hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
グローバリゼーション下における日本型金融とアジア型金融の推移に関する比較研究

アメリカモデルはどれほど一般解として妥当なのかについて、アメリカのニューエコノミーと称される経済構造の矛盾を、ファストフード業界や流通業界の林立と、低賃金層の増大に求め、ITとナスダックの両輪によるベンチャー・ビジネスの成功という認識が一面的だということを分析した。一方、日本を含むアジアでは、グローバリゼーションの浸透によるアメリカモデルの席巻がこの10年あまりの特徴だった。とりわけ、1997年から98年にかけての通貨危機以降においては、不良債権ビジネスの主役は圧倒的に欧米系ファンドが占め、価格の下がったアジアの資産(不動産や株式)を買収する新規投資家には欧米系資本が中心だった。この点が、、「アジア的価値」や「儒教資本主義」といった思考様式が幅を効かせたそれ以前との相違である。つまり、グローバリゼーションの風圧によって、アジア的価値観の妥当性を問うといった視点よりも、各種のファンド・ビジネスによって買い叩かれた不動産や企業が、欧米系資本によって買収されるという事態が続き、株式時価重視や収益性重視の風潮が勢いを増した。日本でも、かつての含み益重視は後景に退き、持ち合いによる安定性よりも、収益性重視の手数料ビジネス、キャッシュ・フロー経営が人気を集めた。間接金融よりも直接金融、銀行よりも資本市場、基礎的な研究開発よりもM&Aといった価値観が席巻した。公的ガイダンスよりも、民営化や市場機能重視が社会的風潮になった。こうしたグローバリゼーションのアジア宅の広がりは、一方の主役・中国を台頭させた。中国は改革開放の勢いに乗り、外国資本の導入に躍起となり、輸出競争力を加速させ、巨大な人口を武器に、世界最大の工場から世界最大の市場へと変貌を遂げた。それによって、東南アジアや東アジア域内における対中国取引の比重は増大し、各国が中国とFTAを結ぶ意欲を強めた。さらに、東南アジアの経済的担い手に華人が多いことから、アジアは全体的に華人圏だという声を聞かれるようになり、東アジア共同体へのシナリオは、中国と東南アジアとの合作が主導する。つまり、グローバリゼーションの勢いがアメリカモデルの浸透のみならず、中国と華人圏という新たなファクターを生み出すことによって、アジアは新たな躍動局面に入った。脱亜に拘ってきた日本的近代化のあり方の再考が求められている。今年度は、アングロサクソン型金融システムに対するアメリカの研究者の認識と、日本における認識を比較することを狙った。前者については、ロサンゼルス近郊のカリフォルニア大学リバーサイド校世界システム調査研究所へ客員として滞在し(平成14年10月)、アメリカにおけるエンロン事件やワールドコム事件を発端とした資本市場をめぐる諸々の事件の認識について意見交換を行った。その成果として、カリフォルニア大学教授の論考を雑誌『週刊エコノミスト』に訳出した。一方、日本では、広島でマツダ自動車のフォード化(フォードが最大株主になったこと)によっていかなる経営姿勢に変わったのかについてヒアリングを重ねるとともに、アジア志向の強かった福岡の代表的企業やマスコミからも、アジア志向の顛末についてヒアリングを重ねた。これらの結果、マツダのフォード化がフォードのグローバル戦略のもとでの買収だったこと(中国市場狙い)、あるいは、日本企業のアングロサクソン化といっても、地元での定着度という点では、なかなか根付くというところまではいっておらず、自治体関係者や従業員の意識を含めて、フォード化によるマツダ離れが進んでいる印象を受けた。

とはいえ、福岡のアジア志向も、アジア通貨危機以降は方向が定まらず、その影響での不況進化も囁かれていた。後者の部分はまだ活字にはしていないが、資本市場がなぜ根付かなかったのか、さらには日本におけるグローバリゼーションへの反応については、今年度に図書(筑摩書房より平成15年に公刊)や、いくつかの論考にまとめた。今年度は、ゼミナール学生に依頼して、証券市場の定着度に関するアンケート調査と、グローバリゼーションに関するアンケート調査を行い、街の声を集めた。サンプル数は各300だが、一定の傾向(アジア志向と欧米志向の混在、あるいは、民営化には肯定的なるも、金融不安が消えない中、郵便局の人気が依然高い)が看取された。また、福岡に行って、アジア志向に関する金融機関の動向をヒアリングした。後者に関しては、雑誌『経Kei』に「福岡はアジアをめざす」と題して、発表する(平成16年4月号予定)。いずれも、アジア取引やアジア志向に対する実際の生の声を集めるのに力点を置き、日本の証券市場の推移と比較しながら、アジアの実際の証券市場の発展の様子について、ヒアリングを重ねた。以上のように、今年度は、概して、実際のビジネスの現場や証券市場関係者から、日本もアジアも生の声を収集してヒアリングに努めた。それによって、実際には間接金融(とりわけ銀行)中心だった既存の金融システムにどのような変容が起こっているのかをフォローした。その結果、なかなか既存の金融システムに取って代わるほどのものではないものの、証券市場の活性化をめぐる政策は相当に進んでいて、とりわけ不良債権ビジネスや民営化のプロセスで一定の役割を果たしていることが分かった。しかも、上海は香港から、ジャカルタはシンガポールからというように、国際的なキャピタルフローを引き込みながら、不良債権や民営化ビジネスを行っていて、金融システムの改革が国際的キャピタルフローの動きと絡んでいることに特徴があることが分かった。しかも、その際のキャピタルフローの出自は、欧米系の投資ファンドや金融機関であることが多く、邦銀や日本の金融機関の影は薄い。したがって、平成16年度は、本研究の3年度目であり、まとめでもあるので、そういった実際の現地で収集した声や見解と日本やアジアの金融システムに関するデータをつき合わせて、アジアの金融システムの変貌について、まとめとなる報告書を推敲したい。その際、キャピタルフローの推移と、そこで既存の金融システムの改革がどう関わるのかについて、一定の結論を出したい。今年度は、最終研究年度ということで、一度、福岡でアジア化の実態について調査を行った以外は、概して、ヒアリングで専門家・関係者の話を聞くというプログラムを行った。福岡では、アジア取引に熱心な企業を中心に、中小企業に熱心なアジア取引の実態、アジア進出とアジア企業の対日投資の実態についてヒアリングを行った。
児童期後期からの言語発達:レジスターの多様化とその社会的使用能力の発達過程

本研究は、生活世界の広がりとともに児童期後期から本格化する、発話状況や話者の立場に応じて使い分ける社会的なことば(レジスター)の発達過程を明らかにし、児童期後期から青年期を視野に入れた、生涯発達的な言語発達モデルの構築を目標にする。本研究は、児童期後期から青年期にかけて展開する、言語の社会的使用能力の発達過程を研究対象とする。具体的には以下の3側面を明らかにして児童期後期からの言語発達モデルの構築を行った。なお、本研究ではとくに方言使用地域の児童および青年を取り上げる。その理由は方言と共通語がレジスターの変異であり、言語の社会的使用の発達過程を鮮明化できると考えたからである(1)児童期から青年期までのレジスターの多様化に関する質問紙調査児童期後期以降の発達の概略を知るために、山形県庄内地方の小学3年、5年、中学1年、3年、高校1年、青年の各100名を対象とした言語発達に関する質問紙調査を行った。場面想定によるレジスター交替に関する項目、言語発達の節目に関する項目、聞きなれない方言との出会いに関する項目、方言と共通語の好悪の差などに関する項目を用いた。(2)日常の言語使用における児童および青年のレジスターの多様化と交替に関する談話分析すでに小学生に関する自然談話資料は充実しているので、同じく山形県庄内地方の中学生の談話資料を収集する。中学生の授業中および、部活動時の談話資料を収集し文字化して分析し、方言と共通語レジスターの交替過程を明らかにする。すでに収集済みの児童の資料と比較を行う。(3)児童期から青年期におけるレジスター使用に関するナラティブの収集と分析半構造的な面接調査を、同じ年齢段階5名ずつに実施し、言語に関するよりビビッドな言説(語り)を収集した。本研究では、レジスター(発話状況や話者の立場に応じた社会的なことば)に注目して、児童期後期から青年期にかけて展開する、言語の社会的使用能力の発達過程を明らかにした。具体的には、以下の3側面から明らかにして児童期後期からの言語発達モデルの構築を行った。(1)児童期から青年期までのレジスターの多様化に関する質問紙調査ならびに面接調査(2)日常の言語使用における児童および青年のレジスターの多様化と交替の観察と談話分析(3)児童期から青年期におけるレジスター使用に関するメタ言語能力の発達過程その際、本研究ではとくに方言使用地域の児童および青年を取り上げた。その理由は方言と共通語がレジスターの変異であり、言語の社会的使用の発達過程を鮮明化できると考えたからである。このうち本年度は、(2)および(3)に集中した。その理由は補助金が認められたのが11月と遅かったので、日常生活における談話データの収集と、メタ言語意識に関する調査の実施に集中した。前者については、児童の談話データを収集した。後者については、児童、生徒、および成人を対象とする、質問紙調査を実施し、データを収集した。本研究は、児童期後期から青年期にかけて展開する。言語の社会的使用能力の発達過程を研究対象とする。その理由は方言と共通語がレジスターの変異であり、言語の社会的使用の発達過程を鮮明化できると考えたからである(1)児童期から青年期までのレジスターの多様化に関する質問紙調査

児童期後期以降の発達の概略を知るために、山形県庄内地方の小学3年、5年、中学1年、3年、高校1年、青年の各100名を対象とした言語発達に関する質問紙調査を行った。場面想定によるレジスター交替に関する項目、言語発達の節目に関する項目、聞きなれない方言との出会いに関する項目、方言と共通語の好悪の差などに関する項目を用いた。(2)日常の言語使用における児童および青年のレジスターの多様化と交替に関する談話分析すでに小学生に関する自然談話資料は充実しているので、同じく山形県庄内地方の中学生の談話資料を収集する。中学生の授業中および、部活動時の談話資料を収集し文字化して分析し、方言と共通語レジスターの交替過程を明らかにする。すでに収集済みの児童の資料と比較を行う。(3)児童期から青年期におけるレジスター使用に関するナラティブの収集と分析半構造的な面接調査を、同じ年齢段階5名ずつに実施し、言語に関するよりビビッドな言説(語り)を収集した。
越境とリミックスの世界文学：東欧ユダヤ人作家ロマン・ガリを手掛かりに

M・ダリュセック『警察調書剽窃と世界文学』(藤原書店)を訳出し、古今の剽窃の告発例を通して文学の本質を考察し、国・言語・宗教の越境により他者性を生きることを強いられたユダヤ人(ツェラン、キッシュ、マンデリシュタームら)の例を見て「詩人はすべてユダヤ人」というテーゼ(ツヴェターエワ)を得た。このテーゼをめぐり、沼野恭子(ロシア文学)・真島一郎(アフリカ地誌学)・大辻都(カリブ文学)・温又柔(台湾籍の日本語作家)各氏とシンポジウムで議論した。東欧出身のユダヤ人で仏語・英語作家ロマン・ガリについて、縁の地(ヴィリニュス・ワルシャワ・ニース等)の現地調査を行い、評伝と作品の翻訳を刊行予定である。1.ロマン・ガリの詳細な伝記・先行研究書数冊について、作家のフランス入国以前の幼少期の部分を読み比べた。それらを基に、平成25年8月20日から9月7日(8日羽田着)まで、フランス(パリ)、ポーランド(ワルシャワ)、リトアニア(ヴィリニュスおよびシュヴェンチョニース)に出かけ、作家が幼い頃に住んだ建物や周辺地域、またパリでは晩年の住居付近を調査した。ポーランドとリトアニアは、言語が理解できないため、それぞれ通訳(および町の案内)を頼み、作家の行動の足跡をわかる限り歩き、第1次大戦直後の写真や情報を収集した。東欧は、研究者が言語を理解できない上、ナチスやソビエト統治により、かなり町も文化状況も変貌しており、作家自身も幼少期について偽りの自伝等を残しているため、足跡を確定するには限界がある。しかし、幼少期の体験、東欧出身のユダヤ人としての体験が、作家の作品や人生に決定的な影響を与えていることは確かであり、成人後に活躍した英仏米などの文化・風土とは全く異質な国々の気候風土や多民族・多宗教と多様な国・政権の支配を受けてきた地域の様子を肌で感じることができたのは、大きな収穫であった。2.上記の実地調査の報告を、総合社会科学会の学会誌『総合社会科学研究』第3集6号(26号)に、「研究ノート」として発表した。また、直接ガリを扱うものではないが、「越境とリミックスの世界文学」に関する本研究に深く関わる翻訳(マリー・ダリュセック『警察調書:剽窃と世界文学』(藤原書店)が、ようやく刊行された。4.ガリの作品、彼の文章を掲載した雑誌類、ガリについての研究書の収集を進め、現在流通しているフランス語文献はほぼ揃ってきたと言える。本研究の最終目的は、近代の国民文学・オリジナリティ追求が行き詰まり、国家・言語・性・人種の越境と混交が進む現代において、既存のものの模倣・翻訳・翻案等々(本研究では「リミックス」と呼ぶ)であった近代以前の文学観に立ち帰り、リミックス概念を方法論的軸として、「世界文学」の新しい可能性を構想するものである。26年度は、ロマン・ガリが少年期を過ごし、母親がそこで最期を迎え、ガリ自身2度の結婚相手と何度も滞在し、作品にも多く語られている地中海地域を中心に、現地調査と先行研究・ガリ自身の作品を読んで研究・考察した。1.作家ガリのアイデンティティ形成の基礎となったニースでの少年期を、現地調査と自伝的作品の分析、先行研究の検討を元に考察し、その結果を総合社会科学会の学会誌『総合社会研究』第3集7号(27号)に発表した。2.ガリが最初の妻と所有し、外交官の仕事の合間に訪れては滞在、執筆活動に専念したロックブリュヌを現地調査し、その地の独特の雰囲気が重要な役割を担う小説Les couleurs du jour』(1952)と、それを27年後に書き変えた小説Les clowns lyriques(1979)について、雑誌『ふらんす』のロマン・ガリ生誕100年特集に寄稿した。3.今回成果をまとめるには至らなかったが、ガリがフランスの外交官として最初に赴任し、ソ連による東欧への圧力の始まりを象徴するような政治家粛清を目撃したブルガリアを現地調査し、ガリ作品のブルガリア語への翻訳者、Zornica Kitinska(ゾルニツァ・キティンスカ)氏と意見交換をした。4.ガリが2度目の妻や息子とともに何度も滞在したマヨルカ島の現地調査を行った。5. 2014年は生誕100周年であったため、新たなガリ自身の著作・講演の刊行や、研究書・雑誌特集号などの刊行も盛んに行われたため、それらを収集した。本研究は、1東欧系ユダヤ人作家、ロマン・ガリの研究を通して、2近代文学が求めた「個性」と「国民文学」を越えるものとして、国境・言語・宗教・民族・ジェンダーの「越境」と、既存のジャンル・作品・諸要素の「リミックス」を行う「世界文学」の可能性を探るものであった。27年度は、1としては、ロマン・ガリが2度外交官として滞在したアメリカの現地調査をし、アメリカを舞台とする作品を研究し、2としては、4名の研究協力者を迎えて「世界文学」を模索するシンポジウムを開いた。11.ロマン・ガリが国連のフランス代表として赴任したニューヨークを訪問し、国連内を見学した。2.ガリが別名で執筆した国連を舞台・テーマとする作品『鳩を抱いた男』を和訳した。(現在、出版社を探している)3.フランス公使として滞在したロサンゼルスに行き、ニューヨークを題材とした作品『白い犬』に登場する各所を現地調査した。3.彼が愛し、最重要作品とも言える自伝的作品『夜明けの約束』の語り手の居場所として設定したビッグ・サー海岸(全長90マイル)を現地調査した。

2としては、1.日本女子大学文学部・文学研究科主催の座談会(『漂泊・彷徨・流転』をテーマとする)で、「文学に表現されるジプシー」についてなど、話をした。(座談会報告書を2016年3月に刊行)。2.シンポジウム「越境とリミックスの世界文学」を開催し、ロシア文学者の沼野恭子氏、アフリカ民族誌学者の真島一郎氏、カリブ海文学者の大辻都氏、台湾籍の日本語作家、温又柔氏をパネラーに迎えて、国家・言語・性・宗教・人種の「得「越境」と、翻訳、翻案、パロディ、コラージュ、ジャンル・文琢のリミックス(混淆)をめぐる現代文学の在り方と可能性を語り合った。(テープ起こしして小冊子作成予定)。M・ダリュセック『警察調書剽窃と世界文学』(藤原書店)を訳出し、古今の剽窃の告発例を通して文学の本質を考察し、国・言語・宗教の越境により他者性を生きることを強いられたユダヤ人(ツェラン、キッシュ、マンデリシュタームら)の例を見て「詩人はすべてユダヤ人」というテーゼ(ツヴェターエワ)を得た。このテーゼをめぐり、沼野恭子(ロシア文学)・真島一郎(アフリカ地誌学)・大辻都(カリブ文学)・温又柔(台湾籍の日本語作家)各氏とシンポジウムで議論した。東欧出身のユダヤ人で仏語・英語作家ロマン・ガリについて、縁の地(ヴィリニュス・ワルシャワ・ニース等)の現地調査を行い、評伝と作品の翻訳を刊行予定である。主な理由は、1昨年すでに遅れてしまっていること、2研究すればするほど、彼の行動範囲の広さ、人間関係の複雑さ、言語表現の多彩さ、アイデンティティの不確かさが明らかになり、容易に把握しきれないこと、である。そのため、当初の予定では、2014年度は、ガリの第2次大戦後を研究するつもりであったが、彼の作品・生き方の基盤を形成したと思われるニースでの少年期を中心に研究することになった。2014年研究計画のうち、1)私生活の軌跡と作品の関係を探ることに関しては、18年間を共に生きた最初の妻による、Lesley Blanch,Romain,un regard particulier,2009などの回顧伝や、アメリカ人女優ジーン・セパーグとの2度目の結婚から生まれた一人息子が書いた自伝的小説Alexandre DiegoGary,S.oul'espérance de vie,2009から彼の私生活での姿を読むことはできたが、それをまとめるまでには至らなかった。2)英語作品や映画化など、アメリカ文化との関係、3)さまざまなペン・ネーム、とりわけ晩年のÉmile AJARとしての作家活動の2つについて研究するまでには至らなかった。フランス文学最終年度となり、残された1年間で作家ガリの1世界各地での活動と執筆、22度の結婚生活や外交官生活と文筆活動の関係、3英語・フランス語での執筆・翻訳、4異なるペンネームの使い分け、5文学と芝居や映画制作との関係の全容を研究し尽くすことは難しいが、研究途中の12を継続するとともに、2015年度は3を主に研究したい。具体的には、1)ガリがフランスの外交官として勤務したニュー・ヨークとカリフォルニア州の現地調査をし、フランスよりアメリカで作品を評価されアメリカ文化の中で生きた時代の公私の生活を、作品やアメリカの雑誌などから読み取る。2)英語で書いた後、自らフランス語に翻訳した作品や、フランス語で書いた後、自ら英語に翻訳した作品について、翻訳による内容の差異や、ガリにとっていずれも母語ではない英語・フランス語の使い分けを分析する。
心・血管系における負荷に対する応答機構-分子生物学的アプローチによる解析

循環器系において、血行動態という負荷による心・血管系の変化を、器官のレベルばかりでなく、細胞・分子レベルでとらえることは、心肥大、心不全および血管攣縮、動脈硬化症などの循環器疾患の発症機構を解明する上できわめて重要な課題である。特に物理的な刺激が細胞内の応答機構に生化学的なシグナルとなって伝達され、代謝を調節する機序は、生体が外界からの刺激を受けて反応する現象を生化学的に解明するモデルになるものとして、医学ばかりでなく生物学の広い領域から注目されている。われわれは細胞に物理的な負荷を加える装置を独自に開発するとともに、分子生物学の最先端技術を導入することにより、従来では、生化学的なアプローチが因難であった、物理的な負荷に対する心筋および血管内皮と平滑筋細胞における応答機構の解析を行った。その結果、本研究は循環器疾患の基礎的な病態である心肥大や心不全、あるいは血管攣縮や動脈硬化病変の形成などの病因を遺伝子や分子レベルで捉える研究の発端となって、この分野での知見の著しい進展をもたらすところとなった。具体的には1)心筋の負荷に対する応答機構の解明として、独自に開発したシリコンディシュを用いて心筋細胞に直接機械的なストレスを与え、胎児性蛋白と核内癌遺伝子の発現機序をフォスファチジルイノシトール代謝を中心に解析し、肥大を形成する心筋細胞内応答機構のしくみを明らかにした。さらに形質変化をきたす心筋蛋白のアイソフォーム変換機序をgelshift法などを用いて検討し、心筋の負荷に対する適応現象を遺伝子レベルから究明した。2)血管内皮および平滑筋細胞における血流ストレスに対する応答機構を、固有に存在する遺伝子の発現調節機序を解明することによって、血流に対応した臓器循環が調節されるメカニズムを明らかにした。心肥大は、心筋の負荷に対する適応現象であり、心筋細胞における収縮蛋白の生合成が亢進する結果発生すると考えられる。心肥大の発生機構を細胞、分子レベルで明らかにするために、我々はこれまでに、独自に開発したシリコン培養ディッシュを用い、伸展刺激を加えた培養心筋細胞における細胞内情警伝達系の解析で、心肥大形成にイノシト-ルりん酸代謝の亢進によるCキナ-ゼの活性化、さらには核内癌遺伝子cーfosの発現が直接関連していることを示した。今回我々は、様々な増殖因子によって活性化し、細胞内情報伝達のキ-蛋白として近年注目されているMAP(mitogenーactivated protein)キナ-ゼに着目し、培養心筋細胞におけるその活性化を検討した。その結果,30分伸展刺激を加えたラット新生児心筋細胞の抽出液中において、MAPキナ-ゼ及びCキナ-ゼの共通の基質として知られているMBP(myelin basic protein)のキナ-ゼ活性が約1.8倍に亢進し、ゲル内リン酸化反応により、そのキナ-ゼ活性が分子量43kDa及び76kDaの蛋白にあることを見いだした。さらに、MAPキナ-ゼに対する抗体を用いた免疫沈降反応及びリン酸化アミノ酸解析により、伸展刺激で約6倍に増加した分子量43kDaのリン酸化蛋白は、スレオニン及びチロシン残基がリン酸化され活性化したMAPキナ-ゼ自身であることを明らかにした。MAPキナ-ゼは、cーjun等の核内癌遺伝子発現を介して転写レベルで蛋白生合成亢進に寄与しているのみでなく、40Sリボゾ-ムのS6キナ-ゼIIの活性化を介して、翻訳レベルでの蛋白生合成亢進に関係している可能性がある。さらに検討を重ねる予定である。

心肥大の発生機構を細胞、分子レベルで明らかにするために、我々はこれまでに、独自に開発したシリコン培養ディッシュを用い、伸展刺激を加えた培養心筋細胞における細胞内情報伝達系の解析で、心肥大形成にイノシトールりん酸代謝の亢進によるCキナーゼの活性化、さらには核内癌遺伝子c-fosの発現が直接関連していることを示した。今回我々は、様々な増殖因子によって活性化し、細胞内情報伝達のキー蛋白として近年注目されているMAP(mitogen-activated protein)キナーゼ、S6キナーゼに着目し、培養心筋細胞におけるその活性化を検討した。その結果、10分伸展刺激を加えたラット新生児心筋細胞の抽出液中において、MAPキナーゼの基質として知られているMBP(myelin basic protein)キナーゼ活性が約1.8倍に亢進し、ゲル内リン酸化反応により、そのキナーゼ活性が分子量42kDaの蛋白にあることを見いだした。さらに、MAPキナーゼに対する抗体を用いた免疫沈降反応及びリン酸化アミノ酸解析により、伸展刺激で約6倍に増加した分子量42kDaのリン酸化蛋白は、スレオニン及びチロシン残基がリン酸化され活性化したMAPキナーゼ自身であることを明らかにした。さらに伸展刺激によってS6キナーゼの活性化がもたらされることも明らかにした。MAPキナーゼは、c-jun等の核内癌遺伝子発現を介して転写レベルで蛋白生合成亢進に寄与してるのみでなく、S6キナーゼの活性化を介して、翻訳レベルでの蛋白生合成亢進に関係していることが示された。
神経線維腫症原因遺伝子群を介した細胞内腫瘍抑制シグナルの解明と分子治療標的の開発

本研究では、NF1及びNF2の病態発症メカニズム解明と治療ターゲットの開発を目的として、それぞれの原因遺伝子産物;NF1蛋白(Neurofibromin),及びNF2蛋白(Merlin)の細胞内機能に関連する特異的なシグナル分子群を融合プロテオミクスおよび細胞生物学的手法を用いて詳細に解析した。モデル細胞として用いたPC12細胞において、siRNAによるNF遺伝子発現の抑制は、NGFによる神経突起伸長を経時的に阻害し、細胞骨格系の制御異常、運動能の亢進および腫瘍塊様の形態変化を誘導した。プロテオミクスによる定量的発現変動解析の結果、約1600種のPC12細胞内発現蛋白質を同定し、さらに72種の神経系細胞分化と細胞死抑制に関わる新規機能分子群の同定に成功した。また、neurofibromin、およびMerlinの神経系細胞内結合蛋白質の解析を行い、neurofibrominにおいては58種類の、Merlinにおいては68種類の、ニューロン分化制御因子群、リン酸化酵素制御因子群、細胞骨格系制御等に関わる分子群を同定した。特にNF結合蛋白質群は、RAS-Rho-RhoK-CRMP2およびRAS-MAPK-CDK5-GSK3-b-CRMP2シグナルの制御を行うことによって神経系細胞の分化制御に関わっていることを明らかにした。これらの責任分子群を介するシグナル調節がNFにおいて障害された神経系細胞の機能改善に有用である可能性を提唱した本研究では、NF1及びNF2の病態発症メカニズム解明と治療ターゲットの開発を目的として、それぞれの原因遺伝子産物;NF1蛋白(Neurofibromin),及びNF2蛋白(Merlin)の細胞内機能に関連する特異的なシグナル分子群を融合プロテオミクスおよび細胞生物学的手法を用いて詳細に解析した。これらの責任分子群を介するシグナル調節がNFにおいて障害された神経系細胞の機能改善に有用である可能性を提唱した本研究では、神経線維腫症1型NF1及び2型NF2の病態発症メカニズム解明と治療ターゲットの開発を目的として、それぞれの原因遺伝子産物;NF1蛋白(Neurofibromin),及びNF2蛋白(Merlin)の細胞内機能に関連する特異的なシグナル分子群を、詳細に明らかにすることを目標にして研究をすすめている。本年はNF1に注目して、プロテオミクス(iTRAQ法)によるneurofibrominの神経系細胞内結合蛋白質の解析を行い、ニューロン分化制御因子群、リン酸化酵素制御因子群、細胞骨格系制御等に関わる58種類の分子群を同定した。特にニューロンのアクソン形成に関わるCRMP2とtubulinのneurofibrominとの相互作用に注目した。免疫沈降-western blottingによる解析によって、CRMP2分子の非リン酸化フォームのみに特異的に3者が結合し、リン酸化によってこれらの結合が制御されでいることが判明した。又、NGF刺激PC12細胞のneurite、およびラット胎児海馬ニューロンのアクソンにおいてこれらの分子の局在が一致することが免疫染色によって観察された。2D-DIGE法とproQ Diamondを用いたphospho-differential解析にてsiRNAによるNF1ノックダウン細胞とコントロール細胞の発現プロファイルの比較と、各種キナーゼ阻害剤による生化学的・細生物学的比較解析をしたところ、特にRho Kinase(Ser555),CDK(S522),GSK-3b(Ser518,Thr514,Thr509)によるCRMP2の特異的リン酸化がNF1ノックダウン細胞内にて亢進していることが判明した。neurofibrominは神経系細胞内において、RAS-Rho-RhoK-CRMP2およびRAS-MAPK-CDK5-GSK3-b-CRMP2シグナルの制御、及びCRMP2-tubulinとの相互作用を行うことによって、CRMP2のリン酸化を相互制御し、アクソンの形成と伸展に関わっていることが判明した。本研究では、神経線維腫症1型NF1及び2型NF2の病態発症メカニズム解明と治療ターゲットの開発を目的として、それぞれの原因遺伝子産物;NF1蛋白(Neurofibromin),及びNF2蛋白(Merlin)の細胞内機能に関連する特異的なシグナル分子群を、詳細に明らかにすることを目標にして研究をすすめている。本年度は昨年度に引き続き、プロテオミクス(iTRAQ法)によるneurofibromin、およびMerlinの神経系細胞内結合蛋白質の解析を行い、neurofibrominにおいては58種類の、Merlinにおいては68種類の、ニューロン分化制御因子群、リン酸化酵素制御因子群、細胞骨格系制御等に関わる分子群を同定した。

特にニューロンのアクソン形成に関わるCRMP2とtubulinのneurofibrominとの相互作用に注目し、CRMP2分子の非リン酸化フォームのみに特異的に3者が結合し、リン酸化によってこれらの結合が制御されていること、又、NGF刺激PC12細胞のneurite、およびラット胎児海馬ニューロンのアクソンにおいてこれらの分子の局在が一致することを見出した。2D-DIGE法とproQ Diamondを用いたphospho-differential解析にてsiRNAによるNF1ノックダウン細胞とコントロール細胞の発現プロファイルの比較と、各種キナーゼ阻害剤による生化学的・細胞生物学的比較解析をしたところ、特にRho Kinase(Ser555),CDK(S522),GSK-3b(Ser518,Thr514,Thr509)によるCRMP2の特異的リン酸化がNF1ノックダウン細胞内にて亢進していることが判明し、neurofibrominは神経系細胞内において、RAS-Rho-RhoK-CRMP2およびRAS-MAPK-CDK5-GSK3-b-CRMP2シグナルの制御を行うことによってCRMP2のリン酸化を相互制御し、アクソンの形成と伸展に関わることが判明した。これらの結果から、これらの責任キナーゼ阻害薬がNFにおいて障害された神経系細胞の機能改善治療薬として有用である可能性を提唱した。神経線維腫症の病態発症メカニズム解明と治療ターゲットの開発を目的として研究を進めている。本年度はNF1の細胞モデルを用いた融合プロテオミクスの方法論確立を試みた。分子発現差異解析法を融合的に用いて同一サンプル群を同時に解析し、得られたすべての情報を統合マイニングすることによって、重要分子シグナル群を抽出するためのプログラム[MANGO(Mol.Cell.Proteomics 2009),iPEACH(特願2010-81525)]を考案し、さらに抽出重要分子群の迅速検証法、siRNA、阻害剤、活性化剤等を用いた生物学的機能解析法などを検討することによって、スタンダードとなりうる一連の統合的方法論の開発を行った。モデル細胞として用いたPC12細胞において、siRNAによるNF1遺伝子発現の抑制は、NGFによる神経突起伸長を経時的に阻害し、細胞骨格系の制御異常、運動能の亢進および腫瘍塊様の形態変化を誘導した。NF1発現抑制細胞およびコントロール細胞より蛋白質を抽出し、高感度プロテオミクスiTRAQ法を用いて、LC・MALDI-TOF-TOFおよびLC-ESI-QqTOFによる定量的発現変動解析を行った。その結果、約1600種のPC12細胞内発現蛋白質を同定し、その内、NGF刺激によって特異的な発現差異を示す72種の蛋白質を抽出同定した。これらたは既知のNGF誘導分子のみならず、神経系細胞分化と細胞死抑制に関わる新規機能分子群が含まれることが判明した(Kobayashi et al.Mol.Cell.Proteomics 2009)。さらにNF1発現抑制により、NGF刺激PC12内で特異的に発現が変動する38種の蛋白質を確認した。
造血系転写因子RUNX1のユビキチン化修飾および分解制御機構の解明

造血系転写因子RUNX1の発現、活性は精緻に制御されており、その破綻は造血器腫瘍発症の原因となる。RUNX1の機能はユビキチン-プロテアソーム系を介した調節を受けることが知られているが、その詳細なメカニズムはほとんどわかっていない。今回我々は、高感度かつハイスループットにユビキチン化を検出可能なユビキチン化アッセイ法を用いて約300種類のユビキチン化酵素プロテインアレイとRUNX1を対象にスクリーニングを行い、RUNX1のユビキチン化修飾を誘導する候補分子を同定した。この中には、STUB1など既知のRUNX1ユビキチン化誘導酵素が含まれており、スクリーニングは正しく働いていると考えられた。さらに我々は、個々の候補ユビキチン化酵素とRUNX1の関係を詳細に検討し、RUNX1ユビキチン化を誘導する分子を複数同定した。また、RUNX1タンパクの安定性をGFPとmCherryの蛍光強度の比で評価することのできるレポーター細胞を用いて、個々のユビキチン化酵素をノックダウンした時のGFP/mCherry蛍光強度の変化を検証した。この実験では、意外にも個々のユビキチン化酵素ノックダウンによるRUNX1タンパクの大幅な発現増加は認めなかった。この結果は、RUNX1のユビキチン化修飾及び安定性は複数の酵素により複合的に制御されており単一分子のノックダウンでは大きく変化しないことを示唆している。もしくは、我々が同定したRUNX1ユビキチン化誘導分子の中に、RUNX1の分解を促進するのではなく機能調節を行うものが含まれている可能性もある。今後は、個々の分子により誘導されるRUNX1ユビキチン化修飾の役割を明らかにするとともに、ゲノム編集技術を用いてRUNX1ユビキチン化酵素の欠失を誘導し、その生理的意義を解明する。27年度が最終年度であるため、記入しない。
直腸肛門形成におけるGli2遺伝子の役割(自然発症鎖肛ブタモデルを用いた解析)

1.ブタの交配計画と検体の蓄積一鎖肛ブタ家系の維持成獣として5頭維持している。新たに他家系の散発性の新生仔鎖肛雄豚を2頭入手し、生直後に根治手術を施行、肛門ブジーをしつつ飼育している。2.遺伝子解析鎖肛発症において複数の遺伝子が関与していることは、我々の作成樹立した筑波鎖肛ブタを用いた交配結果より予測されている。独自に樹立した遺伝性を有する自然発症の鎖肛ブタの遺伝子解析にむけて、離れた系であるメイシャンブタ(梅山ブタ)を導入して純系に近い鎖肛ブタとの人工授精に成功し、これより得られたFlを鎖肛ブタに戻し交配したところ、F2において8%(42/523)の頻度で鎖肛ブタが発症した。この家系においてF0,F1,F2のサンプルは現在も十分な量が凍結保存してあり連鎖解析はすべてこれらのサンプルを用いた。今回は連鎖解析のマーカーを増やしてさらに詳細な検討を加え多因子遺伝とされる中で4つ染色体において異常領域を推定するところまで到達した。これまでの結果はNCBI(National Center for Biotechnology information)により提供されているOMIA(Online Mendelian Inheritance in Animals)に掲載された(OMIA ID:000083)。今回は最も有力視されているブタ15番染色体上のGli2遺伝子に的を絞った。これまで全く不明であったブタにおけるGli2遺伝子についてSomatic Cell Hybrid Panelによる検討でブタの遺伝子はChr15q1.2-q1.4上にあることを確認した。またGli2のEXON 8の構造と染色体上の部位を決定することができた。現在はイントロンを含めたGli2遺伝子全領域について鎖肛を発症したものと、しないものにおける違いを詳細に検討している。この結果により鎖肛遺伝子(異常部位)が特定できれば、cloacal plateの発生との関係を遺伝子レベルで明らかにすることができ、直腸肛門の発生学的な機序の解明やさらにはヒトにおいても予防や治療にも役立つと思われる。また先天性外科疾患の多因子遺伝解析モデルとしてのみではなく他疾患の解析法を探索する上でも役立つと思われる。1.ブタの交配計画と検体の蓄積-鎖肛ブタ家系の維持成獣として5頭維持している。2.遺伝子解析我々の樹立した筑波鎖肛ブタから選んだ3頭の鎖肛雌ブタ、遺伝子解析用に交配のため導入した1頭のメイシャンブタ、11頭のF1、戻し交配に使った9頭の鎖肛ブタ、戻し交配で発症した42頭の鎖肛ブタと各鎖肛ブタの兄弟に当たる42頭の正常ブタを対象とした。脾臓からDNAを抽出し165個の多型の証明されているマイクロサテライトマーカーを用いて詳細に遺伝子の多型パターンを調べた。TWOPOINT analysisではmarker SW919(Chr15)でlod score Z=3.2,比較遺伝子マップによる検討ではGli2(ヒトではChr2q14)はSomatic Cell Hybrid Panelによる検討でブタの遺伝子はChr15q1.2-q1.4上にあることを確認した。またmarker SW539(Chr9)ではLod score Z=2.45となり2つ目の遺伝子の関与が示唆された。

3.現在・今後の計画現在ノンパラメトリックな手法を用いた検討やChr9上の候補遺伝子の検索中である。また海外共同研究者Leif Andersson教授と互いのデータを確認しGli2遺伝子のイントロンの部分に異常があることを推測して、発症しなかったすべてのF2の検体(約500)を用いて同部の塩基配列の異常を検索する計画を立てた。遺伝子抽出を円滑にするために自動核酸抽出装置(QuickGene-800)を購入した。ヒトの多因子遺伝疾患を解析するために筑波鎖肛ブタ家系は非常に有効な動物モデルであることを再確認し研究を続けている。1.ブタの交配計画と検体の蓄積一鎖肛ブタ家系の維持成獣として5頭維持している。新たに他家系の散発性の新生仔鎖肛雄豚を2頭入手し、生直後に根治手術を施行、肛門ブジーをしつつ飼育している。2.遺伝子解析鎖肛発症において複数の遺伝子が関与していることは、我々の作成樹立した筑波鎖肛ブタを用いた交配結果より予測されている。独自に樹立した遺伝性を有する自然発症の鎖肛ブタの遺伝子解析にむけて、離れた系であるメイシャンブタ(梅山ブタ)を導入して純系に近い鎖肛ブタとの人工授精に成功し、これより得られたF1を鎖肛ブタに戻し交配したところ、F2において8%(42/523)の頻度で鎖肛ブタが発症した。この家系においてF0,F1,F2のサンプルは現在も十分な量が凍結保存してあり連鎖解析はすべてこれらのサンプルを用いた。今回は連鎖解析のマーカーを増やしてさらに詳細な検討を加え多因子遺伝とされる中で4つ染色体において異常領域を推定するところまで到達した。これまでの結果はNCBI (National Center for Biotechnology information)により提供されているOMIA (Online Mendelian Inheritance in Animals)に掲載された(OMIA ID:000083)。今回は最も有力視されているブタ15番染色体上のGli2遺伝子に的を絞った。これまで全く不明であったブタにおけるGli2遺伝子についてSomatic Cell Hybrid Panelによる検討でブタの遺伝子はChr15q1.2-q1.4上にあることを確認した。またGli2のEXON 8の構造と染色体上の部位を決定することができた。現在はイントロンを含めたGli2遺伝子全領域について鎖肛を発症したものと、しないものにおける違いを詳細に検討している。この結果により鎖肛遺伝子(異常部位)が特定できれば、cloacal plateの発生との関係を遺伝子レベルで明らかにすることができ、直腸肛門の発生学的な機序の解明やさらにはヒトにおいても予防や治療にも役立つと思われる。また先天性外科疾患の多因子遺伝解析モデルとしてのみではなく他疾患の解析法を探索する上でも役立つと思われる。
溶融金属積層と切削加工の複合加工を可能にするCAMおよび工程設計システムの開発

大型機械部品や金型を迅速に造形可能なアーク放電・ワイヤ材料方式の積層技術である溶融金属積層法と切削加工を効果的に組み合わせた,積層造形・切削加工の複合加工を可能にするCAMおよび工程設計システムの開発を行った.1)中実形状造形時に,積層経路と造形物形状の関係を明らかにし,切削により除去される余肉体積が小さい積層経路を明らかにした.積層造形物が目標とするCADデータを包含されるように積層経路を補正するプログラムを開発し,本機能を有するCAMを開発した.2)目標形状を積層造形により付加する領域と,切削により除去する領域について,材料消費量や加工時間の観点から決定を支援する工程設計システムを開発した.本システムでは,素材寸法や目標形状と素材の相対位置を変更しながら,各場合における材料消費量や加工時間を算出し,これらの関係を可視化可能にした.これにより作業者の目的に応じて,素材形状および積層造形と切削による加工領域を定量的に決定することが可能になった.3)材料消費量や加工時間の算出において必要なパラメータを実験から獲得し,ケーススタディを実施した.積層造形のための積層経路の算出には開発したCAMプログラムを用いた.工程設計システムを利用して推定した材料消費量および加工時間と,実加工により消費した材料および時間を測定して,推定精度を検証した.推定精度への影響が大きい因子としては,造形中の冷却時間が支配的であることを明らかにした.大型機械部品や金型を迅速に造形可能なアーク放電・ワイヤ材料方式の積層技術である溶融金属積層法と切削加工を効果的に組み合わせた,積層造形・切削加工の複合加工を可能にするCAMおよび工程設計システムの開発を目的とする.積層造形CAMの開発にあたり,まず造形形状の最小単位を定義した.その最小単位の組み合わせにより様々な目標形状の造形が可能となる.造形の最小単位のうち,特に1パスのビード上に鉛直にビードを形成する場合に着目し,造形条件が造形形状に与える影響を調査した.この造形を繰り返すことで,中空構造やリブ形状などを造形することができる.ビード上に鉛直にビードを形成する際の,ビード断面形状を2次元断面モデルを用いて予測し,連続的に2次元断面モデルをつなぎ合わせることで造形形状を予測するシミュレータを開発し,シミュレータの予測精度を検討した.造形形状シミュレータをCAMに実装することで,目標形状を精度良く造形するために適切な送り速度条件を出力することが可能になった.今後は,ビードを平面上に形成する場合,ビードを隣接して造形する場合についても検討し,様々な目標形状へ対応可能なCAMの開発を行う.造形のための形状の最小単位を定義して場合分けを行い,その場合における最適な造形条件算出方法を,造形形状シミュレータを開発することにより実現した.造形形状シミュレータの精度を調査することで造形可能な精度に関してもある程度評価可能となった.CAMに実装することで目標形状に応じた最適な造形条件の算出する機能を付与することが可能となった.全ての場合について最適な造形条件の算出方法は確立されていないが,概ね順調に進展している.大型機械部品や金型を迅速に造形可能なアーク放電・ワイヤ材料方式の積層技術である溶融金属積層法と切削加工を効果的に組み合わせた,積層造形・切削加工の複合加工を可能にするCAMおよび工程設計システムの開発を目的とし,造形形状の最小単位を定義した.その最小単位について造形物形状特性を調査した.本年度は特に,ラティス構造造形のための柱状形状造形と,中実形状造形のためのビードを水平方向に並べて積層する場合について検討した.1)柱状造形時の電流,電圧,放電時間および待機時間などの造形条件と,造形物形状の関係を調査した.放電時間が造形物形状,特に造形高さに与える影響が大きいことを明らかにし,造形物形状を制御可能にした.また,得られた柱形状造形技術を用いて,ラティス構造を造形するためのCAMを開発した.これにより任意の領域を選択することによりラティス構造を造形するための積層パスおよび条件が出力可能になった.2)中実造形を行うために,ビードオンプレート時の造形物形状と電流,トーチ送り速度などの造形条件の関係を明らかにした.また,ビードを水平方向に並べて造形する際の,造形間の待機時間やクロスフィード量と造形物形状の関係を明らかにした.十分な入熱を与える条件下では,トーチ傾斜角度が造形物形状に与える条件は小さいことが明らかになった.中実形状を高精度に造形するための造形条件の決定方法を提案し,その効果の実験的な検証を開始した.中実形状やシェル形状を構成する造形方法について,造形形状と造形条件の関係を実験的に知見を得ることができている.これに加えて,当初は想定していなかったラティス構造を造形するための造形条件に関する実験やCAMの開発も実施することができたため大型機械部品や金型を迅速に造形可能なアーク放電・ワイヤ材料方式の積層技術である溶融金属積層法と切削加工を効果的に組み合わせた,積層造形・切削加工の複合加工を可能にするCAMおよび工程設計システムの開発を行った.1)中実形状造形時に,積層経路と造形物形状の関係を明らかにし,切削により除去される余肉体積が小さい積層経路を明らかにした.積層造形物が目標とするCADデータを包含されるように積層経路を補正するプログラムを開発し,本機能を有するCAMを開発した.2)目標形状を積層造形により付加する領域と,切削により除去する領域について,材料消費量や加工時間の観点から決定を支援する工程設計システムを開発した.本システムでは,素材寸法や目標形状と素材の相対位置を変更しながら,各場合における材料消費量や加工時間を算出し,これらの関係を可視化可能にした.

これにより作業者の目的に応じて,素材形状および積層造形と切削による加工領域を定量的に決定することが可能になった.3)材料消費量や加工時間の算出において必要なパラメータを実験から獲得し,ケーススタディを実施した.積層造形のための積層経路の算出には開発したCAMプログラムを用いた.工程設計システムを利用して推定した材料消費量および加工時間と,実加工により消費した材料および時間を測定して,推定精度を検証した.推定精度への影響が大きい因子としては,造形中の冷却時間が支配的であることを明らかにした.積層造形CAMのアルゴリズムを一般化し,様々な目標形状に対応したCAMの開発を行う.特に,平板状に造形する場合,ビードを隣接して造形する場合について検討する.造形条件と造形形状の関係を明らかにし,モデル化することで目標形状を高精度に造形するための最適条件算出方法を確立する.その後,切削加工との組み合わせにより形状創成を行う場合を考慮して,素材形状の決定方法や切削加工により除去する場所,積層造形により付加する場所の決定方法について検討する.判断指標としては加工時間や材料消費量を用いる.AMと切削加工の複合加工工程設計システムを開発する.1)目標形状と素材形状の差分をとり造形形状,切削による除去形状を算出するプログラムを作成2)造形形状,切削による除去形状から加工時間,材料消費量を算出するプログラムの作成3)上記のプログラムを利用して,加工時間,材料消費量などの観点から適切な素材形状や加工工程を探索するアルゴリズムを開発する.当初の予定よりも効率的に実験を遂行することができ,出張等も想定より少なかったため次年度使用額が生じた.翌年度は実験計画を見直し,試行回数を増やして適切に使用する.
寄主特異性を決定する共生ウイルスおよびウイルス様粒子の類似性および相違性の解明

鱗翅目幼虫の体内に異物が侵入した場合、血球より大きな異物に対して細胞性防御応答が引き起こされ、侵入異物は血球によって取り囲まれる包囲作用が起こる。その際の初期応答にに大きな役目を担っていると思われる我々が見つけた新たな血球種hyperspread cell (HSC)の寄主幼虫体内における造血器官を探り当てた。HSCは異物の表面に付着し細胞の周辺にメラニンを沈着することで他の血球に異物であることを知らせる役目を持ち効率よく異物を処理できるものと考えている。この血球は鱗翅目幼虫によっては持っている種と持っていない種があることが分かってきているが、まずは持っている種での起源をつかみ特定し、特異的遺伝子発現を見つける必要がある。まず寄主アワヨトウ幼虫を結紮することでいくつかのパートに分けて、胸部が一番多く出ることが明らかになった。また胸部には造血器官があることから造血器官を摘出したが、その寄主でも異物を注入すると未摘出の寄主と変わらず多くのHSCが異物の周りを取り囲むことが明らかとなり、従来の造血器官から生産されている血球ではないことが明らかになった。そこで、かなり時間がかかったがHSCを作る器官の探索を続け、やっとそのHSCを排出する造血器官である可能性がかなり高い器官を見つけられた。現在その器官を培養したり切片にしたり、発現している遺伝子を明らかにすることを検討し始めたところである。さらに、カリヤコマユバチ(Ck)のポリドナウイルス(PDV)と毒液が発現している寄主の血球からRNAを取り出しRNAseqを行って結果を得たが、比較のために現在Cotesia ruficrus(Cr)のPDVの発現解析の方を進めている若齢にPDV+毒液を注入したが、血球サンプルが思ったより、とれにくく苦戦してきた。少しい大きめの寄主を使うことで確実にサンプルを採取することを検討する必要が生じた、一時期Cr蜂個体群が少なくなってきていたことから、増殖等に時間を要した。最近十分な個体を得たことからさらに検討を続けて3令ではなく4令まで寄生できることを確認できた。そこで本年度はCr寄生の4令寄主から血球を採取することでRNAseqができることを目指している。結局本年度まで、一回論文は投稿したが、rejectされたため1報も報告がない状態となった。また、高校の教材化に貪食反応は各自学生が行うことでの実習体系は組めたが、包囲作用の教材化を如何するかの見当がまだである。内部寄生蜂のコマユバチ科2種Cotesia kariyai(Ck)とC.ruficrus(Cr)の持つ共生ウイルス(ポリドナウイルス、PDV)とそれぞれの毒液を注入した寄主アワヨトウから、血球を取り出してRNAseqを行うことを目標とした。寄主の若齢にしか産まないCrの寄主として3令を使って、寄主からの血液を採ろうとした。しかし、かなり小さいことから血液を寄主から採取するときの方法をいろいろ検討したが、十分量のRNAを採取することが難しく困難を極めた。本年度では3令ではなく4令に令期を引き上げて採取する予定。寄主の防御行動によってCrは産卵を避ける傾向はあることで、3令寄主からの採血にこだわっていたが、4令でも寄生は成功することは確かめた。一方Ckは寄主が6令まで寄生可能であることから既にRNAseqをやって調べてある。Crの結果を待って違いを明らかにする。さらに寄主アワヨトウの全ゲノムを読まなければ、寄主側の免疫反応に関与する遺伝子が特定できないことから、現在全ゲノムを読むためにサンプルを取ることを試みているが、如何してもDNAが断片化してしまうことから、何回もチャレンジをしている。コツがつかめてきたことから、近々成功すると思っている。ここまでで2ー3報の準備は整っているために最終年度には報告を多く行えると思う。寄主との密接な関係を持つ内部寄生蜂の寄主特異性は、共生ウイルス(ポリドナウイルス:PDV)や毒液の遺伝子の違いによることがわかってきている。しかし、寄主特異性に関与するPDVと毒液の機能的な類似点や相違点を若齢にしか寄生できない寄生バチ(Cotesia ruficrus)と終齢まで寄生可能な特性を持つ寄生バチ(Cotesia kariyai)間で明らかにすることで、進化における種分化の仕組みを明らかにしていく。今年度は主にPDVにおけるゲノム解析を行った。1.以前行った実験結果ではかなり共通遺伝子を持っていることが予測されていたが、ゲノムの共通性を解析したところ、あまり共通してない可能性が見えてきた。今後はPDVゲノムはagarose電気泳動で様々な大きさのセグメントに分かれることから、それぞれのセグメントごとの解析を行うことで重複している配列を明らかにし、ゲノム配列の類似点と相違点を明らかにする。2.寄主側の反応として、PDVの作用によって血球種のHSC(Hyperspread cell)がいなくなり機能を失うことはすでにあきらかになっていて、寄生成功にはこの細胞が大きく関与していると思われている。そこで、まずは寄生されていない個体でのHSCの動態の検討を行った結果、この細胞の再利用は行われず、皮膚を構成する表皮細胞から供給されている可能性が示されている。これがPDVの作用でどのように変わるかなどを検討することで、PDVが特異的にこの細胞の機能を消失させている可能性を明らかにする。