hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
結婚、出産と女性のキャリア形成に関する日中比較

中国のパネル調査のデータ構築は時間がかかるため、本年度は先に「21世紀成年者縦断調査」を用いて、日本における「結婚、出産と夫婦間の賃金格差」について分析を行った。分析では、結婚前(妻の結婚前、夫の結婚時の所得を利用)、出産前の夫婦間賃金格差、および夫婦の学歴の組み合わせ、年齢の差、結婚、出産時の妻の年齢、妻の世帯収入に関する考え方をコントロールし、結婚・出産が夫婦間賃金格差に与える影響について分析を行った。さらに、結婚前正規就業かどうか、出産前後に就業継続したかどうかに着目し、その後の夫婦間賃金格差の違いについて考察した。賃金指標として、年間所得、観測賃金率、推定賃金率の3つを利用した。分析の結果、以下のことが確認された。結婚、出産は夫婦間の賃金格差を拡大させる。結婚、出産が夫婦間賃金格差に与える影響の度合いは、年間所得を賃金指標とした場合が最も大きく、その次は観測賃金率、推定賃金率の順となっている。結婚前非正規就業だった女性と比べ、正規就業した女性のほうが結婚後の夫婦間賃金格差の拡大度合いが大きい。女性全体の平均的な効果と比べ、継続就業した女性のほうが出産後における夫婦間の賃金格差が小さい。結婚、出産が夫婦間の賃金格差に与える影響の度合いは、夫婦の学歴の組み合わせや、妻の結婚、出産年齢、および結婚、出産前の夫婦間の賃金格差の水準によって異なる。夫と比べ妻が低学歴の場合、結婚、出産後の夫婦間賃金格差が大きい。その反対に、妻が夫より高学歴の場合、結婚、出産後の夫婦間賃金格差が小さい。日本では、結婚、出産をきっかけに、家庭内の性別役割分業は強まる傾向にあるが、妻の結婚、出産前の稼得能力によって、家庭内の役割分業が異なることがうかがえる。来年度に関しては、中国のパネル調査を利用した分析を加え、日中比較を行う。当初の予定通り、まず日本のデータを用いて、「結婚、出産と夫婦間の賃金格差」について分析を進め、国内外の学会、セミナーなどで研究報告を行い、有益なコメントを得ることができたため。「結婚、出産と夫婦間の賃金格差」については、いただいたコメントに基づき修正・改訂を行う。来年度は中国のパネル調査を加え、「結婚、出産と女性のキャリア形成に与える影響に関する実証分析」の日中比較を行い、原稿をまとめる。学会や研究会などで研究報告を行うとともに、査読雑誌への投稿を行う。原稿の英文校正に利用する予定だったが、間に合わなかった。残額を次年度以降の研究を進めるための英文校正や書籍購入に利用する予定である。
腸上皮オルガノイドと血流温存バイオチューブによる小腸再生の研究

短腸症候群症例に対して、小腸移植を凌駕する治療法の開発が望まれる。バイオチューブは、体内の異物周囲に線維性組織とコラーゲンで形成される組織である。既に、組織の補修材として移植し、外・内・中胚葉組織の自律再生が確認されている。一方でオルガノイドは、組織の細胞を三次元構造として培養したものである。腸上皮オルガノイドが粘膜欠損腸管に移植されると腸上皮組織を再生することが証明されている。我々は、小腸粘膜上皮オルガノイドをバイオチューブに播種して小腸粘膜を再生させ、この上皮付与バイオチューブと遊離腸管節を吻合することで神経と平滑筋組織の自律再生を実現させ機能的腸管の再生研究を行う。
一般人口における抑うつ評価尺度の総スコアと項目反応の分布の数理パターン

うつ病は現在社会では深刻な社会問題となっている。そして現在のうつ病診断は、抑うつ症状の重症度を評価することによって行われる。では一般人口において、抑うつ症状の重症度はどのような数理学的な分布を呈するのだろうか?意外なことに先行研究はほとんどなかった。我々は大規模なサンプルサイズのデータを用いれば、一般人口における抑うつ評価尺度の項目反応や総スコアの分布に何らかの特徴的な数理パターンが見出せるのではないかと仮説を立て、研究を開始した。一般人口3万人を対象とした保健福祉動向調査(2000年)のCES-D抑うつ評価尺度データを解析した。その結果、我々は抑うつ症状の項目反応には共通するパターンが存在することが明らかになった。さらに任意の抑うつ症状の項目スコアの和の分布が、最少スコア部分を除いて指数パターンに従い、また指数パターンにおけるパラメーターの値は選択した項目数によって決まることを見出した。当該年度においては、日本だけでなく、欧米の大規模疫学調査のデータを使って本現象の再現性が確認した(Tomitaka et al 2018:PloS )。またK6,PHQ-9といった他の抑うつ評価尺度でも、本現象を確認できた(Tomitaka et al 2019: Heliyon)。さらに抑うつ症状の分布が年齢に対して安定しているのは、指数分布が関係していることを報告した(Tomitaka et al. 2018:Frontiers in psychiatry)。今後はなぜこういった指数分布に従った現象が起きるのか、そのメカニズムを明らかにする予定である。「研究実績の概要」に記載したように、様々な評価尺度を用いた抑うつ症状の項目反応や総スコアの分布について解析を行い、成果を得た。その内容を海外の学術誌に投稿したところ、3本が掲載された。また国内の研究会でも一度発表を行った。これまでCES-D,PHQ-9やK6といった評価尺度を用いた日欧米の公的データを分析することによって本現象の再現性を確認したが、他のGHQ,SDS(Self-rating Depression Scale),ベック抑うつ評価尺度、あるいはGAD-7のような不安評価尺度でも検証する。また一般人口以外の集団でも調査を行い、更に分布に影響を与える因子(年齢、性、他の属性)を抽出する。更にこのような現象が起きるメカニズムを明らかにする。そのためには、以下の方法論を用いる予定である。(1)抑うつ評価尺度の数理学的な考察によってモデル(仮説)を作成する。(2)上記モデルを検証するためのシミュレーション研究や数理的証明を行う。当初計画よりも研究が進展したため、本年度だけで既に3つ論文を掲載することができ、さらに現在一つの論文が掲載予定である。

予想していた以上の論文の掲載費用が必要となったため、前倒し支払い請求を行ったが、出版社からの論文掲載費用の請求が2019年度にずれてしまったため、次年度使用額が生じてしまった。生じた次年度使用額は、来年度に先送りとなった論文掲載のための費用にあてるつもりである。基本的には本年度以降の研究計画に大きな変更はなく、得られた成果を取りまとめ、成果の発表を進めて行く。
「供養の文化」の比較研究をとおして見る「死」の表象の形成過程とその現代的変容

「供養の文化」を日本の民俗宗教の重要な特徴のひとつとして位置づけることによって、古代・中世から近現代にいたる、その歴史的変遷の一端を解明することができた。さらに、フィールドワークを通して、中国・韓国を含めた現代の東アジア地域における「供養の文化」の活性化や変貌の実態を明らかにした。本研究の目的は、日本における民俗宗教的な死者儀礼をささえる霊魂観や死後イメージの特徴を「供養の文化」という文化類型のもとに把握し、その歴史的・宗教思想的な形成過程を東アジア世界との比較研究をとおして解明すること、そして、今後の日本社会の動向においてそれがどのような意義と問題点をもつものであるかを、とりわけ現在大きく変容しつつある「死」の表象の行方を問うことを通じて、学際的・領域横断的に明らかにすることである。その方法として、(1):東アジア地域全般の死生観や死後イメージの多様性を「供養の文化」複合の視点に立って整理・検討すること、(2)日本における「供養の文化」の形成過程とその宗教思想上の意義と特質とを学際的に検討しなおすこと、(3)現代日本における葬送儀礼や墓制の急激な変容をとおして予測される「死」の表象の行方について、隣接東アジア諸地域での並行的な事例の実地調査を交えつつ比較検討すること、を予定している。上記の目的に沿って実施した19年度の活動内容は、おおむね次のとおりである。(1)韓国社会の葬礼文化の現状について実地調査を行ない、都市化によって儒教的な葬墓制が火葬へと大きく転換することで生じている死生観・家族観・共同体意識の急激な変化について検討した。(2)中国・上海市における仏教寺院の死者供養儀礼について実地調査を行ない、文革によって中断していた中国社会の死者祭祀の現状について多方面の情報収集を実施した。(3)「供養の文化」の日本的な特質として想定される動物供養の現代的な現象として大学病院や製薬産業において行なわれている実験動物慰霊行事をとりあげることとし、大正期に遡る大学医学部等での動物供養の実態とその宗教的背景について調査を開始した。(4)そのほか、各分担者の専門領域内での「供養の文化」にかかわる諸問題について調査研究をすすめた。本研究の目的は、日本における民俗宗教的な死者儀礼をささえる霊魂観や死後イメージの特徴を「供養の文化」という文化類型のもとに把握し、その歴史的・宗教思想的な形成過程を東アジア世界との比較をとおして解明すること、さらに、今後の日本社会の動向においてそれがどのような意義と問題点をもつものであるかを、とりわけ現在大きく変容しつつある「死」の表象の行方を問うことを通じて、学際的・領域横断的に明らかにすることであった。年度後半には代表者が体調不良で入院となったが、分担者・連携研究者のサポートによって、所期の成果を達成することができた。20年度の実績として、まず「供養の文化」の歴史的形成過程については、縄文時代から古墳時代に創出されたとみられる死者供養的な儀式、日本独自といわれる中世の五輪石塔、供養文化の普及に貢献した琵琶法師の役割、などに焦点を合わせた研究成果が蓄積された。新発見となった伊勢弘正寺の五輪塔は、伊勢市の文化財にも認定されることになった。東アジアとの比較では、日本における動物供養儀礼と、日本占領下に始められた韓国における実験動物供養との比較研究を、現地調査によって進めた。「供養の文化」の現代的変容については、死者供養仏教の興隆が注目される沖縄県、土葬から火葬への変化や、儒教的習俗の著しい変化がみられる韓国都市部などにおいてフィールドワークを行なった。さらに、中国沿岸の経済先進地域の仏教寺院や道教廟における冬至の死者供養儀礼、墓苑における落葬(納骨)儀礼などの実態について現地調査を行なった。これらの詳細は、学術論文・学会発表等で順次公表する予定である。前年度の代表者、中村生雄の体調不良により、最終年度にあたる21年度は池上良正を代表者として、所期の成果をあげることができた。本年度は各メンバーが、それぞれの課題に関する「まとめ」や、国内外での補充調査を進めるとともに、全メンバーによる共同調査および共同討議、共同の成果報告を行なった。まず6月には、伊勢市の内宮・外宮周辺地域において、中世の死者供養施設、および近現代の神葬祭関連施設の共同調査を行なった。さらに9月には、京都大学で開催された日本宗教学会において、「死者供養文化の深層」というパネル発表で、本科研の成果を報告した。

代表者の池上がパネル責任者と司会をつとめ、分担者の佐藤が古代の日本列島における死者供養文化の淵源について、松尾が中世における石塔の思想史について、岡田が近代の実験動物供養の歴史的展開について、井上が現代韓国における仏教的な死者供養儀礼の実態について研究成果を発表し、フロアを交えて質疑応答を行なった。また、東京23区内における動物供養碑の基礎資料を収集した。これは近くデータベースとしてインターネットなどで公表の予定である。
モデル動物を用いた骨格筋におけるインスリンシグナルの役割の解明

体重はMIRS1/2DKOでのみ減少し、骨格筋重量が低下していた。糖代謝については、糖負荷試験、インスリン負荷試験を行ったが、MIRS1KO, MIRS2KO, MIRS1/2DKOの3系統ともインスリン分泌不全及び抵抗性を認めなかった。一方、インスリン負荷試験と同様の方法でIGF-1負荷試験を行ったところ、MIRS1/2DKOでは有意なIGF-1抵抗性を認めた。このことを分子的にも確認するため、下大静脈よりIGF-1を投与し、骨格筋のAktのリン酸化を評価したところ、IGF-1投与後のAktのリン酸化は明らかに低下しており、このIGF-1抵抗性が体重減少、骨格筋量低下の原因と考えられた。次に、運動時のIRS-2の役割を検討するため、MIRS2KOの運動耐用能を検討したが、有意な差を認めなかった。MIRS2KOの暗期/明記および運動負荷時(高負荷/低負荷)の呼吸代謝測定を行ったところ、暗期および高負荷運動後に呼吸商の上昇を認めた。インスリンの持つ同化ホルモンとしての作用を考えると、骨格筋のIRS-2は運動後のグリコーゲン合成・再貯蔵に関与している可能性が示唆された。●骨格筋の糖代謝に対する役割:骨格筋特異的IRS-1欠損マウス(MIRS1KO)と骨格筋特異的IRS-2欠損マウス(MIRS2KO)では、インスリン負荷試験・経口ブドウ糖負荷試験では表現型を認めなかったが、骨格筋特異的IRS1/2ダブル欠損マウス(MIRS1/2DKO)ではインスリン感受性には異常を認めなかったものの、経口ブドウ糖負荷試験では空腹時血糖値および負荷後15分の血中インスリン値が有意に低下を認めた。以上の結果より、インスリン依存性の血糖低下作用には差を認めないが、インスリン非依存的な骨格筋のブドウ糖取り込みが亢進しているではないかと考えた。●骨格筋の成長に対する役割:MIRS1/2DKOの体重を経時的に測定したところ、7週齢から78週齢までは有意に体重の減少を認めたが、79週齢以降はコントロールマウスの体重が低下傾向とり、体重の有意な減少は消失した。MIRS1/2DKOの各組織の重量を解剖およびCTで検討したところ、MIRS1/2DKOの体重減少は骨格筋重量の減少によると考えられた。また、体長についてはMIRS1/2DKOで短縮を認めた。●以上の結果よりMIRS1/2DKOではインスリン受容体シグナルのみならずIGF-1受容体シグナルの障害が主たる表現型を説明するものと考えた。そこでマウスの腹腔内にIGF-1の投与を行い血糖値の推移をインスリン負荷試験同様に観察したところ、MIRS1/2DKOでは有意なIGF-1抵抗性を示した。その分子メカニズムを解明するため、マウスの下大静脈よりIGF-1を投与し、骨格筋におけるインスリンシグナル関連分子の変化をウエスタンブロット法で検討を行ったところ、IGF-1投与後のAktのリン酸化はほぼ消失していた。これらの結果よりMIRS1/2DKOの骨格筋減少はIGF-1受容体シグナルの障害が主たる原因であると考えられた。骨格筋の糖代謝と成長に関する解析はおおむね順調に進んでいるが、運動時の骨格筋におけるIRS-2の役割についてはやや解析が遅れている。その理由として、各マウスの運動耐用能により同一条件の運動条件では運動負荷の度合いが異なり、血糖値の低下やIRS-2の発現上昇の程度にばらつきが大きいためである。今後は研究目的に合致した運動プロトコールの条件検討が必要である。●骨格筋の糖代謝・成長に対する役割については、主にIGF-1受容体シグナルが障害されていることが示唆されたが、ウエスタンブロット法ではAktのリン酸化までしか確認できていないため、当初の予定通りGSK3β, AS160, TBC1D1といった下流分子のリン酸化の検討、骨格筋へのブドウ糖取り込み量の測定を進めていくとともに、骨格筋の成長障害という観点から、mTor, S6Kといった分子についても検討を行っていく方針である。また、平行して骨格筋の成長障害について組織学的評価も行っていく方針である。●運動時の骨格筋における役割に関しては、本研究目的に合致した運動プロトコールの条件検討を行い、運動中の呼吸代謝測定および運動前後の血糖値の変化を測定する予定である。
放射線誘発甲状腺がんの新規バイオマーカー探索と発がん機構解明

研究実績の概要東電福島原発事故後、長期低線量率放射線被ばくによるがんを含む健康影響が懸念されている。特に放射線感受性の高い小児の被ばく影響に関心が高まっている。実際に福島県において、甲状腺がんが健康調査によって多く発見され危惧されている。しかし、福島で発見されている甲状腺がんの遺伝子変異パターンはチェルノブイリ原発事故後の甲状腺がんとは異なっており、放射線被ばくに起因する発がん過程における遺伝子変異について詳しくはわかっていない。2018年においては、動物実験で得られた甲状腺の病理標本を用いて、病理診断を進めた。我々のマウス甲状腺の標本は胎仔期、新生仔期あるいは若成体期に放射線を照射して終生飼育したマウスであり、発がん過程の各段階における病理組織の特徴や照射時年齢依存性について調べることができる。来年度は、さらにそのグループごとの遺伝子変異解析により放射線誘発甲状腺がんのバイオマーカーの探索を行うことによって、発がん機構解明のための基礎的情報を得ることを目標としている。概ね順調に進んである。放射線誘発甲状腺の標本をみたところ、線量依存性では1Gyで病変の数の増加をみとめた。照射週齢に関しても統計解析を進み、さらに詳しい結果を求める。甲状腺病理診断を完成したうえで、免疫染色でタンパクレベルでの評価と次世代シーケンシングでの遺伝子解析を進める予定である。次世代シーケンシング甲状腺固定標本がサイズ的小さいため、可能かどうか検討中であり、500pgからの微量調整可能な試薬は既に購入済み。免疫染色など条件検討が必要となり、一部試薬の購入を来年度にまわしたため。
ナノシリコンドット・ナノワイヤの配列制御によるネオシリコン量子情報処理素子の創製

ナノ結晶シリコンの粒径制御、配列制御法を検討し、微小電極間に1個のナノ結晶を配列し、電子輸送特性の測定を行った。Ge/Siコアシェルナノワイヤの形成技術を最適化して、熱電素子応用への展望を拓いた。多重集積シリコン量子ドットを作製し電子輸送特性を測定した。2重結合量子ドット、3重結合量子ドットおよびp型結合量子ドットを形成して、少数電子領域やパウリスピンブロッケードの観測により、スピンベース多重集積量子ビットの実現に重要な進展を得た。ナノシリコン量子ドット、ナノワイヤの作製、評価および量子情報デバイスの集積化を目指す研究を行い、以下の成果を得た。1.VHFプラズマセルによるナノ結晶シリコンの粒径微細化、均一化、高成長速度を目指した研究を行い、パルスガス供給時のプラズマ発光スペクトル変化と結晶粒径との間に相関があることを発見し、成長プロセスモニターに利用出来ることを示した。さらにオリフィス径の拡大とプラズマセルの小型化によりガス滞留時間を短縮してナノ結晶シリコン粒径を5nm以下に縮小化した。従来のプラズマセルでは粒径の縮小化に伴い堆積速度が激減したが、改造後のプラズマセルでは堆積速度の現象はわずかにとどまった。2.VLSCVD法によるGeナノワイヤに低温成長CVD法によりSiシェルを形成したデバイスを作製し、電気特性を測定した、Ge中の正孔がSi障壁に閉じ込められたp型伝導を観測した。アンドープのGeナノワイヤでp型伝導を観測したのでヘテロ接合による変調ドーピング効果があることを実証した。さらに熱電素子を作製し、従来の材料以上の性能が期待できることを実証した。3.電子スピンの制御を目的としてシリコン2重結合量子ドットに単電子トランジスタ電荷センサを集積したデバイスを作製し、量子ドット中の少数電子数をカウントすることに成功した。垂直エッチングプロセス条件を改良して量子ドットの縮小化に成功、界面トラップ準位を激減させて良好な電荷安定状態図を得ることに成功した。強磁性体により静電結合強度を増大できることを発見した。また、パルス測定によりパウリスピンブロッケードを観測するとともに、スピンコヒーレント時間が2ms以上と長い事を実証した。空調工事のため2ヶ月間クリーンルームが使用できなかったが、H26年度予算をH27年度に繰り越して使用した結果、所定の成果を上げることが出来た。ナノシリコン量子ドット、ナノワイヤの作製、評価および量子情報デバイスの集積化を目指す研究ならびにテラヘルツセンサの高度化に関する研究を行い、以下の成果を得た(1)VHFCVD法によるナノ結晶シリコンの3次元集積化技術を検討し、ディップコーティング法に電気泳動技術を組みあわせて3次元稠密集積化を実現した。ディップコーティング法において課題であったストライプ構造の形成要因をメニスカス部へのナノ結晶シリコン供給欠乏と解析し、電気泳動による安定供給を図った。電気泳動電圧、分散液濃度などのパラメーターを変化させて最適化を行い、ストライプフリーの3次元集積構造の作製に成功した。(2)Ge/Siコアシェルナノワイヤの結晶成長条件を検討し、2ステップ成長法により触媒金粒子のマイグレーションを抑制し、ナノツリー構造形成の問題を解決した。この材料をトランジスタおよび熱電素子に応用した。ナノワイヤ径と電気伝導度の関係を調べてナノワイヤ径が縮小すると電気伝導度が増加する事を見いだした。熱電素子の性能指数は従来のBiTe系に匹敵する0.6を達成した。(3)スピンベース多重集積量子ビットへの応用を目指して、SOI基板上に電子ビーム露光で作製した多重量子ドット集積構造の電子輸送特性を評価した。量子ドット内の少数電子制御に成功した。正孔輸送についても電荷センサを集積したデバイスを作製し、少数正孔領域において良好な電荷安定状態図を観測することが出来た。さらにスピンブロッケードの観測に成功した。また磁場依存特性の観測を行い、正孔スピン操作への足がかりを得た。SOI素子の6nmまでの超薄膜化構造により、帯電エネルギー30meVを観測し、高温動作への道を拓いた。ナノ結晶シリコンの3次元集積化、Ge/Siコアシェルナノワイヤの形成および熱電素子特性評価、ナノシリコン量子ドット量子情報処理デバイスの研究はほぼ順調に進んでいる。高周波電気測定の装置も立ち上げが済んでおり、予定通りの成果を上げることが可能な見込みである。ナノ結晶シリコン量子ドット、ナノワイヤの作製、評価および量子情報デバイスの集積化を目指す研究を行い、以下の成果を得た。VHFプラズマCVD法で作製した粒径10nmのナノ結晶シリコンを、電子ビーム露光法で形成した間隔9nmの電極間に配置して、単一シリコン量子ドットの電子輸送特性を測定した。4.5Kでは、クーロンダイアモンドの大きさが電子数に依存することから、人工原子の殻充填現象の観測に成功した。Ge/Siコアシェルナノワイヤの形成プロセスを最適化して、触媒金のマイグレーションを抑制し分岐構造の無いナノワイヤの形成に成功した。これを用いた熱電素子を作製し、電気伝導度、パワーファクターの粒径依存性を測定した。実験データとシミュレーション結果の検討から、ナノワイヤ径を20nm以下にすると、従来の熱電性能指数を凌駕する特性が得られるだろうと結論した。量子コンピューターの実現に向けて、多重集積量子ビットの形成に有望な量子ドットを電界効果ではなくエッチングにより物理的に定義するデバイス設計を行い、電子ビーム露光技術を用いて多重集積量子ドットの作製と電子輸送特性の測定を行った。交換相互作用に着目して3重量子ドットの形成を行い、電荷検出素子との集積化により少数電子状態の観測に成功した。

さらにスピン軌道相互作用の電界制御に注目して、Si2重量子ドットにおける正孔スピンの特性を評価した。パウリスピンブロッケードの観測に成功し、マイクロ波印加によりフォノン支援トンネリングが起こることを確認した。シリコン電界効果トランジスタのゲート酸化膜中欠陥にトラップされた電子をマイクロ波によりコヒーレント制御することに成功した。マイクロ波と電子の共鳴により、コヒーレンス時間40マイクロ秒の電子2準位系を実現した。同様な測定をSi量子ドットでも行い、でコヒーレンスの要因を明確化した。ナノ結晶シリコンの粒径制御、配列制御法を検討し、微小電極間に1個のナノ結晶を配列し、電子輸送特性の測定を行った。Ge/Siコアシェルナノワイヤの形成技術を最適化して、熱電素子応用への展望を拓いた。多重集積シリコン量子ドットを作製し電子輸送特性を測定した。2重結合量子ドット、3重結合量子ドットおよびp型結合量子ドットを形成して、少数電子領域やパウリスピンブロッケードの観測により、スピンベース多重集積量子ビットの実現に重要な進展を得た。1.ナノ結晶シリコンアレイで電気特性を測定するためには、粒径と表面酸化膜が制御された粒子の配列制御が必要である。ディップコーティング法による2次元粒子アレイの作製で問題であったストライプ構造の形成の問題を電気泳動法の採用により解決する。2.Geナノワイヤによるトンネルトランジスタの作製と電気特性評価3.多重結合量子ドットデバイスにおけるスピン制御による量子ビットの実現(1)3次元集積構造ナノ結晶シリコンの電気特性評価を行う。粒径依存性、表面酸化膜厚さを制御して粒子間隔依存性を測定し、ナノ結晶シリコン粒子の電子輸送モデルを構築する。(2)Ge/Siコアシェルナノワイヤの微細化による熱電素子特性の性能指数向上。微細化により、電気伝導度が向上することを観測している。さらなる微細化により量子効果を観測してゼーベック係数の飛躍的向上を期待する。直径3nmまでの極微細ナノワイヤの形成には成功している。Ge/Siコアシェルナノワイヤで何処まで微細化が可能であるか、また微細ナノワイヤを電子ビーム露光装置内で観測して熱電素子を形成できるかどうかが鍵である。(3)スピン制御による量子ビットの実現。髙周波測定により、コヒーレンス時間の観測を行う。磁場勾配を設けてスピン操作を行う。さらに3重量子ドット構造により電界効果による交換相互作用の変化を利用したスピン操作の可能性を検討する。28年度が最終年度であるため、記入しない。電子デバイス28年度が最終年度であるため、記入しない。
南ラオスのゴム園開発と地域住民の社会文化変化に関する研究

ベトナムのゴム会社とラオス政府主導で開始されたゴム・プランテーション開発による、地域住民の社会文化的変化は、実際には開発主体が予想あるいは期待したような農民から労働者への単純な移行という形では表れておらず、むしろ従来ほぼ自給してきたコメを継続して栽培するための外部も含めたさまざまなネットワークやその他の現金収入源の模索という形で表れている。そこには労働環境や雇用条件だけでなく、文化的な要因が作用していると考えられる。2009年度は研究計画通り、2回、現地調査を行った。1回目は2010年2月に2週間、ラオスへ行き、村で世帯調査を中心にフィールドワークを行った。現在の世帯数は実質的に38戸であり、そのうち19戸について聞き取りを行った。また、ゴム園労働に関して村人たちからの聞き取りと、ちょうどベトナム正月(テト)の時期と重なっていたため、ゴム園を訪れ、観察と簡単な聞き取りを行った。さらに、村で貧困対策プロジェクトとして機織りの研修が行われており、これについて簡単なデータ収集を行った。2回目は3月に2週間、ラオスに滞在し、残りの19戸の世帯調査と、村の最大の年中行事である水牛供犠祭りを観察し、データを収集した。残念ながら1週間程度続くこの儀礼の最後まで見届けることはできなかったが、一部だけでも参加し観察することができたことは、文化変化というテーマに関して大きな意義があったと思う。というのは、この儀礼が村人たちの文化的アイデンティティに重要な位置をかつて占めていたことが分かっているからであり、この点についての変化を分析することは重要だと思われる。また、文化という面からは、この2回の調査を通じて、10数年前に観察した占い(キーカポと現地で呼ばれている)を観察することができたのも重要な意義があった。これも、村における共同性のあり方や社会関係を分析するうえで重要な意味をもつと同時に、村人たちの現在における病気に対する解釈やさらには世界観をも理解する手掛かりとなりうると思われるからである。特に、前回の調査と比較することにより、文化的な変化の一面を明らかにすることも可能ではないかと考えている。さらに、この2回の調査では、パラゴムノキ植林プロジェクト以外の開発プロジェクトの存在についても知ることができ、開発に関してより対象を広げていきたいと思った。22年度は2回のフィールドワークを行い、データを収集した。1回目は8月末から9月にかけての2週間であり、2回目は12月後半の2週間である。1回目の調査では前回の世帯調査の補足と追跡調査を中心に行い、ゴム園労働をはじめ、焼畑に代わる生業への転換の状況や、家計について聞き取りを行うと同時に、滞在中に寺で行われた儀礼の調査をし、現在進行しつつある村人たちの宗教実践に関する変化について観察と聞き取りを行った。2回目の調査では村で行われた儀礼と慣習を中心に調査を行った。一つは村の祭司を務めていた長老の葬儀であり、もう一つは森に棲む村の守護霊を祀る儀礼、そして「プークケーン」と呼ばれる儀礼であり、これは出稼ぎから戻ってきた娘のためある世帯が催したものである。これらに参加し観察と聞き取りを行った。儀礼や慣習をめぐる実践は、文化変化が顕著にあらわれるため、大変重要なデータとなる。そのほかに複数の世帯の生業についてもデータを収集し、村の外部の資源へのアクセスの状況や、世帯の生存戦略の変化を明らかにするための材料を得ることができた。4月5月と、8月9月の計2回、それぞれ2週間程度ラオスに滞在し、現地調査を行った。最初の調査では、これまで同様、住民たちの経済活動について聞き取りと観察を行うと同時に、ゴム園のタッピング(樹液採集)の研修について複数の住民から詳しいデータを収集した。2回目の調査では、タッピングが開始されていたため、ゴム園に行き、じかにその様子を観察するとともに、会社の幹部にインタビューを行った。この2回の調査で明らかになったのは、住民たちの生業に関する戦略が多様化していることである。ゴム園での労働需要が、タッピングがまだ本格的に始まっていない現時点では極めて不安定であり、そのためこれに頼れないという状況があり、これにより生業そのものというよりは、米や米を購入する現金を獲得するための戦略が多様化している。と同時にゴム園労働への参加の度合いや仕方も世帯により異なる傾向がある。そして、これらの戦略の多様化から浮き彫りになったのは、親族や姻族との関係における違い、また村落内の親族間の関係の変化である。この親族関係の変化については、まだそれほど目立つものではないが、土地という生産手段を失った住民たちが、これについて村落内で互いに頼れなくなっていることから、外部の親族や知り合いに頼る傾向が強まっており、それは親族だけでなく、他の資源についても外部へと目を向けつつあることがうかがえる。ごく一部の住民は、親族ではなく、自らの努力を頼りに生き残りのための戦略をたてている。以上のことから、かつて村落はこの地域で輪郭の明確な一つの空間を作っていたが、これが徐々に緩みつつあることが明らかとなった。
シナプス後肥厚部を場としたシナプス可塑性発現の仕組みの解明

1.抗PSD抗体を作成し,ラット大脳のcDNAライブラリーからエクスプレッションクローニングを行った結果,いくつかのクローンを拾った.そこには既知のタンパク質(フォドリン,プレクチン,ニューロフィラメント)をコードするものもあったが,未知の遺伝子も含まれていた.未知の遺伝子のクローニングを進めた結果,一つの新規遺伝子の塩基配列を決定した.ホモロジー検索を行った結果,synGAPの一つのisoformであることがわかったので,仮にsynGAP-βと命名した.mRNAは約6キロベースで,比較的発育の早い段階から発現しており,老化脳では発現が減少していた.in situ hybridizationを行い,ニューロンに局在すること,タンパク質はシナプス後肥厚部画分に限局することを明らかにした.また,少なくとも7種のsynGAP mRNA,5種のsynGAPタンパク質を同定した.2.未知のシナプスタンパク質を認識する別の抗体を用いて,エクスプレッションクローニングを行った.その結果,全長3960bのDNAをクローニングし,2903bのcoding regionを同定した.アミノ酸配列では細胞膜と細胞骨格とのクロスリンカータンパク質であるtalinやその類縁タンパク質とカルボキシル末端側半分にホモロジーがみられた.また全体としてはHuntingtin-interacting protein(HIP)とホモロジーがあった.Northern blottingおよびin situ hybridizationでは,脳に広く発現がみられた.また,脳の他にはtestisに強い発現が見られた.フュージョンタンパク質を抗原として抗体を作成し,タンパク質の分布を調べたところ,脳とtestisに発現していた.また,神経細胞内ではシナプトソーム,シナプス膜画分に局在していた.以上の結果,このタンパク質のシナプス機能,Huntingtinとの連関が示唆された.1.抗PSD抗体を作成し,ラット大脳のcDNAライブラリーからエクスプレッションクローニングを行った結果,いくつかのクローンを拾った.そこには既知のタンパク質(フォドリン,プレクチン,ニューロフィラメント)をコードするものもあったが,未知の遺伝子も含まれていた.未知の遺伝子のクローニングを進めた結果,一つの新規遺伝子の塩基配列を決定した.ホモロジー検索を行った結果,synGAPの一つのisoformであることがわかったので,仮にsynGAP-βと命名した.mRNAは約6キロベースで,比較的発育の早い段階から発現しており,老化脳では発現が減少していた.in situ hybridizationを行い,ニューロンに局在すること,タンパク質はシナプス後肥厚部画分に限局することを明らかにした.また,少なくとも7種のsynGAP mRNA,5種のsynGAPタンパク質を同定した.2.未知のシナプスタンパク質を認識する別の抗体を用いて,エクスプレッションクローニングを行った.その結果,全長3960bのDNAをクローニングし,2903bのcoding regionを同定した.アミノ酸配列では細胞膜と細胞骨格とのクロスリンカータンパク質であるtalinやその類縁タンパク質とカルボキシル末端側半分にホモロジーがみられた.また全体としてはHuntingtin-interacting protein(HIP)とホモロジーがあった.Northern blottingおよびin situ hybridizationでは,脳に広く発現がみられた.また,脳の他にはtestisに強い発現が見られた.フュージョンタンパク質を抗原として抗体を作成し,タンパク質の分布を調べたところ,脳とtestisに発現していた.また,神経細胞内ではシナプトソーム,シナプス膜画分に局在していた.以上の結果,このタンパク質のシナプス機能,Huntingtinとの連関が示唆された.1.抗PSD抗体を作成しラット大脳のcDNAライブラリーからエクスプレッションクローニングを行った.その結果いくつかのクローンを拾った.そこには既知のタンパク質(スフォドリン,プレクチン,ニューロフィラメント)をコードするものもあったが,未知の遺伝子も含まれていた.未知のものについて,さらにクローニングを進めて,より長い配列を読む作業を続けている.現在までのシークエンスでホモロジー検索を行った結果,rasGAPタンパク質のカルボキシル末端側半分とホモロジーのある遺伝子であったので,新規のrasGAPproteinの可能性がある.Northen blotによるとメッセンジャーは約6キロベースで,比較的発育の早い段階から発現しており,老化脳では発現が減少していた.現在さらに,open reading frameの全長を求めてクローニングを続けている.2.PSDタンパク質と反応性のあるもう一種の抗体を用いたエクスプレッションクローニングも行った.その結果,全長3.6キロベースのDNAがクローニングされた.ORFは約2.5キロベースであった.Northern blottingおよびIn situ hybridizationでは,脳に幅広い発現がみられた.アミノ酸配列ではメンブレンと細胞骨格とのクロスリンクタンパク質であるtalinやその類タンパク質とカルボキシル末端側半分にホモロジーがみられた.現在,フュージョンタンパク質を発現させ,抗体を作成中であり,今後はタンパクの発現場所,シナプス後肥厚部(PSD)との関係などを明らかにする計画である.1.抗PSD抗体を作成しラット大脳のcDNAライブラリーからエクスプレッションクローニングを行った.その結果一つの新規遺伝子をクローニングし塩基配列を決定した.ホモロジー検索を行った結果,synGAPの一つのisoformであることがわかったので,仮にsyn GAP-b1と命名した.Northen blotによるとメッセンジャーは約6キロベースで,比較的発育の早い段階から発現しており,老化脳では発現が減少していた.in situ hybridizationを行い,ニューロンに局在することも明らかにした.2. PSDタンパク質と反応性のあるもう一種の抗体を用いたエクスプレッションクローニングも行った.その結果,全長3.6キロベースのDNAがクローニングされた.

ORFは約2.5キロベースのORFが同定された.Northern blottingおよびIn situ hybridizationでは,脳に広く発現がみられた.また,脳の他にtestisに強い発現が見られた.アミノ酸配列ではメンブレンと細胞骨格とのクロスリンクタンパク質であるtalinやその類縁タンパク質とカルボキシル末端側半分にホモロジーがみられた.フュージョンタンパク質を抗原として抗体を作成して,タンパク質の分布を調べたところ,脳とtestisに発現していた,また,脳のシナプス膜に多く分布していた.最近のデータベース検索でこの遺伝子のひとホモローグが報告されたので,それとの比較を含めたcharacterizationを行っている.また,ORFがさらに5'側に伸びているらしいことが判明したので,完全長を求めてクローニングを再開した.1.抗PSD抗体を作成し、ラット大脳のcDNAライブラリーからエクスプレッションクローニングを行った結果、いくつかのクローンを拾った。そこには既知のタンパク質(スフォドリン、プレクチン、ニューロフィラメント)をコードするものもあったが、未知の遺伝子も含まれていた。未知の遺伝子のクローニングを進めた結果、一つの新規遺伝子の塩基配列を決定した。ホモロジー検索を行った結果、synGAPの一つのisoformであることがわかったので、仮にsyn GAP-βと命名した。mRNAは約6キロベースで、比較的発育の早い段階から発現しており、老化脳では発現が減少していた。in situ hybridizationを行い、ニューロンに局在すること、タンパク質はシナプス後肥厚部画分に限局することを明らかにした。また、少なくとも7種のsynGAPmRNA、5種のsynGAPタンパク質を同定した。2.未知のシナプスタンパク質を認識する別の抗体を用いて、エクスプレッションクローニングを行った結果、全長3960bのDNAを単離し、2903bのcoding regionを同定した。アミノ酸配列では細胞膜と細胞骨格とのクロスリンカータンパク質であるtalinやその類縁タンパク質とカルボキシル末端側半分にホモロジーがみられた。また全体としてはHuntingtin-interacting protein(HIP)とホモロジーがあった。
種子発芽温度反応の比較生態学的スクリ-ニング

埼玉県浦和市田島ヶ原の特別天然記念物サクラソウ群落の構成種約50種の種子による繁殖の季節スケジュ-ルと種子発芽における季節選択機構を比較分析した。種子発芽の季節選択機構は、発芽温度反応の段階的温度処置一斉試験法(Washitani,1987)により検討した。採集直後および種子に4°C冷湿処置、4°C乾燥保存、25°C乾燥保存、野外放置の4つの温度前処理を様々な期間(1,2,5,6ヶ月)施したのち、2種類の段階的温度処理(温度上昇系・温度下降法:4-36°C)にさらし両系における発芽パタ-ンを記録した。また。それぞれの系の最終温度に数日間さらした後、さらに12°C-25°Cの交代温度、もしくは25°Cの恒温条件下に1週間ほどおいて、各系の最大発芽率を求めた。両系での発芽パタ-ンおよび前温度処理の影響を比較することにより、特定の温度にさらされることによる休眠解除および誘導の有無、発芽可能温度域、発芽速度などの情報を得た。その結果、これら50種の間には種ごとに多様な反応パタ-ンが認められた。種子散布直後の発芽可能性、冷湿処理による体眠水準の変化、高温域における二次休眠の誘導の有無を基準にして、調べた種は5つの反応型に分類できた。そのうち4反応型は休眠解除への低温要求性において序列をつけうるもので、種の種子散布時期が遅いものほど(晩秋散布のもの)低温要求性が低いことが示された。このように休眠のタイプとその水準は種子の散布時期に大きく依存するのに対して、非休眠種子の発芽の過程そのものの温度依存性は、エマ-ジェンス時期と密接な関係を持っていることが示された。また。
鉄代謝経路の解析によるがん性悪液質新規治療法確立のための研究

進行期がん患者の重篤な合併症である治療不応性癌性悪液質における炎症性サイトカインを介した鉄代謝機構(ヘプシジンーフェロポルチン系)を解析し、がん性悪液質の新規治療法の開発を目的として研究を開始した。動物実験とヒト検体の双方を用いた研究を考案しているが、進行期がん患者における癌性悪疫質の状態と炎症性サイトカイン、および鉄代謝機構の関連性についての前提条件を確認するため、まずは実臨床における患者血液検体を用いた研究を先行して開始した。川崎医科大学総合医療センター緩和ケア病棟で入院治療され、8日間以上生存することが可能であった進行期悪性腫瘍患者の血液検査から(n=132)、患者血清フェリチン値、血清CRP値赤血球沈降速度について、それぞれ入棟時および入棟1週間後の測定値とその推移についてデータ収集した。入棟時の血清フェリチン値およびCRP値とその両者の推移は患者生存予後との相関を見た場合、入棟時の血清フェリチン値およびCRP値については負の、またこれら両者の1週間の推移については正の相関関係が明らかに存在することを確認した。血中ヘプシジン25値については文書による同意を取得しえた16例の患者血液を用いて、ELISA法にて測定した。結果的に入院時ヘプシジン25値と患者生存期間との間には明らかな負の相関関係が存在し、3週間以内の死亡例におけるヘプシジン25値は3週間以上生存した患者グループと比較して有為に上昇していることを確認した。(8-21日:66.46ng vs 22日以上:29.98ng P=0.027)まずは前提条件である炎症性サイトカインと癌性悪液質の因果関係について確認を急いだことから、2018年度はヒト検体を用いた研究を先行させて行った。既報の如くで、治療不応性癌性悪液質と炎症性サイトカインや血中炎症性マーカー(特にCRPやフェリチン値)との間に因果関係が存在することが統計学的にも有為差を持って確認できたことは喜ばしい。研究の前提条件は確認できたが、次年度は本研究の本体ともいえる動物実験モデルの研究に移行して研究することとなるため、関係各所への連携を密にして研究を遂行したいと考えている。EGFR遺伝子改変マウスexon 19[15bp in-frame deletion (nucleotides 2242-2256) SP-C-Egfr mutant-SV40]については約20匹のマウスを確保し維持するためにかなりの労力を要することが想定されることから、研究補助員の雇用を急ぎ、動物実験施設での実験効率についても岡山大学第二内科研究室とも連携をとりつつ効率の良い実験体制を取りたいと考えている。またEGFR遺伝子改変マウスいがいにもXenograftモデルの使用についての見当も考慮しており、幅広い可能性の中で研究を進めることを視野に入れている。EGFR遺伝子改変マウスexon 19[15bp in-frame deletion (nucleotides 2242-2256) SP-C-Egfr mutant-

SV40]については約20匹のマウスを確保し維持するためにかなりの労力を要することが想定されることから、研究補助員の雇用を急ぎ、動物実験施設での実験効率についても岡山大学第二内科研究室とも連携をとりつつ効率の良い実験体制を取りたいと考えている。またEGFR遺伝子改変マウスいがいにもXenograftモデルの使用についての見当も考慮しており、幅広い可能性の中で研究を進めることを視野に入れている。ヒト検体を用いた研究を先行させた結果、研究の本体部分である動物実験が次年度以降に繰り越されたことから、研究が前後しており、本来初年度に予定していた動物実験が2年目に、2年目に予定されていたヒト検体を用いた実験を初年度に行ったことから上記の会計となったが、研究自体は概ね順調に進んでいる。
悪性グリオーマの浸潤性増殖のメカニズムの解明とその克服に関する研究

免疫組織化学でみた悪性グリオーマ組織内でのN-カドヘリンの発現には、発現の全くみられないパターンと陽性細胞と陰性細胞が混在(割合は種々)するパターンが観察されたが、それらの症例のその後の観察では、発現パターンと臨床上(画像上)の浸潤との間に一定の相関を見い出すことはできず、グリオーマの浸潤能評価には、N-カドヘリンの発現のみではなくその機能(活性)の評価が必要であること、さらに、細胞間接着以外の腫瘍細胞の運動能、細胞外マトリックス分解酵素の発現など浸潤に関与する形質を総合てきに評価する必要がある結論された。そこで我々はさらに、ヌードラット脳にヒトグリオーマ株細胞の移植モデルを作成し、種々の形質の複合である浸潤を総合的に評価する方法の開発の新たな研究を遂行した。9週齢雄ヌードラットF344/Njcl-rnuの右基底核に、fast blueで蛍光標識したヒトグリオーマ株細胞U251MGおよびU87MG 5X10^5個を低位的に移植して、2週間後に摘出した脳を固定し10μmの凍結切片としてHE染色した後、蛍光顕微鏡下で標識細胞を観察した。U87MGでは腫瘍が現局して増大しているのに対し、U251MGでは腫瘍細胞が周囲脳に浸潤して増大していることが観察され、このモデルで腫瘍間の浸潤能の差を評価できる可能性が示された。さらに、狭い脳室の空隙に沿った湿潤などもみられ、本モデルで湿潤細胞の動態上の特徴を観察することも可能であることが示された。今後さらに、切片の作成を工夫することで定量化をはかり、摘出された個々のヒトグリオーマの浸潤評価を行う研究を進めたい。グリオーマの浸潤にN-カドヘリンの発現がどのように関与するかを明らかにし、腫瘍の浸潤能をあらかじめ評価して治療に役立てることを目的に研究をすすめてきたが、ヒトN-カドヘリン抗体が開発され入手が可能となったため、N-カドヘリンmRNAアンチセンスを導入してN-カドヘリンの発現を抑制した腫瘍モデルでの浸潤能の評価を行う初年度の予定を変更し、ヒトグリオーマ組織におけるN-カドヘリンの発現パターンの検討を先に開始した。すでに胃癌においてE-カドヘリンの発現パターンに3種が存在し、これが胃癌の浸潤能に相関することが明らかにされている。今回、免疫組織化学で悪性グリオーマ(Gr.III,Gr.IV)におけるN-カドヘリンの腫瘍組織内での発現をみたところ、腫瘍内にN-カドヘリンの発現の全くみられないパターンと、発現のみられる細胞と発現の見られない細胞が腫瘍内に混在するパターンの2種が確認された。この結果は、N-カドヘリンの発現のみられない細胞が離脱しやすいと考えられることから、これらの悪性グリオーマは易浸潤性の腫瘍であることが示唆された。次年度はアンチセンスを用いた研究とともに、高分化型グリオーマ(Gr.I,Gr.II)も加えてさらに多数例を免疫組織化学で検討し、N-カドヘリンの発現パターンと腫瘍の臨床上の浸潤能との相関を明らかにしたい。グリオーマの浸潤にN-カドヘリンの発現がどのように関与するかを明らかにし、脳腫瘍の浸潤能をあらかじめ評価して治療に役立てることを目的に研究をすすめてきた。

近年、ヒトN-カドへリンに対する抗体が開発され入手が可能となったため、当初のN-カドヘリンmRNAアンチセンスを導入してN-カドヘリンの発現を抑制したin vitroおよび腫瘍モデルを用いたin vivoでの浸潤能の実験的評価を行う予定を変更して、実際のヒトグリオーマ組織におけるN-カドヘリンの発現パターンと浸潤能の相関について検討を開始した。すでに胃癌においてE-カドヘリンの発現パターンに3種が存在し、これが胃癌の取扱い規約からみた各腫瘍の浸潤能に相関することが明らかにされている。今回、ヒトN-カドヘリン抗体を用いた免疫組織化学で悪性グリオーマにおけるN-カドヘリンの腫瘍組織内での発現をみたところ、腫瘍内にN-カドヘリンの発現の全くみられないパターンと、発現のみられる細胞と発現の見られない細胞が腫瘍内で種々の程度に混在するパターンが認められた。N-カドヘリンの発現のみられない細胞が母集団から離脱しやすいと推定されることから、この結果はN-カドヘリンの腫瘍内の発現パターンはグリオーマの浸潤能の評価に利用できるものと考えられ、現在各腫瘍の臨床上の浸潤能についての評価を継続中である。
X線解析を目指した多剤耐性ポンプMDR1の大量発現系の構築と結晶化

ヒトの多剤耐性ポンプMDR1を対象として、X線結晶構造解析を目的とした結晶化を達成することを目的として以下の研究を行なった。1.X線結晶解析に適したMDRl結晶の調製結晶化条件探索を広範囲に拡大するため、更なる大量生産系を構築した。すなわち、30リットル/1ヶ月の培養ペースで連続して安定な生産が可能になった。さらに、精製蛋白質の質的改善を目指し、構造安定性の向上に寄与する界面活性剤を検索した。約20種類の界面活性剤を検討した結果、1つの界面活性剤が新たに見つかった。一方、結晶化能を向上させると予想される2種類の部位特異的変異導入蛋白質を大量発現、精製することに成功した。得られた精製標品を用いて結晶化を行なったところ、微針状結晶からキューブ状の微結晶が得られた。しかし、X線を照射してもX線回折像は得られなかった。さらに改良を検討している。2.Fab複合体調製による結晶化の支援MDR1の細胞外ドメインに対するモノクローナル抗体を入手して検索した結果、立体構造特異的な結合をしていると示唆されるFab断片を得ることができた。そして、MDR1との複合体を形成していることがゲル濾過から示された。3.膜蛋白質の結晶化能を把握する手法の確立可溶性蛋白質では、精製した蛋白質溶液の動的光散乱分析により分子量分布の狭い試料は結晶化の可能性が高いことが知られている。そこで、膜タンパク質における同様の方法を検討した。その結果、電子顕微鏡を用いた蛋白質分子の直接観察およびゲル濾過法の利用により、界面活性剤の存在下でも分子量分布の広狭の違いを観測することが可能になった。ヒトの多剤耐性ポンプMDR1のX線結晶構造解析を行うため、同遺伝子をバキュロウイルスをベクターとして昆虫培養細胞を用いて大量に調製するための系を確立した。さらに、結晶化を目指して以下の研究を行った。1.大量発現系の安定化大量発現が安定して得られなかったことから、大量発現不安定化の原因を調べた結果、増幅ウィルスの品質低下が明らかとなった。そこで、増幅ウィルスの品質管理システムの確立を試みた。その結果、連続して安定な発現と生産を達成できるようになった。2.MDR1タンパク質の安定性の向上MDR1の異物排出活性の指標となるATP加水分解活性をモニターする手法により、界面活性剤、脂質、温度、pH、イオン強度、還元剤、特殊金属イオン、緩衝液、その他の添加物など、タンパク質の安定性が向上する因子を網羅的に検索した。その結果、とりわけ、コレステロールの添加がMDR1の安定性の維持に効果的であることが判明した。ここから得られた情報を精製操作にフィードバックし、従来よりも安定性の高い精製標品を調製できるようになった。3.結晶化能の向上を目指した変異体MDR1の作製結晶化能を高めるため、立体構造の不安定化に寄与するアミノ酸残基を置換した変異体MDR1の作製を試みた。これまでに、2種類の変異体ウィルスを作製し、昆虫細胞に感染させて発現を確認した。現在、精製サンプルの分子物性の解析や発現系のスケールアップを進めている。