hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
断層心エコー図学の基礎としての胎生期と新生児期の心臓大血管断面解剖の研究

小児の先天性心疾患の診断において断層心エコー図は極めて有力であり、最近では新生児早期の重症先天性心疾患に対しては、症例によって、カテーテル検査などの侵襲的検査を行なわないで、心エコー図のみで非侵襲的に診断を確定して手術を行なう場合も増加する傾向にある。従って、断層心エコー図で、出来得る限り正確かつ詳細な診断が要求されるようになっている。そのためには、実際の断面解剖と照らし合わせて、断層エコー像の心臓の各部位を同定していくことは診断精度の向上へと繋がる。また先天性心疾患の胎内診断も行なわれるようになり、胎児心臓の胎児内での空間的位置関係、胎内での断面解剖などの基礎的研究が必須であった。これに対し、我々は昭和60年度には主にラットの新生仔を用い、昭和61年度には主にラットの胎仔を用いて断面解剖の研究を行なった。ドライアイスアセトンまたは液体窒素による全身急速凍結法で凍結させたラットを凍結ミクロトームを用いて任意の断面で切り、その断面を実体顕微鏡で観察して断層心エコー図の像と比較同定を行なった。その結果、ヒトとラットの種属間の相異はあっても、ラットの心臓断面を理解することは、ヒトの心臓断面の細部の同定を行なうのに極めて有力な情報を提供することになり、結果的にヒトの断層心エコー図について、細部まで解剖学的な同定が可能となった。また、ラット胎仔の断面解剖を理解することにより、ヒトの胎児心についても断面解剖を理解する手助けとなり、ハイリスク妊婦の胎児心エコーによって、完全型心内膜床欠損症を正確に診断することが可能であった。
民族舞踊習得のための学習者適応機能をもったマルチメディア教材の開発

本研究者らは、民族舞踊習得のために、コンピュータのマルチメディア機能をつかって、模範動作の反復、速度の調節、模範動作とのずれの修正などあたかも指導者と対面して学習しているかのような機能および音声認識システムによりコンピュータへのアクセスを自由自在に手放しでやれる機能などの学習者適応機能(「学習者が教材にあわせる」のではなく「学習者に教材があわせる」機能)をもったインタラクティブ実技学習教材システム(ハードウエア、ソフトウエア、コンテンツ)のプロトタイプを開発している。本研究ではそのプロトタイプシステムを実際の教育現場に普及できるよう、操作簡便性、可搬性、低価格化をはかり、実用システムの開発をおこなった。開発したシステムの概要は以下のとおりである。1.ハードウエアの基本構成は、パーソナルコンピュータ、DVDプレーヤー、ビデオカメラ、音声認識装置(ヘッドセット、ワイヤレスマイク等)である。2.ソフトウエアは、ウィンドウズのプラットフォームで、コンピュータと外部機器が動作することにした。また実技学習の際に学習者がコンピュータを手放しで操作できる音声認識機能を開発した。3.コンテンツはビデオレクチャー(日本人教師による講義)、テキストブック、実技学習の模範動作(外国人民族舞踊指導者)、民族舞踊鑑賞用映像である。それらは、すべてDVD-VideoとDVD-ROMのハイブリッド版DVD(デジタル多用途ディスク)に収録した。簡便で操作性の高い、実用水準にほぼ達するシステムが開発できた。本研究者らは、民族舞踊習得のために、コンピュータのマルチメディア機能をつかって、模範演技の反復、速度の調節、模範演技とのずれの修正などあたかも指導者と対面して学習しているかのような機能および音声認識システムによりコンピュータへのアクセスを自由自在に手放しでやれる機能などの高度学習者適応機能(「学習者が教材にあわせる」のではなく「学習者に教材があわせる」機能)をもった対話型実技学習教材システムのプロトタイプを開発している。本研究はそのプロトタイプにもとづいて、今日のパーソナルコンピュータの最新の技術を応用した簡易で安価なシステムの実用化をめざしている。本年度は以下の検討と開発を行った。1ハードウェアの構成について、さまざまな検討を実験的に行った。特に音声認識装置は、実用レベルの認識率をもつハードウェアとアプリケーションをしぼりこんだ。2ソフトウェアは、動画コントロールシステムの検討と3次元化の実用可能性と教材としての有効性について検討を行った。3コンテンツについては、DVD-ROMに収録するための収録および編集の方法論を確立するために、模範演技の一部を正面、左右、背面の角度からデジタル収録し、デジタル編集を試みた。4コンテンツ全体のオーサリングツールについても検討した。本研究者らは、民族舞踊習得のために、コンピュータのマルチメディア機能をつかって、模範動作の反復、速度の調節、模範動作とのずれの修正などあたかも指導者と対面して学習しているかのような機能および音声認識システムによりコンピュータへのアクセスを自由自在に手放しでやれる機能などの高度学習者適応機能(「学習者が教材にあわせる」のではなく「学習者に教材があわせる」機能)をもったインタラクティブ実技学習教材システムのプロトタイプを開発している。1ハードウェアのシステム構成は、パーソナルコンピュータ、DVD、ビデオカメラからなる、実用的で簡易でありながら高度な機能をもつものとした。2テキストブックとビデオ教材がすべてDVDで収録できるよう、DVD-VideoとDVD-ROMのハイブリッド版を使用することとした。テキストブックはHTMLおよびMPEG-2で、インターネット対応の学習教材としての汎用性をそなえる。ビデオレクチャーはDVD-Videoにより、従来のビデオにはないマルチアングル機能などを活かすこととした。このDVDをパソコンで自由自在にアクセスでき高度な学習者適応機能をそなえた、基本ソフトウェアの開発と検証をおこなった。3コンテンツについては、システムの機能の高度化にともない、追加収録、構成、編集を行いながら強化をつづけている。1.基本ソフトウェアについて、昨年度おこなった検証実験の結果を反映させた改良を加えた。また、DVDの特性を最大限活かし、より使いやすく学習効果の向上が期待できるよう、ソフトウェアの高度化を行った。2.基本ソフトウェア上で稼働するコンテンツ(教材)のプロトタイプを作成した。

この民族舞踊教材は、民族舞踊とそれを生み出した文化の総合的知識の習得のための「テキストブック」、学習者の音声によるリクエストコマンドにより、内容選択、速度調節、反復、静止、鏡像などをもちいて実技習得をする「リクエストコントロール」、講師による民族舞踊の解説と一流の演技者のいくつかの演目を鑑賞教材として収録した「レクチャー」から構成されている。「リクエストコントロール」および「レクチャー」で使用する素材については、ハードウェアシステムおよび基本ソフトウェアの機能の高度化に対応させるため、追加の映像収録を行った。3.新しく開発したDVDを用いたリクエスト・コントロールシステムを、実際に学習者が使用し、その実用性を検証するための試行実験を行った。
走査トンネル顕微鏡によるZhang-Rice一重項の直接的検証と高温超伝導の研究

本研究により得られた成果を以下にまとめる。1)Bi2212の一粒子スペクトルにおける低温(T<<T_c)エネルギー・ギャップ2Δ_0が、ホール濃度pの低下と共に単調に増大し、擬ギャップの発達が顕著となる温度T^*とほぼスケールすること、また、T^*は2Δ_0から得られる平均場のT_c(T_<co>)とほぼ一致することが明らかとなった。さらに、T_c(p),T^*(p)の値は系によって異なるが、多くの高温超伝導体においてpを最大のT_c(T^<max>_cを与えるホール濃度p_0で、T_c(p),T^*(p)をT^<max>_cで規格化すると、T_cとT^*およびT_<co>(∝2Δ_0)はそれぞれユニバーサルな曲線にほぼ載ることも明らかになった。このことは、高温超伝導体の擬ギャップと超伝導が一体の現象であることを示しており、超伝導転移の機構を考える上で重要な成果である。2)STSにより、La214における擬ギャップの存在が始めて明らかとなった。また、電子比熱や磁化率の測定から、T^*はLa214でもBi2212と同様T_<co>とほぼ一致することが明らかになった。3)La214における磁化率の磁場依存性と電子比熱の温度変化の測定から、超伝導臨界揺らぎはT_c近傍のT^*よりかなり低温(T_cの2割程度高温)で発達し始めることが明らかになった。擬ギャップの起源として一重項(電子)対の形成が考えちれているが、本研究における超伝導臨界揺らぎに関する結果は、T^*付近から形成されると思われる一重項対の集団運動におけるコヒーレンスがT^*より十分低温のT_cの近傍で発達することを示しており、超伝導転移の機構を考える上で興味深い成果である。4)Bi2212とLa214両系で、k_BT_cpΔ_0の関係が成立すること、すなわち、T_cを決めるエネルギー・スケールがpΔ_0となることが明らかにされた。本研究では、以上の研究成果を基に超伝導転移の機構も考案された。本研究は、高温超伝導の発現と密接に関わる低ホール濃度における電子系の異常を次の2点に焦点を絞って調べることを目的とする。1)ホール濃度の異なるビスマス系銅酸化物において超伝導に本質的なCu-O面のSTM原子像観察を行い、低濃度におけるCu3d電子の局在性とZhang-Rice一重項状態の存在の是非を調べる。2)トンネルスペクトルのホール濃度依存性と温度変化を詳細に測定し、低濃度において超伝導転移温度T_Cのかなり高温T^*から発達する擬ギャップの原因を調べる。今年度は、擬ギャップの起源に関して次のような興味深い結果が得られた。ii)この超伝導ギャップの大きさ2Δ。から予想される平均場の超伝導転移温度T_C^<MF>、或いは、平均場RVB理論で期待されるスピンチャンネルにおける一重項対形成温度は、擬ギャップが開き始める温度T^*とほぼ一致する。iii)T^*以下の電気抵抗が超伝導の前駆現象のように振る舞うことも明らかになった。

以上の結果は、超伝導に転移する十分高温から既にインコヒーレントな何らかの一重項対が形成されていることを示唆するものであり、超伝導の発現機構を理解する上で極めて重要な知見と考えられる。本年度の研究では、La系銅酸化物(La214)とBi系銅酸化物(Bi2212)における超伝導ギャップの大きさ2Δ_oが走査型トンネル顕微鏡(STM)によるトンネル分光(STS)がら調べられ、高温超伝導の発現機構と密接に関わる次の2つの点が明らかになった。1)超伝導転移温度T_cと超伝導ギャップの大きさ2Δ_oの関係La214のT_cと2Δ_oは、Bi2212に比べて半分程度であるが、両系のT_cと2Δ_oをそれぞれの系における乙の最適(高)値(T^<max>_c)で規格化し、さらに、キャリアー濃度pをT^<max>_cを与える値p_oで規格化すると、乙と2Δ_oはそれぞれ一本の曲線にほぼ載ることが分かった。このことは、T_cと2Δ_oの間に一定の関係があることを示している。実際、2Δ_oとk_BT_cの比2Δ_o/k_BT_cをpに対してプロットしてみると、1/pの関数におおよそフィットすることが分かった。つまり、k_BT_c2pΔ_oという関係が成り立つ。これは、T_cを決めるファクターとしてペアリング相互作用の強さと関係する超伝導ギャップの他にキャリアー濃度も重要であることを示しており、高温超伝導体における擬ギャップ状態(おそらく、何らかの一重項状態)から超伝導状態への転移の機構を考える上で非常に興味深い成果である。2) La214における擬ギャップ高温超伝導研究では擬ギャップ形成とペアリング相互作用との関連性がホットな問題となっているがLa214では擬ギャップの存在がまだ明らかになっていなかった。今年度の申請者らの研究で、La214に於いても擬ギャップの存在を示唆するSTSの結果が得られたが、その擬ギャップが発達する温度Pははっきりしなかった。これまで申請者らは、Bi2212におけるSTSの実験から擬ギャップ温度T^*が2Δ_oから見積もった平均場の転移温度T_c、或いは、平均場RVB理論で期待される対形成温度T_<RVB>とほぼ一致することを明らかにし、擬ギャップの起源が超伝導と密接に関係することを指摘してきた。今後、La214における擬ギャップ温度T^*もT^<MF>_c或いはT_<RVB>に匹敵するすることを明らかにしていきたい。本年度の研究では、高温超伝導発現機構の解明と密接に関係する以下の問題を精力的に調べた。1)La系銅酸化物(La214)における擬ギャップの研究高温超伝導体の擬ギャップはBi系銅酸化物(Bi2212)において発見され、他の高温超伝導体においても擬ギャップが存在するかどうかが大きな問題となっていた。本研究では、走査トンネル分光(STS)とポイント・コンタクト型トンネル分光(アルゴンヌ国立研究所との共同研究)により、La214における擬ギャップの存在が明らかとなり、擬ギャップは高温超伝導体に共通する性質であることが示された。また、電子比熱や磁化率の測定から、擬ギャップの発達が顕著となる温度(擬ギャップ温度)T^*は、La214でもBi2212と同様、超伝導状態におけるギャップの大きさ2【right filled triangle】_0から予想される平均場の超伝導転移温度T_<co>とほぼ一致することが明らかになった。これは、擬ギャップの起源が超伝導と密接に関係すること示しており、高温超伝導の研究分野における重要な成果である。2)La214における超伝導臨界揺らぎLa214における磁化率の磁場依存性と電子比熱の温度変化の測定から、超伝導臨界揺らぎはT_c近傍のT^
超高速マルチニューロン画像法を用いて神経演算システムに迫る

海馬CA3野において観察される同期発火活動について、その発生メカニズムの究明を行った。本研究ではシナプス結合パターンを同定することにより、同期発火を生み出す回路基盤を明らかにした。本成果は論文として纏められ、Proc Natl Acad Sci USA誌に掲載された。次いで、これらの同期発火がポストシナプス細胞のシナプス入力としてどのように反映されているのかを検討した。通常用いられるパッチクランプ記録法では、シナプス活動の時系列パターンしか観察することはできない。ここでは樹状突起上における入力の空間パターンについても追及するため、カルシウムイメージング法を用いてシナプス活動を可視化しその時空間パターンを観察することに成功した。結果として、同期入力は樹状突起上の局所にクラスター化して生じることを見出した。このクラスター入力は興奮性ニューロンにおいて見られ、一部の抑制性ニューロン種においては観察されなかったことからニューロン種特異的な入力の空間特性であることが示唆される。またNMDA受容体の阻害薬を慢性処置した際にクラスター入力が消失したことから、本特性はシナプス可塑性に基づくシナプス回路形成によって支持されていると考えられる。本成果はシナプス活動の空間パターンを解明した初めての報告であり、ニューロンの情報演算機構を理解する上で重要な布石になると期待される。脳波を代表とする同期活動は、脳において恒常的に観察される神経活動である。近年、同現象は多数の神経細胞の協調活動として、感覚情報の処理や記憶形成過程において重要な役割を果たすことが示唆されている。本研究ではラット海馬より作成した培養スライス標本を用いて、高速多ニューロン画像法により数百におよぶ神経細胞群の自発活動パターンを記録した。その結果、細胞間の同期性は一様に分布するのではなく、特定の細胞ペアおよびグループにおいて高頻度に同期発火することを見出した。続いて、同期活動発生メカニズムを解明するべく、同時に複数の細胞から細胞内記録を行った。2細胞間のシナプス入力の類似性を検証した結果、より発火同期性の高い細胞ペアは共通した興奮性シナプス入力を受けることを明らかにした。また抑制性入力については同新注の大小に関わらず、すべての細胞間で一様に高い相関が観察された。以上の結果を回路構造の側面から検証するため、我々は新規のシナプスマッピング法を開発した。従来シナプス結合の有無は、同時に2細胞から細胞内記録を行うことで判別されたが、ネットワークレベルで多細胞間の結合パターンを明らかにすることは困難であった。上記手法は細胞内記録法と多ニューロン画像法を組み合わせることで、同時に多細胞間のシナプス結合パターンを再構築することが可能である。再構築されたシナプス結合パターンと細胞間の同期性を比較したところ、同期性の高いペアはより高確率で共通したプレシナプス細胞からの投射を受けることがわかった。またそれら共通プレシナプス細胞間の同期性が高いことも見出した。以上より、細胞間の同期発火は、それらに共通したプレシナプス細胞が同時に発火することで、発火閾値を超えうる入力を受けて惹起されるものと考察される。以上の研究成果は、現在論文として投稿準備段階にある。前年度に引き続き、海馬CA3野の神経細胞群において観察される同期現象について解析を進めた。とりわけ同期活動を含む回路活動と、シナプス結合を基盤とした内部構造との関係を検証するため、新規に開発したROTing法を用いて研究を行った。本手法は、マルチニューロン画像法を応用した大規模なシナプスマッピング技術であり、同時複数細胞間のシナプス結合を同定することが可能である(Sasaki et al.,2009)。本手法によって細胞間のシナプス結合パターンを同定し、回路構造から活動パターンの再解釈を行った。これら同期活動解析の結果は論文として投稿され、現在リバイス改定中である。次いで、本研究の延長として神経細胞樹状突起上での自発活動の観察を行った。まず実験の進行にあたり、樹状突起から効率的にパッチクランプ記録を行うために、蛍光パッチクランプ電極の開発を試みた(Ishikawa et al.,in press)。電極先端を蛍光物質で被覆することで、蛍光イメージング下において樹状突起や軸索といった微小な構造体からの記録が可能となった。本発明は、現在特許申請中である。
新規核内mRNPによる遺伝子発現制御機構

低温ショックドメインタンパク質AtCSP3と核内で複合体を形成する核型ポリA結合タンパク質PABN1の機能解析を行った.PABN1はCSP3と核スペックルで相互作用し,低温,乾燥,塩などのストレス耐性の獲得に働いていることが明らかとなった.また,それ以外にも花成や花茎の分枝の制御にも関わることが示された.また,SPL4が新たにこの複合体に含まれることが示唆された.低温ショックドメインタンパク質AtCSP3と核内で複合体を形成する核型ポリA結合タンパク質PABN1の機能解析を行った.PABN1はCSP3と核スペックルで相互作用し,低温,乾燥,塩などのストレス耐性の獲得に働いていることが明らかとなった.また,それ以外にも花成や花茎の分枝の制御にも関わることが示された.また,SPL4が新たにこの複合体に含まれることが示唆された.FLAG-タグをN末端に付加したAtCSP3遺伝子を構築し,Agrobacteriumを介して,シロイヌナズナにフローラルディップ法で形質転換した.形質転換体はT1世代において,カナマイシン耐性で選抜し,T2世代で分離を解析し,導入遺伝子をホモにもつ系統を分離した.次に,FLAG-AtCSP3,を過剰発現する形質転換体の総タンパク質より抗FLAG抗体を用いた免疫沈降を行った.種々の条件で免疫沈降を行ったが,十分量の相互作用タンパク質バンドを検出することはできなかった.今後は,Anti-FLAGビーズを用いたアフィニティー精製等新たな分離手法の検討およびをFLAG-AtCSP3より多く生産する高発現系統のスクリーニングを行うなど,実験系の再構築が必要である.AtCSP3とPABNlの相互作用部位に関する解析は,酵母ツーハイブリッド法および2分子蛍光相補性検定法を用いて行った.PABNをN末端側領域とRRM-RNA結合ドメインを含むC末端側領域に分けそれぞれをベイトとしてAtCSP3との相互作用をHis栄養要求性並びにβ-ガラクトシダーゼ活性の測定により評価した.PABN全長を用いた場合は,相互作用が両アッセイにおいて検出されたが,ドメイン毎に分割した場合は,N末端側,C末端側いずれもAtCSP3と相互作用を示さなかった.従って,N末端側とC末端側の両方でAtCSP3と相互作用すると考えられた.シロイヌナズナのPABN1のストレス応答における機能をあきらかにするため,ストレス応答発現を解析したところ,転写産物やタンパク質が低温、塩、乾燥、ABAなど様々なストレス条件下で蓄積することが判明した。次に,ABRCストックセンターより入手したPABN1(At5g51120)のT-DNAが挿入ノックアウト変異体を用いてストレス耐性の検討を行った.低温馴化植物体の一12°C凍結処理後生存率で比較した場合野生株が91.6%であるのに対して,pabn1-1変異体では33.3%であり,耐凍性が低下していることが明らかとなった.また,耐塩性においても,190mMNaCl含有培地における生存率が野生株の96%に対してpabn1-1変異体では80%と低下していた.次においては耐凍性と耐塩性においてけるストレス耐性を検討した.AtPABN1遺伝子の欠損株pabn1-1は野生株と比較して耐凍性及び耐塩性が著しく低下していた。次に,カリフラワーモザイクウィルス(CaMV)35Sプロモーターを付加したPABN1のconstructをアグロバクテリウムを介して導入し、形質転換体を作出した。ホモ系統の過剰発現株を選抜後,Semi-quantitative RT-PCRを行い、PABN1遺伝子が過剰発現していることを確認した。過剰発現体の耐凍性を調べたところ,一14°C凍結処理後の生存率が野生株では0%であるのに対して,過剰発現株では33%であった。また耐塩性試験では200mMNaCl含有培地での生存率が野生株の0%に対して,3つのラインで12-60%の生存率を示した.更に乾燥耐性についても顕著な向上が観察された.PABN1の生理機能を解明するため,今年度は,PABN1過剰発現体が示す形態上の表現型について解析した.興味深いことにPABN1oxは花茎の分枝に顕著な表現型を示した.その特徴は,主茎が短く,側茎が異常に増加するというものであった.このような特長はシロイヌナズナのmaxと呼ばれる一連の変異体の表現型と酷似していた.max変異体はSLの生合成或いは認識の変異体であることが最近の研究で明らかになっている.そこで,PABN1oxはSL生合成の欠損或いはSL認識,シグナル伝達の欠損のいずれかであろうと仮説を立て,まずSL生合成遺伝子の発現を調べた.MAX1遺伝子の発現は野生株,PABN1ox間で殆ど変化なかったが,MAX4の発現がPABN1ox株で大きく上昇していた.MAX4の発現上昇はSLレベルの上昇を示唆するが,SLが花茎分枝の抑制因子である点を考えるとPABN1oxが示す多分枝の表現型と矛盾する.また,MAX4はSLによりフィードバック制御を受けるが,MAX1は受けないことが知られている.これらの点を踏まえて,PABN1oxではSLの生合成ではなく,シグナル伝達機構に欠損を生じていると考えられた.SLの受容に関わるMAX2の発現は正常であったことから,その下流がPABNの作用部位ではないかと推定された.

また,PABN1と複合体を形成するタンパク質を酵母ツーハイブリッド法によりスクリーニングしたところ,複数の相互作用因子が同定された.この中でSquamosa promoter binding protein-like 4 (SPL4)に着目した.SPL4はAtCSP3との相互作用因子としても同定されており,AtCSP3-PABN1-SPL4からなるmRNP複合体の形成が示唆された.今後はこのSPL4の機能解析と複合体としてどの様な調節を受けるのかを明らかにする必要がある.PABN1の機能解析で予想通りストレス耐性の表現型が観察された.24年度が最終年度であるため、記入しない。予定通りに研究をすすめる.24年度が最終年度であるため、記入しない。
PIポリアミドを用いた血中循環腫瘍DNA濃縮による高感度遺伝子型判定法の開発

近年、血液中の循環腫瘍DNA(ctDNA)を用いたがんのクリニカルシークエンスが注目されている。しかし、無細胞遊離DNA (cfDNA)中のctDNAは存在比が微量であるため、ctDNA解析の早期診断への応用は困難とされている。我々は、標的遺伝子のDNA配列に特異的に結合する化合物複合体を用いることで、血液中に存在する微量ctDNAを濃縮する技術を開発した。本研究において、この濃縮法の臨床的有用性を検証する。
直系家族制から夫婦家族制への移行に関する社会学的研究

今年度は「研究実施計画」にしたがって、主観的家族の範囲と老親同居・扶養・介護意識の関連についての分析を行い、数理社会学会において報告を行った。報告の内容は次のとおりである。全国家族調査委員会による、NFRJ-08パネルデータを用いて分析をおこなった。同居、扶養、介護についての規範意識としてNFRJの調査項目で使用した質問文は以下の3つである。「親が年をとって、自分たちだけでは暮らしていけなくなったら、子どもは親と同居すべきだ」「年をとって収入がなくなった親を扶養するのは、子どもの責任だ」「親が寝たきりなどになった時、子どもが介護するのは当たり前のことだ」質問項目に対する回答は「そう思う」「どちらかといえばそう思う」「どちらかといえばそう思わない」「そう思わない」の4件尺度である。分析の結果、義母、父、母を家族と思うことが老親に関する意識との関係において重要であり、義父を家族と思うかどうかはあまり関係ない。義母を家族であると思っていることが扶養すべき、介護すべきにプラス。夫に兄がいるかどうかは効果がない。若い世代より、以前の出生コーホートが伝統的意識をもっていない、ということが明らかとなった。さらに、主観的家族の範囲が何を意味しているのかについての先行研究と直系家族制、夫婦家族制についての先行研究、老親に関する意識の先行研究の整理を行い、分析結果とともに論文にまとめているところである。研究計画に記載していた分析の一部を行い、学会報告を行ったが、新聞記事の分析が遅れているため。今年度は最終年度であるため、これまでに収集したデータや学会報告した内容を整理し、論文にまとめていく。アウトプットを中心に行っていきたい。今年度は、計画どおり、主観的家族の範囲についての分析、老親扶養・介護に関する規範の分析および新聞のおくやみ・訃報データの収集を行った。NFRJ-08パネルデータのロングデータを用いて、主観的家族の範囲と老親扶養・介護に関する規範の分析を行い、日本社会学会で報告を行った。報告の内容は、直系家族制と夫婦家族制の理念の整理、理念と現実(実態)の関連、直系制家族と夫婦制家族との関連、家族の範囲をどのように決めればよいのかについて(森岡1993)に依拠しながら整理した。森岡(1993)では、同居しない家族の範囲について5つの条件を考慮しているが、そのうち5つ目の「当事者による単一家族の認知」が必要十分条件であるとみなし、分析を行った。分析の結果明らかにしたことは、以下のとおりである。全体の傾向としては、男性、女性ともに、若い出生コーホートほど実父母を家族であると回答する割合が高い。男性は配偶者の親についても同様の傾向があり、年齢が若いほど夫婦家族制を支持しているわけではない。同居していれば家族と回答する傾向がある。女性は扶養はするが、同居、介護はしないという回答割合が多い。対して男性は女性に比べ、直系家族制につながる、親との同居、扶養、介護についての肯定意識をもつ割合が高い。新聞おくやみ欄のデータについては、奈良新聞と京都新聞の電子版の購読契約を行い、亡くなった方の情報と喪主データを収集した。データの整理にあたっては、学生アルバイトを雇用して行った。京都新聞は544件、奈良新聞は60件でのデータが得られた。研究計画において想定していた課題すべてに取り組むことができたため。直系制家族、夫婦制家族の理念の支持層の分布を全国規模のデータで明らかにしたうえで、それらが、同居、扶養、介護についての規範意識にどのように影響を与えているのかを分析し、学会発表を行う。さらに、地方紙掲載のおくやみ欄の分析により、祭祀の継承の表出としての喪主が誰なのかを分析し、家族内における性別役割分担の頑健性の理由の解明へとつなげる。その結果を論文として発表する。
シグナル制御因子Spred/Sproutyの血管リモデリングにおける機能解析

Ras-Raf-MAPキナーゼ経路は細胞外刺激に応じて細胞増碓、細胞分化、細胞死を調節する中心的な細胞内シグナル伝達経路として理解されている。PDGF, Angiotensin II, VEGFやFGF2などの血管リモデリングの病態において重要な増娃因子はRas-Raf-MAPキナーゼ経路を活性化する。Sprouty/SpredファミリーはRafに会合しRas-Raf-MAPキナーゼ経路を特異的に負に制御する遺伝子として同定された。Ras-Raf-MAPキナーゼ経路の異常な活性化は、例えば発癌など、生体にとって危険信号である。したがって、この経路の制御機構は極めて重要であるが、Sprouty/Spredの心血管病における生理機能や病態との関連もほとんど不明のままである。本研究課題において以下の実験を行い以下の結果を得ることができた。血管内皮細胞、平滑筋細胞をAngiotensin II, FGF2,VEGFで刺激することによって、Sprouty/Spred nmRNAの誘導が検出された。また、高脂脂肪食を負荷したApoE遺伝子欠損マウスの動脈硬化巣において、MAPキナーゼ経路を活性化とSprouty/Spred遺伝子の誘導が検出された。現在、動脈硬化マウスであるApoE遺伝子欠損マウスとSprouty/Spred遺伝子のダブルノックアウトマウスを作成中であり、今後、動脈硬化の発症進展におけるSprouty/Spred遺伝子の役割が明らかとなるであろう。また、ラットバルーン傷害モデルにSprouty/Spred遺伝子を導入し、内膜肥厚に対する治療効果についても検討する予定である。(1)AGIIとVEGFは血管平滑筋におけるSprouty/Spred遺伝子を誘導するラットの血管平滑筋をAGIIとVEGFで刺激し、Sprouty/Spred遺伝子の発現をRT-PCRで調べた。ファミリのなかで、Spred1, Sprouty2, Sprouty4がAGIIとVEGF刺激によって誘導された。血管内皮細胞HUVECでも同様の結果が得られた。ApoE欠損マウスとSpred1もしくはSprouty2欠損マウスの掛け合わせ開始し、ダブルノックアウトの完成が間近である。来年度はこれらのマウスを用いて動脈硬化進展におけるSpred/Sprouty遺伝子の役割について明らかにする。
受精前後の胚乳発生を制御する新しい鍵転写因子とエピゲノム制御の包括的理解

平成30年度は平成29年度までに解析していた受精非依存的に胚珠が肥大するキメラリプレッサーの元となる転写因子のうち、特にESP3に着目した研究を遂行した。まず、ESP3キメラリプレッサー植物体の胚珠肥大メカニズムを明らかにするため、Pro35S:ESP3SRDXの未受精で肥大した胚珠をサンプリングし、トランスクリプトーム解析を実施したところ、Pro35S:ESP3SRDXの未受精で肥大した胚珠における遺伝子発現パターンは野生型の受精後の胚珠と類似していることがわかった。さらに個別の遺伝子発現について解析を行ったところ、受精後に発現する糖代謝関連遺伝子がPro35S:ESP3SRDXにおいては未受精胚珠でも発現していた。そこで、Pro35S:ESP3SRDXの未受精胚珠の糖分析を行ったところ、受精後に蓄積するヘキソースやスターチなどが未受精でも蓄積しており、この糖の蓄積が胚養育能力と関連している可能性が考えられた。一方で、ESP3の本来の機能を明らかにするため、ESP3のゲノム領域(5'上流3 kbpから終止コドンまで)にGFPを融合したコンストラクトを導入した胚珠を解析した結果、ESP3は受精後の胚乳で特異的に発現することがわかった。しかし、母由来・父由来ゲノムからの発現を確認したところ、ESP3は両親由来のゲノムから発現することがわかり、直接インプリンティングされている遺伝子ではないことが示唆された。また、ESP3は過剰発現時にも未受精での胚珠肥大を誘導したことから、胚珠発生をポジティブに制御する因子であることがわかった。これらの結果から、ESP3は本来、受精後の胚乳で発現し、胚珠への糖蓄積をポジティブに制御することで、種皮の形成・胚の養育に関与する因子である可能性が示唆された。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。平成29年度は受精非依存的に胚珠が肥大するキメラリプレッサーを複数単離し、これらにおいて機能的な胚乳が発生しているかを多角的に評価した。機能的な胚乳は胚を養育する能力と、種皮発生を誘導する能力を併せ持つことが知られている。我々はまず、未受精での種皮の発達を確認するため、3種の胚珠肥大キメラリプレッサー(Pro35S:ESP1aSRDX, Pro35S:ESP2SRDX, Pro35S:ESP3SRDX)の未受精胚珠のバニリン染色を行った。バニリン染色は、種皮の発達に伴って蓄積するプロアントシアニジンを赤色に呈色する。Pro35S:ESP1aSRDX, Pro35S:ESP2SRDX, Pro35S:ESP3SRDX)の未受精胚珠はいずれも赤色の呈色を示し、未受精でのプロアントシアニジンの蓄積が検出され、未受精で種皮の発生が明らかとなった。次に我々は、各胚珠肥大キメラリプレッサー植物体の詳細な解析を行うため、ライン化を試みた。胚珠肥大の表現型が強い胚珠肥大キメラリプレッサー植物体においては稔性が低下する傾向があったが、ProESP1a:ESP1aSRDX, Pro35S:ESP3SRDXについて良好なラインを得ることに成功した。そこで次に、胚を養育する能力を評価するために、胚珠肥大キメラリプレッサーラインを母体とし、精核が一つしかできないkokopelli変異体花粉を交配して、Single fertilization実験を行った。

その結果、野生型を母個体とした場合に単独で受精した胚は球状型で発生を停止するのに対して、ProESP1a:ESP1aSRDX,もしくはPro35S:ESP3SRDXを母個体とした場合に単独で受精した胚は初期心臓型胚まで生育しうることがわかった。これらの結果から、キメラリプレッサーによって肥大した胚乳が、胚養育能力を有していることが示された。胚乳は胚の養育を担う種子形成に必須の組織であり、受精まではその発生を休止している。この発生を制御する「鍵」の1つがエピジェネティック制御であることはよく知られているが、関連転写因子については報告がない。本研究では、転写因子の機能抑制法であるキメラリプレッサー法を用いて単離した受精非依存的な胚珠肥大を誘導するキメラリプレッサー植物体の機能解析を通して、胚乳発生に対する転写因子についての関与に関する知見を得ることを目的としている。平成29年度には、3種のキメラリプレッサー植物体における未受精での種皮発達を観察し、2種のキメラリプレッサー植物体の未受精胚珠中で単独受精した胚が心臓型まで発生しうることを確認した。これらの結果は、未受精で肥大したキメラリプレッサー胚珠の中の胚乳(もしくは肥大した中央細胞)が、ただ肥大しているのみではなく、種皮形成、および、胚養育に関するなんらかの機能を習得していることを示しており、今後の研究において、各キメラリプレッサー植物体の胚珠肥大メカニズムや、エピジェネティック制御との関連性について解析を進める上で非常に重要な基礎的知見を得たと考えている。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。まずは、各キメラリプレッサーがどのようなメカニズムで受精非依存的な胚乳発生を誘導するのかを明らかにするため、胚珠トランスクリプトーム解析を実行する。その結果から、各キメラリプレッサーのターゲット因子を推定し、エピジェネティック制御やその他の胚乳発生因子などとの関連性について知見をえる。また、未受精での胚珠肥大キメラリプレッサーの元となっている転写因子の本来の機能を明らかにするため、ESP1a, ESP2, ESP3の発現時期とタンパク質の局在解析などを行う。
薄膜構造と光特性の融合による温感型発光性鎖状希土類錯体開発

本研究課題の目的は、独自のコンセプトにより設計・合成した希土類錯体をユニットに用い、その分子制御により薄膜化した発光性融合マテリアルとして実現させることである。具体的には、結合軸を設計した独自の配位子と種々の希土類イオンをユニットとし、これを発光色を加味したリンカーで融合した鎖状の発光性希土類融合マテリアルの開拓を試みた。明らかになった点は主に2点である。(1)一連のランタニドを中心金属に有するヘリカルな希土類錯体(LnL, Ln=Nd, Eu, Gd, Tb and Ho)の光基礎物性を明らかにした。さらに、これらを発光ユニットとし、ベンゼンジカルボン酸bdcで連結した鎖状錯体を合成し、構造解析を大型放射光実験施設SPring-8 BL02B2で行った。この鎖状錯体は高い規則性を有する。EuLとTbLを50%ずつ混合した系は、室温でEuLのみが赤色発光し、低温でTbLとともに黄色発光する。すなわち温感特性を発光色でセンシングできる材料である。これを基に、アントラセンジカルボン酸An-dcでの架橋を試みた。このAn-dcは、紫外光励起によりアントラセン骨格の青色発光を示す。EuLとAn-dcは鎖状構造をとる。しかし、この系はいずれの場合でも発光しない。これは、配位子の励起状態からの緩和とアントラセン部位の遷移が競合する系であることが分かった。(2)先の知見を基に、新学術領域内であらたな発光性合物の創成とその発光特性評価に挑戦した。たとえば、会合性を有する三回対称性有機分子を母骨格とし、その液晶性と発光発現、およびテルビウムを含む低分子ヒドロゲル形成と発光発現について、領域内共同研究として論文を報告するまでに至った。26年度が最終年度であるため、記入しない。本研究課題の目的は、溶液中で構造および光機能が安定な希土類錯体をユニットに用いた発光性融合マテリアルの創成である。具体的には、配位子と種々の希土類イオンの融合により温度やイオンに応答して発光状態(発光色・偏光性)を変化させる環境応答型発光性希土類融合マテリアルを創成する。一連のランタニドを中心金属に有するヘリカルな希土類錯体(LnL, Ln=Nd, Eu, Gd, Tb and Ho)の合成とその光基礎物性を論文としてまとめた。EuLおよびTbLを発光ユニットとし、ベンゼンジカルボン酸で連結した鎖状錯体の合成法を基に、アントラセン(An)ジカルボン酸An-dcでの架橋を試みた。このAn-dcは、紫外光励起によりAn骨格の青色発光を示す。EuLとAn-dcの鎖状構造であり規則性を伴っていることは、IR, XPSおよび放射光XRDで確認した。しかし、この系ではEuLもAn-dcも室温、77 Kのいずれの場合でも発光を示さない。TbLでも同様の化合物を合成することができたが、これらも発光しない。この興味深い現象は、本来の目的と拮抗しているように見受けられるが、消光の原因を明らかにすることはより強発光性の化合物を設計するための重要な結果である。An骨格の電子遷移は、π共役の単軸方向の遷移モーメントLaが発光に寄与する。An-dcは、9, 10-位にカルボン酸を有し、LnLとはこのカルボン酸がカルボキシレートとして金属イオンと結合する。すなわち、Anの単軸方向に金属イオンが結合すると、電子構造は大きく変化し、発光を司るLa遷移よりも低エネルギー側に発光に関与しない遷移が新たに生じる可能性が示唆される。これを証明するために、ナフタレン(Np)骨格を有する同様のリンカーを用いた。その結果、Npに由来する発光とLnの発光が連結鎖型に錯形成しても保持された。

(2)先の知見を基に、新学術領域内であらたな発光性合物の創成とその発光特性評価に挑戦した。たとえば、会合性を有する三回対称性有機分子を母骨格とし、その液晶性と発光発現、およびテルビウムを含む低分子ヒドロゲル形成と発光発現について、領域内共同研究として論文を報告するまでに至った。26年度が最終年度であるため、記入しない。1年目は粉末状態での発光機構の解明を目的としており、合成と発光スペクトル測定からこの目的を達成したため、現在この論文を投稿準備の段階であるため、おおむね順調に進展しているといえる。2年目は、粉末の情報を基盤として、発光性鎖状分子を薄膜化させる。これにより偏光発光特性を促し、発光に付加価値のある融合マテリアルの創成を目指す。具体的には、疎水処理あるいは親水処理を施した無蛍光の石英基板に、スピンコート法や浸漬法で鎖状錯体を固着させる。いずれも湿式膜法であり、環境負荷が低減されることが期待される。ただし、濃度調整等に試行錯誤を必要とするため、今年度の前半は、溶液調整の基準化を試みる。薄膜の構造は、大型放射光実験施設SPring-8を用い、放射光XRDパターンから短い距離における秩序性を考察する。またX線光電子スペクトルやラマン分光なども用い、金属錯体ユニットと、リンカー分子の結合の様相についても考察を試みる。発光スペクトルは、既存の高精度な装置に偏光子を取り付けて直線偏光発光の観測を試みる。構造と発光スペクトルの相関から、分子配列や鎖状錯体の基板に対する傾きなどを考察し、再度薄膜調製の条件にフィードバックし、本来の目的を目指す。
ヒト及び脊椎動物の味細胞における味覚刺激情報のトランスダクションの分子機構

1.カエル味細胞の受容膜にはカチオンチャネルとアニオンチャネルが存在する。NaCl刺激のNa^+は前者を、Cl^-は後者を通り細胞内に入る。しかしCl^-の透過性は低く脱分極が発生する。2.カエル味細胞幕に80pSと40pSのK^+チャネルが存在する。80pSK^+チャネルは電位及びCa^<2+>依存性であるが、40pSK^+チャネルは両方に非依存性である。40pSK^+チャネルの閉口にはcAMP、プロティンキナーゼAが関与する。両方のK^+チャネルは受容膜と樹状突起膜に高密度に存在する。3.マウス味蕾内味細胞の受容膜だけにアミロライドを与えると外向き電流が生じるが、基底外側膜に与えてもこの電流は生じない。アミロライド感受性Na^+チャネルは、受容膜にだけ存在する。4.スナネズミの味細胞の甘味刺激変換には2つの経路が存在する。糖類刺激の変換にはセカンドメッセンジャーのcAMPが関与し、非糖類刺激の変換にはIP_3が関与すると思われる。5.ショ糖またはNaCl刺激に対してヒト茸状乳頭の味蕾内細胞のCa^<2+>濃度変化を調べた。味刺激が違うと味蕾内のCa^<2+>変化の起こる部位は異なり、各味細胞の反応性は異なることを示す。1.ウシガエル味細胞に存在するイオンチャネルの種類及び分布の様相を、パッチクランプ法のcell attachedパッチ記録、inside-out・outside-outパッチ記録で調べた。2.80psと40psのK^+チャネルを見い出した。前者の開口確率は細胞内液のCa^<2+>に依存して増大した。また膜電位に依存してチャネルの開口確率は変化した。40psのK^+チャネルの開口確率は、細胞内Ca^<2+>濃度及び膜電位に依存して変化しなかった。但しATP存在下でのcAMPによってチャネル活動は抑制された。3.20psのCl^-チャネルを見い出した。このチャネルはCl^-チャネルブロッカーのSITSで抑制された。4.非選択性の30psカチオンチャネルが、ウシガエル味細胞膜に存在し、Na^+、K^+、Cs^+もほぼ同じように透過させた。5.80ps K^+チャネルは味細胞の受容膜とデンドライト膜に分布、40ps K^+チャネルは味細胞全体に分布するが密度は受容膜とデンドライト膜で高かった。Cl^-チャネルとカチオンチャネルは味細胞膜全体に分布するが、分布密度はどこでも低い。6.スナネズミの単離味細胞をホールセル記録法で調べ、サッカリンのような一群の甘味は、外向きK^+電流を抑制するが、トリプトファンのような他群の甘味は、K^+電流を増大させることを見い出した。スナネズミの舌味細胞の甘味刺激変換機構を調べた。酵素処理により舌の茸状乳頭の味蕾から単離した味細胞を使用した。イオン流の記録はホールセルのパッチクランプ法による。保持膜電位-60mV下で、脱分極性パルスで誘発される味細胞の外向きK^+電流は、10mMサッカリンNaで刺激すると抑制されるが、D-トリプトファン刺激で増強した。同様に、外向きK^+電流は、5mM cpt-cAMPの外液投与で抑制され、IP_3の細胞内投与で増強した。D-トリプトファンやIP_3の投与中には味細胞は過分極を示した。このような事実は、サッカリンNa刺激中セカンドメッセンジャーのcAMPが産生され、K^+チャネルをブロックするために外向きK^+電流が抑制されることを示唆する。逆に、D-トリプトファン刺激中セカンドメッセンジャーのIP_3が産生され、細胞内部からCa^<2+>が遊離しCa^<2+>依存性K^+チャネルを活性化して、K^+が流出するためにK^+電流が増大することを示唆する。

外向きK^+電流は、糖応答の阻害剤のグルマリンをサッカリンNaに加えると抑制されなくなるが、D-トリプトファンに加えても増強は維持された。単離味上皮を用い、味刺激中の味蕾細胞内Ca^<2+>[Ca^<2+>]_iの挙動をフラ2蛍光法で分析した。Ca^<2+>を含有する100100mM蔗糖液で刺激すると[Ca^<2+>]_iは有意に増大したが、無Ca^<2+>の蔗糖液では変化しなかった。しかし、10mM D-フェニールアラニン刺激の場合、外液中にCa^<2+>が無くとも[Ca^<2+>]_iは有意に増大した。このような結果から、甘味刺激変換には少なくとも2経路が存在するといえる。1つは、糖甘味物質刺激の場合、cAMPの産生、K^+チャネルの抑制、脱分極の発生の経路である。他は非糖類甘味物質刺激の場合、IP_3の産出、内部からCa^<2+>の遊離、Ca^<2+>依存性K^+チャネルの活性化、脱分極なしで味細胞から伝達物質の放出の経路である。味細胞における味刺激の変換の分子メカニズムを研究した。カエル味細胞の受容膜にはカチオンチャネルとアニオンチャネルが存在する。NaCl刺激の場合、Na^+はカチオンヤネル、Cl^-はアニオンチャネルを通り細胞内に入るが、Cl^-の透過性は低く、脱分極性受容器電位が発生する。パッチ膜を用いての単一チャネル電流の分析から、カエル味細胞膜には80と40pSのK^+チャネルが存在することを見出した。80pSK^+チャネルは電位とCa^<2+>依存性であるが、40pSK^+チャネルの活動はそれらに依存しない。40pSK^+チャネルはcAMPでブロックされるが、プロテインキナーゼ抑制剤でブロックが解除される。したがって、40pSK^+チャネルはcAMP依存性プロテインキナーゼAを介して閉じ、味細胞はコンダクタンスの減少を伴う脱分極応答を示す。マウスの味蕾内の味細胞からホールセル記録を行い、味孔にのみアミロライドを与えるとアミロライド感受性外向き電流が生じるが、基底外側膜にアミロライドを与えてもその電流は生じない。味孔にNaClを与えるとアミロライド感受性Na^+チャネルを通り内向き電流が発生する。スナネズミの味細胞の甘味刺激変換メカニズムを調べ、次のことが示唆された。糖類はG蛋白、アデニレートシクラーゼを活性化し、cAMPを産生し、K^+チャネルのブロックにより脱分極を発生する。非糖類はG蛋白、ホスホリパーゼCを活性化し、IP_3を産生し、小胞体からCa^<2+>を放出する。これが伝達物質の放出に関与する。
ダイズの乾燥耐性向上に向けたGmNAC転写因子の包括的解析

ダイズの全ゲノム配列よりNAC転写因子であるGmNAC遺伝子を包括的に解析し、データベースを作成した。さらにGmNAC遺伝子とその上流因子である2成分制御系(TCS)について詳しい解析を行った。本研究は、乾燥応答性NACシグナル伝達経路とそれを制御する2成分制御系の基盤研究としてだけでなく、遺伝子組み換え技術をもちいた乾燥耐性ダイズ作製に必要なGmNAC遺伝子および乾燥応答性プロモーターを選抜するためにも役立つものである。1.ダイズ転写因子のカタログ化ダイズ全ゲノム配列をコンピューター分析し、転写因子をコードする全ての遺伝子を抽出、隠れマルコフモデルに基づきDNA結合ドメインで分類した。4342遺伝子座に存在する5035個の転写因子が61個のファミリーに分類された。これらの情報をまとめて、ダイズの全転写因子を網羅するデータベース、SoybeanTFDB(http://soybeantfdb.psc.riken.jp)を作製した。そこには、機能モチーフ、完全長cDNA配列、ドメイン配列のアライメント、プロモーター領域、ゲノム構成、およびシロイヌナズナとの比較分析で得られた遺伝子アノテーションに基づき推定された制御機能などの情報が含まれている。さらに全てのプロモーター配列を解析し、PLACEデータベースに登録されている全タイプのシス因子を抽出後、非生物学的ストレス応答シス因子を同定した。SoybeanTFDBは公開情報リソースとして誰でも利用できるので、容易にシス因子や遺伝子アノテーションなどの情報にアクセスでき、ダイズ転写因子の機能予測から目的に合った遺伝子を選抜できる(Mochida et al.2009, DNA Res 16 : 353-369)。2.GmNAC転写因子の同定、構造解析及び系統解析ダイズ全ゲノム配列より205個のダイズNAC転写因子(GmNAC)を同定した。それらをコードする完全長ORF(Open Reading Frame)を決定し、全GmNAC転写因子の構造解析を行った。さらに他のマメ科植物、シロイヌナズナ、イネ、ポプラとの比較解析、及びNCBI nrとUniProtに登録されているタンパク質との比較解析を行った。データは理化学研究所のSoybeanTFDB及びマメ科植物の転写因子統合データベース、「LegumeTFDB(http://legumetfdb.psc.riken.jp/index.pl)で公開している(Mochida et al.2010, Bioinformatics 26 : 290-1)。またGmNAC転写因子の機能を予測するため、GmNAC転写因子とゲノム解析された異なる植物種の全NAC転写因子との包括的系統解析を行った。1.乾燥ストレス応答性GmNAC転写因子の系統解析ダイズ全ゲノム配列より予測された205個のダイズNAC転写因子(GmNAC)のうち、完全長ORF(Open Reading Frame)を持つ152個のGmNAC転写因子の系統解析を行った。さらにシロイヌナズナの乾燥応答性ANAC転写因子を元に、49個の乾燥応答性GmNAC転写因子を予測した。上記で予測された乾燥応答性GmNAC遺伝子の乾燥応答性を確認するため、ダイズの根と地上部をもちいた定量RT-PCRを行った。既に数個のGmNAC遺伝子の乾燥応答性を確認できているが、現在もこの実験は継続中である。3.GmNAC転写因子の転写活性測定乾燥応答性を確認した上記のGmNAC遺伝子のうち、4個の乾燥応答性GmNAC転写因子について酵母をもちいた転写活性測定により転写活性を確認した。4.乾燥応答性GmNAC遺伝子のシロイヌナズナ過剰発現体の作成転写活性を確認した上記の4個のGmNAC遺伝子を恒常発現用プロモーター(35S)とストレス応答プロモーター(RD29A)に繋げて、シロイヌナズナに形質転換した。形質転換体の選抜は現在継続中である。これらの形質転換体は今後、乾燥耐性等を含めた生理学実験にもちいる予定である。5.GmNAC転写因子の上流で働く二成分制御系(TCS)因子の探索TCSがGmNAC転写因子の上流で働くことは広く知られている。我々はダイズのゲノム解析を行い、ダイズのTCS因子を探索した。予測されたTCS遺伝子のうちいくつかの遺伝子が乾燥応答性を示したことから、これらは乾燥応答性GmNAC転写因子の上流となる可能性があると考えられた。