hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
希望を育てる学校教育の検討―教師・子どもの評価行動に着目して

年度当初より年度末まで、産前産後休暇および育児休暇を取得したため。研究を中断していた。研究を中断していた。延長申請届を提出予定である。2019年度より、フィールドワーク開始予定である。RAなども使いながら、計画を遂行していきたい。本研究の目的は、「いま、なぜ我が国の若者・子どもたちが希望を持てないのか」という問いに対し、教育社会学の立場から取り組み、子どもの希望を損なわずに育てる学校の教育方法について明らかにするよう試みることである。そのために、子どもの「希望(ホープ)」を育てることに成功しているEd Vision型プロジェクト・ベース学習を取り入れている中学校に行き、フィールドワーク調査をおこなう予定である。そこで、初年度である平成29年度は、調査を成功させるための基盤固めとして有効な観察視点を得ることを目的に据え、主に以下のふたつに注力した。ひとつは、E.ゴッフマンの相互作用研究で提示される知見を整理し、学級内の評価行動を抽出するための理論的検討をおこなった。これに加えてふたつめに、既存データの再分析、および再分析で得た知見を活用しながら学級内で生じる評価行動の抽出をおこなった。具体的には、内閣府調査の再分析、および申請者自身が過去に調査した共同的な学習を通して「学びから逃走」せずに向き合うようになっていくフィールドワークデータの再分析を試みた。実績の一部として、フィールドワークデータの分析内容について簡単に紹介しておく。子ども同士の関心を高めよいところを見つけ合うような取り組み(教師が子どもを表立って評価しない、指名しない、子どもを頭ごなしに叱らないなど)を通して、子ども同士で学習面だけに限らない些細なものも含む多様なよいところの指摘が相互におこなわれ、子どもたちの学習態度が変化したことがうかがえた。こうした変化は、ゴッフマンが指摘するような自己呈示の方法の変更によりもたらされたものである。すなわち、教室内で子どもたちは自分自身が与える印象を操作しようと試みていた。しかし、担任教師やクラスメイトの子どもたちから褒められるという経験により、その自己呈示の方法が変更されたのだと指摘できる。今年度、教師ー子ども間の評価方法、子ども間の評価方法の変化と、子どもたちの学習に向かう姿勢とのあいだに関連があることは見出された。さらにデータを読み込むとともに、ていねいに理論を整理すべきであると自覚しているが、今後の分析の見通しを掴むことができたという意味で、おおむね順調であると考える。研究を中断していた。研究を中断していた。今年度おこなった、理論の整理、およびデータの再分析を継続するとともに、フィールドワーク調査を開始したい。また、調査にあたっては、フィールドワーク調査に加えて、質問紙調査の実施も考えている。そこでその内容の検討を始めたい。また、現状までの分析内容について、学会での口頭発表および学会誌への投稿をおこない、その妥当性についてにも検討していく予定である。物品費については、おおむね予定通りに使用することができた。一方で、当初予定していた予備調査旅費や学会発表旅費については、日程が合わず実施することができなかった。しかし、次年度はこれらの調査や学会へ必ず行く予定であり、加えてアメリカのプロジェクトベース学習の推進校に視察も予定しているため、次年度末には当初の計画通りの額の使用が見込まれる。年度当初より年度末まで、産前産後休暇および育児休暇を取得し研究を中断していた。
神経因性疼痛に関わる脊髄後角神経回路の神経可塑性発現機構における一酸化窒素の役割

神経因性疼痛時脊髄後角神経回路において、脊髄後角のシナプス終末に存在するプロスタグランジンE2の受容体の一つであるEP1受容体活性化に伴うグルタミン酸遊離によりNMDA受容体がFynを介したチロシンのリン酸化により活性化され、神経型一酸化窒素(NO)合成酵素の細胞膜へ移動を伴う酵素活性の増大によりNO産生が上昇し、その産生の維持にはPKAとPKCの活性化が協同して行われていることが示唆された。脊髄における神経型一酸化窒素日成酵素(nNOS)の活性化による一酸化窒素(NO)産生の増加が神経因性痙痛の維持に重要であることを明らかにしてきた。本研究では、脊髄での神経可塑性を誘導するNMDA受容体-NO経路の機能的、可逆的変化について、ノックアウトマウスや各種プロスタグランジン(PG)、オピオイド、グルタミン酸アナログを用いて検討した。nNOS活性という生化学的な変化をNADPHジアホラーゼ活性を用いた酵素組織化学により組織学的に可視化、定量化して、それらのNO産生を神経因性痺痛の客観的指標にすることを成功し、さらに、NO自身が逆行性メッセンジャーとしてシナプス前終末に働きnNOS活性にフィードバックをかけていることを明らかにした。また、本研究では神経因性痙痛のin vitroモデルの作製を試みている。摘出脊髄標本を用いLTPなどの神経の可塑性を誘導し、その可塑性が神経因性痙痛モデルマウスにおける可塑性と同じであるか、nNOS活性を指標に検討中で、in vitroの神経因性痺痛モデルとして成り立つかも検討している。nNOS活性だけでなく、リアルタイムNOイメージング法により、実際に産生されるNOについても摘出脊髄全載標本で記録準備を進めている。そのNOを指標として、神経因性痺痛に関連する各種PG、オピオイド、グルタミン酸アナログの神経可塑性に対する効果を細胞および神経回路レベルで解析する。神経因性痺痛モデルマウスから摘出脊髄標本を作製し、すでに完成した神経可塑性を構成する神経回路への電気刺激に対するNO産生応答について検討準備をしている。さらに、NMDA受容体へのnNOSの移動による物理学的な調節の神経因性痙痛への関与の解析や、NMDA受容体やnNOSが活動する場である樹状突起スパイン形態変化とnNOS活性との関係の解析の予備実験を開始した。脊髄における神経型一酸化窒素合成酵素(nNOS)の活性化による一酸化窒素(NO)産生の増加が神経因性疼痛の維持に重要であることを明らかにしてきた。nNOS活性という生化学的な変化をNADPHジアホラーゼ活性を用いた酵素組織化学により組織学的に可視化、定量化して、それらのNO産生を神経因性疼痛の客観的指標にすることを成功し、さらに、NO自身が逆行性メッセンジャーとしてシナプス前終末に働きnNOS活性にフィードバックをかけていることを明らかにした。NMDA受容体へのNOSの移動による物理的な調節の神経因性疼痛への関与の解析nNOSはNMDA受容体にPSD95タンパクを介し結合して活性化される。その移動について、細胞レベルでの解析を行った。我々は、脳下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド(PACAP)とNMDAが相乗作用で膜への神経型一酸化窒素合成酵素(nNOS)の移動を引き起こして、PC12細胞でNO産生を増強することを明らかにしてきた。我々はnNOSのN末端に蛍光タンパク質(YFP)を付けた変異体(nNOSNT-YFP)をPC12細胞導入し、その移動を追跡した。PACAPとNMDAの相乗作用で引き起こされるnNOSNT-YFP移動は、プロテインキナーゼA(PKA)、プロテインキナーゼC(PKC)とSrcキナーゼの抑制剤によってブロックされた。そして、PACAPの効果は、PKAとPKC活性化することにより観察された。nNOSのPSD-95認識のためのβフィンガー領域はnNOSのPSD-95への移動に必要であることを明らかにした。PACAPがその受容体PAClを介してPKAとPKCを活性化することによりnNOS移動を引き起こしたことを明らかにした。
自己免疫疾患「ランバート・イートン筋無力症候群」モデル動物の開発

1.シナプトソームを免疫原とするモデル動物の作成シビレエイ電気器官シナプトソームで免役したマウスの神経-筋標本(横隔膜)の終板電位の量子解析を行ったところ,ランバート・イートン筋無力症(LES)に特徴的な伝達物質遊離量子数の減少が確認された。2.受動免疫によるモデル動物の作成上記と同様に電導器官シナプトソームを用いてウサギに能動免疫を行い、そのウサギの血清をマウスに注入することによりマウスへの受動免疫を行った。LES患者の血清を受動免役した場合と同様に、伝達物質遊離量子数の減少が認められた。3.SCLC細胞のP型Caチャネルに対する患者血清の効果高カリウム刺激時におけるSCLC細胞のCa上昇をイメージング法で測定し,各Caチャネルタイプの特異的毒素による阻害効果を調べた。その結果全体のCaチャネルのうちLES発症原因とされるP型Caチャネルの割合は約20%であると推定された。このSCLC細胞を患者あるいは健常人のIgGとインキュベートし、高K刺激時のCa上昇の差を調べたが、有意差は認められなかった。4.アセチルコリンエステラーゼ阻害薬の効果マウスの神経筋標本を用いて、アセチルコリンエステラーゼ阻害薬(ドネペジル)の効果を調べたところ,quantal contentsの増大が認められ,しかも,LESの治療に現在繁用されている4-aminopyridine(副作用大)と相乗作用があることを見出した。5.P型Caチャネル可視化の試みLES発症機構と考えられているP型Caチャネルのdownregulationの機構として,internalizationを仮定した。これを実証する目的で,FITC標識した合成ペプチド毒ω-AgaIVAを用いてP型Caチャネルの蛍光ラベル化の可能性を検討したところ,共焦点顕微鏡下でSCLC細胞膜近辺に明るい蛍光が認められた。1.シナプトソーム免疫によるモデル動物の作成:シビレエイ電気器官シナプトソームで免疫したマウスの神経-筋標本(横隔膜)を電気生理学的に調べた。自発的な微小終板電位(MEPP)の大きさに差は見られなかったが、運動神経を電気刺激して生じる終板電位(EPP)の大きさは減少していた。MEPPの結果はアセチルコリン受容体側に変化がないことを示している。EPPの量子解析からはquantal contentの減少が確認された。以上のことは、神経終末のCa^<2+>チャネルが阻害されていることを示しており、LEMS様症状を示すモデル動物を作成することができたと考えられた。2.受動免疫によるモデル動物の作成:上記と同様に電気器官シナプトソームを用いてウサギに能動免疫を行い、そのウサギの血清をマウスに注入することによりマウスへの受動免疫を行った。LEMS患者の血清を受動免疫した場合と同様に、quantalcontentの減少が認められた。3.モノクローナル抗体産生の作成:電気器官シナプトソーム膜標品で免疫したマウスの脾臓より抗体産生ハイブリドーマを作成した。スクリーニングにはELISA法を用い、シナプトソーム膜標品に反応し、神経細胞体膜標品には反応しない抗体を産生するハイブリドーマを選択した。その結果、認識抗原が異なる7種類のハイブリドーマを得ることができた。次に、これらハイブリドーマがLEMS様症状を引き起こす抗体を産生するかどうかを調べるために、ハイブリドーマをマウス腹腔内で増殖させ、そのマウスの横隔膜標本の筋電位を細胞外記録により測定した。その結果、7種類のハイブリドーマのうちの1つにおいて、頻回刺激で筋電位の増強が生じる(facilitation)というLEMSに特徴的な現象を確認することができた。

今後、さらに細胞内記録により量子解析を行ってLEMS様症状を確認する予定である。1.モデル動物の解析筋電位waxing現象が確認された抗体産生細胞起因の腹水からIgGを精製し,マウス小脳を抗原としたwestern blottingを行ったところ,80kDa付近に特異的バンドを見いだした。4回継代後にマウス腹腔内に注射し、横隔膜の終板電位を細胞内記録したが、waxing現象は認められなかった。腹水IgGを精製してwestern blottingを行ったところ上記バンドが消失していたことから,80kDa蛋白を認識する抗体がLEMS様症状発症の原因となっていた可能性がある。2.SCLC細胞のP型Caチャネル高K^+刺激時におけるSCLC細胞のCa上昇をイメージング法で測定し,各Caチャネルタイプの特異的毒素による阻害効果を調べた。その結果全体のCaチャネルのうちLES発症原因とされるP型Caチャネルの割合は約20%であると推定された。3.Ca動態に及ぼす患者血清の効果SCLC細胞を患者あるいは健常人のIgGをインキュベートし、高K^+刺激時のCa上昇の差を調べたが、有意差は認められなかった。4.アセチルコリンエステラーゼ阻害薬の効果マウスの神経筋標本を用いて、アセチルコリンエステラーゼ阻害薬(ドネペジル)の効果を調べたところ,quantal contentsの増大が認められ,しかも,LESの治療に現在繁用されている4-aminopyridine(副作用大)と相乗作用があることを見出した。5.P型Caチャネル可視化の試みLES発症機構と考えられているP型Caチャネルのdownregulationの機構として,internalizationを仮定した。これを実証する目的で,FITC標識した合成ペプチド毒ω-AgalVAを用いてP型Caチャネルの蛍光ラベル化の可能性を検討したところ,共焦点顕微鏡下でSCLC細胞膜近辺に明るい蛍光が認められた。
複核金属錯体結晶における電子移動反応のフェムト秒ダイナミックスと位相緩和

76MHzの高繰返し励起では試料に与える熱的影響が大変大きく再現性のあるデータが得られないことがわかった。そこでレーザーロッドを分散の少ない短いもの(0.25%Ti,3.6mm)へ交換することで短パルス化をはかるとともに、キャビティダンパーを導入して繰返し周波数の低減化(10k-10MHz)と同時にパルス当たりのエネルギーを上げる装置改良をおこなった。短パルス化に伴うレーザー共振器とブラッグセルの位置調整が大変むづかしく長期間を要したが、なんとか安定な発振に成功することができ、ブラッグ回折効率約50%で単一パルスのエネルギーも10倍近く(35fs,20nJ/pulse)に向上させることができた。2.錯体結晶薄膜および複核錯体での高速正逆電子移動速度の測定。光電導素子として注目されているオキソチタニルフタロシアニン結晶膜(100nm厚)やプルシアンブルー型混合原子価錯体についてポンプ・プローブ法による測定をおこない緩和と電子移動反応の減衰・回復過程における位相緩和情報を取り出すべく努力しているが、現在の所SNが悪く成功していない。高濃度混合結晶[Os_xRu_<1-x>(bpy)_3](PF_6)_2(bpy=2,2′bipyridine)でのRu(II)(ドナー)からOs(II)(アクセプター)への光エネルギー移動について、上記で製作したレーザーシステムを用いて時間相関単一光子計数法により発光のダイナミックスを測定した。高濃度にドープされたOs(II)存在下での高速発光減衰曲線をRu-Ru間の励起移動を考慮したランダムウオークモデルでシュミレーションすることに成功し、励起移動およびエネルギー移動速度の距離依存性について明らかにした。またその機構はどちらも電子交換機構であることが明らかになった。現在稼働中のTi:Sapphireレーザー(76MHz,0.5W,100fs)のパルスで手始めにフタロシアニン結晶膜(100nm厚)や溶液セルでポンプ・プローブ法による測定を試みた。その結果、信号は得られるものの再現性が非常に悪く、試料に与える熱的影響が意外に大きいことがわかった。そこでキャビティダンパーを導入して繰返し周波数の低減(10k-10MHz)と同時にパルス当たりのエネルギーを上げることを装置改良の第一目標にした。これは同時に発光の単一光子計数法の光源としても有用であるので、その検出系の整備も行なった。プラッグセルの調整が大変難しいが、現在回折効率の向上をめざして努力している。2.混合原子価複核錯体や複錯塩イオンペアにおける系の探索と高速逆電子移動速度の測定。これまで混合原子価錯体や錯イオン対でMMCTスペクトルが評価されている比較的相互作用の強い系でダイナミックスは検討されていない系としてプルシアンブルー型混合源子価錯体をモデルとして取り上げ、その合成と複錯塩単結晶生成の条件を検討している。前年度で76MHzの高繰返し励起では試料に与える熱的影響が大変大きく再現性のあるデータが得られないことがわかった。短パルス化に伴うレーザー共振器とブラッグセルの位置調整が大変むづかしく長期間を要したが、なんとか安定な発振に成功することができ、ブラッグ回折効率約40%で単一パルスのエネルギーも10倍近く(70fs,20nJ/pulse)に向上させることができた。しかし当初の目的である20fs程度の短パルス化には未だ成功していない。

2.錯体結晶薄膜および複核錯体での高速正逆電子移動速度の測定。光電導素子として注目されているオキソチタニルフタロシアニン結晶膜(100nm厚)やプルシアンブルー型混合原子価錯体についてポンプ・プローブ法による測定をおこない励起エネルギー緩和と電子移動反応の減衰における位相緩和情報を測定すべく努力している。
ヒトBach転写因子cDNAのクローニング

【本研究の背景および目的】赤芽球系転写因子NF-E2は、巨核球と赤芽球の分化・成熟に、重要な働きをしている。その小サブユニットであるsmall Maf因子とへテロ二量体を形成し、NF-E2の認識配列に結合する新たな転写因子Bach1の遺伝子を単離し、機能を解析すること。【研究によって得られた知見・成果】科研費交付申請書に従った研究を行い、以下のような知見が得られた。【1.ヒトBach1転写因子遺伝子の単離】平成9年度に本研究で単離したヒトBACH1 cDNAの情報をもとに、この遺伝子を単離し、その構造を決定した。【2.ヒトBach1転写因子の新たな選択的スプライシング型の発見】ヒトの各組織におけるBACH1の発現を検索・解析した結果、一部構造の異なるBACH1転写因子が存在することを明らかにし、その遺伝子構造も決定した。【3.NF-E2認識配列を介した転写調節におけるヒトBach1の機能解析】ヒトBach1転写因子はNF-E2認識配列に結合し、転写抑制因子として機能することを明らかにした。また、新たに同定したBach1のアイソフォームは、これとは異なる機構で転写因子として機能する可能性を見い出した。【本研究の背景】赤芽球系転写因子NF-E2は、巨核球と赤芽球の分化・成熟に、重要な働きをしている。その小サブユニットであるsmall Maf因子とヘテロ二量体を形成し、NF-E2の認識配列に結合する新たな転写因子Bachがマウスにおいて単離された。【本研究の目的】ヒトのBach転写因子のcDNAを単離を単離し、その機能を明らかにすること。【1.ヒトBach転写因子群cDNAの単離】マウスbach1およびbach2をプローブとして用い、ヒトbach1およびbach2のcDNAを単離した。予想されるアミノ酸配列にはマウスとヒトの間で約80%という高い保存性が確認された。【2.ヒトBach転写因子群の各組織における発現】ヒトbach1およびbach2mRNAの発現は各々白血球、胸腺において高いことが明らかになった。【3.ヒトBach転写因子群の各血球系細胞における発現】ヒトbach1およびbach2mRNAの発現は各々赤芽球系、リンパ球系において高いことが明らかになった。
郭店楚簡と戦国諸子思想の研究

本研究課題は、古代儒家思想における人性論の歴史的展開と、儒家道家の思想交渉の歴史的展開に関する研究を進めた。具体的には、(1)『孟子』所載の仁内義外説を再検討し、「義」に対する告子の倫理思想を明らかにした。(2)郭店楚簡『性自命出』に見える「性」「命」「勢」「物」といった概念の意味内容と比喩表現を再検討し、その思想的特徴を明らかにした。(3)上博楚簡『民之父母』に見える「五至」について、『老子』『荘子』『淮南子』の記載を手がかりにその意味内容を検討し、儒家と道家の思想的交渉の様子を明らかにした。戦国諸子の仁義内外論の研究本研究は、戦国諸子の仁義内外論を総合的に再検討し、『孟子』に見える仁内義外論の思想的意義の解明を目的とした。本研究では先ず、『孟子』以外の戦国諸子文献(『管子』戒篇、『墨子』経説下篇、郭店楚簡『語叢一』)において、「仁」と「義」とが「内」と「外」という概念で論じられるとき、そこでは一体の何が主題となっているのか、問題意識の一般的状況を確認し、仁内義外説に対する従来の観点の不備を指摘した。その上で、告子の仁内義外説には従来の研究が想定する観点とは別に、独自の思想的意義が存することを明らかにし、その思想的意義を解明することができた。告子自身が提示する比喩と説明とによるならば、その仁内義外説の主題は、「仁」は「我の私的な親疎の基準(「我」)」に従い決まるものであり、「義」は「白さ」や「長さ」と同様、客觀的で公的な尺度に従い決まることを示すことにある。したがって、告子の義外説は、「門外」に適用される「義」の客觀性を強調する郭店楚簡『六徳』や、「道」の客觀性に假託する形で、「義」の規範としての客觀性を證明しようとする郭店楚簡『語叢一』と、ほぼ同様の問題意識に基づくとを明らかにした。更に、重要な点として、告子の義外説は、「理」(『禮記』喪服四制篇)や「道」(『語叢一』)、或いは『墨子』天志中篇に、「義は果たして天より出づ」とある「天」といった、それ自體すでに一定の客觀性が保證された權威的概念を持ち出しておらず、そこに告子の仁内義外説の思想的特徴があることを指摘した。本年度は、古代中国における儒家思想と道家思想の研究に取り組んだ。具体的には、『上海博物館蔵戦国楚竹書(二)』所収の『民之父母』を研究対象とし、道家の「道」の哲学が儒家思想に与えた思想的影響について、明らかにした。『民之父母』は、その内容が『礼記』孔子閑居篇や『孔子家語』礼論篇等の伝世文献と重なることから、人々の注目を集めた新出土資料である。この資料は、『礼記』等伝世文献との間に、文字の異同が見られることも、既に指摘されている。例えば、『民之父母』に、「物之所至、志亦至焉」とある一文は、『礼記』孔子閑居篇では、「志之所至、詩亦至焉」に作る。現在までの所、この字句の異同に関しては、二つの考え方が存する。一つは、『礼記』等伝世文献文献の字句をもとに、『民之父母』の字句を改めるもの。もう一つは、『民之父母』の字句を改めず、現存の字句に従い、合理的な解釈を模索しようとするものである。本研究では、第二の考え方を踏襲し、この文献の思想的背景を探り、併せて一文の表現形式を詳しく分析し、合理的な解釈を模索した。『民之父母』を理解するためには、道家の「無」の思想及びその礼楽批判の思想との関係を考慮すべきであり、そうしてはじめて、「物之所至、志亦至焉」という一文の思想的意味を理解することができることを指摘した。その具体的な研究成果は、「〓〓上海筒《民之父母》中的"物之所至者,志亦至焉"」として、2011年国際漢語修辞学会(於札幌、2011、10)の口頭発表にて、公表された。本年度は、戦国諸子思想と郭店楚簡に関する研究の一環として、郭店楚簡『性自命出』の研究に取り組んだ。

その研究成果として、学術論文「郭店楚簡『性自命出』の人性論とその周辺ー主要概念と比喩表現の再検討ー」(『中国ー社会と文化』第二十七号、二〇一二年)を発表した。郭店楚簡『性自命出』は発見以来、『礼記』中庸篇や同楽記篇等との思想上の類似点が指摘され、その成書年代や所属学派が議論されてきた。一方、我が国においては、その研究の初期段階から、中庸篇との思想上の相違点がいち早く指摘された。そうした研究によって、当文献の思想内容を理解する上で鍵となる「性」「心」といった主要概念は、漸くその独自の意味内容が明らかになってきた。だが、その一方で、それら主要概念の意味内容に関しては、より具体的な説明を試みる餘地が、なお残されていた。そこで、本研究では、『性自命出』に見える「性」「命」「心」「物」や、「善」「不善」及び「物」「勢」といった概念について、これら概念を繞る比喩表現や文章構造を改めて検討し、その意味内容を検討した。その上で、『性自命出』の人性論は、人間を支配する必然的な因果法則と、人間の主体的な判断を可能にする心の自由の領域とを区別し、後者に人倫規範の根源と価値とを見いだす思想であることを指摘した。研究計画に従い、当該文献の分析を進めている。24年度が最終年度であるため、記入しない。引き続き研究計画に従い、研究を進める。
新構造メタラサイクルによる中員環π共役系化学の発展

芳香族化合物は剛直な骨格や多様な置換様式を活かして、有機材料化学の観点から広く研究が行われている。これらの分子は発光特性や導電性といった特異な電子物性が発現するため、極めて興味深い。本申請研究では新しい構造のメタラサイクルという反応活性種に着目して、新しい芳香族化合物の有機合成手法の開発に取り組む。具体的にはパラジウム触媒を用いる環化カップリング反応群であり、八員環に代表される様々な中員環を有するπ共役系分子の創出とその展開を行う。
南西諸島における農地相続慣行と農地の所有構造に関する研究

1研究の経過昭和61年度,62年度,63年度に亘って沖縄県宮古・八重山,沖縄本島,奄美諸島において、農地の相続慣行と所有構造に関する調査を行った。調査した集落は17,調査農家数は258戸である。2研究の結果(1)南西諸島における農地の相続は、分割を伴いつつなされている。しかし、分割は男子のみを対象としており、また男子のなかでも長子が優先されている。すなわち、男子分割・長子優先の分割である。(2)農地相続がこのような形態をとるのは、分家する二・三男の生活を支えようとする「生活の原理」と、先祖の位牌を継承する長男により多くの土地を分けようとする「祭祀の原理」という二重の原理が対抗的に作用してことによると考えられる。(3)分割の割合は、屋取集落〈本(百姓)集落〈宮古・八重山〈奄美の順に高くなっている。本集落,宮古・八重山、奄美の間にはそれほど大きな差はみられないが、この3地域と屋取集落の間には大きな開きがある。(4)屋取集落と他の3地域の違いは、屋取集落には地割制がなく、他の3地域には地割制もしくはそれに近い土地利用の慣行があったという点にある。このことから分割相続は、地割制における土地配分の観念が引き継がれたものとして理解することができる。(5)農地の分割相続の結果、土地所有の構造は極めて零細かつ分散的である。しかし利用の面では、売買や貸借といった移動を通してかなり柔軟な動きがみられる。(6)今後、利用の面での柔軟性をさらに拡大していくことを視点に据えた研究が必要であると考える。1.研究の経過沖縄県宮古、八重山地方における農地の相続慣行と農地の所有構造に関する調査を行った。調査を実施した集落は、与那国町祖内,平良市池間,多良間村塩川,竹富町波照間,石垣市大浜,下地町上地,の6集落である。調査方法は面接調査,調査農家数は1集落につき20戸,合計120戸である。2.研究の結果宮古、八重山地方における農地の相続は、男子分割的であることがほぼ認められた。分割の方法については大まかに次のようにまとめることが出来る。(1)長男の取り分が次、三男より多いことは、どの地域も共通しているが、定量的な原則は認められない。(2)しかし、次、三男の間でも必ずしも均分になるとは限らない。親の経営に対する寄与、独立前の受益(学資等)の有無によって差がある。(3)また、他出者は分与の対象としない地域もある。この他、やや特殊な相続慣行に属するが、平良市池間(離島)では女子を含めた分割相続がなされている。もっとも、これは贈与のかたちでなされるのが普通であり、母が嫁入りの時実家から贈与された土地を、その娘が嫁に行く時贈与する、というかたちで代々引き継がれてきている。池間島は漁業が産業の中心をなしている島であり、近年まで男子は漁業、女子は農業といったかたちでの性的分業が比較的はっきりしていたようである。池間島の相続慣行はこのような社会経済的条件のもとで形成されたものと考えられるが、社会経済的条件と相続慣行の関連を考察するうえで興味深い慣行である。1.研究の経過沖縄本島における農地相続慣行と農地の所有構造に関する調査を行った.調査を実施した集落は,本島南部--知念村久手堅,同久原,本島中部--石川市嘉手苅,具志川市川田,本島北部--国頭村比地,本部町大堂の6集落である.また奄美諸島における農地相続慣行と農地の所有構造に関する調査(63年度予定)のための予備調査を行った.

なお,沖縄本島周辺離島,都市化が進行した地域の集落については,調査を計画した時期に天候の不順が続いたこと(離島),調査対象地区を変更した(都市化地域)ことなどから2月末までに調査を完了することが出来なかった.これらの地域については3月に実施する予定である2.研究の成果沖縄本島における農地の相続慣行も基本的には男子分割的であることが認められた.その主な特徴点は次のとおりである.(1)相続の慣行は基本的には男子分割的であるが,分割の事例は宮古,八重山地方に比べれば少ない.(2)旧集落と屋取集落の間には大きな差異は認められなかった.(3)位はい(トートーメー)の男子承継の観念が強固である.トートーメーには財産(通常,農地)が付随する場合が多く,子供が女子のみの場合その家の財産が位はいとともに他人(多くは近い親戚)に渡る例もみられた.1研究の経過奄美諸島における農地の相続慣行と所有構造に関する調査を行った。調査を実施した集落は、奄美大島住用村市、同西仲間、徳之島伊仙町東伊仙西、沖永良部島和泊町根折、与論島城である。調査対象農家は1集落につき1618戸、合計68戸、調査方法は面接調査である。2研究の結果(1)奄美諸島においては、農地の相続が沖縄以上に分割的であり、かつ均分的である。(2)家、位牌の相続については、長男相続が多いものの、長男以外の者が相続している例もかなりみられた。(3)徳之島伊仙町では、兄弟で位牌を分祀する例がみられた。(4)与論島では、女子への土地の分与が広範にみられた。(5)次、三男または女子へ土地を分与することの理由としては、分家後の次、三男、婚出した娘の生活の補助ということが強く意識されている。昭和61年度、62年度、63年度に亘る調査の結果、奄美、沖縄の南西諸島においては、農地の相続は分割を伴いつつなされていることが明らかになった。このことの背景には、土地が家族の生活を支えるものとして観念され、個々の家族構成員に対応したものとして意識されているということがある。その結果、農地所有の構造は極めて零細かつ分散的なものとなる。しかし一方、利用の面では貸し借りや預け預かりといった移動を通して、かなりの程度柔軟な対応がみられる。今後、利用の面の柔軟性をさらに拡大していくことを視点に据えた研究を企画したい。具体的には不在地主の存在形態と土地所有、新規参入者の土地取得と地域の対応などについて調査を行う予定である。
社会教育職員の「専門性」形成に関する比較モデル的研究

本研究は、社会教育職員の専門的力量形成のためのプログラムを具体的に策定する前提として、「自己形成史」分析法(タテ軸)及び学習(講座)関与モデル分析法(ヨコ軸)にもとづいた社会教育職員の実践過程に刊する実証的な研究をめざすものであった。本研究に取り組んだ結果、以下の事項が明かとなった。(1)「自己形成史」分析法(タテ軸)を確立するための社会教育職員のヒヤリング調査から、地域差や自治体の規模をある程度反映しつつも、基本的には社会教育専門職員としての力量を形成するためにほぼ共通した職歴をもつ傾向があることが明かとなった。一般的には、地域の社会教育関係団体への「指導・助言」や団体に関連する講座を担当する職務(年齢が近くコミュニケーションがとりやすいという理由から、とりわけ青年団体)の経験<公民館主事的職務>をもとに、次第に地域社会教育計画にかかわる事業(講座)の連関や施設・職員配置などの幅の広い計画的職務の経験<社会教育主事的職務>を経て、旧来の社会教育行政の枠を越えた学校教育や一般行政領域(健康・福祉・労働・環境・産業など)との交流や関連を重視する職務<生涯学習的職務>へと、職員の専門性が広がっていく傾向が見られた。他方、(2)学習(講座)関与モデル分析法(ヨコ軸)を確立するための連携した「健康学習」事業の事例調査については、実質的な連携を実現しているケースがほとんどなく、公民館主事と他の専門職がそれぞれ個別に実施する講座への関与の仕方をモデル化する方法に切り替えたが、事例収集に時間がかかり分析途上にある。以上のことから、「自己形成史」分析法(タテ軸)の精緻化を大枠としつつ、学習(講座)関与モデル分析法(ヨコ軸)を個々の事例を補足するために使用するという考え方が適当ではないかという予測をもっている。本研究の一部は、平成8年度の専門学会で報告される予定である。
同一機能酵素において正常発生と傷害で制御される遺伝子間差異の分子的証明

エチレンは高等植物のおいて植物ホルモンとして重要な役割を果たしており、生成速度はいろいろな刺激で変動する。すなわち、エチレン生合成の律速酵素であるアミノシクロプロパンカルボン酸(ACC)合成酵素はオ-キシン、組織傷害、果実追熟等異なった刺激によって顕著に誘導形成される。本研究は異なった刺激で誘導されるACC合成酵素の分子間差異を分子レベルで証明することを目的とし、以下の成果を得た。カボチャ果実の傷害誘導ACC合成酵素を分離、精製し、その特異抗体を用いてcDNAを選別クロ-ン化した。得られたcDNAの全塩基配列を決定し、傷害誘導ACC合成酵素の推定1次構造を提出した。本cDNAの同定は、推定1次構造中には精製酵素で決定した部分アミノ酸配列が見いだされたこと、cDNAが大腸菌にて活性酵素を発現したことから確定した。本酵素のmRNAは無傷組織では検出出来なかったが、果実、胚軸ともに傷害を与えるて初めて検出されたので、その遺伝子は傷害刺激で発現するものである。カボチャのオ-キシン誘導酵素のmRNAは傷害誘導酵素のcDNAと相補的分子対合をしなかったのでオ-キシン誘導酵素のcDNAをクロ-ン化するために、オ-キシン誘導酵素を精製して部分アミノ酸配列を決定した。その配列に基づいた合成オリゴDNAを用いてオ-キシン誘導酵素のcDNAをクロ-ン化し、全塩基配列を決定した。オ-キシン型cDNAの構造は6箇所の保存された領域を除き傷害型cDNAと顕著に異なることが明らかとなった。オ-キシン型遺伝子は胚軸をオ-キシン処理した場合のみ発現した。したがって、カボチャではオ-キシン型酵素と傷害型酵素は発現刺激の異なる2種遺伝子に規定されることが証明された。またトマトではオ-キシン型、傷害型、追熟型酵素は発現刺激の異なる3遺伝子に規定されることを証明した。エチレン生合成は傷害またはオ-キシンなど異なった刺激で誘導されるが、ともに1-アミノシクロプロパン-1-カルボン酸合成酵素(ACCS)が生合成の律速酵素となっている。傷害誘導酵素とオ-キシン誘導酵素は免疫化学的に異なることが明らかになっているので、本研究は傷害誘導酵素とオ-キシン誘導酵素のcDNAの構造比較から異なった遺伝子の発現によることを証明することを目的としている。本年度は、前年度に単離したカボチャ傷害誘導ACCSのcDNAの全塩基配列を決定した。単離cDNAは1748塩基対からなり、そのうち連続してアミノ酸を指定する領域は1479塩基対で493アミノ酸からなるタンパク質であることが明かとなった。このcDNAで形質転換した大腸菌は酵素活性を持つタンパク質を産生した。また、塩基配列から決定したアミノ酸配列の中には、精製酵素の部分アミノ酸配列と全く同一の配列が見いだされた。したがって、単離したcDNAは構造的にも機能的にも傷害誘導ACCSに対応することが証明された。酵素のアミノ末端側には疎水性の高いアミノ酸が約40個集中し、この部分を欠失したタンパク質も酵素活性を示すが、さらに40アミノ酸を欠失すると酵素活性が消失した。この結果は、酵素の精製過程で得られた部分分解したタンパク質にも酵素活性があると言う知見とよく一致した。本cDNAの各種断片をプロ-ブとした結果、5'側3分の1の断片がオ-キシン誘導ACCSのmRNAと結合することが明かとなり、この部分を用いて、オ-キシン処理組織のcDNAライブラリ-を検索していくつかの陽性反応を示すcDNAを単離し、現在解析中である。エチレン生合成は傷害またはオ-キシンなど異なった刺激で誘導されるが、ともに1ーアミノシクロプロパンー1ーカルボン酸合成

酵素(ACCS)が生合成の律速酵素となっている。傷害誘導酵素とオ-キシン誘導酵素は免疫化学的に異なることが明らかになっているので、本研究は傷害誘導酵素とオ-キシン誘導酵素のcDNAの構造比較から異なった遺伝子の発現によることを証明することを目的としている。本年度はオ-キシン誘導ACCSの精製と、cDNAの単離、塩基配列を決定することを目的とした。未熟キウリ果実の切片をオ-キシン処理し、誘導されたACCSをイオン交換、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフにより高度に部分精製した。この部分精製酵素を14CーSーアデノシルメチオニンの存在下に酵素反応を進行させて酵素を特異的に放射化した。放射活性を指標として高速逆相クロマトグラフィ-、ゲル電気泳動的に単一の成分とした。精製酵素の臭化シアン分解し、得られたペプチドを分離してアミノ酸配列を決定した。アミノ酸配列に基づいて合成した4種の合成DNAをプロ-ブとしてノ-ザン分析の結果1種の合成DNAがオ-キシンで誘導される、1.9kbのmRNAと分子会合した。この合成DNAを用いて、cDNAライブラリ-を選別し2種の陽性クロ-ンを得た。制限酵素分析の結果、2種のcDNAは同一のものと判定したので、その1種について塩基配列の概略を決定し、全鎖長cDNAであることが確認された。塩基配列の中には酵素の部分アミノ酸配列を満足する配列が存在したことから目的のクロ-ンと同定した。完全な塩基配列は決定中である。ノ-ザン分析の結果、傷害型酵素のmRNAとはサイズは同一であるが全く分子会合せず、塩基配列の相同性は約50%に過ぎなかったので、オ-キシン型酵素は傷害型酵素とは別の遺伝子産物であることが実証された。カボチャのオ-キシン誘導ACC合成酵素に対するcDNAを単離するために、容易に大量に入手出来るキウリ未熟果実切片のオ-キシン誘導酵素を基質ラベル法によって精製し、プロテア-ゼ分解によって生じた2種ペプチドのN未端アミノ酸配列を決定した。この配列に基づいて合成したオリゴDNAは、カボチャ下胚軸にオキシン処理で発現するmRNAと相補的分子対合した。オ-キシン処理をしたカボチャ下胚軸のmRNAを鋳型として作成したcDNAライブラリ-を、合成オリゴDNAを利用して選別し、強く分子対合するcDNAクロ-ン(CMA101)を得た。CMA101の大腸菌においてACC合成酵素活性を示すタンパク質の合成を誘導したためACC合成酵素のcDNAであると同定した。次いで、CMA101の全塩基配列を決定し、推定アミノ酸配列を提示した。先に単離した傷害型酵素のcDNA(CMW33)と比較し、翻訳枠のアミノ酸総数が18短いこと、全体の類似性は58.3%に過ぎないことが明らかになり、同一植物でもオ-キシン型酵素遺伝子と傷害型酵素遺伝子は異なることを証明した。しかし、両者のアミノ酸配列間でよく保存された配列領域が6箇所見いだされた。カボチャ果肉、下胚軸に傷害を与えると傷害型遺伝子のみが発現し、オ-キシン型遺伝子は発現しなかった。
量子場の理論と無限次元リ-環の表現論

古典型の単純リ-環Xnに対応するアフィン・リ-環Xn^<(1)>の積分可能表現によるゲ-ジ不変性を持つ共形場の理論を展開する。ファィンマン図式での外線にXnの同じ表現を与えると、相関関数の空間が定まり、対応する微分方程式のモノドロミ-問題が生じ、絡み目群の表現が得られる。特にこの表現としてXnの自然表側を選べば、バ-マン・ウェンツェル・村上(BWMー)代数と呼ばれるブラウワ-代数のqーアナロ-グ(有限次元代数)の表現が得られる。この表現は既約性と同値性の問題を考えるため、Xnの自然表現に付随した2次元統計力学の格子模型に於いて、神保らによって計算されたボルツマン・ウェイトを利用する。つまり、抽象的にウェイトの道の空間を考え、その上にボルツマン・ウェイトの三角関数極限を使って、BWMー代数の表現を作り、既約性と同値性の問題を解いた。更にマルコフ・トレ-スの存在を示すことにより、BWMー代数の半単純な商代数を通して作用していることを示した。更にBWMー代数のモノドロミ-表現がこうして得られた表現と同値であることが示される。この際BWMー代数が含んでいるパラメ-タqが問題になる。qが1の巾根でない場合には、qーアナロ-グの理論は比較的簡単であるが、1の巾根になる場合には複雑になる。今の場合、共形場の理論そのものが1の巾根から始まっており、qが1の巾根の場合を含めて証明を得ることが出来る。qが1の巾根の場合の研究には、整数論的な側面が重要であるが、副産物として露峰氏の業績が得られた。共形場の理論を積分可能表現以外にも展開する必要があるが、これには脇本氏らの業績が重要である。又無限次元の解析の適用の際、石谷氏らの業績との関連性が見出される。
複素環状モノマー類の合成とそれらの新しい非収縮性材料への応用

重合や硬化といった材料化時の体積収縮は材料科学の分野において大きな問題となっており,体積収縮を示さない材料が生まれれば多くの分野での応用が期待される.本研究では,新しい機能材料創出にはモノマーの分子設計が極めて重要であると考え,非収縮性機能をもつ基本骨格の高次機能化による新しいモノマーの合成とその非収縮性材料への応用について検討した.1.(1)ラジカル重合性基をもつ非収縮性モノマーとして,分子内に二つのスチリル基,エリル基,及びエキワヌチレン基を有するスピロオルトカーボナート(SOC)を合成した.また,側鎖にスピロオルトエステル(SOE)をもつアクリラート,メタクリラートを合成した.(2)スチリル基及びアリル基をもつSOCは,それぞれラジカル開始剤による重合によりビニル重合体,カチオン触媒による重合により開環重合体を与えた.また,両方の重合を併用することにより,架橋体を得た.これらの重合では,カチオン重合で体積膨張し,ラジカル重合により体積収縮を示す結果となった.また, SOE型(メタ)アクリラートは,ホモ重合又はスチレン等の汎用モノマーとの共重合により側鎖にSOE基をもつポリマーう与え,これらはカチオン触媒により,体積膨張を伴って架橋した.(3)アリル型SOC及びエキワメチレン型SOCとジチオールとの反応により,主鎖に非収縮性機能団を持つポリスルフィドが得られ,酸触媒により,体積収縮することなく架橋体を与えた.2.スルホニウム塩構造を持つスチレン誘導体と非収縮性機能団をもつビニルモノマーとの共重合により,熱により自己触媒架橋機能を有し,しかも硬化時に非収縮性を示す新しいポリマーを合成した.3.その他(1)新しいヘテロ原子置換モノマーの合成と重合挙動を検討した.(2)パーフロロアルキル基を側鎖にもつSOEモノマーの合成と重合について検討した.4.二官能性非収縮性モノマーの合成等については現在検討中である.重合や硬化といった材料化時の体積収縮は材料科学の分野において大きな問題となっており,体積収縮を示さない材料が生まれれば多くの分野での応用が期待される.本研究では,新しい機能材料創出にはモノマーの分子設計が極めて重要であると考え,非収縮性機能をもつ基本骨格の高次機能化による新しいモノマーの合成とその非収縮性材料への応用について検討した.1.(1)ラジカル重合性基をもつ非収縮性モノマーとして,分子内に二つのスチリル基,エリル基,及びエキワヌチレン基を有するスピロオルトカーボナート(SOC)を合成した.また,側鎖にスピロオルトエステル(SOE)をもつアクリラート,メタクリラートを合成した.(2)スチリル基及びアリル基をもつSOCは,それぞれラジカル開始剤による重合によりビニル重合体,カチオン触媒による重合により開環重合体を与えた.また,両方の重合を併用することにより,架橋体を得た.これらの重合では,カチオン重合で体積膨張し,ラジカル重合により体積収縮を示す結果となった.また, SOE型(メタ)アクリラートは,ホモ重合又はスチレン等の汎用モノマーとの共重合により側鎖にSOE基をもつポリマーう与え,これらはカチオン触媒により,体積膨張を伴って架橋した.(3)アリル型SOC及びエキワメチレン型SOCとジチオールとの反応により,主鎖に非収縮性機能団を持つポリスルフィドが得られ,酸触媒により,体積収縮することなく架橋体を与えた.2.スルホニウム塩構造を持つスチレン誘導体と非収縮性機能団をもつビニルモノマーとの共重合により,熱により自己触媒架橋機能を有し,しかも硬化時に非収縮性を示す新しいポリマーを合成した.3.その他(1)新しいヘテロ原子置換モノマーの合成と重合挙動を検討した.(2)パーフロロアルキル基を側鎖にもつSOEモノマーの合成と重合について検討した.4.二官能性非収縮性モノマーの合成等については現在検討中である.
肉離れ損傷後の結合組織瘢痕形成の基礎的解析

本研究では、スポーツ現場において頻発する肉離れ損傷のメカニズムを解明することを目的とした。ラットエキセントリック筋収縮装置を用いて様々な条件下で筋損傷を誘発した結果、骨格筋萎縮を伴う比較的重度の肉離れ損傷モデルを作成することができた。さらに、タンパク質・遺伝子発現を検討した結果、修復に伴いミオスタチン・タンパク質分解系シグナル発現が増加し、骨格筋萎縮・結合組織瘢痕化への関与が示唆された。本年度は、腓腹筋を対象として重度肉離れ損傷モデルを作成することを目的とした。代表者の研究グループはこれまでにラットエキセントリック筋収縮装置を用いて比較的短期肉離れ損傷モデルを報告している。しかし、このモデルは、筋力低下が2-3日と比較的短期間であり、かつ筋重量に関してはコントロール群との比較において有意な差が認められないという結果であった。そのため、スポーツ現場で発生する肉離れ損傷との直接比較が難しい点が問題となっていた。そこで我々は、これまでのモデルをもとに、1)同条件の肉離れ収縮を1週間おきに2度実施する(実験期間は2週間)、2)同条件の肉離れ収縮を2日おきに4度実施する(実験期間は1週間)、の2条件で実験を行った。その結果、実験1では、有意な筋力低下(解剖直前)及び筋湿重量の減少が認められなかった。一方、実験2では、有意な筋力低下及び筋湿重量の有意な減少を観察した。以上から、スポーツ現場との直接比較が困難となっていた過去のモデルの条件を改変することで、重度肉離れ損傷モデルを作成したことを本年度の重要な成果とする。このモデルの確立は、スポーツ現場において頻発する肉離れ損傷のメカニズムの解明について、先行研究とは異なる非侵襲的手法を用いて検討することが可能となる。そして本モデルを用いることで、筋損傷に伴う筋機能低下・筋萎縮・瘢痕化・その修復時の応答メカニズムについて新たな知見を得ると同時に、肉離れ損傷の発症の予防と回復を促進する上での基礎データを提示するものと考えられる。来年度はこのモデルを使用し、修復時のタンパク質・遺伝子発現量の変化(結合組織瘢痕化の分子機構)について検討する予定である。我々の研究グループでは、これまでにラットエキセントリック筋収縮装置を用いて比較的短期肉離れ損傷モデルを報告している。しかし、このモデルは、筋力低下が2-3日と比較的短期間であり、かつ筋重量に関してはコントロール群との比較において有意な差が認められないというものであった。そこで昨年度より上記の問題点を解決するために骨格筋萎縮モデルの作成を試みている。このモデルは一日おきに計4回の高強度エキセントリック収縮を実施するものである。本年度は、そのモデルを使用し、1)筋線維組成、2)アポトーシス、3)タンパク質・遺伝子発現量の変化について検討した。解析の結果、重度肉離れ群とコントロール群との比較において、有意な骨格筋量の減少・筋力の低下を観察した。筋線維組成には変化が認められなかったことから、全ての筋線維タイプにおける萎縮が考えられた。さらに、本研究で用いたモデルにおける筋萎縮はアポトーシスではなく、タンパク質分解によって引き起こされることが示唆された。特にFOXO1, 3, myostatin (TGF/smad系)の発現は顕著であり、筋重量の減少と深く関連するものと考えている。本モデルで観察した結果は、スポーツ現場において頻発する肉離れ損傷のメカニズムの解明に新たな知見を得え、かつ肉離れ損傷の発症の予防と回復を促進する上での基礎データを提示するものといえる。特に、myostatinのタンパク質量が顕著に増加していたことは、骨格筋の萎縮のみならず結合組織瘢痕化にも関与する可能性を示唆しており、今後更なる検討が必要であると考えている。
魚類におけるエストロゲンによる生殖腺性分化誘導の分子メカニズム

本研究では、硬骨魚類(ティラピア)を用いて生殖腺と脳の性分化における性ホルモン、特にエストロゲンの役割を明らかにすることを目的としている。昨年度までの研究では、性分化期の前後における遺伝的雌雄の生殖腺と脳における種々遺伝子(芳香化酵素、エストロゲン受容体αとβ、アンドロゲン受容体αとβ、及びAd4BP/SF-1)の発現をRT-PCRを用いて解析した。その結果、生殖腺の性分化に関しては、特に卵巣分化に関して卵巣型芳香化酵素、エストロゲン受容体αとβ、及びAd4BP/SF-1が重要な役割を果たしていることが考えられた。一方、脳の性分化に関してはエストロゲン受容体βとアンドロゲン受容体αが雄化、一方、エストロゲン受容体α、βはいずれも雌化に重要な役割を果たしていることが示唆されたが、他の遺伝子の脳における発現については若干の雌雄差はみられるものの、顕著ではなかった。そこで今年度は、生殖腺と脳の性分化におけるセロトニン合成系の関与を検討した。これまでの研究から、孵化直後のXYティラピア稚魚をセロトニン合成酵素であるトリプトファンハイドロキシレース(l-トリプトファンを5-OH-Lトリプトファンに転換する酵素)(TRH)の阻害剤であるPCPAを含む飼育水中で飼うと雌化することが分かっていた。従って、セロトニンは脳の雄化に関与する可能性が考えられた。そこで、本研究では、このTRH遺伝子をティラピアの生殖腺と脳からクローニングするとともに、そのmRNAの発現を性分化期前後における生殖腺と脳においてRT-PCRにて詳しく解析した。その結果、以下の興味ある結果が得られた。すなわち、生殖腺では遺伝的雌雄にかかわらず孵化直後から発現がみられ、顕著な雌雄差は認められなかった。一方、性分化期の脳におけるTRHの発現には顕著な雌雄差が観察された。遺伝的雌では、孵化直後に弱い発現が認められた以外は、孵化後5-90日の間ではほとんど発現はみられなかった。これとは対照的に遺伝的雄では、孵化後5日にTRHの発現が開始し、10日でもっとも強くなり、15日には弱まり、その後はほとんど発現が消失した。脳におけるこのようなTRH mRNAの発現パターン(性分化における一過性の発現)の雌雄差は、TRHが脳の雄化に関与することを示唆していて、きわめて興味深い。今後、このTRHとエストロゲンやアンドロゲン合成との関連、特に芳香化酵素遺伝子発現との関連、さらには性行動などとの関連についても研究を進める予定である。
青色光受容体フォトトロピンのリン酸化情報伝達機構の解明

青色光受容体フォトトロピンは受容体型プロテインキナーゼで、植物において多様な青色光応答を制御する。フォトトロピンは青色光により活性化し、リン酸化反応を介して生理応答を誘導すると考えられるが、フォトトロピンによって直接リン酸化される標的蛋白質は未同定である。今年度の研究では、フォトトロピンの標的蛋白質を同定することを目的とし、(1)青色光に依存してリン酸化される蛋白質を植物体から直接探す2D-DIGE法を用いた実験と、(2)フォトトロピンとin vitroで相互作用する蛋白質を探すALPHAスクリーニングを並行して進め、複数の標的候補を得た。実験(1)では、青色光に応答して、かつフォトトロピンの下流でリン酸化が促進される蛋白質を得ることに成功した。質量分析を用いてこの蛋白質を同定した結果、細胞膜に局在する小胞輸送の制御に関わる蛋白質であった。この蛋白質のリン酸化は、フォトトロピン依存的であり、フォトトロピンの活性化キネティスとリン酸化のキネティクスが一致していた。現在、この蛋白質をコードする遺伝子に関して、遺伝子破壊株と過剰発現株を作製し、青色光に依存したフォトトロピン応答を調べ、機能解析を進めている。実験(2)では、ALPHAスクリーニングを完了し、試験管内において再現よくフォトトロピンと相互作用するプロテインキナーゼを一つ得ることに成功した。これは、CBL-interacting protein kinasefamilyの一つであった。このキナーゼの遺伝子破壊株では、青色光に応答した気孔開口が阻害されており、フォトトロピンの下流で働いている可能性が高いと考えられる。現在、このキナーゼがフォトトロピンによって直接リン酸化され、活性化するのか調べている。
common γ鎖ターゲティングマウスにおける造血幹細胞増加の機序

IL-2Receptorγ鎖は、IL-2,IL-4,IL-7,IL-9,IL-15受容体に共通する分子である。この遺伝子を破壊したマウスでは、予想されたように、T細胞、B細胞、NK細胞の著明な減少を認めた。さらに、われわれは、ノックアウト(KO)マウスの脾において幹細胞が、対象に比して、増加しているのを見い出した。LinKit^+Sca-1^+細胞(未分化幹細胞)は、KOマウスにおいて、野生型の10倍以上に増加しており、前駆細胞も20倍の増加がみられた。そこで、われわれは、幹細胞を増加させる「造血微少環境」が重要な意味を持つであろうと考えた。その解析前に、8週令前後のマウスの病理学的検索を進めたところ、腸管、腸間膜リンパ節、肺、肝、腎に非特異的炎症が存在することが確認された。この所見はIL-2KOマウスにおいて観察されるものに類似し、病理菌は検出されなかった。しかしながら、IL-2Receptor-γ鎖KOマウスの幹細胞増加には、炎症が関与すると考え、さらなる検索は中止した。造血微少環境の分子基盤を明らかにするため、われわれは、新たに受容体型チロシンキナーゼNTKとその結合因子HTKLをモデルとして、幹細胞/ストロマ細胞の相互作用検索を開始した。HTKLは、ストロマ細胞に発現されているリン酸化蛋白で、シグナルは、ストロマ細胞から幹細胞へと伝えられるだけでなく、幹細胞からストロマ細胞へ入っている可能性も示唆され、造血微小環境の解析に新しい展開を与えると期待される。
関節破壊に及ぼす蛋白質分解酵素、特にGELATINASEの役割について

慢性関節リウマチ(以下RAと略す)の滑膜組織は、蛋白分解酵素を産生し関節破壊を引き起こす主要な因子であると考えられている。関節包を含む滑膜下組織にはgelatinase(MMP-2,MMP-9)の発現が亢進すると言われている。このような事実から、RA末期滑膜組織ではgelatinase活性が亢進すると考えられる。そこで我々は、RA滑膜組織を培養して、培養上清中のgelatinaseを中心に蛋白分解酵素活性を測定し、関節破壊の関与について等閑視されていたgelatinaaseの役割を明確にする目的で本研究を行った。先ず、関節包と滑膜表層組織の蛋白質破壊活性をproteoglycanの分解を指標とするproteoglycanase活性を測定した。関節包では全活性中の45%に、滑膜表層組織では65%にproteoglycanase活性が認められた。滑膜表層組織の分解活性をgelatin zymographyにて検索すると、stormelysin活性が主に認められ、gelatinase活性は約38%に認められた。関節包の分解活性は、stormelysin活性やcollagenase活性は約42%で、残りはgelatinase活性であった。関節包中の培養上清をgelatin affinity chromatographyで処理すると、proteoglycanase分解活性は約49%の消失がみられた。gelatinaffinity chromatography処理によりgelatinaseがgelatinに吸着され、素道り画分にはgelatinase活性がほぼ消失する事を利用したものである。以上の結果により、RA滑膜組織のgelatinase活性を測定して、RA炎症による関節破壊にはgelatinaseも重要な関与をしていると考えられる。