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第二次大戦後ヨーロッパの「新秩序」構想の政治史的分析

一年延長し、2018年度に5年目に入った本研究プロジェクトでは、成果の論文集の形での出版を中心に共同研究を進めた。前年の2017年度には、日本政治学会、日本比較政治学会の二つの学会にパネルを立てて、研究成果を報告し、多くの反響、意見を得ることができた。これらの学会報告ペーパーをコメントを生かしつつ書き直し、また他の研究分担者の書下ろし原稿も加えて、論文集を企画した。2018年6月の研究会で分析概念や共同研究全体の結論を再度確認し、2018年9月の研究会では、全体の原稿を読みあって、調整を行った。その後、修正を重ね、2019年初頭に、網谷龍介、上原良子、中田瑞穂編『戦後民主主義の青写真:ヨーロッパにおける統合とデモクラシー』(ナカニシヤ出版、2019年(ISBN-10: 4779513790、ISBN-13: 978-4779513794))として出版することができた。その後、専門知識の提供を受けたヨーロッパ政治史、比較政治史、政治学理論の専門家に本書を読んでもらい、現在も引き続き書評会や合評会の形で成果の普及に努めている。すでに多くの専門家から、政治史上見落とされていたヨーロッパの戦後デモクラシーとは何か、という重要な問題に光を当てた画期的な成果であり、かつ、デモクラシーの変化がみられる現在、現代的な意義を持つ研究であるとの評価を得ている。なお、平成26年度に立ち上げた本研究のウェブサイト「European New Order after the WWII」では、これらの学会のパネル、研究会の成果や、文献リストを公開している。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。平成26年度は計画初年度にあたるため、最も重要な課題は、研究に必要な資源の準備であった。各参加者は、文献・資料・データの体系的な目録の作成と収集に努めた。また、イタリア、ドイツ、フランス運動の質的分析に関しては、担当者である八十田、網谷、上原が、それぞれ現地調査を実施し、入手困難な文献の購入・複写、文書館の未公開資料の探索、関係者へのインタビューなどを実施した。これと並んで、理論動向の検討・共有と、分析枠組の精密化のために研究会を3回開催した。第一回目の研究会では、メンバー外の専門家も招き専門知識の提供を仰いだ。第二回目と第三回目は、研究分担者が順番に分析枠組みの構築に寄与すると思われる文献を紹介し、議論をおこなった。また、文献リストの提出とその検討も実施した。ヨーロッパ戦後史研究のすそ野を広げ、若手を育成するために研究会には若手の参加も呼びかけた。その結果、数名の若手研究者が研究会に参加している。なお、本研究のウェブサイト「European New Order after the WWII」を立ち上げ、これらの研究会の成果や、文献リストの公開を開始した。平成27年度は本研究プロジェクトの二年目に当たり、引き続き、研究に必要な資源の準備を継続し、各参加者は、文献・資料・データの体系的な目録の作成と収集に努めた。またチェコスロヴァキア、カトリック統合運動、ドイツ保守系の質的分析に関しては、現地調査を実施し、入手困難な文献の購入・複写、文書館の未公開資料の探索、関係者へのインタビューなどを実施した。これと並んで、理論動向の検討・共有と、分析枠組の精密化のために研究会の開催を継続した。年度内に四回開催した研究会の中で、二回はメンバーの報告を中心に行い、二回はメンバー外の専門家も招き専門知識の提供を仰いだ。メンバー外からの参加としては、特にヨーロッパ戦後史研究のすそ野を広げ、若手を育成するため、ヨーロッパ史の若手研究者に積極的に報告を呼びかけた。具体的には、戦後欧州の人権保障秩序構築についての報告、フランスの戦後福祉政策の分野での新秩序構想を1930年代から振り返る報告と、オランダにおける戦後議会政党関係の起源についての報告が実現した。メンバー中心に実施した研究会では、保守右翼、カトリック、左翼の戦後秩序構想について理論動向の報告と、メンバーの研究の途中経過報告を行い、それぞれの戦後秩序構想の共通部分と分岐部分についての議論を詰めている。なお、平成26年度に立ち上げた本研究のウェブサイト「European New Order after the WWII」では、これらの研究会の成果や、文献リストを公開している。現地での史料収集、文献収集、枠組み作りのための研究会はそれぞれ計画通り進んでいる。現地の史料収集については、予定通り、初年度に実施しなかった研究分担者の残りが実施し、二年間でほぼ全員が一回目の調査を終了した。文献収集もリストを作成しつつ、現物の収集を進めている。研究枠組みについては、保守、カトリック、左翼の各担当者が独自の枠組みを形成している途上である。ウェブサイトによって、情報の共有、公開も実施できている。平成28年度は本研究プロジェクトの三年目に当たり、共同研究のまとめに入った。研究に必要な文献について、各自、新刊書を中心に収集を継続した。またフランス・カトリック運動、イタリア・自由主義運動の質的分析に関しては、追加的現地調査を実施し、入手困難な文献の購入・複写、文書館の未公開資料の探索、関係者へのインタビューなどを実施した。ドイツ社会民主主義運動については、アメリカのフィラデルフィアで開催されたヨーロッパ研究評議会CES(Council for European Studies)の研究大会にて、組織政党政治についての報告を行った。これと並んで、分析枠組に沿った各自の研究の共有のために研究会の開催を継続した。

年度内に三回開催した研究会のうち、一回はメンバー外の専門家も招き専門知識の提供を仰いだ。具体的には、戦後フランスにおけるジャーナリズム界の再構成についての報告と、東ドイツの戦争賠償をめぐる問題についての報告、オランダのカトリックにおける政党概念についての報告が実現した。メンバー中心に実施した研究会では、イタリアの行動党、チェコスロヴァキアの国民社会党、ドイツの社会民主党の戦後秩序構想についての研究の中間報告が行われた他、メンバー全員の研究を国と思想傾向別に組み合わせ、ヨーロッパの戦後秩序構想のマッピングを作る作業を行った。それに基づき、成果報告を日本比較政治学会と日本政治学会の二つのパネルで実施する計画である。なお、平成26年度に立ち上げた本研究のウェブサイト「European New Order after the WWII」では、これらの研究会の成果や、文献リストを公開している。現地での史料収集、文献収集、枠組み作りのための研究会はそれぞれ計画通り進んでいる。現地の史料収集については、予定通り追加調査を二名が実施した。研究報告については、一名が国際学会における報告を実施し、来年度の国内の二つの学会における報告にかんしてもパネルが承認されている。ウェブサイトによって、情報の共有、公開も実施できている。平成29年度は本研究プロジェクトの四年目に当たり、共同研究のまとめに入った。研究に必要な文献について、各自、新刊書を中心に収集を継続した。またチェコスロヴァキアの第二次世界大戦中のロンドン亡命政権の戦後構想については、追加的現地調査を実施し、入手困難な文献の購入・複写、文書館の未公開資料の探索などを実施した。またドイツについても、ボンのフリードリッヒ・エーベルト財団に戦後体制の構築についての資料調査を実施した。これらと並行して、今年度は、共同研究の成果を学会と共有するための学会報告を二つの学会で実施した。まず、2017年6月には中田と網谷が、もう一名の研究者と共に本共同研究の政党政治と新秩序構想に光を当てたパネルを立て報告を行った。2017年9月の日本政治学会では上原、八十田が、やはり本科研の研究会に参加した研究者と共にパネルを組み、欧州統合と新秩序構想に焦点を絞った研究報告を行った。報告についてはワーキングペーパーを作成し、後者のパネルでは日本研究者を討論者に迎え、活発な議論が行われた。メンバー中心に実施した研究会では、分担者の戸澤がドイツからアメリカ亡命者の戦後構想を、また同じく分担者の板橋はハルシュタインの構想についての研究報告を行った。現地での史料収集、文献収集、枠組み作りのための研究会はそれぞれ計画通り進んだ。研究公開については、国内の二つの学会にパネルを立て、いずれも多数の聴衆を集めて研究成果を報告し、ワーキングペーパーを作成、公開することができた。さらに、これらのワーキングペーパーをに、他の研究分担者の書下ろし原稿を加えた論文集の2019年度中の出版が決まっている。
ヒト進行性全身性硬化症モデル動物としてのTSKマウスの分子的解析

ヒト自己免疫疾患である進行性全身性強皮症のモデルマウス、TSKマウスは皮膚の硬化と肺における肺気腫を発症する。TSKマウスにおいて変異型fibrillin1の単離を行い、これが強皮症の原因遺伝子であるかを調べるため、前年度、変異型fibrillin1cDNAをchickenβアクチンプロモーターベクターに組み込み、そのベクターを用いて、受精卵注入し、トランスジェニックマウス4系統を作成した。これらトランスジェニックマウスにおいて変異型fibrillin1の発現をRT-PCR法により確認した。この変異型fibrillin1トランスジェニックマウスは加齢とともに、皮膚の厚さが増加し、皮膚のヒドロキシプロリン含有の増加を示した。また、topoisomeraseIに対する、自己抗体の産生も認めた。しかし、TSKマウスにおいて認められるような、抗fibrillin抗体、および、肺気腫は認められなかった。また、変異型fibrillin1を発現ベクターに組み込み、DNAワクチン法により、野性型マウスに免疫したところ、ヒドロキシプロリン含有の増加を伴う一過性の皮膚厚の増加、および抗fibrillin1抗体の産生を認めたが、この方法においても、肺気腫は認められなかった。以上の結果より、変異型fibrillin1がTSKマウスの強皮症症状の一部の原因遺伝子であると結論した。肺気腫の発症がこれら変異型fibrillin1の発現が不十分である可能性、2)変異型fibrillin1のごく近傍に肺気腫の発症の原因遺伝子がある可能性、がある。1)の可能性を検討するため、現在、keratin14プロモーターとelongation factorプロモーターを用いて、変異型fibrillin1トランスジェニックマウスを作成中である。TSKマウスの胎仔から得られた初代線維芽細胞よりmRNAを抽出し、RT-PCR法を用いて、変異型fibrillin 1 cDNAを単離することに成功した。得られたcDNAは、11900塩基長あり、ノザンブロット法による予測長から判断してほぼ全長領域を単離したと考えられた。変異型fibrillin 1は、遺伝子内重複をもつ事が示されており、我々による全長塩基配列のシークエンス解析の結果、3857アミノ酸から成るたんぱく質であると予想された。次に、この変異型重複たんぱく質が、in vitroにおいて作成でき得るかを調べた。まず、変異型fibrillin 1 cDNAの3末端にFLAGペプチドタッグを付加したものを、SRαプロモーターを有する発現ベクターに組み込んだ。これを用いてCOS7細胞への強制発現を試みたところ、細胞質内において変異型fibrillin 1を抗FLAG抗体を用いて検出した。同様の結果をfibrillin 1に対する抗血清を用いても得ている。また、同実験から、この変異型fibrillin 1が分泌していることを培養液を用いたウエスタンブロット法により確認している。さらに、我々は、変異型fibrillin 1を恒常的に発現する細胞株の樹立を試みたが、成功しなかった。人自己免疫疾患である進行性全身性強皮症のモデルマウス、TSKマウスにおける変異型fibrillin 1の役割を調べるため、変異型fibrillin 1トランスジェニックマウスを作成することを試みた。変異型fibrillin 1 cDNAをchicken βプロモーターベクターに組み込み、そのベクターを用いて、受精卵注入後、トランスジェニックマウスの作成を行った。ゲノミックサザン法による解析から、4匹の変異型fibrillin 1トランスジェニックマウスの作成に成功し、現在、トランスジーンの発現を確認するため、繁殖させているところである。ヒト自己免疫疾患である進行性全身性強皮症のモデルマウス、TSKマウスは皮膚の硬化と肺における無気肺を発症する。TSKマウスにおいて変異型fibrillin1の単離を行い、これが強皮症の原因遺伝であるかを調べるため、前年度、変異型fibrillin1cDNAをchickenβアクチンプロモーターベクターに組み込み、そのベクターを用いて、受精卵注入し、トランスジェニックマウス4系統を作成した。

この変異型fibrillin1トランスジェニックマウスは加齢とともに、皮膚の厚さが増加し、皮膚のヒドロキシプロリン含有の増加を示した。また、topoisomeraseIに対する、自己抗体の産生も認めた。しかし、TSKマウスにおいて認められるような、抗fibrillin抗体、および、無気肺は認められなかった。また、変異型fibrillin1を発現ベクターに組み込み、DNAワクチン法により、野生型マウスに免疫したところ、ヒドロキシプロリン含有の増加を伴う一過性の皮膚厚の増加、および抗fibrillin抗体の産生を認めたが、この方法においても、無気肺は認められなかった。以上の結果より、変異型fibrillin1がTSKマウスの強皮症症状の一部の原因遺伝子であると結論した。無気肺の発症がこれら変異型fibrillin1を生体内にて発現したマウスで認められない原因として、1)変異型fibrillin1の発現が不十分である可能性、2)変異型fibrillin1のごく近傍に無気肺の発症の原因遺伝子がある可能性、がある。1)の可能性を検討するため、現在、keratin14プロモーターとelongation factorプロモーターを用いて、変異型fibrillin1トランスジェニックマウスを作成中である。
タンパク質泡気液界面評価系を用いたタンパク質の界面変性の解析

溶液のバイオ医薬製剤では、タンパク質溶液と気体または固体との界面においてタンパク質の立体構造が変化し、タンパク質の凝集が引き起こされる。タンパク質凝集体は重篤な副作用につながる可能性がある。そのため、タンパク質の界面変性と凝集を防ぐ必要があるが、界面でのタンパク質の立体構造変化に関する詳細な研究がないため、それらを抑制する方法は限定的である。そこで本研究では、より安定で安全なバイオ医薬品の創製に向けて、界面におけるタンパク質の立体構造変化の詳細を明らかにする。具体的には、タンパク質泡気液界面評価系の確立および水素/重水素交換質量分析を用いた立体構造変化の解析を行う。
嗅覚本能回路における嗅皮質‐視床下部外側野回路の機能的役割の解明

近年の嗅覚研究により、天敵の匂いに対する恐怖反応など、嗅覚本能行動に特異的に働く神経回路が明らかになってきた。しかし、本能行動として重要な、嗅覚にもとづく摂食行動の神経回路は依然として明らかでない。これまでに申請者は、摂食行動および覚醒・睡眠制御の中枢である視床下部外側野に直接投射する嗅皮質亜領域を新たに発見した(ventral olfactory nucleus、VONと名付けた)。そこで本研究では、このVONから視床下部外側野に投射する回路が、匂いによって誘起される摂食行動および覚醒・睡眠状態を制御するかどうかを明らかにする。
顎関節への胸鎖関節円板移植にともなう関節の機能回復に関する細胞組織化学的研究

ヒト胸鎖関節内と細胞外基質中の弾性線維とオキシタラン線維の分布をカラーイメージシステムと免疫ペルオキシダーゼを使用して明らかにした。材料は,顕微鏡レベルの組織化学的解析に適切な,肉眼的および病理学的異常を伴わない成人男性24名(年齢27-70歳)を剖検時に選択した。固定,脱灰後,通法に従いパラフィン切片(前額断で3μm厚の連続切片)を作製し,Elastica-van Gieson染色,酵素抗体法により構成要素(弾性線維,膠原線維,細胞外基質など)の局在と配列を調べた。繊細な弾性線維は胸鎖関節の関節円板中の線維層に散在していた。この関節円板は,胸鎖関節内の胸骨側の円板は膠原線維で構成されていたが,鎖骨側の円板は結合組織を含む細胞成分で構成されていた。関節円板の厚さは,下部から上部に行くに従って,次第に厚くなっていった。膠原線維I型,III型,V型および他の細胞外基質は,胸鎖関節の鎖骨側と胸骨側,さらに関節顆の結合組織中に,肥厚している区域が認められた。細胞活動は,関節円板の胸骨側の表面より頚部側の表面でより強く行われていた。細胞外基質の分布の違いは,さまざまな機能上の特性に関する細胞活動の相違を示している。従って,関節の形態学的特徴を示すには,細胞外基質の出現と分布が重要であることを示している。また,胸鎖関節の鎖骨側と胸骨側の肥厚した部分では,骨基質の再造形を促進する高度なレベルの細胞活動が存在するので,細胞外基質の存在は,骨基質の再造形と成形機能のための最も重要な因子の一つである。以上の本研究で得られた結果と,今まで報告されている顎関節に関する細胞組織化学的データから,胸鎖関節の移植は,顎関節の再建のために可能であると考えられる。胸鎖関節と顎関節との形態的類似性に着目し,顎関節の機能回復のための胸鎖関節円板の移植の可能性を肉眼解剖学的および細胞組織化学的立場から検討した。肉眼解剖的検索についてはX線ならびにマクロ解剖学的手法を用い,ヒトの胸鎖関節について骨性形態,関節靱帯,関節円板の形態を観察した。骨形態は(1)convex,(2)straight,(3)concave,(4)wave,(5)mixed,(6)with suprasternal boneの6型に分類された.関節靱帯は,前胸鎖靱帯,後胸鎖靱帯,鎖骨間靱帯が認められ,前胸鎖靱帯の走行に比べ,後胸鎖靱帯の走行は不明瞭であった.肋鎖靱帯に関しては,教科書に記載されているような走行の確認は,比較的困難であった.また,関節円板の形態は,1型:均一に厚いもの,2型:周囲が厚く中央部が薄いもの,3型:中央部に穴のあるもの,4型:その他の4型に分類することができた.以上のことから,胸鎖関節の形態学的特徴には,顎関節と類似する点が多いことが明らかになった.細胞組織化学的検索についてはコラーゲン,フィブロネクチン,ラミニン,テネイシンなどの細胞外基質が骨,関節円板,滑膜などにおいて各分子種ごとに特徴ある局在性が認められたことから,正常な機能を営む関節における細胞外基質の作用に関する知見ならびに顎関節への胸鎖関節円板の移植のための基礎的知見が得られた。

これらのことから,胸鎖関節円板の移植に関しては,術前に十分な診査を行い形態的な個体差を把握した上で細胞外基質の作用を考慮し,それを応用することによって健常側の一部の円板部を顎関節部に正着させることが可能と考えられた.ヒト胸鎖関節内と細胞外基質中の弾性線維とオキシタラン線維の分布をカラーイメージシステムと免疫ペルオキシダーゼを使用して明らかにした。材料は,顕微鏡レベルの組織化学的解析に適切な,肉眼的および病理学的異常を伴わない成人男性24名(年齢27-70歳)を剖検時に選択した。固定,脱灰後,通法に従いパラフィン切片(前額断で3μm厚の連続切片)を作製し,Elastica-van Gieson染色,酵素抗体法により構成要素(弾性線維,膠原線維,細胞外基質など)の局在と配列を調べた。繊細な弾性線維は胸鎖関節の関節円板中の線維層に散在していた。この関節円板は,胸鎖関節内の胸骨側の円板は膠原線維で構成されていたが,鎖骨側の円板は結合組織を含む細胞成分で構成されていた。関節円板の厚さは,下部から上部に行くに従って,次第に厚くなっていった。膠原線維I型,III型,V型および他の細胞外基質は,胸鎖関節の鎖骨側と胸骨側,さらに関節顆の結合組織中に,肥厚している区域が認められた。細胞活動は,関節円板の胸骨側の表面より頚部側の表面でより強く行われていた。細胞外基質の分布の違いは,さまざまな機能上の特性に関する細胞活動の相違を示している。従って,関節の形態学的特徴を示すには,細胞外基質の出現と分布が重要であることを示している。また,胸鎖関節の鎖骨側と胸骨側の肥厚した部分では,骨基質の再造形を促進する高度なレベルの細胞活動が存在するので,細胞外基質の存在は,骨基質の再造形と成形機能のための最も重要な因子の一つである。以上の本研究で得られた結果と,今まで報告されている顎関節に関する細胞組織化学的データから,胸鎖関節の移植は,顎関節の再建のために可能であると考えられる。
看護職のフットケア能力の向上にむけたプログラム開発

本研究の目的は、在宅看護とリハビリテーション看護を専門とする看護師を対象にフットケア能力の向上を目指すプログラムを開発することである。今年度はプログラムの実施と評価を行った。対象は2つの施設に勤務している15名の看護師で、プログラムは1ヶ月に1回2回の頻度で、計4回(60分×1回と90分×3回の約6時間)実施した。スタッフは研究協力者のフットケアの専門家1名と共同研究者23名、開催場所は対象施設の研修室を借用した。フットケアに使用する器具は、爪切り用ニッパー、角質削り用のコーンカッター、グラインダー、レデューサーで、全て研究者が準備した。プログラムの1回目は自作のDVD(基礎編30分)の視聴と講義、2回目は健康な模擬爪と模擬の踵部を用いた爪切りと角質削りの実践、3回日は対象が2人1組で互いの足をモデルにした爪切りと角質削りを実施した。4回目は肥厚爪、巻き爪の模擬爪を用いた爪切りと角質削りとお互いの足をモデルにマッサージを行った。プログラムの評価は、毎回のプログラム終了後のアンケート調査で行った。結果では、プログラム全体については、全員が「とても満足」か「まあ満足」で、「自信がもてた」技術では爪切りが50%、グラインダーの使い方とマッサージが各68%であった。今後の看護実践に「とても」「少し」活用できるが各50%であった。全体の自由記載では、1)その場で質問に応じてくれるスタッフの対応や楽しい雰囲気、2)十分な実践時間の確保、3)(専門家による)高度なケア技術を間近で見れる、4)自分の足に関心が持てるようになったことなどから、プログラムの目標はほぼ達成できたと考えられる。同時に今後の課題は、1)爪切りの練習時間が足りない、2)グラインダーの代替用品によるケア方法を練習したいなどの意見が複数あったことから、技術項目の洗練と施設の実情にあわせた器具の選択であると考える。平成20年度は国内外の文献とフットケアを実践している4名の看護師への面接、およびフットケア技術を教授している美容業者・ケアワーカーら11名を対象にしたアンケート調査の結果から、看護師が行うフットケアのねらいと技術に関して検討した。面接を行った看護師4名のうち2名は皮膚・排泄ケア認定看護師、1名は糖尿病療養指導士の資格をもつ看護師、残り1名は以前に透析室の看護師の経験があり、現在はフットケアサロンを開業している。データ分析の結果より、ケアワーカーが考えるフットケアは、1日の疲れをとる、血流を改善させるといった、感覚的で限定的なものであった。一方、看護師が捉えるフットケアは、糖尿病者で創傷治癒が遅延している事例や血液透析患者で血流障害があり些細な傷から切断に至りやすい事例を経験していることに由来した、微細な異常の発見とケアを行う前に、どのようなケアをすべきか、すべきでないかの判断を行うアセスメントと再発させないことに焦点が置かれていることがわかった。また、爪きり、角質除去、マッサージの技術も、美容業者・ケアワーカーらは、足浴、角質削り、爪切り、マッサージに-連のやり方が決まっていたが、看護師らは、フスフレーゲや北欧のフットケアなどの技術を基盤に、医学的知識が不足している部分は各自がエビデンスを調べるとともに、日々の実践事例における振り返りを通して、独自のやり方を確立していた。次年度は、今年度の結果を基に看護師によるフットケア技術のねらいと項目を決定し、教育教材用の視聴覚教材を開発することとする平成21年度は前年度のヒアリングとアンケート結果から看護師が行うフットケア技術の内容を抽出しミニマムな内容を検討した。その結果、アセスメント・足浴(清拭)・爪切り・角質コントロール・マッサージのなかで、アセスメントは特に重要と捉え視聴覚教材と補足部分を印刷資料で追加した。視聴覚教材の足モデルは在宅療養中の患者2名と訪問看護師1名とし、施術はドイツのフットマイスターから直接施術を習得し、海外・国内で10年以上足のケアを行っている講師に依頼した。撮影前に療養者ご本人とご家族、療養者の主治医と訪問看護ステーションの所長からケアの実施と撮影について署名による許可を得た。DVDは基礎編(約20分)とアドバンス編(約5分)の技術レベルの違いを明確にした。具体的には、肥厚爪の爪切りの際、基礎編では比較的健康な伸びた爪甲のみを切除しているが、アドバンス編では、剥離した爪甲部分あるいは白濁した爪甲部分をできる限り切除し、正常な爪甲のみを残すレベルの技術とした。また、踵部を中心とした角質コントロールでは、基礎編は角質肥厚が軽度の対象でコーンカッターとグラインダーを用いた5分程度のケアであるのに対し、アドバンス編では踵部・前足部の高度な角質肥厚に対して、コーンカッターを中心に、グラインダー、レデューサーを活用した内容とした。これら爪切り・角質コントロールの技術は侵襲性が高い技術でとくに注意を要するため、技術習得の必要性と施術前に本人と家族、主治医の許可を得ることについては、名ナレーションとテロップで強調すると同時に、肥厚爪や角質肥厚を放置することのリスクについても解説した。平成22年度は、これらの教育教材を用いて老人保健施設、訪問看護ステーション2施設の看護師を対象に介入研究を実施し、看護師のフットケア技術にどのような変化があるのかを調査する計画である。

対象は2つの施設に勤務している15名の看護師で、プログラムは1ヶ月に1回2回の頻度で、計4回(60分×1回と90分×3回の約6時間)実施した。スタッフは研究協力者のフットケアの専門家1名と共同研究者23名、開催場所は対象施設の研修室を借用した。フットケアに使用する器具は、爪切り用ニッパー、角質削り用のコーンカッター、グラインダー、レデューサーで、全て研究者が準備した。プログラムの1回目は自作のDVD(基礎編30分)の視聴と講義、2回目は健康な模擬爪と模擬の踵部を用いた爪切りと角質削りの実践、3回日は対象が2人1組で互いの足をモデルにした爪切りと角質削りを実施した。4回目は肥厚爪、巻き爪の模擬爪を用いた爪切りと角質削りとお互いの足をモデルにマッサージを行った。プログラムの評価は、毎回のプログラム終了後のアンケート調査で行った。結果では、プログラム全体については、全員が「とても満足」か「まあ満足」で、「自信がもてた」技術では爪切りが50%、グラインダーの使い方とマッサージが各68%であった。今後の看護実践に「とても」「少し」活用できるが各50%であった。全体の自由記載では、1)その場で質問に応じてくれるスタッフの対応や楽しい雰囲気、2)十分な実践時間の確保、3)(専門家による)高度なケア技術を間近で見れる、4)自分の足に関心が持てるようになったことなどから、プログラムの目標はほぼ達成できたと考えられる。同時に今後の課題は、1)爪切りの練習時間が足りない、2)グラインダーの代替用品によるケア方法を練習したいなどの意見が複数あったことから、技術項目の洗練と施設の実情にあわせた器具の選択であると考える。
トキソプラズマ性網脈絡膜炎発症における熱ショック蛋白およびインターフェロンの意義

1.細胞内寄生体トキソプラズマ(T.g.)により惹起されるT.g.性網脈絡膜炎発症および生体防御反応におけるインターフェロンガンマ(IFN-γ)とT.g.熱ショック蛋白70(T.g.HSP70)の機能解析を目的として研究を遂行した。3.T.g.HSP70感染死する直前に発現することを明らかにした。4.以上より、IFN-γはT.g.感染に対する生体防御反応に枢軸的役割を演じることを明らかにし、IKOにおいて、経口感染により眼内にT.g.DNAが存在することを明らかにした。1.トキソプラズマFukaya弱毒株の5シストを感受性マウスC57BL/6および抵抗性マウスBALB/cおよびC57BL/6とBALB/cのインターフェロンガンマノックアウト(IFN-γKO)マウスに経口投与後、経時的に眼球を含め臓器を摘出し、Quantitative competitive(QC)-PCR法でトキソプラズマの数を測定した結果、C57BL/6では、トキソプラズマDNAが小腸、腸間膜リンパ節、盲腸、大腸、肝、膵臓、肺、心臓、脳、眼球の順で検出されたが腎臓には検出されなかった。感染後3日から、9日でその数はピークに達し、2週間後には小腸、脳、心臓、肺以外の臓器では消失した。BALB/cではトキソプラズマDNAはC57BL/6と同様の順でトキソプラズマDNAが検出されたがC57BL/6と比較して、検出される時期が遅くかつ数は少数であった。また、肝、腎、眼には検出されず、検出された臓器においても、2週間の経過観察で小腸、脳以外の臓器で消失した。脳内のトキソプラズマDNAは、BALB/cでは2週間の経過観察で減少したが、C57BL/6では逆に微増した。C57BL/6とBALB/cのIFN-γKOマウスでは、全ての臓器でトキソプラズマDNAが検出され、その数は野生型マウスと比較して、有意に多く、経時的に指数関数的に増加した。しかし、腎臓、脳、眼においては他臓器と比較して、その数は少なかった。C57BL/6 IFN-γKOマウスとBALB/c IFN-γKOマウスと比較するとC57BL/6 IFN-γKOマウスの方が、トキソプラズマDNAが多かった。2.同時に各時期のマウスの眼を散瞳し麻酔下で眼底検査し、網脈絡膜炎の有無およびその眼底所見の変化を観察したところ、検眼鏡的には、炎症像を認めなかった。3.ヒトおよびトキソプラズマ原虫HSP70に対するモノクローナル抗体を作成した。3.T.g.HSP70は感染死する直前に発現することを明らかにした。
胎生期の物理的原因による脳発生異常の発現機序とその制御に関する研究

胎生期の高温環境による脳発生異常の発症メカニズムと高温に対する胎児組織の感受性を明らかにするため、実験動物(モルモット及びマウス)を用いた実験と、ヒトと実験動物胎児の比較胎生病理学的研究を行い、今年度に次記の成果を得た。1.ヒトとモルモットにおける高温による脳発生異常の比較胎生病理学的研究京都大学医学部付属先天異常標本解析センターに所蔵されるヒト胎児症例のうち、神経管奇形(無脳症,二分脊椎)をもち、その母親が妊娠初期に高熱疾患に罹患した既応を有する例を選び出し、うち約10例について全身の連続組織標本を作製した。これらの胎児の脳組織を光学顕微鏡的に観察したところ、神経上皮組織の層構築の乱れや空洞形成、神経上皮細胞の壊死像、ロゼット形成などが観察された。また、神経管閉鎖不全のために外反した脳組織内では、神経上皮細胞の有糸分裂像が増加しており、神経管閉鎖不全に伴って二次的に神経組織が過増殖すると考えられた。これらの異常組織像は、ニューロン増生期に高温を負荷されたモルモットに見られる所見と酷似しており、高温はヒトとモルモットの胎児脳組織を共通のメカニズムで障害すると推定された。モルモットは脳の組織発生がヒトに似ており、他の実験用小動物に比べて、脳がより成熟した状態で生まれてくるので、胎生期の脳障害を研究する上で、モルモットがすぐれたヒトのモデルになり得ることがわかった。2.胎児組織における熱ショック蛋白の誘導と温度耐性の発現妊娠9.5日の雌ラットから胎児をとり出しラット血清中で48時間回転培養すると、神経管が閉鎖し体軸の回転が起こる。培養開始数時間後に7.5分間、培地の温度を43°Cに上昇させたところ、異常胎児が高率に発生し、その多くに神経管奇形が認められた。次に、催奇形作用をもたない温度条件(42°C、10分間)で前処理した後に、上と同様の43°C、7.5分間の高温負荷を行ったところ、異常胎児の発生率が有意に低下し、ラット胎児がマイルドな加温により温度耐性を獲得することが明らかになった。ラットの胎児組織には、成動物とは異なる熱ショック蛋白が存在し、その発現に組織および時期特異性が認められる。ラット胎児の神経外胚葉組織には、HSP88、73、71が有意に増加し、HSP73が減少した。こうした熱ショック蛋白発現の変化が、胎児の温度耐性獲得と関連していると考えられるので、現在更に詳細な解析を続けている。3.胎生期の高温負荷による軸骨格のトランスフォーメーション妊娠7、8、9日の雌マウスに7.515分間43°Cの高温を負荷し、妊娠末期に殺して、その胎児の骨格を軟骨・骨二重染色によって観察した。その結果、下位(尾方)の椎骨が上位(頭方)のそれの特徴をもつようになるanterior transformationと、逆に上位の椎骨が下位の特徴をもつようになるposterior transformationが、時期特異的、温度依存的に誘発された。このことから、胎生期の高温ストレスはホメオティック遺伝子の機能発現に影響を及ぼし、体節構造の分化を障害することが示唆された。4.高温の催奇形性に及ぼすアシドーシスの影響培養細胞は、培地のpHが低下すると高温に対して感受性が高くなることが知られている。我々は、妊娠マウスに高温(42または43°C)を負荷する13時間前にacetazol amideを投与してアシドーシスを起こしたところ、高温の催奇形作用が有意に増強され、神経管奇形の発生が増加した。この結果から、in vivoにおいても、アシドーシスによって高温の催奇形作用が増強されることが明らかになった。以上の結果から、胎生期の高温ストレスは胎児組織、特に胎児中枢神経系を障害し、脳発生異常の原因になり得ることが明らかになった。また、モルモットがヒトの脳発生のすぐれたモデルになることがわかった。高温による脳障害発現の分子メカニズムとその発症を制御するための条件を追求するため、分子生物学的・細胞生物学的研究を日豪共同で進めている。

2.胎児組織における熱ショック蛋白の誘導と温度耐性の発現妊娠9.5日の雌ラットから胎児をとり出しラット血清中で48時間回転培養すると、神経管が閉鎖し体軸の回転が起こる。培養開始数時間後に7.5分間、培地の温度を43°Cに上昇させたところ、異常胎児が高率に発生し、その多くに神経管奇形が認められた。次に、催奇形作用をもたない温度条件(42°C、10分間)で前処理した後に、上と同様の43°C、7.5分間の高温負荷を行ったところ、異常胎児の発生率が有意に低下し、ラット胎児がマイルドな加温により温度耐性を獲得することが明らかになった。ラットの胎児組織には、成動物とは異なる熱ショック蛋白が存在し、その発現に組織および時期特異性が認められる。ラット胎児の神経外胚葉組織には、HSP88、73、71が有意に増加し、HSP73が減少した。こうした熱ショック蛋白発現の変化が、胎児の温度耐性獲得と関連していると考えられるので、現在更に詳細な解析を続けている。3.胎生期の高温負荷による軸骨格のトランスフォーメーション妊娠7、8、9日の雌マウスに7.515分間43°Cの高温を負荷し、妊娠末期に殺して、その胎児の骨格を軟骨・骨二重染色によって観察した。その結果、下位(尾方)の椎骨が上位(頭方)のそれの特徴をもつようになるanterior transformationと、逆に上位の椎骨が下位の特徴をもつようになるposterior transformationが、時期特異的、温度依存的に誘発された。このことから、胎生期の高温ストレスはホメオティック遺伝子の機能発現に影響を及ぼし、体節構造の分化を障害することが示唆された。4.高温の催奇形性に及ぼすアシドーシスの影響培養細胞は、培地のpHが低下すると高温に対して感受性が高くなることが知られている。我々は、妊娠マウスに高温(42または43°C)を負荷する13時間前にacetazol amideを投与してアシドーシスを起こしたところ、高温の催奇形作用が有意に増強され、神経管奇形の発生が増加した。この結果から、in vivoにおいても、アシドーシスによって高温の催奇形作用が増強されることが明らかになった。以上の結果から、胎生期の高温ストレスは胎児組織、特に胎児中枢神経系を障害し、脳発生異常の原因になり得ることが明らかになった。また、モルモットがヒトの脳発生のすぐれたモデルになることがわかった。高温による脳障害発現の分子メカニズムとその発症を制御するための条件を追求するため、分子生物学的・細胞生物学的研究を日豪共同で進めている。1.ヒトとモルモットにおける高温による脳発生異常の臨界期の同定:胎生期に高温ストレスに暴露されると種々の中枢神経系奇形が誘発される。モルモットにおける奇形発生の臨界期は、神経管奇形については妊娠23-25日、小頭症については同49-56日であることが実験的に明らかになった。京都大学医学部附属先天異常標本解析センターに所蔵される奇形胎児を調べたところ、神経管奇形を有する16例の胎児について、その母親が娠妊4週に発熱等による高温を経験していたことが明らかになった。これは発生学的にモルモット娠妊23-25日の時期に相当し、高温に対する感受期が両種の間でほぼ一致することが明らかになった。2.高温による脳発生異常の比較胎生病理学的研究:妊娠中に高温に暴露されたヒトとモルモットの胎児の脳を組織学的に検索し、両者を比較した。
薬用植物のin vitro保存

薬用植物の冷蔵培養器官(シュート、塊茎、不定胚)から復元したクローン植物の植物学的評価並びに含有成分の母植物との定性的・定量的同一性に関する化学的評価を行うことにより,薬用植物のin vitroにおける保存法としての培養シュート冷蔵法の信頼性と汎用性を証明することを目的として本研究を実施して、以下の結果を得た。熱帯性のレモングラスは5°Cでは1月間でも枯死し、10あるいは15°Cでも14週間しか冷蔵保存できなかった。同じく熱帯性のチョウセンアサガオ属植物は10あるいは15°Cで半年以上の保存が可能であった。温帯性のオケラ属植物、アミガサユリ、エゾエンゴサクは12年間25°Cで保存できた。特に、ホソバオケラ培養シュートは1992年以来12年間冷蔵した後通常培養条件下で1世代培養し再び12年間冷蔵することにより継代した結果今年度までその培養系統を維持することができた。2年間冷蔵したハシリドコロおよびオオバナオケラのシュートから復元した植物の栽培試験を実施した。非冷蔵シュート由来の対照植物と比較することにより、形態および成分組成に関する評価を実施した。その結果、形態的変異は観察されず、薬用として用いられる根茎に含まれるトロパンアルカロイド(ハシリドコロ)および精油(オオバナオケラ)のガスクロマトグラムパターンおよびその主要成分であるヒヨスチアミンとスコポラミン(ハシリドコロ)並びにアトラクチロン(オオバナオケラ)含量にも有意な差は認められなかった。以上の結果から、薬用植物培養シュートのin vitro保存法は形態学的のみならず化学的な変異を起こさないことが実証され、遺伝子源の中期的な保存法としての信頼性が確かめられた。冷蔵培養シュートから復元したクローン薬用植物の植物学的評価並びに含有成分の母植物との定性的・定量的同一性に関する化学的評価を行うことにより,薬用植物のin vitroにおける保存法としての培養シュート冷蔵法の信頼性と汎用性を証明することを目的として本研究を実施して、以下の結果を得た。1培養シュートの確立とミクロ繁殖:冷蔵保存実験に供する植物材料として、本学薬用植物園で系統保存しているセリ科ハマボウフウ(7)、キク科オケラ属植物のオケラ(3)、オオバナオケラ(1)、ホソバオケラ(5)、チョウセンオケラ(1)、シナオケラ(1)、暖地性の植物種としてイネ科レモングラス(1)、ナス科コダチチョウセンアサガオ(1)のシュート培養を確立しし(かっこ内は系統数)、ミクロ繁殖を行った。2冷蔵実験:ユリ科アミガサユリの培養鱗茎は0-4°Cで冷蔵することにより5年間移植することなく試験管内の寒天培地上で保存が可能であった。3栽培実験:オオバナオケラおよびナス科ハシリドコロの冷蔵シュート並びにケシ科エゾエンゴサクの冷蔵不定胚から復元した植物を圃場またはプランターで栽培した。4評価の実施:2年間明所又は暗所で冷蔵した培養シュートから復元した長崎県由来のハマボウフウを98年4月に対照植物群とともに圃場に定植したものを99年9月に収穫した。冷蔵系統の植物に外部形態上の変異は観察されなかった。地下部の成分として、少量のインペラトリンと多量のフォルカリンジオールとパナキシノールが検出され、以前に筆者らが報告した南方系のパターンに一致した。明所で冷蔵した株では、量的にも対照と有意差がなかったが、暗所冷蔵株では、いずれの成分も有意に低下していた。冷蔵培養シュートから復元したクローン薬用植物の植物学的評価並びに含有成分の母植物との定性的・定量的

同一性に関する化学的評価を行うことにより,薬用植物のin vitroにおける保存法としての培養シュート冷蔵法の信頼性と汎用性を証明することを目的として本研究を実施して、以下の結果を得た。1培養シュートのミクロ繁殖前年度にシュート培養を確立したオケラ属(キク科)、レモングラス属(イネ科)、チョウセンアサガオ属(ナス科)植物のミクロ繁殖を行って冷蔵保存実験に供給するシュートを得た。2冷蔵実験上記によりミクロ繁殖したオケラ(3)、オオバナオケラ(1)、ホソバオケラ(5)、チョウセンオケラ(1)、シナオケラ(1)、レモングラス(1)、コダチチョウセンアサガオ(1)の培養シュート(かっこ内は系統数)の冷蔵を開始した。オケラ属植物は、5°Cで保存を開始し、2年後に再培養して生存率を確認する予定である。レモングラスは熱帯原産であるので5°Cの他に10と15°Cでも保存した。3ヶ月間の保存結果では、5°Cではすべて枯死し、10°Cおよび15°Cではすべて生存した。なお、光の有無は生存率に影響しなかった。3栽培試験:オオバナオケラおよびナス科ハシリドコロの冷蔵シュートから復元した植物を圃場またはプランターで引き続いて栽培した。4評価の実施栽培しているハシリドコロについては、今年の春に形態を比較し、夏に成分組成の評価を実施予定である。冷蔵培養シュートから復元したクローン薬用植物の植物学的評価並びに含有成分の母植物との定性的・定量的同一性に関する化学的評価を行うことにより,薬用植物のin vitroにおける保存法としての培養シュート冷蔵法の信頼性と汎用性を証明することを目的として本研究を実施して、以下の結果を得た。1培養シュートの系統維持とミクロ繁殖前年度までにシュート培養を確立したオケラ属(キク科)、レモングラス属(イネ科)、チョウセンアサガオ属(ナス科)、ハシリドコロ属(ナス科)植物培養シュートの系統を維持した。2冷蔵実験ミクロ繁殖したオケラ、オオバナオケラ、ホソバオケラ、チョウセンオケラ、シナオケラ、レモングラス、コダチチョウセンアサガオの培養シュートの冷蔵を引き続き実施した。3栽培試験:オオバナオケラおよびナス科ハシリドコロの冷蔵シュートから復元した植物を圃場またはプランターで栽培した。4評価の実施冷蔵シュートから復元して栽培したオオバナオケラおよびハシリドコロを収穫し、非冷蔵シュート由来の対照植物と比較して、形態および成分組成に関する1回目の評価を実施した。オオバナオケラの根茎は冷蔵株が有意に重かったが、それ以外の生育指標および根茎中のセスキテルペノイドであるアトラクチロン含量には有意差が認められなかった。ハシリドコロの生育指標および根茎中の有効アルカロイド成分であるヒオスチアミンとスコポラミンの含量に有意な差は認められなかった。1培養シュートの冷蔵保存による系統維持ホソバオケラ培養シュートは1992年以来12年間冷蔵した後通常培養条件下で1世代培養し再び12年間冷蔵することにより継代した結果今年度までその培養系統を維持することができた。その他の培養シュートの系統についても冷蔵による系統維持が可能であった。2復元植物の栽培実験とその評価の実施
環境汚染微量金属(ヒ素)の慢性摂取による炎症及び発癌の分子機構の解明

金属の人体に対する影響は、水銀など公害問題を起こした金属については精力的に研究されてきた。しかし、その他の金属については余り研究されていない。近年アジアでは、井戸水などに微量に混入するヒ素を住民が長期間摂取した結果、広範囲に慢性ヒ素中毒が発生し、大きな社会問題となっている。慢性ヒ素中毒に苦しむ人々を救う事は世界的な急務とされる。そのためには、未解明な慢性ヒ素中毒の発症機構を解明しそれを防御する必要がある。本研究は研究代表者のこれまでの研究成果を元に、ヒ素中毒発症機構を、ヒ素のメチル化代謝に伴うアポトーシスの制御という新しい観点から解析した。現在の学会では、無機ヒ素がヒト体内でメチル化を受ける過程で、毒性の強い反応中間体であるメチル3価ヒ素が生成することを根拠に、ヒ素のメチル化代謝は毒性を増す負の生体反応であるとされている。我々はこの仮説が正しいか確かめるため、生体内で実際に生成されるメチル3価ヒ素化合物であるモノメチル3価ヒ素グルタチオン複合体、或はジメチル3価ヒ素グルタチオン複合体を、従来法より簡便且つ安全な方法で化学合成し、その細胞毒性を培養肝細胞を用いて解析した。その結果、これらのメチル3価ヒ素化合物は、培養液中で容易にメチル3価ヒ素イオンとなり、未知のトランスポーターから細胞内に大量に侵入して強い毒性(アポトーシスの誘導)を示す事が明らかとなった。この毒性は細胞内グルタチオン濃度に依らず、細胞内で産生される活性酸素にも非依存的であった。また、メチル3価ヒ素イオンの細胞内流入は、生体レベルのグルタチオンや他のチオール化合物の添加で完全に阻害され、毒性も抑制された。以上より、ヒ素のメチル化が毒性を増す反応であるという証拠は得られなかった。1、ヒ素化合物の新しい定量分析法を開発した。生体内に入った無機ヒ素が臓器や細胞でどの様な形でどの位存在しているのか把握するため、慢性ヒ素中毒が実際に起きているアジアの後進地域でも応用可能な簡便で安価なヒ素化合物の化学形態別定量法を構築した。具体的にはヒ素化合物をin vitroで還元型グルタチオン(GSH)と混ぜてそれぞれのGSH複合体を生成させ、このヒ素-GSH複合体を薄層クロマトグラフィーで分離し、結合しているGSHをヨウ素蒸気で検出する事により、ヒ素化合物の定性、定量を行った。この方法により、無機ヒ素とメチルヒ素化合物の形態別定量が簡単に出来、かつ生体内で実際に起こるヒ素化合物とGSHの化学反応様式についても新たな知見を得る事ができた。2、培養肝実質細胞を用い、ヒ素化合物の毒性発現機構をin vitroで解析した。ラット由来培養肝非実質細胞であるTRL 1215を用い、主に無機ヒ素のヒトでのメチル化代謝中間代謝物であるmonomethylarsonic acid(MMA)の細胞毒性発現メカニズムについて検討した。その結果、MMAは正常な細胞には毒性を示さないが、細胞内のGSHを涸渇させると毒性を示す様になり、誘導された細胞死はnecrosisとapoptosisがほぼ半分ずつである事が明らかとなった。更にこのMMAによる細胞毒性は、細胞内に侵入したMMAが活性酸素種を発生させて誘導している事もわかった。普段は無毒であるMMAも、GSHが不足すると毒性を示した事から、ヒ素の毒性発現に生体内GSHは防御的に働いていることが推測された。しかしMMAをin vitroでGSHと反応させて合成したMMA-SG複合体は正常細胞に対しても猛毒であったので、ある場面ではGSHはヒ素化合物の毒性を増す働きのある可能性もあり、現在さらに詳細に解析を行っている。井戸水などに含まれる無機ヒ素はヒトの体内に入ると還元型グルタチオン(GSH)の働きにより酵素的メチル化代謝を受け、最終的にdimethylarsinic acid(DMA)に変換すると考えられている。また、このメチル化代謝過程で一時的にメチルヒ素-GSH複合体が生成すると言われる。最近、化学合成されたメチルヒ素-GSH複合体の細胞毒性が非常に強い事が報告され、ヒ素のメチル化代謝はヒ素の毒性を増す反応であるという説が有力となっている。しかし、仮説は仮説であり、世界的にみてもヒ素のメチル化代謝の真の意義は明らかにされていない。我々はこの課題を解くために、先ずDMA-GSH複合体の合成を試みた。DMAのヒ素分子は5価であるがDMA-GSH複合体(DMA-SG)のヒ素分子は3価であるので、本化合物は不安定で化学合成が難しいとされていたが、我々は文献に示されている方法より遥かに簡単な方法でDMA-SGの合成に成功し、特殊な薄層クロマトグラフィーを用いた分離法で純品を得る事ができた。様々な化学分析により、この合成DMA-SGはヒトの体内で生じると報告されているDMA-GSH複合体と構造が一致した。DMA-SGの細胞毒性をラット培養肝実質細胞などを用いて詳細に解析したところ、DMA-SG自身は分子量が大きくて細胞内に侵入できず毒性を示さないが、通常の細胞培養用液体培地に溶かすと容易に一SG基がはずれて3価DMAとなり、これが猛毒(50%細胞致死濃度がnMレベルで無機3価ヒ素より毒性が強い)である事が判明した。しかし培地にヒトの血中レベルのGSH、アルブミンや血清などを添加するとDMA-SGの形が維持されて細胞内に入れず毒性は全く示されなかった。

言い換えれば、ヒトの体内でヒ素のメチル化代謝過程でDMA-SGが生成されたとしても、通常のヒトの体内では恐らく毒性は現れ得ない事が推定された。金属の人体に対する影響は、水銀など公害問題を起こした金属については精力的に研究されてきた。しかし、その他の金属については余り研究されていない。近年アジアでは、井戸水などに微量に混入するヒ素を住民が長期間摂取した結果、広範囲に慢性ヒ素中毒が発生し、大きな社会問題となっている。慢性ヒ素中毒に苦しむ人々を救う事は世界的な急務とされる。そのためには、未解明な慢性ヒ素中毒の発症機構を解明しそれを防御する必要がある。本研究は研究代表者のこれまでの研究成果を元に、ヒ素中毒発症機構を、ヒ素のメチル化代謝に伴うアポトーシスの制御という新しい観点から解析した。現在の学会では、無機ヒ素がヒト体内でメチル化を受ける過程で、毒性の強い反応中間体であるメチル3価ヒ素が生成することを根拠に、ヒ素のメチル化代謝は毒性を増す負の生体反応であるとされている。我々はこの仮説が正しいか確かめるため、生体内で実際に生成されるメチル3価ヒ素化合物であるモノメチル3価ヒ素グルタチオン複合体、或はジメチル3価ヒ素グルタチオン複合体を、従来法より簡便且つ安全な方法で化学合成し、その細胞毒性を培養肝細胞を用いて解析した。その結果、これらのメチル3価ヒ素化合物は、培養液中で容易にメチル3価ヒ素イオンとなり、未知のトランスポーターから細胞内に大量に侵入して強い毒性(アポトーシスの誘導)を示す事が明らかとなった。この毒性は細胞内グルタチオン濃度に依らず、細胞内で産生される活性酸素にも非依存的であった。また、メチル3価ヒ素イオンの細胞内流入は、生体レベルのグルタチオンや他のチオール化合物の添加で完全に阻害され、毒性も抑制された。以上より、ヒ素のメチル化が毒性を増す反応であるという証拠は得られなかった。
運動器慢性痛の発症機序の解明-生後発達因子の行動組織学的研究から-

神経損傷以外の慢性痛モデルとして、筋損傷による慢性痛モデルを確立した。このモデルにおいて3週齢(若齢期)処置では9週齢(成熟期)処置と異なり、慢性痛が発症しなかったことから、3週齢で完成していない部分が慢性痛発症に関与していることが示唆された。また、筋組織で処置急性期および慢性期において3週齢処置、9週齢処置で大きな差が見られなかったことから、末梢筋組織の損傷回復ではない他の要因の関与が伺えた。運動器障害をはじめとした神経損傷以外の原因で発症する慢性痛は、発症起点より空間的・時間的拡大を示す慢性広範囲痛を呈し、社会的に大きな問題となっている。そこで本研究では、運動器障害による慢性痛のメカニズム解明を進めるために、独自に開発した運動器慢性痛モデルを用いて、慢性痛の発症・維持要因を探る。特に、若齢期において慢性痛が発症しにくいことに注目し、生後の発達過程における何らかの要因が発症に関与している可能性が考えられることから、その要因を末梢および中枢から行動学的、組織学的に探っていく。それにより、運動器慢性痛のメカニズムの解明と効果的な慢性痛リハビリテーションの基礎の構築につなげる。本モデルでは急性期の末梢損傷組織が長期痛み行動を引き起こすトリガーとなる可能性が考えられるため、障害筋である下腿三頭筋の凍結切片を作成し、急性期と慢性期を時間軸として、それぞれの時期における筋組織での損傷像、再生像を解析する。また、本モデルでは障害部から離れた足底部(両側性)、さらに尾部まで痛みが拡がるため、脊髄における可塑性発現の時間・空間的な拡がりについても解析を進める。これまでに成熟(生後9週)処置で10週間以上も長期に続く慢性痛がみられたのに対し、若齢(生後3週)処置では慢性痛が発症しないのが認められている。そこで、若齢と成熟処置での違いが発症要因と関連すると考えられることから、障害筋の経時的変化を組織学的に検討し、痛み行動が極大となる処置後6週においては成熟、若齢処置のどちらでも同様に治癒が進んでいることが認められつつある。そこで本研究では、運動器障害による慢性痛のメカニズム解明を進めるために、運動器慢性痛モデルの開発と、そのモデルを用いて慢性痛の発症・維持要因を探る。特に、若齢期においで慢性痛が発症しにくいことに注目し、生後の発達過程における何らかの要因が発症に関与している可能性が考えられることから、その要因を末梢および中枢から行動学的、組織学的に探っていく。神経損傷以外の慢性痛モデルとして、筋を損傷することにより慢性痛が発症する運動器慢性痛モデルを確立した。このモデルにおいて9週齢(成熟期)処置では、処置後2週目から10週以上にわたり両側性に亢進が長期持続し、慢性痛発症が確認された。一方、3週齢(若齢期)処置では9週齢(成熟期)処置と異なり、慢性痛が発症しなかった。また、筋組織で処置急性期では筋線維の一部が変性・壊死し、壊死した筋線維の周囲には好中球、マクロファージが浸潤していた。慢性期では、LH処置後6週目では、ほぼ正常な筋組織像に近いが、まだ、中心部に核を持つ再生筋細胞が大小不同で多く残っていた。これらの所見は3週齢処置、9週齢処置で大きな差が見られなかった。今回、3週齢処置で9週齢処置と異なり、慢性痛が発症しなかったことは、3週齢で完成していない部分が慢性痛発症に関与していることを示唆しており、また、筋組織において、処置急性期および慢性期において3週齢処置、9週齢処置で大きな差が見られなかったことから、末梢筋組織の損傷回復ではない、他の要因の関与が大きいことが伺えた。