hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
保育における「子ども理解」形成のローカル・ダイバーシティ

本研究課題は、保育の専門性の中核をなすといわれる「子ども理解」の形成過程について、そのローカリティへの注目(子ども理解形成の多様性とその形成条件の分析)および歴史的・地域的・個人史的に変容する保育現場と保育者との関係への注目(保育現場と保育者の役割が変わることと子ども理解のあり方の変容)により、保育研究・子ども学における「子ども理解」概念の精緻化・豊富化を目指すものである。今年度は、予備的な調査活動・文献検討および研究会開催を中心に活動した。主な研究実績として以下の5点を挙げる。(1)本課題代表者および分担者全員による研究計画および研究内容に関する第1回研究会(キックオフミーティング)を開催し、中核となる「子ども理解」概念に関する予備的検討、方法的課題について討議した。(2)二年次に向けた調査準備として、研究倫理審査の申請、インフォーマントの著作等の検討、インタビューガイドの作成、予備インタビューを実施した。(3)実地調査活動として、北海道、東京都、沖縄県、香川県等の幼稚園・保育所・子育て支援現場に訪問し、聞き取り調査や史料・資料収集等を行った。(4)予備的な文献検討として、明治期以降の日本保育史、キリスト教保育史、子ども理解概念、保育と地域との関連、養成課程における学生の子ども理解形成に関する文献渉猟および分析を行った。(5)保育における子ども理解や評価のあり方、発達概念(特に「第一次反抗期」)の受容、保育現場から子育て支援現場へと異動になったことによる保育者の子ども理解と親理解の変容に関する学術論文や研究発表を行った。本課題は、保育の専門性の中核をなすといわれる『子ども理解』の形成過程について、その地域的・歴史的・個人史的な条件の多様性を包摂し得る概念枠組みを整備することを目的としている。一年次は、研究期間を通して到達可能な研究計画を精査し、本格的な研究活動に入る二年次に向けた調査準備や予備調査を中心的な課題とした。上記「研究実績の概要」のとおり、当初期待した研究活動内容に達したと評価し、「おおむね順調に進展している」と考えた。一年次の準備をもとに、二年次は本格的な調査活動に入る。そのために、年度の早い時期において本課題メンバー全員による第2回研究会を開催し、一年次の研究活動内容、到達点、方法的課題を洗い出し、共通理解を構成して二年次の研究活動に入る。さらに、年度中間に第3回研究会を開催し、互いの進捗状況を確認していく。2018年9月に発生した北海道胆振東部地震の影響により当初計画していた北海道内での調査活動の一部が延期され、旅費の支出が抑制されたことがある。今年度遂行できなかった調査を次年度に行う計画である。
肝臓への腸内細菌のBacterial translocationについて

消化器外科領域におけるBacterial translocation(以下BT)は、腸内細菌が腸管壁や胆管、血管、リンパ管を通って他の部位に感染する場合(狭義)と、感染巣から他の部位への感染する場合(広義)があり、この度は多角的に研究した。腸内細菌の腹腔へのBT頻度の高いのはEnterobacteriaceaeとCandida spp.で、低いのはEnterococcus spp.であった。なお、壊死組織が存在すると緑膿菌のBT頻度が高くなった。また、緑膿菌はカテーテルから血液に高率にBTした。原発(感染)巣から血液に高率にBTされる菌種は、Escherichia coli、Serratia marcescens、Staphylococcus coagulase(-)であった。消化管から胆汁中に多くBTされた菌種はE.coliおよびKrebsiella pneumoniaeであった。S.marcescensは感染抵抗力の低下した患者において血液中にBTが生じやすかった。手術侵襲、抗癌剤投与、出血性ショック、術後膵炎、薬剤ショックは腸内細菌のBTを引き起こす要因となった。BTに関しては、具体的な情報が少ない。したがって、本研究では臨床に即してデータを収集した。実際に、腸内細菌や感染巣の細菌が腹腔、血液、胆道・肝にBTすることが多く、BTすることによって全身感染へと進展している。また、抗菌薬の使用による消化管内細菌の変動も大きな問題となる。たとえば、緑膿菌が糞便から分離された症例(n=81)において85%69例にSSIからも分離された。したがって、糞便中に緑膿菌が分離された場合には、周術期感染のrisk factorとなった。消化器外科領域において敗血症例はまれではなく、教室における症例では多種の細菌が検出された。過去3年間において敗血症例122例の血液から154の菌株が分離された。このうち、Streptococcus coagulase(-)が最も多く26株(16.9%)、続いてPseudomonas aeruginosa 16株(10.4%)、Escherichia coli 15株(9.7%)、Serratia marcescens 14株(9.1%)であった。敗血症例のうち、Bacterial translocation (BT)によるものは少なくなかった。BTは、術後、抗菌薬投与、出血性ショック、腸閉塞、腹膜炎、膵炎、禁食、熱傷などが発症の危険因子となり、腸管の粘膜バリアーの破綻に伴って発症するといわれている。敗血症例において、明らかな感染巣がなく、血液中に細菌が出現したものをBTと定義すると、検討症例49例中13例(26.5%)にBTが発症していた。7例(53.8%)では手術侵襲が大きく関与し、このうち膵炎発症例1例、肝移植1例が含まれていた。この他、2例(15.4%)はショック発症例(抗菌薬ショック、出血性ショック)であった。3例(23.1%)は化学療法後の白血球数の減少に伴ってBTを発症した。13例において18株が血液にBTされたが、複数菌が分離された症例は4例(30.8%)であった。検出率の高かった菌種はE.coli(4株)、Enterococcus spp.(4株)、Enterobacter cloasae(3株)であり、前述(敗血症症例)の細菌の検出頻度と異なっていた。これらの分離株の抗菌薬耐性状況と使用抗菌薬は予後に関与していた。また、多くの症例において血液のみならず、肝へのBTも示唆された。現在、in vitroでの研究が進められている。

肝臓の感染の代表的な疾患に肝膿瘍がある。そこで、肝膿瘍症例35例を検討した。成因は細菌性25例、アメーバー性3例、原因不明7例であった。細菌性肝膿瘍を感染経路で検討すると、特発例10例(40%)、胆管炎性8例(32%)、医原性4例(16%)、経門脈性2例(8%)であった。腸内細菌が何らかの経路で肝内に侵入し、病巣を形成したことを示している。肝切除術後の感染症を検討した。肝切除症例48例中、切開表層SSI(surgical site infection)は3例(6.3%)、臓器/腔SSIは16例(33.3%)にみられた。16症例から細菌が分離され、初回検体からの分離菌はPseudomonas aeruginosaが7株、Enterococcus faecalisが4株、Staphylococcus coagulase(-)が2株、MRSAが1株であった。各細菌の抗菌薬感受性をみると、抗菌薬を投与する前から耐性を示す株が多かった(Pseudomonas aeruginosa:カルバペネム系抗菌薬を投与しない症例7例において分離菌5株がimipenem耐性であった)。このことは、院内感染菌が起炎菌であることを示す。ドレーン排液中の胆汁濃度を調べると、ビリルビン濃度2mg/dl以上と2mg/dl未満で分けると、前者において感染が多かった(p=0.032)。このことから胆汁を介した感染発症の可能性が高いと考える。
スーパー抗原刺激が誘導する免疫応答シフトとメモリー細胞分化制御の解析

T細胞活性化作用を有する一群の細菌毒素であるスーパー抗原は、抗原特異性に無関係に多数のT細胞を活性化し、大量のサイトカイン産生を誘導する。しかしその後いわゆるトレランスに陥り、メモリー細胞分化は誘導しないと考えられてきた。本研究では、スーパー抗原刺激によりメモリー細胞誘導が可能か否か、アナジーの誘導はメモリー細胞の誘導とどのような機序の違いにより生じるのかについてサイトカイン産生を指標に明らかにすることを試みた。2002年度は、OVA23-3-TgおよびTSST-1を用いてinvivoアナジーの系を確立した。この系を通常抗原OVA刺激によるT細胞の活性化と比較し、アナジー誘導がサイトカインストームによる免疫応答の遅延と異なることを明らかにした。さらに、2003年度は、このシステムを用いてin vivoアナジーにおけるIL-2プロモーター領域のヒストンアセチル化レベルの解析を行い、invivoアナジーにおけるIL-2産生抑制との関連性を解析した。遠位プロモーター領域と近位プロモーター領域のヒストンアセチル化をChiP-assay法により解析したところ、in vivoおよびin vitro初回刺激後48時間において近位プロモーター領域のヒストンアセチル化が亢進する一方で、アナジー誘導系においては、近位・遠位両者のプロモーター領域でヒストンアセチル化レベルが低下していた。IL-2mRNAレベルがアナジー誘導系で低下することは、Northern blottingにより確認された。昨年度報告したように、IL-2はタンパクレベルで抑制されていることが明らかとなっており、IL-2産生量の抑制がヒストンアセチル化に関連した転写レベルの調節機構によることが示唆される。一方、これらアナジー誘導系においては、CD69、CD25等の活性化抗原の発現が認められ、IL-2産生は転写レベルで抑制されているものの、ある程度の活性化は誘導されている事が明らかとなった。これらはメモリーマーカーであるCD44陽性細胞を含んでおり、in vivoアナジーを誘導されたT細胞は、メモリー細胞と共通する性質を持つ可能性が考えられる。本年度は、まず、新たにOVA特異的TCR-TgであるOVA23-3-TgとTSST-1という組み合わせにより、sAg刺激のモデルマウスシステムを作製した。このシステムは、TSST-1が認識するVb遺伝子が3種類しかないため、内在性Vb遺伝子による反応が非常に低レベルに押さえられる事、さらにコントロールマウスとして用いるLDマウスではこれらを認識するVbが全て完全に欠損しているという事において、Do11.10を用いたシステムよりもすぐれている。このシステムを用いて以下の結果を得た。(1)OVA23-3-TgにTSST-1を投与すると、OVA投与と比較して非常に高いIL-2/IL-6産生を投与後3時間で視察したが、これらは12時間後にはほぼ非投与レベルまで低下した。TSST-1特異的抗体としては、血清中にTSST-1特異的IgMは検出されたが、特異的IgGは検出されなかった。また、central memory markerであるCXCR-5の発現は、投与後五日で比較したところ、TSST-1投与ではOVA投与と比較してほとんど増加しなかった。(2)in vitroでこのマウスの脾細胞を刺激すると、TSST-1ではOVAと比較して低いレベルで細胞増殖が起こり、IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IFN-gなどのサイトカイン産生も亢進した。

これらのサイトカイン産生の上昇は、LDマウスを用いた場合は検出されず、Vb特異的である事が示された。(3)OVA23-3-TCRを発現するHH4-13ハイブリドーマおよびI-Adを発現するA20cell lineを用いて、両者の初期リン酸化シグナルを比較したところ、両者の間に質的な差は検出されず、量的にはTSST-1刺激の方が高くなる傾向が検出された。(4)これらのマウスにOVAおよびTSST-1を投与し、2週間後にin vitroで再刺激を行った。その結果、IL-2およびL-4産生はTSST-1刺激により完全に抑制され、アナジー状態である事が確認された。以上の結果、TSST-1投与群では、時的なサイトカインの大量産生が誘導される方で、メモリーT細胞およびメモリーB細胞の分化は誘導されない事が示された。通常抗原は10000倍以上の量で刺激しないとTSST-1により誘導される量のサイトカインが産生されない。今後、このサイトカイン量の増大がメモリー細胞の分化誘導を負に制御する可能性に付いて検討する予定である。T細胞活性化作用を有する一群の細菌毒素であるスーパー抗原は、抗原特異性に無関係に多数のT細胞を活性化し、大量のサイトカイン産生を誘導する。しかしその後いわゆるトレランスに陥り、メモリー細胞分化は誘導しないと考えられてきた。本研究では、スーパー抗原刺激によりメモリー細胞誘導が可能か否か、アナジーの誘導はメモリー細胞の誘導とどのような機序の違いにより生じるのかについてサイトカイン産生を指標に明らかにすることを試みた。本年度は、昨年度までに確立したOVA23-3-Tgin vivoアナジーにおけるIL-2プロモーター領域のヒストンアセチル化レベルの解析を行い、invivoアナジーにおけるIL-2産生抑制との関連性を解析した。遠位プロモーター領域と近位プロモーター領域のヒストンアセチル化をChiP-assay法により解析したところ、in vivoおよびinvitro初回刺激後48時間において近位プロモーター領域のヒストンアセチル化が亢進する一方で、アナジー誘導系においては、近位・遠位両者のプロモーター領域でヒストンアセチル化レベルが低下していた。IL-2 mRNAレベルはアナジー誘導系で低下することは、Northern blottingにより確認された。昨年度報告したように、IL-2はタンパクレベルで抑制されていることが明らかとなっており、IL-2産生量の抑制がヒストンアセチル化に関連した転写レベルの調節機構によることが示唆される。一方、これらアナジー誘導系においては、CD69、CD25等の活性化抗原の発現が認められ、IL-2産生は転写レベルで抑制されているものの、ある程度の活性化は誘導されている事が明らかとなった。これらはメモリーマーカーであるCD44陽性細胞を含んでおり、invivoアナジーを誘導されたT細胞は、一部メモリー細胞と共通する性質を持つ可能性が考えられる。
連続音声確認のための知識ベースとその構築支援環境の開発

本研究では,従来より行ってきた,ルール表現された知識を用いた連続音声認識研究の経験を生かして,音声認識のための本格的な知識ベースの構築とそのための支援環境の開発を行った.当初の計画では,支援環境は認識システムを核として,ルールデータベース,音声データベース,及び認識システムインタフェイスの3つの支援モジュール群より構成される予定であったが,最終的な構成ではルールトランスレータが加わり,合計5つのモジュール構成となった.ルールデータベースはルール(認識知識)のドキュメントの管理,ルール実行履歴と音声データとの関連の保持などを行い,音声データベースはルール作成,或はシステム評価用のデータの提供を行う.ルールトランスレータは音声の専門家用に設計された高級言語から認識システムが用いているプロダクションシステムOPS5のソースコードへの変換を行い,インタフェイスは各モジュールを利用して知識ベースを構築するためのコマンド群を提供する.この構築支援環境はLispマシンで開発され,インタフェイスの優れたシステムとなっている.認識システムの実行結果はマルチウインド上に表示され,殆どの情報はマウスセンシティブになっているため,システムの処理を利用者が容易に知ることができるようになっている.この環境を利用して,認識知識ベースを整備したところ,認識性能を落とすことなく,ルールの数を約70%に縮小することができた.支援環境によるルールの開発効率に関して,それがないときに比べて10-20倍の向上が確認された.そして,最終的に構築されたルールベースの認識性能として, 6人の成人男性の連続音声にたいして, 94%の音韻境界認識率, 87%の音韻認識率を得た.本研究によって,知識工学的な方法に基づく音声認識の新しい方法論の確立への知見が得られた.本研究では,従来より行ってきた,ルール表現された知識を用いた連続音声認識研究の経験を生かして,音声認識のための本格的な知識ベースの構築とそのための支援環境の開発を行った.当初の計画では,支援環境は認識システムを核として,ルールデータベース,音声データベース,及び認識システムインタフェイスの3つの支援モジュール群より構成される予定であったが,最終的な構成ではルールトランスレータが加わり,合計5つのモジュール構成となった.ルールデータベースはルール(認識知識)のドキュメントの管理,ルール実行履歴と音声データとの関連の保持などを行い,音声データベースはルール作成,或はシステム評価用のデータの提供を行う.ルールトランスレータは音声の専門家用に設計された高級言語から認識システムが用いているプロダクションシステムOPS5のソースコードへの変換を行い,インタフェイスは各モジュールを利用して知識ベースを構築するためのコマンド群を提供する.この構築支援環境はLispマシンで開発され,インタフェイスの優れたシステムとなっている.認識システムの実行結果はマルチウインド上に表示され,殆どの情報はマウスセンシティブになっているため,システムの処理を利用者が容易に知ることができるようになっている.この環境を利用して,認識知識ベースを整備したところ,認識性能を落とすことなく,ルールの数を約70%に縮小することができた.支援環境によるルールの開発効率に関して,それがないときに比べて10-20倍の向上が確認された.そして,最終的に構築されたルールベースの認識性能として, 6人の成人男性の連続音声にたいして, 94%の音韻境界認識率, 87%の音韻認識率を得た.本研究によって,知識工学的な方法に基づく音声認識の新しい方法論の確立への知見が得られた.本研究者は、従来よりルール表現された知識を用いた連続音声の研究を行って来た。本研究はその経験を生かして、連続音声認識のための本格的な知識ベースを構築することを主目的としている。本年度は2年計画の中の初年度でもあり、知識ベースの構築を支援する環境の開発に重点を置いて行った。先ず、従来大型計算センタのLispl.9及び自作のプロダクションシステム上で稼動しているシステムを、現在のリスプマシンとその上のops5n移植を行った。その際にルールの構造の根本的な見直しを行い、処理の単位毎の知識源として再構成した。また、その際にルールの再編成も行い、114個のルールを認識能力を保ったまま70個に縮少することができた。これは後述する支援環境を用いて行ったが、作業は極めて円滑に行われ、支援環境の有効性を検証する1つの結果と考えている。-支援環境は、認識システムを中心として、ルールのバージョンや実行の履歴を管理するルールデータベース,ルールをop65の形成に変換するルールトランスレータ,音声データの管理を行う音声データベース,及び全サブシステムを有機的に統合して支援システムを構成するマン・マシンインタフェイスの5つのモジュールより構成されている。-本支援環境は、現在、リスプマシン上で実現されており評価を行っている。認識対象とする話者を3名増加して、認識ルールの調整を行うことによって支援環境の評価を行ったところ、従来より作業効率が57倍程度向上することが確認された。次年度はルールの例題からの学習機構の開発と同時に、支援環境に基づく知識ベースの本格的な構築を行うことを計画している。
OCTダイナミック解析による手掌部発汗量精密測定と発汗異常症診断への応用

本研究では、OCTによる発汗量の定量測定法を用いて、発汗異常症患者と健常者の汗腺構造の違いを評価する基礎データを蓄積した。実験では、中心波長1.325ミクロンで光軸方向の分解能12ミクロンの光周波数掃引型OCT(SS-OCT)を用いた。指先指紋部の鉛直断面OCT(en face OCT)を構築して、エクリン汗腺に関心領域を設定した。我々は連結抽出処理と適応しきい値法によって、関心のあるエクリン汗腺のみを抽出する手法を考案した。手掌多汗症患者と健常者の汗腺を比較では、平均導管半径において14ミクロン付近に境界があり、多汗症患者の汗腺の構造は太く発達していることが明らかになった。1.エクリン汗腺抽出プログラムによるOCT立体イメージの構築と発汗量の測定OCTイメージにおけるエクリン汗腺の汗管の抽出のための最適しきい値処理プログラムを開発し、汗管形状の精密自動測定を行った。イメージにおける構造の連結部の単独度関数を定義し、これを用いてらせん構造をもつ汗管形状(直径、容積)の精密測定を行った。汗腺における精神性発汗のダイナミックOCTを取得し、発汗時における容積膨張率を測定し、発汗現象の評価法を提案した。光周波数掃引型SS-OCTを用いて、指紋に平行(x方向)に光を走査しながら、指紋に垂直(y方向)にステップ状にOCTを200枚以上取得した。得られたOCTから、x-y平面でスライスしたen-face OCTを深さ方向(z方向)に沿って作成する。2×2mm2の領域で指紋5列にわたり10数本の汗腺の発汗量の同時測定を行った。これにより角層内における汗腺の三次元構造が反映されたイメージを構築した。3.複数汗腺の同時観察による精神性発汗の定量的評価上述のen-face OCTにより、指紋45列にわたり1020本の汗腺をイメージを取得した。ダイナミックSS-OCTにより、フレーム間隔約3秒で時系列に3次元OCTを取得し、複数汗腺の個々の発汗量を同時測定を行った。これにより、外部刺激の種類(音刺激、握力負荷、暗算負荷)を変えて、交感神経活動の興奮度に対する個々のエクリン汗腺の発汗活動をミクロに評価した。1.OCTによる掌蹠多汗症の臨床診断応用掌蹠多汗症などの発汗異常症は、患者への精神的な苦痛によりQOLが著しく低い疾患である。本研究課題で開発する発汗量の定量測定法を用いて、発汗異常症患者と健常者の汗腺構造の違いを評価する基礎データを蓄積した。実験では、中心波長1325んm、光軸方向の分解能12ミクロンの光周波数掃引型OCT(SS-OCT)を用いた。被験者指先指紋部分の鉛直断面OCT(en face OCT)を構築して、エクリン汗腺に関心領域(ROI)を設定した。3次元OCT像から適応しきい値法によって最適なしきい値を設定し、汗腺のみを連結抽出処理によってボリュームレンダリング像を構築した。多汗症患者と健常者のOCTイメージを比較に関しては、特にOCTイメージにおける汗腺の傾きを考慮した重心を求めて、汗腺の体積、導管の長さ、平均導管半径を求めるプログラムを開発した。2.OCTによる発汗異常症の臨床診断応用本研究を通して、手掌多汗症患者と健常者の汗腺を比較した。その結果、平均導管半径びおいて14.014.5ミクロン付近に境界があり、多汗症患者の汗腺の構造は太く発達していることが明らかになった。さらに、塩化アルミニウム塗布治療における多汗症患者の平均導管半径は約1.1ミクロン減少していることが明らかとなった。今後はイオンフォトレーシスによる多汗症の治療効果の評価も検討する予定である。掌蹠多汗症などの発汗異常症は、患者への精神的な苦痛によりQOLが著しく低下する疾患である。本年度は汗腺の3次元構造の精密測定に必要なノイズ処理に重点を置いて研究を進めた。実験では、中心波長1325ナノメートル、光軸方向分解能12ミクロンでイメージを取得できる光周波数掃引型OCT(SS-OCT)を使用し、被験者の右手第二指のOCT画像を取得した。テンプレートマッチングなどに使われる正規化相互相関法を用いて深さ方向のずれを補正し、三次元メディアンフィルタ処理を行ってスペックルノイズの低減を行った。三次元メディアンフィルタ処理は、三次元データについて注目画素を含む13方向にグループ化し、それぞれのグループで1次元メディアン処理を行う。そこで得られた13個のメディアン値を出力画素値とした。この処理の後、取得した三次元画像から適応しきい値法によって最適なしきい値を決定し、汗腺のみを連結抽出処理によって取り出し、エクリン汗腺のボリュームレンダリング像を作成した。ボリュームレンダリング画像のx-y平面スライスから、汗腺の重心を求め、これにより汗腺の長さを算出し平均導管断面積を計測した。この3次元メディアンフィルタ処理を施すことにより、汗腺信号の抜けやスペックルノイズを効果的に除去することができた。本手法の皮膚科臨床診断応用として、手掌多汗症患者と健常者のエクリン汗腺の3次元構造を比較した。その結果、平均導管半径において14.014.5ミクロン付近に境界があり、多汗症患者の汗腺の構造は太く発達していることが明らかになった。

さらに、塩化アルミニウム塗布治療における多汗症患者の平均導管半径は約1.1ミクロン減少していることが明らかとなった。本研究では、OCTによる発汗量の定量測定法を用いて、発汗異常症患者と健常者の汗腺構造の違いを評価する基礎データを蓄積した。実験では、中心波長1.325ミクロンで光軸方向の分解能12ミクロンの光周波数掃引型OCT(SS-OCT)を用いた。指先指紋部の鉛直断面OCT(en face OCT)を構築して、エクリン汗腺に関心領域を設定した。我々は連結抽出処理と適応しきい値法によって、関心のあるエクリン汗腺のみを抽出する手法を考案した。手掌多汗症患者と健常者の汗腺を比較では、平均導管半径において14ミクロン付近に境界があり、多汗症患者の汗腺の構造は太く発達していることが明らかになった。本研究は順調に進展し、実験データの蓄積および研究成果等が国内外の学会にて発表を行っている。総合領域本研究の成果を踏まえて、今後は本研究による発汗異常症の重症度の評価に応用していく予定である。特に汗腺の3次元構造解析により、多汗症患者の平均導管半径を計測して有意差を検討する。エクリン汗腺の精神性発汗は交感神経の興奮度を反映する。OCTによる精神性発汗の動的解析とレーザドップラー血流計測による末梢血流量を組み合わせて、自律神経活動との相関を明らかにする予定である。本研究は順調に進展し、実験データの蓄積のみならず研究成果等が国内外の学会にて発表を行っている。少額の研究用物品費が残っており、本年度の研究費に使用する予定である。本研究の成果を踏まえて、今後はOCTによる掌蹠多汗症の臨床診断応用、及び発汗異常症の臨床診断応用へ展開していく予定である。本研究を通して、汗孔の閉塞やダクトの構造不全を含む汗腺の異常診断、汗腺の構造的・機能的欠陥を含む多汗症の原因究明や塩化アルミニウム塗布治療、イオントフォレーシス(手掌部に通電して汗孔を閉塞する手術)による多汗症の治療効果の評価などを行う予定である。光干渉計用の光学部品の購入に使用する予定である。少額の研究用物品費が残っており、本年度の研究用に使用する予定である。OCT測定用プローブの改良と光学部品の購入に使用する予定である。
大腸癌の多段階発癌・進展におけるゲノム変異解析

18年度【方法】(1)癌23症例に対し、凍結標本からlaser microdissection (LMD)を行い癌細胞のみを切り出しゲノムDNAを抽出した。ゲノムDNAと対照用のhumanfemale DNAをそれぞれCy3,Cy5で標識のうえ、4,030spotのBACクローンを載せたスライドガラス上で、アレイCGHを施行した。(2)得られた結果から各spotごとのサンプルのDNAコピー数を計測し、予後との関連を調べた。【結果】(1)BACアレイ4030スポットにおけるデータ収集は良好で、正常粘膜由来DNAでのスポットは基線上±0.5以内に収まり良好であった。(2)予後に関連あるゲノム33カ所を見いだした。このなかで染色体3p,3q,4q,8qそれぞれ当該部位が欠失あるいは増幅している症例では極めて明瞭に患者予後が分かたれる。またそれぞれのゲノム変異範囲に含まれる遺伝子は15個であり、現在これらに含まれる癌関連遺伝子について詳細な解析を進めているところである。マイクロダイセクションによるmRNA,DNA抽出効率の改善に関する検討凍結標本よりマイクロダイセクションによる遺伝子(DNA,RNA)の抽出と増幅(井上)平成17年度は大腸癌10例、食道癌30例の凍結標本よりマイクロダイゼクションにより腫瘍(表層部、浸潤部)、間質に弁別した遺伝子(DNA,RNA)の抽出を行い質のよいRNA,DNAを抽出した。核酸の品質は総じて良好であった。マイクロアレイ解析(井上)(1)質のそろったRNAが得られた食道癌30例、大腸癌10例、肝臓癌では7例にマイクロアレイ解析を行った。多段階発癌を示すと考えられる部位を詳細にマイクロダイゼクション法により切り分け、その組織学的分化度に一致するRNAマイクロアレイプロファイリングを得ることが可能であった。一部の遺伝子については、その発現産物蛋白に対する抗体を用いて、発現解析を裏付けるデータを得た。(2)DNAレベルではBACアレイによる全グノム解析をまず行ったところ、食道癌では8p,11q,17p等々において従来以上の精度でゲノムの増幅、欠失が生じていることが示された。食道癌30例においてその欠失・増幅パターンは極めて類似度が高く、これは大腸癌とは異なっていた。平成18年度は(1)RNA・DNAレベルを同一サンプルで評価することを目標とする、全ゲノムマップ上において40000遺伝子の遺伝子発現パターンと遺伝子ゲノム変異を同時にマッピングする。(2)癌の多様性を示す病理学的部位ごとのサンプル採取は順調に進んでいるので、この多様性に関与する様々な遺伝子あるいは遺伝子群を抽出することを本年度の目標とする。18年度【方法】(1)癌になりやすさの指標としての遺伝子多型:全結腸内視鏡検査を行い腫瘍の有無を確認した患者600例、対照600例。末梢血DNAについて機能的多型を持つ20遺伝子多型(SMYD3、PPARG、TP53、STK15、IGFBP3等々)をTaqMan PCR法で解析、シークエンスで確認した。(2)腫瘍におけるゲノムアレイ解析(アジレソト44kアレイ)を手術切除標本30例について施行した。【結果】(1)SMYD3多型について遺伝子型(1/2)subtype頻度が対照群16%、大腸癌群22%と有意な差を認めた(p=0.05)。更に2遺伝子による複合多型解析ではSMYD3、STK15、ADPRT遺伝子のうちいずれの2つの組み合わせでも有意な差を認めた。また遺伝子発現解析では癌進展に強く関連する遺伝子としてMYC, CLDN1,FABP6,TROP2,BMP7,MMP11,MMP7,DCC1,COL2A1が抽出され中でもTROP2,FABP6は腫瘍での発現が顕著で転移に関連し、独立した予後規定因子となった。(2)ゲノムアレイ解析では25症例において8p12-11、10q22.3を認めたため、当該領域にある遺伝子発現との相関を検討している。
アンギオテンシンIIによる心臓ペースメーカー細胞のCa電流抑制機序とcGMPの役割

アンギオテンシンIIによるペースメーカー細胞のCa電流抑制アンギオテンシンIIは0.1-10μMの濃度域で用量依存性にCa電流を減少させた.これに平行し,活動電位の自発興奮頻度を減少させ陰性変時作用を有することが示唆された.アルギオテンシンIIのCa電流抑制作用は細胞内を8Br cAMP, protein kinase A inhibitorypeptide又はH89で潅流することにより消失し,細胞内cAMPの減少を介したものであることが判明した.エンドセリンとアセチルコリンによるCa電流抑制とアンギオテンシンIIエンドセリン,アセチルコリンはCa電流を同様に抑制させた.アンギオテンシン潅流下でもエンドセリン,アセチルコリンは相加的に抑制し,逆にアンギオテンシンはそれらに相加的に働かなかった.これら3物質の作用はcGMP, KT5823, methylene blue, L-NMMA等の細胞内外潅流により影響されず,cGMP系の積極的な関与は認められなかった.アンギオテンシンIIとアセチルコリンの作用は百日咳毒素により消失した.エンドセリンは8Br cAMPを飽和させた細胞でもCa電流を抑制し(対照の40%),この成分は百日咳毒素によっては遮断されなかった.結論アンギオテンシン,アセチルコリン,エンドセリンはいづれも百日咳毒素感受性G蛋白を介し,cAMP合成を抑制することにより陰性変時作用を来す.cAMPの分解促進,protein kinase Gの活性化といったcGMP系の関与する経路の役割は小さいことが明かとなった.アンギオテンシンIIによるペースメーカー細胞のCa電流抑制アンギオテンシンIIは0.1-10μMの濃度域で用量依存性にCa電流を減少させた.これに平行し,活動電位の自発興奮頻度を減少させ陰性変時作用を有することが示唆された.アルギオテンシンIIのCa電流抑制作用は細胞内を8Br cAMP, protein kinase A inhibitorypeptide又はH89で潅流することにより消失し,細胞内cAMPの減少を介したものであることが判明した.エンドセリンとアセチルコリンによるCa電流抑制とアンギオテンシンIIエンドセリン,アセチルコリンはCa電流を同様に抑制させた.アンギオテンシン潅流下でもエンドセリン,アセチルコリンは相加的に抑制し,逆にアンギオテンシンはそれらに相加的に働かなかった.これら3物質の作用はcGMP, KT5823, methylene blue, L-NMMA等の細胞内外潅流により影響されず,cGMP系の積極的な関与は認められなかった.アンギオテンシンIIとアセチルコリンの作用は百日咳毒素により消失した.エンドセリンは8Br cAMPを飽和させた細胞でもCa電流を抑制し(対照の40%),この成分は百日咳毒素によっては遮断されなかった.結論アンギオテンシン,アセチルコリン,エンドセリンはいづれも百日咳毒素感受性G蛋白を介し,cAMP合成を抑制することにより陰性変時作用を来す.cAMPの分解促進,protein kinase Gの活性化といったcGMP系の関与する経路の役割は小さいことが明かとなった.
カルシウム過負荷時の不整脈に対するマグネシウムイオンの作用機序

本研究の目的はCa^<2+>過負荷時の不整脈に対するMg^<2+>の抗不整脈作用機序を検討することである.初年度は、筋小胞体からの自動性Ca^<2+>放出によりCa^<2+>濃度の増加が細胞内を伝播する現象(Ca^<2+>Wave)に対する高Mg^<2+>溶液の効果についてCa拮抗薬と比較した.2年目は、Ca^<2+>Waveに対するMg^<2+>の抑制作用が筋小胞体への作用によるものかについて検討した.結果:(1)Ca^<2+>Waveの頻度は、1mMから12mMへの細胞外Mg^<2+>濃度の増加により、17.6+2.2回/分から6分後には10.5+2.7回/分に減少した(p<0.05).(2)細胞外Mg^<2+>濃度の1mMから12mMへの増加により細胞内Mg^<2+>濃度は1.06+0.16mMから6分後には有意に増加、30分後には1.87+0.22mMと上昇した(n=12、p<0.01).(3)高Mg^<2+>溶液とVerapamilは共にCa^<2+>Waveを抑制したが、Ca^<2+>transientに対する効果は異なっていた.高Mg^<2+>溶液ではCa^<2+>transientのpeakとbase値を変化させなかったが、verapamilはbase値を変化させなかったが、peak値を有意に低下させた.(4)Post restのCa^<2+>transientは、細胞外Mg^<2+>の増加により増大した.(5)CaffeineによるCa^<2+>transientの振幅は、1mMから12mMへの細胞外Mg^<2+>濃度の増加により0.29+0.13から0.33+0.11へと有意に増大した(n=10、p<0.05).総括:Ca^<2+>Waveは細胞膜を脱分極させtriggered activityによる不整脈の原因となるとされている.本研究により、高Mg^<2+>溶液によるCa^<2+>Waveの抑制はverapamilの様式が異なり、細胞内Mg^<2+>濃度の増加を伴うことから、電位依存性Caチャネルに対する作用によるものではない.しかし、CaffeineによるCa^<2+>transientを増大させたことより、高Mg^<2+>溶液の効果は筋小胞体のCa^<2+>結合能の増大やCa^<2+>放出チャネルの抑制によることが示唆された.Mg^<2+>の抗不整脈作用は、tgriggered activityの原因となるCa^<2+>waveを消失させることによると考えられる.本研究の目的はCa^<2+>過負荷時の不整脈に対するMg^<2+>の抗不整脈作用機序を検討することである.初年度は、筋小胞体からの自動性Ca^<2+>放出によりCa^<2+>濃度の増加が細胞内を伝播する現象(Ca^<2+>Wave)に対する高Mg^<2+>溶液の効果についてCa拮抗薬と比較した.2年目は、Ca^<2+>Waveに対するMg^<2+>の抑制作用が筋小胞体への作用によるものかについて検討した.結果:(1)Ca^<2+>Waveの頻度は、1mMから12mMへの細胞外Mg^<2+>濃度の増加により、17.6+2.2回/分から6分後には10.5+2.7回/分に減少した(p<0.05).(2)細胞外Mg^<2+>濃度の1mMから12mMへの増加により細胞内Mg^<2+>濃度は1.06+0.16mMから6分後には有意に増加、30分後には1.87+0.22mMと上昇した(n=12、p<0.01).(3)高Mg^<2+>溶液とVerapamilは共にCa^<2+>Waveを抑制したが、Ca^<2+>transientに対する効果は異なっていた.高Mg^<2+>溶液ではCa^<2+>transientのpeakとbase値を変化させなかったが、verapamilはbase値を変化させなかったが、peak値を有意に低下させた.(4)Post restのCa^<2+>transientは、細胞外Mg^<2+>の増加により増大した.(5)CaffeineによるCa^<2+>transientの振幅は、1mMから12mMへの細胞外Mg^<2+>濃度の増加により0.29+0.13から0.33+0.11へと有意に増大した(n=10、p<0.05).総括:Ca^<2+>Waveは細胞膜を脱分極させtriggered activityによる不整脈の原因となるとされている.本研究により、高Mg^<2+>溶液によるCa^<2+>Waveの抑制はverapamilの様式が異なり、細胞内Mg^<2+>濃度の増加を伴うことから、電位依存性Caチャネルに対する作用によるものではない.しかし、CaffeineによるCa^<2+>transientを増大させたことより、高Mg^<2+>溶液の効果は筋小胞体のCa^<2+>結合能の増大やCa^

<2+>放出チャネルの抑制によることが示唆された.Mg^<2+>の抗不整脈作用は、tgriggered activityの原因となるCa^<2+>waveを消失させることによると考えられる.【目的】Ca^<2+>Waveは、Ca^<2+>過負荷時に[Ca^<2+>]iの上昇が筋小胞体(SR)からの自動性Ca^<2+>放出により細胞内を緩徐に伝幡する現象である。これは、細胞膜を脱分極させtriggered activityによる不整脈の原因となるとされている。前回、我々は、[Mg^<2+>]oの増加によるCa^<2+>Waveの抑制は、電気的刺激非存在下でも観察されること、Verapamilと抑制様式が異なること、[Mg^<2+>]iの増加に伴うことから、電位依存性Ca^<2+>channelに対する作用によるものではなく、細胞内作用によることが示唆された。今回、Ca^<2+>Waveに対するMg^<2+>の抑制作用がSRへの作用によるかを検討するため、CaffeineによるCa^<2+>transientに対する[Mg^<2+>]oの増加の効果を検討した。【方法】indo-1を負荷したrat心室筋細胞にglass capillarytubeよりCaffeine(20mM)をmicrosplitzerを用い短期間急速投与することにより、SRのCa^<2+>量を反映するとされているCa^<2+>transientを発生させた。Ca^<2+>transientは、340nmで励起した際の405nmと480nmの蛍光を2つの光電子増倍管を用い同時に測定し、その比で表した。【結果】CaffeineによるCa^<2+>transientの振幅は、1mMから12mMへの[Mg^<2+>]oの増加により0.29±0.13から0.33±0.11(n=10、mean±SE、p<0.05)へ増大した。【結論】[Mg^<2+>]oの増加がSRのCa^<2+>量の指標となるCaffeineによるCa^<2+>transientを増大したことにより、[Mg^<2+>]oの増加によるCa^<2+>Waveの抑制は、[Mg^<2+>]iの増加によるSRのCa^<2+>結合能の増大や、SRのCa^<2+>放出Channelの抑制による可能性が示唆された。Mg^<2+>の抗不整脈作用は、triggered activityの原因となるCa^<2+>Waveを消失させることによることが示唆された。
応力場を考慮した構造体コンクリートの耐久性照査・劣化予測システムの構築

本研究では,構造体に作用する応力レベルの相違が劣化進行機構に及ぼす影響を明かにするため,圧縮応力場におけるコンクリートの各種物性値や耐久性の変化に着目し検討を行った。その結果,作用応力レベルの相違は劣化進行速度に影響を及ぼすとともに,劣化前後において細孔径分布が異なることを明らかにした。また,コンクリートの弾性域に相当する圧縮応力は,劣化の進行を抑制する特異的な作用を持つ可能性を示唆した。さらに,応力レベルの違いによるひび割れの発生性状や変形挙動を評価し,圧縮応力場におけるコンクリートの変形挙動をモデル化することで応力と耐久性との関連性について検討した。本研究は、構造体コンクリートが曝される種々の荷重条件下で発生する応力が、各種耐久性に及ぼす影響を明らかにし、構造体に作用する応力の影響を考慮した耐久性照査・劣化予測手法の確立に寄与することを目的としている。本研究課題では、特にコンクリートに常時作用する圧縮応力を実験室において再現する簡易システムを構築するとともに、そのシステムを適用することで異なる荷重レベルでの耐久性試験を実施する。これにより部材に作用する荷重レベルの違いが各種劣化の進行速度に及ぼす影響を定量的に評価し、応力作用下における劣化進行メカニズムを解明しようとするものである。今年度は、まず、コンクリート供試体に常時圧縮応力を作用させる簡易システム(応力導入載荷フレーム)を作製した。応力作用状態における各種耐久性試験の再現性を高めるため、供試体に一様な応力を伝播させることに主眼を置き、載荷軸の偏心や導入応力の減衰が極力生じない構造を検討した。その検討より、一辺40mmの正方形断面をもつステンレスバーで供試体を挟みこみφ25mmの主軸2本で応力を導入したまま拘束する形式とした。なお、材質をステンレスとしたのは、促進試験で用いる塩化物の影響を考慮してのことである。次に、上記で作製した載荷フレームを用い、応力を導入したコンクリート供試体を対象とし、真空脱泡法により低粘度蛍光エポキシ樹脂を含浸・硬化させることで、供試体内部におけるマイクロクラックを可視化し、顕微鏡像によりクラックの性状や発生分布を把握した。これにより、導入応力の増加に伴い、クラック幅やクラックの発生密度が増加することが明らかとなった。また、各種耐久性試験の精度に影響を及ぼすと思われるコンクリートのクリープや載荷フレームのリラクセーションを把握するため、一部の応力導入状態の試験体を用いて供試体および載荷フレームの継時的な歪挙動の長期計測を開始した。本研究は、種々の荷重条件下に曝される構造体コンクリートに生じる応力が各種耐久性能に及ぼす影響を明らかにし、構造体に作用する応力の影響を考慮した耐久性照査・劣化予測手法の確立に寄与することを目的としている。平成26年度は、昨年度作製した応力導入載荷フレーム(コンクリート試験体に常時圧縮応力を作用させる簡易システム)を用いた耐久性能試験を実施し、作用する荷重レベルの違いがコンクリートの劣化進行速度に及ぼす影響について検討した。今年度は、マクロ的な耐久性能の把握を目的として、耐凍害性試験、促進中性化試験、透過性(透気)試験および塩化物浸透試験を実施した。その結果、何れの促進劣化試験および物性試験においても、無載荷状態のコンクリートと載荷状態のコンクリートでは、劣化進行速度に大きな違いが生じることを確認した。さらに、劣化因子の相の違い(液相か、気相かの違い)によって、各荷重レベルで見られる劣化進行速度の変化が異なる様相を示すことを確認した。具体的には、耐凍害性評価のために実施したRILEMCDF試験において、最大圧縮強度に対する導入応力の比として定義した応力強度比(以下f/σと略記)を20%前後とした場合、無載荷状態の試験体よりもスケーリングの発生が減少する特異的な傾向を示す点が存在する可能性が示唆された。一方、促進中性化試験においては、f/σの増加に伴い、比例的に中性化深さも深くなる傾向を示した。これらの相違は、圧縮応力の導入による微細空隙の閉塞や拡張、或いは、応力導入により組織内部に生じたクラックによる空隙等の短絡に起因する劣化因子の浸透特性の変化が影響していると考えられるが、現状では推察の域を脱しない。したがって、これらの現象の解明については、次年度の最優先課題として取り組み、特に、気泡組織測定や細孔構造特性評価によるミクロ的な組織構造変化の観点からアプローチする。本研究は、構造体コンクリートに生じる種々の応力が各種耐久性に及ぼす影響を明らかにすることを目的としている。平成27年度は、主に昨年度実施した各種耐久性実験の再現実験をもとに検討を進めてきた。その結果、何れの促進劣化試験および物性試験においても、無載荷状態と載荷状態のコンクリートでは、劣化進行速度に大きな違いが生じることを確認した一方で、一部の実験において昨年度実施した実験の結果を再現できない結果が得られた。今年度は、多くの時間を再現実験における不整合に関する検証に費やしたが、得られた研究成果を纏めると次の通りである。まず、応力作用下におけるコンクリートの透過性について、透気性は応力強度比(導入応力/圧縮応力)3040%において減少し,以降,応力強度比の上昇に伴い増加する傾向を示し、透水性は応力強度比1020%で僅かに減少し,応力強度比30%以降,導入応力の上昇にともない増加する様相が確認された。

また、応力作用下におけるコンクリートの耐凍害性については、スケーリング劣化の進行を抑制する劣化抑制領域(応力強度比1030%)が存在し,特に応力強度比20%付近での劣化抑制効果が大きいことが確認されたが、各応力強度比における吸水量とスケーリング量の間に相関性を見出すことはできなかった。しかし細孔構造評価において、細孔径2004000nmの領域に着目した場合、劣化前の健全な試験体の細孔量と比較して応力強度比60%では細孔量の増加が顕著となり、応力強度比0%および30%は僅かな増加にとどまることが明らかとなった。これに対し、応力強度比20%では健全供試体と比較して僅かに減少する様相が見られ,スケーリング発生と傾向が酷似することを明らかにした。平成27年度は、交付申請書に記載した研究実施計画をベースとして、随時研究計画の見直しを行いながら、応力作用下におけるコンクリートの劣化進行メカニズムの解明に向け各種耐久性試験および分析を実施した。特に今年度は、昨年度に実施した各種耐久性能試験(1各種耐久性(マクロ的物性値)に関する評価および分析、2載荷によるミクロ的組織構造(気泡・細孔)の変化に関する評価および分析)の再現実験としての位置付けで各種実験を行い、検討を進めてきた。しかし、研究実績の概要にも示したように実験の再現性や影響因子と思われる指標との相関性に現段階で説明できない部分があり研究成果として纏めるまでには至らなかった。これらの経緯から、再現実験における結果を改めて検証する必要性が高いと判断し「補助事業期間延長承認申請」を行い、事業期間の延長(次年度1年間)が認められている。事業期間の延長が認められた次年度は、今年度に実施した再現実験の方法や分析手法を改めて精査し、追加の検証実験を行うことで事象の解明に努めるとともに、これらの成果を踏まえ、学会参加および論文投稿を行いたいと考えている。以上より、今年度実施した再現実験の不整合や実験方法および分析手法の精査の必要性を踏まえ、現段階における研究の進捗度を自己評価すると、「やや遅れている。」と判断せざるを得ない。本申請課題では、コンクリートに生じる圧縮応力場が耐久性へ及ぼす影響について、各種実験を通して検討を進めてきた。平成28年度は、これまでに得られた研究成果の信頼性向上を目的に、昨年度までに実施した耐久性試験の再現実験を実施した。なお、平成28年度は、特に昨年度までに実施した再現実験において理論的に説明できない事象に着目し、改めてその実験方法や分析手法を見直し、事象の解明に努めた。今年度実施した再現実験から得られた成果を纏めると次の通りである。これまでの成果として、圧縮応力作用下では作用応力レベルによってスケーリングの発生性状が異なり、f/σ=30%未満の圧縮応力が作用する場合、無載荷時と比較してスケーリング量が抑制されることを明らかにしている。この事象を裏付けるために実施した実験において、凍結融解に伴う細孔径分布の変化は応力強度比の違いにより異なる傾向を示し、特に、細孔径2004000nmの領域における細孔構造の変化はスケーリングの発生に影響を及ぼす可能性が示唆された。また、コンクリートが静的圧縮載荷を受ける場合、f/σ=20%程度ではひび割れの発生は認められず、f/σ=40%程度で遷移帯に独立的なひび割れが確認され、以降は作用応力レベルの上昇に伴いひび割れが拡張・進展する様相を確認した。
癌転移・骨髄依存薬物耐性の動的超分子機構解明のケミカルプローブ創出と創薬展開

平成18年度に引き続き、選択的CXCR4アンタゴニストT140を基本骨格とする蛍光標識プローブの開発を行った。TZ14011のD-Lys8をFluorescein、AlexaFluro488で蛍光標識した誘導体は、親化合物の受容体に対する結合親和性を維持しているとともに、CXCR4受容体を発現する細胞株の細胞表面を有意に蛍光標識することが可能であることを明らかにした。また、本蛍光プローブは、共焦点レーザー顕微鏡での染色実験、フローサイトメーターでの細胞の分析・分画に利用可能であることが示唆された。環状ペンタペプチドFC131をリードとしたCXCR4アンタゴニストの低分子化・非ペプチド化研究を行い、FC131のファルマコフォアを含むペプチドミメティクスが中程度の受容体結合阻害活性を示すことを明らかにした。また、環状ペプチドの中心骨格をいわゆる「ドラッグライク」な化学構造に置き換えた各種誘導体を合成・評価し、インドールを中心骨格とする新規低分子CXCR4アンタゴニストを見出した。いずれの誘導体もμMレベルでの活性値であることから、抗がん剤や腫瘍転移抑制剤としての応用のためにはさらなる高活性化が望まれるものの、構造展開を行う上でのリード化合物として適当な分子骨格の化合物を見出すことができた。多因子疾患である癌および白血病に対する治療薬の開発、および、白血球細胞等の細胞分裂を解析するためのケミカルプローブの開発を目的として、細胞分裂のG2/M期において染色体の均等分配に関わるキネシンEg5に対して阻害活性を示す保護システイン誘導体の構造活性相関研究を行った。その結果、4-メトキシトリチルシステインが従来知られていたSTLCに比べて約10倍強力なEg5阻害活性を示すことを明らかにした。がんの転移抑制に関わると報告されたGPR54リカンドKisspeptin類の低分子化研究により見出された新規アゴニストTOM80とその関連誘導体に関わる定量的構造活性相関研究を実施し、TOM80上のN末端の安息香酸上の官能基の違いが、リガンドのアゴニスト活性に大きく関与していることを明らかにした。また、TOM80の生体内での安定性の向上や経口投与可能な薬剤への展開を目指して、非ペプチド化研究を実施した。Phe-Glyジペプチド部分に対して種々のペプチドミメティクスを導入した各種誘導体を合成し、GPR54アゴニスト活性を評価した結果、ペプチド結合をE型アルケンに置換した誘導体で活性の保持が認められたものの、予期に反してフルオロアルケン型等価体では殆ど活性が消失することが判明した。一方、研究代表者らが見出した高活性CXCR4アンタゴニストFC131の詳細な構造活性相関研究を行い、FC131より1.3倍高い活性を有する誘導体FC122を見出した。FC122は、FC131にメチル基を導入し、構成アミノ酸の1残基に立体配置の異なるアミノ酸を変えた分子であり、FC131との構造の共通性から、低分子CXCR4アンタゴニストのデザインを行う上で有用な知見を与えた。また、すでに報告したuMオーダーで活性を示す二核亜鉛錯体構造を有する低分子CXCR4アンタゴニストについて、大量合成法を確立し、in vivo実験に必要な化合物量を確保した。さらに、14残基からなる選択的CXCR4アンタゴニストT140を基本骨格とする、蛍光標識プローブのデザインを行った。すでに報告した111In放射標識T140誘導体のデザインコンセプトをもとに、ペプチドのN末端、および、Lys8のアミノ基を標識した分子を設計した。現在、化合物の合成を完了し、その生物活性の評価、および、プローブとしての機能評価を実施している平成18年度に引き続き、選択的CXCR4アンタゴニストT140を基本骨格とする蛍光標識プローブの開発を行った。