hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
チタン合金の陶材焼き付けに関する研究

ビタ陶材では大気中で焼成した方がアルゴンガス中より高い焼付け強さを示した.またセラムコII陶材の方がビタ陶材より引抜き強度は高かった.界面の微小X線分析の結果から,セラムコII陶材にはZrO_2,LiO_2が含まれており,これがチタンの表面酸化物との結合に寄与していることが推定された.また,ビタ陶材の熱膨張は純チタンよりかなり大きいことも,界面結合強度の弱かった一因と考えられた.しかし,いずれにしても純チタンと陶材との焼付け強さは現在用いられているNiーCr合金との焼付け強さにくらべてはるかに弱く,実用に供しないと考えられた.チタンの歯科への応用が盛んとなってきたが純チタンの陶材焼付けはまだきわめて難しい。そこで本研究ではチタンの合金化によりチタンの陶材焼付けを可能にし、チタンの応用範囲をさらに広げようとするものである。前年度はまず純チタンと陶材の界面結合強さ、反応機構を基本的に検討した。この結果、純チタンと陶材の界面結合強さは、焼成条件を種々に変化させてもきわめて弱く実用に供し得ないことがわかった。この原因は主に現在市販の陶材の熱膨張率が純チタンの熱膨張率より3割以上大きいため、冷却時に陶材に大きな引張力が働き界面剥離すること、また界面結合強さ自体も弱いことが推定された。そこで本年度は熱膨張率が純チタンより大きいTi-20wt%Cr-0.2Si合金およびTi-25Pd-5Cr合金を選び、これらと陶材との界面結合強さを引き抜き法により測定し、界面結合組織の観察、微小X線分析を行った。Ti-20wt%Cr-0.2Si合金の熱膨張率は11.5×10^<-6>、Ti-20Pd-5Cr合金のそれは13.5×10^<-6>で純チタンの熱膨張率10×10^<-6>より大きかった。引き抜き強さはいずれの場合も高く、陶材焼付け用のNi-Cr合金の引き抜き強さよりやや高かった。とくに熱膨張率の大きいTi-25Pd-5Cr合金の引き抜き強度が高かった。この引き抜き強さは焼成時の焼成炉内の雰囲気をアルゴンガス雰囲気とするより大気中とした方か高くなった。アルゴンガス雰囲気中での焼成では、陶材との界面に陶材との結合に十分なチタンの酸化層が少なく、引き抜き強度が低下したものと考えられた。しかし板状のTi-25Pd-5Cr合金とTi-20Cr-0.2Si合金に陶材を大気中で焼付けても、曲げ試験をするとNi-Cr合金の場合より小さな曲げで陶材が剥離することが判った。板状の試料では熱膨張係数差の影響が出やすいものと思われる。このため、チタン用に熱膨張率の小さい陶材の試作を行い、これにより曲げによる焼付け強さを検討中である。チタンに陶材焼付けが可能となれば、チタンの補綴領域への応用範囲が格段に広がることが期待される。しかしチタンの陶材焼付けはまだきわめて難しいのが現状である。本研究はチタンを合金化と陶材の改良により、陶材焼付けを可能にすることを目的にし進めてきた。まず純チタンと陶材の界面結合を検討し、純チタンでは熱膨張率が陶材よりかなり小さいこと、陶材との結合反応に寄与するチタンの表面酸化膜が剥離し易いことから界面接合強さが得られないことが明らかにされた。そこで熱膨張率が純チタンより大きく、酸化膜の結合が強固なβ型チタン合金Ti-20Cr-0.2SiとTi-25Pd-5Crを選び陶材を焼成し、引き抜き法による接合強さ、界面反応について調べた。この結果β型合金と陶材との接合強さは純チタンの陶材との接合強さよりはるかに大きかった。しかし、板状のβ型チタン合金に陶材を焼付けるとわずかな曲げ応力で陶材に亀裂が入り、界面が剥離することが判った。これはβ型合金でも熱膨張率が陶材の熱膨張率まだ小さいためと考えられた。そこで熱膨張の低い陶材の試作を行った。
卵巣癌の浸潤・転移機構における各種プロテアーゼ・同インヒビターの役割に関する研究

癌の浸潤・転移の過程では、細胞外基質の分解に関与する酵素とそのインヒビターが重要な役割を果たしている。われわれは、卵巣癌由来培養細胞株が、従来報告されている種々のマトリックスメタロプロテアーゼに加え、セリンプロテアーゼ、なかでもその代表的酵素であるトリプシノーゲンを分泌していることを見い出した。卵巣癌の進展におけるトリプシンの関与を明らかにするために、卵巣癌由来培養細胞株よりtotal RNAを抽出しノザン法およびRT-PCRにより増幅した産物のサザン法によりトリプシノーゲン遺伝子発現を検討し、その存在を確認した。また手術時に採取した臨床検体における遺伝子発現をNorthern blot法により確認した。トリプシノーゲン蛋白の局在は、抗ヒトトリプシン/トリプシノーゲンモノクローナル抗体を用いて、卵巣癌組織の免疫染色法により検討し、癌細胞に局在していることをみいだした。コレラの結果から本酵素は細胞株においても発現が認められるが、癌組織自体でより強く発現しており、強い蛋白分解活性を有するトリブシンが、in vivoにおける卵巣癌の浸潤、転移に関与していることが示唆された。さらに検討を重ねたところ、境界型悪性腫瘍と卵巣癌とのあいだにトリプシン発現の差異が認められ、卵巣癌においては早期からトリプシンの産生がみられるという事実が判明した。また組織型別では腹腔内への播種病変が多くみられる漿液腺癌においてより高頻度にトリプシンの発現がみられた他、転移巣においてもみとめられるなど卵巣癌の悪性進展形式との関連性が示唆された。また、トリプシンを分泌する胃癌や卵巣癌細胞由来のインヒビターの一つを精製、cDNAを単離したところ、それがPP5/TFP12であることが判明し、悪性化に伴う発現の変化を検討するため、絨毛癌細胞株を用いてノザン法、サザン法を行った。その結果、絨毛癌細胞株ではPP5mRNAの発現が認められず、このPP5の発現の消失により、局所におけるトリプシンはじめセリンプロテアーゼ活性が相対的に亢進し、更に血液凝固反応の惹起という機序を介して、癌細胞の浸潤性増殖、血行性転移能が高まる可能性が考えられた。これらの研究結果から、セリンプロテアーゼの代表的酵素であるトリプシンならびにそのインヒビターであるPP5の癌組織における存在様式がその浸潤・転移機構に深く関与している可能性を示唆した。平成7年度における本研究の概要を以下にまとめた。[目的]癌の浸潤、転移の過程で細胞外マトリックスを分解するプロテアーゼが重要な役割を果たしていると考えられている。われわれは、卵巣粘液性腺癌由来培養細胞株(MCAS)が、従来報告されている種々のマトリックスプロテアーゼに加え、消化酵素であるトリプシノーゲンを分泌していることを見い出した。今回、卵巣癌の進展におけるトリプシンの関与を明らかにするために、細胞株と臨床検体を用いてトリブシノーゲン遺伝子発現および蛋白の局在を検討した。[方法]卵巣癌由来培養細胞株よりtotal RNAを抽出し、Northern blot法およびRT-PCRにより増幅した産物のSouthern blot法によりトリプシノーゲン遺伝子発現を検討した。

手術時に採取した臨床検体における遺伝子発現をNorthern blot法により確認した。トリプシノーゲン蛋白の局在は、抗ヒトトリプシン/トリプシノーゲンモノクローナル抗体を用いて、卵巣癌組織の免疫染色法により検討した。[成績]培養細胞株5株のNorthern blot法による分析では、MCAS細胞のみで遺伝子発現を認めたが、RT-PCR Southern blot法ではすべての細胞株で遺伝子発現がみられた。一方、臨床検体のNorthern blot法では、10例中8例に遺伝子発現が認められ、特に進行癌組織で強い発現がみられた。また、免疫染色法ではトリブシノーゲン/トリプシン蛋白は卵巣癌組織の癌細胞に局在していた。[結論]トリプシノーゲン遺伝子は、細胞株に於ても発現が認められるが、癌組織自体でより強く発現しており、強い蛋白分解活性を有するトリプシンが、in vivoにおける卵巣癌の浸潤、転移に関与していることが示唆された。癌の浸潤・転移の過程では、細胞外基質の分解に関与する酵素とそのインヒビターが重要な役割を果たしている。われわれは、卵巣粘液性腺癌由来培養細胞株(MCAS)が、従来報告されている種々のマトリックスメタロプロテアーゼに加え、セリンプロテアーゼ、なかでもその代表的酵素であるトリプシノーゲンを分泌していることを見い出した。卵巣癌の進展におけるトリプシンの関与を明らかにするために、卵巣癌由来培養細胞株よりtotal RNAを抽出し、Northern blot法およびRT-PCRにより増幅した産物のSouthern blot法によりトリプシノーゲン遺伝子発現を検討しその存在を確認した。また手術時に採取した臨床検体における遺伝子発現をNorthern blot法により確認した。トリプシノーゲン蛋白の局在は、抗ヒトトリプシン/トリプシノーゲンモノクローナル抗体を用いて、卵巣癌組織の免疫染色法により検討し、卵巣癌組織の癌細胞に局在していることを見いだした。結論として本酵素は細胞株に於ても発現が認められるが、癌組織自体でより強く発現しており、強い蛋白分解活性を有するトリプシンが、in vivoにおける卵巣癌の浸潤、転移に関与していることが示唆された。また我々は、胃癌や卵巣癌細胞がセリンプロテアーゼであるトリプシンを分泌し、そのインヒビターの一つを精製、cDNAを単離したところ、それがPP5/TFP12であることが判明し、悪性化に伴う発現の変化を検討するため、4種の絨毛癌細胞株を用いてノザン法、サザン法を行った。その結果、絨毛癌細胞株ではPP5mRNAの発現が認められず、このPP5の発現の消失により、局所におけるトリプシンはじめセリンプロテアーゼ活性が相対的に亢進し、さらに血液凝固反応の惹起という機序を介して、癌細胞の浸潤性増殖、血行性転移能が高まる可能性が考えられた。これらの研究結果から、セリンプロテアーゼの代表的酵素であるトリプシン/トリプシノーゲンならびにそのインヒビターであるPP5の癌組織における存在様式がその浸潤・転移機構に関与している可能性を示唆した。
「阿吽の呼吸」の神経基盤

本研究では、大規模な人間集団の同期現象によって魅力的な芸術表現を実現している典型例として、インドネシア・バリ島の祭祀祝祭芸能をとりあげ、その表現行動を支える脳機能の同期性を明らかにすることにより、「阿吽の呼吸」のコミュニケーションを支える神経基盤を明らかにすることを目的とした研究を実施し、以下の成果を得た。1.ノイジーな振動子集団のシンクロを最適化するネットワークモチーフ:ケチャの演奏者を振動子とみたて、ネットワーク上のノイジーな振動子集団について、ラプラス行列が非対称な場合の集団の同期の良さを定量化してネットワーク構造の優劣を比較し、少数の振動子からなる強連結ネットワークの同期の良さを明らかにした。その結果から、上級者を振動子集団の先頭に配置するときに良い同期が得られることが示された。2.カエルの鳴き声の同期性とケチャ合唱リズムパターンとの相同性の発見:2匹のカエルが鳴き交わすときには、位相180度で交互に鳴くことが知られているが、3匹が同時に鳴き交わすときには、3匹が均等に3連符の様に鳴く状態と、2匹と1匹が交互に鳴き交わす状態とがあり、両者の間で相転移が生じる。ケチャの合唱パターンを詳細に解析してみると、この両者がリズムパターンの中に埋め込まれていることが明らかになった。3.同期型音楽演奏中にトランス状態を呈した被験者の自発脳波の記録と解析:屋外で音楽演奏中の被験者から脳波を記録することが可能なフィールド用テレメトリ型多チャンネル脳波記録システムを開発し、バリ島の祭祀芸能において、舞踊を伴うガムラン音楽を演奏中に憑依トランスを呈した7名の被験者から自発脳波を記録した。その結果、憑依トランスの最中には、禅や瞑想中に観察されるのと同じように、自発脳波のα波θ波の帯域成分のパワーが統計的有意に増加することを明らかにした。29年度が最終年度であるため、記入しない。本研究では、大規模な人間集団の同期現象によって魅力的な芸術表現を実現している典型例として、インドネシア・バリ島の祭祀祝祭芸能「ケチャ」をとりあげ、その表現行動を支える脳機能の同期性を明らかにすることにより、「阿吽の呼吸」のコミュニケーションを支える神経基盤に迫る。そのために、ケチャ演奏中の複数被験者から脳波同時計測を行い、個体間脳波成分の同期の程度と表現されたリズムの同期性との関連を検討する。平成28年度は、以下の研究項目について探索的検討を行った。1.個体間自発脳波同期性評価手法の開発:カエルの鳴き交わしの同期現象がケチャのリズムパターンと非常に類似性があることが、領域内共同研究によって明らかになったため、自然な同期現象を実現するために脳波α波パワーに着目して解析する手法について検討した。2.演奏音評価手法の開発:ケチャの演奏音を広帯域録音し、16ビートを形成する各パルス音波形のエンベロープを抽出し、その拡がり、前後パルスとの分離度合い、パルス間隔のばらつきなどから、演奏音の同期性を評価する手法を検討した。3.脳波・演奏音同時計測:6名の異なる被験者から同時に脳波を記録するシステムを構築し、演奏中にアーティファクトをできるだけ抑えた状態で脳波記録する手法を探索的に検討した。4.モデル研究:演奏者の空間的配列がリズムパターン形成に及ぼす影響についてモデル化とシミュレーションを用いた検討を領域内共同研究として行った。当初計画した内容は概ね順調に進行している。それに加えて、領域内の共同研究により、カエルの鳴き交わしの同期現象がケチャのリズムパターンと類似していることが明らかになり、カエルの鳴き声の解析手法を本研究にも導入することになった。また、演奏者の配列がリズムパターン形成に及ぼす影響についてモデル化とシミュレーションを用いた検討を領域内共同研究として行った。

その結果、憑依トランスの最中には、禅や瞑想中に観察されるのと同じように、自発脳波のα波θ波の帯域成分のパワーが統計的有意に増加することを明らかにした。引き続き以下について検討する。1.個体間自発脳波同期性評価手法の開発:カエルの鳴き声の同期現象に着目し、その分析手法を導入した解析法を開発する。2.演奏音評価手法の開発:28年度に検討した内容をさらに深める。3.脳波・演奏音同時計測:脳波と演奏音の同時記録を実施する。4.ケチャ演奏に伴う自発脳波同期性の検討:上記で記録した脳波データの同期性を、研究項目1で開発した解析法によって評価する。基本的な比較は、ケチャ演奏時と非演奏時でどのように同期性が変化するかを比較する。5.表現内容と自発脳波同期性との関連の検討:研究項目1で開発した個体間脳波の同期性評価法と、研究項目2で開発した演奏音の同期性の評価とを組み合わせ、両者の関連について検討する。6.モデル研究:昨年度の検討をさらに深め、ケチャパターンのモデル化を試みる。29年度が最終年度であるため、記入しない。
時間分解蛍光イムノアッセイによる高感度・広測定域サイトカイン測定系の開発

昨年本計画により、Dissociation enhanced lanthanide fluoroimmuno-assay(DELFIA)によるサイトカイン測定系を確立するため、サイトカインに対する抗体へのEuropium標識の条件を確立した。またサイトカインに対する数種の抗体から感度の高い測定系が確立される相応の抗体を選択しTNFα及びIL-6の測定系を確立した。本年度は以下の研究を行った。IL-5測定系確立のため高津はモノクローナル抗体NC-17を作製した。ウサギ抗IL-5抗体との間で系を確立した。しかし本系の場合は500pg/ml以上でなければ測定不能で感度が悪く、新たな抗体を要すると思われた。可溶性のIL-6レセプター(sIL-6R)の測定系は抗原認識部位の異なる2種のモノクローナル抗体を用いて確立し10pg/ml以上の感度が得られた。なお測定範囲はいずれも10^4の広測定域が得られた。2.血清材料測定系の確立TNFα,IL-8の血清レベルでの測定系を確立した。sIL-6Rは10倍以上希釈した血清を用いるならばスタンダードカーブに平行に希釈曲線を描くことができ、血清レベルでも測定することが確かめられた。3.サイトカイン、sIL-6Rの生理・病態意義糸球体腎炎はメサンギウム細胞の増殖、上皮細胞の増殖等がみられる。この発症機序にIL-1,IL-6,IL-4等の関与が考えられる。我々は既にメサンギウム細胞の増殖にIL-6がautocrineとして作用することを示した。今回IL-1によって上皮細胞がその増殖を抑制すること、分化を促しIL-6,IL-8等の産生が生じることを見出した。このことは急性進行性腎炎の場合の半月体形成の機作を裏付けるものと思われる。sIL-6Rは血清中に約50ng/ml存在する(IL-6の100倍)。この分泌細胞は不明であるが、末梢顆粒球数と関連性を見出し、現在顆粒球系細胞からの産生を検討している。1.DELFIAによるアッセイ系の確立本年度はIL-6、IL-8、TNF-αの測定系をDELFIA(Dissociation Enhanced Lanthanide Fluoroimmunoassay)にて確立することができた。IL-6の場合はヤギ抗IL-6を固相抗体に、マウスモノクロ-ナル抗体をユ-ロピウム(Eu)ラベル抗体として確立した。感度として0.5fg/mlより測定可能で10^4オ-ダ-まで直線の標準曲線が得られた。IL-8の場合はマウスモノクロ-ナル抗体を固相抗体に、ウサギ抗IL-8抗体をEuラベル抗体とし、10pg/mlより測定可能で10^4オ-ダ-まで直線的に標準曲線が得られた。TNFαの場合は抗原結合部位の異なる、マウスのIgG、IgMモノクロ-ナル抗体を両抗体とし、1pg/mlより10^4オ-ダ-まで直線の標準曲線が得られた。標準曲線はrecombinant IL-6、IL-8、及び純化TNFαを用いて作成したが、細胞培養上清を用いた測定には十分使用することが可能であった。なお、Euの抗体へのラベルにはいずれの抗体を用いてもEu/protcinモル比が5-10mol/抗体にすることができ安定してラベルが可能となった。2.生体材料測定についてTNFαの場合は血清中の測定が全く問題なく可能である。即ち添加回収、希釈曲線等理論通りに測定が可能である。IL-8の場合も血清中IL-8の測定は可能であるが、添加回収が多少血清により異なる。これは加えるrIL-8が塩基性で様々の蛋白に結合するためかもしれない。血清中のIL-6は本法では測定困難である。種々の血清で測定系に修飾が生じ、希釈曲線が直線とならない場合も生じる。これは、IL-6の場合血清中にIL-6を結合する蛋白が多く存在するためと思われる。即ち可溶性のIL-6受容体、α2-macro globuline等が存在する。次年度にこの可溶性IL-6受容体の測定系を確立し、その結合能等を検討する。

3.サイトカイン、sIL-6Rの生理・病態意義糸球体腎炎はメサンギウム細胞の増殖、上皮細胞の増殖等がみられる。この発症機序にIL-1,IL-6,IL-4等の関与が考えられる。我々は既にメサンギウム細胞の増殖にIL-6がautocrineとして作用することを示した。今回IL-1によって上皮細胞がその増殖を抑制すること、分化を促しIL-6,IL-8等の産生が生じることを見出した。このことは急性進行性腎炎の場合の半月体形成の機作を裏付けるものと思われる。sIL-6Rは血清中に約50ng/ml存在する(IL-6の100倍)。この分泌細胞は不明であるが、末梢顆粒球数と関連性を見出し、現在顆粒球系細胞からの産生を検討している。
低侵襲治療用多機能カテーテルのための前方視血管内超音波内視鏡の開発

本研究の目的は、多機能カテーテルに搭載するための前方視血管内超音波内視鏡の開発を行い、臨床で使用できる治療システムの構築を目指すことである。多機能カテーテルとは、本研究で開発する前方視血管内超音波内視鏡や、血管内圧測定用光ファイバ圧力センサや、カテーテル先端の位置・姿勢測定用磁気ベクトルセンサなどの要素を搭載して多機能化させた、形状記憶合金コイルをアクチュエータとして動作する医療用カテーテルである。この多機能カテーテルを用いることで、より安全で確実な血管内低侵襲治療を実現できる。研究は具体的には、超音波素子の作製,信号線多重化のための集積回路の設計と評価,画像構成プログラムの開発を行い、医療現場で使用できるシステムの構築を最終的に目指した。平成15年度では、作製した超音波プローブを搭載したカテーテルを治療現場で使用できるような最終的なシステムを構築することを目指し、物体の撮像を通してシステムの総合評価を行った。具体的には、作製した超音波プローブを入れる試験容器に対して、各種回路基板と信号送受信機器(制御用PCやオシロスコープなど)とを接続した実験系を用いて、レーザブレークダウンで発生させた衝撃波誘起超音波(ULIB)を音源とし、プローブ前方の物体の撮像を試みた。実際の物体と得られた像と差とを、プログラミングによる画像処理の補正により最適化することで、前年度の画像処理プログラムの向上をはかり、参照物体と構築画像との間に差異を減少させることに成功した。医療現場で使用できるシステムとして、カテーテルでの撮像の正確性は必須条件である。また、現場の医療従事者である医者にフレンドリーな装置であることも必要である。そのために、医者方々との装置の改良をさらに進める必要があると考える。研究は具体的には、超音波素子の作製,信号線多重化のための集積回路の設計と評価,画像構成プログラムの開発を行い、医療現場で使用できるシステムの構築を最終的に目指す。平成14年度では、主に画像構成プログラムの開発を行った。まず、開発するプログラムが正しく機能するか確認するための実験系を構築した。具体的には、作製した超音波プローブを入れる試験容器に対し、各種回路基板と信号送受信機器(制御用PCやオシロスコープなど)とを接続して実験系とした。次に、脱気した水を満たした試験容器に作製したプローブを浸し、その前方に参照物体(大きさが既知の金属棒など)を設置して、開発したプログラムを用いて、送受信信号から画像を構築した。幾度かのプローブ作製とそれを用いた画像構築を繰り返したが、現時点では参照物体と構築画像との間に差異が確認できる。今後は、画像構築プログラムの改良を行うとともに、理想的な超音波プローブを作製し、よりよいプログラムの完成を目指していく予定である。
精神・免疫・内分泌系の統合的制御～ストレス特異的サイトカインカスケードの解明

本研究により、(1)ストレスの種類と量のマーカー、(2) IL18、活性酸素、TNF-αを介する三つのサイトカインカスケード(3)ミトコンドリアが介するサイトカイン誘導メカニズム(FEBS Letter 2011)(4)大うつ病の重症度マーカー(5)ストレス後精神障害予測マーカーをそれぞれ発見した。(4)、(5)に関しては更なる検討を予定。成果は、2011年度後半から東北太平洋沖地震救援活動従事者の健康管理に役立っており、本研究の社会的成果は多大である。(1)(主として関山担当)-(1)日周リズム(サーカディアンリズム)によるサイトカイン類の血中濃度変化の解明ボランティアヒト20名を対象として、1時間毎に血液と唾液を採取、IL18、TNF-alphaを含む30種類以上のサイトカイン、キマーゼ等の血中酵素群、ホルモン(以下サイトカイン類と記述します)を網羅的に測定、日周リズムによるサイトカイン類パターン変化を明らかにする。(1)-(2)計算課題負荷の、サイトカイン相関パターンに対する影響の検討ボランティアから、内科的、精神医学的診察によって健常と認められる30名を選択。クレペリン課題を45分を1クールとして負荷。クール毎に唾液、血液中のサイトカイン類の濃度を測定。分泌パターンへの影響を明らかにする。(1)-(3)運動課題負荷の、サイトカイン相関パターンに対する影響の検討(1)-(2)の被験者にエアロバイク課題を45分を1クールとして負荷。唾液、血液を採取。サイトカイン類の濃度を測定、分泌パターンへの影響を明らかにする。以降の年度では(1)-(2)と(3)の結果を総合し、別の集団で再現性を確認。精神的負荷と肉体的負荷に対応するマーカーを確立する。(1)-(4)労働によるサイトカインパターン変化の検討医療従事者80名を対象に、夜勤の前後で血液、尿、唾液を採取し、同時に生理学的諸指標(体重、心拍、血圧、歩数ほか)を記録、さらに質問紙による心理テスト(GHQ28、MAS、SDS、自覚症しらべ、FFI、TEG等)を施行。サイトカイン類レベルと生理学的諸指標および心理状態との相関を検定。有意相関するものについては人格傾向毎に定量的変化を検討。労働内容及び強度がサイトカイン類レベルに与える影響を、総合的に明らかにする。(1)-(5)ストレスハイリスク群における相関パターンの検討(1)-(1)、(4)の参加者のうち、心理テストで一般的に健常とされるスコア以上のものをストレスハイリスク群に分類し、小規模(20名程度)の追跡研究を行う(精神科医のインタビューによる評価も行い、倫理的見地から希望者にはカウンセリングも行う。)(2)(主として関山、千田担当)-(1)NADPHオキシダーゼ欠損マウスのストレス応答に対する検討NADPHオキシダーゼタイプ2欠損マウスに対し拘束ストレスと単数飼育ストレスとをそれぞれ負荷。血液、脳、副腎を採取。ストレス下のサイトカイン類の変動および分泌機構を明らかにする。(2)-(2) ACTHレセプター欠損マウスのストレス応答に対する検討研究分担者千田らが作出したACTHレセプター欠損マウスを対象に、2-(1)と同様の検討を行う。ヘテロ欠損個体も用いるが、ホモ欠損個体の生存率が極めて低いため、検討に要する期間を長期間とした。(3)-(1)(主として関山、内村担当)ストレス下のリンパ球ホーミング機構の解明ストレス後のリンパ球ホーミングの変化および制御機構を明らかにする。(3)-(2)(主として関山、笠原担当)ストレス下の樹状細胞機能変化の検討拘束ストレス及び単数飼育ストレスが樹状細胞のT細胞活性化能に影響を与える際に鍵となるサイトカインを、IL18、TNF-alphaの役割を検討する。遺伝子欠損マウス等を用いて明らかにする。平成20年度の研究成果【総括】平成20年度は本研究の開始年であり、開始以前に試験的に得られていた知見に対し、より深い理解を得た年度となった。以下(1)は心理状態とサイトカインが照応関係を示すことが、(2)によって、新たなストレス特異的サイトカイン制御機構が、(3)によって、サイトカインを介する、ストレス下でのみ発動する生体応答がそれぞれ新たに見いだされた。機能分子を分泌するリンパ球のホーミング機構の解析によってこれら(1)-(3)が統合的に理解される可能性が期待される。(1)心理状態とサイトカイン類との相関パターンを示した。数百人のヒトボランティアから、精神、肉体両面の健康度を指標に120名の研究参加者群を形成。参加者に対し、休日の朝、および夜勤後の朝に精神、肉体両面のアセスメントを行い、GHQ28スコアに対して血中サイトカイン濃度プロファイルとの照応関係があることを明らかにした。

SDS、MASおよび自覚症しらべとの照応関係を示唆するデータも得ているが、これについては現在さらに検討中である。(成果の一部は米生物学的精神医学会発表予定。)(2)NADPHオキシダーゼタイプ2(NOX2)のストレス下の役割を示した。当該遺伝子欠損マウス、10,14,18週齢各5-60匹にストレスを負荷し、血中サイトカイン、ケモカイン、分泌型因子、非分泌型因子を測定、野生型マウスと比較した。驚くべきことに、好中球活性酸素発生酵素であるNOX2が、ストレス時に非分泌型因子の血中レベル上昇に関与する事を見いだした(未発表)。(3)ストレス誘導サイトカインの脳内グルココルチコイドレセプターに対する作用を解明。ストレスで誘導されるサイトカインが、脳内グルココルチコイドレセプターの発現、タンパクレベル減少を惹起することを発見した。同レセプターの減少はうつ病の発症機構と考えられていることから、本発見は、うつ病発症予防のための基盤的知見となる可能性がある。平成21年度の研究成果【総括】平成21年度は本研究の2年目であり、1年目において得られた知見に対し、再現性の確認と背景への科学的洞察とを得た年度となった。以下(1)により、負荷されたストレスをサイトカイン濃度を用いて判別可能である可能性、(2)により加齢がストレス特異的サイトカイン制御機構に影響する経路の一つ、(3)によって、慢性ストレスによる視床下部下垂体副腎軸のストレス応答パターンの形成にサイトカインが関与することがそれぞれ新たに見いだされ、検証された。機能分子を分泌するリンパ球のホーミング機構の解析によってこれら(1)-(3)が統合的に理解される可能性が期待される。(1)負荷されたストレスとサイトカイン類との相関パターンを示した。健常参加者に、運動ストレスまたは精神作業を負荷、血中サイトカイン濃度プロファイルが、負荷されたストレスと対応関係があることを明らかにした。サイトカイン応答には負荷に対する特異性があることを示した(成果の一部は国際ストレス学発表予定。)(2)老齢NADPHオキシダーゼタイプ2(NOX2)のストレス下の役割を示した。当該遺伝子欠損マウス、78,84,90週齢各8匹にストレスを負荷し、血中サイトカイン、ケモカイン、分泌型因子、非分泌型因子を測定、老齢野生型マウスと比較した。好中球活性酸素発生酵素であるNOX2が、老齢マウスにおいて、ストレス時に非分泌型因子の血中レベル上昇に関与する事を見いだした(未発表)。(3)慢性ストレス下での脳内グルココルチコイドレセプター発現レベルに対するサイトカインの作用を解明。慢性ストレスによる脳内グルココルチコイドレセプターの発現、タンパクレベル抑制に関与する特定のサイトカインを同定した。(1)日周リズム(サーカディアンリズム)によるサイトカイン類の血中濃度変化の解明
沿岸域で直接測定した乱流特性量による懸濁物質の凝集・崩壊現象のパラメタリゼーション

本研究では,懸濁物質の凝集を乱流エネルギー散逸率(以下,散逸率)で表現するWinterwerp(2002)の凝集モデルを有明海に適用することを目的として,散逸率と懸濁物質フロック径の関係を評価するための現地観測を行った.その結果,散逸率には潮汐周期の変動が認められたが,フロック径は1015μm程度で時間的に大きく変化することはなかった.Winterwerpのモデルによる推定値と観測値とを比較した結果,モデル係数を修正する必要があるものの,モデルによって現地海域のフロック径を概ね再現できることが確認された.本研究では,懸濁物質の凝集を乱流エネルギー散逸率(以下,散逸率)で表現するWinterwerp(2002)の凝集モデルを有明海に適用することを目的として,散逸率と懸濁物質フロック径の関係を評価するための現地観測を行った.その結果,散逸率には潮汐周期の変動が認められたが,フロック径は1015μm程度で時間的に大きく変化することはなかった.Winterwerpのモデルによる推定値と観測値とを比較した結果,モデル係数を修正する必要があるものの,モデルによって現地海域のフロック径を概ね再現できることが確認された.わが国の沿岸域における水環境悪化の一因として,浮遊懸濁物に関連した水環境の変化が挙げられる.これらの問題を解決するために,沿岸域の懸濁物質輸送現象をより高精度に評価可能な数値モデルを確立する必要がある.そこで,本研究では凝集やフロックの崩壊を乱流エネルギー散逸率で表現するWinterwerp(2002)の懸濁物輸送モデルを有明海に適用することを目的として,乱流エネルギー散逸率と懸濁物質(SS)の動態の関係を評価するための現地観測を実施した.観測は2008年12月3日に有明海竹崎島沖において一潮汐間にわたって行った.フロック径の測定にはアレック電子社製の水中顕微鏡を用い,海底から1m, 4m, 8mの位置において60分毎に測定を行った.エネルギー散逸率はアレック電子社製の微細構造プロファイラを用いて観測時間中に300回計測した.さらに,多項目水質計による60分毎の塩分,水温,濁度の測定,ならびに採水によるSS測定と採泥も併せて実施した.観測結果より, SS濃度は3.011.0mg/lの間で変動していることが確認された.エネルギー散逸率は全ての層で上げ潮時,下げ潮時に大きな値を示し,憩流時には比較的小さな値を示した.また,海底から1mの層では一潮汐間にわたって他の層に比べ, 1オーダー程度大きな値を示した.水中顕微鏡によって実測されたフロック径は20μm前後であり,一潮汐間にわたってフロック径に大きな変化は見られなかった.また,モデルによる推定値と観測値とを比較すると,海底面上4mと8mではフロック径の変化がモデルにより概ね再現できた.しかし,海底に近いほど観測結果との差異が見られた.これは本研究で用いたモデル式では海底から巻き上げられた直後のフロックの影響が考慮されていないためと推察される.沿岸域における水環境問題を解決するために,沿岸域の懸濁物質(SS)輸送現象を高精度に評価可能な数値モデルを確立する必要がある.本研究ではSSの凝集やフロックの崩壊を乱流エネルギー散逸率(以下,散逸率)で表現するWinterwerp(2002)のモデルを有明海に適用することを目的として,散逸率とSSの動態との関係を評価するための現地観測を実施した.しかし,1)水中顕微鏡で測定したフロック径にはプランクトンの影響が含まれている,2)微細構造プロファイラに搭載された乱流シアセンサーでは海面や底面近傍および密度勾配が大きい層の散逸率を評価することが困難である,などの問題があった.そこで,平成21年度は,2008年に取得したデータの再解析を行った.微細構造プロファイラによる散逸率の算定には,乱流シアデータの代わりに温度シアデータを用いることとした.その際,成層が強い状況下での温度シアによる散逸率算定の妥当性を検証するために,過去に取得された夏季のデータも併せて解析した.その結果,密度成層が弱い状況下においては乱流シアと温度シアのどちらを用いても散逸率の値は同程度であったが,密度躍層近傍では温度シアから算定した場合にのみ散逸率の大きな減少が見られた.これは,密度躍層における乱れの抑制を現していると考えられる.また,温度シアデータを用いれば,海面や底面近傍の情報も取得できるため,沿岸域における散逸率の測定には温度シアデータの使用が有効であることが確認された.一方,水中顕微鏡によって撮影された画像からプランクトンの影響を除去した結果,フロック径は1015μm前後であることが確認された.WinterwerpのモデルにSS濃度と散逸率を入力してフロック径の時間変化を推定した結果,モデル係数を若干修正する必要があるものの,モデルによって現地海域のフロック径を概ね再現できることが確認された.
在日韓国・朝鮮人社会における伝統スポーツと民族アイデンティティの研究

研究初年度は在日韓国・朝鮮人のエスニシティなどに関する先行研究を調べるとともに、多数の韓国・朝鮮人が集団で居住する大阪のいくつかの地域のフィールドワーク調査によって本テーマの考察を試みた。また、夏には韓国に赴き、本研究で採りあげる韓国の「伝統スポーツ」なるものをより明確にするため、その歴史やスタイル、伝承形態などの集中的な調査を行った。現時点においては在日韓国・朝鮮人社会のおいて、伝統スポーツの伝承形態を把握することが中心となり、それと彼らのアイデンティティとの関わりについて、明確な関連性を提示するには次年度に予定している更なる集中調査が必要である。日本国内において彼らの伝統スポーツが実践される機会は、主として民族系の学校、在日本大韓民国居留民団、在日本朝鮮人総連合会などによって提供されている。しかし、本国で広範囲に行われている綱引きや車戦といった集団スポーツが伝承されていないことは彼らに地理的なコミュニティが欠落していることも一要因だと思われる。ゆえに、伝承されているのは個人レベルで完結するシルムと呼ばれる朝鮮相撲やテコンドーなど、格闘技が多いことが一つの特徴である。女性の板飛びやぶらんこなどが行われることはあるものの、年中行事の域を越えず、日常の娯楽とはなりえていない。テコンドーに関しては韓国式と北朝鮮式の異なる二つのスタイルが共存しているが、それらのスタイルと実践者の国籍に関しては顕著な関連は見られず、むしろ地理的な条件の方が、スタイルの選択に影響を与えているケースが多い。また、朝鮮学校の授業で行われる場合などを除き、両スタイルの実践過程に政治的イデオロギーが持ち込まれることは少ない。
腎局所レニン-アンジオテンシン系の高血圧における役割の研究

近年、様々な組織においてレニン-アンジオテンシン系の各コンポーネントの存在が報告されており、従来から知られている全身性のものとは異なった調節を受けていると考えられる、局所レニン-アンジオテンシン系が注目されている。我々は本態性高血圧症の原因解明の一端として、高血圧症治療の第1選択薬の一つであるアンジオテンシン変換酵素阻害薬の、腎局所レニン-アンジオテンシン系に対する影響を検討した。ヒト本態性高血圧症のモデル動物である高血圧自然発症ラット(SHR)および正常血圧ラット(WKY)に、アンジオテンシン変換酵素阻害薬エナラプリルを7日間経口投与した。エナラプリル3mg/kg/day投与により、高血圧発症前期である4週齢のSHRは対照群と比較して約10mmHg、高血圧維持期である14週齢のSHRでは約25mmHgの降圧が観察された。同週齢のWKYでは降圧は観察されなかった。極めて興味あることに、この時、腎組織中のアンジオテンシンIIの濃度は血圧に比例して低下したが、血漿中のアンジオテンシンII濃度は変化しなかった。またアンジオテンシンI濃度は降圧に起因すると考えられる増加がSHRにおいて見られた。これらの結果は、エナラプリルの降圧効果には腎局所のアンジオテンシンII量の減少が関与していることを示唆している。また、同様の処置をした各週齢のSHRおよびWKYの腎糸球体および尿細管のアンジオテンシンII受容体量を比較した結果、エナラプリルの降圧効果に腎局所のアンジオテンシンII受容体量および親和性は関与しないと考えられた。今後、異なる種類の実験高血圧モデルを用いるなどし、高血圧症における腎局所レニン-アンジオテンシン系の役割をさらに検討していく予定である。
電子励起が誘起する原子移動過程

最近、半導体・絶縁体において、光や電子線をあて電子を励起させると原子が大きく動く現象が次々に見いだされている。これらは「結合電子を励起することで原子系が再配列する現象」と統一的に捉えることができる。本総合研究では、個別的現象論に陥ることなく、分野間の垣根を越えて「電子励起状態を通してみた原子凝集機構」をキーワードに、原子移動の機構とその応用について企画調査を行った。平成4年10月2224日に山梨県小淵沢で行った研究会では、班員以外にも広く呼びかけ、次の項目について発表・討論を行った。(1)物質の凝集形態の違いによる原子移動機構の類似点と相違点。(2)非平衡物質ともいえるアモルファス物質での電子励起による構造変化の機構。(3)半導体電子素子などの劣化現象の原因とされている欠陥反応の機構。(4)電子励起状態のもとで原子を凝集させ、熱的な過程では不可能な新物質・新機能素子を作成することの可能性。(5)電子励起の方法による違い。活発な討論・調査を通じて、基底電子状態に束縛された旧来の物質群と物質観から解放され、電子・原子を総合した高次空間で凝縮物質の構造と電子状態を包括的・大局的に扱う「新物質科学」への道が見い出された。そこでは、電子励起状態を通じて原子凝集機構の多層性を知るという物質科学での基礎的発展とともに、原子移動過程を利用することで新しい電子素子・人工物質を作成するという物質工学への貢献が期待できる。なお本研究調査活動の成果を基に、雑誌「固定物理」の別冊特集号<電子励起による非平衡固体ダイナミックス>が編集され、平成5年3月に出版される。また、本研究領域を一層推進するために、平成5年度科学研究費総合研究(B)「電子励起による非平衡固定ダイナミックス」および平成6年度発足科学研究費重点領域研究「電子励起による新物質科学の創出」が計画・申請された。
重症筋無力症胸腺胚中心形成の形態および機能に関する基礎的研究

重症筋無力症(MG)胸腺の胚中心形成を成す濾胞について、免疫組織学的検索を行い次の結果を得た。1.MG胸腺の濾胞には、Bリンパ球の集合が著明であるが、免疫グロブリン保有細胞は極めて疎であった。集合Bリンパ球は認識抗体反応に差があり、L26抗体に比し、LN1(CDw75),LN2(CD74)抗体の反応は弱かった。2.MG胸腺濾胞中に、Bリンパ球のほか、伸長したL26陽性細胞が散在し、この細胞はトノフイラメントおよびデスモゾームを有し、上皮性性格を示した。この細胞はリンパ節の濾胞には存在せず、樹枝状細胞と異なる細胞で胸腺上皮と推定された。3.新生児胸腺髄質にはL26陽性の伸長した胸腺上皮細胞が散在し、この細胞は構造的にMG胸腺濾胞の上皮性性格の細胞と構造的に一致した。4.MG胸腺濾胞の免疫グロブリンの遺伝子再構成について検索したが、免疫グロブリンの遺伝子再構成は認められなかった。5.MG胸腺のapoptosisについて、Fas抗原発現を免疫組織染色法で検索した。濾胞外の胸腺組織では発現が明瞭あったが、濾胞内細胞の発現は低減していた。BM1抗原の発現は何れにも認められなかった。6.MG合併胸腺腫にはmedullary differentiationおよび濾胞形成を伴う例が約45%あり、そのなかにBリンパ球が多く集合するが、免疫グロブリン保有細胞は極めて疎であった。MG非合併胸腺腫にはmedullary differentiation及び濾胞形成は無く、免疫グロブリン保有細胞は同様疎であった。以上の結果より、MG胸腺の濾胞にはBリンパ球が多数存在するが抗体産生活性前の状態である。この濾胞には胸腺由来の上皮性細胞が存在した。胸腺濾胞細胞のapoptosisは低減した状態であった。MG合併胸腺腫のBリンパ球も同様な免疫組織学的所見を示した。重症筋無力症(MG)の胸腺では、正常成人胸腺にはみられない胚中心成形を成すリンパ濾胞の発達を認め、この濾胞に免疫組織染色を行うと、Bリンパ球集合が目立つが、自己免疫抗体と考えられるIgG保有細胞は極めて少なく、胸腺リンパ濾胞内での抗体産生亢進所見は認められず、集合Bリンパ球は抗体産生活性化前の状態と考えられた。従来、胸腺髄質内に存在するMG症例の発達リンパ濾胞は、胸腺外組織と考えられているが、本研究において、MG胸腺リンパ濾胞の電顕所見では、集合リンパ球のほか、胞体が比較的明るく、多形性細胞の散在が認められ、これらの細胞はデスモゾーム、トノフィラメントを有し、上皮性性格を示し、自己免疫疾患を有しない症例のリンパ節には存在しなかった。MG症例胸腺組織の免疫電顕において、これら上皮性性格を有する細胞はL_<26>抗体と反応するほか、免疫組織染色において、サイトケラチン抗体、抗テネイシン抗体に弱く反応染色した。また、リンパ節デンドリテイク細胞と反応する抗DRC抗体、抗C_abr抗体では染色を示さなかった。正常胸腺において、新生児胸腺には髄質中、L_<26>抗体に染色する同様形態の細胞が存在することを認めた。

以上の所見より、MG胸腺の胚中心形成を成すリンパ濾胞には、リンパ節リンパ濾胞には存在しない上皮性性格の細胞が存在し、免疫組織染色所見と合わせ考えると、おそらく、胸腺上皮由来の細胞と推定され、胸腺リンパ濾胞は胸腺外組織とする従来の考えと矛盾する。また、MG胸腺リンパ濾胞の発達は非特異性変化とする考えと異なり、自己免疫疾患の特異反応であり、胸腺上皮が関連していると推定された。今後、MG胸腺リンパ濾胞の免疫グロブリン特異性について検討を進め、MG胸腺リンパ濾胞内Bリンパ球の起原、リンパ濾胞内上皮性細胞の機能的役割について検索する予定である。重症筋無力症(MG)症例の胸腺髄質に存在する胚中心形成を成すリンパ濾胞中には、免疫グロブリン保有細胞は少なく、その可溶性蛋白を採取し、免疫グロブリンのDNAを抽出し、遺伝子の再構成をみたが、免疫グロブリン遺伝子の再構成は認められなかった。MG症例は胸腺腫を合併する頻度が高く、腫瘍中にmedullary differentiationを見る症例が約45%存在し、またリンパ濾胞様構造を示す症例が約36%あり、抗体産生直接関連について免疫組織染色を行った。これらの構造組織中には、Bリンパ球が集合しているが、免疫グロブリン保有細胞は極めて少なかった。同様に、MG非合併胸腺腫について、免疫組織染色を行ったが、腫瘍中にmedullary differentiationおよびリンパ濾胞様構造は認められなかった。Bリンパ球保有腫瘍はMG症例で約55%,非MG症例で約50%存在し、差を認めなかったが、非MG胸腺腫のBリンパ球の集合密度はMG胸腺腫に比し疎であった。またBリンパ球を認識するLN1抗体陽性細胞はMG胸腺腫に約36%認められたが、非MG胸腺腫には認められなかった。免疫グロブリン保有細胞は非MG胸腺腫でも極めて疎で、MG胸腺腫との差は認められなかった。MG胸腺の濾胞について、抗体産生細胞に関連するapoptosisの検索を行った。Fas抗原およびBM1抗原の発現を免疫組織染色で行い、MG胸腺濾胞ではFas抗原の発現が減少し、BM1抗原発現は認められなかった。以上の結果で、MG胸腺の発達した濾胞にはBリンパ球の集合が目立つが、活性前の状態であり、またMG胸腺腫でも同様であった。MG胸腺濾胞のapoptosisは低減を示し、MG胸腺のnegative regulationを攪乱し、自己抗体産生亢進に関与していると推定された。
原子層MOCVDによる超低〜超高誘電体多層超格子酸化膜の作製

1.原子層MOCVD法により再現性良く高誘電体超薄膜を形成するための検討を行った。第3世代MO原料としてテロラエンを会合させたβジケトン金属錯体を用いると原料の劣化が少なく、長時間にわたって安定した結晶成長が可能であることを明らかにした。超音波式混合ガス濃度計を用いてMO原料の供給量を正確に制御すること、分光エリプソメトリにより結晶成長のその場観察を行うことが結晶成長の再現性向上に効果的であることを明らかにした。2.高誘電体結晶SrTiO3薄膜のX線回折スペクトルを詳細に測定し、ファイスキャンスペクトルの対称性からMgO基板上にエピタキシャル成長を実現できていること、ロックインカーブの半値幅は0.18度ですでに報告されているどの値よりも鋭く、高品質の薄膜結晶が得られていることを明らかにした。また、薄膜の格子定数は、歪みの効果によりバルクの値より伸びていることを明らかにした。3.酸化剤N2Oの分圧を変化させて薄膜結晶成長を行い、得られた薄膜の結晶性をX線回折により評価し、表面平滑性を原子間力顕微鏡により評価した。この結果、最適成長条件を見出した。また、原料供給法について原子層パルス制御法と同時供給法の比較を行った結果、原子層制御MOCVD法では成長表面上のマイグレーションが促進されている結果、平滑で結晶性の高い薄膜が得られることを明らかにした。
先天型筋緊張性ジストロフィー症の発症機構の解明と遺伝子治療の研究

1、遺伝子診断を利用した出生前診断の方法の確立遺伝子異常を検出するために、ラジオアイソトープを用いないPCR法ならびにサザーン法を開発した。この方法を患者の遺伝子診断、出生前診断に用いた。また、出生前診断には近傍のマーカーを用いた遺伝子のハプロタイプの解析を併用することにより、確実な診断が行えるようになった。また、このラジオアイソトープを用いない診断法は他の3塩基繰り返し配列を検討する場合にも有用で、脆弱X症候群、ハンチントン舞踏病の解析が可能となった。リンパ芽球を材料に遺伝子発現を検討した。リンパ芽球での発現は微量であるためにPCR法を利用した。PCR法を遺伝子発現の定量に用いる場合には、原理的に誤差を生む可能性が大きく、そのために競合PCR法のシステムを開発し検討を行った。先天型筋緊張性ジストロフィー症と正常対照を検討したが、その差はなく、発現の異常は認められなかった。遺伝子の発現は臓器ごとに異なる場合もあり、今後、発現量の多い筋肉等で検討してゆく必要がある。大腸菌を用いた原因遺伝子産物を産生を試みた。まず、myotonin/protein kinaseのヒトおよびマウスの全長cDNAを作成した。ヒトでは心筋からRNAを分離し、PCR法にて作成した。またマウスcDNAはヒトmyotonin/protein kinase cDNAをプローブとして、cDNAライブラリーのスクリーニングを行い単離した。これらのcDNAを発現ベクターに導入し、大腸菌内での蛋白の産生を試みたが、蛋白の産生は認めらりなかった。今後さらに、発現システムの検討、ドメインごとの発現の検討が必要と考えられた。本年度は筋緊張性ジストロフィー症におけるMyotonin/protein kinaseのmRNAレベルの解析とマウス及びヒトMyotonin/protein kinase遺伝子を作成した。1)mRNAの解析:まずリンパ芽球を用いRNAを分離し、RT-PCR法によってMyotonin/protein kinase遺伝子発現量を測定する方法を検討した。リンパ芽球ではこの遺伝子の発現量は少なく、内部標準として用いたGAPDHとの比較が通常の方法では困難であった。そこで、定量化にすぐれる競合PCR法のシステムを作成し、定量化をおこなった。その結果、リンパ芽球のMyotonin/protein kinase遺伝子発現量はGAPDH遺伝子の1/100であり微量であることが判明した。患者と正常対照との比較では、この遺伝子発現量に明らかな差はなかった。現在筋肉のサンプルを用いて同様の方法でこの遺伝子発現量を検討している。2)マウス及びヒトMyotonin/proteinkinase遺伝子の作成PCR法によりヒト遺伝子をまたcDNAライブラリーよりマウス遺伝子を単離した。これらの遺伝子はその長さよりほぼ全長のcDNAと判断した。現在その塩基配列を確認している。それと平行して、そのcDNAを大腸菌の発現ベクターに組み込み大量にそのその蛋白を作成する準備を整えている。今後この蛋白の性質を解析してゆく予定である。また、これらの遺伝子を細胞に導入して、細胞内シグナル伝達機構がこのように変化するかを確認する。この疾患では、遺伝子発現のみでなく、その遺伝子産物の細胞での機能が明らかになっておらず、そのために細胞レベルでの異常が明らかとなっていない。本研究では、大腸菌を用いた原因遺伝子産物を産生を試みた。これらのcDNAを発現ベクター(pRSET)に導入した。この発現系はファージのT7プロモーターを利用して大腸菌内で蛋白を産生させるものである。大腸菌内にmyotonin/protein kinase遺伝子を組み込んだRSETベクターとファージのT7ポリメレースを産生するM13ファージを同時に大腸菌に導入し発現を試みた。しかし大腸菌内での蛋白の産生は認められなかった。

これは、使用したcDNAが全長であり、3'に3塩基繰り返し配列を含んでいるためにmRNAの安定性に影響を与えている可能性も考えられた。今後さらに、発現システムの検討、ドメインごとの発現の検討が必要と考えられた。