hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
大気エアロゾル中多環芳香族炭化水素の長距離輸送における腐植様物質の機能解析

また、大気中SPMが沈着、堆積する湖沼底質中に保存される性質を持つ多環芳香族炭化水素(PAHs)及び金属成分の分布により長距離輸送の課程を推定することを試みた。大気SPMの試料の採取は京都市左京区松ヶ崎の京都工芸繊維大学の屋上(地上20m)でハイボリュームサンプラーにより石英ろ紙上に捕集した。底質試料は、京都に近い底質が安定した湖沼であり広い集水域を持たない余呉湖を選択し、湖深部において不攪乱採取泥器を用い、高さ35cmのコアを採取した。また、中国大陸から京都への間に位置する隠岐の島(島根県)男池にても同様に底質コアを採取した。ろ紙上の大気SPMからは脂肪族炭化水素(n-alkanes)を熱分解GC/MSを用いて熱脱着領域にて定量することが可能であった。また、PAHsは蛍光検出HPLC法により定量することにより評価を行ってきたが、熱分解GC/MSで300°Cにて脱着するPAHs成分の分析を試みたが、脱着速度が緩やかで、定量可能な分離能を得ることができなかった。そのため、ヘッドスペースGC/MS法にて300°Cまで保温温度を上昇させることで熱脱着成分のPAHsの定量を試みたところ、一時的には分析定量が可能であったが、装置のポリシロキサンによる汚染のために、装置の運用が困難となった。本研究の根幹である。現在、PAHsの迅速簡易定量法の確立を熱脱着GC/MSの導入により検討している。当初予定していたヘッドスペースGC/MSを用いた場合に専用バイアルセプタムからポリシロキサンなどの大量ブリードが原因で、分析が困難となった。現在、熱脱着GC/MSを用いた分析法の開発を進めている。本研究において捕集ろ紙からの直接分析法は非常に重要で有り、研究野進捗に直接影響していた。腐植様物質を生成することなく大気汚染物質との相互作用について検討する方法を検討する予定である。現在準備を進めている方法としては、腐植様物質とPAHsを含んだ捕集ろ紙試料に太陽光シミュレーターにより光照射し、PAHsの濃度変化と腐植様物質の簡易水抽出による蛍光特性の評価により相互作用について検討を行う。本法では、前処理をほとんど必要としないため、化学処理による化学組成の変化を受けない点で優れているといえる。底質試料中及び捕集ろ紙試料中のPAHs濃度の測定については、ヘッドスペースGC/MS分析装置を用いた方法を検討しており、こちらについてもこれまでの煩雑な前処理を必要としないためにより正確で迅速な分析方法の確立が期待される。熱脱着GC/MSを用いた分析法を開発する。2019年度は島津製熱脱着前処理装置(TD-30)を導入し、PAHsの安定的な迅速分析法を確立し、捕集ろ紙上において光化学反応に影響をHULISの動態と共に評価する予定である。旅費の計算により年度末調整があり、46250円の残が発生した。大きい額でないため次年度の物品費に充当する予定である。1194円が前年度残額が生じた。次年度に繰り越して消耗品等を購入する予定である。
長波長発光(深紅色発光)を示す新規化学発光基質の設計と合成

○ヘテロ環を含む縮環系芳香環の導入ではベンゾチアゾール環を有するジオキセタンが最大発光波長(λ_<max>)730nmと深紅色発光を示すことが分った。○1の1位アリール基として、4あるいは5位に芳香環を有する3-オキシフェニル基を導入したジオキセタンを合成したところ、3-オキシフェニル基のみの発光に比較して導入した置換基により60nm程度長波長シフトすることが分った。なおこれらのジオキセタンの中に、生化学分析系で重要となる水系溶媒中でも極めて高い発光効率を見いだされた。○1を含むCIEEL型発光基質ではオキシ芳香族エステルがその発光種としてもっぱら検討されてきたが、1の1位と5位の置換様式を逆にし、オキシ芳香族ケトンが発光種となるジオキセタンを合成したところ、対応するエステル体に比較して80nm程度長波長シフトすることが分かり、λ_<max>=642nmの赤色発光を示す発光基質が得られた。○新たにベンジル型アニオンを利用した発光基質の検討を行ったところ、λ_<max>=702nmの深紅発光を示す発光基質が得られた。本研究の準備段階において、1-aryl-5-t-butyl-4,4-dimethyl-2,6,7-trioxabicyclo-[3.2.0]-heptane(1)がCIEEL(Chemically Initiated Electron Exchange Luminescence)-型発光基質の基本骨格となること、そしてそれが極めて熱安定性に優れたものであることを見いだしている。また様々なナフタレン、ベンゾフランおよびベンゾチオフェン置換ジオキセタンを合成、それらの発光特性を検討することにより、発光種となる芳香環に関しトリガーとなるオキシアニオン部分とジオキセタン環の位置関係によりその発光特性が著しく異なることをすでに明らかにしている。本研究の第一歩としては、ナフタレン環置換ジオキセタンでのさらなる長波長発光種の創出を検討した。すなわちナフタレン環上にさらにナフタレン環を導入したビスナフチル型ジオキセタンを合成したところ、もとのナフタレン単環ジオキセタンに比較し最大発光波長(λmax)が最大100nmも長波長シフトする場合があることが分かった。この現象はフェニル置換ジオキセタンでも認められ、β-ナフチル基を3-ヒドロキシフェニルジオキセタンの5位に導入した化合物では、導入前に比較しλmaxが約60nm、さらにフェニル環の4位にメチル基を導入することによりさらに50nmも長波長シフトするということが分かった。本研究ではCIEEL(Chemically Initiated Electron Exchange Luminescence)型発光基質であり、すでに熱安定性に優れることを見出している1,2-ジオキセタン骨格、1-aryl-5-t-butyl-4,4-dimethyl-2,6,7-trioxabicyclo[3.2.0]heputane(1)の電子供与性基であるアリール基を、今までの知見を基に種々変換することで長波長発光を示す新規化学発光基質の創出を行った。ヘテロ環を含む縮環系芳香環の導入では、ベンゾ-チアゾール環を有するジオキセタンが最大発光波長(λ_<max>)730nmと深紅色発光を示すことが分かった。1の1位アリール基として、4あるいは5位に芳香環を有する3-オキシフェニル基を導入したジオキセタンを合成したところ、3-オキシフェニル基のみの発光に比較して導入した置換基により60nm程度長波長シフトすることが分かった。なおこれらのジオキセタンの中に、生化学分析系で重要となる水系溶媒中でも極めて高い発光効率を示す発光基質が見いだされた。また、1を含むCIEEL型発光基質ではオキシ芳香族エステルがその発光種としてもっぱら検討されてきたが、1の1位と5位の置換様式を逆にし、オキシ芳香族ケトンが発光種となるジオキセタンを合成したところ、対応するエステル体に比較して80nm程度長波長シフトすることが分かり、λ_<max>=642nmの赤色発光を示す発光基質が得られた。また新たにベンジル型アニオンを利用した発光基質の検討を行ったところ、λ_<max>=702nmの深紅発光を示す発光基質が得られた。
多機能性エピジェネティクス低分子化合物を用いた骨増成機構への多面的アプローチ

本研究はエピジェネテジクス低分子化合物による炎症制御、細胞遊走促進、骨芽細胞分化促進の作用を検討し、多面的な骨欠損治癒、骨形成促進作用の検討を行うことを目的とする。本研究により確実性、安全性、予知性に優れた骨増生法を開発することを目的とする。HDACiであるバルプロ酸によって処理した細胞に分化刺激を加えることにより、骨芽細胞文化マーカー遺伝子の発現は対照群に比較して有意に発現の上昇が認められた。さらに細胞遊走因子の遺伝子発言の上昇、及び血管形成促進因子の遺伝子発現の上昇を示した。また、処理細胞を頭蓋骨骨欠損モデルに移植したところ、未処理細胞移植窩洞よりも骨形成の有意な促進が観測された。HDACiは遺伝子発現を後遺伝学的に制御し得る低分子化合物として抗癌剤や、抗てんかん薬、近年ではiPS細胞の効率的な作成などに応用されている。我々はHDACiの骨形成能賦活化に着目しin vivo, in vitroにおける研究を行ってきた。HDACiによる骨形成賦活化は遺伝子配列変化を伴わない比較的安全かつ、既存の成長因子等による活性化より上流における制御機構であることがその理由である。我々のin vivoにおけるHDACi全身投与実験では円筒形骨欠損修復能力の明らかな活性化がみられたが、その詳細なメカニズム解明には至っていない。さらに、in vitroにおける骨芽細胞の分化促進研究ではHDACiによる分化促進作用を認め、in vivo実験データを裏付けているが、in vivoで観察される新生骨形成促進作用を十分説明するには至っていない。本研究の目的はHDACiによる炎症制御、細胞遊走促進、骨形成促進の解明と、確実性、安全性、予知性に優れた多面的アプローチによる骨増成法開発である。従来の骨増成法は主に細胞、足場材、サイトカインを併用するもので、長期残存や汎用性など未だ多くの問題点が残されている。HDACiを用いた骨増成法は比較的安価、安全で従来の骨増成法と併用可能である。HDACiによる多面的骨形成、骨増成促進作用が証明できれば、基礎及び臨床歯科医学的意義は高い。研究の最終的な目標はインプラント治療の適応症の拡大と成功率、生存率のさらなる向上である。本年度はHDACi処理細胞を頭蓋骨欠損モデルに移植し欠損修復速度の有意な促進を観察した。本研究の目的は多機能性エピジェネティクス低分子化合物(ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤(HDACi))による炎症制御、細胞遊走促進、骨形成促進の解明と、確実性、安全性、予知性に優れた多面的アプローチによる骨増成法開発である。in vitroでの骨芽細胞分化促進、血管形成因子発現上昇、細胞誘導因子上昇は確認され、骨欠損部位に対する処理細胞移植による骨形成促進、は確認されている。口腔内インプラント稙立モデルに関しては今後の実施となる。本研究はエピジェネティクス低分子化合物による炎症制御、細胞遊走促進、骨芽細胞分化促進の作用を検討し、多面的な骨欠損治癒、骨形成促進作用の検討を行うことを目的とする。本研究の推進により隔日制、安全性、予知生に優れた多面的アプローチによる骨増生法を開発することを最終目的とする。HDACiであるバルプロ酸によって処理した細胞に分化刺激を加えることで、分化マーカー遺伝子の発現は対照群と比較して優位に発現の上昇を認めた。さらに、細胞遊走因子の遺伝子発現の上昇、及び血管形成促進因子の遺伝子発現上昇を示した。また、処理細胞を頭蓋骨骨欠損モデルに移植したところ、未処理細胞移植窩洞よりも骨形成が優位に促進された。細胞誘導の進捗がやや遅れているが動物実験に関して順調に進行中である処理細胞による骨増生と増生骨量維持に対する研究及び処理細胞による血管形成能研究、造成部に対するインプラント稙立実験を今後継続していく歯科補綴学標識細胞の移植実験及びGFP細胞移植等によりin vivoレベルでの細胞誘導検証を行う動物実験施設が細菌感染により使用不能になった期間があり、実験動物購入費用、実験施設使用料が使用不能であったため。細胞誘導実験が当初の予想よりも難航し、問題解決のため実験が中断したため実験動物購入および施設使用料に使用予定である使用細胞と解析用試薬の変更
農業経営の主体的発展に向けた支援手法の開発－政策支援と民間支援の融合の観点から－

昨今の農業経営政策では、かねてより担い手自身の主体的成長を促す政策体系へのシフトが望まれてきた。本研究は従来の政策支援の効果を高め、農業経営者の主体的経営改善を促進するため、段階的支援方策のあり方について検討を行った。具体的には、まず国際比較の観点から、農業の担い手に対する政策支援の実態と効果的な支援のあり方について日本とカナダの比較研究を行った。また、国内については経営者能力の高度化に従った必要支援策の変化を確認するとともに、成長初期段階における支援策のあり方を検証した。さらに、高度な経営については、資金需要に焦点を当て、企業的農業経営と金融機関取引の実態を明らかにした。平成25年度の研究実績は,次の通りである。まず,国内の認定農業者を対象とした経営改善意欲を高めるための段階的支援策の検討については,2012年1月に実施したアンケート調査の分析を行い,2014年7月に刊行予定の著書『農業経営学の現代的眺望』の第9章「認定農業者の経営管理に関する現状分析と課題」にその成果を執筆したところである。また,経営者能力に応じた必要支援策の変化に関する統計解析は,別途日本農業経営学会の投稿論文としてとりまとめているところである。さらに認定農業者になる以前の新規就農段階における支援策のあり方を探るため,全国農業会議所と共同でアンケート調査を実施しているところであり,調査票の集計を現在鋭意行っている。また,国内の高度な経営を対象とした金融支援の確立に関する課題については,農協以外の民間金融機関による,企業的農業経営に対する多様な貸出手法を理論的に整理し,その成果を『月刊金融ジャーナル』2014年1月号に執筆したところである.また,これらの成果を「農業金融における貸出手法と企業的経営の会計情報の整備・支援」として著書の分担執筆として論文にとりまとめている.一方,日本とカナダを対象とした比較研究については,カナダ・オンタリオ州を中心に,農業改善支援プログラムの比較分析を実施し,同プログラムの制度設計についての論文を公刊した。また,2013年より新規プログラム(Growing Forward 2)が開始されていることから,その内容・実績などを確認するとともに,以前のプログラム(Growing Forward)との差異についても分析を進めているところである。本研究は,認定農業者や企業的畜産経営などを主な分析対象として,経営支援政策のあり方や民間(主に金融機関)による財務支援のあり方を考察するものである。1.認定農業者に関する調査は,平成25年に実施した認定農業者アンケート結果の分析を進め,学会誌への論文投稿を行った。論文は現在審査中で,審査員の指摘を受け,修正・再投稿を行っている。また,全国農業会議所の協力を得て新規就農者に対するアンケート調査を実施し,現在はその結果を解析中である。2.企業的畜産経営に関する調査は,(1)企業的農業経営(約800経営)に対する民間金融機関との取引関係に関するアンケート調査、(2)農協以外の民間金融機関として、全ての信用組合・信用金庫に対して企業的農業経営に対する多様な貸出手法および経営支援の実態に関するアンケート調査を実施し、その成果の一部を下記の研究成果の通り「信用組合における農業融資の現状と課題ー信用組合における農業融資の実態と意向に関するアンケート調査の結果からー」として執筆した。3.経営改善手法の国際比較については,カナダ・オンタリオ州の政策および政府組織が変更されたため,変更に伴う影響に関する情報収集を進めている。現地とは定期的には情報交換を進め,新年度には再度現地調査を行うべく準備を進めた。以上のように,本年度は二年目にあたるため,3年目のとりまとめに向けた情報収集と整理・分析を中心に実施した。昨今の農業経営政策においては、激変する経営環境にも対応可能な有能な担い手経営の育成を図るため、担い手自身の主体的成長を促す政策体系が望まれている。本研究課題では,現状の農業の担い手政策の根幹をなす「認定農業者制度」等の諸制度が、こうした自発的な経営改善の取組を支援・助長する政策メカニズムを必ずしも内包してない現状に鑑み、農業経営者の主体的経営改善に向けた取組について、これまで実施されてきた政策支援体系を実態に合わせてよりきめ細かいものとし、さらに金融機関等の民間支援を動員する形で経営発展支援方策のあり方を包括的に検討することを目的とした。具体的な研究内容は、次の通りである。まず第一に、農業の担い手の経営改善に向けた取組とそれに対する政策支援の実態について、日本とカナダの事例の比較を交えながら解明することを課題とした。カナダとの比較研究では,農業経営者の経営者能力を高めるための支援策として,民間組織(会計士,弁護士など)が活用されているなどの取り組みが,我が国においても取り入れられるべき視点であることを指摘した。第二に、日本国内における農業経営支援施策体系について、経営改善意欲を高めるための段階的支援方策について検討を行った。ここでは特に、1経営者能力の高度化に従って必要とされる支援策がどのように変化するかを確認し、2経営開始後間もない新規就農者に焦点を当て、成長初期段階における支援策のあり方について考察を行った。第三に、高度な経営については、特に資金需要に対する支援に焦点を当て、民間信用会社が保有する信用調査に基づき、企業的農業経営に対するアンケート調査を実施するとともに、全国の信用組合・信用金庫・農協に対する悉皆アンケート調査を実施した。これらに基づき、民間金融機関による農業金融の実態と課題を整理した。

具体的には、まず国際比較の観点から、農業の担い手に対する政策支援の実態と効果的な支援のあり方について日本とカナダの比較研究を行った。また、国内については経営者能力の高度化に従った必要支援策の変化を確認するとともに、成長初期段階における支援策のあり方を検証した。さらに、高度な経営については、資金需要に焦点を当て、企業的農業経営と金融機関取引の実態を明らかにした。アンケート調査やヒアリング調査などを予定通り実施している。国際比較(カナダ)において,調査対象組織の組織再編などがあったが,次年度にフォローできる見込みである。農業経営学平成27年度は、1)国内外の農業経営者に対するヒアリング調査,2)取引金融機関(農協系統など)に対するアンケート調査,3)海外における支援方策の実態調査(カナダ)といったこれまでと同様の調査研究を継続する。また,27年度は最終年度であるため、今まで行ってきた調査の結果を総合的にふまえ、本研究のとりまとめを実施する。経営改善意欲を高めるための段階的支援策の構築に関する課題については,初年度に予定していた新規就農者向けのアンケート調査の実施を済ませており,26年度にこれらデータの分析に取りかかれる状況となっている。また,高度経営に対する金融支援の構築に関する課題については,企業的農業経営を対象とした民間金融機関との資金取引に関するアンケート調査を予定しており,25年度は調査票の作成・印刷を済ませ,配布準備が完了したところである。調査結果の学会・論文発表も計画していたが、その部分には及んでいない。また,企業的農業経営に対するヒアリング調査は計画通り実施済みである。日本とカナダの比較研究については,現地との情報交換および新たな施策の制度設計の分析を進めており,ほぼ計画通りの進捗となっている。信用金庫・信用組合に対して実施したアンケート調査と同様のアンケート調査を、全ての農協および信連に対しても実施を予定していたが、平成26年度中にできなかったため。平成26年度は,段階的支援策の構築に関する課題については,既に実施している新規就農者向けアンケート調査の分析を進め,2012年1月に前の科研費課題(萌芽的研究)で実施した認定農業者アンケートとの結果の異同について分析を進めることを予定している。高度経営に対する金融支援のあり方については,企業的農業経営を対象とした民間金融機関との資金取引に関するアンケート調査を速やかに実施し,その結果を学会・論文等で発表することを予定している。また,引き続き企業的農業経営に対する民間金融機関との資金取引に関するヒアリングを行うと同時に,民間金融機関へのヒアリングも行う。日本とカナダの比較研究については,カナダにおける現地訪問調査を実施し,農業経営支援プログラムの枠組み・有効性および民間コンサルタント等による経営支援の実態について調査分析を行うことを予定している。全ての農協および信連に対し、農業融資の実態と意向に関するたアンケート調査およびヒアリング調査を実施する。
フォークヘッドドメイン遺伝子LUNの肺発生、肺分化、肺発癌における役割について

LUN遺伝子と名付けた遺伝子は細気管支上皮細胞とII型肺胞細胞に発現している。細気管支細胞とII型肺胞細胞は遠位呼吸上皮の幹細胞と考えられており、肺腺癌が発生してくると信じられている細胞でもある。そこで、肺発生、肺分化、肺発癌におけるLUN遺伝子の役割を、ノックアウトマウスを作製し、器官培養の系で、化学肺発癌の系を用いて、明らかにする。まず、肺内におけるLUN遺伝子の発現を詳細に解析した。コントロールとして、II型肺胞細胞で発現していることがわかっているsurfactant C遺伝子をいっしょに用いてin situ hybridizationを行った。その結果、LUN遺伝子はII型肺胞細胞と細気管支上皮細胞にシグナルが認められることを明らかにした。また、遺伝子構造が類似しているHFH8が小腸でも発現していることから、LUN遺伝子の小腸における発現をノーザン解析したところ、LUN遺伝子も小腸で肺よりは弱いながらも発現していることが判明した。LUN遺伝子のノックアウトマウス作製のために、相同的組換えを起こしたESクローンを胚盤胞に微小注射してキメラマウスを得て、さらにヘテロマウスを得た。ヘテロマウスは外見上正常マウスと差がなかった。ヘテロマウスどうしを交配し、ホモマウスを作製した。ホモマウスは出産するが、すべて出生後1日以内に死亡した。A/Jマウスにウレタン投与して120日後に肺を観察してみると、多数の肺腺癌が出現していた。また肺腺癌細胞A549でのLUN遺伝子の発現をノーザン解析により検討したところ、この肺癌細胞はLUNを発現していることが明らかになった。
国家を超越した人材育成のための場づくりに関する研究

本研究では、国家を超越した人材を育成するためにはどのような環境を設定すればよいかということについて考察した。そのためにまず、チューター制度に関する実態と教育的効果に関する調査を行った。その結果、留学生との接触頻度がチューターの教育的効果に大きく影響を与えていることがわかった。次に阪神淡路大震災で被災した外国人留学生を教育援助者の立場から物理的、心理的な両側面から調査すると同時に、そのダメージと支援との関係についても調査した。その結果、適当な支援環境が整っていれば、深刻なダメージがあっても心理的に癒されるということがわかった。そればかりか「危機は人を育てる」ということさえも言えるということが分かった。また、キャンパスフォーラムを2度にわたって開催し、研究討論をして、多くの学生と共に国際社会で活躍するための資質について協議した。その他、「障害をもつ外国人留学生の受入れ環境の整備に関する研究」に関して兵庫県立福祉の街づくり工学研究所で内地研究(1999年6月15日9月14日)を実施し、そこで「障害をもつ学生の受入れ」に関して調査を行った。また、アメリカカンザスシティで開催された障害をもつ学生の大学への受入れに関する国際会議(AHEAD2000)に出席し、多くの知見を得、また同時に啓発教育の重要性についても再確認をした。以上のことから、国家を超越した人材育成のための支援ネットワークモデルを異文化間教育学会や『阪神淡路大震災と被災外国人学生の支援とこころのケア』の第IV章「教育的援助者からの提言」にまとめ、発表した。1.チューター制度に関して行った調査(留学生と当該チューター)についてさらに分析を加えると共に指導教官、留学生担当教官にインタビュー調査した結果、留学生の変化について、「満足度」との相関係数では特に「日本語の上達」と「勉学にプラス」が、それぞれ0.7040,0.7339ときわめて高かった。また「チューターとの人間関係」と「留学生の変化」についても「勉学にプラス」と「日本人の友達が増加」との関連が強く、以下、「日本語の上達」「自国を客観視」「日本文化に理解」「国際問題に関心」「日本政治・経済に関心」が続き、教育的効果のみならず、意識変化も見られた。一方、チューターの変化について、「留学生との人間関係」との相関係数で見てみると「勉学にプラス」(0.6889)「外国語が上達」(0.6159)で高い値を示していた。以下、「外国人の友達が増加」「世界情勢に関心」「留学に興味」が続き、教育的効果のみならず、意識変化も見られた。(データー処理:統計ソフトSPSSによる)2.専門家を招き、キャンパスフォーラムI<地球がキャンパス:21世紀に求められる人材とは>を開催(平成10年11月)した。その内容についてはデジタルビデオカメラに収め、記録を残した。また、インターネットで公開する(平成11年3月ホームページ完成予定)。今後も、キャンパスフォーラムII,III,IV,Vを開催の予定。その内容についても、インターネットで公開し、広く意見を収集する予定である。3.国家を超越した人材育成モデルについて新たな視点を加え、『被災外国人学生に対する支援とこころのケア』(ナカニシヤ出版)の第IV章に発表した。4.「教育的援助者としての人材育成の試み」として異文化間教育学会第20回大会(平成11年5月;鳴門教育大学)のラウンドテーブルで研究結果について発表、研究協議をすることが決定している。1.平成11年6月15日から9月14日まで、兵庫県立福祉のまちづくり工学研究所で「障害を伴う外国人留学生の受入れ環境の整備」を研究テーマにして、内地研究を実施した。期間中、実際に障害(肢体・聴覚・視覚・内部)をもつ学生にインタビューを実施すると共に、全国の大学(国公私立)620校に対して質問紙(アンケート調査)調査を行った。「障害をもつ学生の受け入れ」についてハード・ソフトの両面からの調査を実施し、359校から有効な回答を得た。

調査の目的は、障害をもつ留学生・日本人学生の人材育成、並びに障害をもつ学生との関わりにおいて健常者の教育ということにも視点を置いている。359校のすべてのデータ入力を完了。一部、データ解析を行い、調査実施校(調査結果の報告を希望する大学)に対して報告書を送付した。2.専門家を招き、キャンパス・フォーラムII<地球が舞台:まだまだあるある異なる視点・論点>を開催した(平成11年11月)。障害をもつ学生の留学交流ということに視点を置き、フォーラムを進行すると共に、講演は聴覚障害者に対しても聴講可能なようにすべて要約筆記を準備した。その内容については、デジタルビデオカメラに収録済であり、現在、インターネットで公開する準備をしている(平成12年3月公開予定)。本研究者が今年度に人材育成の場として実践的に行ったのは、主に3つの場:(1)教育的援助等、(2)障害をもつ学生の受入れ、(3)障害をもつ外国人留学生の受入れ環境の整備である。まず、(1)については、阪神・淡路大震災後、教育的援助者として支援活動を実践してきたことから明らかになったことを分析し「教育的援助者からの提言」としてまとめ、「国家を超越した人材育成のためのモデル」と「国家を超越した人材育成のための支援ネットワークモデル」として発表したことをふまえて学生に教育の場を提供。また、日常的には留学生との交流支援ボランティアサークルの指導、助言、ならびに国際学生交流シンポジウムの開催指導、助言を人材育成の場として提供。第15回「コロッキアム」研究・講演討論会(今、求められる留学生教育とは)を開催した。また、10年度、11年度に開催したキャンパス・フォーラムI、及びIIで発表された内容ついては、本学留学生センターのHPでもすでに公開している。このフォーラムに関しては今後も継続できる環境が整ったので来年度も開催の予定。(2)(3)については、「障害をもつ外国人留学生の受入れ環境の整備」を目的として内地研究(期間:平成11年6月15日平成11年9月14日、研究先:兵庫県立福祉のまちづくり工学研究所)をした時に行った全国調査(「障害をもつ学生の受入れ」)の結果を基礎データとして、アメリカの大学での障害学生の受入れ状況を調査した。また、障害をもつ(留)学生の受入れに関しては、米国のカンザスシティで開催された学会AHEAD2000(Association on Higher Education and Disability)に出席し知見を得た。「障害をもつ学生の受入れ」に関する調査は、今後、障害をもつ外国人留学生の受入れ、ならびに障害をもつ日本人学生の海外派遣の調査へと発展させ、学ぶ権利を共有できる環境を整えていく基礎的データが出来た。
蝸牛神経低形成の新規原因候補ZBTB10の内耳発生における機能解析

本研究では蝸牛神経低形成を伴う難聴患者において、エクソーム解析により新規の難聴原因候補遺伝子ZBTB10を同定し、その解析を行った。ZBTB10は蝸牛神経細胞で発現しており、神経芽腫細胞NB-1の神経突起伸張時にZBTB10発現量が上昇していた。ただしゲノム編集技術により作出したZbtb10mut/+マウスは聴力正常であった。胎仔期14.5日齢(E14.5)時点で変異ホモマウス全例と変異ヘテロマウスの半数が死亡していた。Zbtb10は胎仔生存に重要な役割をもつと予想された。今後、E9.5変異マウスを得、脳・耳胞・生殖細胞系列等を対象とした組織化学的解析を続行し論文にまとめる予定である。内耳奇形を伴う難聴のほとんどは原因不明である。研究代表者らは蝸牛神経低形成を伴う難聴患者において、エクソーム解析により新規の難聴原因候補遺伝子ZBTB10を同定し、これが蝸牛神経細胞で発現していることを確認している。本研究は、ZBTB10の内耳形態形成における役割を解析することを目的とする。平成27年度は、I:神経突起伸長中の神経細胞に対して本遺伝子の機能解析実験をおこなった。また、II:ゲノム編集技術を用いてZbtb10突然変異マウスを作成した。I:神経細胞に対する本遺伝子の機能阻害実験神経芽腫細胞NB-1は、cAMP刺激により神経突起伸張を起こすが、この時、ZBTB10発現量が上昇することを研究者は明らかにした。正常ZBTB10、または難聴患者で検出された変異型ZBTB10を発現し、かつN末端に蛍光タンパク質mCherryを融合タンパク質として発現するベクターを作成し、これをNB-1細胞に導入した。ZBTB10を強制発現させたNB-1細胞はmockベクター導入時に比較しほとんどが突起伸張をせず、細胞死に至ることが観察され、本遺伝子の精密な発現量調節が、神経細胞の生存・分化に重要であることが示唆された。現在、RNA干渉法によるZBTB10発現量調節と細胞増殖・分化との関連解析実験を実施し詳細な解析を続行している。II:ゲノム編集技術を用いたZbtb10突然変異マウスの作成CRSPR/Cas9法を用い、難聴患者で検出されたnonsense変異とほぼ同様の位置にフレームシフト変異をヘテロに持つマウスを二系統作出することに成功した。うち一系統はオスでC57BL/6マウスとの継代にも成功し、今後繁殖させて聴力・その他の表現型・内耳形態を解析していく予定である。もう一系統はメスで、現在のところ繁殖に成功していない。神経芽腫細胞NB-1に対する遺伝子導入には様々なリポフェクション試薬による導入効率が悪く、electroporation法の条件検討に時間を費やした。またRNA干渉法についても、当初のsiRNAの導入効率の評価法が不明確であり、あらたにsiRNA発現ベクターを構築する必要が生じたため、細胞実験が予定より遅れている。一方Zbtb10突然変異マウスの作成に成功し、動物実験の準備は予定より早く進んでいる。平成28年度は、I:平成27年度に引き続き神経突起伸長中の神経細胞に対して本遺伝子の機能解析実験をおこなった。また、II:平成27年度にゲノム編集技術を用いて作成したZbtb10変異マウスの表現型解析をおこなった。I:神経細胞に対するZBTB10の機能解析実験神経芽腫細胞NB-1は、cAMP刺激により神経突起伸張を起こすが、この時、ZBTB10発現量が上昇する。代表者は昨年度に正常ZBTB10、または難聴患者で検出された変異型ZBTB10を発現し、かつN末端に蛍光タンパク質mCherryを融合タンパク質として発現するベクターを作成し、これをNB-1細胞に導入したが細胞死を誘発し解析不能であった。本年度は発現ベクターのプロモーター部位を改変した系を作成することで、NB-1細胞へ本遺伝子を導入することが可能となった。現在、ZBTB10発現と細胞増殖・分化との関連解析実験を実施中である。II: Zbtb10変異マウスの表現型解析CRSPR/Cas9法を用い、難聴患者で検出されたnonsense変異とほぼ同様の位置にフレームシフト変異をヘテロに持つZbtb10mut/+(変異ヘテロ)マウスを作出し、聴力・その他の表現型・内耳形態の解析を実施した。Zbtb10変異ヘテロマウス同士の交配による産仔中に変異ホモマウスが含まれていないため、変異ホモマウスは胎生致死であると考えられた。Zbtb10変異ホモマウスを体外授精により作出する試みを平成29年度に実施し、胎仔の組織化学的解析を実施する。神経芽腫細胞NB-1に対する遺伝子導入に試行錯誤の結果成功した。現在画像データを取得・解析中であり、進捗状況は順調である。一方Zbtb10変異マウス解析についても、聴力測定は終了し、進捗状況は順調である。

内耳奇形を伴う難聴のほとんどは原因不明である。研究代表者らは蝸牛神経低形成を伴う難聴患者において、エクソーム解析により新規の難聴原因候補遺伝子ZBTB10を同定し、これが蝸牛神経細胞で発現していること、神経芽腫細胞NB-1の神経突起伸張時にZBTB10発現量が上昇することを確認してきた。本研究では、I:神経突起伸長中の神経細胞に対して本遺伝子の機能解析実験をおこなった。また、II: Zbtb10変異マウスの表現型解析をおこなった。I:N末端に蛍光タンパク質mCherryを融合する、正常ZBTB10または難聴患者で検出された変異型ZBTB10を発現するベクターを作成し、ZBTB10および変異体の発現と細胞増殖・分化との関連を検討したが、有意な変化はみられなかった。II:CRSPR/Cas9法を用い、難聴患者で検出されたnonsense変異とほぼ同様の位置にフレームシフト変異をヘテロに持つZbtb10mut/+(変異ヘテロ)マウスを作出したが聴力・その他の表現型・内耳形態に顕著な異常はみられなかった。体外授精によりZbtb10変異ホモマウス作出を試みた。計55卵を仮親に移植したところ、E12.5時点で44胚が生着し18頭生存(40%)したが、変異ホモマウスは含まれなかった。Zbtb10は胎盤において発現量が最も高く、胎仔生存に重要な役割をもつと予想された。以上、Zbtb10は正常な胚成長に必須な遺伝子であることが明らかとなった。今後、耳胞およびspiral ganglion原基の見られる最初期のE9.5での変異ホモマウスを得、全組織を対象とした組織化学的解析を実施し論文としてまとめる予定である。本研究では蝸牛神経低形成を伴う難聴患者において、エクソーム解析により新規の難聴原因候補遺伝子ZBTB10を同定し、その解析を行った。ZBTB10は蝸牛神経細胞で発現しており、神経芽腫細胞NB-1の神経突起伸張時にZBTB10発現量が上昇していた。ただしゲノム編集技術により作出したZbtb10mut/+マウスは聴力正常であった。胎仔期14.5日齢(E14.5)時点で変異ホモマウス全例と変異ヘテロマウスの半数が死亡していた。Zbtb10は胎仔生存に重要な役割をもつと予想された。今後、E9.5変異マウスを得、脳・耳胞・生殖細胞系列等を対象とした組織化学的解析を続行し論文にまとめる予定である。細胞実験は、平成27年度までに遺伝子導入法が確立されたので、今後はBrdU取り込みや神経突起伸張を指標として、RNA干渉法によるZBTB10発現量調節と細胞増殖・分化との関連解析実験を着実に実施していく。動物実験は聴力測定だけでなく、眼球運動の測定も試行する。エンドポイントを3か月齢として内耳形態観察へ移行するが、一部の動物は長期間飼育し他臓器への影響も観察する。当初の計画を発展させ、体外授精によりZbtb10変異ホモマウスを作出し、胎生期における同遺伝子の内耳発生における役割を考察する予定である。体外授精は、CRSPR/Cas9法によりZbtb10変異マウスを作成した東京都医学総合研究所・哺乳類遺伝プロジェクト吉川欣亮博士に依頼する。また、本結果をまとめ論文を投稿し、国内外の学会で発表する計画である。分子生物学平成27年度の実験計画における、培養細胞実験における遺伝子導入試薬の変更にともない、試薬消耗品にかかる経費が計画よりも少額となった。
掻破による快感が過剰掻破を引き起こす脳内メカニズム

過剰掻破はアトピーなどの痒みの治療で問題となっている。過剰掻破が起こる原因として、掻破による快感が関係すると指摘されているが、そのメカニズムは不明である。本研究では、ヒトを対象とした脳機能イメージング法を用いて、その脳内メカニズムを検討した。その結果、報酬系、第一次体性感覚野、島皮質が快感に関係することや、快感が過剰掻破を引き起こす原因として運動関連領野が関係する可能性があることを発見した。過剰掻破の原因のひとつとして掻破による快感が指摘されているが、そのメカニズムはほとんど検討されていない。そこで、本研究では、ヒトを対象とした脳機能イメージング法により、掻破による快感が過剰掻破を引き起こす脳内メカニズムについて検討した。本年度は掻破による快感が過剰掻破を誘発することを実験的に再現することに成功した。すなわち、掻破による快感が強いほど、掻破時間が延長するという関係性が確認された。fMRI実験で快感時に運動関連領野の活動が亢進することを発見した。この点を考慮すると、fMRIや脳時図で観測した掻破や掻破欲求に伴う運動関連領野の活動は快感が強いほどより大きく変動する可能性が高い。今後その点について詳しく検討しなければならない。掻破によって快感が生じているときには、報酬系という脳部位(中脳や線条体)、知覚に関係する一次体性感覚野、情動に関係する島皮質が活動することが明らかとなった。脳局所の神経活動を操作できるtDCSを用いて、それら脳部位が快感に関係することを確認するための検討も本年度に着手した。掻破による快感の強さは与える痒みの強さに依存するが、tDCS刺激を脳局所に与えることにより痒みが減弱してしまうことがわかった。今後、この点を考慮した実験デザインを組み、各脳部位の快感との関係を正確に評価したいと考えている。本研究は、脳機能イメージング技術を用いることにより、掻破による快感や過剰掻破の脳内メカニズムについて世界で初めて検討した。その結果、快感に関係すると考えられる脳部位を同定した。また、快感が過剰掻破を引き起こす原因として運動関連領野が関係する可能性があることもつきとめた。快感に伴う過剰掻破の脳内メカニズムを理解するうえで大きな前進となった。痒いところを掻きむしると快感が生じる。この快感によってもっと掻きむしりたくなってしまう。このような快感に伴う過剰掻破は皮膚にダメージを与えてしまうため、特に、難治性の痒みで苦しむ患者にとっては深刻な問題となる。しかしながら、掻破による快感と過剰掻破の関係について調べた脳研究はこれまでにないため、そのメカニズムはほとんどわかっていない。そこで、本研究では脳機能イメージング技術を用いて、そのメカニズムについて調べた。本年度は、機能的MRI(fMRI)を用いて、掻破による快感が生じているときにどの脳部位が活動するのかを調べた。痒み刺激を与えた手首の近辺を掻破する条件(快感条件)と、痒み刺激を与えた場所から離れたところを掻破する条件(対照条件)において、脳活動をfMRIを用いて計測した。快感条件では被験者は掻破による快感が生じたと報告し、対照条件ではそのような快感はほとんど生じなかったと報告した。掻破中に活動した脳部位を快感条件と対照条件で比較した。その結果、快感特異的に活動した脳部位として、報酬系関連の脳部位(線条体と中脳)、第一次体性感覚野、島皮質、運動関連領野(補足運動野、運動前野や小脳)、前頭回などで認められた。この結果から、報酬系関連の脳部位、第一次体性感覚野や島皮質が掻破による快感と関係すると示唆された。報酬系は運動関連領野と解剖学・機能的に連絡を持つ。よって、運動関連領野の活動増加は報酬系の活性化に関係すると推察された。報酬系と運動関連領野が形成するネットワークの活性化が潜在的に快感に伴う過剰掻破の原因となる可能性が考えられた。本研究の目的は、掻破による快感が過剰掻破を引き起こす脳内メカニズムを明らかにすることである。特に、本年度の目的は、それに関連する脳部位を全脳の中から絞り込むことであった。研究実績の概要にも記載したように、fMRI実験によってその候補となる脳部位を絞り込むことができた。よって、おおむね順調と考えている。掻破による快感によって報酬系や運動関連領野が活性化することを明らかにしたので、そのメカニズムをより詳しく調べる。例えば、報酬系と運動関連領野がどういったネットワークを形成するのか、についてfMRIや脳磁図などの脳機能イメージング法を用いて検討する。また、掻破の脳活動への影響についてもイメージング技術を用いてより詳しく検討するなど多角的に掻破と快感の関係を調べる。一方、快感に伴う過剰掻破を実験的に再現する心理実験ではまだ成果が出ていないので引き続き実験を行う。快感によって過剰掻破が出やすい条件、あるいは、出やすい人を探し出して効果的に実験を進めることで心理実験で成果を出す。

さらにそれを脳機能イメージング実験にも応用して、掻破による快感やその快感に伴う過剰掻破の脳内メカニズムをより深く理解する。そして、経頭蓋直流電気刺激などを用いて脳局所の神経活動を操作したときに掻破による快感や、掻破行動にどのような変化が起きるのか、そのときに脳内でどのような変化が起こっているのかを脳機能イメージング法を用いて調べる。研究所の工事の影響で脳磁図実験を思うように進めることができなかったことや、心理実験が進んでいないことがあって当該研究費が生じた。しかしながら、工事が終了したため脳磁図実験が行える状況にある。また、心理実験では問題を克服するために、新しい手法を取り入れた実験をしたり、被験者数を増やしたりする予定である。これと並行して、次年度に予定しているfMRI、脳磁図や経頭蓋直流電気刺激を用いた実験も行う。次年度使用額と次年度請求額を使って以上の実験を実施することで研究目的を達成する。
角化細胞活性酸素産生に関わる情報伝達系Ca^<2+>,Cキナーゼ活性化機構の解析

細胞内では紫外線,放射線,薬剤等によりO2-が生じsuperoxide dismutaseによりH2O2に変換される.これまで表皮角化細胞のH2O2を直接測定し,UV照射が細胞内H2O2を容量依存性に増加させることを報告した.また,TPAによる角化細胞のH2O2産生が報告され,著者が研究してきたprotein kinase C活性化,細胞内遊離カルシウム濃度上昇刺激は,活性酸素産生を伴うと考えられる.紫外線により表皮で産生され,免疫抑制作用を有するCis-urocanic acidは角化細胞ヒスタミン受容体の反応性を抑制することを報告したが,細胞内遊離カルシウム上昇を調節するヒト角化細胞ヒスタミン受容体をagonist,antagonistを用いて検討し,H2受容体が関わっていることを見い出した.さらにサイトカインとその受容体の角化細胞での局在,遊離調節機構を検討した.角化細胞はstem cell factor(SCF)を生成遊離して肥満細胞やメラノサイトの増殖や機能を調節する.抗体で二重染色するとSCFの受容体Kitは角化細胞に発現しておらず,遊離されたSCFは続いての遊離を直接調節しないと考えられる.角化細胞からのSCFのmRNA,蛋白の生成はグルココルチコイド,ヒスタミンにより抑制される.さらにIL-18について検討した.IL-18はinterferon-g誘導因子である.乾癬にはInterferon-gを産生するTh1リンパ球が炎症反応に携わっており,IL-18の角化細胞における解析は乾癬の研究に重要である.IL-18とIL18受容体のヒト培養角化細胞、皮膚における発現を免疫組織化学,immunoblot法により確認した.細胞内では紫外線,放射線,薬剤等によりO2-が生じsuperoxide dismutaseによりH2O2に変換される.これまで表皮角化細胞のH2O2を直接測定し,UV照射が細胞内H2O2を容量依存性に増加させることを報告した.また,TPAによる角化細胞のH2O2産生が報告され,著者が研究してきたprotein kinase C活性化,細胞内遊離カルシウム濃度上昇刺激は,活性酸素産生を伴うと考えられる.紫外線により表皮で産生され,免疫抑制作用を有するCis-urocanic acidは角化細胞ヒスタミン受容体の反応性を抑制することを報告したが,細胞内遊離カルシウム上昇を調節するヒト角化細胞ヒスタミン受容体をagonist,antagonistを用いて検討し,H2受容体が関わっていることを見い出した.さらにサイトカインとその受容体の角化細胞での局在,遊離調節機構を検討した.角化細胞はstem cell factor(SCF)を生成遊離して肥満細胞やメラノサイトの増殖や機能を調節する.抗体で二重染色するとSCFの受容体Kitは角化細胞に発現しておらず,遊離されたSCFは続いての遊離を直接調節しないと考えられる.角化細胞からのSCFのmRNA,蛋白の生成はグルココルチコイド,ヒスタミンにより抑制される.さらにIL-18について検討した.IL-18はinterferon-g誘導因子である.乾癬にはInterferon-gを産生するTh1リンパ球が炎症反応に携わっており,IL-18の角化細胞における解析は乾癬の研究に重要である.IL-18とIL18受容体のヒト培養角化細胞、皮膚における発現を免疫組織化学,immunoblot法により確認した.正常ヒト角化細胞は無血清培地を用いて培養している.継代を重ねるに従い細胞増殖能は低下する。そこで、膜情報伝達系が継代により反応性に変化がおきないか検討した.継代3から8代について、ヒスタミン、エピネフリン刺激による細胞内遊離カルシウム上昇の有無を検討した.6代以上になると反応性は低下し、検索した細胞中上昇を示した細胞の割合は有意に低下した.エピネフリンがヒスタミンよりも程度が強かった.7代目の細胞を用い、カルシウムの上昇を高めると報告されているビタミンD3、角化細胞の老化防止効果のあるレチノイン酸を添加し、エピネフリン刺激に対する角化細胞の細胞内遊離カルシウム上昇を検討した.いずれも影響を示さなかった.角化細胞はβ-アドレナリン刺激により、細胞内遊離カルシウム上昇、cyclicMAP産生する.もう一つの膜情報伝達機構、phopholipase Cに対する作用は知られていない.そこで豚表皮を用い検索した.β-アドレナリン刺激はprotein kinase Cを活性化をきたし、inositol1, 4, 5-trisphosphateを産生した.エピネフリンによるprotein kinase Cを活性化はβ-プロッカーpropranoloにより阻害された.β-アドレナリンは角化細胞phopholipase Cを活性化し、protein kinase Cの活性化、inositol 1, 4, 5-trisphosphateの産生を引き起こすことが明らかになった.培養ヒト角化細胞にH_2O_2を添加すると,ラグタイムをおいて、細胞内遊離カルシウムが上昇する.さらにヒスタミンで刺激すると細胞内遊離カルシウムは再度上昇する.H_2O_2による細胞内遊離カルシウム上昇の機序について検索中である.紫外線照射により、表皮細胞は種々の影響を受ける.そのなかには活性酸素の関わるもの、異なった機序によるものがあると思われる.紫外線照射により、皮膚における遅延型接触アレルギー反応は抑制される.これは種々の機構によると考えられるが、表皮においてtrans-urocanic acidがcis型に転換されることが関与すると考えられる.urocanic acidはヒスタミンと同じくヒスチヂンから生成される.そこでcis-urocanic acidの培養表皮細胞に対する影響を検討した.材料:cis-

urocanic acidはtrans-urocanic acidにUV-Bを照射し生成されたcis-urocanic acidをHPLCにより抽出、精製した.表皮細胞はヒスタミン、エピネフリン刺激により、一過性の細胞内遊離カルシウムが上昇する.培養表皮細胞培地にcis-urocanid acidを加え、30分後、細胞をヒスタミンで刺激すると、細胞内遊離カルシウムの上昇は抑制される.エピネフリン刺激による細胞内遊離カルシウムの上昇は影響を受けない.trans-urocanic acidはいずれにも影響を与えなかった.cis-、trans-urocanic acid自体は、細胞内遊離カルシウム変動をきたさない.adenylale cyclase活性に対する影響は、cis-、trans-urocanic acidいずれも活性化せず、表皮細胞内cyclic AMPの上昇をきたさなかったが、cis-urocanic acidは、ヒスタミン刺激によるcyclic AMP上昇を抑制した.trans-urocanic acid破影響を与えなかった.UV-B照射により産生されたcis-urocanic acidはヒスタミンの表皮細胞に対する刺激効果を抑制することが明かとなった.紫外線照射により生成される活性酸素とcis-urocanic acidの関係は今後検討をおこなう.細胞内では紫外線,放射線,薬剤等によりO2-が生じsuperoxide dismutaseによりH202に変換される.これまで表皮角化細胞のH202を直接測定し,UV照射が細胞内H202を容量依存性に増加させることを報告した.また,TPAによる角化細胞のH202産生が報告され,著者が研究してきたprotein kinase C活性化,細胞内遊離カルシウム濃度上昇刺激は,活性酸素産生を伴うと考えられる.さらにサイトカインとその受容体の角化細胞での局在,遊離調節機構を検討した.角化細胞はstem cell factor(SCF)を生成遊離して肥満細胞やメラノサイトの増殖や機能を調節する・抗体で二重染色するとSCFの受容体Kitは角化細胞に発現しておらず,遊離されたSCFは続いての遊離を直接調節しないと考えられる.角化細胞からのSCFのmRNA,蛋白の生成はグルココルチコイド,ヒスタミンにより抑制される(J Invest Derinatol 1998).さらにIL-18について検討した.IL-18はinterferon-γ誘導因子である.乾癖にはinterferon-γを産生するThlリンパ球が炎症反応に携わっており,IL-18の角化細胞における解析は乾癬の研究に重要である.IL-18とILl8受容体のヒト培養角化細胞、皮膚における発現を免疫組織化学,immunoblot法により確認した(J Invest Dermatol in print).
嗅覚性記憶の分子機構:細胞内分子カスケードの検討

交尾して間もない雌マウスが交尾相手の雄から引き離され、他系統の雄の尿中フェロモンに暴露されると、妊娠阻止が起こる。勿論、この妊娠阻止は交尾相手のフェロモンでは起こらない。実のところ、これは、雌マウスが交尾刺激を引き金として交尾相手のフェロモンを記憶し、この記憶によってこのフェロモンの妊娠阻止作用を食い止めているからである。フェロモンの妊娠阻止作用は副嗅覚系によって司られている。この妊娠阻止作用を食い止める記憶は、交尾直後から数時間の臨界期に、副嗅覚系の最初の中継核である副嗅球において形成される。われわれが目指すゴールは記憶成立の分子カスケード機構であるが、現在のところ、この記憶を担う分子、いわゆる記憶分子をひとつひとつ拾い上げている段階にある。最近、種々の記憶の成立過程にカルモデュリン系の関与が示唆されている。この研究では、フェロモンの記憶形成にカルモデュリン系が関与しているか否かを明らかにする目的で、カルモデュリン、カルシウム/カルモデュリン依存性プロテインキナーゼII(CaMKII)、カルシウム/カルモデュリン依存性プロテインフォスファターゼ2B(カルシニューリン)の阻害剤を記憶形成の臨界期に3回ないし4回、両側副嗅球に注入することによって記憶障害がもたらされるか否かを検討した。カルモデュリンの阻害剤であるカリミダゾリウムの注入により記憶障害が起こったが、CaMKIIの選択的阻害剤であるKN-62やカルシニューリンの選択的阻害剤であるFK506の注入では記憶障害は起こらなかった。FK506はむしろ記憶形成を促進する方向に働いた。