hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
コンデイショナル・ジーンターゲッテイングによるTsc2遺伝子産物の機能解析

本研究では、P1フアージのCre組換え酵素(Cre)とloxP配列の部位特異的組換えシステムを利用し、結節性硬化症原因遺伝子であるTsc2遺伝子のコンデイショナル・ジーンターゲテイングの実験系を確立した。まずエクソン3と4を一対のloxP配列で挟んだ潜在型変異Tsc2アレルを持つマウスの系統を樹立した。潜在型変異アレルからCreの働きにより誘導したエクソン3-4欠失アレルは、そのヘテロ接合体マウスが腎腫瘍を発生することにより、機能が不活化されたものであることが確認された。次に心室心筋細胞特異的にCreを発現する改変アレル(Mlc2v-Cre)を持つマウスとの交配により、Mlc2v-Creを持つ潜在型変異Tsc2アレルホモ接合体マウス、すなわち心筋特異なコンデイショナル・Tsc2ノックアウト(CKO)マウスを作製した。CKOマウスは外見上は正常に生まれて発育するものの、30週齢前後を中心とし、生後1年までの間に死亡することが明らかとなった。CKOマウスの心臓においては、loxP配列間での組換えによりエクソン3-4欠失変異アレルが生じていることが確認された。また、30週前後の個体の剖検により、CKOマウスには心臓の拡張が認められた。これらのいずれの症状も、潜在型変異アレルヘテロ接合体でMlc2V-Creを持つコントロールマウス群では認められなかった。組織学的にはCKOマウスの心筋においては細胞の肥大化、細胞の配列の乱れや核の形態の異常が観察された。またCKOマウスの心臓では、心エコーにより左室の拡張が観察され、不全心のマーカーである心房性ナトリウム利尿ペプチド等の発現亢進が観察された。これらの結果から、CKOマウスは拡張型心筋症の状態に陥っていると推察された。今後、CKOマウスの解析を通し、心筋を用いたTsc2産物の機能解析を進めたいと考えている。本研究で確立したコンデイショナル・Tsc2ノックアウトマウスの実験系は、Tsc2産物の機能の解明に有用なものであると考えられる。コンディショナル・Tsc2ノックアウトマウス作製のため、まず通常のジーンターゲッティング法により、同方向の一対のloxP配列をエクソン3と4を挟みこむ形でイントロンに挿入した潜在型変異Tsc2アレル(Tsc2-floxPアレル)を持つマウスES細胞株を樹立した。このTsc2-floxPアレルを持つマウスの系統を樹立し、F1ヘテロ接合体同志の交配を行ったところ、tsc2-floxPアレルのホモ接合体マウスを得ることができた。またすでに機能的に不活化されていることが明らかとなっている欠失変異Tsc2アレル(Tsc2-44アレル)とTsc2-floxPアレルとのヘテロ接合体マウスも得ることができた。Tsc2-44アレルのホモ接合体は胎生期に死亡するが、上記のヘテロ接合体が得られたことにより、Tsc2-floxPアレルは機能を保持していることが明らかとなった。

またCAGプロモーターにより部位特異的Cre組換え酵素を発現するトランスジェニックマウスとの交配を行い、loxP間での組換えによりTsc2-floxPアレルのエクソン3、4を欠失させた変異アレル(Tsc2-dex3/4アレル)を持つマウスの系統を樹立したところ、そのヘテロ接合体ではTsc2-44アレルを持つマウスの場合と同様に腎発癌が観察された。またTsc2-dex3/4アレルのホモ接合体は得られず、胎生致死となっていると考えられた。これらの結果によりTsc2-dex3/4アレルは不活化されていることが明らかとなった。以上の結果をふまえ、生後1週のTsc2-floxPアレルホモ接合体マウスの脳にCreを発現する改変アデノウィルスを注入し、脳内でTsc2の不活化を試みること、および心筋特異的ミオシン軽鎖遺伝子プロモーターによりCreを発現するトランスジェニックマウスとの交配による、心筋特異的なコンディショナル・Tsc2ノックアウトマウスの作製を行った。現在それらのマウスの表現型の解析と共に、Tsc2-floxPアレルホモ接合体マウス由来の培養細胞を用いたin vitroでのTsc2不活化の実験系の樹立を進めている。本年度はエクソン3と4を一対のloxP配列で挟んだ潜在型変異Tsc2アレルのホモ接合体で心室心筋細胞特異的にCreを発現する改変遺伝子(MLC2v-Cre)を持つ心筋特異的なコンディショナル・Tsc2ノックアウトマウス、及び小脳プルキニエ細胞特異的にCreを発現する導入遺伝子(PCP2-Cre)を持つコンディショナル・Tsc2ノックアウトマウスを作製し、表現型の解析を進めた。双方とも胎生致死とはならず、正常に生まれることがわかった。プルキニエ細胞特異的コンディショナル・Tsc2ノックアウトマウスに関しては経過観察を行っているがこれまでのところ異常所見は確認されていない。しかし、心筋特異的コンディショナル・Tsc2ノックアウトマウスは生後1年までの間に死亡する個体が頻発することがわかり、また異常な呼吸の様子を示すマウスが観察された。Creの発現により心臓特異的に確かに潜在型Tsc2変異アレルからloxP配列間での組換えにより欠失変異アレルの誘導が生じることも確認された。呼吸が異常になったマウスを死亡前に屠殺・剖検したところいずれの個体においても心臓の肥大化の傾向が認められたことから、一種の心筋症のような状態に陥っていると推察された。これに対し、野生型およびヘテロ接合体でCreの発現系を持つマウスのコントロール群ではその様な症状を呈するものは認められなかった。現在、組織学的解析を手始めとしてこの心臓特異的コンディショナル・Tsc2ノックアウトマウスの症状の発症機序の解明を続けている。
悪性リンパ腫の放射線感受性制御におけるChk2の機能

DNA損傷時の細胞応答制御において、様々な癌遺伝子産物、癌抑制遺伝子産物が極めて重要な役割を担っており、これらの発現・機能の異常の多くは細胞の癌化と密接に関連すると考えられる。核内セリン・スレオニンキナーゼChk2は、DNA損傷に伴って活性化し、細胞周期チェックポイント制御、DNA損傷修復または細胞死の決定において重要な役割を担うと考えられている。本年度の研究により、我々はDNA損傷に伴いp53依存的に発現誘導される核内タンパク質ホスファターゼWip1がChk2と機能的に共役することを明らかにした。主な研究成果としては、Wip1とChk2がin vitro, in vivoで物理的に会合すること、両者の会合動態が放射線照射により変動すること、Wip1がChk2の活性化に必要な68番目のスレオニンのリン酸化を脱リン酸化し得ること、内因性のWip1の発現を抑制することにより放射線照射に伴うChk2のリン酸化が長期間持続すること等を明らかにしており、Wip1が脱リン酸化を介してChk2の機能を制御することが強く示唆された。また、病理学的組織像からHodgkin病(HD)とNon-Hodgkinリンパ腫(NHL)に大別される悪性リンパ腫由来の細胞株において、Chk2を中心とするDNA損傷応答に関わる一群の遺伝子の発現解析を行い、HD由来細胞株においてChk2がDNAメチル化・ヒストン脱アセチル化による発現抑制を受けていることを明らかにした。
上部尿路がん早期発見を目的とした新規検査法の開発

1本邦での上部尿路癌におけるアリストロキア酸の関与に関する検討台湾では上部尿路癌患者のうちアリストロキア酸-DNA付加物を約6割に認め、p53の特徴的変異も高頻度で認めると報告されている。一方、本邦での上部尿路癌におけるアリストロキア酸の関与は不明である。これまでに解析した33例ではアリストロキア酸-DNA付加物は6%で検出された。今後、症例を集積することで、実際の頻度が明らかにできると思われる。これまでの報告では、アリストロキア酸による上部尿路癌が、若年者、女性に多く、対側同時性癌の頻度も高いが、喫煙者の頻度はむしろ低いとの可能性が指摘されている。そこで、我々の解析結果を他の日本人における臨床的特徴と比較検討するため、本邦での上部尿路癌の臨床的特徴を日本泌尿器科学会による癌登録情報を用いて解析した。上部尿路癌と膀胱癌の比較では、臨床病期T2とT3の比較において、T3では有意に予後不良であり、この傾向が上部尿路癌でより顕著であったことを報告した。また、腎尿管全摘除術を行った臨床的リンパ節転移のない患者では、リンパ節郭清による明らかな予後の改善は認めなかった。これらより得た日本人の臨床的特徴と、今回の研究にて明らかにされるアリストロキア酸による上部尿路癌の臨床的特徴を比較検討する予定である。2尿中活性型PKCαを標的とした新規スクリーニング法の開発臨床現場において尿を用いた尿路上皮癌のスクリーニング法としては尿細胞診が最も汎用されている。当施設での膀胱癌症例を後ろ向きに検討した結果、尿細胞診陽性症例では術後膀胱内再発の頻度が高かったが、尿細胞診の感度はlow grade腫瘍では低かった。我々は、これまでに活性型PKCαを尿検体より検出できることを確認した。今後、検査法、検体保存法の最適化を進め、検査法の有用性を特に尿細胞診と比較していく予定である。1本邦での上部尿路癌におけるアリストロキア酸の関与に関する検討現在、症例集積中である。これまでに33症例についてDNAの抽出を行った後、アリストロキア酸-DNA付加物を検索したところ、2例(6%)のみにアリストロキア酸-DNA付加物を検出した。一方DNAシークエンスの結果、2例ともアリストロキア酸によるp53遺伝子の特徴的遺伝子変異は認めなかった。台湾での同様の研究においては約60%にアリストロキア酸-DNA付加物が検出されており、本邦ではアリストロキア酸による上部尿路癌に頻度は低い可能性が考えられた。2尿中活性型PKCαを標的とした新規スクリーニング法の開発九州大学医系地区部局臨床倫理審査委員会において課題名「尿路上皮癌における尿中活性型プロテインキナーゼCα(PKCα)の診断およびバイオマーカーとしての機能評価」の研究実施許可を平成29年7月5日に得た。(許可番号:28-110,変更後許可番号:28-393)許可を得た後、症例集積開始した。対象患者から同意を得て尿を採取し、尿中の活性型PKCαを質量分析装置にて検出試みたところ、一部の検体では活性型PKCαを検出しえた。同時に同一検体を凍結後に解凍し測定すると活性が極端に低下することも判明した。現在、測定条件の最適化に向け検討中である。1本邦での上部尿路癌におけるアリストロキア酸の関与に関する検討これまでの解析により本邦ではアリストロキア酸による上部尿路癌の頻度は低い可能性が考えられる。当初の研究計画にそって50例まで症例を集積し、中間解析としてアリストロキア酸-DNA付加物の検出、特徴的p53遺伝子変異を検索する予定である。その時点でアリストロキア酸-DNA付加物の検出頻度が15%未満であればこれを最終解析とする。一方、研究計画に沿って、FGF3、Ras遺伝子の変異頻度については別途解析を行う。2尿中活性型PKCαを標的とした新規スクリーニング法の開発質量分析装置による測定条件、検体の保存方法を最適化したのち、尿路上皮癌患者及び対照群からの検体にて活性型PKCαを測定し、カットオフ値を設定し当検出法の感度を算出する。感度に関しては、尿細胞診、NMP-22、尿中BTAなどの既存の臨床検査法との比較を行う。同時に、安価に測定を行うためにELISA等による測定法の開発に着手する。

また、腎尿管全摘除術を行った臨床的リンパ節転移のない患者では、リンパ節郭清による明らかな予後の改善は認めなかった。これらより得た日本人の臨床的特徴と、今回の研究にて明らかにされるアリストロキア酸による上部尿路癌の臨床的特徴を比較検討する予定である。2尿中活性型PKCαを標的とした新規スクリーニング法の開発臨床現場において尿を用いた尿路上皮癌のスクリーニング法としては尿細胞診が最も汎用されている。当施設での膀胱癌症例を後ろ向きに検討した結果、尿細胞診陽性症例では術後膀胱内再発の頻度が高かったが、尿細胞診の感度はlow grade腫瘍では低かった。我々は、これまでに活性型PKCαを尿検体より検出できることを確認した。今後、検査法、検体保存法の最適化を進め、検査法の有用性を特に尿細胞診と比較していく予定である。1本邦での上部尿路癌におけるアリストロキア酸の関与に関する検討現在、症例集積中である。これまでに33症例についてDNAの抽出を行った後、アリストロキア酸-DNA付加物を検索したところ、2例(6%)のみにアリストロキア酸-DNA付加物を検出した。一方DNAシークエンスの結果、2例ともアリストロキア酸によるp53遺伝子の特徴的遺伝子変異は認めなかった。台湾での同様の研究においては約60%にアリストロキア酸-DNA付加物が検出されており、本邦ではアリストロキア酸による上部尿路癌に頻度は低い可能性が考えられた。2尿中活性型PKCαを標的とした新規スクリーニング法の開発九州大学医系地区部局臨床倫理審査委員会において課題名「尿路上皮癌における尿中活性型プロテインキナーゼCα(PKCα)の診断およびバイオマーカーとしての機能評価」の研究実施許可を平成29年7月5日に得た。(許可番号:28-110,変更後許可番号:28-393)許可を得た後、症例集積開始した。対象患者から同意を得て尿を採取し、尿中の活性型PKCαを質量分析装置にて検出試みたところ、一部の検体では活性型PKCαを検出しえた。同時に同一検体を凍結後に解凍し測定すると活性が極端に低下することも判明した。現在、測定条件の最適化に向け検討中である。1本邦での上部尿路癌におけるアリストロキア酸の関与に関する検討これまでの解析により本邦ではアリストロキア酸による上部尿路癌の頻度は低い可能性が考えられる。当初の研究計画にそって50例まで症例を集積し、中間解析としてアリストロキア酸-DNA付加物の検出、特徴的p53遺伝子変異を検索する予定である。その時点でアリストロキア酸-DNA付加物の検出頻度が15%未満であればこれを最終解析とする。一方、研究計画に沿って、FGF3、Ras遺伝子の変異頻度については別途解析を行う。2尿中活性型PKCαを標的とした新規スクリーニング法の開発質量分析装置による測定条件、検体の保存方法を最適化したのち、尿路上皮癌患者及び対照群からの検体にて活性型PKCαを測定し、カットオフ値を設定し当検出法の感度を算出する。感度に関しては、尿細胞診、NMP-22、尿中BTAなどの既存の臨床検査法との比較を行う。同時に、安価に測定を行うためにELISA等による測定法の開発に着手する。
NF-κBシグナルを標的とした骨格筋萎縮性疾患治療の分子基盤形成

骨格筋の萎縮は要支援・要介護の大きな原因であり、超高齢社会のわが国にとって優先的に取り組むべき課題である。NF-κBは様々な生命現象に不可欠な因子である。今回、骨格筋代謝におけるNF-κBの役割の解明を試みた。NF-κBの活性は筋線維の分解・減少期と増殖期には亢進し、それに引き続く分化融合期には減少する。さらに、TNFαで誘導したNF-κBは筋の分解と増殖を促進し、分化・融合を抑制することが明らかとなった。サルコペニアなどの骨格筋萎縮性疾患は要支援・要介護の大きな原因の一つである。さらに誤嚥性肺炎の原因となる摂食機能障害も摂食嚥下関連筋の萎縮性疾患としての側面があり、超高齢社会の日本にとって骨格筋の機能をいかに維持・回復させるかは重要な課題である。転写因子NF-κBシグナルは骨格筋萎縮を引き起こすと考えられるが、その詳しいメカニズムは明らかでない。本研究では萎縮骨格筋の骨格筋組織幹細胞-サテライト細胞に注目し、NF-κBシグナルの局在と強度をリアルタイムに検出することができるTG1085マウス用いて解析を行っている。そして現在までに、NF-κBのメインサブユニットであるp65は静止期のサテライト細胞では発現していないが、活性化し増殖期に入るとp65の発現が認められた。TNFα処理で誘導したNF-κBシグナルによりサテライト細胞の増殖が亢進し、それとは逆に筋分化を抑制した。さらに筋分化抑制メカニズムの一つとしてp65は筋分化のマスターレギュレーターであるMyoDに会合しその転写活性を抑制している可能性が考えられた。さらに、TG1085マウスの坐骨神経切除を行い、除神経性の筋萎縮モデルを作製した。筋萎縮の過程で除神経後5日目をピークに萎縮筋全体のNF-κBシグナルが亢進したが萎縮筋から分離したサテライト細胞でもNF-κBシグナルの増加が認められた。今後は萎縮筋サテライト細胞のNF-κBシグナル増強因子を同定していきたい。申請書の研究計画通りのペースで研究が進んでいるため。骨格筋分解・減少過程におけるNF-κBシグナルの動態を確認した。除神経により骨格筋の減少・分解を誘導したTAでは5日目をピークにNF-κBシグナルが上昇した。さらに単離したEDLをTNFαで3日間処理したところ線維幅径の減少と筋肉の減少に関与するユビキチンリガーゼのMuRFとAtrogin-1の発現が上昇していた。次に骨格筋再生過程におけるNF-κBシグナルの動態を確認した。Notexin注射による骨格筋再生モデルでは3日目、すなわち増殖期をピークにNF-κBシグナルが上昇し、分化期に入るにつれて減少していった。増殖期のサテライト細胞ではメインサブユニットのp65の核移行、すなわちNF-κBシグナルの亢進が認めらえた。TNFα処理によりサテライト細胞の数が増加し、細胞周期に関わる遺伝子CyclinD1やCyclinA2の発現上昇が認められた。それとは逆にTNFα処理の濃度依存的にサテライト細胞の分化を抑制した。さらに筋分化のマスターレギュレーターであるMyoDの転写活性に対するp65の作用を検討するためにp65の欠失変異体とMyoDを10T1/2細胞に過剰発現しMG-185-ルシフェラーゼ活性を測定した。すると、p65はMyoDの転写活性を強力に抑制し、その抑制作用にはp65のTA2ドメインが必要なことがわかった。以上より、NF-κBシグナルは筋線維の分解・減少期と増殖期には亢進し、それに引き続く分化融合期には減少する。さらに、TNFαで誘導したNF-κBは筋の分解と増殖を促進し、分化・融合を抑制することが明らかとなった(L)。現在NF-κBの阻害剤は骨格筋の分解を抑制するため骨格筋委縮性疾患の有力な候補となっているが、サテライト細胞の増殖を抑制しないように骨格筋代謝のステージに応じた厳密なNF-κBのコントロールが重要であることが示唆された。タモキシフェン誘導性Pax7-Creマウスとp65 floxマウスを交配し、サテライト細胞特異的p65ノックアウトマウスを作製する。このマウスで骨格筋萎縮モデルを作製し、萎縮筋のサテライト細胞におけるp65、すなわちNF-κBシグナルの役割を検討する。分子生物学
歪み有り情報圧縮の高速符号化アルゴリズムの開発と理論解析

有歪圧縮とは、データの復元が不完全である代わりに高い圧縮性能を実現することを目的とした情報圧縮である。許容する歪に対してどの程度まで情報が圧縮できるかという限界をレート歪特性といい、レート歪特性の限界は理論的に示されている。平成16年度の研究において、階層的ニューラルネットワークの一種である木構造3層パーセプトロンを用いた有歪圧縮方法を提案した。木構造3層パーセプトロンとして、中間素子の出力の積で出力素子の出力を決めるパリティマシンと、中間素子の出力の多数決で出力素子の出力を決めるコミティマシンについて性能評価を行なった。その結果、中間素子数が2以上のパリティマシンを用いた有歪圧縮方法は、理論限界を達成することが明らかにした。理論限界を達成する有歪圧縮方法は申請者の発見したパリティマシンを用いた方法のほかに、非単調パーセプトロンを用いた方法や、疎行列を用いた方法など既に複数の方法が発見されている。これらは全て同じレート歪特性を持っているにもかかわらず、異なった符号化特性を持つ。この差異の原因を解明すれば、系統的な高速符号化法の開発に寄与できると期待されるため、符号化特性を系統的に調べることは極めて重要となる。パリティマシンによる有歪圧縮方法は、圧縮符号の分布をひとつのパラメータによって制御可能である。これは、非単調パーセプトロンを用いた方法と、疎行列を用いた方法の持つ特徴と同様の特徴を特殊な場合として含む方法となっている。このため、圧縮符号の分布に対する符号化特性の影響を系統的に調べることが申請者の提案によって可能となった。また、符号化特性の解析で重要となる経路積分法の適用についても研究を行い、経路積分法によって系の定常状態を得る理論的方法を開発した。圧縮符号の分布やコスト関数を通じた有歪圧縮の幾何学的な理解や、より高効率な符号化法の開発などが今後の課題である。歪み有り情報圧縮について符号化が多項式時間となるような符号化アルゴリズムを開発して、その性能の典型評価を統計力学的手法により解析を行った。指数関数的な計算時間が必要である理論限界を達成する高効率アルゴリズムの近似アルゴリズムがTAP法により既に導出されている。TAP法による解析を行うと、最適な圧縮符号がアトラクタとなるようなエネルギー曲面の緩和過程が求められる。しかし、このエネルギー曲面はゴルフホール型であるため、緩和過程の定常状態は初期状態に大きく依存するので初期値の選び方が重要となる。既存の近似アルゴリズムでは、初期値をランダムに選んでいたために、最適な圧縮符号を得ることができなかった。そこで、S/N解析によって圧縮過程を解析し、初期値のレート歪み関数を得た。アトラクタに近い初期値から緩和を始めることができれば、高速に最適な圧縮符号を得ることが可能となる。初期値の影響について、現在計算機シミュレーションなどによってさらなる検討を重ねている。また、圧縮に用いるアルゴリズムそのものの改良についても理論的に検討した。多層パーセプトロン特にパリティマシンおよびコミティマシンを用いた符号化方法を理論的に解析し、特定のパラメータ領域において解析結果を得た。平成16年度にさらにこれらの研究を推進する予定である。初期値の選択を含めた高速で高効率なアルゴリズムを提案して、その性能評価を行なう。さらに、計算機シミュレーションと比較することにより理論の検証を行う。
機能性磁性ナノ粒子を用いた三次元生体組織の構築

平成18年度は、実験計画に従って、磁力を用いた血管・尿管(三次元管状構造)の構築法の開発を行った。厚み5mmの棒磁石を芯にし、機能性磁性ナノ粒子で標識したそれぞれの細胞(血管の場合は血管内皮細胞、平滑筋細胞、線維芽細胞の3種類、尿管の場合は移行上皮細胞)を棒磁石に順番に配置・接着させていくことで、厚みをもった細胞組織を構築することに成功した。その細胞組織をコラーゲンゲルで固めて、芯の磁石を引き抜くことで、5mmの管腔を持った小口径の管組織を構築した。その管状構造の断面図を観察すると、尿管の場合は移行上皮細胞が5層の細胞層を作っており、また血管の場合は、磁石に巻き付けた順に内側から、血管内皮細胞、平滑筋細胞、線維芽細胞の3種類の細胞が層構造を作って配列した。さらに研究を発展させ、この技法を脱細胞化血管への細胞播種へ応用した。血管の組織工学の場合、人工血管の弾性が重要なファクターであることから、動物の血管を無細胞化(脱細胞処理)して使用する手法が注目されているが、目的の細胞を脱細胞化血管に高効率で播種することは困難だった。本研究では、ブタの脱細胞化血管に棒磁石を挿入し、機能性磁性ナノ粒子で標識したそれぞれの細胞を磁力で播種したところ、磁力がない場合(従来法)では10%程度であった細胞の播種効率を、100%近くまで向上させることに成功した。これらの結果から、磁力を用いた細胞の播種方法は、複雑な形状の組織を構築するのに、優れていると考えられ、機能性磁性ナノ粒子を用いた三次元生体組織の構築法は、組織工学にとって、有望な手法であると考えられる。
PIPポリアミドを用いた血中循環腫瘍DNA濃縮による高感度遺伝子型判定法の開発

本研究課題はがん関連遺伝子の活性型変異を標的とした化合物複合体(ピロールイミダゾール含有ポリアミドにビオチンを付加修飾した複合体:PIP-biotin)を用いて、がん患者を対象に、その血液サンプルに含まれる無細胞遊離DNA(cfDNA)から腫瘍由来の標的がん遺伝子の変異部位を含むDNA断片(ctDNA)を特異的に超濃縮することで高感度遺伝子診断法の確立を目指すものである。当該年度は昨年度実施した実験結果を解析し、論文化することに注力した。これまでに、本申請課題において大腸がん患者(21例)の保存血清中のcfDNAを対象に、PIP-biotinによるKRASの遺伝子型の判定を試みている。患者背景は、StageI/II/III/IV:2/2/6/11であった。ddPCRによる変異アレルの検出感度は、StageIV症例では濃縮前・後ともに81.8%(9/11)と同等であった。一方、StageIIIIの症例では濃縮前の検出感度10%(1/10)であったのに対して、濃縮後では80%(8/10)と、有意に検出感度が向上した(p<0.01)。これらの結果から、PIP-biotinを用い標的遺伝子を濃縮することで、血液中KRAS変異アレルの検出感度が向上することが確認された。特にcfDNA量の少ないStageIIIIの症例で有効であったことから、早期診断や再発のモニター等に応用できる可能がある。今後は、患者サンプルの増加、他のがん腫および他のがん遺伝子への応用を検討している。現在、論文化に注力しているため、他のがん種等の解析にやや遅れが出ている。本申請課題の結果を論文化し、その後、新たに前向きにがん患者から血清を採取することで本診断法の有用性や汎用性の確認を実施したい。本研究課題はがん関連遺伝子の活性型変異を標的とした化合物複合体(ピロールイミダゾール含有ポリアミドにビオチンを付加修飾した複合体を用いて、がん患者を対象に、その血液サンプルに含まれる無細胞遊離DNA(cfDNA)から腫瘍由来の標的がん遺伝子の変異部位を含むDNA断片(ctDNA)を特異的に超濃縮することで高感度遺伝子型診断法の確立を目指すものである。当該年度においては、患者サンプルを用いる前のプロトコール作成に注力した。すでにPIポリアミドによる特異的結合が報告されているKRASの活性型変異をモデルとして用いた。ビオチン化PIポリアミドをKRAS2(WT)、KRAS4(12Cおよび12S)、KRAS5(12Vおよび12D)の3種類設計・合成した。次にKRAS野生型アレルおよび4つのKRAS遺伝子変異(G12V, G12D, G12S, G12C)アレルのコンストラクトを作製し、PCRの鋳型として用いた。またアレルの検出にはKRASマルチプレックススクリーニングキットによるddPCR法により実施した。まずは、それぞれのビオチン化PIポリアミドによる標的アレルの回収率を算出した結果、KRAS2はWTアレルに対して90.2%、KRAS4は12Cに対して93.7%、12Sに対しては56.2%であった。またKRAS5は12Vおよび12Dともに10%以下の回収率であったため、再設計を予定している。KRAS4が回収率が最も高かったことから12Cをターゲットとし、スパイク実験を実施した。健常者由来の全血およびKRAS野生型ホモであるHT29細胞株からgDNAを抽出し、そこへプラスミド由来12Cアレルをスパイクさせ、KRAS4による免疫沈降プルダウンを実験を行った。12C変異アレルの存在比を算出した結果、コントロール群に比べ、35倍の12C変異アレルの存在比向上に成功した。当該年度においては、化合物の設計・合成、プロトコールの作成、検出系の立ち上げなどに注力し、おおむね計画通りに進行している。申請者の所属する研究施設には化合物生成のシステムがすでに立ち上がっており、今後より加速して実験が進展することが期待できる。当該年度においては実際の大腸がん患者(21例)の保存血清中のcfDNAを対象に、PIP-biotinによるKRASの遺伝子型の判定を試みた。当該年度においては、昨年度までに確立した検出系を含むプロトコールを用いて、実際の患者サンプルを用いた実験に注力した。

その結果、本濃縮法が有効であることが示された。今後は、患者サンプルの増加、他のがん腫および他のがん遺伝子への応用を検討している。本研究課題はがん関連遺伝子の活性型変異を標的とした化合物複合体(ピロールイミダゾール含有ポリアミドにビオチンを付加修飾した複合体:PIP-biotin)を用いて、がん患者を対象に、その血液サンプルに含まれる無細胞遊離DNA(cfDNA)から腫瘍由来の標的がん遺伝子の変異部位を含むDNA断片(ctDNA)を特異的に超濃縮することで高感度遺伝子診断法の確立を目指すものである。当該年度は昨年度実施した実験結果を解析し、論文化することに注力した。これまでに、本申請課題において大腸がん患者(21例)の保存血清中のcfDNAを対象に、PIP-biotinによるKRASの遺伝子型の判定を試みている。患者背景は、StageI/II/III/IV:2/2/6/11であった。ddPCRによる変異アレルの検出感度は、StageIV症例では濃縮前・後ともに81.8%(9/11)と同等であった。一方、StageIIIIの症例では濃縮前の検出感度10%(1/10)であったのに対して、濃縮後では80%(8/10)と、有意に検出感度が向上した(p<0.01)。これらの結果から、PIP-biotinを用い標的遺伝子を濃縮することで、血液中KRAS変異アレルの検出感度が向上することが確認された。特にcfDNA量の少ないStageIIIIの症例で有効であったことから、早期診断や再発のモニター等に応用できる可能がある。現在、論文化に注力しているため、他のがん種等の解析にやや遅れが出ている。今後の研究推進方策として、大腸がん患者に最も多い、KRAS変異12Vおよび12Dを特異的に認識する新規PIポリアミドの再合成を推進するとともに、プラスミドDNAおよび細胞株の基礎データから実際の患者サンプルに適応するプロトコール作成に取り組む。併せて、保存患者血清サンプルからのDNA抽出法および、KRAS変異アレルの検出法の検討などを実施する予定である。当該年度においては、昨年度までに確立した検出系を含むプロトコールを用いて、実際の患者サンプルを用いた実験結果から、大腸がん患者に最も割合の多いKRAS変異12Vおよび12Dを特異的に認識するPIP-biotinの有用性が示された。一方、KRAS変異12Cおよび12Sについてはプラスミドを用いた検証実験では有効性が示されているものの、該当する大腸がん患者サンプル数が少ないのが現状である。今後は、KRAS変異が多いがん腫、膵がんや肺がんなどの患者サンプルを用いることで、その有用性を検証したい。本申請課題の結果を論文化し、その後、新たに前向きにがん患者から血清を採取することで本診断法の有用性や汎用性の確認を実施したい。当該年度においては、実験系の立ち上げに注力したこともあり、学会等の旅費が掛からなかったため。当該年度においては、患者サンプルを用いた実験が多くなったことに加え、それらの検出に注力したこともあり、学会等の旅費が掛からなかったため、次年度使用額が生じた。また使用計画としては物品費に充てる。
色素増感太陽電池における不均一系電子移動反応の定量評価と反応機構の解明

色素増感太陽電池は,界面での電子移動過程によって動作するが,そこにはナノ多孔質半導体電極/色素/電解液の界面環境に由来する不均一性が存在する。一方,この不均一性の大きさや,その起原については未だ不明である。そのため,これまで能動的な反応制御は実現しておらず,光電変換効率向上の重大な妨げとなってきた。本研究では,時間分解分光による界面電子移動ダイナミクスの定量的な観測と,反応のモデル化によって,不均一性の起源や大きさを明らかにすることを試みた。まず,反応ダイナミクスを定量的に測定するために,時間分解過渡吸収分光の光学系を改良し,色素増感太陽電池のデバイス中における電子移動ダイナミクスを直接観測する手法を確立した。さらに時間分解能の異なるフェムト秒過渡吸収分光装置,およびサブナノ秒過渡吸収分光装置を用いた評価を行った。その結果,フェムト秒からサブナノ秒領域といった幅広い時間領域における電子移動ダイナミクスの定量的観測を実現した。さらに,不均一性を因子として含んだ反応モデルを新たに提案し,モデルによるシミュレーションを行った。実験結果と比較することで不均一性の原因を検討した。その結果,不均一を及ぼす主たる原因が電子移動反応におけるドナーである色素のエネルギーレベルにあることが示唆された。得られた研究成果を用いて,国内学会,国際学会での発表,および海外の研究室訪問での情報収集,討論を行った。今後得られた成果については,雑誌論文で発表する予定である。本研究の成果は,素過程と応用分野を結びつける役割を担うことができるとともに,今後の色素増感太陽電池の応用分野での発展のみならず,関連する界面電子移動反応を利用するシステムにおいても,さらなる素過程の理解の助けになると期待される。(抄録なし)色素増感太陽電池は,界面での電子移動過程によって動作するが,そこにはナノ多孔質半導体電極/色素/電解液の界面環境に由来する不均一性が存在する。(抄録なし)
イネの発生・形態形成を制御する遺伝子の単離とその機能の解明

本研究は,イネを主な研究材料とし,その発生分化や形態形成に関する遺伝子を単離し,その機能を解明することを目的として研究を行った.(1)イネのdlooping leaf (dl)変異体は心皮が雄ずいへとホメオティックに変異するとともに,葉の中肋が欠失する.変異体の表現型や空間的発現パターンの解析結果から,DLは心皮のアイデンティティーと中肋の形成を制御していることが明らかとなった.また,DLはクラスBのMADS遺伝子と互いに負に制御していることが示された.(2)トウモロコシおよびコムギからDLオーソログを単離しその発現パターンを解析した.その結果,これらの植物においても,DLの機能が保存されていることが示された.(3)DLはYABBY遺伝子ファミリーに属している.イネより新たに7種のYABBY遺伝子を単離し,その構造や発現を解析した.発現パターンからは,YABBY遺伝子の機能が双子葉植物とはかなり異なっていることが示唆された.(4)イネのfon1変異体は花器官数が増加する変異体として単離され,その原因は花分裂組織のサイズが大きくなることによると考えられている.このFON1遺伝子の単離をポジショナルクローニング法により試み,ほぼその遺伝子を同定することができた.本研究は,イネを主な研究材料とし,その発生分化や形態形成に関する遺伝子を単離し,その機能を解明することを目的として研究を行った.(1)イネのdlooping leaf (dl)変異体は心皮が雄ずいへとホメオティックに変異するとともに,葉の中肋が欠失する.変異体の表現型や空間的発現パターンの解析結果から,DLは心皮のアイデンティティーと中肋の形成を制御していることが明らかとなった.また,DLはクラスBのMADS遺伝子と互いに負に制御していることが示された.(2)トウモロコシおよびコムギからDLオーソログを単離しその発現パターンを解析した.その結果,これらの植物においても,DLの機能が保存されていることが示された.(3)DLはYABBY遺伝子ファミリーに属している.イネより新たに7種のYABBY遺伝子を単離し,その構造や発現を解析した.発現パターンからは,YABBY遺伝子の機能が双子葉植物とはかなり異なっていることが示唆された.(4)イネのfon1変異体は花器官数が増加する変異体として単離され,その原因は花分裂組織のサイズが大きくなることによると考えられている.このFON1遺伝子の単離をポジショナルクローニング法により試み,ほぼその遺伝子を同定することができた.シロイヌナズナなどの双子葉植物においては,花の器官決定を制御する遺伝子はMADS遺伝子ファミリーに属し,2つの隣接するwhorlで機能していること,心皮の決定にはAG遺伝子が大きな機能を果たしていることが明らかとなっている.イネのDL遺伝子の欠損変異体は,心皮が雄蕊に転換するホメオテックな変異を示す.この遺伝子を単離したところ,YABBY遺伝子ファミリーに属すること,心皮が形成される一つのwhorlのみで発現し機能していることが明らかとなった.したがって,イネにおいては花の器官決定は双子葉植物とは少し異なる機構によって制御されていると考えられる.そこで,このDLの機能とそれから推定される花の発生モデルが一般化できるのかどうかを明らかにする目的で,イネ科のコムギおよびトウモロコシよりDLの相同遺伝子をそれぞれ単離した.次年度からは,野生型および変異体の花分裂組織におけるこれらの遺伝子の発現パターンを解析し,そのモデルがこれらの植物に適用できるかどうかを検討する予定である.YABBY遺伝子は,シロイヌナズナにおいては種々の発生過程で重要な機能を果たしていることが示されている.そこでイネにおけるYABBY遺伝子ファミリーの機能を解明することを目的として,新たに6種のYABBY遺伝子を単離した.in situハイブリダイゼーションにより空間的・時間的な発現パターンを解析したところ,各々の遺伝子で興味深い発現パターンが示された.シロイヌナズナでは,YABBY遺伝子は一般的に背腹性を制御すると考えられているが,イネにおいてはそのような機能を推定するような発現パターンは得られず,単子葉植物のYABBY遺伝子の機能は双子葉植物とは大きく分岐していることが示唆された.イネのDL遺伝子の欠損変異体は,心皮が雄蕊に転換するホメオテックな変異を示す.この遺伝子を単離したところ,YABBY遺伝子ファミリーに属すること,心皮が形成される一つのwhorlのみで発現し機能していることが明らかとなった.したがって,イネにおいては花の器官決定は双子葉植物とは少し異なる機構によって制御されていると考えられる.そこで,このDLの機能とそれから推定される花の発生モデルが一般化できるのかどうかを明らかにする目的で,イネ科のコムギおよびトウモロコシよりDLの相同遺伝子をそれぞれ単離した.これらの遺伝子がコードするタンパク質は非常に相同性が高く,ZnフィンガーおよびYABBYドメインのみならず,通常はほとんど相同性の見られない領域まで高度に保存されていた.この相同性の高さと分子系統学的解析から,単離したcDNAは確かにDLのorthologであることが判明した.次に,雌雄異花植物であるトウモロコシのDL ortholog (ZmDL)の空間的発現パターンを解析した.

雌花幼穂においては,心皮の原基の予定領域よりその発現が検出され,心皮の発生,花柱の形成される時期を通じて強い発現が認められた.また,雄花の発生過程では,いったん心皮原基が形成され,その後退化する.この雄花幼穂においても,心皮原基においてZmDLの発現が認められた.同様に,コムギのDL orthologも心皮の原基および発生中の心皮で発現が観察された.両植物とも心皮以外の花器官では,DL orthologの発現は検出されなかった.これらの結果は,トウモロコシおよびコムギにおいてはDL orthologが心皮の発生を制御していることを強く示唆している.本研究は,イネを研究材料とし,その発生分化や形態形成に関する遺伝子を単離し,その機能を解明することを目的としている.イネのdlooping leaf (dl)変異体は心皮が雄ずいへとホメオティックに変異するとともに,葉の中肋が欠失する.DLの空間的発現パターンを解析したところ,心皮の予定領域で発現を開始し,心皮原基で強く発現が持続していた.次に,イネの花の発生を制御する他の遺伝子とDLとの相互作用の解析を進めた.その結果,DLとクラスBのMADS遺伝子が互いに負に相互作用していることが明らかとなった.また,DL遺伝子の下流で働く遺伝子を単離・同定することを目的とし,中肋形成時の組織を用いてマイクロアレイ法により,野性型とdl変異体との発現パターンを検討した.その結果,野性型で発現の増加している約60個の遺伝子を同定した.イネのfloral organ number1(fon1)変異体は花器官数が増加する変異体として単離され,その原因は花分裂組織のサイズが大きくなることによると考えられている.このFON1遺伝子の単離をポジショナルクローニング法により試みた.その結果,FON1遺伝子の座乗位置を約150kb以内に絞り込むことができた.この領域内でFON1の候補となりそうな遺伝子を推定し,2つのfon1変異体における塩基配列を決定した結果,この候補遺伝子内にそれぞれアミノ酸置換を生じる点突然変異が存在することが判明した.
がん遺伝子の機能解析

リンパ球の抗原受容体と物理的に会合しているLynやFynが、抗原受容体を介するシグナル伝達反応に於て機能していることを示した。そして、Lynからのシグナル伝達系には、分子量約70,000のチロシンリン酸化された蛋白質やPIー3キナ-ゼが関わっていること、また、FynからのシグナルがSH2とCD3ζ鎖の相互作用により下流に伝えられることを示唆した。さらに、脳においてFynは胚ならびに生直後そして成体の全てで、海馬等の神経細胞で発現している事を示した。更に、免疫グロブリン遺伝子エンハンサ-支配下のlynならびにfyncDNAをtransgeneとして有するマウスを作成し、B細胞の機能・分化についての解析を進めている。さらに、gene targeting法により、fyn遺伝子を欠損するマウスを共同研究で得ているし、lyn遺伝子についても進行中である。Yes蛋白質については、アミノ末端近傍で細胞周期依存的にリン酸化されることを見いだし、その意義について検討中である。ErbBー2蛋白質については、子牛血清中に見いだした特異的なキナ-ゼ活性促進因子の精製を進め、アルファフェトプロテインに富む画分にその活性をが存在することを見いだした。さらに数種のステロイドホルモンがErbBー2蛋白質に直接結合して、そのキナ-ゼ活性を亢進させること、そしてErbBー2蛋白質の標的蛋白質としてPIー3キナ-ゼと蛋白質とキナ-ゼ活性を有する分子を予備的に見いだしている。遺伝子発現調節機構の解析に関しては、lyn遺伝子とcーerbBー2遺伝子について進展があった。まずp40^<tax>によりlyn遺伝子プロモ-タ-が活性化されることを明かにすると共にそのプロモ-タ-領域の詳細な解析を行なった。cーerbBー2プロモ-タ-に関しては、乳癌細胞株での転写活性上昇に関わる配列に結合する転写因子の候補を得ている。
顎裂部に誘導された新生骨中への実験的歯の移動に関する研究

実験動物にはネコを用いた。実験的骨欠損は、第一臼歯近心部の口蓋粘膜組織をコの字型の粘膜骨膜弁として剥離したのち、直径3mmのラウンドバーを用い、第一臼歯に可及的に近接し、かつ歯根膜を損傷させない位置に形成した。実験群は、欠損部に填入する物質により、A:自家腸骨海綿骨移植群、B:牛長幹骨より作製した脱灰骨粉末移植群、C:非移植群の3群に分けた。移植終了後、剥離弁を戻し縫合した。1週間経過後、犬歯を固定源とする装置を装着し、実験的骨欠損部および移植部を第一臼歯歯根が通過するよう方向に牽引し歯の移動を4週間行った。各群は、断頭屠殺後、軟X線による観察と通法に従ったパラフィン切片を作製、HE染色し光学顕微鏡にて観察を行った。麻酔はケタラールを0.8ml/kg、気道分泌抑制の目的で硫酸アトロピンを0.2ml/kg、術後管理としてプロカインペニシリンを毎日0.02ml/kg筋注した。その結果、骨欠損部の状況および歯の移動に際して、A群では、既存骨と移植海綿骨との境界がすでに不明瞭で判別が困難であった。従って、既存骨中および移植骨中での歯の移動に際し、組織学的反応の差は著明ではなく、骨改造機転にも差異は認められなかった。B群では、既存骨と移植脱灰骨粉末とは明確に判別できた。しかし、歯の移動に際し両組織の組織学的反応は正常であり、脱灰骨粉末部で骨吸収能が低下し、かわりに歯根が吸収されるという所見は得られなかった。C群では、連続性の回復がなされていなかった。そのため、第一臼歯の近心傾斜がより強く認められたが、骨改造機転に異常は認められなかった。以上より、脱灰骨粉末は口唇裂口蓋裂患者に行われるsecondary bone graftの移植代用骨として有用である可能性が示唆された。
多線式比例計数箱による中性子位置検出の研究

1.多線式比例計数箱の製作とガスの選定ギャップ13mmのアノード・カソード間にXY読出し電極を配した多線式比例計数箱(有感面積21×21cm^2)をアルミ製高圧容器に収納し, ^3HeとArを基本成分とするカウンター・ガスを約4気圧充填した.クエンチング・ガスとしてCO_2,CF_4などを混合し,ガス増巾度などのカウンター特性を調べた.その結果, ^3He50%-Ar47.5%-CO_22.5%の組成が最適であることが分った.2.二次元位置読出し方式の検討中性子信号の波高測定などより位置読出し方式としては,コインシデンス・レジスターを使用する直接エンコード方式を採用することに決定した. X,Yの位置情報は, 64×64pixelsとして得られる.3.検出器ガスの純化精製の検討ガラス繊維入りエポキシ樹脂にワイヤリングするため,酸素や水蒸気などの電気的陰性の不純物ガスによるカウンター特性の劣化がある.これら不純物を除去する手法を検討した.アルミナ, Ti系触媒なども検討したが, Ca金属ショットを400450°Cに常時加熱し,カウンターガスを対流循環させることにより,多線式比例計数箱は長時間安定に動作することを確認した.4.総合性能試験^<252>Cfの中性子源を使用して中性子2次元位置検出器としての総合性能試験を行った.得られた中性子信号の波高スペクトルは,ガンマ線などによるバッククラウンドとの分離も十分で,効率よく安定に動作することが判明した.この研究成果を基にして,中性子小角散乱実験に必要な大型の2次元位置検出器を製作する.1.多線式比例計数箱の製作とガスの選定ギャップ13mmのアノード・カソード間にXY読出し電極を配した多線式比例計数箱(有感面積21×21cm^2)をアルミ製高圧容器に収納し, ^3HeとArを基本成分とするカウンター・ガスを約4気圧充填した.クエンチング・ガスとしてCO_2,CF_4などを混合し,ガス増巾度などのカウンター特性を調べた.その結果, ^3He50%-Ar47.5%-CO_22.5%の組成が最適であることが分った.2.二次元位置読出し方式の検討中性子信号の波高測定などより位置読出し方式としては,コインシデンス・レジスターを使用する直接エンコード方式を採用することに決定した. X,Yの位置情報は, 64×64pixelsとして得られる.3.検出器ガスの純化精製の検討ガラス繊維入りエポキシ樹脂にワイヤリングするため,酸素や水蒸気などの電気的陰性の不純物ガスによるカウンター特性の劣化がある.これら不純物を除去する手法を検討した.アルミナ, Ti系触媒なども検討したが, Ca金属ショットを400450°Cに常時加熱し,カウンターガスを対流循環させることにより,多線式比例計数箱は長時間安定に動作することを確認した.4.総合性能試験^<252>Cfの中性子源を使用して中性子2次元位置検出器としての総合性能試験を行った.得られた中性子信号の波高スペクトルは,ガンマ線などによるバッククラウンドとの分離も十分で,効率よく安定に動作することが判明した.この研究成果を基にして,中性子小角散乱実験に必要な大型の2次元位置検出器を製作する.
市民・患者と医療多職種の”カフェ型”ヘルスコミュニケーションモデルの開発と評価

カフェ型ヘルスコミュニケーションの参加者にどのような学習プロセスが起きているか探索した。カフェ参加者189名の事後アンケート記述の質的分析から「視座の変容」や「自己省察」など変容的学習に関する概念が抽出された。その結果をもとに、変容的学習等の概念に関する計72項目からなる質問紙を作成しウェブ調査を行い、共分散構造分析によって分析した。141名のデータから(有効解答率39.5%)、対話において「多様な価値観と遭遇」したり「当事者のナラティブ」を聴くことで参加者に「自己省察」や「パースペクティブ変容」などの変容的学習が起きていた。その結果、専門職の「患者・利用者への意識変容」などにつながっていた。1.背景と目的:情報の非対称性やコミュニケーション機会の不足、不正確なネット情報の氾濫など、医療系専門職と市民・患者間のヘルスコミュニケーションにおける現代的課題を克服する一手法として、カフェ型の対話アプローチ「カフェ型ヘルスコミュニケーション」が注目されている。しかし、カフェ型ヘルスコミュニケーションが参加した個人にどのような効果を及ぼすのか検証した報告は少ない。本研究では、カフェ型ヘルスコミュニケーションにおいて参加者に変容的学習プロセスが起きているかを測定し、学習の帰結(他者への理解、ヘルスリテラシーの向上、専門職側の患者・利用者への意識変容など)との関連を検討する。2.方法:変容的学習や帰結概念に関する計72項目からなる質問紙を作成した。カフェ型ヘルスコミュニケーションの参加者357名を調査の対象とし、ウェブアンケート調査をメールにて回答依頼した。統計解析ソフトSPSS 22.0, Amos 22.0を使用し、変容的学習に関する質問項目に関して、探索的因子分析を行った。その後、共分散構造分析による確認的因子分析を行った。その後、共分散構造分析を行い、概念間の関連を検討した。3.現在までの結果:医療系専門職と市民・患者を含む141名より回答を得、変容的学習に関連する概念を共分散構造分析によって分析した。統合モデルの分析によって、対話において「多様な価値観と遭遇」したり「当事者のナラティブ」を聴くことで、参加者には「自己省察」や「パースペクティブ変容」などの変容的学習が起きていた。変容的学習の帰結として、立場の異なる「他者への理解」や、専門職の「患者・利用者への意識変容」が起きていた。本研究によって、カフェ型ヘルスコミュニケーションによる参加者へのポジティブな効果が検証された。市民・患者と医療者の相互理解の促進のため、この実践を普及させていくことが期待される。(研究の目的)医療系専門職と市民・患者間のヘルスコミュニケーションにおける障害(情報・立場の非対称性など)を克服する一手法として「カフェ型ヘルスコミュニケーション」が注目されている。この対話型アプローチでは自由な雰囲気の中で対話がなされ、お互いから学びあう場となっている。しかしその参加者にどのような効果を及ぼすのか検証した報告は少ない。本研究では、カフェ型ヘルスコミュニケーションにおいて参加者に変容的学習プロセスが起きているかを測定し、学習の帰結(他者への理解、伝達的・批判的ヘルスリテラシーの向上、専門職側の患者・利用者への意識変容など)との関連を検討した。(研究の方法)計72項目からなる質問紙を作成し、2010年8月より2013年9月まで開催した「みんくるカフェ」関連企画、計33回の参加者357名を調査の対象とし、ウェブアンケート調査をメールにて回答依頼した。変容的学習に関する質問項目に関して、探索的因子分析、および確認的因子分析を行った。(研究の結果)医療系専門職と市民・患者を含む141名より回答を得(有効回答率39.5%)、変容的学習に関連する概念を共分散構造分析によって分析した。変容的学習プロセスは、直接「パースペクティブ変容」に至るパスと、「自己省察」から「混乱的ジレンマ」を経て「パースペクティブ変容」に至るパスが認められた。変容的学習の帰結として、「他者への理解」や、専門職の「患者・利用者への意識変容」が起きていた。また市民・患者においては主に「形成的学習」により「伝達的・批判的ヘルスリテラシーの向上」が起きていた。ヘルスコミュニケーション1年目の研究計画として予定していた、カフェ型ヘルスコミュニケーションの参加者における学習とその効果に関する分析はほぼ終了した。2年目の研究計画であった、カフェ型ヘルスコミュニケーション活動のアクションリサーチについては、計画を若干変更して実施する可能性がある。

地域基盤型参加型研究(CBPR)としての研究、あるいは、カフェ型ヘルスコミュニケーションと非カフェ型のアプローチとの比較分析などを検討している。当初の見積もりより安価に購入できたものがあったため。2年目の研究のための消耗品購入費などに当てる予定。