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マカートニー使節団の記録にみる中国像――未公刊史料を中心に――

そのため、アンダースンらが記録し、描写している中国女性の特徴とその理由を指摘することで、中国像形成への影響について論じた。昨年度からの遅れの作業を今年度は中心的に行った。すなわち国内での資料収集と、分析を中心に行い海外での調査に備えた。しかし、東洋文庫等にて調査を行ったところバローやストーントンなどの団員の著作の挿絵にはアレグザンダーの手による画像資料以外の画像も複数使用されていることが確認できたため、画像資料の新たな分析方法を検討している。それらを優先するために海外での調査は来年度に行うこととした。しかし、一方で画家アレグザンダーの未公刊史料である日記、各種画像資料を中心に分析を進められたため、基盤的な作業は着実に進んでいるといえよう。今後の研究推進方策としては、引き続き1)3)の作業を行い、発展させる。さらに、国内で収集した資料調査の結果をもとに、4)イギリスにて大英図書館、Royal Asiatic Society of Great Britain and Irelandにて資料収集を行い、中でも5)未公刊史料の一つであるアレグザンダーのスケッチ画像資料の収集および分析を進め、6)現地での研究協力者たちへの協力を仰ぎ、意見交換を行う。それらをもとに7)学会での発表、および論文でその成果の発表を行う。今後の方策として、1)国内での資料調査の完了、2)海外での資料調査、3)アレグザンダーの未公刊史料であるスケッチブック(大英図書館所蔵)と刊行済み資料の検討等を中心に行っていく予定である。とりわけ未公刊史料の分析と収集、ならびにその成果の発表に重点をおく。当初の計画では、国内での調査ならびに学会発表等の出張をより活発に行う予定であったが、上記の通り体調不良のため予定通りの実施が難しかった。次年度以降の海外出張費、ならびに学会発表への出張費にあてたい。今年度は当初の予定では英国の大英図書館、Royal Asiatic Society of Great Britain and Irelandでの調査を計画していたが、前年度の体調不良による遅れを取り戻し、より現地での調査を円滑に行うために国内での資料収集・分析を中心に行った。以上の理由より、英国での調査を来年に見送ることにしたため、次年度の使用額が生じることとなった。
マイコプラズマ細胞膜糖脂質の生物機能解析に関する研究

マイコプラズマ肺炎菌(M. pneumoniae)の細胞膜には、主要構造成分であるリン脂質とコレステロールに加えて、β結合型二糖(Glc-Gal, Gal-Gal)を極性基にもつグリセロ糖脂質が存在する。筆者らは他に先駆けてそれらの化学構造を化学的に決定し、マイコプラズマ肺炎菌が生産する種特異的抗原であること、マイコプラズマ感染の確定診断法に利用可能であることを明らかにしてきた。本研究では、これた細胞膜糖脂質が、マイコプラズマ肺炎菌の生命活動に、どのような役割を演じているのかを、立体化学的なアプローチから検証をすすめた。特に、筆者らの立体選択的重水素化法と1H-NMRスペクトル法を用いたグリセロール部位の動的配座解析を行った。平成30年度は、本糖脂質の基本骨格を形成する1,2-ジアシルグリセロール(1,2-DAG)の動的配座挙動を基質濃度を変化させて解析を行った、その結果、1,2-DAGは非極性溶媒(クロロホルム)中で、濃度依存的に水素核のケミカルシフトと結合定数が同時に変化することが明らかになった。1,2-DAGのsn-3水酸基を塩素原子に置換した誘導体を作成し、同様の試験を行ったが、濃度依存性は観察されなかった。このことから、1,2-DAGがもつsn-3位水酸基が分子間相互作用に関与していると考えられた。相互作用の解析から数百mMレベルで働く弱い2分子間相互作用であること、濃度上昇とともに脂質部位のゴーシュ配座が安定されることなどから、水酸基とカルボニル基との水素結合を介する二量化が起こると考えられた。1,2-DAGは、極性溶媒との相互作用に基づく動的変化に加えて、自己集合化による動的変化を示す特異な分子であることが判明した。一方、sn-3位水酸基にβGalを結合したグリセロ糖脂質はクロロホルムへの溶解性が低いことから濃度依存性を確認することはできなかった。マイコプラズマ肺炎菌の細胞膜には、リン脂質とコレステロールに加えて、2種のグリセロ糖脂質(DGGL)が存在する。DGGLは肺炎マイコプラズマ菌が生産する新規糖脂質で、飽和脂肪酸(C16, C18)と(1-6)結合した二糖をもつことを特徴とする。先に、筆者らは、菌体から抽出したDGGLの化学構造を明らかとし、合成DGGLを利用した感染診断法を開発した。現在、実用化を進めている。本申請研究は、本DGGLが、細胞膜成分として、どのような立体構造と動的挙動を示すのか、詳細に解析する。立体構造をもとに、肺炎マイコプラズマ菌にとって、これら細胞膜糖脂質がどのような役割を果たしているのか検証する。2017年度は、細胞膜脂質(リン脂質と糖脂質)が、溶液中で、どのような動的分子挙動を示すのかを核磁気共鳴スペクトルと分子力場計算法を用いて解析した。その結果、以下のことが明らかとなった。(1)脂質二重膜形成に直接関与する1,2-ジアシルグリセロール部位(脂質部位)の動的平衡は、sn-3位の置換基によって大きく変化する。(2)sn-3位に水酸基を持つDAGの場合、脂質部位の動的挙動は溶媒効果により,大きく左右される。(3)sn-3位がリン酸化されると、脂質部位は、溶媒に関係なく、一つのゴーシュ配座を優先的にとるようになるなど、動的挙動に顕著な変化をもたらす。(4)sn-3位がスルホニル化(メシル化、トシル化)されると、脂質部位の回転配座は、溶媒に関係なく、ほぼ無秩序な配座挙動に移行する。(5)sn-3位が糖化(ベータガラクトシル化)されると、脂質部位の回転配座は、2つのゴーシュ配座の平衡状態に移行する。その傾向は、特に、極性溶媒中で顕著となり、糖脂質の動的挙動は、リン脂質とDAG-C16の挙動と大きく異なっている。おおむね、研究は順調に進展している。当初の計画では、平成28年度に糖種が異なるDGGL異性体、平成29年度に糖を様々な置換基に代えたグリセロ脂質を化学合成する予定であったが、これを同時に進行することにした。後者の化学合成は平成28年度で、ほぼ完了してNMR解析を進めることができた。前者の糖脂質誘導体は、モノα-ガラクト型糖脂質の化学合成を行ない、NMR解析を行った。2糖結合をもつα-ガラクト型脂質の化学合成を現在進めているが、二糖構築が思うように進んでいない。平成29年度は、グリコシル化法を種々検討して、目的とする各種DGGL異性体の化学合成を完了する。前年度までに、1,2-ジアシルグリセロ脂質(1,2-DAG)の動的配座は、sn-3位の置換基の種類によって大きく変動することを明らかにした。平成29年度は、グリセロ糖脂質、並びに硫酸化グリセロ脂質の化学合成をおこない、その一部について動的配座解析を行った。<sn-3位に様々な置換基が結合した1,2-DAGの化学合成>市販の光学活性(S)-グリシドールとガラクトース(Gal)を出発原料に用いて、脂質部位にパルミチン酸(C16)、極性部位にbeta-Galを導入した1,2-DAGを合成した。また、蛍光試薬ダンシルクロリドをsn-3位の水酸基と反応させて、発蛍光性硫酸化グリセロ脂質を化学合成した。<動的配座の解析

>発蛍光性硫酸化グリセロ脂質の動的配座を、筆者らの1H-NMR-Karplus法で解析した。その結果、硫酸化グリセロ脂質の脂質部位(sn-1,2部位)は無秩序に自由回転し、その動的挙動は、リン脂質の挙動と大きく異なることが判明した。<グリセロ脂質の動的配座とその規則性>これまでに、筆者は、様々な置換基を3位にもつ1,2-DAGを合成して、独自の解析法(1H-NMR-Karplus法)で動的配座を解析してきた。今年度、硫酸化グリセロ脂質を新たに合成して、詳しい解析を行った。その結果、グリセロ脂質の配座挙動には一定の規則性が存在し、その規則性はリン脂質や糖脂質にも適用できることを見出した(2017年、Beilstein J. Organic Chemistry、Chemical Biology特集号に招待執筆)。その規則性は、長鎖脂肪酸が結合した1,2-DAGだけではなく、芳香族アシル基からなる1,2-ジベンゾイルグリセロールにも当てはまることを明らかにした(Tetrahedron Asymmetry, Dr. Haward Flackを偲ぶ特集号に招待執筆)。平成28年8月と9月に、溶媒回収装置(3台のうち1台)並びに、真空乾燥用の油圧式ポンプ(2台のうち1台)が故障した。修理の予算要求(学内経費)と実際の修理に3か月を要したため、実験のうち、とくに、マイコプラズマ糖脂質抗原のモデル化合物の合成が、当初の計画に比べて遅延した。これに伴い、平成29年度に予定していたの関連糖脂質を対象とする動的配座解析の一部が未完成に終わった。上述した機器の故障によって合成計画が遅延したが、合成実験ができない時間を、これまでに取得したデータの机上解析と論文作成に利用した。特に、グリセロ脂質の動的配座の挙動に、何らかの規則性がないか、理論計算と統計学処理を行って検討をすすめた。その結果、当初、まったく予想していなかった「規則性」を見出すことができた。グリセロ脂質の動的配座は、脂質部位(sn-1,2炭素軸)の自由回転によって、gt, gg, tgと3種の回転配座を与える。従来、この3種の配座は、置換基間の立体反発、クーロン相互作用、ファンデルワールス力、双極子モーメントなど、多くの立体的要因の総和にであり、それらの平衡(存在比率)には相関性はないと考えられてきた。本研究で見出した「規則性」から、相関関係を表す「一般式」を導き出すことができ、ドイツの化学分野英文誌(Beilstein J. Org. Chem.)に報告した。また、同規則性を他の化合物を用いて検証し、その結果をTetrahedron Asymmetry (Haward Flack博士の追悼号)に報告した。この「規則性」は、リン脂質、糖脂質、中性脂質、その他に各種合成脂質の全般に適用可能である。本成果は、グリセロ脂質の立体化学的研究にとって、従来の基本概念を一新するものであり、マイコプラズマ糖脂質の研究をもとより、関連するグリセロ脂質研究は、大いに進展すると確信する。マイコプラズマ肺炎菌(M. pneumoniae)の細胞膜には、主要構造成分であるリン脂質とコレステロールに加えて、β結合型二糖(Glc-Gal, Gal-Gal)を極性基にもつグリセロ糖脂質が存在する。筆者らは他に先駆けてそれらの化学構造を化学的に決定し、マイコプラズマ肺炎菌が生産する種特異的抗原であること、マイコプラズマ感染の確定診断法に利用可能であることを明らかにしてきた。本研究では、これた細胞膜糖脂質が、マイコプラズマ肺炎菌の生命活動に、どのような役割を演じているのかを、立体化学的なアプローチから検証をすすめた。
白色と黒色の微粒子の混合分散液の泳動電着による構造色コーティング法の開発

本研究課題では、白色のシリカ粒子と黒色のカーボン粒子の混合分散液を用い、泳動電着法によって微粒子集積型構造色材料をコーティング膜とする手法の開発し、その機能化を図ること目的とした。最初にアノード型の泳動電着で構造色コーティングを試み、均一な製膜が迅速に可能であり、複雑なな形状の表面にも適用可能であることを明らかにした。次にカチオン性高分子電解質を用いてカソード型泳動電着による構造色コーティングを試みた。ここでは分散媒のpHの違いでコーティング膜における粒子集積状態を制御することができ、角度依存性のある構造色膜と角度依存性の小さい構造色膜を作り分けることができることを明らかにした。平成28年度はまず様々な粒径を有する単分散シリカ粒子を用いて泳動電着によるコロイドアモルファス集積体の形成を行った。印加電圧、電着時間などの電着条件が得られる粒子集積体の状態に大きな影響を及ぼすことが明らかになり、電着膜におけるシリカ粒子の集合形態が結晶構造とアモルファス構造になる条件を見出した。また得られる電着膜の膜厚も印加電圧、電着時間で制御可能であることが分かった。しかしながらこれらの膜はほぼ白色に見え、構造色は僅かにしか確認できなかった。そこで単分散シリカ粒子分散液に黒色物質としてカーボンブラックナノ粒子を添加して電着を行ったところ、鮮やかな発色の構造色を呈するコーティング膜が得られた。カーボンブラックナノ粒子の添加量の最適化も行った。また、粒径の異なるシリカ粒子を用いることで様々な色で発色させることにも成功した。反射スペクトルの測定によれば、結晶構造を有するコーティング膜は反射ピークが測定角を変化することで大きくシフトすることが明らかになり、いわゆる角度依存性のある構造色のコーティング膜であることが分かった。これに対し、アモルファス構造の粒子集合形態を有するコーティング膜では反射ピークが測定角を変化させてもそのシフトは小さく、いわゆる角度依存性の小さい構造色を呈するコーティング膜となっていることが分かった。さらに、平板基板のみならず、複雑かつ曲面のある表面への構造色コーティングが泳動電着によって可能であることも明らかにした。当初の計画通り、鮮やかな構造色を呈するコーティング膜を泳動電着法で作製でき、また、粒径の異なる粒子を用いることで様々な色で発色させることに成功した。これに加え、電着条件を制御することで、角度依存性のある(ギラつきのある)構造色と、角度依存性の小さい(マットな)構造色を作り分けることにも成功し、また平板基板のみならず複雑かつ曲面のある表面への構造色コーティングも達成したため。本研究課題ではSiO2粒子を用いた泳動電着法によって構造色コーティング膜を形成させる手法を検討した。前年度まではアノード型の泳動電着で行ってきたが、アノード型電着では被塗物が金属の場合に腐食がおこる懸念があった。また、これまでに得られているコーティング膜は基板と粒子、粒子間の接着力が弱く、容易に剥離してしまう欠点もあった。そこで平成29年度は、正電荷を有する物質を用いることでカソード型電着による構造色コーティングを試みた。正電荷を有する物質として、カチオン性高分子電解質であるポリジアリルジメチルアンモニウムクロリド(PDDA)を用いる方法について検討を行った。従来は容易ではなかった構造色の発色の角度依存性の制御を電着条件の調整で実現することを試みた。さらに、作製したコーティング膜の耐摩擦特性をアノード電着で作製したものと比較し、その向上を図る検討を行った。PDDAを用いるとSiO2粒子およびカーボンブラック粒子の表面に吸着し、粒子表面電荷が正に反転することで、カソード型泳動電着による構造色コーティングが可能となった。また、分散媒のpHの違いでコーティング膜における粒子集積状態を制御することができ、角度依存性のある構造色膜と角度依存性の小さい構造色膜を作り分けることができることも明らかになった。次に得られた膜の耐摩擦特性を評価した。アノード電着により作製したものは磨耗試験において、1度の摩擦で全ての膜が剥離してしまい、耐摩擦特性は極めて乏しかったが、PDDAを用いたカソード電着により作製したものはそれよりも耐摩擦特性の向上がみられた。すなわちPDDAが電荷を反転させる役割だけでなくバインダーとしても働いていることが明らかになった。実施計画に示したとおり、粒子の表面電荷の制御によって従来のアノード型電着ではなく、よりメリットの多いカソード型電着による構造色コーティングを実現する。さらに「構造色をより実用的な塗装に応用する」ことを実現するため、ひっかきや摩擦に耐性を有する堅牢なコーティング膜とするための検討を実施し、研究のとりまとめを行う。

無機材料科学当初はゾルーゲル法によって様々な粒径を有する単分散シリカ粒子の合成を行う予定であったが、連携研究者(名古屋大学竹岡敬和准教授)から、これらの提供を受けることが可能となったため、その合成等に用いる予定であった試薬やガラス器具等の購入費用を軽減することができたため。当初計画より研究が進展しており、成果も大きな注目を集めている。したがって得られた成果を国際会議で発表することや、オープンアクセスの論文誌に投稿し、成果のさらなる普及を行うことを計画している。
乱流プラズマ中の波動の長時間相関に関する研究

この研究は電子ビ-ム・プラズマ系に発生する乱流プラズマ中で、不規則に発生、消滅を繰り返している高域混成波ソリトンとイオン波乱流の相互作用を実験的に調べたものである。その結果として次の事柄が明かになった。1)高域混成波ソリトンは集合し易い性質を持ち、その集合したソリトンの包絡線をフ-リエ分析すれば、イオン波のスペクトルが得られる事から高域混成波ソリトンの集合でイオンが発生すると考えられる。2)プラズマ中にイオン波ソリトンの発生が確認されたが、これが高域混成波の窪みに入り込み“対"を作る現象が見られた。そこで高域混成波ソリトンが群速度で移動する際、共にイオン波ソリトンを輸送するものと考えられる。後進波である高域混成波の群速度がプラズマ密度の高い容器中央部分で零になる事が予想されるが、丁度この附近に強力な高域混成波とイオン波の対が定常的に存在する事から、高域混成波によるイオン波ソリトンの輸送と場所的輸送停滞がもたらす混成波とイオン波のエネルギ-蓄積が生じるものとみられる。3)イオン波ソリトンの出現する時刻に高域混成波ソリトン(非線形ランダウ減衰により三角波形を示す)の尾部に振幅振動が発生する事が判明した。これはイオン波ソリトンが捕捉粒子を介して高域混成波と相互作用をした結果と推測されるが、この現象は上記の高域混成波の窪みにイオン波ソリトンが入り込む機構を表わすものと考える。4)その他、高域混成波の波高値と出現確率を調べ、熱平衡のボルツマン統計から大きくずれた非平衡過程である事、非線形ランダウ減衰の証拠が得られるなど多くの知見を得る事ができた。
ヒト骨髄ニッチにおける造血幹細胞支持機構の解明と造血幹細胞体外増幅法の開発

申請者は当該研究期間において、ヒト造血幹細胞(HSC)が高度に濃縮された、ヒト臍帯血由来18Lin-CD34+/-分画細胞の一部あるいは全部に反応性を示す抗体産生ハイブリドーマを約500クローン作製した。これら抗体より、ヒト骨髄由来間葉系幹細胞(MSC)によるHSC支持能阻害活性を持つ抗体のスクリーニングを行った。このスクリーニングは、50クローン分程度終えており、その中には、ヒトMSCによるHSC支持能を約20%程度阻害するものも含まれていた。残りのクローンにおいても同様のスクリーニングを行う予定である。今後、阻害活性を有する抗体を見つけることにより、ヒトHSC支持因子の同定が期待される。1)ヒト造血幹細胞(HSC)支持因子受容体を同定するため、HSC支持因子受容体に対する阻害抗体の作製を試みた。具体的には、ヒトHSCが高度に濃縮されたヒト臍帯血由来18Lin-CD34+/-分画細胞あるいはヒト白血病細胞株であるKG-1細胞をBalb/cマウスに免疫することにより、18Lin-CD34+/-分画細胞の一部あるいは全部に反応性を示す抗体産生ハイブリドーマを約500クローン作製した。2)次いで、これらのハイブリドーマを自作の無血清培地に移し、その培養上清より抗体を精製した。その後、精製抗体をヒトHSC支持能を有するヒト骨髄Lin-CD271+SSEA-4+分画由来間葉系幹細胞(DP MSCと18Lin-CD34+/-細胞との共培養系に添加することにより、CD34+細胞維持・産生能を阻害する抗体のスクリーニングを行った。このスクリーニングは現在、50クローン分程度終えており、今後、残りのクローンにおいても同様のスクリーニングを行う予定である。3) In vivoにおけるDP MSCのHSC支持能の検討を行った。具体的には、NOGマウス左脛骨に2 x 10^5/mouseのDP MSCと8,000/mouseの18Lin-CD34-細胞を骨髄内直接移植(IBMI)法にて同時に移植した。対照群には、18Lin-CD34-細胞単独で移植を行った。移植後20週目にマウスを犠牲死させ、移植部位におけるヒトCD45陽性細胞の生着率を解析した。その結果、18Lin-CD34-細胞単独で移植を行っても80%以上の非常に高いヒトCD45陽性細胞の生着を示すマウスが認められた。そのため、この系では、DP MSCによるSRC支持能を正確に評価することは困難であると考えられた。今後、新たなin vivoにおけるHSC支持能の評価系が必要である。本研究年度内において、申請者は以下の検討を行った。1)ヒトHSC支持因子受容体を同定するため、HSC支持因子受容体に対する阻害抗体の作製を試みた。具体的には、18Lin-CD34+/-細胞あるいはヒト白血病細胞株であるKG-1細胞をBalb/cマウスに免疫することにより、18Lin-CD34+/-分画細胞の一部あるいは全部に反応性を示す抗体産生ハイブリドーマを約500クローン作製した。次いで、これらのハイブリドーマを自作の無血清培地に移し、その培養上清より抗体を精製した。その後、精製抗体をDP MSCと18Lin-CD34+/-細胞との共培養系に添加することにより、CD34+細胞維持・産生能を阻害する抗体のスクリーニングを行った。現在、50クローン分程度のスクリーニングを終えている。今後、残りのクローンにおいても同様のスクリーニングを行う予定である。2) In vivoにおけるDP MSCのHSC支持能の検討を行った。具体的には、NOGマウス左脛骨に2 x 105 /mouseのDP MSCと8,000/mouseの18Lin-CD34-細胞をIBMI法にて同時に移植した。今後、新たなin vivoにおけるHSC支持能の評価系を開発する予定である。平成24年度における申請時の計画は以下のとおりである。1) 18Lin-CD34+/-細胞支持因子受容体に対する阻害抗体の作製および受容体の同定2) 18Lin-CD34+/-細胞支持因子の同定および抗体の作成

1)に関しては、現在18Lin-CD34+/-細胞に反応性を示すクローンを500個程度作成しており、現在、これらの抗体群より阻害活性を示すものをスクリーニングしている。2)および3)に関しては1)の終了後に着手する予定である。また、上記予定とは別に、申請者は、ハイブリドーマ用自家製無血清培地の作製および抗原特定に有用な免疫沈降法の改良を実施済みである。これらは、今後の研究を進めていく上で非常に大きなアドバンテージだと考えられる。また、平成25年度に実施予定であった「4) In vivoにおけるDP MSCによる支持因子を介したヒトHSC支持機構の解析」の予備的検討も実施済みである。これらの理由により、上記自己評価に至った。現在、18Lin-CD34+/-HSC支持因子受容体に対する阻害抗体の作製および受容体の同定は順調に進んでいる。平成25年度は、これらの抗体群よりHSC支持能に対する阻害活性を有する抗体のスクリーニングを行う予定である。In vivoにおけるDP MSCによる支持因子を介したヒトHSC支持機構の解析の予備的検討として、重症免疫不全マウス骨髄にDP MSCとCD34- SRCの同時移植を実施した。しかしながら、CD34- SRC単独移植群でも非常に高いヒトCD45陽性細胞の生着が観察された。したがって、この系では、DP MSCによるSRC支持能を正確に評価することは困難であると考えられた。そのため、新たなin vivoにおけるHSC支持能の評価系の開発を行う。具体的には、コラーゲンスポンジにDP MSCを培養下で付着させた後、NOGマウス背中の皮下に移植する。次いで、DP MSCがNOGマウスに生着した後、コラーゲンスポンジ内部に18Lin-CD34+/-細胞を移植し、20週以上ヒト造血が維持されることを確認する。この系により、ヒトHSCの支持能が適切に評価できることを確認した後、In vivoにおけるDP MSCによる支持因子を介したヒトHSC支持機構の解析を行う。研究費の使用用途は以下のとおりである。具体的には抗体作成用のBalb/cマウス(1,300円/マウス)および異種間移植実験に用いるNOGマウス(13,000円/マウス)購入費およびSPF環境下での飼育費に合計300,000円。また、FCM解析とFACS解析に用いるモノクローナル抗体200,000円およびEasySep免疫磁気ビーズ(100,000円/1 ml)を200,000円。抗原同定に必要な電気泳動試薬に100,000円、MS解析用試薬に200,000円を要する。また、遺伝子組み換えベクター作成に必要な、制限酵素(100,000円)およびPCR用試薬(150,000円)、lipofectionによる遺伝子導入試薬(200,000円)を予定している。また、学会発表に係る経費150,000円および論文投稿に係る経費100,000円を計上した。
神経におけるユビキチンリガーゼＫＬＨＬ７の機能と制御

BTBタンパク質であるKLHL7の変異は優性遺伝型の網膜色素変性症を起こすことが知られている。我々はこれまで、KLHL7がユビキチンリガーゼを形成し、病原性変異体はその機能を抑制することを明らかにした。しかし、KLHL7のユビキチン化する標的分子や機能、そしてその生理的役割の詳細はわかっていなかった。そこで本研究ではKLHL7の機能とその生理的役割を解析することを目的とし、これまでKLHL7のユビキチン化基質候補の同定や細胞レベルにおけるKLHL7の機能解析を行ってきた。また本年度ではKLHL7のノックアウトマウスを作出しその解析を行うことでKLHL7のin vivo機能の解析を試みた。KLHL7条件的ノックアウトマウスを作製し、Ayu-Creマウスと交配することで全身性のKLHL7ノックアウトマウスを樹立した。また、ノックアウトマウスより線維芽細胞を樹立し、これらを用いKLHL7ノックアウトの影響について検討した。KLHL7のユビキチン化基質候補タンパク質がスプライシング機構において重要な役割を担う因子であることから、スプライシング機構に着目しKLHL7欠損の影響を検討した。KLHL7ノックアウト細胞では細胞内のsnRNA量の変化や、モデルターゲットのスプライシングの有意な変化が観察された。これらのことからKLHL7は基質の制御を介してスプライシング機構の調節に関わる可能性が考えられる。また、個体レベルでもKLHL7ノックアウトマウスの脳をはじめ一部の組織ではsnRNAの量変化が認められたことから、個体レベルにおいてもKLHL7がスプライシング機構の調節に関与していることが考えられた。現在はKLHL7ノックアウトマウスの脳の解析を行っており、より詳細な解析により神経系におけるKLHL7機能の更なる解明を目指している。26年度が最終年度であるため、記入しない。BTBタンパク質であるKLHL7の変異は優性遺伝型の網膜色素変性症を起こすことが近年報告されたが、その機能については未解明である。本研究員は、KLHL7が複合体型ユビキチンリガーゼを構成し、変異型KLHL7はそのユビキチン化活性をドミナントネガティブに抑制する働きがあることを明らかにしている。しかし、KLHL7の機能については不明であり、KLHL7を制御する機構の詳細はわかっていない。そこで本研究では、KLHL7の制御機構とその生理的役割を解析することを目的とした。本年度はKLHL7の分子制御機構の解析と分解ターゲットとする基質候補や他の制御因子の探索を主な目標とした。KLHL7の分子制御機構について、KLHL7と相互作用する新奇タンパク質の機能解析を行った。この新奇タンパク質はユビキチンリガーゼ活性を負に制御し、酸化ストレス応答に必須な因子の調節を行うことが明らかとなった。さらに、この新規タンパク質自身も酸化ストレスの制御を受けることから、ストレス応答経路に何らかの役割を持つということが示唆された。その他、KLHL7の制御因子や基質タンパク質を探索するため、酵母ツーハイブリッドスクリーニングと相互作用タンパク質の質量分析解析を行った。幾つかの候補因子を取得したので、今後はこれらのKLHL7制御に対する役割や、KLHL7によるユビキチン化制御について検証して行く予定である。KLHL7の変異は神経変性症の一種である網膜色素変性症の原因となることが知られている。我々は以前、KLHL7は複合体型ユビキチンリガーゼを形成し、その優性遺伝性の病原性変異体がユビキチンリガーゼ活性をドミナントネガティブに抑制することを明らかにした(Kigoshi, et al., 2011)。しかし、KLHL7の基質や生理的役割の詳細については不明であった。そこで、本研究ではKLHL7の機能や生理的役割の解明を目的とした。まず、ユビキチン化ターゲットとなる基質候補を酵母ツーハイブリッドや相互作用因子の質量分析によって探索し、その相互作用を免疫沈降実験で解析した。その結果、KLHL7の基質候補としてメチルトランスフェラーゼの一種を同定した。KLHL7とメチルトランスフェラーゼとの結合はプロテアソーム阻害剤により増加し、また細胞内におけるメチルトランスフェラーゼのユビキチン化は原性変異型KLHL7の発現により抑制された。また、同メチルトランスフェラーゼはゴルジ体形態の調節に関わっていることが知られており、KLHLI7の強制発現により同タンパク質のゴルジ体局在が増加した。さらに同タンパク質がゴルジ体に強く局在した細胞では、ゴルジ体の拡大が観察された。これらのことから、KLHL7はメチルトランスフェラーゼのユビキチン化を介してゴルジ体の形態制御に関与している可能性が考えられた。今後はその詳細な機序の解析と神経における影響について検討する予定である。

KLHL7条件的ノックアウトマウスを作製し、Ayu-Creマウスと交配することで全身性のKLHL7ノックアウトマウスを樹立した。また、ノックアウトマウスより線維芽細胞を樹立し、これらを用いKLHL7ノックアウトの影響について検討した。KLHL7のユビキチン化基質候補タンパク質がスプライシング機構において重要な役割を担う因子であることから、スプライシング機構に着目しKLHL7欠損の影響を検討した。KLHL7ノックアウト細胞では細胞内のsnRNA量の変化や、モデルターゲットのスプライシングの有意な変化が観察された。これらのことからKLHL7は基質の制御を介してスプライシング機構の調節に関わる可能性が考えられる。また、個体レベルでもKLHL7ノックアウトマウスの脳をはじめ一部の組織ではsnRNAの量変化が認められたことから、個体レベルにおいてもKLHL7がスプライシング機構の調節に関与していることが考えられた。現在はKLHL7ノックアウトマウスの脳の解析を行っており、より詳細な解析により神経系におけるKLHL7機能の更なる解明を目指している。26年度が最終年度であるため、記入しない。本年度の目的の一つであった、制御機構の解析は順調に進展した。もう一つの目的であった基質候補の探索や他の制御因子の解明については、候補タンパク質の取得に成功し、現在解析中である。本年度の目的であった基質の同定とその制御についての解析は概ね順調に進展している。神経における解析はやや遅れているが、細胞レベルでの影響に関する解析が想定より進展した。また、もう一つの目的であったコンディショナルノックアウトマウスの作製についても、キメラマウスを作製し、ヘテロマウスの誕生が確認されたので総じて比較的順調に進んでいると考えている。スクリーニングより得られた候補タンパク質の機能を検証することで、KLHL7の制御や機能を解明することを目指す。また、得られた分子機序の知見をもとに、今後は神経系におけるKLHL7の生理機能や個体レベルでの解析を目指す。基質制御の解析に関してしっかりしたデータを揃え、計画どおり、神経における影響と、樹立したノックアウトマウスを用いた個体レベルでの解析を行い、論文にまとめていく予定である。
エチレン－ジャスモン酸クロストークを利用した果実成熟・老化調節技術の開発

クライマクテリック型果実の成熟制御は,エチレン合成や信号伝達に着目した形質転換体や薬剤に因るものであったが,非常に高い効果のため果実が十分に可食なレベルにならないなどの問題があった.そこで,この研究ではホルモンのクロストークに着目して,新しい制御技術の開発を試みた.JAZはエチレンとJAのクロストークのhub因子であり,候補として最適と考えられた.そこで,果実作物であるメロンとトマトJAZ遺伝子をデータベースから抽出し,系統樹解析で分類した.JAZ1は果実成熟により急激に発現が低下し,また変異体・形質転換体の発現パターンからもJAZ1が果実成熟に関連している可能性があると考えられた.ジャスモン酸の信号伝達の一員で抑制的に働くJAZタンパク質は,エチレン信号伝達のキーとなるEIN3にも結合・抑制し,2つのシグナルのハブとして働くと期待される.エチレンは老化や成熟に関わるホルモンであり,その新たな制御方法として,JAZタンパク質を利用したい.これまでの研究からJAZタンパク質のJASドメインを欠失することでJAシグナルを不全にすることが分かっている.さらなるJAZの制御法を検討するために,JAZの無効化を行うユビキチン化サイトを特定し,他のアミノ酸への置換を通じて,JAZタンパク質の不活性化の阻止を検討した.これまでに,変異コンストラクトを作成し,アラビドプシスでの形質転換実験を行い,遺伝子組換え体も得ているが,実生段階で枯死しており,JAZの機能の変化に対して十分な検証が行えなかった.これに関しては,加えた変異が致死のためか,他の要因なのかをさらに調べる必要があると考えられる.また,トマト果実のSRAやメロン果実のトランスクリプトーム解析を行い,データを得ている.これらに関しては,次年度にさらに解析を行う予定である.植物の主要なホルモンであるエチレンとジャスモン酸は,JAZとEIN3と呼ばれる転写制御因子を介してクロストークしていることが明らかとなっている.エチレンは果実の成熟や花卉の老化を促進するホルモンである.EIN3はエチレン信号伝達の重要な因子として単離された遺伝子で,ノックアウトなど機能不全に陥るとエチレンを全く感受しなくなる.JAZはEIN3に結合するとEIN3の働きを抑制する.JAZにはアラビドプシスでは12のホモログが存在し,機能が分岐していると考えられている.そこで,本年度では果実のモデル植物であるトマトとメロンにおいて次世代シークエンサーのデータを利用して,全JAZ遺伝子の抽出・分類と果実における発現の経時的変化を追った.・JAZの分類:モデル植物のアラビドプシスでは12のJAZが同定されており,4つのグループに分類されている.トマトでもデータベースが整備されており十分な解析が可能であった.メロンに関してはトマトより劣っており,さらに複数のデータベースが混在する状態である.そこで,複数のデータベースを比較しつつ,本研究で得たHiseqのデータからde novo assemblyを行った.結果的に,アラビやトマトと同様の数のJAZ遺伝子をメロンで同定できた.それらを使い,トマトとメロンのJAZ遺伝子の系統樹を作成し,アラビドプシスでの分類を元に遺伝子名をつけた.・JAZ遺伝子の発現解析:トマトのSRAと本研究で得られたメロン果実のRNA-seqのリードをマッピングし,発現量を調査した.果実で主に発現していて,果実成熟で発現が減少するのはJAZ1とJAZ3で,トマトとメロンに共通していた.それに加え,JAZ1はトマトやメロンの成熟不全系統で発現が減少しないことも明らかとなった.これらの事から,やはりJAZ1が果実成熟に関与する可能性が考えられた.JAZは植物ホルモンの一つであるジャスモン酸のレセプターのCOIを阻害する因子であり、JAシグナル因子の一つとして考えられてきた。また、エチレンシグナル因子の一つであるein3はJAZと結合し、JAZに因ってその機能が制限されることが示唆されている。したがって、JAZはJAとエチレン信号伝達のクロストークに関与しており、JAZを利用したエチレン信号伝達の制御が可能では無いかと考えられる。果実でのJAZの働きを推測するために、トマトとメロンのNGSデータを利用して、JAZの発現パターンの解析を行っており、特定のグループの発現パターンが果実成熟に連動していると考えられた。そこで、H27年度はトマトにおいてJAZのドミナントネガティブコンストラクトを用いた形質転換を試みた。リーフディスク法を用いてカルス形成、再分化を経て形質転換体の作出を行った。その結果、カルス形成までは比較的問題なく出来るが、その後のシュート形成がほとんど起きず枯死してしまった。選抜に用いる個性物質を変更しても改善しなかった。同じコンストラクトを利用してアラビドプシスでfloral dip法で形質転換した場合は、問題なく軽質転換体が得られている。この子とを考慮すると、35Sプロモーターでドライブしたドミナントネガティブコンストラクトが再分化・シュート形成の際に何らかの悪影響を及ぼしているものと考えられた。したがって、リーフディスク法など再分化が必要な形質転換法では、コンストラクトをドライブするプロモーターに何らかの工夫が必要であると考えられた。クライマクテリック型果実の成熟制御は,エチレン合成や信号伝達に着目した形質転換体や薬剤に因るものであったが,非常に高い効果のため果実が十分に可食なレベルにならないなどの問題があった.そこで,この研究ではホルモンのクロストークに着目して,新しい制御技術の開発を試みた.JAZはエチレンとJAのクロストークのhub因子であり,候補として最適と考えられた.

そこで,果実作物であるメロンとトマトJAZ遺伝子をデータベースから抽出し,系統樹解析で分類した.JAZ1は果実成熟により急激に発現が低下し,また変異体・形質転換体の発現パターンからもJAZ1が果実成熟に関連している可能性があると考えられた.平成26年度は,トマトとメロンに於いてJAZ遺伝子の分類と発現解析を行い,候補遺伝子の効率的な絞り込みに至っており,ほぼ予定通り進んでいる.植物分子遺伝学1つの種に10前後存在するJAZであるが,本解析からJAZ1が最も果実成熟に関与している可能性が高いと考えられた.平成27年度はアラビドプシス,メロン,トマトのJAZ1の変異コンストラクトを作成し,アラビドプシスやトマトにて形質転換を行い,エチレン信号伝達への影響を調査する.また,トマトSRAデータやメロンのRNA-seqデータを元に,エチレンやJAシグナル伝達と果実成熟の関連を網羅的に解析し,新規の遺伝子の探索を行う.H25年度については,ユビキチン化サイトに着目して変異を導入し,機能への影響を検証する実験を行った.コンストラクトや形質転換体自体は得られているが,十分に検証を行えるレベルではなかった.また,この枯死が今回の変異導入によるものであるならば,今回の改変方法の効果が強すぎると言うことになる.このことは,変異導入については,JASドメインの欠失が最も現実的な手法で有り,それ以外の改変が非現実的であると言うことを示しているのかもしれない.従って,これらを考慮して条件検討など行い,十分な検証を行う必要があると考えられる.変異コンストラクトの実験以外にも,トマトやメロン果実のRNA-seqのデータを得ている.これまではJAZ1を対象に解析をおこなっているが,アラビでも12のJAZ遺伝子があり,エチレンに関連するのはJAZ1だけではないと考えられる.それらを検証するためにも,得られたデータの解析を行いたいと考えている.10近く存在するJAZ遺伝子であるが,候補遺伝子を効率よく1つに絞ることが出来たため,形質転換などの実験の規模を小さくすることが可能となり,平成26年度の予算を次年度に繰り越すことが出来た.引き続きユビキチン化サイトに変異を入れたコンストラクトを用いた実験を行う.前年度では本コンストラクトを入れた個体が枯死したことから,効果が強すぎ致死を誘発する変異である可能性もある.このことを考慮して,タバコやトマトからJAZ遺伝子を単離して,JASドメインを欠失させた従来の方法でのコンストラクトの作成と,アラビドプシスやトマトへの導入を検討している.RNA-seqのデータに関しては,前年度はデータを得ただけなので,H26年度は本格的な解析を行う.JAZ遺伝子のカタログ化は当然として,JAZに影響を受ける因子,JAホルモン関係の因子などホルモンのシグナル伝達全般について,解析を行いJAと成熟の関係について解析を行いたいと考えている.平成27年度は遺伝子組換えの外注を行う事で実験遂行の効率化をはかる.さらに,メロンに於いて多品種にわたるRNA-seq解析を追加し実験の規模を拡大することで,より詳細なデータを得る予定である.
デジタルポートフォリオを活用した教育実習の質の向上

平成13年度から千葉大学教育学部では教育実習の方法が変更され、3年次から実習が行われるようになった。平成13年度はその移行期で、3年次と4年次で実習を行ったので両学年の実習生のポートフォリオを作成した。以下は両年度にわたって作成を実施したときの報告である。ポートフォリオ作成実施校千葉市内公立小学校5校および千葉大学教育学部附属小学校作成時期および人数平成13年4月より平成14年10月小学校主専攻実習4週間3,4年生計20名作成の手続き教育実習生にポートフォリオ作成に必要なファイル、ポケットファイル、ポストイットを配布し、作成の手引き、実習目標、実習評価項目をもとに事前に説明会を開いた。実習中には訪問、観察をし、実習後に各自が作成したポートフォリオを見ながら検討会を開いた。実習校の指導教員はポートフォリオの作成には原則的には参加しなかった。13年度1それぞれの実習校において実習後ポートフォリオ検討会を開催した。そこで出された意見は次のようであった。(1)全ての記録がまとまっているので実習後に振り返るのは便利である。実習のいい思い出と反省の資料となる(2)実習中は授業準備、児童の指導が忙しく振り返りの時間が取れない。(3)収集する資料を限定する、収集の目的を明確にするなどの工夫が必要である。2作成したポートフォリオをスキャナーでデジタル化した。14年度3これらの意見および実践を参考にして14年度では、精錬実習に関わる内容をパーマネントポートフォリオとして再編成しデジタル化を試みた。4 1週間ごとに指導教師へポートフォリオレターを送りそれをデジタル化した。レターは実習生には好評であった。5実習生どうしの携帯電話のメールをパソコンの掲示板に乗せ実習生どうしの情報を共有することを企画したが、プライバシーの問題が起こる可能性があるので検討することにした。平成13年度は千葉大学教育学部では教育実習の方法を変更し、従来4年次で実習していたものを3年次に変更した。本年度はその移行期にあたり、3年次と4年次の学生が実習を行った。教育実習におけるポートフォリオの作成においても3年次および4年次学生で実施した。4年次の教育実習では千葉市内の公立小学校で4名の実習生を対象として実施した。3年次学生では附属小学校、千葉市内公立小学校2校に作成の協力を依頼した。それぞれの小学校で教育実習担当教員と学生にポートフォリオについての説明、作成方法、活用の方法を説明し、作成に関わる用品を配布した。実習中に訪問し作成過程の様子を見、疑問等に答えた。実習終了後、作成したポートフォリオ、実習記録簿をスキャナーでデジタル化した。また、学生とのポートフォリオ検討会を開催し、教育実習におけるポートフォリオの意義について話し合った。その結果として次のようなことが明らかになった。1.実習の全ての記録がまとまっているので実習全体を後で振り返ってみるのに非常に便利である。2.実習中は授業準備、生活指導など児童に関わり合うことが多くポートフォリオを使って振り返選っている時間がとれない。3.収集する資料を限定する、収集する目的を明確にする等の工夫が必要瀬ある。4.ポートフォリオ検討会を実習生同士で行うのがよい。5.パーマネントポートフォリオの作成は義務づけないとできない。6.デジタル化については内容を限定する、器機の整備など検討を要する問題がある。これらの問題を検討し来年度ではより一層の指導教員の協力のもとでデジタル化の方向を目指していく予定である。平成13年度は千葉大学教育学部では教育実習の方法を変更し、実習を3年次に実施するようにした。平成13年はその移行期にあたり,3年次と4年次で実習を行ったので両学年の実習生のポートフォリオを作成した。

ポートフォリオ作成実施校千葉市内の小学校5校および千葉大学教育学部附属小学校作成時期および人数平成13年4月より平成14年10月小学校主専攻実習4週間3,4年生計20名作成の手続き教育実習生にポートフォリオ作成に必要なファイル、ポケットファイル、ポストイットを配布し、作成の手引き、実習目標、実習評価項目をもとに事前に説明会を開いた。実習中に訪間、観察をし、実習後に作成したポートフォリオを見ながら検討会を開催した。13年度実習終了後ポートフォリオ検討会を各実習校毎に開催した。指導教師は参加しなかった。1作成したポートフォリオと実習記録簿をスキャナーでデジタル化した。2ポートフォリオ検討会を開催した。そこで出された意見(1)すべての記録がまとまっているので振り返るのは便利である。実習のいい思い出と反省の資料となった。(2)実習中は授業準備、児童の指導で忙しく振り返りの時間が取れない。(3)収集する資料を限定する、収集の目的を明確にするなどの工夫が必要である。3これらの意見を参考にして14年度では、パーマネントポートフォリオの作成とデジタル化を試みた。4 1週間ごとに指導教師へポートフォリオレターを送りそれをデジタル化した。レターは実習生には好評であった。5実習生同士の携帯電話のメールを掲示板に載せ情報を共有することを企画したが、プライバシーの問題が起こる可能性があることから、掲示板に乗せずに個人のホームページに書くことを企画したがまだ完成しでいない。
木造による高齢者用居住空間の空気環境が生理および心理に及ぼす影響

静岡市内の特別養護老人ホーム「竜爪園」を対象として、高齢者居住施設の居住性を検討した。当該施設は木造3棟およびRC造棟が隣接するため、それらの比較が可能である。木造各棟は小屋組架構方式・使用木材に違いがある。木造・RC造棟共用部分の視覚的刺激が心理に及ぼす影響を検討するために、予備知識を有さない学生を被験者として、視覚的印象をSD法で、感情プロフィールをPOMS短縮版で評価した。視覚的刺激として各棟内部の静止画を被験者に提示する方法により実験室的に行った。SD法では木造棟は暖かく安心であると評価されたが、木造の建物間あるいはRC造棟でも階により評価結果に差異が見られた。感情プロフィールについては総じて木造棟はRC造棟に比して負の感情が低く、活気感が高かった。昨年度実施した施設現場における評価結果と比較すると傾向に異なる部分も見られ、精度向上のためには、実験方法も含め更に検討が必要である。各棟共用部分における温熱環境を比較すると、夏期においては木造棟よりRC造棟の温度変動が大きく、冬期ではRC造棟の温度が低かった。相対湿度については、RC造棟は木造棟より総じて高く、その変動も大きかった。木造棟の電気空調、RC造棟のガス空調により使用された電力量・ガス流量を見ると、総じて木造棟の方がRC造棟より省エネルギの傾向にあった。木造棟はRC造棟に比して、少ないエネルギで容易に温湿度制御を行えることが示唆された。しかし、両者は空調・断熱等の仕様や床面積・気積等が異なるため、より詳細な検討が必要である。本研究により、木造棟はRC造棟と比較してより快適な居住空間を実現できる可能性が示され、それらの心理・生理への影響をある程度把握できることが明らかとなった。しかし、居住空間の物理的指標が心理・生理に及ぼす影響に関しては、実験方法も含め今後更なる検討が必要である。当該施設は隣接した木造3棟および鉄筋コンクリート(RC)造棟により構成されるため、構造・使用材料による比較が可能である。木造各棟は小屋組架構方式が異なり、室内に暴露された木材・木質材料の樹種および材積に違いがある。居住空間が心理に及ぼす影響を評価するために、学生を被験者として室内の視覚的印象をSD法にて評価した。視覚的印象は「明度/安心感」、「情緒/自然感」、「斬新/都会感」の3因子に分類された。RC造棟と比較して、木造棟では明るく開放的で安心でき、暖かく快適で、また面白みがあり、自然で健康的であるとの評価を得た。木造小屋組の違いでは、和小屋は古く田舎的であると、洋小屋は新しく都会的であると感じていた。室内の印象は内装材料や構工法により異なることが明らかとなった。各棟共用部分の温熱環境を測定したところ、温度・相対湿度とも木造棟とRC造棟に大きな差は見られなかった。温度に関しては暖房期および空調を使用しない期間において、木造棟に比してRC造棟は若干低い値を示した。湿度では冷房期および空調なしの時期で、木造よりRC造の変動がやや大きかった。施設内の空気質を検討するため、シックハウス原因物質や天然由来香気成分等について夏期および冬期に実態を調査した。使用木材や仕上げ塗布剤等から放散されるVOCと室内空気質との関係も検討した。何れの棟においても厚生労働省のガイドラインに示された化学物質の気中濃度は低く、良好な空気環境にあった。季節による成分構成に変化は見られなかった。木造棟では木材に由来する成分が検出されたが、エタノールは消毒剤、テルペン類は天然系仕上げ塗布剤に主として由来すると考えられた。以上より、木造による高齢者施設は、適切な設計を行うことにより良好な居住環境を実現できると考えられる。静岡市内の特別養護老人ホーム「竜爪園」を対象として,高齢者居住施設の居住性を検討した。当該施設は木造3棟およびRC造棟により構成され,構造・使用材料による比較が可能である。木造各棟は小屋組架構方式が異なり,使用された木材に違いがある。温熱環境の指標として,夏期暑熱時における各棟のWBGT(湿球黒球温度)およびPMV(予想平均申告)・日内変動を測定した。木造棟では弱めの空調制御により熱中症注意域前半のWBGTを維持しており,温度制御は比較的容易で,総じて快適であった。RC造棟では弱い空調制御を行なっていた早朝からWBGTは徐々に上昇し,空調を強めた午後に急激に低下した。RC造棟は,熱中症危険域の温度に達する恐れがあるため空調稼働が不可欠でるが,温度変化は大きく,温度制御が比較的困難であった。また,木造棟ではRC造棟に比して冷房機以外の温度が高く,RC造棟の相対湿度は振れ幅が総じて大きかった。居住空間が心理・生理に及ぼす影響を検討するために,学生を被験者として視覚的印象評価(SD法)・感情プロフィールテスト(POMS短縮版)の心理指標,唾液中アミラーゼ活性・血圧・心拍数の生理指標を測定した。SD法による3因子「安心/安定」・「単調/殺風景」・「斬新/都会」と感情プロフィール項目「緊張-不安」に有意差が見られた。木造棟は総じて安心で面白みがあり,古風な印象で,木造棟聞でも差が見られた。

RC造棟は都会的であるが不安で退屈な印象であった。感情プロフィールでは,総じて木造棟がRC造棟より負の感情が低く,活気感が高かった。一方,何れの生理指標においても木造棟とRC造棟で有意差は見られなかった。短時間で移動を含む測定の場合,木造とRC造による環境刺激は人の生理的変化に影響を及ぼさないと考えられ,更に検討が必要である。木造高齢者施設は,適切な設計により良好な居住環境を実現できると考えられる。静岡市内の特別養護老人ホーム「竜爪園」を対象として、高齢者居住施設の居住性を検討した。当該施設は木造3棟およびRC造棟が隣接するため、それらの比較が可能である。木造各棟は小屋組架構方式・使用木材に違いがある。木造・RC造棟共用部分の視覚的刺激が心理に及ぼす影響を検討するために、予備知識を有さない学生を被験者として、視覚的印象をSD法で、感情プロフィールをPOMS短縮版で評価した。視覚的刺激として各棟内部の静止画を被験者に提示する方法により実験室的に行った。SD法では木造棟は暖かく安心であると評価されたが、木造の建物間あるいはRC造棟でも階により評価結果に差異が見られた。感情プロフィールについては総じて木造棟はRC造棟に比して負の感情が低く、活気感が高かった。昨年度実施した施設現場における評価結果と比較すると傾向に異なる部分も見られ、精度向上のためには、実験方法も含め更に検討が必要である。各棟共用部分における温熱環境を比較すると、夏期においては木造棟よりRC造棟の温度変動が大きく、冬期ではRC造棟の温度が低かった。相対湿度については、RC造棟は木造棟より総じて高く、その変動も大きかった。木造棟の電気空調、RC造棟のガス空調により使用された電力量・ガス流量を見ると、総じて木造棟の方がRC造棟より省エネルギの傾向にあった。木造棟はRC造棟に比して、少ないエネルギで容易に温湿度制御を行えることが示唆された。しかし、両者は空調・断熱等の仕様や床面積・気積等が異なるため、より詳細な検討が必要である。本研究により、木造棟はRC造棟と比較してより快適な居住空間を実現できる可能性が示され、それらの心理・生理への影響をある程度把握できることが明らかとなった。しかし、居住空間の物理的指標が心理・生理に及ぼす影響に関しては、実験方法も含め今後更なる検討が必要である。