hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
うつ病休職者に対するリワークプログラムの開発

また,離職者のフォローとして,地域の就労支援事業所と連携していく予定であったが,連携会議が行えなかった.しかし,平成28年8月より復帰するため,プログラムの再拡大が可能であると思われる.1.気分障害患者・ストレス関連障害患者の復職プログラムの実施,効果測定平成26年4月から平成29年3月までの間に,研究協力に対して同意の得られた15名に対し,Illness management and Recovery (IMR)を基本とする心理教育(病気や治療について,ストレスマネジメントや再発予防についての学習)に,集団認知行動療法,対人関係療法,社会リズム療法,アサーショントレーニング,アンガーマネジメントを追加した週2回の学習プログラムと,週5日の個別精神科作業療法を組み合わせた3ヵ月間のプログラムを3回(/年)実施した.15名中6名は職場訪問や上司、産業医との面談を実施し,職場の環境調整を行った.また,復職できた者に対しては,月1回の定期的な面談や,メールで相談を受け,就労継続のための援助を行った.離職者に対しては,3ヵ月のプログラム終了後も週5回の精神科作業療法でフォローし,再就職までの職業能力の維持・向上のためのトレーニングや対人関係トレーニングを実施した.平成29年3月現在では,7名が復職,4名が再就職,求職中1名,離職1名,転医により転帰不明1名,復職予定が1名である.15名中11名(73.3%)が復職または再就職でき,11名の就労継続期間は,1年2年が5名,半年1年が2名,半年未満が4名であり,復職・再就職後の離職者はない.プログラム参加者15名は,初回時と比較して,認知機能と復職準備性の有意な改善が認められた.また復職や再就職に至らなかった4名は,復職や再就職に至った11名と比較し,プログラム終了時の社会適応度が低く,認知機能も低い傾向にあった.2.関係機関・企業とのネットワークづくり県内の就労支援関連施設(長野県障害者職業支援センター,就労移行支援事業所,県内リワーク実施医療機関)との会議を開催し,情報交換を行った.平成27年9月平成28年8月まで研究代表者が産休・育休取得のため,当初週2回実施していた学習プログラムを週1回に縮小して実施していたが,平成28年9月より復帰し,プログラムの再拡大を行い,新たに7名の新規参加者を確保することができた.また,平成26年より開始した本施設でのリワークプログラムが徐々に認知され始め,他施設からの紹介や,転医してプログラム参加を希望する参加者が増加してきており,今後は利用者の増加が予想される.また,平成29年3月現在で,復職・再就職率は70%以上と,他のリワークプログラム実施施設の成績とも遜色ない.1.気分障害患者・ストレス関連障害患者の復職プログラムの実施,効果測定平成26年4月から平成30年3月までの間に,研究協力に対して同意の得られた23名に対し,週2回の学習プログラムと,週5日の個別精神科作業療法を組み合わせた3ヵ月間のプログラムを実施した.23名中11名は職場訪問や上司,産業医との面談を実施し,職場の環境調整を行った.また,復職または再就職できた者に対しては,月1回の定期的な面談やメールで相談を受け,就労継続のための援助を行った.離職者に対しては,3ヵ月間のプログラム終了後も週5日の精神科作業療法でフォローし,再就職までの職業能力の維持・向上のためのトレーニングや対人関係トレーニングを実施した.
藻類の有性生殖で機能する走化性フェロモンの検出・単離と生化学的解析

異系接合型のミカヅキモ(Closterium pslc)の接合過程の解明を目的として、本年度は以下の解析を行った。1.有性生殖時に機能する細胞分裂誘導フェロモンの探索C.pslc.の有性生殖過程では、まず・両細胞の分裂(有性分裂)による配偶子細胞形成が起こり、続いて相補的な配偶子細胞によるペア形成、それぞれからのプロトプラスト放出、プロトプラストの融合が行われ、接合子が形成される。この有性分裂を誘起する生理活性を検出することに成功した。2.ミカヅキモの性フェロモン(PR-IP inducer)の酵母による産生これまでの研究で、ミカヅキモの性フェロモンの一つであるPR-IP inducerをコードするcDNAの単離にも成功している。このcDNAを、Saccharomyces cerevisiaeに導入し、組換え型タンパク質の発現を試みた。その結果、25-60kDa程度に広がるスメアーな糖タンパク質としての分泌が見られ、+型細胞に与えた場合、PR-IPの分泌を特異的に誘導することが確認された。3.有性的ペア形成と配偶子分化の機構C.pslcと形態的に全く異なり、接合様式も異なる別種のミカヅキモ(C.ehrenbergii)より、配偶子形成を引き起こす性フェロモンを精製した。この性フェロモンは、配偶子形成を誘起することに必要な濃度より10-100倍に希釈することで、接合相手の細胞を自身の存在方向に引き寄せるような走化性も示したことから、性フェロモンの放出量により機能を使い分けるという新たな調節機構が見いだされた。
コマチアイトの希ガス同位体比-地球大気の起源と進化-

これまでコマチアイト中の希ガスを全岩で測定してきたが、やはり全岩では同化、変成の影響をぬぐえない。そのため、本研究では西オーストリアのピルバラクラトンからのコマチアイトについて、鉱物分離を試みた。鉱物の種類により大きさが異なることを薄片で観測できたことから、岩石を粉砕しサイズ分けしたところ、各フラクションにより鉱物が分離されていることがわかった。この方法により鉱物分離を行った。一方、質量分析計についている溶解炉のラインを改良し、岩石の粉砕によりでてくるガスを分析するため、質量分析計のラインを改良し、新しい粉砕器をつけた。従来の方法ではソレノイドコイルにより外側からピストンを上下させて試料を粉砕する方法であったが、新しくエア-バルブを用いた装置を試作した。しかし、最初に製作したものはパワーが足りず、充分な粉砕には至らなかった。現在この装置を改良した2号機の完成を待っている段階である。しかし、予備的な実験として、一番大きなサイズフラクションについて粉砕法による測定を試みた。重い希ガスは測定に充分な量がでなかったが、Heについては最初の200回のピストン上下による粉砕による測定では^4He量が1.11x10-^7cm^3STP/g、^3He/^4He比は9.25x10-^8であった。さらに50回の追加粉砕測定では^4He量が5.35x10-^8cm^3STP/g、^3He/^4He比は3.70x-10^7であった。合計では^4He量が1.65x10-^7cm^3STP/g、^3He/^4He比は1.83x10-^7になる。このHe比は典型的な地殻物質よりは高い値であるが、大気よりは低い値である。NeやArの測定結果がないので、現段階では詳しい議論はできない。現在、新しい粉砕機の完成を待つと同時に新鮮な試量の鉱物分離を行っている段階にある。
中枢神経系オリゴデンドロサイトの起源

UDP-ガラクトース・セラミドガラクトシルトランスフェラーゼ(CGT)は、中枢神経系ミエリン形成細胞であるオリゴデンドロサイトのマーカーのガラクトセレブロシド(GalC)の、合成酵素である。すなわち、CGT遺伝子はGalCより早期に、オリゴデンドロサイト特異的に発現していることが予想された。私は、CGTcDNAのPCRクローニングに成功し、これを用いて、マウス脳におけるCGTmRNAの分布すなわちオリゴデンドロサイト前駆細胞の分布をin situ hybridization法で検討した。CGT陽性細胞は胎性17日マウス脳にはじめて検出された。この分布は脊髄と延随の境界領域の腹側から始まり、その後数日の間にニューロフィラメント-M陽性神経軸策に沿って延随の全領域に広がっていくことが明らかとなった。小脳では生後5日にはじめて観察され、これは延随からの分布の広がりの延長上に見られた。また、生後2日から5日の間には間脳や大脳のsubventricular zoneからもCGT陽性細胞が観察された。これらのことから、オリゴデンドロサイトの起源は脳内の3領域程度に分類され、ここからニューロフィラメント陽性神経軸策に沿って脳全体に分布が広がることが示唆された。
コーク大学を拠点とした幾何学に関する国際連携研究教育推進準備企画

基礎科学系、特に数学研究分野では、その学問の国際性からみて、国際的な研究連携を展開する必要があり、米国や欧州では、他国間がそれぞれ研究教育協定を結び、様hな国際連携により、学生の相互交流、研究者交流を進め、多くの人材育成、研究の進展が見られる。本研究は、日本がこのような国際連携が行われていなかった。このために国際研究協力の糸口を作ることを試みるものである。アイルランドは、力学系、幾何学および数理物理学に伝統を持ち、隣国である英国からの研究の影響と連携によりこの分野での進展を行ってきた。一方、日本はリーマン幾何学、シンプレクティック幾何学、トポロジー、大域解析、リー群論等では世界的な研究が行われてきた。幾何学の研究は、特に数理物理を中心とした様々な複合的研究として発展してきている。特に、非線形微分方程式,リーマン多様体における様々な多様体の幾何学的構造,力学系と離散解析幾何学,シンプレクティック幾何学,超弦理論と場の量子論に重点をおき連携のための準備を行った。日本-アイルランド共催幾何学・数理物理学国際会議の開催準備調査として、日本側の研究主題に対して、アイルランド側との具体的な協力、主題の検討を行うために、アイルランドから、コーク大学、Jurgen Berndt教授を中心に幾何学に関する4名の研究者を招聘し、慶應義塾大学でアイルランド-日本ワークショップを開催した。ダブリン、トリニティカレッジおよびIHES所属のSamson Shatashvili教授を招聘し、アイルランドでの数理物理研究の現状について討議した。コーク大学から、B.McKay, D.Hurley, J.Berndt、N.O'Cornnel、ダブリン高等研究所S.Shatshvili、ダブリン・トリニティカレッジS.Sen各氏との連携協力が得られ、国際会議の開催の計画、相互の研究者交流計画等の具体的計画を策定できた。英国からウォーリック大学数学研究所K.D.Elworthy、が確率解析の研究分野での協力を承諾、このプロジェクトへの参加を得た。コーク大学数学教室と研究教育協定締結を行った。
土壌細菌と植物細胞の相互作用

1.Agrobacterium rhizogenes A4株の保有するRiプラスミド(pRiA4)からT-DNAが植物細胞へ移行し、植物に毛根を誘発するのに必要なvirulence(vir)領域約30,000塩基対のうち17,000塩基対の配列を決定し、その構造解析と突然変異株の解析から、(1)pRiA4のvir遺伝子群の編成はTiプラスミドのそれとほぼ対応しており、一部の遺伝子を除いて各vir遺伝子は互いに非常によく似ているが、遺伝子間のスペ-サ-部分の塩基配列は、転写調節に関与した特徴的な6塩基対配列(2.参照)以外は殆ど保存されておらず長さも変化していること、及び(2)幾つかのvir遺伝子の機能、を明らかにした。2.植物誘導物質の有、無の両条件下での各vir遺伝子の転写開始位置を正確に決定し、植物因子による誘導を転写開始の頻度として測定し、これをもとに誘導型のプロモ-タ-の構造を解析し以下の成果を得た。(1)virAとvirGは植物因子の有無によって転写開始部位が異なり、誘導型と構成型のプロモ-タ-が直列に並んでいる;(2)各誘導型のプロモ-タ-の上流には6塩基対からなる特徴的な配列が1ないし4個存在し、これらは11塩基対を周期とした位相に位置する;(3)この6塩基対配列に転写調節因子VirG蛋白質が結合する;(4)6塩基対配列の位相はRNAポリメラ-ゼがプロモ-タ-と相互作用する-10及び-35領域とほぼ反対の位相に相当する;(5)これらの事実をもとに、誘導型プロモ-タ-領域において、VirG蛋白質が上の6塩基配列を認識してDNAの片側に協調的に結合し、その結果-35領域が活性化されRNAポリメラ-ゼがVirG蛋白質とは反対側からDNAに結合するという3者の相互結合様式のモデルを提唱した。3.Agrobacterium菌を用いた遺伝子解析(相補性テスト等)のための厳密制御型プラスミドベクタ-を、Ri及びTiプラスミドの複製開始領域を同定し、それぞれからミニプラスミドを分離することによって構築した。Riプラスミドの一種pRiA4b(約250kb)の遺伝子ライブラリーをコスミドベクターを用いて作成し,それぞれのクローンを制限酵素で切断し切断点地図を作成した.これらのクローンを用いてTiプラスミドのvir領域との相同性をサザンハイブリダイゼイションによって解析した.その結果このRiプラスミドのvir領域は約40kbの領域に局在していること,いくつかのvir遺伝子の大きと及びvir遺伝子間(virA,B,C,D,E,G)のスペーサーの長さはTiとRiで差異が認められたがvir遺伝子の全体の編成はTiの場合と良く似ていることが明らかになった.さらにvir領域内にトランスポゾンを挿入した変異Riプラスミドは確かに植物(ベンケイ草科カヲンコエ及び黒田五吋ニンジンディスク)に対する病原性を失っていることを確認した.vir領域の構造についてより詳しい知見を得るためにvivCD領域(約8kb)の塩基配列決定を行った.上で作成したRiプラスミド遺伝子ライブラリーの代表20株(Riの全領域をカバーするように選択したもの)を形質転換或はヘルパー存在下の接合(ベクターにRK2

プラスミドのoriTを組み込んである. )によってAgrobacteriumに導入しそれぞれの複製能力を調べた.その結果virA遺伝子から約20kb離れた所に自律増殖能を支配する領域が存在することが明らかになった.この領域のサブDNA断片の複製能力,不和合性及びプラスミド安定性について調べたところ約4.6kbの領域が存在すれば親Riプラスミドと同じ複製持性を示す事が判明した.この4.6kb領域の塩基配列データから3ツの蛋白質合成可能なフノーム(repA,repB,repC)が示唆され,これらはそれぞれの遺伝子産物をゲル電気泳動で同定することによって確認した.repAあるいはrepB遺伝子を破壊すると複製能またはプラスミド安定性に僅かに影響を与えたがrepCを破壊すると複製能は完全に無くなった.昨年度はRiプラスミドのvir領域の内virCDの構造と機能について明らかにしたが今年度はvirGの全構造及びvirA、virEの一部分の構造を明らかにした。塩基配列からvirGには普通の翻訳開始コドンATG、GTGが存在せず当初真のアミノ末端が不明であったがラクトース遺伝子との融合遺伝子の解析から、virGの翻訳は珍しいTTGコドンで開始されることが示唆された。これを確認するためにAgrobacterium菌内でこの融合蛋白質を量に合成させた後、蛋白質を精製しそのアミノ末端領域14個のアミノ酸配列をエドマン分解法で決定したところ、塩基配列から予想される配列と完全に一致した。TiプラスミドのyirGはATGから翻訳が開始されると云われているがRiプラスミドの翻訳開始部位付近の塩基配列はTiプラスミドでも非常によく保存されているのでRiのみならず「Tiも同じようにTTGから翻訳が開始されていると思われる。これと平行して、野性型のVirG蛋白質の大腸菌内での過剰発現を試みたところ、tacやラムダp_Lのような強いプロモーターをvirGの上流に配置し、かつTTGをATGに変異させると高頻度で発現することを確認した。しかしこのように高頻度で発現したvirG蛋白質は何故か不溶性になってしまい今までのところ、変性させずに精製することができない。しかし界面活性剤を用いる変性条件では非常に多量に蛋白質を精製することが出来るのでこの試料を用いて抗体の作成や基礎的な物理化学的性質を調べる予定である。併せてこの変性条件で精製した蛋白質を再生することが出来るか否かも調べているところである。RiのvirD、E遺伝子間のスペーサー及びvirE遺伝子の構造を調べたところスペーサー領域は病原性に必要でないにもかかわらずTiとRiでよく保存されており逆に病原性に必要なvirEがRiには存在しないことが明らかになった。RiがvirE遺伝子無でなぜ病原性があるのかは不明である。昨年度までにRiプラスミドのvirレギュロンの転写調節因子、VirG蛋白質、を多量産生する大腸菌株を構築したが、このVirGの大部分は不溶性分画に存在した。これは封入体に存在するためと考えられたので、まず封入体を低速遠心で集め、続いて塩酸グアニジン等の変性剤によって可溶化し、ゲル濾過法によって精製した。この段階でVirG蛋白質の純度はすでに80%以上であった。しかしこの試料は変性蛋白質から成ると考えられるので、段階的透析によって蛋白質の巻戻し・再生を行なった。
細胞質雄性不稔性キャベツ類の稔性回復遺伝子の同定

Diplotaxismuralisの細胞質(mur型細胞質)を持つBrassicaの細胞質雄性不稔性の稔性回復遺伝子を同定するため、mur型細胞質雄性不稔性のブロッコリーと稔性回復遺伝子を持つカイラン(Brassica oleracea var. alboglabra)のF_2集団を用い、両親間で多型を示すDNAマーカーを作成して遺伝子型を分析することにより、昨年度稔性回復遺伝子を第1連鎖群にマッピングした。今年度は、稔性回復遺伝子が含まれる第1連鎖群のゲノム領域のシンテニーを解析し、これまでいくつかの種で稔性回復遺伝子として報告されてきたpentatricopeptide(PPR)モチーフを持つ遺伝子を、その領域に3つ見出すことができた。その遺伝子発現を解析したところ、稔性回復系統と不稔性回復系統で発現量に差が見られたことから、それらが稔性回復遺伝子の候補と考えられた。これらの結果を論文にまとめ、投稿中である。同研究室内の別の学生が行っているB.oleraceaの耐病性のQTL解析のためにSNPマーカー作成を協力し、これら2つの研究で得られた連鎖地図を統合することによって、320マーカーからなるB.oleraceaの連鎖地図を構築した。カイランの白花とブロッコリーの黄花は1遺伝子によって決定されるが、白花は黄花に対し優性である。この遺伝子も第1連鎖群にあり、稔性回復遺伝子とは25cM離れていることを見出した。色素合成に関わる酵素の遺伝子を分析したが、カイランとブロッコリーで変異がない、あるいはDNA塩基配列に変異があっても、マッピングした位置に座乗しないなどのため、この特性に関わる遺伝子の候補は見出されなかった。Diplotaxis muralisの細胞質(mur型細胞質)を持つBrassica oleraceaの細胞質雄性不稔性の稔性回復遺伝子を同定するため、mur型細胞質雄性不稔性のブロッコリーと稔性回復遺伝子を持つカイラン(Brassica oleracea var.alboglabra)のF2集団を作成し、細胞質雄性不稔性の分離を調査し、両親間で多型を示すDNAマーカーを作成した。F_2の205個体中、完全な雄性不稔個体は14、部分的雄性不稔個体は21で、可稔個体は170であり、完全な雄性不稔個体は約1/16で分離していることから、稔性回復には2つの同義遺伝子があることが示唆された。カイランは白花でありブロッコリーは黄花であるが、F_2では白花153個体で黄花が52個体に分離し、白花が優性であった。この花色遺伝子と稔性回復遺伝子は独立であることが分かった。稔性回復遺伝子をマッピングするため、両親間で多型があるDNAマーカーを作成した。初めは、ブロッコリーの倍加半数体系統とカイランの間で多型があるSNPマーカーをスクリーニングし、120のドットブロットSNPマーカーを作成した。これを用いてF_2世代の遺伝子型を分析したところ、半数程度が多型を示さなかったことから、再度mur型細胞質雄性不稔性のブロッコリー系統と稔性回復遺伝子を持つカイラン系統の間で多型を示すものを選抜し直した。EST情報で設計したプライマーで増幅したDNAの塩基配列を決定することによって、SNPマーカーを増やしている。白花が優性であることの原因を解明するため、cDNAサブトラクション用に花弁からRNAを抽出した。ブロッコリーとカイランの間で多型を示すことが確認されていた206のDNAマーカーでF_2の両親のDNAを分析したところ、52マーカーのみで多型が検出された。そのため、新たにF_2の両親間のSNPマーカーを作出するため、ダイコンcDNAの塩基配列から設計した1448プライマー対を用いて増幅した720のPCR産物の塩基配列を決定し、236のPCR産物でSNPを検出した。これらSNPでdot-blot-SNPマーカーを作成し、新たに作出した12のSCARマーカーも加えて、F_2205個体の遺伝子型を分析した。連鎖解析を行い、162マーカー(160のSNP、2つのSCARマーカー)で10の連鎖群からなる連鎖地図を作成した。F_2205個体の雄性不稔性を調査し、稔性回復遺伝子が第1連鎖群に座乗することがわかった。カイランの白花とブロッコリーの黄花は1遺伝子によって決定されるが、白花は黄花に対し優性であり、この遺伝子は稔性回復遺伝子に連鎖し、約30cM離れていた。Diplotaxis muralisの細胞質(mur型細胞質)を持つBrassicaの細胞質雄性不稔性の稔性回復遺伝子を同定するため、mur型細胞質雄性不稔性のブロッコリーと稔性回復遺伝子を持つカイラン(Brassica oleracea var. alboglabra)のF_2集団を用い、両親間で多型を示すDNAマーカーを作成して遺伝子型を分析することにより、昨年度稔性回復遺伝子を第1連鎖群にマッピングした。

同研究室内の別の学生が行っているB.oleraceaの耐病性のQTL解析のためにSNPマーカー作成を協力し、これら2つの研究で得られた連鎖地図を統合することによって、320マーカーからなるB.oleraceaの連鎖地図を構築した。カイランの白花とブロッコリーの黄花は1遺伝子によって決定されるが、白花は黄花に対し優性である。この遺伝子も第1連鎖群にあり、稔性回復遺伝子とは25cM離れていることを見出した。色素合成に関わる酵素の遺伝子を分析したが、カイランとブロッコリーで変異がない、あるいはDNA塩基配列に変異があっても、マッピングした位置に座乗しないなどのため、この特性に関わる遺伝子の候補は見出されなかった。
サルコペニアが下肢虚血と血管新生療法に及ぼす影響とメカニズムの解明

独自の方法で作製したサルコペニアモデルマウスは、コントロールマウスと比較して有意に下肢重量の低下が認められ、また、下肢筋肉において肉眼的・組織的に有意な萎縮が認められた。作製したサルコペニアモデルマウスとコントロールマウスに下肢虚血を加え、レーザードップラーによる血流評価を行った。結果としてサルコペニアモデルマウスで有意に血流低下が認められた。そのメカニズム解明に関しては、引き続き検証が必要である。マウスに対して、右下肢を4週間にわたりテープ固定。血圧や心拍数にその後、筋萎縮の評価として下肢重量・固定肢の断面積がコントロールと比較して有意に低下しており、組織的には、筋線維においても有意に萎縮していることを確認した。血液検査においては、肝臓機能や腎機能に有意な差はなかったが、固定していたマウスにおいて、アルブミンなど栄養状態を示唆する数値が有意に低下を認めた。筋委縮については、固定解放後5日目まで観察し、下肢重量・断面積は有意に低下しており、萎縮が残存していると考えた。同モデルをサルコペニアモデルマウスとし、血管新生に影響があるサイトカインをウェスタンブロットで評価したが、有意差がでるような結果は得られなかった。つづいて固定開放5日目に、右大腿部の血管を露出し、電気メスで凝固をおこない下肢虚血モデルマウス作製をおこなった。虚血評価としては、術後にレーザードップラーによる血流評価をおこない、下肢虚血に陥っていることを確認した。その後、7日後・14日後とそれぞれレーザードップラーによる血流評価をおこなった。7日後ではコントロールと比較し有意な差はなかったが、14日後に関しては、有意に血流改善が乏しい結果が得られた。同モデルの下肢筋肉を使用して、現在ウェスタンブロットで血管新生に関与するサイトカインの分泌の評価を行っており、現在検証中である。また、CD31蛍光染色を行い、毛細血管密度を評価することで、血流が低下しているか否かも検証中である。大学病院における実臨床の人手不足で、臨床に費やす時間が長時間であるため。また、CD31蛍光染色を行い、毛細血管密度を評価したところ、有意ではないが、サルコペニアモデルマウスで密度が低下している傾向が認められた。しかし、下肢虚血作製後の筋肉を採取し、ウェスタンブロットで血管新生に関与するサイトカインがコントロールとサルコペニアモデルマウスで有意に変化している所見は現状では認めていない。以上より、作製したサルコペニアモデルマウスにおいて、筋肉萎縮に伴い下肢虚血後の血管新生が減弱している可能性が示唆された。引き続き、その原因についてはウェスタンブロットでの検証を含め実験していく予定である。現在、レーザードップラーによる血流評価で、サルコペニアモデルマウスのおける下肢虚血の改善が乏しい理由に着目している状況である。ウェスタンブロットによる血管新生にかかわるサイトカインの評価を行っている状況ではあるが、ミトコンドリア機能にかかわる蛋白も同様に評価を行う方針としている。その中で、血流低下の要因となるような結果がえられれば、その要因を改善しうる方法も検証していく。なお、研究推進方策として、実臨床時間の削減できるように、部署と相談のうえ実験計画をおこなっていく方針である。心臓・血管内科マウス代および試薬代、各種実験器具代に使用しているが、実験の遅れもあることから、試薬購入が不足した。前年度と同様に、マウスおよび試薬代を主として使用していく予定である。
すばるHSCサーベイを軸とした広域全波長探査で暴く巨大ブラックホール進化の全貌

本計画で着目している、静止系紫外線のカラーで選択されるクェーサー、エックス線で選択される活動銀河核、中間赤外線で明るく輝く塵に覆われた進化途上の活動銀河核、電波帯で明るく輝く電波銀河のそれぞれの天体種族について、サンプル構築および選択したサンプルの統計的性質の調査が順調に進んでいる。またそれぞれの天体種族についての統計的性質の調査結果について論文化まで行うことができている。更に、特にエックス線と可視光のシナジー研究を進める上で必要になる国際共同研究の調整も順調に進み、関係国際会議における関係者との打合せや合意文章の締結などを滞りなく進めることができている。以上の理由により、本計画はおおむね順調に進展していると判断できる。すばる望遠鏡のHSCサーベイは現在も進行中であり、1400平方度に対する撮像深宇宙観測の完遂を目指して観測が続けられている。新しく得られたHSCデータを用いて、これまで未調査だった天域に対しても天体選出を進め、サンプルを拡大させることにより各種統計的調査の精度を向上させる。また得られたサンプルの中で特に興味深い天体に対して、可視光・赤外線・ミリ波帯での分光フォローアップ観測を推進し、巨大ブラックホールの質量・母銀河の力学質量・電離ガスの金属量などを計測していく。これらの情報をもとに、巨大ブラックホール進化の全貌および巨大ブラックホール進化と銀河進化の関係について知見を深めるための調査を進める。また得られた成果を公表するための論文化および国内外での研究集会における成果発表を行っていく。平成28年度には、各種サンプル構築に必要な準備を行った。静止系紫外線のカラーで選択されるクェーサーについては、サーベイの完全性を見積もる方法について従来考慮されていなかった効果を新たに考慮する事により信頼性を向上させた。具体的には、クェーサースペクトルの形状の光度依存性をサーベイ完全性の見積もりに反映させる新たな方法を考案した(Niida, Nagao, et al. 2016)。またすばる望遠鏡HSCを用いてクェーサー探査を行うためにHSCのデータやその解析ソフトウェアの挙動を正しく理解するための基本的な調査を進め、HSCサーベイに基づくクェーサー探査の初期成果を出版した(Matsuoka et al. 2016)。一方、エックス線を用いた活動銀河核選択をHSCサーベイの天域内で行えるようにするため、近年の広域エックス線サーベイであるXXL計画、および近年中に打ち上げが予定されているエックス線宇宙望遠鏡eROSITA計画の両計画の関係者との相談を進め、共同研究に向けた調整を行った。特にeROSITA計画の関係者と詳細な情報交換を行うため、ミュンヘンで行われたeROSITA会議に出席して関係者との調整を進めた。赤外線宇宙望遠鏡WISEによる広域中間赤外線データとHSC可視光データを組み合わせて選択する塵に覆われた進化途上の活動銀河核については既に選択方法を確立済であるため、データを用いた天体選出までを完了させ、空間分布に関する統計的性質を論文にまとめ出版した(Toba, Nagao, et al. 2016)。また電波帯で明るい電波銀河を選択するために、HSCのデータと広域電波サーベイFIRSTのデータをどう組み合わせればよいか検討した。具体的には、両データのマッチングによりFIRST源の可視対応天体を選出する際にマッチング条件をどう定めるかによりサンプルの完全性および誤混入の程度が変わるため、様々な場合を試みることで、できるだけ誤混入を避けつつサーベイの完全性を向上させる条件を特定した。本計画で特に注目している、静止系紫外線のカラーにより選択されるクェーサー、エックス線で選択される活動銀河核、中間赤外線を用いて選ばれる塵に覆われた進化途上の活動銀河核、電波帯での強度に着目して選択される電波銀河という各種天体について、それぞれの選択方法の吟味および必要な基礎調査を着実に遂行することができている。更に、一部については初期成果に基いて統計的性質の報告を査読付論文の形で行うことができている。なお、全ての天体種族について可視光データとしてすばる望遠鏡HSCで取得された可視光広域撮像データを使用するが、データのクオリティが良すぎる場合にデータの一部がパイプラインにより適切に解析されないことが判明したため、HSCチームと相談しながら問題が生じている天域やその対応方法などについて理解を深めた。この件の影響により本計画の一部に若干の遅れが発生したが、全体の成果創出との関係ではほとんど問題とはなっていない。平成28年度のうちに、天体選出に関する基本的調査を終えて天体選出の方針が固まったため、平成29年度以降には実際の天体選出を進めてサンプル構築を進める。

静止系紫外線のカラーにより選択されるクェーサー、エックス線で選択される活動銀河核、中間赤外線を用いて選ばれる塵に覆われた進化途上の活動銀河核、電波帯での強度に着目して選択される電波銀河のそれぞれについて、すばるHSCサーベイの初期データと多波長広域データを組み合わせることで構築したサンプルの統計的性質を調査し、その結果を取りまとめて査読付論文の形で公表する。こうした解析を進める上で、一部は綿密な国際協力に基いて進める必要があるため、必要に応じて国外の研究機関に渡航して調整や議論を進める。選択された天体のうち特に興味深いものについては、可視光・赤外線・ミリ波における分光フォローアップ観測を行う必要が生じるため、これを遂行するための観測提案活動を進める。また以上の活動により得られた多波長情報を組み合わせて、巨大ブラックホール進化の全貌解明に向けた解析を進める。すばる望遠鏡のHSCサーベイは現在も進行中であり、1400平方度に対する撮像深宇宙観測の完遂を目指して観測が続けられている。新しく得られたHSCデータを用いて、これまで未調査だった天域に対しても天体選出を進め、サンプルを拡大させることにより各種統計的調査の精度を向上させる。また得られたサンプルの中で特に興味深い天体に対して、可視光・赤外線・ミリ波帯での分光フォローアップ観測を推進し、巨大ブラックホールの質量・母銀河の力学質量・電離ガスの金属量などを計測していく。これらの情報をもとに、巨大ブラックホール進化の全貌および巨大ブラックホール進化と銀河進化の関係について知見を深めるための調査を進める。また得られた成果を公表するための論文化および国内外での研究集会における成果発表を行っていく。
水素検出顕微鏡によるプロチウムの吸脱着機構の解明

本研究では水素吸蔵合金におけるプロチウムの吸脱着機構を表面物性的手法を用いて解明することを目的として今年度次のような研究成果を得た。(1)水素吸蔵合金に使用されるZr表面でのプロチウムの挙動及び酸素との関係について315K以下で電子励起脱離(TOF-ESD)法を用いて調べた。水素ガスの解離は顕著でなかったが、酸素を導入するとプロチウムはバルクから表面へ偏析した。(2)Ti(0001)面での水素、酸素吸着を調べた。水素吸着は硫黄の影響が大きく実験は困難であったが、イオン衝撃、アニール条件を選び、極力硫黄の影響を少なくした。Zrの場合と同様に酸素を導入するとバルクからのプロチウムの偏析が観察された。(3)水素検出顕微鏡の空間分解能を1ミクロン以下に改良し、バナジウム系水素吸蔵合金におけるプロチウム、酸素の挙動を調べた。実用的なバナジウム系合金は粒径が1ミクロン以下と小さいので、現時点の分解能ではプロチウムの吸脱着過程が十分に観察できない。従って粒径ほぼ10ミクロン程度のものを鏡面研磨して用いた。SEM像は結晶粒界が不鮮明でありアルゴンイオン衝撃によりスパッタリング率の違いを利用してグレインを出して実験を行った。酸化物が前面を覆っているときは結晶粒界によるプロチウム分布の差は明確ではなく、母相のバナジウム酸化物と結晶粒界のTi,Ni酸化物からの酸素を識別できる程度であった。しかし清浄化が進むと、母相と結晶粒界の表面特性の差異が現れて、プロチウムは母相に、酸素は結晶粒界のTi,Ni酸化物に局在することを明らかにした。
レニンーアンジオテンシンシステム抑制による胃発癌予防効果の検討

本研究は、ヘリコバクターピロリ(HP)感染時における疾患多様性を規定する可能性があるレニン-アンジオテンシン(RA)システムに関連した遺伝的背景を明らかにし、特に胃癌の高危険群を遺伝子検査にて絞り込む方法の確立を平成19度の目標としていた。アンジオテンシノーゲン(AGT)やACE、キマーゼ、ATII受容体遺伝子などには遺伝的な多型性が存在し、その遺伝子多型により各分子の産生量に個人差が生じ、その活性度が個々により異なる。そのため胃癌を含めた各臓器の癌の発症においてもRAシステムの各分子の遺伝子多型が関与する可能性が考えられるが、胃癌発症における検討はない。報告者は、平成19年度はAGTやACE、キマーゼの遺伝子多型が胃癌発症における影響を検討し、AGT遺伝子多型(AGT-20)の高産生性アレルであるCアレルの保持者の胃癌発症リスクが1.69倍に増加し、CMA遺伝子多型(CMA/B)の高産生性アレルのAアレル保持者で2.22倍に増し、特にAA型の遺伝子多型で7.12倍と有意に危険度が増すことを示した。また、両SNPの高産生アレルの保持者は4.70倍に発症リスクが増加した。病理組織学的な検討でも胃粘膜の萎縮や炎症程度に遺伝子多型が影響を及ぼし、遺伝子多型別にその程度が異なることも明らかにした。このことから、胃癌発症にはRAシステムが関与することが明らかとなり、RAシステムを考慮して胃癌の高リスク群の抽出し、そのような症例に対して厳重な管理や除菌治療を積極的に行うことで胃癌発症予防や早期発見に繋がり、医療経済学的にも有用となる可能性が考えられる。
心筋線維化抑制による拡張障害の治療法開発-変異型TGF-β受容体遺伝子導入による遺伝子治療-

HA-tagged TβRII : Fc遺伝子組み換え発現プラスミドpVR1255T βRII : Fcを作成しnaked DNA法にてラット大腿骨格筋に筋注導入したが、pVR1225プラスミドの発現がきわめて低いことが明らかとなった。このため、現在新たな発現ベクター数種に組み換えて最も生体内での発現効率の良いものをスクリーニング中。(2)圧負荷肥大心モデルラットの腎動脈直上で大動脈を縮窄し高度の心筋線維化に伴い拡張不全が進展する圧負荷肥大心モデルを作成。現時点においてT βRII : Fc遺伝子導入法が確立されていないため、抗TGF-β中和抗体を用いた生体内TGF-β機能抑制実験を施行。抗TGF-β中和抗体+圧負荷群・非免疫IgG+圧負荷(コントロール)群にランダマイズ。圧負荷手術1日前よりに抗TGF-β中和抗体または非免疫IgGを連日腹腔内投与し圧負荷手術28日後まで飼育。抗TGF-β中和抗体により、血圧・左心室肥大・収縮能には変化を認めないが、心筋線維芽細胞活性化の抑制、心筋線維化の抑制が認められさらに拡張障害の改善を認めた(Circulation 2002)。さらに圧負荷直後に心筋内血管の内皮細胞のICAM-1発現と血管周囲へのマクロファージ浸潤を認めた。抗ICAM-1中和抗体を投与すると、マクロファージ浸潤が消失したのみならず反応性心筋線維化が予防された(Hypertension 2003)。圧負荷により一過性に心筋で活性化される組織アンジオテンシン系が、これらのマクロファージ浸潤・TGF-β発現の引金を引くことが明らかとなった(J Cardiovasc Pharmacol, in press)。また、圧負荷モデルを用いて、高血圧が大動脈外膜栄養血管の新生に与える影響を検討した。圧負荷により中膜平滑筋層の相対的虚血がHIF-1・VEGF発現を引き起こしその結果、大動脈外膜栄養血管が形成されること、外膜栄養血管形成により中膜虚血が代償されること、高脂血症がこの外膜栄養血管形成を抑制することを明らかとし報告した(Hypertension 2002a ; Hypertension 2002b)。肥大期より抗TGF-β中和抗体を投与したところ、本モデルに特徴的な瀰漫性+置換性心筋線維化は有意に抑制されたが、拡張不全進展・心不全による死亡が抑制されず予後改善も見られなかった。これは主として腎病変進展による腎不全→容量負荷による心不全が原因と考えられた。10週間中和抗体を投与したが明らかな心筋線維化・拡張障害の改善効果は見られなかった。中和抗体を長期投与すると免疫作用等によって効果が慢性的には期待できないため、Cre-LoxPシステムによるTβR : Fc遺伝子治療を開発し、効果を確認する予定である。

これは主として腎病変進展による腎不全→容量負荷による心不全が原因と考えられた。10週間中和抗体を投与したが明らかな心筋線維化・拡張障害の改善効果は見られなかった。中和抗体を長期投与すると免疫作用等によって効果が慢性的には期待できないため、Cre-LoxPシステムによるTβR : Fc遺伝子治療を開発し、効果を確認する予定である。(1)TβRII : Fcキメラ遣伝子作成と、そのドミナントネガティブ活性検討:ヒトTβRIIの細胞外ドメインにイムノグロブリンFc鎖を結合させたHA-taggedキメラ遺伝子をPCR法を用いて作成し発現プラスミドベクターpVR1255に組み換えた(pVR1255TβRII : Fc)。in vitro発現系を用いてTβRII : Fcタンパク質を精製した。TGF-β投与による培養ラット胎児心筋細胞・心筋線維芽細胞のコラーゲンmRNA発現活性化をマーカーとしたin vitroアッセイ系によりTβRII : Fcタンパク質の抑制作用を確露した。(2)TβRII : Fc遣伝子導入法の確立:HA-tagged TβRII : Fc遺伝子組み換え発現プラスミドpVR1255TβRII : Fcをnaked DNA法にてラット大腿骨格筋に筋注導入し局所でTβRII : Fcタンパク質を発現させ、血中に分泌されたTβRII : Fcにより生体内の作用部位(心臓)においてTβRII : Fc機能を拮抗阻害するという戦術を用いる。導入局所発現を抗HA免疫染色にて、血中TβRII : Fc濃度を抗ヒトTβRII ELISA法にて、TβRII : Fc発現の程度と時間経過を検討したところ、pVR1225プラスミドの発現が導入局所筋肉においてきわめて低く、血中には有意な分泌が得られていないことが明かとなった。このため、現在新たな発現ベクター数種に組み換えて最も生体内での発現効率の良いものをスクリーニング中である。(3)圧負荷肥大心モデル:ウィスターラットの腎動脈直上で大動脈を縮窄し高度の心筋線維化に伴い拡張不全が進展する圧負荷肥大心モデルを作成した。平成14年3月上旬現在TβRII : Fc遺伝子導入法が確立されていないため、抗TGF-β中和抗体を用いた生体内TGF-β機能抑制実験を行っている。抗TGF-β中和抗体+圧負荷群・非免疫IgG+圧負荷(コントロール)群にランダマイズ。圧負荷手術1日前よりに抗TGF-β中和抗体または非免疫IgGを連日腹腔内投与し圧負荷手術28日後まで飼育。a.生理学的評価:左頸動脈に留置したカテーテルにて覚醒時血圧を、心エコー法にて、左室拡張期内径・収縮能の指標として左室内径短縮率・拡張能の指標として左室流入血流波形decerelation time(DT)およびE/A比を経時的に測定し比較検討。b.組織学的・分子生物学的検討:心臓を摘出し以下を検討。組織学的検討-心筋細胞肥大・心筋線維化率、免疫組織学的検討-TGF-β活性の指標として線維芽細胞増殖(PCNA)。ノザンブロット法-心臓内TGF-β発現。Tβ
同種胎児心筋細胞の拒絶反応解析:同種臓器心臓移植との比較

1)同種心筋細胞移植と臓器移植における拒絶反応の比較Lewisラットの腹部にLewisラットの心臓を異所移植したRecipient、およびDonor心筋細胞としてLewisとACIラットの培養胎児心筋を用いた。1群では上記のRecipientにLewis培養心筋を移植(同系臓器、同系心筋細胞移植)、2群ではACI培養心筋を異所性移植心内に注入(同系臓器、同種心筋細胞移植)、3群としてACIからLewisへの異所性臓器移植を行った(同種臓器移植)。FK-506 1mg/kg dayを移植後2日間のみ投与し、以後は中止した。3群では激しい細胞浸潤が認められ、14日目には心停止となった。同系心筋細胞移植では移植細胞が術後2日から28日まで一貫して存在することが確認され、その周囲の炎症所見は軽度であった。同種心筋細胞移植でも心筋細胞集団が認められたが、その細胞周囲には炎症細胞浸潤も認められた。これを3群と比較すると細胞浸潤は心筋細胞移植の方が軽度であった。2)同系細胞移植、同種細胞移植の移植後慢性期心機能評価心筋梗塞モデルラットを作製し、4週間後に新生児培養心筋細胞(6x10^6)を梗塞周辺領域に移植した。免疫抑制剤は与えなかった。術後8週間まで心エコーによる心機能評価を行い、犠牲死後蛍光顕微鏡にて病理組織評価を行った。Percent Circumferential Shortening (PCS)、Percent Area Change(PAC)が移植後4週までは同系、同種移植ともに有意に改善したが、その後4-8週の間に同系移植ではさらに機能が改善したのに対して、同種移植ではPCS,PAC共に再度機能が低下した。蛍光顕微鏡で検討すると両群とも移植培養心筋細胞が多数認められた。同種移植後の心臓機能が4週の経過で一旦改善した後に再度低下するという結果はゆっくりとした拒絶反応の進行と考えられた。<背景と目的>心筋細胞移植においては心臓の血管成分はRecipient由来であり、臓器の心臓移植ではDonor由来であるので、心筋細胞移植の拒絶反応は臓器移植に比べて軽度である、という仮説が成り立つ。本研究ではラットの異所性心移植モデルを用い、細胞移植、臓器移植の拒絶反応の程度を解析した。<方法>Lewisラットの腹部にLewisラットの心臓を異所移植し、これをRecipientとした。同時にLewisとACIラットの胎児心筋を培養し、これをDonor心筋細胞とした。1群では上記のRecipientにLewis培養心筋を移植(同系臓器、同系心筋細胞移植)、2群ではACI培養心筋を異所性移植心内に注入した(同系臓器、同種心筋細胞移植)。さらに3群としてACIからLewisへの異所性臓器移植を行った(同種臓器移植)。免疫抑制剤としてFK-5061mg/kg dayを移植後2日間のみ投与し、以後は中止した。ラットを移植後2日、8日、14日、28日に犠牲死させ病理標本を作製した。凍結標本にてDonor細胞をPKH Dye標識し、蛍光顕微鏡にてその存在を確認した。<結果>3群の同種臓器移植では術後8日で完全に拒絶反応が生じて移植心は停止した。これを2群の同種心筋細胞移植と比較すると細胞浸潤は心筋細胞移植の方が軽度であった。同系心筋細胞移植において心筋細胞は28日まで生存することを確認したが、移植した細胞数の何%が生存しているかは不明であった。<結論>

心筋細胞移植の拒絶反応は臓器移植に比べて軽度である。【目的】昨年度の研究成果で、同種心筋細胞移植後の拒絶反応が臓器の心臓移植に比べてゆっくり、軽く進行するという病理学的な結果を得た。この結果に基づき、ラット心筋梗塞モデルを用いて、心筋細胞移植を同系、同種およびコントロールの3群を作成し、心エコーによって心臓機能の推移を8週間にわたってフォローし比較検討した。【方法】左前下行枝を結紮した心筋梗塞モデルラット(梗塞範囲22.9?9.9%)22頭を作製し、4週間後に新生児培養心筋細胞(6x10^6)を梗塞周辺領域に移植した。免疫抑制剤はまったく与えなかった。心エコーによる評価を経時的に細胞移植後8週間まで行い、犠牲死後、病理標本を作製した。【結果】Percent Circumferential Shortening(PCS)、Percent Area Change(PAC)が移植後4週までは同系、同種移植ともに有意に改善したが、その後4-8週の間に同系移植ではさらに機能が改善したのに対して、同種移植ではPCS, PAC共に再度機能が低下した。コントロールでは機能の改善はまったく認められなかった。移植後8週目に犠牲死後に蛍光顕微鏡で検討すると移植培養心筋細胞が多数認められた。【結論】同種移植後の心臓機能は4週の経過で一旦改善し、さらに次の4週間を経てその機能が再度低下した。この結果は同種移植での病理によるゆっくりとした拒絶反応の進行という結果に合致する心臓機能の変化と考えられた。
円形精子細胞は生殖補助医療に使用可能か : 受精諸プロセスにおけるその機能の検証

本研究では受精成立能力が極めて低いとされている哺乳動物の円形精子細胞の受精成立能をヒトおよび実験動物(マウス、ウサギ)を用いて検討した。円形精子細胞には卵子活性化能力、および精子中心体機能という精子が卵子内に侵入したのちの受精の大きなイベントを遂行するための精子機能が欠如あるいは極めて低下していることが明らかになった。さらに、円形精子細胞で低下していた卵子活性化能力を補う方法の一つとして、マウス円形精子細胞のホルモン添加下セルトリ細胞との共培養系を開発した。以上より、哺乳動物の円形精子細胞は受精のイベントをプロセスする能力が低い、しかしそれを補填できる方法も存在する可能性が示された。平成21年度の本研究の主題は精子細胞が現在までに正常な受精の成立に必要と考えられているファンクションを有するか否かの検討である。さらに、その機能が正常に発現されているかの検証も並行して行うことを予定した。研究の端緒として、ウサギの未成熟精子細胞の顕微授精システムを用いた動物実験モデルを使用した。すなわち、ウサギの円形精子細胞から精子までの各成熟段階の精細胞をウサギ卵子内に顕微注入して、その発育と免疫蛍光染色による精子星状体の発現、すなわち、精子中心体機能を評価した。円形精子細胞の顕微注入後の卵子活性化能は極めて低いことがあきらかになった。さらに円形精子細胞を顕微注入後の卵子内で精子中心体の機能発現である精子星状体の形成は認められなかった。すなわち、この基礎実験からよりは、円形精子細胞には受精の成立に必要な精子中心体機能が備わっていないことが明らかになった。さらに、円形精子細胞注入後の卵子に人為的な活性化処理をおこなったが、精子星状体の形成は認められなかった。すなわち、ヒト臨床でも円形精子細胞を使用する場合は補助活性化処理のみならず、その中心体機能を補助するような方法が必要であることが考えられた。研究用に使用するヒト精巣組織のサンプリングに関しては当初の予想より、その症例数をそろえるのに時間がかかっている。次年度以降にヒト精子細胞を用いた本格的な検討を始める予定である。受精を成立させるためにもっとも大切な精細胞の役割が卵子内への活性化因子(停止していた減数分裂を再開させる)の導入である。本年度は円形精子細胞における活性化能力を顕微授精システムを用いて評価した。精巣組織を細切して、顕微鏡下に形体的に円形精子細胞を同定し、マイクロマイクロマニュピレーターで細胞それぞれを回収した。それらの円形精子細胞を卵子内に注入して、細胞内のカルシウムオシレーションを測定した。さらに、円形精子細胞をホルモン添加セルトリ細胞共培地で2日間体外培養した。体外培養により約20%の円形精子細胞は細胞質が楕円形になり伸長精子細胞様の形態を示した。これらの体外培養伸長精子細胞を卵子内に顕微注入し、卵子内のカルシウムオシレーションを測定した。体外培養伸長精子細胞は円形精子細胞に比してより多くの卵子を活性化し、そのカルシウムパターンは精巣より直接採取した伸長精子細胞(体内成熟精子細胞)と同様の所見をしめした。すなわち、円形精子細胞には卵子活性化因子が殆ど存在せず、卵子活性化能は円形精子細胞が形態を変化させつつある精子成熟の過程で、出現することが明らかになった。さらに円形精子細胞を体外培養することで、形態が伸長精子細胞様に変化した精子細胞には円形精子細胞に比して活性化能が高くなったことが明らかになった。この知見はJ Assisted Reprod Genetics 27 : 565-570. 2010に掲載され、その号の巻頭コメンタリーに新しい知見として紹介された。本年度の研究の端緒は平成21年度に報告したウサギ未成熟精子細胞の受精機能の検討である。すなわち、ウサギの未成熟精子細胞の顕微授精システムを用いた動物実験モデルを使用した。この動物実験からよりは、円形精子細胞には受精の成立に必要な精子中心体機能が備わっていないことが明らかになった。本年度はヒト円形精子細胞における中心体機能の発現を顕微授精システムを用いて評価した。ヒト精巣組織のサンプリングはなかなか機会が恵まれずその遂行に時間を要した。それらの円形精子細胞を卵子内に注入したところ、卵子の活性化とそれに引き続く発生は認められなかった。しかるに、カルシウムイオノファーを用いて補助活性化を施行した。

補助活性化により核相は減数分裂を再開がみとめられたので、それを継続して培養し免疫蛍光染色にて微小管の形成を観察した。検討した30個の円形精子細胞注入後補助活性化施行卵子のなかで精子中心体機能の発現である精子星状体がみとめられたのは3個(10%)であった。この結果はヒト円形精子細胞にも微小管形成中心としての機能的な精子中心体が存在することを示す。しかし、その機能発現効率は通常の補助活性化などでは低く、新しい中心体機能賦活化の方法の開発が必要であることが明らかになった。
量的・質的混在データのための潜在変数を含む一般化線形モデルの研究

一般化線形モデルと潜在変数の概念を取り入れた共分散構造モデルは全く独立に発展してきた。一般化線形モデルは、古典的の回帰分析を量的変数のみならず、様々な尺度の変数に適用できるよう拡張したものであり、共分散構造分析は因子分析の拡張として発展してきた。また、回帰分析は潜在変数がない共分散構造分析の特殊ケースとしてとらえることもできる。本研究では、一般化線形モデルと共分散構造モデルの融合を考え、より適用範囲の広い一般モデルを提唱した。具体的には、一般化線形モデルで潜在変数を取り扱えるような拡張を行い、そのモデル内のパラメータ推定のための計算方法として、EMアルゴリズムを利用した方法やその簡便法などを与えた。提唱した推定方法については、計算効率や推定効率の側面から、シミュレーションによる数値評価を行い、効率的アルゴリズムの探索を行った。さらに、実際のデータ分析の際に必要とされる小標本での統計推測のために、MCMC(Markov Chain Monte Carlo)法を利用した標本分布の導出法も提唱した。提唱されたモデルに関する推定についての成果やその提唱されたモデルの適用分析については、すでに、いくつかの論文誌に掲載済みである。また、MCMCを利用した標本分布の導出法に関する結果は、日本計算機統計学会でその一部が発表済みである。さらに、大阪で開催された国際会議であるIMPS2001で応用事例とそこで生じた問題に関する解決策をそれぞれ発表した。また、IMPS2001のカンファレンスボリュームに論文を投稿中である。さらに、オランダのユトレヒトで開催された統計計算に関する国際会議であるCOMPSTATと10月に東京で開催された日中統計シンポジウムで応用事例とそこで生じた問題に関する解決策をそれぞれ発表した。