hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
コンディショナルTRIC-B欠損マウスの作製と機能解析

当該年度の研究実績として、心臓特異的Tric-b欠損マウスの作製について記載する。キメラマウス(Tric-b flox/flox)と心臓特異的Myh6-Creマウス(Myh6-Cre/+)を交配し、心臓特異的Tric-b欠損マウス(Tric-b flox/flox-Myh6-Cre/+)を作製した。Creを有さないTric-b flox/flox-Myh6-+/+の遺伝子型を持つマウスをコントロール対象群とした。過去に報告されているタモキシフェン誘導型コンディショナルマウスを参考に0.1 mg/kg/dayの濃度にて3日間タモキシフェンをマウスに腹腔内投与し、TRIC-Bが心臓特異的に欠損したかを検討した。このとき、TRIC-Bが豊富に発現している骨格筋をコントロールとして用いた。タモキシフェン投与後2週間および4週間ではタンパクレベルで心臓特異的なTRIC-Bの欠損は確認できなかった。タモキシフェンの投与量および投与してからの時間が不足していたものと考えられるため、次年度の別プロジェクトにてそのあたりの検討を行う予定である。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。当該年度の研究実績として、1コンディショナルTric-b欠損マウスの作製と2Tric-b欠損ES細胞の作製について記載する。全身性のTric-b欠損マウスは、肺胞形成不全により出産直後に呼吸困難を引き起こし新生致死となってしまう。成獣マウスにて、TRIC-Bの機能を解析するためには、コンディショナルノックアウトマウスの作製が必要不可欠であることから、本実験計画を提案するに至った。1コンディショナルTric-b欠損マウスの作製では、コンディショナルポテンシャルを有するES細胞がEuMMCR(European Mouse Mutant Cell Repository)にて作製されており、そこよりES細胞を購入し、キメラマウスの作製を公益財団法人実験動物中央研究所へ委託した。3月末の段階でキメラマウスが複数個体得られており、順調に成育している。2Tric-b欠損ES細胞の作製は、キメラマウス作製がうまくいかないことも考慮し、Tric-b欠損ES細胞を心筋や神経細胞等に分化させin vitroで実験を行うことも計画していた。こちらは株式会社トランスジェニックへの委託であるが、CRISPR/Cas9によるTric-b遺伝子の欠損ベクターを作製し、それをES細胞に導入後、クローニング作業を行った。現在は、最終クローニング工程に進んでいる。上記2つに項目のいずれかにて、心筋細胞あるいは神経細胞などを用いてTRIC-Bを標的とした医薬品を探索する。最終的に、TRIC-Bの医薬品による副作用発現への関与等を明らかにすることができれば、副作用の軽減やさらにはTRIC-Bを標的とした医薬品の創出に貢献することが期待できる。申請者が、平成27年1月に現在の所属先に異動した関係上、本研究費の交付決定後に遺伝子組換え実験や動物実験計画書等の申請を新規に行う必要性があった。また、コンディショナルポテンシャルを有するES細胞の購入についても、購入方法に関して仲介業者を介するか介さなかの問題が生じ、そこで遅れが生じてしまった。Tric-b欠損ES細胞の作製では、当初NextGEN-CRISPRという新規ゲノム編集ツールを用いて作製を試みたが、うまくポジティブクローンが得られなかったため、CRISPR-Cas9ベクターの作製の最初の段階から委託をお願いし、作業を進めたため平成27年度中にTric-b欠損ES細胞の作製完了を予定していたが、やや遅れる結果となった。当該年度の研究実績として、1コンディショナルTric-b欠損マウスの作製、および2Tric-b欠損ES細胞を用いた中枢神経系細胞系譜への分化過程におけるTRIC-Bの役割の解明について記載する。1コンディショナルTric-b欠損マウスの作製については、平成27年度までにEuMMCR(European Mouse Mutant Cell Repository)から購入したコンディショナルポテンシャルを有するES細胞から個体を作製し、キメラマウスを得た。その後、ターゲッティングベクター上のFRT配列に挟まれたLacZおよびNeo遺伝子を除去する目的でフリッパーゼ(Flp)のインジェクションを行い、Floxマウスを得た。今後、インジェクションにより得られた個体をCreマウスと交配させて、全身性のCAG-Creおよび心臓特異的Myh6-Creマウスと交配し、それぞれのCreに依存したTric-b欠損マウスを得る予定である。上記2つの項目のいずれかにて、心筋細胞あるいは神経細胞などを用いてTRIC-Bを標的とした医薬品の探索を行う。平成28年度までにCAG-Creマウスと交配させて、全身でTRIC-Bが欠損しII型肺胞上皮細胞でのサーファクタント合成・分泌が原因で肺胞形成不全により新生致死となるか否かの確認を行う予定であった。しかしながら、ターゲッティングベクター上にFRT配列に挟まれたLacZおよびNeoがあり、これらを除くためにFlpをインジェクションする必要が生じ、これに時間を要した。1コンディショナルTric-

b欠損マウスの作製については、キメラマウスを全身性のCAG-Creおよび心臓特異的Myh6-Creマウスと交配し、それぞれのCreに依存したTric-b欠損マウス作製が完了した。全身性Tric-b欠損マウスについては、新生致死となることを個体レベル及び組織レベルにて証明するためヘテロ同士の交配によって得られた胎児(E18.5)をすでに採材し保管している。平成30年度の初めには組織学的解析や電子顕微鏡による解析を実施する予定である。心臓特異的Tric-b欠損マウスについては、タモキシフェン誘導タイプであるため、成獣になったところでタモキシフェンを投与し、心臓機能を観察するところから開始する予定である。2Tric-b欠損ES細胞を用いた中枢神経系細胞系譜への分化過程におけるTRIC-Bの役割の解明については、Tric-b欠損ES細胞において小さなNeural stem cellができやすいことが明らかとなった。Neural stemmcellが小さい傾向にあることは再現性が取れたが、その後の神経細胞への分化については再現が取れないため今後心臓を中心に解析を行うこととした。TRIC-Bの医薬品による副作用発現への関与等を明らかにすることができれば、副作用の軽減やさらにはTRIC-Bを標的とした医薬品の創出に貢献することが期待できる。全体的にマウスの作製に時間を要しており、最終年度に入ってから機能解析ができる状況になっている。当該年度の研究実績として、心臓特異的Tric-b欠損マウスの作製について記載する。キメラマウス(Tric-b flox/flox)と心臓特異的Myh6-Creマウス(Myh6-Cre/+)を交配し、心臓特異的Tric-b欠損マウス(Tric-b flox/flox-Myh6-Cre/+)を作製した。Creを有さないTric-b flox/flox-Myh6-+/+の遺伝子型を持つマウスをコントロール対象群とした。過去に報告されているタモキシフェン誘導型コンディショナルマウスを参考に0.1 mg/kg/dayの濃度にて3日間タモキシフェンをマウスに腹腔内投与し、TRIC-Bが心臓特異的に欠損したかを検討した。このとき、TRIC-Bが豊富に発現している骨格筋をコントロールとして用いた。タモキシフェン投与後2週間および4週間ではタンパクレベルで心臓特異的なTRIC-Bの欠損は確認できなかった。タモキシフェンの投与量および投与してからの時間が不足していたものと考えられるため、次年度の別プロジェクトにてそのあたりの検討を行う予定である。今後、1コンディショナルTric-b欠損マウスの作製は、キメラマウスを繁殖させてコンディショナルポテンシャルの確認を行うべく全身でCreを発現させるCAG-Creマウスとの交配を予定している。CAG-Creマウスとの交配により全身でTric-b遺伝子が欠損するため、肺におけるTric-bも欠損することになり、全身性Tric-
CEFR上位者のビジネス・プレゼンテーションのストラテジー調査と検証法の確立

CEFR上位者のビジネス・プレゼンテーションのストラテジー調査と検証法の確立を目指し、質的研究手法と量的手法を用いて信頼性と妥当性を高めた。まず英語上位のCレベルの被験者へのインタビューを実施した。次に、公開されている世界的企業の代表者99名の英語スピーチのスクリプトをコーパス化し分析した。これらの結果をもとに明らかになったCSの質問項目を作成し被験者に予備調査を行った。この結果を因子分析で確認し、最終調査項目を選定した。これを240名の被験者に調査し,再び因子分析で統計処理を行い最終的な信頼性のある調査用紙を構築することができた。CEFRでは、コミュニケーションストラテジー(CS)は、英語の発話を通して目標言語を習得する重要なストラテジーとして定義されている。しかし、実証分析に基づいた検証はあまり報告がなかった。まず本年度は、詳細な文献検索を行った。結果として、現時点では日本の英語上位レベルのビジネス・プレゼンテーションの目標設定は未だ明確でなかった。また、学習者のレベルや場面ごとのCS使用に関する具体的なCan Doリストなどもまだ開発されていないことが分かった。このため、初期の実証分析として、国際ビジネスの第一線で活躍する被験者に対して、ビジネス・プレゼンテーションにおけるCSに関するインタビュー調査を実施した。初年度は、パイロットスタディということで、インタビュー形式の確立や、質問内容の整合性を高めるため、試験的に10名の被験者に対して詳細なインタビューを行った。時間は1時間2時間かけてじっくり行い、インタビューの談話をICレコーダーで録音した。この録音資料を再生し、各被験者がプレゼンテーションにおいて有効だと考えているCSの抽出を行った。結果は、それぞれ独自のCSを確立しており効果的にスピーチを実施していることが分かった。次にインタビューを補完するものとして、約150名の別の被験者を選び、効果的なビジネスプレゼンテーションに関して質問紙の自由回答を収集した。これらのデータをテキストマイニングにかけ、互いに関連性のある重要なCSを抜き出す作業を行っている。さらにWEB上で公開されている英語ビジネスコミュニケーションの上位者のプレゼンーションのスクリプトを集め、コーパス分析を行うテキストデータとして整理している。企業の代表者の英語スピーチを取集した発話データを活用した。当該研究に関係するビジネ関連の話題についての99人分のスクリプトを基にコーパスデータを構築できた。このデータと、米国英語の書き言葉を集めた代表的なコーパスであるFLOBコーパスを参照コーパスとして比較し、英語ビジネスプレゼンテーションに特徴的な語彙を調査した。方法としては、コーパス分析ソフトウェアによるKeyword分析で検証し、英語プレゼンテーションにおける特徴語を抽出した。一般英語であるFLOBコーパスに比べ、ビジネスプレゼンテーションで特に多用されるのは、ビジネス関連語彙より、人称代名詞のYou, We, Iなどであった。これは既存の研究では確認されていない新たな発見といえる。またこれらの語彙のクラスターを追加検証し、特徴的な句や節も抽出することができた。さらに、聴衆との交渉で有効となるCSの使用頻度やテキスト上の位置を確認できた。この中でメタディスコースや、緩衝表現の特徴的な使用方法を確認し、ビジネスで一流の実績のあるスピーカが実際に使用する言語事象が、ある程度明らかになってきた。以上の結果をインタビュー結果と比較し、概念的に認識しているCSと,実際に使用されているスクリプト上のCSを相互に検証することができた。この結果、初期の質問項目として適切なものを作成できた。これらの成果を国際ビジネスコミュニケーション学会全国大会で発表し、学術誌に投稿した。企業の代表者の英語スピーチのスクリプトを当初は50人分をコーパス化する予定であったが、99人分のコーパスデータを収集できた。英語プレゼンテーションにおけるCSの使用頻度やテキスト上の位置をコーパス分析ソフトウェアで検証した結果、先行研究では言及されていなかったCSを新たに抽出することができた。またこれらをインタビュー調査の質的データと検証することで研究の信頼性や妥当性を高めることができた。また、明確な成果としてこれらの成果を国際ビジネスコミュニケーション学会全国大会で発表することができた。まず初年度に、プレゼンテーション技能に関する詳細な文献レビューを行い、先行研究で提示された本研究に参考となるCS項目を収集することができた。特に重要な項目は、プレゼンテーション構成の概念であり、聴衆をうまく巻き込むレトリックを構築し内容の説得を行う重要性が示唆された。次にCEFRの上位であるCレベルの被験者へのインタビューを実施した。被験者はいずれも産業界の第一線で活躍している経営実績の高い人を選んだ。彼らは商談を成功に導くために、プレゼンテーションにおいて特定のCSを使用していることが示唆された。これらをコーパス化しテキストマイニングにより特定のCSの概念を抽出することが可能となった。さらに公開されている世界的企業の代表者99名のの英語スピーチのスクリプトをコーパス化し分析用のデータとして収集した。これをコーパス分析ソフトで解析し、結果としてCS使用の頻度や種類を確認することができた。さらにプレゼンテーションで有効と思われる重要な語彙やクラスターも抽出することができた。これらの成果を2015年の国際ビジネスコミュニケーション学会で口頭発表し、さらに同学会誌に、中谷(2016)として掲載された。最終年度は、上記の検証により明らかになったCSの質問項目を作成し被験者100名に予備調査を実施した。

これを240名の被験者に調査し,再び因子分析で統計処理を行い最終的な信頼性のある調査用紙を構築することができた。このことにより当初の目標であったビジネスプレゼンテーションにおけるストラテジー使用を正確に計測できるBPSIが完成した。CEFR上位者のビジネス・プレゼンテーションのストラテジー調査と検証法の確立を目指し、質的研究手法と量的手法を用いて信頼性と妥当性を高めた。まず英語上位のCレベルの被験者へのインタビューを実施した。次に、公開されている世界的企業の代表者99名の英語スピーチのスクリプトをコーパス化し分析した。これらの結果をもとに明らかになったCSの質問項目を作成し被験者に予備調査を行った。この結果を因子分析で確認し、最終調査項目を選定した。本年度は以下の3つの目標を立て研究を実施したが、研究実績で報告しているように、ほぼ達成することができた。1先行研究のプレゼンテーションのCS評価方法の検証と項目調査を行う。2インタビュー調査の協力者の確定及び本格的調査を実施する。3インタビューをコーパスデータ化する。前年度までに抽出したCS使用の質問項目を基に予備の調査紙を作成する。これを精査しリカートタイプの質問紙として100名の被験者に調査の依頼をする。各項目に関して,1ー5段階でCS活用の頻度を回答してもらう。因子負荷量の低い項目や共通性に影響を与えない項目を削除し,調査項目の累積寄与率と信頼性係数を高めるように最終質問項目を選定していく。完成されたものを国際ビジネスパーソンに回答してもらい因子分析を行う。最終的にプレゼンテーションで有効なCSの因子をまとめ,完成度の高い調査用紙である応用言語学効果的なビジネスプレゼンテーションに関して約150名の別の被験者を選び、質問紙の自由回答を収集した。本年度はこれらのデータをテキストマイニングにかけ、互いに関連性のある重要なCSを抜き出し、基本的な質問項目の基礎を構築する。また、WEB上で公開されている英語ビジネスコミュニケーションの上位者のプレゼンーションのスクリプトを集めテキストデータを作成している。これを基に、プレゼンテーションで有効な語彙、コロケーションなどを抽出し、上記の質問紙分析との整合性を確認する。さらに、国際ビジネスで活躍するビジネスパーソンへのインタビュー調査を継続し、総合的に検証し有効なCS項目をより正確に確認する。当初予定していたインタビュー調査がキャンセルとなり使用額に差が出た。実施できなかったインタビューを必ず行い、使用する予定である。
ホウ素中性子捕捉療法における中性子測定に適した自己放射化有機シンチレータの開発

申請者等はヨウ素含有無機シンチレータを用いて高エネルギーX線がん治療装置周りの光中性子測定研究を進める過程で、自己放射化法の有用性に気づいた。そこで、これを応用・改良し高強度のBNCT場で適用可能とする開発を申請課題とすることにした。手持ちのシンチレータ材料とヨードベンゼンを用いて、ヨウ素添加有機シンチレータを試作してその特性を確認済みである。ヨウ素化合物とその添加量が決まれば、クエンチングの補正量は一意に決定されるので、一般の「液体シンチレーションカウンタ」の様に、個々の測定試料毎にクエンチングの補正を行う必要は無いものと判断しており、高強度中性子検出器としての最適化を試みる。
超新星1987Aリング形成の電磁流体的過程とX線・ガンマ線放射の研究

超新星1987Aの周辺、中心から約0.65光年の距離に形成されていることが観測により明かとなっている高密度のリング状のガス塊について、電磁流体力学的(MHD)過程により解析を行った。軸対称系でMHDシミュレーション解析を行い、赤色巨星、青色巨星及びそれらの星風についての信頼し得るパラメーターを用いてリングの生成をシミュレーションボックス上で再現することに成功した。星の自転に伴い惑星間空間中に生成されるトロイダル磁場は星風により遠方へと運ばれる。低速(約10km/s)の赤色星風に内側から高速(約550km/s)の青色星風が追いつき、星風-星風相互作用領域では赤色星風のガス及びトロイダル磁場が掃き集められる。磁気圧は磁場強度の自乗で強まるため、そこでは磁気圧が急激に高まり、この効果により赤道面上の相互作用領域にガス塊が集中される。以上の過程が実際にシミュレーションボックス上で確認された。密度分布だけでなく、磁場の時間空間分布も詳しく解析することが出来た。相互作用領域では衝撃波が形成されるが、0.65光年の位置に前方衝撃波が形成される時の後方衝撃波の位置は0.27光年であり、磁場強度は後方衝撃波と接触面(前方衝撃波のすぐ近く)の間の領域では前方衝撃波の領域ほど大きくはないが、その半分程度の大きさで丘上に増大していることが明かとなった。超新星爆発から約3年後に電波が観測されたことは、爆発物質がこの後方衝撃波に突入したであろう時期とちょうど合い、磁場の強い領域でのシンクロトロン放射と考えれば我々のMHDモデルを強力に支持するものとなる。本研究結果は国際誌に投稿中である。
無口蓋義歯が咀嚼機能に与える影響

上顎全部床義歯の床縁は、口蓋正中部を延長することが一般的である。しかし、この床の延長は、粘膜への刺激遮断や舌房の侵害を引き起こし、感覚運動能力の低下を招いている可能性がある。本研究では、口蓋部形態に相違のある2種の実験用口蓋床(無口蓋型・有口蓋型)の装着下で、口腔形態認識能力及び咀嚼効率の測定を行った。有口蓋型の口蓋床の装着は、咀嚼能力を低下させ、さらに口腔形態認識能力による咀嚼運動の制御機構に障害を与える可能性が示唆された。一般的に上顎全部床義歯は.その維持力ならびに機械的強度の確保のために口蓋正中部を床により被覆する.しかし,この部位の義歯床による被覆は,粘膜への外来刺激の遮断および床の厚みによる舌運動の障害が予想される.そこで本研究課題は,義歯の口蓋部床縁形態が口腔感覚運動能力および咀嚼機能に与える影響を調べることで,上顎全部床義歯のより機能的な床縁形態を明らかにすることである.平成20度においては,正常有歯顎者を対象とし,口蓋部の形態に相違のある2種類の実験用口蓋床が咀嚼効率と口腔感覚運動能力に与える影響,およびそれらの関係に与える影響を調べた.咀嚼効率はピーナッツによる篩分法を用いて算出し,口腔感覚運動能力の評価には口腔形態認識能(OSA)試験を用いた.被験者は15名の健常有歯顎者(平均26.4歳)とし, 2種類の実験用口蓋床は,口蓋正中部を被覆しない無口蓋型(A床),口蓋正中部を被覆する有口蓋型(B床)を使用した.咀嚼効率は,口蓋床非装着時と比較してB床の装着により有意に低下したが, A床の装着は有意な影響は及ぼさなかった.また, OSAスコアは口蓋床の装着の有無による有意な影響は受けなかった.以上より,口蓋正中部を被覆しないA床の装着は,咀嚼効率に影響を及ぼさないことが明らかとなった.一方,口蓋正中部を被覆するB床の装着により咀嚼効率は低下し,口蓋正中部の床の厚みによる舌の運動障害によって,咀嚼機能に障害を与える可能性が示唆された.高次脳機能と咀嚼運動に関して,ガム咀嚼時に視覚野の活動が確認され、一次視覚野はガムの大きさ,硬さに関連することが明らかとなっている.また,口腔内の形態認知は物体から得られる情報が,大脳皮質にて過去の感覚記憶と比較・統合されることでなされるとされている.以上から,口腔形態認識能試験時には一次視覚野の処理を受けることが予想される.平成21年度では、正常有歯顎者15名を対象に、口蓋部の形態に相違のある2種の実験用口蓋床が咀嚼効率と口腔形態認識に与える影響,およびそれらの関係に与える影響を調べた,結果,口蓋正中部を被覆しない無口蓋型の床装着は,咀嚼効率に影響を及ぼさなかったが,口蓋正中部を被覆する床は、咀嚼効率を低下させ,さらに咀嚼効率と口腔形態認識能との間の正の相関関係を消失させた.以上より,口蓋正中部を床により被覆することは,咀嚼能力を低下させ,口腔形態認識能力による咀嚼運動の制御機構に障害を与える可能性が示唆された.また,正常有歯顎者7名を対象に,口腔形態認識能試験時の一次視覚野領域の脳血流量を光トポグラフィー(ETG4000(HITACHI, Medical Co.)により測定し,口腔形態認識時に視覚野の活動が関わるかを検討した.結果,口腔形態認識時に脳血流量は有意な増加を示し,咀嚼効率と関連の認められている口腔形態認識能は視覚野を活性化し,咀嚼の円滑な遂行になんからかの影響を与えている可能性が示唆された.
空隙型スピネル構造のイオン移動経路における高速イオンのイオンダイナミクス

空孔欠陥型スピネル構造において,銅とインジウムが同時に固体内を動いているイオンダイナミクスを調べる目的で,パルスNMR法[Bruker社のMSL400]で空孔量変化に対応したCuIn_5S_8,CuIn_<11>S_<17>,CuIn_<21>S_<32>,の試料を用い^<63>Cuおよび^<115>Inの線幅の変化の温度依存性を調べた.^<115>Inと^<63>Cuの空孔量変化に対応した線形測定結果は^<115>Inの2つのピークの内大きな方のピークが16dサイト(八面体位置)にあるインジウムイオン,小さい方のピークが8aサイト(四面体位置)にあるインジウムイオンのピークに対応し,空孔量増加に対応して^<115>Inのピークが広くなり,空孔を導入することによって,インジウムの周りの対称性が悪くなっていると考えることができる.^<63>Cuの空孔量依存性では、空孔量増加で線幅が広くなっており,空孔導入による対称性の乱れが考えられる.CuIn_<11>S_<17>の^<115>Inの線形の温度変化は500Kで16dサイトのシャープなピークが有るものの8aのゆるやかなピークはほとんどわからなくなり,これは銅イオンの運動などによって空孔も移動し,それがインジウムイオンの周りの対称性を著しく悪化させてしまったためと解釈できる.^<63>Cuの線形は温度が高いと線形がシャープになりかつ化学シフトが観察された.16dサイトのInイオンのイオン移動経路での運動は空孔欠陥量を増大させることにより,16dサイト8aサイト(四面体位置)の空孔に近くその影響を受けやすいため線形が非常に広がり,8aサイトのInイオン自身は8aサイトの空孔による影響受けにくいと考えられる.高温でのInイオンのイオン移動経路での動きは8aのピークが変化し16dが残っていることから8aサイトのInイオンの動きが小さいことが考えられる.高温のCuのピークがInのものに比し変化が少ないことからインジウムの動きが銅に比べ小さいことが考えられる.空孔欠陥型スピネル構造において,銅とインジウムが同時に固体内を動いているイオンダイナミクスを調べる目的で,パルスNMR法[Bruker社のMSL400]で空孔量変化に対応したCuIn_5S_8,CuIn_<11>S_<17>,CuIn_<21>S_<32>,の試料を用い^<63>Cuおよび^<115>Inの線幅の変化の温度依存性を調べた.^<115>Inと^<63>Cuの空孔量変化に対応した線形測定結果は^<115>Inの2つのピークの内大きな方のピークが16dサイト(八面体位置)にあるインジウムイオン,小さい方のピークが8aサイト(四面体位置)にあるインジウムイオンのピークに対応し,空孔量増加に対応して^<115>Inのピークが広くなり,空孔を導入することによって,インジウムの周りの対称性が悪くなっていると考えることができる.^<63>Cuの空孔量依存性では、空孔量増加で線幅が広くなっており,空孔導入による対称性の乱れが考えられる.CuIn_<11>S_<17>の^<115>Inの線形の温度変化は500Kで16dサイトのシャープなピークが有るものの8aのゆるやかなピークはほとんどわからなくなり,これは銅イオンの運動などによって空孔も移動し,それがインジウムイオンの周りの対称性を著しく悪化させてしまったためと解釈できる.^<63>Cuの線形は温度が高いと線形がシャープになりかつ化学シフトが観察された.16dサイトのInイオンのイオン移動経路での運動は空孔欠陥量を増大させることにより,16dサイト8aサイト(四面体位置)の空孔に近くその影響を受けやすいため線形が非常に広がり,8aサイトのInイオン自身は8aサイトの空孔による影響受けにくいと考えられる.高温でのInイオンのイオン移動経路での動きは8aのピークが変化し16dが残っていることから8aサイトのInイオンの動きが小さいことが考えられる.高温のCuのピークがInのものに比し変化が少ないことからインジウムの動きが銅に比べ小さいことが考えられる.
神経系発生過程でのc-Jun N-terminal Kinase(JNK)の機能

これまでの研究から、c-Jun N-terminal kinase(JNK)およびp38、ERKというMAPキナーゼファミリーに属するキナーゼは、神経細胞の分化に重要な役割を果たしていることがわかってきた。ニワトリ胚を用いたこれまでの研究から、活性型JNKがニワトリ胚脊髄に出現するが、その分布パターンは発生時期により変化することが明らかとなった。JNKと同じMAPキナーゼファミリーであるERKについても同様に解析をすすめ、活性型ERKの分布パターンも発生過程により、変化すること、またその分布領域はJNKとは異なっていることを明らかにした。さらに、活性型ERKは、希突起膠細胞の前駆体と思われる細胞にも発現していることを明らかにした。また、ラット胎児視床下部培養実験より、女性ホルモンは視床下部細胞のJNK活性は増加させないがERKの活性を増加させることがわかった。また、女性ホルモンはシナプシンIの陽性領域を増加させるが、この効果は、女性ホルモンの核内受容体拮抗剤、アクチノマイシンD、シクロヘキシミドによってはいずれも抑制されずなかった。また、E2-BSAは、シナプシンI陽性領域の増大をE2と同程度に引き起こした。さらに、ERK阻害剤であるU0126はシナプシンIの陽性領域を激減させ、さらにE2やE2-BSAによるシナプシンI陽性領域の増加も抑えた。以上のことから、視床下部ニューロンに女性ホルモンが作用しシナプシンIの局在を変化させる場合、女性ホルモンは、核内受容体を介してmRNAやタンパクの合成経路に作用するのではなく、膜上に存在すると考えられる受容体(エストロジェン受容体であるかは、未だ不明であるが)を介して、ERKを含む細胞内シグナル伝達系に影響を及ぼしていると考えられた。以上より、MAPキナーゼファミリーに属するJNKおよびERKは神経系発生過程に関与するものの、その機能はそれぞれのキナーゼによりまったく異なっていると考えられた。PC12h細胞は、プロテアソーム阻害剤ラクタシスチンにより神経様細胞に分化した後、アポトーシスを起こす。その際、MAPK : mitogen-activated protein kinaseの一つ、JNK : c-Jun N-terminal kinaseとp38の活性が高まることが以前の研究で分かった(Masaki et al.,2000)。アポトーシスへのJNKやp38の関与は以前から報告されているが、アポトーシス誘導刺激後、新たに合成されたJNKやp38がどの程度アポトーシスに関与するかは不明な点が多い。そこで本研究では、JNK及びp38に対するホスホロチオエート化アンチセンスオリゴヌクレオチド(以後ASODNと略す)を用いて両MAPK合成を阻害したのちラクタシスチンを添加し、その際のアポトーシス細胞出現率を調べた。その結果、JNKのASODN添加により、ラクタシスチン誘導性アポトーシスは有意に抑えられた。しか対照群のレベルにまではアポトーシスは抑えられなかった。またp38のASODN添加、によっても、ラクタシスチン誘導性アポトーシスはある程度抑えられた。そして、JNKとp38の両方に対するASODNを合わせて添加した場合には、ラクタシスチン誘導性アポトーシスは対照群レベルにまで抑えられた。以上のことから、JNKおよびp38がラクタシスチン誘導性アポトーシスに直接関与する事が示された。昨年度は、PC12細胞を用いてアポトーシスに及ぼすMAPキナーゼの影響について、MAPキナーゼのうちc-Jun-N-terminal kinase (JMK)に主に焦点をあてて解析した。

本年度は、胎生16日齢のラット視床下部を用いて、MAPキナーゼの神経系発生過程への影響について検討した。ラット視床下部は、臨界期(胎生16日ごろから出生後約5日の期間)に性ステロイドホルモン(エストロゲン)の影響により、雌雄差が発生する脳部位の1つとして知られている。そこで、胎生16日より摘出した視床下部細胞を解離後、臨界期に相当する期間、性ホルモン添加・および非添加条件で培養し、神経細胞・グリア細胞の発達を解析した。そして、これらの発達に対するMAPキナーゼの関与について検討した。(結果)エストラジオール17βは、視床下部ニューロンの突起伸長(MAP2免疫陽性領域として計測)およびシナプス形成(synapsinI免疫陽性領域として計測)を増加させた。このとき、ホルモン添加群と非添加群とで、JMK、p38の活性に差は認められなかったことから、JNKやp38はホルモンによる視床下部ニューロンの発達変化に関与しないと考えられた。一方、ERKの活性はエストラジオール17βにより増加した。そこで、ERKの活性をU0126を用いて抑えたところ、synapsinI陽性領域は、ホルモン添加群・非添加群とも著しく抑えられた。このことから、視床下部ニューロンのシナプス形成にERKが関与すること、およびホルモンの影響がERKにより仲介されていることが考えられた。一昨年度は、PC12細胞を用いて、神経細胞分化時にプロテオソーム阻害剤により誘導されるアポトーシスについて、MAPキナーゼの関与を調べた。また、昨年度は、胎生期ラット視床下部ニューロンの培養細胞を用いて、女性ホルモンが神経細胞に及ぼす影響と、その過程でのMAPキナーゼの関与について調べた。そして、本年度はこの研究をさらに発展させ、視床下部ニューロンが女性ホルモンの影響を受けて、前シナプスの形成が盛んになることと、そのメカニズムについて解析した。さらに、ニワトリの脊髄におけるMAPキナーゼの発現について、神経路や髄鞘形成との関連について調べた。MAPキナーゼ・ファミリーにはc-Jun N-terminal Kinase (JNK)、Extracellular regulated kinase (ERK)、およびp38の3つのキナーゼが属する。視床下部ニューロンが女性ホルモンによりシナプス形成が増加することは、これまでにも報告があったが、その詳細なメカニズムはまだ不明であった。そこで、今年度は視床下部ニューロンに女性ホルモンが作用する際、シナプス形成に関してどのような影響がでるのかを調べ、女性ホルモンの作用メカニズムをMAPキナーゼの関与の面から解析することを試みた。女性ホルモン添加により、培養視床下部ニューロン内で前シナプス関連蛋白質であるsynapsinIの局在化が起こることを明らかにした。この局在化は、古典的な蛋白合成を介する女性ホルモン受容体を介した作用ではなく、膜付近に存在する受容体およびそこからの情報伝達経路が関与すると考えられた。また、女性ホルモンの添加により、培養視床下部ニューロン内のJNK、p38の活性はほとんど変化がなかったが、ERKの活性および活性型ERKの発現は明らかに増加した。さらに、ERK活性阻害剤は、女性ホルモンによるsynapsinIの局在化を抑えた。
生命システムの解明を目指した線虫のペプチド大量シーケンスと機能解析

本研究では,線虫C.elegansの生理活性ペプチドの効率的な抽出法の確立と単離を行い,その一部についてアミノ酸配列決定を行った。【線虫の大量調製】プレート法および液体培養法により線虫C.elegansの幼虫および成虫を約100g調製した。【ペプチド画分の精製】線虫を液体窒素中で粉砕し,冷アセトンで脱脂後,80%エタノールで低分子ペプチドを抽出した。さらに,2%食塩水を用いて残さより高分子ペプチドを抽出した。それぞれのペプチド画分を熱処理してタンパク分解酵素を失活させ,イオン交換樹脂を用いて中性,酸性,塩基性画分に大別した。さらに,酸性および塩基性画分についてはイオン強度によりペプチドを細分化した。それぞれの画分について逆相HPLCで分析した結果,良好な分離パターンが得られた。よって,上記の方法により,ペプチドを迅速に単離できると考えられる。さらに,幼虫期および成虫期由来のペプチドでは分離パターンが著しく異なることから,発育段階別にペプチド精製を行うことが極めて有効であると考えられる。【ペプチドの単離】逆相HPLC分析で比較的単離し易いと思われる20種のペプチドについて,イオン交換および逆相HPLCを組み合わせることにより,精製単離した。現在,さらなるペプチドの単離操作を行っている。【アミノ酸配列決定】単離したペプチドの分子量をESI-TOF-MSを用いて測定した。次いで,アミノ酸配列分析を行った。アミノ酸配列が得られたペプチドについて,部分配列,分子量をもとに線虫のデータベース検索を行うことにより,全一次配列を決定した。N末端修飾によりアミノ酸配列が得られなかったペプチドについては,MS-MSによる配列決定を行っている。
TTC39B標的RNA医薬搭載肝特異的バイオナノカプセルによる脂肪肝炎治療薬開発

RNAiは血中に存在するendonucleaseによる分解により速やかに分解されてしまうため、化学修飾による耐性向上か、ナノキャリア搭載による保護が必要である。今回申請者は、endonuclease耐性が高くなる独自のたんぱく修飾をした核酸作成技術をもつA社と共同研究契約を結び、LDL受容体の発現調節に関与しているPCSK9に対して、マウスのヒトで保存されている配列を選択しRNAiを作成した。Hepa1-6などの細胞株にて、RNAiの配列を選定した。分担研究者の黒田が開発したヒト肝臓特異的DDSナノキャリアであるバイオナノカプセル(Yamada et al. Nature Biotech 2003)に搭載した。バイオナノカプセルはヒト肝臓特異的に感染するB型肝炎ウイルスの表面タンパク質を提示しており、同ウイルス固有の1ヒト免疫系からの回避能、2高効率かつ高特異性のヒト肝臓細胞感染能、3ヒト肝臓細胞内におけるエンドソーム脱出能を有している。培養細胞株でPCSK9 mRNA抑制効果を検討したが、十分なPCSK9抑制効果が得られなかったので、A社作成のRNAiとバイオナノカプセルの相性(電荷、疎水性など)がよくなく、十分RNAiが格納されていない可能性が考えられた。そこで、別の性質を持つナノカプセルB、ナノカプセルCを作成し、A社のRNAiを搭載した核酸を作成した。一定の効果が得られたことを確認したのち、LDL受容体ヘテロマウスにwestern dietを2週間給餌して血清LDL-C値を高くしたのちに、ナノカプセルCに搭載した抗PCSK9-RNAiを投与する郡、PBSを投与する郡で計10匹に尾注し、血清LDL-C、肝PSCK9 mRNA(qPCR法)を評価した。Hepa1-6細胞株にて、RNAiの配列を選定した。一定の効果が得られたことを確認したのち、LDL受容体ヘテロマウスにwestern dietを2週間給餌して血清LDL-C値を高くしたのちに、ナノカプセルCに搭載した抗PCSK9-RNAiを投与する郡、PBSを投与する郡で計10匹に尾注し、血清LDL-C、肝PSCK9 mRNA(qPCR法)を評価することができた。また脂肪肝炎の評価のために、これまでの高脂肪高シュクロース胆汁酸含有食を改変し新規食事誘導性脂肪肝炎マウスモデルを作成した。LDL受容体ヘテロマウスにwestern dietを2週間給餌して血清LDL-C値を高くしたのちに、ナノカプセルCに搭載した抗PCSK9-RNAiを投与する郡、PBSを投与する郡で計10匹に尾注し、血清LDL-C、肝PSCK9 mRNA(qPCR法)を評価することができたが、予想していたより個体間のLDL-C値のバラツキが大きく、評価が難しかった。このため、当面はC57Bl/6マウスを導入し、ナノカプセルCに搭載した抗PCSK9-RNAiを投与する群、ナノカプセルCのみを投与する群、RNAiのみを投与する群で、効果の評価をすることとした。脂肪肝炎の評価のために、これまでの高脂肪高シュクロース胆汁酸含有食を改変し新規食事誘導性脂肪肝炎マウスモデルを作成したので、PCSK9のRNAiで一定の成果が出た場合には、TTC39Bに対するRNAi搭載ナノカプセルについても、C57Bl/6マウスに投与する実験を予定としている。

培養細胞株でPCSK9 mRNA抑制効果を検討したが、十分なPCSK9抑制効果が得られなかったので、A社作成のRNAiとバイオナノカプセルの相性(電荷、疎水性など)がよくなく、十分RNAiが格納されていない可能性が考えられた。そこで、別の性質を持つナノカプセルB、ナノカプセルCを作成し、A社のRNAiを搭載した核酸を作成した。一定の効果が得られたことを確認したのち、LDL受容体ヘテロマウスにwestern dietを2週間給餌して血清LDL-C値を高くしたのちに、ナノカプセルCに搭載した抗PCSK9-RNAiを投与する郡、PBSを投与する郡で計10匹に尾注し、血清LDL-C、肝PSCK9 mRNA(qPCR法)を評価した。RNAiは血中に存在するendonucleaseによる分解により速やかに分解されてしまうため、化学修飾による耐性向上か、ナノキャリア搭載による保護が必要である。今回申請者は、endonuclease耐性が高くなる独自のたんぱく修飾をした核酸作成技術をもつA社と共同研究契約を結び、LDL受容体の発現調節に関与しているPCSK9に対して、マウスのヒトで保存されている配列を選択しRNAiを作成した。Hepa1-6細胞株にて、RNAiの配列を選定した。分担研究者の黒田が開発したヒト肝臓特異的DDSナノキャリアであるバイオナノカプセル(Yamada et al. Nature Biotech 2003)に搭載した。一定の効果が得られたことを確認したのち、LDL受容体ヘテロマウスにwestern dietを2週間給餌して血清LDL-C値を高くしたのちに、ナノカプセルCに搭載した抗PCSK9-RNAiを投与する郡、PBSを投与する郡で計10匹に尾注し、血清LDL-C、肝PSCK9 mRNA(qPCR法)を評価することができた。また脂肪肝炎の評価のために、これまでの高脂肪高シュクロース胆汁酸含有食を改変し新規食事誘導性脂肪肝炎マウスモデルを作成した。LDL受容体ヘテロマウスにwestern dietを2週間給餌して血清LDL-C値を高くしたのちに、ナノカプセルCに搭載した抗PCSK9-RNAiを投与する郡、PBSを投与する郡で計10匹に尾注し、血清LDL-C、肝PSCK9 mRNA(qPCR法)を評価することができたが、予想していたより個体間のLDL-C値のバラツキが大きく、評価が難しかった。このため、当面はC57Bl/6マウスを導入し、ナノカプセルCに搭載した抗PCSK9-RNAiを投与する群、ナノカプセルCのみを投与する群、RNAiのみを投与する群で、効果の評価をすることとした。脂肪肝炎の評価のために、これまでの高脂肪高シュクロース胆汁酸含有食を改変し新規食事誘導性脂肪肝炎マウスモデルを作成したので、PCSK9のRNAiで一定の成果が出た場合には、TTC39Bに対するRNAi搭載ナノカプセルについても、C57Bl/6マウスに投与する実験を予定としている。
セラミックス系スラスタの研究

1.500N級スラスタ燃焼試験500N級窒化珪素系モノリシックセラミックス製燃焼器の耐熱強度及びスラスタ性能を評価するため、燃焼試験を実施した。まず、高膨張比一体型燃焼器を用い、標準条件(燃焼圧=0.69MPa)での燃焼試験を実施した。スラスタの燃焼状態は安定しており、計画通りの性能であることが確認された。また、燃焼器に異常は見られず、燃焼器が燃焼中の圧力、温度に対し十分な耐性を持つことを確認した。本試験及び2項の結果から500N級二液式スラスタ、燃焼器として世界で初めて窒化珪素系モノリシックセラミックス一体整形品を完成させ、本科研費による研究目的を達成した。次に耐熱性限界確認のため、低膨張比型燃焼器に燃焼室壁面冷却用推薬配分率(フィルムクーリング率)を従来の30%から20%に低減させた噴射器を組み合わせた供試体を用い、標準条件での燃焼試験を実施した。燃焼状態は安定していたが、燃焼室温度が約1300°Cを越え、燃焼開始後約52sで燃焼器が破砕した。本件については燃焼器内液膜の挙動、実効燃料/酸化剤混合比等の把握が必要であり、今後の研究課題とすることとした。2.500N級スラスタ機械環境試験高膨張比一体型燃焼器の機械環境に対する強度評価を行うため、機械環境試験を実施した。試験条件としては、M-Vロケットの打上げ環境を想定した認定試験レベル環境条件を用いた。燃焼器に発生する最大応力は推力軸直交方向ランダム振動加振時の約90MPa(3σ)であり、脆性材料構造物強度の評価指標である破壊確率は上限の10^<-2>に対し、10^<-9>程度であった。また試験後の外観検査及びモーダル試験で異常は見られなかった。このことから高膨張比一体型燃焼器がM-Vロケット打上げ時の機械環境に対し、十分な強度を有していることが確認出来た。1.接合供試体強度確認モノリシックセラミックス-CMC接合部の要素評価試験を行うため、強度試験用供試体を製作した。今回は、セラミックス-CMCの接合部成形性を確認することを目的とした試作であったので、実機スラスタを模擬した直径80mmの窒化珪素系モノリシックセラミックス円筒に、SiCクロスを積層してPIP法でCMCを成形した。製作した供試体で、スラスタ燃焼時の熱環境を模擬した熱サイクル試験と常温での曲げ試験を行った。製作及び試験の結果、CMCの成形性は良好であり、接合部については、化学的な結合によらず機械的な結合で十分な接合強度を持つことが確認された。しかし、CMC強度のばらつきが大きく、最大で3倍程度の差があることが判明した。以上のことから、モノリシックセラミックス-CMC接合部の強度をスラスタに適用するためには、製造上のばらつきを小さくすることが重要であることがわかったので、来年度はCMC製造プロセスを適切にすることと、設計に使うために定量的な評価を行う平板での接合強度試験を実施する予定である。2.セラミックス製燃焼器燃焼試験窒化珪素系モノリシックセラミックスの二液スラスタに対する強度評価(耐圧強度・耐熱性)を行うため、500N級二液スラスタの燃焼器(直径約48mm)を製作し、燃焼試験に供試した。試験結果の詳細な解析・評価は来年度実施する予定である。

1.CMC製造プロセス確認試験平成14年度に実施したSN282-CMC接合試験片強度試験において、焼成炉内への大気混入による繊維のBNコーテイングの酸化、焼失に起因すると思われる強度低下(予測強度の半分程度)が生じた。そこで製造設備の改善(酸化防止)を実施した上で製造した供試体を用いて曲げ試験を実施し、プロセス改善の妥当性を確認した。強度評価は円筒状供試体から切り出した試験片の3点曲げ試験により行った。その結果CMCが予想通りの曲げ強度を有していること及び荷重・変位関係から脆性的な破壊を生じないというCMCの特性が良好に発現していることが確認された。以上より、今回実施したCMC製造プロセス適性化の妥当性が確認出来た。但し、破壊時の亀裂が主に層間方向に進展する現象が見られ、層間強度の向上に更なるプロセス改善が必要であることが分かった。2.500N級スラスタ燃焼試験窒化珪素系モノリシックセラミックスの二液スラスタに対する強度評価(耐圧弾度、耐熱性)を行うために、500N級窒化珪素系モノリシックセラミツクス製燃焼器を用いた燃焼試験と詳細な解析を実施した。燃焼試験において、推薬弁開と同時に燃焼圧は正常に立ち上がり、失火、爆燃等の異常撚焼は見られず、安定した燃焼をすることを確認した。また、燃焼試験後も燃焼器に異常は認められず、本材がスラスタの燃焼器材料として十分な耐性を有することが確認出来た。赤外放射温度計で計測した燃焼器温度は、従来の金属製スラスタと比較して低く、モノリシックセラミックスの耐熱温度に対して十分な余裕がある一方、スラスタ性能は従来とほぼ同程度であった。このことから、今後インジェクタ部の設計最適化を行うことにより、従来の金属製スラスタと比較して性能向上が可能との見込みを得た。昨年度の実験結果を受けて、セラミック一体成形スラスタ形状の再設計を実施した。具体的には、スラスタへの着火時の衝撃的な圧力変化や温度変化に対応し、かつ、定常燃焼状態における性能劣化を抑えることを目的として、インジェクタ部の応力緩和のための取付構造変更設計や、ノズル断面形状の変更設計を実施した。これらの設計変更によりセラミックスラスタの実現可能性が実証されれば、従来の金属製スラスタより、信頼性が高く、かつ、性能が高いスラスタを得ることができると期待される。本年度は、この設計変更結果をもとに500N級セラミック製スラスタを試作し、地上燃焼試験を実施した。この試験結果の詳細解析を実施することで、セラミック製スラスタを現実の宇宙機に適用することの可否がほぼ明らかになる。セラミックの一体成形スラスタの地上燃焼試験を実施する一方で、ノズル部をCMCで製作し、それを接合する技術の研究も実施した。この研究を実施した大きな目的は一体成形スラスタの製作性に対する懸念であるが、その他にも、宇宙空間にあるスペースデブリやマイクロメテオロイドの影響を軽減することも期待される。宇宙空間には多数のちり状の飛散物が存在しており、これが衛星に衝突することが懸念されている。衛星の中でも、大型スラスタのノズルは宇宙空間に大きく突き出しているため、衛星の他の部位と比較して、飛散物が衝突する確率は無視できない。そのため、ノズルに使用する材料は、衝撃力に対して、ある程度の強度を有することが望ましい。そのため、本年度は、CMCをノズル材料とするための接合技術を検証した。昨年度明らかになった、接合部焼成時の酸化現象問題を、プロセス管理により回避することで、衛星用スラスタとして要求されるレベルの接合が実現可能であることがわかった。
i PS細胞の遺伝子治療戦略を可能とする非ウイルス型ベクターの開発

血友病Aに対する遺伝子治療法を目指し、長期間安定に外来遺伝子の発現を維持可能な、非ウイルス型ベクターの開発を行った。新規トランスポゾンを利用することにより、ヒトiPS細胞において150日以上、外来遺伝子発現を維持可能である事を示した。また、遺伝子治療用ベクターとしては初めて、7. 0kbものサイズを持つ全長型第VIII因子cDNAの発現に成功した。本研究の新規トランスポゾンベクターは、血友病遺伝子治療用のベクターとして期待される血友病Aに対する遺伝子治療法を目指し、長期間安定に外来遺伝子の発現を維持可能な、非ウイルス型ベクターの開発を行った。本研究の新規トランスポゾンベクターは、血友病遺伝子治療用のベクターとして期待される本研究では、先天的血液凝固異常症である血友病Aに対して、ヒトiPS細胞を利用した遺伝子治療アプローチを開発する事を将来目標として、長期間安定に高いレベルで発現を維持する非ウイルス型遺伝子導入ベクターの構築を進めている。本年度では、EGFPを組込んだレポーター発現ベクターを作成し、ヒトiPS細胞への遺伝子導入条件最適化を行った。その結果、リポフェクション試薬を用いれば20%程度、Neonトランスフェクション・システムを用いることで40%程度のヒトiPS細胞へ外来遺伝子導入が可能となった。ベクターはピューロマイシン薬剤耐性遺伝子を搭載しているため、薬剤選択で99%以上の細胞での発現も確認された。また、EGFPを発現するプロモーターを5種類検討した中で、ヒトiPS細胞においてEF1aプロモーターの発現活性が最も高いことが判明した。さらに、ベクターを導入した後にヒトiPS細胞を長期培養してフローサイトメトリーでEGFP発現を経時観察した所、ある程度の割合でEGFP発現の低下が見られたものの、数ヶ月以上に渡って長期発現を維持可能であることを見出した。これは、ヒトiPS細胞などで急激な発現抑制を受けるレトロウイルスベクターやレンチウイルスベクターと比較しても優れた特徴であり、今後、新規の遺伝子治療用のベクターとしての可能性を示唆するものである。これらの結果を受けて、血友病Aの原因遺伝子である血液凝固第八因子のBドメイン欠損型および全長のcDNAをEF1aプロモーターの下流にクローニングしたベクターを構築した。現在は第八因子の発現およびタンパク質活性測定を進めている所である。本研究では、先天性血液凝固異常症である血友病Aに対して、ヒトiPS細胞を利用した遺伝子治療法を開発する事を将来目標とし、長期間安定に高いレベルで発現を維持する非ウイルス型遺伝子導入ベクターの構築を進めている。昨年度までに作成したEGFPレポーター発現トランスポゾンベクターを骨格とし、本年度においては、血友病Aの原因遺伝子である血液凝固第VIII因子のBドメイン欠損型(4.3kb)および全長(7.0kb)のcDNAをEF1aプロモーターの下流にクローニングしたベクターを構築した。第八因子のBドメインは血液凝固活性には直接必要ないが、効率的なタンパク質の分泌に重要であることが示唆されている。それぞれのベクターにおいて、HEK293T細胞およびヒトiPS細胞へ導入し、第VIII因子の発現をmRNAの定量および免疫染色にて確認。また、細胞外に分泌された第VIII因子に関しては、凝固活性をaPTT法にて測定した。その結果、トランスポゾンベクターを用いることにより、短縮型のBドメイン欠損第VIII因子と同等以上の活性型全長第VIII因子の生産に成功した。また、Hydrodynamic injection法により血友病Aモデルマウスにトランスポゾンベクターを投与した所、Bドメイン欠損型第八因子および全長型第八因子の両方について、数ヶ月以上に渡って安定に血中へ分泌可能であることが確認できた。以上の事より、新規トランスポゾンベクターはex vivo遺伝子治療およびin vivo遺伝子治療の両面において有用なベクターとなることが示唆された。
混晶半導体中の欠陥準位に関する研究

山研究の目的は、種々の混晶系における欠陥準位を過渡容量分光法(DLTS)によって調べ、同時にそれによって混晶特有の原子配列の乱れを解明する新しい評価法を確立することにある。本年度において得られた主な成果は次の通りである。1.AlGaAs中の欠陥準位をDLTS法で調べ、ドナー(D)と未知の欠陥(X)の複合体よりなるとされていたDX中心のドナー種依存性を明らかにした。2.AlGaAs混晶と静水圧下GaAsとにおける伝導帯構造の類似性に着目し、GaAsの静水圧下でのDLTS測定を行い、DX中心は従来考えられていた複合体ではなくドナー自身であること、特殊な伝導帯構造となるときにDX準位が形成されることが明らかにされた。3.静水圧下でのGaAsの光伝導度の測定を行い、DX中心が浅いドナー準位と深い準位の二面的性格を示すのはその大きな格子緩和現象によることをみいだした。4.上記2の結果に基づいて、他の混晶系においてもこの種の欠陥準位が存在する可能性があることを指摘した。以上を要するに、静水圧下でのDLTS測定が、混晶中の欠陥物性を解明するための有効な手段となることがわかった。