hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
酵母におけるD-アスパラギン酸に特異的な転写誘導機構の解明

平成16年度は、ChDDO遺伝子プロモーターにおけるD-Asp特異的な転写誘導に必須な領域の解析を容易にするため、本酵母における自律複製型ベクターの構築を考え、本酵母のゲノムDNAからの自律複製配列(ARS)の単離を検討した。本酵母のゲノムDNAを制限酵素で切断した後、アガロースゲル電気泳動により分離し、16kbpのDNA断片をゲルから回収した。回収したDNA断片を本酵母の染色体DNA組込み型ベクターに連結し、ARS単離のためのゲノムDNAライブラリーを構築した。構築したゲノムDNAライブラリーをエレクトロポレーションにより本酵母のウラシル栄養要求性変異株に導入し、ウラシル非栄養要求性となった株を選択培地により選別した。これらの株からプラスミドを大腸菌に回収することにより、本酵母細胞内で自律的に存在するベクターを選別した。さらにこの選別を2回繰り返して行い、高い形質転換効率を有するベクターを複数個得た。これら形質転換体のサザンブロット解析により、染色体DNAに組込まれず、自律的に細胞内に存在するベクターをさらに選抜した。選抜されたベクターの一つにはARSを有すると推測される4.2kbpのゲノム断片が存在していた。現在、当該DNA断片の欠失断片を用いてARS機能領域を限定している。酵母Cryptococcus humicolus UJ1は、D-アスパラギン酸(D-Asp)を唯一の窒素源として培養した時にのみ、D-アスパラギン酸酸化酵素(DASPO)を誘導合成する。このことから、本酵母においてD-Aspの立体構造を特異的に認識する遺伝子発現制御機構の存在が示唆された。本研究は、本酵母におけるDASPOの誘導発現に関わる因子を解明することにより、D-Aspの立体構造に特異的な遺伝子発現制御機構を解明することを目的とする。本研究の研究期間内では、(1)DASPO遺伝子の単離、(2)プロモーター中の転写誘導に必須な配列の解明、(3)トランスに作用する転写活性化因子の遺伝子単離を目的とする。本酵母から精製したDASPOの部分アミノ酸配列をもとにプライマーを設計し、ゲノムDNAを鋳型としたPCRにより本酵素の部分遺伝子断片を得た。この遺伝子断片をプローブとして用い、ゲノムDMライブラリーから本酵素遺伝子全長を含むDNA断片を単離した。また、本酵素のcDNAを合成し、その塩基配列を解析した。本酵素遺伝子は1,110bpからなり、370アミノ酸からなる分子質量39,459Daのタンパク質をコードしていた。本酵素の推定アミノ酸配列には、D-アミノ酸酸化酵素(DAO)間で保存されている触媒残基やFAD結合モチーフが保存されていた。また、C末端にはペルオキシソーム標的シグナルがみられた。本酵素の推定アミノ酸配列は哺乳動物由来のDASPOと約27%、カビ由来のDAOとは約30%の相同性を示した。本酵素遺伝子を大腸菌内で発現させたところ、発現産物のDASPO活性が確認された。現在、本酵素遺伝子の大腸菌での大量発現を検討するととともに、本酵素遺伝子のプロモーター領域の塩基配列を解析している。また、本酵素の生理機能について解析を行っている。平成14年度の本研究においてC.humicola UJ1のD-アスパラギン酸酸化酵素(ChDDO)遺伝子の単離と大腸菌での活性発現に成功した。平成15度は、以下の事項について検討した。1.ChDDO発現の基礎的解析と上流領域の単離本酵素活性は、利用し易い窒素源であるアンモニアなどの共存下においてもD-アスパラギン酸(^D-Asp)の存在により誘導発現し、D-Aspを唯一の炭素源とした場合にも誘導が観察された。このことから、ChDDOの発現がカタボライト抑制の脱抑制によらないことが示唆された。また、ノーザン解析から、ChDDOはD-Asp特異的に転写段階で誘導されることが明らかとなった。ChDDO遺伝子上流領域約2kbpを単離し、既知の転写因子結合配列を検索したところ、ストレス応答配列など多数の転写因子結合配列の存在が確認された。現在、レポーター遺伝子を用いたシスエレメント解析系の構築が進行中である。2.組換えChDDOの諸特性の解析大腸菌で発現させた組換えChDDOを精製し、その酵素学的諸特性を解析したところ、組換えChDDOの基質特異性などの諸性質は酵母から精製したChDDOと一致した。現在、部位特異的変異導入によるChDDOの構造機能相関に関する研究が進行中である。3.ChDDOの生理機能解析ChDDO遺伝子破壊株を構築し、D-Aspを唯一の窒素源、炭素源および窒素源と炭素源とした培地における生育を観察したところ、野生株とは反対に、破壊株はいずれの培地においても全く生育しなかった。この結果より、ChDDOは本酵母においてD-Aspを代謝する唯一の酵素であり、D-Aspを栄養源として利用する役割を担っていることが明らかとなった。また、破壊株はD-Aspの毒性に対して高い感受性を示したことから、ChDDOが解毒酵素としても機能していることが明らかとなった。

回収したDNA断片を本酵母の染色体DNA組込み型ベクターに連結し、ARS単離のためのゲノムDNAライブラリーを構築した。構築したゲノムDNAライブラリーをエレクトロポレーションにより本酵母のウラシル栄養要求性変異株に導入し、ウラシル非栄養要求性となった株を選択培地により選別した。これらの株からプラスミドを大腸菌に回収することにより、本酵母細胞内で自律的に存在するベクターを選別した。さらにこの選別を2回繰り返して行い、高い形質転換効率を有するベクターを複数個得た。これら形質転換体のサザンブロット解析により、染色体DNAに組込まれず、自律的に細胞内に存在するベクターをさらに選抜した。選抜されたベクターの一つにはARSを有すると推測される4.2kbpのゲノム断片が存在していた。現在、当該DNA断片の欠失断片を用いてARS機能領域を限定している。
中世楽書の生成と秘伝の相承ならびに楽書の基礎的研究

楽書についての研究と、音楽に関連する資料についての研究を行った。まず、楽書については春日大社寄託の楽書断簡二葉についての論文をまとめ、鎌倉期成立の『掌中要録』の書写について検討した。加えて、鎌倉期成立の『文机談』の秘曲伝授説話に着目して、この説話に当時の音楽をめぐる状況が反映されていることを明らかにした。音楽に関わる資料としては、仏教儀式で演奏される『音楽講式』の断簡を紹介した。また音楽法会をともなう場面を有する大阪府堺市所在の堺長谷寺蔵の長谷寺縁起を調査して報告書としてまとめ、同寺の縁起関連資料について考察した。1狛氏周辺における楽書の研究(1)楽書断簡の研究春日大社に寄託されている楽書断簡二葉についての紹介と検討を行った。本断簡は、同大社蔵の鎌倉期成立の楽書群「春日楽書」のうち、『楽所補任』の上巻末尾、『舞楽手記』の冒頭であることが判明した。両断簡の出現により、『楽所補任』『舞楽手記』の不明部分が明らかになったことは、「春日楽書」を研究するうえで重要なことといえる。(2)『掌中要録』の研究狛海王丸(『続教訓抄』の著者狛朝葛の幼名)写の『掌中要録』は、南都狛氏に継承されていた左方の舞楽の舞譜集成であるが、伝本や成立事情などについては明らかではない。十数本を数える伝本があるが、『続群書類従』所収本系統の本文は「流布本系」とされる。その系統の伝本のうち、元文五年(一七四〇)の識語をもつ紅葉山文庫旧蔵の『掌中要録』書写の経緯について検討した。すなわち、該本は江戸城紅葉山文庫にはすでに『掌中要録』が存在したものの、欠巻などの不備のため、別に写本を探索し、新たに作成されたものであることが明らかになった。2『音楽講式』断簡の紹介と検討本講式は鎌倉時代に成立したもので、音楽と法会・文学との関わりをうかがわせる興味深い資料である。これまで鎌倉末頃写の高野山大学図書館寄託金剛三昧院蔵本、江戸末期写『魚山叢書』所収本が知られるのみであったが、鎌倉時代末写と推測される架蔵の断簡が存在する。本断簡を紹介するとともに他伝本との比較を行い、これが金剛三昧院本と同系統であること、傍訓等がない等の両本とは異なる特徴をもつことを指摘した。3関連する典籍の研究研究途上に見出された典籍について、本年度は、堺長谷寺蔵の縁起二点『堺長谷寺縁起』『(大和)長谷寺縁起』についての検討を行った。4『続教訓抄』『体源抄』伝本の分析と整理これまでに収集した『続教訓抄』『体源抄』の伝本の本文検討を行った。1狛氏周辺における楽書の研究狛海王丸(『続教訓抄』の著者狛朝葛の幼名)の書写とされる『掌中要録』の研究をおこない、成果を発表した。具体的には、古本系とされる「春日楽書」中の『掌中要録』(鎌倉時代写)と元文5年(1740)書写の国立公文書館蔵『掌中要録』の関係について考察を加えた。その結果、後者は江戸城紅葉山文庫中に収蔵されていた「春日楽書」の写本である「楽書」中の『掌中要録』の本文に問題があるために新たに書写されたものであることが判明した。これにより、徳川幕府の楽書の収集、書写、収蔵の一端が明らかになった。2金剛寺所蔵音楽資料についての研究大阪府河内長野市の天野山金剛寺に伝わる聖教のうち、音楽資料についての研究発表をおこなった。金剛寺聖教のうちの多くを書写した禅恵(1484-1364)に着目し、音楽という方面から、その交流圏について考察した。禅恵の書写した『諸打物譜』を検討することで、これまでは知られていなかった、金剛寺と住吉社などとの関わりを見出すことができた。3関連する典籍の研究研究途上の調査の過程で見出された大阪府堺市の長谷寺蔵『泉州堺長谷寺縁起』『(大和)長谷寺縁起』の本文翻刻と内容の検討をおこなった。両書ともに開眼供養の法会場面が描かれており、当時の法会と音楽について考えるうえでも有益と思われる。前者は、全文紹介がなされていないものであり、後者も「長谷寺縁起」伝本中でも比較的書写の古いものであるため、両者の全文を紹介することは、有意義なことといえる。4『続教訓抄』と『体源抄』の基礎研究四大楽書とされながら基礎研究が進んでいない『続教訓抄』と『体源抄』の伝本収集を継続し、その本文検討と分析を進めた。1鎌倉時代から室町時代に盛んにおこなわれた琵琶の秘曲伝授にまつわる説話の生成についての研究をおこなった。具体的には、本朝琵琶の祖である藤原貞敏の説話について検討した。遣唐使として中国にわたった貞敏は、帰国に際して師の廉承武から秘曲を授けられる。その際、師に謝礼を贈ったが、その額は資料によって異なっている。そのうち、琵琶道の歴史を語る音楽説話集『文机談』所載の説話に着目した。

この説話は、秘曲伝授の始原としての意味をもつが、そこには秘曲伝授の儀式をおこなって報酬を得る楽人側の意識が反映されていることを指摘した。最初の秘曲伝授説話としてある種の神秘性を漂わせる説話に、実は楽人の事情が反映されているという、秘伝の伝承にまつわる説話生成の一端が明らかになった。2堺市所在の堺長谷寺の縁起に関わる資料の研究をおこなった。これらの資料は、本研究を進める過程で見出されたものである。これらの資料を調査し紹介することは、学界に有益であると思われる。同寺の縁起に関わるものとしては、寺蔵の『泉州堺長谷寺縁起』、堺市立中央図書館蔵堺「長谷寺絵図」、「泉堺長谷寺略縁起」がある。同寺には奈良県桜井市の大和長谷寺の縁起である『長谷寺縁起絵巻』も所蔵されている。この絵巻は、室町時代末の成立かと思われ、研究上の価値も高いと判断されるため、これらをあわせて調査し、影印をのせた報告書を刊行した。報告書には、略解題とともに本文翻刻をのせ、『泉州堺長谷寺縁起』大和『長谷寺縁起絵巻』の絵巻2点は、できるだけ原本の姿に近づけるためにカラーで掲載している。本報告書は、国文学のみならず日本史、美術史等の分野において今後の研究に資することが期待される。3鎌倉時代末期成立の『続教訓抄』・室町時代末成立の『体源抄』の伝本収集、本文検討を継続しておこなった。本年度は、本課題の研究目的である秘伝の伝承にまつわる説話についての考察をおこない、また本研究を進める過程で見出された資料類について、前年度からの研究を継続し、その成果としての報告書を刊行できた。以上のことにより、本研究はおおむね計画通り進展していると思われる。本研究では、日本文化史上の音楽の重要性に鑑み、楽書と、音楽をともなう仏教儀式にまつわる資料についての研究を中心に行った。楽書研究では、南都の楽人狛氏周辺で成立した楽書「春日楽書」『掌中要録』(どちらも鎌倉期成立)『竹舞眼集』(室町期成立)を検討した。まず、春日大社寄託の断簡二葉が、同大社蔵の鎌倉期成立の楽書群「春日楽書」の一部であることを明らかにした。この成果は、今後の「春日楽書」研究に資するところ大であるといえる。狛氏で伝承された舞楽の楽譜集成である『掌中要録』については、2系統の伝本の書写の経緯について検討し、当該楽書が徳川幕府による楽書の収集、書写、収蔵と関わっていることを明らかにした。また『竹舞眼集』引用の『舞楽府合抄』をとりあげ、この楽書が楽の家の継承者2名に与えるべく微妙に内容の異なる形で2種作られたという、楽の家の相承と楽書生成の相関を明らかにした。加えて『文机談』に記される始原の秘曲伝授説話に着目し、この説話に貴顕に秘曲伝授の儀式を行って報酬を得る楽人の実情が反映していることを指摘し、秘伝の相承にまつわる説話生成の具体相を明らかにした。楽書の基礎研究として、『続教訓抄』『体源抄』という中世の重要な楽書の伝本の収集、分析を進めた。作業は現在も進行中であるが、最終年度には今後の伝本研究に活用すべく、資料のデジタル化を行った。音楽をともなう仏教儀式に関しては、儀式で奏される「講式」を記した「音楽講式」の断簡を紹介した。また音楽法会をともなう場面をもつ堺長谷寺蔵の長谷寺縁起について調査を行い、同寺所蔵の縁起関連の資料とともに『(堺)長谷寺縁起』ならびに『(大和)長谷寺縁起』の影印・翻刻を掲載した報告書を刊行し、最終年度には堺長谷寺蔵の同寺縁起関連資料についての考察をまとめた。本研究は、楽書研究、説話研究のみならず日本音楽史研究の進展に寄与するものといえる。楽書についての研究と、音楽に関連する資料についての研究を行った。まず、楽書については春日大社寄託の楽書断簡二葉についての論文をまとめ、鎌倉期成立の『掌中要録』の書写について検討した。加えて、鎌倉期成立の『文机談』の秘曲伝授説話に着目して、この説話に当時の音楽をめぐる状況が反映されていることを明らかにした。
TLR3下流II型IFN応答の制御機構の解明

TLR3によるII方IFN産生機構について、コクサッキーウイルス(CVB3)を題材として解析した結果以下の成果を得た。1.TLR3はCVB3複製の課程で生じる核酸を認識する事が示唆された。2.TLR3は下流でIRF転写因子を活性化し、II型IFNを誘導することを明らかにした。3.上記の応答は様々なCD11b陽性のマクロファージで起こる事を明らかにした。TLR3下流II型IFN応答の制御機構を解明するため各解析を行ない、以下に記載する進展を得た。1.TLR3リガンドの特定CVB3をUV照射により複製不可能な状態にしても、腹腔マクロファージでの遺伝子誘導が影響を受けない事を明らかにした。TLR3リガンドがCVBの複製過程で生じるのではなく、構造中に含まれることが示唆されたため、次にウイルスRNAを抽出し、腹腔マクロファージを刺激したところ、遺伝子誘導が起こらなかった。このことから、CVB3構造蛋白にTLR3リガンドが含まれる事が示唆された。さらに、CVB3構造蛋白中のCVB3リガンドを特定するため、HAタグ付きのTLR3Tg発現細胞株を樹立した。この細胞を用いて、TLR3と結合するウイルス蛋白を免疫沈降により単離する予定である。2.TLR3下流のII型IFN産生メカニズムの解明TLR3下流において、II型IFNを誘導するサイトカイン(IL12、IL15、IL18)の誘導が起こる事を明らかにした。また、IL12、IL15の産生に重要な転写因子IRF1の欠損マウスにおいて、野生型と比較し、CVB3の増殖が増強される事を明らかにした。さらにIRF1のII型IFN誘導機構を解析する予定である。3.TLR3-II型IFN応答の行う細胞の特定CVB3感染後のII型IFN誘導を各臓器で解析したところ、肝臓、心臓、脾臓でII型IFNの誘導が観察された。そこで肝臓におけるII型IFN産生細胞を特定するため、肝臓から血球系細胞を単離し、FACS解析により、TLR3依存的にII型IFNを産生する細胞の特定を試みたところ、NK細胞、CD8T細胞、樹状細胞においてII型IFN陽性細胞が観察されたものの、TLR3依存的ではなかった。CD11b陽性のマクロファージにおいて、TLR3依存的にII型IFN誘導が誘導される事が明らかとなった.1.TLR3リガンドの特定さらに解析を進めた結果、様々な炎症性サイトカインは、CVBの複製に依存しないものの、II型IFN誘導を含めたいくつかの遺伝子誘導には、CVB3の複製が必要であることが明らかとなった。一方で、tagつきのTLR3過剰発現細胞を用いて、TLR3と結合するCVB3蛋白の同程を試みたが、TLR3と結合するウイルス蛋白は存在しなかった。上記の結果と合わせると、TLR3はCVB3の蛋白ではなく、複製の課程で生じる核酸を認識している可能性が高いと考えられた。そのため、今後さらに、CVB3RNAがTLR3と結合するかどうか検討する予定である。2.TLR3下流のII型IFN産生メカニズムの解明II型IFN遺伝子のプロモーター解析を行なったところ、転写開始点上流1000bp以内にIRFファミリー転写因子の結合サイトが複数存在することが明らかとなった。そのため、19のIRF転写因子について、欠損細胞を用いて、II型IFN誘導への関与を検討したところ、あるIRFの欠損細胞において、その誘導が著明に減弱した。さらに、II型IFNの転写制御機構を明らかにするため、II型IFNプロモーターを含むレポーター遺伝子の作製を完了した。今後、レポーターassayとChIPassayとを合わせて、II型IFNの発現制御機構について、さらに解析を進める予定である。3.TLR3-II型IFN応答を行う細胞の特定CD11b陽性マクロファージにおけるII型IFN誘導機構についてさらに解析を行なった結果、TLR3のmimetie ligandであるpolyIC刺激は他のTLR受容体ligandと比較して、非常にII型IFNの誘導が弱い事が明らかとなった。この結果から、CVB3によるII型IFN誘導にはTLR3が必要であるが、十分ではない事が示唆された。そのためpolyICと様々なリガンドを組み合わせて、マクロファージを刺激し、II型IFNの誘導を解析したとろ、特定のリガンドの組み合わせにより、著明なII型IFNの誘導が起こる事が明らかとなった。この結果から、CVB3がTLR3以外のシグナル経路も同時に活性化し、II型IFNを誘導している可能性が示唆されたため、今後さらにCVB3の新しい受容体について、特定を試みる予定である。
室温ハーフメタルの探索と超高感度磁気センサーへの応用

電流面直巨大磁気抵抗(CPP-GMR)はトンネル磁気抵抗に比べ、面積抵抗(RA)が1桁以上小さく、ハードディスクドライブの再生ヘッドセンサーへの応用が期待される。CPP-GMR出力の増大のために、低いアニール温度で高い規則性を持つホイスラー合金を用いることが必要である。本研究ではCoFeMnGe合金に着目し下地層、アニール温度とB2型規則度との関連を調べた。SPring8において放射光を用いた異常分散X線回折を行い、下地層としてアモルファスCoFeTaB合金を用いることにより、多結晶CoFeMnGeについて、アニール時のCo-Fe間の規則度が増大することがわかった。スペーサー層に比較的高電気抵抗の導電性酸化物を用いたAg/InZnO(IZO)/Znの積層構造を用いてCPP-GMR素子を作成した。その結果、RAを70120 mΩμm2、ΔR/Rを15%以上に増大することができた。透過電子顕微鏡を用いた解析の結果、アニールによってスペーサー層のAgとIZO間に拡散が起こり、AgがIZOスペーサー中に不均一に分布し面直電流はAg濃度の高い部分を選択的に流れることが予想される。すなわち、不均一な電流分布が、RAとΔR/Rの増大の起源であると考えられる。基盤(S)課題番号17H06152の交付決定に伴い、重複受給が認められないため廃止した。本課題の研究は基盤(S)の課題に引き継いで行う。29年度が最終年度であるため、記入しない。
若年話者を声で識別する安心ウェブシステムの研究開発

本研究は,発話を入力とする大人・子ども識別法の開発を行った.(1)音声ウェブシステムを用いた実環境発話収集(2)HMMによる識別法を備えたプロトタイプの作成(3)人間と機械の識別能力の比較(4)収集発話の言語特徴の調査を行った.しかし,実験から,変声期に当たる10代若者の音声を正しく判別できないことが明らかになった.この問題に対し,(5)HMMとSVMの組み合わせによる識別法を提案し,改善を得ることができた.本研究は,発話を入力とする大人・子ども識別法の開発を行った.(1)音声ウェブシステムを用いた実環境発話収集(2)HMMによる識別法を備えたプロトタイプの作成(3)人間と機械の識別能力の比較(4)収集発話の言語特徴の調査を行った.しかし,実験から,変声期に当たる10代若者の音声を正しく判別できないことが明らかになった.この問題に対し,(5)HMMとSVMの組み合わせによる識別法を提案し,改善を得ることができた.本研究では、利用者の年齢層を発話から自動判別するウェブシステムの開発及び公開実験を行う。若年層に対し、安全・安心なネットサーフィン環境を提供することが目的である。本事業では、研究代表者がこれまでに開発した音声入力ウェブシステムw3voieを用いて、被験者発話を収集する公開実験を実施した。開発した音声収集システムを、我々が運営するウェブサイトを通じて公開した。被験者によって録音された発話は、同サイトのサーバに蓄積される。昨年度の準備段階では、今後の分析に有効な発話を適切に収集するのに、アクセスの量の確保並びに被験者属性(年齢層や性別等)のバランスを操作する必要が生じていることが判明していた。この解決を図るために、本実験の被験者の誘引及びスクリーニングをインターネットアンケートの専門業者に依頼したうえで、オンラインでの発話収集を実行した。また、子どもに対して、実験の親しみやすさを改善するために、インタフェースの改良を行った。実施期間は、2009年12月8日から12月28日までである。実験のウェブサイトへはユニークIP数で3,767のアクセスを得た。そのうち、3つの録音ステップとアンケートのすべてを完遂できたのは720であった。これは、回答率で19.1%となる。また、内容を手作業ですべて確認した結果、有効な発話数は1,944であった。この時の発話者数は661である。この結果、子どものサンプル数は、事前の収集発話と合わせて1,533発話となった。全収集発話の59.7%である。以上のように、当初目的の通り、バランスが整った状態のデータベースを構築することができた。本研究では、利用者の年齢層を発話から自動判別するウェブシステムの開発及び公開実験を行う。本年度は、(1)昨年度から引き続き、音声入力ウェブシステムw3voiceを応用した子ども発話の収集及び、収集発話のデータベースとしての整備・分析(2) w3voiceシステムと提案法の統合によるプロトタイプシステムの開発の二つを重点項目として実施した。(1)に関しては、合計3,053個の実環境発話サンプルの収集が完了しており、そのうち、59.7%が子どもの発話である。サンプルの音響的な分析に加え、発話内容の言語的観点からの分析を行った。その結果、子どもの場合は、キャラクターの名称等の単語のみの発話、一方、大人は、ことわざや格言、四字熟語を用いた発話を好む等の言語的な傾向の違いを確認した。また、被験者聴取の主観的評価によって、発話のみからの大人・子ども識別能力を調査し、人間の聞き分け能力と、機械学習による識別能力を比較した。そこから、大人と子どもを区分する年齢の閾値は、13歳程度が妥当であるとの結果が得られた。この他に、機械学習のアルゴリズムにSVM(Support Vector Machine)の導入を行い、実験を開始している。(2)に関しては、ウェブブラウザからの発話の入力を受け、そのユーザが大人か子どもかを判別するデモシステムを開発した。このシステムを情報処理学会全国大会(東京大学)において公開した。次年度以降、本システムを用いた提案法の評価実験及び、アルゴリズムの改良を行う。本研究は、生体情報として発話を入力とする、大人・子ども自動識別サービスを、ICT(情報通信技術)の技術基盤であるウェブ上に整備することが目的である。その実現に向け,大人・子ども話者自動識別アルゴリズムについて重点的に検討を進めた.本年度は,実用レベルの識別性能を得ることを目指し,アルゴリズムの改良を行った.昨年度までに作成したプロトタイプでは,一般的な音声認識システムと同様に,HMM(隠れマルコフモデル)ベースの識別手法を採用していた.しかし,音声ウェブシステムによる実環境発話を用いた評価実験によって,境界年齢の上昇に伴い,識別性能の低下が生じることを確認した.音声認識を転用したこれまでのアルゴリズムでは,音響的特徴を尤度比較に基づき単純に扱うため,変声期の10代若者の発話を正しく判別することは困難である.

また,変声期の音声は,人間の耳でも判断が難しい.この問題に対し,HMMとSVM(サポートベクタマシン)を2層に組み合わせた新たな識別手法を考案し,評価した.直近の成果としては,提案した2層アルゴリズムに,尤度を基準とした素性選択を導入することによって,大人の判別性能を維持したまま,10代以降の子ども判別の精度改善(17歳を大人・子ども境界とする場合で正解率75.2%)を得ることに成功した.しかし,境界をさらに引き上げ,19歳に設定すると,正解率は69.9%に留まる.今後は,実用的に動作する境界年齢をさらに引き上げるように,新たな識別特徴量の導入を検討し,提案手法の実用化を目指す.
ラチス構造物の波動伝播可視化に対する実験的研究

これまでに片持ち梁や平板型ラチス構造物の波動伝播特性に関する実験を継続して行ってきた結果、実験結果を可視化することが結果を考察する上で重要であることがわかってきた。波動伝播現象は時間的変動に加え空間的にも状態が変化するため、現象を把握する上でフーリエ変換等が利用されることが多い。しかしながら周波数領域における特性を知ることはできても実現象として把握しにくい欠点がある。実験データを時間軸と空間軸において見やすく描画できるソフト、その他効果的可視化の手段を開発することは今後の研究上非常に重要であると考えている。本年度は、昨年に引き続き、インパクトハンマーによるラチス構造物の波動伝播実験を行った。試験体は、アクリル製である。試験体をインパクトハンマーで打撃し,多チャンネルの加速度応答の同時多点計測を行った。昨年度および今年度に行った平板型およびドーム型ラチス構造物の波動伝播実験より得られたデータをまとめ、可視化のためのデータベースの基礎資料を作成した。また、可視化のためのプログラミングの基本フローチャートを作成した。経費の大半は実験用消耗品、あるいは、コンピュータによる作業に附随するソフトウェアや消耗品等の購入に充てられた。成果の一部を2003年1月に開催された「やわらか建築ワークショップ」において発表し、意見交換および情報収集を行った。本年度は数種類のラチス構造物の試験体を作成し、インパクトハンマーによる波動伝播実験を行った。試験体は、実験の測定精度を考え、伝播速度が比較的遅いアクリル製とした。これまでに3体の平板型ラチス構造試験体を作製し実験を行っているため,新たに作成した試験体はドーム状(立体格子形)の試験体である。平板型ラチス構造試験体と同様に3ミリ厚の一枚のアクリル板をくり抜き加工し,まず平板型試験体を作製した後,ドーム型に成形加工した。経費の大半は実験用の消耗品の購入に充てた。試験体固定テーブル,計測器のジグ,計測機器等については、既存のものを利用した。試験体をインパクトハンマーで打撃し,多チャンネルの加速度応答の同時計測を行った。得られたデータを整理し,可視化のためのデータベース作成のための基礎データを作成した。
低い特性温度を持つ磁性体の強磁場による研究-三端子容量法を用いた極低温磁化測定

重い電子系の研究では、その特徴的温度スケールが低いために、その基底状態の挙動を探るためには1K以下の低温が必要になることが多い。しかし磁化に関しては、主として技術的な困難さから、これまで国内ではAC法を除く^3He温度以下での測定はほとんど行なわれていなかった。本研究は最低温度100mKを目標に、磁場9Tまでの新しいファラデー法極低温磁化測定装置を開発し、実用化することが目的である。ファラデー法磁化測定のポイントは磁場勾配の発生法と力の検出法である。まず、磁場勾配については、均一な中心磁場(最大9T)に任意の大きさの一様な磁場勾配(最大10T/m)を重ね合わせることができる、専用の超伝導マグネットを導入した。またファラデー力の検出には、MITの強磁場施設で微小試料の磁化測定に使われたことのある可動電極キャパシタンス方式を発展させて、小型のキャパシタンス式ロードセル(一種のバネばかりで直径30mm,高さ15mm程度)を独自に製作した。これを高分解能の自動バランスデジタルキャパシタンスブリッジと組み合せることにより、希釈冷凍機の断熱セル中でマイクログラムオーダーの荷重変化が検出可能となった。種々の試料(CeB_<6'>TmTe等)を用いた極低温磁化測定の結果、新しい知見が数多く得られた。CeB_6は約3.4Kで4重極転移、2.3Kで反強磁性転移を示すことで知られているが、その低温磁気相図はあまりよくわかっていない。(110)方向の磁化測定を行ったところ、約1.5Tの磁場でこれまで知られていなかった非常にシャープな磁化の飛びを0.5K以下で観測した。TmTeは常磁性の重い電子化合物と考えられているが、1K以下の温度でヒステリシスを伴う磁化の異常が見出された。これはΓ_8基底状態が約4Kで軌道整列し、低温ではそのドメインが磁場で配向する効果が見られたものと考えられる。その他にも、重い電子系Ce化合物、U化合物および3dラーベス相化合物の低温強磁場において、数多くの興味ある結果を得た。本研究の特徴はこれまで困難であった100mk以下の強磁場(10テスラ)極低温磁化測定技術を開発し、低い特性温度を持った磁性体における低温磁性の解明に応用するものである。本計画では新しい試みとしてキャパシタンスセルを用いたファラデー法を用いる。そこで本年度はまず、磁化を検出するためのキャパシタンスセルの設計・試作と、システムのテストに重点をおいた。種々のテストの結果、厚さ90140μmのガラス薄板に金属を蒸着したものを可動電極として用いることによって、加重検出感度10マイクログラムを得た。本年度購入した磁場勾配コイル付超伝導マグネットとデジタルキャパシタンスブリッジと組み合わせることにより、1emuの磁化を10^<-4>10^<-5>の分解能で測定することが出来、第一段階としては十分であると考えている。平行して行っている物性研究の面で新たに得られた知見は、2種類の重い電子系希釈系において、低温で特徴的な現象を見出したことである。

第一は、URu_2Si_2をThで溥めた糸であり、帯磁率が低温でlog発散していることが明らかとなった。これは2チャンネル近藤効果と呼ばられる現象で、不純物スピンが伝普電子によってオーバースクリーングされるために不完全なスピンの自由度が残ることによるが、実験的に明らかにされたのは初めてである。第2点は、CeRu_2Si_2の等体積希釈系においてやはり帯磁率が低温で上昇しつづける非フェルミ液体的挙動を示したが、この場合はCeイオンの近藤温度Tkが局所環境効果によってきわめて広いエネルギースケールにわたって分布してしまうことで説明される。いずれも極低温下の磁性として興味ある系であると考えられる。重い電子系の研究では、その特徴的温度スケールが低いために、その基底状態の挙動を探るためには1K以下の低温が必要になることが多い。しかし磁化に関しては、主として技術的な困難さから、これまで国内ではAC法を除く^3He温度以下での測定はほとんど行なわれていなかった。本研究は最低温度100mKを目標に、磁場9Tまでの新しいファラデー法極低温磁化測定装置を開発し、実用化することが目的である。ファラデー法磁化測定のポイントは磁場勾配の発生法と力の検出法である。まず、磁場勾配については、均一な中心磁場(最大9T)に任意の大きさの一様な磁場勾配(最大10T/m)を重ね合わせることができる、専用の超伝導マグネットを導入した。またファラデー力の検出には、MITの強磁場施設で微小試料の磁化測定に使われたことのある可動電極キャパシタンス方式を発展させて、小型のキャパシタンス式ロードセル(一種のバネばかりで直径30mm、高さ15mm程度)を独自に製作した。これを高分解能の自動バランスデジタルキャパシタンスブリッジと組み合せることにより、希釈冷凍機の断熱セル中でマイクログラムオーダーの荷重変化が検出可能となった。種々の試料(CeB_<6,> TmTe等)を用いた極低温磁化測定の結果、新しい知見が数多く得られた。CeB_6は約3.4Kで4重極転移、2.3Kで反強磁性転移を示すことで知られているが、その低温磁気相図はあまりよくわかっていない。(110)方向の磁化測定を行ったところ、約1.5Tの磁場でこれまで知られていなかった非常にシャープな磁化の飛びを0.5K以下で観測した。TmTeは常磁性の重い電子化合物と考えられているが、1K以下の温度でヒステリシスを伴う磁化の異常が見出された。これはΓ_8基底状態が約4Kで軌道整列し、低温ではそのドメインが磁場で配向する効果が見られたものと考えられる。
日本における医療の経済史―放射線器械の普及を中心に（1890-1960年）―

この研究は、日本における医療市場の形成に関する新しい医療技術(エックス線装置の事例を通して)の影響を明らかにした。2点は特に強調された。1)病院システムの構造(日本の場合は都市において多数の私立小病院の集中)・組織(日本には、自由競争)は技術の普及と強い関係がある。その結果、日本市場の特徴を理解していたエックス線装置メーカー(島津製作所)は、グローバル企業(ドイツのシーメンス)より市場を支配した。2)新技術は投資であり、病院の経営へのインパクトは大きかった(富裕層の患者の入院など)。病院システムの調整のため、国家は介入した。1予定通りに,研究期間初年度においては,放射線医学業界の社会史を解明するために,欧米諸国・日本に関する資料・データを収集した。業界・学会の雑誌・出版物の収集に,東京及び金沢市へ出張した。また,特許電子図書館のデータを基に,医療器械・放射線器械に関わる特許(1513件)をデータベース化した。2集まった史料に基づいて,海外と日本で4回,研究報告を行った。社会経済史学会(2013年6月1日)及びEuropean Business History Associationの大会(2013年8月23日)で,日本の医療器械産業の発展を課題としながら,放射線器械に関する特徴を明らかにした。また,経営史学会(2013年10月26日)及びBusiness History Conference(2014年3月26日)では,日本を含める戦前の新興国において,放射線装置の普及へのSiemensの貢献を紹介した。3これらの研究報告は,25年度の出版物の基盤となった(『日本医史学雑誌』)。現在,他の論文は国際学術雑誌へ投稿中である。3これらの報告に基づいて、2015-2016年に出版する予定の国際雑誌と論文集へ二つの論文を準備した。5研究期間最終年度に『医療の経済・経営史ー放射線器械の普及を中心に(1890-1960年)』の原稿のために、「日本における放射線学の誕生・発展」(仮題)と「放射線器械産業の形成・発展」(仮題)の章を作成した。1研究期間3年目には、1-2年目で集めた史料を分析し、国内・海外で学会でご報告しました。とくに、Miamiで行ったアメリカ経営史学会(BHC)と欧州経営史学会(EBHA)の共催コンファレンス(2015年6月27日)に「放射線装置産業における競争・協調」を発表しました。この報告は、Erasmus University(オランダ)のBen Wubs准教授との共同研究であり、現在は国際ジャーナルへの投稿準備中であります。出版社との交渉は企画していたより時間がかかりました。去年、「日本における放射線学の誕生・発展」(仮題)の章の作成が遅れていると報告しましたが、今年、同章の作成は完了した。今年度は最後の年となり、以下の2つの目的があります。1本の作成の完全(国際出版社との交渉を含む)。2University of BarcelonaのPaloma Fernandez教授と共にバルセロナで国際研究会を共催し、そので私の研究の最後のご報告です(日本病院の経営の近代化に対して新技術の影響)。今年度に関して、計画に従い、研究を推進する予定であり、病院の経営史の観点から、病院の組織・経営に対して、新しい技術としての放射線器械の役割を分析する。この研究はとくに諸病院の文書と出版された様々な『○○病院史』に基づいて、史料調査のため国内出張する予定。8月に京都で世界経済史会議においてセッションをDavid教授(Lausanne University)と共催する。また、12月に欧州における医療ビジネス経営史の専門家Paloma Fernandez教授(University of Barcelona,スペイン)とワークショップを共催する予定。今年度にも、「医療技術と病院経営の近代化」に関する1章を作成する予定。なお、出版社と出版契約の交渉を進めたい。25年度には,研究は一般的に予定通り進捗していた。ただ,予定よりも遅れているのは,「日本における放射線学の誕生・発展」(仮題)の章の作成である。26年6月末までに,同章を完成させる予定。特許電子図書館のデータからの,医療器械・放射線器械と関わる特許(1513件)のデータベース作成は計画より時間がかかった。しかし,このデータベースは26年度の課題(日本の放射線装置メーカーの経営史)のために使用する予定であるので,今年度末までの研究は順調に進展する。物品費の残り物品費の残り物品費や出張費などのために使用する予定今年度に関して,研究計画に従い,研究を推進する予定であり,経営史のアプローチに基づく放射線器械メーカーによる放射線器械の普及に焦点を当てる。これのために,次の通りの史料・データを集める予定がある:1生産統計,2各国の貿易統計,3日本の放射線器械メーカーに関する史料,4外国の多国籍企業の放射線器械メーカーに関する史料,5特許のデータ(特許電子図書館)。

13に関するデータ・史料は国内で収集が出来るため,東京へ出張する予定がある。4日本で活動していた外国の企業に関して,25年度に他の研究費でErlangen(ドイツ)でSiemens Medical史料館を訪問に際して,すでに日本の関連史料を集めた。その結果,今年度には,GE史料館(Schenectady Museum内,アメリカ)へ出張する予定。また,34に関して,世界の放射線器械メーカー(日本を含めて)について資料を集めたManchester University Libraryを訪問する予定である。なお,5に関しては,特許のデータは25年度の課題のために収集したが,今年度の課題のためにも使用ができる。今年度にも,放射線装置メーカーの経営史に関する原稿の1章を作成する予定。物品あるいは出張のために使用する予定。物品費の残り。
擬似過圧密土の構成関係, 特に長期圧密に関する研究

擬似過圧密度では,年代の経過とともにセメンテーショが卓越し,各粒子の結合が強固になるとともに構造単位ごとの結合も強くなっている.これらの様子を大阪湾沖積粘土層および数種類の年代の異なる洪積層粘土を用いて,走査型電子顕微鏡(SEM)により粒子構造の観察を行いその特徴をとらえた.特に,底生生物のふん痕(ペレット)の出現頻度に関するし深度分布と土粒子構造骨格に与える影響について検討を加えた.また,この大きさの構造単位に注目し,セメンテーションの発達状況について微視的観察を行った.また,これから予想される液性限界の減少と粒径加積曲線が粒径が大きいほうにずれることも,物理試験を行うことにより明らかになった.さらに,自然状態では,セメンテーションの発達は非常に遅い反応のもとで進行するため,土の硬化をある程度速く反応させるなど反応速度を制御することで人工的にセメンテーション効果を与えた試料も作製し,同様の効果があることを確かめた.つぎに,力学的特性を調べるために電顕装置に内蔵した超小型位一面せん断試験機により,擬似過圧密土のせん断時の粒子配向の変化をとらえ,同時にせん断帯の形成とセメンテーションによる強度発現の機構との関連性をある程度明らかにした.さらに,上述した人工粘土を用いて三軸圧密非排水せん断試験,一次元圧密試験を行い,セメンテーションの発達による時間硬化の影響について定量的な変化をとらえた.しかし,微視的研究および土質力学的研究の各項目の分担課題を総合し,経年過程を有する擬似過圧密土の構成関係を樹立するまでにはいたらなかった.よって,今後,載荷除荷過程を経た通常の過圧密土との差異を調べ,あわせてこの種の地盤の設計パラメーターを合理的に決定する手法を提案することが残された課題である.擬似過圧密度では,年代の経過とともにセメンテーショが卓越し,各粒子の結合が強固になるとともに構造単位ごとの結合も強くなっている.これらの様子を大阪湾沖積粘土層および数種類の年代の異なる洪積層粘土を用いて,走査型電子顕微鏡(SEM)により粒子構造の観察を行いその特徴をとらえた.特に,底生生物のふん痕(ペレット)の出現頻度に関するし深度分布と土粒子構造骨格に与える影響について検討を加えた.また,この大きさの構造単位に注目し,セメンテーションの発達状況について微視的観察を行った.また,これから予想される液性限界の減少と粒径加積曲線が粒径が大きいほうにずれることも,物理試験を行うことにより明らかになった.さらに,自然状態では,セメンテーションの発達は非常に遅い反応のもとで進行するため,土の硬化をある程度速く反応させるなど反応速度を制御することで人工的にセメンテーション効果を与えた試料も作製し,同様の効果があることを確かめた.つぎに,力学的特性を調べるために電顕装置に内蔵した超小型位一面せん断試験機により,擬似過圧密土のせん断時の粒子配向の変化をとらえ,同時にせん断帯の形成とセメンテーションによる強度発現の機構との関連性をある程度明らかにした.さらに,上述した人工粘土を用いて三軸圧密非排水せん断試験,一次元圧密試験を行い,セメンテーションの発達による時間硬化の影響について定量的な変化をとらえた.しかし,微視的研究および土質力学的研究の各項目の分担課題を総合し,経年過程を有する擬似過圧密土の構成関係を樹立するまでにはいたらなかった.よって,今後,載荷除荷過程を経た通常の過圧密土との差異を調べ,あわせてこの種の地盤の設計パラメーターを合理的に決定する手法を提案することが残された課題である.洪積粘土の力学挙動が、擬似過圧密的性質を有するのは、粒子間のシキソトロピー的性質を有する吸着水と粒子間に付着する鉱物によりセメンテーションが発達しているためである。本年度は、この特徴的性質のうち、物理的性質と力学的性質のうち基本的性質について調べた。まず、自然状態でセメンテーションが発達した擬似過圧密土と思われる洪積粘土を対象に粒径や液性限界塑性限界などの物理定数の変化を調べた。また、粒子間のセメンテーションの発達状況を走査型電子顕微鏡を用いて土の講造(粒子配向性、粒子間付着状況)に注目して観察した。特に、低生生物の糞(ペレット)について、堆積環境や堆積年代に応じて土粒子骨格構造の発達がどのよな特色を示すかに注目した。しかし、粒子の接着状況を定量的に表す方法や粒子配向の定量的評価については検討をおこなっておらず、今後、X線回折装置を用いて粒子間に付着する成分分析とともに試みる必要がある。力学試験に用いた供試体は、地盤改良用セメント系固化材、普通ポルトランドセメント、水ガラスの3種類をそれぞれ人工的に加えたカオリン粘土である。圧密試験を中心として間隙水圧がほぼ消散した時点からの挙動を二次圧縮速度の変化や応力状態の変化など種々の方法により調べてその影響をみた。また、再び載荷を開始する場合のB値や圧縮曲線Cc,Cs,Pc,圧密係数応力状態の変化などについて通常の過圧密土と比較した。特に、静止状態にある応力状態を調べるため側方応力測定可能な圧密試験機を用いた試験も行ったが、現在壁面摩擦の影響を含んだ形でしか応力ひずみ関係を予想することができず、この評価法を実験的に確立する必要がある。さらに、各圧密段階においてCIU試験を行い、有効応力面上でせん断強度よりPcを決定して上の結果と比較した。
マカク細胞を用いたin vitroヒト加齢モデルの作成

採材された線維芽細胞の初代培養から分裂停止期に至るまでの継代培養2代毎にサンプリングし、40の凍結保存細胞系列を作成した。得られた40系列の内36系列では通常の加齢パタンを呈した。残りの4系列は延命を見せた。内1系列においては継代数は150を越え、不死化細胞とみなされた。延命した細胞系列の内2系統においてガン抑制遺伝子であるp53に異常が見られた。加齢系列から延命系列への移行に細胞周期チェックポイント異常の関与が示唆された。不死化細胞系列においては、接触阻害の消失、足場依存性の消失が認められ、形質転換していることが示された。SV40の存在は確認されなかった。各サンプリング時に細胞の加齢形質として、テロメア長とテロメレース発現を解析したところ、テロメアの短小化が全てに観察された。テロメレースの発現はいずれのグループにおいても見られなかった。マカク細胞はin vitroにいて、ヒトと齧歯類の中間型を示すことが示唆された。これらのことから、マカク細胞の加齢に関するアウトラインを把握することがで、Ready to useの加齢研究資材の確立が成された。また、同一個体より同時に得られている不死化系列細胞は、遺伝的背景を共有するため老化と癌化(不死化)の比較研究の材料としても適している。本研究の目的はこれまでの研究で有用性が確認されたマカクの細胞をヒトの加齢・老化研究のモデルとして確立し、その加齢系列細胞を保存・解析することにより、ハード(細胞)とソフト(細胞の性状)を兼ね備えた汎用化パネルを作成することである。日本における霊長類研究の一般性と現状から、ニホンザル及びカニクイザルを対象とした。細胞の加齢現象には由来となる個体の年齢が影響するので、採材は新生児(流産・死産児を含む)から成獣までの試料を得た。ニホンザル試料は京大霊長研、カニクイザル試料は国立感染症研究所由来のもの、及び、これまでの研究で既に得ているものを用いた。採材された線維芽細胞の初代培養から分裂停止期に至るまでの継代培養2代毎にサンプリングし、38の凍結保存細胞系列を作成した。得られた38系列の内36系列では通常の加齢パタンを呈した。残りの2系列は延命を見せた。同時に、各サンプリング時に細胞の加齢形質として、テロメア長とテロメレース発現を解析したところ、テロメアの短小化が全てに観察された。テロメレースの発現は見られなかった。
Go期特異的に転写誘導される細胞増殖抑制遺伝子群の単離と機能解析

我々は重差分化法により静止期特異的に発現が誘導される新規な遺伝子群の包括的単離と機能解析を行ってきた。最終的に60種類ほどクローニングし、順番にTIGA160(Transcript induced by growth arrest)と名付けてきた。期待どうり、これらの幾つを細胞内に導入して発現させると、いずれも強力な増殖抑制活性を示した。ノーザンブロット解析はG_0期導入過程のみでなく、接触阻害の実験系についても行った。すなわち、培養液の血清濃度を通常の5%に保ったまま、ヒト繊維芽細胞を培養シャーレ一杯にまで培養して接触阻害を起こさせ、これまでクローニングしてきたTIGA遺伝子群が転写誘導されるか否かをテストした。これによってG_0期に転写誘導される遺伝子のうちで接触阻害によっても転写誘導されるものと、接触阻害の場合には転写誘導されないものに分類できる筈である。この結果、幾つかのTIGA遺伝子は接触阻害によっても転写誘導されることが判明した。単離したTIGAの中でも特に細胞増殖抑制作用の強い、膜貫通ドメインを持つTiga1蛋白質(120aa)をコードする新規遺伝子TIGA1についてのより詳細な機能解析を継続して行ってきた。TIGA1 mRNAは細胞の増殖停止に応答して発現し、TIGA1の過剰発現はヒト肺癌細胞の増殖を阻害した。HA-Tiga1融合蛋白質は細胞膜および細胞内小器官の膜に局在した。TIGA1は多くの癌でLOHが確認されている5番染色体(5q21-22)に座位し、ESTデータベースに登録されているTIGA1 cDNAには多くの塩基置換が報告されている。実際、30種類以上の肺癌細胞を入手し、正常部分と比較するかたちでPCRによる直接のDNA塩基配列決定を行って幾つかの癌細胞部分特異的な塩基配列置換を見出した。さらに、癌細胞部分特異的なLOHを実際に検出することができた。我々はヒト初代培養細胞(TIG-1)において静止期と対数増殖期にある細胞間でサブトラクションを行い、重差分化法と名付けた新たに開発した手法を用いて作成したサブトラクションcDNAライブラリーから、静止期特異的に転写誘導されるヒト遺伝子群を多数クローン化してTIGA(Transcript Induced by Growth Arrest specific gene)と包括的に命名した。これまでに、約600クローンについてノーザン解析を行った結果、静止期特異的に発現がみられるもの(Type I)、あるいは、静止期に入ることで急激に発現が上昇しているもの(Type II)を約40クローン単離することができた。その中には、すでに癌抑制遺伝子あるいはそのcandidateであることが報告されているものを5クローン、新規遺伝子であると考えられるものを6クローン単離が含まれていた。また、様々な遺伝子解析プロジェクトによって登録はされているが機能については殆どわかっていないものを10クローン単離することができた。中でもTIGA1は、癌抑制遺伝子の候補となる可能性が報告されているデータベースESTに登録されているクローンと同一であり(その機能に関しては未解析)、新規の癌抑制遺伝子である可能性が十分に考えられるものであった。実際、TIGA1はE.coli、哺乳動物細胞で強力な増殖抑制作用を示した。Tiga1蛋白質は膜貫通ドメインを持っており、抗体を作製して免疫染色を行ってみると細胞膜が明瞭に染色されたので膜蛋白質であると思われる。TIGA1遺伝子は肺癌患者において頻繁に欠失が認められる第5染色体に配座していた。実際、培養肺癌細胞において変異を持つものを見いだした。ヒトのG_0期

特異的に転写誘導される遺伝子として我々が単離した新規遺伝子TIGA1について以下の解析を行った。Tiga1蛋白質(120aa)は膜貫通ドメインと思われる疎水性領域が存在する以外に既知のモチーフは存在しない。まずTIGA1の発現を血清飢餓あるいは接触阻害の両面から調べたところ、TIGA1mRNAは細胞の増殖停止に応答して発現していることが示唆された。次にヒト肺癌の細胞株であるEBC-1を使ってコロニー形成能を測定したところ、TIGA1を発現させたことによるコロニー形成能の低下が観察された。以上の結果より、TIGA1はG_0期の維持に何らか役割を果たしていることが示唆される。またTiga1タンパク質の細胞内局在を調べるために、HAタグ融合Tiga1をCOS-7細胞に発現させ、抗HA抗体で間接蛍光抗体法を行った。その結果、細胞全体からドット状のシグナルが観察された。今後より詳細な解析が必要であるが、Tiga1は細胞膜、あるいはいずれかのオルガネラの膜に存在すると思われる。データベースを用いた検索によりTIGA1は5q21-22に存在することが分かった。多くの癌で5番染色体のLOHが確認されている。そこで癌細胞株と癌の臨床サンプルで5q21-22付近にLOHが存在するかどうか検討した。その結果、多くの癌細胞株と3種類の臨床サンプルでLOHの存在が確認された。一方でESTデータベース検索を行ったところ、TIGA1cDNAと相同性のある各ESTクローンにおいて多くの塩基置換が起こっていた。この塩基置換は突然変異におけるホットスポットである可能性は低いと考えられたが、腫瘍組織由来のESTクローンでは明らかにTiga1のORF中に塩基置換が多く、Tiga1タンパク質の生理的機能に大きな影響を及ぼしている可能性が示唆された。ヒトのG_0期特異的に転写誘導されるTIGA遺伝子群の包括的単離と機能解析を引き続き継続して行ってきた。まず、これまでに、段階的サブトラクションを6次まで行い、60種類以上のTIGA遺伝子群をクローニングすることに成功した。本年度はこれらの性質を包括的により詳しく解析するために、ノーザンブロット解析を接触阻害の実験系についても行った。すなわち、培養液の血清濃度を通常の5%に保ったまま、ヒト繊維芽細胞を培養シャーレ一杯にまで培養して接触阻害を起こさせ、これまでクローニングしてきたTIGA遺伝子群が転写誘導されるか否かをテストした。これによってG_0期に転写誘導される遺伝子のうちで接触阻害によっても転写誘導されるものと、接触阻害の場合には転写誘導されないものに分類できる筈である。この結果、幾つかのTIGA遺伝子は接触阻害によっても転写誘導されることが判明した。一方、膜貫通ドメインを持つTiga1蛋白質(120aa)をコードする新規遺伝子TIGA1についてのより詳細な機能解析を継続して行ってきた。TIGA1 mRNAは細胞の増殖停止に応答して発現し、TIGA1の過剰発現はヒト肺癌細胞の増殖を阻害した。