hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
歴史的集落・町並みの保存・継承を担う次世代育成プログラムの開発に関する研究

1)ローテンブルク市役所を訪問し、歴史的町並み・建造物の保全・保存に関する法制度、具体的取組、組織、建築規制、学校教育における町並み学習等について担当者から聞き取りを行った。また城壁内市街地に残る旧ユダヤ人街の住居の保存・再生に取り組むNPO法人の活動内容や建物保存状況の現地調査を実施した。2)学校や地域での町並み学習教材として、平成29年度に国の重要伝統的建造物群保存地区に選定された大分県杵築市を対象に、大分県指定有形文化財「大原邸」をモデルにしたペーパークラフトを開発した。これより、身近な歴史的建造物を教材とした町並み学習の展開が可能となった。3)町並み保存の次世代育成の取組として、新たに「きつき子ども歴史ガイド」(大分県杵築市)や大分県内他地域における同様の実践例を収集した。子どもガイドの育成には多様なスタイルがありうることが明らかとなった。4)科研費で開発したペーパークラフトを活用した住まい学習の授業実践例を収集した(山梨県A高校ほか)。5)平成30年3月に全国の重要伝統的建造物群保存地区117ヶ所を対象に実施した学校アンケートの結果を集計・分析し、学校教育の場を活用した多様な町並み学習の実践状況を把握した。また佐賀県鹿島市等を対象にモデル的な学校での町並み学習の取組内容や教材収集を継続した。以上のほか、3年間の研究実施期間全体を通じた研究成果として、伝建地区等の歴史的集落・町並み保存のための次世代育成の取組を全国規模で明らかにし、同時にモデル地区において詳細に把握すると共に、町並み学習のためのオリジナル教材としての民家ペーパークラフトの提案とそれらを使った授業実践・評価の結果等を踏まえながら、学校・地域・自治体・NPO等との多様な連携による町並み保存の次世代育成のためのプログラム(骨子)を検討し、町並み学習の意義・方向性・課題等について整理した。平成28年度は主として次の4点について検討した。1)全国110ヶ所の重伝建地区の基礎調査として、歴史的集落・町並みの空間特性、自治体及び町並み保存団体等による町並み保存活動、学校教育における町並み保存学習の取り組みを把握するため、現地調査や文献調査を行った。また、伝建地区の選定時期や町並み保存学習の内容から地区の類型化を試みた。2)歴史的集落・町並み保存のための次世代育成の具体的取り組みとして、肥前浜宿スケッチ大会(佐賀県鹿島市)や総合的な学習の時間「合掌家屋を造ろう!」の授業(岐阜県白川村)を観察し、効果と課題分析を行った。また、町並み保存のための次世代育成事業に取り組んでいるモデル的な自治体を対象に予備調査を行った。3)平成28年度科研費の研究成果「山口醤油醸造場ペーパークラフト」を使った総合的な学習の時間の授業を鹿島市・地元NPO法人と共同で企画し、鹿島市立H小学校において授業実践・分析を行った。鹿島市浜中町八本木宿重伝建地区の歴史的町並みの体験型学習教材としてペーパークラフトは有効であり、学校・自治体・地域・大学等の連携による町並み保存学習の効果を確かめることができた。岐阜県白川村立S小学校4年生の総合的な学習の時間では旧遠山家住宅ペーパークラフトを組み立てる授業を導入し、旧遠山家住宅の見学や「合掌家屋を造ろう!」の授業とあわせた系統的な町並み保存学習のカリキュラム開発を試みることができた。このほか、過去の科研費等で開発した各地の民家ペーパークラフトを教材として、新潟県立T高校、大分県立S高校、山梨県立K高校、山梨県立F高校等で授業実践を行い、生徒の感想文や担当教師の授業評価等を収集・分析した。4)鹿島市浜庄津町浜金屋町重伝建地区内の民家「南舟津の茅葺き三棟」をモデルにしたペーパークラフトを開発した。平成28年度研究実施計画に記載した項目すべてについて研究に着手し、それぞれ一定の成果を得た。民家ペーパークラフトを活用した授業実践については多くの協力を得て、予定数以上の授業実践と資料収集が実現できた。1)重伝建地区を活用した民家・町並み・まちづくり学習の授業実践内容を詳細に把握するため、全国117ヶ所の重伝建地区内及び周辺に立地する小・中・高校計506校を対象にアンケートを実施した。内容は平成27年度に実施した調査と同一とした。重伝建地区の歴史や特性に対応させて、学校種、教科、学年別に授業の目標、活動内容、外部講師の活用、授業前後の子どもの変化などの授業実践の実態を全国規模で具体的に把握することができた。2)佐賀県鹿島市A小学校の協力を得て、平成28年度に開発した町並み学習教材「南舟津の茅葺き三棟ペーパークラフト」を活用した5年生の総合的な学習の時間の授業実践を行った。授業観察及び授業後の児童の感想文等の分析により、ペーパークラフトを使った体験的な学習は地域に残る歴史的町並みや民家の構造・間取り等の理解に役立ち、地域の人・もの・自然を題材にしたふるさと学習の充実に有効であることが確かめられた。また、他の民家ペーパークラフトを活用して高校家庭科の授業実践を山梨県内2校で行うなど、ペーパークラフトの活用事例を蓄積することができた。3)歴史的集落・町並み保存のための次世代育成の具体的取組を明らかにするため、「肥前浜宿スケッチ大会」、「合掌造り屋根組み授業」、「茅葺き体験学習」等の現地調査と町並み保存団体への聞き取り調査を行った。学校と地域・自治体・NPO等との積極的な連携が地域に根ざした豊かな学びに結びついていることを実証した。

4)民家ペーパークラフトの学校での活用を促進するため、岐阜県白川村の重要文化財「旧遠山家住宅」をモデルにした既存ペーパークラフトの改良(部品数の削減、組立方法の見直し等)を行った。5)歴史的集落・町並み保存のための担い手育成に関する国際比較研究のため、調査候補都市を対象に基礎資料を収集するなど、次年度の現地調査に向けた準備を進めた。平成29年度の研究実施計画に沿って研究に着手し、期間内に一定の成果を得た。1)重伝建地区を活用した民家・町並み・まちづくり学習に関する調査については平成20年度以降定期的に実施し、授業実践データを蓄積してきた。新たに平成29年度のデータを収集し、多様な実態を経時的に分析することが可能となった。2)学校、教育委員会、町並み保存団体等の協力を得て民家ペーパークラフトを活用した授業実践を行い、町並み学習教材としてのペーパークラフトの効果と改善点について新たな知見を得ることができた。また、ペーパークラフトの授業への導入のネックとなっていた組立時間については部品構成や組立方法の見直しにより組立時間の短縮化の目処がついた。3)子ども町並みガイドや合掌造り屋根組み体験学習に加えて茅葺き体験学習の授業実践について調査することができたが、モデル的な事例調査を全国規模で追加していく必要がある。4)歴史的集落・町並み保存のための担い手育成に関する国際比較調査については平成29年度中の現地調査(第一次)を計画していたが、調査内容の整理のために関連資料の収集を継続する必要があり、また訪問先の自治体や学校との事前調整に十分な時間をかけた方がよいと判断し、海外都市を対象とする現地調査は平成30年度実施とした。1)ローテンブルク市役所を訪問し、歴史的町並み・建造物の保全・保存に関する法制度、具体的取組、組織、建築規制、学校教育における町並み学習等について担当者から聞き取りを行った。また城壁内市街地に残る旧ユダヤ人街の住居の保存・再生に取り組むNPO法人の活動内容や建物保存状況の現地調査を実施した。2)学校や地域での町並み学習教材として、平成29年度に国の重要伝統的建造物群保存地区に選定された大分県杵築市を対象に、大分県指定有形文化財「大原邸」をモデルにしたペーパークラフトを開発した。これより、身近な歴史的建造物を教材とした町並み学習の展開が可能となった。3)町並み保存の次世代育成の取組として、新たに「きつき子ども歴史ガイド」(大分県杵築市)や大分県内他地域における同様の実践例を収集した。子どもガイドの育成には多様なスタイルがありうることが明らかとなった。4)科研費で開発したペーパークラフトを活用した住まい学習の授業実践例を収集した(山梨県A高校ほか)。5)平成30年3月に全国の重要伝統的建造物群保存地区117ヶ所を対象に実施した学校アンケートの結果を集計・分析し、学校教育の場を活用した多様な町並み学習の実践状況を把握した。また佐賀県鹿島市等を対象にモデル的な学校での町並み学習の取組内容や教材収集を継続した。
包括的エピジェネティック変異原検出系の次世代化とその応用

研究代表者は、すでに発がんに関わるエピジェネティック制御の変化(変異)を引き起こす化学物質のユニバーサルな検出系として、酵母凝集性が利用できることを報告している。本凝集性に関わる遺伝子FLO1プロモーターのレポーターシステムを活用し、精度が担保されかつ有用性が向上したエピジェネティック解析システムの構築を目指すことが本研究の目的となる。今年度は研究計画の初年度に相当する。まずは各種変異型FLO1プロモーターが示すエピジェネティック変異原応答性の解析に着手する方向で研究を開始した。しかしながら、FLO1プロモーターの各種変異体を作成して、これら各種変異体が示す応答性について検討を開始したものの、応答性を検出する感度の問題もあり、目的とする変異体の取得が困難な状態となっている。また、研究環境面でも研究施設の移転直後という状況下において当初の想定とは異なる事象も発生したことも重なり、結果目的とするFLO1プロモーター変異体の取得には至っていないのが現状である。一方、現行の遺伝毒性試験結果では遺伝毒性は不明確であるものの発がん性が危惧される環境化学物質がプロトタイプのFLO1プロモーター活性に及ぼす影響については、一部成果が得られている。同化学物質がFLO1プロモーター活性を抑制する作用について検証するための凝集性への影響と生化学的手法によるエピジェネティック制御に対する作用解析の準備については、今年度でその一部は完了できたと考えている。本年度は、所属する国立医薬品食品衛生研究所の移転翌年度に相当する。移転作業自体については完了したものの、研究計画の実施にあたり施設設備関係等について調整・改善など必要な事象が想定以上に生じたことがその主な理由となる。昨年度の状況を考慮して、研究計画の再検討も否定しない方向性でストラテジーを考えたい。すなわち、得られる研究結果に柔軟に対応し、最終目的からは逸脱ないよう研究材料の準備段階を含めたストラテジーの再構築も視野に入れた研究計画としたい。実験材料の構築に遅延が生じたことと、移転翌年度でもあり研究環境の追加のビルドアップの必要が当初の予定とは異なり生じたことが主因と考えている。今年度は、研究計画の一部変更する可能性も排除せず、研究目的の達成に向けた2年目としての進捗が確保できるよう予算執行に努めたい。
睡眠呼吸障害による認知機能悪化のエピジェネティクス解析

本研究の結果により閉塞性睡眠時無呼吸を有する高齢患者において、その重症度が筋力や身体能力に関連することが示された。左室拡張能低下などとも相関を認めた。認知機能に関しては横断研究では強い相関を認めなかった。認知機能は個人差が大きいため横断研究では結果が出にくかったと考え、各患者の認知機能を経時的に評価している。また、持続陽圧呼吸(CPAP)療法により、筋力や身体機能、左室拡張能の進行を抑制・改善できるかを前向きに観察している。さらにこの機序についてDNAメチル化などの情報などから検討を続けていく。本研究の目的は1日本人を対象として睡眠呼吸障害(SDB)の心血管疾患や認知症への関与を前向きに検討すること2持続陽圧呼吸(CPAP)療法の心血管疾患や認知症への治療効果を前向きに検討すること3認知症発症・進行時の遺伝情報の発現制御(エピジェネティクス)について詳細な検討を行うことである。現在、当院への入院患者を対象として簡易睡眠モニターと終夜睡眠ポリソムノグラフィーを用いてSDBを評価するとともに、採血・採尿などによる危険因子の評価、心機図・超音波検査などを用いた動脈硬化病変・心血管病変の評価、心理検査のバッテリーを用いた認知機能・総合機能評価、握力・歩行速度検査・重心動揺検査などによる筋力・身体能力の評価を行い、followしている。認知機能が軽度低下している睡眠呼吸障害患者でも簡易モニターや終夜睡眠ポリソムノグラフィー検査が可能であることを確かめており、臨床上必要な患者にCPAPを導入し、24時間自由行動下血圧測定での血圧変動patternなどを含めた評価も行っている。エピジェネティクスの解明についても取組中である。心血管疾患や認知症への関与、CPAPの治療効果などを前向きに検討している。CPAPの導入により夜間血圧が心血管リスクが高いtypeからリスクが低いtypeに変化することを確かめている。また、SDBに関する各計測法と動脈硬化の進行度との関係や、高齢者の身体能力とSDBの重症度の関連などを評価している。現時点での横断研究の成果を学会などに発表する予定である。睡眠呼吸障害(SDB)は高血圧の危険因子であると同時に、さまざまな心血管疾患に合併することが知られており、その発症伸展に重要な役割を果たしている。また精神活動や認知機能にも影響を及ぼし、SDBがアルツハイマー型認知症や血管性認知症に合併するという報告もある。本研究の目的は1日本人を対象としてSDBの心血管疾患や認知症への関与を前向きに検討すること2CPAPの心血管疾患や認知症への治療効果を前向きに検討すること3認知症発症・進行時の遺伝情報の発現制御(エピジェネティクス)について詳細な検討を行うことである。現在、当院の高血圧パス・もの忘れパス・SDB精査入院の患者を対象として血圧・血液・尿・筋力等を検査し、画像検査等で心血管疾患の検索を行い、認知機能や抑うつ状態を質問表などを用いて評価している。その上で簡易睡眠検査やポリソムノグラフィーを用いてSDBの状態を評価している。また、必要と考えられる患者に持続陽圧呼吸(CPAP)療法を導入し、その後の経過もfollowしている。各検査機器や治療機器の取り扱い・管理に習熟し、滞りなく施行できている。当院でのプレリミナリーの検討や既報で予測したとおり、難治性高血圧患者の睡眠呼吸障害合併率が高かった。さらにCPAPの導入により夜間血圧がriser typeやnon-dipper typeのような心血管リスクが高いpaternからdipper typeのようなリスクの低いpatternに変化することを確認した。また、軽度認知機能低下を有する睡眠呼吸障害患者へのポリソムノグラフィー検査やCPAP導入が可能であることも確認し、検査・加療を開始している。このようにSDBの各疾患への関与とCPAPの治療効果を前向きに検討するとともに横断研究も行っている。遺伝情報の発現制御(エピジェネティクス)の解明についても取り組み中である。高齢者のADLやQOLにおいては、心血管疾患などの身体疾患だけでなく、認知機能・抑うつ状態などの神経心理機能や筋力・歩行能力などの身体機能も大きな影響を及ぼす。睡眠呼吸障害(SDB)や、その一形態である閉塞性睡眠時無呼吸(OSA)は心血管疾患の発症進展において重要な役割を果たしているが、神経心理機能や身体機能へ及ぼす影響については不明なことが多い。我々はSDBやOSAなどが疑われる患者を対象に1ポリソムノグラフィによる睡眠プロファイルの評価と心血管合併症、認知機能、抑うつ状態、筋量、筋力、身体能力などの評価を行い、関係と機序を解明する横断研究2適応がある患者に持続陽圧呼吸(CPAP)の導入を行い、臨床パラメーターの変化・改善を評価する縦断研究3認知機能低下や筋力・筋量低下を呈するSDB・OSA患者における神経心理機能や身体機能の低下とエピジェネティクス変化の関係を解明する研究を行っている。

横断研究の結果、●高血圧患者においてOSAの重症度が左室拡張能などの心機能と関連する●OSAを有する高齢者において筋力や身体能力の低下とOSAの重症度が関連することなどを明らかにした。特に後者は今までにほとんど報告されていない。中途覚醒や交感神経活性亢進、低酸素、酸化ストレス、炎症などが問題なのか、それ以外の要素が関係しているのかを血液検体などから検討中である。CPAPを用いた縦断研究においては継続使用者を追跡しているが、現状では比較群間で年齢や肥満といった交絡因子を排除しきれておらず、症例数を積み上げている過程である。また、SDBやOSA患者のエピジェネティクス解析において、認知機能低下や身体機能低下をもたらす変化を現時点では見いだせていないが、今後、DNAメチル化などの解析以外にmicro RNAの解析を行うことにより、これらの機序の解明を図りたいと考えている。老年病近隣で睡眠呼吸障害に対して治療を行っている医療機関が急増し、紹介患者が予想より少ない状態が続いた。エピジェネティクスの解明に関しては絞り込みが不十分である。CPAPの導入に関しては想定よりも導入の対象は多かったが、不快感などによるCPAPの脱落率が予想より高いという問題点がある。病棟の再編成が行われた際、一時的に高血圧パスやもの忘れパスが中止となり、睡眠呼吸障害の精査目的患者を中心に検査を行なうこととなったため対象者が減少した。また、当科が睡眠呼吸障害の検査・加療を行なっていることの近隣医療機関や患者への周知が進まず、紹介患者が予想より少なかった。その結果、現時点で睡眠簡易検査50例程度、ポリソムノグラフィー検査30例程度となっている。遺伝情報の発現制御(エピジェネティクス)の解明についても具体的なターゲットが絞り込めていない。検査を行なった患者のなかでは中等度重症の睡眠呼吸障害の患者が比較的多く、CPAPの導入を行う患者が予想より多く、dataの蓄積は進んでいる。その反面、高齢者などではCPAP施行時の睡眠時無呼吸の改善効果が明らかにあるにも関わらず、手技や不快感のために継続できない患者も多い。結果として当初の予定よりやや遅れ気味となっている。受診患者数・紹介患者数が少ないことに関しては、当科で睡眠呼吸障害の診断・加療を行っていることは少しづつ周知され、紹介患者は増加傾向にある。さらに、研究会での講演や、学会での発表、論文の掲載などを行うことにより、さらなる増加を目指す。CPAPの脱落率の問題に関しては、2014年月から専門外来を設けて外来followの時間・回数を増加することによって、患者の希望・不満にきめ細かく対応し、継続率を上げていく方針である。今後は今までどおり検査・診断・加療を進めながら、睡眠呼吸障害の心血管疾患や認知症への関与を明らかにし、CPAPの治療効果を明らかにしていく。CPAPの睡眠時無呼吸への改善効果が明らかにあるにも関わらず、継続困難となる患者も多いことから、その規定因子についても検討していく。さらに抑うつやサルコペニアへの影響に関しても、SDBの関与を当初の予定より詳しく検討していく予定である。症例数の不足に関しては、高血圧パス・もの忘れパスを再開しており、睡眠呼吸障害パスも開始予定である。
グルコース応答性ナノカプセルの高機能化

グルコース濃度を計測するためのナノカプセルおよびグルコースに応答してインスリンを放出するナノカプセルの開発を実施した。まず、これらのナノカプセルを作製するための材料とレクチン複合体およびインスリンの封入方法を確立した。すなわち、レクチン複合体またはインスリンを封入した微粒子の表面を薄膜で被覆した後に、微粒子を溶解させてナノカプセルを作製することに成功した。これらのナノカプセルは、グルコースの検出およびグルコースに応答したインスリンの放出に有用であることを見出した。ナノカプセル型グルコースセンサーの開発を目的として、交互累積膜法により蛍光標識コンカナバリンAとグリコゲンの複合体をナノカプセル化することに成功した。カプセル材料として、ポリアミンおよびポリスルホン酸を用いると良好なナノカプセルとなることがわかった。芯物質として炭酸カルシウムを用いる方法の操作条件を最適化した結果、このナノカプセルの蛍光強度は溶液中にグルコースが存在すると減少した。すなわち、このナノカプセルがミリモルレベルのグルコースを検出するセンサーとして機能することを確認した。しかし、このセンサーは繰り返し使用特性に難があり、耐久性を向上させることが次年度の課題として残った。次に、グルコースに応答してインスリンを放出するナノカプセルの開発を行い、ポリアミンおよびポリスルホン酸から調製したナノカプセルにインスリンを封入する方法を確立した。このカプセルからのインスリンの漏出特性を検討したところ、カプセルを作製するために用いたポリアミンの分子量の違いが漏出速度に顕著な影響を与えていることが明らかになった。分子量の小さいポリアミンは漏出速度を抑制する傾向があった。これらの結果は、カプセルの分子設計上非常に有用な指針となる。さらに、カプセルからのインスリン漏出速度をグルコースにより制御できるシステムの検討を行い、コンカナバリンAとグリコゲンをカプセル材料として用いることが有効であることを見出した。すなわち、コンカナバリンAとグリコゲンで作製したナノカプセルは10ミリモル程度のグルコースが存在するとインスリン漏出速度が顕著に増大することが判明した。これは、コンカナバリンAにグルコースが結合することに伴いグリコゲンとの結合が弱くなり、カプセルの膜構造が荒くなることに起因する。ナノカプセル型グルコースセンサーの応答性改良を検討した。従来のセンサーでは、繰り返し使用時に、内包したタンパク質が漏出する欠点があったが、この問題を解決するためにタンパク質-高分子電解質凝集体のカプセルからの漏出挙動を検討した。その結果、凝集体のサイズが大きい場合には、カプセルからの漏出が抑制できることが判明した。この結果はナノカプセル型グルコースセンサーの応答性改良につながる成果である。グルコースに応答してインスリンを放出するナノカプセルの開発に成功し、基本的な性能の検討を行った。開発したナノカプセルは、フェニルボロン酸修飾ポリマーとポリビニルアルコールから作製されたもので、この両者がボロン酸エステルを介して結合してカプセル皮膜を形成することが明らかになった。一方、グルコースが共存するとエステル交換が起こりポリマー間の結合が解裂しカプセルが分解した。これに伴い、内包したインスリンが放出されることが明らかになった。このようなグルコース応答は弱塩基性で高い応答を示すが、中性では応答が十分ではないことが現状の欠点である。中性条件でグルコースの応答するナノカプセルの開発が次年度の目標である。さらに、高性能材料の探索を実施し、フェニルボロン酸修飾ポリマーとしてデンドリマーが有用であることを見出した。フェニルボロン酸修飾ポリアミドアミンデンドリマーとポリビニルアルコールの累積膜が中性条件でグルコースに良好な応答を示したことから、ナノカプセル材料として有望であることがわかった。インスリンを封入した高分子電解質ミクロカプセルの簡便で効果的な作製方法の検討と、作製したミクロカプセルからのインスリンの放出拳動の最適化を実施した、さらに、ミクロカプセルと類似したミクロ構造を有する薄膜の中にインスリシを共存きせて、pH変化に応答したインスリンの放出についても検討した。フェニルボロン酸修飾ポリアミンとポリビニルアルコール、ポリスチレンスルホン酸、またはアルギン酸などの高分子材料を用いて、高分子電解質ミクロカプセルを調製し、その内部にインスリンを効果的に封入する方法を詳細に検討した。また、150mM程度の塩化ナトリウムが共存する中性付近の条件下で、糖に応答したインスリン放出の制御を検討した。その結果、pH8以上では糖が共存するとミクロカプセルからのインスリンの放出速度が上昇することが確認されたが、pH7付近では糖の効果は小さく、さらに改善する必要のあることがわかった。次に、インスリンをミクロカプセルと類似した構造を有する薄膜中に固定化して、pHに応答したインスリンの放出挙動について検討した。その結果、酸性条件においてはインスリンの放出はほとんど抑制され、pH5以上の中性条件において放出が促進されることが判明した。高分子電解質薄膜を用いたために、インスリンの放出速度は中性条件では急激に増大した。また、酸性溶液にタンパク質分解酵素(ペプシン)を共存させて37度Cに加温しても、インスリンはほとんど酵素分解を受けないことが明らかになった。
HIV-2ヌクレオキャプシド・タンパク質の立体構造と機能の解析

当研究は,HIV-2のヌクレオキャプシド(NC)タンパク質(NCp8:zincfinger motif(ZFM)を2つ含む49アミノ酸残基のペプチド)を対象とし,その機能発現機構解明を目的としている.研究成果を以下に列記する.1. N端側ZFMを含む部分ペプチド(NCp8-f1:29残基)の構造機能相関の研究NCp8-f1はウイルスRNA認識能を有する.このことはHIV-1のNCタンパク質(NCp7)と共通している.NMRで立体構造を決定し,NCp7の立体構造と比較して機能発現機構について議論した.さらに1つのZFMでNCp8およびNCp7と同等の活性を持つNCp10(マウス白血病ウイルスのNCタンパク質)の構造と比較して,機能発現に必要な構造要素を推定した.2. C端側ZFMを含む部分ペプチド(NCp8-f2:27残基)の構造機能相関の研究NCp8-f2の立体構造解析を行った.その結果,機能発現に重要なlinker領域(2つのZFMをつなぐ部分)が安定した1つの立体構造を形成していることがわかった.3. NCp8の機能発現機構の解明NCp8単独およびRNAとの複合体の立体構造解析を行うためには,窒素核を安定同位体標識したNCp8を大量に調製する必要がある.研究分担者の河野は大腸菌を使ったペプチドの大量発現系を構築した.この発現系を使ってNCp8の大量発現番開始した.NMRに必要な量(10mg以上)のNCp8を調製するための大腸菌培養条件および精製条件を決定した.4. NCp8の物理化学的解析の基礎研究タンパク質室温リン光寿命解析および,分析用遠心機を用いた分子間相互作用解析の基礎研究を行った.今後,NCp8の機能発現機構解明に利用する予定である.当研究は,HIV-2のヌクレオキャプシド(NC)タンパク質(NCp8:zincfinger motif(ZFM)を2つ含む49アミノ酸残基のペプチド)を対象とし,その機能発現機構解明を目的としている.研究成果を以下に列記する.1. N端側ZFMを含む部分ペプチド(NCp8-f1:29残基)の構造機能相関の研究NCp8-f1はウイルスRNA認識能を有する.このことはHIV-1のNCタンパク質(NCp7)と共通している.NMRで立体構造を決定し,NCp7の立体構造と比較して機能発現機構について議論した.さらに1つのZFMでNCp8およびNCp7と同等の活性を持つNCp10(マウス白血病ウイルスのNCタンパク質)の構造と比較して,機能発現に必要な構造要素を推定した.2. C端側ZFMを含む部分ペプチド(NCp8-f2:27残基)の構造機能相関の研究NCp8-f2の立体構造解析を行った.その結果,機能発現に重要なlinker領域(2つのZFMをつなぐ部分)が安定した1つの立体構造を形成していることがわかった.3. NCp8の機能発現機構の解明NCp8単独およびRNAとの複合体の立体構造解析を行うためには,窒素核を安定同位体標識したNCp8を大量に調製する必要がある.研究分担者の河野は大腸菌を使ったペプチドの大量発現系を構築した.この発現系を使ってNCp8の大量発現番開始した.NMRに必要な量(10mg以上)のNCp8を調製するための大腸菌培養条件および精製条件を決定した.4. NCp8の物理化学的解析の基礎研究タンパク質室温リン光寿命解析および,分析用遠心機を用いた分子間相互作用解析の基礎研究を行った.今後,NCp8の機能発現機構解明に利用する予定である.当研究は,HIV-2のヌクレオキャプシドタンパク質(NCp8:zincfinger motif(ZFM)を2つ含む49アミノ酸残基のペプチド)を対象とし,その構造とウイルスRNA認識機構の関係を解明することを目的としている.2つのZFMはlinker領域と呼ばれる塩基性アミノ酸残基に富む7残基のアミノ酸でつながれている。この点を含めてNCp8はHIV-1のヌクレオキャプシドタンパク質(NCp7)と一次配列上の相同性が高い。また、両方のヌクレオキャプシドタンパク質(NC)のlinker領域は活性発現に必須であることが報告されている。本年度は主にNCp8の部分ペプチド(NCp8-f1)の構造活性相関の解明を行った。NCp8-f1はN端側のzincfinger motif(ZFM)とlinker領域を含む29アミノ酸残基のペプチドである。この部分はNCp8の活性発現に必要な最小単位である。昨年度NCp8-f1の立体構造を大まかに決定した。これに引き続き本年度は亜鉛配位の距離制限情報と二次元NMR(NOESY)から得られた近接水素核間距離制限情報(343個)、主鎖の2面角(10個)の情報を元にディスタンスジオメトリー法を用いてより精度の高い構造解析を行った。その結果、linker領域がNCp7では観測されていない立体構造を持っていること。さらに、その構造が1つのZFMでNCp8およびNCp7と同様の活性を発現するNCp10(Moloney murine leukemia virusのNC)の活性発現部位の構造と良く似ていることがわかった。

現在、NCp8-f1の構造機能相関についてNCp7およびNCp10と比較して議論し、その内容を中心とした論文を作成中である。その他の成果:C端側のZFMを含む27アミノ酸残基のペプチド(NCp8-f2:上記のbasicregionをN端側に持つ)を合成した.これに関しても2次元NMR測定結果を解析し,既に主鎖の水素核の帰属を完了した.また,今後RNAとの結合時の構造を求めるために窒素核を安定同位体標識したNCp8の大量調製が必要である.本年度はNCp8をコードするDNAを大腸菌の発現ベクターに組み込むことを終了した.当研究は,HIV-2のヌクレオキャプシド(NC)タンパク質(NCp8:zincfinger motif(ZFM)を2つ含む49アミノ酸残基のペプチド)を対象とし,その機能発現機構解明を目的としている.本年度は主に次の3点について研究を進めた.1. N端側ZFMを含む部分ペプチド(NCp8-f1:29残基)の立体構造解析結果の論文発表NCp8-f1はウイルスRNA結合活性を有する.このことはHIV-1のNCタンパク質(NCp7)と共通している.論文ではNCp8-f1の立体構造とNCp7の立体構造,さらに1つのZFMでNCp8およびNCp7と同等の活性を持つNCp10(マウス白血病ウィルスのNCタンパク質)の構造と比較して,機能発現機構について議論した.(Kodera,Y.et al.(1998)Biochemistry 37,17704-17713)2. C端側ZFMを含む部分ペプチド(NCp8-f2:27残基)の立体構造解析NCp8-f2はウイルスRNAとの結合活性を持つ.これに対してNCp7の相当領域の部分ペプチドはウイルスRNAとの結合活性を持たない.この点に注目してNCp8-f2の立体構造解析を行った.その結果,NCp8-f2では機能発現に重要なlinker領域(2つのZFMをつなぐ部分.7残基を含む)が構造を持っていることがわかった.現在論文作成中である. (1998年11月,NMR討論会にて発表)3.大腸菌を用いたNCp8の大量調製今後,NCp8およびRNAとNCp8の複合体の立体構造解析を行うためには,窒素核を安定同位体標識したNCp8が大量に必要である.そのため本年度は,大腸菌を用いてNCp8を大量発現することを開始した.既にNCp8の発現を確認した.
ラマン分光法によるハンチントン病凝集タンパク質の定量的モニタリングシステムの開発

1培養細胞内の凝集タンパク質の測定:GFPまたはmNeptune標識した変異Huntingtin exon-1タンパク質(98残基ポリグルタミン鎖を含む)をHela細胞・HEK293T細胞に強制発現させ,細胞内に封入体を形成させた.レーザーラマン顕微分光装置を用いて蛍光標識と共局在する封入体に特徴的なラマンスペクトル波形を検索した.封入体内部で観測されたラマンシフトうち,1012cm-1, 1559cm-1, 1617cm-1の3つのラマンシフトの組み合わせは観測視野内で封入体に特異的であった.伸長ポリグルタミン鎖はβ-sheet構造をとることが知られており,それが不溶性の理由とされる.封入体特異的なラマンシフトの一つ1617cm-1は,β-sheet構造に相当するアミドI結合の分子振動を見ている可能性がある.今回発見したラマンシフトは,生理的な封入体形成過程でのポリグルタミン分子の挙動を解明する上で重要なツールとなりうる.2ラマンスペクトルに出現する分子振動の推定システムの構築:構造式の定まった任意の分子についてその立体構造予測と分子振動解析を行い,ラマンスペクトルを理論的に予測する計算機システムを構築した.現在200300原子以下の分子の計算が可能である.これを用いてグルタミンオリゴマーのラマンスペクトル予測を行い,実測結果と比較を行った.グルタミンオリゴマーの理論計算ラマンスペクトルには1617cm-1の振動モードは存在しなかった.この振動モードがグルタミン残基自体でなく,それ以外の分子振動(分子間の水素結合など)に由来する可能性を間接的にサポートする結果である.このような実測結果と計算結果との比較は,分子特異的マーカーとして機能する特徴的なスペクトルが確実に凝集タンパク質に由来することを,物理化学の理論面から保証するための必要不可欠な過程である.当初平成24年度に予定していた疾患脳から精製した凝集タンパク質のin vitro測定はまだできていないが,一方,平成25年度に予定していた培養細胞中の凝集タンパク質の測定は予定より早く系が立ち上がった.学会発表を平成24年度にできなかったことは予定より遅れている.疾患脳からの凝集タンパク質の抽出,組織中での凝集タンパク質の測定を進めていき,特徴的なラマンスペクトル波形が分子特異的マーカーとして機能し,生体組織中で非標識のまま分子の存在判定が行えることを示す.1培養細胞内の凝集タンパク質の測定:GFPまたはmNeptune標識した変異Huntingtin exon-1タンパク質(98残基ポリグルタミン鎖を含む)をHela細胞・HEK293T細胞に強制発現させ,細胞内に封入体を形成させた.レーザーラマン顕微分光装置を用いて蛍光標識と共局在する封入体に特徴的なラマンスペクトル波形を検索した.封入体内部で観測されたラマンシフトうち,1012cm-1, 1559cm-1, 1617cm-1の3つのラマンシフトの組み合わせは観測視野内で封入体に特異的であった.伸長ポリグルタミン鎖はβ-sheet構造をとることが知られており,それが不溶性の理由とされる.封入体特異的なラマンシフトの一つ1617cm-1は,β-sheet構造に相当するアミドI結合の分子振動を見ている可能性がある.今回発見したラマンシフトは,生理的な封入体形成過程でのポリグルタミン分子の挙動を解明する上で重要なツールとなりうる.2ラマンスペクトルに出現する分子振動の推定システムの構築:構造式の定まった任意の分子についてその立体構造予測と分子振動解析を行い,ラマンスペクトルを理論的に予測する計算機システムを構築した.現在200300原子以下の分子の計算が可能である.これを用いてグルタミンオリゴマーのラマンスペクトル予測を行い,実測結果と比較を行った.グルタミンオリゴマーの理論計算ラマンスペクトルには1617cm-1の振動モードは存在しなかった.この振動モードがグルタミン残基自体でなく,それ以外の分子振動(分子間の水素結合など)に由来する可能性を間接的にサポートする結果である.このような実測結果と計算結果との比較は,分子特異的マーカーとして機能する特徴的なスペクトルが確実に凝集タンパク質に由来することを,物理化学の理論面から保証するための必要不可欠な過程である.当初平成24年度に予定していた疾患脳から精製した凝集タンパク質のin vitro測定はまだできていないが,一方,平成25年度に予定していた培養細胞中の凝集タンパク質の測定は予定より早く系が立ち上がった.学会発表を平成24年度にできなかったことは予定より遅れている.疾患脳からの凝集タンパク質の抽出,組織中での凝集タンパク質の測定を進めていき,特徴的なラマンスペクトル波形が分子特異的マーカーとして機能し,生体組織中で非標識のまま分子の存在判定が行えることを示す.
中尊寺を中心とする奥州藤原文化圏の宗教彫像に関する調査研究

本研究の内容は大きく4点にまとめられるので、以下に、そのそれぞれにづいて実績を報告する。(1)中尊寺所蔵の主要作例の、X線透過撮影をともなう調査中尊寺所蔵の金色堂諸像及び大長寿院文殊五尊像について、X線透過撮影を伴う調査を完了した。撮影画像の分析により、従来未詳だったこれら諸像の構造を一挙に解明した。(2)中尊寺を中心とする奥州藤原文化圏の関連作例の調査以下の各像について詳細な観察データと高精細な画像資料を得た。願成寺薬師如来像、永泉寺聖観音立像(一関市)、双林寺本堂聖僧坐像、天部立像、二菩薩像他(宮城県栗原郡築館町)、林ノ沢観音堂金銅菩薩立像、本堂所在菩薩立像他、大光寺薬師如来立像、不動明王像(東磐井郡千厩町)、善光寺銅造阿弥陀如来立像(宮城県高清水町)、大門神社所蔵二天立像及び地蔵菩薩像(岩手県花泉町)、新宮寺文殊五尊像(宮城県名取市)、無量寺阿弥陀如来像(福島県小野町)、熊野神社文殊騎獅像・神像(福島県喜多方市)(3)調査データ、撮影データのデジタルコンテンツ化・調査データは、すべてテキストデータ化した。・撮影済みの4×5ポジ及びネガフィルム、計298カットをプロフォトCDとしてデータ化した。・撮影済みX線画像をデジタル画像化したうえで、画像処理により接合し、継ぎ目のない像全体の画像資料を得た。(4)報告書の作成各研究分担者による詳細の調査報告、金色堂諸像及び大長寿院文殊五尊像のX線透過画像、中尊寺を中心とする奥州藤原文化圏の関連作例のカラー図版を掲載した、総ページ数157頁の報告書を刊行した。研究の初年度として本年度は、以下の二点について特に留意し研究を進めた。(1)本研究の主要目的のひとつである中尊寺金色堂諸像のX線撮影調査について、照射データ及び調査手順のマニュアルを確定し、今後の継続調査の基礎を作る。(2)平泉を源とする藤原氏関連の造像例を、県指定品、未指定品を含めて広くリストアップし、予備調査をおこなう。(1)については、2000年11月に第一回目のX線撮影調査をおこない、中央壇の如来、二菩薩、二天について撮影を完了した。その過程で、現有のソフテックス社のX線発生装置では、一部の像に対してX線の強度が足りず長時間の照射が必要となり、連続使用に際しては過熱によって不都合が生じる可能性が認められた。それを受けて、より高度の透過能力を有し、連続使用に耐えるエクスロン・インターナショナル社のSMART225を本年度の備品として購入し、2001年2月に第二回目の撮影調査をおこなった。この折には、中央壇地蔵菩薩像六体の撮影を順調なペースで終えられ、今後の照射データを確定することができた。また、撮影から調査にいたるマニュアルを設定し、調査に際し特に不測の事故のないよう配慮した。(2)については、岩手東山町二十五菩薩堂諸像、平泉町西光寺不動明王坐像、一関市永泉寺聖観音立像、同願成寺薬師如来坐像、千厩町大光寺薬師如来立像、花泉町大祥寺十一面観音立像、宮城中田町弥勒寺弥勒如来及び二比丘像を対象に、今後の本調査のための予備調査をおこなった。また、資料整理・蓄積については特に、4×5ポジ及びネガフィルム118カットを今年度分としてデジタル画像化し、今後の画像データベース構築への資源とした。本年度は、研究の二年目として、主目的である中尊寺金色堂諸像のX線撮影調査についておこない、これを完了した。

本年度は、第一回目の調査を、平成13年9月3日(月)7日(金)におこない、西北壇上の全像と西南壇の天部及び二菩薩像について、第二回目の調査を、平成13年12月10日(月)12日(水)におこない、西南壇の残りの全像と、中央壇の二天の再調査をおこなった。以上により、従来知られていなかった後補部分について重要な発見が得られた。また、調査及び4×5版カメラによる撮影を、以下の日程でおこなった。8月20日(月)願成寺薬師如来像(一関市)8月22日(水)永泉寺聖観音立像(一関市)9月5日(水)双林寺本堂聖僧坐像、天部立像、二菩薩像他(宮城県栗原郡築館町)9月7日(金)林ノ沢観音堂金銅菩薩立像、本堂所在菩薩立像他(東磐井郡千厩町)11月19日(月)大光寺薬師如来立像、不軸明王像(於岩手県立博物館)11月20日(火)善光寺銅造阿弥陀如来立像(宮城県高清水町)4×5ポジ及びネガフィルム180カットを今年度分としてデジタル画像化し、今後の画像データベース構築への資源とした。本年度は、中尊寺所在像のうち、讃衡蔵所在文殊五尊像のX線撮影調査をおこない、これを完了した。これにより、従来不明確だった讃衡蔵所在文殊五尊の構造について詳細な知見が得られた。その他の関連作品を含む、調査及び4×5版カメラによる撮影の日程は以下の通りである。7月4日-6日中尊寺讃衡蔵所在文殊五尊像のX線撮影調査9月4日・5日中尊寺讃衡蔵所在文殊五尊像のX線撮影調査9月5日岩手県花泉町大門神社所蔵二天立像及び地蔵菩薩像の調査撮影10月30日宮城県名取市新宮寺文殊五尊像31日福島県小野町無量寺阿弥陀如来像11月1日福島県喜多方熊野神社熊野神社文殊騎獅像・神像本年度は研究の最終年度として、既撮影分のX線フィルムをすべてデジタル化し、それを接合した参照用画像ファイルを作成した。この画像に加え、別途作成した4×5フィルムからのデジタル画像を含めた画像を掲載し、調査成果を盛り込んだ、詳細な報告書を年度内に刊行予定としている。
小児期メタボリック症候群の肝・膵幹細胞におけるカルシウムシグナルの役割

Calreticulinは肝細胞、膵臓β細胞、脂肪細胞などにおいて、糖、脂質代謝の調節に関与している。本研究では、時間、組織特異的calreticulinの過剰発現をtamoxifenにより誘導可能なトランスジェニックマウスを作成した。そして、calreticulin欠損マウスと、時間、組織特異的calreticulinの過剰発現マウスのカルシウムシグナルにおける機能の解析を遺伝子発現やタンパク質の機能の調節に重要なカルシウムシグナルの観点から解析した。メタボリックシンドロームは、肥満、高脂血症、高血圧や糖尿病などの合併によって起こる動脈硬化のハイリスク群である。また、calreticulinは肝細胞、膵臓β細胞、脂肪細胞などにおいて、糖、脂質代謝の調節に関与していることが明らかになった。本研究では、肝細胞、膵内分泌細胞へと分化する内胚葉系幹細胞の分離、分化誘導法を用いて、calreticulin欠損マウスと、時間、組織特異的calreticulinの過剰発現マウスから内胚葉系幹細胞を確立し、そのカルシウムシグナルにおける機能の解析を行った。そしてメタボリックシンドロームの発症のメカニズムを、遺伝子発現やタンパク質の機能の調節に重要なカルシウムシグナルの観点から解析した。そのために、calreticulinの発現レベルを肝細胞、膵臓β細胞、脂肪細胞のそれぞれにおいて調節できるトランスジェニックマウスを用いて、calreticulin過剰発現の確認を行った。このトランスジェニックマウスを用いて、肝細胞特異的にcre recombinaseを発現するマウスと交配し、ウエスタンブロット法を用いることにより、肝細胞におけるcalreticulinの発現量を野生型と比較した。このトランスジェニックマウスにおいて、肝臓、膵β細胞、脂肪細胞における糖、脂質代謝について解析した。また、Calreticulin欠損マウスは、脂肪組織の発生が障害されるとともに、糖、脂質代謝異常をおこすことが示唆されている。それゆえ、過剰発現マウスにおいても糖の産生、貯蔵やインスリンの産生、分泌、脂質の肝臓への取り込みや分解、アディポサイトカインの産生などについても解析した。そのために、calreticulinの発現レベルを肝細胞、膵臓β細胞、脂肪細胞のそれぞれにおいて調節できるトランスジェニックマウスを用いて、肝細胞特異的にcre recombinaseを発現するマウスと交配し、ウエスタンブロット法、RT-PCR法を用いることにより、肝細胞におけるcalreticulinの発現量を野生型と比較した。そこで、calreticulin過剰発現マウスにおける糖の産生、貯蔵やインスリンの産生、分泌、脂質の肝臓への取り込みや分解、アディポサイトカインの産生などについて解析した。calreticulinは肝細胞、膵臓β細胞、脂肪細胞などにおいて、糖、脂質代謝の調節に関与している。本研究では、時間、組織特異的caheticulinの過剰発現をtamoxifenにより誘導可能なトランスジェニックマウスを作成した。そして、マウス肝細胞、膵内分泌細胞へと分化する幹細胞の分離、分化誘導法を用いて、calreticulin欠損マウスと、時間、組織特異的calreticulinの過剰発現マウスから内胚葉系幹細胞を確立し、そのカルシウムシグナルにおける機能の解析を行った。そのために、caheticulinの発現レベルを肝細胞、膵臓β細胞、脂肪細胞のそれぞれにおいて調節できるトランスジェニックマウスを用いて、肝細胞特異的にcre recombinaseを発現するマウスと交配し、ウエスタンブロット法、RT-PCR法を用いることにより、肝細胞におけるcalreticulinの発現量を野生型と比較した。
35型アデノウイルスベクターによる遺伝子治療の開発とその遺伝子発現制御

アデノウイルスベクター(Ad)は癌化のリスクがないため安全性が高く、また、導入効率が良いことから、FDAで認可された遺伝子治療の大半を占めている。この一方、免疫原性が高く遺伝子発現期間が短いなどの欠点もあることからその改良が検討されている。この目的から、Ad血清型5, 28, 35のHI loopにRGD motif挿入したもの(Ad+)としてないもの(Ad-)を作成し、これらの新しいウイルスベクターの眼内での発現の特性を検討してきた。その結果、従来型のAd5に比べ、Ad35の改変ベクターでは、網膜色素上皮細胞だけでなく、視細胞にも導入されること、遺伝子発現期間も6ヶ月までに及ぶことが明らかとなった。これらの事実は、アデノウイルスベクターの欠点を克服するものであり、加齢黄斑変性や糖尿病網膜症などの、Life spanでの発現は帰って不利になる疾病に対する遺伝子導入には極めて有効な方法である可能性が示唆された。アデノウイルスベクター(Ad)はrandom integrationがないため安全性が高く、また、導入効率が良いことから、FDAで認可された遺伝子治療の大半を占めている。この一方、遺伝子発現期間が短いなどの欠点もあることからその改良が検討されている。今回Ad血清型5,28,35のHI loopにRGD motif挿入したもの(Ad+)としてないもの(Ad-)を作成し、これらの新しいウイルスベクターの眼内での発現の特性を知るため、まず、Ad35を眼内に硝子体注入・網膜下注入した時、眼内のどのような細胞に親和性があり、どの程度発現するかを、他のウイルスベクターであるAd5およびAd28と比較しながら、GFP遺伝子を導入し組織学的に検索した。また、Luciferase遺伝子を導入し、眼内での発現量を定量的に解析し、他のベクターと比較検討した。その結果、硝子体注入では、すべてのAdにおいて虹彩、角膜内皮、線維柱帯に遺伝子導入したが、特にAd35+では線維柱帯に選択的に発現した。経時的にはAd5はスパイク状に発現し、その後減弱したのに対し、Ad28およびAd35でかなり長期間安定して発現した。網膜下注入では、Ad5-は色素上皮細胞に、Ad5+では視細胞により強く遺伝子導入された。Ad35では色素上皮細胞と視細胞の双方に遺伝子導入を引き起こしたが、Ad28では視細胞のみに遺伝子導入された。以上、Adのgenetic backboneやfiberの構造を変えることで、特異的な細胞を標的にすることは可能であった。これは抗血管新生作用だけでなく、神経保護の観点からも重要な特性と考えられ、Ad5に変わる新たな遺伝子治療の可能性が示された。この目的から、昨年度よりAd血清型5,28,35のHI loopにRGD motif挿入したもの(Ad+)としてないもの(Ad-)を作成し、これらの新しいウイルスベクターの眼内での発現の特性を検討してきた。昨年度は、Ad35を眼内に硝子体注入・網膜下注入した時、眼内のどのような細胞に親和性があり、どの程度発現するかを比較しながら、GFP遺伝子を導入し組織学的に検索した。本年度は、Ad5, Ad28, Ad35にLuciferase遺伝子を導入した場合の、眼内での発現量を定量的、かつ投与後6ヶ月までの長期間にわたって経時的に解析し比較検討した。その結果、Ad5はスパイク状に発現し、1-2週間程度でbaselineレベルまで後減弱したのに対し、Ad28およびAd35では、導入後3ヶ月までは長期間安定して発現し、6ヶ月ではbaselineレベルまで低下した。この発現期間の延長は臨床レベルで使用が期待できるものであり、次年度の実験で予定されているATRAによる反復発現の効果に期待したい。昨年度は、Ad35を眼内に硝子体注入

・網膜下注入した時、眼内のどのような細胞に親和性があり、どの程度発現するかを比較しながら、GFP遺伝子を導入し組織学的に検索した。また、それぞれの血清型について、導入遺伝子をLuciferaseにした場合の眼内での発現量を定量的に検索した。本年度は、Ad5,Ad28,Ad35にLuciferase遺伝子を導入した場合の、眼内での発現量を投与後6ヶ月までの長期間にわたって経時的に解析し比較検討した。その結果、Ad5はスパイク状に発現し、1-2週間程度でbaselineレベルまで後減弱したのに対し、Ad28およびAd35では、導入後3ヶ月までは長期間安定して発現し、6ヶ月ではbaselineレベルまで低下した。この発現期間の延長は臨床レベルで使用が期待できるものである。加えて、ATRA投与による遺伝子の再発現の有無を検討した。その結果、Ad5およびAd35について、ATRA投与でいったん消退した遺伝子発現が再度増加することがわかった。これらの事実は、アデノウイルスベクターの欠点を克服するものであり、加齢黄斑変性や糖尿病網膜症などの、Lifespanでの発現は帰って不利になる疾病に対する遺伝子導入には極めて有効な方法である可能性が示唆された。
知的障害特別支援学校におけるKABC-Ⅱを活用した長所活用型の文字の読み書き指導

1研究の目的変化の激しいこれからの社会を生きる子どもたちには,「生きる力」「確かな学力」を育むことが必要である(文部科学省, 2008)。「生きる力」の要素の一つである「確かな学力」をつけることは,知的障害特別支援学校においても小・中学校同様に大変重要なことであると考えられる。特に,文字の読み書きや計算などのアカデミックスキルを確実に身に付けることは,自立や社会参加を主目的とする特別支援学校の教育においても必要不可欠的である。中でも,書き言葉の習得は全ての教科学習に深く関与しており,思考力・判断力の発達にも影響を及ぼすとも言われている(坂野, 1997)。そこで,本研究は,知的障害特別支援学校に在籍する生徒に2013年に標準化された日本版KABC-II検査を実施し,生徒の認知特性を生かした長所活用型指導を実施することで,知的障害のある生徒の文字の読み書きの困難性を改善し,文字習得の向上を目的とした。2研究方法(1)対象児:知的障害特別支援学校高等部2年生に在籍する男子生徒(2)指導期間:平成27年月から平成28年3月まで(3)指導漢字:文化庁漢字頻出表1位から1000位までの漢字200字(4)アセスメント: KABC-II検査3研究成果漢字200字中正しく書くことができなかった漢字50字について対象児の認知特性に合わせて学習した。対象児の得意な認知特性である同時処理能力並びに視覚処理能力を活用し,漢字の偏と旁,形態を意識できるような色分けや漢字間違い探しを行いながら指導にあたった。その結果,指導20回で誤答となった漢字50字について書くことができるようになった。今回, KABC-II検査を実施し知的障害がある生徒の認知特性を把握し,得意な認知特性を生かした長所活用型指導を行うことで,漢字の書字能力を向上させ,教育的な指導効果をさらに高め,文字の読み書きの能力を向上させることができることを示唆する成果を得ることができた。