hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ＤＮＡ結合親和性に寄与するＧＡＴＡ１アミノ末端側亜鉛フィンガーの生理機能解析

本研究では、GATA1アミノ末端側亜鉛フィンガー(N-フィンガー)生理的役割をDNA結合能の観点から解析し、多様なDNA結合様式の選択的利用により調節される、GATA1標的遺伝子発現制御メカニズムを実証することを目的とした。第一に、網羅的ChIP-Seq解析による血球系細胞ゲノム上でのDNA結合能を解析した。ゲノム全域の回文状GATA配列に対し、N-フィンガー変異GATA1において結合能低下傾向が認められることを、生物情報学的に明らかにした。また単一GATA配列と回文状GATA配列が隣接する領域では、単一GATA配列への正常な結合が保たれていることで、領域全体として結合能が低下しない傾向にあることが、新たに明らかとなった。この結果は、これまでのマウス解析で限定的ないくつかのGATA1標的遺伝子座において検出されたDNA結合特性を、ゲノムレベルにまで拡大して適用できることを意味する。第二に、ルシフェラーゼレポーター解析による、DNA結合能の差異が転写活性化能に与える影響を解析した。回文状GATA配列を有するレポーター遺伝子をN-フィンガー変異GATA1により誘導した場合、GATA1の発現量および発現時間に依存したレポーター活性の上昇が、野生型GATA1により誘導した場合と比較して低下することがわかった。一方で単一GATA配列を有するレポーター遺伝子では、N-フィンガー変異GATA1であっても野生型GATA1と同等の転写活性化能を示すことがわかった。この結果は、多様なGATA配列に対しそれぞれ適切な結合様式が形成されることが、GATA1の転写活性化能を直接的に支えていることを意味する。以上の知見は、これまでの生化学解析から得られたGATA1のDNA結合特性をより一般化し、マウス個体での標的遺伝子発現制御および血球分化制御の分子メカニズムと連結させる、重要な研究成果である。26年度が最終年度であるため、記入しない。本研究では、GATA1アミノ末端側亜鉛フィンガー(N-フィンガー)生理的役割を、DNA結合能の観点から解析し、その機能破綻に起因する血球分化異常発症メカニズムを明らかにすることを目的とする。1.精製蛋白質を用いた生化学的DNA結合能解析表面プラズモン共鳴法による結合速度論解析の結果、GATA結合配列パターン(数・並び方)の違いに依存して、GATA1の結合様式・結合強度に多様性が生じることを明らかにした。特に本研究で重点的な機能解析を目的としているN-フィンガーは、回文状の重複GATA結合配列を特異的に認識することがわかった。この結果は、GATA1のDNA結合におけるN-フィンガーの役割を裏付けるものである。また結合速度論という独自の観点から構築したGATA1のDNA結合モデルは、GATA1の詳細な分子機能解明を導く重要な知見となる。2.トランスジェニックマウスを用いた、N-フィンガーDNAの相互作用の生理的機能解析ヒト遺伝性血液疾患患者から見つかった、回文状GATA結合配列への結合が特異的に減弱化するGATA1変異体をマウス個体内で発現させることにより、変異に起因して、GATA1標的遺伝子の広域な発現異常と、致死性の貧血を誘発する重篤な赤血球分化異常が引き起こされることを明らかにした。この結果は、上記の生化学的解析で明らかにした結合様式の特異性が個体内でも再現され、実際の血球分化において重要な役割を担っていることを示し、またその機能破綻が直接的に病態形成に関わることを示唆する、生理・病理学的に重要な知見である。さらに、GATA結合配列パターンに依存した結合様式の多様性が、ゲノム全域に渡って認められるかを検証する為、タグ付き野生型GATA1及び変異GATA1を安定発現するマウス赤白血病由来細胞(MEL)株を樹立し、今後の網羅的ChIP-Seq解析に用いるサンプルを得た。

26年度が最終年度であるため、記入しない。結合速度論に基づいたGATA1のDNA結合モデルの構築と、マウス個体内でのDNA結合特性の再現、およびその破綻による遺伝子発現制御・血球分化異常の解析に成功した。また網羅的ChIP-Seq解析に用いるサンプルの取得に成功した。これまでに樹立した細胞株を用いた網羅的ChlP-Seq解析により、細胞内でのGATA1結合領域中で、N-フィンガーが特異的に関与する配列パターンとして回文状GATA配列が有意に抽出されるかを、生物情報学の観点から検証する。この結果を変異GATA1レスキューマウスでのマイクロアレイ解析結果と比較し、回文状GATA配列への結合異常が、個体レベルでの発現制御異常に結びつく遺伝子が存在するかどうかを検証する。また、DNA結合様式の違いが転写活性化能の強弱に直接的な影響を与えているかを、ルシフェラーゼレポーター解析により検討する。以上の解析により、多様なDNA結合様式により調節される、GATA1の複雑な標的遺伝子発現制御機構を構成する新たなメカニズムを提唱することができると考える。
抗ウイルス活性物質ヘンオキサゾールAの合成研究

ヘンオキサゾール類は,1991年比嘉らにより沖縄県宮古島近海より採取された海綿の一種,Polyfibrospongia sp.より単離された生理活性物質である。その構造は,ビスオキサゾール核を中心に、左側にはテトラヒドロピラン部分,右側にはトリエン部分の3つの部分より成っている。ヘンサオキサゾールAは,herpes simplex(単純包疹)virus type Iに対し活性、細胞毒性が認められている。以上のように,ヘンオキサゾール類は生理活性的にも構造的にも非常に興味深い化合物である。ヘンオキサゾールは,テトラヒドロピラン部分,オキサゾール部分,トリエン部分に分けられるので,まず,テトラヒドロピラン部分とトリエン部分を合成し最後にオキサゾール環を構築するというルートで合成を進めた。トリエン部分の合成は市販の(R)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロピオン酸メチルから出発し、アリルブロム体を合成し、これをパラジウムを触媒としてビニルスズ体とクロスカップリングすることにより達成した。テトラヒドロピラン部分の合成は(S)-1,2,4-ブタントリオールから出発した。まず1,2-ジオール部分の選択的保護体へ誘導し、次に末端水酸基をParikh-Doering法により酸化してアルデヒドとした後、不斉アリル化反応を用いてanti-1,3-ジオール体のみを選択的に得た。次に,二級水酸基をTBS基で保護し,末端オレフィンをWacker酸化したところ,目的とするメチルケトン体を得た。現在、上のメチルケトン体からテトラヒドロピラン部分の合成を検討中である。1991年に沖縄産の海綿Polyfibrospongiaから発見されたヘンオキサゾール類(A-D)に注目し、これの全合成を行っている。その構造はピラン環、ビスオキサゾール環、非共役トリエン、5個の不斉中心を含んでいる。ピラン環上の一部の相対配置が明らかにされたが絶対配置は未確定である。この合成研究ではヘンオキサゾールAの立体選択的合成法の確立と同時に未確定の絶対配置の決定を行なう。まず始めに(2S,4S,6S,8S,22S)-体を標的化合物としてテトラヒドロピラン部分とトリエン部分の合成研究を行なった。トリエン部分については(R)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロピオン酸メチルを出発原料として炭素鎖を延長し望みのトリエン部分の構造を合成した。テトラヒドロピラン部分については市販の(S)-1,2,4-ブタントリオールを出発原料し、1,2-ジオールをペンチリデンケタールで保護し、残った水酸基をアルデヒドとした後、立体選択的アリル化反応、Wacker酸化をへてテトラヒドロピラン部分の構造を合成した。現在ヘンオキサゾール骨格の合成を検討中である。ヘンオキサゾール類は,1991年比嘉らにより沖縄県宮古島近海より採取された海綿の一種,Polyfibrospongiasp.より単離された生理活性物質である。ヘンオキサゾールAは,herpes simplex(単純庖疹)virus typeIに対し活性、細胞毒性が認められている。ヘンオキサゾールは,テトラヒドロピラン部分,オキサゾール部分,トリエン部分に分けられるので,まず、テトラヒドロピラン部分とトリエン部分を合成し最後にオキサゾール環を構築するというルートで合成を進めた。

まず1,2-ジオール部分の選択的保護体へ誘導し、次に末端水酸基をParikh-Doering法により酸化してアルデヒドとした後、不斉アリル化反応を用いてanti-1,3-ジオール体のみを選択的に得た。次に,二級水酸基をTBS基で保護し,末端オレフィンをWacker酸化したところ,目的とするメチルケトン体を得た。現在、上のメチルケトン体からテトラヒドロピラン部分の合成を検討中である。
ガングリオシド分子種選択的な新たな自然免疫制御機構の解明と炎症性疾患への関与

本研究では、高脂肪食をKKマウスに8週間負荷し糖尿病性腎症モデルを作成した。この高脂肪食負荷KKマウスの腎臓では、グロボ系糖脂質Gb3の発現が著しく増加していた。その分子種解析を,液体クロマトグラフ-タンデム質量分析計(LC-MS/MS)を用いて行った結果、Gb3のセラミド部分のアシル鎖に飽和の極長鎖(C22, C23, C24)有する分子種が特に増加していることを見出した。この結果より,グロボ系糖脂質の病態形成への関与が示唆されることから,糖尿病性腎症の病態形成に重要な炎症反応における,グロボ系糖脂質の炎症惹起活性の有無をヒト単球やマウス骨髄由来マクロファージを用いて評価した.その結果,極長鎖グロボ系糖脂質は, Toll-like receptor 4 (TLR4)リガンド(LPS, HMGB1)の存在下, TLR4選択的なポジティブモジュレーターとして炎症促進活性を持つことが示唆された。また、彼はレプチン受容体が変異したdb/dbマウスではGb3の発現が低く、レプチンの腹腔内投与で、Gb3の発現が回復することを見いだしている。高脂肪食負荷により肥大した脂肪組織から分泌促進されたレプチンが、腎臓のグロボ系糖脂質の発現を増加させ,増加したグロボ系糖脂質が、TLR4に作用することで炎症反応を促進し,糖尿病性腎症の病態形成に関与している可能性が本研究より示唆された。これらの研究成果は、糖尿病性腎症の新たな診断法や治療薬開発につながることが期待される.我々は、メタボリックシンドローム患者の血清中GM3値が上昇すること、さらに、GM3分子種をLC-MS/MSで網羅的に調べたところ、GM3のセラミド部分のアシル鎖2位(α位)の水酸基付加体(d18:1-OH24:0やd18:1-OH24:1など)が選択的に増加し、インスリン抵抗性やメタボリックリスクファクターとの強い相関性を見出している[Veillon et al., PLosOne 2015]。1これらGM3分子種のマクロファージの活性化に対する構造活性相関を検討したところ、長鎖および不飽和アシル鎖GM3は単球・マクロファージ上のTLR4の活性化を抑制し、反対に、極長鎖GM3はTLR4の活性化を強く促進する。2メタボリックシンドローム患者の血清中およびマウス脂肪組織において、GM3のアシル鎖構造の構成比が、炎症惹起性の極長鎖G M3へと顕著に偏る。3脂肪細胞で発現するGM3分子種は、肥満で生じる炎症性サイトカイン刺激と低酸素ストレスによって大きく変化する。4さらに、ヒトTLR4発現細胞を用いた各種実験の結果、TLR4と相互作用する脂質結合性アクセサリータンパク質(MD-2、CD14など)がガングリオシドを介したTLR4活性化制御に必要であること、また、アクセサリータンパク質の種類によってアシル鎖構造に対する選択性が異なることが明らかになった。これらの知見から、肥満時のストレスがGM3の分子種を変化させ、自然免疫系細胞の活性化を促進することで、慢性炎症疾患が進行すると予想される。GM3分子種のマクロファージの活性化に対する構造活性相関を検討したところ、長鎖および不飽和アシル鎖GM3は単球・マクロファージ上のTLR4の活性化を抑制し、反対に、極長鎖GM3はTLR4の活性化を強く促進した。脂肪細胞で発現するGM3分子種は、肥満で生じる炎症性サイトカイン刺激と低酸素ストレスによって大きく変化することが明らかになった。さらに、ヒトTLR4発現細胞を用いた各種実験の結果、TLR4と相互作用する脂質結合性アクセサリータンパク質(MD-2、CD14など)がガングリオシドを介したTLR4活性化制御に必要であること、また、アクセサリータンパク質の種類によってアシル鎖構造に対する選択性が異なることが明らかになった。

これらの研究成果は、糖尿病性腎症の新たな診断法や治療薬開発につながることが期待される.我々は、極長鎖飽和アシル鎖をセラミド構造中に有するGM3分子種が、メタボリックシンドローム患者血清で増加しており、TLR4受容体の内因性リガンドとしてGM3分子種が機能することを世界に先駆けて見出した。一方、短鎖アシル鎖長または不飽和化GM3分子種は、抗炎症性GM3としてTLR4活性化を抑制することが判明した。そこで我々は、「メタボリックシンドロームなどの慢性炎症性疾患では、炎症惹起性GM3分子種の発現優位によって炎症増悪ループが形成され、自然免疫活性化、さらにはアレルギー性喘息、自己免疫疾患などの発症要因となる」というブレークスルーを目指す。また、医学部附属病院の多くの診療科(糖尿病代謝内科、呼吸器内科、耳鼻咽喉科、血液・リウマチ科、腎臓内分泌科、消化器外科、泌尿器科、総合診療科、臨床検査部)と連携し、慢性炎症状態が発症原因になっている様々な病態の患者血清中の炎症促進性GM3分子種及び炎症抑制性GM3分子種を網羅的にLC-MS/MS解析することで、新規バイオマーカーの開発を実施中である。次年度使用額73,600円は、30年度の細胞培養消耗品費として充当する。
アンテナ・フィルター体型RF-CMOS低雑音増幅器の開発

これまで行ってきた受動素子の開発技術と、CMOSプロセスによるアナログ増幅器とを一体化し、アンテナ・フィルター体型RF-CMOS低雑音増幅器を開発することを目的とする。(1)広帯域整合回路と増幅器の一体化技術の確立については、作製した整合回路とCMOS増幅器をボンディングによりオンチップ化するための設計方法を確立した。まず、電極パッドのマイクロ波的な影響を明らかにするため、試作チップ内にダミーパッドを設計し、現有するベクトルネットワークアナライザから得られるSパラメータの実部及び虚部のデータを得た。得られたデータをアドミタンス行列に変換し、寄生パラメータを差し引くことで、パッドのみの情報を得た。その結果、電極パッドとの接触部の影響については、接触インピーダンスがキャパシティブであることを明らかにした。(2)アンテナ・フィルター体型増幅器の実装試験については、オンチップ化によるマイクロ波特性の影響について測定し、その影響を考慮して、設計の再調整を行った。特に、中心周波数と使用帯域については、実用化の観点からは正確さが求められるので、中心周波数はアンテナのスロット長を調整し、帯域についてはインバータ回路の形状を調整することで実現した。また、導体の膜厚についても、設計値との誤差が確認されたので、これを考慮に入れて設計を行った。最終的にプリント基板上に3段バンドパスフィルター体型スロットアンテナを設計し、現有装置であるマスクアライナを用いてウエットエッチングプロセスにより試作した。その結果、中心周波数がほぼ一致したフィルター体型アンテナを完成した。本研究は、CMOSプロセス上で、アナログ増幅器とアンテナをフィルタ機能を持った整合回路により一体化し、アンテナ・フィルタ一体型RF-CMOS低雑音増幅器を開発することを目的とする。今年度の研究実績を以下に示す。1)アンテナ・フイルタ一体型広帯域整合回路の設計電磁界・回路シミュレータ(アジレントテクノロジ;ADS2002)により、アンテナ・フィルタ一体型広帯域インピーダンス整合回路を設計した。これにより整合条件が明らかとなった。また、得られたレイアウト結果から、従来型の整合回路に比べ小型化が可能となった。2)CMOS低雑音増幅器の設計東京大学VDECよりライセンス提供されたCAD Tool(Cadence ; icfb)及びHspiceにより、CMOS増幅器を設計した。また、現在テスト用チップを試作中であり、試作完成後マイクロ波領域での特性を評価する。本研究の目的は、CMOS低雑音増幅器(LNA)の入力部とスロットアンテナとのインピーダンス整合及び帯域設計を、分布定数線路とインバータ回路によるバンドパスフィルタを応用することにより一体化することである。平成16年度の研究成果を以下に示す。1)CMOS低雑音増幅器の設計東京大学VDECよりライセンス提供されたCAD Tool(Cadence;icfb)及びHspiceにより、CMOS増幅器を設計した。設計プロセスとして台湾のLSI FabメーカであるTSMC社の0.25μmCMOSプロセスを用いた。また、試作チップのマイクロ波領域での特性を評価した。2)広帯域整合回路の評価高温超伝導薄膜(YBCO薄膜)上に、スロットアンテナと、コプレーナ導波路を用いたフィルタ一体型広帯域整合回路を作製した。YBCO薄膜は膜厚8000オングストローム、誘電体基板として比誘電率9.6のMgO(酸化マグネシウム、基板厚0.5mm)を用いた。エア・コプレーナ・プローブと、現有するベクトル・ネットワーク・アナライザ(VNA)(HP-8722C)を用いて低温におけるフィルタ一体型アンテナ回路の高周波特性を評価した。その結果、2.45GHz及び5GHz帯において、それぞれ良好なフィルタ特性を得ることができた。なお、アンテナサイズとして、最小で4mm角までの小型化設計が可能となり、将来のアンテナのアレー化について、十分な小型化設計が可能となった。
微細形態解析による発達神経毒性メカニズムの解明

低用量の環境化学物質(ダイオキシン、ビスフェノールA、無機ヒ素など)への周産期曝露によって成熟期に高次脳機能(記憶・学習、情動、社会性等)異常が生じることがヒトや実験動物において報告されている。本研究において、曝露動物において発達期における神経細胞の微細形態(樹状突起の長さ、複雑性、スパイン密度等)の異常が生じていること、その背景には遺伝子発現異常を伴う場合があること、さらに超音波発声行動が、乳児期マウスの脳機能の新規の毒性影響指標となりうることを明らかにした。微量の化学物質への周産期曝露が後々に健康影響を引き起こすという発達毒性の解明は、放射線・化学物質影響科学における重要課題である。本研究では、高次脳機能への曝露影響が認められている化合物であるダイオキシン(TCDD)とビスフェノールA(BPA)を用いて、微細形態学的基盤に着目した曝露影響の解明を目的とした研究を行う。異なる受容体をもつこれらの化合物について、行動・形態レベルと細胞・分子レベルの間にある微細形態の変化という共通の表現型を新たな指標として提示する。化学物質に対する細胞レベルの反応から個体レベルの異常までをつなぎあわせ、正常な脳の発達が化学物質曝露により逸脱していくメカニズムを解析する。本年度の研究実績概要を項目ごとに示す。低用量曝露マウスの作成:文献調査、ならびにこれまでの我々の研究報告や行動試験等の成果をもとに曝露動物を作成した。既報のLOAELとされている曝露量と同等以下であり、母体や仔動物の一般観察所見では何ら影響が確認できない低用量曝露を原則として用いた。さらにマウスの観察所見や行動データについても収集した。遺伝子改変マウスを用いた微細形態の発達時系列解析:神経細胞にて蛍光タンパク質を発現するマウスを用い、微細形態の発達時系列解析を行った。TCDDあるいはBPAの低用量曝露により、ライフステージの比較的早い時期から微細形態変化が生じているという予備知見に関して、本年度例数を増やして検証することができた。化学物質受容体と関連分子の発現解析:実際に曝露を受けている発達期(胎仔期・授乳期)の脳を用い、化学物質に反応して発現変動する遺伝子群の発現解析と探索を行った。網羅的発現解析とともに、化学物質の受容体遺伝子を出発点として、その関連遺伝子や下流で変動する分子群についての検討行った。本研究では、高次脳機能への曝露影響が認められている化合物であるダイオキシン(TCDD)、ビスフェノールA(BPA)などを用いて、微細形態学的基盤に着目した曝露影響の解明を目的とした研究を行う。微細形態変化とダイオキシン受容体シグナルとの関連:TCDD毒性に不可欠なダイオキシン受容体(AhR)の微細形態変化への関連を検討した。発生・発達期にAhRシグナルを活性化させた神経細胞の微細形態を解析することで、ダイオキシン曝露が微細形態変化を引き起こす毒性メカニズム解明の切り口になると考えられる。微細形態の解析手法の拡充:細胞膜局在シグナルを付加した膜結合型GFPについて検討した。その結果、水溶性GFPと比べて微細形態がより詳細に可視化でき、フィロポディア様の突起が観察された。微細形態変化をより正確に捉えるための重要な手法を獲得できた。胎児期における曝露影響の解析:TCDD曝露による微細形態変化の原因を探るため、胎仔の時点での神経細胞に顕れる変化について調べた。細胞移動や突起形態などを指標とすることで、化学物質曝露と生後発達期における微細形態変化との間を埋め、毒性メカニズムを理解する上で重要な知見となる。微量の化学物質への周産期曝露に伴う発達神経毒性の解明は、放射線・化学物質影響科学における重要課題である。本研究では、ダイオキシン(TCDD)、ビスフェノールA(BPA)への曝露により個体で観察される発達神経毒性を、神経細胞の微細形態学的変化の観点から解明することを目的としている。1.受容体ノックイン(KI)実験:Cre/Loxシステムを応用した子宮内電気穿孔(IUE)法を用いて神経細胞を「まばら」に可視化する方法を確立し、恒常活性型ダイオキシン受容体(CA-AhR)を海馬、大脳皮質の神経細胞に発現させ微細形態に及ぼす影響を調べた。いずれの脳領域においても樹状突起の形態変化ならびに細胞移動の遅滞が観察された。複数の脳領域においてAhR下流シグナルの活性化が微細形態に影響を与えることが明らかとなった。同時に、微細形態変化の解析においてIUR法が極めて有用であることが判明した。2.神経ネットワーク解析:IUE法により大脳皮質の神経細胞に蛍光タンパク質を発現させることで、反対側の大脳皮質へ投射する軸索線維を可視化する実験系を構築した。

CA-AhRが軸索投射に及ぼす影響を調べたところ、投射の様子に顕著な変化は観察されず、CA-AhRは樹状突起選択的に影響を及ぼすことが分かった。3.新規試験を用いた微細形態変化が疑われる脳領域の探索:周産期TCDD曝露した母動物から生まれた仔が成熟した後に、新規行動試験(対連合学習課題)を実施したところ、学習体系依存性の記憶・学習機能が有意に障害をうけることが明らかとなった。また独自に開発したLMD-qPCR法により、社会環境隔離マウスによる脳領域ごとの遺伝子の発現量変化を明らかにした。これらの行動試験結果は、微細形態変化が疑われる脳領域を絞り込む上で重要な知見となる。今年度は、既に設置済みの設備を用いることで円滑に研究を進めることができた。CA-AhRを用いた実験より、AhRシグナルの活性化が微細形態および細胞移動の変化を引き起こすことが明らかとなった。これらの変化は複数の脳領域・細胞で観察されたことから、AhRシグナルの活性化と微細形態変化との密接な関連を示唆する知見を得ることができた。現在、これらの結果について論文の投稿・執筆を進めている。微量の化学物質への周産期曝露に伴う発達神経毒性の解明は、放射線・化学物質影響科学における重要課題である。本研究では、ダイオキシン(TCDD)、ビスフェノールA(BPA)への曝露により個体で観察される発達神経毒性を、神経細胞の微細形態学的変化の観点から解明することを目的としている。本年度の研究実績概要を項目ごとに示す。1)微細形態解析実験系の構築:より精緻な微細形態解析を可能にするため、本年度に共焦点顕微鏡を購入した。蛍光タンパク質を発現した神経細胞を三次元再構築する実験系を確立し、樹状突起やスパイン構造を定量的に解析できるようになった。その後、神経細胞における恒常活性型ダイオキシン受容体(CA-AhR)の発現解析の実験条件の検討を行った。2)神経細胞におけるAhRの発現解析:ダイオキシンと結合して活性化したAhRが毒性影響を引き起こすシグナルを誘導すると考えられている。本年度、我々はマウス脳においてAhRを検出する免疫組織化学プロトコールを開発し、神経細胞においてAhRの発現を確認できた。これにより、化学物質曝露に応答したAhRタンパク質の発現の時空間的分布率の解析を開始した。3)新生仔期マウスを対象とした行動試験系の構築:母仔間コミュニケーションの手段と考えられている仔マウスが発する超音波を定量的に測定する実験系を構築した。低温刺激により仔マウスの超音波発声は惹起され、生後1週間ほど続くことが判明した。神経細胞の微細形態異常と生後初期の行動変化との関係を実験的に検討することが可能となった。本研究は研究代表者ならびに研究分担者の研究室スタッフ(特任助教1名、技術補佐員3名)と学生2名が中心となって行った。相互の連絡も密であり、円滑な研究体制のもとに研究を遂行した。ダイオキシン曝露およびCA-AhRが神経細胞の微細形態に及ぼす影響、ならびにBPAやヒ素の曝露影響について論文を発表しており、これまでの研究成果を着実に論文としてまとめ上げることができた。平成27年度はCA-AhRを用いた実験により毒性メカニズムに迫る知見を数多く得たことから、これらの結果について論文の投稿・執筆を進めている。
骨量獲得に関する成長ホルモン系・性腺ホルモン系の役割についての臨床的・基礎的研究

骨量獲得過程に及ぼす成長ホルモン・性腺ホルモンの影響を検討する目的で、研究を行った。当該年度は性腺ホルモン特に女性ホルモンの小児期の骨に対する影響を検討した。対象・方法:高感度エストラジオール測定法により、小児期の低濃度の血中濃度の測定可能性と、骨密度との関連を検討した。正常対照63名、低身長児、女23名3.915.2歳、男73名2.315.7歳を対象に、小児期の低濃度域における血中濃度測定の信頼度を検討し、腰椎骨密度との関連を検討した。結果:低濃度域の測定系の精度は小児期の血清を使用した検討で、測定内変動、測定間変動ともに従来の測定感度10pg/ml以下の濃度においても10%以下であった。添加回収、希釈試験も良好な結果を得、1.4pg/ml以上で十分な精度を持って可能であると考えられた。年齢に伴う変動は、乳児期に高値、幼児期から学童期にかけて低値で思春期の開始とともに増加する年齢に伴う変化を認め、男児においても低濃度(1.412.7pg/ml)での年齢に伴う変化が存在することを確認した。成長障害児における検討では、男女とも腰椎の骨密度は体積あたりの骨密度値、従来の面積あたりの骨密度値のZscoreともGRF試験の成長ホルモン頂値、エストラジオール濃度と正の相関を認めた。男性においてもtestosterone濃度とは明らかな関係は認めなかった。成長ホルモン分泌不全の有無により、2群に分けて検討を行ったがどちらの群でもエストラジオールと骨密度の関係は保たれており、成長ホルモンの分泌状態と関係なく、骨の成長過程において骨量の獲得に、エストラジオールが関与していると考えられた。小児期の骨量獲得における成長ホルモンの影響を検討するために、小児期の骨量獲得過程を明らかにし、成長ホルモン分泌不全児における骨量と、成長ホルモンの骨量獲得に及ぼす影響を検討した。84名の成長ホルモン分泌不全患児を対象に研究を行った。日本人正常対照より求めた年齢別基準値をもとに、患児の第2-4腰椎骨密度を評価し、成長ホルモン治療中の骨密度を縦断的に評価した。成長ホルモンは0.5IU/kg/weekの投与量で週5-7回皮下注にて投与し、3年間の投与中の腰椎骨密度の変化を検討した。治療前のZscoreは女児で1.52±0.96SD、男児で-0.87±0.80SDであり、正常対照より低値であった。体積補正した骨密度を計算すると正常との差はわずかとなったが、低値である傾向は変わらなかった(女性-0.49±1.4SD、男性-0.37±1.47SD).女児においては、腰椎骨密度のZscoreは成長ホルモン投与開始1年目から増加し、3年間続いて増加した(開始時-1.52±0.97、1年目-1.37±0.94SD、2年目-1.35±1.07SD、3年目-1.27±1.21)男児においては1年目における増加が認められず2年目以降直線的に増加がみられた(開始時-0.87±0.80SD,1年目-0.91±0.79SD,2年目-0.84±0.90SD,3年目-0.50±0.81SD).各パラメータの分析より、成長ホルモンは骨の大きさを持続的に増加させる一方、骨量の増加は男女とも1年目では著明ではなく、2年目以降に明かとなってくることが明かとなった。

以上より、成長ホルモンは成長段階にある骨量獲得に重要であり、骨の大きさを増加させる作用とともに、骨密度を増加させる作用を有していることが明らかとなり、更に、両作用の間に時間的なずれが存在することが明らかとなった。骨量獲得過程に及ぼす成長ホルモン・性腺ホルモンの影響を検討する目的で、研究を行った。対象・方法:性腺機能機能不全を有さない部分成長ホルモン分泌不全症患児185名(3.515.7歳)について、腰椎骨密度をDual energy Xray absorptiometryにより、縦断的に検討した。高感度測定法による血中エストラジオールに関する検討には、正常対照63名、低身長児、女23名3.915.2歳、男73名2.315.7歳を対象に、小児期の低濃度域における血中濃度測定の信頼度を検討し、腰椎骨密度との関連を検討した。結果:部分型成長ホルモン分泌不全において、成長ホルモン投与により、腰椎の面積および骨塩量の増加が見られた。腰椎面積の増加が投与開始1、2、3年目と年間15%の増加を見たが一方、骨塩量の増加は1年目(男20.5%女17.5%)に比し2年目(男28%女33%)、3年目(男36%女34%)と漸増して認められ、その結果投与3年目に男女とも有意の骨密度の増加を認めた。小児期のエストラジオールの測定は1.4pg/ml以上で十分な精度を持って可能であり、乳児期に高値、幼児期から学童期にかけて低値で思春期の開始とともに増加する年齢に伴う変化を認め、男児においても低濃度(1.412.7pg/ml)での年齢に伴う変化が存在することを確認した。成長障害児における検討では男女とも腰椎の骨密度はGRF試験の成長ホルモン頂値、エストラジオール濃度(女r=0.584、男r=0.261(P<0.05))と正の相関を認めた。男性においてtestosterone濃度とは明らかな関係はなかった。結論:骨の成長過程において骨量の獲得に、成長ホルモンおよびエストラジオールの両者の関与が男女とも明らかになった。
自己免疫性リンパ球増殖性多臓器疾患―新しい疾患単位の可能性

日本全国の10施設より合計85症例の症例登録あり。そのうち64例をIgG4+MOLPS(IgG4関連多臓器リンパ増殖症候群)と診断。それらと典型的シェーグレン症候群(SjS)との比較検討を行った。1、自覚症状としての口腔乾燥、眼乾燥、関節痛の頻度は、IgG4+MOLPSでは有意にSjSより低率であった。また合併症としてのアレルギー性鼻炎、自己免疫性膵炎は有意にIgG4+MOLPSで高率であった。3、IgG4+MOLPSの病変組織ではリンパ球浸潤、形質細胞浸潤が著明で、IgG4陽性形質細胞が増加(IgG4+/IgG>50%)しており、更に線維化や硬化像が特徴的であり、一方SjSではIgG4陽性細胞は殆ど見られなかった。5、以上より、臨床像や傷害臓器は類似しているものの、IgG4+MOLPSは典型的SjSとは異なった疾患群である事が判った。ここまでのデータに関して、既に英文論文を執筆し投稿中である。以上のデータをもとに、2007年9月21日、22日に京都にて開催された第16回日本シェーグレン症候群研究会において、IgG4関連Mikulicz病の診断基準(案)を提案し、2008年の同会で承認を得る予定となっている。更に、自己免疫性膵炎を中心とした消化器病グループとも共同で、本邦発の新たな疾患概念としてのIgG4関連疾患全体の診断基準および治療指針を確立していく予定となっている日本全国の10施設より合計85症例の症例登録あり。更に、自己免疫性膵炎を中心とした消化器病グループとも共同で、本邦発の新たな疾患概念としてのIgG4関連疾患全体の診断基準および治療指針を確立していく予定となっているAMOLPS/Mikulicz病研究会のホームページを作成し、全国の施設より症例登録を行った。2006年3月の時点で43例のAMOLPS(自己免疫性リンパ増殖性多臓器疾患)の症例登録が行われた。このまとめを、第50回日本リウマチ学会(2006年4月23日26日、長崎)にて以下の内容にて発表予定である。「43例のAMOLPS(自己免疫性リンパ増殖性多臓器疾患)の臨床的解析」我々は、従来のMikulicz病(MD)がSjogren症候群(SS)の亜群/IgG4関連自己免疫疾患/自己免疫性膵炎(AIP)と関連性があることに着目し、これらを一括してAMOLPS(自己免疫性リンパ増殖性多臓器疾患)として提唱している。AMOLPS検討会参加施設より報告された43症例を、type1(SSの診断基準を満たすMD;15例)、type2(SSの診断基準を満たさないMD;24例)、type3(SSにもMDにも相当しないIgG4関連疾患;4例)の3群に分け、典型的SS(抗SS-A/SS-B抗体共に陽性のSS)との比較を行った。血清IgG4の上昇は全てのタイプのAMOLPSに認めたが、典型的SSでは稀であった。AMOLPSの合併症としてはAIP,間質性腎炎、間質性肺炎、アレルギー性鼻炎が多かった。またモノクローナルオリゴクローナルなB細胞増殖がAMOLPSに認められた。2006.9.29.(金)日本シェーグレン症候群研究会において病理組織検討会。シェーグレン症候群研究会会員にIgG4関連疾患を啓蒙。その後も症例登録を継続し、日本全国の10施設より76症例のデータが蓄積された。概要を列挙すると;1,IgG4+AMOLPSにおいては自己免疫性膵炎、間質性腎炎、間質性肺炎、アレルギー性鼻炎、気管支喘息の合併例が多く認められた。2,IgG4+AMOLPSの殆どが抗SS-A抗体および抗SSB抗体が陰性。RFおよびANA陽性率も各々38%,28%とシェーグレン症候群(SS)に比べ低率。3,IgG4+AMOLPS群では血清IgE,IgG2およびIgG4が有意にSSより高値。4,IgG4+AMOLPSの組織ではIgG4陽性形質細胞浸潤が認められたが、典型的SSでは認められなかった。

5,IgG4+AMOLPSでは、ステロイド投与が著効する例が多い。しかし、ステロイド漸減により病態の再燃を認める例が多かった。ステロイド治療群は、ほぼ全例で少量の維持投与が行われていた。一方、無治療での自然寛解例、投与不要例も認められ、これは涙腺病変のみの眼科の症例で多かった。再燃例の免疫抑制剤の併用に関しては、まだ投与経験例が少なく、更に症例を蓄積し検討する必要がある。結果をまとめ、欧文論文を現在執筆中である。日本全国の10施設より合計85症例の症例登録あり。そのうち64例をIgG4+MOLPS(IgG4関連多臓器リンパ増殖症候群)と診断。それらと典型的シェーグレン症候群(SjS)との比較検討を行った。1、自覚症状としての口腔乾燥、眼乾燥、関節痛の頻度は、IgG4+MOLPSでは有意にSjSより低率であった。また合併症としてのアレルギー性鼻炎、自己免疫性膵炎は有意にIgG4+MOLPSで高率であった。3、IgG4+MOLPSの病変組織ではリンパ球浸潤、形質細胞浸潤が著明で、IgG4陽性形質細胞が増加(IgG4+/IgG>50%)しており、更に線維化や硬化像が特徴的であり、一方SjSではIgG4陽性細胞は殆ど見られなかった。5、以上より、臨床像や傷害臓器は類似しているものの、IgG4+MOLPSは典型的SjSとは異なった疾患群である事が判った。ここまでのデータに関して、既に英文論文を執筆し投稿中である。以上のデータをもとに、2007年9月21日、22日に京都にて開催された第16回日本シェーグレン症候群研究会において、IgG4関連Mikulicz病の診断基準(案)を提案し、2008年の同会で承認を得る予定となっている。更に、自己免疫性膵炎を中心とした消化器病グループとも共同で、本邦発の新たな疾患概念としてのIgG4関連疾患全体の診断基準および治療指針を確立していく予定となっている。
イヌの神経軸索ジストロフィーの原因遺伝子探索とヒト疾患モデルとしての応用

本研究は、パピヨン犬の神経軸索ジストロフィー(NAD)の原因遺伝子を明らかにすることを目的として実施した。まず、次世代型シークエンサーを用いた全エキソーム解析法により、PLA2G6 c.1516G>A変異を候補変異として同定した。次に、TaqMan genotypingにより候補変異の浸透度を大規模にスクリーニング調査したが、本研究実施期間中にキャリア個体を摘発することはできなかった。また、NAD犬の神経組織にはLC3、p62、ATG5、ATG16L、Beclinなど、オートファジーに関与する様々なタンパク質が病変部のスフェロイドに蓄積していることが判明した。全エキソーム解析法によりパピヨン犬に散発的に発生する神経軸索ジストロフィー(NAD)の原因遺伝子を同定した。本研究では(A)多症例のパピヨン犬において変異の大規模スクリーニング検査を行い、キャリア犬を摘発すると同時に、(B)同変異が疾患の病態発生に与える影響について調査する。平成26年度の研究成果を以下に示す。(A)多症例における変異のスクリーニング検査では、主に未発症のパピヨン犬のDNAサンプルの収集にあたり、同定された変異のジェノタイピングを行った。サンプル収集については麻布大学と鹿児島大学の協力もあり、短期間のうちに想定以上のDNAサンプル数を収集することが出来た。ジェノタイピング検査では、収集した未発症の個体はいずれも野性型のアリルを有することが判明し、全エキソーム解析法によって同定された変異アリルの浸透度は想定以上に低いことが示唆された。以上の研究成果については、次世代型シークエンサーを用いた全エキソーム解析法に関する研究と併せて本年度の獣医内科学アカデミーにて公表した。(B)遺伝子の機能解析については、NADの主病変であるスフェロイドにおいて、同定した遺伝子のタンパク質が局在することを免疫組織化学法により明らかにした。またNAD症例では、スフェロイドにオートファジー関連タンパク質LC3も局在することが判明した。同蛋白質は、神経細胞体における発現が正常対照群と比較して有意に減弱しており、本疾患において神経細胞で恒常的に機能するオートファジーが障害されている可能性が示唆された。以上の研究成果については本年度の神経病理学会にて公表した。今年度中に正常脳組織・全身組織における候補遺伝子のタンパクの発現分布や、アイソフォーム、細胞内局在などについても検討する予定だったが、現状は健常ビーグル犬から脳および全身臓器より組織サンプルを収集するまでにとどまっている。全エキソーム解析法により、パピヨン犬に散発的に発生する神経軸索ジストロフィー(NAD)の原因遺伝子を特定した。本研究では、(A)多症例のパピヨン犬において変異の大規模スクリーニング検査を行い、キャリア犬を摘発すると同時に、(B)同変異が疾患の病態発生に与える影響について調査する。平成27年度の研究成果を以下に示す。平成26年度に引き続き、平成27年度では未発症パピヨン犬のDNAサンプルを収集し、同定された変異のジェノタイピングを行った。ジェノタイピング検査では、収集した未発症の個体はいずれも野性型のアリルを有することが分かり、キャリア個体を摘発することはできなかった。また、NADはパピヨン・チワワ交雑種においても発生が見られたことから、チワワ犬についてもDNAサンプルを収集し同様の検索を行ったが、キャリアを摘発することはできなかった。(A)多症例における変異のスクリーニングについては前年度同様多くのサンプル収集を行うことができ、順調に進展している。しかし、依然キャリア個体を摘発できておらず、NADモデル犬の作出への道のりはまだ遠い。また(B)変異が疾患の病態発生に与える影響については、マイトファジーについて検討する予定であったが、検討に必要な抗体が見つからず進展していない。全エキソーム解析法により、国内のパピヨン犬に散発的に発生する神経軸索ジストロフィー(NAD)の原因遺伝子を特定した。平成28年度の研究結果を以下に示す。平成28年度は、前年度に引き続き未発症パピヨン犬のDNAサンプルを収集し、同定された変異のジェノタイピングを行った。ジェノタイピング検査では、収集した未発症の個体はいずれも野性型のアリルを有しており、今回同定された変異の浸透度は極端に低いことが示唆された。また、前年度および前々年度の反省を踏まえ、パピヨン犬、チワワ犬以外の犬種についても大規模に変異を調査してみたが、いずれの犬種からも変異個体を摘発することはできなかった。以上の成果については学術誌Plos oneに公表した。

(A)多症例における変異のスクリーニング検査については、他大学の研究協力のおかげもあり当初の予定より非常に多くのサンプル収集を行うことができ、非常に順調に進展していると思われる。一方、(B)遺伝子変異が本疾患の病態発生に与える影響については、今年度中に同定した遺伝子のタンパク発現分布を正常対照犬および疾患犬で調査・比較する予定だったが、組織サンプルの収集に時間がかかってしまい、まだ遂行できていない。しかしながら、NAD症例においてオートファジー関連タンパク質の発現分布の異常を確認することができ、同疾患の病理発生の解明に寄与することができた。以上より、平成26年度の研究計画については、一部の研究内容に若干の進行の遅れがみられるものの、全体としては順調に進捗していると判断する。(A)多症例における変異のスクリーニングについては、上述の通りパピヨン犬において変異の浸透度が非常に低いことが示唆され、まだキャリア個体を摘発できていない。次年度も引き続きゲノムサンプルを収集するが、パピヨン犬を繁殖しているブリーダーとも交渉し、積極的に情報を収集・解析する予定である。(B)については、1原因遺伝子がミトコンドリアで機能していること、2NAD症例においてオートファジー関連タンパク質の分布異常が確認されたことを踏まえ、マイトファジー関連タンパク質について精査する。獣医学(A)多症例における変異のスクリーニング調査では、上述の通りパピヨン犬において候補変異の浸透度が非常に低いことが示唆され、キャリア個体をまだ摘発できていない。よって次年度以降も引き続きゲノムサンプルを収集し、ジェノタイピング検査を実施する必要があると考えている。サンプルの収集については、大学病院に来院した動物を中心に実施する予定だが、パピヨン犬を繁殖しているブリーダーとも交渉し積極的に収集・解析しキャリアの淘汰を目指す。(B)遺伝子変異が病態発生に与える影響については、次年度中にタンパク質の発現分布を特定するとともに、可能であれば脳に発現する遺伝子のアイソフォームも同定する。また、次年度以降はミトコンドリア関連タンパク質の分布について重点的に調査する予定である。症例犬のサンプルを用い遺伝子の異常とミトコンドリアの異常、およびオートファジーの異常の3点を結びつける因子について病理学的に検索する。なお、病態解析には経時的変化についても精査する必要があるため、NADモデルマウスの導入を検討している。
列車群運行総合評価シミュレータ

従来の成果を受けて、最終年度である本年度の成果を中心に、全体の報告をする。列車群運行総合評価シミュレータの内容は、内容的には、饋電回路の電力、列車群の運行のシミュレーションとこれらを評価する部分とからなる。このうち饋電回路電力シミュレーションの部分については、他の類似のものに比べて精度が格段に高く、十分に有用でかつ汎用的なものにすることができ、既に新線計画に用いられている。列車群運行シミュレーションについても、軌道回路と信号システムを詳細に取り入れたシミュレーションに近い精度を、簡易で実用的な範囲で実現し得たと考えている。これらと旅客需要データとから詳細な乗降人員・乗車人員を求めるシミュレーションも完成し、トレインアワ-や乗客の待ち時間・乗車時間等の各種所要時間、消費電力量、ピーク電力、混雑度などの基本的な評価量を全て算出が可能になった。このような多次元の評価の他、評価計数を入力すれば、金額等の単一の総合評価量も得られ、総合評価シミュレータが完成したことになる。シミュレータは広く使用されなければ価値が発揮できないから、汎用化とマニュアルの整備も重要である。このシミュレータはRailway Total System Simulator "RTSS"と名付けられ、マニュアルの整備を進めている。現時点では、饋電回路関係が完成しており、これだけでも使用可能な状態になっている。内容の性格と分量の関係上、学会発表には適さないから、少数部を印刷配布するほか、電子・磁気的媒体を利用した公表および利用促進を検討している。今後の課題としては、内容的に予想よりもはるかに複雑であることが判明したために、今回組み込むことを断念した。最適停車駅決定問題をさらに検討することと、使い勝手を改善してより広く使って貰うための改善が残されている。「研究計画・方法」の記載と対応させて記述する。(1)車両の性能と駅間所要時間が与えられた場合の省エネルギー運転法に関しては、直線平坦線区の一般論として、最大加速・定速・惰行・最大減速のパターンが得られ、このうち定速に関しては、最高速度、途中の速度、このモードが存在しない場合の3ケースがあることが明らかになった。(2)車両の性能が与えられた場合の駅間所要時間と消費エネルギーとの関係は駅間所要時間を精度高く求める手法が確立でき、この結果十分信頼のおけるシミュレーションが完成した。(3)回生車両の回生失効率と饋電回路の諸定数(無負荷電圧、電圧変動率、インピーダンス、回生絞込特性)との関係については、(2)と併せたシミュレーションプログラムが完成した。(4)省エネルギーと設備利用率向上のための変電所・列車の最適制御方法については、直流については、(2)(3)と併せて完成し、交流については基本計算プログラムがほぼ完成し、現在デバッギングを行っている。既に一部は実際の路線計画にも反映している。(5)与えられた信号システムのもとでの最小運転時隔と停車駅間平均速度との関係の組み込みについての検討も進めている。(6)(7)列車ダイヤと旅客流動表(OD表)とが与えられた場合の乗客からみた基本評価(平均損失時間と実効混雑度)と最適停車パターン作成ではプログラムの書換と汎用化を進め、選択停車型ダイヤでの乗換回数・駅の混雑を含めた新たな知見が得られた。

列車群運行シミュレーションについても、軌道回路と信号システムを詳細に取り入れたシミュレーションに近い精度を、簡易で実用的な範囲で実現し得たと考えている。これらと旅客需要データとから詳細な乗降人員・乗車人員を求めるシミュレーションも完成し、トレインアワ-や乗客の待ち時間・乗車時間等の各種所要時間、消費電力量、ピーク電力、混雑度などの基本的な評価量は全て算出が可能になった。このような多次元の評価の他、評価計数を入力すれば、金額等の単一の総合評価量も得られ、総合評価シミュレータが完成したことになる。シミュレータは広く使用されなければ価値が発揮できないから、汎用化とマニュアルの整備も重要である。このシミュレータはRailway Total System Simulator “RTSS"と名付けられ、マニュアルの整備を進めている。現時点では、饋電回路関係が完成しており、これだけでも使用可能な状態になっている。内容の性格と分量の関係上、学会発表には適さないから、少数部を印刷配布するほか、電子・磁気的媒体を利用した公表および利用促進を検討している。今後の課題としては、内容的に予想よりもはるかに複雑であることが判明したために、今回組み込むことを断念した、最適停車駅決定問題をさらに検討することと、使い勝手を改善してより広く使って貰うための改善が残されている。
うつ病の症状の多様性に着目した認知行動療法の治療効果と作用機序の解明

本研究では、質問紙調査、プログラム評価研究を用いて、認知行動療法がどのように抑うつ症状の改善をもたらすかについての一連の研究に取り組んだ。まず、128名の大学生を対象に、認知的要因(非機能的態度:抑うつを引き起こすネガティブな考え方)と行動的要因(報酬知覚:快事象を経験する程度)が抑うつ気分や興味・喜びの喪失とどのような関係性を示すのかを検討した。その結果、報酬知覚が少ない大学生ほど、抑うつ気分や興味・喜びの喪失が強いこと、非機能的態度は報酬知覚が少ない場合にのみ抑うつ気分を強めることが明らかになった。次に、102名のうつ病患者を対象に、報酬知覚の少なさが抑うつ気分や興味・喜びの喪失を強めるという関係性に対して、目標に向かう活動がどのように影響しているのかを検討した。その結果、目標に向かう活動が報酬知覚を良好にし、興味・喜びの喪失を緩和させていることが明らかとなった。上述の研究成果に基づき、うつ病の認知行動療法の構成要素の中でも、行動的要因に着目した方法である行動活性化による抑うつ症状に対する作用機序を明らかにするために、4セッションで実施できる集団行動活性化を開発した。55名のうつ病患者に行動活性化を実施し、抑うつ症状(抑うつ気分、興味・喜びの喪失)、行動的要因(目標に向かう活動、報酬知覚)を実施前後で測定した。包括基準に合致した27名を対象とした分析の結果、各変数が実施後に改善し、興味・喜びの喪失の改善に対して目標に向かう活動や報酬知覚の改善の程度が影響していた。したがって、認知行動療法の構成要素の中でも、行動活性化は、興味・喜びの喪失に対して有効な技法であり、その背景理論に基づく作用機序を経ることが科学的に初めて実証された。今後、うつ病の症状の中でも、興味・喜びの喪失の改善を標的とした場合に、行動活性化を適応できるという点を明らかにできたことが意義深い。29年度が最終年度であるため、記入しない。本年度は、大学生およびうつ病患者を対象とした質問紙調査を継続的に実施した。次に、102名のうつ病患者を対象に、報酬知覚の少なさが抑うつ気分や興味・喜びの喪失を強めるという関係性に対して、目標に向かう活動がどのように影響しているのかを質問紙調査及び半構造化面接を用いて検討した。その結果、目標に向かう活動が報酬知覚を良好にし、興味・喜びの喪失を緩和していることが明らかとなった。2つの研究成果から、抑うつ気分と興味・喜びの喪失の維持には報酬知覚の少なさが影響していること、そして報酬知覚には目標に向かう活動が影響していることが示された。したがって、認知行動療法の進展過程を明らかにする上で、まず、行動的技法や行動的要因に着目し、抑うつ症状の改善過程を明らかにする必要があると考えられた。上述の研究成果に基づき,うつ病の認知行動療法の治療構成要素の中でも,特に行動的技法に特化した方法である行動活性化による抑うつ症状に対する作用機序を明らかにするために,まず,集団行動活性化プログラムを整備した。医師,心理士,精神保健福祉士,研究員のチームを構成し,4セッションで実施できる集団行動活性化プログラムを開発した。現在までに,北海道内の3つの医療機関の協力のもと,うつ病患者25名がプログラムを完遂し、プログラム前後での質問紙の測定が終了している。本年度内に、医療機関に通院中のうつ病に罹患する協力者に対する全調査データの取得が終了した。また、半構造化面接と医師の診断によってうつ病の罹患の有無を判断したために、研究を遂行する上で適切な協力者に対して調査を実施することが出来た。また、大学生を対象にした研究データは論文に受理されており、うつ病患者を対象にした研究データは国内外の学会で発表され、次年度の論文投稿への準備も最終調整の段階に入っている。また、次年度に予定していた行動活性化プログラムの実施についても、予定通り今年度中に研究マニュアルが整備され、すでに連携する医療機関でプログラムが実施されている。したがって、研究は概ね順調に進展していると判断される。上述の研究成果に基づき、うつ病の認知行動療法の構成要素の中でも、行動的要因に着目した方法である行動

活性化による抑うつ症状に対する作用機序を明らかにするために、4セッションで実施できる集団行動活性化を開発した。55名のうつ病患者に行動活性化を実施し、抑うつ症状(抑うつ気分、興味・喜びの喪失)、行動的要因(目標に向かう活動、報酬知覚)を実施前後で測定した。包括基準に合致した27名を対象とした分析の結果、各変数が実施後に改善し、興味・喜びの喪失の改善に対して目標に向かう活動や報酬知覚の改善の程度が影響していた。したがって、認知行動療法の構成要素の中でも、行動活性化は、興味・喜びの喪失に対して有効な技法であり、その背景理論に基づく作用機序を経ることが科学的に初めて実証された。今後、うつ病の症状の中でも、興味・喜びの喪失の改善を標的とした場合に、行動活性化を適応できるという点を明らかにできたことが意義深い。うつ病患者を対象にした調査研究の成果は、すでに英語論文としての投稿の準備が終わり、現在投稿中の段階である。行動活性化プログラムの実施については、研究マニュアルが整備され、すでに連携する医療機関でプログラムが実施されていることから、継続的に実施する。認知的技法に関する研究についても、連携する医療機関との打ち合わせ後、研究マニュアルを整備し、随時実施予定である。29年度が最終年度であるため、記入しない。