hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
臓器固有細胞ー浸潤炎症細胞間相互作用から捉える歯周医学の分子基盤

重度歯周炎によって惹起される生体の軽微な慢性炎症の成立機序の分子基盤を明らかにするため、浸潤マクロファージと組織固有細胞の相互作用を中心に解析を行い、以下の点を明らかにした。1炎症脂肪組織のCCL19の高発現を確認した。主な発現細胞は脂肪細胞であった。2CCL19受容体欠損マウスは高脂肪食負荷で肥満を呈さず、インスリン抵抗性を回避した。3本マウスでは熱産生系が亢進しており、摂取エネルギーが熱エネルギーに効率的に変換されていると考えられた。4一方、膵島におけるマクロファージと組織固有細胞の相互作用を検討した結果、活性化マクロファージ浸潤でβ細胞死が誘導される可能性があることが明らかとなった。腎機能異常は虚血性心疾患に対する強力な危険要因(心腎連関)であり、中でも慢性腎臓病(CKD)の概念は、糖尿病性腎症の増加からとりわけ重要とされる。近年、CKDの進行に慢性炎症が関与するとの考えが導入され、注目されている。そこでCKDの進行に果たす炎症の役割を臓器固有細胞-浸潤炎症細胞相互作用の観点から解明するため、臓器固有細胞としてメサンギウム細胞を、浸潤炎症細胞としてマクロファージを取り上げ、両細胞を共培養し内毒素刺激した際に発現変動する遺伝子群をマイクロアレイの手法を用い、網羅的に解析した。その結果、内毒素刺激マクロファージとの共培養でメサンギウム細胞にCXCL1、2,、5、CCL2、20などのケモカイン、serum amyloid A、lipocalin-2遺伝子等が強発現することを見出した。さらに、リアルタイムPCRによりこれら遺伝子の発現増強を確認した。また、培養上清中への蛋白レベルでの分泌増強作用も確認した。その中でもとりわけ強い発現増強を認めたlipocalin-2に注目し、解析を進めた。lipocalin-2遺伝子発現はメサンギウム細胞においてリコンビナントTNFと内毒素添加で相乗的に上昇したことから、内毒素刺激マクロファージ由来TNFが発現上昇に重要な役割を果たすと考えられた。そこでlipocalin-2分子と腎機能異常との関連性を疫学的に検討するため、健診者を対象とした疫学調査を実施した。血清lipocalin-2はクレアチニンと正の相関を、eGFRと負の相関を示した。ロジスティック解析の結果からlipocalin-2はeGFR、sTNFRII、uric acidと強く相関した。この結果は被験者から糖尿病を除いても同様であった。以上から、lipocalin-2は腎機能異常を予知する上で有用かつユニバーサルなマーカーとなり得ることを明らかにした。脂肪細胞とマクロファージの共培養系を内毒素刺激することで、脂肪細胞において成熟樹状細胞の遊走に関与するケモカインccl19の遺伝子発現が著しく亢進することを見出した。これを受け、ccl19が肥満、インスリン抵抗性に果たす役割をccl19受容体CCR7欠損マウスを用いて検討した。CCR7欠損マウスでは高脂肪食負荷により肥満が惹起されず、インスリン感受性も正常であった。コントロールマウスでは高度なCD11c陽性細胞浸潤が観察されたが、CCR7欠損マウスでは炎症性細胞浸潤が観察されなかった。また、炎症性サイトカインの発現も通常食負荷のコントロールマウスと同程度であった。さらに、CCR7欠損マウスでは、脂肪細胞のサイズがコントロールと同程度であり、脂肪肝も惹起されなかった。高脂肪食負荷CCR7欠損マウスで肥満が惹起されない機序を検討した。本マウスは食餌摂取量はWTマウスと同程度であったが、寒冷下で飼育することにより熱産生が亢進した。すなわち、成熟樹状細胞の浸潤が回避された状況では、熱産生が亢進し高脂肪食負荷によっても肥満が惹起されないことを明らかにした。重度歯周炎では循環血中活性化樹状細胞が増加することが報告されている。歯周病によって惹起される脂肪組織炎症、インスリン抵抗性の機序の一端を明らかにした。一方、近年膵ベータ細胞においても炎症が惹起され、機能障害が起こることが報告された。膵ベータ細胞とマクロファージ、膵アルファ細胞とマクロファージの共培養系を確立し、内毒素刺激の有無による両細胞での遺伝子発現解析を行った。今後、パスウェイ解析を行うとともに、機能障害に関わると考えられる遺伝子に注目してその役割を解明する予定である。成熟脂肪細胞とマクロファージの相互作用により成熟樹状細胞の遊走に関わるccl19遺伝子が高発現したことから、本ケモカインに対する受容体(ccr7)欠損マウスを用いて肥満・インスリン抵抗性に果たす本分子の役割を検討した。結果、ccr7欠損マウスは高脂肪食負荷で肥満を呈さず、インスリン抵抗性や脂肪組織炎症が惹起されず、熱産生が亢進することを明らかにした。本結果に基づいて、歯周炎症で樹状細胞がどの程度活性化されるか、脂肪細胞特異的ccl19マウスで同様の病態が観察されるか否かを明らかにする研究に発展させることとした。さらに、マクロファージと共存する脂肪細胞で補体B因子の遺伝子発現が著明に亢進したことから、脂肪細胞特異的に補体B因子を高発現するマウスを作製し病態を観察した。本マウスオス個体では通常食でもより体重増加が観察されたことから、補体B因子が何らかの形で肥満の病態形成に関わる可能性が示唆された。

近年膵島においてもマクロファージの浸潤が報告されたことから、膵β細胞とマクロファージ、膵α細胞とマクロファージの共培養系を確立し、各々を内毒素刺激することで発現変動する遺伝子群を内毒素非存在下で発現している遺伝子群とマイクロアレイ法にて比較・解析した。興味深いことに、遺伝子の変動は膵α細胞よりもβ細胞で大きいことが明らかとなった。さらに、膵β細胞においてアポトーシスを促進する作用のある分子が強発現することを見出した。以上から、膵島にマクロファージ浸潤が起こった際には、α細胞に比べβ細胞がより影響を受けやすいこと、またβ細胞死がより促進される環境に曝される可能性があることが明らかとなった。本現象は2型糖尿病におけるβ細胞機能異常のみならず、1型糖尿病の発症に関わる可能性がある重要な現象であると考えられた。本分子を標的とした新規治療法確立の可能性を示唆する重要な知見を得た。重度歯周炎によって惹起される生体の軽微な慢性炎症の成立機序の分子基盤を明らかにするため、浸潤マクロファージと組織固有細胞の相互作用を中心に解析を行い、以下の点を明らかにした。1炎症脂肪組織のCCL19の高発現を確認した。主な発現細胞は脂肪細胞であった。2CCL19受容体欠損マウスは高脂肪食負荷で肥満を呈さず、インスリン抵抗性を回避した。3本マウスでは熱産生系が亢進しており、摂取エネルギーが熱エネルギーに効率的に変換されていると考えられた。4一方、膵島におけるマクロファージと組織固有細胞の相互作用を検討した結果、活性化マクロファージ浸潤でβ細胞死が誘導される可能性があることが明らかとなった。脂肪細胞ーマクロファージ共培養系において脂肪組織炎症を強力に惹起する因子のみでなく、肥満そのものの成立に重要と考えられる炎症惹起因子を明らかにした。その機序を熱産生のレベルで解明した。当初計画にある重要なケモカインの解析が充分に達成できた。本研究成果は論文として受理された。膵アルファ細胞とベータ細胞における炎症との関わりを解明する検討においても予定通り、遺伝子発現解析が終了した。今年度、その結果を受け、機能面から解析する予定である。27年度が最終年度であるため、記入しない。歯周病学炎症脂肪組織において補体B因子が高発現すること、本因子がヒト肥満、インスリン抵抗性、炎症状態と有意に相関することを予備実験で確認している。そこで、補体B因子過剰発現マウスを用い、炎症脂肪組織で産生が亢進する補体B因子の役割を解明する予定である。一方、前年度膵アルファ細胞およびベータ細胞とマクロファージの相互作用でアルファ、ベータ細胞で発現変動する遺伝子群を確認している。機能障害に関わる分子を同定し、炎症とインスリン分泌、血糖上昇との関連性について検討を行う予定である。本申請時点で歯周医学の分子基盤を臓器固有細胞-浸潤炎症細胞間相互作用の観点から解明するため、以下に示す3つの細胞間相互作用を検討するとした研究計画を立てた。1メサンギウムーマクロファージ相互作用、2脂肪細胞ーマクロファージ相互作用、3膵アルファ、ベータ細胞ーマクロファージ相互作用である。25年はそのうち1について研究を完結し、成果発表を行った。
ロシア語圏の中上級日本語学習者のためのシラバスの構築

平成14年度の研究成果を以下の3点から報告する。1.ロシア語圏での日本語教育に関する情報収集と情報結果の提供初年度よりのアンケート調査に加え、ロシア語圏3都市において現地日本語教師を対象にインタビュー調査を行った。その結果、教育目的や理念による教授項目の相違と多様化、話す教育や読解教育等の技能別教育における教授内容及び教授方法開発の必要性、教科書利用に関する情報支援の必要性が確認できた。調査結果はウェブサイトを利用して公開する。なお今後は地域別特徴の分析、学生の視点からのニーズ調査実施を検討したい。2.学習シラバス作成及びデータベース資料作成現在、現地教師のニーズに応える形で、ロシア語圏で使われている教科書数種類に関する情報のデータベース化を進めている。また、技能別教育の教授内容開発に関する支援として、主教材の会話素材のシラバス作成、読解教育で利用できる素材と学習シラバスとしての整理分析を行っている。今後は、教育素材として活用可能なリソースの紹介とともに、具体的な教授方法の提案を行いながら成果を配信していく予定である。3.インターネット環境に関する調査結果及び今後の支援環境整備調査の結果、現地の異なるニーズへの対応性を有するウェブサイトが支援ツールとして有効であることが確認できた。現地のIT環境にかんがみ、より多くの現地教師による利用を可能にするためIT関連の技術的情報の提供や配信方法、サイトの構成を更に工夫したい。なお、研究代表者異動のため、来年度以降本研究を科学研究費による研究として遂行できなくなるが、今後はウェブサイト等を活用し、引き続き研究成果の公開と情報交換を続けていくこととしたい。平成13年度(初年度)の研究成果を以下の3点から報告する。1.ロシア語圏での日本語教育に関する情報収集ロシア語圏で日本語教育を行なう上での教師の視点から見たニーズの調査を目的に、現在日本語教育に従事するロシア人日本語教師を対象としたロシア語によるアンケート調査を実施した。回収された調査結果からは、学習者の学習目的の多様化とそれに伴う教授項目の広がり、音声教育などをはじめとする話しことば教育に関する情報の必要性が伺える。アンケート調査は来年度以降も継続して行なう。2.シラバス作成およびデータベース資料作成ロシア人教師の多くが学んだロシア語圏の教科書を足がかりとして、(1)現在ロシア語圏で使用されている日本語の教科書(ロシア及び日本で発行されたもの)のシラバスとの関連性(2)話しことば教育の観点から見たシラバスとの関連性(3)話題という観点から見たシラバスとの関連性の分析を行なっている。来年度以降は、順次分析結果をデータベース化し、ホームページ等を利用して情報提供をする。また、日本人派遣教師から提供されるロシア人学習者の誤用例は、ロシア語専門家及びロシア語話者の意見も新たに取り入れ、ロシア語圏日本語学習者のための学習シラバスとして整理する。3.支援環境整備の前提としてのインターネット環境に関する調査支援の前提を明確にするため、使用されているOSの種類やバージョン、使用されているソフトの種類、インターネット回線の種類と安定度、日本語の読み書きの可能性、等を質問紙調査している。来年度は、上記1のための情報収集も含め、現地において実地調査を行なう。
ラインX線の熱的放射の基礎過程

天体X線解析の基礎となるプラズマ放射モデルについて、衝突電離プラズマにおける素過程の研究および不確定要因の定量的評価を行った。不確定性の原因については既に95年度の研究で明らかにされたので、96年度は、スペクトル解析への影響を定量的に調べることを目的とした。このため、高エネルギー分解能で観測された太陽フレアデータを実際に解析し、電子温度など、解析の結果得られる物理量に対する不確定性の伝播を調べた。この結果、次のようなことが明らかになった。結晶を用いた分散型分光で実現されるような、E/dE>1000の高エネルギー分解能では、二電子性再結合の不確定性が直接的に電子温度の不確定性に現れるものの、逆にそれを考慮した解析が可能になるため元素量などの二次的な物理量への影響をむしろ抑えることができる。一方、宇宙X線観測衛星ASCAで実現されたE/dE20の中間エネルギー分解能では、鉄のL殻遷移が他の元素のK殻遷移とブレンドするため電子温度の不確定性と元素量を分解することが困難になる。この結果、解析によって得られる元素量が放射モデル(二電子性再結合)に依存することになり、実際、ASCAで観測された銀河団プラズマを複数の放射モデルコードで解析したところ、得られる電子温度と鉄の元素量の間に相関が見られることが確かめられた。これらの結果をまとめた論文は既に学術雑誌に受理されており、現在印刷中である。この中で、電子温度の不確定性と元素量の解析を分離するために、電離温度を導入し電子温度と併せて2つの温度パラメタスペースで解析することを提案している。この方法は、既に著者自身によって提案された、超新星残骸の非平衡電離放射モデルと類似の概念に拠るものである。この他、本研究ではまた、プラズマが強い輻射場の下にある場合の影響、一見光学的に薄く見えるような場合でも、どのようなプロセスが関わって理論スペクトルからずれるかを調べた。ここで考えた輻射場は、輻射輸送の影響は極めて弱く光子吸収は起きないが、原子準位の占有密度には大きく影響が現れるような場合である。具体的な対象として中性子星に降着するプラズマを考え、高階電離した鉄からの輝線放射領域のモデリングを進めた。これまでに、プラズマの力学的安定性や熱的構造について調べたが、未だ放射スペクトルの計算には至っていない。
テルル原子上でのラジカル置換反応を利用する有機合成反応の開拓

本研究は、テルル原子上でのラジカル置換反応を利用する、新しい合成反応の開発を目的としている。本研究の成果は下記の通りである。1.種々のアルキル置換基を有するテルリドが、ラジカル開始剤共存下、アセチレン類に効率よく付加することを見いだした。この反応原理を応用して、ジアルキルテルリドとアセチレン類から、ジビニルテルリドの高効率的かつ立体選択的合成法を確立した。2.アセチレン類へのテルリドの付加反応が高い位置選択性を示すこと、またこの反応の立体選択性が、遷移状態における置換基同士の立体反発の効果により説明できることを明らかにした。3.テルリドのテルル-炭素結合解裂の位置選択性が、生成するラジカルの安定性の差に基ずく事を明らかにした。4.電子吸引性置換基を有するテルリドが種々のオレフィン類に効率よく付加することを明らかにするとともに、この反応を利用するテルリドの新しい合成法を開発した。5.ビニルテルリドと種々の有機金属試薬との反応を検討した結果、有機リチウム、アルミニウム、亜鉛、およびジルコニウム化合物とトランスメタル化反応が進行し、対応するビニル金属種が生成することを見いだした。さらに、この方法で生成させたビニル金属種は、遷移金属触媒などを用いることにより、有機ハロゲン化合物等とのカップリング反応に利用できることを明らかにした。6.本反応の合成化学的利用の一つとして、アルデヒドまたはエポキシドとシリルテルリドとの反応により、対応するα-またはβ-シロキシルアルキルテルリドを合成し、これらをアセチレン類に付加させることにより、アリルアルコールおよびホモアリルアルコール誘導体の新しい合成法を開発した。本研究は、テルル原子上でのラジカル置換反応を利用する.新しい合成反応の開発を目的としている。現時点までの研究成果は、下記の通りである。アセチレンとしては、芳香族基やカルボニル基等の電子吸引基を有するものが高い反応性を示した。また、末端アルキンを用いた場合には、アルキル基が末端炭素、テルロ基が内部炭素に位置選択的に導入されることを明らかにした。:2.テルリドのテルル-炭素結合解裂の位置選択性も極めて高いことを明らかにした。上記付加反応では、ラジカル的により安定な置換基とテルルとの結合が選択的に解裂し、対応する付加生成物を与えた。3.α-テルロエステルなどの電子吸引性置換基を有するテルリドを用いた場合には、オレフィン類に対しても付加が進行することを明らかにした。末端オレフィンを用いた場合には、内部にテルロ基を有する生成物のみが選択的に得られた、オレフィンとの反応においても、高い位置選択性が確認された。4.本反応の合成化学的利用を目的として、アリルアルコールおよびホモアリルアルコール誘導体の新しい合成反応を開発した。すなわち、アルデヒドまたはエポキシドとシリルテルリドとの反応により、対応するα-またはβ-シロキシアルキルテルリドを合成し、これらとアセチレン類との反応を行ったところ、付加反応が効率よく進行した。この反応では、中間体となるテルリドを単離することなく最終生成物を得ることが出きることから、本法はテルロ基を有するアリルおよびホモアリルアルコール誘導体の簡便な合成法となる。本年度は、テルリドと種々のオレフィン類およびアセチレン類との反応について、その適用範囲を明らかにするとともに、この反応をビニルテルリドの新規合成法として確立し、合成化学的応用に向けて展開することを主目的とした。

さらに、本反応により生成させたビニルテルリドを、種々の有機金属種に変換する新反応の開発を行った。本年度の成果は、下記の通りである。1.ジアルキルテルリドに2当量のアセチレン類を反応させることにより、ジビニルテルリドの高効率的かつ立体選択的合成法を確立した。2.アセチレン類へのテルリドの付加反応の立体選択性が、遷移状態における置換基同士の立体反発の効果により説明できることを明らかにした。3.テルリドのテルル一炭素結合解裂の位置選択性が、生成するラジカルの安定性の差に基ずく事を明らかにした。4.電子吸引性置換基を有するテルリドを種々のオレフィン類に付加させることにより、テルリドの新しい合成法を開発した。5.ビニルテルリドと種々の有機金属試薬との反応を検討した結果、有機リチウム、アルミニウム、亜鉛、およびジルコニウム化合物とトランスメタル化反応が進行し、対応するビニル金属種が生成することを見いだした。さらに、この方法で生成させたビニル金属種は、遷移金属触媒などを用いることにより、有機ハロゲン化合物等とのカップリング反応に利用できることを明らかにした。
子宮内膜の脱落膜化機構における細胞成長因子の役割に関する研究

前年度までの検討成績を参考に、個々の実験系の有機的連携を計り,一定の結論を導き出そうとした.その結果,1)子宮内膜間質細胞は妊娠の成立に伴い脱落膜化を来すが,同時に免疫組織化学的染色法にてEpidermal Growth Factor(EGF)の細胞内局在性が明確となり,2)[ ^<35>S]methionineーlabel・免疫沈降・autoradiographyにて,このEGFの免疫組織化学的局在性は脱落膜細胞の局所産生に基づくことがわかった.3)非妊娠時子宮内膜間質細胞および脱落膜細胞におけるEGF受容体について,Scatchard plotsにて解析したところ,いづれも単一種の受容体を有しているが、妊娠に伴い親和性(Kd)変化を来さないものの,受容体数(B_<max>)が511にまで増加することがわかった(脱落膜細胞:Kd=1.02±0.28nM,B_<max>=89.4±14.4pM/2x10^5cells).したがって,妊娠に伴い脱落膜細胞から局所産生されたEGFは,脱落膜細胞表面の特異的受容体との結合により,autocrine機構を介して生理作用を発現しているものと考えられた.4)EGFのautocrine機構によりいかなる生理作用が発現されているかを検討した結果,EGFは脱落膜化に伴い分泌されるprolactin産生を抑制(IC_<50>=700pg/ml)することがわかった.5)しかも,この作用発現機序には特異的受容体に内在するtyrosine kinaseだけでなく,phospholipase Cの活性化によって賦活化されたprotein kinase Cが関与していることがわかった.6)さらに,二次元蛋白電気泳動法・autographyにて特異的蛋白リン酸化反応について検討したところ,48kDaの酸性蛋白が特異的にリン酸化を受けることがわかった.以上のように,EGFをヒト子宮内膜の脱落膜化機構における重要な調節因子として位置づけるとともに,その作用発現機序を特異的受容体・細胞内刺激伝達機構にまで掘り下げて明らかにすることができた.前年度までの検討成績を参考に、個々の実験系の有機的連携を計り,一定の結論を導き出そうとした.その結果,1)子宮内膜間質細胞は妊娠の成立に伴い脱落膜化を来すが,同時に免疫組織化学的染色法にてEpidermal Growth Factor(EGF)の細胞内局在性が明確となり,2)[ ^<35>S]methionineーlabel・免疫沈降・autoradiographyにて,このEGFの免疫組織化学的局在性は脱落膜細胞の局所産生に基づくことがわかった.3)非妊娠時子宮内膜間質細胞および脱落膜細胞におけるEGF受容体について,Scatchard plotsにて解析したところ,いづれも単一種の受容体を有しているが、妊娠に伴い親和性(Kd)変化を来さないものの,受容体数(B_<max>)が511にまで増加することがわかった(脱落膜細胞:Kd=1.02±0.28nM,B_<max>=89.4±14.4pM/2x10^5cells).したがって,妊娠に伴い脱落膜細胞から局所産生されたEGFは,脱落膜細胞表面の特異的受容体との結合により,autocrine機構を介して生理作用を発現しているものと考えられた.4)EGFのautocrine機構によりいかなる生理作用が発現されているかを検討した結果,EGFは脱落膜化に伴い分泌されるprolactin産生を抑制(IC_<50>=700pg/ml)することがわかった.5)しかも,この作用発現機序には特異的受容体に内在するtyrosine kinaseだけでなく,phospholipase Cの活性化によって賦活化されたprotein kinase Cが関与していることがわかった.6)さらに,二次元蛋白電気泳動法・autographyにて特異的蛋白リン酸化反応について検討したところ,48kDaの酸性蛋白が特異的にリン酸化を受けることがわかった.以上のように,EGFをヒト子宮内膜の脱落膜化機構における重要な調節因子として位置づけるとともに,その作用発現機序を特異的受容体・細胞内刺激伝達機構にまで掘り下げて明らかにすることができた.妊卵の着床が全うされ妊婦が正常に維持されるためには、子宮内膜の脱落膜化や絨毛細胞の増殖が円滑に進行する必要がある。本過程にEGFがいかに関与するかを明らかにするため、免疫組織化学的手法を用いて検討した結果、妊婦時(正常妊娠・子宮外妊娠)・非妊娠時(偽妊娠療法)を問わず、ひとたび子宮内膜間質細胞が脱落膜化を来すと、明らかにEGFの局在(特異染色)が認められるようになることがわかった。また、絨毛組織においても、栄養膜合胞体の刷子縁および栄養膜細胞の細胞質を中心にEGFが存在することもわかった。次に、子宮内膜間質細胞培養系を用いてプロラクチン(PRL)産生能を指標としたin vitro脱落膜化モデルを確立するとともに、EGFの脱落膜化過程に及ぼす影響についても検討した。その結果、形態的・機能的に脱落膜化を誘導するためにはプロゲステロンの存在が必須であり、PRL分泌は96時間目頃より漸増し、240時間目をピーク(プロゲステロン100ng/ml添加にて63±12.5ng/ml/48時間)とすることがわかった。

EGFの同時添加では、PRL分泌は容量依存性に抑制され、EGFの最少有効濃度は0.1ng/ml以下であり、1ng/ml以上の濃度では、プロゲステロンの作用を完全に阻害することがわかった。なお、本年度に得られた以上の興味ある知見についてはSymposium on Development of Pre-implantation Embryos and Their Enoironment(8th International Congress of Endocrinology)において、本研究代表者がシンポジストとして報告することもできた。1.子宮内膜間質細胞分離培養系による検討成績:(1)ヒト分泌期子宮内膜からcollagenase処理により間質細胞を分離し、progesteroneの存在下でin vitro脱落膜化を誘導する実験系を確立した。prolactinを脱落膜化の指標として検討した結果EGFは脱落膜化を用量依存性(最少有効濃度:10pg/ml以下、IC_<50>:700pg/ml)に抑制し、しかもその作用は可逆性であることが明らかとなった。(2)Ca^<2+>ーactivated phospholipidーdependent proteinkinase(protein kinase c)の賦活剤であるphorbol 12ーmyristate 13ーacetate(PMA)を培養系に添加しても同様の抑制効果が認められた。2.イノシト-ルリン脂質代謝回転に関する検討成績:イノシト-ル1.4.5ーミリン酸(IP_3)の産生能を指標として、イノシト-ルリン脂質代謝回転に及ぼすEGFの影響を検討したところ、EGFは用量依存性の促進効果を惹起することがわかった。前年度までの検討成績を参考に,個々の実験系の有機的連携を計り,一定の結論を導き出そうとした.その結果,1)子宮内膜間質細胞は妊娠の成立に伴い脱落膜化を来すが,同時に免疫組織化学的染色法にてEpidermal Growth Factor(EGF)の細胞内局在性が明確となり,2)[ ^<35>S]methionineーlabel・免疫沈降・autoradiographyにて,このEGFの免疫組織化学的局在性は脱落膜細胞の局所産生に基づくことがわかった.3)非妊娠時子宮内膜間質細胞および脱落膜細胞におけるEGF受容体について,Scatchard plotsにて解析したところ,いづれも単一種の受容体を有しているが,娠妊に伴い親和性(kd)に変化を来さないものの,受容体数(B_<max>)が511倍まで増加することがわかった(脱落膜細胞:kd=1.02±0.28nM,B_<max>=89.4±14.4pM/2x10^5cells).したがって,妊娠に伴い脱落膜細胞から局所産生されたEGFは,脱落膜細胞表面の特異的受容体との結合により,autocrine機構を介して生理作用を発現しているものと考えられた.4)EGFのautocrine機構によりいかなる生理作用が発現されているかを検討した結果,EGFは脱落膜化に伴い分泌されるprolactin産生を抑制(IC_<50>=700pg/ml)することがわかった.5)しかも,この作用発現機序には特異的受容体に内在するtyrosine kinaseだけでなく,phospholipase Cの活性化によって賦活化されたprotein kinase Cが関与していることがわかった.
フォトレジスト廃液からの水酸化テトラアルキルアンモニウムの分離回収プロセスの開発

本研究では、吸着法を用いた、フォトレジスト廃液からの水酸化テトラアルキルアンモニウム(TAAH)の低コストかつ省スペースな分離・回収プロセスについて、エンドオブパイプで廃水処理が可能なシステムを確立することを目的として研究を進めた。ゼオライトAおよびX吸着剤を開発し、バッチ吸着特性を明らかにした。加えて造粒吸着剤を開発し、カラム操作でのTAAHの吸着分離プロセスを開発した。本研究では,吸着法を用いた,フォトレジスト廃液からの水酸化テトラアルキルアンモニウムの低コストかつ省スペースな分離・回収プロセスについて,パイプエンドで廃水処理が可能なシステムを確立することを目的として研究を進めている。平成19年度では,水酸化テトラメチルアンモニウムの選択的な吸着が可能なゼオライト吸着剤について検討を進めた。具体的にはゼオライトAおよびXを調製し,水酸化テトラメチルアンモニウムの吸着特性を評価した。これらのゼオライトのカウンターカチオンをナトリウムからカルシウムやストロンチウムなどの2価のカチオンに交換したところ,水酸化テトラメチルアンモニウムの吸着容量が飛躍的に増大した。そこで,これらのゼオライトのキャラクタリゼーションを行った結果,カウンターカチオンの交換により細孔径が大きくなったことが示唆された。即ち,水酸化テトラメチルアンモニウムの吸着容量とゼオライトの細孔径に相関関係があり,細孔径が大きなゼオライトの場合に効果的に水酸化テトラメチルアンモニウムを吸着可能であった。加えて,全てのゼオライトにおいて,高pH領域で吸着容量が高いことが示され,水酸化テトラメチルアンモニウム廃液への適用が可能であることが示唆された。また,吸着等温実験を行った結果,水酸化テトラメチルアンモニウムの吸着がラングミュア型により進行していることが明らかとなり,化学反応を介した吸着メカニズムであることが強く示唆された。本研究では、吸着法を用いた、フォトレジスト廃液からの水酸化テトラアルキルアンモニウム(TMAH)の低コストかつ省スペースな分離・回収プロセスについて、パイプエンドで廃水処理が可能なシステムを確立することを目的として研究を進めてきた。平成20年度では、19年度に研究開発したゼオライト型の吸着剤に加えて、TMAHを鋳型としたゼオライトAおよびXの調製を行った。その結果、TMAHを鋳型としたゼオライトXが最も高い吸着能を有することが示された。これは、細孔径が大きくなったためであると考えられる。そこで、TMAH鋳型ゼオライトXを用いたカラム吸着実験を行った。カラム操作においては、粉末状のゼオライトを用いた場合では、圧力損失のためにポンプ動力が大きくなるため、アルミナ系のバインダーを用いて造粒を行った。造粒したゼオライトを用いた場合でも、粉末状のゼオライトと同様に、アルカリ領域において効率的な吸着が可能であった。また、溶離については、希塩酸を用いることで定量的に行うことが可能であった。加えて、実プロセスへの適用のために、模擬廃液として、フェノールとTMAHの混合溶液をカラムにより処理した結果、TMAHの吸着-溶離挙動に変化は見られず、有機系の混合物存在下においても本吸着系の利用が可能であることが示された。また、吸着-溶離後のゼオライトを用いて、再度カラム実験を行った結果、TMAHの溶離曲線に変化は見られず、ゼオライト吸着剤の再利用も可能であった。
超音波、紫外線、人工磁気の魚類忌避効果に関する行動学的研究

1)アイゴ、ブダイ、イスズミの3種を対象に、魚群探知機による90kHzと200kHzの超音波放音を行った。放音によっていずれの魚種も遊泳行動に変化はみられず、摂餌を停止することはなかった。これらの結果より、魚群探知機の放音出力では、超音波は忌避刺激にならないと判定された。2)ウグイ、オイカワ、アユ、サケ、スズキ,ラージマウスバス、ブルーギル、ゴマサバおよびマアジの9種を対象に、近紫外線(UV)の点滅放射に対する反応行動を調べ、可視光の点滅放射に対する反応行動と比較検討した。点滅UV放射に対する反応行動は魚種によって異なり、ウグイとゴマサバは顕著な忌避反応を示し、サケには行動変化が全くみられなかった。その他の魚種は弱いながら忌避反応を示したが、点滅UV放射は慣れの生じない持続的な忌避刺激になり得ないと考えられた。実験結果は点滅UV放射への反応行動の強さは眼のUV感度とは相関しないことを示した。3)メダカとウナギを対象に前者では地磁気の最大313倍、後者では地磁気の最大801倍の人工磁気を印加して、魚の行動変化を水槽観察した。水槽内を自由遊泳するメダカは弱い磁気区に移動する傾向は認められなかった。ウナギは人工磁気の印加によってシェルターから脱出し、人工磁気に長時間曝されたウナギは磁気感覚を喪失した。これらの結果より、強い人工磁気は魚の忌避刺激になり得ると判定された。人工磁気刺激に関する実験は学部実験室(実験魚はメダカ)、超音波は附属実験所の屋外大型タンク(メジナ、マアジ、ゴマサバ)、紫外線は学部屋外タンク(アユ、オイカワ、ウグイ)と附属実験所の屋外大型タンク内生簀(メジナ、マアジ、ゴマサバ)及び民間養殖場のタンク(アユ)で実験を行った。【人工磁気刺激】人工磁気の強さに傾斜をもたせた水槽にメダカを入れ、人工磁気付加前後のメダカの分布様式の変化をみた。地磁気の最大313倍(1千万nT)の人工磁気を付加したが、強磁気を避ける傾向は認められなかった。また、強磁気の付加後の生残は対象と変わらなかった。しかし、メダカが磁気感覚をもつことが明らかになり、分布様式の解析に応用したcircular statisticsは有効な分析方法であることが確認された。【紫外線刺激】本研究のために、光源に3種のLEDを使った魚類忌避刺激装置を製作した。ヒトに光害をもたらさない近紫外線(λmax:365nm)刺激はいずれの魚種にも有効な忌避刺激であった。ただし、忌避刺激となるのは刺激を点滅させた時のみであった。顕著の忌避を示したゴマサバの忌避閾値の放射照度は1.80μW/cm^2/nmであった。青光で0.02μW/cm^2/nm、赤光で1.0μW/cm^2/nmという閾値と比べ、感紫外線錐体を網膜にもたないゴマサバで低い紫外線忌避閾値を得たことは、点滅紫外線が様々な魚種の行動制御に有効な刺激になる可能性を示す。【超音波刺激】市販の魚群探知機を用いて、波長50Hzと200Hzの超音波を刺激とした。いずれの魚種も送受波器の前から音圧が低い部分に移動する傾向はなく、忌避は認められなかった。魚群行動制御への応用を意図して、ヒトは感じないが魚は感じる刺激として人工磁気、紫外線、超音波を考え、これらに対する魚の忌避反応を調べた。実験の結果、点滅紫外線は魚種によって忌避効果が顕著に異なり、地磁気の800倍程度の強さの人工磁気と魚群探知機から発する程度の強さの超音波は忌避刺激に成り得ないことが明らかになった。【人工磁気刺激】

実験地の地磁気の約800倍(265Gauss)から100倍(33.3Gauss)の強さの水平方向の傾斜人工磁気を加えた水槽実験では、ニホンウナギ(養殖魚)は265Gaussに置かれた隠れ場から出てより弱い磁気位置に移動するという期待された行動(忌避反応行動)を示さなかった。この程度の強さの人工磁気は忌避刺激にならなかったが、265Gaussに45分間以上置かれたウナギでは磁気感覚が失われた。【紫外線刺激】河に遡上したサケ親魚を用いた大型水槽実験で、サケはLEDからの点滅紫外線(λmax:383nm)に全く忌避反応を示さなかった。また、同時に行った比較試験では、点滅青色光(λmax:475nm)にも忌避反応を示さなかったが、点滅赤色光(λmax:623nm)には弱いながら忌避反応を示した。生簣内のスズキは、2-3Hzの点滅紫外線に明瞭な忌避反応を示し、反応の強さは点滅青色光の場合と同等であった。【超音波刺激】魚群探知機(海上電機、記録機R-41型送受信器SR-56/57型,最大出力)からの90kHzの超音波(イルカはこの周波数の超音波を発して)に対するアイゴ、イスズミ、ブダイの反応行動を生簣と水槽でビデオ記録した。これらの魚は藻場造成域の再生藻の食害魚として知られ、忌避刺激による駆除が望まれている。これらの魚は90kHz超音波を発しても遊泳行動に変化はみられず、藻を摂食中に90kHz超音波を発しても摂食を止めなかった。
1991-92年出土敦煌懸泉置漢簡の研究

1)地名、人名、官職その他、物品、語句考証論文及び一字索引よりなる『居延漢簡索引』(全420頁)を完成、刊行した。この成果は本補助金と、これに先立つ、平成2、3年度の1930-31年出土居延漢簡の研究(課題番号02044146)、平成4、5年度の1973-74年出土の居延漢簡の研究(課題番号04044152)の成果とを総合して完成したものである。2)居延漢簡が発掘された内蒙古自治区エチナ河流域の、甲渠候官址、カラホト等の実地調査を行い、移籍の影像を含む現状報告書を作成した。この調査は、NHK取材班が「シルク・ロード」番組作成の為に現地を訪問して以来の外国人の訪問で、特に漢簡を中心テーマに外国人が調査に入ったことは前例がない。3)籾山分担者が行った台湾、中央研究院歴史語言研究所所蔵刻歯木簡の調査は、同分担者がここ数年来継続してきた刻歯木簡、木簡の右側に刻みの入った木簡の確認の為の実地調査で、数値の記載のある木簡には、その数値を示す百、十、一などの刻み方のルールがあり、その刻みを入れることによって、文字面が改ざんされても、真実を示すようにほどこされた処置である。この発見は漢簡の実物を精査することによって到達し得た結論で、門田協力者が発見した、細い木枝から簡材を作成した場合におこる鈍角梯形両行簡の形態、冊書編成前に刻む編をかける目印などと共に、木簡を実見することによる研究の成果があがっており、常時実物を手にできる中国研究者がこれらの事実を見逃していることは、日本人研究者の観察の細かさの特色が現れているともいえるし、中国人が文字を中心に見ている研究法の欠陥ともいえ、共同研究の成果の特筆すべき点かと思料する。4)上記の刻歯の存在は、西洋中世の木簡にTallyとしてあらわれているのと共通の現象で、ローマ時代の木簡などの西洋の書写材料と比較研究を行うことが中国木簡研究に有効な刺激効果を及ぼすものであることを認めしめる。5)今年度初頭、ようやく居延漢簡の一部、甲渠候官中心の出土簡の写真版が出版された。この出版には長い時間を要したが、中国内の極端な利益追求の風潮による、学術出版の減少が印刷出版段階において時間を空費した以外に、発掘関係者間の巧名争いが原稿提出を遅延させた。このような事情は、共同研究者として効果的な協力の余地がなく、学界全体に及ぼす悪影響は防ぐ有効な手段がない。また、写真整版技術が拙劣である為、写真原稿の段階で見た精確な写真が、出版されてみると使用に耐えない結果となる。日本の技術で製品の制度を向上させる協力を図ってみたが、金銭的折れ合いがつかず、計画は失敗に終わった。木簡の釈文作業の段階で赤外線テレビを導入すれば、台北の居延漢簡や奈文研の日本木簡などで実証されている効果を期待できるのであるが、そのような設備機器の提供が本研究費補助金では不可能であるのは、いささか残念である。6)敦煌懸泉置出土簡の釈読作業は、中国においてはほぼ終了し、出版に作業の中心が移る。この発掘は居延新簡に比較すれば、全く単一の機構で行われ、その機関、甘粛省文物考古研究所が釈読作業を行ったのであるから、居延漢簡に比較すれば成果の刊行、研究者の共有は早いものと期待される。7)『居延新簡』の出版により、新旧居延漢簡と総合して研究することが可能となった。次年度以降に計画される研究は、両居延漢簡の統一的な総合であると考えている。8)江蘇省連雲港市所在の漢墓から約150簡の副葬木簡が出土し、漢代東海郡の交通関係の上計の木簡が含まれている。将来、懸泉置漢簡と共に交通史の資料が増加することは明らかで、両方の出版ができれば、その面からの研究が進展するものと期待される。

この発見は漢簡の実物を精査することによって到達し得た結論で、門田協力者が発見した、細い木枝から簡材を作成した場合におこる鈍角梯形両行簡の形態、冊書編成前に刻む編をかける目印などと共に、木簡を実見することによる研究の成果があがっており、常時実物を手にできる中国研究者がこれらの事実を見逃していることは、日本人研究者の観察の細かさの特色が現れているともいえるし、中国人が文字を中心に見ている研究法の欠陥ともいえ、共同研究の成果の特筆すべき点かと思料する。4)上記の刻歯の存在は、西洋中世の木簡にTallyとしてあらわれているのと共通の現象で、ローマ時代の木簡などの西洋の書写材料と比較研究を行うことが中国木簡研究に有効な刺激効果を及ぼすものであることを認めしめる。5)今年度初頭、ようやく居延漢簡の一部、甲渠候官中心の出土簡の写真版が出版された。この出版には長い時間を要したが、中国内の極端な利益追求の風潮による、学術出版の減少が印刷出版段階において時間を空費した以外に、発掘関係者間の巧名争いが原稿提出を遅延させた。このような事情は、共同研究者として効果的な協力の余地がなく、学界全体に及ぼす悪影響は防ぐ有効な手段がない。また、写真整版技術が拙劣である為、写真原稿の段階で見た精確な写真が、出版されてみると使用に耐えない結果となる。日本の技術で製品の制度を向上させる協力を図ってみたが、金銭的折れ合いがつかず、計画は失敗に終わった。木簡の釈文作業の段階で赤外線テレビを導入すれば、台北の居延漢簡や奈文研の日本木簡などで実証されている効果を期待できるのであるが、そのような設備機器の提供が本研究費補助金では不可能であるのは、いささか残念である。6)敦煌懸泉置出土簡の釈読作業は、中国においてはほぼ終了し、出版に作業の中心が移る。この発掘は居延新簡に比較すれば、全く単一の機構で行われ、その機関、甘粛省文物考古研究所が釈読作業を行ったのであるから、居延漢簡に比較すれば成果の刊行、研究者の共有は早いものと期待される。7)『居延新簡』の出版により、新旧居延漢簡と総合して研究することが可能となった。次年度以降に計画される研究は、両居延漢簡の統一的な総合であると考えている。8)江蘇省連雲港市所在の漢墓から約150簡の副葬木簡が出土し、漢代東海郡の交通関係の上計の木簡が含まれている。将来、懸泉置漢簡と共に交通史の資料が増加することは明らかで、両方の出版ができれば、その面からの研究が進展するものと期待される。1)今年度の海外調査では研究代表者はロンドンで敦煌漢簡を調査したほか、スイスBruggにおいてローマ木簡(ヴィンドネッサ出土)を精査し、同博物館の保存方法を調査した。吉村、鵜飼分担者及び門田、陳協力者は、主に江陵荊州博物館、武漢湖北省博物館、長沙湖南省博物館で出土漢簡の調査と研究者との討論を行った。2)招請研究者として北京大学張伝璽、裘錫圭、中国政法大学徐世虹、社会科学院世界歴史研究所徐建新は、それぞれ共同研究会に参加して釈文の検討を行った。又、下記の漢簡の展示の時期に来日した謝駿義、何双全等甘粛省研究所関係者は、共同研究会に出席するメンバーに対し、懸泉置漢簡発掘状況について説明、研究報告を行った。3)代表者大庭が館長を兼任する大阪府立近つ飛鳥博物館では10月4日より11月20日迄甘粛省文物考古研究所より懸泉置漢簡を含む漢代木簡約90点を借用、一般に展示したが、その間日本奏漢史研究会会員をはじめ多数の来館者があり、特定少数の研究者には、ケースを開いて観察できるようにし、一般の入館者の中では、特に書道関係者が大きな関心をよせた。研究と同時に一般的啓蒙にも役立ったが、特に漢簡の現物に接し得ない研究者には大きな貢献を果たしたと自負している。4)1989年以来与えられている科学研究費補助金(国際学術研究)の援助のもとに継続して作業を続けた、上島紳一分担者を中心に、吉村昌之、鵜飼昌男分担者、門田明協力者の作成した『居延漢簡索引』を刊行することができた。
哺乳類・初期生殖細胞における遺伝子発現の研究

始原生殖細胞(PGC)は生殖系列の最も初期に出現する細胞であり、マウスでは原腸胚形成時に初期未分化細胞である胚体外胚葉から分化してくるとされている。したがって、PGCにおける遺伝子発現プロファイルを詳細に比較検討することにより、生殖細胞分化過程および体細胞-生殖系列の分岐に関しての分子レベルでの知見が得られることが期待される。しかし、PGCというごく少数の細胞を単離し、直接そこに発現する多数の遺伝子を解析するのは通常の手法では大変困難であった。そこで今年度は初期のステージよりマウスPGCを単離する技術を確立することを第一義的な目標とし実験を行ってきた。具体的にはPGCのマーカーであるアルカリフォスファターゼ遺伝子をlacZ(大腸菌β-ガラクトシダーゼ)遺伝子で置換したTNAP(組織非特異型アルカリフォスファターゼ)ノックアウトマウス(TNAPKO)を用い、lacZ発現を指標としてPGCを分離、純化する方法を開発した.方法としては、PGCを含む胚体組織をTNAPマウスから取りだし、トリプシン処理、ピペッティングにより解離し、浸透圧ショックによりb-ガラクトシダーゼの基質であるFDGを細胞内に取り込ませた。FDGがb-galと反応すると蛍光を発することを利用し、セルソーターを用いてlacZ陽性細胞を検出、単離し、陽性細胞の性質を検討した。実際にソーティングにより蛍光陽性の細胞を単離し、アルカリフォスファターゼ染色をすると蛍光陽性細胞の95^98%が染色させることが判明した。染色される細胞は、比較的大きく丸い形状のもので、核が著しく大きい、という典型的な始原生殖細胞の形態を持つことが確かめられた。また、PGCの増殖に必須なチロシンキナーゼであるc-kitの抗体で染めたところ、やはり^98%の細胞が染色された。これらの結果より、レポーター発現を指標としたフローサイトメトリー法により、従来の方法では得ることができなかった、非常に高い純度の幹細胞を単離し得ることが明らかになった。現在はさらに初期のPGC単離のための条件検討を行うとともに、12.5日胚、13.5日胚由来のPGCを単離、プールしており、これを用いたcDNAライブラリー作製の準備を行っている。
白金,酸化チタン固定化固体酸触媒による炭化水素の選択酸化

これまで酸素と水素の混合ガスを酸化剤に用いた反応系において,水素の活性化と酸素の還元的活性化に必要な触媒機能の分担と協奏を基盤概念に置くことにより,穏和な条件での炭化水素の部分酸化が可能な触媒系を開発してきた.最近では,Pt/Ti0_2/Si0_2触媒を用いHC1/MeC0_2HあるいはHC1/Me_2CO溶媒を用いることにより,アルカンの選択酸化反応が進行することを見いだしている.アダマンタン酸化では付加価値の高い2級炭素酸化生成物合計の選択率が60%と高く,他の酸化反応系で報告されている選択率(10%)よりも高い特徴を有している.しかし,腐食性のHC1を用いる必要があり,プロセス的には取り扱いにくい.そこで;本特定領域研究においてHC1の代わりに固体酸を機能させることを試みたところ, Pt/TiO_2/H-ZSM-5触媒がベンゼン水酸化反応に活性であることを見いだした.上述したようにHC1の代わりに,シリカアルミナ,βゼオライト,モルデナイト, ZSM-5等の各種固体酸を担体に用いた触媒を用いて,ベンゼン水酸化を実施したところ,フェノールおよびヒドロキノン,カテコールが生成することを見出した.ベンゼン水酸化生成物以外にはフェノールが水素化されたシクロヘキサノール,およびベンゼン水素化物のシクロヘキサンの生成が観測された.中でもPt/TiO_2/H-ZSM-5が最も水酸化活性が高いことが分かった.Pt以外のPd, Rh, Au, Ru等の貴金属を用いたところ,Ptが特異的に高活性であり,Ptは単に水素分子の活性化に関わるだけでなく, Pt, TiO_2,固体酸の界面が協奏的に作用して活性酸素の生成に関与していることが明らかとなった.これまで酸素と水素の混合ガスを酸化剤に用いた反応系において,水素の活性化と酸素の還元的活性化に必要な触媒機能の分担と協奏を基盤概念に置くことにより,穏和な条件での炭化水素の部分酸化が可能な触媒系を開発してきた.最近では,Pt/Ti0_2/Si0_2触媒を用いHC1/MeC0_2HあるいはHC1/Me_2CO溶媒を用いることにより,アルカンの選択酸化反応が進行することを見いだしている.アダマンタン酸化では付加価値の高い2級炭素酸化生成物合計の選択率が60%と高く,他の酸化反応系で報告されている選択率(10%)よりも高い特徴を有している.しかし,腐食性のHC1を用いる必要があり,プロセス的には取り扱いにくい.そこで;本特定領域研究においてHC1の代わりに固体酸を機能させることを試みたところ, Pt/TiO_2/H-ZSM-5触媒がベンゼン水酸化反応に活性であることを見いだした.上述したようにHC1の代わりに,シリカアルミナ,βゼオライト,モルデナイト, ZSM-5等の各種固体酸を担体に用いた触媒を用いて,ベンゼン水酸化を実施したところ,フェノールおよびヒドロキノン,カテコールが生成することを見出した.ベンゼン水酸化生成物以外にはフェノールが水素化されたシクロヘキサノール,およびベンゼン水素化物のシクロヘキサンの生成が観測された.中でもPt/TiO_2/H-ZSM-5が最も水酸化活性が高いことが分かった.Pt以外のPd, Rh, Au, Ru等の貴金属を用いたところ,Ptが特異的に高活性であり,Ptは単に水素分子の活性化に関わるだけでなく, Pt, TiO_2,固体酸の界面が協奏的に作用して活性酸素の生成に関与していることが明らかとなった.
骨盤位の妊婦が実施する無煙棒灸の頭位変換の効果：ランダム化比較試験

骨盤位(逆子)は帝王切開の適応である。そのため、自然分娩を希望している妊婦の骨盤位を治したい思いは切実である。研究者はパイロットスタディとして、妊娠33週以降の骨盤位の妊婦に無煙棒灸実施群と灸を実施しない群との比較研究を実施し、無煙棒灸群は通常ケア群より統計的有意に頭位に変換した結果を得た。次の研究を実施し、灸による下肢の皮膚温と血流の上昇が新たな成果指標となる示唆が得られた。次のステップとして、本研究では骨盤位妊婦を対象とした無煙棒灸群と対照群のランダム比較試験を実施する。妊婦のセルフケアにおける代替医療のエビデンスの質を向上させ、妊婦のQOL向上に貢献する。
食品の必須脂肪酸バランスが高次の脳神経機能に影響を及ぼす機構の解析

2世代にわたって精製飼料をベ-スとした高αーリノレン酸(シソ油)食あるいは高リノ-ル酸(ベニハナ油)食を与えたマウスについて、一般行動および薬物感受性を調べた結果、次のような結果が得られた。<両食餌群間に有意な差がみられなかった項目>___ー自発運動量(回転かごによる)、疼痛閾値(Tailーflick法)、明暗識別能(Y迷路)、学習(高架式十字迷路)、エ-テルによる麻酔作用、ジアゼパムによる筋弛緩作用<両食餌群間で有意な差がみられた項目>___ー不安誘発(高架式十字迷路)の頻度はシソ油食群が有意に少なく、程度もシソ油食群が低い傾向にあった。水迷路学習能試験(Morris Water Maze test)ではシソ油食群が有意に学習能が高かった。またペントバルビタ-ルに対する感受性はベニハナ油食群が有意に高く、スコポラミンによる行動量の増加は、シソ油食群が有意に多かった。従来、明暗識別型学習能試験(オペラント型)ではシソ油食群の方がベニハナ油食群より学習能が高いことを繰り返し証明してきたが、今回の研究の結果、食餌の油脂成分(αーリノレン酸/リノ-ル酸)が、広く一般行動や、薬物感受性にまで影響を与えることが、明かとなった。すなわち、食品中のリノ-ル酸摂取量を減少させ、αーリノレン酸量を増加させることが、高度な脳神経系の機能維持に重要である。また、この栄養指針は、我々の他の研究成果から多くの慢性疾患を予防する上からも有効であると思われる。
新規自己免疫性難聴モデルマウスの解析による革新的な感音難聴治療法の探索

内耳性難聴の原因のひとつに古くから自己免疫の関与が考えられており、自己抗体や標的タンパクの同定を中心に国内外で多くの基礎的・臨床的検討がされてきている。当研究では自己免疫発症の実態である免疫寛容の破綻に焦点を当て、発生工学を駆使して新規自己免疫性難聴トランスジェニックマウスモデルを樹立し解析した。CD4陽性T細胞による内耳有毛細胞に対する自己免疫は早期より難聴を呈した。3週齢より低音部の一側性変動性難聴で発症し、徐々に両側で中高音へと進行した。ほとんどの個体で高齢では前庭機能障害を発症し一連の症候はメニエール病に酷似していた。今後このマウス蝸牛の組織学的解析をさらに進め、治療標的を探索する。当研究では自己免疫による内耳性難聴の発症について、自己免疫の本体である免疫寛容の破綻に研究の焦点を当て、発生工学を駆使してマウスモデルで解析する。これにより自己免疫発動と感音難聴の因果関係をprospectiveに免疫学的手法で直接証明し、ひいては病態生理の詳細な解析を通して新規治療標的や治療薬候補の探索を目指す。以下に当該年度の研究成果を記す。(1)各種トランスジェニックマウス(Tg)の準備これまでに(1)国際共同研究で樹立した内耳有毛細胞にHA抗原を発現するMath-HA Tg、(2)HA抗原を特異的に認識するTCRをCD4陽性T細胞に発現する6.5TCR Tg、(3)同TCRをCD8陽性T細胞に発現するCL4TCRマウスを輸入していた。H24年度には現行コロニーにおける遺伝子発現パターンを再確認してから各々2系統ずつを選択し、慶大医学部内の実験動物センター(SPF環境)で実験に必要な数を確保した。(2)齧歯類用OAE(耳音響反射)測定機器の整備これまでにハーバード大Liberman博士の指導の下、同研究室で実績のあるEPL Acoustic System Assemblyの測定プローブを慶大内で作成していた。H24年度は電気回路の作成を行なった。本年度初頭に音源との接続を予定している。(3)直接交配による慢性自己免疫性内耳傷害モデル上記(1)一(2),(1)一(3)の2重Tgを作成して慢性の自己免疫による難聴を検討する。H24年度の検討から、経時的なABR測定の結果、CD8陽性T細胞のみならずCD4陽性T細胞による内耳有毛細胞への自己免疫も高音漸減型の難聴を誘導することが明らかになった。現時点までの予備実験レベルでの解析では、難聴の進行はほぼ同程度の週齢から始まるものの、後者のほうが難聴の程度は悪い傾向にある。H25年度も引き続き解析を行う。1、齧歯類用OAE(耳音響反射)測定機器の整備これまでにハーバード大Liberman博士の指導の下、同研究室で実績のあるEPL Acoustic System Assemblyの測定プローブを慶大内で作成していた。本年度は電気回路含めたハード面の完成に続いて、自動キャリブレーションなどを含めたプログラムを構築し、実際に齧歯類での測定が可能となった。2、直接交配による慢性自己免疫性内耳傷害モデルの長期予後検討Nを増やしCD8陽性T細胞による局所免疫破綻(CL4; Math-HA)とCD4陽性T細胞による局所免疫破綻(6.5TCR; Math-HA)の聴力を1年に渡って解析した。その結果(1)CD4陽性T細胞による自己免疫性難聴のほうが発症が早く、(2)難聴は一側性・片側性の低音障害型難聴の反復を経て、高音漸減型の恒久性難聴へ移行していく、(3)他方CD8陽性T細胞による難聴では変動性難聴は観察されず、高音漸減型の進行性難聴を呈していた。これらの表現形は予想外であり、臨床的にも基礎的にも興味深い。3、病態生理解明を目的として、経時的に各種マウスからサンプルを採取している。来年度以降はこれらの組織学的解析と網羅的遺伝子発現解析を通して、新規バイオマーカー探索や治療標的同定を進める。