hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
シグナル分子Wntファミリーの小胞体内での生合成機構

ショウジョウバエ体節極性決定遺伝子porcupine(porc)に欠損を持つ3令幼虫の原虫基では、分泌性形態形成因子Wntファミリーの一員であるWingless(Wg)のアスパラギン結合型糖鎖修飾が不完全になること、また逆に原虫基でporcを過剰発現させるとWgの糖鎖修飾が促進されることを先ず見い出した。そこで、Wgの糖鎖修飾に焦点をあてショウジョウバエS2細胞を用いた実験を行った。Wgはタンパク質翻訳と同時に分子内ジスルフィド結合を形成するために糖鎖修飾が阻害され、PorcはWgのタンパク質翻訳後の糖鎖修飾を促進することを明らかにした。タンパク質翻訳後の糖鎖修飾過程では、アスパラギン結合型糖鎖修飾部位(NXS/T)のOST複合体(小胞体膜に存在する)による認識が律速段階となる。したがって、PorcはWgのアミノ末端ドメインに結合し、さらにWgを小胞体膜にアンカーすることによりNXS/T部位のOST複合体による認識を促進させる機能を持つと考えられる。PorcはショウジョウバエHed gehogのパルミチン酸化に働くSkinny hedgehogと同様、膜結合型アシル基転移酵素ファミリーに属することから、WgがPorcによりアシル化され小胞体膜に強く結合する可能性が示唆される。また、我々はマウス及びアフリカツメガエルのporc相同体を単離し、これらにはaltenative splicingにより4種類のmRNA(A-D)が存在することを明らかにした。さらに、発現するmRNAのタイプが発生段階及び成体組織によって異なることを見い出した。例えば、成体脳ではDタイプが主に発現しており、肺や精巣ではAタイプが強く発現している。これら4種類のmRNAによってコードされるマウスPorc相同体(MporcA-D)タンパク質は、様々なマウスWntタンパク質とショウジョウバエWgの糖鎖修飾を促進する。さらにこれらは、ショウジョウバエporc変異株胚の表現型をレスキューすることから、Porcファミリーの機能は進化上極めて良く保存されていると結論できた。多細胞生物の発生過程において、オーガナイザーの一部として機能するシグナル分子Wntファミリーのプロセッシング機構をショウジョウバエWingless(Wg)を発現するS2細胞を用いて解析を行った。S2細胞においてWgのアスパラギン結合型糖鎖修飾の効率は著しく低く、これが小胞体内でタンパク質の翻訳後に行われているためであることを明らかにした。さらに、膜結合型Wgの糖鎖修飾が分泌型より効率良く行われることもこれに一致する。Wgのアスパラギン結合型糖鎖修飾は、DTT存在下ではタンパク質の翻訳と同時に効率良く行われることから、ジスルフィド結合形成によるWgタンパク質のフォールディングと糖鎖転移酵素複合体(OST complex)による糖鎖修飾が競合していることが分かる。一方、小胞体膜タンパク質をコードする体節極性決定遺伝子porcupine(porc)の存在下においても、Wgのアスパラギン結合型糖鎖修飾が促進される。PorcはWgのアミノ末端24アミノ酸を含むドメインに特異的に結合する。従って、翻訳終了後のWgはPorcにより小胞体膜にアンカーされ、糖鎖修飾部位(NXS/T)が効率良くOST complexに認識されることにより糖鎖修飾が促進される。また、このドメインとプロラクチンから成るキメラタンパク質の糖鎖修飾もPorcにより促進されることを見い出した。WgのPorc結合ドメインには、Wntファミリーで極めて良く保存されているC(X)_7RWNCモチーフが存在する。

ショウジョウバエporc変異株胚では、Wg及びDrosophila Wnt-3の分泌が阻害されており、PorcはC(X)_7RWNCモチーフを含むドメインを持つWntファミリーへの結合を介してタンパク質翻訳後のアスパラギン結合型糖鎖修飾を促進すると考えられる。分泌性形態形成因子として機能するWntファミリーは、システインに富む分泌糖タンパク質であり、多細胞生物において細胞の運命や移動を制御するタンパク質群である。ショウジョウバエ体節極性決定遺伝子porcupine(porc)は、複数の膜貫通ドメインを持つ小胞体膜タンパク質をコードしており、この遺伝子を欠損するショウジョウバエでは、Wntファミリーに属するWingless(Wg)のアスパラギン結合型糖鎖修飾が不完全となる。一方、porcの過剰発現は内在性及び強制発現させたWg両方のアスパラギン結合型糖鎖修飾を促進する。Wgのアスパラギン結合型糖鎖修飾は小胞体内においてタンパク質翻訳後に起こるが、ジチオスレイトール存在下においてはタンパク質翻訳と同時に効率良く起こる。したがって、タンパク質翻訳と同時に起こるWgのジスルフィド結合の形成が糖鎖転移酵素複合体によるアスパラギン結合型糖鎖修飾と競合していることが明らかとなった。Porcは、Wntファミリー内において良く保存されているWgのアミノ末端側に存在する24(83-106)アミノ酸ドメインに結合することによりその周辺においてアスパラギン結合型糖鎖修飾を促進する。これと一致して、PorcはWgだけでなく、ショウジョウバエWntファミリーの一員であるDWnt-3のアスパラギン結合型糖鎖修飾及び細胞外への分泌に必須である。PorcはHedgehogのパルミチン酸化に機能するSkinny hedgehogと同様に、膜結合型アシル基転移酵素ファミリーに属することから、Wntファミリーのアシル化に機能することが示唆される。したがって、PorcはWntファミリータンパク質を小胞体内でアシル化することにより小胞体膜にアンカーすると考えられる。この作用により、アスパラギン結合型糖鎖修飾部位がタンパク質翻訳後においても糖鎖転移酵素複合体に認識されうると推測できる。
X線撮像観測によるパルサー周辺の加速現象の研究

パルサーによって加速された相対論的荷電粒子によって作られるシンクロトロン雲をX線で観測することによって、パルサー周辺の荷電粒子の空間分布とエネルギーを明らかにし、パルサー風あるいはパルサー・ジェットの加速機構と、パルサー周辺からのX線・ガンマ線発生の仕組みを究明することを目的とする研究を行なった。このために、X線天文衛生『あすか』によって観測されたパルサー(Crab Pulsar,Vela Pulsar,PSR B1509-58,PSR B1951+32,PSR B1610-50,PSR B0656+14,PSR B1046-58,PSR B1929+10,Geminga,PSR B1055-52)に関して、周囲に見られる拡散X線源のスペクトルとX線光度を調べ、パルサー雲のX線光度がパルサー回転エネルギーの1.3乗に比例するという関係を明らかにした。さらに、この成果を生かして、銀河面上の未同定ガンマ線源の正体を探る研究を開始した。Comptonガンマ線天文台衛星のEGRET検出器によって100MeV以上の高エネルギーバンドで検出された銀河面に沿って分布するガンマ線源の多くはまだ未同定で正体が不明であるが、CrabやVelaに類似した若いパルサーであるという説が有力である。われわれは上記の成果に基づき、X線シンクロトロン雲によってパルサーの存在を検証するという方法を提案した。未同定ガンマ線源2EG1811-2339は1997年に『あすか』によって観測され、予想通りに非熱的なスペクトルをもつ拡散X線源を発見した。これは、このガンマ線源がパルサーを含む可能性が高いことを示すものである。
新規髄鞘形成分子テニューリン４の分子機能メカニズム解明とその応用を目指す研究

中枢神経系の髄鞘形成阻害や欠落・変性は、白質形成不全症や脱髄性疾患等の様々な神経疾患を引き起こす。その診断・治療を目的とした髄鞘形成の分子作用機序の解明の必要性が求められている。本研究では膜貫通型タンパク質テニューリン-4(Ten-4)に着目し、オリゴデンドロサイトによる髄鞘形成の分子機序を解明を目的に実験を行った。その結果、Ten-4は細胞接着活性を有しており、オリゴデンドロサイトの他の細胞との相互作用や形態形成に関わっていることが示された。今後より詳細な分子メカニズム解析が期待される。本研究では、最近申請者らが機能解明をした髄鞘形成促進タンパク質・テニューリン-4(Ten-4)に着目し、その分子作用機序の解明とそれに基づく髄鞘関連疾患への初期応用実験を試みる。初年度である平成25年度は、1)これまで未解明であった神経系細胞におけるTen-4機能の解明と、2)Sox10-VENUSマウスからのフローサイトメトリーを用いたオリゴデンドロサイト前駆細胞(OPC)の分化培養系の確立、3)オリゴデンドロサイトと神経細胞の共培養系の確立とその条件下におけるTen-4の機能を探ることを目指した。1)に関して、申請者らはneuroblastoma cell lineであるNeuro-2aの神経突起伸長アッセイ系において、内因性Ten-4の発現が誘導され、神経突起の成長錐に局在することを明らかにした。さらに、Ten-4をノックダウン系と過剰発現系を用いて、Ten-4が神経突起形成を正に制御していることを見出した。またこの条件下において、Ten-4がfocal adhesion kinase(FAK)のシグナル経路を活性化していることが解明された(Suzuki et al., 2014, FASEB J)。2)に関しては、Sox10-VENUSマウスのcharacterizationを行い(Suzuki et al., 2014, Pediatr Surg Int)、フローサイトメトリーを用いてこれまで困難とされて来たマウスOPCの精製とオリゴデンドロサイトへの分化系を確立した。1)、2)で特に関連論文のリバイスに予定以上の時間がかかり、3)は平成25年度に完了するに至らなかった。平成26年度以降に継続・遂行する。本研究では、最近申請者が機能解明をした髄鞘形成促進タンパク質・テニューリン-4(Ten-4)に着目し、その分子作用機序の解明とそれに基づく髄鞘関連疾患への初期応用実験を試みる。二年目に当たる平成26年度は、1)初年度(平成25年度)の研究継続、2)Ten-4結合分子の同定、3)髄鞘形成におけるTen-4シグナル伝達経路の解析、を計画し実施した。1)初年度(平成25年度)の研究継続については、フローサイトメーターを用いたSox10-Venusマウス脳からのオリゴデンドロサイト前駆細胞の精製と培養を確立し、オリゴデンドロサイトやII型アストロサイトへの分化誘導に成功した。ここまでの内容をまとめた論文を作成し、投稿準備段階とした。2)Ten-4結合分子の同定については、マウス脊髄組織のタンパク質抽出サンプルと抗Ten-4抗体を用いて免疫沈降を行い、その免疫沈降サンプルのマススペクトロメトリー(ショットガン法)の結果を解析した。その結果、細胞膜タンパク質として、全てのテニューリンファミリー分子が得られ、また、細胞内タンパク質としては、多くのアクチン制御分子が同定された。さらにいくつかの核内タンパク質も得られた。細胞外タンパク質は同定できなかった。これらのTen-4結合タンパク質候補の組換えタンパク質発現プラスミドを作成中である。3)髄鞘形成におけるTen-4シグナル伝達経路の解析については、2)の結果で得られたタンパク質群を、さらに相互作用・シグナル解析ソフトで解析し、いくつかの細胞骨格制御シグナル経路がTen-4制御下に置かれている可能性が示唆された。平成27年度に、2)と3)の実験を継続し、Ten-4結合タンパク質が同定とTen-4シグナル経路の活性化を調べ、残りの計画を遂行して行く。最終年度に当たる平成27年度は、これまで(平成2526年度)の研究継続とTen-4結合分子の同定を中心に進めた。これまでの研究継続については、中枢神経系でオリゴデンドロサイト系譜細胞に特異的に発現しているSox10遺伝子のプロモーター下流に蛍光タンパク質Venusを発現するように遺伝子改変されたSox10-Venusマウス脳から、オリゴデンドロサイト前駆細胞の精製と培養を確立し、オリゴデンドロサイトやII型アストロサイトへの分化誘導に成功した。内容をまとめた論文を投稿し、現在リバイス中である。Ten-4結合分子の同定については、マウス脊髄組織のタンパク質抽出サンプルと抗Ten-4抗体を用いて免疫沈降を行い、その免疫沈降サンプルのマススペクトロメトリー(ショットガン法)の結果を解析した。テニューリンファミリー分子に関しては、各々の発現プラスミドを作成し、テニューリンファミリー分子間でのホモフィリックまたはヘテロフィリック結合を検出した。

細胞内結合タンパク質の方では、Ten-4と免疫共沈降したタンパク質のウェスタンブロットでの検出と、組織免疫染色法での共局在を検出することができた。成果発表を行うために、これまで得られた内容のまとめを行った。最終年度である平成27年度は、上述した通り、これまで(平成2526年度)の研究継続とTen-4結合分子の同定を計画し実施した。Sox10-Venusマウスを用いたオリゴデンドロサイトの培養法確立に関しては、論文を投稿するに至ったが、リバイスに予想以上の時間がかかり、計画が大幅に遅れた。それに伴い、Ten-4結合分子の同定の実験も遅れる結果となった。しかし、Ten-4結合分子の同定に関しても十分とはいかないが、着実に結果が得られた。当該年度の平成28年度は、当初の期間よりも一年延長して、研究継続と成果発表を行った。本研究の目的は、中枢神経系での髄鞘形成の分子機序を解明することである。そのため中枢神経系の髄鞘形成細胞であるオリゴデンドロサイトの培養が必須となるが、一方で、マウスからのオリゴデンドロサイトの初代培養は、既に確立されているラットの方法と比べると困難であることが知られている。そこで当初計画していた通り、中枢神経系でオリゴデンドロサイト系譜細胞に特異的に発現しているSox10のプロモーターにより蛍光タンパク質Venusが発現するように遺伝子改変されたSox10-Venusマウスの脳から、フローサイトメーターを用いてVenus陽性細胞を精製することで、マウスオリゴデンドロサイト前駆細胞(OPC)を単離することに成功した。さらに、このOPCは培養条件によって、オリゴデンドロサイトやII型アストロサイトへの分化誘導することができた。この独自のOPC精製・培養法を用いて、本研究で注目している髄鞘形成分子であるテニューリン4(Ten-4)の分子機能解析も進めた。細胞膜貫通タンパク質であるTen-4の細胞外ドメインにはOPC接着活性があり、さらにTen-4細胞外ドメインには、髄鞘構造を形成するために必要な細胞突起部位のシート状の細胞膜形成に関与していることが示された。本研究結果より、マウスOPCの新規培養法とそれを利用したTen-4の分子機能の解析が可能となった。本研究成果をまとめた論文を専門誌に投稿中である。また国際学会として、Experimental Biology 2016とThe 2017Japan-NIH Joint Symposium、国内学会では、第48回日本結合組織学会学術大会、第59回日本神経化学会大会、第16回日本再生医療学会総会にて成果発表を行った。中枢神経系の髄鞘形成阻害や欠落・変性は、白質形成不全症や脱髄性疾患等の様々な神経疾患を引き起こす。その診断・治療を目的とした髄鞘形成の分子作用機序の解明の必要性が求められている。本研究では膜貫通型タンパク質テニューリン-4(Ten-4)に着目し、オリゴデンドロサイトによる髄鞘形成の分子機序を解明を目的に実験を行った。その結果、Ten-4は細胞接着活性を有しており、オリゴデンドロサイトの他の細胞との相互作用や形態形成に関わっていることが示された。今後より詳細な分子メカニズム解析が期待される。
地域社会における外国法の情報提供に関するリーガル・ネットワークの構築

1.本研究は,地域社会における外国法に関する情報提供の現状を明らかにし,外国法に関する情報提供を促進する一つの方法として,渉外関係に関する法情報についてのリーガル・ネットワークを構築することの意義とそのようなネットワークを構築するうえでの課題を検討し,さらに,そのようなネットワークを構築する具体的な道筋を示すことを目的としている。2.本研究では、具体的に、以下のような調査・研究を行った。(1)外国法の情報提供に関する欧米諸国の先行的な試みについて,文献の収集および分析を行い,その現状と外国法の情報提供に関する法理論上および実際上の問題を明らかにした。(2)外国法情報が各種の法律関係セクター(官公庁,裁判所,法律専門家など)を通じてどのように提供されているか,またそれらの情報が企業あるいは市民団体・個人によってどのように利用されているかについて、わが国の現状とわが国に固有の問題点を析出した。(3)地域におけるリーガル・ネットワーク構築のための連携のあり方について,官公庁,弁護士会,企業,市民団体に対してヒアリングを行い,各界の意見を聴取した。(4)外国法に関する情報提供ネットワーク構築のために、試行的に「外国法情報ネット」のホーム・ページを作成した(平成20年度内に公開予定)。3.本研究で明らかになった点は、次の通りである。(1)わが国においても外国法情報はそれぞれの法律関係セクターにおいて精力的に収集されているが、それらが独立・分散しているために、情報へのアクセスは容易でない。(2)法情報に関するインフラ整備という観点からは、外国法情報センターの設立が望ましいが、わが国の現状では実現可能性は乏しい。(3)当面は、外国法に関する情報を保有する各セクター間にネットワークを構築することが、外国法情報を提供するシステムとして最も実現可能な方策と考えられる。本研究は、地域社会における外国法に関する情報提供の現状を明らかにし、外国法に関する情報提供を促進する一つの方法として、渉外関係に関する法情報についてのリーガル・ネットワークを構築することの意義とそのようなネットワークを構築するうえでの課題を検討し、さらに、そのようなネットワークを構築する具体的な道筋を示すことを目的としている。本年度は、研究の初年度として、以下のように、わが国における外国法の情報提供の現状を調査し、その分析を行うとともに、地域におけるリーガル・ネットワーク構築のための準備作業を行った。(1)外国法の情報提供に関するシステムの整備が進んでいる欧米諸国の先行的な試みについて、文献の収集および分析を行い、その現状と問題点を明らかにした。(2)現在、わが国において、外国法に関する情報が各種の法律関係セクター(官公庁、裁判所、法律専門家など)を通じてどのように提供されているか、また外国法に関する法律情報が企業あるいは市民団体・個人などの民間セクターによってどのように提供されているかについて、実態調査をするためのアンケート案の検討を行った。(3)地域におけるリーガル・ネットワークを構築するため、その重要なセクターと考えられる官公庁、弁護士会、企業、市民団体などとの連携のあり方を検討するために、岡山大学法務研究科を中心に設立された法律専門家ネットワーク主催のシンポジウムに参加し、各界の意見を聴取した。(4)マルチメディアや高速情報通信網を活用するために必要な各種の技術的情報を収集し、インターネットを利用してのネットワークの実施に伴う問題点の析出を行った。本年度は、前年度に引き続き、以下のように、わが国における外国法の情報提供の現状を調査・分析するとともに、海外における外国法の情報提供の実情を知るために海外調査を行った。

また、地域におけるリーガル・ネットワーク構築のためのホーム・ページ作成の準備作業を行った。(1)外国法の情報提供に関するシステムの整備が進んでいる欧米諸国の先行的な試みについて、文献の収集および分析を行い、その現状と問題点を明らかにした。(2)多数の移民が居住しているフランスについて海外調査を行い、外国法情報の提供の現状とその課題について検討を加えた。(3)外国法に関する情報が各種の法律関係セクター(官公庁、裁判所、法律専門家など)を通じてどのように提供されているか、また外国法に関する法律情報が企業あるいは市民団体・個人などの民間セクターによってどのように提供されているかについて、実態調査をするためのアンケートを作成した。(4)地域におけるリーガル・ネットワーク構築のための連携のあり方について、官公庁、弁護士会、企業、市民団体に対してヒアリングを行い、各界の意見を聴取した。(5)ネットワーク構築のためのホーム・ページ作成の準備作業を行った。本研究は,地域社会における外国法に関する情報提供の現状を明らかにし,外国法に関する情報提供を促進する一つの方法として,渉外関係に関する法情報についてのリーガル・ネットワークを構築することの意義とそのようなネットワークを構築するうえでの課題を検討し,さらに,そのようなネットワークを構築する具体的な道筋を示すことを目的としている。本年度は,研究の最終年度として、以下のように,わが国における外国法の情報提供の現状を調査・分析するとともに,地域におけるリーガル・ネットワーク構築のために、試行的な「外国法情報提供ネット」のホーム・ページを作成した。このホーム・ページは平成20年度中に公開する予定である。(1)外国法の情報提供に関するシステムの整備が進んでいる欧米諸国の先行的な試みについて,文献の収集および分析を行い,その現状と外国法の情報提供に関する法理論上の問題点と実際の実施に関する問題点を明らかにした。(2)外国法に関する情報が各種の法律関係セクター(官公庁,裁判所,法律専門家など)を通じてどのように提供されているか,また外国法に関する法律情報が企業あるいは市民団体・個人などの民間セクターによってどのように提供されているかについて行ったこれまでの調査を基礎に、わが国の現状とわが国に固有の問題点を析出した。(3)地域におけるリーガル・ネットワーク構築のための連携のあり方について,官公庁,弁護士会,企業,市民団体に対してヒアリングを行い,各界の意見を聴取した。(4)外国法に関する情報提供ネットワーク構築のために、試行的に「外国法情報ネット」のホーム・ページを作成した。
分裂酵母新規ＤＮＡ領域局在化ＲＮＡ群の解析

分裂酵母の核内のDNA領域に局在する新規RNAについて解析した。新たに解析した6個のうち、5つは約700塩基内に、残りの1つは約2,700塩基内に局在化配列が存在することが明らかになった。先行して解析を進めているB1199については、B1199と相補的なRNA配列もDNA領域に局在することが明らかとなった。また、B1199の局在化配列の付加によってmRNAが核内に係留されることが示唆された。遺伝情報は、遺伝子の本体であるDNAからRNAに写し取られて発現する。したがって、RNAの細胞内局在化は、遺伝子発現を時空間的に制御するための重要な現象である。本研究は、我々が発見した多数の新規細胞内局在化RNAのうち、核内のDNA領域に局在するRNA群について、局在化に必要なRNA配列や局在化機構を明らかにすること、および局在化の生理的意義を解明することを目的とし、局在化RNAの全貌解明に貢献することを目指している。本年度は平成23年度に引き続き、核内のDNA領域に局在する8個の新規局在化RNAのうち、B1199とF958の2つのRNAについて解析した。平成23年度に、B1199の局在化配列をマーカー遺伝子につないで酵母の細胞に導入したところ、マーカー遺伝子の遺伝子産物(マーカー蛋白質)の発現が1/4程度に減少したことから、B1199の局在化配列の付加によってマーカー遺伝子由来のmRNAが核内に係留され、細胞質への移動が制限されることが示唆されていた。しかし、同じく平成23年度に、B1199の局在化配列を付加したマーカー遺伝子のmRNAの局在について、タグーGFP法およびin situ hybridization法を用いて顕微鏡下で観察したところ、核への顕著な局在を検出することはできなかった。本年度は、B1199の局在について、タグーGFP法で再確認を行なった。B1199を局在化RNAとして発見した当時とは、研究室が変わり主たる実験者も変わったので、再確認を行なったのであるが、B1199の顕著な局在化を観察することが困難であった。F958については、ゲノム上の局在化配列の破壊を目指し、複数の方法で繰り返し試みたが、失敗した。本研究は、我々が発見した多数の新規局在化RNAのうち、核内のDNA領域に局在するRNA群について、局在化に必要なRNA配列や局在化機構を明らかにすること、および局在化の生理的意義を解明することを目的とし、局在化RNAの全貌解明に貢献することを目指している。本年度は、B1199の局在について、新たな実験環境の下で、タグーGFP法を用いて確認を行なった。バックグラウンドレベルが高く苦労したが、試行錯誤の末、たしかにDNA領域に局在を観察することができた。また、F958についても、同じく新たな実験環境の下でDNA領域への局在を確認することができた。F958については、引き続きゲノム上の局在化配列の破壊を目指して新たな実験を行ない、12個のマーカー陽性の候補株を得たが、PCRの結果、これらの中に目的の破壊株が含まれていないことがわかった。従って、RNAの細胞内局在化は、遺伝子発現を時空間的に制御するための重要な現象である。本年度は、核内のDNA領域に局在する8個の新規局在化RNAのうち、B1199とF958の2つのRNAについて解析した。B1199の局在化配列をマーカー遺伝子に繋いで酵母の細胞に導入したところ、マーカー遺伝子のみを導入した場合と比べ、マーカー遺伝子の遺伝子産物(マーカー蛋白質)の発現が1/4程度に減少することが明らかとなった。この結果は、B1199の局在化配列を付加したことによって、マーカー遺伝子由来のmRNAが核内に係留され、細胞質への移動が制限されたことを示唆する。しかし、B1199の局在化配列を付加したマーカー遺伝子のmRNAの局在を、タグーGFP法およびin situ hybridizationで確認したとろ、B1199の局在化配列を付加していない場合と比べ、顕著な差が観察できなかった。今回用いた局在観察の条件設定が適切でない可能性と、もともとの係留の程度が低い可能性が考えられる。B1199の局在化配列の付加によって、マーカー蛋白質の発現は1/4程度に減少するが、ゼロにはならないため、後者の可能性が高いと考えている。F958の局在化配列に関しては、spo9 mRNAについてRT-PCRと3'RACE法を用いて調べた結果、spo9の2種類のmRNAのうち、一方のmRNAの3'UTRと一部重複することを確認した。

したがって、RNAの細胞内局在化は、遺伝子発現を時空間的に制御するための重要な現象である。本研究は、我々が発見した多数の新規局在化RNAのうち、核内のDNA領域に局在するRNA群について、局在化に必要なRNA配列や局在化機構を明らかにすること、および局在化の生理的意義を解明することを目的とし、局在化RNAの全貌解明に貢献することを目指している。本年度は、B1199とF958以外の残り6個の新規局在化RNAについて、局在化の再現性を確認するために、タグーGFP法により局在観察を行なった。その結果、はっきりと局在化が確認できたものと、局在化が確認しづらいものとがあったため、今後さらに観察数を増やして局在化の再現性を確認する予定である。また、局在観察と並行して、これら6個の新規局在化RNAについて、局在化に必要な配列を特定するために、断片化を進めた。遺伝情報は、遺伝子の本体であるDNAからRNAに写し取られて発現する。本研究では、我々が発見した多数の新規局在化RNAのうち、核内のDNA領域に局在する8個のRNAについて、局在化に必要なRNA配列や局在化機構を明らかにすること、および局在化の生理的意義を解明することを目的とし、局在化RNAの全貌解明に貢献することを目指した。8個のDNA領域局在化RNAのうち、B1199について、内在性の発現を確認したところ、細胞内ではB1199の配列の他にB1199と相補的な配列も転写されており、いずれのRNA鎖もDNA領域への局在を示すことがわかった。また、B1199の局在化配列をマーカー遺伝子につないで酵母の細胞に導入し、マーカー遺伝子のみを導入した場合と比べ、マーカー遺伝子の遺伝子産物(蛋白質)の発現量に差が出るか否かを測定した。マーカー遺伝子のmRNAの発現量が等しい株同士で比較したところ、B1199の局在化配列の付加によって、マーカー遺伝子の遺伝子産物の発現量が約1/3に減少することを確認した。この結果から、B1199の局在化配列の付加によって、マーカー遺伝子由来のmRNAが核内に係留され、細胞質への移動が制限されることが示唆された。すでに局在化配列の同定が終了していたB1199とF958以外の6つのDNA領域局在化RNAついて、断片化実験を行ない、局在化配列の同定を進めた。その結果、6つのうち5つは約700塩基内に、残りの1つは約2,700塩基内に局在化配列が存在することが明らかになった。分裂酵母の核内のDNA領域に局在する新規RNAについて解析した。新たに解析した6個のうち、5つは約700塩基内に、残りの1つは約2,700塩基内に局在化配列が存在することが明らかになった。先行して解析を進めているB1199については、B1199と相補的なRNA配列もDNA領域に局在することが明らかとなった。また、B1199の局在化配列の付加によってmRNAが核内に係留されることが示唆された。F958の局在化配列の遺伝子破壊や、RNA局在の再現性確認など、予定通りに進まなかった実験が複数あるため、研究期間(現在まで、4年間)を通して、少しずつ遅れが蓄積してしまった。遺伝学B1199とF958以外の残り6個の新規局在化RNAについて、局在化の再現性を確認し、局在化に必要な配列を特定する。
ＴＮＦ－αによる破骨細胞形成における骨細胞の作用について

マウス頭蓋骨より、軟組織を取り除いた後、コラゲナーゼ等で酵素処理を行い、骨表面の細胞を取り除いた骨を調整し、その後キレート剤を用いて脱灰することにより純度の高い骨細胞の単離を試みた。それぞれのフラクションで骨細胞特異的因子であるDMP-1をリアルタイムPCRにて解析したところ、作用5回目のフラクションに骨細胞は多く含まれている事がわかった。このフラクションをα-MEM培養液中でTNF-αを作用させ、細胞を回収し、Total RNAを精製し、破骨細胞分化関連因子を解析した。破骨細胞関連因子であるRANKLの増加傾向が確認された。破骨細胞分化の必須誘導因子として骨芽細胞が発現するRANKLが発見され、破骨細胞の分化・活性化機構の解明が進歩した。また、近年、同じように炎症性のサイトカインであるTNF-αでも破骨細胞が誘導されることがわかった。このことから一般的に骨のリモデリングを含む生理的骨吸収は、RANKLが主に働いており、リウマチや感染などによる病的骨吸収は、TNF-αが主に働いているものだと考えられている。それらのことよりTNF-αでの破骨細胞形成のメカニズムの解明することは、重要な課題となっている。本研究では、破骨細胞形成に関与している細胞である骨細胞のin vivoでのTNF-αによる破骨細胞形成への関与を検討しそのメカニズムを解明することを目的として研究を開始した。まず、骨細胞の単離から行った。採取した細胞を顕微鏡下で観察したところ樹状様の突起物がある骨細胞様の細胞が単離されたことが確認された。単離した骨細胞をα-MEM 200μl培養液中でTNF-αを作用させ、細胞を回収し、Total RNAを精製し、破骨細胞分化関連因子であるRANKL、OPGおよびM-CSF等のmRNAの発現をreal-time PCR法を用いて解析した。しかしながら、骨細胞が培養途中で完全に死滅あるいはほぼ死滅していくために充分なRNAが採取できない状況にある。現在、骨細胞の培養条件を検討している。破骨細胞形成は、破骨細胞前駆細胞である骨髄マクロファージ、RANKLを発現する間質系細胞(特に骨芽細胞)およびT細胞が関与しているといわれている。最近の報告で、骨細胞特異的にRANKL遺伝子が破壊されるトランスジェニックマウスにおいて、生理的な破骨細胞形成が抑えられ、骨硬化症を呈することが示された。これより、骨細胞がRANKLを分泌し生理的骨吸収をコントロールしているということがわかった。今後、この骨細胞様細胞を用いて、RANKLの発現、共培養による破骨細胞形成を観察していく予定である。

本研究では、破骨細胞形成に関与している細胞である骨細胞のin vivoでのTNF-αによる破骨細胞形成への関与を検討しそのメカニズムを解明することを目的として研究を開始した。まず、骨細胞の単離から行った。マウス頭蓋骨より、軟組織を取り除いた後、コラゲナーゼ等で酵素処理を行い、骨表面の細胞を取り除いた骨を調整し、その後キレート剤を用いて脱灰することにより純度の高い骨細胞の単離を試みた。それぞれのフラクションで骨細胞特異的因子であるDMP-1をリアルタイムPCRにて解析したところ、作用5回目のフラクションに骨細胞は多く含まれている事がわかった。このフラクションをα-MEM 200μl培養液中でTNF-αを作用させ、細胞を回収し、Total RNAを精製し、破骨細胞分化関連因子を解析した。矯正歯科マウス頭蓋骨より、骨細胞の単離は、うまく行くようになったが、その後の骨細胞の培養において、細胞死が起こり、培養条件の設定に時間がかかっている。培養時間の設定、TNF-aの作用濃度などの調整を行い、細胞死を防ぐ必要がある。マウス頭蓋骨より、軟組織を取り除いた後、コラゲナーゼ等で酵素処理を行い、骨表面の細胞を取り除いた骨を調整し、その後キレート剤を用いて脱灰することにより純度の高い骨細胞の単離を試みたが、最適なコラゲナーゼ処理の時間の条件を決めるのに時間がかかった。短すぎると他の細胞が混在してしまうか、長すぎると細胞死がおこった。また、キレート剤を作用させる時間の条件を決めるのにも時間がかかった。短すぎると採取できる細胞数が少なくなり、長くなると細胞死がおこった。単離した骨細胞をα-MEM 200μl培養液中で経時的にTNF-α(100μg/ml)を作用させ、細胞を回収し、Total RNAを精製し、破骨細胞分化関連因子であるRANKL、OPGおよびM-CSF等のmRNAの発現をreal-time PCR法を用いて定量的に解析する。現在、培養中に骨細胞が細胞死を起こすため、細胞死がおこらないような培養条件を設定する。その骨細胞にTNF-αを作用させ、経時的に細胞を回収、細胞溶解し、ウェスタンブロットにて、NF-kBの経路、MAPKの経路およびAktの経路などのシグナル伝達因子の発現とリン酸化を観察する。また、単離した骨細胞と96穴ウェルプレートにて骨細胞104cell/wellと骨髄細胞105cell/wellをVitamin D3(10-6M)およびTNF-α(100ng/ml)存在下でα-MEM 200μl培養液中で5-10日共培養を行い経時的に破骨細胞形成を観察する。TRAP染色にて確認を行う。評価は細胞像、TRAP陽性細胞の数をカウントすることで行う。方法は、我々が通常行っている骨芽細胞の共培養の方法に準じて行う。骨芽細胞も同様な作用があることから生後1日齢マウスより、頭蓋骨を取り出し、平滑筋等の周囲の組織を取り去り細かく断片化し、組織培養用コラーゲン入りの培養液中で培養し、5-7日後に回収し、初期培養の骨芽細胞として単離してくる。骨細胞と同様にマウスより採取した骨髄細胞と共培養でTNF-αを作用させ、破骨細胞形成能を比較する。同様に破骨細胞形成因子の発現をreal-
被災者が表現活動を通して具現化する「安心」～寄り沿い支援の実証的研究と理論の展開

本研究では、災害後に展開される社会モデルとしての「寄り添い支援」に着目し、アート等を通した支援(『表現型』寄り添い支援)の中で被災者が表現する「安心」の内実を分析することにより、その活動の意義や方法論を明確にする。先行研究、とりわけ方法論的な研究が少ないため、初年度は概念の整理、実践、そして実践振り返りワークショップに重点をおいた。実績としては、まず、研究会を4回(7月20日、9月28日、12月25日、1月9日)開催して、概念の整理をはかった。それに加えて、「女性支援による継続可能な社会づくりのための意見交換会・交流会」というワークショップを加賀市、岩手県大槌町、大船渡市で開催した。加賀市では、朴木佳緒留が「こっとりKAGA」でワークショップを開催し、女性の就労や子育て支援に必要な要素を話し合うことを通じて、支援策としての人と人の関係性の在り方について検討した(2018年9月29日;「こっとりとKAGA」(加賀市山中温泉東町2丁目ツ6)。大槌町では、アレキサンダー・ロニーと桂木聡子が絵本と絵描きのワークショップ「ポーポキと一緒に安心を描こう!」(岩手県大槌町シーサイドタウン「マスト」、主催NPOつどい・大槌町国際交流協会)を開催し、「安心」を表現する活動を行った(2019年2月10日)。また、大船渡市防災観光交流センターでも同様のワークショップを行った(2019年2月11日、主催:おはなしころりん)。さらに、勅使河原君江は高齢者のニーズに焦点をあて、「美術制作を通したシニアの学習ニーズの変容」(安里知陽、勅使河原君江、2018年9月23日)と第57回大学美術教育学会(奈良教育大学)においてポスター報告した。本研究を追及するにあたって、若干の困難があり、十分に活字化できなかった。困難の理由は1モデルとなる先行研究がないため、方法論的に手探りによる試行をせざるを得ない、2学際的な研究を行うため、研究分担者の専門分野が異なっており、同じ言葉(「支援」など)を使っても分野によって理解が違い、共通理解を構築するための時間がかかることである。また、実践面において、対象としている地域におけるワークショップの日程を定めることが遅れたため、予定した実践ができなかったこともある。以上より、ワークショップの内容を十分にまとめるに至らなかった。今年度は、概念の整理を続けながら、今まで行ってきたワークショップに対する振り返りワークショップから始める予定であり、振り返りを通じて方法論を明らかにすることが目標である。また、実践としてワークショップを最低2回開催することによって、新たな論点を獲得することを目指す。「『表現型』寄り添い支援」の特徴、意義の明確化を行いながら、表現活動による「安心」のイメージ分析と、ヒューマンネットワークの形成に取りかかる。また、子ども支援の観点から強化するため、小児科医の高田哲を新しく研究分担者として加える。

また、実践としてワークショップを最低2回開催することによって、新たな論点を獲得することを目指す。「『表現型』寄り添い支援」の特徴、意義の明確化を行いながら、表現活動による「安心」のイメージ分析と、ヒューマンネットワークの形成に取りかかる。また、子ども支援の観点から強化するため、小児科医の高田哲を新しく研究分担者として加える。本研究はモデルとなる先行研究がないため、方法論の手探りに多くの時間を使った。また、文理融合型研究であるため、研究分担者は専門が異なり、共通の基礎的な基盤構築にも時間がかっかたため、予定していた調査はできなかった。
リボソームRNAの高度保存部位に見られる蚕に特異的な塩基配列とその機能解析

蚕28S rRNA中のGTPaseドメインの塩基配列を解析したところ、全生物で共通と考えられてきた塩基U-1094とA-1098(塩基番号は大腸菌23S rRNAの命名法に準じる)がそれぞれCとGに変化していた。他の昆虫の塩基配列も解析し、この塩基置換が、鱗翅類昆虫の特徴であることを明らかにした。この塩基置換により、rRNAの高次構造は不安定化するが、この部位に結合するリボソームタンパク質P0,P1,P2,およびeL12により安定化することを示した。これらリボソームタンパク質によるRNA構造調整の仕組みを解析した結果、P1-P2ヘテロダイマーの形成が引き金になり、安定なP0-P1-P2複合体を形成し、これがeL12と協調的にrRNAに結合し、不安定なRNA構造を安定化することを明らかにした。また、大腸菌リボソーム上の相同タンパク質と蚕タンパク質との置換実験により、上記タンパク質結合によりリボソームのGTPase機能が誘発されることを実証した。これらの実験で、蚕のリボソームタンパク質は他の動物種からのタンパク質と比べ扱いやすく、リボソームタンパク質の機能解析に優れた材料であることが判明した。蚕型塩基配列のリボソーム機能への効果を探る目的で、大腸菌rDNA(rrnB)を含むプラスミド中に蚕型のC-1094とG-1098を導入し、大腸菌を形質転換した。形質転換体から得られたリボソーム中に蚕型RNA配列が含まれ、蚕型配列を導入した大腸菌23SrRNAにも細胞中でリボソームタンパク質が結合し、リボソーム粒子形成が正常に起こることを示している。得られた蚕型RNA配列を含むリボソームの機能解析が今後の研究として残された。リボソーム28SrRNA中の"GTPaseドメイン"と呼ばれる機能部位は、蚕ではユニークで、全生物で共通と考えられてきた塩基U-1094とA-1098がそれぞれCとGに変化していた。本年度、他の昆虫の塩基配列も解析したところ、この塩基置換は、ハスモンヨトウやエビガラスズメでも見られたが、ハエ、バッタ、ゴキブリでは変化しておらず、鱗翅類昆虫の特徴であることが示された。また、100ヌクレオチドの合成RNA断片を用いた分析により、蚕型の塩基置換を有する合成RNAは不安定で主に二種類の構造異性体の出現が確認された。蚕型RNA構造の不安定な性質は、ここに結合するリボソーム蛋白質,P0-P1/P2複合体やeL12により安定化することが判明した。従って、蚕型RNAの性質はP0-P1/P2複合体とeL12蛋白質の特徴と相関するものと推察される。また、P0-P1/P2とGTPaseRNAドメインとの結合機構を探る為、蚕リボソームより、P0,P1,P2を精製し、RNAとの結合性をゲルシフト法により解析した。その結果、P0単独ではRNA結合性は低いが、P1とP2の共存下により、その結合性は著しく増強した。しかしP0とP1のみ、またはP0とP2のみではRNA結合性の増強はわずかであった。また、P1とP2間の結合性も観察された。以上の結果、P1-P2間結合により、P0との複合体が生じ、P0を介して蚕GTPaseRNAドメインに結合し、RNAの高次構造を調整するという結合機構モデルが考案された。リボソームのGTPaseセンターはタンパク質合成効率に寄与する機能部位であり、28S rRNA中の"GTPaseドメイン"とこれに結合するタンパク質成分、P0, P1, P2, eL12により構成される。

蚕リボソームではGTPaseドメイン構造が特徴的で不安定であることを実証してきたが、本年度はこの部位に結合するリボソームタンパク質の性質を解析した。P1、P2、P0の各タンパク質を蚕絹糸腺リボソームより分離・精製し、タンパク質問相互作用とrRNA結合性およびリボソーム機能誘発活性をin vitroで分析した。その結果、1) P1-P2間に強い結合性があること、2)この二量体になり初めてP0に結合すること、3) 2組のP1-P2二量体がP0に結合し、P0(P1-P2)_2の五量体構造を形成すること、4)この五量体構造体を形成し初めてrRNAのGTPaseドメインに強く結合すること、を証明した。さらに、このタンパク質複合体は、eL12とともに、ラットおよび大腸菌rRNAにも強く結合することを明らかにした。また、得られた蚕タンパク質の機能を解析するため、大腸菌リボソームのGTPaseセンターを構成する相同タンパク質を特異的に遊離させ、その部位に蚕タンパク質を結合させた。得られたハイブリッド型リボソームの機能を解析したところ、蚕細胞の翻訳因子を受容し、合成poly(U)を鋳型とするPoly(Phe)合成活性を示した。以上の結果より、蚕リボソームのGTPaseセンターに存在するリボソームタンパク質、P1, P2, P0は互いの密接な相互作用により安定なP0(P1-P2)_2五量体構造を形成し、機能単位となることが示された。蚕GTPaseRNAドメインのユニークな構造はこのタンパク質五量体との結合により調整され、蚕に特徴的な機能構造を形成することが示唆された。高いタンパク質合成能を示す蚕のリボソームでは、GTPaseドメインと呼ばれるrRNA機能部位に特徴的な塩基配列が見られる。すなわち、28S rRNAで高度に保存されているはずの塩基、U-1094とA-1098(塩基番号は大腸菌の命名法に従う)が蚕ではそれぞれCとGに変化している。この塩基置換のリボソーム機能への効果を探る目的で、本年度は、大腸菌の相同RNAである23S rRNAのU-1094とA4098を蚕型であるCとGに塩基置換しその効果をin vitroとin vivoの両面から解析した。RNA断片を用いたin vitroゲルシフト法により、蚕型塩基を導入した大腸菌RNAと大腸菌リボソームタンパク質L11とL10-L7/L12複合体との結合性を分析した。その結果、蚕型塩基の導入により、各タンパク質の結合性は低下したが、両タンパク質を共存させることで安定なRNA-タンパク質複合体が形成されることを確認した。この結果は、蚕型配列を大腸菌rRNAに導入しても、リボソームタンパク質が集合し、リボソーム粒子が形成される可能性を示唆するものである。大腸菌rDNA (rrnB)を含むプラスミド中で23S rRNAにC-1094とG-1098を導入し、これを用いて大腸菌を形質転換した。形質転換大腸菌の生育速度は減少したが、長時間の培養で菌体が得られた。菌体からリボソームを調製し、その中に蚕型RNA配列を含むものが存在するかどうか分析した。逆転写酵素を用いたプライマー伸長法によるRNA塩基配列の分析により、得られたリボソームの約50%に蚕型配列が含まれることを確認した。本年度の結果は、蚕型配列を導入した大腸菌23S rRNAにも細胞中でリボソームタンパク質が結合し、リボソーム粒子形成が生じることを示している。得られた蚕型RNA配列を含むリボソームの機能解析が今後の研究として残された。
高齢者虐待における共依存関係に焦点をあてた看護ケアプログラムの有効性の検証

本研究は、高齢者虐待における主介護者と被介護高齢者間の共依存関係に焦点をあてた看護ケアプログラムの有効性を検証することを最終目的とした。訪問看護師は、共依存点数が20点以上の主介護者は、20点未満の主介護者より、被介護高齢者を思い通りにすることができるという考えのもと支援を行っていたとことに有意な差があった(P=6.459 a,P>0.05 )。共依存点数が20点未満の主介護者の方が、訪問看護師は両価的感情を持っていると認識していた(P=8.263 a,P>0.05)。介護にこだわりがない主介護者は、第三者を大いに頼りにしていた(P=6.794a,P>0.05)。本研究は、高齢者虐待における主介護者と被介護高齢者間の共依存関係に焦点をあてた看護ケアプログラムの有効性を検証することを最終目的としている。第一段階は、全国の訪問看護ステーションを対象に共依存関係にある主介護者および被介護高齢者の実態把握である。高齢者虐待の文献検索を同時に実施し、無作為抽出した訪問看護ステーション500箇所に対して、共依存関係にある主介護者と被介護高齢者に対する看護ケアプログラムの精選をすることであった。全国調査による共依存関係にある主介護者と被介護高齢者に対する看護ケアの実態把握のため、研究者が開発した看護ケアプログラムの内容をベースに質問紙票を作成し、時期別に収集する。次に看護ケアプログラム項目の精選を実施する。看護ケアプログラム質問票は、4時点で回答することにした。訪問看護師のケア内容は、ケア内容の実施の有無と評価として改善・悪化・維持に分類した。日本では子供が老親を世話するのが当然であるという風習が残っている。日本では、高齢者虐待について多くの研究がなされている。多くの研究は、主介護者の介護負担によって高齢者虐待が起こっているとされ、共依存に焦点をあてた研究は報告されていない。主介護者は薬物中毒者やアルコール中毒者でもない。そこで本研究は、共依存関係にある主介護者と被介護高齢者の特徴と、ケア内容を明らかにすることを目的とする。調査対象者および機関は、全国問看護事業協会に登録している訪問看護ステーション600か所を無作為抽出し、調査対象者は199名となった。さらに未回答29名、事務所閉鎖5名、業務多忙6名、該当者なし13名を除外し、分析対象者は175名とした。被介護高齢者の年齢は80歳以上から90歳未満が37.3%と最も多く、次いで70歳以上から80歳未満が28.9%であった。共依存人数は5人以下が84.6%であった。主介護者の年齢は、50歳未満が33.1%と最も多かった。家族構成は、配偶者が71(44.4%)、次いで息子が49(30.6%)であった。主介護者の55.6%が介護にこだわりをもっていた。特に被介護高齢者に呼ばれたら心身の疲労を顧みずに過剰な介護に没頭していたに35.3%が回答していた。共依存点数が20点以上の主介護者は、高齢者虐待点数が40点以上であった。共依存点数が20点以上の主介護者は、20点未満の主介護者より被介護高齢者を思い通りにすることができるという考えがある。共依存点数が20点未満の主介護者は20点以上の主介護者より、被介護高齢者を大切な存在であるということを認識していた。共依存関係にある主介護者と被介護高齢者間では献身的に介護をしているが、介護内容は被介護高齢者にあっておらず、主介護者の不適切な介護がエスカレートし虐待行為につながっている。本研究は、高齢者虐待における主介護者と被介護高齢者間の共依存関係に焦点をあてた看護ケアプログラムの有効性を検証することを最終目的とし、平成26年度に検討された看護ケアプログラムを個別介入することで、有効な看護ケアプログラムの完成を目指した。調査対象者は、研究協力者である7機関の訪問看護ステーションに勤務する訪問看護師であり、平均経験年数も10.5年と訪問看護に関しても豊富な経験を有した5名とした。共存点数が20点以上の主介護者は、高齢者虐待も40点以上であることに有意な差が認められた(P=24.498a,P>0.00)。主介護者は共依存点数には関係なく、50%以上が時々興奮していた(P=5.199 a,P>0.1 )。主介護者が興奮した時は、訪問看護師として傾聴するにとどまることが多かった。共依存点数が20点未満の主介護者の方が20点以上の主介護者より、訪問看護師は両価的感情を持っていると認識していた(P=8.263 a,P>0.05)。介護にこだわりがなく、あるいは不明な場合は、介護にこだわりをもっている主介護者より、第三者を大いに頼りにしていた(P=6.794a,P>0.05)。

看護ケアプログラムでは、共依存や高齢者虐待点数の確認、初回訪問時の主介護者への違和感、主介護者の介護に対する過剰な義務感がモニタリングの対象となり、訪問看護支援としては、主介護者の介護を否定しないよう傾聴にとどまり、提案型に終始する。また訪問看護支援によって閉鎖的な二者関係を崩すことがプログラムでは重要な項目であった。本研究は、高齢者虐待における主介護者と被介護高齢者間の共依存関係に焦点をあてた看護ケアプログラムの有効性を検証することを最終目的とした。訪問看護師は、共依存点数が20点以上の主介護者は、20点未満の主介護者より、被介護高齢者を思い通りにすることができるという考えのもと支援を行っていたとことに有意な差があった(P=6.459 a,P>0.05 )。共依存点数が20点未満の主介護者の方が、訪問看護師は両価的感情を持っていると認識していた(P=8.263 a,P>0.05)。介護にこだわりがない主介護者は、第三者を大いに頼りにしていた(P=6.794a,P>0.05)。質問紙票調査の実施時期に後れを生じてしまったが、その後の分析などについては、順調に進んでいる。訪問看護最終年度になっているため、研究協力機関に今回の調査結果を説明し、再度、有意な差がでた項目について、事例から確認をしてもらい、さらなる調査を行っていく方向である。無作為抽出600箇所であったため、質問紙票の発送に若干の遅れが生じたこと、そして留置き期間の問題により、現在、質問紙票の回収中である。最終年度は、質問紙票調査の結果をうけて、研究協力機関に再度調査を依頼するため、翌年分と合わせて使用する。平成26年度は臨地の訪問看護ステーションによる有効な看護ケアプログラムの検証であるため、質問紙票が返送されたらば、早急に看護ケアプログラム内容を項目別に分類し、臨地の訪問看護師と共同で有効な看護ケアプログラムを修正・追加していく。成果中間発表として、アメリカ精神保健学会で発表する。質問紙票調査の結果をもとに研究協力機関に対して、共依存関係にある主介護者および被介護高齢者に対してチェックをし、どのように看護支援すればよいのか看護ケアプログラムの有効性につなげるのか検討するために、研究協力機関に再度調査を依頼するため、翌年分と合わせて使用する。無作為抽出した600箇所に対し、質問紙票の発送の遅延、また年度をまたがった発送となってしまい、翌年度分になってしまった。無作為抽出した600箇所の訪問看護ステーションに対し、質問紙票の発送と回収、必要物品について使用する予定である。
国際的工程間分業の進展下での通商協定の目的と互恵的貿易自由化のあり方

本研究では、企業の生産活動のグローバル化によって、通商協定が果たすべき新たな役割が生まれてくるのか、通商協定による互恵的な貿易自由化のあり方はどのように異なってくるのか、という問いを経済学的視点から検討する。国境をまたいで生産工程が分散立地されるようになることで、最終財の取引のみを想定した従来のモデルから導かれる結果と比較して、通商協定の目的・必要性がどう異なってくるのかを理論的に明らかにする。
臓器工学的手法による先天性心疾患の新しい経静脈的カテ-テル治療法の開発

開胸術や開心術を行なうことなく先天性心臓疾患を治療することは、先天性心疾患治療における究極の目標と言ってもよい。しかし、すでに臨床に適応されている動脈管開存に対する非開胸的動脈管閉鎖術であるPorstmann法は、経静脈的に人工栓を動脈管に挿入する方法であり、年少時では人工栓挿入時に大腿動脈を損傷する可能性が高く、小児には適応が困難である。大腿動脈の損傷を避けるため、経静脈的に人工栓を動脈管に挿入する方法の開発が待たれている。本研究では、経静脈的カテ-テル法によって栓塞する臓器工学的治療を開発の最終年度であり、開発した本技術の概要を要約すると、肺動脈側が大動脈側に比して太いという動脈管の特徴的な形態のため、肺動脈側から動脈管に人工栓を挿入することになる経静脈的方法では、狭い肺動脈側の動脈管入口部を通過した後人工栓自体が拡大する。この機能を付与するため、湯をかけると元の形状に戻る特性を待つ“形状記憶術脂"を使用した人工栓を成型・加工してdeviceを作成した。細かく小さく変形した人工栓にガイドワイヤ-を通し、プッシングカテ-テルでdeviceを後押しして経静脈的に動脈管に挿入し、動脈管内にて温めた生理食塩水をかけて大きくし、留置すると動脈管が閉鎖した。以上のような、経静脈的動脈管カテ-テル治療法を開発し、先駆的な“血管内手術"の基礎を構築し、応用できる可能性を示した。新しい経静脈的動脈管閉鎖術の開発を試み、形状記憶樹脂ポリノルボルネンを使用したプロトタイプ人工栓を作製した。シリコンシ-トで“大動脈"“肺動脈"“動脈管"からなる大動脈模型を作り、拍動ポンプを装着して湯が循環する回路を組みin vitroの実験装置とした。37°Cの湯が循環している大血管模型での“動脈管"閉鎖の実験において、常温で細かく変形された状態の形状記憶樹脂製人工栓は、前もって留置されたガイドワイヤ-とプッシングカテ-テルに導かれて“動脈管"へ容易に挿入された。カテ-テルから約50°Cの湯を吹きかけると人工栓は大きく拡大して変形前の形状に戻り、ガイドワイヤ-とカテ-テルの抜去後も“動脈管"内に安定に留った。これにより“大脈管"圧の著名な上昇と“動脈管"での短絡率の減少がみられた。形状記憶樹脂製の人工栓は大血管模型の“動脈管"閉鎖に有用であり、将来の臨床応用も有望であると考える。この機能を付与するため、湯をかけると元の形状に戻る特性を持つ“形状記憶樹脂"を使用した人工栓を成型・加工してdeviceを作成した。