hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
次世代シーケンサーによる膵癌早期診断マーカー同定と低侵襲十二指腸液検査法への応用

膵癌を浸潤癌に至る前に早期診断するための新規遺伝子学的診断法の開発を目的とした。正常膵管組織、PanIN 2-3、浸潤性膵管癌の組織を採取し、癌関連の578遺伝子のエクソン領域の塩基配列データを取得した。正常膵管組織では認めず、PanIN 2-3の75%以上で出現する変異として、NOTCH2、AFF3、EXT1、IL21R、CDH6の5遺伝子変異を同定した。IPMN嚢胞内容液中DNAを対象にこれら5遺伝子変異をCast PCR法もしくはdigital HRM法で調べたところ、低中等度異型のIPMNからはいずれの変異も検出されず、高異型度IPMNの67%で1つ以上の変異を認めた。膵癌の予後改善のためには早期診断が最も重要な課題である。本研究では、臨床応用に直結しうる膵癌の新規遺伝子学的低侵襲スクリーニング法を開発することを目的とする。現行の画像検査を中心とした診断法を凌駕する臨床的有用性を備えた早期診断マーカーの条件として、浸潤癌へと進展する前の高異型度前癌病変の段階で特異的に現れる、低侵襲に採取可能な検体から検出できる、という点が重要である。本研究では、次世代シーケンサーによる網羅的体細胞変異検索により膵癌の段階的発癌過程新規分子マーカーを同定し、これを高感度遺伝子変異検出技術で臨床検体から検出することを目標とする。1,次世代シーケンサーを用いて、正常膵管、膵癌前癌病変の各段階、浸潤性膵管癌での体細胞変異を網羅的に検索し、段階的癌化の過程それぞれの遺伝子変異パターンを明らかにする。2、前癌病変が浸潤癌へと移行する段階に特徴的に出現する体細胞変異に着目し、新規の膵癌発癌を予測しうるマーカーおよび変異パターンを同定する。4、検出されたターゲット変異と、画像所見や病理組織学的所見との対比、長期経過を調べることで、その臨床的意義を明らかにする。膵癌は発見時にすでに遠隔転移を伴っていることが稀でなく、予後改善のためには浸潤癌に至る前の早期診断が最も重要である。本研究ではこの問題を解決しうる、臨床応用に直結する新規遺伝子学的低侵襲スクリーニング法開発の基盤となる知見を得ることを目的としている。次世代シーケンサーによる網羅的体細胞変異検索により膵癌の段階的発癌過程新規分子マーカーを同定し、これを高感度遺伝子変異検出技術で臨床検体から検出することがゴールである。平成27年度までに、以下の実績を得ている。名古屋大学医学部附属病院消化器外科二において膵切除術を施行した膵癌症例の凍結保存検体から、顕微鏡で確認し正常膵管組織、PanIN 2-3、浸潤性膵管癌の組織を採取した。QIAamp DNA Micro Kitを用いて次世代シーケンサーでの解析に適した高品質DNAを抽出した。未知の遺伝子変異を同定すべく、癌関連の578遺伝子のエクソン領域を網羅的にカバーするSeqCap EZ Choice Library (Roche Applied Science)のComprehensive Cancer Designを用いてライブラリ調整を行い、Illumina Hiseq (Illumina)によるPaired-End法(100塩基)で塩基配列データを取得した。リードデータを処理し、重複して出力された変異候補箇所については変異塩基ごとに転写・翻訳産物への影響が最も強いと予測される箇所に絞って解析を進めた。正常膵管組織では認めず、PanIN 2-3の75%以上で認められ、かつ浸潤性膵管癌でも75%以上に認められる変異を検索した結果、NOTCH2、AFF3、EXT1、IL21R、CDH6の5遺伝子のエクソン内に条件に合致する変異を認めた。微小病変からの高純度なDNA検体を必要検体数分確保する作業に予想以上の期間を要したが、膵癌段階的発癌過程の各段階を対象とした次世代シーケンサーによる網羅的遺伝子変異解析は完了し、そのデータ解析も達成することができた。それと同時に、臨床検体からの候補マーカー検出を試みる準備は進んでいる。膵癌の予後改善のためには浸潤癌に至る前の早期診断が最も重要である。本研究では次世代シーケンサーによる網羅的体細胞変異検索により膵癌の段階的発癌過程新規分子マーカーを同定し、これを高感度遺伝子変異検出技術で臨床検体から検出することがゴールである。膵切除術を施行した膵癌症例の凍結保存検体から、顕微鏡で確認し正常膵管組織、PanIN 2-3、浸潤性膵管癌の組織を採取した。次世代シーケンサーでの解析に適した高品質DNAを抽出し、癌関連の578遺伝子のエクソン領域を網羅的にカバーするSeqCap EZ Choice Library (Roche Applied Science)のComprehensive Cancer Designを用いてライブラリ調整を行い、Illumina Hiseq (Illumina)によるPaired-End法(100塩基)で塩基配列データを取得した。臨床検体、とくに膵液やIPMN嚢胞液などでは、抽出されるゲノムDNAのほとんどが正常組織由来であり、病変由来の微量な遺伝子変異を検出するためには、高感度な遺伝子変異解析手法が必須である。そこで、Cast PCR法とdigital HRM法によって、最小で0.1%の変異allele存在率まで検出可能であることを確認した。IPMN

嚢胞内容液および腫瘍組織からDNAを抽出し、NOTCH2、AFF3、EXT1、IL21R、CDH6変異をCast PCR法もしくはdigital HRM法で調べたところ、低中等度異型のIPMNからはいずれの変異も検出されなかった。一方で、高異型度IPMNの67%で、NOTCH2、AFF3、EXT1、IL21R、CDH6の1つ以上の変異を認めた。IPMN腫瘍組織のDNAから同様の変異パターンが確認された。膵癌を浸潤癌に至る前に早期診断するための新規遺伝子学的診断法の開発を目的とした。正常膵管組織、PanIN 2-3、浸潤性膵管癌の組織を採取し、癌関連の578遺伝子のエクソン領域の塩基配列データを取得した。正常膵管組織では認めず、PanIN 2-3の75%以上で出現する変異として、NOTCH2、AFF3、EXT1、IL21R、CDH6の5遺伝子変異を同定した。IPMN嚢胞内容液中DNAを対象にこれら5遺伝子変異をCast PCR法もしくはdigital HRM法で調べたところ、低中等度異型のIPMNからはいずれの変異も検出されず、高異型度IPMNの67%で1つ以上の変異を認めた。微小病変からの高純度なDNA検体を必要検体数分確保する作業が予想以上に困難であり、期間を要したが、現在、膵癌段階的発癌過程の各段階を対象とした次世代シーケンサーによる網羅的遺伝子変異解析が開始されている。臨床検体の収集は進んでおり、次世代シーケンサーの結果を得てターゲット変異が絞り込めた時点で、次の段階に移行する準備はできている。平成28年度は、これまでの成果である高度異型前癌病変に移行する段階で特異的に出現する遺伝子変異を、臨床検体から検出できるかを検証する。膵液検体、IPMN嚢胞内容液などの臨床検体の収集は進んでおり、まずは入手した各種臨床検体からの核酸抽出をDNeasyBlood & Tissue Kit (Qiagen)により行い、均一かつ高品質なDNA検体を準備する。微量な遺伝子変異を検出するためには、高感度な遺伝子変異解析手法が必須であり、0.1%の変異allele存在率まで検出可能であることをすでに確認しているCast PCR法とdigital HRM法を用いる。臨床検体からのNOTCH2、AFF3、EXT1、IL21R、CDH6変異およびTP53、GNAS変異の検出率を調べるとともに、膵切除検体から得られた腫瘍部組織に対しても同様に変異解析を行い、体液中から得られる変異マーカーの結果が原発巣の遺伝子変化を反映しているかについても評価する。28年度が最終年度であるため、記入しない。消化器外科学次世代シーケンサーによる網羅的遺伝子変異解析結果が得られ次第、高度異型前癌病変に移行する段階で特異的に出現する遺伝子変異を検索する。入手した各種臨床検体からの核酸抽出をDNeasyBlood & Tissue Kit (Qiagen)により行い、均一かつ高品質なDNA検体を準備する。微量な遺伝子変異を検出するためには、高感度な遺伝子変異解析手法が必須である。正確性および再現性を高めるため、2つの高感度遺伝子変異解析法を行う予定である。
両大戦間のドイツにおけるゲルマンとスラブの文化接触とその歴史的意義

研究代表者を含め4人の共同研究者は、それぞれ1.ワイマール共和国時代のドストエフスキイ流行について、2.ベルリンにおける亡命ロシア人の活動と文学作品のかかわり、3.ワイマール時代のドイツにおけるユダヤ人問題について、4.映画製作の手法における独露の影響関係について、といったテーマを設定し、概ね次のような知見に達した。1.ワイマール時代のドストエフスキイ流行は、既にロシア第一次革命の直後に種子が蒔かれており、その仲立ちを務めたのがメレジュコフスキイとメラー-ファン-デン-ブルックであった。後者はドストエフスキイの過激な民族主義とナチズムをつなぐ役目を果たしてもいる。2.亡命ロシア人、ことにウラジーミル・ナボコフにとってベルリンは、サンクトペテルブルグを髣髴とさせる安住の地であったが、作品執筆に当たり、彼はロシア語版と英語版でベルリンを想起させる描写に相違を持たせ、作品に一層の普遍性を与えようとした。3.)ワイマール時代とは、ユダヤ人にとって「同化」を目指す変貌の極点であったが、同時に反ユダヤ主義とシオニズムが一層激しさを増した時代でもあった。そのような中に身をおいたユダヤ人が自らのアイデンティティーの基盤としたのが虚構の精神的共同体としてのJudentumであった。4.ワイマール期から第二次大戦に至る時期のドイツ映画に特徴的なディテールを分析していくとひとつの方向性を見出すことができる。それは、単に時代精神や社会的動向によってのみ説明される方向性ではなく、「バロック的アレゴリー劇」とでも名付け得る流れであり、その影響力は近年の映画製作にも及んでいる。本研究は最終的にワイマール共和国期のドイツにおけるゲルマン・スラブ両文化の交錯と影響関係を考察の対照としているが、2003年度においては、各研究分担者の専門領域における基板固めを中心とする活動に従事した。研究代表者松本は、両大戦間のドイツにおけるドストエフスキイ熱が、主として彼の民族主義的言説と非合理性への志向に対する共感に基づくものではないかという仮設に立ち、彼のロシア・キリスト教を至高価値とする言説の分析に着手した。「同胞愛」という、キリスト教世界固有の概念にドストエフスキイが付与したロシア的(正教的)意味合いを、彼の小説作品と評論の双方にまたがって検討し、二篇の論考にまとめるを得た。研究分担者諫早は、ブライアン・ボイドの大著『ナボコフ伝』の翻訳作業に従事し、ナボコフ研究という自らの研究領域を更に補強しつつ、ベルリン時代のナボコフについての知見を広めていくことによって、ナボコフにとってのベルリンが、単にボリシェヴィキのロシアからの亡命先であっただけではなく、自らが捨ててきた故国ロシアのペテルプルグを想起させる都市として機能していた可能性を指摘し、一篇の論考にまとめるを得た。研究分担者山本は、ドイツ、ロシアにおけるユダヤ人居住区の実態調査と資料収集に専念すると共に、これまでは専門領域外であったロシアにおけるユダヤ人問題に関する知見を広めるために、ロシアにおけるユダヤ人史の専門家を講師として研究会を開く、あるいはペテルプルグに現存するシナゴーグを訪問してラビに聞き取り調査を行なう等、活発なフィールドワークを行なった。本年度は本共同研究の2年目に当たり、各研究分担者は自らの専門領域から、時間的には「両大戦間」期へ、空間的には「ドイツ」へと調査対象を次第に狭めていった。研究代表者松本は、ドストエフスキイをドイツの文学界がどのように受け留めたのかという跡付け調査に着手した。

ドストエフスキイの受容は両大戦間期に突発的に生じた現象ではなく、既に19世紀末のドイツ自然主義の流行時にその端緒が見られること、そしてこの段階で既にドイツにおけるドストエフスキイ評価が、もっぱらその心理描写に向けられているという知見を得たが、このような一面的なドストエフスキイ理解は、ニーチェによるドストエフスキイ理解やワイマール期のドストエフスキイ理解にみられるゆがみの原型となった可能性もある。研究分担者諫早は、両大戦間のベルリンを中心とする都市文化の研究を行なった。従来のエンターテインメントや消費文化中心の都市研究から、交通機関へと研究の幅を広げ、それらの総体としての都市文化が、当時ベルリンにあったロシア人亡命者によってどう受け止められ、その文学にどう反映しているのか、というのが主たるテーマであるが、その成果の一端は、6月発行予定の書評(レヴィング著「駅・ガレージ・格納庫:ウラジーミル・ナボコフとロシア・アーバニズム」に発表される予定である。研究分担者高木は、両大戦間のロシア、フランス、ドイツの代表的なドキュメンタリー映画(「カメラを持った男」(ロシア)、「アタラント号」(フランス)、「伯林--大都会交響曲」「日曜日の人々」(ドイツ))において、都市の動力としての機械の円環的反復的運動が、都市生活者の行動の反復性・画一性との関連でどのように表象されているのかを分析した。本年度は本共同研究の最終年度に当たるため、研究代表者および研究分担者は過去3年間にわたる研究作業を総括し、年度末までに一定の成果を出すことを目標とした。具体的には、研究代表者松本は、ワイマール共和国時代のドイツにおけるドストエフスキイ流行の背景を検討し、19世紀の70年代に最も激越なものとなったドストエフスキイの汎スラヴ的、民族主義的言説が、すでに1906年に、ドミートリイ・メレジュコフスキイと、後に『第三帝国』を執筆することになる保守思想家メラー-ファン-デン-ブルックというプリズムを通してドイツに紹介され、メレジュコフスキイの特異なドストエフスキイ観をメラーが継承しているのではないかとの知見に達した。また、研究分担者諫早は、この3年の間に再構築してきた亡命ロシア人のベルリン(Russian Berlin)という特殊な「場」についての知識を総動員し、従来の研究対象である亡命ロシア人作家ヴラジーミル・ナボコフの具体的な作品(『キング、クイーンそしてジャック』)に関してロシア語版と英語版を比較検討しながら細密な読解を行い、「大都市小説」の条件について新たな提言を行った。研究分担者山本は、両大戦間のドイツにおけるユダヤ人問題を睨みつつ、ともすれば上滑りで感情的な議論に陥りがちのユダヤ人問題について、この3年間に得た幅広い知見を元にバランスの取れた、しかし鋭い問題提起を含む総論的なノートを完成した。最後に、研究分担者高木は、驚異的ともいえる量の映画経験を基にして、ワイマール期から第二次大戦に至る時期のドイツ映画の特徴的なディテールを分析検討し、その方向性を単に時代精神や社会的動向に求めるだけでなく、ベンヤミンに依拠しつつ、「バロック的アレゴリー」という美学的分類に求め、併せて、映画製作におけるこの流れの強い影響力をも指摘した。
持続可能性音声教育を担う教師研修プログラムの構築

本研究は、日本語音声教育において教師が多様化する学習者に対応し、持続的に音声教育を実践できる自律的な教授能力の養成を目指す教師研修プログラムの構築を目的とする。具体的には、日本語教師を取り巻く現状をインタビューおよびアンケート調査を通して明らかにし、韓国における日本語音声教育の課題を明らかにした。次に、日本語音声教育の教師研修を行い、教師の学びを分析した。これらの結果を踏まえて、日本語教師が自分を取り巻く現状を能動的に認識し、自己の問題を解決するための糸口を自分と関わりのある人、モノ、コトの中で探ること(=自律的な教授能力)ができるように支援する教師研修プログラムの構築を試みた。1.前年度に行った教師研修会の成果と課題の分析:韓国で日本語教育に携わっている教師を対象にしたワークショップにて音声教育の教師研修を行い、収集したデータを分析した。本研修を通じて、教師たちは自分の発音の知覚・産出過程を能動的に認識し、また協働的な話し合いを通して様々なリソースに基づく聞き取り・発音基準の構築が可能であることに気づきを得ていた。教師たちが現場で学習者の発音学習における認知過程を支え、自己モニタリング力を育成するために、教師がその認知過程を経験していれば、音声の知覚・産出につまずきを感じる学習者にアクセス可能なリソースに対する助言や問題解決につながる問いを提供することが可能になると考えられる。一方、本研修会で追体験したピア・モニタリング活動を既存のカリキュラムの中で応用することや、使用する教科書の選定に困難を感じている教師がいることが明らかになった。2.シラバスの改善及び他の教師研修プログラムとの連携:上記の課題を踏まえ、教師研修のためのシラバスを改善した。具体的には、自分の実践の中でどのような応用が可能であるかを議論し、共有することを通して授業改善とリソースの拡大を図るものである。また、本教師研修プログラムは、音声教育に特化したプログラムであるため、他の教師研修プログラムとの連携や長期的な教育実習への発展ができるようなデザインの工夫が必要であった。そこで、平成25年12月に、韓国日語教育学会主催のワークショップ「ピア・ラーニングの授業デザインの実際」に本研修プログラムを組み込んだ形で行うことにより、他の教師研修プログラムとの連携が可能であることを示した。3.日本語音声教材の内容分析:早稲田大学の日本語教師4名と協働し、日本語音声教材の内容分析を行った。月1回の勉強会を設け、文献講読を通して分析観点を検討し、分析を進めた。日本語教師の中には音声教育に対して困難や不安を抱えている者が多いと言われている(河野2009)。その原因を明らかにするために、24年度から25年度にかけて日本語教師を取り巻く人(学習者・教師仲間)、モノ(音声教材・音声知識)、コト(シラバス・実践)の調査を通して日本語教師が直面している現状を把握する。24年度は上記の中で以下の二つの調査を行った。一つ目の調査は、日本語音声教材の内容分析である。近年、日本語音声に特化した発音練習教材が出版されているが、これらの教材の内容分析はまだなされていない。そこで、早稲田大学の日本語教師4名と月1回の勉強会を行い、音声教材の内容を協働で検討した。1人(教材を使う対象)、2モノ(取り上げている音声項目)、3コト(タスクや練習問題のタイプ)を主な分析観点として分析した。勉強会では教師各自が分析した内容を発表し、教育現場をふり返りながら議論を重ねた。このような議論を通じて、現場で用いる際の困難点や学習者の学びを支援するためにどのような工夫が必要か提案できるという点で意義がある。二つ目の調査は、教師が実践の中でどのような問題を抱えているかに関する調査である。2012年1月29日から31日の間に、韓国高麗大学および国際交流基金ソウル日本文化センターにて日本語母語話者教師と非母語話者教師を対象にした特別研修会を行った。研修会では、教師が教育現場で普段行っている実践内容や実践上の困難点について議論し、持続可能性音声教育の方法を体験した。この研修会には大学教育のみならず中等教育に携わっている教師も参加しており、普段接することのできない教師同士が実践内容を共有できたという点で意義がある。(1)前年度の教師研修プログラムの改善および台湾における実施前年度の教師研修プログラムを改善し、平成26年11月8日に台湾交流協会主催のワークショップ「協働学習の活動デザイン体験」に本研修プログラムを組み込んだ形で行った。(2)日本語教師の協働に対する期待と不安の分析本研究は、日本語教師を取り巻く現状の調査を通して、取り組むべき課題を選定することが課題である。教師研修の方法論として用いている「持続可能性音声教育モデル」は、協働学習が基盤になっているため、研修に参加した教師の協働学習に対する認識を分析し、上記の課題を明らかにする一つのステップとして位置づけた。この成果は、平成26年11月9日に台湾交流協会主催の研究会で発表した。(3)日本・韓国・台湾におけるインタビュー調査日本語教師を取り巻く現状の調査を通して、取り組むべき課題を選定するために、日本、韓国、台湾の日本語教師を対象にインタビュー調査を行った。本研究は、1.シラバス作成・実施、2.教師の現状と課題の整理、3.プログラムの構築、という3つのステップに沿って進めてきた。

最終年度は、プログラム構築に向けて韓国における日本語教師を取り巻く現状と音声教育に取り組む際の困難点を探るために、2016年1月から2月にかけて、韓国の大学の日本語教師20名(日本人教師7名、韓国語教師13名)を対象に半構造化インタビューを実施し、分析した。また、3月に質問紙およびweb調査によるアンケート調査を行い、35名から回答が得られた。分析の結果、以下のことが明らかになった。音声を積極的に指導しにくい理由としては、まず、韓国の大学の評価システムがあげられる。相対評価システムの中では、音声は評価の対象になりにくいため、音声に対する学習者の動機が低下しているという。そのため、学習者はやさしくて単位が簡単に取れるような授業を好み、教師や学習者双方にとってハードルの高い音声授業に対するニーズは高くない。また、社会的・経済的変化により、日本語を受講する学生数が減ったことも音声教育に積極的に取り組めない理由の一つとして指摘されている。教養科目の場合、初級レベルの授業がほとんどであり、時間的な余裕がないため、積極的に音声教育を取り入れる場がないという指摘もあった。このような状況の中で、教師たちは上記の問題を解決するために様々な工夫をしながら音声教育に取り組んでいることも明らかになった。音声教育の現状を改善するために必要なこととしては、教師の実践(ノウハウやリソース)が共有できる「場」・研究と実践を結びつけることができる「場」の形成、音声教育に対する教師の意識変容、教師間の協働、授業間の連携、普段の授業で使える韓国独自の音声教材の開発、学習者の積極的な参加を促すための活動やタスクの開発、教授能力をブラッシュアップするための定期的な教師研修などがあげられた。本研究は、日本語音声教育において教師が多様化する学習者に対応し、持続的に音声教育を実践できる自律的な教授能力の養成を目指す教師研修プログラムの構築を目的とする。具体的には、日本語教師を取り巻く現状をインタビューおよびアンケート調査を通して明らかにし、韓国における日本語音声教育の課題を明らかにした。次に、日本語音声教育の教師研修を行い、教師の学びを分析した。これらの結果を踏まえて、日本語教師が自分を取り巻く現状を能動的に認識し、自己の問題を解決するための糸口を自分と関わりのある人、モノ、コトの中で探ること(=自律的な教授能力)ができるように支援する教師研修プログラムの構築を試みた。本研究は、【1】教師の現状と課題の整理、【2】シラバス作成・実施、【3】プログラムの構築、という3つのステップに沿って進めている。以下は進捗状況である。【1】教師の現状と課題の整理:インタビュー調査および教師研修会に参加した教師による協働学習に対する期待と不安の調査が済んでおり、研究論文にまとめるためのミーティングを行っている。質問紙調査は、27年度に実施する予定である。【2】平成24年および25年に行った2回のワークショップを踏まえ、教師研修プログラムを改善し、台湾の日本語教師を対象にしたワークショップにて音声教育の教師研修を行った。【3】【1】と【2】の結果をまとめ、持続可能性音声教育を担う教師研修プログラムを構築する。以上の進捗状況から、計画はおおむね順調に進んでいると言える。
絶滅危惧種オガサワラノスリ母島個体群の現状分析に関する研究

絶滅危惧種オガサワラノスリの分布や生息数について、小笠原諸島母島に生息する個体群を対象とした調査を実施した。現在までのところ,従来同地域に生息すると考えられていた数よりも多い数が認められた。19・20年度の結果を合わせると母島全体では今まで一般的に考えられていた数より大分多い20を超える番が生息することが明らかになってきた。このことは密度的に以前我々によって明らかにされた父島の密度とおなじレベルでオガサワラノスリが母島にも生息することを示している。しかし調査は未だ途上にあり、やっと生息番数の概略が判明してきたところである。調査時期・期間の関係から、研究目的の一つであった詳しい繁殖成績の調査も充分行えていない。今後、生息数推定の精度を上げつつ、繁殖成績等のデータを収集する必要がある絶滅危惧種オガサワラノスリの分布や生息数について、小笠原諸島母島に生息する個体群を対象とした調査を実施した。今後、生息数推定の精度を上げつつ、繁殖成績等のデータを収集する必要があるオガサワラノスリButeobuteo toyoshimaiはアジア大陸に広く分布するノスリB. buteoの小笠原産固有亜種である.生存数の少なさから現在、国の天然記念物,種の保存法に基づく国内希少野生動植物種,レッドデータリストの中での絶滅危惧種等に指定されている。最近小笠原諸島は世界自然遺産候補地として注目を浴びているが,反面、開発,観光等による環境の変化は小笠原に棲む猛禽類であるオガサワラノスリにとって非意図的な繁殖妨害などあまり好ましくない状況を生じさせつつある。主に報告者を初めとする首都大学の研究者によってオガサワラノスリの生態学的研究が実施されて来た。その結果、現在生息密度を含め多くのことが明らかにされている。しかしそれらは父島の個体群について行われたものがほとんどで,母島の個体群についてはその生息数や繁殖成績などほとんど判っていない。オガサワラノスリの保全のためにも母島個体群の状況を調べることは急を要している。そこで、本研究において母島個体群の実態調査に着手した。19年度は,母島南部地域に生息するオガサワラノスリの分布や生息数について調査を実施した。現在までのところ,従来同地域に生息すると考えられていた数よりも多い数(密度的には父島とおなじレベル)が認められている。今までの調査を元に,今後個体数推定の精度を上げつつ,調査区域を母島全体に拡充して行く予定である。なお本研究は平成19・20年度研究として計画・申請され、採択されたものである。しかし交付決定が平成19年10月末でその通知が届いたのは11月になってからであった。その結果調査実施の時間的余裕があまりなく,19年度作業としては2年度目の平成20年度実施調査の予備的調査および文献等情報収集が主なものとなった。オガサワラノスリButeobuteo toyoshimaiはアジア大陸に広く分布するノスリB.buteoの小笠原産固有亜種である.生存数の少なさから現在、国の天然記念物,種の保存法に基づく国内希少生動植物種,レッドデータリストの中での絶滅危惧種等に指定されている。最近小笠原諸島は世界自然遺産候補地として注目を浴びている。しかしその反面、開発,観光等による環境の変化は小笠原に棲む猛禽類であるオガサワラノスリにとって非意図的な繁殖妨害などあまり好ましくない状況を生じさせつつある。オガサワラノスリの生態学的研究は報告者を初めとする首都大学の研究者によって主に実施されて来た。その結果、現在生息密度を含め多くのことが明らかにきれそいる。オガサワラノスリの保全のためには母島個体群の状況を調べることは急を要している。そこで、本耕究において母島個体群の実態調査に着手した。20年度は、オガサワラノスリの分布や生息数について母島北部地域を中心に生昼する個体群を主な対象として調査を実施した。19年度の結果と合わせると母島全体では一般的に考えられていた今までの数よりも大分多い20を超える番が生息することが明らかになってきた。これは密度的に父島とおなじレベルのオガサワラノスリが母島にも生息することを示している。しかし調査は未だ途上にあり、やっとおおよその生息密度が判明してきたところであり、調査期間の関係から、研究目的の一つである詳しい繁殖成績の調査も充分行えていない。今後個体数推定の精度を上げつつ、繁殖成績等のデータを収集する必要がある。
味覚障害患者の舌にみられる味覚受容体遺伝子発現の変化とその臨床的意義の解明

舌における味覚受容体遺伝子の発現について、健常者と味覚低下例および自発性異常味覚例で比較検討した。味覚低下例で有意の発現率の低下がみられ、また自発性異常味覚例では有意の発現亢進がみられた。さらに、亜鉛欠乏のラットにおいて、受容体遺伝子の発現が有意に低下し、亜鉛の投与により発現の改善がみられた。また、このラットにおける遺伝子発現の変化を、in situhybridizationにより形態学的に示した。味覚障害の発現機序に、受容体遺伝子の発現異常が関与するものと思われる。本研究に関連して、これまでにわれわれが得ている興味深い結果を下に示す。今後、症例を増やし、またPCR産物の定量的測定などの面を加えて、さらなる研究の進展をはかる。1.健常者の舌から採取した検体を用いて、10個のT2R味覚受容体遺伝子の発現を検討した。健常者において10遺伝子のうち6良好な発現を認めた,一方残りの4遺伝子の発現は比較的低率であった。2.同様の味覚受容体遺伝子の発現を味覚低下の症例、特に苦味の低下が見られていたと症例の舌の検体を用いて検討した。常者で良好に発現していた6種類の受容体遺伝子発現は味覚低下例では有意に低下していた。健常者で発現の比較的不良であった4遺伝子の発現ま有意の変化を示さなかった。下は味覚低下の発症機序にお重要な関連性をもつものと思われた。3.味覚障害の原因と味覚受容体遺伝子発現との関連性は、明確な対応は見られなかったが、亜鉛欠乏性の症例ては、発現の低下した遺伝子の種類が5種類と、多く認められた。味覚障害の原因・病態診断に関する有効性については、さらに検討する必要がある。4.味覚低下の程度が高度の症例では、軽度の症例はに比べてより多数の遺伝子の発現が有意に低下していた。味覚障害の重症度評価こも本遺伝子発現の検査は有用性があるものと思われる。5.自発性異常味覚の症例では健常者では発現が低率であった3つの遺伝子の発現が、有意に亢進していた。通常は発現の乏しい遺伝子の発現亢進が、自発性異常味覚め発症機序に何らかの関与を示しているものと思われる。これまでに得ている重要な結果を下に示す。1.24例の健常者の舌から採取した検体を用いて、予定通り10個のT2R味覚受容体遺伝子の発現を検討した。健常者において10遺伝子のうち6種類の受容体遺伝子の良好な発現を認めた。一方、残りの4遺伝子の発現は比較的低率であった。2.同様の味覚受容体遺伝子の発現を40例の味覚低下症例で検討した。その結果、健常者で発現の高かった6遺伝子において味覚低下例での有意の発現率の低下がみられた。味覚受容体遺伝子の発現低下は、味覚低下の発症機序に重要な関連性をもつものと思われた。(英文誌に報告した)3.自発性異常味覚の43症例で味覚受容体遺伝子の発現の変化を検討した。健常者では発現が低率であった3つの遺伝子の発現率が、自発性異常味覚の例では有意に亢進していた。通常は発現の乏しい遺伝子の発現亢進が、自発性異常味覚の発症機序に何らかの関与を示しているものと思われる。(英文誌に報告した)4.薬剤性味覚障害と味覚受容体遺伝子の発現を検討するために、抗腫瘍薬を使用している3名の患者から組織採取を行い、現在検討を進めている。本研究項目は患者の協力が極めて得にくいため、現在はラットに抗腫瘍薬を投与して舌における受容体遺伝子の発現の変化を検討している。5.亜鉛欠乏はヒトにおける味覚障害の重要な原因となる。現在その機序としての味覚受容体遺伝子の発現変化を、亜鉛欠乏ラットを作成して厳密な検討を行っている。いくつかの遺伝子の発現に亜鉛欠乏と亜鉛投与が有意の影響を与えることが認められており、ヒトの亜鉛欠乏性味覚障害の発症機序の解明に有用な結果が導かれるものと期待している。1すでにわれわれは、味覚低下の症例から採取した舌上皮の検体においては、味覚受容体遺伝子の発現の有意の低下が見られることを見出だした。このことはヒトの味覚低下の発症機序に重要な関連性を持つものと結論し英文誌に報告した。さらに、自発性異常味覚の症例では、味覚低下例とは逆に、有意に味覚受容体遺伝子の発現が亢進していることを見出した。この異常所見は自発性異常味覚の発症機序に重要な関連性をも持つものと結論し英文誌に報告した。以上より、ヒトの味覚障害の発現機序に味覚受容体遺伝子の発現変化が関与しているものと考えられる。2亜鉛欠乏はヒトの味覚障害の主要な原因としてよく知られている。また亜鉛欠乏ラットで味覚障害が出現することは多くの報告がある。われわれは、亜鉛欠乏ラットを作成し、舌の有郭乳頭部

上皮における味覚受容体遺伝子の発現変化を検討した。その結果、亜鉛欠乏ラットでは有意に発現が低下する遺伝子がみられ、またその一部は亜鉛の投与で発現が有意に回復することが示された。亜鉛欠乏性味覚障害の機序に、味覚受容体遺伝子の発現変化が関与すると結論し、英文誌に報告した。3上記の実験結果に基づき、亜鉛欠乏ラットにおける舌有郭乳頭の味雷における遺伝子発現の変化をin situhybridizationにより検討した。健常ラットでは苦味受容に関与するTAS2R受容体遺伝子は味蕾細胞に発現するが、塩味受容に関与するENaCは有郭乳頭内以上に、粘膜上皮細胞に強い発現がみられた。これらの遺伝子発現は亜鉛欠乏ラットにおいては有意に減少することが示され、亜鉛欠乏性味覚障害の機序に、味覚受容体遺伝子の発現低下が関与すると結論し、英文誌に報告(in press)した。4薬剤性味覚障害と味覚受容体遺伝子発現の変化の関係をみるために、ラットに抗腫瘍薬を投与して検討を行っている。その結果の一部についてすでに学会報告を行っている。健常者24例から得た舌のサンプルを用いて味覚受容体遺伝子の発現を検討することができた。また、味覚障害のうち、臨床検査の十分施行された味覚低下例40例から、また自発性異常味覚例43例から舌のサンプル採取が行われ、味覚受容体遺伝子の発現状況を検討することができた。これらはすでに英文論文として発表した。24年度が最終年度であるため、記入しない。味覚障害の原因として、味覚受容体遺伝子の発現変化が影響している可能性が確認された。残る検討は、味覚障害の原因別に受容体遺伝子の関与をみてゆくことである。一つは、亜鉛欠乏はヒトの味覚障害の重要な原因となるため、亜鉛欠乏性味覚障害の発症機序における味覚受容体遺伝子の役割を解明することである。その厳密な検討のために亜鉛欠乏ラットを作製して味覚受容体遺伝子の発現変化の検討をすすめている。また、薬剤性味覚障害と味覚受容体遺伝子の発現を検討するために、抗腫瘍薬を使用している3名の患者から組織採取を行い、現在検討を進めている。本研究項目は患者の協力が極めて得にくいため、症例の蓄積が大変困難である。現在はラットに抗腫瘍薬を投与して舌における受容体遺伝子の発現の変化を検討している。
インテリジェント核酸の段階的被覆法による環境応答型薬物ナノキャリアの設計と創製

薬物包摂人工核酸アプタマーを改変設計することによって、環境に応じて薬物を包摂・放出するインテリジェント核酸の作製を行った。さらに、酵素的ポストモディフィケーションにより、ポリメラーゼ反応による修飾ヌクレオチドの導入を行った。担持ヌクレオチドの末端配列や修飾ヌクレオシド三リン酸の化学構造によって導入効率が有意に変化したが、用いるポリメラーゼを改変することにより、ある程度の改善が確認された。本研究では、人工核酸分子の機能の拡張性と構造設計の簡素さに着眼し、独自に開発した薬物包摂人工核酸アプタマーを改変設計することによって、薬物を環境に応じて包摂したり放出したりするようなインテリジェント核酸を作製し、さらに、それを薬物が修飾されたナノ担体表面に、段階的に被覆することによって、環境応答型薬物ナノキャリアの創製を試みた。まず、薬物担体(サリドマイド誘導体)および連結アプタマーの調製を行った。サリドマイド誘導体を包摂する人工核酸アプタマーの修飾基をそれぞれ化学的に改変し、これらのアプタマーの標的分子に対する結合親和性を、表面プラズモン共鳴法などを用いて調べたところ、化学改変の部位や様式によっては結合活性が著しく低下するものがみられた。特に、包摂部位近傍の化学改変はその活性に大きく影響をおよぼす傾向がみられたが、二次構造予測より二重鎖を組み比較的部分構造が安定であると考えられる部位への改変は、結合活性が概ね保持されることが確認された。次に、制ガン剤として知られるカンプトテシン誘導体についても、同様にナノキャリアを作製するために、カンプトテシン誘導体に結合するアプタマーの取得に着手した。市販のカンプトテシンを原料として、5段階の反応を経て誘導体化を行った。水溶性のリンカーが付加された7位置換誘導体を得、これをNMRおよびESI-Massなどにより同定した。得られた誘導体は、高い水溶性を示し、セレクション・ゲルに高密度に固定化できることを確認した。薬物包摂人工核酸アプタマーを改変設計することによって、薬物を環境に応じて包摂したり放出したりするようなインテリジェント核酸の作製を行った。薬物担体にはアプタマーはサリドマイド誘導体およびカンプトテシン誘導体を包摂するものをそれぞれ作製し実験に用いた。サリドマイド誘導体およびカンプトテシン誘導体は、市販のヒドロキシフタル酸無水物およびカンプトテシンから、それぞれ56段階の反応で得ることができた。カンプトテシン結合アプタマーは、アフィニティゲルを用いた試験管内選択法で得られた。配列解析により、得られたアプタマーの多くがグアニン塩基を多く含むものであることが判った。また、表面プラズモン共鳴法等による測定より、それらのアプタマーの標的分子に対する結合親和性(Kd)が概ね1μMであることが判った。二次構造予測に基づく配列の組換えによって与えられたいくつかの連結アプタマーの候補の中から、連結で結合活性が損なわれずに保持され、且つ、酸性条件下において有意に結合活性が低下するものを選び出た。さらに、それらをキャリア担体に担持させた後、薬物キャリアのヌクレアーゼ耐性等の向上や機能拡張を狙って、酵素的ポストモディフィケーションにより、ポリメラーゼ反応による修飾ヌクレオチドの導入を行った。担持ヌクレオチドの末端配列や修飾ヌクレオシド三リン酸の化学構造によって導入効率が有意に変化することが判ったが、用いるポリメラーゼを改変することにより、ある程度改善されることが確認された。
歯垢形成を増強するクオラムセンシングの解明とその抑制によるう蝕予防法の開発

齲蝕の原因となる歯垢は、歯面に成立したバイオフィルムで、その主たる構成物質はグルコシルトランスフラーゼ(GTF)によって合成されたグルカンである。Streptococcus mutansは、抗菌剤などの外来刺激に対する防御反応として、3種のGTF遺伝子(gtfB,gtfC,gtfD)の発現を増強するといわれている。また、S.mutansは成熟したプラークバイオフィルム中ではホルモン様伝達物質を放出し、細菌間で互いにクオラムセンシングを行い、プラーク中のグルカン量を調節したり、細菌の密度を一定にしたりして歯面への強固な定着を維持していると考えられる。今年度は、成熟したグルカンバイオフィル中でS.mutansがどのようにグルカン量を調節し、強固なバイオフィルを維持するかを解明するために、3種のgtf遺伝子、デキストラナーゼをコードするdexA遺伝子、ラクトース代謝に関与するβ-ガラクトシダーゼ遺伝子の発現量をリアルタイムRT-PCRを用いた比較Ct法によって半定量的に解析した。その結果、S.mutans3種のgtf遺伝子とdexA遺伝子の発現を調節してグルカンの合成と分解のバランス化させ、グルカンの総量を-定化していることが明らかとなった。また、バイオフィルムが強固になると外部からの刺激には強くなるが、その外部から栄養源である糖の摂取をするのは困難となる。これに対して・-ガラクトシダーゼ遺伝子の発現解析を行い、外来性の糖は使用しないこと、グルカンバイオフィルムの加水分解により得られるグルコースを利用していることを示唆した。またその一方で、バイオフィルムの増強因子であるGTFのエピトープ解析を行って、これを応用したDNAワクチンによる齲蝕予防法を模索するとともに、バイオフィルムに対する外来刺激のひとつである分泌型lgAによる口腔細菌数の変化の観察もたった。齲蝕の原因となる歯垢は、歯面に成立したバイオフィルムである。このバイオフィルムは、ミティスグループレンサ球菌などの早期にヒト口腔内に定着するレンサ球菌が産生した菌体外多糖(グルカン)を足がかりとし、さらにミュータンスレンサ球菌が定着することによって形成される。バイオフィルムは、環境の変化、宿主の免疫等の侵害刺激からの防御壁となっており、齲蝕の発生に大きく関与する。このバイオフィルム中で、細菌はホルモン様伝達物質、オートインデューサー(AI)を放出し、菌種間で互いにコミュニケーションを取って細菌の密度を一定に保ったり、免疫に対抗する集団を形成したりすることで共生し、この現象はクオラムセンシングと呼ばれている。今年度、我々は、歯垢形成に関わるミュータンスレンサ球菌が産生する酵素グルコシルトランフェラーゼ(GTF)に注目し、この酵素の産生に影響を与えると考えられる因子は何かを検討した。その因子の候補として、唾液IgA、スクロース以外の糖を考え、これらを人工バイオフィルム中のStreptococcus mutansに投与し、GTFの産生量、酸産生がどう変化するかを観察した。その結果、現段階では、ラクトースがスクロースやグルコースなどの糖とは異なり、酸産生をあまりしないという動態までは明らかにした。この結果は、第24回日本小児歯科学会九州地方会にて報告した。今後はリアルタイムRT-PCRなどを利用してGTFの産生量等のmRNAレベルでの発現量など詳細に検討する予定である。その一方で、データベース検索から、クオラムセンシングに直接影響を与えるコンピテントスティミュレーティングペプチド(CSP)を同定し、この因子が細菌細胞内に侵入できる特徴を利用して、アンチセンス効果を利用したペプチド核酸(PNA)によるGTFのサイレンシングを計画した。これに関しては、CSP-PNA結合体を作成中であり、今後GTFの産生抑制能を検討する予定である。

齲蝕の原因となる歯垢は、歯面に成立したバイオフィルムで、その主たる構成物質はグルコシルトランスフェラーゼ(GTF)によって合成されたグルカンである。Streptococcus mutansは、抗菌剤などの外来刺激に対する防御反応として、3種のGTF遺伝子(gtfB、gtfC、gtfD)の発現を増強するといわれている。また、S.mutansは成熟したプラークバイオフィルム中ではホルモン様伝達物質を放出し、細菌間で互いにクオラムセンシングを行い、プラーク中のグルカン量を調節したり、細菌の密度を一定にしたりして歯面への強固な定着を維持していると考えられる。今年度は、成熟したグルカンバイオフィル中でS.mutansがどのようにグルカン量を調節し、強固なバイオフィルを維持するかを解明するために、3種のgtf遺伝子、デキストラナーゼをコードするdexA遺伝子、ラクトース代謝に関与するβ-ガラクトシダーゼ遺伝子の発現量をリアルタイムRT-PCRを用いた比較Ct法によって半定量的に解析した。その結果、S.mutansは3種のgtfが遺伝子とdexA遺伝子の発現を調節してグルカンの合成と分解のバランス化させ、グルカンの総量を一定化していることが明らかとなった。また、バイオフィルムが強固になると外部からの刺激には強くなるが、その外部から栄養源である糖の摂取をするのは困難となる。これに対して・-ガラクトシダーゼ遺伝子の発現解析を行い、外来性の糖は使用しないこと、グルカンバイオフィルムの加水分解により得られるグルコースを利用していることを示唆した。またその一方で、バイオフィルムの増強因子であるGTFのエピトープ解析を行って、これを応用したDNAワクチンによる齲蝕予防法を模索するとともに、バイオフィルムに対する外来刺激のひとつである分泌型IgAによる口腔細菌数の変化の観察も行った。
スフィンゴシン1-リン酸の細胞外動態と受容体サブタイプ持異的応答機構

スフィンゴシン1-リン酸(SIP)は当初、細胞内シグナル分子として考えられたが、細胞外シグナルとしても機能することが、我々をふくめた国内外のグループから報告され、現在、我々が見出したEdg-6を含め5種(Edg-1/S1P1,Edg-3/S1P3.Edg-5/S1P2,Edg-6/S1P4 Edg-8/S1P5)のG蛋白連関型S1P受容体が同定されている。本研究ではS1P定量法を確立し、その機能と作用機構に関して解析した。1.新規のS1P定量法を確立し血中レベルを測定したところ、その濃度(400900nM)は受容体の親和性(230nM)をはるかに越え、生体では過剰な受容体活性を抑える何らかの機構が想定された。S1Pの血中分布を調べたところ、S1Pはリポ蛋白質画分に結合していることが判明し、このリポ蛋白質との結合が、S1Pの実質有効濃度を低く抑え、受容体の過剰な刺激から細胞を保護していると推定した。2.また、S1Pは血中でリポ蛋白質に強く結合していることを見いだした。リポ蛋白質は血管細胞機能と密接に関連していることが知られており、血管内皮細胞の生存保護、遊走促進作用を取り上げ解析したところ、高密度リポ蛋白質(HDL)によるこれらの作用はS1P受容体Edg-1ならびにEdg-3受容体を介していると結論した。このように、リポ蛋白質作用のメディエーターという新しい観点からS1P機能と病態との関連が想定された。3.神経系にもS1P、LPA受容体が分布しているが、その機能は不明である。本研究ではアストログリア細胞、C6グリア細胞を用い、Edg-1(Erk系を介した神経細胞栄養因子であるbFGFの発現),Edg-5(カルシウム、ホスホリパーゼC, Dの活性化)の機能分担、また、これら神経系の細胞でもリポ蛋白質作用の一部がS1P/S1P受容体を介していること等を明らかにし、中枢神経系においてもリポ蛋白質作用のメディエーターとしてS1Pが機能していることが推定された。本研究では新規の脂質メディエーターであるスフィンゴシン1-リン酸(S1P)の機能とその作用機構の他、新規S1P定量法を確立し、その血中分布を調べた。その結果(1)S1P新規受容体の同定:以前よりリガンドが不明であったEdg-6を新規のS1P受容体と同定した。その結果、現在Edg-1、-3、-5、-8をふくめ5種のサブタイプの存在が明らかにされた。(2)血管内皮細胞ではEdg-1、-3が発現しており、S1PはErkを介し細胞増殖、p38MAPキナーゼを介し細胞遊走を促進すること、また、いずれの応答も百日咳毒素処理で抑制されることを明らかにした。このように、S1Pによる細胞増殖、細胞遊走はG蛋白質をし、異なったMAPキナーゼ系を介していると推定された。(3)C6

グリア細胞ではEdg-1、-5が発現しているが、それぞれがErk/FGF2発現系、ホスホリパーゼC/D系の活性化と連関しており、S1P受容体サブタイプの機能分担が明らかにされた。(4)新規S1P定量法の開発と血中S1P分布等を調べた。本定量法により血漿、血清の他、組織、培養細胞中のS1P量が従来法に比べ極めて簡便に測定可能になった。また、血中ではHDLなどのリポ蛋白質中に濃縮していることが判明した。このように、S1Pはリポ蛋白質に濃縮している。HDL、LDL、酸化LDLは循環器疾患との関連が指摘されており、今後、(1)リポ蛋白質中作用におけるS1Pの役割を明らかにしたい。(2)複数S1P受容体の機能分担に関してもさらに研究を発展させたい。(3)S1P定量法の応用研究として、血小板からのS1P放出機序、血中S1P濃度変化と病態との関連等を明らかにしたい。本年度では新規の脂質メディエーターであるスフィンゴシン1-リン酸(S1P)の作用を主に血管平滑筋細胞、血管内皮細胞での細胞レベル、またイヌの脳底動脈収縮を個体レベルで解析した。その結果(1)血管平滑筋細胞にはS1P受容体として、Edg-1、-3、-5 mRNA発現がノーザンブロット法で確認された。S1Pは血管平滑筋細胞の増殖を促進し、一方で細胞遊走を抑制する。このS1P作用に関与する受容体サブタイプをS1P誘導体であるジヒドロスフィンゴシン1-リン酸(DHS1P)との効力との差より解析したところ、血管平滑筋では主にEdg-5を介していることが推定された。一方、血管内皮細胞ではS1Pで細胞増殖と細胞遊走の促進がいずれもEdg-1ならびにEdg-3に基づくことが前年での研究で推定されている。このように、平滑筋細胞と内皮細胞でS1P受容体サブタイプの機能分担が示唆された。(2)我々はS1Pの新規定量法を確立し、血中でS1Pはアルブミン画分よりリポ蛋白画分に蓄積していることを見いだしている。従来より、リポ蛋白は血管細胞に多彩な作用を発揮することが知られている。そこで、血管内皮細胞におけるリポ蛋白、特に高密度リポ蛋白(HDL)の細胞保護作用を取り上げS1Pの関与を調べた。その結果、S1PはHDLと同様にErkの活性化を伴って細胞を酸化LDLなどから保護するが、この作用はHDL中のS1Pに基づくことが脂質成分の分画等の実験で明らかにされた。(3)クモ膜下出血後の脳底動脈の聯縮には血小板凝集時に放出される生理活性物質の関与が推定されている。そこで、血小板から放出されるS1Pの関与を推定し、イヌの脳髄液中にS1Pを投与したところ脳底動脈の強力かつ持続的な収縮が観察された。摘出脳底動脈のマグヌス法でもS1PによりRhoキナーゼ阻害剤感受性の収縮反応が観察された。この収縮に必要なS1P濃度にみあう量のS1Pが血小板凝集時に放出されることが確認された。このように、S1Pがクモ膜下出血後の血管聯縮に関与していることが推定された。従来より、低密度リポ蛋白(LDL)特に酸化LDLは動脈硬化促進性に働き、一方、高密度リポ蛋白(HDL)は抗動脈硬化性に働くとされる。我々はHDLによる抗動脈硬化作用がスフィンゴシン1-リン酸(S1P)などの脂質性シグナル分子によってメディエートされているという仮説にたち、解析してきた。今年度は従来からの血管内皮細胞の生存保護作用に加え遊走促進作用も取り上げ、リポ蛋白中S1Pの役割に関して解析した。その結果、(1)血管内皮細胞を無血清下に培養した際の細胞機能低下(培養皿からの細胞離脱、アポトーシス)は酸化LDLの添加でさらに低下するが、このような細胞機能低下はHDL、S1P添加で抑えられる。また、ボイデンチャンバー法を用いた細胞遊走能もHDL、S1Pで著明に促進された。(2)HDLをアルカリまたは酸性下での有機溶媒分画、薄層クロマトグラフィー分画を行ったところ、S1P画分にのみこれらの活性が回収された。
オペレーティングシステムの核を記述するための並行オブジェクト指向言語の開発

米澤らによって提案された並行オブジェクト指向計算モデルABCMを、手続きおよび関数をオブジェクトと統一行するルーチンオブジェクトを導入することによって拡張し、プロセスの世界、すなわちプロセスを活動単位として存在せしめ力環境、を作り出すことを可能にした(言語版並行オブジェクト指向言語ABCL/C+を設計し、その処理系を試作するとともにABCL/C+を用いてオペレーティングシステム核を記述することを試みた。ABCL/C+の設計に際してはベル研究所で開発されたオペレーティングシステム核XINUを書き替えることで言語機能の妥当性を確かめた。さらに、小型ではあるがXINUをベースとしたオペレーティングシステムをパーソナルコンピュータPC-9801上に実現し、その上に実験的なウィンドウシステムを試作することによって我々の考え方の有効性を確認している。これらの研究・開発を通して、ABCLのような簡潔にして強力な並行オブジェクトを記述する能力をもつ言語であれば、きわめて分りやすく見通しのよいオペレーティングシステムシステム核を記述できることが確かめられた。しかし、現実の問題として、次のような問題が残されている。(1)言語処理系の吐き出すオブジェクトコードの効率(2)並行オブジェクト間のメッセージパッシングの効率のよい実現方法(3)オブジェクトの入れ子構造をモジュール化と併せて定義するための方法特に、オペレーティングシステム核ともなると実行効率が死命を制することから(1)、(2)は今後の重要な研究課題である。突然変異体マウスwastedは,常染色体劣性変異体で,イオン化放射線感受性や免疫不全,高発癌性を示すヒト遺伝病AT(Ataxia-telangiectasia)の疾患モデル動物として紹介された.共同研究者を含め,これまでに得た知見によれば, in vivoでガンマ線照射した後の骨髄細胞に,高率の染色体異常の誘発が認められ,しかもそれは離乳後の日令に依存している.本研究は,この点に関する検討を行ない,以下の成果を得た. in vivoで照射した精原細胞, in vitroで照射した培養骨髄細胞,培養線維芽細胞の染色体を調べたところ,この異常高発は,培養骨髄細胞のみに認められ,しかも細胞採取時の動物の乳後の日令に依存していた.これは, in vivoにおける染色体異常高発現象が,骨髄細胞自身の変化によるものであり,組織特異的であることを示している.また,放射線照射後の細胞の生存率をメチルセルロース添加培地中のコロニー形成で観察したところ,骨髄細胞の放射線感受性は,赤血球産生系の幹細胞CFU-Eに特異的に生じ,顆粒球系の幹細胞CFU-Cには認められなかった.このことは,変異遺伝子wstの効果に,同じ器官のなかでも細胞特異性があることを示している.上記の成果とこれまでの知見によれば, wastedマウスとヒトATは,特異的な細胞に限れば,種々の生物学的指標に関してよい一致を見ることが判明した.これらの変異体については, DNA修復に関与するある種の修飾酵素の機能に関し共通した異常が認められること,また免疫不全や神経症状の内容の酷似より,造血系,免疫系,神経系を含む体細胞の分化・増殖におけるDNA修復過程の果たす役割を解明するモデル系になると考えられ,その遺伝子の解明を予定している.