hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
サイバーADRシステムの開発

1.法令や調停事例の検索技術と利用技術に関して検索技術として,相談事例,判例,調停事例の3つの検索サブシステムを開発し,調停の途中でさまざまな意思決定を行うための材料を収集することができ,調停の実質的な支援を行うことができることを示した.相談事例の利用技術として,過去の個々の相談事例の中で特徴的な部分を抽出して特徴ベクトルを作ることによって,助言に至るまでの質問のフローを生成し,調停機関での自動相談システムの構築の負担を軽減するシステムを開発した。2.擬人化エージェントを使った調停の進行制御技術に関して人間の代わりに擬人化エージェントが調停を進行させるためには,発言の制御と表情の制御が必要である.発言の選択は,主に過去の類似場面で使われた発言をコピーすることで対処した.表情の選択は,人間の表情表出モデルを心理状態の遷移によるベイジアンネットとして構築する手法を提案し,実験によって,人間の代行が可能であることを示した.また,感情を扱えるように拡張したゲーム理論と表情制御が関連あることを示し,表情表出の戦略について考察した.3.サイバーADRシステムの実装に関して上記の研究成果をサイバーADRシステムとして実装した.このシステムは法科大学院において試用を行い,その結果に基づいて仕様の改良を行った.また,このシステムを利用して,模擬調停の事例を収集し,統計的な解析を試みた.その結果,このシステムを使用した調停は,従来の対面方式との調停を比べて,論理的な会話がなされ,より質の高い調停結果が得られることが確認された.4.調停委員教育への応用に関してサイバーADRシステムで収集した調停の事例ベースを用いて,調停のクラスタリングや,調停員のタイプ分類,という2つの解析を試みた.その結果,事例ベースが調停スキルの教育に有望であることが示された.1.法令や調停事例の検索技術と利用技術に関して検索技術として,相談事例,判例,調停事例の3つの検索サブシステムを開発し,調停の途中でさまざまな意思決定を行うための材料を収集することができ,調停の実質的な支援を行うことができることを示した.相談事例の利用技術として,過去の個々の相談事例の中で特徴的な部分を抽出して特徴ベクトルを作ることによって,助言に至るまでの質問のフローを生成し,調停機関での自動相談システムの構築の負担を軽減するシステムを開発した。2.擬人化エージェントを使った調停の進行制御技術に関して人間の代わりに擬人化エージェントが調停を進行させるためには,発言の制御と表情の制御が必要である.発言の選択は,主に過去の類似場面で使われた発言をコピーすることで対処した.表情の選択は,人間の表情表出モデルを心理状態の遷移によるベイジアンネットとして構築する手法を提案し,実験によって,人間の代行が可能であることを示した.また,感情を扱えるように拡張したゲーム理論と表情制御が関連あることを示し,表情表出の戦略について考察した.3.サイバーADRシステムの実装に関して上記の研究成果をサイバーADRシステムとして実装した.このシステムは法科大学院において試用を行い,その結果に基づいて仕様の改良を行った.また,このシステムを利用して,模擬調停の事例を収集し,統計的な解析を試みた.その結果,このシステムを使用した調停は,従来の対面方式との調停を比べて,論理的な会話がなされ,より質の高い調停結果が得られることが確認された.4.調停委員教育への応用に関してサイバーADRシステムで収集した調停の事例ベースを用いて,調停のクラスタリングや,調停員のタイプ分類,という2つの解析を試みた.その結果,事例ベースが調停スキルの教育に有望であることが示された.本年度はADR(紛争に関する助言・斡旋・調停・仲裁)に関して,以下の成果を得た。1.トラブル事例の検索と調停案の提示オンラインADRの試行を行っている調停機関を訪問し,一般相談者からの相談内容をメールで受け付けてから,結論を出すまでの相談員の調停の手順を観察した。また,相談事例をおよそ300ほど入手し,これらの事例を分析して,事例を分類するための重要な概念を抽出した。この概念を利用して,事例集をXML文書として整理し,相談事例から相談結果を推定するためのルール集合を帰納推論の手法で求めた。このルール集合を利用すると,相談者はいちいち相談員を呼ばなくても,自分で相談結果を推定することが出来るので,相談員の負荷を大きく減じることができる。このルール集合を利用した自動相談システムの仕組みを,上記の調停機関のホームページに掲載し,一般相談者に開放している。2.擬人化エージェントによる調停オンライン調停において,アニメーションを使うインターフェースを開発し,喜怒哀楽などのアニメーションの表情が調停およぼす心理的な影響が大きいことを確認した。さらに,調停における相談員の一部の役割を擬人化エージェントで自動化するシステムを試作した。この擬人化エージェントは,相談員の表情変化の癖を反映したベイジアンネットを構築し,相談員と同じような表情変化を起こすことによって,一般相談者には違和感を生じさせないことを,被験者を用いた実験で確認した。本年度はオンラインADR(紛争に関する助言・斡旋・調停・仲裁)に関して,以下の成果を得た。1.消費者センターにおける自動相談システムの開発と評価実験昨年度は相談事例から人間の手でルールを抽出し,自動相談のWebページを作成したが,本年度はその仕組みを拡張し,以下のように相談事例から自動的に相談のWebページを生成するシステムを開発した。まず,相談員と相談者の間のメールを自動的にXML文書に変換し,事例データベースに蓄積する。次に個々の事例について特徴的な部分に人手でマークを行うと,帰納推論を行って,相談を行うためのWebページを自動的に作成する。

このシステムを実装して,相談員の方々に評価していただき,相談員の方々の想定するWebページとの差異が少ないことを示した。2.擬人化エージェントを利用した,オンライン調停支援システムの機能の拡充昨年度に開発を始めたオンラインの調停支援システムに関して,複数の法律の専門家に評価していただき,事例検索機能やCGアニメーションの表情制御機能などの拡張を行った。3.模擬調停事例の収集と分析オークション取引におけるトラブル事例について,3名1組(調停者,落札者,出品者)の模擬調停を行い,論点の推移の分析や類似場面の検索についての分析を行った。15組の実験を行ったところ,オンラインシステムを用いても,実際の対面調停と比べて,発言内容が制約されることはなく,むしろ,論理的な議論が可能であることを示した。昨年度までに開発したオンライン調停支援システムに類似場面検索機能を付加した。この機能は,事例ベースに蓄積した過去の調停記録の中から,現在の調停場面に類似した部分を検索し,次になすべき発言についての材料を得ることを目的とする。従来では,発言内容を直接類似検索する手法が多かったのに対し,本手法では発言内容を,(1)争点と(2)前の発言との関係の2つからインデキシングする点で特徴がある。過去の類似場面を,このインデックスを用いて検索する際に,検索精度を高めるために,連続する3発言のインデックスを用いて検索する手法をとっている。実験の結果,本手法で高い精度の類似場面検索が可能となり,その次になすべき発言の候補を抽出することが可能となることを示した。次にオンライン調停を自動化するため,調停のセミナーにおいて,調停スキルの解析を行った。調停においてはアクティブリスニングとよばれる手法(積極的に当事者から話を聞き出しだり,話し合いの内容を確認したりする技法)が重要な役割を果たすこと,および,調停には促進的な調停と評価的な調停があることを認識し,これらをオンライン調停支援システムに組み込むため,従来の調停事例のインデキシングに,調停技法に関する情報を組み込めるように拡張を行った。さらに調停における情報収集の1手法として判例の構造に着目した判例検索手法を開発した。これは従来のようにキーワードを用いて判例検索をするのではなく,事件の概要を入力して,その事件に関係の深い判例を抽出するものである。出現頻度は高くなくても,重要な用語に着目することにより,検索精度を高めることができることを示した。これらの成果を利用し,オンライン調停において,過去の事例を利用して調停を自動的に行うエージェントの試作を行い,その実用可能性に関して評価を行った。
クラヴィコードを視点とした18世紀ヨーロッパの音楽文化に関する研究

本年度は,クラヴィコードに関する美学的・実践的な研究を主として行った。久保田はクラヴィコード作品を数多く作曲したC.P.E.バッハの音楽美学を,彼の標題音楽との関連において考察した。とりわけ彼の音楽美学は,音や音楽の表出性に基礎をもっており,クラヴィコードという楽器によって,最も効果的に実現されることを明らかにした。この研究は,東京学芸大学紀要第2部門人文科学編(第50集・1999年)に掲載される論文「C.P.E.バッハと標題音楽-その理念と実践-」にまとめられている。さらに7月には,角倉一朗(東京芸術大学教授)を招き,J.S.バッハの「平均律クラヴィーア曲集」について講演を行った。ここでは特にハ長調の前奏曲の成立過程が明らかにされ,さらにこの曲集が18世紀,19世紀にどのように受容され,今日に至ったのについての研究の発表があった。椎野はクラヴィコードの演奏法の研究を行い,10月にはチェンバロ奏者・辰巳美奈子を招き,今回の科学研究費補助金で購入したクラヴィコードで,C.P.E.バッハの作品を演奏会を開催した。なお,ここではクラヴィコード,クラヴィーア,チェンバロという楽器名が用いられたが,18世紀にあってはこれら楽器はクラヴィーアという名前でもって総称されていた。平成9年8月に、クラヴィコードが搬入された。椎野は、楽器奏法を取得し、18世紀の作曲家(J.S.バッハ、C.P.E.バッハ等)のクラヴィコード作品の演奏を試みた。特にフレージング、ベ-ブンク、リズム法といった、この楽器の特性に由来(適)する音楽表現様式と、実作品との関係を、演奏を通して考察した。その結果、クラヴィコードの特性を作曲家は理解し、その表現に努力しており、クラヴィコード以外の鍵盤楽器(例えば、チェンバロ、ピアノ・フォルテ、オルガン)の作曲様式が演奏様式にも、クラヴイコードの奏法の影響が指摘できる。家庭用楽器あるいは卓上楽器であったクラヴィコードが、この時代の鍵盤音楽の基本的音楽様式を形成していたことが明らかになった。久保田および丸山は、楽器学の立場から、楽器の構造の特性を解明した。基本的には、古代・中世の「モノコルド」に由来するクラヴィコードは、モノコルドが音楽理論の考察の楽器であったことを反映して、作曲家用の卓上楽器として、重要な地位を保ち続けた。他方、弦と鍵盤が直結したクラヴィコードでは、演奏家の指や手の動きが、直接弦に伝わり、実にニュアンスに富んだ音楽表現を可能とした。このように、クラヴィコードは、音楽史において、その役割を持つことになった。
イネ脱粒性遺伝子の栽培化における役割および遺伝子ネットワークの解明

1.イネの栽培化において脱粒性の喪失の原因となった遺伝子の解析これまでに作出した3つの脱粒性遺伝子、qSH1,OSH15, sh4の相互作用を解析するための8種類の材料を用いて、出穂直後から1週間毎に4週間後まで脱粒性の定量的な測定を行った。また、籾の基部の切片を作成し、詳細な形態観察を行い、3つの脱粒性遺伝子qSH1,OSH15, sh4の各遺伝子の離層形成および離層崩壊への関与を再調査した。2.イネの新規脱粒性遺伝子の探索選抜した脱粒性の突然変異系統を用いて、後代で表現型および遺伝子型の再確認を行った。また、野生型との交配および世代促進を行い、F2種子を得た。F2個体を栽培し、脱粒性の分離を調べた結果、表現型がおおよそ3:1に分離することが再確認できた。1.イネの栽培化において脱粒性の喪失の原因となった遺伝子の解析これまでに、申請者は、野生イネ(O.nivara)から機能型のsh4遺伝子をクローニングしている。また、先の申請者らによる研究によって、脱粒性遺伝子qSH1の準同質遺伝子系統であるNIL(qSH1)と、新規脱粒性遺伝子OSH15の突然変異体であるd6突然変異体(名古屋大学の北野先生より分譲していただいた)との交雑後代よりqSH1およびOSH15に関する4種類の固定系統(1. qSH1機能型:OSH15機能型、2. qSH1機能型:OSH15機能欠損型、3. qSH1機能欠損型:OSH15機能型、4.qSH1機能欠損型:OSH15機能欠損型)を作出している。平成27年度は、これらの4種類の固定系統に野生イネ由来の機能型のsh4遺伝子およびベクターのみを形質転換した8種類の系統を作出した。2.イネの新規脱粒性遺伝子の探索脱粒性遺伝子qSH1の準同質遺伝子系統であるNIL(qSH1)の種子約3,000個体にガンマ線照射を行い、自殖させ10個体から20個体を1バルクとして161バルクで収穫した突然変異2世代目(M2世代)の種子をすでに準備している。平成27年度は、161バルクの各バルクから50個体ずつ合計で約8,000個体のM2世代の個体を圃場に展開し、脱粒性に関する突然変異体の選抜を行った。計画していた下記の2つの解析を遂行できているため。1.イネの栽培化において脱粒性の喪失の原因となった遺伝子の解析2.イネの新規脱粒性遺伝子の探索1.イネの栽培化において脱粒性の喪失の原因となった遺伝子の解析これまでに、申請者は、野生イネ(O.nivara)から機能型のsh4遺伝子をクローニングしている。平成27年度は、これらの4種類の固定系統に野生イネ由来の機能型のsh4遺伝子およびベクターのみを形質転換し、8種類の系統を作出した。平成28年度は、これらの8種類の材料を用いて、出穂直後から1週間毎に4週間後まで脱粒性の定量的な測定を行った。また、籾の基部の切片を作成し、詳細な形態観察を行い、3つの脱粒性遺伝子qSH1,OSH15, sh4の各遺伝子の離層形成および離層崩壊への関与を調べた。平成28年度は、選抜した4つの難脱粒性突然変異体の脱粒性と離層観察および遺伝子型の確認を行った。また、野生型との交配および世代促進を行い、F2個体を得ることができた。1.イネの栽培化において脱粒性の喪失の原因となった遺伝子の解析2.イネの新規脱粒性遺伝子の探索1.イネの栽培化において脱粒性の喪失の原因となった遺伝子の解析これまでに作出した3つの脱粒性遺伝子、qSH1,OSH15, sh4の相互作用を解析するための8種類の材料を用いて、出穂直後から1週間毎に4週間後まで脱粒性の定量的な測定を行った。

また、籾の基部の切片を作成し、詳細な形態観察を行い、3つの脱粒性遺伝子qSH1,OSH15, sh4の各遺伝子の離層形成および離層崩壊への関与を調べた。2.イネの新規脱粒性遺伝子の探索選抜した脱粒性の突然変異系統を用いて、後代で表現型および遺伝子型の確認を行った。また、同時に野生型との交配および世代促進を行い、F2種子を得た。F2個体を栽培し、脱粒性の分離を調べた結果、表現型がおおよそ3:1に分離することが確認できた。計画していた下記の2つの解析を遂行できているため。1.イネの栽培化において脱粒性の喪失の原因となった遺伝子の解析2.イネの新規脱粒性遺伝子の探索1.イネの栽培化において脱粒性の喪失の原因となった遺伝子の解析これまでに作出した3つの脱粒性遺伝子、qSH1,OSH15, sh4の相互作用を解析するための8種類の材料を用いて、出穂直後から1週間毎に4週間後まで脱粒性の定量的な測定を行った。また、籾の基部の切片を作成し、詳細な形態観察を行い、3つの脱粒性遺伝子qSH1,OSH15, sh4の各遺伝子の離層形成および離層崩壊への関与を再調査した。2.イネの新規脱粒性遺伝子の探索選抜した脱粒性の突然変異系統を用いて、後代で表現型および遺伝子型の再確認を行った。また、野生型との交配および世代促進を行い、F2種子を得た。F2個体を栽培し、脱粒性の分離を調べた結果、表現型がおおよそ3:1に分離することが再確認できた。今年度は、下記の解析を引き続き進める予定である。1.イネの栽培化において脱粒性の喪失の原因となった遺伝子の解析2.イネの新規脱粒性遺伝子の探索今年度は下記の解析を引き続き進める予定である。1.イネの栽培化において脱粒性の喪失の原因となった遺伝子の解析2.イネの新規脱粒性遺伝子の探索今後は、選抜した脱粒性の突然変異体および野生型、F2で脱粒性が分離したDNA等を用いて次世代シークエンサーによりゲノム塩基配列の解読を行い、ガンマ線照射による変異部位の特定および原因遺伝子の同定を試みる。さらに、新規脱粒性候補遺伝子の組織特異的な発現解析および相補性試験を行い、機能証明を行う。当初、外注しようと考えていたNGS解析が、東京農業大学のゲノム支援に採択していただけ、支出がなくなったため。当初、予定していた実験が順調に進んだため、試薬代等を抑えることができたため。(理由)当初、予定していた実験が順調に進んだため、試薬代等を抑えることができたため。(使用計画)F2後代で脱粒性の表現型の分離が確認できたため、NGS解析による原因遺伝子の絞り込み実験等に使用予定である。野生型と突然変異型との交配を行い、後代で表現型が分離していることが確認できれば、NGS解析を外注するために使用する予定である。野生型と突然変異型との交配を行い、後代で表現型が分離していることが確認できれば、NGS解析を外注するために使用予定である。
非行理論の体系化のための基礎的総合研究

上記の課題について,大学所属の研究者と矯正機関の実務者計22名が共同研究をすすめるべく, 4つの下位課題((1)非行理論の比較検討,(2)非行の様態と矯正教育の歴史的考察,(3)現代非行の動向分析と位置づけ, (4)非行の地域性の比較考察)にそって研究をすすめた.昭和62年11月,東北大学を会場に「共同研究報告会」を開催し,成果が以下のような題目・発表者によって報告された.(1)「高校非適応と非行」(山形少年鑑別所・水田恵三),(2)「道徳性の発達と非行」(神戸少年鑑別所・小林裕),(3)「非行少年の悪意識」(東京少年鑑別所・遠山宜哉),(4)「青少年非行の様態と矯正処置の歴史処置の展開に関する社会心理学的研究」(いわき少年鑑別所・渡辺成夫,東北大学・菊池武剋,作道信介), (5)「非行への家族の対応と伝統文化」(東北大学・大橋英寿,那覇少年鑑別所・金城正典), (6)「逸脱と快楽のエスノグラフィー」(東北大学・佐藤郁哉),(7)「生徒指導における教師生徒関係の諸問題」(弘前大学・清俊夫),(8)「暴力犯罪における社会的相互作用の分析」(大阪教育大学・大渕憲一,大阪拘置所・山入端津由), (9)「罪悪感についてー日本人の場合ー」(昭和女子大学・新田健一), (10)「明治初期における刑法理論の受容形成過程」(東京国際大学・安倍淳吉).全体討論の過程で次のような諸点の重要性が再確認された.(1)社会の耳目を集めるような事例にのみ注目するのではなく,非行現象全体をとりあげる.(2)各非行事実を明確に直接とらえる.(3)とりあげる資料を時代史的変遷のなかに位置づけるだけの準拠枠をもつ.(4)全国レベルの資料を安易に利用するのではなく,地域特質に応じて非行現象をとらえる.上記の課題について,大学所属の研究者と矯正機関の実務者計22名が共同研究をすすめるべく, 4つの下位課題((1)非行理論の比較検討,(2)非行の様態と矯正教育の歴史的考察,(3)現代非行の動向分析と位置づけ, (4)非行の地域性の比較考察)にそって研究をすすめた.昭和62年11月,東北大学を会場に「共同研究報告会」を開催し,成果が以下のような題目・発表者によって報告された.(1)「高校非適応と非行」(山形少年鑑別所・水田恵三),(2)「道徳性の発達と非行」(神戸少年鑑別所・小林裕),(3)「非行少年の悪意識」(東京少年鑑別所・遠山宜哉),(4)「青少年非行の様態と矯正処置の歴史処置の展開に関する社会心理学的研究」(いわき少年鑑別所・渡辺成夫,東北大学・菊池武剋,作道信介), (5)「非行への家族の対応と伝統文化」(東北大学・大橋英寿,那覇少年鑑別所・金城正典), (6)「逸脱と快楽のエスノグラフィー」(東北大学・佐藤郁哉),(7)「生徒指導における教師生徒関係の諸問題」(弘前大学・清俊夫),(8)「暴力犯罪における社会的相互作用の分析」(大阪教育大学・大渕憲一,大阪拘置所・山入端津由), (9)「罪悪感についてー日本人の場合ー」(昭和女子大学・新田健一), (10)「明治初期における刑法理論の受容形成過程」(東京国際大学・安倍淳吉).全体討論の過程で次のような諸点の重要性が再確認された.(1)社会の耳目を集めるような事例にのみ注目するのではなく,非行現象全体をとりあげる.(2)各非行事実を明確に直接とらえる.(3)とりあげる資料を時代史的変遷のなかに位置づけるだけの準拠枠をもつ.(4)全国レベルの資料を安易に利用するのではなく,地域特質に応じて非行現象をとらえる.
内分泌細胞の酸素応答とホルモン生合成・分泌制御のクロストークを解明する

内分泌細胞で、ペプチドホルモンや多くの生理活性ペプチドは、まず分子量の大きな前駆体として粗面小胞体で合成され、トランスゴルジネットワーク(TGN)まで輸送される過程で、順次、シグナルペプチドの除去、S-S結合の形成、糖鎖付加などの修飾を受ける。その後、分泌顆粒に選択的に輸送されたホルモン前駆体(プロホルモン)は、顆粒中でプロホルモン活性化酵素(prohormone-converting enzyme; PC1/3, PC2など)による塩基性アミノ酸対の切断、カルボキシペプチダーゼE(Carboxypeptidase E; CPE)による末端塩基性アミノ酸の除去、N末端アセチル化、C末端アミド化と云ったプロセッシングを受け、活性を持つ成熟型ホルモンとなり細胞外に分泌される。通常、分子量の大きなプロホルモンは生理活性を欠き、プロセッシングなど翻訳後修飾を受け、はじめて活性のある成熟型ホルモンとなる。生体は肺で大気(21%酸素濃度= 160 mmHg酸素分圧)を吸い、肺胞でヘモグロビンを介して血中に酸素を取り込む。取り込まれた酸素は血流で全身の細胞に分配され、全身の細胞は酸素を使ってATPを作り生命現象を維持している。生体内の酸素濃度は動脈血で13% (100 mmHg)程度、静脈血で5%程度、組織中の酸素濃度では3.6-12.8%と報告されている。本研究では生理的酸素濃度下でのホルモン分泌能を調べるために、マウス脳下垂体と膵島組織およびその細胞株を種々の酸素濃度(1, 5, 7.5, 10, 15, 21%)で培養したところ、10%酸素濃度下でPC1/3, PC2, CPEの発現が亢進し、成熟型ホルモンの細胞内貯蔵量と分泌が最大値となることを見出した。当初の予定通り、マウス脳下垂体と膵島の内分泌組織およびその細胞株を種々の酸素濃度(1, 5, 7.5, 10, 15, 21%)で培養したところ、10%酸素濃度下でPC1/3, PC2, CPEの発現が亢進し、成熟型ホルモンの細胞内貯蔵量と分泌が最大値となることを検証して論文投稿した。21%,10%酸素濃度で培養した内分泌細胞からRNAを抽出し、10%酸素培養において有意に発現が増強あるいは減弱する遺伝子をDNAマイクロアレイで網羅的に同定し、ノーザンブロット、ウエスタンブロットで検証したのち、その機能を解析する。
酸素標識抗体による抗原保持細胞の特異的破壊

Carcinoempryonic antigen(CEA)は,正常上皮細胞刷子縁のみに存在するが,癌細胞では全表面に現われることが免疫組織化学的に証明されている.この事実に基づき,このような局在変化を示す抗原を標的とすることにより,ミサイル免疫療法を考案した.Glucose oxidaseで標識した抗CEA抗体をヒト直腸癌を移植されたヌードマウスに静注したところ,標識抗体は正常細胞とは反応せず,癌細胞のみと反応し,その近傍で発生したH_2O_2は癌細胞膜を酸化して膜の透過性を高め,追って静注したヨードイオンが浸透して癌細胞は破壊された.この処置で腫瘍の著しい縮小が認められた.本法では貧食細胞が標識抗体を取り込んでも,これを消化,不活性化するため, ricinのような毒性物質で標識した抗体で生ずる網内系への副作用が回避できた.しかし, galactose oxidaseで代用し,それをbiotin-avidine-biotin系により抗体に結合させる方法を開発した.また, CEAは血中に溶出するため,静注した標識抗体と反応し腎臓等に沈着する副作用が生じたので,膜表面にあって,上皮細胞が癌化しても血中に溶出しないがCEAと同様に分布が変化する抗原を検索した.この検索には純度の高い多量のヒト結腸上皮細胞刷子縁を必要としたので,新しい方法を開発した.その結果,刷子縁にのみ存在する,分子量が数千の数種の抗原の分離に成功した.現在はこれら抗原に対する抗体の作製及び分離を施行している.上記のミサイル療法は,上皮性癌細胞の除去のみならず,臓器移植時の拒絶反応に参与する免疫細胞の選択的な除去にも応用可能と考えられる.上皮細胞の癌化に伴う極性の変化の結果,血管側に発現される抗原を腫瘍のミサイル治療に応用することは,癌特異抗原を必要としないので現実性があり,近い将来での広範囲な応用が期待される.Carcinoempryonic antigen(CEA)は,正常上皮細胞刷子縁のみに存在するが,癌細胞では全表面に現われることが免疫組織化学的に証明されている.この事実に基づき,このような局在変化を示す抗原を標的とすることにより,ミサイル免疫療法を考案した.Glucose oxidaseで標識した抗CEA抗体をヒト直腸癌を移植されたヌードマウスに静注したところ,標識抗体は正常細胞とは反応せず,癌細胞のみと反応し,その近傍で発生したH_2O_2は癌細胞膜を酸化して膜の透過性を高め,追って静注したヨードイオンが浸透して癌細胞は破壊された.この処置で腫瘍の著しい縮小が認められた.本法では貧食細胞が標識抗体を取り込んでも,これを消化,不活性化するため, ricinのような毒性物質で標識した抗体で生ずる網内系への副作用が回避できた.しかし, galactose oxidaseで代用し,それをbiotin-avidine-biotin系により抗体に結合させる方法を開発した.また, CEAは血中に溶出するため,静注した標識抗体と反応し腎臓等に沈着する副作用が生じたので,膜表面にあって,上皮細胞が癌化しても血中に溶出しないがCEAと同様に分布が変化する抗原を検索した.この検索には純度の高い多量のヒト結腸上皮細胞刷子縁を必要としたので,新しい方法を開発した.その結果,刷子縁にのみ存在する,分子量が数千の数種の抗原の分離に成功した.現在はこれら抗原に対する抗体の作製及び分離を施行している.上記のミサイル療法は,上皮性癌細胞の除去のみならず,臓器移植時の拒絶反応に参与する免疫細胞の選択的な除去にも応用可能と考えられる.上皮細胞の癌化に伴う極性の変化の結果,血管側に発現される抗原を腫瘍のミサイル治療に応用することは,癌特異抗原を必要としないので現実性があり,近い将来での広範囲な応用が期待される.本年度はglucose oxidaseに代わる他の過酸化水素産生酵素としてgalactose oxidaseの有用性を検討した。Galactose oxidase標識抗体はその酵素活性と抗体活性を維持する必要がある。Galactose oxidase標識抗体の作製にはperoxidase標識抗体やglucoseoxidase標識抗体の場合と異なる架橋結合方法を検討する必要が生じた。従来我々が蛋白や糖蛋白の架橋反応に使用するNa【IO_4】法ではgalactose oxidaseの活性が極端に低下した。またglutaraldehyde法では条件を変えても架橋反応後、両蛋白が沈澱していずれの活性も低下した。そこでtolylene-2,4,-diisocynateを使用して2段階にわたる架橋反応によりgalactose oxidaseを家兎抗体に標識する条件を確立している。現在では約20%の酵素活性を家兎IgGに標識できるが、約90%のIgGは無標識のままであると予想されるので、今ひとつ架橋反応の能率を向上させる必要がある。現在は標識された抗体を分離して、この標識抗体の細胞におよぼす影響とNaIおよびcatalaseの適切な濃度とを遊離した脾臓細胞を利用して決定している。またgalactoseはいずれ静注する必要があるので、galactoseの生体におよぼす影響を検討している。癌化により細胞表面でCEAと同様の分布変化を示しかつ血中に溶出しない表面抗原を同定するには、多量の正常上皮細胞の刷子縁を必要としたので、刷子縁の分離方法を確立した。まず摘出された大腸から細胞を遊離して急速凍結を行う。

それをマクロファージを分離するのと同様の方法で処理すると、ガラスファイバーに吸着しないのは殆どが刷子縁であることが判明した。そこでこの方法によって得られた刷子縁から糖蛋白を分離して、血中に溶出しない糖蛋白に対するマウス単クローン抗体および家兎抗体の作製を試みている。現在のところ、家兎では少々の抗体は得られているが、ラット刷子縁糖蛋白に対して得られたような単クローン抗体は未だ得られていない。
脳磁場計測によるヒトの高次脳機能に関する研究

超伝導技術の進歩により、脳が発生する極めて微弱な磁場を検出することが可能となった。この方法は、時間分解能および空間分解能に優れており、非侵襲的にヒトの脳機能を計測する方法として注目を集めつつある。本研究では、脳磁場を計測することにより、ヒトの高次脳機能、特に言語に関する脳磁場活動の計測を試みた。(1)言語課題としては、日本人なら熟知しており、また相当の負荷を有するということで、しりとり課題を取りあげた。被験者に、声には出さず自分でしりとりを繰り返し続け、言葉を思いついた時、直ちに母趾を屈曲するように指示しておく。この屈曲をトリガーとして両大脳半球から脳磁場を記録した。また、しりとりを行わずに、足の母趾を屈曲だけさせた場合についても記録を行い比較した。足の屈曲のみの課題では、足の感覚運動野の活動が観察されたのに対し、しりとり課題の場合は、足の感覚運動野の活動に加えて、両側の前頭葉外側部にも活動が認められた。三次元再構成されたMRI像と重ね合わせると、この活動部位は一部Broca野を含むと想像された。このように、言語想起などの言語活動には、両側前頭葉の活性化が重要であるとの結論を得た。(2)文字の認知に関連した脳活動を検出する目的で、漢字と、それを4分割し再構成して作った「偽漢字」とを被験者に提示した際の誘発脳磁界を計測し、両者を比較、検討した。遅い潜時(300500ms)において両側側頭葉に有意な反応が観察され、これは漢字提示の際に大きい傾向があった。同様な差は、平仮名と「偽平仮名」などでも観察された。このように、文字の視覚認知に両側側頭葉が関与していることが、示唆された。以上の結果は、脳磁場計測がヒトの脳機能、特に高次脳機能の解明に有力な手段を提供することを示している。今まで、知覚の基礎的な情報処理、あるいは単純な運動制御に係わる脳内機構についての、基礎的な研究を行ってきたので、本年度は、これらの成果を踏まえて、言語に関する脳磁場活動を、捉えることを試みた。いうまでもなく、高度な言語はヒト特有のものであり、また思考過程にも関与しているので、ヒトの高次脳機能解明への重要な足がかりになるとと考えられる。課題としては、日本人なら熟知しており、また相当の負荷を有するということで、しりとり課題を取りあげた。この屈曲をトリガとして両大脳半球から脳磁場を記録した。

このように発声を伴わなくても、言語想起などの言語活動に際しては、両側前頭葉が活性化すると考えられる。超伝導技術の進歩により、脳が発生する極めて微弱な磁場を検出することが可能となった。この方法は、時間分解能および空間分解能に優れており、非侵襲的にヒトの脳機能を計測する方法として注目を集めつつある。本年度は、昨年度に引き続き、運動性の言語野に関する研究を継続するとともに、文字の認知に関する神経機構についても検討を行った。いうまでもなく、高度な言語はヒト特有のものであり、また思考過程にも関与しているので、このような研究は、ヒトの高次脳機能解明への重要な糸口になるとと考えられる。(1)昨年、報告したように、発声を伴わない「しりとり課題」の場合に、両側の前頭葉外側部に特異的な活動が認められ、三次元再構成されたMRI像と重ね合わせると、この活動部位は一部Broca野を含むと想像された。左右両側の活動を比較してみると、電流双極子の大きさ、および潜時にあまり差がないことなどにより、Broca野ばかりでなく劣位半球の相同部位も同様に働いていると考えられた。このように、言語想起などの言語活動には、両側前頭葉の活性化が重要であるとの結論を得た。(2)文字の認知に関連した脳活動を検出する目的で、漢字と、それを4分割して再構成して作った「偽漢字」とを被験者に提示した際の誘発脳磁界を計測し、両者での差を比較、検討した。遅い潜時(300500ms)において両側側頭葉に有意な反応が観察され、これは漢字提示の際に大きい傾向があった。同様な差は、平仮名と「偽平仮名」などでも観察された。しかし、本反応は文字というよりは、形の認知に関連した脳活動の可能性もあるので、今後、検討を続ける必要がある。
患者報告アウトカム・QOLの科学的評価手法の確立－研究と解釈のガイドライン作成

1.海外重要文献の日本語版の提供:ISOQOL(国際QOL研究学会)のPRO臨床実践ガイドラインの逆翻訳を終えISOQOL担当者と翻訳のチェックのやり取りを行った。国際学会では翻訳担当者会議に参加した。2. MIDシステマティックレビュー:MIDの新着論文を追加検索した後、日本語での総説論文を分担執筆した。投稿に向けて調整中である。3.縦断的実証調査:がん治療データの2次的利用にてレスポンスシフト解析を行い、観察されたスコア変化を抽出されたレスポンスシフトにて調整したスコアを検出する方法を確認した。4.情報公開:Web教科書(仮称QOL/PRO Wiki)システムを開発・公開した。QOL/PRO研究会との共催にて初学者向け研究方法に関するセミナーを開催した(2月)。また、MID研究の先駆者の一人であるKathleen Wyrwitch氏を招き、米国における最新動向に関する講演を開催した(2月)。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。本研究は、患者報告アウトカム(Patient-related outcomes: PRO)、特に生活の質(Quality of Life: QOL)(以下、QOL/PROと略す)の評価・解析の信頼性と解釈可能性を高めるために、最小重要差(minimally importantdifference: MID)とレスポンスシフトを取り上げ、この2点に関して研究と解釈のためのガイドラインを策定することを目的としている。H27年度の実績は以下のとおりである。1)重要文献の日本語版の提供国際的機関が発行している資料やガイドラインを検索して取り組むべき4文献を選定し、発行元と翻訳版の作成について契約を行った。第1資料については日本語翻訳をほぼ終了した。2)最小重要差MIDについてシステマティック・レビューを実施した。最新のレビュー論文を参考に抽出した検索用語を用いてPubMedにて文献を検索し、1465文献を抽出してアブストラクトレビューを実施した。レビューテーマを5つ設定し、すでに質の高いレビュー論文がある3テーマについてはそのレビュー論文の内容に最近の知見を加えてまとめることとした。また、2テーマについては新たに文献をレビューしまとめることとした。H27年度は最小重要差MIDとレスポンスシフトのシステマティックレビューを行う予定であったが、検索用語を整理して抽出した結果当初の推定よりもMIDの論文が多数存在したことからMIDのレビューのみを行うこととなった。レスポンスシフトに関するレビューは引き続きH28年度に行うが、すでにMIDのレビューによって手順が明らかになっているため、時間を短縮して実施できるものと考えている。一方、H28年度実施予定の実証研究について、MIDのシステマティックレビューが順調に進んでMIDに関する問題点を早期に抽出できたため、実証研究の具体的計画策定をH27年度に開始することができた。これらを鑑みると、全体としてはおおむね順調に進展していると考える。1.海外重要文献の日本語版の提供:ISOQOL(国際QOL研究学会)によるPRO実践ガイドラインの順翻訳、翻訳者間の調整、質の評価、逆翻訳を終えた。逆翻訳の質の評価を終えた後、ISOQOLに略翻訳版を送り数度のやり取りを経て修正を加えた後、日本語版が完成する予定である。ISOQOLとは他の資料に関する翻訳権についても協議を行った。2. MIDのシステマティックレビュー:1465文献のアブストラクトレビューを受けて、(1)定義、(2)方法論、(3)活用分野について日本語総説論文としてまとめることとした。(4)臨床試験での活用方法については、これまで用いた検索用語では重要論文が抜けていることが判明したため、検索用語を増やし、対象を絞って検索することを決定した。3.縦断的実証調査:摂食嚥下QOL尺度を用いた調査のベースライン調査を終了し、フォローアップ調査を実施中である。データ収集後に、MIDおよびレスポンスシフトの解析を実施し、尺度のMIDを提示するとともにレスポンスシフト抽出の方法論を検討する。4.質的調査:研究分担者・協力者研究計画を作成し倫理委員会からの承認を得て開始した。5.情報公開:初学者向けWeb教科書(仮称QOL/PRO Wiki)を作成することおよびそのコンテンツを決定した。次年度公表に向けて原稿の分担執筆を開始した。レスポンスシフトのシステマティックレビューは、ISOQOLのSpecial Interest Groupにて同様の研究を実施していることが発表されたため、本研究では実施しないこととした。実証研究については、一部は予定通り実査を開始したが、健常者を対象とした実証研究についてはISOQOLの発表した論文から対象者やデータ取得期間を見直す必要があると判断し、これを中止することとした。別途QOL/PRO研究のニーズを明らかにするための調査を企画し、当初の計画にあったインタビュー調査にその内容を含めて実施することとしたため、本年度計画の一部をH29年度に繰り越して実施した。その結果、10名のデータを収集し、内容分析を開始することができた。1.海外重要文献の日本語版の提供:ISOQOL(国際QOL研究学会)のPRO実践ガイドラインの逆翻訳を終えISOQOL担当者と翻訳のチェックのやり取りを行った。2. MIDシステマティックレビュー:臨床試験におけるMIDについて、新たな検索用語での論文抽出を実施した。

また、(1)定義、(2)方法論、(3)活用分野については、第1回論文抽出時点以降の論文を再抽出し、新たな情報を加えた。3.縦断的実証調査:がん治療データの2次的利用にてレスポンスシフト解析を行い、観察されたスコア変化を抽出されたレスポンスシフトにて調整したスコアを検出する方法を確認した。4.情報公開:Web教科書(仮称QOL/PRO Wiki)システムを開発し、担当者間で吟味の上公開できるようにした。第1次原稿が完成した。上記の結果について、2018年3月2日に中間報告会を実施した(於:日本橋ライフサイエンスビル、QOL/PRO研究会と共催にて実施)。43名が参加し、MIDの測定方法やレスポンスシフトの解釈などについて活発に議論がなされた。システマティックレビューは論文の公開に至っていないが、浮き彫りになった問題点を考慮した上で文献の再抽出が進んでいる。実証研究については、予定通り、既存研究の2次解析を進め、研究会や学会での報告を行うことができた。ガイドラインの作成とWeb教科書の作成は最終年度を待たずに開始され、第1次原稿が作成された。これらを鑑みると、全体としてはおおむね順調に進展していると考える。1.海外重要文献の日本語版の提供:ISOQOL(国際QOL研究学会)のPRO臨床実践ガイドラインの逆翻訳を終えISOQOL担当者と翻訳のチェックのやり取りを行った。国際学会では翻訳担当者会議に参加した。2. MIDシステマティックレビュー:MIDの新着論文を追加検索した後、日本語での総説論文を分担執筆した。投稿に向けて調整中である。QOL/PRO研究会との共催にて初学者向け研究方法に関するセミナーを開催した(2月)。また、MID研究の先駆者の一人であるKathleen Wyrwitch氏を招き、米国における最新動向に関する講演を開催した(2月)。予定通り進行する。予定通りに進行する。H28年度は当初計画の一部(インタビュー調査)をH29年度に繰り越して実施したが、繰り越した内容以外の内容は、すでにH29年度に順調に進行した。H30年度は最終年度であるので、情報を統合・加工し、公開していく。予定通りに進行する。最終年度となるので、未完のプロジェクトを完了させるとともに、情報を統合・加工してガイドラインを作成し、公開する。また、本研究を推進する上で残された課題を整理し、次の研究課題を明確にする。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
イネ穂の分枝を決定する分子機構の解析

LAX遺伝子の単離719個体を用いた精密マッピングにより、LAX遺伝子座を約80kbの領域に絞り込んだ。強い表現形を示すlax-2アリルではこの領域中に36kb以上の欠失が認められた。36kb中に予想される遺伝子に関してlax-1アリルの塩基配列を決定したところ、そのうちのひとつについてのみ変異が認められたため、これがLAX遺伝子であると考えた。LAXタンパク質は222アミノ酸からなり、bHLHドメインを持つ転写因子であると予想された。また、bHLHドメイン以外には保存された配列は見い出されず、また、シロイヌナズナゲノム中には相同遺伝子が見つからなかった。lax-1アリルでは、ORF中にLTRタイプのレトロトランスポゾン様配列が挿入しており、その結果、148番目のアミノ酸以降に3アミノ酸が挿入され、終止コドンが生じていた。In situハイブリダイゼーション法によりLAXmRNA発現部位を決定した。LAXは茎頂分裂組織と器官分化予定領域の境界で特異的に発現していた。この発現は器官分化の開始にともない消失した。FZP遺伝子の単離53個体の変異体の解析により、FZP遺伝子座を第7染色体上の266kbの領域に絞り込んだ。さらに、精密なマッピングを行うために、この266kb領域に12個のdCAPSマーカーを作成した。また、約800個体のF2集団を育成中であり、この集団中のfzp変異個体を精密マッピングに用いる。
マルチフィーダー式パウダージェット加工法の開発と除去・付着加工のメカニズム変化

マイクロマシンなどの微小電気・機械システムに必要なサブミリサイズ(0.01-1mm程度)のマイクロセンサやマイクロアクチュエータの開発研究が注目されている.本研究では0.1数μmの微粒子を搬送ガスで加速し,真空および大気圧環境下で基板に高速で衝突堆積させて厚膜を形成するパウダージェット加工(アブレイシブジェット加工)について検討した.このプロセスは成膜速度が大きく,サブミリサイズの機能構造体を作製するには実用レベルにあるが,微粒子を搬送ガスに混合する機構が不十分であるため,構造体の寸法生成に直接関与する成膜速度やその密度に関与する混合比率が均一でないという問題がある.昨年度は,真空中で微粒子を定量かつ間欠噴射することのできるパウダージェット加工装置を試作した.本年度はこの装置を用いて実験をした.しかし真空中では様々な制約があり,実用化を念頭に置いた場合,大気中での付着加工のほうが利用価値が高い.そこで最初に大気中での付着加工の可能性を最初に検討した.さらに試作した装置を用いて除去作用から付着作用へ変化する砥粒径,噴射条件,噴射速度,加工メカニズムの変化について検討するとともに,付着強度について測定した.その結果,大気中では,アルミナ粒子,炭化珪素粒子をガラスやシリコンの基板に噴射したとき,粒径が約2ミクロン以下に小さくなると除去から付着に遷移することがわかった.付着高さは数秒で定常になり,20-120ミクロンに達した.また噴射粒子の運動エネルギーと,基板の硬度が付着特性に大きな影響を及ぼすことがわかった.また膜の極微小硬度とダイナミック硬度の差から機械的特性を評価する方法を提案した.その結果,シリコン基板に噴射したほうが膜の硬度は大きくなった.さらに,電子材料であるPZT,フェライトも大気圧中で成膜可能であることを示した.マイクロマシンなどの微小電気・機械システムに必要なサブミリサイズ(0.01-1mm程度)のマイクロセンサやマイクロアクチュエータの開発研究が注目されている.本研究では0.1数μmの微粒子を搬送ガスで加速し,真空および大気圧環境下で基板に高速で衝突堆積させて厚膜を形成するパウダージェット加工(アブレイシブジェット加工)について検討した.このプロセスは成膜速度が大きく,サブミリサイズの機能構造体を作製するには実用レベルにあるが,微粒子を搬送ガスに混合する機構が不十分であるため,構造体の寸法生成に直接関与する成膜速度やその密度に関与する混合比率が均一でないという問題がある.昨年度は,真空中で微粒子を定量かつ間欠噴射することのできるパウダージェット加工装置を試作した.本年度はこの装置を用いて実験をした.しかし真空中では様々な制約があり,実用化を念頭に置いた場合,大気中での付着加工のほうが利用価値が高い.そこで最初に大気中での付着加工の可能性を最初に検討した.さらに試作した装置を用いて除去作用から付着作用へ変化する砥粒径,噴射条件,噴射速度,加工メカニズムの変化について検討するとともに,付着強度について測定した.その結果,大気中では,アルミナ粒子,炭化珪素粒子をガラスやシリコンの基板に噴射したとき,粒径が約2ミクロン以下に小さくなると除去から付着に遷移することがわかった.付着高さは数秒で定常になり,20-120ミクロンに達した.また噴射粒子の運動エネルギーと,基板の硬度が付着特性に大きな影響を及ぼすことがわかった.また膜の極微小硬度とダイナミック硬度の差から機械的特性を評価する方法を提案した.その結果,シリコン基板に噴射したほうが膜の硬度は大きくなった.さらに,電子材料であるPZT,フェライトも大気圧中で成膜可能であることを示した.マイクロマシンなどの微小電気・機械システムに必要なサブミリサイズ(0.01-1mm程度)のマイクロセンサやマイクロアクチュエータの開発研究が注目されている。一般にこれらの加工は、バルク材から削り出す方法と分子やイオン、超微粒子等を材料表面に衝突させ付着堆積させる方法に大別される。サブミリサイズの部品を対象とした場合、前者の除去加工では加工対象が微小あるいは極薄であるため加工力により破損したり、ハンドリング中に破損してしまうなど問題も多い。一方、後者の付着加工の場合は、成膜速度が遅いために実用的ではない。そこで、0.1数μmの微粒子を搬送ガスで加速し、真空環境下で基板に高速で衝突堆積させて厚膜を形成するパウダージェット加工について検討する。このプロセスは成膜速度が大きく、サブミリサイズの機能構造体を作製するには実用レベルにあるが、微粒子を搬送ガスに混合する機構が不十分であるため、構造体の寸法生成に直接関与する成膜速度やその密度に関与する混合比率が均一でないという問題がある。本研究の第1の目的は、パウダージェット加工における成膜速度、成膜密度の均一化のためのマルチフィーダーを有する真空中パウダージェット加工装置を開発することである。本年度は、真空中で微粒子を定量かつ間欠噴射することのできる真空中シングルフィーダーシステムを製作した。そしてそれを用いて、単一組成の膜形成実験を試みた。粒径の異なるアルミナ粒子をガラス基板に噴射衝突させ、そのときの加工現象の変化について調べた結果、粒径が約5ミクロン以下になると材料除去から付着現象に遷移することがわかった。来年度は、マルチフィーダーシステムとするとともに、除去作用から付着作用へ変化する砥粒径、噴射条件、噴射速度、加工メカニズムの変化について詳細に検討するとともに、付着強度について測定する予定である。マイクロマシンなどの微小電気・機械システムに必要なサブミリサイズ(0.01-1mm程度)のマイクロセンサやマイクロアクチュエータの開発研究が注目されている.

本研究では0.1数μmの微粒子を搬送ガスで加速し,真空環境下で基板に高速で衝突堆積させて厚膜を形成するパウダージェット加工について検討した.このプロセスは成膜速度が大きく,サブミリサイズの機能構造体を作製するには実用レベルにあるが,微粒子を搬送ガスに混合する機構が不十分であるため,構造体の寸法生成に直接関与する成膜速度やその密度に関与する混合比率が均一でないという問題がある.昨年度は,真空中で微粒子を定量かつ間欠噴射することのできるパウダージェット加工装置を試作した.本年度はこの装置を用いて実験をした.しかし真空中では様々な制約があり,実用化を念頭に置いた場合,大気中での付着加工のほうが利用価値が高い.そこで最初に大気中での付着加工の可能性を最初に検討した.さらに試作した装置を用いて除去作用から付着作用へ変化する砥粒径,噴射条件,噴射速度,加工メカニズムの変化について検討するとともに,付着強度について測定した.その結果,大気中では,アルミナ粒子,炭化珪素粒子をガラスやシリコンの基板に噴射したとき,粒径が約2ミクロン以下に小さくなると除去から付着に遷移することがわかった.付着高さは数秒で定常になり,20-120ミクロンに達した.また噴射粒子の運動エネルギーと,基板の硬度が付着特性に大きな影響を及ぼすことがわかった.また膜の極微小硬度とダイナミック硬度の差から機械的特性を評価する方法を提案した.その結果,シリコン基板に噴射したほうが膜の硬度は大きくなった.さらに,電子材料であるPZT,フェライトも大気圧中で成膜可能であることを示した.
転写因子FOXO1の翻訳後修飾と寿命決定メカニズムの解明

転写因子FOXO1は酸化ストレスに応答して活性化し、標的遺伝子である活性酸素除去酵素の発現を促進する。またモデル生物を用いた研究から、FOXO1が寿命の延長に必須な遺伝子であることが示されている。本研究で我々はFOXO1の活性調節にタンパク質翻訳後修飾が重要な役割をしていることを明らかにした。さらに線虫の遺伝学的解析により、実際にFOXO1のアルギニンメチル化制御が寿命の調節に深く関与することを解明した。1.ポリADPリボシル化酵素PARP-1によるFOXO1制御機構の解明FOXO1の新規結合因子としてPARP-1を同定した。PARP-1はFOXO1の細胞内局在や安定性には影響を与えなかったが、転写活性化能を顕著に抑制した。さらにRNAiやレスキュー実験の結果から、PARP-1はFOXO1の標的遺伝子であるp27の発現を抑制することにより、細胞増殖を調節していることが明らかになった。またPARP-1はFOXO1をポリADPリボシル化したが、この修飾はFOXO1の転写活性に影響を与えなかったことから、転写調節以外の機能に寄与している可能性が示唆された。2.線虫アルギニンメチル化酵素rmt-1の同定と機能解析線虫の寿命決定メカニズムにおける「FOXO1のアルギニンメチル化制御の意義」を検証するため、まずPRMT1の線虫オルソログをデータベースから予測し、新規遺伝子としてrmt-1をクローニングした。生化学的実験から、RMT-1はヒトPRMT1と同様に非対称型のアルギニンジメチル化活性を有すること、またFOXO1の線虫オルソログであるDAF-16のAKTリン酸化コンセンサス配列のアルギニン残基をメチル化することが示された。また、RNAi法によりrmt-1をノックダウンする手技も確立しており、現在はrmt-1遺伝子の寿命への影響を検証している。1.PARP-1によるFOXO1のADPリボシル化と転写活性抑制機構の解明申請者らはこれまでにFOXO1が様々な翻訳後修飾を受けることでその活性が調節されていることを報告してきたが、今回新たにFOXO1がPARP-1によってADPリボシル化されることを見出した。またPARP-1がFOXO1の転写活性を強力に抑制すること、さらにFOXO1標的遺伝子であるp27の発現抑制を介して細胞増殖を促進することを明らかにした。現段階ではADPリボシル化修飾と転写抑制の間に直接的な相関は見られていないが、FOXO1の活性化シグナルである酸化ストレスがPARP-1のADPリボシル化活性を亢進することから、酸化ストレス下における両者の機能的相互作用を現在検討中である。2.DNA損傷応答機構におけるFOXO1の新規機能の解明哺乳類細胞の大量培養系によるFOXO1複合体精製を行い、新規にDNA損傷応答に関わる因子を同定した。これまでに紫外線照射後のDNA損傷応答にFOXO1が必須であること、特に細胞周期のS期においてその影響が顕著であることを解明している。さらに最近、FOXO1のRNAiにより主要なDNA損傷シグナル因子であるCHK1のリン酸化が亢進することを明らかにしており、モデル生物である線虫を用いた遺伝学的解析においても、FOXO1が紫外線損傷応答に関与するというデータを得ている。本研究成果は、転写を介さないFOXO1の新たな機能を示唆するものであり、FOXO1の長寿遺伝子としての働きを考える上でも重要な知見であると考えられる。
大腸癌Sarocopenia発症のエピゲノム機序解明と新たなバイオマーカーの開発

大腸癌に伴う癌悪液質発症の、特に骨格筋量減少にかかわる血清中miRNA群を同定し、新たな非侵襲的診断マーカーを確立し、癌悪液質の機序解明と治療法開発を目的とするTwowayapproachを行い、極めて予後不良な経過をたどる悪液質に苦しむ大腸癌患者の予後・QOLの向上をめざすことを目的とする。
安定化有機ホウ素π電子系の創製と機能

有機πラジカルは不対電子に由来して特異な光・電子物性を示す.一方で,本質的な不安定性が問題である.本研究では,平面固定化とホウ素の導入によるπラジカルの安定化という切り口をもとに,光・電子機能性の追求を目的とする.πラジカル本来の両極性電荷輸送能に加え,ホウ素を電子受容性部位として導入することにより,長波長での蛍光特性を付与できる.この高い潜在性をもつ分子骨格をさらに造り込み,分子構造を最適化することで,電荷輸送能を向上させ,新たな発光性電荷輸送性材料としての多彩な展開を目指す.さらに,リビングラジカル重合への展開というまったく異なる方向性の展開を組み入れ,安定化ラジカルの機能性を探求する.有機πラジカルは不対電子に由来して特異な光・電子物性を示す.一方で,本質的な不安定性が問題である.本研究では,平面固定化とホウ素の導入によるπラジカルの安定化という切り口をもとに,光・電子機能性の追求を目的とする.πラジカル本来の両極性電荷輸送能に加え,ホウ素を電子受容性部位として導入することにより,長波長での蛍光特性を付与できる.この高い潜在性をもつ分子骨格をさらに造り込み,分子構造を最適化することで,電荷輸送能を向上させ,新たな発光性電荷輸送性材料としての多彩な展開を目指す.さらに,リビングラジカル重合への展開というまったく異なる方向性の展開を組み入れ,安定化ラジカルの機能性を探求する.