hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
顎関節滑膜組織の退行性変化とその誘発・進行因子の解析

まず発生学的に正常なラット顎関節滑膜組織の組織観察を行った。続いて過大開口による異常顎関節モデルを作成してその滑膜組織の組織学的観察を行った。正常と今回の異常モデルの滑膜組織に大きな組織学的な差はみられなかったが、本研究を遂行したことで、顎関節滑膜組織の発生過程といわゆる正常滑膜組織の詳細があきらかとなった。今後は他の方法で異常顎関節モデルを作成し、滑膜組織の退行性変化を形態学的、生物学的に解析する予定である。顎関節症患者の滑膜組織には炎症性変化、線維化、石灰化などが生じている報告はなされているが、そのような組織学的変化の誘発や進行過程に関わる因子は全くもって不明であり推論の余地を過ぎないのが現状である。本研究の目的は、まず正常な顎関節滑膜組織を形態学的、生物学的に明らかにしたのち、その情報をもとに異常顎関節モデルを作成して、免疫組織化学的、微細構造学的手法ならびに分子生物学的手法で、顎関節滑膜組織がたどる退行性組織変化とその誘発および進行因子を、形態学的、生物学的に明らかにすることである。申請した研究計画にもとづき、まずは生後30日齢のラット顎関節滑膜組織を観察した。生後30日齢ラットのH-E標本では、上下関節腔がはっきりと形成されており、前方、後方部では滑膜ヒダの形成もみられた。また滑膜表層細胞は25層を形成していた。免疫組織学的に、Hsp25免疫陽性のB型細胞は、前方、後方ともに、滑膜表層に配列するタイプと、やや深部に細胞体を位置しその細胞質突起を関節腔表層に伸ばしているタイプが観察された。透過電顕では、免疫陽性細胞は円形で明るい核をもち、豊富な粗面小胞体を有する細胞質を特徴とし、その細胞質突起を関節腔にむけて伸ばしていた。一方、免疫陰性のライソゾームや偽足様突起をもつA型細胞は、滑膜表層からわずか深部に存在していた。また、基底膜の構成要素であるlamininによる免疫染色では、その陽性反応が滑膜表層細胞の細胞膜や細胞質突起に限局してみられ滑膜表層を覆っている様子が観察され、透過電顕でその陽性反応はB型細胞のみに認められた。今後はさらに観察を続けるとともに、異常顎関節モデルを作成してその組織学的変化を比較検討していく予定である。顎関節症患者の滑膜組織には線維化、石灰化などの退行性変化が生じている報告はなされているが、そのような組織学的変化の誘発や進行過程に関わる因子は全くもって不明であり推論の余地を過ぎないのが現状である。本研究の,目的は、まず正常な顎関節滑膜組織を形態学的、生物学的に明らかにしたのち、その情報をもとに異常顎関節モデルを作成して、免疫組織化学的、微細構造学的手法ならびに分子生物学的手法で、顎関節滑膜組織がたどる退行性組織変化とその誘発および進行因子を、形態学的、生物学的に明らかにすることである。申請した研究計画にもとづき、まず正常滑膜組織の構造を明らかにすべく発生学的見地からラット顎関節滑膜組織を観察した。生後1目では、上関節腔滑膜表層に扁平なHsp25陽性細胞が出現し、下関節腔の形成が開始されていた。生後3日目では、滑膜表層に配列するHsp陽性細胞に加え、深部に存在し、関節腔に細胞質突起を伸ばす陽性細胞も確認された。生後7日目では増加したHsp陽性細胞は細胞内小器官を充実させ、滑膜表層に連続して配列するようになり、滑膜表層は陽性細胞の細胞体や細胞質突起によって覆われるようになった。生後15日目では滑膜表層の一部でHsp陽性細胞が重層化を示し、上関節腔後方部では、突出した滑膜ヒダ側面を扁平な陽性細胞がシート上に覆う像が観察された。生後30日目では生後15日目と組織学的変化はなく、生後15日目以後の滑膜表層の細胞の状態がいわゆる正常の滑膜組織の像であると考えられた。今後は、さらなる免疫組織学的研究を進め、異常顎関節モデルについても観察し比較検討を行っていく予定である。顎関節症患者の滑膜組織には線維化、石灰化などの退行性変化が生じているとされるが、その組織学的変化の誘発や進行過程に関わる因子は全くもって不明である。本研究の目的は、まず発生学的見地から正常な顎関節滑膜組織というものを形態学的、生物学的に明確にした後、異常顎関節モデルを作成して、免疫綿織化学的ならびに微細構造学的手法をもちい、顎関節滑膜組織がたどる退行性組織変化とその誘発および進行因子を、形態学的、生物学的に明らかにすることである。生後1目では、上関節腔滑膜表層に扁平なHsp25陽性のB型細胞が出現した。

生後3日目では、滑膜表層に配列するB型細胞に加え、深部に存在し細胞質突起を表層に伸ばすHsp25陽性のB型細胞も確認された。またライソゾームや偽足様突起をもつHsp25免疫陰性のA型細胞もやや深部にわずかに観察された。生後7日目では、滑膜表層がB型細胞の細胞体や細胞質突起によって覆われるようになり、A型細胞もその数を増した。生後15日目では滑膜表層のHsp陽性B型細胞が重層化し、突出した滑膜ヒダ側面を扁平な陽性細胞がシート上に覆っていた。A型細胞は細胞内小器官を発達させ表層下に位置するようになった。生後30日目では生後15日目と組織学的変化はなく、生後15日目以後の滑膜組織がいわゆる正常の滑膜組織の像であると考えられた。また、過大開口モデルを作成し、滑膜組織の組織学的変化を観察したが、これまでに大きな違いは見出せなかった。
TRIMファミリータンパク質によるシグナル伝達制御

申請者らの研究により、細胞内シグナル伝達制御におけるTRIMファミリーユビキチンリガーゼ群の重要性が明らかとなった。特に、細胞増殖や細胞分化の過程を制御するシグナル伝達系に、TRIMファミリーユビキチンリガーゼが関与していることが示された。そこで本研究申請においては、網羅的ノックダウンスクリーニングやプロテオミクス的手法により、さまざまな細胞内シグナル系におけるユビキチン化を制御するTRIM型ユビキチンリガーゼを同定・解析した。さらには、siRNAライブラリーを用いたTRIMファミリー遺伝子の網羅的ノックダウンにより、代謝や免疫シグナルに関する候補遺伝子を同定し、その機能解析を行った。特に、細胞の増殖及び分化過程を制御するシグナル伝達系に、TRIMファミリーユビキチンリガーゼが関与していることが示された。本年度は、免疫シグナルに関与するTRIMファミリーとしてTRIM39を同定し、機能解析により、TRIM39は免疫炎症反応を負に制御することが判明した。TRIM29がDNA修復シグナル及び細胞分化(扁平上皮分化)の制御に関与することを明らかにした。さらに、siRNAライブラリーを使ったTRIMファミリー遺伝子の網羅的ノックダウンによる機能スクリーニングを行い、幾つかのシグナル制御に関する候補遺伝子を同定し、現在はその機能を解析中である。初年度に計画した実験が遂行され、かつ興味深い幾つかの結果を得ているから。本年度は、心臓特異的な発現をするRNF207の機能解析により、RNF207が心臓の代謝制御に関与することを明らかにした。さらに、プロテオミクス解析により、RNF207の結合タンパク質としてVDAC1を同定し、ミトコンドリア代謝におけるRNF207の役割を解析した。細胞レベルにおいて、マウス胎児心筋細胞を使った実験により、さまざまなストレス刺激によりRNF207のmRNA及びタンパク質レベルの変動が起きることが明らかとなった。さらに、三種類の心不全モデルマウスを使用することにより、RNF207の発現変動は起きることが明らかとなり、RNF207の機能回復が心臓機能の改善・回復に常用であることが示唆された。さらには、siRNAライブラリーを用いたTRIMファミリー遺伝子の網羅的ノックダウンによる機能スクリーニングにより、転写制御や免疫シグナルにおける候補遺伝子を同定し、現在、それらの機能を解析中である。初年度に計画した実験が遂行され、かつ興味深いいくつかの結果を得ているから。本年度は、TRIM59がSTATシグナルを制御することで、グリオーマの悪性化に影響をもたらすことを示した。EGF受容体シグナルにより、転写因子SOX9を介してTRIM59の発現が増加し、TRIM59が核内のSTAT3と結合することで、STAT3の脱リン酸化を抑制することが判明した。それにより、STAT3による転写活性化およびグリオーマ細胞の増殖能が上昇することが判明した。TRIM59のノックダウン実験により、グリオーマ細胞の増殖能、浸潤能、転移能が減少することも明らかとなった。したがって、TRIM59はグリオーマ細胞の悪性化を制御する分子として重要であり、将来的にはグリオーマに対する分子標的薬のシーズの可能性が示された。さらには、siRNAライブラリーを用いたTRIMファミリー遺伝子の網羅的ノックダウンによる機能スクリーニングにより、細胞増殖に関係するシグナルや免疫シグナルに関する候補遺伝子を同定し、その機能解析を行った。また、TRIM29が正常皮膚において高発現しており、皮膚がんにおいてはその発現が減少することを見出して、皮膚がんの診断において重要な病理学的バイオマーカーになる可能性を示した。概ね順調に計画が進んでいるので、予定通りに実験計画を進める予定である。29年度が最終年度であるため、記入しない。医化学29年度が最終年度であるため、記入しない。
日常認知における領域個有性・一般性の規定要因

「領域固有性・一般性」は、認知心理学における最近注目されている問題の一つである。ある刺激の認知や課題の遂行が、それらに特化したメカニズムに基づいてなされているのか、それとも共通のメカニズムに基づいているのかという問題である。この問題は、視覚認知、認知発達、神経心理学など様々な領域において議論されているが、未解決の問題である。本研究ではこの問題について、次の3つの側面について検討した。(1)画像認知において追加が削除よりも検出されやすいという非対称性混同効果について、領域固有的メカニズムが存在するかどうかの検討。(2)領域固有性・一般性に関する脳内機序について、f-MRIを用いた検討。(3)自閉症に見られる認知の障害が領域固有的であるのかどうかについての検討。本研究ではこれらの点について検討し、次のような成果を得た。(1)一般に画像認知において追加変化は削除変化より認知されやすく、その背景に違和感の生起があること、(2)非対称的混同効果ならびに眼球運動の関係を調べたところ、違和感を喚起させる追加変化刺激の観察時は、変化した領域へ目は向かうことになり、その領域は正しく特定されるが、一方、削除変化刺激の観察時には、事物がなくなった領域への目の動きを生じさせるが、その領域は正しく特定されないこと、(3)違和感判断を行うときの脳活動をf-MRIを用いて調べたところ、脳の特定領域、特に後部帯状回、島の活性化を引き起こすことが分かった。また、同一の刺激であっても違和感判断を行わずカテゴリー判断を行う場合異なる領域の活動が認められたこと、(4)自閉症に見られる認知の障害は症状としては領域固有的であると言えるが、自閉症の成立の過程を見ると、その認知の障害は生得的なものでなく、知的能力の全般の障害を源として環境との交互作用の結果、形成されたものであること、が明らかになった。認知心理学において最近注目されている問題の一つは、「領域固有性・一般性」である。ある刺激の認知や課題の遂行が、それらに特化したメカニズムに、それとも共通のメカニズムに基づいているのかという問題である。本研究は、画像認知や、自閉症、脳研究などの多角的側面からアプローチするものである。今年度は、本課題に関する見解の擦り合わせを行うために討論の機会を設けた。この議論を踏まえて、それぞれ今年度行う実験計画を吟味した。次に,研究遂行に必要機材を購入し、実験システムの構築を行った。さらに、それぞれの領域について予備的研究を行い、具体的には次のような成果を得た。1.非対称性混同効果(一般に画像に加えられる追加変化は削除変化よりも認知されやすいという現象)について、日常の様々な光景を描いた画像を用いて成人の被験者を対象に予備的実験を行ない,追加優位の非対称性混同効果を確認した。その背景に変化が加えられた画像に対する違和感があることが示唆された。2.子どもを対象に非対称性混同効果の予備的実験を行なった。言語によらずに被験者の反応を知るために皮膚電気反射の測定を行い,これからの実験方法の確立を行った。3.味覚に関する表情変化の認知が、味覚の種類によってどのように異なるのか、生得的にすでに決まっているものとそうでないものは何なのかを決定するための実験を行ない、味覚表情の認知に関わる領域固有性についてのデータを得た。4.対人認知は領域固有かそれとも一般であるのかという問題について、顔の表情認知を中心に自閉症の子どもを対象に予備的研究を行い、領域固有性に関する知見を得た。5.視線は対人関係において危険や脅威,恐怖刺激の検出にとって重大な意味を持つ。

視線知覚による注意促進と対象認知に関して予備的研究を行い、領域固有性に関して証拠を得た。「領域固有性・一般性」は、認知心理学における最近注目されている問題の一つである。ある刺激の認知や課題の遂行が、それらに特化したメカニズムに基づいてなされているのか、それとも共通のメカニズムに基づいているのかという問題である。この問題は、視覚認知、認知発達、神経心理学など様々な領域において議論されているが、未解決の問題である。本年度の研究ではこの問題について、次の角度からアプローチを試みることを目的とした。(1)生物画像の認知に特化したメカニズムの存在を示すような証拠があるのかどうか明らかにするために、生物画像と非生物画像の認知を比較する。(2)自閉症に見られる認知の障害が領域固有的であるのかどうかを検討する。(3)領域固有性・一般性に関する脳内機序について検討する。すなわち、心理実験においてある刺激・課題の処理が領域固有性を示すとすれば、それを司る脳内機序も異なるはずであり、この点について明らかにする。(4)領域固有性・一般性に関する発達的傾向を明らかにする。研究の結果、(1)図形の変化の認知における非対称性を検討したところ、猫画像を除くほとんど全ての生物画像において非生物画像と同様に追加変化に対して敏感であることが明らかになった。(2)追加変化の認知が削除よりも優れているという傾向は大人のみならず幼児においても認められた。(3)「自閉症は心の理論の欠損した病態である」という言わば領域固有性に立脚したモデルでは説明できないという証拠が認められた。ただ、脳内機序に関する実験はf-MRIの準備が整わなかったため、予備的研究に留まった。また、図形認知に見られる非対称性が認められるか否かに、変化に対して違和感が経験されるかどうかが関係することが示唆された。来年度の研究においてこのことをさらに明らかにしたい。本研究ではこの問題について、次の3つの側面について検討する。(1)「生き物」の認知に特化したメカニズムの存在を示すような証拠があるのかどうかについて、生物画像を用いた実験的検討。(2)自閉症に見られる認知の障害が領域固有的であるのかどうかについての検討。(3)領域固有性・一般性に関する脳内機序について、f-MRIを用いた検討。最終年度である本年度はこれらの点について検討し、次のような成果を得た。(1)変化した(特に削除変化を施した)生物画像の認知においてはその他の画像認知には見られない感情的変化(憐憫の情の喚起)が生じ、このことと変化の認知成績との間に関係が認められること、(2)生物画像、非生物画像の変化の認知の際、違和感と再認成績との間に密接な関係があること、(3)違和感の喚起
シリコンフォトニクス用電流注入型ゲルマニウムレーザーの開拓

本研究の目的は、高速・大容量通信を可能にするとされるシリコンフォトニクス技術においてボトルネックとなっているレーザー光源を開拓することである。Si基板上に直接集積することができ、光通信波長帯において発光するGeが発光材料として有望視されているが、これまでに報告されているGe発光素子(レーザー)は動作エネルギーが理論値よりも二桁程度大きく、実用化には程遠いものであった。この理由として、Si基板上に集積されたGeには内部及びSiとGeの界面付近に非常に高密度に欠陥が存在し、その欠陥によって発光効率が著しく低下するためと考えられてきた。本研究では平成29年度までにGe中の欠陥(貫通転位)の密度を低減するために逆リブ構造(SiとGeの界面付近に部分的に空隙をもつ構造)が有用であることを報告してきた。平成30年度は、逆リブ構造による貫通転位密度の低減効果を、理論モデル・貫通転位密度測定及び透過型電子顕微鏡観察により実証した結果を学術論文において発表した。加えて、SiとGeの界面において発光を大きく妨げる機構が働くこと、及びGeの表面を酸素雰囲気中で熱処理することでGe表面における光損失が著しく低減されることを実験的に示し、国際学会及び学術論文にて発表した。逆リブ構造と酸素雰囲気中での熱処理によって発光効率が増大したと期待されるGeを用いて発光素子の試作を行い、試作した素子からの発光を測定した。レーザーとしての動作を確認することはできなかったが、逆リブ構造のない、従来構造のGeと比較して良好な発光特性が見られ、高効率Geレーザーの実現に向けた進歩が見られた。この結果は学術論文において発表した。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。本研究の目的は、高速・大容量通信を可能にするとされるシリコンフォトニクス技術においてボトルネックとなっているレーザー光源を、Geを発光材料に用いて開拓することである。レーザー光源の材料はSi基板上に集積可能かつ高効率で発光する必要があり、Geがその両方を満足し得る材料として注目されている。Geを用いた高効率レーザー光源は理論上可能であることが知られているが、これまでに報告されてきたGeレーザーは動作エネルギーが理論値の100倍近いという、非常に効率の低いものであった。Geレーザーの効率の低さはGe中に欠陥が高密度に存在することに起因すると考えられており、欠陥密度の小さいGeを実現することが求められてきた。Ge中の欠陥密度を低減する方法としては熱処理や厚い緩衝層を用いる方法が提案されてきたが、それらはpn接合の劣化や光の閉じ込め効率悪化を誘発し、レーザー光源への応用には適さない。そこで昨年度は、レーザー光源への応用に適したGe中欠陥密度低減法を確立することを目的とした。高温の熱処理や厚い緩衝層を用いないGe中欠陥密度低減法として、昨年度は「逆リブ構造」というSi基板とGe層の界面付近に空隙を持つ構造を用いる方法を提案し、理論モデルの構築と実証実験の実施により逆リブ構造の有用性を示した。逆リブ構造Ge中においては、主たる欠陥である貫通転位の密度が従来のGe(1平方センチメートルあたり10の8乗中盤10の9乗程度)のおよそ10分の1となる、1平方センチメートルあたり4かける10の7乗を達成した。Ge中の欠陥が発光効率の低下を引き起こしていることはよく知られてきたが、Ge中欠陥密度の低減によく用いられる熱処理や厚い緩衝層の採用はレーザー光源への応用には適さなかった。昨年度はレーザー光源への応用が可能な欠陥密度低減法として逆リブ構造のGeを用い、理論モデルを構築し実証実験で確かめることで、その有用性を示した。本来であれば直ちに素子開発を進めていく計画だったが、受入研究員の異動に伴い実験設備も移動し、立ち下げ・移動・立ち上げ・条件出しで一年のうち九ヶ月近く装置の利用ができない期間が発生した。このため新たな素子の作製や評価がほぼできない状況であったが、その中でも上記のように発光材料としてのGeの改善に向けた検討が進み、平成30年度前半の公表に向け準備中ではあるが試作において優良な発光特性の発現も見受けられ、全体としてはおおむね順調に推移していると評価できると考えている。

レーザーとしての動作を確認することはできなかったが、逆リブ構造のない、従来構造のGeと比較して良好な発光特性が見られ、高効率Geレーザーの実現に向けた進歩が見られた。この結果は学術論文において発表した。引き続き逆リブ構造Geを用いた発光素子の作製・評価を進めていく。発光素子の駆動には、光エネルギー供給による光励起と電力供給による電気励起の2種類があり、まずはより測定の容易な光励起を、その後により実用的な電気励起を用いる。加えて、ごく近年Ge層内部の欠陥のみならずGe層表面やSi-Ge界面の状態が発光特性に深く関わることを示唆する研究結果が報告されており、本研究の遂行中にもそれに準ずる結果が確認されている。これを逆リブ構造Geに応用することで発光効率の改善が見込まれ、さらなる構造や素子作製プロセスの最適化が可能になると考えている。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
新規免疫化学療法開発に向けた進行消化器がん患者における網羅的免疫応答解析

免疫応答解析を実施し、初回標準化学療法を実施された大腸癌患者において治療前のmonocytic MDSC、およびエフェクターメモリーT細胞の数量とPFSとの関連を認めた。さらに、化学療法を施行された進行胃癌患者においてはgranulocytic MDSCの数量とPFSの相関を認めた。他の癌腫においても末梢血、腫瘍局所レベルで免疫抑制細胞やエフェクター細胞の数量と治療効果(OS, PFS)との相関を認めた。また、がん患者由来MDSCに強発現する分子の同定した。免疫抑制細胞とその液性因子を解除する薬剤を含む併用療法がが抗腫瘍効果を増強し治療成績の向上に寄与するか否かさらに前向きに検証を進めたい。「抗がん剤治療を受ける消化管がん患者の免疫モニタリング」という課題名で、当院倫理審査委員会の承認を受け(研究課題番号2012-367)検体の収集を行い、本年度をもって症例登録を予定通り終えた。採血は計画通り、治療前、化学療法2コース終了後、病勢増悪による治療中止時または治療開始から6か月経過後の計3ポイントで行った。免疫学的解析としてリンパ球サブセットの解析(CD4/CD8陽性T細胞のナイーブ/メモリー形質、NK細胞、NKTなど)に加え、独自のマルチカラーフローサイトメトリーパネルを用いて、免疫を負に制御する制御性T細胞やMDSC(後述)、ICOS・PD-1などT細胞の活性化・疲弊化マーカー、各種細胞内サイトカインや細胞増殖マーカーなどを広範囲に解析を行っている。順次、免疫モニタリングの結果と奏功割合や無増悪生存機関との関連を検証し免疫系因子でのバイオマーカー検討の解析中であるが、進行大腸がんにおいて、治療前の末梢血myeloid derived suppressor cells(MDSCs)の数量がPFS(無増悪生存)と逆相関することが示され、現在、国際学会発表の準備と国際誌への投稿の準備中である。さらに、他の消化器がんについても同様に解析を開始した。平成27年度は計画通り研究を進めることができた。一次標準化学療法を施行された進行大腸癌患者についての免疫応答解析については、すでに解析を終了し、標準化学療法の臨床効果に宿主の免疫状態が関連することを明らかにし、国際学会発表及び論文投稿を終え、アクセプトを得て現在in pressとなっている。標準化学療法を施行された進行胃癌に患者ついても、予定通り免疫応答解析を進め、すでに国際学会の発表を終え、現在、論文投稿準備中である。平成28年度は本研究を総括し、今後の研究課題を明確にしてさらに研究を継続していく予定である。癌種や化学療法の内容によっては化学療法の効果と宿主の治療前の免疫状態が関連することが明らかになっったため、今後、がん免疫療法の併用療法を考えていく上で宿主の免疫状態を解析し解明していくことがますます重要になってくると考えられる。予定症例の集積を終え、進行大腸がんについての解析は国際雑誌に論文の投稿も終了し、すでにアクセプトされているため、順調に研究すすんでいると考える。進行胃癌についても、研究が2年経過した時点ですでに論文の投稿準備に入っている。当初の計画通り、化学療法前後での進行消化器がん患者の血液検体の収集を終えることができ、フローサイトメーターを主体とした免疫応答の解析を進めることができているため。化学療法が施行された進行大腸がん患者においても治療前におけるmyeloid derived suppressor cells(MDSCs)の数量がPFS(無増悪生存)と逆相関することを示すことができ、当初の予定よりも早く学会発表、国際誌への投稿の準備をすすめることができているため。最終年度の平成28年度は、標準化学療法を化学療法を施行された進行胃癌患者についての論文を投稿する。また、本研究によって得られた知見を総括し、次年度以降に向けてさらに発展的な研究を計画し、次年度の科研費にも応募させていただく予定である。腫瘍免疫学、腫瘍内科学、内科学、引き続き、残存検体の解析をすすめ、各種免疫担当細胞やそれらの細胞が発現する各種細胞内外の分子と臨床効果との相関を検証していく。先述したPFSに関しては一定数の増悪症例がでたためデータがそろいつつあるが、overall survival(全生存期間)のデータを出すためには、さらにフォローアップ期間が必要であるため、本年度は患者イベントの発生の推移を経過観察していく。また、大腸がん以外の他の消化器がんについても同様にデータを集計していく予定である。本研究で使用する試薬(物品費)を購入するには不足する金額であったため次年度に繰り越すこととした。なるべく本年度の予算を年度内で全て使用させていただくように努めましたが、必要とする物品で最後に残った440円で購入できる物品がございませんでした。本研究に必要な試薬(物品費)に使用する予定である。
美術史・文化史的視点による近世俳諧史の構築に関する研究

1.研究出張(資料調査・閲覧) 9月、兵庫県伊丹市柿衛文庫の元禄期俳人関係の絵俳書を調査、閲覧した。12月、奈良県天理大学附属天理図書館で三井秋風(元禄期俳人)の資料を調査、閲覧した。2008年1月、愛知県西尾市立岩瀬文庫の『父の恩』など多色摺絵俳書を調査、閲覧した。2.資料の購入立圃関係資料自画賛1点を購入した。他に卓池自画賛、長翠自画賛、杉風画芭蕉画像(模写)、宗因自画賛などを購入することが出来た。いずれもオリジナルなもので科研のテーマに役立つものである。3.研究発表・講演4月、江東区芭蕉記念館で「俳諧資料の魅力」と題して講演した。5月、俳文学会東京例会で「俳諧の形象史」と題して研究発表した。11月、岐阜県富加町教育委員会で「芭蕉の真贋」と題して講演した。4.展覧会の開催4月26日から6月24日まで江東区芭蕉記念館で「雲英文庫に見る芭蕉・蕪村・一茶と新しい領域I」展を開催。本科研のテーマに沿った俳画・絵俳書112点を展示。また8月27日から10月6日まで、早稲田大学大隈記念タワーで「芭蕉・蕪村・一茶一雲英コレクションに見る近世俳諧の美」展を開催。両展で8千名余の見物者が入場した。5.研究業績の発表『カラー版芭蕉、蕪村、一茶の世界』を刊行した。俳諧の歴史を今まであまり注目されなかった俳画や絵俳書、俳諧一枚摺などを多く用いて視覚的に示して解説した。さらに俳諧の文化史的・芸能的な側面にも注目して構成した。また「本多李喬とその母柳波女の俳諧一枚摺」の紹介、山岡元隣の「堅田記」を影印・翻刻した。その他俳人の短冊を図版で紹介した「近世俳人短冊逍遥」の12回分を別紙のことく行った。以上、こ報告致します。1.研究出張(資料調査・閲覧)(1)7月、柿衛文庫で野々口立圃関係の資料を閲覧。また藪本家の貞徳・立圃・西鶴・芭蕉などの自筆資料約30点を調査した。(2)8月、同志社大学日文研究室で神谷勝弘教授所蔵の惟中などの短冊を調査した。(3)9月、天理大学附属天理図書館で『本哥取絵入百人一句』の編者山口清勝の関連俳書『清水千句』を閲覧した。2.資料の購入立圃関係の資料(1)「国土皆」自画賛1軸、(2)『十八番花月発句会』(模本)1巻の2点を購入した。他に忠知・鬼貫・也有などの短冊を購入した。3.研究発表・講演10月、俳文学会全国大会(於奈良大学)で、「『本哥取絵入百人一句』をめぐって」と題して研究発表を行った。また4月、柿衛文庫で「俳諧資料と私のコレクション」と題して講演を行った。4.展覧会の開催4月15日から6月4日まで柿衛文庫で「雲英文庫に見る芭蕉・蕪村・一茶と新しい領域」展を開催した。本研究課題に添って貞門時代から近代までの俳画・絵俳書・俳諧枚摺など371点を展示した。図録を作成し、また講演や講座に講師として出講した。5.研究業績の発表『芸術新潮』6月号の特集『芭蕉から蕪村へ俳画は遊ぶ』で、室町時代の宗鑑から江戸幕末期までの俳画について解説を加えた。また、坪内稔典氏と「俳画今昔」と題して対談を行った。その他、本研究課題目に添った研究では、蕪村の俳画のきわめてユニ一クな点を指摘した「蕪村と俳画」、絵俳書として貴重な『両兎林』の翻刻・影印、俳人の短冊を図版で紹介した「近世俳人短冊逍遥」の12回分などを別紙のごとく行った。以上、ご報告致します。平成19年4月1日1.研究出張(資料調査・閲覧)9月、兵庫県伊丹市柿衛文庫の元禄期俳人関係の絵俳書を調査、閲覧した。

本科研のテーマに沿った俳画・絵俳書112点を展示。また8月27日から10月6日まで、早稲田大学大隈記念タワーで「芭蕉・蕪村・一茶一雲英コレクションに見る近世俳諧の美」展を開催。両展で8千名余の見物者が入場した。5.研究業績の発表『カラー版芭蕉、蕪村、一茶の世界』を刊行した。俳諧の歴史を今まであまり注目されなかった俳画や絵俳書、俳諧一枚摺などを多く用いて視覚的に示して解説した。さらに俳諧の文化史的・芸能的な側面にも注目して構成した。また「本多李喬とその母柳波女の俳諧一枚摺」の紹介、山岡元隣の「堅田記」を影印・翻刻した。その他俳人の短冊を図版で紹介した「近世俳人短冊逍遥」の12回分を別紙のことく行った。以上、こ報告致します。
ヒト着床過程の分子生物学的研究

これまで、我々は一貫して子宮内膜の機能・形態について検討してきた。その結果、子宮内膜細胞の培養系において、培養基質に細胞外マトリックスを導入することにより、内膜上皮細胞や絨毛組織の形態形成を、in vitroで再構築することに成功した。さらにその形態形成には、Platelet-derived growth factor,PDGFをはじめ、種々の成長因子・サイトカインなどが関与することが推測された。Hepatocytegrowthfactor,HGFは、当初、肝細胞再生に関わる因子として注目されてきたが、近年、その他の組織においても形態形成・機能分化に重要な役割を果たしている事が明かとなった。HGFは月経周期に応じ、子宮内膜の再生に伴い、血中レベルも上昇し、また、内膜においてもHGFmRNAが検出された。しかし、HGFの由来が内膜間質細胞単独のものであるのか、時期によっては内膜内に散在するbonemarrow derived cellの関与の有無については今後の検討課題として残された。何れにしても、着床期周辺の子宮内膜にとって、HGFは促進的に作用し、TGF-βは阻害的に作用することが推定された。また、HGFは、内膜の状態を反映したmarkerであるとともに、HGFを誘導するヘパリンの使用により、臨床的に月経期の短縮や、体外受精・胚移植法において胞胚着床に向けての内膜環境の改善にも有効である可能性が示唆された。今日、生殖技術は急速に発展しつつあり、また、不妊症治療への貢献は多大なものとなっている。しかし、本来それら技術の応用に先立つべき基礎的知識、特に着床周辺期の知見は圧倒的に欠乏している。一連の受精・着床現象の解明が遅れている要因のひとつとして、取り扱う系が微小であり、従来法のような大きな細胞集団を扱う実験系では解析困難な事象であることが挙げられる。このような点を克服するために、我々は分子生物学的な手法を用い、これらの機構の解明を試みている。発生工学技術を応用すれば、胞胚の浸潤の中心となる栄養膜細胞のみを分離可能である。具体的には、次に、Primer Extension Preamplification,RT-PCR,PCRなどの手法を用い、極めて微量な細胞集団から、極端には細胞1個からでも、目的とする物質の発現を解析可能な系を考案した。着床現象はがん転移に極めて類似する点が多いことから、まず、特に胞胚が子宮内膜間質に侵入する際に作用していることが推定される細胞外基質分解酵素ファミリー中の92kDaまたは72kDa Matrix Metalloproteinaseに関して現在解析を行っている。今後は、順次、がん遺伝子・がん抑制遺伝子産物や接着因子など対象とする分子種を拡大してゆく予定である。また、可能であれば着床周辺期に転写を介した調節機序が推定された場合には、それらの機構まで解析することを予定している。1)培養基質に各種の細胞外マトリックスを用いた実験系を用い、内膜上皮細胞や胎盤絨毛の形態形成を培養条件下で完全に再現した。その結果、両細胞の形態形成促進因子として肝細胞成長因子(HGF)が重要な役割を果していることが明らかとなった。2)この内膜培養系に初期胚を作用させ初期着床現象を詳細に検討し、成長因子HGF(促進)、TGF-β(阻害)の役割や着床の浸潤過程に不可欠な細胞外マトリックス分解酵素と成長因子の相互作用を明らかにしつつある。HGFは内膜上皮細胞の形態形成・機能分化の調節因子であり、遺伝子レベルの検討から月経期には子宮外組織(腎、肝など)から分泌され月経発来後の内膜修復に関与し、着床初期には初期胚侵入後の微小内膜再生に内膜間質細胞由来のHGFが効果的に作用していることが推測される。また、絨毛細胞の子宮内膜組織内での浸潤・増殖・妊娠成立にもこれらの成長因子が細胞外マトリックス分解酵素を介して関与していることが示唆された。4)子宮内膜間質細胞に発現するHGFは肝より産生されるものとは異なるものであることが示唆され、現在詳細な検討を行っている。

5)in vivoにおいてもHGFは月経周期に応じ変動し、妊娠時にはこれと異なる挙動を示すことが明かとなった。6)HGFと平行し、HGFの受容体であるc-met oncogene産物についても、その子宮内膜上皮細胞における役割を検討中である。
音の知覚と情報統合に関する総合的研究

頑健な人間の音知覚や音環境認知の能力を明らかにし、音声認識、雑音抑圧、音場再現などに役立つ音響信号・情報処理のモデルを実現するための基盤的研究を進めた。音源方向同定と残響抑圧に関する新しい方法を示し、これらを単に従来のように音声認識の前処理として使用するのではなく、認識アルゴリズムと一体化する方法を示した。本研究で明らかにされた人間の音知覚における情報の知覚的統合能力にはまだ及ばないものの音環境情報の統合を軸とした今後の音声認識の研究方向を打ち出し得た意義は大きい。個々の具体的成果を以下に示す。音場:実用上十分な精度での周波数軸上の音場再現逆フィルター設計法を確認した。また3次元音場にも適用可能な直交変換による音場符号化法を与えた。音場シミュレーション用の各種音場データベースを作成した。音源定位:零交差時間情報に基づく、騒音に頑健な方向定位の工学的モデルを与えた。ヘッドホン受聴頭外定位の逆フィルターを求める良好なアルゴリズムを決定した。また頭部伝達関数の補間は周波数領域が有効であることを示した。複数の発話者像が視覚的に存在するときの、音源定位バイアスを発見した。音源までの距離感は仮想音源位置伝達関数のインパルス応答の短時間成分(60ms以下)に強く依存することを示した。音源分離:相互情報量最小化に基づく音源分離法を実音場の信号に適用し、効果を確認した。2マイク、3マイクアレー設定で、それぞれ雑音と残響を抑圧する簡便で実用的な方法を提案した。また人間の知覚的特性を利用してAM調波複合音と雑音が重畳した音響信号から両者の分離抽出を可能とする方法を与えた。音情報の表現:時間一周波数次元上のスペクトル包絡面の新表現(STRAIGHT)と新ピッチ抽出法(TEMPO)により、高品質の音声分析合成法を得た。これは広く音情報や聴覚の研究に大きなインパクトを持つ。残響音や雑音が存在する通常の音環境における、人間のrobustな音知覚及び音環境認知を総合的に明かとするため、音場特性、音源定位、音源分離、音声生成に対する聴覚的フィードバック、音声の知覚的情報統合に対する基盤的研究を進めた。音場については、伝達関数のウェーブレット分析を行ない、振幅成分にパルス状信号成分が出現すること及び位相成分が定常なランダム性の指標となることを解明した。特にフラッターエコー性の音場での反射成分やそのフラクタル性の抽出に対する見通しを得た。音源定位については、頭外音像定位実験装置を完成させた。これを用いて、先に提案した仮想音源位置伝達関数と音源までの距離感についての受聴実験を進めた。また特定周波数のフォーカシングにもとづく能動的な音源方向推定方法について提案し、音源数が既知の場合に、従来法より良好な結果を得た。音声信号の周期性に着目して、先に提案した帯或分割-自己相関分析法(SBCOR)を両耳聴に拡張し、耐雑音性の高い音声特徴抽出法を検討した。また位相情報にもとづく波形法を検証するため雑音中から純音を抽出する実験を行ない、S/N比20dBを改善する結果を得た。またこれをベースにした共変調マスキング解除のシミュレーションを行ない、人間の知覚特性と一致する結果を得た。音声生成における聴覚との相互作用を解明するための変換聴覚フィードバック(TAF)法の多次元への拡張を行なった。また多次元信号の解析モデルを提案し、人間特性の定量的推定を可能とした。

音声知覚における情報の統合過程においては、複数話者音声の重畳や音源方向の手掛かりを与えた場合の知覚実験を通じ、一旦抽出された音素特徴の知覚的統合には、トップダウン情報の働きが大きいことを示した。頑健な人間の音知覚や音環境認知の能力を明らかにし、音声認識、雑音抑圧、音場再現などに役立つ音響信号・情報処理のモデルを実現するための基礎的研究を進め、以下の成果を得た。音場:実用上十分な精度での周波数軸上の音場再現逆フィルター設計法を確認した。また3次元音場にも適用可能な直交変換による音場符号化法を与えた。音場シミュレーション用の各種音場データベースを作成した。音源定位:零交差時間情報に基づき、高騒音下で動作可能な方向定位の工学的モデルを与えた。ヘッドホン受聴で頭外定位を実現するための逆フィルターを作成する良好なアルゴリズムを決定した。また頭部伝達関数の補間は周波数領域が有効であることを示した。複数の発話者像が視覚的に存在するとき、口の動きとマッチングする話者像の方向に音源定位がバイアスすることを発見した。音源までの距離感は仮想音源位置伝達関数のインパルス応答の短時間成分(60ms以下)に強く依存することを示した。音源分離: J.A.Bellの相互情報量最小化に基づく音源分離法を実音場の信号に適用し、信号分離比で10dB程度の向上を確かめた。マイクロホンアレーを用いた話者方向同定によって、騒音下での音声認識率を向上させる3次元ビタービ探索法を提案し、有効性を確認した。また残響による劣下の軽減に有効な方法も提案した。2マイク、3マイクアレー設定で、それぞれ雑音と残響を抑圧する簡便で実用的な方法を提案した。また人間の知覚的特性を利用してAM調波複合音と雑音が重畳した音響信号から両者の分離抽出を可能とする方法を与えた。音情報の表現:時間-周波数次元上のスペクトル包絡面の新表現(STRAIGHT)と新ピッチ抽出法(TEMPO)により、高品質の音声分析合成法を得た。これは広く音情報や聴覚の研究に大きなインパクトを持つ。
B型肝炎ウイルスのコードするmicroRNAの検索

(1)microRNAのライブラリー作成HBVゲノムが組み込まれている肝癌細胞株を用いることで、肝癌組織に存在するB型肝炎ウイルスゲノムからmicroRNAをスクリーニングした。すなわち、肝癌細胞株から、1725塩基のRNAをアクリルアミド・ゲルで抽出し、5'、3'端にアダプターを付加後、逆転写反応を行いcDNAを作成し、制限酵素配列(BanI)を付加したプライマーでPCR反応後、制限酵素切断、ライゲーションした。500-1,000塩基の断片を抽出、tailing後、TA cloningにてライブラリーを作成した。(2)HBVのゲノムにコードされたmicroRNAの塩基配列の決定ライブラリーの数百のバクテリア・コロニーからプラスミドを精製し、挿入された塩基配列を決定し、アダプターに挟まれた1725塩基配列が、HBVのゲノム配列と相同性を持つかどうかに関して検索した。(3)HBVのゲノムにコードされたmicroRNAの発現の検討昨年に引きつづき、相同性を持つ塩基配列を含む近傍のHBVゲノムがstem loop構造を取りうること、相同性を持つ塩基配列が肝癌細胞株で発現があることを調べるべく実験を予定したが、肝癌からHBVのゲノム配列と相同性を持つ塩基配列は得られなかった。ヒト肝癌組織やB型肝炎患者肝組織から(1)(3)と同様の検討を今後改めて行う予定にしており、今回の肝癌細胞株を用いた検討は今回で終了とする。(1)microRNAのライブラリー作成HBVゲノムが組み込まれている肝癌細胞株(PLC/PRF/5、Hep3Bなど)を用いることで、肝癌組織に存在する、または、ヒトゲノムに組み込まれたB型肝炎ウイルスゲノムからmicroRNAをスクリーニングした。すなわち、PLC/PRF/5、Hep3Bなどの肝癌細胞株から、1725塩基のRNAをアクリルアミド・ゲルで抽出し、5'、3'端にアダプターを付加後、逆転写反応を行いcDNAを作成し、制限酵素配列(BanI)を付加したプライマーでPCR反応後、制限酵素切断、ライゲーションした。(3)HBVのゲノムにコードされたmicroRNAの発現の検討相同性を持つ塩基配列を含む近傍のHBVゲノムがstem loop構造を取りうること、相同性を持つ塩基配列がB型肝炎患者の肝組織または上記の肝癌細胞株で発現があることを調べるべく実験を予定したが、現在までHBVのゲノム配列と相同性を持つ塩基配列は得られていない。今後、他の肝癌細胞株や肝炎患者肝組織での検討も予定している。
古代ローマにおける弁論術の形成と発展

キケロ、クインティリアヌスといった古代ローマの弁論家は、弁論術の学的な根拠を追求するわけではなく、学的な根拠は古代ギリシアのアリストテレスによって作られた弁論術を継承している。18世紀になると弁論術の学的な根拠はバウムガルテンによって書きかえられた。現代におけるレトリック復興は、古代の弁論術を継承するものではなく、古代の弁論術への誤解と「認識がレトリカルだ」とする現代の考え方とによる。本研究課題は、日本においてこれまで部分的ないし皮相的にしか言及されることのなかった古典弁論術に関して、歴史的な側面と理論的な側面との二面から考察し、古典弁論術、とりわけ古代ロ-マの弁論術の形成とその後の西洋文化における発展について一定の俯瞰的な展望を与えることを目的とする。具体的には、以下の弁論術書を取り上げ、それぞれの理論的な側面を考察し、その上で相互の影響関係を考察する。古代ギリシアの弁論術書としてはプラトン『パイドロス』『ゴルギアス』、アリストテレス『弁論術』『詩学』、ヘレニズム期の弁論術書としては偽ロンギノス『崇高論』、古代ロ-マの弁論術書としては、キケロの『トピカ』『弁論家』『ブル-トゥス』、クインティリアヌス『弁論家の教育』、そして現代における弁論術書としては、ヤコブソン、ジュネット、ペレルマンなどの弁論術書である。また近現代の芸術における弁論術の影響も考察する。本研究は、古代ローマにおける弁論術の形成とその影響を美学的ならびに文芸学的に解明しようとするものである。そのさい最大の動機(モティーフ)となったのは、弁論術が西洋においては二千年の歴史をもち、西洋近代の文化に多大な影響を与えているにもかかわらず、日本においては従来あまり主題的なはとりあつかわれないまま充分に研究されてこなかったということである。なによりも強調されねばならないのは、マルクス、フロイト、ニーチェのあとで修辞学(弁論術)は死に絶えたと現代文学理論家ロラン・バルトが主張しなければならないほど西洋文化のさまざまな側面において弁論術が確たる地位を有していたということであり、バルトの主張を鵜呑みにして弁論術の研究を怠るべきではないということである。本研究が解明をめざす問題は多岐にわたるが、四年間にわたる研究期間の初年度に特に重点をおいたのは、1.弁論術の概念規定、2.古代ギリシアの弁論術から古代ローマの弁論術への移植、3.キケロおよびクインティリアヌスの弁論術、といったものである。1についてはとりあえずの概念規定として、弁論術とは「(広義の)文学現象をいくつかのジャンル(類)に分類し、それぞれのジャンルに固有の書式(修辞)技法を規則化した一連の体系」と定義した。ジャンルの数も書式技法の術語も修辞学者によって異なるが、広く概念を規定することによって多様な見解を包括的にとらえることができる。2についてはヘレニズム期の修辞学書の大半が亡失したため、確たる断定ができなかった。定評ある研究書においてもこの時期の弁論術の変遷については推測に基づく記述、あるいは誤解に基づく記述にとどまる。とはいえこの時期の弁論術についての研究は欧米でも充分とはいえず、今後あたらしい知見がえられる可能性がある。3については現在、キケロの弁論術書を読解し、またクインティリアヌス『弁論家の教育』を邦訳しているところである。本年度は、アリストテレスの『弁論術』とキケロの弁論術書(『弁論家について』『弁論家』『トピカ』『ブルートゥス』)、そしてクインティリアヌスの『弁論家の教育』という弁論術において重要な役割を果たした三者を研究対象にすえ、これら三者を比較して、これら三者の弁論術の特徴を明らかにすることを目標とした。研究代表者は、説得推論(エンテューメーマ)を比較の基準として、研究協力者の吉田俊一郎はエートス(性格)とパトス(感情)とを比較の基準として上記三者の異同を調べそれぞれの特徴を指摘した。これらの成果を研究代表者と吉田俊一郎はそれぞれ研究会で発表した。また、研究代表者、研究分担者および研究協力者は、研究協力者でもある森谷宇一大阪大学名誉教授の指導のもので古代ローマ弁論術を完成したクインティリアヌスの『弁論家の教育』全12巻のうち3巻から5巻までを邦訳した。これは来年度、京都大学学術出版会から刊行される。また、研究代表者と研究分担者とは、研究協力者の協力をえて、クインティリアヌス『弁論家の教育』の1巻から5巻までの主要用語および主要術語の辞書(データベース)を作成した。また以上とは別に、研究代表者は、キケロの弁論術書の一つである『トピカ』を読解しているところであり、同じくキケロの弁論術書の一つである『弁論家』を邦訳しつつある。また、研究分担者は、近代美学の成立過程における弁論術の影響を研究しているところである。本年度に実施した研究成果は、第一に、クインティリアヌス『弁論家の教育』全12巻中第3巻から第5巻までを初めて邦訳し、刊行したこと(クインティリアヌス『弁論家の教育2』京都大学学術出版会、2009年2月20日)が挙げられる。

クインティリアヌス『弁論家の教育』は、弁論術理論としてはいうまでもなく、教育理論としても芸術理論としても重要な著作であるが、これまで部分訳(第1巻と第2巻と第12巻)しかなく、また日本では研究もされてこなかった。今回の初訳により、クインティリアヌスの弁論術理論の一端が日本の読者に提供されることとなり、その意義はきわめて大きい。第二に、今年度も年2回の研究会(通称「弁論術研究会」)を開催し、古代ギリシアの言語観について(特にプラトン、アリストテレス、ロンギノスの言語観について)、および現代におけるレトリック研究の可能性について研究をおこなった。プラトンにおいては話し言葉と書き言葉についての意識の違いが見られないが、アリストテレスにおいて徐々に話し言葉と書き言葉が分離することがわかった。また古代ギリシアのヘレニズム期の修辞学書であるロンギノス『崇高論』においては、ストア派の言語観の影響、アジア主義とアッティカ主義との抗争など当時の言語観の影響などがあることがわかった。さらに、現代におけるレトリックの可能性については、ヤコブソン理論の誤解の上に現代レトリック論が展開されている現状が明らかになり、転義法の観点からあらためてヤコブソン理論を問い直すべきだという意見にまとまった。本研究の最終年度にあたる21年度は、(1)キケロの修辞学、(2)現代の美学・芸術学における弁論術について、(3)科学研究費補助金研究成果報告書の作成という三つを柱に研究をおこなった。(1)キケロの修辞学については、研究代表者はキケロ『トピカ』を邦訳し、研究会を開いた。研究会の場では『トピカ』の邦訳を検討し、その内容の問題を討議した。キケロ最晩年の著作である『トピカ』の重要性が確認できたが、図式的な記述のわりには複雑な内容であり、とくにストア派の影響を解明する必要がある、ということが分かった。(2)現代の美学・芸術学における弁論術については、連携協力者と研究協力者の先生方に音楽批評の現場と美学理論の現場について報告をしていただいた。現代における「レトリックの死」というロラン・バルトの言葉を待つまでもなく、弁論術は批評としてはいまなお機能しているものの、哲学とはすでに有効な共同関係を築きえなくなっていることがわかった。(3)研究成果報告書については、すでに作成・提出の義務がなくなったとはいえ、本研究課題の交付を受けた4年前に立案した計画に基づいて作成することにした。この研究成果報告書によって4年間の研究成果が報告されるとこになる。ただし、研究代表者が邦訳したキケロ『トピカ』は、この研究成果報告書には掲載されていない。いずれ機会があれば紀要などに掲載し、報告することとしたい。これら三つの柱とは別に、クインティリアヌスの『弁論家の教育』を研究し、また邦訳しているところである。本年度におけるクインティリアヌス研究成果はまだ充分に出ていないが、随時京都大学学術出版会から出版する予定である。
Prevotella loescheiiのプラスミン様プロテアーゼの精製と諸性質

生理的役割を調べるために、本精製酵素をヒト血清成分から精製したプレカリクレインに作用させ、あらかじめ色素を静脈注射したモルモットの皮下に精製プラスミン様酵素を注射し、色素の透過性への影響を調べた結果、血管透過性の亢進が認められた。このことは、Prevotella loescheiiのプラスミン様酵素がプレカリクレインを活性型カリクレンに変換したものと考えられる。また、本酵素をヒト歯根膜細胞の不活性型コラゲナーゼに作用させたところ活性型コラゲナーゼへの変換が認められた。以上のことから、細菌産生プロテアーゼが外因子として宿主側の内因性キニン産生カスケードに働きかけて、局所の血管透過性を亢進するとともに、コラゲナーゼの活性化にも関与するものと考えられ、そのことが局所の歯周組織や根尖組織の炎症の発症進展、破壊に関与することが示唆された。
カテコラミンによるグルコース輸送体の活性化とそのシグナル伝達機構の解析

申請者は前年度までに、細胞内へのグルコース輸送を促進する交感神経の作用機構を解析するために、褐色脂肪細胞の初代培養系を確立した。本年度はこの細胞を用いて、グルコース輸送を促進するノルエピネフリン(NE)の作用機構を、インスリンの場合と比較しながら追究した。NEによるグルコースの輸送促進効果は、NEの濃度ならびに作用時間に依存して増大し、細胞膜透過性のcAMPアナログで模倣された。このNEの作用は、約100分の1の濃度のβ_<3->アドレナリン作働薬(BRL37344)によって再現されたので、β_3受容体を介して引き起こされると考えられた。インスリンもこの細胞に対して促進効果を示したが、NEの作用とは相加的であったため、両者は全く異なる伝達経路で輸送を促進することが示唆された。このことは、インスリンの情報伝達系において重要な役割を果たすP13kinaseの阻害剤(ワ-トマニン)によって、インスリンによるグルコース輸送の増加が完全に抑制されるのに対し、NEの促進効果が全く影響を受けないことからも支持された。インスリンが脂肪細胞に作用すると、ミクロゾーム画分から細胞膜上へのグルコース輸送体(GLUT4)のトランスロケーションが誘導され、グルコースの輸送が増加することが明らかとされているが、初代培養褐色脂肪細胞においてもインスリンによるGLUT4のトランスロケーションは観察された。しかし、NEを作用させた場合には、GLUT4の細胞内分布の変動は認められず、トランスロケーション以外の機構が存在することが見出だされた。グルコース取り込みのKm値とVmax値を測定してみると、インスリンの場合にはGLUT4のトランスロケーションを反映して、Vmax値の増加が顕著であった。一方、NEを作用させた細胞では、Vmax値にはほとんど変化がなく、Km値の低下が認められた。
乳歯歯髄由来未分化幹細胞における低酸素培養の影響

乳歯歯髄由来細胞は、様々な細胞に分化することが知られている。さらに低酸素培養を行うことで、永久歯歯髄由来細胞や歯根膜由来細胞においては未分化マーカー遺伝子発現の増強や脂肪細胞、骨芽細胞、軟骨細胞分化が明らかになっている。これまでに乳歯歯髄由来細胞において低酸素培養下における脂肪細胞分化の増強を明らかにしており、他の細胞への分化の確認を行うために、まず骨芽細胞分化を行った。低酸素培養を行った乳歯歯髄由来細胞において骨芽細胞への分化をアリザリンレッド染色にて確認した。現在はリアルタイムPCRにて骨芽細胞マーカー遺伝子変動の確認を行っているところである。さらに、永久歯歯髄由来細胞を低酸素下で培養する前処理を行うと細胞生存率、増加度、骨形成を向上させたという報告があり、現在、乳歯歯髄由来細胞において低酸素培養の前処置を行い、骨芽細胞への分化を検討している。当初の計画とはずれてはいるが、おおむね順調に進展していると思われる。持続的に低酸素下で培養を行うだけではなく、低酸素培養を前処置として行うことで細胞生存率や増加度を増強している報告もあることから、持続的な低酸素培養と前処置としての低酸素の活用について、検討を加えていく予定である。乳歯歯髄由来細胞において持続的低酸素培養、前処置として低酸素培養を行い、通常培養下(20%酸素)と細胞生存能、未分化マーカー遺伝子発現変動を検討し、さらに骨芽細胞へ分化させ、比較検討を行う予定である。購入予定であったプライマーの納期が次年度になった為。