hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ＤＵＸ４融合遺伝子陽性Ｂ細胞性急性リンパ性白血病の病態解明

本研究はDUX4融合遺伝子を有する白血病におけるDUX4融合遺伝子の機能の解明を目標としている。昨年度からの研究では急性リンパ性白血病(ALL)におけるDUX4融合遺伝子の転写活性についてRNA-seq及びChIP-seqを用いた解析を行い、DUX4融合遺伝子は野生型と同様のDNA結合様式をとるにも関わらず、遺伝子発現誘導能は減弱していることを明らかにした。これらの結果は本年度中に英文雑誌に出版された。ChIP-seqを用いたDUX4融合遺伝子による転写制御の測定を多様なヒストンマークをDUX4融合遺伝子を持つ白血病細胞株NALM6を用いて行い、他の白血病細胞株にDUX4融合遺伝子を強制発現させる系でも行った。DUX4融合遺伝子の結合部位では部分的に転写活性が増加する部位とそうでない部位があることが明らかになった。FLAGタグを付加したDUX4融合タンパクをNALM6細胞に強制発現させてFLAGタグで免疫沈降を行い、質量分析を行った。結果、エピジェネティック制御に関わるタンパクが複数候補として挙がり、実際にNALM6においても結合が認められた。これらのタンパクについて機能解析を進めている。まず、昨年度から継続しているDUX4融合遺伝子の転写活性についての論文が英文雑誌に本年度中に出版された。その延長として本年度ではChIP-seqを用いたDUX4融合遺伝子による転写制御の測定を多様なヒストンマークをDUX4融合遺伝子を持つ白血病細胞株NALM6、及び他の白血病細胞株にDUX4融合遺伝子を強制発現させる系で行い、DUX4-IGHによる特徴的なクロマチン制御の可能性を見出した。そこでDUX4-IGHノックダウン前とノックダウン後のクロマチン状態をATAC-seqにより比較解析を行い、DUX4-IGHによる特徴的なクロマチン制御パターンをデータ解析により確認している。また、DUX4融合タンパクの免疫沈降からの質量分析を行うことでDUX4融合タンパクの結合タンパクを同定しており、その中には上記のクロマチン制御に影響を与えている可能性のある結合タンパクも含まれており、機能解析を進めている。また、DUX4-IGH融合遺伝子陽性の患者検体を入手しNSGマウスに移植を行い、PDXマウスを樹立する作業を継続しており、現在2系統の樹立を確認している。今後さらに検体数を増やしていくとともに、これらのマウスを用いて上記の知見の確認を行っている。研究開始当初の計画ではDUX4融合遺伝子が限定的なターゲット遺伝子の転写を促進し、それらが白血化を促進していると予測していたが、DUX4融合遺伝子の転写活性について多様な系で検討を進めていく過程で、DUX4融合タンパクの存在下での、より大規模なクロマチン構造の変動が白血化の原因であることが示唆されている。ATAC-seq及び結合タンパク探索によってそのメカニズムの一因が示唆されており、今後それらのタンパクと白血化の関連について機能解析を進めて検証していく予定である。PDXマウスに関しては、現在樹立したマウスの解析を進めるとともに、さらに患者検体収集を続けて、複数のマウスの樹立を目指し、上記の知見の確認を行う予定である。まず、DUX4融合遺伝子を有するB細胞性白血病細胞株であるNALM6及びDUX4融合遺伝子を有さないB細胞性白血病細胞株であるRehを用い、DUX4抗体を用いたクロマチン免疫沈降シーケンス(ChIP-seq)を施行し、DUX4融合タンパクが野生型DUX4タンパクと同様のDNA結合能を有することを確認した。DNA結合能は類似していても野生型DUX4とDUX4-IGHでは機能が異なっているため、NALM6においてDUX4-IGH(NALM6型)を異所性に発現させて、RNA-seqにより発現の比較を行った。野生型DUX4によって誘導される遺伝子のうちDUX4-IGH(NALM6型)との間でオーバーラップするものは3.8%のみであった。DUX4-IGHのNALM6におけるChIP-seqでは野生型DUX4のターゲット遺伝子への結合は認めたが、発現解析においては野生型DUX4の異所性発現では十分な転写活性を認める一方で、DUX4-IGHでは発現誘導を認めず、DUX4-IGHの転写活性は野生型に比して減弱しており、その活性は野生型DUX4とは異なることが示唆された。また、DUX4-IGHをノックダウンすることによる発現への影響をNALM6でのRNA-seqで確認し、DUX4-IGHによって正に制御されている遺伝子を同定した。そのうちChIP-seqにおいてDUX4-IGHの結合が確認されたものは14%であり、ほとんどが間接的に制御されていると考えられた。これらの上昇、減少パターンはRehに異所性にDUX4-IGHを発現させた場合及び臨床サンプルの発現データでも同様のパターンを認めており、DUX4融合遺伝子陽性白血病におけるDUX4-IGHによる特有の遺伝子制御が示唆された。まず、DUX4融合タンパクが野生型DUX4タンパクと同様のDNA結合パターンを示す一方で転写活性が減弱していることを示した。また、NALM6においてDUX4-IGHをノックダウンすることで発現が減少した遺伝子はDUX4-IGHによって正に制御されていると考えられるが、中でもChIP-seqにおいてDUX4-IGHの結合が確認されたものは14%であり、ほとんどが間接的に制御されていると考えられた。これらの上昇、減少パターンはRehに異所性にDUX4-IGHを発現させた場合及び臨床サンプルの発現データでも同様のパターンを認めており、DUX4-IGHによる特有の遺伝子制御が示唆された。

しかしながら、これらのターゲット遺伝子のうち、細胞伝達に関わっている既報のある遺伝子のノックダウンをNALM6において試行したが、単一のノックダウンでは細胞増殖が減弱することはなかった。また、DUX4融合遺伝子がIgHエンハンサー(Eμ)により発現誘導されるベクターを作成し、トランスジェニックマウスの作成を試みた。得られた第一世代の個体の骨髄中のDUX4 mRNA発現量についてスクリーニングを行ったところ、ほとんどのgenotype陽性個体においてDUX4 mRNAが認められず、転写抑制が働いていることが示唆された。その中でもDUX4-IGH低コピー導入個体においてDUX4の発現が認められる個体を見出し、それらの精子を用いて個体化作業を進めている。また、DUX4-IGH融合遺伝子陽性の患者検体を入手し、NSGマウスに移植を行ったところ、生着を認め、PDXマウスの樹立に成功した。また、現在さらに1例のDUX4-IGH融合遺伝子陽性検体を入手し、移植中である。本研究はDUX4融合遺伝子を有する白血病におけるDUX4融合遺伝子の機能の解明を目標としている。昨年度からの研究では急性リンパ性白血病(ALL)におけるDUX4融合遺伝子の転写活性についてRNA-seq及びChIP-seqを用いた解析を行い、DUX4融合遺伝子は野生型と同様のDNA結合様式をとるにも関わらず、遺伝子発現誘導能は減弱していることを明らかにした。これらの結果は本年度中に英文雑誌に出版された。ChIP-seqを用いたDUX4融合遺伝子による転写制御の測定を多様なヒストンマークをDUX4融合遺伝子を持つ白血病細胞株NALM6を用いて行い、他の白血病細胞株にDUX4融合遺伝子を強制発現させる系でも行った。DUX4融合遺伝子の結合部位では部分的に転写活性が増加する部位とそうでない部位があることが明らかになった。FLAGタグを付加したDUX4融合タンパクをNALM6細胞に強制発現させてFLAGタグで免疫沈降を行い、質量分析を行った。結果、エピジェネティック制御に関わるタンパクが複数候補として挙がり、実際にNALM6においても結合が認められた。これらのタンパクについて機能解析を進めている。まず、昨年度から継続しているDUX4融合遺伝子の転写活性についての論文が英文雑誌に本年度中に出版された。その延長として本年度ではChIP-seqを用いたDUX4融合遺伝子による転写制御の測定を多様なヒストンマークをDUX4融合遺伝子を持つ白血病細胞株NALM6、及び他の白血病細胞株にDUX4融合遺伝子を強制発現させる系で行い、DUX4-IGHによる特徴的なクロマチン制御の可能性を見出した。そこでDUX4-IGHノックダウン前とノックダウン後のクロマチン状態をATAC-seqにより比較解析を行い、DUX4-IGHによる特徴的なクロマチン制御パターンをデータ解析により確認している。
反復型数値計算における収束過程の可視化による高速化支援

本研究では、大規模シミュレーションにおける反復型数値計算の高速化を支援することを目的として、反復型数値計算の収束過程における残差分布の時間変化をシミュレーションユーザに理解しやすい形で可視化し、多角的に解析する支援環境を構築した。解析支援環境の構築にあたっては、シミュレーションサーバと高精細可視化サーバの非同期協調型のシステムを実装し、実行中のプログラムに対する対話的な解析ならびに高速化のためのプログラム実行制御を可能とした。[残差分布可視化システムの大規模数値計算問題への拡張]従来から開発を行っている可視化フレームワークを拡張し、数万次元を超える大規模問題に対しても収束過程での残差分布を可視化可能な機能拡張を行った。この際、従来の2次元的な情報提示だけでは重要な現象を見落とす可能性がある。そこで、解くべき問題を表現する行列データに対応するシティマップ上に変数毎の残差をマッピングするとともに、分布状況を3次元的に可視化するフレームワークを構築した。さらに、反復計算の進行とともに急激に減少する残差に対して、その分布状況の時系列を視覚的に追従可能とするための動的スケーリングの機能を追加した。これにより、200万元を超える大規模疎行列問題に対して収束過程の実時間時系列可視化を可能とした。[残差拡散制御による高速化手法の適用可能性の評価と数学モデルの構築]Matrix MarketやFlorida Matrix等の公開データを用いて、残差拡散制御の適用可能性を評価し複数のデータに対して有効性を確認した。この際、同一の行列データに対しても、初期値の与え方によって収束パターンが異なる様子が上述の可視化フレームワークを用いることで視覚的に確認可能となった。また、係数行列や右辺ベクトルの個々の要素の大きさを考慮した相対的な残差マッピングを行うことで、収束速度が低下した状態での個々の残差の重要度を再評価する枠組みを構築し、更なる高速化支援に結び付ける可能性があることを発見した。[反復計算過程の多次元可視化によるデータマイニング]多次元可視化を支援するタイルドディスプレイを用いた高精細可視化システムの実装法について検討しプロトタイプ実装を行った。多次元可視化により収束速度が低下する状況が目視で観測可能となったが、現時点では振動現象の発生を明確に特定するには至っておらず、今後も継続して現象の観測・解析ならびに解析支援の可視化手法の検討を行う予定である。[タイルドディスプレイを用いた複合可視化システムの構築]平成22年度に作成したタイルドディスプレイシステムと、反復計算過程の多次元可視化システムを連携し、収束過程の残差マッピング結果を高精細タイルドディスプレイに表示するシステムを構築した。また、計算過程の対話的な実時間解析を可能とするため、シミュレーション実行モジュールと解析支援モジュール(可視化モジュール)を分離するとともに、非同期インタラクションを可能とした。[解くべき問題の物理現象と対応付けた多次元可視化による現象解析支援]解くべき問題の物理現象を表現する3次元CGモデルが与えられた場合、残差分布等を対応付け3次元空間上での空間的広がりを俯瞰するための解析支援システムを構築した。また、従来用いられてきた残差ノルムの時系列可視化と同時に解析可能とすることで、時空間併用型の現象解析支援を可能とした。時空間併用型の解析支援については、解くべき問題の構造情報が与えられない場合にも、係数の絶対値を考慮したシティマップへの残差マッピングとの併用を可能とした。[反復計算過程の多次元可視化によるデータマイニング]収束過程での残差拡散の様子を解析する手法として、係数行列をグラフ表現と見なして係数行列の非ゼロ要素をグラフのエッジと考えた時に、ある特定の変数に注目した時の残差分布を表現する方法としてコーンツリーを用いた残差分布の可視化を行うモジュールを開発した。また、注目領域とそれ以外の領域で収束条件を変えることで、系全体での残差ノルムの値自体は等しくても、注目領域内での残差を低く抑えるとともに実行時間も短縮できることが確認できた。この性質を利用して対話的に注目領域を指定する方法の検討を行った。[大規模並列計算機上の反復計算ソルバとの連携およびフィードバック手法の検討]数値シミュレーションを行う大規模並列計算機と可視化支援のための可視化用計算機を分離し計算のスケーラビリティと視覚解析の対話性を両立する解析支援環境を構築した。また、実行中の数値計算過程を実時間モニタリングし、シミュレーションの目的に応じた「実用的な収束」判定の手段をユーザに提供するための対話型ユーザインタフェースを開発した。具体的にはGUIを用いて問題の物理空間上の注目領域を対話的に指定可能とすることで、シミュレーション空間の境界周辺等の実用上重要ではない空間に対して収束判定条件を緩和し、注目領域に対して「実用的な収束」を加速できる可能性を示した。また、計算と可視化を分離したことで様々な反復型数値解法に対して収束過程の可視化が可能となった。その一例として、GMRES法におけるリスタートタイミングの影響を、反復回数だけではなく実行時間を考慮して解析することが可能となった。[反復計算過程の多次元可視化によるデータマイニング]

我々が既に提案した残差拡散制御は必ずしも全ての条件において普遍的な有効性を示す訳ではない。本年度は残差拡散制御が逆に収束の障害となる例を見つけ収束過程でどのような現象が発生しているかを多次元可視化により解析した。その結果、不適切な境界条件や初期条件の設定を行うと残差の震動現象が発生し収束の妨げとなる状況を視覚的に発見することができた。また、CG法においては収束過程において残差分布の時系列に特異な周期構造が現れる事例を発見した。さらに、CG法とGMRES法では収束までの反復における残差分布の時系列特性が全く異なることを視覚的に示すことができた。当初目標にない発展的な研究課題として、これらの視覚的解析結果に基づく高速化アルゴリズムの検討を行った。収束過程の可視化を支援するシステムの開発自体は順調に進んでおり、解析のための多様な可視化情報を提示できるようになっている。また、このシステムを使った解析の結果、単なる数値的な収束以外の「質の良い収束」という新しい評価軸による高速化の可能性が見えてきた。24年度が最終年度であるため、記入しない。当初の計画通り、大規模シミュレーションとの連携や、インタラクティブなパラメータ変更による収束の加速等に関する研究をすすめていく。
小腸移植後免疫応答における好中球の役割に関する実験的研究

平成11年度は阻血再灌流モデルにおけるロイコトリエンB4受容体拮抗薬の組織保護作用を確認した。そこで、好中球が移植後早期の炎症反応に関与しその反応を抑制することによりそれに続く拒絶反応が抑制されるという仮説を立て、ラット早期拒絶部分小腸移植モデルでその単独投与効果を検討したところ、有意の免疫抑制効果を確認できなっかた。そこで今年度は、タクロリムスの効果を検討するのに確立されたラット全小腸移植拒絶モデルを用いて、免疫抑制剤との併用効果を検討した。結果:タクロリムスを単独連日投与した群(0.15mg/kg/day i.m.n=9)では,グラフト生着期間は8日から25日で中央値が10日であった。一方、タクロリムスにロイコトリエンB4受容体拮抗薬(100mg/kg/day p.o.術前3日から術後6日まで)を併用した群(n=9)では、グラフト生着期間は10日から28日で中央値は20日であった。両群の差は、統計的にはp=0.0.2であった。同モデルでロイコトリエンB4受容体拮抗薬単独投与群(n=5)を検討したところ、生着期間は6日から8日で中央値は7日であり、薬剤非投与群と同様であった。考察:ロイコトリエンB4受容体拮抗薬は単独では十分な免疫抑制効果を持たないが従来の免疫抑制剤との併用薬として小腸移植に有用であるとが示唆された。さらに、拒絶反応が関与する小腸グラフト機能廃絶の機序に、好中球が関わることが示唆された。ロイコトリエンB4受容体拮抗薬投与期間を延長したモデルでの検討を計画している。まず、ラット部分小腸阻血再潅流モデルを用いてロイコトリエンB4受容体拮抗薬の温阻血20分後の潅流早期での病理組織、ミエロペルオコキシダーゼ活性、血清生化学検査を比較した。コントロール群と比較して薬剤投与群では、再灌流6時間後で血清LDHが有意に低下していた。ミエロペルオキシダーゼ活性は有意な差は見られなかったが、薬剤投与群で低下傾向が見られた。これらをふまえた上で、ラット小腸移植の早期拒絶反応モデルBN-LEWIS系を用いて、ロイコトリエンB4受容体拮抗薬ONO-4057の拒絶反応抑制効果を検討した。コントロール群と比較して単独薬剤投与群では、病理組織学的検索において現在のところ、グラフト小腸に明らかな有意差は認められていない。また、グラフト小腸において術後早期にγ-GTPが発現していた。今後、これらに加え免疫抑制剤との併用効果を検討していく予定である。
長期歴史トレンド解析による大陸起源大気汚染物質長距離輸送の環境影響評価

大陸に近く,大陸起源汚染物質を良く記録していると考えられる東シナ海や日本海側の離島,島根県隠岐男池,長崎県壱岐・対馬・五島列島,沖縄県宮古島,新潟県佐渡の7箇所の池において,長さ約1mの不攪乱堆積物試料を採取した.それぞれの堆積物の層相記載,C-137法とPb-210法を用いた年代測定,球状炭化粒子(SCPs)・球状灰粒子(IASs)分析,多環芳香族炭化水素(PAHs)分析,重金属元素濃度分析,鉛同位体比測定や珪藻分析を行った.研究の結果,隠岐男池および五島汐池堆積物は過去約100年間以上の歴史トレンド解析に適していることが判明した.これらの池堆積物の鉛・亜鉛・銅・水銀などの重金属濃度やSCPs・IASs含有量は,1930年代から現在まで増加した.この歴史的変化傾向,とくに1970年代以降の変化については,日本の都市域の変化傾向とは明瞭に異なり,中国大陸の変化傾向に一致することが明らかになった.さらに,1970年代以降,隠岐および五島に負荷された鉛同位体比は,中国大陸由来の鉛同位体比と類似することを示し,これらの離島には1930年代から日本および中国大陸からの影響,1970年代以降は,主として中国大陸の影響が顕著であることを指摘した.また,PAHs濃度の歴史トレンド解析では,1970年代以降は中国大陸の影響が大きいこと,五島は隠岐よりも中国大陸からの影響を強く受けていることを明らかにした.なお,珪藻群集に関しては,時代的な変遷は明瞭には認められなかった.大陸に近く,大陸起源汚染物質を良く記録していると考えられる日本海側の離島である島根県隠岐の男池,長崎県壱岐の2箇所の溜池(黒山,大清水)において,長さ約1mの堆積物試料を採取し,堆積物の層相記載,C-137法とPb-210法を用いた年代測定,球状炭化粒子(SCP)・球状灰粒子(IAS)分析,多環芳香族炭化水素(PAHs)分析,重金属元素濃度分析,さらに予察的に珪藻分析を行った.これらの測定と分析は継続中であるが,隠岐男池堆積物研究について進展があった.長さ107cmの男池堆積物コアは均質な泥からなり,Pb-210法による堆積年代は最深部で1890年であった.また,C-137の鉛直変化はそのグローバルフォールアウトの時代変化と良く一致した.このことは,このコアが環境変遷の時系列変動解析に適した試料であることを示している.この堆積物に対する水銀の人為的負荷は1920年代から始まり,堆積物に対するフラックスは1960年代に最大値を示す.それ以降は現在まで一定値で推移する.-方,鉛の人為的負荷量は1930年代に始まり,現在まで増加し続ける.このほか,PAHs濃度も鉛と同様,1930年代から現在まで増加傾向を示す.これらの重金属元素やPAHs濃度の時系列変化は,大阪や琵琶湖での時系列変化と明瞭に異なることから,隠岐における重金属・PAHsなどの人為汚染は,朝鮮半島や中国大陸の影響が大きいことが推察できた.このほか,男池堆積物には,化石燃料燃焼起源と推定できる球状炭化粒子や球状灰粒子が含まれていたことから,これら粒子の歴史トレンド解析を行うことによって,大陸起源汚染物質が具体的に評価できる可能性を得た.なお,珪藻群集に関しては,時代的な変遷は認められなかった.大陸に近く,大陸起源汚染物質を良く記録していると考えられる東シナ海や日本海側の離島,島根県隠岐男池,長崎県壱岐・対馬・五島列島,沖縄県宮古島,新潟県佐渡の7箇所の池において,長さ約1mの不攪乱堆積物試料を採取した.それぞれの堆積物の層相記載,C-137法とPb-210法を用いた年代測定,球状炭化粒子(SCPs)・球状灰粒子(IASs)分析,多環芳香族炭化水素(PAHs)分析,重金属元素濃度分析,鉛同位体比測定や珪藻分析を行った.研究の結果,隠岐男池および五島汐池堆積物は過去約100年間以上の歴史トレンド解析に適していることが判明した.これらの池堆積物の鉛・亜鉛・銅・水銀などの重金属濃度やSCPs・IASs含有量は,1930年代から現在まで増加した.この歴史的変化傾向,とくに1970年代以降の変化については,日本の都市域の変化傾向とは明瞭に異なり,中国大陸の変化傾向に一致することが明らかになった.さらに,1970年代以降,隠岐および五島に負荷された鉛同位体比は,中国大陸由来の鉛同位体比と類似することを示し,これらの離島には1930年代から日本および中国大陸からの影響,1970年代以降は,主として中国大陸の影響が顕著であることを指摘した.また,PAHs濃度の歴史トレンド解析では,1970年代以降は中国大陸の影響が大きいこと,五島は隠岐よりも中国大陸からの影響を強く受けていることを明らかにした.なお,珪藻群集に関しては,時代的な変遷は明瞭には認められなかった.
ウールリッヒ病およびベスレムミオパチーの病態解明と治療法開発に関する研究

これまでにUCMDの皮膚および線維芽細胞においてfibronectin受容体の発現が低下し、collagen VIの欠損が細胞接着にも影響することを証明した。thrombomodulin(TM)は、近年接着分子としても注目されており、今回ヒト可溶性リコンビナントTM(rTM)がUCMD患者線維芽細胞の接着能と増殖能を改善することを証明した。今後、UCMD患者の筋芽細胞に与えるrTMの影響を究明し、細胞接着異常をきたす他の筋疾患を含めて治療に応用できる可能性を追求したい。コラーゲン特異的分子シャペロンであるheat shock protein 47(HSP47)の発現異常を検索したところ、dystrophinopathyおよび福山型先天性筋ジストロフィーでは線維化結合織と周辺筋基底膜にHSP47の発現がみられたが、6型コラーゲン遺伝子異常を有するウールリッヒ病(UCMD)およびベスレムミオパチー(BM)では筋基底膜の発現は少なく,結合織のみに発現していた。UCMDおよびBMにおける筋基底膜上のHSP47の発現低下は筋再生異常に関与する可能性がある。これまでの研究でUCMDの皮膚および培養線維芽細胞においてfibronectin受容体の発現が著明に低下し、6型コラーゲンの欠損が細胞接着にも影響を及ぼすことを証明していた。以前我々が別疾患筋組織での発現を報告したトロンボモジュリン(TM)は、近年接着分子として働く可能性が注目されており、今回ヒト可溶性リコンビナントTM(rTM)を用いた実験系を組み、rTMがUCMD患者培養線維芽細胞の接着能と増殖能を改善することを証明した。rTMの作用機序は未だ明らかではなく、複数の生理活性部位をもつrTMが、接着・増殖・分化を行う細胞活動の中で、複雑な作用を示している事が予想される。今後、UCMD患者の筋細胞・筋芽細胞に与えるrTMの影響を究明し、細胞接着異常をきたす他の筋疾患を含めて、治療に応用できる可能性を追求していきたい。
マイクロプロ-ブ・オ-ジェ電子回折法による結晶表面構造の解明

マイクロプロ-ブ(μ-probe)オ-ジェ電子回折装置は一応の完成を見た。しかし、当初、計画していた性能を出した部分と、そうでない部分がある。それらをまとめると以下のようになる。2.空間分解能(100αA2FA)--ほぼ計画通り4.μ-probeオ-ジェ電子回折装置としての性能--ほぼ計画通り5.μ-probe RHEEDの性能(表面上のステップが見えない)--期待した性能が出ないこのうち、5.については、日立製作所中央研究所の市川昌和らのμ-probe RHEED装置の性能と比較したとき、その性能が劣っていることを意味する。これを向上させることが装置の改良の点ではもっとも重要である。しかし、本装置の特色である4.のμ-probeオ-ジェ電子回折装置としてはほぼ計画通りの性能が出ており、本研究は成功であったと言える。装置の完成の後の結晶表面構造解析の研究はその緒についたばかりである。Si(111)表面上の金属初期界面についていくつかの研究方向を代表する研究を行った。それらは、3.μ-probeオ-ジェ電子回折--(Si(111)4×1-In,√<3>×√<3>-InのIn MNNオ-ジェ電子回折パタ-ン測定)である。1.真空(ベ-スで2x10^<-10>Torr)--ほぼ計画通り2.空間分解能(100αA2FA)--ほぼ計画通り4.μ-probeオ-ジェ電子回折装置としての性能--ほぼ計画通り5.μ-probe RHEEDの性能(表面上のステップが見えない)--期待した性能が出ないこのうち、5.については、日立製作所中央研究所の市川昌和らのμ-probe RHEED装置の性能と比較したとき、その性能が劣っていることを意味する。かねてよりほぼ同一研究題目で東レ科学振興会に申請中であった助成金の決定通知を昭和61年3月に受けていたので、実質的設計打ち合せを日立製作所那珂工場、電子装置設計部技術者と重ねていた。5月に、文部省科研費内定通知を得て、研究費の面で余裕が生じ、当初の研究計画よりも一段階上の計画を立てることができた。すなわち、当初は普及型の走査電子顕微鏡、日立S-510型を購入し改造する予定であったが、それを電界放射型電子銃をそなえてた日立S-800型走査電子顕微鏡を購入、改造することである。S-800型は電界放射型であり、分解能が高く、しかも電子銃部分がすでに超高真空化されているので本研究には好都合であった。ただし、試料槽は通常真空であるので、これを超高真空化することに伴う電子顕微鏡本体の改造をあらかじめ行っておく必要があった。このことに関する打ち合せを日立製作所技術者と何度か行ない、S-800特型を購入することとなった。費用的には、特型の走査電子顕微鏡本体を東レ科学振興会よりの助成金で購入し、特型の走査電子顕微鏡デイスプレイを文部省科研費で購入できることとなった。昭和61年12月8日、日立S-800特型走査電子顕微鏡が搬入され、その後、約10日間をかけて検収と操作の研修を終えた。検収時における分解能試験で、磁気テープ上に真空蒸着された金微粒子を観察し、約20【A!°】の分解能を得た。一方、オージェ電子回折実験は、先の検出器の修理を終え、オージェ電子分光器の性能テストをほぼ終了し、実際に半導体初期界面構造の解析を開始した。しかし、既設の試料マニピュレーターは位置の設定精度と再現性が悪く、データの質が非常に良くないことが判明した。したがって62年度に製作予定のマニピュレーターの完成を急ぐこととなった。前年度報告したように,昭和61年12月8日,日立S-800特型走査電子顕微鏡が搬入された.本年度は電子顕微鏡の試料槽(分析槽)を超高真空化する作業も進めた.超高真空化に当って,次の各部を設計製作する必要があった.1)試料槽本体のステンレス化と超高真空フランジ取り付け,および超高真空ポンプの取り付け.2)超高真空試料マニピュレーターの製作3)電子レンズ可動シボリの改造4)2次電子検出部の改造5)反射高速電子回折スクリーンの取り付け6)上記改造に伴う電子コントロール系の改造昭和63年3月現在,上記の改造をほんんど終了し,目下組立て作業を行っている.

今後,本装置の調整作業を進め,数ケ月後には本実験が開始できる予定である.また,オージェ電子回折装置も若干の改造を加え,上記1)の試料槽本体に組み込んだ.本年度は以下のような研究を行った。1.マイクロプロ-ブ・オ-ジェ電子回折装置の最後のテストとして、下地Si(111)7x7表面とInを吸着させたSi(111)√<3>x√<3>ーIn表面のIn MNNマイクロプロ-ブ・オ-ジェ電子回折パタ-ンを測定し、結果を既知の構造モデルを用いて解析し、良好な一致を得た。3.Si(111)4x1ーIn表面のマイクロ・ドメインを、RHEED暗視野像を取ることによって、観察した。4x1シングル・ドメインをマイクロプロ-ブで捜すことによって、かなり大きなシングル・ドメイン4x1表面を作ることができた。この表面について、In MNNマイクロプロ-ブ・オ-ジェ電子回折パタ-ンの測定を行った。結果を現在解析中である。4.試料中を流れる電流よって、Si(111)表面上のInの移動が起こる。この電流効果のUHVーSEEによる観察を行った。
黄色ブドウ球菌ロイコシジンおよびガンマヘモリジンの3次元構造の解明

LukFの3次元構造の解明:LukF単独並びに[LukF・フォスフォコリン]複合体結晶の1.8Å解像力でのX線解析により,(1)水可溶性LukFモノマーは、キャップ、リム及びプレステムの3領域から構成されていること、(2)LukFの血球膜上の結合リガンドは、フォスファチジルコリンのフォスフォコリン部位であること、(3)フォスフォコリンはLukFのW177とR198残基が形成するポケット構造部分に結合することを明らかにした。更に、LukFの生化学的解析、並びにX線結晶解析により、水可溶性分子として分泌されるLukFが赤血球膜上で水不溶性分子に変化し、Hlg2との複合体を形成する機構を解明した。即ち、グリシン及び疎水性アミノ酸を多く含む18アミノ酸残基から構成されている領域がプレステムの状態でLukF表面に折り畳まれて存在し、膜孔形成時に毒素表面から触手のように突き出てステムになり、これが血球膜に貫入することを明らかにした。これらの発見は、黄色ブドウ球菌の細胞崩壊毒素の細胞膜上におけるアッセンブリー機構を明らかにしたばかりでなく、広く水可溶性膜孔形成毒素タンパク分子が標的細胞膜上で水不溶性分子へ構造変化を起こす機構について新しい概念を打ち立てた画期的なものである。LukFの3次元構造の解明に成功した。本結晶のX線解析よりシステム領域に相当するグリシンおよび疎水性アミノ酸を多く含む18アミノ酸残基から成る領域がLukFにおいては"プレステム"の状態でLukF表面に折りたたまれて存在すること、ならびにプレステム領域を形成しているアミノ酸残基の疎水基がキャップ領域のアミノ酸残基と疎水結合して存在し、その結果プレステム領域の表面が親水性になっていることが判明した。これらの結果よりγヘモリジンの水溶性分子が膜孔形成時においてプレステム領域の劇的な構造変化がおきることが証明された。本発見は、黄色ブドウ球菌の細胞崩壊毒素の細胞膜上におけるアッセンブリー機構を明らかにしたばかりでなく、広く水可溶性膜孔形成毒素蛋白分子が標的細胞膜上で水不溶性分子へ構造変化を起こす機構について新しい概念を打ち立てた画期的なものとなった。次に著者等は、[LukF・フォスフォコリン]複合体結晶のX線回折による解析から、(1)LukFの血球膜上のレセプターはフォスファチジルコリンのフォスフォコリン部位であること、(2)フォスフォコリンはLukFのW177とR198残基が形成するポケット構造部分に結合することを明らかにした。
東南アジアにおけるヒルステーションの持続的発展：ＲＳとＧＩＳによるアセスメント

フィリピンとベトナムにおけるヒルステーションのフィールドワークを実施した.フィリピンでは,アメリカ合衆国が開発した高原避暑地としても知られるバギオにおいて,都市構造,土地利用変化,住民生活,交通混雑,将来計画/政策などに関し市役所の担当者から聞き取り調査を行うとともに,郊外における都市化の現状について現地調査を行った.郊外の斜面の危険地帯などで開発が進み,無秩序なスプロール化が急速に進行している現状が明らかになった.不法の住居占有も見られ,早急な対策が求められる.生活環境が加速的に悪化しており,強力な土地利用規制が必要である.ベトナムでは,ダラットを現地調査した.大都市と離れているため急激な都市化は起こっていないが,産業活動により景観破壊が進んでいることが明らかになった.特に都心では人口の集積が進むとともに,観光客も増えていることがわかった.以上のフィールドワークを踏まえ,GISとRSを援用して都市化の空間解析を行った.今年度の研究成果は,地理情報システム学会や日本地球惑星科学連合の年次大会で発表した.また,11月にはCSIS DAY(東京大学)において,ポスター発表を行った.以上の研究成果を踏まえ,2年間でインテンシブにフィールドワークを行った4つのヒルステーションを対象に,都市化の実態と将来展望をまとめたが,これに関しては2015年に開催される国内学会やAAGなどの国際学会で口頭発表する.さらに,国際学術誌に論文を投稿する.26年度が最終年度であるため、記入しない。26年度が最終年度であるため、記入しない。急成長が続くヒルステーション(高原避暑地)では,社会インフラの整備が追いつかず,もともと自然環境が脆弱なことも相まって,深刻な社会環境問題を引き起こしている.この目的を達成するため,衛星画像をデータとして,リモートセンシングとGISの技術を組み合わせて空間可視化と空間分析を行なった.また,ヒルステーションの都市化の実態とそのメカニズムを明らかにすべく,地域調査(フィールドワーク)を実施した. 2014年の2月7日から15日までは,インドネシアのボゴール(Bogor, Indonesia)で,そして2月15日から23日までは,ミヤンマーのメイミョ(ピン・オ・ルウィン, Pyin Oo Lwin, Myanmar)で聞き取りを行うとともに,役所で都市発展と環境変化に関する資料収集を行った.また, 2013年8月2630日にインドネシアで開催されたEcosystem Services Partnership Conferenceでは,研究発表を行うとともに,エコシステム評価に関するワークショップに参加し,手法を学んだ.会議はバリ島で行われたので,バリ島の自然環境に関するフィールドワークも実施した.以上の研究成果は, 3つの国際学会で発表し, 3つの国際学術雑誌に受理された.以上の研究活動を通じて,ヒルステーションにおける都市発展の脆弱性について新たな知見が得られた.フィリピンとベトナムにおけるヒルステーションのフィールドワークを実施した.フィリピンでは,アメリカ合衆国が開発した高原避暑地としても知られるバギオにおいて,都市構造,土地利用変化,住民生活,交通混雑,将来計画/政策などに関し市役所の担当者から聞き取り調査を行うとともに,郊外における都市化の現状について現地調査を行った.郊外の斜面の危険地帯などで開発が進み,無秩序なスプロール化が急速に進行している現状が明らかになった.不法の住居占有も見られ,早急な対策が求められる.生活環境が加速的に悪化しており,強力な土地利用規制が必要である.ベトナムでは,ダラットを現地調査した.大都市と離れているため急激な都市化は起こっていないが,産業活動により景観破壊が進んでいることが明らかになった.特に都心では人口の集積が進むとともに,観光客も増えていることがわかった.以上のフィールドワークを踏まえ,GISとRSを援用して都市化の空間解析を行った.今年度の研究成果は,地理情報システム学会や日本地球惑星科学連合の年次大会で発表した.また,11月にはCSIS DAY(東京大学)において,ポスター発表を行った.以上の研究成果を踏まえ,2年間でインテンシブにフィールドワークを行った4つのヒルステーションを対象に,都市化の実態と将来展望をまとめたが,これに関しては2015年に開催される国内学会やAAGなどの国際学会で口頭発表する.さらに,国際学術誌に論文を投稿する.26年度が最終年度であるため、記入しない。研究成果がまとまり, 3つの国際学術誌に受理された.次年度は計画通り,フィリピンとベトナムでフィールドワークを実施し,ヒルステーションにおける都市化の実態と今後の推移にっいて地域調査を行う,
胃癌の進展と癌細胞核DNA量に関する研究

細胞核DNA量は癌細胞の生物学的悪性度の指標として注目されており、細胞核DNA量と胃癌の深達度、転移などの胃癌の進展との関連について研究を行い、治療への応用の可能性についても検討を加えた。DNA量分布パタ-ンはIからIV型に分類し、分散幅の狭いI、II型をlow ploidy、広いI II、IV型をhigh ploidyに分類した。切除された胃癌254例を対象として深達度別に各DNAパタ-ンの頻度を比較すると、high ploidy群は深達度が進むにつれて増加し、この傾向は未分化型において顕著であった。未分化型ss-s癌を組織学的に児玉らの分類に従って集簇状態で分類すると、癌細胞が胞巣をつくる集簇型とhigh ploidy群、遊離型とlow ploidy群が関連があった。ssまたはseの各層別にDNAを測定すると分化型で15%(3/20)、未分化型で30%(6/20)にいずれかの層でII型およびIII型間に移行が認められ、深部に進行するにつれて分散幅が広がる傾向であった。リンパ節転移をみるとlow ploidy群では転移率が26%(39/152)であるのに、high ploidy群では49%(50/102)で有意に高率であり、深達度別に比較してもhigh ploidy群に転移が高率であった。リンパ節転移巣のDNAパタ-ンが原発巣に比してより狭い分散を示すploidy reductionが60.7%(37/67)に認められた。この現象にはリンパ節の免疫反応が関与が示唆された。5年生存率は全体でlow ploidy群がか91%で、high ploidy群の74%に比べて有意に良好であり、特にリンパ節転移症例において両群間の予後に差がみられた。さらに多変量解析によりDNAパタ-ンは独立した予後因子であることが判明した。癌細胞の感受性をSDI法で分析し、DNAパタ-ンとの相関について検討すると、特に未分化型においてIV型胃癌はII型、III型に比し各種薬剤についてに対し感受性が高かった。以上より細胞核DNA量は悪性度を表す指標として重要であることが明かになり、また治療への応用の可能性が示唆された。胃癌の原発巣とリンパ節転移巣のDNAパターンを比較した.早期胃癌10例中7例(70%)に,リンパ節転移巣のDNAパターンが原発巣より狭い分散を示すPloidy reductionが認められた.進行胃癌でも20例中11例(55%)にPloidy reductionが認められた.このPloidy reductionの原因を検討した.転移リンパ節内の癌の量との関係をみると,転移した癌の量が少ないものでは66%に,多いものでは55%にPloidy reductionを示しており,癌の量の多少とは関連が小さいようであった.

stem lineとの関係をみると, Ploidy reduction例ではstem lineが原発巣4.4c±0.8c,リンパ節転移巣3.1c±0.6cと有意に小さくなり,逆にPloidy reductionのない例では原発巣3.6c±0.8c,リンパ節転移巣3.2c±0.9cとあまり変化しなかった.すなわちPloidy reductionに際してはDNAのstem lineも変化して小さくなっていた.さらに組織型との関係についてみると,分化型では91%(10/11)がPloidy reductionを示しているのに対し,未分化型では42%(8/17)しかPloidy reductionを示してなかった.以上より,胃癌ではリンパ節転移に際して, DNAパターンがPloidy reductionを示す例が5570%も認められ,それは分化型に多く,それらのDNAパターンのstem lineも変化して小さくなっていることが明らかになった.以上の点に関しては症例を重ねて,それらの事実を確実にしてゆくことが必要である.細胞核DNA量分布パターンは、癌の生物学的悪性度の指標として有用である。そこで、このDNAパターンが胃癌の進的に伴うリンパ節転移や他の臓器への浸潤転移と、どのように関係しているかを検討した。1)胃癌の原発巣とリンパ節転移巣のDNA量を比較した結果、61例中37例(60.7%)に、リンパ節転移巣のDNAパターンが原発巣に比べより狭い分散を示すploidy reduction現象が認められた。ploidy reductionを呈した転移リンパ節を組織学的に検討すると、paracortical hyperolasiaが顕著な症例が存在することから、リンパ節の免疫反応がこの現象に一部関与している可能性が示唆された。2)胃癌254例についてDNAパターンと深達度の関係を検討した。high ploidyの割合はm癌24.0%、sm癌45.6%、pm癌38.9%、S癌53.1%であり、癌の深達度とともに次第に増加する傾向がみられた。low ploidy群(I、II型)のリンパ節転移率をみると、m癌17.5%、sm癌18.6%、pm癌22.7%、S癌53.3%と比較的緩徐に増加するのに比べ、high ploidy群(III、IV型)ではm癌0%、sm癌36.1%、pm癌42.1%、s癌91.2%と、転移率は癌の深達と共に急激に増加する傾向にあった。3)漿膜浸潤陽性胃癌40例を対象とし、胃癌の各浸潤層別のDNA量を測定した。40例中31例(77.5%)が各層間においてDNAパターンに変化のみられないhomogenous型であったが、9例(22.5%)はいずれかの浸潤層でDNAパターンの異なるheterogenous型であり、深達度が深くなるほど分散幅が広くなる傾向がみられた。homogenous群とheterogenous群のリンパ節転移率を比較すると、54.8%(17/31)と100%(9/9)でありheterogenous群の転移率が高かった。又、heterogenous群はhomogenous群に比して、分化型腺癌では静脈侵襲率が、低分化型腺癌では腹膜播種陽性率が高い傾向が認められた。以上の事実をふまえた上で、今後はDNAパターンと胃癌の進行及び悪性度との関係を総合的に考察することが必要である。PS(+)の未分化型胃癌100例を対象とした。DNA量分布パタ-ンは顕微測光法にてLow ploidy、High ploidyに、集簇形態は遊離型と集簇型に分類し、さらに集簇型を胞巣の大きさに応じ、小胞巣型と髄様の大胞巣型に亜分類した。〔結果〕High ploidy群はLow ploidy群に比しリンパ節転移、リンパ管侵襲、静脈侵襲、肝転移の頻度が有意に高く、同様に大胞巣型は遊離型に比しいずれも頻度が高く、小胞巣型はその中間値を示した。
複雑な背景動画像を対象とする高機能映像生成・合成システムの包括的構築

本研究課題は、映像(実写映画、アニメ映画、ゲームなど)制作現場において新たな映像編集技術として期待される、実写映像とCG映像のシームレスな合成技術について包括的に研究開発することを目的とする。実写をベースとする映像においてある特定の(気に入らない)樹木の形状と動きをCGに置き換えかつ周辺の様子に合わせて樹木の配色を自動変換する手法、および背景画像に大量に登場する人のリアルな個人顔形状やアニメキャラクタを短時間で生成する手法などを開発した。本研究課題は、3年計画で以下のことを行うことを目標としている。(1)風に揺れる複数の樹木映像生成支援(編集)システム「Levante」の機能向上(2)実画像との連携技術の開発(3)実動画像との合成技術の開発初年度の平成20年度では、以下のことを行った。・前課題で構築した、樹木群及び草原に関する実時間物理シミュレーションに基づく対話的映像制作(編集)支援ツール「Levante」の機能向上(1)並列処理のレベルを上げ、風の流れに基づいて樹木が同時に揺れ動くリアルタイムシミュレーションにおいて、対象とする樹木の数がこれまで10程度であったのを100程度までに向上した。(処理速度の向上によるシミュレーション空間の拡大)(2)樹木だけでなく、何種類もの草からなる草原を対象として物理シミュレーションに基づくアニメーションが可能になるように、生態系に基づく自然な草原の自動生成手法を構築した。今後、樹木と草が同時に揺れ動くシミュレーションを実現させる予定である。(背景要素の拡大)平成21年度は、研究実施計画に示した以下の3点について研究を実施した。(1)並列処理のレベルを上げ、風の流れに基づいて数百の樹木が同時に揺れ動くシミュレーションを実現すること16台構成のPCクラスタを効率的に制御する手法を構築し、風に対する相互作用を考慮しつつ多量の樹木を並列に生成および描画することに成功した。本手法により、多量の樹木が風に揺れる映像を制作する際に葉の一枚一枚の動きに至るまで詳細に表現することが可能となり、作品の品質を大幅に向上させることが可能となった。本研究の成果を論文にまとめ、精密工学会論文誌において成果を公表した。さらに、数万本以上の樹木を含む大規模な森林の表示を目指し、GPUを活用した描画の高速化手法を構築し、4万本の樹木をリアルタイムに表示することを可能にした。(2)制作者が自由に樹形を編集できる個体差編集ツールを開発すること植物学的な根拠に基づいた樹木形状のモデル化手法を構築し、従来手法では40種類以上の設定項目があった樹木形状編集ツールを、13種類の項目数に減らしかつ同等の編集性能をもつツールへ改良した。これにより制作者の樹木制作の際の負担を軽減させることに成功した。また、階層的ベイズモデルを用いた個体差の分析手法を構築し、樹種に即した形状生成を自動生成することを可能にした。(3)背景画に登場させる3Dキャラクタの簡易生成ツールの開発3Dキャラクタを簡便かつ安価に生成することを目的とし、市販のデジタルカメラを用いた人体形状の取得手法を構築した。本年度は、特に手足の形状取得に重点を置き研究を行い、誤差1%以内の精度において人体形状を復元することに成功した。・実動画像との合成技術の開発実写をベースとする映画などにおいて、ある特定の背景部分の動きを自由に編集するツールの開発を行う際に、CGにより生成した樹木とすでに取得済みの実写映像をシームレスに合成する技術の開発を行った。CGと実写間の色の相違を簡便に修正するために,次の2段階の手法を開発した。(1)撮影環境に適した樹木の陰影を生成するために,映像制作者が容易に陰影を制御することのできる陰影付け手法(2)実写映像と(1)の手法で生成した映像の配色を自動的に一致させる手法、すなわち、数種類の色の対応付けを行うだけで画像全体の配色をなめらかに変換することのできる配色変換手法両手法を組み合わせることでCG画像を実写画像に類似した画像へ変換できることを実証し,研究成果を論文として報告した。
果糖過剰摂取による認知症に対する影響について

免疫組織学的検討結果からは、果糖の輸送体の中でGLUT5とGLUT8が脈絡叢の上皮細胞と上衣細胞に存在する事、GLUT8が脳室周囲領域のグリアの細胞質に存在する事、高血糖状態のマウスでは糖を含む血管内物質の脳室周囲領域への移行が示唆される事が判明し、血管内の果糖が脳室周囲領域に直接移行することが示唆された。一方、短期および長期の高フルクトース環境において、培養神経細胞の生存率や活性酸素種産生量や突起伸長に対する影響を検討し、また、培養ミクログリアの生存率や活性酸素種産生量の測定を行った。その結果、長期培養下での神経細胞の生存率が軽度低下していたが、それ以外のパラメータに明らかな差はなかった。過剰摂取された果糖が認知機能へ影響を及ぼすためには、果糖が直接脳内に入っていく必要がある。しかしながら、果糖の脳内移行に必要なグルコース輸送体(GLUT)の局在が解明されていない。そこで、まず、平成26年度前半に、果糖の代表的輸送体であるGLUT5に関しては、脈絡叢の上皮細胞と脳室上衣細胞に局在することを報告できた。現在、さらに、他の輸送体に関する知見も得られており、論文作成中である。さらに、in vitro実験として、神経細胞をはじめとした培養細胞に対する果糖投与の効果をみる実験系が立ち上がり、一定の成果が出だしている。まず、過剰摂取された果糖の脳内移行に必要な輸送体の脳内局在を明らかにすべく検討した結果、GLUT5が脈絡叢の上皮細胞と上衣細胞に局在すること(Neuroscience, 2014, 160, 149-157)と、さらに、GLUT8も同部位に局在することを見つけ、現在、論文作成中である。また、GLUTだけでなく様々な輸送体が、上記部位に存在することもあわせて明らかになりつつある。これで、果糖をはじめとした様々な物質が血管を介してだけでなく脈絡叢を介して脳内移行しうることとその機序が明らかになりつつある(Histochem Cell Biol 2015, 144, 597-611)。さらに、in vitro実験として、神経細胞をはじめとした培養細胞に対する果糖の投与実験を行い、果糖がラット由来海馬初代培養神経細胞に対する生存率を軽度ながら減少させることが明らかになりつつある。また、GLUT8がアストロサイトに局在することからは、果糖は、アストロサイトを介して神経神経細胞に影響を与えている可能性が推測される。現在も、果糖の神経細胞やグリア細胞に対する効果を検討し続けている。果糖の脳内移行のための輸送体の局在が明らかになりつつある。初代培養神経細胞に対する果糖の効果をみる実験系がたちあがり、その効果が明らかになりつつある。果糖の輸送体はGLUT5のみならずGLU8も脈絡叢の上皮細胞と上衣細胞に存在することが判明し(Histochem Cell Biol, 2016, 146, 231-236)、さらに、GLUT8は脳室周囲領域のアストロサイトやミクログリアの細胞質に局在することも判明した(Neurosci Lett 2017, 636, 90-94)。これらのことからは、脳室周囲領域では果糖はグリア細胞に取り込まれて、神経細胞に何らかの影響を与えている可能性が推測された。さらに、高血糖状態のマウスでは糖を含む血管内物質の脳室周囲領域への移行が亢進している事を示唆する所見が得られ、高血糖状態では脳室周囲領域が糖化などの影響を受けやすいものと推測された(Microsc Res Tech 2016, 79, 833-837)。また、高フルクトース環境の神経細胞の初期分化時の生存や突起伸長へ影響を評価するため、初代培養ラット胎仔の神経細胞にフルクトースを0.1 mMまたは1 mM加えて48時間培養し、生存率、活性酸素種産生量、突起伸長に対する影響を比較したが、負荷によりこれらのパラメータには明らかな差は見られなかった。一方、播種後7日を経過した初代培養ラット神経細胞に対し、フルクトースを加えて3週間以上培養を継続し、細胞の生存率、活性酸素種産生量の測定を行った。細胞生存率については、コントロールに比べ、1 mMフルクトースを長期負荷した状態では10%程度生存率が低下していたが(p < 0.05)、活性酸素種産生量については、フルクトース長期負荷群とコントロール群との間に明らかな差はなかった。さらに、GLUT5を発現しているミクログリアにD-フルクトースを負荷後、生存率及び活性酸素種産生量を測定したが、これらのパラメータにおけるフルクトース負荷による影響は明らかではなかった。

果糖の脳内輸送に必要な輸送体の局在が明らかになりつつある。培養細胞における果糖投与の効果をみる実験系が立ち上がり、データが出だしている。果糖投与に対する、初代培養神経細胞だけでなく、グリアを加味した細胞群に対する効果を検討する。そして、モデル動物における果糖投与の効果を検討する。神経病理学果糖の脳内輸送に必要な輸送体の局在を解明する。神経細胞だけでなく様々な細胞を用いた培養細胞における果糖投与の効果をみる実験系で、細胞間において異なるであろう果糖投与の効果を検討していく。そして、in vivoの種々の動物モデルでの果糖投与の効果を検討していく。消耗品中心に、当初の予定通りに購入できたが、値段がちょうど一致し、かつ、必要な消耗品が目当たらず、最後に8,692円が残ってしまった。上記繰越の8,692円と今年度の交付予定の1,300,000円とを合計した1,308,692円でもって今年の実験計画の、果糖投与のin vivo実験とin vitro実験と果糖の輸送体の脳内局在の確立を行っていく予定である。