hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
東日本大震災後の地域コミュニティの再編と宗教の公益性に関する調査研究

(3)市民の街づくり会議等に出席するとともにボランティアを行いながら調査を行う「関与型調査」を模索し、学会と公開シンポジウムで、その成果を問うことができた。今年度の研究計画は(1)いわき市における予備調査を踏まえて、宗教とコミュニティの再編に関わる調査を継続するとともに、(2)行政資料を関係機関に求め、(3)さらに次年度以降の調査地の拡大を行うことであった。これらに関して、震災モニュメントという切り口を得たことによって、より具体的にコミュニティの再編と宗教文化との関係が明らかになったものの、教団宗教への目配りがやや乏しくなったことは否めない。また(2)行政資料の収集は十分に展開することができなかった。一方、調査地の拡大については釜石市において被災者支援を続けるキリスト教団体の調査に着手することができ、また仙台市の被災した仏教寺院への聞き取りも行い、今後、当該課題へのアプローチが可能になったことを評価したい。震災後のコミュニティの変容(再生・復興を含む)と宗教(宗教団体のみならず、祭りや民俗芸能やイベントも含む)との関連を、現在のいわき市だけはなく被災三県に調査地を拡大して検討する。あわせて復興イベントなどの実践的課題に取り組む宗教学的方法論の刷新を目指す。宗教学(1)2011年からの予備調査も踏まえ、いわき市のコミュニティの再編と宗教文化との関わりに関する調査報告を取りまとめる。(2)いわき市調査と並行して、被災三県において公共の領域で際立った/典型的な活動をなす宗教団体の活動や宗教行事・イベントを調査し、これまでの成果とあわせて比較・類型化を試み、同時にかかる成果を学会報告、市民向けシンポジウム、行政関係者へのフィードバックとして公開し、情報交換と次なる調査の更新を実施する。(3)以上の成果をもとに行政・宗教団体・宗教研究者組織の連携を模索、具体的には臨床宗教師制度やスピリチュアルケアワーカーなど公共の領域での活動を念頭に置く宗教者育成プログラム策定への提言、大学や大学間・大学地域連携の被災地支援プログラム作りを実施する。本研究課題の研究調査遂行上、3月11日の被災三県における行事の観察、関係者の聞き取り調査が必要である。平成27年度においては聞き取り調査分および復興イベントの参与観察が次年度に延びたため、繰越金が生じた。(1)いわき市における行政調査の未執行(118,485円)。(2)分担研究者1名が急病につき岩手(釜石市)調査不参加(75,000円)。上記の聞き取り調査および復興イベントの参与観察は平成28年5月2日・3日に実施したほか、本来、平成27年度に実施すべき聞き取り調査は平成28年5月・6月に行う予定である。次年度使用額は、全額、旅費にあて、平成26年度に行う予定であった行政調査と岩手調査を実施する。
大動脈プラークへのマルチプルバイオマーカーおよび心血管画像診断法によるアプローチ

大動脈および頸動脈プラークの進展は、脳梗塞や動脈塞栓症の発症をもたらすため、その予知・予防や発症メカニズムの解明は重要なテーマである。我々は、経食道心エコーで評価した大動脈プラークの進展に関連する因子を解明し、大動脈や頸動脈プラークの不安定化に炎症および酸化ストレスバイオマーカーが関連することを報告してきた。これらに加え、大動脈プラークの進展や不安定化に、新たに慢性腎臓病や血圧変動の増大が密接に関連すること、さらには、症候性脳梗塞のみならず、頭部MRIで検出した無症候脳梗塞の発症にも関与することを明らかにした。近年、わが国では、食生活の欧米化、高齢化社会の到来、メタボリック症候群の増加などの社会背景により、冠動脈疾患のみならず、大動脈、頸動脈、下肢動脈などの全身におよぶ動脈硬化性疾患が急速に増加してきている。この中でも大動脈の動脈硬化性病変(大動脈プラーク)は、脳梗塞や動脈塞栓症の発症をもたらすため、その予知・予防や発症メカニズムの解明は重要なテーマである。本研究では、大動脈プラークの進展や不安定化に対し、炎症および酸化ストレスに関与するバイオマーカーおよび心血管画像診断法による多面的アプローチにて検討し、そのメカニズムを解明することを目標としている。本年度は、大動脈プラークの危険因子を検索することを目的として、非弁膜症性心房細動例において、経食道心エコーで検出した大動脈の不安定プラークと、脳梗塞や動脈塞栓症のリスク層別化に広く使用されているCHADS2スコアとの関連について検討した。その結果、大動脈の不安定プラークの存在は、CHADS2スコア高値と密接な関連を認め、大動脈の不安定プラークは脳梗塞や動脈塞栓症の重要なリスクであることがあらためて確認された。これらの結果を学会および論文として発表した(Sugioka K, et al. Ultrasound Med Biol. 2014 in press.)。また、大動脈プラークとバイオマーカーとの関連についての研究においても、現在、大動脈プラークを検索した経食道心エコー施行例の血液検体採取は順調に進んでおり、さらなる症例のリクルートと、血液バイオマーカーおよび画像診断の解析を推進している。本年度は、大動脈プラークの無症候性脳梗塞への影響を検索する目的で、非弁膜症性心房細動例において、経食道心エコーで検出した大動脈の不安定プラークと、頭部MRIで評価した無症候性脳梗塞との関連について検討した。その結果、大動脈の不安定プラークの存在は、左房内異常と同等に無症候性脳梗塞と密接な関連があることが示され、大動脈の不安定プラークは症候性のみならず無症候性脳梗塞においても重要な危険因子であることが示唆された。これらの結果については、学会および学術誌にて発表する予定である。また、大動脈プラークとバイオマーカーとの関連についての研究においても、現在、大動脈プラークを検索した経食道心エコー施行例の血液検体採取は順調に進んでおり、現在、これらの結果解析をおこなっているところである。本年度は最終年度として、これまで収集したデータから経食道心エコーで評価した大動脈プラークと頭部MRIで検出した無症候性脳梗塞との関連性、および血液バイオマーカーとの関連性について検討している。その結果、大動脈の不安定プラークの存在は、無症候性脳梗塞との関連性を有することが示され、学会および学術誌に報告した。また、現在、大動脈プラークと血液バイオマーカーとの関連性を検討すべく、374例の血液検体を解析中である。これらの結果についても、学会および学術誌にて発表する予定である。本年度は、経食道心エコーで検出した大動脈の不安定プラークと、頭部MRIで評価した無症候性脳梗塞の存在が密接に関連していることを見出した。

これらの結果については、学会および学術誌にて発表する予定である。本研究の大きな柱である大動脈プラークとバイオマーカーの関連についての検討は、症例数が300例を超え、現在解析をすすめているところである。医学大動脈プラークとバイオマーカー解析のための血液検体採取をさらにすすめていくとともに、蓄積された血液データおよび画像診断の解析をおこない、それらの結果を学会や論文にて報告していく予定である。本年度は、経食道心エコーで検出した大動脈の不安定プラークと、脳梗塞や動脈塞栓症のリスク層別化に使用されているCHADS2スコアと密接な関連があることを見出し、これらの結果を学会および論文に発表することができた。また、本研究の大きな柱である大動脈プラークとバイオマーカーの関連についての研究は、まだ解析には至っていないが、大動脈プラークを検索した経食道心エコー施行例の血液検体採取が平成25年5月以来154例に達し、順調にリクルートが進んでいる。本年度は、前年度からの検体および画像データの収集を継続し、蓄積された血液データの分析は一部のみしかできなかったため。大動脈プラークとその危険因子についての研究を継続するとともに、バイオマーカー解析のための血液検体採取をすすめていく。さらに、蓄積された血液データおよび画像診断の解析をおこない、それらの結果を学会や論文にて報告していく予定である。次年度は、蓄積された血液データの分析と、解析結果を発表するために、研究費を使用する。本年度は、主に血液検体および画像データの収集を行い、蓄積された血液データの解析は、まとめて次年度以降に行う予定となったため。次年度以降は、蓄積された血液データの解析を行っていく。また、得られた解析結果を発表する機会もさらに増加することが予想され、そのために研究費を使用したいと考えている。
胎児骨髄移植後のregulatoryT細胞を利用したドナー特異的免疫寛容の誘導

実験の準備段階として、顕微授精用のマイクログラスニードルを作成する機器を使って、胎児骨髄移植に使用可能なマイクログラスニードルの作成を行った。(この、マイクログラスニードルは、胎児に直接細胞を注入するのに使用するために作成は容易ではない)。それから、naiveのB6マウスとBalb/cマウスから骨髄細胞を採取し、各種抗体を用いてキメラマウスを解析するためのFACScanの条件設定(templateの作成)を行った(lineageの各抗体についても行った)。次に、実際に胎児骨髄移植を行った。妊娠14日のBalb/cマウスをレシピエントとし、胎児1匹に対し、5x10^6のB6の骨髄細胞を移植した。しかし、骨髄移植後の出生率は、約60%程度と若干低く生後約4週目に移植後のキメラのチェックを血液でFACSにて解析したが、ブサルファン投与後の骨髄移植でキメラがenhance(キメラ中のドナー細胞の比率が高くなること)できる1%以上のキメラマウスがほとんど得られず次の段階へ進めない状態である。私が米国で実験を行ったときもキメラマウスがあまり得られなかった時期があり、骨髄細胞の準備の段階および移植そのものの手技についても再確認が必要である。また、妊娠マウスにブサルファンの投与をした後に胎児骨髄移植を行うなど効率よくキメラマウスを作成する方法を思案中である。(この場合、胎児の骨髄増殖のcell cycleを遅延させるために移植した骨髄細胞がより高率に生着することが期待される)。
少数採血デザインと頑健データ解析法を用いた臨床薬物動態試験

医薬品を適正に使用するにあたっては、薬物血中濃度と薬効・副作用の関係を定量化するとともに、薬物動態変動機構を明らかにし、患者個々に投与設計を行うことが必要である。最近申請者は、症例数および採決ポイントが少ない探索的な臨床試験データの解析法として、三段階の解析法が有用であることを見出した。本研究では、小・中規模の探索的臨床薬物動態試験に対する三段階のデータ解析法の有用性を再検証した医薬品を適正に使用するにあたっては、薬物血中濃度と薬効・副作用の関係を定量化するとともに、薬物動態変動機構を明らかにし、患者個々に投与設計を行うことが必要である。本研究では、小・中規模の探索的臨床薬物動態試験に対する三段階のデータ解析法の有用性を再検証した医薬品を適正に使用するにあたっては、薬物血中濃度と薬効・副作用の関係を定量化するとともに、楽物動態変動機構を明らかにし、患者個々に投与設計を行うことが必要である。一方、薬物個別投与設計を遂行する上で不可欠であるにも拘わらず最も企画と実施が困難なものの一つは、実際に薬を服用している患者を対象とした臨床薬物動態・薬効試験である。すなわち、一人の患者から速度論的解析に耐えるほど数多くの血中薬物濃度データを得ることは多くの場合困難であることに加え、市販後に一施設で行う臨床薬物動態試験では、対象患者が多くても数十人に限られる。このようなデータの処理に対しては、従来の速度論的解析法は適用が難しく、事前に臨床試験の成否の目処を立てることが困難であった。最近申請者らは、症例数および採血ポイントが少ない探索的な臨床試験データの解析法として、三段階の解析法が有用であることを見出した。本研究では、小・中規模の探索的臨床薬物動態試験に対する三段階のデータ解析法の有用性を再検証するとともに、実際の臨床試験で得られた薬物動態情報を医療現場に提供する事を目的とした。平成22年度は小児肺高血圧患者を対象として肺高血圧症治療薬ボセンタンの臨床薬物動態試験を行った。データ解析の結果、薬物併用や薬物動態関連分子(CYPおよびOATP)の遺伝子変異には有意な影響が認められなかったものの、小児集団では年齢がボセンタンの体内動態の影響因子の一つである事が明らかとなった(論文執筆中)。先天性心疾患を有する小児患者にボセンタンが投与される機会は比較的高く、本研究の知見はボセンタンの投与設計を行う上で重要な知見であると考えられた。申請者らは平成21年度から小児肺高血圧患者を対象とする臨床試験に取り組んできた。新規肺高血圧症治療薬であるボセンタンの臨床薬物動態試験を行った。データ解析の結果、薬物併用や薬物動態関連分子(CYPおよびOATP)の遺伝子変異には有意な影響が認められなかったものの、小児集団では年齢がボセンタンの体内動態の影響因子の一つである事が明らかとなった(論文印刷中)。先天性心疾患を有する小児にボセンタンが投与される機会は比較的高く、本研究の知見はボセンタンの適正使用を図る上で重要な知見であると考えられた。平成22年度よりその他肺高血圧治療薬(タダラフィル等)の臨床薬物動態試験を開始した。また、ミゾリビンの消化管吸収にナトリウムが影響を及ぼす事を明らかにした。吸収改善を目的とした新規製剤開発に繋がる成果と期待される。医薬品を適正に使用するにあたっては、薬物血中濃度と薬効・副作用を定量化するとともに、薬物動態変動機構を明らかにし、患者個々に投与設計を行うことが必要である。

本研究では、小・中規模の探索的臨床薬物動態試験に対する三段階のデータ解析法の有用性を再検証するとともに、実際の臨床試験で得られた薬物動態情報を医療現場に提供する事を目的とした。平成23年度は、小児腎移植患者と成人腎移植患者におけるミゾリビンの体内動態変動機構解析を行った。データ解析の結果、患者の腎機能に加え、ミゾリビンの消化管吸収過程の個体差が体内動態の個体間変動の別要因となり得ることが明らかとなった。さらに健常成人を対象とした臨床試験を実施し、ミゾリビンの消化管吸収率は、核酸トランスポーターであるconcentrative nucleosidetransporter1(CNT1)のの遺伝的多型の影響を受けることを明らかにした。
神経細胞死とそれを防御するトランスポーター種とその機序

神経細胞死に関連して発現する遺伝子.蛋白群をディファレンシャルディスプレイ法を用いて検索した。実験的に脳浮腫を引き起こさせたマウス大脳皮質より新規の遺伝子が単離された。種々の検索の結果、この蛋白は世界で初めて見いだされた脳特異的新規ペプチドトランスポーター(PT)であることが判明した。このPTは膜12回貫通型で、温度依存性、プロトン依存性であった。さらにこのPTはヒスチジンを特異的に取り込み、その取り込みはジペプチドやトリペプチドで阻害された。脳では神経細胞とグリア細胞の両者に発現している。我々はこのPTをペプチド/ヒスチジントランスポーター(PHT)1と名づけた。PHT1はシナプス間隙においてペプチデ-スで断片化されたジ-あるいはトリペプチドをプレ側に取り込み、再び、ペプチドの材料として再利用するための働きや、脳浮腫時に神経細胞を細胞死から守るために、ペプチド断片をオスモライトとして取り込み、細胞内外の浸透圧維持に関与していると思われる。我々は一過性虚血を負荷された砂ネズミ海馬より亜鉛トランスポーター1型(ZnT1)遺伝子を単離した。この遺伝子は一過性に虚血を負荷された海馬CA1錐体細胞内に24時間から3日後まで上昇する。術後1週間ではCA1錐体細胞の消失とともに、ZnT1遺伝子の発現は消失する。しかしZnT1自体の蛋白は発現しない。培地に亜鉛を加えると神経細胞は亜鉛を取り込み死にいたる。この細胞にZnT1蛋白を発現させると神経細胞は死なない。一過性虚血を引き起こした海馬CA1では亜鉛の集積が起こり海馬CA1細胞は亜鉛を取り込む。CA1細胞は取り込んだ亜鉛を細胞外の排除するためにZnT1亜鉛を発現させるが、蛋白にまでは翻訳されないので、その機能が発揮できず、死に至る。さらに本研究ではオスモライトトランスポーターが脳浮腫による神経細胞死を防ぐ働きがあることをも、併せて明らかとした。ラット網膜中心動脈の選択的結紮による虚血モデル動物の作製方法を確立し、一過性の網膜虚血後、時間経過を追ってグルタミン酸トランスポーター(GLAST)、オスモライトのトランスポーターであるミオイノシトールトランスポーターの遺伝子発現調節をin situハイブリダイゼーション法やノーザンブロット法により検討した。また同時にグルタミン酸トランスポーターの蛋白の局在及びその量を観察するため、免疫組織化学法やウェスタンブロット法を併用した(島田)。その結果虚血網膜ではグルタミン酸トランスポーターのうちGLASTmRNAが急増した。しかしグリシンおよびGABAトランスポーター(GAT1)には殆ど変化が見られない。GLASTはグリア細胞の一種であるミューラ細胞に局在し、GLASTの蛋白発現部位は虚血による細胞死の進行する部位に対応して発現が移動していることも明らかとした。また脳虚血や脳浮腫に陥った脳の動物ではミオイノシトールトランスポーターmRNAの急増が認められた。主にニューロンにその変化を認めた。また、腹腔に高NaCl負荷を与えた動物脳でもミオイノシトールトランスポーターmRNAの増加が認められたがその部位は脳内では限られた部位で特に小脳に強かった。この事実は小脳が外界からの浸透圧負荷に極めて敏感な部位であると共にそれに対してミオイノシトールトランスポーターを用いて対処していることを示す。グリシン、GABA、タウリン等他のトランスポーターの一過性虚血における遺伝子発現の変化も検討し、GLASTの発現パターンと比較した(金銅)。浸透圧調節に関係するオスモライトのうちミオイノシトール-Na^+トランスポーター(SMIT)の動態を実験的に脳浮腫や虚血を引き起こさせたマウス脳で検討した。これらの脳ではSMITmRNAの急増が観察され、ニューロンとグリア細胞の両者にその発現が見られた。発現パターンで特に強調したいことはSMITmRNAの発現増加が見られた部位は脳の損傷部位のみならず、きわめて広範囲に拡がっており、時間経過によっては反対側脳においてもSMITmRNAの増加が見られた。この事実は従来考えられていた以上に浮腫や虚血の影響が脳の広範囲に及んでいることを示すものである。また眼組織においてもSMITmRNAの動態について検討した。通常ではSMITmRNAは毛様体、虹彩、レンズの上皮と網膜では神経節細胞および内果粒層の細胞に発現していた。Na^+負荷では網膜におけるSMITmRNAの急増が認められた。以上の事実より脳には網膜に発現するSMITは神経細胞に加えられる様々な浸透圧負荷に対応し、その発現を高めることにより神経細胞を細胞死から免れるような方向に働いているものと思われる。

PHT1はシナプス間隙においてペプチデ-スで断片化されたジ-あるいはトリペプチドをプレ側に取り込み、再び、ペプチドの材料として再利用するための働きや、脳浮腫時に神経細胞を細胞死から守るために、ペプチド断片をオスモライトとして取り込み、細胞内外の浸透圧維持に関与していると思われる。我々は一過性虚血を負荷された砂ネズミ海馬より亜鉛トランスポーター1型(ZnT1)遺伝子を単離した。この遺伝子は一過性に虚血を負荷された海馬CA1錐体細胞内に24時間から3日後まで上昇する。術後1週間ではCA1錐体細胞の消失とともに、ZnT1遺伝子の発現は消失する。しかしZnT1自体の蛋白は発現しない。培地に亜鉛を加えると神経細胞は亜鉛を取り込み死にいたる。この細胞にZnT1蛋白を発現させると神経細胞は死なない。一過性虚血を引き起こした海馬CA1では亜鉛の集積が起こり海馬CA1細胞は亜鉛を取り込む。CA1細胞は取り込んだ亜鉛を細胞外の排除するためにZnT1亜鉛を発現させるが、蛋白にまでは翻訳されないので、その機能が発揮できず、死に至る。さらに本研究ではオスモライトトランスポーターが脳浮腫による神経細胞死を防ぐ働きがあることをも、併せて明らかとした。
障碍児者の受けた震災被害と支援に関する文献研究―既存の知見の体系化－

本研究では、震災に関する既存の文献や資料を収集し、障害児者の被災状況、防災策における今後の課題等について、時期別に、次のようにまとめた。1)平常時の取り組みでは、避難行動要支援者名簿、個別支援計画の策定、福祉避難所の指定、福祉避難所の周知、備蓄・人的支援の仕組みづくり、福祉避難所のあり方について。2)発災後の避難では、避難情報、避難支援、安否確認、個人情報保護条例の壁。3)避難生活では、障害児者にとっての一次避難所、福祉避難所の課題、避難所にいない障害者に支援物資が届かないこと。4)生活再建では、仮設住宅のバリアフリー化、孤立化、福祉サービスが受けられないこと、仮設住宅の立地、であった。本年度の実施計画は、障碍児者の中でも、身体障害をもつ障碍児者についての、被災状況、支援について、文献検索システムを用いて資料を収集し、質的分析を行い、これまでの知見を体系化することであった。しかし実際に検索をかけてみると、資料は身体障害児者に限定されておらず、障碍児者全体を扱っていることから、今年度は身体障碍、精神障碍、発達障碍、視覚障碍など、障碍を限定せずに文献検索と資料の収集を行った。現在、資料の分析を行っているところであるが、現在のところ、資料からは次のようなキーワードを抽出している。1避難行動の困難(障害の特性ゆえの移動の困難、命の綱となるケアの道具の運搬の困難、支援の確保の困難(近所に支援を頼める人がいない)、どこに避難したらよいかわからない)、2情報の確保の困難(障害の特性ゆえ、アクセスの難しい情報源がある)、3避難所生活の困難(周囲への気遣いゆえ避難所へ行くことを諦める、避難所に入っても自宅に戻る、ケアスタッフの不在、ケア道具がない)、4福祉避難所を知らない(情報不足、周知が徹底されていない)、5生きる意欲の喪失(どうにもならない現実)、6福祉避難所の指定の遅れ、7避難行動要支援者名簿の困難、8福祉避難所に指定された施設の介護人材の不足、9サービスのコーディネート、10物資のコーディネート、11支援の格差である。これらのキーワードの中に入る情報を整理し、キーワードの体系化を図っている。また、今後の分析でキーワードの修正、増減の可能性がある。当初、大学図書館で新聞記事の検索を行おうと計画していたが、複写代の領収書が出ないということで、図書館での検索作業ができなくなり、他の手段を探すこととなった。その結果、新聞記事の検索の有料データベースが見つかったが、こちらに料金を払うとなるとアルバイトを雇うことが難しくなり、代表者が自ら検索、印刷、などの作業全体を行うことになり、研究全体の進捗が遅れてしまった。また今年度は身体障碍に限った検索を行う研究計画であったが、障碍の種類を限定せずに障碍全体を取り扱う資料が多いため、身体障碍だけの検索でなく、障碍全体を検索することとなった。このため、検索が大量になってしまい、進捗が遅れてしまった。東日本大震災において、障害児者の死亡率が健常者の2倍であった背景には何があるのか。それを探るために、障害児者の避難状況、困難、支援ニーズ、実際行われた支援、支援の課題などをについて、新聞記事、体験記、手記、各種資料、論文などを逐一、関連事項を挙げて、内容を整理した。当初、障害別に整理する予定であったが、上記のドキュメントで語られているのは、障害別ではなく、全ての障害者に共通する状況であることが多かった。特に、集中して語られているのは、避難所、福祉避難所に障害児者がいられず、崩壊した自宅や、親戚の家に戻るパターンなどの問題であった。避難所が障害児者にとって生活するのが難しい物理的環境であった側面もあるが、障害児者は何か言いたくても声を上げられないこと、周囲への気兼ねや軋轢があることも語られた。またそういった問題は、昔から変わらず引き継がれていているものであった。また、地域で生活する障害児者が災害にあった時に、果たして地域住民、近所の人びとに支援を求めることができるのかといった地域との関わりの薄さに由来する問題も浮かんできた。今後も引き続き、当事者や関係機関の人びとの生の声を丹念に拾い上げ、内容を整理・体系化していく。また、今後の防災に役に立つことのできるような資料集を作成する予定である。収集した多量のドキュメントを質的分析ソフトを用いて分析するためには、word文書に打ち直す必要があるが、その作業を依頼する学生アルバイトを募集できずにいるので、異なるルートを検討中である。大震災において、障害児者の死亡率が健常者と比較して非常に高くなる事態の背景には何があるのか。それを探るために、障害児者の避難状況、困難、支援ニーズ、実際行われた支援、支援の課題などをについて、国立情報学研究所文献検索システムCinii Article、Cinii Booksを用いて「震災障害者」「震災福祉避難所」「震災避難所」と検索キーワードを投入して文献検索を行い、抽出した資料のすべてを対象とした。そしてその中から、震災における障害者の課題に関連のある箇所をピックアップし、質的分析ソフトMAXQDAを用いて整理した。特に多かったのは、障害児者が避難所を使用できずに、倒壊した家屋に戻ったり、車中泊をしたり、親戚知人の家に身を寄せるという事態についてであり、地震の場所、時代に関わらず、同じエピソードが繰り返されていた。そこから、次のような問題を整理した。

「障害者にとって一般の避難所」、ここではバリアだらけの環境、周囲との軋轢、また障害者地震の気兼ねの問題、情報入手の困難など、また障害別に困難を整理した。「障害者にとっての福祉避難所」、ここでは福祉避難所といっても障害者にとっては次のような課題があることを整理した。すなわち、1避難行動要支援者名簿、個別支援計画の策定と、その先の福祉避難所との関係づけ、2地域防災計画の中に福祉避難所を位置づけ、3福祉避難所の運営(マンパワー不足、備蓄の不足、建物の設備の未整備、個人情報の不足)であった。本研究では、震災に関する既存の文献や資料を収集し、障害児者の被災状況、防災策における今後の課題等について、時期別に、次のようにまとめた。1)平常時の取り組みでは、避難行動要支援者名簿、個別支援計画の策定、福祉避難所の指定、福祉避難所の周知、備蓄・人的支援の仕組みづくり、福祉避難所のあり方について。2)発災後の避難では、避難情報、避難支援、安否確認、個人情報保護条例の壁。3)避難生活では、障害児者にとっての一次避難所、福祉避難所の課題、避難所にいない障害者に支援物資が届かないこと。4)生活再建では、仮設住宅のバリアフリー化、孤立化、福祉サービスが受けられないこと、仮設住宅の立地、であった。今年度はやり残しの検索作業と、質的分析を急ピッチで進めていく。特に、質的分析ソフトを有効に活用し、分析速度のアップを図る。そのためには、データの文書を質的分析ソフトに使えるようにする作業等が必要となるが、アルバイトを雇用して作業の効率化を図る。また、この研究の途中、熊本で大地震が起こり、新たなデータを収集する予定である。今後もドキュメントを追加収集しながら、内容を検討し、質的分析ソフトを用いて分析していく。また、実際に役に立つ資料となるよう、資料の形式を検討していく。その際課題となるのは、word入力を依頼するアルバイトの募集であるが、アルバイト募集のサイトなどを使って募集をかける予定である。社会福祉学アルバイト雇用で遂行しようとしていた作業の一部(図書館での検索作業)が不可能となってしまったため、研究者が全ての作業をすることになり、作業全体の進捗が遅れてしまった。学内で学生アルバイト雇用が進まないために、次年度使用額が生じた。学内の学生の雇用ができないため、違うルートでの募集を検討している。もう一度、アルバイトに任せられる作業を見直し、任せられるものと任せられずに研究者がやらなくてはならない部分を区分することで、作業のスピードアップを図る。其れと同時に、質的分析ソフトを導入し、少しでも分析の効率化を図る。違うルートでアルバイトを募集し、人数を確保する。そして、質的分析ソフトへの入力をすすめ、データの質的分析を行い、整理・体系化をはかる。
分子性触媒コンポーネントを融合させた太陽光水分解用光電気化学セルの開発

我々は、ルテニウム錯体色素を修飾したTiO2電極(アノード)と白金ポルフィリン水素生成触媒を修飾したTiO2電極(カソード)を導線のみで接続した外部バイアスフリーの分子性色素増感光電気化学セル(分子性DSPEC)において、犠牲還元剤の存在下、アノードに可視光照射を行うと、カソード上において水素生成触媒反応が進行することを報告した。本年度は、この分子性DSPECにおいて起電力が生じる理由、すなわち、高エネルギー電子がアノードからカソードへ移動する理由を明らかにすることを目的として研究を行った。この外部バイアスフリーの分子性DSPECにおいて、両極の電極電位の差(起電力)を観測したところ、暗所下においては電位差が生じていないのに対し、アノードへ可視光照射を行うと、28μV程の電位差が生じることが明らかとなった。この電位差は、可視光照射のオンオフに対して迅速に応答すること、カソードに白金ポルフィリン無しのTiO2電極を用いた場合においても観測されること、そして犠牲還元剤を含まない電解液を用いた場合には観測されないことが明らかとなった。すなわち、この起電力はアノード上における連続的な光化学反応に由来するものであることが判明した。ルテニウム錯体色素を修飾したTiO2電極を犠牲還元剤を含む電解液中に浸漬し、Ar雰囲気下において可視光照射を行ったところ、可視近赤外領域(5001200 nm)に及ぶ非常に広い波長範囲において、吸光度の増大が観測された。この結果は、可視光照射によってTiO2伝導帯に高エネルギー電子が充填されたことを示しており、これに伴ってTiO2のフェルミ準位が上昇することが判明した。従ってこの外部バイアスフリーの分子性DSPECにおいては、アノードのTiO2伝導帯への高エネルギー電子の充填に伴うフェルミ準位の上昇が、起電力として作用していることが明らかとなった。本研究課題においては、ノンバイアス太陽光水分解を駆動できる分子性色素増感光電気化学セル(分子性DSPEC)を開発することを目標としている。この目的を達成するためには、アノード上における光酸素生成反応による高エネルギー電子の捕集、アノードからカソードへの高エネルギー電子の移動、およびカソード上における高エネルギー電子を用いた水素生成反応、の3つの反応を外部バイアスを印加せずに効率良く進行させなくてはならない。我々は、TiO2を両極に用いた分子性DSPECにおいて、アノードからカソードへの高エネルギー電子の移動、およびカソード上における高エネルギー電子を利用した水素生成反応の2つの反応が、外部バイアスの印加を必要とせずに進行することを見出している。本年度は、アノードからカソードへ高エネルギー電子が移動する理由、すなわち、この分子性DSPECにおける起電力の起源を明らかにすることに成功した。一方、色素分子と酸素生成触媒分子を修飾したTiO2電極(アノード)上における光酸素生成反応を効率良く進行させるためには、TiO2伝導帯下端の電位、錯体色素の基底状態および励起状態の酸化電位、さらに酸素生成触媒による触媒電流の立ち上がり電位、の4つの電位を最適な値に制御することが必要不可欠である。本年度は、これら4つの値の精密制御に取り組んだ結果、効率の良い光酸素生成反応の達成に向けて、より小さな過電圧で酸素生成触媒反応を駆動できる触媒分子が必要である事が判明した。従って次年度は、触媒電流の立ち上がり電位がより負電位側に位置する酸素生成触媒分子の開発に取り組むことによって、本研究課題の目的であるノンバイアス太陽光水分解を駆動できる分子性DSPECを達成できると期待される。以上のように本研究課題は、当初の計画通り順調に進んでいると考えられる。「これまでの進捗状況」に記したように、次年度はより小さな過電圧で酸素生成触媒反応を駆動できる触媒分子の開発に取り組む計画である。本年度の研究結果より、中性条件下における酸素生成触媒反応の立ち上がり電位が1.0 V vs. SCE程度であれば、アノード上における光酸素生成触媒反応が効率良く進行すると予測されることから、この条件を満たす新規酸素生成触媒分子の開発を行う計画である。一方、アノード上における光酸素生成反応をより効率良く進行させるためには、TiO2伝導帯に充填された高エネルギー電子による酸素生成触媒分子の還元反応(逆電子移動反応)を抑制することが重要である。そこで、この逆電子移動反応を抑制するため、酸素生成触媒分子とTiO2表面とを空間的に隔離するスペーサー導入型酸素生成触媒の開発も併せて行う計画である。触媒電流の立ち上がり電位をより負電位側にシフトさせ、スペーサーの導入によって逆電子移動反応を効果的に抑制することができれば、アノード上における光誘生成反応がより効率良く進行すると期待される。以上の研究から得られた成果を組み込む事によって、研究期間内にノンバイアス太陽光水分解を駆動できる分子性DSPECが開発できると期待している。

この外部バイアスフリーの分子性DSPECにおいて、両極の電極電位の差(起電力)を観測したところ、暗所下においては電位差が生じていないのに対し、アノードへ可視光照射を行うと、28μV程の電位差が生じることが明らかとなった。この電位差は、可視光照射のオンオフに対して迅速に応答すること、カソードに白金ポルフィリン無しのTiO2電極を用いた場合においても観測されること、そして犠牲還元剤を含まない電解液を用いた場合には観測されないことが明らかとなった。すなわち、この起電力はアノード上における連続的な光化学反応に由来するものであることが判明した。ルテニウム錯体色素を修飾したTiO2電極を犠牲還元剤を含む電解液中に浸漬し、Ar雰囲気下において可視光照射を行ったところ、可視近赤外領域(5001200 nm)に及ぶ非常に広い波長範囲において、吸光度の増大が観測された。この結果は、可視光照射によってTiO2伝導帯に高エネルギー電子が充填されたことを示しており、これに伴ってTiO2のフェルミ準位が上昇することが判明した。従ってこの外部バイアスフリーの分子性DSPECにおいては、アノードのTiO2伝導帯への高エネルギー電子の充填に伴うフェルミ準位の上昇が、起電力として作用していることが明らかとなった。本研究課題においては、ノンバイアス太陽光水分解を駆動できる分子性色素増感光電気化学セル(分子性DSPEC)を開発することを目標としている。この目的を達成するためには、アノード上における光酸素生成反応による高エネルギー電子の捕集、アノードからカソードへの高エネルギー電子の移動、およびカソード上における高エネルギー電子を用いた水素生成反応、の3つの反応を外部バイアスを印加せずに効率良く進行させなくてはならない。我々は、TiO2を両極に用いた分子性DSPECにおいて、アノードからカソードへの高エネルギー電子の移動、およびカソード上における高エネルギー電子を利用した水素生成反応の2つの反応が、外部バイアスの印加を必要とせずに進行することを見出している。本年度は、アノードからカソードへ高エネルギー電子が移動する理由、すなわち、この分子性DSPECにおける起電力の起源を明らかにすることに成功した。一方、色素分子と酸素生成触媒分子を修飾したTiO2電極(アノード)上における光酸素生成反応を効率良く進行させるためには、TiO2伝導帯下端の電位、錯体色素の基底状態および励起状態の酸化電位、さらに酸素生成触媒による触媒電流の立ち上がり電位、の4つの電位を最適な値に制御することが必要不可欠である。本年度は、これら4つの値の精密制御に取り組んだ結果、効率の良い光酸素生成反応の達成に向けて、より小さな過電圧で酸素生成触媒反応を駆動できる触媒分子が必要である事が判明した。従って次年度は、触媒電流の立ち上がり電位がより負電位側に位置する酸素生成触媒分子の開発に取り組むことによって、本研究課題の目的であるノンバイアス太陽光水分解を駆動できる分子性DSPECを達成できると期待される。以上のように本研究課題は、当初の計画通り順調に進んでいると考えられる。「これまでの進捗状況」に記したように、次年度はより小さな過電圧で酸素生成触媒反応を駆動できる触媒分子の開発に取り組む計画である。
Shaggy aorta症候群への挑戦:病態解明と治療法開発へ の応用

Shaggy aorta症候群は、大動脈の高度の粥状硬化に由来する微細なコレステリン結晶が末梢動脈を閉塞し,臓器障害を呈する疾患である。その病態機序の知見は乏しく、病因・病態を解明して治療法が確立することが求められている。本研究におけるヒト大動脈組織ならびに培養マクロファージを用いた検討から、Shaggy aorta症候群におけるコレステリン結晶過剰形成の分子機序に、ASC/Caspase-1インフラマソームが関わる可能性が示唆された。Shaggy aorta症候群は、確立した治療法が無い予後不良な疾患であり、その病態機序の知見は極めて乏しい。本研究の目的は、Shaggy aorta症候群の分子病態機序を解明し、それに基づく新たな治療法を開発することである。そのために本年度は以下の2つの研究計画を実施した。手術時に動脈硬化性大動脈のヒトサンプルを収集した。現在もサンプル採取は継続中である。サンプルは、蛋白解析用に凍結保存し、同時に病理学的解析ならびに免疫組織学的解析のためホルマリン固定し組織切片を作製した。病理組織像から、コレステリン結晶形成の程度を3段階にグレード分類した。また、炎症細胞浸潤の程度も観察した。今後サンプル数を確保して、コレステリン結晶形成や炎症細胞浸潤の程度とASC蛋白発現あるいはCaspase-1活性化との相関を解析する。【コレステリン結晶刺激に対する炎症応答機序の解明】培養マクロファージ実験系を用いて、ASC/Caspase-1系がコレステリン結晶刺激に対する細胞の炎症応答に重要な役割を果たすことを実証する計画である。本年では、まずASC/Caspase-1系の抑制のため、ASCKO(ノックアウト)マウス由来のマクロファージの培養とヒト由来培養マクロファージ(THP-1)においてASC低分子干渉RNA(siRNA)によるASC抑制法を確立した。ASC低分子干渉RNA(siRNA)の効果は、ASC蛋白発現をウエスタンブロット法で検出し確認した。今後、コレステリン結晶刺激に対するマクロファージの炎症応答を解析する。本研究の目的は、Shaggyaorta症候群の分子病態機序を解明し、それに基づく新たな治療法を開発することである。そのために本年度は、まず以下の2つの研究計画を前年度に引き続いて実施した。【ヒト標本の解析】手術時に動脈硬化性大動脈のヒトサンプルを収集した。さらなるサンプル数の確保のため、現在もサンプル採取に継続中である。昨年度までに実験系として確立したASC KO(ノックアウト)マウス由来の培養マクロファージとASC低分子干渉RNA(siRNA)によりASC/Caspase-1系を抑制したヒト由来培養マクロファージ(THP-1)を用い、これらの培養細胞に各種刺激を加えて、炎症応答を解析した。さらに本年度から、『以下の研究計画を開始した。マウス大動脈病変におけるASC/Caspase-1系の役割を解明するために、マウス腹部大動脈局所を各種ミネラル結晶で刺激し、慢性炎症を惹起するモデルを確立した。本年度は、以下の3つの研究計画を前年度に引き続いて実施した。【ヒト標本の組織学的解析とASC/Caspase-1解析】手術時に動脈硬化性大動脈のヒトサンプルを収集した。Shaggy aorta症候群の病理組織では、大動脈内腔にコレステリン結晶に富んだ粥状硬化巣が進展し、コレステリン結晶の形成端に一致して、顕著な炎症細胞浸潤が確認された。【培養マクロファージにおけるASC/Caspase-1系の役割解明】マクロファージ伸展刺激後の炎症応答(IL-1 beta分泌亢進)にASCが必須であることを、ASCノックアウトマウス由来の培養マクロファージを用いて明らかにした。【モデルマウスにおけるASC/Caspase-1系の役割解明】マウス腹部大動脈局所をリン酸カルシウム結晶で刺激し慢性炎症を惹起するモデルを作成し、野生型マウスとASCノックアウトマウスを比較解析した。その結果、炎症細胞浸潤、中膜弾性線維の破壊において明らかな差は認められなかった。現在引き続き解析を実施している。交付申請書に記載した3つの研究計画をおおむね予定通り実施した。24年度が最終年度であるため、記入しない。おおむね計画書通りに研究を推進する予定である。
廃ガラスの高度化利用を目指した学生実験の取り組みに関する研究

研究目的深刻な環境問題に直面する今、建設分野では、建設リサイクル法の下、特定建設資材の再資源化に努めている。一方、特定建設資材以外にはリサイクルの義務付けがなく、その削減と活用のための方策が強く求められている。本研究は、廃棄物の高度化利用を目指し、建築を学ぶ学生に対し、特定建設資材以外である「建築廃ガラス」等の、素材・資源としての活用方法を求める場を与えることを目的に行った。研究方法本研究は、「建築構造材料実験」授業の中で、建築学専攻1年の学生7名が建築・インテリア・生活雑貨への廃ガラスの活用案を求め取り組み、行った。まず、「建築板ガラス」「ガラス瓶」のリサイクルの現状について、事前調査を行った。その結果、粉砕後の利用にあっては、色分別や混合均一性、小粒径破砕や高温度焼成が必要となる等の課題を見出し、取り組みに際しては、「企業が取り組みにくい、学生だからできるリサイクル・リユースのあり方」をコンセプトに、粉砕だけでなく、原形での利用・提案を求めた。(予備実験)原形・粉砕状のガラスを、異なる温度で焼成し、製作へ向けた基礎的データとした。(製作1・発表)予備実験で得られた課題をもとに、3班に分かれ、A班は「アルミ缶を型に利用したペーパーウェイト」、B班は創作性・装飾性を重視した「質感を楽しむ食器」、C班は低温度焼成による「凹凸・素材感、透過性を楽しむランプ」を提案・製作した。焼成ガラスの鋭利面の残存、透明度の喪失等が課題として見られた。(製作2)製作1の課題を検討し、食器・ライト・カレンダー等を提案・製作・発表をし、意見交換を行った。(研究発表)平成25年度実験・実習技術研究inイーハトーブいわてにおいて研究発表、製作物を展示し、アンケート調査を行った。研究成果課題発見から製作という一連の流れを通し、学生の独自性と創造的思考の醸成が図られた。焼成後の鋭利面の処理方法等が今後の課題として残ったが、「インテリア性や創造性を重視しつつ製作自体を楽しむ」という視点は、ワークショップ等で大人から子供まで楽しめるツールとして、廃ガラスの再利用・高度利用化の、企業のアプローチとは異なるリサイクルの新たな方向性と特定建設資材としての将来性を示唆するものとして、本研究の目的は達成されたものと考える。
ケースヒストリー手法を用いた古構造学の創設

昨年度は、事例研究(エヌビック社のRC橋建設における基本的な設計・施工コンセプトの分析)に基づいて以下の点を古構造学の基本的な枠組みとして設定するに至った。(1)前提:過去に見られたすべての構造は考察に値する。(2)研究対象:現在は大きく取り上げられることのない橋梁。現存しないものも含むが、アイデアのみで実現に至っていないものは除外する。(3)研究手法:設計者が発想に至るまでの具体的な行動や思考の過程を解明する。今年度はさらに、エッフェルやフレシネ等の事例を参照しつつ研究手法に関する考察を深め、古構造学の方法論として以下に示すような視点が重要であることを見出すに至った。(1)俯瞰的な視点:構造形式という今日的な枠組みは考慮に入れない、(2)遡及的な視点:構造形式という枠組みを越えた場所に発想の源泉を見出す、(3)同時代的な視点:対象となる構造物が建設された当時における価値を見出す。以上のような視点による事例研究を蓄積することで、発想の変遷史を記述するという、順調な発展史とは異なった橋梁史の側面を解明することが可能となる。また、古構造学によって明らかにされる歴史は、従来の手法では捉えることが困難であった橋梁史の新たな側面を描き出すことにもつながる。ただし現段階では事例数が十分であるとは言い難い。今後は、ドゥ・ラ・ノエによってフランスのブルターニュ地方に建設された鉄道高架橋梁群を対象とした事例研究を予定しており、古構造学の方法論の確立を目指したい。鉄筋コンクリート橋の発生と発展を明らかにすることを目的として、今年度は主にエヌビック社の橋梁建設について研究をおこなった。エヌビック社は19世紀末に活動を開始し、エヌビックシステムという技術に基づいた鉄筋コンクリート構造物の一般化に大きく貢献した会社である。同社はまた、アーチ橋のスパン記録を約10間で2度樹立していることや、短期間で大量の橋梁を建設しており、橋梁史上特異な存在であるが、通常は多々ある原始的な試みのひとつとして位置づけられる傾向にあり、その実体はほとんど明らかにされていない。本研究では、橋梁建設におけるエヌビックシステムの分析を中心として、鉄筋コンクリート橋梁史におけるエヌビック社の再評価を試み、次のような点を明らかにした。新技術の導入に慎重な当時のフランスでは、主として信頼性や美観といった理由から鉄筋コンクリート橋の日常的な利用は極めて困難な状況であり、橋梁建設の主流は依然として石造アーチ橋や鉄橋であった。鉄筋コンクリート橋の普及を目的とするエヌビック社は、(1)T桁構造による「部材上のシステム」、(2)T桁構造に全固定構造と装飾を加えた「設計上のシステム」によって、構造上、美観上の問題を克服した。さらに(3)技術移転と情報戦略による「経営上のシステム」を構築することで、鉄筋コンクリート橋を実験レベルから日常レベルへと発展させることに成功した。こうして新技術の定着に成功した同社の橋梁建設は、構造や造形の洗練がおこなわれる今日的な鉄筋コンクリート橋の時代を準備することに貢献したと言える。昨年度におこなった事例研究(エヌビック社のRC橋建設における基本的な設計・施工コンセプトの分析)にもとついて、本年度は方法論の確立へと研究を展開し、以下の点を古構造学の枠組みとして設定するに至った。(2)研究対象:世界初を達成しつつも、現在は用いられていない橋梁(構造)。(3)研究手法:設計者が発想に至るまでの具体的な行動や思考の過程を解明する(know-why型)。また、研究対象の評価に当たっては「対象となる構造物が建設された当時における価値を見出す」という視点が不可欠であることを確認した。今日的な視点ではなく、古構造学的視点から歴史を捉えることではじめて、対象構造物が完成に至るための創造性が明確になる。事例研究においては、これまでRC橋梁史の劈頭に2度のスパン記録更新をしたことが評価されるにとどまっていたエヌビック社の橋梁建設には、新旧技術の統合と組織経営という創造性を解明するに至った。以上のような視点による事例研究を蓄積することで、順調な技術の発展史とは異なる、発想の変遷史を記述することが可能となる。今後いくつかの事例研究を重ねることで、古構造学の方法論の確立を目指す。(1)俯瞰的な視点:構造形式という今日的な枠組みは考慮に入れない、(2)遡及的な視点:

構造形式という枠組みを越えた場所に発想の源泉を見出す、(3)同時代的な視点:対象となる構造物が建設された当時における価値を見出す。以上のような視点による事例研究を蓄積することで、発想の変遷史を記述するという、順調な発展史とは異なった橋梁史の側面を解明することが可能となる。また、古構造学によって明らかにされる歴史は、従来の手法では捉えることが困難であった橋梁史の新たな側面を描き出すことにもつながる。ただし現段階では事例数が十分であるとは言い難い。今後は、ドゥ・ラ・ノエによってフランスのブルターニュ地方に建設された鉄道高架橋梁群を対象とした事例研究を予定しており、古構造学の方法論の確立を目指したい。
表面バイメタル系の作る新しい表面秩序構造

Cu(001)面に室温でリチウムをつけたときに形成する4x4構造を決定することができた。テンソルLEED法により24個の構造モデルを計算しペンドリーの信頼度因子比較により決定された。4x4構造は、低被覆率の3x3構造に類似してはいるが、3x3構造より多くのリチウム原子を受け入れるために次のような構造変化をおこなっている。(1)銅クラスターは3x3構造では4個の銅原子であったが、4x4構造では9個に増えた。(2)銅クラスター上のリチウム吸着原子は、1個から4個に増加。(3)銅クラスターをつなぐ置換吸着リチウム原子は、2個から3個に増加。実は3x3構造の決定が完了したあとに、4x4構造の予測をした。3x3の構成要素である銅4原子クラスターと1個のリチウム吸着原子(略してCQA)が4x4の配列をし、銅クラスターの間は2原子列の溝ができその中にリチウム原子がジグザグに並んでいる構造を予想した。決定された構造はそうはなっていなかった。CQAがCu(001)-Li系の重要な構成要素であり、それが秩序化するという考えが誤りであったことを示している。リチウムの被覆率の増加とともになぜ2x1→3x3→4x4のような構造変化おこすのかについて簡単な考察を加えた。2x1構造では置換吸着の場所はすべて使われてしまっている。表面にさらにリチウム原子を受け入れるためには、表面銅原子が動いて、置換吸着リチウム原子の数はあまり変えずに単純吸着のための新たな場所を形成したものが3x3構造と考えられる。さらに表面にリチウムを受け入れるために、もっと広い単純吸着のための場所を作ったのが4x4構造である。リチウム原子の被覆率ごとに、その被覆率での平均吸着エネルギーが最大になるように、表面原子が再配列していると考えられる。
サイトカインによる魚類ヘルパーT細胞の分化誘導機構について

1.トラフグCD4^+T (Th)細胞の分化制御機構の検討最終年度ではTh細胞の分化機構のさらなる解明を目的とし、細胞内サイトカイン染色法を用いた研究を行った。細胞内サイトカイン染色とは細胞を抗原もしくはマイトジェンとともに培養することで、活性化されたサイトカインを産生する細胞をタンパク質・細胞レベル検出する測定系である。まず、トラフグの組換えIFN-γおよびIL-4/13Aを大腸菌タンパク質合成系で作製し、CD4^+T細胞に作用させたところ、哺乳類と同様にTh1およびTh2サイトカインの産生がそれぞれ増加することがフローサイトメトリー解析から明らかになった。これらの結果は、魚類においても特異的なサイトカインを産生するCD4^+T細胞が存在し、さらにサイトカインによる分化制御機構を有していることが示唆された。2.トラフグ単球細胞のサイトカイン発現動態に関する研究ヘルパーT細胞は、抗原提示細胞(APC)から抗原刺激を受け、APCおよびTh細胞自身から産生されるサイトカインによって活性化する。そのため、Th細胞の分化制御において抗原提示細胞の働きは重要である。そこで、抗原提示能を持つ単球の活性化や分化の制御機構をサイトカイン遺伝子の発現動態から検討した。まず、トラフグの末梢血より単球を分離し、形態観察、フローサイトメトリー(FCM)解析および細胞マーカーの発現解析を行った。分離された単球に対し免疫誘導物質(LPS、polyI : C、IMQ)で刺激した結果、新たな細胞集団がFCM解析によって検出された。この細胞集団は、刺激前の単球集団と比べ高い貧食活性を示した。さらに、単球の活性化に重要なCSF-1bだけでなく、Th細胞の分化誘導に深く関係するIFN-γなどのサイトカイン遺伝子の発現増加が認められた。平成25年度において、魚類におけるCD4^+T(Th)細胞およびTh細胞の分化制御に大きく関与する抗原提示細胞である単球の特性を解析する研究を行った。その結果、免疫刺激によって魚類の単球が活性化し、Th細胞の分化を誘導するサイトカインの発現も確認された。さらに組換えサイトカインによってTh細胞の分化が誘導された。これらの結果より、哺乳類と同様に魚類免疫担当細胞においてもサイトカインによる複雑な制御機構が形成されていることが推察された。これらの結果より、当初の計画が順調に進んでいると判断される。本研究課題において、魚類におけるTh細胞の分化制御の解析を行ってきた。魚類にはCD4やサイトカインに特有の分子が存在することが分かっている。今後の研究では、Th細胞に関与する魚類特有の分子を対象に研究を推進する。具体的な研究としては、魚類サイトカインの組換え体および抗体をさらに作製し、Th細胞の分化制御についてのさらなる解析などが挙げられる。また、Th細胞だけでなく他の免疫関連細胞の特性を解析することで、これまで明らかにされていなかった魚類の免疫機構が解明される可能性がある。1.抗トラフグCD4抗体を用いたCD4^+T(Th)細胞の分取養殖魚であり、ゲノムデータベースも充実しているトラフグ(Takifugu rubripes)を対象に研究を行った。Th細胞の分取に用いた抗トラフグCD4抗体はトラフグCD4を発現させた動物細胞(CHO)およびトラフグ末梢血白血球のライセートを用いて特異性を確認した。末梢血白血球(PBLs)から純化したT細胞に対し、抗トラフグCD4抗体を用い磁気細胞分取法によってTh細胞の分取を試みた。分取した細胞の特性を解析するため、蛍光標識された2次抗体と反応させ、蛍光顕微鏡観察した結果、ほぼすべての細胞で蛍光が確認された。またFCM解析から95%以上の非常に高い純度でのTh細胞が確認された。さらに細胞マーカー遺伝子の発現解析からT細胞群の中でもCD4陽性の細胞が分取したことが確認された。2.Th細胞の免疫刺激後の発現動態の解析PBLsをグラム陰性菌(大腸菌)の細胞壁外膜の構成成分であるリポポリサッカライドド(LPS、疑似細菌感染)や合成二本鎖RNA(polyI:C,疑似ウイルス感染)またはT細胞マイトジェンであるコンカナバリンA(Con A)でin vitro刺激し、各刺激区から継時的にCD4細胞を分取した。さらに、本細胞におけるThサイトカイン遺伝子(Th1系:IL-2,IFN-γ,TNF-α,Th2系:IL-4/13A,IL-4/13B,Th17系:IL-17A/F3,Treg系:TGF-β1,IL-10)の発現を、Multiplex RT-PCRアッセイで解析した。その結果、LPSおよびpolyI:C刺激は、Th1,Th2,Th17およびTregのサイトカインの発現を増強し、Th2サイトカインの発現を減少させた。また、ConAは全サイトカイン遺伝子の発現を増強させた。しかしながら、各刺激におけるサイトカインの発現レベルは異なった。このことから、魚類のTh細胞も哺乳類と同様に、免疫(病原体)刺激に応じて異なるサイトカインを産生するサブセットが存在する可能性が示唆された。