hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
熱帯泥炭湿地林の人為的攪乱による森林機能・生態系サービスの変化と地域社会への影響

その結果、草原植生の種類が地下水位とその水質によって決定されていることが明らかとなり、地上部植生が泥炭火災跡地の環境条件を判別する上での明確な指標となることが示唆された。この結果には中部カリマンタン州で行われた既存研究との類似性が認められたため、現在、西カリマンタン、南カリマンタン州の泥炭火災跡地を含めた広域を対象とした文献収集と調査を行い、泥炭火災後の草原植生の分布とその回復可能性を理解するためのモデルを構築中である。加えて、草原植生の後に発達する二次林についても検討する予定である。これまで国際学会で複数回の発表を行うとともに、インドネシア、マレーシアおよびブルネイの熱帯泥炭湿地林の環境問題に関する文献研究を行い、これに関する論文を出版した。また、泥炭湿地林の回復可能性に関するレヴュー論文も現在投稿中である。インドネシアの各泥炭湿地林について、順調に過去および現在の森林に関するデータの収集を行いつつある。また、インドネシア、マレーシアおよびブルネイの熱帯泥炭湿地林の環境問題に関する文献研究を行うことによって、各国における熱帯泥炭湿地林の現状とそれぞれの政策の違いについての理解が深まり、これをレヴュー論文として出版している。このため、研究は概ね順調に進展していると言える。熱帯泥炭湿地林の総合的な理解に向けて、おもにインドネシアを対象としてこれまで様々な観点から研究を行ってきた。近年の泥炭湿地林の人為的攪乱のおもな原因は泥炭火災であり、火災発生後には被害の強度や環境要因に応じて植生が発達すると考えられる。そこで、スマトラ島リアウ州において、火災後に見られる草原植生の分類とその分布を決定する環境要因を明らかにするための調査を行った。その結果、泥炭火災後の草原植生の種類が地下水位とその水質によって規定されていることが明らかとなり、地上部の植生が泥炭火災跡地の環境の指標となりうることが示唆された。また、中央カリマンタン州の低地では、その特徴的な地形により泥炭湿地林とともにヒース林の発達が見られる。これまでに隣接する泥炭湿地林とヒース林で調査を行ったところ、これらの森林には共通する種は見られるものの、樹高や優占種が異なっていることが確認されている。そこで、今年度より、泥炭湿地林とヒース林の移行帯にトランセクトを設置して毎木調査を行うとともに、泥炭深度や土壌に関する調査を行い、土壌環境の違いが樹木群集の種組成や種特性に与える影響を明らかにするための調査を開始した。これらの研究により、自然状態攪乱後といった様々な条件下の泥炭湿地林についての調査を行うことができた。これにより、泥炭湿地林の人為的攪乱が森林機能や生態系サービスの変化を通して地域に与える影響について考察する予定である。インドネシアの各森林において、順調に過去、および現在の森林に関するデータの収集を行ってきた。今年度は新たに泥炭湿地林と隣接したヒース林の調査も開始することができた。今年度より勤務先が変更になったため、新たな勤務先とインドネシアのカウンターパートとのあいだで改めて基本合意書(MOU: Memorandum of Understanding)を取り交わす必要があり、その間、現地での調査を行うことができずに計画に遅れが生じた。
メソポタミア諸地域の土器胎土と彩文顔料の異同からみた都市形成

本研究は、人びとの暮らしに欠かせない土器を切り口として、世界最古の都市がどのようにメソポタミアで形成されていったのかを追究する。北シリア、南東トルコ、南イラクなどで出土した土器について、胎土の鉱物組成の分析によりその焼成温度を比較推定し、彩文顔料の原料となる鉱物の組成によりその由来地を探っていく。そして、日本とトルコでそれぞれ土器焼成実験を行いながら、複眼的にメソポタミアの都市形成を検証していく。
手術中の血圧制御のための生体の血圧調節機構の解析

手術中に低血圧を維持するための血圧制御システムの安全性および安定性を増すために,(a)血圧低下を防止する生体の血圧調節機構の解析,(b)降圧剤の血圧に及ぼす影響の薬理学的な立場からの考察,を行った.具体的には,降圧剤としてカンシル酸トリメタファンとニカルジピンを使用し,(a)に関して,血圧低下に対する内分泌系の防御機構である交感神経-副腎系の分泌物質,アドレナリン,ノルアドレナリン,およびレニン-アンジオテンシン系の分泌物質,レニン,アンジオテンシンの通常血圧時,血圧降下時および低血圧時の血中濃度の変化を測定し,それぞれの系のモデル化を行った.また,(b)に関して,薬理学に基づいて降圧剤に対する血圧の応答をモデル化し,実際の応答の同定結果と比較してみた.その結果,まず(a)について,・血圧低下を防止する機構は,同定結果から求めた従来のモデルの非線形部分のように血圧値のみから決定されるものではなく,血圧の変化率の影響も大きく受ける,・降圧剤によって,血中物質の変化に相違があるため,当初考えていたような単純に血圧のみを変数とした血圧調節系のモデルは妥当であるとはいえず,降圧剤の作用機序を考慮に入れてモデル化を行う必要がある,ことがわかった.また(b)について,・薬理学に基づく降圧剤に対する血圧の応答は一次遅れで表せ,降圧剤が十分循環されるために必要な時間となると考えられる,・降圧剤の種類,個体差の影響は一次遅れのゲイン,時定数といったパラメータの変更で対応できる,ことがわかった.手術中に低血圧を維持するための血圧制御システムの安全性および安定性を増すために,(a)血圧低下を防止する生体の血圧調節機構の解析,(b)降圧剤の血圧に及ぼす影響の薬理学的な立場からの考察,を行った.具体的には,降圧剤としてカンシル酸トリメタファンとニカルジピンを使用し,(a)に関して,血圧低下に対する内分泌系の防御機構である交感神経-副腎系の分泌物質,アドレナリン,ノルアドレナリン,およびレニン-アンジオテンシン系の分泌物質,レニン,アンジオテンシンの通常血圧時,血圧降下時および低血圧時の血中濃度の変化を測定し,それぞれの系のモデル化を行った.また,(b)に関して,薬理学に基づいて降圧剤に対する血圧の応答をモデル化し,実際の応答の同定結果と比較してみた.その結果,まず(a)について,・血圧低下を防止する機構は,同定結果から求めた従来のモデルの非線形部分のように血圧値のみから決定されるものではなく,血圧の変化率の影響も大きく受ける,・降圧剤によって,血中物質の変化に相違があるため,当初考えていたような単純に血圧のみを変数とした血圧調節系のモデルは妥当であるとはいえず,降圧剤の作用機序を考慮に入れてモデル化を行う必要がある,ことがわかった.また(b)について,・薬理学に基づく降圧剤に対する血圧の応答は一次遅れで表せ,降圧剤が十分循環されるために必要な時間となると考えられる,・降圧剤の種類,個体差の影響は一次遅れのゲイン,時定数といったパラメータの変更で対応できる,ことがわかった.
Cell Pinballメカニズムの解明

Cell Pinball現象は幅50μm、厚さ4μmのマイクロ流路を用いて生理食塩水で薄めた赤血球を流したときに観察された。しかも赤血球固有のもので赤血球以外の細胞で観察された報告例がない。したがって直径68μm、中央部厚さ1μm、外周部厚さ2μmという赤血球独特な形状に解決のヒントが隠されていると考えられる。平成30年度の研究では、Cell Pinball現象を起こした状態において接触形状を観察するためにマイクロ流路通過中の赤血球形状の可視化を試みたが、直径68μmという微小スケールの赤血球形状を連続的に追跡することが困難でその全容はつかめなかった。マイクロ流路の一部で摩擦特性をステップ状に変化させCell Pinball現象発生状況について観察しようとしたが、挙動に明快な有意差がでるまでには至らなかった。(1)生理食塩水で塩分濃度を薄くすることによって、Cell Pinball現象が助長されること、(2)平成29年度の研究から、マイクロ流路と赤血球の接触は外周に近い領域でドーナツ状に起こっている可能性が高いことを踏まえ、Cell Pinball現象は塩分濃度が低い液体中にある赤血球の内圧増加に伴って、赤血球の形状が球状に近くなり、結果として赤血球がマイクロ流路上下面で同時に面接触し、流体力学的効果との連成によって回転トルクが生成され、回転しながら主流と直交方向に運動する力成分を作り出していると解釈するのが一番自然であると考えられる。ただ、接触状態は必ずしも図心に対して軸対象になっていないため、側壁に当たるとそのバランスが崩れて、回転方向が反転するという現象に繋がっているものと推察している。生理食塩水中の塩分濃度を下げていったとき赤血球のどの部位が上下面に最初に接触するかについてマイクロ流路内に血液を生理食塩水で薄め,透過型顕微鏡で観察した.赤血球は中心部位の厚さが1μm程度であるのに対し外周部位が2μm程度であるため,マイクロ流路の高さを下げたときに最初に赤血球と接触するのは,中心部位ではなく外周部位になる.単純に考えると接触部はドーナツ状になっているはずである.一方,生理食塩水濃度を下げると赤血球の形状は徐々に球に近づいていくため,この状態でマイクロ流路の高さを上げていくと,接触部のドーナツ形状の半径は小さくなり,極限的に赤血球が球になったときに半径ゼロ,つまり接触面積ゼロの点接触になるはずである.実際にドーナツ状の接触形状が顕微鏡で観察できた訳ではないが,興味深い傾向として,Cell Pinball現象を起こしている赤血球は例外なく,赤血球外周が極端に黒くなっている様子が顕微鏡で観察することできた.透過型顕微鏡は,光が透過した部分は白く,光が吸収された部分は黒く見える性質を示すため,この事実はCell Pinball現象を起こしている赤血球の外周部分が厚くなっていることを示唆している.この実験により,Cell Pinball現象を起こしている赤血球では,赤血球外周部分がマイクロ流路上下面に接触している可能性が高いことがわかってきた.つまり赤血球中心部は流路上下面には接触せず,周囲だけが流路上下面に接触している可能性が高い.その結果として,Cell Pinball現象時における赤血球の運動軌跡が直線からぶれにくくなっているものと考えている.これは平成30年度の研究に向け,重要なヒントを提供してくれた.本申請では研究計画を大きく以下の二つに分けることができる.平成29年度:生理食塩水濃度を下げ,赤血球の内圧を上昇し,赤血球の形状が球状に近づく.はじめに生理食塩水中の塩分濃度を下げていったとき赤血球のどの部位が上下面に最初に接触するかについて調べる.もし厳密な球になれば,接触点は球の頂点,つまり幾何学的中心に一致するはずである.一方,もし厚さ2μm外周部位の方が最後まで高さの優位性をキープできたとすると,接触部は外周に存在する凸形状部位の一部になるはずである.赤血球固有の形状を考えると,後者が起こる可能性が高い.この点を初年度に明らかにする.平成30年度:Cell Pinball現象を起こした状態において接触部形状を可視化し, Cell Pinballの新しい運動モデルを構築し,その普遍性についてのエビデンスを取得する.平成29年度研究実績概要より,Cell Pinball現象を起こしている赤血球の外周部分が厚くなっていることを実験的に明らかにし,接触部は外周に近い領域でドーナツ状に起こっている可能性が高いことを示唆した.以上が平成29年度の研究計画を予定通り遂行していると判断した根拠である.Cell Pinball現象は幅50μm、厚さ4μmのマイクロ流路を用いて生理食塩水で薄めた赤血球を流したときに観察された。

(1)生理食塩水で塩分濃度を薄くすることによって、Cell Pinball現象が助長されること、(2)平成29年度の研究から、マイクロ流路と赤血球の接触は外周に近い領域でドーナツ状に起こっている可能性が高いことを踏まえ、Cell Pinball現象は塩分濃度が低い液体中にある赤血球の内圧増加に伴って、赤血球の形状が球状に近くなり、結果として赤血球がマイクロ流路上下面で同時に面接触し、流体力学的効果との連成によって回転トルクが生成され、回転しながら主流と直交方向に運動する力成分を作り出していると解釈するのが一番自然であると考えられる。ただ、接触状態は必ずしも図心に対して軸対象になっていないため、側壁に当たるとそのバランスが崩れて、回転方向が反転するという現象に繋がっているものと推察している。Cell Pinball現象は幅50μm,厚さ4μmのマイクロ流路を用いて生理食塩水で薄めた赤血球を流したときに観察される.しかも赤血球固有のもので赤血球以外の細胞で観察された報告例がない.したがって直径68μm,中央部厚さ1μm,外周部厚さ2μmという赤血球独特な形状に解決のヒントが隠されていると考えるのは自然であろう.(1)生理食塩水で塩分濃度を薄くすることによって,Cell Pinball現象が助長されること,さらに,(2)平成29年度の研究から,マイクロ流路と赤血球の接触部は外周に近い領域でドーナツ状に起こっている可能性が高いことがわかってきた.(1)については赤血球の内圧増加に伴って,赤血球の形状が球状に近くなり,結果として赤血球がマイクロ流路上下面に接触する可能性が高くなることからCell Pinball現象の発生頻度が増加するという説明で十分である.つまりCell Pinball現象の完全理解には,この点を踏まえ,平成30年度の研究では,Cell Pinball現象を起こした状態において接触部形状を詳細に可視化し,一定の接触状態が維持されつつ,直線移動が持続される点について考察していきたい.Cell Pinballの詳細メカニズムについて、赤血球が接触する可能性があるマイクロ流路壁上面・下面の摩擦特性について深く議論した。
イネジーンプールの分化機構

育種は自然界に存在する遺伝子を組み合わせて優れた個体を選ぶことであり、遺伝子の組み換えを促進することが育種操作の根幹をなす。したがって、有性生殖を通じて共通に利用できる遺伝子給源であるジーンプールの分化様相は育種操作の難易度とも関連する。本研究では、栽培イネの形質多様性についてアミロース合成酵素遺伝子(Wx)とアントシアニン基本着色遺伝子(C)の変異部位を調査し、多数の複対立遺伝子が栽培化過程で人為的に選抜されて生じたことを明らかにした。Wx遺伝子では、5種類の対立遺伝子が栽培系統だけに見出され、アミノ酸置換、RNAプロセッシング、フレームシフトなど固有の突然変異が存在することが判った。また、C遺伝子はMyb様蛋白をコードする制御因子であることがはじめて判明した。栽培系統で蓄積されてきた遺伝的特異性は、生殖的隔離障壁によって維持される。主要な生殖的隔離障壁として、栽培および野生種でみられる雑種不稔と交雑不親和に関与する遺伝子の解析を行った。雑種不稔遺伝子に関して、第6染色体上に3遺伝子を、第1染色体上に1遺伝子を精密分子マップ上に位置づけた。S10遺伝子はWxから0.15cMの距離に座乗し、発現マップの比較からS10候補領域を推定することが出来た。また、配偶子形成の細胞学的観察から、これら遺伝子は雌または雄配偶子に異なったキラー作用を起こすことを明らかにした。交雑不親和性に関して、雑種胚の致死を引き起こす3つの遺伝子を精密分子マップ上に位置づけた。以上のように、本研究成果はイネのジーンプール形成における遺伝的多様性と生殖隔離の関連を明らかにし、遺伝子の単離にむけての基礎情報を与える。ジーンプール分化に関与する遺伝因子の多様性を解析するため、異なる分類単位から特定因子を導入した準同質遺伝子系統を供試し、発育的制約に関わる遺伝子の分析を行った。本年度は、特に交雑不親和性と出穂性について詳細に調査した。これらの遺伝子は第6染色体に座乗しており、分子マーカーを利用して詳細な位置情報を得ると共に遺伝発現モデルを構築した。交雑不親和性では少なくとも3遺伝子が雌・雄側の発現に関与すること、出穂性については、発育時期特異的に作用する日長反応遺伝子が存在することが判った。いずれの因子も第6染色体に座乗し、明らかに、交雑の難易を支配する遺伝複合体が形成されていた。雑種不稔性について分子レベルの比較をおこなう目的で、モチ遺伝子座およびその近傍の分子的構造を比較・調査した。モチ遺伝子座の第一イントロン近傍域の配列を決定し発現様式との関連を比較した。また、誘発突然変異系統についてもPCRダイレクトシーケンス法で比較し、座内組換え頻度を塩基配列レベルで推定した。さらに、雑種不稔性遺伝子の単離にむけて、BACライブラリーからモチ遺伝子を含む約200kb-300kbの断片を得、サブクローンして物理地図を作成している。現在、花粉由来のcDNAライブラリーを作成し、第6染色体上のcDNAを選抜して位置を決定する実験を進めている。イネのジーンプール形成機構として重要な生殖的隔離機構の遺伝解析を行った。まず、開花期の遺伝的差異を取り上げた。第6染色体短腕上に座乗する感光性遺伝子Se1は、地域に適した成長期間を規定する役割をもつ。強感光性のインド型品種から、第6染色体短腕部位を戻し交雑によって弱感光性系統に導入して解析した。その結果,この領域には、Se1座の他に少なくとも2つの劣性遺伝子が存在する複合遺伝子座であることが判った。その一つは、発育特異的に日長効果を変更した。また、花粉管伸長抑制による受精前隔離機構をイネで初めて見いだした。

日本イネに不親和性遺伝子を戻し交雑により導入するために交雑を継統している。交雑後の隔離機構として、雑種胚退化現象と雑種不稔の遺伝解析を行った。交雑後の種子退化を引き起こす不親和性は、3つの遺伝子により決定されており、いずれも第6染色体短腕上に座乗することは既に報告した。今年度は分子マーカーにより座乗位置を調査し、雄側反応遺伝子が動原体近傍に存在することを明らかにした。雑種不稔については、もち遺伝子(wx)に連鎖する不稔遺伝子(S10)を単離するための実験を継続した。S10遺伝子はwx座より0.15cMと極めて近傍にマップされる。wx座変異体は第2エキソンに変異を持ち座内組換えが0.14cMにおよぶので、S10候補領域はwx座上流と予測された。イネシモキタ由来のBACライブラリーよりwx遺伝子を含む合計約320kbのコンティグを構築しし、Hind IIIの物理地図を作成した。全Hind III断片を60サイトに分け分析したところ、シングルコピー領域から反復領域までの4つのパターンに分類できた。コンティグ内には、12箇所合計72kbのシングルコピー領域が存在し、反復領域は全体の約70%260kbに及ぶことを明らかにした。遺伝的距離から候補を選んで配列を決定したところ、その領域はウィルスと相同性をもち、系統間で高度に多型的であった。さらに、両親の葯よりcDNAライブラリーを作成し、両者の比較からS10候補領域を探索している。ジーンプール形成機構として1)雑種不稔遺伝子の候補領域の絞り込み、2)一方向性交雑不親和性の遺伝的複雑性、3)ポリジーンと発育様式について実験を継続した。1)もち遺伝子に0.15cMで連鎖する雑種不稔遺伝子S10の候補を、もち遺伝子近傍300Kbをカバーするコンティグ上に位置づけるために、葯発現転写マップを作成した。両親間における葯発現のcDNAの発現比較と連鎖関係から、もち遺伝子葯10Kbに下流に位置するcDNAが第一の候補と考えて、現在配列の比較することを開始している。2)第6染色体単腕上には、一方向性交雑不親和性を支配する3つの遺伝子(Cinf,Su-Cinf,cinm)が存在する。本年は、これら遺伝子の分布をアジア・アフリカ栽培イネと野生イネで調査した。2つの遺伝子(Su-Cinf,cinm)は雑種不稔遺伝子S6と密接に連鎖すると考えられ、これら複合体を解析するために第6染色体単腕に関する自殖組換体の作成を急いでいる。現在までに、この遺伝子複合体は動原体近傍の単腕上に位置することがRFLP分析によって明らかとなった。3)出穂性ポリジーンは生殖隔離機構としても重要である。過去に複数の研究者によって作出された出穂性遺伝子に関する準同質遺伝子系統を用いて発育様式を詳細に比較した。モジュール構造をもつイネでは、繰り返し構造の発育様式が出穂性遺伝子から予測可能であることが判った。第6染色体単腕上には複数の出穂性遺伝子が複合体を形成しており、これら遺伝子の組み合わせによって発育様式が変更を受けるようである。本年度は、栽培イネで形質変異の多様性に富むアミロース合成酵素遺伝子(Wx)とアントシアニン基本着色遺伝子(C)の複対立
エビデンス・マップを用いた補完統合医療の安全性と効果の体系化

本研究は、妊婦が病院や治療院で治療として受けた統合医療に加え、セルフケアとして活用している統合医療の実態について明らかにすることを目的とした。妊娠35週以降の妊婦に質問紙またはWeb調査にて回答を求めた。質問紙は、対象者の特性、セルフケアとしての統合医療の活用状況、医師や専門家による施術・処方等で構成した。分析は記述統計量を算出し、各療法と対象者特性についてχ2検定を実施した。本研究は、聖路加国際大学研究倫理審査委員会の承認を得て行った(17-A068)。5施設241名の妊婦に質問紙を配布し、187名(有効回収率77.6%)を対象とした。妊娠期に治療として統合医療の療法を受けていた者は51名(27.3%)であり、最も多かったのは整体(9.7%)であった。セルフケアとして1種類以上の療法を活用していた者は141名(75.4%)であり、そのうち活用について医療者に相談していた者は27.0%であった。活用者が多かったのは、サプリメント摂取89名(47.6%)、ウォーキング60名(32.1%)、ハーブ38名(20.3%)、灸32名(17.1%)、ヨガ32名(17.1%)であった。セルフケアとして活用していた妊婦の特徴は、学歴が高い(p<0.001)、出産歴がない(p=0.042)であった。情報源で最も多かったのは「友人・家族」(22.0%)であり、医療者が情報源であった割合は、「医師」(4.2%)、「助産師」(12.0%)、「分娩施設関連(医師・助産師を除く)」(16.2%)であった。統合医療に関して妊婦が活用している療法や情報源・目的等の実態が明らかとなった。今後、各療法の情報提供の内容や方法等の調査を行い、安全かつ効果的な活用のための情報提供・指導を目的とした医療者への教育を検討・実践していく必要性が示唆された。今年度は、周産期における補完統合医療の中でハーブ療法に関する文献レビュと産科施設での補完統合医療に関する実態調査を行った。母乳分泌を促進するためのハーブ療法の効果に関する文献について、国内外のガイドライン、医中誌Web、PubMed、Cochrane Library、EMBASEを用いて検索した結果、5件の介入研究が抽出された、介入となったハーブはTorbangun、Shatavari、Fenugreek、Milk thistelの4種類であった。介入群は、比較群に比べ母乳分泌量が増加したが、血中プロラクチン値および児の体重変化は研究毎に結果が異なっていた。5件の研究はバイアスリスクが高いものが多く、結果の信頼性への影響が危惧された。産科施設における補完統合医療の実態調査は、全国318施設を対象に行った。妊娠期において浮腫改善のための足浴の推奨は、病院12.1%、診療所5.3%、助産所26.5%であった。マッサージの推奨については、病院8.1%、診療所10.5%、助産所32.8%であった。腰痛・骨盤痛緩和のための運動は、病院19.2%、診療所20.0%、助産所42.6%が推奨していた。分娩期では、分娩誘発を目的とした灸療法を勧めているのは、病院0%、診療所1.1%、助産所3.0%であった。分娩促進のための鍼療法は、病院1%、診療所0%、助産所1.5%が勧めていた。指圧については、病院3.1%、診療所3.2%、助産所16.4%であり、鍼療法よりも勧める施設が多かった。本研究の結果から、エビデンスギャップについて考察し、今後の課題を導き出した。周産期におけるハーブ療法に関する文献レビュを行い、エビデンスを明確化できた。今後、さらに健康食品、アロマセラピー、ホメオパシーの効果に関する文献レビュを実施する予定である。今年度、産科施設における実態調査を行ったため、来年度は妊産婦を対象に補完統合医療に関するセルフケア実施の実態を調査する予定である。ほぼ、計画書に従って進行できている。平成29年度は、妊産婦への統合医療に関する実態調査を実施した。研究協力施設は5か所の病院(1か所)、診療所(2か所)、助産所(2か所)であった。妊娠35週以降の妊婦241名に質問紙を配布したところ、有効回答率は77.6%であった。質問紙は、対象者の特性、セルフケアとしての統合医療の活用状況、医師や専門家による施術及び処方、認知度・興味に関する質問で構成した。本研究は、聖路加国際大学研究倫理審査委員会の承認を得て実施した(17-A068)。その結果、妊娠期に統合医療の療法を受けていたのは27.3%であり、最も多かったのは整体であった。セルフケアとして1種類以上の療法を活用していた妊婦は75.4%であり、サプリメント摂取(47.6%)、ウォーキング(32.1%)、ハーブ(20.3%)、灸(17.1%)、ヨガ(17.1%)の順で多かった。活用数の平均値は1.98(SD=1.8)であった。そのうち活用方法について医療者に相談していた者は27.0%であった。セルフケアとして活用していた妊婦の特性としては、高学歴、初産婦であった。

情報源として最も多かったのは「友人・家族」であり、医療者に中では、助産師、医師の順であった。活用の目的は、体調不良・マイナートラブルの改善が最も多かった。また、興味のある療法は、マッサージ(52.9%)、ヨガ(52.9%)、アロマセラピー(47.6%)の順であった。研究結果より、統合医療に関して妊婦が活用している療法や情報源、目的等の実態が明らかになった。エビデンスギャップがある療法について考察された。なお、妊産婦への統合医療に関する実態調査は、対象者数の増加に向けて、引き続き継続している。妊産婦への統合医療に関する質問紙調査の研究協力施設を探すのに時間を要したためである。現在、研究協力施設にてデータ収集を実施中である。本研究は、妊婦が病院や治療院で治療として受けた統合医療に加え、セルフケアとして活用している統合医療の実態について明らかにすることを目的とした。妊娠35週以降の妊婦に質問紙またはWeb調査にて回答を求めた。質問紙は、対象者の特性、セルフケアとしての統合医療の活用状況、医師や専門家による施術・処方等で構成した。分析は記述統計量を算出し、各療法と対象者特性についてχ2検定を実施した。本研究は、聖路加国際大学研究倫理審査委員会の承認を得て行った(17-A068)。5施設241名の妊婦に質問紙を配布し、187名(有効回収率77.6%)を対象とした。妊娠期に治療として統合医療の療法を受けていた者は51名(27.3%)であり、最も多かったのは整体(9.7%)であった。セルフケアとして1種類以上の療法を活用していた者は141名(75.4%)であり、そのうち活用について医療者に相談していた者は27.0%であった。活用者が多かったのは、サプリメント摂取89名(47.6%)、ウォーキング60名(32.1%)、ハーブ38名(20.3%)、灸32名(17.1%)、ヨガ32名(17.1%)であった。セルフケアとして活用していた妊婦の特徴は、学歴が高い(p<0.001)、出産歴がない(p=0.042)であった。情報源で最も多かったのは「友人・家族」(22.0%)であり、医療者が情報源であった割合は、「医師」(4.2%)、「助産師」(12.0%)、「分娩施設関連(医師・助産師を除く)」(16.2%)であった。統合医療に関して妊婦が活用している療法や情報源・目的等の実態が明らかとなった。今後、各療法の情報提供の内容や方法等の調査を行い、安全かつ効果的な活用のための情報提供・指導を目的とした医療者への教育を検討・実践していく必要性が示唆された。妊産婦を対象に補完統合医療に関するセルフケア実施の実態を調査については、現在研究計画書を作成中である。計画書は、聖路加国際大学研究倫理審査で承認を得て、8月にはデータ収集を開始する予定である。11月までにデータを回収し分析を行い、1月に論文として完成させる計画である。現在、質問紙調査について、新たな研究協力施設2か所に依頼を行っている。これらに研究協力施設での調査を進めて研究対象者を増やしていく。医療施設での調査の費用が予定より少額であったため、来年度の使用額が生じた。(理由)研究協力施設を探すのに時間を要し、計画通り質問紙調査が終了しなかった。(使用計画)研究協力施設、対象者数を増やすため、引き続き質問紙調査に使用する予定である。今年度予定している妊産婦への調査は、サンプル数を増やして計画しているため、郵送費および謝金として使用する予定である。
DNA傷害チェックポイントを制御する情報伝達系の解明

哺乳動物細胞におけるChk2の生理機能と活性調節機構を明らかにする目的で、Chk2ノックアウト(KO)細胞の表現型とChk2発現調節機構を詳細に解析した。Chk2KOマウスは見かけ上正常で生殖可能であったが、長期間の飼育維持により野生型と比較して有意に癌の発症が増加していた。このことからChk2は少なくともマウスにおいて癌抑制遺伝子として機能することが示された。Chk2KO細胞は野生型と比較して電離放射線処理に対して耐性であったが、p53KOマウスよりは感受性であった。Chk2KO細胞におけるp53機能を解析したところ、Chk2KO細胞では野生型と比較して、DNA傷害に反応したp53転写活性の増強が有意に低下していた。またこのとき、p53タンパク安定化には大きな違いが認められなかったため、Chk2はp53をリン酸化することによりその転写能を制御することが示唆された。このリン酸化部位については現在未同定であるが、プレリミナルな結果からC末端の転写調節領域であると考えられている。一方、p53はChk2の転写を間接的に負に制御することが明らかとなった。レポータ解析およびドミナントネガティブNF-Yを用いた結果から、この分子機構はp53が転写因子NF-Y活性を制御することで制御されていることが分かった。興味あることに、p53非反応性Chk2外来遺伝子を導入したA172ヒトグリオーマ細胞(p53正常)は、野生型A172細胞と比較してDNA傷害後のG2/M期停止が長くなっており、チェックポイント停止から細胞周期への再移入が遅延していることが分かった。このことから、p53によるChk2発現の負の制御はDNA傷害修復後の細胞が細胞周期に再移行する際の時期の決定に重要な役割を果たしていると考えられた。哺乳動物細胞におけるChk2キナーゼの機能解析とその活性調節機構を明らかにする目的で、Chk2ノックアウトマウスの表現型とChk2発現調節機構を詳細に解析した。Chk2-/-マウスは見かけ上正常で生殖可能であった。しかしながらChk2-/-マウスでは電離放射線処理によるDNA傷害時に認められる胸腺、脾臓、海馬での広範なアポトーシスがほとんど認められなかった。さらにDNA傷害存在下における細胞周期停止を解析したところ、Chk2-/-MEFsではG2/M期停止は野生型と比較してほぼ同程度であったが、G1期停止は不完全であった。これらのことは、Chk2が生体内においてp53の機能を制御することによりDNA傷害存在下におけるアポトーシスあるいはG1期停止を制御していると示唆している。実際、DNA傷害時におけるp53蛋白質の安定化は、野生型細胞に比較してChk2-/-細胞では大きく損なわれていた。一方、Chk2の発現調節を調べたところ、Chk2は正常p53によりその発現が負に制御されること、またこの調節は転写因子NF-Yの活性制御を介して行われることが分かった。正常線維芽細胞にChk2を強発現させ細胞を解析したところ、p53によるChk2発現の負の制御はDNA傷害修復後の細胞が細胞周期に再移行する際の時期の決定に大きな役割を果たしていると考えられた。これらの知見は、Chk2が遺伝学的および生化学的にp53と密接な関係があることを示しており、生体内においてChk2とp53の間にはフィードバック機構により互いの機能を調節しながらDNA傷害チェックポイント機構に作用していることが明らかになった。

Chk2KOマウスは見かけ上正常で生殖可能であったが、長期間の飼育維持により野生型と比較して有意に癌の発症が増加していた。このことからChk2は少なくともマウスにおいて癌抑制遺伝子として機能することが示された。Chk2KO細胞は野生型と比較して電離放射線処理に対して耐性であったが、p53KOマウスよりは感受性であった。Chk2KO細胞におけるp53機能を解析したところ、Chk2KO細胞では野生型と比較して、DNA傷害に反応したp53転写活性の増強が有意に低下していた。またこのとき、p53タンパク安定化には大きな違いが認められなかったため、Chk2はp53をリン酸化することによりその転写能を制御することが示唆された。このリン酸化部位については現在未同定であるが、プレリミナルな結果からC末端の転写調節領域であると考えられている。一方、p53はChk2の転写を間接的に負に制御することが明らかとなった。レポータ解析およびドミナントネガティブNF-Yを用いた結果から、この分子機構はp53が転写因子NF-Y活性を制御することで制御されていることが分かった。興味あることに、p53非反応性Chk2外来遺伝子を導入したA172ヒトグリオーマ細胞(p53正常)は、野生型A172細胞と比較してDNA傷害後のG2/M期停止が長くなっており、チェックポイント停止から細胞周期への再移入が遅延していることが分かった。このことから、p53によるChk2発現の負の制御はDNA傷害修復後の細胞が細胞周期に再移行する際の時期の決定に重要な役割を果たしていると考えられた。
尿中酸化ストレスマーカーと循環器疾患発症に関する後ろ向きコホート研究

酸化ストレスは糖尿病や動脈硬化を進展させるといわれています。これらは脳梗塞や心筋梗塞などの原因になりますが、酸化ストレスの高さが脳梗塞等を引き起こすかどうかはわかっていません。そこでこの研究では一般地域住民の方で脳梗塞や心筋梗塞を発症した人とそうでない人を比べて、発症前の尿中に含まれる酸化ストレスマーカーの量が異なるのかを調べました。その結果、女性では脳梗塞や心筋梗塞を発症した人の方が、発症していない人よりも尿中の酸化ストレスマーカーの量が多いことが分かりました。男性では統計的な差がありませんでした。この結果より、酸化ストレスが高いと将来脳梗塞などになりやすくなる可能性が示唆されました。本研究対象者の脳卒中および虚血性心疾患の発症状況を調査するため、茨城県C市における地域住民健診の受診者に対する脳卒中および虚血性心疾患発症状況の聞き取り(のべ4回)、同じく茨城県C市K地区において脳卒中および虚血性心疾患の発症が疑われるケースについての救急搬送録の採録、また茨城県C市役場において脳卒中および虚血性心疾患の治療に関連したと推測される国民健康保険の診療報酬明細書の採録、そして茨城県後期高齢者医療広域連合における後期高齢者医療の診療報酬明細書についても同様の採録を行った。今後、この調査で得られた情報を元に電話調査にて脳卒中または虚血性心疾患発症の確認を行い、受診医療機関における診療諸記録の閲覧により発症情報を確定する。本研究において尿中8-ヒドロキシデオキシグアノシン(8-OHdG)の測定に用いる高速液体クロマトグラフィーシステムについては、獨協医科大学への移設を完了させている。本研究では測定を予定している検体数が多いため、測定精度向上と1検体の測定に要するコストと労力と時間の短縮を目的として、最適なプロトコルを検討している。従来法では固相抽出による前処理を行うことで尿中の夾雑物を除去および濃縮を行い8-OHdGを検出しているが、この方法では固相抽出操作における作業者の習熟度によって誤差が生じる可能性がある。また固相抽出に用いるカートリッジのコストや時間が膨大になるという課題がある。そこで分析カラムとは別に前処理用のカラムを用いたカラムスイッチ法を採用することにより、前処理における人的誤差およびコストと作業時間の削減を図っている。測定プロトコルが確定し次第、保存検体の連続測定に着手する。当該年度において、高速液体クロマトグラフィー(以下HPLC)及び電気化学検出器(以下ECD)を用いて、尿中8-ヒドロキシ2'-デオキシグアノシン(以下8-OHdG)の測定法の確立を目指した。測定の方針として固相抽出を用いた前処理を行う方法も検討したが、オペレーターの手技が再現性に影響すること、前処理に時間を要する事、将来的に多検体を処理するにはコストがかかることを考慮し、カラムスイッチングによるオンラインでの前処理法を試みた。具体的には、HPLCシステムには日立D-7000シリーズを用い、ECDはアンペロメトリック方式の(株)資生堂製3005を用いた。前処理カラムには(株)資生堂の生体試料分析用カラムMF-SCX(4.6mm i.d.×150mm)および同種ガードカートリッジを用い、分析カラムにはインタクト(株)の水系移動相用カラムUnison UK-18(4.6mm i.d.×150mm)および同種ガードカートリッジを用いた。移動相は0.2mM-EDTAを添加したリン酸緩衝液および酢酸緩衝液にメタノールまたはアセトニトリルを添加したものについて、塩濃度・pH・有機溶媒濃度の最適化を試みた。HPLCシステムへの影響も考慮した結果、40mMリン酸緩衝液・0.2mM-EDTAに1%メタノールを添加したもので8-OHdGピークを確認できたが、未だ分離が不十分である。測定間再現性は良好であるため、今後は主に前処理カラムについて、更なる検討が必要である。また本研究対象地域において、住民健診における問診、電話調査、レセプト閲覧、診療録閲覧により、本研究のアウトカムである脳卒中および虚血性心疾患の発症について研究協力者らと共に発症調査を行った。研究対象者の健診情報、発症情報、尿検体情報が格納されているデータセットを集め、結合し、データクリーニングを行い、データベースを構築した。当初の研究方法では全尿検体を測定する計画であったが、測定方法に関して計画を変更したため、それに付随して解析対象者を限定する必要が生じた。そこでコホート内症例対照研究の形式を採用し、循環器疾患発症・死亡者に対して性別・年齢(±2歳)、検体保管年数、地域、喫煙習慣の有無についてマッチさせた対照となる解析対象者のランダム選出を実現するプログラムの構築を行った。このプログラムを元に測定対象の尿検体を抽出し、ELISAによる8-OHdGの測定を実施した。またこれと並行して、ELISAによる測定精度確保の為、引き続き高速液体クロマトグラフィーによる8-OHdG測定法の検討を行った。これらは28年度も引き続き行う。アウトカム調査である研究対象地域での脳卒中・虚血性心疾患発症調査も継続して行った。これら循環器疾患発症・死亡の情報と尿中8-OHdG濃度との関連を明らかにすることが本研究の目的である。尿中酸化ストレスマーカーの測定に関して、高速液体クロマトグラフィーによる測定を試みていたが、十分な精度を得られる測定法が確立できていないため、研究試料の測定に至るまでに想定以上の時間を要することとなった。

そこで代替法としてELISA式による尿中酸化ストレスマーカーの測定を試みているが、コストの問題からコホート内症例対照研究の手法を用いる必要があるため解析対象者を限定する必要が生じた。そのため循環器疾患発症・死亡者に対して性別・年齢(±2歳)、検体保管年数、地域、喫煙習慣の有無についてマッチさせた対照となる解析対象者のランダム選出を実現するプログラムを構築した。このプログラム構築とデータベースの作成が非常に難航し、27年度内に全ての測定を終了させることができなかった。アウトカム調査である研究対象地域での脳卒中・虚血性心疾患発症調査は予定通り順調に行われており、関係者・研究協力者との協同も円滑に行われている。酸化ストレスは糖尿病やアテローム性動脈硬化を進展させることが分子レベルで明らかになっているが、酸化ストレスと循環器疾患発症リスクとの関連については未だ不明瞭である。8-ヒドロキシ-2'-デオキシグアノシン(以下8-OHdG)はDNAが酸化障害を受けることで尿中に排泄される物質であり、酸化ストレスのマーカーとして主に患者を対象として広く用いられているが、一般住民を対象とした疫学研究は限られている。そこで本研究は日本人一般住民を対象として、尿中8-OHdG排泄量と循環器疾患発症との関連を明らかにすることを目的とした。CIRCSコホートにおいて、1996ー2005年に循環器健診を受診し、かつ24時間畜尿検査を実施した者のうち心筋梗塞・脳卒中・労作性狭心症既往者を除いた男女3,454人を対象にコホート内症例対照研究の手法を用いた。11.1年(中央値)の追跡期間中に66名の虚血性循環器疾患(脳梗塞、心筋梗塞、労作性狭心症)の発症が認められ、それらと性・年齢・受診年と地域・ベースライン時の喫煙習慣有無をマッチングしたコントロール189名の計255人について、24時間あたりの尿中排泄8-OHdGを測定し条件付ロジスティック回帰分析にて虚血性循環器疾患発症オッズ比を算出した。多変量解析ではBMI、飲酒量、喫煙本数、総コレステロール値(以上全て連続値)、高血圧・糖尿病既往の有無を調整した。解析の結果、女性では尿中8-OHdG排泄量の1標準偏差増加分のオッズ比が11.0(95%信頼区間:1.6ー72.2)であり、量依存的に虚血性循環器疾患発症と正の関連を示したが、男性では有意な関連は認められなかった。この結果より、一般集団において酸化ストレスが虚血性循環器疾患発症に関連している可能性が示唆された。しかし男性においては差が認められなかったことから、酸化ストレスと他のリスク因子との関連などの観点から性差による影響の違いについて今後更なる研究が必要である。酸化ストレスは糖尿病や動脈硬化を進展させるといわれています。これらは脳梗塞や心筋梗塞などの原因になりますが、酸化ストレスの高さが脳梗塞等を引き起こすかどうかはわかっていません。そこでこの研究では一般地域住民の方で脳梗塞や心筋梗塞を発症した人とそうでない人を比べて、発症前の尿中に含まれる酸化ストレスマーカーの量が異なるのかを調べました。その結果、女性では脳梗塞や心筋梗塞を発症した人の方が、発症していない人よりも尿中の酸化ストレスマーカーの量が多いことが分かりました。男性では統計的な差がありませんでした。
酸素センサータンパク質FixLによる環境情報伝達機構の解明

酸素センサータンパク質FixLは、マメ科植物の根に根粒を形成する根粒菌中に存在し、周囲の酸素濃度を感知し、窒素固定酵素の合成を遺伝子レベルで調節するヘムタンパク質である。FixLはヘム結合ドメインとキナーゼドメインから成り、前者は酸素濃度を感知し、後者はATPからリン酸基を受け取りレギュレータータンパク質FixJをリン酸化する。周囲の酸素濃度が高いときには、ヘム鉄に酸素が結合し、キナーゼ活性を示さない。しかし、酸素濃度が低下すると、ヘム鉄から酸素が解離し、キナーゼ活性が上昇してFixJのリン酸化を通して窒素固定遺伝子が活性化される。平成12-14年度にわたる本研究では、酸素濃度の変動という環境情報が最終的に窒素固定酵素の合成にまで伝達されるプロセスの「かなめ」の位置にある酸素センサータンパク質FixLに着目し、(1)ヘム結合ドメインの構造と機能の解明、(2)他のヘムタンパク質、例えばミオグロビン、ヘモグロビンとの詳細な比較、(3)FixL分子内の情報伝達機構の解明、(4)FixLとFixJとの相互作用の解明、(5)リン酸化に伴うFixJの活性化と転写活性機構の解明などをを行うことができた。なお、FixLを含めたヘムタンパク質に共通する自動酸化メカニズムの解明については、従来の活性酸素発生説をくつがえす活性水素説を提唱したが、現時点では論文審査員と論争中である。以上、当初の研究目標のほぼ90%を達成することができたが、上記の自動酸化メカニズムの解明については今後の展開を待ちたい。しかし、酸素濃度が低下すると、ヘム鉄から酸素が解離し、キナーゼ活性が上昇し、FixJのリン酸化を通して窒素固定遺伝子が活性化される。本年度は、酸素濃度の変動という環境情報が最終的に窒素固定酵素の合成にまで伝わるプロセスの「かなめ」の位置にある酸素センサータンパク質FixLに着目し、その分子内情報伝達機構の解明を目的として以下の研究成果を得た。1.FixLにおけるリガンド結合反応の精密解析:酸素センサー部位であるFixLのヘム鉄に対する各種リガンドの親和性を自記分光光度計で精密に測定し、他のヘムタンパク質ヘモグロビン、ミオグロビンと詳細に比較検討した。2.スピン状態とキナーゼ活性との相関性の再検討:FixLのヘム鉄が高スピン状態からリガンド結合型の低スピン状態へ変化するとキナーゼ活性が発現するとの説に反し、CO結合型(低スピン状態)でもキナーゼ活性が発現することを見いだした。3.分子内情報伝達に必須のアミノ酸の同定:遺伝子工学的手法により、ヘム鉄近傍に位置するアミノ酸をランダムに置換した試料に自己リン酸化活性測定法、電子スペクトル法、レーザーラマン分光法を適用し、N末端から209、210番目のイソロイシン(疎水性側鎖を持つアミノ酸)が分子内情報伝達に必須であることを見いだした。

本年度は酸素濃度の変動を感知するFixLならびにその情報を窒素固定遺伝子に伝えるFixJに着目し、タンパク質分子内、分子間情報伝連の機構を解明する目的で以下の研究を行なった。1.スピン状態とキナーゼ活性との相関性の確立:FixLのヘム鉄が低スピン状態にあるCO結合型以外にもNO結合型においてキナーゼ活性がみられることを発見し、酸素化型(低スピン状態)でなぜキナーゼ活性が発現しないかを最近報告されたX線結晶構造解析の結果に基づいて考察した。2.ラマン分光法による2原子分子結合状態の解析:トリプトファンを導入したFixLミュータントに紫外ラマン分光法を適用し、酸素分子のみがヘムの第6配位座近傍のアミノ酸残基の再配列を引き起こすことにより、分子内情報伝達を遮断することを明らかにした。3.転写因子FixJの機能性アミノ酸残基の解析:β-ガラクトシダーゼ遺伝子を含む適切なレポーターシステムを利用して、酸素存在下でもFixLからFixJに(分子間)情報伝達が起こるような変異をFixJに誘導することに成功した。また、この変異がFixJの二つのドメインであるリン酸化ドメインとDNA結合ドメインの内、前者にのみ導入されることを発見し、情報伝達に関わる重要なアミノ酸を同定した。酸素センサータンパク質FixLは、マメ科植物の根に根粒を形成する根粒菌中に存在し、周囲の酸素濃度を感知し、窒素固定酵素の合成を遺伝子レベルで調節するヘムタンパク質である。FixLはヘム結合ドメインとキナーゼドメインから成り、前者は酸素濃度を感知し、後者はATPからリン酸基を受け取りレギュレータータンパク質FixJをリン酸化する。周囲の酸素濃度が高いときには、ヘム鉄に酸素が結合し、キナーゼ活性を示さない。しかし、酸素濃度が低下すると、ヘム鉄から酸素が解離し、キナーゼ活性が上昇し、FixJのリン酸化を通して窒素固定遺伝子が活性化される。平成12、13年度において、研究計画のほぼ8割を達成したので、本年度は残された以下の二つの研究課題を実施した。1.自動酸化メカニズムの比較検討:酸素センサーとして機能するヘムタンパク質FixLと他のヘムタンパク質の自動酸化メカニズムか同じか否かについて、種々の酸素濃度条件下で比較する。一般に、2価のヘム鉄に結合した酸素分子が二価のヘム鉄からの電子移動によりスーパーオキシドアニオンとなり、その結果三価のヘム鉄から分離するという通説(活性酸素説)が有力であったが、我々はリガンド非結合型の二価鉄から活性水素が放出される可能性を示唆する結果を得た。2.リン酸化によるFixJの活性化と転写活性の検討:FixJは酸素センサーFixLからリン酸基を受け取ると活性化しDNAのプロモーター領域に結合し転写活性が向上する。そのメカニズムを解明するために、FixJのリン酸化部位のアミノ酸置換体をもちいて、機能発現に必須のアミノ酸を検索し、DNAへの結合特性に対するリン酸化部位の影響を定量的に調べた。
カルシウム調節ホルモンによるβーカテニンシグナル増強・骨量増加作用の検討

細胞株を用いて、活性型ビタミンD、副甲状腺ホルモン(PTH)などのカルシウム調節ホルモンとcanonical wnt経路のクロストークが存在することを証明した。さらに、wntのcoreceptorの1つであるlow-density lipoprotein receptor-related protein 6(Lrp6)の骨代謝における機能をLRP6の機能が低下した自然発症マウスrsを用い、解析した。その結果、wntのLRP6を介する効果としては骨芽細胞におけるRANKLの発現を抑制する事によって破骨細胞形成を抑制し、骨量を増加させることである事を証明し、論文として公表した。骨髄間質系細胞株であるST2細胞にカルシトリオール(1a,25(OH)2D3:1,25D)を添加するとwntのco-receptorの1つであるlow-density lipoprotein receptor-related protein 6(Lrp6)の発現は増加しなかったが、もう1つのco-receptorであるLrp5の発現は増加した。さらに、ST2細胞におけるwnt/beta-cateninシグナルに対する1,25Dの影響をSuper8×TOPFLASHレポータアッセイによって検討したところ、wnt3aにより増強されるTCF依存性転写活性を1,25Dは抑制した。また、骨芽細胞系細胞株MG63細胞に、5%FCS存在下で1,25Dを添加し24時間後のビタミンDレセプター(VDR)、LRP5およびLRP6、Wntシグナルの抑制因子であるsFRP1の遺伝子発現を解析した結果、VDRおよびLRP5の発現上昇が認められsFRP1の発現は低下した。このとき培養上清中のオステオカルシン濃度の著明な産生亢進が認められた。PTHの間欠的な処理を行ったところ、Super8×TOPFLASHレポーター活性は上昇し、この効果はH7添加により阻害された。また内因性のwntの標的遺伝子として知られるwisp2、nkd2の発現も、PTHの添加により誘導された。このPTHの効果はGSKβの阻害効果によることを証明し、論文として公表した(Suzuki A, Ozono K, et al. J CellBiochem,2007 Epub)。以上、当初の目的であるカルシウム調節ホルモンとwntのクロストークが存在することを実験的に証明した。細胞株を用いて、活性型ビタミンD、副甲状腺ホルモン(PTH)などのカルシウム調節ホルモンとcanonical wnt経路のクロストークが存在することを証明し、当初の目的は達成した。本年度は、wntのcoreceptorの1つであるlow-density lipoprotein receptor-related protein6(Lrp6)の骨代謝における機能をLRP6の機能が低下した自然発症マウスrsを用い、骨形態計測、免疫組織化学、細胞分化誘導、蛋白質機能解析などの方法で解析した。その結果、wntのLRP6を介する効果としては骨芽細胞におけるRANKLの発現を抑制する事によって破骨細胞形成を抑制し、骨量を増加させることである事を証明し、論文として公表した(Kubota T, Ozono K, et al. J Bone Miner Res,2008)。この結果は、Wntのもう一つのcoreceptorであるLRP5が骨吸収制御ではなく骨形成の増加作用を介して骨量を増加させるとの従来の知見と対象的であり、LRP5は骨に対するWntの作用発現に関与していない可能性が示唆された。申請者らの論文発表直後、Karsentyたちのグループが、LRP5の骨量増加作用はセロトニンを介する事を示す論文を発表した(Yadav VK et al. Cell2008)。骨におけるWntの作用とLRP5/6の使い分けについては、今後さらに検討されることが期待される。