hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
細胞系譜の後成的メカノケミカル制御機構を初期胚の顕微力学操作によって検証する

発生や増殖過程を通じて、分裂期の細胞をとりまく物理的な環境は、細胞形態の変形や分裂方向の決定などの細胞機能や制御機構に非常に重要な役割を果たす。本研究では、初期胚に与えた外部負荷の履歴が細胞系譜にどのような影響を与えるのかを検証する実験系の構築を試みた。主な成果を以下に記す:(1)紡錘体極の力学特性は、対称的にバランスされている。(2)細胞外環境の硬さは、細胞分裂過程に影響を与える。(3)初期胚の顕微力学操作によって、細胞系譜の後成的メカノケミカル制御機構を検証できる実験系を構築した。細胞分裂時に働く力は、細胞の運命決定、組織の形態形成など生物の形作りに必須の役割を果たすことが分子細胞生物学的観点から示唆されてきた。しかしながら、その力を直接操作して検証した実験の報告はない。本研究では、初期胚の胚全体もしくは特定の細胞の細胞分裂期を顕微力学操作によって制御し、形態形成への力の影響を定量化し、それに関わる主要な遺伝子の動態変調を時空間的に解析する。本研究の目的は、力学的環境の擾乱に対して、発生機構が備えるメカノケミカル制御・応答機構を顕在化し、プログラム化された機能遺伝子に支配される初期発生過程における“細胞分裂を制御する力"の役割を明らかにすることにある。以下に、得られた成果を箇条書きにする。1.初年度、計画通りウニを用いて研究課題を開始したが、生殖シーズン(実験可能な季節)が限定されるなどの問題により、ライブイメージング・顕微操作する個体数・実験数が期待される以上に得られない問題に直面した。そのため、実験室で通年安定的に使用可能なクラゲを導入し、当初の計画を実施する実験系の確立を完了した。2.顕微力学操作を行う232細胞期において、外部負荷の方向、細胞分裂のタイミングと分裂面を定量解析するため、細胞周期、アクチン細胞骨格及び微小管細胞骨格を4細胞期から幼生期までを通してイメージング可能な動態解析用タンパク質プローブをクラゲ用に改良・開発した。3.動態解析用タンパク質プローブを顕微注射した4細胞期の初期胚において、細胞分裂時に外部負荷を加える顕微操作に成功し、顕微操作や動態イメージングの実験技術基盤を確立した。現在、外部負荷条件に対する発生様式と幼生の表現型を体系的に解析している。4.後期紡錘体の力学特性及び染色体分配動態への影響を明らかにした。5.後期紡錘体への力学摂動は染色体分配のみならず細胞質分裂へも影響を及ぼすことを明らかにした。1.昨年度より導入したクラゲにおいて、有性生殖及び無性生殖のライフサイクルを回すため、卵成熟誘起ホルモンの探索と、プラヌラ幼生からポリプへの変態誘導物質の探索を行った。変態誘導物質に関しては、効果的な物質を選定できたが、卵成熟誘起ホルモンに関しては、現在も解析中である。現在、共同執筆で、報告を準備中である。2.後期紡錘体への力学摂動は染色体分配のみならず細胞質分裂へも影響を及ぼすことを昨年度明らかにしたが、本年度は力学摂動を与える顕微力学操作用カンチレバーの硬さに対する依存性を検証した。細胞分裂後期進行の速度は、特定の硬さに強く依存していることが分かった。3.減数分裂期及び受精過程の細胞温度や細胞内小器官の温度測定を行った。細胞周期に依存して、細胞内温度が変動している可能性を示す結果が得られている。初期胚の顕微力学操作のみならず、さらに顕微熱的操作の効率を検証することも開始し、研究内容を順調に達成しつつある。1.導入したクラゲのメス個体において、トランスクリプトーム解析を行った。得られた結果から、卵成熟誘起ホルモンの遺伝子探索と、変態誘導物質の遺伝子探索を行った。候補となった遺伝子群については、人工ペプチドを合成し、その効果を解析した。その結果、変態誘導物質の遺伝子は決定できたものの、卵成熟誘起ホルモンに関しては、効果的な遺伝子の決定には至らなかった。

2.昨年度、細胞分裂後期進行の速度は、特定のカンチレバーの硬さに強く依存していることを明らかにした。本年度は、細胞分裂後期進行を遅延させるカンチレバーの硬さと、それを感受していると推測されるアクトミオシン活性との関係を定量した。3.中期紡錘体の形状は、赤道面を挟んで左右対称である。我々は、左右両極の形状のみならず、紡錘体極の力学特性も左右でほぼ等しいことを明らかにした。その形状と力学特性の左右対称を維持する機構を明らかにするため、顕微操作を用いて片側の紡錘体極を変形すると、もう片側の紡錘体極も自発的に同様な変形を示すことが分かった。また、この力学応答性に積極的に関わる分子モーターの寄与も明らかにした。発生や増殖過程を通じて、分裂期の細胞をとりまく物理的な環境は、細胞形態の変形や分裂方向の決定などの細胞機能や制御機構に非常に重要な役割を果たす。本研究では、初期胚に与えた外部負荷の履歴が細胞系譜にどのような影響を与えるのかを検証する実験系の構築を試みた。主な成果を以下に記す:(1)紡錘体極の力学特性は、対称的にバランスされている。(2)細胞外環境の硬さは、細胞分裂過程に影響を与える。(3)初期胚の顕微力学操作によって、細胞系譜の後成的メカノケミカル制御機構を検証できる実験系を構築した。当初計画していた実施項目について、計画通りにウニを用いて開始した。しかしながら、実験室において1年を通して状態良く実験に用いることが想定以上に難しいことがわかり、新たな実験動物の選定を行った。また、それに応じて、動態プローブの改良が必要となり、多少時間がかかったものの、実施目的の初期胚の顕微操作に成功し、研究内容を順調に達成しつつある。今後は、網羅的力学負荷条件に対する発生過程の応答性解析、応答性に関わる主要遺伝子の発現解析を継続する。また細胞周期にともなう細胞温度変化も解析する。28年度が最終年度であるため、記入しない。生物物理学今後は、昨年度から開始している網羅的力学負荷条件に対する発生過程の応答性解析、応答性に関わる主要遺伝子の発現解析を継続する。本年度は、2月中旬から受入研究室の閉室と新研究室立ち上げのため、多少の実験ペースの減速が生じたため。本年度は、得られつつ研究成果の重要性を考慮して、海外での成果発表を控えたため、次年度への繰越研究費が生じた。最終年度は、研究計画通りに研究費を使用する予定であり、加えて国内外での成果発表・発信を積極的に行う予定である。次年度は、研究計画通りに研究費を使用する予定であり、加えて国内外での成果発表・発信を積極的に行う予定である。
グリム童話における「文化的変位」に関する研究

グリム童話のペロー童話・バジーレ童話との比較・分析,さらには日本昔話・古典落語との比較・分析を通じて,1つの物語が,その伝播に際して民族ないし国々のもつ文化的変位によって変化を被るが,その核心は不変のものであり,物語の精神によって人間と共に永遠に存続するものである。「1つの童話が異国に伝播されるとき,その本質的部分は不変のものであるが,その童話の文化的環境は,12の文化的変位によって異国の伝統文化・習慣へと置き換えられる。」「グリム童話」は、世界各国の言葉に翻訳され、現在では聖書に次いで広く普及している。「その魅力の源を突き止め、グリム童話の普遍的核心を摘出すると同時に、愛読者界での誤解を正すこと」を本研究の目的とする。」課題研究の初年度に当たる本年度の研究成果は、主として以下の3点である。1.携帯用パソコンを購入し、情報処理能力を高めると同時に、グリム童話・日本古典落語に関するCD-ROMによる資料を収集した。2.「アジア・ゲルマニスト会議ソウル2006」に参加し、「現代文化におけるファンタジー文学について」と題して、ドイツ語で研究発表した。同時に、韓国の口承文芸に関する情報交換と資料収集を行なった。3.ファンタジー文学に関する2本の論文発表と1本の全国学会での口頭発表を行なった。さらに、「グリム童話」3話の翻訳と「グリム童話を用いた教授法」に関して1本の論文を発表した。研究成果:グリム童話と日本の類話を比較・分析した結果、次のような注目すべき「文化的変位」が判明した。グリム童話の類話に関し、日本においてこれまで次の2組が見い出された。(1)日本古典落語『死神』は、『死神の名づけ親』(KHM44)の類話である。しかし、両者を比較・分析すると、次の5つ差異が見い出される。:(宗教的要素)(人物関係)(解決手段)(登場人物の職業)(謝礼・報酬)。(2)日本昔話『歌い骸骨』は、『歌う骨』(KHM28)の類話である。しかし、両者を比較・分析すると、次のそれぞれ4つの差異が見い出される。:(人物関係)(解決方法)(解決手段)(処罰の方法)。次年度は、この難問を解決するとともに、「1つの童話が異国に伝播されるとき、その童話の文化的環境は、1.宗教的要素、2.人物関係、3.解決手段、4.解決方法、5.登場人物の職業、6.謝礼・報酬、7.処罰の方法の点において、異国の伝統文化・習慣へと置き換えられる」という仮説の真偽をペローの童話とグリム童話とを比較・分析する(例えば、『眠りの森の王女』と『いばら姫』(KHM50)、『赤ずきん』と『赤ずきん』(KHM26)、『サンドリヨン』と『灰かぶり』(KHM21)である。)課題研究の2年目に当たる本年度の研究成果は、主として以下の3点である。1.グリム童話・日本古典落語・アメリカ映像文化に関するDVD資料を収集した。2.日本ヘルダー学会春季研究発表会で、シンポジウム「進歩・進化の思想-18世紀から現代へ-」の発表者として、「進歩を進化に連動させるファンタジーの智恵-ホフマンとグリム兄弟、そしてエンデ-」と題して研究発表を行なった。3.研究課題に関する4本の論文発表を行なった。さらに、「グリム童話」2話の翻訳と「ファンタジー文学-SF-ユートピア文学」に関する翻訳1本を公刊した。具体的研究成果:1.ファンタジーの機能を、ホフマン文学、グリム童話、エンデ文学において考察し、2007年の「日本ヘルダー学会春季研究発表会でのシンポジウム」で研究発表した。2.「新訳グリム童話二編-KHM192、197-」と題する翻訳を、鹿児島大学法文学部紀要『人文学科論集』第66号に掲載した。3.グリム童話『手なし娘』と日本昔話『てっきり姉さま』を比較・検討し、この論文を『西日本ドイツ文学』第19号に発表した。4.「ファンタジー文学-SF-ユートピア文学」に関するドイツ語論文を翻訳し、『かいろす』第45号に発表した。5.「グリム童話における復讐の美学」というテーマで、グリム童話、『ニーベルンゲンの歌』、『モンテ・クリスト伯』、『恩讐の彼方』を中心に、比較・検討しながら「復讐の美学」について考察し、その論文を紀要第67号に発表した。6.グリム童話『死神の名付け親』(KHM4)と『歌う骨』(KHM28)の「文化的変位」に関する論文を、ドイツ語で『VERBA』第32号に発表した。課題研究の3年目に当たる本年度の研究成果は、主として以下の4点である。2.国際会議「アジア・ゲルマニスト会議2008金澤」で、Ober den Kannibalismus im Marchen“Dornrohen"(『イバラ姫』に見られるカニバリズムについて)と題して研究発表を行なった。

3.日本独文学会秋季研究発表会で、シンポジウム「エンデ文学におけるファンタジー」の発表者として、「『はてしない物語』におけるファンタジーの機能」と題して研究発表を行なった。4.研究課題に関する2本の論文と、ドイツ語論文2本の翻訳を公刊した。具体的研究成果:1.国際会議「アジア・ゲルマニスト会議2008金澤」で、Ober den Kannibalismus im Marchen “Dornroschen"(『イバラ姫』に見られるカニバリズムについて)と題して研究発表を行なった。2.2008年日本独文学会秋季研究発表会:シンポジウム「エンデ文学におけるファンタジー」で研究発表を行なった。3.ハインツ・レレケ「グリム兄弟の童話における女性(講演)」(ドイツ語論文)を翻訳し、『かいろす』第46号に公刊した。4.論文「『イバラ姫』(KHM50)に見られる文化的変位について」を、鹿児島大学法文学部紀要『人文学科論集』(第68号)に公刊した。5.ディーター・ペニング「無秩序の秩序」(ドイツ語論文)を翻訳し、『人文学科論集』第69号に公刊した。6.論文「グリム童話におけるアメリカの文化的変位」を、『VERBA』(第33号)に公刊した。21年度の研究計画は,「第1段階で得られた文化的変位を,第2段階・第3段階での吟味を経て,グリム童話に関する「普遍妥当的変位」を確定し」,「最終報告書を作成すること」であった。これを踏まえ,研究課題の最終年に当たる本年度の研究成果は,主として以下の4点である。1.グリム童話・日本古典落語・アメリカ映像文化に関するDVD資料を収集した。3. 20年度に実施した日本独文学会秋季研究発表会でのシンポジウム「エンデ文学におけるファンタジー」に関する研究叢書(No.64)を編集責任者として発行した。4.研究課題に関する3本の論文と,ドイツ語関係2本の論文の翻訳を公刊した。具体的研究成果:研究課題に関して,平成1821年度にわたる研究成果を報告書にまとめ,以下の結論を提示した。「1つの童話が異国に伝播されるとき,その本質的部分は不変のものであるが,その童話の文化的環境は,1.宗教的要素,2.人物関係,3.解決手段,4.解決方法,5.登場人物の職業,6.謝礼・報酬,7.処罰の方法,8.果実の種類,9.社会制度,10.文化の成熟度,11.性の開放度,12.良心に基づく勧善懲悪の精神,の点において異国の伝統文化・習慣へと置き換えられる。」
高い耐久性を有する硬質リライン材の開発

本研究は義歯床用材料へのフッ素系モノマーである2,2,2-trifluoroethyl methacrylate (TFEMA)添加の効果を評価した。動力学的性質の経時的変化、ぬれ、吸水量および溶解量について測定を行った。結果はTFEMAを添加することにより、義歯床用材料の吸水量および溶解量の減少、接触角の増加を認め、その結果として動力学的性質の変化が減少した。これよりTFEMAを添加することにより、義歯床用材料の耐久性が向上することが示唆された。フッ素を含有した高い耐久性を有するリライン材の開発に先立ち、フッ素系モノマーの添加が硬質リライン材の物性に及ぼす影響について検討する必要がある。そのため試作リライン材を作製し、これにフッ素系モノマーを添加し、その影響について測定を行った。試作硬質リライン材の作製に使用するモノマーは、硬質リライン材で一般的に用いられているものから親水性の異なる2種類(iso-butyl methacrylateおよび2-hydroxyethyl methacrylate)を選択し、ポリマーはPoly(ethyl methacrylate)とした。フッ素系モノマー1分子中に含まれるフッ素原子が多くなると、側鎖の増大による機械的性質の低下が予想される。そこで添加するフッ素系モノマーは、試料作成に使用する2種類のモノマーと構造が似ている2,2,2-trifuluoroehyl methacrylateを選択した。フッ素系モノマーの過大な添加は、硬化挙動実験において硬化時間の大きな上昇を認め、臨床での使用が困難であると判断されるため、添加量は重量比で30wt%とした。本研究では、リライン材が咀嚼などの短時間で周期的な応力を受けていることを考慮し、動的粘弾性自動測定器を用いて経時的に動力学的性質を測定し、これを耐久性とした。結果は、フッ素系モノマーを添加することにより動力学的性質の経時的変化が減少し、安定する傾向となった。すなわち、物性が安定し、耐久性が向上したものと推察された。これはフッ素系モノマーの添加により、試料の表面エネルギーが低下し、疎水性となったためと考えれらる。吸水量および溶解量試験においても、これと矛盾しない結果を得た。高い耐久性を有する硬質リライン材開発のため、粉液比および架橋剤の添加がリライン材の硬化挙動および機械的性質に及ぼす影響について詳細に検討した。本材は主にチェアサイドにて使用するため、硬化挙動より算出される硬化時間の把握は重要である。硬質リライン材の粉液比が増加し、架橋剤の割合が減少すると硬化時間は短くなり、また粉液比が増加すると曲げ強さおよび曲げ弾性率が増加することがわかった。粉末と液を混和する際に粉液比が増すとよりポリマー間のからみ合いが多くなるため硬化時間が短くなったものと推測される。本材の重合はポリマーにモノマーが浸透、拡散したのちに化学反応が生じることにより完了する。架橋剤の分子量は硬質リライン材に使用されるモノマーよりも高いため、浸透、拡散に時間を要する。そのため架橋剤の含有量が増加するほど硬化時間が長くなったものと推測される。機械的性質においては、粉液比が大きくなるほど最大曲げ強さや曲げ弾性率が高い値を示した。これは粉液比が増加したことにより残留モノマーが減少し、さらに強固な3次元構造が構築されたためと考えられる。以上より、硬質リライン材の硬化挙動および機械的性質は粉液比と架橋剤の添加によって影響されることが示唆された。抵抗力の低下した高齢義歯使用者にとって、C.albicansは義歯性口内炎だけでなく、誤嚥性肺炎などの重篤な疾患の原因となりうる。硬質リライン材にフッ素系モノマーを添加することにより、表面エネルギーが低下することが前年度までの研究で明らかとなった。このことから、フッ素系モノマーの硬質リライン材への添加はC.albicansなどの真菌の付着にも影響を与えると推察されたため、C.albicansを用いて菌付着試験を行った。試料は前年度までと同様に、ポリマーとしてPoly(ethyl methacrylate)、モノマー2種類(iso-butyl methacrylateおよび2-hydroxyethyl methacrylate)を用いて作製したリライン材に30wt%でフッ素系モノマーである2,2,2-trifuloroethyl methacrylateを添加して、その影響を検討した。作製した試料にC.albicansを付着させ、吸光度にてその付着量を定量して評価を行った。結果は、フッ素系モノマーを添加することによりどちらの試料についてもわずかにC.albicansの付着量が低下する傾向が認められたが、有意差は認めなかった。平成27年度の研究実施計画では、臨床試験を実施する予定であったが、C.albicansの付着試験においてフッ素系モノマーの有効性について予想する結果が得られなかったため計画の変更をおこなった。

これよりTFEMAを添加することにより、義歯床用材料の耐久性が向上することが示唆された。当初の計画で予定していたC.albicansの付着試験を次年度へと変更し、代わりに粉液比および架橋剤の添加がリライン材の物性に及ぼす影響についてより詳細に検討を行うこととした。計画の変更はあったが、全体としておおむね予定通り進行している。義歯用材料硬質リライン材の耐汚染性の評価を行うため、C.albicansの付着試験を行う。C.albicansは誤嚥性肺炎の原因とされており、その評価は重要と考えられる。フッ素系モノマーを添加することにより、硬質リライン材の表面エネルギーが低下することから、真菌の付着は抑制されると予想される。最終年度となるため、研究の総括を行う予定である。他分野で応用されている含フッ素高分子が有する撥水性が、本研究における硬質リライン材への添加でも同様に確認できた。またそれに伴う耐久性の向上も認められ、予測されていた結果が十分得られた。次年度使用額はわずかであり、おおむね計画通り使用できている。フッ素系モノマーの添加が及ぼす機械的性質への影響を評価するため、曲げ試験を行い、曲げ強さおよび曲げ弾性率を評価する。試験は万能材料試験機(インストロン社製)を用い、ISOに準じて行う。耐汚染性評価には、C.albicansを用いて真菌付着試験を行う。C.albicansは誤嚥性肺炎の原因とされており、その評価は重要と考える。動力学的性質、硬化挙動、吸水量および溶解量含めた以上の測定項目を市販製品についても行い、比較する。真菌付着実験のための消耗品の購入に充てる予定である。研究結果が予測されていたように得られ、硬質リライン材作製のための材料が大幅に削減できた。本研究開始当初使用可能であった超純水製造装置が使用不可能となったため、この装置の新規購入を予定している。超純水は、予定している物性測定、真菌付着実験で必要不可欠である。
細胞膜-細胞壁接着仲介分子の探索とその機能解析

植物の細胞壁が担う生理学的役割に対する認識は、近年大きく変り、生理反応に不可欠な役割を果たしていると考えられている。このため、細胞内外を結ぶ構造とその分子種の同定が緊急課題になっている。本研究では、維管束植物としては下等なシダ植物をモデル系として、動物細胞ではECMと細胞膜の結合阻害に働くRGDペプチドを、植物細胞で探索することを目的とした。市販のRGDペプチドが、植物の、しかも表層微小管のみならず、核や葉緑体の形状など細胞膜から離れた細胞内構造にまで影響を及ぼすということを発見したが、この結果はRGDペプチドの合成時に混入したほんの少量の酢酸の影響であることが、判明した。そこで植物における細胞膜と細胞壁を接着する因子そのものを直接探索することを計画し、動物細胞の接着因子として働いているインテグリンβサブユニットの保存領域を参考にプライマーを作製し、我々の材料であるホウライシダにインテグリン様分子が存在するか否かをRT-PCRにより探索した。しかし得られたRT-PCR産物の中には細胞接着因子と考えられるアミノ酸配列をもつものは発見できなかった。これらの結果からだけでは、シダ植物にRGDペプチドは存在していない、とは言い切れないが、植物細胞でのRGDペプチドの存在の確たる証拠がない現在、植物での細胞接着因子は動物におけるRGDペプチドとは異なる種類の分子が働いている可能性が高いと考えられる。前年度までに、RGDペプチドが、植物の、しかも表層微小管のみならず、核や葉緑体の形状など細胞膜から離れた細胞内構造にまで影響を及ぼすということを発見し、動植物を通して新しい知見であり、早急に解析されるべき特色ある研究研究結果であった。本年度はさらにこの作用機作を解明するための詳細な実験を続けた結果、この結果はメーカーのRGDペプチドの合成時に混入したほんの少量の酢酸の影響であることが、メーカーとのやりとりの結果判明した。上記のように、本年度はRGDペプチドの直接の作用ではないが、細胞に対する微量な酢酸の影響についての結果を得た。そこで植物における細胞膜と細胞壁を接着する因子そのものを直接探索することを計画し、動物細胞の接着因子として働いているインテグリンβサブユニットの保存領域を参考にプライマーを作製し、我々の材料であるホウライシダにインテグリン様分子が存在するか否かを探索した。まず、様々なRNA抽出方法を検討した結果、CTAB法を改良した方法で比較的純度の高いRNAを得ることができたので、RT-PCRを行った。明所で生育させた胞子体幼葉を用いると4本(1.5,0.92,0.6,0.48kb)のバンドが検出できた。アニーリング温度を上昇させると1.5kbのバンドは消失したので、このPCR産物は非特異的産物と考えられた。現在、これらのRT-PCR産物をクローニング中である。
ゲノム編集技術を活用したWnt/ PCPシグナル経路の新規制御機構の解明

動物の組織を形成する上で、組織を構成する細胞は、適切な形態を取り秩序を持って配列する必要がある。こうした細胞の振る舞いは、細胞極性により決定される事が知られている。細胞極性の形成が障害されると、組織の異形成を伴い、様々な疾患の発症に繋がります。また、細胞極性の維持は、組織の恒常性の維持に必要であり、破綻すると発がんやがんの悪性化の要因となる。私共はゲノム編集技術を用いて解析対象のタンパク質を生体内で可視化し、これまでの実験手法では解析が出来なかった、タンパク質が有する細胞内での本来の動きや局在を解析した。その結果として、細胞極性を調節する新しい制御システムの解明に成功した。Wntシグナル経路のひとつであるWnt/平面内細胞極性(planar cell polarity:PCP)経路は、細胞運動時に観察される前後極性や上皮組織における上皮細胞の配向パターン(PCP)を制御することで、器官形成に関与する。Wnt/PCP経路は、細胞骨格のダイナミクスと相互的に協調して機能すると考えられているが、その詳細は明らかでない。私共は、細胞骨格の中でも微小管に着目し、微小管ダイナミクスとWnt/PCP経路の連関について、培養細胞を用いて解析し、微小管結合蛋白質のひとつであるMap7とそのパラログであるMap7D1(Map7/Map7D1とする)のノックダウン細胞が、Wnt/PCP経路の構成因子群のノックダウン細胞と同様の表現型(細胞運動能と細胞接着能の低下)を示すことを見出した。Map7/Map7D1はWnt/PCP経路の構成因子であるDishevelled (Dvl)と内在性レベルで複合体を形成し、PCPの形成に必須であるDvlのDEP領域を介して直接的に結合した。また、Dvlは細胞運動時に先導端の細胞表層に集積するが、Map7/Map7D1ノックダウンによりその集積が消失した。Map7-EGFPノックインHeLa細胞を用いたMap7の動態解析から、Map7が微小管プラス端方向に移動することが明らかになり、前述の知見と合わせて、Map7/Map7D1がDvlを細胞表層へ輸送する可能性が示唆された。Wnt/PCP経路は上皮組織におけるPCPの形成に必須であるが、PCPを形成する培養細胞株は存在しない。そこで、Map7/Map7D1のPCPへの関与を、ショウジョウバエ蛹・翅を用いて解析した。ショウジョウバエMap7ホモログ・Ensconsin(Ens)は近-遠位軸に沿って偏在化して局在し、Ensノックアウトにより上皮細胞の配向性に異常が認められたため、EnsがPCPの形成に関与することが明らかになった。培養細胞・ショウジョウバエの解析結果から、Map7/Map7D1はWnt/PCPシグナル経路においてDvlの局在を制御し、前後極性やPCPの形成に関与すると考えられる。ゲノム編集技術によりノックイン細胞やノックインショウジョウバエを作製したことで、内在性レベルでの蛋白質の蛍光イメージングが可能となり、これまでの技術では解析不能であった現象を捉えることができ、詳細な分子メカニズムの解明につながった。また、本研究から派生して、Map7と同じファミリーに属するMap7D2が脳特異的に発現することに着目し、神経分化におけるMap7D2の機能解析を実施したところ、Map7D2が神経突起の進展を抑制する因子である可能性が示唆された。本研究成果の一部については、第67回日本細胞生物学会大会とBMB2015にて学会発表を行った(学会発表の項参照)。Wntシグナル経路のひとつであるWnt/平面内細胞極性(planar cell polarity:PCP)シグナル経路は、細胞運動時に観察される前後極性や上皮組織における上皮細胞の配向パターン(PCP)を制御することで、器官形成に関与する。Wnt/PCPシグナル経路は、細胞骨格のダイナミクスと相互的に協調して機能すると考えられているが、その詳細は明らかでない。私共は、前年度までに、微小管結合蛋白質であるMap7とMap7D1(以降、Map7/7D1)がWnt/PCPシグナル経路の構成因子であるDishevelledと結合し、局在化を制御することで、Wnt/PCPシグナルをエフェクター分子に伝達し、細胞骨格のダイナミクスを制御する可能性を見出した。本年度はノックイン細胞、ノックインハエを用いた解析に加え、マウス・卵管上皮を用いた解析にまで研究を発展させて、以下の知見を得た。1)ノックイン細胞を用いたFRAP解析から、Map7の微小管プラス端方向への移動はキネシン依存性であり、また、Wnt/PCPシグナルによる制御を受けることが明らかになった。2)Map7の動態に関与するキネシンのノックダウンによりDvlの細胞表層への集積が消失した。従って、Map7/7D1-キネシンによりDvlが輸送される可能性が示唆された。3)ショウジョウバエ蛹・翅を用いたモザイク解析により、PCPの形成過程において、EnsがDishevelledの局在制御に関与することが明らかになった。

4)ノックインハエを用いたライブイメージング、及び、マウス・卵管上皮を用いた免疫染色により、Ens、及び、Map7/7D1が、微小管マイナス端が集積するとされる近位・卵巣側に偏在化して局在することが明らかになり、PCP形成過程におけるMap7/7D1とEnsの機能が生物種を超えて保存されている可能性が示唆された。熊本地震の影響により、上半期の予定については大幅な変更を余儀なくされた。しかし、共同研究先と連携して、解析対象を培養細胞株から個体レベル(上皮組織)へとシフトしたことで、私共が培養細胞を用いた解析で明らかにした分子メカニズムが上皮組織におけるPCPの形成過程においても重要である可能性が示唆された。本研究成果の一部は、現在、論文投稿の準備中である。前年度に本研究から派生して、Map7と同じファミリーに属するMap7D2が神経突起の進展を抑制する因子である可能性を見出した。本年度の研究計画では、Cdk5によるMap7D2のリン酸化部位の同定と非リン酸化型及び疑似リン酸化型変異Map7D2の機能解析までを予定していたが、熊本地震により質量分析装置(熊大・発生研所有)が転倒・故障したため、研究計画が遅延した。しかし、復旧の後に、Cdk5によるリン酸化部位をすべて同定することができ、非リン酸化型及び疑似リン酸化型変異Map7D2の作製まで終了したため、現在、機能解析を実施している。本研究成果の一部については、第68回日本細胞生物学会大会、第39回日本分子生物学会年会等にて学会発表を行った(学会発表の項参照)。Wntシグナル経路のひとつであるWnt/平面内細胞極性(planar cell polarity:PCP)シグナル経路(以降、Wnt/PCP)は、細胞運動時に観察される前後極性や上皮組織における上皮細胞の配向パターン(PCP)を制御することで、組織・器官形成に関与する。Wnt/PCPは、細胞骨格のひとつである微小管のリモデリングと相互的に協調して機能する可能性が示唆されてきたが、その詳細は明らかでない。私共は、Wnt/PCPのひとつであるWnt5aシグナル経路がヒト子宮頚癌由来細胞株・HeLa細胞の細胞接着・運動を制御する事に着目し、HeLa細胞を用いたsiRNAライブラリーによる表現型スクリーニングを行った。これまでの研究経緯から、微小管結合タンパク質とそのパラログを対象としてスクリーニングを行い、Wnt5aシグナル経路を制御する新規分子としてMap7とそのパラログであるMap7D1(以降、Map7/7D1)を同定した。Map7/7D1は、Wnt5aシグナル経路の構成分子であるDishevelled(Dvl)と結合し、Wnt5aシグナル経路ー微小管リモデリングの相互依存性を制御した。また、Map7/7D1がPCPの形成に関与するか否かを明らかにすべく、ショウジョウバエMap7/7D1ホモログ・Ensconsin(Ens)のPCP形成過程における機能を解析した。EnsはショウジョウバエDvlホモログ・Dshと結合し、その局在化を制御する事で、PCPの形成に関与した。さらに、Map7/7D1とEnsは共に、PCPを形成する上皮細胞において近位側に偏在化して局在した。局在化パターンとDvl/Dshとの結合の保存性から、Map7/7D1とEnsのPCP形成過程における機能が保存されていると考えられる。以上の研究成果を纏めた論文がEMBO reportsに採択された。動物の組織を形成する上で、組織を構成する細胞は、適切な形態を取り秩序を持って配列する必要がある。こうした細胞の振る舞いは、細胞極性により決定される事が知られている。
顎関節症の分子細胞レベルでの総合的診断システムの構築

日本で顎関節症は歯科三大疾患の一つで患者数が多い。診断のためにX線写真やMRIなどの画像検査を行うことが多いが、顎関節の構造が複雑なため正確な病態把握は難しかった。我々はこれまでに顎関節症の治療で関節洗浄治療を行った後の洗浄液中に含まれる細胞成分をcell block tissuearray標本を作製して病理検査を行い、細胞レベルで顎関節部の病態を調べる検査方法を開発してきた。顎関節の病態をさらに詳しく調べるためには、分子細胞レベルで検査を行う必要がある。そこで本研究では、顎関節部の病態を遺伝子レベルで調べるための検査方法を検討し、一連の検査手技を確立した。26年度は顎関節症患者に関節洗浄を施した際の洗浄液を遠心分離により細胞成分と液体成分に分け、関節局所の病態を把握するために、形態分析とタンパク発現の分析を同時に行うための手技の確立を試みた。顎関節症患者の関節洗浄液には炎症の影響により強い粘稠性を伴う場合があることが予め分かっていた。また、年間に採取可能な洗浄液の件数も限られていたことから、分析手技の確立には嚢胞患者17例から採取した嚢胞内容液を用いた(岩手医科大学倫理審査委員会承認番号01201)。洗浄液中の細胞成分はCell Block Tissue Array標本を作製して鏡検下で形態観察を行った。嚢胞内容液は細胞成分を含み平均約0.5mlを採取することができ、関節洗浄液と同様に粘稠性もあり、膿汁様や血液の混在したものも多かった。採取後のタンパク分解を防ぐためにprotein inhibitorを加え、適宜PBSで希釈してサンプルの粘稠性を和らげた。粘稠性が低い場合にはELISA法によりIL-6の定量が可能なサンプルもあった。しかし、種々の濃度に希釈しても粘稠性が残った場合はタンパク分析が困難だった。当初は洗浄液中に含まれる滑膜細胞を初代培養してPCR法により遺伝子発現を調べると伴に、タイムプラス撮影で形態観察を行う予定であった。しかし、次世代シーケンスによるトランスクリプトーム解析を行った方が、炎症関連遺伝子の発現を網羅的に検索可能であり、将来的にも発展性があると考えた。そこで実際に関節洗浄液を採取して初代培養する前に、Cell Block Tissue Array標本を想定してパラフィン包埋した細胞から抽出したtotal RNAと、初代培養を想定して通常の培養細胞から抽出したtotal RNAを用いてトランスクリプトーム解析を行い、網羅的遺伝子発現解析のための解析フローを確立した。26年度終了時までに、顎関節症患者の顎関節洗浄液中に含まれる細胞成分からのホルマリン固定パラフィン包埋(FFPE)ブロックを作製し、組織標本を用いた形態解析を行ってきた。洗浄液中の炎症性サイトカイン(IL-6など)のタンパク分析もELISA法で試みたが、検体の粘性により成功率が低かった。そこで代わりに、FFPEブロックからtotal RNAを抽出して次世代シーケンスでトランスクリプトーム解析を行い、網羅的遺伝子発現解析を行うための解析フローを確立した。26年度の結果からは、(1)ホルマリン固定試料における遺伝子の断片化への対処、(2)少量の検体から炎症性細胞を選択的に回収する手技の確立、(3)診断に応用するための遺伝子データ解析フローの確立、が課題としてあげられた。27年度は、(1)への対処としてQiagen社のPAXgene tissuecontainerを用い、DNAやRNAを断片化することなく標本作製と遺伝子解析が行える固定方法を試した。(2)に対しては、レーザーマイクロダイセクションにより選択的に回収した微量な細胞からも次世代シーケンスで遺伝子解析が可能か検討した。(3)に対しては、次世代シーケンスで得られた遺伝子データを臨床応用するための診断向け解析に特化したPC用OS(DIAGNO Linux)の開発を行った(http://www.diagnolinux.com)。その結果、Qiagen社のPAXgene tissuecontainerを使用することでFFPE試料と同等の形態観察と、新鮮材料と同等の遺伝子解析が可能となった。マイクロダイセクションで回収した微小サンプルでも遺伝子抽出は可能で、DIAGNO Linuxを用いて遺伝子解析環境を容易に構築してデータ解析が行えた。当初の予定では、滑膜細胞を初代培養して炎症性サイトカイン、結晶性関節炎を惹起する種々のリン酸カルシウム、および滑膜軟骨腫症で発現しているBMP-2、アグリカン、II型コラーゲンに対する滑膜細胞の反応性を調べることを計画していた。しかし、分担研究者が年度の後半から1年間の海外出張に出たことや、過去の本研究テーマにおける共同研究者が退職したことで、新たな関節洗浄液の採取が困難となった。そこで今年度は「顎関節症の分子細胞レベルでの総合的診断システムの構築」に必要な手技の確立と、臨床応用に必要な遺伝子解析に特化したPC用OSの開発を先に行った。本学生化学講座で昨年、ラットの滑膜細胞株の樹立に成功し、次年度は本研究用に供与してもらうことが決まった。研究の順序が当初の計画と少し変わったが、現在までに微小検体をホルマリン固定を行わずに形態観察と遺伝子解析を行う手技を確立し、マイクロダイセクションによる目的細胞の選択的回収後の次世代シーケンスによる遺伝子解析も可能となった。さらに本検査法を臨床応用するための遺伝子解析のためのPC用OSもUbuntu Linuxベースで開発することができた。以上より、研究はおおむね順調に進展している。

平成26年度終了時までに、顎関節症患者の顎関節洗浄液中に含まれる細胞成分からホルマリン固定パラフィン包埋(FFPE)切片を作製し、形態観察による病理診断法(急性炎症、慢性炎症、顎関節疾患との鑑別など)を検討してきた。平成27年度には、より詳細な病態把握のためには関節洗浄液中の細胞成分を用いた遺伝子解析が有用と考え、FFPE切片からの遺伝子抽出法について検討した。それにより、FFPE切片からマイクロダイセクションまたはマクロダイセクションで回収した微量サンプルからDNA/RNAを抽出し、次世代シーケンスで解析する方法を確立した。また、従来のホルマリン固定ではなくQiagen社のPAXgene tissuecontainerを用いた検体固定法を用いることで、細胞切片の形態観察と同時に、遺伝子の断片化の少ない良質な遺伝子抽出が可能であることも確認した。平成28年度は本研究の最終年度であり、一連の研究結果をもとに口腔外科の臨床歯科医(研究分担者)と協力し、顎関節洗浄液による「分子細胞レベルでの総合的診断システム」について考え、実際に臨床応用する場合に起こりうる問題点についても考慮して実際の導入に向けた検討を行った。ホルマリン固定では遺伝子の断片化を防ぐためになるべく短い固定時間とし、PAXgeneではcontainerに含まれる固定液が少ないことから、遠心操作によりなるべく洗浄液を除き細胞成分のみを回収して固定する必要があった。そのため、顎関節洗浄後にそれらの作業を速やかに行う外来の体制作りが必要と考えられた。検査の再現性を高めるためには、遺伝子抽出操作の手技の標準化も必要と考えられた。遺伝子のデータ解析は複雑であるため、我々が開発した遺伝子解析のためのPC用OS(DIAGNO Linux)を用い、遺伝子発現解析や遺伝子多型検索を行うための一連の解析フローを作成した。日本で顎関節症は歯科三大疾患の一つで患者数が多い。診断のためにX線写真やMRIなどの画像検査を行うことが多いが、顎関節の構造が複雑なため正確な病態把握は難しかった。我々はこれまでに顎関節症の治療で関節洗浄治療を行った後の洗浄液中に含まれる細胞成分をcell block tissuearray標本を作製して病理検査を行い、細胞レベルで顎関節部の病態を調べる検査方法を開発してきた。顎関節の病態をさらに詳しく調べるためには、分子細胞レベルで検査を行う必要がある。そこで本研究では、顎関節部の病態を遺伝子レベルで調べるための検査方法を検討し、一連の検査手技を確立した。26年度は17例の患者から採取した液状検体を細胞成分と液体成分に分け、それぞれ形態観察とELISAによるタンパク分析を同時に行う手技を確立した。しかし、炎症の強い病変部から採取した液状検体では粘稠性が高く、PBSで種々の濃度に希釈してもタンパク分析が困難な検体が多かった。そのため、洗浄液中の細胞成分の観察は可能であっても、液体成分を用いてタンパク分析を日常検査として行うことは困難であると考えた。本研究では、関節洗浄液を用いた顎関節症の分子細胞レベルでの総合的診断システムの構築を目的としている。
乳児の音声刺激に対する選好反応の発達と障害の影響に関する実験的研究

今年度は、選好振り向き法を用いて、生後414ヶ月の健常乳児の、対乳児音声(IDS)と対成人音声(ADS)の刺激対に対する選好聴取反応の発達変化を横断的及び縦断的に測定した。また、1例ずつではあるが、ダウン症乳児及び低出生体重児に対して、健常児と同様の手続きを用いて選好振り向き法を実施し、その反応について検討した。(1)被験者:414ヶ月齢の健常乳児80名(男53名、女32名)(2)結果:被験児の日齢の分布を4等分してみると、206287日齢の範囲内の乳児を除いて、他の月齢範囲の乳児は一貫してIDSの方をADSよりも有意に選好した。一方206287日齢の乳児はどちからの音声タイプを一貫して選好する傾向はみられず、むしろ、個々の乳児のばらつきが大きかった。2.IDSvs.ADSに対する健常児の選好反応-縦断的測定(*途中経過)-(1)被験児:健常乳児6名(男3名、女3名)で、46ヶ月齢から開始し、月に12回の測定を継続している。(2)結果:6名中5名の被験児が、早期にはIDSの方をADSよりも選好していたものの、250日齢位までにADSへの選好の逆転あるいは刺激聴取時間差の短縮がみられている。3.選好振り向き法の障害乳児への適用(1)被験児:11ヶ月齢ダウン症乳児(男)1名、6ヶ月齢低出生体重児(男)1名(2)刺激音:音声刺激(女声の会話音声)と雑音(中心周波数1kHzの帯域雑音)(3)結果:選好反応に個々の障害特性が反映する可能性が示唆された。
ILー4で誘導したCTL(細胞障害性T細胞)による養子免疫療法

一方,ILー4はILー2によるLAK細胞の誘導を抑制するが抗原特異的CTLの産生は抑制しない(J Exp Med 166,1447ー1455,1987)。ILー4を使用してtumorーspecific CTLを作成した報告は殆どない。当科で樹立した神経芽細胞腫株HNBーMSをstimulatorとしてILー2/ILー4存在下に寛解中の患児より得たリンパ球と混合培養を行いCTLを作製した。このCTLのin vitroでHNBーMSに対して殺細胞効果を示すことを確認した後in vivo(患者)に投与してその抗腫瘍効果について検討した。放射性同位元素標識CTLは腹腔内転移巣に集積した。抗腫瘍効果については、投与細胞数が充分でなく抗腫瘍効果を示すまではいたらなかったが(Am J Pediatric Hematology/Oncology,accepted)、今後の臨床応用が期待される。
イオンビーム技術の基礎科学

本研究は、共鳴励起の研究、偏極イオンの注入の研究、固体表面・界面の研究の3グループに分かれて進められた。1.共鳴励起の研究では、高精度ゴニオメータおよびチェンバーを作製する一方、銀の(100)単結晶薄膜を作り、高速重イオンの透過チャネリング実験、共鳴励起による荷電変換に最も敏感と考えられるコンボイ電子スペクトルの測定を行った。また、表面チャネリングによる共鳴励起の研究では、単結晶表面で方位角を変えて小角散乱させたH,Heイオンの荷電分布を測定した。2.偏極イオンを用いる研究では高速核スピン制御データ収録装置を完成し、これと手作りの装置を結合してバナジウム中の【^(12)N】が四面体位置を占めることを見出した。さらに、鉄中の【^(12)N】について測定中である。また、鉄中の原子番号56までの不純物について置換位置における超微細場、スピン格子緩和時間の計算を行い、さらに、原子番号10までの不純物について格子間位置も含めた安定位置・周辺原子の緩和等を求めるプログラムを作製している。3.表面構造の研究では、チェンバーと回転台を作製し、Si(100)2×8構造が約1%の表面濃度のNiの付着により現れることを見出した。表面分析の研究では、反跳粒子検出による軽元素の定量法の感度・深度分解能を評価すると共に、チャネリング法によりTi,Zr中のDが、四面体位置を占めることを見出した。PIXE法による分析の研究では、波高分析器を購入し、不純物深度分布の標準試料を作成し、フーリェ法による深度分布の解析法の開発および検出感度の評価を行った。界面構造の研究では、MBE法で作ったGaas(100)面上のZnSeとZnSについて、チャネリング法により積層界面に格子緩和があることを見出した。
オンチップ分散配置駆動機構を有するマイクロシステムのアセンブリフリー加工法の開発

本研究では、MEMS製造システム技術のフレキシブル化・ハイスループット化を目的として、駆動機構を有する複数の機能を集積化したマイクロシステムを単一マスクパターンからアセンブリフリーで作製する方法を開発した。本技術の特徴は、複雑に流路が入り組んだマイクロ流体システムの作製と、さらにその内部に磁気駆動素子を組み込むことをアセンブリフリーでできる点にある。作製方法として、独自の加工技術である単一マスク回転傾斜リソグラフィにより、(1)フォトレジストを塗布して流路構造を作製し、(2)さらに(1)とは逆型のフォトレジストに磁気微粒子を懸濁し、流路内に導入して同じマスクを用いて露光することによって、磁気駆動素子をマイクロ流路内に作製・同時設置する方法を提案した。本研究では、MEMS製造システム技術のフレキシブル化・ハイスループット化を目的として、駆動機構を有する複数の機能を集積化したマイクロシステムを単一マスクパターンからアセンブリフリーで作製する方法を開発する。作製方法としては、独自のリソグラフィ技術である単一マスク回転傾斜リソグラフィにより、(1)ネガ型フォトレジスト(露光部が残留)を塗布して縦・横穴構造を一度のリソグラフィにより作製し、(2)さらにポジ型フォトレジスト(露光部が除去)に磁気微粒子を懸濁して同じマスクを用いて露光し、磁気駆動素子をマイクロ流路内に作製・同時設置する方法を提案する。昨年度は、通常の垂直露光法を用いた加工方法により、加工経験が豊富なネガ型レジストに磁気微粒子を懸濁した複合材料の加工性評価を主に検討を行い、ナノ粒子を高粘度のレジスト内で均一に撹拌する技術と、その分散度評価のための光学顕微鏡評価システムを構築し、均一な特性を得るための条件について検討を行った。また、加工精度・再現性評価についても実際に構造物を製作し、特に構造物高さについての加工限度の検証を行った。また、作製した駆動素子がマイクロ流路内の液中で駆動可能であることを電磁石を用いた駆動試験から確認した。次年度については、より定量的な駆動特性評価を行うため、カンチレバー型駆動力評価システムの構築と、最適な磁気微粒子の混合率について検討を行い、最終的な応用例のひとつであるマイクロバルブとしての評価を開始する。独自の加工技術である単一マスク回転傾斜露光法により、(1)フォトレジストを塗布して縦・横流路構造を一度に作製し、(2)さらに(1)とは逆型のフォトレジストに磁気微粒子を懸濁し、流路内に導入して同一マスクを用いて露光することによって、磁気駆動素子をマイクロ流路内に作製・同時設置する方法を提案した。初年度は、レジストに磁気微粒子を懸濁した複合材料の加工性評価を行い、微粒子を高粘度のレジストに均一撹拌する技術と、その分散度測定のための光学システムを構築し、均一な光学特性と必要な加工精度を得るための条件について検討を行った。最終となる本年度は、駆動特性の定量評価のためのカンチレバー型駆動力評価システムを構築し、吸引力と磁気微粒子混合度の関係と、レジスト膜厚に関する加工精度を評価し、最終的な応用例のひとつであるマイクロバルブの試作を開始した。プロトタイプとして、ソフトマイクロマシニング技術を用いて作製した透明なシリコンゴムの一種であるPDMS(ポリジメチルシロキサン)製のマイクロ流路に、剥離層となる低粘度ポジ型フォトレジストを導入して流路壁面にレジストを付着させた後に、磁気微粒子を含むネガ型フォトレジストを流路内に導入することで、流路内部の複合材料をオンサイトで外部から露光・現像・流路内リリースする方法を提案し、作製した駆動素子がマイクロ流路内の液中で駆動可能であることを電磁石を用いた駆動試験により確認した。
ヘンリー・ソローにおける野性の詩学の研究

本研究課題(平成1820年度)の期間中、2度の海外研修(カリフォルニア大学デーヴィス校、ハーヴァード大学)を行なったほか、論文5件、研究発表6件、編著書1件、事典(分担執筆)1件の成果を得た。さらに、この研究成果の一部から着想された「ソローの愛した子供たちー超絶主義思想と教育改革」が科学研究費基盤研究C(課題番号21520262、平成2123年度)に採択された。平成18年度については、ソローとエマソン関係の貴重な資料を購入したほか、冬期休暇中に10日間カリフォルニア大学デーヴィス校の図書館で研修および資料収集を行なった。カリフォルニア大学において様々な学会誌のバックナンバーから、ソローにおける「詩論」、「野性」、「身体」をキーワードとした論文を資料として収集できたことは有意義であった。また、デーヴィス校の図書館には、ゲーリー・スナイダーのスペシャル・コレクションが保管されており、ソローからスナイダーに受け継がれた「野性の実践」という思想について考察を深める機会も得た。18年度の研究成果としては、現在執筆中である著書『コンコードの文学』(仮題)の二章を推敲できたことである。その一部は以前刊行した「ソローにおける身体の論理」(日本ソロー学会編『新たな夜明け-「ウォールデン」出版150年祈念論集』2004所収)を、さらにもう一章は「ソローの耳」(『自然と生命の文学』松柏社、2001所収)を全面的に改稿し、増補したものであり、研究課題「野性の詩学」に連なる課題として、18年度の研究計画に挙げていた事項である。また、ソローのエッセイ「ウォーキング」に見られる「野性」を基軸とした文学論については、とくに自然と文明の「境界」という観点から「境界の文学」という論文を刊行した。同論文を含む『シリーズもっと知りたい名作の世界3「ウォールデン」』(ミネルヴァ書房、2006)を上岡克己氏(高知大)と共編著として刊行した。平成19年度については、ソローやエマソンらの超絶主義者、およびゲーリー・スナイダー関係の貴重な資料を購入したほか、夏期休暇中に二週間ハーヴァード大学ワイドナー図書館で研修および資料収集を行なった。ハーヴァード大学では、特に19世紀に出版されたマサチューセッツ州コンコードに関する歴史書を閲覧し複写した。また、ハーヴァード大学滞在中に、ソローやエマソンの故郷コンコードを訪れる機会を得たのも貴重な体験であった。というのも、本研究課題はソローやエマソンの文学を19世紀中盤におけるコンコード周辺の文化的・宗教的風土に置き直し「コミュニティの文学」として読む作業の一環であり、その意味においてコンコードの文化的風土を体感できたことはきわめて有意義であった。19年度の研究成果としては、「野性の詩学の系譜学-エマソンからゲーリー・スナイダーへ」(『ヘンリー・ソロー論集』印刷中)を執筆できたことである。これは、本研究課題の中心をなす論考であり、日本ソロー学会におけるシンポジウム「エマソンの現代的意義」において発表した内容を改稿したものである。18年度に『シリーズもっと知りたい名作の世界3「ウォールデン」』(ミネルヴァ書房、2006)を共編著として刊行し、その中でソローのエッセイ「ウオーキング」に見られる「野性」を基軸とした文学論について論じたが、今回の論文は「野性」の文化的な意義についてさらに進展させた論考である。平成20年度については、さらに言語における有機性の問題、想像力とエコロジーといった問題についてゲーリー・スナイダーの文化論を中心として考察し、前記の論文とともに報告書にまとめたいと考えている平成20年度は本研究課題の最終年度にあたり、おもに成果報告書の作成に力を注いだ。これまでに執筆した「ソローにおける身体の詩学」「境界の文学--『ウォールデン』論」等を大幅に改稿して研究成果報告書にまとめたほか、「野性の詩学の系譜額--エマソンからゲーリー・スナイダーヘ」(『ヘンリー・ソロー研究』日本ソロー学会)を発表した。また、「野性の文化」という概念の考察を深めるにあたってレヴィ=ストロースの『野生の思考』等の著作に研究の範囲を広げたほか、「野性」という概念と言語との関連に関してさらに考察を進めている。現在執筆中の研究は本研究課題の延長線上にあり、1件は「自己の詩学--ソローにおけるエゴイズムの諸相」を九州アメリカ文学会(琉球大学、5月9日に発表予定)、もう1件は“Language Without Metaphor: Thoreau's Poetics of the Wild"であり、「野性の詩学」という観点からWaldenの“Sounds"の章を再解釈するものである。研究報告書に収める予定にしているほか、学会誌に投稿の予定である。さらに、19世紀マサチューセッツにおける超絶主義思想の研究に関連して、「ソローの愛した子どもたち--超絶主義思想と教育改革」という研究発表を日本英文学会全国大会第80回大会で行い、その概要をProceedingsに発表した。