hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
半導体ミクロポーラスクリスタルの合成と応用

粘土のケイ酸塩層間を架橋して得られる粘土層間架橋多孔体の出現は、それまで、ゼオライトだけに限られていたミクロポア多孔体の種類を大幅に拡大することに成功した。本研究では、層間架橋の手法を層状チタン酸塩に適用し、半導性ミクロポア多孔体を合成し、その特性を生かした機能性材料の応用開発を行う.1.シリカ架橋層伏チタン酸塩の合成と吸着特性Rb_<0.75>Mn_<0.75>Ti_<1.25>O_4のRbイオンをアルキルアンモニウムイオンで交換し、チタン酸塩層間を拡げてから、テトラエトキシシラン(TEOS)を層間で加水分解し、その後、熱分解を行うことによってシリカ架橋多孔体を合成した.吸着侍性の詳細な解析を行い、多孔体の細孔は疎水性を有し、ゼオライトに類似した均一なミクロポアからなることを明らかにした.窒素吸着曲線はミクロポア多孔体に特有のLangmuir型であり、多孔体は600°Cの高温まで、500m^2/g以上の高比表面積を保持する.2.層状チタン酸塩層間層間架橋体の精密細孔制御.酸化によりイオン交換容量を調整した層状チタン酸塩を用いることにより、細孔径が制御できることを明らかにした。しかし、交換容量が減少すると、予想とは逆に、細孔径は増大する傾向にあり、これはシリカ架橋の生成機構と関連すると思われる。3.半導体ミクロポーラスクリスタルの触媒への応用架橋多孔体にイオン交換性を回復することに成功し、銅イオンを担持した半導性ミクロポア多孔体を合成した。この多孔体はCOの酸素酸化反応に活性が高いことを見出した。銅を担持していないシリカ架橋多孔体においては、触媒活性を示す温度は100°C近く高く、シリカ架橋していないチタン酸塩は全く触媒活性を示さなかった。[目的]当研究者らは、粘土の二次元ケイ酸塩層を構造単位として、その層間を微細な酸化物粒子で架橋して支えることにより、層間にミクロポアを有する、粘土層間架橋多孔体の合成に成功している。本研究では非ケイ酸塩系の半導体層状結晶についても層間架橋を行うと共に、新規半導体ミクロポアポーラスクリスタルの合成を試みる。[研究成果の概要]1。層状チタン酸塩の層間架橋層状結晶Rb_xMn_xTi_<2-x>O_4を出発物質として、シリカおよびチタニアによる層間架橋を行った。シリカ架橋多孔体では600°Cまで500600m^2/gの高い比表面積を有する耐熱性の高いミクロポア多孔体を得ることに成功した。2。シリカ架橋粘土多孔体の触媒特性半導体ミクロポア多孔体の特徴を利用して、光化学触媒機能を検討した。水の光化学分解では、白金無添加試料で、水素の発生が認められた。アンモニアについても低温酸化触媒活性を有することを見出した.層状結晶RbxMnxTi2-xO4をKMnO4水溶液で処理することにより、層間のRbイオンを除くことができることを見い出した。層間カチオン量を調節することにより、チタン酸塩層間の架橋密度を調節できる可能性があり、この層状結晶を用いる精密層間架橋を試みている.4。ゲルマニウムクラスレート化合物の合成ゲルマニウムのsp^3-s結合によりつくられる開いた網目構造の合成をアーク炉を用いて行った。

Baを鋳型として、新しいクラスレートBa_8Ge_<43>の合成に成功し、X線Rietveld法による構造解析を行っている。[目的]粘土のケイ酸塩層間を架橋して得られる粘土層間架橋多孔体の出現は、それまで、ゼオライトだけに限られていたミクロポア多孔体の種類を大幅に拡大することに成功した。本研究では、層間架橋の手法を層状チタン酸塩に適用し、半導体ミクロポア多孔体を合成し、その特性を生かした機能性材料の応用開発を行う。[研究成果の概要]1.層状チタン酸塩層間層間架橋体の精密細孔制御酸化によりイオン交換容量を調整した層状チタン酸塩を用いることにより、細孔径が制御できることを明らかにした。しかし、交換容量が減少すると、予想とは逆に、細孔径は増大する傾向にあり、これはシリカ架橋の生成機構と関連すると思われる。2.半導体ミクロポーラスクリスタルの触媒への応用架橋多孔体にイオン交換性を回復することに成功し、銅イオンを担持した半導性ミクロポア多孔体を合成した。この多孔体はCOの酸素酸化反応に活性が高いことを見出した。銅を担持していないシリカ架橋多孔体においては、触媒活性を示す温度は100°C近く高く、シリカ架橋していないチタン酸塩は全く触媒活性を示さなかった。3.半導体ミクロポーラスクリスタルのリチウム二次電池電極材料への応用ホストとして用いた層状チタン酸塩、Rb_xMn_<0/75>Ti_<1.25>O_4自体も酸化することにより、正極活物質として利用できるが、シリカで層間架橋することにより、可逆性が改善されることが分かった。また、層間架橋によっても,Mnの酸化数は3価で保持されていることも放電容量の測定から明らかにした。
代謝ストレス応答性長鎖非コードRNAの機能

グルコース飢餓ストレス応答性の長鎖非コードRNA(lncRNA)とアンチセンスRNA(asRNA)の役割や動態を解析した。その結果、対になって合成されるlncRNAとasRNAの間に相反的な発現制御があること、asRNAの発現制御にはヒストンH3K4のメチル化を介したクロマチン制御が関わること、asRNAが細胞質内でリボソームと結合し、ナンセンス仲介分解系で分解されること、lncRNAの抑制・脱抑制にlncRNAとTup型転写抑制因子の相互作用を介した制御が存在すること、マウス膵β細胞にも遺伝子上流から合成され、遺伝子発現上昇と共役するlncRNA転写が複数見られることなどを明らかにした。ゲノムの大半を占める非コード領域から、長鎖非コードRNA(lncRNA)が多数合成されるが、大半の機能は不明である。本研究では、申請者らが見出した代謝ストレス応答性lncRNA(mlonRNA)、および付随するアンチセンスRNA(asRNA)の機能を解析した。1RNA合成阻害剤や上流域の配列置換株などを用いてmlonRNAの転写を阻害すると、プロモーター上流域への転写活性化因子Atf1の結合が大幅に低下した。また、Atf1の結合阻害はmlonRNAのカスケード転写を阻害した。以上の結果から、mlonRNA転写とAtf1結合間にポジティブ・フィードバック制御が存在するが示された。また、グルコース豊富時にfbp1領域でmlonRNAと相反的に合成されるアンチセンスlncRNAの機能を解析した。今回、誘導的プロモーターをこれらlncRNA上流に配置し条件発現制御系を構築した。その結果、mlonRNAを発現するとasRNAの転写が抑制され、asRNAを誘導発現するとセンス鎖RNAの合成が抑制された。2mlonRNAの過半が細胞質に移行してリボソームに結合して徐々に分解される。fbp1上流域に高密度で存在するuORFのATGを全てACGに変換した株では、mlonRNAが著しく安定性した。この結果は、mlonRNAにNo-Go分解経路(NGD)が作動する可能性を示唆するため、NGD類縁遺伝子の変異体を解析したが、その関与は否定された。また、各種変異体を用いて半減期の測定を行い、これらlncRNAの分解経路を明らかにした。3ヒト膵臓β細胞株MIN6を低グルコース・高グルコース培地で培養し、グルコース濃度に依存して合成される遺伝子の抽出を行った。4ヒトMIN6細胞でエキソサイトーシスを誘発し、放出されるエキソソームを単離した。エキソソーム画分に低分子のncRNAが存在することを確認した。ヒトゲノムの大半を占める領域から合成される長鎖非コードRNA(lncRNA)について、申請者らが見出した代謝ストレス応答性lncRNA(mlonRNA)、およびそれに付随するアンチセンスRNA(asRNA)の機能を、分裂酵母や哺乳類細胞を用いて解析した。1グルコース飢餓時の分裂酵母を用いて、修飾ヒストンを認識する抗体によるChIP-Seq実験を行い、ヒストン密度や修飾パターンの全ゲノム解析を行った。また、センス鎖lncRNAを介した遺伝子発現のポジティブ・フィードバック制御の機構として、lncRNAとAtf1やTup11、Tup12などとの相互作用を解析し、mlonRNAとTup11、Tup12が結合することを明らかにした(Takemata et al., NAR, 2016)。2ゲノムワイド解析で同定したmlonRNA様センス鎖lncRNAのリボソーム結合を解析し、これら因子のリボゾーム結合を示唆する結果を得た。また、グルコース飢餓応答が誘導された分裂酵母を、再度グルコース豊富な培地に導入した際に見られるfbp1mRNAの急速な消失が、アンチセンスlncRNAやダイサーなどを介して促進されることを示した。また、上記lncRNAに関して視覚化プローブをデザインし、一分子RNA FISHを実施して検出に成功した。3低グルコースや低グルタミン条件下に暴露したマウス膵β細胞株MIN6等を用いて、発現誘導される遺伝子やlncRNAの探索を行い、複数の候補遺伝子群を同定した。とくに、グルタミン飢餓処理を行ったMIN6では一群のアポトーシス系遺伝子が活性化されることを、qRT-PCRによる定量的解析で明らかにした。また、グルコース飢餓処理後のマウス膵島初代培養細胞における既存の転写物解析データを用いて、mlonRNA様lncRNAを複数同定した。分裂酵母の解析は順調に進んでおり、論文発表を行った。マウス細胞の解析に関しても、当初目的としていた類縁lncRNAの同定に目処が付きつつある。ヒトゲノムの大半を占める領域から合成される長鎖非コードRNA(lncRNA)について、代謝ストレス応答性lncRNA(mlonRNA)、およびそれに付随するアンチセンスRNA(asRNA)の機能を、分裂酵母や哺乳類細胞を用いて解析した。1これまでに分裂酵母のグルコース飢餓に対するストレス遺伝子(fbp1など)の一部に、センス鎖lncRNAを介した遺伝子発現のポジティブフィードバック制御があることを見出した。これらの遺伝子の上流から合成されるmlonRNAは微弱ではあるものの、ストレス特異的な反応を示すことが多い。実際、fbp1などグルコース飢餓時に特異的に発現する遺伝子において、他のストレス(高浸透圧、高イオン濃度など)下では、mlonRNAの発現が大幅に低減していた。一方、ストレス遺伝子上流域で強制的かつ恒常的にmlonRNAを発現する実験を行ったところ、どのようなストレス種下においても、ストレス遺伝子上流の転写因子結合が顕著に促進することがわかった。

この結果から、mlonRNAの発現がストレス種特異的な遺伝子発現を補強することが示唆された。2分裂酵母mlonRNAの相補鎖から生成されるasRNAについて、一分子RNA FISHなどを実施して、その細胞質局在や確率的発現を確認した。また、asRNAが、細胞質においてリボソームと結合し、ナンセンス仲介分解(NMD)経路によって急速に分解されることを示した。さらに、既存のリボソームプロファイリング・データを用いて、リボソーム結合部位を推定した。3経代培養回数が少ないマウス膵β細胞株MIN6の細胞株を導入し、低グルコース条件下で発現誘導される遺伝子やlncRNAの探索を行い、複数の候補遺伝子群を同定した。これらの遺伝子領域については、ノザン解析を実施し、分裂酵母で見られたmlonRNAと同様のlncRNAを複数種明らかにした。分裂酵母の解析結果は、今年度も論文発表を行った。現在、さらに興味深い結果が得られつつあるので、研究期間を1年延長して論文発表を行う予定である。マウス細胞の解析に関しては、細胞株の見直しにより、当初目的としていた類縁lncRNAの同定がほぼ成功し、論文準備を行っている。ゲノムの大半を占める遺伝子をコードしない領域から合成される長鎖非コードRNA(lncRNA)について、遺伝子発現における役割や、普遍性の検証を行った。とくに、代謝ストレス応答性長鎖非コードRNA(mlonRNA)、およびそれに付随するアンチセンスRNA(asRNA)の機能を、分裂酵母や哺乳類細胞を用いて解析した。平成29年度は期間延長を行い、マウス膵β細胞における遺伝子発現と上流RNA合成の可能性を検証した。特に再現性などの確認と、データ精度を向上させる実験を追加した。具体的には、以下に示す結果を確認した。高グルコース環境下で培養したマウス膵β細胞株MIN6細胞株をを低グルコース条件に移行させた際、発現が増大した遺伝子群をRNA-seqを用いて多数同定した。これらのうち、転写物の長さがグルコース飢餓応答に際して変化する遺伝子をバイオインフォマティクス手法を用いて絞り込んだ。これらの遺伝子領域については、ノザン解析や5' RACE解析を実施し、遺伝子上流から合成される分裂酵母で見られたmlonRNAと同様の転写物を複数同定する事に成功した。これらの多くはアポトーシス誘導に関わるシグナル伝達因子や転写因子であった。実際にグルコース飢餓でMIN6がアポトーシスを誘発する事も確認できた。以上から、哺乳類細胞においても、分裂酵母で見出されたmlonRNAと同様のはたらきをする転写物が存在する可能性が高い事が示された。グルコース飢餓ストレス応答性の長鎖非コードRNA(lncRNA)とアンチセンスRNA(asRNA)の役割や動態を解析した。
古代地中海世界における欲望と禁欲

最終年度に当たる本年度はそれぞれの研究結果についての情報交換と同時に、昨年度の末に学外の講師を招いて行ったシンポジウムで披瀝された知見との批判的な突き合わせを進め、二つを踏まえて研究成果報告の作成に備えた。水谷智洋は昨年度から引き続き研究協力者に留まり、研究課題に積極的に関与することはなかった。研究分担者の本村凌二は、初年度にローマ社会における性倫理の変貌、昨年度は剣闘士の見せ物をめぐる生と死の観念を取り上げたのに続いて、今年度は馬の優良種をめぐる所有欲の変遷を実証的に跡づけた。研究代表者の大貫隆は、古代末期の地中海世界のキリスト教の内外における禁欲主義として、「世界の破滅」を目指すグノーシス主義のそれと並んで、外典使徒行伝に代表されるエンクラテイズム、4世紀に最盛期を迎える初期修道制の禁欲主義の少なくとも三つの類型を確認し、それぞれの内的な動機づけの過程を「禁欲の進学」と呼んで、原資料に即して明らかにした。同時に、同時代の正統主義教会がこれら三つの禁欲主義を意識しながら、地域社会の日常生活の中で実行可能な「慎み深い結婚生活」の性倫理を説いたことも明らかにした。この最後の論点は、本村凌二がローマ社会史の側から、同じ時代に「結婚」が法制度の手続き面というよりも、事実上の営みとして社会生活のなかで認知されてゆくにともない、性関係が「対」をなす男女つまり夫婦の間に限定されてゆき、「夫婦愛」の観念を含む「内なる世界」を重んじる風潮が広まったこと、それと同時に「性」は一般に「汚れ」として意識されるようになっていったこと、キリスト教はまさにこのような古代地中海世界の心性の偏向にあらかじめ準備されて台頭したことを指摘したことと見事に符号するものである。この点に、本研究のもっとも顕著な成果が認められるてしかるべきである。今年度、研究分担者水谷智洋は「失われた黄金時代」というギリシア・ローマの神話と文学に広範囲に渡って認められる表象をオウィディウス『転身譜』の第一巻を中心に検討した。その結果、当初の予想通り、「黄金時代」とは人間が「無欲」で生きることができた時代であること、「欲望」も「禁欲」も人類がその後の「銀の時代」以降堕落を深めて行った段階の事態であることが明らかになった。研究分担者本村凌二は共和制から帝制に移行する時代におけるローマ人の性愛をめぐる心性一般が、心や魂など「内なる世界」を見つめる方向へ偏向し、それを制約し貶める肉体を悪の原理とする見方を深めていたことを、すでに蓄積していた個別論考を基にさらに発展させ著書『ローマ人の愛と性』に上梓した。研究代表者大貫隆は後2-4世紀に焦点を絞って、多くの外典使徒行伝からエンクラティズムの性倫理(「禁欲の闘技者」)、聖アントニオスとパコミオスに代表されるエジプトの初期修道制の禁欲の神学(「この世を神と和解させるための禁欲」)、新約聖書の牧会書簡・合同書簡と使徒教父文書から正統主義の性倫理(慎ましい夫婦生活)をそれぞれ析出し、すでに平成8-9年度の科学研究費成果報告の中でも明らかにしたグノ-シス主義の「世界を破滅させるための禁欲」と比較した。その一応の結果が著書(論文集)『グノ-シス考』に収録されている。大貫が今年度に計画していた東地中海世界の修道院の現地調査はこの3月から4月にかけて実行する予定である。研究分担者水谷智洋は昨年度末をもって定年退職となっているが、引き続きギリシア神話に現れた欲望と禁欲の言語表現を中心に研究を進めたが、体調不良で必ずしも生産的ではなかった。

研究分担者本村凌二はローマ帝政期の欲望と禁欲の問題を、主として民衆の見世物興行における行動と倫理の関連について分析した。戦車競争や剣闘士試合に代表される見世物は人々を興奮の坩堝と化し、それらは民衆の注目をひたすら集めるものであった。キケロやセネカのような知識人たちは、これらの見世物を軽蔑したり非難したりしたが、民衆は熱狂したのである。とりわけ、死者を目にすることになる剣闘士試合には、人々の抑圧された欲望が隠されていたと言われ、そのおぞましい欲望の実態はローマ社会を考察する上で重要な要因であることが分かった。興味深いことに、性の禁欲が意識される時代になるにつれ、かえって死体をながめる欲望は目立ってくる傾向がある。性を中心とする欲望の在り方は、古代地中海世界においても、生と死をめぐる人々の意識や行動ににさまざまな影響をおよぼしていることが理解される。研究代表者大貫隆は紀元4世紀にエジプトを中心とする古代地中海世界の東部地域に発生した初期修道制の展開をたどるために、関連する文献資料(アタナシウス『聖アントニウス伝』、匿名氏『パコミオス伝』、パッラデイウス『ラウソスに献じる修道者伝』、匿名氏『エジプトの修道者伝』、匿名氏『砂漠の師父たちの言葉』他)の本文の再講読と分析を進めた。また年度末(3月2日)に、後藤篤子(法政大学教授)、豊田浩志(上智大学教授)、筒井賢治(東京大学非常勤講師)、高橋通男(慶応大学教授)を講師とするシンポジウムを開催した。最終年度に当たる本年度はそれぞれの研究結果についての情報交換と同時に、昨年度の末に学外の講師を招いて行ったシンポジウムで披瀝された知見との批判的な突き合わせを進め、二つを踏まえて研究成果報告の作成に備えた。水谷智洋は昨年度から引き続き研究協力者に留まり、研究課題に積極的に関与することはなかった。研究分担者の本村凌二は、初年度にローマ社会における性倫理の変貌、昨年度は剣闘士の見せ物をめぐる生と死の観念を取り上げたのに続いて、今年度は馬の優良種をめぐる所有欲の変遷を実証的に跡づけた。研究代表者の大貫隆は、古代末期の地中海世界のキリスト教の内外における禁欲主義として、「世界の破滅」を目指すグノーシス主義のそれと並んで、外典使徒行伝に代表されるエンクラテイズム、4世紀に最盛期を迎える初期修道制の禁欲主義の少なくとも三つの類型を確認し、それぞれの内的な動機づけの過程を「禁欲の進学」と呼んで、原資料に即して明らかにした。同時に、同時代の正統主義教会がこれら三つの禁欲主義を意識しながら、地域社会の日常生活の中で実行可能な「慎み深い結婚生活」の性倫理を説いたことも明らかにした。この最後の論点は、本村凌二がローマ社会史の側から、同じ時代に「結婚」が法制度の手続面というよりも、事実上の営みとして社会生活のなかで認知されてゆくにともない、性関係が「対」をなす男女つまり夫婦の間に限定されてゆき、「夫婦愛」の観念を含む「内なる世界」を重んじる風潮が広まったこと、それと同時に「性」は一般に「汚れ」として意識されるようになっていったこと、キリスト教はまさにこのような古代地中海世界の心性の偏向にあらかじめ準備されて台頭したことを指摘したことと見事に符号するものである。この点に、本研究のもっとも顕著な成果が認められてしかるべきである。
乳がん悪性化をもたらす亜鉛トランスポーターの分子機能解明と亜鉛シグナルの解析

乳がんの脅威は、初発部位にはなかった性質を獲得し、高い腫瘍形成能力および治療耐性能力を発揮しながら悪性化を進展することである。これまで、亜鉛トランスポーターZIP6は乳がんの悪性化の運命を支配することを明らかにしてきた。しかし、乳がんにおける亜鉛と亜鉛トランスポーターのネットワーク、特に、亜鉛イオンの標的分子の詳細は不明であった。本研究では、乳がんの悪性化プロセスにおける亜鉛トランスポーターZIP6を介した亜鉛シグナルの解明を目的とし、乳がんの悪性化に密接に関与している固形腫瘍内部の低酸素環境における乳がん細胞の生存能力を制御する仕組みについて検討した。乳がん細胞MCF-7を3次元的に培養した結果、形成したコロニーの内部に低酸素環境が存在することを明らかにした。また、低酸素条件下では、MCF-7の細胞死は抑制され、低酸素誘導因子HIF-1の活性を伴って著しく高い生存能力を示した。細胞透過性亜鉛特異的キレート剤の添加は、HIF-1の活性とコロニーの形成、低酸素条件下での生存率を著しく減少させたことから、亜鉛イオンがHIF-1の活性を介して低酸素環境耐性を示す可能性を明らかにした。さらに、MCF-7の高い低酸素環境適応性には、ZIP6の発現低下を発信源とするZIP6とZIP7の発現量の比率が重要であることをZIP6特異的ノックダウン細胞の解析から明らかにした。一方、個体レベルでは、乳がん腫瘍の大きさと血清中亜鉛濃度は正の相関関係を示す傾向にあり、腫瘍の形成を抑制する治療によって、その相関関係は消失した。これは、乳がんの悪性化プロセスと亜鉛は密接に関係していることを示しており、現在、低酸素環境と亜鉛シグナルを個体レベルで検討している。以上のことから、乳がん悪性化のプロセスはZIP6を起点とする亜鉛ネットワークにより支配され、その標的分子の一つとしてHIF-1を明らかにした。本年度は、乳がん悪性化のプロセスはZIP6を起点とする亜鉛ネットワークにより支配され、その標的分子の一つとしてHIF-1が重要であることを明らかにした。本研究成果は、乳がん悪性化の仕組みの解明とその関連分子を介した新戦略の開発に繋がる可能性があると考える。ZIP6を起点とする亜鉛ネットワークが、乳がん悪性化プロセスに対して、どのように統御するのか明らかにするため、細胞モデルおよびin vivo担がんモデルを作製し、亜鉛シグナルの機能的役割について解析する。細胞モデルとしては、Tet誘導shRNAシステムを用いてZIP6を可逆的かつ特異的に発現制御できる細胞を構築し、亜鉛特異的蛍光プローブを用いて亜鉛の細胞内動態を捉えながら、標的分子との関連を解析する。さらに、そのときの細胞内亜鉛ネットワークをライブイメージング技術により時空間的に解析する。同定できた分子について、in vivo担がんモデルにおいても、動態を把握する。

2018年度、乳がん細胞モデルを用いて、低酸素環境における亜鉛動態の解析を行い、その結果を基に動物実験を行うとともに学会発表する予定であった。しかし、動物実験の一部分について、悪性度の高いがんの個体の状況から、データの取得が不可能な事態が生じた。実験計画の変更と計画していた学会発表を行わなかったため、未使用額が生じた。動物モデルの詳細な解析とその研究成果の発表に関しては、次年度に行うこととし、未使用額はその経費に充てる。
日・仏・米における「贅沢」の比較文化史研究

初年度に実施したフランスにおける贅沢研究は、ココ・シャネルというキーパーソンを得て、現地でのフィールドワーク(シャネルが青春をすごした修道院の視察など)が豊かな成果をあげたと思う。また、日本における贅沢の研究も白州正子という対比項を得て、二人を比較しつつ著作『贅沢の条件』にまとめることができた。アメリカについては想定外のリーマン・ショックのため贅沢研究がすすめられる環境がなく、余儀なく割愛した。今後に記したい。今後に記したい。課題に掲げた「日・仏・米における贅沢の比較文化史研究」のうち、フランスにおける贅沢の研究にかんしては、8月に実施したフランスにおけるフィールドワークによって、贅沢の一ルーツとしての修道院」文化研究が予想以上の成果をあげた。キーパーソンとしてココ・シャネルに焦点をしぼったことも実りある研究成果につながったと思う。また、9月に実施したイタリアにおけるフィールドワークも、フランス文化の特殊性を照射するものとして大きな意義があった。日本の「贅沢」にかんしては、白州正子をキーパーソンとして研究をすすめたが、結果として、シャネルのケースと同じく、近代の大量生産・大量消費にアンチする「手仕事」の贅沢さ、効率より少量生産の「質」を求める贅沢さなど、近代批判につながる共通点を把握することができて、日仏における「贅沢」の共通点を見出すことができたと思う。さらに、大衆の「夢」としての贅沢という意味において、昭和時代の日本のサブカルチャー(たとえば歌謡曲)に視野が広がったことも成果の一つであった。以上の成果を、著書にまとめるべく、250枚の論文を書きおろした。出版は2009年7月に決定している(岩波書店より刊行)。課題に掲げた研究題目について、日仏の「贅沢」研究にかんしては、その成果を250枚の論文にまとめ、岩波新書として出版した。予定より早く、かつそれなりに充実した研究として発表できたことは大きな成果であったと思う。さらに、上記の研究をすすめるうち、ココ・シャネルの贅沢の原点が修道院であったことを認識し、「清貧」と「贅沢」の逆説的な関係に眼をひらかれたのも大きな収穫であった。このことに着眼して、日・仏にわたり、来年度の研究の一方向を定めたいと思う。ことに「清貧の思想」のいわば本家である日本文化研究に力をいれたいという方向がみえてきたことも成果であった。また、シャネルの南仏の「別荘」の在り方も示唆に富むものであった。これと関連して、フランス・イタリアのフィールドワークで経験した修道院ホテルや南仏プロヴァンスの夏の家での経験も、人が土地を選んで-たとえば季節に応じて-「住み」わけるという贅沢に眼が開かれた。今後の研究課題にいかしたいと思う。アメリカの贅沢研究にかんしては、リーマン・ショックに始まる世界不況の震源地としてますます贅沢研究の困難性を痛感し、この点では、研究課題を十全に果たし得なかったと思う。というより、申請前と世界情勢がちがいすぎて、課題を大きく変更せざるをえないと感じている。そのうえで、今後いかなる方向性があるのかを模索したいと思うが、一つの可能性として、米国国内のフィールドワークというより、アメリカ発の贅沢スタイルの在り方として、いわゆる「ロハス」なエコ志向の文化や思想に焦点を絞ると、「住む」ことにまつわる贅沢-ある土地を選び、その自然の恵みを護りつつ、これを人の富として享受する行為-に日米の比較研究が可能ではないかと思う。上記のごとく、残された課題も多いが、日仏の贅沢研究を一著にまとめたうえで、さらに今後の研究課題が見えてきたことじたい本年度の研究成果であったと考えている。「贅沢の空間論」という視点から別荘地研究をすすめたが、伊豆、熱海、軽井沢など日本の代表的別荘地の視察をとおして浮かび上がった問題は、景観や緑という贅沢な環境に別荘=セカンドハウスを持つという贅沢よりも、むしろその地を人生のセカンド・ステージとして選んで生きるという永住型の贅沢であった。こうして贅沢研究が現代日本のシニア層のライフスタイル研究につながることを発見できたのが最大の収穫であった。このようなセカンド・ステージの舞台となる土地は、別荘地に限らず、自然環境に恵まれた都市近郊一般(たとえば名古屋なら知多半島など)であろうと思う。この意味で、「贅沢の空間論」は別荘地研究からさらにエリアを広げて、都市とその近郊全般におよび、テーマもまた、都市暮らしと田舎暮らしなど、晩年のライフスタイルの比較研究につながる。こうしたアクチュアルな研究課題を今後に期したい。他方で、日仏米の比較研究という観点からみると、軽井沢に代表される別荘地がイギリスの宣教師によって開発されたように、別荘というコンセプトじたいがヨーロッパ文化の模倣から生まれたものであることを再確認できた。それと同時に、研究エリアに選んだ別荘地の特質は、ファーストフードに代表されるようなアメリカ文化の影響がきわめて少ないことを確認した。以上の研究から得たとりあえずの結論は、別荘という贅沢が日仏(日欧)に共通するもので、アメリカ文化とはむしろ対立するということである。

ただし、別荘を離れて、いわゆるロハスなライフスタイルという点では近年のアメリカ文化の影響は大きい-リーマンショック以来の経済情勢のため米国のフィールドワークを実施してこの点を深めることができなかったのが残念だが、これも今後の課題としたい。
簡単な分子の液体における分子再配置運動素過程の探索と不可逆的構造緩和の解明

1.過冷却液体1,3-ジフェニル,1,1,3,3-テトラメチルジシロキサン、oーターフェニル、プロピレンカーボネート、ジブチルフタレートにおいて、その熱容量測定から、αとともにβガラス転移を見出した。また、柔粘性結晶シクロヘキサノールにおいて、2組のαとβガラス転移、さらに他の独立なガラス転移を見出した。分子位置の秩序化を通して分子再配置運動がデカップルした可能性もある。2.α-過程の平均緩和時間の温度依存性に関して非アレニウス性の度合が異なる、グリセロール、プロピレングリコール、1,3-ジフェニル,1,1,3,3-テトラメチルジシロキサン、ジブチルフタレートのα-緩和過程を一定温度条件下で長時間追跡した。その緩和過程を伸長指数関数の非指数関数性パラメータβで特性化し、その結果を温度ジャンプ量Δ_jTの関数として考察した。その結果、液体のフラジル性mと緩和関数の非線形性δ(=dβ/dΔ_jT)の間に強い相関を見出した。3.フルオレンジベンゾフラン固溶体について、ガラス転移温度におけるエンタルピー緩和過程を精密に追跡した。その結果、各組成結晶について、非指数関数性パラメータβはΔ_jTに依存せず、一定であった。これは液体の結果と全く異なり、液体における緩和の非線形性が非アレニウス性にあることが実証された。oーターフェニルおよびザロールについて、液体のガラス転移温度近傍で結晶胚凝集に基づく、新しい結晶化過程を発見した。その成長速度は、α過程ではなく、β過程緩和時間に支配されており、今日一般的な結晶核生成理論の常識を覆す結果を得た。1.液体における分子再配置運動の詳細を解明するための装置として、クライオスタット内の温度環境を長時間不変に保つように工夫した超高精度熱量計を設計、開発した。2.ガラス形成能が高いことで知られる数種の液体(1,3-ジフェニル,1,1,3,3,-テトラメチルジシロキサン、_0ーターフェニル、プロピレンカーボネート)において、その熱容量測定から、β-ガラス転移を見出した。α-過程はフラジル性mで特徴づけられる非アレニウス的な緩和時間の温度依存性を示し、一方、β-過程はアレニウス的な依存性を示した。両過程の緩和時間は高温で一致し、"β-過程はα-過程の素過程である"ことを強く示唆する結果を得た。3.α-過程の平均緩和時間の温度依存性に関して非アレニウス性の度合が異なる、グリセロール、プロピレングリコール、1,3-ジフェニル,1,1,3,3-テトラメチルジシロキサンのα-緩和過程を一定温度条件下で長時間追跡した。4.固溶体を形成することが知られているフルオレンとジベンゾフランそれぞれの結晶において、ガラス転移を見出した。種々の組成を持つ固溶体について液体の場合と同様にエンタルピー緩和過程を追跡する予定である。5.超イオン伝導性ガラスである(AgI)_<0.5>(AgPO_3)_<0.5>のα-過程を追跡し、この種の系においても同様に、その緩和関数が顕著な非指数関数性を示すことを見出した。液体の分子配置構造および再配置運動の解明を進めるために、分子の位置と配向が無秩序な過冷却液体、分子配向のみが無秩序な柔粘性結晶、さらに比較として位置も配向も基本的に秩序構造を持つ安定結晶のガラス転移および構造緩和過程について、熱測定による研究を行った。1.過冷却液体ジブチルフタレートにおいて、αとともにβガラス転移を見い出した。αとβ過程の緩和時間の関係は昨年報告した他の液体と同様であった。

また、柔軟性結晶シクロヘキサノールにおいて、2組のαとβガラス転移、さらに他の独立なガラス転移を見出した。分子位置の秩序化を通して分子再配置運動がデカップルした可能性もり、過冷却液体の挙動は大変興味深い。2.1,3-ジフェニル-1,1,3,3-テトラメチルジシロキサンのガラス転移は比較的近い温度で出現することを確認した。これは液体における分子再配置運動が結晶のそれに近いことを示唆するものであり、今後この示唆の確認を進めて行く必要がある。3.oーターフェニルおよびザロールについて、液体のガラス転移温度近傍で結晶胚凝集に基づく、新しい結晶化過程を発見した。その成長速度は、α過程ではなく、β過程緩和時間に支配されており、今日一般的な結晶核生成理論の常識を覆す結果を得た。4.フルオレンジベンゾフラン固溶体について、ガラス転移温度におけるエンタルピー緩和過程を精密に追跡した。その緩和過程を伸長指数関数の非指数関数性パラメータβで特性化し、その結果を温度ジャンプ量Δ_jTの関数として考察した。その結果、各組成結晶について、βはΔ_jTに依存せず、一定であった。これは液体の結果と全く異なり、液体における緩和の非線形性が非アレニウス性にあることが実証された。
オブジェクト指向技術を用いた実時間分散システムの動的モデリング

実時間分散システムを統一的かつ効果的に設計し開発するためには、システムの実時間仕様を的確に表現する形式的な技法が必要である。本研究では、当研究組織で長年に渡って得た基礎成果をもとに、実時間分散システムに適した実時仕様のモデル化と仕様の解析に有効な技法を開発した。仕様の進化的な変更(evolutional change)に柔軟に対処できるモデルの構築も併せて行った。さらに、仕様表現のための形式言語を開発し、それをもとに仕様の解析を支援する方法を確立した。本研究の成果により、実時間分散システム開発をその初期段階から保守・運用に至る段階まで効果的にカバーでき、結果的に分散システムを統一的かつ効果的に構築できた。平成9年度では、本研究の動機は、オブジェクト指向アプローチの基本思想を反映する動的モデルを設計することにある。より正確に言うと、我々のモデルはオブジェクト指向応用の設計過程の次の2つの本質的な局面を強調した:(1)オブジェクトの振る舞いの時間的な展開(進化)の記述,(2)オブジェクトの振る舞いの時間的な合成、つまりオブジェクトの集まりの協調に関する時間的性質と規則の記述。我々の目的に於ける1つの重要な要件は、我々のモデルに関する形式的基礎を構築することであった。この要件を満足することで、モデルに統合された種々の考え方の無矛盾性を調べるだけでなく、ユーザ提供の仕様の無矛盾性を調べることも可能と成ります。幾つかの形式論の中で、命題時制論理の言語が我々の目的に対して適切であった。一方、分散システムに適したオブジェクト指向を用いた仕様のモデル化と解析に有効な技法を開発した。(1)分散システム仕様のオブジェクト指向に基づいたプロセス、データ、振る舞いの統合的なモデル化技法の開発、(2)仕様を表現するためのオブジェクト指向に基づいた形式言語の開発、(3)形式言語で表現された仕様の解析技法の開発、の研究を行った。(1)については、分散システムの大規模性、並行性およびシステムの進化に伴う仕様の変更性を考慮した従来にない新しい仕様記述のモデルを確立した。(2)については、(1)で確立したモデルに基づいて、柔軟性、厳密性、拡張性に優れた形式言語の構文と意味を設計した。(3)については、分散システムの設計に関連する要件、性質を整理し、それらを(2)の言語で書かれた仕様の上で解析する基本的な技法を確立した。平成8年度では、本研究の動機は、オブジェクト指向アプローチの基本思想を反映する動的モデルを設計することになった。より正確に言うと、我々のモデルはオブジェクト指向応用の設計過程の次の2つの本質的な局面を強調した:(1)オブジェクトの振る舞いの時間的な展開(進化)の記述、(2)オブジェクトの振る舞いの時間的な合成、つまりオブジェクトの集まりの協調に関する時間的性質と規則の記述。我々の藻矩形に於ける1つの重要な用件は、我々のモデルに関する形式的基礎を構築することであった。この用件を満足することで、モデルに統合された種々の考え方の無矛盾性を調べるだけでなく、ユーザ提供の仕様の無矛盾性を調べることも可能となった。

幾つかの形式論の中で、命題時制論理の言語が我々の目的に対して適切であった。一方、分散システムに適したオブジェクト指向を用いた仕様のモデル化と仕様の解析に有効な技法を開発した。(1)分散システム仕様のオブジェクト指向に基づいたプロセス、データ、振る舞いの統合的なモデル化技法の開発、(2)仕様を表現するためのオブジェクト指向に基づいた形式言語の開発、(3)形式言語で表現された仕様の解析技法の開発、の研究を行った。(1)については、分散システムの大規模性、並行性およびシステムの進化に伴う仕様の変更性を考慮した従来にない新しい仕様記述のモデルを確立した。(2)については、(1)で確立したモデルに基づいて、柔軟性、厳密性、拡張性に優れた形式言語の構文と意味を設計した。(3)については、分散システムの設計に関連する用件、性質を整理し、それらを(2)の言語で書かれた仕様の上で解析する基本的な技法を確立した。実時間分散システムを統一的かつ効果的に設計し開発するためには、システムの実時間仕様を的確に表現する形式的な技法が必要である。本研究では、当研究組織で長年に渡って得た基礎成果をもとに、実時間分散システムに適した実時仕様のモデル化と仕様の解析に有効な技法を開発した。仕様の進化的な変更(evolutional change)に柔軟に対処できるモデルの構築も併せて行った。さらに、仕様表現のための形式言語を開発し、それをもとに仕様の解析を支援する方法を確立した。本研究の成果により、実時間分散システム開発をその初期段階から保守・運用に至る段階まで効果的にカバーでき、結果的に分散システムを統一的にかつ効果的に構築できた。平成9年度では、本研究の動機は、オブジェクト指向アプローチの基本思想を反映する動的モデルを設計することにある。より正確に言うと、我々のモデルはオブジェクト指向応用の設計過程の次の2つの本質的な局面を強調した:(1)オブジェクトの振る舞いの時間的な展開(進化)の記述,(2)オブジェクトの振る舞いの時間的な合成、つまりオブジェクトの集まりの協調に関する時間的性質と規則の記述。我々の目的に於ける1つの重要な要件は、我々のモデルに関する形式的基礎を構築することであった。この要件を満足することで、モデルに統合された種々の考え方の無矛盾性を調べるだけでなく、ユーザ提供の仕様の無矛盾性を調べることも可能と成ります。
近代日本の国際法継受と治外法権　文明国・野蛮国・未開国における裁判の比較考察

近代「国際法」の法理において国家は「文明国」「野蛮国」「未開国」に分類され、開国当初のに日本は、欧米諸国から「野蛮国」に位置づけられた。その結果、国家としての完全主権を認められず、不平等条約の締結を強いられた。他方で、「文明国」への仲間入りを果たそうとする日本は、その途上で中国や韓国に対して不平等条約を強い、これらの国で領事裁判権を行使した。本研究では、欧米諸国が日本で行った領事裁判と日本が東アジアで行った領事裁判の具体的事例を外交史料や判決原本をもとに調査・分析し、両者の裁判が果たした役割を問うた。また、韓国については領事裁判が、理事官による裁判を経て、植民地裁判に移行する過程を追った。〔研究目的〕本研究は日本が幕末・明治維新以降、欧米諸国による近代「国際法」の法理を受容する過程で、「治外法権」が日本を含む東アジア諸国にもたらした波及効果を領事裁判と植民地裁判を中心に比較考察することにある。本研究では第一に、欧米諸国が文明水準の違いに応じて如何なる裁判を行ったのか比較考察するとともに、第二に、明治日本が「野蛮国」から「文明国」へ発展する過程で近代国際法がどのように昇華され、近隣の東アジア諸国へ波及していったのかについて考察する。〔研究方法〕第一の目的のために、当時最も影響力を持った英国領事裁判について、現存する領事裁判記録を中心に調査を進めた。同記録は、先行研究により、国内では神戸市立中央図書館及び神戸市博物館に原資料の一部が所蔵されていること、海外では英国公文書館に関連資料があることが確認されている。日英に分かれて存在する原資料につき、両者の関連づけを行いながら内容分析を試みた。第二の目的のために、前年度に引き続き、福岡高等裁判所から国立公文書館へ移管された領事訴訟記録(民事判決原本)の調査・分析を行った。併せて、「野蛮国」から「文明国」への過渡期に起きた明治24年の大津事件について最高裁判所及び滋賀県県政史料室、滋賀県警が所蔵する事件記録の調査を行った。〔研究成果〕第一に、神戸に残された英国領事裁判記録の欠損を埋める史料を英国公文書館で発見することはできなかった。しかし、同種の裁判記録として長崎に関連するものを数点発見することができた。第二に、日本領事裁判につき、国立公文書館所蔵資料から、在北京・南京・天津日本帝国領事による具体的裁判事例を確認することができた。大津事件の記録からは事件の「ヘイトクライム(憎悪犯罪)」としての側面や被告人に対する過酷なまでの取り調べ状況、さらには事件をめぐる全国弁護士会の動きなど、新たな着眼点を得た。本研究では第一に、欧米諸国が「国際法」の名のもとに如何なる裁判を行ったのか、その法と制度を比較考察するとともに、具体的な事例についても実証研究を行う。第二に、第一の比較考察及び実証研究を手がかりに、明治日本が「野蛮国」から「文明国」に発展する過程で、国際法がどのように昇華され、それが治外法権の形で近隣の東アジア諸国へ波及していったかについて考察する。本年は第二の点において、既に入手していた「民事判決原本」中、日本領事裁判の記録を中心に調査分析を進めた。現在、韓国・大法院記録保存所に所蔵されている資料について、京城(現ソウル)と仁川で行われた日本領事裁判の記録(部分)を確認しているが、他地域についても追跡調査を進めた。特に在留邦人の多かった釜山の記録につき、領事裁判記録については確認できなかったものの、釜山理事庁による裁判記録については約30数冊の簿冊が大法院記録保存所に現存することが判明した。明治38(1905)年の第二次日韓協約により、韓国は外交権を失い、事実上日本の保護国となる。その後、韓国の各開港場等に理事庁が開かれ、理事官が置かれた。理事官は従来韓国日本領事に続したる一切の職権を執行する者であるため、従来の領事裁判も理事官裁判として継続することになる。しかし、理事庁は明治43(1910)年の韓国併合までわずか数年の組織であり、そこで如何なる裁判が行われたのか不明な点が多い。「職員録」を確認する限り、従来領事であった者がその後理事官になる場合が多く、人的側面では理事官裁判は領事裁判の延長といえる。他方で、従来の領事館が理事庁に改編された直後から訴訟数が飛躍的に増加しており、日韓交渉事件も増えている。日本語・韓国語(ハングル)両併記の記録も多く、韓国併合に至る数年間に裁判制度の大きな変革があったことが伺える。

〔研究目的〕本研究の目的は日本が開国以降、欧米諸国による近代「国際法」の法理を受容する過程で、「治外法権」が日本を含む東アジアにもたらした波及効果を考察することにある。欧米諸国が日本を「野蛮国」「半文明国」とみなし完全主権を認めずに不平等条約をしいたこと、他方で「近代」国家の途上にあった日本が中国や朝鮮に対しては不平等条約をしいて領事裁判や植民地裁判を行ったことの意味を問うとともに、両者の「裁判」が民事における紛争解決や刑事における犯罪者処罰に果たした役割をも問うていくものである。〔研究実施計画〕上記目的を達成するため、平成24年度には韓国・大法院記録保存所に在る日本領事裁判の民事判決原本と韓国・国家記録院に在る日本領事裁判の刑事判決原本の調査を中心に研究を進めた。とくに、領事裁判から植民地裁判への過渡期ともいえる理事庁における裁判については司法統計、任命された理事官、具体的な事件について分析した。平成25年度には日本で行われた欧米諸国による領事裁判について、先行研究をふまえ追跡調査を行い、とくに神戸市立中央図書館や神戸市博物館に在る英国領事裁判記録について調査を行った。併せて、領事裁判と比較する意味で、日本人の外国人に対する犯罪事件のうち、特に大津事件について、最高裁判所、滋賀県県政史料室、滋賀県警に在る関係記録を調査し、比較考察及び先行研究に対する再考を行った。平成27年度(最終年度)は先の2年間の調査をふまえ、国内においては国立公文書館にある長崎控訴院民事判決のうち、領事裁判に関する記録を調査した。海外においては、英国公文書館と米国公文書館において、領事裁判・植民地裁判記録の追跡調査を行った。さらに、今後の研究を展開する意味で、「治外法権」の近・現代版ともいえる占領期の沖縄における裁判につき、沖縄県公文書館と米国公文書館の裁判記録を中心に調査を行った。日本法史平成25年度は欧米諸国が各々の本国外で行った裁判について調査するため、最初に制度の概要について前年度までに収集した資料を中心にまとめ、具体的事例について調査した後、英国公文書館及び米国公文書館を中心に調査を行う予定であった。国内では、横浜開港資料館所蔵の明治期新聞や外務省外交史料館所蔵の領事裁判史料の継続調査を行い、次いで在神戸英国領事裁判記録につき、神戸市立中央図書館と神戸市博物館所蔵の原資料確認を行った。また、国立公文書館所蔵の領事館訴訟記録(民事)につき、提供された複写物(電子データ)から内容分析を進めていたが、資料の保存状態等の理由から一部原本でしか確認できないものがあり、継続調査の必要がある。海外では、英国公文書館における調査から、在長崎英国領事裁判記録の一部を確認することができた。同館では目録が電子化され、所蔵資料の一部もインターネット上から閲覧可能となっているが、本研究関連資料については詳細な目録はなく(資料の特定が困難)、デジタル資料もない(アクセス上の困難)状態のため、未確認資料を次年度継続して調査する必要がある。米国領事裁判記録、特に米領事裁判の上訴先であるカリフォルニア巡回裁判所の記録を調査予定であったが、上記英国調査及び資料分析に予想以上の時間がかかったため、本国調査は実施しなかった。代わりに、データベース上で公開されている資料と判例の調査を行った。この調査により、日本から米国本国まで行って争われた領事裁判事例があることが確認された。韓国大法院記録保存所所蔵の民事判決原本については平成24年度に引き続き継続調査を行った。新たな資料を発見することはなかったが、既収集資料の不明な点(複写物で確認できない箇所や複数
振動分光技術を用いた非標識α-シヌクレインのin vivo定量的測定法の開発

本研究では、パーキンソン病で脳に蓄積するα-シヌクレインを、非標識下に生きた細胞・組織中で定量的に検出する方法論の開発を行った。成果として、培養細胞や組織標本を対象に、安定してラマン分光画像を測定する測定系を開発できた。これを用いて、試験管内で作成したα-シヌクレイン凝集体、培養細胞中に形成したα-シヌクレイン凝集体のラマン分光画像を測定し、化学構造を反映したラマンシフトの空間分布を解析した。α-シヌクレイン凝集体のラマンスペクトル波形には、非凝集状態では認められない特徴的なラマンシフトが存在し、この波形がα-シヌクレイン凝集体の分子特異的マーカーとして、生体内で機能する可能性が示唆される。1.非線形ラマン分光装置の開発新たにCARS(coherent anti-Stokes Raman scattering)スペクトルの測定系を製作した。チタンサファイアオシレータで発生した単一のフェムト秒パルスを、バンドパスフィルターを用いたマイケルソン干渉計に導き、広帯域なポンプ光と狭帯域なプローブ光とに一旦分離、その後再度共軸化し試料に集光する。試料中の分子は広帯域光で複数の振動準位が同時に励起されており、狭帯域光の高速位相変調に応じて試料のCARS光に生じる変調成分を抽出することで、multiplexなCARSスペクトルが取得できる。干渉計であらかじめ狭帯域光に大きな遅延を与えておけば、非共鳴CARS信号を抑制できるのがメリットである。本測定系のテストとして、クロロホルムの263, 369, 669[cm^-1]のラマンシフトを観測した。2. in vitroでのα-synucleinの振動スペクトル測定recombinant α-synuclein(Tris-HCl buffer溶液の凍結乾燥後粉末)の振動スペクトルを測定した。別に測定しておいたTris-HClの振動スペクトルのうち、主要なピークはrecombinant α-synclueinで測定した振動スペクトル中でも認められた。Tris-HCl由来と考えられるピークを減算することで、α-synucleinタンパク質本来のラマンスペクトルを導出することができた。他の神経変性疾患で脳に沈着が認められるポリグルタミン(Huntingtin-Q98)やAmyloidβと比較したときの、α-synucleinの振動スペクトルの特徴は、1001[cm^-1], 1450[c^m-1], 1652[cm^-1]のピークが目立たないこと、および、1300[cm^-1], 900[cm^-1]周辺の幅の広いピークが目立つことであった。1).組織中での振動スペクトル測定技術の開発:ヒト剖検脳中でのLewy小体(シヌクレイン凝集体)の振動スペクトルを取得するためには、非染色試料で振動スペクトル画像を取得した後に、免疫染色を行ってLewy小体を同定し、Lewy小体のある画素での振動スペクトルを同定する、という手続きが必要である。振動スペクトルの測定と免疫染色画像の撮影の間に、免疫染色操作が入るため、二つの測定を同じタイミングで連続して行うことはできない。このような実験を確実に行うためには、先に振動スペクトル測定した部位と同じ標本上の場所を、免疫染色後に定位するための位置あわせの技術が必要になる。本研究では、この問題を解決するために、明視野画像から自動で検出した細胞の輪郭を免疫染色前後で比較し、互いにsuperimposeすることで、免疫染色後にはじめて確認できるLewy小体の位置を、振動スペクトル画像上で特定する画像処理プログラムを製作した。2).非線形ラマン分光装置の開発:昨年度構築したCARS分光の測定系の光源には、施設共用のチタンサファイアレーザーを利用していた。施設共用の光源を使った測定は確保できるマシンタイムが限られることが、研究を進める上でのボトルネックになっていた。本年度は、新たに本研究のためにチタンサファイアレーザーを自作した。自作したチタンサファイアレーザーからのパルス光を、作成したCARS分光光学系に導き、クロロホルムのCARS信号の測定に成功した。3).培養細胞系でのα-シヌクレイン凝集体の作成:培養細胞を用いて、α-シヌクレイン凝集体を作成する系を構築中である。装置開発に時間がかかっており、α-シヌクレイン凝集体のヒト脳組織中・培養細胞標本中での振動スペクトル測定が、まだできていない。1).非線形ラマン分光顕微鏡の開発:自作のチタンサファイアレーザーのレーザー共振器の密閉および空気ゆらぎの排除を行い、光源となるフェムト秒レーザーのモード同期の時間安定性の向上を行った。これにより、画像取得に必要な時間オーダーで、光源を安定して動作させることができるようになった。自動ステージを用いたラスタースキャンにより画像取得を行う顕微鏡を新たに製作し、完成した光源レーザーおよびCARS分光光学系と組み合わせて、非線形ラマン分光顕微鏡を完成させた。現在、空間分解能の評価を行っている。2). CARS画像と同じ視野で透過光画像の取得を行い、試料上での観察位置の確認を行うための光学系を作成した。これを昨年度までに作成した画像処理プログラムと組み合わせて、非線形ラマン分光画像測定後に、同じ切片を従来法で染色し、従来法とラマン分光画像を比較して観察のできる系を立ち上げた。さらに、二片の組織連続切片を用いて、片方に従来法による染色を施し、もう片方で非線形ラマン分光画像測定を行うことで、従来法とラマン分光画像の比較を行えることも確認した。

3). 1).で完成した非線形ラマン分光顕微鏡を用いて、試験的に培養細胞(HeLa細胞, HEK293T細胞)のラマン分光画像を測定した。また、ラマン分光画像の取得・解析を行うためのソフトウェアを開発し、個々の振動モードを選んで、振動モードごとの空間分布のマッピング・イメージングを行った。本研究ではαシヌクレイン凝集体の観察に必要な非線形ラマン分光顕微鏡を新規に開発している。計画一年目に試料中の一点でラマンスペクトルを測定するCARS分光光学系は完成していたが、光源レーザーのマシンタイムの制限から、本研究を効率的に進めるために新たに光源レーザーを製作することになった。また自作したレーザーの発振の安定性を実現する研究開発に想定以上の時間を要した。本研究では、パーキンソン病で脳に蓄積するα-シヌクレインを、非標識下に生きた細胞・組織中で定量的に検出する方法論の開発を目的としている。今年度はまず、大腸菌に作らせた組み換えα-シヌクレインをリン酸緩衝液中で振盪しながらインキュベートすることで、α-シヌクレイン凝集体をin vitroで作成した。昨年度までに製作したラマン分光顕微鏡を用いて、in vitroで作成したα-シヌクレイン凝集体のラマン分光画像を測定し、凝集体中の化学結合に由来するラマンシフトの空間分布を測定した。in vitroのα-シヌクレイン凝集体には、非凝集状態のrecombinantのα-シヌクレイン同様に、一般的なタンパク質のスペクトルに認められる1001,1445,1645cm-1などのラマンシフトを認めた。さらにこれらのピークに加えて、in vitroのα-シヌクレイン凝集体では、βシート構造の存在を示唆すると考えられる1550,1600cm-1などのラマンシフトを認めた。次に、SNCA遺伝子を組み込んだレンチウィルスベクターを用いてα-シヌクレインを定常発現させたHeLa細胞に、別途作成したα-シヌクレイン凝集体を超音波破砕したものをseedとして加え、24時間培養することで、培養細胞内にα-シヌクレイン凝集体を形成した。この凝集体を含む培養細胞標本を蛍光標識した抗α-シヌクレイン抗体で免疫染色し、蛍光信号と共局在するラマンシフトを調べたところ、in vitroで作成したα-シヌクレイン凝集体と同様のラマンスペクトル波形が観測された。このことは、測定されたラマンスペクトル波形が、凝集状態にあるα-シヌクレインの分子特異的マーカーとして、培養細胞内においても機能する可能性を示している。すなわち、この波形を手掛かりに、生体組織中でのα-シヌクレイン凝集体の非染色条件下での分子同定と定量が可能である。本研究では、パーキンソン病で脳に蓄積するα-シヌクレインを、非標識下に生きた細胞・組織中で定量的に検出する方法論の開発を行った。成果として、培養細胞や組織標本を対象に、安定してラマン分光画像を測定する測定系を開発できた。これを用いて、試験管内で作成したα-シヌクレイン凝集体、培養細胞中に形成したα-シヌクレイン凝集体のラマン分光画像を測定し、化学構造を反映したラマンシフトの空間分布を解析した。