hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
生合成系の融合による分子多様性の拡大

糸状菌ゲノムデータベースを対象に、ポリケタイド合成酵素およびプレニル基転移酵素の共存する遺伝子クラスターを検索することで、2種のメロテルペノイド生合成遺伝子クラスターを見いだし、各酵素遺伝子を異種糸状菌で発現することにより機能同定した。これらの酵素はいずれも既知生合成酵素とは反応性、特異性を異にする新規な酵素であり、天然物の構造多様性拡大への貢献が期待される。また、異種糸状菌での共発現によるメロテルペノイド生合成系の再構築に成功し、さらに、非生理的基質を出発基質とすることで非天然型新規メロテルペノイドの生成に成功した。本年度は、糸状菌Aspergillus fumigatusの生産するメロテルペノイド化合物ピリピロペンの生合成遺伝子の同定を目的とした。ピリピロペンの生合成は、ニコチン酸由来のCoA体をスターター基質とし、2分子のマロニル-CoAの縮合により生じる特異なピロン部分の生成に始まり、これにファルネシル基の付加、末端二重結合のエポキシ化、そしてテルペン部分の環化反応を経て基本炭素骨格が構築されると考えられる。そこで、A.fumigatusゲノム配列中にこの生合成を担うと予想されるポリケタイド合成酵素(PKS)ならびにプレニル基転移酵素(PT)の両遺伝子を含む遺伝子クラスターを検索した。その結果、9遺伝子から成る約22kbのクラスターを見出した。このクラスター中には酸化酵素に加え、CoA ligase(CL)と思われる遺伝子も存在し、ピリピロペンに特徴的なニコチン酸由来のCoA体の生成に関与しているのではないかと推測された。そこで、本クラスター中のCL(pyrl)とPKS(pyr2)遺伝子をA.oryzaeM-2-3株を用いた異種糸状菌発現系にて共発現し、ニコチン酸を基質としてピリピロペン生合成中間体であるピロン体(4-hydroxy-6-(3-pyridinyl)-2Zl-pyran-2-one(HPPO))を生成することを明らかにした。次いで、同じ発現系を用いてCL、PKSならびにPT(pyr6)の3遺伝子共発現を試みた。その結果、これら遺伝子を導入したA.oryzae形質転換株において、HPPOにファルネシル基の付加したfarnesyl-HPPOが生成することを明らかにした。これらの結果は、本遺伝子クラスターがピリピロペン生合成に関与することを強く示唆するものである。今後、さらにクラスター内の遺伝子の機能同定を順次進めていく予定である。本年度は、糸状菌Aspergillusterreus中のメロテルペノイド生合成遺伝子クラスターに注目した。A.terreusは、前年度に生合成遺伝子クラスターの解析を行ったA.fumigatus由来のピリピロペンと基本炭素骨格が類似したテリトレムを生産する。そこで、A.terreusゲノム配列中にその生合成を担うと予想されるポリケタイド合成酵素(PKS)およびプレニル基転移酵素(PT)の両遺伝子を含む遺伝子クラスターを探索し、13遺伝子から成る約36kbのクラスターを見出した。しかしながら、本クラスター中のPKS遺伝子にはメチル基転移酵素(MT)ドメインやチオエステラーゼ(TE)ドメインが見られ、ピリピロペンの生合成に関与するPKSとは構造が大きく異なっていた。このことから、本クラスターはテリトレムではなくA.terreusの生産する別のメロテルペノイドであるテレトニンの生合成に関与するものと予想した。本クラスター中のPKS(trt4)遺伝子を、A.oryzae M-2-3株をホストとする異種糸状菌共発現系を用いて機能解析を行ったところ、6置換芳香環である2,4-dihydroxy-3,5,6-trimethylbenzoic acid(DTBA)を生成することが明らかとなった。本化合物は、テレトニンの生合成中間体であることが知られている。次いで、同じ発現系を用いてPT(trt2)遺伝子の機能解析を行った。PKSならびにPT両遺伝子を共発現し、DTBAにファルネシル基の付加したfarnesyl-DTBAが生成することを明らかにした。本反応は、6位炭素上に置換反応ではなく付加反応でファルネシル基を転移し、芳香環の崩れた化合物を与える大変興味深い反応である。これらの結果から、本遺伝子クラスターはテレトニン生合成に関与するものと結論した。昨年度に引き続きAspergillus terreusのテレトニン生合成におけるエポキシ化酵素以降の検討を行った。テレトニン生合成クラスター中のフラビン要求性モノオキシゲナーゼをプレニル基転移酵素と供に異種糸状菌A.oryzae M-2-3株において共発現し、基質となる2,4-dihydroxy-3,5,6-trimethylbenzoic acidを投与したところ、epoxyfarnesyl化された生成物を単一のジアステレオマーとして確認した。次に、A.fumigatusのピリピロペン

生合成におけるPyr4と相同性のある遺伝子(trtl)をテレトニン生合成クラスター中にも見いだし、異種発現タンパクによる機能解析を検討中である。上記膜結合型新規テルペン環化酵素Pyr4には既知テルペン環化酵素に見られる酸性アミノ酸残基からなる活性モチーフ(DXDXXD等)が見られない。そこで、Pyr4のホモログに共通して存在する酸性アミノ酸残基であるGlu63あるいはAsp218の変異体を作成したところ、これらの変異体はいずれも環化活性を失ったことから、これら酸性アミノ酸残基が協同的に働き基質のエポキシ環のプロトネーションに関わることを明らかにした。一方、ピリピロペン生合成酵素遺伝子群を用いて、構造類縁体の創製を試みた。ニコチン酸の代わりに安息香酸を出発基質とし、ピリピロペン生合成の5段階の酵素群と反応させたところ、ピリジン環がベンゼン環に置換されたピリピロペン類縁体の生成に成功した。また、生合成系の融合による分子多様性の拡大を図るため、糸状菌由来I型およびIII型新規ポリケタイド合成酵素をクローニングし、異種発現タンパクを用いた機能同定に成功した。これらの成果は、メロテルペノイド生合成酵素系を用いた構造多様性の拡大に大きな展望を拓くものである。
マシンビジョンシステムを使った新しい呼吸同期定位放射線治療の開発

呼吸停止下の放射線治療では、呼吸停止時の胸腹壁の位置情報を被験者/患者自身にフィードバックする(visual feedback法)ことにより、息止めの位置の再現性が高まることを明らかとした。その研究結果を応用し、visual feedback法による呼吸同期放射線治療専用のソフトウェアおよびシステムを開発した。このシステムにより自発的な息止めによっておこなう呼吸同期照射法を簡便かつ正確に実施できると考えられた。その研究結果を応用し、実際に工業用に使用されている、高精度画像処理システム(マシンビジョンシステム)の位置認識機能を利用して、CCDカメラにより呼吸移動に伴う胸腹壁の変位を正確にとらえ、その情報を被験者にフィードバックすることにより、breath holding techniqueにおける呼吸停止位置精度を高められることを発表した。しかし、画像処理システムは工業用に開発されたもので、操作が煩雑であり、習熟に時間がかかることが欠点であった。そこで、breath holding techniqueによる呼吸同期放射線治療専用のソフトウェアおよびシステムを開発した。システムは36万画素CCDカメラ、情報処理用PC、操作者用モニタ、患者用モニタより成るマシンビジョンシステムである。ソフトウェアは、CCDカメラにて患者腹壁上のマーカーを認識、モニタ上にその動きを波形として表示する。患者用モニタ上には息止めのための目標領域が設定され、被験者はこの領域内で呼吸を停止するように指示される。また、呼吸停止の時間は、息止め時間の目安としてヘッドマウントディスプレイ等のモニタに表示される。本システムの開発により、マーカーの位置認識および目標領域設定のプロセスが簡素化された。また、本システムの位置認識精度をハイトゲージを用いて検証した。カメラ中心より±30mmの範囲においてほぼ±0.5mm以内であった。また、画像処理および表示にかかる時間は約0.1秒であった。本システムは使用も簡便で、十分臨床応用可能と考えられた。我々は,前年度,レーザーポインタを使用した呼吸補助システムにより,呼吸時の胸腹壁の位置を被験者自身にフィードバックすることにより,息止めの位置精度を高めることを明らかとした(Nakamura, et. al.IJROBP68,2007)。その研究結果を応用し,実際に工業用に使用されている高精度画像処理システム(マシンビジョンシステム)の位置認識機能を利用して,CCDカメラにより呼吸移動に伴う胸腹壁の変位を正確にとらえ,その情報をヘッドマウントディスプレイ(HMD)にてフィードバックするシステムを開発した。5名のボランティアでの実験により,このシステムはbreathreath holding techniqueにおける呼吸停止位置精度を高められることを明らかにした(Yoshitake,Nakamura, et. al.Radiat Med 26,2008)。しかし,このシステムは工業用に開発されたマシンビジョンシステムを用いるため,操作が煩雑であった。そこで,我々は,breath holding techniqueによる呼吸同期放射線治療専用のソフトウェアおよびシステムを開発した。システムは36万画素CCDカメラ,情報処理用PC,操作者モニタ,患者用モニタより成るマシンビジョンシステムである。ソフトウェアは,CCDカメラにて患者腹壁上のマーカーを認識,モニタ上にその動きを波形として表示する。患者用モニタ上に息止めのための目標領域が設定され,被験者はこの領域内で呼吸を停止するように指示される。また,呼吸停止の時間は,息止め時間の目安としてヘッドマウントディスプレイ等のモニタに表示される。また,本システムの位置認識精度は,ほぼ±0.5mm以内であった。現在,本システムを実際の体幹部定位放射線治療をおこなう患者の息止め照射に利用し,その精度,有用性を検証中である。前年度に引き続き、visual feedback法による呼吸同期放射線治療専用のソフトウェアおよびシステムを開発した。また、呼吸停止の時間は、息止め時間の目安として外部液晶モニタやヘッドマウントディスプレイ等に表示される。本年度は、この呼吸同期システムを臨床応用できるようにさらに改良を行った。主な改良点は、ソフトウェアの操作性を改良したこと、バッテリを取り付け、コンセントを外しても1-2時間程度は動作するようにしたこと、CCDカメラの保管台を取り付け、片手で移動できるようにしたことなどである。マシンビジョンシステムを使った呼吸同期法の特徴として、Visual feedback法により、呼吸停止位置精度を高めることができる、CCDカメラを使うため、治療室を暗くする必要がない、CCDカメラの位置認識はきわめて精度が高く、胸腹壁の位置を正確に認識できる、カメラを治療寝台上に取り付けるため、治療寝台を動かしても、同じように胸腹壁の位置を認識できる、などがあげられる。本研究により開発した呼吸同期照射法は非常に有効な方法のひとつであり、体幹部定位放射線治療において、有害事象の低減、治療成績の向上が期待でき、実臨床において大きなインパクトを持つと考えられた。
北米東部と東アジアの分断植物相をめぐる共生・寄生系の進化学的解析

植物をめぐる共存系が、植物の進化に伴いどのように進化したのかを知る目的で、北米東部と東アジアに隔離分布している植物種を餌として利用している昆虫群の系統関係を明らかにし、共存形として分化したのか、新たに共存系が成立したのか考察を行った。チョウ目では、多少の例外はあるものの、東アジアと北米で近縁植物種を餌としているものは、互いに姉妹種となった。それに対し、コウチュウ目では近縁な近縁植物種を餌にしているものが、系統的に離れたものであった。生物間相互作用ネットワークは、生物種の進化動態に大きな影響を与える。生物間相互作用を解析した研究は多いが、生物の種分化を伴う数万年から数千万年におよぶ長い進化過程の中で共存系がどのように各構成要素および共存系自体の進化に影響を与えてきたかはわかっていない。そこで本研究では、北米東部と東アジアの温帯地域に隔離分布する植物群集における共存系に着目し、今日見られる共存系の成り立ちを進化的スケールで捉え、陸上生態系の中でも特に重要な植物とその者をめぐる共存系を対象として、各生物種および共存系自体が植物の進化に伴いどのように進化したのかを解析した。22年度は北米のアパラチア山脈とカナダの東部、および日本でのフィールド調査と解析資料の採集を行った。北米の調査地ではアメリカブナとカエデ属の植物を中心に、各種を餌にしているチョウ目、コウチュウ目、カメムシ目の昆虫の食餌部位、頻度を調査した。また、各種について数個体を標本およびDNA解析用アルコール液浸標本用に採集した。また、各植物種は葉をシリカゲルにて乾燥してDNAサンプル作成した。日本国内でも関東地方および東北地方にてブナ、イヌブナとカエデ属植物について同様の調査および採集を行った。現時点では、北米、日本での採集種数はそれぞれ、チョウ目15種、10種、コウチュウ目7種、5種、カメムシ目3種、3種である。昆虫類に関してはミトコンドリアCOI遺伝子を、植物に関しては葉緑体rbcL,matK遺伝子と核ITSの塩基配列を行った。それぞれの昆虫群に関して予備的に系統樹を作成したが、種数が少ないため、まだ十分な結論を出せるには至っていない。23年度以降にさらに調査を進めて種数を増やす必要がある。そこで本研究では、北米東部と東アジアの温帯地域に隔離分布する植物群集における共存系に着目し、今日見られる共存系の成り立ちを進化的スケールで捉え、陸上生態系の中でも特に重要な植物とその者をめぐる共存系を対象として、各生物種および共存系自体が植物の進化に伴いどのように進化したのかを解析を行った。23年度は、アジア地域のフィールド調査と解析資料の採集を行った。22年度に続き、ブナ科とカエデ属の植物を中心に、各種を餌にしているチョウ目、コウチュウ目、カメムシ目の昆虫の食餌部位、頻度を調査した。また、米国・スミソニアン博物館にて、北米産の昆虫の種同定のため、標本との比較検討と海外協力研究者との解析結果についての議論を行った。22年度および23年度に採取したチョウ目、コウチュウ目、カメムシ目の昆虫について、COIによる系統解析を行い、暫定的な系統樹を得た。その結果、近縁植物種を餌としているものの中に、東アジアと北米で近縁な昆虫種がいる群と、そうではない群の両者がみつかった。24年度には、それぞれの群でどのような特徴があるかの解析および、各群で昆虫種数を増やしての解析を行う予定である。24年度は、アメリカ合衆国のアパラチア地域におけるフィールド調査と解析資料の採集を行った。ブナ科とカエデ属の植物を中心に、各種を餌にしているチョウ目、コウチュウ目、カメムシ目の昆虫の食餌部位、頻度を調査した。

また、米国・スミソニアン博物館にて、北米産の昆虫の種同定のため、標本との比較検討と海外協力研究者との解析結果についての議論を行った。これまでに採取したチョウ目、コウチュウ目、カメムシ目の昆虫について、COIによる系統解析を行い、系統樹を得た。その結果、チョウ目とカメムシ目では、多少の例外はあるものの、東アジアと北米で近縁植物種を餌としているものは、互いに近縁種であることが明らかになった。それに対し、コウチュウ目では近縁な近縁植物種を餌にしているものが、系統的に離れたものである場合が多いことがわかった。この両パターンが生じている理由はまだ明らかではないが、この昆虫の目レベルでの際は南半球のナンキョクブナ属におけるチョウ目、コウチュウ目の植食性でも観察されているものである。両大陸でのサンプリング、およびDNA塩基配列決定は順調に進んでいる。24年度が最終年度であるため、記入しない。両大陸で近縁な昆虫種が食害している群と、そうではない群で、どのような特徴があるかの解析および、各群で昆虫種数を増やしての解析を行う必要がある。
喘息気道リモデリングに関与する骨髄由来線維芽細胞の解析と介入的機能調節

骨髄キメラマウスの喘息モデルの解析方法:中間報告で述べた骨髄キメラマウスを用いて気管支喘息のマウスモデルを作成した。感作2週間後卵白アルブミン(OVA)溶液の吸入暴露を一日おきに反復して行い、一ヶ月目まで経時的に末梢血、気管支肺胞洗浄液、肺組織を採取した。加えて、骨髄細胞から組織への移行を促進させるため、OVA吸入時に連日G-CSFを腹腔投与し、G-CSF非投与群と比較した。肺組織変化の評価:肺組織をホルマリン固定後パラフィン包埋し、組織標本を作製し、HE染色後、肺胞組織への細胞浸潤の程度を半定量的な組織スコアとして評価する。更に、凍結標本について蛍光顕微鏡下で上皮および気道粘膜下のGFP陽性細胞を検出し、更に抗GFP抗体によってもGFP陽性細胞を確認した。結果:OVA暴露後1週間の骨髄キメラマウスの肺組織には、好酸球を主体としてリンパ球、単球の気道周囲、肺胞腔への浸潤が著明であった。また2週間-1ヶ月目の組織において、上記炎症細胞の浸潤に加え気道上皮基底膜の肥厚やコラーゲンの沈着が著明となった。蛍光顕微鏡下でGFP陽性細胞を確認し、多くは好酸球などの炎症細胞であったが、一部の細胞は気道上皮下に紡錘状の形態を呈し、線維芽細胞と考えられるGFP陽性細胞が確認され、抗GFP抗体によっても確認した。また、G-CSF投与群では肺内全体のGFP陽性細胞数が増加しており、G-CSFが骨髄細胞の肺への移行を促進したと考えられる。更にEM染色でみた気管支周囲の線維化がG-CSF非投与群と比較して減少していた。結論:気管支喘息におけるアレルギー性炎症に伴う気道粘膜化の線維化に骨髄由来線維芽細胞が関与している可能性が示唆された。1.骨髄キメラマウスの作製放射線照射後のC57BL/6に対してGFPトランスジェニックマウスの4x10^6個の骨髄細胞を静注して、GFP陽性細胞に置き換わったことを確認した。2.喘息マウスモデルの作成作製した骨髄キメラマウスを用いて気管支喘息のマウスモデルを作成した。3.骨髄キメラマウスの喘息モデルの解析肺組織変化の評価:肺組織をホルマリン固定後パラフィン包埋し、組織標本を作製し、HE染色後、肺胞組織への細胞浸潤の程度を半定量的な組織スコアとして評価する。

感作2週間後卵白アルブミン(OVA)溶液の吸入暴露を一日おきに反復して行い、一ヶ月目まで経時的に末梢血、気管支肺胞洗浄液、肺組織を採取した。加えて、骨髄細胞から組織への移行を促進させるため、OVA吸入時に連日G-CSFを腹腔投与し、G-CSF非投与群と比較した。肺組織変化の評価:肺組織をホルマリン固定後パラフィン包埋し、組織標本を作製し、HE染色後、肺胞組織への細胞浸潤の程度を半定量的な組織スコアとして評価する。更に、凍結標本について蛍光顕微鏡下で上皮および気道粘膜下のGFP陽性細胞を検出し、更に抗GFP抗体によってもGFP陽性細胞を確認した。結果:OVA暴露後1週間の骨髄キメラマウスの肺組織には、好酸球を主体としてリンパ球、単球の気道周囲、肺胞腔への浸潤が著明であった。また2週間-1ヶ月目の組織において、上記炎症細胞の浸潤に加え気道上皮基底膜の肥厚やコラーゲンの沈着が著明となった。蛍光顕微鏡下でGFP陽性細胞を確認し、多くは好酸球などの炎症細胞であったが、一部の細胞は気道上皮下に紡錘状の形態を呈し、線維芽細胞と考えられるGFP陽性細胞が確認され、抗GFP抗体によっても確認した。また、G-CSF投与群では肺内全体のGFP陽性細胞数が増加しており、G-CSFが骨髄細胞の肺への移行を促進したと考えられる。更にEM染色でみた気管支周囲の線維化がG-CSF非投与群と比較して減少していた。結論:気管支喘息におけるアレルギー性炎症に伴う気道粘膜化の線維化に骨髄由来線維芽細胞が関与している可能性が示唆された。
高オクタン価代替ガソリン基材合成プロセスへの浸透気化分離法の応用

高オクタン価代替ガソリン基材としてのメチル-t-ブチルエーテル(MTBE),エチル-t-ブチルエーテル(ETBE)の合成化学反応プロセスへの浸透気化分離の適用を目的に、有機高分子膜素材および無機膜素材の透過物性を検討した.有機高分子膜素材としては耐熱性・耐溶剤性に優れたポリイミド膜を、無機膜素材としては分子ふるい能を有するゼオライトの膜化を検討し、それぞれのアルコール/有機溶媒系での浸透気化分離性能を評価した結果、Y型ゼオライト膜が優れた分離性能を有することが明らかとなった。次いでY型ゼオライト膜の最適製膜条件について検討し、水ガラスとアルミン酸ナトリウムおよび水酸化ナトリウムの水溶液を室温で混合し、生じたアルミノシリケートゲルを1日エージング後、水熱合成用の反応管に仕込み、この中に表面に種結晶を仕込んだ管状多孔質アルミナ支持体を浸漬して、100°Cで5時間、水熱合成後、水浸漬して製膜したY型ゼオライト膜が、メタノール/MTBE、エタノール/ETBE系の浸透気化分離でこれまで報告されている膜に比べて高透過高選択性であり、かつ分離性能は長期間安定であった。膜の製膜機構を検討するため、電子顕微鏡及びX線回折により膜表面の状態を詳細に検討した結果、膜形成は支持体表面でのゲルの形成と結晶核の発生および結晶成長からなること、さらにメタノール/MTBE、エタノール/ETBE系で透過物性の供給液濃度依存性および温度依存性を調べた結果、Y型ゼオライト膜の高アルコール選択性は膜へのアルコールの選択吸着によることを明らかにした。次いでY型ゼオライト膜の最適製膜条件について検討し、水ガラスとアルミン酸ナトリウムおよび水酸化ナトリウムの水溶液をSiO_2/Al_2O_3=10,Na_2O/SiO_2=1.4,H_2O/Na_2O=60のモル比で室温で混合し、生じたアルミノシリケートゲルを1日エージング後、水熱合成用の反応管に仕込み、この中に表面に種結晶を仕込んだ管状多孔質アルミナ支持体を浸漬して、100°Cで5時間、水熱合成したY型ゼオライト膜が、メタノール/MTBE、エタノール/ETBE系の浸透気化分離で最も優れたアルコール選択性を有することが明らかとなった。このY型ゼオライト膜の性能は、メタノール/MTBE系60°Cで透過流束1.7kg/(m^2h)、分離係数5300とこれまで報告されている膜に比べて高透過高選択性であり、かつ分離性能は長期間安定であった。さらに膜の透過機構を検討するため、メタノール/MTBE、エタノール/ETBE系で透過物性の供給液濃度依存性および温度依存性を調べた結果、Y型ゼオライト膜の高アルコール選択性は膜へのアルコールの選択吸着によることが示唆された。高オクタン価代替ガソリン基材としてのメチル-t-ブチルエーテル(MTBE),エチル-t-ブチルエーテル(ETBE)の合成化学反応プロセスへの浸透気化分離の適用を目的に、前年度検肘した有機高分子膜および無機膜のなかで、特に優れた透過選択性を示したY型ゼオライト膜についてさらに詳細に製膜条件及び透過物性を検討した。先ずY型ゼオライト膜の最適製膜条件について再検討し、水ガラスとアルミン酸ナトリウムおよび水酸化ナトリウムの水溶液をSiO_〓/Al_〓O_〓=10,Na_〓O/Si0_〓

l.4,H_2O/Na_2O=57のモル比で室温で混合し、生じたアルミノシリケートゲルを1日エージング後、水熱合成用の反応管に仕込み、この中に表面に種結晶を仕込んだ管状多孔質アルミナ支持体を浸漬して、100°Cで5時間、水熱合成後、水浸漬して製膜したY型ゼオライト膜が、前年度に報告した膜に比べてメタノール/MTBE、エタノール/ETBE系の浸透気化分離で高いアルコール透過性を有することを明らかとした。この時生成するY型ゼオライトのSi/A1比は1.9であった。さらに、膜の製膜機構を検討するため、電子顕微鏡及びX線回折により膜表面の状態を詳細に検討した結果、膜形成は支持体表面でのゲルの形成と結晶核の発生および結晶成長からなることを明らかにした。一方、同じフォジャサイト属のX型(Si/A1比は1.3)についても製膜と透過物性を検討した結果、分離性能はより疎水性のY型ゼオライトが優れていることが明らかになった。以上、Y型ゼオライト膜が既報の膜に比べてメタノール/MTBEおよびエタノール/ETBE系の浸透気化分離に最適の膜性能を有することが明らかとなった。
人為起源粒子（PM1）の高時間分解測定と北東アジアの実態解明

成果の具体的内容:2017年度のPM1及びPM2.5のPM714による1時間値データについて精査した。PM714により得られたPM2.5-1濃度は、補正がかけられていない値であることから、PM1と同様の計算式を用いて補正し、PM1との合計値を得た。当センターで実施している標準法による24時間捕集から得たPM2.5濃度とを比較したところ、両者は概ね整合していた。PM2.5濃度が粗大粒子の影響を強く受けた期間は、PM2.5-1>10ugは5日、PM1/PM2.5<0.5は51日あり、計52日がいずれかに該当していた。また、7月24日から8月21日に富士山頂で1日単位のPM1採取を行った。採取はPM2.5シーケンシャルサンプラの分級部をPM1サイクロンに交換して行い、試料の水溶性無機イオンと無機元素成分の分析を行った。富士山頂のPM1濃度は1.9±1.7ug/m3であった。PM1に含まれる無機元素の濃縮係数(EFs)を、2017年に許可を得て採取した富士山表土の値を基準として求めた結果、人為起源と考えられる元素(Cr, Ni, Cu, Zn, Ga, As, Rb, Cd, Pbなど)はPM2.5のEFsと比較して2100倍高く、自然起源と考えられる元素(Mg, Ca, Fe, Sr, Tiなど)は理論値である1に近い値となった。PM1濃度の上昇した期間の気塊の起源を後方流跡線により求めたところ、中国内陸部からの飛来を示唆するものであった。また同時期に、上海、韓国での同時採取も実施した。なお、夏季には、大気境界層上部の標高1000m前後の大気汚染を調べる目的で、ドローンを用いたO3とPMの観測も行った。適したPM1計が見つからなかったことから、PM2.5で代用した。その結果、PM2.5には大きな差が見られなかったが、上空にO3の高濃度気塊の存在が分かった。富士山頂でのPM1観測では、既設のPM2.5サンプラーの分級器を交換することでスムーズにPM1採取を行うことができた。一方、PM714のテープフィルター分析は、分類と前処理に多くの時間がかかり、現在進行中である。PM714のテープフィルターの分析を中心に進める。また、夏季の富士山頂PM1観測では12時間採取を検討する。大気境界層上部のPM計測については、PM1に適した計器を探索し、夜間を通した観測を検討する。成果の具体的内容:PM2.5の発生源には、人為起源粒子のほか、粒径が2.5&micro;mより大きい、粗大粒子の一部が含まれる。これらの多くは土壌や海塩粒子などの自然起源粒子であるため、PM1を計測した場合には、人為起源に特化した評価が可能となる。我々は2005年から週単位のPM1通年測定を行い、年間のPM1/PM2.5は約8割程度であることが分かったが、週単位では0.31.0と大きな差が見られた。そこで本研究では、PM1の1時間測定を行い、人為起源粒子の濃度変動を明らかにすることを目的とする。2017年度は環境科学国際センターにて、PM1の1時間値の計測が可能なPM714を稼働させ、PM2.5と併せて濃度変動を詳しく調べた。その結果PM1の年間平均値は7.7ug/m3、PM2.5-1は3.7ug/m3であった。PM1濃度は11月、12月に上昇し、PM2.5-1は4月、5月にやや上昇し、上昇する月が異なっていた。PM1/PM2.5は通常0.70.8前後で推移したが、4月8日夜4月9日昼にPM1は上昇せずに、PM2.5-1のみが38ug/m3まで上昇する現象が見られた。この時のPM1/PM2.5は0.1前後まで低下した。これはPM2.5が自然起源粒子によって上昇した事例であった。また、PM1/PM2.5は日中に上昇し、夜間に低下する日内変動が見られることが分かった。(u:マイクロ)意義・重要性:PM1とPM2.5の1時間値並行計測は国内でもほとんど例が無い。本成果は、2.5の濃度上昇が自然起源粒子のみによっても起こることを示す例である。今後人為発生源の対策が進むと、人為起源粒子に対して、自然起源粒子による濃度上昇が相対的に増える可能性があるがこれらの対策は難しい。また、夜間にPM1/PM2.5が低下する現象は、PM2.5の生成メカニズムに起因する可能性がある。PM1の1時間値計測が可能なPM714を先行して設置していたことから、年度当初より測定値が得られた。また、本機の計測値は湿度等により補正を行う必要があるが、並行測定しているPM2.5についてはデフォルトでは未補正値が出力されてしまう。メーカーにより提供された補正式により補正することができ、妥当な測定値が得られたことが順調な研究の進行に繋がった。

当センターで実施している標準法による24時間捕集から得たPM2.5濃度とを比較したところ、両者は概ね整合していた。PM2.5濃度が粗大粒子の影響を強く受けた期間は、PM2.5-1>10ugは5日、PM1/PM2.5<0.5は51日あり、計52日がいずれかに該当していた。また、7月24日から8月21日に富士山頂で1日単位のPM1採取を行った。採取はPM2.5シーケンシャルサンプラの分級部をPM1サイクロンに交換して行い、試料の水溶性無機イオンと無機元素成分の分析を行った。富士山頂のPM1濃度は1.9±1.7ug/m3であった。PM1に含まれる無機元素の濃縮係数(EFs)を、2017年に許可を得て採取した富士山表土の値を基準として求めた結果、人為起源と考えられる元素(Cr, Ni, Cu, Zn, Ga, As, Rb, Cd, Pbなど)はPM2.5のEFsと比較して2100倍高く、自然起源と考えられる元素(Mg, Ca, Fe, Sr, Tiなど)は理論値である1に近い値となった。PM1濃度の上昇した期間の気塊の起源を後方流跡線により求めたところ、中国内陸部からの飛来を示唆するものであった。また同時期に、上海、韓国での同時採取も実施した。なお、夏季には、大気境界層上部の標高1000m前後の大気汚染を調べる目的で、ドローンを用いたO3とPMの観測も行った。適したPM1計が見つからなかったことから、PM2.5で代用した。その結果、PM2.5には大きな差が見られなかったが、上空にO3の高濃度気塊の存在が分かった。富士山頂でのPM1観測では、既設のPM2.5サンプラーの分級器を交換することでスムーズにPM1採取を行うことができた。一方、PM714のテープフィルター分析は、分類と前処理に多くの時間がかかり、現在進行中である。PM1/PM2.5の比率が大きく変化した事例を季節別に抽出し、その特性を解明する。同時に日内変動についても季節別に整理するとともに、典型的な事例を抽出して、捕集されたスポットの化学分析を試みる。今年度は富士山頂におけるPM1計測を試みる、同時に中国、韓国等でもPM1の実態を明らかにする。PM714のテープフィルターの分析を中心に進める。また、夏季の富士山頂PM1観測では12時間採取を検討する。大気境界層上部のPM計測については、PM1に適した計器を探索し、夜間を通した観測を検討する。PM1分級用サイクロンを2台購入した際、当初の見積金額より安く購入することができたため。予定していた学会への出張の取りやめによるものです。
副腎白質ジストロフィー：ドナー由来ミクログリア様細胞の神経変性抑制メカニズム

本研究は、副腎白質ジストロフィーの骨髄移植による神経変性抑制メカニズムの解明を目的とした。本疾患は炎症性脱髄反応を特徴とする神経変性疾患で、極長鎖脂肪酸の蓄積がその原因と考えられている。本疾患では発病初期の骨髄移植が脱ミエリン化を抑制することが明らかになっており、脳内に生着したドナー由来骨髄マクロファージが神経変性抑制に関わっていると考えられる。本研究ではGFP発現野生型マウスの骨髄細胞をX線照射したabcd1欠損マウスに移植し、レシピエントマウス大脳の生化学的解析及び遺伝子発現解析を行った。その結果、レシピエントマウス大脳ではドナー由来GFP陽性細胞がIba1陽性のマクロファージ様細胞として生着していることを示した。しかし骨髄移植による大脳での極長鎖脂肪酸含量の低下は認められなかった。これらの結果から、骨髄移植ではドナー由来マクロファージ様細胞が脳内のミクログリアやアストロサイトと相互作用し、炎症反応を抑制している可能性が推察された。一方、炎症性脱髄の発症におけるミクログリアの役割を調べるため、abcd1欠損マウスから調製した初代培養ミクログリアを用いて自然免疫応答について解析した。野生型及びabcd1欠損ミクログリアともにLPS処理ではIL-1βの分泌は認められず、LPSとnigericin処理でIL-1βの分泌が確認された。しかし、分泌量に有意な差は認められなかった。一方、abcd1欠損ミクログリアではnigericin処理のみでもIL-1βの分泌が認められたことから、abcd1欠損ミクログリアではNLRP3インフラマソーム活性化が亢進している可能性が示唆された。従って、本疾患はミクログリアの自然免疫応答の感受性の亢進が発病の原因となっており、abcd1欠損ミクログリアが様々な刺激に対して過剰に応答することで、炎症反応が引き起こされ、結果として発病に至ると考えられた。副腎白質ジストロフィー(ALD)はペルオキシソーム膜ABCタンパク質ABCD1の機能欠損を原因とする難治性の神経変性疾患で、発病初期の骨髄移植が神経変性に対して抑制効果を示すことが知られている。しかし、その機序は解明されていない。本研究では、骨髄移植による抑制機構を解明する目的で、abcd1欠損マウスに野生型もしくはabcd1欠損のGFP発現骨髄細胞を移植し、移植マウス各組織の組織化学染色、及び遺伝子発現解析を行った。移植したマウスでは、末梢血のドナー由来細胞の割合が移植6ヶ月後においても90%以上を維持しており、移植がうまくできていることを確認した。脳や脊髄ではドナー由来GFP陽性細胞の分布が認められ、そのほとんどはIba1陽性を示しており、骨髄細胞が脳内に侵入後、マクロファージ様細胞に分化し生着していることが確認された。野生型骨髄細胞(wild-GFP)とabcd1欠損骨髄細胞(KO-GFP)を移植したレシシピエントマウス間でGFP陽性細胞の分布や数、形態に違いは認められなかった。abcd1欠損マウス脳では極長鎖脂肪酸含量の増加が認められるが、骨髄移植による低下は認められなかった。この結果より、骨髄移植による神経変性の抑制は極長鎖脂肪酸含量の低下によるものではないことを明らかにした。一方、遺伝子発現解析ではCh25h遺伝子の発現が野生型マウスに比べてabcd1欠損マウスで増加しており、野生型骨髄細胞を移植したマウスで有意に減少していた。Ch25h遺伝子の発現は炎症反応に関わっていることから、骨髄移植では脳内に生着したマクロファージ様細胞が炎症反応を抑制していることが考えられた。この結果は、発症機構、及び骨髄移植による発症抑制機構を解明する上で重要な知見である。おおむね順調に進展している。計画では移植したマウス大脳のドナー由来ミクログリア様細胞を単離してその性状を解析する予定であったが、セルソーティングにより調製した細胞数が極めて少なかったことから、DNAマイクロアレイ等による解析はできなかった。骨髄移植による神経変性に関わる生化学的指標については、当初考えていたミトコンドリアの機能障害、オートファジー機能低下、リソソームへの遊離コレステロールの蓄積に着目していたが、有意な違いは認められなかった。現在、移植マウス大脳のDNAマイクロアレイによる遺伝子発現解析を行い、骨髄移植により変動する遺伝子を同定することにより、生化学的指標の探索を行っている。本研究計画は、炎症性脱髄反応を特徴とする神経変性疾患である副腎白質ジストロフィーの骨髄移植による神経変性抑制メカニズムの解明を目的としてた。本疾患は発病初期の骨髄移植が脱ミエリン化を抑制することが明らかになっていることから、骨髄移植により脳に生着したドナー由来マクロファージ様細胞が神経変性抑制に関わっていると推察される。実験ではGFP発現野生型マウス及びabcd1欠損マウスから調製した骨髄細胞をX線照射したabcd1欠損マウスに移植し、レシピエントマウス大脳の生化学的解析及び遺伝子発現解析を行った。昨年度までに脳内に生着したドナー由来マクロファージ様細胞が極長鎖脂肪酸代謝異常の改善とは異なる機構により神経変性を抑制していることを示した。一方で骨髄移植によりCh25h遺伝子の減少が認められたことから、25-hydroxycholesterolの産生量の低下が神経変性抑制に関わっている可能性が示唆された。またabcd1欠損マウス由来グリア細胞やALD患者線維芽細胞ではCh25h遺伝子発現が増加していた。これらの結果から、骨髄移植ではドナー由来マクロファージ様細胞が脳内のグリア細胞と相互作用し、中枢神経系細胞の25-hydroxycholesterol

代謝異常を改善している可能性が推察された。本研究結果は、ミクログリアもしくはアストロサイトの25-hydroxycholesterol代謝異常が発病と関連しているという可能性を示唆しており、本疾患の発病機構の解明に繋がることが期待される。本疾患は極長鎖脂肪酸の異常蓄積を生化学的特徴とするが、予想通り野生型マウスの骨髄細胞を移植したレシピエントマウス大脳の極長鎖脂肪酸含量の減少は認められなかった。そこで当初の計画通りドナー由来マクロファージ様細胞を、レシピエントマウス脳のGFPの蛍光からFACSでソーティングを行い、RNA抽出をして遺伝子発現の解析を試みたが、遺伝子発現を解析するのが困難であった。そこで、DNAチップによる網羅的遺伝子発現解析の結果から、レシピエントマウス大脳において骨髄移植により変動する候補遺伝子についてreal-time PCRによる解析を行っている。一方、骨髄細由来マクロファージ、及び脳由来アストロサイトやミクログリアの初代培養系を用い、in vitroでのコレステロール代謝や炎症性サイトカイン産生について解析を行っている。本研究は、副腎白質ジストロフィーの骨髄移植による神経変性抑制メカニズムの解明を目的とした。本疾患は炎症性脱髄反応を特徴とする神経変性疾患で、極長鎖脂肪酸の蓄積がその原因と考えられている。本疾患では発病初期の骨髄移植が脱ミエリン化を抑制することが明らかになっており、脳内に生着したドナー由来骨髄マクロファージが神経変性抑制に関わっていると考えられる。本研究ではGFP発現野生型マウスの骨髄細胞をX線照射したabcd1欠損マウスに移植し、レシピエントマウス大脳の生化学的解析及び遺伝子発現解析を行った。その結果、レシピエントマウス大脳ではドナー由来GFP陽性細胞がIba1陽性のマクロファージ様細胞として生着していることを示した。しかし骨髄移植による大脳での極長鎖脂肪酸含量の低下は認められなかった。これらの結果から、骨髄移植ではドナー由来マクロファージ様細胞が脳内のミクログリアやアストロサイトと相互作用し、炎症反応を抑制している可能性が推察された。一方、炎症性脱髄の発症におけるミクログリアの役割を調べるため、abcd1欠損マウスから調製した初代培養ミクログリアを用いて自然免疫応答について解析した。野生型及びabcd1欠損ミクログリアともにLPS処理ではIL-1βの分泌は認められず、LPSとnigericin処理でIL-1βの分泌が確認された。しかし、分泌量に有意な差は認められなかった。一方、abcd1欠損ミクログリアではnigericin処理のみでもIL-1βの分泌が認められたことから、abcd1欠損ミクログリアではNLRP3インフラマソーム活性化が亢進している可能性が示唆された。従って、本疾患はミクログリアの自然免疫応答の感受性の亢進が発病の原因となっており、abcd1欠損ミクログリアが様々な刺激に対して過剰に応答することで、炎症反応が引き起こされ、結果として発病に至ると考えられた。骨髄移植により、中枢神経系におけるCh25h遺伝子の発現抑制が確認された。
フロイトの「死の欲動」概念を受容し発展させるための思想的枠組をつくる試み

本研究の主要な目的は、フロイトの「死の欲動」概念の思想的意義を明確化し、その今日的な射程を見きわめることであり、具体的な取り組みとして、1/データ・ベース「フロイトの死の欲動論」の作製と分析、2/フロイトの「死の欲動」概念と直接・間接の影響関係にある哲学的・文学的思想を、フロイト以前、フロイトと同時代、フロイト以後の三つの観点から探求する、および、3/人間の倫理性が死の欲動に由来するというフロイトのテーゼを支えている論理を洗い出し、その射程を見きわめる、という三つの個別のアプローチが設定されている。昨年度、フロイトのテクストの電子化により1の、作業がほぼ終了したのを受けて、今年度は、主に2および3のテーマが中心的な研究課題となった。2については、とくにフロイトとドイツ・ロマン主義との関係に光が当てられた。この関係は、連続と断絶という二重性において捉えられねばならず、ことに「死の欲動」概念をめぐってはこの二重性のどちらの極を研究者が重視するかによって、当の概念そのものの解釈に変動が生じうることが明らかになった。それどころか、この二重性はフロイトの理論構築のなかに潜在的な亀裂を内在させており、それによってたとえば精神分析(治療)の終結=目的といったきわめて臨床的な主題においてさえ、「死の欲動」から出発して完全に相反する二つの帰結が導き出されることが分かった。3については、昨年度開始された作業の延長線上に立ち、フロイトの倫理についてJ.デリダが行った指摘をいかに発展させるべきかが検討された。この作業は目下進行中であり、今後も一、二年の継続が見込まれる。なお、本研究の成果をもとに現在『精神分析研究』誌(日本精神分析学会)に投稿中の論文「死の欲動についてフロイトはなにを語ったか」においては、今日社会問題化しつつある「抑鬱」「暴力」「依存」という三つの病理現象を「タナトス問題系」として一貫したロジックのもとに解明すべきであることが提唱されている。本研究の主要な目的は、フロイトの「死の欲動」概念の思想的意義を明確化し、その今日的な射程を見きわめることであり、その具体的な取り組みとして今年度当初に計画されたのは、1)データ・ベース「フロイトの死の欲動論」の作成と分析、2)フロイトの「死の欲動」と直接・間接の影響関係にある哲学的概念を、フロイト以前、フロイトの同時代、フロイト以後の三つの観点から探求すること、および、3)人間の倫理性が死の欲動に由来するというフロイトのテーゼを支えている論理を洗い出し、その射程を見きわめること、という三つのアプローチである。このうち1)については、ほぼ完全なデータ・ベースが構築され、必要な情報がフロイトのテクストから自由に取り出せるようになった。これにより、1920年に「死の欲動」概念を醸成させるに至る複数の論理が、フロイトの思想の内部で初期の段階からどのように胎動していたかを辿ることができた。2)については、とくにフロイト以後の精神分析における「死の欲動」概念の受容について調査が進められた。フロイト理論を戦後もっとも広範に、かつ多角的に吸収・展開することができたのはフランスであるが、昨年9月のパリ滞在において多くの資料に目を通した結果、フランスにおける今日の「死の欲動」理解のベースになっているのが1973年のJ.ラプランシュ著『精神分析における生と死』であることが判明した。この著作においては、フロイトの「死の欲動」概念に内在する経済論的アポリアが明確に指摘されており、その指摘がそれ以後の精神分析内外における同概念の理論的受容に多くの影響を与えていることが明らかになった。3)については、その基礎的な調査は完了し、そこから得られたデータを現代的な文脈と照合させる作業が現在進行中である。以上の研究の成果は、本年1月に東京で開かれた「精神病理コロック2003-2004」において発表され、多くの反響を得た。

3については、昨年度開始された作業の延長線上に立ち、フロイトの倫理についてJ.デリダが行った指摘をいかに発展させるべきかが検討された。この作業は目下進行中であり、今後も一、二年の継続が見込まれる。なお、本研究の成果をもとに現在『精神分析研究』誌(日本精神分析学会)に投稿中の論文「死の欲動についてフロイトはなにを語ったか」においては、今日社会問題化しつつある「抑鬱」「暴力」「依存」という三つの病理現象を「タナトス問題系」として一貫したロジックのもとに解明すべきであることが提唱されている。
日本古文書ユニオンカタログの構築

1600年以前に日本で作成された古文書について、原本はもとより影写本・謄写本・写真帳・目録・翻刻などあらゆる媒体に依る情報を網羅し、グルーピングすることをコンセプトとする「日本古文書ユニオンカタログ」システムを構築し、213, 624件のデータを公開した。1、「日本古文書ユニオンカタログ」システムの開発を株式会社シールズに依頼し、要件定義書・基本設計書・詳細設計書が納品された。(1)入力校正機能、(2)公開検索機能、(3)グルーピング機能(入力校正)、(4)グルーピング表示機能(公開検索)、(5)XML出力機能、(6)外部連携、(7)内部連携、(8)統計機能について、機能詳細と項目テーブル、画面項目が検討されている。これにもとづき次年度プログラミングが行われることになる。2、ユニオンカタログに搭載するデータとしては、史料編纂所の架蔵する原本・影写本・謄写本および刊本を予定しているが、そのうち本年度は特に刊本と写真帳について、登録対象となるものの調査を行った。特に刊本については、編年文書集として機軸となる『南北朝遺文』九州編、『戦国遺文』後北条氏編・武田氏編の目録データを作成し、写真帳として大規模な点数を占める醍醐寺文書についてやはり目録データを作成した。また西大寺文書マイクロフィルムよりデジタル画像データを作成した。3、香春神社、大阪城天守閣、西大寺等において古文書の調査をおこなった。4、熊本大学稲葉継陽助教授を招聘し、同大学が所蔵する阿蘇文書および永青文庫所蔵文書のデータベース化の計画について議論した。5、ハーバード大学およびイェール大学の所蔵する古文書についてユニオンカタログに目録データを搭載し、それからリンクしてそれぞれの画像データを公開することについて、両大学との折衝を開始した。ハーバード大学ミカエル・アドルフソン准教授を招聘し、この計画について議論した。1、「日本古文書ユニオンカタログ」システムの開発を株式会社シールズに依頼した。2005年度の要件定義・基本設計・詳細設計にもとづき、(1)入力校正機能、(2)公開検索機能、(3)グルーピング機能(入力校正)、(4)グルーピング表示機能(公開検索)、(5)XML出力機能、(6)外部連携、(7)内部連携、(8)統計機能等のプログラミングが行われ、納品された。2、ユニオンカタログに搭載するデータとしては、史料編纂所の架蔵する原本・影写本・謄写本および刊本を予定しているが、そのうち刊本について登録対象となるものの調査を、2005年度に引き続き行った。3、米国ハーヴァード大学に出張し、ロースクール図書館、イェンチン図書館、サックラー美術館所蔵の日本古文書を調査し、デジタル画像の撮影と画像の公開について交渉した。そのうちロースクール図書館については先方で撮影したデジタル画像ファイルが当方に提供された。4、米国イェール大学に出張し、バイネッケ図書館所蔵の日本古文書についてデジタル撮影を行った。デジタル画像ファイルはイェール大学に提供し、イェールから公開される画像にユニオンカタログからリンクを張ることとした。一部のデータ(イェール大学所蔵「古文書貼交屏風」)についてサンプルを作成し公開した。5、国内においては、岩手県立図書館・福井県立歴史博物館などに出張し、古文書原本の調査を行った。本研究は,1600年以前に日本で作成された古文書について,原本はもとより影写本・謄写本・写真帳・目録・翻刻などあらゆる媒体に依る情報を網羅し,グルーピングすることにより,ナショナルユニオンカタログの構築をめざすものである。古文書を文化財として管理する上でも,また古文書に基づいて歴史研究を行う上でも,本データベースを構築することの意義はきわめて大きい。この計画を達成するために2007年度においては以下の研究を進めた。1.2005年度に納品された「日本古文書ユニオンカタログ基本設計書」にもとづき,イメージ表示の異種ファイル対応・英語版対応・関連データ(古文書フルテキスト・奈良時代古文書フルテキスト・平安遺文フルテキスト・鎌倉遺文フルテキスト)参照・グルーピングデータ管理番号出力などのシステム開発を,株式会社シールズに依頼して進めた。2.史料編纂所架蔵原本・謄写本・写真帳・刊本のうちユニオンカタログの登録対象となるものを選定する作業を,2006年度に引き続き行った。3.滋賀県湖北地域及び福井県敦賀市域において古文書調査を行った。4.滋賀県長浜市について古文書調査を行った。5.神戸大学所蔵古文書の調査を行った。6.奈良市西大寺所蔵古文書の調査を行った。7.2006年度に調査したイェール大学所蔵古文書について,東大-イェールイニシアティブ主催「日本資料研究ワークショップ」(イェール大学,2008年3月26日)において発表した。本研究は、1600年以前に日本で作成された古文書について、原本はもとより影写本・謄写本・写真帳・目録・翻刻などあらゆる媒体に依る情報を網羅し、グルーピングすることにより、ナショナルユニオンカタログの構築をめざすものである。古文書を文化財として管理する上でも、また古文書に基づいて歴史研究を行う上でも、本データベースを構築することの意義はきわめて大きい。この計画を達成するために2008年度においては以下の研究を進めた。

1.「日本古文書ユニオンカタログ」システムを完成させるため、入力校正システムにおける検索方式の改善(検索用テーブルと底本マスターテーブルから検索用ビューを作成して、底本マスターテープル上の項目を条件とする検索を可能とする)、入力校正システムから公開検索システムへのデータ移行方式の改善(グループ番号・セキュリティの変更、グループ番号を同じくするデータの削除等により公開検索システム上で代表表示されるべきデータが適切に変更されるようにする)、公開検索システムにおける不備の解消(底本を条件に指定した場合は代表表示を選択させない等、また画面回りを使い勝手をよくするように改善)などを進めた。2.「古文書目録データベース」より、影写本分211,086件、謄写本分231件、レクチグラフ分167件、写真帳分1,702件、原本・古写本分394件、総計213,580件を「日本古文書ユニオンカタログ」に移行し、データベースの骨格とした3.『大日本古文書』家わけ分データ48,462件、『平安遺文』分データ5,527件、『鎌倉遺文』分データ35,125件を登録し、「古文書フルテキスト」「平安遺文フルテキスト」「鎌倉遺文フルテキスト」各DBとのリンクを実現した。4.東北大学日本史研究室の承諾を得て、同室所蔵「朴沢文書」に関するデータ16件を登録し、同室提供の同文書データベースとのリンクを実現した。イェール大学バイネッケ図書館所蔵「古文書貼交屏風」分データ28件を登録し、バイネッケ図書館提供Digital lmages Onlineとリンクする準備を進めた。5.上記のうち、2・4に相当するデータ213,624件を公開した。6.長野県立歴史館、京都府立丹後郷土資料館、および三重県下において古文書原本を調査した。7.今後の計画として、20092012年度の4年間に、史料編纂所架蔵謄写本約2,100冊分のデータ82,000件と都道府県史史料編約130冊分のデータ約126,000件を登録する計画を立案した。8.東京大学史料編纂所附属前近代日本史情報国際センター公開研究会「歴史知識学の創成」(2008年11月22日、東京大学山上会館)において、研究発表を行い、その内容を、石川徹也・横山伊徳編『歴史知識学ことはじめ(勉誠出版、2009年2月)に掲載した。
microRNAによる骨格筋.血管クロストークの制御

microRNA(以下miRNA)は、mRNAに結合して転写後レベルの抑制を引き起こす新たな階層の遺伝子発現制御因子である。本研究では、小型淡水魚ゼブラフィッシュを用い、骨格筋で発現するmiRNAであるmiR-1が細胞非自律的に血管形成を制御するメカニズムを解析した。その結果、miR-1が分泌因子VEGFを負に制御することで血管形成を調節していることが明らかとなった。総遺伝子のうち3050%が数百のmiRNAによって制御されていると試算される一方、その生理機能が明らかになっているmiRNAは未だ氷山の一角でしかない。本年度は小型淡水魚ゼブラフィッシュを用いて骨格筋で発現するmiRNAであるmiR-1による血管形成制御機構を解析し、以下の知見を得た。1)これまでの予備的結果から、miR-1が細胞非自律的に血管形成を負に制御していることが明らかとなっていた。そこでこの過程に関わる標的遺伝子の探索およびレポーター実験系による評価を行った。その結果、血管形成促進因子であるVEGFAaおよびVEGFAbの3'UTR中にあるmiR-1標的配列を介して、実際にmiR-1による転写後抑制が引き起こされることを見出した。2)VEGFA以外の血管形成因子についても同様の解析を行った結果、これら既知の因子はmiR-1の標的配列を有していないか、有してはいるが効率的に抑制されないことが明らかとなった。3)miR-1の機能阻害時による血管形成促進の表現型を詳細に解析した結果、血管を形成する細胞数が増加していることが明らかとなった。この表現型はVEGFAの過剰発現時においても観察された。以上の結果から、miR-1は分泌因子VEGFの発現を直接的に負に制御することで、血管形成のバランスをコントロールしている可能性が強く示唆された。昨年までの研究結果から、ゼブラフィッシュ骨格筋において発現するmiR-1が細胞非自律的に血管形成を負に制御していること、およびmiR-1がVEGFAaおよびVEGFAbの3'UTR中にあるmiR-1標的配列を介して、転写後抑制を引き起こしうることが明らかになっていた。そこで、本年度はその詳細なメカニズムの解析を行い、以下の知見を得た。1)miR-1による血管形成の制御過程において実際にVEGFAaまたはAbを介しているかを検証するため、miR-1とVEGFAaまたはAbの2重阻害実験を行った。その結果、miR-1阻害時の表現型はVEGFAaの阻害によって回復することが明らかとなった。一方、VEGFAbの阻害ではそのような回復は見られなかった。以上の新たに得られた知見とこれまでの結果をまとめ、現在論文を投稿中である。