hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
化合物特異的な同位体分析による先史人類集団の定量的食性復元方法の開発

また、陸上動物と淡水生物でフェニルアラニンの窒素同位体比に顕著な違いがみられることを初めて報告した。このことから、グルタミン酸とフェニルアラニンの窒素同位体比がヒトのタンパク質摂取量(肉食率)の指標となることを明らかにした。最後に,人骨の14C年代を直接測定したものとしては国内最古級の後期更新世時代の人骨群(石垣島・白保竿根田原洞穴人骨)の食性復元にも着手した。その結果,島嶼環境であったにもかかわらず,当時の人々が陸上の食料資源に非常に強く依存していたことを初めて明らかにした。この成果は,一般に保存の良くない更新世の古人骨に,アミノ酸レベルでの同位体分析法を応用した世界で初めての例として重要である。また、考古学試料(土器)に残存する脂質(脂肪酸)の同位体分析にも着手し、予備的な分析を試みた。その結果、土器に残存する脂肪酸と土壌中に存在する脂肪酸で同位体比が似たような値を示すことが分かり、埋没中の資料に対する環境からの汚染を評価する方法を確立する必要性を新たに指摘した。
CRISPR/Cas9システムを利用したほ乳動物の産み分けに関する研究

本研究では、近年開発されたゲノム編集技術であるCrispr/Cas9システムを用いて、受精を阻害できる遺伝子を性染色体にノックインし、この遺伝子をもつ精子の受精を阻害することで雌雄の産み分けを可能にする技術の開発を目的とした。今回は、目的の遺伝子をX染色体にノックインし、X染色体を持つ精子が受精できない、つまり雄のみを産む個体の作出を計画した。その結果、3系統の雄において遺伝子が挿入されていたが、雄のみを産む個体は得られなかった。他の雄系統においても交配実験を継続中であり、雌系統の組換えマスにおいては野生型雄との交配により雄の組換えマウスの系統確立を行っている。本研究では受精を阻害できる遺伝子Xを、近年開発されたゲノム編集技術であるCrispr/Cas9システムを用いて性染色体にノックインし、遺伝子Xをもつ精子の受精を阻害することで雌雄の産み分けを可能にする技術の開発を目的とした。導入遺伝子はプロタミン1プロモーター制御下において、遺伝子XおよびAcGFPを発現するように構築し、制限酵素処理によって直鎖状にして顕微注入に用いる。また、性染色体上における遺伝子Xの挿入部位は、ヘテロクロマチン領域および機能遺伝子領域を避けた部位でかつ、Crispr/Cas9システムによって認識される、オフターゲットの少ないものの中から選出した。これらの条件を満たす領域の選出にはNCBIのゲノムデータベースおよびgRNA設計サイト(http://crispr.mit.edu/)を参照し、X染色体上ではCAGATTGAAGTCAACCATCG、Y染色体上ではACTAGGTCGTTTCTACAATTの配列を持つ部位に決定した。同定したターゲットシーケンスをpx330プラスミドにライゲーションし、目的部位をPCRによって増幅させ、その産物をMEGAshortscriptT7 kitでin vitro転写を行うことによってCas9が認識するgRNAを作製する。hCas9についても同様にin vitro転写を行うようにプラスミドに組み込んだ。さらに、Crispr/Cas9により切断された性染色体の上流50bpと直鎖状にした導入遺伝子の上流50bp、直鎖状にした導入遺伝子の下流50bpとCrispr/Cas9により切断された性染色体の下流50bpをそれぞれ接続した計100bpのオリゴDNAを2本作製した。以上のように作製した導入遺伝子、gRNA、hCas9、オリゴDNAを同時にマウス受精卵に顕微注入することで、効率的に遺伝子Xを性染色体にノックインできる。本研究では受精を阻害できる遺伝子を、近年開発されたゲノム編集技術であるCrispr/Cas9システムを用いて性染色体にノックインし、目的遺伝子をもつ精子の受精を阻害することで雌雄の産み分けを可能にする技術の開発を目的とした。導入遺伝子はプロタミン1プロモーター制御下において、受精を阻害する遺伝子およびAcGFPを発現するように構築し、制限酵素処理によって直鎖状にして顕微注入に用いた。また、性染色体上における目的遺伝子の挿入部位は、ヘテロクロマチン領域および機能遺伝子領域を避けた部位でかつ、Crispr/Cas9システムによって認識される、オフターゲットの少ないものの中から選出した。同定したターゲットシーケンスをpX330プラスミドにライゲーションし、目的部位をPCRによって増幅させ、その産物をMEGAshortscriptT7 kitでin vitro転写を行うことによってCas9が認識するgRNAを作製した。さらに、Crispr/Cas9により切断される性染色体の上流50bpと直鎖状にした導入遺伝子の上流50bp、直鎖状にした導入遺伝子の下流50bpとCrispr/Cas9により切断された性染色体の下流50bpをそれぞれ接続した計100bpのオリゴDNAを2本作製した。以上のように作製した導入遺伝子、gRNA、hCas9 RMA、オリゴDNAを同時にマウス受精卵に顕微注入し、遺伝子組換えマウスを作出した。得られた産子が雌であったため、次世代の作出を行っている。また、遺伝子組換えマウスの解析においては複数系統の組換えマウスを作製して解析を行う必要があるため、現在作製実験を継続している。得られた遺伝子組換え産子が雌であったため、次世代の作出を行っている。また、遺伝子組換えマウスの解析においては複数系統の組換えマウスを作製して解析を行う必要があるため、現在組換えマウスの作製実験を継続している。導入遺伝子はプロタミン1プロモーター制御下において、受精を阻害することが予測される遺伝子を構築した。本研究では、X染色体に目的遺伝子を導入するため、ヘテロクロマチン領域および機能遺伝子領域を避けた部位でかつ、Crispr/Cas9システムによって認識される、オフターゲットの少ないものを選定し、この配列中のPAM配列を切断するcrRNAを合成した。また、ノックインする遺伝子を持つプラスミドについても同様にcrRNAを合成した。これらの2本のcrRNAにはCAS9認識配列を持つtracrRNAが相補的に結合できる配列を付加して、gRNAとした。CAS9によって切断される性染色体の上流50bpとプラスミド状の導入

遺伝子の上流50bp、また導入遺伝子の下流50bpとCAS9により切断される性染色体の下流50bpをそれぞれ接続した計100 bpのオリゴDNA(ssODN)を2本作製した。以上のように作製した導入遺伝子、crRNA、tracrRNA、Cas9 mRMA、ssONAを同時にマウス受精卵に顕微注入し、遺伝子組換えマウスを作出した。得られた産子27匹(♂13匹、♀14匹)について、実際に産み分けができるかどうかについて交配実験を行った結果、現時点で6系統の雄において結果が得られたが、雄だけしか生まない系統は得られなかった。他の雄系統においても交配実験を継続中であり、雌系統においては交配により雄系統の確立を行っている。本研究では、近年開発されたゲノム編集技術であるCrispr/Cas9システムを用いて、受精を阻害できる遺伝子を性染色体にノックインし、この遺伝子をもつ精子の受精を阻害することで雌雄の産み分けを可能にする技術の開発を目的とした。今回は、目的の遺伝子をX染色体にノックインし、X染色体を持つ精子が受精できない、つまり雄のみを産む個体の作出を計画した。その結果、3系統の雄において遺伝子が挿入されていたが、雄のみを産む個体は得られなかった。他の雄系統においても交配実験を継続中であり、雌系統の組換えマスにおいては野生型雄との交配により雄の組換えマウスの系統確立を行っている。目的の遺伝子の導入部位もX、Y両性染色体について確定できた。また、ノックイン方法についても昨年度に学会発表されオリゴDNAを用いる方法を用いることにより、より効率よくノックインができることが明らかとなったため、本研究においてもこの方法を用いて、ノックインを行うための遺伝子の精製等を行っている。今後は、標的とする性染色体に目的の遺伝子が挿入されていることを確認し、その組換え遺伝子を持つ雄マウスを野生型雌マウスを交配させ、産み分けができるかかどうかを確認する。生殖生物学本年度は昨年度に構築した遺伝子をマウス受精卵に顕微注入して、胚盤胞期における導入効率について検討する。また、遺伝子構築においては導入遺伝子にCMV制御下でm-Cherryを発現する導入遺伝子を作製し、受精卵に導入後m-Cherryを発現した胚、つまりノックインがうまく行われた胚のみを発情を同期化した偽妊娠雌マウスに移植できるように遺伝子を設計する。この方法によって生まれた雄マウスを用いて、後代の産子の性を確認する。研究課題の実施により、当初の目的である遺伝子組換えマウスの作製はできたが、遺伝子組換えマウスが雌であったため、雄の作製に取り組む必要がある。また、遺伝子組換えマウスの解析においては複数系統の組換えマウスを作製することで、より精緻な解析ができるため、1年の延長を申請した。6万円ほどの繰越が生じたが、これは遺伝子構築にかかる経費が予定より少なくなったためである。実験用マウスの購入と導入遺伝子の作製に使用する。
運動機能回復に関わるエラーモニタリングの神経機序解明

平成30年度では,ピアノ演奏のようにクロスモーダルで複雑な手指系列動作の学習に対してtDCSが促進効果をもたらすかについて検証した.参加者(ピアノ未経験者)をtDCS群とsham群に振り分け,課題曲(バッハメヌエットト長調)を20試行反復練習してもらった.陽極電極を頭皮上C3,陰極電極をC4位置に装着し,練習中に1 mAで10分間刺激した.練習直後と1日後には,保持テストと転移テストを実施した.パフォーマンス(打鍵タイミング精度)について群(2)×練習試行(20)の2要因分散分析を行った結果,練習の主効果は認められたが,tDCSの効果はなかった.交互作用も有意でなかった.両テストともパフォーマンスに群間差はなく,tDCSの促進効果に関する従来の知見を再現できなかった.その原因に課題難度の設定不良が示唆されたため,今後は課題難度を調整する.ACL受傷アスリートのリハビリテーション過程における脳波データの取得を開始した.ACLの症例が少なかったため,十分なデータを得ることができなかった.研究期間の残り2年間を通してデータ取得を継続する.運動学習と終夜睡眠の関係を調べた実験ではデータ分析を進めており,フィードバック関連陰性電位が睡眠前よりも睡眠後に大きくなる傾向がみられた.令和元年度では,昼間睡眠実験においてスピンドルの有無等の視点から,運動スキルの記憶固定について検討する.早稲田大学・西多が新たに参画し,実験を実施する.予定していたfMRI実験は見合わせた.その理由は,平成30年度に現有1.5テスラから3テスラMR装置への入れ替え作業が生じたことにある.ただし,事象関連デザイン実験に必要な課題装置作成と実験制御プログラミングを島根大学・小野田と正木で完遂することができた.新規MR装置導入が完了したことから,令和元年度より,力量発揮課題を用いた運動学習実験を実施する.平成30年度に1.5テスラMRから3テスラMRへの装置入れ替えがあり,機能的MRI実験の開始を見合わせた.ACL受傷者が予想より少なく,実験参加者のリクルートが難航した.令和元年度では,ACL受傷アスリートの協力を得ることに力を入れ,受傷アスリートの理解を得ながら,本年度も継続してデータを取得していく.運動学習に及ぼす睡眠の効果については,新たに参画した早稲田大学・西多が実験を実施する.本研究はエラーモニタリングという新しい視座から運動学習過程を捉え,リハビリテーションに応用可能な基礎的知見を得ることを目的としている.エラー検出能力が学習と共に向上するのであれば,脳波のエラー関連陰性電位(ERN)は運動学習に伴って増大すると予想された.平成29年度ではそのエビデンスを得るため,経頭蓋直流電気刺激(tDCS)と夜間睡眠によって学習速度を操作し,ERNの変化を主に調べた.tDCS実験では,ボタンを順序正しくタッピングする運動系列学習課題を用いた.陽性刺激を与える陽性群と偽刺激を行う統制群の2群を比較した(各6名).両群とも10ブロック(各25試行)の課題遂行に伴い,遂行時間に短縮が認められたものの,tDCSの効果はなかった.運動系列学習課題の前後には空間ストループ課題でERNを測定した.両群ともにERNが明瞭に惹起したものの,tDCSに伴うエラーモニタリングの機能亢進は認められなかった.睡眠操作実験では,研究分担者の小川が夜間睡眠に伴う動作スキル記憶固定の促進効果について検証した.参加者は非利き手による8系列のタッピング課題を就床前と起床後に遂行した.運動スキルの記憶固定に関与する睡眠段階2のスピンドル出現量を操作した.その結果,スピンドル出現量に伴って翌朝の運動スキルに向上が認められた.研究分担者の小野田は,行動データに基づき強化学習モデルでエラー情報を推定し,その変化と関連する領域をmodel-based fMRIにて検証した.その結果,エラーは背側前帯状回で表象されることを確認した.さらに,スポーツ種目によるエラーモニタリングの差異,結果フィードバックの予期と意思決定過程の関係,有酸素運動に伴う認知機能の変化,反応抑制とエラーモニタリングの関係についても脳波計測を通して調べた結果,エラーモニタリングの機能的意義をさらに明確にする知見を得た.当初の計画通り,tDCS装置の導入によって実験環境を整備することができた.役割分担も機能しており,広島大学で実施された睡眠操作実験ではデータが順調に収集されており,狙い通りの学習効果も確認できている.一方,従来の知見に反して,運動学習に及ぼすtDCS効果が得られなかったことから,運動学習課題と実験プロトコルに修正を加えて追試する必要性を見出した.初年度での適切なプロトコル修正は,研究期間内に成果を得るための有益な作業と考えている.その他,エラーモニタリングに関わる脳機能を様々な課題と対象者で検証した結果,有益な知見を多く得ることができた.その一部は初年度に論文化することができた.平成30年度では,ピアノ演奏のようにクロスモーダルで複雑な手指系列動作の学習に対してtDCSが促進効果をもたらすかについて検証した.参加者(ピアノ未経験者)をtDCS群とsham群に振り分け,課題曲(バッハメヌエットト長調)を20試行反復練習してもらった.陽極電極を頭皮上C3,陰極電極をC4位置に装着し,練習中に1 mAで10分間刺激した.練習直後と1日後には,保持テストと転移テストを実施した.パフォーマンス(打鍵タイミング精度)について群(2)×練習試行(20)の2要因分散分析を行った結果,練習の主効果は認められたが,tDCSの効果はなかった.交互作用も有意でなかった.

両テストともパフォーマンスに群間差はなく,tDCSの促進効果に関する従来の知見を再現できなかった.その原因に課題難度の設定不良が示唆されたため,今後は課題難度を調整する.ACL受傷アスリートのリハビリテーション過程における脳波データの取得を開始した.ACLの症例が少なかったため,十分なデータを得ることができなかった.研究期間の残り2年間を通してデータ取得を継続する.運動学習と終夜睡眠の関係を調べた実験ではデータ分析を進めており,フィードバック関連陰性電位が睡眠前よりも睡眠後に大きくなる傾向がみられた.令和元年度では,昼間睡眠実験においてスピンドルの有無等の視点から,運動スキルの記憶固定について検討する.早稲田大学・西多が新たに参画し,実験を実施する.予定していたfMRI実験は見合わせた.その理由は,平成30年度に現有1.5テスラから3テスラMR装置への入れ替え作業が生じたことにある.ただし,事象関連デザイン実験に必要な課題装置作成と実験制御プログラミングを島根大学・小野田と正木で完遂することができた.新規MR装置導入が完了したことから,令和元年度より,力量発揮課題を用いた運動学習実験を実施する.平成30年度に1.5テスラMRから3テスラMRへの装置入れ替えがあり,機能的MRI実験の開始を見合わせた.ACL受傷者が予想より少なく,実験参加者のリクルートが難航した.前年度より開始したtDCS実験(早稲田大学・正木)と夜間睡眠実験(広島大学・小川)について,一部プロトコルの修正を加えたうえで追加実験を行う.tDCS実験では,運動学習課題の練習期にtDCSで一次運動野に直流刺激を加え,運動学習に伴うERNの動態を調べる.実験参加者をtDCS群,Sham群それぞれ20名程度になるまで実験を行う.夜間睡眠実験では,睡眠段階2のスピンドルを操作して運動スキルの記憶固定を促進させる.運動系列課題の練習後に夜間睡眠をとる睡眠群と,昼間の覚醒時に動作スキルを練習させて十分な休息を置く覚醒群を比較する.各群15名程度になるまでデータ収集を続ける.いずれの群でも課題練習の前後でERNを計測し,保持テストとの関連も調べる.また,fMRI実験を早稲田大学で準備する.新規3テスラMRI装置の導入が平成30年度末に予定されているため,平成31年度から本格的に開始することにした.そこで本年度は,fMRI実験準備(課題装置作成,実験制御プログラミング等)を島根大学・小野田と早稲田大学・正木が完遂させる.本年度より,早稲田大学・広瀬,正木を中心に,スポーツ医科学クリニック(早稲田大)において,ACL受傷アスリートのリハビリ過程における脳波データを取得する.怪我の程度と予測されるリハビリ期間を総合的に広瀬が判断し,本実験に適する参加者を選定していく.ACL再建後のリハビリ期間中に脳波データを継続的に取得する(正木).リハビリ過程は,1患部改善と筋再教育に関係する再建直後,2可動域・筋力・バランス能力改善に関わる訓練前期,3ジョギングを開始する訓練後期,4復帰準備期に分けて,段階移行期と訓練前後でERNを測定する.ACL損傷リスク肢位である膝関節外反位回避と股関節屈曲を伴う体幹の軽度前傾姿勢が運動学習課題であり,これらの習得過程におけるERNを調べる.
ライブ映像と計算機空間の重畳によるプレゼンテーション支援システムの開発

研究発表などのプレゼンテーションでは電子化が大いに進んだ。一方で、講義や授業などのプレゼンテーションではなかなか効果的な情報化が行われない現状がある。これは、授業のようにトータルの時間が数十時間にもおよぶプレゼンテーション内容の電子化には多大なる労力が必要であり、また、聞き手からのフィードバックに柔軟に対応できる資料作りが難しいことにあると考えられる。本研究では、従来型の紙と黒板ベースのプレゼンテーションに、電子的プレゼンテーションのよいところを効果的にとりいれられるような手法の検討を行った。計画研究の年限内では、紙ベースと電子ベースのプレゼンテーションの融合を図るために以下の2項目について研究を行った。1能動型カメラによる適応的文書画像の収集テーブルの上に置かれたプレゼンテーション用文書を、自動的に検出し、その文書に応じた最適な取得パラメータにしたがって、高精細な文書として収録するための装置を開発した。(a)文書の自動的な検出プログラムの開発-プレゼンテーション用ステージの上に置かれた文書を自動的に検出するための手法を開発した(b)適応的文書画像収集法-能動的に動くCCDカメラを用いて、過不足のない適切な解像度で文書を撮影するための手法を開発した。2プレゼンテーション用文書の管理について(a)プレゼンテーションに利用する文書の同定-プレゼンテーション中の文書に関連した情報の記録を検索するために、高速に大量の文書を同定するためのアルゴリズムを開発した。(b)文書のレイアウトの管理-ステージに置かれている文書のレイアウトの履歴を自動的に記録するための手法について検討を行った。また、同様のシステムを机の上の文書の管理に用いる方法についても検討を行った。・アクティブカメラによる適応文書画像入力アルゴリズムの検討は終了し、現在、実証用システムに移植をしているところである。・ライブ映像解析による文書のトラッキング新規に机上に登場した文書を自動的に検出するための、文書トラッキングシステムを開発している。ワークスペース内の文書はユーザーによって移動させられるので、文書管理の一貫性を保つためには配置を変えられたトラッキングも行い、計算機内部に蓄積された文書データとの論理的との整合性を保つ。机全体を撮影するカメラを用いて検出した低解像度の文書画像を部分的遮蔽があっても、高速に同定する方法を提案した。・文書ライブ映像と電子テキストの重畳ワークスペース内の文書の上に高解像度ビデオプロジェクターからの情報を投影する(実はこのために文書のトラッキングが必要不可欠である)システムを現在作成中である。これにより、ユーザーは計算機からフィードバックされる情報を文書と重畳して見ることが可能になる。自動的に検出された強調文字に関する情報、論理的なブロックの検出結果等はその場で呈示される。本年度は、テーブルの上で操られる文書をカメラで撮影し、プレゼンテーション等に利用するための手法を検討すると共に、実証システムを作成した。具体的な研究成果は以下のとおりである。1ライブ映像による指示動作理解と高速な文書の同定テーブル上の文書を低解像度の映像として撮影し、これから文書の移動や交換を検出する手法を明らかにした。文書をカメラでモニターする場合、通常のNTSCカメラでは解像度が低く文字の認識は不可能である。そこで、文書の同定を文字ベースで行うのではなく、段落や行末の情報を利用して認識する方法を開発した。この方法は文書の見開きに登場する複数の段落を、票アルゴリズムで認識しているためにオクルージョンなどに強い性質を持つ。この同定のあと、文書への動作理解を行うことで、どの文書がどのような操作をされたかが同定できるようになった。2曲面にマッピングされた文書の解析1の手法は平面に対しては有効に働くが、一般の書籍を見開いた場合のように曲面になった文書はそのままでは適用ができない。そこで、映像中のエッジの分布密度を利用して文書の曲がり方を推定し、平面に復元する手法をとった。これにより、厚手の文書であっても平面に補正を掛けてから扱うことができるようになった。
運動時におけるヒトの脳活動と体内ホルモン変化との関係-ポジトロン断層法を用いて-

セロトニンはヒトの気分に関わる脳内神経伝達物質である。動物を用いた先行研究では、運動によって大脳前頭皮質のセロトニン濃度が増加することが知られている。しかし、ヒトにおいては運動時のセロトニン活動はこれまで観察されていない。そこで本研究はポジトロン断層装置(PET)と[^<11>C]N-methylspiperone(NMSP)を用いて、ヒトの運動後のセロトニン神経活動を画像で観察した。NMSPはセロトニンの5-HT2受容体に特異的に結合する能力(以下、結合能)を持つ。ところが生体由来のセロトニンよりは結合能が弱い。したがって、脳内のセロトニン神経活動が亢進すると、NMSPの結合能を示すPET画像の信号は減弱する。被験者は健康な無酸素系運動種目の経験を持つ男子8名であった(年齢20.6±0.26歳、最大酸素摂取量46.8±2.16ml kg^<-1>min^<-1>,平均±標準誤差)。被験者には午前と午後に1回ずつPET検査を実施した。午前中には安静時のPET検査を行った。午後は運動後にNMSPを投与し、その後PET検査を実施した。運動は最大酸素摂取量の70%強度であり、運動時間は30分間であった。また、被験者の気分(主観的疲労感)や体の痛み、気分をVisual analog scale(VAS)を用いて簡便に測定した。その結果、NMSPの5-HT2受容体への結合能は、前帯状回皮質において、安静時に比べ運動時に有意に減弱した(P<0.05)。この結果は運動によって、前帯状回皮質のセロトニン神経活動が亢進したことを示している。また主観的疲労感と体の痛みを示すVASは安静時に比べ運動後に有意に上昇した(P<0.001,and P<0.05,respectively)。したがって、運動後に誘発される前帯状回皮質のセロトニン神経の亢進は主に疲労感に関係している可能性が考えられた。【目的】本年度の研究ではPETと^<18>F-fluorodeoxyglucose (FDG)を用いて、末梢血中のエネルギー代謝物質と脳活動の関係を調べることであった。【方法】被験者は健康な男子10名であり、運動は55% VO2max強度での50分間の自転車エルゴメータ運動であった。運動開始20分後にFDGが投与された。PET撮影は運動終了15分後に開始した。脳の放射活性を測定する5分間のエミッションスキャンに続き、脳の形態と減弱補正を測定するための3分間のトランスミッションスキャンを行った。脳活動領域の統計的解析はソフトウェアStatistical Parametric Mapping (SPM99)を用いて行った。末梢血中のエネルギー代謝物質として遊離脂肪酸(FFA)と乳酸(La)の濃度を経時的に測定した。【結果】扁桃体の活動とFFA濃度との間に負の相関が認められた。運動時のFFA濃度は有意な増加を示した。橋網様体の活動と運動時の乳酸濃度との間に有意な正の相関が認められた。運動時の乳酸濃度も有意な増加を示した。【考察】怒りや不安、不快感を司る扁桃体の活動がFFA濃度の増加と負の相関を示したことは、運動が情動を改善する一因になる可能性を示唆するものである。乳酸の増加と正の相関を示した橋網様体には橋下部持続的吸息中枢が存在する。乳酸濃度の上昇に伴う化学受容器の求心性の情報が、橋下部持続的吸息中枢を刺激している可能性を示すものである。持続的な吸息中枢の刺激は有酸素運動には有利な作用である。運動時の末梢血中の代謝物質は、中枢神経に末梢の情報を伝える伝達因子であると共に、中枢の制御因子としての働きを持つ可能性が考えられた。脳神経由来のセロトニンは、覚醒度を上昇させる一方で、攻撃性の減少や疲労感の誘発など様々な情動の変化に関与することが知られている。そこで、本研究の目的は、運動が人間の脳内のセロトニン動態に及ぼす影響を検証した。また脳神経由来のセロトニンの前駆体といわれている動脈血中遊離トリプトファン濃度とセロトニン濃度との相関を観察した。運動によるセロトニン受容体結合能変化はセロトニンのアンタゴニスト[^<11>C]N-methylspiperone (NMSP)とPETを用いて観察した。被験者は4人で、年齢20.75歳、身長171.5cm、体重80.3kg、最大酸素摂取量44.2ml./min/kg(全て平均値)であった。まず安静時のPET撮影を行った。3時間以上の間隔を置き、最大酸素摂取量の70%強度で30分の自転車運動をで行い、運動終了20分目からPET撮影を行った。PET画像は画像解析ソフト(Dr.View)を用いて解析した。被験者4人中3人で、セロトニン受容体結合能の上昇は運動野、後頭葉、尾状核、被殻、海馬、帯状回において認められた。NMSP結合能の上昇はセロトニン分泌の減少を示唆している。また動脈血中遊離トリプトファン濃度とセロトニン濃度が有意に相関する領域は認められなかった。

これまで運動後では脳内セロトニンは上昇すると考えられていたが、本研究の結果ではセロトニン濃度が減少する傾向を示した。本研究では方法論上、運動終了20分目からPETの撮影を行った。したがって運動中や運動終了直後とは違ったことが、先行研究と異なる結果になったことが推察される。脳内セロトニン濃度の減少は睡眠の誘発にも関係しており、本研究の被験者がPET撮影時に眠気を訴えたことは非常に興味深い。今後、運動中、および直後におけるセロトニン受容体結合能を観察し、時系列で運動との関係を明らかにすることが重要と考えられる。また動脈血中遊離トリプトファンの上昇は脳内セロトニン濃度の上昇と必ずしも相関していないことが示唆された。セロトニンはヒトの気分に関わる脳内神経伝達物質である。動物を用いた先行研究では、運動によって大脳前頭皮質のセロトニン濃度が増加することが知られている。しかし、ヒトにおいては運動時のセロトニン活動はこれまで観察されていない。そこで本研究はポジトロン断層装置(PET)と[^<11>C]N-methylspiperone(NMSP)を用いて、ヒトの運動後のセロトニン神経活動を画像で観察した。NMSPはセロトニンの5-HT2受容体に特異的に結合する能力(以下、結合能)を持つ。ところが生体由来のセロトニンよりは結合能が弱い。したがって、脳内のセロトニン神経活動が亢進すると、NMSPの結合能を示すPET画像の信号は減弱する。被験者は健康な無酸素系運動種目の経験を持つ男子8名であった(年齢20.6±0.26歳、最大酸素摂取量46.8±2.16ml kg^<-1>min^<-1>,平均±標準誤差)。被験者には午前と午後に1回ずつPET検査を実施した。午前中には安静時のPET検査を行った。午後は運動後にNMSPを投与し、その後PET検査を実施した。運動は最大酸素摂取量の70%強度であり、運動時間は30分間であった。また、被験者の気分(主観的疲労感)や体の痛み、気分をVisual analog scale(VAS)を用いて簡便に測定した。その結果、NMSPの5-HT2受容体への結合能は、前帯状回皮質において、安静時に比べ運動時に有意に減弱した(P<0.05)。この結果は運動によって、前帯状回皮質のセロトニン神経活動が亢進したことを示している。また主観的疲労感と体の痛みを示すVASは安静時に比べ運動後に有意に上昇した(P<0.001,and P<0.05,respectively)。したがって、運動後に誘発される前帯状回皮質のセロトニン神経の亢進は主に疲労感に関係している可能性が考えられた。
Ir錯体によるアミン、アルデヒドおよびアルキンの触媒的1:2:2カップリング反応

プロパルギルアミンは、有機合成上有用な中間体であることから、効率的な合成法の開発が望まれている。末端アセチレンをC=N結合へ付加する反応は、プロパルギルアミンの簡便な合成法となるが、末端アセチレンのC=O結合への付加によるプロパルギルアルコールの合成に比べ、成功例は少ない。以前、私はイリジウム錯体触媒存在下、アミン、アルデヒドおよび1-オクチンのような単純アルキンの反応により、反応中生成するイミンの窒素原子に隣接するC-H結合の活性化を経る新規な三成分カップリング反応を見出し報告している。本研究では、アミン、アルデヒドおよびトリメチルシリルアセチレンの反応を行ったところ、1:1:1カップリングおよび1:2:2カップリング反応が生起し、対応するプロパルギルアミン誘導体が得られることが明らかになった。触媒量の[IrCl(cod)]_2存在下、n-ブチルアミン、n-ブチルアルデヒドおよびトリメチルシリルアセチレンをTHF中60°Cで反応させたところ、系中でアミとアルデヒドから生成したイミンへ、トリメチルシリルアセチレンが付加した1:1:1カップリング生成物が78%の収率で得られた。またこのとき、アミン、アルデヒドおよびアルキンが1:2:2の比でカップリングした生成物の副生が確認された。そこで1:2:2カップリング生成物の生成を目指し種々検討した結果、1,4-ジオキサン中75°Cで反応させることにより、目的物が80%を超える収率で合成できることが明らかになった。溶媒にシクロペンチルメチルエーテルを用い100°Cで反応を行うと、短時間で反応は完結した。このような、アミン、アルデヒドおよびトリメチルシリルアセチレンの1:2:2カップリング反応は報告例がなく、本反応は、新規なプロパルギルアミン誘導体の触媒的合成法として有用である。イリジウム錯体を触媒に用いることで、アミン、アルデヒドおよびトリメチルシリルアセチレンのような末端アルキンの新規な1:2:2カップリング反応が起こることを見出した。例えば、[Ir(cod)Cl]_2錯体触媒存在下、n-ブチルアミン、n-ブチルアルデヒドおよびトリメチルシリルアセチレンの反応をTHF中70°Cで行うと、対応する1:2:2カップリング生成物が70%程度の収率で得られた。この反応は、反応系中で一旦イミンが生成し、さらにエナミンの生成を経て進行することが示唆された。そこで、種々のエナミンを別途に合成し、トリメチルシリルアセチレンとの反応を検討したところ、期待通り目的とするカップリング反応が生起することが明らかになった。一方、同様のイリジウム錯体触媒を用い、少量の塩基存在下、ケトンとアルコールの反応を検討したところ、ケトンのα-アルキル化反応が良好に進行することが明らかとなった。ケトンのα-アルキル化反応は、炭素-炭素結合形成反応として有機合成上最も基本的な反応の一つである。例えば、2-オクタノンをモデル基質とし、触媒量の[Ir(cod)Cl]_2およびPPh_3存在下、あらかじめKOHを溶解させた1-ブタノールを加え100°Cで4時間反応させたところ、6-ドデカノンが良好な収率で得られた。本反応は、2-オクタノンの1位の炭素へ位置選択的にα-アルキル化が起こることが明らかになった。また、ケトンとアルコールをほぼ1:1の割合で用いて反応を行うことができ、無溶媒条件のもと効率良く反応が進行することから、本反応は原子効率の高い反応となる。同様に、アセトフェノンと1-ブタノールの反応によりフェニルペンチルケトンが生成することがわかった。
強い電子相関・電子-格子相互作用場における光反応過程の探究とその制御

今年度我々は、物質自身によって生み出される「協力的相互作用場」が特に強いと期待される物質であるπ電子共役ポリマーポリジアセチレンにおける「光誘起相転移」のナノ秒ダイナミクスと、一次元分子の非線形光学を用いた光反応制御に関して集中的な研究を行った。(1)π電子共役ポリマー結晶における光誘起構造相転移ポリジアセチレン(PDA: =CR-C≡C-CR′=n; R,R′は側鎖基)は代表的な一次元π電子共役ポリマーである。我々は、このPDA結晶を相転移ヒステリシス内の温度に保持しながら光励起を行った。その結果、光励起によってこの相転移が発生すること、また1励起光子で約2-300モノマーユニットもの領域に相転移が発生する、つまり非常に高効率な光誘起構造変化(異性化)が「協力的相互作用場」の中では発生していることを明らかにした。さらに、相転移の初期過程は50ナノ秒以内で終了すること、ヒステリシス外の温度でも光励起によって発生した揺らぎがミリ秒近い長時間接続することも本研究によって明らかとなった。(2)非線形光学過程を用いた一次元物質の光反応制御シス-スチルベンは266nmの光で励起を行うと、トランス体への異性化と同時に環化反応をおこすことがよく知られている。我々は、シス-スチルベンを532nmのレーザー光で2光子励起すること、この2種の反応のうちで異性化過程のみが選択的に発生することを明らかにした。さらにシリコンオリゴマーであるジフェニルトリシランにおいても同様な反応選択性を見い出した。スチルベンさらにはポリエン類は、電子相関(クーロン相互作用)と電子-格子(振電)相互作用という2つの「協力的相互作用場」が重要な役割を担っている物質である。そして光異性化過程に、これらの相互作用に起因する多電子励起状態(2光子遷移許容状態:2^1A_gg)が重要な役割を果たしている。この多電子励起状態を利用すれば、光反応制御が可能であることが初めて明らかとなった。
エネルギー代謝を標的にした転移浸潤性膀胱癌に対する新規抗癌剤の開発

癌細胞では、好気的環境下でも解糖系によるエネルギー産生が優位となるグルコース代謝のシフト(ワールブルグ効果)が生じている。解糖系の制御の標的として、ピルピン酸からアセチルCoAへの反応を抑制して解糖系を亢進するピルビン酸脱水素酵素キナーゼ4(PDK4)に着目した。本申請では、このPDK4を分子標的とする新しい低分子化合物を用いて、ワールブルグ効果を抑制することによる抗腫瘍活性および転移浸潤抑制活性をヒト膀胱癌のin vitro培養細胞系およびin vivoのマウス腫瘍モデル実験系を用いて解析し、既存の抗がん剤と異なる代謝を標的とした薬剤による新たな膀胱癌治療法を開発する。
アクチン・ミオシン複合体の分子微細運動と接触面微細構造

筋収縮の原動力となる蛋白質構造の変化について2つの方向から実験的検討を加えた。スピンラベルマレイミド(MSL)ー軽鎖LC2をミオシン頭部に交換導入し、筋細胞を磁場と平行に置きESR測定した。筋細胞のアクチン線維に結合した頭部S1のラベルの向きは約66゚であった。双頭部HMMの場合は66゚と42゚で、一方の頭部の軽鎖は歪んでいる。硬直筋細胞内ミオシン軽鎖はサルコメア構造のため様々な方向に歪められていた。ミオシン頭部中心部にラベルを導入したときには向きは常に一定であるので、中心部と軽鎖(首部)の間に屈曲がおきやすい。しかしながら、キャビティに横穴をあけ硬直筋をくくった糸に荷重2kg重/cm^2をかけて引っ張っても方向がそろうことはなかった。弛緩状態のMSL軽鎖の向きはランダムで、頭部はアクチンから解離している。AMPPNP(低イオン強度)ではHMMと同様に66゚と42゚が観察され、頭部とS2がミオシンフィラメントから外れ、S2柔軟性のため軽鎖部への歪みが解消されるらしい。今後は張力発生中の実験を横穴式キャビティを用いATP還流して行う計画である。Gーアクチンは架橋剤MBSで処理すると塩存在下でも単量体で存在し(mーアクチン)、化学架橋アクチン二重体もMBS処理で重合が阻害される(dーアクチン)。mーアクチンはミオシン頭部当たり2個結合した。dーアクチンは頭部当たり1個結合した。ATPは結合を数倍だけ弱くする。その他の解析から、頭部には少なくとも3種類のアクチン結合部位があり、1番目はmー,dー,Fーアクチンを、2番目はm,Fを、3番目は少なくともATPを存在下でFを結合し、3番目へのFの結合は1、2番目の結合を著しく抑える。ミオシン頭部が複数のアクチン結合部位を巧みに変え歩行する分子模型が考えられる。非重合性アクチンはミオシンとの結合位置の電顕観察、S1との複合体の結晶化、溶液散乱実験に有用である。
水泳競技におけるレース分析データの指導現場へのフィードバックシステムの開発

水泳競技(競泳)のレースには、ストローク局面、スタート局面、ターン局面及びフィニッシュ局面が存在し、競技力向上にはこれらの要素をより客観的に評価していく必要がある。そこで、我々は、1987年より、ビデオ映像を用いた競泳のレース分析に関する研究を開始し、レース中における各要素を客観的に評価して、それらのデータを選手や指導者にフィードバックすることを試行してきた。そこで、本研究の目的では、1)大幅なハードウェアの改良により、分析時間の短縮及び分析データの精度を高めること、2)システムアップとソフトウェアの開発により、自動データ入力を試みること、3)個人データベースのネットワーク化及び個人のデータの数年間の比較を瞬時に行えるようにすること、4)レース分析結果より、競技力向上に活用可能な研究成果を得ることを目的に行ったものである。その結果、レース分析の実験システムにおけるハードウェア及びソフトウェアの開発により、分析データの即時フィードバックを実現することができた。また、過去5年間のレース分析結果の個人別データベースを作成し、インターネット上で閲覧可能なデータベースシステムとしての構築に成功した。これらのデータは、個人名、種目、大会等のキーワード入力により、個人データの数年間の比較または選手間の比較を瞬時に行えるようにした。さらに、これまでのデータを活用することで、スタート、ターン及びフィニッシュタイムから、それらの技能の能力を評価することも可能となった。水泳競技のレース分析に関する国内外の先行研究資料を収集・整理し、指導現場へのフィードバックシステム開発に関わる基礎的検討を行った。また、一流水泳選手が出場する全国規模の競技大会において、2台の小型カラーハイスピードビデオカメラ及び5台のビデオカメラを用いて、レースの模様を全て撮影した。映像は、公式のスタート信号と同期して記録されており、泳者の1ストローク当たりの進む距離であるストローク長(m/stroke)と単位時間当たりのストローク数であるストローク頻度(stroke/min)を求めて、分析を行った。レースは、スタート動作局面(010m)、ターン動作局面(ターン前5mからターン後7.5m)、ストローク動作局面(スタート、ターン及びフィニッシュ局面を除く)、そしてフィニッシュ動作局面速度および前後半のストローク長とストローク頻度がデータとして、選手一人一人について分析提示される。これらのデータは、一般的には、競技後の通常の水泳指導現場にフィードバックされるが種々検討の結果、競技現場において分析後、データで即時にフィードバックされるシステムが構築され、競技会での予選のレース分析データを、同日午後の決勝レースまでに処理して指導現場に提供する、さらに決勝での分析結果をその日の内にフィードバックすることが可能であることが実証された。水泳競技のレース分析及び指導現場へのフィードバックシステムに関わる国内外の最新の資料を収集・整理すると共に、水泳競技場における選手及び指導者へのレース分析データの即時フィードバックを試行し、その技術的・実践的有効性と問題点を検討した。一流水泳選手が出場する全国規模の競技大会において、ハイスピードビデオカメラを用いてレース分析を行い、分析データを即時にフィードバックした。データは、スタート局面速度、ストローク局面速度、ターン局面速度並びにストローク長(m/ストローク)、ストローク頻度(ストローク数/秒)である。50mおよび100mレースの場合は、25m毎の変化を、そして200mレースの場合は50m毎の変化を求めた。また、ターン局面においては、泳ぎからターン動作に入り、壁に足が接地するまでの局面としてのターン・イン局面と壁接地から泳ぎ出し局面までのターン・アウト局面に分けた。また、分析においては、撮影されたビデオ映像から、通過時間を自動的にコンピューターに入力できるシステムを開発した。このシステムは簡易スリットビデオを実現したものであり、画像の横軸が時間を表すことにより、マウスでの選手の頭の画像をクリックすることで、通過時間を知ることができる。これらのシステムは、データが個人毎に提示されること、選手のレース内容を詳細に把握できること、汎用コンピュータと普及レベルのハードディスクで対応が可能なこと、データの収集時間を短縮できること等の利点があることが確認された。通過時間の自動読み取り機能の開発である簡易スプリットビデオシステムについては、昨年度のシステムにより改良を加えることによって、レース分析データの精度を高めることができ、さらには、それらの即時フィードバックのための時間短縮の可能性が示唆された。また、レース分析結果の個人別データベース化においては、インターネット上で閲覧可能なデータベースシステムとしての新規システムの構築を行った。加えて、今後開催される競技会場で、コンピューター上での記録の公開が可能となった。

フィードバック方法については、選手、コーチは、以下の機能を用いてレース分析データをWeb Browserから検索し閲覧でき、レース会場ではプライベートLANを構築することが実現できる。また競技会終了後は同マシンをインターネット上に置くことにより、レース分析データを閲覧し自己データの把握およびレースペースの研究が容易にでき、これらの成果として、レース分析データを選手・コーチ等にその各々の要求に応じたフィードバックが可能になる。今後はいつでも誰でもデータを閲覧し、他者のレースデータとの比較なども容易に出来る様になることから、これまで行ってきたレース分析データの一般普及にも拍車がかかるものと考えられる。本年度の研究目的は、1)過去数年間の個人データベースのネットワーク化を図り、個人データの数年間に渡る比較を瞬時に行えるように試みること、2)大会期間中に会場内にて、プライベートLANを構築し、パーソナルコンピュータを設置してレース分析データの即時フィードバックを試みること、3)各個人のレース分析結果から、競技力向上に必要と考えられる問題点の指摘を可能とする能力評価に関する研究資料を得ることであった。過去5年間のレース分析結果の個人別データベース化においては、インターネット上で閲覧可能なデータベースシステムとしての構築が完成し、加えて個人名、種目、大会などのキーワード入力により、個人データの数年間の比較、または選手間の比較を瞬時に行えるようになった。また、シドニーオリンピック代表選手選考会時には、会場にプライベートLANを構築し、3台のパーソナルコンピュータを設置することで、レース分析データの即時フィードバックに成功した。つまり、選手や指導者は、大会期間中に、レース分析のデータを簡単に検索することができるとともに、過去の個人データとの比較および他選手との比較も容易にできることになった。これによって、たとえば、予選のレース分析結果を決勝のレース展開に活用することや今後の競技力向上のための基礎資料として活用することも可能となった。また、これまでのレース分析データからスタートやターンの問題点などが指摘できるように、各選手の能力を評価できる基礎的資料を作成した。
ヒト肥満細胞の純培養法を用いた新しい抗アレルギー療法の開発に関する研究

現在行われている抗アレルギー療法は肥満細胞からの化学伝達物質の生成、遊離抑制を狙った抗アレルギー薬による治療が主体である。しかし、これらの治療法のみでは十分な治療効果が得られない場合が多く、他の抗アレルギー療法の開発は重要な課題となっている。臍帯血CD34陽性細胞からのstem cell factor(SCF)単独刺激による肥満細胞産生システムを用いて、IL-6、レチノイドによる肥満細胞の増殖分化に対する影響を検討した。SCFにIL-6を添加することにより、肥満細胞の増殖は濃度依存性に抑制された。フローサイトメトリーを用いた検討から、IL-6による増殖抑制作用の一因はc-kitのdown regulationによるものと考えられた。また、IL-6により、肥満細胞コロニーの形成は、有意に抑制された。一方、細胞内ヒスタミン量とキマーゼ陽性細胞比率は有意に増加した。IL-6の作用はIL-6レセプターおよびgp130を介してSCF依存のヒト肥満細胞増殖を抑制し、細胞内のヒスタミン量を増加させることが明らかとなった。一方、レチノイン酸をSCFとともに培養10週目の培養肥満細胞に加えたところ、用量依存性に明らかな増殖抑制効果が認められた。また、至適濃度のレチノイン酸は肥満細胞内のヒスタミン量をも減少せしめた。RT-PCRによる解析では、肥満細胞にはRARα,RARβ,RXRαおよびRXRβなどのレチノイド受容体のmRNAが発現していた。各レチノイド受容体に選択的に作用する合成レチノイドの増殖抑制効果を比較したところ、レチノイン酸は主にRARαを介して作用することが判明した。これらの研究結果により、レチノイン酸は肥満細胞の増殖過程を阻害し、アレルギー疾患患者の肥満細胞の絶対数を減少せしめるまったく新しい抗アレルギー療法となりうることが示唆された。臍帯血CD34陽性細胞からのstem cell factor(SCF)単独刺激による肥満細胞産生システム(Sawai,Koike et al.,BLOOD;Kinoshita,Koike et al.,BLOOD)を用いて、レチノイド、ビタミンD誘導体、FK506などの免疫抑制剤などによる肥満細胞の増殖分化および化学遺伝物質やサイトカインの産生、遊離に対する影響を検討した。これらの中で、レチノイン酸をSCFとともに培養10週目の培養肥満細胞に加えたところ、用量依存性に明らかな増殖抑制効果が認められた。レチノイン酸には、種々の細胞の増殖や機能に対しての作用が報告されているが、肥満細胞に対する作用は不明である。そこで、培養ヒト肥満細胞を用いてレチノイン酸が肥満細胞の増殖や分化に及ぼす影響について検討した。(方法)ヒト

臍帯血CD34陽性細胞をSCF存在下で培養し得られた肥満細胞に、種々の濃度のATRA、9-cis RAを加えて培養し、細胞数や細胞内ヒスタミン量などを検討した。RAR、RXR各々の核内レセプターの発現をRT-PCRにより検討し、それぞれの特異的agonistによる影響についても検討した。さらにsingle cell cultureやcolony assay法を用いてのATRAの作用の検討も行った。(結果)ATRA、9-cis RAは肥満細胞の増殖を濃度依存性に抑制し、その作用はIL-6よりも強力であった。IL-6は細胞のサイズ、細胞内ヒスタミン量を増加させるのに対し、レチノイン酸は両者を減少させた。培養肥満細胞にはRAR-α、RAR-β、RXR-α、RXR-βの発現がみられ、RAR-αagonist(Ro 40-6055)はATRAと同等の効果がみられたが、RXR agonistにはその効果はみられなかった。また、single cell cultureによる検討で、ATRAはCD34陽性細胞からの肥満細胞の増殖を抑制した。(結語)レチノイン酸は肥満細胞の増殖や分化を抑制する。その作用は主としてRAR-αを介した直接的な作用である。レチノイン酸のアレルギー疾患治療戦略への応用が示唆される。
NAFLD病態改善作用を持つ新規化合物の探索および特異的バイオマーカーの探索

非アルコール性脂肪性肝疾患(NAFLD)や非アルコール性脂肪肝炎(NASH)の病態進展にマクロファージ(MΦ)の活性化は重要な役割を演じている。種々のシグナル伝達物質により活性化されたMΦは炎症型のM1型と抗炎症型のM2型に分極することが知られている。我々は様々な肝硬変モデルやMΦ細胞株を用いてSアリル化合物によりMΦの分極を制御できることを報告してきた。本研究の目的はSアリルグルタチオン(SAG)によるMΦ分極制御を介したNAFLD/NASH病態の進展抑制効果を検討することである。同時にMΦの分極に関与する生理活性セラミドを病態別に解析することで、NAFLD/NASHの病態増悪の関与するセラミド分子種を同定し、新規バイオマーカーとなりうるかを検討する。初年度である平成30年度は既報を参考に下記のNAFLDモデルラットを作成した。すなわちSprangue-Dawley雄性ラットに高脂肪食(脂質エネルギー比40%)にコレステロール2.5%付加を与え20週、30週、40週まで飼育し、脂肪肝並びに肝線維化の進行状態を確認したが、脂肪肝のみで線維化が生じないことが判明した。そこで高脂肪食を新規食餌内容に変更し、21週後に肝脂肪化および線維化を確認したところ高度な脂肪化、酸化ストレス関連タンパクの増加並びにマクロファージの分極の変化、軽度の線維化を確認できた。さらに同モデルに肝での慢性炎症由来の線維化を惹起するため、よりヒトNAFLD病態に近いモデル作成のため新規モデルを作成中である。予定より実験進行は遅れているが、プレリミナリーな実験ではより有用なモデルが作成できたため、次年時以降、前述の本実験に進む予定である。当初研究計画に記載の既報のようなNAFLD・NASHモデルでは脂肪肝は惹起されるが、線維化は生じないことが判明した。また、我々の考案した新規モデルでは高度脂肪肝並びに軽度の線維化が惹起されるが、未だ線維化は不十分であると考えられる。そこでさらにひとNAFLD/NASH病態に近い病態を作成するために種々の工夫を加え、プレリミナリーではあるが動物モデルの作成に至った。本実験モデル作成の過程は、最低11.5ヶ月単位の期間がかかるため、新規モデルの作成のために長時間を要した。現在、新規モデルを作成し、計画書に記載の実験内容を遂行中である。より有効な実験モデルの確立できたため、当初の実験モデルを変更し、新規モデルの特徴を解析の上、当初研究計画に記載のごとくSAGの治療効果および線維化抑制効果の確認をはじめ、研究計画に記載の項目につき検討していく予定である。当初研究計画に記載の既報のようなNAFLD・NASHモデルでは脂肪肝は惹起されるが、ヒト類似の肝線維化は生じないことが判明した。

結果、我々は新規モデルを考案する必要があり、予備実験のための時間を要したため、研究経過のように実験が進んでいない。しかし現在すでに記述のごとく実験モデルは確立し、現在、研究計画推進に向けて実験を進行中である。