルとして、Alurの時間オートマトンを大域変数付きに拡張したモデルTASVを提案し、そのモデル上でのデッドロックフリー性を効率よく判定する判定手法を考案した。提案するアルゴリズムでは、大域変数の値が依存するような2つのオートマトン間に対して、大域的にはその変数制約を無視しても良いという十分条件を満たすのであれば、その2つのオートマトンのデッドロックフリー性を独立に判定するという効率上の工夫を行なっている。この手法を本年は、MMNS'99(ICPP'99 workshop)で発表した。3.並行動作順序回路を記述できるモデルとして、整数レジスタを持つEFSMに着目し、単体のEFSMに対する時相論理式の記号モデル検査アルゴリズムを考案した。このアルゴリズムでは整数上の論理判定を用いて整数レジスタの桁数に依存せず判定を行なう工夫や、無限の状態集合を、条件選択の制約式のクラスの有用性を損なうことなく,、有限の領域として抽象化する工夫などを行なっているため、従来のBDD等を用いた手法では検査できなかった規模の回路の正しさを、実用時間で検証できるようになった。例題としてTCPD'94で提案されたベンチマーク問題の一部とビデオ電話の標準規格であるH.223を選び、実際に適用した。これらの結果をまとめた論文を研究集会で発表予定である。また、この結果は、並行動作順序回路にも比較的容易に適用可能であると考え、現在そのための具体的手法を考案中である。(1)昨年に引き続き,拡張有限状態機械(EFSM)の動的性質(望みどおりの要求性質を満たす状態にいつかは必ずたどりつける,デッドロック状態に陥ることはない,など)を自動検証できるように,単体のEFSMに対する動的性質の検証アルゴリズムの検討をおこなった.考案した検証法では,自動検証を可能にするため回路に対する十分条件を定めた.そのもとで,検証では,整数を直接扱えるようプレスブルガー文真偽判定ルーチンを有効に使う工夫も行った.

(2)引き続き,EFSMを複数個に拡張したモデルに対する動的性質の検証アルゴリズムを考案し,そのアルゴリズムの実装と評価実験を行った.この手法において自動検証を可能にするためのモデルを定めた.そのモデルでは,各EFSM間の同期,非同期が自由に指定できる.評価のための例題としてオークションシステムをとりあげ,「いつかはいずれかのバイヤーが落札する」,「複数のバイヤーが共に落札することはない」などの諸性質をPC上で数分以内で検証可能であることを確かめた.(3)CPU高位設計の自動検証作業を経験させるために,学部学生のCPU設計実験において,本研究室で開発した自動検証ツールを3年前より導入している.この学生実験では,CPUの高位の要求記述から始めて,最終的には,複数の順序回路で表現されたCPU制御部を作成する.学生の作業履歴や設計CPUを調べた結果,検証ツールが誤りのない設計を行うのには特に有効であることを確認し,その結果を今年度,論文2編にまとめた.(4)昨年,時間制約付きで複数の並行動作回路を記述できるモデルとして,Alurの時間オートマトンを大域変数付きに拡張したモデルTASVを提案し,そのモデル上でのデッドロックフリー性を効率よく判定する判定手法を考案した.今年度はそれを理論的に整理して論文としてまとめ,論文誌に投稿した.
細胞表層提示型キチナーゼのキチン分解機構の解明と糖転移活性向上によるオリゴ糖生産

本研究は、Paenibacillus属細菌由来新規キチナーゼChiWのキチン分解機構の解明と、その糖転移活性の向上を目的とした。(1) ChiWキチン分解能力の解明: ChiWの複合ドメイン構造を2.0オングストローム分解能で決定した。また、ChiWのドメイン構造がキチン分解時に協奏的に働いていることが示唆された。(2) ChiW糖転移活性の向上: 120-130%オリゴ糖合成活性が上昇した変異体が2種類取得された。(3)細菌P. FPU-7のキチン分解機構に関する研究:P. FPU-7培養上清に含まれるタンパク質を決定した結果、ChiW以外にも複数種類のキチン分解酵素を見出した。本課題研究は、Paenibacillus属細菌由来新規なキチナーゼChiWの複合ドメイン構造による強力なキチン分解の分子機構を明らかにし、糖転移活性を向上させることによって、キチンおよびキチンオリゴ糖の利用拡大に資することを目的としている。本年度は、ChiWの「複合ドメイン構造」と「高いキチン分解活性」の構造機能相関解析に着手した。(1) ChiW触媒反応の解析: ChiWのキチンおよびそのオリゴ糖に対する反応様式を明らかにするため、ChiW全体、触媒ドメインのみ、立体構造不明ドメインのタンパク質試料を調製した。立体構造不明ドメインのみにはキチン分解活性は認められなかったが、ChiW全体および触媒ドメインのみには分解活性が認められ、キチンはランダムに分解され、最終的には2糖にまで分解された。その反応の最適温度、最適pHは、それぞれ50°C、pH 5付近であった。(2) ChiWのX線結晶構造解析: ChiWがキチンを強力に分解できる立体構造的要因を明らかにするため、タンパク質試料の精製条件と結晶化条件の再検討を行った。結果、ChiW全長の結晶の回折データの分解能を2.6から2.1オングストロームにまで向上することができた。触媒ドメインのみの結晶に関しては、1.93オングストローム分解能の回折データが得られた。(3) ChiW立体構造の動きの解析:キチンとの結合/分解の際に生じる動きを解析するため、円二色性スペクトルデータの取得を試みた。結果、ChiWの立体構造不明ドメインが主にβ-ストランドで構成されていることを明らかにした。次年度は、立体構造不明ドメインの機能解析を進め、立体構造と強力なキチン分解能力との相関解析を行う。また、ChiWの糖転移活性の向上とキチンオリゴ糖の合成研究も進めていく。本課題研究は、Paenibacillus属細菌由来新規キチナーゼChiWの複合ドメイン構造による強力なキチン分解の分子機構の解明、および、その糖転移活性の向上によるキチンおよびキチンオリゴ糖の利用拡大を目的としている。本年度は、引き続き、ChiWの「複合ドメイン構造」と「高いキチン分解活性」の構造機能相関解析を進め、さらに、糖転移活性の向上とキチンオリゴ糖の合成研究に着手した。(1) ChiWのX線結晶構造解析: ChiWがキチンを強力に分解できる立体構造的要因を明らかにするため、結晶化条件と試料の調製法の最適化し、立体構造の構築を行った。結果、ChiW全長の詳細な立体構造が2.0オングストローム分解能で決定された。(2) Stemドメインの機能解析:機能が不明であったStemドメインと種々の糖との結合実験を行った。その結果、Stemドメインが真菌細胞壁由来多糖と強く結合することが明らかとなった。(3) Stemドメインの自己切断機構の解析: Stemドメインの自己切断部位付近の部位特異的変異体を作製し、本ドメインがセリンプロテアーゼ様の自己切断を行っていることが明らかとなった。(4) ChiWの糖転移活性の向上とキチンオリゴ糖の合成:糖転移活性に影響を与えることが知られているアミノ酸残基を他のアミノ酸に置換することを進めた。現在7種類の変異体が作製でき、それらの活性を測定したところ、120-130%オリゴ糖合成活性が上昇した変異体が2種類取得された。最終年度は、決定した立体構造に基づき、強力なキチン分解能力の解明を行う。また、ChiWの変異体をさらにスクリーニングし、糖転移活性のさらなる向上とキチンオリゴ糖の効率的な合成を行う。最終年度は、前年度に決定した立体構造に基づき、強力なキチン分解能力に解明研究、および、ChiW糖転移活性の向上を目指し、変異体の作製とそれらの活性測定を行った。(1) ChiWの立体構造に基づく分解能力の解明研究:前年度までにChiW全長の立体構造を2.0オングストローム分解能で決定した。立体構造に基づき、触媒ドメインのみ(触媒ドメイン1,触媒ドメイン2)、および触媒ドメインの順番を入れ替えた変異体タンパク質を調製した。そして、各ドメインと活性の相関解析を行ったところ、各ドメインがキチン分解時に協奏的に働いていることが示唆された。(2) ChiWの糖転移活性の向上に関する研究:立体構造に基づき、糖転移活性に影響を与えると予測されるアミノ酸残基を他のアミノ酸に置換し、解析したところ、120-130%オリゴ糖合成活性が上昇した変異体が2種類取得された。

(3) Paenibacillus属細菌のキチン分解機構に関する研究:キチン分解細菌であるP. FPU-7を培養し、その上清に含まれるタンパク質を決定した。その結果、これまで確認しているキチナーゼ以外にも複数種類のキチン分解酵素およびそれらと遺伝子上でクラスター構造を形成している機能不明タンパク質を見出した。さらに、キチンオリゴ糖を細胞質内へと輸送するタンパク質の候補も見出した。本研究は、Paenibacillus属細菌由来新規キチナーゼChiWのキチン分解機構の解明と、その糖転移活性の向上を目的とした。(1) ChiWキチン分解能力の解明: ChiWの複合ドメイン構造を2.0オングストローム分解能で決定した。また、ChiWのドメイン構造がキチン分解時に協奏的に働いていることが示唆された。(2) ChiW糖転移活性の向上: 120-130%オリゴ糖合成活性が上昇した変異体が2種類取得された。(3)細菌P. FPU-7のキチン分解機構に関する研究:P. FPU-7培養上清に含まれるタンパク質を決定した結果、ChiW以外にも複数種類のキチン分解酵素を見出した。ChiWの「複合ドメイン構造」と「高いキチン分解活性」の構造機能相関解析を進め、下記(1)-(3)の成果を得た(現在、論文投稿準備中)。(1) ChiWのX線結晶構造解析: ChiW全長の詳細な立体構造を2.0オングストローム分解能で決定した。現在、投稿準備中である。(2) Stemドメインの機能解析:機能不明ドメイン(Stem)が、基質結合ドメインとして機能することを明らかにした。(3) Stemドメインの自己切断機構の解析: Stemドメインがセリンプロテアーゼ様の自己切断を行っていることを明らかにした。また、取得した立体構造に基づき、ChiWの糖転移活性の向上とキチンオリゴ糖の合成研究も進め、オリゴ糖合成活性を上昇(120-130%)させることができた。これらの成果はおおむね当初の研究計画のとおりである。構造生物学交付申請書の通り、研究を進めていく。1. ChiWの「複合ドメイン構造」と「高いキチン分解活性」の構造機能相関:決定したChiW全長構造をもとに分子動力学的シミュレーション実験を行う。そして、強力なキチン分解能力を立体構造的に解明し、どのように細胞壁キチンを分解するのか解析する。2. ChiWの糖転移活性の向上とキチンオリゴ糖の合成:決定した立体構造や反応様式の解析結果に基づき、糖転移活性の向上が期待される変異体を作製し、スクリーニングを行う。3.キチンオリゴ糖の合成条件の最適化:酵素と基質の反応条件を変化させ、オリゴ糖合成条件を最適化する。変異体と糖転移活性の相関を解析することで、活性部位と糖転移活性に関する新たな知見を得る。ChiWの「複合ドメイン構造」と「高いキチン分解活性」の構造機能相関解析を進め、下記の成果を得た。(1) ChiW触媒反応の解析: ChiW解析用試料が調製でき、その諸性質を明らかにすることができた。また、結果を論文として掲載することができた。(2) ChiWのX線結晶構造解析: ChiW解析用試料の精製度をこれまでよりも向上させることができ、さらに回折データ質を向上することができた。
ホルモン補充療法が本邦女性の疾病構造に与える影響及び医療経済学的効果に関する研究

閉経後女性に対するホルモン補充療法は、海外においては広く処方され、虚血性心疾患発症抑制、骨粗鬆症発症抑制・改善、アルツハイマー病発症抑制、泌尿生殖器系の症状改善などの治療効果を挙げているが、本邦ではあまり普及していない。わが国でもホルモン補充療法を普及させることにより、高齢女性のquality of lifeを改善し、寝たきり老人を減少させるなどの効果が現れ、国民医療費を抑制することも可能となると考えられる。この仮説を科学的に証明するため、本研究では、(1)本邦閉経後女性へのホルモン補充療法施行により、各種疾患の羅患率がどのように変化するか、その結果本邦女性の生命予後にどのような影響を及ぼすかを、医療統計学的手法を用いて検討する。(2)本邦の医師および女性に対してホルモン補充療法に対する意識調査を行い、今後のホルモン補充療法実施率がどのように変化するかを予測する。(3)前記2項の結果を踏まえ、今後ホルモン補充療法の普及が予測される場合の医療費の増減を医療経済学的に検討することを目的とした。平成1011年度の研究では上記(2)が行われ、わが国におけるホルモン補充療法実施現況、今後の推移の把握を目的とし、まずホルモン補充療法に対するわが国女性の意識調査を行うため、札幌市の内科、人間ドック受診中の女性患者、さらに健康センターに来訪した女性、計800名に対し質問票調査を行った。その結果、本邦女性ではホルモン補充療法を知っていた者は少なかったが、良く説明を行えばかなりの女性が本療法を欲することが分かった。また、日本各地の婦人科医および内科医・整形外科医計5000名に対して、ホルモン補充療法についての意識とその実施状況を問う質問票を発送、回収した。その結果、わが国では婦人科医は本療法をほぼ全員施行しているが、内科医・整形外科医はほとんど行っておらず、後者の意識改革が必要であると考えられた。更年期以後の女性に対するホルモン補充療法は、海外においては広く処方され、虚血性心疾患発症抑制、骨粗難症発症抑制・改善、アルツハイマー病発症抑制、泌尿生殖器系の症状改善などの治療効果を挙げているが、本邦ではあまり普及していない。この仮説を科学的に証明するため、本研究では、(1)本邦閉経後女性へのホルモン補充療法施行により、各種疾患の罹患率がどのように変化するか、その結果本邦女性の生命予後にどのような影響を及ぼすかを、医療統計学的手法を用いて検討する。(2)本邦の医師および女性に対してホルモン補充療法に対する意織調査を行い、今後のホルモン補充療法実施率がどのように変化するかを予想する。(3)前記2項の結果を踏まえ、今後ホルモン補充療法の普及が予測される場合の医療費の増減を医療経済学的に検討することを目的としている。平成10年度では、1)わが国におけるホルモン補充療法実施現況、今後の推移の把握を目的とし、日本各地の婦人科医および内科医・整形外科医計5000名に対して、ホルモン補充療法についての意織とその実施状況を問う質問票を発送した。2)ホルモン補充療法に対するわが国女性の意謀調査を行うため、北海道内の産婦人科、内科、人間ドック受診中の女性患者3000名への質問票調査を開始した。3)ホルモン補充療法がわが国において、各種疾患の発症率、その疾患による死亡率へどのような影響を及ぼすか、過去の患者データに基づき検索を開始した。
虚血性腸傷害の発症および修復へのエンドセリン-NO系関与の解析と治療薬の開発

ラットを用いて、一過性腸管虚血・血流再開通処置によって生ずる小腸粘膜障害における一酸化窒素(NO)の役割を調べ、さらに一酸化窒素合成酵素阻害剤の障害に与える影響を検討した。その結果、1時間虚血・血流再開通後より著明なNO産生量の増加が再開通後1時間値をピークとして3時間程度認められた。この時間経過は組織障害の指標である乳酸脱水素酵素(LDH)活性の変化とほぼ一致していた。また、顕微鏡観察での組織学的検索においても再開通後1時間から3時間後において傷害の度合いが最も大きかった。なお、虚血1時間処置だけでは、組織傷害の度合いは軽微であり、NO産生量も増加しなかった。血管永久結紮群では、NO産生の急激な上昇は認められなかった。したがって、一過性虚血・血流再開通によりNO産生系が活性化され、産生されたNOにより腸管組績が障害を受けたと考えられ、虚血性腸管障害にNO系が重要な役割を担っているものと推測される。また、一酸化窒素合成酵素阻害薬であるN^G-nitro-L-arginine methyl ester(L-NAME)1.0mg/kg-2.5mg/kgの虚血前投与により、虚血血流再開通後のこのNO産生量の増加は用量依存的に抑制され、LDH活性の増加も抑制された。さらに、組織学的検索によっても傷害の改善が認められた。したがって、低用量の一酸化窒素合成酵素阻害薬に虚血再開通により生じる腸管障害を改善する効果があることが示唆された。次に、定量的受容体オートラジオグラフィー法を用いて一過性腸管虚血・血流再開通処置によって生ずる小腸粘膜障害におけるエンドセリン受容体の変動について検討した。その結果、小腸粘膜障害部位およびその近傍において、ET_B受容体の増加が認められた。したがって、小腸粘膜障害にエンドセリン系の関与も示唆された。虚血性腸炎の成因については、高血圧や動脈硬化など血管側の因子だけでなく腸管側因子の関与も指摘されているが、まだ不明な点が多い。我々は、これまでに虚血性脳神経細胞障害の発症ならびにその修復過程にエンドセリン(ET)系および-酸化窒素(NO)系が関与していることを報告し、腸管においてもET系およびNO系の変動が虚血性腸炎の発症あるいは修復に重要な役割を担っている可能性が考えられる。そこで、我々は虚血性腸炎モデルラットを作製し、虚血性腸炎へのET系およびNO系の関与について検討し、さらに虚血性腸炎の薬物による治療の可能性を追求することを目的とした。まず、ラットをハロタン麻酔下に腹部正中切開を加え、回腸部の両端にチューブを接続し、回腸部を温生理食塩水にて灌流できるようにした。その後、前腸間膜動脈および後腸間膜動脈の各岐始部を動脈クリップにて1時間クランプし、虚血前および虚血血流再開通後経時的に温生理食塩水を腸管内に灌流し、灌流液中のNO産生量をNO測定装置により経時的に測定した。その結果、血流再開通後より著明なNO産生量の増加が3時間程認められ、その後徐々にNO産生量は減少していった。一酸化窒素合成酵素阻害薬であるNAMEの虚血前投与により、虚血血流再開通後のこのNO産生量の増加は用量依存的に抑制された。また、腸管障害の度合いを調べるために灌流液中の乳酸脱水素酵素(LDH)活性を測定した。

その結果、NO産生量の動きとほぼ一致したLDH活性の増加が認められ、このLDH活性の増加もNAMEの虚血前投与により抑制された。したがって、一過性虚血によりNO産性系が活性化され、産生されたNOにより腸管組織が障害を受けたと考えられ、虚血性腸管障害にNO系が重要な役割を担っているものと推測される。ラットを用いて、一過性腸管虚血・血流再開通処置によって生ずる小腸粘膜障害における一酸化窒素(NO)の役割を調べ、さらに一酸化窒素合成酵素阻害剤の障害に与える影響を検討した。その結果、1時間虚血・血流再開通後より著明なNO産生量の増加が再開通後1時間値をピークとして3時間程度認められた。この時間経過は組織障害の指標である乳酸脱水素酵素(LDH)活性の変化とほぼ一致していた。また、顕微鏡観察での組織学的検索においても再開通後1時間から3時間後において傷害の度合いが最も大きかった。なお、虚血1時間処置だけでは、組織傷害の度合いは軽微であり、NO産生量も増加しなかった。血管永久結紮群では、NO産生の急激な上昇は認められなかった。しかだって、一過性虚血・血流再開通によりNO産生系が活性化され、産生されたNOにより腸管組織が障害を受けたと考えられ、虚血性腸管傷害にNO系が重要な役割を担っているものと推測される。また、一酸化窒素合成酵素阻害薬であるN^G-nitro-L-arginine methyl ester(L-NAME)1.0mg/kg 2.5mg/kgの虚血前投与により、虚血血流再開通後のこのNO産生量の増加は用量依存的に抑制され、LDH活性の増加も抑制された。さらに、組織学的検索によっても傷害の改善が認められた。したがって、低用量の一酸化窒素合成酵素阻害薬に虚血再開通により生じる腸管障害を改善する効果があることが示唆された。次に、定量的受容体オートラジオグラフィー法を用いて一過性腸管虚血・血流再開通処置によって生ずる小腸粘膜障害におけるエンドセリン受容体の変動について検討した。その結果、小腸粘膜障害部位およびその近傍において、ETB受容体の増加が認められた。したがって、小腸粘膜障害にエンドセリン系の関与も示唆された。
ディスプレイとスピーカーの再配置による空間認知の拡張のための表現研究

本研究は、ディスプレイを中心に音を割り振って再生する従来の環境を崩して再配置し、新たな映像再生環境とサウンドデザインによって可能となる表現を模索している。本研究の研究期間は2年であり、当初の研究計画では1年目は「実験をして手法を確立すること」「機材を選定すること」を目的とし、2年目は「研究代表者が手法を使って作品展示すること(展示A)」「手法を体系化・シェアすること」「他者に本手法を使って作品制作させること(展示B)」という予定であった。しかし、申請時からメディア環境が変化しつつあることから、当初予定していた「機材の選定および購入」は見送る判断をした。本年度は研究計画を少し変更して、「実験をして手法を確立すること」「研究代表者が手法を使って作品展示すること」の2点を目標とし、プロトタイピングや実制作を通して本手法について知見を得て、可能性を探ることにした。本手法を使って制作した作品≪おれのチョロQ≫を、「できごととできごととできごとと(2018.08.24-08.31)」アラヤニノ(秋田)、「みかた・みえかた展2(2018.09.07-09.11)」ブカツドーギャラリー(神奈川)という展覧会で展示・発表した。制作・展示発表・フィードバックを通して、本手法について知見を積み重ね、考えを整理することができた。また、本作品そのものをサンプルとして、2年目計画の目標の1つである「手法のシェア」の準備に着手することができた。申請時とメディア環境が変化しつつあることから、本年度は機材の購入を見送る判断をしたが、身の回りで使用可能な機材を用いて習作や小作品を制作することによって、現時点でのメディア環境において適切な機材のスペックについて見込みをつけることはできた。また、小規模ではあるが、作品を制作し発表したことによって、知見の積み重ねと考えの整理、手法のシェアの準備に着手することができた。研究計画の通り、「機材の選定および購入」「手法を体系化・シェアする」「他者に本手法を使って作品制作させる(展示B)」という計画を実行する。最終年度は展覧会を計画・実施するので、制作依頼のする作家とのやりとりや、広報活動等の運営の部分も含めて計画的に進めていく。申請時からメディア環境が変化したため、機材の購入を見送ったため。次年度に機材の選定を行う予定。
微小トンネル接合における散逸効果の研究

微小な超伝導トンネル接合(微小ジョセフソン接合)は巨視的量子効果の研究の格好の舞台である。一個のク-パ-対のトンネルに伴う静電エネルギーの増加(4e^2/2C、Cは接合の電気容量)が温度やジョセフソン・エネルギーと・エネルギーと同程度の領域では、系の振る舞いは電極の秩序パラメタの位相差を一次元座標とする空間に余弦関数の周期ポテンシャルが存在する中を運動する仮想的な質点の運動と等価になる。有限温度で存在する準粒子トンネルや、接合に並列に付された抵抗器は、この運動に対する摩擦として働く。この研究の目的は摩擦が量子力学系に与える影響を調べることである。同一の基板上に、アルミニウムを電極とする単独の接合と、NiCr抵抗器と、抵抗器でシャントされた接合の三つを同じ条件で作成し、それぞれの電気伝導の温度依存性を数10mKの低温まで測定した。抵抗器の抵抗値が量子抵抗(h/4e^2=6.5kΩ)よりも十分小さいとき、単独の接合の抵抗が低温に向かって半導体的に増大する場合でも、抵抗器でシャントされた接合の抵抗は低温に向かって減少することを観測した。これは、摩擦を付加されたとき量子力学系の時間発展が遅くなるとする一般性のある理論をはじめて定量的に検証したことに相当する。
マレイン酸イルソグラジンを用いた歯肉上皮細胞の機能制御による歯周病予防法の開発

マレイン酸イルソグラジン(IM)は,Helicobacter.Pylori刺激によって誘導される胃粘膜上皮細胞のIL-8産生を抑制し,細胞間連絡能を促進することにより胃粘膜防護治療薬として臨床応用されている。これまでに研究者は,IMがAggregatibacter aetinomycetemcomitans(Aa)およびAaの外膜タンパク質OMP29刺激によって誘導されるヒト歯肉上皮細胞(HGEC)のIL-8産生促進を抑制すること,および細胞間結合(ギャップジャンクション,タイトジャンクション)の低下を回復することをinvitroの研究において明らかにした。今年度の研究では,AaがIL-8を介してギャップジャンクションの機能を低下させていることを明らかにした。さらにサイトカイン(IL-1β)刺激下のHGECに対するIMの効果を調べたところ,Aaに対する効果と同様にギャップジャンクションの回復が認められた。これらのことから,IMは細菌やサイトカインによる細胞間結合の破壊に対し,予防的に働くことが示唆された。また,F344ラットを用いた動物実験においてAaを歯肉上皮に塗布することにより歯肉上皮下に炎症所見が確認され,ラット好中球遊走因子(CINC-2)の発現が上昇することが確認された。しかしながら,IMを投与することにより,Aaによって誘導される炎症が抑制される傾向にあることが確認された。これらのことから,IMが歯肉上皮下の炎症を抑制することによって,歯周病予防薬としての可能性があることが示唆された。マレイン酸イルソグラジン(IM)層は,Helicobacter pylori刺激によって誘導される胃粘膜上皮細胞のIL-8産生を抑制し,ギャップジャンクションを介した細胞間コミュニケーション能を促進する作用を有している。IMはA.actinomycetemcomitans (Aa)の刺激によって誘導される歯肉上皮細胞の細胞間コミュニケーションの抑制や,サイトカイン産生を調節する可能性がある。本研究では,IMがIL-8産生とギャップジャンクション及びタイトジャンクションに及ぼす影響について調べた。ヒト歯肉上皮細胞(HGEC)にAa及びIMを作用させ,培養上清中のIL-8をELISA法で分析した。IL-8産生はAa刺激で増加したが,IMはその増加を抑制した。HGECにAa, IL-8,及びIMを作用させ,mRNAレベルでギャップジャンクションの構成タンパク質であるコネキシン43(CX43),タイトジャンクションの構成タンパク質であるオクルディン,クローディン,ZO-1のmRNA発現を分析した。CX43,オクルディン,クローディン,ZO-1 mRNA発現は,Aa刺激で減少した。Aaと共にIMを添加した場合,CX43,オクルディン,クローディン,ZO-1 mRNAの発現の減少は回復した。CX43 mRNAはIL-8の作用によって減少したが,IMを同時に添加した場合,CX43 mRNA発現の減少は抑制された。しかしながら,IL-8はオクルディン,クローディン,ZO-1のmRNA発現には影響を与えなかった。歯周病原性細菌の刺激によって誘導されるIL-8は歯肉上皮細胞の細胞間接着能を低下させると考えられる。IMは歯周病原生細菌によって歯肉上皮細胞から誘導される炎症性サイドカインの発現を抑制することによって,上皮細胞の接着を回復し,歯肉上皮組織の機能を維持する可能性が示唆された。このようなデータの結果を踏まえ最終年度となる来年度はIMの歯周病予防薬としての有用性についてさらに検討を進めたい。
異常タンパク質蓄積による神経変性疾患発症の分子機構の解明

E4B(-/-)ノックアウトマウスは胎生致死であった。一方、E4B(+/-)マウスはPurkinje細胞の変性を認め、運動失調(歩行障害)を示した。さらにE4Bの機能を詳細に解析するために、E4Bを神経特異的に欠損したマウス(E4B CKO)の作製を行い、行動学的解析や病理学的解析によりE4Bの機能を解析した。E4Bコンディショナルノックアウトマウス(E4B CKOマウス)は正常に発生したが、20週令までにほとんどが突然死を起こした。突然死の原因として癩癇発作が疑われたが、実際、癩癇誘発剤に対する感受性は野生型マウスと比較して明らかに高かった。このように、E4Bが神経変性の防御機構において極めて重要な分子であり、脳神経系におけるE4Bの基質探索の重要性が浮き彫りとなった。そこで、E4Bヘテロノックアウトマウスにおいて蓄積しているタンパク質(E4Bの基質候補)を種々のプロテオミクス技術を用いて探索を試みた。2D-DIGE法によって野生型マウスとE4Bノックアウトマウスの発現プロテオーム比較を行った。その結果、複数のスポットがE4Bノックアウトマウスにおいて増加していることが明らかとなった。これらの変動したスポットは質量分析計による同定を終え、現在、検証実験を行っている。さらに.超高感度nanoLC-タンデム質量分析計と安定同位体標識法を組み合わせることで、大規模なタンパク質の発現定量解析システムを行い、2D-DIGE法ではとらえることができなかった微量タンパク質の変動を見出した。また、E4Bの基質探索のための他の方法として、in vitroユビキチン化アッセイを用いたE4B依存的なユビキチン化タンパク質の検出システムを構築した。今後、これらの異なる手法で得られたE4B基質候補分子のリストを総合的に判断し、絞り込みを行ったうえで詳細な解析を進める予定である。ユビキチン・プロテアソーム系によるタンパク質分解が、ポリグルタミン病の病態へ関与していることが示唆されている。われわれはポリグルタミン病の一つであるMachado-Joseph病の原因遺伝子産物ataxin-3に対するユビキチン依存性分解酵素E4B(UFD2a)を同定し解析を進め、酵母two-hybrid法によりE4B結合タンパク質としてFEZ1を同定した。FEZ1は線虫の運動や神経軸索の束形成に関与していることが報告されているタンパク質UNC-76の哺乳類オルソログと考えられている。マウスにおいてFEZ1は脳に特異的に発現している。FEZ1がE4Bのユビキチン化の基質となる可能性を検討した結果、E4Bの過剰発現によりFEZ1のポリユビキチン化の亢進が認められ,それはPKCζによるリン酸化依存的であった。FEZ1上のポリユビキチン鎖を詳細に調べた結果、ユビキチン上のLys48ではなく、Lys27を介してポリユビキチン鎖形成が起きていることが判明した。このポリユビキチン鎖の役割を調べるために、E4B及びE4B(P1140A)変異体の安定発現PC12細胞株を作製したところ、NGF(nerve growth factor)やPKCζ-FEZ1依存的な神経細胞様突起の伸長がE4B(P1140A)発現細胞株において抑制された。ShRNAによりE4Bの発現を抑制するとNGFによる神経様突起形成の誘導が阻害されたことから、たしかにE4Bは突起形成に必要であることを見出した。以上より、E4BによるFEZ1のポリユビキチン化はユビキチン-プロテアソーム系による分解のための標識ではなく、神経様突起伸長のための機能修飾である可能性が示唆された。また、FEZ1コンディショナルノツクアウトマウスの作製を行い、現在解析を進めている。

また、E4Bの基質探索のための他の方法として、in vitroユビキチン化アッセイを用いたE4B依存的なユビキチン化タンパク質の検出システムを構築した。今後、これらの異なる手法で得られたE4B基質候補分子のリストを総合的に判断し、絞り込みを行ったうえで詳細な解析を進める予定である。
骨軟部腫瘍におけるMAGE遺伝子の発現

骨腫瘍細胞株におけるMAGE遺伝子の発現をmRNAおよび蛋白レベルにて確認した。また、HLA-class 1及び-A2分子の癌細胞表面上での発現を解析し、免疫療法の有用性について検討した。骨腫瘍細胞株として、20種類の骨肉腫細胞株と1種類の軟骨肉腫細胞株を用いた。mRNAレベルの解析として先ずこれらの細胞株よりAGPC法を用いてtotal RNAを抽出し、cDNAを合成した後、特異的プライマーを用いてRT-PCR法にて増幅した。そしてPCR productを電気泳動法にて確認した。また、蛋白レベルでの解析は、MAGE-1及び-4に対するポリクロナール抗体を用いてwestern blotting法にて検討した。細胞膜表面のHLA分子の解析はそれぞれ特異的なモノクローナル抗体を用いてFACScanにて行なった。mRNAレベルにおいてMAGE-1,-2,-3,-4,-6,はそれぞれ11(52.4%)、10(47.6%)、10(47.6)、1(4.8%)、10(47.6%)種類の細胞株に発現していた。また、12種類(57.1%)の細胞株にいづれかのサブファミリーが発現していた。蛋白レベルにおいては、MAGE-1で8種類(38.1%)、MAGE-4で1種類(4.8%)に発現していた。mRNAレベルにて1種類以上のサブファミリーが発現していた12種類の細胞株においてHLA-class 1及び-A2分子の膜表面での発現を検討したところ、HLA-class1分子は、ほとんどすべての細胞株において陽性を示した。HLA-A2分子は3種類(25%)において陽性を示した。MAGE-3遺伝子はHLA-A1または-A2拘束性に発現されるが、日本人の約半数がHLA-2陽性である事と、MAGE-3遺伝子が約50%の細胞株に発現している事を考慮に入れると、本邦悪性骨腫瘍患者に対するMAGE遺伝子産物を用いた癌ワクチン療法の有陽性が示唆された。
ヒト悪性黒色腫組織におけるα-アクチンの意義に関する研究

ヒト悪性黒色腫組織をホモジェナイズし、抗α-アクチン抗体を用いてウエスタン・ブロット法によるα-アクチン発現量をみると、良性の色素性母斑にくらべバンドが著明に減少していることを既に報告した。今回種々の病型の悪性黒色腫のパラフィン切片を用いて抗α-アクチン抗体による免疫組織化学染色をおこない、腫瘍内および周辺の血管におけるα-アクチンの染色パターンとウエスタン・ブロット法の解析結果との比較、さらには予後との関連性について検討した。悪性黒色腫の表皮内限局型(melanoma in situ)では腫瘍巣に近接する真皮上層の小血管壁のα-アクチンは母斑とほぼ同程度の染色性を示した。原発性の肢端黒子型では腫瘍巣内の小血管のα-アクチンの染色性は不均一で明瞭な血管と不明瞭な血管が混在していた。腫瘍の浸潤部の血管の染色性が減弱している傾向がみられた。結節型では腫瘍が深く浸潤している部分でさらに染色性が減弱していた。原発性悪性黒色腫の場合腫瘍巣周辺の血管壁のα-アクチンの染色性はかなり保持されていた。転移性の場合では皮膚転移巣では腫瘍巣内のみならずその周囲の血管もα-アクチン染色性が減弱していた。リンパ節転移巣ではリンパ節内の転移巣内血管は染色性が著明に減弱していたが、辺縁洞からリンパ節被膜部の血管は明瞭にα-アクチンが染色されていた。悪性黒色腫組織の抗α-アクチン抗体を用いた酵素抗体法による血管の染色性の結果は以前おこなったウエスタン・ブロット解析によるα-アクチンの半定量的分析とほぼ相関していた。また染色性の減弱の程度と悪性黒色腫のステージの進行・患者の予後とはほぼ相関したものと思われた。ヒトの色素細胞系病変部の皮膚生検組織中より抽出された蛋白質のうち、色素性母斑や老人性色素斑などの良性組織におけるのと比べて悪性黒色腫で検出される血管平滑筋型αアクチンが減少していた。このαアクチンの組織中での発現細胞を同定するために、モノクロ-ナル抗平滑筋型αアクチン抗体を用いた免疫組織化学染色を行った。色素性母斑や皮膚線維腫などの良性組織ではαアクチンが小動脈壁の平滑筋細胞や毛細血管の周細胞に豊富に検出され,間質の筋線維芽細胞にも少量検出された。悪性黒色腫では黒色腫細胞にほとんど発現はみとめられず,腫瘍組織血管にもごくわずかしかαアクチンが検出されないのみならず,症例によっては腫瘍周辺部の既存血管と思われる血管にも反応が弱くαアクチンの減少を示していた。従って正常組織や良性病変部では本来αアクチンを発現する細胞に対して,悪性黒色腫が何らかの抑制作用を持つ場合があることが考えられた。そこで悪性黒色腫細胞のこのような細胞に対する作用を検討するために,ヒト色素性母斑から遊走法で培養した細胞にヒト悪性黒色腫細胞株Mー14の培養上清を加えた。対照の線維芽細胞培養上清を加えた場合豊富なαアクチンの発現が認められたのに比べ,Mー14培養上清はαアクチン発現に抑制効果を持つことがわかった。ウシ網膜より培養した網膜毛細血管周細胞に対しては、Mー14培養上清はこのような抑制効果を示さず,種特異性あるいは臓器特異性が存在する可能性も考えられた。今後はこのような作用を持つ因子をさらに詳細にその特徴を調べるとともに,ヒト生検組織中のαアクチンの計量化を試み,予後などとの関連性を検討する予定である。ヒトの色素細胞系病変部の皮膚生検組織中血管平滑筋型αアクチンを免疫組織化学的に検討すると、色素性母斑や老人性色素斑などの良性疾患では小動脈周囲の平滑筋細胞、毛細血管の周細胞、立毛筋などに豊富に陽性所見がみとめられるのに対し、悪性黒色腫では腫瘍内血管にごく弱い陽性像をみとめるのみで、腫瘍辺縁の既存血管と思われる比較的径の大きい血管にも反応が弱く、αアクチンの発現減少を示唆していた。そこで良性組織のαアクチン発現細胞に対し悪性黒色腫細胞が何らかの発現抑制因子を放出する可能性を考え、培養細胞の系を用いて検討した。まずヒト色素性母斑より遊走法で細胞培養を行い、蛍光抗体法でαアクチンの発現を確認した。さらに培養悪性黒色腫細胞株Mー14の培養上清を添加して2日間培養後、ウエスタン・ブロット解析を行ったところ、対照に用いた線維芽細胞培養上清に比べて、Mー14培養上清はαーアクチン発現に抑制作用を示した。αーアクチンを発現することが報告されている。ラット培養線維芽細胞株3YIに対しても、Mー14培養上清はαアクチン発現抑制作用を示した。細胞より抽出したmRNAでαアクチンのノ-ザンブロットを行ったところ、添加12時間後にαアクチンmRNAの減少がみられた。継時的に回収した細胞のウエスタンブロットでは、一回のM14培養上清添加後18時間後よりαアクチンは減少し、24時間から48時間の間減少した状態が続き、3日目には回復し始めていた。これらの性質は血管平滑筋に対する血小板由来成長因子(PDGE)の作用に類似していたことから、抗PDGF抗体でM14培養上清を前処理したところ、αアクチン抑制活性は減弱した。従って悪性黒色腫細胞によって産生されるPDGF様物質が良性細胞のαアクチンの発現を抑制することが示された。

ヒト悪性黒色腫組織をホモジェナイズし、抗α-アクチン抗体を用いてウエスタン・ブロット法によるα-アクチン発現量をみると、良性の色素性母斑にくらべバンドが著明に減少していることを既に報告した。今回種々の病型の悪性黒色腫のパラフィン切片を用いて抗α-アクチン抗体による免疫組織化学染色をおこない、腫瘍内および周辺の血管におけるα-アクチンの染色パターンとウエスタン・ブロット法の解析結果との比較、さらには予後との関連性について検討した。悪性黒色腫の表皮内限局型(melanoma in situ)では腫瘍巣に近接する真皮上層の小血管壁のα-アクチンは母斑とほぼ同程度の染色性を示した。原発性の肢端黒子型では腫瘍巣内の小血管のα-アクチンの染色性は不均一で明瞭な血管と不明瞭な血管が混在していた。腫瘍の浸潤部の血管の染色性が減弱している傾向がみられた。結節型では腫瘍が深く浸潤している部分でさらに染色性が減弱していた。原発性悪性黒色腫の場合腫瘍巣周辺の血管壁のα-アクチンの染色性はかなり保持されていた。転移性の場合では皮膚転移巣では腫瘍巣内のみならずその周囲の血管もα-アクチン染色性が減弱していた。リンパ節転移巣ではリンパ節内の転移巣内血管は染色性が著明に減弱していたが、辺縁洞からリンパ節被膜部の血管は明瞭にα-アクチンが染色されていた。悪性黒色腫組織の抗α-アクチン抗体を用いた酵素抗体法による血管の染色性の結果は以前おこなったウエスタン・ブロット解析によるα-アクチンの半定量的分析とほぼ相関していた。また染色性の減弱の程度と悪性黒色腫のステージの進行・患者の予後とはほぼ相関したものと思われた。