hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
衛星画像で見られる陸棚海況変動の時空間構造の研究

1.陸棚海況変動の3次元構造: STDを購入し,田辺湾において,ADCP観測と平行してSTD観測を各季節で行い,密度場と流れの対応を調べた.とくに台風シ-ズンにADCPを湾口に海底設置して,2カ月間連続観測を行い,回収に成功した.また大潮時にADCPの曳航観測を行い,半日間の潮流の3次元分布の変化を観測した.2カ月間のADCPの記録を白浜海洋観測塔の連続海象観測および湾沿岸の水位観測とあわせて解析した結果,水位においては月齢にともなって規則正しく大潮と小潮が交代していながら,流れにおいてはその2倍の周期の変動が卓越していて,内部潮汐が卓越していることを明らかにした.2.陸棚海況変動の季節変化:衛星画像(NOAAおよびランドサット)およびフェリーによる水温モニターによって,黒潮から沿岸にいたる海況変動を追跡し,沿岸異常潮位との対応が季節によりどの様に変化するのかを調べた.そして洪水による河川水の流出が沿岸フロントのみならず,黒潮の流動に影響を及ぼしている可能性を捕らえた.3.陸棚海況変動の診断モデル解析:田辺湾湾口部におけるSTD観測による密度分布から診断モデルによる流れの場を計算した.ADCP曳航観測でえられた流れの3次元分布と比較検証した.1.陸棚海況変動の3次元構造: STDを購入し,田辺湾において,ADCP観測と平行してSTD観測を各季節で行い,密度場と流れの対応を調べた.とくに台風シ-ズンにADCPを湾口に海底設置して,2カ月間連続観測を行い,回収に成功した.また大潮時にADCPの曳航観測を行い,半日間の潮流の3次元分布の変化を観測した.2カ月間のADCPの記録を白浜海洋観測塔の連続海象観測および湾沿岸の水位観測とあわせて解析した結果,水位においては月齢にともなって規則正しく大潮と小潮が交代していながら,流れにおいてはその2倍の周期の変動が卓越していて,内部潮汐が卓越していることを明らかにした.2.陸棚海況変動の季節変化:衛星画像(NOAAおよびランドサット)およびフェリーによる水温モニターによって,黒潮から沿岸にいたる海況変動を追跡し,沿岸異常潮位との対応が季節によりどの様に変化するのかを調べた.そして洪水による河川水の流出が沿岸フロントのみならず,黒潮の流動に影響を及ぼしている可能性を捕らえた.3.陸棚海況変動の診断モデル解析:田辺湾湾口部におけるSTD観測による密度分布から診断モデルによる流れの場を計算した.ADCP曳航観測でえられた流れの3次元分布と比較検証した.1.陸棚海況変動の3次元構造:本年度はSTDを購入して,田辺湾において,ADCP観測と平行して,STD観測を各季節で行なってきた.湾口にADCPを海底設置して,夏から秋にかけて2カ月間の連続観測を行ない,その間3回,湾内全域のSTD観測を行なった.STD観測から季節躍層の発達がみられ,ADCP観測から内部潮汐が発生していることが見られた.昨年度中に冬季の田辺湾の流れをADCP海面曳航観測で求めており,あわせて湾内の潮流の季節変化を求めている.2.陸棚海況変動の季節変化:NOAA衛星画像をとりよせ,フェリ-および観測塔による長期観測資料を解析して,陸棚海況変動の時間的な変動(個々の現象の発生消滅過程および季節による発生状況の推移)を調べている.本年度夏期は台風多発にともない,日本列島は雲におおわれることが多く,良好な衛星画像はすくなかった.また,フェリ-観測システムが故障し,夏期から秋期にかけて長期欠測してしまった.したがって,解析は昨年度までの資料も採用している.3.陸棚海況変動の診断モデル解析:上述した田辺湾のSTD観測から,密度分布を求め,診断モデル数値計算をおこなって流れの場を求め,ADCP観測による測流デ-タと比較した.流れの場と水温分布から,田辺湾の熱フラックスを計算して,衛星画像デ-タから田辺湾の熱フラックスを推算するために有効な海面下構造の設定を検討している.1.陸棚海況変動の3次元構造:前年に引続き,田辺湾において,台風シーズンにドップラー流速計(ADCP)を湾口に海底設置して,2カ月間連続観測を行い,回収に成功したが,内部回路の故障により,記録は取れなかった。湾口部の潮流の実態を明らかにするため,大潮時にADCPの曳航観測を行い,半日間の潮流の3次元分布の変化を観測した。この際にはSTD観測も実施した。前年に観測した2カ月間のADCPの記録を白浜海洋観測塔の連続海象観測および湾沿岸の水位観測とあわせて解析した。水位においては月齢にともなって規則正しく大潮と小潮が交代していながら,流れにおいてはその2倍の周期の変動が卓越していた。2.陸棚海況変動の季節変化:衛星画像(NOAAおよびランドサット)およびフェリーによる水温モニターによって,黒潮から沿岸にいたる海況変動を追跡し,沿岸異常潮位との対応が季節によりどの様に変化するのかを調べている。そして洪水による河川水の流出が沿岸フロントのみならず,黒潮の流動に警響を及ぼしている可能性を捕らえた。3.陸棚海況変動の診断モデル解析:田辺湾湾口部におけるSTD観測による密度分布から診断モデルによる流れの場を計算した。ADCP曳航観測でえられた流れの3次元分布と比較検証している。
多量体α-グルコシダーゼの耐熱化機構と機能発現の解析

多量体構造のサブユニット間相互作用が好熱菌タンパク質の熱環境への適応戦略となるか否かの分子的基盤情報を得るため、30-66°Cの温度領域で生育する通性好熱菌Bacillus thermoamyloliquefaciensKP1071の80°Cで10分の半減期を示す分子量540,000のサブユニット非解離性ホモ6量体α-グルコシダーゼIIと72°Cの150mMリン酸緩衝液(pH6.8)内で10分の半減期を示す分子量530,000のサブユニット解離会合性ホモ6量体α-グルコシダーゼIIIの各々のサブユニットをコードする対応遺伝子をクローニングし、遺伝子構造を解析した。その結果、1)対応遺伝子は各々4.8-kbp SalI-HindIII DNA断片と3.8-kbp HindIII DNA断片してクローニングされた;2)これらのDNA断片は各々2361bpと2310bpのオープンリーディング・フレームを含み、787残基よりなる分子量91,070のタンパク質と770残基よりなる分子量88,620のタンパク質に対応した;3)大腸菌で発現され均一に純化された酵素IIとIIIは、酵素IIがN末端7残基を欠落していないことを除けば、分子特性(ホモ6量体構造、分子量、耐熱性など)や触媒特性では対応天然型酵素と一致した;4)酵素IIのサブユニットの一次配列は、グリコシルヒドロラーゼ・ファミリー31に属する古細菌Sulfolobussolfataricus 98/2α-グルコシダーゼの一次配列と34%、酵素IIIのサブユニットの一次配列と32%、14の真核生物由来のα-グルコシダーゼの一次配列と24-30%一致した;5)他のα-グルコシダーゼと同様に、酵素IIとIIIのサブユニットは三つの二次構造領域、即ち、β構造のN末端領域、二つの触媒残基(酵素IIではAsp407とAsp484;酵素IIIではAsp383とAsp451)を含むα/βまたはα+β構造の中央領域、β構造のC末端領域から構成されるβ(α/β)βまたはβ(α+β)βのサンドウイッチ二次構造トポロジー・モチーフをとることが判明した。多量体構造のサブユニット間相互作用が好熱菌タンパク質の熱環境への適応戦略となるか否かの分子的基礎情報を得るため、30-60°Cの温度領域で生育する通性好熱菌Bacillus thermoamyloliquefaciensKP1071の80°Cで10分の半減期を示す分子量540,000のホモ6量体α-グルコシダーゼIIのサブユニットをコードする遺伝子をクローニングし、その遺伝子構造を解析した。その結果、1)酵素サブユニットをコードする遺伝子はpUC18に挿入された4.8-kbp SalI-HindIII DNA断片としてクローニングされた;2)本DNA断片は開始コドンATGと終止コドンATGを保持する2361bpのオープンリーディング・フレームを含み、フレームは787残基よりなる分子量91,070のタンパク質に対応した;

3)開始コドン5'上流にはシャイン・ダルガルノ配列とプロモーター・-35/-10配列に対応する配列(GGAGG;TTGCCA/TATATT)が出現した;4)終止コドン3'下流には対称逆方向反復配列が出現した;5)大腸菌で発現され均一に純化された酵素は、N末端7残基を欠落していないが、その他の分子特性(ホモ6量体構造、分子量、耐熱性など)や触媒特性では天然型酵素と一致した;6)酵素サブユニットの一次配列は、グリコシルヒドロラーゼ・ファミリー31に属する古細菌Sulfolobus solfataricus 98/2α-グルコシダーゼの一次配列と34%、B.thermoamyloliquefaciensホモ6量体α-グルコシダーゼIII(分子量530,000)のサブユニットの一次配列と32%、14の真核生物由来のα-グルコシダーゼの一次配列と24-30%(平均26%)一致した;7)他のα-グルコシダーゼと同様に、α-グルコシダーゼIIのサブユニットは三つの二次構造領域、即ち、β構造のN末端領域、二つの触媒残基Asp407とAsp484を含むα/β構造の中央領域、β構造のC末端領域から構成されるβ(α/β)βサンドウイッチ構造の二次構造トポロジー・モチーフをとる、ことが判明した。多量体構造のサブユニット間相互作用が好熱菌タンパク質の熱環境への適応戦略となるか否かの分子的基礎情報を得るため、30-66°Cの温度領域で生育する通性好熱菌Bacillus thermoamyloliquefaciensKP1071の72°Cの150mMリン酸緩衝液(pH6.8)内で10分の半減期を示す分子量530,000のサブユニット解離会合性ホモ6量体α-グルコシダーゼIIIのサブユニットをコードする遺伝子をクローニングし、その遺伝子構造を解析した。その結果、1)酵素サブユニットをコードする遺伝子はpUC19に挿入された3.8-kbp HindIII DNA断片としてクローニングされた;2)本DNA断片は開始コドンATGと終止コドンTAAを保持する2310bpのオープンリーディング・フレームを含み、フレームは770残基よりなる分子量88,620のタンパク質に対応した;3)開始コドン5'上流にはシャイン・ダルガルノ配列とプロモーター・-35/-10配列に対応する配列(AGGAGT;GATGAGG/AAGAAT)が出現した;4)終止コドン3'下流には対称逆方向反復配列(AATGTCATCAA)が出現した;5)大腸菌で発現され均一に純化された酵素は、免疫学的特性、分子特性(ホモ6量体構造、サブユニットとオリゴマーの分子量、N末端配列、塩濃度と温度依存サブユニット解離会合性、耐熱性など)や触媒特性では天然型酵素と一致した;6)酵素サブユニットの一次配列は、グリコシルヒドロラーゼ・ファミリー31に属するB.thermoamyloliquefaciensサブユニット非解離性ホモ6量体α-グルコシダーゼII(分子量540,000)のサブユニットの一次配列と32%、古細菌Sulfolobussolfataricus 98/2α-グルコシダーゼの一次配列と28%、、8の真核生物由来のα-グルコシダーゼの一次配列と24-30%一致した;
Rho標的蛋白質による細胞悪性化と細胞移動の分子機序の解析

低分子量G蛋白質Rhoは、アクチン細胞骨格の再編成を介して細胞移動・接着を調節しており、ガン細胞の浸潤転移へもその関与が示されている。また、Rhoは細胞悪性化への関与も示されており、Rhoを介するシグナル伝達経路の解明は、がん細胞の生物特性を知る上で極めて重要な情報を提供することが期待される。本年度の主たる研究成果および経過は、(1)Rho-Rac間のシグナルクロストーク(2)Rho標的蛋白質mDia、ROCKの微小管配向、安定化への寄与とその局在である。(1)リゾフォスファチジン酸で血清飢餓状態のSwiss3T3細胞を刺激すると、ストレス線維、細胞接着斑の形成される。C3酵素で前処理しておくと、これら構造は形成されない。ROCK阻害薬Y-27632でも、ストレス線維、細胞接着斑の形成は阻害されるが、これに加え、細胞周囲にmembrane rufflilngが観察される。このrufflingはRacのdominant negative体を発現させることにより抑制されるから、Rac依存的なものである。この結果はRhoからRacへのシグナル伝達機構の存在を示唆するものである。また、そのシグナル伝達経路にCas並びにRho標的蛋白質mDiaが関与することを見い出した。(2)HeLa細胞にmDiaの部分欠失変異体(活性化変異体)を発現させたところ、発現細胞は伸長し、アクチンストレス線維、微小管の細胞の長軸方向に沿って走行しているが認められた。このような微小管の走行に不可欠なmDiaの領域を決定したところ、mDiaのC末端側のFH2領域であることが判明した。この結果は、mDiaによるアクチン細胞骨格の再編成と微小管の配向とがmDiaの異なる領域を介していることを示唆するものである。
ヒト胃癌と大腸癌における膵関連酵素タンパクとmRNAの局在と役割

ヒト胃癌と大腸癌における膵関連消化酵素(アミラーゼ、リパーゼ、トリプシン、キモトリプシン)の蛋白とmRNAの発現を、免疫組織化学、Western blot解析、in situ hybridezation、酵素活性の生化学的分析を用い検討した。材料は外科的切除された胃癌、大腸癌を用いた。免疫組織化学では、胃癌と大腸癌の細胞質に、アミラーゼ、リパーゼ、トリプシン、キモトリプシンの免疫反応性を50-60%の症例で認めた。非腫瘍部の胃、大腸組織では殆ど免疫反応性は見られなかった。Western blot解析では、胃癌と大腸癌組織から採取した蛋白に、アミラーゼ、リパーゼ、トリプシン、キモトリプシンの特異的バンドが、55%の症例に認められた。非腫瘍部の胃、大腸組織では、殆どバンドが見られなかった。In situ hybridizationによるmRNAの分析では、アミラーゼ、リパーゼ、トリプシン、キモトリプシンのmRNAのシグナルが、胃癌と大腸癌の細胞の細胞質に認められ、その頻度は50-60%であった。非腫瘍部の胃、大腸組織では、殆どシグナルが見られなかった。RT-PCRによるmRNAの分析では、アミラーゼ、リパーゼ、トリプシン、キモトリプシンのmRNAのシグナルが、50-60%に見られた。酵素活性の生化学的分析では、胃癌と大腸癌組織から採取した蛋白にアミラーゼ、リパーゼ、トリプシン、キモトリプシンの酵素活性を認め、それらは非腫瘍部に比べ増加していた。これらの結果より、胃癌と大腸癌の発生過程において、アミラーゼ、リパーゼ、トリプシン、キモトリプシンなどの膵関連消化酵素のmRNAと蛋白が発現することが見いだされた。これらの膵関連消化酵素は細胞外器質蛋白を分解することが知られ、胃癌と大腸癌の浸潤や転移に重要な役割を果たしていることが推測された。外科切除胃癌および大腸癌のホルマリン固定・パラフィン包埋切片より、膵関連消化酵素(膵αアミラーゼ、トリプシノーゲン、キモトリプシノーゲン、膵リパーゼ)の免疫染色を酵素抗体間接法(ABC法)で行った。その結果、正常胃粘膜と胃癌の60%では発現が見られた。一方、正常大腸粘膜では発現がなく、大腸癌では発現が40%にみられた。合成オリゴヌクレオチドのプローブ(センス+アンチセンス)を用い、可視化はビオチン標識digoxygeninを用いたIn situ hybridizationでは、アンチセンスプローブで膵関連消化酵素(膵αアミラーゼ、トリプシノーゲン、キモトリプシノーゲン、膵リパーゼ)mRNAのシグナルが見られたが、センスプローブでは見られなかった。このIn situ hybridizationでは、シグナルは正常胃粘膜でみられ、正常大腸粘膜ではなかった。新鮮材料をホモゲナイズし、市販のキットを用いて、組織における膵αアミラーゼ、トリプシン、キモトリプシノーゲン、膵リパーゼ、膵αアミラーゼの酵素活性を測定した。その結果、正常胃粘膜、胃癌および大腸癌では活性が見られが、正常大腸粘膜で活性がなかった。新鮮材料よりタンパクを抽出し、ポリアクリルアミドゲルで電気泳動し、ニトロセルロース膜に転写し、ECL法にて可視化し、膵関連消化酵素タンパクの有無をWestern blotで検討した。その結果、正常胃粘膜と胃癌でシグナルが見られた。正常大腸粘膜と大腸癌では未だ検討中である。
同一個体における複数回自家海綿骨細片移植による骨成熟過程の再現性

ビーグル犬の左下顎骨前臼歯部に抜歯後、人工的顎堤欠損部を作成した。同時に長管骨より骨髄海綿骨を採取し、人工的顎堤欠損部への自家海綿骨細片移植(以下、骨移植とする)を行った。また、2、4、8、12週間の待機後、屠殺をせずに2(4、8、12)週間後の骨移植部を全身麻酔下に採取した。採取は移植骨のみならず、人工的顎堤欠損断端部の母床骨と移植骨とを一塊として採取、観察した。採取と同時に2回目の骨移植を行い、以下同様の手術をもう1回繰り返し、都合同一部位に3度の骨移植を行った。骨移植せずに閉創したものをコントロールとした。各回採取時の骨の状態を肉眼観察した。同標本を10%ホルマリン固定後、マイクロCT撮影し骨密度測定を行った。その後、標本は通法に従って脱灰後薄切とし、HーE染色ならびにコッサ染色の組織化学染色を行い鏡検した。採骨完了した2、4、8、12週におけるマイクロCT撮影を行い、骨密度測定を行った結果、待機期間が同週のものにおいて、骨密度は類似した結果となった。コントロールに関しては、結果より各週とも骨移植により繰り返し行った3回がいずれも同程度回復していた。中でも8週目の骨移植のものが、コントロールとともに骨密度が一番高く、4週目と12週目は同程度の結果となった。H-E染色組織標本の顕鏡より、待機期間2週より4週、4週より8週、12週と骨梁形成が次第に太く厚みを増していく様子が認められた。新生骨の形成は8週までは盛んであったが、12週になると形成量の減少が認められた。しかし骨芽細胞は各週とも骨梁周囲を取り囲むように認められた。層板構造は8週から認められ、骨小腔、骨細胞の数は数個であったが、12週にはその数を増し、層板の厚みも増していた。破骨細胞は骨梁周囲に4週で数個、8週で若干その数を増していたが、それ以降はほとんど認められなかった。待機期間2、4週は骨移植を行った3回とも同様の所見で骨梁間は血管様の管腔構造を認めたが、8、12週ではともに2回目より3回目に多くの炎症細胞を骨梁間に認めた。また12週における1回目、2回目の標本で、骨梁間のほとんどを脂肪が満たしていた。コッサ染色組織標本の顕鏡より、待機期間8週までは骨梁が増し、新生骨形成が活発化している所見を得た。しかし待機期間12週は、新生骨形成が待機期間8週より減少していた。以上より、骨移植8週目に骨形成のピークを一度迎え、その後骨形成が一時安定する過程をたどることが示唆された。また、同一部位への骨移植に関して、2回目より3回目の方が、週を重ねる毎に炎症性変化が強く、本結果より、同一部位への骨移植を繰り返す回数が増すに従い、骨形成に影響を及ぼす可能性が示唆された。さらに、今後は16週について同様の実験を行い、一度低下した骨密度が再度回復するか維持されるかについて観察を行う予定である。ビーグル犬の左下頸骨前臼歯部に抜歯後、人工的顎堤欠損部を作成する。同時に長管骨より骨髄海綿骨を採取し、人工的顎堤欠損部への自家海綿骨細片移植(以下、骨移植とする)を行う。ビーグル犬の長管骨の性状から2、4、6、8週間の待機期間を4、8、12週間の待機期間に変更した。その後、屠殺をせずに4(8、12)週間後の骨移植部を全身麻酔下に採取し、採取は移植骨のみならず、人工的顎堤欠損断端部の母床骨と移植骨とを一塊として採取する。採取と同時に2回目の骨移植を行い、以下同様の手術をもう1回繰り返し、都合同一部位に3度の骨移植を行う。各回採取時の骨の状態を肉眼観察し、写真撮影し記録として保存する。同標本を10%ホルマリン固定後、通法に従って脱灰後薄切切片とし、H-E染色ならびにアルシアンブルー染色等の組織化学染色を行い鏡検する。現在、4、8、12週における骨移植および採取移植骨の標本作製中である。1回目以降各回の採取骨の所見をそれぞれ比較し、骨創治癒過程ならびに骨形成の量ならびに質について検討することで同一個体、同一部位でのrepeated experimentの可能性を探る。4、8、12週間の待機後、屠殺をせずに4(8、12)週間後の骨移植部を全身麻酔下に採取し、採取は移植骨のみならず、人工的顎堤欠損断端部の母床骨と移植骨とを一塊として採取、観察した。待機期間4週における骨形成が予想より早かったため、待機期間2週間を追加した。各回採取時の骨の状態を肉眼観察し、写真撮影し記録として保存した。

その後、標本は通法に従って脱灰後薄切切片とし、H-E染色ならびにコッサ染色の組織化学染色を行い鏡検する。現在、2、4、8、12週における骨移植および採取移植骨の標本作製中である。採骨完了した4、8週におけるマイクロCT撮影を行い、骨密度測定を行った結果、正常時の顎骨骨密度を100%としたとき、待機期間4週の移植骨採骨1回目は17.05%、2回目15.21%、3回目12.70%で、8週の1回目は38.55%、2回目42.82%、3回目43.69%であった。待機期間が同週のものにおいて、骨密度は類似した結果となった。コントロールに関しては待機期間4週が41.04%、8週が49.06%であった。結果より4週および8週において、骨移植により3回とも同程度回復していることがわかった。次年度では、引き続き骨創治癒過程での石灰化、病理所見について検討し、また同一個体、同一部位でのrepeated experimentの可能性を探り、その調節因子について検討する予定である。ビーグル犬の左下顎骨前臼歯部に抜歯後、人工的顎堤欠損部を作成した。同時に長管骨より骨髄海綿骨を採取し、人工的顎堤欠損部への自家海綿骨細片移植(以下、骨移植とする)を行った。また、2、4、8、12週間の待機後、屠殺をせずに2(4、8、12)週間後の骨移植部を全身麻酔下に採取した。採取は移植骨のみならず、人工的顎堤欠損断端部の母床骨と移植骨とを一塊として採取、観察した。採取と同時に2回目の骨移植を行い、以下同様の手術をもう1回繰り返し、都合同一部位に3度の骨移植を行った。骨移植せずに閉創したものをコントロールとした。各回採取時の骨の状態を肉眼観察した。同標本を10%ホルマリン固定後、マイクロCT撮影し骨密度測定を行った。その後、標本は通法に従って脱灰後薄切とし、HーE染色ならびにコッサ染色の組織化学染色を行い鏡検した。採骨完了した2、4、8、12週におけるマイクロCT撮影を行い、骨密度測定を行った結果、待機期間が同週のものにおいて、骨密度は類似した結果となった。コントロールに関しては、結果より各週とも骨移植により繰り返し行った3回がいずれも同程度回復していた。中でも8週目の骨移植のものが、コントロールとともに骨密度が一番高く、4週目と12週目は同程度の結果となった。H-E染色組織標本の顕鏡より、待機期間2週より4週、4週より8週、12週と骨梁形成が次第に太く厚みを増していく様子が認められた。新生骨の形成は8週までは盛んであったが、12週になると形成量の減少が認められた。しかし骨芽細胞は各週とも骨梁周囲を取り囲むように認められた。層板構造は8週から認められ、骨小腔、骨細胞の数は数個であったが、12週にはその数を増し、層板の厚みも増していた。破骨細胞は骨梁周囲に4週で数個、8週で若干その数を増していたが、それ以降はほとんど認められなかった。待機期間2、4週は骨移植を行った3回とも同様の所見で骨梁間は血管様の管腔構造を認めたが、8、12週ではともに2回目より3回目に多くの炎症細胞を骨梁間に認めた。また12週における1回目、2回目の標本で、骨梁間のほとんどを脂肪が満たしていた。コッサ染色組織標本の顕鏡より、待機期間8週までは骨梁が増し、新生骨形成が活発化している所見を得た。しかし待機期間12週は、新生骨形成が待機期間8週より減少していた。以上より、骨移植8週目に骨形成のピークを一度迎え、その後骨形成が一時安定する過程をたどることが示唆された。
日本中世仏教成立史にみる意志的普遍思想の形成

日本史における中世の成立史を10世紀から12世紀にたどった。その重要な特徴は、仏教の全社会的な組み込みであると判断した。その上で、国家宗教や政治宗教として発達した日本中世仏教の圧倒的威力を確認しつつ、それらに抗して獲得されはじめた普遍的思想について、文献史料から見出す研究を実施した。日本中世の国家宗教としての仏教の確立は、東アジア世界の激動に影響されつつ、権力事業としてなしとげられた。いっぽう、民衆の生活世界では、地縁によって自立化をめざす新しい村づくりが進展し、自覚的に平等・結集・平和が求められ、その手がかりが仏教に求められ始めた。以上の点を、文献史学の手法によって、例示的に論じた。日本中世仏教成立史を日本中世成立史の問題として考察するために、東アジア世界の中の日本中世形成史論と列島社会内在的な日本中世形成史論に目配りし、12世紀の歴史的達成を世界史上に位置づけることが目的である。特に、古代国家から中世国家への転換期における国家宗教としての仏教の実態を重視しつつ、被支配身分の民衆が自らの必要水準から主体的・意志的に仏教を導入する契機・過程・実態・意義を解明する計画のもとに、史料調査・現地見学・学会報告・論文執筆を実施した。学会報告としては、「近代天皇制史観と前近代天皇制」「中世天皇即位儀礼の歴史的位置」「中世寺院と山・里・海」「中世山寺の基本構造」「平安仏教の特質」「普門寺史料の出現と愛知文化遺産」がある。執筆論文は、「中世寺院研究と根来寺」「永暦2年(1161)永意起請木札をめぐって」「中世山寺の基本構造ー三河・尾張の例からー」がある。学会報告と論文執筆の基礎として、『大日本史料』などの刊本史料集を揃え、普門寺(愛知県豊橋市)や櫻堂薬師(岐阜県瑞浪市)などの史料を調査し、六郷満山(大分県豊後高田市)などの山寺を踏査するとともに、博物館等の企画展で史料観覧を重ねた。本研究では、形成期中世の民衆生活で自覚され獲得された普遍思想の水脈把握を課題としている。また、そのために、前史探究の時代幅と空間幅を拡大し、人類英知たる普遍思想の鉱脈把握を試みている。前者については個別事例の地道な検討に着手している。後者については、インド仏教にまで遡った研究史や、政治思想史・民衆思想史の通史研究に学ぶ段階である。初年度の実績はなお体系的ではないが、本研究にとって、また日本中世史研究にとって、山寺(山林寺院)の重要性が浮上したと考える。今年度は、著書・論文の発刊(単著図書1、共著図書4、単著論文2)、学会等での報告(学会等報告4)、史料調査とフィールドワークについて、バランスよく遂行できた。このうち、『愛知県史』『三重県史』の通史編執筆は、かねてからの計画を完遂したものだが、本研究課題と密接な構想によって叙述することができた。単著『平安京と中世仏教』は、本研究課題の中間報告としての位置づけをもっている。東アジア世界の中の日本中世形成史を跡づけることによる普遍思想の鉱脈把握について、「北宋・遼の成立と日本」(論文)、「摂関期仏教の転回様式」(報告)などで考察を進めた。列島社会内在的な日本中世形成史論について、「山寺における文字文化の形成と発見ー三河国普門寺文化遺産ー」(論文)、「東アジアの中の『大般若経』と民衆生活実感」(報告)などで探究した。両者を総合しつつ『平安京と中世仏教』を執筆した。地域と寺院・仏教の関係について、特に山寺に即して解明する課題に集中し、愛知県域と三重県域を中心に、文献探査とフィールドワークを進めた。三河国の普門寺・瀧山寺、尾張国大山寺、伊勢国近長谷寺、美濃国の櫻堂薬師・飯高観音などを特に重視した。その成果は、すでに一部を公表しているが、なお次年度以降に研究継続する予定である。日本中世における山寺の重要性について、研究構想段階以上に大きいことが理解できてきた。その場合、里山に立地する山寺と里人との関係を復元するだけでなく、山寺間の広域的なネットワークの存在や、巡礼拠点としての役割を解明する課題が浮上した。それに伴い、東アジア世界での広がりだけではなく、世界史上の聖地巡礼を視野に入れる計画を含めるにいたった。論文等の執筆は次年度以降に持ち越しているが、調査研究を蓄積しつつある。単著『平安京と中世仏教』の刊行は、本研究の中間報告としての意味を持つとともに、学術的な反響を得ることで、自身の見解を相対化・反省する好機会になった。普門寺(愛知県豊橋市)の史料調査に長く携わってきたが、『豊橋市埋蔵文化財調査報告書第141集普門寺旧境内ー総合調査編ー』が刊行されることとなり、論考・史料解説・史料目録を分担執筆し、本研究課題の輪郭を明確化することとなった。寺院の立地について、東アジアに視野を拡げて考察する計画について、文献からの考察を進めているが、現地踏査は実現していない。一方、研究遂行課程で、日本中世の山寺をめぐる広域的なネットワークの存在が明らかになり、その人的交流の実態解明が必要であることを理解するに至った。この点は、聖地巡礼という、世界史上の動向を視野に入れた考察が有効であることも、近年の研究動向から学ぶことができた。

そこで西ヨーロッパのキリスト教圏にあるサンティアゴデコンポステーラ(スペイン)を踏査し、比較史の実際を試みることができた。東アジア世界のなかで日本中世成立史を捉える課題に即して、学会報告「入宋僧奝然と南都仏教」(ザ・グレイトブッダ・シンポジウム)、「摂関期仏教の転回」(東方学会)を行い、後者は同名の論文として公表した(愛知県立大学日本文化学部論集)。古代・中世の山寺史の展開が、日本史上の重要な場面であることを理解し、継続している調査研究を進めた。特に普門寺(愛知県豊橋市)の研究成果を広く公表するため、豊橋市美術博物館企画展「普門寺と国境のほとけたち」に協力し、展示解説と図録執筆を分担した。また、個別事例の研究として、論文「伊勢国近長谷寺と地域社会の胎動」を公表した。久保智康編『日本古代の山寺』の一部をなすもので、執筆者間での研究交流を背景としている。この研究は、三重県史編纂事業に参加した経験を継承している。中世成立期を重視する研究課題に即して、11世紀・12世紀の尾張国に焦点を絞り、「古代仏教と民衆生活ー尾張国郡司百姓等解文の後裔たちー」を公開講演会で発表した。この研究は、愛知県史編纂事業に参加した経験を継承している。地域民衆の意志的普遍思想の表出痕跡を史料から見出す試みである。本研究課題に掲げた「意志的普遍思想の形成」に関しては、なお史料探査を中心とする作業段階であるが、成果の一部を「中世民衆の意思表示ー作法と思想ー」と題する講演をポルトガル・ミーニョ大学で行った。同大学で開催されたセミナー「日本イベリア関係史ー16世紀から今日までー」に参加したものである。普遍思想をめぐって、時代と地域を越えた議論を共有することができた。調査実績としては、普門寺(豊橋市)や櫻堂薬師(岐阜県瑞浪市)で継続し、情報を整理している。越前市二階堂の白山神社大般若経の悉皆調査を、岐阜県教育委員会の依頼で実施・完遂した。調査、学会発表、論文執筆をバランスよく実施している。調査は、現地で史料・景観を対象とする場合と、刊本からの検索がある。刊本については、『福井県史』『小浜市史』『岡山県史』その他の自治体史史料編を中心とする探査を行っている。読解を伴う作業なので、徐々に蓄積している段階である。口頭発表は依頼に応じて行っているが、本研究の計画に即して実施している。論文執筆も、依頼に応じたものが中心だが、論文集に編むことを展望している。研究開始当初は、研究対象地を幅広く設けていたが、研究進展の過程で越前・若狭に注目することができた。民衆生活史と宗教施設(特に山寺)を研究する視点がはっきりしてきたからである。このほか、これまでから手がけている尾張・三河に加え、荘園・村落に関する中世史料が多い地域にも目配りが可能となった。主に10世紀から12世紀の日本中世形成期に対象時代を絞り、仏教の社会的組み込みが権力事業として進展することを東アジア世界史との関係で解明しつつ、その受容客体にとどまらない民衆による意志的な仏教導入の営為を見出し、後者の中に意志的普遍思想獲得という歴史上の画期的意義を見出した。政治思想史研究等において、日本思想史上の一大特徴として超越権威の不在が指摘されているが、文献史学の方法によって再考する糸口をつかもうとしたものである。
1992年統合に伴うEC法と加盟国国内法との関係に関する研究

1992年末のヨーロッパ域内市場完成を契機として,日本においてもにわかにEC統合ブームが起こり,いくつかの学会においてもEC統合がテーマとされた.しかし,日本におけるEC法研究は,少数のパイオニアにより細々と行われてきたのが実情であった.このような事情を反映し,マ-ストリヒト条約批准の難航に象徴される統合ム-ドの冷え込みとともに,学界におけるEC統合ブームも急速にしぼんでしまったように見える.本研究は,1991年度から東京大学法学政治学研究科において「ヨーロッパ法」が開講されたことを背景として,継続的且つ本格的なEC法研究の端緒となることを狙ったものであった.そのためには,長期的な視野のもとに,EC域内市場統合という継続的な過程を,一方でECと加盟国との関係において,他方でECとGATT等の国際関係において検討し直すことがまず必要であるとの認識に立ち,1992年統合を点としてではなく,総合的なプロセスとして捉えることに留意しつつ,研究分担者の問題関心に従い,各領域に関する分析を行った.ここで個別的内容について立ち入ることはできないが,本研究の成果としては,第一に,EC統合,統合への球心力と国家主権維持という遠心力との,時期により異なるバランスの上に推移しており,1992年域内市場統合というキャッチフレーズには集約しえない,長期的且つ複雑なプロセスであることを,特定領域に関して実証したこと,第二に,基本的なECの制度の訳語選定にあたり,日本におけるEC法研究のアプローチに関する問題を認識するにいたったこと,第三に,EC内部の動きを世界的なハ-モナイゼーションの過程とパラレルに捉えることの必要性を認識するに至ったこと等をあげうる.EC統合は,当分の間終わりのないダイナミックなプロセスであって,今後とも,その推移を研究し続けることが不可欠であることを最後につけ加えておきたい.1992年末のヨーロッパ域内市場完成を契機として,日本においてもにわかにEC統合ブームが起こり,いくつかの学会においてもEC統合がテーマとされた.しかし,日本におけるEC法研究は,少数のパイオニアにより細々と行われてきたのが実情であった.このような事情を反映し,マ-ストリヒト条約批准の難航に象徴される統合ム-ドの冷え込みとともに,学界におけるEC統合ブームも急速にしぼんでしまったように見える.本研究は,1991年度から東京大学法学政治学研究科において「ヨーロッパ法」が開講されたことを背景として,継続的且つ本格的なEC法研究の端緒となることを狙ったものであった.そのためには,長期的な視野のもとに,EC域内市場統合という継続的な過程を,一方でECと加盟国との関係において,他方でECとGATT等の国際関係において検討し直すことがまず必要であるとの認識に立ち,1992年統合を点としてではなく,総合的なプロセスとして捉えることに留意しつつ,研究分担者の問題関心に従い,各領域に関する分析を行った.ここで個別的内容について立ち入ることはできないが,本研究の成果としては,第一に,EC統合,統合への球心力と国家主権維持という遠心力との,時期により異なるバランスの上に推移しており,1992年域内市場統合というキャッチフレーズには集約しえない,長期的且つ複雑なプロセスであることを,特定領域に関して実証したこと,第二に,基本的なECの制度の訳語選定にあたり,日本におけるEC法研究のアプローチに関する問題を認識するにいたったこと,第三に,EC内部の動きを世界的なハ-モナイゼーションの過程とパラレルに捉えることの必要性を認識するに至ったこと等をあげうる.EC統合は,当分の間終わりのないダイナミックなプロセスであって,今後とも,その推移を研究し続けることが不可欠であることを最後につけ加えておきたい.92年度から,本共同研究メンバーを中心とするヨーロッパ法研究会を発足させ,EC法に関する報告・討議を行ってきた.上記研究会報告によって得られた知見の要点のみを箇条書的にまとめれば、以下の如くである。1.伊藤洋一が,EC裁判所への先決問題移送事件における判決効制限の問題を素材として,EC裁判所と国内裁判所との間の対立があること,対立の背景として,EC判例によるEC裁判所権限の強化に対する国内裁判所の反発,法的安定・適法性原理に関する各国の法的思考の違い等があることを明らかにした.2.松下満雄が,EC域内における規準認証問題の動向につき,従来の詳細な指令方式に代えて,極めて大雑把なガイドラインしか定めず場合により業界団体による各種統一規準の制定を認める所謂「ニュー・アプローチ」が採用されるようになってきたこと,この手法も,EC域内統一規準作成の特効薬とは言えぬ等,その実情を明らかにした.3.中村民雄が,マーストリヒト条約が国家間協力モデルと連邦制モデルとの相対立する二つの理念の妥協の産物であり、最近とみに喧伝されている「補充性原理(サブシディアリティー)」も,EC権限制約規範としてさほどの実効性を持ちえぬこと,またヨーロッパ議会権限強化も不徹底であることを明らかにした。4.B.Rudden教授(オックスフォード大学)から、欧州統合の成果と今後の課題,ECアンチ・ダンピング法につき貴重な最新情報を得ることができた。93年度には、欧州単一市場完成,マーストリヒト条約批准,旧EFTA諸国の加盟交渉開始問題等,ECにとって極めて重要な課題が山積している。ヨーロッパ法研究会を継続・発展させ,各分野の専門家による意見交換を,引き続き活発に行っていくことにしたい。EC法の重要性が増大の一途を辿っている中で,各分野の専門家による意見交換の場としてヨーロッパ法研究会を発足させることができたのは大きな収穫であった。

同研究会報告等によって得られた知見の要点のみをまとめれば,以下の如くである。1.植木俊哉助教授(東北大学)から,「国際法から見たEC及びEC法」と題する報告をしていただいた。同助教授は,EC法研究に際して従来採られてきた主要なアプローチを,比較法的アプローチ,実体法的アプローチ,国際法的アプローチの三つに区分した上で,最後のもの,特に国際組織法的アプローチの有効性を,EEC条約に対するウィーン条約法条約の適用を例にとりつつ主張された。しかし,この主張に対しては,伝統的な国際組織法の枠組にECが収まると言えるかにつき,EC法の独自性を重視するメンバーとの間で活発な応酬が交わされた。この議論は,EC法研究の視角に関する重要な論点を明らかにしたと言えよう。2.また,EC競争法に詳しい弁護士で,ヨーロッパ大学(ブリュージュ)の講師でもあるIvo Van Bael氏から,(1)ECにおける国家補助(State Aids),(2)EC合併規則の概要と最近の施行状況,(3)EC独禁法遵守計画に関する合計3本の報告をしていただいた。まず,上記(1)は,加盟国の企業に対する多様な補助形態がECレヴェルでどのように規制されているかを扱うものであり,一国の産業政策へのEC委員会の介入とその限界が注目された。(2)は,EC統合の進展にも拘らず制定が遅れていた,EC合併規則の最近の施行状況を見るかぎり,比較的緩やかな運用がなされていると言えること,しかしかかる運用状況が今後も継続するかは予断を許さないことが明らかにされた。(3)は,EC競争法の重要化に伴う,企業側の対策を扱うものであり,ヨーロッパ単一市場の成立が,日本企業にとっても重要な関心事となったことを印象づけることになった。
知覚学習と脳刺激による主観的時間の操作

我々の感じる時間の長さは、様々な要因によって伸びたり縮んだりする。我々は近年、ヒトの右下頭頂小葉(rIPL)と呼ばれる脳領域が数百ミリ秒の特定の時間の長さ(時間長)に対して感度をもち、さらに実験参加者の時間長の推定精度、および主観的時間長の伸縮と関係していることを発見した。しかしながら、これらの研究は相関関係を示したに過ぎず、rIPLと主観的時間の因果関係は不明である。そこで本研究では、学習および脳刺激の手法により主観的時間を操作し、その際に生じる脳の変化を脳イメージングや脳磁図といった手法を用いて機能および構造の面から多角的に検討し、主観的時間と脳の因果関係を明らかにする。
新規微生物成分認識分子NOD2の情報伝達系の解明

昨年度はマクロファージ細胞株RAW264.7細胞を用いたNOD2の発現機構解析とTNBS誘発結腸炎モデルにおけるNOD2の発現パターンについて解析し、以下の2つの知見を得た。(1)LPS受容体TLR-4とリンクしてNOD2遺伝子発現がマクロファージで亢進し、この亢進がTNFαのオートクライン作用を介して起こる。(2)結腸炎症部の粘膜クリプト部位や筋層の一部において、TNBS投与2日目で明かなNOD2陽性細胞が認められ、クローン病患者の病変部と類似した発現パターンを示す。本年度は、これらの知見を論文としてまとめるために、(1)では定量的解析を行うとともに、LPS刺激によって増加するNOD2遺伝子発現が、TLR4欠損マウス由来の腹腔マクロファージでは減弱すること、TNFα欠損マウス由来の腹腔マクロファージにおいてもLPSによるNOD2発現誘導が抑制されることを明らかにした。(2)に関しては、NOD2発現について経時的により詳細に検討したところ、TNBS投与4日目で最も発現が高く、その後も14日目まで有意な発現増加が認められた。また、NOD2発現と共にTLR2、TLR4、Myd88の発現亢進も認められたことから、腸内フローラの乱れから生じる炎症部へのエンドトキシン曝露が腸炎の病態発生に重要な役割を担っていることが明らかにされた。これらの知見を加えて、本年度は2つの論文を公表するに至っている。(1)マクロファージ細胞株RAW264.7細胞を用いたNOD2の発現誘導機構:クローン病の原因遺伝子として特定されたNOD2遺伝子の、マクロファージにおける機能解析に関しては、培養マクロファージRAW264.7細胞を用いて、ペプチドグリカンやLPSをはじめとする各種菌体成分によるNOD2発現亢進の分子機序について検討した。その結果、培養マクロファージにおいては、LPS受容体TLR-4とリンクしてNOD2遺伝子発現がマクロファージで亢進すること、この亢進がTNFαのオートクライン作用を介して起こることを証明した。(2)クローン病原因遺伝子NOD2の培養マクロファージにおける解析:NOD2の発現はクローン病病変部(ヒト粘膜組織)およびマウスTNBSモデルの粘膜組織で増加することを確認した。また、ラットのTNBS誘発腸炎モデルを用いてNOD2の発現パターンについて解析したところ、TNBS処置2日目からNOD2遺伝子発現は粘膜部のみならず、筋層部でも上昇していることが明らかになった。この遺伝子発現上昇はTNBS投与後7日目でも有意であった。In situ hybridizationによる発現部位の同定を行った所、粘膜部ではクリプトの根本の部位で発現細胞が認められ、筋層部では筋層間に存在するマクロファージと思われる細胞と神経節を形成する細胞の一つに顕著な発現が認められた。今後、これらのNOD2発現細胞を同定すると共に、タンパク質レベルでの発現変動の解析などを行う。
不斉有機触媒反応を鍵工程とした生物活性アルカロイドの効率的全合成研究

近年、有機触媒反応が爆発的進展を遂げている。その理由は、触媒自身が安価であり、生体に対する影響も低く、分子を構築する際に高い立体選択性を発現し、操作が簡便であるためである。本研究では、そのような特性を持つ有機分子触媒を用いた新規骨格構築反応を駆使した、自然界に存在する有用な有機化合物(天然物)の全合成研究を行った。具体的に開発した反応は光学活性なピペリジン環を得るためのα、β、γ、δー不飽和アルデヒド誘導体とβーケトアミド誘導体を基質とした不斉ドミノマイケル/ヘミアミナール化反応である。本反応を開発するにあたって既存の触媒のみならず、新たに設計した新規触媒を合成し反応の最適化を行った。結果として、高い光学純度で目的とする光学活性ピペリジン環を構築する事が出来た。また、本反応において酸の添加およびその当量が反応速度に大きく影響する事を明らかとした。この発見により、これまで1020モル%で反応を行なう事が常である有機触媒反応において、15モル%でも反応が進行する事を可能とした。続いて、本反応を鍵工程として、植物由来アルカロイドの全合成へと展開した。植物由来モノテルペノイドインドールアルカロイド類は多種多様な骨格や生物活性が知られており、医薬品候補化合物群として有望視されている。植物体内では、そのようなアルカロイド類がガイソチザールおよびガイソシジンという天然物から派生している(生合成されている)事に着目した。もし、生体内の合成経路をフラスコ内で再現できれば、網羅的にこれら重要アルカロイドを合成できる事となる。したがって、グラムスケール合成可能なガイソチザール、ガイソシジンの全合成を計画した。鍵工程として、先に開発した不斉ドミノマイケル/ヘミアミナール化反応を用い、一段階で全合成に必要な全ての官能基を高い光学純度を伴って合成した。現在、全合成に向けて更なる検討を行っている。25年度が最終年度であるため、記入しない。植物由来モノテルペノイドインドールアルカロイド類および主に細菌類から見出されているピロリジノインドリンアルカロイド類はアミノ酸の一種であるトリプトファンから派生しているアルカロイドであり、種類が多い事、構造が多彩な事、極めて顕著な生物活性を有している化合物が多く見出されている事が知られている。本研究では生合成模擬的な手法および不斉有機触媒を駆使する事により、統一的にこれらアルカロイドを合成する事を目的に研究を行った。ピロリジノインドリンアルカロイド類の合成において、市販のトリプトファンエチルエステルから独自に開発した生合成模擬的な水中での二量化反応を鍵工程として、WIN 64821、ナセセアジンB、ジトリプトフェナリンの全行程2ポットもしくは3段階合成を達成した。2ポット合成においては合成に使用した溶媒は環境に水とエタノールのみであり、非常に効率的な合成となっている。また、本合成の中間体に不斉有機触媒としての機能を世界に先駆けて見出した。この中間体は更なる化学変換が容易であり、新たな不斉有機触媒開発へと展開できる。一方、モノテルペノイドインドールアルカロイド類の統一的合成において、鍵中間体となるガイソチザールを合成の全合成研究を行った。鍵工程として、効率的Stillカップリング反応および、不斉有機触媒による不斉ドミノ不斉マイケル/ヘミアミナール化反応を新規に開発した。不斉ドミノ不斉

マイケル/ヘミアミナール化反応では既存の有機触媒では低い不斉収率であったため、新たに触媒の設計、合成を行った。10種類以上の触媒を合成し、不斉反応に付したところ、極めて高い不斉収率で目的物を与える新規触媒を見出した。また、抗HIV活性を有するペトロシンの全合成研究を行った。不安定なピリドン誘導体を種々合成し、不斉反応へと展開した。提案していたガイソチザールの合成においては、目標であった不斉反応の開発を達成した。また、既知の触媒ではうまくいかなかった事が功を奏し、独自に設計した新規触媒を見出す事に成功した。この触媒は今後様々な不斉反応に適用できる可能性があり、研究の幅を大きく広げたといえる。また、ピロリジノインドリンアルカロイドの短段階合成に成功し、そこから、新規不斉触媒の開発に繋がっている。当初の計画には無かった付加的な成功であるが、本結果もこの分野の推進に大きなインパクトを持つと確信している。モノテルペノイドインドールアルカロイドの統一的全合成に向けて、ガイソチザールの全合成を行う。現在用いている不斉反応は化学収率、不斉収率ともに良好であるが、反応時間の削減、触媒量の低減という観点から更に最適かの必要があるため、引き続き検討を行う。同時に、合成ルートを残り数段階進め、全合成を達成する。グラムスケールでガイソチザールを合成した後、生合成模擬的反応による各種アルカロイド合成へ展開する。また、今回新たに見出した数種の新規触媒の有用性を証明するため、これまでの触媒では十分な不斉収率が得られなかった反応系を用いて検討を行う。さらに、光学活性ピペリジン環を有する天然物を統一的に合成する手法として、ピリドン誘導体を基質とした不斉反応の開拓を行う。最終的に抗HIV活性を有するペトロシンの全合成へと展開する。25年度が最終年度であるため、記入しない。
侵襲型歯周炎原因菌のキノールペルオキシダーゼの生理的役割と病原性との関連の研究

侵襲型歯周炎原因菌のキノールペルオキシダーゼ(QPO)は呼吸鎖のキノールを利用して内在性過酸化水素を代謝し、また病原因子のLtxAの分泌に必要であることを、QPO欠損変異株などを用いて明らかにしてきた。今回QPO阻害剤のアスコフラノンを見出し、これの野性株への添加によってQPO欠損変異株と同様の結果になることを示した。また大腸菌にリコンビナントタンパクを作製させ、このQPOを用いてping pong bi bi機構によって酵素反応が進むことを示した。Actinobacillus(Aggregatibacter)actinomycetemcomitansは細胞膜結合性のペルオキシダーゼを産生する。このペルオキシダーゼは報告者らによって精製、クローニングが行われ、詳細な生化学的性質が明らかにされた。この酵素は、ユビキノールー1(還元型ユビキノン-1)を電子供与体として、過酸化水素に電子を渡し、これを環元して水に変えるペルオキシダーゼ活性を有しているので、キノールペルオキシダーゼ(QPO)と命名した。QPOは3個のヘムcを結合した、N末端に一回膜貫通領域を持つ分子量53kDaの単量体タンパクであり、本菌の内膜に結合し、ペリプラズム側に突き出ている構造をしていることが推定された。QPOは呼吸鎖成分のキノンと連結しており、見方を変えると呼吸鎖成分の一部であるとの捉え方もできる。平成21年度は、QPOの阻害剤であるアスコフラノンを生菌に添加すると、病原因子の一つで活性酸素に感受性の高いロイコトキシン(LtxA)の産生量が減少し、複数のタンパクの過酸化が観察されたことから、QPOの生理的役割は過酸化水素を環境から無くすことであり、LtxAとの関連性から考えて歯周病治療のターゲットとなりうることを報告した(インターネットで論文の全文がすでに公開されている)。また、酵素学的な解析のために、リコンビナントQPOの大腸菌での大量産生系と精製系を確立して報告した(論文が雑誌に公表された)。Actinobacillus(Aggregatibacter)actinomycetemcomitansは、侵襲型歯周炎の原因菌のひとつとして知られており、細胞膜結合性のペルオキシダーゼを産生する。この酵素は報告者らが精製、クローニングを行い、詳細な生化学的性質を報告した。このペルオキシダーゼは、ユビキノール-1(還元型ユビキノン-1)を電子供与体として、過酸化水素に電子を伝達し、これを還元して水にする活性を有しているので、キノールペルオキシダーセ(QPO)と命名した。QPOは3個のヘムcを有した、N末端に1回膜貫通領域を持つ分子量が53KDaのモノマータンパクであり、内膜に結合し、ペリプラズム側に突き出た構造をしている。QPOは呼吸鎖成分のキノンと連結しているので呼吸鎖のメンバーと考えることもできる。今年度は、QPOの阻害剤としてアスコフラノンとアスコクロリンを見い出し、その阻害様式について詳細に解析し、生菌にこれらの阻害剤を添加して増殖させると病原因子の一つで活性酸素に高感受性のロイコトキシン(LtxA)の産生が阻害されるので、QPOの生理的な役割は、過酸化水素を環境から除くことにあると推定される。この結果は、以前のQPO変異株を用いた研究成果とも一致する。さらに、大腸菌を用いたリコンビナントQPOの大量生産系について検討した結果、結晶化を試みるのに必要な量を入手可能であるが純度や量に関してさらなる改善が必要である。また結晶化に関しては、針状結晶が得られているが、X線解析には適切な段階に達していないので、引き続き結晶化条件を検討する。また、部位突然変異を酵素に導入する系を確率したので、今後変異QPOを順次作製し、解析する予定である。侵襲型歯周炎原因菌Aggregatibacteractinomycetemcomltansは膜結合性キノールペルオキシダーゼ(QPO)を産生する。本酵素は申請者らが精製、遺伝子のクローニングを行い、生化学的性質を報告した。QPOはユビキノール-1を還元し、H_2O_2を酸化して水とする活性を有し、呼吸鎖成分のキノンと連結しているので、呼吸鎖のメンバーとしても捉えることができる。今までに、QPOの阻害剤としてアスコフラノンとアスコクロリンを見いだし、前者に関して詳細な阻害機構の解析を行い、すでに報告済みであるが、アスコクロリンについても解析を行い、特に生菌に添加すると増殖及び病原因子LtxAの分泌量が減少した。現在動物実験系を用いて生菌の病原性に対する2種の阻害剤の作用を検討中である。さらに300種類の化合物ライブラリーを調べたが、現時点では上記以外の阻害剤は見つかっていないのでスクリーニングを継続する。また大腸菌を用いたリコンビナントQPOの発現系について検討したところ、γ-アミノレブリン酸の添加によって本酵素の発現量が増加した。今後、さらにより良い培養条件を検討する。