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日本前近代の巡礼に関する空間史的研究

本研究は日本の前近代における巡礼および巡礼霊場の成立と変容の過程について、空間論的に分析するものである。本年度は、巡礼が信仰の対象から遊楽的な存在へと移行していく劃期としての中近世移行期の問題について、善峯寺所蔵の参詣曼茶羅を素材として分析を行った。前年度は曼茶羅に描写される事物の基礎的な分析を行っていたが、本年度はさらに京都市歴史資料館所蔵の善峯寺文書の読み込みを行い、これをもとに、西国巡礼20番札所である善峯寺の空間を、同寺をめぐる重層的な社会関係のもとに描き出すことを試みた。この成果は高橋慎一朗・千葉敏之編により刊行計画中の『中世都市を考える(仮)』(東京大学出版会)のうち、「善峯寺参詣曼茶羅から見る寺院と都市」として公表する予定である。この論考により、従来は図像の比定にとどまっていた参詣曼茶羅分析を社会・空間論の次元に深め得たと考えている。また本年度はこのほか、都市規模の巡礼として最も古いものとみられる洛陽33カ所観音巡礼について、その成立と変遷について分析を行った。これについては引き続き研究を進め、論文としての公表を目指したい。また前年度までの成果のうち、今年度中に公刊された成果として、Asian Cultural Studies誌の"Chichibu's Kannon Temples Before and After the Meiji Restoration"、吉川弘文館の『身分的周縁と近世社会6寺社をささえる人びと』(共著、「札所」執筆)がある。本研究は日本の中世・近世に展開された巡礼およびその霊場に関する空間論的分析を行うものである。本年度は以下の3つのテーマについて研究を行った。第一に、全国スケールから建築的スケールまで多様なレベルにおいて存在する巡礼の空間について、それらの相互関係やその質的差異について整理を行った。事例としてはこれまでに扱った秩父34ヵ所に加え、西国33ヵ所などの広域巡礼、護國寺33ヵ所・御室88ヵ所・覚王山88ヵ所などの境内地巡礼、栄螺堂などの建築内巡礼などの新たな事例分析を行い、これらの総合的位置づけを試みた。その成果は2007年3月開催の日本建築学会都市史小委員会シンポジウムにおいて報告「巡礼空間の内と外」を行った。第二に、中世近世移行期の巡礼の空間についての考察を行った。具体的には京都市の西国20番札所、善峯寺に所蔵される2幅の参詣曼荼羅を史料として用い、描かれた巡礼空間の分析を行った。その中間的成果は東京大学史料編纂所高橋慎一朗氏を主査とする「中世都市と史料」研究会にて報告を行い、今後さらに精緻な検討を加えていきたいと考えている。
蛋白質間相互作用と立体構造解析に基づく免疫細胞受容体LIR/ILT群の機能解明

Leukocyte Ig-like receptor (LIR,別名LILR、Ig-like transcript (ILT)、CD85)群は白血球に幅広く発現する受容体で、活性型(LIR6,7,9a, LLT7,8,10)、抑制型(LIRI,2,3,5,8)、分泌型(LIR4,9b)が存在する。本研究では、LIMLT群受容体について、リガンド候補分子との相互作用解析からリガンドの特定を行う。また立体構造解析を行うことで、リガンドが特定できなかった受容体についても構造的見地から分子認識について深い議論ができると考える。LIMIT群の分子認識機構の全体像を明らかにすることにより、免疫細胞の機能制御の理解につながる基礎を築くことが本研究の目的である。日本学術振興会特別研究員を7月31日付けで中途辞退するため、今回は平成18年7,月31日までの実績を報告する。前年度に良好な結晶を得ることができた活性型受容体LIR9に関して、放射光施設にて2.2Å分解能の回折データを得ることができ、分子置換法により構造解析を試みたが適当な解を得ることができなかった。そこでLIR9のセレノメチオニン(SeMet)体を作製した。SeMet体の結晶は野生型と異なる条件下で得られ、放射光施設にて1.9Å分解能のデータを得ることができた。LLR9の構造はMAD法により決定した。構造解析の結果、LIR1やLIR2においてMHCクラスI(MHCI)との結合に深く関与するドメインlの部位に、大きな構造の違いが見られた。この構造の違いがLIR9がMHCIを認識しない大きな理由であると考えられる。また抑制型受容体LIR2とリガンドの一つであるHLA-Gの複合体の結晶化に成功した。HLA-Gは胎盤の栄養膜に主に発現しており、LIR2と最も高親和性で結合するリガンドである。放射光施設にて3.2Åのデータを得ることができた。現在構造解析を行うと同時に、より高分解能のデータを目指して改良を行っている。Leukocyte Ig-like receptor(LIR,別名LILR、Ig-like transcript(ILT)、CD85)群は白血球に幅広く発現する受容体で、活性型(LIR6,7,9a,ILT7,8,10)、抑制型(LIR1,2,3,5,8)、分泌型(LIR4,9b)が存在する。本研究では、LIR/ILT群受容体について、リガンド候補分子との相互作用解析からリガンドの特定を行う。LIR/ILT群の分子認識機構の全体像を明らかにすることにより、免疫細胞の機能制御の理解につながる基礎を築くことが本研究の目的である。本年度はまず全てのLIR/ILT受容体群のクローニングを行い、大腸菌を用いた大量調製、巻き戻し系の確立を行った。LIR3、4、6、7、8、9、ILT7については発現系や培養条件を最適化することで封入体の形で培地1L当り10mg以上の蛋白質を得ることができた。またこのうちLIR3、4、7、8、9については巻き戻しにより解析に十分な量の蛋白質を得ることができた。LIR6、ILT7については巻き戻し条件の最適化を行っても十分量を得ることができなかった。LIR5は少量ながらも結合試験に必要な量を巻き戻しにより調製できた。構造解析に必要な量を確保するためには、LIR5、6、ILT7については発現系自体の見直しをする必要がある。またこれらの受容体のリガンド候補であるヒトMHCI(HLA-A2、A11、B27、B35、Cw4、Cw7、E、G1)の調製を行った。リガンド候補であるUL18の調製も試みたがうまく巻き戻すことができなかった。調製できた受容体およびリガンド候補から順次、表面プラスモン共鳴を用いて相互作用解析を行った。その結果、LIR4にアリル特異的(Cw4)な弱い結合が見られた以外は、ほとんど結合しなかった。LIR3、5、7、8、9についてはMHCI以外のリガンドを認識すると考えられる。最後にLIR3、LIR8、LIR9について結晶化のスクリーニングを試みた結果、LIR3、8では全く結晶が得られなかったが、LIR9で良好な結晶を得ることができた。

前年度に良好な結晶を得ることができた活性型受容体LIR9に関して、放射光施設にて2.2Å分解能の回折データを得ることができ、分子置換法により構造解析を試みたが適当な解を得ることができなかった。そこでLIR9のセレノメチオニン(SeMet)体を作製した。SeMet体の結晶は野生型と異なる条件下で得られ、放射光施設にて1.9Å分解能のデータを得ることができた。LLR9の構造はMAD法により決定した。構造解析の結果、LIR1やLIR2においてMHCクラスI(MHCI)との結合に深く関与するドメインlの部位に、大きな構造の違いが見られた。この構造の違いがLIR9がMHCIを認識しない大きな理由であると考えられる。また抑制型受容体LIR2とリガンドの一つであるHLA-Gの複合体の結晶化に成功した。HLA-Gは胎盤の栄養膜に主に発現しており、LIR2と最も高親和性で結合するリガンドである。放射光施設にて3.2Åのデータを得ることができた。現在構造解析を行うと同時に、より高分解能のデータを目指して改良を行っている。
光誘起ダイナミクスへの電磁場効果と分子配向

光誘起電子移動反応を示す電子供与体と受容体あるいは両者をメチレン鎖で連結させた分子をポリマー中に分散させ、発光および吸収の電場効果を調べることにより、電子移動反応初期過程、電荷再結合過程および電荷分離過程に対する電場効果を調べた。特にカルバゾールとテレフタル酸の組み合わせに関して集中的に調べ、エキサイプレックス蛍光の電場消光が光キャリアー生成によるものであることを光電流およびその光励起スペクトルの測定により明らかにした。また、単調なメチレン鎖の長さ依存性があることも明らかにした。ピレンとジメチルアニリン等、他の反応系に関しても同様の実験を行ない、光誘起電子移動反応が外部電場により変化を受けるのは一般的であることを示した。またピレンの励起二重体形成反応に対する電場効果を調べ、光誘起電子移動反応以外の励起ダイナミクスも外部電場により変化することを見い出した。また、ピレンの場合、通常のサンドイッチ型のエキシマーと部分的な重なりを持つ異なる型のエキシマーでは受ける電場効果が異なることを見い出した。均一分散系以外に、LB配向膜を用いて電子供与体と受容体を異なった層の単分子膜として累積し、構築した一方向に光誘起電子移動が起こる分子システムについても、電子移動反応の電場効果を発光の電場効果より調べた。その結果、電場効果は反応と電場の方向に大きく依存することがわかった。またLB膜中に単量体と二重体が存在する場合、電子移動反応およびその電場効果が両者で大きく異なることを、例えばチアシアニンあるいはオキサカルボシアニンとビオローゲンの組み合わせに関して明らかにした。光誘起電子移動反応の速度および再結合過程に対する電場効果を、光励起後に発する蛍光の電場効果より明らかにした。カルバゾールと種々の電子受容体(テレフタル酸ジメチルや無水フタル酸等)をPMMA中に分散させた系では光励起されたカルバゾールからの分子間電位移動が起こる結果エキサイプレックス(EX)蛍光が観測される。この電子移動が電場により速くなることがカルバゾール蛍光の電場による消失によりわかった。しかも電子移動速度およびその電場効果の大きさは、電子受容体と供与体間の分子間距離が小さくなるにつれて大きくなることがわかった。またEX蛍光の電場効果は電子供与体と受容体の濃度に依存することがわかった。たとえばカルバゾールの濃度が小さい場合には受容体の濃度にかかわらず、EX蛍光強度が電場により増加する。カルバゾールの濃度が増えるにつれ、この増加量は減少し、ある程度以上の濃度では逆に減少するようになる。EX蛍光の電場による増加はラジカルイオン対の再結合が電場により阻害されるためである。また電場消光は光キャアリア-生成のためであり、このことは光電流の観測により確認された。また電子供与体と受容体をメチレン鎖で連結させた系についても同様の実験を行い、電荷再結合に対する分子鎖の役割を明らかにした。またLB膜を用いることにより、電子供与対(シアニン系色素)と受容対(ビオローゲン)を異なる単分子層に累積した積層型の電子移動反応系を構築し、シアニン色素励起後の蛍光の電場効果を調べた結果、この光誘起電子移動の速度も電場により変化することを見い出すとともに、その効果は作用する電場の方向に大きく依存することを見い出した。光誘起電子移動反応を示す電子供与体と受容体あるいは両者をメチレン鎖で連結させた分子をポリマー中に分散させ、発光および吸収の電場効果を調べることにより、電子移動反応初期過程、電荷再結合過程および電荷分離過程に対する電場効果を明らかにした。昨年度からの継続であるカルバゾールとテレフタル酸の組み合わせに関して引き続き調べ、エキサイフレックス蛍光の電場消光が光キャリアー生成によるものであることを光電流およびその光励起スペクトルの測定により明らかにした。また、単調なメチレン鎖の長さ依存性があることも確かめることができた。

さらにこの電子移動反応系以外にも、たとえばピレンとジメチルアニリンの系に関して同様の実験を行ない、均一分散系における光誘起電子移動反応が外部電場により変化を受けるのは一般的であることを示すことができた。またピレンの励起二量体形成反応に対する電場効果を調べ、光誘起電子移動反応以外の励起ダイナミクスも外部電場により変化しうることを見い出した。しかも、ピレンの場合、通常のサンドイッチ型のエキシマーと部分的な重なりを持つ別の型のエキシマーでは受ける電場効果が異なることを見い出した。均一分散系以外に、LB配向膜を用いて電子供与体と受容体を異なった層の単分子膜として累積し、構築した一方向に光誘起電子移動が起こる分子システムについても、電子移動反応の電場効果を発光の電場効果より調べた。その結果、電場効果は反応と電場の方向に大きく依存することがわかった。またLB膜中に単量体と二量体が存在する場合、電子移動反応およびその電場効果が両者で大きく異なることを、例えばチアシアニンあるいはオキサカルボシアニンとビオローゲンの組み合わせに関して明らかにした。
尿路結石蛋白;オステオポンチンがなぜ蓚酸カルシウム結晶に強い親和性を有するのか

【目的】尿路結石のマトリックス成分の一つであるオステオポンチン(OPN)の構造上のどの部分が結石形成に深く関与するのかを検討した。【方法】【結果】【結論】nOPNはシードクリスタル法のみならず全尿法でも抑制活性を有していたことにより、生体内でも結石形成に対して重要な役割をはたしている可能性が示唆された。またこの抑制活性は蛋白の一次構造によるものではなく、OPNの高次構造や側鎖のシアル酸が深く関与していると考えられた。さらにこの抑制活性は結晶の凝集の阻害によるものであることが明らかとなった。尿路結石に含まれるオステオポンチンの生化学的特性を検討した。ヒト母乳より精製したオステオポンチンとリコンビナントオステオポンチンを作成し、これからがシュウ酸カルシウム結晶成長に与える影響をシ-ドクリスタル法にて検討するとともに、その形態学的変化をSEMにて調べた。又オステオポンチンは、側鎖にシアル酸を多く含むため、これを酵素を用いて消化したアシアロオステオポンチンも同じく用意した。この三者の活性はリコンビナント、オシアロ、ネイティブオステオポンチンの順に強い抑制活性を有していた。この事から、オステオポンチンの側鎖が、この活性には重要であり、蛋白の一次構造それ自体はあまり重要でないことが明となった。
均一バリア放電を用いた空気原料オゾナイザにおけるNOxの発生抑制とオゾン収率向上

強い酸化力を有するオゾンは水処理や大気浄化などに使用されている。本研究の目的は,FTIRを用いたオゾンガス中の窒素酸化物(NOx)濃度の測定法の構築と,空間一様に発生するバリア放電(APTD)を用いたオゾン発生器において,放電装置のギャップ長や放電場のガス圧力などがオゾンや窒素酸化物の発生特性に及ぼす影響を調べることである。研究の結果,(1)換算電界の低減によりN2Oの発生率を低くできたがオゾン生成率も低下した。(2)APTDと従来のバリア放電の組合せにより,APTDモードよりもオゾン発生効率を向上できることと,従来のバリア放電モードよりもN2O発生率を減少できることを明らかにできた。オゾンは強い酸化力を有しており,上下水道や室内空気の浄化などの分野で使用されている。オゾンの発生法は,発生効率の高いバリア放電法が主流であるが,空気を原料にしてオゾンを生成すると,生成されたオゾンガスには自然分解できない一酸化窒素(NO)や地球温暖化係数の高い亜酸化窒素(N2O)などの副生成物が含まれてしまう問題がある。したがって,これら副生成物の発生を抑制した空気原料オゾン発生器の開発が望ましい。本研究の目的は,空間一様に発光するバリア放電を用いた空気原料オゾン発生器による窒素酸化物の発生抑制効果とオゾン生成効率を明らかにすることである。この研究目的の達成に向けて,平成25年度は次の研究を実施した。1.長光路ガスセルを備えたフーリエ変換型赤外分光光度計(FTIR: Fourier Transform Infrared Spectroscopy)を用いて,空気原料オゾン発生器により生成されたオゾンガスに含まれる副生物の分析し,オゾンガス中の副生成物は,五酸化二窒素(N2O5),N2Oおよび硝酸(HNO3)であることを確認した。2.生成されたオゾンガスの温度を250°C程度まで高くすると,熱分解のためオゾンガス中のN2O5の量が減少し,NOや二酸化窒素(NO2)になることを確認した。3.生成されたオゾンガスの温度を250°C程度まで高くしてもN2Oの量はほとんど変わらないことを確認した。4.オゾンガス中のN2O濃度を評価すれば,放電装置からの熱の影響を受けることなくNOxの発生抑制効果を評価できることがわかった。5.校正ガスを用いてN2Oの吸光度からN2Oの濃度を測定できるようにし,オゾンガス中のN2O濃度を定量評価できるようにした。オゾンは強力な酸化力を有しており,上下水道の浄化や室内空気の浄化などの分野で使用されている。オゾンの発生には,発生効率の高いバリア放電法が主流である。空気を原料にしてオゾンを生成すると,生成されたオゾンガスには自然分解できない一酸化窒素(NO)や地球温暖化係数の高い亜酸化窒素(N2O)などの副生成物が含まれてしまう。本研究の目的は,空間一様に発光するバリア放電を用いた空気原料オゾン発生器において,ギャップ長や放電場のガス圧力がオゾン生成効率や窒素酸化物の発生抑制効果に及ぼす影響を明らかにすることである。平成26年度は,平成25年度に構築したオゾンガスとN2Oの定量評価法を用いて,バリア放電装置のギャップ長や放電場のガス圧力がオゾン生成効率(g-O3/kWh)やN2Oの発生率(g-N2O/kWh)に及ぼす影響を調査した。以下に得られた成果を要約する。(1)実験で使用したバリア放電装置への注入エネルギーが200 J/L以下のとき,放電場のガス温度は40°C程度であった。この注入エネルギー領域で実験を行えば,バリア放電装置を冷却しなくても,ギャップ長や放電場のガス圧力がオゾンやN2Oの発生率に及ぼす影響を調査できる。(2)バリア放電装置のギャップ長を大きくすると,放電維持電圧と分子数密度から求めた換算電界が低下するので,オゾン生成効率とN2Oの発生率が低下する。(3)放電場のガス圧力を高くすると分子数密度が増えて換算電界が低下するので,オゾン生成効率とN2Oの発生率が低下する。(4)同一注入エネルギーにおけるオゾン生成効率の低下はN2O発生率の低下よりも小さい。電気電子工学ほぼ予定通り,長光路ガスセルとFTIRによるオゾンガス中の副生成物の分析と副生成物発生特性を解明できた。また,副生成物の発生抑制効果を定量評価するための指標を決定できた。次年度は,構築した副生成物の発生抑制効果評価法を用いて,ギャップの長さやガス圧力を変えたときのオゾン生成効率とN2Oの発生抑制効果への影響を実験的に明らかにしていく。また,得られた成果を国内外の学会で発表する。研究成果報告書を作成し提出する。

校正ガスの準備が可能なNO,NO2ならびにN2Oについて,定量評価法を構築する計画であった。今年度の研究活動により,1.熱の影響を受けやすいNO2を直接的な性能評価指標とするのは不適切であること。2. NOはNO2熱分解により発生するため,NO2を直接的な性能評価指標とするのも不適切でること。3. N2Oは熱の影響を受けにくいため,N2Oを直接的な性能評価指標とするのは適切であることを明らかにできた。以上のことから理由は,性能評価のために購入すべき校正ガスの種類が減ったためである。オゾン発生器の部品製作費用や乾燥空気などの消耗品購入費用として使用する。
1920-30年代「大日本帝国」における総合・大衆雑誌の中の心象地理に関する研究

平成16年度は、1920-30年代日本のメディア環境について調査するとともに、当時、内地で発行されていた主な雑誌(『改造』『中央公論』『婦人公論』『文芸春秋』『キング』『主婦之友』『婦人倶楽部』『アサヒグラフ』)に眼を通し、当時の「心象地理」とかかわりの深いテクストジャンルを幾つか抽出した。前年度のこの調査結果を受け、平成17年度は、『主婦之友』を中心とした(婦人雑誌を含む)。大衆雑誌における国民表象の問題を誌面の視覚化と読者の反応の相互関係に焦点を当てて考察する研究を主に行った。考察にあたっては、文化ナショナリズム研究、クロス・ジャンル研究、他者・自己表象研究、写真研究、言説分析、出版史研究、メディア研究の各分野の手法を、適宜、採用した。また、学会以外の研究会で、二度、本研究の概要を発表し、複数の分野に渡る他の研究者たちの批判を仰ぎ、有益な情報と助言を得た。本研究成果の一部は、『比較文學研究』第88号(2006年/平成18年)に発表される予定である。なお、本年度はこの他にも二本の小論が受理された。ただ、時間的・経済的制約から、台湾、朝鮮半島の雑誌については簡単な予備調査しかできなかったのは、残念であった。今後は、内地の雑誌に関する今回の研究成果をさらに発展させ、内地の総合雑誌と大衆雑誌における国民表象とその受容の差異の分析を進めるとともに、国民表象の流布と消費に関する内地・外地の比較研究にも取り組んでいきたい。平成16年度は、研究対象である1920-30年代「大日本帝国」内で発行されていた古雑誌のうち、当時の「内地」で出版された日本語大衆雑誌(『キング』『主婦之友』など)を中心に、調査を行った。この調査を通して、雑誌メディアの表象を通じて反復・継承されていく心象地理を明らかにする上で具体的に分析していくべき現象とテキストジャンルをいくつか抽出した。目下、これを受けた形で、日本語の総合雑誌(『中央公論』『文芸春秋』など)やグラフ誌・週刊誌を調査中である。平成17年度は、これらの現象から浮かび上がる心象地理を、クロス・ジャンル研究的手法・歴史学的手法・歴史社会学的手法・文化学的手法を用いて、詳細に分析・検討する予定である。また、上述した研究に価する現象に関する、日本語、英語による先行研究と、これらの現象の考察に資すると考えられる、帝国/植民地主義と大衆文化の相関に関連する理論的研究を渉猟し、個別研究と理論研究の両側面から、従来の研究の動向を概観した。今後は、これら従来の研究の成果を批判的に受け継ぎながら、韓国における関連研究も踏まえつつ、当該雑誌テクストの具体的分析を行っていく。さらに、本年度は、朝鮮半島および台湾で同時期に発行されていた雑誌の予備調査も行った。平成17年度は、引き続き、重点的にこれらの雑誌の調査を行い、「内地」の雑誌テクストの分析結果と比較・考察していきたい。
胆管癌幹細胞の単離と新規治療標的の同定に関する研究

当科における肝内胆管癌77例の手術検体を用いてCD90の発現を原発巣及びリンパ節転移巣に対して免疫組織学的染色を行い,臨床病理学的所見や予後との関連について検証した.さらにヒト肝内胆管癌細胞株を用いて,フローサイトメトリーで単離したCD90陽性/陰性細胞の特性解析を行った.肝内胆管癌原発巣においてCD90の発現は77例中25例でみられた.CD90発現はリンパ節転移との有意な相関関係が認められた.さらに癌転移リンパ節についてもCD90で免疫染色を行ったところ,原発巣と転移リンパ節との間にCD90発現に関して相関性が見られた.生存分析ではCD90陽性症例は無再発生存期間,全生存期間ともに有意に短く, CD90発現は独立予後因子の一つであった.2つのヒト肝内胆管癌の細胞株を用いて解析したところ,分離したCD90陽性細胞は陰性細胞と比較し有意に高い遊走能を示した.また転移に関わる細胞機構とされる上皮間葉転換(EMT)に関する遺伝子発現を定量PCRで確認したところ,CXCR4とMMP7の高発現を示した.CD90発現のノックダウンによりこれらの発現は低下した.CXCR4とMMP7はWnt/b-catenin signaling pathwayの標的遺伝子とされている.CD90陽性細胞で有意にWnt/b-catenin signaling活性が上昇していた.一方Wnt/b-catenin阻害薬をCD90陽性細胞に作用させると,CXCR4とMMP7の発現が低下した.本研究は,肝幹/前駆細胞マーカーであるAFPおよびCD90と胆管細胞癌幹細胞との関係を細胞生物学的に検証するとともに,胆管細胞癌幹細胞が引き起こす癌の転移メカニズムを検討し,胆管細胞癌に対する新規治療ターゲットの同定を目的とする.本年度は胆管細胞癌切除標本におけるAFP・CD90発現の検証をおこなった.胆管細胞癌手術検体に対する免疫組織染色:これまでに京都大学肝胆膵移植外科において施行された胆管細胞癌手術での摘出標本に対しanti-humanAFP抗体およびanti-human CD90抗体を用いて免疫染色を行い,腫瘍部・非腫瘍部におけるAFP・CD90の発現を検証した.その結果を元にAFP・CD90発現症例の予後解析を行った.胆管細胞癌症例の予後(全生存率・無再発生存率)をKaplan-Meire曲線により検証したとともに,AFP・CD90発現とその他の各種臨床因子(分化度・脈管浸潤有無・リンパ節転移有無・血清ビリルビン値、PT値、血小板値、ICGR15値など)を含めた単変量解析・多変量解析を行いAFP・CD90発現の予後に与える影響を検証した.その結果,CD90は胆管細胞癌のリンパ節転移と強い相関を持っており,CD90陽性胆管細胞癌にはケモカインレセプターであるCXCR4を強発現している症例が多いことが判明した.次に,胆管細胞癌株におけるAFP陽性CD90陽性細胞の単離を行なった.AFP発現細胞を可視化するためにHuman AFPの転写調節領域(enhancer/promoter)をクローニングしAFP転写調節下にE GFPを発現するプラスミドベクターを作成した.そのベクターをヒト胆管細胞癌細胞株へ遺伝子導入を行い,安定導入株を得ることができた.当初の予定通り概ね順調に研究は進んでいる.本研究は,肝幹/前駆細胞マーカーであるAFPおよびCD90と胆管細胞癌幹細胞との関係を細胞生物学的に検証するとともに,胆管細胞癌幹細胞が引き起こす癌の転移メカニズムを検討し,胆管細胞癌に対する新規治療ターゲットの同定を目的とする.前年度において,胆管細胞癌切除標本におけるAFPとCD90発現の検証をおこなったところ,CD90は胆管細胞癌のリンパ節転移と強い相関を持っていることが判明した.本年度は胆管細胞癌株におけるAFP陽性CD90陽性細胞の単離を行なった.AFP発現細胞を可視化するためにHuman AFPの転写調節領域(enhancer/promoter)をクローニングしAFP転写調節下にEGFPを発現するプラスミドベクターを作成した.そのベクターをヒト胆管細胞癌細胞株へ遺伝子導入を行い,複数の胆管癌細胞株に置いて安定導入株を得た.これを用いてin vitroで検証したところ,フローサイトメトリーでAFP発現の有無やCD90発現の有無に置いて細胞を分離することができた.AFP陽性かつCD90陽性細胞は,CD90陰性細胞よりも定量PCRにてケモカインレセプター(CXCR)4およびマトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)7を含む上皮間葉転換関連遺伝子のより高い発現を示し,さらによりwoundhealing assayやmigration assayにおいて高い遊走能を有していることがわかった.これらによりCD90陽性胆管癌細胞はより高い転移能をもち,臨床的に重要な意義を持つことが示唆された.当初の予定通り概ね順調に研究は進んでいる.当科における肝内胆管癌77例の手術検体を用いてCD90の発現を原発巣及びリンパ節転移巣に対して免疫組織学的染色を行い,臨床病理学的所見や予後との関連について検証した.さらにヒト肝内胆管癌細胞株を用いて,フローサイトメトリーで単離したCD90陽性/陰性細胞の特性解析を行った.肝内胆管癌原発巣においてCD90の発現は77例中25例でみられた.CD90

発現はリンパ節転移との有意な相関関係が認められた.さらに癌転移リンパ節についてもCD90で免疫染色を行ったところ,原発巣と転移リンパ節との間にCD90発現に関して相関性が見られた.生存分析ではCD90陽性症例は無再発生存期間,全生存期間ともに有意に短く, CD90発現は独立予後因子の一つであった.2つのヒト肝内胆管癌の細胞株を用いて解析したところ,分離したCD90陽性細胞は陰性細胞と比較し有意に高い遊走能を示した.また転移に関わる細胞機構とされる上皮間葉転換(EMT)に関する遺伝子発現を定量PCRで確認したところ,CXCR4とMMP7の高発現を示した.CD90発現のノックダウンによりこれらの発現は低下した.CXCR4とMMP7はWnt/b-catenin signaling pathwayの標的遺伝子とされている.CD90陽性細胞で有意にWnt/b-catenin signaling活性が上昇していた.一方Wnt/b-catenin阻害薬をCD90陽性細胞に作用させると,CXCR4とMMP7の発現が低下した.1.癌幹細胞としての特性解析A. in vitroでの特性解析:単離したAFP陽性またはCD90陽性細胞・陰性細胞をsingle-cell cultureし,その経過から自己複製能・分化能を検証する.それぞれMTS assayにより増殖能の比較を行うとともに,アガロース培地での足場非依存性増殖能やsphere形成能を比較検証する.B. in vivoでの特性解析:単離したAFP陽性CD90陽性細胞・陰性細胞をそれぞれNOD/SCIDマウスの皮下に同数細胞移植することにより腫瘍形成能の差を比較検証する.また形成された腫瘍を免疫染色やフローサイトメトリーで解析することにより自己複製能・分化能を検証する.2.転移能の解析:AFP陽性CD90陽性細胞・陰性細胞の上皮間葉系転移関連遺伝子発現を比較するほか,migration assayやwound-healing assayにより細胞遊走能を比較検証する.CD90陽性細胞が高い転移能を有するメカニズムの解明を今後の研究の目標とする.具体的には,AFP陽性CD90陽性細胞・陰性細胞において,既知の上皮間葉転換に関連しているとされるシグナル経路であるSmad2/3のリン酸化をウェスタンブロッティングなどにて比較検証しTGFb/Smad pathwayとの関連を調べる.続いてAFPとCD90のsiRNAや強制発現ベクターを用意し,それぞれのGain/Loss of functionにより各signaling pathwayの活性化に変化が生じるかを比較検証する.また臨床的には上述のようにCD90陽性胆管癌はリンパ節転移と相関することが示されている.CXCR4はケモカインレセプターであり,これを中和する抗体を用いることで細胞の遊走能が抑制されるのか,などの機能変化をin vitroで観察するとともに,動物実験モデルにおいてリンパ節転移との関連を検討しそれを抑制する方策についても検討する.次年度に癌幹細胞におけるDNA次世代シークエンスなどのDNA解析を行う予定であり,その解析費用の一部とするため.
似顔絵生成システム開発による認知的ビジョンの研究

本研究課題では、似顔絵生成システム開発を通して、認知的視覚実現に必要な機能を現状のコンピュータビジョン技術の基盤上に構築することを目指し、以下に述べる研究項目で研究を遂行した。(a)パターンデータベースの構築と図形処理ツールの整備:TVカメラによる直接的データと顔写真を介する間接的データを想定して、実験用に顔画像データベースを構築した。顔部品認識、個人性特徴の抽出の方式開発に伴う原理的問題の可否、難易についての実験的検討を十分に保障した。また、横顔などの角度次元や笑顔などの顔表情のデータも併用することし、顔のもつ個人性特徴の多元的抽出の検討も可能性にした。(b)似顔絵認識ベースと顔の個人性特徴抽出機構の構築:専門家が描いた似顔絵(線画)を収集し、これと画像処理で抽出された顔線画像を実験的に比較した結果に、種々のデフォルメ機構の可能性を検討した(平均顔+中割り、強制錯視)。また、これを強化するために、錯視などの認知心理学的知見に基づき、個人性特徴の抽出法と選択法の統一を図った。(c)パターンデフォルメ推論エンジンの開発:統計的手法により種々の標準パターンを導入し、顔の個人性特徴抽出の観点からそれらの有効性を比較検討した。更に、この標準パターンと似顔絵を生成するプロセスとを結合し、似顔絵の誇張表現の可能性を評価した。ここでも錯視などの人の目の見え方の認知的特性を活かしたデフォルメ制御機構を具体的に構築した。(d)似顔絵ワークステーションの構築:以上の検討結果を集約して、ワークステーション上に似顔絵コノピュータを構築して、性能評価を実施した。(e)その他:(1)(パターン表示用のモジュールの開発)空間次元を付加して似顔絵パターン拡張的に構成したり、パターンの表示効果を上げる為に、3次元簡易グラフィクスシステム開発にも着手した。ここでは、多方向の角度からの基礎データの収集と顔部品図形の発生、消滅のモデル化の検討を行った。(2)(部品認識手法と顔パターン自動記述法の検討)カメラ入力した濃淡画像から直接顔画像の初期記述を生成するために、顔の画像処理と認識の基礎的実験を行った。また、線図形の再標本化(resampling)問題を検討して、指定した境界点数まで削除/追加するモードのプログラムを開発し、顔部品の形状を損なわない顔記述の自動生成の可能性を確認した。
サクラマスとイワナのDNAフィンガープリントによる個体判別と家系集団解析への応用

サクラマスの塩分耐性および体型その他数量形質に関する遺伝性と有用形質の育種学的研究を進めているが、その中で、幾つかの形質について個体間に変異がみられ、特に、稚魚期の塩分耐性に関しては家系による違いとその遺伝性が明らかにされ、育種目標になり得ることを明らかにした。また体型については頭長比、体高比について、個体差が大きく家系集団の分離飼育が不可欠であった。本研究では半兄弟10家系に更に全兄弟10集団および、半兄弟10集団を加え、合計30家系を作り出した。これらの家系を全て分離飼育することは施設の関係で極めて困難な状態となり、個体識別に使用されるPITダグを使用し、更に生化学的識別法として最近注目されているDNAフィンガープリント法について検討した。特に本研究ではアイソトープを用いないコールドプロープ法について検討し、相DNAのフィンガープリントのバンドの検出を試みた。材料として、サクラマスと同様に残留型と降河型の2型分化の起る方ショロコマを使用した。核DNA(以下nDNA)の抽出には血液を用い、フェノール、フェノールクロロフォルム、クロロフォルム処理により除蛋白し、その後エタノール沈澱により高分子nDNAを得た。このようにして得られたnDNAを5μgとり、四塩基認識制限酵素のHaeIIIで37°Cで一晩処理し、0.8%アガロースゲルで電気泳動を行った。DNAが適当に分離したところで泳動を終了し、DNAをアルカリトランスファーによりゲルからナイロンメンブランへ移し、そのナイロンメンブランを乾熱処理(80°C,30分)することによりDNAをナイロンメンブランに固定した。ブローブにはM13を使用し、ハイブリダイゼーションにはランダムプライム法によりジゴキシゲニン-11-αUTPが標識されたものを用いた。バンドの検出にはELISA法を用いた。4-20Kbの位置に個体差のある10本程度のバンドが検出され、個体識別が可能と判断された。
ヒト膀胱平滑筋のK_<ATP>チャネルの分子薬理学的研究と新規K_<ATP>開口薬の検索

尿意切迫、頻尿、尿失禁といった症状を呈する過活動膀胱(overactive bladder : OAB)に対し、本研究はヒト膀胱平滑筋のK_<ATP>チャネルの分子薬理学的特性を解明し、OAB治療に対して臨床応用が可能なK_<ATP>チャネル開口薬の開発を目指した。K_<ATP>チャネルはチャネルポアを形成する内向き整流性K^+チャネル(Kir6.0)とスルフォニルウレア受容体(SUR)によって構成される。Kir6.0ファミリーとしてKir6.1とKir6.2が、SURファミリーとしてSUR1、SUR2A、SUR2Bがクローニングされている。従来血管をはじめとする平滑筋型K_<ATP>チャネルは主にKir6.1+SUR2Bの組み合わせであると考えられてきた。パッチクランプ法を用いた検討では膀胱平滑筋K_<ATP>チャネルは内向き整流性を示し、約80pSのチャネルコンダクタンスを有し、高いATP感受性を有していた。これらの特性に加えRT-PCR法やWestern-blotting法でKir6.2が検出されたことより、ヒト膀胱平滑筋では主にKir6.2が機能的に発現していると考えられた。さらにヒト膀胱平滑筋のSURサブタイプを検討するとSUR2 agonistであるpinacidil、SUR1 agonistであるdiazoxideいずれによってもK_<ATP>チャネルは活性化され、Western-blotting法でもSUR1、SUR2いずれも検出された。この結果よりヒト膀胱平滑筋においてはSUR2B+SUR1が発現している可能性がある。また同時に比較的組織として取り扱いやすいブタ尿道平滑筋を用いてSURサブタイプを解析したところ、SUR2Bに加えてSUR1が機能的に発現していることが明らかとなりこれを報告した。これらの我々が本研究において発見した結果は新しい平滑筋型K_<ATP>チャネルの分子構成の概念を導くものであると考えられる。K_<ATP>チャネルは静止膜電位付近において比較的活性化されやすいK^+チャネルであり、その開口薬は膜過分極をもたらし平滑筋においては静止膜電位と静止筋緊張を安定化すると考えられ、泌尿器科領域においては過活動性膀胱への治療応用が期待されている。K_<ATP>チャネルはチャネルポアを形成する内向き整流性K^+チャネル(Kir)及びスルフォニルウレア受容体(SUR)という少なくとも2種類の蛋白によって構成され、このKirとSURにはそれぞれ数種類のサブタイプが存在し、それぞれのサブタイプの組み合わせがK_<ATP>チャネルの特性の決定に大きく関与していると考えられている。我々はより膀胱平滑筋に選択的なK_<ATP>チャネル開口薬の開発を目的としてヒト膀胱平滑筋K_<ATP>チャネルのKir, SURのサブタイプの同定を試みている。単離ヒト膀胱平滑筋細胞のK_<ATP>チャネルの特性をパッチクランプ法を用いて検討したところ、細胞内ATP感受性や単一チャネルコンダクタンスが血管平滑筋K_<ATP>チャネルで報告されている特性とは明らかに異なっていた。血管平滑筋K_<ATP>チャネルでは主にKir6.1が発現していると考えられているが、我々が観察した膀胱平滑筋K_<ATP>チャネルは既報のKir6.2を有するK_<ATP>チャネルの特性と極めて類似していた。一方SURに選択性のあるチャネル開口薬を用い薬理作用を検討したところ血管平滑筋と同様にSUR2Bを有するK_<ATP>チャネルの特性と類似した傾向が観察された。分子生物学的手法を用いて膀胱平滑筋K_<ATP>チャネルのKirサブタイプの発現を検討したところRT-PCR法によるmRNAレベル、ウェスタンブロット法を用いた蛋白レベルいずれにおいてもKir6.2サブタイプの発現が検出されたし今後SURサブタイプに関しても同様の検討を行う予定である。膀胱平滑筋K_<ATP>チャネルを構成する蛋白が明らかとなれば、次には培養細胞に膀胱平滑筋型K_<ATP>チャネルを再構築しより膀胱平滑筋に選択的なK_<ATP>チャネル開口薬を検索することが可能となる。今後はアストラゼネカ社、Wyeth-Ayerst Research社との産学共同研究も進めていく予定である。この結果よりヒト

膀胱平滑筋においてはSUR2B+SUR1が発現している可能性がある。また同時に比較的組織として取り扱いやすいブタ尿道平滑筋を用いてSURサブタイプを解析したところ、SUR2Bに加えてSUR1が機能的に発現していることが明らかとなりこれを報告した。これらの我々が本研究において発見した結果は新しい平滑筋型K_<ATP>チャネルの分子構成の概念を導くものであると考えられる。
胚性幹細胞研究に基づく肝癌幹細胞増殖機構の解明

胚性幹細胞(ES細胞)特異的転写因子のZfp57は,ヒトがん細胞において,imprinting遺伝子であるIGF2のloss of imprintingを介してAKTをリン酸化し,造腫瘍性を亢進させるとともに,血行性転移能獲得に中心的な役割を果たすことを明らかにした.Zfp57は「がん遺伝子」として機能する.2食道癌,胃癌,大腸癌,膵癌,肝癌,乳癌などのヒト癌組織を用いてZfp57の発現を検討した結果,様々な癌組織でZfp57蛋白の発現が認められることが明らかとなった.特に大腸癌で高頻度に発現が認められた.3悪性腫瘍由来のHT1080細胞を用いて,Zfp57過剰発現細胞とZfp57ノックダウン細胞を作成し,それらの増殖能を評価した.その結果,Zfp57過剰発現細胞は増殖能が高く,一方,Zfp57ノックダウン細胞は増殖が抑制されることが明らかとなった.さらにそれらの細胞をマウスの皮下へ移植したところ,Zfp57過剰発現のHT1080細胞は増殖能が高く,一方,Zfp57ノックダウン細胞は増殖能が低下することが明らかとなった.4Zfp57の下流分子について検討したところ,Imprinting geneに加えてInsulin like growthfactor (IGF) 2が制御を受けていることが明らかとなった.Zfp57を過剰発現させた細胞は増殖能が高く,足場非依存性に増殖するとともにIGF2の発現が亢進していた.これにIGF2の中和抗体を作用させたところ,HT1080細胞の足場非依存性増殖能が低下することが明らかとなった.つまり,Zfp57高発現⇒IGF2の高発現⇒HT1080細胞の足場非依存性増殖という図式が成り立つことが明らかとなった.5ES細胞も悪性腫瘍由来の培養細胞と同じようにNanogを過剰発現するとZfp57を介して足場非依存性増殖が促進されることが明らかとなり,このことが「がん幹細胞」と共通する生物学的な特性なのではないかと推察された.胚性幹細胞(ES細胞)の研究から,ES細胞特異的な転写因子としてZfp57遺伝子が同定された.この遺伝子はStat3やOct3/4のES細胞特異的な転写因子の下流に存在するとともに,Nanogの支配を受けることを見出した.ES細胞でこの遺伝子を過剰発現させると,足場非依存性増殖が亢進するとともに,ヌードマウスに移植したさいには造腫瘍が亢進することが判明した.また,ヒト線維芽細胞由来の培養細胞でもこの遺伝子を過剰発現させると,足場非依存性増殖が亢進し,悪性転化の可能性が示唆された.以上より,Zfp57遺伝子が,ヒト「がん細胞」の増殖にも深く関わっている可能性を見出し,ヒト由来がん培養細胞を用いてZfp57遺伝子の機能を解析した.Zfp57は,Nanogの支配を受けるとともに,imprinting遺伝子のIGF2のloss of imprintingを介してAKTをリン酸化し,がん細胞の増殖にも深く関わっていることを見出した.また,ヌードマウスの血行性転移モデルを用いて解析した結果,Zfp57を過剰発現した場合にのみ血行性転移(肺転移)が形成された.一方,Zfp57を過剰発現させてもIGF2をノックダウンすると,血行性転移は形成されなかった.以上より,Zfp57はimprinting遺伝子のIGF2のloss of imprintingを介して,血行性転移能獲得にも深く関わっていることを見出した.ヒトがんの臨床検体では,食道癌,胃癌,大腸癌,膵癌,乳癌などでZfp57の過剰発現を認め,特に大腸癌肝転移巣やリンパ節転移巣で発現がきわめて亢進していた.以上より,Zfp57遺伝子は,ES細胞特異的な転写因子であるだけでなく,ヒトがんにおいても増殖と血行性転移能獲得の重要な遺伝子として機能していることが明らかとなった.胚性幹細胞(ES細胞)特異的転写因子のZfp57は,ヒトがん細胞において,imprinting遺伝子であるIGF2のloss of imprintingを介してAKTをリン酸化し,造腫瘍性を亢進させるとともに,血行性転移能獲得に中心的な役割を果たすことを明らかにした.Zfp57は「がん遺伝子」として機能する.申請者らはこれまでに胚性幹細胞(ES細胞)と癌細胞株の詳細な遺伝子profilingの結果,Zfp57遺伝子が両者に共通した増殖関連転写因子であることを明らかにした.さらに申請者らは,Zfp57が幹細胞の未分化能維持に欠かすことのできないSTAT3やOct3/4の下流に位置する転写因子であり,Nanogを介してβ-catenin転写経路の下流にも位置し,胚性幹細胞や癌細胞株の自己複製能と増殖能にきわめて重要な役割を担っていることを明らかにしつつある.NanogはES細胞や癌細胞の重要な転写因子であり,ヒトの各種癌において,その高発現が予後不良の因子と報告されている.しかし,これまでZfp57遺伝子そのものについては,十分な検討が行われていなかった.そこで,申請者らは初年度に以下の研究を行い成果をあげた.【研究成果】(1) Enhancer領域を改変したさまざまなZfp57遺伝子のクローンを作成して,Nanogの発現とZfp57の発現との関係について検討を行った.

その結果,Nanogは転写因子としてZfp57のすぐ上流に位置し,Zfp57はNanogの直接支配を受けることを明らかにした.(2) (1)の結果をもとに,Zfp57遺伝子のenhancer領域を改変した様々なvectorを用いて解析を進めた結果,Zfp57遺伝子の「-210+79」領域にNanogのbinding siteが存在することが明らかとなった.さらに,Nanogのbinding siteに関する過去の報告をもとに検討した結果,同領域の3か所の「ATT」領域がNanogのbinding siteであることがほぼ確定した.当該年度に計画した研究は以下のごとく達成しており,概ね順調に進展していると判断いたします.2ヒトの各種癌の切除標本の病理検体を用いて,NanogとZfp57の発現を詳細に検討し,臨床的な意義を明らかにしました.初年度の目的は,(1) Nanogは転写因子としてZfp57のすぐ上流に位置し,Zfp57はNanogの直接支配を受けていることを明らかにすること,(2) Zfp57遺伝子のenhancer領域の解析を進め,Nanogのbinding siteを明らかにする2点であった.(1) Enhancer領域を改変したさまざまなZfp57遺伝子のクローンを作成して,Nanogの発現とZfp57の発現との関係について検討を行った結果,Nanogは転写因子としてZfp57のすぐ上流に位置し,Zfp57はNanogの直接支配を受けることを明らかにした.(2) Zfp57遺伝子のenhancer領域を改変した様々なvectorを用いて解析を進めた結果,Zfp57遺伝子の「-210+79」領域にNanogのbinding siteが存在することが明らかとなった.さらに,Nanogのbinding siteに関する過去の報告をもとに検討した結果,同領域の3か所の「ATT」領域がNanogのbinding siteであることがほぼ確定した.以上より,初年度の目的はほぼ達せられており,研究はおおむね順調に進展していると自己評価いたします.2当該年度は,悪性腫瘍由来のHT1080細胞を用いて,Zfp57過剰発現細胞とZfp57ノックダウン細胞を作成し,それらの増殖能をマウスの皮下移植モデルを用いて評価したが,今後はさらにマウスを用いて肺転移能を評価する予定である.マウスの大腿四頭筋内に各種細胞を移植し,Zfp57の発現状況が肺転移形成能にどのように影響するのかを評価する.3Zfp57の下流分子について検討したところ,Zfp57高発現⇒IGF2の高発現⇒HT1080細胞の足場非依存性増殖という図式が明らかとなったが,今後は上皮系悪性腫瘍(癌)由来の培養細胞を用いて,同様の評価を行い,上皮系細胞においても同様の図式が成り立つかどうかを評価する.(1)まずはじめに,Oligo DNAを用いたPull down assay (in vitro)やChromatin immuno-precipitation (in vivo)を行い,Zfp57遺伝子上流域のNanogのbinding siteを確定いたします.それをもとに論文を投稿します.(2)ヒトの各種癌の切除標本の病理検体を用いて,NanogとZfp57の発現を詳細に検討し,臨床的な意義について明らかにします.(3)各種チップを用いて,Zfp57の下流遺伝子の探索を行います.これまでの研究でimplinting geneがそのターゲットの有力候補の一つであることを突き止めています.これが直接的なものなのか,あるいは他の因子を介した間接的なものなのかを明らかにする必要があります.
生体で機能する糖脂質の機能解明を目指した支持脂質二重膜系での観測手法の確立と適用

細胞膜の機能を人工細胞膜を用いて解明する。本研究では特に「糖鎖」に着目する。細胞表面に存在する糖鎖は「細胞の顔」と言われており、重要な役割を担っているが構造の複雑さ等から未解明なことが多く残っている。本研究では細胞膜を固体基板上に展開した人工細胞膜を利用する。この人工細胞膜はナノスケールの構造や分子の動きを観察できる点に強みがある。細胞膜中の糖鎖の動きや形を直接観察することで未解明の機能解明を試みる。観察対象としては大腸菌が持つ糖鎖の一種を予定している。
官能基交換型新規不斉合成反応の開発研究

1.Meerwein-Ponndorf-Verley(MPV)還元は古い反応であるがガルボニル基の重要な還元反応の一つである。しかしながらキラルアルコールを不斉源として用いた不斉MPV反応の鏡像体過剰率は20%以下であることが報告され、高選択的な不斉還元反応は実現されていなかった。高選択的不斉MPV反応を実現するためには遷移状態においてキラルアルミニウムアルコキシドとカルボニル化合物との間にキレーション構造の立体配座を固定することが重要であると考え、基質を固定するフッカーの役割を担う官能基としてメルカプト基をキラルアルコールに導入することを計画し種々検討した。(S)-カンファースルホン酸から誘導した光学活性メルカプトアルコールとα,β-不飽和カルボニル化合物をルイス酸(ジメチルアルミニウムクイロリド)を用いて反応させたところ、新しい高選択的不斉Tandem Michael-MPV反応を開発することができた。反応基質としては脂肪族、芳香族どちらの置換基を有するα,β-不飽和ケトンにおいても反応は良好に進行し(収率73-90%)、後述する還元的脱硫反応を行うことにより96-99%eeの高いエナンチオ選択性で光学活性二級アルコールを得ることができた(論文投稿準備中)。2.還元的脱硫反応にはラネ-ニッケルが一般的に用いられているが二級アルコールをラセミ化することが知られている。この事実は有機イオウ化合物を用いる不斉合成において大きな問題点となっている。そこで、水素源として次亜リン酸ナトリウム-酢酸緩衝液を用いてラネ-ニッケルを反応させる反応剤が脱硫反応において二級アルコールのラセミ化を完全に防止できることを見いだした。(Tetrahedron Letters印刷中)。3.光学活性メルカプトアルコールを用いた光学活性モノチオアセタールの新反応剤AgNO_2-I_2系による光学活性α-ヒドロキシアルデヒドの合成を行った(Heterocycles投稿中)。
占領期都道府県軍政資料の収集・整理及び分析とその効果的な公開利用方式の確立

本研究計画では、「占領期都道府県軍政資料」(MG資料)を収集・公開し、その資料を効果的に利用できる状況をつくることを第1の目標とした。基本作業は、収集資料を(1)地方別・府県別、(2)時系列(その大部は「月例報告(月報)」)に整理・目録化し、(3)さらに政治・経済・教育などの項目ごとに「概要」を作成することである。(1)平成14年度16年度にかけて、米国国立公文書館でMG資料を計4回にわたって、基本資料約3万5000枚、関連資料3000枚を収集した。(2)全体会議(ブロック合同会議も含む)は、14年度は3回、15年度は2回、16年度は2回、17年度は1回の計8回開催した。またブロック研究会は、14年度が2回、15年度が6回、16年度は3回の計9回開催した。なお、研究協力者は、分担者を除いて最大時約46名で資料整理と解読、「概要」作成にあたった。(3)資料「コピー」の1セットを国立国会図書館現代資料室に17年度に寄贈した(確認・国立国会図書館主題情報部政治史料課大島康作氏発10月18日付メール「寄贈資料12箱分を昨日受領」)(4)「概要」は県により精粗があるが、「概要」だけで「A4版」2000頁と膨大な量となった。このため、最小限に縮小した。また資料収集の際の「目録」と報告書の「解説」を加えると1500頁以上となった。報告書が大部となるため、詳細目録・概要の掲載を3分の2程度とし、全てをCD-ROMに収録した。(5)研究協力者の大半がMG資料の読解に不慣れのため、地方占領組織、資料読解法、「概要」の様式と統一表記法などについて研究会で学び、また主要な訳語についても検討した。当該研究のための研究者養成の意味も果たした。また本研究計画は、MG資料を公開し、効果的に利用できるようにすることで、占領資料を用いた本格的な地方史・地域史研究を進めるための資料的な基盤整備となり、占領史研究を全体として新たな発展段階へと底上げすることに寄与するであろう。(1)米国国立公文書館で「占領期都道府県軍政資料」(MG)を2回にわたって収集した。第1回目は2002年8月14日9月15日、第2回目は2002年12月26日03年1月7日。2回とも荒敬・石田雅春(広島大学大学院生)があたった。収集結果は沖縄を除く全県のMG資料(約38000枚)を一応コピーしたが、コピー漏れ・コピーミスなどの取り直しが1割程度必要と思われる。(2)当初、ブロック研究会及び専門分野の研究のために複製コピーを4セット作成する予定であったが、全体会議における討議の結果、現在、沖縄に本土分1セット、東海北陸・関東ブロックにそのブロック分各1セット、九州・中四国・関西・北海道東北ブロックに各2セットを配布した。また適宜、概要作成の研究協力者に担当県分1セットを配布した。