hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
RNAiスクリーニングによるC型肝炎ウイルス感染成立に寄与する宿主因子の探索

C型肝炎ウイルス(HCV)の感染・複製に関与する宿主因子は、未だ完全に解明されていない。本研究では、HCV培養細胞感染系を用いて、RNA干渉スクリーニング法によりそれらを探索した結果、6つの候補遺伝子を見出した。また、遺伝子機能阻害ならびに遺伝子機能促進実験から、Mx遺伝子がHCVの感染に必要であり侵入に重要な役割を有することが確認された。今後、そのメカニズムを明らかにして、新たな創薬探索を目指したい。C型肝炎ウイルス(HCV)は慢性肝疾患の主要な原因ウイルスである。HCV発見から既に20年の歳月が経つが、HCVの増殖に関与する宿主因子の解析は、いまだ十分に明らかになっていない。近年HCV培養細胞感染系の樹立はHCV複製機構や関連宿主因子などの解明に新しい道を開くこととなった。本研究では、HCV培養細胞感染系(レプリコン)を用いて、自然免疫及び脂質代謝関連遺伝子群を標的とするRNA干渉スクリーニングによりHCV増殖に必要な宿主因子を同定することを目的としている。3年計画の初年度であるH20年に、1)HCV replicon RNA複製細胞株により高い力価の感染性ウイルス粒子を作製し、またHuh7.5.1細胞へのsiRNAの導入及び至適条件を検討・確立した。2)Bioinformatics情報を活用して、自然免疫におけるTLR依存と非依存二つのパスウェイに関与する候補遺伝子を66個に絞ってsiRNAライブラリーを作製した。そして、3)HCV培養細胞感染系に上記siRNAライブラリーのスクリーニングを行い、negative controlに比較しHCV増殖促進または阻害作用(いずれも3倍以上を設定)が示唆された遺伝子5つを得た。さらに、4)得られた5つ遺伝子のsiRNAのノックダウン効果およびHCV増殖に及ぼす影響を検証したところ、Mx遺伝子の発現をノックダウンするとHCV増殖が阻害されることが明らかになった。来年度は、昨年と同様にHCV培養細胞感染系において、脂質代謝に関与するsiRNAライブラリーのスクリーニングを行い、HCV増殖に影響を及ぼす遺伝子を同定する。また、得られた遺伝子を強制発現させ、その遺伝子のHCV増殖に及ぼす影響を検証し機能的に解析する。C型肝炎ウイルス(HCV)発見から既に20年の歳月が経つが、HCVの感染・複製に関与する宿主因子の詳細は、いまだ十分に解明されていない。近年、HCV培養細胞感染系の樹立はHCV複製機構や関連宿主因子などの解明に新しい道を開くこととなった。本研究では、HCV培養細胞感染系(replicon)を用いて、RNA干渉スクリーニング法によりHCV感染・複製に必要な宿主因子を探索することを目的とした。本年度までの研究で、自然免疫及び脂質代謝関連遺伝子群を標的とするsiRNAライブラリーを作製し、またHCV培養細胞感染系を用いてsiRNAによるノックダウン法と定量的RT-PCR法によってライブラリーのスクリーニングを行った。その結果、HCVの感染・複製に関わる新たな6つの宿主因子を見出した。6つの因子のうち、特にMx遺伝子をノックダウンすると、感染細胞内のウイルスRNA、および培養上清中に放出されるウイルス蛋白質の減少は顕著であった。さらに、モノクローナル抗体による機能的な解析実験から、Mx遺伝子がHCVの侵入に重要な役割を担っていることが示唆された。現在、HCV感染の感受性が高いヒト肝がん細胞株Huh-7.5.1と、感受性が低いヒト肝がん細胞株Huh-7にMxを強制発現させ、タンデムタグ免疫沈降法と質量分析によって、Mx蛋白質と相互作用する下流因子及びウイルス側の因子の同定を試みている。C型肝炎ウイルス(HCV)の感染・複製に関与する宿主因子の詳細は、いまだ十分に解明されていない。近年のHCV培養細胞感染系の樹立は、HCV複製機構や関連宿主因子の解明に新しい道を開くこととなった。本研究では、HCV培養細胞感染系を用いて、RNA干渉スクリーニング法によりHCV感染・複製に必要な宿主因子を探索・同定することを目的とした。昨年度までは、主にHcv培養細胞感染系にsiRNAライブラリーのスクリーニングを行った。その結果、HCV増殖に関わると推定される6つの候補遺伝子を見出すことができた。また、siRNAやモノクローナル抗体による遺伝子機能阻害(loss-of-function)実験から、6つの因子のうちMxという遺伝子がHCVの感染に必要であることかつ侵入に重要な役割を担っていることが検証された。H22年度は、肝がん細胞株Huh-7.5.1にMxを強制発現させ、遺伝子機能亢進(gain-of-function)によるHCV感染に及ぼす影響を検討した。Real-time PCRやWestern Blottingの結果から、Mx遺伝子の発現亢進がHCV感染・増殖に促進することが明らかになった。さらに、免疫蛍光染色法やタンデムタグ免疫沈降法を用いてMx蛋白質とHCVの相互作用を調べたところ、MxがHCV粒子の吸着、侵入に関与していることが示された。

結論として、我々はHCV培養細胞感染系を用いたsiRNAライブラリーによる効率的なHcv感染・複製に関わる宿主因子のスクリーニング法を確立し、その結果、HCV粒子の吸着、侵入に関わる新規宿主因子Mxを同定できた。今後、本因子のHCV感染成立に関わる詳細なメカニズムを明らかにするとともに新たな抗ウイルス剤の標的の探索も目指したい。
分子クラスターを用いたC-H/π相互作用の赤外分光研究

生体分子の高次構造や分子認識においては、CH基とπ電子との極めて弱い引力的相互作用が重要な役割を果たしていることが、近年多く指摘されている。この相互作用を非常に弱い水素結合と見なすか、或いは分散力であるとするかを巡っては盛んに議論が行われており、相互作用の性質解明が待たれている。このような極めて弱い分子間相互作用の研究には、他の相互作用による摂動のない孤立気相クラスターが理想的な系であり、今回の研究では、クラスターに赤外分光法を適用することで、分子間相互作用の性質解明を試みた。まず最初の試みとして、比較的酸性度が強く、強いCH基とπ電子との相互作用が期待できるアセチレンと芳香族分子との組み合わせによる二分子クラスターを対象に選び、アセチレンのCH伸縮振動のクラスター形成に伴う振動数変化を赤外分光法で観測した。ベンゼン-アセチレンはそのプロトタイプとなる系であり、アセチレンCH伸縮振動数の顕著な低下がベンゼンとのクラスター形成により観測された。,クラスター構造は、実測した赤外スペクトルと量子化学計算の対応から、ベンゼンのπ電子にアセチレンのCHが配位する形を取ることが分かり、CH-π相互作用の存在が確認された。ベンゼンに電子供与基であるメチル基を導入すると、メチル基の数に比例してCH-π相互作用の強度増大が見られた。一方、大きな分極率を持つ多環式芳香族とアセチレンのクラスターにおけるアセチレン側CH振動数を観測したが、環数の増大に伴いCH振動数シフトは減少し、分子間相互作用と分極率との相関は見られなかった。これらの結果から、アセチレンのCH基とπ電子との相互作用は静電力の寄与が大きく、通常の水素結合と同様の性格を持つものと結論した。現在、アルカン類のCHとπ電子との相互作用を解明するため、メタンとベンゼン誘導体とのクラスターにおけるメタン側CH伸縮振動の観測を行っている。メタンはアセチレンと同様にπ電子にCH基を接したクラスターを形成するが、置換基導入による振動数変化は見られず、分散力的性質が強まっていることが示唆されている。芳香族分子と炭化水素分子との間には「C-H/π相互作用」と呼ばれる引力的相互作用が働き、タンパク質の折り畳み構造や分子認識等に大きな役割を果たしているという仮説がある。この「C-H/π相互作用」はO-H・・・π型の水素結合と本質的に等しく、単にその強度を減じたものであるのか、あるいは分散力相互作用そのものであるのか、これまでに様々な議論がなされてきた。しかしながら、C-H/π相互作用のエネルギーは2-3kcal/molと見積もられ、このような微弱な相互作用の本質を多種多様な相互作用が重なりあう凝集相で解明することは極めて困難である。そこで本研究では、超音速ジェット中で生成する芳香族と炭化水素との1:1クラスターを用い、他の相互作用を排除してC-H/π相互作用のみを純粋な形で取り出し、観測することを試みた。本年度では研究の初年度として、炭化水素中でも酸性度の高いC-H基を持つアセチレンとベンゼン誘導体とのクラスターに注目し、そのアセチレン側CH伸縮振動を赤外-紫外二重共鳴法で観測した。

アセチレンのCH逆対称伸縮振動はベンゼンとのクラスター形成により約20cm-1の低波数シフトを示し、ベンゼンπ電子とアセチレンC-H基の相互作用によりクラスターが形成されていることが確認された。ベンゼンに様々な置換基を導入することによりπ電子密度を変化させると、それに対応してC-H振動のシフト値が変化するのことが観測された。また、ベンゼン、ナフタレンと受容体の分子サイズを変化させてもアセチレンC-H振動シフトに大きな変化は見られず、分子全体の分極率ではなくC-H基周辺のπ電子密度が相互作用強度を決めていることが分かった。以上の結果より、アセチレンのC-H基とベンゼン誘導体との相互作用はπ型の水素結合であると結論した。来年度では、より酸性度の弱いアルカン、アルケンと芳香族との相互作用について検証を行う。生体分子の高次構造や分子認識においては、CH基とπ電子との極めて弱い引力的相互作用が重要な役割を果たしていることが、近年多く指摘されている。この相互作用を非常に弱い水素結合と見なすか、或いは分散力であるとするかを巡っては盛んに議論が行われており、相互作用の性質解明が待たれている。このような極めて弱い分子間相互作用の研究には、他の相互作用による摂動のない孤立気相クラスターが理想的な系であり、今回の研究では、クラスターに赤外分光法を適用することで、分子間相互作用の性質解明を試みた。まず最初の試みとして、比較的酸性度が強く、強いCH基とπ電子との相互作用が期待できるアセチレンと芳香族分子との組み合わせによる二分子クラスターを対象に選び、アセチレンのCH伸縮振動のクラスター形成に伴う振動数変化を赤外分光法で観測した。ベンゼンーアセチレンはそのプロトタイプとなる系であり、アセチレンCH伸縮振動数の顕著な低下がベンゼンとのクラスター形成により観測された。クラスター構造は、実測した赤外スペクトルと量子化学計算の対応から、ベンゼンのπ電子にアセチレンのCHが配位する形を取ることが分かり、CH-π相互作用の存在が確認された。ベンゼンに電子供与基であるメチル基を導入すると、メチル基の数に比例してCH-π相互作用の強度増大が見られた。一方、大きな分極率を持つ多環式芳香族とアセチレンのクラスターにおけるアセチレン側CH振動数を観測したが、環数の増大に伴いCH振動数シフトは減少し、分子間相互作用と分極率との相関は見られなかった。これらの結果から、アセチレンのCH基とπ電子との相互作用は静電力の寄与が大きく、通常の水素結合と同様の性格を持つものと結論した。現在・アルカン類のCHとπ電子との相互作用を解明するため、メタンとベンゼン誘導体とのクラスターにおけるメタン側CH伸縮振動の観測を行っている。メタンはアセチレンと同様にπ電子にCH基を接したクラスターを形成するが、置換基導入による振動数変化は見られず、分散力的性質が強まっていることが示唆されている。
アミロイドA蛋白とその前駆体の解析ーアミロイド原性サブタイプの有無について

ヒトのAAアミロイドーシスと血清アミロイドA蛋白(SAA)のサブタイプとの関連を調べるため、以下の検体の収集と解析をおこなった。1)非アミロイドーシス患者血清(約200人分)よりSAA蛋白2)AAアミロイドーシス患者臓器よりアミロイドA蛋白5例1)は未だ完全には解明されていないSAAサブタイプを調べるため、2)は実際にアミロイド線維となって沈着しているAA蛋白を調べ、SAAのどのサブタイプに由来するのかをみるため、3)はゲノムDNAレベルでAAアミロイドーシスとSAAの関連性を調べるためである。以上の解析は完全には終了しておらず、アミロイドーシスの検体は現在も引き続き収集中であるが、現時点までで以下のような知見を得た。1.SAA1には蛋白レベルでSAA1α、SAA1βが報告されていたが、遺伝子レベルではSAA1αしか知られていなかった。我々は、精密な質量分析法とアミノ酸シークエンス分析によりSAA1αとSAA1βの2つを確認するとともに、これまで知られていなかったSAA1γがかなり一般に存在しているることを発見した[ABB,1993]。さらに、これらのSAAサブタイプには翻訳後修飾によると思われるN末端1および2個アミノ酸が切断されたものの混在が認められた。また、最近Beachらによって報告されたSAA1β-^<72>Asnも確認できた。2.AAアミロイドーシスの1例でSAA1γに由来するAAが認められた。また、SAA2αに由来するAAも共に沈着していることがわかり、これら2つのSAAサブタイプがamyloidogenicであることを初めてあきらかにした[BBA,1992]。また、1個体において複数のSAAサブタイプがAAアミロイドとなり得ることがわかり、ヒトのAAアミロイドーシスはマウス等でのように1つのSAAサブタイプのみがamyloidogenicなのではないことが示された。3.SAA1遺伝子の多形性領域であるエクソン2-エクソン3部について、AAアミロイド患者のDNAを鋳型にしてpolymerase chain reaction(PCR)をおこないsingle-strand conformation polymorphism(SSCP)法で多形性解析をおこなったところ、少なくとも3つのアロタイプがホモおよびヘテロ接合体として認められ、いまのところアミロイド患者で特定のアロタイプのみにに偏っているというデータは得られていない。
脊髄損傷後の神経機能再生時における血液-脳関門再形成の分子機構

脊髄損傷を病理学的に考察すると、最初の衝撃による神経細胞の死滅、血管の破裂、血液脊髄関門の崩壊、軸索の断裂などの一次損傷と、損傷部位周囲に急性炎症の波及で起こる二次損傷に分けることが出来る。一次損傷の程度は受傷時に決定するため、脊髄損傷の治療において二次損傷の抑制は非常に重要な治療戦略となっている。損傷後の脊髄では破綻した血液脊髄関門から炎症細胞が浸潤し、二次損傷の拡大につながるとされているが、この詳細なメカニズムは不明であった。血液脊髄関門は血管内皮細胞、基底膜、アストロサイト終足によって構成される。これらのうち特に基底膜の変化に着目し、炎症細胞浸潤の関係について研究を行った。マウスを用いて、NYU impactorによる胸髄圧挫損傷モデルを作成した。損傷後、経時的に光学顕微鏡による蛍光免疫染色法による組織観察ならびに電子顕微鏡による超微細構造の観察を行った。炎症細胞が浸潤する炎症巣における局所的な基底膜変化種々の抗体を用いて免疫染色した。損傷後初期から晩期にいたるまで損傷部の周辺で基底膜が二重に分かれている血管が存在した。急性期にはこの二重基底膜間およびその周囲に炎症細胞が浸潤していた。晩期には二重基底膜の外周でグリア境界膜の再形成が完了し、炎症細胞は二重基底膜間にのみ限局する傾向が見られた。本研究を通じて、「損傷後の脊髄では血管周囲の基底膜が二重に分かれるという組織学的な変化が起こっており、この変化が炎症細胞浸潤ひいては二次損傷に関与している」ということを明らかにした。脊髄損傷後の治療に対し,神経幹細胞移植などが試み始めているが,脊髄機能の再獲得には脊髄神経細胞の再生だけでなく,正常の脊髄と同じく,選択的な物質の透過性をもたらす血液-脳関門(BBB)の再形成も非常に重要となる.本研究では以下に述べる如く,脊髄損傷のマウスモデルを作製,BBBの破綻と再生過程におけるグリア境界膜の関与を分子レベルで明らかにすること,さらに脊髄機能再生におけるグリア境界膜の関与を明らかにすることを目的とした.グリア境界膜に特異的に発現している分子として同定し,過去に報告した新規膜タンパク質limitrinの脊髄損傷における関連性を解析した.本研究を通し,グリア境界膜が血液脳関門の機能維持に重要な役割を果たしていることが示唆された.脊髄外傷モデルにおいて血液-脳関門不全が生じるメカニズムの一つを見出したと考えている.1,脊髄損傷モデルの作製C57BL/6マウスを用いて,脊髄損傷モデルを確立した.2,脊髄損傷モデルにおける血液脳関門の破綻と再生の組織学的な解析マウス脊髄において,グリア境界膜の構成分子であるlimitrinやジストログリカン,アクアポリンによってグリア境界膜を可視化することが可能となった.そこで損傷組織におけるBBBとグリア境界膜の経時的な変化を組織染色,免疫組織染色によって詳細に解析した.これらは損傷後速やかに消失し,その後脊髄機能再生に伴って局在の回復が認められた.これらの結果から,損傷によってグリア境界膜はいったん破綻し,その後,修復されると考えられる.さらに,その変化と炎症細胞の浸潤の程度に変化がみられた.すなわちBBBの機能にグリア境界膜が関与することを示唆する結果が得られた.脊髄損傷を病理学的に考察すると、最初の衝撃による神経細胞の死滅、血管の破裂、血液脊髄関門の崩壊、軸索の断裂などの一次損傷と、損傷部位周囲に急性炎症の波及で起こる二次損傷に分けることが出来る。
樹冠拡張プロセスの解明に向けた３次元樹木モデルの時系列解析手法の構築

樹木にとって樹冠の拡張は光資源獲得のための重要な挙動である。本研究では、地上型3次元レーザスキャナにより取得した点群に基づく3次元樹木モデルを複数の時間断面で正確に重ね合わせる技術と、枝葉の空間配置変化の定量化手法により、動的な樹冠拡張プロセスを記述するための時系列解析手法を開発することを目的として行った。3次元点群データに基づく樹木モデルの時系列解析に向け、過去に計測済みの試験林における点群データの再計測を実施した。また、試験林内での相対光量子密度の測定を行い、点群データから林内光環境を推定する手法を検討した。より正確な樹木モデルの構築のため、これまでに開発した樹木モデリング手法の改良を進めた。その結果、幹についてはより複雑な断面形状に対するモデリングが可能となった。さらに枝構造の検出手法を再検討し、よりロバストに検出可能な方法を開発した。葉の点群は幹や枝の検出の際に誤差の要因となるため、樹木モデリングの際の問題となっていた。このため、葉と幹・枝の反射強度の違いを利用し、葉由来の点群を除去する方法の開発を進めた。その結果、適切に反射強度情報が得られた点群に関しては、葉由来の点群の除去が可能であった。また、レーザスキャナの機種により得られる反射強度情報が異なることを確認し、本手法が適用可能な機種を特定した。樹冠部形質の定量化及び形状情報取得のため、点群をボクセルとして集約したデータの利用を試みた。その結果、ボクセル情報から個体ごと樹冠モデリングに成功し、樹冠体積、表面積等の定量化と形状情報を詳細に取得することができた。樹木モデルによる形態形質の推定の精度を検証する目的で、3次元計測した試験林において計測個体の一部を伐倒し、地上高別の幹、枝、葉のサイズあるいは現存量を測定した。その結果、高さ別の幹の直径や葉の現存量は高い推定精度であることを確認した。また、試験林内での相対光量子密度の測定を行った。さらに、これまで取得した点群について、異なる計測点で得られたデータの統合(レジストレーション)の精度を確認し、解析用データの精査を行った。今年度はこれまで開発した樹木モデリング手法の改良を進めた。その結果、幹についてはより複雑な形状に対するモデリングが可能となった。このため、葉由来の点群を除去する方法として、反射強度の利用の検討を進めてきた。今年度は、これまでの手法を他のデータセットに適用することを試みた。その結果、反射強度情報のある点群データセットについては、これまでと同様に葉由来の点群の除去が可能であることを確認した。樹冠部のモデリングによる定量化及び形状情報取得のため、点群をボクセルとして集約したデータの利用を試みた。樹木モデルの時系列レジストレーション手法の開発に向け、同一林分で異なる年次に複数回計測した3次元点群データセットを計測年次ごとに解析し、樹木モデル構築を進めた。さらに、異なる時間断面で得られた個体位置情報の重ね合わせに着手した。今年度の当初計画のとおりに課題を遂行できた。取得した点群データを時系列解析等に供するにあたり、異なる計測点のデータのレジストレーションの精度が重要となる。今年度の課題実施中に、既存のデータに一部低精度な部分が認められたため、再レジストレーションとデータ精査を実施した。今後もこうした問題が発生することが予想されるため、その対応のための準備として、解析前のものも含めたデータの整理を実施する。

また、レーザスキャナの機種により得られる反射強度情報が異なることを確認し、本手法が適用可能な機種を特定した。樹冠部形質の定量化及び形状情報取得のため、点群をボクセルとして集約したデータの利用を試みた。その結果、ボクセル情報から個体ごと樹冠モデリングに成功し、樹冠体積、表面積等の定量化と形状情報を詳細に取得することができた。樹木モデルによる形態形質の推定の精度を検証する目的で、3次元計測した試験林において計測個体の一部を伐倒し、地上高別の幹、枝、葉のサイズあるいは現存量を測定した。その結果、高さ別の幹の直径や葉の現存量は高い推定精度であることを確認した。対象林分における3次元計測として、過去に計測した試験林における点群データの再取得を実施する。時系列レジストレーション手法の開発として、異なる時間断面で取得された樹木モデルの重ね合わせを、前年度よりさらに細かなスケールで試みる。その結果を基に、枝葉の時系列的な空間配置変化の定量化手法の開発を進める。さらに、点群データと光量子束密度の実測値を統合し、林内の光量子束密度推定モデルの開発を進める。年度当初は、解析環境の拡張のため新たな計算機及び記憶媒体の購入を予定していたが、当年度中については既存の設備で対応可能であると判断したため、予定していたものの一部の購入を見合わせた。また、3次元点群データの取得のための役務費を見込んでいたが、既存の機器による計測で対応可能であったため、当該支出がなかった。これらの理由から次年度使用額が生じた。今後の使用計画としては、研究課題の進捗に伴い新たに取得したデータや解析結果を格納する必要性が増大するため、大容量記憶媒体を購入する。また、試験林内の樹木個体の系統管理として、一部の材料についてDNA分析による確認の必要性が生じているため、その分析用試薬の購入に当てる予定である。
ヒストンバリアントＣＥＮＰ－Ａによる動原体形成メカニズムの解明

ヒストンH3バリアントであるCENP-Aは染色体のセントロメア領域に集積することで動原体形成の起点となる。これまでにCENP-Aがセントロメアに供給される分子機構について国内外で盛んに研究が行われているが、一度セントロメアに供給されたCENP-Aが維持されるメカニズムについては不明な点が多い。本研究はセントロメアに供給されたCENP-Aの維持機構を解明することを目的としている。前年度までに、動原体タンパク質CENP-I/Mis6がCENP-Aの維持に寄与することを見出していたため、本年度はMis6がCENP-Aを維持する機構の詳細な解析を行った。具体的には、セントロメアからタンパク質に翻訳されないノンコーディングRNAが転写されることに着目し、Mis6とRNA転写の関連性について追究した。その結果、Mis6の機能が低下するmis6温度感受性変異体において、セントロメア領域におけるRNAポリメラーゼIIの蓄積が増大し、転写量の増加がみられた。すなわち、Mis6はセントロメア領域での過剰な転写を抑制することでCENP-Aヌクレオソームの脱落を防ぐことが示唆された。このことは前年度に示した、RNAポリメラーゼの阻害によりmis6変異体でのCENP-A量の減少がみられなくなる結果からも支持される。さらに、一部のクロマチンリモデリング因子を欠失させた変異体においてもCENP-A量の低下がみられたことから、野生型相当の転写が起きる際には特定のクロマチンリモデリング因子によってCENP-Aが維持されることが示唆された。最終的に、このようなCENP-Aの維持機能の破綻によって、染色体の不均等分配の頻度が増加して細胞の生育が悪化することを明らかにした。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。染色体のセントロメア領域に呼び込まれるCENP-Aは動原体形成に必須のタンパク質である。セントロメアにおけるCENP-Aの量が減少あるいは増加すると染色体分配に異常が生じることから、CENP-Aの量は厳密に制御されている必要がある。本研究は、セントロメアに呼び込まれたCENP-Aの量がどのようにして制御されるのかについて解明することを目的としている。本年度は分裂酵母CENP-AにGFPがタグ付けされ、かつ各細胞周期で停止する変異体を作製し、CENP-Aが呼び込まれる時期をFRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching)法を用いて特定した。その結果、G1期およびG2期にはCENP-Aはセントロメアに呼び込まれたが、分裂期には呼び込まれなかった。また、興味深いことにCENP-Aは呼び込まれ続けても過剰に蓄積しなかったことから、過剰量のCENP-Aがセントロメアに蓄積しないように制御する機構が存在することが示唆された。染色体分配に必須の役割を担う動原体は、ヒストンH3バリアントであるCENP-Aを基点として形成される。セントロメアにおけるCENP-A量の過不足は染色体分配の異常につながることから、CENP-A量は厳密に制御されている必要がある。本研究は、セントロメアに呼び込まれたCENP-A量がどのようにして制御されるのかについて解明することを目的としている。本年度では、セントロメアに呼び込まれたCENP-Aの維持に動原体タンパク質CENP-I/Mis6が寄与していることを明らかとした。また、Mis6がどのようにしてCENP-Aの維持に寄与しているか以下の2つのモデルを考えて研究を進展させた。先行研究の知見から、Mis6がCENP-Aに直接結合することがCENP-Aの安定性を高めていると推測した。しかしながら、共免疫沈降法によるMis6とCENP-Aの結合は確認出来なかった。また、CENP-A変異体においてMis6の局在は完全に消失しなかった。以上のことから、Mis6は本モデルとは異なる機構でCENP-Aの維持に寄与していると結論づけた。(2) Mis6がクロマチンリモデリング因子を介してCENP-Aを維持するモデルセントロメアからノンコーディングRNA(ncRNA)が転写されるという知見から、Mis6はncRNAが転写される際に、CENP-Aの脱落を防いでいると推測した。実際に、RNAポリメラーゼIIの阻害剤を用いてncRNAの転写を停止させると、mis6変異体でのCENP-A量の減少がみられなくなった。この結果は本モデルを支持するものであり、次年度はさらにこのモデルの正当性を追究する。セントロメアに呼び込まれたCENP-Aがどのようにして制御されるのかという問いに対して、多角的に仮説を立て実験を行い、一定の成果が得られた。

具体的には、セントロメアからタンパク質に翻訳されないノンコーディングRNAが転写されることに着目し、Mis6とRNA転写の関連性について追究した。その結果、Mis6の機能が低下するmis6温度感受性変異体において、セントロメア領域におけるRNAポリメラーゼIIの蓄積が増大し、転写量の増加がみられた。すなわち、Mis6はセントロメア領域での過剰な転写を抑制することでCENP-Aヌクレオソームの脱落を防ぐことが示唆された。このことは前年度に示した、RNAポリメラーゼの阻害によりmis6変異体でのCENP-A量の減少がみられなくなる結果からも支持される。さらに、一部のクロマチンリモデリング因子を欠失させた変異体においてもCENP-A量の低下がみられたことから、野生型相当の転写が起きる際には特定のクロマチンリモデリング因子によってCENP-Aが維持されることが示唆された。最終的に、このようなCENP-Aの維持機能の破綻によって、染色体の不均等分配の頻度が増加して細胞の生育が悪化することを明らかにした。本年度の研究により、過剰量のCENP-Aがセントロメアに呼び込まれないように制御する機構が存在することが示唆された。今後は、その機構を解析するとともに、一度セントロメアに呼び込まれたCENP-Aが維持され続ける機構についても着目し、解析を行なう予定である。本年度の研究から、セントロメアからncRNAが転写される際に、Mis6によってCENP-Aが維持されることが示唆された。次年度は、転写の際にヒストンのリサイクルに寄与するクロマチンリモデリング因子とMis6の関係性を追究する。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
ドイツにおける移民の社会統合の促進とスポーツクラブの役割

日本とドイツは、少子高齢化という共通の課題を抱えているが、外国人の受け入れについてはその考え方と政策において違いが見られる。ドイツ連邦統計庁の国勢調査によると、2015年現在、「移民的背景を持つ者」は、約1,710万人で、ドイツ総人口の21%を占めている。2015年以降、ヨーロッパにおいて反移民・反難民の動きが活発化し、外国人受け入れに対する危惧やヶ年が高まっている。こうした状況にもかかわらず、ドイツでは今も移民や難民を積極的に受け入れている。こうした国の政策を背景として、他国からの移民を社会に統合するという点でスポーツクラブの果たす役割が益々重要になっている。2019年3月15日から23日まで7泊9日の予定でドイツを訪問し、実際に移民の受け入れを積極的に行っている「ヤン・カペレン体操クラブ」「オルケン体操クラブ」「TUSグレーベンブロイヒ」「ロートヴァイス・ギーラス体操クラブ」「ノイス水泳クラブ」「SGカールスト」「TSVバイヤードルマーゲン」の7つのスポーツクラブを訪問し、理事の方々と地域スポーツクラブの果たす社会的統合の役割と機能について様々な意見交換を行った。その結果、スポーツクラブにおけるスポーツ活動の場が、移民同士または移民と地元住民の会話の場となったり、犯罪等の地域が抱える問題を緩和するきっかけとなったり、相互の文化に対する理解を深める機会や母国から離れて暮らす移民の帰属意識を回帰させる機会になるなど、さまざまな側面において移民同士や移民と地元住民の間に効果をもたらしているという興味深いコメントを聞き出すことができた。また、州スポーツ連盟や郡・市町村のスポーツ連盟が様々な民族に対応しながら、スポーツを通じた社会統合プログラムを実施していることが明らかとなった。2019年3月15日から23日まで、調査対象地であるライン・ノイス郡を訪問し、スポーツ相談課長のアクセル・ベッカー氏(Axel Becker)、ヤン・カペレン体操クラブのクラウス・カルヴィス会長(Klaus Calvis)とアクセル・シュリューター副会長(Axel Schlueter)、オルケン体操クラブのハインツ・ペーター・コルテ会長(Heinz-Peter Korte)、TUSグレーベンブロイヒのフリーデル・ゴイエニヒ理事長(Friedel Geuenich)、ロートヴァイス・ギーラスクラブのサンドラ・コグリン副理事長(Sandra Koglin)、ノイス水泳クラブのギーゼラ・フーク事務局長(Gisela Hug)、SGカールストのアンドレアス・ヴァルント理事長(Andreas Warnt)そしてTSVバイヤードルマーゲンのアクセル・ベルツ事務局長(Axel Wertz)等にインタビュー調査を実施することができた。その結果、移民大国ドイツの社会統合の促進に地域スポーツクラブが大きな役割を及ぼしていることが明らかとなった。次年度は、ライン・ノイス郡のスポーツクラブを対象にオンライン・アンケート調査(2019年8月末から9月初旬)を行う予定である。主な質問内容は、クラブの概要(設立年、会員数、、種目数等)、会員に占める移民的背景を持った人々の割合、ボランティアに従事する移民的背景を持った人々の割合、移民的背景を持った人々を受け入れるための特別なプログラム実施の有無、スポーツクラブにおける移民の当配分、会員に占める移民の割合の高いクラブと低いクラブが抱える問題、スポーツ施設の利用状況、財務状況、諸機関との連携・協力、国際交流、スポーツ指導者と運営スタッフ(有給・無給)、クラブの支援活動に対する満足度と重要度、今後の課題と展望、そしてフェースシート等である。【研究実績の概要】2018年3月19日から24日の4泊6日の日程で、SSC大泉の茨田理事長と共にドイツ中西部に位置するライン・ノイス郡(人口44万人)を訪問した。まず、ライン・ノイス郡内にある約350の地域スポーツクラブに対して様々な指導・助言を行っているスポーツ相談課長のアクセル・ベッカー氏に移民の社会的統合とスポーツクラブの役割についてヒアリングを行ったところ、近年の国際化を背景として、他国からの移民を社会に統合するという点でスポーツクラブの果たす役割が益々重要になっていること、ドイツのスポーツクラブでは、全会員の10%に当たる約280万人の移民的背景を持っている人々を会員として抱えていることが明らかになった。次に、実際に移民の受け入れを積極的に行っているグレーベンブロイヒ市にある「ヤン・カペレン体操クラブ」や「オルケン体操クラブ」、コルシェンブロイヒ市にある「シニア世代体操クラブ」、ユッヘン町にある「ロートヴァイス・ギーラス体操クラブ」、ドルマーゲン市にある「TSVバイヤードルマーゲン」の5つのスポーツクラブを訪問し、理事の方々と地域スポーツクラブの果たす社会的統合の役割と機能について様々な意見交換を行った。今年度末、調査対象地であるライン・ノイス郡を訪問し、スポーツ相談課長のアクセル・ベッカー氏(Axel Becker)、ヤン・カペレン体操クラブのクラウス・カルヴィス会長(Klaus Calvis)とアクセルシュルター副会長(Axel Schlueter)、オルケン体操クラブのハインツ・ペーター・コルテ会長(Heinz-Peter Korte)、コルシェンブロイヒ・シニア世代体操クラブのホルスト・リップハーン理事長(Horst Ripphahn)、ロートヴァイス・ギーラスクラブのサンドラ・コーグリン理事長(Sandra Koglin)、そしてTSVバイヤードルマーゲンのアクセル・ベルツ理事(Axel Wertz)等にインタビュー調査を実施することができた。

その結果、移民大国ドイツの社会統合の促進に地域スポーツクラブが大きな役割を及ぼしていることが明らかとなった。日本とドイツは、少子高齢化という共通の課題を抱えているが、外国人の受け入れについてはその考え方と政策において違いが見られる。ドイツ連邦統計庁の国勢調査によると、2015年現在、「移民的背景を持つ者」は、約1,710万人で、ドイツ総人口の21%を占めている。2015年以降、ヨーロッパにおいて反移民・反難民の動きが活発化し、外国人受け入れに対する危惧やヶ年が高まっている。こうした状況にもかかわらず、ドイツでは今も移民や難民を積極的に受け入れている。こうした国の政策を背景として、他国からの移民を社会に統合するという点でスポーツクラブの果たす役割が益々重要になっている。2019年3月15日から23日まで7泊9日の予定でドイツを訪問し、実際に移民の受け入れを積極的に行っている「ヤン・カペレン体操クラブ」「オルケン体操クラブ」「TUSグレーベンブロイヒ」「ロートヴァイス・ギーラス体操クラブ」「ノイス水泳クラブ」「SGカールスト」「TSVバイヤードルマーゲン」の7つのスポーツクラブを訪問し、理事の方々と地域スポーツクラブの果たす社会的統合の役割と機能について様々な意見交換を行った。その結果、スポーツクラブにおけるスポーツ活動の場が、移民同士または移民と地元住民の会話の場となったり、犯罪等の地域が抱える問題を緩和するきっかけとなったり、相互の文化に対する理解を深める機会や母国から離れて暮らす移民の帰属意識を回帰させる機会になるなど、さまざまな側面において移民同士や移民と地元住民の間に効果をもたらしているという興味深いコメントを聞き出すことができた。また、州スポーツ連盟や郡・市町村のスポーツ連盟が様々な民族に対応しながら、スポーツを通じた社会統合プログラムを実施していることが明らかとなった。2019年3月15日から23日まで、調査対象地であるライン・ノイス郡を訪問し、スポーツ相談課長のアクセル・ベッカー氏(Axel Becker)、ヤン・カペレン体操クラブのクラウス・カルヴィス会長(Klaus Calvis)とアクセル・シュリューター副会長(Axel Schlueter)、オルケン体操クラブのハインツ・ペーター・コルテ会長(Heinz-Peter Korte)、TUSグレーベンブロイヒのフリーデル・ゴイエニヒ理事長(Friedel Geuenich)、ロートヴァイス・ギーラスクラブのサンドラ・コグリン副理事長(Sandra Koglin)、ノイス水泳クラブのギーゼラ・フーク事務局長(Gisela Hug)、SGカールストのアンドレアス・ヴァルント理事長(Andreas Warnt)そしてTSVバイヤードルマーゲンのアクセル・ベルツ事務局長(Axel Wertz)等にインタビュー調査を実施することができた。
生体適合性材料の金属表面への化学結合による安定固定化の実現

近年、医療の高度化に伴い、金属材料を血管内で直接血液と接触するような条件下で使用する局面が多くなっている。金属材料を血液中で安定に用いるためには眷属表面に高い血液適合性を付加することが必要である。本研究は、高い抗血栓性を有する高分子材料を安定に金属材料表面に固定化することを目的とし、種々の金属材料表面に金の層を形成し、チオール基と金の反応を利用し、金表面に安定な高分子を作製する手法を検討した。1.金属の作製:医療用金属として広く利用されているステンレスを金メッキすることにより表面医金の博捜を形成した。メッキ法は工業的に確立されており、比較的容易に安定な金層が得られ応用範囲が広いと考えれる。2.金表面へのポリマーの導入:製膜性の良いプチルメタクリレートとメタクリル酸クロライドとの共重合体を合成し、アミノエタンチオールと反応させることにより、チオール基を有するポリマーの作製を試みた。反応後得られたポリマーは、不溶化した。これは、S-S結合の形成によると考えられる。ポリマーの不溶化を避けるため、金表面にアミノ基を導入後、アミノ基を利用してポリマーを固定化することを検討した。金メッキをしたステンレス版(20×30×0.5mm)を24時間アミノエタンチオール溶液(2wt%,クロロホルム)に浸漬し、洗浄液接触角を測定した。接触角はpH依存性を示し、アミノ基の導入が確認された。4.今後の計画:今後このアミノ基と酸クロライドを有するポリマーの反応により表面ポリマーを固定する。報告者らは、ガラス表面にポリスチレンを化学結合させた後に抗血栓性材料をコートすることにより、安定なポリマー層が得られることを見いだしており、この手法を応用し、金属表面に血液適合性を付加する。
血液脳関門を介した脳からの薬物排出過程の定量的評価に関する研究

本研究課題の目的は、薬物のBBB排出速度と流入速度を分離して評価すること、及び、これまでほとんど明らかにされていない薬物のBBB排出輸送系と、生体内内因性物質輸送系との関連を明らかにすることであった。薬物には、脳移行性の低い酸性薬物プロべネシドとサリチル酸を選択した。平成7年度は、脳マイクロダイアリシス法などの種々のin vivo実験法を用いて両薬物のBBB流入過程と排出過程を速度論的に分離評価した。その結果、両薬物のBBB排出クリアランスは流入クリアランスに比べ大きく、また定常状態において、血漿中および脳脊髄液中から細胞間液中への下り坂濃度勾配が観察された。平成8年度はプロべネシドを中心に、上述のBBB排出輸送についてさらに検討を加えた。プロベネシドのBBB排出クリアランスはN-エチルマレイミドにより有意に低下し、この排出輸送には機能性の蛋白が関与していることが示された。次に、この輸送系と内因性物質輸送系との関連を明らかにするために、種々の阻害剤を用いて輸送系の特徴づけを行った。その結果、腎有機アニオン輸送系の基質であるパラアミノ馬尿酸、アミン輸送系のコリンはプロベネシドのBBB排出にほとんど影響を与えなかったが、モノカルボン酸輸送系の基質である安息香酸およびサリチル酸、また有機カチオンのN'-メチルニコチンアミドでは有意な阻害が認められた。さらにサリチル酸のBBb排出もプロべネシドおよび安息香酸により阻害された。以上の検討結果より、プロベネシドおよびサリチル酸は、BBBに発現しているモノカルボン酸輸送系に一部認識されて脳から積極的に排出され、このことが脳移行性の低い原因であることが示唆された。本研究成果は、薬物の脳移行性評価のみならず、中枢性疾患に対する薬物療法やBBB難透過型薬物の脳移行性改善法の開発にとって有意義な情報を与えるものと確信する。本研究の課題は、酸性薬物の血液脳関門排出過程を定量的に評価すること、及び内因性物質輸送系との関連を明らかにすることであり、本年度は以下の研究実績を得た。実験は、脳マイクロダイアリシス法、in situ脳潅流法、静脈内投与法、脳細胞間液内投与法などの種々のin vivo実験法を用いて、酸性薬物プロベネシドおよびサリチル酸の血液脳関門透過性を血液側から脳側への流入速度と、脳から血液側への排出速度に分離して評価した。その結果、1)定常状態におけるプロベネシドおよびサリチル酸の脳細胞間液中濃度、並びに脳脊髄液中濃度は、血漿中非結合型濃度よりも低く、脳室から脳細胞間液に向けての下り坂濃度勾配と、脳細胞間液側から血液側に向けての上り坂濃度勾配が成立していた。2)脳組織内薬物量/脳細胞間液中濃度で定義される脳内分布容積は、両薬物ともに約2.5ml/g脳となり、脳細胞内への分布が確認された。3)血液脳関門排出クリアランスに対する流入クリアランスの比は、プロベネシドで約5、サリチル酸で約8となり、両薬物ともに排出クリアランスは流入クリアランスを上回った。4)プロベネシドとサリチル酸の血液脳関門排出クリアランスは、互いを阻害剤とすることで有意に低下した。以上の結果より、プロベネシドとサリチル酸の脳移行性は制限されていて、それは上り坂濃度勾配に逆らって起こる積極的な血液脳関門排出に起因することが、定量的に明らかとなった。

また、両薬物の血液脳関門排出には、相互に阻害される内因性物質輸送系の関与することが示唆された。本研究により、これまでP糖蛋白以外にはほとんど明らかにされていなかった血液脳関門排出過程に対して、酸性薬物を脳内から積極的に排除する輸送システムが存在し、それは薬物あるいは老廃物の解毒機構として重要な役割を担っていることが示唆された。また上記の結果は、薬物の脳内薬理効果および脳特異的薬物送達法の開発にとって、有意義な情報を与えるものと確信する。本研究成果を、第17回生体膜と薬物の相互作用シンポジウム、第10回日本薬物動態学会年会にて発表した。本研究の課題は、酸性薬物の血液脳関門排出過程を定量的に評価すること、及び排出輸送系と内因性物質輸送系との関連を明らかにすることであった。実験は、脳マイクロダイアリシス法、in situ脳潅流法、静脈内投与法、脳細胞間液内投与法などの種々のin vivo実験法を用いて、酸性薬物プロベネシドおよびサリチル酸の血液脳関門透過性を血液側から脳側への流入速度と、脳から血液側への排出速度に分離して評価した。その結果、1)定常状態におけるの脳細胞間液中濃度、並びに脳脊髄液中濃度は、血漿中非結合型濃度よりも低く、脳室から脳細胞間液に向けての下り坂濃度勾配と、脳細胞間液側から血液側に向けての上り坂濃度勾配が成立していた。2)血液脳関門排出クリアランスに対する流入クリアランスの比は、プロベネシドで約5、サリチル酸で約8となり、両薬物ともに排出クリアランスは流入クリアランスを上回った。3)プロベネシドのBBB排出クリアランスは、蛋白修飾剤N-エチルマレイミドで有意に低下した。これらの知見に加えて、両薬物のBBB排出は、1)モノカルボン酸輸送系の基質である安息香酸、サリチル酸で有意に阻害されたが、2)パラアミノ馬尿酸や、有機カチオン系の基質であるN-メチルニコチン酸アミドとコリンではほとんど阻害されなかった。以上の結果より、プロベネシドとサリチル酸の脳移行性は制限されていて、それは上り坂濃度勾配に逆らって起こる積極的な血液脳関門排出に起因することが、定量的に明らかとなった。また、両薬物の血液脳関門排出には、モノカルボン酸輸送系が一部関与することが示唆された。
時系列データによる日本の博物館の動態分析

時系列データの分析により日本の博物館の動態について以下の点を解明した。(1).博物館と社会との関係の変化は公立館に顕著なこと(2).入館者数と生涯学習政策の関連性(3).博物館の入館者に2極化傾向が見られること(4).特別展の増加が入館者増に結びついていないこと(5).情報化・デジタルアーカイブの充実は入館者の多さと相関すること(6).公立館の入館者が開館6年目迄に開館時の約7割に減少すること(7).1990年代以降活動の力点を収集保存,展示から教育普及へと移行する博物館が顕著なこと時系列データの分析により日本の博物館の動態について以下の点を解明した。(1).博物館と社会との関係の変化は公立館に顕著なこと(2).入館者数と生涯学習政策の関連性(3).博物館の入館者に2極化傾向が見られること(4).特別展の増加が入館者増に結びついていないこと(5).情報化・デジタルアーカイブの充実は入館者の多さと相関すること(6).公立館の入館者が開館6年目迄に開館時の約7割に減少すること(7).1990年代以降活動の力点を収集保存,展示から教育普及へと移行する博物館が顕著なこと研究テーマ:「博物館と社会の関係変化とその背景の解明博物館を取り巻く社会情勢・教育情勢の変化」市民・利用者サイドに立つ博物館の運営を研究視点として,(1)博物館と社会との間の関係変化はどのような点で見て取れるか,(2)変化はどのような博物館に生起している,(3)変化を生み出している博物館を巡る環境の変化は何か,博物館運営の特徴は何か,の3項目を検証するため、以下の研究を行った。1博物館に関する入館者等のデータの時系列化等・日本博物館協会が実施した「博物館総合調査」の過去3回分(平成9、16、20年度)のデータの時系列化・文部科学省が実施する「社会教育調査」の調査項目の変遷の把握と主要項目のデータの時系列化・日本博物館協会が保有する博物館の入館者データ(昭和50年度以降)の時系列化・上記データのうち平成11年度以降から現在まで全年度のデータが存在する博物館のデータの抽出と当該博物館の入館者数と企画(特別)展の開催状況に関するデータの整理2博物館に関する国の政策動向に関する論点整理・文部科学省の博物館関係の会議のメンバーとして活動されてきた博物館関係者から、博物館政策の現状と課題について報告していただき、研究メンバーと議論した。3博物館の動向に関する年表の作成・博物館を取り巻く社会情勢・教育情勢について検証し、「年表」を作成するとともに、論文形式で博物館の動向とその背景を整理した。4博物館の活動実態・科学系博物館の活動実績(資料のデータベース化と情報発信状況)を調査した。研究テーマ:「博物館と社会の関係変化とその背景の解明博物館を取り巻く社会情勢・教育情勢の変化」市民・利用者サイドに立つ博物館の運営を研究視点として,(1)博物館と社会との間の関係変化はどのような点で見て取れるか,(2)変化はどのような博物館に生起している,(3)変化を生み出している博物館を巡る環境の変化は何か,博物館運営の特徴は何か,の3項目を検証するため、以下の研究を行った。1博物館に関する入館者等のデータの時系列化と分析・日本博物館協会が保有する入館者データ等の整序作業を行い、博物館の入館者動向、開館後の年度経過による入館者数の増減傾向について分析した。・科学系博物館のITの活用状況、デジタル・アーカイブ化の状況を調査し、ITの活用等の状況が入館者数とどのような相関関係にあるかを分析した。・入館者に占める企画(特別)展の入館者の状況に関するデータを整序した。・日本博物館協会が実施した「博物館総合調査」の過去3回分(平成9、16、20年度)のデータについて、時系列比較が可能なかたちでの整序を行い、最近の博物館の動向(教育普及活動への力点の移行、博物館が抱える課題等)について、現状把握と規定要因の分析を行った。・「社会教育調査」(文部科学省)の博物館関連統計のうち主要データの時系列化を行い、グラフ表示を行った。2博物館に関する国の政策動向に関する論点整理・戦後の社会教育行政全般の動向の中で博物館行政の特徴について分析した。3博物館と社会の関係変化とその背景・博物館の事業展開の特徴を明らかにするため、博物館の実態調査を行うとともに、千葉県を事例に、博物館のネットワークの在り方について考察した。日本博物館協会の博物館総合調査・博物館園活動報告、文科省の社会教育調査等の入館者状況その他のデータを分析することにより、日本の博物館の動態について以下の点を解明した。1博物館と社会との関係の変化について検証し、博物館を取り巻く社会・教育情勢、博物館の取組について時系列の推移表を作成した。博物館と社会との関係の変化は公立館に顕著であることを解明した。2博物館の入館者数等の変化と国の博物館・社会教育・学校教育政策の関連を解明した。また、教育委員会と首長部局所管の博物館の役割等について考察した。3博物館の入館者について所在地と開館時期に着目した分析とパネルデータによる分析を行い、入館者数が増加傾向にある館と減少傾向にある館に2極化していること、減少傾向にある館に共通する特性として経営資源の少なさが見られることを解明した。4企画展・特別展は,年度や地域,館種・運営組織,入場者状況及び展示テーマについて時系列データからどのような特徴があるか分析し、各館で実施数、開催日数は増加しているが、入館者増には必ずしも結びついていないことを解明した。

5入館者数が把握できた平成12・17・22年度の博物館ウェブサイトをデジタルアーカイブの実施項目別に調査し,デジタルアーカイブの充実と入館者数の状況,検索エンジンによるヒット件数の多寡との関係を解明した。6公立館が開館して以後の入館者数の推移において,大多数の館が漸減あるいは急減し、開館6年目までに入館者数がほぼ7割まで減少する等の「平均的」な傾向を明らかにするとともに、特異的な傾向を見せた事例を概観した。7博物館総合調査の再分析を通じ、1990年代以降、活動の力点を収集保存から展示、更に教育普及へと移行している館が目立つこと、この動きの背景には、評価活動を通した館の在り方の再検討があり、この動きは館の教育普及活動を活性化させていることを解明した。扱うデータが膨大なため、データの整序作業に予想以上の時間がかかり、分析作業は、現時点では途中段階ではあるものの、分析の枠組みは固まりつつある。24年度が最終年度であるため、記入しない。・博物館の所在する地域の特徴や博物館の活動状況を十分反映するデータを入手・整理し、博物館の入館者数との相関関係を把握していく。・日本博物館協会の「博物館総合調査」と文部科学省の「社会教育調査」のデータは、多くの関係者の共有資産になるように整序化の作業を継続し、日本博物館協会が実施する今後の調査で過去のデータを有効に活用できるように、「社会教育調査」のデータを時系列化したもの等については、多くの関係者がアクセス可能な公表方法を検討する。