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正常眼圧緑内障の病因としての神経免疫学異常に関する研究

若年例の正常眼圧緑内障の原因を解明するために、これまでに報告されているEndothelin-1(ET-1),自己免疫ニューロパチーで抗体価の上昇が報告されている抗ガングリオシド抗体を同時測定し、正常眼圧緑内障の病因としての神経免疫学的機序の関与について検討した。まず、正常眼圧緑内障(NTG)31例(平均年齢49.5才、屈折値-4.6±3.1diopter)、原発開放隅角緑内障(POAG)18例(平均年齢44.7才、屈折値-8.8±3.1diopter)、正常人17例(平均年齢44.5才)に対して視力検査・視野検査・ET-1,ガングリオシド抗体の測定を行った。NTG患者、POAG患者、正常人におけるET-1値はそれぞれ、1.5±1.7pg/ml、1.6±1.8pg/ml、1.4±1.1pg/mlであった。NTG患者とPOAG患者を比較したところ、年齢・視野病期・ET-1に有意な差はなかったが、POAG患者がより近視であった(p<0.001)。抗ガングリオシド抗体は、抗GA1 IgG抗体、抗GQ1b IgG抗体、抗GM1 IgG抗体(+),抗GM2 IgG抗体(+)がそれぞれ1名ずつの異常値を認めたが、いずれも軽度陽性であり、特徴的な視神経所見もなく、特異的なものではないと考えた。全症例のうち上半視野の欠損しているものは8例、下半視野の欠損しているものが12例であった。上半視野症例でのET-1は1.2±0.5pg/mlであった。一方、下半視野症例でのET-1は1.7±0.8pg/mlであり、有意な差はなかった(p=0.14)。ET-1値と年齢・屈折・眼圧値・視野病期との相関を調べたところ、ET-1値はいずれ有意な相関は示さなかった(p>0.1)。ET-1値は従来の報告のように、高齢の開放隅角緑内障患者の病因とは関連あるかもしれないが、若年緑内障患者においては関連は少ないと思われた。若年例の正常眼圧緑内障の原因を解明するために、これまでに報告されているEndothelin-1(ET-1),neuron specific enolase(NSE)濃度の測定に加えて、自己免疫ニューロパチーで抗体価の上昇が報告されている抗ガングリオシド抗体を同時測定し、正常眼圧緑内障の病因としての神経免疫学的機序の関与について検討した。まず、正常眼圧緑内障(NTG)27例(平均年齢49.1才、屈折値-4.3±3.2diopter)、原発開放隅角緑内障(POAG)17例(平均年齢45.7才、屈折値-9.0±3.3diopter)に対して、視力検査・視野検査・ET-1,NSE,ガングリオシド抗体の測定を行った。NTG患者におけるET-1は1.5±0.6pg/ml、NSEは6.7±1.7ng/mlであった。一方、POAG患者におけるET-1は1.6±0.8pg/ml、NSEは6.8±1.7ng/mlであった。抗ガングリオシド抗体は全例において陰性であった。NTG患者とPOAG患者を比較したところ、年齢・視野病期・ET-1・NSE値に有意な差はなかったが、POAG患者がより近視であった(p<0.001)。ET-1・NSE値と年齢・屈折・眼圧値・視野病期との相関を調べたところ、ET-1値はいずれ有意な相関は示さなかったが、NSE値は、年齢が高いほどNSE値が高くなる傾向があった(r=0.333,P=0.026)。今後さらに症例を追加することにより、正常眼圧緑内障の病因解明に迫り、新治療法確立のための多くの新知見が得られるものと考える。

全症例のうち上半視野の欠損しているものは8例、下半視野の欠損しているものが12例であった。上半視野症例でのET-1は1.2±0.5pg/mlであった。一方、下半視野症例でのET-1は1.7±0.8pg/mlであり、有意な差はなかった(p=0.14)。ET-1値と年齢・屈折・眼圧値・視野病期との相関を調べたところ、ET-1値はいずれ有意な相関は示さなかった(p>0.1)。ET-1値は従来の報告のように、高齢の開放隅角緑内障患者の病因とは関連あるかもしれないが、若年緑内障患者においては関連は少ないと思われた。
小学校算数を通した数感覚の拡張プロセス

本研究では、小学校3,4,5年生計311名を対象として、数の大小判断課題を実施し、整数の数表象から小数及び分数の数表象への発達パスが連続的であるのか、非連続的であるのかについて検討した。数の大小判断課題は、iOSアプリケーションとして、独自に開発し、小学生1名に対して1台のiPodを用意することで、調査による小学校側の負担を軽減した。本研究の結果からは、どの学年でも小数と整数の大小判断課題の反応時間に有意な相関が見られ、整数から小数への連続的パスが見られた。一方、分数の反応時間と整数の反応時間との間には有意な相関が見られず、分数の表象と整数の表象との間には非連続性があることが明らかになった。目的:本研究の第1の目的は、小学生の整数感覚と小数感覚や分数感覚への連続性が見られるのかどうかについて検討することであり、第2の目的は、iPodを用いた実験ツールを開発し、数の大小判断課題への有効性を検討することであった。対象者:大阪府内の公立小学校1校から、小学3年生100名、4年生122人、5年生89人が本研究に参加した。課題:本研究で用いた課題は、数の大小判断課題であり、2つの数をペアで提示し、どちらの数が大きいかを判断するように求めるものであった。整数、小数、分数の3つの異なる数概念が含まれていた。まず、3つの大小判断課題には、それぞれ8種類のペアが含まれていた。結果と考察:大小判断課題での反応時間の分析からは、整数<小数<分数の順に反応時間が遅くなっており、どの学年でも分数の大小判断課題が最も困難であることが明らかになった。また、整数と小数の反応時間の相関分析からは、3年生r=.64、4年生r=.68、5年生r=.67が得られ、どの学年においても整数の反応が速い子どもは小数の反応も速くなることが明らかになった。このことは、整数と小数では、利用している数表象が共通していることを示している。これに対して、整数と分数の反応時間の相関分析からは、3年生r=.24、4年生r=.30、5年生r=.16が得られ、優位な相関が得られた3年生と4年生でも、整数と小数の相関係数よりもかなり低い値を示した。このことは、分数は整数とは異なった数表象を用いている可能性を示唆している。加えて、5年生では整数と分数の間の相関係数は.16とかなり低い値を示し、関連性が低いことが明らかになった。このことは、5年生で学習する異分母異分子の分数では、整数の数表象が利用されていないことを示唆していると思われる。今後、小学生の分数の数表象がどのように獲得されるのかについての検討が必要であると考えられる。平成24年度には,以下の2つの仮説を検証するための実験を行った。まず,最初に,「仮説1:小数の数感覚は,自然数の数感覚を拡張していくような形で獲得される」を検証するために,小数と自然数の大小判断に要する時間を測定し,2つの課題の反応時間の関連性を調べる。仮説1が正しければ,2つの課題での判断時間は,正の相関を示すと考えられる。次に,「仮説2:分数の数感覚は,自然数の数感覚を拡張するものではなく,独自の数感覚として新たに形成される数感覚である」を検証するために,分数と自然数の大小判断に要する時間を測定し,2つの課題の反応時間の関連性を調べる。仮説2が正しいとすれば,無相関か一部のグループでのみ相関がみられると考えられる。これら2つの仮説を検証するために,小学校3年生100名,4年生122名,5年生89名の計311名を対象に,iPodを用いた整数,小数,分数の3種類の数の大小判断課題を実施した。大小判断課題は,iPod画面上に2つの数が左右に並べられて提示され,参加者は,左右2つの数字を大きな方を判断して,数字の下に配置されたボタンを押すことが求められた。2つの仮説を検証するために,整数と小数,整数と分数の反応時間の相関係数を算出したところ,整数と小数では,3年生r=.557,4年生r=.524,5年生r=.485となり,いずれの学年でも有意な相関が得られた。この結果は,小数の大小判断と整数の大小判断では,共通した心的構造を利用している可能性を示している。

これに対して,分数と整数の反応時間の相関係数は,3年生r=.100,4年生r=.253,5年生r=.118となっており,3年生と5年生はほぼ無相関であることが明らかになった。この結果は,分数の大小判断には,整数の大小判断で用いた心的構造が使われておらず,分数は独自の数感覚である可能性を示している。平成24年度は,研究計画書に記載した2つの仮説を検証するための研究を実施できており,おおむね計画通りに研究を進展させることが出来たと判断している。ただ,実験課題であるiPod及びiPadを用いた大小判断課題の作成がやや遅れたために,全体としては,やや遅れていると判断した。本年度は,iPadの入手がうまくいかなったこともあり,研究がやや遅れているが,すでに主要設備は整えることが出来たので,次年度以降の研究は順調に推移するだろうと考えている。昨年度使用を予定していた研究費のうち,実験実施後に,カリフォルニア大学サンタバーバラ校のOkamoto博士とデータについて意見交換するという計画部分が,昨年度中に実施できなかったために,次年度当初の4月中にこの点についての検討を行う予定であるための,そのための旅費として使用する。
背弧域上部マントルの熱・物質循環の解明

中国東部に分布する新生代アルカリ玄武岩の試料採取及び分析を行った。この地域の玄武岩は東北アジア内で最もアルカリ・鉄に富み、同位体的にdepleteした端成分として位置づけられる。見積もられたマントルポテンシャル温度は西南日本下・東北部中国よりも高温で、一方微量元素組成からはdepleteしたマントルの融解にカーボナタイトメルトが寄与した可能性を示唆する。火山岩の分布はマントル遷移層に停滞するスラブの西端と比較的よく一致することから、スラブ先端からの沈み込み由来物質の寄与が考えられる。中国東北部の玄武岩活動は九州よりも高温のマントル上昇による可能性があることが、東北アジア一帯に分布する新生代火山活動に関する膨大な数の文献資料をコンパイルデータから新たに分かった。しかしその可能性はマグマ中の含水量やマントルの枯渇度合いに応じて違う解釈も可能である。それを確かめるためには大量に出されている全岩の同位体比や微量元素データのみならず、岩石記載および鉱物分析値も含めた包括的なデータの検討が必要不可欠であるが、そのような包括的なデータセットはいまだに乏しかった。そこで東北アジア一帯における海洋プレート沈み込みに伴う上部マントル中の熱・物質循環プロセスを包括的に理解するために、中でも最も重要であると考えられる中国山東半島一帯の新生代火山岩および五島列島・福江島周辺のサンプル採取を行った。風化の度合いが弱く分析に適した玄武岩試料、基盤を構成していると考えられる花崗岩・変成岩、およびカンラン岩ゼノリスなどを多数採取することができた。当該年度以前に採取した韓国・全谷里玄武岩、共同研究者によって採取済みの中国Hannuoba火山およびWeichang火山、および本年度採取した試料の分析は当該年度から開始している。九州および韓国の玄武岩試料に関しては分析が終了し、それによると九州下では距離の近いフィリピン海プレートよりも、離れた太平洋プレートからの流体の影響の方がより強いことを明らかにした。また韓国・全谷里玄武岩活動をもたらしたマントルは九州下よりも低温だった可能性があることを明らかにした。今後の一連の全岩・鉱物分析によってマグマの分化課程や含水量などを見積もることで、上記の課題に関して強い制約が次年度には与えることができると期待できる。前年度サンプリングを行った中国東部山東半島の新古第三紀玄武岩試料、北西九州五島列島福江島玄武岩試料に関して、予定通り一連の分析を終えた。具体的には岩石研磨薄片試料作成・観察・分析(約100枚)、XRF, ICP-MS, TIMSによる主成分元素(約100試料)・微量元素(約100試料)・Sr-Nd-Pb同位体(約30試料)を行った。また新たに山東半島より南部に位置する南京・杭州付近の新古第三紀および第四紀玄武岩試料のサンプリングを行った。採取した岩石試料(約50試料)の岩石研磨薄片試料作成・観察・分析、各種全岩分析を行った。従来中国東部の玄武岩はほぼ無斑晶質で全岩化学組成が液組成として扱われてきた。しかし、採取した多くの岩石にはキンクバンドを有するカンラン石、反応縁を有する単斜輝石、シンプレクタイト状組織を有する結晶集合体を10vol%以上有する試料が多数存在し、マグマの分別プロセスは従来考えられていたよりも複雑であることが分かった。このことは単純な分別プロセスを仮定して見積もった中国東部全体のマントル温度分布に関しても、再考が必要であることを意味する。一方、ある特定の岩石系列に属する岩石のSr-Nd-Pb同位体組成は時代・場所によらず比較的均質な組成を有することが新たに分かった。そしてその岩石の分布と深さ660kmに停滞する沈み込んだスラブの分布が比較的よい相関を示すことを新たに明らかにした。それらの成果の一つは国際誌へ投稿する最終段階にある。スラブの沈み込みによる地球の全マントル内での物質循環を考える上で、背弧域における熱・物質循環過程はほとんど明らかにされていない。本研究はその課題に関してマグマ組成の時間・空間分布から一つの解を与えることができると考えられる。
X線回折法による各種破面の解析に関する研究

近年、種々の破壊事故の解析が広く行われてきている。一般に用いられている方法はSEMによる破面観察である。しかし、実際の事故品においては破面が酸化あるいは腐食されていて、SEMによる観察が不可能な場合も多い。X線回折法によると、このような場合にも定量的な解析が可能である。本研究においては、シャルピー衝撃試験及び疲労試験をして得られたアルミニウム合金の破面にX線を照射し、得られた回折強度曲線を解析した。まず、焼なまし材に種々の塑性変形を与え、これから得られた積分幅を用いることにより、相当塑性ひずみと積分幅の関係を数式化して表わした。破面にX線を照射することにより、破面からの情報を得ることができる。一様な変形を受けた場合以外には、一般に破面の深さ方向に進むに従って変形の程度は減少する。また、材料としてアルミニウムを使用した場合にはX線の浸透深さが0.1mm程度と比較的深いため、この浸透深さを考慮した補正をする必要があることを明らかにした。その結果、相当塑性ひずみは破面からの深さと共にほぼ指数関数的に減少することが明らかになった。相当塑性ひずみが得られると、応力-ひずみ曲線を用いることにより、そのひずみに対応する塑性仕事を求めることができる。したがって破面からの深さ方向及び破面全体について塑性仕事を求めると、これはその試験片に吸収されたエネルギに対応してくる。この方法により得られたエネルギとシャルピー衝撃値を比較した所,絶対値には差異が認められるものの、両者にはほぼ1対1の相関性が得られた。すなわち、X線的に破面を解析することにより吸収エネルギを推定できる可能性のあることが明らかになった。一方、疲労破面においてはデータのばらつきが大きく、うまく適用できなかった。
他我論再構築のための歴史的存在論的研究

本年度も夏と冬の二回にわたって合同の研究合宿を催した。発表者は、新田、神崎(夏合宿)、滝浦(冬合宿)の三人である。フッサ-ル哲学を専門する新田は、〈構成主観としての私が原点に置かれている限り、フッサ-ルの他者構成理論においては他者の他者性が結局は奪われてしまう〉との批判を認めつつも、フッサ-ルの他者経験に関する分折にはこうした自我論的制約を越える可能性がはらまれていることを指摘した。新田によれば、フッサ-ルにあって志向性は必ずしも作用(対象化的)志向性にとどまるものではなく、自己移入の手続きに先立つ次元で他者との関係がすでに構造的に成り立つ場面をフッサ-ルは垣間見ていたという。この場面を新田は「われわれ性」とよび、「〈他者は私ではない〉という非性の経験」がその核をなすことを強調した。神崎は、「他者経験と懐疑」と題された発表において、デカルトの懐疑とアウグスティヌスの懐疑にあっては他者という存在が或る本質的な役割をはたすこと仰指摘してみせた。また、前代表者である滝浦は、本研究の総括を兼ねた発表において、人称代名詞の用いられ方を例にひきつつ、われわれ日本人が他我ないし他者を論じる際にあまりにも無自覚に西洋哲学の概念枠組みに依拠してしまうことの危険性に対して警告を発した。滝浦によれば、一人称、二人称の代名詞が、つまり英語のIとyouに相当する語が複数存在し、しかも具体的な使用の場にあってそれらの間に相互互換性が成り立たないという日本語の特質ひとつをとってみても、たとえば〈我ー汝〉といった関係性を無媒介にわれわれの議論の出発点としてはならないことがわかるという。われわれの研究課題である他我問題は、従来、とりわけ古代・中世にあっては主題的に論じられることがほとんどなかった。それゆえ、63年度の研究活動はます、なにゆえに哲学においていま他我を問題にしなければならないのか、それを問題とする際の基本的な視座・方法はどのようなものであるべきか、に関する、研究代表者である滝浦の基調報告により開始されることとなった(第一回合宿)。滝浦が協調した論点は次のとおりである。(1)対象言語のレベルに「我」の存在を求めることは不可能。(2)純粋なCogitatio=cogitatumの自己指示・言及ということはありえぬ。(3)自己指示は身体的存在のみが、他者との言語的関わりの中でなしうるもの。(4)「I」の用法の習得は、「you」の用法の習得と相関的-。これを受けて今年度は、各研究分担者が専門分野に応じてそれぞれの時代を担当し、代表的な哲学者の思想に対して他我問題の視点からあらたな検討を加える作業に従事した。このうち宇佐美は、他者理解を道徳的評価の問題場面において取り上げ、他者の行為を道徳的視点から理解するにあたっての不可欠の前提となる実践的推論のありうべき構造を、ハーマンを手懸かりにしながら素描してみせた。また野家は、クワインのホーリズムを下敷にしつつ、他我問題を徹頭徹尾言語の意味理解の視点からとらえるべきことを提唱し、自他の非対称性についても言語行為における機能的な異種性としてあくまで語用論的次元において問題にすべきであること、この観点からすればむしろ自他の等根源性といった事態にこそ着目すべきであることを主張した。これに対しては、まさにその都度言葉に耳を傾け言葉を発するほかないこの私になんらかの固有性というものは問題とならないのか、それはどう位置づけられるのか、といった問題が今後の課題とされた(第二回合宿)。従来主題に論じられることがほとんどなかった他我問題に関して、昭和63年度における研究は、主としてそれを取り扱う際の基本的な視座・方法の確立を目標にして行われた。

そこでの確認に立って、本年度は各研究分担者が専門分野に応じてそれぞれの研究を深化させている。このうち篠は本年度第1回合宿での「垂直的可知性にむかって--メルロ=ポンティのシモン覚書から」と題した発表において、他我を含めた世界総体の根源的開けの場としての身体ないし知覚の意義を、具体的な文学的テキストの解釈をとおして浮き彫りにしてみせた。また同合宿において上妻は、カント、フィヒテ、ヘ-ゲルらの陰に隠れて従来論じられることの少なかったヤコ-ビに焦点を合わせ、我と汝との直接的交わりの意義を論理的推論等の理性的活動に先立つ人間の根源的体験として称揚する彼の論点を取り上げて論じた。本年場は諸般の都合により第2回の合宿は本報告書提出後(3月末)の開催となるが、そこでは岩田靖夫、黒崎宏の両名が、それぞれ「ハイデガ-のロゴス--アリストテレスの『形而上学』の注釈によせて--」、「他者論と他我論」という題目のもとに研究発表を行う予定である。この合宿においては昨年度来の懸案である、自他の等根源性(語用論的アプロ-チからすれば自他の非対称性はつまるところ言語行為における機能的な異種性にすぎない)と自他の異質性(まさにその都度言葉に耳を傾け言葉を発するほかないこの私の固有性)という二つの事態調停をめぐる問題についても、踏み込んだ発表・討論が行われる予定である。本年度も夏と冬の二回にわたって合同の研究合宿を催した。発表者は、新田、神崎(夏合宿)、滝浦(冬合宿)の三人である。フッサ-ル哲学を専門とする新田は、〈構成主観としての私が原点に置かれている限り、フッサ-ルの他者構成理論においては他者の他者性が結局は奪われてしまう〉との批判を認めつつも、フッサ-ルの他者経験に関する分析にはこうした自我論的制約を越える可能性がはらまれていることを指摘した。新田によれば、フッサ-ルにあって志向性は必ずしも作用(対象化的)志向性にとどまるものではなく、自己移入の手続きに先立つ次元で他者との関係がすでに構造的に成り立つ場面をフッサ-ルは垣間見ていたという。この場面を新田は「われわれ性」とよび、「〈他者は私ではない〉という非性の経験」がその核をなすことを強調した。神崎は、「他者経験と懐疑」と題された発表において、デカルトの懐疑とアウグスティヌスの懐疑にあっては他者という存在が或る本質的な役割をはたすことを指摘してみせた。また、前代表者である滝浦は、本研究の総括を兼ねた発表において、人称代名詞の用いられ方を例にひきつつ、われわれ日本人が他我ないし他者を論じる際にあまりにも無自覚に西洋哲学の概念枠組みに依拠してしまうことの危険性に対して警告を発した。滝浦によれば、一人称、二人称の代名詞が、つまり英語のIとyouに相当する語が複数存在し、しかも具体的な使用の場にあってそれらの間に相互互換性が成り立たないという日本語の特質ひとつをとってみても、たとえば〈我ー汝〉といった関係性を無媒介にわれわれの議論の出発点としてはならないことがわかるという。
細胞分裂を制御するコンドロイチンの機能調節機構の解明

私は、プロテオグリカン関連遺伝子の線虫C.elegansの個体発生における機能解析を行う過程で、コンドロイチン合成酵素(ChSy)が初期胚の細胞分裂の進行に必須であることを発見した。RNAiや遺伝子欠失突然変異株tm546を取得しての解析から、コンドロイチンが欠失すると細胞分裂が正常に進行せず、細胞分裂停止や細胞分裂の逆行とみられる現象が生ずることがわかり、プロテオグリカンの糖鎖が胚細胞の細胞分裂に関与していることを世界で初めて明らかにした。この現象は当初、細胞質分裂の異常とされたが、さらに詳細に検討すると染色体分配までが異常になっていることがわかった。コンドロイチンがどのようにして細胞分裂を制御しているかを明らかにするため、同様の細胞分裂異常をRNAiでひきおこす遺伝子を網羅的に同定し検討した。ChSyのパラログと思われるPAR2.4遺伝子や、ユビキチンリガーゼ遺伝子、N-acetytransferase遺伝子、importin遺伝子などのRNAiで同様の細胞分裂異常を確認した。特にPAR2.4遺伝子は神戸薬科大学の菅原一幸教授らによって同定されたヒトchondroitin polymerizing factorのオーソログであることがわかり、その機能阻害はChSyの阻害と全く同じ分裂異常をひきおこすことを確認した。次にPAT2.4::DsRed融合蛋白質を導入したトランスジェニック線虫とChSy::EGFP融合タンパク質を導入したtransgenic線虫などを作成して蛍光蛋白質を利用した発現解析を行い、これらが細胞レベルでの局在を同じくしていることを発見した。コンドロイチンによる細胞分裂制御の分子メカニズムを解明するため、bioinformaticsと二次元電気泳動法を用いた解析を行い、胚細胞表面に存在する数種のコンドロイチン・コア蛋白質の同定に成功した。多細胞生物において今まで全く機能が不明であったコンドロイチンプロテオグリカンが、細胞分裂に必須であることを世界ではじめて明らかにした。本研究ではモデル生物である線虫Caenorhabditis elegansを用い、ヒトのコンドロイチン合成酵素ChSyの遺伝子の線虫オーソログの機能をRNA干渉法と欠失突然変異体の解析で研究した。胚発生への影響はタイムラプス全自動微分干渉蛍光顕微鏡(四次元顕微鏡)をもちいて単一細胞レベルでの胚発生を追跡することで追跡して解析した。この結果、コンドロイチンの量が減少した胚では、細胞分裂に異常が生じ、細胞分裂が見かけ上、逆行する現象がしばしば観察された。さらにコンドロイチンが完全に欠失した胚では、細胞分裂(核の分裂と細胞質の分裂からなる)における、細胞質分裂の完全な喪失と異常な染色体分配を伴う核分裂を確認した。これはコンドロイチンが正常な細胞質分裂に不可欠であり、また核分裂にも必須であることを示している。従来、Auroraキナーゼをはじめとして細胞内で細胞分裂を制御する様々な因子が発見されていたが、細胞表面の分子についてはほとんど未知であった。本研究によって、細胞表面に存在している糖鎖が細胞分裂に関与していることがはじめて明らかになり、細胞分裂制御ネットワークの解明で全く未知であった細胞表面の役割にはじめて光があてられた。本研究の成果は、糖鎖生物学に新しい一章を書き加えた(Nature Cell Biol.誌)などの高い評価を受けている。さらに同様の細胞分裂に対する影響を与える関連遺伝子についても明らかにしており、コンドロイチン合成酵素や関連蛋白質について、GFP蛍光蛋白質などとの融合蛋白質を導入したトランスジェニック線虫による遺伝子の発現解析も終えている。
老人と歯科医療とに関する研究-有床補綴処置による咀嚼機能回復に関する補綴学的ならびに栄養学的検討-

高齢者の歯科医療対策は、歯科界にとっても急務であり、最近報告も数多く見られるようになったが、いまだ本質的な問題に触れたものは余り見られず、老人歯科医療の実態の把握が進められているのが現状である。これらの報告によると、調査母胎の状況、例えば在宅老人や各種老人施設入所者の違いにより傾向が異なっているようで高齢者全体を把握するのが困難とされている。当教室でも有床補綴学の立場より、外来総義歯患者の食生活の状況を調べ、その臨床症状との関係を補綴学的ならびに栄養学的に検討している。この度病院では観察出来ない、歯科治療の受診困難な養護施設入所者、いわゆる寝たきり老人を対照に研究調査し、以下のような結果を得た。1.特別養護老人ホーム入所者(寝たきり老人)の口腔内の補綴学的研究により、(1)片顎を含めた無歯顎者は、被検者全体の73%の高い割合であった。(2)有歯顎者の残存歯数は平均4,1本で、下顎前歯の残存が多かった。また、この数は他の報告に比べ少なかった。(3)総義歯および局部義歯使用者の約半数の者が不満を持っているが、そのまま使用していた。などが分かった。また、2.寝たきり老人の食生活の補綴学的ならびに栄養学的研究すら、(1)ADLの食事の評価は、総合評価のレベル1,3,4でほぼ評価が一致した。(2)ADL評価の低下に伴い義歯使用者の割合が減少し、また常食を摂取する者の数も減少した。(3)主食、副食共に常食を摂取するものは無歯顎者より義歯使用者のほうに多かった。(4)食品摂取充足率、栄養素別充足率は、不足するものが多く、また個人差が見られた。以上のような結果より、寝たきり老人の多くが良好な咀嚼機能の回復がえられていないが、それぞれ工夫して食生活を送っていることが判った。今後これらの被検者の継続的な追跡を行ってゆく予定である。などが分かった。特別養護施設入所者の口腔内の詳細な実態調査を行ない,合わせて食事習慣及び食事内容の分析,さらに咬合力,筋電計などの顎機能測定,また日常生活動作能力(ADL)や基礎代謝率の調査を行ない高齢者における咀嚼機能の役割を検討することを目的としているが,現時点では口腔内の実態調査に合わせ食習慣(食事調理形態)と食事摂取内容の調査,ならびにADLの調査を終了した.これらの資料を基に,各被検者の口腔内状況,ことに義歯使用の有無,食習慣の一面として主食,副食の調理形態の種類,ならびに全身的活動状態の指標としてADLの各レべルとの関係について検討を行ない,その成績を日本大学歯学会(昭和62年11)において報告した.その内容については日大口腔科学に投稿予定である.更に現在食事記録を整理し,その栄養価分析を行なっている段階で,次の日本大学歯学会及び秋期日本補綴歯科学会にて学会報告する計画である.なお,器械を用いた測定については,多数例に行なうのは困難であるため,今回調査した被検者の内から一定の条件の者を選択して行なう必要があり,その検討中である.また器械の扱いにも習熟中である.前述の学会報告の要旨について簡単に述べると以下のようである. 1.ADLレベルの低下に従い高齢者が増加していた.

2.ADLレベルの低下に従い常食形態で食事を摂取するものの割合が減少していた.3.義歯と食事形態の関係では,主食,副食とも常食を取るものは,義歯使用者の占める割合が多かった.4.ADLと義歯使用状況を見ると, ADLレベルの低下にともない,義歯使用者の割合が減少し,逆に義歯を所持しないものが増加していた.このように高齢化ならびにADLの低下に伴い食事摂取の状況が悪化することが考えられるので,更に摂取栄養価を含め咀嚼機能の役割を検討してゆく計画である.歯科外来にて治療を受けられない寝たきり老人については、そのすべてを把握することは難しく、いまだ十分に理解されていないのが現状である。今回、有床補綴の立場より、これら高齢者の咀嚼機能の回復に当たり義歯によりその目的がどのように達成されるかを検討する目的で、特別養護施設の入所者を対象にその口腔内の実態調査を基に、補綴学的ならびに栄養学的面から食物の物性を主にして、食事の調理形態を多方面から検討を加えた結果、寝たきりの高齢者に適した義歯の対策を立てる上で重要な指針が得られたと思われる。本研究の結果をまとめると以下のようになる。1.ADL(日常生活動作能力)については次のような傾向が出た。(1)全般的に、ADLのレベルと年齢との間に関連が見られ、また高年齢になるに従いADLのレベルの低下する傾向が見られた。(2)ADLレベルの低下と共に義歯使用者の比率が減少した。(3)食事の項目は、レベル2以外では綜合評価を良く反映していた。(4)女性は、どの年齢群でもADLレベル2,3の比率が高かった。2.食事の調理形態については以下の傾向が得られた。(1)全被検者において常食を採る者は主食で30%、副食で15%であり、多くの老人が柔らかい食事を選んでいた。(2)主食、副食とも常食を採る者は、義歯使用者に多く、顎粘膜の良好な状態であったが、無咬頭歯を使用している者の方が多かった。(3)ADLレベルの低下と共に常食者の比率が減少する傾向があるが、副食でその傾向が強くみられ、増齢化と供に食事の楽しみが減少すると思われ、摂取食品および栄養素別充足率の不足する者が多いことからも納得出来た。寝きり老人の食生活の一面が観察できたが、それぞれ個人差があり、更に他の観点からも、より客観的な追跡を行ないたい。
被災地での学びを地域や世代を超えて伝える災害伝承・防災教育システムの開発

本研究は、大学生を対象として被災地訪問よるアクティブラーニング型のゼミナールを実施し、被災地からの学びを他地域の小中学生へ伝えるイベントを、大学生のアイディアに基づいて企画し、それを開催することによって、学び手が伝え手になる認知過程を明らかにするとともに、効果的な災害伝承・防災教育システムの開発を目指すものである。
安定同位体比を用いた水圏底生生態系食物網の解析的研究

水圏底生生態系食物網を、炭素・窒素安定同位体比による解析法を用いて、複雑系としての河口域生態系と河川生態系、単純系としての強酸性湖(潟沼)生態系を対象として、調査した。1.強酸性湖潟沼生態系において、酸性湖の単純な食物連鎖を利用して、消費者の餌の選択性について室内の摂食実験により調べた。その結果、サンユスリカは底生珪藻よりも植物プランクトンをより選択的に同化すること、さらにその餌は生息水深により変化し、水深が浅い場所では底生珪藻を、深い場所では植物プランクトンを多く利用することを明らかにした。また、サンユスリカ幼虫の飢餓条件と給餌条件での炭素・窒素安定同位体比の変化を実験的に比較し、同位体比の変化は給餌による体重量の増加にともなって起きることを明らかとした。2.仙台湾七北田川河口域の蒲生潟を調査地として大型底生動物の餌資源の解析を行った。まず、餌候補物質として、POM(水中懸濁有機物)、SOM(堆積有機物)、海藻オゴノリとその付着物、塩性湿地植物のヨシ、また底生珪藻を堆積物から分離して、炭素・窒素安定同位体比を測定し、底生動物の同位体比と比較することにより、底生動物が同化している餌物質を推定した。その結果、堆積物食底生動物は潟内部で生産された微小藻類を主な餌としていることが分かった。懸濁食底生動物はPOMと同様に底生珪藻もかなりの程度同化していることが分かった。3.河川の源流域において、底生無脊椎動物の餌物質の推定を炭素・窒素・硫黄安定同位体比解析により行った。その結果、トビケラ類は水質に関係なく外来性の陸上植物由来の有機物を主な餌としていることが分かった。また、カワニナが、他の底生動物よりも低い炭素・硫黄同位体比をもつことから、餌として化学合成独立栄養の硫黄酸化細菌の寄与が予想された。このことから、河床が砂礫の源流域においても川底に嫌気環境が存在することが推察される。1.強酸性湖潟沼生態系の研究においては、生産者としての植物プランクトンと底生珪藻、また消費者としてサンユスリカ幼虫が各1種のみという酸性湖の単純な食物連鎖を利用して、消費者の餌の選択性について調査した。潟沼から分離した植物プランクトンと底生珪藻を餌とした摂食実験により、サンユスリカの炭素・窒素の同位体分別を測定し、そのデータを用いたミクシング・モデルにより選択的同化について調べた。その結果、サンユスリカは底生珪藻よりも植物プランクトンをより選択的に同化することが分かった。また、潟沼のサンユスリカ幼虫の餌は生息水深により変化し、水深が浅い場所では底生珪藻を、深い場所では植物プランクトンを多く利用することが分かった。2.河口域生態系の研究においては、仙台湾七北田川河口の蒲生潟を調査地として大型底生動物の餌資源の解析を行った。まず、餌物質として、POM(水中懸濁有機物)、SOM(堆積有機物)、海藻オゴノリとその付着物、塩性湿地植物のヨシ、また底生珪藻を堆積物から分離して、炭素・窒素安定同位体比を測定し、異なる地点から代表的な底生動物を採集し、その同位体比と比較することにより、底生動物が同化している餌物質を推定した。

その結果、底生動物は潟内部で生産された微小藻類を主な餌としていることが分かった。また、既往の文献から堆積物食者とされている種の一部には実際には肉食と考えられるものがいること、懸濁食者はPOMと同様に底生珪藻もかなりの程度同化していることが分かった。3.河川生態系の研究では、河川の源流域において、水質が酸性(pH=5.3-5.6)と中性の河川を選び、そこに生息するトビケラ類の餌物質の推定を行った。その結果、トビケラ類は水質に関係なく外来性の陸上植物由来の有機物を主な餌としていることが分かった。1.強酸性湖潟沼生態系の研究においては、堆積物食サンユスリカ幼虫の飢餓条件と給餌条件での炭素・窒素安定同位体比の変化を実験的に比較し、また蛹化から羽化までの変態に伴う同位体比の変化を調べた。その結果、同位体比の大きな変化は給餌による体重量の増加にともなって起きることが明らかとなり、飢餓条件での変化は、炭素同位体比は有意に増加したものの、極めて小さいものであった。従って、ユスリカの同位体比の変化は新たな体成分のとしての炭素の付加によることが示唆された。また、蛹化から羽化の間にも、窒素同位体比は有意に増加したが、その変化は小さい。2.河口域生態系の研究では、仙台湾名取川河口の井戸浦において、底土有機物の起源推定および泥干潟に生息する堆積物食者の餌資源解析をおこなった。その結果、井土浦の底土の炭素同位体比の値は流入河川水中の懸濁有機物(POM)の値に近く、底土有機物が主に河川由来の腐植起源であることを示していた。しかし、堆積物食者の炭素同位体比はそれよりも6‰以上高く、彼らが底土表層の底生珪藻マットを選択的に同化していることを示していた。堆積物食者が優占する底生低次食物網では、消化が良い餌である底生珪藻が生産者として重要な役割を果たすことが分かった。3.河川生態系の研究では、河川の源流域において、底生無脊椎動物の餌物質の推定を炭素・窒素・硫黄安定同位体比解析により行った。その結果、カワニナが、他の底生動物よりも低い炭素・硫黄同位体比をもつことが分かった。このことからカワニナの餌として化学合成独立栄養の硫黄酸化細菌の寄与が予想され、河床が砂礫の源流域においても川底に嫌気環境が存在することが推察された。
小売業における人材ポートフォリオとライン管理者の人材育成行動

本研究では、小売業における店長や売場管理者等のライン管理者による人材育成行動の実態と規定要因、社員の企業内キャリアへの影響についての解明を試みた。研究課題の遂行にあたり、ライン管理者の人事管理上の役割に関する英国等での先行研究の論点を整理した。これを踏まえ、既存のアンケート調査のデータをもとに、1小売業における人材育成に積極的なライン管理者の特徴や、2スーパーマーケットにおける店舗戦略とライン管理者による人事管理の課題との関係、3大手小売業に勤務する多様な雇用形態の社員の企業内キャリアと就業意識の実態について分析にした。以上の成果として8本の学術論文を刊行している。1.小売業における現場第一線のライン管理者による人材育成行動(販売員の技能・キャリア志向の把握、仕事の割り振り、動機付け等)の実態を明らかにすることを研究目的としている。ライン管理者の人材育成行動は、ライン管理者が担う人事管理に関わる行動の一つと位置づけることができる。そこで、本年度は本研究(3年間)の初年度であることから、小売業及び人材育成行動に限定せず、より一般的にライン管理者の人事管理上の役割に関する英国等での先行研究を収集し、そのレビューを通じて、研究・分析枠組みの検討を行った。ライン管理者の人材育成機能に関する研究レビューの成果は、「ラインマネジャーの人材育成機能に関する研究レビュー」『法政大学イノベーションマネジメント研究センターワーキングペーパー』にまとめた。同成果からの知見として、先行研究の蓄積のある英国等において、1ライン管理者が人材育成に関して主に担当するのは、必要性の特定、対象者の選定、直接の指導が中心となること、2ライン管理者が人材育成に関わることで、幅広い従業員に人材育成の機会を与えることや、組織のニーズと個人業績を踏まえた人材育成がしやすいなどの利点があること、3それに応じたラインマネジャーの技能形成のための教育訓練が必要とされることなどの実態や課題があることを把握できた。2.食品スーパーマーケット企業1社を対象として、店舗での人材育成に関する事項を中心に、本社人事担当者へのインタビュー調査を実施した。インタビュー記録を作成したが、匿名性確保のため現時点では公表していない。3.本研究のテーマに即して、既存のアンケート調査の個票をもとに、人材育成に積極的な売場マネジャーの特徴を分析し、「管理職の部下育成行動と職場での人材育成に関するパフォーマンスー小売業の売場マネジャーなどの売場管理者に注目してー」を公表した。1.本研究は、小売業における現場第一線のライン管理者による人材育成行動(販売員の技能・キャリア志向の把握、仕事の割り振り、動機付け等)の実態を明らかにすることを研究目的としている。ライン管理者による販売員の各人に合わせた個別的な人材育成は、販売員のキャリア(仕事経験)の多様化を生じさせている可能性がある。ただし、そうした傾向は必ずしも小売業に限定されないとも考えられる。こうした論点に関連して、小売業を含む幅広い職種を対象に、既存のアンケート調査の再分析から社員のキャリア志向に対応したキャリアの多様化の実態について再分析した成果をもとに、英語論文として、`Diversification of Regular Employees' Career Orientations and the Current Status of Careers and Working Styles'を公表した。2.小売業1社の複数の売場管理者を対象として、売場での人材育成に関するインタビュー調査を実施した。また、小売業4社について、それぞれ人事担当者と店長に対するインタビュー調査を実施した。3.研究課題を通じて得た知見を踏まえて、店舗での人材活用を含むオペレーションに関する一般向けの論文として「2030年に向けた店舗オペレーションの構築」を公表した。4.ライン管理者による人材育成行動に着目する研究課題に関連して、高齢者雇用の文脈でライン管理者の部下管理に着目した論文として「高齢者による自律的な役割の決定と管理職のマネジメント」を刊行した。本研究の2年目にあたる27年度は、26年度に行った先行研究整理の成果等を踏まえて、調査研究事項を精査し、小売業を対象とする事例収集を進めた。具体的には、小売業1社について、複数の売場マネジャーを対象とする貴重なインタビュー調査の機会を得た。また、26年度より関係(ラポール)を構築した業界団体との連携を通じてチェーンストアを営む小売業4社についてそれぞれ本社人事担当者と店長に対するインタビュー調査を実施することができた。最終年度に当たる28年度の成果取りまとめに向けて、有益な資料を得ることができたと考えている。以上より、研究は「(2)おおむね順調に進展している」と判断した。最終年度にあたる本年度の研究成果としては、研究課題の遂行のため、旧・日本サービス・流通労組連合(JSD)が2012年に実施した『第6回JSD意識調査』のデータについて、学術的利用の許可を得て分析を行った。これをもとに、共同研究者3名の成果論文集として『小売業における多様な雇用形態の人事管理と就業意識・企業内キャリアー「第6回JSD意識調査」の個票に基づく2次分析ー』(法政大学イノベーションマネジメント研究センターワーキングペーパー)を刊行した。同書の第1章にあたる論文では、百貨店事業を主に営む大手小売企業の販売・営業職に焦点を当て、正社員及びパート・契約社員の企業内キャリアと就業意識について分析し、各雇用形態の中でも、役職昇進の有無やタイミングに関して、各人のたどる企業内キャリアが多様化していることを明らかにした。このような雇用形態内でのキャリアの多様化をもたらす要因の一つとして、売場管理者等のライン管理者が、部下の技能や意識等に応じて個別的に人材育成を遂行していることが考えられる。

第2章にあたる論文では、食品スーパー業に焦点を当て、パート社員の仕事内容の高度化を左右する要因として企業の店舗戦略に着目した分析を行った。分析結果から、特に、店舗への権限移譲を伴う店舗戦略をとる企業では、店長や部門長など現場のライン管理者による人事管理を充実させることの重要性が高いという示唆を得た。第3章にあたる論文では、60歳以降の社員として、正社員のほか、嘱託社員等の定年後の雇用契約に基づいて働く社員など様々なタイプ社員が含まれる現状認識を踏まえ、そうした雇用形態の多様化が進展する小売業の社員を多く含む上記調査データをもとに、正社員やパートタイマー・アルバイト、契約社員、嘱託社員として働く60歳以降の社員の就業意識や仕事内容、労働組合活動の状況について分析し、これらの実態を明らかにした。本研究では、小売業における店長や売場管理者等のライン管理者による人材育成行動の実態と規定要因、社員の企業内キャリアへの影響についての解明を試みた。研究課題の遂行にあたり、ライン管理者の人事管理上の役割に関する英国等での先行研究の論点を整理した。これを踏まえ、既存のアンケート調査のデータをもとに、1小売業における人材育成に積極的なライン管理者の特徴や、2スーパーマーケットにおける店舗戦略とライン管理者による人事管理の課題との関係、3大手小売業に勤務する多様な雇用形態の社員の企業内キャリアと就業意識の実態について分析にした。以上の成果として8本の学術論文を刊行している。研究の初年度にあたる本年度は、先行研究の整理を中心に研究を進めた。先行研究の整理にも基づく成果をとりまとめることができ、次年度以降の研究に向けた分析枠組みの検討については、十分に進めることができたと考える。他方で、調査によるデータ収集については、調査先企業との実施時期調整等の都合もあり、調査実施の小売企業は1社のみにとどまった。しかし、同事例については、有益な情報を得ることができた。また、業界団体との関係構築を進めることで、次年度以降の本格的な調査の実施に向けた準備を進めることはできた。さらに、本研究の関心に即して、既存アンケート調査の個票を分析し、売り場マネジャーの部下育成を促す要因についての論文を公表した。以上から、研究は「(2)おおむね順調に進展している」と判断した。最終年度に当たる28年度においては、これまでに実施した事例調査および関連するアンケート調査の集計・分析に基づき、研究成果をまとめることを目標とする。そのために、1)これまでの研究成果および先行研究を踏まえた分析枠組みを再検討するほか、2)事例調査の実施と分析および既存のアンケート調査の再分析を行う。より具体的には、上記1)に関して、研究分担者と研究会を開催し、研究に関して議論し情報共有、研究内容の充実化をはかるとともに、調査研究の進捗の確認を行っていく。
腸炎ビブリオの持つ菌体結合性赤血球凝集素(cHA)の腸管定着因子としての解析

腸炎ビブリオの病原性としては、腸管定着能と毒素産生性が挙げられる。現在までに本研究での研究対象であるcHA(Cell-associated hemagglutinin)が腸管定着因子として機能することをCaco-2細胞(ヒト大腸上皮細胞由来)等の培養細胞や単離小腸上皮細胞を用いて証明してきた。さらに本研究ではcHAの機能解析を遺伝子レベルで行うとともに、腸炎ビブリオが細胞に定着した後に、細胞にどのような影響を与えているのかを細胞生物学的に検討した。1 cHA構造遺伝子のクローニングを行うため、左記遺伝子の欠落した腸炎ビブリオをinsertion mutation法を用いて作成し、赤血球凝集能が失われ、かつ培養細胞への定着能が低下した変異株を得た。現在、この変異株を用いてcHA構造遺伝子のクローニングを行っている。2腸炎ビブリオは小腸上皮細胞に定着し、毒素を産生して下痢原性を発揮すると考えられる。しかしながら、腸炎ビブリオのcHAを介した上皮細胞への定着が細胞にどのような影響を与えるのかは全く不明である。そこでCaco-2細胞を腸炎ビブリオ(cHA^+)を感染させた後、免疫蛍光染色法を用いて、細胞骨格タンパク(F-アクチン、微小管構成タンパク)の変化を解析したところ、菌が定着した部位に特異的にF-アクチンと微小管が凝集し、細胞骨格の再構築が起こっていることが明らかとなった。
組換えDNA実験によるカリニ肺炎ワクチンの作成とそれを用いた予防・治療の検討

ニューモシスチスカリニ(以下,カリニと略す)肺炎は後天性免疫不全症候群(エイズ)をはじめとする免疫不全状態で発症し易く致命症となるケースが多い.そのために本症の診断と治療法の確立が望まれている.現在において培養液によるカリニの増殖はほとんど成功しておらず,このために診断やワクチンの材料となるカリニに量産を画るために組換えDNAの応用が有力と考えられる.このための基礎的研究を進めて以下の成果を得たので報告する.(1)カリニ遺伝子の研究:カリニから遺伝子を分離した.まずDNAを分離してベクターに組込み,現在ゲノムライブラリーを作製中である.このうちの一部のプローブを用いてカリニのDNA診断を試みた結果,ラットとヒト(患者)由来のカリニ塩基配列に相異が認められた.またリポゾームのSSRNAを分離して塩基配列を決定した.この結果,カリニの生物系統樹では虫むし真菌と塩基配列に相同性が認められた.(2)クローニングの標的となる蛋白質の研究:カリニには分子量11万5千ダルトン(P115と略する)の糖蛋白質が主要な膜蛋白であることが,モノクロナール抗体,免疫電顕,ウェスタンブロット, 2次元電気泳動などの技法を駆使して明らかにした.この蛋白はハイマンノース型の糖鎖を有し,抗原性も高いと考えられることから,ワクチンや血清診断法の標的物質になり得ると判断している.ただし, P115は2次元電気泳動法でみると数個のスポットから成る集合体で,更らに分画してからペプタイドに切断して,数ヶ所でアミノ配配列の決意を行う作業を進めている.今後はアミノ酸配列から合成オリゴヌクレオチドや合成オリゴペフタイドをデザインして, P115をコードしている部分の遺伝子クローニングの実験を展開する予定である.他方,ハイマンノース型糖鎖とマクロファージ(膜にはマンノースレセプターが確認されている)との関連についても研究を行う予定である.ニューモシスチスカリニ(以下,カリニと略す)肺炎は後天性免疫不全症候群(エイズ)をはじめとする免疫不全状態で発症し易く致命症となるケースが多い.そのために本症の診断と治療法の確立が望まれている.現在において培養液によるカリニの増殖はほとんど成功しておらず,このために診断やワクチンの材料となるカリニに量産を画るために組換えDNAの応用が有力と考えられる.このための基礎的研究を進めて以下の成果を得たので報告する.(1)カリニ遺伝子の研究:カリニから遺伝子を分離した.まずDNAを分離してベクターに組込み,現在ゲノムライブラリーを作製中である.このうちの一部のプローブを用いてカリニのDNA診断を試みた結果,ラットとヒト(患者)由来のカリニ塩基配列に相異が認められた.またリポゾームのSSRNAを分離して塩基配列を決定した.この結果,カリニの生物系統樹では虫むし真菌と塩基配列に相同性が認められた.(2)クローニングの標的となる蛋白質の研究:カリニには分子量11万5千ダルトン(P115と略する)の糖蛋白質が主要な膜蛋白であることが,モノクロナール抗体,免疫電顕,ウェスタンブロット, 2次元電気泳動などの技法を駆使して明らかにした.この蛋白はハイマンノース型の糖鎖を有し,抗原性も高いと考えられることから,ワクチンや血清診断法の標的物質になり得ると判断している.ただし, P115は2次元電気泳動法でみると数個のスポットから成る集合体で,更らに分画してからペプタイドに切断して,数ヶ所でアミノ配配列の決意を行う作業を進めている.今後はアミノ酸配列から合成オリゴヌクレオチドや合成オリゴペフタイドをデザインして, P115をコードしている部分の遺伝子クローニングの実験を展開する予定である.他方,ハイマンノース型糖鎖とマクロファージ(膜にはマンノースレセプターが確認されている)との関連についても研究を行う予定である.今年度の研究実績はPneumocystis carinii(以下P.cariniiと略す)からDNAを取り出してプラスミッドDNA(以下、DNAプローブとする)を作製したことである。P.cariniiの材料はヌードラットの感染肺から集シスト法により得た。集シスト後、できるだけ肺成分の混入を避けるため庶糖密度勾配に重層して超遠心法で分離した。シストから核酸を取り出す方法はシスト壁には固いポリサッカライド膜を有しているため、種々の破壊法を試みた結果、リゾチームを最初に反応させ、次ぎにプロテナーゼとデタージント(SDS)で処理することで十分であることが分かった。DNAの抽出法は一般に用いられるフェノール法に従い、エタノールで沈澱回収した。DNAのクローニングにはプラスミッドベクター(【PBR_(322)】)に先に得られたDNAを組込んで行った。この組換えには制限酵素Hind【III】が適当であると考えられたため、この酵素でプラスミッドとP.cariniiのDNAを処理した後、【PBR_(322)】の5 ́-未端の燐酸基にアルカリフォスファターゼを作用させてブロックしてから両者を結合させた。クローニングにより、20数個の組換えDNAが得られた。このうち、比較的分子量の大きいプローブを数個選んで、ニック法でRI標識し、サザン法でヒトやラットの肺から得られたP.cariniiのDNAとハイブッドさせて、これらの核酸の配列に差異がないかどうか検討した。その結果、P.cariniiのDNAに差異のあることが判明した。この成果を現在、論文にまとめている。

一方、m-RNAから蛋白を合成させ、P.cariniiの構成蛋白を検定するために必要なモノクロナール抗体を4種作成したが、このモノクロを用いた血清診断法についても検討した。その結果、ヒトのカリニ肺炎には血中抗原をEIAで測定する際、モノクローナル抗体では検出できない例があり、ポリクローナル抗体で測定する方がよいと考えられる。ただし、喀痰検査にはモノクロール抗体が役立つことが判明した。