hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ヘテロクロマチン構造の確立と維持を制御する分子機構

Cul4はユビキチンリガーゼ活性を有しているが、そのユビキチン化活性がClr4の機能とどのように関連するのか、実際の標的分子も含めて明らかにされていない。昨年度に引き続き、既知のクロマチン関連因子、転写関連因子にタグを付けて発現させ、電気泳動における挙動を調べるスクリーニングを行い、ユビキチン化修飾を受ける候補因子としてRNAポリメラーゼIIのサブユニットの一つを同定することに成功した。交付申請書に記載したとおりErs1の機能解析を進め、Hrr1とSwi6との関連を明らかにすることに成功した。CLRC複合体の機能解析について、申請書では生化学的解析による検討を中心に記載していたが、実際には同時並行していた基質のスクリーニングを優先して進めた。生化学的解析については来年度以降継続して進める予定。25年度が最終年度であるため、記入しない。遺伝学的なスクリーニングは、系が実際に動くかどうかも含めて成果に結びつくか不確定な要素が多い。しかし、今回スクリーニング系を一から立ち上げ、実際にこれまで機能の明らかにされていなかった2つの因子の同定に成功したことは極めて高く評価できる。また、その機能解析を行い、それぞれの因子がRNAi機構の中心的な役割を果たす事を明らかにすることができた。本成果は国際的にも高く評価され、それぞれPNAS誌、Genes & Development誌に報告することができた。また今回明らかになった新規因子を起点に研究を展開することで、高次クロマチン構造形成とRNAポリメラーゼの終結反応という、これまで明らかにされていない接点を見出すことができた。本研究は残りの研究期間でさらに大きく発展するものと期待できる。新規RNAi因子であるErs1の機能解析については、順調に進展しており論文として成果を発表できると思われる。今後さらに遺伝学的な解析を継続して進めRNAi経路を制御する因子の解析を進める予定である。またCLRC複合体の機能解析については、基質のスクリーニングと生化学的解析を平行して進める予定。これまでの研究によって明らかになった、RNAポリメラーゼの終結因子とヘテロクロマチン構造形成の関係についてさらに解析を続けて行う。研究代表者の異動に伴い研究体制を一部変更する必要が生じたが、可能な範囲で研究費を人件費に充てるなど臨機応変に対応することで、計画通り研究を遂行する予定である。
ゲノム編集技術を用いた子宮内膜脱落膜化に関与する新規エンハンサー領域の解析

脱落膜化マーカー遺伝子であるIGFBP-1の上流領域にはH3K27acが誘導されていた。よって、この領域がIGFBP-1遺伝子発現に関わるenhancer領域であると考え解析を行った。脱落膜化を誘導したところ、同領域の転写活性が上昇することを確認した。ChIP assayにより、この領域には様々な転写因子が結合することがわかった。さらに、enhancer領域のIGFBP-1遺伝子発現への関与を証明するため、ゲノム編集を行いenhancer欠失細胞を作成した。この細胞ではIGFBP-1発現が低下していた。以上より脱落膜化におけるIGFBP1発現に関与する新規enhancer領域が明らかとなった。着床に不可欠な現象である子宮内膜間質細胞の脱落膜化過程では、ゲノムワイドな遺伝子発現変化に伴い多くのゲノム領域で活性化ヒストン修飾変化が起きる。これらの多くは、転写開始点から離れた領域に存在し、未知のenhancer領域であると考えられる。近年開発されたゲノム編集の技術を応用することで、このenhancer領域が実際に遺伝子発現に関与しているかを証明することができる。本研究では、エピゲノム解析により見出された新たなIGFBP1のenhancer領域の転写活性をゲノム編集技術により証明することを目的とした。最初、初代培養または不死化子宮内膜間質細胞を用いて、ゲノム編集によるIGFBP1 enhancer領域欠失細胞の作製を試みたが、トランスフェクション効率の低さやゲノム編集効率の低さから目的の細胞を作製することはできなかった。代わりに、IGFBP1を高発現しているHepG2細胞を用いて、IGFBP1 enhancer領域欠失細胞の作製を試みたところ、目的の細胞を作製することができた。このenhancer領域欠失細胞は、IGFBP1遺伝子発現が低いことがわかった。これにより、着目したenhancer領域が実際に遺伝子発現に関与していることを証明できた。また、この領域に結合する転写因子をChIP assayにより解析したところ、脱落膜化によりいくつかの転写因子の結合が誘導されることを証明した。ゲノム編集は技術的にも難しく目的の変異細胞を作製することが困難な場合が多い。今回は、HepG2細胞を用いることで研究の目的にあった細胞を作製することができた。よって、おおむね順調に進展していると判断した。ヒト子宮内膜間質細胞(ESC)において起こる脱落膜化変化をは、胚の着床や妊娠の成立に必要な生理現象である。RNA-sequenceを用いたゲノムワイド発現解析により、多くの遺伝子発現が脱落膜化によって変化することを見出した。また、ChIP-sequenceを用いたゲノムワイドヒストン修飾解析により、脱落膜化により、活性化enhancerマーカーであるH3K27acがゲノム上の多くの領域、特に転写開始点より3 kb以上はなれた遠位領域に誘導されることがわかった。つまり、これらの領域は脱落膜化によって活性化される未だ着目されていないenhancer領域である可能性が示唆された。IGFBP1は、脱落膜化によって特異的に発現が誘導される脱落膜化マーカー遺伝子である。この遺伝子の上流4.7 kbの領域にもH3K27acが誘導されていた。よって、この領域が脱落膜化におけるIGFBP1遺伝子発現に関わるenhancer領域であると考え、以下の解析を行った。ESCに脱落膜化を誘導したところ、IGFBP1 enhancer領域の転写活性が上昇することをLuciferase assayで確認した。ChIP assayにより、この領域にはC/EBPβ、FOXO1といった脱落膜化に重要な転写因子が結合することがわかった。また、C/EBPβをノックダウンすることでenhancer領域のH3K27ac誘導が消失したため、H3K27ac誘導にはC/EBPβが密接に関与していることがわかった。さらに、enhancer領域のIGFBP1遺伝子発現への関与を証明するために、CRISPR/Cas9によるゲノム編集を行い、enhancer欠失細胞を作成した。この細胞では、IGFBP1発現が低下していた。以上の結果から、脱落膜化におけるIGFBP1発現に関与する新規enhancer領域が明らかとなった。平成29年度は、enhancer領域に結合する転写因子に着目し、さらなる詳細な解析をすすめる。そのためには、これまで通り月一回のカンファレンスにて研究の推進状況を報告し、研究成果に対して討論を行い、研究の方向性を適宜調整することにより研究効率の向上を図る。生殖内分泌学本年度の実験内容に変更はなかったが、実験が順調に進んだこと及び実験試薬の変更などにより、次年度使用額が生じた。次年度使用額は、ChIP assayなどに用いる実験試薬や消耗品、成果発表の旅費に合わせて使用する。
時計蛋白質CRY1の変異が惹起する膵β細胞の老化様変化と膵島機能異常の解明

代表者は、時計蛋白質CRY1の亜鉛結合部位変異体を過剰発現させることで新しいMODY様の糖尿病モデルマウスを確立し、CRYの研究グループを組織し、その膵β細胞機能障害の主要な分子機序を明らかにしてきた。本研究では、当該マウスでは加齢と共に繊維化を伴う膵構造変化が進行すこと、及び膵島内にムチン産生性の膵管異型細胞が生成されることを新たに示した。膵β細胞の細胞老化様の性質が、それらの加齢依存的な異常の進展の本質であると考えられる。KPNA2タンパク質に着目した実験も実施し、KPNA2は特にアダルト期のマウス膵島に於いて、膵β細胞の機能維持に重要な役割を果たすことを示す結果を得た。アダルトのTgマウス(Cys414-Ala変異mCRY1-Tgマウス)が示す膵α細胞数の増加と分布異常(S.Okano etal, J Diabetes Investig., 2013)の原因を調べる目的で, 2週齢のマウス膵組織を用いて,膵島内の膵α細胞領域測定と膵α細胞の増殖能の評価を行った。その結果, 2週齢で既に,膵島に当たりの膵α細胞エリアは野生型マウスと比較して増加している一方,膵α細胞の増殖率はTgと野生型マウス間で差は見られず, Tgマウスの膵α細胞数の増加は増殖能の亢進によるものではないことが強く示唆された。アダルトのTgマウス膵β細胞では脱分化が亢進していることは既に見いだしていることから,膵β細胞から膵α細胞数への分化転換が主因であると考えられる。アダルトのTgマウス膵島では,サイトケラチン17/19陽性の,異常な膵管様構造(嚢胞様構造)を伴うことを見いだしたので, 40週齢マウス組織を用いて定量的評価を行い,この膵管様構造は,Tgマウスで高頻度に出現することを明らかにした。さらにこの構造体の一部の細胞はインスリン陽性であることが判った。アダルトのTgマウス膵島で血管新生が亢進していることも明らかになり, Tgマウスの膵島では膵β細胞の消失とともに,膵島構造のリモデリングが進行していると考えられる。核内受容体ファミリータンパク質のRORγのmRNAが, Tgマウスの膵島で大きく低下していたので,マウス膵組織を用いた免疫染色を実施し,タンパク質レベルでも顕著に減少していることを明らかにした。プロテオミクス解析では,分担者の安井教授が野生型CRY1と比較し変異型CRY1で結合が弱い,新規CRY1結合タンパク質候補の同定に成功し,確認のための実験を進めている。膵β細胞の細胞老化様変化を伴う機能不全や,膵島構造の変化とその原因となりうる分子機構の解析が,前年度に引き続き着実に進展した。膵島の膵管様構造体の発見などの新たな知見も得られた。クリプトクロム(CRY)タンパク質のプロテオミクス解析についても進展した。Tgマウスの給餌性概日リズムの解析については,とりまとめた研究成果を代表者がヨーロッパ時間生物学会(EBRS/WCC Meeting 2015;マンチェスター)で発表するとともに論文原稿をsleep and biological rhythms誌に投稿し,平成28年1月7日付でアクセプトされ,研究成果を学界へ発信することが出来た。ここ十年程の間に、少なからぬ研究者の努力により生物時計と代謝制御についての知見は飛躍的に増大し、それらをまとめた優れた総説も公表されてきた。しかしながら、多能な時計蛋白質クリプトクロム(CRY)に焦点を絞り、その代謝制御の面に軸足を置いた最新の英文総説の必要性が痛感された。代表者が科研費の課題として行ってきた一連の研究成果から、変異型CRY1マウス(Tgマウス)では、特異な概日リズムの表現型を示すのみならず、膵β細胞が老化様の性質を示し加齢に伴い消失すること、膵管上皮細胞の増殖性の異型病変が出現することや、それを起点にβ細胞新生(neogenesis)が起こることを報告してきたが、これらの複合的な現象を統合的に、簡潔に論じて伝える意義も少なくないと感じていた。そこで、研究エフォートの一部を、総説論文の執筆作業に当てることとし、本研究課題の最新の成果と他研究グループの最新の知見も含めて解説した原稿を作成し、J Diabetes Res誌に投稿した。原稿は2016年11月27日付でアクセプトされ公表された。実験面では、引き続き膵β細胞機能障害の原因究明と膵管異型病変ついて解析を行い、上述の膵管異型細胞では一部がムチン陽性であり、膵上皮内腫瘍性病変(PanIN)と類似の病変であることを見出した。Tgマウスでは、加齢に伴いtubular complex(TC)が生成されることも判明した。TCは膵島新生に寄与していると考えられる。さらに、TCやPanIN様の細胞ではHES1蛋白質が高発現していることも明らかにした。この結果から、異型病変の生成にNotchシグナル経路が関与することが示唆される。安井明加齢研フェローは引き続きプロテオミクス解析を中心に実験を継続し、結合蛋白質の同定に具体的成果を得た。理研/東北大加齢研ポスドク時代から一貫して継続して実施して、研究代表者として科研費により補助を受けて遂行してきたCRYに関する一連の研究をまとめた総説論文を公表し、科学コミュニティーに向けて広く発信することができ、研究成果の社会への還元の観点から、研究面における一定の社会的責任を果たすことが出来たと考えている。

また、研究組織に新たに佐藤賢一教授(東北医科薬科大学[前宮城県がんセンター])が連携研究者として参画し、膵管異型の解析を多いに進展させることが出来た。代表者は、科研費基盤Cの成果を主とするクリプトクロム(CRY)に関する英文レビュー執筆で生じた遅れを取り戻すべく、佐藤賢一教授(東北医科薬科大学・消化器内科)、五十嵐雅彦センター長(山形市立病院済生館・地域糖尿病センター)、早坂清名誉教授(山形大学医学部・前遺伝子実験施設長)と密に議論を重ねながら、マウス膵臓の解析に注力した。早坂名誉教授は高い立場からも支援を行い、当研究組織の機動的/安定的運営に対して貢献した。昨年度報告書に記載したPanIN様構造は、その周囲に繊維化を伴っており、活性化膵星細胞の繊維化領域への集積が見られた。正常な膵管細胞では、KPNA2(importin alpha-1)の明確な発現が見られなかったが、異型度の進行に伴い発現が増加することが明らかになった。以上の結果から、PanINや膵癌の形成にKPNA2の発現の増加が一定の役割を果たす可能性が示唆された。さらに代表者は、Tgマウスでは加齢とともに膵島に繊維化が進行することを見出した。Tgマウス膵島への、活性化膵星細胞の集積は特に認められないことから、この繊維化には、M2マクロファージが主に関わっているのではないかと推測している。以前にプロテオミクス解析から特定した複数のCRY1結合蛋白質候補であるが、技術的問題から解析が滞っていた。そこで安井明・加齢研フェロー及び菅野新一郎博士は(東北大学・加齢医学研究所)、新たにCRY1のGST融合タンパク質を調整し結合アッセイを実施した。その結果、懸案であったRNA結合蛋白質とCRY1の結合が確かめられ、C414A置換型CRY1に対して結合が弱まることが確認できた。現在、この蛋白質が、Tgマウスで観察される病態の生成に具体的にどの様に寄与するかを、引き続きこの東北地域にわたる研究ネットワークにて解析している。代表者は、時計蛋白質CRY1の亜鉛結合部位変異体を過剰発現させることで新しいMODY様の糖尿病モデルマウスを確立し、CRYの研究グループを組織し、その膵β細胞機能障害の主要な分子機序を明らかにしてきた。本研究では、当該マウスでは加齢と共に繊維化を伴う膵構造変化が進行すこと、及び膵島内にムチン産生性の膵管異型細胞が生成されることを新たに示した。膵β細胞の細胞老化様の性質が、それらの加齢依存的な異常の進展の本質であると考えられる。KPNA2タンパク質に着目した実験も実施し、KPNA2は特にアダルト期のマウス膵島に於いて、膵β細胞の機能維持に重要な役割を果たすことを示す結果を得た。これまでの膵島のマイクロアレイの解析から, TGFβ経路やWnt経路に関わる遺伝子の発現が, Tgマウスで変化していることを見いだしており、これらがTgマウス膵β細胞の細胞老化様変化や脱分化をもたらす重要な要因であることが考えられるため,この経路の解析を行う。RORγやDBP, TEF, HLFはTgマウス膵島で発現が著しく低下していることを明らかにしたが,これらが関与する膵β細胞の代謝の変化も,膵β細胞機能不全に関連している可能性があり,この観点からの解析も進める。プロテオミクス解析をさらに継続するとともに,同定したCRY1結合タンパク質はマウス膵組織を用いた免疫染色や膵β細胞株でのノックダウンして解析する。Tgマウス
ランダムショートカットと光通信技術による超低遅延グリーンインターコネクト

本研究では,エクサスケール規模以上の高性能計算機システムにおいて,ランダムショートカットリンク接続を光波長多重スイッチ技術により実現することで(1)最長通信遅延1μ秒,(2)現状の電気スイッチのみを用いたHPCインターコネクトと比べて電力性能比数倍を実現するインターコネクト技術を提案し,有効性を示した.本光多重技術の利用により配線を隣接キャビネット間に抑えることが可能となるため,総配線長をほぼ最小にできる.さらに,スモールワールド性を利用してランダムトポロジや通信パターンにあわせて最適なネットワークトポロジを構成することが可能である.本研究は,エクサスケール規模以上の高性能計算機システムにおいて,ランダムショートカットリンク接続を光波長多重スイッチ技術により実現することで(1)最長通信遅延1μ秒,(2)現状の電気スイッチのみを用いたHPCインターコネクトと比べて電力性能比10倍(3)通信パターンに応じた可変トポロジを実現するインターコネクトを探求する目的のもと遂行した.初年度である平成25年度は,国立情報学研究所グループと慶應義塾大学グループは,低次元電気スイッチを用いた場合に,階層的にリンクを追加することで直径と次数がランダムトポロジの特性に近づきつつ,レイアウト時にトーラスよりも短い配線長に抑えること成功した.この見積により,スイッチ遅延とケーブル遅延の和で定まる最長通信遅延を従来の規則網に比べて大幅に削減可能なことが分かった.さらに,光波長多重スイッチ技術にトラヒックをオフロードすることにより大規模計算機システムにおいてジョブ毎のパーティショニングが極めて上手くできることが分かった.産業技術総合研究所グループでは,光スイッチを用いたHPCインターコネクトのトポロジについて、光スイッチ技術、ネットワーク構成、要求パフォーマンス等の観点から検討を行った。また、メモリ間通信をCPUを介さず行うダイレクトメモリコピーアーキテクチャについても検討を行った。試算の一つとして、10万計算ノードの相互接続に必要となる光スイッチのハードウェア規模をラック数で換算すると、シリコンフォトニクス技術を用いた高密度集積により、計算ノードを収容するラック数の数%程度に収まるとの結果を得た。また、現在実現されている光スイッチは切替ガードタイムが比較的大きいため、転送サイズが数数十メガバイト以上という領域において効率的なバーストスイッチングが可能であるとの試算を得た。本研究は,エクサスケール規模以上の高性能計算機システムにおいて,ランダムショートカットリンク接続を光波長多重スイッチ技術により実現することで(1)最長通信遅延1μ秒,(2)現状の電気スイッチのみを用いたHPCインターコネクトと比べて電力性能比10倍(3)通信パターンに応じた可変トポロジを実現するインターコネクトを探求することを目的としている.平成26年度は、まず、電気スイッチネットワークに対し,光波長多重スイッチを補助的に利用することにより,k-ary n-cube, Fatツリー,ランダムという3種類の電気スイッチ間トポロジを効率良く内包可能な低遅延結合網を提案した.提案手法は,既存のトポロジに比べ低い導入コストで,かつ,遺伝的アルゴリズムによる探索範囲を限定することでトポロジ内包性とシステム全体での低遅延性を両立できることが分かった.そして多くの場合,並列アプリケーションのプロセス空間に適したトポロジを全体の計算システムから割り当てることが可能となることが分かった.次に、本相互結合網を導入する場合のフロアプランについて,拡張可能なように光パッチパネルを導入する方法、低遅延低次元トポロジの提案とそのトポロジにおける任意の電気、光波長多重スイッチ数の拡張が可能なフロアプランを開発した.そして,最終的に本相互結合網における数千並列で実行する並列科学技術アプリケーションの評価を行うことが可能なイベントドリブンシミュレーションSimGrid環境の構築を行い、通信プロファイルのさらなる見える化を実現する拡張を行った.以上より,光波長多重スイッチと電気スイッチの混在する相互結合網における(電気スイッチの)可変トポロジの構築方法を確立し、並列アプリケーションの通信パターンに合わせた構成が可能となり、数百ラック規模の計算機システムにおいて最長ゼロ負荷通信遅延1μ秒を達成できる場合が多いことが分かった.我々がこれまでに開発した高パーティショニング能力を持つHPC/データセンターネットワーク技術を発展させ,評価を行った.具体的にはNAS並列ベンチマーク,Graph500,行列計算,Himenoベンチマークを対象にSimGridイベントシミュレーションを行い,本提案手法を用いることで実行時間を大幅に短縮することに成功した.これは,主に並列計算におけるプロセス間の通信時間を大幅に短縮したことに起因する.さらに,インターコネクト網に光スイッチ技術を導入する際に、光スイッチの切替を分散制御的に実行可能とする新たな手法を提案した。これにより、従来提案されている集中制御手法に比べ、既存インターコネクト網制御技術との高親和性の達成、及び、切替にかかるオーバーヘッドタイムの削減が可能となる.両者より,ランダムショートカットリンクを光スイッチ上で効果的に利用することが可能となり,効率的に低遅延性と高バンド幅を要求するアプリケーションをサポートすることが可能となった.現状のHPCネットワークは汎用のアクティブ光ケーブルとInfiniBandなどの電気スイッチで構成されている.しかし,ムーアの法則の終焉が近づいていることを考えると,これらの既存のネットワークアーキテクチャでは,将来的に大規模化が進むHPC/データセンターを構成するネットワークに十分な低遅延性,電力性能比,帯域を提供することは難しいと考えられる.

一方で,本研究で開発したランダムショートカットリンク技術を波長多重スイッチ技術により実現することで,最長システム内通信遅延1μ秒,電力性能比10倍,1Tbps級の高帯域リンクを達成可能である.よって,これらの技術は,今後のネットワーク設計において極めて有望である.本研究では,エクサスケール規模以上の高性能計算機システムにおいて,ランダムショートカットリンク接続を光波長多重スイッチ技術により実現することで(1)最長通信遅延1μ秒,(2)現状の電気スイッチのみを用いたHPCインターコネクトと比べて電力性能比数倍を実現するインターコネクト技術を提案し,有効性を示した.本光多重技術の利用により配線を隣接キャビネット間に抑えることが可能となるため,総配線長をほぼ最小にできる.さらに,スモールワールド性を利用してランダムトポロジや通信パターンにあわせて最適なネットワークトポロジを構成することが可能である.平成26年度は、MPI並列プログラムの実行時間を数%の誤差で見積ることができるイベントドリブンシミュレーションSimGridを用いた評価環境を構築することができ、提案可変トポロジの有効性を示す評価を行うことができた。これは、SimGrid研究開発チーム(フランス)からの直接的なバグフィックスを含むサポートが想定外に得られたことによる。その結果,目的の1つである通信パターンに応じた可変トポロジの実現を示すことができた。また、スーパーコンピュータのネットワーク機器の遅延、コスト、電力計算などに関する計算ツールを開発することで,一部実機による測定を行わずとも、システム設計の評価を行うことができた。このことにより、もう1つの目的である最長通信遅延1μ秒について、多くの場合達成できることを示した.以上より、本研究の課題について現時点で一部解決しており,当初の計画以上に進展しているといえる。27年度が最終年度であるため、記入しない。相互結合網、計算機システム・ネットワーク当初の計画以上に進展しているため、現状の研究体制,総括の枠組みを維持する。これまでに構築した可変トポロジにおけるショートカットリンク構築に関して、光多重による更なる効率的な構成方法を開発する。これは相互結合網のスケーラビリティとコスト抑制を行うためには必須である。この構成方法に基づく設計を進めることで、直接網、間接網を問わず現状最大規模以上のスーパーコンピュータの相互結合網を構築可能とする。さらに、ツリー系トポロジを採用しているデータセンターへの適用を実現する。本可変相互結合網の構成方法の戦略により、エクサスケール規模以上の計算機において最長通信遅延1μ秒、現状のInfiniBandの電気スイッチのみで構成した場合と比べて電力性能比10倍を達成する。
「創造性」を育む「社会的協働学習」に関する国際比較研究―実践モデルの構築に向けて

本研究は、学校と学校外の教育リソースとの連携に基づく、社会的協働学習の実践モデルを構築することで、以下の3点に特徴を持つ。(1)学校-家庭-地域の連携に基づく「社会的協働学習」実践が持つ教育的意義・効果についての(1)理論分析と実践調査、(2)国際比較を包含した体系的研究である。(2)「学校外教育リソース」「教育エージェント」という新たな概念に基づき、学校知と生活知(実践知)、体験と思考とを包含した社会教育、学校教育、家庭教育を論じることを可能にする。(3)学校と「学校外教育リソース」との連携がもつ効果・意義・課題を明らかにしたうえで、よりよい連環を形成するための具体的なモデルを提供する。
時間管理モデルと感情印象の修正による話者の意図が伝わる話速変換会話システムの実現

話速変換を用いたときの3人会話の分析を行い,参与者らが発話開始のタイミングを把握できる話速変換会話システムを開発した.最初に,話し手が聞き手側の聞き終わりを把握できるように,話者の発話終了後に話者にループバック音声を受聴させる機能を話速変換会話システムに実装した.次に,時間伸長によって生じた待ち時間を画面上に配置したメーターによって可視化し,待ち時間を全参与者が把握できるインタフェースを実装した.会話実験を実施し反応潜時を分析した結果,待ち時間の可視化によって,平均反応潜時が有意に短縮することが明らかとなった.これらは,先行話者と後続話者の円滑な話者交替を可能に効果があることを示した.H.26年度は,(1)話速変換を利用した複数人会話の収録とその分析.(2)感情印象を維持しながら話速変換をするシステムの開発に向け,音声パラメータ制御したゆっくり音声から受ける印象の評価実験.(3)音声区間を自動抽出して話速変換を処理するシステムの実装を実施した.(1)まず,若年者2人と高齢者1人が参与する会話実験を通常速度と,話速変換を利用した会話環境で収録し分析をした.その結果,通常速度の会話環境では発話の開始が遅れる傾向にある高齢者が,話速変換を利用した会話環境では,場に相応しいタイミングで発話開始できることを示した.しかし,順番交替の際には,話速変換による時間伸長によって現行の話し手の発話完了時点が不明確となり,発話衝突および沈黙が発生することがわかった.これらの結果より,話速変換を利用する会話環境では,話速変換の支援を必要としないユーザにも情報把握をするための支援が必要であることを明らかにした.(2)話速とピッチを同時に制御して感情印象が維持できるかの評価実験を実施した.評価実験では,発話中の重要な文節のみをゆっくりにした上でピッチ制御をする区分的韻律制御手法の効果を分析した.その結果,高快度・高覚醒度の音声について,元音声の感情印象を維持できる手法を明らかにした.(3)話し手が話しやすい会話環境の実現するためには,時間伸長によって生ずる余分な待ち時間の低減が必要になった.そこで,時間伸長を適用する区間を最小限にすることを目的に,音声区間を自動的に抽出する機構を組み込んだ話速変換会話システム試を作し,予備実験を実施した.その結果,参与者らはジェスチャを多用し,より通常の会話に近づくことを確認した.H.27年度は,研究計画の通り「順番交替を支援する時間管理モデルの構築」を課題に進めた.話速変換を介した会話では,話し手の発話終了時刻と聞き手の聴取完了時刻に時間差が生じる.この時間差は,話し手と聞き手の双方に負の影響を与えるため,話速変換を利用した会話では,順番交替時の時間差の補間方法が課題となっていた.この課題に対する具体的解決法として,「話し手」には「聴覚」,「聞き手」には「視覚」による補助情報の呈示をし,順番交替を支援する2つ機能を実装した.(1)音声フィードバックによる「話し手」の待ち時間を補間する支援時間伸長によって生じた話し手の待ち時間中に,話し手自身の伸長音声を聴取させる手法(音声フィードバック)を構築した.これは,話し手が聞き手側の受聴状態を把握することを目的に実装した機能である.3人会話実験の映像観測から,フィードバック音声を受聴した話し手は,発話内ポーズにおいて,自身の音声を受聴した後に後続発話を開始する発話様式をとるようになり,発話衝突回避への有効性を示した.この研究成果は電子情報通信学会HCS研究会にて発表し,同学会において2015年度ヒューマンコミュニケーション賞を受賞した.(2)視覚情報(メーター)による「聞き手」が次の話し手として話し始める際のタイミングを把握する支援聞き手の聴取終了までの予定時間をメーターにより可視化するインタフェースにより実現した.このインタフェースを使った3人会話実験の映像観測からは,メーターの残量を手がかりに,話し手の発話に後続発話が有るか否かを確認してから話し始め,後続発話との発話衝突の回避に効果を示した.また,メーターの残量が上昇中か下降中かの動きを見て,伸長音声の再生終了前に後続発話が有るか否かの予測が可能になり,聴取音声が再生終了する前に次話者が発話を開始できる効果を示した.H.27年度は計画に沿って「順番交替を支援する時間管理モデルの構築」の課題に対して,時間管理モデルを構築できた.その具体的達成度評価は以下の通りである.・「話し手」に生ずる待ち時間は,音声フィードバックを聴取する時間とし,そのアルゴリズムとリアルタイム処理機能を実装した.さらに,会話実験によりその有用性を確認した.・「聞き手」が,聴取時間の残量を視覚的に把握できるメーター表示機能を,リアルタイム話速変換会話システム上に実装した.・実際の会話データを分析した結果,笑い声や雑音の伸長が会話のしにくさに影響していることがわかり,音声区間抽出の精度を向上させ,話しやすさを改善するための新たな課題が発見できた.・ゆっくり音声に同期し,映像もゆっくりと再生する映像処理手法策定に新たに着手した.H.28年度は,研究計画の通りH.26,H.27の調査結果を基に「時間管理モデルを反映した話速変換システムのインタフェース構築とその評価」を進めた.

通常会話においては,交替潜時(自らが発話を終了してから後続話者が発話開始するまでの時間長)と反応潜時(先行話者が発話を終了してから自らが発話開始するまでの時間長)の長さは同一となり遅れ時間は無いが,話速変換会話では,先行話者にとっての交替潜時は,伸長音声を聴取している後続話者の反応潜時より長くなる.これは,先行話者の交替潜時には,反応潜時にシステムによって物理的に延伸した再生時間が加算されるためでり,複数人の会話に適用した場合においては話しにくくなる要因であったが,構築した会話システムでは,この遅れ時間を会話参加者が把握することが,話しにくさの問題解決になると考え,音声伸長時に発生する話者の発話の終了時と聞き手の聴取終了の時間差を可視化するインタフェースをメータによってユーザに提示する可視化インタフェースを実装した.評価実験では,会話の順番交替のしにくさが提案システムによりどの程度改善するかを定量的に評価した.具体的には,システムによって物理的に延伸した再生時間の可視化と順番交替における後続発話の開始時間の関連を分析した.3人会話を実験的に実施したところ,システムによって物理的に延伸した再生時間である「残余発話聴取時間」の可視化が平均反応潜時を有意に短縮することが明らかとなった.反応潜時が短縮したのは,提案手法によって実現した順番交替のタイミングまでの時間の提示機能によるものであることが示唆された.話速変換会話において交替潜時が短縮することは,先行話者と後続話者の円滑な順番交替を可能にし,話速変換会話における会話のしやすさに大きく貢献できると期待できる.この研究成果は,論文誌を投稿中である.話速変換を用いたときの3人会話の分析を行い,参与者らが発話開始のタイミングを把握できる話速変換会話システムを開発した.最初に,話し手が聞き手側の聞き終わりを把握できるように,話者の発話終了後に話者にループバック音声を受聴させる機能を話速変換会話システムに実装した.次に,時間伸長によって生じた待ち時間を画面上に配置したメーターによって可視化し,待ち時間を全参与者が把握できるインタフェースを実装した.会話実験を実施し反応潜時を分析した結果,待ち時間の可視化によって,平均反応潜時が有意に短縮することが明らかとなった.これらは,先行話者と後続話者の円滑な話者交替を可能に効果があることを示した.H.26年度は計画にそって体制を確立することが出来た.設定していた3つの課題に対してそれぞれチームを組み分担して取り組んできた.その具体的な達成度評価は以下の通りである.(1)話速変換を利用した会話の収録とその分析:高齢者を含む複数人会話映像を4組収録し,書き起こしおよび分析を実施した.(2)話速変換音声の感情印象の分析と加工:高快度・高覚醒度の音声についての,元音声の感情印象を維持できる音声加工手法を示した.(3)時間差が感情印象に及ぼす影響の分析:感情,意図を正確に伝達する手法(時間管理モデル)が必要であることを示した.H.28年度は,「順番交替支援機能と,話者の意図が正確に伝わる時間管理モデルの実現」の課題設定を達成すべく,H.26, H.27年度の成果に基づき以下の3つを統合した話速変換会話インタフェースを構築し,その評価を実施する.(1)話し手を支援する「音声フィードバック」(聴覚)(2)聞き手を支援する「メーター表示」(視覚)(3)話速変換時の音声と映像のズレを補正する機能の実現信号処理,インタフェースH.27年度の,音声遅延により生ずる話しにくさの低減するため,話し手が聞き手の受聴終了時点を把握する方法を導入し,話し手にとって話しやすいインタフェース設計する.
消化管間質腫瘍における血中浮遊腫瘍細胞検出とその有用性検討の試み

平成23年度に2種類の培養GIST細胞(GIST882,GIST48)にhTERTのmRNA発現とコクサッキーアデノウイルスレセプター(CAR)の発現を確認し、また実際に培養GIST細胞にテロメスキャンを感染させ、GFP蛍光が観察できることを蛍光顕微鏡下に確認していた。これにより血液中にGIST細胞が存在すればテロメスキャンで可視化できると予想できていたため、平成23年度から引き続きGIST患者血液を用いてのテロメスキャン感染GFP陽性細胞の検出を試みた。平成25年3月31日までに、12名のGIST患者より研究参加の同意が得られた。全例において原発巣の手術切除前に血液を採取した。採血サンプルは溶血させた後に遠心にて細胞成分を分離して、1×104PFUのテロメスキャンウイルスと24時間混合培養した。回収した細胞をcytospinにてスライドガラス上にspot状に張付け、蛍光顕微鏡下に陽性細胞を確認したところ12例中6例の症例でGFP陽性細胞が確認できた。GFP陽性細胞数は1症例あたり1-7個の範囲で確認できた。この結果はGIST症例においても末梢血中に浮遊腫瘍細胞(CTC)が存在することを示唆する結果であり、今まで全く報告されていない事実である。また、この結果は採血という非侵襲的に方法によって得られており、臨床的意義の大きい新規バイオマーカーとしての可能性を示唆したと考える。さらにGFP陽性細胞を蛍光顕微鏡下でなくフローサイトメトリーを用いて確認することが3例で可能であった。この3例で1個・4個・7個のGFP陽性細胞が得られたため、極少細胞からDNAを抽出した。全症例で原発巣のC-kit遺伝子変異解析はできており、CTCと思われる細胞から抽出されたDNAをシークエンスにかけて原発巣のC-kit遺伝子解析結果と比較する段階まで研究は進展した。まず、GIST細胞株のhTERT活性測定、テロメスキャンの感染効率を検討した。2種類の培養GIST細胞(GIST882,GIST48)にhTERTのmRNA発現があることをリアルタイムPCRで確認した。またアデノウイルス感染効率予測のため、この2種類の培養GIST細胞のコクサッキーアデノウイルスレセプター(CAR)の発現をフローサイトメトリーで確認した。そのうえで実際にGIST882・GIST48にテロメスキャンを感染させ、GFP蛍光が観察できることを蛍光顕微鏡下に確認した。これにより、血液中にGIST細胞が存在すればテロメスキャンで可視化できると予想されたため、GIST患者血液を用いてのテロメスキャン感染GFP陽性細胞の検出を試みた。平成24年3月31日までに、6名のGIST患者より研究参加の同意が得られた。すべて検査上血行性転移のない胃原発GISTの症例で、手術切除前に血液を採取した。回収した細胞をcytospinにてスライドガラス上にspot状に張付け、蛍光顕微鏡下に陽性細胞を確認したところ6例中3例の症例で1、4、4個のGFP陽性細胞が確認できた。研究計画書に記載した平成23年度の計画どおり、GIST患者からのGFP陽性細胞検出まで達成しており、極少細胞からのDNA、RNA抽出とその増幅に関しても既に検討・実施の段階であるため。臨床GIST患者からの血液を用いたテロメスキャン感染GFP陽性細胞の検出の症例を重ねつつ、検出GFP陽性細胞からのDNAを抽出し、GISTで薬物療法の奏効率との相関が既に知られているC-kit遺伝子変異の検出を試みる。これらの集積された研究結果と臨床病態を比較検討し、臨床的有用性を探求する。本研究はもともと平成23年度、24年度で達成することを計画しており、当初の予定通り今後腫瘍細胞の生物学的特性解析のためのフローサイトメトリーやウエスタンブロット、PCR解析に必要な酵素・試薬・多数の抗体等の研究費用として必要となる。また、研究の結果を早い時期に学会発表や論文として適宜情報発信する予定であり、そのための国内外の学会等への旅費や論文校閲および別刷費用も計上している。
運動視刺激を用いたタッチパネル式運転能力評価法の開発

高齢化に伴い認知症患者の交通事故が社会問題化している。本研究では、短時間で簡便に施行できる運転能力評価法の開発を目的としている。研究実施計画としては、タッチパネル式タブレット端末を用いたオプティックフロー認知検査の検査装置が完成後、健常者および認知症患者にその検査とドライビングシュミレーター検査を行い、オプティックフロー認知能力と運転能力との関連性を検討していく予定である。それにより、簡便だが正確な運転能力評価法の開発を進める。現在、タッチパネル式タブレット端末を用いたオプティックフロー認知検査の検査装置の作製を行っているところである。一度作製した検査装置を用いて健常者と認知症患者数名に検査を行ったところ、いくつか問題点が挙げられた。そのため、現在装置の改良中である。平成29年度前半で運転能力評価装置の作製が完了する予定であったが、いくつか問題点がみつかり、現在、装置の改良を行っているため。装置の改良が終了した後、予備的実験を行う。そこで問題点がなければ、本格的な実験を進めていく。装置が完成しさえすれば、研究は問題なく進めることができると考えられる。検査装置の作成に遅れが生じているため、本格的な実験がまだ行えていない状況である。そのため、研究協力費(謝金)として予定していた予算をまだ使用していないためである。検査装置が完成し次第、翌年度に実験を行う。実験を行う事で研究協力費(謝金)を支払う必要性が出てくるため、その費用として使用する。
ナビゲーション行動をモデルとした「補償的情報処理機構」の解析

動物は,種々の環境情報を受容しそれらに実効的に重みづけをしながら一つの行動を達成するという処理系,すなわち「補償的情報処理機構」を獲得することで,環境変化に速やかに対応することを可能にしていると考えられる.昨年までの研究で,ベニツチカメムシは光コンパスを用いた経路統合システムと化学マーキングシステムという複数の定位システムを重みづけして,昼間のナビテーションを遂行することを明らかにした.本年度は,昼夜間での環境変化に対する情報処理様式の切り替えという問題を中心にすえ,夜間ナビゲーションシステムと感覚器適応について研究を進めた.赤外線暗視システムが備わったハンディビデオを用いてカメムシの夜間の行動を観察した.複眼を遮光するとカメムシの定位は乱れ,夜間にも視覚情報が優先的に利用されていた.複眼の内部構造は夜間,暗順応として光を多く受容できるように形態変化しており,網膜電位図法で測定したところ複眼の光感度が昼間に比べて上昇していた.夜間の森の中でカメムシがどのようなcueを優先して定位しているのか,特にカメムシの頭上に存在するキャノピー(林冠)の視覚像の利用について検証した.林内でキャノピーとギャップ(空隙部)の光量を観測し,それを模した大型の箱形野外実験アリーナを作成した.アリーナ上面には,キャノピーのギャップを単純化した円形の開空部を1つもうけた.出巣したカメムシが餌を発見したところでギャップを移動するとカメムシの帰巣方向はギャップの移動に合わせて変化した.これらの結果は,ベニツチカメムシがキャノピーの視覚情報を定位のcueとして利用する夜間ナビグーションシステムを保持することを示している.また昼夜という光環境変化において,システムの重みづけを変えるのではなく,システムはそのままに感覚器を順応させるという情報処理機構を用いて本種が視覚ナビゲーションを達成していることを明らかにした.動物行動の情報処理機構に関するこれまでの研究では,特定の環境に対する単一の情報処理系が扱われてきた.しかし実際には,非常に単純な情報処理機構をもつとされる動物においてさえ,時空間的に変動する多くの情報を利用し,別々の情報に重みづけをする補償的な処理系を介して実効的に一つの行動を達成している.このことから私は,動物は「補償的情報処理機構」を獲得することにより環境適応しているという視点から生物現象を理解する必要があると考えている.ベニツチカメムシの視覚および嗅覚を用いたナビゲーション行動をモデル系として,本研究では複数の情報処理系が階層的あるいは並列に存在している「現実の行動様式」を理解することを目的としている.本年度は,太陽コンパスを用いた場合のナビゲーション行動について研究を進めた.太陽を模した光源を提示した実験空間における歩行速度,定位精度などの行動要素の測定,太陽を検出する複眼の外形的特徴の解析,複眼における個眼間角度等の組織学的解析,物理的環境計測として太陽の経時的移動の測定を行った.それらの結果から,後方に光源が位置する場合,行動的に補償することで軌跡が交互に転向するという発見を中心として,太陽の位置に伴った太陽コンパスの情報処理における変異を定量的に把握することができた.本研究では,なぜ動物は複数の情報処理機構を並列に有し,外環境の変化に伴い階層性が表れるのか?という問題に対する理論的枠組みと実験的検証モデルを構築することも重要な目標である.国内外の定位行動の研究者と議論することで,ナビゲーション行動における「補償的情報処理機構」解析の大まかな検証モデルを考案した.これまでのナビゲーションにおける複数のcueの検証モデルでは,すべて180°のcueの対置的な提示が行われてきたが,新しい検証モデルではcueを90°に方向変位させ,加えてベクトル量を測定する実験系を提案するものである.動物は,種々の環境情報を受容し,それらの情報に実効的に重みづけをしながら一つの行動を達成するという処理系,すなわち「補償的情報処理機構」を獲得したことにより環境適応していると私は考えている.本研究では,動物のナビゲーション行動をモデルに,この「補償的情報処理機構」の枠組みについて提示することを目的としている.本年度は,ベニツチカメムシの帰巣において,1.化学マーキングと経路統合の階層性,2.経路統合における速さと正確さのトレードオフの関係,という2つの主要な点についての成果を達成することができた.1.ベニツチカメムシの採餌では,「経路統合(移動中の定位方向と距離をモニターし,これを経路積算して出発地点を推定するナビゲーションシステム)」が用いられることは既に明らかにしている.今回は,帰巣の最終段階における化学cueの利用について検討した.触角情報を遮断したメスは,巣に定位することができなかった.幼虫を交換した巣にはメスは定位・定着するが,巣の基質を交換すると幼虫が自らの子であっても巣に定位・定着しなかった.帰巣途中に巣の基質を提示すると,メスは直接巣に入ることから,巣の基質にマーキングされた化学物質が経路統合に優先するという階層的なナビゲーション機構が存在することを明らかにした.2.情報処理上の制約の1つである「速さと正確さのトレードオフ」が,本種の経路統合にどのような影響を与えるのかについて実験を行った.餌を奪おうとする同種他個体に遭遇した場合,運搬メスは歩行速度を上昇させる.速い歩行速度で帰巣しているメスと接触を受けず通常の速度で帰巣しているメスとで,定位精度に違いがあるかを観察した.

歩行速度を上昇させたメスの帰巣方向の推定精度には変化がなかったが,巣までの距離を常に過大推定した.経路統合の際,特に距離情報の処理において,トレードオフの影響が強く見られることを明らかにした.動物は,種々の環境情報を受容しそれらに実効的に重みづけをしながら一つの行動を達成するという処理系,すなわち「補償的情報処理機構」を獲得することで,環境変化に速やかに対応することを可能にしていると考えられる.昨年までの研究で,ベニツチカメムシは光コンパスを用いた経路統合システムと化学マーキングシステムという複数の定位システムを重みづけして,昼間のナビテーションを遂行することを明らかにした.本年度は,昼夜間での環境変化に対する情報処理様式の切り替えという問題を中心にすえ,夜間ナビゲーションシステムと感覚器適応について研究を進めた.赤外線暗視システムが備わったハンディビデオを用いてカメムシの夜間の行動を観察した.複眼を遮光するとカメムシの定位は乱れ,夜間にも視覚情報が優先的に利用されていた.複眼の内部構造は夜間,暗順応として光を多く受容できるように形態変化しており,網膜電位図法で測定したところ複眼の光感度が昼間に比べて上昇していた.夜間の森の中でカメムシがどのようなcueを優先して定位しているのか,特にカメムシの頭上に存在するキャノピー(林冠)の視覚像の利用について検証した.林内でキャノピーとギャップ(空隙部)の光量を観測し,それを模した大型の箱形野外実験アリーナを作成した.アリーナ上面には,キャノピーのギャップを単純化した円形の開空部を1つもうけた.出巣したカメムシが餌を発見したところでギャップを移動するとカメムシの帰巣方向はギャップの移動に合わせて変化した.これらの結果は,ベニツチカメムシがキャノピーの視覚情報を定位のcueとして利用する夜間ナビグーションシステムを保持することを示している.また昼夜という光環境変化において,システムの重みづけを変えるのではなく,システムはそのままに感覚器を順応させるという情報処理機構を用いて本種が視覚ナビゲーションを達成していることを明らかにした.
インタラクトームを基盤とした神経変性疾患の多様性を生み出す要因の解明

神経変性疾患では、例え同じ病因タンパク質が凝集・蓄積しても異なる病態、症状を示すことが知られている。病態の複雑性を生み出す発症機構の解明は、疾患多様性に対応した予防・治療への喫緊の課題である。病因タンパク質の1つ、αシヌクレインは、パーキンソン病、多系統萎縮症やレビー小体型認知症で凝集・蓄積する(シヌクレイノパチー)。共通の凝集・蓄積タンパク質がどのようにして多様な病態が生じるかは未だ不明であるが、最近、αシヌクレインが異なるアミロイド線維を形成しうることが報告されており、これとシヌクレイノパチー多様性との関連が指摘されている。昨年度までに、ヒトαシヌクレインと共に、7つのアミノ酸残基が異なるマウスαシヌクレインに着目し解析を進め、電子顕微鏡解析により、これら凝集体は異なったアミロイド線維構造を有することを見出し、国内学会のシンポジウムで発表した。今年度は、さらに、質量分析解析により、これら凝集体が異なるプロテアーゼコア領域を持つことを見出すとともに、ヒトαシヌクレインの53位のアラニンをスレオニンに置換するだけで、アミロイド線維の構造変換には十分であることを明らかとした。さらに、家族性のシヌクレイノパチーに関連した変異体6つについても、電子顕微鏡解析、質量分析解析を行い、これらが異なる構造をもつ凝集体を形成することを明らかとした。以上をまとめ、Biochim Biophys Acta、Biochem Biophys Res Communに誌上発表した(共責任著者)。リコンビナントタンパク質を用いた解析から、αシヌクレイン凝集体が異なる構造・性質を持つアミロイド線維を形成していることを明らかとした。現在、培養細胞やマウス脳にこれら異なる凝集体を導入し、細胞内での凝集体の多様性について、生化学的解析を進めている。細胞内、マウス脳内の凝集体を生化学的に分離・精製し、これの網羅的質量解析を行い、アミロイド線維の構造依存的なインタラクトームを解明することにより、アミロイド線維の多様性がどのようにして異なる病態を引き起こすか、その分子機構の解明を目指す。今年度は、ヒトαシヌクレインと共に、7つのアミノ酸残基が異なるマウスαシヌクレインに着目し、これらを詳細に比較解析行うことで、凝集体多様性を生み出すメカニズムの同定を試みた。まず、リコンビナントタンパク質の凝集性について検討したところ、マウスαシヌクレインの方がヒトのものより早く凝集することが観察された。また、得られた凝集体をタンパク質分解酵素や変性剤で処理したところ、マウスαシヌクレインの方がこれらに高い感受性を持つこと、また電顕解析により、これら凝集体は異なったアミロイド線維構造を有することを見出した。以上のことから、ヒトαシヌクレインとマウスαシヌクレインは、全長140アミノ酸のうち7残基の違いでも性質の異なる凝集体を形成しうることが明らかとなった。以上をまとめ、生命科学系学会合同年次大会(分子生物学会)のワークショプにて口頭発表した。リコンビナントタンパク質を用いた解析から、αシヌクレイン凝集体が異なる構造・性質を持つアミロイド線維を形成していることを明らかとしつつある。現在、その分子メカニズムについて解析を進めると共に、ヒトおよびマウスαシヌクレインを用いた異種間クロスシーディング反応を行い、異なるアミロイド線維構造を形成するかについて解析を進めている。

リコンビナントタンパク質を用いた解析から、αシヌクレイン凝集体が異なる構造・性質を持つアミロイド線維を形成していることを明らかとした。現在、培養細胞やマウス脳にこれら異なる凝集体を導入し、細胞内での凝集体の多様性について、生化学的解析を進めている。得られたαシヌクレインの各種凝集体について、これらを培養細胞に導入し、実際細胞内でも異なる凝集体を形成するか、細胞生存に影響するかについて検討を進める。さらに、細胞内凝集体の網羅的質量解析を行い、アミロイド線維の構造依存的なインタラクトームが存在するかを明らかにし、アミロイド線維の多様性がどのようにして異なる病態を引き起こすか、その分子機構の解明を目指す。細胞内、マウス脳内の凝集体を生化学的に分離・精製し、これの網羅的質量解析を行い、アミロイド線維の構造依存的なインタラクトームを解明することにより、アミロイド線維の多様性がどのようにして異なる病態を引き起こすか、その分子機構の解明を目指す。これまでに、αシヌクレインのリコンビナントタンパク質を用いて、異なる凝集体を形成するシステムを確立してきた。次年度は、これらを細胞内に導入し、凝集体を免疫沈降法にて精製しプロテオーム解析を行う予定であるが、そのための細胞培養試薬、タンパク質導入試薬、免疫沈降関連試薬や質量分析などに多額の費用が必要であり、このために研究費が必要となった。これまでに、αシヌクレインのリコンビナントタンパク質を用いて、異なる凝集体を形成することを明らかとしてきた。また、これらを細胞内やマウス脳に導入し、凝集体を生化学的に分離・精製する方法もほぼ確立しつつある。次年度は、プロテオーム解析を行う予定であるが、そのためのタンパク質導入試薬や質量分析などに多額の費用が必要であり、このために研究費が必要となった。