hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
新生児エリテマトーデスの発症要因に関する研究

(2)母親のHLA classII遺伝子のプロフィルにより、子供の症状(皮膚症状、先天性心ブロック、あるいは無症状)がある程度予測可能である(J Invest Dermatol 108:881-885,1997).0301/DQA1^*0501/DQB1^*0201)とは異なっている。HLAとの相関は、抗体のプロフィルと関連があり、SLE、シェーグレン症候群あるいは無症状などの臨床像とは関連しない(Arthritis Rheum, 41:927-934,1998).2シェーグレン症候群との関連NLE児の母親は、シェーグレン症候群の臓器特異抗原であるα-120kdfodrinに対するIgG抗体が陽性である(J Invest Dermatol 111:1189-1192,1198)ことから、NLEと母親のシェーグレン症候群との関連が明確に示された.3予防と治療NLE児出産のリスクの高い妊婦(既往歴、抗Ro/SSA高値、抗52kd Ro/SSA陽性)に、妊娠初期からステロイドを予防投与することにより、先天性心ブロック児出産を予防できる可能性がある(2)母親のHLA classII遺伝子のプロフィルにより、子供の症状(皮膚症状、先天性心ブロック、あるいは無症状)がある程度予測可能である(J Invest Dermatol 108:881-885,1997).0301/DQA1^*0501/DQB1^*0201)とは異なっている。HLAとの相関は、抗体のプロフィルと関連があり、SLE、シェーグレン症候群あるいは無症状などの臨床像とは関連しない(Arthritis Rheum, 41:927-934,1998).2シェーグレン症候群との関連NLE児の母親は、シェーグレン症候群の臓器特異抗原であるα-120kdfodrinに対するIgG抗体が陽性である(J Invest Dermatol 111:1189-1192,1198)ことから、NLEと母親のシェーグレン症候群との関連が明確に示された.3予防と治療娠初期からステロイドを予防投与することにより、先天性心ブロック児出産を予防できる可能性がある2母親のHLA class II遺伝子のプロフィルにより、子供の症状(皮膚症状、先天性心ブロック、あるいは無症状)がある程度予測可能である(J Invest Dermatol 108:881-885,1997)。(2)母親のHLA classII遺伝子のプロフィルにより、子供の症状(皮膚症状、先天性心ブロック、あるいは無症状)がある程度予測可能である(J Invest Dermatol 108:881-885,1997)。2シエーグレン症候群との関連NLE児の母親は、シェーグレン症候群の臓器特異抗原であるα-120kdfodrinに対するIgG抗体が陽性である(J Invest Dermatol 111:1189-1192,1998)ことから、NLEと母親のシェーグレン症候群との関連が明確に示された.3予防と治療NLE児出産のリスクの高い妊婦(既往歴,抗Ro/SSA高値,抗52kd Ro/SSA陽性)に、妊娠初期からステロイドを予防投与することにより、先天性心ブロック児出産を予防できる可能性がある
光制御可能な反応場を目指した金属ナノ粒子・フォトクロミック分子複合体の創生

本研究では、金属ナノ粒子がプラズモン増強効果により光化学反応を促進する反応場として機能することを示し、最終的には光による制御が可能な新しい反応場を創生することを目指して、フォトクロミックジアリールエテンポリマーで覆われた金属ナノ粒子(Au-poly(DE))を合成し、その光学特性の評価を行っている。平成23年度は、金ナノ粒子のプラズモン増強効果に大きな影響を及ぼすと考えられる粒子の粒径、ナノ粒子表面からジアリールエテンまでの距離、ジアリールエテンの分子構造および照射波長の影響を実験的に明らかにすることを目的とし、粒径やポリマーの構造、ジアリールエテン分子の構造などを制御したAu-poly(DE)を合成し、様々な照射波長下における光開環反応に対するプラズモン増強効果を解析した。その結果、より大きな金ナノ粒子のより近傍において大きなプラズモン増強効果が観測された。一方、プラズモン増強効果はジアリールエテンの分子構造や光学特性には依存せず、金ナノ粒子のプラズモン共鳴バンドから離れた長波長側の光を用いた際に最も大きなプラズモン増強効果が観測された。これは金ナノ粒子のプラズモン共鳴バンドの形状から予想される傾向と異なっており、金ナノ粒子のプラズモン増強効果が特徴的な波長依存性を示すことが明らかとなった。また、金ナノ粒子を銀ナノ粒子置き換えたAg-poly(DE)を合成する手法を確立し、得られたAg-poly(DE)を用いて銀ナノ粒子のプラズモン増強効果の解析を行った。その結果、金ナノ粒子よりも顕著なプラズモン増強効果が観測され、例えば直径約19nmの銀ナノ粒子において450nmの光を照射した際には、粒子の表面から約8nmの範囲において6倍反応速度が増大していると見なせることが明らかとなった、また、銀ナノ粒子が吸収する光の量と反応速度が比例関係にあり、金ナノ粒子とは異なり、プラズモン増強効果が単純にナノ粒子が吸収した光の量のみに依存することが示唆された。以上の成果により、金属ナノ粒子のプラズモン増強効果における新たな知見が得られた。本研究では、金属ナノ粒子が光化学反応を促進する反応場として機能することを示し、最終的に光による制御が可能な新しい反応場を創生することを目指して、フォトクロミックジアリールエテンポリマーと金属(金および銀)ナノ粒子との複合体を合成し、その光学特性の評価を行っている。平成21年度は、まず金の部分の粒径が制御された複合体の合成方法を確立し、ジアリールエテンの光反応に伴って金属ナノ粒子の光学特性が粒径に依存して可逆的に変化することが明らかにした。この現象は金ナノ粒子の光学特性を光により制御できることを示しており、目的とする光による制御が可能な反応場へと応用することができると考えられる。また、金属ナノ粒子周辺におけるジアリールエテンの光異性化反応を追跡した結果、粒子近傍において反応速度が増強(促進)されていることが示唆された。数値的なシミュレーションにより溶液中における反応を詳細に解析したところ、粒子表面から数ナノメートルの範囲においてジアリールエテンの反応が25倍程度増強されていることが明らかとなった。同様に、ジアリールエテンポリマーと銀ナノ粒子との複合体を新たに合成し解析を行った結果、粒子近傍において最大約12倍の反応の増強が観測された。これにより、金および銀ナノ粒子近傍における光反応の増強を実験的に明らかにし、その解析方法を確立することができた。さらに、ジアリールエテンの構造と金属ナノ粒子による光反応の増強との関連性を調べるために、種々の構造のジアリールエテンを有するポリマーの合成に着手した。上記実験においては光により青色に着色するジアリールエテンを用いていたが、新たに赤色や黄色に着色する新規ポリマーの合成に成功した。平成22年度はこれらの新たに得られたポリマーと金属ナノ粒子との複合体を合成し、その光学特性および反応の増強を評価する予定である本研究では、金属ナノ粒子が光化学反応を促進する反応場として機能することを示し、最終的には光による制御が可能な新しい反応場を創生することを目指して、フォトクロミックジアリールエテンポリマーで覆われた金属ナノ粒子を合成し、その光学特性の評価を行っている。平成22年度は平成21年度に引き続き、理論的シミュレーションも交えながら金ナノ粒子近傍におけるジアリールエテンの光開環反応の促進(増強効果)について詳細に検討を行い、成果を学術論文として発表した。この増強効果における照射波長依存性を検討するために、種々の波長領域に吸収を有するジアリールエテンポリマーで覆われた金ナノ粒子を合成し、その増強効果と照射波長との相関関係を検討した。その結果、照射波長が長波長であるほど増強効果が大きくなり、金ナノ粒子の局在型表面プラズモンバンドの形状から予想される傾向とは大きく異なっていることが明らかとなった。詳細な原因は明らかではないが、金のバンド間遷移が関わっていると考えられる。合成した各種ジアリールエテンポリマーは新規化合物であるため、光学特性の評価を行い、フルカラー表示材料を見据えた研究も行っている。また、これまでに用いてきた金ナノ粒子の合成方法についてさらなる知見を得るために、被覆分子として種々のポリマー鎖長を有するポリスチレンを用いて金ナノ粒子の合成を行った。その結果、ポリマー鎖長によらず対応するポリスチレン被覆金ナノ粒子が得られたが、被覆ポリスチレンの数平均分子量が一定以下の場合は溶媒に分散しないことが明らかとなった。

熱重量分析などからポリマーの被覆密度を概算したところ、溶媒に不溶な粒子ではポリスチレンが密に詰まっており、溶媒が入り込めないために不溶となっている可能性が示された。これらに加え、リンゴ酸を用いた新規金ナノ粒子合成法を確立し、粒径約40nmの粒子が簡便に合成できるようになった。本研究では、金属ナノ粒子がプラズモン増強効果により光化学反応を促進する反応場として機能することを示し、最終的には光による制御が可能な新しい反応場を創生することを目指して、フォトクロミックジアリールエテンポリマーで覆われた金属ナノ粒子(Au-poly(DE))を合成し、その光学特性の評価を行っている。平成23年度は、金ナノ粒子のプラズモン増強効果に大きな影響を及ぼすと考えられる粒子の粒径、ナノ粒子表面からジアリールエテンまでの距離、ジアリールエテンの分子構造および照射波長の影響を実験的に明らかにすることを目的とし、粒径やポリマーの構造、ジアリールエテン分子の構造などを制御したAu-poly(DE)を合成し、様々な照射波長下における光開環反応に対するプラズモン増強効果を解析した。その結果、より大きな金ナノ粒子のより近傍において大きなプラズモン増強効果が観測された。一方、プラズモン増強効果はジアリールエテンの分子構造や光学特性には依存せず、金ナノ粒子のプラズモン共鳴バンドから離れた長波長側の光を用いた際に最も大きなプラズモン増強効果が観測された。これは金ナノ粒子のプラズモン共鳴バンドの形状から予想される傾向と異なっており、金ナノ粒子のプラズモン増強効果が特徴的な波長依存性を示すことが明らかとなった。また、金ナノ粒子を銀ナノ粒子置き換えたAg-poly(DE)を合成する手法を確立し、得られたAg-poly(DE)を用いて銀ナノ粒子のプラズモン増強効果の解析を行った。その結果、金ナノ粒子よりも顕著なプラズモン増強効果が観測され、例えば直径約19nmの銀ナノ粒子において450nmの光を照射した際には、粒子の表面から約8nmの範囲において6倍反応速度が増大していると見なせることが明らかとなった、また、銀ナノ粒子が吸収する光の量と反応速度が比例関係にあり、金ナノ粒子とは異なり、プラズモン増強効果が単純にナノ粒子が吸収した光の量のみに依存することが示唆された。以上の成果により、金属ナノ粒子のプラズモン増強効果における新たな知見が得られた。
腸管内栄養状況を変える腸内細菌の生存戦略と糖尿病発症との関連性の解明

ショ糖の過剰な摂取は、一過的な食後高血糖を引き起こす。この食後高血糖は、肥満や糖尿病などの生活習慣病の原因となる。我々は、カイコのショ糖摂取後の血糖値の上昇を抑制する活性の有無を指標に、食後高血糖を抑制する腸内細菌株の同定に成功している。しかし、この腸内細菌が宿主の食後高血糖を抑制する分子機構は不明である。本研究の目的は、腸管内栄養状況を変える腸内細菌の生存戦略の解明とその腸内細菌の糖尿病発症への影響を明らかにすることである。平成29年度において我々は、腸内細菌YM0831株がグルコースの摂取による血糖値の上昇を抑制すること、カイコの腸管グルコース輸送実験系を用いて腸内細菌YM0831株がそのグルコース輸送を阻害することを見出した。さらに、腸内細菌YM0831株がヒト腸管培養細胞であるCaco-2細胞におけるグルコース取り込み活性を阻害することも明らかにした。また、トランスポゾンによる遺伝子変異株ライブラリーを作成し、Caco-2細胞のグルコース取り込みに対する阻害活性が低下した腸内細菌YM0831株由来の変異株を得ることに成功した。平成30年度において我々は、Caco-2細胞のグルコース取り込みに対する阻害活性が低下した腸内細菌YM0831株由来の変異株において、腸内細菌のマンノースの代謝に関わる遺伝子を複数有するオペロンのプロモーター領域にトランスポゾンが挿入されていることを見出した。またRT-PCR法により、腸内細菌YM0831株由来の変異株において、そのオペロンに含まれる遺伝子群の発現が低下していることを見出した。以上の結果から、腸内細菌YM0831株がマンノースの代謝経路を介して宿主腸管内のグルコースの取り込みを抑制することにより、宿主の血糖値の上昇を抑制することが示唆された。平成30年度の研究計画で予定していたCaco-2細胞のグルコース取り込みに対する阻害活性が低下した腸内細菌YM0831株由来の変異株のトランスポゾンの挿入部位の同定に成功し、マンノース代謝に関わる遺伝子群の発現が低下していることを見出せた。すなわち、平成30年度の研究計画をおおむね達成することができている。平成31年度では、Caco-2細胞のグルコース取り込みに対する阻害活性が低下した腸内細菌YM0831株由来の変異株における哺乳動物における効果を検証する。また、腸内細菌YM0831株からCaco-2細胞のグルコース取り込みに対する阻害活性分子の精製を行う。この阻害分子の精製においては、野生株とCaco-2細胞のグルコース取り込みに対する阻害活性が低下した腸内細菌YM0831株由来の変異株の両方を用いて、この変異株で量が低下している活性分子の精製を目指す。ショ糖の摂取による高血糖は、肥満や糖尿病を引き起こす原因となる。これまでに我々は、独自に開発したカイコの実験系を用いてショ糖摂取後の血糖値の上昇を抑制する腸内細菌株を同定している。この腸内細菌は宿主の腸管内で糖の吸収を阻害すると考えられるが、その作用機序や腸管内栄養状況に与える影響は不明である。本研究により、腸内細菌が宿主の因子に作用して腸内栄養状況を変えて優先的に増殖する機構の解明につながると期待できる。さらに、宿主の腸管内で糖の吸収を阻害する腸内細菌による糖尿病発症の抑制効果が期待できる。我々がスクリーニングにより同定した腸内細菌YM0831株は、カイコを用いた実験系におけるショ糖の摂取による血糖上昇以外にも、グルコースの摂取による血糖値の上昇を抑制することがわかった。次に、カイコの摘出腸管を用いたex vivoの腸管グルコース輸送実験系を確立し、腸内細菌YM0831株がそのグルコース輸送を阻害することを見出した。以上の結果から、腸内細菌YM0831株が宿主腸管内のグルコースの取り込みを抑制することにより、宿主の血糖値の上昇を抑制することが示唆された。このことから、この腸内細菌YM0831株が宿主腸管内のグルコース濃度の上昇という腸管内栄養状況を変える効果がある菌株であることが考えられる。平成29年度の計画にあった腸内細菌YM0831株の宿主血糖上昇抑制における作用機序の一つとして、宿主腸管細胞のグルコース取り込みの阻害であることが明らかにできた。また、計画どおり、トランスポゾンを用いた遺伝子変異株ライブラリーの作成と、その変異株ライブラリーを用いたスクリーニングにより、Caco-2細胞のグルコース取り込みに対する阻害活性が低下した腸内細菌YM0831株由来の変異株を得ることに成功した。

平成29年度において我々は、腸内細菌YM0831株がグルコースの摂取による血糖値の上昇を抑制すること、カイコの腸管グルコース輸送実験系を用いて腸内細菌YM0831株がそのグルコース輸送を阻害することを見出した。さらに、腸内細菌YM0831株がヒト腸管培養細胞であるCaco-2細胞におけるグルコース取り込み活性を阻害することも明らかにした。また、トランスポゾンによる遺伝子変異株ライブラリーを作成し、Caco-2細胞のグルコース取り込みに対する阻害活性が低下した腸内細菌YM0831株由来の変異株を得ることに成功した。平成30年度において我々は、Caco-2細胞のグルコース取り込みに対する阻害活性が低下した腸内細菌YM0831株由来の変異株において、腸内細菌のマンノースの代謝に関わる遺伝子を複数有するオペロンのプロモーター領域にトランスポゾンが挿入されていることを見出した。またRT-PCR法により、腸内細菌YM0831株由来の変異株において、そのオペロンに含まれる遺伝子群の発現が低下していることを見出した。以上の結果から、腸内細菌YM0831株がマンノースの代謝経路を介して宿主腸管内のグルコースの取り込みを抑制することにより、宿主の血糖値の上昇を抑制することが示唆された。平成30年度の研究計画で予定していたCaco-2細胞のグルコース取り込みに対する阻害活性が低下した腸内細菌YM0831株由来の変異株のトランスポゾンの挿入部位の同定に成功し、マンノース代謝に関わる遺伝子群の発現が低下していることを見出せた。すなわち、平成30年度の研究計画をおおむね達成することができている。平成30年度では、Caco-2細胞のグルコース取り込みに対する阻害活性が低下した腸内細菌YM0831株由来の変異株の遺伝子変異部位の同定と責任遺伝子の同定を行う。また、腸内細菌YM0831株からCaco-2細胞のグルコース取り込みに対する阻害活性を指標に責任分子の精製を行う。遺伝学的な解析と生化学的解析の結果を統合して、腸内細菌YM0831株がどの遺伝子の発現を介してどういう分子を生産することにより宿主の腸管のグルコース取り込みを阻害するかを明らかにする。平成31年度では、Caco-2細胞のグルコース取り込みに対する阻害活性が低下した腸内細菌YM0831株由来の変異株における哺乳動物における効果を検証する。また、腸内細菌YM0831株からCaco-2細胞のグルコース取り込みに対する阻害活性分子の精製を行う。この阻害分子の精製においては、野生株とCaco-2細胞のグルコース取り込みに対する阻害活性が低下した腸内細菌YM0831株由来の変異株の両方を用いて、この変異株で量が低下している活性分子の精製を目指す。平成29年度の研究計画の内、哺乳動物を用いた試験を行う予定であったが、カイコとヒト腸管培養細胞を用いた検討からいくつか知見が得られたので、そのシステムを用いて作用機序の予測を行うことに集中した。よって、哺乳動物を用いた実験に使用する予定の資金を平成29年度に使用しなかった。また、平成30年度は、活性物質の精製が計画されているが、構造決定のための質量分析やNMR解析を委託する場合の資金もあったほうがいいと考えて、繰り越すこととした。
ウエルシュ菌β毒素の細胞膜マイクロドメインに対する作用、及び、構造解析

ウエルシュ菌β毒素がHL-60細胞に対し膜障害作用を示すことか、他リンパ球系細胞としてヒト組織球性リンパ腫細胞のU937、急性単球性白血病細胞THP-1、T細胞様の性質を示すMOLT-4、B細胞様の性質を示すBALL-1について検討した。感受性の違いは認められるが、いずれの細胞も本毒素により膨化をひきおこし、さらに、毒素感受性に依存して細胞膜ラフトにβ毒素オリゴマーのバンドが認められた。一方、非リンパ球系細胞では、いかなる細胞毒性もマウスにおいて認められず、オリゴマーの形成も認められなかった。従って、β毒素は、免疫系の細胞に作用すると推察される。次に、本毒素による培養細胞からのサイトカイン遊離作用を検討するため、本毒素をHL-60細胞に作用させると、TNFαやIL-1βの遊離は約1時間後から認められ、4時間後にピークとなった。これらの結果から、β毒素は、リンパ球系細胞に作用してサイトカインの遊離を示すことが判明した。そこで、in vivoにおけるβ毒素の作用を検討するため、マウスにヘルパーT細胞に作用してサイトカインの遊離を抑制するタクロリムス(2.5mg/kg)を2日間i.p.投与後、β毒素を投与して致死活性を調べると、未処理群と比較して、本毒素による致死時間が有意に遅延された。次に、β毒素投与後のマウス血中のTNFα量を測定すると、TNFαは、毒素投与後約1時間でピークとなり、さらに、この遊離作用は、タクロリムスの前投与で有意に阻害された。すなわち、本毒素は、免疫系細胞に作用し、TNFαなどのサイトカインの遊離を促進し、致死を誘導すると推察される。以上からβ毒素は、免疫系細胞膜上のラフトに結合後、7量体のオリゴマーを形成し、種々の炎症性サイトカインの遊離を促進させ、致死活性を惹起することが明らかとなったウエルシュ菌β毒素がHL-60細胞に対し膜障害作用を示すことか、他リンパ球系細胞としてヒト組織球性リンパ腫細胞のU937、急性単球性白血病細胞THP-1、T細胞様の性質を示すMOLT-4、B細胞様の性質を示すBALL-1について検討した。以上からβ毒素は、免疫系細胞膜上のラフトに結合後、7量体のオリゴマーを形成し、種々の炎症性サイトカインの遊離を促進させ、致死活性を惹起することが明らかとなったウエルシュ菌β毒素の細胞への作用を明らかにするため、本毒素がヒト白血病由来のHL60細胞に特異的に作用することから、本毒素の特異的レセプターが細胞表面に存在すると考えた。最近、細胞膜に存在するマイクロドメイン(ラフト)が膜を介した生物機能発現に重要であると報告されている。そこで、β毒素がHL60細胞膜のマイクロドメインに結合して作用を発揮するのかどうかを検討するため、細胞と[^<32>P]-ラベルβ毒素をインキュベーション後、ショ糖不連続密度超遠心法で膜を分画しSDS-PAGEとオートラジオグラフで解析すると、15と30分処理ではラフト分画に毒素の7量体のオリゴマーが認められ、60分では毒素のバンドが減少した。この結果、本毒素は今回初めて細胞膜ラフトに結合することが明らかとなり、さらに、本毒素は、ブドウ球菌α毒素と高いアミノ配列の相同性を示すことから、本毒素もオリゴマーを形成する可能性が推察されていたが、本毒素は感受性細胞膜上でオリゴマーを形成することが初めて明らかとなった。次に、本毒素の作用とラフトの関係をさらに明らかにするため、ラフトからコレステロールを選択的に除去するMβCDでHL-60細胞を処理すると、膜のコレステロール量が有意に減少しこの条件下で本毒素による細胞毒性と細胞からのK^+イオン遊離作用が抑制され、MβCD処理細胞にコレステロールを再添加すると膜のコレステロール量が回復し、細胞毒性も認められた。以上の結果かから、β毒素は、HL60細胞膜のラフトに存在するレセプターに結合し、7量体のオリゴマーを形成し細胞を刺激して細胞障害活性を示すことが判明した。

ウエルシュ菌β毒素がHL-60細胞にの細胞に対する作用を明らかにするため、β毒素による培養細胞からのサイトカイン遊離作用を検討した。本毒素をHL-60細胞に作用させると、TNFαやIL-1βの遊離は約1時間後から認められ、4時間後にピークとなった。さらに、毒素によるHL-60細胞からの種々のサイトカインのmRNAの発現量を測定すると、TNFαやIL-1βのmRNA量の発現増加が認められた。これらの結果から、β毒素は、HL-60細胞に作用してmRNAの発現によりサイトカインの遊離を促進することが判明した。次に本毒素の他のリンパ球系細胞に対する作用としてヒト組織球性リンパ腫細胞U937、急性単球性白血病細胞THP-1、T細胞様の性質を示すMOLT-4、B細胞様の性質を示すBALL-1について検討した。感受性の違いは認められるが、いずれの細胞も本毒素により膨化をひきおこし、さらに、毒素感受性に依存して細胞膜ラフトにβ毒素オリゴマーのバンドが認められた。一方、非リンパ球系細胞では、いかなる細胞毒性もマウスにおいて認められず、オリゴマーの形成も認められなかった。従って、β毒素は、免疫系の細胞に作用すると推察される。次に、in vivoにおけるβ毒素の作用を検討するため、マウスにヘルパーT細胞に作用してサイトカインの遊離を抑制するタクロリムス(2.5mg/kg)を2日間i.p.投与後、β毒素を投与して致死活性を調べると、未処理群と比較して、本毒素による致死時間が有意に遅延された。さらに、β毒素投与後のマウス血中のTNFα量を測定すると、TNFαは、毒素投与後約1時間でピークとなり、さらに、この遊離作用は、タクロリムスの前投与で有意に阻害された。すなわち、本毒素は、免疫系細胞に作用し、TNFαなどのサイトカインの遊離を促進し、致死を誘導すると推察される。以上からβ毒素は、免疫系細胞膜上のラフトに結合後、7量体のオリゴマーを形成し、種々の炎症性サイトカインの遊離を促進させ、致死活性を惹起することが明らかとなった。
常磁性マイスナー効果の研究

本研究の目的は、まず、我々のグループにおいて以前に観測されたLa_2CuO_<4+δ>の常磁性マイスナー効果と思われる現象を確認し、その原因を追究すること、また、s波超伝導体のNb(板状)でも常磁性マイスナー効果と同じような現象が報告されており、これを確認すること、そしてこの原因についても追究することである。まず、La_2CuO_<4+δ>については、電極酸化法を用いてさらにδを増加させることができた。この試料については、他のグループの文献で得られているように、転移温度が約45Kの超伝導体が得られた。しかし、常磁性マイスナー効果と思われる現象は今のところ見つかっていない。また、100barの高圧酸素処理して作成された板状の試料に、その面に垂直に磁場をかけ、磁場中冷却を行うと、転移温度より少し低温で一度少しだけ常磁性側に向かうというデータが得られた。このデータは再現性もあり、現在、d波からくる常磁性マイスナー効果に起因するのか、後に示すNbに表れる常磁性と同じ原因によるものか、また、高温超伝導体特有の磁束の融解に関係しているのか、等、原因を追究しているところである。Nbについては、他のグループが報告しているように、本研究においても常磁性マイスナー効果と同じような現象が、観測された。Nbの表面を研磨すると、これも他のグループの報告通り、この現象は抑えられた。また、高温でアニールしても、抑えられた。このことから、Nbの表面の磁束のピン止めが重要であると考えられている。
サブ・オングスローム波長でのＸＦＥＬのフル・コヒーレント化の研究

X線領域のレーザ光が発生可能なFELにおいて、単色性と単パルス性(時間的にシングルモード)に優れたシードFELの技法についての研究を行った。FELのフル・コヒーレント化のための研究である。まず、ラジアル偏光レーザを用いたシードFELの検討を行った。次に、シード光源となるラジアル偏光・高次高調波の発生を試みた。また、高度なシードFELに必要な基礎技術であるシードレーザと電子ビームのタイミングモニターを構築した。X線領域のレーザ出力が可能な自由電子レーザ(FEL)において、出力のフル・コヒーレンス化を行うための技術研究を実施した。FELのフル・コヒーレント化のために、電子ビームに外部からレーザ光を重ねて変調を与える。本研究では、ラジアル偏光の外部レーザ光源を用いた新しいシードFELの技法開発を目的としている。昨年度にラジアル偏光レーザと電子ビームを重ねて変調を与える手法について検討をした。そこで、当初構想の方法では所望の変調を与えることが困難であることがわかり、新しい構成を考案した。本年度は、キー技術の1つであるラジアル偏光・高次高調波の生成を引き続き行った。具体的には、昨年度実施した基本波ラジアル偏光レーザ光源から、ラジアル偏光の高調波の生成を試みた。基本波ラジアル偏光レーザは波長800nmの超短パルスTi:Sapphireレーザ光を、1/2波長板の角度を8パターンにずらして配置した特殊光学素子を通すことにより生成した。横モードにおいて、ビーム軸に対して軸対称に位相を半波長ずらすことにより、ラジアル偏光とした。この光源を集光して気体を非線形媒質として高調波の発生を確認した。ラジアル偏光の高次高調波の検証を確実に行うため低次の高調波を対象にした。波長266nmである3次高調波を生成し、ラジアル偏光であるかその偏光特性を調べた。しかしながら、ラジアル偏光・高次高調波を確認することができていない。これは、集光点において望まない非線形現象が起こっているためであると考えている。シミュレーションによる検討においては、生成が可能であることが検証出来ている。THzからX線までの広範囲でのレーザ出力が可能な自由電子レーザ(FEL)において、出力のフル・コヒーレント化を行うための技術研究を実施している。現状のFELは、SASE光と呼ばれ高い空間コヒーレンスを有するが、時間コヒーレンスは制限されている。コヒーレント化のためには、FELの電子ビームに、外部からのレーザ光を重ねて一定の変調を与えるシードFELの技術が必要である。具体的には、ラジアル偏光・シード光源を用いたシードFELの検討を行なっている。ラジアル偏光・シードFELは、ラジアル偏光シード光を集光したスポットに出来るZ偏光電場により、低エネルギー電子バンチに対して、エネルギー変調を与える。その後、その電子バンチを高エネルギーに加速するとともにバンチ圧縮することにより、このエネルギー変調を密度変調へ変換し圧縮する。この技法により、シード光源よりも桁違いに短い波長のシードFELを実現する。現在までに、以下の研究項目を実施している。ラジアル偏光シード光による、電子バンチへのエネルギー変調を加える技法について、シミュレーションによる検討を実施し、実現可能な1つの技法を考案した。これにより、ラジアル偏光シード・FELが可能であることが確認できた。また、ラジアル偏光シード光を生成するための、基本波ラジアル偏光・高エネルギーレーザ光源を立ち上げた。そして、この基本波光源を用いて、ラジアル偏光・高次高調波の生成を試みている。世界でもラジアル偏光・高次高調波を生成した報告はまだなく、この光源の生成が本研究の最大のポイントである。並行して、シードFELに重要な電子バンチとシード光源との同期技術の研究を積み重ねており、直線偏光シード・FELにおいてシーディングの成功確率が、従来の0.3%から25%へ向上した。同期精度の向上により、ラジアル偏光シード・FELの実証試験の確度が向上する。申請時の計画通りに1年目は、遂行できており、研究を通しての達成度は、40%である。ラジアル偏光シード・FELのシミュレーションによる検討を行い、Z偏光電場によりフル・コヒーレント化に必要なエネルギー変調が得られることが確認できた。しかし、申請当初計画していたシード光と電子ビームを同軸で入射し、重ね合わせることでは、十分なエネルギー変調が得られないことが判明した。シード光の位相速度と電子バンチの速度を合わせるために、電子ビームが偏向している箇所でシード光と電子ビームの重ねる方法を考案した。基本波ラジアル偏光・高エネルギーレーザ光源を制作した。基本波ラジアル偏光生成のために、1/2波長板の角度を8パターンにずらした特殊光学素子を製作した。ダメージ試験を行い、本研究に耐えうる有効径20mmの光学素子とした。

この素子と直線偏光の超短パルスTi:Sapphireレーザシステムを用いて、パルスエネルギー1mJ、パルス幅50fsの波長800nmの基本波ラジアル偏光光源を実現した。このラジアル偏光光源を用いて、ラジアル偏光・高次高調波の生成の実験を行なっている。ラジアル偏光光源をArガス中で集光することにより、基本波と同じ偏光成分の高次高調波の実現を目指している。シミュレーションでは生成可能なことが確認できている。しかしながら、生成された高調波は、ラジアル偏光ではなく、ランダム偏光で現れている。原因を調査中である。シードFELに重要な技術の研究、実施実績を重ねている。従来の直線偏光シード・FELの特性向上化を行った。特に、シードFELと同時に、シード光源と電子バンチの到達時間をEOサンプリング法により測定し、タイミング制御を行うことにより、シードFELの成功率が、従来の0.3%から25%へ向上した。ラジアル偏光シード・FELの実証試験を実施する際のキー技術が蓄積できている。現在までに、シミュレーションにより、ラジアル偏光シード・FELを実現しうる1つの構成案ができた。引き続き、更に効率の良い方法が無いか、他の構成案の検討を続ける。そして、効率よくシードが行える方法を決定する。並行して進めているラジアル偏光・高次高調波の生成結果をもとにし、ラジアル偏光シード・FELの実証実験を実施するための設計・シミュレーションを行う。また、気体を非線形媒質とした、ラジアル偏光・高次高調波の生成を行う。現状で、ラジアル偏光・基本波からラジアル偏光の高調波の発生を実験により確認できていない。今までに、ラジアル偏光・高次高調波を生成した報告は世界でもない。このラジアル偏光・高次高調波の生成が本課題の最も難しい研究課題である。高強度のレーザを集光すると、それ自身の高強度場により、多くの非線現象が起こり所望のラジアル偏光が生成されない。シミュレーションと実験の結果を合わせて評価して、問題の解析を行う。そして、ガスセル中での基本波の集光状態を最適化し、ラジアル偏光・高次高調波の生成を目指す。申請時においては、ラジアル偏光シード・FELの実証試験をSPring-8のSCSS試験加速器で行うことを検討していた。しかしながら、SCSS試験加速器が平成25年度5月中に停止することが決まり、使用できなくなった。他施設において、実証試験を行うことを模索する。SPring-8サイト内には、その他、入射器を研究する施設などもあるため、それらの使用も検討し、本研究の実行を行う。実証試験のために、キー項目であるラジアル偏光・高次高調波の生成を最優先で行う。平成25年度は、ラジアル偏光・基本波の立ち上げを、保有の物品を有効に活用することで想定よりも安価に研究が進められ、研究費の繰越金が発生した。また、24年度は本務業務の都合により、想定をした旅費を執行することができなかった。本繰越金は、現在直面しているラジアル偏光・高次高調波が実現できない問題解決のために使用する。まだ、この問題の原因はわかっていない。想定される全ての要因に対処できるように、実験素子の購入を行う。
新古典輸送理論における有限バナナ幅効果の研究

本研究の主な目的は,ρ_p/L<<1,ρ_p/r<<1(ポロイダルラーマー半径ρ_ρ,勾配のスケール長L,磁気軸から磁気面までの距離r)の条件の成り立たない領域へ新古典輸送理論を拡張することにあり,以下のような研究を行った.1.無衝突領域にあるトカマクプラズマにおいては,ρ_ρ/r<<1の仮定が破れる磁気軸近傍では有限バナナ幅効果が重要になる.この有限バナナ幅効果を取り入れ,磁気軸上の新古典輸送を簡単に記述する理論を提唱した.また,この理論より求まる磁気軸上の輸送係数と,r>>ρ_pの領域で成り立つ従来の新古典輸送係数とを簡単に補間する方法を提唱し,これを用いて磁気軸を含めたプラズマの全領域で使える輸送係数の表式を求めた.核反応で生成されるアルファー粒子に対しても同様の方法を用いてブートストラップ電流の解析的な表式を求めた.有限バナナ幅効果を考慮すると,ブートストラップ電流のみでつくるトカマク平衡が可能になる.この平衡が存在するための条件やその性質についても調べた.2.急峻な密度勾配や圧力勾配が存在するときのエネルギー輸送を調べ次のような研究を行った.(1)一様磁場の中での,磁場を横切るエネルギー束Qと密度,圧力との間の非局所的な輸送方程式を求めた.また,簡単な密度勾配,圧力勾配のもとで輸送方程式を具体的に解き,Qのρ/L(ρはラーマー半径)への依存性を調べた.(2)同様な方法で,プラトー領域での非局所的な輸送方程式を求めた.これら(1),(2)の結果は,任意の大きさのρ/Lやρ_p/Lの領域への従来の輸送理論の拡張になっている.3.ブートストラップ電流などの磁力線方向の輸送に対する異常輸送の影響を調べるため,揺動を含む運動論的方程式から出発し,アンサンブル平均した分布関数を求めるための定式化を行った.本研究の主な目的は,ρ_p/L<<1,ρ_p/r<<1(ポロイダルラーマー半径ρ_ρ,勾配のスケール長L,磁気軸から磁気面までの距離r)の条件の成り立たない領域へ新古典輸送理論を拡張することにあり,以下のような研究を行った.1.無衝突領域にあるトカマクプラズマにおいては,ρ_ρ/r<<1の仮定が破れる磁気軸近傍では有限バナナ幅効果が重要になる.この有限バナナ幅効果を取り入れ,磁気軸上の新古典輸送を簡単に記述する理論を提唱した.また,この理論より求まる磁気軸上の輸送係数と,r>>ρ_pの領域で成り立つ従来の新古典輸送係数とを簡単に補間する方法を提唱し,これを用いて磁気軸を含めたプラズマの全領域で使える輸送係数の表式を求めた.核反応で生成されるアルファー粒子に対しても同様の方法を用いてブートストラップ電流の解析的な表式を求めた.有限バナナ幅効果を考慮すると,ブートストラップ電流のみでつくるトカマク平衡が可能になる.この平衡が存在するための条件やその性質についても調べた.2.急峻な密度勾配や圧力勾配が存在するときのエネルギー輸送を調べ次のような研究を行った.(1)一様磁場の中での,磁場を横切るエネルギー束Qと密度,圧力との間の非局所的な輸送方程式を求めた.また,簡単な密度勾配,圧力勾配のもとで輸送方程式を具体的に解き,Qのρ/L(ρはラーマー半径)への依存性を調べた.(2)同様な方法で,プラトー領域での非局所的な輸送方程式を求めた.これら(1),(2)の結果は,任意の大きさのρ/Lやρ_p/Lの領域への従来の輸送理論の拡張になっている.3.ブートストラップ電流などの磁力線方向の輸送に対する異常輸送の影響を調べるため,揺動を含む運動論的方程式から出発し,アンサンブル平均した分布関数を求めるための定式化を行った.従来のスタンダードな新古典輸送理論は,ポロイダルラーマー半径ρ_pと,平衡量の勾配のスケール長Lまたは磁気軸から磁気面までの距離τとの比が十分に小さいとの仮定に基づいて構築されている.本研究の目的は,この仮定の成り立たない領域へ新古典輸送理論を拡張することにあり,本年度は以下のような研究を行った.1.無衝突領域にあるトカマクプラズマにおいて,ρ_p<<τの仮定の破れる磁気軸近傍では有限バナナ幅効果が重要になる.この磁気軸近傍での有限バナナ幅効果を研究し次の結果を得た.(1)磁気軸近傍の新古典輸送を簡単に記述する理論を提唱した.(2)この理論より求まる磁気軸近傍の輸送係数と,τ>>ρ_pの領域で成り立つ従来の新古典輸送係数とを自然に補間する方法を提唱し,これを用いて磁気軸を含めたプラズマの全領域で使える,径方向や平行方向の輸送係数の表式を求めた.(3)核反応で生成されるアルファー粒子によってつくられるブートストラップ電流に対して,磁気軸近傍での有限バナナ幅効果を調べ,この効果の重要性を示した.(4)有限バナナ幅効果により可能となるブートストラップ電流のみでつくるトカマク平衡を簡単な場合に具体的に求めた.2.急峻な勾配が存在するときのプラズマ輸送を研究する第一歩として,まずz軸方向に一様磁場があるときの古典輸送について調べた.衝突項として,粒子数及びエネルギー保存則をみたすKrookモデルを用いて次の結果を得た.(1)磁場を横切る粒子束Γ,エネルギー束Qと密度n,圧力pとの間の非局所的な輸送方程式を求めた.

(2)密度分布n(x)=n_0exp(-x^2/L^2),圧力分布p(x)=p_0exp(-x^2/L^2)のもとで輸送方程式を具体的に解き,Γ,Qを求めた.例えば,強磁場の場合には,粒子束のρ/Lへの依存性は,ρ/L<<1ではΓ_x/(n_0L/τ)(ρ/L)^2,Γ_y/(n_0ν_0)ρ/Lと書けるが,ρ/L>>1ではΓ_x/(n_0L/τ)ρ/L,Γ_y/(n_0υ_0)(ρ/L)^<-1>へと遷移することが分かった.本研究の目的は,ρ_p/L<<1,ρ_p/r<<1(ポロイダルラーマー半径ρ_p,勾配のスケール長L,磁気軸から磁気面までの距離r)の仮定に基づいて構築されている従来の新古典輸送理論を,この仮定の成り立たない領域へと拡張することにあり,昨年度に引き続き以下のような研究を行った.1.昨年度の研究で求めた磁気軸を含めプラズマの全領域で使えるブートストラップ電流の表式を用いて,ブートストラップ電流のみでつくるトカマク平衡の研究を行い次のような結果を得た.(1)平衡が可能になるポロイダルベータ.(2)有効電荷数Zが1に近くなると,バルク粒子によるブートストラップ電流と核反応で生成されるアルファー粒子によるブートストラップ電流の流れる向きが逆になる.このため,イオン温度などで決まるZ_cに対して,ブートストラップ電流のみでつくる平衡はZ>Z_cの条件をみたすプラズマに対してのみ存在する.2.急峻な密度勾配,圧力勾配が存在するとき,プラトー領域における径方向のエネルギー束を調べ,このエネルギー束と密度n,圧力pとの間の非局所的な輸送方程式を求めた.また,簡単な密度勾配,圧力勾配のもとで輸送方程式を具体的に解き,エネルギー束をρ_p/Lと衝突周波数の関数として求めた.また,ここで求めたエネルギー束は,ρ_p/Lが小さくなるに従いスタンダードな新古典輸送理論の値に近づき衝突周波数に依存しなくなる.3.ブートストラップ電流のみでつくる平衡を考えるとき,異常輸送によるブートストラップ電流の径方向の拡散も重要になる.このような効果を取り入れるためには,揺動による径方向のドリフトを取り込んだ運動論的方程式を扱う必要がでてくる.このような観点から,揺動を含む運動論的方程式から出発し,アンサンブル平均した分布関数を求めるための定式化を行った.
統合失調症におけるグルタミン酸神経伝達異常に対する統合的アプローチ

統合失調症におけるグルタミン酸神経伝達系の異常を明らかにするために、遺伝子、血液生化学マーカー、神経画像計測を統合したアプローチを行った。その結果、統合失調症において、グルタミン酸神経伝達系のプローブとなる各指標の異常が相互関連していることを明らかにした。この結果は、統合失調症のグルタミン酸神経伝達系異常仮説に依拠した補助診断法開発や分子標的治療研究への基盤となるものである。統合失調症患者12名と健常者27名において、血中d-serine濃度を比較したところ、仮説どおり統合失調症群で有意に低下していることを見出した。一卵性双生児10組および二卵性双生児4組(卵性診断はDNAマーカーを用いた)の健常成人におけるミスマッチ陰性磁場強度の検討から、ミスマッチ陰性磁場強度がある程度遺伝的素因を反映する指標であることが示唆された。健常成人男性26名において、ミスマッチ陰性磁場強度とGRM3遺伝子多型に有意な関連を見出した。また、BDNF多型がミスマッチ陰性磁場強度の左右半球優位性に有意な影響を及ぼすことを明らかにした。これらのことから、ミスマッチ指標がグルタミン酸神経伝達系関連遺伝子の中間表現型として有望であることを示した。初発統合失調症患者11名において、ミスマッチ陰性電位振幅とヘシェル回灰白質体積が有意な相関を示すことを示した。このような異常な相関は、初発感情障害群(N=13)または健常対照群(N=13)では認められなかった。また、初発から1.5年後の時点での計測を行ったところ、初発統合失調症群においてのみ、ミスマッチ陰性電位振幅の変化量と、ヘシェル回灰白質の変化量の間に有意な相関を認めた。この相関は初発感情障害群または健常対照群では認められなかった。これらの結果から、統合失調症の病初期に聴覚皮質における進行性脳異常が存在し、その背景にグルタミン酸神経伝達系の異常が存在することが明らかとなった。統合失調症患者25名と年齢,性をマッチさせた健常者37名において,血漿中d-serine濃度を比較したところ,仮説どおり統合失調症群で有意に低下していることを見出した(p=0.041)。一卵性双生児10組および二卵性双生児4組(卵性診断はDNAマーカーを用いた)の健常成人におけるミスマッチ陰性磁場強度の検討から,ミスマッチ陰性磁場強度が高い遺伝性を示し(heritability:0.66-0.98),遺伝的素因を反映する指標であることが示唆された。健常成人男性36名において,GRM3遺伝子rs274622多型とBDNF遺伝子val66met多型が相互作用的にミスマッチ陰性磁場強度へ影響を及ぼすことが明らかとなった。すなわちGRM3遺伝子多型によってその強度に有意な影響を及ぼすとともに,BDNF遺伝子多型によってその左右半球優位性に影響を及ぼし,またその影響はGRM3遺伝子多型の別によって異なることが明らかとなった。これらのことから,ミスマッチ指標がグルタミン酸神経伝達系関連遺伝子の中間表現型として有望であることを示した。初発統合失調症患者11名において,ミスマッチ陰性電位振幅とヘシェル回灰白質体積が有意な相関を示すことを示した。このような異常な相関は,初発感情障害群(N=13)または健常対照群(N=13)では認められなかった。また,初発から1.5年後の時点での計測を行ったところ,初発統合失調症群においてのみ,ミスマッチ陰性電位振幅の変化量と,ヘシェル回灰白質の変化量の間に有意な相関を認めた。これらの結果から,統合失調症の病初期に聴覚皮質における進行性脳異常が存在し,その背景にグルタミン酸神経伝達系の異常が存在することが明らかとなった。統合失調症患者を対象として、グルタミン酸神経伝達系の機能プローブと考えられる、ミスマッチ陰性電位(mismatch negativity,MMN)を脳磁図によって計測した(magnetic counterpart of MMN:MMNm)。さらに、同一被験者において、NMDA受容体の内因性アゴニストであるd-serineを血中で計測した。その結果、MMNmは、健常者に比べて統合失調症患者で有意に減衰しており、d-serine濃度も統合失調症患者で有意に低値であった。さらに、統合失調症患者において、MMNmの潜時がd-serine濃度と相関する傾向を示した。MMNmの大きさは、GRM3遺伝子多型とBDNF遺伝子多型の影響を受けることも示唆された。また、統合失調症において、近赤外線スペクトロスコピーにて計測した実行機能課題施行時の前頭前皮質血流変化は、sigma-1受容体遺伝子多型の影響を受けることが示された。

これらのことから、統合失調症のグルタミン酸神経伝達系の異常について、神経画像、生化学物質、遺伝子の階層性に沿って明らかにし、MMNや血中d-serineなどが、統合失調症のグルタミン酸神経伝達機能のマーカーとして有用である可能性を示唆した。これらの結果は、統合失調症の前駆状態や初発時期の診断、治療に資する生物学的マーカーの確立や、グルタミン酸神経伝達をターゲットとした薬理学的介入方法の開発に重要な示唆を与えるものである。
トランスオミクス解析によるがん悪性進展機構の解明

正常細胞をhTERT/SV40-T抗原/c-Mycでトランスフォームさせると、通常の2次元培養での増殖能は著しく増加するが、足場非依存増殖能(コロニー形成能)は決して高くない。また、ヌードマウスでの造腫瘍能もほとんど有さないことがわかっている。申請者らは、この細胞を前がん状態細胞と仮定し、足場非依存培養を行うことで生き残った(コロニー形成した)細胞(Anchorage-independent growth: AIG細胞)は特殊な代謝状態へと遷移していることを見出している。本研究課題の一年目では、このAIG細胞をさらに足場非依存的培養を繰り返すことで段階的に悪性進展した細胞集団を多数単離し、これらのプロテオミクスおよびメタボローム解析を行っている。プロテオミクスに関してはiMPAQTシステム『ゲノムワイドな組み替えタンパク質を用いてLC-MS解析における高感度ペプチドの選定とその座標情報(LC上の保持時間、質量、および部分質量)の事前取得を行うことで、大規模なターゲットプロテオミクス(MRM: multiple reaction monitoringなど)を実施する定量プロテオミクス・プラットフォーム』を用いて悪性化プロセスに関与すると思われるカテゴリー(代謝酵素、シグナル伝達因子、クロマチン制御因子等)を中心に、測定対象タンパク質の選定とメソッド最適化および定量解析を実施している。解析対象となる悪性進展モデル細胞はすでに樹立済みであり、悪性化プロセスに関与すると思われるカテゴリー(代謝酵素、シグナル伝達因子、クロマチン制御因子等)を中心に、測定対象タンパク質の選定とメソッド最適化および定量解析を実施している。加えてiMPAQT解析に必要となる内部標準タンパク質を、これまでの合成ペプチドの系からバーコードタグを導入した安定同位体標識組換えタンパク質への改良を行っている。この新システムに移行できれば、これまでよりもタンパク質の定量化の効率が大幅に改善できる。すでに作製した悪性進展モデルを対象に、改良したiMPAQTシステムによるタンパク質の情報やメタボロームの情報を階層横断的に取得する。また、プロテオーム階層に関しては発現量解析に加えて、各種翻訳後修飾の定量解析も行う予定である。具体的には、シグナル伝達において重要なリン酸化やヒストンコードに重要なアセチル化やメチル化を定量するためのターゲットプロテオミクスによる定量を実施する。これらを統合することで多様に変遷するがん悪性化の代謝ネットワークを明らかにする。
輝度変動係数による腱コラーゲン線維配向定量法の妥当性の検討と応用研究

腱炎の発症に伴い腱コラーゲン線維配向(配列)には乱れが生じる。これまで我々は腱の超音波画像において輝度変動係数を測定することで腱コラーゲン線維配向を定量できる可能性を報告した。しかしながら、本手法の妥当性は示されていない。そこで本研究課題では超音波輝度変動係数による腱コラーゲン線維配向定量法の妥当性を検討する。さらに、腱炎の発症・治癒過程における腱構造および細胞機能の経時的変化を調べ、腱炎の重症度を判断するための情報を得るだけではなく、腱炎の発症・治癒メカニズムの解明に迫る。最終的には、輝度変動係数をヒト生体における腱炎の発症リスクや治癒過程、重症度の把握に用いることを目的とする。
日本古代の令文解釈諸説の引用形態・特徴を解析する方法の開発に関する研究

本研究に関して、以下の諸点について研究を実施した。1.『令集解』研究の問題点古代国家研究の必須文献である『令集解』について、どのような点に研究上の問題点が存在するか検討し、本研究を進める際に留意すべき箇所を把握することに努めた。その結果、『令集解』研究には、(1)書誌学的問題点、(2)現存『令集解』の系譜上の問題点、(3)典籍として文章構造上の問題点、(4)現時点の研究状況の問題点、が存在することを指摘できた。2.漢文文献の表現・用語に関する先行研究漢文文献である『令集解』の文章構造を把握するため、漢文の表現・用語に関する先行研究の援用の可能性を検討した。特に、以下の諸点について詳細に検討した。(1)助字・万葉仮名に関する国語学上の先行研究の活用方法を検討した。(2)中国隋・唐代の口語的表現の抽出から、当時の明法家の書き癖の差異を明確にする方法の検討を試みた。(3)法文解釈上特色ある表現の抽出を実施し、明法家諸説にどのような特徴が存在するか、検討した。3.『令集解』諸説の検討『令集解』に重層的に集大成された古代の明法家たちの解釈諸説の構造と特徴を分析した。特に、「穴記」の構成や「古記」や「令釈」における漢籍の利用形態などの分析を実施した。実施方法として、水本・柴田が作成したデータベースSHUUGE(京都大学大型計算機センターにて公開)を使用しながら、特色の抽出に努めた。