hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
英語スピーキング能力を伸ばす授業法：その指導法と成果の可視化に関する実証的研究

本研究は,グローバル化に対応した大学生の英語コミュニケーション能力育成のために,特に共通教育初年次において,その基盤となる基本的スピーキング力を身につけさせる指導法と評価法の確立を目指した。授業ではスピーチ(成果発表)を定期的に行い,授業外ではそのスピーチに向け口頭でリハーサル(練習)をする「スピーチ&リハーサル」法を用い,リハーサルはスピーキング力を向上させるかどうかを検証していた。その結果,リハーサルをすればするほどスピーキング力が向上することが示された。練習期間が1ヵ月であっても,学習者にとって馴染みのあるタスクでのスピーキング力の向上には,2カ月間と同等の効果があることも分かった。本研究は,グローバル化に対応した大学生の英語コミュニケーション能力育成のために,特に共通教育初年次において,下記の3つのプロジェクトを行うことを目的としている。(1)授業と授業外学習を有機的に結び付けた英語スピーキング能力を育成する指導方法の実践と改善(2)ルーブリックの作成・実施と妥当性・信頼性の高い評価法の確立(3)英語習熟度や授業期間が異なる複数のクラスでの実践普遍的な指導法への発展に向けて本研究の予備研究として,平成26年度に国立大学1年生の必修英語科目2クラスにて「スピーチ&リハーサル」法を実践し,平成27年度にその効果を検証・成果発表をした。両クラスとも,学期中にひとり8回2分間のスピーチを行い,スピーチに向け週に5回以上リハーサルすることが課題とされた「リハーサル強制」(20名)とリハーサルをするかしないかは自由とされた「リハーサル自由」(19名)グループに分けられた。2種類のスピーキング・テスト(スピーチとナラティブ)をリハーサルの事前・事後に実施し,重回帰分析をしたところ,スピーチ・テストにおいて,リハーサルが強制か自由かは点数の伸びに影響を与えていないが,リハーサルの回数は影響を与えていることが分かった(β= .55; p < .05)。つまりリハーサルをすればするほど,スピーキング力が向上することが示された。この結果については,平成27年度に学会および論文にて発表をした。平成27年度に実施した研究については,「現在までの進捗状況」にて詳しく報告する。本研究1年目(平成27年度)は,国立大学1年生の必修英語科目3クラスにて「スピーチ&リハーサル」法を実施した。予備研究の内容に,スピーチの「構成」の指導を加え,各クラスは次の3つのグループに分けられた。(1)リハーサル強制+指導(22名):スピーチに向け週に5回以上リハーサルすることが課題とされ,さらにスピーチの構成についての指導を受ける,(2)リハーサル自由+指導(21名):リハーサルは自由とされ,構成についての指導を受ける,(3)リハーサル自由(20名):リハーサルは自由とされ,構成についての指導は受けない。さらに,予備研究からテスト実施方法と評価法を改善した上で,リハーサルおよび構成に関する指導の効果を検証した。平成26年度の予備研究と同じように,スピーチ,ナラティブの2種類のスピーキング事前・事後テストを実施した。重回帰分析を行った結果,構成についての指導の効果は見られなかったが,スピーチ(β= .33; p < .05),ナラティブ(β= .42; p < .05)の両テストにおいて,リハーサルをするほどスピーキング力が向上していることが分かった。予備研究の結果をふまえ,平成27年度はスピーキング・テストの実施方法および評価方法をより信頼性,妥当性の高いものへと改良した。改善の結果,両テストにおいてリハーサルはスピーキング力の向上に効果があることが示された点は意義深い。本研究の成果発表は,本年度(平成28年)8月に,第55回JACET国際大会にて口頭発表をし,その後論文としても発表する予定である。本研究は,グローバル化に対応した大学生の英語コミュニケーション能力育成のために,共通教育初年次において,次の3つのプロジェクトを実施することを目的としている。(1)授業と授業外学習を有機的に結び付けた英語スピーキング能力を育成する指導法の実施と改善(2)ルーブリックの作成・実施と妥当性・信頼性の高い評価法の確立(3)英語習熟度や授業期間が異なる複数のクラスでの実践これまでの成果は以下の通りでる。H2627:国立大学1年生の英語科目2クラスにて「スピーチ&リハーサル」法を実践し,その成果を学会や論文にて発表した。両クラスとも,学期中にひとり2分間のスピーチを8回行い,スピーチに向けて週に5回以上リハーサルすることが課題とされた「リハーサル強制」(20名)とリハーサルするかしないかは自由とされた「リハーサル自由」(19名)グループに分けられた。リハーサルの事前・事後に,2種類のスピーキング・テスト(スピーチとナラティブ)を実施し,データを重回帰分析をしたところ,スピーチ・テストにおいてのみ,リハーサルをすればするほどスピーキング力が向上することが示された。H2728:ルーブリックやテスト実施法の改善を図ったうえで,英語科目3クラスにて「スピーチ&リハーサル」法を実施し,リハーサルおよびスピーチの構成に関する明示的指導の効果を検証した。その結果,2種類のスピーキング・テストにおいて,リハーサルをすればするほどスピーキング力が向上することが分かった。明示的指導の効果は直接的には見られなかったが,指導を受けたクラスはリハーサル回数が多いことが分かった。結果は学会にて発表し,論文にもまとめた。H2829:同大学にクォーター制が導入されたことに伴い,リハーサル期間が短くなった。

リハーサル実施期間がスピーキング力の向上にどう影響するかを現在調査している。本事業は,大学生の英語コミュニケーション能力育成のために,3つのプロジェクト,(1)授業と授業外学習を有機的に結び付けた英語スピーキング能力を育成する指導法の実施と改善(2)ルーブリックの作成・実施と妥当性・信頼性の高い評価法の確立(3)英語習熟度や授業期間が異なる複数のクラスでの実践,を実施することを目的としている。H29年度が事業最終年度であるが,予備研究を含め,これまで3つの研究を実施し,(1)(3)を遂行するためのデータを全て収集することができた。その成果は,学会(4回)および論文(2本)で発表している。また,新たに1本の論文執筆を終えたところである。現在,上記(3)のプロジェクトについての結果を分析・検証しており,学会や論文にて成果発表を行う準備をしている。以上のことから,本事業は当初の予定通り順調に進展していると言える。本研究課題において,これまで3つの研究を,研究方法や分析方法を改善しながら実施してきた。その結果,英語スピーキングによるリハーサルの効果について,主に4点が明らかになった。1.リハーサルは,学習者の第二言語項目への気づきを高める,2.リハーサルすればするほどスピーキング力が向上する,3.スピーチの構成に関する明示的指導は,リハーサルに取り組む動機付けとなる,4.リハーサルの回数が同じであっても,長期的にリハーサルに取り組んだほうが,スピーキング力の向上により効果がある。最終年度(H29年度)は,これらの結果をふまえ,2つの国際学会で成果発表をするだけではなく,英語スピーキング指導についてワークショップ(一般公開)を開催し,本テーマについて議論する場を設けることができた。さらに最終年度においては,本研究課題で明らかになった問題点を踏まえ,次のプロジェクトへ研究を進めるためのパイロット・スタディを実施することができた。本研究課題では,ひとりで行う英語スピーキングによるリハーサルの効果が実証されたが,スピーチ・テストやナラティブ・テストなどの,ひとりで話すモノローグでの効果であることから,次の段階として,他者との会話では同じような効果が見られるのか検証する予定である。さらに,ひとりで行うリハーサルと他者(ペアなど)と協同で行う会話のリハーサルを比較し,それぞれスピーキング力の向上にどう影響するのかを調査したいと考えている。したがって,これらを検証するためのリサーチ・デザインやテストを作成し,一部授業で取り入れ,予備研究を行うことができたことも最終年度の大きな成果である。本研究は,グローバル化に対応した大学生の英語コミュニケーション能力育成のために,特に共通教育初年次において,その基盤となる基本的スピーキング力を身につけさせる指導法と評価法の確立を目指した。授業ではスピーチ(成果発表)を定期的に行い,授業外ではそのスピーチに向け口頭でリハーサル(練習)をする「スピーチ&リハーサル」法を用い,リハーサルはスピーキング力を向上させるかどうかを検証していた。その結果,リハーサルをすればするほどスピーキング力が向上することが示された。
Gene body領域エピゲノムのモニタリングによる細胞成熟誘導法の最適化

本研究計画はglobal DNAメチル化修飾をバックグラウンドとする哺乳類ゲノムにおいて、gene body領域のエピジェネティック状態が細胞成熟に関与する可能性を検討し、これをもとに細胞成熟の評価および誘導を目指す。当初の成熟誘導法の樹立の計画に先立ち心筋細胞と肝細胞の比較を行ったところ、低メチル化を特徴とするgene body領域エピジェネティック・ドメインは心筋細胞により強く、他の細胞にはあまり顕著に見られない特徴であることがわかった。また、DNA脱メチル化代謝中間産物の解析により酸化的脱メチル化過程がこの活性エピジェネティック・ドメインの構築に関与している可能性が示された。本研究計画では、細胞分化モデルを用いて遺伝子のgene body領域のDNAメチル化状態の変化を明らかにし、細胞成熟過程のエピゲノム変化とそれを利用した細胞成熟モニタリング法を確立する。1細胞種特異的レポーターを持つES細胞株の作製と分化誘導、2培養条件によるDNAメチル化レベルの操作および3分化誘導時のgenebody領域のエピゲノム計測と転写効率の定量化により、より機能的細胞の分化法選択に役立つツールを作出し、さらにこれを4ヒトES/iPS細胞に利用することを目的とする。27年度はまず、分化状態の均一な細胞集団を抽出するためにMyh6プロモーターを用いたEmerald GFPレポーター(Myh6:Em)を持つES細胞を樹立した。DNAメチル化レベルと細胞分化誘導効率の関係を検討するために、細胞を通常培養条件(FBS存在条件)基底状態(2i+LIF培養条件)においたうえで細胞の分化誘導を試みたところ、既報の通り基底状態からの分化誘導効率の向上が見られた。この2つの培養条件からの分化誘導を行ったMyh6:Em陽性心筋細胞をFACSソーティングにより回収する試みを行っているが、FBS存在条件からの分化誘導効率が低いため解析に必要な量の細胞を回収するに至っていない。このことを解決するため、現在、より早期マーカーの遺伝子レポーターを選択し分化誘導法の改善を試行中である。一方、生体由来細胞のDNAメチル化解析では、心筋細胞分化誘導直後に細胞特異的遺伝子群がgene body領域を含むglobal DNAメチル化を回避していることが明らかになった。Genebody領域のエピゲノム構成には未分化細胞状態からの継承と分化成熟過程での転写依存性修飾の両方が関わっていると考えられるため、その関係を精査し、機序に即した効果的な成熟状態モニタリングを検討していく。当初の研究計画から、ほぼ27年度中に進めておくべき1細胞種特異的レポーターを持つES細胞株の作製と分化誘導、2培養条件によるDNAメチル化レベルの操作についてある程度の条件検討を進めることができた。また、3分化誘導時のgenebody領域のエピゲノム計測と転写効率の定量化に重要な生体由来心筋細胞の解析が十分に進められており、ほぼ計画通りの進捗であるといえる。哺乳類など巨大なゲノムを持つ生物には、ゲノム全域にわたる「global DNAメチル化修飾」が存在し、これが希少な低メチル化領域とのコントラストを形成している。我々は、成熟細胞における活発な転写活動がgene body領域における高度なPol II集中とDNA低メチル化と共存することを発見した。これに基づき、ゲノムレベルでのエピジェネティック修飾と分子配置の関係性が転写マシナリー分布を規定することで主要な遺伝子の転写量確保と安定化に寄与している可能性を検討した。心筋細胞の分化過程におけるDNAメチル化修飾の変化を、in vivoから得た心筋細胞のゲノムワイド5hmC解析(DNA脱メチル化中間産物)により調べたところ、心筋細胞と肝臓細胞の差異はde novoDNAメチル化を促進するgenebody領域におけるH3K36トリメチル修飾が細胞種特異的遺伝子で抑制されることにより、5hmCによる脱メチル化が心筋特異的遺伝子で優位になることによって起こること、この差異が比較的長い遺伝子を含む細胞種特異的遺伝子群への特異的なPol II集中に関与することが予想された。このことから、H3K36トリメチル化活性を阻害または促進することによって心筋細胞分化の抑制または幼若化が期待できると考えられ、現在検討を行っている。分化誘導における検証のため、当初低メチル化状態のマウスES細胞(2i培養条件)での実験を計画したが、最適化された無血清培地を用いたヒトES細胞で分化誘導に対する高い分化効率および同期性を得られたことから、この培養条件が低メチル化状態に類似するエピジェネティック状態にあるのではないかと予想し、この条件を用いた分化誘導と遺伝子発現操作を行っている。これらの結果が、今後基礎研究および医学研究分野での応用を目的とした細胞成熟誘導方法に活用されることを期待している。28年度は3分化誘導時のgene body領域のエピゲノム計測と転写効率の定量化を進めていく。細胞種特異的レポーターを当初のMyh6レポーターの他に複数使用することで、対象となる細胞集団の違いが生まれるため、その違いも含めて慎重に解析していくことで、分化細胞集団の性質も踏まえたより正確な細胞成熟状態の観測のつながると期待している。

また、解析に伴い現在モデルとして用いている心筋細胞とその他の細胞との違いも明らかになってきたため、細胞成熟の細胞種ごとに異なる戦略を明らかにしていくことも視野に入れて研究を進めていく。エピゲノム学試薬代金の改訂により合計額における差額が生じたため、これを次年度の研究費として使用する。未使用額の発生は、効率的な物品調達を行った結果である。物品費(主に試薬代)として使用する予定。
食品の褐色色素の微生物による脱色と、排水処理への活用

モデル褐色色素として、糖とアミノ酸をそれぞれ加熱還流し、メイラード反応系色素を得た。またクロロゲン酸を酸化重合させ、フェノール系色素を得た。500nmにおける吸光度を約1.0に調整した上記色素を一定容量内で一定比率(0100%まで9段階)で混合し、これを添加した液体培地を調製した。放線菌Streptomyces werraensis TT14,糸状菌Paecilomyces canadensisNC-1,担子菌Coriolus versicolorIFO 30340を本培地中でそれぞれ振盪培養し、培養液の上澄の500nmにおける吸光度を測定して脱色率を求め、色素の混合比率との関係について調べた。その結果、Glc-Glyメラノイジン(以下Glc-Gly)+クロロゲン酸、Xyl-Gly+クロロゲン酸の場合、メラノイジンの割合の増加に伴い、それぞれ担子菌、放線菌による脱色率は上がった。しかしメラノイジンの割合が一定量以下では着色した。Glc-Trp+クロロゲン酸の場合、糸状菌ではGlc-Trpの割合の増加に伴い脱色率も上がった(約35→90%)が、担子菌では全体的に着色した。また、市販の褐色食品についても同様に調べた結果、コーヒー+糖蜜では担子菌・糸状菌ともにコーヒーの割合の増加に伴い脱色率は減少したが、担子菌の脱色率の方が糸状菌より高かった(約8040%)。醤油+味噌では担子菌による脱色率は70%前後でほぼ一定であったが、糸状菌では全体的に着色した。麦茶+紅茶では、担子菌の場合麦茶の割合が40%以下では着色したが、割合の増加に伴い脱色率が上昇した(最高約70%)。以上の結果から、原料の異なる褐色色素2種類の混合液でも、脱色率は色素が1種類の場合にほぼ比例することがわかった。さらに、担子菌と糸状菌について固定化菌体を調製し、褐色食品の混合培地に順次添加し3日間ずつ培養した結果、醤油+味噌では糸状菌→担子菌の順で添加した場合の方が脱色率が高い傾向にあった。この場合、培養温度(27°C、4°C)による差は小さかった。
Extended Landau Theoryによる実効エネルギー損失関数の導出

本年度は、昨年度に行った、extended Landau theoryを用いた反射電子エネルギー損失分光(REELS)スペクトル解析法の円筒鏡型エネルギー分析器(CMA)への応用を踏まえ研究を行い、以下のような結果を得ている名古屋工業大学の後藤らの開発したオージェ電子分光法(AES)装置を用いたAl、Cu、Ag及びのREELSスペクトルの高精度測定を行った。電子の入射エネルギーは1keV及び100eVである。2.REELSスぺクトル解析1keVの入射エネルギーの電子を用いて測定したREELSスペクトルの解析を行い、実効エネルギー損失関数の導出を行った。Cu、Ag、Auにおいては10eV程度のエネルギー損失に相当する非常に顕著な表面励起の効果が見られた。これらは、実効エネルギー損失関数のデータベース構築が今後の表面電子分光法のスペクトル解析において非常に重要な役割を果たすことを示す結果と言える。3.実効エネルギー損失関数のデータベース構築これまで我々阪大のグループのみで行ってきたが、現在、本研究分野は欧米が非常に進んでおり、特にデータベース構築は危機的状態である。そこで実効エネルギー損失関数のデータベース構築を目指して、名古屋工業大学、物質・材料研究機構などの日本国内の数グループとの共同研究による早急な研究推進体制の確立を目指して、いる。本年度は、Al、Cu、Ag、Auなどの基本的な金属の清浄表面に対してREELSスペクトルの精密な測定を行い、Extended Landau Theoryを用いたREELSスペクトル解析により実効エネルギー損失関数を導出し、これらの金属表面でのバルク及び表面励起に関する知見を得ることを目指して研究を行った。現在までに得られている結果は以下の通りである。1.円筒鏡型エネルギー分析器(CMA)への応用これまで本解析法は、半球型エネルギー分析器(CHA)により測定したREELSスペクトルに対して応用してきた。本研究で得られる実効エネルギー損失関数の精度を向上させるためには、測定したスペクトル自体の高い精度が要求される。そこで、日本で最も高精度な電子分光スペクトルの絶対測定が可能である、名古屋工業大学の後藤らの開発したオージェ電子分光(AES)装置によるスペクトル測定を行った。本装置では、通常のAES同様CMAを備えており、CMAではCHAに比べ検出立体角が大きいため、本解析法が適用可能かを検討する必要があった。そこで、実際に入射エネルギー1keVで測定したAuに対するREELSスペクトル解析を行い、本解析法が応用可能であることを確認した。Al、Cu、Ag、Auについて、不純物濃度0.050.01%の試料を用いて、入射エネルギー1keVでのREELSスペクトルの測定を行った。また、これまで表面励起について詳細な研究が殆ど行われていない入射エネルギー100eVでのスペクトル測定も行った。現在これらのREELSスペクトルの解析を行っている。特に低入射エネルギーでは特異なエネルギー損失構造を示しており、新たな知見が得られると期待される。
最新コミュニーション技術の生理心理学　－これ以上、誤った判決をださないために－

コミュニーケーション技術に関して3実験を行った。最初に、オープンクエスチョンにおける虚偽検出で、質問内容(自我関与の高低)と虚偽返答の出現頻度についてSCRを指標として検討した。その結果、交互作用が有意で、高頻度で虚偽の返答を行う条件でもっとも検出率が高いことが確認された。次に、文の真偽判断をさせる事態で、虚偽の返答を行わせた場合、反応時間は有意に遅延するが、心拍率などの生理指標では有意な差がとらえられなかった。最後に、実験参加者にスピーチを行わせ、それにポジティブな評価とネガティブな評価を行った際の、生理反応を比較したが、差は見られず、述べた意見の自信の程度によって心拍率が異なっていた。Concealed informationtest(CIT)に関して、犯行時に起きたイベントが詳細事実の符号化におよぼす影響について検討した。すなわち、犯行中に実験参加者自身が強い情動的覚醒を生じるような行動を自らおこなう条件(自己覚醒)、犯行中に犯行場面に予測しない侵入者が現れる条件(他者覚醒)ならびに覚醒イベントのない条件(統制)において、生理指標の比較を行った。その結果、SCRにおいて、条件(自己覚醒、他者覚醒、統制)と質問内容(裁決・非裁決)の2要因の分散分析を行ったところ、質問内容の主効果ならびに条件と質問内容の交互作用が有意で、下位検定では自己覚醒と他者覚醒での項目間の差が、統制条件を上回ることが明らかにされた。したがって、覚醒条件は統制条件よりもCITの検出率を高める作用があるものの、その内容が自己覚醒と他者覚醒で有意な差がないとがことが明らかにされた。最終年度は以下の二つの実験を行った。命題の真偽判断におよぼす虚偽返答の効果:文の真偽判断課題における虚偽返答の効果研究計画のステージ1にあげた研究である。犯罪者がアリバイを尋ねられた時、実際に自分がいた場所(犯行場所)を答えると疑われてしまうので、別の都市名にリプレースして答えることが多い。一方、真犯人ではなく、事件に関与しない無実の人間であれば、当該犯罪の発生した時刻にいた場所について、心に浮かんだ場所をそのまま答えればよく、別の都市名に置き換える必要はない。この差が虚偽検出課題で生理反応に反映されるのではないかと考え、命題の真偽判断課題を用いて、置き換えの効果を検討したところ、虚偽返答では有意に反応時間が長くなる事が確かめられたが、課題が複雑であるためか生理反応のは差は認められなかった。スピーチ後の肯定的・否定的評価が心拍率におよぼす効果:研究計画のステージ3にあげた研究である。実験参加者は被聴取者、実験者が聴取者となり、両者の生理指標を同時測定しながら、インタビュー調査をおこなう。実験条件として、被聴取者の答えに対して同調的態度(同意する、軽く驚いて興味を示す、ほめる、おだてる)と、否定的態度(怪訝な表情、タイミングの悪いうなづき、反対意見を述べる)で受け答えをおこない、コミュニケーションの成立の度合いが生理反応にどのような影響をおよぼすかという点を検討した。その結果、実験者による肯定・否定の評価は生理反応い直接的な差異をもたらさないが、実験参加者が述べた意見の確信度が心拍率に高低を決めることが判明した。すなわち、社会的に容認されている意見に同調する考えを述べる場合は,自信の度合いが大きいために,心拍率の上昇が抑えられるが、社会的に容認されていない意見にそった考えを述べる際にはストレスにより心拍率が有意に上昇した。Concealed Information Test(以下CIT)における裁決項目への生理的変化は、虚偽の返答ではなく、有意刺激が低頻度で呈示されることに依存して生起すると考えられている。しかしながら、刺激の有意性と低頻度呈示のいずれが、より重要であるのかという点に関して明確にされていない。また、CITは、実務場面にしろ、実験事態にしろ、「いいえ」という同じ返答を繰り返す点でひじょうに単調で受動的になりやすく、覚醒水準が低下しやすい。これに対して、Furedy, Davis & Gyrevich,(1988)が考案したdiffrential deception paradigm(以下DDP)は、20の質問に対し、虚偽と真実の返答を自由におこなう事態であるため、ヒトが日常場面でウソをつく状況に近い状態になり、実験参加者は能動的に取り組むことになる。しかしながら、DDPは質問数が多く、実験参加者が虚偽の返答内容を保持することの負担が大きく、本来の課題である実験者を欺くことに集中できていない可能性がある。そこで、本研究では、CITのように裁決項目を低頻度で呈示する効果をDDPで検討するために、質問数を大幅に減らした上で、虚偽返答の頻度の効果を検討するために以下の実験を実施した。

その結果、SCRについて、返答内容(真偽)と群(自由・制限返答)に関する2要因の分散分析を実施したところ、、返答内容の主効果(F(1/43)=34.32 p<.001)ならびに返答内容と群の交互作用(F(1/43)=6.71 p<.05)が有意であった。すなわち、自由返答群に比べて制限返答群では返答の真偽に対するSCRの差は増大することを示しており、低頻度でウソをつく場合には、検出が容易になることが明らかにされた。覚醒イベントの実験を追加して先に実施したものの、研究は順調に進行している。今年度は真偽判断の実験と、CIT実施中の実験参加者・検査者のSCRを同時測定する実験を実施予定である。データ処理プログラム改良の問題から、実験の順序が多少変わったものの、研究は順調に進行している今年度は末梢指標を用いた真偽判断を、実験参加者60名程度でおこなう予定である。特定の命題を示し、真偽判断をおこなわせる事態で、生理指標を測定する。「ペンギンは鳥類である」「クジラはほ乳類ではない」「ニューヨークはアメリカの首都である」「ボンはドイツの首都ではない」・・・などの命題を呈示し、真の命題に「真」、偽の命題に「偽」のキープレスをおこなわせる条件(真実条件)と、真の命題に対し「偽」、偽の命題に対し「真」のキープレスをさせて(虚偽条件)、情報処理負荷が一過性の生理反応に及ぼす影響と、持続的水準での覚醒レベルを測定する。真実を答える群ではありのままを述べるので、特別な情報処理活動をおこなう必要がないため、生理的変化は起きないが、虚偽返答条件では緊張の水準も高く、複雑な処理に伴うSCRの発現が予測される。このような基礎研究に続いて、さらに、実験中の被検者と,測定中の実験者のSCRの同時測定をおこなう予定である特定の命題を示し、真偽判断をおこなわせる事態で、生理指標を測定する。真実を答える群ではありのままを述べるので、特別な情報処理活動をおこなう必要がない。たとえば、この実験を日常場面に置き換えると、ウソの応答をおこなう群では、たとえば「実際にいた場所」を隠蔽するために、「いなかった場所」に置き換え、「その時間帯に実際にあっていた相手」を「別の相手」に置き換えて答える必要があるため、緊張感も高く、高次の精神活動を必要とする。そこで、虚偽返答群では真実返答群では、実験に臨む心理的構えに緊張感が伴うために高い心拍水準(1分間に100拍)を維持しながら、一方で、質問に対する心拍は返答前に比べて返答後、一時的に2-3拍程度、低下することが予測される。このような基礎研究に続いて、さらにより一般的な場面での虚偽検出の実験的研究をおこなう予定である。実験1を実施予定実験実施のための、追加の測定用システムの導入、ディスポ-ザブル電極などの消耗品の購入、学会参加の参加費、交通・宿泊費にあてる予定である。
転移性消化器癌ワクチン開発の基礎的研究

上皮癌患者抹消血より樹立した細胞傷害性T細胞株(KE4-CT)を用いて新たにクローニングしたlckは、リンパ球系細胞の増殖・機能発現に関与する一方、転移性大腸癌や肺癌の部でも異所性に発現している事から、本分子由来のペプチド抗原が転移癌と関連した癌ワクチンの候補になり得るかどうかを検討した。lckの発現は正常細胞・組織ではType IIプロモーターが関与しているのに対して、癌細胞では主にType Iが関与していることがRT-PCRの結果で確認され、タンパク質レベルでは両者共同じ易動度のタンパク質としてウェスタンブロットで検出された。タンパク質の発現は正常細胞でも認められたが、KE4-CTLは認識しないことが示唆された。しかし、CTLが正常細胞は認識せず癌細胞を選択的に傷害する機序に関しては現在のところ明らかではない。HLA-A24結合モチーフを有する合成ペプチドを、ClR/A*2402細胞株と反応させた後KE4-CTLが産生するIFN-γを測定し、HLA-A24拘束性に認識するペプチド抗原を3種類(Lck208-218,Lck486-494およびLck488-497)同定した。次に決定したペプチドで患者末梢血細胞を刺激し、KE4細胞株に特異的なCTLの誘導を試みたところ、転移癌患者ではペプチド刺激していない群でも前駆細胞が認められ、刺激することにより増強されることが示唆されたが、非転移癌患者および健常人では認められなかった。以上の実験成績から、本ペプチドが、特に転移癌の癌ワクチン候補となりうることが示唆された。現在共同研究者の伊東らが、Lckを含む我々の研究室で同定した複数のペプチドのなかから患者末梢血中の前駆細胞をあらかじめ検査してからワクチンを投与するという、50例以上の高度進行癌を標的としたペプチドワクチンの臨床試験を行っており、Lckペプチドは80%以上に投与されている。また、投与部位における発赤以外の有害事象は現在までのところ認められていない。食道癌患者末梢血より樹立した細胞傷害性T細胞(KE4-CTL)を用いて新たにクローニングしたlckは、リンパ球系細胞の増殖・機能発現に関与する一方、転移性大腸癌や肺癌の一部でも異所性に発現している事から本分子由来のペプチド抗原が転移癌と関連した癌ワクチンの候補になり得るかどうかを検討した。lckは正常細胞・組織ではType IIプロモーターが関与しているのに対して、癌細胞では主にType Iが関与していることがRT-PCRの結果で確認され、タンパク質レベルでは両者共同じ易動度のタンパク質としてウエスタンブロットで検出された。しかし、その機序に関しては現在のところ明らかではない。HLA-A24結合モチーフを有する合成ペプチドを、C1R/A^*2402細胞株と反応させた後KE4-CTLが産生するIFN-γを測定し、HLA-A24拘束性に認識するペプチド抗原を3種類(Lck208-218,Lck486-494およびLck488-497)同定した。

現在共同研究者の伊東を中心に、HLA-A24およびHLA-A2拘束性ペプチドの臨床応用に向けての有害事象の有無の検討を始めている。今後lckに関しても、転移癌を標的としたペプチドワクチンの確立をめざしてその解析を行うと同時に臨床試験を行う予定である。上皮癌患者末梢血より樹立した細胞傷害性T細胞(KE4-CTL)を用いて新たにクローニングしたlckは、リンパ球系細胞の増殖・機能発現に関与する一方、転移性大腸癌や肺癌の一部でも異所性に発現している事から本分子由来のペプチド抗原が転移癌と関連した癌ワクチンの候補になり得るかどうかを検射した。lckの発現は正常細胞・組織ではType IIプロモーターが関与しているのに対して、癌細胞では主にType Iが関与していることがRT-PCRの結果で確認され、タンパク質レベルでは両者共同じ易動度のタンパク質としてウエスタンブロットで検出された。タンパク質の発現は正常細胞でも認められたが、KE4-CTLは認識しないことが示唆された。しかし、CTLが正常細胞は認識せず癌細胞を選択的に傷害する機序に関しては現在のところ明らかではない。HLA-A24結合モチーフを有する合成ペプチドを、C1R/A*2402細胞株と反応させた後KE4-CTLが産生するIFN-γを測定し、HLA-A24拘束性に認識するペプチド抗原を3種類(Lck208-218,Lck486-494およびLck488-497)同定した。次に決定したペプチドで患者末梢血細胞を刺激し、KE4細胞株に特異的なCTLの誘導を試みたところ、転移癌患者ではペプチド刺激していない群でも前駆細胞が認められ、刺激することにより増強されることが示唆されたが、非転移癌患者および健常人では認められなかった。以上の実験成績から、本ペプチドが、特に転移癌の癌ワクチン候補となりうることが示唆された。現在共同研究者の伊東らが、Lckを含む我々の研究室で同定した複数のペプチドのなかから患者末梢血中の前駆細胞をあらかじめ検査してからワクチンを投与するという、50例以上の高度進行癌を標的としたペプチドワクチンの臨床試験を行っており、Lckペプチドは80%以上に投与されている。また、投与部位における発赤以外の有害事象は現在までのところ認められていない。
肺癌細胞のテロメラーゼ活性・遺伝子変異と化学療法反応性の検討

肺癌非手術検体における遺伝子変異・テロメラーゼ活性を測定し、それらと、予後・抗癌剤反応性との関係を検討することを試みた。肺癌非手術症例の経気管支鏡的擦過細胞診検体等について、蛋白を抽出した後核ペレットからDNAを抽出した。蛋白溶液のテロメラーゼ活性をTRAP法にて測定したが、細胞診検体中の肺癌細胞が占める割合は種々で、かつ、非小細胞癌では元来テロメラーゼ活性レベルが低い症例が過半数を占めるため、検出率が約40%と低いのみならず、活性レベルは混入する正常細胞の割合に左右された。そこでまず、テロメラーゼ蛋白成分のhTERT mRNAを定量的RT-PCR法で測定したが、alternative splicingを考慮しても必ずしもテロメラーゼ活性レベルを正しく反映するものではなかった。そこで、hTERT抗体を用いた免疫染色を試みたところ、テロメラーゼ高活性例は例外なく染色される癌細胞の割合が高く、低活性例では染色されない癌細胞の比率が高かった。すなわち、細胞診検体のように正常細胞が多数混入する検体であっても、その中の癌細胞についてhTERT陽性細胞:陰性細胞比で、もともとの癌のテロメラーゼ活性レベルが推定可能であった。さらにテロメラーゼ高活性の転移巣と低活性の原発巣のRNAを用いてマイクロアレイで解析したところ、いくつかの、発現パターンが異なる遺伝子が検出され、これらがテロメラーゼ活性化に関わっている可能性が示唆された。一方、核ペレットから抽出したDNAを用いたPCR-DGGE法によるp53遺伝子変異の検索は組織検体を用いた解析に匹敵する結果が得られた。そこで、非手術症例70例の細胞診・生検標本においてこのp53遺伝子変異の有無を指標として肺癌の予後を検討した結果、化学療法施行群、非施行群、全体のいずれでも、p53遺伝子変異は有意な予後不良因子であることが判明した。われわれはこれまでに,細胞が不死化して無限増殖するためには必須と考えられる逆転写酵素テロメラーゼが肺癌組織の80%以上で活性化され検出されること、その活性レベルは特に非小細胞癌では大きくばらつていること、を報告し、テロメラーゼが高活性である癌は、クローン選択を繰り返した細胞で構成されていることを提唱してきた。本年度の研究で、この仮説を裏付けるため、テロメラーゼ高活性を示した肺癌と、その臨床背景・生物学的特性との関連を統計学的に解析した。外科的に切除された原発性肺癌97例の検討でテロメラーゼ高活性と関連を示す因子は、小細胞癌、6ヶ月以内死亡例(非小細胞癌)、Rb遺伝子領域アリル欠失、テロメア長変化(延長または短縮)、%S期細胞高値、aneupleudyなどであった。傾向を示す因子は、L-myc遺伝子領域アリル欠失、p53遺伝子領域アリル欠失、異常FHITmRNA発現量、複数遺伝子変異(>5hits)などで、関係ない因子は、年齢、腫瘍径、病理病期、分化度、FHIT遺伝子領域アリル欠失、c-myc増幅、p53変異、1p34-pter LOH、L-mycSアリル、K-ras変異などであった。Kaplan-Meier法により予後と有意に相関した因子は、上記のうち、テロメラーゼ高活性とRBLOHであった。非手術検体については、検体・データ収集中であるが、テロメラーゼ活性を検出しなかった症例で、化学療法後再発を見ず予後良好の傾向を認めた。

肺癌非手術症例の経気管支鏡的擦過細胞診検体等について、細胞診用スライド作製後残った細胞から蛋白を抽出し、核ペレットからはDNAを抽出した。蛋白溶液のテロメラーゼ活性をTRAP法にて測定したが、細胞診検体中の肺癌細胞が占める割合は種々で、かつ、非小細胞癌では元来テロメラーゼ活性レベルが低い症例が過半数を占めるため、検出率が約40%と低いのみならず、活性レベルは混入する正常細胞の割合に左右された。そこで、感度が高く正常細胞が多数混入しても影響されない方法の確立をめざした。まず、テロメラーゼ蛋白成分のhTERT mRNAを定量的RT-PCR法で測定した。alternative spllcingされていない全長mRNAの発現量とテロメラーゼ活性はある程度相関したが、必ずしもテロメラーゼ活性レベルを正しく反映するものではなく、mRNA発現がありながら活性が認められない症例があった。そこで、hTERT抗体を用いた免疫染色を試みたところ、テロメラーゼ高活性例は例外なく染色される癌細胞の割合が高く、低活性例では染色されない癌細胞の比率が高かった。すなわち、細胞診検体のように正常細胞が多数混入する検体であっても、その中の癌細胞についてhTERT陽性細胞:陰性細胞比で、もともとの癌のテロメラーゼ活性レベルが推定できると考えられた。さらに、テロメラーゼ高活性の転移巣と低活性の原発巣のRNAを用いてマイクロアレイで解析したところ、いくつかの、発現パターンが異なる遺伝子が検出され、これらがテロメラーゼ活性化に関わっている可能性が示唆された。
HDAC1/2特異的阻害剤K560の神経保護作用に基づく新規緑内障治療薬の開発

本研究プロジェクトでは、アイソタイプ選択的HDAC阻害剤K560による神経保護作用機序を解明することを目的としている。予備的実験の結果から、K560がNMDA誘導性の神経過剰興奮毒性によって生じる網膜神経節細胞死を抑制することを示唆するデータを得た。当該年度には、予備的実験データの再現性の検討、及びその結果を信頼づける周辺データの取得を目指した。まずマウスにK560を経口投与したのち、網膜においてアセチレーションの亢進が見られるかどうか、western blot法により検討した。その結果、投与個体によりアセチレーション亢進にバラツキが見られることが明らかとなった。この結果から示唆されるように、NMDA投与眼においても、網膜ごとに細胞死レスキューの程度にバラツキが見られた。この結果を踏まえ、まずはK560の製剤化検討を行うことで、安定的にアセチレーションの亢進が認められる経口投与条件について検討した。K560は極度に疎水性であり、経口投与後の体内吸収において、何らかの支障が出る可能性を考えた。そこでK560に対し、親水性を高める処理を施し、親水化K560を経口投与したのち、K560の血中濃度及び経口投与後のアセチレーションの程度について検討した。しかしながら、想定通りの結果が得られなかった。薬剤用法としては経口投与が適当であると考えられるが、基礎研究において薬効薬理を評価する段階では、神経節細胞に安定的にK560をデリバーすることが必須であるため、今後は、経口投与ではなく、硝子体投与による投与方法を試して見る予定である。経口による投与法では、アセチレーションの程度にバラツキが見られることが明らかとなり、その対策のため、当初の計画よりも進捗がやや遅れている。記述の通り、経口投与法では個体間でアセチル化の程度にバラツキが見られたため、硝子体経由での薬剤投与を検討している。以前、経口投与でK560の薬効薬理を検討した先行研究はあるが、硝子体投与においては、投与量の検討から実施する必要があり、当初の予定よりも実験動物を消費することになるかもしれない。当面は実験条件の検討にエフォートを注ぐ。「研究実績の概要」及び「現在までの進捗状況」の項目にて記述したように、研究を進める過程でK560経口投与による網膜のアセチル化亢進に個体差が見られるといった問題が認められたため、そのトラブルシューティングに時間を要している。結果、研究計画に遅延が生じ、次年度使用額が発生した。今後、引き続きトラブルシューティングを進めていく予定であるが、次年度使用額は、そのための動物購入費に充てたい。
ColE2群プラスミドの複製開始蛋白質の機能構造

ColE2群プラスミドの複製開始蛋白質の機能解析を目標として、本年度は主としてColE2とColE3との間での複製開始蛋白質(Rep)と複製開始部位(Ori)の相互作用の特異性決定の仕組みを明らかにすることを目的とする研究を行なった。本年度の研究により下記のような成果を得た。1.認識・結合の特異性は、RepのC末端側約4分の1の領域内の2ヶ所のアミノ酸の欠失・挿入を含む領域(AとB)とOri内の2ヶ所の1塩基の欠失・挿入のある部位(αとβ)の組合せによって決まることが明かとなった。即ち、AとαおよびBとβの由来がそれぞれ一致する場合には、RepとOriとの結合が安定であり、プラスミドの複製開始効率が高く、プラスミドが安定に保持される(正常)。一方、Aとαの由来のみが一致する場合には、RepとOriとの結合が非常に不安定であり、複製開始効率が低く、プラスミドの保持がやや不安定となる。2.プラスミドのコピー数は、高い複製開始効率を示すRepとOriの組合せの場合より、低い複製開始効率の組合せの場合の方が高いことが判明した。このことは、RepとOriの組合が不安定な組合せでは、複製開始の調節が正常に行われないことを示すと考えられる。3.A領域については9アミノ酸の欠失・挿入が特異性を決定していることが解った。また、B領域については2アミノ酸の欠失・挿入以外の残基が特異性を決定していることが解った。4.α部位については挿入残基がAでもTでもColE3特異性を示した。また、β部位についてはGのみColE2型となった。以上のことから、A領域がRep内の2つのドメインをつなぐリンカー領域で、対応するα部位がOri内の2つの領域を隔てるスペースであるという新しいDNA結合の特異性決定機構の存在の可能性が示唆された。この点を明確にすることは今後の課題である。
小学校英語授業改善に向けた教師の認知研究:言語教師としての信条分析

本研究の目的は,小学校教師がもつ言語教師としての認知を解明することにより,小学校英語教育の改善に資することである。課題解決のために,3回の質問紙調査による統計的分析と2回のインタビューや集団討議による質的分析を行ってきた。その結果,小学校教師のもつ言語教師としての認知の特徴と成長のプロセスの一端が明らかにすることができた。また小学校教師の言語教師としての認知や実践の変化に影響を及ぼしている要因の幾つかが示唆された。本研究の目的は小学校教員のもつ言語教師としての認知を解明することにより、小学校における外国語教育の改善に資することである。研究の1年目である本年度は、主としてアンケート調査とインタビューや自由討論によるデータの収集と分析を行った。(1)アンケートによる調査beliefを調べるための質問紙調査BALLIを実施し(N=98)、因子分析を行った結果6つの因子が抽出された(累積寄与率、69.2%)。「経験」が教師の認知にどのように影響を与えているのかを知るため、経験の違いによって教師をグルーピングし、グループ間の因子得点の平均値を比較した。その結果、教師の経験の違いによって有意差のある要因(「手本重視」「人間形成重視」「基礎重視」など)があることが示唆された。一方、この質問紙調査の妥当性を調べるため主成分分析を行った結果、「技能・知識」「学習方法」といったBALLIの構成概念とは異なる成分が見られ、小学校教師を対象とした新たな質問紙を作成することの必要性が示唆された。(2)インタビューによる調査インタビューと自由討論(N=3)を実施し、データベース発想法(藤沢1992)によって分析を行った。その結果、外国語活動の実践に影響を及ぼしている特徴的な要因の幾つかが明確になり、先行研究(Lortie, 1975;他)で明らかになっている英語専門教師に見られるものとは異なった要因やBorg(2003)の「教師認知をめぐる枠組み」の中で説明されている教育実践に影響を与えていると考えられるContextual Factorsには見られない要素が抽出された(地域の影響、同僚との葛藤、学級作りの視点、未開発の教科であることの面白さなど)。これらの結果はデータの数が少ないため現段階では一般化することはできないが、研究の初年度として次年度以降の研究の方向性を見極めるための貴重な示唆が得られた。本研究の目的は,小学校教師のもつ言語教師としての認知を解明し,小学校における英語教育の改善に資することである。研究2年目となる本年度は,前年度に得られたデータを再検討し,さらに大規模なデータの収集を行った。研究課題の解決のために,質問紙による量的なデータと調査目的にあったサンプリングによる質的データを混合して用い,統計的な検証と記述データの考察を繰り返し行った。質問紙調査の分析には基本的に横断的研究方法を用い,被験者の様々な属性の違いによって教師を群化し,その群間の違いを統計的な手法で比較した。また、質的なデータはデータベース発想法(藤沢1992)などの手法により,コード化とそのカテゴリー間の関係を解釈することで理論の構築を図った。本年度の具体的な成果は以下である。(1)前年度に実施した質問紙による調査結果から,小学校教員め認知を構成している要因と教師の自律的成長に関わっていると思われる要因を抽出し,それらを測定するためのアンケート質問紙(230項目)を作成してパイロットスタディを実施した。(2)同様に前年度の質的調査(インタビューと集団討議)から明らかになった教師の自律的成長の過程に関する情報から,教師の成長は一定の過程をたどるのではないかという仮定のもとに,それらをどのような尺度や代表値で測定するかを検討し,教師の自律的成長の尺度化を試みた。(3)以上の情報をもとにパイロットスタデイの質問項目を精査し,教師の自律的実践の度合いを測定する項目を追加した本調査のための質問紙を構築した。(4)これらの結果を補完し,指導経験が教師の認知に与える影響を探るため,外国語授業VTRを刺激素材としたグループ討議を実施し外国語活動経験者と未経験者g授業観の違いを探った。現在発言をすべて文字化して分析中である。本研究の目的は,小学校教師のもつ言語教師としての認知を解明し,小学校における外国語活動の改善に資することである。これまでの研究において,質問紙による量的なデータとインタビューや討論による質的データを収集し,混合研究法による分析と考察を行ってきた。研究の最終年度に当たる本年度の主たる成果は以下である1.小学校外国語活動指導経験者と未経験者を対象に,ある小学校外国語活動の授業をビデオで視聴した後グループ討議を実施し,両グループの発話を質的に分析した。分析の結果から,授業を見る視点,解釈の仕方,コミュニケーション観などに興味深い違いが見られた。こうした研究を積み重ねることで得られる知見を,多様な教師経験をもつ教師を対象とする現職教師教育の具体的な改善策を検討する上で役立てていきたい。

2.小学校教師のもつpedagogical beliefを調べるため,外国語活動に関するビリーフと自己の教育実践に関するビリーフを調べる2種類の質問紙を作成した。また教師の個人差要因として,外国語学習動機,態度,学習者信条を調べる質問紙を作成した。個人差要因を独立変数,pedagogical beliefを従属変数とした重回帰分析により,例えば学習者として外国語学習動機の低い教師に英語指導能力を重視する傾向が見られるなど,幾つかの要因間の関係が示唆された。小学校教師の意識のレベルでの特徴を知るために,今後もこうした研究を積み重ねていきたいと考えている。3.小学校教師の外国語活動実践の特徴を調べるため,これまでの研究で得た情報から18項目から成る質問紙を作成した。さらに授業実践に影響を与える要因として,小学校教師のもつ外国語学習者としての個人差要因,教師としての個人的要因,教師をとりまく教育環境を仮定し,同様に質問紙を作成し調査を実施した。これらの要因間の関係を明らかにすべく,現在結果を分析中である。3年間の研究計画において,1,2年目に計画していた量的・質的調査は順調に進展しており,小学校教師の言語教師としての認知を解明するという研究目的は順調に達成されつつある。しかしながら,研究の進展に伴って新たな研究課題(教師の自律的成長段階における認知の特徴)が生じ,これらの調査を継続して行うこととした。そのため,3年目に予定していた授業観察とその分析のための準備を進めることができなかった。24年度が最終年度であるため、記入しない。今後は,構築した質問紙による本調査を実施しより多くのデータを収集し分析するとともに,教師の自律的成長の尺度化を試み,それぞれの成長段階における教師の認知の特徴を明らかにしていく。そのために,これまで構築してきた人的ネットワークやwebによるコミュニテイサイトを活用していく。また,グループ討議によるデータの収集も継続し,教師がおかれた環境が教師認知に与える影響も調査していきたい。得られた結果から,小学校教師が自信をもって外国語活動に取り組むことを支援するための教飾教育の在り方について具体的な方策を提案していく。
糖鎖改変技術を利用したバイオ輸送システム

本研究は細胞種に由来する特異性を活かした疾病治療を可能にするポリマーマテリアルの創出を目的として企画された。具体的には,研究期間において1糖鎖改変技術により免疫細胞の表面を核酸アプタマーを修飾し,この免疫細胞で特定の癌細胞を選択的に捕捉すること,2細胞膜の糖タンパク質を担持したナノマテリアルを調製し,これを医療展開するための要素技術を集積すること,について検討した。1では,癌細胞の表面に過剰発現しているprotein tyrosine kinase 7 (PTK-7)に対して特異的に結合する核酸アプタマー(sgc8)を免疫細胞の表面に修飾した.糖鎖の生合成経路を介しマウスマクロファージ(RAW264.7)の表面にメタクリロイル基を誘導した.続いて,末端をチオール化したsgc8(sgc8-SH)と光ラジカル誘導剤(Eosin-Y)を添加し,可視光線を10分間照射した.RAW264.7の表面に修飾したsgc8をAlexa Fluor 488でラベル化された相補鎖を作用させることにより確認した.PTK-7を過剰発現しているヒト白血病細胞(CCRF-CEM)を穏やかに振盪しながら30分間接触させた.ネイティブの細胞やManM(-)の表面にはほとんどCCRF-CEM細胞が認められないのに対し,ManM(+)には多くのCCRF-CEM細胞が粘着していることが認められた.一部の粘着したCCRF-CEM細胞がRAW264.7細胞に貪食されることも認められた.2では,白血球細胞由来の膜タンパク質P-セレクチン糖タンパク質リガンド-1(PSGL-1)と水溶性ポリマーの複合体を調製し,この複合体による活性化血管内皮細胞のターゲッティングを試みた。27年度が最終年度であるため、記入しない。26-1 N-アセチルマンノサミン誘導体による細胞内糖鎖合成の可視化D-マンノサミン塩酸塩またはD-グルコサミン塩酸塩とNBD-Clを反応させ蛍光化アミノ糖NBDMとNBDGをそれぞれ合成した。モデル細胞としてヒト子宮頸癌細胞(HeLa)を使用し、NBDGとNBDMの毒性をCCK-8キットを用いて評価した。その結果600nM以下の終濃度では細胞の生存に影響を及ぼさなかったため、以降の実験では蛍光化アミノ糖の終濃度を600nMと設定し、可視化実験を行った。NBDMとNBDGをHeLa細胞に接触させ、細胞を経時的に観察したところ、いずれのアミノ糖も細胞内に取り込まれたが、NBDGの取り込み速度がNBDMに比べ著しく大きいことがわかった。蛍光アミノ糖の細胞内分布においても蛍光アミノ糖の構造によって若干異なる蛍光が認められた。26-2細胞膜成分を担持させたナノゲルと細胞との相互作用重合性基を糖鎖に誘導した細胞を集めた容器に,所定の界面活性溶液を添加し,細胞を溶解した。この溶液に,所定濃度2-メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン(MPC)と水溶性の架橋剤を添加し,震盪しながらレドックス重合し、細胞由来糖タンパク質を含有したナノゲルの調製に成功した。26年度では、細胞内イメージングのための新たな蛍光プローブの作成と薬物輸送担体を指向したナノ粒子の調製について検討することを計画した。これまでに糖タンパク質を含有したナノ粒子の蛍光化アミノ糖の合成に成功し、細胞内イメージングの実験に着手することができた。また、糖タンパク質を複合化したナノ粒子の合成にも成功し、おおむね当初の計画通りに研究を遂行することができた。26年度で合成した蛍光化アミノ糖を用い、細胞内糖鎖合成の可視化を行う。

この時、アミノ糖の構造に起因する特異性を明らかにする。一方、糖タンパク質を担持したナノ粒子の標的指向性を、in vitroで作成した炎症モデルを用いて評価する。また、このナノ粒子に薬剤を担持し、DDSキャリアとしての有用性を見出す。27年度が最終年度であるため、記入しない。