hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
身体診察実習に伴う心理的障壁を克服する新たな学習モデルの開発

医師や看護師の卒前教育では身体診察の技術習得が求められている。本研究目的は、一般的に行われている学生同士で行う身体診察演習において羞恥心などの学生の心理的負担が学習効果や障壁につながる要因を明らかにし、新たな学習モデルを開発するため、先行研究レビューと日本で実施されている身体診察演習の現状を整理しその課題を抽出した。医学教や看護教育において、羞恥心や侵襲を伴う技術習得のための演習では、学習者に対する倫理的配慮や説明と同意について再考する必要性があることが示唆された。今後の研究では、これらの学習効果の根拠を示すことと適正な学習環境を整備する為の取り組みが必要であると考える。本研究の目的は、医師や看護師が卒前教育より求められる身体診察技術習得の過程において、一般的な学習方略である学生同士で行う身体診察実習の際に生じる心理的負担などの教育的課題や学習の障壁となる要素を明らかにしたうえで、効果的な身体診察の実習環境を提供するためのモデルを開発することである。今年度は、これまでの研究成果をふまえ以下の研究活動を行った。(1)学生同士で行う身体診察実習の先行研究の再検討:これまで収集した医療系専門職の身体診察実習について再検討し、新たな文献や資料を収集し検討した。専門領域や卒前卒後により実習領域が広範囲に及ぶため、看護学領域の身体診察実習カリキュラムに焦点を絞り先行研究を検討した。(2)看護学領域の身体診察実習カリキュラムに関する先行研究について、文献レビューを行った。学生同士で行う身体診察は、世界各国で活用されており、コストの面において利点がある一方、実施においてはジェンダーに関する課題や心理面の障壁が報告され、その方略の活用についての課題が潜在することが明らかとなった。本成果はHannover(ドイツ)で開催された国際学会European Nurse Directors Association and World Academy of NursingScience(ENDA & WANS Congress 2015)で口演による発表を行った。(3)今後日本国内で行われている身体診察実習に関する実態を調査することに向けた情報収集を行い、作業内容の検討を行った。当初の計画では、初年度では日本国内で行われている身体診察実習についての実態調査を行う予定であったが、調査の作業内容を検討するまでにとどまり、実施までは至らなかったため。本研究の目的は、医師や看護師が卒前教育で求められる身体診察技術習得の過程において、一般的な学習方略である学生同士で行う身体診察(Peer Physical Examination: PPE)の際に生じる心理的負担などの教育的課題や学習の障壁となる要素を明らかにしたうえで、効果的な身体診察の実習環境を提供するためのモデルを開発することである。今年度はこれまでの研究成果をふまえて以下の研究活動を行った。日本国内で行われている身体診察実習の現状を調査実施にむけて、調査項目の抽出、母集団と選定、調査手段の選定、および研究者の所属する施設内倫理審査委員会の倫理審査を受審した。調査の対象となる身体診察技術には複数の実習項目を含むため、日本の医学、看護学の卒前カリキュラムで行われている、侵襲や羞恥心を伴い、身体診察技術の実習内容を広くカバーするような質問項目を抽出し、それらを担当する教員を対象としてWebアンケート調査を実施する準備を整えたところである。初年度に行った文献レビューに関しては論文作成中である。国際雑誌に掲載された先行研究によりPPEの多様さと学生の心理的負担の大きさ明らかとなり、そこには文化的影響による違いが生じる可能性がでてきた。また国によりその対応が異なっていたため、日本における侵襲や羞恥心を伴う実習の現状を詳しく調査する必要性を考慮し、調査の手段や内容を再検討する必要がでてきたため。本研究の目的は、その学習において一般的に行われている学生同士で行う身体診察演習での羞恥心による学生の心理的負担が教育の効果や学習の障壁につながる要素を明らかにし、適正な身体診察の実習環境を提供するモデルを開発することにある。平成29年度はこれまでの研究成果を踏まえて以下の研究活動を行い、日本で実施されている身体診察演習の現状を整理しその課題を抽出した。(1)日本国内で行われている身体診察演習の現状を把握するために、身体診察演習の実施経験がある教職員、医学部生を対象にWeb調査を実施した。調査内容は、回答者の属性、指導者としての身体診察実習の実施経験、医学生としての演習経験、演習で行った身体診察の種類や身体部位、その際に生じた心理的負担の有無や程度、演習に関する説明や同意の実施状況や倫理的配慮の有無について尋ねた。調査対象者は医学教育に従事または関心をもつ医療職者や学生を対象としたメーリングリスト登録者等である。調査の結果から、学生同士で行う侵襲や羞恥心を伴う演習に対する倫理指針やガイドラインの必要性と演習前に学生に対する説明と同意を再考する必要性が確認され、その内容として、羞恥心を伴う患者役を学生が行うことに関する倫理的配慮、演習内容や環境に関する指針、演習可能な項目学生に対して要求してよい許容範囲など具体的課題が挙げられた。(2)市中病院で行われている臨床看護師を対象とした身体診察技術研修において、布地の上からでも聴診を妨げない診察衣を利用した診察技術演習と従来の演習方法とを比較するための事前検証を実施した。(3)初年度、前年度に行った学会発表の成果は学術雑誌への投稿準備中である。

本研究目的は、一般的に行われている学生同士で行う身体診察演習において羞恥心などの学生の心理的負担が学習効果や障壁につながる要因を明らかにし、新たな学習モデルを開発するため、先行研究レビューと日本で実施されている身体診察演習の現状を整理しその課題を抽出した。医学教や看護教育において、羞恥心や侵襲を伴う技術習得のための演習では、学習者に対する倫理的配慮や説明と同意について再考する必要性があることが示唆された。今後の研究では、これらの学習効果の根拠を示すことと適正な学習環境を整備する為の取り組みが必要であると考える。(1)日本国内で行われている身体診察実習についての実態調査を行う。(2)実態調査結果の分析により、日本の身体診察実習における学生の心理的負担や学習障壁の要因について明らかにし、学習効果との関連性を探索する。(3)(1)および(2)を根拠とした仮説を設定し、その検証を行う。1.文献レビューに関する論文執筆を行う2.侵襲や羞恥心を伴う学生同士で行う実習に関する全国調査を、Webアンケートシステムを用いて実施する3.羞恥心を伴う身体診察の実際の現場で適用可能な方略や学習環境の条件について学習効果の側面から検証する医学教育・看護学教育当初の計画では、日本国内で行われている身体診察実習についての実態調査を行う予定であったが、実施に至らなかったため。年度内に予定していた全国調査の予定であったが実施に至らなかったため。次年度に日本国内における身体診察実習についての実態調査にかかる費用として使用する予定である。侵襲や羞恥心を伴う学生同士で行う実習に関する全国調査を、Webアンケートシステムを用いて実施し、その調査やデータ入力に係る費用として使用する予定である。
離散数理におけるP進的方法とその応用

本研究においては主としてp進解析学の一分野と離散最適問題を取り上げた。研究者の1人はベルヌイ数または第1種指標に対する一般ベルヌイ数のp進的性質を計算機による検証を援用しながら詳しく調べた。その結果、第1種指標に対するp進L関数について、一般ベルヌイ数の指標和によるp進近似を精密化する手法により、極限においてFerrero-Greenbergの公式を導く型の、p進L関数の0における導関数値の合同近似式を得た。また、そこで用いた方法をp進ゼータ関数にも応用するため、ベルヌイ数またはタイヒミュラー指標の巾に対する一般ベルヌイ数の次数の多項式で表されるp進近似式を求めた。この場合は極限へ移行できる形には至っていないがpの高い巾を法とする合同式の具体的な形は応用に際して役立つものと思われる。研究者の他の一人は、結合型最適経路問題の研究において次のような結果を得た。不変埋め込み原理を用いることにより、結合型最短経路問題を解く再帰方程式を導き、その解の一意性を証明するとともにその解に収束する逐次関数列を構成した。また、ネットワークの最適化を含む一般化された多くの最適経路問題において、それぞれと密接に関連する双対問題を対応付け、双対理論を展開した。それによって2つの関連する再帰方程式の系を同時に解く方法を見いだし、双対問題により目的の問題の解を容易に得るアルゴリズムを確立した。さらに別の研究者は多数の自作の数値実験用プログラムに改良を行いデータを収集中である。本研究で計算機の利用も中心的な手段としたことによって興味ある計算結果や教育にも利用できる主題がいくつか得られた。高次Dedekind和のp進的な性質をより詳しく調べるため,そのp進的補間関数であるp進Dedekind和の1次の係数を問題にした.隣接する問題にp進L関数の0における1階導関数値あるいはp進Euler定数の研究があるが,本年度はこれに対する結果が得られた.Bernoulli数のより深いp進的近似,すなわち,Bernoulli数の次数をnとするとき,n,n-1,n-2,n-3をmodulusに含む近似式を調べ,次の結果を得た.1. Teichmu ller指標に属する一般Bernoulli数に対する上記の近似式.p進Dedekind和の場合もそうであったが,p=2,p=3,p≧5の場合について異なる特徴をもつことがわかった.p=2の場合はn(n-1)(n-2)(n-3)の2進指数付値に8を加えた指数をもつ2のべきを法として,p=3の場合は同じものの3進指数付値に5を加えた指数をもつ3のべきを法として,p≧5の場合はn(n-1)のp進指数付値に1を加えた指数をもつpの巾を法としてのnの多項式による近似が得られた.これらはp進ゼータ関数の0における微分係数および1のまわりのローラン展開の定数項(すなわちEuler定数)に関する情報を与えるものである.1999年2月20日/日本数学会九州支部例会で報告した.2.一般Bernoulli数と奇素数pに関して,上と同様な方向でWittの公式の近似精度を上げることができた.それによって,導手がpと素な成分を含む第1種指標の場合に,Ferrero-Greenbergの公式(p進L関数の0における微分係数に対する)の別証明を得た.同2月4日-6日/章田学術会第5回日韓整数論セミナーで報告した.研究分担者も,自然数解をもつ不定方程式,離散最適化問題その他において,成果をあげた.一般Bernoulli数や高次Dedekind和のp進解析的補間関数であるp進L関数およびp進Dedekind和の性質を計算機による検証を取り入れながら詳細に調べることが本研究の目的の1つであった.

Bernoulli数の次数が素数pに関して特殊な形のものであるときp進L関数やp進Dedekind和のそれに対応する部分の性質を通常よりも詳しく調べることができ,(1)p進ゼータ関数に含まれるp進Euler定数の合同式近似,(2)P進L関数の0での微分係数の合同式近似,において次のような成果が得られた.(2)は極限へ移行すればFerrero-Greenbergの公式と呼ばれるよく知られた結果を与えるもので,一般Bernoulli数の指標和でのp進近似を精密化することによって得られた.極限における等式は既知であるものの,合同式近似により収束の様子が詳しく捉えられたことが応用に際して重要なことと思われる.(1)においては計算機による検証が証明を進めるのに特に効果的であった.素数pをパラメータとする究極的な形の予測がまだつかない段階にとどまっているが,副次的ないくつかの計算結果が得られた.たとえば整数((p-1)!1+1)/pがpで割り切れるような素数pは200万以下では5,13,563だけである.この整数のpを法とする値がー般にどんな意味を持つかはまだわかっていない.p進Dedekind和に関する上と同様の(1)および(2)も重要と思われるため同じ方法での可能性を探ることを含めて引き続き研究対象としたい.本研究を分担した丸山は,離散最適化問題の分野で著しい成果をあげた.通信ネットワークにおける伝達ロスを最小にする経路設定への応用などが期待される研究である.実社会へ応用できるアルゴリズムの最適化を考察対象としているため非常に価値ある研究といえることを特筆したい.
カンナビノイド受容体の内因性リガンドとしてのアナンダミドの生合成と代謝

マリファナの有効成分であるカンナビノイドが特異的に結合する受容体が脳(CB1)や末梢組織(CB2)に見出され、その内因性リガンドとしてアラキドノイルエタノールアミン(アナンダミド)と2-アラキドノイルグリセロール(2-AG)が同定され、現在活発な研究対象となっている。本研究計画では、これらの生合成と代謝を、その測定法と生理活性と関連づけて追究することを目的として、以下の成果を得た。1)代謝酵素の研究:アナンダミドを加水分解してその生理活性を失わしめる酵素が、脳や肝に見出され、山本尚三らは部分精製して、広い基質特異性と反応の可逆性を示し、このことは酵素のcDNAのクローニングと発現によって確認された。注目すべきは、同じ酵素が2-AGも加水分解することである。この酵素がカンナビノイド類によって阻害されることが、山本郁男らによって報告されている。生合成に関しては、上記の酵素の逆反応は生理的とは思われず、N-アラキドノイルホスファチジールエタノールアミンの生合成とそのホスホリパーゼDによる水解の経路が、和久ら、工藤らによって示唆されている。2)測定法の研究:アナンダミドの蛍光誘導体化とそのHPLCによる分画定量が今井らによって、また、GC-MSによる定量法が山下らによって開発された。3)生理作用の研究:和久らは2-AGがリガンドとなることを発見し、2-AGが細胞内カルシウムの一過性上昇を起こすことを見出した。また、種々の類縁体の結合実験から、CB1は2-AGの構造を厳密に認識するが、アナンダミドは部分活性薬となることが示された。工藤らはコラーゲン誘発血小板凝集をアナンダミドが阻害することを見出し、その機構を解析した。さらに山本郁男らは、カンナビノイドとアナンダミドのカタレプシーや体温降下の作用に対する交叉耐性を検討した。宮本らは中枢作用のないCB2特異的アゴニストを開発している。1)測定法の開発と分布検討:今井らは蛍光誘導体化試薬DBD-COC1を用いた蛍光HPLC法、および液体クロマトグラフィー-大気圧化学イオン化質量分析法によって、アナンダミドとその類縁体の分離定量法を開発した。和久らはラットの脳に含まれるアナンダミドの量を調べた結果、数pmol/g tissueとごく僅かしか含まれていないことを示した。2)生理作用:工藤らの知見は、ラット血小板にはCB1とCB2受容体が発現しており、アナンダミドはCa依存的Kチャネルを活性化して、低濃度コラーゲン誘発血小板凝集を阻害することを示唆した。また、和久らによって、アナンダミドだけでなく、2-アラキドノイルグリセロールも内在性カンナビノイド受容体リガンドであることが明らかとなった。3)生合成:リン脂質の1位に含まれるアラキドン酸が一旦PEのアミノ基に転移してN-アラキドノイルPEが生成し、これがさらにホスホリパーゼDの作用によって分解してアナンダミドが生成するのが、主要経路であることが和久らによって示された。また、山本尚三らはラットの各組織のアナンダミド水解酵素でも、可逆的にアナンダミドを作る活性を示した。

4)代謝:山本尚三らはラットの各組織を調べて、脳や肝の他にも、胃や小腸にもアナンダミド水解酵素があるが、それが混在する脂質様物質によって阻害されて見かけ上低値を示すことを見出し、このことはノーザンブロットの知見によって支持された。山本郁男らは、アナンダミド水解酵素活性のマウス臓器分布を検討して、主に肝と脳のミクロソーム画分に認めた。これらの活性は、重金属(Hg,Cu,Se)およびフェニルメチルスルフォニルクロリドにより強く阻害された。また、脳ミクロソームの酵素活性は、カンナビノイドにより阻害されたが、肝の酵素は阻害されなかった。肝ミクロソームの酵素を各種クロマトグラフィーを行い、約100倍に精製した。1)アナンダミド微量測定法の開発(分担:今井一洋、山下幸和):ラット脳から抽出したアナンダミドをDBD-COClで蛍光誘導体として、HPLCで分離定量する方法を検討し、ほぼ満足できる条件を見出した。GC-MSによる定量法も検討された。2)アナンダミド分解酵素の研究(分担:山本尚三、山本郁男) :アナンダミド水解酵素活性と合成酵素活性をラットの各臓器についてスクリーニングしたところ、肝、脳など多くの臓器では水解活性と合成活性がほぼ近い値であったが、小腸では水解活性が遥かに低く、種々検討した結果、組織に含まれる脂質が水解酵素活性を著明に阻害することが明らかになった。また、ラット肝のアミド水解酵素のcDNAを発現させたところ、水解酵素と合成酵素が併行して現れ、1つの酵素が両反応を可逆的に触媒することを確認した。さらに、ある種のカンナビノイドおよび代謝物が、水解酵素を阻害することが見出された。3)アナンダミドの生物活性の研究(分担:和久敬蔵、工藤一郎、宮本積) :もう1つのカンナビノイド受容体リガンドとして見出された2-アラキドニルグリセロールが、電位依存性カルシウムチャンネルを抑制することが示された。さらに、カンナビノイド受容体アゴニストとして新規化合物JTE-614が見出され、末梢型受容体CB2に高い親和性をもつことが見出され、その抗炎症作用も報告された。また、アナンダミドがコラーゲン誘発の血小板凝集を、特異的に阻害することが見出された。マリファナの有効成分のカンナビノイドが特異的に結合する受容体の内因性リガンドとして、アラキドノイルエタノールアミン(アナンダミド)と2-アラキドノイルグリセロール(2-AG)が同定された。本研究計画では、これらの1)代謝酵素、2)微量測定法、3)生理作用という3つの分担研究課題をそれぞれ推進することによって、アナンダミドの生合成と代謝、ひいてはその生理作用の調節の仕組みを解明することを、研究目的としている。今年度はそれぞれ以下の研究成果を得た。1)代謝酵素の研究(山本尚三):ラットのアナンダミド水解酵素cDNAを発現させて得たヘキサヒスチジンをもつ組換え酵素を精製して、水解反応と合成反応の可逆性を示し、平衡定数を求めた。また、この酵素が2-AGを水解することも明らかにされた。2)測定法の研究(今井一洋):試料の蛍光誘導体化後に、固相抽出精製とカラムスイッチングHPLCを導入して、アナンダミドの鋭敏なピークが検出されるようになった。3)生理作用(和久敬蔵、山本郁男、宮本積):種々の誘導体と受容体CB1との結合を検討して、CB1が2-AGの構造をかなり厳密に認識し、アナンダミドは部分活性薬として作用することを明らかにした。また、アナンダミドとカンナビノイドの交叉耐性が検討された。さらに、CB2に特異的なリガンドとして、既知のJTE-614HCIの他にJTE-715を見出し、cAMPレベルを上昇し、モデル動物で抗炎症作用が示された。
可逆量子磁束回路を用いた熱力学的限界を超える超低エネルギー集積回路技術の創成

本研究は、低エネルギー動作を特徴とする断熱的量子磁束回路(AQFP)を用いた双方向演算が可能な可逆回路の学理を明らかにし、論理回路の熱力学的極限を超える究極の低消費エネルギー集積回路を実現する。これにより回路の消費エネルギーを半導体回路に対して6桁以上低減し、冷却電力を考慮しても十分な優位性を生み出す。本研究は可逆AQFPを中核技術とし、回路設計技術、新規可逆回路、プロセッサアーキテクチャ、磁性体を用いた位相シフトAQFP、3次元集積回路技術を研究し、超省エネ集積回路の基盤技術を確立する。最終目標として100nW以下の動作が可能な4b可逆AQFPプロセッサの実現を目指す。
中咽頭癌における治療効果予測因子としてのYB-1遺伝子発現の解明

扁桃扁平上皮癌におけるY-ボックス結合タンパク1(YB-1)の核内発現が認められたが、全症例には認めらなかった。Human Papillomavirus(HPV)-DNA陽性例は24例(HPV-DNA16型19例、18型1例、31型2例、35型1例、58型1例)の31%で、陰性例は53例(69%)であった。HPV関連扁桃癌は角化傾向が強く高分化型が多い傾向にあった。HPV関連扁桃癌と非HPV関連扁桃癌におけるYB-1の発現については、HPVの発現や抗癌剤への感受性、および生命予後と有意な相関はなかった。H25年度の研究目標)頭頸部癌の中でも扁桃扁平上皮癌におけるY-ボックス結合タンパク1(YB-1)の核内発現がHuman Papillomavirus(HPV)感染や抗癌剤への感受性、予後と関連するか検討することである。対象)2000年1月2009年12月まで当院で初回治療を行った扁桃原発中咽頭癌症例である。方法)生検もしくは手術の際に採取した扁桃原発中咽頭癌組織のホルムアルデヒド固定パラフィン包埋標本を用いてDNAを抽出し、multiplex PCR法にてHPVーDNA型判別を行った。その上で、HPV関連扁桃癌と非HPV関連扁桃癌に区分し、癌の浸潤形態の相違、in situ hybridization法によるHPV局在証明と同時に免疫学的手法を用い酵素抗体法によるYB-1の発現を解析した。結果)対象の扁桃原発中咽頭癌は77症例であった。年齢は37歳87歳(平均63.5歳)であった。手術治療主体64例、放射線化学療法主体31例であった。HPV-DNA陽性例は24例(HPV-DNA16型19例、18型1例、31型2例、35型1例、58型1例)の31%で、陰性例は53例(69%)であった。なお現在、HPV関連扁桃癌と非HPV関連扁桃癌におけるYBー1発現、扁桃扁平上皮癌においてYB-1の発現とHPV感染には関連を検討している。H26年度の研究目標)頭頸部癌の中でも扁桃扁平上皮癌におけるY-ボックス結合タンパク1(YB-1)の核内発現がHuman Papillomavirus(HPV)感染や抗癌剤への感受性、予後と関連するか検討することである。なお現在、HPV関連扁桃癌と非HPV関連扁桃癌におけるYBー1発現、扁桃扁平上皮癌においてYB-1の発現とHPV感染には関連を検討した。目的)頭頸部癌の中でも扁桃扁平上皮癌におけるY-ボックス結合タンパク1(YB-1)の核内発現がHuman Papillomavirus(HPV)感染や抗癌剤への感受性、予後と関連するかを検討する。また、HPV関連扁桃癌と非HPV

関連扁桃癌におけるYBー1発現、扁桃扁平上皮癌においてYB-1の発現とHPV感染には関連を調査したが、有意な相関性はなかった。扁桃扁平上皮癌におけるY-ボックス結合タンパク1(YB-1)の核内発現が認められたが、全症例には認めらなかった。Human Papillomavirus(HPV)-DNA陽性例は24例(HPV-DNA16型19例、18型1例、31型2例、35型1例、58型1例)の31%で、陰性例は53例(69%)であった。HPV関連扁桃癌は角化傾向が強く高分化型が多い傾向にあった。HPV関連扁桃癌と非HPV関連扁桃癌におけるYB-1の発現については、HPVの発現や抗癌剤への感受性、および生命予後と有意な相関はなかった。H26年度は本研究のRetrospectiveな部分が多く、研究失敗などでの時間を要することが少なかった。咽頭HPV関連扁桃癌と非HPV関連扁桃癌におけるYBー1核内発現、扁桃扁平上皮癌におけるYB-1の発現とHPV感染の関連、および化学療法抵抗性についても検討する。H25年度は本研究のRetrospectiveな部分が多く、研究失敗などでの時間を要することが少なかった。検査試薬(硫酸ナトリウム溶液)に不足が生じ、実施計画を遂行するために購入が必要であった。HPV関連扁桃癌と非HPV関連扁桃癌におけるYBー1核内発現、扁桃扁平上皮癌におけるYB-1の発現とHPV感染の関連、および化学療法抵抗性についても検討する。組織の脱灰完了後に、硫酸ナトリウム溶液で中和処理する必要があった。
生理的酸化ストレスに起因する肝線維化と発癌の特異的検出・評価系の構築

慢性肝疾患の進展には酸化ストレスの関与が指摘されているが、活性酸素は肝細胞傷害や炎症によって発生するため、酸化ストレスが単独で肝線維化進展に与える影響を評価することは困難であった。今回、ミトコンドリア由来の活性酸素を惹起可能なマウス(Tet-mev-1)から肝細胞を分離したところ、ミトコンドリア膜電位の変化が観察された。また、Tet-mev-1マウスに対する高脂肪・高ショ糖食の給餌は肝組織におけるCCリガンドの発現を増強させたが、線維化所見は認められなかった。酸化ストレスと高脂肪食の負荷により肝組織中のKupffer細胞数は激減しており、線維化進展におけるKupffer細胞の重要性が示された。酸化ストレスが非アルコール性脂肪肝炎(Non-alcoholic steatohepatitis, NASH)やC型慢性肝炎の進展に関わることは広く認識されているが、肝細胞壊死に伴う炎症反応などの影響が大きく、酸化ストレスが肝線維化を促進させる機序は不明であった。本研究は、生体内の酸化ストレス発生量を調節可能な遺伝子改変マウスを用いて、肝線維化進展に及ぼす酸化ストレスの影響を直接的かつ特異的に検出する評価系を構築することを目的とした。ミトコンドリア電子伝達系のsuccinate dehydrogenasecytochromeb (SDHC)遺伝子に変異を有し、テトラサイクリン誘導下に活性酸素を過剰産生するトランスジェニックマウス(Tet-mev-1)から分離された肝細胞では、ミトコンドリア膜電位の変化が見られ、これと共培養した星細胞のコラーゲン遺伝子プロモーター活性は3.5倍に増加した。また、本マウスの肝細胞では野生型マウス由来の肝細胞と比較して、CCL3, CCL4, CCL8, CCL12などのCCケモカインリガンドの発現が20倍ないし300倍と著しく増加していた。本マウスに高脂肪・高ショ糖食を給餌すると、これらのケモカインの発現が相乗的に増加した。以上の結果より、ミトコンドリア由来の酸化ストレスはCCケモカインの発現増加を介して肝線維化を直接的に進展させること、またその作用は高脂肪・高ショ糖食の給餌により相乗的に増強されることが明らかになり、NASH進展における食事負荷と酸化ストレスの関与を解明する上で有用なモデルになり得ると考えられた。酸化ストレスが非アルコール性脂肪肝炎(Non-alcoholic steatohepatitis, NASH)やC型慢性肝炎の進展に深く関わることは広く認識されているが、肝細胞壊死に伴う炎症反応などの2次的影響が大きく、酸化ストレスの影響を純粋に評価するには不向きである。本研究は、生体内の酸化ストレス発生量を生理的範囲で調節可能な遺伝子改変マウスを用いて、肝線維化の進展や発癌に及ぼす酸化ストレスの影響を直接的かつ特異的に検出・評価する世界初のモデル動物を構築することを目的としている。初年度の実験では、ミトコンドリア電子伝達系のsuccinate dehydrogenasecytochrome b (SDHC)の遺伝子変異により酸化ストレスの亢進状態にあるトランスジェニックマウス(Tet-mev-1)に対して、ドキシサイクリンを1年以上にわたって長期間飲水投与し、肝組織内への炎症細胞浸潤や肝星細胞の活性化、さらには肝細胞周囲の線維化など、NASHの類似病変が惹起されることを明らかにした。一方で、線維化の程度にはマウス個体間で大きな差異があり、NASHの進展には遺伝学的な異常以外に複数の要因が関わっていることが推測された。また、本Tet-mev-1マウスと、研究代表者自らが樹立したコラーゲン遺伝子プロモーターの活性化を高感度かつ特異的に検出可能なレポーター・マウスを交配することで、生理的範囲の酸化ストレスによる組織障害をin vivoで特異的かつ定量的に評価することを可能にした。本Tet-mev-1マウスが、NASHの進展過程における酸化ストレスの関与を評価する上で有用なモデル動物であることを証明するとともに、生理的な酸化ストレスによるコラーゲン遺伝子プロモーターの活性化を高感度に検出するin vivoの評価系を確立するなど、ほぼ予定通りの研究成果を得ている。上記の評価系を用いて、高脂肪食で飼育した際のインスリン抵抗性と肝線維化進展に対する酸化ストレスの影響を直接的かつ特異的に評価するとともに、同マウスから分離した肝細胞と星細胞を共培養して、ドキシサイクリンの存在下・非存在下でコラーゲン遺伝子のプロモーター活性を比較定量することで、上記のin vivoの実験結果に理論的裏付けを与える。初年度は、本研究代表者の所属施設で継代維持されている遺伝子改変マウスを用いて評価系を確立することを目標に掲げたため、マウスの使用匹数も限られ、当初計上した研究経費を全額使用するに至らなかった。

次年度には、多数のマウスを用いて酸化ストレスの発生と高脂肪食の摂取が肝線維化進展に与える影響を複数群間で比較するとともに、分離培養した肝細胞や星細胞を用いたin vitroの実験も予定されているため、遺伝子改変マウスの飼育管理料の他、多くの試薬やプラスチック類の購入が予定されている。
コヒーシンの転写制御における役割の解明

コヒーシンサブユニットSMC3コンディショナルノックアウト(SMC3KO)マウスを作製した。神経細胞特異的にSMC3のヘテロノックアウトすると、神経細胞の維持ができず、細胞死が誘導される。現在、神経細胞分化段階で、時期を変えてノックアウトを行い、形態学的な影響とともに遺伝子発現変化、クロマチン高次構造解析を行うことを予定している。一方、SMC3が、ESCO1/ESCO2によりアセチル化されることと、その特異的な脱アセチル化酵素としてHDAC8を新たに見いだした。さらにHDAC8が、今まで原因が特定されていなかったCdLS遺伝病の原因遺伝子の一つであることが明らかとなった。これらの発見に加え、コヒーシンのアセチル化、脱アセチル化状態がダイナミックに変動しているという知見から、コヒーシンのアセチル化制御と転写制御との連携の可能性が考えられた。現在、ChIP-seq解析法を用いて、染色体上での経時的なコヒーシンのアセチル化領域の変化について詳細に解析を進めるとともに、アセチル化の分子的意義について解析を進めている。コヒーシンのサブユニッSMC3はアセチル化され、このアセチル化修飾がコヒージョン形成に必須である。今回、アセチル化酵素としてESCO1とESCO2両因子がともに働くこと、さらに恒常的にアセチル化、脱アセチル化を受け変動すること、脱アセチル化酵素としてHDAC8が働くことを見いだした。これら酵素の欠損は細胞増殖に影響を与え、遺伝子の発現プロファイルに影響を与えた。コヒーシンのアセチル化の制御は、ピストンと同様に転写制御に働く可能性を示した。また、ChIP-seq.法の技術の確立と同定できる領域効率を確認するため、ChIP-seq.により得られたコヒーシンの局在結果を以前にChIP-chip法により同定されたコヒーシンの局在領域との比較、検討を行った。その結果、ChIP-chip法により得られた領域をほとんどカバーすることができ、同時に、DNAチップでは検出できない領域にも局在が観察された。同時に、ChIP-seq法によりアセチル化されているコヒーシンの領域も同定した。次に、少ない細胞数で行えるChIP-seq法の確立を目指した。マウス胎児からの取り出した組織や細胞を扱う場合、集めることのできる細胞数は、培養細胞に比べ少ない。そこで、少ない細胞数においても効率よく行えるChIP法、またそれにより得られた少ないDNAの増幅法の検討を行った。特に固定条件、断片化法やバッファー条件の変更等でChIP法の改善を行った。確立したっs方法と効率よく細胞を同調培養することを組み合わせることでコヒーシンの結合領域が同定できる。コヒーシンサブユニットSMC3のアセチル化は、細胞の機能(遺伝子発現、細胞増殖)に重要な役割を担っている。コヒーシンは、染色体上でアセチル化され、染色体の高次構造を制御し、機能を発揮していると考えられる。前年度にSMC3を特異的に脱アセチル化する酵素としてHDAC8を見いだした。HDAC8は、染色体から乖離したコヒーシンを積極的に脱アセチル化することを明らかにした。今までに知られているコヒーシン関連遺伝子に原因がないコルネリア・デ・ランゲ症候群患者の中に、HDAC8遺伝子に変異をもつ人がいることを同定し、HDAC8が新たなCdLS原因遺伝子であることを明らかにした。また、アセチル化SMC3のChIP-seq解析を行い、アセチル化SMC3の染色体局在を同定し、その領域はコヒーシン局在領域全体のうち、約1割程度であったが、HDAC8欠損やノックダウンすると、染色体上のアセチル化コヒーシン局在領域が増加した。一方で、これらの細胞ではコヒーシンそのものの結合領域の減少が見られ、コヒーシンの染色体への結合の不安定化が起こっている可能性が示唆された。さらにHDAC8欠損細胞では、コヒージョン形成の異常は認められないが、新たなコヒーシン合成を抑制するとコヒージョン形成の異常を示すことが分かった。これらの結果から、HDAC8が機能しなくなると、コヒーシンのアセチル化は消去されず、アセチル化されたままの異常なコヒーシン複合体が蓄積し、細胞の機能不全を引き起こしている可能性が考えられる。
アクティブラーニングを活用した高大連携によるスポーツ傷害予防システムの開発

オリンピックを2020年に迎える我が国において、次世代を担う一流のスポーツ選手の育成は重要なテーマである。心身ともに成長する時期、中高生のスポーツ傷害の予防方法を開発し、その実践によって傷害発症を抑えることは、生涯にわたるスポーツ活動の継続、高齢期における日常生活活動の低下にも繋がる。本研究では、大学と高校の連携に加え、大学生のアクティブラーニングによる支援、さらには病院・クリニックによるリハビリテーションを総合的に活用したスポーツ傷害予防システムを開発し、高校における教育的かつ競技力の向上も図れ、スポーツ傷害からの復帰のプロセスも見えるスポーツ支援を構築することを目的とした。2017年度は、6月、サッカー部選手21名に対し、教員1名、卒業生3名、学生8名、大学の臨床教授1名が参加し、3月の測定結果のフィードバックを行い、スポーツ傷害予防教室として、柔軟性の向上と筋機能の改善を図るトレーニングの指導を実施した。8月、選手39名に対し、教員2名、卒業生2名、学生23名が参加し、実地調査として、筋力、パフォーマンステストを実施した。9月には選手39名に対し、教員3名、卒業生1名、学生23名が参加し、キック力、ダッシュ力などのフィールドテストを実施した。2018年度は、4月にサッカー部の練習視察を行い、11月に測定の打合せ、12月、選手38名に対し、教員2名、学生41名が参加し、体力測定を行った。2019年2月に第2回目のフィールド調査を予定していたが、雨天により2回延期となり、実施できなかった。学生の実地調査やスポーツ傷害予防教室の関わりは、授業のとしての地域アクティブラーイングに組み入れるようになった。2019年度は、1年生であった選手が高校3年間でのスポーツ傷害の発症状況について調査し、さらに地域アクティブラーニングの教育効果について検証する予定である大学と高校の連携に加え、大学生のアクティブラーニングによる支援によるスポーツ障害予防を目的とする実地調査、スポーツ傷害予防教室は、雨天により実施できなかったこともあったが、概ね良好に進んでいる。学生の地域アクティブラーニングについては、授業に取り入れるようになり、学生は能動的に活動に参加している。スクリーニング調査等により、スポーツ傷害の発生状況を分析する。スポーツ傷害予防教室は、スポーツ傷害の発生状況、運動部顧問や高校スポーツ選手の要望を確認して内容を修正する。地域アクティブラーニングの教育効果については、今後検証する予定である。その一つとして、心身ともに成長する時期、中高生のスポーツ傷害の予防方法を開発し、その実践によって傷害発症を抑えることは、生涯にわたるスポーツ活動の継続、高齢期における日常生活活動の低下にも繋がる。そこで、本研究では、大学と高校の連携に加え、大学生のアクティブラーニングによる支援、さらには病院・クリニックによるリハビリテーションを総合的に活用したスポーツ傷害予防システムを開発し、高校における教育的かつ競技力の向上も図れ、スポーツ傷害からの復帰のプロセスも見えるスポーツ支援を構築することを目的とした。2017年3月に併設校の聖隷クリストファー高校サッカー部選手のスクリーニング調査、実地調査として体力測定を実施した。2017年6月、サッカー部選手21名に対し、教員1名、卒業生3名、学生8名、大学の臨床教授1名が参加し、3月の測定結果のフィードバックを行い、スポーツ傷害予防教室として、柔軟性の向上と筋機能の改善を図るトレーニングの指導を実施した。現在、2017年度中のサッカー部選手のスポーツ傷害の発生状況について調査しており、その結果を踏まえ、スポーツ傷害予防システムの修正等を行っていく予定である。また、学生による実地調査やスポーツ傷害予防教室での関わりを通して授業としての地域におけるアクティブラーニングに転換、推進していく予定である。大学と高校の連携に加え、大学生のアクティブラーニングによる支援によるスポーツ障害予防を目的とする実地調査、スポーツ傷害予防教室は順調に進んでいる。一方で、スポーツ選手への個別指導、スポーツ傷害復帰を目指すための病院・クリニックによるリハビリテーションを活用したスポーツ傷害予防システムについては、スポーツ傷害の発生状況、スポーツ選手の要望を踏まえて実施するか検討する。

2018年度は、4月にサッカー部の練習視察を行い、11月に測定の打合せ、12月、選手38名に対し、教員2名、学生41名が参加し、体力測定を行った。2019年2月に第2回目のフィールド調査を予定していたが、雨天により2回延期となり、実施できなかった。学生の実地調査やスポーツ傷害予防教室の関わりは、授業のとしての地域アクティブラーイングに組み入れるようになった。2019年度は、1年生であった選手が高校3年間でのスポーツ傷害の発症状況について調査し、さらに地域アクティブラーニングの教育効果について検証する予定である大学と高校の連携に加え、大学生のアクティブラーニングによる支援によるスポーツ障害予防を目的とする実地調査、スポーツ傷害予防教室は、雨天により実施できなかったこともあったが、概ね良好に進んでいる。学生の地域アクティブラーニングについては、授業に取り入れるようになり、学生は能動的に活動に参加している。スクリーニング調査等により、スポーツ傷害の発生状況を分析する。スポーツ傷害予防教室は、スポーツ傷害の発生状況、運動部顧問や高校スポーツ選手の要望を確認して内容を修正するスクリーニング調査等により、スポーツ傷害の発生状況を分析する。スポーツ傷害予防教室は、スポーツ傷害の発生状況、運動部顧問や高校スポーツ選手の要望を確認して内容を修正する。地域アクティブラーニングの教育効果については、今後検証する予定である。今年度は個別指導および資料整理の謝礼が残った。研究成果を学会で発表し、また個別指導および資料整理の謝礼として使用する。今年度はこれまでの調査データのまとめ、分析をしていない。そのため、資料整理の人件費、スポーツ医学・リハビリテーション関連図書、学会発表の旅費、論文投稿料の支出が発生せず、残金が生じた。次年度は調査したデータをまとめ、分析を行うとともに、学会発表および論文等投稿に支出する予定である。
GCN経路とTOR経路を結ぶ分子のゲノムワイドスクリーニング

研究代表者は前年度、GCN経路とTOR経路を結ぶ詳細な分子機構の解明を目標に、GCN4 5'-UTRにlacZ遺伝子を繋げた翻訳レポーターを非必須遺伝子破壊株コレクションの個々の株に導入し、ラパマイシンによる翻訳誘導が野生株と比して減弱する株の網羅的検索を行った。その結果、有意な誘導の減弱が観察された123株を同定した(予め翻訳誘導されないと予想された破壊株4株は全て含まれていた)。本年度はこれらの候補を用いて解析を行い以下の知見を得た。(1)123株の候補の中から、ラパマイシン刺激によるGCN4 mRNAの脱抑制に必須であるeIF2α,のリン酸化障害を伴う6株を同定した。(2)上記6株の中から、目的の株つまりアミノ酸飢餓誘導によるGCN4 mRNAの翻訳誘導、eIF2αのリン酸化惹起の応答は正常であるが、ラパマイシンによるこれらの応答が障害された株pmr1Δ,ser2Δ,srb51Δを同定した。(3)上記3株は他の既知のGCN経路活性化刺激であるMMS(DNA障害剤)、azAde(Adenine欠乏を惹起)には応答しており、これらの株がGCN経路とTOR経路を結ぶ目的の分子である可能性が強く示唆された。得られた3株の候補の一つであるPMR1は、TORの上流に位置する分子として昨年同定された(PNAS,2006 103,17840-5)。この論文と本アプローチによって同定されるべき4株を全て同定した結果は本実験手法の有効性を如実に示しているだけでなく、得られた候補が目的とする分子である可能性を強く示唆している。引き続き今後ともこれらの分子の詳細な解析を行う予定である。研究代表者は酵母アミノ酸飢餓応答経路であるGCN経路と、別の栄養感知経路であるTOR経路の解析を行ってきた。そしてTOR経路の特異的阻害剤であるラパマイシンがGC経路において中心的役割を担うGCN2を活性化し、eIF2αのリン酸化を介してGCN4 mRNAの翻訳を誘導することを見出し、TOR経路とGCN経路のクロストークを明らかにした。そこで今年度はGCN経路とTOR経路を結ぶ詳細な分子機構の解明を目標に、GCN45'-UTRに1acZ遺伝子を繋げた翻訳レポーターを非必須遺伝子破壊株コレクションの個々の株に導入し、ラパマイシンによる翻訳誘導が野生株と比して減弱する株の網羅的検索を行った。その結果以下の進捗を得た。(1)96穴プレートを用いた簡便で高効率な形質転換法、ならびにBiomek FXを用いた半自動的なレポーター活性測定法を考案し、ハイスループットな一連の測定系を構築した。(2)上記の方法により非必須遺伝子破壊株コレクションのGCN4 mRNAの翻訳誘導をモニターし、123株において有意な誘導の低下が観察された。この中には予め翻訳誘導されないと予想された破壊株が全て含まれていた(GCN経路に必須であるgcn1,gcn3,gcn20、ラパマイシンによるTOR経路阻害に必須であるfpr1)。これは本研究手法の有効性を如実に示している。次にこれらの翻訳誘導の低下がeIF2αのリン酸化依存的であるかどうかを確認した。その結果6株(gcn1,gcn20,fpr1は除く)において、ラパマイシンによるeIF2αのリン酸化の誘導が観察されなかった。更にこの内の3株は目的の株、つまりアミノ酸飢餓誘導によるGCN4 mRNAの翻訳誘導ならびにeIF2αのリン酸化の応答は正常であるがラパマイシンによる応答のみが障害された株であった。現在、これらの株についての詳細な解析を行っている。
老人施設の高齢者の衣生活意識と情動の活性化に関する調査研究

我が国においては人口の高齢化が急速に進んでおり、高齢者が物質面のみならず精神面においても充実した生活を送ることは重要な問題である。本研究の目的は、高齢者に対する情動の活性化に対して、衣服や化粧を手段とするおしゃれ意識やその行動がどのように寄与できるかについての基礎的資料を得るために、高齢者の衣服や化粧に対する意識や実態について考察することである。この研究を進めるにあたり、まず高齢者女性190名(平均年齢74.1歳)を対象として、1995年11月に質問紙個人面接法によりアンケート調査を実施した。調査内容は化粧に対する意識や実態、衣服の着装行動に対する意識や実態などである。その結果、化粧をすることに対して約8割が「気持ちが若返る」と回答し、また、約7割が「高齢者が化粧をすることについてまわりの反応は冷たい」とは思わず、約9割が「高齢者になっても化粧は必要だ」と考えており、化粧に対する意識は肯定的意見が過半数を占めたが、加齢による化粧行動の実態は、約4割が「簡素化した」と回答しており、化粧に対する意識と実態の間には違いが認められた。次に、化粧を通して情動を活性化させる効果が報告されている鳴門山上病院を視察し、化粧行動の実態と効果を把持するために実態調査を行った。鳴門山上病院では、化粧によって情動に刺激を与え、個人の社会性を回復させ、また化粧を本人がすることにより、機能の回復・維持・増進させる手段ととらえ実践している。その結果、容姿への関心の増加・日常動作の変化・オムツ外しの成功・情動の安定・痴呆症状の改善等の効果がみられた。本研究により衣服や化粧を手段としたおしゃれ意識やその行動は、情動の活性化や積極性の拡大等のプラス効果をもたらす生きがいの一要因になることが明らかとなった。
「喉音三行弁」の観念の成立と日本音韻学の自立化過程に関する学説史的研究

純粋書記規範に過ぎなかった仮名遣いを日本音声学の成立にまで至らしめた直接の契機は、仮名遣いの説明をいろは歌によってではなく五十音図を採用したことにあった。しかし、音図は、成立こそ古いものの世俗の知識世界に流布したものではなかった。音図は、もと密教の悉曇学のアルファベットである悉曇章に起源を発するもので日本語音の配当図では無論ありえない。これが平安時代後期、明覚によって「日本化」を遂げた後であっても悉曇学侶にとっては日本語の音図という意識はなかった。日本悉曇学は、鎌倉時代に日宋貿易を通じて『韻鏡』が輸入された際に、これをよく理解して後世に『韻鏡』注釈を伝えた。その過程で『韻鏡』注釈書に音図が付載されたものと見られる。室町時代頃までの『韻鏡』注釈はなお悉曇学内で行われたので、これに付録された音図の知識もまた悉曇学内にとどまった。これが世俗世界に流出するのは、公家が『韻鏡』を占いの道具に使ったことがきっかけである。『韻鏡』は、長らく漢字反切を説明したものと考えられていたことから、これを利用して人名や年号の吉凶を占ったのである。占いを介した『韻鏡』に対する世俗の関心はこの後も継続し、近世には在京世俗の儒者による『韻鏡』注釈書が盛んに出版され、これに付録された音図もまた世俗世界に流出するに至った。契沖によって音図を古代日本語音を過不足なく配列した「五十音図」としての地位を与えられて仮名遣いの説明原理として十分な威力を発揮したのである。かように、日本音声学(固有名は音韻学)の成立は、空海以来の悉曇学に鎌倉時代の『韻鏡』注釈が加わり、さらに院政期以来の仮名遣いが近世の学術の変革期に絶妙な形で合流して立ち上がったわが国の誇るべき学術の金字塔である。今日の日本語研究の直接の源流は院政鎌倉時代の平安仮名文芸作品(古今集など)の古注釈にある。この時期は、律令国家体制が崩壊しつつあり、伝統的な公家社会の社会的権威が、台頭する武家の勢力の前に揺らぎ始めていた。そこで京都の公家たちは自らのよって立つ文化的基盤を確認し、その政治的全盛時代の宮廷文化を観念的に復元する文芸復古運動を行った。漢籍や仏典以外の日本語で記された日本古典の学がこの時に成立した。言語研究が古典注釈から成立したという事情は、前3世紀にアレキサンドリアでホメロスの叙事詩の古注釈から西洋古典学が立ち上がった実情と近似する現象である。西洋の言語研究はこの時期の古典ギリシャ語文法学に発する。西洋文法学は、ギリシャ語のほかローマ帝国時代の標準的記載言語であったラテン語文法を併せて知的世界の基礎的教養源として不動の権威を構成した。ルネサンス期における学問の世俗化のなかで文法学もキリスト教学から離脱し、さらにヨーロッパ諸国の東方経営の過程でサンスクリットを発見するに及び比較言語学が発足し、言語研究は古典注釈からも離脱する。以後、近代科学としての言語学は本質的に言語の系統関係を元に祖語を再建する歴史言語学として発展するが、20世紀初頭にスイス人ソシュールが非歴史的な理論言語学を提唱して以来、言語の歴史的変遷を機能論的に解明する新しい言語史研究が成立した。他方、伝統的日本語学は西洋古典学の展開と似て密教教学からの離脱に成功して大衆化する(国学)。

明治以後、西洋言語学を受け入れたわが国で「国語史」の概念が成立したが、ここには伝統的な古典解釈のための語学と系統論的な歴史言語学およびソシュール以後の機能論的歴史言語学という異質の研究が相互批判抜きに雑多な形で共存している。今後日本語の歴史的研究の発展のためには、機能論的方法の開発を自覚的に進めなければならない。本居宣長『字音仮字用格』「喉音三行弁」は、中世以来の仮名遣いの背後にあってこれを本質規定する古代語の音声の秩序を始めて具体的に明らかにして画期的業績である。宣長の果たした役割は、かのドイツ言語学におけるグリムの法則の発見に比肩される。グリムの法則は、比較文法学の形態分析の過程で、これ以上難散的単位に分割出来ない切片として取り出されたものが綴り字と区別された音声であり、これによって古代ゲルマン語の子音推移が具体的な音価推定として浮かび上がったのである。その際,民族主義者ヤ-コプ・グリムは、古代ゲルマン人の発音を合理的推論によって復元し得たと確信した。グリムと同様な宣長は、合理的推論によって仮名遣いの背後にある古代人の発音の区別を「喉音三行弁」の音声学的規定を通じて復元したのである。従来の言語学史と国語学史が見落としていた重要な点がここにある。すなわち、音声学は民族主義的情熱とともに合理的推論の過程を経て生まれたものであり、その東西の立て役者が宣長とグリムであった。言語学史は十九世紀末のイギリス音声学をもってその開始を告げるのであるが、かかる叙述はこの学問の自然科学としての狭隘な一面を不当に強調するものである。言語学の正当の系統を離れたイギリスにおいて何故十九世紀末に俄かに近代音声学が興起したかを言語学史は決して説明しないのである。かかる意識をもとに、今期は「喉音三行弁」の音声学的規定に先行して日本語音を漢字音から離れた独自の存在としてとらえた文雄の『和字大観鈔』の独創性と定家仮名遣いという伝統に縛られていたその限界を併せて明らかにした。本居宣長は『字音仮字用格』「喉音三行弁」において、古代日本語の具体的音声を学史上初めて科学的推論と実証によって復元することに成功した。日本音声学は、そのような意味において本居宣長によって開始されたのだと言える。かかる宣長の方法は、しかしながら民族主義的情熱と一体のものであったので、正確に復元された古代国語音声の再構成への宣長の学問的自信は民族主義的排他性への傾向を急速に強める結果となった。『字音仮字用格』からまもなく上梓された『漢字三音考』では、復元された古代国語音こそが純正であって中国語を初めとする外国語音を不正であると断定する極端な外国語蔑視の姿勢となって現れた。このような宣長の態度が上田秋成との『呵刈葭』論争を引き起こすことになる。この論争については今日改めて再評価が求められるが今期は上田秋成が対宣長論争の際に依拠した礪波今道の学説に注目し、それを正確に復元することに留意した。礪波の名は『呵刈葭』において秋成の側から頻繁に挙げられているが、最終的に宣長によって葬り去られた形になっている。そのためであるのか、同人は国語学史では全く無名で今日まで本格的に報告された例を見ない。今道の『喉音用字考』は、その主著であり写本一点が静嘉堂文庫に所蔵されている。本書の内容は、古代漢字音にmn韻尾の区別が存在したこと、喉音三行弁を韻鏡音図に基づき正確に規定したことなど国語学史上重大な内容が含まれており、上田秋成が主張した内容とは異質の情報が含まれている。その意味で本書が『呵刈葭』論争に関する評価を書き替える可能性があることを解明した。中世以来の仮名正書法である仮名遣いは、近世中期の学術の展開の中で画期的変革を遂げた。