hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
多言語社会における言語政策-マレーシアの英語重視政策をめぐる論争と現状の調査

本研究はマレーシアにおける理数教育における英語使用の導入をめぐる論争と教育現場での現状を把握することを目指した。マハティール前首相が国際競争力強化を目的として英語教育の拡充を提言し、2002年に小・中、高等学校において理数科目授業を英語で教授することが決定され、2003年から実施された。この言語政策の変更に関して、母語教育の維持を主張する華人社会や国家統合のシンボルとしてのマレー語の地位低下を懸念するマレー人社会の一部から強い反対がある一方、英語教育強化によって国民統合が推進されるという声や都市部中間層からは社会・経済的進出のために必要であると好意的に受け止める反応とが混在している状況である。多民族・多言語社会における言語政策の複雑性を示す論争となった。最近のマレーシアでの英語へ重心をシフトさせる言語政策の変化は、過去アジア諸国が独立に際し採用した国家建設推進のための言語政策とは異なり、主にここ10数年の間に加速した経済のグローバル化やIT・バイオ技術の世界的進展を背景とするきわめて実利的要請によって出現しているとみることができる。このことは日本、中国、韓国等を取り巻くアジア全体の動きとパラレルな現象としてとらえられる。つまり、言語政策の今日的課題の重要なポイントは、よりプラグマティックな経済政策の一部として理解することが必要となっているのである。現状調査では、特に教室での観察、関係者のインタビュー等をもとに新政策導入初期段階における諸課題を検証した。また、マレーシア政府が新たに作成した英語版理数教育教材を分析し、教科内容を英語で教えるにあたってはいかなる準備、訓練が必要とされるかを考察した。
エノールエステルのアシル-酸素結合開裂によるオキサアリル金属錯体の生成とその応用

筆者は、エノールエステルのアシル-酸素結合の開裂による金属錯体への酸化的付加反応、すなわちオキサアリル錯体(エノラート)の新しい生成法の開発、およびそのアルドール型縮合反応への応用を試み、以下の点を明らかにした。1.酢酸イソプロペニルとベンズアルデヒドの反応をモデルとして、触媒/試剤系を調べたところ、PdCl_2(PhCN)_2/SnCl_2,Pd(OAc)_2/2PPh_3/Zn,Ni(COD)_2/2PPh_3/Zn(NaHCO_3,orCsF)が有効であった。2.上記の複合剤系で酢酸イソプロペニルと種々のアルデヒドの反応を試みたところ、Pd/ZnおよびNi系では、配位力の強いアルデヒドが反応しやすく、通常、選択的に(E)-3-ブテン-2-オン誘導体を生成した。3.2の結果を踏まえて、異種アルデヒド存在下の化学選択性を調査したところ、キレート可能なアルデヒドが選択的に反応することがわかった。置換ベンズアルデヒドでは、電子供与基を持ったものが選択的に反応した。4.エノールエステルのニッケル(0)またはパラジウム(0)錯体への酸化的付加がキーステップであることを推定した:Pd(OAc)_2/2PPh_3またはNi(COD)_2/2PPh_3をベンズアルデヒドに対して当量使用し、Znなしで反応を行ったところ、ニッケル系のみ反応した。また、ニッケル系では亜鉛の代わりに塩基(NaHCO_3,CsF)を用いても反応した。それらの結果から、ニッケル系では、酸化的付加して生成したニッケルエノラートが直接反応し、亜鉛(または塩基)は脱離した酢酸をつかまえ、ニッケル(0)の活性を維持する役割をしていると考えた。パラジウム系では、亜鉛がなくては反応しないので、酸化的付加した後、亜鉛から電子移動が起こることにより進行すると考えた。
宿主の生活史や行動の違いが介在した、ネジレバネの宿主選択性の進化

ネジレバネの中で最も多様化しており宿主の情報も揃っているグループであるハナバチネジレバネについて、日本産種を中心に、ヒメハナバチに寄生するStylops属のネジレバネとコハナバチに寄生するHalictoxenos属とEustylops属のネジレバネについて分子系統解析を行った。その結果、liハナバチネジレバネ属とヒメハナバチネジレバネ属それぞれの単系統性が強く支持され、それぞれの系統上で多様化が独立に進行したことが明らかになった。また、分子と形態双方の情報よりネジレバネの新しい種の概念を提示し、コハナバチネジレパネ属は単独性コハナバチよりも真社会性コハナバチをより高い確率で宿主としており、しかも宿主特異性がきわめて高いことを示した。また、ネジレバネによる宿主の訪花行動の操作を検出するために、本研究では寄生されたハナバチの変化と訪花植物の送粉者への報酬に注目し、調査を行った。ネジレバネに寄生されたハナバチは生殖能力を失い営巣しなくなるため、幼虫の餌として花粉を集める必要がなくなり花粉に対する需要が変化する。またエゾアジサイはハナバチを中心に様々な昆虫が訪花するが、花粉のみを送粉者への報酬として提供しており、蜜を出さない。花蜜と花粉を出すトリアシショウマと、花粉のみを出すエゾアジサイが同時期に同所的に開花している場所で、どちらの花にも頻繁に訪花し、かつネジレバネの寄生がみられたニジイロコハナバチに特に注目し、7月に長野県小谷村周辺で調査を行った。ネジレバネに寄生されたハナバチは通常のハナバチと同様にエゾアジサイの花に訪花するが、花の上での行動は変化しており、寄生されたハチは花の上で採餌も集粉も行なわずネジレバネの1齢幼虫を放出するような行動を行なっていることを明らかにした。これらの研究成果は宿主とネジレバネの寄生系の実体の解明につながる重要なものである(抄録なし)スズメバチネジレバネの分子系統解析と記載スズメバチは生態系の中では捕食者として重要であり、人との関わりでは強い毒と高い攻撃性のために重要な害虫として有名である。Vespa属の真社会性の大型スズメバチ類に寄生するスズメバチネジレバネを材料に分子系統解析を行い、スズメバチネジレバネとして知られていたXenos mutoni以外にもう一種いることを明らかにし、記載も行った。日本を含む東アジアからVespa属のスズメバチとそれに寄生しているネジレバネのサンプリングを行った。そして、それらのネジレバネについてミトコンドリアのシトクロームオキシダーゼ1の塩基配列(652塩基)に基づいて系統解析を行った。さらに形態的な比較を行うことでこれまで一種として扱われてきたスズメバチネジレバネに2種含まれていることを解明した。既知種であるXenos moutoniに対し、新種をXenos oxyodontesとして記載した。X.moutoniがオオスズメバチを中心にVespa属の複数種のスズメバチを宿主として利用していたのに対し、X.oxyodontesはコガタスズメバチとキイロスズメバチへの特殊化が見られた。コガタスズメバチからはX.oxyodontesの寄生しか確認されなかった。このように2種は異なった宿主利用様式を示すことを明らかにした。スズバチネジレバネのサンプリング琉球諸島に分布するカリバチ類はアシナガバチからドロバチまで色彩が似ており、さらにその色彩の収斂の結果は島ごとに異なっている事が知られており、亜種として分類されている。一方ドロバチ類に寄生するネジレバネではそのような色彩変異は知られていないが、島ごとに宿主とするドロバチが変化している可能性があった。4月、6月、7月に奄美大島、徳之島、沖縄本島、宮古島、石垣島、西表島において竹筒トラップの設置及び回収を行った。その結果、奄美大島と徳之島以外の島ではオオフタオビドロバチ及びそれに寄生するスズバチネジレバネのサンプリングに成功した。

花蜜と花粉を出すトリアシショウマと、花粉のみを出すエゾアジサイが同時期に同所的に開花している場所で、どちらの花にも頻繁に訪花し、かつネジレバネの寄生がみられたニジイロコハナバチに特に注目し、7月に長野県小谷村周辺で調査を行った。ネジレバネに寄生されたハナバチは通常のハナバチと同様にエゾアジサイの花に訪花するが、花の上での行動は変化しており、寄生されたハチは花の上で採餌も集粉も行なわずネジレバネの1齢幼虫を放出するような行動を行なっていることを明らかにした。これらの研究成果は宿主とネジレバネの寄生系の実体の解明につながる重要なものであるカリバチ類寄生性ネジレバネの分子系統解析についてはスズメバチのネジレバネにおいて未記載種の発見と記載を報告するに至っており、一部当初の計画以上の進展し、一定の目的を達成したと考えている。もう一点のスズバチネジレバネの系統解析については一部地域でのサンプリングが不十分でやや遅れが見られるが、当初の計画の範囲内である。本年度は琉球諸島のスズバチネジレバネについて未だサンプルが得られていない地域があり、その地域で重点的にサンプリングを継続すると同時に解析も並行して行い、結果のまとめ及び報告を行う予定である。(抄録なし)
バベシア原虫の介卵伝播に関与するマダニ発育胚の分子基盤について

マダニはバベシア原虫Babesiagibsoniを媒介する吸血性節足動物である。その媒介過程において、親マダニが取り込んだ原虫は卵を介し次世代の幼ダニへと移行する(介卵伝播)。本研究ではマダニを用いた原虫の介卵伝播実験系とマイクロアレイを組合せたマダニ遺伝子発現解析実験系を確立した。本研究によりマダニの生活史上、構成的に発現している遺伝子群は、原虫の感染に影響されることなく発現レベルを維持することが示唆された。バベシア症の病原虫であるバベシア原虫を媒介するマダニにおいては、中腸や卵巣で産生される生物活性分子が、マダニの吸血・繁殖に関わる恒常性を維持していることに加え、原虫の増殖・分化をも制御していることが分かってきた。しかし、バベシア症の感染源である幼ダニへの原虫伝播機構は未解明のままである。本研究では、産下卵が幼ダニに発育する間に、原虫を増殖させながら、いつどこでどのようにして、原虫を保有しているのかを明らかにするために、申請者が単離に成功している卵の胚伝播制御分子(ETCM)について、原虫感染による発現応答の詳細かつ包括的な解明を図る。明らかにされたETCMの機能を利用しマダニ胚で作用するマダニ及びバベシア原虫双方の成長・発育を阻害する薬剤(TBGR剤)など新たなマダニ及びバベシア症制御技術の開発に資することを、主要な目的とする。_本年度は、マダニアレイ解析によるバベシア原虫感染マダニ胚ETCM候補の選抜を行った。具体的には、1.供試原虫はイヌバベシア虫Babesia gibsoniであり、そのベクターマダニは、国内最優占種マダニのフタトゲチマダニHaemaphysalis longicornis単為生殖系を供試した。2.マダニ胚ESTデータベースの配列情報をもとにプローブ配列を設計しマダニアレイを構築した。3.マダニアレイ解析によって原虫感染及び非感卵(胚発生中期)におけるトランスクリプトームの比較を行い、原虫感染によりに発現が増強するマダニ遺伝子を選抜した。今後は、さらに定量RT-PCRによるETCMの決定を行うため、1.原虫感染及び非感染卵について、発現変動を比較解析しアレイ結果のバリデーションを行う。2.原虫感染胚で顕著に発現量が増大する遺伝子を次年度以降の解析対象とし、さらに詳細な解析を行う予定である。本研究では、産下卵が幼ダニに発育する間に、いつどこでどのようにして、原虫を保有し増殖させているのかを明らかにするために、申請者が単離に成功している卵の胚伝播制御分子(ETCM)について、原虫感染による発現応答の詳細かつ包括的な解明を図る。明らかにされたETCMの機能を利用し、マダニ胚で作用するマダニ及びバベシア原虫双方の成長・発育を阻害する薬剤(TBGR剤)など新たなマダニ及びバベシア症制御技術の開発に資することを、主要な目的とする。本年度は、原虫感染卵の効率的な選抜方法の確立を試みた。摘脾により重篤なバベシア症を発症させた実験犬にマダニを吸血させた。得られた飽血個体より8個体選抜し産卵させ、Babesia gibsoni原虫の有無を確認したところ、重度感染卵は1個体の産卵後期においてのみ産下された。このようなことから、感染卵の効率的収集に関しては、マダニの個体差が問題となることが分かった。次に個体差がイヌ(宿主)の免疫等の状態に依存しているのではないかと考え、宿主要因を除外すべく人工吸血実験系の開発に着手した。今後は人工吸血実験系をもちいた原虫感染実験により、効率的に感染卵を得る予定である。また、卵発育(胚発生)に関連するマイクロアレイ搭載遺伝子の発現挙動についても明らかにする必要があるため、その点についても解明していく予定である。バベシア症の病原虫であるバベシア原虫を媒介するマダニにおいては、中腸や卵巣で産生される生物活性分子(TBM)が、吸血・繁殖に関わる恒常性を維持しており、また原虫の増殖・分化をも制御している。しかし、バベシア症の伝播源である幼ダニへの介卵伝播機構は未解明である。そこで、マダニの胚の介卵伝播制御分子について、原虫感染による発現応答の詳細かつ包括的な解明を図ることが主目的とし本研究を行った。その結果、1動物宿主(実験犬)とマダニベクターを用いたバベシア原虫伝播実験モデルを確立し、マダニステージにおけるバベシア原虫の定量的検出系を構築した。2マダニアレイの確認

実験として行ったマダニ胚の発現解析の結果、マダニ制御対策を行う上で唯一、基盤的知見が不足した発生段階の遺伝子発現動態を明らかにした。データマイニングやリアルタイムPCRの結果、中期において特異的に発現が上昇する遺伝子を複数同定することができ、胚発生特異的な遺伝子を複数同定することができた。3原虫感染卵および非感染卵を用いたアレイ解析による発現比較解析の結果、原虫感染によって転写量が2倍以上あるいは0.5倍以下に変動する遺伝子が複数検出されたが、有意差は認められなかった。4派生実験として、原虫感染中腸および非感染中腸を用いたアレイ解析による発現比較解析を行ったが、原虫感染によって2倍以上あるいは0.5倍以下に変動する遺伝子は複数検出されたが、有意差は認められなかった。以上を総括すると、本研究により作製したマダニアレイは、恒常性維持に関連するTBMが搭載されていたため、その転写量変化は原虫感染時においても平時と大差がないということになる。従って、介卵伝播に関与する遺伝子について、原虫感染により特異的に誘導される遺伝子を探索し、その分子機能と介卵伝播との関連を検証するという戦略転換が必要ということになる。マイクロアレイを用いたマダニ胚発生に関連するトランスクリプトーム解析および人工吸血実験系の確立しており、次年度においては感染卵の分子基盤についての分子カタログを整備することが可能と想定される。24年度が最終年度であるため、記入しない。今後は人工吸血実験系をもちいた原虫感染実験により、効率的に感染卵を得る予定である。また、卵発育(胚発生)に関連するマイクロアレイ搭載遺伝子の発現挙動についても明らかにする必要があるため、その点についても解明していく予定である。
ポリマーセメントモルタルにより下面増厚補強されたRC床版の寿命予測に関する研究

静的荷重下におけるポリマーセメントモルタルの付着強度について、基盤コンクリートの粗骨材最大寸法とはつり深さを変数として実験を実施した。基盤コンクリート表面の粗さについては,表面積変化率およびJISの粗さパラメータにより評価を行い,粗さが引張付着強度とせん断付着強度に与える影響を検討した結果,以下のことが知見として得られた。・同じ表面処理深さにおいて,ウォータージェット工法による表面は,ショットブラスト工法よる表面に比べて2倍程度以上の粗さとなる。・表面粗さをJISの粗さパラメータを尺度とすることで,引張付着強度およびせん断付着強度を連続的に評価することができる。・引張付着強度については,算術平均粗さが1.1でピークとなり,さらに粗さが増すと低下していく傾向がとらえられた。せん断付着強度については,粗さが増加するにつれてわずかではあるが単調に増加する傾向が見られた。・引張付着強度およびせん断付着強度について,基盤コンクリートの表面粗さの影響を取り入れた強度算定式を構築した。さらに,下面増厚補強された道路橋床版増厚部の剥離の予測方法を構築するために,応力レベルを変数として疲労荷重下における付着強度試験を実施し,ポリマーセメントモルタルの付着破壊に対する疲労寿命の検討を行った結果,以下の知見を得た。・応力レベルによる疲労寿命の予測式として,応力振幅と最小応力で関係付けられるGoodman型を適用した場合は,引張付着とせん断付着ともに式中の係数Kは20程度となった。本研究の目的は,静的および疲労荷重下におけるポリマーセメントモルタルと既存コンクリートの界面の付着特性に対して定量的な評価方法を構築し,下面増厚補強された構造物の疲労寿命を予測する手法を提示することである。本年度は,基盤コンクリートの最大粗骨材寸法と表面処理におけるはつり深さを変数として要素試験体を作製し,静的荷重下におけるポリマーセメントモルタルの付着強度(引張付着,せん断付着)に与える表面祖度の影響を調べた。以下に得られた知見を示す。1.平均はつり深さとJISの粗さパラメータの関係から,ショットブラスト工法とウォータージェット工法によって粗度の特性が異なることが示された。同じはつり深さに対して,ウォータージェット工法はショットブラスト工法の2倍程度以上の粗度が得られる。粗骨材寸法の違いについては,明確な傾向が見られないことから,通常の粗骨材寸法のコンクリートでは最大寸法の影響がないと思われる。2.引張付着強度は,粗度の増加に伴って増加するが中間の粗度でピークを迎え,それ以降では強度の低下が見られた。引張付着強度に対して,粗度が増加することにより強度を増す効果と,露出した粗骨材がゆるむことにより有効な抵抗領域が減少し強度を低下させる効果の複合的な作用を数式によって表す試みを行った。3.せん断付着強度は,粗度が増加するにつれて単調に増加する傾向が見られた。関連する3つのJISの粗さパラメータを用いて,せん断付着強度と粗度の関係を近似式により表した。前年度のポリマーセメントモルタルの付着試験では,基盤コンクリートの表面処理工法として表面処理深さが3mm程度以下についてはショットブラスト工法を,3mm程度以上についてはウォータージェット工法を用いた。本年度は,新たにウォータージェット工法を用いて表面処理深さが3mm程度以下とした基盤コンクリートを用意し,付着強度試験を行った。前年度の実験結果に本年度の実験結果を加えて,表面粗さ形状が静的荷重下におけるポリマーセメントモルタルの付着強度に与える影響について再検討をおこなった結果,以下の知見を得た。・表面処理深さの小さい領域でもウォータージェット工法はショットブラスト工法よりも同じ表面処理深さで2倍程度以上の粗さとなる。・引張付着強度およびせん断付着強度について,今回のデータを加えて,表面粗さの影響を取り入れた強度算定式を再構築した。

さらに,下面増厚補強された道路橋床版増厚部の剥離の予測方法を構築するために,疲労荷重下における付着強度試験を実施し,ポリマーセメントモルタルの付着破壊に対する疲労寿命の検討を行った結果,以下の知見を得た。・応力レベルによる疲労寿命の予測式として,応力振幅と最小応力で関係付けられるGoodman型を適用した場合は,引張付着とせん断付着ともに式中の係数Kは20程度となる。
東南アジア地方都市社会における「文化複合」の研究

今回の調査研究を通して、本研究テ-マの「文化複合」の問題がきわめて緊急かつ重大な課題であることの認識がますます強くなった。スリ・ランカにおけるシンハラ系人とタミル系人との間の民族問題、マレ-シアのマレ-人、中国人、タミル人の間の微妙な緊張、フィリピンにおける山地民およびイスラム系国民の自治問題等、それぞれに背景と進展の程度を異にしつつも、「文化複合」の問題が最重要の解決すべき課題のひとつとして社会と国家に大きくのしかかっている。しかも、信頼すべき学術的な基礎資料とその分析を大きく欠いたまま事態は深刻な方向へ進んでいる。この事実は、本調査のテ-マの単なる学問的な妥当性を示すのみではなく、研究対象国側からも緊急に調査研究が必要とされていることでもある。それに加えて、今度の調査研究だけをとっても、現地側研究者と共通認識をつくり、共通の研究関心を生み出す作業にはまことにめざましい進展がみられた。本調査研究では、今回、ヌワラ・エリヤ市、ゴ-ル市およびコロンボ市(以上スリ・ランカ)、コタキナバル市、マラッカ市およびクアラルンプ-ル市(以上マレ-シア)、セブ市、バギオ市およびマニラ首都圏(以上フィリピン)において実地調査と文献資料調査を実施した。調査実施と研究討議に関して、コロンボ大学、マレ-シア国民大学、フィリピン大学、アテネオ・デ・マニラ大学および研究者の緊密な協力を得た。共通研究課題である地方都市における「文化統合」の問題は、次に述べる各国の各都市において以下のような面で調査研究された。ヌワラ・エリヤ市とゴ-ル市では、行政側の問題への対応と展望、政治・経済・教育の分野における「文化複合」の現状と政策的方途のあり方、宗教と儀礼をめぐる民族的分布、長い伝統をもつ多民族社会およびリゾ-トとしての都市の性格と構造を中心に、調査研究が行われた。マレ-シアでは、旧くからの交易都市マラッカ、新興開発都市コタキナバル市において、マレ-系住民と中国系住民の共存の可能性、さらに少数民と都市環境の問題、政治的系列化と宗教政策をめぐる調査研究を行った。フィリピンでは、経済活動を活発に展開する中国系住民と海外投資(香港、台湾)の活況を中心にセブ市と、山岳少数民の自治と都市における諸民族の共生の問題をテ-マにバギオ市において調査研究を行った。今回の調査研究を通して、これまでに明らかとなったのは以下の五点である。1.本調査研究を経て、東南アジア地方都市社会の民族誌的研究に基礎を置く「文化複合」の研究が初めて本格的に着手された。2.「文化複合」の問題は、国家レベルにおける大問題であるが、今回とりあげた地方都市社会のレベルにおいてその問題は、たとえば居住区の区分、宗教施設の分布など実体的かつ具体的な現れをみせるとともに、地方都市社会においてはこの問題の暫定的な解決の方途、あるいは調整も行われていることが明かとなった。3.「文化複合」の視点からの地方都市社会の研究は、多民族・複合化を特徴とする都市社会の構造と性格の根幹にかかわる問題提起であり、従来の都市研究を一歩進めるデ-タと理論枠組みの提出が可能となる。4.このテ-マに関連して、1989年7月に大阪大学人類学講座が主催した国際シンポジウム『国際化と文化摩擦』においても明かとなったように、「文化複合」の問題は日本社会も含め世界大的な問題となっており、東南アジア社会における本調査を基礎としてさらに大きな枠組みによる比較研究を進展するめどがついた。5.本調査研究のテ-マは、東南アジア諸社会における社会科学者の間に強い共通関心を引き出し、今後にわたる研究協力の展開がさらに確かなものとなった。さらにその成果の一部はシンポジウム開催等によって、ハ-バ-ド大学、ロンドン大学等の研究者との討議に発展し、東南アジア、日本、欧米の研究協力が始まっている、今後この協力態勢をいっそう進める所存である。なお、成果の一部は、報告書の形をとって刊行作業中であるが、さらに論文、著書を刊行する予定である。学会発表、国際シンポジウムの開催も計画している。

共通研究課題である地方都市における「文化統合」の問題は、次に述べる各国の各都市において以下のような面で調査研究された。ヌワラ・エリヤ市とゴ-ル市では、行政側の問題への対応と展望、政治・経済・教育の分野における「文化複合」の現状と政策的方途のあり方、宗教と儀礼をめぐる民族的分布、長い伝統をもつ多民族社会およびリゾ-トとしての都市の性格と構造を中心に、調査研究が行われた。マレ-シアでは、旧くからの交易都市マラッカ、新興開発都市コタキナバル市において、マレ-系住民と中国系住民の共存の可能性、さらに少数民と都市環境の問題、政治的系列化と宗教政策をめぐる調査研究を行った。フィリピンでは、経済活動を活発に展開する中国系住民と海外投資(香港、台湾)の活況を中心にセブ市と、山岳少数民の自治と都市における諸民族の共生の問題をテ-マにバギオ市において調査研究を行った。今回の調査研究を通して、これまでに明らかとなったのは以下の五点である。1.本調査研究を経て、東南アジア地方都市社会の民族誌的研究に基礎を置く「文化複合」の研究が初めて本格的に着手された。2.「文化複合」の問題は、国家レベルにおける大問題であるが、今回とりあげた地方都市社会のレベルにおいてその問題は、たとえば居住区の区分、宗教施設の分布など実体的かつ具体的な現れをみせるとともに、地方都市社会においてはこの問題の暫定的な解決の方途、あるいは調整も行われていることが明かとなった。3.「文化複合」の視点からの地方都市社会の研究は、多民族・複合化を特徴とする都市社会の構造と性格の根幹にかかわる問題提起であり、従来の都市研究を一歩進めるデ-タと理論枠組みの提出が可能となる。4.このテ-マに関連して、1989年7月に大阪大学人類学講座が主催した国際シンポジウム『国際化と文化摩擦』においても明かとなったように、「文化複合」の問題は日本社会も含め世界大的な問題となっており、東南アジア社会における本調査を基礎としてさらに大きな枠組みによる比較研究を進展するめどがついた。5.本調査研究のテ-マは、東南アジア諸社会における社会科学者の間に強い共通関心を引き出し、今後にわたる研究協力の展開がさらに確かなものとなった。さらにその成果の一部はシンポジウム開催等によって、ハ-バ-ド大学、ロンドン大学等の研究者との討議に発展し、東南アジア、日本、欧米の研究協力が始まっている、今後この協力態勢をいっそう進める所存である。なお、成果の一部は、報告書の形をとって刊行作業中であるが、さらに論文、著書を刊行する予定である。学会発表、国際シンポジウムの開催も計画している。
窒息屍内臓うっ血の成因

われわれは、これまでに窒息屍モルモット肺うっ血の成因を種々の方法で検討してきた。即ち、窒息屍肺の顕著なうっ血をその含鉄量から明らかにし、さらに絞死肺では、肺動脈収縮比あるいは肺毛細血管および肺静脈の短径を計測することにより肺動脈や肺毛細血管の痙攣あるいは収縮のために静脈性うっ血が生じていることを明らかにした。また、これらはノルアドレナリンが肺動脈及び肺毛細血管の内皮細胞に侵入し、痙攣ああるいは収縮を生ぜしめているのを蛍光組織化学法、電顕酵素抗体法(PAP法)、オ-トラジオグラフィ-およびラジオアッセイで確認した。肺静脈に関しては、窒息時に増量したヒスタミンによるH_1レセプタ-関与の内皮細胞依存性拡張が生じている可能性を電顕酵素抗体法およびラジオアッセイで確認した。次に、肺以外の臓器におけるうっ血の状態を明らかにするために、^3Hーwaterを呼吸停止時に投与、心停止時に各種臓器を採取し、サンプルオキシタイザ-を用い分布状態を測定した。その結果、脾臓の含血量が減少し、肺、腎臓の含血量が増加することが明らかになった。また、^3アドレナリンおよび^3Hノルアドレナリンを投与し各種臓器での分布状態を検討した。その結果窒息屍脾臓の収縮にはアドレナリン関与の可能性が考えられた。窒息時の肺以外の臓器の血管短径を画像解析装置を用い測定し、脾臓中心動脈および脾柱静脈の収縮および腎小葉間静脈および皮質、髄質毛細血管の拡張が窒息時に認められた。また脾臓血管短径の計測を行い、脾臓血管の収縮部位が脾動脈あるいは脾静脈で認められた。その収縮に関与していると思われるアドレナリンの脾臓血管における局在性をオ-トラジオグラフィ-あるいは免疫電顕酵素抗体法をもちいて検討しアドレナリンが脾臓では脾中心動脈、脾柱静脈および脾洞内皮細胞内に、腎臓では小葉間動脈内皮細胞に認められた。ブタ大動脈から採取した内皮細胞を継代培養して以下の実験に使用した。実験装置としては、血液粘土計の一部を改良した円錐平板型の装置を本年度新たに製作し、内皮細胞にせん断応力を負荷できるようにした。1.流れの条件下での物質透過性実験に先立ち、その対照として静置培養系での実験を行った。膜としては、ニュークリポアフィルタにコラーゲンをコートしたものを用い、この上に内皮細胞を培養した。トレーサ物質としては、分子量約400のフルオレセインナトリウム、分子量4k500kのFITC-デキストラン及び分子量約70kのFITC-アルブミンを用いた。こうして、トレーサ物質の透過性を検討したところ、分子量の最も大きい50kのFITC-デキストランを除いてほぼ分子量に依存して透過性が変化していることがわかった。流れの条件下での透過性実験については現在進行中である。2.培養内皮細胞の力学的性質に果たす細胞骨格の役割をマイクロピペット法を使った粘弾性特性試験によって検討した。その結果、マイクロフィラメントの粘性及び弾性特性が細胞全体の力学的性質に強く影響を及ぼしていることが明らかとなった。一方、マイクロチューブルの粘性特性は比較的弱く弾性的性質を持った成分であることがわかった。

3.ガラスの上に内皮細胞を培養してせん断応力を負荷する実験を行っている際に、培養液の代わりにPRP(血小板多血漿)を用い蛍光色素と光の反応を起こさせると、in vivoにおいて血小板血栓ができて来るのと同様に、内皮細胞上に血小板が粘着、凝集して来る現象が新たに見つかった。この原因については、光-色素反応によって発生する活性酸素が内皮細胞膜に微小な傷害を与えていることが示唆された。また、この現象の一部である血小板の凝集は、アラキドン酸カスケードのシクロオキゲナーゼ阻害酵素によって抑制されることが判明した。
アセチルコリンエステラーゼ活性測定の自動分析法の確立

アセチルコリンエステラーゼ(以下AChE)はアセチルコリンを介して神経伝達系をコントロールする酵素である。有機リン系農薬を服毒した場合には、このアセチルコリンエステラーゼおよび血清中に存在するブチルコリンエステラーゼが低下する。現在、有機リン中毒患者の臨床経過としては、ブチルコリンエステラーゼを観察することが一般に行われている。しかし有機リン中毒の場合は神経伝達系作動に関与するAChEを測定することが望ましいとされている。従来の測定法では、特異性も低く用手法で行うために時間も要し有機リン中毒患者経過観察としての利用頻度は低い。今回はAChEに特異的とされるMATP+を試薬として日立7600自動分析装置Pモジュール(日立ハイテクノロジーズ)を使用して測定法確立を試みた。1.自動分析装置への分析条件設定用手法の測定法に準じSample量12.5μL、使用試薬量は第一試薬225μL、第2試薬25μLとして分析条件を入力しエラーの発生しないことが確認できた。2.致適測定条件の検索測定する試薬の致適pHを7.0から8.0の間で検索した、最も反応性の良かったpHは7.4であった。致適測定波長を見つけるために、溶血させた血液をSampleとして自動分析装置で設定できる340800nmの範囲で調査を行い、405nmでの吸光度が最も良いことが確認できた。3.自動分析装置への致適条件での測定測定波長405nm、第一試薬pH7.4リン酸バッファー、第2試薬DTNB、MATP+混和基質として再度測定条件を入力し、従来法との相関、同時再現性および日差再現性の確認を行った。同時再現性で多少のバラツキが見られるものの相関性、日差再現性は良好な結果が得られた。本測定条件により自動分析装置への対応が可能であることが示唆される。
遺伝子改変マウスを用いたBACH1の機能解析

DNA損傷によりBACH1^<-/->,BACH1^<S990A/S990A>,BACH1 WTの順にDNA修復機構の破綻を認めた。BACH1ノックアウトマウス、BACH1^<S990A/S990A>ノックインマウスの表現型は腫瘤形成を認めた。さらにDNA損傷によるBACH1ノックアウトマウスの表現型の生存率は低下を認めた。以上より、BACH1だけでなくBRCA1とBACH1の相互作用もDNA修復・チェックポイント機構に重大な役割を果たしている事が生物学的に証明できた。BACH1^<-/->とBACH1-BRCA1が結合できない変異型であるBACH1^<S990A/S990A>のマウスES細胞を作製し、DNA損傷応答の解析を行うことによりBACH1のDNA損傷時の機能を明らかにし、さらにはBACH1-BRCA1結合の機能を明らかにする事が目的である。以上より、BACH1はDNA修復・チェックポイント機構に重大な役割を果たしており、BRCA1とBACK1の相互作用もDNA修復・チモックポイント機構に重大な役割を果たしている事が生物学的に証明できた。BACH1-/-とBACH1-BRCA1が結合できない変異型であるBACH1S990A/S990AのマウスES細胞を作製し、DNA損傷応答の解析を行うことによりBACH1のDNA損傷時の機能を明らかにし、さらにはBACH1-BRCA1結合の機能を明らかにする事が目的である。BACH1S990A/S990Aのタンパク発現が弱いためか、局在を観察することが出来なかった。BACH1ノックアウトマウスの表現型は50匹中32匹に腫瘤形成(Lymphomaなど)を認めた。BACH1S990A/S990Aノックインマウスの表現型は30匹中3匹に乳癌の発現を認めた。さらに、BACH1ノックアウトマウス,BACH1S990A/S990AノックインマウスのDNA損傷による感受性の解析のため、γ-IRを与えたところ、BACH1ノックアウトマウスの生存率は、BACH1WTが100%生存しているのに対し21日後には85%のマウスが死亡した。それに対し、BACH1S990A/S990AノックインマウスはBACH1WTと差がなかった。以上より、BACH1はDNA修復・チェックポイント機構に重大な役割を果たしており、BRCA1とBACH1の相互作用もDNA修復・チェックポイント機構に重大な役割を果たしている事が生物学的に証明できた。
ハエ目昆虫の光周性に関与する遺伝子の解析

本研究は光周性の発現に関与する分子を明らかにしようとするものである。短日で飼育されたナミニクバエSarcophaga(Parasarcophaga)similisは蛹で発育を停止して蛹休眠に入ることが知られている。一方、長日で飼育された場合は発育を続け成虫となる。昨年度までの研究により、胚から短日で飼育したワンダリング幼虫に数日(最低4日間)の水処理を行い、その間に長日を与えると、休眠への運命が消去されてほぼすべての個体が非休眠へと切り替わることが明らかになった。そこで本年度は次の実験を行った。(1)subtractive hybridizationによる光周期特異的遺伝子の解析(2)概日時計関連遺伝子periodの発現。(1)暗期の光中断実験により、暗期中には2つの光感受相が存在することが明らかになった。そこでその位相に2時間の光パルスを与えたものと与えなかったものから脳を取り出し、subtractive hybridizationを行った。現在のところ、この光パルスの有無によって特異的に発現する遺伝子は得られていない。(2)昨年度までの研究により、水処理中の光周期感受には概日時計が関与していることが示唆された。そこで本種より概日時計関連遺伝子periodをクローニングし、水処理中も継続的に短日を経験した幼虫(A群:休眠運命)、水処理中も継続的に長日を経験した幼虫(B群:非休眠運命)、短日を経験した後水処理中に長日を経験させた幼虫(C群:非休眠運命)でその発現を調べた。その結果、A群では暗期の前半にピークをもつパターン、B群では暗期の後半にピークを持つパターンが得られた。C群での発現ではピークは不明瞭になったものの、暗期後半での発現量がB群と同様に増大していることが明らかになった。このような発現パターン、発現量の違いが光周性の発現に関与しているのかもしれない。概日時計と光周時計の関連を明らかにするため、ルリキンバエProtophormia terraenovaeから概日時計関連遺伝子であるperiod, timeless, cryptochrome, cycle, discs-overgrown (double-time), Clockのホモログのクローニングを行った。これら遺伝子から予測されるアミノ酸配列を、概日時計の分子メカニズムが明らかになっているキイロショウジョウバエDrosophila melanogasterの配列と比較したところ、高い相同性を示した。また、これらのタンパク質が機能するのに重要だと考えられるドメインで特に相同性が高かった。よって、ルリキンバエの概日時計のメカニズムはキイロショウジョウバエと同様であることが示唆された。また、periodの発現パターンを成虫頭部で調べたところ、キイロショウジョウバエと同様に、そのmRNAが口のうちで周期的に変動していることが示された。また、その発現パターンを長日下と短日下で比較したところ、暗期の開始時期に応じてピークの位置が変化することが示された。今後、これらの遺伝子が脳内のどこで発現しているのか、発現パターンの変化が光周性に関与しているのか、について検討していく予定である。また、ナミニクバエのperiod, timelessのクローニングも終了した。今後、光周期感受期である幼虫期にどのような発現をするのか、について解析する予定である。光周性の発現に関与する分子メカニズムを明らかにするため、1)明瞭な光周性を示し、2)ある特定のステージで光周期を感受し、3)その感受期が短い、という条件を満たすモデル生物を検討した。その結果、ナミニクバエSarcophaga(Parasarcophaga)similisのワンダリング幼虫に水処理を行うことが適当であることがわかった。通常、ナミニクバエは胚から幼虫に至る4日間に光周期を感受し、この間に長日を感受すれば発育を続けて成虫になるが、短口を感受した場合には蛹で休眠に入る。しかし胚から幼虫にいたるステージでは、発生が盛んに行われていることから上記条件の2には適合しない。一方、胚から短日で飼育したワンダリング幼虫に数日(最低4日間)の水処理を行い、その間に長日を与えると、休眠への運命が消去されてほぼすべての個体が非休眠へと切り替わることが明らかになり、本種は上記3つの条件を満たす好適な材料であることがわかった。そこで、この「休眠運命の消去」に関して生理学的により詳しく調べた結果、この水処理の期間は短日・長日の両方の光周期を感受していること、概日時計が関与していること、暗期に2つの光誘導相があり外的符号モデルが適用できることが明らかになった。この光周期感受期に発現が変化する遺伝子の候補として、Hsp83,Rack 1,EcRなどを挙げ、これらの遺伝子のクローニングおよび発現解析を行った。その結果、候補としてあげたいずれの遺伝子も短日・長日下での発現に差は見られなかった。また、キイロショウジョウバエのマイクロアレイを用いた異種間でのマイクロアレイ解析を行い、短日・長日下で特異的に発現している遺伝子を探索した。結果、いくつかの遺伝子が候補に上がったものの、ノーザンハイブリダイゼーション法による解析では発現量に差は見られなかった。現在、前年にクローニングが終了した概日時計関連遺伝子period, timelessの発現パターンを短日・長日で比較している。

短日で飼育されたナミニクバエSarcophaga(Parasarcophaga)similisは蛹で発育を停止して蛹休眠に入ることが知られている。一方、長日で飼育された場合は発育を続け成虫となる。昨年度までの研究により、胚から短日で飼育したワンダリング幼虫に数日(最低4日間)の水処理を行い、その間に長日を与えると、休眠への運命が消去されてほぼすべての個体が非休眠へと切り替わることが明らかになった。そこで本年度は次の実験を行った。(1)subtractive hybridizationによる光周期特異的遺伝子の解析(2)概日時計関連遺伝子periodの発現。(1)暗期の光中断実験により、暗期中には2つの光感受相が存在することが明らかになった。そこでその位相に2時間の光パルスを与えたものと与えなかったものから脳を取り出し、subtractive hybridizationを行った。現在のところ、この光パルスの有無によって特異的に発現する遺伝子は得られていない。(2)昨年度までの研究により、水処理中の光周期感受には概日時計が関与していることが示唆された。そこで本種より概日時計関連遺伝子periodをクローニングし、水処理中も継続的に短日を経験した幼虫(A群:休眠運命)、水処理中も継続的に長日を経験した幼虫(B群:非休眠運命)、短日を経験した後水処理中に長日を経験させた幼虫(C群:非休眠運命)でその発現を調べた。その結果、A群では暗期の前半にピークをもつパターン、B群では暗期の後半にピークを持つパターンが得られた。C群での発現ではピークは不明瞭になったものの、暗期後半での発現量がB群と同様に増大していることが明らかになった。このような発現パターン、発現量の違いが光周性の発現に関与しているのかもしれない。
液液界面における単一蛍光分子の拡散過程・反応頻度の計測と統計学的評価

約0.14mmという橿葺の水相の上に,安定に有機相をのせられるマイクロセルを,穴をあけたカバーガラスとスライドガラスから作成した。二相系には,ドデカン/水を選択した。Cw-Nd:YAGレーザーの第2高調波(波長532nm,出力5-50mW)をレンズで集光し,直角プリズムを通して界面に約73°の入射角で照射した。この角度は,ドデカン/水界面の臨界角より大きく,界面でレーザー光の全内部反射が見られた。倒立型の蹟微鏡を用いて,下から高開口数(1.4,油浸)の60倍対物レンズを用いて界面からの蛍光を集め,アバランシェフォトダイオード(APD)検出器を用いてフォトンカウンティングを行った。APDの検出部分に直径50μmのピンホールを付け,界面の観測領域を直径830nmに制限した。溶質として,まず蛍光性で界面活性なインドシアニン色素である,1,1'-ジオクタデシル-3,3,3',3'-テトラメチルインドカルボシアニン(Dil)を用いた。得られた結果を統計学的に解析し,単一Dil分子の界面における二次元の拡散係数,蛍光量子収率を評価した。また,数種の界面活性剤(SDSとDMPC)を添加し,それらが単一Dil分子の拡散係数やを蛍光量子収率に及ぼす効果についても検討した。さらに,これらの結果より,界面の粘性率を求めた。また,蛍光性のテトラメチルローダミンでラベルしたタンパク質,コンカナバリンAのドデカン/水界面における二次元拡散や水相からの吸着過程について,単一タンパク質レベルで検討した。それらに及ぼす界面活性剤(AOT)の影讐についても検討を行った。約0.14mmという極薄の水相の上に安定に有機相をのせられるマイクロセルを,穴をあけたカバーガラスとスライドガラスから作成した。溶質として,蛍光性で界面活性なインドシアニン色素である,1,1^1-ジオクタデシル-3,3,3^1,3^1-テトラメチルインドカルボシアニン(Dil)を用いた。cw-Nd : YAGレーザーの第2高調波(波長532nm,出力5-50mW)をレンズで集光し,直角プリズムを通して界面に約72°の入射角で照射した。この角度は,ドデカン/水界面の臨界角である69°より大きく,界面で全内部反射を起こす。このような励起条件では,下方の水相には励起光が通らず,界面におけるレーリー散乱光と溶媒のラマン散乱光のみがバックグラウンドの原因となるため,バックグラウンドが低く抑えられる。倒立型の顕微鏡を用いて,下から高開口数(1.4,油浸)の60倍対物レンズにて界面からの蛍光を集光し,アバランシェフォトダイオード(APD)検出器を用いて単一光子の計測を行った。APDの検出部分の直前に,直径50μmのピンホールを付け,界面の観測領域を直径830nmに制限した。得られた結果を統計学的に解析し,単一Dil分子の界面における二次元の拡散定数,蛍光量子収率を評価した。また,数種の界面活性剤を添加し,それらが単一Dil分子の拡散係数やを蛍光量子収率に及ぼす効果についても検討した。
フランス近現代思想における身体論(愛・性・家族から見たその展開)

一年目は近現代フランスのさまざまな思想家の著作を読み、そこに現れる身体観を、愛・性・家族の諸問題を通じて解き明かすことに努めた。この準備作業を経て、二年目の秋に国際シンポジウム「結婚の脱構築-レヴィ=ストロース、ボーヴォワール、クロソウスキー、デリダ」を開催し、海外の研究者らとともに、20世紀フランス思想に現れる身体の諸問題を、「結婚」という具体的な例に即して思考することを試みた。本プロジェクトの目的は二つある。まず、DC2、PDで行なった研究プロジェクトをさらに深化させていくこと、これまでに扱いえなかった思想家・テクストを取り上げることで、我々がこれまで19・20世紀フランス思想に確認しえた、「(非)有機的」な(身体外技術を無際限に取り込んでいく)身体論の基本的な方向性をより精密に捉え直すこと。これに関しては、2009年10月に法政大学で行なわれた国際シンポジウムで、ベルクソンとドゥルーズの生気論的な政治哲学を比較する発表、また、2010年3月にまずは明治大学でベルクソンとシモンドンの想像力論・記憶論を比較する発表、次いで同月、福岡の九州日仏学館でベルクソンとドゥルーズの記憶論を比較する発表など計6つの発表を行ない、後に挙げる6本の論文を執筆・公刊することでその目的を一定程度達成したと考える。次に、新たに取り上げるそれらのテクストを新たな観点から取り上げること、すなわちそれらのテクストにあらわれる身体論を「愛」「性」「家族」の側面から焦点化していくことで、フランス的身体論の可能性と限界を見定めることであった。これに関しては、2010年11月20日に九州日仏学館で、愛・性・家族の結節点としての「結婚」に関する哲学的な考察をめぐる国際シンポジウムを開催することで、自分自身発表するとともに、他の講演者(フレデリック・ケック、パトリス・マニグリエ、澤田直の各氏)との意見交換による、さらなる発展を期待しつつ、現在鋭意準備中である。そこでは「ポストセクシュアル」の観点が重要になると思われる。「身体」を規定しているものとしての、愛・性・家族について、フランス近現代の思想の中から広くさまざまな問題点を洗い出そうと試みるうち、本年はより制度的な側面への関心が高まり、一つはそのような「身体」についての言説を生産する場としての「哲学的制度」すなわち「大学」を含む高等教育機関の分析という形に、もう一つは「身体性」が具体的に顕現する場としての「宗教」の分析という形に結実した。今年度前半のほとんどの業績が、言ってみれば認識論的な準備作業を形成している。他方で、事柄それ自身としての「愛・性・家族の結節点としての身体論」は、その最も日常的な顕現の場としての「結婚」を例に、幾つかの学会発表(招待講演)に結実している。すなわち、「結婚の形而上学とその脱構築」と題して行なわれた三つの発表がそれである。2010年11月17日(水)に大阪・大阪大学・吹田キャンパスで行なわれた発表では、「結婚」概念の歴史を短く振り返った後、ドゥルーズの『アンチ・オイディプス』を取り上げ、彼による「家族主義」の批判が必ずしも「家族」概念の全否定を意味しないことを確認した。2010年11月20日(土)には福岡・九州日仏学館にて、日本人研究者1名、フランス人研究者2名を招いて、国際シンポジウムを開催し、それぞれにレヴィ=ストロース、ボーヴォワール、クロソウスキーについて語ってもらった後、デリダにおける結婚概念が孕む「優先性」の批判的検討を分析した。最後に、2011年2月10日(木)に、フランス・パリ、高等師範学校で行なわれた国際シンポジウム「アジアにおけるフランス現代哲学」において、契約・優先性・個人の三つの概念について、ロック、カント、ヘーゲル、アドルノ、デリダ、ドゥルーズらの概念を再検討した。以上の発表はいずれも、これから本格的に取り組まれるべき主題を先取りし素描したものであり、今後もこの取り組みを続けていきたいと考えている。
バイオ超解像位相差電子顕微鏡法の開発

我々が開発した3次元フーリエ・フィルタリング法は、電子顕微鏡からあらゆる収差を補正し原子レベルの分解能を達成すると同時に、生物組織の観察にとって特に重要となる1-2nmの比較的大きい構造を高コントラストで、しかも非常に高いS/N比で観察することを可能にする日本のオリジナルの位相再構成技術である。本研究の目的は、生物組織観察にとって最も重要となる電子線照射を極力抑えた条件下で、3次元フーリエ・フィルタリング法の最適処理条件を決定し、世界初の生体分子の分子レベル観察を実現するバイオ超解像位相差電子顕微鏡法を確立することにある。昨年度は、(1)電子照射を極力抑えた条件下での最適3次元フーリエ・フィルタリング処理条件を決定し、(2)DNAの様な生物試料を支持するナノサイズの孔径の多孔質の金薄膜支持膜を安定的に作製する方法を確立した。さらに、(3)75kVの低加速電圧で最適に機能する生態観察用特殊対物レンズを試作開発した。本年度は、(1)昨年度に開発した特殊対物レンズを用いて生体試料の分子レベル観察を実施し、低加速電圧での収差補正技術を確立するとともに、通常の約1/100の低ドーズであっても分解能0.3nmを保証できることを実証した。また、(2)個々の散乱電子が形成するコントラストを理論的に計算することで、低ドーズ下での生体試料の分子構造がどの程度のコントラストで観察可能かを定量的に示した。さらに、(3)生体観察には低加速電圧化が好ましいこと、低い電流密度で長時間観察する方が生体分子を傷つけないことを実験的に証明した(今秋の国際会議での発表を予定)。さらに、(4)DNA分子鎖の分子レベル観察を実施した結果、損傷の程度は大きいがこれまでにない鮮明さで2重螺旋構造と塩基対配列が観察でき、生体構造の分子レベル観察を実現するバイオ超解像位相差電子顕微鏡法を確立することができた。我々が提案する3次元フーリエ・フィルタリング法は、日本のオリジナルの位相再構成技術であり、あらゆる収差を補正し、生物組織の観察にとって特に重要となる1-2nmの比較的大きい構造を高コントラストで、しかも高S/N比で観察することを可能とする。本研究の目的は、3次元フーリエ・フィルタリング法を生物観察のための顕微鏡法として最適化し、分子レベルでの生体分子構造観察を実現することにある。平成15年度は、(1)数ナノから数十ナノも孔径を持つ多孔質の金薄膜支持膜を安定的に作製する方法を確立した。この支持膜は、電気伝導性だけでなく熱伝導性、機械的安定性にも優れており、DNAの様な生物試料を支持するには最適であると思われる。(2)生体試料は電子照射に極めて弱いために、通常の無機試料の観察の1/1000程度の電子照射しか許されない。そこで電子照射を極力抑えた条件下で、現行の電子顕微鏡と撮像系ならびに処理システムを用いて3次元フーリエ・フィルタリング処理する場合の最適条件を系統的な実験から決定した。その結果、現行のシステムを利用しても最適条件下では、生体分子観察に対する分解能を0.3nmでキープしたままで約1/100の低ドーズ化が実施できることを明らかにした。(3)生体分子の照射損傷を定量的に検討した。この種の研究はこれまでにほとんど行われていない。照損傷の加速電圧依存性、観察像のS/N比の加速電庄依存性、照射損傷の電流密度依存性および照射領域依存性を調べた。

その結果、生体観察には低加速電圧化が好ましいこと、低い電流密度で長時間観察する方が生体分子を傷つけないことが定量的に示された。(今春の国際会議での発表を予定)(4)今回求めた条件でDNA分子鎖の分子レベル観察を実施した。損傷の程度は大きいが、これまでにない鮮明さで2重螺旋構造と塩基対配列が観察できた。(論文執筆中)(5)75kVの低加速電圧で最適に機能する生態観察用特殊ポールピースを試作開発した。現在性能を検証中であり、今後の実験によりその成果が発揮できると思われる。次年度は、新しい生体試料作製、試料保持技術の開発、ヘリウム冷却ホルダーによる極低温での低損傷実験、低加速電圧での収差補正技術の確立と生体分子の分子レベル顕微鏡法を確立する。我々が開発した3次元フーリエ・フィルタリング法は、電子顕微鏡からあらゆる収差を補正し原子レベルの分解能を達成すると同時に、生物組織の観察にとって特に重要となる1-2nmの比較的大きい構造を高コントラストで、しかも非常に高いS/N比で観察することを可能にする日本のオリジナルの位相再構成技術である。本研究の目的は、生物組織観察にとって最も重要となる電子線照射を極力抑えた条件下で、3次元フーリエ・フィルタリング法の最適処理条件を決定し、世界初の生体分子の分子レベル観察を実現するバイオ超解像位相差電子顕微鏡法を確立することにある。昨年度は、(1)電子照射を極力抑えた条件下での最適3次元フーリエ・フィルタリング処理条件を決定し、(2)DNAの様な生物試料を支持するナノサイズの孔径の多孔質の金薄膜支持膜を安定的に作製する方法を確立した。さらに、(3)75kVの低加速電圧で最適に機能する生態観察用特殊対物レンズを試作開発した。本年度は、(1)昨年度に開発した特殊対物レンズを用いて生体試料の分子レベル観察を実施し、低加速電圧での収差補正技術を確立するとともに、通常の約1/100の低ドーズであっても分解能0.3nmを保証できることを実証した。また、(2)個々の散乱電子が形成するコントラストを理論的に計算することで、低ドーズ下での生体試料の分子構造がどの程度のコントラストで観察可能かを定量的に示した。さらに、(3)生体観察には低加速電圧化が好ましいこと、低い電流密度で長時間観察する方が生体分子を傷つけないことを実験的に証明した(今秋の国際会議での発表を予定)。さらに、(4)DNA分子鎖の分子レベル観察を実施した結果、損傷の程度は大きいがこれまでにない鮮明さで2重螺旋構造と塩基対配列が観察でき、生体構造の分子レベル観察を実現するバイオ超解像位相差電子顕微鏡法を確立することができた。