hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
私的領域との関連から政治を捉えるフレームの影響の検討

政治を個人の私的領域と関連づけて捉えるフレームが有権者の政治的態度にもたらす影響を検討するため、インターネット調査実験を用いた検証を行った。また、練馬区選挙管理委員会におけるインターンシップ活動の参与観察を通じて、大学生にとって社会で働くことと選挙や政治について学ぶことがどう関連づけられるのかという点について考察を行った。これらの研究の結果、より良い民主主義社会を築く上で、政治を自らの私的生活領域と関連づけることの有効性が示唆された。プリテストを行い質問項目のワーディングやフレームの操作を行うための文章についての検討を重ねた上で、2011年2月に株式会社クロス・マーケティングのリサーチ・パネルを対象としたウェブ調査実験を実施した。まず、調査対象者を抽出するためのスクリーニング調査を行い、政治関心・政治的有効性感覚についての実験操作を行う前のデータ、および基本的な属性に関するデータを取得した。スクリーニング調査の対象となったのは5612名である。さらにスクリーニング調査から1週間後の間隔を置いた上で、5612名のうち1415名に対して本調査を実施し、私的生活との関連で政治を捉えるフレーム・政治を抽象的な理念をぶつけあわせる場として捉えたフレームを提示した上で、政治関心・政治的有効性感覚等の変化について検討した。その結果、私的生活との関連で政治を捉えるフレームを提示したことの効果が見られたが、効果の詳細については2011年度も継続して検討を行った上で研究成果を論文にまとめる予定である。また、これまで著者が行ってきた有権者の行動やマスメディアへの接触についてまとめるとともに量的・質的研究についてレビュー論文を執筆した。フレーミングはマスメディアにおける報道と密接な関連を持っており、2011年度に研究成果を発表する上での土台となるものである。さらには、申請段階での研究計画では予定していなかったが、練馬区選挙管理委員会における学生のインターンシップ活動の取材を行う機会を得た。選挙管理委員会におけるインターンシップは、キャリア教育と有権者教育としての側面が両立しており、2011年度における検討テーマの一つとなる「仕事」と「政治」の関連を考察する上で、重要なケースとなるものである。当初の予定とは異なり、有権者における仕事と政治の関連について検討する上で格好の題材といえる練馬区選挙管理委員会における大学生のインターンシップ活動に関わる機会を得た。そのため、この活動に対する参与観察を行い研究の成果をまとめた。学生達は、選挙管理委員会におけるインターンシップ活動を通じて、選挙における中立性を遵守しながら、なるべく(税金を財源とする)経費をかけずに、少しでも多くの有権者の投票を促すという選挙管理委員会における啓発活動について、正統的周辺参加の過程を経て学習することが出来た。3か月間のインターンシップは、学生達が有権者や民主政治のあるべき姿について考えると同時に、啓発発動が課外活動やボランティアではなく、厳密な法律の規制の下にあり、あくまで成果が求められる「仕事」であるというということを実感する過程でもあった。これは、自らの仕事と政治を関連づけるフレームを獲得することが大学生にとって、キャリア形成という観点からも有権者という観点からも有効であることを示唆しているといえよう。加えて、平成22年度とは異なり、私的領域と政治を関連づけるフレームを直接文章で提示するのではなく、従属変数となる政治関心や政治的有効性感覚の測定の前に尋ねる質問項目(個人の私的生活に関連した直接経験争点・私的生活とは関連し難い間接経験争点)を変えることによってフレームを潜在的に操作するインターネット調査実験を行った。その結果、フレームの政治関心および政治的有効性感覚には群ごとの差が見られなかった。この点については、回答者が調査のみに集中しているとは限らないインターネット調査実験という手法の特徴を踏まえ、実験室実験を行うことや、より強いフレームの操作を行うといった改善策が望まれる。
車輪型移動ロボットの走行制御に関する研究

車輪型移動ロボットをモデル化し、移動しながら負荷を推定し、車輪同士の協調制御を行うことでスムーズな動作を実現した。さらに、障害物などの外乱が入った場合でも安全に動作できる走行制御手法を確立した。本研究は,車輪型移動ロボットにおいて,移動しながら負荷を推定し,車輪同士の協調制御を行うことでスムーズな動作を実現し,さらに,障害物などの外乱が入った場合でも安全に動作できる走行制御手法を確立することを目標としている。初年度である平成19年度は,実験システムの構築と基本的なPID制御を用いた制御特性の把握に主眼を置いて研究を開始した。具体的には,シミュレーションソフトであるMATLAB/SIMULINKから直接モータ制御が実現できる制御コントローラを購入し,そのシステムを用いてオフライン動作でメカ特性を把握するモータ制御システムを構築した。次に,オフラインで負荷イナーシャ値,粘性摩擦定数,クーロン摩擦およびメカ共振振動数を同定してモデル化する方法を確立し,1軸スライドシステムを用いてMATLAB/SIMULINKを用いて同定が可能なことを確認した。しかし,車輪型移動ロボットではモータのパワー不足によりトルク飽和が起こり,制御特性の同定ができなかった。現在,ギア比を大きくしたモータの納入待ち(5月15日納期)である。さらに,駆動条件の違いによる制御特性の違いを把握するため,同じスライダを2台用意し,一方には5kgの重りを載せ,同じパソコン(RT-Linux)上で同時に制御し,リアルタイムで制御対象の負荷を変えて位置決め特性がどのように変化するかを確認した。この変化に関しては,一般的なPID制御則に非線形制御補償を加えることで位置決め特性が悪化しないことを確認し,特許出願(モータ位置制御装置:特願2007-158010号)し,展示会(ロボット産業マッチングフェア北九州2007,九州国際テクノフェア2007)にて公表するとともに,電気学会産業応用部門誌へ論文投稿(現在査読中)した。本研究は、車輪型移動ロボットにおいて、移動しながら負荷を推定し、車輪同士の協調制御を行うことでスムーズな動作を実現し、さらに、障害物などの外乱が入った場合でも安全に動作できる走行制御手法を確立することを目標としている。以下、平成20年度の実施計画に基づいて報告する。1.車輪型移動ロボットのメカ特性の把握とモデル化平成19年度はモータのパワー不足によりトルク飽和が発生していた車輪型移動ロボットのモータのギア比を変更し、MATLAB/SIMULINKを利用した制御実験装置を用いて、オフラインでメカ特性(複数のハードウエアを含めたトルク定数、負荷イナーシャ値、メカ共振周波数)を測定した。制御対象を2慣性系+軸干渉を考慮してモデル化し、現在は実験結果とモデル応答を整合中である。2.線形制御則と非線形制御則の比較ができるシミュレーション環境と実験環境の構築代表的な線形制御則であるPID制御、フィードフォワード制御、2自由度制御、および、非線形制御則として、スライディングモード制御、適応制御をシミュレーションと実験で比較可能な環境を構築した。さらに、非線形外乱、指令加速度等がリアルタイムで変更可能なソフトウエアを作成した。3.線形制御則と非線形制御則をシミュレーションおよび実験で比較制御対象として、ACサーボモータ、1軸転がり案内スライダ、非電磁アクチュエータを用いた1軸スライドシステムを用いて、線形制御則と非線形制御則の比較を実験で評価した。その結果、摩擦の悪影響が大きいシステムにおいて非線形制御則の方が位置制御応答が優れていることが分かった。以下、平成21年度の実施計画に基づいて実績を報告する。1.車輪型移動ロボットのメカ特性の把握とモデル化平成21年度はMATLAB/SIMULINKを利用した制御実験装置を用いて、オフラインで車輪型移動ロボットのメカ特性(複数のハードウエアを含めたトルク定数、負荷イナーシャ値、メカ共振周波数)を測定した。制御対象を2慣性系+軸干渉を考慮してモデル化し、実験結果とモデル応答の周波数応答がほぼ一致するモデル作成に成功した。2.車輪同士の協調動作を行うための制御アルゴリズムを開発各車輪に加わる外乱力を推定するために現存する複数の外乱オブザーバを評価し、本システムに適する外乱オブザーバを利用して、両軸に加わる外乱力を均一とするように補償する軸干渉補償方法を提案し、直線走行動作、曲線走行動作における実機実験で提案方法の効果を確認した。さらに、車輪型移動ロボットの車輪軸を模擬した実験装置でH20年度に提案した非線形制御則(リアルタイムな負荷変動に対応可能)を評価したが、振動を誘発し、剛性の低い(振動しやすい)メカには適用できないことが分かった。従って、一般的なPID制御則に外乱オブザーバと軸干渉補償を加えた制御則が本車輪型移動ロボットに適することが分かった。3.目標軌道上に障害物などの外乱がある場合の回避手段の構築障害物に衝突する前の障害物検知手段として、ステレオカメラによる障害物検知方法を開発し、さらに、無線LANを用いて遠隔操作できる方法を開発した。衝突した後の障害物検知手段として、外乱オブザーバで検知(推定)する方法を開発した。
凍結乾燥食品への高圧力利用

復元生の良い凍結乾燥食品を作る条件、すなわち、適度な大きさの氷結晶を均一に生成するために必要な冷凍条件(圧力、温度)を検討した。豆腐を用いて詳細に条件検討を行なった後、野菜や肉類についても試みた。充填豆腐(30×30×15mm角)3個、ニンジン(直径15mm×高さ10mm)6個、豚肉(20mm角)3個を試料とした。真空包装した試料を、食品高圧処理装置(Dr.Chef、神戸製鋼所製)を用いて-5°C,50MPa、100MPa、150MPa;-10°C,100MPa;-15°C,150MPaで60分間圧力移動凍結、または大気圧下の-20、-30、-80°C冷凍庫で冷凍した。これらを凍結乾燥機(ヤマト科学株式会社製)で乾燥し、75°C温水で復元後、外観撮影、重量測定、クリープメータ(山電製)による破断強度解析を行った。また、氷結晶と微細構造をクライオ走査型電子顕微鏡(日立製作所製)で観察し、官能評価を行った。圧力移動凍結し凍結乾燥した豆腐は、全体にほぼ均一なサイズの氷結晶跡がみられ、そのサイズは0.1MPa,-20°C≫0.1MPa,-30°C>50MPa,-5°C>150MPa,-5°C≧100MPa,-5°C>150MPa、-15°C≒100MPa、-10°C≧0.1MPa、-80°Cであった。冷凍保存試料では氷結晶のサイズが小さい程物性の変化が少ないが、凍結乾燥の場合は150MPa,-5°Cおよび100MPa,-5°Cで冷凍した試料が外観、物性とも最も未処理近く、官能検査でも最も良いと評価された。この時の氷結晶サイズは約3×103μm^2であった。すなわち、圧力と温度を組み合わせ凍結過程で氷結晶のサイズや形をコントロールすることで凍結乾燥食品の品質を向上させることができる可能性が示唆された。ニンジン、豚肉においても同様の傾向はみられたが、組織が複雑なため氷結晶の観察が難しく、明確な差はみられなかった。これまでの圧力移動凍結の効果が明らかで、かつ氷結晶の観察に最適であるのは豆腐と思われた。また、豆腐は凍結乾燥後の復元性を確認する上でも、実用性の面からも適していると考えられる。よって、基礎的な情報を得るため、圧力移動凍結法で冷凍した豆腐を凍結乾燥したときの製品の品質を検討した。充填豆腐(10mm角、30×30×15mm角)を真空包装し、食品高圧処理装置(神戸製鋼所製、Dr. Chef)を用いて、200MPaの圧力下で-20°Cまで冷却後、大気圧下まで圧力解除することにより圧力移動凍結した。対照として、冷凍庫内(-20、-30、-80°C)の大気圧下で空冷による冷凍もおこなった。このように凍結させた試料を、凍結乾燥機(東京理化器械製FDU-830、現有設備)を用い、約24時間かけて乾燥物とした。乾燥品の外観を比較すると、大気圧下で冷凍したものはやや黄色くなり氷結晶痕跡が確認できる状態であるのに比べ、圧力移動凍結したものは未処理の時の乳白色を保っており氷結晶痕跡はみられないが、表面に細かいひびがみられ非常に固い状態であった。ぬるま湯で戻した後の外観を比較すると、大気圧下で冷凍したものはスポンジ状の食感となった。一方、圧力移動凍結したものは、ぬるま湯に浸漬すると溶けてしまい固体状を保つことができず、豆乳様の白濁液となった。戻す水の温度、戻し時間の条件を変えても、水に浸漬後速やかに溶解してしまい、復元性のないことが明らかとなった。すなわち、豆腐の凍結乾燥品においては、氷結晶サイズが微細すぎては復元しない。圧力だけでなく温度なども考慮に入れ、均一かつ適度なサイズの氷結晶を作る条件を検討する必要がある。また、この現象が豆腐特有であるか、多糖ゲルなど他のゲル状食品も同様であるのか、野菜、肉・魚類では高圧力を用いた凍結乾燥が有効であるか、慎重に検討しなければならない。復元生の良い凍結乾燥食品を作るには、冷凍保存のようにより微細な氷結晶にすれば良いのではなく、適度な大きさの氷結晶を均一に生成する必要がある。よって、適度な大きさの氷結晶とはどの程度なのか、またそのような氷結晶を均一に生成するために必要な冷凍条件(圧力、温度)を検討した。充填豆腐(30×30×15mm角、3個)を真空包装し、食品高圧処理装置(神戸製鋼所製、Dr.Chef)で0°C以下でも凍らないの領域(不凍域:液相)内で圧力および温度を変動させて圧力移動凍結をおこなった。実用性の面から圧力によるタンパク変性やエネルギー効率を考慮し、50150MPa、-5°C-15°Cの範囲内で検討した。対照として、冷凍庫内(-20、-30、-80°C)で大気圧下(0.1MPa)の空冷による冷凍もおこなった。以上の条件で冷凍した試料を、凍結乾燥機(ヤマト科学株式会社製、Neocool Freeze Dryer DC56A/56B)を用い約24時間かけて乾燥物とした。乾燥物は75°Cの熱水に浸漬し復元した。

大気圧下で空冷したものは樹枝状に氷結晶が成長し部位によりサイズにばらつきがあったが、圧力移動凍結した試料では全体にほぼ均一なサイズの丸みを帯びた氷結晶が生成していた。各試料の氷結晶サイズは、0.1MPa,-20°C(約300×10^3μm^2)》0.1MPa,-30°C>50MPa,-5°C>150MPa,-5°C≧100MPa,-5°C>150MPa、-15°C≒100MPa、-10°C≧0.1MPa、-80°C(約1×10^3μm^2)であった。冷凍保存後解凍した試料では氷結晶のサイズが小さい程物性の変化が少ないが、凍結乾燥後復元した場合は150MPa,-5°Cおよび100MPa,-5°Cで冷凍した試料が最も未処理の物性に近かった。この時の氷結晶サイズは3×10^3μm^2前後であった。すなわち、圧力と温度を組み合わせることにより凍結過程で氷結晶のサイズや形をコントロールすることで凍結乾燥食品の品質を向上させることができる可能性が示唆された。復元生の良い凍結乾燥食品を作る条件、すなわち、適度な大きさの氷結晶を均一に生成するために必要な冷凍条件(圧力、温度)を検討した。豆腐を用いて詳細に条件検討を行なった後、野菜や肉類についても試みた。充填豆腐(30×30×15mm角)3個、ニンジン(直径15mm×高さ10mm)6個、豚肉(20mm角)3個を試料とした。真空包装した試料を、食品高圧処理装置(Dr.Chef、神戸製鋼所製)を用いて-5°C,50MPa、100MPa、150MPa;-10°C,100MPa;-15°C,150MPaで60分間圧力移動凍結、または大気圧下の-20、-30、-80°C冷凍庫で冷凍した。これらを凍結乾燥機(ヤマト科学株式会社製)で乾燥し、75°C温水で復元後、外観撮影、重量測定、クリープメータ(山電製)による破断強度解析を行った。また、氷結晶と微細構造をクライオ走査型電子顕微鏡(日立製作所製)で観察し、官能評価を行った。圧力移動凍結し凍結乾燥した豆腐は、全体にほぼ均一なサイズの氷結晶跡がみられ、そのサイズは0.1MPa,-20°C≫0.1MPa,-30°C>50MPa,-5°C>150MPa,-5°C≧100MPa,-5°C>150MPa、-15°C≒100MPa、-10°C≧0.1MPa、-80°Cであった。冷凍保存試料では氷結晶のサイズが小さい程物性の変化が少ないが、凍結乾燥の場合は150MPa,-5°Cおよび100MPa,-5°Cで冷凍した試料が外観、物性とも最も未処理近く、官能検査でも最も良いと評価された。この時の氷結晶サイズは約3×103μm^2であった。すなわち、圧力と温度を組み合わせ凍結過程で氷結晶のサイズや形をコントロールすることで凍結乾燥食品の品質を向上させることができる可能性が示唆された。ニンジン、豚肉においても同様の傾向はみられたが、組織が複雑なため氷結晶の観察が難しく、明確な差はみられなかった。
放線菌ストレプトミセス・グリセウスのゲノム解析のための基盤研究

放線菌Streptomycesgriseusの抗生物質生産、形態分化の開始は、自己調節因子A-ファクターによるホルモン制御やセリン/スレオニンキナーゼAfsKによるシグナル伝達が複雑に絡み合って制御されている。前年度にA-ファクターカスケードの中心に位置する転写因子AdpAの標的遺伝子を網羅的に取得していた。1.AdpAの標的遺伝子の中に金属プロテアーゼ、3種のセリンプロテアーゼ、ポリケタイドに合成遺伝子群を見出し、これらはA-ファクター依存的に転写されることを確認した。2.培地中のグルコースに依存して基底菌糸ないに隔壁を形成して、そのまま成熟胞子を着生する変異株をUV処理により取得した。遺伝子クローニングにより、本変異にはABCトランスポーター(ATP-binding cassette transporter)を構成するdasRABCが関係することを見出した。本遺伝子の塩基配列決定、転写解析や変異株の電顕観察により放線菌の形態分化の一端を明らかにできiた。なお、この変異株が示すectopic sporulationは、A-ファクター非依存性であった。4.AfsKの自己リン酸化を蛋白-蛋白結合によって制御するKbpAを同定した。kbpAは培養後期に発現され、afsK/afsR系で開始された抗生物質生産を抑制する負のフィードバックループを形成すると推定された。AfsKの標的蛋白であるAfsRはATpase活性を有し、afsSを標的とする転写因子であることを証明した。AfsRのリン酸化はAfsRのDNA結合能を飛躍的に高め、ATPase活性へも影響を与えた。このように、AfsK/AfsRのシグナル伝達系に新たにKbpA, AfsSの役者が加わり、本制御系の全解明に一歩近づいた。
関節リウマチと転写伸長遺伝子Aff3の関連についての解析

AFF3遺伝子は、関節リウマチ、I型糖尿病、SLEなどの自己免疫疾患と関連していることがGWAS解析によって示唆されている。AFF3は、転写伸長因子であるAFF1、AFF4と相同性を持つが、その生理・分子機能についてはほとんどわかっていない。本研究では、Aff3の生理的、分子的な機能を解明し、その自己免疫疾患との関連を明らかにすることを目的としている。平成30年度は、Aff3欠損マウスにおいて、免疫細胞の分化・活性化等にどのような影響が及ぼされているかについて解析を行った。B細胞・T細胞の分化や、それらのin vitroでの活性化においてはAff3欠損の影響は認められなかった。一方、血清中の抗体価を測定したところ、IgG2c、IgG1、IgG3の総量に有意な低下が認められた。さらに、OVA/CFAによりマウスを免疫しOVA特異的な抗体価を測定したところ、IgG2cにおいて低下が認められた。また、マウスマラリア感染モデルを用いて検証したところ、Aff3欠損マウスではマラリア感染の遷延化が認められ、抗マラリアIgG2c, IgG1抗体の低下が認められた。以上のような結果を得たことから、マウスよりB細胞を単離して培養したところ、そのAff3欠損細胞では抗体のクラススイッチの低下が認められ、さらにこの培養系においてAff3を過剰発現させたところ、その低下が回復した。これらの結果から、Aff3はB細胞内在的に、抗体のクラススイッチに関与していることが示された。本年度は、Aff3欠損マウスにおいて認められる免疫細胞の異常を探索する予定であった。Aff3遺伝子は、TおよびB細胞での発現が特に高いことから、その分化・活性化についての分析およびそれに関連する免疫機能の探索を行い、特定のクラスの抗体量が低下していることを発見できた。さらに、その原因を特定するために、細胞培養と遺伝子導入などを行い、B細胞においてAff3が抗体のクラススイッチに関与していることを明らかにできた。さらに、マラリア感染モデルにおいても、感染抵抗性の低下、特異的抗体の減少などが見られ、上記の異常を確かめることができた。以上のことから、現在までの進捗状況は概ね順調であると考えられる。Aff3がB細胞内において抗体のクラススイッチを制御することが明らかになったので、今後はその分子機構について解析を行う。現在までにcDNA microarrayなどを行ったが、Aff3欠損によって変化のある遺伝子は非常に少なく、また変化のあったものもクラススイッチとの関連も薄いことから、DNA上のクラススイッチ制御領域に直接結合している可能性をChIP-qPCRなどで検証する。既報の論文からは、このクラススイッチ領域において、転写伸長が抑制されることクラススイッチに必要であることが示唆されており、Aff3がこのステップを制御しているかどうか、RNAポリメラーゼIIの結合量や、他の転写伸長関連因子への影響をChIP-qPCR等で検証する。さらに、ヒトにおいてもAFF3が抗体のクラススイッチに関与しているかどうか、ヒトB細胞でのAFF3ノックダウン(RNAi等により)で検証する。また、自己免疫疾患との関連を解析するため、そのマウスモデルで検証する。

現在までにcDNA microarrayなどを行ったが、Aff3欠損によって変化のある遺伝子は非常に少なく、また変化のあったものもクラススイッチとの関連も薄いことから、DNA上のクラススイッチ制御領域に直接結合している可能性をChIP-qPCRなどで検証する。既報の論文からは、このクラススイッチ領域において、転写伸長が抑制されることクラススイッチに必要であることが示唆されており、Aff3がこのステップを制御しているかどうか、RNAポリメラーゼIIの結合量や、他の転写伸長関連因子への影響をChIP-qPCR等で検証する。さらに、ヒトにおいてもAFF3が抗体のクラススイッチに関与しているかどうか、ヒトB細胞でのAFF3ノックダウン(RNAi等により)で検証する。また、自己免疫疾患との関連を解析するため、そのマウスモデルで検証する。
植物細胞の空間情報処理機構の階層的理解

多細胞生物の発生では個々の細胞が適切な形態や機能を獲得するプロセスが必須である。植物においては細胞膜直下に並ぶ微小管やアクチン繊維が細胞壁の沈着パターンを適切に制御することにより細胞の成長や分化を支えている。そのためには細胞内での細胞骨格等の構造の配置を時空間的に厳密に制御する必要がある。本研究課題では木部道管における細胞分化をモデルとして細胞内に適切に細胞骨格を配置し、細胞壁の沈着パターンを決定づける空間的なシグナルの分子実体とその階層的な作用機序の解明を試みた。その結果、新規の微小管付随タンパク質IQD13およびCORD1を同定し、これらのタンパク質が微小管と細胞膜との相互作用を調節することにより、微小管ならびに細胞膜上に局在するROPGTPaseの局在パターンを制御していることが判明した。IQD13は微小管および細胞膜と相互作用を促進する一方微小管の脱重合を抑制し、細胞膜上でのROPGTPaseの拡散を抑制していることが示唆された。一方CORD1は細胞膜と微小管との相互作用を抑制し、微小管の細胞膜からの剥離を促進していた。これにより細胞膜上での微小管によるROPGTPaseへの作用を弱めていることが示唆された。これらの相反する活性を持つタンパク質の作用バランスにより、細胞膜上の微小管とROPGTPaseの局在パターンが決定され、それが細胞壁の沈着パターンとして表出されることが示唆された。これらの成果により、細胞骨格とROPGTPaseとの相互作用を通して細胞自律的に細胞内での配置が決定される仕組みが明らかとなった。平成29年度が最終年度であるため、記入しない。本研究課題は木部道管の二次細胞壁パターンの形成機構を明らかにすることにより、細胞の形態形成を担う細胞の空間情報処理機構を理解することを目的とします。平成28年度は二次細胞壁パターンに異常を示すシロイヌナズナ変異体の解析および逆遺伝学的に同定した二次細胞壁パターン制御因子の解析を行いました。次世代シーケンサーを用いたゲノム解析により、二次細胞壁パターンに異常を示す変異体の原因遺伝子として、ROP GTPase制御因子、微小管タンパク質、転写因子などをコードする遺伝子を同定しました。これらの遺伝子のT-DNA挿入変異体においても同一の表現型が観察されたこと、また一部の変異体に関しては相補実験により表現型が回復したことから、これらが原因遺伝子であることが判明しました。逆遺伝学的手法により同定した新規の微小管付随タンパク質ファミリーの解析も行いました。この遺伝子ファミリーのT-DNA挿入変異体を解析しましたが、顕著な表現型が観察されなかったことから、このファミリーの遺伝子が冗長的に働いていることが示唆されました。公開されているシロイヌナズナのRNAseqデータを解析した結果、これらの遺伝子が道管を含み広く植物体において発現していることがわかりました。そのうち、道管で発現する2つの遺伝子のTーDNA挿入変異体をクロスし、二重変異体を作出したところ、二次細胞壁のパターンに若干の異常が観察されたことから、これらの微小管付随タンパク質が二次細胞壁パターンの形成に貢献していることが示唆されました。各手法により新知見が得られていることから、順調に進んでいると言えます。今後は植物体および培養細胞、in vitroでの実験を組み合わせ、同定した制御因子の機能をさらに詳細に解明してゆく予定です。
唱導資料を通した延慶本『平家物語』の思想史的研究

延慶本『平家物語』について、唱導(説経)資料を通した研究を行った。特に、延慶本に多く挿入されている寺院関係記事について、これが盛り込まれた社会的・宗教的背景を考察した。その結果、十三世紀から十四世紀に頻発した寺院間の相論(訴訟)が背景にあることが分かった。相論に当たっては、訴えの内容を述べた「申状」「奏状」「事書」などが作成された。この時、大寺院は、多くの証拠文書を朝廷に提出するだけでなく、裁判を優位に進めるために、自らの主張の補強材料となるような物語や説話を積極的に喧伝するようになった。また、これらの訴訟文書を作成し、物語や説話を喧伝する際には、平安時代後期より隆盛を極めた唱導の成果が取り入れられていることを明らかにできた。すなわち、唱導活動においては、縁起・説話・物語などが用いられ、自らの寺社の霊験を顕揚する対句仕立ての美文が作成されたが、これらの成果が訴訟関係文書作成に用いられているのである。具体的には、延慶本『平家物語』巻六における白河院高野御幸説話が成立した背景に、十三世紀初頭の東寺と延暦寺との諡号相論があることを明らかにした。延慶本の高野御幸説話は、院政期・鎌倉時代の唱導を継承しつつ、鎌倉時代末期の東寺を中心とする真言宗興隆運動の中で整備されたものである。また、延慶本『平家物語』巻五における南都炎上記事は、平安時代末、平重衡によって焼討ちされた南都を復興するために行われた重源や弁暁の唱導活動を背景にして生まれた言説をもとにしていることを明らかにした。さらに、『平家物語』は寺院から発信された歴史認識の枠組みを用いて歴史叙述を立ち上げていること、また、寺院間の対立の影響を受けて変容した箇所があることも明らかにできた。延慶本『平家物語』と唱導(仏事法会の場における表白や説法)との関係性について、1、寺院間の相論、2、末法思想という二つの側面から追究した。1、中世において、有力な権門寺院(延暦寺・東大寺・醍醐寺・東寺など)はさまざまな利権をめぐって相論を繰り返した。その場合、自寺院の卓越性を広く説き知らせるための寺院縁起が盛んに編纂された。本年度、『平家物語』に含まれる東大寺縁起について具体的に考察し、延慶本が院政期の唱導の言説を取り入れていること、『源平盛衰記』が鎌倉時代末期に醍醐寺と東大寺との間で交わされた相論を背景にしていることを明らかにした。一方、寺院間の相論に当たっては、他宗に対すて自宗の優位性を説くための「宗論説話」というべきものも生み出された。延慶本『平家物語』に存在する弘法大師の宗論説話(弘法大師が天台宗を始めとする他宗の碩徳と問答をして真言宗の優越を実証したという話)について検討し、この説話が十四世紀初頭、延暦寺と東寺との間で交わされた訴訟と関連していることを報告した。2、末法思想は時代とともに仏教の教えが廃れていくことを説くが、これが広く流行した最も大きな要因は、造寺起塔を促し菩提心を起こすことを説くため、中世顕密仏教が人々の危機感を煽ったことにある。延慶本『平家物語』の「山門滅亡事」の章段は比叡山延暦寺の荒廃の様を語っている。本年度、関連する唱導資料などを調査し、延慶本の山門滅亡(法滅)の表現が、唱導世界で培われた言説を取り込みながら成り立っていることを明らかにした。以上のような作業と同時に、唱導資料『寺役転輪集』『安極玉泉集』『釈門秘鑰』の読解を進めた。大須真福寺所蔵の十二巻本『表白集』巻第四について調査し、翻刻と解題を公にした。十二巻本『表白集』は1200年前後に仁和寺御室の周辺で編纂されたと考えられる表白文の類聚で、院政期から鎌倉時代の文化を考えるには格好の資料である。その巻第四の諸本としては、国立歴史民俗博物館所蔵本(鎌倉時代前期書写)・京都女子大学所蔵本(鎌倉時代中期書写)などが知られているが、真福寺本もおそらくは鎌倉時代の写本と認められ、貴重な存在である。その本文を調べた結果、歴博本がもっとも整った本文を持ち、対して真福寺本と京都女子大学本とは共通の誤写箇所を持つなど、ごく近い位置にあることが判明した。合わせて収録される表白各篇について、その作者・施主・制作年代・思想的背景などを考察した。このような考察から判明したことの一つは、寺院における文筆活動の中には、歴史認識に関わる面が存在することである。そこで、表白や文書における歴史認識のあり方を延暦寺・園城寺・東大寺を例に考察し、それらと延慶本『平家物語』の歴史叙述との類似点・差異を探った。その結果、鎌倉時代の寺院においては、<寺-天下>同調史観とでも言うべき認識が基本になっていることがわかった。これは、自らの寺院の興廃と天下の盛衰とを連動させる見方で、自寺院の正統性を前面に押し出す認識である。延慶本『平家物語』は基本的にこの枠組みを採用し、権門寺院の興廃と天下の盛衰とを連動させる叙述方法を採用する。

しかし、特定の寺院の主張に偏ることなく、いくつかの寺院を同等に見る視座をも合わせ持っている。つまり、<寺-天下>同調史観を特定の寺院の主張から切り離して普遍化することで、特定の立場に偏らない物語の叙述を創り上げることに成功したのが延慶本『平家物語』であると考えられる。延慶本『平家物語』について、唱導(説経)資料を通した研究を行った。特に、延慶本に多く挿入されている寺院関係記事について、これが盛り込まれた社会的・宗教的背景を考察した。その結果、十三世紀から十四世紀に頻発した寺院間の相論(訴訟)が背景にあることが分かった。相論に当たっては、訴えの内容を述べた「申状」「奏状」「事書」などが作成された。この時、大寺院は、多くの証拠文書を朝廷に提出するだけでなく、裁判を優位に進めるために、自らの主張の補強材料となるような物語や説話を積極的に喧伝するようになった。また、これらの訴訟文書を作成し、物語や説話を喧伝する際には、平安時代後期より隆盛を極めた唱導の成果が取り入れられていることを明らかにできた。すなわち、唱導活動においては、縁起・説話・物語などが用いられ、自らの寺社の霊験を顕揚する対句仕立ての美文が作成されたが、これらの成果が訴訟関係文書作成に用いられているのである。具体的には、延慶本『平家物語』巻六における白河院高野御幸説話が成立した背景に、十三世紀初頭の東寺と延暦寺との諡号相論があることを明らかにした。延慶本の高野御幸説話は、院政期・鎌倉時代の唱導を継承しつつ、鎌倉時代末期の東寺を中心とする真言宗興隆運動の中で整備されたものである。また、延慶本『平家物語』巻五における南都炎上記事は、平安時代末、平重衡によって焼討ちされた南都を復興するために行われた重源や弁暁の唱導活動を背景にして生まれた言説をもとにしていることを明らかにした。さらに、『平家物語』は寺院から発信された歴史認識の枠組みを用いて歴史叙述を立ち上げていること、また、寺院間の対立の影響を受けて変容した箇所があることも明らかにできた。
レインリリ-(Zephyranthes,Habranthus)の類縁関係

レインリリ-の花色育種に当たり形態学的特性,アイソザイムおよび交雑親和性から類縁性を推定した。供試材料はZephyranthes5種および8栽培品種,Habranthus3種および1栽培品種,Rhodophiala1種であった。1.Zephyranthesは花が直立するのに対して,Habranthusは斜上していた。Habranthusの花は一つの、花茎に一つの花であったが,Rhodophialaは3-4花をつけた。その他には明確な類縁性を示す形態学特徴はなかった。2.エステラーゼ,パーオキシターゼ,酸性フォスフォターゼの3酵素についてアイソザイム分析を行い,類縁関係を調査した.Zephyranthesには種内に共通のバンドは認められず,なかでもZ.candidaはザイモグラムを構成するバンド数が全体的に少なく,他とは異なるザイモグラムを示していた。一方.Habranthusには共通のバンドがいくつか認められ,H.andersoniiには特異的なバンドも認められた。3.アイソザイム分析の結果を基にクラスター分析を行ったところ,Z.`Luciae'はHabranthusと類縁性が高く,4.子房培養,胚珠培養を併用して,相互交雑を行った結果,比較的容易にF_1個体を得ることができたが,それらの多くは傾母個体であった.しかし,形態的特性およびアイソザイムのバンドパターンからいくつかの組合わせについては雑種と確認された.5.得られたF_1個体の花色には変異の拡大が認められた.レインリリ-の花色育種に当たり形態学的特性,アイソザイムおよび交雑親和性から類縁性を推定した。3.アイソザイム分析の結果を基にクラスター分析を行ったところ,Z.`Luciae'はHabranthusと類縁性が高く,4.子房培養,胚珠培養を併用して,相互交雑を行った結果,比較的容易にF_1個体を得ることができたが,それらの多くは傾母個体であった.しかし,形態的特性およびアイソザイムのバンドパターンからいくつかの組合わせについては雑種と確認された.5.得られたF_1個体の花色には変異の拡大が認められた.1.Zephyranthesは花が直立するのに対して,Habranthusは斜上していた。Habranthusの花は一つの花茎に一つの花であったが,Rhodophialaは3-4花をつけた。2.交雑により得られた雑種の多くは傾母個体であったが,Z.`Luciae'を種子親とした雑種においては両親の中間的形態あるいは両親と異なった形態を示した。3.アイソザイム分析は,エステラーゼ,パーオキシダーゼ,酸性フォスフォターゼの3酵素について行った。Zephyranthesには共通のバンドは認められず,なかでもZ.candidaはザイモグラムを構成するバンド数が全体的に少なく,他とは異なるザイモグラムを示していた。一方,Habranthusには共通のバンドがいくつか認められ,H.andersoniiには特異的なバンドも認められた。4.アイソザイム分析の結果を基にクラスター分析を行ったところ,Z.`Luciae'はHabranthusと類縁性が高く,またRhodophialaはどの種とも類縁性は低かった。5.Zephyranthesの種間交雑においては比較的容易に雑種を得ることができた。また,Habranthusとの属間交雑における雑種作出は困難であったが,子房培養,胚珠培養を併用した結果、いくつかの組合わせにおいて雑種が得られた。アイソザイム分析による類縁性と交雑親和性の間には明瞭な関係は認められなかった。平成9年度は,作出されたF_1個体について形態学的調査およびアイソザイム分析により雑種性を確認した.1.相互交雑を行い,子房培養,胚珠培養による胚救済を行うことにより,比較的容易にF_1個体を得ることができた.しかし,それらの多くは傾母個体であった.いくつかの組合わせについては,形態学的特性およびアイソザイムのバンドパターンから雑種と確認された.2.得られたF_1個体の花色には変異の拡大が認めら,今後の育種素材としての利用が期待される.

レインリリ-は,中南米を中心にZephyranthes約35種,Habranthus約12種が自生しており,まだかなりの原種が眠っているという興味深い球根植物である.さらに,acessionを増やし広範囲に交配を行い,変異性を追求する予定である.本研究の結果によれば,雑種の獲得率が極めて低いことより,今後雑種獲得には,多数の交配が必要であるとともに,交雑胚の発達経過を観察し,胚の救済時期の確認も必要である.また,種により花弁にカロチノイドを含むもの,アントシアニンを含むものがある.花色素の調査により,花色と花色素の関係などが判明すればさらに花色育種は進むものと期待される.
台湾における胃癌と大腸癌の発生要因の調査研究

十二指腸潰瘍が胃潰瘍よりも多く,かつ胃瘍が少ない沖繩県に隣接する台湾でも十二指潰腸瘍が胃潰瘍より多いといわれており,台湾における胃癌や大腸癌の実態を明かにし,その発生要因を検討するのが本研究の目的である。記述疫学的に死亡統計をみてみると,台湾では,男で胃癌の漸減傾向,直腸癌と結腸癌の増加傾向が,女で胃癌の減少傾向,結腸癌の漸減傾向,直腸癌の漸増傾向がみられたのに対して,日本では男で台湾と同様の推移が,女で胃癌が減少傾向,直腸癌が漸減傾向,結腸癌が増加傾向を示していた。また,日本では結腸癌の増加傾向が著しいが,台湾では過去15年間に一貫して結腸癌の方が直腸癌よりも高率であり,いわゆる欧米的なパターンを呈していたことが強調される。1991年12月より台湾大学医学院内科他3施設において内視鏡検査受診者に対するライフスタイルなどの調査を開始した。1993年1月末現在で上部消化管内視鏡検査受診者7856人と大腸内視鏡検査受診者589人分の資料を収集した。最終的に胃癌患者は約100例,大腸癌患者は約50例になる予定である。このうち,既に整理の終わった胃癌患者30例と大腸癌患者24例の資料を用いて分析疫学の症例・対照研究の手法で台湾における胃癌と大腸癌のリスク・ファクターの検討を行った。解析に用いた胃癌症例は男18例,女12例,合計30例である。対照は上部消化管内視鏡検査で著変なかった男47例,女156例,合計203例である。これらの対象の既往歴,癌の家族歴,飲酒,喫煙及び食餌習慣について性・年齢階級の絞絡を補正するためにMantel-Haenzel法によって各要因単独の暴露ありのオッズ比を求めた。その結果,統計学的に10%以上の有意水準で有意であった要因について,相互の絞絡を補正するために多変量解析のunconditional logistic regression analysisを用いて解析した。高血圧の既往があることとのオッズ比は0.02であり,香辛料を週に2-3回以上摂取することのオッズ比は0.07でともに有意に胃癌のリスを下げていた。同様に大腸癌症例男13例,女11例,合計24例と大腸内視鏡検査で著変なかった対照の男47例,女60例,合計107例について単独の要因について解析した。牛肉を週を1-2回以上摂取することは有意に大腸癌のリスクを0.30に下げ,塩からい食品を毎日摂取することは有意に大腸癌のリスク3.52倍高めていた。なお,大腸癌については少数例であり多変量解析は行えなかった。この結果の評価については,最終的に収集できた全胃癌症例と大腸癌症例を用いて行う予定である。また,背景の遺伝子の解析としてPGC RFLPパターンは台湾の胃潰瘍では前庭部と他部位で異なっていた。

同様に大腸癌症例男13例,女11例,合計24例と大腸内視鏡検査で著変なかった対照の男47例,女60例,合計107例について単独の要因について解析した。牛肉を週を1-2回以上摂取することは有意に大腸癌のリスクを0.30に下げ,塩からい食品を毎日摂取することは有意に大腸癌のリスク3.52倍高めていた。なお,大腸癌については少数例であり多変量解析は行えなかった。この結果の評価については,最終的に収集できた全胃癌症例と大腸癌症例を用いて行う予定である。また,背景の遺伝子の解析としてPGC RFLPパターンは台湾の胃潰瘍では前庭部と他部位で異なっていた。十二指腸潰瘍が胃潰瘍よりも多く、かつ胃癌が少ない沖縄県に隣接する台湾でも十二指腸潰瘍が胃潰瘍より多いといわれており、台湾における胃癌や大腸癌の実態を明かにし、その発生要因を検討するのが本研究の目的である。台湾の死亡統計による記述疫学的実態をみてみると人口約2千万人の台湾地区で1年間に約10万人の死亡者があり、死因順位は1位悪性新生物、2位脳血管疾患、3位不慮の事故及び有害作用となっていた。1988年の台湾における悪性新生物死亡は18,233人であり、その死因の上位は男では、肝臓癌、肺癌、胃癌、食道癌、結腸癌、白血病、女では、肺癌、子宮癌、肝臓癌、胃癌、乳癌、結腸癌の順となっていた。台湾と日本における胃癌、結腸癌、直腸癌、胃潰瘍、十二指腸潰瘍の瀬木の世界人口を基準人口とした性別年齢調整死亡率を1974年1989年について求めて比較した。男性では、台湾においても日本においても、胃癌、胃潰瘍及び十二指腸潰瘍の減少傾向と結腸癌と直腸癌の増加傾向が認められた。女性でも、胃癌、胃潰瘍及び十二指腸潰瘍の減少傾向は台湾と日本の両者に共通して見られたが、大腸癌では、台湾で結腸癌が漸減傾向、直腸癌が漸増傾向を示したのに対して、日本で直腸癌が漸減傾向、結腸癌が増加傾向を示していた。台湾においては日本よりも胃癌が高率であり、また上記期間を通して男女ともにおいて結腸癌の方が直腸癌よりも高率であり、いわゆる欧米的なパタ-ンを呈していたことが強調される。更に現在、臨床統計資料を収集中であり、次年度末には集計・解析する予定である。台湾における胃癌と大腸癌の分析疫学的アプロ-チとしては、1991年12月より内視鏡検査受診者の生活習慣の調査を開始しており、症例・対照研究の手法を用いて次年度末までに解析する予定である。その他、台湾人の背景胃粘膜の病理学的検討も行う予定である。
冷えストレスによる下部尿路症状の解析と臨床応用の検討

冷えストレスによる下部尿路症状(LUTS)はQOLを低下させることで悩んでいる人が多いが検討は十分とは言えない。基礎的検討では膀胱の尿路上皮に注目し,前立腺肥大症患者において,自律神経系受容体mRNAの発現を検討したところ,アドレナリンα1D, β3受容体,セロトニン2b, 3a, 7受容体の変化が起こることが示された。臨床的検討では健康講座の受講生を対象として冷え症と冷え性でない2群に区分し,LUTSに対する体操の効果を検討したところ,冷え症群では,体操が蓄尿症状を改善させることが認められた。また,大建中湯が便秘症とLUTSを有する患者に対して冷え症とLUTSに有用なことが示された。冷えストレスにより下部尿路症状を生じる主要臓器である膀胱の粘膜に注目し、自律神経系受容体のmRNAの解析結果と臨床症状・尿流動態検査結果との相関を検討した。信州大学医学部医倫理委員会承認の下、前立腺肥大症に対して前立腺摘出を施行した症例の膀胱粘膜の、交感神経系受容体(α1 a,b,d、β3)のmRNAを測定して、術前の尿流動態検査結果、下部尿路症状との相関性を検討した。前立腺肥大症に対して、経尿道的前立腺切除術を受けた20名の患者を対象とした。初発尿意が200ml以下もしくは最大尿意が300ml以下(膀胱容量が少ない群)の群と初発尿意が201ml以上かつ最大尿意が300ml以上(膀胱容量が大きい群)の群とでは国際前立腺症状スコア(IPSS)、過活動膀胱症状スコア(OABSS)においては差を認めなかったが、前者が後者よりもアドレナリン受容体1dにおいて、mRNAの有意な増加を認め、免疫染色にても同様の結果を得た。また、別の32名の患者を対象とした研究では、尿流動態検査にて、尿路閉塞の強い(Schafer nomogramにて閉塞度V以上)症例において、アドレナリンβ3受容体の有意な発現の低下を認めた。本研究においては、膀胱容量については、アドレナリンα1d受容体が、また、膀胱出口部の閉塞にはアドレナリンβ3受容体が関連することが判明した。このことは、尿流動態検査結果をもとにそれぞれの受容体に特異性の高い薬剤を選択すると、よりよい臨床効果が得られることが期待できると考えられた。下部尿路症状をおこす主要臓器である膀胱の尿路上皮に注目し、自律神経系受容体の中でも頻尿治療薬の標的として注目されているα1aおよびα1dアドレナリン受容体、および体温調節などの生理機能に関与しているといわれている神経伝達物質であるセロトニン(5HT)に注目してmRNAの解析を行った。その結果、アドレナリン受容体には変化を認めなかったが、5HT受容体の中では、前立腺肥大症(BPH)群(n=27)および正常群(n=5)ともに5HT2Bおよび5HT7の発現を多く認めた。BPH群と正常群を比較すると、5HT2b、3a、7が、BPH群で有意に発現の増加を認めた。前立腺肥大症によって、体温調整に一部、関連する5HTの尿路上皮に関連する受容体に変化がおこる可能性が示唆された。また、腹が冷えて痛み、腹部膨満感がある症例に対して使用される大建中湯の冷えによる排尿症状および便秘症に対する臨床効果を検討した。大建中湯の臨床効果は、平均年齢77歳、男性15名、女性5名を対象として行った。大建中湯投与前の冷えと便秘の有無別で3群に分けた各群の国際前立腺症状スコア(IPSS)、QOLスコア、過活動膀胱症状質問票(OABS)、尿流測定による排尿量(Voided Volume)、最大尿流率(Qmax)、平均尿流率(Qave)、超音波測定による残尿量(Residual urine)を検討した。大建中湯投与後のIPSSの総点数は便秘の群で改善した。IPSSの蓄尿症状点数はいずれの群でも改善した。OABSSは、便秘もしくは冷え性の症状のある群で改善を認めた。大建中湯投与前後の尿流測定では、Qmax、Qaveは、便秘のある群で改善し、残尿量も減少した。腹の冷えで使用される大建中湯は、便秘の改善のみならず、冷えおよびそれに伴う下部尿路症状に対して、有用である可能性が示唆された。松本市ウエルネス健康講座「頻尿」を受講された方を対象とした。自己申告に基づいて,冷え性の群,冷え性でない群に分けた。それぞれの群において,身長,体重,腹囲,国際前立腺症状スコア:IPSS(排出障害、蓄尿障害、夜間頻尿回数、生活の質などが含まれる汎用問診表)および過活動膀胱症状質問票:OABSS(排尿回数,失禁とその程度がわかる汎用問診表)にて問診を行った。

手足の温度をサーモセンサーを用いて評価した。これらのデータに基づいて下部尿路症状(LUTS)と身体所見の相関性についての検討を行った。冷え性を改善する体操を指導し,2週後に先の項目の再評価を行い比較検討した。肥満度、血圧との関連性については冷え性でない(cold non-sensitive: CNS)群の平均BMI (Body Mass Index)は23.6,平均血圧は120/75 mmHgで,冷え性の(cold sensitive: CS)群は平均BMI(Body Mass Index)は22.6,平均血圧は123/73mmHgで差は認めなかった。体操前後の手足の温度変化についてはCNS群およびCS群ともに,足が冷えていた。とくにCS群では冷えの程度が強いが,体操によって改善を認めた。また,いずれの所見も左右差は認めなかった。IPSS,OABSSにおける評価では2週間の生活指導および体操の継続によって,IPSSの中の蓄尿症状の改善がCS群で有意に認められた。トータルスコアでも改善を認めた。また,QOLスコアにおいても改善が認められた。OABSSでは,CS群で改善効果を認める傾向があったが有意ではなかった。当初,尿流動態検査(膀胱内圧検査)を施行する患者を対象として,メントールの皮膚への噴霧による切迫性尿意(どうにも我慢ができない感覚)が生じるかどうかや膀胱収縮が起こるかどうかについての検討を計画していたが,治療に結びつく検討を優先し,冷えストレスにより下部尿路症状を生じる主要臓器である膀胱の粘膜に注目し、自律神経系受容体のmRNAの解析結果と臨床症状・尿流動態検査結果との相関を検討した。その結果膀胱容量については、アドレナリンα1d受容体が、また、膀胱出口部の閉塞にはアドレナリンβ3受容体が関連することが示唆できた。冷えストレスによる下部尿路症状を有する患者を対象として,国際前立腺症状スコア,過活動膀胱症状質問票,身長,体重,血圧,腹囲についての調査した。これらのデータに基づいて下部尿路症状と身体所見の相関性について検討した結果,冷え性の群で下部尿路症状と足の冷えが体操により改善することが示唆された。治療に結びつく知見が得られた。メントールの皮膚への塗布により膀胱収縮が起こるかどうかについて検討するとともに,その機序について関与する神経回路に焦点を当てて解明する。また,女性患者における冷えストレスによる下部尿路症状に着目し,閉経後の冷えストレスによる過活動膀胱の機序について膀胱粘膜のアドレナリン受容体,皮膚のTRIP8受容体の関与を含めて解明を加える。さらに,男女での違いを明らかにするために,膀胱出向部閉塞モデルを作成し,膀胱粘膜の自律神経系受容体のmRNAと尿流動態検査結果との相関について検討を加える。男女での違いなどを症例数を増やして検討する。尿流動態検査(膀胱内圧検査)を施行する患者を対象として,メントールの皮膚への噴霧による切迫性尿意(どうにも我慢ができない感覚)が生じるかどうかや膀胱収縮が起こるかどうかについて検討する。また,レーザー血流計オメガフローにて末梢血流の変化も測定し,尿意の出現との相関性を検討する。過活動膀胱患者を対象とし,下部尿路症状を排尿に関する症状と尿流動態検査などから評価した成績とメントールの皮膚への噴霧に対する反応との相関について検討する。以上から冷えストレスによる排尿筋過活動の機序を解明する。
ショウジョウバエ生殖細胞特異的小分子RNA「piRNA」の生合成経路の解明

ショウジョウバエPIWIタンパク質であるAGO3,Aubergine(Aub),Piwiは、生殖細胞特異的に発現し、piRNAと結合することによりトランスポゾン等の遺伝子発現を抑制している。piRNAは、Primary processing経路で最初に作られた後、Amplification loopにより増幅されると考えられている。これらpiRNA生合成経路については、未だ不明な点が多く存在する。私は、Aub、AGO3が修飾を介してTudと特異的に結合することを明らかにした。さらに、Tudは、Amplification loopにおいてpiRNAの品質管理で機能することが示唆された。しかし、Tudの詳細な機能については判っていない。以前の遺伝学的解析から、Armitage(Armi)は、piRNA生合成経路への関与が示唆されていた。そこで、piRNA生合成経路におけるTudとArmiの機能解析を試みた。生殖巣由来の体細胞株であるOSC (ovarian somatic cell)でArmiのRNAiを行うとprimary piRNAの量が減少した。また、ArmiはPiwi及びYbと三者複合体を形成していることが明らかになった。OSCでYbのRNAiにより、primary piRNAの量が減少することから、YbはArmiと同様にprimary piRNA生合成で機能する事が示唆された。Tudの機能を解析するため、卵巣内で特異的に結合する因子の同定を試みた。Tudは、多数の因子と結合していることが判明した。それら因子の質量分析により、ImportinβとNucleoporinを同定した。Importinβは卵巣の哺育細胞の核膜周辺に局在することからTudを核膜孔付近に留めておくことに関与していると推測する。または、NucleoporinがTudと直接的に結合することにより、Tudを核膜孔付近に留めているとも考えられる。Tudと核膜孔またはImpβとの共局在をみるため、野生型卵巣を用いてTudとImpβ、TudとNupの共染色を試みている。小分子RNAによる遺伝子発現抑制機構をRNAサイレンシングとよぶ。RNAサイレンシングにおける中核的な因子はArgonauteである。ショウジョウバエには5種類Argonauteが存在する。これら5種類のうち、生殖細胞特異的に発現するPiwi、Aubergine(Aub)、AGO3は、レトロトランスポゾン由来の小分子RNAであるpiRNA(PIWI-interacting RNA)と特異的に結合する事によってレトロトランスポゾンの発現抑制に関わる事が知られている。spindle-E(spn-E)やmaelstrom(mael)遺伝子を欠失したmutantではpiRNAが減少するため、これら因子のpiRNA生合成経路への関与が期待されるが、その詳細は不明である。私はSpn-EとMaelのpiRNA生合成における関与を生化学的に解析するため、Spn-EとMaelに対するモノクローナル抗体を作成した。作製した抗体を用いてovaryから免疫沈降実験を行い、Maelに特異的に結合する因子を質量分析で同定した結果、その多くが微小管形成に関わる因子である事が判明した。これによりpiRNA生合成に微小管形成が関係している可能性が浮上した。現在、その生理学的意義を解明している。Spn-E抗体を用いた免疫沈降は現在行っている。スプライシング因子Smタンパク質はUsnRNAと結合する事によって機能を発揮する。このタンパク質-RNA複合体形成には、Tudorドメインタンパク質の一つSMNがSmタンパク質に結合する事、また、その結合にはSmがもつ対照的ジメチル化修飾(sDMA)修飾が重要である事が判っている。最近の研究からAubはSmと同様にsDMAを持つ事が判明した。そのためAubに結合するTudorドメイン因子を探索したところ、Tudorドメインを9個もつTudorタンパク質である事が判明した。今後、Aub-Tudor間の結合とpiRNA生合成の関係を明らかにする。小分子RNAを介した遺伝子発現抑制機構では、Argonauteタンパク質が中核因子となって機能する。ショウジョウバエには5種類のArgonauteタンパク質が存在する。その内、Aubergine(Aub)、AGO3、Piwiは生殖細胞特異的に発現し、piRNAとの結合を介してレトロトランスポゾン遺伝子の発現抑制をすることが明らかになってきた。piRNA生合成において、Aub、AGO3そしてPiwiが持つendonuclease活性が関与することが示唆されたが、この経路の詳細は明らかにされていない。最近、Aub、AGO3及びPiwiが、dPRMT5によりアルギニンの対称的ジメチル化修飾(sDMA)を受けることが判明した。UsnRNP構成因子であるSmタンパク質は、sDMA依存的にTUDOR(TUD)ドメインを持つSMNと複合体を形成する。その複合体にUsnRNAが取り込まれUsnRNP形成が促進する。このことから、TUDドメインを持つ因子がpiRNA生合成経路においても機能するのでは無いかと考えられた。Aub及びAGO3がsDMA依存的に11個のTUDドメインを持つTudor(Tud)と結合し、三者複合体を形成しうることを明らかにした。この三者複合体には、レトロトランスポゾン由来のpiRNA前駆体が含まれていた。tud欠失変異体においてAubとAGO3に結合しているpiRNAの全体量は、野生型と比較して増加していた。それらのpiRNAを次世代シーケンサーによって解析したところ、tud欠失変異体ではレトロトランスポゾン由来のpiRNAの内分けが変化していた。