hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
飲酒習慣と健康に関するレトロスペクティブコホート研究

飲酒習慣と循環器関連の検診項目について、現在までにデータベース化できた昭和61年度から平成7年までの10年間の資料について検討した。昭和61年度の飲酒頻度についての問診に回答している受診者で、この10年間に実施された10回の住民検診のうち3回以上受診した者245名(男76名、観察開始時平均年齢64.2歳、女性168名、観察開始時平均年齢61.9歳)を対象とした。検診成績評価の項目のうち循環器関連の項目(高血圧、高血圧疑、高コレステロール、高中性脂肪、低HDL-コレステロール、心電図異常、心電図軽度異常の7項目)について問題者は高得点となるように点数付与して点数化し、受診年度の循環器関連検査の成績を評価し、その点数の「平均」および縦軸に点数、横軸を年齢とした時の回帰直線の「傾き」を総合的な評価指標とし、これらを従属変数とし、年齢、性別、開始期評価、喫煙習慣、飲酒頻度を独立変数として分散分析を利用して解析を試みた。飲酒頻度と「平均」については、昭和61年時の飲酒頻度について「ときどき飲む」または「毎日飲む」と回答した者は「飲まない」と回答した者に較べて「平均」が統計的に有意に低得点であり、循環器関連検査項目の評価としては相対的に良好であった。「傾き」についても「ときどき飲む」または「毎日飲む」と回答した者の方が「飲まない」と回答した者に較べて統計的に有意に経年的に低下傾向であり、循環器関連検査項目の評価としては改善傾向であった。昭和61年と平成3年の飲酒頻度の資料を合わせた「飲酒頻度の変化」に関しても検討したが、飲酒する者の方が循環器関連の検査項目の評価は良好である傾向は変わらなかった。飲酒習慣には頻度と量とがあり、今後は量についての評価を組み入れて解析を工夫したいと考えている。健康の保持増進には生活習慣が深く関わっていることは疑いの無いことであり、その中でも飲酒習慣の占める位置は大きい。飲酒習慣には精神保健的な要因との関連も考えられ、平成7年度は対象者の精神保健と生活習慣との関連について、住民検診受診者のうちの男性203名(67.1±10.8歳)、女性375名(63.4±12.6歳)を対象として、断面的な検討を試みた。ここではGoldbergらの開発によるGenaral Health Questionnaire(CHQ、一般健康調査票)の12項目版(リカート法により合計点が2点以下を「精神保健的な問題無し」、3点以上を精神保健的な問題あり」とした)および前田によるA行動パターン簡易質問紙(原法に従い、17点以上をタイプAと判定)を利用して精神保健的な状態を評価し、生活習慣についてはBrealowらのいわゆる七つの健康習慣を参考にして健康習慣得点を評価した。女性は男性に較べ健康習慣得点が、すべての年齢階級で高得点であった。タイプA得点およびGHQ得点については顕著な一定の傾向は認められなかったが、GHQ得点は40歳代から70歳代において女性は男性に較べやや高値であった。健康習慣得点を目的変数とし、性(男女の2水準)、年齢階級(20歳代、30歳代......80歳以上の7水準)、GHQ(2水準)、およびタイプA(2水準)を要因とした分散分析の結果では、女性は男性に較べ生活習慣が有意に健康的であり、GHQ得点によるメンタルヘルスの評価がよいものは生活習慣も有意に健康的であった。一方、生活習慣とタイプA得点については特に関連は認められなかった。これらのことは精神保健的な要素が生活習慣に関わっていることを示しているものと考えられ、飲酒習慣と疾病との関連についての検討に際し、精神保健的要因も重要な交絡因子であるものと考えられた。

飲酒習慣には頻度と量とがあり、今後は量についての評価を組み入れて解析を工夫したいと考えている。健康的な生活習慣の形成が疾病の予防や寿命の延長等に深く関わるとされているが、生活習慣のうちの飲酒習慣については高血圧や肥満との関連も指摘されており興味深いものがある。平成8年度は対象者の肥満とそれに関連すると考えられる検診項目とについて現在までに整理できた昭和61年度から平成6年度までの9年間の資料について検討した。この9年間の住民検診の連続受診者231名(男性81名、観察開始時平均年令62.8歳、女性150名、観察開始時平均年令59.3歳)を対象として、肥満(飲酒習慣を含めた生活習慣を類推する指標とした)とそれに関連する検診項目の成績との関連を取り上げ、長期観察資料のひとつの処理方法を試みた。要因については、まず、観察開始時(1986年度)の身長・体重からBMIを計算し、肥満群、中間群、るいそう群を区別した。次に、9個のBMI値から回帰分析を利用して傾きと変動を対象者毎に求め、以後の生活習慣の反映とした。いずれも25パーセンタイルおよび75パーセンタイルを境界として、傾きについては上昇群、中間群、および低下群とに、また変動については変動群、中間群、および安定群とに区分した。(すなわちBMIについて、初期値、傾き、および変動という三つの要因を設定した。)結果としての健康状態の評価については各年度の検診成績のうち、血圧、血清コレステロール、血清中性脂肪、血清HDLコレステロール、および心電図の評価所見について保健指導の内容に応じて重みづけした点数を割り当てその合計点を産出し、点数の大きいものは健康上問題が多いものと評価した。分散分析を利用して要因と合計点数との関連をみるとBMIの初期値がその後の検診成績に有意に関連していたが、傾きや変動は有意ではなかった。この方法は検討に際し有用と思われるが、肥満と飲酒習慣との関連について引き続き手法的な工夫を検討中である。飲酒習慣と循環器関連の検診項目について、現在までにデータベース化できた昭和61年度から平成7年度までの10年間の資料について検討した。昭和61年度の飲酒頻度についての問診に回答している受診者で、この10年間に実施された10回の住民検診のうち3回以上受診した者245名(男性76名、観察開始時平均年齢64.2歳、女性168名、観察開始時平均年齢61.9歳)を対象とした。検診成績評価の項目のうち循環器関連の項目(高血圧、高血圧疑、高コレステロール、高中性脂肪、低HDL-コレステロール、心電図異常、心電図軽度異常の7項目)について問題者は高得点となるように点数付与して点数化し、受診年度の循環器関連検査の成績を評価し、その点数の「平均」および縦軸に点数、横軸を年齢とした時の回帰直線の「傾き」を総合的な評価指標とし、これらを従属変数とし、年齢、性別、開始期評価、喫煙習慣、飲酒頻度を独立変数として分散分析を利用して解析を試みた。飲酒頻度と「平均」については、昭和61年時の飲酒頻度について「ときどき飲む」または「毎日飲む」と回答した者は「飲まない」と回答した者に較べて「平均」が統計的に有意に低得点であり、循環器関連検査項目の評価としては相対的に良好であった。「傾き」についても「ときどき飲む」または「毎日飲む」と回答した者の方が「飲まない」と回答した者に較べて統計的に有意に経年的に低下傾向であり、循環器関連検査項目の評価としては改善傾向であった。昭和61年と平成3年の飲酒頻度の資料を合わせた「飲酒頻度の変化」に関しても検討したが、飲酒する者の方が循環器関連の検査項目の評価は良好である傾向は変わらなかった。
組織制御によるB2型NiAl基合金の延性改善

次期耐熱材料として盛んに研究がなされている金属間化合物は、一般に延性に乏しく、そのことが実用化への最大の障害となっている。単相では脆い材料も、多相化することにより延性の改善が得られる場合も少なくない。本研究では、高い融点と優れた耐酸化性を有するNi-Alβ相を主相とする多相合金を作製し、組織と機械的性質の関係を明かにした。本年度は、Ni-Al-Fe系、Ni-Al-Co基系におけるβ+γまたはβ+γ'2相合金の組織と熱間加工性、機械的性質との兼ね合いについて研究をおこなった。同時に、Ni-Al-X系の状態図を作成し、次の点が明かとなった。(1)鋳造組織と熱間加工性についてa、β中にわずか数%のγ相が存在するだけで、加工性が飛躍的に向上する。b、鋳造組織が、等軸晶の場合に加工性が良好となる。c、γ'相の存在によって、熱間加工性は著しく劣化する。(2)組織と機械的性質についてa、γ相がβ相の結晶粒界にフィルム状に存在する場合に、6%以上の引張伸びが得られる。b、Ni-Al-Fe系、Ni-Al-Co系では、β+γ'2相組織であっても良好な伸びが得られる。c、状態図の情報を活用することによって、高温でβ+γ2相として熱間加工を行い、中温度で時効することによって組織をβ+γ'2相に制御できることを見いだした。この場合、マルテンサイト変態と規則-不規則変態の利用によって、極めて微細な組織を得ることが出来る。
HCVレプリコンシステムを用いた薬剤感受性規定領域の検討

HCVは世界中に多くの感染者が存在する重大な感染症の一つである。しかし、その治療はインターフェロン(IFN)を中心とした治療に頼っているのが現状である。その大きな原因は、HCVの培養が不可能であり抗ウイルス剤の効果を十分評価できないことにある。我々はHCV遺伝子型2aのプリコンからレポーター遺伝子を持ったレプリコンを作成し、HCVの増殖を簡便に検出でき、各種抗ウイルス剤に対する感受性を高感度に評価可能な系を樹立した。HCV遺伝子型2aのプリコンのネオマイシン耐性遺伝子をルシフェラーゼ遺伝子に置換したレプリコンシステムを新たに構築した。このレポーターレプリコンをトランスフェクション後、4時間で細胞内のルシフェラーゼ活性を測定し遺伝子導入効率のコントロールとした。その後IFNやリバビリン(RIB)等の抗ウイルス剤を加え、経時的に24時間、48時間、72時間後のルシフェラーゼ活性を測定することでレプリコンの増殖を評価した。レポーターレプリコンをトランスフェクション後、抗ウイルス剤を添加しない状態ではルシフェラーゼ活性は時間経過とともに指数関数的に上昇した。IFNやRIBの投与によりレプリコンの増殖は用量依存的に抑制された。臨床用量ではIFNは99%以上、RIBは約40%の増殖抑制効果を示し、RIBの抗ウイルス作用はIFNに比べかなり弱いと考えられた。またIFNとRIBの同時投与では、相加的にレプリコンの増殖が抑制された。この新たなレポーターレプリコンシステムを用いることにより、IFNやRIBの用量依存的な抗HCV効果の検出が可能であった。この高感度で正確なシステムを用いることにより、HCVに対する抗ウイルス効果のある新たな薬剤の探索が可能となると考えられた。
超離散解析による工学システムに対する新手法の提案

本研究は、超離散解析を工学システムに応用し、カルマンフィルターなどの具体的な対象について、これまでの離散解析では取り扱いが難しかった問題に対して新しい知見・解決策を見いだすこと、及び得られた結果を用いてさまざまな非線形工学システムに対して超離散化・逆超離散化を用いた新しい解析手法の提案を行うことを目的としている。本年度は、QRT写像の標準形と離散パンルヴェ方程式の関連について考察,閉じ込められない特異性を持つ写像の代数的エントロピーの新しい計算法の提示、交通流のモデルとなる新しいタイプの非線形差分方程式の提案という3つの成果を得た。研究期間3年間全体で得た成果は以下の通りである。1)超離散系に対するカルマンフィルターの提案、及び数値的な実験によるその有効性の検証を行い、今後の実用化に向けた新しい方向性を得ることができた。2)線形化可能な非線形差分方程式の可積分性判定法の検証、閉じ込められない特異性を持つ写像の代数的エントロピーの新しい計算法を提示などを行い。連続系・離散系・超離散系の関係を明らかにするための一つの知見を得た。3)非対称な構造を持つ離散パンルヴェ方程式を分類し、加法的な方程式の場合の解の構造を明らかにした。またいくつかの新しいタイプの可積分離散方程式を提案した。これらの結果も連続系・離散系の関係を明らかにするための知見を与えたものである。4)交通流のモデルとなる非局所非線形発展方程式の差分化について議論するとともに、新しいタイプの非線形差分方程式を提案した。これらの結果は離散系と超離散系の関係にこれまでにない見方ができることを示すもので、今後実用化も含めてさらに綿密な研究を進めていく予定でさる。本研究は、「超離散解析を工学システムに応用し、カルマンフィルターなどの具体的な対象について、これまでの離散解析では取り扱いが難しかった問題に対して新しい知見、新しい解決策を見いだすこと、及び得られた結果を用いて、さまざまな非線形工学システムに対して超離散化・逆超離散化を用いた新しい解析手法の提案を行うこと、とくに、非線形系に対し超離散化を施し、これまでのフィルターより高速に実行できるカルマンフィルターを構成すること」を目的としている。この目的及び関連した非線形系の取り扱いに関して、本年度は以下の研究成果を得た。1)超離散系に対するカルマンフィルターを提案するとともに、数値的な実験により、その有効性を示した。今後、超離散化の方法を変えることにより結果がどう変わるかを考察するとともに、対象とする系の拡張を検討し、有用な非線形カルマンフィルターの構成を試みる予定である。2)線形化可能な非線形差分方程式の可積分性判定法について、解の次数の増大度をもとにした議論を行い、増大度の違いにより、方程式のクラスが異なることを示した。この結果は連続系・離散系・超離散系の関係を明らかにするための一つの知見を与えたものである。この結果も連続系・離散系の関係を明らかにするための知見を与えたものである超離散システムや非線形離散系に対するさまざまな知見を得るとともに、工学システムの一つとして重要なカルマンフィルターについて、その超離散系への拡張という結果を与え、研究目的であげた課題の解決をさらに進めていけると判断する。この目的に関連した非線形系の取り扱いに関して、本年度は以下の研究成果を得た。1)交通流のモデルとなる非局所非線形発展方程式の差分化について議論した。この方程式はバーガーズ方程式を拡張したもので、認識距離が実質的に有限と考えられる。今後、様々な初期値に対する解を数値的及び解析的に求め、交通流で生じる渋滞解明に役立つ結果を得ることを2)超離散系に対するカルマンフィルターの拡張について考察を加えるとともに、有用な非線形カルマンフィルターの構成を引き続き検討している。3)アファインワイル群E8に関連した非線形差分方程式を提出した。そのうちのいくつかは線形化可能なものであり、別のいくつかは楕円関数を解に持つものであるが、それらは新しい離散パンルヴェ方程式になることも示した。4)閉じ込められない特異性を持つ写像の代数的エントロピーの新しい計算法を提示した。この方法はそれまでのものと比べ容易に実行できるものであり、今後の応用が期待できる。

本年度は、QRT写像の標準形と離散パンルヴェ方程式の関連について考察,閉じ込められない特異性を持つ写像の代数的エントロピーの新しい計算法の提示、交通流のモデルとなる新しいタイプの非線形差分方程式の提案という3つの成果を得た。研究期間3年間全体で得た成果は以下の通りである。1)超離散系に対するカルマンフィルターの提案、及び数値的な実験によるその有効性の検証を行い、今後の実用化に向けた新しい方向性を得ることができた。2)線形化可能な非線形差分方程式の可積分性判定法の検証、閉じ込められない特異性を持つ写像の代数的エントロピーの新しい計算法を提示などを行い。連続系・離散系・超離散系の関係を明らかにするための一つの知見を得た。3)非対称な構造を持つ離散パンルヴェ方程式を分類し、加法的な方程式の場合の解の構造を明らかにした。またいくつかの新しいタイプの可積分離散方程式を提案した。これらの結果も連続系・離散系の関係を明らかにするための知見を与えたものである。4)交通流のモデルとなる非局所非線形発展方程式の差分化について議論するとともに、新しいタイプの非線形差分方程式を提案した。これらの結果は離散系と超離散系の関係にこれまでにない見方ができることを示すもので、今後実用化も含めてさらに綿密な研究を進めていく予定でさる。(今後の推進方策)順調に研究が進んでおり、今後国内外の研究者との研究討論を活発にし、研究を深化させていきたい。その上で、これまでの研究成果をもとに、さらに意義ある研究を進めていく予定である。(H29年度の使用理由と使用計画)(使用理由)研究をさらに進めるために、国内外の研究者とさらなる議論を進める必要がある。また、数値計算などをさらに推し進めるために、補助的な人員を配置することも必要である。(使用計画)研究経費のうち、最も大きな割合を占めるのは外国旅費、国内旅費である。フランスの研究者と超離散系に関する研究討論を行うこと、及び国内の研究者と,カルマンフィルターなどに関する研究討論を数回行うことを予定している。また研究課題に関わる知見を得るため、さまざまな研究集会に参加することも計画している。順調に研究が進んでおり、今後国内外の研究者との研究討論を活発にし、研究を深化させていきたい。交付内定が10月下旬であり、昨年度上半期に参加した国際会議等の経費として支出できなかったため。研究計画が順調に進行しほぼ全額使用したが、端数が残った。本年の研究で端数を使用する予定である。研究経費のうち、最も大きな割合を占めるのは外国旅費、国内旅費である。今年度は国際会議で超離散系に関する招待講演を行うこと、フランスの研究者と超離散系に関する研究討論を行うことを予定している。また国内の研究者と,カルマンフィルターなどに関する研究討論を数回行うことを予定している。
境界要素法の基礎理論の充実と逆問題・非適切問題の数値解析への適用

楕円型境界地問題に対する境界要素法に関し、収束性・安定性などについての数学的な基礎理論の充実を図ると共に、この手法の実用性を数値計算(通常の浮動小数点計算と多倍長計算)の両面から数値実験を行った。境界要素法の収束性については、対象とする境界積分方程式の数値解析の部分を切り出して議論を行ってきたが、この議論だけでは現実の数値計算の高制度性を説明することができないことは平成10年度の研究で明らかになっている。これを踏まえて、本年度は研究の締め括りとして、多倍長数値計算環境の充実を行い、この計算環境を利用してこれまでの高精度性の数学からの説明を数値的にも検証した。この結果,内点計算の際には積分核が解析的となるため収束率が上がることが分かり,境界上で与えるデータが滑らかなときは境界上での収束率が多少悪くても内点計算のではコンパクトセットを固定する。毎には高い収束率を示すことが具体的にわかった。また境界データの滑らかさや有界性がない場合も内点での広義一様収束が、精密な数値計算により明らかになった。ただこの収束率の上昇と境界データの滑らかさの関係についての厳密な関係を数学的に証明するには至らなかった。しかし応用上の観点からは、本研究で明らかになった性質、境界要素法の適用に具体的な指針を与えるものであり、今後の計算力学の計算現場に寄与するものと思われる。さらに上述の研究成果をあげるために、平成11年度は高速で信頼性を持つ倍長計算の環境整備に時間を費やしたが、この点では大きな成果を得た。研究協力者の藤原宏志氏の作成した多倍長数値計算環境は、従来に流通している同種のソフトウエアに比べて格段に速く、この成果は今後の逆問題・非適切問題の数値解析の新たなツールを提供するものであり、優れた成果と思われる。楕円型境界値問題に対する境界要素法に関し、収束性・安定性などについての数学的な基礎理論の充実を図ると共に、この手法を逆散乱問題に適用して数値実験を行った。従来、境界要素法の収束性にについては対象とする境界積分方程式の数値解析の部分を切り出して議論を行ってきたが、この議論だけでは現実の数値計算の高精度性を説明することができない。本年度の理論研究ではこの高精度性の数学からの説明を研究したが、これによって内点計算の際には積分核が解析的となるため収束率が上がることが分かった。すなわち、境界上での収束率が多少悪くても、内点計算の際にはコンパクトセットを固定する毎にこの上の任意オーダーのソボレフ空間に対する完全連続作用素となるため、境界での収束率以上の内点収束が示される。くわえて、解析函数の積分核が丸め誤差などに対するノイズフィルターの役割を持つことも期待できることが分かった。数値計算面では、上述の収束率に関する特徴を多倍長計算を利用して研究を行なっている。特に多倍長計算は流布されているソフトウエアは、計算が遅いためこれらを利用しての研究は困難である。そこで本年度は、分担者と協力して高速の多倍長ソフトウエアの設計を行い、この研究は現在進行中である。楕円型境界値問題に対する境界要素法に関し、収束性・安定性などについての数学的な基礎理論の充実を図ると共に、この手法の実用性を数値計算(通常の浮動小数点計算と多倍長計算)の両面から数値実験を行った。境界要素法の収束性については、対象とする境界積分方程式の数値解析の部分を切り出して議論を行ってきたが、この議論だけでは現実の数値計算の高精度性を説明することができないことは平成10年度の研究で明らかになっている。

これを踏まえて、本年度は研究の締め括りとして、多倍長数値計算環境の充実を行い、この計算環境を利用してこれまでの高精度性の数学からの説明を数値的にも検証した。この結果、内点計算の際には積分核が解析的となるため収束率が上がることが分かり、境界上で与えるデータが滑らかなときは境界上での収束率が多少悪くても内点計算のではコンパクトセットを固定する毎には高い収束率を示すことが具体的にわかった。また境界データの滑らかさや有界性がない場合も内点での広義一様収束が、精密な数値計算により明らかになった。ただこの収束率の上昇と境界データの滑らかさの関係についての厳密な関係を数学的に証明するには至らなかった。しかし応用上の観点からは、本研究で明らかになった性質は、境界要素法の適用に具体的な指針を与えるものであり、今後の計算力学の計算現場に寄与するものと思われる。さらに上述の研究成果を挙げるために、平成11年度は高速で信頼性を持つ倍長計算の環境整備に時間を費やしたが、この点では大きな成果を得た。研究代表者の研究グループの藤原宏志氏の作成した多倍長数値計算環境は、従来に流通されている同種のソフトウエアに比べて格段に速く、この成果は今後の逆問題・非適切問題の数値解析の新たなツールを提供するものであり、優れた成果と思われる。
光波マイクロホンCTスキャンによるプラズマジェット圧力波計測

光波マイクロホンを用いてプラズマジェットから放出される圧力波、この場合、音波の計測に成功した。しかしながら、その発生メカニズムはよくわかっていない。そこで、当該年度はメカニズム解明のため、単一周期のサインバースト波印加電圧を、その周波数を変化させながら印加し、その際プラズマジェットから放出される圧力波を検出し、バースト周期を短くして連続的なサイン波印加電圧に近づけていくことで、どのようにして連続的な音波発生が起こるのか調べた。単一周期のサイン波印加電圧を加えたとき、プラズマジェットは正極性と負極性とで二度のブレークダウンを発生させることがわかった。その際、その爆発的エネルギー放出に伴い衝撃波が発生し、光波マイクロホンで検出された。印加電圧の周波数を増加させていくと、正極性時と負極性時にそれぞれ発生した衝撃波同士がオーバーラップし始め、ある周波数の時に干渉し強めあう。バースト周期を短くしていくと、それぞれの単一サイン波印加電圧により発生し干渉した衝撃波同士が、ある周波数において、さらに干渉を引き起こし、結果的に比較的強度の強い連続的な音波として、観測されるということがわかった。印加電圧の周波数、ガスの流速、計測位置によってガスの屈折率が変化するため、検出される音波の周波数はそれらに強く依存することがわかった。圧力波生成のメカニズムなど、おおむね予想通りの結果が得られている。光波マイクロホンCTスキャンは周波数毎の圧力波強度分布を描写することが可能であるが、発生メカニズムの理解が重要であると考える。衝撃波の発生メカニズムについて、印加電圧の電界が効いているのか、入力パワーが効いているのかを調べるため、プラズマジェットの電力を変化させながら光波マイクロホンの計測を行う。また、理論計算により、その圧力波の音圧を見積もる予定である。
減数分裂における細胞分裂装置の再編成機構

本研究では、細胞分裂装置であるスピンドル極体(SPB;酵母で中心体に相当する構造)が減数分裂期にどのように再編成されていくのか、その分子機構の解明を目的として研究をおこなっている。具体的には、多くのSPB構成因子は組み換え期に一度消失し、その後に再局在する。本研究ではその分子機構を探求することで、配偶子形成過程である減数分裂において本現象がもつ生物学的重要性を明らかにして、減数分裂の細胞分裂機構を包括的に理解する。当該年度においては、研究計画に則して(1)SPBタンパク質の経時的な局在プロファイルの作成、(2)SPBタンパク質の消失および復活を引き起こす分子メカニズムの解明、および(3)SPBタンパク質がSPBから消失する生物学的な意義の追及をおこなった。(1)においては、既知のSPBタシパク質が減数分裂期にどのような挙動を示すかをライブセルイメージングで調べ、包括的にカタログ化した。これによって、減数分裂時に消失するものとしないものなどのクラス分けをすることができ、各因子の機能解明に貢献するものと思われる。(2)MAPキナーゼがいくつかのSPB構成因子をリン酸化するかどうかについて検討を試みたが、MAPキナーゼの精製に問題があり、難航している、CDKがCdc31などをリン酸化するか追究したが、現状ではリン酸化の兆候は認められず、その他のキナーゼによるリン酸化などを検討する必要がある。(3)SPBタンパク質の消失をおこさないためにはPoloキナーゼをSPBに強制局在する必要があることをつきとめた。この状況下では、SPBの過剰複製が起きていることが分かった。すなわち、減数分裂における特殊なSPB制御は、2連続で起きる減数分裂におけるSPBの過剰複製を抑えるための特別なメカニズムである可能性を示唆しており、今後の研究の継続が望まれる。本研究では、細胞分裂装置であるスピンドル極体(SPB;酵母で中心体に相当する構造)と動原体が減数分裂期にどのように再編成されていくのか、その分子機構を明らかにする。具体的には、多くのSPB構成因子と動原体タンパク質は組み換え期に一度消失し、その後に再局在する。このとき、本来は局在しないはずの微小管結合タンパク質が予想外に動原体に局在することを我々は発見している。このように、SPB、動原体および微小管を含む分裂装置全体が、組み換え期から減数第一分裂にかけて細胞周期の進行とともに大規模な再編成を受ける。本年度は、SPBを構成する構成因子が減数分裂前期にSPBから消失するか否かをカタログ化し、SPB構成因子の中でも一部の因子は当該時期にSPBから消失しないことを確認した。また、その他、消失する因子は、接合フェロモンのシグナル伝達経路に依存して消失することを遺伝学的・細胞生物学的に示した。さらに、SPB・動原体構成因子が減数第一分裂直前にそれぞれの位置に復活してくる分子メカニズムについても調査した。動原体因子もSPB因子も、細胞周期進行が重要な位置を占めることが分かり、現在は分裂期キナーゼの関与を調査している。さらに、減数分裂前期から第一分裂に至る時期の細胞内染色体・SPB観察を容易にする同調実験系を構築し、発表した。
血管内皮の産生する生理活性ペプチドエンドセリン-1の血管平滑筋作用機構の研究

ETA受容体、ETB受容体を発現する種々の細胞を用いて、両受容体を介するPLC活性化、PLA2活性化、Ca^<2+>動員機構について検討した、ET-1は培養大動脈平滑筋細胞A10細胞、Swiss3T3線維芽細胞のETA受容体に作用しPLC活性化、細胞内Ca^<2+>の2相性変化を引き起こす。細胞膜透過処理をほどこしたA10細胞を用いた検討では、ET-1によるイノシトールリン酸産生はGTPrSに強く依存し、^<125>I-ET-1の受容体への結合はGTPrSによって農度依存性に抑制された。A10細胞、Swiss3T3線維芽細胞膜には百日咳毒素によりADP-リボシル化される約41kDaの蛋白質が存在するが、いずれの細胞においてもET-1によるPLC活性化は百日咳毒素により抑制されなかった。ET-1はA10細胞、Swiss3T3細胞、ROS17/2細胞においてETA、或はETB受容体を介してアラキドン酸放出を引き起こし、この反応はPLA2阻害剤メパクリンの感受性であった。Swiss3T3細胞ではET-1によるPLA2活性化は2相性であり、第1相(最初の約1分)は細胞内Ca^<2+>動員に依存した。一方、第2相(2分以後)はCキナーゼ及び細胞膜を介するCa^<2+>流入に依存した。ETA受容体を発現するA10細胞及びSwiss3T3細胞とは異なり、ETB受容体を発現するROS17/2細胞ではPLA2活性化の6070%は百日咳毒素により抑制された。ET-1はETA受容体を発現するA10細胞、Swiss3T3細胞,Y-1細胞、ETB受容体を発現するROS17/2細胞のいずれにおいても細胞膜を介するCa^<2+>流入を促進する。A10、Swiss3T3、ROS17/2細胞では、ET-1によるCa^<2+>流入はジヒドロピリジンCa拮抗剤非感受性であった。これらの細胞とは異なり、Y-1細胞はL型電位依存性Ca^<2+>チャンネルを発現する。K^+刺激やBAYK8644によるCa^<2+>流入はジヒドロピリジンCa拮抗剤により抑制されるが、ET-1によるCa^<2+>流入はA10細胞、Swiss3T3細胞と同様にジヒドロピリジンCa^<2+>拮抗剤非感受性であった。
鋭敏な温度応答性を有する官能基含有新規アクリルアミド誘導体ハイドロゲル

可逆的な高分子連鎖への水和・脱水和によって温度応答性を発現するポリ(N-イソプロピルアクリルアミド)(PIPAAmと略す)を、多くのバイオメディカル領域へ応用する場合、PIPAAmの官能基化は極めて重要な課題である。しかしながら、たとえばアクリル酸との単純な共重合を行なうと、LCSTは高温側に大きくシフトし相転移も緩慢化する。本研究では、多数の官能基を導入後も、鋭敏な温度応答性を発現させるモノマーの設計ならびに、そのポリマーのバイオメディカル領域への応用展開を目指し一連の研究を遂行した。細胞培養にはこれまで細胞の接着や増殖を促すためにウシ胎児血清が用いられてきたが、臨床応用を目指すためには、各種接着・増殖因子を明確にし、精製されたものを使う必要がある。そこでこれらの問題を解決するために、本研究で開発したCIPAAmのカルボキシル基を利用して細胞の接着を促すRGDS(Arg-Gly-Asp-Ser)の固定化を図った。血管内皮細胞培養の結果、無血清において10%ウシ胎児血清含有培地を用いたときと同等の結果を得た。温度応答性連鎖に固定化されたRGDSが細胞の接着を促進したものであり、また培養細胞はコンフルエントになるまで増殖し、低温処理によって細胞シートとして回収できることも確認している。温度応答性のハイドロゲルを体内埋め込み型の薬物制御放出用のデバイスとして用いるための設計を行った。この設計の方針は、最終的に合成されるハイドロゲルが温度応答性を発揮するためには、プレポリマーの段階でも敏感な温度応答性を発現する必要があると考え、それぞれポリアミノ酸連鎖(AlaとGlyとの共重合体)を有するIPAAm-AIPAAmコポリマーおよびカルボキシル基が活性化されたIPAAm-CIPAAmコポリマーを用いた。これらの水溶液を混合するだけでゲル化が進行し,得られゲルは37°C付近で明確な体積相転移温度を示した。さらにその相転移温度を挟んだ酵素分解性を調べたところ、ゲルが十分膨潤する25°Cにおいてはゲルの分解が観察された。本研究では種類、含量を種々変化させた官能基を有しながらも優れた温度応答性を有する高分子およびハイドロゲルを設計、合成しその生医学領域への応用展開を図る。本年度は、昨年までに確立した構造類似性に着目したモノマーの分子設計法に基づき合成された2-carboxyisopropylacrylamide(CIPAAm)を有するisopropylacrylamide(IPAAm)との共重合体を細胞培養用ポリスチレン上に電子線重合法により固定化し、その表面上での培養細胞の接着挙動ならびに脱着挙動を詳細に追求した。その結果、CIPAAmを導入することにより、血管内皮細胞を播種した後の接着性はCIPAAmを含まないIPAAmのみの表面と比較してほとんど変化せず、一方、低温処理による細胞の脱着は加速されることが見出された。これはCIPAAmを含む共重合体はアクリル酸などとの共重合体とは異なり、LCST以上に加温されると構造類似性のゆえにカルボキシル基を有していても十分に脱水和、疎水化するためであると考えられる。このカルボキシル基を利用して、細胞接着性因子を共有結合によって固定化し、これまで細胞接着が困難であった細胞種への応用展開を図る予定である。側鎖に一級アミノ基を有する2-aminoisopropylacrylamide(AIPAAm)を合成し、それとIPAAmとの共重合体を調製し、その温度応答挙動を検討した。この共重合体は前年度までに報告したカルボキシル基を有するCIPAAm含有IPAAm共重合体と比較して、若干相転移温度が水溶液に影響される結果となったが、アクリル酸などの構造が異なるコモノマーとの共重合体と比較して、比較的ホモポリマーと近いものであった。このアミノ基含有共重合体のアミノ基からアミノ酸無水物(NCA)を開環重合させ、側鎖にペプチド連鎖を有する共重合体を得た。さらにカルボキシル基をスクシンイミドで活性化させたCIPAAm-IPAAm共重合体と反応させて、架橋部分が生分解性であるIPAAmハイドロゲルを合成した。このハイドロゲルの平衡膨潤度を追及したところ、37°C付近で明確な体積相転移が観察された。現在、酵素分解性、モデル薬物の内封およびその放出挙動を検討している。

温度応答性連鎖に固定化されたRGDSが細胞の接着を促進したものであり、また培養細胞はコンフルエントになるまで増殖し、低温処理によって細胞シートとして回収できることも確認している。温度応答性のハイドロゲルを体内埋め込み型の薬物制御放出用のデバイスとして用いるための設計を行った。この設計の方針は、最終的に合成されるハイドロゲルが温度応答性を発揮するためには、プレポリマーの段階でも敏感な温度応答性を発現する必要があると考え、それぞれポリアミノ酸連鎖(AlaとGlyとの共重合体)を有するIPAAm-AIPAAmコポリマーおよびカルボキシル基が活性化されたIPAAm-CIPAAmコポリマーを用いた。これらの水溶液を混合するだけでゲル化が進行し,得られゲルは37°C付近で明確な体積相転移温度を示した。さらにその相転移温度を挟んだ酵素分解性を調べたところ、ゲルが十分膨潤する25°Cにおいてはゲルの分解が観察された。
15世紀から19世紀における日本語と韓国語の音声・音韻の変遷について-朝鮮資料をもちいて-

平成15年度は研究目的にそって18-19世紀の文献資料の発掘と分析を行なった。その研究結果を論文投稿と学会発表などにより、日本語と韓国語の変遷に関する研究の発展に資した。文献資料の収集は、東京大学の「小倉文庫本」を中心に行ない、これまでほとんど分析が進まなかった、19世紀末頃の日本人と西洋人によって編纂された韓国語学習書などを多く調査した。なお、韓国での資料収集も行った。平成15年度に収集した資料のうち、特に東京大学総合図書館書庫に収められた「鷄林文訳』は1798年に桂川甫周により著されたもので、東大本が唯一本であり、これまで報告されていなかった。この文献は18世紀末の韓国語の音声的特徴をよく反映しており、資料的価値が高い。この資料については「東京大学言語学論集」22に分析と影印を載せた。なお、日本語をハングルで記録している文献の分析により、江戸初期における日本語の清濁の音韻論曲性質は鼻音性の対立であったことを論じ、また15世紀から18世紀における濁音の鼻音性の変遷過程の分析を行なった。また、韓国語を仮名で記録している文献の分析を通し、中期・近代韓国語の母音の変遷過程に関して通説とは異なる説を提示し、この論文を韓国の学会で発表と投稿を行った。16年度は15年度に収集した文献の分析を通して、19世紀における日本語と韓国語の変遷および両言語の互に及ぼした影響などの分析を進める。
超分子ナノワイヤーの冗長性拡張による金属化

結晶性超分子ナノワイヤーの多芯化による金属化を目指して、Crystal Engineeringに基づく新物質開発研究を実施した。目的としていた構成分子の合成には成功し、これを用いたハロゲン結合ネットワークの構築も出来たが、ネットワーク同士の相互貫入のため、多芯ワイヤーの構築には到らなかった。一方で得られたネットワーク構造は、直交ワイヤー結晶の様式を内在しており、今後の物質開発につながる重要な手がかりを得ることが出来た。20年度は超分子ナノワイヤーの被覆に用いる含ヨウ素中性分子の合成ルート開拓を行った。1, 3, 5-Trifluoro-2, 4, 6-triiodobenzeneを出発物質として、1, 4-diethynylbenzeneにより分子骨格を拡張していく戦略で最初に検討を行った。分子量が小さい分子の合成に対してこの方法はある程度有効であったが、分子量が大きくなるにつれて反応が進まなくなり、最終目標の三回対称分子までたどり着くのが困難であった。これは分子量が大きくなるにつれて溶解度が落ち、反応が進みにくくなったためと考えられる。そこで目的物の溶解度を上げるために1, 4-diethynylbenzeneの代わりに類似の直線性と剛直性を有する1, 4-diethynylbicyclo[2. 2. 2]octaneを用いて反応を行った。その結果生成物の溶解度が改善され、量は少ないものの、目的の三回対称分子が得られることが明らかとなった。現在この物質の収量を上げるべく反応ルートの最適化を検討中である。また、これとは別に中程度の分子量の含ヨウ素中性分子とハロゲン化物イオンを混合することにより超分子アニオンネットワークを構築する試みを行った。その結果、Tetrabutylammonium bromideとBis[2, 4, 6-trifluoro-3, 5-bis(iodoethynyl)phenylethynyl]benzeneとの共結晶を得ることに成功し、そのX線構造解析を行った。前年度に引き続き、分子骨格を拡張した含ヨウ素中性分子の合成を行った。前年度使用した1,4-diethynylbicyclo [2.2.2] octaneは、分子の溶解度を上げるのには適しているが、ち密な結晶構造を作るのには適していないことが結晶構造解析の結果判明したので、今年度はフッ素原子を積極的に導入することによって分子の可溶化を図った。その結果、2, 2', 4, 4'-Tetrkis(4-iodoethynyl-phenylethnyl)-1, 1', 3, 3', 5, 5'-hexafluorobiphenylの大量合成に成功し、そのX線構造解析を行うことが出来た。結晶中で当該分子はチューブ構造を形成しており、絶縁被覆材料として適した素材であることが確認できた。この分子を共存させた条件で、各種TTF誘導体のカチオンラジカル塩を合成し、現在その構造解析に取り組んでいるところである。また、他の絶縁分子として、計画書に記した3回対称分子1, 3, 5-Tris[4-(1, 3, 5-trifluoro-2, 4-diiodophenylethynyl)-phenylethynyl)-2, 4, 6-trifluorobenzeneの合成にも成功した。これからこの分子の大量合成に向けて、条件検討を行っているところである。一方、こうした巨大分子を合成する傍ら、超分子作成の要素技術としてConcave型ハロゲン結合分子の合成にも取り組んでいる。今年度は実際にそうした分子がハロゲン化物イオンと強い相互作用を形成することを結晶構造解析から明らかにすることが出来たので、今後これを拡張した超分子の構築にも道を拓いていく予定である。前年度に引き続き、2,2',4,4'-Tetrkis(4-iodoethynyl-phenylethnyl)-1,1',3,3',5,5'-hexafluorobiphenylの大量合成と、これを絶縁材料に用いた伝導性カチオンラジカル塩の作製を行った。最初に当該分子が超分子集積構造を持った結晶を作ることを確認するために、ハロゲン化物四級アンモニウム塩との共結晶化を試み、いくつかの塩の結晶構造解析に成功した。結晶中では実際に三次元のネットワーク構造の構築が確認出来たが、二つの副格子が相互貫入した構造となっていた。これは当該分子単体での結晶化においては見られなかった構造であり、三次元ネットワークを作ることにより出現した構造様式である。次に各種TTF誘導体のカチオンラジカルとの共結晶化を試み、BPDT-TTFとの塩を得ることが出来た。しかしながらこの場合も超分子ネットワークの相互貫入が見られ、ワイヤー構造の構築には到らなかった。
ドイツ現代史のメディア環境と「新聞学」成立史

歴史学と社会学の学際領域であるドイツ新聞学の学説史的研究を通じて、メディア学の体系的研究に寄与する視点を構築することが、この萌芽的研究の課題であった。20世紀初頭のドイツで、歴史的手法を利用して成立した新聞学の社会史研究は、情報化社会が本格化する中でメディア研究の方法論が模索される現在、参照すべき貴重な系譜といえる。既に執筆済みの「第三帝国におけるメディア学の革新」(『思想』833号)、「ドイツ広報史のアポリア-ナチ宣伝からナチ広報へ」(『広報研究』4号)に加えて、この萌芽的研究に関連する成果としては、「ナチズムのメディア学」(『岩波講座文学2メディアの力学』所収)を発表した。ドイツを代表する世論研究者エリザベス・ノエル・ノイマンの反ユダヤ主義と戦争責任に関するドイツ公示学会での論争を紹介しつつ、総力戦体制化で誕生したアメリカのマス・コミュニケーション学とナチ新聞学の同質性を跡付けた。そうした連続性は戦時中はナチ新聞学の研究者として活躍し、戦後はアメリカ占領軍の指導に協力してマス・コミュニケーション学や世論調査研究の普及につとめた、小野秀雄・小山栄三など東京大学文学部新聞研究室(戦後の新聞研究所、現在の社会情報研究所)のメディア研究者においても確認できる。こうした総力戦体制期のファシスト的公共性とメディア研究の関係を、ドイツ-アメリカ-日本の比較において考察する著作『ファシズムのメディア学』(中公新書)を2004年の刊行を目指して現在執筆している。ドイツ新聞学の成立と日本での受容をめぐる本研究の基本的枠組みについて、2000年6月5日関西大学において開催された日本マスコミュニケーション学会大会のワークショップ「日本におけるメディア史研究の源流」で報告した。その概略については、『マスコミュニケーション研究』58号に掲載される予定である。なお、この報告を発展させドイツ新聞学成立史に絞った内容を、同志社大学で2001年6月に開催予定の日本マスコミュニケーション学会大会シンポジウムでも報告予定である。なおドイツ新聞学研究の意義について、「ドイツ広報史のアポリア-ナチ宣伝からナチ広報へ」『広報研究』(日本広報学会)を執筆した。ここでは、第三帝国時代のメディア研究を分析対象とするためには、「宣伝」というイデオロギー色の強い視点からの考察ではなく、「広報」ないし「公示」という中立的な視点が必要であることを具体的に提示した。また、『情報学事典』(弘文堂・2002年刊行予定)で「公示学」「宣伝学」など関連項目を執筆した。さらに、ナチズムとメディアをめぐる資料集として『『外国の新聞と雑誌』にみる海外論調』(ドイツ編・全五巻・柏書房2000年)を編集し解題を執筆した。また、日本の大衆文化におけるナチズム問題のメディア分析として『ヒトラーの呪縛』(飛鳥新社2000年)を編集した。平成13年度は予定どおり「宣伝学と世論研究」「ジャーナリスト教育」に関する研究を行い雑誌に発表するつもりである。研究計画の直接の成果は,『ファシズムのメディア学』(仮題)として出版を予定している。ドイツ新聞学の成立と日本での受容をめぐる研究枠組について,2001年6月2日同志社大学で開催された日本マス・コミュニケーション研究の起源を問い直す-ドイツ,アメリカ,日本におけるメディア研究の20世紀」(司会:吉見俊哉東京大学社会情報研究所教授)で「第三帝国ドイツ新聞学の"遺産"」を報告した。また,10月6日東京大学社会情報研究所文化研究シンポジウム「戦争とメディア」にて「戦時雑誌とファシスト的公共性」を報告した。関連する副産物として,『情報学辞典』(弘文堂.2002年刊行予定)に「公示学」「宣伝学」などを執筆した。
病原微生物(ウィルス)によるアトピー型喘息の発症促進機構および制御機構の解明

本研究では、先行するウィルス感染様刺激によって喘息の発症促進あるいは抑制が認められるマウスモデルを利用して、その機序の解明を目指した。その結果、先行するウィルス感染様刺激はCD8+T細胞およびIL-13を介して促進的に働くこと、また、CD8+T細胞ならびにIFN-gを介して抑制的に制御していることを見いだした。さらに、これらの反応はいずれもTLR3、TLR4ならびにMDA-5非依存的であった。本研究では、先行するウィルス感染様刺激によって喘息の発症促進あるいは抑制が認められるマウスモデルを利用して、その機序を解明することにより、気管支喘息の病態解明ならびに新規治療標的の探索を目的としている。本年度は、先ず2本鎖RNA(dsRNA)前処置による喘息様病態形成の促進および抑制に関与する遺伝子を、in vivoモデルの気管および肺のサンプルを使用してDNAマイクロアレイにより網羅的に解析することとした。すなわち、マウスの気管内にdsRNAのみを投与した群、ダニ抗原のみ投与した群、dsRNA先行投与後にダニ抗原を気管内投与した群からそれぞれ気管・気管支・肺実質を回収し、それらをサンプルとしてDNAマイクロアレイによる実験を実施した。現在、実験が終了し、その解析を始めたところである。本年度のもう一つの課題である本表現系発現へのTLRの関与を、toll-like receptor (TLR)3、4およびtype I IFN受容体欠損(KO)マウスを用いて検討した。その結果、TLR3あるいはTLR4 KOマウスではdsRNA前処置によって観察されるダニ抗原による喘息様病態形成の促進および抑制への影響は全く認められなかった。従って、本モデルではdsRNAの認識にはTLR3は関与していない可能性が示唆された。また、ダニ抗原あるいはdsRNA中にはごく微量のLPS等の混入も考えられ、それらが表現型に影響を及ぼす可能性も考えられたが、TLR4KOマウスにおいても本モデルにおける表現型は観察されたため、その可能性は少ないと思われる。一方、type I IFN受容体KOマウスに関しては、マウスのbackgroundがB6マウスであるため、本来の表現型を十分に再現することができなかった。本年度は、昨年度に引き続き、2本鎖RNA (dsRNA)前処置による喘息様病態形成の促進および抑制に関与する遺伝子の解析を行った。その結果、ダニ抗原低用量投与群に比しダニ抗原低用量+dsRNA低用量投与群において、投与後2、8、24時間後の全ての時間帯に遺伝子発現が2倍以上に亢進または低下している遺伝子数はそれぞれ31または0であった。これに対し、ダニ抗原低用量投与群に比しダニ抗原低用量+dsRNA高用量投与群においてはそれぞれ270または207であった。一方、対照として検討したダニ抗原低用量投与に比し高用量投与において、投与後2、8、24時間後の全ての時間帯に遺伝子発現が2倍以上に亢進または低下している遺伝子数はそれぞれ28または0であった。今後、個々の遺伝子に関して、in vitroとin vivoの相関性など、精査を加えていく予定である。また、本年度のもう一つの課題として、in vivoにおけるCD8陽性細胞の意義を検討した。すなわち、dsRNAによるダニ抗原のcross presentationが生じている可能性を検討する目的で、抗CD8抗体を実験期間中に投与し、低用量ならびに高用量のdsRNAによる表現型に及ぼす影響を検討した。その結果、抗CD8抗体は低用量dsRNA投与による喘息発症の促進および高用量dsRNAによる喘息様病態形成の抑制を有意に抑制した。また、CD8細胞の遊走に関与することが知られているleukotriene B_4の関与を抗LTB_4受容体拮抗薬を用いて検討したところ、低用量dsRNAによる喘息発症促進の系において好酸球増多を有意に抑制した。本年度は、昨年度に引き続き、2本鎖RNA(dsRNA)前処置による喘息様病態形成の促進に関与する機能分子の探索を目的とし、特にIL-13の意義について検討を行った。すなわち、これまでの成績から、dsRNA前処置による喘息様病態形成の促進時には気管支肺胞洗浄液中でIL-13産生量の著しい亢進が観察されている。これに対し、当研究室ではIL-13KOマウスを飼育・維持しているが、本マウスの場合、ダニ抗原に対する免疫応答自体の低下が観察されているため、本研究においてもIL-13のみの影響か否かを明らかにするには研究ツールとして不適当であると考えられる。そこで、本研究では新たに抗IL-13抗体を樹立し、モデルマウスに投与することにより、IL-13の意義を検討した。その結果、抗IL-13抗体はdsRNA前処置による喘息様病態形成の促進を有意に抑制した。

従って、ウィルス感染による喘息発症促進機序の一部にIL-13が重要な役割を有していることが明らかとなった。一方、これまでの2年間の検討ではdsRNAの気管内投与によるマウス気道炎症はTLR3非依存的であることをTLR3KOマウスを用いた検討から明らかにしている。そこで本年度、in vivoにおけるdsRNAの受容体としてのMDA5の意義を検討した。その結果、MDA5KOマウスでは野生型マウスと同様に、dsRNA気管内投与により著明な好中球増多性の気道炎症が認められ、その程度は両マウス間で差はみられなかったことから、少なくとも本モデルにおけるdsRNA刺激によるパスウェイにはMDA5は関与していないことが明らかとなった。
培養細胞を用いたニフェジピン誘発歯肉増殖に関する研究

慢性辺縁性歯周炎患者2名(A;47歳女性、B;49歳男性)より歯周外科処置時に採取した歯肉片よりアウトグロスした歯肉線維芽細胞(39継代)を、各種濃度のニフェジピン、diltiazem(HERBESSOR)、アレビアチンを含む培地で一定時間培養し細胞数、コハク酸脱水素酵素活性(SDA)、ミトコンドリアの形態的変化を調べた。その結果diltiazemのみが顕著な効果を示したのでこれについてのみ詳細な実験を行った。(基本的にトリプリケ-トで実験を行った)1.SDA:濃度依存性実験では、最終濃度0,5,10,20,40,60,80及び100μg/mlのdiltiazemを添加し72時間培養した。経時的変化の実験では系列毎に培養開始より0,24,36,48,60、66及び72時間後に最終濃度が40μg/mlとなるように刺激物を加え総計72時間培養した。培養後にSDAをCelltiter96^<TM>Cell Proliferation Assay(Promega Co., USA)を用いて測定した。その結果2040μg/mlのdiltiazem刺激でSDAはピークを示しより濃い濃度では抑制が見られた。また、diltiazem50,100μg/ml刺激では3時間以降、25μg/ml刺激では12時間以降無刺激群に比べ有意に高いSDAを示した。024時間の短時間培養では刺激群間に有意差は見られなかった。しかし4872時間の長時間培養では25,50μg/mlの方が100μg/ml刺激よりも有意に高いSDAを示した(p<0.05)。2.細胞数:40μg/mlのdiltiazem刺激で、3日間培養では細胞数、生細胞比率ともに刺激群と無刺激群間に有意差は認められなかったが、10日間培養では刺激群で有意に低かった。(p<0.01)3.培養上清中の蛋白濃度測定:0、3、6、12、24、48時間後の40μg/mlのdiltiazem刺激上清中の蛋白濃度を測定したところ12、24時間で有意に刺激群で高かった。((p<0.05)4.ミトコンドリア染色:カバー・スリップ上に培養した細胞をrhodamin123(10μg/ml)含有10%FBSMEMにて37°C30分培養し洗浄後チャンバー・スライドグラス上に同培地でマウントし蛍光顕微鏡(485nmUV)で観察したところ無刺激群に比べ刺激群では、ミトコンドリアは短く屈曲したものが多く、コハク酸脱水素酵素染色でより強く陽性に染まった。