hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
甲殻類の性分化を制御するヘテロ2本鎖糖ペプチド(造雄腺ホルモン)の作製と機能解析

甲殻類の造雄腺ホルモン(AGH)前駆体はN末端側からB鎖、Cペプチド、A鎖からなり、A鎖に糖鎖が付加されるとともに、Cペプチドが除去されて成熟型となる。最初に、大腸菌発現系を用いて発現させた組換えオカダンゴムシAGH前駆体からCペプチドを除去する技術を確立した。そして、バキュロウイルス発現系を用いて、糖鎖を有する組換えオカダンゴムシAGH前駆体と組換えオニテナガエビAGH様分子前駆体を発現させた。造雄腺ホルモン(AGH)前駆体はN末端側からB鎖、Cペプチド、A鎖からなり、Cペプチドが除去されて成熟型となる。最初に、AGH前駆体からCペプチドを効率よく除去する技術の確立を行った。大腸菌で発現させたオカダンゴムシの組換えAGH前駆体を、低濃度(0.25ng/μ1)のメタロエンドペプチダーゼで8時間消化したところ、Cペプチドの両端をほぼ完全に切断できた。消化産物を逆相のHPLCに供したところ、B鎖とA鎖からなるヘテロ2本鎖ペプチドが簡便に精製できた。次に、糖鎖が付加した組換えオカダンゴムシAGH前駆体を得るために、バキュロウイルス・昆虫細胞発現系で組換えAGHを発現させることにした。オカダンゴムシAGH cDNAをポリヘドリンプロモーターの下流に組み込んだ組換えバキュロウイルスDNAを作製した。組換えバキュロウイルスDNAをリポフェクション法により昆虫培養細胞sf9へ導入し、組換えオカダンゴムシAGH前駆体を発現させた。今後、上述の方法を用いて組換えAGH前駆体からCペプチドの除去を行う予定である。十脚目のAGHではないかと考えられているインスリン様造雄腺特異的因子(IAG)をコードするcDNAを、オニテナガエビから単離した。オニテナガエビのIAGにもオカダンゴムシのAGHと同様に糖鎖付加モチーフが存在したことから、組換えオニテナガエビIAG前駆体を得るために、バキュロウイルス・昆虫細胞発現系で組換えIAGを発現させた。オカダンゴムシの造雄腺ホルモン(AGH)前駆体はN末端側からB鎖、Cペプチド、A鎖からなり、Cペプチドが除去されて成熟型となる。本年度は、組換えAGH前駆体をバキュロウイルス・昆虫細胞発現系を用いて発現させた。細胞溶解液をSDS-PAGEで分離し、抗オカダンゴムシAGH抗体を一次抗体に用いたウエスタンブロットを行った結果、17.5kDaと22kDaの位置に2本の免疫陽性のバンドが観察され、17.5kDaのバンドは糖鎖が付加していないもの、22kDaのバンドは糖鎖が付加したものと考えられた。次いで、組換えAGH前駆体を逆相HPLCで精製し、同様にウエスタンブロットに供した。その結果、二つのピーク画分に、共に免疫陽性の2本のバンドが確認された。二つのピークにまたがって免疫陽性の反応が観察されたのは糖鎖のパターンが異なっているためと推測された。組換えオカダンゴムシAGH前駆体の発現法を参考にして、オニテナガエビの造雄腺ホルモン様分子(IAG)の前駆体をバキュロウイルス・昆虫細胞発現系を用いて発現させた。オニテナガエビのIAGに対する抗体を用いてウエスタンブロットを行った結果、組換えバキュロウイスルを感染させた細胞では免疫陽性のバンドが検出されたが、ウイルスを感染させていない細胞ではバンドは観察されなかった。また、検出された免疫陽性のバンドの位置は、組換えIAG前駆体の予想される分子量よりも大きかった。これらの結果より、期待通りの糖鎖を有する組換えIAG前駆体が発現していると考えられた。
ディスレクシア学習者に対する教授法開発―教員養成における指針の策定と手引書の試作

本研究では、ディスレクシアを抱える学習者が外国語として日本語を学ぶ際に現場の教師にどのような支援が可能なのか、その具体的な方法を明らかにするとともに、ディスレクシアを抱える学習者に対して、前向きに、そして適切に対応することのできる日本語教員を育成するためには、日本語教員養成課程において、どのような項目を扱う必要があるのかを明らかにしたうえでそれらの項目を含んだハンドブックの試作を行った。今年度は平成24年度に引き続き、ディスレクシアを抱える日本語学習者についての事例収集、および、中国、フランス、イギリスにおけるディスレクシアを抱える学習者に対する支援状況の情報収集を行った。具体的には、イギリス、フランスに加えて、スロヴェニアの研究協力者に現地の情報を集めてまとめてもらうとともに、新たに中国の協力者を加えて、中国(主として上海地区)における学習困難児に対する認識の度合い、学習支援の状況についての情報収集を行った。また、今年度は、ディスレクシアを抱える学習者が日本語を学習する際に、どのような支援が有効であるかを探るため、様々な教授法、介入方法についての先行研究を分析するとともに、ITテクノロジー使用の可能性を探るため、Assisitive Technologyについての先行研究分析を行った。さらに、日本語教員養成課程で教えられている項目について調査を行うとともに、日本語教育の現場で実際に教えている教師がディスレクシアについてどの程度の認識を持っているのかを調査した。今年度については、日本国内の日本語学校で教えている教師を対象とした調査のみだったが、来年度は、イギリス、フランス、スロヴェニア、中国においても同様の調査を実施する予定である。さらに、今年度は、日本国内で教師に対して実施した意識調査から、日本語教員養成課程において、ディスレクシアに関する項目を取り上げる必要性が明らかになったことを受け、取り上げるべき項目、取り上げ方について整理し、ハンドブックの構成を作成した。平成24年度は、主に海外の研究協力者とともに、読み書きに障害をもつ学生支援の進んだ国における事例の収集および実態調査を行うことを目的として取り組んだ。具体的には、ヨーロッパのイギリス、フランス、さらにはスロヴェニアの事例や実態を文献、現場の教師、学校関係者からの聞き取りなどを通して収集した。さらには、北米の高等教育機関における学習支援実態等について、主に文献から情報収集を行った。また、本研究のもう1つの目的である、日本語教員養成のためのハンドブック開発のための基礎研究として、海外において教育機関及び教員向けに発行しているハンドブックを調査し、そこに含まれている項目等について比較検討を実施した。以上の調査を基礎として、日本語教育の現場に立つ教員が、ディスレクシアについて知っておくべき項目は何か、指導の際に留意すべき点はどんな点かについて、国内国外の日本語教育関係者と意見交換を始め、ハンドブックで取り上げるべき項目の選定作業を開始したところである。また、ディスレクシア研究は、主にアルファベットを文字とする言語における研究が主流であり、日本語のように特殊な文字体系を持つ言語における研究がほとんど見られないため、数少ない中国語における文献、アラビア語における文献等を参考にしつつ、言語(主として音韻と文字)の観点から、日本語とディスレクシアの関連について明らかにすべく、文献調査を開始している。平成26年度は、24年、25年で収集したデータや情報を基に、日本語教育の現場に適用できる教授法や教材についての研究を行った。音韻をベースとする日本語のひらがな・カタカナの習得に、どのような方法が有用であるのか、さらには、意味をあらわす文字であると同時に、音読みや訓読みなど1つの文字に複数の「音」が結びついている漢字の習得にはどのような指導が必要かなどについて研究を行った。海外のディスレクシア対応は、その多くが音韻意識を高めたり、音素の取り出しをトレーニングしたりするものであるが、日本語の表記システムは英語とは異なるため、日本語における指導、支援についても先行研究をあたった。しかし、日本語におけるディスレクシア支援は、その対象がほとんど児童であり、本研究で対象とする大学生(成人)の指導にすぐに適用できるかについては疑問が残った。今後は、大学生(成人)向けに、指導内容や指導に用いる教材などを改善していく必要性が明らかとなった。また、海外の日本語教育の現場では、国内以上にディスレクシアを抱える学習者に対する対応が求められていることがわかったため、日本語教員養成課程において、これから日本語教師になろうとする学生たちに、効果的にディスレクシアに対する知識、心構え、支援の選択肢等を教えていくための「ハンドブック」の作成に取り組んだ。ハンドブックにおいては、ディスレクシアとは何か、どのようにディスレクシアかどうかを認定するのか、個々の学習者がどのような特徴を持つのか、学習者の学習を支援するには、どのようた対応が可能なのかについて、わかりやすくまとめた。今年度は、これまでに収集した海外の事例、調査の結果に基づき、ディスレクシアを抱える学習者に前向きに対応していくことのできる日本語教員を養成するためには、養成の課程において何を知っておくべきかをまとめ、その成果として「日本語教師を目指す人、日本語教育現場で働く人のためのディスレクシアハンドブック」を作成した。ディスレクシアとは何か、教室という現場で対応できる指導方法にはどのようなものがあるか、学習者のどのような特徴からディスレクシアであると判断可能か、外部の役立つリソースはどこにあるのかなどを簡潔にまとめたもので、現在、立教大学の日本語教員養成プログラムにおいて活用を試用中である。また、主として「読解」、「表記」の指導の際に効果的だと思われる教授法や支援法について提案したが、指導法部分については、まだ検証の段階まで至ることができていない。今後は、さらに研究を続け、教授法、教材の提案までつなげたいと思っている。

本研究では、ディスレクシアを抱える学習者が外国語として日本語を学ぶ際に現場の教師にどのような支援が可能なのか、その具体的な方法を明らかにするとともに、ディスレクシアを抱える学習者に対して、前向きに、そして適切に対応することのできる日本語教員を育成するためには、日本語教員養成課程において、どのような項目を扱う必要があるのかを明らかにしたうえでそれらの項目を含んだハンドブックの試作を行った。交付申請書では、26年度に日本語教員養成課程で使用できる、あるいは、日本語教育の現場で教育に携わる教員が活用できる「ハンドブック」の作成を完成させる予定であったが、海外の情報収集等に時間がかかり、その目標を年度内に達成することができなかった。この点においては、交付申請書に記載した計画より、やや遅れていると言わざるをえない。しかし、海外でのディスレクシア支援の状況把握、日本語教育に活用できるであろう教授法等の情報については、計画通り収集することができており、その点においては、交付申請書の計画通りに進められたと思われる。日本語教員養成、日本語教育工学、ディスレクシア学習者支援今回の研究で集められた情報、得られた知見を、さらに現場の教師が活用できる形にすべく、今年度からはさらに実現可能な教育支援方法についての研究を行う。さらに、今回の研究から、ディスレクシアを抱える学習者であっても、その状況(どんなところに困難を抱えているのか)は多様であることがわかったため、学習者の状況に個別に対応できる教育支援の方法についても研究を行っていく予定である。申請時に計画していた25年度に実施すべき項目3つー1国内外での事例収集、実態調査、2教授法の開発、3教員養成課程で取り上げるべき教授項目の基礎となる事項の策定ーについて、おおむね達成できている。今年度の目標である、国内外の事例や情報の収集については、当初の計画通りに進行している。また、調査や研究に必要な文献の収集も順調に進展した。しかし、ディスレクシアを持つ学習者への対面の聞き取りや、海外の教育機関における聞き取り調査等は実施できていないため、「おおむね」と言わざるをえない状況である。しかし、対面聞き取りや海外における聞き取り調査は、25年度に実施予定であるため、本研究全体としての進捗については、それほど大きな問題とはなっていない。以上の状況からこのような自己評価にいたった。26年度に作成予定であった、ディスレクシアを抱える学習者に対応する際に活用できるハンドブックの作成が間に合わなかったため。ハンドブックには、日本語教育の現場で活用できる具体的支援法を含める予定であったが、教授法をまとめるのに時間がかかり、年度内に完成させることができなかった。また、報告書についても、イギリス、フランスの調査報告が年度内に間に合わなかったため、作成が遅れてしまった。これまでの研究成果をふまえ、今年度は、実際の教材作成、教授法開発のための研究をすすめたい。
断髄後のDentin Bridge形成に関与する神経線維と神経終末の電顕的研究

犬の犬歯を用いて、生活歯髄切断を施術し、硬組織被蓋の形成(Dentine Bridge)が生成される過程を観察した。歯髄切断後のPulp Capping剤としては水酸化カルシウムを用いた。覆髄後57日経過すると、石灰化前線あるいは、石灰化の起始点とも考えられるような部位、すなわちCollagen fiberにCa, Pが沈着した部位に神経終末、神経線維が接触嵌入して観察された。特に、このような神経終末と未分化間葉細胞・線維芽細胞様細胞数などに接触していた電顕所見において認められた。Synapic Cleftに似た像が認められた。そこで、このSynapic Cleftの真偽を確かめるべく、犬を用いてCalcium transmitter releaseの動態を確認しようと実験をかさねているものの、固定上の問題がありなかなかそのような所見が得られないのでボランティアにより、ヒトの歯に断髄を施した。これにより単独の未分化間葉系細胞に嵌入、接触した神経線維、神経終末が多数見られた。これら未分化間葉系細胞に接触・嵌入した神経線維や神経終末には、その細胞膜の消失や、内容物の崩壊、流出がしばしば認められた。石灰化前線(石灰化のStarting pointというべき)における神経終末と繊維芽細胞様細胞との接着部又は嵌入接着部の微細構造には明らかなSynaptic cleftの管状の連続性が認められた。しかしながらCalcium transmitter releaseの動像態をキャッチするまでには到らなかった。所謂、Calciumの移動するような像をAntimonate法で得ることが出きなかった。今後、Ca^<++>のTracer法により確認したい。成犬5匹を用い、20歯に生活歯髄切断を施行した。実験期間は1週、2週、3週、4週、5週とした。各々期間後に実験歯を取り出し、2.5%グルタールアルデヒドに浸潤固定を1昼夜行った。一部にはAntimonate法を施し、ともに、1%O_5O_4による後固定を行った。Epon812に包埋し、重合したのち、ダイヤモンドナイフにより23μmの切片を作製し、トルイジンブルー染色を施した。この切片により生活歯髄切断面下の硬組織化の開始点を観察し、この部を中心に電顕観察、撮影した。これらの結果は以下の通りであった。1.生活歯髄切断後12週における、歯髄表層には線維芽細胞、線維細胞が見られた。これらの細胞に接触、嵌入した神経線維や神経終末が散見された。これらの神経終末はDensityの高い顆粒を有するAdrenergieなものが比較的多く認められた。2.Adrenergic Vesiclesを有する神経終末に接触嵌入した線維芽細胞または線維細胞は核が大きく、肥大したSpindle様細胞に変化していたものではないかと考えられるような傾向が認められた。3.核が大きく、肥大した細胞に接触し嵌入した神経終末には、しばしば変性した像が認められた。覆髄後57日経過すると、石灰化前線あるいは、石灰化の起始点とも考えられるような部位、すなわちCollagen fiberにCa, Pが沈着した部位に神経終末、神経線維が接触して観察された。特に、このような神経終末と神経線維がお互いに接触していた電顕所見においては、所謂、Synaptic Cleftに似た像が認められた。そこで、このSynaptic Cleftの真偽を確かめるべく、犬及びラットを用いてCalcium transmitter releaseの動態を確認しようと実験を重ねているものの、なかなかそのような所見が得られないでいる。更に、単独の未分化間葉細胞様細胞に嵌入、接触した神経線維、神経終末が多数見られた。

これら未分化間葉系細胞に接触・嵌入した神経線維や神経終末には、その細胞膜の消失や、内容物の崩壊、流出がしばしば認められた。一方の石灰化前線においては、肥大した祖面小胞体を多く有した線維芽細胞が散在し、胞体内には横紋構造を有したCollagen fiberを多く有したものや、細胞外にCollagenの前駆物質やトロポコラーゲン等を放出している像が認められた。これらの細胞の周囲にはCollagen fiberの集積や小胞、松状結晶などが見られた。今後は、ラットでのSynaptic cleftにおけるCalciumのtrans-mitter releaseの実験をさらに重ねて行くつもりである。昨年度まで、犬の歯牙を用いた標本での酵素染色的手法がなかなか難しく、思うような結果が得られなかった。そこで本年度は、ボランティアにより七人の歯6本を研究に使用出来たので、この資料にEnzmes Stainを行った。研究法はを用いて3日、5日、7日、10日、14日、21日間経過の後に抜歯を行い、通法による分割、固定を行った。固定後、歯髄を取り出し、再度電顕用固定を行い、Epon812に包埋して資料作製を行い、電顕観察を行った。5日、7日の経過例において、特に神経の発芽様所見や神経終末像が多く認められ、歯髄の線維芽細胞様細胞の胞体や突起などに神経終末が接触・陥入した所見を認めた。特に、これらの中には、線維芽細胞様細胞に陥入接触して、細胞内と貫通すると思われるような所見が多数認められたが、これはCa^<2+>の流入が在り得るような像であり、極めて数少ない所見が得られたものと考えるこのような所見の時期にCa^<2+>と結合するトレーサーを用いて再度実験する必要がある。但し、この場合、Ratのような小動物でperfusion固定可能であることが必要であり、現在も尚Ca^<2+>高濃度液を注射して、神経終末の膜孔からCa^<2+>の細胞内への移動を電顕切片より観察、検索中である。
三次元割れ目解析-フラクチャーネットワークの時系列解析-

平成13年度の研究成果概略筑波花崗岩・常陸北条において,三次元写真測量・フラクトグラフィ(破断面解析)・顕微鏡観察を用いて,露頭規模の割れ目解析を行った.そして割れ目系の時系列をある程度解明することができた(NS系節理の形成→EW系節理の形成→NS系・EW系節理の剪断とNE系節理の形成>.この成果は深田地質研究所年報2002に報告した.同様の解析を筑波花崗岩・きのこ山において行うが,元来均質な花崗岩中の複雑な割れ目系を詳細に解析することは困難であると判明する.平成14年度は那珂湊層群の砂岩中の割れ目解析を行った.砂岩は花崗岩と同じく珪長質岩石であるが,初生構造として層理面構造を持つ.那珂湊海岸の3つの砂岩露頭を対象に,以下の解析を行った.(1)三次元写真測量用に立体写真の撮影と標定点測量を行う.(2)解析図化機MPS-2と処理ソフトを用いて砂岩露頭の数値地形モデルを作成し,割れ目の境界をトレースする.(3)露頭において割れ目の詳細な観察を行い(フラクトグラフィ),節理と小断層を厳密に区別した.そして以下の結果が得られた.(1)研究を行った周辺では,4つの小断層群を確認できる.(2)多くの節理は小断層をまたいで連続しない.(3)節理系は小断層を境界としてその発達傾向が異なる.(4)節理が断層でずらされた証拠はない.以上の結果から,小断層系が先に形成され,これが境界条件となって主な節理系が形成されるという時系列関係を明らかにすることができた.上記成果を2002年応用地質学会学術大会で発表した.1.筑波花崗岩において露頭規模の割れ目解析を行った.花崗岩を用いたのは,粒子が均一で比較的homogeneousな岩石だからである.まずはじめに常陸北条の古い石切場で解析を行った.(1)全体的な割れ目系の把握(平面面積10000m^2程度の広さ)と詳細な解析を行う場所の決定(写真に写った面積25m^2程度)(2)立体写真の撮影と測量(3)解析図化機MPS-2を用いて割れ目系を3次元的に把握する(4)露頭において割れ目の詳細な観察を行う(形態,空間的配列,ズレのセンス,伝播の方向など)(5)割れ目のコアサンプリング,薄片を鏡下で観察(6)割れ目の時系列を総合的に判断<NS系節理の形成→EW系節理の形成→NS系・EW系節理の剪断とNE系節理の形成>上記結果を2001年地質学会学術大会で発表した.2.きのこ山の林道沿いの花崗岩で同様の解析を行う(1)(5)まで上記と同じように解析を行う.(4)の解析で一つの割れ目面上に複数の剪断が確認できた,(5)の解析でも形成時期の異なる充填物が重複してみられた.従って割れ目は重複変形・破壊を被っており,時系列解析が困難であることが判明する.3.花崗岩中には予想した以上の複雑な割れ目系が存在した.そこで花崗岩と同じ珪長質岩石である砂岩を対象に解析を行った.花崗岩と異なるのは「層理面」という初生構造をもつことである.(1)(4)那珂湊砂岩を対象にして上記と同様の解析を行った.一見すると複雑な割れ目系であるが,(3)と(4)の解析から断層と節理を分離することができた.これに層理面を加えて,(6)<断層の形成および層理面の剪断→層理面・断層面が境界条件になり,2方向の節理が形成>という時系列が明らかになった.14年度は砂岩の割れ目解析を続け,筑波花崗岩にフィードバックさせる予定である.平成13年度の研究成果概略筑波花崗岩・常陸北条において,三次元写真測量・フラクトグラフィ(破断面解析)・顕微鏡観察を用いて,露頭規模の割れ目解析を行った.そして割れ目系の時系列をある程度解明することができた(NS系節理の形成→EW系節理の形成→NS系・EW系節理の剪断とNE系節理の形成>.この成果は深田地質研究所年報2002に報告した.同様の解析を筑波花崗岩・きのこ山において行うが,元来均質な花崗岩中の複雑な割れ目系を詳細に解析することは困難であると判明する.平成14年度は那珂湊層群の砂岩中の割れ目解析を行った.砂岩は花崗岩と同じく珪長質岩石であるが,初生構造として層理面構造を持つ.那珂湊海岸の3つの砂岩露頭を対象に,以下の解析を行った.(1)三次元写真測量用に立体写真の撮影と標定点測量を行う.(2)解析図化機MPS-2と処理ソフトを用いて砂岩露頭の数値地形モデルを作成し,割れ目の境界をトレースする.(3)露頭において割れ目の詳細な観察を行い(フラクトグラフィ),節理と小断層を厳密に区別した.そして以下の結果が得られた.(1)研究を行った周辺では,4つの小断層群を確認できる.(2)多くの節理は小断層をまたいで連続しない.(3)節理系は小断層を境界としてその発達傾向が異なる.

(4)節理が断層でずらされた証拠はない.以上の結果から,小断層系が先に形成され,これが境界条件となって主な節理系が形成されるという時系列関係を明らかにすることができた.上記成果を2002年応用地質学会学術大会で発表した.
プロティンキナーゼC活性化調節機構の分子レベルでの解明に関する研究

1977年西塚らにより発見されたセリン-スレオニン燐酸化PKC(プロテインキナーゼC)は、細胞内情報伝達に重要な役割をはたす酵素として注目を集めている。又この酵素は、発癌プロモーターであるホルボールエステルの受容体であるために、細胞増殖に深くかかわっていることが考えられている。PKCの活性化には、カルシウムイオン、リン脂質(ホスファチジルセリン等)、ジアシルグリセロール(又はホルボールエステル)が必要である。生体内においてPKCはこれらの活性化剤により細胞質から膜分画へ移行し、活性化を受け三次元構造を変えると考えられている。この活性化剤との結合に膜系が必要であるという点が、PKCと活性化剤の解明を困難にしていると考えられる。これらの点を解明すべく、ホルボールエステルを用いて集中的な検討を行っている。平成7年度は、二つの点で大きな成果を得た。以下、概略を記す。1.コンピュータを用いた種々の発癌プロモータの重ね合わせ研究から、いくつかのファーマコホアモデルが提唱されている。この点を検証すべく、3-カレンを出発物質として数種のホルボール類縁体を化学合成した。PKCとの結合能を検討したところ、ファーマコホアモデルの妥当性が認められた。しかしながら、大変興味深いことに、これらの類縁体はPKCを活性化はしないことが分かった。2.ホルボールエステルのPKCへの結合部位を明確にすべく、フォトアフィニティーラベル化法を検討している。いまだ効率は高くないものの、PKCをラベル化する化合物の設計と合成に成功した。以下、概略を記す。
インフルエンザ感染に伴うＡＲＤＳ後の肺線維化の発症機序の解明

急性肺傷害(ALI)とその後の肺繊維化の病態における細胞間タイトジャンクション構成分子:Claudinの役割を検討した。感染性・非感染性ALIモデルにおいて特に急性期にClaudin-4の発現亢進、Claudin-18の発現低下を認め、Claudin-4が上皮細胞以外に炎症細胞に発現を認めた。また、In vitroでInfluenza virus感染肺胞上皮細胞からにMicroparticlesの誘導を認め、これらが肺マクロファージにおける炎症性サイトカイン/ケモカインの誘導に関与することがわかった。以上より主にALIの急性期にClaudin分子が深く関与すると考えられた。急性肺傷害(ALI/ARDS)は種々の原因で発症するが、肺の炎症と透過性亢進を特徴とし、急速発症、両側性陰影、低酸素血症を呈し、心原性肺水腫とは異なる病態と定義される。H5N1鳥インフルエンザやH7N9鳥インフルエンザウイルスなど高病原性インフルエンザウイルス感染症では、劇症型ARDS症例も報告されている。ALI/ARDSの研究が肺の炎症極期に対する過剰炎症炎症の制御に着目されているのものが多い。しかし、急性呼吸窮迫症候群(ARDS)の臨床経過で急性期を超えても、その後線維化が起こり呼吸機能低下による死亡率の上昇およびQOLの低下が知られている。新型インフルエンザウイルス(2009H1N1)感染症でも、ICU入室症例の大部分がARDSを呈し死亡率が高いことが知られているが、そのARDS発症症例で10-20%に肺の線維化を認め、長期予後において呼吸機能の低下によるQOL低下が報告されている。ARDSの病態において、急性期および線維化期においても肺上皮細胞のバリア機能の破綻と修復は非常に重要である。Claudin分子は細胞間接着因子として着目されているが、インフルエンザウイルス感染による急性肺傷害における重症化および肺の過剰炎症に引き続く線維化におけるClaudin分子の役割は不明である。今回、我々はインフルエンザウイルス感染によるARDSの病態および肺の修復期における肺上皮の役割をClaudin分子に着目し、これらのノックアウトマウスを使用し病態解明を行っている。急性肺傷害(ALI/ARDS)は種々の原因で発症するが、肺の炎症と透過性更新を特徴とし、急性発症で低酸素血症をきたし、画像所見で両側性の陰影を認め、心原性肺水腫とは異なる病態と定義される。近年、H5N1やH7N9鳥インフルエンザウイルス感染症において、急速進行性で致死率の高い劇症型のARDS症例も報告されている。ここ数十年集中治療領域における医療技術の進歩にかかわらず、ALI/ARDSを一旦発症すると死亡率が40%と高い疾患で、治療法も限られている。ALI/ARDSの研究が多くが急性期における肺の過剰炎症の制御に着目されており、我々の研究室においても劇症型ARDS動物実験モデルを作成し、病態解析を行ってきた。一方、ALI/ARDSの臨床経過において急性期を超えても、10-20%の症例で肺の過剰炎症に伴った繊維化が起こり呼吸機能の低下、予後不良さらにQOLの低下が知られている。ARDSの急性期の病態および繊維化期においても肺上皮細胞のバリア機能の破綻と修復は非常に重要であると考える。Claudin分子は細胞間の接着因子として着目されているが、ARDSの急性期および線維化期におけるClaudin分子の役割は不明である。我々は、劇症型ARDSモデル動物とインフルエンザウイルス感染により肺に過剰炎症の後繊維化を引き起こすモデル動物を対象に、Claudin分子の発現パターンの変化とその役割について検討を行っている。本研究ではInfluenza virusを感染にる肺傷害(ALI/ARDS)および肺の繊維化における細胞間接着因子Claudin分子の役割を検討している。昨年度までの研究で、Claudin分子が急性期における肺上皮ー血管内皮細胞の破綻および、炎症細胞集積に関与している可能性を見いた出した。近年、Apoptosisを起こした細胞や活性化された細胞からExtracellular microvesicle (Microparticles, Exosomes)が放出され、これらが炎症病態に深く関与していることが判っている。これらの細胞は、放出した細胞の表面に発現しているタンパク質を保持しており、Claudinを発現している可能性がある。本研究者はマウスから肺上皮細胞を取り出しIn vitroでInfluenza virus感染させ、Microparticlesを抽出し、同じくマウスから取り出した肺胞マクロファージを刺激したところ、IL-6ならびに好中球遊走因子KCの産生が亢進していた。加えて、肺胞上皮細胞から放出されたMicroparticlesは凝固・線溶系促進因子を保持しALI/ARDSの病態に関与していることから、それらを制御するrecombinant Thrombomodulinをマウスに投与し、Influenza virusを感染させ肺傷害および死亡率への影響を検討したが、肺傷害ならびに死亡率に差を認めることはなかった。以上より、ALI/ARDSの病態の急性期にClaudin分子が深く関与しているが、繊維化期での関与は少ないと考えられた。また、In vitroでInfluenza virus感染肺胞上皮細胞からにMicroparticlesの誘導を認め、これらが肺マクロファージにおける炎症性

サイトカイン/ケモカインの誘導に関与することがわかった。以上より主にALIの急性期にClaudin分子が深く関与すると考えられた。インフルエンザウイルス感染による肺の過剰炎症後の繊維化モデルマウスの作成に成功し、劇症型ARDSモデル動物とともにClaudinの発現パターンの解析を終了した。また、Cluadin-4, -18に関しては劇症型ARDSモデル動物に対してClaudin-4,-18遺伝子欠損マウスを用いた病態解析が進んでいる。臨床感染症昨年度行ってきた研究を継続するとともに、インフルエンザウイルス感染時におけるClaudin遺伝子欠損マウスを用いた病態への解明を行ってく方針である。本年の研究目標であった、非致死性のインフルエンザウイルス投与による肺線維化モデルマウスの作成に成功し、経時的なClaudinの発現の検討を行っている。また、Claudin-4, -18ノックアウトマウスを用いて、すでに我々が確立している劇症型急性肺傷害モデルマウスにおけるClaudin-4, -18の役割についても検討が行われている。インフルエンザウイルス感染後に経時的に肺をサンプリングし、Claudinの発現パターンをqPCR、免疫染色などの手法を用いて検討を行っているが、当初予想していた以上にこれらに時間を費やしたため。昨年度行ってきた研究を継続するとともに、ノックアウトマウスを用いたインフルエンザウイルスによる急性肺傷害およびその後に続く肺の線維化についての解析を行っていく予定である。引き続き、インフルエンザウイルス感染後の肺傷害・組織繊維化におけるClaudinの検討をこれらの遺伝子欠損マウスを用いた検討を行う。そこで、未使用金に関しては当該研究に充てる予定である。ノックアウトマウスの飼育の問題で、やや実験が遅れているため。次年度は、本年度遅れていた実験を継続するとともに、ノックアウトマウスを用いた実験環境を早急に整えながら次年度の実験を行う。
小学校英語教育を視野に入れた、子供の絵本の読み聞かせにおける理解過程の解明

第1に、英語の絵本の読解力に優れた子どもは、英単語の音のみならず、読み手の声の調子、絵、背景的知識、推測力など様々な学習方略を使い、内容を統合的に理解する過程が明らかになった。一方、読解力が弱い子どもは、絵にのみ集中する傾向があり、他の読解方略を有効に使うことができない、という特徴を明らかにした。第2に、母親と子どもの対話を分析し、発話力の高い子どもの母親は応答タイミングが早く、発話時間が短く、話しかける時はゆっくりと話すという特徴を見出した。こうした読み方が、子どもの理解力を促進することが解明された。小学生を対象とした適切な絵本の読み聞かせの指導法を考案することを最終的な目的として、そのための科学的な根拠となる、小学生の英語L2学習者と25歳児の日本語母語児の絵本の理解過程及びストラテジーを明らかにすることが本研究の目的である。そこで21年度は、【研究1】として、小学生を対象としてthink aloudの手法を用い、英語絵本の理解過程を調査した。19名の被験者一人ずつの対面調査を行ったところ、理解が得意な児童は英単語をよく聞き取り、絵に注目し、自分の経験、背景的知識など複数のストラテジーを統合的に使い内容を理解していることが明らかになった。一方、理解が不得手な児童は、絵のみに注目する傾向が強く、複数の手掛かりを同時に使って理解することが難しい。この研究成果から、絵本を読み聞かせする時には、絵と共に、単語や音調などの英語音にも同時に注目させ、背景的知識を使い内容を推測させる指導が大切であるとのヒントを得た。【研究2】としては、子どもの言語発達や産出力を促進させる、より適切な教師の児童へのコミュニケーションの取り方を考案することを視野に入れ、23歳児の遊びや絵本の読み聞かせ時における母親の発話タイミングと幼児の語彙サイズ・模倣力との係わりを調査した。語彙力のある子どもは2歳児から頻繁に母親の言葉を模倣し、また母親もほぼ同じ率で子どもの言葉を模倣している。さらに、発話量の多い子どもの母親の応答速度は少ない子どもの母親に比べ速く、かつ発話時間が短い。いわゆる聞き役に回り、リズミカルなコミュニケーションの取り方が、子どもの発話を促すことが理解できる。話しかける速度も遅い。以上から、読み聞かせを教室で行う際も、児童の話には素早く、短く返答し、児童の返答の一部を模倣する返答を取り入れながら会話を続けることが、児童の発話を促す指導法につながるというヒントを得た。第一に、母親が幼児に読み聞かせなどをしている時の発話タイミング、発話持続時間、発話速度をカウントしたところ、発話量の多い幼児の母親の応答タイミングは、発話量の少ない幼児の母親よりも速く、また発話時間が短いこと、さらに話しかけるときの発話速度が遅いことが判明した。こうした母親の発話態度が、絵本の理解過程にも影響し、幼児が絵本の内容を話すときの発話量にも影響を与えることが明らかになった。また、複数の調査者が保育園にて3歳児20名を対象に絵本の読み聞かせをしたところ、絵本の内容についての発話量が多い幼児を担当した調査者の発話は、子どもの発話への相槌、反復が多く、短く速い応答になっていることが分かる。これは、上記の母親の発話態度と共通している。教師側が内容に言及するのではなく、子どもの発話にすばやく反応することで、幼児の発話への意欲、関心を高めていると考えられる。第二に、34歳児における歌・チャンツ・絵本の朗読聴取による英語の語彙習得の度合いを調査した結果、平均月齢の低いグループにおいては、絵本の朗読聴取が語彙習得に効果があり、歌による語彙習得の割合は低めであることが判明した。一方、平均月齢の高いグループにおいては、特に朗読聴取が語彙習得に効果的というわけではない。平均月齢の低い子どもには、歌詞に加えて旋律の記憶という負荷がかかる歌よりも、絵本の朗読の方が、非母語の聞き取りや語彙の習得には効果的であること、また、こうしたアクティビティの違いが語彙習得の年齢にも係ることが明らかになった。こうした幼児の結果を踏まえ、平成23年度は小学生を被験者として、絵本読みの理解過程、語彙習得効果を計測する。小学生を対象とした適切な絵本の読み聞かせの指導法を考察することを最終的な目的として、そのための科学的な根拠となる、小学生の英語L2学習者と25歳児の日本語母語児の、絵本の理解過程及び絵本の読み聞かせの効果を明らかにすることが本研究の目的である。21年度は小学生を対象として英語絵本の理解過程を調査し、22年度はより適切な教師の児童へのコミュニケーションの取り方を考案することを視野に入れ、子どもの言語発達や産出力を促進させる、遊びや絵本の読み聞かせ時における母親の発話タイミングと幼児の語彙サイズ・発話量との係わりを調査した。

2年間の研究から、子どもは英語音のみならず、背景的な知識や絵、読み手の声や抑揚などもヒントにして絵本を理解すること、また、母親などの読み手が子どもに対して行うインタラクションの取り方が、子どもの発話量を促す要因となること、すなわち、読み手のインタラクションの取り方も理解度に影響を与えることを明らかにした。そこで23年度は、聴取刺激が読み聞かせ(朗読)とチャンツ、歌では何が異なるのかに焦点を当て、3歳7カ月6歳3カ月児210名を対象として調査を行った。(1)歌、(2)チャンツ、(3)朗読、(4)コントロールの4グループに分け、3週間それぞれの音源のCDを聞かせ、英語音の獲得効果を個別に単語反復調査を行い測定した。その結果、読み聞かせ(朗読)が、語彙年齢、生活年齢に係わらず共通して英語音獲得効果があること、また、CDに出現していない単語音にも、朗読グループでは獲得効果が見られることを明らかにした。しかし、5歳以降では聴取刺激間に有意な差は見られなかった。特に4歳までの未就学児では絵本の読み聞かせを行うことは英語音の獲得も効果的であり、読み手がインタラクションを工夫することで理解や発話量も促進されることが明らかになった意義は大きい。
脳神経科学に基づく人格概念の自然化とその刑法学的意義

本研究の目的は神経哲学において議論されてきた自然主義的な人格概念を幅広く調査し、その刑法学的意義を明らかにすることである。予備調査後、本格的に研究を実施したが、そこでは感情がもつ刑法的意味の解明に焦点を絞り、マーサ・ヌスバウムの『感情と法』で展開されている議論を、神経科学・哲学・刑法学の観点から検討することにした。その結果、明らかになったことは、以下通りである。裁判員裁判において法の専門知を持たない裁判員は、感情に導かれながら法的判断を下す傾向性を示すが、嫌悪にもとづく判断は法的判断として妥当性を欠く。というのも、嫌悪を伴う対人認知は、知覚対象を人格とはみなさない脱人格化作用をもつためである。本研究の目的は、神経哲学において議論されてきた自然主義的な人格概念を幅広く調査し、その刑法学上の意義を明らかにすることである。平成23年度に行った研究により、心の自然化の影響を特に受けやすい、刑法で問題となる人格の構成要素が感情であることが明らかとなった。そこで、今年度、規範的判断の基礎となる妥当な感情的判断とはいかなるものであるかについて、感情についての神経科学や心理学研究を視野に入れながら、調査した。手掛かりになるのが、ヌスバウムやカハンによって提唱され、展開された<刑法における感情的価値評価理論>である。その成果として、平成25年1月13日に開催された北日本哲学研究会において、「普通の人の良識ある判断:ヌスバウムにおける感情と刑法」という題で、研究発表を行った。また、昨年度に行った研究の成果として、論文「刑法における嫌悪感情の役割と社会脳ーリーガル・モラリズムと嫌悪感情」が芋阪直行編『社会脳シリーズ第2巻社会意識を育む脳』の一章として公刊された。また、平成23年度に、井頭昌彦『多元論的自然主義の可能性ー哲学と科学の連続性をどうとらえるか』(新曜社)の合評会を開催したが(平成24年1月7日、東北大学)、その時に行われた、コメンテータ(植原亮、佐藤駿、成瀬尚志)と著者、井頭昌彦による討論をまとめた書評特集を、東北大学倫理学研究会編『MORALIA』第19号、2012年に掲載した。平成23・24年度に行った研究により、感情と刑法の関係が現代の法システムに与える影響の点で重要であるとの理解に至った。そのため、平成25年度には、感情がもつ刑法的意味の解明を行う傍ら、特にこのテーマを主題的に扱っているマーサ・ヌスバウムの『感情と法』で展開されている議論を、神経科学・哲学・刑法学の観点から検討した。内海が行った調査により、感情というテーマが刑法では特に法益論と関連することが明らかになった。そこで、法益論という観点から感情がどのように扱われるかを分析するために、平成23年度、法益論に関する日本語文献を収集・分析し、平成25年夏にはドイツ・ケルン大学でこのテーマに関する文献を収集した。この研究成果を「感情の刑法的保護序論」にまとめた。また、ヌスバウムについての解釈は「マーサ・ヌスバウム『感情と法ー現代アメリカ社会の政治的リベラリズム』(2010年)を読む」で展開した。原は、ヌスバウムが『感情と法』の前半で扱っている嫌悪が刑法において果たす役割を検討した。ヌスバウムは英米法における嫌悪の役割を検討しているのだが、ドイツの法制度の影響を強く受ける日本の刑法に対して、ヌスバウムの議論をただちに適用できるわけではない。そこで、平成25年度、裁判員制度における裁判員の感情の役割を、ヌスバウムが展開した、感情に依拠する法的判断論に基づいて明らかにする研究を行った。この研究を「刑法と感情感情による法的判断の正当化ー」にまとめた。本研究の目的は、神経哲学において議論されてきた自然主義的な人格概念(特に、自己や自由意志概念)を幅広く調査し、その刑法学的意義を明らかにすることである。平成23年度最初に行ったのは、刑法にとって関連性をもつ人格がもつ性質としてどのようなものがあるのかを改めて調査することだった。立命館大学法科大学院教授、松宮孝明氏の協力を得て検討した結果、刑法の法益論に関連する人格の側面として感情があることが明らかとなった。そこで、刑法における感情の役割の調査・検討を、研究課題の一つとして追加することにした。平成23年度後半、研究分担者の内海の助言を得ながら、研究代表者の原が、嫌悪感情に焦点を当てつつ、刑法における感情の意義の研究を実施した。

その研究結果を2012年2月に立命館大学で開催された刑法読書会2012年2月例会において発表した。研究会での討論をもとに原稿を改訂し、論文「刑法における嫌悪感情の役割と社会脳ーリーガル・モラリズムと嫌悪感情ー」を原が執筆した。この論文は、苧阪直行編『社会脳シリーズ第2巻社会意識を育む脳ー神経哲学と神経倫理学ー』に収録、公刊される予定である。自己に関しては、自然主義的自己論を展開した書物である、Metzinger, T. 2009. The Ego Tunnel: The Science of the Mind and the Myth of the Self. New York. Basic Booksの翻訳を年度後半に開始した。本研究の目的は、神経哲学において議論されてきた自然主義的な人格概念を幅広く調査し、その刑法学的意義を明らかにすることである。現在、刑法において問題となる人格概念のなかで心の自然化の影響を受けやすいものとして、感情に焦点をあてた研究をおこなっている。一昨年、昨年度までで、すでに論文発表1件と研究発表2件をおこなっている。本研究の目的は、神経哲学において議論されてきた自然主義的な人格概念を幅広く調査、検討し、その刑法学的意義を明らかにすることである。平成23年度においては、研究課題の一つに追加した、刑法における感情の役割を調査し、その結果を論文にまとめることができた。また、自然主義的な自己概念については、これを論じた書物を翻訳途中である。以上のペースにより研究を進めていけば、研究期間中に研究目標を達成することは十分に可能であると考えられる。平成25年5月11日に感情心理学会で「刑法と感情ー感情に基づく法的判断の健全性ー」という題で招待講演をおこなう。また今年度、刑法読書会や科学哲学系学会において研究発表を実施する計画がある。そこで、主に、これらの研究発表や論文執筆に必要となる資料を購入するために予算執行をおこなう計画である。平成23年度、特に後半は、刑法における感情の問題に焦点を絞り、論文作成に専念したこともあり、自然主義的な自己、自由意志概念の調査・検討の作業とそれを実施するための研究費を次年度以降に持ち越すことになった。平成24年には、自己や自由意志概念の調査・検討に研究費を使用する。例えば、2012年5月に大阪大学で実施される日本刑法学会第90回大会では、ヴォルフガング・フリッシュ氏(フライブルク大学)による招待講演「責任刑法の将来:責任刑法と神経科学」が予定されているが、これに参加し、神経科学の刑法に与える影響の国際的な研究動向を調査したい。
地上望遠鏡からの中間赤外線スペクトル観測のための基礎開発

本研究では地上望遠鏡からの中間赤外線領域での観測の為の基礎的な実験と開発を行うことを目的とし、(1)高速での検出素子駆動システムの開発と、(2)長スリット分光器の開発、の2点について研究をおこなった。(1)高速での検出器駆動システムについては、128x128の画素を持つ素子を200Hzで駆動し、画像データをフレームメモリに積算することのできるシステムの開発を行った。現在までに、デジタル部分のHDL(ハードウェア記述言)によるシステムの記述とシミュレーションを終えており、アナログ回路については主な部品を入手した段階である。あと数ヶ月でシステムが完成する予定である。(2)分光器については、十分な性能の得られる光学的な解を見つけることができたので、それに基づいて光学素子の制作を依頼し、既に入手している。機械部分については設計を終えて、部品の加工を依頼している。2月中にはこの加工を終える予定であり、今年度内には組み立てを行う。その後、来年度からは調整と試験を開始し、来シーズン(秋以降)から試験観測を行う予定である。
mTORC1の細胞内分布パターンが早期肺腺癌の再発と予後に与える影響の検討

初期の肺腺癌患者では手術後に再発しにくい予後の良い群と、積極的に追加治療を行うべき予後の悪い群が混在しているが、追加治療の判断基準は明確でない。申請者のグループは、肺腺癌細胞株においてTGF-βによって誘導されるTUFT1が、mTORC1の細胞内分布を通じてシグナル調節をしており、さらにTUFT1の発現が肺腺癌のStageI/II特異的に予後に影響を与えることを見いだした。以上を踏まえ、mTORC1複合体の細胞内分布パターンと初期肺腺癌の予後の関係を早期肺腺癌患者検体を使用し病理学的検討を行う。また、細胞内輸送がどのようにmTORC1の細胞内分布を制御するかについての分子生物学的解析も行う。
特異的に安定化された成長種によるリビング精密重合とモノマーの分子設計

アニオン重合を利用して重合体の構造を精密に制御し、新規の高分子材料を創成することを目的に、本研究ではモノマーとして特異なアニオン重合反応性を有するN-置換マレイミドを用い、その重合反応性につき基礎的側面からの研究を行った。環状イミド構造を有するN-置換マレイミドは非環状構造のモノマーにない特異な重合反応性を有することが明らかとなった。N-置換マレイミドはアルカリ金属アルコラート、アート錯体の様な比較的弱い開始剤にてもアニオン重合し、N-フェニルマレイミドにおいては重合はリビング的に進行した。このN-フェニルマレイミドのフェニル基のp-位に種々の電子吸引性および電子供与性置換基を導入したモノマーを合成し、そのアニオン重合反応性を調べたところ、環状イミド構造を有するこれらのモノマーは通常のアニオン重合性のモノマーとは異なり、電子吸引基、電子供与基いずれの置換基を導入してもそのアニオン重合反応性は低下するという、ユニークな結果が得られた。このユニークな重合反応性の発現につき、分子軌道計算によって検討したところ、アニオン重合反応は重合成長種のHOMOとモノマーのLUMOの広がりによってその反応性が決定されるということが実験的例証のもとに明らかになった。また、N-置換基として、色々な機能を有する基を持ったN-置換マレイミドを合成し、その反応性および物性につき検討した。N-(4-ビニルフェニル)マレイミドでは重合官能基選択重合が可能となり、さらにリビング重合も適当な開始剤を用いればできることを見い出した。このことより、重合を官能基別に精密に制御し、かつ分子量も整ったポリマーを合成できるようになった。また、フッ素を含むモノマーや重合機構のことなる含フッ素エポキシドとの共重合により、これまでにない物性の高分子を合成した。特異的に安定化されたエノール型アニオンを生成するN-置換フェニルマレイミドにおいて、本研究ではN-(4-置換フェニルマレイミド)をモノマーとして研究を遂行した。当該年度においては、N-フェニルマレイミド(N-PMI)において、1.アルコキシドアニオンによるN-PMIのアニオン重合を行ない、その成長種のUV-可視吸収スペクトルを測定、安定成長種は508nmに固有の特性吸収を有することを見い出し、この特性吸収を用いて、N-PMIのアニオン重合反応について詳しく検討した結果、アルカリ金属アルコキシドを開始剤とするN-PMIのアニオン重合はリビング的に進行することを明らかにできた。2.tert-BuOLiを開始剤として用いN-フェニルマレイミドのアニオン重合を行ない、反応系の^7LiNMRを測定した。その結果対カオチンであるリチウムイオンの存在状態に関して重要な知見を得た。3.メタノール、水、酢酸など種々のpKaが異なる酸を濃度を変化させて重合反応系に加え、重合成長種の濃度変化を分光学的方法により測定し、重合成長種の安定性について評価した。実験結果との比較検討を行った。これまでにリビング重合成長種の構造の解明においては、UV-可視、およびNMRスペクトルの解析によってほぼ、そのエノールアニオンの構造を明らかにすることができた。現在その成長種の異常な安定性とアニオン重合におけるかなりの反応性の関連につき検討を行なっている。当該年度においては、N-フェニルマレイミド(N-PMI)において、1.アルコキシドアニオンによるN-PMIのアニオン重合を行ない、その成長種のUV-

可視吸収スペクトルを測定し、安定成長種は508nmに固有の特性吸収を有することを見い出し、この特性吸収を用いて、N-PMIのアニオン重合反応について詳しく検討した結果、アルカル金属アルコキシドを開始剤とするN-PMIのアニオン重合はリビング的に進行することを明らかにできた。2.tert-BuOLiを開始剤として用いN-フェニルマレイミドのアニオン重合を行ない、反応系の^7LiNMRを測定した。その結果対カチオンであるリチウムイオンの存在状態に関して重要な知見を得た。3.メタノール、水、酢酸など種々のpKaが異なる酸を濃度を変化させて重合反応系に加え、重合成長種の濃度変化を分光学的方法により測定し、重合成長種の安定性について評価した。あわせて、MOPAC等の分子軌道計算ソフトによる量子化学的計算を行い、実験結果との比較検討を行った。これまでにリビング重合成長種の構造の解明においては、UV-可視、およびNMRスペクトルの解析によってほぼ、そのエノールアニオンの構造を明らかにすることができた。現在その成長種の異常な安定性とアニオン重合におけるかなりの反応性の関連につき検討を行なっている。