hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
液相析出法により作製される金属酸化物薄膜の構造制御と物性

本研究の主題となる薄膜構造に対する反応条件(温度・溶液濃度・物質添加)の依存性について本年は、複合酸化物系を主として取り扱い、SiO_2/TiO_2積層薄膜中への金属超微粒子の複合、およびFe/Ti系傾斜組成薄膜に関する構造およびその微小領域の構造について検討を行った。液相析出法により(SiO_2/TiO_2)積層薄膜中のAu微粒子の分散過程を解明した。始めに従来作製法が確立しているTiO_2薄膜の合成を行い、得られたTiO_2薄膜を空気中で加熱処理を行った。熱処理後のTiO_2薄膜を基板とし、Au-SiO_2薄膜を積層させた。得られた薄膜(Au-SiO_2/TiO_2)を空気中、加熱処理を行い熱処理前後の薄膜について、断面TEM観察により観察した。熱処理によりAu微粒子は結晶性のよいアナターゼ型のTiO_2薄膜層へ転移することが観察されたため、析出条件を逆にして(TiO_2/Au-SiO_2)薄膜を析出させた。熱処理前後の薄膜について同じように観察を行った。熱処理後の薄膜では(Au-SiO_2/TiO_2)薄膜系のようにAu微粒子は結晶性のよいアナターゼ型のTiO_2薄膜層へ転移すること確認された。薄膜中のAu微粒子とTiO_2媒体間の相互作用が強く影響していると考えられる。以上の結果から、Au微粒子はSiO_2から結晶性のよいアナターゼ型のTiO_2薄膜層へ移動することが明らかとなった。また、Ti/Fe酸化物系傾斜組成薄膜に関する合成を行った。FeOOH薄膜析出反応溶液へ滴下するTiO_2薄膜析出反応液の流速を変化させて薄膜の析出を試みた。流速の変化は処理溶液中のTiとFeの濃度変化時間に直接依存するため、析出反応場における反応溶液の組成と析出組成との相関を考慮すれば薄膜内の組成制御を行うことが可能であることが明らかとなった。従って、流速を変化させることで濃度変化を制御し、組成が膜厚に沿って均一に変化する傾斜薄膜の合成が可能であることが明らかとなった。傾斜組成薄膜に関してSnO_2薄膜の上にTiO_2を積層させることによりTiO_2単独の薄膜よりも光触媒活性が向上することから、本研究では積層構造を持つTiO_2よりも高い光触媒活性を得ることを目的にTi_xSn_<1-x>O_2傾斜薄膜を金属フッ化物錯体の溶液内平衡反応を利用した液相析出(LPD)法を用いて合成し、その光触媒活性について検討した。反応条件を変化させることで様々な組成分布を持つTi_xSn_<1-x>O_2傾斜薄膜の合成に成功した。傾斜組成分布を持つ薄膜はSnO_2/TiO_2薄膜、TiO_2薄膜よりも高い活性を示すことが明らかとなった。傾斜組成構造を有する場合、TiO_2への光照射によって生じた電子がより低いエネルギーをもつSnO_2の伝導帯に速やかに移動し、電子と正孔の再結合の割合が減少したためであり、薄膜の組成分布の相違が光触媒活性に大きく依存することが明らかとなった。また、様々なサイズの細孔を持つシリコンウェハおよびウェハを鋳型として作製したレプリカフィルムを基板とし、周期構造を有する酸化物薄膜の合成を試みた。シリコンウェハを基板として用いLPD法によりTiO_2薄膜を析出させ、合成した薄膜を基板からピーリングした試料は薄膜の突起部分が基板と同様に規則正しく配列し、基板上に析出した際の形状を保っていることが明らかとなった。基板表面および細孔内壁面と底部にも薄膜が析出していることが明らかとなり、また反応時間の増加とともに膜厚が増加していることが確認された。
顆粒膜細胞の黄体化に伴うCyp11a1遺伝子発現に関するエピジェネティクス制御

卵巣顆粒膜細胞では、LHサージから排卵までの短時間で急速にプロゲステロンが合成される。本研究では、そのプロゲステロンの合成に関与する遺伝子の一つであるCyp11a1遺伝子の発現調節機構に、ヒストン修飾の変化によりクロマチン構造が弛緩するというepigeneticな制御が関与することを解明した。さらに、このクロマチン構造の変化に伴い転写因子C/EBPβの結合が増加し転写を活性化していることが分かった。LHサージによる黄体化に伴い、卵巣顆粒膜細胞ではプロゲステロン合成に働く酵素であるCyp11a1が急激に発現する。この短時間での巧妙に制御されたステロイド合成関連蛋白酵素の遺伝子発現調節において、遺伝子プロモーター領域のヒストン修飾やクロマチン構造変化といったエピジェネティックな調節機構が関わっていることが報告されている。本研究では黄体化に伴うCyp11a1の発現制御にエピジェネティックな調節機構が関わっているかを明らかにし、さらにはその調節機構を変化させる細胞内情報伝達経路を解明することを目標とした。平成27年度は、LHサージから排卵までの、卵巣顆粒膜細胞の黄体化に関して、以下実験を行いCyp11a1の発現制御にエピジェネティックな調節機構が関わっているかを明らかにした。1Cyp11a1プロモーター領域におけるDNAメチル化状態の変化をBisulfite genomic sequencing法で、ヒストン修飾の変化をChIP assayで解明する。2エピジェネティクス変化に伴うクロマチン構造変化をDNase I chromatinaccessibility assayを行い解明する。3Cyp11a1プロモーター領域において結合が変化する転写因子とリクルートされるヒストン修飾酵素をChIP assayを用いて同定する。今後は、顆粒膜細胞の培養実験により、LH刺激によるCyp11a1プロモーター領域のヒストン修飾変化とin vivo実験で同定したヒストン修飾酵素のリクルートに細胞内情報伝達系としてERK1/2が関与するかを、ERK1/2阻害剤(U0126)を用いて明らかにする。また、Cyp11a1発現制御に関与する転写因子に関しても検討を行う。平成27年度に達成目標としていたCyp11a1の発現制御にエピジェネティクス変化が関与するかに関しては、以下の方法で概ね検討を行うことができた。3週齢雌ラットにPMSGを投与し過排卵モデルを作成、hCG投与前(0h)と投与後4h,12hの顆粒膜細胞を回収し以下の解析を行った。1)定量的RT-PCRにおいて、mRNAは0hに比べ4h,12h後に有意に増加した。2)ヒストン修飾をChIP assayを用いて検討したところ、近位promoter領域(ー23bpー206bp)では,転写活性に働くヒストン修飾であるH3K4me3は0hと比べ12hで有意に増加し,逆に転写抑制に働くヒストン修飾であるH3K9me3とH3K27me3は4h、12hともに有意に減少した。3)DNAメチル化をBisulfite sequencing法を用いて検討したところ、約-500bpまでの5 CpG部位のDNAは低メチル化であり,hCG投与後も有意な変化は認めなかった。4)クロマチン構造をchromatin accessibility assayを用いて検討したところ、近位promoter領域のクロマチン構造は0hと比較し4h、12hでは有意に弛緩した。5)ヒストン修飾酵素の結合をChIP assayを用いて検討したところ、H3K27me3のメチル化酵素であるEZH2が優位に減少した。以上のことから、Cyp11a1発現制御にはエピジェネティクス変化が関与することが明らかになった。平成27年度は、LHサージから排卵までの卵巣顆粒膜細胞の黄体化に関して、Cyp11a1プロモーター領域におけるDNAメチル化状態の変化をBisulfite genomic sequencing法で、ヒストン修飾の変化をChIP assayで解明し、エピジェネティクス変化に伴うクロマチン構造変化をDNase I chromatinaccessibility assayを行い解明した。さらに、Cyp11a1プロモーター領域において結合が変化する転写因子とリクルートされるヒストン修飾酵素をChIP assayを用いて同定した。平成28年度は、顆粒膜細胞の培養実験により、LH刺激によるCyp11a1プロモーター領域のヒストン修飾変化を確認し、以前に同定したヒストン修飾酵素のリクルートに細胞内情報伝達系としてERK1/2が関与することを、ERK1/2阻害剤(U0126)を用いて明らかにした。また、in vivo実験においてCyp11a1発現制御に関与すると同定されたC/EBPβに関して、ルシフェラーゼ解析を行い転写活性を有していることを解明した。

さらに、このクロマチン構造の変化に伴い転写因子C/EBPβの結合が増加し転写を活性化していることが分かった。平成28年度は、平成27年度に明らかになったCyp11a1発現に関与するヒストン修飾変化に、ERK1/2が関与しているかをラット卵巣顆粒膜細胞の培養系を用いて検討する。3週齢雌ラットにPMSGを投与し48時間後に顆粒膜細胞を回収、ERK1/2阻害剤であるU0126を投与し2時間培養後、hCGを添加し、4時間後に顆粒膜細胞を回収。ヒストン修飾をChIP assayを用いて検討する。また同様に回収した培養顆粒膜細胞を用い、ヒストン修飾酵素のChIP assayを行い、U0126投与と非投与におけるヒストン修飾酵素のリクルートの変化をみる。生体分子学平成27年度に購入予定であった実験動物(ラット)と実験試薬や抗体量が予定数よりも減少したため、次年度使用額が生じた。必要量の実験動物や実験試薬を購入することに加え、成果発表の旅費等に使用する。
脂肪酸結合タンパク質の嗅神経細胞における生理機能の解明

本研究では、神経細胞の形成や維持における脂肪酸結合タンパク質の生理的役割を解明することを目的として、嗅覚神経細胞層(嗅上皮)での脂肪酸結合タンパク質の発現様式およびその欠損による影響の解析を行った。初めに、嗅上皮cDNAを用いたRT-PCRによって特定のサブタイプの脂肪酸結合タンパク質が嗅覚神経細胞層に発現することを明らかにした。さらに、その脂肪酸結合タンパク質に対する特異的な抗体を作製し、嗅上皮における局在をタンパク質レベルで明らかにすることに成功した。嗅上皮には様々な神経形成段階の細胞が存在しているが、脂肪酸結合タンパク質は未成熟な神経細胞の軸策および樹状突起に主に局在していることが明らかとなった。次に、脂肪酸結合タンパク質の嗅神経細胞における機能を調べることを目的として、欠損マウスの嗅上皮の組織学的な解析を行った。その結果、脂肪酸結合タンパク質欠損マウスでは嗅覚組織自体に形態的な異常は見られないにも関わらず、神経細胞層の厚さが野生型のマウスと比較して薄くなっていることを発見した。TUNEL染色において、欠損マウスでは神経細胞層にシグナルが多く観察されたことから、脂肪酸結合タンパク質は神経細胞の維持に重要な役割を担っている可能性が示唆される。今後、欠損マウス嗅上皮における細胞増殖能や分化能についても解析を行う予定である。また、免疫沈降法によって脂肪酸結合タンパク質が嗅神経細胞内で結合する因子の探索を行い、その作用機構の解析も試みる。
大脳局所電場電位のβγシンクロ二―による上肢運動時のサル・ヒトの脳機能比較

二匹のサルに、コンピュータディスプレイ上に提示される目標に対して、両手でジョイティックを操作させその位置カーソルが追いかける運動課題を学習させた。左右両側の大脳一次運動野を中心とする領野の硬膜に25極のECoG電極を慢性的に設置し両手運動と同期して発生するβγ周波数(2050Hz)シンクロニー活動を訓練期間から長期にわたり記録した。報酬獲得時に行っている両側運動の方がその他の両側運動時よりも大きなLFPの同期活動が観測できた。よってこの活動は報酬系あるいは注意機構によって修飾を受けている。一方ヒトのEEGからは両手運動時のβγシンクロニィーは観測されにくかった。1)二匹のサルに、コンピュータディスプレイ上に提示される目標に対して、両手でジョイティックを操作させその位置カーソルが追いかける運動課題を学習させた。左右両側の大脳一次運動野を中心とした領野の硬膜に各々25極のECoG電極を慢性的に設置し運動と同期して発生するβγ周波数シンクロニー活動を長期にわたり記録した。運動学習未達成期、学習達成初期、運動達成期で比べると、両側のβγシンクロニーの発生頻度とその空間的分布がそれぞれの時期に応じて大きく変化することを、サルの記録データで確かめることができた。このことは、βγシンクロニーが記録部位間の神経結合の変化として反映されることを示唆する。2)人にサルと全く同じタスクを行わせ頭皮上よりEEGを記録した。しかしサルのECoG記録と比較すると、空間的な記録精度が悪くまたβγシンクロニーの発生も検出しにくいことが判明した。研究の目的は1)サルに、コンピュータディスプレイ上に提示される標的を両手でジョイスティックを操りその位置カーソルが標的を追いかける課題を行なわせる。大脳皮質硬膜に埋め込んだ慢性電極より記録されたECoGの局所電場電位(LFP)を多数同時記録する。このβγ(20Hz50Hz)周波数帯の同期周期活動の強さを反映する相互相関をコンピュータで計算する。相互相関係数の大きさは2つのECoG記録部位の神経結合の強さを表す可能性が高いことが分かっている。この事実を用いてタスク遂行時の左右大脳間及び半球内の各領野間での神経結合の強さを比較する。2)長期の運動学習過程における、相互相関係数の変化すなわちLFPのβγ周波数シンクロニーの変化と大脳領野間のダイナミックな時間的な神経結合変化の関連性を調べる。特に運動学習未熟期、運動学習達成初期時、運動学習達成期に分けてLFPのβγ周波数シンクロニーの発生頻度の比較を行い運動学習との相関を詳しく解析する。3)ヒトで同じタスク実行時のEEGシンクロニーを記録しサルとの空間分布の比較を行いこれらを通じて人の感覚運動情報処理での半側特異性について調べること。の3点である。ヒトのEEGのシンクロニー記録実験については、実験装置のセットアップを終えパイロット的な記録を行った。またサルの実験については実験用サル2匹の納入が実際に行われたのが10月終りになった。この直後よりサルの訓練を開始し実験環境に適応するレベルまで到達している。片側25本のマルチ電極を左右両側大脳皮質硬膜への埋設しECoGの記録を始める段階にある。この実験では2匹の日本サルに、両手で2つのジョイスティックレバーでディスプレイ上の2次元位置カーソルを動かし目標のカーソルを追いかけさせるタスクを訓練した。両手運動を使って標的追跡運動課題ではβγ周波数の左右大脳一次運動野神経シンクロニィーが増加することはこれまでの実験結果から明らかになっている。このシンクロニィーは約半数の神経のみが局所電位と同期し残りのものは同期しないという性質をもち生理学的な意味については不明の点が多い。一方このシンクロニィーは、運動遂行中よりもリワード期間直前に増大することから注意発現の神経機構によって強化されることも予想される。ただこの期間にはサルは、目標の近傍で位置カーソルを一定位置に維持することが要求されていることから、注意の神経機構だけでなく、より両手運動に密接に関係したものとも考えられる。両手の運動が、同時に急激に動きだしたときには神経シンクロニーは出現しにくくなっており、運動開始直前0.30.5秒程度にレバーを一定位置に保持する期間に現れやすい。どのような両手の運動パラメータの組み合わせがシンクロニィー発生に関係するのかを明らかにするため、そして両側のM1の上肢支配領域を中心とした、25極のECoG電極を硬膜に設置し長期にわたり記録した。運動学習未達成時期、学習獲得初期、学習達成時期を比べると明らかにβγシンクロニーの発生頻度が違っていた。同じ実験を人で行い、頭皮上から記録されるEEGを記録したが、ECoGに比べると明らかに空間精度が悪く、しかも人では簡単に運動学習が完成するため学習との関係は明らかにできなかった。

神経生理学前年の研究実績にも述べたが、サルの入手に半年以上かかってしまったため計画は必然的に遅れることになった。このため研究計画を当初の予定の2年から一年間延長することにした。二匹のサルは、実験の遂行には概ね協力的でありタスクを習得した。現在二匹のサルの、実験とデータの解析を続けている。研究計画の遅れの主な原因は、NBR(ナショナルバイオリソース)から供給を受けた実験用サルの納入が今年度は年2度しかなく10月末までかかったことにある。このことに関する調査不足と研究計画の不備は研究者側にも責任があるかもしれないが、最速の供給が年度開始から半年かかる制度は少々遺憾である。動物を受け入れた後は、訓練に励み記録開始ができる時点に到達したところである。この研究の目的のひとつは、サルの運動野に現れるECoGとヒトの頭皮から記録されるEEG記録のβγシンクロニーが、BMIの運動開始信号として使えるかどうかの考察を行うことにもあった。当初から予想されたことであるがヒトの頭皮からのEEG信号の空間的な精度が、ECoG記録に比べると非常に低い事,βγシンクロニー自体が非常に記録しにくかった。ヒトの脊髄損傷患者を対象としたBMI利用では、硬膜外から記録できるECoGがもっとも有望な非侵襲的神経記録の候補と考えられる。サルの運動学習時に長期間記録するECoGのβγシンクロニーの時間的分布の変化を片手運動、両手運動のそれぞれで、左右大脳で空間的に分布がどのように違いを示すかを詳しく調べる。1)ヒトのEEG実験については、本年度に本格的にはじめる。研究協力者(村瀬)の指導する大学院生と学部学生などに被験者として協力を得る方針である。少なくとも10人のヒトのEEGデータが確保できるようにする。これまでの吃音者と健常者から記録を行ってきた言語処理過程での脳波・事象関連電位の記録実験装置をほとんどそのまま使うことができる。EEGの情報は、大脳の機能局在性を調べるのに不十分な手段であるといわれて来たが、本当に(サルの)ECoGに比較して劣る情報でしかないのかをシンクロニー記録から明らかにする。2)サルのECoG記録については、引き続き大脳半球内、両側半球間の神経シンクロニーの強さを計算し大脳各部位の機能結合性を調べる。実験計画の遅れにより、当初計画していた旅費などを使わなかった。そのため研究計画の延長願いを提出し許可された。実験用サルの飼育経費、学会出席のための旅費、薬品等の消耗品代に使う予定である。繰越金が生じた主要原因は、当初予定していた日本光電製16Ch生体アンプの購入をやめたことにある。この理由は16CH記録だけでは、必要とするECoGの記録電極の数にどうしても足らない為である。次年度に32ch脳波計を一台を入手し、現存の32ch脳波計と合わせた64chが記録可能な実験システムに変更する。サル用のECoG用慢性マルチ電極がもう一匹分さらに必要になるのでこの購入も予定している。
非線形問題に対する高速・高精度数値計算及び精度保証に関する研究

我々は今年度においては、主として、Nekrasov方程式の正値解の大域的な一意性に対する数値的検証法に関する研究を行なった。水面波におけるある種の進行波の一意性を証明することは、Nekrasov方程式に対する正値解の一意性の証明に帰着することが知られている。一意性の証明は多くの水面波の研究者にとって40年来の未解決問題であったが、Nekrasov方程式に対し数値的検証法を用いることにより正値解の大域的な一意性の証明に成功した。本研究においては、精度保証付き数値計算を用いて反復により解の存在範囲を逐次評価し、ある程度解の存在範囲が限定されたところで縮小写像を評価するという手法を用いた。実際の計算においては計算速度を上げるため、浮動小数点の丸めの方向を制御することにより精度保証を実現している。この結果、3.009【less than or equal】μ【less thanor equal】3.0092と3.3【less thanor equal】μ【less thanor equal】30の範囲について正値解の一意性を証明することができた。μ=3はこの方程式の分岐点になっており、分岐点近傍での数値計算は非常に困難であるが、その付近での検証にも成功した。加えて、μが3以上3.009以下の場合については正値解の一意性を解析的に証明した。精度保証付き数値計算を数学的な証明に用いている研究は、これまでにも多く報告されているが、それらの研究のほとんどは方程式の局所的な性質に関するものであり、本研究のように方程式の大域的な性質を証明した結果はほとんど知られていない。それだけに、数値的検証法によってNekrasov方程式の正値解の一意性が証明されたという結果は、それ自体が数学的に重要である上に、数値的検証法の有効範囲を拡張することが出来たという点においても非常に意味がある。
北アルプス内蔵助圏谷底にみられる巨大氷体の年代決定

内蔵助雪渓は、その越年性の氷体部の厚さが30mに及ぶ我国最大規模の氷体である。この氷体には、深さ約8m(1986年秋の雪/氷境界を基準)に大規模な不整合面があり、上位氷体と下位氷体に分けている。上位氷体の層理は、現在の秋の雪面および不整合面にほぼ平行であるのに対し、下位氷体では全く異なり、氷河に特徴的な層構造を持つ。また、この氷体には氷河消耗域で見られるムーランに似た縦穴が存在する。このような巨大な氷体およびその構造の形成、維持機構を解明する上で、この氷体の形成年代を知ることは重要である。そこで、本研究はこの氷体の形成年代を測定することを目的とし、下位氷体内混入植物片の【^(14)C】年代測定および現地調査を行なった。1979年に上述の縦穴の表面積雪が消失して開口した時、この縦穴に潜り、下位氷体内の汚層中に包含されていた枝片(4mg)と数本の葉片(2mg)を採取、保存していたものを、学内アイソトープ総合センターのタンデム質量分析器により【^(14)C】年代測定したところ、それぞれ1720±170aBPおよび1480±330aBPであった。氷体の層構造から判断して、この下位氷体中には、もっと古い氷からより新しい氷まで存在する可能性があり、古環境研究上重要なものであることが判った。今後氷体各部の形成年代を測定する必要がある。9月24日から10月3日の現地調査では、残雪量が例年の4倍もあり、試料採取に不適当な条件であったため、今後の試料採取および研究方針を決める上で必要なデータを得るため以下の調査を行なった。1)インパルス・レーダーによりプロテラスランパートより上流部の規模=深さ20mに及ぶ。2)ウィルド測量による縦穴の位置の同定および、開口部まで堀り下げることができた。3)電動および手動オーガーによる14ケ所のボーリング=最高11mまで到達できた(手動)。
t(1;22)(p13;q13)型乳児白血病転座部位遺伝子の同定

1)発現ベクターの作製:OTT, MAL, OTT-MAL融合遺伝子の遺伝子配列を、PCR法を用いて増幅し、得られたそれぞれの遺伝子断片をサブクローニングしCMVプロモーターをもつ発現ベクターに組込みが終了した。3)アンチセンスDNAの作製:phosphorotioate修飾したOTT-MAL融合遺伝子の接合部位に特異的な16-20merのアンチセンス遺伝子断片を合成し、HIS細胞培養上清に24時間おきに5-20μg/mL添加する。対照としてセンス、ランダムオリゴマーを用い、アンチセンスにより特異的にHISのmRNAが減少することをRT-PCR法で確認し、HIS細胞に起こる細胞変化(形態、アポトーシスの有無、細胞周期変化、表面型質変化)を観察した。4)微小残存白血病細胞の検出:実際の症例(インフォームドコンセント済)の初診時、寛解時の骨髄血、末梢血からRNAを抽出し、Real-time PCR法による残存白血病細胞の定量を行い臨床経過を観察し、その相関を調べた。1)t(1;22(p13;q22)もつ白血病細胞株の樹立我々は、乳児巨核芽球性白血病症例の末梢血単核球細胞を採取し、培養することでHIS細胞株を樹立することに成功した。細胞株は、植え込み材料と同様に、t(1;22)(p13;q22)の染色体異常をもち、表面型質としてCD34,CD41,CD42を発現しており、巨核芽球性白血病としての性質を保持していた。また、細胞はスロンボポエチン、エリスロポエチンに対し、増殖反応を示すことが明らかとなった。2)FISH法による22番染色体側切断点の解析22番染色体上に位置するBACクローンを入手し、HIS細胞株の染色体分裂像上でFISH解析を行った。その結果、1042K10BAC上にt(1;22)の切断点が存在することが明らかになった。3)FISH法による染色体診断上記BACクローン(1042k10)を用い、t(1;22)型白血病症例にFISHを行ったところ、蛍光シグナルの分断を認め、本法が染色体診断に有用であることが明らかとなった。4)RT-PCRによる融合遺伝子の検出t(1;22)(p13;q22)では、OTT-MAL遺伝子が融合遺伝子として発現していることが、報告されたが、HIS細胞株もPCRプライマーを作成し、RT-PCRによる融合遺伝子の検出が可能かどうかを調べた。その結果、OTT-MAL融合遺伝子が、RT-PCRにより検出され、本法が、微小残存白血病細胞の検出に有用であることが判明した。1)発現ベクターの作製:OTT, MAL, OTT-MAL融合遺伝子の遺伝子配列を、PCR法を用いて増幅し、得られたそれぞれの遺伝子断片をサブクローニングしCMVプロモーターをもつ発現ベクターに組み込みが終了した。
若年層のライフコースにおける不平等とその連鎖構造に関する社会学的研究

若年期とは、さまざまなライフイベントを経験する時期であると同時に、若年層内部においてもあるイベントを経験するかしないか、できるかできないかといった格差が存在している。本研究では、さまざまな大規模調査データを用いて、若年層の貧困が一部の層に固定化しているということ、性行動が活発な層とそうでない層に分極化してきたこと、出身背景によって性行動が強く規定されていることなどを明らかにした。初年度である平成25年度は、第1に、本研究課題の体制づくりを行った。本研究専用のパソコンや文房具の整備、文献の入手等であり、これらはおおむね8月末までに完了できた。当初の予定では、既存の調査データの計量分析に加え、性行動と性意識の階層的不平等を解明するための独自の社会調査を実施することとしていたが、調査環境の問題から次年度に繰り越し、平成25年度は二次分析に専念することとした。申請の段階から、この繰り越しの可能性については想定していたため、これに関して問題は特に生じていない。この間の研究業績は、査読付き国際学会報告1件、図書の分担執筆2件、査読付き論文1件、学会誌の依頼記事1件である。これらの業績は、大きく「青少年の性行動調査」研究によるものと、社会階層と離婚行動に関する研究による成果である。前者では、時系列分析の結果から近年において、男女ともに性的関心が低下しているにもかかわらず性行動は活発化していること、高校生段階における性行動の進行が著しいことが明らかになった。さらに青少年の性の二極化が生じており、特に女子における「性的関心なし・性交経験あり」というグループの量的拡大は著しく、さらにこのグループは性に対する否定的なイメージが強く、性知識も他のグループに比べて乏しいことが明らかになった。後者については、第1により最近のコーホートにおいて離婚は低い学歴階層で発生しやすいこと、第2に夫が高い収入を得ている夫婦ほど、夫と妻それぞれの結婚満足度が高く、夫の収入の上昇は妻の結婚満足度を高めること、第3に、夫婦の合計収入に占める妻の収入比率が20%台である夫婦は、妻の収入比率がより低いグループだけでなく、より高いグループと比較しても妻の満足度が低い、ということが明らかになった。1.性行動と性意識に関する階層問題についての大学生調査を実施した。サンプルサイズは約800であり、ある程度の統計分析には耐えられるデータセットとなっている。調査票には、大学生の性に関する実態、意識、大学生の親の学歴、職業などの高いプライバシーをともなう質問を多く設けたが、回収率や質問項目ごとの無回答率も低めに抑えることができている。2.若年層の貧困問題についての研究も進めた。主な知見は以下の通りである。(1)個人収入150万円未満を低所得状態と定義し、若年層内部に広がる経済的不利の現状を確認した。その結果、若年未婚者の約3割は低所得状態にあり、正規雇用以外の雇用形態が低所得状態に陥りやすいことが明らかになった。また低所得状態の経験回数を調べたところ、男性で23割、女性で約半数もの人々が少なくとも1度は低所得状態を経験していることから、これは稀な現象ではなく身近な不利だということが明らかになった。(2)労働市場への参入時の状況が調査時現在の低所得状態に影響を与えるプロセスを考察したところ、学校から職業への移行において間断があることは初職が正規雇用以外であることに影響し、初職は職業キャリアを通して現職を規定し、現職が正規雇用以外であると低所得状態に陥りやすくなるという不利の連鎖が明らかになった。また初職が非正規雇用であっても現職で正規雇用になることができれば低所得状態へ陥る危険性が低いと予想したが、そのような挽回のチャンスも少ないようである。(3)ある時点の低所得状態がその後のライフコースに与える影響について、結婚を取り上げて検証したところ、そもそも低所得状態からは結婚が困難であること、結婚できたとしても結婚後の世帯の経済的水準は低いことなどから、低所得状態がその後のライフコースにも負の影響を与えていることが確認された。最終年度は、青少年の性行動に対する家庭環境の影響を考察し、学会での発表および論文執筆を行った。家庭環境には、親の教育レベルや社会経済的地位の高さ、子育て・しつけの厳格さ、きょうだい構成、住環境などのさまざまな要因が挙げられる。親の教育レベルや社会経済的地位の高さ、子育て・しつけの厳格さについては、教育レベルや社会経済的地位が高いほど、また厳しい家庭で育つほど性行動が抑制されると考えられている。一方、母親の影響については別の見方も存在しており、「母親が家にいること(専業主婦であること)が子どもの性行動を抑制する」という仮説もしばしばみられる。きょうだい構成については、年上のきょうだいがいることが年下のきょうだいの性行動を促進する要因になりうる。住環境については、専用の個室を持っていることは、プライベートな空間を保有していることから、性行動を促進させるのではないかと予想される。分析には「第46回の青少年の性行動全国調査」の中学生・高校生のデータを用いた。分析の結果、子どもの性別を問わず、父が「勤め人(事務)」であることに比べて「いない」または「自営」であることは初交経験を促進させ、母が「勤め人」であることに比べて「専業主婦」であることは初交経験を抑制することがわかった。

兄・姉がいること、専用個室を持っていることも、本人の性別を問わず初交イベントに対して正の影響を持っていることから、これらの家庭背景はそれぞれ独立した要素として青少年の性行動に影響を与えていることが明らかになった。研究期間全体を通して、若年層の生活の複数面における格差を実証できたという点で意義があると考える。特に若年層の貧困問題や、性にかんする分極化は、その後のライフコースを左右するだけでなく、少子高齢化対策や社会保障の在り方にかんする議論にも、関連づけていくことができるだろう。若年期とは、さまざまなライフイベントを経験する時期であると同時に、若年層内部においてもあるイベントを経験するかしないか、できるかできないかといった格差が存在している。本研究では、さまざまな大規模調査データを用いて、若年層の貧困が一部の層に固定化しているということ、性行動が活発な層とそうでない層に分極化してきたこと、出身背景によって性行動が強く規定されていることなどを明らかにした。平成26年度は、性行動と性意識の階層的不平等に関する大学生調査を実施した。調査計画から実査、データ作成、データクリーニング、基礎集計の作成までが平成26年度内に終了しており、平成27年度には速やかに分析に入ることができる。また、若年層の職業キャリアと貧困の研究、社会階層と離家の関係に関する研究についても仮説や分析案ができ始め、研究成果が求められる最終年度に向けての準備がほぼ整った状態である。社会学本研究課題の今後の推進方策として、平成27年度は以下のことに取り組む。第1に、性行動と性意識に関する階層問題に関する論文を完成させる。第2に、本研究課題の最重要課題であるライフコースを通じた不平等の連鎖構造について、具体的に若年層の貧困問題を取り上げ論文を完成させる。第3に、本研究課題の自己点検と評価を行い、次年度以降の研究計画を具体化する。性行動と性意識の階層的不平等を解明するための独自の社会調査を実施する予定だったが、調査環境の問題から次年度に繰り越すこととした。この調査については平成26年度にすでに実施することが決まっている。平成25年度に調査を実施しなかったため、それにかかる時間、労力を二次分析に充て、数点の研究業績をあげることができたため、研究課題全体のスケジュールからみれば、おおむね順調に進展していると判断できる。調査に係る旅費と人件費を削減することができたために生じた額である。本研究課題の今後の推進方策として、平成26年度は社会調査の実施に多くの時間と労力を割き、平成27年度に研究課題の総括を行う。平成26年度より所属が変更になったが、これに伴う研究活動の遅延は起こっていないため、当初の予定通りに研究が進んでいくようスケジュールを調整する。海外の研究動向を把握するために、所属大学の図書館に入っていない英語書籍の購入に充てる。
体育学独自の研究方法としての「間身体的アプローチ」の構想

本研究の目的は、体育学独自の研究方法として「間身体的アプローチ」を構想し、その方法を具体的に明示することであった。間身体的アプローチは、妥当な仕方で他者の身体(身体性)を理解する方法であり、理性的・知性的認識とは異なった身体的認識方法になると予想された。研究初年度には、体育学における自然科学的研究方法をを批判的に検討するとともに、哲学における「現象学的方法」の適用可能性について吟味しながら、「他者の身体運動」に対する分析の応用が吟味された。また発達心理学等で方法化されている「間主観的アプローチ」について検討した結果、「間身体的アプローチ」を構想するためには,他者の「主観性」にではなく「身体性」に焦点化する方法論が構想される必要性を説いた.研究2年目には,引き続き「他者の身体運動」を分析する方法の検討がされ、他者の身体運動を「見る」ということに焦点をあてながら、運動実践者あるいは運動観察者の経験を忠実に記述する方法が吟味された。それと同時に,間主観的アプローチを詳細に検討することによって,その限界と質的研究としての可能性が探られた。研究3年目には、体育学における「モルフォロギー的研究法」や「体育学としての現象学的方法」の限界を指摘するとともに、現象学的方法をより具体的に「現象学的還元」「形相的還元」「反省・記述」の要素として捉え直したうえで、体育学の研究方法へと適用することが検討された。研究最終年では、体育学独自の研究方法としての「間身体的アプローチ」がどのような方法であるかが具体的に構想された。結果として、体育学の方法を補う形で、現象学的方法および間主観的アプローチを変形して適用する方法が6つの視点から示された。本研究の目的は、体育学独自の研究方法として「間身体的アプローチ」を構想し、その方法を具体的に明示することである。「間身体的アプローチ」は、妥当な仕方で他者の身体(身体性)を理解する方法であり、理性的・知性的認識とは異なった身体的認識方法となるだろう。本年度の研究実施計画としては,i)体育学の研究方法論の検討,ii)哲学および心理学における認識論の検討,およびiii)教育学および教育哲学における自他関係論の検討,が予定された.i)に関連し,次のことが明らかとなった.体育学における自然科学的な研究方法は,確かに身体運動を客観的に説明するが,実践者が経験している「身体運動それ自体」を語り得ないのであり,個人的(主観的)な方法が模索される必要性がある.体育学において実践者の立場を尊重する方法としては,「モルフォロギー的研究法」や「体育学としての現象学的方法」があるが,本研究では,これらの方法を改変し「他者の身体運動」の分析に応用することが必要となる.またii)に関連し,次のことが明らかとなった.「現象学的方法」について検討した結果,それらの方法は「事象そのものへ」と遡及するために,「現象学的還元」「形相的還元」「反省(記述)」などを手続を必要とする.今後これらの方法を,「他者の身体運動」の分析に応用することがもとめられることになる.iii)に関連する事柄では,発達心理学等で方法化されている「間主観的アプローチ」について,検討された.本質的にはわかり得ない「他者の主観性」へと辿り着くために,やはりそこでも「現象学的方法」が適用されていた.今後,「間身体的アプローチ」を構想するためには,他者の「主観性」にではなく「身体性」に焦点化する方法論が構想される必要がある.研究初年度は,i)体育学,ii)哲学および心理学,iii)教育学および教育哲学の領域から,それぞれ研究方法論に関わる文献の精読・検討が予定されていたが,特に現象学の方法論の難解さが原因となり,その理解に予想以上の時間が要された.今後,引き続き,解説書および関連分野の講読をすすめ,その精確な読解が必要になるだろう.一方において,発達心理学における「間主観的アプローチ」については,その概容が明らかになってきた.さらにその研究方法論の中核を活かしながら「間身体的アプローチ」を構想してゆくヒントが得られないかと期待している.本研究の目的は、体育学独自の研究方法として「間身体的アプローチ」を構想し、その方法を具体的に明示することである。間身体的アプローチは、妥当な仕方で他者の身体(身体性)を理解する方法であり、理性的・知性的認識とは異なった身体的認識方法となるだろう。特に本年度は、実際に間身体的アプローチを構想するためのヒントを得るため、諸領域の研究方法の限界と適用可能性について吟味することを目的とした。本年度の実施計画は、昨年度より引き続き、i)体育学の研究方法論の検討、ii)哲学および心理学における認識論の検討、iii)教育学および教育哲学における自他関係論の検討、を予定した。i)の内容に関わり、ライプチッヒ大学(独)を訪問し資料収集をおこない、マイネル,K.の運動学について理解を深めた。また、体育学に独自の研究方法を探る試みとして他者の身体運動を「見る」ことに焦点をあて、ハードル走者の視点について吟味し、その結果を報告した(体育・スポーツ哲学会、千葉大学)。さらには、ii)に関わり、心理学(発達心理学および精神分析学)の方法として定着しつつある間主観的アプローチを検討し、その限界と応用可能性が探られた。その内容は、日本体育学会体育哲学研究領域において報告され、「体育学の方法と間主観的アプローチー

『間身体的アプローチ」の構想ー」(『体育哲学研究』)として掲載される予定である。さらには、iii)に関わる議論としては、特に教育学(臨床教育学)における現象学的アプローチの方法や、質的研究方法について検討され、それらが妥当性を確保するための条件が探られた。本年度は、i)体育学の研究方法論の検討、に関わり、マイネルの運動学についての理解を深めた。彼のモルフォロギー的研究方法は、客観科学が排除しようとする主観的世界を説明しようとするが、その手続きに客観科学を利用しており、方法として不完全なものであった。また、ii)哲学および心理学における認識論の検討に関わり、発達心理学等で適用される間主観的アプローチの全体像が明らかとなってきた。それらの方法の妥当性と限界が明らかになったことによって、それらがどのようにして体育学独自の「間身体的アプローチ」に適用可能であるかが吟味され得ることになるだろう。ただし、質的研究法と称される間主観的アプローチやその他の現象学的アプローチもまた、現象学的方法をさまざまな程度で適用しており、最終的には現象学的方法の本質とは何かが明らかにされなければならないことになる。本研究の目的は、体育学独自の研究方法として「間身体的アプローチ」を構想し、その方法を具体的に明示することである。間身体的アプローチは、妥当な仕方で他者の身体(身体性)を理解する方法であり、理性的・知性的認識とは異なった身体的認識方法となるだろう。特に本年度は、実際に間身体的アプローチを構想するためのヒントを得るため、これまでの体育学の研究方法について吟味したうえで,現象学的方法の適用可能性を探ることを目的とした。したがって,本年度の実施計画は、i)体育学における研究方法の批判的検討、ii)哲学(特に現象学的方法)の適用可能性についての検討、を予定した。i)の内容に関わって明らかとなったのは,次のことである.体育学における自然科学的方法は,人間の身体運動を主観的な側面から記述しえない.その点において,マイネルのモルフォロギー的研究法は,主観的な視点から身体運動の固有性を捉えようとするが,結果的に客観的分析装置に頼って妥当性を確保するものである.また瀧澤の「体育学としての現象学的方法」は,現象学を忠実に適用しようとする点で,他者の身体運動の記述にも応用しうる可能性が示された.この内容は,体育哲学年報第48号(「身体運動を語りうるか:体育学における研究方法の検討」)に掲載予定である.また,ii)の内容に関わって明らかとなったのは,次のことである.現象学とは,事象そのものへと遡及しようとする本質学であり,フッサールの現象学的方法は,おおよそ「現象学的還元」「形相的還元」「反省と記述」からなっている.体育学が他者の身体運動の本質を記述するためには,この方法を観察者の主観性だけでなく身体性によって捉える方法へと変容させる必要がある.この内容は,体育哲学年報第48号(「現象学的方法は体育学の方法となりうるか」)に掲載予定である.過年度までの研究において,本研究が構想すべき間身体的アプローチの対極に位置づくと考えられる間主観的アプローチの詳細が検討されている.間主観的アプローチは,精神分析的心理学や発達心理学などの分野で妥当性を得ている方法論であり,そこでは他者に帯する共感的分析が主要な方法として適用され,特に現象学的方法が大きな理論的根拠になっていることが明らかになっている.
塩酸イリノテカン代謝酵素UGT1A1の遺伝子多型と同薬剤の副作用発現との関連

日本人の婦人科癌患者においてもUGT1A1 *6・*28のアレル頻度は日本人における肺症小細胞癌や大腸癌などの固形癌患者における研究と同様の結果であった。日本人婦人科癌患者においてもUGT1A1 *6ヘテロかつ*28ヘテロ接合体、またはUGT1A1*6ホモ接合体の遺伝子多型は、塩酸イリノテカンを用いた抗癌化学療法に伴う高度の好中球減少の発現と関連する可能性がある。これまでに自身の採血検体を利用してDNAの抽出と定量、UGT1A1 *6,*28,*60遺伝子多型解析を行う手技を確立した。近年特にUGT1A1 *6, *28の遺伝子多型と塩酸イリノテカンの副作用について特に注目されつつあり、解析する遺伝子多型を*6,*28,*60に絞り込んで研究を行うことにした。現在は患者採血検体収集DNAの抽出と定量を行っており、当院で婦人科癌に対する抗癌剤治療として塩酸イリノテカンの投与を受け外来通院中の患者より同意を得て末梢静脈からEDTA採血10mlを施行し、wizard Genomic DNA purification Kit (Promega A1620)を用いて末梢血中の白血球よりDNA抽出し、DyNAQuant200 (Hoefer, Pharmacia Biotech)を用いてDNAを定量、定量後のDNA溶液の一部を-20°Cで保存、残りを-80°Cで保存している。収集された検体より、1例の重篤な副作用を呈した患者の検体を含む10検体を抽出して試験的にUGT1A1 *6,*28,*60各々に特異的なプライマーを用いてPCRを行いシーケンサーにて塩基配列を確認してUGT1A1遺伝子解析を行った。重篤な副作用を呈した患者でのみUGT1A1*6,*28の双方において変異遺伝子を認め、消化器癌同様に婦人科癌においてもUGT1A1*6,*28遺伝子多型が塩酸イリノテカンの副作用の発現において重要な因子であろうことが再確認された。UGT1A1 *60の遺伝子多型と副作用については試験的解析では明らかな傾向は判断できなかった。以上の試験的解析結果より、UGT1A1 *6,*28遺伝子多型と塩酸イリノテカンの副作用の相関については引き続き多数の患者群での遺伝子解析を行い、重篤な副作用との相関を検討することで、重篤な副作用発現の予測に必要な基礎的情報が得られると考えている。前年度までの試験的解析により、UGT1A1 *28,*6の遺伝子多型に絞って検討することとしたため、ひきつづき当院で婦人科癌に対する抗癌剤治療として塩酸イリノテカンの投与を受け外来通院中の患者より同意を得て採血、DNAを抽出し、UGT1A1遺伝子多型解析を続けた。OGT1A1 *28,*6の頻度解析結果は以下の通りであった。UGT1A1*6ハプロタイプ頻度...16.7%、UGT1A1 28ハプロタイプ頻度...16.7%(全例ヘテロ接合体)。UGT1A1 *6へテロかつ*28へテロの全例でイリノテカンによる副作用と考えられるGrade4以上の強い好中球減少を認めた。これらのハロタイプ頻度は日本人で報告されている主に消化器癌・肺癌での検討と同様の結果であった。副作用の頻度と遺伝子多型についての相関について解析したが、6,*28を持つものでは副作用が強い傾向にあったが、有意差は認めなかった。婦人科癌では塩酸イリノテカンを主に再発・再燃治療で使用しているため、前治療の影響もありイリノテカン投与量が一定しないこと0卵巣明細胞腺癌でのイリノテカン・シスプラチン治療ではイリノテカン投与量が60mg/m^2と少ない〔肺小細胞癌では80mg/m^2が標準投与量〕ことが有意差を認めなかった一因と考えている。2009年4月にはイリノテカン投与時のUGT1A1 *28,*6遺伝子多型解析は保険診療として認められ、肺癌・消化器癌ではイリノテカン投与前や初回投与後の副作用発現時の検査として遺伝子多型解析は一般的となりつつある。今回の結果から、婦人科でもUGT1A1 *6,*28は予期しない重篤な副作用(特に好中球減少)と関連すると考えられた。今後、卵巣明細胞腺癌に対する塩酸イリノテカン治療開始前には保険診療内で本人の同意のもとUGT1A1 *6,*28の多型解析を行い、副作用との関連の情報を集積し、イリノテカン投与量(60mg/m^2)が適切かどうかも含めて検討していきたいと考えている。
トキソプラズマ感染細胞による抗原提示機構の分子論的、超微形態学的解析

細胞内寄生原虫に対するワクチン開発への基礎的研究を目的とし、トキソプラズマ原虫感染細胞がトキソプラズマ原虫感染細胞特異的細胞傷害性T細胞にHLA class I分子で抗原提示する機序、特に宿主細胞内におけるトキソプラズマ原虫抗原の動態について解析を行った。トキソプラズマ原虫を感染させたヒトB細胞腫を急速凍結法、凍結置換固定法、ディープエッチング法を用いた超微形態学的解析の結果、トキソプラズマ原虫外膜と宿主parasitophorous膜の融合、およびチャンネル様構造形成が起こることが明らかとなった。そこでトキソプラズマ原虫を生体pH指示剤(BCECF)で生体蛍光染色Workstation(ACAS)およびcytoflowmetry(FACScan)で解析した結果、感染後1-2時間後にトキソプラズマ原虫由来のBCECFが宿主細胞内に移行することが示された。そこでトキソプラズマ原虫感染細胞が細胞傷害性T細胞にトキソプラズマ原虫抗原を提示する際に機能するHLA class I分子を特定するために抗HLA class I privateモノクローナル抗体を用いて検討した結果、HLA-A2がトキソプラズマ抗原提示に機能していることが示された。次にトキソプラズマ原虫感染細胞によって提示されるペプチドT細胞エピトープを解析した。トキソプラズマ原虫感染細胞を超音波で破砕後、trifluoro-acetic acklにより抽出し、逆相高速液体クロマトグラフィーにより分画した。このペプチド分画をトキソプラズマ原虫感染細胞特異的傷害性T細胞の標的細胞にpulseすることによって、エピトープの検索を行ったところfraction 29に含まれることが分かった。fraction 29に含まれるペプチドエピトープのアミノ酸解析の結果、N末端から2番目にLeu、3番目にIle、9番目にMetあるいはPheの疎水性アミノ酸を持つオリゴペプチドであることが示された。平成4年度では、トキソプラズマ原虫感染細胞がトキソプラズマ原虫感染細胞特異的細胞傷害性T細胞にHLA class工分子で抗原提示する機序、特に宿主細胞内におけるトキソプラズマ原虫抗原の動態について解析を行った。トキソプラズマ感染細胞の超微形態学的解析の結果、トキソプラズマ原虫外膜と宿主parasitophorous膜の融合、およびチャンネル様構造形成が起こることが明らかとなった。そこでトキソプラズマ原虫を生体pH指示剤(BCECF)で生体蛍光染色Workstation(ACAS)およびcytofloumetry(FACScan)で解析した結果、感染後12時間後にトキソプラズマ原虫由来のBCECFが宿主細胞内に移行することが示された。トキソプラズマ原虫感染細胞が細胞傷害性T細胞にトキソプラズマ原虫抗原を提示する際に機能するHLA class I分子を特定するために抗HLA class I privateモノクローナル抗体を用いて検討した結果、HLA-A2分子によってトキソプラズマ抗原が提示されていることが示された。トキソプラズマ原虫感染細胞を超音波で破砕後、trifluoroacetic acidにより抽出し、逆相高速液体クロマトグラフィーにより分画した。このペプチド分画をトキソプラズマ原虫感染細胞特異的細胞傷害性T細胞の標的細胞に、pulseすることによって、エピトープの検索を行ったところfracrtion29に含まれることが分かった。現在、ペプチドエピトープのアミノ酸解析を進めている。さらに、トキソプラズマ原虫感染細胞による細胞傷害性T細胞に対する抗原提示はbrefeldin Aによって阻止されるが、トキソプラズマ原虫感染細胞から抽出したオリゴペプチドを標的細胞へpulseし抗原提示させる際にbrefeldin A処理しても抗原提示を全く阻止されない事から、新たな抗原提示pathwayの存在が示唆された。細胞内

寄生原虫に対するワクチン開発への基本的研究を目的とし、トキソプラズマ原虫感染細胞がトキソプラズマ原虫感染細胞特異的細胞傷害性T細胞にHLA classI分子で抗原提示する機序、特に宿主細胞内におけるトキソプラズマ原虫抗原の動態について解析を行った。トキソプラズマ原虫を感染させたヒトB細胞腫を急速凍結法、凍結置換固定法、ディープエッチング法を用いた超微形態学的解析の結果、トキソプラズマ原虫外膜と宿主parasitophorous膜の融合、およびチャンネル様構造形成が起こることが明らかとなった。そこでトキソプラズマ原虫を生体pH指示剤(BCECF)で生体蛍光染色Workstation(ACAS)およびcytoflowmetry(FACScan)で解析した結果、感染後1-2時間後にトキソプラズマ原虫由来のBCECFが宿主細胞内に移行することが示された。そこでトキソプラズマ原虫感染細胞が細胞傷害性T細胞にトキソプラズマ原虫抗原を提示する際に機能するHLA classI分子を特定するために抗HLA class I privateモノクローナル抗体を用いて検討した結果、HLA-A2がトキソプラズマ抗原提示に機能していることが示された。次にトキソプラズマ原虫感染細胞によって提示されるペプチドT細胞エピトープを解析した。トキソプラズマ原虫感染細胞を超音波で破砕後,trifluoro-acetic acidにより抽出し、逆相高速液体クロマトグラフィーにより分画した。このペプチド分画をトキソプラズマ原虫感染細胞特異的細胞傷害性T細胞の標的細胞にpulseすることによって、エピトープの検索を行ったところfracrtion29に含まれることが分かった。fraction29に含まれるペプチドエピトープのアミノ酸解析の結果、N末端から2番目にLeu,3番目にIle、9番目にMetあるいはPheの疎水性アミノ酸を持つオリゴペプチドであることが示された。