hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
生物トキシンによる生体機能の解析とその応用

【I】.細菌細胞表層の生体機能調節物質:1)本特定研究第2班の芝、長谷川班員により合成されたリピドAおよびそのアナログ、あるいは部分構造の内毒素および関連する生物活性を調べ、S.minnesota型リピドAはE.coli型のそれより内毒素活性が弱いこと、4-0-モノリン酸GlcN誘導体のあるものがリピドA活性の一部を発現することが示された(本間、小谷、金ヶ崎)。2)結核菌の毒性糖脂質の関連物質:trehalosemonomycolateと類縁物質の致死毒性、Mφに対する活性機能を比較した(東)。3)INFγが内毒素の発熱原性を著しく高めることが見出された(田中)。4)数種のgram(+)菌の両親媒性物質の化学組成と生物活性を比較、検討した(加藤)。5)百日咳毒素によって、ADPリボシル化される(tTP結合蛋白が受容体を介する情報伝達系として働くことが示され(宇井)、またこの毒素の感染防御能に与えるエピトープ、サブユニットの解析が単クローン抗体を用いて行われた(佐藤)。【II】.蛋白毒素:1)ヒト破傷風の病態モデルを作り、破傷風毒素作用の特性を明らかにした(松田)。2)ジョロウグモの精製向神経毒を用い、神経組織受容体の特異的阻害機構を明らかにした(川合)。3)ハチ毒アパミンはある種のCa依存性K電流の特異的遮断因子であることを示した(栗山)。4)エラブトキシンはヒトとチンパンジーの筋Ach受容体には結合しないが、他の全ての脊椎動物のそれには結合した(嶋田)。5)シビレエイ電気器官の水溶性画分にヘビ神経毒と結合する新蛋白を見出し、また受容体の糖鎖構造を明らかにした(林恭)。【III】.応用研究:1)ジフテリア毒素低抗性細胞出現を指標として、発がん、変異原物質の檢索を行った(寺田)。2)ツニカマイシンをラット脳内に投与し、小脳内ミエリン形成を検討した(塚田)。3)モルモットと遅延型アレルギー反応局所から精製したリンパ球遊走因子の1つはマウス、ヒトのB細胞、2つはhelper/inducerT、他の1つはsuppresson/cytosoxicT細胞に特異的に作用した(林秀)。
過疎地域と地方都市間の関係分析による人口減少社会モデルの生活構造論的構築

本研究では、急激な人口減少下にある九州・中国地方の過疎地域と、過疎地域を内包する地方都市圏の維持のあり方を検討する。その際、過疎地域のみでなく、過疎地域と地方都市間の人の移動と社会資源へのアクセシビリティに注目し、人々の生活実態の動態的な把握を行うことで、人口減少に対応し得る広域的な社会モデル構築を目指す。本研究では地域生活構造分析を採用し、時間・空間・社会関係・経済の4アスペクトを交差させながら、地域社会の維持再生の要件を検討する。それらをふまえて地域人口基盤、家族ネットワーク安定基盤・家族支援、生活ネットワーク拡張・生活支援、生活基盤といった地域社会維持モデルを検討する。
マイクロチャネルスラグ流の薄液膜挙動に関する実験的研究

管径0.31.3mmの細径を用いて,液スラグ後方に生じるミクロンオーダーの非定常な薄液膜厚さをレーザー共焦点変位計を用いて測定した.液膜厚さに及ぼす断面形状,寸法,乾き度,慣性力,表面張力,粘性力等の影響を明らかにした.得られたデータを整理し,キャピラリー数Ca,ウェーバー数We,レイノルズ数等の無次元パラメータを用いた無次元液膜厚さの予測式を提案した.管径0.31.3mmの細径を用いて,液スラグ後方に生じるミクロンオーダーの非定常な薄液膜厚さをレーザー共焦点変位計を用いて測定した.液膜厚さに及ぼす断面形状,寸法,乾き度,慣性力,表面張力,粘性力等の影響を明らかにした.得られたデータを整理し,キャピラリー数Ca,ウェーバー数We,レイノルズ数等の無次元パラメータを用いた無次元液膜厚さの予測式を提案した.近年のエネルギー・素材価格の高騰や,地球温暖化に代表される環境問題等への意識の高まりに伴い,超小型で高効率な熱エネルギー機器へのニーズが非常に強くなってきている.マイクロ化の主たる利点は,代表寸法の小型化による熱物質輸送の促進にあるが,このためには,マイクロチャネルにおける熱流動,特に大流量・大熱流束条件での流動様式や伝熱機構に関する基礎的な理解に基づいた高度な設計技術の構築が不可欠である.本研究では,0.5mm程度以下の細径・マイクロチャネル二相流の系統的な実験評価を行い,液スラグ後方に生じるミクロンオーダーの非定常な薄液膜挙動に及ぼす断面形状,寸法,乾き度,加速度,慣性力,表面張力,粘性力,濡れ性等の影響を明らかにすることを目的とする.速度と加速度の影響を独立に制御して評価するために,様々な断面形状のマイクロチャネル内に形成されたメニスカスを,ステッピングモータを利用して移動させることで,壁面上に形成される薄液膜の厚さ測定を行う.レーザー共焦点変位計を用いて液膜厚さをサブミクロンオーダーで精度良く測定した.まず,液膜厚さに及ぼす断面形状,寸法,乾き度,慣性力,表面張力,粘性力等の影響を明らかにした.得られたデータを整理し,キャピラリー数Ca,ウェーバー数We,レイノルズ数等の無次元パラメータを用いた無次元液膜厚さの予測式を提案した.近年の地球温暖化に代表される環境問題等への意識の高まりや,エネルギーおよび素材価格の高騰に伴い,超小型で高効率な熱エネルギー機器へのニーズが高まってきている.マイクロ化の主たる利点は,代表寸法の小型化による熱物質輸送の促進にあるが,このためには,マイクロチャネルにおける熱流動,特に様々な流量や熱流束条件での流動様式や伝熱機構に関する基礎的な理解と,それに基づいた高度な設計技術の構築が不可欠である.本研究では,0.5mm程度以下のマイクロチャネル内二相流の系統的な実験評価を行い,液スラブ後方に生じるミクロンオーダーの非定常な薄液膜挙動に及ぼす断面形状,寸法,乾き度,加速度,慣性力,表面張力,粘性力,濡れ性等の影響を明らかにすることを目的とする.速度と加速度の影響を独立に制御して評価するために,様々な断面形状のマイクロチャネル内に形成されたメニスカスを,ステッピングモータを利用して移動させることで,壁面上に形成される薄液膜の厚さ測定を行った.レーザー共焦点変位計を用いて液膜厚さをサブミクロンオーダーで精度良く測定した.今年度は,液膜厚さに及ぼす加速度の影響を明らかにした.得られたデータを整理し,キャピラリー数Ca,ウェーバー数We,レイノルズ数,および加速度で定義されたボンド数等の無次元パラメータを用いた無次元液膜厚さの予測式を提案した.スラグ流は細管径内を気泡と液スラグが交互に規則的に流れる流動様式である.スラグ流の特徴として,液スラグの中での循環による混合促進と,気泡と管壁の間に形成される薄液膜を介した熱物質輸送が挙げられる.この薄液膜の厚さは液スラグ中での循環や熱物質伝達率を決める上で非常に重要なパラメータである.従来からマイクロ管内の液膜厚さを測定するための研究が行われてきてはいたが,数ミクロンオーダーの薄い液膜厚さを鞍良く測定するのは非常に難しく,信頼できる実験データが今まで得られてなかった.本研究では,マイクロ管内の二相流でも最も重要なパラメータの一つである薄液膜厚さを,レーザー共焦点法を用いて世界で初めて高精度に測定することに成功した.スラグ流での気泡は気泡キャップ、遷移領域、薄液膜領域の三つの領域に分けられ,液膜厚さは遷移領域での力学的なバランスによって決定される.キャピラリ数は粘性力と表面張力の比を現す無次元数であり,既存の研究では液膜厚さはキャピラリ数の関数として整理される.本研究の結果から,キャピラリ数だけでなくレイノルズ数によって液膜厚さが大きく変化することが観察された.小さいキャピラリ数では慣性力が無視でき,液膜厚さはキャピラリ数だけで決まるが,キャピラリ数が大きい場合の液膜厚さはレイノルズ数の増加とともに極小値をとった後に徐々に増加し,レイノルズ数が2000を超えると乱流へ遷移し一定値をとる.また,矩形管においても角部と平滑部での液膜厚さを初めて測定し,円管の場合と同様なレイノルズ数依存性を確認した。

一方,加速時の液膜厚さも測定を行い,気泡の加速によって液膜が非常に薄くなることを観察した.液スラグ中の速度分布が変化することで,遷移領域の界面曲率が影響を受けたためと考えられる.得られたデータを用いて定常状態と加速時を含む液膜厚さに対する新しい相関式を提案した.
NMR を利用したタンパク質および複合糖質の揺らぎの検出とその機能連関の探査

超高磁場NMR分光法と種々の生物物理学的研究手法を用いて、複雑なタンパク質・複合糖質およびそれらの超分子複合体の立体構造の揺らぎを探査した。特に、糖脂質クラスターと神経変性疾患に関わるタンパク質との動的な相互作用や、細胞内におけるタンパク質運命決定に関与する分子複合体の3次・4次構造の動態を解析する新規な方法を開発することに成功し、これらを利用して生命分子の構造揺らぎと機能の関連を明らかにした。NMR分光法を中心とする構造生物学的手法を用いて、生体高分子の水溶液中における揺らぎを検出し、得られた知見をもとに、分子およびその複合体の動的3次元構造を原子レベルの分解能で探査する。とりわけ、糖タンパク質、多ドメインタンパク質、天然変性タンパク質などを対象とした揺らぎの解析を研究計画の中心におき、分子機能との連関を探求する。特に、内部運動の自由度が高く従来のアプローチでは構造解析が困難であった糖鎖や、複雑なタンパク質・複合糖質およびそれらの超分子複合体の動的3次元構造を、920MHz超高磁場NMR装置を縦横に活用することで解析し、様々な時間的・空間的スケールの分子構造の揺らぎと分子認識の相関を明らかにすることを目指す。本年度は超高磁場NMR計測を通じて糖鎖およびマルチドメインタンパク質のコンフォメーションの揺らぎを解析するためのモデル分子の設計と作出を行った。(1)糖鎖の動的3次元構造を探査するための常磁性タグによる化学修飾モデル糖鎖(マルトヘキサオースおよびキトビオース)を対象にして、それらの還元末端をEDTAのアナログにより化学修飾する方法を確立した。これに常磁性金属イオンを加えて超高磁場NMR計測を行うことにより、糖鎖のコンフォメーションを反映する選択的なスペクトル変化が生じることを確認した。一方、酵母の変異体を利用した代謝標識により、8残基のマンノースを含む高マンノース型糖鎖を^<13>Cによる均一標識を施した試料として大量に調整することに成功した。これらにより、糖鎖のコンフォメーションとその揺らぎについて精密解析を実施する技術基盤を整えることができた。(2)マルチドメインタンパク質のモデル系としてのユビキチン鎖の構築試験管内における酵素反応によってユビキチン鎖の安定同位体標識体を作出し、それらをマルチドメインタンパク質のモデル分子としてNMR解析に供した。特に、イソペプチド結合を介して直鎖状および環状に連結されたユビキチン2両体のNMRスペクトルを種々のpH条件下で比較解析することによって、溶液中におけるユビキチンユニット間の相互作用のダイナミクスに関する情報を原子レベルの分解能で取得することに成功した。(1) NMR計測による糖鎖め揺ちぎの解析酵母変異体を利用した代謝標識により、高マンノース型糖鎖M8Bについて糖残基中の特定の部位を選択的に^<13>Cで標識した一連の標識体を調製した。超高磁場計測によって得られたNMR信号の帰属を行うとともに、緩和解析を通じて本糖鎖の動的性質を評価した。(2)マルチドメインタンパクにおけるドメイン間相互作用の揺らぎの検出イソペプチド結合を介して直鎖状および環状に連結したユビキチン二量体を用いて種々のNMR計測を実施し、ドメイン間の相互作用に関する情報を収集した。一方、タンパク質の立体構造形成を補助する多ドメイン酵素であるプロテインジスルイソメラーゼ(PDI)の基質認識部位を構成するb'およびa'ドメインを対象にして、NMRおよびX線小角散乱により構造解析を行った。その結果、活性部位の酸化還元状態の変化に応じて、これら両ドメインの相互作用とダイナミクスが変化することが判明した。すなわち、活性部位の酸化に伴って、基質結合部位を構成するドメイン間のインターフェースの疎水性領域の溶媒露出度が上昇することが明らかとなった。こうした構造変化を通じて本酵素の基質の捕捉と遊離が制御されているものと考察される。(3)糖鎖クラスターの構築DHPCとDMPCから成るバイセルにガングリオシドGM1を構成分子として組み込むことを検討した。NMR測定と動的光散乱測定により評価した結果、実際にGM1がバイセルに組み込まれていることが確認でき、更に、DHPC/DMPC/GM1の比率や総脂質濃度を変化させることで、GM1含有バイセルのサイズを制御できることが明らかとなった。また、lyso-GM1を用いて形成したミセルを対象にNMR解析を実施し。ミセル上に提示された糖鎖のコンフォメーションを決定するとともに、アミロイドβ(Aβ)との相互作用様式を明らかにすることに成功した。(1)NMR計測による糖鎖の揺らぎの解析糖鎖安定同位体標識体の大量発現法の応用範囲をM8B以外の高マンノース型糖鎖の生産にまで拡張することを試みた。具体的には、ゴルジ体酵素に加えてER α1-2マンノシダーゼを欠失した酵母変異体を用いて^<13>C標識を施した高マンノース型糖鎖M9の生産に成功した。

また、高マンノース型糖鎖に常磁性タグを導入するための反応条件を確立したことにより、多様な糖鎖を対象にして常磁性効果を利用した動的高次構造研究を展開することが可能となった。(2)マルチドメインタンパク質におけるドメイン間相互作用の揺らぎの検出Lys48を介して連結した野生型ユビキチン2量体の結晶構造および2か所でイソペプチド結合を形成して環状化したユビキチン2量体も溶液構造を決定したところ、それらはそれぞれ、疎水性表面を露出した構造と遮へいした構造を示していた。NMR解析の結果、野生型ユビキチン2量体は溶液中において両構造の間の平衡にあるが、その割合は疎水性表面を露出したものの方が高いことが明らかとなった。また、X線小角散乱法により、完全長のプロテインジスルフィドイソメラーゼについて、活性部位の酸化還元状態の変化に伴うドメイン間相互作用の変動を明らかにした。(3)糖鎖クラスターとアミロイドβの相互作用の解析放射光VUV-CD計測および部位特異的安定同位体標識と組み合わせたNMR計測によって、GM1ミセル上におけるアミロイドβ(Aβ)の分子間相互作用を解析した。その結果、Aβはミセル上で高密度に存在する条件下においてC末端部分がチオフラビン反応性を有するβ様構造を形成することが明らかとなった。(1)糖鎖の揺らぎの解析平成22年度までに確立した手法を用いて高マンノース型糖鎖M9に常磁性タグを導入し、NMR計測によって立体構造情報を反映した常磁性効果を観測することに成功した。さらにガングリオシドGM3およびGM2の糖鎖に常磁性タグ修飾法を拡張するとともに、分子動力学計算とNMR法を組み合わせた、糖鎖の動的立体構造解析法を確立した。また、常磁性タグを付加した糖鎖と細胞質レクチンFbs1とのNMR相互作用解析を実施した。(2)アミロイド形成機構の解明糖鎖クラスター面の曲率や密度を制御することを目的に、GM1ガングリオシドを組み込んだナノディスクの調製法を確立した。また家族性変異型アミロイドβ(Aβ)の発現・精製法を確立した。こうして得られたFlemish型変異Aβについて各種ガングリオシドクラスターを用いたNMR解析を実施し、ガングリオシドクラスターに対する結合特異性と、相互作用に伴うAβのコンフォメーション変化を明らかにした。(3)マルチドメイン・マルチサブユニットタンパク質の構造揺らぎの探査マルチドメインタンパク質であるプロテインジスルフィドイソメラーゼ(PDI)について、核オーバーハウザー効果を利用したNMR解析を行い、活性部位近傍のトリプトファン残基が酸化・還元状態の違いにより、異なるアミノ酸残基と相互作用していることを明らかにした。このことからトリプトファン残基がドメイン間の相対配置を決定する重要な因子であることを示すことができた。また、タンパク質の重水素標識を利用した中性子小角散乱(SANS)法により、ホモオリゴマータンパク質のサブユニット交換の速度論解析を行う方法を開発した。この方法は今後様々なオリゴマータンパク質に応用可能であり、4次構造の揺らぎに関する有用な知見をもたらすことが期待される。(1)糖鎖の揺らぎの解析:酵母発現系を用いて調製した高マンノース型糖鎖M9およびM8Bの13C標識体を調製し、核オーバーハウザー効果等を利用して立体構造情報を収集した。
黄色ブドウ球菌α毒素およびTh22を介した好酸球性副鼻腔炎の病態機構の解明

副鼻腔炎患者の中鼻道から検出された黄色ブドウ球菌の98.8%はα溶血を示した。αトキシンは鼻茸細胞に働き、ICAM-1依存性にIL-5、IL-13、IFN-γ、IL-10、IL-17Aなどの多彩なサイトカイン産生を誘導した。αトキシンはIL-22産生も誘導した。特にIL-22産生不全は好酸球性炎症や下気道狭窄と関連した。またIL-22はIL-22受容体発現量に依存して気道上皮細胞からのMUC1発現を誘導した。本年度はIL-22の好酸球性副鼻腔炎における発現と、黄色ブドウ球菌エンテロトキシン/αトキシンによる産生とその臨床的意義について検討した。免疫染色にてIL-22は主に浸潤炎症細胞に発現し、その発現は鉤状突起に比較して鼻茸で強かった。一方、IL-22受容体は主に上皮細胞に発現していた。リアルタイムPCRにて鼻茸および鉤状突起におけるIL-22およびIL-22受容体の発現量を測定した。IL-22 mRNAは鉤状突起、特に副鼻腔炎を合併しない鉤状突起に比較して鼻茸でその発現量が有意に高値であった。特に喘息合併例で発現量が高かった。IL-22受容体mRNA量は鉤状突起に比較して鼻茸で有意に低値を示した。鼻茸の中でも、アスピリン喘息患者での発現量は有意に低かった。鼻茸を酵素処理し、鼻茸細胞を単離した。鼻茸細胞は黄色ブドウ球菌エンテロトキシンやαトキシンの刺激で有意なIL-22産生を示した。鼻茸細胞からのIL-22産生量は鉤状突起から分離した細胞に比較して有意に高値を示した。さらに、エンテロトキシンに誘導されるIL-22産生量とαトキシンによるIL-22産生量は有意な正の相関を示した。外毒素によるIL-22産生量は鼻茸浸潤好酸球数と有意な負の相関を示した。また1秒率を有意な正の相関を示した。以上の結果より、好酸球性副鼻腔炎、特に喘息合併例ではIL-22の産生が亢進しているが、これはIL-22受容体の発現低下を補完するためかNegative feedbackによる可能性が示唆された。また本年度は、慢性副鼻腔炎患者における黄色ブドウ球菌の保菌率と検出された黄色ブドウ球菌の溶血毒の産生率を観察した。副鼻腔炎患者の約半数で、中鼻道鼻汁から黄色ブドウ球菌が検出された。非副鼻腔炎症例と比較して検出率は高かったが、有意な差は認めなかった。黄色ブドウ球菌の98%でα溶血を認めた。以上の結果より、中鼻道に存在する大多数の黄色ブドウ球菌は溶血毒を産生することが明らかとなった。本年度はIL-22刺激による鼻茸細胞の遺伝子発現の網羅的解析、IL-22刺激による鼻茸細胞のMUC1発現、鼻茸好酸球におけるIL-22発現、鼻腔検出黄色ブドウ球菌の毒素検出率について検討した。IL-22の鼻茸細胞に対する遺伝子変動の網羅的解析については、3名の副鼻腔炎患者から鼻茸細胞を作製し、20 ng/mlのリコンビナントIL-22で刺激した。変動遺伝子のなかには、アリルスルファターゼBやarylamine N-acetyltransferaseやplasminogen activator inhibitor type 1など好酸球性炎症への関与が報告されているものが同定された。鼻茸細胞をIL-22で刺激したところ、MUC1発現の有意な発現亢進がみられた。MUC-1は組織炎症に対して防御的に作用することが知られていることから、IL-22の抗炎症作用のひとつとしてMUC1誘導作用が示唆された。さらに興味深いことに、MUC-1発現量は鼻茸細胞のIL-22R1 mRNA発現量と正の相関を示した。鼻茸好酸球におけるIL-22発現については抗IL-22抗体および抗ECP/EPX抗体(EG2)を用いた二重免疫染色にて検討した。EG2陽性細胞の多くは抗IL-22抗体陽性であり、鼻茸好酸球がIL-22を発現することが確認できた。鼻腔検出黄色ブドウ球菌の毒素検出率については毒素検出キットを用いて解析した。好酸球性副鼻腔炎および非好酸球性副鼻腔炎の間で毒素の検出率に有意な差を認めなかった。前年度までの検討で、1鼻茸におけるIL-22mRNAの発現は鉤状突起に比べ亢進し、特にアスピリン不耐患者で高値であること、2逆にIL-22受容体の発現は鉤状突起に比べ低下し、特にアスピリン不耐患者で顕著であること、3鼻茸細胞は黄色ブドウ球菌外毒素刺激によってIL-22を産生するが喘息患者ではその産生が抑制されていること、4鼻茸細胞のIL-22産生量は鼻茸浸潤好酸球数と負の相関を示し、逆に1秒率とは正の相関を示すことなどを明らかにし、好酸球性副鼻腔炎、特に喘息合併例ではIL-22の産生が亢進しているが、これはIL-22受容体の発現低下を補完するためかNegative feedbackによる可能性が示唆された。

本年度はIL-22による好酸球性炎症の調節機構を解析した。マイクロアレイ解析にて鼻茸細胞へのIL-22添加にて膜結合型ムチンであるMUC1のmRNA発現が亢進されることを見いだし、複数検体でのリアルタイムPCRで有意性が確認できた。IL-22添加によるMUC1発現量は鼻茸細胞のIL-22受容体mRNA発現量と正の相関を示した。一方、上皮性サイトカインであるIL-33、IL-25、IL-18、IL-8、TARC、RANTES、エオタキシンについてはIL-22添加による産生の変化はみられなかった。アスピリン不耐患者においては組織中のMUC1mRNA発現量とIL-22受容体mRNA発現量は正の相関を示した。MUC1はTLR4やTLR3などのTLRシグナルを抑制することにより気道炎症を抑制することやグルココルチコイド抵抗性に関与することなどが知られている。以上の結果より、好酸球性副鼻腔炎におけるIL-22の好酸球性炎症の抑制作用には、IL-22受容体発現に依存するMUC1の産生誘導が関与する可能性が示唆された。副鼻腔炎患者の中鼻道から検出された黄色ブドウ球菌の98.8%はα溶血を示した。αトキシンは鼻茸細胞に働き、ICAM-1依存性にIL-5、IL-13、IFN-γ、IL-10、IL-17Aなどの多彩なサイトカイン産生を誘導した。αトキシンはIL-22産生も誘導した。特にIL-22産生不全は好酸球性炎症や下気道狭窄と関連した。またIL-22はIL-22受容体発現量に依存して気道上皮細胞からのMUC1発現を誘導した。平成26年度中に4つの課題をこなした。またマイクロアレイ解析を行うことで、新しい機能制御分子を同定することが可能となった。論文化も進めており、現在RevisionがPeer Review中である。耳鼻咽喉科学、臨床微生物学、アレルギー学今後はAhRに関する研究を進める。すなわち、鼻茸細胞の黄色ブドウ球菌毒素刺激に対するAhR阻害薬の効果などを検討し、慢性副鼻腔炎の病態におけるAhRの機能的関与を検討する。IL-22産生とその制御作用に関する研究は順調に推移している。αトキシンの鼻汁内検出に関する研究も解析が進んでいる。消耗品購入の中で予定金額より安価で購入できたため残額が発生した。AhRに関する検討を進める。また粘液産生に対するIL-22やAhRに関する検討も次年度に継続して進める。平成27年度の試薬費や成果発表のための旅費への使用を計画している。臨床研究棟の耐震化工事による実験室の移転準備および引っ越し並びに仮移転にともに実験室の規模の縮小のため実験計画が予定通りに進行しなかった。平成25年度に主に試薬費に使用計画していたが、安く購入できたため残額が生じた。平成26年度にて試薬費や成果発表のための旅費への使用を計画している。
尋常性および落葉状天疱瘡抗原遺伝子の表皮特異的発現調節機構の解析

1.類天疱瘡抗原遺伝子(BPAG1)ヒト培養ケラチノサイトに活性型ビタミンD_3(VitD3)を種々の濃度で添加し、種々の時間インキュベートした後にRNAを抽出し、Northern blotting法及びCATアッセイ法にてBPAG1の発現を検討した。その結果、BPAG1mRNAは、VitD3濃度依存的、時間依存的に減少した。この現象はcycloheximideの同時添加により変化しないため、de-novoの蛋白合成を介さず、既に細胞内に存在する分子機構によることが示された。BPAG1プロモーター・CATプラスミドをトランスフェクトした培養ケラチノサイトを用いた実験系により、このBPAG1の発現抑制は、後転写レベルで生じていることが明らかとなった。BPAG1のケラチノサイト特異的発現を調節しているcis-element、KRE2に対し、POUホメオドメイン遺伝子産物でケラチノサイトで優位に発現しているOct-11が結合し、組織特異的発現を制御していることが明らかとなった。2.ヒト尋常性天疱瘡遺伝子(Dsg3)BPAG1遺伝子と同様に、Dsg3遺伝子の発現もVitD3で制御されることが明らかとなった。BPAG1と異なり、低濃度あるいは短時間のインキュベートでは発現増加、高濃度あるいは長時間では発現抑制が観察され、in vivoにおいてもin vivoと同様に表皮細胞の分化の程度に従ってその発現動態が変化すること、すなわち未分化表皮細胞での発現亢進と、高分化表皮細胞での発現抑制が示された。1.ヒト尋常性天疱瘡抗原(Dsg3)遺伝子ヒトケラチノサイド由来mRNAをテンプレートとし,ランダムヘキサマーDNAをプライマーとして,逆転写酵素によりケラチノサイトcDNAを作成。さらにこれをテンプレートとし,既に報告されているヒトDsg3cDNAの塩基配列を基に,PCR法(RT-PCR)にて5′末端付近の約400bpのヒトDsg3cDNA断片を作成。これをプローブとして,ヒトゲノムDNAライブラリーをスクリーニングし,5つの異なるクローンを得た。これらのクローンDNAを複数の制限酵素で切断し,アガロース電気泳動した後,5′端の塩基配列を含むオリゴDNAとのサザーンハイブリダイゼーションにて最も5側の配列を含むクローンを同定,自動DNA塩基配列決定装置を用いてこのクローンの塩基配列約5kbを決定した。この塩基配列をcDNAの塩基配列と比較することにより,エクソン・イントロン構造を決定。最後に第1エクソン上流の塩基配列を基に作成したオリゴDNAをプライマーに用いてプライマー伸長法により転写開始部位を同定した。2.マウスDsg3遺伝子ヒトDsg3cDNA塩基配列の5′端付近で,カドヘリン遺伝子群との間で相同性の高い領域を検討し,その領域の配列からなるオリゴDNAを作成。このオリゴDNAを用い,ヒトの場合と同様,RT-PCR法にて5′端近傍約300bpのcDNA断片を得た。これをプローブとしてマウスcDNA及びゲノムDNAライブラリーをスクリーニングし,マウスDsg3cDNA及びゲノムDNAクローンを単離,これらDNAの塩基配列を決定した。3.ヒト落葉状天疱瘡抗原(Dsg1)遺伝子ヒトDsg3遺伝子の場合と同様の手法にてヒトDsg1cDNAプローブを作成。これを用いてヒトゲノムライブラリーをスクリーニングし,複数のDsg1DNAクローンを得た。1.類天疱瘡抗原遺伝子(BPAG1)ヒト培養ケラチノサイトにTGF-βを種々の濃度で添加し、種々の時間インキュベートした後にRNAを抽出し、RT-PCR法にてBPAG1の発現を検討した。その結果、濃度依存的、時間依存的にBPAG1の発現は減少した。この現象はcycloheximideの同時添加により消失するため、de-novoの蛋白合成を介することが明らかとなった。BPAG1のケラチノサイト特異的発現を調節しているcis-element、KRE2に結合する核蛋白をゲルシフトアッセイ法にて検討した。その結果、この遺伝子の組織特異的発現にはPOUホメオドメイン遺伝子が関与していることが明らかとなった。2.ヒト尋常性天疱瘡遺伝子(Dsg3)クローニングされたDsg3のプロモーター領域の種々の長さのDNA断片をCAT遺伝子上流に接続したプラスミド群を作成し、培養ケラチノサイトを用いたトランスフェクション実験によりこの遺伝子の表皮特異的発現に関与するcis-elementを同定した。その領域内に、POUホメオドメイン遺伝子産物の結合を示唆する塩基配列が同定され、この遺伝子が、BPAG1と類似の転写調節機構を有する可能性が示唆された。BPAG

1のケラチノサイト特異的発現を調節しているcis-element、KRE2に対し、POUホメオドメイン遺伝子産物でケラチノサイトで優位に発現しているOct-11が結合し、組織特異的発現を制御していることが明らかとなった。2.ヒト尋常性天疱瘡遺伝子(Dsg3)BPAG1遺伝子と同様に、Dsg3遺伝子の発現もVitD3で制御されることが明らかとなった。BPAG1と異なり、低濃度あるいは短時間のインキュベートでは発現増加、高濃度あるいは長時間では発現抑制が観察され、in vivoにおいてもin vivoと同様に表皮細胞の分化の程度に従ってその発現動態が変化すること、すなわち未分化表皮細胞での発現亢進と、高分化表皮細胞での発現抑制が示された。
日本語における助詞の習得に関する多角的比較研究

本研究は次の二つの目標を掲げて行われた。一つは幼児と成人の助詞の言い誤りを中心とする文法的に逸脱した発話資料のデータベース化を進めること。もう一つは、得られた資料をもとに、発話における文法的符号化の一側面を発達的・記述的な観点から明らかにする、という目標であった。前者については、既に世界中で利用されているアメリカのCHILDESと呼ばれる発話資料データベースに、その日本語版を作って参加するという計画を大嶋百合子マッギル大学(カナダ)教授等とともに進め、筆者の言い誤りをデータベース化(現在フロッピィディスク2枚)するという形で達成されつつある。助成金で購入したビデオに収めた幼児の記録をモニターする装置とコンピュータ及びソフトはこうしたデータベースのマルチメディア化に役立っている。後者の目標については、成人と幼児の助詞の言い誤りを比較・分析した結果、次のようなことが明らかになった。まず、文法理論研究からの注目度も高い幼児の助詞の過剰生成の問題では、しばしば指摘されるノだけではなく、ガの過剰生成も注目されること。そして、この二つの助詞は理論的にみても、機能範疇が関わる助詞として分類されるべき特徴をもつこと。またガの過剰使用に関しては、成人も幼児と同様の傾向を示すこと。これには項構造や格付与といった形式的アプローチの他に、談話的な観点から潜在する名詞句に付与されるはずの助詞がからんでいると考えられるので機能的なアプローチも必要であること。しばしば、「言い誤りは失文法患者の発話と健常者の発話の中間的な特徴を持つ」といった図式化が行われることがあるが、その中間性を示す基準や手順は明らかなものでなく、今後の重要な課題となりうること。こうした成果の一部は既に認知科学会冬のシンポジウムの話題提供講演と論文集、および研究紀要等で発表済みであるが、8年度にかけて国際音声処理会議(投稿中)、言語学会機関誌『言語研究』等への投稿(準備中)で公にされる予定である。
細胞質型チロシンホスファターゼの細胞外シグナルによる制御機構

細胞接着のシグナル伝達や細胞骨格の制御は、がん化やがんの進展、転移と密接に関連する。PTP36は、我々が初めて構造を明らかにした細胞質型チロシンホスファターゼ相同性分子で、細胞骨格タンパクであるezrin、radixin、moesin(ERM)、あるいは神経線維腫症2型(NF2)の原因遺伝子merlinと類似のN末端ドメイン(バンド4.1相同性ドメイン)を持ち、バンド4.1スーパーファミリーに属する。我々はこれまで、細胞接着状態の変化やv-srcキナーゼの導入がPTP36のリン酸化と細胞内局在を制御することを明らかにした。この事実は、PTP36の構造的特徴とも併せて、PTP36が細胞接着や細胞骨格の制御に関わることを強く示唆する。本年度は、まず、PTP36の調節機構として、その細胞内での局在がPTP36自身のセリン残基のリン酸化を介して制御されていることを明らかにした。即ち、3T3線維芽細胞細胞が接着した状態では、PTP36はリン酸化型で細胞質に存在した。一方、接着の剥離やv-srcの導入によって脱リン酸化されたPTP36は、主に細胞膜近傍の細胞骨格へと移行した。また、PTP36の発現が調節可能な遺伝子導入細胞を樹立し、過剰発現による効果を検討した。脱リン酸化型PTP36をHeLa細胞で過剰発現させると、1)アクチンストレスファイバーの減少、2)接着性と接着斑の減少、3)増殖性の減少が生じた。さらにこのような現象を引き起こす機構を明らかにする目的で、PTP36と結合する分子の検索を行い、PTP36と結合する分子を複数クローニングした。そのうち、2-8(セリン/スレオニンホスファターゼ)と2-26(βカテニンと相同性を持つ)が細胞内とPTP36と結合することを確認した。
鼻粘膜を利用した末梢神経再生の研究

胎児マウスの嗅裂には多くの組織幹細胞が存在しており、その幹細胞を培養し、顔面神経麻痺モデルマウスの顔面神経周囲に移植した。その結果、顔面神経麻痺モデルマウスにおいて、嗅粘膜由来の組織幹細胞を麻痺神経周囲に移植することにより、自然治癒したモデルマウスと比較し、顔面神経麻痺改善に要する期間が有意に短縮されることが示唆された。麻痺改善については、幹細胞移植マウスと自然治癒群では両群に有意差を認めなかった。神経の再生については、神経再生が活発であることを示す、BrdUの取り込みが多く認められた。遺伝子発現があるか組織幹細胞を採取し、培養した後、Sox1.2 Pax6,Musashi1,GFAP,nestin,TC2,OCTなどをRT-PCRにて確認した。また、細胞内に蛋白発現があるかnestin,OMPについて免疫染色を行った。その後、このセルラインにmath1,HES,Notch等の転写因子を形質導入した。成長因子(BDNF,GDNF)、レチノン酸、ビタミンB12、ヘパリンなどと共培養し形質導入および共培養後、cDNA microarreyをすることにより、幹細胞がどのようなシグナルを受けて嗅上皮へ分化していくか検討した。BrdUで標識した嗅粘膜由来組織幹細胞を、当科で作成したアレルギー性鼻炎モデルマウスや硫酸亜鉛を用いて作成した嗅覚障害マウスの嗅粘膜に微小注入機を利用して投与し、組織幹細胞の局在、嗅上皮への分化の有無を観察し、移植後、1,2,4,6週間後にマウスの嗅裂を摘出し、4%パラフォルムアルデヒドにて固定後、メタノールにて脱水、キシレンで置換、パラフィンにて胞埋、5μmの切片を作成する。BrdU-1次抗体により蛍光免疫染色を行い光学顕微鏡で生着部位を確認した。また、嗅細胞マーカー(OMP)と蛍光二重染色を行い、組織幹細胞由来の嗅細胞を同定し、嗅裂は非常に小さな組織であるため、切片を多数作ることに限界があり、蛍光多重染色はこの問題を解決する手段として、非常に有効であった。妊娠マウスをケタミンで麻酔し、胎児の鼻粘膜を取り出し、EGF,bFGF、成長因子とともに培養し、組織幹細胞のセルラインを確立した。3から5継代培養した組織幹細胞から、RT-PCRと免疫染色を施行し、Nestin、MUSASHI1の発現を確認し、幹細胞であることを証明した。その後、神経系の組織幹細胞であることを確認するため、この組織幹細胞を分化させた。培養液からEGFとbFGFを取り除き、接着系の培養皿でさらに継代培養を行い、ベータチューブリン(神経系)、GFAP(星状膠細胞)、ガラクトセレブロシデース(オリゴデンドロサイト)のそれぞれのマーカーをRT-PCRと免疫染色にて確認した。よって鼻粘膜に神経由来の組織幹細胞が存在することが確認された。次に、この組織幹細胞を利用し、末梢神経再生に利用できないか検討した。顔面神経をモスキートペアンにて30秒間絞扼した顔面神経麻痺モデルマスに、この組織幹細胞を徐放剤に取り込ませた後に、顔面神経の挫滅部に投与し、麻痺の改善を投与群と非投与群で比較した。麻痺評価は、閉眼と髭の動きをスコア価し評価した。また、誘発筋電図にて、投与群と非投与群とで神経回復のの程度を比較検討した。治癒時の顔面神経の再生神経の程度をクリューバーバレラ染色にて評価した。その結果、幹細胞投与群ではスコア、筋電図、再生神経数ともに有意に回復が早く、治癒期間の短縮が期待された。臨床応用が可能であることが示唆された。妊娠20日の妊娠マウスをケタミン、ザイラジンにて麻酔後、胎児を取りだし、胎児を断頭して脳組織を取り除き、嗅裂を含むように鼻粘膜を取り出した。抗生剤を含んだ生理食塩水にて組織を洗浄後、0.25%トリプシンにて組織を37°Cにて15分間静置し、細胞を分離させ、骨などの不要組織をナイロンメッシュにて除去した。その後回収した細胞を、EGFなどの成長因子を加えた培養液で継代した。ディッシュに付着する細胞と浮遊する細胞を分離し、浮遊細胞を継代した。浮遊細胞は球状なneuro-sphereを形成し、12ヶ月以上継代することが出来た。これらの細胞からRNAを抽出し、RT-PCRにて神経系マーカーの発現をみると、Musashi1、Nestin、などの神経幹細胞を示唆する遺伝子の発現を認め、組織由来神経幹細胞として今研究に使用した。顔面神経麻痺に対する、組織幹細胞の治癒効果を確認するため、顔面神経モデルマウスに組織幹細胞を投与し、治療効果を確認した。顔面神経麻痺モデルマウスは、愛媛大学にて作成している方法に準じた。顔面神経を露出して、鉗子にて神経をクランプし、顔面神経麻痺モデルマウスを作成した。クランプした顔面神経周囲に継代している組織幹細胞を移植し、顔面神経麻痺の回復期間と麻痺の程度を観察した。

その結果、組織幹細胞移植群が非移植群に比較し、有意に回復時間が早く、治癒過程において効果のあることが示唆された。細胞マーカー発現を確認したに過ぎないが、今後はより詳細な機能解析を行って行きたい。24年度が最終年度であるため、記入しない。神経障害モデルマウスを利用し、組織幹細胞を障害神経周囲に散布させ、障害神経が再生していくか検討する。
高エネルギーハドロン反応におけるシングルスピン非対称の解明

偏極陽子-無偏極陽子衝突のパイオン生成過程(pp↑→πX)における大きなシングルスピン非対称(以下SSA)は実験で報告されて以来、高エネルギーハドロン過程において未だに理解されていない現象の一つである。従来の高エネルギー過程では、ハドロンをパートンと呼ばれる自由な点状粒子の集まりとみなすパートン模型がよく実験を再現する。しかし、パートン模型による予言ではSSAはほぼ0であり、実験で観測されるような大きな値は得られない。現在では、パートンの固有横運動量や多体相関が大きなSSAの起源であることが予想されている。我々はこの多体相関の1つである3-グルーオン相関の寄与の定式化を行った。我々は前年度にセミインクルーシブ深非弾性散乱過程とD中間子生成過程の計算を行っており、今年度の4月にアメリカの国際会議でこの結果を発表した。我々の結果は全く新しいもので、多くの研究者に興味を持っていただけた。次の目標としてJ/Ψ生成過程の計算を考えていたが、我々はまず先に、実験結果の多い軽ハドロン生成過程やSSAの起源を調べる上で重要なDrell-Yan、直接光子過程の解析を行った。直接光子生成過程は先行研究が存在したが、我々の定式化に基づいて計算することで、この結果が誤りであることを明らかにした。Drell-Yan過程の結果は今後SSAの起源と目されている核子中のパートン同士の多体相関と固有横運動量の関係を調べるために必要になる。軽ハドロン生成過程のSSAは、前述のとおり、パイオンのSSAが報告されて以来多くの研究者が心血を注いでいる問題である。過去の軽ハドロン生成過程に対する解析は、多体相関の一つであるクォーク・グルーオン相関のみを取り入れたものしかなかったが、我々の計算によって、3-グルーオン相関も含めたより完全な解析が可能になった。我々はこの多体相関の1つとして、3-グルーオン相関の定式化を行い、これに基づきセミインクルーシブ深非弾性散乱過程や陽子-陽子衝突の様々な過程における散乱断面積の計算を行った。我々はこの研究において、先行研究の結果が誤りであることを明らかにし、正しい結果を与えた。セミインクルーシブ深非弾性散乱過程の結果はPhysical Review Dに掲載され、陽子-陽子衝突についても近々投稿する予定である。私は8月に京都で行われた国際会議に参加し、この結果を発表した。この研究会では、多くの理論屋に興味を持ってもらい、有益な議論ができた。また、10月にドイツのユーリッヒで国際会議が開催され、そこでも同様の結果について発表を行った。この国際会議には陽子-陽子衝突実験を行っている実験屋が数多く参加していたため、多くの実験屋に興味を持ってもらい、議論を交わした。現在の実験データの解析は先行研究の間違った定式化に基づいていたため、我々の話を多くの実験家に聞いてもらえたことは、今後のSSA研究に大きなインパクトを与えることになると自負している。

過去の軽ハドロン生成過程に対する解析は、多体相関の一つであるクォーク・グルーオン相関のみを取り入れたものしかなかったが、我々の計算によって、3-グルーオン相関も含めたより完全な解析が可能になった。
生物多様性の創出・維持機構の解明

現在、我が国の研究者によって進められている国内外の生物多様性に関連した各種研究の現状分析を行い、本研究課題に関連した具体的な研究項目、方法論、目的等について大局的な検討を行った。参加研修者は、次のようなプロジェクトから選んだ。:重点領域研究「地球共生系」;新プロ「アジア太平洋地域を中心とする地球環境変動」;各種海外学術調査(東シベリア,バイカル湖,中国,タイ,マレーシア,インドネシア,オーストラリア,その他);MAB関係者,IGBP関係者具体的には以下の二つの集会をもった。1.国際ワークショップ「寒帯生態系の展望」11月23日-25日(於:京大会館)ワークショップIII「生物多様性の創出・維持機構の解明」1月16日-17日(於国際交流セミナーハウス皇子が丘荘)これらの成果は、報告書にまとめられた。(添付資料参照)以上の成果に基づいて、重点領域研究「共進化する森林」を申請した。(報告書参照)現在、我が国の研究者によって進められている国内外の生物多様性に関連した各種研究の現状分析を行い、本研究課題に関連した具体的な研究項目、方法論、目的等について大局的な検討を行った。(報告書参照)
糖尿病性腎症における新規バイオマーカー及び治療標的の探索

1型および2型糖尿病のマウスモデルを用いて、糖尿病性腎症の早期に発現増加が改善する遺伝子としてgremlin 1、growtharrest-specific 6、Wt-1、Rab3bなどを同定し、これらの因子の糖尿病性腎症への関与が示唆された。さらに糖尿病性腎症においては尿中Ngalが増加し、アンギオテンシン受容体阻害薬の投与により減少することを明らかにし、尿中Ngalの新規バイオマーカーとしての有用性を報告した。本研究では、発症機序の異なる糖尿病性腎症モデル動物及びその治療モデルを組み合わせて、共通点を明らかにすることにより、薬物の直接作用の影響を最小限にし、糖尿病性腎症の可逆性に関わる最上流のcommon pathwayの同定を目指す。第一に、STZ誘発インスリン依存性糖尿病、db/dbインスリン非依存性糖尿病、脂肪萎縮性糖尿病という3種類のマウス糖尿病性腎症モデルを用いて、腎臓から糸球体を単離し正常腎臓と比較することにより、共通に発現増加あるいは減少する遺伝子をスクリーニングする。第二に、それぞれをインスリン、ピオグリタゾン(PPARγagonist)、レプチンにより治療したのち早期に糸球体を回収し、組織学的変化に先行して発現変動する遺伝子を探索する。cysteine-rich protein 61は細胞外マトリックスの働きを修飾する分泌蛋白であるが、正常糸球体ではpodocyte特異的に発現し、糖尿病性腎症では進行と共に発現が減弱した。Cyr61はin vitroで血管内皮細胞の接着を促進する一方で、メサンギウム細胞とpodocyteの遊走を阻止し、糸球体の内部環境の保持に重要な役割を果たすと考えられた。connective tissuegrowthfactorはCyr61と同様にCCN superfamilyに属し、糖尿病性腎症のpodocyte及びメサンギウム細胞において発現が亢進する。Nephrin promoterを用いてpodocyte特異的にCTGFを過剰発現するトランスジェニックマウスを作出したところ、マトリックス分解酵素のMMP2の発現低下によりメサンギウム基質の増大、podocyte障害の増強により蛋白尿の増加をもたらすことを明らかにし、糖尿病性腎症において発現誘導されるCTGFが腎障害の新しい増悪因子であることを示唆する成績を得た。
包絡分析法(DEA)の理論と応用に関する総合的研究

DEAにおける理論と応用の両面からの展開とその融合研究を行った。ネットワークDEAや不確実性下のDEA、評価指標の開発などの理論的貢献とこれらの成果の多様な分野への適用による事例研究における応用面での貢献を得ることができた。さらに、国際シンポジウムの開催や外国人研究者の招へいなどによる国際交流の活性化および国内におけるDEA研究の中心的役割を果たすことができた。平成18年度はそれぞれの研究者の専門分野での理論研究や応用研究を中心に行った。研究集会を4回開催し、互いの研究や情報の交換を行うとともに他の研究者や実務家からの発表を通じた情報収集を行った。また、国際会議での成果発表や海外研究者との相互交流を通じて、最新の研究動向の把握も行った。平成18年度には6名の海外研究者を招へいし、共同研究の遂行、次年度以降の共同研究に向けた研究計画の立案、研究成果の情報収集などを積極的に行った。2月には本年度の研究成果を発表するための国際シンポジウムを大阪大学で開催した。研究代表者・分担者らによる成果発表に加えて、招へいした海外研究者らによる講演や公募による一般講演など全部で20件の講演があり、活発な意見交換がなされた。共同研究に発展するなどの世界的な人的ネットワークの拡大をすることができた。DEAの理論に関する研究では、スラック基準型評価尺度に関するものが多く取り上げられ、ノイズなどの不確実性に対する頑健性、比率尺度との融合による総合的評価尺度、比率尺度におけるスラックなどの性質を明らかにした。また、主成分分析や正準相関との関連や、ラッセル尺度に対する2段解法も示した。応用研究では、銀行、鉄道交通、電力、通信、産業構造、スポーツ等の幅広い対象を取り上げた研究を行った。その中では、ネットワーク型DEAによる垂直構造を持ったシステムの効率性評価、外部要因を取り入れた評価モデルなどの新たなモデルや手法を提案した。鉄道会社の効率性評価やサッカー選手の成績評価といった事例研究も行った。平成19年度は研究集会を4回開催し、互いの研究や情報の交換を行うとともに他の研究者や実務家からの発表を通じた情報収集を行った。また、国際会議での成果発表や海外研究者との相互交流を通じて最新の研究動向を把握するとともに、国内の学会とあわせて23件の成果発表を行った。2月には本年度の研究成果の公表を発表するための国際シンポジウムを成蹊大学で開催し、研究代表者・分担者らによる成果発表に加えて、招へいした海外研究者らによる講演や公募による一般講演など全部で21件の講演を行い、57名の参加者による活発な意見交換がなされた。平成19年度には8名の海外研究者を招へいし、共同研究の遂行、次年度以降の共同研究に向けた研究計画の立案、研究成果の情報収集などを積極的に行った。欧米豪にわたる世界的な人的ネットワークの拡大とともに、特に韓国、中国、台湾をはじめとするアジア地域でのネットワークは、今後の研究交流を緊密なものとするのに大きな成果を得ることができ、ネットワークDEAモデルや変数選択問題などの共同研究に結びついている。DEAの理論研究では、ネットワークDEAモデルに関するものが多く取り上げられ、システム構造を取り入れた評価法の有効性が示された。また、スラック基準型尺度、距離最小化加法モデルなどの評価尺度、変数選択に関する問題、集団意思決定のDEAモデルなどの性質を明らかにした。応用研究では、銀行、電力、通信、スポーツ、農業、環境問題、病院経営、化学工業やユーティリティ産業などの分析等の幅広い対象を取り上げた研究を行った。最終年度となった平成20年度は、4回の研究集会を開催し、連携研究者との研究や情報の交換を行うとともに他の研究者や実務家からの発表を通じた情報収集を行った。また、国際会議での成果発表や海外研究者との相互交流を通じて最新の研究動向を把握するとともに、国内の学会とあわせて27件の成果発表を行った。1月には本研究課題の成果発表も兼ねた国際シンポジウムを大阪大学で開催し、招へいした海外研究者による講演や公募による一般講演も含めて全部で23件の講演を行い、35名の参加者による活発な意見交換がなされた。平成20年度には6名の海外研究者を招へいし、最新の研究動向の把握、共同研究の遂行、新たな共同研究に向けた計画立案などを積極的に行った。特に、米国、韓国、中国、台湾、オーストラリアなどの環太平洋地域でのネットワークは、今後の研究交流を緊密なものとするのに大きな成果を得ることができた。DEAの理論研究では、不確実性下における評価モテル、ネットワークモデル、多期間モデル、時系列モデルなどが多く取り上げられた。また、スラック基準型尺度、距離最小化加法モデルなどの評価尺度、変数選択に関する問題なども成果が得られた。応用研究では、銀行、電力、スポーツ、病院経営などの幅広い対象が取り上げられ、国際比較や経営診断などの解析結果を示した。ネットワークモデルの応用研究への適用により、その解析対象は大きく広がってきている。さらに、統計的手法や専門家の知識を評価に取り入れる融合手法などの研究へも展開された。これらの成果は15件の学術論文として発表されている。
現代都市の道の多元的な空間構成における公共性とコンフリクト

本研究は、現代都市道空間の公共性の特質について明らかにすることを目的とし、道空間を、物理的空間、社会的相互作用空間、表象空間の3側面に分け、とくに後2者の側面から、現代都市街路の道空間の公共性の特質を、その多元的な空間構成のダイナミックな関係に注目して探ろうとしたものである。その研究成果は、理論編、国内各都市とパリの街路の事例研究、絵画・写真に表象された道空間の分析としてまとめられた。1.道空間の公共性についての概念的検討:道空間は、本来、開放性、混在性、境界性、危険性など、いくつかの前公共的特質があると考えられる。それは、異質なもの同士が余儀なくされる社会性ゼロの前公共性である。近代以降の道路建設の理念としての「公共性」の成立過程をとくに文献調査を通じて整理する作業をある程度行った。2.対象地域の選定:初年度は、4月6月にかけて、まず研究の対象地域の選定が重要な課題となる。現代都市の「一般道路」において、交通事故の直接的要因にかかわる物理的環境空間ばかりでなく、人と車の共存によるドライバーと歩行者、沿道生活者の間に心理的、社会的、文化的コンフリクトを生み出す要因となる社会文化的空間構成を探り出すことを試みるために、a.首都圏近郊都市として、埼玉県、神奈川県、千葉県内の都市、b.地方都市として、札幌・小樽、沖縄那覇、金沢、熊谷、四国から松山市、高松市など地方観光都市を選定した。それぞれの地域ごとに、街の中心部と周辺部をセットで選定した。3.ビデオ撮影による道空間のダイナミックな動きの把握:7月8月、および2008年2月3月にかけて、調査対象地域の候補のなかからいくつかを選んで、道空間のダイナミックな動きの把握のためにビデオ撮影を行った。具体的には、現地の一定区間の道路を少し高い位置から見下ろすことのできる場所を確保したり、道路空間の通行車両や人のダイナミックな動きを通行者間の相互行為儀礼に注目しつつ、定点設置カメラや歩行しながら撮影したり、移動する車の中から前方を撮影するなどの方法が取られた。本研究では、現代都市における道空間の公共性を巡る問題を、地域の交通計画、街路環境を背景として、歩行者、自転車、自動車がそれぞれのテリトリー空間を調整しつつ、街路空間をどのように相互に秩序づけているか、あるいは逆に、テリトリー侵害をコンフリクトとしてとらえる観点から、どのようなコンフリクトをいかなる要因によって引き起こしているかを分析することを狙いとしている平成19年度から20年度にかけて、(1)道空間の公共性についての概念的整理、(2)事例研究のための研究枠組みの整理、(3)事例研究の対象地域選定とそこでの地域交通計画、道路環境を背景とした、ビデオ観察データ収集と分析、(4)特定事例に関するアンケート調査の実施である。平成21年度3月までに、事例研究としては、沖縄県那覇市、石川県金沢市、東京都渋谷区、愛媛県松山市、香川県高松市、岡山県岡山市、神奈川県横浜市、東京都町田市、北海道旭川市など日本国内のほか、フランス・パリ市における事例調査など、約10地域に及ぶ都市街路を中心に、主としてビデオデータを収集し、ほぼ分析を終えて、現在その成果をまとめている。今年度は、ビデオ撮影による都市街路の社会的空間構成の把握のほかに、千葉文夫教授に「研究連携者」として参加していただくと同時に、Ludovic Bruneaux氏にも研究協力者としてご参加いただき、諸外国および日本の道について写真表象としての道空間の考察をしていただいている。また、坂上桂子教授にも研究員としての参加をお願いして、19世紀印象派の絵画を素材として、絵画表象としての道空間についての考察をしていただき、「道空間」の公共性について、物理的空間、社会的空間、表象的空間相互の関連を視野に入れたアプローチの可能性を探る試みも合わせて行っている。