hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ヒト羊膜中胚葉系細胞の心筋分化と免疫学的寛容機序の解明

我々は、従来までに羊膜細胞から間葉系細胞(Amniotic Membrane-derived Mesenchymal Cells=AMC)の分離技術を確立した。この研究によって、羊膜の再生医療に置ける有効性および汎用性が確認でき再生医療に用いうる莫大な細胞リソースの確保が可能となる。心筋誘導効率の最も良い、AMC至適培養条件の模索・異種移植時のAMCの長期生着、心筋分化の科学的実証・AMCが免疫学的寛容を生じるメカニズムの検証を同時に進行するが、初年度内に心筋誘導効率の最も良い、AMC至適培養条件について検討した。具体的には各種条件での培養後に心筋誘導効率を比較する事により、初代培養条件で心筋への分化誘導能力が高くなることを明らかにした。次年度は心筋誘導率の高い培養条件下のAMCを心筋梗塞モデルラットへ移植することにより、心機能の評価、心筋梗塞領域の測定、心筋細胞への分化及び生着率についての検証を行い、AMCが心機能を改善させることを明らかにした。また他家移植にて生着、心筋分化、生存することから本年度はAMCの免疫寛容について、in vitroおよびin vivoにおいて検証した。具体的には免疫寛容に関連するサイトカイン等の添加により免疫寛容能及び心筋分化能への影響を検証した。これらの検証により、AMCの心筋再生医療における細胞源としての有用性により迫る研究となりうる。
腎細胞癌におけるVEGF発現誘導のメカニズムの解析

所有している腎細胞癌細胞株のVEGF mRNAのNorthern blottingを行った。SN12Cが最もVEGFを発現。また、SN12CにおいてVEGF mRNAの発現は20ng/ml TPAにより4倍まで誘導。Actinomycin DによりTPAは転写レベルでVEGF mRNAの発現を調節していることが示唆された。次に、PCRによってcloningした2.3kbhumanVEGF promoterをluciferasegeneの上流につないだreporter plasmidを作成し、SN12cにtransfectしてluciferase活性を確認した。TPAによってreporter plasmidの活性が上昇するかどうか調べた。TPAはこの活性を5倍上昇させた。minimalなVEGF promoter活性しか持たないreporter(1個のGC boxのみを含む)によってでもTPAにより約10倍誘導された。以上より、TPAはVEGF promoterの基本転写調節因子に作用し、VEGFの発現調節に関与していることが示唆された。次に、様々なdeletion mutantをSN12cにtransfectし、絶対的なluciferase活性を測定すると、VEGFの転写開始点の上流59bpから86bpまでの間でまず14倍のluciferase activityの違いが認められた。この領域には3個のGC boxが含まれており、これらがVEGFの基本的な転写発現に関与していると考えられた。さらに転写開始点の上流131bpから400bpまでの領域で2.8倍のluciferase activityの上昇が認められた。つまりこの領域には他のcis-acting elementが含まれていることが示唆された。現在、このDNA断片をsubcloning中である。Northern blottingの結果、我々の所有しているcell lineのうちSN12cが比較的よくVEGF mRNAを発現していた。VEGF mRNAの発現はTPAにより約2時間から4時間で4倍まで誘導された。この発現の誘導が転写レベルで調節されているかどうかみるため、Actinomycin Dを用いてVEGF mRNAのstabilityを観察した。この半減期は約120分で、TPAの有無に関係がなかったため、TPAは転写レベルでVEGF mRNAの発現を調節していることが示唆された。次に、我々はPCRによってcloningした2.3kbのhuman VEGF promoterをLuciferase geneの上流につないだreporter plasmid(pSV-2271VEGFLuc)をすでに作成していたため、これをSN12c cell lineにCa-Phosphate法にてtransfectした。VEGF promoterはAN12cの中で十分なpromoter活性を持っていた。更にTPAはVEGF mRNAの発現を誘導していたため、TPAによってpSV-2271VEGFLucの活性が上昇するかどうか調べた。TPAはこの活性を約5-6倍上昇させていた。しかしながら、cAMPやProstaglandin E2はこの活性を上昇させなかった。VEGFのpromoter領域には可能性のあるAP-1 binding siteがいくつかあることが既にわかっているが、本当にこれらのAP-1 binding siteが今回のTPAによる誘導に関与しているかどうか調べるため、VEGF promoterのserial deletion mutantを制限酵素等を用いて作成した。現在これらのmutantを用いてTPA response elementを調査中である。次に、PCRによってcloningした2.3kb human VEGF promoterをluciferase geneの上流につないだreporter plasmidを作成し、SN12cにtransfectしてluciferase活性を確認した。

以上より、TPAはVEGF promoterの基本転写調節因子に作用し、VEGFの発現調節に関与していることが示唆された。次に、様々なdeletion mutantをSN12cにtransfectし、絶対的なluciferase活性を測定すると、VEGFの転写開始点の上流59bpから86bpまでの間でまず14倍のluciferase activetyの違いが認められた。この領域には3個のGC boxが含まれており、これらがVEGFの基本的な転写発現に関与していると考えられた。さらに転写開始点の上流131bpから400bpまでの領域で2.8倍のluciferase activityの上昇が認められた。つまりこの領域には他のcis-acting elementが含まれていることが示唆された。現在、このDNA断片をsubcloning中である。
星間分子雲における極低温表面原子反応によるアミノ酸の重水素濃集機構の解明

本研究では,星間分子雲における化学進化で重要な役割を担う星間塵表面反応による,アミノ酸の重水素濃集に関する研究をおこなった。もっとも単純なアミノ酸であるグリシンを超高真空反応チャンバー内に設置した反応基板(12K)に蒸着し,重水素原子と反応させた。FTIRやNMRで反応生成物を分析したところ,グリシンの重水素置換体の生成が確認された。反応には高い活性化エネルギーが存在するため,極低温での重水素置換体生成には量子力学的なトンネル効果が重要だと考えられる。本研究では,アミノ酸が星間分子雲における極低温表面原子反応によって重水素濃集可能であることを示した。本研究では星間分子雲に存在する氷星間塵表面におけるアミノ酸およびその前駆物質の重水素濃集機構解明を目的としている。アミノ酸は代表的な地球外物質である炭素質隕石中で豊富に存在することが知られ,さらに地球上に存在するものに比べ,高い重水素濃集を示すことが知られている。その重水素濃集の起源として星間分子雲における極低温反応の関与が示唆されているが,これまでにそれを検証した例はなく,その解明に挑戦する本研究は画期的だといえる。まず,極低温表面反応によるアミノ酸の重水素濃集に関する研究から着手した。当初の計画ではアミノ酸蒸着装置を自ら設計し,現有の装置を改良して取り付ける予定であった。しかし市販品でアミノ酸を真空装置内に設置された反応基板上に蒸着可能な装置を見つけた。そこで装置設計・改良等による時間のロスを防ぐため,北野精機製の有機物蒸着装置を購入した。その際,現有の装置と蒸着装置をマッチングさせるため,北野精機担当者との打ち合わせを念入りに行い,適切に装置を選択した。アミノ酸試薬の準備も完了しており,実験を開始できる段階まで到達している。また,最も単純なアミノ酸であるグリシンと,重水素原子との反応による水素引き抜きー重水素付加が理論的に起こるかどうか,量子化学計算によって反応の活性化エネルギーを見積もった。2つの水素が結合するアルキル炭素から,重水素原子が水素原子を引き抜くために必要な活性化エネルギーはおよそ25kJ/molであった。この程度の大きさのエネルギーが必要な反応は,典型的な星間分子雲の温度である10ケルビン程度では熱的に起こりえないが,量子力学的トンネル効果によって進行可能だと推測する。本研究では,星間分子雲に存在する氷星間塵表面におけるアミノ酸およびその前駆物質の重水素濃集機構解明を目的としている。前年度までにアミノ酸蒸着装置の選定・購入を済ませ,さらに本研究専用の超高真空極低温表面反応実験装置の設計・組み立ての大半を終えていた。本年度はまず装置の組み立てを完成させ,真空度計測装置や温度モニター,加熱用ヒーター用の電気系統の配線をおこない,さらに原子源および蒸着装置の水冷用の水回りの整備をおこない,装置を起動できるまでに至った。もっとも単純なアミノ酸であるグリシン50mgを蒸着装置の石英サンプルホルダーに入れ,蒸着装置を実験装置に取り付けて真空引きした。一晩以上真空で放置し,アミノ酸に吸着している可能性がある水などを除去した。蒸着装置先端を反応基板の表面からからおよそ1.5cmの位置に固定し,160°Cに加熱した。160°Cに到達後,蒸着装置先端のシャッターを開け,12Kに冷却した反応基板上にグリシンを蒸着させた。赤外分光光度計による分析で,グリシンが実際に反応基板に蒸着されていることを確認した。得られたスペクトルは,同様の方法で蒸着されたグリシンのものと,よく一致した。グリシン蒸着量を正確に見積もることは現時点で容易でないが,先行研究と比較すると,厚さ数ミクロンの薄膜だと考えられる。続いて,作製したグリシン薄膜(12K)に原子源で作製した重水素原子を4時間照射した。照射開始後30分程度で照射前の赤外吸収スペクトルには見られなかった領域に吸収バンドが成長し,これらが重水素置換体に由来するものだと判断した。本研究結果は,グリシンが星間分子雲における極低温固体表面反応で重水素濃集可能であることを強く示唆するものである。さらに炭素質隕石中グリシンが重水素に富むことと調和的であり,星間塵表面反応が隕石有機物の重水素濃集の要因の一つとなる可能性を初めて示すことができた。所属研究室の事情により実験室レイアウトを大幅に変更し,装置の移動とその後の装置の立ち上げに数か月を要したため。また,実験室の循環水設備の不良により実験室が浸水し,その復旧が順調に進まなかったことも大きな要因である。25年度が最終年度であるため、記入しない。実験計画に従って研究を行う。予定よりやや遅れた現状をふまえ,実験前に実験条件を吟味し,効率よく成果をあげることを目指す。
口腔の健康から健康長寿をめぐる性差パラドックスの解明を目指す研究

2019年度は、福岡県久山町の生活習慣病予防健診で久山町住民を対象に歯科健診を791人に対して実施した。また、次年度以降に口腔の状態と終末糖化産物の変化の関係における性差を評価するにあたり、今年度は、過去の歯科健診データ(20092011年)を用いて口腔の状態に性差が認められるかを調べた。久山町の歯科健診では2009年は50歳代、2010年は60歳代、2011年は70歳代を主に対象としているために、各年度つまり各年代の歯数および歯周組織状態の性差を調べた。50歳代(男性207人、女性328人)では、28歯以上ある者の割合が男性41.1%、女性32.0%(p=0.060)で、女性のほうが喪失歯を保有している傾向があった。歯周組織状態では、平均アタッチメントレベル(AL)が男性は2.70±1.11mm、女性は2.21±0.69mm(p<0.001)で、女性のほうが平均ALは低かった。また、60歳代(男性319人、女性336人)では、28歯以上ある者の割合が男性31.0%、女性21.1%、9歯以下の者は男性が21.9%、女性19.0%(p<0.001)で、女性のほうが少数歯を喪失している者が多い一方で、多数歯を喪失している者が少なかった。歯周組織状態では、平均ALが男性は2.81±1.04mm、女性は2.38±0.83mm(p<0.001)で、女性のほうが平均ALは低かった。70歳代(男性201人、女性224人)では、現在歯数に性差は認められず(p=0.452)、歯周組織状態では平均ALが男性は2.58±0.92mm、女性は2.32±0.75mm(p=0.024)で、女性のほうが平均ALは低かった。どの年代でも女性のほうが歯周組織状態は良好である傾向が認められた。歯数に関しては、50、60歳代で女性のほうが少数歯欠損の者は多く、60歳代では男性のほうが多数歯欠損が多かった。当初の計画どおり、歯科健診の実施と血漿試料を採取した。また、グリセルアルデヒド由来の終末糖化産物を測定するための準備を進めている。次年度は、歯科健診の実施と血漿試料を採取し、過去の血漿試料を用いてグリセルアルデヒド由来の終末糖化産物を測定する予定である。今年度グリセルアルデヒド由来の終末糖化産物を測定する予定であったが、測定しなかったため、次年度測定する。
神経幹細胞の上皮構造再生能の経時変化メカニズムと複雑脳形成における役割

本研究では、(1)マウスを用いて、我々が新たに発見した神経幹細胞の持つ上皮構造再生能とその経時変化のメカニズムを解明し、(2)複雑脳を持つフェレットをモデル系として、複雑能の幹細胞も対称分裂期には高い上皮再生能を持つこと、さらにこの再生能が神経産生期に減衰することが新しい幹細胞帯の形成に必須であるという仮説を検証する。
部位特異的変異導入によるサーモライシンの機能改変とペプチド合成への応用

これまでの報告から,サーモライシン(TLN)の活性を向上させる変異はLeu144→Ser(A1),Asp150→Glu(A2),Ile168→Ala(A3)であり,熱安定性を向上させる変異はSer53→Asp(S1),Leu155→Ala(S2),Gly8→Cys/Asn60→Cys/Ser65→Pro(S3)である.これらの変異の組合わせによる活性と熱安定性への効果を調べた。その結果,活性を向上させる変異であるA1とA2を組合わせたとき活性が最も向上した[N-carbobenzoxy-L-aspartyl-L-phenylalanine methyl ester(ZDFM)加水分解のkcat/kmは野生型酵素の10.5倍].一方,A1とA3を組合わせると活性が消失した。熱安定性を向上させる変異であるS1とS2を組合わせたとき熱安定性が最も向上した[80°Cで熱失活の一次反応速度定数(kobs)は野生型酵素の10%].一方,S1とS3を組合わせると熱安定性が向上しなかった。さらに,A1,A2,S1を組合わせると活性と熱安定性がともに向上した(ZDFM加水分解のkcat/kmは野生型酵素の10.2倍,kobsは野生型酵素の60%).すなわち,変異の組合わせにより,活性と熱安定性がともに向上した変異型TLN(L144S/D150E/S53D)が取得された。一方,A1,A2,S1,S2,あるいはA1,A2,S2を組合わせると活性が消失した。A1とS2の組合わせは活性を消失させることが示唆された。また,TLNは加水分解の逆反応を利用して人工甘味剤アスパルテームの前駆体であるZDFMの合成に応用されてきた.活性が向上した変異型酵素によるZDFM合成反応を解析した.その結果,これらの変異型TLNは野生型酵素よりもZDFM合成反応を効率的に進めることができると考えられた。従来の組換えサーモライシン生産法では,自己触媒的な切断の活性が低下あるいは消失した活性部位の変異型酵素は生産されない.よって,N末端にpelBリーダー配列を含むTLNの成熟型配列とサーモライシンのプレプロ配列をnpr遺伝子のプロモーター配列の支配下に共発現させることにより,自己触媒的な切断を必要としない新規の組換えサーモライシン生産法を構築した.新規の方法では,従来の方法では生産されなかった活性部位の変異型酵素が生産された.これまでの報告から,サーモライシン(TLN)の活性を向上させる変異はLeu144→Ser(A1),Asp150→Glu(A2),Ile168→Ala(A3)であり,熱安定性を向上させる変異はSer53→Asp(S1),Leu155→Ala(S2),Gly8→Cys/Asn60→Cys/Ser65→Pro(S3)である.これらの変異の組合わせによる活性と熱安定性への効果を調べた。
鉱さいを活用した持続的かつ環境にやさしい水稲生産技術の開発

本研究では,鉱さいを原料とする含鉄資材を用いて,環境保全効果としての水田からの温室効果ガス(メタン)の放出抑制と水稲生産性の向上を調和的に達成する水稲生産技術の開発を行った。鉱さい資材の主成分である酸化鉄(合成品)とケイ酸(シリカゲル)が水稲生育とメタン放出量に対する効果を稲わら施用条件のポット試験によって検討した。還元発達が中庸な土壌では酸化鉄は硫化水素害を緩和し,またケイ酸添加はケイ酸供給により水稲収量を向上させた。メタン放出量は酸化鉄添加によって抑制されたが,ケイ酸添加の全メタン放出量に対する効果は判然としなかった。易還元性酸化鉄量および易分解性有機物量が異なる沖積土および黒ボク土(各3土壌)を用いたワク試験によって,稲わら施用(500g/m^2)条件で含鉄資材(マンガン鉱さい,1kg/m^2)の効果を圃場条件で検討した。含鉄資材区の玄米収量は,資材のケイ素供給およびアルカリ効果による土壌窒素無機化促進によって213%増加した。しかし,供試含鉄資材はその酸化鉄の還元抑制効果が低く,pH上昇による有機物分解促進によってメタン放出量を低下させることはできなかった。また,多くの市販含鉄資材(10資材)は,易還元性鉄供給能よりもpH上昇効果が大きいためにメタン生成量を抑制できないことが明らかとなった(湛水培養(30°C,28日間)の結果)。そこで,含鉄資材のpH上昇効果を低下させ,かつ酸化鉄の易還元性を高めるために,塩酸処理(pH6まで中和)を行い,その改良した含鉄資材の効果を圃場条件で明らかにした。3種のオリジナルの市販含鉄資材は,pH上昇による窒素無機化促進とケイ酸供給によって水稲収量を向上させたが,pH上昇によってメタン放出量を1837%増加させた。一方,3種の改良含鉄資材は,対照区に比べて水稲の玄米収量を3446%増加させ,かつ2つの改良した資材はpHを上昇させず,土壌の易還元性酸化鉄を増加させることにより,メタン放出量を1041%減少させた。改良した含鉄資材は,ケイ酸,酸化鉄,塩基,微量要素の供給といった総合的な土壌改良効果により水稲生産性の持続性を高め,かつ水田からのメタン放出量を減少させることができることを明らかにした。本年度は,鉱さい肥料の主成分である酸化鉄とケイ酸が水稲生育とメタン放出量に対する効果を検討した.主な着眼点は,酸化鉄添加は水稲生育を向上させるか?,ケイ酸添加はメタン放出量を低下させるか?,これらの効果は土壌特性によって変動するか?,である.川渡土壌(黒ボク土)は酸化鉄が少なく,大潟土壌(沖積土)は易分解性有機物が多いために,メタン生成能が高い.色麻1土壌(黒ボク土)と色麻2土壌(沖積土)は酸化鉄が多く,メタン生成能は低い.このように酸化鉄含量およびメタン生成能の異なる4土壌に非晶質酸化鉄(実験室で合成)

またはシリカゲル(市販品)を施用基準に従って、それぞれ14.3gFe_2O_3/pot(2.5kg dry soil),1.41g/potを混合施用した.さらに,充分量のN,P_2O_5,K_2O(各1g/pot)と標準量の稲わら(10g/pot)を施用し,野外での水稲栽培条件でメタンフラックスと水稲の籾重を資材無施用区と比較した.水稲収量(籾重):酸化鉄処理によって土壌が強還兀状態となる大潟土壌では低下し,還元が中庸な色麻2土壌では増加した.酸化鉄添加は強還元土壌では2価鉄生成が非常に多くなり,水稲に鉄過剰を生じさせたと考えられる,還元発達が中庸な土壌では酸化鉄は還元環境で生成する硫化水素の障害を緩和する可能性があることが示唆された.ケイ酸処理によって水稲のケイ酸含量が高まり,4土壌において籾重が増加した,ケイ酸処理は稲の光合成能を向上させたと考えられる.メタン放出量:酸化鉄処理は土壌における還元の進行を抑制し,いずれの土壌においてもメタン放出量を低下させた(平均で18%)、ケイ酸処理は水稲根の活力が高い最高分げつ期のメタンフラックスを4土壌で低下させた.ケイ酸は水稲根の酸化能を向上させ,根圏におけるメタンの酸化分解を促進した可能性がある.以上の結果より酸化鉄,ケイ酸を含む鉄鋼スラグがメタン放出量を抑制し,水稲生育を向上させる可能性が示唆されたが,ポット試験での評価には限界があり,圃場条件での検討が必要と考えられた.本年度は,鉱さい資材のメタン放出および水稲収量に対する効果を圃場条件と室内培養で検討した。1)圃場条件での鉱さい鉄資材の効果の判定供試した沖積土,黒ボク土(各3土壌)の易還元性酸化鉄(酸性シュウ酸塩可溶鉄)および易分解性有機物(300°C、28日間の無機化窒素)の含量は2.120.3gFe/kg、26220mgN/kgと大きく異なった。この枠試験区(作土15cm、27.5cm×27.5cmの枠)を東北大学大学院農学研究科附属農場に設定し、稲わらを添加(500g/m^2)し、鉄資材(マンガン鉱さい、1kg/m^2よびケイ酸資材(シリカゲル、60g/m^2施用した。無処理と比較して鉄資材、シリカゲル処理は、メタン放出量を有意に低下させなかった。水稲の玄米収量は無処理の102113%(鉄資材区)、99116%(シリカゲル区)を示した。鉱さいのケイ素供給およびアルカリ効果による土壌窒素無機化促進は水稲生産性を向上させた。しかし、供試した鉄資材においては酸化鉄添加による還元抑制効果がアルカリ効果による有機物分解促進効果によって打ち消され、シリカゲル添加はメタンの根圏での酸化(水稲根による酸化)を実質的には上昇させなかったと解釈された。2.土壌インキュベーション法による多様な鉱さい鉄資材のメタン生成抑制効果の検討鉱さい鉄資材(市販品11資材)はアルカリ性を示し、湛水培養条件(300°C、28日間)での易還元性鉄供給能は、全く無いものから高いものまで変異が大きかった。シリカゲルはメタン生成に全く影響しなかった。生成した二酸化炭素に対するメタンの比は、二価鉄生成量と有意な負の相関を示し、無処理土壌に比較してすべての鉱さい鉄資材の添加によって有意に低下した。鉱さい鉄資材は土壌のアルカリ性化による有機物の分解促進と酸化鉄供給によるメタン生成抑制のバランスによって、メタン生成抑制効果が決定されることを明らかにした。酸化鉄供給が高い中性資材の開発が必要と考えられた。含鉄資材のメタン放出量に対する影響を圃場試験および培養試験によって調査したこれまでの結果より,すべての種類の市販含鉄資材はメタン放出量を低下させないことが明らかとなった。
高延性接着剤の繰返し粘塑性挙動のモデル化と接着接合金属板プレス成形解析への適用

高延性接着剤を用いて接合した金属板のプレス成形加工時に生じる被着体の曲げ・曲げ戻し変形による接着層の繰返しせん断変形に注目し、主として次のことを行った。高延性接着剤の繰返し粘塑性挙動把握実験を行い、その挙動を表現できる構成モデルを構築した。得られた構成式を汎用有限要素解析プログラムのユーザーサブルーチンに組み込んだ。接着板の引張り曲げ・曲げ戻し及びプレス成形加工(V曲げ加工:加圧曲げ)の各種実験及び解析を行った。平成22年度の研究は、1.突合せ継手を用いた繰返しねじり実験、2.高延性接着剤の繰返し粘塑性構成式の構築、3.汎用有限要素解析プログラム用ユーザーサブルーチンの基本枠組みの作成に大別される。それぞれについての主な成果は以下のとおりである。1.突合せ継手を用いた繰返しねじり実験高延性接着剤の繰返し粘塑性挙動を把握するために、突合せ継手を用いた繰返しねじり実験を行い、せん断応力-せん断ひずみ関係を測定した。その結果、接着剤は繰返し加工軟化を示し、その後一方向に変形を与えると単純ねじり試験結果に収束した。また、速度の増大に伴い、顕著なバウシンガー効果およびせん断応力の急増(逆反り)が見られた。2.高延性接着剤の繰返し粘塑性構成式の構築実験結果をもとに、高延性接着剤の繰返しせん断応力-せん断ひずみ曲線の特徴を表現できる応力-ひずみ構成式を構築した。構成式の基本的な枠組みとしては、超過応力モデルを用いた。得られた繰返し粘塑性構成式により、各せん断ひずみ速度についての繰返し加工軟化を比較的精度良く表現できた。逆反り開始のせん断ひずみの変化についてはもう少し検討する必要がある。3.汎用有限要素解析プログラム用ユーザーサブルーチンの基本枠組みの作成平成23年度以降の研究において、接着板の曲げ・曲げ戻し解析を現有の汎用有限要素解析プログラムMSC.Marc 2010を用いて行うが、その際、接着剤の温度・速度依存特性を考慮した繰返し粘塑性構成式をMSC.Marc 2010のユーザーサブルーチンとして作成し組み込む必要がある。本年度は、繰返し粘塑性構成式を組み込むためのユーザーサブルーチンの基本枠組みを検討した。平成23年度の研究の、主な成果は以下のとおりである。1.接着板の曲げ・曲げ戻し実験昨年度の研究により得られた接着剤の繰返し粘塑性構成式の妥当性を検証するために、引張試験機を用いた接着板の曲げ・曲げ戻し実験装置を作成し実験を行った。その結果、次のことがわかった。(1)作成した実験装置を用いて、接着層の曲げ・曲げ戻し変形挙動を観察できた。(2)被着体の強度特性が接着層の変形挙動に大きく関係する。2.汎用有限要素解析プログラムへの構成式の組込み昨年度の研究により得られた接着剤構成式のMSC.Marc 2010のユーザーサブルーチンへの組込みを行っているが、まだ完全な組込みができていない。(次年度も継続して行う)3.接着板の曲げ・曲げ戻し解析MSC.Marc 2010への接着剤の繰返し粘塑性構成式の組込みが完了していないことから、既に構築済みの温度・速度依存特性を考慮した多軸粘塑性構成式を、MSC.Marc 2010の強度特性入力用のTable機能を用いて使用し解析を行った。その結果、解析精度には検討の余地があるものの、曲げ・曲げ戻し変形挙動のシミュレーションができた。4.接着板のプレス成形加工(その1)接着板のプレス成形加工その1として、異種材料接着板のV曲げ加工(自由曲げ)に及ぼす速度と温度の影響について、実験とMSC.Marc 2010を用いたFEM解析(接着剤の強度特性は、上記3の場合と同じ)により調べた。(1)異種材料接着板のV曲げ加工も、低温環境かつ高速で行うことが望ましい。(2)曲げの内側に引張強さの大きい材料、外側に引張強さの小さい材料を用いると、その逆の組み合わせで曲げた場合に比べて接着板に生じるカモメ折れやせん断ひずみを小さく抑えることができる。ただし、その違いは僅かである。(3)接着層のずれ変形が大きくなる程、実験結果と解析結果の違いが大きくなる。平成24年度の研究の主な成果は、以下のとおりである。1.汎用有限要素解析プログラムへの構成式の組込み:高延性アクリル系接着材の速度・温度依存特性を考慮した繰返し粘塑性構成式を、複素数階微分法を用いて汎用有限要素解析プログラムMSC.Marc2010のユーザーサブルーチンに組込んだ。2.構成式を組み込んだMSC.Marc2010を用いた各種解析:接着板の繰返し曲げ・曲げ戻し解析、プレス成形加工解析(V曲げ:加圧曲げ)を行った。その結果、接着板の変形及び接着層のせん断変形挙動を定性的には表せることがわかった。

しかし、解析精度は十分でなく、このことについては今後さらに検討していく必要がある。3.接着層厚さの違いによる影響:接着接合板を用いた曲げ加工に関する一連の研究として、接着層厚さの違いによる影響について検討した。その結果、接着層の厚さが厚くなるほど接着板に生じる成形不良(カモメ折れ)は大きくなるが、接着層に生じるせん断ひずみは逆に小さくなることがわかった。4.研究の総括:本研究で得られた内容を総括すると次のようになる。1高延性接着剤の繰返し粘塑性構成式を構築できた。2得られた構成式を複素数階微分法を用いて汎用有限要素法プログラムMSC.Marc2010のユーザーサブルーチンに組込んだ。3新たに提案した構成式の妥当性を検証するために、接着板の曲げ・曲げ戻し実験・加圧曲げ(V曲げ)実験及びそれらの解析を行った。4解析結果は、各種実験における接着板の変形及び接着層のせん断変形挙動を定性的には表せることがわかった。しかし、解析精度は十分ではなく、今後さらに研究を進めていく必要がある。昨年度の研究により得られた接着剤の繰返し粘塑性構成式のMSC.Marc 2010のユーザーサブルーチンへの組込みを行っているが、まだ完全な組込みができていないため。24年度が最終年度であるため、記入しない。昨年度の課題を踏まえて、本年度の研究は次のように進めていく。1.まず、平成22年度の研究により得られた接着剤の繰返し粘塑性構成式を、汎用有限要素解析プログラムMSC.Marc 2010のユーザーサブルーチンへ早急に組込む。2.接着板の繰返し曲げ・曲げ戻し実験及び解析を行い、構成式の妥当性を検証する。3.接着板のプレス成形加工実験及び解析を行い、高精度な製品形状予測の確立を目指す。4.研究の総括を行う。
高血圧ラットにおける血管原性脳浮腫の研究

ラット脳より内皮細胞,ペリサイト,アストロサイトを分離し,共培養して血液脳関門(BBB)in vitro modelを作成した.advanced glycation endoproducts (AGEs)により増強される低酸素化再酸素化負荷と血管原性脳浮腫の実験を行った.さらに低酸素化再酸素化に対しcilostazolがBBBに与える影響について検討した.AGEsはnormoxiaの条件下ではTEERに影響を与えなかったが,低酸素化再酸素化では有意ににTEERを減少させた.一方,cilostazolはAGEs投与下のH/Rの条件でTEERを回復させた.免疫染色でtight junction蛋白のclaudin-5の形態的評価を行い,western blot analysisでは定量的評価を行った.AGEsは低酸素再酸素化の条件でclaudin-5の発現を減少させたが,cilostazolはclaudin-5の発現を回復させた.さらに,AGEsは細胞外のTGF-β1の産生を上昇させた.cilostazolはその産生を抑制しtight junctionの統合性を回復した.また,同様に作成したBBB in vitromodelを用いて,脳腫瘍(glioblastoma)cell lineのLN-18と肺癌cell lineのNCI-H1299を用いてBBB機能と細胞浸潤について検討した.NCI-H1299はバリアを通過し,BBB機能をLN-18は通過しなかった.fibroblast growth factor 2 (FGF2)はoccludinとZO-1の発現を上昇させ,BBB機能を上昇させた.FGF2の中和抗体を投与するとその効果は抑制された.BBBと細胞浸潤および脳転移についての病態解明に発展する可能性がある.ラット脳より内皮細胞,ペリサイト,アストロサイトを分離し,共培養して血液脳関門(BBB)in vitro modelを作成した.モデルではtight junction機能の指標である電気抵抗値(TEER)が100オーム以上あり,適切に作成されたものと評価された.advanced glycation endoproducts (AGEs)により増強される低酸素化再酸素化負荷と血管原性脳浮腫の実験を行った.さらに低酸素化再酸素化に対しcilostazolがBBBに与える影響について検討した.AGEsはnormoxiaの条件下ではTEERに影響を与えなかったが,低酸素化再酸素化では有意ににTEERを減少させた.一方,cilostazolはAGEs投与下のH/Rの条件でTEERを回復させた.免疫染色でtight junction蛋白のclaudin-5の形態的評価を行い,western blot analysisでは定量的評価を行った.AGEsは低酸素再酸素化の条件でclaudin-5の発現を減少させたが,cilostazolはclaudin-5の発現を回復させた.さらに,AGEsは細胞外のTGF-β1の産生を上昇させた.cilostazolはその産生を抑制しtight junctionの統合性を回復した.学術誌に発表した(Mol Cell Neurosci. 2014 in press).内皮細胞、ペリサイト、アストロサイトにて構成されたin vitro BBB modelを用いてadvanced glycationendoproducts (AGEs)により増強される脳虚血再灌流障害と血管原性脳浮腫の実験を行った。そして、この虚血再灌流障害に対しcilostazolが血液脳関門(BBB)に与える影響について検討した。AGEs投与の下、normoxiaやHypoxia/Reperfusion(H/R)の条件下で実験を行った。AGEsはnormoxiaの条件下ではタイトジャンクション機能の指標である電気抵抗値(TEER)に影響を与えなかったが、H/Rの条件では明らかにTEERを減少させた。一方、cilostazolはAGEs投与下のH/Rの条件でTEERを回復させた。免疫染色やwestern bolt analysisでは、AGEsはH/Rの条件でtight junction蛋白で主に機能しているclaudin-5の発現を減少させたが、cilostazolはclaudin-5の発現を回復させた。さらに、AGEsは細胞外のTGF-β1の産生を上昇させたが、cilostazolはその産生を抑制しtight junctionの統合性を回復した。また,同様に作成したBBB in vitroモデルを用いて,グリオーマが周囲脳に対してfibroblast growth factor 2を介してZO-1の発現が上昇し,BBB機能が高まることを明らかにした.これまでの研究で血液脳関門の低酸素化再酸素化障害の一部が明らかになった.既に学会で発表し,論文投稿に至っている.(理由)ラット脳から毛細血管内皮細胞,ペリサイト,アストロサイトを分離,培養でき,血液脳関門モデルを作成,実験を行えている.バリア機能の評価,tight junction蛋白の評価も電気抵抗や免疫染色を用いて評価できている.また,脳腫瘍における血液脳関門機能の評価にも発展している.腫瘍細胞の血液脳関門に対する作用を検討することで,腫瘍細胞の浸潤,転移のメカニズムを解明できる可能があり,研究を発展させている.今後は現在の血液脳関門モデル作成を継続し,分子生物学に評価し,細胞内情報伝達の機序や血液脳関門の保護作用がある薬剤などについて検討する予定である.昨年度と同様に実験動物,分子生物学的解析試薬,論文制作,学会参加などに使用予定である.研究費は血液脳関門モデル作成のための実験動物(ラット)の購入,細胞分離試薬(酵素など)の購入,分子生物学試薬(免疫染色用抗体,蛋白電気泳動用抗体など),施設使用料に使用する予定である.
新しいベクトル磁気センサーによる原子炉用蒸気伝熱管の極微小亀裂探査並びに疲労推定

1.新しい磁気ベクトルセンサーの性能評価実験行い,以下の点が明らかとなった。(1)微小欠陥亀裂の影響による外部漏れ磁束は,従来の垂直成分より水平成分の方が顕著であり,測定のS/N比も大きいことが判明した。(2)ベクトル測定により,ベクトルの空間位相差角から欠陥探査情報を得られる。2.欠陥探査のための外部からの印加磁界方法の検討結果から(1)回転磁界の印加により,欠陥探査のための情報が,探知磁界ベクトルの大きさ及び方向のみならず,それが形成するベクトル軌跡の軸比,傾き角の顕著な差異が発見された。(2)移動磁界の印加により,広範囲な磁界下で局所的な探査が可能となった。これを,移動磁界型磁気センサーと名付けた。(3)直流磁界と交流磁界の偏磁磁界を印加した結果,従来より深いところに位置する欠陥の探査の可能性を捉え,今後の新しい磁気センサーの開発の手がかりを得た。以上の結果から,本研究による新しい磁気ベクトルセンサーは広範囲において応用可能で,かつ従来のスカラー型センサーに比べて高性能であることが実証された。さらに,このベクトル型センサーを発展させた回転磁束型バルクハウゼン磁気センサーの新たな開発により,回転バルクハウゼンノイズを測定し,その波形解析並びにフラクタル解析により,原子炉用蒸気伝熱管インコネル材のくびれ部分における疲労の推定を行い,実験室内においてそれが可能であることが確認された。ただ問題点として,高感度な回転バルクハウゼンノイズセンサーの開発が必要で,そのために微小加工技術のもと材料評価が課題として挙げられる。3.回転磁界下の回転バルクハウゼンノイズによる疲労推定事件の結果から,(1)ノイズ波形の分析からクロス量より,パワー値に顕著な変化が見られ,フラクタル性が見られた。(2)従来の交番磁界下のバルクハウゼンノイズと異なり,連続したノイズ帯で現象が異なり,そのエネルギー値は従来のそれより上回ることが明らかとなった。
子宮頚癌における新しい診断及び治療法の確立

1. HPV16型E7による細胞形態変化の分子機構:E7蛋白にはRBと結合するポケットドメイン及びC-junと結合するC未領域が存在し、E7蛋白により示される生物学的機能に重要な役割を担っている。Rbとの結合にはポケット領域中の24番目のシスチンがまたc-junとの結合には94番目のシスチンの存在が必須である。このため、シスチンをグリシンに置換したC24G及びC91GE7変異体を作成した。野生型E7とともにE7変異遺伝子をRat1A細胞へ遺伝子導入しSMα-アクチン発現変化をウエスタンブロット法により解析した。C24GE7変異体の導入によりSMα-アクチンは野生型E7導入と同様に顕著に抑制された。しかしC91G変異体の導入によってはSMα-アクチン発現の抑制は全く観察されなかった。MyoDはAP1と結合し、AP1依存性に発現が抑制される。このため、野生型E7、C24G変異体及びC91G変異体を導入したRat1A細胞においてMyoDの発現レベルを解析した。その結果野生型E7及びC24GE変異体はMyoDの発現を抑制するが、C91G変異体はMyoD発現を抑制しないことが判明した。このため、E7はc-junと結合することにより、MyoD-c-jun結合を阻害し、SMα-アクチンの転写抑制能を有することが明らかとなった。2. HPV E6/E7を用いた子宮頚癌の進行期診断:HPV E6/E7遺伝子領域をPCRで増幅することによりリンパ節転移の有無を診断しその臨床的有用性を評価した。子宮頚癌64サンプルの原発巣からDNAを抽出し、コンセンサスプライマーを用いたPCR法を行った。臨床病理学的診断では10/64症例でリンパ節転移(+)、54/64症例でリンパ節転移(-)であった。病理学的にリンパ節転移陽性症例では全例PCR-サザン法によるリンパ節におけるHPV16型ゲノムの存在が確認された。一方、病理学的にリンパ節転移(-)54症例中45例にPCR-サザン法でHPV16型ゲノムの存在が確認された。PCR-サザン法を用いたリンパ節転移診断が非常に高感度であることが示された。今後の45症例の臨床的予後を追跡調査する予定である。3. AS新素材の開発:AS核酸配列に依存的な標的蛋白の発現抑制及び細胞増殖抑制の普遍性を獲得するため、ASの高機能化を企てた。ソラーレンは特定波長(365nm)の紫外線の存在下で、DNA或いはRNAに強固な架橋を形成することが知られている。このため、核酸塩基特異的に標的遺伝子を識別し、さらにソラーレンによる強固なDNA-RNA結合体形成を期待し、ソラーレン結合型AS(PS-AS)を作成した。本研究ではHPV16、18型E6遺伝子蛋白翻訳開始領域に対し3種類のPS-ASを作成した(PS・P・1・HPV18、PS・k・3・HPV16、PS・k・4・HPV16、さらにP1のスクランブル配列を有するPS・1scr)。(1)紫外線照射により塩基配列依存的にPS・P・1は機能していること、(2)C4II細胞にはPS・K・3及びPS・K・4が認識する内因性mRNAが転写されていること、(3)SiHa細胞がコードするHPV16E6mRNA中のPS・K・4標的部位は未知の現象によりPS・ASとの結合が阻害されていることが判明した。PS・ASは0.5μM濃度から頚癌細胞増殖抑制効果を示したためホスホロチオエート型と比較し80倍以上の高機能化が示された。しかしヒト正常ケラチノサイトの増殖は0.5μM PS・ASの投与及び紫外線照射により全く影響を受けず、無処理のそれとほぼ同様の細胞増殖が示された。このため、正常細胞へのPS・AS投与は非特異的細胞毒性とならず、PS・ASを用いた子宮頚癌治療の臨床応用への道を拓くものと示唆された。

このため、E7はc-junと結合することにより、MyoD-c-jun結合を阻害し、SMα-アクチンの転写抑制能を有することが明らかとなった。2. HPV E6/E7を用いた子宮頚癌の進行期診断:HPV E6/E7遺伝子領域をPCRで増幅することによりリンパ節転移の有無を診断しその臨床的有用性を評価した。子宮頚癌64サンプルの原発巣からDNAを抽出し、コンセンサスプライマーを用いたPCR法を行った。臨床病理学的診断では10/64症例でリンパ節転移(+)、54/64症例でリンパ節転移(-)であった。病理学的にリンパ節転移陽性症例では全例PCR-サザン法によるリンパ節におけるHPV16型ゲノムの存在が確認された。一方、病理学的にリンパ節転移(-)54症例中45例にPCR-サザン法でHPV16型ゲノムの存在が確認された。PCR-サザン法を用いたリンパ節転移診断が非常に高感度であることが示された。今後の45症例の臨床的予後を追跡調査する予定である。3. AS新素材の開発:AS核酸配列に依存的な標的蛋白の発現抑制及び細胞増殖抑制の普遍性を獲得するため、ASの高機能化を企てた。ソラーレンは特定波長(365nm)の紫外線の存在下で、DNA或いはRNAに強固な架橋を形成することが知られている。このため、核酸塩基特異的に標的遺伝子を識別し、さらにソラーレンによる強固なDNA-RNA結合体形成を期待し、ソラーレン結合型AS(PS-AS)を作成した。本研究ではHPV16、18型E6遺伝子蛋白翻訳開始領域に対し3種類のPS-ASを作成した(PS・P・1・HPV18、PS・k・3・HPV16、PS・k・4・HPV16、さらにP1のスクランブル配列を有するPS・1scr)。(1)紫外線照射により塩基配列依存的にPS・P・1は機能していること、(2)C4II細胞にはPS・K・3及びPS・K・4が認識する内因性mRNAが転写されていること、(3)SiHa細胞がコードするHPV16E6mRNA中のPS・K・4標的部位は未知の現象によりPS・ASとの結合が阻害されていることが判明した。PS・ASは0.5μM濃度から頚癌細胞増殖抑制効果を示したためホスホロチオエート型と比較し80倍以上の高機能化が示された。しかしヒト正常ケラチノサイトの増殖は0.5μM PS・ASの投与及び紫外線照射により全く影響を受けず、無処理のそれとほぼ同様の細胞増殖が示された。このため、正常細胞へのPS・AS投与は非特異的細胞毒性とならず、PS・ASを用いた子宮頚癌治療の臨床応用への道を拓くものと示唆された。1.HPVE7遺伝子により転写抑制をうける細胞骨格構築蛋白の同定:ラット線維芽細胞において、E7蛋白はRbと結合し、Rb-bHLH蛋白によるSM-αアクチンの発現抑制に干渉することを明らかにした。Rb-bHLHによるSM-αアクチンの発現誘導は同遺伝子プロモーター領域中のEboxを介して行われることをCATアッセイを用いて確認した。ヒトケラチノサイトでは同様にEbox構造を5'及び3'非翻訳領域に保有するβ-アクチンの転写がE7蛋白により約1/3に抑制され、E7による形態変化の誘導との関連が示唆された。2.HPVゲノムを用いた子宮頚癌の進行度診断:進行子宮頚癌10例を収集し、HPVゲノム検出を行った。同時にリンパ節からDNAを抽出し、原発巣と同様にコンセンサスプライマーを用いたHPVゲノムの検出を行った。その結果通常の病理組織学的検索でリンパ節転移陰性とされた症例に、原発巣と同じタイプのHPVゲノム増幅の認められる例が存在することを確認した。今後これら症例の予後について詳細に検討する予定である。
口腔がん組織マイクロアレイで新規個別化治療バイオマーカーを探索し臨床応用させる

現在までに口腔がん診療において臨床応用されている個別化治療バイオマーカーはない。そこで組織マイクロアレイを用いて候補分子を探索し、実臨床に応用可能なバイオマーカーを発見することを目的に本研究をおこなった。これまでに臨床病理学的データ・予後データを搭載した口腔がん組織マイクロアレイを作成した。アクチン関連タンパク質を網羅的に免疫染色し、個別化治療バイオマーカーとなる可能性がある分子を同定した。続いて組織切片を用いて染色の局在やintratumoral heterogeneityを評価するとともに再現性試験をおこなった。候補分子は腫瘍の浸潤先進部に強く染色することが明らかとなった。さらに候補分子の発現と頸部リンパ節転移との関連が示唆された。年齢、性別といった臨床的因子に加え,病理組織学的因子である脈管浸潤,リンパ管浸潤,Stage,YK分類、組織学的異型度(Grade分類)との関連はみられなかった.一方、候補分子陽性群が陰性群に比べ後発頸部リンパ節転移が有意に多かった(P<0.05, Fisher's exact test)。候補分子と後発頸部リンパ節転移との間に相関がみられた。Kaplan-Meier analysisで候補分子発現陽性群と陰性群の間に全生存率(OS)の有意な差は見られなかった。しかし,無病生存率(DFS)では陽性群で有意な低下がみられた.(P<0.01, log rank test)以上の結果を論文として海外学術雑誌へ投稿した。さらに各アクチン関連タンパク質の発現を組み合わせることでより厳密に予後予測できることが明らかになり学会発表をおこなった。現在までに口腔がんにおいて臨床応用されている個別化治療バイオマーカーはない。セツキシマブといった分子標的薬が現場に浸透し治療法の選択肢は増えたが個別化治療の実現には至っていない。免疫チェックポイント阻害薬の開発、臨床応用も開始されるが費用対効果、患者選択の問題が付き纏う。そこで組織マイクロアレイを用いてハイスループットに新規個別化治療バイオマーカーを探索し臨床応用が可能なバイオマーカーを発見することを目的に研究を開始した。まず、東京都立多摩総合医療センター倫理委員会に研究許可の申請し、口腔がん組織マイクロアレイ作成の許可および患者データ収集の許可を得た。続いて口腔がん患者データベースを構築するために、臨床病理学的データ並びに予後データの収集をおこない東京都立多摩総合医療センター・口腔がん患者データベースを完成させた。その中からデータ欠落のない症例をピックアップし、組織マイクロアレイの作成を開始した。結果、口腔がん89例の組織検体と臨床病理学的データ・予後データを搭載した口腔がん組織マイクロアレイが完成した。今後は口腔癌組織マクロアレイを用いて実際にバイオマーカー探索をおこなう。候補分子のピックアップはすでに開始している。免疫組織化学染色から臨床応用が可能なバイオマーカーを探索をする準備も整った。組織切片による再現性試験も視野にいれ、さらにバイオマーカーの細胞生物学的学意義や機能も解析していく。以上の結果を学会発表、そして論文化し公表していくための環境整備も終了した。研究代表者の所属変更があり、それに併せて倫理委員会の申請、データベースの構築から開始することとなったためやや遅れが生じた。以上のことから組織検体を用いて候補分子の発現を免疫染色で確認することで頸部リンパ節転移を来しやすい高悪性度口腔がんをスクリーニングできる可能性がある。口腔がん組織マイクロアレイを作成しアクチン関連タンパク質を網羅的に免疫染色しハイスループットにスクリーニングをすることで、個別化治療バイオマーカーの候補となる分子を同定できた。さらに組織切片を用いて染色性を確認するとともに臨床病理学的因子・予後との関連を統計学的に検討することができた。

候補分子と後発頸部リンパ節転移との間に相関がみられた。Kaplan-Meier analysisで候補分子発現陽性群と陰性群の間に全生存率(OS)の有意な差は見られなかった。しかし,無病生存率(DFS)では陽性群で有意な低下がみられた.(P<0.01, log rank test)以上の結果を論文として海外学術雑誌へ投稿した。さらに各アクチン関連タンパク質の発現を組み合わせることでより厳密に予後予測できることが明らかになり学会発表をおこなった。口腔がん組織マイクロアレイは既に完成しているため、バイオマーカーとなりえる候補分子をピックアップし免疫染色を開始する。さらに学会発表・論文化し研究結果を公表していく予定である。候補となる個別化治療バイオマーカーを用いて後方視的に検討し、高悪性度口腔癌の診断や予後との関連をさらに検討し、臨床応用への発展を試みる。組織マイクロアレイの作成は済んでいるがまだ納入されていないため支払いが生じてない。予定していた免疫組織化学染色の費用も発生していない。研究成果の学会発表時における旅費や論文作成時の校正費、投稿費として充てる予定である。今後予定している免疫染色が終了し納入された時点で支払いが生じる。さらに学会参加や論文投稿費用に充てる予定である。
生息地予測解析を用いた底生生物の底質環境指標開発

本申請課題では、瀬戸内海を対象として、個人研究では到底収集できない海域全体のベントスとその生息環境の情報を環境省が実施した延べ1,200地点以上のマクロデータから解析する。これまで特定の希少種の分布推定に利用されてきた生息地予測解析(Maxent model)を瀬戸内海に出現する主要50種に適用し、結果を生息環境に基づき類型化していく。そして実際の調査で個々のベントスが検出されたかどうかに関わらず、生息環境に基づいてベントスの生息可能海域をマッピングすると同時に、人間活動に伴う有機堆積物の増加や泥化、あるいは富栄養化の改善に伴う底質改善がベントスの生息可能海域をどう変化させるかを解析する。
可微分多様体の研究

本研究補助金により、研究実施計画に基づいて得られた成果をのべる。1.微分幾何学的成果:剱持勝衛は4次元ユークリッド空間内の曲面について研究し、そのガウス写像と平均曲率ベクトル場との関係を明らかにして一般化されたワイエルシュトラウスの表現定理ともいうべきものを得た。又剱持は1986年7月から10月にかけてブルガリヤ,ブラジルに招聘され総合講演や共同研究を行なった。陶山芳彦は、難解な幾何学的測度論を駆使して、ある種のコンパクトなリーマン多様体の中への写像のホモトピー類の中に面積最小な超曲面の存在することを証明した。浦川肇は、精力的に研究を行なって多数の結果をえた;主なものとして、(1)正曲率等質空間上のラプラス作用素の第1固有値の決定,(2)単連結コンパクト単純リー群のある領域に関するジリクレ問題のスペクトルの決定,(3)調和写像の安定性に関する総合的な研究,特に種々の調和写像の指数と退化次数の決定,(4)リッチテンソルにある条件のつくリーマン多様体上の主バンドルで考えるヤン・ミル場の指数と退化次数の評価がある。押切源一は、全測地的葉層構造とキリングベクトル場との関係を研究し、以前に余次元1の場合に得た結果を余次元が2以上の場合に拡張した。2.位相幾何学的成果:麻生透は、コンパクト3次元多様体上の滑らかなSL(2。C)-作用について研究し、【S^3】の場合に完全な分類を実行した。3.代数学的成果:内田興二は、類数1をもつ【2^m】次の虚アーベル数体について顕著な成果をえて、昨年日本で行われた整数論に関する国際会議で発表した。中村哲男は、Witt環上の1次元形式群の位数【P^n】の部分群の生成するガロア拡大とそのガロア群を扱い、ある種の形式群について、その拡大を具体的に述べ、又そのガロア群の形を求めた。今井秀雄は、ある種のアーベル多様体のP-進的高さについて研究した。