hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
金属フリーな非白金触媒としてのシルク活性炭による酸素還元活性メカニズムの解明

白金代替触媒として、シルク(絹)を原料とする「シルク活性炭」の開発を行った。作製条件を変え、活性に関与すると考えられる窒素種および細孔構造を定量し、酸素還元活性との関係について研究を行った。炭化後賦活したシルク活性炭は、ピリジン型、ピロール型の窒素が減少したのに対し、グラファイト型の窒素の変化量は小さく、最も安定なことが分かった。メソ孔体積で規格化した酸素還元電流は、高電位領域ではほぼ一定であり、酸素還元電流は窒素量よりもメソ孔に支配されていることが示唆された。また、酸素還元開始電位は、比表面積の影響をそれほど受けず、高い炭化温度によるグラファイト型の窒素種が高活性に寄与することが示唆された。白金の酸素還元能を代替する触媒として、金属フリーで安価かつ高性能な窒素含有炭素触媒である、シルク(絹)を原料とする「シルク活性炭」の開発に引き続き取り組んだ。シルクを炭化したのちの賦活条件を変えることで、細孔と酸素還元活性との関係を調べた。シルク活性炭は、一次炭化→ボールミルによる粉砕→二次炭化→二酸化炭素賦活という工程で作製した。得られたシルク活性炭について、X線光電子分光(XPS)によりN1s,C1sスペクトルを測定し、窒素と炭素の比率を求めた。また、XPSスペクトルのピーク分離を行い、4種類の窒素の定量を行った。また、窒素吸着等温線測定とその解析により、比表面積、平均細孔径の定量を行った。更に、回転ディスク電極によるサイクリックボルタンメトリー(CV)を用い、電解液中を窒素及び酸素で飽和したときの、電位走査時の電流の比較により酸素還元活性を求めた。窒素のXPSスペクトルより、CO2賦活により、全窒素量が減少していることがわかる。ピリジン型の窒素は、賦活の初期で減少し、その後変化が小さくなった。賦活時間の増加とともに、ピロール型の窒素が減少したのに対し、グラファイト型の窒素の変化量は小さかった。酸素還元反応の電流は賦活処理により増加したが、処理時間が長くなると逆に減少した。酸素還元開始電位は、比表面積の影響をそれほど受けなかった。メソ孔体積で規格化した酸素還元電流は、0.3V以上ではいずれのシルク活性炭についても同程度となった。これより、酸素還元電流はメソ孔に支配されていることが示唆された。白金は多くの産業で用いられ、高価で希少なため、代替材料の開発が大きな課題である。白金の酸素還元能を代替する触媒として、金属フリーで安価かつ高性能な窒素含有炭素触媒である、シルク(絹)を原料とする「シルク活性炭」の開発を行った。酸素還元触媒としてのメカニズムの解明および性能向上を目的として、作製条件を変え、活性に関与すると考えられる窒素種および細孔構造を定量し、電気化学測定による酸素還元活性との関係について研究を行った。シルク活性炭は、一次炭化→ボールミル粉砕→二次炭化→賦活という工程で作製した。炭化及び賦活条件を変えて、酸素還元活性との関係を調べた。得られたシルク活性炭について、X線光電子分光(XPS)によりN1s,C1sのスペクトルを測定し、窒素と炭素の比率を求め、スペクトルのピーク分離を行い、4種類の窒素の定量を行った。また、窒素吸着測定とその解析により、比表面積、平均細孔径の定量を行い、XRDとラマン分光により、結晶構造及び結晶の欠陥についての解析を行った。酸素還元開始電位および酸素還元電流について、回転ディスク電極によるサイクリックボルタンメトリー(CV)を用い、電解液中を窒素及び酸素で飽和したときの電位走査時の電流の比較により求めた。炭化後賦活したシルク活性炭のXPSスペクトルより、賦活により全窒素量が減少し、ピリジン型、ピロール型の窒素が減少したのに対し、グラファイト型の窒素の変化量は小さく、最も安定なことが分かった。酸素還元電流は賦活処理により増加したが、処理時間が長くなると逆に減少した。白金の酸素還元能を代替する触媒として、金属フリーで安価かつ高性能な窒素含有炭素触媒である、シルク(絹)を原料とする「シルク活性炭」の開発に取り組んだ。シルクの炭化条件(温度と時間)を変えることで窒素・炭素比を変え、酸素還元活性との関係を調べた。シルク活性炭は、一次炭化→ボールミルによる粉砕→二次炭化→水蒸気賦活という工程で作製した。また、XPSスペクトルのピーク

分離を行い、4種類の窒素の定量を行った。また、窒素吸着等温線測定とその解析により、比表面積、平均細孔径の定量を行った。更に、回転ディスク電極によるサイクリックボルタンメトリー(CV)を用い、電解液中を窒素及び酸素で飽和したときの、電位走査時の電流の比較により酸素還元活性を求めた。高温条件で、炭化した試料について、窒素種の影響を見たところ、それよりも低い温度で炭化したシルク活性炭と比較して、窒素含有量は少なかったが、酸素還元開始電位は、それほど大きく低下しなかった。このことから、酸素還元活性の活性点は窒素自体でなく、窒素があることで炭化時に形成されたサイトが活性点となっていることが示唆された。一方、電流について比較したところ、高温で炭化したシルク活性炭の電流は低温のものと比べて小さかった。高温炭化したものは、比表面積が小さく、そのために、電流が流れなかったと考えられる。このことから、高活性なシルク活性炭を得るためには、酸素還元開始電位だけでなく、電流が得られるように、比表面積も考慮して炭化温度を決定する必要があることがわかった。研究の目的としていた、賦活処理したシルク活性炭について、窒素種および細孔構造を定量し、電気化学測定による酸素還元活性との関係から、酸素還元活性に及ぼすメソ孔の影響についての知見を得ることができた。研究の目的としていた、高温で炭化したシルク活性炭について、窒素種および細孔構造を定量し、電気化学測定による酸素還元活性との関係から、酸素還元活性の活性サイトについての知見を得ることができた。更に、当初の研究計画以上に、シルク活性炭を燃料電池の電極として用い、発電特性を向上させることができた。また、次年度の研究計画に含まれていた、ボールミルによる比表面積の増加が活性に及ぼす影響についても既に、一部の成果を得ることができている。これまでの研究で、炭化条件と賦活条件をかえてシルク活性炭を作製し、窒素種および細孔構造を定量し、電気化学測定による酸素還元活性との関係から、酸素還元活性には、窒素量よりもメソ孔が影響していることがわかった。そこで、細孔分布の制御を行うための賦活条件について更なる検討を行う。メソ孔を増やすのに賦活条件を最適することで、更なる性能向上を図る。また、これまで明確になっていない、活性サイトについての知見を更に得るため、XRDやラマン分光による解析を行い、結晶構造及び結晶の欠陥についての解析を行う。これまでの研究で、炭化温度を高くすることで窒素種は減少するが、酸素還元開始電位の大幅な低下は見られなかった。この温度は、通常の活性炭作製の条件よりも高く、活性サイトについての知見を更に得るため、炭素の状態等の観察を行う。また、これまでの研究で酸素還元電流については、比表面積が大きく支配していることがわかった。シルク活性炭について、水蒸気賦活あるいは、ボールミルでの粉砕による比表面積の増加が酸素還元活性に及ぼす影響について検討する。平成24年度の研究計画で使用予定であった装置について、研究代表者の所属研究機関が保有する装置を連携研究者が用いることにより、触媒作製と評価を平行して行い、当初の研究計画よりも早く進めることが可能となった。
農業生物におけるウイルス・プラスミドの微細構造とその生物工学的利用に関する研究

(1)植物では、性状究明が要望されていた各種のひも状、棒状、球状、双球状、桿菌状の重要なウイルスについて、それらの逆染色、超薄切片による細胞内所在や増殖様式などの微細構造を精査し、それらを純化精製し、理化学的性状、構成素材、抗原性を究明した。さらに、植物プロトプラストへのウイルス遺伝子導入、遺伝子ベクターとしてのDNAウイルスの性状、ハイブリドーマによるモノクローナル抗体の作製、ゲノム核酸のクローニングとそのシークエンス、プローブによる遺伝子診断を行った。フリー核酸が病原のウイロイドではバラ科を中心に探索し、ナシ、モモ、バラ、リンゴおよびカーネーションで新たに特異的なRNAが見出された。菌類では、新たに22種の菌からウイルス、3種の菌からプラスミド様DNAを見出し、それらの性状を詳細に調べ、分子構造の分析を行った。(2)カイコ、農業昆虫の核多角体病、細胞質多角体病、ポックス、濃核病、軟化病の各種ウイルスについて、純化試料での表面、薄切での細胞内特性などの微細構造を調べ、さらに構成素材の種類、分子量などを求めた。DNAウイルスでは培養細胞での感染・増殖、抗ウイルス剤の探索、カイコでの抵抗性遺伝、野外昆虫との関係なども検討した。(3)脊椎動物では、イヌ、ネコ、ウマ、ニワトリのアデノ、ヘルペス、カリキ、パラミキソ、コロナなどのDNA、RNAウイルスについて、培養細胞や臓器から精製して微細構造を精査し、理化学性や抗原性を探究し、さらにそれらの検出、診断法を検討し、さらにワクチンの応用を試みた。(4)細菌では、イネ根圏の窒素固定菌Klebsiella oxytocaの窒素固定遺伝子群をクローン化してその構造を明らかにし、遺伝子操作で窒素固定能の増強を行った。枯草菌のセルラーゼ遺伝子の塩基配列を決定しその特性を究明し、さらにStreptomycesのセルラーゼの性状を明らかにした。また、ムコールレンニンのイーストへの組換体とその発現を実証した。(1)本邦産でウイルス学的に興味済たれる球状,双球状,桿状,ひも状,桿菌状の植物ウイルスについて粒子形状および寄生細胞内での増殖様式と細胞変性などの微細構造を究明した.純化標品については構成素材を分離し,理化学的性状を調べた, DNAウイルスとジャガイモYウイルス(cDNA化)についてはゲノム分析,制限酵素切断地図,あるいは一部シークエンスを決定した.フリー核酸が病原のウイロイドをカーネーションで見出した.モノクロナール抗体をRDVで作製し,これで5種のエピトープを確認した.イネ科植の発生する数種のウイルスおよび双子葉植物に広く分布するBBWVについて系統解析を試った.菌類ウイルスとしては各種さび病菌に径約40mmが広く分布し,メダケ赤衣病菌ウイルスは純化され,理化学的および血清学的性状を明らかにした.灰色かび病菌ではみトコンドリア分画から2ー3Kdの線状DNAのプラスミド様核酸が見出された.(2)カイコの2種の濃核病ウイルス,DNVー1,DNVー2の培養細胞およびカイコ中腸におけるウイルスの増殖様式,細胞病変,干渉を確認し,カイコ個体ではその増殖について遺伝的要因を分析した.異種ウイルス間の増殖様式についてはNPVーCIVでも検討した. BNPVではツニカマイシンなどを含めウイルス剤の探索を行った.チャノコクモンハマキポックスウイルスについては構造蛋白質と核酸ゲノムの性状を究明した.

(3)イヌコロナウイルスの検出・診断法を開発するためその3株をCRFK細胞にプレートすることで接種後2日で明瞭はプラックを形成し,その数は接種量と相関した.本法は本ウイルスの有効な定量法で,また中和試験にも利用できると思われた. (4)土壌から分離した放線菌から得られたセルラーゼ(3成分)の性状を明らかにした.Mucor pusillusのaspertic proteaseのレンニンをイーストに遺伝子組換えし,その発現を明らかにした.枯草菌のセルラーゼ遺伝子の構造と利用を行った.(1)植物では、イネ科のサトウキビモザイクウイルスを形状、理化学性、抗原性で千系統に類別し、オギ条斑ウイルスの環状ssDNA,複製型のdsDNAの性状を究明し遺伝子ベクターの検討を行った。トマト菜脈透化ウイルスではその桿菌状形態、細胞内所在様式を詳細に調べ、純化試料での核酸ゲノムと構造蛋白質を解析し、さらにポリおよびモノクローナル抗体による抗原性を検討した。ジャガイモYウイルスでは2種の系統のゲノムRNAのクローニングを行い、一部その一次配列を決定し、さらにプローブによる遺伝子診断を進めた。ウイロイドでは、リンゴゆず果病とカネーションで環状のssRNAと思われる低分子核酸を見出した。菌類では、A.alternatrで球状ウイルスを見出し形態、理化学性、ssRNAを明らかにし、さらに灰色かび病菌でユニークな直鎖状のプラスミド様のDNAを見出し分子性状を究明した。(2)昆虫では、カイコのDNUの中腸における転写、DNV1,2の増殖の組織化学的比較を行い、さらにカイコの品種抵抗性を疾理・遺伝子的に検討した。クワノメイガにみられるーnonocculudedのDNV、IFVはカイコに寄生性が認められ、それらの起源が注目された。チャノコカクモンハマキのentomopoxuirusを純化し、そのゲノムDNA、蛋白質を分析した。(3)ニワトリの重要な腫瘍ウイルスのマレック病ウイルス(MDV)についてモノクローナル、ポリクローナル抗体によるELSA検定法を確立し、また本ウイルスで腫瘍が進行すると脾臓細胞は細胞毒性を示した。ネコヘルペスウイルスでは感染株化細胞から赤血球凝集素の抽出を行った。(4)細菌では、枯草菌のセルラーゼ遺伝子の塩基配列をさら検討し、さら放線菌の一系統からのセルラーゼの性状を究明した。また、窒素固定菌のKlebsiellaの窒素固定遺伝子群の構造と機構を調べ、K.oxytocaのnif遺伝子群のクローン化し、塩基配列の決定とこれらの窒素固定能の強化を検討した。
新しい核マトリックス蛋白質N/MAXの細胞複製制御における役割

新しい核マトリックスタンパク質:N/MAXのcDNAクローンをHeLa細胞のcDNA発現ライブラリーから単離して以下のことを明らかにした。1)このcDNAは約1900アミノ酸をコードする約7kbの塩基配列を持つ。2)80%以上の相同性を持つマウスN/MAXのcDNAを単離すると同時に、可変スプライシングによる異型体が少なくとも3種類存在することを明らかにした。3)N/MAXはa)多くのhnRNP見られるアルギニンとセリンに富むRS領域、b)既知の核マトリックス蛋白質であるマトリン3と相同なMH0、MH1とMH2領域、c)RNA結合蛋白質に見られるRRM領域、d)DNA結合領域やe)酸性アミノ酸がらなる特徴的な配列が9回繰り返すacidic repeat領域等を持つ多機能蛋白質である。4)N/MAXはシトシンが集中する2本鎖DNAに特異的に結合する。すなわち、N/MAXは核マトリックス結合配列とされるMAR配列とは異る領域を認識する。5)acidicrepeat領域は酵母の遺伝子転写系を活性化する能力を持つ。6)acidicrepeat領域はカルシウム結合能を示し、この結合によってDNA結合能が失われる。7)DNA結合領域の組換体の抗体は多様なヒト由来細胞核の核内を顆粒状に染色するが核小体は染色しない。8)HeLa細胞の分画の結果もN/MAXが核マトリックス成分であることを示した。9)N/MAXの染織像は核分裂期に出現する凝集クロマチンから排除され、核膜の崩壊に伴って細胞質全体に拡散するが、核分裂終期には核内に再濃縮される。10)N/MAX遺伝子の発現は変異細胞株で高い傾向を示す。本研究課題では、このように新しい核マトリックス蛋白質を発見し、その構造を明らかにすると共に、細胞複製における役割に関して重要な知見を得た。
古代日本文学における河川交流の研究―日本海と瀬戸内海を繋ぐもの―

本研究では、経済用語として捉えられてきた「交易」という行為を、単なるモノの交換ではなく人と人との関係を築くものとして捉えることによって、古代日本文学を新しく解釈することを目指した。その際注目したのは、日本海や瀬戸内海のみならず、日本海と瀬戸内海(太平洋)を繋ぐ河川ルート、即ち西から1加古川水系ー由良川水系、2淀川水系、3天竜川水系ー姫川水系の三つの水系であり、記紀風土記の伝承や万葉集の旅の歌の中に、それら水系を利用した人々の移動や交易がなされるさまを見出した。それによって、それぞれの水系には、歴史的な意味や文学的なイメージが託されていることが明らかとなった。25年度は琵琶湖ー宇治川ー木津川水系を中心とした南北にわたる河川交易と、紀伊半島を横断する紀ノ川ー吉野川ー櫛田川という東西河川交易の様相解明を目指した。そのアプローチ方法として、Aテキスト研究とBフィールド調査を行った。Aテキスト研究では、古代文学である『古事記』『日本書紀』『万葉集』『風土記』に加え、中世文学である『倭姫命世記』および『神道集』の研究を行った。中でも特に『倭姫命世記』を丹念に読み込んだことから、倭姫巡行には記紀に描かれていたような神話的意味ばかりでなく、隠された意味があることがわかった。すなわち、その巡行地でその土地の神や豪族から帰順の印として御田を献上されていたことを根拠に、倭姫巡行には経済的意味があるのではないかと想定した。そこでBフィールド調査でも倭姫巡行の地を巡り、それら巡行の地が祭祀場であると同時に、水上交通の要衝であることを確認した。その結果、倭姫巡行の物語は、伊勢神宮設立を支える経済活動であったことが明らかとなった。また、Aテキスト研究で改めて記紀の三輪山伝承と『山城国風土記』逸文の賀茂伝承の研究を行い、その背後には、かつて難波潟で繋がっていた大和川ー淀川ー鴨川および木津川水系があることがわかった。そのような水系の存在を視野に入れれば、今までその関係が不明確であった三輪山伝承と賀茂伝承は無理なく接続する。神話の型としての類似ばかりでなく、実際の人々の動きとしてその繋がりは確認でき、そのような移動の背景に、疑似的血縁関係を結んで同族と称しはじめた人々の経済活動があることにも気がついた。そのような琵琶湖水系や大和から和歌山にまで至る、紀ノ川水系は、『万葉集』の羈旅歌でもよく歌われており、古代人の実生活の中でもそれら水系を利用した人々の移動を確認することができた。26年度は由良川ー加古川水系を利用した日本海と瀬戸内海を繋ぐ河川交易を明らかにすべく、丹後、若狭、越にかけての日本海交易の様相解明を目指した。Aテキスト研究では、『古事記』『日本書紀』『万葉集』『風土記』に描かれた越に注目し、韓半島から渡来したアメノヒボコが出石を本拠地とするまでの軌跡を追った。西は「由良川ー加古川」水系から、東は「敦賀ー近江」を結ぶラインまでというその移動範囲は、畿内を包括したその一つ外側の地域にあたり、朝廷直轄地であるミケツ国に囲まれている。そのミケツ国からは塩が貢納されていて、結界をつくる塩によってその範囲が示されているのは「王の力」を考える上で極めて象徴的である。呪いをかける呪具として語られている一方、塩と言えば、サラリーの語源がソルトであったように、貨幣的価値を持つものにして流通していくものである。まさに王とはそれを独占し流通させていくものであることが明らかになった。また、越が蝦夷征伐の拠点であることに注目し、蝦夷・悪路王・坂上田村麻呂伝承の研究も行った。古代における蝦夷は交易相手であったことが『日本書紀』の記述などからうかがえるのだが、そのような友好的な関係が壊されたのは仏像に鍍金するための黄金が必要になったからである。古代文献のみならず、寺社縁起や口承伝承、『神道集』の諏訪大明神秋山祭及び五月会事や『遠野物語』にも蝦夷伝承を探り、どのようにして蝦夷征伐がなされたのか多角的にアプローチした。その際、Bフィールド調査として田村麻呂伝承を追って北上川をその水源まで遡り、田村麻呂によって奉納された千手観音や十一面観音の背後には黄金伝承があることを確認した。その結果、東北に散見される長谷寺は布教の名のもとにそのような交易ネットワークを拡大していったことが明らかとなった。平成27年度は「越国ー糸魚川ー木曽川ー伊勢湾ルート」及び「諏訪湖ー天竜川ー太平洋ルート」を明らかにすべく、糸魚川及び天竜川、諏訪の風土の検証を行った。諏訪に関しては古代日本文学に描かれることが少ないため、中世の書物ではあるけれど『神道集』の諏訪関連伝承から、東海道や東山道のあり方を探ることにし、文献研究は「諏訪縁起」の注釈作業を中心にすすめた。諏訪関連伝承に語られる地名を追ってみると、その多くは歌枕や古代からの聖地と重なり、古代において明かではなかった古代道の解明に役立つことがわかった。例えば、ヤマトタケルの東征において、『日本書紀』では伊勢の次に駿河に向かっていて尾張に寄ったという記述がなく、尾張がかつて東海道ではなく東山道に属していたことを推測させるのだが、東山道を利用して陸奥の悪事の高丸退治に向かった田村麻呂に、諏訪明神に加えて熱田明神が加勢していることは、それを裏付けている。

あるいは、田村麻呂が伊那で諏訪明神に出会うのは、伊那が信州への入り口にあたるからのみならず、その地が東海道とも天竜川を介して繋がる交通の要衝であったからであった。そのような諏訪の風土が注釈作業およびフィールドワークから明かとなった。尚、その注釈は、研究成果として冊子にまとめ、関連研究機関などに配布した。また、サブテーマ『三国遺事』の研究に関しても、韓国で開かれた国際学会において、記紀神話との比較から発表を行った。日韓のテキストを読み比べてみると、環東シナ海ともいうべき広域の文化圏があることがわかり、記紀に語られる「カラクニ」にはそのような世界観が語られていることを指摘した。国際学会での発表により、韓国の説話研究者との国際交流を深めることができたことも大きな成果であった。三年間の研究成果は、科研費学術図書の助成金をうけ、平成28年度に出版することになったことを付け加えて記す。本研究では、経済用語として捉えられてきた「交易」という行為を、単なるモノの交換ではなく人と人との関係を築くものとして捉えることによって、古代日本文学を新しく解釈することを目指した。その際注目したのは、日本海や瀬戸内海のみならず、日本海と瀬戸内海(太平洋)を繋ぐ河川ルート、即ち西から1加古川水系ー由良川水系、2淀川水系、3天竜川水系ー姫川水系の三つの水系であり、記紀風土記の伝承や万葉集の旅の歌の中に、それら水系を利用した人々の移動や交易がなされるさまを見出した。それによって、それぞれの水系には、歴史的な意味や文学的なイメージが託されていることが明らかとなった。琵琶湖水系における交易の様相解明を行いつつ、それを発展させた形で、日本海を利用した水上交易に関しての研究を進めることができた。特に今までの研究ではあまり触れられてこなかったアメノヒボコの勢力圏に関して、「塩」と「ミケツ国」という視点から論じることができた。さらに、蝦夷征伐の出航地であった越に注目して蝦夷の問題にまで言及したことから、柳田国男の『遠野物語』の中に坂上田村麻呂によって征伐された蝦夷の姿を見出したり、水系に注目して伝承の分布を把握したりするなど、近代の書物まで視野にいれた新しい視点を蝦夷伝承の解釈に導入することもできた。それら研究のまとめとして、都を中心とした水系にはそれぞれ担わされた文学的イメージがあることを指摘し、そのモデルを提示できたことは26年度の大きな成果である。また、日本・韓国・中国・ベトナムの四国が参加した国際学術大会で研究発表したことから、東アジアという大きなくくりの中で日韓の「龍」の違いを考える機会を得、龍の伝承を大きく二つの型ー海洋民族が持っていた龍の神話すなわち母系的龍の神話と、稲作農耕民が持っていた龍退治の神話すなわち父系的龍の神話ーに分類して捉えなおすことを提案し、それを韓国学会にむけて発信することもできた。当初目論んでいた、日韓文学の比較から「渡来」「漂流」の問題を考えるところまでは至らなかったものの、最終年度のテーマである「浜名湖ー諏訪湖ー糸魚川」を結ぶ水系によって描き出される「東国」及び「東北」の全容をつかみ、その研究に着手することができた。よっておおむね順調に進展していると考える。日本古代文学本年度は、昨年に引き続いて日本海における交易の様相解明を行いつつ、それを発展させた形で、「東北」及び「東国」経営に関する研究を進めるものとする。中でも東国との境界をなしている「天竜川ー諏訪湖ー糸井川」水系に注目し、天狗及び諏訪信仰をキーワードに人々の移動と交流の様相解明を目指す。
臨床心理学的援助におけるアセスメント・スキルに関する研究

本研究では、心理検査を用いたアセスメント結果を、クライエントやその関係者にどのようにフィードバックするか、的確なフィードバックをするためにはどのようなアセスメント・スキルが必要とされるのか、アセスメント・スキルを育成するために有効な養成教育とはどのようなものか、を検討した。大学の実習授業や研究会で事例検討を積み重ね、初心臨床家にとっての困難点など特徴を整理し、新たに養成教育の中で活用するための資料、ワークブックを作成した。本研究では、心理検査を用いたアセスメントのプロセスに着目し、アセスメントの結果として得られた所見をクライエントやその関係者にどのようにフィードバックするか、的確なフィードバックをするためにはどのようなアセスメント・スキルが必要とされるのかを明らかにすることを目的としている。初年度は、フィードバックに関する理論的枠組みを構築することを目標として、(1)文献収集、(2)学会・研修会(日本心理臨床学会、日本ロールシャッハ学会等)における全国のアセスメント専門家との意見交換により、フィードバックをする際の留意事項等を整理する作業、(3)研究代表者が開催する研究会(月12回で継続中)での具体的な事例検討の中で若手臨床家から出された困難点およびその対策や工夫などを整理する作業を行った。これらは次年度も継続していく予定である。統一書式を作成し、データとして蓄積していく。さらに、心理アセスメントの実践教育内容を充実するために、アセスメント技法における指標の明確化のための基礎研究を行った。ロールシャッハ法のスコア再検討についての学会発表、S-HTP描画法の青年期の特徴をテーマとした論文投稿(採択済)、大学院生その他比較的初心の心理臨床家に役立つことを意図した共著書を出版し、心理検査の所見フィードバックについて論じた。本研究は、心理検査を用いたアセスメント(臨床心理査定)のプロセスに注目し、アセスメントの結果として得られた所見をクライエントやその関係者にどのようにフィードバックするか、的確なフィードバックをするにはどのようなアセスメント・スキルが必要とされるのかを明らかにすることを目的としている。前年度に引き続き、アセスメントに関する知見の収集が主となった。日本心理臨床学会第29回大会ワークショップ「心理アセスメント各論-心理検査の報告書の書き方」(講師:加藤志ほ子氏)等に参加し国内の専門家との意見交換を行ったほか、研究代表者が開催する研究会で事例検討を通して、ベテラン臨床家および初心臨床家からフィードバックをめぐる考えや実践での工夫についてインタビューした内容、研究代表者・分担者の担当授業(学部・大学院)における初心者の所見レポート作成過程の観察内容を蓄積する作業を行った。結果の分析は次年度に予定している。研究発表として、アセスメント教育に関する体験学習の効果について国際学会にてポスター発表、現状と課題をめぐる研究集会における指定討論を行ったほか、描画、ロールシャッハ法などの基礎研究(論文、発表)を通して、アセスメント結果の活用について検討した。本研究は、心理検査を用いたアセスメント(臨床心理査定)の結果として得られた所見をクライエントやその関係者にどのようにフィドバックするか、的確なフィードバックをするにはどのようなアセスメント・スキルが必要とされるのか、を明らかにすることを目的としている。今年度は描画および質問紙を用いて対象者の特徴をとらえる手法について、多様な題材により検討し、成果を発表した。これらについては今後も研究継続していく予定である。本科研は、最終年度にあたることから、報告書を作成し、フィードバックに関する文献検討、養成教育(授業、卒後研修)のモデル提示、アセスメント所見作成における初学者の特徴などの知見をまとめた。初学者の場合、心理検査記録から被検査者の特徴として重要な点に注目し、それにもとづいて人物像をイメージアップすることは適切にできるが、所見レポートをまとめる際に、目立った特徴に影響されやすいため全体を過不足なく把握するのが困難であること、より客観性の高い指標にもとづく結果と印象レベルの解釈とが混在していまうこと、総じて検査結果(回答、反応、指標など)とその意味するところ(解釈、現実行動との結びつき)の連関が十分に意識されていないことが問題として見られた。本報告書は次年度からの査定実習授業の中で副読本として活用することにより、フィードバック・スキルの向上に役立てていく予定である。
生殖細胞形成過程におけるレトロトランスポゾン制御ネットワークの解明

マウス生殖細胞の発生過程ではエピジェネティックな状態がダイナミックに変化する。雄の場合、生死形成過程の第一段階である始原生殖細胞で一旦DNAメチル化がほぼ消失し、前駆精原細胞の時期に再メチル化される。これらの時期を含めて、精製形成過程ではpiRNAと呼ばれる生殖細胞特異的な小分子RNAが発現し、レトロトランスポゾンの再メチル化を促進していると考えられている。本研究ではDNA再メチル化異常を伴うDnmt3l KOマウス、piRNAが合成できないPld6 KOマウス、およびそれらの二重変異体について、前駆精原細胞、精原細胞、および精母細胞をそれぞれ精製してmRNA-seqによってレトロトランスポゾンの発現量を解析した。その結果、前駆精原細胞ではpiRNA系によってレトロトランスポゾンRNAを切断することで発現抑制を行っている一方、精母細胞の時期になるとpiRNAによる転写後抑制よりも、DNAメチル化に転写抑制の方が重要な役割を担うようになることを明らかにした。さらに、それらの途中段階である精原細胞でもmRNA-seqを行ったところ、まだpiRNA系がドミナントに働いているレトロトランスポゾンのファミリーと、すでにDNAメチル化による制御系にシフトしているファミリーがあり、レトロトランスポゾンのファミリーごとに異なる制御ダイナミクスをたどることを見出した。さらに精原細胞を用いてChIP-seq解析を行ったところ、Dnmt3l KOマウスでレトロトランスポゾン上のH3K9me3が減少し、H3K4me3が上昇していた。これは、ヒストン修飾状態がDNAメチル化による影響を受けていることを意味する。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。雄の場合、精子形成過程の第一段階である始原生殖細胞で一旦DNAメチル化がほぼ消失し、前駆精原細胞の時期に再メチル化される。なお、これらの時期では転写抑制的なヒストンH3K9ジメチル化は低いレベルにある。これらの時期を含めて、精子形成過程ではpiRNAと呼ばれる生殖細胞特異的な小分子RNAが発現し、レトロトランスポゾンのDNAメチル化を促進していると考えられている。本研究ではDNAメチル化に関わるDnmt3l遺伝子とpiRNA合成に必須なPld6遺伝子のノックアウトマウスについて、前駆精原細胞の時期と減数分裂期(精母細胞)のmRNA-seq解析を行ってレトロトランスポゾンの発現量を解析し、またバイサルファイトシーケンシング(BS-seq)法によってDNAメチル化レベルを解析した。その結果、Dnmt3l遺伝子はほとんどのレトロトランスポゾンのDNAメチル化に関わることを明らかにし、その他のゲノム領域でも遺伝子密度の低い領域のメチル化に関わることを見出した。また、ほとんどのレトロトランスポゾンはpiRNAが無くてもメチル化されることを明らかにした。さらにレトロトランスポゾンの発現抑制については、前駆精原細胞の時期はpiRNA系による転写後制御が重要で、精母細胞の時期ではDNAメチル化による転写制御が重要であることを明らかにした。H28年7月に所属機関が変更となり、研究室の引越しを行った。使用する実験動物の輸送と繁殖、実験室の整備などに時間がかかったため、年度後半は予定していたよりも進行が遅れている。本研究ではDNA再メチル化異常を伴うDnmt3l KOマウス、piRNAが合成できないPld6 KOマウス、およびそれらの二重変異体について、前駆精原細胞と精母細胞を精製してmRNA-seqによってレトロトランスポゾンの発現量を解析した。ほぼ計画通りの実験を行うことができた。

さらに、それらの途中段階である精原細胞でもmRNA-seqを行ったところ、まだpiRNA系がドミナントに働いているレトロトランスポゾンのファミリーと、すでにDNAメチル化による制御系にシフトしているファミリーがあり、レトロトランスポゾンのファミリーごとに異なる制御ダイナミクスをたどることを見出した。さらに精原細胞を用いてChIP-seq解析を行ったところ、Dnmt3l KOマウスでレトロトランスポゾン上のH3K9me3が減少し、H3K4me3が上昇していた。これは、ヒストン修飾状態がDNAメチル化による影響を受けていることを意味する。変異体マウスの繁殖が軌道に乗りつつあるので、変異体マウスから各発生ステージの生殖細胞を分離して、mRNA-seqおよびChIP-seqにより、レトロトランスポゾンの発現やクロマチン状態を解析する。前駆精原細胞、精原細胞、精母細胞について、H3K9me3, H3K9me2, H3K4me3, H3AcのChIP-seqを行い、この時期にレトロトランスポゾン上のヒストン修飾がどのように変遷していくのかをファミリーごとに解析する。KOマウスでも同様の実験を行って、piRNAやDNAメチル化がなくなることで、ヒストン修飾が変化するかどうかを明らかにする。さらに、ESET (H3K9me3化酵素)の生殖細胞特異的ノックアウトマウス、HSP90a(分子シャペロン)ノックアウトマウスの生殖細胞でmRNA-seqおよびChIP-seqを行い、これらの遺伝子のレトロトランスポゾン抑制における役割を明らかにする。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
ガリウムの歯科への応用に関する研究・球状金合金を用いたガリウム練成充填材の開発

アマルガムに代わる金属練成充填材の開発を目的として,ガリウムを液体金属に用い,合金粒子に銀を主成分とするものは市販されている。しかし,これは寸法変化量,耐食性,耐変色性で満足できるものではない。そこで耐食性を考慮して金を主成分として実験を行うと,寸法変化量の大きいことが判明している。そのため金量を50wt%におさえて,これに銀,銅,白金,錫を加えた合金を作り,アニーリング温度を500°Cの高温で処理した合金につき寸法変化量,圧縮強さ,圧縮時の変形量,耐変色性,耐摩耗性を調べた。その結果,(1)寸法変化量が小さくなるのは銅を銀量より多くし,白金と錫は等量のときであった。実験組成中,50wt%Auに対し15Ag-25Cu-5Pt-5Snの組成は60μ/cm以下となった。(2)圧縮強さでは銀,銅量には影響を受けず白金,錫量により変化し,白金,錫が等量のとき最も強くなった。本実験では圧縮強さは全組成で42Kgf/mm^2以上となりアマルガムより,はるかに強い値が得られた。(3)圧縮ちぢみ率では錫,銀量を多くし,白金,銅量を少なくしたとき大きくなった。また,圧縮ちぢみ率が3%をこえたものは50wt%Auに対し25Ag-15Cu-2Pt-8Sn,20Ag-20Cu-2Pt-8Sn,15Ag-25Cu-5Pt-5Snの3組成であった。これらは咬合圧により,展延性を示すことを示唆している。(4)0.1%硫化ナトリウム水溶液に3日間全浸漬したときの,浸漬前後の色差では銀と銅量が20%のもので白金が多いものほど大きく,錫量が多いほど小さくなった。(5)耐摩耗試験では白金と錫が等量の組成で小さく良好となった。以上から,銅量は銀量より多く,また白金と錫が等量のとき諸性質が良好となることがわかった。
class II tRNA におけるアイデンティティー決定戦略の進化

私はこれまでに、バリアブルアームの長いtRNA(class II tRNA)のtRNA identityに着目して研究を行ってきた。その結果、真性細菌である大腸菌(tRNA^<Ser>,tRNA^<Leu>,tRNA^<Tyr>の3種類がclass II tRNA)と真核生物である酵母(tRNA^<Ser>,tRNA^<Leu>の列重類がClass II tRNA)で、全く異なった様式の認識識別の戦略をとっていることが明らかになった。大腸菌では、塩基特異的な認識というよりもむしろ立体構造の違いがアミノ酸受容特異性の決定に中心的な働きをしているという、従来考えられていなかったタイプの認識識別の機構が存在していた。一方、酵母では通常のtRNAに広く見られるような塩基特異的な認識が中心であった。この違いはtRNA^<Tyr>のバリアブルアームの長さの違いによるclass II tRNAを構成するtRNAの数と種類の違いに起因しているものと考えられた。本年度は、大腸菌と酵母との間でヘテロな組み合わせでアミノアシル化の実験を行った。大腸菌のSerRSとLeuRSはどちらも酵母のtRNAを認識することはできなかった。一方、酵母のSerRSとLeuRSはどちらも大腸菌のtRNAを認識することができた。その際、酵母の酵素は自分に対応しないtRNAをも認識してしまった。このように、基質認識の甘さに大腸菌と酵母の酵素の間で決定的な違いが見られたが、このこともまた、class II tRNAを構成するtRNAの数と種類の違いが大きく関係しているものと考えられた。
アルデヒドの触媒的不斉アルキル化反応を目的とするポリマ-担持不斉触媒の設計と合成

メチレン基をスペ-サ-として含むノルエフェドリンから誘導した高分子担持不斉触媒(不斉合成を行う機能性有機材料)を用いて、ジェチル亜鉛の脂肪族および芳香族アルデヒドへの不均一系エナンチオ選択的付加反応を行った。その結果、6個のメチレン基をスペ-サ-とする不斉触媒を用いて、光学活性な第二級アルコ-ルが、良好ないし高い不斉収率で得られた。高分子担持不斉触媒は、不斉合成を行う機能性材料と見なせる。しかし、炭素一炭素結合を生成する不斉合成反応で、高いエナンチオ選択性を示すものは、きわめて少ない。我々は、先に、N,Nージブチルノルエフェドリン(DBNE)が、従来困難な課題とされていた脂肪族アルデヒドに対するジアルキル亜鉛の不斉付加反応に有効であること、また窒素原子上の置換基がエナンチオ選択性に及ぼす影響が大きいことを報告した。本研究では、DBNEの不斉環境を再現すべくメチレン基をスペ-サ-として介してポリスチレンに不斉触媒を担持し、アルデヒドに対するジアルキル亜鉛のエナンチオ選択的付加反応を行った。その結果、特に、脂肪族アルデヒドに対して従来の不均一系触媒よりも高い不斉収率で、対応する脂肪族第二アルコ-ルが得られた。すなわち、1.6ーヘキサンジオ-ル、クロロメチルポリスチレン、およびNーブチルノルエフェドリンから高分子担持不斉触媒を合成した。この不斉触媒を用いて、不均一系でアルデヒドの不斉アルキル化を行い、光学活性第二級アルコ-ルを良好ないし高い不斉収率で得た。不斉触媒は、ろ過により容易に回収され、再生後、再使用できた。
マイクロ波帯パッシブレーダを用いた空中高圧送電線検知法の開発

本研究は、空中高圧送電線を検知するために、パッシブレーダ法を用いた手法を提案し従来のアクティブレーダ法にくらべ小型で安価なシステムを構築する。そして、この新しい手法の実験的な検証を行なうことが目的であった。これまでに、小型の受信機を設計・製作しハードウエアを構築した。受信には口径37cmの市販のBS受信用パラボラアンテナとそれに付随する検波器を用いた。アンテナで受信したノイズ(ハム)信号に含まれている商用給電電圧の周波数50Hzの信号成分を受信機で増幅した。実験では、送電線ではなく蛍光灯を用いた。このとき、SN比(信号対ノイズ比)は10倍以上で検出することができた。測定対象外の外部ノイズ(屋内蛍光灯)の影響があったことから、比較的高感度な受信性能であった。当初の予定では、屋外の送電線検出まで行なうはずであったが、室内シミュレーション実験だけにとどまった。受信機、アンテナ、計測器(オシロスコープ)、データ取得用PCを一体にまとめ、測定対象から自由に移動できるようにし、アンテナは、対象物に対して横方向に自動掃引(測定範囲:50cm)し、受信信号と測定位置を同時にPCに取り込むようにした。送電線に代わり測定対象として市販の蛍光管(長さ120cm、直径4cm)を用いた。蛍光灯は、商用電源ノイズの良い発信源であるため、測定評価が明確になるため使用した。最終年度は、測定および測定データを効率よく処理するためのデータ収集プログラムと実験を行なった。詳細な検討にいたるまでのデータの取得は少ないが、この方法を用いた検出法の有効性は期待できると考えられる。課題としては、遠距離になると受信信号レベルは下がるため、より高感度の受信機の開発が必要なことと、空間分解を上げるためにはアンテナの放射パターンの改善が必要と考えられる。本研究では従来のアクティブレーダ法にくらべ安価なシステムで小型軽量の装置を構築すべく、空中高圧送電線を検知するための新しい手法としてパッシブレーダ法を用いた方法を提案した。初年度では以下のことを実施した。1.受信器の製作:低雑音・高利得の高周波回路を実現するために製作を業者に委託した。基本的な回路部品は、市販のBS受信器に使われている既存部品と技術を用いており、アンテナで受信した電磁波をへテロダイン検波を行い中間周波数をRFアンプで増幅した。そして最終的には3つの出力信号(音で確認できる可聴音信号、生のRF信号、100Hzバンドパスフィルタを用いたDC検波出力)を取り出した。実験内容によって、これらの出力信号測定が使い分けられるが、100Hzの検波出力はDC出力のため実用的には電圧計やオシロスコープで受信レベルを容易に測定することができる。なお、この受信器は小型(230mm×200mm×50mm)・軽重量の上、バッテリー駆動のため持ち運びが容易で屋外使用が可能となっている。2.測定システムの構築:BS用パラボラアンテナ(直径370mm)を真上に向け掃引装置(速度可変、測定範囲500mm)に固定しアンテナの自動掃引制御およびデータ収集のためのシステムを構築した。アンテナの掃引制御はできたが、掃引と同時にデータを収集するまでのシステムには至らなかった。3.初期実験:検知装置システムを用いて、蛍光灯を送電線に見立て位置の検出を試みた。その結果、数m離れたところに設置された蛍光灯からの電磁波放射が受信できた。データ解析プログラム等はまだ完成に至っていないため詳細な定量評価まではなされていない。受信器を製作するのにあたり、その要求性能を満たすための設計・製作時間を要したため研究の進捗が遅れている。受信器の詳細な性能評価に関してはまだ実施されていない。しかしながら当初計画案どおり受信器の製作は終了した。現在、送電線を模擬する室内実験を開始しはじめたが、データ収集、解析プログラムの開発が遅れている。さらに、掃引装置の配置や室内実験システムにもまだ改良の必要性があり、様々な実験条件で実施するのが困難である。これらの受信器周辺の測定環境整備が遅れている。しかし、定性的ではあるが、この受信器を用いて、当初の研究目的を遂行できることの見通しは確認できた。低高度で有視界飛行する小型飛行機やヘリコプタなどの衝突防止法として空中高圧送電線を検知するために、従来のアクティブレーダ法にくらべ小型で安価なシステムを構築するため、新しい手法として、パッシブレーダ法を用いた方法を提案し実験的な検証を行なう。研究期間中には、空中高圧送電線を検知するためのマイクロ波帯パッシブレーダを設計・製作しその性能評価をする。そして、給電線の検出が可能かどうかの室内模擬実験評価を行い、高圧送電線の屋外測定を試みる。この結果を元に受信システムの改良を行い、実用性を評価・検討する。これまでに実施した事は、小型の受信器を設計・製作しハードウエアはほぼ完成した。そして、今回、製作した受信システム雑音レベルを実験により見積ろうと試みたが明確な値を出すことができなかった。しかし、対象とする測定源の受信信号測定はできているので、この装置を使用し実験を行なった。測定装置は、一昨年製作した受信器、アンテナ、データ取得用PCを一台の台車の上に設置し測定対象から自由に移動できるようにした。蛍光管とアンテナ間の距離を1mから徐々に離してゆき5mを超えると受信信号が弱くなり測定が困難になった。この間、受信強度の最大値は、おおよそ距離に比例して減衰した。

受信信号強度は掃引方向に対しガウス分布となり半値全幅(1/e幅)は、蛍光灯の直径に比べ5倍程度であり、アンテナからの距離が離れても大きく広がるようには見えなかった。2本の蛍光管を13cm離し同様の測定を行なった。この実験での信号強度は、4倍になったが半値全幅は若干広くなったものの受信強度はガウス分布となり、2本の蛍光管を区別することはできなかった。また、この実験でも5mを超えると受信はできるものの分布が広がり蛍光管を認識するのが困難であった。受信器を含めた測定システムのハードウエア部はほぼ完成した。受信システムの雑音レベルを測定することで、屋外で使用した場合の性能を見積もることができるため放射体の温度差を用いた評価測定を行なった。しかし、現有のスペクトルアナライザではこの測定ができなかった。そこで、室内実験での受信システムの基礎特性を把握するために、送電線ではなく雑音レベルが大きい蛍光管を用いて室内実験を開始した。この実験では、測定対象物から5m程度離れても受信信号を測定することができた。生データは取得されているが、この結果をより詳細に検討するためのデータ収集、解析プログラムの開発が遅れている。このため、測定データ処理が手作業であるうえ、アンテナの指向性などの補正も加えていない生信号の評価だけである。この測定では、ノイズ源として比較的大きい蛍光管を使用しているが、実際に使用されている送電線は入手できたが、これを室内でどのように用いるか、蛍光管とどう比較するかなどの課題がある。計画より研究が遅れているのは、当初、解析ツールとしてVisual BasicもしくはFortranで解析プログラムを構築しようとしたが、データ取得方法が一般的に使われているExcelシートに書き込まれるためExcelーVBAを使用することにした。研究代表者は、これを使用したことがないため構築に時間がかかってしまった。本研究では、低高度で有視界飛行する小型飛行機やヘリコプタなどの衝突防止法として空中高圧送電線を検知するために、従来のアクティブレーダ法にくらべ小型で安価なシステムを構築するため新しい手法として、パッシブレーダ法を用いた方法を提案し実験的な検証を行なうことが目的である。初年度では、小型の受信機を設計・製作しハードウエアを完成させた。受信機は、口径37cmのパラボラアンテナに接続され受信素子は市販のBSアンテナを使用した。アンテナで受信したノイズ信号に含まれている商用給電電圧の周波数50Hzの信号成分を受信機で増幅する。受信素子およびアンテナ等は市販品を使用しているため安価に作成できた。また、受信機性能を定量的に評価はしていないが50Hzの信号が受信できることが確認できた。2年目では、室内シミュレーション実験を行うため、受信機、アンテナ、計測器(オシロスコープ)、データ取得用PCを一台の台車の上に設置し測定対象から自由に移動できるようにした。アンテナは、対象物に対して横断するように横方向に自動掃引することができる。送電線に代わり測定対象として市販の蛍光管(長さ120cm、直径4cm)を用いた。
食品の低齲蝕性化に関する研究

目的:食品の低齲蝕性化の方法のうち酸産生能を低下させることは重要な方法の一つである。これには、低・非齲蝕性甘味料および緩衝性物質の応用あるいは双方の併用がある。本研究の目的は、食品の低齲蝕性化に緩衝性物質の応用が有効かどうかを検討することである。結論:(1)pH7.0付近からの発酵性糖質添加後の歯垢pH低下阻止は、pKa値が6.5前後にある緩衝性物質によって効果的に阻止される。(2)LMCSは、pKaが6.4であり、S.mutans cellsuspension中での発酵によるpH低下を阻止する能力が高かった。5%glucoseに0.01%LMCS添加でその効果が現われ、1%添加によってpH低下はほぼ完全に阻止された。(3)LMCSは、ヒト歯垢のpH低下を阻止する能力が高かった。5%glucoseに1%のLMCSを添加することによって明らかな効果を発揮し、同量の5%添加ではエナメル質の臨界pHである5.5以下に低下させなかった。(4)LMCSのヒト歯垢pHの低下阻止能は、分子量:3,000,脱アセチル化度:50%の試料が最も高かった。これらの結果より、LMCSは、他の緩衝性物質と比較して呈味に与える影響もほとんどないことから、発酵性糖質を含む食品の低齲蝕性化に有用であることが示唆された。研究方法:本研究に用いた緩衝性物質は、5種でそのうちキトサン(LMCS)に注目した。In vitro酸産生能測定をS.mutans菌体浮遊液を用いたautoma-tic titration methodおよびpH-fallの実験系によって測定した。また、乳酸の定速注入による方法も用いた。In vivoでの歯垢pH低下阻止能はIS-FET sensor(トランジスタ-pH電極)(Type PH-6010)を用いて、成人男性5名を被験者として行った。
Gene targetingによるex vivo遺伝子の基礎研究

銅代謝異常症の-つであるWilson病の遺伝子治療を想定し、以下のような実験を行った。Wilson病遺伝子および本疾患の動物モデルであるLEC(Long Evans Cinnamon)ラットの遺伝子はすでにクローニングされ、約70%のホモロジーが認められている。我々はこのLECラットのex vivo遺伝子治療を試みるために、肝細胞分離技術を確立した。特に初年度に確立された肝細胞分離技術の改善により細胞数生存率共に大きく向上した。枝術的に習熟したことはもとより、門脈カニュレーションの変更、脱血のタイミング、分離液に酸素投与を行ったことなどが寄与したものと考えられた。また肝部分切除術に関しても本実験に必要とされるレベルを確保できた。しかし肝細胞培養法に関しては依然として培養液をはじめ、いくつかの問題点を有するため、なお検討を必要とした。遺伝子導入に関しては、基礎実験としてWister系ラット初代培養肝細胞を用い、アデノウイルスベクターによる大腸菌lacZ遺伝子の導入および発現を試みた。初代培養肝細胞を用いた実験においては蛋白レベルでその発現を確認することができた。第2段階は、本遺伝子を導入した培養肝細胞を門脈を介し、肝部分摘出ラットに注入し、その生着を確認することが、ex vivo治療の基礎的技術の最低限必要な条件となる。またその一方、アデノウイルスベクターを用いたin vivoでの遺伝子導入の有用性が明らかとなってきたため、ex vivo治療との比較という視点から当初の計画に加え、門脈、腹腔内、股静脈を用いてlacZ遺伝子導入を試みる実験を行った。経時的に摘出された各臓器について、免疫組織染色法により遺伝子発現の部位、時間的推移などについて検討した。しかしながら今回の実験では、両法ともに生体での蛋白発現を確認することができず、遺伝子導入上の問題、発現確認上の問題の双方から更なる検討が必要と考えられた。平成6年度は次のような実験を行った。本年度当初、基礎実験として遺伝子組み換え細胞の蛋白質発現に関する実験を行った。すなわちチャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞上でヒトライソゾーム由来保護蛋白質を発現させた。ヒトライソゾーム由来保護蛋白質cDNAをコードする組み換えDNAをCHO細胞に導入し、ネオマイシン・メソトレキセート耐性細胞株を樹立した。発現蛋白質は細胞培養液中に分泌され、その機能とともに確認することができたが、回収率が比較的低いため、次に新たな培養細胞の検討を行った。腎癌由来細胞A293および肺癌由来細胞A549を対象とし同様の実験を繰り返した。その結果、A549細胞の発育と蛋白生成能はCHO細胞やA293細胞を数十倍上回ることが判明した。一方、我々は本研究の最終目標として銅代謝異常症の一つであるWilson病の遺伝子治療を想定している。Wilson病遺伝子および本疾患の動物モデルであるLEC(Long Evans Cinnamon)ラットの遺伝子はすでにクローニングされ、約70%のホモロジーが認められた。我々はこのcDNAを入手できる予定であり、目下、LECラットのex vivo遺伝子治療を試みるべく、正常ラットを用いての基礎実験を繰り返している。ラット肝細胞分離技術の確立は本研究の基礎となるが、初年度の目標は達成したと考えられる。細胞数、回収率、生存率共に本研究を進める上で必要なレベルを確保できた。肝細胞培養、肝部分切除術に関しては、依然として改善すべき点を残しているが、次年度さらに検討していく予定である。また現在、基礎実験としてラット肝細胞におけるlac Zの導入および発現系を確立すべく準備中であり、その後LECに対し遺伝子導入を試みる予定である。初年度に引き続き、Wilson病モデルLECラットのex vivo遺伝子治療を目的として正常ラットを用いて以下のような実験を行った。

本実験的治療に必要な肝細胞を効率よく回収するために種々の検討を加えた。特に初年度に確立された肝細胞分離技術の改善により細胞数、生存率共に大きく向上した。技術的に習熟したことはもとより、門脈カニュレーションの変更、脱血のタイミング、分離液に酸素投与を行ったことなどが寄与したものと考えられた。また肝部分切除術に関しても本実験に必要とされるレベルを確保できた。しかるに肝細胞培養法に関しては依然として培養液をはじめ、いくつかの問題点を有するため、なお検討を必要とする。遺伝子導入に関しては、基礎実験としてWister系ラット初代培養肝細胞を用い、アデノウイルスベクターによる大腸菌lac Z遺伝子の導入および発現を試みた。初代培養肝細胞を用いた実験においては蛋白レベルでその発現を確認することができた。したがって第2段階として本遺伝子を導入した培養肝細胞を門脈等を介し、肝部分摘出ラットに注入し、その生着が確認できればex vivo治療の基礎的技術は確立したものと考えられる。その一方、アデノウイルスベクターを用いたin vivoでの遺伝子導入の有用性が明らかとなってきたため、ex vivo治療との比較という視点から当初の計画に加え、門脈、腹腔内、股静脈を用いてlac Z遺伝子導入を試みる実験を行った。すでに経時的に核臓器を摘出し終えており、免疫組織染色法により遺伝子発現の部位、時間的推移などについて検討しているところである。
イスラム法廷文書をもちいた中東の家族史研究:19〜20世紀初頭のダマスカス

12月に国立社会保障・人口問題研究所で催された第10回イスラム人口研究懇談会において「オスマン朝末期の人口構造」、2003年2月に東洋文庫で催された東洋史談話会において「オスマン朝末期のシリアの社会-家族・人口・戦争-」の題で発表した。どちらの発表も3年間の研究成果の最終報告として位置づけられる。2月の発表の後、イギリス、シリア、トルコにおいて調査を行い、イギリスのパブリック・レコード・オフィスとトルコの総理府オスマン文書局では主にダマスカスのキリスト教徒、ユダヤ教徒の年齢分布、居住状況および移民についての資料を収集した。また、シリアのダマスカス歴史文書館での調査では20世紀初頭の遺産分割文書の閲覧・記録をほぼ終了した。3月中旬に京都外国語大学の中央アジアのイスラム法廷文書セミナーに参加し、シリアのイスラム法廷文書との比較のレヴューを行った。