hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
初期放射線科学と女性－マリー・キュリーの後継者たち

本研究は、ノーベル賞を二度受賞した後のマリー・キュリーのキャリアの中でも、とりわけいままであまり注目されてこなかった指導者としてのマリー・キュリーの側面に光を当てた。ソルボンヌ大学理学部教授だったピエールの死は、マリーが夫の後任としてフランス初の女性大学教員の地位をもたらした。当時、「放射能」の講座で授業できるだけの男性科学者がフランスにいなかったからである。そのことは自動的に、女性教師のマリーが科学を志す男女の学生達の「指導教員」になることを意味する。これもフランス初のことである。マリーの教え子は世界に広がり、その後の放射能研究の発展に大きな足跡を残した。そしてまたそれら教え子の弟子たちもまた、なんらかの形でキュリーの研究スタイルを受け継ぎ、これを継続していったのである。特にラジウム研究所所長としてマリー・キュリーの名声は世界に広がり、フランスのみならず日本や中国からも複数の研究者が彼女に師事した。これらの弟子はのちに本国に帰ってから、その国の科学の発展に力を尽くした。中でも女性たちにとって大いなるロール・モデルであったマリー・キュリーの存在は、若い女性学者にとって自分たちの将来に希望を持たせるものであり、彼女たちの科学者としての業績は、男性の弟子に全く劣らないものであったことが判明した。ここからも、男女の科学者に対する教育者としてのマリー・キュリーの資質もまた、科学者としてのそれに劣らず、素晴らしいものであることが判明した。また本研究では、直接の弟子だけではなく、孫女弟子にも注目した。ここから、日本人初の女性物理学者湯浅年子や、有機化学の変革者と言われたビアンカ・チューバなど、非常にユニークな女性科学者がそこに含まれていたことも判明した。当該年度は、初年度なので、マリー・キュリーの女弟子のおおざっぱなデータベースを作成した。また、これについては、リケジョのロールモデルとしても非常に興味のもたれているテーマであることから、化学雑誌などに啓蒙のための論文を書くことを頼まれ、2本発表した。女性ではないが、日本人弟子として最初にキュリーに師事し、多くの女性の同僚に囲まれて研究した最初の日本人科学者山田延男を紹介するホームページを世界で初めて英語で作成した。これは各界から好評を得ている。講演としては、東海地区の高校の化学教員の会から、名古屋大学での講演を頼まれ、キュリーとポロニウム発見の過程について解説した。日本学術会議からは、女性科学者をいかにして増やすかという問題に焦点を当てて、キュリーがポーランドで受けた女子へのの科学教育という主題を特に掘り下げて講演した。論文としては、先の高校化学教員の会で発表し内容を、より学問的にまとめ、学会誌『化学史研究』に発表した。また、昨年の国際学会でのキュリーの女弟子たちと山田延男のことについて、学会主催のネットの英文誌に発表した。キュリーの孫弟子にあたる湯浅年子についても、パリのキュリー・アーカイヴで新しい発見をしたので、とりあえず資料の一覧表を作成した。次年度でこれを論文にまとめたい。私はパリのキュリー・アーカイヴの学芸員と懇意であり、非常に資料を得やすい立場にある。そこで、なかなか長期の渡仏は難しいが、学芸員たちが可能な限りのデジタル資料を提供してくれるので、それをもとにおおざっぱなデータベースを作成することができたことが大きい。さらに、日本全体が、女性科学者のロールモデルの必要性を強調しているので、それにふさわしいこの研究テーマには社会の需要があるので、講演などに適宜呼ばれ、知識を提供するだけでなく、私もまたそこから新たな知見を得ているからである。今年度もマリー・キュリーについての講演が多数あり、なるべくキュリー本人だけでなく、彼女が所長を務めていたラジウム研究所とそこにいた女性の弟子たちについても話をした。特に名古屋女性会館では、孫弟子の湯浅年子について単独の講演ができ、科学と女性について広く考える機会を聴衆に提供できたと思う。そのほか、あとにのべる湯浅論文ともども、「後継者」研究の進展と啓蒙に貢献できたと思う。論文では、パリで発見した湯浅年子の資料をまとめて、まずは日本語で発表することができた。湯浅はキュリーの弟子のジョリオの弟子なので、ここれはジョリオとその時の女性の同僚についても考察した。ここでは、フランスの状況だけでなく、戦後すぐの日本における放射能研究所実情と女性研究者のおかれた状況を詳しく考察することができた。また、キュリーの最初の日本人弟子、山田延男と湯浅年子について比較した英語の論文を完成し、欧文雑誌に送り、最近審査が通過したので、2017年度に出版予定である。さらに、先の科学研究費において出版した『マリー・キュリーの挑戦』(トランスビュー・2010)の改訂版を出版した。ここでは、この科学研究費の成果も取り入れることができた。この年度は、キュリーの「孫弟子」として、さらにビアンカ・チューバという新たな女性科学者の存在を知ることができた。チューバはキュリーの弟子のカトリーヌ・シャミエの教え子で、優秀な化学者であった。2016年11月に、1981年度のノーベル化学賞受賞者ロアルド・ホフマン博士から、キュリーすら落選したパリの科学アカデミーの化学部門初の女性科学者エイゼンシュテインを紹介され、そのエイゼンシュテインから科学アカデミーのしくみと、チューバについてのインタビューを行うことができた。今後は本研究にチューバも射程に入れる予定である。キュリーの女弟子についてのデータベースはだいたい作ることができている。ただ、なかなか男性の弟子までに手が回っていない。

ただ、日本人の山田延男については出身大学の東北大学理学部の同窓会などからも資料を得ることができているし、あらたにビアンカ・チューバの存在を知り、資料を得ることができたので、その部分の埋め合わせはできたと思う。しかも、山田と湯浅についての英語論文の発表が決まったので、(特に山田について英語で公表される論文はこれが世界初)これは近代日本の科学政策の一環を世界に知らせることにもなるので、よかったと思っている。湯浅についても、日本語の草稿が親族の手にあり、研究を進めるのが難しかったのだが、パリで新しい文書を発見し、世界で初めてそれを読んだ研究者としてその内容を発表することができたので、これは当初予想もしなかった大きな成果であると思っている。予想外なことは、ビアンカ・チューバの存在を知ったこともそうである。ホフマン博士はチューバと実際にあったこともあるということで、2017年度にこのことで本格的にホフマン博士のインタビューを行う予定である。また、科学上の弟子ではないが、キュリーの次女エーヴのキャリアがはっきりわかる伝記が出版され、それをもとにして『マリー・キュリーの挑戦』のその部分を大きく書き直したことは、戦前における女性のキャリアの多様性を示すものとして意味があったと思う。当該年度は、一昨年度よりパリで閲覧し、筆写あるいはタイプ打ちのみが許された、終戦直後の湯浅年子(マリー・キュリーの孫弟子)とレデリック・ジョリオ・キュリー(マリー・キュリーの弟子)との往復書簡について、日本語で論文を発表した。これは各方面から反響を得た。この文書については、介護などのためにフランス出張ができなくなった私に代わり、招へいを依頼したパリ大学オルセー校のダニエル・フォーク氏が、パリのキュリー古文書館でこの往復書簡をタイプ打ちし、日本に来てレクチャーを行ってくれた。フォーク氏のおかげで、書簡のほぼ全部を手に入れることができた。また、日本でのフォーク氏との討論により、フランス側から見たこの文書の意味を理解することができた。昨年度は日本語で発表した論文の英語版も完成していたのだが、フォーク氏との討論の結果、フランス側からの見方についても論文に盛り込むことが妥当であろうとの結論になり、次年度に英語論文の大幅な書き直しをすることを決定した。やはりキュリーの孫弟子にあたるビアンカ・チューバについては、チューバを直接知っている、1981年度のノーベル化学賞受賞者ロアルド・ホフマン博士から来日の際に直接、チューバについてのインタビューを行うことができた。先のフォーク氏からもチューバについての貴重な資料の提供を受けた。フォーク氏からはさらに、キュリーの弟子ではないが、キュリーの次に女性の大学教授になったポーリーヌ・ラマールもまた、本研究に加える意味があるのではないかと示唆され、情報提供を得た。ラマールにも女弟子がたくさんおり、ロールモデルとして貴重な人材であることが判明した。そのほか、山口大学の男女共同参画室から、本研究のテーマ、特に女の弟子を育てた女性科学者という側面からマリー・キュリーについての講演を頼まれ、これを行った。
rh-BMP2とbFGF混合埋植による顎裂閉鎖と歯周組織再生

8週齢と16週齢のラットの左右頭頂骨に直径3.5mm、深さ1mmの骨欠損を作製した。次いでBMPを含浸した担体に、生理食塩水に溶解した0ng,25ng,250ngのFGFを滴下したものを移植した。術後2,4週に組織の観察と、石灰化度、ALP活性の測定を行った。さらも15週齢のラットの左側上顎第一臼歯近心に3×3×0.5mmの骨欠損を作製し、16週齢時にBMPを含浸した担体を移植した。BMP移植直後または移植1週後に、抜去直後の自家上顎第三臼歯をBMP移植部へ移植し、4週後の組織を観察した。その結果、以下のことが明らかになった。結果:術後4週では、すべての若年群と25ngのFGFを加えた成熟群で良好な骨形成像と高い石灰化度を示し、他の成熟群の石灰化度は低かった。ALP活性は週齢に関係なく、FGF添加群で術後2週に上昇し、4週で低下した。BMP移植直後に歯を移植した群では、4週後、移植歯周囲の骨形成が良好であったが、移植歯と新生骨は骨性癒着を呈していた。一方BMP移植1週後に歯を移植すると、骨形成が良好であることに加え、骨性癒着が認められず、移植歯と新生骨の間に歯根膜組織および歯根膜線維の走行が観察された。
非アルコール性脂肪性肝炎における細胞特異的なSTAT3の役割

非アルコール性脂肪性肝炎(NASH)における細胞特異的なSTAT3の役割を肝細胞およびマクロファージ/好中球特異的STAT3ノックアウトマウスに、マウス非アルコール性脂肪性肝炎モデルであるメチオニンコリン欠乏食を投与し検討を行った。肝細胞におけるSTAT3は、SREBP1cの発現亢進を介し脂質合成を抑制していることが明らかになった。マクロファージ/好中球におけるSTAT3は炎症浸潤を促進する一方で、肝細胞のSTAT3の役割を活性化することにより脂質沈着を抑制する可能性が示唆された。"非アルコール性脂肪性肝炎(NASH)におけるSTAT3の役割"を(1)細胞特異的STAT3ノックアウトマウスを用いた実験系と(2)臨床検体を用いた実験系により解析を行った。まず、(1)細胞特異的STAT3ノックアウトマウスを用いた実験系において、肝細胞特異的STAT3ノックアウトマウスおよび、マクロファージ/好中球特異的STAT3ノックアウトマウスに、NASHの実験モデルであるメチオニンコリン欠乏食(MCD食)負荷を行い、(A)炎症および(B)脂質沈着の観点から検討を行った。第一に、MCD食の負荷により肝細胞特異的STAT3ノックアウトマウスではMCD食開始後3日から2週間では、野生型マウスに比較して、肝臓における有意な脂質沈着と血清中の中性脂肪の上昇を認めたが4週間および8週間の投与では有意な差を認めなかった。このMCD食開始早期の、脂質沈着にはSREBP1cの発現亢進および活性化が関与していることが示唆された。一方で、炎症性サイトカインや炎症細胞の浸潤に差は認めず、肝細胞におけるSTAT3は脂質合成を抑制する役割を果たしていることが示唆された。第二にマクロファージ/好中球特異的STAT3ノックアウトマウスにおいては、MCD食開始3日目より、野生型マウスに比較して著名な炎症性細胞浸潤をみとめる一方で、肝臓における脂質沈着は軽度であった。この現象は4週間、8週間投与の時点でも確認された。このメカニズムとして、炎症細胞はIL-6をはじめとするサイトカイン産生を介して、肝細胞におけるSTAT3を活性化することにより、抗脂質沈着に作用することが示唆された。(2)臨床検体を用いた実験系においては、免疫染色による検討において、NASH患者の肝生検サンプルでは、脂肪肝患者と比較して、肝細胞および炎症細胞におけるSTAT3の活性化が亢進していることを明らかにした。"非アルコール性脂肪性肝炎(NASH)におけるSTAT3の役割"を、肝細胞特異的STAT3ノックアウトマウスおよび、マクロファージ/好中球特異的STAT3ノックアウトマウスに、NASHの実験モデルであるメチオニンコリン欠乏食(MCD食)負荷を行い、またSTAT3活性に重要なサイトカインであるIL-10ノックアウトマウスにインスリン抵抗性を惹起するNASHモデルである高脂肪食負荷を行い検討を行った。このMCD食開始早期の、脂質沈着にはSREBPlcの発現亢進および活性化が関与していることが示唆された。第三にIL-10ノックアウトマウスでは、6か月間の高脂肪食負荷により、有意な炎症細胞浸潤を認める一方で、脂質沈着を抑制することが示唆された。これらの結果はSTAT3の細胞特異的な役割を明らかにし、また、炎症細胞浸潤が肝臓における脂質沈着を抑制するという新たな知見を示唆するものである。“非アルコール性脂肪性肝炎(NASH)におけるSTAT3の役割"を(1)細胞特異的STAT3ノックアウトマウスを用いた実験系と(2)臨床検体を用いた実験系により解析を行った。

第一に、MCD食の負荷により肝細胞特異的STAT3ノックアウトマウスではMCD食開始後3日から2週間では、野生型マウスに比較して、肝臓における有意な脂質沈着と血清中の中性脂肪の上昇を認めたが4週間および8週間の投与では有意な差を認めなかった。このMCD食開始早期の、脂質沈着にはSREBP1cの発現亢進および活性化が関与していることが示唆された。一方で、炎症性サイトカインや炎症細胞の浸潤に差は認めず、肝細胞におけるSTAT3は脂質合成を抑制する役割を果たしていることが示唆された。第二にマクロファージ/好中球特異的STAT3ノックアウトマウスにおいては、MCD食開始3日目より、野生型マウスに比較して著名な炎症性細胞浸潤をみとめる一方で、肝臓における脂質沈着は軽度であった。この現象は4週間、8週間投与の時点でも確認された。このメカニズムとして、炎症細胞はIL-6をはじめとするサイトカイン産生を介して、肝細胞におけるSTAT3を活性化することにより、抗脂質沈着に作用することが示唆された。(2)臨床検体を用いた実験系においては、免疫染色による検討において、NASH患者の肝生検サンプルでは、脂肪肝患者と比較して、肝細胞および炎症細胞におけるSTAT3の活性化が亢進していることを明らかにした。複数の論文発表および、複数の学会発表を行っている。24年度が最終年度であるため、記入しない。今回得られた知見の一部は、すでに論文としており、ノックアウトマウスから得られた知見を、ヒトNASH検体を.用いてさらなる解析を行っている。
小脳視床路シナプスの時間符号化を解読する

小脳は、運動の調整と教師あり学習の要である。プルキンエ細胞の抑制性出力が、小脳核から視床を介して、最終的にどのように大脳皮質運動野の活動を制御するのかについては未だに不明の点が多い。小脳核からの出力信号はニューロンの発火率の増減によって情報を表現する(発火率符号化)という見方が一般的だが、運動中にしばしば見られる小脳核ニューロンの発火休止は、スパイク列の時系列構造として「時間符号化」され、視床や大脳皮質にとって特別な意味を持つ可能性がある。本研究は、巨大EPSPを細胞外電極で検出した「S電位」というユニークな記録を手がかりに、小脳視床路シナプスの時間符号化を解読することを目指すものである。視床の投射ニューロンから傍細胞記録法により細胞外電極で活動電位(スパイク)を記録中に、振幅の小さな電位を記録した。これは50年ほど前に、ネコの外側膝状体において、同様に細胞外電極により発見された「S電位」に酷似している。外側膝状体のS電位は網膜神経節細胞由来のEPSPが記録されたものである。新たにS電位を記録した細胞の所在は視床運動核のVL核と髄板内核群のPC核/CL核であった。このうちVL核は駆動型入力として小脳核から巨大なグルタミン酸作動性軸索終末を受けているため、新たに見つかったS電位は小脳核由来のEPSPであると仮説を立てた。皮質脳波が徐波活動状態にあるときは、S電位は高頻度(>40 Hz)発火しながら数秒に一度0.5秒間ほど発火停止し、発火再開の際に必ず数発のEPSPに続いて、スパイクが連続するバースト発火が見られた。これに対し、皮質脳波が活性化状態にあるとき、S電位は持続的に高頻度発火し続け、およそ30%の確率でEPSPからスパイクを生じた。また、小脳核の投射ニューロンが、視床で観察したS電位とよく似た脳状態依存性を示すことが確認され、S電位の小脳核由来仮説を支持した。小脳皮質プルキンエ細胞の発火特性や可塑性が明らかにされてきた一方、プルキンエ細胞の抑制性出力が、小脳核から視床を介して、最終的にどのように大脳皮質運動野の活動を制御するのかについては未だに不明の点が多い。小脳核からの出力信号はニューロンの発火率の増減によって情報を表現する(発火率符号化)という見方が一般的だが、運動中にしばしば見られる小脳核ニューロンの発火休止は、スパイク列の時系列構造として「時間符号化」され、視床や大脳皮質にとって特別な意味を持っている可能性がある。本研究は、巨大EPSPを細胞外電極で検出した「S電位」というユニークな記録を手がかりに、最新のin vivo電気生理学的手法、薬理学、光遺伝学を駆使し、小脳視床路シナプスの時間符号化を解読することを目指すものである。視床の投射ニューロンから傍細胞記録法により細胞外電極で活動電位(スパイク)を記録中に、EPSP様の振幅の小さな電位が記録された。これは50年ほど前に、ネコの外側膝状体において、同様に細胞外電極により発見された「S電位」と呼ばれる電位に酷似している。しかしこれまで外側膝状体以外での報告、また齧歯類での報告は知られていない。記録した細胞の所在は視床運動核のVL核と髄板内核群のPC核/CL核であった。VL核については駆動型入力として小脳核のグルタミン酸作動性ニューロンが広く想定されているため、新た見つかったS電位は小脳核由来のEPSPではないかと仮説を立てた。視床皮質投射ニューロンのS電位=EPSPとスパイクの間の時間関係について、相互相関図を用いて調べたところ、皮質脳波が徐波活動中において、S電位の休止からの再開の直後にバースト発火が生じるという極めて緊密な時間関係の存在が確認された。このうちVL核は駆動型入力として小脳核から巨大なグルタミン酸

作動性軸索終末を受けているため、新たに見つかったS電位は小脳核由来のEPSPであると仮説を立てた。皮質脳波が徐波活動状態にあるときは、S電位は高頻度(>40 Hz)発火しながら数秒に一度0.5秒間ほど発火停止し、発火再開の際に必ず数発のEPSPに続いて、スパイクが連続するバースト発火が見られた。これに対し、皮質脳波が活性化状態にあるとき、S電位は持続的に高頻度発火し続け、およそ30%の確率でEPSPからスパイクを生じた。また、小脳核の投射ニューロンが、視床で観察したS電位とよく似た脳状態依存性を示すことが確認され、S電位の小脳核由来仮説を支持した。S電位とスパイクを含む電気生理学記録をこれまでに多数得ることができ、同時記録した大脳皮質運動野の脳波、視床皮質投射ニューロンの活動電位とS電位の3つの事象について、傍事象時間柱状図や位相柱状図上に時間的な相互関係を詳しく調べることが可能になった。技術的には振幅の小さなS電位をいかにして記録時の背景騒音から分離するかというスパイクソーティングの行程に大きな課題を抱えていたが、大半のデータについては手動による手間ひまをかけたソーティングで十分な品質のS電位を単離できている。さらに難度の高い問題として、スパイク(活動電位)とS電位(EPSP)の波形が重なっている時に、両者を同定できるかという問題があった。さまざまな重なり方の組み合わせを揃えた多数の鋳型作製によりある程度の精度を達成したが、パラメータの設定がどうしても恣意的にならざるを得ず、かつ結果がそのパラメータに著しく依存するという問題があった。これについては共同研究者の田中琢真博士からまったく異なる新しいアプローチを提案された。計算時間がかなりかかるという弱点はあるが、それ以外については従来法の欠点を克服するものであり、試験結果によりこの点についても見通しが明るくなった。また小脳核の投射ニューロンからも傍細胞記録法による記録を行っており、視床で記録されるS電位と、小脳核ニューロンのスパイク(活動電位)が同じような発火パターンを有しているか比較を進めている。小脳核の解剖学的構造についても専門家と相談することで理解を深めることができた。多くの時間を記録データを効率的に解析するためのプログラムの開発に当てたが、その根幹となる部分はほぼ出来上がりつつあり、今後のデータ解析とそれに伴うデータの修正のプロセスが自動化され大幅に効率化されると期待している。以上から、初年度としてほぼ想定された通りの達成度を得られたと判断している。本研究の推進にあたっては、電気生理学記録データの充実と同時に、比較的複雑なデータ解析が要求されるため、得られたデータの解析のための環境を整備することが極めて重要であると認識している。プログラミングについては単体テストを用いた「テスト駆動開発」を取り入れて効率よく行う。GNU makeに似た仕掛けによって解析途中でのデータの更新作業を迅速化する。データ解析そのものについては、まず、大変な労力を要するS電位のスパイクソーティングを完了させていくことが重要な課題である。さらに視床と小脳核の投射ニューロンの発火性質を比較するために、大脳皮質運動野から同時記録した脳波を時間軸上の基準点として用い、徐波活動状態と皮質活性化状態の二つの脳状態を脳波によって区別しながら、平均発火頻度の比較や、ヒルベルト変換を用いた位相解析を行う予定である。すでに一部のデータについてはこのような解析を進めており、これを元に集団データへと拡張する。このような麻酔下で得られるデータの解析を重点的に進めて、ほぼ目処が立った段階で、無麻酔頭部固定ラットからの電気生理学手法を確立させる。この部分については同じ研究室内ですでに確立しているため、大きな障害はないはずである。
消化器系(食道、胃、大腸)前癌病変における発癌予測

1.胃癌発癌機序の検討内視鏡的粘膜切除術にて切除された胃腺腫32例、胃m癌55例のパラフィン包埋標本を対象としFhit蛋白発現、Mlh1蛋白発現、粘液形質(HGM,CD10,MUC2)発現を免疫染色により解析した。Fhit蛋白発現異常(低下、消失例)、Mlh1蛋白発現異常(陰性例)は胃m癌で胃腺腫より有意に異常頻度が高かった(Fhit ; p=0.021, Mlh1 ; p=0.0076)。また、Fhit蛋白発現異常とミスマッチ修復蛋白発現異常との間に有意な関係を認めた(p<0.0001)。粘液形質別でのFhit蛋白の発現低下、消失は胃型で有意に高率であった(p=0.0011)。以上より1)胃癌においてミスマッチ修復遺伝子異常がFHIT遺伝子異常を引き起こす原因となりうることが示唆された。2)FHIT遺伝子の異常は胃型胃癌で関与が大きく、また胃癌発生の早い段階に認められ、発癌に重要な役割を果たしている可能性が示唆された。2.大腸癌発癌機序の検討外科的に切除された進行大腸癌52例のパラフィン包埋材料を対象とし、Fhit蛋白、Msh2蛋白、M1h1蛋白及びP53蛋白発現を免疫染色により解析した。Fhit蛋白の発現が著明減少または消失しているものは52例中18例(34.6%)であった。分化度別では低分化でより高頻度にFhit蛋白発現低下を認めた(p<0.001)。Msh2またはM1h1蛋白発現異常(陰性例)は52例中21例(40.4%)に認められた。以上より1)進行大腸癌においてFHIT遺伝子異常は分化度と関係があり、特に低分化型の発癌に関与している可能性が示唆された。2)大腸癌においてミスマッチ修復遺伝子異常がFHIT遺伝子異常を引き起こす原因となりうることが示唆された。消化器癌(食道、胃、大腸)および前癌病変標本を用い、FHIT(fragile histidine triad)遺伝子、p53遺伝子、がん関連蛋白であるCOX-2の関連につき検討した。1.食道癌発癌機序の検討外科的に切除された食道癌(扁平上皮癌)75例のホルマリン固定パラフィン包埋標本を対象としFhit蛋白発現、p53発現を免疫染色により解析した。Fhit蛋白発現消失、減弱は89.3%に認められ、また前癌病変であるdysplasiaにおいても異常が認められ、発癌に重要な役割をはたしている可能性が示唆された。Fhit蛋白発現とp53発現との間には関連は認めなかった。2.胃癌発癌機序の検討内視鏡的粘膜切除または外科的切除された胃腺腫21例、m癌42例、sm癌10例、進行癌26例のホルマリン固定パラフィン包埋標本を対象としFhit蛋白発現を免疫染色により解析した。胃腺腫の38%、m癌の64%、sm癌50%、進行癌の88%にFHIT蛋白の減衰または消失を認め、FHIT遺伝子の異常は胃癌発生の早い段階に認められ、発癌に重要な役割を果たしている可能性が示唆された。3.大腸癌発癌機序の検討1.胃癌発癌機序の検討内視鏡的粘膜切除術にて切除された胃腺腫32例、胃m癌55例のパラフィン包埋標本を対象としFhit蛋白発現、Mlh1蛋白発現、粘液形質(HGM,CD10,MUC2)発現を免疫染色により解析した。以上より1)進行大腸癌においてFHIT

遺伝子異常は分化度と関係があり、特に低分化型の発癌に関与している可能性が示唆された。2)大腸癌においてミスマッチ修復遺伝子異常がFHIT遺伝子異常を引き起こす原因となりうることが示唆された。
BMP受容体会合蛋白質を標的とする薬物スクリーニング系開発

BMPタイプI受容体と会合する分子を同定するために、BMPタイプI受容体をベイトとする酵母2ハイブリッドスクリーニングによってヒトライブラリーより数種類のcDNAを単離した。そのうち2種類はそれぞれ既知のタンパク質FKBP-12,p50をコードしていた。新奇タンパク質断片をコードするcDNAについてはBMP receptor-asscociated molecule 2(BRAM2)と命名し、同じくヒトcDNAライブラリーより全長cDNAを単離した。BRAM2cDNAは416アミノ酸のタンパク質をコードしていた。BRAM2と受容体との結合に関わる領域を欠損変異体を用いて酵母2ハイブリッド法で検討したところ全長タンパク質のうちN末端側を欠いたものほどBMP受容体に結合しやすいことが判明した。したがってN末端側領域はBRAM2と受容体結合の制御領域であると予想される。さらに、BRAM2はBMPシグナルを担う新規MAPKKK、TAKIの活性化因子として発見されたTAB1と受容体との3分子複合体を形成することが明らかになった。BRAM2の過剰発現による機能解析の結果からBRAM2はBMP受容体、TAB1に結合することによってBMPシグナルを促進するシグナル分子であると考えられた。したがってBRAM2と受容体との結合に関わる負の制御領域に結合し、コンフォーメーション変化を引き起こすことによってBRAM2とBMP受容体の結合を促進するような低分子化合物はBMP作用を模倣する薬物となる可能性がある。本研究によってBMPアゴニストの模倣薬スクリーニングの基盤が確立したと考えている。骨形成タンパク質(bone morphogenetic protein,BMP)はTGF-βスーパーファミリーに属する細胞増殖因子で,異所性に骨や軟骨を誘導,形成する活性を有している.このBMPの受容体はセリン/スレオニンキナーゼであることが知られており,構造上の特徴からタイプIおよびタイプII型に分類される2種類が同定されている.これらの受容体のうち,とくにタイプI受容体はシグナル伝達に必須な役割を担っていると考えられている.したがって我々は平成7年度に酵母を用いた2ハイブリッド法によってBMP-2およびBMP-4に特異的なBMPタイプI型受容体に会合する分子のスクリーニングを行った.その結果,新規遺伝子を単離し,それに続くヒトcDNAライブラリーのスクリーニングによって分子量約7万のタンパク質をコードする全長cDNAの構造を明らかにした.このタンパク質はBMP受容体に結合することからBRAM-2(BMP receptor-associated protein-2)と名付けられた.全構造決定の結果,同タンパク質は分子のC末端側で結合することが明らかになり,また欠損変異体の作製によりN末端側はBMP受容体との結合に抑制的に働くことが明らかになった.さらに,細胞内でもBMP受容体とBRAM-2が結合することが確認され,BRAM-2はBMP受容体と結合することによって,生理的に重要な役割を担っているものと予想された.実際に,細胞内での過剰発現の結果からBRAM-2はBMPシグナルに良く静的に働くことが示唆されたため,受容体とBRAM-2との結合を阻害する物質はBMPシグナルのアゴニストとして働くものと期待される.したがって次年度はそのような物質の探索するためのスクリーニング系を構築する計画である.BMPタイプI受容体と会合する分子を同定するために、BMPタイプI受容体をベイトとする酵母2ハイブリッドスクリーニングによってヒトライブラリーより数種類のcDNAを単離した。BMPはTGF-βに属する細胞増殖因子であり、ウシ長骨抽出液に存在する異所性に骨を誘導するタンパク性物質として発見された。TGF-βスーパーファミリーの情報伝達はタイプIおよびタイプII受容体によって行われることがわっている。我々はBMPの作用メカニズムを明らかにするために、保存されたセリン・スレオニンキナーゼに対する縮合オリゴヌクレオチドプライマーを用いたPCR法を用いてBMPのタイプI受容体遺伝子を単離した。さらにBMPタイプI受容体を介した細胞内情報伝達系を明らかにするために、細胞内シグナル伝達因子を同定する第一歩として、同受容体と会合する分子を同定することを試みた。これは受容体と会合するシグナル分子を同定し、その分子をターゲットとした化合物をスクリーニングすれば、BMPシグナル伝達系を活性化する薬剤を開発することも可能であるとの見解に基づいている。酵母2ハイブリット法を用いマウスBMPタイプI受容体の細胞内

キナーゼドメインをベイトとしたスクリーニングを、ヒトcDNAライブラリーに対して行うことによって、数個のポジティブ・クローンを得たので現在その構造を解析中でる。現在までに解析済みの遺伝子は、転写調節因子NF-kB、FK506結合タンパク質FKBP12の二つの既知遺伝子と、ひとつの新奇遺伝子であった。新奇遺伝子については現在全長cDNAをクローニング中である。クローニングした遺伝子を用いて融合タンパク質を作製し、細胞内で実際にBMP受容体と結合することを確認したいと考えている。
マンガン貴金属合金の巨大磁気光学効果とその高密度光磁気記録媒体への応用

マンガンを含むMnBiやPtMnSbといった金属間化合物や合金が非常に大きな磁気光学効果を示すことから光磁気記録材料への応用が模索されている。しかし、磁気特性などについての実用上の問題点の解決には時間がかかりそうである。本研究では、マンガンを含む新しい光磁気記録材料を探索しようという視点にたって、貴金属とマンガンとの間の規則合金についてその薄膜化、磁気的性質、磁気光学スペクトルに関して検討を行った。その結果、MnPt_3という規則合金相が非常に大きな磁気Kerr回転角を示すことが発見された。MnPt_3合金膜、RF2極スパッタリング装置を用いて、まずMnとPtの多層膜の構造を室温において成膜し、これを真空中でアニールすることによって規則合金膜を作製した。アニール条件を700°C、30minとすることで膜の体積の90%以上をMnPt_3の規則相とすることができた。MnPt_3膜の磁気特性は、完全な面内磁化膜で、直ちに光磁気材料に応用することは難しいが、多層構造を利用した境界異方性の助けを借りるなどの方法で垂直磁気異方性が誘導できるのではないかと考え、現在検討を進めている。MnPt_3膜の磁気光学Kerr回転角は、波長1000nmにおいて1.2度にも達しており、この値は、1983年に発見されたPtMnSbの2.0度以来、この10年間で最も大きなものである。本研究では、この大きな回転角の起源を探るため、誘電率テンソルの対角成分および非対角成分を精密な光学測定より導出した。その結果、1000nm付近の大きな磁気光学効果は、プラズマエンハンスによるものではなく、バンド間遷移に起因していることが判明した。このことは、我々の実験結果に触発され、ドレスデン大学の理論グループが行った最近の理論計算からも裏付けられた。
2原子結晶における各原子の温度因子を独立に測定する方法

昨年度に試作したSORビ-ム位置追従装置を改良し、SOR光散乱体に銅板を用いた。またX線TVで検出した散乱および蛍光X線強度を1操作線上において256回積分して強度分布を求めるように積分回路を増設した。その結果S/N比が向上し、半値幅の中心をビ-ム位置とすると位置検出感度は±0.03mmであった。回折計の高さの制御精度は±0.01mmであって、回折計に対するビ-ム位置変動を±0.3mm以下として単色X線の波長変動を±0.0001(Å以下に保という目的を達成した。GaAs粉末試料を用い、GaK吸収端(1.19580Å)の長短両側の2波長、1.19735Å(λu)と1.19462【.SY.Angstrom.】(λs)において回折測定を行った。両波長においけるGaとAsの異常分散補正項、f'_G、f"_Gとf'_A、f"_Aの理論値について、f"_Gの差はf"_<Gs>-f"_<GL>=3.886-0.492=3.394であるが、他の項の差はすべて0.01以下である。λsにおける測定では、検出器にSSDを用い、8本の回折線について回折X線と蛍光X線とを分離して測定し、蛍光X線強度の角度分布を得た。この蛍光X線、強度をシンチレ-ションカウンタによる測定強度から差引いて回折X線強度を得た。GaAsの奇数指数の回折線は、h+R+l=4n+1の線とh+R+l=4n-1の線とが同数交じっているので、λsとλLで得られた構造因子の平方の差を求めるととなり、左辺の実測値からGaの温度因子B_Gが得られる。しかし回折X線積分強度の測定精度が充分でないことと、回折計の入射X線強度モニタ-の感度がλsとλLとで異なるために、得られたB_Gの値の精度が低い、また得られた値も、CuK_α線を用いた回折測定から得られた構造因子について、通常のパラメ-タ最適化法で求めた値の2倍程度となっている。放射光実験施設(PF)用高精度X線粉末回析計のモノクロメータへの放射光の入射角の変動を0.001度以内に止め、単色X線の波長の変動を0.0001〓以内に止めて、異常分散項の変動を小さくしなければ所期の目的を達し得ないので、まず上記回析計用のビーム追従装置の設計、試作を行なった。追従装置の零ドリフトを最小にし、保守を容易にするため、X線ビームの検出にはX線テレビを用いる。放射光の位置を示す適当な強度のX線を得るため、モノクロメータの入射スリットの放射光側の傍に、放射光を散乱し蛍光X線を発生する散乱体を置き、ビームに直角をなす水平方向から、散乱体からのX線をX線テレビで受ける。

そのX線強度を調べX線源の位置検出方法を見出すため基礎実験を行った。その結果は(1)散乱体の材質によりX線の強度が異なり、亜鉛のときが強度大である。(2)X線の強度はあまり強くない。(3)X線源の位置検出のため、長さ10cm、拡散角0.2度のソラースリットを用いると、線源位置の変動は解るが、ソラースリットの隔壁板の間隙にむらがあり、定量的な位置検出精度があまり良くない。(4)線源位置検出のため、ピンホーン写真方式を用いる。ただしX線強度が低下しS/N比が悪化するので、信号を積分してS/N比を向上させる。であった。追従装置を試作し、性能検査の実験を行ったところ、ピンホールの代りに0.5mmのスリットを用いると、放射光の0.1mmの位置変動を検出できて、所期の位置分解能が得られた。しかし本年度はシステムの検討に時間を要し、放射光による実験も少なく、ビーム位置追従のためのソフトの完成と、異常分散を利用したX線回析実験を実現出来なかった。昨年度に試作したSORビ-ム位置追従装置を改良し、SOR光散乱体に銅板を用いた。X線TVで検出した散乱および蛍光X線強度を1走査線上において256回積分して強度分布を求めるように積分回路を増設した。その結果雑音が減少し、半値幅の中心をビ-ム位置とすると位置検出感度は±0.03mmであった。回折計の高さの制御精度は±0.01mmであって、回折計に対するビ-ム位置変動を±0.3mm以下としてX線波長変動を±0.0001Å以下に保つという目的を達成した。GaAs粉末試料を用い、GaK吸収端(1.19580Å)の長短両側の2波長、1.19735Å(λι)と1.19462Å(λs)において回折測定を行った。両波長におけるGaとAsの異常分散補正項、f_G′,f_G′′とf_A′,f_A′′の理論値について、f_G′′の差はf_<GS>′′-f_<GL>′′=3.886-0.492=3.394であるが、他の項の差はすべて0.01以下である。λsにおける測定では、検出器にSSDを用い、8本の回折線について回折X線と蛍光X線とを分離して測定し、回折角に依存する蛍光X線強度を得た。この蛍光X線強度をシンチレ-ションカウンタによる測定強度から差引いて、回折X線強度を求めた。GaAsの奇数指数の回折線は、h+k+l=4n+1の線とh+k+l=4n-1の線が同数混っているので、λsとλιで得られた構造因子の平方の差は1Fs(hkl)1^2-lF_L(hkl)1^2=16(f_<GS>′′^2-f_<GL>′′^2)exp[-2B_G(sionθ/λ)^2]となり、左辺の実測値からGaの温度因子B_Gが求められる。しかし回折X線積分強度の測定精度が充分でないことと、回折計の入射X強度モニタ-の感度がλιと異なるために、得られたB_Gの値の精度が低い。また得られた値も、Cukd線を用いた回折測定から得られた構造因子について、通常のパラメ-タ最適化法で求めた値の2倍程度となっている。
ファンデルワールス強接着のためのポリマー構造の最適化

これまでに確立したネックレス型ポリマーの階層的構造制御技術を活かし、系統的に構造を変化させたポリマー群を合成し、現有の試料と合わせてポリマーライブラリーを構築・充実させる。ポリマーサンプル群の基本物性(一次構造、平均分子量、熱物性)を整理し、接着特性との相関性を明らかにする。
有機集積回路を用いた高感度ウェアラブル化学センサの開発

高齢者や病気予備軍の人口が増大する現代において、皮膚に貼り付けて生体の化学情報を長期間モニタリングできるウェアラブル化学センサの必要性が高まっている。本研究では、生体分子を検出する酵素電極と電流増幅機能を有する3電極式の測定回路を一体化したウェアラブル化学センサを開発し、汗に含まれる生体分子をリアルタイムに測定することを目指す。具体的には、柔軟なプラスチックフィルム上に、グルコースや乳酸といった生体分子を検出する酵素電極を形成し、有機トランジスタを用いた信号増幅・電流変換回路と統合する。
色素体―核コミュニケーションを介した植物機能統御の新機構

植物細胞の色素体(葉緑体)と核の間には、双方向性のシグナルネットワークが存在する。この色素体ー核コミュニケーションは、色素体分化の制御や、生物的および非生物的ストレス応答で重要な役割を果たしていると考えられる。本研究では、その実態解明を目指し、光合成電子伝達活性による植物免疫応答の制御、Ca2+結合タンパク質CASによる葉緑体コード遺伝子の発現制御、また色素体Ca2+応答の発生機構などの研究を進めた。また、機械刺激による防御遺伝子発現制御や葉緑体およびミトコンドリア小分子量GTPaseの進化、葉緑体のpsbD光応答プロモータの進化に関する研究にも取り組んだ。色素体と核の間には、双方向性のシグナルネットワークが存在する。色素体が発信する逆行性シグナルには、生物的ストレスおよび非生物的ストレスと関係した多くの潜在的ストレスシグナル経路が含まれていると考えられているが、その実体はあまり分かっていない。植物免疫応答においても、免疫応答の活性化と葉緑体分化制御シグナルとのトレードオフや、感染シグナルと光等の環境情報の統合に、逆行性免疫シグナルが関与することが分かりつつある。その過程で中心的に働くのが葉緑体Ca2+結合タンパク質CASである。本年度は、1色素体による感染・環境ストレスシグナルの感知とそれらの統合機構について、免疫応答遺伝子の光依存性について網羅的発現解析を行い、その活性化に光を必要とする遺伝子群を同定した。さらに、光による制御に光合成電子伝達活性が関わることも明らかにした。2CASを介した逆行性免疫シグナルの発生、応答機構については、CASが光化学系Iの循環的電子移動の制御因子PGRL1と相互作用することを明らかにした。しかし、PGRL1変異体における免疫遺伝子応答は限定的な影響しか受けておらず、逆行性免疫シグナルと循環的電子移動の関係の実体はまだ明らかになっていない。一方、CAS過剰発現体で根の伸長が促進されることも明らかにした。3順行性葉緑体分化シグナルと逆行性免疫シグナルの相互作用の研究については、逆行性免疫シグナルの発信によって葉緑体遺伝子の発現が大きく抑制されることを見いだし、免疫応答の活性化と葉緑体分化のトレードオフ制御の実態に迫る手がかりを得た。さらに、ミトコンドリアCa2+シグナルと関係する候補分子としてMICU1/MCUとMSL1の機能解析を勧めた。色素体と核のコミュニケーションについて、次の3つの研究に取り組んだ。研究1本年度、根の色素体で生じるCas2+シグナルに注目し、根の細胞質Ca2+シグナルと比較研究を行った。その結果、根の色素体では,葉の葉緑体と異なるCa2+シグナルが生じることを明らかにした。生物的ストレスについては、根の色素体や細胞質では、細菌のフラジェリンなどの(PAMP)に対する応答は見られなかった.一方、NaClや浸透圧ストレスに対して,根の色素体で比較的大きく早いCa2+応答が見られることを明らかにした。また薬理学的解析から、細胞外からのCa2+流入に応答して色素体Ca2+濃度上昇が起こることが分かった。また、ROSとCa2+シグナルを同時測定するシステムの開発を進めた。研究2葉緑体が発信する逆行性免疫シグナルについて,更に解析を進めた。flg22などのPAMPは核コードの葉緑体遺伝子の発現を抑制する。今回、flg22に応答して、葉緑体ゲノムにコードされた遺伝子の発現も低下することを見いだした。flg22は、葉緑体シグマ因子やファージ型RNAポリメラーゼのNEPなどのアンテログレードシグナルの発現を低下させることで,葉緑体コードの遺伝子発現を抑制していることが分かった。興味深いことに、シグマ因子やNEPなどのアンテログレードシグナルの低下や葉緑体コード遺伝子の転写抑制は、葉緑体Ca2+結合タンパク質CASの変異体では抑制されていた。CAS依存のシグナルが葉緑体コード遺伝s二の発現制御の上流で働くことが明らかになった。また、循環型電子移動変異体において、flg22が誘導するPR1などの防御遺伝子の発現が有意に促進されることを見いだした。研究3表皮細胞、孔辺細胞、葉肉細胞のプロトプラストを分離調整する手法をほぼ開発した.今後,この手法を使い、葉緑体機能の組織別相違の研究の展開が可能になる。植物細胞の葉緑体やミトコンドリアが発信する逆行性シグナルは、細胞の増殖や分化の制御、病原体感染やストレスに対する応答制御などで、重要な役割を果たしている。しかし、その分子実態や生理的役割の詳細は明らかになっていない。葉緑体を中心にレトログレードシグナルの分子機構を明らかにし、その生理的役割を解明するのが本研究の目的である。まず、接触刺激に対する応答遺伝子を同定するために、次世代シーケンサを使ったトランスクリプトーム解析を行った。その結果、接触刺激に対する遺伝子発現応答が、病原体分子パターン(PAMP)に対する応答で見られる防御遺伝子の活性化と成長関係遺伝子の抑制(成長と防御のトレードオフ制御)とよく似ていることを見出した。さらに、同様なトレードオフ制御が、ミトコンドリアの電子伝達を阻害することで生じることを見出し、ミトコンドリアが発するレトログレードシグナルが成長と防御遺伝子のトレードオフ発現制御に関わっている可能性を明らかにした。さらに、機械刺激応答とDBMIB応答で、細胞質ゾルのCa2+濃度上昇が共通して見られることも見出した。この細胞質Ca2+動員は、細胞内Ca2+ストアに依存しており、ミトコンドリアによる細胞質ゾルのCa2+動態制御が重要な働きをしている可能性が示唆された。

また、ミトコンドリアに局在するCa2+制御因子の候補として、バクテリア型機械需要チャネルMSLおよびCa2+輸送制御因子MICU1に注目し、それらがミトコンドリア内膜に局在するタンパク質であることを明らかにした。さらに、根の色素体において、塩ストレスや浸透圧ストレスに応答したCa2+濃度の一過的上昇が見られることも明らかにした。1接触刺激応答遺伝子のトランスクリプトーム解析を行い、病原体分子パターン(PAMP)に対する応答で見られる防御遺伝子の活性化と成長関係遺伝子の抑制(成長と防御のトレードオフ制御)とよく似た遺伝子発現応答をすることを見出した。また、遺伝子応答に先立って、細胞質ゾルのCa2+濃度の一過的上昇が起こること、このCa2+動員は細胞外からのCa2+流入を必要とせず、色素体またはミトコンドリアが関わる可能性を示した。2葉緑体及びミトコンドリアの電子伝達阻害剤であるDBMIBが、PAMP応答および接触刺激応答と同様な遺伝子発現のトレードオフ制御を行うことを見出した。また、DBMIB処理も、細胞質ゾルCa2+濃度の一過的上昇を引き起こすことを明らかにした。一方、細胞内Ca2+濃度を人為的上昇させた場合も、同様なトレードオフ制御が起こることがわかった。これらを総合し、葉緑体ミトコンドリアの電子伝達阻害が細胞質Ca2+上昇を引き起こし、遺伝子発現のトレードオフ制御が起こる可能性が示された。また、同様な過程が接触刺激応答時にも起こっている可能性も示唆された。3ミトコンドリア内膜にバクテリア型の機械需要チャネルMSL1が局在することを確認した。また、ミトコンドリア内膜のCa2+チャネルMCUがミトコンドリアに局在することを示すとともに、MCUの制御因子MICUがミトコンドリア内膜に存在することを生化学的に確認した。4塩や浸透圧変化などの複数の非生物的ストレスに応答して、根の色素体で一過的きCa2+上昇が起こることを見出した。また、この応答は、細胞外からのCa2+流入が必要であることを明らかにした。以上のように、ほぼ計画通りに研究は進展している。本研究では、色素体と核のコミュニケーションが高次の細胞応答を制御する機構を明らかにすることを目指した。今年度は、以下のことを明らかにした。「葉緑体Ca2+結合タンパク質CASによる気孔制御」これまでの研究で、葉緑体Ca2+結合タンパク質CASが気孔運動に関係することが指摘されていたが、そのメカニズムは不明であった。CASは光依存的にリン酸化されるタンパク質であることから、リン酸化部位痴漢変異体を作成し、気孔応答への影響を調べた。その結果、気孔閉孔の制御にCASのリン酸化が必要であること、さらにCASの恒常的リン酸化変異体では常に気孔が閉じていることを明らかにし、葉緑体タンパク質CASのリン酸化が気孔運動を制御する新しい分子機構がわかってきた。さらに、CASのノックアウト変異体の解析から、CASが細胞質ゾルのCa2+応答制御に部分的に関わっていることが示された。
運動能力の異なる幼児の運動量及び基本的動作についての検討

【研究目的】幼児期の運動能力の低下には、運動量の減少に加え、「走る」、「跳ぶ」、「投げる」といった基本的動作の経験の乏しさが影響している。幼児期の運動能力の向上に繋がる教育課程を作成する上で、幼児の運動量及び基本的動作の経験を把握し、運動能力との関連を明らかにすることは非常に重要である。本研究では、運動能力の異なる幼児の運動量及び基本的動作を一年に亘って捉え、運動能力別の運動量及び基本的動作の経験を明らかにし、特に運動能力が低い幼児の課題を明確にしていくことが目的である。【研究方法】2013年4月に幼稚園1園の年長児約120名に対して、幼児運動能カテストを行い、運動能力上位群と下位群の男女児それぞれ2名ずつ計8名を対象児とした。2013年5月より、保育中にライフコーダEX4秒版による運動量の測定とビデオカメラによる基本的動作の観察を対象児ごとに一カ月約1時間、5月から10カ月間継続して行った。基本的動作の観察結果は、先行研究を基に作成したチェックシートを用いて分析した。【研究成果】月ごとの運動量と基本的動作の種類数には何れも運動能力上位群が下位群よりも有意に多かった。その一方で各群の月ごとの運動量と基本的動作の種類数の差は明らかではなかった。基本的動作の種類を姿勢制御系・移動系・操作系に分類すると運動能力上位群下位群どちらも移動系が最も多く、操作系が最も少なかった。また、どの月においても下位群は運動量や基本的動作が少ない静的な遊びを好む傾向にあり、上位群と同じ遊びを選択したとしても基本的動作の種類は少なかった。幼児期の運動能力の発達には、特定の時期の運動経験というよりも一年を通じた積み重ねが影響しており、さらに下位群には一年を通じて動的な遊びを教師が援助する必要が見いだされた。また全ての幼児に操作系の基本的動作の経験が豊富になるような工夫が必要であることが明らかにされた。
Lumicanの免疫機能解析

Lumican knock-outマウスとLumican wild typeマウスの骨髄内好中球の成熟度をcell marker(CD11b^+Gr-1^<lo>-前駆細胞、CD11b^+Gr-1^<hi>-成熟好中球)を用いたflow cytometryにより比較した結果、赤芽球系細胞を除いた細胞群においては、knock-out(86.7%)wild type(87.0%)が成熟好中球であり、好中球自体の成熟に差を認めなかった。さらに腹腔内カゼイン投与前後の抹消血白血球に占める好中球とリンパ球の割合を塗抹標本とflow cytometryで比較した結果、knock-outで有意に好中球の割合が多く、カゼイン刺激でさらに割合が増加することが観察された。この結果より、好中球は骨髄内に正常にプールされていて、刺激により血管系に放出されるが、Lumicanが無いと、血管から組織へ移動できないことを示唆しているものと考えられる。さらにこの仮説を裏付けるため、Lumicanによる好中球接着実験および遊走実験を行った。カルチャーディッシュをLumicanや他のタンパク質(Albumin、コントロール)でコートし、カゼインによってLumican wild typeマウスの腹腔内に誘導された好中球の接着能をみる実験においては、LumicanコートがAlbuminコートに比べ有意にwild type好中球の接着が多く、wild type好中球の遊走についてもLumicanコートがAlbuminコートに比べ有意に増加することがわかった。なおknock-out好中球のPercoll【○!R】による分離を試みたが実験に使用に耐えうる好中球の活動性が得られず、knock-out好中球で同様の接着実験や、遊走実験は行えていない。現在までの結果をもとに論文を執筆中であり、眼内感染症における好中球の役割と好中球細胞膜に存在すると仮定しているLumican Receptorの検索については、実験の準備をしているところである。