hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ヨーロッパトウヒ樹皮の生物活性スティルベン配糖体の局在解析と定量解析

そのため、このような組織構造の変化により軸方向柔細胞と放射柔細胞の連続性がなくなり、スティルベン類の合成量や合成する成分の種類が変化した可能性が考えられた。この研究は名古屋大学農学研究科福島教授らとの共同研究として行った。Cryo-TOF-SIMS/SEM解析について、樹皮試料および標品を用いた実験から目的の成分に特徴的なピークの同定を行うことができた。27年度を予定していた、乾燥試料と水を含んだ凍結試料との違いも明らかにできた。これらの結果を元に、スティルベン類として細胞レベルの蓄積挙動を解明できた。27年3月に予定していたフィンランドでの傷処理誘導実験は試料の準備が間に合わず行うことができなかったが、27年4月から実験を開始するための準備を行った。27年4月現在、連携研究者のJyske博士がフィンランドに行き、誘導実験開始の準備を行っており、若干の遅れがあるものの予定した実験を行う準備は順調である。以上の理由で、26年度は4ヶ月しかなかったが、おおむね順調に進展しているといえる。27年度が最終年度であるため、記入しない。最重要の課題は、樹皮試料のCryo-TOF-SIMS/SEM解析で検出される二次イオンスペクトルの中から各種スティルベン配糖体およびそれらのアグリコン由来のピークを分離して同定することである。今後、標品で得られたいくつかの特徴ピークを組み合わせて1つの成分を同定する試みを行い、樹皮試料に適用する。これらから各種スティルベンの蓄積の様子をマッピングにより明らかにする。申請の段階では、傷処理でスティルベン配糖体を誘導する実験を3月に行う予定であったが、試料の調達が間に合わず行うことができなかった。27年度に連携研究者のJyske博士がフィンランドに行き、誘導実験を行い試料の採取と調整を行う。得られた試料を用いてCryo-TOF-SIMS/SEM解析を行う。また、得られた試料の一部はフィンランドの研究協力者に依頼し成分分析を行う。研究の方向性に問題はなく、今後も実験データを蓄積し、得られた結果をまとめていく。
ナノインデンテーションによる極表面変形のマイクロメカニクス

ナノインデンテーション試験では微小領域で負荷および除荷過程における荷重Pおよび押込み深さhを連続的に測定してインデンテーション曲線(P-h曲線)を描き,その曲線から材料の機械的特性を算出するが実際の接触面積Aについての情報は得られない。本研究課題では得られた圧痕のSEM画像プロファイルから各荷重における接触面積Aを解析的に求めることを試み,圧痕の応力分布を算出して最大負荷荷重Pmax,接触深さh_Aを求めるとともに除荷曲線を再現し,実験で得られたP-h曲線と比較検討した。実際にはヴィッカース圧子とバーコヴィッチ圧子を用いた部分安定化ジルコニア(ZrO_2)のインデンテーション試験を行い,この圧痕の深さ方向の情報をSEMにより取得して,シミュレーションによりP-h曲線との比較検討を行なった。この圧痕の解析には縦241,横321画素,縦,横とも0.125mm間隔で測定したSEM画像を用い,接触面積Aは次のような手順で計算した。SEM画像の最深点を探して圧痕の中心とし,この圧痕中心から対角線上の稜線を辿って最高点を見つけ,この2点を斜辺とする直角二等辺三角形を取り出し計算範囲とする。次に理想的圧子が最大押込み深さまで押込まれたものと仮定してSEM画像との差分を弾性戻り分(u_3i)とし,各点における影響係数を算出して影響係数と弾性戻り分から連立方程式をたてて解く.ここで得られた要素に圧力が負となるものがあれば除外し,すべての要素の圧力が正となるようにする。最後に圧力要素からPmaxを求め,要素数から接触面積Aを計算する。以上の手順で求めた除荷曲線を実験で得られた除荷曲線と比較すると全域にわたってよく一致し解析で求めた要素とSEM画像ともその形状と大きさについてもよく一致しており,接触面積を正しく表していると考えられる。この接触面積Aを用いて計算した接触深さh_Aも過去の理論式で求めたものとほぼ等しくなった。10年度は押込み深さ数10nm以下の深さのナノインデンテーション試験で種々の薄膜やガラス極表面層の変形挙動について調べ,さらに本試験法の規格化を念頭において,試験機や標準試料の問題点について考察した。またナノインデンテーションの理論的位置づけのため,連続転位モデルを用いた弾塑性材料における押込み解析も試みた。得られた成果は以下のとおりである。1.三角錐圧子を膜構造体に押込んだときの弾性荷重-変位曲線を有限要素解析を用いて導出した。この結果を用い,圧子先端丸みおよび下地の影響を考慮し,膜厚10nm極薄膜や実際のハードディスク用へッドスライダ保護膜の弾性常数を推測することができた。2.市販の3種類の硬さ標準試料のナノインデンテーション試験を荷重を0.3mNから3mNまで変えて測定した。測定結果のばらつきの変動係数は,いずれの材料においても荷重が増大すると2%から7%まで増えた。3.各種ガラス極表面をナノインデンテーション評価した。液晶基板ガラス表面は研磨により,局所的に損傷し若干の軟化を示す。光学ガラスにおいては,表面数nmが一様に強い軟化を示した。4. ZrO_2の四角錐および三角錐圧子押込み試験に対する連続転位モデル解析を行ない,推定された材料の塑性域大きさ,降伏応力は文献データとの良い一致を見た。ナノインデンテーション

試験では微小領域で負荷および除荷過程における荷重Pおよび押込み深さhを連続的に測定してインデンテーション曲線(P-h曲線)を描き,その曲線から材料の機械的特性を算出するが実際の接触面積Aについての情報は得られない.本年度は得られた圧痕のSEM画像プロファイルから各荷重における接触面積Aを解析的に求めることを試み,圧痕の応力分布を算出して最大負荷荷重Pmax,接触深さhAを求めるとともに除荷曲線を再現し,実験で得られたP-h曲線と比較検討した.実験ではヴィッカース圧子を用いてジルコニア(Zr02)のインデンテーション試験を行い,解析に縦241,横321画素.縦,横とも0.125μm間隔で測定したSEM画像を用いた.P-h曲線は負荷荷重Pmax=4.9Nで最大押し込み深さhmax=4.59μmが得られた.この圧痕の接触面積Aを次のような手順で計算した.SEM画像の最深点を探して圧痕の中心とし,この圧痕中心から対角線上の稜線を辿り最高点を見つけ,この2点を斜辺とする直角二等辺三角形を取り出し計算範囲とする.次に理想的圧子が最大押込み深さまで押込まれたものと仮定してSEM画像との差分を弾性戻り分(u3i)とし,各点における影響係数を算出して影響係数と弾性戻り分から連立方程式をたてて解く.ここで得られた要素に圧力が負となるものがあれば除外し,すべての要素の圧力が正となるようにする.最後に圧力要素からPmaxを求め,要素数から接触面積Aを計算した.以上の手順で求めた除荷曲線は実験で得られた除荷曲線と比較すると全域にわたってよく一致した.また解析で求めた要素とSEM画像ともその形状と大きさはよく一致しており,接触面積を正しく表していると考えられる.またこの接触面積Aを用いて計算した接触深さhAも過去の理論式で求めたものとほぼ等しくなった.ナノインデンテーション試験では微小領域で負荷および除荷過程における荷重Pおよび押込み深さhを連続的に測定してインデンテーション曲線(P-h曲線)を描き,その曲線から材料の機械的特性を算出するが実際の接触面積Aについての情報は得られない。本研究課題では得られた圧痕のSEM画像プロファイルから各荷重における接触面積Aを解析的に求めることを試み,圧痕の応力分布を算出して最大負荷荷重P max,接触深さhAを求めるとともに除荷曲線を再現し,実験で得られたP-h曲線と比較検討した。実際にはヴィッカース圧子とバーコヴィッチ圧子を用いた部分安定化ジルコニア(ZrO2)のインデンテーション試験を行い,この圧痕の深さ方向の情報をSEMにより取得して,シミュレーションによりP-h曲線との比較検討を行なった。この圧痕の解析には縦241,横321画素,縦,横とも0.125mm間隔で測定したSEM画像を用い,接触面積Aは次のような手順で計算した。SEM画像の最深点を探して圧痕の中心とし,この圧痕中心から対角線上の稜線を辿り最高点を見つけ,この2点を斜辺とする直角二等辺三角形を取り出し計算範囲とする。次に理想的圧子が最大押込み深さまで押込まれたものと仮定してSEM画像との差分を弾性戻り分(u3i)とし,各点における影響係数を算出して影響係数と弾性戻り分から連立方程式をたてて解く.ここで得られた要素に圧力が負となるものがあれば除外し,すべての要素の圧力が正となるようにする。最後に圧力要素からPmaxを求め,要素数から接触面積Aを計算する。
リン酸化部位特異的抗体を用いたイオンチャネル制御機構の解析

イオンチャネルの膜内動態や機能制御機構として、リン酸化などの細胞内代謝過程との深い関連が指摘されているが、その機序を詳細に解析したものは少ない。そこで本研究ではこのリン酸化と機能制御の相関を最近のチャネル分子構造研究での成果と、新しい電気生理の手法を結びつけた研究体勢によって推進を図った。本年度はラット脳Naチャネルについて、リン酸化部位指向性の抗ペプチド抗体を用いた電気生理学実験の検討を行うと共に、心筋Caチャネルのリン酸化推定部位に対する抗体の作成を行った。1.ラット脳から抽出したNaチャネルのmRNAをツメガエル卵母細胞に発現させて、人工的にリン酸化を進めてみると、チャネル不活性化過程を促進することが、電気生理学的に再現性よく確かめられた。2.上の過程に対する抗体の効果は十分大きなものではないが、抑制効果をもつ傾向を示した。3.ブタ心筋Caチャネルのリン酸化推定部位のアミノ酸配列をもつペプチドに対して作成した抗体の一つは、明らかにCaチャネル分子と、シ-クエンス特異的に反応することが確認できた。4.3の抗体はウサギ骨格筋Caチャネルの類似シ-クエンスと反応することも確かめられた。この抗Caチャネル抗体が実際にタンパク質リン酸化を抑えるか否かは非常に興味深いところで、鋭意検討中である。
南部アフリカにおける開発政策と先住民運動にともなう狩猟採集社会の再編に関する研究

本研究は南部アフリカの狩猟採集民として知られるサンが、再定住をともなう開発政策と先住民運動の渦中で、自らの社会や文化を再編する過程を明らかにしたものである。サンの政治参加、「伝統文化」活動、アイデンティティと社会関係などを調査した結果、「文化の消滅」の場となることが危惧されていた再定住地が、むしろこの社会や文化の特徴が再編されつつ維持、再生産される場となっていることが明らかになった。今日、ボツワナ共和国のサンの多くが、従来の生活域を離れ、開発計画の拠点として政府が設けた再定住地で生活をしている。この再定住政策は、サンの「脱狩猟採集民化」と主流社会への同化をはかる意図があると批判される一方で、散在していた小規模集団を結集させ、内部に分裂や対立の可能性を含みながらもサンの社会秩序が守られる大規模なサン・コミュニティを誕生させている。そこで本研究では、再定住地をサンの文化や社会の再生産や再構築に貢献する場としてとらえ、サンの独自の価値観や生活システムの維持、再構築に果たす役割を検討することを目的とする。この目的のもと、本年度はとくに、再定住地におけるサンの活動が、世界的な先住民運動の高まりに後押しを受けている点に注目して、研究を進めた。1990年代にはいって多数誕生した先住民団体はサンの故地に対する先住民としての権利を主張し、再定住政策を批判するが、同時に、サンが集住する再定住地を活動の拠点として、そこでのサンの政治参加や文化活動の活性化を推し進めている。そこでまず研究会やワークショップで、これまでの調査結果を分析し、先住民運動が再定住地の生活に与えている影響、あるいは齟齬について発表した。なかでも再定住地における伝統的なダンスの活発化や、サンの故地をめぐる先住民運動の動向についてそれぞれ小論にまとめた。さらに再定住地をめぐる開発政策と先住民運動のあいだの論争を整理し、その両者の影響を直接的にうけながらも、独自に再編される再定住地の生活についての論文を執筆し出版された。また2月3月にはボツワナにおいて、再定住地の政治的代表者であるヘッドマンについての広域調査を行った。さらにボツワナ大学で調査成果を発表するとともに、スタッフらと今後の調査の進め方や研究成果の現地への還元の方法について打ち合せや議論をおこなった。この目的のもと、本年度は、まず昨年度までに収集した資料にもとづいて、世界的に展開される先住民運動が再定住地のサンの生活に与えている影響、あるいは齟齬について学会などで研究発表した。また再定住地における居住形態の変化と土地の権利をめぐる問題を扱った論文と、再定住地において再編される社会関係と、そのなかでサンに特徴的な相互扶助である食物分配がいかに維持、変化しているかを論じた論文を執筆した。8月9月には、ボツワナにおける2つの再定住地において、政治的代表者の選出過程と居住形態の変遷について調査をした。またNGOが主催する伝統音楽や踊りに関する文化事業についても明らかにした。ボツワナ大学および関連NGOのスタッフらとは、今後の調査の進め方や研究成果の現地への還元の方法についての打ち合せや議論もおこなった。続いて、同じコイサン系の人々が居住しているが、政策やNGOの活動状況が異なる南アフリカおよびナミビアの再定住地を訪れ、3カ国の比較検討を行うための予備的な調査をおこなった。また2月には、カメルーンの国際ワークショップで発表し、アフリカの狩猟採集民や先住民が共通して直面している問題について議論した。本目的のもと、本年度は、国際的に展開される先住民運動が再定住地の生活に与えるインパクトに注目し、政治的代表者の選出にかかわるマイクロ・ポリティクスおよび土地の利用形態について分析し、学会やシンポジウムなどで議論を深めた。また研究成果を、他のサン研究者とともに百科事典のかたちで発行し、調査地で配布した。

またそれを用いて、住民をはじめ、ボツワナのサン支援について中心的な役割を担っているNGOや政府機関およびボツワナ大学などの協力も得ながら、サンの文化や社会の持続性に関して議論する機会をもうけた。さらに昨年度までの研究成果とあわせて、再定住地に暮らすサンの民族誌を単著として出版し、再定住地で再編されるサン・コミュニティに注目することの重要性を指摘するとともに、そのダイナミクスを生業、土地利用、相互扶助、政治活動などの点に注目して論じた。
続き間型住宅における格式的意匠の伝承過程に関する編年的研究

近年の地方都市圏の戸建住宅建設では、いわゆる公私室型系列の平面とは異質な〈続き間型〉系列の平面が多くみられる。伝統的平面との関連では町家系列と農家系列の2種類の続き間型平面がみられるが、今回の研究では前者に焦点をあて、金沢市内で約50戸を抽出(幕末から昭和50年頃までの建築)し、平面と座敷回り意匠の変容過程の分析を行い以下の結果を得た。1)平面形式の変容:町家の平面形式の発展は平家型(【I】型),中二階・二階一室型(【II】型),中二階・吹抜残存型(【III】型),中二階・二階全居室型(【IV】型),本二階二階全居室型(【V】型)にタイプ化できる。伝統的町家は【I】型に集中していたが、まず明治中期にアマの一部に座敷をとる【II】型が現われ、大正期になるとアマが全て無くなり吹抜けだけ残る【III】型、アマも吹抜も無くなるが本二階には軒高の足りない【IV】型が出現している。昭和初期になり本二階が現われ、金沢の町家の二階発達は最終段階に達している。戦後の変化はトオリニワ部分の床上化に集約される。昭和30年代には台所の床上化、40年代には玄関土間以外は完全に床上化する。40年代後半になると、二階にあった座敷が一階に移り、二階が個室化する。一階に移った奥座敷は中の間との続き間化が散見されるようになる。2)座敷構成の変容:座敷飾りの変容に注目し編年を行った。床の間・床脇・書院の三つ揃っているもの、二つ揃っているもの、一つだけのものを夫々A,B,Cと名づけると、江戸末期では上層町家座敷は10帖の広さでAであるのに対し、一列型町家はAは少なかった。大正に入ると一列型町家でもAになる。昭和になるとAでは二重回り縁をもつ天井がつくられた。昭和初期にはBのものに長押が普及し、座敷飾りの大衆化がすすんだ。戦後は30年前後のAでは長押、二重回り縁が用いられた。45年以降は二階座敷の一階への再移動がすすみ、白木柱、目透かし天井が現われ、意匠の多様化が現われた。
歯肉溝滲出液における好中球細胞外トラップと歯周組織の炎症との関わりの解析

歯肉溝で口腔細菌の侵入を防ぐ為、好中球は貪食だけではなく、細胞外トラップにより侵入を阻止していると考えられている。しかし歯肉溝におけるNETosisの制御機構について不明な点が多い。歯肉溝浸出液中のタンパク質成分をSDS-PAGE法、質量分析法などにより解析したところ、NETosisの誘導分子として知られているラクトフェリン、セロトランスフェリン、S100A8,9、IL-1β、補体等が検出された。一方で、細菌LPSでin vitro系において好中球及び好中球様細胞を刺激すると、NETosisが誘導された。歯肉溝において細菌因子による刺激で好中球にNETosisが生じている可能性が示唆された。硬組織である歯は口腔粘上皮を突き破って存在する。歯は歯槽骨に直接結合せず、歯根膜と呼ばれる靱帯組織を介して骨に結合し、歯の生えぎわ(歯肉の辺縁部)では上皮性結合により常在菌や歯周病原菌の侵入を防ぐ。何らかの要因によって侵襲と防御の均衡が崩れると炎症が拡大し、上皮性付着や線維性付着が破壊され歯周組織に炎症の波及した歯周炎に進展する。生体防御として、血漿由来の組織液である歯肉溝浸出液(以下、GCF)や好中球が歯周組織に分布する毛細血管から血管外へ、そして上皮を通過して歯肉溝や歯周ポケットに到達する。歯周ポケットにおいて好中球による微生物の貪食が知られているが、近年は細胞外トラップ(以下、NETs)による防御の報告が散見される。我々はこれまでの解析により、歯肉溝滲出液中にはNETosisに深く関与するミエロペルオキシダーゼ(MPO)、ヒストンH2-4、S100タンパク質等が存在することを明らかにした。しかし、細菌感染による炎症環境の中でNETosisが生じるメカニズムには不明な点が多い。そこで、1NETosisが起こるメカニズムの解析、2GCFに含まれるNETosis起因性物資の検出、の2つ視点より研究計画を立案した。1について、好中球様に分化誘導の可能なヒト前骨髄球細胞株HL-60と、血液より採取したヒト好中球を用いてin vitro実験評価系を構築した。レチノイン酸誘導体により好中球様に分化させたHL-60細胞株においてツニカマイシンで、ヒト好中球ではPMA、LDL、酸化LDLによる刺激で、NETosisをおこさせることができた。2について、健常者ボランティアよりGCFをペーパーポイントを用いて採取し、質量分析により含まれるタンパク質の種類と存在比の分析を行った。ペプチドに非放射性同位体よる標識を行い二次質量分析解析を行う準備手段の確立がなされた。in vitro評価系において、NETosisを顕微鏡で目視で行った。定性的な根拠となる確認手段が必要であることが判明した。歯肉溝浸出液の成分の分析として質量分析法、iTRAQ質量分析法(成分の相対的比較)を計画し、歯周病患者から採取した歯肉溝浸出液の解析を計画している。しかし、初年度では、健常者ボランティの協力の下採取方法の確立を行ったが、採取した歯肉溝浸出液に含まれる総タンパク質量が解析に対して不足する傾向が明らかとなり、サンプル調整法の見直しを行ったために、計画通りの患者からのサンプリングができなかった。歯周病に罹患した歯周ポケットでは、歯周ポケット細菌叢の中の細菌の生体への侵入を防ぐために好中球による細菌の貪食が盛んに行われている。好中球による防御は貪食作用だけではなく、細胞外トラップ(以下、NETs)により歯周病原細菌の侵入を阻止している。この防御機構は、歯周病態が進行する前、すなわち臨床的に健康な歯肉溝においてもホメオスタシスを維持するために機能していると考えられる。歯周組織で好中球NETsが生じるトリガーは口腔細菌で、とりわけ歯周病の進行により増加するグラム陰性菌との関係を検索した。好中球様に分化誘導の可能なヒト前骨髄球細胞株HL-60と、血液より採取したヒト好中球を用いて、NETs誘導の条件を検討した。HL-60はAll-Trans Retinoic Acidにより好中球様に分化を誘導した。NETsはSYTOGreenによる拡散物質の核外や細胞質外への逸出を確認した上で、シトルリン化ヒストンH4に対する免疫染色で確認をした。HL-60ではツニカマイシンで濃度依存的(0, 5, 10, 20μg/ml)に、ヒト好中球ではPMAで濃度依存的(0, 10, 20, 50nM)にNETsが誘導された。さらに、HL-60では歯周病原菌の一つであるグラム陰性桿菌Porphyromonas gingivalisのLPS(0, 1, 2, 5μg/ml)によりNETsが誘導された。しかし、LPSによる刺激では濃度依存性は確認されなかった。一方で、NETs誘導率(発生率)の算定法に改善の余地がある。NETsによる網状構造が広がり細胞数の測定が容易でないためである。今後はシトルリン化酵素(PAD4)の活性化や抗シトルリン化ペプチドの測定によるNETs形成の定量化を進める。

歯肉溝浸出液中のタンパク質成分をSDS-PAGE法、質量分析法などにより解析したところ、NETosisの誘導分子として知られているラクトフェリン、セロトランスフェリン、S100A8,9、IL-1β、補体等が検出された。一方で、細菌LPSでin vitro系において好中球及び好中球様細胞を刺激すると、NETosisが誘導された。歯肉溝において細菌因子による刺激で好中球にNETosisが生じている可能性が示唆された。in vitro系での定性的な解析については、先行論文等で報告のある、NETs関連タンパク質の免疫染色等による確認手法を取り入れ、評価結果の信頼性向上をはかるものとする。歯肉溝浸出液のサンプリングについて、第一段階としてサンプル採取の方法を再確認し、十分な量のサンプル採取が可能になるような採取方法の確立を急ぐ。歯周病態・診断学消耗品の一部(ピペット先端、消耗品)が当初の見込みよりも少なく研究が進行したために、一箱購入が少なくなったため。研究資金支出にも十分気を配りながら、計画の通りに進める。
マイクロアレイを用いた花の有用形質を制御する遺伝子群の解析

ペチュニアの2野生種を用いた雑種の蕾で発現している遺伝子のうち、重複のない2,976遺伝子を単離し、マイクロアレイを作成した。これを用いて、花冠の縁が緑色になる野生突然変異を解析したところ、緑色部分と通常の花冠で光合成関連遺伝子の発現量が異なった。これは花冠縁部の花器官化と葉器官化の決定を調節する転写因子が突然変異の原因であることが示唆された。さらに、原因遺伝子FBP2を特定し、トランスポゾンの挿入によることを示した。ペチュニア品種の起源種とされるPetunia axillarisとP.integrifoliaの交雑後代の蕾から単離したRNAより完全長cDNAライブラリーを構築し、EST解析を行った。任意のcDNAクローンを解析し、得られた配列の異なるcDNAクローンからcDNAマイクロアレイを作製した。FBP2遺伝子の変異により花冠縁部が葉化したP.inflata(以下、GE変異体)と野生型P.inflataの蕾の花冠縁部よりTriZOL (Invitrogen)を用いてtotal RNAを抽出した。CyScribe First-Strand cDNA Labelling Kit (Amersham)を用いてcDNA合成を行い、CyScribe GFX Purification Kit (Amersham)を用いて精製した。cDNAをアレイ膜に65°Cでハイブリダイズさせた。発現程度はScanAlyzeを用いて解析した。任意のcDNAクローン4800種のEST解析した結果、2976種の固有のcDNAクローンを選抜した。これらの得られたクローンからcDNAマイクロアレイを作製した。GE変異体はEクラスMADS-boxに属するFBP2遺伝子の変異が原因で、花冠縁部が葉状組織となっている。GE変異体の花冠縁部では野生型に比べ、発現量(fold change)が2倍以上であった遺伝子は合計111個であった。アレイにスポットされている光合成関連遺伝子がGE変異体でのみ顕著に増加した。特に最も発現の差があった遺伝子は光合成関連遺伝子ribulose 1,5-bisphosphatecarboxylaseのホモログで10倍以上の相対的発現量が増加した。以上の結果から、FBP2遺伝子は花冠縁部の花器官化と葉器官化の決定を調節する転写因子機能をもっている可能性が示唆された。平成18年度の解析結果を踏まえ,マイクロアレイ用完全長cDNAライブラリのEST解析を継続して行った。合計で7001のクローンをランダムに選び,塩基配列を決定した。その結果,611群の関連した遺伝子と2410個の固有な配列が得られ,1098の高度に保存されたESTでは機能を推定した。新たに作成したマイクロアレイの有効性を調査するため,蕾をステージごとに採集し,RNAを抽出して解析したところ,112の機能を推定した遺伝子で開花直前に発現量が増加した。アントシアニン合成系やタンパク分解に関係する遺伝子もこれらに含まれたため,このマイクロアレイがペチュニアの開花に関係する遺伝子の発現解析に有効であることが示された。また,FBP2遺伝子の変異個体の分析も継続して行った。花冠縁部が緑色に着色するFBP2変異個体では花冠縁部が気孔をもつなど,葉に近い構造をしている。その変異遺伝子のゲノム塩基配列を決定したところ,第2イントロンにspm様トランスポゾンが挿入されており,これをdPiTp1と名付けた。エクソンの配列は正常な遺伝子と同じであったことから,このトランスポゾン挿入によって転写が抑制されていることが示唆された。今後のマイクロアレイ解析の材料として予定しているベイン関連遺伝子について,野生変異個体を見いだし,その交雑後代の分離比から,原因遺伝子が単一である可能性を明らかにした。また,ベイン系品種との交雑により,品種とこの野生変異の遺伝子が同一であることも確認した。今年度はマイクロアレイ解析の材料の準備に終始した。まず、ベイン関連遺伝子について、Petunia integrifoliaの淡色野生変異個体(B1197b)を固定し、市販44品種と交配し、Flの表現型を観察した。ベイン系品種との後代はすべてベインか、ベインと単色が1:1に分離した。また、1品種についてF2の分離比が単色:ベイン=3:1に分離した。以上から、B1197bのもつ淡色遺伝子と品種のベイン遺伝子が同一であり、これらの形質が単一遺伝子支配であることが明らかになった。今後はマイクロアレイを用いて淡色花とベインの遺伝子発現の違いを確認することで、品種ベイン遺伝子の特定への足がかりとする予定である。また、野生種の白花は制御遺伝子An2の変異による可能性が高いが、市販品種の白花では原因が異なることが予想されている。これもマイクロアレイで解析する予定であったが、今年度は品種とP.axillarisの白花の違いを含有成分と既知の色素合成遺伝子の発現から研究した。花冠の含有成分は品種が有機酸であったのに対し、P.axillarisではフラボノールであった。

このことから品種では合成系の上流で変異が起きていることが予想された。既知の色素合成遺伝子の発現を調べると、品種ではCHS-AとCHS-Jが抑制されていたが、P.axillarisではCH3-Jのみが抑制されていた。さらに詳しく調べたところ、品種ではCES-AのsiRNAが蓄積しており、市販白花品種はサイレンシングによってCHS-Aの発現が抑制されていることが判明した。
ゲノムの機能解析

大久保公策:ヒト2万遺伝子の基本解剖学発現パタンのBodyMapデータベースを構築し、トランスクリプトームの構造を明らかにした。加藤菊也:アダプター付加競合PCR法を開発し、マウス小脳皮質の生後発生過程の発現プロファイル解析を行った。菅野純夫:オリゴキャップ法を開発し、多数の完全長cDNAライブラリーを作製し遺伝子構造解析を行った。高橋永一:ヒト未知遺伝子162の機能解析を行った。相垣敏郎:ショウジョウバエGene Search系統を2,000作製し,機能獲得変異体の表現型情報を解析した。小原雄治:線虫C.elegansの半分強の7000cDNAの発現パターンを明らかにし、それをもとに母性発現500遺伝子の詳細なRNAi解析、クラスタ解析、調節領域の情報学的推定をおこなった。三谷昌平:線虫欠失変異体を従来法の約100倍の効率で分離するシステムを確立した。杉本亜砂子:soaking RNAi法を開発し、C.elegansの2500遺伝子の表現型解析を行った。前田ミネ子:細胞性粘菌のcDNAプロジェクトと発現パターンのダイナミクスの解析を進めた。伊藤隆司:酵母の全蛋白質を対象に2ハイブリッド法を用いた網羅的相互作用解析を行った。村上康文:出芽酵母第VI染色体遺伝子の発現プロフィールの解析を行った。小笠原直毅:枯草菌2674遺伝子の変異株作製・解析を、日欧共同プロジェクトとして完成した。成果報告ヒトcDNA解析については、まずヒト各組織40およびマウス主要臓器20から3′無作為シーケンスを約60000集積しボディマップの充実を進めた(大久保)。また完全長cDNAの解析を進め701種類の新規蛋白質遺伝子を含む1284種類の完全長cDNAクローンを同定し、82種類の新規完全長の配列決定をした(加藤)。未知遺伝子の機能解析のために酵母、マウスを用いたジーンターゲティングシステムの確立をおこなった(高橋)。モデル生物ゲノムの解析では、線虫ゲノムのcDNAのカタログ化を全遺伝子の約半数(7000)にまで進め、約1000について発現細胞(系譜)を決定し発現パターンマップの構築を進めた(小原)。出芽酵母ゲノムでは第6染色体の遺伝子破壊実験の結果127のORFのうち増殖必須遺伝子は24個であり新規のものは7個であった。これらについて5つの条件でノーザン解析をおこなった(村上)。また12の破壊株に蛍光ディファレンシャルディスプレイ法を応用し発現変化のみられるバンドを多数同定した。さらにゲノム塩基配列からバンド同定ができるよう全遺伝子を網羅するプライマーのセットをデザインするとともに、系統的2ハイブリッド法を開発した(伊藤)。枯草菌ゲノムではわが国で決定された1.4Mb領域の約1400の遺伝子のうち240の遺伝子の破壊変異株を作成したところ、23個で表現型が見出され、2個の2成分制御系遺伝子が見つかった。また全蛋白の2次元電気泳動での同定と破壊株との対応付けのシステムの準備をした(小笠原)。以上の研究結果は東大医科研ヒトゲノムセンターなどにおいてインターネット上での公開を進めている。成果報告ヒトcDNA解析については、まずヒト各組織54およびマウス主要臓器から3'無作為シーケンスを約110,000集積しボディマップの充実を進めた(大久保)。また完全長cDNAの解析を進め1260種類の新規蛋白質遺伝子を含む2130種類の完全長cDNAクローンを同定し、200種類の新規完全長の配列決定をした(加藤)。未知遺伝子の機能解析のために酵母、マウスを用いた遺伝子破壊システムの確立をおこなった(高橋)。モデル生物ゲノムの解析では、線虫ゲノムのcDNAのカタログ化を全遺伝子の半数以上の8000種にまで進め、約2000種について発現細胞(系譜)を決定し発現パターンマップの構築を進めた(小原)。

細胞性粘菌のcDNA解析を進めるため、18,000クローンをグリッド化し、タグ塩基配列決定、アンチセンスRNA発現コンストラクト作成を進めた(前田)。出芽酵母ゲノムでは第6染色体の遺伝子破壊実験から見いだされた24個の増殖必遺伝子について表現型解析をおこなった(村上)。EUグループとの共同で野生株、破壊株、過剰産生株の間でFDD解析を行い、新規の標的遺伝子候補22種及び8種の遺伝子を負の標的遺伝子として同定した。酵母全ORFの間でtwo-hybrid解析による蛋白質相互作用解析の準備をした(伊藤)。枯草菌ゲノムではわが国で決定された14Mb領域の約1400の遺伝子のうち443の遺伝子の破壊変異株を作成した。表現型のシステマチックな検出のために、7種類のC源の利用能、カタボライト感受性、蛋白質の分泌能、細胞の運動性、DNA損傷の感受性、塩・エタノール・過酸化水素・温度などのストレスに対する感受性、SDSに対する感受性を調べるための21種類のプレートを選び、コロニーの大きさ(増殖能)とLacZ活性による呈色の変化(発現)を調べる作業を開始した。また全蛋白の2次元電気泳動での同定と破壊株との対応付けを進めた(小笠原)。以上の研究結果は東大医科研ヒトゲノムセンターなどにおいてインターネット上での公開をおこなっている。成果報告ヒトcDNA解析については、基本臓器35及び広汎な病理組織から3万のEST(GS)を追加し、ボディマップの充実を進めた(大久保)。ATAC-PCR(アダプター付加競合PCR法)の改良を進め、最大1000倍のdynamic rangeをもつ高精度の発現パターン情報の集積を開始した(大久保、加藤)。オリゴキャップ法による高品質の完全長cDNAライブラリーを作成し、神経芽細胞腫、回腸粘膜、大腸粘膜から計7000クローンの5'端の情報を得た(菅野)。127種類の新規完全長クローンの全長塩基配列を決定した(加藤)。未知遺伝子の機能解析のため30種のノックアウトマウスを作成した(高橋)。モデル生物ゲノムの解析では、ます線虫cDNAのカタログ化を全遺伝子の約半数(10000)にまで進めた。うち約3500について発現細胞(系譜)を決定し発現パターンマップデータベースの構築を進めるとともに、RNAiによる系統的機能解析をおこなった(小原)。細胞性粘菌では14000のEST解析を終了し、発現パターン解析法の確立と機能解析法の確立を進めた(前田)。出芽酵母では、遺伝子発現ネットワーク解明をめざして遺伝子破壊株および発現制御株約170を作製した。全長ORFをクローン化した酵母two-hybrid用コンストラクトの約8000株バンク作成し、プーリング戦略による体系的なタンパク相互作用データ収集を開始した(伊藤)。第6染色体の詳細な機能解析も続けた(村上)。枯草菌では、日本の領域の新規遺伝子1000の変異株バンク作成をほぼ終了した。変異株651株のうち38%に表現型を見いだした。さらに556 Kbの領域に合計186の転写単位を同定した(小笠原)。以上の研究結果は東大医科研ヒトゲノムセンターなどにおいてインターネット上での公開を進めている。大久保
制作者の体験からみた箱庭療法の「治療的要因」に関する心理臨床学的研究

本年度は、昨年度までに、いわゆる"健常な"大学生(非臨床群)を対象として行った箱庭制作調査と制作者による体験の語りをデータとして行った質的分析をベースデータとして、研究代表者がこれまでに臨床心理士として関与した臨床事例におけるクライエント(臨床群)の体験の比較分析を行った。その結果、非臨床群の制作体験には出現していなかった臨床群に特有と考えられる体験のあり方が浮き彫りとなり、またそこで見られた特徴的な体験のあり方が、そのクライエントが、臨床の場を訪れざるを得なかった心理的課題と密接に関連しており、クライエントを見立てる有効な手がかりとなり得ることを示すことができた。また、こうした比較分析を通して、制作者の体験からみた「治療的要因」について検討したところ、箱庭の用具そのものやセッティングそのものに治療的要因があるというよりも、そうしたセッティングがあたかも治療的要因を持つかのように体験することを可能とする制作者自身の心の機能にこそ「治療的要因」の本質があるのではないかと考えられた。こうした点については、臨床心理学のみならず、進化心理学の観点からみた「感覚」に関する議論(Humphrey,N.,2006)や、神経心理学の観点からみた「触覚」と「視覚」の曖昧さに関する議論(Armel,K.C.&Ramachandran,V.S.,2003)、またイメージを「仮想的身体運動」として捉える視点(月本ら,2003)などとも矛盾なく馴染むのではないかと考えられた。平成17年度は、箱庭療法の「治療的要因」を抽出するベースとなる、制作者の「体験」に関する資料を収集する目的の面接調査を行った。調査の全体的な枠組みは、グランデッドセオリー・アプローチの方法論に則り、データの収集と分析・解釈を同時並行的・有機的に行う視点に立っている。調査協力は、調査内容を十分説明した上で調査参加の自発的意思をもった大学生に依頼した。今年度は、20名の協力者を得ることができた。調査は、心理臨床実践で用いられる箱庭療法の標準的なセットを用意した面接室で、約500個のアイテムの中から、「これだと思うものを一つだけ選んで、この箱の中のここだと思う位置に置いてください」という教示によって行った。アイテムを一つ選び、置くという体験に関して、質問紙形式でたずねるとともに、質問紙の回答についてより詳細に尋ねるインタビューを行った。調査場面は、2台のビデオカメラによって動画で記録し、インタビューについては、ICレコーダーを用いて音声記録をした。音声記録は、文字化して面接記録として保存した。なお、調査は、協力者1名につき2セッションずつ行った。現在は、文字化した記録をもとに、アイテムを一つ選び、置くという過程で制作者に起きてきた体験から、「治療的体験」と呼びうるものを抽出する作業を行っている。その中で、例えば、これまで前提として捉えられ、あまり主題として論じられることのなかった「砂箱」や「砂」という「箱庭療法のセッティング」が、制作者の体験を治療的体験へと集約させる方向へ体験を強く限定する要因として機能しているさまが、事例を通して描き出せるのではないかという手応えを感じている。来年度は、現在あるデータを分析することを通して、さらなるデータ収集の方向性を見出し、手続きに修正を加えながら、新たにデータの収集を行いながら、箱庭療法の臨床実践事例の中で得られる臨床データをも説明しうる鍵概念を見出すことを目的に研究を進めていく予定である。本年度は、昨年度収集した非臨床事例の箱庭制作者の主観的体験に関する質的データ(一つのミニチュアを選び、置くという調査研究による)を、木下(2003)による修正版グラウンデッドセオリーアプローチ(M-GTA)の手法を頼りに、網羅的に分析した。その結果、箱庭制作者の主観的な体験を記述する大きなカテゴリーとして【砂箱という前提との間で】、【モノとイメージの交錯】、【ミニチュアを置く】の3カテゴリーが得られた。【砂箱という前提との間で】は、箱庭療法が成立するために不可欠な「砂の入った箱」というセッティングとの間での制作者の体験を記述するカテゴリーであり、砂箱に対しては【自明の前提となる】、【前提に戸惑う】、【前提に馴染む】という体験のあり方が、また砂に対しては、【感覚される砂】という体験のあり方が抽出された。【モノとイメージの交錯】は、砂や箱やミニチュアといった物理的な存在に制作者のイメージが交錯することで、制作者の体験の中で、単なるモノでありながら、同時に単なるモノではなくなるという体験を記述するカテゴリーであり、【ミニチュアが異彩を放つ】、【モノとイメージのはざまを垣間見る】、【モノをアニメイトする】、【時間の流れを生み出す】、【箱庭の世界へ自分が入る】、【砂箱空間のイメージ体験】の6つの体験のあり方が抽出された。【ミニチュアを置く】は、選んだミニチュアを砂箱の中へ置くことにまつまわる体験を記述するカテゴリーであり、【「ここだ」という位置が直感される】、【「ここではない」と思う位置から決まる】、【「どこだ?」と迷う】、【「どこでもいい」】の4つの切り口から検討することが可能であった。以上の分析によって、箱庭制作者の主観的体験に関するベースデータを得たことになる。これを基に、臨床事例におけるクライエントの箱庭制作体験と継続的比較分析を行い、箱庭の「治療的要因」を探っていくことが来年度の課題として残された。

本年度は、昨年度までに、いわゆる"健常な"大学生(非臨床群)を対象として行った箱庭制作調査と制作者による体験の語りをデータとして行った質的分析をベースデータとして、研究代表者がこれまでに臨床心理士として関与した臨床事例におけるクライエント(臨床群)の体験の比較分析を行った。その結果、非臨床群の制作体験には出現していなかった臨床群に特有と考えられる体験のあり方が浮き彫りとなり、またそこで見られた特徴的な体験のあり方が、そのクライエントが、臨床の場を訪れざるを得なかった心理的課題と密接に関連しており、クライエントを見立てる有効な手がかりとなり得ることを示すことができた。また、こうした比較分析を通して、制作者の体験からみた「治療的要因」について検討したところ、箱庭の用具そのものやセッティングそのものに治療的要因があるというよりも、そうしたセッティングがあたかも治療的要因を持つかのように体験することを可能とする制作者自身の心の機能にこそ「治療的要因」の本質があるのではないかと考えられた。こうした点については、臨床心理学のみならず、進化心理学の観点からみた「感覚」に関する議論(Humphrey,N.,2006)や、神経心理学の観点からみた「触覚」と「視覚」の曖昧さに関する議論(Armel,K.C.&Ramachandran,V.S.,2003)、またイメージを「仮想的身体運動」として捉える視点(月本ら,2003)などとも矛盾なく馴染むのではないかと考えられた。
細胞成長の効率に関する理論的研究

また、生物の環境変動に対する新たな適応メカニズムを理論的に提案した。生物は環境変化に応じて内部の化学反応を制御し、高い成長速度を維持できるように適応する機構を持っている。従来、このような適応機構に関してはシグナル伝達系などの研究が主流であった。しかし対応するシグナル伝達系などを持たないような環境変動に直面した場合でも生物は適応的な状態へと遷移できることが実験的に報告されている。このような現象に関してはアトラクター選択理論という先行研究が存在するが、本研究ではDNAのエピジェネティック制御に着目し、適応現象の一般的な理論構築を試みた。本研究によって、ある環境変動に対して、あらかじめシグナル伝達系が用意されていなくても、また高成長状態がアトラクターでなくても、高い成長率が実現できることが明らかになった。29年度が最終年度であるため、記入しない。細胞成長のエネルギー論を構築するため、本研究ではエネルギー効率が高いと言われているLag Phase,Stationary Phaseにおける細胞成長理論の研究を行った。その結果、下記の結果を得た。(1). 3通りの「成長相」の実現、細胞成長曲線の再現:作成した細胞モデルの定常状態を計算することにより、モデルは3通りの「相」を示すことが分かった。また、バッチ培養環境を模した数値シミュレーションの実施により、細胞の成長曲線も再現することが出来た。これらの結果より、定常状態で得られた3つの相は相は微生物の成長曲線におけるExponential,Stationary,そしてDeath Phaseにそれぞれ対応していると考えられる。(2).ラグタイムの現象論的法則の発見とそのメカニズムの解明:貧栄養状態に置かれた飢餓状態細胞を富栄養な培地へ移植すると、成長を再開するまである時間がかかることが広く知られており、「ラグタイム」と呼ばれている。ラグタイムが飢餓時間などに伴いどのように増加していくかということはこれまで理解されていなかったが、本研究によりラグタイムは飢餓時間の平方根で増大すること、また最大成長速度に反比例していることが明らかになった。これらの結果は実験とも整合し、また理論解析によりそのメカニズムも新たに提案することが出来た。(3).新たなラグタイムの分布を発見:確率的シミュレーションにより、本モデルにおけるラグタイムの分布を計算した。その結果、従来理論的に予言されていた正規分布とは大きく異なる分布が得られた。この分布は近年高精度の実験により新たに報告されたラグタイムの分布と非常に良く一致する。新たなラグタイム分布が出現するメカニズムも、本モデルのラグタイムと飢餓時間の関係式、ならびに少数性効果の解析により明らかになった。これまで、現象論的モデルによる細胞の研究は指数関数的増殖期(Exponential Phase)に限られていた。しかしLag PhaseやStationary Phaseは細胞が低成長状態で自己維持を図っている相であると考えられ、すなわち非常にエネルギー効率の優れた成長相である。そのためこれらのPhaseにおいて成立する普遍法則の解明は細胞のエネルギー論を構築する上で必須であると考えられるが、本年度に行った研究により、これを達成することができた。初年度において、細胞の低成長速度における理論を構築することができた。高成長速度領域におけるエネルギー論の構築も行いつつ、次年度(29年度)においては28年度に彫られた理論をより発展させ、低成長速度領域におけるエネルギー効率に関する理論構築を行う。また、より発展的な課題として「老化」理論へのアプローチも計画している。PRX誌掲載論文のプレスリリース
準安定原子線を用いた高感度脱離反応計測

将来のエネルギー源であるプラズマ核融合炉技術において、燃料の水素の炉内分布あるいは摩耗しにくい炉の特性を確保するには、炉壁表面で起きる反応の解明が重要である。なかでも、反応生成物あるいは吸着種の高感度同定が不可欠であることから、吸着種の脱離計測を高感度で行うために、準安定原子線をパルス化する技術を研究・開発した。まず、長寿命の励起状態にある準安定原子線を放電により高強度で発生する技術、原子線強度を保つために中空円筒状にN/S極を3組配置した6極磁子を用いる技術を開発した。さらに、原子線をパルス化する、音叉を使った機械的な原子線断続技術を確立した。水素インベントリーや化学スパッタリングなどプラズマ対向材料の優れたプラズマ耐性を確保するには最表面で生ずる化学反応の解明が重要であり、反応生成物あるいは吸着種の高感度同定が不可欠である。そこで、吸着種の脱離計測を極めて高感度で行うための、低速準安定原子線を用いた技術を開発する。低速準安定原子線は、表面から真空側で反射されてしまうことから、最外層の原子を選択的に刺激できる理想的なプローブである。分子原子に対して電離作用を持つ低速準安定原子線に最外層の吸着子を脱離させる能力があることは、既に検証されているが、検出信号強度が充分でないことも同時に明らかとなっており、実用的計測法として確立するには、信号強度の増大あるいは信号の効率的な利用を図る技術開発が必須である。本研究は、低速準安定原子線を用いた脱離反応計測技術を確立するため、準安定原子線をパルス化する技術開発を行い、脱離信号強度および利用効率両面での飛躍的な向上を図るとともに、脱離現象に深くかかわる材料表面最外層の電子状態を計測する技術開発等、反応計測技術の新たな展開を目指している。前年度までに放電試験用真空槽にカソードを内蔵する絶縁体ノズルと陽極を兼ねるスキマーとで構成される原子線源を構築し、ヘリウムガスの導入と大容量真空排気ポンプによる排気を行いながら、カソードとスキマー間の放電をパルス電圧の印加によってパルス化し、得られる準安定原子線の特性を解析し、パルス放電の安定化を図り、不斉磁界として6極磁子を用いたコリメーション効果を確認した。今年度は、機械式チョッパーの真空内での検証を行い、動作の安定性に関する知見を得た。その結果、追加の技術開発が必要と判明し、目標を達成するため研究期間を一年延長することとした。本研究は、低速準安定原子線を用いた脱離反応計測技術を確立するため、準安定原子線をパルス化する技術開発を行い、脱離信号強度および利用効率両面での飛躍的な向上を図るとともに、脱離現象に深くかかわる材料表面最外層の電子状態を計測する技術開発等、反応計測技術の新たな展開を目指した。これまでに放電試験用真空槽にカソードを内蔵する絶縁体ノズルと陽極を兼ねるスキマーとで構成される原子線源を構築し、ヘリウムガスの導入と大容量真空排気ポンプによる排気を行いながら、カソードとスキマー間の放電をパルス電圧の印加によってパルス化し、得られる準安定原子線の特性を解析し、パルス放電の安定化を図り、不斉磁界として6極磁子を用いたコリメーション効果を確認した。前年度、機械式チョッパーの安定性が不十分であることが判明したが、研究期間を延長し、周波数安定性を確保する対策を完了した。低速準安定He原子線に最外層の吸着子を脱離させる能力があることが報告され、その高いポテンシャルが示されたが、同時に検出信号強度や脱離種情報が充分でないことも明らかとなっており、信号の効率的な検出ならびに質量分解能の向上が求められている。そこで、本研究では、脱離イオンの検出効率が高いパスル法で必要とされる低速準安定He原子線パルス化の要素技術である機械式チョッパーに関する検討を行った。低速準安定He原子線は、ノスル・スキマー放電法によってビーム形成と同時に励起することで生成できる。

さらに、技術的には困難を伴うが、ノズル・スキマー放電をパルス化すれば高密度の準安定He原子線を得ることができる。ただし、ノズルにカソードを内蔵した構造で放電を維持するにはガス圧を高くできないため、ビームは断熱膨張による超音速ビームよりも拡散ビームに近い性質を持ち、なおかつ放電プラズマ中の電子との衝突により運動量をランダムに受けるため速度分布がかなり広くv/Δvが1に近い。そのため、ビームをノズル・スキマー放電で一旦パルス形成しても、試料までの飛行時間tに応じて、時間軸でのパルス巾がtに広がることが課題である。試料上でのパスル巾を狭くするには、飛行時間(飛行距離)を短くするかあるいは速度分布を鋭く(v/Δvの値を大きく)する必要がある。飛行距離は、チョッパーを試料直近に配置することで短くすることが可能である。従来から原子・分子線実験で用いられている回転チョッパーに代えて音叉チョッパーを用いれば小型化が実現できる。レーザー光を用いた模擬実験を行ったところ、2個の音叉チョッパーを位相同期回路を介して異なる位相で動作させることにより数10μ秒の応答時間が得られ、音叉チョッパーによる低速準安定He原子線パルス化の実効性が確かめられた。低速準安定He原子線に最外層の吸着子を脱離させる能力があることが報告され、その高いポテンシャルが示されたが、同時に検出信号強度や脱離種情報が充分でないことも明らかとなっており、信号の効率的な検出ならびに質量分解能の向上が求められている。そこで、本研究では、脱離イオンの検出効率が高いパスル法で必要とされる低速準安定He原子線パルス化の要素技術である機械式チョッパーの真空中での動作安定性に関する検討を行った。低速準安定He原子線は、ノスル・スキマー放電法によってビーム形成と同時に励起することで生成できる。放電をパルス化すれば高密度の準安定He原子線を得ることができる。前年度大気中で性能を確認したチョッパーを真空中で試験したところ周波数安定性が不十分であることが判明し、安定性を確保する追加の技術開発を行うため、研究期間の延長が必要となった。水素インベントリーや化学スパッタリングなどプラズマ対向材料の優れたプラズマ耐性を確保するには最表面で生ずる化学反応の解明が重要であり、反応生成物あるいは吸着種の高感度同定が不可欠である。そこで、吸着種の脱離計測を極めて高感度で行うための、低速準安定原子線を用いた技術を開発する。低速準安定原子線は、表面から真空側で反射されてしまうことから、最外層の原子を選択的に刺激できる理想的なプローブである。分子原子に対して電離作用を持つ低速準安定原子線に最外層の吸着子を脱離させる能力があることは、既に検証されているが、検出信号強度が充分でないことも同時に明らかとなっており、実用的計測法として確立するには、信号強度の増大あるいは信号の効率的な利用を図る技術開発が必須である。
子宮体内膜の癌化に伴う糖転移酵素の遺伝子変化に関する研究

子宮体癌では正常体内膜に比較してフコシル化糖鎖が高率に発現している。特に、末端にフコ--ス(Fuc)残基を有するLewis b型糖鎖(Le^b)を主として認識するモノクローナル抗体MSN-1は体癌組織と高率に反応する。また、細胞表面のフコシル化糖鎖は血管内皮に存在するセレクチン等との間に相互作用があるところから、癌の転移能・接着能といった予後因子と密接に関連していることが示唆されている。こうしたフコシル化糖鎖をはじめ、癌化に伴う糖鎖の変化のメカニズムは、糖鎖を構築する糖転移酵素によって制御されていると考えることができる。一方、MSN-1の認識糖鎖抗原と関連の深いLewis式血液型を決定しているLe遺伝子はα(1,3/1,4)フコース転移酵素(LE酵素)遺伝子であることが明らかにされている。Le酵素はI型糖鎖にはα1-4結合で、II型糖鎖にはα1-3結合でFucをGlcNAcに結合させる糖転移酵素で、ミスセンス変異(le遺伝子)のために不活化され、そのホモ接合体(le/le)の個体はLewis式血液型が陰性となる。さらに、赤血球表面のLe^bの発現に対しては、非還元末端のGalにα1-2結合でFucを結合させるα(1,2)フコース転移酵素(Se酵素)が知られており、Le酵素と同様にミスセンス変異(sej遺伝子)のホモ接合体(sej/sej)を有する個体では本酵素は不活化される。そこで本研究では、子宮体癌患者の抹消血有核細胞由来のDNAを用いてLe酵素とSe酵素の遺伝子型をPCR-RFLPの手法によって決定し、MSN-1に対する体癌組織の組織化学的反応性と比較した。MSN-1の反応性はこれらの酵素の遺伝子型とは一致しなかったが、Le^bの発現はLe遺伝子の遺伝子型と一致していた。しかしながらSe酵素が不活化されている場合でも体癌組織ではMSN-1認識抗原もLe^b抗原もよく発現しており、体癌組織で発現するフコシル化糖鎖の構築には、Se酵素以外のα(1,2)フコース転移酵素が関与していることが示唆された。<目的>我々の研究室では、子宮体癌由来培養細胞株SNG-IIを免疫原として作成したモノクローナル抗体MSN-1が、子宮体癌組織と高率に反応し、多くの子宮体癌症例の追跡調査から、その反応性と予後との間に関連が見いだせることについて報告してきた。また、MSN-1の認識抗原が主として血液型関連糖鎖ルイスbであり、その抗原が、癌化によって生じる因子の中でも予後を左右する可能性が高いことから、当院で治療を受けた子宮体癌症例において、血液型関連糖鎖の表現型と、ルイスb型糖鎖の構築に関与する糖転移酵素の遺伝子型につき検索を行った。<対象>過去15年にわたり、当院で子宮体癌の切除を受け、その後経過観察中にその組織のMSN-1反応性及び、ルイス式血液型を調べ得た症例。<方法>過去15年間に得られた子宮体癌組織のパラフィン包埋切片を、MSN-1を用いて、ABC法にて染色し、症例毎の反応性を判定する。