hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
銀イオンが創傷治癒に及ぼす影響の分子生物学的解析.創傷治癒を促進させるか

(1)銀イオン自体は軽度ではあるが細胞毒性を持つ。(2)bFGFは銀イオンの呈する細胞毒性を緩和する作用を持つ。(3)銀イオンはbFGFに対して直接的に作用し、そのタンパク質としての活性を低下させる。ことが明らかとなった。銀イオンの抗菌作用は古くから知られているが、近年医療分野でも注目されるようになり、数々の銀含有製剤が開発されてきている。本邦でも創傷被覆材のうち、銀イオンを徐放するものが発売されるようになった。同時に本邦では国内で開発されたbFGF製剤が創傷治療に用いられている。これらの併用は一見、創傷治療において極めて有効だと考えられがちであるが、銀イオンがbFGFをはじめとする創傷治癒に関与するタンパク質へ、どのような相互作用をし、線維芽細胞をはじめとする細胞増殖に関与するのかについて、一定の見解は無い。われわれは、銀イオン存在下での線維芽細胞の増殖および銀イオンへの正ないしは負の遊走性の有無、さらには銀イオンの細胞増殖におけるbFGFへの阻害作用の有無について検討を行いたく、本研究を開始した。まず、銀イオン濃度を色素法により決定した。これを標準溶液とし、線維芽細胞の培地に添加し、24時間、48時間、72時間でミトコンドリア活性法により培養時間と活性との相関を検討した。その結果、銀イオンの影響は24時間で最も強く、経時的に影響は弱まる事が明らかとなった。次に、24時間に培養時間を固定した後、銀イオン濃度を変化させ、銀イオン濃度とミトコンドリア活性との相関を検討した。その結果、銀イオンを微量添加する事で活性は増大するが、この傾向は釣り鐘型の傾向が認められた。このデータより、銀イオンの最大影響濃度を決定し、この濃度において、bFGFの濃度を変化させ、ミトコンドリア活性を測定した。銀イオンを添加する事で、ミトコンドリア活性は有意に低下した。以上の結果より、銀イオンを添加する事でbFGFの細胞への活性(間接的に)は阻害される事が示された。
皮質間および皮質下構造ネットワークと高次脳機能

【背景】脳機能画像法を利用した大脳皮質機能マッピングは、Roy and Sherringtonが提唱したneurovascular couplingが成立することを前提としている。すなわち、神経活動に伴って二次的に血流カミ増加することを前提に、神経活動自体ではなく血流変化を測定している。しかし、このneurovascular couplingが常に正しい前提として保証されているとは言い難い。このような背景から我々は、拡散強調画像による機能的磁気共鳴画像法(DfMRI)を用いて、神経細胞の活動に直結する変化、具体的には神経活動に伴う細胞内の水の拡散運動の変化を、生体内の複雑な環境のままで推定する方法を開発してきた。【目的】今回我々は、DfMRIと、神経細胞の電気活動を評価できる脳磁図(MEG)とを複合的に用いて、DfMRI信号の生理的意義を明らかにするための基礎的研究を行った。【方法】健常被験者2名を対象として、チェッカーボード図形を反転させる視覚刺激を与えてDfMRI、Blood Oxygen Level Dependent(BOLD)によるfMRIと、MEGの測定を行い、それらの空間分布と経時変化との相違を比較した。【結果】DfMRI、BOLDによるfMRI、MEG、それぞれの手法で、視覚刺激に反応する脳部位が同定できた。それらの空間分布と経時変化の相違を比較したところ、今回対象とした被験者では、三者の関係に一定の傾向を見出すことはできず、DfMRIの方がBOLDによるfMRIに比べて、神経細胞の活動をより正確に反映することを示すことはできなかった。【考察】今後さらに被験者数を増やすことで、DfMRIが細胞内の水の拡散運動の変化に伴う信号変化を反映し、直接神経細胞の活動を捉えているという仮説が確認できることが期待される。【背景】ヒトの言語機能に関わる側頭・頭頂葉内の皮質問ネットワークを、機能と構造の両面からin vivoで解明することを試みた。術前評価のために留置した硬膜下電極から単発電気刺激を与えて皮質誘発電位(cortico-cortical evoked potential ; CCEP)を記録し、皮質問の機能的な結合を調べた。一方、MRI拡散強調画像にprobabilistic diffusion tractographyを適用して、脳領域間の構造的な結合を推定した。【方法】言語優位半球の側頭・頭頂葉外側及び側頭葉底面に硬膜下電極を留置した難治性側頭葉てんかん3症例を対象とした。術前評価の一環として、言語機能に関わる領域を同定した。同定した領域に単発電気刺激を与えてCCEPを記録し、側頭・頭頂葉内の機能的な結合を調べた。1症例では、拡散強調画像も撮像した。言語機能に関わる領域の皮質に関心領域を設定して、構造的な結合をtractographyで推定した。【結果】側頭葉底面(下側頭回・紡錘回)は、全例で物品呼称と漢字・仮名読みに関わっていた。この部位の単発電気刺激では、全例で隣接皮質とウェルニッケ野後方に位置する側頭葉・下頭頂葉の境界領域にCCEPが記録された。側頭葉底面と下頭頂葉の言語関連領域に関心領域を設定してtractographyを行うと、下側頭回・下頭頂葉間の構造的な結合が推定された。また、ウェルニッケ野を単発電気刺激すると、全例で隣接する前下方の側頭葉外側からCCEPが記録された。ウェルニッケ野に加えた単発刺激の刺激部位を関心領域とするtractographyでは、CCEPの分布に相当する隣接領域に強い結合が示唆された。【結論】言語機能に関わる大脳皮質領域間ネットワークを、CCEPとtractographyを用いて探索した。側頭葉底面言語野とウェルニッケ野では、皮質問結合様式が異なっていた。側頭葉底面とウェルニッケ野後方の側頭・頭頂葉領域はともに語彙処理に関係することから、両者間の結合は語彙処理ネットワークに関わる可能性がある。【考察】

今後さらに被験者数を増やすことで、DfMRIが細胞内の水の拡散運動の変化に伴う信号変化を反映し、直接神経細胞の活動を捉えているという仮説が確認できることが期待される。
肝移植予後予測バイオマーカーの確立と、肝再生規定因子の同定

本研究は、これまで未解明であった、グルタチオン(GSH)濃度の減少によって肝再生が抑制されるメカニズムの解明を試みた。増殖因子であるHGFの刺激を受容したラット初代培養肝細胞、およびラット2/3部分肝切除モデルを用いて解析を行った結果、(1)G_1中後期におけるc-MET/PI3K/Akt/mTORC1経路の活性化がcyclin D1の誘導および肝細胞のS期への移行に必要であること、(2)GSH濃度の減少は、mTOR抑制因子であるAMPKの活性化を介してG_1中後期におけるmTORC1の活性化を抑制し、cyclin D1の発現上昇を抑制すること、を明らかにした。本知見は、肝再生過程においてGSH濃度およびmTORC1の活性を保持することの重要性を示唆し、重症肝疾患患者における治療予後の向上を図る上での基盤情報になると期待される。また、本研究は、AMPKがGSH濃度の減少に起因して活性化することを初めて見出し、これまで全般的に詳細な分子メカニズムが不明であった酸化ストレスの細胞増殖抑制効果において、AMPKが関与している可能性を示唆した価値ある研究と考えられる。GSH濃度の減少が肝再生に影響を及ぼすことから、肝臓内GSH濃度のモニタリングが術後肝疾患患者の予後予測に有用である可能性が考えられた。そこで、肝臓内GSH濃度を反映しうる生体内代謝物であるγ-glutamyl-dipeptide(γ-Glu-Xs)の血中濃度を肝移植患者において測定し、肝機能の回復プロファイルとの相関性を検討した。約30人の肝移植患者における肝機能マーカー等の生化学検査値プロファイルと、血中γ-Glu-Xs濃度プロファイルとの相関性を比較したが、有意な相関性は観察されなかった。グルタチオン濃度の減少に伴って肝再生が抑制される分子メカニズムを初めて明らかにしたことに加え、肝移植患者の血清サンプルの解析まで終了しているため。肝移植患者の血中γ-Glu-Xs濃度プロファイルと、肝機能マーカー等の生化学検査値プロファイルとの間に相関性が観察されなかった理由を精査するため、まずγ-Glu-Xsの動態特性を検討する必要があると考えられる。また、肝移植患者の血清サンプルをメタボローム解析し、肝移植後の肝機能の回復に関連する新たな候補代謝物質を見出す予定である。
津波を想定した落橋防止ケーブルの設計に関する研究

これまでに沿岸域の国は津波によって幾度も被害を受けており,津波によって桁が流失する可能性が大いにある.しかし,橋梁構造物においては津波外力が橋梁に作用した場合の具体的な応答や流体力の特性は解明されていない.よって,本研究は,津波が橋梁に与える影響を検討する.そして橋梁に作用する津波外力の評価および落橋防止ケーブルの合理的な設計法を提案することを目的とする.実験では大学で作成した装置を用いて水理実験を行った.その結果,津波の高さと津波外力には一定の関係があることがわかった.また津波の速度から津波外力を算定することが可能であることもわかった.これまでに沿岸域の国は津波によって幾度も被害を受けており,津波によって桁が流失する可能性が大いにある.しかし,橋梁構造物においては津波外力が橋梁に作用した場合の具体的な応答や流体力の特性は解明されていない.よって,本研究は,津波が橋梁に与える影響を検討する.そして橋梁に作用する津波外力の評価および落橋防止ケーブルの合理的な設計法を提案することを目的とする.実験では大学で作成した装置を用いて水理実験を行った.その結果,津波の高さと津波外力には一定の関係があることがわかった.また津波の速度から津波外力を算定することが可能であることもわかった.これまでに沿岸域の国は津波によって幾度も被害を受けており,津波によって桁が流失し橋梁の機能が破壊される可能性が大いにある.しかし,橋梁構造物においては,津波外力が橋梁に作用した場合の具体的な応答や流体力の特性は解明されていない.よって,本研究は,津波が橋梁に与える影響を検討する.そして橋梁構造物の落橋を防止する落橋防止ケーブルにより津波への安全性を保障するために,津波が衝突した時の衝撃力や波圧などが作用した時のケーブル耐力や衝撃緩衝性能を水理実験及び数値解析により明らかにする.さらに橋梁に作用する津波外力の評価および落橋防止ケーブルの合理的な設計法を提案することを目的とする.模型による津波実験では,学内予算で昨年度作成した実験装置を用い,基礎的研究として橋梁は長方形断面およびみぞ形断面模型を1/150モデルにして作成し実験を行った.実験では水槽に水を溜め,水が一定量に達してからゲートを一気に開放することにより津波を発生させ,それによって橋梁模型に作用する流体力や波高を測定した.その結果,水平方向の流体力は貯水高が小さい場合はピークの山が1つであるのに対し,貯水高が大きくなると,津波が模型に作用した直後に急激な力が作用し,ピーク値も短時間になることがわかった.また鉛直方向の流体力は長方形断面では津波が模型に作用した直後に急激な下向きの力が作用し,みぞ形断面では急激な下向きの力が作用しないことがわかった.津波の数値解析では,津波が橋梁に衝突した状態をシミュレーションし,実験結果と比較検討した.解析では粒子法(MPS法)を用い,解析モデルは実験装置をモデル化し,その他の条件も実験と同じにして行った.その結果,長方形断面における数値解析で,粒子の粗さはあるが,津波作用時における橋梁周辺の流況は定性的に表現できた.これまでに沿岸域の国は津波によって幾度も被害を受けており,津波によって桁が流失し橋梁の機能が破壊される可能性が大いにある.しかし,橋梁構造物においては津波外力が橋梁に作用した場合の具体的な応答や流体力の特性は解明されていない.よって,本研究は,津波が橋梁に与える影響を検討する.そして橋梁構造物の落橋を防止する落橋防止ケーブルにより津波への安全性を保障するために,津波が衝突した時の衝撃力や波圧などが作用した時のケーブル耐力や衝撃緩衝性能を水理実験及び数値解析により明らかにする.さらに橋梁に作用する津波外力の評価および落橋防止ケーブルの合理的な設計法を提案することを目的とする.模型による津波実験では,新たに作成した実験装置を用い,プレートガーダー橋およびボックスガーダー橋に似せた2主桁断面および箱形断面模型を1/150モデルにして作成し実験を行った.実験では水槽に水を溜め,水が一定量に達してからゲートを一気に開放することにより津波を発生させ,それによって橋梁模型に作用する流体力や波高を測定した.その結果,鉛直方向の流体力は模型張り出し部によって津波作用直後に急下な上向きの力が作用することがわかった.同時に津波作用直後に時計回りの流力モーメントが模型に作用することがわかった.さらに,流速を考慮して3分力係数で津波の流体力を表現した結果,3分力係数はほぼ一定の値になることがわかり,3分力係数を用いることで,津波の流速から津波の流体力を算定することが可能であることがわかった.
多様化する部下の就業形態に対する管理職の認知とその役割

両立支援策(育児休業ならびに短時間勤務制度)を利用する正規従業員を部下としたことがある管理職(課長クラスを中心とした)を対象とし、次の3点を明らかにした。第一に、彼らの両立支援策自体に対する肯定的評価や否定的評価に対して影響を与える要因を明らかにした。第二に、彼らの両立支援策に対する認知や両立支援策を利用する者を部下とする経験がもたらす行動や情緒への影響を明らかにした。第三に、両立支援策を利用する者を部下とする経験が両立支援策利用者を超えて部下全体に与える影響を明らかにした。平成20年度に実施した研究は、両立支援策利用者(短時間勤務制度に限定)を部下とする管理職の認知と行動に関する研究と、両立支援策の施策概要ならびに運用(運用の中に管理職の行動を含む)が従業員に与える影響を検討した研究の2つである。それぞれの概要は以下の通りである。第1に、両立支援策の中でも短時間勤務制度を利用する部下を持つ管理職を対象とした質問紙調査では、短時間勤務を中核とする両立支援策とその運用、ならびに両立支援策利用者の職務内容等が、管理職の両立支援策に対する認識とリーダーシップ行動に与える影響を検討した。分析結果からは、管理職が認識する両立支援策の導入理由や施策利用者の担当業務の内容などが重要な要因となることが明らかになった。分析結果については学会発表の大会実施報告として学会誌に掲載されており、その後現在論文として、学会誌に投稿中である。第2に、両立支援策の概要ならびに運用のあり方が施策利用者だけでなく広く従業員全体に与える影響を検討した。その際、管理職がはたす役割をあわせて検討している。分析結果から、両立支援策が施策利用者だけでなく広く従業員全体に対して効果をもたらすためには、運用上の工夫として「評価の公平性」が重要であることが指摘された。この結果は、現在報告書としてまとめられ、近く公刊される予定である。2つの分析結果から、両立支援策の施策概要だけでなく広く運用のあり方が従業員に対して影響を与えること、また運用場面における管理職の行動が従業員に対して影響を与えることが確認された。平成21年度は、短時間勤務制度を利用する部下を持つ管理職の制度に対する認識(「積極的評価」と「否定的評価」)に影響を与える要因、ならびに認知がリーダーシップ行動に与える影響を取り上げた論文を作成した。短時間勤務制度導入は従業員への肯定的影響を目的とするものであると管理職が認識することが、「積極的評価」を高め、「否定的評価」を低めることが確認された。また短時間勤務者の勤務時間が短いことが「否定的評価」を高め、短時間勤務可能期間が短いことが「積極的評価」を高めることが確認された。これらのことから短時間勤務制度は「なんらかの理由で勤務時間を制限せざるを得ない正社員を一時的に支える制度」という一時的かっ緊急避難的な制度である場合に、管理職は「肯定的評価」をすると言える。一方、彼らのリーダーシップ行動(「達成圧力」「配慮」「コンフリクトへの対応」)に関する分析からは、管理職が短時間勤務制度に対して「積極的評価」の重要性が確認された。ただし、「否定的評価」が「コンフリクトへの対応」を強化することから、「否定的評価」が常に好ましくない影響を与えるとは限らない点に注意が必要である。さらに重要なことは、部門にとってリスクにつながるという認識をもたらす要因も、リーダーシップ行動に影響を与え、その影響力は、制度への認識と同等、場合によってはそれ以上の大きさを持つことである。これは、「制度への評価」の重要性を損なうものではないが、制度運用上の主要な担い手である管理職に注目する際に、制度への理解ばかりでなく、短時間勤務制度が内包する、彼らがリスクと認識するような要因にも焦点をあてる必要性を指摘するものである。また、部下が受けたリーダーシップ行動を明らかにすべく、部下の短時間勤務制度の利用経験等の違いによるリーダーシップ行動の違いを比較するために新たな調査を実施した。平成23年度は、両立支援策の運用が管理職に与える影響と、管理職を通じて部下に与える影響を検討することを目的として、以下の2点について検討を行った。第一に、両立支援策の運用状況(導入からの年月ならびに運用状況)、なかでも両立支援策利用者を部下とした経験の有無が管理職に与える影響、さらには管理職を通じてその直属の部下に与える影響を検討した。その結果、両立支援策を利用する者を部下とする経験は、管理職の組織コミットメントを高めることが確認された。現在、両立支援策が従業員に与える影響を説明する理論的枠組みとして社会的交換理論が用いられることが多いが、本分析の結果は、部下の社会的交換を支える行為が、社会的交換と同等の効果をもたらすことを示したものであり、両立支援策が従業員に与える影響を説明する理論的枠組みの拡大をはかることが必要であることを示すものである。

また、管理職が両立支援策を利用する者を部下とする経験は、現在の直属の部下の組織コミットメントにも影響を与える。すなわち、両立支援策は管理職に「両立支援策利用経験」を付与することを通じて、両立支援策による社会的交換が成立しえない従業員に対しても影響を与えることが示された。この点も両立支援策が従業員に与える影響を説明する理論的枠組みの拡大をはかることの必要性を示唆するものである.第二に、管理職が「両立支援策を利用する者を部下とする経験」を有することの影響をより詳細に検討することを目的として、調査を実施したことである。従業員規模300名以上の企業の管理職層を対象として、同経験がもたらす影響を組織コミットメント・リーダーシップ行動に与える影響を検討すべくインターネット調査を実施した。
脳の性分化過程におけるエピジェネティック機構間相互作用の解析

脳の性差は出生前後に精巣由来のアンドロゲンの作用を受けるか否かで恒久的に構築されるが、このアンドロゲンの効果を成体まで維持する分子機構は不明であった。研究代表者は、従来の研究で、ヒストンアセチル化とDNAメチル化のエピジェネティック制御が、この機構の本体であることを示してきた。本研究では、脳の性分化過程において、異なるエピジェネティック機構がどのように相互作用することで、脳の性分化が成し遂げられるのか解明を行った。その結果、特に脳の性分化初期制御過程においてヒストンアセチル化、ヒストン脱アセチル化、DNAのメチル化といったエピジェネティックス機構間に上下関係が存在することが示唆された。本研究申請では、脳の性分化過程の出生前後から成熟後までの時間軸の中で、ヒストンアセチル化とDNAメチル化といった、異なるエピジェネティック機構がどのように相互作用することで、脳の性分化が成し遂げられるのか解明を行う。平成23年度までに、胎児期から成体までの性分化の時間経過の中において脳の性差に関わる領域(内側視索前野,MPO)で脳の性分化に必須のエストロゲン受容体遺伝子のエピジェネティック修飾のプロファイルを解析し、ヒストンアセチル化がDNAメチル化修飾に先んじて起きることを明らかにした。平成24年度は、ヒストン脱アセチル化酵素を阻害した場合、このエピジェネティック修飾プロファイルに変化が起きるか明らかにするために、ヒストン脱アセチル化酵素の阻害薬を生後に脳室内投与した個体から成体期にMPOを回収し、クロマチン免疫沈降法を用いてヒストンアセチル化の程度を、バイサルファイトマッピング法でDNAメチル化の程度を解析した。その結果、阻害薬投与によりヒストンアセチル化が上昇し、次いでDNAメチル化の雄性化が阻害されることが明らかになった。すなわち、脳の性差形成過程において、ヒストンのアセチル化がDNAのメチル化といった別のエピジェネティックス機構に影響を与える上下関係が存在することが示唆された。以上の成果をもとに、日本行動神経内分泌研究会、日本神経内分泌学会、日本神経科学会、日本解剖学会で発表し、注目を集めた。さらに、学術論文として神経科学領域の学術雑誌に3編、細胞生物・生化学領域の学術雑誌に1編発表した。平成23ー24年度度に、胎児期から成体までの性分化の時間経過の中において脳の性差に関わる領域(内側視索前野,MPO)で脳の性分化に必須のエストロゲン受容体遺伝子のエピジェネティック修飾のプロファイルを解析し、ヒストンアセチル化がDNAメチル化修飾に先んじて起きることを明らかにした。ヒストン脱アセチル化酵素の阻害薬を生後に脳室内投与した個体から成体期にMPOを回収し、ヒストンアセチル化とDNAメチル化の程度を解析した。その結果、阻害薬投与によりヒストンアセチル化が上昇し、次いでDNAメチル化パターンの雄性化が阻害されることが明らかになった。平成25年度は、ヒストン脱アセチル化に先立っておこるヒストンアセチル化反応が脳の雄性化に関与していることをこの反応をになう酵素の阻害薬を投与した動物を用いた行動レベルでの解析で示した。すなわち、脳の性差形成過程において、ヒストンのアセチル化、ヒストン脱アセチル化、DNAのメチル化といったエピジェネティックス機構間に上下関係が存在することが示唆された。以上の成果をもとに、日本神経内分泌学会、日本神経科学会および日本組織細胞化学会で発表し、注目を集めた。特に、日本神経内分泌学会では学会賞を受賞した。さらに、学術論文として神経科学領域の学術雑誌に5編発表した。

本研究申請では、脳の性分化過程の出生前後から成熟後までの時間軸の中で、ヒストンアセチル化とDNAメチル化といった、異なるエピジェネティック機構がどのように相互作用することで、脳の性分化が成し遂げられるのか解明を行う。平成23年度は、各エピジェネティック修飾の継時的変動の解析と、エピジェネティック機構の阻害薬を投与した場合の影響を検証するための資料集めを行った。胎児期から成体まで時間経過を追って、脳の性差に関わる領域を選択的に回収し、脳の性分化に必須のエストロゲン受容体遺伝子のエピジェネティック修飾のプロファイルを、クロマチン免疫沈降法を用いてヒストンアセチル化の程度を、バイサルファイトマッピング法でDNAメチル化の程度を解析した。その結果、ヒストンアセチル化がDNAメチル化修飾に先んじて起きることを明らかにした。ヒストンアセチル転移酵素またはヒストン脱アセチル化酵素を阻害した場合、このエピジェネティック修飾プロファイルに変化が起きるか明らかにするために、両酵素の阻害薬を生後に脳室内投与した個体から、同様に脳領域を回収した。以上の成果を、日本神経科学会、日本解剖学会、環境ホルモン学会、Sino-Japan Symposium on Integrative Behavioral Scienceで発表し、注目を集めた。さらに、学術論文として内分泌学領域の学術雑誌に1編、総説として生命科学・内分泌学領域の学術雑誌に2編発表した。平成24年度は、発達期における脳の性分化のエピジェネティック機構間相互作用の解析を行った。脳の性差形成過程において、ヒストンのアセチル化がDNAのメチル化といった別のエピジェネティックス機構に影響を与える上下関係が存在することを示した。研究計画の半分は完了したことになる。ただし、平成23年度に、研究調書研究計画には入っていなかった、各エピジェネティック修飾の継時的変動の解析を、採択後に本研究を実行するためには必要であると考え、本研究を追加したため、予定より若干遅れている。結果として、ヒストンアセチル化がDNAメチル化修飾に先んじて起きることが明らかになり、平成24年度の解析に必須の基礎データーとなった。ゆえに、研究調書では、平成24年度に成体期における脳の性分化のエピジェネティック機構間相互作用の解析を行う計画であったが、実行できていない。平成25年4月現在、成体期の解析に着手し、サンプルの回収をはじめており、計画達成のために尽力している。交付申請書「研究の目的」には、各エピジェネティック修飾の継時的変動の解析は入っていなかったが、採択後、本研究を実行するためには、基本データーとして薬剤を投与しない定常状態でのエピジェネティック修飾の継時的変動が必要であると考え、本実験を追加したため、予定より若干遅れている。結果として、ヒストンアセチル化がDNAメチル化修飾に先んじて起きることが明らかになり、本研究遂行のための重大な情報を得ることができた。交付申請書「研究の目的」に書かれた、エピジェネティック機構の阻害剤を投与した動物の脳組織の回収(成体での性行動発現に与える影響の解析後)は終了しており、エピジェネティック修飾の量的解析にすぐに着手できる状態である。
大規模音声言語コーパスを用いた独話文の統計的係り受け解析技術の開発

本研究では、講演等の同時通訳における要素技術として利用することを想定し、音声入力に追従して処理可能(実時間性)、入力途中の段階でそれまでの部分に対する構文構造を生成可能(漸進性)、ならびに、日本語文法に逸脱する文であっても解析可能(頑健性)、を備えた独話音声の構文解析手法を開発している。最終年度は、独話音声の解析システムの設計・実現、及び、解析システムの評価を実施し、以下に示す成果を得ることができた。(1)独話音声の解析システムの設計・実装:解析単位認識プログラム、及び、統計的な係り受け解析プログラムを設計し、実装した。解析単位の認識には、節境界解析プログラムCBAPを使用し、独話文だけでなく、独話全体の解析が可能となるように、文境界が未知である状況で決定的に節境界を検出できる枠組みとした。統計的な係り受け解析では、大量の構文木データから係り受け確率を学習した。学習には、あらかじめ人手で作成した約5000文の構文木つき独話文データを使用した。係り受け解析を漸進的に実行するために、節境界が検出されるたびに、節の内部の文節の係り受け解析を実行し、また、節の最終文節の係り受け解析については、節が入力されるたびにその係り先を検討し、解析状況に応じて動的に決定する仕組みを定めた。本手法によれば、漸進的に係り受け先が決定すると同時に、解析結果に基づいて文末を判定することも可能であり、講演音声の同時的なアプリケーションにおいて利用可能なシステムとして実現している。(2)解析システムの評価:昨年度に開発した方式をもとに実装したシステムの総合評価を実施した。テストデータとして10分程度の実際の講演音声を使用した。講演全体に対する解析結果を評価対象とし、解析単位に基づく漸進的な手法の効果と限界を明らかにした。その結果、リアルタイムでの漸進的な構文解析を85%程度の精度で実行できること確認した。本研究による成果については、2編の学術雑誌論文、及び、2編の国際会議論文等により公表した。初年度は、構文木データを構築、独話文の構文的特性の調査、解析単位の検討、評価法の設定、の研究項目を実施し、以下に示す成果を得ることができた。(1)構文木コーパスの構築:以下の研究の基礎資料として、独話音声コーパスに構文木データを与えた。コーパスとして、名古屋大学統合音響情報研究拠点で構築されたCIAIR同時通訳データのうち、日本語講演音声の文字化データを使用した。構文木の形式は係り受け文法に準拠して定め、既存の言語処理プログラムをツールして利用することにより安定したデータ付与を行った。(2)コーパスを用いた構文的特徴の調査:構築した構文木付きコーパスを使用して、係り受け距離や係り受け種類等の分布を調査し、係り受け構造上の特性を明らかにした。分析は、書き言葉データ(京大コーパスを使用)、音声対話データ(CIAIR対話コーパスを使用)からデータを取り出し、それらの間での比較により実施した。(3)解析単位の形式化:上述の(2)の調査結果に基づいて、独話文の言語解析単位を、係り受け構造としてまとまりを構成していることを手がかりに定義した。実時間性を考慮すると言語学的には文節以上かつ文以下の範囲が目安となるが必ずしも言語学上の単位の範疇に制限することなく定めた。ここで定めた解析単位に対して、計算論的な認識可能性を検討した。(4)独話解析の評価法の検討:解析の実時間性、漸進性、頑健性を基準として、解析精度や処理時間、構造生成タイミング等の指標をもとに独話解析システムの総合評価法を検討した。評価項目の一部は、(2)の研究で実施した独話データの構造的分析の結果を基準として設定した。

本手法によれば、漸進的に係り受け先が決定すると同時に、解析結果に基づいて文末を判定することも可能であり、講演音声の同時的なアプリケーションにおいて利用可能なシステムとして実現している。(2)解析システムの評価:昨年度に開発した方式をもとに実装したシステムの総合評価を実施した。テストデータとして10分程度の実際の講演音声を使用した。講演全体に対する解析結果を評価対象とし、解析単位に基づく漸進的な手法の効果と限界を明らかにした。その結果、リアルタイムでの漸進的な構文解析を85%程度の精度で実行できること確認した。本研究による成果については、2編の学術雑誌論文、及び、2編の国際会議論文等により公表した。
消化管上皮が胃と腸形質を発現する分子メカニズムと胃癌の予後に関する研究

1)マウス腺胃の上皮細胞は酵素などを用いて間質と分離し3T3 Feeder Layer上で培養したが、7-14日を限度に増殖を停止してしまい継代培養を行うことは不可能であった。ところが、線維芽細胞を採取するために行った組織片遊走法を繰り返すことで、継代可能な上皮細胞(おそらくprogenitor cell)を偶然採取することができた。一方、線維芽細胞は組織片遊走法にて食道、前胃、腺胃、小腸、大腸、より継代可能な細胞を得た。上皮細胞は限界希釈法にてクローニングを行いMSE1(mouse stomach epithelium)と命名。同細胞株は胃に特異的な分化マーカー(MUC5AC,MUC6,pepsinogen,H-K ATPase etc.)の発現を認めなかったが、タイトジャンクション蛋白occludin,zo-1や単層立方上皮に特異的なサイトケラチン14の発現を認めた。2)MSE1と各消化管の線維芽細胞をコラーゲンゲルに包埋し共培養を行うと、何れにおいてもMSE1は樹枝状構造を呈し各枝は管腔状の腺管様構造を呈した。この現象は線維芽細胞の非存在下では認められず、Montesano Rらにより腎臓上皮細胞株(MDCK)で認められたものと同様の現象であった(1991 Cell 66:697-711)、さらに、各線維芽細胞との共培養系においてMSE1の形質発現の相違を検討したが(MUC5AC,MUC6,pepsinogen,H-K ATPase,MUC2,villin sox2,cdx1,cdx2 etc.)、分化誘導作用に相違は見られなかった。これは培養系で増殖してゆくために線維芽細胞自体の性質が変化し(例えば全てがαSMA陽性となる)それぞれの臓器特性を喪失してしまったためと考えられた。3)HoxC8、HoxA5は、発生、分化に関わるホメオボックス遺伝子であり、消化管での発現については不明な点が多い。そこで胃、小腸、大腸粘膜組織からtotal RNAを抽出し、RT-PCR法によりHoxC8、HoxA5 mRNAの発現を検索した。その結果小腸・大腸では発現が確認されたが、胃では発現が確認されなかった。さらに腺管分離法を用いて、回腸粘膜から上皮を取り出し、上皮とそれを除いた間質から別々にtotal RNAを抽出し、RT-PCR法によりHoxC8 mRNAの発現を検索したところ、HoxC8の発現は間質でのみ確認されHoxC8は腸の形質発現に重要であると考えられた。1.マウス上皮細胞のプライマリーカルチャー法の確立およびその形質発現に関する検討3weeksの雄マウスを用い,胃上皮から組織片遊走法を応用した方法で、上皮細胞を分離培養することに成功した。

この細胞をゲル内で培養すると,同じく胃の間質の繊維芽細胞を培養したゲルと接触させた時のみ,腺管様の構造を呈し,繊維芽細胞から胃上皮細胞の分化を誘導する因子が分泌されていると考えられた。本細胞のoriginを明確にするため、RT-PCRと免疫染色を行い以下のような結果を得た。現在,上皮,間質間でやりとりされている因子につき検討を進めるとともに,このモデルを用いて,分化制御の分化機構につき検討中である.2.臨床胃癌症例における胃型,腸型形質発現の検討我々は、胃がんにおける胃型,腸型形質発現を検索し、ホメオボックス遺伝子Cdx1,Cdx2との関係を検討した。ヒト進行胃がん70例でのCdx1,Cdx2の発現をmRNAレベルで検索したところ、胃がんの組織型とこれらのホメオボックス遺伝子の発現は無関係であった。しかし、Cdx1,Cdx2 mRNAの発現はG type->GI type->I typeになるに従い増加した。抗Cdx2モノクローナル抗体を用いたCdx2の免疫組織化学的な検討では、Cdx2発現は、腸型形質発現を有する胃がん細胞に一致して発現し、組織型とは無関係であることが確認された。我々はさらに、ヒト進行胃がん177例を用いて、胃がんとCdx2発現の臨床病理学的な検討を行った。Cdx2発現は、腸型形質発現と高い相関性を示しCdx2陽性胃がんの方が、陰性胃がんより5年生存率が良好であった。さらに、G型、GI型、I型、N型の4種類に分類される形質発現にて、5年生存率を検討した結果、GI型->I型->G型->N型の順に予後が良好であった。つまり、腸型形質を有する胃がんの方が、予後が良い結果となった。1)マウス腺胃の上皮細胞は酵素などを用いて間質と分離し3T3 Feeder Layer上で培養したが、7-14日を限度に増殖を停止してしまい継代培養を行うことは不可能であった。ところが、線維芽細胞を採取するために行った組織片遊走法を繰り返すことで、継代可能な上皮細胞(おそらくprogenitor cell)を偶然採取することができた。一方、線維芽細胞は組織片遊走法にて食道、前胃、腺胃、小腸、大腸、より継代可能な細胞を得た。上皮細胞は限界希釈法にてクローニングを行いMSE1(mouse stomach epithelium)と命名。同細胞株は胃に特異的な分化マーカー(MUC5AC,MUC6,pepsinogen,H-K ATPase etc.)の発現を認めなかったが、タイトジャンクション蛋白occludin,zo-1や単層立方上皮に特異的なサイトケラチン14の発現を認めた。2)MSE1と各消化管の線維芽細胞をコラーゲンゲルに包埋し共培養を行うと、何れにおいてもMSE1は樹枝状構造を呈し各枝は管腔状の腺管様構造を呈した。この現象は線維芽細胞の非存在下では認められず、Montesano Rらにより腎臓上皮細胞株(MDCK)で認められたものと同様の現象であった(1991 Cell 66:697-711)、さらに、各線維芽細胞との共培養系においてMSE1の形質発現の相違を検討したが(MUC5AC,MUC6,pepsinogen,H-K ATPase,MUC2,villin,sox2,cdx1,cdx2 etc.)、分化誘導作用に相違は見られなかった。これは培養系で増殖してゆくために線維芽細胞自体の性質が変化し(例えば全てがαSMA陽性となる)それぞれの臓器特性を喪失してしまったためと考えられた。
リステリアのバイオフィルム形成細胞化のゆらぎの明確化に関する研究

バイオフィルム形成は微生物の環境への集団適応の一つであり、一度形成すると完全除去は難しく、その形成制御が必要である。食品衛生分野では、食品製造環境等におけるListeria monocytogenesのバイオフィルム形成による食品汚染を介したヒト健康被害が問題とされており、本菌の環境適応に係る分子基盤の解明が求められている。本研究では、本菌の環境適応能力に係るゆらぎの明確化を目指し、バイオフィルム形成段階に顕す細胞形質に基づいた亜集団別分類を通じて細胞構造学的及び分子代謝学的観点からその形質特性を明らかにすると共に、当該形質の成熟機構に係る遺伝学的挙動の解明を行う。
クローン病再燃予測システムの開発

炎症性腸疾患であるクローン病は小腸・大腸に難治性の潰瘍病変を有し、出血・狭窄・瘻孔などが生じるためQOLが著しく低下する。さらに本疾患は若年発症が多く、本邦では近年患者数が急増していることから社会経済への影響も懸念されている。クローン病治療の問題点として、一旦寛解しても再燃を来し狭窄・瘻孔ことが可能であるが、クローン病では小腸を全摘出することは致死的である。そのため、いかに再燃を減少させ健康な小腸を維持できるかがクローン病の予後・QOLの向上に重要なポイントとなる。そこで本研究では、臨床検査及び基礎研究で腸管評価を世界的に先導して開発してきた申請者らが前向き研究にてクローン病の再燃予測因子を探索し、新規再燃分子マーカーを同定することにより臨床検査と複合させた新しい再燃予測スコアを提唱することを目的とする。本研究にて得られる成果は、再燃特異的分子マーカーを基盤としてクローン病再燃メカニズムの解明を計るとともに、分子マーカーもしくは再燃メカニズムを標的とした新規治療薬を開発することでクローン病再燃予防まで発展させることができる。今年度はクローン病患者の病変部と非病変部からオルガノイドを樹立し、マイクロアレイ解析にて病変部特異的発現遺伝子を同定した。クローン病患者からの小腸オルガノイドの樹立に成功し、マイクロアレイ解析にて病変部特異的発現遺伝子を同定していることから、本計画はおおむね順調に進展していると判断した。病変部特異的発現遺伝子の機能解析を進めると共に、その遺伝子発現がクローン病の診断もしくは活動性評価としてのバイオマーカーとなるか臨床情報と組み合わせることにより評価を行う予定である。クローン病治療の問題点として、一旦寛解しても再燃を来し狭窄・瘻孔を生じること、病変部位を切除しても残存小腸から再燃すること、小腸は大腸と異なり全摘出ができないため手術を繰り返した結果、短腸症候群を引き起こすことが挙げられる。炎症性腸疾患のもう一つの代表的な疾患である潰瘍性大腸炎は病変が大腸のみに限局するため最終手段として大腸を全摘出することで完治することが可能であるが、クローン病では小腸を全摘出することは致死的である。事前の深部小腸マイクロアレイにおいて健常者の深部小腸と比較検討を行い、有意に発現が異なる遺伝子を2個選定した。その一つであるHD6はクローン病患者で有意に発現が低下しており、免疫染色にてHD6陰性腺管を認めることからバリアー能破綻が示唆された。また、クローン病患者から上皮細胞を単離しマトリゲルに包埋の後3次元にて培養を行った。現在、病変部由来の遺伝子発現解析を行っており、再燃因子との関連の有無を検討中である。患者由来オルガノイドから病態を反映する機能評価システムを構築する。臨床検査と分子マーカーとの関連を検討し、再燃予測因子の確立を目指す。患者由来オルガノイド培養試薬が予測よりも安価であったため。

次年度以降は各種解析によるオルガノイド培養量の増加が見込まれており、培養試薬購入に使用する予定である。理由:試薬等が計画当初より廉価で購入可能であったため。使用計画:検討する数・種類を拡大して解析を行うため、試薬を増量して購入する予定である。
神経突起伸長におけるシナプトタグミンファミリーの機能の解明

シナプトタグミン1または2はシナプス小胞上に存在する膜タンパク質で、細胞質側に存在する二つのC2ドメイン(C2A,C2B)を介して神経伝達物質放出の際のカルシウムセンサーとして機能するだけでなく、発達中の神経細胞の成長円錐小胞上にも存在し神経突起の伸長にも関与することが明かとなっている。シナプトタグミンはマウスにおいて遺伝子レベルで少なくとも13種類のアイソフォームが存在し(Fukuda et al.(2001)Biochem.J.)、様々な組み合わせのオリゴマーを形成して機能すると考えられている(Fukuda and Mikoshiba(2000)J.Biol.Chem.;J.Biochem.;FEBS Lett.)。本年度はシナプトタグミン1がシナプス小胞のドッキング・フュージョン・リサイクリングの制御だけでなく(Fukudaetal.(2000)Proc.Natl.Aca.Sci.USA)、PC12細胞の突起の伸長(Fukuda and Mikoshiba(2000)Neurosci.Lett.)、さらには損傷した軸索の修復にも関与することを明らかにした(Detrait et al.(2000)J.Neurobiol.;J.Neurosci.Res.)。さらにシナプトタグミン4と呼ばれる4番目のアイソフォームに着目し、特異的抗体を作成することにより以下の知見を明らかにした(Berton et al.(2000)Eur.J.Neurosci.)(1)シナプトタグミン4分子は神経細胞の発達時期にのみ強い発現がみられる。(2)シナプトタグミン1とは異なりシナプス小胞ではなくゴルジ体及び発達中の神経細胞の神経突起先端部に局在する。(3)細胞膜の脱分極刺激によりその蛋白質量が増大し、神経突起の先端方向への小胞輸送が促進されているよう免疫組織像が得られる。以上の結果からシナプトタグミン4分子はシナプトタグミン1分子とは異なる機能を持ち、神経活動依存的に起こると考えられるシナプス(あるいは神経回路網)形成に重要な役割を担うものと考えられた。シナプトタグミンはラットにおいて遺伝子レベルで少なくとも11種類のアイソフォームが存在することが報告されているが、シナプトタグミン1及び2以外のアイソフォームの機能、組織分布及び細胞内局在は全く明らかではなかった。そこで本年度はシナプトタグミンファミリーの機能の多様性を明らかにするためまずマウスシナプトタグミン1-11のcDNAクローニングを行い(Fukuda et al.(1999)J.Biol.Chem.)、ある種のアイソフォームではalternative splicingにより機能が異なると考えられる多様な分子種が生み出されることを明らかにした(Fukuda & Mikoshiba(1999)J.Biol.Chem.)。さらにシナプトタグミン4と呼ばれる4番目のアイソフォームに着目し、特異的抗体を作成することにより以下の知見を明らかにした(Ibata et al.(2000)J.Neurochem.)(1)シナプトタグミン4分子は神経細胞の発達時期にのみ強い発現がみられる。(2)シナプトタグミン1とは異なりゴルジ体及び発達中の神経細胞の神経突起先端に局在する。(3)細胞膜の脱分極刺激によりその蛋白質量が増大する。現在、他のアイソフォームについても特異的抗体を作成し神経突起あるいはシナプス形成との関連性を検討中である。

(2)シナプトタグミン1とは異なりシナプス小胞ではなくゴルジ体及び発達中の神経細胞の神経突起先端部に局在する。(3)細胞膜の脱分極刺激によりその蛋白質量が増大し、神経突起の先端方向への小胞輸送が促進されているよう免疫組織像が得られる。以上の結果からシナプトタグミン4分子はシナプトタグミン1分子とは異なる機能を持ち、神経活動依存的に起こると考えられるシナプス(あるいは神経回路網)形成に重要な役割を担うものと考えられた。
母体ビオチン欠乏状態による奇形発現機序の形態学的・生化学的解析

マウスを妊娠中ビオチン欠乏状態にすると、顔面頭部の異常が誘発されるが、この発現機序については、未だ明らかではない。そこで、本研究では妊娠中期の胎児発育の様子とビオチン量の変化を検討した。妊娠マウス(ICR)にビオチン欠乏飼料を与え、妊娠12日あるいは妊娠15日に開腹した。胎児の体重を測定した後、肢芽および二次口蓋突起の分化状態を形態学的・組織学的に観察した。肢芽の分化状態は、肢芽における指放線間隙数を数えて、その指標とした。口蓋突起については、その形成過程を数値化して、分化状態を評価した。また、妊娠中のビオチンの体内動態を知るために、これらの胎児および母体肝臓のビオチン量を、バイオアッセイ法で測定した。母体がビオチン欠乏状態になると、妊娠12日において既に胎児の発育(体重および体長)に遅れがみられ、肢芽における指放線間隙数も低下していた(対照群平均7.6:欠乏群6.7)。妊娠15日では、ビオチン欠乏胎児で小顎症(95.8%)、短肢症(42.1%)および外脳症(11.1%)などの形態学的な異常が観察された。また、二次口蓋突起の形成をみると対照群ではほとんどの胎児(99.5%)で突起の融合がみられたが、ビオチン欠乏胎児ではわずか13.5%であり、ビオチン欠乏状態で口蓋突起の分化の遅れがみられた。これらの頻度は、出産直前で観察した各々の奇形の出現頻度と一致していた。ビオチンの体内動態を見ると、ビオチン欠乏症胎児においてはビオチンは殆ど検出されなかった(0.5ng/g以下)。一方、対照胎児のビオチン量(457.6ng/g)は、母体のおよそ10倍であった。なお、妊娠中期において、ビオチン欠乏胎児の顔面頭部に組織学的な変化は観察されなかった。このように、妊娠中期においてマウス胎児のビオチン要求量が高くなっており、ビオチンは、少なくともマウスにとっては、胎児の発育および形態形成に重要な役割を果たしていることが示唆された。
老化過程におけるForkhead転写因子とその標的遺伝子の重要性

[目的と方法]食餌カロリー制限(CR)は、げっ歯類等の個体の老化速度を抑制し、寿命を延長する再現性の高い方法であるが、そのメカニズムは未だ解明されていない。しかし、近年、CRの抗老化・寿命延長作用に、成長ホルモン/インシュリン様成長因子(GH/IGF-1)抑制およびそのシグナルの標的であるForkhead転写因子の重要性が示唆されている。本研究では、自由摂食させたGH抑制トランスジェニックミニラット(tg/tg)とwild(-/-)、そのF1ヘテロ(tg/-)、各々をCRしたラット、計6群の寿命とDNA array法を用いた肝臓の遺伝子発現プロフィール、さらに脂質代謝関連遺伝子発現を定量的RT-PCR法により比較し、個体の老化制御に主要な役割を担う遺伝子群を検封した。[結果と考察]1.6群の寿命解析より、強いGH/IGF-1抑制は、個体の生存に不利であるが、適度の抑制は抗老化・寿命延長に有利である。また、CRはtg/tg、tg/-、-/-ラットの寿命を著しく延長し、CRによる抗老化・寿命延長作用には、GH/IGF-1抑制依存性および非依存性メカニズムが存在する可能性が示唆された。2.cDNA array法において、GH/IGF-1抑制およびCRにより、多くのストレス応答、脂質代謝関連遺伝子の発現が、有意に変化していた。前者の多くは、IGF-1レベルと相関しており、一方、後者の多くはIGF-1レベルに非依存性であった。それゆえ、CRの抗老化・寿命延長作用のうち、前者はGH/IGF-1依存性、後者は、非依存性のメカニズムの主体であると推定された。3.GH/IGF-1抑制レベルの違いにかかわらず、CRラット肝臓では、食餌摂取後には、脂肪酸合成促進遺伝子群が、また空腹時は、多くのbeta-酸化関連遺伝子の発現が増強していた。血清の脂質関連パラメータと考え併せると、CRは、食餌摂取後では摂取されたエネルギーを蓄積し、空腹時では蓄積されたエネルギー源の利用を促進し、エネルギー源としての脂質の効率的な利用を促進すると考えられる。【研究目的と方法】長期の食餌制限(DR)は、げっ歯類をはじめとする個体の老化速度を抑制し、様々な疾患や腫瘍の発症を抑制、遅延し、寿命を延長する再現性の高い方法であるが、そのメカニズムは未だ解明されていない。しかしながら、近年、DRのこの抗老化・寿命延長作用に成長ホルモン/インシュリン様成長因子(GH/IGF-1)抑制およびそのシグナルの標的であるForkhead転写因子の重要性が示唆されている。本研究では、GH抑制トランスジェニック(ミニ)ラットとwildラット、そのF1ヘテロおよび各々をDRしたラット、計6群の寿命とDNA array法を用いた肝臓での1176個の遺伝子発現プロフィールを比較する事により、個体の老化制御に主要な役割を担う遺伝子群を明らかにし、抗老化・寿命延長作用におけるGH/IGF-1抑制の重要性を検討した。【結果と考察】34カ月齢現在のラットの生存率は、高い順にF1DR、ミニDR>wildDR、F1自由摂食(AL)>wildAL>ミニALてある。

ミニALラットがNK細胞活性が低くいためか、腫瘍発生率が極めて高く、予想に反し短寿命であるが、それ以外5群の生存率はIGF-1レベルと負の相関があり、寿命延長における適度のGH/IGF-1系抑制の重要性を示唆する。一方、1176個中343個の遺伝子が肝臓において発現しており、そのうちDRにより発現が変化する遺伝子は、ストレス応答、脂質代謝関連遺伝子を中心に17個あり、そのうち1/3はIGF-1の変化に依存し、2/3は非依存性であった。F1ヘテロやミニラットのようなGH分泌を抑制したラットに食餌制限を行うことにより、寿命がさらに延長するという事実と遺伝子発現プロフィールを考え併せると、食餌制限による老化制御には、GH/IGF-1依存性および非依存性のメカニズムがあり、後者特にストレス応答関連遺伝子の発現増加と脂質代謝関連遺伝子発現の修飾がより重要であると推定された。今後は、これら遺伝子の転写制御機構におけるForkhead転写因子の関与を検討する予定である。[目的と方法]食餌カロリー制限(CR)は、げっ歯類等の個体の老化速度を抑制し、寿命を延長する再現性の高い方法であるが、そのメカニズムは未だ解明されていない。しかし、近年、CRの抗老化・寿命延長作用に、成長ホルモン/インシュリン様成長因子(GH/IGF-1)抑制およびそのシグナルの標的であるForkhead転写因子の重要性が示唆されている。本研究では、自由摂食させたGH抑制トランスジェニックミニラット(tg/tg)とwild(-/-)、そのF1ヘテロ(tg/-)、各々をCRしたラット、計6群の寿命とDNA array法を用いた肝臓の遺伝子発現プロフィール、さらに脂質代謝関連遺伝子発現を定量的RT-PCR法により比較し、個体の老化制御に主要な役割を担う遺伝子群を検討した。[結果と考察]1.6群の寿命解析より、強いGH/IGF-1抑制は、個体の生存に不利であるが、適度の抑制は抗老化・寿命延長に有利である。また、CRはtg/tg、tg/-、-/-ラットの寿命を著しく延長し、CRによる抗老化・寿命延長作用には、GH/IGF-1抑制依存性および非依存性メカニズムが存在する可能性が示唆された。2.cDNA array法において、GH/IGF-1抑制およびCRにより、多くのストレス応答、脂質代謝関連遺伝子の発現が、有意に変化していた。前者の多くは、IGF-1レベルと相関しており、一方、後者の多くはIGF-1レベルに非依存性であった。それゆえ、CRの抗老化・寿命延長作用のうち、前者はGH/IGF-1依存性、後者は、非依存性のメカニズムの主体であると推定された。3.GH/IGF-1抑制レベルの違いにかかわらず、CRラット肝臓では、食餌摂取後には、脂肪酸合成促進遺伝子群が、また空腹時は、多くのbeta-酸化関連遺伝子の発現が増強していた。血清の脂質関連パラメータと考え併せると、CRは、食餌摂取後では摂取されたエネルギーを蓄積し、空腹時では蓄積されたエネルギー源の利用を促進し、エネルギー源としての脂質の効率的な利用を促進すると考えられる。
内皮-間葉トランスフォーメーションに関わるES蛋白群の解析(ES蛋白群のアフィニティー精製・抗体作製による免疫組織化学的検討)

EDTAの存在下で調製した発生ステージ24の鶏胚ホモジネートを段階的に遠心分画し、SDS-PAGE/Western blotで検討した結果、100,000gの超遠心後の上清にES抗体陽性の蛋白が豊富に存在することが明らかになった。polyspecificなES抗体を用いてこの上清をアフィニティーカラム精製したところ、70、63、44、27-kDaの蛋白が比較的豊富に、また、120、50-kDa付近にも小量のES抗体陽性の蛋白が認められた。これらのうち70-kDaのES蛋白はN末端アミノ酸マイクロシークエンシングによりtransferrinであると判明したため、免疫組織化学・生化学的な検討を加えた。その結果、transferrinが心臓内皮から間葉細胞へのtransformationと同期して発現し、誘導因子のco-factorとしてあるいは内皮から生じた間葉細胞に対する選択的な増殖因子として働いているという新知見が得られ、これを本報告書別項に記載したとおり学術雑誌に論文報告した。精製された他の蛋白については、これらを免疫原としてモノクローナル抗体の作製を行い複数のハイブリドーマを得た。スクリーニングの過程で得られたデータから興味深いと考えられた2つのクローンが産生するD10およびA2抗体について検討を進めたところ、D10抗体(IgG1 type)の抗原が約52-kDa(免疫沈降法による)であり鶏胚の心筋組織と心臓内皮間の細胞外基質にgradientをもって分布していること、また、conformation-dependentなepitopeを認識していると思われるA2抗体(IgM type)の抗原分子が鶏胚心臓および発生初期の一部の毛細血管内皮に局在することが明らかになったため、これを第14回国際解剖学会で報告した。