hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
In vivo生体微細構造・機能評価のための高周波超音波高速電子走査型探触子の開発

本研究では、高周波高速電子走査型探触子(10,13および15MHz)を中心とする超音波システムの開発に成功した。本システムは、距離方向0.20mm未満、方位方向0.25mm未満という、従来の装置を超える優れた空間分解能を達成するとともに、最大656フレーム毎秒の良好な時間分解能をあわせ持つ。本システムの有用性を以下の3つの分野で検討した。1.冠動脈の観察と計測:市販型7.5MHz探触子と本研究で試作した10MHz探触子を用いて、ヒト冠動脈標本を観察し、組織学的所見と比較した。10MHz探触子は従来の7.5MHz探触子に比し、動脈硬化巣を含めた血管構造をより忠実に描出し、血管内腔面積および内膜中膜面積の計測精度を改善した。2.ApoEノックアウトマウスの心血管病変の評価:ヒトに類似した動脈硬化を自然発症するApoEノックアウトマウスの心大血管をin vivoで観察した。13MHz探触子を用いた経胸壁的心エコー法により、マウス大動脈の粥状硬化病変や壁伸展性の低下の検出とともに、二次的に生じた左室の形態変化を検出することができた。3.筋性中動脈の計測精度の検討:7.5MHz、10MHzおよび15MHz探触子を用いてヒト上腕動脈および橈骨動脈の血管内径と内膜中膜厚計測を行い、その再現性を比較した。これら全ての計測において、15MHz探触子の再現性が最も良好であった。上腕動脈の血管拡張反応についての検討においても、15-MHz探触子の再現性が最も高かった。我々の新しい高周波超音波診断システムは、ヒトおよび実験小動物の心血管系病変のより精密評価を可能とし、今後の臨床的・研究的応用が期待される。1. 10MHz探触子の試作と予備的検討:10MHzリニア型探触子を作製し、以下の検討を行った。(1)工学的特性の検討:ハイドロホンを用いた発信超音波の周波数スペクトラム測定で、周波数帯域が5.8MHzから12.5MHzにおよぶ広帯域であること、また、ファントムを用いた空間分解能測定で、従来の7.5MHz探触子に比し優れた距離方向および方位方向分解能を有することがわかった。(2)生体での上肢小動脈計測の精度に関する検討:健常者14例の上腕動脈と撓骨動脈を観察し、その内径および壁厚を計測し測定値の再現性を検討したところ、従来の7.5MHz探触子に比し10MHz探触子では再現性が高く、小動脈計測精度に優れていた。(3)冠動脈摘出標本における計測精度の検討:剖検例から摘出した固定後の冠動脈を血管外から観察し、計40箇所につき内腔面積と内膜中膜複合体面積を計測し、同一断面の病理組織標本からの計測結果と比較した。従来の7.5MHz探触子に比し10MHz探触子では、内腔および中膜外膜境界が全周にわたって明瞭に描出され、動脈硬化病変の形状もより忠実に描出された。内腔面積と内膜中膜複合体面積の計測における、組織標本からの結果との相関係数は、7.5MHz探触子でr=0.60,r=0.55であったのに対し、10MHz探触子ではそれぞれr=0.86,r=0.83と改善し、より高い計測精度を有することが証明された。2. 12MHz探触子の試作と性能評価:l2MHz高速電子走査型探触子の製作にあたっては、従来より狭い幅の振動子が必要であり、その切削加工に困難を伴った。

現在、完成した探触子を用いてファントムを観察し、超音波装置の画像作成回路の調整を行うとともに、探触子の工学的特性を評価中である。今後は、小血管摘出標本、ヒト末梢動脈および小動物の心臓に試用し、実用に向けての性能評価を行う。1.12MHz探触子の試作と性能の検討:12MHzリニア型探触子を作製し、これを用いて以下の検討を行った。(1)工学的特性の検討:平成10年度に作製した中心周波数10MHzの高周波探触子との比較検討を行った。ハイドロホンを用いた発信超音波の周波数スペクトラム測定で、10MHz探触子に比し、中心周波数が高く周波数帯域が広帯域であることがわかった。また、パルス巾は10MHz探触子に比し約16%短縮しており、より高い距離方向分解能が期待されることがわかった。(2)マウスの心血管病変観察への応用:現在、動脈硬化の機序や治療法の検討に用いられている高脂血症・動脈硬化症自然発症マウスである、Apo Eノックアウトマウス(ApoE-KO)を対象に、in vivoでの心血管病変評価を試みた。断層法による大動脈弁硬化度の視覚的半定量評価では、健常マウスに比しApoE-KOで硬化度が強かった。また、健常マウスとApoE-KOで心血管内径と左室内径短縮率、左室壁厚を計測したところ、心拍による大動脈径変化率がApoE-KOで有意に低下していた。以上より、12MHzリニア型探触子を用いることにより、マウスの動脈硬化病変や大動脈の硬化度をin vivoで経時的に評価可能であり、今後、動脈硬化の機序解明や薬物治療の研究などに応用可能であると考えられた。2.15MHz探触子の試作:15MHz高速電子走査型探触子の製作にあたっては、従来より狭い幅の振動子が必要であり、その切削加工に困難を伴った。現在、完成した探触子を用いて超音波装置の画像作成回路の調整を行うとともに、探触子の工学的特性を評価中である。今後は、小血管摘出標本、ヒト末梢動脈および小動物の心血管系に試用し、実用に向けての性能評価を行う。1.15MHz高速電子走査型探触子の試作とその工学的特性に関する検討:今回試作した15MHz探触子の周波数帯域は9-17MHzであり、13MHzから15MHzでほぼフラットな最大強度を有する周波数特性が得られた。送信パルス幅は、従来の7.5MHz探触子に比し顕著な短縮が認められた。新たな高周波超音波診断システムの特長として、まず、高周波化による距離分解能の向上があげられる。つぎに、本体装置にデジタルビームフォーマと重み付け送受信機能を採用することにより、良好な方位分解能を得るためのビーム幅の狭い超音波音場と、優れたコントラスト分解能を得るための音響ノイズの低減が可能となった。さらに、並列受信ビームの同時処理により、毎秒656フレームにおよぶ撮像が可能であり、時間分解能に優れることも特長のひとつである。2.15MHz探触子によるヒト末梢筋性中動脈の計測精度の検討:従来の7.5MHz探触子と、本研究で開発した10MHzおよび15MHzリニア電子走査型探触子を用いてヒト上腕動脈および橈骨動脈を観察し、2検者間での計測値を比較することにより、血管内径と内膜中膜複合体厚の計測精度を比較検討した。7.5MHz探触子の空間分解能は内膜中膜複合体の観察には不十分であったが、15MHz探触子では橈骨動脈でも壁内三層構造が明瞭に描出可能であった。血管内径・内膜中膜複合体厚の計測に関する検者間での再現性は周波数が高くなるほど段階的に改善し、15MHz探触子では良好であった。
脳内における化学物質の空間分布評価システムの研究

本研究では、臓器・組織由来の乳酸分泌量を連続計測するシステムについて開発を進め、特に脳内のエネルギー代謝に伴う乳酸生成のリアルタイム計測に応用するとともに開発した技術の更なる応用展開についても検討した。研究機関全体を通じた成果として、乳酸分泌量のリアルタイム計測システムを新規に開発し、(1)ブロック脳標本から分泌する乳酸量の連続計測を行い、その変動がブドウ糖濃度と相関する様子について評価できることを実験的に示した(IEEJ Transactions on Sensors and Micromachines 2017)。(2)またこのシステムにより検出される乳酸量が標本への薬物刺激等に依存することを明らかにした。(3)加えて、本システムが臓器・組織レベルのモニタリングのみならず、個体レベルでのモニタリングに応用可能であることを示した。特に2018年度においては、本システムを用いて実際に生体試料(臓器から個体までを含む)のモニタリングを行う応用面での研究に著しく進展が見られた。具体的には、脳標本由来の乳酸を連続的にモニタリングし、その標本に化学的刺激を加えることで乳酸量が変動する様子を明らかにした。また、研究実施計画に示した通り検出用のバイオセンサにバリエーションを持たせ、多様な物質への応用展開も行った。特に、汗中の乳酸においては運動や医療現場でのモニタリングに利用できる可能性を実験的に示し、その成果は本年度より実施予定の研究課題(基盤C:19K04432)の基盤となっている。またオキシトシンなどのペプチドホルモンの計測が可能な電気化学式免疫センサも開発し(Proc. BMEiCON2018, Doi:10.1109/BMEiCON.2018.8609952)、乳酸以外の生体成分についても適用可能とした。平成28年度は脳内成分の空間的・時間的な変化をモニタリングする新しいマイクロフロー計測技術に必要なセンサデバイスの特性向上と、生体試料サンプルの評価を行った。(1)センサデバイスの開発では、オスミウム錯体をメディエータとして用い、西洋わさび由来ペルオキシダーゼによって酸化酵素の反応生成物である過酸化水素の分解を電気化学的に計測する、酵素センサを開発した。本センサの特長は一つのカウンター電極並びに参照電極と、二つの同一形状を有する作用電極を1チップ上に集積化し、片方の作用電極にのみ酸化酵素を固定化した。両作用電極の出力差を計測する事で、酵素反応以外の夾雑物による影響(分泌成分に由来するノイズ)を打ち消すことが可能である。(2)樹脂製のスタンプ表面に酵素溶液を浸潤させ、電極上に転写する酵素スタンプ式固定化法を開発し、乳酸センサに応用した。スタンプ材料の最適化を行ったところ、メラミン樹脂製のスタンプが酵素スタンプに適していることが確認され、本手法を用いて作製したセンサは応答速度が従来法の約60秒から8秒へと向上し、リアルタイムでの脳内乳酸計測に適していることが示された。(3)流路系の改善では、従来PDMS製のフローチャネルをスクリーン印刷にて形成した電極上に直接貼り付けていたが、電極とPDMSの間に中間層としてPVC製のレイヤーを形成することで、電極近傍におけるキャリアフローの滞留やリークが解消され、上記応答速度の向上に資することが確認された。平成28年度の研究計画はほぼ計画通りに実施できており、研究自体の進捗、成果発表ともに順調である。順調に進捗しているとして判断した理由として、当初計画していた(1)スタンプを用いた酵素固定化法が生体計測に利用できることを確認し、学会発表・論文等でその成果の報告に至ったこと。(2)流路形成法の改善により、システムの応答性が向上し、時間分解能の向上に寄与していること。(3)上記で改良を進めたシステムを生体試料のモニタリングに応用できることが確認されたことの三点があげられる。平成29年度においては、システムの最適化を中心に研究を進めた。脳標本を使用する実験では人工脳脊髄液(aCSF)を使用するが,これには高濃度(10mM)のグルコースが含まれている。本研究で開発したグルコース電極の定量範囲は10<[Glucose(uM)]<2000であり,ダイナミックレンジを超えている。これは、グルコース酸化酵素の触媒活性が律速となるためである。そこで、aCSF中に含まれる高濃度のグルコースを計測する為にはサンプルそのものの濃度を希釈する必要がある。そこで、乳酸のリアルタイム計測における感度を犠牲にすることなく、グルコースを計測する際のみPBSを常時供給することでサンプルを希釈しながら計測するための微小流路を考案した。具体的には,サンプルとPBSが1:2の割合でセル内に導入されるデバイスを構築し,グルコースを計測する際にサンプルの濃度を約1/3に希釈することを可能とした。これにより脳標本由来の分泌物の動態がグルコースの濃度にどのように依存するかを調査することが可能となった。また、開発しているシステムの更なる応用展開についても詳細な検討を開始した。当初より、本システムが生体由来の分泌物をリアルタイム計測する目的に有用であることから、注目する対象のスケールを個体レベルとした場合の応用についても言及してきた。システムの改良に伴って、これらの応用についても現実的なものとなってきたので、皮膚表面からの乳酸計測に本システムを応用し、その有効性を確認した。研究実施状況は良好に進捗している。本年度の成果として目的とする技術開発の中でも以下の点で進捗が得られている。

(1)単に分泌物である乳酸をリアルタイム計測するだけでなく、標本に供給する人工脳脊髄液の成分も同時にモニタリングできることとなり、化学的な入力(ブドウ糖の増減)に対する応答を適切に調べる事が可能となった。(2)システムの完成度が向上することにより、脳標本の計測に限らず、個体レベルで分泌物をモニタリングする目的にも利用できる可能性を明らかにした。これらの達成状況は、当初目的の位置情報を含む乳酸モニタリング技術の実現及び、その応用展開に向けて、重要なアンカーポイントとなるものである。また、研究の進捗及びその成果の展開について情報発信することにも注力した。これらを踏まえて「順調に進捗している」、とした。本研究では、臓器・組織由来の乳酸分泌量を連続計測するシステムについて開発を進め、特に脳内のエネルギー代謝に伴う乳酸生成のリアルタイム計測に応用するとともに開発した技術の更なる応用展開についても検討した。研究機関全体を通じた成果として、乳酸分泌量のリアルタイム計測システムを新規に開発し、(1)ブロック脳標本から分泌する乳酸量の連続計測を行い、その変動がブドウ糖濃度と相関する様子について評価できることを実験的に示した(IEEJ Transactions on Sensors and Micromachines 2017)。(2)またこのシステムにより検出される乳酸量が標本への薬物刺激等に依存することを明らかにした。(3)加えて、本システムが臓器・組織レベルのモニタリングのみならず、個体レベルでのモニタリングに応用可能であることを示した。特に2018年度においては、本システムを用いて実際に生体試料(臓器から個体までを含む)のモニタリングを行う応用面での研究に著しく進展が見られた。具体的には、脳標本由来の乳酸を連続的にモニタリングし、その標本に化学的刺激を加えることで乳酸量が変動する様子を明らかにした。また、研究実施計画に示した通り検出用のバイオセンサにバリエーションを持たせ、多様な物質への応用展開も行った。特に、汗中の乳酸においては運動や医療現場でのモニタリングに利用できる可能性を実験的に示し、その成果は本年度より実施予定の研究課題(基盤C:19K04432)の基盤となっている。またオキシトシンなどのペプチドホルモンの計測が可能な電気化学式免疫センサも開発し(Proc. BMEiCON2018, Doi:10.1109/BMEiCON.2018.8609952)、乳酸以外の生体成分についても適用可能とした。平成29年以降も引き続き研究実施計画に従って開発を進める予定である。センサの改良では、乳酸、グルコースに加えて脳内の神経伝達物質として知られ、睡眠・覚醒や摂食行動などの生理機能と関連が知られているヒスタミンの計測に応用する。ジアミンオキシダーゼはヒスタミンを酸化触媒することが知られており、本センサのプラットフォームにジアミンオキシダーゼを固定化することで実現できると考えられる。また開発したシステムを用いて、脳標本の代謝を調べる実験を行う。この時、本システムの特性を活かして、標本に投入する薬剤の濃度を変化させ、それに対する応答をリアルタイム計測する。また本研究成果は医療や日常の健康づくりなど、さまざまな分野に発展させ、利用することが可能である。
準自動運転におけるドライバのリスク補償行動への理解と対策

Level 2, 3の自動運転車では運転作業にかかるドライバの負担軽減が期待されるが,(1)走行中に別の作業を行う,(2)注意散漫状態でも走行を継続してしまう,といったリスク補償行動により安全が阻害される懸念がある.本研究では上記(1),(2)のリスク補償行動下での安全性向上のために,準自動運転中に想定されるドライバのリスク補償行動の特性と走行中のドライバの挙動の関係性を明らかにし,リスク補償行動への対策を検討する.Level 2, 3の自動運転車では運転作業にかかるドライバの負担軽減が期待されるが,(1)走行中に別の作業を行う,(2)注意散漫状態でも走行を継続してしまう,といったリスク補償行動により安全が阻害される懸念がある.本研究では上記(1),(2)のリスク補償行動下での安全性向上のために,準自動運転中に想定されるドライバのリスク補償行動の特性と走行中のドライバの挙動の関係性を明らかにし,リスク補償行動への対策を検討する.
次世代線形加速器における高精度高安定ビーム光学制御の研究

高エネルギー物理実験や放射光実験においては、精密な実験データの取得の必要性が高まっており、特にリニアコライダ、SASEFEL、大強度陽子加速器など次世代の粒子線形加速器において、超高輝度、高安定の粒子ビームの加速が重要になっている。本研究においてはこのような要求に応えるために、これまで用いられてきた粒子の数や粒子の位置などの情報の他にも粒子ビーム品質を測定する手段を確立し、ビーム光学的に安定度を高める手法を探った。まず、これまでの4電極のビームモニタに加え、8電極のビームモニタを実用化し、ビーム位置や強度の情報の他に横方向のビーム形状の情報を取得できるようにした。この情報は他の情報と組み合わせることによって、横方向のビームエミッタンスやエネルギー幅の情報に換算することができ、非破壊のビーム品質や安定度のモニタとして利用されるようになった。KEKBの入射ビームに対しては、常時このような情報の監視を始めており、入射の安定度を格段に高めることが可能になった。特にエネルギー幅の監視情報はKEKB入射の安定化において不可欠になっている。またすでに他の加速器でも導入が検討されている。さらに、高速(50Hzパルス毎)の情報読み出し機構の開発にも成功し、速いフィードバックなどへの応用も期待されているので、マイクロ波の高速制御機構の構築を急いでいる。このように非破壊、かつ実時間で新しく入手可能になった情報を使用して、加速マイクロ波やタイミング制御機構の安定度とビームの品質安定度の相関関係を、特に線形光学で評価しにくいウェーク場の測定を通して理解を進めて来た。これによって、通常と異なる運転形態を必要とするチャネリング実験などについても敏速に対応できるようになった。複数のビーム制御情報の間の相関関係を蓄積表示するソフトウェア環境も構築し、エミッタンスやエネルギー幅などをさらに高めるための、ビーム品質最適化アルゴリズムの構築を進めているところである。線形加速器は高エネルギー素粒子物理実験や放射光実験において重要な役割を果たしているが、その性能をさらに高めることによって、実験成果を向上させることが可能である。特にその安定度を向上させるために、加速ビームの光学的特性を実時間で把握し、加速器モデルを精度よく構築することが重要になってきている。ビームエネルギー幅やエミッタンスを非破壊で高速に測定することができれば、フィードバック機構により、大幅にビームの安定度が向上することが期待される。電気的にビームの情報を取得する方法の一つとして、ストリップライン型のビーム位置モニタを利用する方法があるが、このようなビームモニタから通常はビームの強度、X, Y方向の位置の3つの情報を取得する。しかし、その他にX, Yのビームサイズ比に関する情報を取得することができる潜在可能性がある。もしもそれができれば、ビームラインの情報等と組み合わせることによって、ビームエネルギー幅やエミッタンスを導出することが可能になる。もちろん、その信号は弱く工夫が必要とはなる。今年度はまず、その信号を効率良く取り出すために、電極の数を通常の4つではなく8つのものを使用し、さらに高速に情報を収集して、統計処理を施す試験を行った。具体的にはKEKB入射器の、ディスパージョン関数が大きな場所に新型のビーム位置モニタを設置し、エネルギー幅が測定できるかどうか調べてみた。その結果、試行錯誤の末、十分有用であることがわかった。さらに同様な工夫により、加速器の直線部分のディスパージョン関数がない場所でエミッタンスの変動を測定できると期待される。また、今回開発された高速ビームモニタ読み出しの仕組みは通常のビームモニタにもそのまま利用でき、既存のビームフィードバックシステムにも適用が可能であると思われる。

平行して、海外の加速器研究所において同様な工夫をしているかどうか、また参考にできるかどうか国際会議に参加したり、研究所を訪問したりして調査した。その結果、ビームトランスポートラインでのビームの縦横比を測定しようとしている例があったが、我々の加速器にはそのままは適用できないことがわかった。また、エネルギー幅の測定を試みている研究所はなさそうであった。高エネルギー物理実験や放射光実験においては、精密な実験データの取得の必要性が高まっており、特にリニアコライダ、SASE FEL、大強度陽子加速器など次世代の粒子線形加速器において、超高輝度、高安定の粒子ビームの加速が重要になっている。本研究においてはこのような要求に応えるために、これまで用いられてきた粒子の数や粒子の位置などの情報の他にも粒子ビーム品質を測定する手段を確立し、ビーム光学的に安定度を高める手法を探った。まず、これまでの4電極のビームモニタに加え、8電極のビームモニタを実用化し、ビーム位置や強度の情報の他に横方向のビーム形状の情報を取得できるようにした。この情報は他の情報と組み合わせることによって、横方向のビームエミッタンスやエネルギー幅の情報に換算することができ、非破壊のビーム品質や安定度のモニタとして利用されるようになった。KEKBの入射ビームに対しては、常時このような情報の監視を始めており、入射の安定度を格段に高めることが可能になった。特にエネルギー幅の監視情報はKEKB入射の安定化において不可欠になっている。またすでに他の加速器でも導入が検討されている。さらに、高速(50Hzパルス毎)の情報読み出し機構の開発にも成功し、速いフィードバックなどへの応用も期待されているので、マイクロ波の高速制御機構の構築を急いでいる。このように非破壊、かつ実時間で新しく入手可能になった情報を使用して、加速マイクロ波やタイミング制御機構の安定度とビームの品質安定度の相関関係を、特に線形光学で評価しにくいウェーク場の測定を通して理解を進めて来た。そして、エネルギー幅などのビーム品質の最適化アルゴリズムの実装を行い、また複数のビーム制御情報間の相関関係を蓄積表示するソフトウェア環境も構築し、ビーム品質安定化とその評価が行えるようになった。これによって、通常と異なる運転形態を必要とするチャネリング実験などについても敏速に対応できるようになった。
１０代で出産した母親のライフプラン構築を支援する包括的プログラムの開発と評価

本研究は、10代の母親達の望まない再妊娠を予防し、母親達が長期的な視点でライフプランを構築するための包括的な支援プログラムを構築することを目的とした。結果から、若年母親は生活基盤が固まり今後の見通しが立つ過程で記載するライフプランに具体性がみられるようになり、ライフプランの記載は若年母親の生活基盤を見る一つの指標ともなっていた。生活基盤は夫や親との関係の変化に伴い急変することがあるため、継続的に把握していく必要がある。若年母親が希望のライフプランを選択し、実行するためには夫を含め家族の協力が不可欠であった。今後は、若年母親を取り囲む家族や地域社会への働きかけの方法について検討していきたい。本研究の目的は、10代の母親グループにおける実態調査を実施し、その結果を踏まえて望まない再妊娠を予防し、就労支援や学業継続支援、家族計画を含めた包括的な支援プログラムを開発することである。24年度は、研究者がフィールド調査を続けている10代の母親グループ2カ所において、保育所での生活と生活リズム、ライフプラン構築、家族計画の情報提供について、保健師、助産師、保育士、子どもが保育所に通所している若年母親の協力を得て実施した。実施後の評価について、昨年度から継続して実施している内容であるため、参加者のライフプランシートへの記入はスムーズで、保育園・幼稚園入所後のことも考えることができている。しかし、車や家を購入したいという目標はあっても、そのための費用をどう捻出するかというところまで考えが行き届きにくいため、先の見通しがついている参加者には、目標を達成するための方法を随時提示していくことが必要であると考えた。避妊については、○年後に欲しいと言う希望があっても、確実な避妊をしていた人は少なく「できたらできたでいい」「できたら産む」といったように積極的に避妊はしていない。このため、子どもが欲しい時期を踏まえて家族計画ができるように関わっていくことが必要だと考える。また生理周期、最終月経、出産予定日の計算方法については理解度が人によって大きく変わっていたため、個別対応も必要であると考えた。子どもを保育所に通園させている母親への聞き取りから、就労や学業については自身で情報を入手して希望の進路に進むことができていたが、今後の取り組みとして、就労や復学への支援についても検討していきたい。本研究では、若年母親グループにおいて家族計画を含めた,ライフプランを構築する取り組みを実施する.そのことにより,若年母親の望まない再妊娠を予防し,母親達が長期的な視点でライフプランを構築するための一助とする.20092013年8月時点における実施回数は8回.参加者は25名(延べ35名).ライフプラン初回参加時の母の平均年齢は20.5歳,第1子の年齢は04歳.1回あたりの参加者は27名.参加回数は1回のみの参加者が大半を占める.ライフプランの記載について、当初は10年間を想定していたが,記載が難しかったため5年間に変更した.ライフプランを記入する際に「何がどうなっているかもわからない」,「めっちゃ怖かった.現実を突きつけられるようで」と表現した人もいた.若年母親の中には生活基盤や将来設計を立てる事より現在の思いを優先するため,目標に向かってどのように行動すべきか考えることが難しいと考えられる母親もいた.複数回参加者の中で,生活基盤が固まり今後の見通しが立つ過程で,記載するライフプランに具体性がみられるようになった人もいる.ライフプランの記載は,生活基盤を見る一つの指標になると考えた.家族計画については,○年後に出産したいと言う希望があっても,「(子どもが)できたらできたでいい」,「計画妊娠したくない」といった希望もあり,積極的に避妊はしていない.このため,子どもが欲しい時期を踏まえて家族計画ができるよう,具体的な時期も含めて伝えていく事が必要である.月経周期,最終月経,出産予定日の計算方法については,参加者の知識に個人差が大きかった.PMS症状が重い,月経周期が不順な人もおり,グループ外での個別対応も並行して進めていく事も重要である.若年母親の生活基盤は、夫や親との関係の変化に伴い急変することがあるため,ライフプランを参考に,継続参加を促し経過を見ていく必要がある.本研究の目的は、10代の母親グループにおける実態調査を実施し、その結果を踏まえて、望まない再妊娠を予防し、母親達が長期的な視点でライフプランを構築するための、就労支援や学業継続支援、家族計画等を含めた、包括的な支援プログラムを開発することである。開発したプログラムは、10代の母親グループにおいて継続的に実施し、参加者の経年的な変化や聞き取り調査により内容を評価し、考察する。23年度は、研究者がフィールド調査を続けている10代の母親グループ参加者で、第1子が02歳前後の母親を対象に、8月に保育所での生活と生活リズムについて、9月にライフプラン構築、家族計画等の情報提供について、保健師、保育士、助産師、子どもが保育所に入所している若年母親等の協力を得て実施した。ライフプラン構築についてはグループワーク形式で、今後5年以内の家族の年齢と、想定されるライフイベントを書きこみ、今後のライフプランを検討した。24年1月に、9月に検討したライフプランを見直し、現状に合わせて変更点を記載した。実施後の評価として、参加者からは「先のことは考えられない」と言う意見もあったが、回を重ねることにより具体的なライフプランが構築できるようになっており、ライフプラン構築は参加者の変化や成長をみる一つの指標になると考える。

家族計画については参加者の知識に個別性が高いため、継続して実施し、より多くの参加者が聞く機会を設ける必要性を感じた。保育所入所、ライフプランなど一つのテーマに絞って話をすることで、参加者の交流を深める機会にもなっていた。人数が多くなった際は、グループにおいて個別の話を深めることが難しいため、必要な場合は個別対応も並行して進めていくことも今後検討していきたい。本研究は、若年母親グループにおいて家族計画を含めた、ライフプランを構築する取り組みを実施する。そのことにより望まない再妊娠を予防し、母親たちが長期的な視点でライフプランを構築するための一助とする。26年度も若年母親に対するライフプランを構築する取り組みを継続して行った。今年度は2グループにおいて1回ずつ行い、参加者は合わせて7名であった。これまでライフプランを5年間と設定していたが、5年の枠以上に記載していた対象者もいたことから、対象者の状況を踏まえて10年間のライフプランの作成についても検討したい。妊娠中の参加者もみられたため、家族計画については個別対応も併せて行っていくことも必要である。プログラム実施中に、夫婦間のコミュニケーションの乏しさを示唆する発言も見られた。このことから、出産後に夫婦がそれぞれ母親・父親としての役割を確立していく中で、夫婦間のコミュニケーションをどのようにとっていくべきか伝えていくことも必要であると考える。26年度は、その他に若年母親に対しこれまでライフプランを実施したスタッフ(保健師2名、助産師1名)に対するインタビュー調査を実施した。助産師、保健師がそれぞれの職種の特性を生かして若年母親にかかわっていること、若年母親を支える地域づくりを目標に支援を行っていることが示された。また、若年母親・父親に対する支援が、公的・民間機関を問わず多様に行われているニュージーランドを視察し、若年父親・母親に関連する職種および若年母親・父親自身からの聞き取り調査を行った。ニュージーランドでも日本と同様若年母親に対するグループ支援は行われているが、日本と異なる点として、若年母親をスタッフとして雇用し、新規参加者とスタッフの仲介役になっていることであった。これらの研究結果をもとに、若年母親の実態を踏まえた支援についてさらに検討したい。本研究では、若年母親グループにおいて家族計画を含めた,ライフプランを構築する取り組みを実施する.そのことにより,若年母親の望まない再妊娠を予防し,母親達が長期的な視点でライフプランを構築するための一助とする.20092015年度の実施回数は10回、参加者は延べ40名であった。2015・2016年度は、ライフプラン構築支援と合わせて、若年母親へのグループ支援を行っているスタッフ(保健師・助産師・心理職)7名に対してインタビュー調査を実施し、ライフプランに関する若年母親の実態を把握し、これまでの支援内容の振り返りを行った。インタビュー調査の結果から、若年母親の特徴として【素直である】、【固定観念がない】といった内容が挙げられた。また【母親役割・認識の個人差】や【夫婦間の話し合いが十分でない】等、若年母親が家族を形成していく上での困難さも示された。
ポピュラーカルチャーの美学構築に関する基盤研究

本研究は5名の研究代表者、分担者を中心とした研究会を複数回開催するとともに、大規模な公開研究集会を年に一回開催し、その成果を映像記録や報告書にまとめることによって、一般からもその成果に対する広い関心を集めることができた。最終年度には報告書として論文集を公刊した。また2014年の国際記号学会においてはラウンドテーブルを組織して、海外の研究者との議論を深めることができた。これらの研究活動によって新しい理論的な枠組の構築に結びつけることができた。本研究はポピュラー文化に関する美学的アプローチの最先端の成果を挙げることができた。本基盤研究は平成25年10月下旬に追加内定の通知を受け、研究代表者および研究分担者とのメールによる打ち合わせが始まり、12月1日(日)の午後から夜にかけて、京都精華大学において、研究代表者、分担者、協力者による第一回のミーティングが開催され、平成25年度の研究方針について議論した。その結果、平成26年2月1日(土)に、京都精華大学で第一回の研究会を開催すること、3月16日(日)に名古屋大学主催で国内外の研究協力者を招いて、一般聴衆にも開放される研究集会を開催することが合意された。この計画に基づき、2月1日には研究代表者・室井尚による研究発表『ポップカルチャーの美学、事始め』、および研究協力者・前川修神戸大学准教授による『ビジュアルカルチャー研究の諸問題--ホラー映画を題材として』の発表がなされ、研究分担者および大学院生等を含む約15名の参加者と共に議論を交わした。また、3月16日(日)には、名古屋市の「ウインク愛知」を会場に研究集会『コスプレの美学』を開催し、約100名の聴衆を集めた。研究協力者としてNPO法人・コス援護会の代表・園田明日香氏、パリ第八大学の大久保美紀氏、リヨン第三大学のジュリアン・ブバール氏の3氏を招いて、コスプレ文化に関する学術的な議論を行った。フロアには名古屋てポップカルチャーイベントの主催者やコスプレ研究者が集まり活発な研究集会となった。この成果は平成26年度に報告書としてまとめられる予定である。研究分担者および研究協力者は、それぞの研究テーマを明確にし平成26年度においては複数回の研究会と、研究集会を行うほか、国際学会での研究発表や、論文の作成などを行う予定である。本基盤研究の二年目は研究実施計画に書いた事業のすべてを行うことができた。具体的には、9月1日から5日かけて連続で京都精華大学の研究分担者・佐藤守弘および研究協力者・島本浣、吉村和真、安田昌弘、小松正史による連続講演「都市とポピュラー文化」を行い、9月にはブルガリア・ソフィアで開催された国際記号学会においてラウンドテーブル「ポップカルチャーの記号論」を組織。研究代表者・室井尚、分担者・吉岡洋、佐藤守弘、吉田寛、協力者・大久保美紀、丸山美佳による研究発表を行った。発表のいくつかは大会のプロシーディングスに掲載されることになっている。さらに11月には分担者・吉田寛によるゲーム研究展開に関する研究発表、2月には京都で佐藤守弘、秋庭史典による歴史G、理論Gに関する研究発表を行った。さらに初年度の研究集会「コスプレの美学」に続く公開の研究会「アニメの美学」を1月31日に横浜で開催し、100名以上の参加者を集めた。研究分担者、協力者のほか特別ゲストして日本最大のアニメフェア「アニメジャパン」事務局の近藤真司氏(ADK)、アニメ研究者のキム・ジュニアン氏(新潟大学)、研究分担者の吉村和真氏をキーノートスピーカーとして約6時間にわたる熱い議論を繰り広げた。会議の様子はUstreamで生中継され、1ヶ月の保存期間中に延べ約350名の視聴数を獲得した。さらに、1月には前年度の「コスプレの美学」の報告書を公刊し、広く社会に向けて研究成果を発表することができた。「アニメの美学」に関しても今年度前半に報告書を公刊する予定である。本基盤研究に関連する研究成果の発表も数多く行われており、2月に開催された文化庁メディア芸術祭や、日本記号学会、個別に参加した国際会議等でも本基盤研究に関連するさまざまな研究成果が公表された。本基盤研究の最終年度において、実施計画に基づいて以下のような実績を達成することができた。横浜にて、7月に研究分担者・吉岡洋、研究協力者・丸山美佳による研究発表、9月に、分担者・佐藤守弘、協力者・島本浣、小松正史らによる5日間の連続講演「都市とポピュラー文化」を開催。2月には京都にて研究代表者・室井尚による3年間を総括した研究発表を行った。大規模な研究集会として、現代社会で大きなムーブメントとなっているアイドル・カルチャーをテーマとして横浜国立大学にて「アイドルの美学」を開催し100名以上の参加者を集めた。分担者全員と数名の協力者の他、アイドル研究者の小林昌廣氏、秋田の地元アイドルpramoのプロデューサー・浅野克紀氏を招聘し、ポピュラーカルチャー美学の視点から現在のアイドル文化について議論を展開した。pramoによる特別ライブも同時開催し、秋田を始め各地から熱心なファン20数名も駆けつけ、通常のライブ同様の握手会や撮影会を観察し、アイドル文化を構成するファン・コミュニティの全体像を議論のテーマとした。研究集会の様子はUstreamで生中継し延べ1500人の視聴数を獲得した。また前年度の研究集会「アニメの美学」報告書と、3年間の研究活動の全体を総括する成果報告書(論文集)を制作、公刊した。

3年間を通して、コスプレ、アニメ、アイドル、ゲームを中心としたポップカルチャー全体にアプローチする理論的な枠組として、従来の芸術文化とは一線を画している作者-作品-受容者の役割が切り離されることなく相互に連続している一種の作品の流通環境としての「ポップカルチャー・ワールド」という仮説を立てることにより、これまで言及されなかったマスメディアではなくインターネットカルチャー以降のポップカルチャーの新しい側面を解明することができるという確信に至り、今後の研究につなげていくことになった。本研究は5名の研究代表者、分担者を中心とした研究会を複数回開催するとともに、大規模な公開研究集会を年に一回開催し、その成果を映像記録や報告書にまとめることによって、一般からもその成果に対する広い関心を集めることができた。最終年度には報告書として論文集を公刊した。また2014年の国際記号学会においてはラウンドテーブルを組織して、海外の研究者との議論を深めることができた。これらの研究活動によって新しい理論的な枠組の構築に結びつけることができた。本研究はポピュラー文化に関する美学的アプローチの最先端の成果を挙げることができた。一年目に行った研究集会「コスプレの美学」の報告書を1月に出版した。また、第二回の研究集会「アニメの美学」を1月31日に実施。研究分担者、研究協力者、外部のアニメ研究者ほか百名を越える多数の参加者を集め、研究発表と活発なディスカッションが行われた。またその様子は予告通りUstreamで生中継され、1ヶ月間の保存期間中に延べ約350名が視聴した。この「アニメの美学」の報告書は今年度5月6月頃に公刊予定である。二回の研究集会を通して、本基盤研究に向けられた社会からの熱い関心を再確認することができた。昨年度は横浜で二回、京都で一回の研究発表会が行われ、研究分担者の吉田寛によるゲーム研究の展開に関する発表、佐藤守弘による大正期から昭和初期における「大衆文化」に関する歴史的文献学的研究、秋庭史典氏によるアニメとマンガに関わるジャンル理論など、歴史Gおよび理論Gに関する各研究発表およびディスカッションが行われた。また横浜では研究分担者・佐藤守弘氏、協力者・島本浣、吉村和真、小松正史、安田昌弘による、マンガ、ポピュラー音楽などに関する連続講演およびディスカッションが行われた。さらに9月にブルガリア・ソフィアで開催された国際記号学会においては、ラウンドテーブル「ポップカルチャーの記号論」を組織し、研究代表者・室井尚、分担者・吉岡洋、吉田寛、佐藤守弘、協力者・大久保美紀、丸山美佳が研究発表を行った。ブルガリア、イタリア、チリなどから多数の聴講者を集め、研究発表は成功裡に終わった。一部の論文は大会のプロシーディングスに掲載される予定である。また、文化庁メディア芸術祭において研究代表者・室井尚、分担者・吉岡洋がそれぞれシンポジウムを組織したほか、研究分担者・佐藤守弘がメデイア芸樹祭のアート部門の審査員になるなど、本基盤研究関連のさまざまな活動を行った。27年度が最終年度であるため、記入しない。人文学昨年度の活動により一年目の遅れはほぼ取り戻すことができたので、最終年度である今年度は、計画書に書かれた予定通り、まず昨年に引き続き研究分担者、研究協力者による研究会を年三回開催し、各自の研究成果を発表し議論を積み重ねていく。
T細胞活性化に必須の副刺激シグナル伝達機構

[目的]一般にTh2細胞は、Th1細胞に比し、AICD (activation-induced cell death)感受性が低い。AICDは活性化T細胞に同時に誘導されるFas及びFasリガンド(FasL)の相互作用において、Fas分子からのシグナル伝達に基づく。Th1とTh2におけるAICDの感受性の差は、Fas又はFasLの発現の差に基づくと考えられるが、その差異、とりわけFas発現誘導の差異については未だ明らかではない。そこで今回、Th1とTh2細胞におけるFas分子の発現レベルを比較検討した。[方法]静止期T細胞を[IL-12+抗IL-4抗体]又は[IL-4+抗IFN-γ抗体]存在下にTCR(CD3/CD28)刺激によりそれぞれTh1又はTh2に誘導した。TCR刺激を解除し、IL-2存在下で一定期間培養した後、再び抗CD3抗体刺激することによりAICDを誘導した。[結果及び考察](1)マウス末梢T細胞をTCR刺激を含むTh1およびTh2誘導条件下で培養すると、両培養系ともにTCR刺激によって一旦はFas発現が誘導された。Th1のFas発現は持続した一方、Th2のFas発現は徐々に消失した。(2)抗CD3抗体での再刺激後も、Th1とTh2のFas発現レベルの差異は持続し、この時惹起されるAICDの強弱と相関した。(3)IL-4-/-マウスではTh2条件下で刺激された細胞上のFas発現は減弱せずむしろ増強し、逆にIFN-γ-/-マウスではTh1条件下で刺激された細胞のFas発現が抑制された。(4)STAT6-/-ではTh2条件下でもFas発現が抑制されなかった。以上、TCR刺激により誘導されるFas発現はIL-4/STAT6経路により負に、IFN-γにより正に制御される結果、IL-4存在下で分化するTh2細胞はFas発現が抑制される一方、Th1細胞はFas発現の抑制が起りにくいことが示された。T細胞は抗原提示細胞(APC)のMHC分子に結合した抗原(ペプチド)によって、そのT細胞レセプター(TCR)が刺激されて活性化に踏み出す。APC上の[ペプチド抗原+MHC]による刺激はT細胞活性化の一次シグナルで、T細胞が真に活性化するためには二次シグナル(副刺激)がAPCから供給されることが必要である。副刺激分子には代表的なCD28以外に、CD5、CD2、CD9、CD44などがnon-CD28副刺激分子として存在する。non-CD28副刺激はCD28副刺激と同程度の^3H-TdRの取り込みを誘導するが、前者はごく少量のIL-2産生しか誘導できず、T細胞は増殖することなく死に至る。そこでCD28とnon-CD28副刺激分子のIL-2産生への情報伝達の差異を検討した。【方法】IL-2プロモーターの活性はIL-2遺伝子のプロモーターにGFP遺伝子を連結させたIL-2 knock-inマウスを用いて解析した。IL-2プロモーターにはたらく転写因子の活性化はEMSAによって解析した。【結果及び考察】(1)non-CD28(CD5又はCD9)副刺激はCD28副刺激とほぼ同等の^3H-TdRの取り込みを惹起した。(2)IL-2 knock-in T細胞においては組み換えたGFP遺伝子は、IL-2mRNAの半減期を短くするAUUUA配列をもたない為、GFPの発現はIL-2プロモーターの活性によってのみ制御される。T細胞を抗CD3/CD28抗体で刺激するとGFP蛋白産生が認められたが、抗CD3と抗CD5又はCD9で刺激した場合、極く微量のGFP蛋白しか誘導できず、後者の副刺激はIL-2プロモーターの充分な活性化を惹起出来ないことがわかった。(3)CD28とnonCD28副刺激は刺激後早期に、ほぼ同程度の弱いレベルのNF-AT、CD28RC、NF-κBを誘導した。CD28副刺激ではこれらの転写因子の誘導が時間と共に増強する一方、non-CD28副刺激では減弱した。とりわけCD28副刺激では持続的な強いNF-κBの活性化が誘導され、そのNF-κBはp50/c-Relを含むことが確認された。以上、non-CD28副刺激は種々の転写因子、特にNF-κB(c-Rel)の誘導が微弱であることより持続的なIL-2の産生を惹起できないことが明らかになった。現在、CD28副刺激によってNF-κB(c-Re1)の誘導に働くシグナル伝達の解析を詳細に行っている。[方法]静止期T細胞を[IL-12+抗IL-4抗体]又は[IL-4+抗IFN-γ抗体]

存在下にTCR(CD3/CD28)刺激によりそれぞれTh1又はTh2に誘導した。TCR刺激を解除し、IL-2存在下で一定期間培養した後、再び抗CD3抗体刺激することによりAICDを誘導した。[結果及び考察](1)マウス末梢T細胞をTCR刺激を含むTh1およびTh2誘導条件下で培養すると、両培養系ともにTCR刺激によって一旦はFas発現が誘導された。Th1のFas発現は持続した一方、Th2のFas発現は徐々に消失した。(2)抗CD3抗体での再刺激後も、Th1とTh2のFas発現レベルの差異は持続し、この時惹起されるAICDの強弱と相関した。(3)IL-4-/-マウスではTh2条件下で刺激された細胞上のFas発現は減弱せずむしろ増強し、逆にIFN-γ-/-マウスではTh1条件下で刺激された細胞のFas発現が抑制された。(4)STAT6-/-ではTh2条件下でもFas発現が抑制されなかった。以上、TCR刺激により誘導されるFas発現はIL-4/STAT6経路により負に、IFN-γにより正に制御される結果、IL-4存在下で分化するTh2細胞はFas発現が抑制される一方、Th1細胞はFas発現の抑制が起りにくいことが示された。
金属配位性ビオローゲンを用いた分子系超構造の創成と機能

ビオローゲンは可逆な二段階一電子酸化還元挙動を示す有機化合物であり、キノン系化合物とともに種々の電子伝達触媒や有機系機能材料あるいは除草剤として広く利用されている。しかしこれまでの研究はほとんどがビオローゲンの酸化還元挙動にのみ着目したものであり、これを高次に組織化し、有機電子材料などへ応用したれはほとんどない。本研究ではビオローゲンの窒素置換基として金属配位性の複素環を導入し、遷移金属との錯形成を利用した分子系超構造の創成と機能解明を目的として検討を行った。分子集合系(超構造)を創成するための材料となるビオローゲン誘導体としては、ピリジン環を窒素置換基として導入したビオローゲン(Py2V)を用いた。原料のPy2Vは1-(4-pyridy1)pyridium chlorideのカップリング反応によって合成した。次に、三つの酸化状態(還元体、ラジカルカチオン体、およびジカリオン体)をそれぞれ単離し、それらの構造や電子状態を明らかにするため、各種分光学特性や結晶構造などについて系統的に検討を行った。この目的には、NMRやESR、紫外-可視スペクトル、X-線結晶構造解析、および分子軌道計算などをフルに活用した。次にパラジウムなどの遷移金属錯体との間のCreutz-Taube型錯体や、4:4大環状型錯体、およびポリマー状の1:1錯体などを合成し、そのキャラクタリゼーションを行った。。特に、複核錯体分子の構造や電子状態ならびに金属間の電子移動速度などは本研究の目的であるレドックスアクティブな超分子集合系形成のための基本的な知見となるので、これについて重点的に検討を加えた。。
眼球運動による視覚イメージの形成モデルの研究

◎ハードウェア構成:CCDカメラを上下・左右2軸回転のステップモータ駆動の回転台に設定している.取り込んだ視野画像はVMEバス経由でTVモニタに表示される.視野における視覚情報処理,認識はFSバス経由でワークステーション上にて下われ,ウィンドウ上に処理過程が表示される.眼球運動制御信号はワークステーションからVMAメモリ転送を経て2軸モータを駆動する.◎データベース構成:視覚情報記憶データベースは索引部とデータ格納部に分かれる.データ格納部には画像データがスキーマ,オブジェクト中心の多分岐木構造で格納されるている.オペレーションデータベースには視覚情報認識の際に行われる眼球運動を含めた基本オペレーションを格納している.これは,発達および学習とともにオペレーションテクニックが更新される仕組みとしている.◎機能モジュール構成:処理をそれぞれのモジュールで分担し、次のような構製とした.(1)初期視覚像処理系として主に周辺視機構によるもので,視野全体の視覚イメージとなり,画像の顕著な特徴情報が抽出される.(2)視覚詳細情報抽出処理系として認識制御処理系から受けた要求に基づき,対象の特徴情報中心の視覚情報の詳細抽出を行う.(3)認識情報処理系として視覚詳細情報からキー情報を抽出し,視覚情報記憶データベースのアクセスを指令しながら認識を行う.同時に詳細情報抽出要求とそのための眼球運動指令をそれぞれ発する.(4)ワーキング記憶はヒトの「見ている」心像を表し,上記で得られた画像情報がこれに投射され,選択的注意や位置の恒常性が確保される.◎この研究結果を、本年3月18日の電子情報通信学会MEとバイオサイバネテイックス研究会で発表する。
糖尿病眼における白内障術後の後発白内障と前嚢収縮発症の機序の解明と予防法の確立

臨床的に白内障術後の前嚢収縮と後発白内障の関連について検討した。術後炎症が高度な症例では、各種サイトカインの産生により水晶体上皮細胞の増殖が促進されるため、前嚢収縮や後発白内障が高度となることが考えられた。そこで、124例124眼で術後炎症と前嚢収縮、後発白内障について検討したところ、術後炎症と前嚢収縮の程度には関連が見られたが、後発白内障との間に関連は見られなかった。次に糖尿病眼で後発白内障の程度と前嚢収縮の程度との関連について検討したところ、その二者の間には相関は見られず、これらのことより、白内障術後の前嚢収縮と後発白内障はその原因が、水晶体上皮細胞に起因するが、両者の相関が見られなかったことにより、その機序は異なることが推察された。実際に白内障術後の前嚢収縮や後発白内障の予防のために、水晶体嚢拡張リングを白内障手術中に挿入してみたが、その効果は認められなかった。糖尿病眼における水晶体上皮細胞の形態学的特徴について検討した。その結果、糖尿病眼水晶体上皮細胞が正常眼に比べてIL-1、TGF-β活性が強いことを免疫組織学的に初めて報告した。また正常眼に比較し糖尿病眼は、細胞増殖が強く、また培養で増殖、伸展していく段階でIL-1、TGF-β活性がより強くなることも示された。糖尿病眼における水晶体上皮細胞の形態学的特徴については現在研究途中である。方法としては白内障手術時に得られた前嚢切片より水晶体上皮細胞を直接観察すると共にサイトカインであるインターロイキン1とTGF-β抗体にて染色を行い、糖尿病眼と非糖尿病眼を比較することとした。また、その水晶体上皮細胞を培養し、各種サイトカインの活動性を調べることとしている。

糖尿病眼における水晶体上皮細胞の形態学的特徴について検討した。その結果、糖尿病眼水晶体上皮細胞が正常眼に比べて、IL-1、TGF-β活性が強いことを免疫組織学的に初めて報告した。また正常眼に比較し糖尿病眼は、細胞増殖が強く、また培養で増殖、伸展していく段階でIL-1、TGF-β活性がより強くなることも示された。
分子生物学的手法によるウシガエルTSH抗体の作製と応用

これまでに知られている他の脊椎動物のTSHcDNAに共通な配列をセンス・アンチセンスプライマーとして、様々な種の両生類(ウシガエル、ヒキガエル、アカハライモリ)の下垂体前葉より抽出したmRNAを鋳型としたRT-PCR法によりTSHcDNAの部分的増幅を試みてきた。この方法は申請者らがこれまでに目的とする遺伝子のプローブを持たない場合に活用してきたもので、組織中である程度発現されている遺伝子の場合には非常に有効な手段であった。しかし、両生類TSHcDNAの場合はその合成量があまりにも少なく、増幅しても何も産物が得られないことがしばしばであり、まれに増幅産物の塩基配列解析ができてもそれらは他の動物種のTSHcDNAとは遺伝子レベル・アミノ酸レベルいずれにおいてもかなり異なっており、特異的な増幅ができているとは考えられない状況である。現状下で考えられる手段としては以下のようなものが挙げられる。(1)抗ヒトTSH抗体はウシガエル下垂体中に存在する未知の物質(TSHであると思われる)に結合することが免疫組織化学的に知られているので、ウシガエル下垂体ライブラリーに対してこの抗体を用いた抗体スクリーニングを行い、この物質をコードした遺伝子を得る。(2)これまでに合成してきたプライマーよりも長い100200mer程度のTSHcDNA特異的な塩基配列を合成し、プローブとして用いて両生類下垂体前葉cDNAライブラリー中からクローンを得る。(3)現在使用しているライブラリーよりもさらにTSHmRNAを発現していると考えられる時期、あるいは発生段階における個体からmRNAを抽出しRT-PCR法によりプローブを得る。しかしこの方法はどの時期にTSHの合成能が高まっているかはTSHタンパク質のRIA系のない現段階では推測の域を出ず、さらに合成が盛んであると思われる変態最盛期前の個体の下垂体前葉の組織の大きさから現在と同規模な、高質のライブラリーを作ることの困難さ・労働力についても合わせて考えると予算的・技術的に不可能なのかも知れない。