hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
小胞体ストレス誘導体アポトーシスに関わるヒト・カスパーゼとその制御因子の同定

アポトーシスの実行因子であるカスパーゼ族は健常細胞中では不活性な前駆体として存在している。カスパーゼ前駆体がプロセスされて活性化するステップは、細胞がアポトーシスへ進むかどうかの重要な決定点の一つであるので、このステップの制御に焦点を当てて研究を進めた。「平成14年度」カスパーゼ-12活性化制御因子の同定を行った。マウス・カスパーゼ-12に結合し、その活性を正または負に制御する因子を酵母2ハイブリッド法によって探索した。探索相手としてHeLa細胞のcDNAライブラリーを使用したところ、腫瘍特異的蛋白質の一つ、MAGE-3(Melanoma associated antigen-3)がカスパーゼ-12特異的結合蛋白質として得られた。MAGE-3はカスパーゼ-12前駆体に結合し、その活性化(プロセシング)を抑制することが判明した。MAGE-3を高発現させた培養細胞株を樹立した。この株は小胞体ストレスに対して抵抗性を獲得した。「平成15年度」もともとMAGE-3を発現している腫瘍細胞株ではMAGE-3がアポトーシス制御に何らかの機能を果たしている事を仮定し、アンチセンスRNAやアンチセンスcDNAによってMAGE-3量を低下させたところ、細胞によっては小胞体ストレスに対する感受性が有意に上昇する結果を得た。MAGE-3にFLAGタグ配列を付与したものをトランスフェクションによりヒト細胞株293Tで大量発現させた。トランスフェクタントから細胞抽出液を調製後、FLAGタグに対する特異的抗体によってMAGE-3を沈降させた。MAGE-3と共に沈降してくる蛋白質がSDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動による解析で20種以上検出された。現時点ではカスパーゼ類似蛋白質は検出されていないが、解析したものの多くは小胞体内外に存在する蛋白質である事から、第二の結合因子が含まれている可能性について検討している。カスパーゼ前駆体がプロセスされて活性化するステップは、細胞がアポトーシスへ進むかどうかの重要な決定点の一つである。本申請課題はヒト・小胞体ストレス誘導性アポトーシスの実行機構をカスパーゼ活性の制御の面から解明することを目指している。本年度はカスパーゼ42活性化制御因子の同定を行った。探索相手としてHeLa細胞のcDNAライブラリーを使用した。約1600万クローンをスクリーンしたところ、腫瘍特異的蛋白質の一つ、MAGE-3(Melanoma associated antigen-3)がカスパーゼ-12特異的結合蛋白質として得られた。MAGE-3は精巣以外の正常組織では発現が見られないが、多くの腫瘍組織(約半数)で発現が検出されている。しかし、MAGE-3の機能については全く不明である。MAGE-3がカスパーゼ-12の活性化やプロテアーゼ活性を阻害するかどうかを試験管内及び細胞内で検討した。MAGE-3の発現系を大腸菌を用いて構築し、MAGE-3蛋白質を得た。MAGE-3はカスパーゼ-12活性化型のプロテアーゼ活性は阻害しなかった。

これらの結果はMAGE-3がカスパーゼ-12の活性化抑制因子として機能していることを示唆しており、癌細胞がアポトーシスを起こしにくくなっていることに寄与している可能性が考えられた。平成14年度に私はマウス・カスパーゼ-12の特異的結合因子、MAGE-3(melanoma associated antigen-3)を同定した。MAGE-3はマウス、ヒト共通に存在することから、ヒト細胞においてカスパーゼ-12オーソログと結合し、アポトーシス制御に関わる可能性を追究した。1.小胞体ストレスに対するMAGE-3の効果の検討。数種類のヒト細胞株を用い、MAGE-3を高発現させたトランスフェクタントを作製したが、小胞体ストレスに対する感受性に変化が見られなかった。小胞体ストレス誘導性アポトーシスに対するカスパーゼ-12への依存度が低い細胞株ではMAGE-3の効果が見えない可能性が考えられた。もともとMAGE-3を発現している細胞株ではMAGE-3がアポトーシス制御に何らかの機能を果たしている事を仮定し、アンチセンスRNAやアンチセンスcDNAによってMAGE-3量を低下させたところ、細胞によっては小胞体ストレスに対する感受性が有意に上昇する結果を得た。今後は、感受性の変化した細胞株に対してカスパーゼ-12の探索を進めていきたい。2.免疫共沈降法による探索。MAGE-3にFLAGタグ配列を付与したものをトランスフェクションによりヒト細胞株293Tで大量発現させた。トランスクェクタントから細胞抽出液を調製後、FLAGタグに対する特異的抗体によってMAGE-3を沈降させた。MAGE-3と共に沈降してくる蛋白質はSDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動による解析で20種以上検出された。再現性よく沈降してくる蛋白質については質量分析法によるアミノ酸配列の推定と蛋白質の同定を試みた。現時点ではカスパーゼ類似蛋白質は検出されていないが、解析したものの多くは小胞体内外に存在する蛋白質である事から、第二の結合因子が含まれている可能性についても検討している。
新規糖蛋白ポドカンのコラーゲン結合能を利用した腎線維化巣特異的遺伝子治療法の開発

今回我々はすでに繊維化が進んでいる病巣に、細胞外基質分解酵素であるMMP1遺伝子を腎間質に導入することで、腎繊維化巣の改善が認められるかどうかの検討を行った。6週齢SD雄ラットに片側尿管結紮を施行して進行性腎線維化モデルを作成し、結紮術後10日後にMMP1遺伝子をHVJ-liposomeに封入して結紮側尿管の口側から逆行性経尿管的に導入した。遺伝子導入効果の判定のため、MMP1遺伝子にはtagをfusionさせた。同時に比較検討のため、tagを付けたLacZ cDNAを導入する群を作成する。遺伝子導入後、4日目に屠殺し、摘出した腎臓の組織学的検討およびウェスタンブロッティングから、遺伝子が通常の10倍程度に導入、発現されたことを確認した。αSMA抗体と導入遺伝子の抗体との二重染色から、腎間質に遺伝子導入されたことを確認した。次にマッソントリクロム染色およびH-E染色により各群の遺伝子導入による組織形態、線維化の変化を評価したところ、MMP1導入群で組織学的に腎繊維化の改善傾向は見られたがスコアリングによる定量化およびコラーゲン染色の定量化では有意差は見られなかった。しかしながら尿中ヒドロキシプロリン、PICPの含有量およびウェスタンブロッティング、RT-PCR法によるコラーゲン、ファイブロネクチンなど各種線維化マーカーの発現の変動を比較検討したところ、MMP1導入群において有意にコラーゲン発現が低下していた。以上の結果から、MMP1遺伝子を腎繊維化巣に導入することは病巣の進行を抑え、沈着した繊維化巣の治療につながりうる可能性が示唆された。さらに今回新規糖蛋白ポドカンのコラーゲン結合部位がLRR23に存在することがコラーゲン結合法から示され、この部位とMMP1遺伝子との融合遺伝子をsubcloningにて作成した。現在、この融合遺伝子を腎繊維芽細胞に過剰発現させ機能解析中である。この検討が終わり次第、作成した融合遺伝子を上記の方法でラット腎繊維化巣に導入し検討する予定である。
風評被害対策に向けた情報の重要度を決める要因の抽出・分析と重要度の自動推定

近年のインターネット時代では、日々の生活で多数の人々がウェブ上の重要度の情報を探そうとしており、重要な情報を自動的に取り出し表示する方法を切望している。そこで、本研究では、各情報の重要度を推定する方法に関する研究を行った。新聞社や一般の多くの人が重要と考える情報の重要度を約90%程度で推測する方法を構築した。個々の個人の興味情報が、その個人がどういう情報を重要と考えるかと相関があることも確認した。本年度は一般的な情報の重要度に関する研究を行った。新聞の一面に書かれている記事は他の面の記事よりも重要であり、長い記事は短い記事よりも重要であると思われる。それを手がかりとした新聞データを利用した教師あり機械学習の実験を行った。新聞データを学習データとして利用した場合、入力された二つの新聞の記事のうち、いずれが1面の記事であるかを9割以上の精度で推定できた。これにより新聞の面情報を基準とした重要度は計算機で比較的容易に学習できることがわかった。また、どちらの記事の方が重要かを問う被験者実験を行った。300人以上の被験者により560組のデータ(以降被験者データと呼ぶ)を作成した。それを手がかりとした実験も行った。被験者データを学習データとして、被験者が重要と考える方の記事を機械学習により推定したところ約7割の精度で推定できた。被験者が重要と考えるものの特定は新聞の面情報を基準とするものよりも難しいが、それでもある程度の精度で推定できることがわかった。また、テキストマイニング技術や教師あり機械学習の学習過程で得られるパラメータの情報から新聞記事中のどのような単語が記事の重要度に寄与しているかを調べた。その結果、「年金」「殺人」「事件」「政府」「事故」といった単語が重要度の大きいものと思われる。この知見は今後の重要度推定システムの構築に役立つものである。情報の重要度の推定処理の高度化を目指して受身文を能動文に変換する研究も行った。本年度はユーザ個人が考える情報の重要度に関する研究を行った。ユーザ同士の判断の一致度を知るために、記事ペアにおいてどちらの記事が重要であるかのユーザによる判定についてKappa値を計算した。Kappa値は0.08という非常に低い一致度の値が得られた。このことからどういう情報を重要と考えるかは人によって異なることがわかった。教師有り機械学習法を用いた実験により、個々のユーザが二つの記事のうちどちらが重要であると判断するかを65%前後の精度で予測できることがわかった。アンケートにおいて答えてもらったユーザ個人の興味情報と、教師有り機械学習により得られた各個人が重要と考える事柄の一致具合を検証した。興味情報が機械学習で重要とされた上位500個の単語の方と有意に重なりが多かった被験者は53人で、下位500個の単語の方が重なりが多かった被験者は2人であった。53人と2人は検定で有意差があるため、ユーザ個人の興味情報が、そのユーザの重要な記事の判断と相関があることがわかった。教師あり機械学習の学習過程で得られるパラメータの情報から、男性は「トヨタ」「野球」を女性は「出産」「懐妊」という事柄を重要と考えていることがわかった。これらの単語が示すものは情報の重要度に大きな寄与をしているものと思われる。情報の重要度の推定処理の応用および発展を目指して特許文書中で特に重要な箇所である請求項とその実施例の比較と対応付けの研究も行った。
聴覚障害児における情報処理様式の個人差に関する研究

聴覚障害児(聾学校児童36年35名)を対象に、視覚的刺激の持つ形態的情報と音韻的情報に対する処理様式について、ストループテストの干渉度(反応時間差)を指標として実験的に検討した。聴覚障害児の干渉度と言語発達との関連を検討するため、聴力レベル、発語明瞭度、語音聴取能力、読話能力との相関を求めた。さらに、干渉度と文字に対する処理様式との関連を検討するために平仮名文字およびカタカナ文字の音の異同判断課題を実施し、反応時間を求めた。後者については、健聴児童および大学生との比較検討も行った。ストループ干渉度については、聴覚障害児と健聴児との間に有意な差は見られなかった。しかし、分布をみると聴覚障害児には健聴児よりも干渉度の小さい者、および干渉度の大きい者がいることが示された。干渉度と前述の言語発達の各測度との相関に一定の傾向は認められなかった。さらに、仮名文字の異同判断に要する時間は干渉度との間に有意な正の相関がみられた。このことから、ストループ干渉度は音韻的な情報処理傾向の強さを示すものというよりも、視覚的情報に対して、形態的な処理と音韻的な処理との間での選択のしやすさを表す指標であることが示唆された。これにより、聴覚障害児については通常のストループ干渉だけでなく、いわゆる逆ストループ刊渉についても検討する必要性が示された。。このことを検討するために、さらに聴覚障害児童(35年28名)を対象として、ストループ干渉と逆ストループ干渉との関係、およびそうした干渉度と、文字情報と図形情報とが競合する視覚的刺激を処理する時間との関係について検討した。。
言語分析による妄想の客観評価法

1、妄想の定義に関する文献、言語論に関する文献の収集・整理を、引き続きおこなった。このために、補助金により購入されたパソコン・スキャナー・MOドライブを使用した。2、妄想定義の問題については、コネクショニズムの観点から考察した。脳という非論理的なネットワークシステムから論理的な思考が生まれるという事実から、正常な思考と妄想が区別されるには、環境と経験が本質的な役割を果たすと結論できた。3、妄想を特徴付けるための補助テストとして用いた常識・見当識のテスト、および思考能力のテストを、同意をえられた患者に対して施行し、そのデータを研究補助者が入力保存した。その結果、妄想を語る患者は、知的な障害を持っている場合もかなりみられた。定義上、妄想は知的な障害がない患者の言動について言われなければならないため、この面からも、妄想定義の変更が求められた。4、補助金によって購入された録音器具を用いて、妄想的陳述の資料収集を引き続きおこなった。その際、インフォームドコンセントおよびプライバシーの保護には、できる限り配慮した。5、4の資料を、補助金により購入された音声分析ソフトで解析した。妄想を語る場合、音声が変わる例があることは認められが、客観的に確認できるだけのデータは得られなかった。6、Sentenceの構造分析からは、従来妄想と呼ばれていた現象を、思考障害として特徴付けることができた。7、倫理的問題から症例の収集が困難であるので、今後とも長期的にデータを集め、種々の結果の実証性を高めていきたい。1,妄想の定義に関係する文献、言語論に関する文献を収集・整理した。言語学や分析哲学の諸理論の検討から、妄想を意味論的に扱うには患者の話の中のsentenceの構造分析を中心に据えるべきであることがわかった。2,被験者に対する本研究への協力同意書を作成した。3,妄想と思考障害の識別・妄想と単なる思い違いとの識別は、理論的にも実際上も非常に難しい。その弁別のために、常識・見当識のテスト及び論理的思考能力のテストを構成した。これらのテストは、WAIS-Rなどの既に十分標準化された知能テストから抜粋・簡略化したものである。4,研究に協力することに同意した被験者に対して、上記の諸テストを施し、その陳述を補助金により購入されたテープレコーダーに記録した。5,上記テープレコーダーの記録から妄想と正常の陳述を同定し、双方をそれぞれ一定量研究補助者によりパソコンに入力し、MOに保存した。6,平成10年度の研究では、確信の表現の仕方が妄想においては独特である可能性が示されたが、未だ被験者数が十分ではなく平成11年度以降の研究の進展にまつところが大きい。7,現在のところ最も新しいSpitzer.Mの妄想定義は、妄想と錯覚の区別がつきにくくなる難点がある。妄想の定義が本研究の課題の一つであるので平成11年度は錯覚の問題も検討事項に入れる予定である。また、妄想を語る時の声の音声学的な分析も、妄想を客観評価するためには有効であると思われるので今後の課題としたい。1,妄想の定義に関係する文献、言語論に関する文献を収集・整理を、前年度に引き続きおこなった。2,妄想定義の問題については、従来の妄想定義の諸説を、対象と基準という二つの観点からまとめ直した。後者の妄想の判断基準は、更に、様相・内容・原因・その他の4つに分けて検討した。その結果、「妄想は誤った判断である」という通説は問題が多いことを報告した。3,妄想の定義を研究するなかで、妄想概念の拡張が必要であることが分かった。この拡張によって、これも通説であった「メランコリー親和型は性格である」という見方は誤りであり、メランコリー親和型は妄想の一形態として解釈されるべきであることが示された。これに関する論文は現在投稿中である。4,妄想を特徴付けるための補助テストとして構成した常識・見当識のテスト、及び論理的思考能力のテストを実際に使用してみたが、その標準化には、時間がかかりそうであった。5,妄想の音声学的な分析については、補助金により音声分析ソフトを購入した。ただし、ソフトの完成が、遅れたため今のところ十分な分析結果は出ていない。6,妄想的陳述の資料収集を、補助金により購入された録音器具を用いて、平成10年度に引き続きおこなった。その際、インフォームドコンセント及びプライバシーの保護には、できる限り配慮した。7,平成12年度は、従来からの研究である妄想定義の問題・妄想の言語分析の問題を、情報論的な観点からも分析し、新しい妄想の評価法を探っていきたい。

定義上、妄想は知的な障害がない患者の言動について言われなければならないため、この面からも、妄想定義の変更が求められた。4、補助金によって購入された録音器具を用いて、妄想的陳述の資料収集を引き続きおこなった。その際、インフォームドコンセントおよびプライバシーの保護には、できる限り配慮した。5、4の資料を、補助金により購入された音声分析ソフトで解析した。妄想を語る場合、音声が変わる例があることは認められが、客観的に確認できるだけのデータは得られなかった。6、Sentenceの構造分析からは、従来妄想と呼ばれていた現象を、思考障害として特徴付けることができた。7、倫理的問題から症例の収集が困難であるので、今後とも長期的にデータを集め、種々の結果の実証性を高めていきたい。
ＳＨＰ２によるｐａｒａｆｉｂｒｏｍｉｎの脱リン酸化を介した発癌分子機構の解析

平成24年度;(1)チロシン脱リン酸化されたParafibrominを機能模倣する(β-cateninと複合体を形成し、Wnt経路を活性化する)がん症例由来のParafibromin点変異を同定した。(2)Parafibrominのチロシンリン酸化を亢進する核内チロシンキナーゼを同定した。平成25年度;(3)SHP2がHippo経路の転写共役分子であるYAPおよびTAZと細胞内で複合体を形成することを見出した。Parafibrominのチロシン脱リン酸化を介してWnt経路の活性化を促進するSHP2の核内集積は、細胞密度依存的に制御を受けるYAP/TAZによって調節されることを明らかにした。SHP2による核内基質Parafibrominのチロシン脱リン酸化が、発がんに関与するWntシグナル経路の活性化に必須の役割を担うことが示されてきた。SHP2は細胞質および核内に分布することから、SHP2の核内移行メカニズムの解明がParafibromin-Wnt経路の制御機構を明らかにすると考えられた。平成25年度の研究実績SHP2の細胞内分布が高密度培養環境では細胞質局在を示す一方で、低密度培養環境では核内分布を示すことを見出した。細胞密度の変化に応答した細胞増殖制御を担うHippoシグナル経路関連分子の関与を検討した結果、Hippo経路の転写共役分子YAP/TAZが細胞内でSHP2と複合体を形成することを明らかにした。種々の欠損変異分子を用いた解析から、SHP2およびYAP/TAZ分子内に存在する複合体形成に関わる領域を特定した。YAP/TAZは細胞密度変化に応答したHippoシグナルによる制御を受け、SHP2と同様に高密度環境では細胞質に分布し、低密度環境では核内に集積する。細胞密度依存的なSHP2の細胞内分布変化は、YAP/TAZの発現抑制および核内集積型TAZ改変分子の発現によって喪失した。TAZの一過性の発現は、Wnt標的遺伝子の転写活性化を引き起こした一方で、SHP2あるいはParafibrominの発現抑制はTAZ依存的なWnt標的遺伝子の活性化を抑制した。一連の結果から、SHP2は細胞密度に応答して核内移行するYAP/TAZと複合体を形成し、これらを核内移行のキャリアーとして利用することで、Parafibrominのチロシン脱リン酸化を介したWnt標的遺伝子の活性化を惹起することが示された。parafibrominチロシン脱リン酸化の発がんへの関与を明らかにする為に、ラット由来RK3E細胞にチロシンリン酸化耐性型(Y290、293、315F)parafibromin分子を発現させた。チロシンリン酸化耐性型parafibrominを一過性に発現する細胞が、細胞ー細胞間接触による増殖阻害から逸脱する結果は現在までに得られていない。実験条件の改善を進めるとともに、足場非依存的な増殖能の測定など他の悪性形質転換実験系を用いて解析を行う。チロシン脱リン酸化型parafibrominを機能模倣する機能獲得型parafibromin変異の探索に関して、既知の疾患由来の変異の中からparafibrominの機能への影響が同定されていない数種類の変異を選出した。それぞれの変異parafibrominの発現ベクターをクローニングし、これをヒト培養細胞に発現させ免疫沈降実験を行った。その結果、チロシンリン酸化耐性型parafibrominと同様に著しく強いbーcatenin結合能を持つ変異体の同定に成功し、この新規変異型parafibrominがチロシンリン酸化耐性型parafibrominと同様にWnt経路を構成的に活性化することを明らかにした。parafibrominを基質とするチロシンキナーゼの同定に関して、核内分布が報告されているチロシンキナーゼの発現ベクターを哺乳動物培養細胞に導入したところ、parafibrominのY290、Y293、Y315におけるリン酸化レベルの亢進が見られた。このキナーゼ発現が引き起こすparafibrominのチロシンリン酸化の亢進は、SHP2ホスファターゼの一過性共発現によって減弱することから、このチロシンキナーゼはparafibrominのY290、Y293、Y315のリン酸化に関してSHP2と拮抗関係にあることが考えられる。交付申請時に設定した平成24年度の研究計画3項目(研究実績の概要に記載)のうち、2項目についてほぼ順調に進展しているため。交付申請時に作成した平成25年度の研究計画に基づいて推進しながらも、予想外の解析結果などにより必要に迫られた場合には研究計画に非記載の解析も新規に取り入れ、本研究課題の目的の達成を目指す。交付申請時に作成した平成25年度における研究費使用計画を基本とし、研究目的の達成に向けて効率良く適切に使用する。
デュアルデリバリーシステムによる新規歯周組織再生医療の創生

本研究の目的は、効率的かつ一般医療に普及可能な新規歯周組織再生医療の開発であり、その結果新規スキャフォールドの応用と細胞外微小環境のイオン制御により、各種細胞成長因子の発現と歯周組織細胞を含む硬組織形成細胞の分化・増殖応答の亢進が誘導されることが明らかとなった。本研究の成果は、細胞治療を応用しなくとも、スキャフォールドのトポグラフィーとイオン徐放性を工夫した上でサイトカイン投与を行うことで、高率に歯周組織再生が行える治療法が開発できる可能性を示すものと考えられる。本研究においては、効率的かつ一般医療にも普及可能な歯周組織再生医療の開発を目的とする。再生医療においては、3大要素として(1)再生を担う細胞、(2)サイトカイン、(3)スキャフォールドが必要とされる。これらのうち、幹細胞などの再生を担う細胞を培養供給することは最もコストがかかるばかりでなく、その供給を受ける医療機関の設備体制の充実が必要とされ、再生医療の一般医療の普及に制限を加えている、従って、細胞供給を行う代わりに、再生の場に存在する細胞の増殖・分化能力を最大限に高めることを目的として、細胞の増殖分化因子(サイトカイン)等に対する感受性を遺伝子導入(ジーンデリバリー)法により上昇させると同時に、薬物徐放性を有するスキャフォールドを用いて受容体のリガンド分子を配送する(ドラッグデリバリー)システムを開発することを着想した(デュアルデリバリーシステム)。具体的には研究期間内に(1)塩基性線維芽細胞増殖因子(bFGF)とその受容体遺伝子のデュアルデリバリーによる歯周組織再生の検討、(2)カルシウム受容体(CsR)遺伝子-Ca^<2+>デュアルデリバリーシステムによる歯周硬組織形成促進の検討を研究期間内に実施する。平成20年度の研究においては、まず歯周組織再生効果の定量的評価系であるマイクロCTを用いた規格化歯槽骨欠損モデルを完成させた。これによりスキャフォールドあるいは成長因子単体とデュアルデリバリーシステムとの歯周組織再生効果の違いの定量的検討が可能となった。また新規スキャフォールドとしてのハニカムフィルムのトポグラフィー効果ならびにセメント芽細胞の増殖・分化に果たすWntシグナル及びCaイオンの役割について明らかにした。以上の成果から次年度以降のデュアルシステム構築に重要な情報が得られた。そのためスキャフォールドの細胞賦活能及び骨伝導能を最大限に発揮できるよう最適な形状と素材を探索するとともに、細胞増殖因子あるいはCa受容体遺伝子を細胞導入して、歯周組織形成促進がみられるかどうかを明らかにすることを目指す。本年度においては、骨伝導能の優れたスキャフォールドとしてのOctacalcium(OCP)の気孔率や粒径が硬組織形成に及ぼす効果をin vivoにおいて明らかにした。その結果、OCPの粒径を大きくすることにより気孔率が上昇し、それに伴って硬組織形成が増加することがラットモデルを用いて明らかになった(Murakami Y.et al,2010).また歯及び歯周組織に存在する硬組織形成細胞である歯髄細胞及びセメント芽細胞を用いて、Ca濃度の増加及びWntシグナルが細胞の増殖と分化にいかなる影響を及ぼすかを検討した。その結果、Wntシグナルはこれまで考えられていたように細胞の分化を促すのではなく歯周組織細胞に対してはむしろ増殖を誘導すること(Nemoto E.et al,2009)、それに対してCa濃度の増加はカルシウムチャンネル依存的・非依存的にBMP-2遺伝子発現を誘導して細胞の分化を誘導することを明らかにした(Tada H et al,2010)。さらにカルシウムチャンネル非依存的なBMP-2遺伝子誘導はERKの活化を介するが、これが今回のターゲットであるCa受容体を介すものであることが示唆された。本年度においてはさらに細胞賦活化の手段としてトポグラフィーに着目して,新規開発されたハニカムフィルムを用いて歯根膜細胞を培養することを試みた。その結果、ハニカムフィルムは同細胞の増殖能や細胞の変形能を刺激して、立体培養による細胞シート作製に有効であることを明らにした。なおこの成果については、代表研究者の島内が2009年アメリカ歯周病学会年次大会において発表し、最優秀ポスター賞を受賞するとともに、イギリスのグラスゴー大学において招待講演を行った(2009年9月)。そのためスキャフォールドの細胞賦活能及び骨伝導能を最大限に発揮できるよう最適な形状と素材を探索するとともに、細胞増殖因子あるいはCa受容体遺伝子発現の人為的な増強を行うことで、歯周組織形成促進がみられるかどうかを明らかにすることを目指す。平成22年度に実施した研究においては、1)歯及び歯周組織由来の硬組織形成細胞の増殖・分化に対する細胞外無機イオンの影響を検討したところ、細胞外PO_4^<2->イオンの増加はERK依存性にBMP-2遺伝子発現を増強することが明らかとなった(Tada H.et al)。

一方、細胞外Ca^<2+>イオンはセメント芽細胞においてcAMP/PKA依存性にFGF-2遺伝子発現を増強することも示された(Kanaya S. et al)。次いで2)細胞賦活化の手段としてトポグラフィーに着目して,新規開発されたハニカムフィルム上で培養した歯根膜細胞の挙動についてさらに解析を行った。その結果、昨年度の本研究で明らかになったフィルム内への細胞侵入による多層細胞培養シート作製の可能性に加えて、ハニカムフィルム上で培養した歯根膜細胞の表面にオステオポンチンタンパクの発現が増強されることが示された(lwama et al.学会発表)。この結果はスキャフォールドの表面トポグラフィーが、歯根膜細胞の細胞増殖のみならず、硬組織形成細胞への分化をも刺激していることを示すものと考えられた。以上の結果から、歯周組織構成細胞の増殖・分化に重要な分子(サイトカインや分化マーカー)の発現増強は、細胞外微小環境やスキャフォールド性状の調整によって達成されることが明らかとなり、細胞治療のみに依存しない歯周組織再生治療の創生が行える展望が明確に示された。
地球環境の変動と人口の変動

1.長期的巨視的人口変動にについては、主として従来の研究成果に依拠しながら、日本と中国に関して、大づかみな趨勢を描くことが可能になった。その結果、日本においては17世紀の増大、18世紀の停滞、19世紀の再増大が、中国においては、16世紀の増大、17世紀の停滞、18・19世紀の増大がみとめられ、時間差をもって、両国では工業化以前に3倍から4倍に達する増大のあったことが確認された。これが共通の要因によるものなのか否かについいての解明は、今後に残された重要な研究課題である。2.短期的人口変動については、個別史科の得られる18世紀の東北日本に関し、宝暦・天明の飢饉時の人口変動の内容を中心に検討したが、太平洋側の諸地域の減少が著しく、とくに出生率が低下したこと、および、高齢者の死亡率が上昇したことが認められた。出生率が低下したので、この地域の人口の回復は遅れることになる。会津、郡山およびその周辺農村には、良質の人口史科が残存しており、将来の分析結果が期待される。3.都市化と人口変動との関係については、近畿地方の都市、京都、大阪、奈良、高砂(播州)の史科から、都市人口の持つ性質、男女比のアンバランス、高い独身率、低い出生率、高い死亡率、居住の不安定性などが検出され、付近農村から大量の人口の流入がなければ、人口の維持すら不可能であることが検証できた。4.以上の観察結果を総合すると、日本でも中国でも、人口変動には地域的な違いがあり、かつ、長期的には増大していても、タイムラグがあることがはっきりした。個々の研究は、完全に達成された訳ではなく、むしろ、今後実施すべき研究課題が明らかになった点もあるが、なかでも、日本と同様の「記名型史科」を有する中国(遼寧省)、オットマン帝国、ベルギー、スェーデンとの比較研究の必要性が見出されたことの意味は大きい。1)自然環境変動.時間的・空間的に極めてて限定された範囲内での自然環境の変動を、歴史文献から追うことは不可能に近く、多くの労力を割くことは、得ることの出来る結果を考えるならば、避けるべきであるとの結論に達した。むしろ、現在行われている他の研究の成果を利用する方向に転換する。2)社会変動.とくに近世日本における農業の展開、とくに特産物を伴う地域的特性、稲作の地域性を明らかにし、人口変動との関係を考える基礎作業を行った。3)巨視的人口変動.自然環境の短期的変動の影響を最も敏感に受ける奥羽地方について、各藩の人口調査資料を収集し、江戸時代の人口趨勢を明らかにすることが出来た。また国勢調査以前の人口統計を整備し、全国の人口変動について、詳細な分析が可能となるよう準備を行った。4)微視的人口変動.江戸時代の巨視的人口変動に対応して、その詳細を知り得るような史料、宗門改帳・人別改帳を調査し、その整理分析を通じて、人口や家族の変化を観察した。今年度は、前年度以来引続き、福島県の旧二本松藩領、会津地方、および、近畿地方の都市(京都、奈良、大阪、高砂)を対象として観察を行い、史料の読み取り、整理シート作成、コンピュータ入力、分析を行った。これらの個別研究を積み重ねることを通じて、巨視的人口変動の中身を実証的に明確にすることが出来た。5)中国については、明清時代の糸譜類および方誌(地方誌)の収集分析を通じ、人口変動の内容を明らかにする基礎作業を継続して行った。
地形傾度に対応した植生パターンに関する研究

3年間にわたって地形と植生との関係について研究を行った。気候要因によってその分化が起こるマクロスケールでの植生帯に対して、その下位のメソ-スケールでの植生分化は地形条件によってその分布・分化が引き起こされる。地形は複合的な環境傾度で、具体的には地形にともなう温度、水分、栄養塩、地表面の安定性、土壌の厚さなどが植物分布を支配する。しかし、これらいずれの条件も単独で効くことはなく、相互に強い相関関係で結ばれている。したがって、ここではこのようなメカニズムで形成される群落一般をさして複合的環境としての地形に着目して地形的群落(topo-community)と名付けた。成果報告書で詳しく述べたように日本のどの気候的植生帯においても、このような地形複合環境傾度に対応していると考えられる植生パターンが一般的に存在することが確認できた。亜熱帯・暖温帯常緑広葉樹林域では安定した頂部平坦面にはスダジイ、カシ類などの亜中形葉(notophyll)を持つ常緑広葉樹林が分布し、やや岩塊根的になるとツガ、アカマツ、ヒメコマツなどの針葉樹類が卓越するようになる。さらにこの領域で特徴的なのは孤立峰や海洋島の山頂部、痩せ尾根、裸地などのように風衛、貧栄養、遷移初期など一般的にシビアなストレス環境下では小形葉(microphyll)の森林に移行するというパターンがみられる点である。これはいずれの場合も環境条件が平滑斜面に発達するnotophyll林の成立を許さない場合であって、これら2種の生活型群、あるいは生態群はnotophyll群が一方的にmicropyll群を競争排除するという関係にあることを確認できた。また、平滑斜面と麓部斜面、下部谷壁斜面、あるいは崩壊地などいわゆる谷型落葉樹林との関係も同様であり、平滑斜面の常緑notophyll林は谷型落葉樹林を競争的に排除していることが明らかになった。同様の分析を冷温帯落葉広葉樹林域でも行った。落葉広葉樹林域では頂部平坦面にミズナラ、岩塊尾根にツガ、斜面にブナといったパターンが形成されるが、この場合は斜面表層物質の安定性が実生の定着、生残に大きく影響していることが明らかになった。これは湿潤変動帯における植生の特徴である。地形と植生との動的関係を調査した.調査地は那須,日光,秩父,清澄山などである.那須,日光,秩父などについては地形計測と植生分布パタ-ンの解析など記載的な調査を行った段階である.斜面以外の地形単位では気候的極相種が定着できずミズナラ林,コメツガ林などといわゆる地形的極相が成立するメカニズムが解明されつつある.清澄山では尾根,斜面,谷の地形に対応した植生分布を調べ,それぞれの植生の成立過程について具体的な知見を得た.約10年前に当時50年生の一斉再生林に設定したパ-マネントコドラ-トで再調査したところ尾根はスダジイ,斜面中部はアカガシ,斜面下部はウラジロガシがそれぞれ成長率が最も高く,次第に地形に応じたすみわけが明瞭になりつつあった.自然林地域で地形と植生のパタ-ンを調べると尾根は針葉樹,常緑樹,落葉樹が混交しており,針葉樹実生の連続的更新が可能であった.

斜面では常緑樹が卓越し,林床での針葉樹の更新は不可能であった.また,谷は落葉樹が優占し,針葉樹は定着可能であるが,頻繁な攪乱によって成長する個体はほとんど無い.頻繁に崩壊を繰り返す谷の崩壊斜面にはフサザクラの優占群落が成立する.この斜面の地形を細かく計測して調査したところ,攪乱頻度が高い部分は先駆的な落葉低木,また,安定しつつある斜面では下層に常緑樹が侵入して周囲のインタクトな斜面の植生と類似してくる.その両者の中間,高木種が定着可能な最前線にフサザクラ林が成立している.この種はパイオニアとしては地形と無関係に広く出現する.したがってこのパタ-ンの成因は安定立地ではフサザクラが競争的に排除されてしまうためである.まとめると,特殊地形は制約要因となって出現種を限定するが,一般地形は種間競争を介して競争的に有利な種を定着させる.次年度以降は地形的制約要因の解明とそれに対する種の適応,種間競争を決める競争的ヒエラルキ-の解明をする.2年目にあたる今年度は、昨年と同様、那須、日光、秩父、清澄山などで調査を継続した。秩父山地の針葉樹・落葉樹混交林での調査の結果、昨年度報告した清澄山の常緑広葉樹林の場合とも整台性のある興味深い結果を得た。山地帯下部にあたる標高1250mにパ-マネントコドラ-トを設置し、2年間にわたって詳しいパタ-ン解析を行ったところ、凸型斜面はブナ・ツガ型、凹型斜面にはブナ・イヌブナ型の森林が対応していた。この植生パタ-ンの成因を樹齢解析、実生の生残過程などによって調べてみると、ブナの実生は地形に無関係にどこにでも出現する。しかし、ツガの実生は凸型斜面では定着するが、凹型斜面では地表面の小撹乱があるために定着できない。ツガが定着する凸型斜面ではツガの定着後は林床の照度が足りず下層に後継樹は侵入できないので、ツガの枯死後はミズメなど先駆性落葉樹が侵入し、針葉樹と落葉樹の間でサイクリックな動態を示す。凹型斜面では落葉樹か枝折れや幹折れなどの撹乱を受れ易く、林冠が完全にはうっぺいしないので、ナツツバキ、コハウチワカエデなどの先駆性・途中相性の落葉樹が混在することが多く、多様性の高い群落が維持されている。それぞれの群落型の成立する立地の土壌の水分条件、林床の光条件などを計測しても群落の成立の第一義的な要因にはならない場合が多かった。日本のように湿潤変動帯に位置する山岳地では清澄山や今回の秩父での例のように地形にともなう地表の安定性が植生の成立に大きな意味を持っていることが明らかになった。その場合は、実生のサイズ、崩落や埋没後の萌芽再生能力などが重要である。また、常緑針葉樹と落葉広樹といった生活型の差異はそれぞれの定着後の後継樹の出現パタ-ンを決定する重要な要因となる。したがって、種間競争を決める競争的ヒエラルキ-は地形単位ごとに設定されねばならない。最終年度である今年度はこれまでの結果をとりまとめる方向で研究を行った。1年目、2年目の調査経過については既に各年次ごとに報告してあるので、ここでは最終的に得られた結果を一般化する方向で報告する。地形に対応した植生パターンの成因が明確に把握されたのは日光、秩父、清澄山などであった。那須でも調査を行ったが、ここでは短期間であったことと、若令林分であったために斜面方位に対応した植生パターンは把握できたものの、その成因までは明確にできなかったので、今後も調査を進める予定である。
西洋における世界国家の経営と民族問題

本年度も,昨年度に引き続いて西洋史上に現われた様々な形態の世界国家=「帝国」における広義の統治システムと帝国内部・周辺諸民族の対応との相互作用について,具体的な事例を通して考察を深化させるために,以下の研究会を開催し,そこでの報告・討論を中心に,問題点の提示・整理・検討を行なった。(1)「20世紀初頭・バルトのドイツ義勇軍について」(報告者・山田義顕):現在のバルト問題にも関連する,第一次対戦後におけるバルト,特にラトビアの独立問題について。(2)「ウェ-ルズにおける宗教改革とウェ-ルズ語」(報告者・指昭博):ウェ-ルズ語の聖書のこの地でのナショナリズムへの影響について。(3)「スラヴ人ト-マスの反乱とビザンツ帝国」(報告者・中谷功治):多民族国家ビザンツにおける被支配民族の動向を反乱を通しての検討。(4)「ドイツ帝国の成立期における民衆と自由」(報告者・南直人):支配者の側からの帝国の枠組みの登場と,これに対する民衆の自由の木に象徴される自由観。(5)「フランス革命と彫像の時代」(報告者・阿河雄二郎):(6)「ロ-マ帝国の衰退と変容(再論)」(報告者・合阪學):ロ-マからフランクへの「帝国の遷移」の当時の文学作品等での受け止めについて。(7)「ノ-ス・カロライナ植民地におけるレギュレ-タ-運動」(報告者・和田光弘):アメリカ植民地時代における内乱を、セクショナリズムと移民問題との関連で検討。以上の発表の成果は,『研究成果報告書』に掲載されるほか,なお検討を要するものについては後日別の形態にて発表を予定している。本年度は、西洋における世界国家の経営と民族問題を究明するために、以下の研究会を開催し、そこでの報告・討論を中心に、問題点の提示・整理・検討をおこなった。1.「文化の多様化と画一化--ロ-マ帝政下の属州に於ける」(報告書・合阪學)では、ロ-マ帝国解体期の5世紀における帝国北方ノリクム属州の諸都市に焦点を当て、ロ-マ軍団の進出・駐屯・撤退過程にあわせて、地方都市の成立(ロ-マ化)とキリスト教化、さらにはゲルマン諸族の侵攻(ゲルマン化)を詳細に報告した。とりわけ、ロ-マ軍不在の属州において、司教や修道士(後に聖人になる)の政治的活躍には注目すべきものがある。本報告の主要な史料は、エウギッピウスの著した『聖セウェリヌス伝』であるが、これについては、報告者が本年2月に発表した論文(裏面参照)において、翻訳・解説・分析がなされている。2.「テュ-ダ-史再論」(報告者・栗山義信)では、イギリスが世界国家としての全貌を現わす以前、テュ-ダ-期・ヘンリ-8世の時代をとりあげ、宗教改革の視点から、その巧みな統治のメカニズムの一端を明らかにした。聖書をめぐる神学上の論争に触れつつも、その背景となる民衆の心性に大いに注目し、後のイギリス世界帝国への道程との関連で、議論が深められた。3.「神話の効用--「マドック伝説」とケルト辺境問題」(報告者・川北稔)では、イギリス帝国支配に関わるひとつの神話=「マドック伝説」を通じて、世界国家経営の一側面を照らしだした。それは支配構造のソフトな部分の解明であると同時に、ケルト辺境という民族問題をも包含する。民族問題と複雑に錯綜した世界国家の重層構造が、具体的なかたちで明らかにされた。本年度は、昨年度の研究成果の更なる発展を目指し、分担者の担当地域・時代ごとに研究課題である「西洋における世界国家の経営と民族問題」を考察するために、次にあげる研究会を開催し、そこでの具体的な報告をもとに、まとめの作業をおこなった。(1)「20世紀初頭・バルトのドイツ義勇軍」(報告者:山田義顕)

(2)「ウェ-ルズにおける宗教改革とウェ-ルズ語」(報告者:指昭博)(3)「スラヴ人ト-マスの反乱とビザンツ帝国」(報告者:中谷功治)(4)「ドイツ帝国の成立期における民衆と自由」(報告者:南直人)(5)「フランス革命と彫像の時代」(報告者:阿河雄二郎)(6)「ロ-マ帝国の衰退と変容《再論》」(報告者:合阪學)(7)「ノ-ス・カロライナ植民地におけるレギュレ-タ-運動」(報告者:和田光弘)以上の内、(1)・(2)・(3)・(6)と昨年度の川北稔による発表の内「マドック伝説」に関係する部分が、討論を重ねた上で『研究成果報告書』にまとめられ、(7)の和田論文は雑誌『西洋史学』160号に掲載されることになった。その他については、更に検討が必要との結論に達し、後日別の形態での発表となった。なお、川北稔の研究報告の残りの成果は、著書『民衆の大英帝国ー近代イギリス社会とアメリカ移民ー』として昨年刊行された。
肝前駆細胞由来肝癌の発癌・進展に関わるmicroRNAとその診断・治療への応用

肝切除時ミラノ基準内で、その後ミラノ基準外の再発をきたしたものと、肝切除時ミラノ基準外であったものの再発を認めなかった症例で比較すると67遺伝子が前者で発現増強していた。肝細胞癌においては36%の症例にezrin発現がみられ、CK19の発現と有意に関連しており、それは独立した有意な再発危険因子であることを見出した。JHH1株に対してsiRNAを利用し、ezrin発現を抑制すると増殖能が抑制された。肝内胆管癌ではNotch2が癌細胞に、そのリガンドであるJagged1が癌細胞と間質細胞に発現していることを明らかにした。1.肝細胞癌における遺伝子発現プロファイリング肝細胞癌に対する肝移植の際に用いられるミラノ基準内の症例においても外科切除後再発をきたす症例が認められるのに対し,ミラノ基準外の症例の中には外科切除後全く再発をきたさない症例も存在する。このようなheterogeneityは同じ肝細胞癌の中に生物学的に異なるsubgroupが存在することを示唆するものであり,Leeらはそのheterogeneityを発癌起源細胞の違いにその原因を求めている。そこで,ミラノ基準内外と再発の有無の関係からDNAマイクロアレイ法を用いて肝細胞癌の遺伝子発現プロファイリングを行い,その違いにつき検討した。現在までにROBO1,STMN1,CKAP2,CCNE1,FGFR4の5遺伝子が候補遺伝子として抽出されており,これらとCK7,CK19,ezrinと関係について検討するとともに,microRNAアレイによるプロファイリングに備えている。2.肝細胞癌におけるezrin(Vi12 gene)の発現評価主に免疫組織染色を用いて,ezrinの発現について検討した。正常肝組織ではezrinの発現はみられず,慢性障害肝では肝前駆細胞活性化を反映するといわれるductular reactionに強く発現がみられた。この結果はezrin発現と肝前駆細胞との関連を示唆するものである。肝細胞癌においては36%の症例にezrin発現がみられ,それらは,CK19の発現と有意に関連していることを示すとともに,ezrinの発現は独立した有意な再発危険因子であることを見出した。ただし,ezrinは炎症性浸潤細胞にも発現していることが明らかになったため,Vi12 geneの発現を組織で検討するのは不適当と判断された。細胞株になかではJHH1株にezrinの高発現がみられたため,それに対してsiRNAを利用し,増殖能などの検討をしている。現在のところezrin発現を抑制すると増殖能が抑制されるという結果を得ている。肝内胆管癌についてもNotchシグナルを中心に現在検討中である。1.肝細胞癌における遺伝子発現プロファイリング肝細胞癌に対する肝移植の際に用いられるミラノ基準内の症例においても外科切除後再発をきたす症例が認められるのに対し、ミラノ基準外の症例の中には外科切除後全く再発をきたさない症例も存在する。このようなheterogeneityは同じ肝細胞癌の中に生物学的に異なるsubgroupが存在することを示唆するものであり、Leeらはそのheterogeneityを発癌起源細胞の違いにその原因を求めている。そこで、ミラノ基準内外と再発の有無の関係からDNAマイクロアレイ法を用いて肝細胞癌の遺伝子発現プロファイリングを行い、その違いにつき検討した。ROBO1、STMN1、CKAP2、CCNE1、FGFR4の5候補遺伝子中、ROBO1とSTMN1についてCK19、ezrinとの関係を免疫組織学的に検討しているが、いまだ有意な結果は得られず、その評価について再検討するとともに、mRNAレベルでの検討を考慮している。2.肝細胞癌におけるezrin(Vi12 gene)の発現評価主に免疫組織染色を用いて、ezrinの発現について検討した。正常肝組織ではezrinの発現はみられず、慢性障害肝では肝前駆細胞活性化を反映するといわれるductular reactionに強く発現がみられた。肝細胞癌においては36%の症例にezrin発現がみられ、それらは、CK19の発現と有意に関連していることを示すとともに、ezrinの発現は独立した有意な再発危険因子であることを見出した。ただし、ezrinは炎症性浸潤細胞にも発現していることが明らかになったため、Vi12 geneの発現を組織で検討するのは不適当と判断された。細胞株のなかではJHH1株にezrinの高発現がみられたため、それに対してsiRNAを利用し、増殖能・浸潤能の検討をした。その結果、ezrin発現を抑制すると増殖能が抑制されるという結果が得られたため、現在ezrin高発現肝細胞癌に対する増殖抑制効果をin vivoにおいて検討することを考慮している。肝内胆管癌についてもNotchシグナルを中心に検討しているが、免疫組織学的にNotchタンパクは癌細胞に、Jaggedタンパクは癌細胞と間質細胞に発現していることを見出している。
薬物吸収部位としての大腸粘膜の評価:薬物透過障壁能の物理化学的解析

大腸粘膜のバリアー能について、透過し得る分子サイズの小腸粘膜との差を明らかにするため、水溶性化合物で分子量の異なるpolyethylene glycol(PEG)300,600及び1000を用いて、in situループ法によりラット小腸及び大腸からの吸収を検討した。用いたPEGはそれぞれ分子量300,600及び1000を中心に、重合度の異なる各種分子量のPEGの混合物である。その結果、小腸では分子量600付近まで吸収が認められるのに対して、大腸では分子量300以上では吸収は困難であった。これらのPEGについては細胞間隙を通るいわゆる経細胞側路が考えられるが、両部位での透過可能な分子量すなわち分子サイズの差は細胞間隙の大きさの違いに基づくものと思われる。この点については電気生理学的解析によっても裏付けられた。また、細胞間隙の帯電状態の違いも示唆されたが、細胞間隙に作用する吸収促進剤EDTAの作用はその帯電状態への影響も含むことが明らかとなった。一方、経細胞路の透過性は薬物の親油性に左右されるが、小腸と大腸では吸収の親油性との関係に違いが見られた。3種のアシルサリチル酸を用いて吸収実験を行った結果、小腸部の方が大腸部より極めて吸収がよく、大腸の中では結腸の方が直腸より吸収が良好であった。これは大腸よりも小腸、特に小腸上部では吸収表面積が大きいことが寄与していると考えられる。また、どの部位でもアシル鎖が長くなるに従って吸収が良好になっているが、小腸部では親油性が増しても、吸収が頭打ちになった。そこで、親油性の異なる2種類の薬物acetaminophenとindomethacinの吸収を評価したところ、高親油性薬物の場合には小腸と大腸で吸収速度に差がなくなることが分かった。これらの現象は粘膜表面近傍に存在する非攪拌水層の抵抗の部位差で説明することができた。
非等方格子QCDによるB中間子の物理の数値的研究

平成14年度は、B中間子の物理の数値計算に用いるための非等方格子QCD作用の理論的研究を行った。具体的には、いくつかの非等方格子フェルミオン作用について摂動の1次までの計算を行うことにより、重いボトムクォークに対する非等方格子の方法の有効性を調べた。本研究では、従来良く用いられていたクローバー型の作用と我々により新たに提案されたD234型の作用の2つを用いた。クローバー型の作用では非等方格子上のボトムクォークに対し、非物理的な状態が余分に現れてしまうという問題があるが、D234型作用では、新たな相互作用項を含むためこの問題は回避できる。私は摂動0次でクォークのエネルギー運動量関係式を計算することにより、このことを確認した。従ってD234型作用はボトムクォークを含むB中間子の物理の数値計算に用いることができる。次に、私は上の二つの非等方格子フェルミオン作用について、フェルミオンの静止質量と運動学的質量を摂動の1次までで計算し、これによりフェルミオン質量に依存した格子離散化の系統誤差を見積もった。この計算の結果、クローバー型作用とD234型作用のいずれの場合でも、フェルミオン質量に依存した系統誤差は非等方格子では非常に小さいことがわかった。この結果は、非等方格子の方法を用いれば系統誤差を抑えつつ、B中間子の物理量を精度良く測定できることを示唆している。
先天性副腎リポイド過形成の病因の同定

先天性副腎リポイド過形性は、副腎・性腺ステロイドホルモンの合成初期段階の異常で全てのステロイドホルモン分泌不全を来す病因不明の疾患である。この酵素はP450sccならびにアドレノドキシン還元酵素・アドレノドキシンより構成されるとミトコンドリア内膜酵素である。本症は胎児期性腺の男性ホルモン産成不全のため全て性表現形が女性となるが、46、XYの染色体型では異所性精巣を持ち治療摘出する必要がある。精巣からRNAを抽出しP450sccのcDNAをRT-PCR法で採取し精製DNAを直接塩基配列法により決定したが、正常人にも見られる1アミノ酸置換のみ検出された。さらにWesternblot法でP450sccの蛋白発現は正常に認められた。以上から予想に反して我々の検討した症例ではP450sccは正常であった(UCLA,Millerならびに九州大学第三内科の症例も同様所見)。さらにアドレノドキシン還元酵素の蛋白発現を見た所これが我々の例では著しく低い事を見いだした。(精巣ミトコンドリアの抽出ならびに酵素活性の測定・アドレノドキシン還元酵素添加による酵素活性の変動ならびにミトコンドリア内膜の脂肪酸構成を検討した(中村学園大学原孝之博士と共同)。この結果脂肪酸構成が症例では正常と異なる事(lysophosphatidylcholine=LPCがコントロールの6倍高い)が判明した。LPCの増加でこの酵素活性が低下する事がすでに示されている(J.Biol Chem261:14118-24、86/Biochemistry 25:6446-6466,86)。ミトコンドリア脂肪酸の異常が他の細胞で認められるかどうかを検討するため、症例リンパ球をセルライン化した。このミトコンドリアについて検討中である。脂肪酸構成を規定する酵素に的を絞り既に得られた精巣cDNAから解析する事で病因に結びつくと考え研究を遂行中である。