hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
医療及び産業応用を目的とした大麻新品種の遺伝子工学的手法による作出

本年度は昨年度に引き続き、アグロバクテリウム法による大麻への遺伝子導入システムの確立を検討した。まず大麻成分生合成酵素であるTHCA synthase及びOLA synthaseのセンス及びアンチセンス遺伝子を有するアグロバクテリウムを大麻幼植物および培養細胞に感染させ、各種ホルモン添加によりカルスあるいは不定胚の形成を検討した。この結果、不定胚は得られなかったものの組み換えカルスを安定的に得る方法を確立した。しかしながら得られた組み換えカルスの成長速度が極めて遅く、多くがサブカルチャー中に枯死したため組み換え体を植物体として得るには至らなかった。そこで新たな方法として、細胞培養を必要としない形質転換法として近年注目を集めているFloral Dip法について検討を行った。材料として本学薬用植物園で栽培した開花時期の大麻雌株を用い、その地上部を上記アグロバクテリウムの培養液に数秒間浸すことにより感染させ、次いで、グロースチャンバー中で短日処理を行うことにより種子の成熟を検討した。しかしながら、アグロバクテリウム処理した植物体はダメージが大きく、種子を成熟させるに至らないことが判明した。Floral Dip法を行う際に、植物体をSilwet L-77などの薬剤で処理することで損傷を免れた例が報告されていることから、現在それらを含め、Floral Dip法の各種条件検討を行っており、今後、遺伝子導入を確認した種子について植物の栽培を行い、植物形態やカンナビノイド含量の変化について検討する計画である。本研究は遺伝子工学による組み換え大麻の作出とカンナビノイド含量のコントロールを目的としたが、本年度までにこれを達成するには至らなかった。しかしながら、本研究では細胞レベルで大麻を形質転換する方法の確立に成功しており、これは組み換え大麻作出に向けた重要な成果であると考えられる。1.発現ベクターの検討本研究では、まず始めに生合成酵素遺伝子の発現に適したベクターの構築のため、各種のプロモーターを有するベクターにTHCA synthase cDNAを組み込み、これをアグロバクテリウム法によりモデル植物のタバコに導入することでTHCA synthaseの発現を検討した。得られた組み換えタバコ培養細胞についてTHCA synthaseの活性を測定した結果、エンハンサー領域を二重にした改良型プロモーターや、翻訳効率を高めるタバコモザイクウイルスΩ配列を組み込んだプロモーターを有するものに比べ、未修飾の35Sプロモーターを有するpBl121ベクターの方が高い活性を与えることが判明した。そこで、発現ベクターとしてpBl121を選択し、THCA synthase及びOLA synthaseのcDNAをセンス、アンチセンスに組み込んだ発現ベクターを構築し、これらをアグロバクテリウムに導入した。2.大麻への遺伝子導入次に調製した組み換え用アグロバクテリウムの大麻リーフディスクへの感染を検討した。感染後のリーフディスクについて、抗生物質を含むカルス誘導培地で培養を行ったが、いかなる条件を用いても組み換えカルスの生成を確認するには至らなかった。この原因として葉部に含まれるカンナビノイドの抗菌作用によりアグロバクテリウムが死滅し、感染及び遺伝子導入が不十分となっている可能性が考えられた。このため、カンナビノイドをほとんど含まない未熟植物茎部への感染とカルス誘導を現在検討中である。大麻への遺伝子導入法の確立本年度は昨年度に引き続き、アグロバクテリウム法による大麻への遺伝子導入システムの確立を検討した。大麻成分生合成酵素であるTHCA synthase及びOLA synthaseのセンス及びアンチセンス遺伝子を有するアグロバクテリウムを大麻幼植物の茎部、子葉などに感染させ、抗生物質及びカルス化を誘導する植物ホルモン(オーキシン)を含むセレクション培地での培養を行ったところ、組換え体と考えられるカルスが数個誘導された。しかしながら、本カルスを常法により継代培養したところ、成長速度が極めて遅く、多くが枯死することが判明し、組み換え体を植物体として得るには至らなかった。大麻カルスは成長、分化の速度が遅いことが知られているため、カルス化を経由した組み換え体の作出は困難であるものと推察された。そこで組み換え細胞から成長、分化の能力に富んだ不定胚を誘導し、これを経由して分化した組み換え体の作出を検討することとした。材料として、無菌幼植物の子葉及び無菌の細胞を液体培地中で培養したセルサスペンジョンカルチャーを用い、これらを上記アグロバクテリウムの培養液に浸すことにより感染させ、次いで抗生物質及び不定胚形成に適した植物ホルモン(ベンジルアデニンなど)を含む、セレクション培地に置床した。現在、セレクション培地上での継代培養を行っており、今後、不定胚を得た後に植物体への再生を行い、導入遺伝子の確認の後、植物形態やカンナビノイド含量の変化について検討する計画である。

材料として本学薬用植物園で栽培した開花時期の大麻雌株を用い、その地上部を上記アグロバクテリウムの培養液に数秒間浸すことにより感染させ、次いで、グロースチャンバー中で短日処理を行うことにより種子の成熟を検討した。しかしながら、アグロバクテリウム処理した植物体はダメージが大きく、種子を成熟させるに至らないことが判明した。Floral Dip法を行う際に、植物体をSilwet L-77などの薬剤で処理することで損傷を免れた例が報告されていることから、現在それらを含め、Floral Dip法の各種条件検討を行っており、今後、遺伝子導入を確認した種子について植物の栽培を行い、植物形態やカンナビノイド含量の変化について検討する計画である。本研究は遺伝子工学による組み換え大麻の作出とカンナビノイド含量のコントロールを目的としたが、本年度までにこれを達成するには至らなかった。しかしながら、本研究では細胞レベルで大麻を形質転換する方法の確立に成功しており、これは組み換え大麻作出に向けた重要な成果であると考えられる。
先進的経路検索理論の実用化を目指した拡張の研究

最短路検索理論は,与えられた始点・終点に対して高速に最短路を答えるための理論的枠組である.組合せ最適化問題としての最短路問題を計算複雑度の意味で改善するものではないが,実計算時間の意味では有効な工夫が2000年台中盤以降数多く提案されている.最短路問題を部分問題として扱う複雑かつ実用的な問題は数多くあるが,最短路検索手法が有効に利用されているとは言い難い.本研究では,最短路検索理論を実用的な問題に適用するための理論的枠組の拡張を行った.本年度は,主にアルゴリズム開発を行う予定であった.しかし,最短経路検索の応用における検討などに終始した.本年度の成果としては,安全下校経路設計問題などのネットワーク設計問題(最適化問題)の解法におけるサブルーチンとして最短経路検索が有用であることの確認ができたものの,その他の応用における実用化に向けた進展は少なかった.しかし一方で,アルゴリズムの開発や研究成果の発表には未だ結びついていないものの,交通システム最適化問題を解く際に有用であることを確認した.例えば,現在電気自動車などを用いたカーシェアリングが普及しつつある.これは従来から存在する交通システムとは運用の枠組みが異なるため,新たなシステム運用方法の構築が必須である.この問題を数理最適化問題としてモデル化する一つの方法として時空間ネットワークを用いる方法がある.時空間ネットワークは概念的にはわかりやすいものの生成されるネットワークのノード数が膨大なものとなるため,従来のアルゴリズムを使用すると計算コストは非常に大きくなる.そこでは時間・メモリの観点から効率的な最短経路検索が非常に有用になる.特に,高速に最短経路問題を繰り返し解く場合にはその重要度が増す.これは,より一般に交通計画の分野における最適化で重要な役割を果たすと思われるため,高性能なアルゴリズムの構築やデータ構造の工夫が出来れば経済的・社会的価値はとても大きなものになると思われる.本研究では、最短路検索を実問題へ応用するための理論的な枠組みを構築することを目的とした。対象として主に取り上げた問題は、センサーネットワークやロジスティクスにおけるネットワーク設計問題である。いずれの問題も、多くの実用的な場面(設定)では計算困難問題に属する。よって高速・高精度なヒューリスティック解法あるいは可能な限り高速な厳密解法が必要とされる。ネットワーク設計問題の高性能なヒューリスティック解法を構築する定石の1つに「解の部品として有用そうなパスを生成し組み合わせる」というものがある。例えば、列生成法やそれをサブルーチンとして用いる分枝限定法などがそれにあたる。ここで有用そうなパスを生成する計算はある種の最短路問題に帰着されることが多い。例えば、制約付き最短路などである。この類の計算では、ほとんど同じパラメータ(ただし部分的に少しだけ変化している)に対する最短路を何回も高速に求める必要がある。このような場面における最短路計算の繰り返しは最短路検索と見なすこともできる。本研究では、最短路検索の計算方法を上述の場面に適用できる場合とできない場合を整理し、適用できる場合に関してはその効率を評価した。最短路検索理論は,与えられた始点・終点に対して高速に最短路を答えるための理論的枠組である.組合せ最適化問題としての最短路問題を計算複雑度の意味で改善するものではないが,実計算時間の意味では有効な工夫が2000年台中盤以降数多く提案されている.最短路問題を部分問題として扱う複雑かつ実用的な問題は数多くあるが,最短路検索手法が有効に利用されているとは言い難い.本研究では,最短路検索理論を実用的な問題に適用するための理論的枠組の拡張を行った.本年度は最短経路検索の理論を拡張するにあたって,その方向性を調査した.最短路計算の応用は多岐にわたるが,輸送計画問題やネットワーク設計問題の部分問題として現れることも多い.よってそのような場合にどのような計算が必要になるか,どのような入力データに対してどの程度の計算時間が要求されるかを調査した.最短経路検索の応用は最適化問題に多い.さらに調査の過程において,既存のよく知られている問題だけではなく,新たな問題に出会った.交通計画において適切に道路を配置する問題,さらには一方通行を適切に設定する問題などである.通常の輸送計画問題においては,その規模の経済により,運ぶ量が多ければ多いほど単位量あたりの費用は少なくなる.しかし,そうではなくて運ぶ量が少ない場合のほうが単位量あたりの費用がかさむ問題もあることがわかった.こういった新しい最適化問題を効率的に解く場合に,最短路検索の立場からはどのように理論を拡張し効率化を図るべきかという問題意識を持つに至った.この研究に関する中間成果はオペレーションズ・リサーチに関連する国内外の会議にて発表した.また,交通計画(道路の設置,一方通行の設定など)で現れる最適化問題においても,その部分問題として最短路検索は重要であると確認した.一方で,当初想定していた方向である,時刻によって変化する最短路,列車乗り継ぎの計算で現れる最短路の調査においては新しい発見は少なかった.こちらをどのように発展させていくかは今後の課題である.最後に,幾何的な空間における最短路の検索なども重要であると新たに分かったが,この方向への発展性も未知数であり,今後の課題といえる.最短経路検索法を実用化するためには,どのように実用化するかその場面を適切に設定する必要がある.そしてその場面に応じたアルゴリズムやデータ構造の工夫をするべきであるが,その設定が完全には固まっていない.

いくつかのネットワーク設計問題(最適化問題)を想定し,その解法のサブルーチンとして最短路検索が有用であることは確認できたものの,それだけでは十分と言えないため.主に輸送・交通における最適化問題で現れる部分問題としての最短路検索の位置づけや重要性を確認した.また,その方向性などもある程度固まった.そういう意味では概ね順調といえる.しかし一方で,幾何的最短路など新たにその重要性が認められたものに関しての進展はないので,当初の計画以上に進展しているとは言えない.交通システムの最適化問題を解く際に最短経路検索が有用であることを確認したので,その分野に注力して,実用につながる理論的基盤を構築しアルゴリズムを開発する予定である.また,実際にその実用性を実感できるように,成果を提示する予定である.ここまでに調査した情報を元に,新たなるアルゴリズムの設計・開発を行う予定である.アルゴリズムを設計していく過程で,新たに必要な課題なども見えてくる可能性は大きい.よって今後も,理論を拡張する方向の調査・整理も同時進行で行う予定である.本年度は,研究(具体的にはアルゴリズム開発)の進展が予定よりも遅れたため,使用した予算も少なめになってしまった.来年度はその遅れを取り戻すとともにその成果を各所で発表する予定のため,今年度使用しなかった分の予算を使用する予定である.今年度と同じく,主に当該分野の理論やデータの調査に研究費を使用する予定である.具体的には,旅費が大きな割合を占めると思われる.
自然放射性物質による放射線被ばく防護研究―化石燃料を安心して使うために

産業の発展や開発に伴い、化石燃料の利用が加速している。化石燃料には、自然由来の放射性物質が含まれており、その利用によって外部被ばくおよび内部被ばくが引き起こされる。国際放射線防護委員会(ICRP)は化石燃料などの天然資源からの放射線被ばくを防護するために、利用者の被ばく管理について勧告した。さらに国際原子力機関(IAEA)において管理のための基準が設定されようとしている。化石燃料については、その使用方法を含め、被ばくの状況についての情報が乏しく、規制管理の必要性を議論できるほどの十分な研究結果が得られていないため、その実態の解明が急がれている。本研究は、包括的な調査を通じて化石燃料等からの一般の作業者や公衆の被ばくの実態を明らかにすることを目的とした研究課題である。本年度は、本研究課題を通じて得られた成果の一部について学会発表や論文発表を実施した。さらに国際原子力機関(IAEA)おいて管理のための基準が設定されようとしている。我が国においては、自然放射性物質を含む天然資源からの被ばくの実態について調査が近年実施され、金属鉱石といった特定の天然資源については原子力規制庁より一定の被ばくの管理目安が導入されつつある(NORMガイドライン)。一方で、化石燃料については、その使用方法を含め、被ばくの状況についての情報が乏しく、規制管理の必要性を議論できるほどの十分な研究結果が得られていないため、その実態の解明が急がれている。本年度は、化石燃料の放射能濃度などのデータを文献および実測から調査した。さらに、エネルギーの大半を天然資源で補っている国(フィリピン)の化石燃料等を入手し、分析を開始した。また、化石燃料等施設における具体的な調査方法について、フィリピン国研究者とともに検討を行った。次年度に、フィリピン国の化石燃料等施設において現地調査を実施する。当初の予定通り、化石燃料などの天然資源の放射能濃度のデータについて文献調査を行い、基礎的な情報を整理した。また、化石燃料等施設における具体的な調査方法について検討を実施した。今年度の成果を踏まえて、次年度の調査を円滑に実施できる。我が国においては、自然放射性物質を含む天然資源からの被ばくの実態について調査が近年実施され、特定の天然資源については原子力規制庁より一定の被ばくの管理目安が導入されつつある(NORMガイドライン)。本年度は、化石燃料の放射能濃度等の調査を実施し、自然核種(ウラン238系列核種やトリウム232系列核種など)の国際的管理目安よりも概ね低いレベルであることが分かった。また、化石燃料等の事業所での実態を踏まえれば被ばく線量は問題とならないレベルであることが分かった。さらに、化石燃料等の天然資源による吸入被ばくの原因の一つとして放射性ガスが挙げられるが、その放射性ガスの濃度測定器が精度よく測定できるように校正装置の開発を実施した。平成29年度に得られた成果を学会発表・論文発表するために期間延長したが、当初計画していた化石燃料の濃度レベルの調査は概ね順調に進んだ。吸入被ばくの原因である放射性ガスの濃度測定器のための校正場の構築を行ったことで、より精度の高い調査につながる可能性がある。次年度はフィリピン国の化石燃料等施設において現地調査を実施することに全力を注ぐ。被ばく線量を評価するうえで、物質の放射能濃度や空間線量率の情報が重要となってくる。それらの情報を得るために現地研究者と実測を行う。

化石燃料等施設での実測の承諾は得られているが、現地研究者と綿密な情報共有を行うことにより良好な信頼関係を引き続き維持する。得られた成果の取りまとめを行い、学会発表や論文発表を行う。また、産業の発展とともに意図せずに化石燃料中の自然放射性核種が環境中に漏えいし、将来に環境中の放射線量が上昇する場合が考えられるため、特定の地域の放射線量のバックグラウンドの調査研究の実施の可能性を検討する。現地調査に関する綿密な情報交換を実施し日程を調整する必要があり、それに時間を要したことによる。次年度は、これまで得られた成果のとりまとめを実施し、学会発表と論文発表を行う。学会発表に必要な経費を今年度執行できなかったため、次年度に使用する。論文についてはすでに投稿し査読の結果待ちであり、掲載料等の必要な経費を執行できなかったため、次年度に必要に応じて使用する。現時点では現地調査の方針も確定しており、次年度に本格的に現地調査を実施する予定である。
ディープサブミクロン配線のタイミング特性の研究

近年、LSI中のトランジスタの微細化に伴い配線も微細化され、配線の寄生抵抗・寄生容量による配線遅延の増大が問題となってきている。スケーリングによってゲート遅延は減少する一方、配線遅延が増加するため回路全体の高速化が難しくなり、配線遅延増加のための対策が必要となる。配線における重要な技術の一つにリピータ挿入という配線長とともに2乗で増加する配線遅延を緩和するが方法ある。長い配線にリピータを挿入することにより分割し、配線遅延の増加を線形程度の増加に抑えることができる。本研究ではリピータ挿入のための遅延時間計算モデルを構築したのち、遅延時間最適化のための分岐を持つ配線へのリピータ挿入の方法についての検討を行った。低消費電力設計に向けたリピータ挿入の問題について、単一配線の場合での研究も行った。消費電力・遅延時間積(PD積)最適化設計のためのリピータ数、リピータサイズの最適値を示し、消費電力と遅延時間の関係についての考察を行った。最適リピータ挿入法が明らかになるとリピータ挿入間隔はテクノロジーと配線長によって一義的に決まる。実際に利用される信号配線においてはこのリピータ挿入間隔分の長さを持ち、配線形状、間隔等はテクノロジーによって規定される。このことにより、テクノロジーごとに単一のケースの配線における挙動を調べればよいことがわかった。近年、配線におけるインダクタンス成分の影響が声高に叫ばれているが、実際にリピータ挿入により分割された配線におけるインダクタンスが設計に影響を与えるかどうかは未だ調べられていない。本研究では実チップにおけるインダクタンスの影響を実測することにより設計の指導原理を得るべく研究中である。被測定チップ内に波形検出回路を設けた配線の試作回路を作り波形を読み取ることによりインダクタンスの影響を抽出する。これらの要素をまとめ、スーパーコネクトの概念を提案した。スーパーコネクトとは従来のLSI技術とパッケージ技術の中間に位置する10um前後の製造・設計技術を指す。従来からのスケーリングの考えからでは増大しつつある配線の消費電力、遅延を抑えることができず、プロセス進化とともに巨大化する配線を提案している。この考え方により、配線の抵抗を軽減し、高速化、消費電力の影響を抑えることができ、配線層数を押さえることができるためチップコストの低減にもつながる。リピータ挿入とは、配線長とともに2乗で増加する配線遅延を緩和する方法である。長い配線を間にリピータを挿入することにより分割し、配線遅延の増加を線形程度の増加に抑えることが目的である。リピータ挿入によって最適化される遅延時間は、トランジスタ・配線のパラメータで決まり、ゲート遅延が減少されればリピータ挿入の効果は増大する。単一配線であれば等間隔に最適サイズのリピータを挿入するのであるが、実際の配線に適用する場合、分岐部分や入出力端の境界条件の変化に対処できるリピータ挿入法を考えなくてはならない。

本研究では、はじめにリピータ挿入のための遅延時間計算モデルを考え、次に遅延時間最適化のためのリピータ挿入の方法についての研究を行った。リピータ挿入の方法として、等間隔リピータ挿入法、simulated diffusionによる方法、新たに提案する方法の3つの方法について、評価を行い結果をSPICEで検証した。Simulated diffusionによる方法は、最良の結果がえられる一方計算時間が膨大となる。新しく提案する方法では計算時間が少なく、遅延時間の増加はsimulated diffusionに比べ今回計算した例では平均1.6%に抑えられた。また、リピータの挿入と共に増加する消費電力も考慮し、低消費電力設計に向けたリピータ挿入の問題について、単一配線の場合での研究を行った。例として消費電力・遅延時間積(PD積)最適化設計のためのリピータ数、リピータサイズの最適値を示し、消費電力と遅延時間の関係についての考察を行った。近年、LSI中のトランジスタの微細化に伴い配線も微細化され、配線の寄生抵抗・寄生容量による配線遅延の増大が問題となってきている。スケーリングによってゲート遅延は減少する一方、配線遅延が増加するため回路全体の高速化が難しくなり、配線遅延増加のための対策が必要となる。リピータ挿入とは、配線長とともに2乗で増加する配線遅延を緩和する方法である。長い配線を間にリピータ挿入することにより分割し、配線遅延の増加を線形程度に抑えることが目的である。単一配線であれば等間隔に最適サイズのリピータを挿入するのであるが、実際の配線に適用する場合、分岐部分や入出力端の境界条件の変化に対処できるリピータ挿入法を考えなくてはならない。本研究では、リピータ挿入のための遅延時間計算モデルを考えたのち、遅延時間最適化のためのリピータ挿入の方法についての研究を行った。リピータ挿入の方法として、等間隔リピータ挿入法、simulated diffusionによる方法、新たに提案する方法の3つの方法について評価を行い、結果をSPICEで検証した。さらに配線パラメータモデルの洗練のために、外部パッケージに封入されていないベアチップに高周波プローブを用いてプローブを当て、波形のひずみを極力排除した上でディジタイザに入力し波形観測を行った。従来のLSI設計においては抵抗とキャパシタンス成分のみが重要視されていたが、LSIの高速化、微細化に伴いクロストーク等として顕著に影響を与えるインダクタンス成分を考慮した設計が求められている。
Src型キナーゼによるNMDA受容体チロシンリン酸化の包括的意義付け

NMDA受容体チロシンリン酸化の記憶における役割を包括的に解析した。NMDA受容体サブユニットNR2A及びNR2Bのチロシンリン酸化残基は既に決定していた。NR2BY1472F改変マウス(NR2B上のTyr-1472をPheに置換した変異体)をジーンターゲティングの手法で樹立した。解析にはC57BL/6に高度にバッククロスしたマウスを用いた。このマウスを海馬・扁桃体機能中心に電気生理学・行動学的に解析した結果、特に扁桃体機能が低下していること(扁桃体LTPの減弱及びauditory fear conditioningでの成績低下)を見出した。またNR2Aのもっとも主要なチロシンリン酸化残基を標的としたES細胞を作製した。現在キメラマウスの作製を進めている。更なるNR2Aチロシン改変マウス樹立を目的として、NR2A上のチャネル活性制御に重要なチロシンリン酸化残基を検証・決定するために、293細胞再構成系での電気生理学的解析を開始した。NMDA受容体のチロシンリン酸化を特異的に認識する抗体を作製した。またNMDA受容体の局在化などに重要な役割を果たすPSD-95もまたマウス脳内においてSrc型キナーゼFyn依存的にチロシンリン酸化されることを見出した。このリン酸化はPSD-95とDAP-1との結合を阻害した。また研究の過程で、Fyn欠損マウスはNMDA受容体依存的なシナプス可塑性やミエリン形成など種々の神経機能に異常を示すが、この異常を遣伝子発現の観点から解析するために、野生型マウスとFyn欠損マウスの脳を用いてDNAチップ解析を行った。また神経系でのチロシンリン酸化の解析を進める過程で、新規のキナーゼ(BREK : Brain-enriched kinase)を同定し、その機能解析を行った。既存の設備を用いて、Src型キナーゼによるNMDA受容体チロシンリン酸化の解析を行った。NMDA受容体サブユニットNR2A及びNR2Bのリン酸化残基は既に決定した。ジーンターゲティングの手法により、これらのリン酸化されるチロシン残基をフニニルアラニンに改変したマウスの樹立を進めた。樹立したマウスについてはC57BL/6に高度に戻し交配した後に、改変マウスの電気生理学・行動学的な解析を進めた。また、これらの残基のチロシンリン酸化を特異的に認識する抗体は以前作製したが、ウニスタンプロットにしか適用できなかったため、新たに免疫細胞染色や組織染色に使用可能なものを目指して、マウスモノクローナル抗体及びうさぎポリクローナル抗体の作製を進めている。NMDA受容体中のチロシンリン酸化蛋白質を検討した結果、NMDA受容体結合分子PSD-95がマウス脳内でFyn依存的にリン酸化されることを示した。PSD-95のFynによるリン酸化に伴い、PSD-95とDAP-1との結合は阻害された。またチロシンリン酸化に依存して、NR2AやNR2Bに結合する分子を検索する過程で新規RhoGAPであるp250GAPをクローニングした。p250GAPは脳に選択的な発現を示し、実際に脳内でp250GAPはNMDA受容体と複合体を形成した。またp250GAPはCdc42とRhoに対して選択的にGAP活性を示し、神経細胞ではスパインに局在した。更に我々はp250GAPがNMDA受容体を介したスパイン内アクチン骨格制御に寄与することを示し、現在個体・細胞レベルでの検証を進めている。

Src型キナーゼによるNMDA受容体チロシンリン酸化の記憶における生理的役割を明らかにするために、NMDA受容体サブユニットNR2A及びNR2Bのチロシンリン酸化残基改変マウスの樹立・解析を進めた。NR2BのTyr1472はFynによる最も主要なリン酸化残基であり、NR2B Y1472F改変マウスではNR2Bのチロシンリン酸化レベルが約30%に減少した。このマウスの電気生理学的・行動学的表現型を解析中であり、扁桃体機能に異常を見出したので、更に詳細な解析を進めている。またNR2BのTyr1472以外のNR2A, NR2B上のチロシンリン酸化残基を標的とした遺伝子改変マウスの樹立も進め、NR2Aの主要なリン酸化残基Tyr1325を標的としたマウスなどを重点的に進めた。チロシンリン酸化されたNMDA受容体の動態を検出するために、化学合成したチロシンリン酸化ペプチドを抗原として、NR2AのTyr1246,Tyr1267,Tyr1325及びNR2BのTyr1252,Tyr1336,Tyr1472のリン酸化を特異的に認識するうさぎポリクローナル抗体の作製を進めた。一部の精製抗体では免疫組織染色で検討を進めた。Src型キナーゼによるNR1/NR2Aチャネルの増強がどのチロシン残基のリン酸化によるものかを293細胞再構成系を用い、電気生理学実験により検討した。以上の解析に前提となるSrc型キナーゼによるNR2A, NR2B上のチロシンリン酸化残基は既に決定してある。
Erysipelothrix属菌の迅速診断法の開発

Erysipelothrix属菌を菌種ごとに型別しうる特異的プライマーを開発するために、我々が見出したErysipelothrix属菌を菌種ごとにひとつのバンドしか増幅しないランダムプライマー(NK51)の増幅産物の塩基配列を解析し、得られた成績から新たな菌種特異的プライマーの設計を試みた。その結果、1.プライマーNK51を用いて得られたE.rhusiopathiae(884bp)、E.tonsillarum(1,265bp)、血清型13型(650bp)および18型(420bp)の増幅産物の塩基配列はいずれも異なっており、また、それらの塩基配列はDDBJのデータベースを用いて検索したが、他の細菌にコードされる病原性などに関連した遺伝子の塩基配列とはいずれも一致しなかった。2.得られた各菌種の増幅産物の塩基配列が異なっていたことから、一つのプライマーで全てのErysipelothrix属菌を菌種ごとに型別しうる特異的プライマーの設計はできなかったものの、各菌種ごとに一つのバンドを増幅しうる特異的なプライマーを設計することができた。設計した4つのプライマーは菌種特異性の高いもので、他の菌種では増幅産物は得られなかった。3.新たに設計したこれら4つのプライマーを混合し、Multiplex PCRを試みたところ、E.rhusiopathiae、E.tonsillarum、血清型13型および18型のいずれにおいても菌種ごとに特徴的なバンドが得られ、菌種の識別は可能であった。
世界において二度と水俣病を起こさないための水銀汚染の原位置生物浄化技術の開発

本研究では、水銀で汚染された土壌試料を用いて、水銀耐性細菌が保有すると考えられる水銀耐性遺伝子のうち、水銀イオン還元酵素遺伝子であるmerA遺伝子群の解析を行った。次に、遺伝子水平伝播による微生物間の水銀除去能の拡散をメーティング実験によって直接検証し、水銀耐性を示したコロニーを得た。しかし、水銀入りの液体培地に植え継いでも増殖は見られなかった。したがって、水銀除去遺伝子の水平伝播においては、何らかの水平伝達媒体が必要とされることが知られた。世界的に見れば広範囲な水銀の環境汚染による水俣病と同じような健康被害が出現する可能性は高まってきている。特に、産業の工業化が近年著しく進行している発展途上国において、その出現リスクの高まりが明確に見られるようになり、将来重大な環境問題として出現することが高い確度で予測されている。このような状況の下で、世界において二度と水俣病を引き起こさないようにするためには、環境の水銀汚染を適切にかつ経済的に浄化する技術の開発と活用が必要とされている。平成21年度においては、水銀で汚染された台湾台南市安順地区工場跡地から採集した土壌試料を用いて、水銀耐性細菌が保有すると考えられる水銀耐性遺伝子のうち、水銀イオン還元酵素遺伝子であるmerA遺伝子群の解析を行った。その結果、merA遺伝子には多様性があることが明らかになったとともに、その多様性は水銀汚染濃度が高いほど大きいことが明らかになった。また、水銀汚染経歴のある水俣湾海底砂サンプルから分離した細菌がトランスポゾン上に持つ有機水銀分解遺伝子のmerB遺伝子と、他の地域で分離された細菌がトランスポゾンおよびプラスミド上に持つmerB遺伝子の各種有機水銀に対する分解活性の違いを調べた。その結果、各細菌が持っているmerB遺伝子は有機水銀分子種ごとに異なる分解活性を示すなどの特異性があることが明らかになった。遺伝子転移媒体としてのトランスポゾン等については、保存水俣湾底泥試料について調べたが、水銀耐性オペロンを持つ複数のタイプのトランスポゾンの存在が確認され、それらトランスポゾンを介しての自然環境において遺伝子が伝播されている可能性が示唆された。台南市安順地区工場跡地から採集した環境試料より抽出したDNA及びRNAについて、それに含まれる水銀浄化遺伝子の特徴を解析し、水銀耐性遺伝子群としてこれまで知られているボストン湾分離遺伝子や水俣湾分離遺伝子との類縁関係を明らかにした。汚染土壌中の水銀還元酵素遺伝子merAに焦点を当て、この遺伝子の分布および多様性の状態を調べた。まず、土壌サンプルからDNAを抽出し、抽出したDNAを鋳型として、Firmicutes(Firm), β/γ-Proteobacteria(β/γ), Actinobacteria(Act), α-Proteobacteda(α-Pro)、4つの微生物門または亜門が保有するそれぞれのmerAに特異的なプライマー^<(1>を用いて、PCRを行った。次に、FirmicutesのmerA増幅用プライマーセットで増幅されたPCR産物を配列決定し、決定した塩基配列をMerA酵素のアミノ酸配列に置き換えてアライメント解析によって調べ、系統樹を作成した。さらに、土壌サンプル中に存在する水銀耐性細菌の単離培養を、塩化水銀濃度が0μM,25μM,50μMの条件下で行った。単離した水銀耐性細菌のゲノムDNAを抽出し、16SrRNA遺伝子の増幅及び塩基配列決定により、単離細菌の同定を行った。土壌DNAおよび単離細菌からPCRによって増幅されたmerA部分配列の塩基配列を決定し、決定した塩基配列をアミノ酸配列に置き換えて解析した。その結果、既知のMerA酵素と相同性が高いものが存在するとともに、新規のMerA酵素も多く含まれており、MerA酵素は多様であることが明らかになった。微生物の水銀耐性はmerオペロンと呼ばれる一連の水銀耐性遺伝子群によって付与されている。merオペロンはトランスポゾンなど、水平伝播能のある転移因子にコードされていることが多いが、merオペロンがこれら因子の細胞間転移により他の微生物に伝播され、それに伴って水銀耐性細菌の分布が広められていると考えられる。本研究では、遺伝子水平伝播による微生物間の水銀除去能の拡散をフィルターおよびサンドウィッチメーティング実験によって直接検証した。その結果、フィルターおよびサンドウィッチメーティング実験とも水銀及びTc耐性を示したコロニーが得られ、そのコロニー出現頻度はそれぞれ2.2×10^<-6>と6.7×10^<-10>であった。しかし供与細菌細胞であったこれらのコロニーをHg及びTc入りの液体LB培地において植え継いでも増殖は見られなかった。したがって水銀耐性形質の水平伝播を確認することはできなかった。一方、B.subtilis RM125株間でpLS20catの伝達実験を行ったところ、Cm及びTc耐性を示すコロニーが得られ、その接合伝達頻度は8.0×10^<-4>であった。また転移したpLS20catは受容菌株において遺伝形質を発現することが確認できた。

次に、水銀耐性細菌Bacillus megaterium MB1株(以下MB1株と呼ぶ)を用いた水銀除去のための固定化微生物技術の開発を目的として、ゲランガムゲルを固定化担体として固定化したMB1株の水銀溶液からの水銀還元除去能を評価した。その結果、ゲランガム固定化MB1株は、最大24時間以内に90%の水銀を溶液から還元・除去できることが知られた。今後の課題として、固定化菌体ビーズをさらに長時間における持久性試験を行う必要があると考えられる。また、ゲルビーズから気化放出される水銀の回収方法を検討する必要があると考えられる。
ヒスタミンを介した難治性疼痛形成機構の解明とその特異的治療薬の開発

神経障害性疼痛時には、一次知覚神経中枢側である脊髄ではhistamineを介した疼痛反応が亢進しており、histamineは脊髄NMDA受容体のpolyamine結合部位を介して疼痛を発現することが明らかとなった。一方、一次知覚神経末梢側である足蹠皮膚では、TRPV1受容体の機能亢進が生じ、神経障害性疼痛が発現することが明らかとなった。本研究の成果より、脊髄NMDA受容体のpolyamine結合部位あるいは末梢皮膚のTRPV1受容体は、神経障害性疼痛の新規治療法を開発するための新規標的となりえる可能性が示された。脊髄においてhistamineは、疼痛伝達に関わる重要な神経伝達物質として働くが、その作用機序は極めて複雑である。研究代表者はこれまでに、低用量histamineの脊髄クモ膜下腔内投与により、疼痛関連行動や疼痛過敏が発現し、これら疼痛反応の発現には、脊髄H1受容体とNK1受容体の活性化が関与する一方、高用量histamineの脊髄クモ膜下腔内投与によっては、NMDA受容体を介した疼痛関連行動が発現することを報告している。疼痛反応には、疼痛関連行動や疼痛過敏の他に、接触刺激等の非侵害刺激を侵害刺激として認識するアロディニア(異痛)も存在する。研究代表者は本年度、低用量histamineの脊髄クモ膜下腔内投与によりアロディニアが発現し、その発現には、脊髄のH1受容体とNK1受容体が関与し、H2受容体とNMDA受容体は関与しないことを発見した。また、坐骨神経半結紮(Seltzer法)による神経障害性疼痛モデルにおいては、強力なアロディニアが発現するが、このアロディニアは低用量histamineの脊髄クモ膜下腔内投与により増強されることを発見し、このアロディニアの増強には、脊髄のH1受容体、H2受容体およびNK1受容体は関与せず、脊髄のNMDA受容体、特にポリアミンサイトの活性化と周囲のグリア細胞が関与することを明らかにした。さらに、同神経障害性疼痛モデルにおいては、極低用量histamineの脊髄クモ膜下腔内投与により疼痛関連行動が発現し、アロディニアと同様に、この発現には脊髄のH1受容体、H2受容体およびNK1受容体は関与せず、脊髄のNMDA受容体、特にポリアミンサイトの活性化と周囲のグリア細胞が関与することを明らかにした。以上本年度の研究結果より、神経障害性疼痛時においては、脊髄histamineを介した疼痛反応は感受性が亢進しており、通常とは異なるメカニズムで発現することが明らかとなった。現在、他の難治性疼痛モデルである炎症性疼痛モデルを使用し、同様の検討を行っている。脊髄においてhistamineは、低用量では脊髄H1受容体を介して、また高用量では脊髄NMDA受容体を介して、疼痛関連行動、疼痛過敏およびアロディニアを発現する。平成25年度には、神経障害性疼痛モデルにおいて発現するアロディニアは、低用量histamineの脊髄クモ膜下腔内投与により増強され、このアロディニアの増強には脊髄のNMDA受容体が関与すること、さらに同神経障害性疼痛モデルにおいては、極低用量histamineの脊髄クモ膜下腔内投与により疼痛関連行動が発現し、アロディニアと同様に、この発現には脊髄のNMDA受容体が関与することを明らかにした。すなわち、神経障害性疼痛時においては、一次知覚神経の中枢側である脊髄では、histamineを介した疼痛反応は感受性が亢進しており、通常とは異なるメカニズムで疼痛を発現することが明らかとなった。本年度は、神経障害性疼痛モデルを用いて、一次知覚神経の末梢側である皮膚における疼痛反応の変化を測定し、皮膚の疼痛伝達機構の変化を検討した。その結果、神経障害性疼痛モデルにおいては、capsaicin足蹠内投与により誘発する、足蹠皮膚のTRPV1受容体を介した疼痛関連行動の発現が亢進することが明らかとなった。また、神経障害性疼痛モデルにおけるアロディニアは、TRPV1受容体拮抗薬の足蹠内投与により一時的に改善され、このアロディニアの形成もまたTRPV1受容体拮抗薬の足蹠内投与により抑制されることが明らかとなった。以上本年度の研究結果から、神経障害性疼痛モデルにおいては、一次知覚神経末梢側である足蹠皮膚のTRPV1受容体の機能亢進により、アロディニアならびに疼痛過敏が発現することが明らかとなった。すなわち、神経障害性疼痛時には、一次知覚神経の中枢側である脊髄と末梢側である足蹠皮膚では、異なった神経可塑的変化が生じることが明らかとなった。平成25年度:脊髄histamineは、低用量ではH1受容体を介して、また高用量ではNMDA受容体を介して、疼痛関連行動およびアロディニアを発現する。神経障害性疼痛におけるアロディニアは、低用量histamineの脊髄投与により増強され、この増強には脊髄NMDA受容体のpolyamine結合部位が関与すること、さらに神経障害性疼痛時においては、極低用量histamineの脊髄投与により疼痛関連行動が発現し、この発現には脊髄NMDA受容体のpolyamine結合部位が関与することを明らかにした。すなわち神経障害性疼痛時には、一次知覚神経の中枢側である脊髄においてhistamineを介した疼痛反応が亢進しており、histamineは通常とは異なるメカニズムで疼痛を発現することが明らかとなった。

平成26年度:神経障害性疼痛時においては、capsaicin足蹠内投与により足蹠皮膚のTRPV1受容体を介して発現する疼痛関連行動が亢進することが明らかとなった。また神経障害性疼痛におけるアロディニアは、TRPV1受容体拮抗薬の足蹠内投与により一時的に改善され、このアロディニアの形成もまたTRPV1受容体拮抗薬の足蹠内投与により抑制されることが明らかとなった。すなわち神経障害性疼痛時には、一次知覚神経末梢側である足蹠皮膚のTRPV1受容体の機能亢進により、アロディニアならびに疼痛過敏が発現することが明らかとなった。平成27年度:脊髄histamineにより誘発される疼痛関連行動の発現には、substance P、glutamate、polyamineが関与している。神経障害性疼痛におけるアロディニアの形成は、polyamine抗体の脊髄慢性投与により抑制されるのに対し、substance P抗体およびglutamate抗体の脊髄慢性投与によっては影響を受けないことが明らかとなった。すなわち神経障害性疼痛のアロディニアは、polyamineがNMDA受容体のpolyamine結合部位に作用することにより形成されることが明らかとなった。神経障害性疼痛時には、一次知覚神経中枢側である脊髄ではhistamineを介した疼痛反応が亢進しており、histamineは脊髄NMDA受容体のpolyamine結合部位を介して疼痛を発現することが明らかとなった。一方、一次知覚神経末梢側である足蹠皮膚では、TRPV1受容体の機能亢進が生じ、神経障害性疼痛が発現することが明らかとなった。本研究の成果より、脊髄NMDA受容体のpolyamine結合部位あるいは末梢皮膚のTRPV1受容体は、神経障害性疼痛の新規治療法を開発するための新規標的となりえる可能性が示された。掻痒の実験動物モデルである「チークモデル」の確立が難航している。非ストレス性に無麻酔下で頬への皮内投与を行うことは現実的に不可能であり、一方麻酔下での頬への皮内投与では、残存する麻酔薬により掻痒反応が抑制されてしまう。皮内投与数分後から発現する掻痒行動に影響を与えない、麻酔薬(麻酔方法)ならびにその使用濃度の設定に時間がかかっている。疼痛制御現在、炎症性疼痛モデルを用いた実験を遂行中であり、また掻痒の「チークモデル」を引き続き確立中である。「チークモデル」が確立され次第、同モデルを用いた実験を遂行する予定である。癌性疼痛モデルを作成する際に移植する腫瘍細胞の保管状態に問題が生じたため、癌性疼痛モデルを用いた実験は休止している。現在、腫瘍細胞の供給元に、腫瘍細胞株の再度の供給を依頼している。「チークモデル」の確立が難航しており、「チークモデル」を用いた実験がまだ実施できていない。そのため、研究費の使用計画に変更が生じた。現在、炎症性疼痛モデルを用いた実験を遂行中であり、次年度はそれに加えて掻痒の「チークモデル」を確立する予定である。また、腫瘍細胞株が供給され次第、癌性疼痛モデルを用いた実験も再開する予定である。現在、炎症性疼痛モデルを用いた実験を遂行中であり、また掻痒の「チークモデル」を引き続き確立中である。次年度は、「チークモデル」が確立され次第、繰り越した研究費を使用して同モデルを用いた「チークモデル」を用いた実験を遂行する予定である。癌性疼痛モデルを用いた実験を一次休止したため、それに伴い研究費の使用計画に変更が生じた。
インビトロ選択法とコンビケム法による超分子認識素子の開発

リボザイムは、核酸の切断や連結反応などの触媒機能を有するRNA分子である。さらにリボサイムと同様の機能を有する機能性DNA(デオキシリボザイム)も、インビトロ選択法などを用いて人工的に作られている。本研究では、新たな機能を有するデオキシリボサイムの開発を試みた。その結果、RNA切断機能を有するカルシウムイオン特異的な小型デオキシリボサイムの開発に成功した。我々はPb^<2+>イオンによって12塩基からなる基質RNAを部位特異的に切断する小型リボサイムの開発を行っていたが、今回新たにRNAを部位特異的に切断するデオキシリボサイム(bGCCTGGCA-G_1G_2C_3T_4A_5G_6C_7T_8A_9C_<10>A_<11>A_<12>C_<13>G_<14>A_<15>GTCCCT;下線はループ部位を示す)を基本型とし、ダウンサイジング法によるデオキシリボサイムの小型化と各種金属イオンによる活性効率の検討を行った。その結果、基本型デオキシリボザイムのループから4塩基を取り除いた11塩基(dG_1G_2C_3T_4A_9C_<10>A_<11>A_<12>C_<13>G_<14>A_<15>)からなる小型デオキシリボザイムを創製できた。また、この小型デオキシリボザイムは、Ca^<2+>存在下でのみ活性を示すカルシウムイオン特異的な新型核酸酵素であることもわかった。さらに、二次反応速度定数(kcat/Km)を算出した結果、基本型デオキシリボザイムの金属イオン間のkcat/Kmの差は約5倍であるのに対して、この変異型デオキシリボザイムでは約20倍に向上していることが明らかとなった。つまりループ内の塩基配列及び金属イオンの種類の両方により、RNA切断反応性を制御できる可能性がある。
Nano Eruptionの高速高分解能イメージング

腫瘍血管が不規則に開閉し、そこから薬剤が腫瘍組織へ勢いよく漏出するという現象(nano eruption)を発見した。現在この現象の機序解明に取り組んでいる。研究の過程でnano eruptionの直前に、血管壁外側に高輝度の顆粒が出現するという、全く新しい知見を得た。本研究では、顕微鏡の撮影条件を工夫してnano eruptionと高輝度顆粒の関係を詳細に観察する。
『ダロウェイ夫人』を巡る変奏のテクスト考察

本研究は、ヴァージニア・ウルフの代表作『ミセス・ダロウェイ』(1925)の主人公クラリッサ・ダロウェイの、脇役としての誕生から長編小説のヒロインへと進化する軌跡、及び後世の作家たちによる様々な翻案及び改変の系譜を検証することで、文学史上においても稀有な一個のキャラクターの「転生」の意義を考察し、またその「転生」を可能としている本キャラクターのモダニティを分析するものであり、著書1点、雑誌論文4点、学会発表2点の形で成果を得た。本研究は、今日の文学・文化研究における最も重要な批評概念の一つであるインターテクスチュアリティを軸に、20世紀を代表する英国人作家Virginia WoolfのMrs Dalloway (1925)を巡るウルフ本人及び後世の作家たちによる「変奏」の各テクストの意義を検証することが目的である。平成25年度における研究の中心は、アメリカ人現代作家Michael Cunninghamが1998年に発表したThe Hoursに関する論文執筆にある。『ダロウェイ夫人』を中心とするウルフのフィクション及びノンフィクションの多岐に亘る諸テクストとのパラレルを分析し、本作が『ダロウェイ夫人』について如何なる政治的・文化的視座に立ち、モダニズム文学の代表的キャノンへの再解釈を提示しているかを検討する本論文は、現在推敲の最終段階にある。加えて本研究に関連し、『ダロウェイ夫人』を下敷きに2003年のロンドンを表象したIan McEwanによるSaturday (2005)に関する英語論文を発表した。また同じく現代作家によるモダニズム文学テクストのアップデートの代表例とも言える、Zadie Smith作のOn Beauty (2005)に関する日本語論文を発表した。本論執筆にあたり現代美学に関する新たな着想を得たことから、それらを発展させるべく、2013年8月29日から9月1日にかけて英国サセックス大学で開催されたModernist Studies Associationの第15回年次大会“Everydayness and the Event"においてセミナーに参加し、"A Decayed Wife and Rembrandt: Everyday Aesthetics in Zadie Smith's On Beauty"を発表した。本研究は、今日の文学・文化研究における最も重要な批評概念の一つであるインターテクスチュアリティを軸に、20世紀を代表する英国人作家ヴァージニア・ウルフの『ダロウェイ夫人』(1925)を巡るウルフ本人及び後世の作家たちによる「変奏」の各テクストの意義を検証することが目的である。平成26年度における研究の中心は、ウルフの他の主人公には見られない様々な変奏の短編と共に、クラリッサ・ダロウェイが初めて登場する『船出』をも再検証することで、後世の作家に改変の欲望をかき立ててやまない『ダロウェイ夫人』の所謂「オリジナル」の成立過程を考察することを目指すことにあった。本論文は、現在推敲の最終段階にある。更にマイケル・カニンガム作の『ジ・アワーズ』の中で作者が如何にポストモダニズム的パロディとは異なる形で「現代版クラリッサ」の一日を提示しているかを検証し、ウルフ、カニンガム、そして作中の人物リチャードという三人の作家に異なる形で「支配」されるクラリッサの映画版における表象についても取り上げた、昨年度から引き続き考察中の議論を、第34回日本ヴァージニア・ウルフ協会年次大会のシンポジウム「メタモダニズムとは何か」において講師として発表した。またウルフのエッセイと小説とのインターテクスチュアリティを検討する中で、『ダロウェイ夫人』と同時期に執筆されたエッセイ「病むことについて」と本テクストとの連関についての考察を論文にまとめ、『英語英文学論輯』第14号に発表した。本研究は、今日の文学・文化研究における最も重要な批評概念の一つであるインターテクスチュアリティを軸に、20世紀を代表する英国人作家ヴァージニア・ウルフの『ミセス・ダロウェイ』(1925)を巡るウルフ本人及び後世の作家たちによる「変奏」の各テクストの意義を検証することが目的である。平成27年度における研究の中心は、『ジ・アワーズ』の中で作者が如何にポストモダニズム的パロディとは異なる形で「現代版クラリッサ」の一日を提示しているかを検証し、ウルフ、カニンガム、そして作中の人物リチャードという三人の作家に異なる形で「支配」されるクラリッサの映画版における表象についても取り上げた論文の完成にあり、本稿は『ヴァージニア・ウルフ研究』第32号に掲載された。また本研究の集大成として来年度に出版予定である単著書の完成に向けて、『ミセス・ダロウェイ』の萌芽である短編「ボンド・ストリートのミセス・ダロウェイ」(1923)に関する論考、更に1999年にアメリカ人作家ロビン・リッピンコットが発表した『ミセス・ダロウェイ』の後日談である『ミスター・ダロウェイ』に関する論考をそれぞれ纏めた。加えて、ウルフ以外のモダニズム作家による作品の現代版と言える諸テクストへの理解を深める過程で、特に評価の高い現代イギリス人作家ゼイディー・スミスがE. M.フォースターの『ハワーズ・エンド』を大胆に改変した作品『美について』についての書評を『図書新聞』に掲載した。平成27年度に予定されていた『ミスター・ダロウェイ』に関する論考をはじめとする諸研究を順調に進めることができ、雑誌論文及び新聞書評を発表する過程で有意義な意見交換やフィードバックを得ることができた。但し3年間の研究の集大成となる単著書出版の予定がやや遅れ、平成28年度秋になると思われる。本年度の研究成果の中心は、作家ヴァージニア・ウルフ(1882-1941)の代表作『ミセス・ダロウェイ』(1925)の主人公

クラリッサ・ダロウェイの、脇役としての誕生から長編小説のヒロインへと進化する軌跡、及び後世の作家たちによる様々な翻案及び改変の系譜を検証することで、文学史上においても稀有な一個のキャラクターの「転生」の意義を考察し、またその「転生」を可能としている本キャラクターのモダニティを分析したこれまでの研究の集大成として、単著『ミセス・ダロウェイの永遠の一日ーモダニズム・アイコンの転生の系譜』を「京都女子大学研究叢刊」の一巻として同朋舎より2016年10月に出版したことである。三部構成である本書は。第一部(二章構成)でウルフの第一作長編小説である『船出』(1915)にクラリッサが脇役として初めて登場し、その後短編「ボンド・ストリートのミセス・ダロウェイ」(1923)の主人公となり、長編『ミセス・ダロウェイ』の素地を築くまでの経緯を考察し、初登場の際からクラリッサが体現していたモダニティにより、ウルフが自らとはかけ離れた政治家夫人というキャラクターに様々な改変を施していくことが可能となったプロセスを検証した。第二部(二章構成)では『ミセス・ダロウェイ』におけるクラリッサの一日が提供する多種多様な批評的アプローチを概観することで、本キャラクターのモダニティに関する議論を更に発展させ、そして第三部(三章構成)では、英米の現代作家による『ミセス・ダロウェイ』の翻案例を三作品取り上げ、現代に甦るクラリッサに施された改変の詳細を検証した。本研究は、ヴァージニア・ウルフの代表作『ミセス・ダロウェイ』(1925)の主人公クラリッサ・ダロウェイの、脇役としての誕生から長編小説のヒロインへと進化する軌跡、及び後世の作家たちによる様々な翻案及び改変の系譜を検証することで、文学史上においても稀有な一個のキャラクターの「転生」の意義を考察し、またその「転生」を可能としている本キャラクターのモダニティを分析するものであり、著書1点、雑誌論文4点、学会発表2点の形で成果を得た。平成26年度の研究として計画されていたとおり、『ダロウェイ夫人』の所謂「オリジナル」の成立過程を検証するために、『船出』を初めとする関連の諸作品について考察することができた。更に当該テーマに深く関係する日本語論文一編の発表に加え、学会においてシンポジウムで口頭発表を行い、メンバー及びフロアと有意義な意見交換を行うことができたという実績から、おおむね順調に進展していると考えられる。平成28年度秋に、『ミセス・ダロウェイ』の主人公クラリッサ・ダロウェイの、脇役としての誕生から長編小説のヒロインへと進化する軌跡、及び後世の作家たちによる様々な翻案及び改変の系譜を検証することで、文学史上においても稀有な一個のキャラクターの「転生」の意義を考察し、またその「転生」を可能としている本キャラクターのモダニティを分析することを目的とした、本研究の集大成となる単著書出版を予定している。20世紀イギリス小説研究の最終年度にあたる平成27年度においては、『ダロウェイ夫人』では脇役に留まっているダロウェイ夫人の保守的な夫を主人公に据えたRobin Lippincott作のMr Dalloway (1998)について検証する予定である。