hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
遺伝的脳卒中モデルラットの血液脳関門は脆弱かーインビトロ再構築技術を用いた検討

また、血液脳関門(BBB)に発現しているトランスポーターを比較したところ、SHRとSHRSPでは、WKYに比べ排出系のトランスポーターであるP-糖タンパク質の発現が亢進していた。BBBは内皮細胞だけでなく、その周囲の細胞であるペリサイトとアストロサイトにより構成・維持されている。そこで、BBB構成細胞であるアストロサイトとペリサイトをWKYとSHRSPより単離培養し、共培養系を作製した。TEERによるバリアー機能評価の結果、SHRSP由来のアストロサイトはWKY由来のアストロサイトに比べ、バリアー機能の強化作用が弱いことが判明した。この時、TJタンパク質であるoccludinとcludin-5の発現はSHRSPで有意に低下していた。一方、SHRSP由来のペリサイトとWKY由来のペリサイトとの共培養系の比較では、SHRSP由来のペリサイトはWKY由来のペリサイトに比べ、バリアー機能の強化作用が強い傾向がみられた。更に、アストロサイトとペリサイト、内皮細胞の3種細胞共培養系では、WKY由来のモデルがSHRSP由来のモデルよりも有意にバリアー機能が高いことが判明した。以上の事から、SHRSPではBBB構成細胞間の相互作用に乱れが生じており、バリアー機能が低下していることが示唆された。脳卒中ラット(SHRSP)の血液脳関門(BBB)の機能不全の解明のため、WKY、SHRとSHRSPからastrocytes (AS)、pericytes (PR)、endothelial cells (EC)を分離しBBBモデルを作成した。SHRとSHRSPのECではWKYに比べclaudin-5が低下しoccluin、P-糖タンパク質が亢進していた。SHRSPのASはWKYに比べ、バリアー機能の強化作用が弱く、SHRSPのPRはWKYに比べバリアー機能の強化作用が強い可能性が観察され、ビタミンEなどがBBB機能に影響を及ぼした。SHRSPでBBBのバリアー機能が低下する可能性を示す。これまで同様の評価を継続し、どの細胞種がBBB機能不全に関与するかを明らかにする。また、低酸素状態、あるいは低酸素再酸素化などの条件を組み合わせて実施する。また、AVP刺激によるTGFβやHGFの発現に対する影響を評価するとともに、食品成分の影響を継続して調べる。これまで同様の評価を継続する。経内皮電気抵抗だけでなく、BBB機能にかかわる分子(タイトジャンクションタンパク質やトランスポーターなど)の変動の詳細を検討する。加えて、研究分担者の並河らは、SHRSPの第1、18染色体にその脳卒中感受性の大部分を説明する量的形質遺伝子座(QTL)が存在することを明らかにしている(Gandolgor et al. Hypertension 2013;62:55-61)。また、遺伝子発現マイクロアレイ解析により、SHRSPと脳卒中抵抗性であるSHRの脳組織で有意な発現差を示す遺伝子を同定している(未発表)。脳卒中感受性QTLに存在する発現変動
消化器発癌におけるTGF-Beta活性化の分子機構とゲノム不安定性の解析

われわれは潜在型TGF-β1活性化の機序を解析するために潜在型TGF-β1を変異させLTBPと結合を不可能にしたマウス(変異型マウス)を作成し、生後4週より肺炎、心筋炎、大腸炎の他、生後8週より胃癌、直腸癌、肛門癌を自然発症することを発見し報告した。この変異型マウスにおいて、血清中潜在型TGF-β1量は野生型と比べ差を認めなかったが、活性型TGF-β1量は有意に低下することがわかった。また、変異型マウスの胃および直腸粘膜上皮は野生型に比べ過形成となっていた。そこで胃および直腸における粘膜上皮の増殖をKi67染色で評価したところ、胃、直腸ともに変異型マウスにおいて腸管粘膜のKi67染色の亢進を認めた。また、c-Myc,リン酸化Smad2,リン酸化Stat3,リン酸化c-Met,β-Cateninの発現を免疫組織染色法にて評価したところ、胃においては変異型マウスで胃粘膜におけるc-Myc、リン酸化Smad2染色の低下を認め、直腸においては変異型マウスでリン酸化Stat3染色の亢進を認めた。レーザーマイクロダイセクション法により変異型マウスの腫瘍組織の腫瘍細胞からDNAを抽出し、p53遺伝子変異の検索をダイレクトシークエンス法で行ったが、5例中5例ともp53遺伝子は野生型であり、癌化におけるp53遺伝子の関与は否定的であった。TGF-β1の活性化の機序の解明として、マウス血清にshear stressをかけて潜在型TGF-β1の活性化を評価したところ、野生型マウスの血清ではTGF-β1の活性化が生じたが、変異型マウスでは活性化が生じないことがわかり、変異型マウス組織でのshear stressによるTGF-β1の活性化の低下が、TGF-βシグナルの低下を来たし、胃および直腸粘膜上皮の過形成、増殖の亢進を来たし癌化に関与することが示唆された。
近代政治思想における未開イメージの形成と変容

本研究の目的は、18世紀後半のフランス啓蒙思想における文明と未開をめぐる哲学的・政治学的言説の検討を通して、啓蒙の思想家たちが、文明社会の外部や周縁世界をどう描いたのかについて、また人間本性と人間の多様性、人間の普遍性と多様性をどう捉えたのかについて考察するものである。本研究では、近代ヨーロッパにおける未開イメージをめぐる叙述を通して、ヨーロッパにおける中心と周縁、文明と未開、ヨーロッパと非ヨーロッパをめぐる思想史の系譜を辿り、ヨーロッパ思想史が知の周縁としてのマイノリティといかに向き合ったのか、植民地史の関連も念頭におきつつ、その一端を考察するものである。そこで、本研究では、16世紀以来のいわゆる地理的拡大による「未開」地域の「発見」から出発し、特に「文明社会」論が活発に論じられる18世紀啓蒙思想に焦点をあて、分析を行うこととする。(a)まず、本研究の出発点となる研究として、ヨーロッパによる未開社会の「発見」から出発し、モンテーニュやラオンタンらのヨーロッパ文明社会を批判して未開社会を称揚するいわゆる<高貴な未開人>に関する言説を分析し、その上で、ヴォルテール、ルソー、ディドロの3人が、未開社会をどう論じたか、3者の比較検討をしつつ考察し、その成果を『政治思想研究』に論文として公表した。(b)また、本研究は、ヨーロッパ社会の未開イメージを通して、ヨーロッパの他者意識やマイノリティ認識などに迫ろうとするものだが、その土台となる多様性や差異をめぐる思想史を、啓蒙の世紀において知の周縁にも目を向けた思想家としてのディドロに着目し、その自然観・美学観・政治観の観点から扱った著作として『ディドロ多様性の政治学』を公刊した。(c)これらを踏まえ、植民地問題との関連性などについても検討している。本研究は、近代ヨーロッパの他者認識とその政治思想的意義の解明を目的とし、本年は特に十八世紀フランス啓蒙期を対象として分析した。まず、ディドロは非理性的存在・社会的少数派・非ヨーロッパ世界などへの言及において所謂ヨーロッパ中心主義や理性中心主義とは異なる見地に立ち、『百科全書』編集以降の政治思想でも植民地論などそのような視座が貫かれている点につき従来の見地を深めた。更に、本年は、人民主権論を提唱したルソーの政治思想における「祖国愛」「道徳」「習俗」などの観念の分析と同時に、それが彼の国際平和論や「人類愛」に関する議論との関連でもつ意義について、教育論における対他感情の育成の観点などから明らかにした。本研究は、近代フランスの啓蒙思想における未開論をめぐる言説を通して、近代ヨーロッパのマイノリティ論を検討することから出発し、本年度は、功利主義や経済的合理主義とは区別された共感や憐憫の情などの、利他的感情に関わる政治的諸価値が、デモクラシーの成立期や植民地の拡大する中、どう論じられていくのかに着目した。啓蒙の合理主義に反してディドロが非理性的な存在や想像力の役割を高く評価した点、それが植民地の問題にもつながったこと、さらにはルソーが人類愛の育成につながる市民の教育を論じた一方で、利他的感情の限界と親密な政治空間の必要性を論じた点などを分析した。さらに、古代から近現代に至る、共感、同情、慈愛などの諸観念の変遷史も明らかにしたが、以上の検討は、貧困や格差社会など様々な社会的な問題との関連で着目されるものであり、現代の社会的課題にも繋がるものである。これらの研究成果は、発表論文・著作の中に活かされているほか、次年度に、「共感」とのタイトルで(『政治概念の歴史的展開第8巻』晃洋書房)の中に論文として公表する予定である。研究は、当初の計画の基本的観点に沿って、一定の進展が見られるが、本年度は資料調査研究が主となったため、ルソーの政治思想に関する論文などは、次年度の公表となる。24年度が最終年度であるため、記入しない。本研究は、これまでの成果について特に、ディドロ、ヴォルテール、ルソーなどを中心として、マイノリティ認識や多様性への認識、さらに社会的紐帯をめぐる問題を検討しており、最終年度は、フランス啓蒙思想がこの問題についてもつ政治思想的意義を総括し、とれまでの成果を論文として公表する。
プロテオーム解析によるエストロゲン応答遺伝子のノンゲノミック経路の解明

本研究では、DNAマイクロアレイを用いた遺伝子発現プロファイリングにより応答性を示すことが明らかになった遺伝子についてプロテオーム解析を用いてシグナル伝達系を明らかにすることによりエストロゲンに応答する遺伝子の機能及びネットワークを明らかにすることを目的として、以下の2項目について解析を行った。(1)エストロゲン応答遺伝子による仮想ネットワークの研究。まず、エストロゲン応答遺伝子について、フェノール類やフタル酸エステル類など、様々な化学物質の刺激に対してエストロゲンとの共通性を統計的に比較し、エストロゲン応答シグナル伝達カスケードのもとになる遺伝子機能によるカテゴリー化を行った。次に、ノンゲノミック経路に特有なMAPK及びAKT2のリン酸化反応を指標にして、リン酸化状態の変動をもとにシグナルの評価を行うとともに、エストロゲン受容体以外の受容体について検討した。また、様々な培養細胞において、様々な化学物質による刺激のもとで遺伝子発現プロファイルの比較、及び、アリルハイドロカーボン受容体との共役系について解析を行った。さらに、カスケードと遺伝子発現プロファイルとの関係、さらに、遺伝子発現プロファイルと様々な細胞・組織レベルでの現象(フェノーム:phenome)との関係を、フォーカスアレイによってどのような情報が得られるかについて包括的な議論を行い、総説として発表した。(2)脳神経系のエストロゲン応答性シグナル伝達系解析。日本医科大と共同で、脳の性分化に関与する脳下垂体及び視床下部領域におけるエストロゲンによる遺伝子の発現変動についてDNAマイクロアレイを用いて解析した。DNAマイクロアレイ解析によって得られた脳の女性化・男性化に関与する遺伝子の中で、アポトーシスや細胞移動に関係する遺伝子(タンパク質)に注目してウエスタンブロット解析などによりシグナルカスケードの探索を行った。本研究では、DNAマイクロアレイを用いた遺伝子発現プロファイリングにより応答性を示すことが明らかになった遺伝子についてプロテオーム解析を用いてシグナル伝達系を明らかにすることによりエストロゲンに応答する遺伝子の機能及びネットワーク(特にノンゲノミック経路)を明らかにすることを目的とする。本年度は、以下の解析を行った。(1)メンブランレセプター及びその関連遺伝子、Ras superfamily遺伝子、及びMAPK/AKT2関連遺伝子に関しては、様々な化学物質の刺激に対してエストロゲンとの共通性を比較することにより、カスケードあるいは遺伝子機能によるカテゴリー化を行った。さらにGene Ontologyタームを用いた統計解析によりそのカテゴリー化の信頼性を上げることが可能になった。また、MAPK及びAKT2については、化学物質による刺激をリン酸化状態の変動を指標にエストロゲン活性の評価を行うとともに、エストロゲン用活性を有する化学物質によるGPR30などエストロゲン受容体以外の受容体のカスケードの検討を行った。また、MCF-7細胞以外の細胞を用いることで上記のカスケードの異なる細胞系においてもシグナル伝達解析が可能であることを示した。(2)脳神経系のエストロゲン応答性に関与する遺伝子の解析に関しては、日本医科大と共同で脳の性分化に関与する遺伝子に関してDNAマイクロアレイ解析により脳の女性化・男性化に関与する遺伝子を取得した。現在、NPY-Y1Rタンパクを含め、アポトーシスや細胞移動に関係するタンパクに関してウエスタンブロット解析などによりシグナルカスケードの探索を行っている。本研究では、DNAマイクロアレイを用いた遺伝子発現プロファイリングにより応答性を示すことが明らかになった遺伝子についてプロテオーム解析を用いてシグナル伝達系を明らかにすることによりエストロゲンに応答する遺伝子の機能及びネットワークを明らかにすることを目的とする。(1)エストロゲン応答遺伝子について、フェノール類やフタル酸エステル類など、様々な化学物質の刺激に対してエストロゲンとの共通性を統計的に比較し、カスケードのもとになる遺伝子機能によるカテゴリー化を行った(Terasaka et al.,2006;及び、論文投稿中)。

MAPK及びAKT2に注目して、エストロゲンアンタゴニストのICI 182,780や4-hydroxytamoxifen処理におけるリン酸化状態の変動を指標にシグナルの評価を行うとともに、エストロゲン受容体以外の受容体であるGPR30のカスケードの関与もGPR30遺伝子のノックダウンにより検討した。(2)脳神経系のエストロゲン応答性に関与する遺伝子を解析するために、日本医科大と共同で脳の性分化に関与する部位における遺伝子の発現変動をDNAマイクロアレイ解析により解析した。特徴的な遺伝子に関しては、RT-PCRにより発現変動を確認した。さらに、遺伝子機能別に部位間及び発生の日齢間での変動を検討した。現在、アポトーシスや細胞移動に関係するタンパクに関してウエスタンブロット解析を行っている。本研究では、DNAマイクロアレイを用いた遺伝子発現プロファイリングによりエストロゲンに対して応答性を示すことが明らかになった遺伝子についてプロテオーム解析を用いてシグナル伝達系を明らかにすることによりエストロゲン応答遺伝子の機能及びネットワーク(ノンゲノミック経路)を明らかにすることを目的とする。本年度は、以下の解析を行った。(1)シグナル伝達系関連タンパク質に関しては、漢方生薬の甘草や人参などの抽出物を用いた解析を行い、エストロゲンとの共通性(ERKやAKTなどのリン酸化状態の変動に関して時間変動や物質の量に対する変動)を比較し、カスケードを詳細に解析した。また、GPR30などエストロゲン受容体以外の受容体のカスケードの検討を行ない、阻害リや受容体に対する抗体による阻害効果を比較した。成果を学会発表及び論文として公表した(Inoue, et. al.,2007;Dong, et. al.,2007;Tanaka, et. al.,2007;Parveen, et. al.,2008)。(2)脳神経系のエストロゲン応答性に関与する遺伝子の解析に関しては、日本医科大と共同でDNAマイクロアレイを用いた脳の性分化り男与する遺伝子の解析を行った。特に、すでに又得した脳の女性化・男性化に関与する遺伝子の中で、アポトーシスや細胞移動に関係する遺伝子(タンパク質)に注目してウエスタンブロット解析などによりシグナルカスケードの探索を行い、成果を報告した(Xu, et. al.,2008)。さらに、アポトーシスのシグナル伝達経路としてTGFβ、TNFαあるいはER-stress signaling等の経路との関係を明らかにした。
オールドローズの花弁にペラルゴニジン配糖体は存在するか?

本研究では19世紀に作出されたバラ園芸品種を1)ガリカ系オールドローズ、2)ガリカ系オールドローズにチャイナローズを交配した品種群、3)ノイバラに中国原産の四季咲き矮性品種を交配したポリアンサ系統の3グループに分け、花弁中のアントシアニン組成の分析を進めてきた。本研究の結果から、従来、ポリアンタ系統の品種で起きた突然変異で初めて生じたと考えられていたペラルゴニジン配糖体が、実際にはそれより古い系統でも生じていたことが明らかになった。特にペラルゴニジン配糖体が多く検出されたのはハイブリッド・パーペチュアル系統の'エドゥアール・アンドレEdouard Andre'(Verdier E., 1880)、'チャールズ・ゲイターCharles Gater'(Paul G., 1893)などの品種であった。19世紀に作出されたバラ園芸品種はその由来により3グループに分けられる。1つめは、ヨーロッパで古くから栽培されていたガリカ系オールドローズ(ガリカ、ダマスク、センティフォリア、アルバ系統)、2つめはガリカ系オールドローズに中国の園芸品種(チャイナローズ)を交配して作出された品種群で、ポートランド、ノアゼット、ブルボン、ハイブリッド・チャイナ、ハイブリッド.パーペチュアル、ティーの6系統。3つめは19世紀後半に日本からヨーロッパへもたらされたノイバラを主に中国原産の四季咲き矮性品種とかけ合わせて作出されたポリアシサ系統で、この系統にはペラルゴニジン(Pg)配糖体合成能力があることがすでに確認されている。これまでの研究ではシアニジン、ペオニジンの配糖体は野生種のバラにも存在するが、Pg配糖体は、交配育種の過程で突然変異により合成されるようになったと考えられており、その起源は明らかでない。1グループにPg配糖体がわずかでも検出されれば、バラのPg配糖体の起源はヨーロッパのガリカ系オールドローズにまでさかのぼり、中国のバラや日本のバラの影響を受ける以前からPg合成能力を有していたということになる。一方、2グループだけにPg配糖体が検出され1に無ければ、ガリカ系オールドローズが中国のバラと交配することによってPg合成能力を獲得したといえる。もし1、2いずれかのグループのオールドローズ品種でPg配糖体が発見されたならば、最初にPg配糖体を獲得したのはポリアンサ系統であるという従来の説が覆される。反対に1、2両方にPg配糖体が存在しないことが明らかになれば、バラはポリアンサ系統品種の作出で初めてPgを合成できるようになったと判断できる。今年度は1と2のグループに属する141品種を収集し、含有するアントシアニンの組成を高速液体クロマトグラフィと2次元薄層クロマトグラフィによって厳密に行った。本研究では19世紀に作出されたバラ園芸品種を1)ガリカ系オールドローズ、2)ガリカ系オールドローズにチャイナローズを交配した品種群、3)ノイバラに中国原産の四季咲き矮性品種を交配したポリアンサ系統の3グループに分け、花弁中のアントシアニン組成の分析を進めている。本年度は1と2のグループのうち、ガリカ系統(3品種)、ダマスク系統(3品種)、モス系統(9品種)、ポートランド系統(1品種)、ノアゼット系統(5品種)、ブルボン系統(16品種)、ハイブリッド・チャイナ系統(14品種)、ハイブリッド・パーペチュアル系統(35品種)、ティー系統(10品種)、およびランブラー系統(10品種)あわせて96品種のサンプルを世界一の品種保有数を誇るイタリアのロゼト・ボタニコ・カーラ・フィネスキから提供いただき、分析を行った。ほとんどの品種ではシアニジン配糖体およびペオニジン配糖体のみが検出されたが、ハイブリッド・パーペチュアル系統、ティー系統、ランブラー系統の一部の品種ではペラルゴニジン配糖体らしい成分がわずかに検出された。非常に微量であるため、詳しい訂正分析はまだ完了していないが、次年度においてより多くの花弁サンプルを入手し、正確な構造解析を行う。また、本年度、十分にサンプルが集められなかったガリカ系統、ダマスク系統、ポートランド系統、ノアゼット系統のサンプル収集および分析も継続して行う。昨年度は2)に分類されるブルボン系統、ハイブリッド・チャイナ系統、ハイブリッド・パーペチュアル系統を中心に分析を行った。

今年度は1と2のグループのうち、ガリカ系統(31)、ダマスク系統(16)、モス系統(29)、ポートランド系統(20)、ノアゼット系統(8)、ブルボン系統(23)、ハイブリッド・チャイナ系統(5)、ハイブリッド・パーペチュアル系統(20)、ティー系統(5)、あわせて177品種のサンプルを新たに入手し、分析を行った。ほとんどの品種ではシアニジン配糖体およびペオニジン配糖体のみが検出されたが、昨年と同じくハイブリッド・パーペチュアル系統、ティー系統の一部の品種ではペラルゴニジン配糖体らしい成分がわずかに検出された。また、昨年は予想できなかったことだが、ガリカ系統、ダマスク系統、モス系統の品種でも非常に微量ながら、ペラルゴニジン配糖体らしい成分が検出された。今年度はサンプル数がたいへん多く、薄層クロマトグラフィによる分析がようやく終了したところである。最終年度である来年度はHPLCによる精密分析を全サンプルについて行い、結果をとりまとめる。本研究では19世紀に作出されたバラ園芸品種を1)ガリカ系オールドローズ、2)ガリカ系オールドローズにチャイナローズを交配した品種群、3)ノイバラに中国原産の四季咲き矮性品種を交配したポリアンサ系統の3グループに分け、花弁中のアントシアニン組成の分析を進めてきた。今年度は、19世紀初頭から20世紀初頭にかけて作出されたポートランド系統(4)、ノアゼット系統(3)、ブルボン系統(7)、ハイブリッド・パーペチュアル系統(20)、あわせて34品種のサンプルを新たに入手し、詳細な分析を行った。昨年度までにペラルゴニジン配糖体と思われる成分が検出された品種については、HPLCによる精密分析および薄層クロマトグラフィによる再確認を行った結果、2)グループに属するハイブリッド・パーペチュアル系統、ティー系統の品種で、少量ながらペラルゴニジン配糖体(3,5-ジグルコシドおよび3-グルコシデ)が確認された。これらのほかに、3-位および5-位に糖を一つずつ有するが、糖がグルコースでない配糖体と思われる成分が検出されたため、現在さらに詳細な分析を行っている。本研究の結果から、従来、ポリアンタ系統の品種で起きた突然変異で初めて生じたと考えられていたペラルゴニジン配糖体が、実際にはそれより古い系統でも生じていたことが明らかになった。分析中の糖の成分が明らかになり次第、結果を論文の形で公表する予定である。
ＤＮＡマイクロアレイによる早期関節リウマチ病態形成分子の探索とその機能解析

関節リウマチ(RA)の病態形成の上位分子を明らかにする事を目的として、DNAマイクロアレイ法により末梢血の遺伝子発現を網羅的に解析した。RA末梢血における特徴的な変化を確認した後、疾患活動性と最も強く相関した遺伝子としてFamily with sequence similarity20, memberA(FAM20A)を同定した。薬剤効果を反映しうる指標であることも確認し、最適化および病態形成への関与についてさらに検討の必要があると考えられた。本研究課題では、関節リウマチ(RA)の病態形成の上位に位置する主要分子を明らかにする事を目的として、無治療早期RA症例の末梢血を対象としてDNAマイクロアレイによって網羅的発現解析を行い、健常人、変形性関節症およびC型肝炎の疾患コントロールに対して発現亢進、発現低下している分子の探索を、初年度研究実施計画に沿って研究を進めてきた。網羅的mRNA発現解析によって候補分子としてヒストン脱メチル化酵素JMJDIA、シグナル伝達調節アダプター分子14-3-3zeta、チロシン脱リン酸化酵素PTPN11が同定された。JMJDIAについては、RA患者および健常人それぞれ10例のPBMC由来のtotal RNAを用いたmRNAの解析および特異抗体による免疫プロットを施行したが、予想に反して有意差は認めなかった。当該分子の好中球における発現が重要である可能性につき詳細な検討が必要と考えられた。14-3-3zetaについては、最新の欧米の報告などより、そのファミリー分子が関節リウマチの治療標的候補として注目されるようになった。14-3-3zetaの血清および培養上清におけるタンパク発現定量のため、サンドイッチEL,ISAの系を構築し、ファミリー分子も含めてRAの病態形成におけるその役割について解析中である。細胞内チリシン脱リン酸化酵素SHP-2分子コードする遺伝子であるPTPN11についてはmRNA、タンパク質レベルにおける発現について、標的細胞を絞った解析を現在試みている。当初に着手した候補分子リストをさらに他の条件を加えた絞り込んだ最新のバイオインフォマティック解析により新たな候補分子を同定した。これらはRAの病態形成において全く新規のもので、公共データベースによる発現情報やその機能、発現レベル勘案し非常に有望であると考えられた。新たな候補分子についての解析に現在着手している。本研究課題では、関節リウマチ(RA)の病態形成の上位に位置する主要分子を明らかにする事を目的として、RA患者末梢血よりRNAを採取し、DNAマイクロアレイによって網羅的遺伝子発現解析を行い、健常人、C型肝炎の疾患コントロールに対して、発現亢進あるいは発現低下している分子の探索を、研究実施計画に沿って研究を進めている。1)リン酸化タンパク質の調節因子14-3-3zeta最新の欧米の報告などでも、14-3-3zetaのファミリー分子が関節リウマチの治療標的候補として注目されるようになっている。アレイデータをもとにMTX未治療RA患者において検討したところ、全血中および末梢血単核球中において蛋白質発現の上昇を認め、陽性細胞率でも全白血球分画、特にB細胞で上昇を認めた。B細胞分画での上昇から、B細胞における機能と関連する可能性が考えられた。今後は、14-3-3zetaの早期炎症を調節するシグナル分子として機能評価を行い、新規治療標的となりうるか明らかにする。2)分泌型キナーゼFAM20A上記に加え複数の候補分子を同定しており解析中である。本研究では関節リウマチ(RA)の病態形成の主要分子を明らかにする事を目的として、RA患者末梢血よりRNAを採取し、DNAマイクロアレイによって網羅的遺伝子発現解析を行い、健常人、C型肝炎の疾患コントロールに対して、発現亢進あるいは発現低下している分子の探索を、研究実施計画に沿って研究を進めてきた。初年度に網羅的mRNA発現解析によって複数の候補分子を同定したことを報告している。本年度は様々なバイオマティクス解析を行うとともに、新たに見いだした候補分子のRA病態形成における役割につき検討を進めた。まず、リン酸化タンパク質の調節因子である14-3-3zetaについては、最新の欧米の報告などより、そのファミリー分子が関節リウマチの治療標的候補として注目されるようになった。14-3-3zetaの血清および培養上清におけるタンパク発現定量のため、サンドイッチELISAおよびフローサイトメトリーの系を構築しファミリー分子も含めた解析を行った。早期炎症を調節するシグナル分子としての役割が期待される。また発現解析データを基に疾患活動性との相関に着目し、DAS28-CRPおよびESR双方の相関p値の平均で序列化したところ、最も相関した遺伝子としてFAM20A (Family with sequence similarity 20, member A)が抽出された。FAM20Aの2種類のプローブとも平均p値は極めて低値であり、発現量をqPCRにより再評価したところ統計学的に有意な相関を認めた。対してRA患者では有意な上昇が認められ、Infliximab投与前後の発現量の変化はDAS28とも有意な相関が認められた。現在、炎症病態における本分子の機能解明のためモノクローナル抗体を作成し、タンパク質の発現解析を進めている。早期RAの病態形成の解明を目指し、解析をすすめていく予定である。

当初の計画予定の1分子についての評価が十分行えなかった点を考慮して評価した。25年度が最終年度であるため、記入しない。現在2分子の機能解析を中心に行っているが、ヒトモノクローナル抗体作成等のタンパクレベルでの実験系の準備、構築に当初計画以上に時間を要しているため。平成24年度は、さらにスピードアップして当初計画を遂行するとともに、新たなバイオインフォマティック解析で浮かび上がった有望な新規分子についての機能解析に取り組む予定である。平成25年度は、機能解析を複数並行することにより、スピードアップして研究に取り組む予定である。
救急医療における卒後教育モデルの開発とデジタル画像教育効果の研究

救急医療における卒後教育のモデルプランとして、新医師臨床研修制度の救急医療の行動目標・アメリカ心臓外科学会(AHA)の一・二次救命処置方法(BLS,ACLS.)ガイドライン・Advanced Trauma Life Support(ATLS)とヨーロッパの外傷教育の資料を参考にしたJATEC(Japan Advanced Trauma Evaluation & Care)の外傷初期診療ガイドラインを参考にして、救急医学の基本的範囲と基準とした。卒後臨床教育のモデルプランとして、救急告示医療機関に勤務する医師に対し、救急医療に関する専門的な研修を行い、救急医専門実施要項を作成し、実際に年一回・10日間の研修カリキュラムを実施した。卒後臨床研修プログラムでは、救急医学における知識・技術・態度を中心にカリキュラムを作成し実施した。モデルプランをデジタル画像を用いた教育ソフトで作成する目的で、救急手技である気管挿管・中心静脈穿刺・胸腔穿刺のマニュアルの作成と教育デジタルビデオの作成を行った。また実際の救急患者をモデルとした症例を、デジタル画像にし、ケーススタディを行った。デジタル画像を用いたモデルプランを試験的に実践する目的で、救急手技のスキルステーションを作成し、高企画模擬患者人形・気管挿管人形・中心静脈穿刺人形によるシミュレーション教育をおこなった。臨床研修医が救急医学の習熟と技術の修得に効果があるかを明らかにする目的では、知識評価として救急医療の研修前後で筆記試験を行い。手技評価として評価シートを作成し、技能評価を点数化した。この結果は、多様な教育手法を駆使することにより明らかに研修後の教育評価は改善した。平成14年2月には、当センターが東京都救急医専門研修事業を委託され二次救急医療機関で救急医療を従事する医師に対して10日間の教育を行った。この際にテキストとしてBLS、ACLS、ATECの資料を参考にし、オンライン、オフライン教育を実施した。平成13年11月には、第29回日本救急医学会総会において医学教育におけるシミュレーション教育の重要性について発表した。現在は、デジタル画像を用いた教育ソフトで作成するために、日常診療における映像をデジタル画像化して蓄積している。今後は、蓄積された画像と症例からシナリオ作成に着手し、ケーススタディーを行う予定である。救急医療における卒後教育のモデルプランとして、新医師臨床研修制度の救急医療の行動目標・アメリカ-心臓外科学会(AHA)の一・二次救命処置方法(BLS, ACLS.)ガイドライン・Advanced Trauma Life Support (ATLS)とヨーロッパの外傷教育の資料を参考にしたJATEC(Japan Advanced Trauma Evaluation & Care)の外傷初期診療ガイドラインを参考にして、救急医学の基本的範囲と基準とした。
口腔癌におけるマッピングアレイを用いた全染色体上の構造異常の解明

【目的】本研究ではAffymetrix GeneChipR Mapping 10K Arrayを用いて舌扁平上皮癌における全ゲノム上のゲノムコピー数異常を解析し舌扁平上皮癌の新規転移関連遺伝子の同定を試みた。【材料および方法】舌扁平上皮癌症例20例を使用した。病理組織学的に所属リンパ節転移陽性例(pN(+))3例および陰性例(pN(-))2例をGeneChipR Mapping 10K Arrayにより解析し、pN(-)例と比較してpN(+)例に共通して認められるゲノムコピー数異常を検出、同座位に存在する転移関連遺伝子候補をリストアップした。さらに候補遺伝子のmRNA発現状況を定量的Real-time PCR法により検証した。【結果】pN(+)例に共通してゲノムコピー数が増加していた領域は16領域、減少していた領域は32領域であった。これらの領域上に存在する75の候補遺伝子をリストアップした。pN(+)例に特異的にコピー数が増加していた領域の一つ6q25.3領域にはZDHHC14遺伝子が座位していた。同遺伝子のmRNA発現量を定量した結果、高頻度な発現亢進が認められた(8/20例40%)。さらにmRNA発現亢進はpN(+)症例において有意に認められた(P=0.019)。【結論】これらの結果からZDHHC14が舌扁平上皮癌の新規転移関連遺伝子である可能性が示唆された。研究目的: Affymetrix 10K SNP Mapping Arrayを用いたDNAマッピングアレイ解析は、全ゲノム上の詳細かつ網羅的なLOH解析を行うことが可能である。乳癌、膀胱癌、前立腺癌、骨肉腫、肺癌、口腔癌由来細胞株等でこのアレイの有用性は証明されているが、ヒト口腔癌における報告はない。そこで、今回はDNAマッピングアレイを用いた全染色体上のLOH解析を行い、同定された領域に対し詳細な構造異常を検索した。研究方法:東京歯科大学口腔外科を受診した30例の舌癌患者の腫瘍組織ならびに同一患者の正常組織から抽出したDNAを用いた。併せて、舌扁平上皮癌由来細胞株を5種・ヒト正常口腔粘膜由来細胞株を2種も用いた。5例の舌癌患者に対しDNAマッピングアレイを用いた全ゲノムLOH解析を行った。LOHが認められた領域に対し30例全例でマイクロサテライトマーカーを用いたLOH解析を行った。さらにその領域に存在する遺伝子のmRNAの解析を6種の舌癌由来細胞株と15例の舌癌患者を用いてReal-time quantitative RT-PCRを行った。研究成績および考察:全ゲノムLOH解析の結果、1q31.1領域にコピー数の減少(コピー数: 1)を認め、LOHの存在が示唆された。30例全例において、1q31.1領域に存在するマイクロサテライトマーカー(DIS1189、DIS2151、DIS2595)を用いたLOH解析を行った結果、DIS1189で18/30(60%)、DIS2151で16/30(53%)、DIS2595で21/30(70%)に高頻度なLOHが認められた。この領域には、EAM50遺伝子が存在しており、Real-time quantitative RT-PCRの結果、舌癌由来細胞株5種において全例で、正常細胞株と比較し明らかな発現低下が認められ、15例の舌癌患者においても正常組織と比較し、有意に発現の低下が認められた。今回の結果より、1q31.1領域にLOHの存在が認められ、この領域に存在するFAM5C遺伝子は癌抑制遺伝子である可能性が示唆された。今後はFAM5C遺伝子のタンパクの機能解析による詳細な解析を行う予定である。病理組織学的に所属リンパ節転移陽性例(pN(+))

3例および陰性例(pN(-))2例をGeneChip^<(R)>Mapping 10K Arrayにより解析し、pN(-)例と比較してpN(+)例に共通して認められるゲノムコピー数異常を検出、同座位に存在する転移関連遺伝子候補をリストアップした。さらに候補遺伝子のmRNA発現状況を定量的Real-time PCR法により検証した。【結果】pN(+)例に共通してゲノムコピー数が増加していた領域は16領域、減少していた領域は32領域であった。これらの領域上に存在する75の候補遺伝子をリストアップした。pN(+)例に特異的にコピー数が増加していた領域の一つ6q25.3領域にはZDHHC14遺伝子が座位していた。同遺伝子のmRNA発現量を定量した結果、高頻度な発現亢進が認められた(8/20例40%)。さらにmRNA発現亢進はpN(+)症例において有意に認められた(P=0.019)。【結論】これらの結果からZDHHC14が舌扁平上皮癌の新規転移関連遺伝子である可能性が示唆された。この研究はこれまで行われてきたゲノム解析とは想像を遥かに超えるほどの情報量が得られ、新探索方法として確実に実績が上げられ、これも海外論文で発表し大きな成果をあげた。また、日本口腔外科学会の学術奨励賞も受賞し高い評価を得た。
地震動の空間変動特性とこれによる構造物の立体応答性状に関する研究

1.アレー観測記録に基づく地震動の空間変動特性評価東北大学青葉山構内における4地点の地震動アレー観測記録を用いて、コヒーレンスにより地震動の空間変動特性を評価した。観測点はほぼ直線状に配置されており、全長は約1kmである。平均コヒーレンスは距離及び振動数の増加に対して急激に減少し、S波(Vs=400500m/s)1波長の距離に対してコヒーレンスは0.30.4に低下した。また、地盤上の記録の岩盤の記録に対するスペクトル比として定義した表層地盤の増幅率は地震によってばらつきを示し、このばらつきの変動係数は地震動のコヒーレンスによって説明しうることを明らかにした。2.不均質地盤モデルによる地震動空間変動の数値解析地盤剛性がランダムに変動する不均質地盤の有限要素モデルを用いて、一様入射波による地表各点の地震動を計算し、それらの空間変動をコヒーレンスで評価した。解析パラメータは、地盤剛性の変動係数と相関距離である。コヒーレンスは地盤剛性の変動係数が大きいほど、また相関距離が小さいほど、距離と振動数に対して、急激に低下することを明らかにした。変動係数0.3、相関距離20mの結果が実測のコヒーレンスとよく対応する。3.空間変動のある地震動入力による構造物の立体応答の解析4本の柱から成る1スパン×1スパンの1層建物モデルに、空間変動を考慮した模擬地震動を各柱の位置に入力し、モデルの応答を計算した。解析のパラメータは、モデルのスパン長と固有周期である。構造物のスパン長が大きくなると、構造物中心における並進応答は小さくなるが、全体のねじれ応答が大きくなる。これはスパン長が大きくなるほど、地震動相互の相関性が小さくなり、並進振動については平均化の効果が強く現れる一方、異なる地動によるねじれ成分入力が大きくなるためである。並進応答とねじれ応答の両方の影響を受ける柱の最大相対変位応答はスパン長の増大に対して低下する。1.アレー観測に基づく地震動の空間変動特性の解析東北大学青葉山構内における4地点の地震動アレー観測記録を用いて、各地点記録相互のコヒーレンスを計算して地震動の空間変動特性を評価した。観測地点は全長約1kmのほぼ直線上に配置されており、隣接観測点間の距離は250400mである。このうちの1観測点は岩盤中にあり、他の3地点は洪積地盤の地表にある。コヒーレンスは振動数及び距離の増加に対して急激に低下し、3Hz以上の振動数成分は距離300mでコヒーレンスの値は0.2程度となる。この低下傾向は既往の研究によるものよりやや強い。これは敷地の複雑な地形に起因するものと考えられる。また、地表観測点の岩盤観測点に対する伝達関数より表層地盤の増幅特性を求めた結果、各地点表層地盤の増幅特性は地震によって変動するばらつきを示すこと、このばらつきの程度は地震動のコヒーレンスと量的に対応することを明らかにした。2.不均質地盤モデルによる地震動空間変動の数値解析地盤剛性が場所によってランダムに変動する不均質地盤の有限要素モデルを用いて、鉛直下方からの一様入射波による地表多地点の地震動を計算し、それらの変動特性をコヒーレンスで評価した。解析パラメータは地盤剛性の変動係数と変動の波長に相当する相関距離である。コヒーレンスの値は地盤剛性の変動係数が大きいほど、また相関距離が小さいほど低下傾向が強いことを明らかにした。

変動係数が0.3、相関距離が20mの場合、波長の1/2程度の距離のコヒーレンスは0.5程度となり、青葉山アレー観測による実測コヒーレンスとの対応がよい。1.地震動アレー観測記録のコヒーレンス評価法の検討地震動の空間変動特性の定量的評価法としてのコヒーレンスの計算には、記録のパワースペクトル、クロススペクトル評価に期待値演算が含まれるが、次の2つの方法によって期待値操作を行い、結果として得られるコヒーレンスの比較検討を行った。〔方法1〕:パワースペクトル、クロススペクトルを振動数領域で平滑化する。〔方法2〕:多くの地震による記録について、フーリエ振幅スペクトルを基準化した後、パワースペクトル、クロススペクトルをアンサンブル平均により評価する。振動数領域での平滑化スペクトルによるコヒーレンスは、選択する平滑化バンド幅によって値が変動する。バンド幅を大きくすると、高振動数域の値は安定するが、低振動数域の値が低下する。スペクトルのアンサンブル平均によるコヒーレンスは、全体に安定した値となる。多くの地震による記録から得られる〔方法1〕によるコヒーレンスの平均と〔方法2〕によるコヒーレンスを振動数について平滑化したものはほぼ同じ結果を示す。2.空間変動のある地震動入力による構造物の立体応答の解析4本の柱から成る1層の1スパン×スパンの立体骨組モデルに、空間変動を考慮した模擬地震動を各柱位置に入力し、モデルの応答を計算した。解析のパラメータは、モデルのスパン長と固有周期である。スパン長が大きいほど、4本の柱位置に入力される地震動相互のコヒーレンスは低下することになる。構造物のスパン長が大きくなると、構造物中心における並進変位応答は小さくなるが、全体のねじれ応答変位が大きくなる。これはスパン長が大きくなるほど、入力される地震動相互の相関性が小さくなり、並進振動については平均化の効果が強く現れる一方、異なる地動によるねじれ成分入力が大きくなるためである。並進応答とねじれ応答の両方の影響を受ける柱の最大相対変位応答はスパン長の増大に対して低下する。
自然免疫応答機構におけるASK1キナーゼの役割の解明

自然免疫応答機構におけるASK1キナーゼの役割に関して、本年度の当初の計画では、マクロファージ以外の細胞におけるASK1キナーゼの役割を解析することであった。しかし、昨年度のマクロファージに焦点を絞った解析の結果から、マクロファージでのASK1キナーゼの役割の重大さを考慮し、本年度もマクロファージについてのみ、更に詳細な解析を行った。特に、マクロファージの自然免疫応答機構として、貧食過程、消化過程により特化した研究を行い、ASK1キナーゼの貧食過程、及び、消化過程への関与が、更に確からしいものとなった。また、ASK1を欠損することで、マウスの個体レベルだけではなく、マクロファージの細胞レベルに対しても細菌感染に脆弱性を示すことが明らかとなった。特に、リステリア菌のような、マクロファージの消化過程を回避する高病原性の細菌では、消化過程の回避に際して、食食経路を破綻させる。リステリア菌の場合は、リソソーム中で、リステリオリジンを産生することで、リソソームに穴を空けるといった具合である。このリソソームに穴を空けることに更に着目して解析を行ったところ、ASK1キナーゼが、リソソームの破裂によって活性化することを見出した。そして、この活性化が、マクロファージ細胞を生存させるような何らかのシグナル伝達を担っている可能性が示唆された。また、過去の解析から、ASK1を欠損するマクロファージでは炎症性サイトカインの産生が低下していることも明らかとなっている。そこで、細菌が感染した際には、リソソームが破裂することで活性化したASK1が、細胞の生存だけではなく、炎症性サイトカイン産生量の制御にも寄与している可能性があると考え、炎症性サイトカインの産生についても検討しようとしている。自然免疫応答機構に対して、特に感染症と炎症におけるASK1キナーゼの役割の解析に主軸を置いて研究を進めたい。自然免疫応答細胞である好中球やナチュラルキラー細胞に関しての解析は全く進捗出来ていないが、マクロファージ細胞に関しての解析によって、自然免疫応答におけるASK1キナーゼの役割の重要さを解明出来つつあるから。研究計画では、マウス個体を用いて様々な疾患モデルを行うことでASK1キナーゼの解析を行うこととなっており、その通りに取り組みたいと考えている。またASK1キナーゼのマクロファージでの役割に関して、より詳細な分子機構の解明を目指し、分子細胞生物学や生化学を取り入れた解析にも取り組んでいく方針である。野生型、ASK1欠損型の骨髄由来分化マクロファージを用いて、蛍光マイクロスフィアに対する取り込み能を定量したところ、ASK1欠損型のマクロファージにおいて、貪食能の低下が認められた。次に、細菌を感染させた時におこるマクロファージの細胞死を、野生型、ASK1欠損型の常在性腹腔マクロファージを用いて検討した結果、ASK1欠損型のマクロファージで、細胞死が亢進していることが明らかとなった。細菌感染、つまり、細菌を貪食した時の、マクロファージ内でおこる現象として、貪食された菌がリソソーム膜を破ることで、マクロファージの消化を回避することが知られている。リソソーム膜の不安定化は、リソソーム内容物の細胞質への流入を引き起こし、細胞死の誘導や、炎症の亢進といった、多様なストレス応答の引き金になっていることが知られている。化合物を用いて、リソソーム膜の不安定化を誘導したところ、ASK1の活性化が確認された。細菌感染と、リソソームに起因するストレス応答にASK1が強く関わっていることを示唆していると言える。細菌感染の際に、細菌を細胞内に取り込み、消化することで、感染の拡大を防ぐことは、マクロファージの自然免疫応答における重要な役割の一つである。これらの過程で、詳細は解明出来てはいないものの、ASK1が重要な機能に関与しており、ASK1を欠損することで、マクロファージの機能が低下していることが考えられ、ASK1の機能を制御することが、感染症に対する新たな創薬開発の基盤になりうることを意味している。特に、マクロファージの自然免疫応答機構として、貪食過程、消化過程により特化した研究を行い、ASK1キナーゼの貪食過程、及び、消化過程への関与が、更に確からしいものとなった。特に、リステリア菌のような、マクロファージの消化過程を回避する高病原性の細菌では、消化過程の回避に際して、貪食経路を破綻させる。

そこで、細菌が感染した際には、リソソームが破裂することで活性化したASK1が、細胞の生存だけではなく、炎症性サイトカイン産生量の制御にも寄与している可能性があると考え、炎症性サイトカインの産生についても検討しようとしている。自然免疫応答機構に対して、特に感染症と炎症におけるASK1キナーゼの役割の解析に主軸を置いて研究を進めたい。自然免疫応答機構におけるASK1キナーゼの役割に関して、本年度の当初の計画では、マクロファージ以外の細胞におけるASK1キナーゼの役割を解析することであった。しかし、昨年度のマクロファージに焦点を絞った解析の結果から、マクロファージでのASK1キナーゼの役割の重大さを考慮し、本年度もマクロファージについてのみ、更に詳細な解析を行った。特に、マクロファージの自然免疫応答機構として、貧食過程、消化過程により特化した研究を行い、ASK1キナーゼの貧食過程、及び、消化過程への関与が、更に確からしいものとなった。また、ASK1を欠損することで、マウスの個体レベルだけではなく、マクロファージの細胞レベルに対しても細菌感染に脆弱性を示すことが明らかとなった。特に、リステリア菌のような、マクロファージの消化過程を回避する高病原性の細菌では、消化過程の回避に際して、食食経路を破綻させる。リステリア菌の場合は、リソソーム中で、リステリオリジンを産生することで、リソソームに穴を空けるといった具合である。このリソソームに穴を空けることに更に着目して解析を行ったところ、ASK1キナーゼが、リソソームの破裂によって活性化することを見出した。そして、この活性化が、マクロファージ細胞を生存させるような何らかのシグナル伝達を担っている可能性が示唆された。また、過去の解析から、ASK1を欠損するマクロファージでは炎症性サイトカインの産生が低下していることも明らかとなっている。研究計画の通りに、自然免疫応答におけるASK1の機能を、マクロファージに着目して、多様な側面から検討することが出来ているから。自然免疫応答細胞である好中球やナチュラルキラー細胞に関しての解析は全く進捗出来ていないが、マクロファージ細胞に関しての解析によって、自然免疫応答におけるASK1キナーゼの役割の重要さを解明出来つつあるから。細菌が感染した際の、ASK1-MAPK経路に着目して、細胞内のシグナル伝達のメカニズムと、その生理的な意義について、より詳細な検討をしていく。研究計画では、マウス個体を用いて様々な疾患モデルを行うことでASK1キナーゼの解析を行うこととなっており、その通りに取り組みたいと考えている。
原爆残留放射能^<63>Niの測定と原爆中性子スペクトルの評価

本研究の目的は原爆に被爆した鉄材中に^<62>Ni(n,γ)^<63>Ni反応により生成されている^<63>Ni(半減期101年、ベータ線最大エネルギー66keV)を測定して原爆中性子スペクトルの評価を行なうことである。平成10年度にSi-NaI逆同時計数装置の製作と^<63>Ni電着装置の製作を行なった。平成11年度にこの測定装置のバックグラウンド特性を調ベ、実際に電着試料のベータ線測定を行なった。1.バックグラウンド特性についてSi検出器のみによる23-66keVエネルギー領域のバックグラウンド計数率は0.133cpsであった。Si検出器をNaI検出器の井戸の中に入れ、周囲を鉛5cmで遮蔽し、さらにSiとNaIの逆同時計数により周囲からのバックグラウンドを低減したところ、0.0017cpsにまで下げることができた。この装置が低エネルギーベータ線の測定に有効であることを示すことが出来た。2.原爆誘導^<63>Niの測定広島で被爆鉄材試料11サンプル、長崎で被爆鉄材試料5サンプルから分離したNiの電着試料を作成した。電着されたNiの量は前後の溶液のPIXE分析により決定した。^<63>Niベータ線の測定では広島、長崎とも爆心に最も近いサンプルから有意な計数が測定された。それらの比放射能は原爆直後に換算して広島原爆ドーム(爆央から602m)で0.01165±0.00078Bq/mgNi、長崎高谷家サンプルで0.00314±0.00047であった。一方、DS86中性子線量から計算すると原爆ドームで0.0093Bq/mgNi、高谷家で0.0017Bq/mgNiとなる。このことから、計算値にほぼ近い実測値が得られたと言える。今後、さらに鉛遮蔽をさらに増してバックグラウンドを改善し、被爆銅中に速中性子で生成された^<63>Niの測定を続ける予定である。本研究は原爆中性子により被爆した銅材、および鉄材中に誘導された^<63>Niを測定し、原爆中性子スペクトルの評価を行うことを目的とする。^<63>Niは低エネルギーのβ線(最大エネルギー66keV)を放出するのでβ線に対する検出効率を高くし、また、微弱な放射能を測定するためにバックグラウンド計数率を低くする必要がある。平成10年度はβ線測定用の表面障壁型Si検出器とその同囲を井戸型NaI(Tl)シンチレーションカウンターで囲むSi-NaI逆同時計数装置の製作を行い、併せて、^<63>Ni電着装置を製作した。66kevβ線のSi中での最大飛程は約25μmであるのでSi検出器は空乏層100μmのものとし、また、有感面積をできるだけ大きくするために600mm^2のものを使用した。井戸型NaI検出器はSi検出器を覆うことができるように、井戸の深さ51mm、直径51mmをもち、また、NaIの厚さ45mmのものを特注し、製作した。装置の全体は鉛5cmで遮蔽した。^<63>Ni試料を直径25mmのステンレス板に電着するための電着セルを製作した。セルの材質はテフロンとし、内径40mm、深さ75mmの円筒形とした。セルの低面にステンレス板を陰極として固定し、陽極には銀線を用いる。平成11年度はSi-NaI逆同時計数装置のバックグラウンド低減のための特性を調べる予定である。そして、実際に原爆被爆鉄材から分離された^<63>Niの電着試料を作成し、低エネルギーβ線の測定を行う。原爆被爆鉄材試料は爆心から、1700mまでの6サンプルにつき、すでに^<60>Coと^<63>Niか分離されている。^<60>CoについてのGe検出器によるγ線測定は研究発表論文に示した。^<63>Niについて^<60>Coとの相関性を明らかにする。

それらの比放射能は原爆直後に換算して広島原爆ドーム(爆央から602m)で0.01165±0.00078Bq/mgNi、長崎高谷家サンプルで0.00314±0.00047であった。一方、DS86中性子線量から計算すると原爆ドームで0.0093Bq/mgNi、高谷家で0.0017Bq/mgNiとなる。このことから、計算値にほぼ近い実測値が得られたと言える。今後、さらに鉛遮蔽をさらに増してバックグラウンドを改善し、被爆銅中に速中性子で生成された^<63>Niの測定を続ける予定である。