hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
癌遺伝子産物由来ペプチド抗原による癌治療

1.4株のBALB/cマウス由来メチルコラントレン誘発肉腫、CMS2、CMS7、CMS8、CMS13担癌マウス血清中のIgG抗体により認識される抗原支配遺伝子を、腫瘍細胞より作製されたλファージcDNAライブラリーを用いたexpression cloning法で単離した。CMS2から42個、CMS7から9個、CMS8から41個、そしてCMS13からは43個のクローンを単離した。2.ヒトHER2のN末端より147個のアミノ酸を含む組み替えHER2蛋白を作製し、コレステロール基により疎水化された多糖類プルランとの複合体(CHP-HER2)を作製した。本複合体で前処置されたHLA-A2402陽性樹状細胞は、HER2p63ペプチド特異的CTLクローンにより殺傷され、またそれらの樹状細胞は同CTLクローンを特異的に刺激した。また、CHP-HER2前処置細胞によるHER2p63ペプチドの提示は、内在性蛋白由来MHCクラスI結合性ペプチド提示と同様の機構によることが明らかとなった。3.CHP-HER2免疫マウスの膝窩リンパ節由来リンパ球のin vitro刺激を繰り返し、CD4^+T細胞ラインを作製した。それらの特異性の解析より、HER2組み替え蛋白中(147アミノ酸)には少なくとも3個のヘルパーエピトープが含まれていることが明らかとなった。2種のマウス腫瘍系を用いて、各々の系でCD8^+細胞傷害性T細胞(CTL)の認識抗原ペプチドの同定を試みた。又それらの同定したペプチドが腫瘍拒絶抗原(TRA)であるかを検証した。1.BALB/cマウス由来のメチルコラントレン誘発肉腫CMS5aに対するK^d拘束性CTLクローンを用いて、CTLクローンの認識する抗原支配遺伝子をexpression cloning法で単離した。得られた遺伝子は136番アミノ酸変異(リシン→グルタミン)を有するMAP Kinase ERK2であった。CTLの認識抗原はこの変異アミノ酸を含んだQYIHSANVLの配列を有するペプチドであった。このペプチドで感作されたBALB/cマウスからはCMS5a特異的CTLが誘導され、又免疫マウスはCMS5aの拒絶能を獲得した。2.BALB/cマウス由来肉腫株にヒトおよびマウス由来のc-erbB2/HER2/neu(HER2)cDNAを導入した細胞株を作製、同系マウスを免疫しHER2特異的K^d拘束性CTLを導入した。CTLは2種のペプチドp63-71およびp780-788を認識することが明らかになった。マウスHER2由来のこれら2種のペプチドで免疫されたBALB/cマウスからはHER2特異的CTLが誘導され、又免疫マウスはHER2発現腫瘍の拒絶能を得た。1. BALB/cマウス由来のメチルコラントレン誘発肉腫CMS5担癌マウス血清中のIgG抗体により認識される抗原支配遺伝子をexpression cloning法で単離した。7種の遺伝子が単離された。これらの単離された遺伝子産物全てに対する抗体は正常マウス血清中及び他の5株のメチルコラントレン誘発肉腫担癌マウス血清中には検出されなかったが、CMS5にて皮下免疫されたマウス血清中に検出された。2. HLA-A2402を有する正常人及び癌患者からの末梢血単核球をc-erbB2/HER2(HER2)由来の2種のペプチドHER2p63及びHER2p780をパルスした自家樹状細胞により感作し、HER2特異的キラー細胞を誘導した。さらに各々のペプチド特異的CD8^+CTLクローンを樹立し、何れもがHLA-A2402拘束性の下にHER2特異的に各種ヒト癌細胞を破壊した。3.ヒトHER2のN末端より147個のアミノ酸を含む組み替えHER2タンパクを作製し、コレステロール基により疎水化された多糖類(プルランまたはマンナン)との複合体を作製した。何れの複合体で免疫されたBALB/cマウスでもHER2発現腫瘍の増殖が抑制された。複合体で前処理された樹状細胞はCD8^+T細胞及びCD4^+T細胞を各々抗原特異的に刺激活性化した。また、これらの樹状細胞で免疫された同系マウスではHER2発現腫瘍の増殖が強く抑制された。

また、CHP-HER2前処置細胞によるHER2p63ペプチドの提示は、内在性蛋白由来MHCクラスI結合性ペプチド提示と同様の機構によることが明らかとなった。3.CHP-HER2免疫マウスの膝窩リンパ節由来リンパ球のin vitro刺激を繰り返し、CD4^+T細胞ラインを作製した。それらの特異性の解析より、HER2組み替え蛋白中(147アミノ酸)には少なくとも3個のヘルパーエピトープが含まれていることが明らかとなった。
放射線を用いたHIV失活によるエイズ治療の基礎的研究

HIV感染症治療としてHIVに感染したリンパ球もしくはウィルス粒子を放射線等で傷害させる方法が提案されている。リンパ球は生体内で最も放射線感受性が高い細胞のひとつであるため,血液中のリンパ球のみを傷害する方法は体外的照射法が応用できる。本研究では猫リンパ球由来の株化細胞を用い,そのX線照射による効果的な傷害作用とその条件を明らかにするための基礎的検討を試みた。ほぼ一定数に調整した培養液中猫リンパ球由来株化細胞(FeT-J, FL-4,Kumi-1,このうちFL-4はFIV持続感染株)に対し,X線(0,2,5,10,15,20G)を照射した。これらの細胞はその後培養を継続し,経時的な生細胞数,チミジン要求量,およびFL-4については培養液中のFIV抗原量もモニターした。FL-4細胞からのFIV抗原量は培養液中の細胞数にのみ依存し,X線照射条件には依存しなかった。このことより,今回のX線照射条件では,FIVには直接影響を与えないが、感染リンパ球に傷害を与えることでFIVを減少させることが可能と考えられた。X線照射後,それぞれのリンパ球は照射線量に応じた増殖特性を示し,それらはチミジン要求特性に対応した。つまり,チミジン要求性の高い細胞はその後増殖し,チミジン要求性が減少した細胞はその後生細胞数が減少した。いずれのリンパ球も,最大20Gyの照射でも12日間のモニタリング期間中には完全に死滅しなかった。この照射後の生細胞の増殖プロフィールとチミジン要求性から,放射線感受性はFeT-J株,FL-4株,Kumi-1株の順に高くなることが示された。FeT-J株は20Gyの照射でも明らかな増殖死を認めず,線量に応じた増殖遅延を示したのち,0Gy条件と同様の細胞数まで増殖した。これに対し,FL-4には2Gyで明らかな増殖死が認められた。Kumi-1株は今回用いた株の中で最も長い増殖遅延を示し,特にチミジン要求量が10-20Gyの照射で顕著に低下した。以上の結果,唯一IL-2要求株であり猫のリンパ球に最も性質が近いと考えられるKumi-1株の結果より,猫リンパ球に傷害を与えるには最低10Gyの照射が必要であると推測された。上記の成果は,当初の計画通り実施され,日本獣医学会(3/30)で発表予定であり,現在投稿準備中である。
酸素酸化による分子交換

本研究は酸化反応,特に酸素分子を酸化剤とする超高率分子変換を目標として進められた.このため,触媒となる遷移金属錯体による酸素の活性化,新しい酸化剤の開発と高選択的酸化反応への応用,酵素類似の高い位置および立体選択性を示す反応系の開発,光増感酸素酸化の含硫黄有機物や含窒素化合物への応用,生体内反応に関連の深い脂質の酸化などについて重点的に研究を行なった.主な研究実績は次のとおりである.1)二核鉄および銅錯体を用いて酸素の活性化とアルカンの酸化を行ない,温和な条件で不活性炭化水素を酸素酸化する酸素添加酵素の類似反応に成功した.また触媒系の複合化により,芳香族側鎖を酸素酸化によってアルデヒド基に選択的に転換する方法を見出した(諸岡).2)飽和炭化水素に位置選択的に水酸基を導入する試薬を開発すると共に, DNA側鎖を位置特異的に水酸化するDNA切断分子のデザインを行なった. (斎藤).3)トリプトファンー2, 3-ジオキシゲナーゼを範とし,鉄(III)TPP錯体を用いて光学活性なイミンを酸化し,ヒドロキシケトンへの不斉誘導を行なった. (杉本). 4)リン脂質,コレストロール等の自動酸化で生じるヒドロペルオキシドの分析にケミルミネッセンス法が有効なことを見出し,生体模中でのヒドロペルオキシドの生成機構の解明と高機能の抗酸化剤の開発を行なった(二木).5)光増感酸素化によるヒドロペルオキシチアゾリン, 1, 2-ジオキソラン等の合成とその高選択的転換(安藤). 6)オレフィンおよびジオールの酸化的開裂における遷移金属錯体の役割と選択性の制御(今中).これらのなかでDNAの選択的切断はブレオマイシンの制ガン作用に関連して注目され,二核鉄錯体によるアルカンの酸化はメタンモノオキシゲナーゼとの関連で興味がもたれる.芳香続アルデヒドの酸素酸化による合成法の確立は,安価な高効率の酸化法として工業的にも価値のある反応である.本研究は酸化反応,特に酸素分子を酸化剤とする超高率分子変換を目標として進められた.このため,触媒となる遷移金属錯体による酸素の活性化,新しい酸化剤の開発と高選択的酸化反応への応用,酵素類似の高い位置および立体選択性を示す反応系の開発,光増感酸素酸化の含硫黄有機物や含窒素化合物への応用,生体内反応に関連の深い脂質の酸化などについて重点的に研究を行なった.主な研究実績は次のとおりである.1)二核鉄および銅錯体を用いて酸素の活性化とアルカンの酸化を行ない,温和な条件で不活性炭化水素を酸素酸化する酸素添加酵素の類似反応に成功した.また触媒系の複合化により,芳香族側鎖を酸素酸化によってアルデヒド基に選択的に転換する方法を見出した(諸岡).2)飽和炭化水素に位置選択的に水酸基を導入する試薬を開発すると共に, DNA側鎖を位置特異的に水酸化するDNA切断分子のデザインを行なった. (斎藤).3)トリプトファンー2, 3-ジオキシゲナーゼを範とし,鉄(III)TPP錯体を用いて光学活性なイミンを酸化し,ヒドロキシケトンへの不斉誘導を行なった. (杉本). 4)リン脂質,コレストロール等の自動酸化で生じるヒドロペルオキシドの分析にケミルミネッセンス法が有効なことを見出し,生体模中でのヒドロペルオキシドの生成機構の解明と高機能の抗酸化剤の開発を行なった(二木).5)光増感酸素化によるヒドロペルオキシチアゾリン, 1, 2-ジオキソラン等の合成とその高選択的転換(安藤). 6)オレフィンおよびジオールの酸化的開裂における遷移金属錯体の役割と選択性の制御(今中).これらのなかでDNAの選択的切断はブレオマイシンの制ガン作用に関連して注目され,二核鉄錯体によるアルカンの酸化はメタンモノオキシゲナーゼとの関連で興味がもたれる.芳香続アルデヒドの酸素酸化による合成法の確立は,安価な高効率の酸化法として工業的にも価値のある反応である.
15世紀フランドル絵画の社会的・宗教的役割-ファン・エイクとその後継者を中心に-

15世紀フランドル絵画の社会的・宗教的役割を検討する上で、ヤン・ファン・エイク作の《ロランの聖母子》は、注文主表現の革新性と機能の重層性という点で、ひとつの指標となる作品である。研究者代表は《ロランの聖母子》を中心としたファン・エイク作品と後の世代への展開を分析しつつ、ファン・エイクと同時代に活躍したフランドルの画家ロベール・カンパン(フレマールの画家)との比較検討も進めた。特にカンパンの《太陽の聖母子》を取り上げたのは、この作品が過去に注目されてこなかった上に、聖母子に向かい合う祈祷者の表現が、《ロランの聖母子》とは異なる役割の特殊性・革新性を有しているように思われるからである。分析の結果、《太陽の聖母子》には祈祷者の権威を暗示する表現が見られ、ファン・エイク作品と同様に注文主の積極的な関与が伺えること、また、聖母子の表現には当時議論の盛り上がっていた「無原罪の御宿り」を支持する役割が付与されていることが新たに明らかになった。聖母子の表現は、シクストゥスIV世が「無原罪の御宿り」を推進したこともあり、15世紀後半以降のフランドル絵画に普及していく。《太陽の聖母子》は注文主の意図を強く反映した、15世紀前半のフランドル絵画の革新的な風潮を示す例として捉えられるが、一方で聖母子の出現を自然と超自然の均衡の中で描く表現などには《ロランの聖母子》と比べると保守的な特徴も残しており、改めてファン・エイクという画家の先進性が示される結果となった。以上の研究の成果はベルギー、ブリュッセル自由大学の考古学・美術史学科の紀要に間もなく発表される予定である。15世紀フランドル絵画の有した社会的・宗教的役割を研究する上で祭壇画は避けることのできないジャンルであるが、本年度の研究においては、祭壇画外翼に多く描かれた彫像表現の意味と役割の検討を進めた。これらの彫像は白や黒の単色からなるグリザイユで表わされているため、先行研究ではモノクロームの意味がおもに考察されてきたが、本研究では、グリザイユ表現の再検討を行うとともに、彫像に不可欠であった台座の部分に着目し、ファン・エイクから後続の画家にいたる表現の変遷を調査した。その結果、ファン・エイク世代が彫像モティーフを導入した当初は台座の物理的・象徴的機能が保持され、観賞者と中央パネルとを仲介するメタ・イメージとしての役割が有効であったこと、しかし続く後継者たちの絵画になると、台座の表現が軽視され、その役割も形骸化していったことが明らかになった。当研究は間もなく三田芸術学会誌『芸術学』にて発表される。また一方で、2002年にベルギーのブリュージュで行われた展覧会「ファン・エイクの時代」の調査も行った。比較対象には1902年に同地で行われた同テーマの展覧会を挙げ、100年の間に進展したフランドル絵画研究の動向と、学際的になりつつある今日の状況を検討し、『日仏美術学会会報』に論文として発表した。その際には、ベルギーでの調査・研究、およびブリュッセル自由大学のD.マルタンス教授との議論が極めて有効であった。
椎間板前駆細胞と力学場から構成される3次元椎間板組織モデルの創出

椎間板で発現する転写因子Pax1の組織特異的な発現制御配列を利用して,線維輪前駆細胞をGFPにより可視化し,生体より高純度に分離・培養する手法を確立する.さらに,椎間板は持続的な力学場で形成および崩壊へと至る組織であることに着目し,MEMS技術により組織内の力学場を微小空間内に再構成した3次元力学刺激培養系を開発する.現在,椎間板の形成制御に関する研究は初代培養細胞または移植などによる動物実験が主流であるが,本研究により3次元椎間板組織モデルが構築できれば,椎間板の形成・成熟化に関わる分子メカニズムの解明および再生のための創薬スクリーニング系として新たな研究基盤になると期待される.椎間板で発現する転写因子Pax1の組織特異的な発現制御配列を利用して,線維輪前駆細胞をGFPにより可視化し,生体より高純度に分離・培養する手法を確立する.さらに,椎間板は持続的な力学場で形成および崩壊へと至る組織であることに着目し,MEMS技術により組織内の力学場を微小空間内に再構成した3次元力学刺激培養系を開発する.現在,椎間板の形成制御に関する研究は初代培養細胞または移植などによる動物実験が主流であるが,本研究により3次元椎間板組織モデルが構築できれば,椎間板の形成・成熟化に関わる分子メカニズムの解明および再生のための創薬スクリーニング系として新たな研究基盤になると期待される.
金属材料の粒界連結性のフラクタル解析による定量化と粒界劣化現象の制御

多結晶金属材料における粒界劣化現象抑制のためのフラクタル解析に基づく新しい粒界設計・制御手法を検討した。結晶構造と積層欠陥エネルギーの違いにより異なる粒界微細組織の発達過程を示す5種類の実用金属材料に対し、粒界劣化現象の優先経路となるランダム粒界の連結性をフラクタルにより定量化できることを明らかにした。ランダム粒界連結性のフラクタル次元が低くなるように粒界制御することにより、バルク材料の耐粒界腐食性が向上することを明らかにした。従来の粒界工学の研究において主要な微細組織因子として用いられてきた粒界性格分布の制御のみの場合に比べ、より精密な材料特性の予測と向上が可能となることを示した。多結晶金属材料において生じる粒界腐食のような粒界劣化現象は、高い粒界エネルギーをもつランダム粒界を優先経路として伝播する浸透現象といえる。そこで、粒界の形成・発達過程が異なる数種類の実用金属材料に対し、ランダム粒界が互いに連結することにより作られるネットワークの幾何学的形状と大きさを、フラクタル解析に基づいて定量化する新しい微細組織評価方法を検討した。ランダム粒界連結性のフラクタル次元が種々の粒界劣化現象に及ぼす影響を明らかにし、実用金属材料の粒界劣化現象を抑制するための新しい粒界工学の手法を確立することを目的とした。低積層欠陥エネルギーのSUS304ステンレス鋼とインコネル600ニッケル基超合金の加工熱処理による粒界制御プロセスについて検討した。両材料ともに、低圧下率の冷間圧延と1000°Cでの溶体化熱処理により、耐粒界腐食性と粒界強度の高い対応粒界、特に∑3対応粒界を高頻度に導入することができた。ステンレス鋼については、平均結晶粒径を16μmから41μm、対応粒界の存在頻度を44%から64%の範囲で変化させた試験片を得ることができた。インコネル600については、平均結晶粒径を16μmから51μm、対応粒界の存在頻度を45%から54%の範囲で変化させた試験片を得ることができた。すべての試験片に対し、最大の連結性をもつランダム粒界のネットワーク(最大ランダム粒界連結性)を抽出し、ボックスカウント法によるフラクタル解析を行った結果、これらの材料の最大ランダム粒界連結性はフラクタルにより定量化可能であることを明らかにした。フラクタル次元は、両材料ともに約1.1から1.6の範囲であり、対応粒界の存在頻度の増加に伴って低下する傾向にあることを示した。さらに、両材料の耐粒界腐食性は、最大ランダム粒界連結性のフラクタル次元を低くするような粒界制御によって向上できることを明らかにした。多結晶金属材料において生じる粒界腐食および粒界偏析のような粒界劣化現象は、高エネルギー粒界であるランダム粒界を優先経路として伝播するパーコレーション現象である。多結晶材料の構成要素である結晶粒界(以下、粒界)の設計・制御によるバルク材料の諸特性の向上に関する研究は、粒界工学として国内外で研究が進められてきた。従来の粒界工学では、粒界性格分布(異なる性格をもつ粒界の存在頻度)を評価・制御因子として用いてきたが、パーコレーション現象である粒界劣化現象の抑制に対しては、経路となるランダム粒界の連結性を制御することが、より効果的であると考えられる。平成27年度は、積層欠陥エネルギーの低い面心立方金属材料であるSUS304、SUS316Lステンレス鋼およびインコネル600ニッケル基超合金に対し、ランダム粒界連結性のフラクタル次元制御による粒界劣化現象、とくに粒界腐食および粒界応力腐食割れ抑制の有効性の検証を、前年度に続いてより系統的に進めた。その結果、ランダム粒界連結性のフラクタル次元は、粒界劣化現象の経路長さの指標となることを実験的に明らかにし、対応粒界(またはランダム粒界)の存在頻度と結晶粒径分布の変動係数の影響を強く受ける因子であることを示した。さらに、対応粒界の存在頻度がほぼ同じ試料であっても、ランダム粒界連結性のフラクタル次元を低下させる粒界制御により粒界劣化現象の抑制が可能であることを明らかにした。さらに、積層欠陥エネルギーの高い面心立方金属材料の2017アルミニウム合金と体心立方金属のSUS430フェライト系ステンレス鋼について、一般的な加工熱処理による粒界制御プロセスを検討した。両材料において、局所的な集合組織の発達により低角粒界を高頻度に導入できる可能性が示された。また、それら2種類の材料のランダム粒界連結性もフラクタルによって定量化できることを明らかにした。低積層欠陥エネルギーのSUS304、SUS316Lおよびインコネル600について、ランダム粒界が相互に連結することにより作られるネットワーク(ランダム粒界連結性)の経路長さとそのフラクタル次元との間に明確な相互関係があることを見出し、フラクタル次元により粒界劣化現象の経路の長さを評価可能であることを示した。対応粒界の存在頻度がほぼ同じ場合でも、結晶粒径分布の変動係数を小さくする組織制御により、ランダム粒界連結性のフラクタル次元を低下させ得ることも明らかにした。ランダム粒界連結性のフラクタル次元を低下させることにより、対応粒界の存在頻度が同程度の場合でも、粒界劣化現象が抑制できることを初めて明らかにした。本研究において導入した粒界連結性のフラクタル解析に基づく新しい粒界制御手法は、従来の粒界工学的手法に比べ、積層欠陥エネルギーの低い面心立方金属材料の粒界劣化現象の抑制をより精密に行えることを明らかにした。高積層欠陥エネルギーの2017合金とSUS430の粒界連結性制御プロセスについても検討した。

両材料ともに、高圧下率の冷間圧延とその後の再結晶熱処理により、局所的な集合組織が発達した。局所的な集合組織の面積率を高めるほど、粒界劣化現象に対して高い抵抗を示す低角粒界を高頻度に導入できる可能性を示した。これらの材料のランダム粒界連結性もフラクタルであることを明らかにし、その次元を評価することができた。今後、積層欠陥エネルギーの高い材料におけるランダム粒界連結性のフラクタル次元をさらに低下させるための粒界制御プロセスを検討する必要がある。積層欠陥エネルギーの高い材料の粒界連結性制御に関しては、交付申請書の「研究の目的」および「研究計画・方法」欄に記載した内容から、わずかに遅れている部分もあるが、計画よりも進められた部分もあることから概ね順調に進んでいるものと考える。粒界腐食のような粒界劣化現象は、高エネルギー粒界であるランダム粒界を優先経路とするパーコレーション現象である。粒界制御に基づくバルク材料の特性向上に関する研究は、粒界工学として国内外で研究が進められている。従来の粒界工学では、粒界性格分布(異なる性格をもつ粒界の存在頻度)を制御因子としてきたが、粒界劣化現象の抑制に対しては、パーコレーション経路となるランダム粒界の連結性を制御することが、より効果的であると考えられる。平成26年度と平成27年度は、低積層欠陥エネルギーのSUS304ステンレス鋼およびインコネル600ニッケル基合金に対し、ランダム粒界連結性のフラクタル次元制御による粒界腐食と粒界応力腐食割れ抑制の有効性を検証した。ランダム粒界連結性のフラクタル次元は、パーコレーション経路長さの指標となることを明らかにし、ランダム粒界の存在頻度と結晶粒径分布の変動係数に依存する組織因子であることを示した。粒界性格分布が同程度の試験片であっても、ランダム粒界連結性のフラクタル次元を低下させることにより、粒界腐食を抑制できることを明らかにした。平成28年度は、高積層欠陥エネルギー材料のSUS430ステンレス鋼について、低エネルギー粒界を高頻度に導入するための粒界制御プロセスを検討した。高圧下率の冷間圧延と焼鈍によって{111}集合組織を発達させることにより、低角粒界および<111>回転軸に対して出現が予測される対応粒界の存在頻度を高められることを示した。2017アルミニウム合金においては、冷間圧延と熱処理により局所的に{001}集合組織が発達した。それらの局所集合組織において,高頻度の対応粒界が導入されることを明らかにした。これらの高積層欠陥エネルギー材料に対して、ランダム粒界の連結性はフラクタルであることを明らかにし、フラクタル次元制御により粒界劣化現象を抑制できる可能性を示した。多結晶金属材料における粒界劣化現象抑制のためのフラクタル解析に基づく新しい粒界設計・制御手法を検討した。結晶構造と積層欠陥エネルギーの違いにより異なる粒界微細組織の発達過程を示す5種類の実用金属材料に対し、粒界劣化現象の優先経路となるランダム粒界の連結性をフラクタルにより定量化できることを明らかにした。ランダム粒界連結性のフラクタル次元が低くなるように粒界制御することにより、バルク材料の耐粒界腐食性が向上することを明らかにした。
サーモグラフィによる薄膜機能性材料の熱特性高速評価法

異なる組成の薄膜サンプルを集積した薄膜ライブラリを用い,薄膜サンプルの熱特性を高速で評価することを目指した.評価はサーモグラフィにより放射率変化を検出することで行い,薄膜ライブラリの表面粗さを増加させることによって,この検出感度の向上が図れることを明らかにした.また,薄膜形状記憶合金の薄膜ライブラリを製作し,提案する手法で加熱・冷却の双方向の変態温度およびその温度ヒステリシスを一括評価することに成功した.異なる組成の薄膜サンプルを集積した薄膜ライブラリを用い,薄膜サンプルの熱特性を高速で評価することを目指した.評価はサーモグラフィにより放射率変化を検出することで行い,薄膜ライブラリの表面粗さを増加させることによって,この検出感度の向上が図れることを明らかにした.また,薄膜形状記憶合金の薄膜ライブラリを製作し,提案する手法で加熱・冷却の双方向の変態温度およびその温度ヒステリシスを一括評価することに成功した.本研究では,コンビナトリアル手法に適用可能な,薄膜機能性材料の相変態温度の高速評価法について研究を行った.サンプルとしてTi-Ni-Pd薄膜形状記憶合金を選択し,加熱・冷却サイクルにおいて双方向のマルテンサイト変態温度の評価を目指した.評価は,サーモグラフィで加熱・冷却中のサンプル表面を観察し,相変態を放射率変化として検知する手法を用いた.単一組成サンプルで原理確認を行った結果,従来の測定法である示差走査熱量測定法と比較して変態温度の差異5K以内,温度ヒステリシスの差異6Kで,双方向の変態温度の測定に成功した.そこで,サンプルサイズ1mm角の組成の異なる薄膜形状記憶合金を集積した,薄膜ライブラリを用いて同様の測定を行った.薄膜ライブラリは,合金構成元素をそれぞれ単独のターゲットから同時に成膜し,薄膜合金を得る,合成スパッタ法を利用し,各ターゲットの成膜位置を調整することで発生する組成の傾斜を利用して製作した.この薄膜ライブラリで測定を行ったところ,Pdの組成3647at.%の間で,変態温度約50K,温度ヒステリシス約50Kの分布を測定することに成功した.本成果は,従来,1サンプル毎に加熱及び冷却をしながら示差走査熱量測定法により測定していた変態温度を,サーモグラフィを用いることで,簡単に複数サンプルを同時評価することを可能にした点で意義が大きい.薄膜形状記憶合金を利用する上で,その駆動性能を大きく左右する熱特性は非常に重要な物性である.一方で,組成や添加元素によってその熱特性は大きく変化することが知られている.そこで,本研究を利用すれば,簡単に広い組成範囲にわたり熱特性を評価することが可能であり,薄膜形状記憶合金の開発や,アプリケーションに相応しい薄膜形状記憶合金の探査に活用することができる.
中性子星の構造と重力波天文学

連星中性子星から放出される重力波を解析するために、摂動論的アプローチを用いて解析を行った。特に本研究では星の回転の効果を取り入れるために、星のモデルとして十分にゆっくりと回転している星を仮定した。十分にゆっくり回転している星の場合に、これまで行われていた手法として摂動方程式の形式としてRegge-Wheeler形式が多く採用されていた。しかし、球対称星の場合、重力波は星の物質と相互作用する極性モードと相互作用しない軸性モードに完全に分離できた。しかし、星に回転があると、極性モードと軸性モードが相互作用するために摂動方程式が複雑になる。そこで、摂動方程式を従来とは異なる形式で構成し、モードの相互作用の効果をより取り扱いやすい形式にならないかを研究した。
乳癌細胞の肺転移を促進する遺伝子の発見とその臨床病理学的研究

Foxc2遺伝子は、中胚葉組織の発生を制御している。乳腺上皮の癌である乳癌細胞に中胚葉的性状をおこすFoxc2を高発現させると、転移能が亢進し、上皮マーカーのE-カドヘリンは減少し、間葉マーカーであるビメンチンや平滑筋アクチンが増加していることを見出した。また、上皮-間葉転換をおこすSnail, Twist遺伝子との上下関係を検討した結果、TwistやSnail遺伝子がFoxc2遺伝子の上流にあることを明らかにした。Foxc2遺伝子は、多くの中胚葉由来組織の発生を制御していることが以前の我々のノックアウトマウスを用いた研究からわかっていた。例えば、体節は最初上皮様構造をとっているが、その後中胚葉細胞に変換し、硬節を経て骨格系の前駆細胞になる。中胚葉発生制御遺伝子Twistが上皮-間葉転換を介して、乳癌細胞の転移能を増加させるという論文を見て、当研究室で研究してきたFoxc2遣伝子について同様な機能があるのではないかと考えて研究をスタートさせた。まず、マウス乳癌EpRas細胞にFoxc2発現ベクターを遺伝子導入し高発現永久株を樹立した。親株のEpRas細胞やFoxc2高発現株細胞をマウス乳腺皮下の脂肪組織に移植した。約6週後に、原発巣および肺転移の癌を検討した。原発巣の腫瘍サイズや数は親株と高発現株の間に差はなかった。しかし、肺への転移巣の数は親株を移植した場合10個であるのに対し、Foxc2高発現株では40個と4倍になっていた。また、転移巣の癌細胞はFoxc2高発現が持続していた。Foxc2高発現乳癌細胞にFoxc2 siRNAを用いてノックダウンすると、Foxc2発現が低下した乳癌細胞は肺への転移が激減した。そこで、Foxc2遺伝子による転移能亢進の分子メカニズムとして上皮-間葉転換がおこっている可能性を明らかにするために、上皮細胞MDCKにFoxc2発現ベクターを遺伝子導入し、永久株を得た。Foxc2高発現細胞における上皮マーカー、間葉マーカーの変化を検討した結果、Foxc2高発現細胞株では、上皮マーカーのE-cadherin、cateninが減少し、間葉マーカーであるVimentin, Fibronectin, N-cadherin, smooth muscle actinが増加していた。前年度は、Foxc2遺伝子が高発現している乳癌細胞は肺への転移が増加すること、典型的上皮細胞であるMDCK細胞にFoxc2を発現させると細胞が上皮様多角形から紡錘状に変化すること、を明らかにした。今年度は、上皮-間質転換をすることが知られているTGFβとFoxc2の関係を検討した。10T1/2細胞にTGFβを作用させると間質マーカーであるsmooth muscle actin(SMA)が誘導されることが知られている。10T1/2細胞をFoxc2 siRNA処理してFoxc2をノックダウンさせた10T1/2細胞にTGFβを作用させてもSMAが誘導されなかった。このことは、TGFβのSMA誘導はFoxc2を介してなされていることを示唆している。そこで、SnailやTwist遺伝子とFoxc2遺伝子の相互関係を明らかにする目的で、Twist高発現細胞株、Snail高発現細胞株、Foxc2高発現細胞株を樹立した。解析の結果、Twist高発現細胞株やsnail高発現細胞株では、Foxc2の発現が上昇していることが明らかになった。一方、Foxc2高発現細胞株ではTwistやsnail遺伝子の発現に変化がなかった。このことは、Twist遺伝子やsnail遺伝子がFoxc2遺伝子の上流にあることを意味している。また乳癌患者サンプルにおいて、FOXC2発現と乳癌悪性度マーカーが相関するかどうかを免疫組織学的に検討した。その結果、FOXC2陽性の乳癌細胞はエストロゲン受容体陰性であり乳癌の悪性度が高いサンプルに高率に認められることが判明した。以上の事実から、FOXC2は乳癌細胞の悪性化遺伝子の1つであり、癌細胞に間質細胞の性質を付与することにより転移能を増加させていると考えられる。
基板バイアス効果を利用した低消費電力LSIのための微細MOSFETに関する研究

私達が以前提案した基板バイアス係数可変完全空乏型SOI MOSFET(以下、γ可変FD SOI MOSFET)は基板バイアス効果を用いた低消費電力化手法において、動作時の高速動作と待機時の低リーク電流という優れた特性を発揮すると考えられる。しかしながら提案デバイスに関する私達のこれまでの報告は、デバイスシミュレーションによる評価と微細化されていない長チャネルデバイスのDC特性の測定結果が主である。したがって、その実測によるAC特性を含めた評価は非常に重要と考えられる。本研究では沖電気工業の有する0.14μmプロセスラインにより、10nmの薄膜BOXを有するウェハ上にγ可変FD SOI MOSFET作成していただいた後、作成されたγ可変FD SOI MOSFETの短チャネル効果の影響、リングオシレータのインバータ遅延時間の評価などを行った。特に、γ可変FD SOI MOSFETで構成されたリングオシレータの測定によりデバイスシミュレーションから予想されたγ可変FD SOI MOSFETのAC特性での優位性を示した。得られた結果は、2006年の12月に行われた電子デバイスの分野でもっとも権威のある学会のひとつであるIEEE International Electron Device Meeting (IEDM)において報告された(pp.877-880)。また、本提案デバイスの新動作方式の解説を行った論文が英文論文誌IEEE Transactions on Electron Deviceの2007年2月号に掲載された。その他には、薄膜BOX完全空乏型SOI MOSFETにおける不純物ばらつきに関する論文を2006 Silicon Nanoelectonics Workshopで発表した。
9-1-1/TopBP1相互作用を基盤とするDNA損傷応答初期過程の解析

Rad9-Hus1-Rad1(9-1-1)複合体はDNA損傷センサーとして働き、TopBP1と結合してそのシグナルを下流へ伝達する。本研究では、9-1-1とTopBP1の結合はそれらのDNA損傷部位への移動には影響せず、損傷部位への移動後のシグナル伝達に関わること、その結合能が細胞の損傷応答能と相関することが分かった。また、9-1-1には潜在的なDNA結合能があり、他の因子との結合によりこのDNA結合能が調節されることが示唆された。Rad9-Hus1-Rad1(9-1-1)複合体は、TopBP1と結合して様々なDNA損傷に応答する代表的なチェックポイント経路であるATR-Chk1経路の活性化に関与する。我々は、ユビキタスなキナーゼCK2がRad9のC末端に存在する341、387番目のセリンの両方をリン酸化すること、またこの両方のリン酸化に依存した9-1-1/TopBP1間の相互作用がATR-Chk1経路の活性化に必要であることを明らかにし、本年度Genes to Cells誌に報告した(Takeishi et al 2010)。我々は、さらにこのリン酸化やそれに伴う9-1-1/TopBP1間の相互作用と、9-1-1とTopBP1のDNA損傷認識における役割との関係を調べるために、精製タンパク質を用いたin vitroのDNA結合実験とヒト培養細胞を用いた局所的紫外線照射後の細胞内におけるこれらのタンパク質の局在解析を行った。精製した9-1-1はRad9のC末端を欠失させるとプライマー/テンプレート型のDNA、特に5'末端が境界に存在するDNAに特異的に結合することが分かった。これに対し、精製TopBP1は一本鎖、二本鎖どちらのDNAにも結合した。またヒト培養細胞内ではRad9やTopBP1はそれぞれ紫外線照射部位へ局在したが、それぞれの局在は他方のノックダウンでは影響されなかった。このことはこれらの損傷部位への局在が独立に行われることを示唆する。TopBP1と結合しないRad9を過剰発現する株では紫外線やアルキル化剤に対して高感受性を示すことから、9-1-1とTopBP1の結合は損傷部位へこれらが集積した後の過程でのシグナル伝達に重要な役割を果たすと考えられる。ヒトの代表的なDNA損傷応答経路としてATR-Chk1経路が存在する。9-1-1(Rad9-Hus1-Rad1)複合体はこの経路の活性化に関わるリング状の三量体であり、Rad9のC末端にはリングから飛び出し様々な因子と相互作用するtai1領域が存在する。このC末端にはTopBP1が結合することが分かっていたが、我々は昨年度、この領域に存在する341番目および387番目のセリンをカゼインキナーゼ2(CK2)がリン酸化し、このリン酸化がRad9とTopBP1の結合を可能にし、ヒト細胞内における損傷応答に必要である事を報告した(Takeishi et al,2010)。本年度はさらにこの9-1-1/TopBP1相互作用の細胞内における役割を調べるために、ヒト培養細胞を用いた局所的紫外線照射後のこれらのタンパク質の細胞内局在の解析を行った。ヒト培養細胞内でRad9およびTopBP1は、それぞれ紫外線照射部位へ局在した。興味深い事にTopBP1と結合しない変異型Rad9を発現する細胞では、Rad9自体の紫外線照射部位への局在は野生型Rad9を発現する株と変わらなかったが、TopBP1の紫外線照射部位への局在が減少した。しかしながら、この損傷部位への局在の減少は紫外線照射後の比較的早い時点でのみ(照射後30分程度)顕著に認められた。一方、同じ条件でATR-Chk1活性化の指標であるChk1の345番目のセリンのリン酸化状態を調べたところ、変異型Rad9発現株でTopBP1の紫外線照射部位への局在が回復する時間帯でもChk1のリン酸化状態は低いままであった。これらの事から、9-1-1とTopBP1のCK2によるリン酸化部位を介した結合は、TopBP1の損傷部位への局在を促進するが、その局在以上にこれらのタンパク質が損傷部位へ局在した後のシグナル伝達に重要な役割を果たす事が明らかとなった。
実解析学と凾数解析学の総合的研究

研究は次の5つの分野について研究グループを組織し,それらを基本的単位として運用しながら,かつ有機的関連を持つようにはかって行った.実解析学の研究,函数空間と作用素の研究,表現論と調和解析の研究,作用素環・函数環の研究,偏微分方程式の函数解析的研究,であるMorrey空間,BMO空間,Besov空間やその上の作用素の研究を行った.宮地晶彦はsharp最大函数を用いて定義される空間について,領域上の函数の延長や函数の積に関する結果を得た.猪狩惶等はBanach空間やBanach代数の研究を行なった.竹尾富貴子はフラクタル集合のハウスドルフ次元を計算した.さらに大春慎之助等は半数形発展方程式に応ずる非線形半群の特徴付けを得,これに関連して解析的半群,共役半群,積分化半群の非線形摂動に関する最終的な結果を与えた.無限次元リ一群,量子群の表現論が活発に研究された.特に柏原正樹や神保道夫の研究がある.半単純リー群と半単純対称空間上の調和解析について,大島利雄,小林俊行,山下博他の研究がある.平井武は,無限離散群の既約表現の構成とその正則表現の既約分解を研究し,また,微分同相群と無限対称群の間のHowe型相互律を与えた.リー超代数の表現論については,西山亨等が表現のcommutant algebraを求め,Weyl型の相互律を研究した.偏微分方程式の解の構成法,表示等につき河合隆裕等の詳しい結果が出された.小松彦三郎の抽象的ラプラス変換の方法も具体的な方程式に適用すれば,古典的な解の表示を手早く再現することが分かった.研究は次の5つの分野について研究グループを組織し,それらを基本的単位として運用しながら,かつ有機的関連を持つようにはかって行った.実解析学の研究,函数空間と作用素の研究,表現論と調和解析の研究,作用素環・函数環の研究,偏微分方程式の函数解析的研究,であるMorrey空間,BMO空間,Besov空間やその上の作用素の研究を行った.宮地晶彦はsharp最大函数を用いて定義される空間について,領域上の函数の延長や函数の積に関する結果を得た.猪狩惶等はBanach空間やBanach代数の研究を行なった.竹尾富貴子はフラクタル集合のハウスドルフ次元を計算した.さらに大春慎之助等は半数形発展方程式に応ずる非線形半群の特徴付けを得,これに関連して解析的半群,共役半群,積分化半群の非線形摂動に関する最終的な結果を与えた.無限次元リ一群,量子群の表現論が活発に研究された.特に柏原正樹や神保道夫の研究がある.半単純リー群と半単純対称空間上の調和解析について,大島利雄,小林俊行,山下博他の研究がある.平井武は,無限離散群の既約表現の構成とその正則表現の既約分解を研究し,また,微分同相群と無限対称群の間のHowe型相互律を与えた.リー超代数の表現論については,西山亨等が表現のcommutant algebraを求め,Weyl型の相互律を研究した.偏微分方程式の解の構成法,表示等につき河合隆裕等の詳しい結果が出された.小松彦三郎の抽象的ラプラス変換の方法も具体的な方程式に適用すれば,古典的な解の表示を手早く再現することが分かった.実函数論・函数解析学2分野合同のシンポジュウムを開催するとともに上記の各分担者がそれぞれの専門分野の研究集会を主催して研究交流した.研究実績はつぎの通り.1.表現論と調和解析の分野では,平井らの無限次元群のユニタリ既約表現の構成・梅田亨らの量子群の構造の研究・山下博らの半単純リー群の表現論ならびに藤原英徳らの可解リー群の表現論の研究等で成果があった.2.実解析学では,微分方程式に函数空間の理論を応用して成果を上げた.フーリエ掛け算作用素に対する作用函数や種々の直交函数系,函数近似,等に関する古典的問題においても成果があった.羽鳥はバナッハ代数と作用函数とに関して良い結果を出した.確率論の佐藤坦らのグループの研究成果は実函数論に新しい刺激を与えつつある.3.函数空間と作用素の研究の分野では,近年益々非線形解析の分野がその重要性を増している.今年度の研究では,従来の研究をさらに発展させると共に具体的な非線形問題の研究に重点を置いた.また共同研究により抽象理論の必要性を示し,多くの新知見を得た.4.作用素環・函数環の分野では,Toeplitz作用素の研究・因子環の指数理論・因子環の包含関係の研究等で進展があった.5.微分方程式の函数解析的研究の分野では,国際会議を主催しその会議録を出版した.ここで公表された研究の多くは,ひき続き発展している.一例として,小松は,ラプラス超函数に対して,角域で整型な函数が自然な乗法因子となることを発見し,微分方程式の解法に役立てた.研究は次の5つの分野について研究グループを組織し,それらを基本的単位として運用しながら,かつ有機的関連を持つようにはかって行った.実解析学の研究,函数空間と作用素の研究,表現論と調和解析の研究,作用素環・函数環の研究,偏微分方程式の函数解析的研究,である。Morrey空間,BMO空間,Besov空間やその上の作用素の研究を行った.宮地晶彦はsharp最大函数を用いて定義される空間について,領域上の函数の延長や函数の積に関する結果を得た.

猪狩惶等はBanach空間やBanach代数の研究を行なった.竹尾富貴子はフラクタル集合のハウスドルフ次元を計算した.さらに大春慎之助等は半線形発展方程式に応ずる非線形半群の特徴付けを得,これに関連して解析的半群,共役半群,積分化半群の非線形摂動に関する最終的な結果を与えた.無限次元リー群,量子群の表現論が活発に研究された.特に柏原正樹や神保道夫の研究がある.半単純リー群と半単純対称空間上の調和解析については,大島利雄,小林俊行,山下博他の研究がある.平井武は,無限離散群の既約表現の構成とその正則表現の既約分解を研究し,また,微分同相群と無限対称群の間のHowe型相互律を与えた.リー超代数の表現論については,西山亨等が表現のcommutant algebraを求め,Weyl型の相互律を研究した.偏微分方程式の解の構成法,表示等につき河合隆裕等の詳しい結果が出された.小松彦三郎の抽象的ラプラス変換の方法も具体的な方程式に適用すれば,古典的な解の表示を手早く再現することが分かった.
過渡的な超分子複合体によるタンパク質膜透過・膜組み込み過程の解明

今年度の実験計画に基づき、バクテリアタンパク質膜透過装置Sec膜タンパク質複合体の結晶構造を明らかにするための実験を進行させた。特に、プロトンの濃度勾配を利用しタンパク質膜透過を促進するSecDF複合体に注目して研究を進めた。SecDFは膜貫通領域とペリプラズム側の可溶性ドメインであるPI-head、PI-headと膜貫通領域をつなぐP1-base及びP4から構成される。SecDFは機能サイクルの中でP1-headが細胞膜に近づいた「F型」、P1-headが細胞膜から遠ざかった「I型」と呼ばれる2つの異なるコンフォメーションを取るとされてきた。F型、I型ではP1-baseとP4は6本のベータシートから構成される安定な構造体に見えていたが、機能解析の結果から、この構造が変化する可能性が示された。そこでこの部位の形状が異なる新規構造の解明を目指した。これまでとは異なる結晶化条件においてSecDFの結晶を取得し、結果としてSecDFの新規構造を分解能2.8オングストロームで決定することができた。この構造は、P1-head領域がF型よりも細胞膜に近づいた状態であったため、「超F型」と名付けた。超F型SecDFでは、F型およびI型ではベータシートであったbase領域がベータバレルに組変わっていた。この構造変化のメカニズムを明らかとすべく、生化学的な実験を行った。その結果、超F型でのみ相互作用が確認された膜貫通領域の保存されたアルギニンとアスパラギン酸を置換すると、生体内で超F型構造を形成しなかった。この結果から、膜貫通領域の相互作用が細胞外領域の構造変化を制御する「リモートカップリング機構」が強く支持された。これらの構造情報と機能解析の結果をまとめ、SecDFの連続した一連の構造変化が駆動するタンパク質膜透過現象の作業仮説を提唱し、論文として報告した。29年度が最終年度であるため、記入しない。今年度の実験計画に基づき、バクテリアタンパク質膜透過装置SecYEGの結晶構造を明らかにするための実験を進行させた。これまでに、SecYEの構造はいくつか報告されていたが、SecGを含む複合体の4オングストローム分解能を超える構造は明らかとなっていなかった。そこで、SecYEGの高分解能構造決定を目指し、研究を行った。高度好熱菌由来のSecYEGを大腸菌内で発現させた後、各種カラムクロマトグラフィーを用いた精製を行い、結晶化に十分な純度でのタンパク質を取得した。LCP法による結晶化を行い、スクリーニングの結果、測定に必要な大きさの単結晶を取得した。大型放射光施設SPring-8における測定により、最高で2.7オングストローム分解能のデータセットの取得に成功した。以前に報告されているSec複合体を用いた分子置換法により、位相決定を行った。構造決定により、これまでの報告では見えていなかったSecGのフレキシブルなループがSecYのサイトプラズム側の孔を塞ぐように位置していることが明らかとなった。システインクロスリンク実験により、SecYとSecGのループが相互作用することを確認した。このループをSecYに固定すると、基質タンパク質の膜透過反応が妨げられた。構造情報とこれらの結果より、これまで役割が不明であったSecGのループは、静止状態のSecYの孔を塞ぐ役割があることが考えられた。これらの結果をまとめ、新たなモデルを提唱した(Tanaka et al., Cell Rep. 2015 )。その後、膜透過反応をより詳細に理解するため、SecYEGと協力して膜透過反応を行うとされるいくつかの因子の構造決定を目指し、研究を進めた。現在、複数の複合体の結晶取得に成功し、構造決定を試みている。Secトランスロコンの高分解能構造解析に成功し、その構造情報を基にした機能解析をとあわせて新たなモデルを提唱した。今後はより高次のSec複合体の構造解析達成を目指す。SecDFは膜貫通領域とペリプラズム側の可溶性ドメインを持ち、可溶性ドメインが「F型」、「I型」と呼ばれる2つの異なるコンフォメーションを取るとされてきた。しかし、I型の全長構造は未知であった。そこで、SecDFのI型構造決定を目指し、研究を行った。グラム陰性細菌由来のSecDFを大腸菌内で発現させた後、各種カラムクロマトグラフィーを用いた精製を行い、結晶化に十分な純度でのタンパク質を取得した。大型放射光施設Spring-8における測定により、最高で2.6オングストローム分解能のデータセットの取得に成功した。以前に報告されたF型SecDFの構造を用いた分子置換法により、位相決定を行い、わずかに異なる複数のI型SecDFの構造を決定した。あるSecDFの構造では、可溶性ドメインのくぼみに結晶化時に添加した小分子が結合していた。生化学的な実験を行ったところ、このくぼみに膜透過タンパク質が結合することが明らかとなった。また、小分子結合型SecDFでは、膜貫通領域の内部に細胞膜を貫通するトンネル構造が見られた。また、このトンネルの中心にはSecDFのプロトン透過活性に必須のアスパラギン酸が存在していた。

コンピュータシミュレーションにより、このトンネルの内部に水分子が入り込み、一列に並ぶ様子が観察された。この水分子を介してプロトンの流入が起こると考えられる。これらの結果をまとめ、SecDFによる新たなタンパク質膜透過モデルを提唱した。SecDFの高分解能構造解析に成功し、その構造情報を基にした機能解析とあわせて新たなタンパク質膜透過モデルを提唱することができた。タンパク質の膜を超えた輸送という生命に不可欠な現象に関わるSecDFの機能メカニズムの解明は、当該分野の基礎研究に大きく貢献するものであると考えている。また、SecDFはバクテリアに特有かつ重要なタンパク質であることから、SecDFを標的とした新たな抗生物質の開発のための構造基盤として利用されることも期待される。今年度の実験計画に基づき、バクテリアタンパク質膜透過装置Sec膜タンパク質複合体の結晶構造を明らかにするための実験を進行させた。特に、プロトンの濃度勾配を利用しタンパク質膜透過を促進するSecDF複合体に注目して研究を進めた。SecDFは膜貫通領域とペリプラズム側の可溶性ドメインであるPI-head、PI-headと膜貫通領域をつなぐP1-base及びP4から構成される。SecDFは機能サイクルの中でP1-headが細胞膜に近づいた「F型」、P1-headが細胞膜から遠ざかった「I型」と呼ばれる2つの異なるコンフォメーションを取るとされてきた。F型、I型ではP1-baseとP4は6本のベータシートから構成される安定な構造体に見えていたが、機能解析の結果から、この構造が変化する可能性が示された。そこでこの部位の形状が異なる新規構造の解明を目指した。これまでとは異なる結晶化条件においてSecDFの結晶を取得し、結果としてSecDFの新規構造を分解能2.8オングストロームで決定することができた。この構造は、P1-head領域がF型よりも細胞膜に近づいた状態であったため、「超F型」と名付けた。超F型SecDFでは、F型およびI型ではベータシートであったbase領域がベータバレルに組変わっていた。この構造変化のメカニズムを明らかとすべく、生化学的な実験を行った。その結果、超F型でのみ相互作用が確認された膜貫通領域の保存されたアルギニンとアスパラギン酸を置換すると、生体内で超F型構造を形成しなかった。この結果から、膜貫通領域の相互作用が細胞外領域の構造変化を制御する「リモートカップリング機構」が強く支持された。これらの構造情報と機能解析の結果をまとめ、SecDFの連続した一連の構造変化が駆動するタンパク質膜透過現象の作業仮説を提唱し、論文として報告した。引き続きより高次のSec複合体の構造決定をすすめる。構造が決定できれば、構造情報に基づいた遺伝学的、生化学的なアッセイにより膜透過現象の詳細な解明を目指す。研究計画に基づき、SecYEGを含むより高次の複合体構造の決定を目指す。29年度が最終年度であるため、記入しない。
会話集による近代日本語の基礎的研究

幕末から明治二十年までに編纂された日本語・西洋語対訳の会話集について、日本語史の資料として多くの研究者が利用できるよう整備することを目的に、当該資料を収集・整理・分類した。また、その代表的な資料であるアーネスト・サトウの"Kuaiwa Hen "(『会話篇』、明治六年刊)について、ローマ字で記された会話体日本語文を漢字仮名交じり文に直して翻字し、かつ、英文で記された注釈を翻訳することにより、同資料を日本語史の資料として一層利用しやすい形にした。本研究の目的は、幕末から明治二十年頃までに編纂された日本語・西洋語対訳の会話集について、日本語史資料として多くの研究者が利用できるよう整備することにある。平成18年度の主な研究実績は以下の通り。1.幕末から明治十九年までに刊行された会話集の全貌を明らかにすべく、約50の会話集について調査を行ない、その影印・コピー等を収集した。2.上記の資料について、以下のような資料群に大別し、内容を検討した。オランダ語対訳の会話集蘭学系英会話集中国系英会話集欧米人による会話集外国会話集を底本とする会話集その他の系統、または系統不明の英会話集3.上記の資料に対する先行研究を集め、各資料における研究の現状を把握した。4.アーネスト・サトウ"Kuaiwa Hen"(明治六年刊)について、翻刻・索引化作業を開始した。5.Bellenger系統の会話集である村松守義『明治会話編』(明治十八十九年刊)について、Bellengerの会話集以外の底本を発見し、その編纂方法を考える手がかりを得た。平成19年度の主な研究実績は以下の通り。1.アーネスト・サトウ"Kuaiwa Hen"(明治六,1873年刊)について、漢字仮名混じり文によるPartIの翻字、及びPartIIの英文翻訳作業を行ない、全25課のうち、序文と巻末の動詞活用表を含めた第16課までについて同作業を終了した。その際、単なる翻訳に終始せず、その中で記されている風俗・習慣・事物などについても辞書類を参照するなどして検証を行なった。2.同資料に関する先行研究を集め、各資料における研究の現状を把握した。平成20年度の主な研究実績は以下の通り。1.アーネスト・サトウ"Kuaiwa Hen"(明治六, 1873年刊)について、漢字仮名混じり文によるPart Iの翻字、及びPart IIの英文翻訳作業を行ない、前年度までに未完成であった全25課について同作業を一通り終了した。加えて、冒頭からもう一度翻字と翻訳について見直し、訳語や書式の統一を図った。2.サトウの日記等、"Kuaiwa Hen"の編纂に関係する様々な資料を参照し、Kuaiwa Hen"の記述との関連性について探った。3.Part IIの英文翻訳の際に気づいた、サトウの日本語文法観や用語の特徴についてまとめた。例えばbase(語基)、root(語根)、participle(分詞)といった用語・概念は、アストンなどの先行学説に拠りながらもサトウ独自の考え方があり、しかも"Kuaiwa Hen"では必ずしも一カ所で詳述されているわけではない。従って、把握するにはやや困難が伴うが、全編を翻訳することによりその全体像が明らかになってきた。なお、Part IIの翻訳については、『茨城大学人文学部紀要人文コミュニケーション学科論集』第7号(2009年9月)以降に、「訳注稿」として連載する予定である。