hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
脂質分子による単細胞体制から多細胞体制への移行の制御機構の解析

本プロジェクトにおいては、細胞性粘菌を対象として、(i)多細胞体形成機構に関与する新規シグナル分子の同定と、(ii)細胞分化の遺伝子マーカーの同定を目標として取り組んできた。(i)に関連して、脂溶性の新規シグナル分子が存在することを明らかにし、その分子量が248.9であることを明らかにしたが、構造の決定には到らなかった。しかしながら、この物質は粘菌細胞の柄細胞化を誘導する一連の因子DIF(Differentiation inducing factor)と類似の性質を持つことが明らかになった。また、DIFの主要分子であるDIF-1がアフリカツメガルの卵母細胞のプロゲストロン誘導性の成熟を阻害することを発見した。これは、DIF-1がプロゲストロン誘導性のcdc2,MAPKの活性化やc-Mosの蓄積を阻害することによって引き起こされていることを明らかにした。DIF-1は、ヒトの癌細胞由来の培養細胞の増殖を阻害してG1/0アレストの状態に留め置くことが知られているが、そのような抗癌活性の標的部位の理解に有用な結果となった。(ii)に関連して、遺伝子の発現が発生段階を通じて遺伝子がどのように制御され、多細胞体における空間的な発現パターンがどのようになっているかを解明するために、マイクロアレイとインシチュ・ハイブリダイゼーション法を用いて解析した。その結果、単細胞体制から多細胞体制への移行期に約2000遺伝子が発現パターンを劇的に変化すること、さらに、多細胞体を構成する2種類の細胞、予定柄細胞と予定胞子細胞とで特異的に発現する遺伝子を大規模に同定することに成功した。これらの結果は、細胞分化および多細胞体構築の機構の解明に大きく貢献するものと期待される。多細胞体の形成過程においては細胞間シグナルは極めて重要な働きをしている。本研究は最も単純な多細胞体制をとる細胞性粘菌を対象として、多細胞体形成に関与する新規シグナル分子の発見と同定を目標とするものである。当グループでは、既知遺伝子の破壊により多細胞体形成が不全になった種々の変異株をテスト細胞として、まず野生型の分泌溶液に多細胞体形成を回復する物質が含まれているかどうかを調べた。その結果、細胞外シグナルの伝達において中心的な役割を果たすプロテインキナーゼERK2を欠損するために多細胞体を形成できない変異体(erk2-)が、野生型が分泌する分子量3000以下の脂溶性物質によって多細胞体形成を行うこと、そのような活性は既知のポリケタイド誘導分子DIF-1にも認められること、さらにDIF-1を合成できない変異体(HM1030)も野生型と同様の活性を持つことを発見した。そこで、野生型およびHM1030株の分泌物質より調製した低分子脂溶性画分をHPLCにより解析した結果、野生型にもHM1030株にもDIF-1とは異なる新規分子が存在することを強く示唆する結果を得た。この新規分子をESI-MSで解析した結果、分子量が249.8であることが明らかになった。
レプチン分泌制御による肉質ならびに牛肉生産性向上

1.黒毛和種去勢牛ならびに雌牛において肥育に伴う血漿中レプチン濃度変化ならびにレプチン濃度と枝肉形質の関連を検討した。去勢牛ならびに雌牛において肥育に伴い血中レプチン濃度は上昇した。またレプチン濃度は去勢牛と比較し雌牛で高いことが示された。一方、体脂肪を示すと考えられる皮下脂肪厚や脂肪交雑には去勢牛と雌牛で明らかな差は認められなかった。また、去勢牛では血中レプチン濃度は体脂肪量を反映していることが示唆され、肥育度の指標として用いることが推察されたが、雌牛においてはすべての枝肉基質とレプチン濃度との間には相関関係は認められなかった。2.肥育去勢牛の異なる脂肪組織におけるレプチンmRNA発現、脂肪細胞径ならびにそれらの関係について検討した。レプチンmRNA量は各脂肪組織で異なり、筋肉内脂肪組織におけるレプチンmRNA量は筋間脂肪組織ならびに腎周囲脂肪組織と比較し低かった。また、皮下脂肪組織におけるレプチンmRNA量は、筋間脂肪組織と比較し低かった。脂肪細胞径は、筋間脂肪組織と比較し、筋肉内脂肪組織ならびに皮下脂肪組織で小さかった。またレプチンmRNA量と脂肪細胞径の間には正の相関が認められた。3.ウシ脂肪組織における性ステロイドホルモンであるエストロジェンおよびエストロジェン様作用を有する大豆イソフラボンの一つであるゲニステインがレプチン分泌およびmRNA発現に及ぼす影響について検討した。またインスリン様作用を示すバナジウム化合物である硫酸バナジルがレプチンmRNA発現に及ぼす影響についても検討した。エストロジェンおよびゲニステインは2,8時間培養においてレプチン分泌を促進した。これに対し、レプチンmRNA発現に対しては6,24時間培養においてエストロジェンおよびゲニステインは促進したが、2時間培養では促進作用は見られなかった。一方、硫酸バナジル添加では低濃度ではレプチンmRNA発現量は増加したが、高濃度では顕著に減少した。さまざまな飼養条件下における肥育牛の血液中レプチン濃度を20頭の雌肥育牛ならびに19頭の去勢牛において検討し、雌牛でも去勢牛でも肥育に伴い血中レプチン濃度は上昇するが、その上昇は体脂肪量に関わらず雌牛で顕著であることを明らかにした。次いで、枝肉形質と屠殺時の血中レプチン濃度の関係を検討し、去勢牛においては脂肪交雑ならびにロース芯面積と血中レプチン濃度との間に有意な正の相関関係が認められ、また、皮下脂肪厚と血中レプチン濃度との関係は正の相関関係の傾向(P=0.09)が認められた。一方、枝肉重量、歩留、バラ厚との間には相関は認められなかった。また、雌牛においては測定した枝肉形質と血中レプチン濃度との間には相関は認められなかった。雌肥育牛における高い血中レプチン濃度の一因はその高い血中エストロジェン濃度である可能性があったので、ウシ単離脂肪細胞を用いてエストロジェンがレプチン分泌に及ぼす影響を検討し、培地への17β-エストラジオール添加はレプチン分泌を促進することを明らかにした。次いで、栄養操作によるレプチン分泌制御の試みとして、エストロジェン作用に干渉すると考えられているダイズイソフラボンであるゲニステイン添加を行ったところ、ゲニステイン添加も17β-エストラジオール同様レプチン分泌を増加させ、これによりゲニステインはエストロジェン様作用によりレプチン分泌を促進することが示唆された。また単胃

動物でレプチン分泌を促進することが知られているインスリン添加はウシ脂肪細胞においてもレプチン分泌を促進した。一方インスリンとゲニステインを共添加すると、レプチン濃度はゲニステイン単独と比較し減少した。これよりインスリンがゲニステインによるレプチン分泌促進作用を抑制することが示唆された。レプチンmRNAの発現量をより正確に定量するためにリアルタイムPCR法の検討を行った。プライマー同士でダイマー形成しないようプライマーをデザインし、PCR反応により形成する2本鎖DNA量に応じて発せられる蛍光を測定するリアルタイムPCRの手法を用いて測定した。段階希釈サンプルに対するリアルタイムPCRによって作成された標準曲線は直線となり、ウシ脂肪組織中のレプチンmRNA、および内部コントロールとして用いるGAPDHmRNAの正確な定量が可能となった。レプチンの分泌や合成はインスリンにより促進され、この作用はグルコース代謝変化に起因していることが推察されている。またバナジウムはインスリン様作用を有し、脂肪細胞におけるグルコース取り込みを促進することが知られている。このことからバナジウムもインスリンと同様にレプチン分泌を促進する可能性が考えられ、その予備的な研究としてまずラットの培養脂肪細胞を用いて、バナジウムのレプチン分泌に及年す影響について検討した。ラットの副睾丸組織から遊離脂肪細胞を調整し、培地中に硫酸バナジルまたはインスリンを添加し2時間培養したところ、どちらも濃度依存的にレプチン分泌を促進した。次いで、インスリンの生理作用のうち、グルコースの取り込みやグリコーゲンの合成などの代謝に関する経路で非常に重要な働きを示すPI3-キナーゼの阻害剤LY294002添加を行ったところ、インスリン、硫酸バナジルのレプチン分泌促進作用はこのLY294002により抑制された。さらにインスリン、硫酸バナジルのレプチン遺伝子発現に及ぼす影響についても検討したところ、インスリンはレプチンmRNA発現には影響を及ぼさなかったが、硫酸バナジルはレプチンmRNA発現を抑制した。以上の結果から短時間のバナジウム処理はインスリン同様にPI3-キナーゼ系を介してレプチン分泌を促進するが、レプチン遺伝子発現に対しては抑制する可能性が示唆された。肥育去勢牛の異なる脂肪組織におけるレプチンmRNA発現、脂肪細胞径ならびにこれらの関係を検討するために、21ヶ月齢の交雑種去勢牛(黒毛和種とホルスタイン種)から、皮下、腎周囲、筋間、最長筋肉内脂肪組織を採取した。レプチンmRNAは各脂肪組織で異なっており、筋肉内脂肪組織におけるレプチンmRNA量は筋間脂肪組織ならびに腎周囲脂肪組織と比較し低かった。また、皮下脂肪組織におけるレプチンmRNA量は、筋間脂肪組織と比較し低かった。脂肪細胞径は筋間脂肪組織と比較し、筋肉内脂肪組織ならびに皮下脂肪組織で小さかった。またレプチンmRNA量と脂肪細胞径の間には正の相関が認められた。以上の結果から、レプチン遺伝子の発現は各脂肪組織で異なること、この遺伝子発現の相違は脂肪細胞径の相違に起因していることが示唆された。さらにウシ脂肪細胞における性ステロイドホルモンであるエストロジェンおよびエストロジェン様作用を有する大豆イソフラボンのひとつであるゲニステインがレプチン分泌およびmRNA発現に及ぼす影響を検討した。
持続的血液濾過透析施行患者におけるカルバペネム系抗菌薬の投与設計法の構築

【目的】カルバペネム系抗菌薬は、重症感染症の経験的治療として選択される。重症感染症で持続的血液濾過透析(CHDF)が導入される患者において、カルバペネム系抗菌薬の薬物動態を評価した報告は少なく、投与の指標は明確ではない。そこで我々は、CHDF施行中におけるカルバペネム系抗菌薬の薬物動態を評価し適切な投与設計を行うことを目的に、当院で使用頻度の高いドリペネム(DRPM)とメロペネム(MEPM)のHPLCによる定量法を構築することとした。【方法】DRPM及びMEPMを添加した血清に、セフタジジム(内標準物質)、アセトニトリルを加えて撹拌した後、遠心分離を行った。得られた上清を減圧下にて溶媒留去し、残渣をMOPS溶液に再溶解したものを分析用試料とした。試料の30μLをHPLCに注入し、以下の条件で分析を行った。すなわち、分析カラムにはInertsil ODS-3(4.6mmi. d. ×250mm、5μm)、移動相には10mMリン酸ナトリウム緩衝液(pH7.4)/アセトニトリル混液を用いた。流速は1.0mL/minに設定し、UV300nmで検出した。【結果・考察】検量線は、DRPMは1.048μg/mL、MEPMは0.548μg/mLの範囲において、R^2=0.999と良好な直線性を示した。バリデーションにおいて、RSDおよびREがともに±15%以内となり、本法が真度および精度に優れていることを確かめた。健常成人でカルバペネム系抗菌薬の血中濃度は0.150μg/mLの範囲で推移することが報告されており、本法は臨床におけるTDMにも対応可能な感度を得られていると考えられる。
慢性腎臓病に伴うサルコペニアにおけるオンコスタチンMの役割

(1)アデニン誘導性慢性腎臓病(CKD)モデルマウスにおけるサルコペニアとoncostatin M(OSM)の関連.C57BL/6マウスに対して通常食に0.2%アデニンを混餌し5週間飼育した.アデニン投与群は通常食群に比べて,体重および下肢骨格筋(腓腹筋)量は有意に低値を示した.アデニン投与群は尿細管間質性腎炎の腎組織所見を示し,血中尿素窒素値は通常食群に比べ高値を示した.骨格筋の組織学的検討にて,アデニン投与群における骨格筋線維断面径の萎縮が見られた.定量的PCRによる遺伝子発現解析の結果,アデニン投与群の骨格筋組織は通常食群に比べatrogin-1, MuRF-1, myostatin, myogeninの発現増強を示した.さらに筋組織における炎症性サイトカインの発現解析の結果,アデニン投与群においてOSMおよびその受容体の発現増強が認められた.ここまでの成績より,アデニン誘導性CKDマウスにおける骨格筋萎縮が示され,筋組織レベルでの筋蛋白分解系の亢進および炎症性サイトカインOSMの作用亢進が示唆された.(2)培養筋芽細胞を用いたOSMの骨格筋における直接作用.C2C12マウス筋芽細胞を2%ウマ血清3日間処理による分化誘導により成熟myotubeを作成し,OSMの存在下で2448時間培養した.成熟したmyotubeにおいて,OSM添加後のSTAT3リン酸化の増強が見られ,非投与対照に比べ2448時間後の細胞径の萎縮,MyoD, myogenin遺伝子発現の減弱,およびatrogin-1, C/EBPδ遺伝子発現増強が認められた.ここまでの成績より,OSMが成熟myotubeにおいて,径の萎縮,筋分化増殖系の抑制,および筋蛋白分解系の促進に関与することが示唆された.(1)アデニン誘導性CKDモデルマウスにおけるサルコペニアとoncostatin M(OSM)の関連.2018年度までの検討により,アデニン誘導性CKDマウスにおける骨格筋萎縮が確認され,CKD関連サルコペニアの動物モデルが確立された.また骨格筋組織レベルでの遺伝子発現解析により,筋分化・増殖系の減弱,筋蛋白分解系の亢進が示唆された.さらに骨格筋レベルの炎症性サイトカインの発現解析の結果,OSMおよびOSM受容体発現の亢進が認められた.(2)培養筋芽細胞を用いたOSMの骨格筋における直接作用の解析.C2C12マウス筋芽細胞を分化誘導し,成熟myotubeに対するOSMの作用を検討した.成熟myotubeにおいて,OSM添加後のSTAT3リン酸化の増強,細胞径の萎縮,MyoD, myogenin遺伝子発現の減弱,およびatrogin-1, C/EBPδ遺伝子発現亢進が認められた.(3)透析中CKD患者における血清OSM濃度と骨格筋量の解析.ODCS研究の参加者の中から骨格筋量測定データ,各種臨床パラメータ,および保存血清の状況の確認を進めているところである.(1)アデニン誘導性CKDモデルマウスにおけるサルコペニアとoncostatin M(OSM)の関連.骨格筋量調節機構の詳細な検討,すなわち筋分化・増殖系,筋蛋白合成系,筋蛋白分解系,オートファジー系の遺伝子・蛋白発現解析を進める.OSMシグナルのin vivoレベルでの詳細な解析,すなわちJAK-STAT経路,MAPK経路,PI3K経路,C/EBPδ発現解析を進める.OSMのソースとしての炎症細胞・サイトカインの発現解析を進める.(2)培養筋芽細胞を用いたOSMの骨格筋における直接作用の解析.成熟したC2C12myotubeにおけるOSM誘導性のSTAT3経路の役割をSTAT3阻害剤あるいはsiRNAによるノックダウン法を用いて解析する.STAT3以外の炎症シグナルについてもJAK経路やMAPK経路を中心に解析する.またOSMによる筋量調節機構につきC/EBPδや,insulin/IGF1シグナルによる役割等,さらに検討を進める.(3)透析中CKD患者における血清オンコスタチンM濃度と骨格筋量の解析.対象患者の選定を進める.ELISAキットを入手し,血清中OSM濃度の測定につき予備的検討を進める.(1)アデニン誘導性慢性腎臓病(CKD)モデルマウスにおけるサルコペニアとoncostatin M(OSM)の関連.C57BL/6マウスに対して通常食に0.2%アデニンを混餌し5週間飼育した.アデニン投与群は通常食群に比べて,体重および下肢骨格筋(腓腹筋)量は有意に低値を示した.アデニン投与群は尿細管間質性腎炎の腎組織所見を示し,血中尿素窒素値は通常食群に比べ高値を示した.骨格筋の組織学的検討にて,アデニン投与群における骨格筋線維断面径の萎縮が見られた.定量的PCRによる遺伝子発現解析の結果,アデニン投与群の骨格筋組織は通常食群に比べatrogin-1, MuRF-1, myostatin, myogeninの発現増強を示した.さらに筋組織における炎症性サイトカインの発現解析の結果,アデニン投与群においてOSMおよびその受容体の発現増強が認められた.ここまでの成績より,アデニン誘導性CKDマウスにおける骨格筋萎縮が示され,筋組織レベルでの筋蛋白分解系の亢進および炎症性サイトカインOSMの作用亢進が示唆された.(2)培養筋芽細胞を用いたOSMの骨格筋における直接作用.C2C12

マウス筋芽細胞を2%ウマ血清3日間処理による分化誘導により成熟myotubeを作成し,OSMの存在下で2448時間培養した.成熟したmyotubeにおいて,OSM添加後のSTAT3リン酸化の増強が見られ,非投与対照に比べ2448時間後の細胞径の萎縮,MyoD, myogenin遺伝子発現の減弱,およびatrogin-1, C/EBPδ遺伝子発現増強が認められた.ここまでの成績より,OSMが成熟myotubeにおいて,径の萎縮,筋分化増殖系の抑制,および筋蛋白分解系の促進に関与することが示唆された.(1)アデニン誘導性CKDモデルマウスにおけるサルコペニアとoncostatin M(OSM)の関連.2018年度までの検討により,アデニン誘導性CKDマウスにおける骨格筋萎縮が確認され,CKD関連サルコペニアの動物モデルが確立された.また骨格筋組織レベルでの遺伝子発現解析により,筋分化・増殖系の減弱,筋蛋白分解系の亢進が示唆された.さらに骨格筋レベルの炎症性サイトカインの発現解析の結果,OSMおよびOSM受容体発現の亢進が認められた.(2)培養筋芽細胞を用いたOSMの骨格筋における直接作用の解析.C2C12マウス筋芽細胞を分化誘導し,成熟myotubeに対するOSMの作用を検討した.成熟myotubeにおいて,OSM添加後のSTAT3リン酸化の増強,細胞径の萎縮,MyoD, myogenin遺伝子発現の減弱,およびatrogin-1, C/EBPδ遺伝子発現亢進が認められた.(3)透析中CKD患者における血清OSM濃度と骨格筋量の解析.ODCS研究の参加者の中から骨格筋量測定データ,各種臨床パラメータ,および保存血清の状況の確認を進めているところである.(1)アデニン誘導性CKDモデルマウスにおけるサルコペニアとoncostatin M(OSM)の関連.骨格筋量調節機構の詳細な検討,すなわち筋分化・増殖系,筋蛋白合成系,筋蛋白分解系,オートファジー系の遺伝子・蛋白発現解析を進める.OSMシグナルのin vivoレベルでの詳細な解析,すなわちJAK-STAT経路,MAPK経路,PI3K経路,C/EBPδ発現解析を進める.OSMのソースとしての炎症細胞・サイトカインの発現解析を進める.(2)培養筋芽細胞を用いたOSMの骨格筋における直接作用の解析.成熟したC2C12myotubeにおけるOSM誘導性のSTAT3経路の役割をSTAT3阻害剤あるいはsiRNAによるノックダウン法を用いて解析する.STAT3以外の炎症シグナルについてもJAK経路やMAPK経路を中心に解析する.またOSMによる筋量調節機構につきC/EBPδや,insulin/IGF1シグナルによる役割等,さらに検討を進める.(3)透析中CKD患者における血清オンコスタチンM濃度と骨格筋量の解析.対象患者の選定を進める.ELISAキットを入手し,血清中OSM濃度の測定につき予備的検討を進める.本額をゼロにすることは事実上不可能であり特別な理由はない.残額については引き続き本研究に必要な物品の購入,旅費,学会・論文発表の費用に使用する.
肝移植の実験的・臨床的研究

〔ラット同所性肝移植〕拒絶のおこる組み合わせ、おこらない組み合わせに対して、肝機能検査、病理組織学検査、モノクローナル抗体を用いた浸潤リンパ球の分析、RI検査による肝血流、肝網内系の分析を行ない相異を調べた。また、拒絶に対するサイクロスポリン、15-deoxy-spergualinの免疫抑制効果を研究した。〔ブタ同所性肝移植〕全身および移植肝の術中循環動態の研究では、前年度までは麻酔法の点から検討を進めてきたが、今年度は主に無肝期体外バイパス流量の点から検討した。まず予備実験として肝温阻血下で輸血速度を一定にした後、バイパス流量を変化させて循環動態を測定した。次いで実際の移植において循環動態を測定し、高流量群と低流量群に分けて検討した。心拍出量と肺動脈圧の変化から高流量系の維持に有利であると考えられた。低流量群では大量出血やバイパス時間の延長に対処しきれないと考えられた。また、2030kgの子ブタにおいては約30ml/kg/分が適正流量と推測された。移植肝代謝の研究では前年度につづいて肝組織中のEnergy charge律速酵素、代謝中間体、血中の糖、乳酸ピルビル酸、アンモニア、インスリン、グリカゴンを測定し、代謝の流れをほぼ解明した。後半ではブドウ糖の投与量を変化させて代謝の動きを比較検討した。ブドウ糖非投与群では無肝期以後に嫌気性代謝の亢進、乳酸の上昇が強かった。一方ブドウ糖投与群では著しい高血糖がみられグルカゴン上昇による糖利用の抑制が推測された。2%程度のブドウ糖投与が望しいと推測されるがひきつづき検討中である。以上の結果は第88回日本外科学会総会、第24回日本移植学会総会で発表した。1.ラットの同所性肝移植では、まず輸血による生命延長効果をみた。ラットはDonovにWister King,RecipientにACI,輸血用にSDのinbredを使用した。SD輸血群,DST群,輸血(-)群に有意の差は認められなかった。これは、inbredラット(SPF)の弱さのためと考えられた。次に、肝移植後の拒絶反応とは関係がないと考えられる、移植後早期肝合併症をみるために、肝細胞膜障害の有害をみた。Wister系雄性ラットを使用した。移植直後群,移植1日群,3日群,5日群のGOT,GPT,Al-P,LDH,ビリルビン,血糖,インシュリン,グルカゴン,インシュリンレセプター,グルカゴンレセプター,病理組織を検討し、同時に、肝保存中(4°C生食中)のインシュリンレセプター,グルカゴンレセプターの時間的変化もみた。結果は、現在検討中であるが、インシュリンレセプターよりもグルカゴンレセプターの変動が著明との傾向がみられている。2.大型動物の肝移植実験としては、前半は雑種成犬、後半はブタを用いた。雑種成犬においては移植前後の肝血行動態,代謝について実験を行ない検討を加えた。しかし、雑種成犬では系・型の均一なものを入手することが困難ということもあり、11月以降は肝解剖がより人間に近い小ブタ(2025kg)を用いて同実験を行った。また、人間にも応用できるように体外ポンプを使用して無肝期を維持し、麻酔科の協力を得てよりsystematicに実験を行なっている。3月中旬までに9回のブタ肝移植を行ない、術式は細部にいたるまで完成し、すでに長期生存(75日)を得ている。現在はSwan-Ganz catheterを中心とした各種モニターを使用し術中の全身血行動態の変化,肝生検による酸素活性の変化,ホルモンの変動を測定している。また、肝保存に対するcytoprotecter agentの使用,拒絶反応に対する免疫抑制剤の使用について準備を進めている。1.ラット同所性肝移植においては,移植後早期の糖代謝変動,ホルモンレセプター変動を経時的に測定した.つまり,術直後より7日目までの血中インシュリン,グルカゴン,移植肝組織中インシュリンレセプター,グルカゴンレセプターを測定し考察を加えた.また,移植手技上最も困難とされている肝上部下大静脈吻合について,新しい技法を開発した.これらは第23回日本移植学会で発表した.2.プタ同所性肝移植では,臨床肝移植に備えてのトレーニングを兼ねて約80回の移植を行った.術中術後の全身および肝循環動態,糖・エネルギー代謝について研究を進め,さらに障害(温阻血)肝移植, living donorよりの部分肝移植について予備実験を行なった.循環動態の研究では,動脈圧,肺動脈圧,心拍出量,左房圧,中心静脈圧,肝組織血流量を測定し,術中管理のトレーニングを積むとともに,各種麻酔法の与える影響について考察を加えた.また,昭和63年より無肝期体外循環用に,従来使用していたローラーポンプに換えて,臨床用のバイオポンプを導入した.前述した各種モニタリングより,ポンプの循環動態に与える影響を適性流量について検討中である.糖・エネル率-代謝の研究では,血中インシュリン,グルカゴン,乳酸,ピルビン酸,アンモニアなどと肝組織中の代謝律速酵素,中間体, nucleotideを測定し,肝移植の代謝系に及ぼす影響について考察を加えた.これらの結果は第23回日本移植学会で発表し,第88回日本外科学会総会で発表の予定である.

また,脳死の問題に関係なくgraftを獲得することをめざして,温阻血肝や部分肝の移植の可能性について予備実験を行なった.温阻血肝移植は可能性はあるが, vabilityの判定が困難なことが課題である. living donorよりの部分肝移植は,肝静脈再建に課題を残すものの,小児に対しての臨床応用の可能性は大きい.〔ラット同所性肝移植〕拒絶のおこる組み合わせ、おこらない組み合わせに対して、肝機能検査、病理組織学検査、モノクローナル抗体を用いた浸潤リンパ球の分析、RI検査による肝血流、肝網内系の分析を行ない相異を調べた。また、拒絶に対するサイクロスポリン、15-deoxy-spergualinの免疫抑制効果を研究した。〔ブタ同所性肝移植〕全身および移植肝の術中循環動態の研究では、前年度までは麻酔法の点から検討を進めてきたが、今年度は主に無肝期体外バイパス流量の点から検討した。まず予備実験として肝温阻血下で輸血速度を一定にした後、バイパス流量を変化させて循環動態を測定した。次いで実際の移植において循環動態を測定し、高流量群と低流量群に分けて検討した。心拍出量と肺動脈圧の変化から高流量系の維持に有利であると考えられた。低流量群では大量出血やバイパス時間の延長に対処しきれないと考えられた。また、2030kgの子ブタにおいては約30ml/kg/分が適正流量と推測された。移植肝代謝の研究では前年度につづいて肝組織中のEnergy charge律速酵素、代謝中間体、血中の糖、乳酸ピルビル酸、アンモニア、インスリン、グリカゴンを測定し、代謝の流れをほぼ解明した。後半ではブドウ糖の投与量を変化させて代謝の動きを比較検討した。ブドウ糖非投与群では無肝期以後に嫌気性代謝の亢進、乳酸の上昇が強かった。一方ブドウ糖投与群では著しい高血糖がみられグルカゴン上昇による糖利用の抑制が推測された。2%程度のブドウ糖投与が望しいと推測されるがひきつづき検討中である。以上の結果は第88回日本外科学会総会、第24回日本移植学会総会で発表した。
インスリン依存性の転写調節因子の同定とその生体における糖代謝への関与の検討

平成15年度におこなったGene Chip解析にて同定された転写調節因子の肝における遺伝子発現変化をマウス肝組織や培養肝細胞などを用いて解析した。さらに、アデノウイルスベクターを用いた肝特異的な過剰発現・機能阻害実験によって、in vitro系やin vivo系での糖代謝恒常性維持にとっての重要性や糖尿病の病態への関与を検討した。【【肝におけるインスリン誘導性basic helix-loop-helix型転写調節因子の解析】この転写調節因子の発現は、インスリンによって誘導された。アデノウイルスベクターを用いてラット初代培養肝細胞に導入すると、ウイルス容量依存的に糖新生律速酵素のホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ(phosphoenolpyrvate carboxykinase : PEPCK)やグルコース-6-リン酸脱リン酸化酵素(glucose-6-phosphatase : G6Pase)の発現が抑制された。糖・脂質代謝関連酵素の発現を抑制的に調節する転写調節因子は報告がほとんどなく、肝における糖・脂質代謝機構の解明に対する新しい知見といえる。【肝におけるインスリン抑制性C2-H2 zincfinger型転写調節因子の解析】この転写調節因子の発現は、グルココルチコイドやcAMPによって誘導され、インスリンによって抑制された。アデノウイルスベクターを用いてラット初代培養肝細胞に導入すると、ウイルス容量依存的にPEPCKの発現が誘導されたが、G6Paseの発現誘導はみられなかった。株化肝細胞を用いてPEPCKプロモーターの活性を測定したところ、この転写調節因子の発現容量依存的にPEPCKプロモーターの活性化がみられた。この転写調節因子は、PEPCKの発現を誘導することで肝における糖新生の制御に関与する可能性が示唆される。肝における新規なインスリン依存性転写調節因子を同定するために、随時摂食時・絶食時・絶食後再摂食時のマウスの肝からtotal RNAを抽出し、Gene Chip(AffymetrixMu74ABC)にて遺伝子発現の変化を解析した。また、ストレプトゾトシン誘導性糖尿病マウスヘのインスリン投与前後の肝についても同様な解析を行った。さらに、ラット初代培養系肝細胞にインスリン、グルコース、及びインスリン拮抗ホルモンであるデキサメサゾンやグルカゴンのセカンドメッセンジャーであるcAMPなどを処理し、遺伝子発現の変化をreal time RT-PCR、ノザンブロット、ウェスタンブロットなどの分子生物学的手法にて解析した。これらの結果、Gene Chipにて解析した約36,000遺伝子の中からマウス個体の肝とラット初代培養系肝細胞の双方において、インスリン誘導性のbasic helix-loop-helix型転写調節因子やLeucine zipper型転写調節因子、グルコース誘導性、またはインスリン拮抗ホルモン誘導性(インスリン抑制性)のC2-H2 zincfinger型転写調節因子などを新規に5種以上同定した。これら新規転写調節因子の発現は、すべてインスリン誘導性、あるいは抑制性の糖・脂質代謝関連酵素の発現に先行しており、肝での糖・脂質代謝機能を転写レベルで調節している可能性が考えられる。現在、これら転写調節因子の野生型や優位抑制型のcDNA、及びsiRNAをコードするアデノウイルスベクターを作成し、in vitro系やin vivo系での肝特異的な過剰発現・機能阻害実験による糖・脂質代謝への影響を検討している。特にインスリン拮抗ホルモン誘導性(インスリン抑制性)のC2-H2 zincfinger型転写調節因子は、初代培養系肝細胞や株化肝細胞に過剰発現させることでホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼやグルコース-6-ホスファターゼなどの糖新生系律速酵素の遺伝子発現を誘導するという結果を得ており、肝における糖新生機能を調節している可能性が示唆されている。
尿細管の細胞間短絡路を介した電解質輸送におけるクローディンの役割

近位尿細管のタイトジャンクションに発現しているクローディン-2の細胞間短絡路のNa/Cl輸送における役割を解明するため、ジーンターゲティング法によって、クローディン-2遺伝子のノックアウトマウス(KO)を作成し、その野生型マウス(WT)を対照として、近位尿細管の形態と機能を、それぞれヘマトキシリン-エオジン染色による光顕的観察や超薄切片法、フリーズフラクチャー法による電顕的観察と、単離・灌流した近位尿細管のNa/Clの透過性比、経上皮抵抗(RT)とタイトジャンクション抵抗(RTj)、正味のNa再吸収量(JNa)、Cl再吸収量(JCl)、水再吸収量(JV)および腎クリアランス法による分画Na再吸収率(FENa)と分画Cl再吸収率(FEC)によって比較した。形態的解析では、KOマウスの近位尿細管上皮細胞においてもタイトジャンクションが存在することが観察され、WTと比較してその構造に著しい差は認められなかった。機能的解析では、KOマウスの近位尿細管でRTとRTjはWTよりも増加していた。また、WTの近位尿細管の細胞間短絡路はNa透過性が優位であるのに対し、KOではCl透過性が優位であった。KOの近位尿細管ではJNa、JCl、JVがいずれもWTに比較し低下していた。自由飲水と食餌摂取下でのFENaとFEClは2群で有意差を示さなかったが、2%NaCl溶液を尾静脈より一定量負荷後のFENaとFEClはKOマウスで増加した。以上より、クローディン-2は、近位尿細管の細胞間短絡路で、その電気抵抗を低くし、かつNa透過性の維持に重要な役割を担っていることが明らかになった。近位尿細管のタイトジャンクションに特異的に発現しているクローディン2のノックアウト(KO)マウスと、その野生型(WT)マウスを用いて、近位尿細管の形態を、パラフィン切片法による光学顕微鏡観察と、超薄切片法、フリーズフラクチャー法による電子顕微鏡観察によって比較した。KOマウスでは、尾より抽出したDNAのSouthern blottingによってクローディン2遺伝子の欠損を、また、腎臓の免疫組織染色によってクローディン2蛋白の欠損を確認した。さらに、KOマウスの近位尿細管のタイトジャンクションではWTマウスと同様にクローディン10とクローディン11が発現していたことより、KOマウス近位尿細管のタイトジャンクションではクローディン10やクローディン11の分布に影響を与えることなくクローディン2のみが選択的に欠損していることが明らかになった。KOマウスはメンデルの法則に従って生まれ、成長や行動パターンはWTマウスと著変はなかった。ヘマトキシリン-エオジン染色では糸球体や尿細管などの腎の形態は両群で明らかな相違はみられなかった。超薄切片法による電子顕微鏡観察でも、WTマウスの近位尿細管と同様に、KOマウスでも多くの微絨毛を有した管腔側膜と、管腔側膜近くの接着複合体が存在していた。接着複合体には隣接する細胞が完全に密着する部位(タイトジャンクションストランド/溝)を1個認めた。フリーズフラクチャー法による電子顕微鏡観察でも、WTマウスの近位尿細管と同様に、タイトジャンクションストランド/溝が1個存在し、クローディン2の粒子が集まりひも状を呈していたた。溝の単位長さ(100nm)当たりの粒子の数はWTマウスで3.4であるのに対し、KOマウスでは1.3であったことから、KOマウスの近位尿細管のタイトジャンクションはWTマウスとは質的な違いが存在することが示唆された。近位尿細管のタイトジャンクションに特異的に発現しているクローディン2のノックアウト(KO)

マウスの腎臓より単離した近位尿細管S2セグメントを灌流し、その野生型(WT)マウスを対照として、機能的差異がないかどうかを検討した。まず、管腔内灌流液の浸透圧を一定に保持しながらNaCl濃度を50mM減らすことによって血管側から管腔側へのNa/Clの濃度勾配を作ると、WTマウスでは経上皮電位が正に偏位するのに対し、KOマウスでは負に偏位した。拡散電位も同様のpatternを示し、Goldman-Hodgkin-Katzの式より、Clに対するNaの透過性の比を算出すると、WTマウスではNa透過性が優位であるのに対し、KOマウスではCl透過性が優位であった。経細胞輸送をouabainで抑制しても、同様のpatternを示した。KOマウスの近位尿細管の経上皮抵抗とタイトジャンクション抵抗はいずれも、WTマウスに比べ約2倍の増加を示した。KOマウスの近位尿細管上皮細胞を介した正味のNa再吸収量、Cl再吸収量、水再吸収量はいずれもWTマウスと比較し有意な低下を認めた。自由飲水と食餌摂取下での分画Na排池率と分画Cl排池率は2群で有意差を示さなかったが、2%NaCl溶液を尾静脈より一定量負荷後の分画Na排池率と分画Cl排池率はKOマウスで有意に増加した。このことから、KOマウスでは近位尿細管の細胞短絡路を介したNa再吸収障害は、二次的にClや水の再吸収障害を引き起こすが、近位尿細管より下流に位置する遠位側ネフロンではこれらの再吸収を増加させることによって代償していることが示唆された。以上より、クローディン2は、近位尿細管のタイトジャンクションに位置し、細胞間短絡路の電気抵抗を低くし、かつNa透過性の維持に重要な役割を担っていることが明らかになった。
タイにおける公民教育の地方分権化に関する実証的研究

本研究は、タイの教育とりわけ公民教育の地方分権の進展状況について、実証的に明らかにすることを目的としている。つまり公民教育政策がいかに地方分権化していくかのプロセスのメカニズムを解明することである。研究方法としては、まず、理念、制度レベルの実態に関する分析である。つまり、法律、政策、計画、カリキュラムに規定されている公民教育、地方分権化に関する諸規定、内容の分析から、理念、制度を明らかにした。次は、実態、意識レベルの調査研究である。県・郡・学校群の長、教師、児童に対して実施した意識調査から、各レベルでの意識を把握し、制度と意識のレベルの比較を通して、地方分権化の定着度を測定した。研究結果は、まずどのレベルで定着しているかに関しては、「学校」において最も定着していた。そしてその主体は「教師」であった。またどこに問題が発生していたかについては、教育行政機関の機関長と現場教師との間には、いくつかの点において意識の違いがみられた。次に、地方分権化する際の問題としては、社会問題、国民の理解不足、予算不足、職員の能力不足が分権化の障害となっていた。そしてこれらの問題は、政治、経済、社会、文化におけるタイ社会がもつ構造そのものに問題があることが明らかになった。最後に問題点をどのように解決するかの方法については、地方分権化の問題解決には、法律の整備、権限の委譲、政策決定への住民参加、委員会方式、学校の独自性発揮、セミナー、ヒアリング、マスメディアによる国民の理解の向上、予算の確保、職員の研修、学校と社会の連携、義務と役割の徹底、倫理・道徳の教育、犠牲の精神、公共人の育成、学校が手本となること、教師が手本となることなどの方法が明らかとなった。1.教育政策文書の収集及びその分析公民教育に関する政策文書をタイから取り寄せ、現在分析中であるが、タイにおいては目下教育改革を推進中であり、その中で21世紀におけるタイの教育は、グロバリゼーション(地球化)のための教育をめざしている。つまりグローバルな市民性の育成という点が大きな政策課題となっていることが明らかになった。2.カリキュラム分析現行のカリキュラム(1991年版)は、現在の政策を受けて策定されたものではない。従ってグローバルな市民性の育成を必ずしも志向しているわけではないということがわかった。唯一国際化に対応するものとして位置づけられているのは、小学校段階から導入された英語教育であった。しかし現行カリキュラムでは、小・中・高校で国際理解教育が位置づけられていた。3.アンケート調査の実施公民教育の地方分権化を探るため、地方(県、郡、学校群)の教育行政機関の長に対して、地方分権化に関する質問紙調査を実施した。県教育事務所76人、郡教育事務所355人、学校群551人、計982人に質問紙を郵送した結果、県から49人、郡から237人、学校群から229人の計515人から回答を得た。結果については、現在分析中である。本年度が第2年目の研究調査となる。本年度は、まず公民教育に関する資料を入手すると共に、特に1998年8月に官報告示された「1999年タイ国家教育法」を全訳した。本教育法は、国レベルの教育基準を定めた法律としては、タイ教育史上初めてのものである。タイの教育、否タイ国家の将来を占う画期的な法律である。本法のエッセンスは、「グローバルスタンダードなタイ国家の建設」である。世界共同体の中で21世紀を生き抜くタイ人、すなわちタイ公民の育成が強く意識されているのが明らかとなった。また8月に実施した現地調査では、全国6ヶ所(北部、東北部、中央部、西部、東部、南部の6地域)において、児童生徒と教師に対して公民教育に関する質問紙調査を実施した。

各地域とも児童生徒100名6地域計600名、教師100名6地域計600名に対し質問紙調査を実施した。質問紙調査の結果については、現在、集計中であるが、今後集計が終了次第、分析を進め、報告書にまとめる予定である。さらに、現地において、小学校や地方の教育行政組織を訪問し、関係者にインタビューも行った。その結果、教育の地方分権化が急速に進んでおり、地方において、独自なカリキュラムが策定されていることが明らかとなった。たとえば北部のランパン県では、教師一人一人が個別の指導計画書を作り、創意工夫された授業が展開されていた。そこでは、グローバル化に対応した教育と、地方の文化伝統を保護発展させようとする教育とが、うまくバランスよくカリキュラムに位置づけられていた。「文化伝統を保護発展できる(localism)と同時に、21世紀のグローバル時代を生き抜くタイ人(globalism)」というタイの公民像が明らかになった。本研究は、タイの教育とりわけ公民教育の地方分権の進展状況について、実証的に明らかにすることを目的としている。つまり公民教育政策がいかに地方分権化していくかのプロセスのメカニズムを解明することである。研究方法としては、まず、理念、制度レベルの実態に関する分析である。つまり、法律、政策、計画、カリキュラムに規定されている公民教育、地方分権化に関する諸規定、内容の分析から、理念、制度を明らかにした。次は、実態、意識レベルの調査研究である。県・郡・学校群の長、教師、児童に対して実施した意識調査から、各レベルでの意識を把握し、制度と意識のレベルの比較を通して、地方分権化の定着度を測定した。研究結果は、まずどのレベルで定着しているかに関しては、「学校」において最も定着していた。そしてその主体は「教師」であった。またどこに問題が発生していたかについては、教育行政機関の機関長と現場教師との間には、いくつかの点において意識の違いがみられた。次に、地方分権化する際の問題としては、社会問題、国民の理解不足、予算不足、職員の能力不足が分権化の障害となっていた。そしてこれらの問題は、政治、経済、社会、文化におけるタイ社会がもつ構造そのものに問題があることが明らかになった。最後に問題点をどのように解決するかの方法については、地方分権化の問題解決には、法律の整備、権限の委譲、政策決定への住民参加、委員会方式、学校の独自性発揮、セミナー、ヒアリング、マスメディアによる国民の理解の向上、予算の確保、職員の研修、学校と社会の連携、義務と役割の徹底、倫理・道徳の教育、犠牲の精神、公共人の育成、学校が手本となること、教師が手本となることなどの方法が明らかとなった。
戦後イタリア政治過程における議会と政党制の機能とその変化

イタリア議会の危機は近年深刻さを増し,政治指導・立法活動・行政コントロール等多方面に渡っている.その原因として次の三点が挙げられる.第一に,議会に国政の中心機関としての実質的機能を保障するための「制度化」が不十分であったこと.第二に,政治文化の分極性を反映して,政治階級にイデオロギー・社会的出自・教育・専門職化・政党支配の程度において,かなりの異質性があること.第三に,これらの構造的欠陥に70年代以降の経済的・政治的・社会的危機が加わり,議会の機能不全を促進したのである.すなわち,イタリア議会は他の西欧諸国と比較しても非常に膨大な数の立法数を毎年生産しているが,それらの法律の大部分が利害関係者が限られた部分的法律であり,しかもその約75%は非公開の常任委員会立法であり,その手続と審議に長期間を要する点で--対等の二院制ゆえにこれが二度繰り返される--非能率と機能不全を示している.他方,「多中心的-連合的高議会化」(DC, PSI)と「統一的-中央集権的・低議会化」(PCI)に二分できる政治階級の構造的異質性は,このような制度化の貧弱さを悪化させる方向に作用した.つまり,政権政党が採用した政治操作手段は「政党クリエンテリズモ」という,議会権限の十全な発展を回避する形での利益分配方式と,「暫定措置令」によるその場しのぎ的対応であった.こうした危機の展開の中で,「第二共和制」への発展とさえも言われるボッツ委員会報告が提出され,議会と国家諸制度の根本的改革が論議されている.同時に,議会改革の取り組みと並行して,国民投票や住民評議会等の直接民主主義の制度的発展は,「新しい民主主義」の模索の現われである.今後は,この議会と政治階級との研究の上に立って,政府の具体的な政策決定と実行過程の分析を企画している.それによって,議会制のダイナミズムと実態が一層明らかになるであろう.イタリア議会の危機は近年深刻さを増し,政治指導・立法活動・行政コントロール等多方面に渡っている.その原因として次の三点が挙げられる.第一に,議会に国政の中心機関としての実質的機能を保障するための「制度化」が不十分であったこと.第二に,政治文化の分極性を反映して,政治階級にイデオロギー・社会的出自・教育・専門職化・政党支配の程度において,かなりの異質性があること.第三に,これらの構造的欠陥に70年代以降の経済的・政治的・社会的危機が加わり,議会の機能不全を促進したのである.すなわち,イタリア議会は他の西欧諸国と比較しても非常に膨大な数の立法数を毎年生産しているが,それらの法律の大部分が利害関係者が限られた部分的法律であり,しかもその約75%は非公開の常任委員会立法であり,その手続と審議に長期間を要する点で--対等の二院制ゆえにこれが二度繰り返される--非能率と機能不全を示している.他方,「多中心的-連合的高議会化」(DC, PSI)と「統一的-中央集権的・低議会化」(PCI)に二分できる政治階級の構造的異質性は,このような制度化の貧弱さを悪化させる方向に作用した.つまり,政権政党が採用した政治操作手段は「政党クリエンテリズモ」という,議会権限の十全な発展を回避する形での利益分配方式と,「暫定措置令」によるその場しのぎ的対応であった.こうした危機の展開の中で,「第二共和制」への発展とさえも言われるボッツ委員会報告が提出され,議会と国家諸制度の根本的改革が論議されている.同時に,議会改革の取り組みと並行して,国民投票や住民評議会等の直接民主主義の制度的発展は,「新しい民主主義」の模索の現われである.今後は,この議会と政治階級との研究の上に立って,政府の具体的な政策決定と実行過程の分析を企画している.それによって,議会制のダイナミズムと実態が一層明らかになるであろう.本年度のこれまでの研究を通じて明らかになったのは次の点である。その第一は、現代のイタリアにおいて、先進資本主義諸国のイギリス、日本等と共通して、議会の機能と役割の再検討が国政上の重要問題となっており、一昨年(1985年)に上下両院合同の議会改革委員会の最終報告書が出され、その一部分は事実上、すでに実施に移されつつあることである。その重要点は内閣権限の強化と議会の有効な活動の強化、二院制問題であり、その改革の方向をめぐって重要な対立が諸政党閣に存在し、それは戦後イタリア議会と政治の歴史的な評価と総括と密接に関わっている。つまり、戦後のイタリア共和国の国家構造の再編成の課題と関係しているのである。第二は、議会と政党を中央レベルでだけでなく、地方レベルで、とりわけ1970年代に導入された州制度の実情を具体的に把握することの必要性が明らかになった。歴史的に機能が不十分であった国家官僚制と政党制は、戦後の改革を通じても十全に発展することがなかなか困難であったが、ある意味では州制度の導入を通じて「参加」が現実のものとなり、議会と政党制の機能が一方では低下と言われながらも、他方では再活性化しているのである。この点では、国民投票制度の有効な活用も論点の一つとなっている。昨年度の関連資料の購入と夏の訪伊を通じて、議会改革に関する議会改革委員会報告書および諸文献の一次資料を入手することができた。

今年度は、上記の研究成果を踏まえ、改革に関する諸議論の問題点を明らかにすることとともに、議会と政党制の具体的機能を、具体的な数量的データをも整理することによって、今日のイタリア議会と政党制を取りまく問題状況の解明を行う予定である。なお、研究成果は来年度発行予定の日本政治学会の年報と広島大学法学部の紀要に発表する予定である。
明治・大正・昭和初期の英語教科書の計量的分析

1、英語教科書のコーパス作成と作成したコーパスを用いた教科書の計量的分析2、英語教科書の総合的計量分析、および英語教科書の発達に関する考察総合的計量分析では、Girls Pacific Readersを含め、これまでに蓄積した教科書コーパスを使って、各時代の英語教科書14セットの教科書コーパスを計量的に分析し、得られたデータに基づき教科書の歴史的展開に関する分析と評価を試みた。分析視点は、(1)総語数、(2)異語数、(3)新語数、(4)総語対新語比、(5)Flesch Reading Ease、(6)Flesch Kincaid Grade Level、(7)受動態、(8)主格関係代名詞、の8視点である。これらの分析の結果、日本における英語教科書の展開の全体像が少しずつ明らかになってきた。特に語彙指数の比較分析の結果、日本の英語教科書がかなりのペースで新語数や総語数を減らし、また、総語対新語比を増やしてきていることが明らかになった。この計量的分析結果を質的分析の結果と組み合わせ、これを総合的に解釈・評価することを試みた。これらの研究成果を小篠敏明・江利川春雄著『英語教科書の歴史的研究』(辞游社)として出版し、世に問うた。また、同時に、7編の論文としての国内外の各種学会誌で公表し、また、11編の論文として,日本英語教育史学会、Korea TESOL国際学会等、国内外の各種学会で口頭発表した。平成15年度は主として次の3種類の研究活動を行った。1、5種類の英語教科書のコーパス作成2、作成したコーパスを用いた教科書の計量的分析・比較3、英語教科書の発達に関する総合的計量分析総合的計量分析では、これまでに蓄積した教科書コーパスを使って、13セットの教科書を計量的に分析し、教科書の歴史的展開の分析を試みた。分析で使用された教科書は,前述のものを除いて、次の通りである。(1)Barnes著New National Readers、(2)Dening著English Readers : The High School Series、(3)文部省著『正則文部省英語読本』、(4)岡倉由三郎著The Globe Readers、(5)Palmer著The Standard English Readers、(6)竹原常太著The StandardEnglish Readresの6セット。これらの研究成果は日本英語教育史学会月例研究会(平成16年3月21日、広島市広島文化センター)で口頭発表された。平成16年度は主として次の2種類の研究活動を行った。分析視点は、(1)総語数、(2)異語数、(3)新語数、(4)総語対新語比、(5)Flesh Reading Ease、(6)Flesch Kincaid Grade Level、(7)受動態、(8)主格関係代名詞、の8視点である。特に語彙指数の比較分析の結果、日本の英語教科書がかなりペースで新語数や総語数を減らし、また、総語対新語比を増やしてきていることが明らかになった。これらの研究成果を小篠敏明・江利川春雄著『英語教科書の歴史的研究』(辞遊社)として出版し、世に問うた。また、同時に、7編の論文としての国内外の各種学会誌で公表し、また、11編の論文として日本英語教育実学会、Korea TESOL国際学会等、国内外の各種学会で口頭発表した。
民国期中国の昔話研究に関する総合的研究

本研究では、民国期の昔話研究の集大成とも言えるエーバーハルトの『中国の昔話タイプインデックス』を基本文献として、中国および日本でエーバーハルトが利用した資料およびエーバーハルトの利用資料に漏れている重要文献について、存在を確認し、できる限り閲覧調査した。最初に上海で、現在、中国で閲覧できる民国期の関係図書を調べた。次にベルリンでエーバーハルト関連の中国関係資料の調査を行った。さらにエーバーハルトに献辞をささげられている曹松葉について、二年目に出身地の浙江省金華で遺族及び地元研究者に聞き取り調査を行い、今まで生没年も知られていなかった曹松葉の経歴のあらましを明らかにした。また曹松葉の出身村曹宅鎮で老人たちから二年間にわたって昔話を聞いて、100話ほどの話を記録した。ベルリンへの空爆で失われてしまった曹松葉が蒐集してエーバーハルトに提供したという「金華昔話集」の500話には遠く及ばないが、金華の昔話伝承情況についての理解を得ることは充分にできた。これらの研究成果を利用して『中国の昔話タイプインデックス』主要部分の訳稿を完成させた。1920年代から30年代という中国昔話研究のもっとも盛んだった時期の各地の「民俗」雑誌や昔話集は、現在原本を見られないものが多い。今回の調査で閲覧できた資料のうち、特に重要と思われるものについては、資料検索の助けとなるように、目次を載せた。当時の中国の民間文学研究者についても、解放後も大学に残って研究を続けたごく一部の人を除き、全く顧みられていない場合がほとんどなので、その経歴を明らかにするように努めた。しかし、この点については、曹松葉を除き、まだ十分な調査ができていない。本研究第一年度にあたる今年度は、民国期の民間文学関係文献の調査を主に行なった。8月26日から9月6日まで、上海在住の研究協力者鄭土有氏とともに上海図書館および解放前の上海で民間文学収集に活躍した研究者の遺族宅を訪問して文献調査を行なった。12月18日から26日まで、ベルリンの国立図書館、ベルリン民族博物館でエーバーハルト関係の文献調査を行なった。エーバーハルトが1920年代中国人の助手曹松葉と記録した浙江省の昔話の手稿本などは残念ながら第二次大戦のベルリン空襲で焼失してしまって見られなかったが、エーバーハルトが『中国昔話のタイプインデックス』で利用している欧文資料およびベルリン所蔵のその他の中国民間文学関係資料について調査できた。以上の海外調査を踏まえ、2月には東京大学東洋文化研究所の倉石文庫、京都大学人文科学研究所などで、上海、ベルリンで見られなかった資料を確認した。一年間の調査によって、『中国昔話のタイプインデックス』で利用されている昔話資料のほとんどを確認できた。林蘭編のものなど、最重要な基本資料は、『民間月刊』一集が数冊しかない(北京大学図書館にそろっている)のを除けば、東京都立大学中国文学研究室も含め、カード検索では出てこなくても、ほとんど日本で閲覧できることが確認できた。一方、上海図書館などでは、基本的資料はほとんど見られないものの、中国でも未整理のまま名前も知られず放置されている小冊子が相当数収められていることがわかった。来年度は、浙江省金華で現在の昔話伝承状況の調査、およびこれまで未整理のまま放置されてきた民国期出版の無数の民間文学関係文献の整理を北京も含め行なう予定である。昨年は、国内と上海、およびベルリンで資料調査を行なった。研究第二年度の今年は、中国浙江省金華でエーバーハルトの助手を務めた曹松葉について調べ、また昔話の聞き取り調査を行って、エーバーハルトの『中国昔話のタイプ』の基礎資料となった金華地域の昔話の現在の伝承状況を調べた。