hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ソーシャルワークの価値の可視化と習得－ワーカーの認識成長プロセスの解明－

ソーシャルワーカーの専門性の構成要素の一つであるスキルについては、実践の基盤とされるアセスメントに焦点を絞った。ソーシャルワークアセスメントスキルについて、プロセスの中でどのようなスキルを展開すべきかを示し、そのスキルを習得するための研修プログラムと、スキル評価指標を開発した。多様な対象に向けてその研修プログラムを展開しており、その受講者が、さらに講師になってプログラムを実施するという広がりを見せている。一方で研究成果全体を網羅した著書を出版し、個々のソーシャルワーカーが自らのスキルを評価しながらスキル向上をはかることも、ソーシャルワーカー集団が著書を参考に一緒に研鑽を積めるようにもした。一方、専門性の基礎にあたる価値規範については、専門職アイデンティティに焦点を絞った。それは、専門職アイデンティティが専門的価値を実現・実行するための基礎になるからである。また専門職アイデンティティの構成要素である「自己規定」と「対象者観」の成長プロセスを明らかにするため、福祉士養成課程卒業生14名(最終年度は10名)の経年インタビュー調査を実施した。その結果、役割認識については、卒業前から個別支援に偏重しており、卒後3年で自らの業務外のソーシャルワーク役割は認識されなくなること、自己規定については、「頼りにされる」かどうか対立する専門職像が卒業前に描かれているが、3年後には変容していた。対象者観については、「成長させてもらう」「教えてもらう」という捉え方と「支援対象者」という対立する捉え方があり、3年後にもそれは変化していなかった。2500名の精神保健福祉士を調査協力者とする質問紙調査を実施し、専門職アイデンティティ尺度の信頼性妥当性を検証し、バーンアウトや職務コミットメント等との関連を明らかにした。ソーシャルワーカーの認識(「自己規定」と「対象者観」)が、専門的価値を表す概念であるという前提の下、その成長プロセスを明らかにする研究に着手した。まず、2014年度に大学で精神保健福祉士受験資格をもって卒業した学生14名を調査協力者として、現時点での認識を明らかにするためのインタビュー調査を行った。また、ソーシャルワーカーの専門的価値を可視化するために、エキスパートPSWへのインタビュー調査計画を立てた。以上2つの質的調査は、目に見えない専門的価値を明らかにし、それらが何によって醸成されるかを解明するための基礎データを提供する。これらの調査と先行研究レビューを統合し、専門職養成教育における専門的価値の取り扱い、教育の仕方、自ら省察しつつ成長を志向するためのポイントを提示できると考えている。アセスメントプロセスと、そこで活用されるスキルを解明するため、2つの質的調査を実施してクライエントから求められるスキルと、エキスパートPSWのスキルを抽出した。これらの知見を基にして、アセスメントスキル研修プログラムを開発した。プログラム試行時の受講者からのフィードバック、受講者のスキル得点の変化をデータとして用い、それらを分析した。これらを踏まえて研修試行と修正を繰り返し、プログラムを完成させた。現在、研修プログラムの普及に向けて冊子を作成し、日本精神保健福祉士協会など、専門職団体に伝えていく。本研究の意義は、ソーシャルワークの要として重視されながらも、その定義も共有されておらず、方法論も明示されていないアセスメントプロセスについて、一定の指標を提示できたことである。実践現場への還元を意図し、「何をどのようにすべきか」という至極単純なスキル指標を明示し、そのスキル向上のために効果的な研修プログラムをあわせて提案しているところが実用性に富むと考えている。ソーシャルワーカーの「自己規定」と「対象者観」が、専門的価値をあらわす概念であるという前提を検証するために、先行研究レビューを行った。その結果、専門職アイデンティティが、専門的価値を実現・実行するための基礎になるものであるがため、自己規定は価値実践を可視化して捉えるための指標たりうることが明らかになった。対象者観についての論考は途上であり、これらをまとめて本研究の理論的枠組みとする予定である。精神福祉士養成課程卒業生13名(退職したため昨年度より1名減)の経年インタビュー調査の2回目を実施し、逐語記録に起こした。3年分の蓄積を待たずに、1回目の14名分データを分析し、実践に入る前のPSW0年生の認識の特徴を明らかにした。この結果から、養成課程教育において重視すべきことについての提言を行う論文を現在執筆中である。また、実践を1年経験した卒業生たちの役割認識の特徴も捉えられた。特筆すべきは、個別支援に偏重するようになったこと、不安は言及されなくなったが不満を抱えていること、個々の認識には実体験が伴うようになったことが大きな特徴である。詳細な分析は今年度の課題である。4つの精神保健福祉士協会都道府県支部の協力を得て、アセスメントスキル評価指標開発のための質問紙調査を実施した。一定の信頼性・妥当性を担保した尺度を作成できたので、学会誌に投稿した。さらにアセスメントスキル向上のための研修プログラムを2回実施し、前後比較データを取った。さらに3か月後の比較のため、調査票を配布しているので、今年度回収予定である。これらのプログラム評価を基に、これまで改良を重ねてきた研修プログラムについてもエビデンスが得られると考えている。ソーシャルワーカーの認識成長の促進要因と阻害要因を明らかにするための、エキスパートインタビュー調査については、全く進めることができなかった。ここが遅れることで、2つの質的調査結果を統合して可能になる質問紙調査とガイドブックの作成に着手できなかった。成果としては、以下の3点があげられる。

1.ソーシャルワークアセスメントプロセスを遂行するために必要なスキルは、行為と思考の両方にまたがっていることがあきらかになり、これについての評価指標は開発することができた。そこで今回は、そうした行為と思考の両面を支える価値に焦点を合わせた。「自己規定」と「対象者観」というソーシャルワーカーの認識が、専門的価値を現すツールになるという前提を置いてきたが、先行研究レビューにより、専門職アイデンティティという概念を用いて、その関係性を明確にし、理論枠組みを構築しつつある。2.アセスメントスキルについては、全般的な研修を受講するだけでは向上できないことが明らかになったので、アセスメントに特化した研修プログラムが必要である。これまでに、試行と改良を繰り返した研修プログラムを完成させている。このプログラムについて、スキル評価指標を用いて前後比較をし効果検証を行った。3.経年インタビュー調査では、1回目データ、つまり実践経験を積む前段階の分析を行い、その特徴を明らかにした。ソーシャルワーカーの専門職アイデンティティが、専門的価値を実現するための基礎になるものであること、一方専門職アイデンティティの基礎に価値があることの両方が先行研究レビューにより明らかになった。専門的価値の可視化と習得プロセスを明らかにしようと探求を進めてきたが、「専門的価値」そのものは、実践者の語りに表出されないことが、これまでの調査を通して示された。そこで、ソーシャルワーカーの「自己規定」と「対象者観」(他者からのまなざしによって自らは規定されるという実存理論を基にして)の変遷を明らかにする経年インタビュー調査と、遡及的にそのプロセスを明らかにするためのエキスパートインタビュー調査を継続した。精神保健福祉士養成課程卒業生13名の経年インタビュー調査の3回目を実施した。卒後1年経過した現任ソーシャルワーカー13名の2回目インタビュー結果を基に、2回の学会発表を行った。その結果、役割認識の混乱と、共通する用語でソーシャルワークを説明できないこと、際立つ自信のなさが明らかになった。これらから、養成教育、実践現場、現任者訓練と一連の教育システムの再検討、役割を明示するための研究の推進、個別のソーシャルワーカーの課題を提言した。エキスパートインタビューについては、TEM分析をするために、講師を招いて研修会を開催した。さらにエキスパート6名のインタビューを実施した。1名については分析を終了したが、長期キャリアは個別性の高い要素が多く、研究遂行について課題が残されている。アセスメントスキル研修については、MSWとPSWを対象に複数回実施した。今年度は、研修講師養成に着手した。具体的には、プログラムの組み立ての検討、プログラム進め方の演習、実際の研修での補助的役割の遂行を試みた。理由は、13名の3年分の成長プロセスは多岐にわたり、予定していた分析手法では、研究課題を明らかにできない可能性が見えてきた。他の分析方法を模索している。
トリメチレンメタン及びヘテロ原子同族体遷移金属錯体の合成・物性・有機合成への応用

本申請者は既に、2-位にアセタール基を持つアリル化合物2-クロロメチル-3,5-ジオキサヘキセン-1(1)の効率的な合成法と、この化合物と0価遷移金属との酸化的付加反応によって2-位にアセタール基を持つ新しいタイプのπ-アリルパラジウム錯体(2a)および白金錯体(2b)が収率よく合成できること、ならびに錯体2を水酸化物イオンで処理することによって、オキソジメチレンメタンパラジウム錯体(3a)および白金錯体(3b)が得られることを明らかにした。本年度は、これらのオキソジメチレンメタン錯体(3)の溶液状態ならびに結晶状態における構造を、^1H NMR、赤外線吸収スペクトル解析、含水溶液の酸性度の測定、およびX-線構造解析などの手法を用いて検討した。その結果、パラジウム、白金両錯体ともπ-アリル極限構造(π-構造)ト、メタラシクロブタノン極限構造(σ-構造)の寄与を持っていること、何れの状態においてもパラジウム錯体の方が白金錯体に比べてπ-アリル性が大きいこと、両錯体ともπ-アリル性の寄与は溶媒の極性の増加あるいはプロトン性溶媒の添加によって大きくなることが判明した。即ち、^1H NMRにおいて、3のメチレンプロトンシグナルが融合温度を持っていることから、σ-構造の寄与のあることが明らかで、その温度は白金錯体の方が溶媒の如何を問わず常に高く、従って、パラジウム錯体よりもσ-結合性が強いことが判明した。X-線解析および赤外吸収何れにおいてもC^2-O長さが1.5重結合に近いこと、かつ白金錯体の方が短いこと、水溶液は何れも塩基性で白金錯体の方が弱いことが明かとなり、両状態ともNMRの結果と同じであることを明かにした。
超臨界アルコールのラマン散乱：分子間ダイナミクスの古典性と量子性

最終年度は,超臨界状態に至るまでと,超臨界状態での,エタノールと1-プロパノールの低振動数ラマン散乱について,資料の密度をパラメータとして再解析を行った。密度の推定は,通常のラマン散乱のVVスペクトルのうち,水素結合が関係していない分子振動モードによる散乱の積分強度が,試料の密度に比例すると仮定して求めた。低振動数ラマン散乱のVHスペクトルには,感受率になおした後,数cm-1付近の最低振動数モードに2状態遷移模型に基づく緩和関数を,40cm-1付近のピークに対しては変形Gaussianをあてはめ,さらに高振動数領域には減衰振動モードをあてはめて,最小自乗フィットを行った。最低振動数モードと40cm-1のモードの積分強度比は,密度に対する変化は小さかった。40cm-1のピークの振動数と線幅は密度に対してほぼ変化しなかった。最低振動数モードの緩和時間(=ピーク位置)は,超臨界に至るまでは変化せず,超臨界状態では密度が小さくなるにつれて増加した。分子間振動や衝突によって,短時間でも離散的なエネルギー準位が決まる場合には,遷移の温度依存性が顕著ではないが,エネルギー準位が決まらない場合に顕著になるというのが現状の作業仮説である。離散準位の有無はスペクトルからだけではわからないが,Stokes/anti-Stokesの強度比が,およそ数cm-1以下で,離散準位を仮定して得られた熱因子からずれるという間接的な証拠がある。超臨界状態では蛍光のバックグラウンドがあるためずれを直接観測できないが,温度に敏感に依存する領域が,熱因子の形が変わる領域にほぼ対応しているということを,超臨界アルコールにおいて確認できた。本研究は、低振動数ラマン散乱スペクトルの最低振動数モードの性質を、起源となっている分子運動に量子準位があるかどうかと関連づけて理解することを目的とする。まずはアルコール類を測定例とし、温度・圧力を変化させてラマンスペクトルを測定し、温度・圧力に依存して振動数シフトを起こしているのが最低振動数モードのみであることを確認する。研究費の申請が認められたのが10月であったため、申請書の実験計画は、本年度は、装置の整備にとどまった。そのかわり、超臨界アルコールのスペクトルの比較対象として、エチレングリコール系・アセトン混合系の低振動数ラマン散乱と、エチレングリコール系の低振動数ラマン散乱の温度依存性の測定を行った。今後、学会等で報告し、論文にまとめる予定である。2016年4月から実施する計画で申請したが、4月時点では交付が認められず、2016年10月になって追加で交付が認められることになったため、当初の計画より、現状では半年遅れている。低振動数ラマン散乱のスペクトルは,数cm-1のみが温度に対して振動数が敏感に変化する。なぜ最低振動数モードだけが温度変化に対する振る舞いが違うのかを調べるため,アルコールを例として,室温1気圧から超臨界状態に至るまでの広い温度・圧力条件でラマン散乱を測定した。今年度はメタノールを対象として実験を行った。メタノールの低振動数ラマン散乱は,もともと数十から数百cm-1の散乱強度が,他のアルコールに比べて大きく,超臨界状態になっても広い範囲で散乱強度が残り,室温では見えていた幅の広いピークがはっきりしなくなって,100cm-1以下に存在するピークにバックグラウンドが加わった形になる。しかしこれは,分子間振動がくずれたものと考えられるのえ,一定のバックグラウンドとして差し引くのは妥当でない。そこで,複数の振動でバックグラウンドをあらわし,低振動数領域のピークと分離する解析を行った。しかし,ピークの成分の振り分けがうまくいかず,密度で整理した結果は,最低振動数モードとそれ以外のモードの温度依存性がはっきり分かれる結果にはならなかった。この結果は,化学系協会東北大会で,木村未来、天羽優子、亀田恭男、臼杵毅「超臨界状態に至るメタノールの低振動数ラマンスペクトル」として発表した。さらに,最低振動数モードの起源を探るため,本テーマに関する補助的な実験として,温度変化の範囲は狭いが,エチレングリコールについて,0.1cm-1以下に至る低振動数ラマンスペクトル温度依存を測定した。半年遅れて追加で採択になったので,初年度は準備のみで実際の実験が2年目から始まったことによる。メタノール,エタノール,プロパノールについて実験を行う予定であったので,最終年度である今年度は,エタノールとプロパノールについて密度推定のためのラマン測定を行えば,計画通りに進めることができると考えている。

分子間振動や衝突によって,短時間でも離散的なエネルギー準位が決まる場合には,遷移の温度依存性が顕著ではないが,エネルギー準位が決まらない場合に顕著になるというのが現状の作業仮説である。離散準位の有無はスペクトルからだけではわからないが,Stokes/anti-Stokesの強度比が,およそ数cm-1以下で,離散準位を仮定して得られた熱因子からずれるという間接的な証拠がある。超臨界状態では蛍光のバックグラウンドがあるためずれを直接観測できないが,温度に敏感に依存する領域が,熱因子の形が変わる領域にほぼ対応しているということを,超臨界アルコールにおいて確認できた。超臨界状態の測定をするための加圧ポンプと、ラマン散乱の光源とするための固体レーザーを本研究費で購入し、ポンプについては設置済みで、現在、加圧セルを含めて測定の準備をしている。このまま作業を進め、申請書通り、高温高圧でのアルコールのラマン散乱の測定を行う。エタノール,1-プロパノールについて,室温1気圧から超臨界状態に至るまでの低振動数ラマン散乱を,最低振動数モードとそれ以外に分けるモデルで解析し,それぞれの振動数と強度の変化を密度で整理する。密度は,同じ温度・圧力条件の高振動数ラマン散乱の振動モードの強度によって推定する。最低振動数モードの振動数のみが他のモードに比べて際立って温度に敏感であるかどうかを確認する。現在,過去に行った低振動数スペクトルの再解析を行っており,数cm-1の最低振動数モードを主に反映した成分とそれ以外に分けられる結果を得ている。今後は,高振動数領域のスペクトルを測定し,密度の推定を進める予定である。内定通知が届いた時、本研究で使う予定の分光器のコントローラーに不具合が生じており、周辺機器にも不具合があったので、まずは修理を行い、その後、購入予定の加圧ポンプとレーザーの選定を開始した。ポンプについては年度内の納品が可能であったが、レーザーについては高額であったため手続きに時間がかかり、発注は年度内に完了したものの、納品が2017年4月になった。課題のための試薬等を購入していたが,実験の区切りの関係で少額の残額が生じた。次年度に行う実験に必要な消耗品と合わせて使用する予定である。レーザーが納品され検収も終えたので、学内会計システムで科研費の項目に入力ができるようになり次第、使用金額を反映させる。
胃癌と腸上皮化生で増加するユビキチンの性状とその動態の解析

胃癌、腸上皮化生に蓄積したユビキチンの解析を行うためマルチユビキチン鎖-蛋白結合体(multi-ubiquitin chain)、遊離型ユビキチン(free ubiquitin)の動態を検討し、以下の実験結果、成果を認めた。1.試料のサンプリング手術検体の一部、内視鏡検査下での生検材料を患者の承諾の上、胃癌、腸上皮化生、正状粘膜、各10検体をサンプリングした。この試料をTris緩衝液で抽出し、易溶性画分を、不溶性成分を8M尿素で可溶化し、難溶性画分を各々調製した。MUb ELISA,FUb RIAの二種類のイムノアッセイ系を用いて、それぞれの分画を測定した。MUbは、難溶性画分において正常粘膜に比べ胃癌で増加していた。またFUbは、正常粘膜に比べ胃癌では、有意な変化は認められなかったが、腸上皮化生において増加を認めた。したがって、免疫組織化学の手法で指摘された胃癌組織中のユビキチンの増加は、難溶性画分で癌特有のユビキチン化蛋白質の蓄積を反映するものと考えられた。また、腸上皮化生で増加しユビキチンは、遊離型ユビキチンと考えられた。このことは、発癌の機序の上でユビキチン系が重要な要素である可能性を示唆しているものと思われた。3.現在進行中の研究現在、胃癌と正常粘膜において3種類のユビキチン遺伝子(UbA,UbB,UbC)のm-RNAの発現をnorthern blot法により解析している。その他、免疫組織化学的手法にて、MUb、FUbの細胞局在を検討している。
^<31>P-NMR spectrometryによる保存臓器の活性判定法に関する研究

肝保存時における細胞内エネルギー代謝を明らかにするために^<31>P-NMRspectrometerを用いて肝細胞内高エネルギーリン酸化合物を措定した。I.Garlickらが開発した心潅流装置を改良しマウス肝潅流装置の作成を行なった。潅流液としてkrebs-Henseleit buffer solutionを用いた。潅流液の酸素化は95%O_2、5%CO_2を直接潅流液に注入することにより行なった。II.上記作成した肝モデルの常温(36°C)で潅流中の^<31>P-NMRスペクトルを測定し潅流液を変化した時のスペクトルの変化を測定したが至適潅流量は5ml/minであった。III.36°Cで温阻血を加えていった時の^<31>P-NMRスペクトルを測定したが温温阻血10分でβ-ATPは測定不能となり無機リン(Pi)は阻血と併に増大していき阻血60分で前値の200%以上となった。しかし再潅流を行なえば一度消失したβ-ATPは回復したが、この限界は30分であった。IV.低温浸漬保存における^<31>P-NMRスペクトルを測定したが低温阻血においてもβ-ATPは約10分で測定不能であった。Piも阻血とともに増大していったが60分における増大率は160%で温阻血時にみられた変化より優位に低かった。また再潅流を行なえばβ-ATP、Pは前値に回復した。回復の限界は10時間以内であった。V.Ca拮抗剤(verapamil)を20umol、40umol、80umol前投与した時の温阻血肝における^<31>P-NMRを測定したが、80umol投与において阻血60分においても再潅流時にβ-ATPの回復が認められた。以上、肝依存と関係する状況において、^<31>P-NMRスペクトルを測定したが、本法は非侵装的に、しかも短時間に細胞内高エネルギーリン酸化合物の変動が測定できるため有用であると思われた。臓器移植は近年めざましい進歩をとげ,生着率は年々向上してきつつある.しかし保存法に関してはまだかなり問題がのこされている.特にその中でも臓器のviability判定法は重要であり種々の方法が考案されているがまだこれといった確立された方法がないのが現状である.最近NMR-spectroscopyにより非侵襲的に細胞内高エネルギーリン酸化合物の変動を観察できるようになってきた.今回この31PNMR spectrometerを用い,保存臓器における細胞内高エネルギーリン酸化合物の変動を測定した.実験方法は,マウス肝にカニュレーションを行ない対外へ摘出し体外灌流モデルを作成した.灌流液は一般に用いられているKrebs-Henseleit液を一部変更し使用した.実験は, 1)常温灌流時2)温阻血時において細胞内高エネルギーリン酸化合物の継時的測定を行なった.結果は以下のとおりであった.1)常温灌流時,灌流量による細胞内高エネルギーの変動を測定したが,結果は流量5ml/min以上で安定したspectrumがえられた.2)温阻血肝における細胞内

高エネルギーの変動を測定した.阻血を開始すると細胞内ATPは徐々に低下していき約10分で測定不能となった.同時に細胞内無機リンのピークは増大していった.またリンの化学シフトからもとめた細胞内pHは阻血とともに低下していくことがわかった.3)温阻血後肝を36°Cまで再灌流し,同時に細胞内高エネルギーリン酸化合物を測定した.阻血30分までは,再灌流を行なうとATP, Piとも前値の80%まで回復するが,阻血45分では回復はみとめられなかった.また細胞内pHも同様の結果であった.以上当該年度は,温阻血における変化を中心に実験を行なった.臓器移植において、臓器のviabilityを判定する適切な方法は現在に至ってもえられておらず、移植後にその臓器の機能が発現するか否かによって初めてこれを知るというのが現状であった。本研究は、保存臓器の細胞内高エネルギーリン酸化合物(ATP、ADP、AMP、NAD、Pi)を^<31>P-NMR spectrometerを用いて測定しviabilityの指標となる因子について検討を加えた。マウス肝を用い摘出肝灌流モデルを作成した。まず、低温浸漬保存された肝について測定を行った。その結果、I.保存後ATPは急激に減少し約10分後には検出不能となった。II.無機燐Piは徐々に増加し30分で前値の170%に増加した。III.低温浸漬保存後Krebs-Henseleit液で肝を再灌流を行ったところ低温阻血1時間ではATPの完全回復が認められた。IV.低温阻血10時間以上ではATPの回復は5%以下であった。次にCa channel blockerであるVerapamilを門脈内より前投与した後低温阻血を加え測定を行った。その結果、I.保存後ATPは減少したが60分後においても検出可能であった。II.無機燐Piは徐々に増加したが30分で前値の140%に増加した。III.低温浸漬保存後再灌流を行ったところ低温阻血1時間ではATPの完全回復が認められた。IV.低温阻血24時間でも再灌流後ATPの約70%の回復が認められた。V.再灌流ATPの回復するものでは再灌流前のMonophosphateと無機燐の比が0.5以上と高く保たれていた。以上の結果から、I.長期低温浸漬保存においてはATPは必ずしもviabilityの指標とはならない。II.verapamilは低温阻血肝においてATPを保存させる効果がある。III.monophosphate esterと無機燐の比は低温阻血肝においてviabilityを示す指標の1つとして重要である。
心臓血管ホルモンの臨床的意義に関する分子生物学的・発生工学的研究

高血圧や心筋梗塞などの心臓血管疾患の病態に、心臓血管ホルモンと総称される生理活性物質やその受容体の異常の関与が示されつつある。本研究ではこれをさらに解明するため、特にナトリウム利尿ペプチド(NP)系、エンドセリン(ET)系、レニン-アンジオテンシン系(RAS)について、これらの遺伝子変異動物を含め、分子生物学的に解析することを目的とした。NP系に関しては、内皮細胞でのCNP遺伝子発現と分泌が血管平滑筋細胞共存培養下で主にTGF-βの活性化を介し著しく亢進すること、逆にVEGFやインスリンで抑制されることを示した。さらに、アデノウイルスを用いた血管平滑筋細胞へのCNP遺伝子導入によりG1 arrestを誘導し、またCNP刺激がアンジオテンシンII(AII)と拮抗して増殖抑制的homeobox因子であるGaxを誘導することを明らかにし、これら種々の相互作用で血管リモデリングが制御される可能性を示した。一方、BNP過剰発現トランスジェニックマウスの生理機能を検討し、有意の低血圧と心肥大抑制効果からBNPの心保護作用を示した。また、BNPとANPの遺伝子がマウスとヒトで同一染色体上に隣接して存在することを証明した。ET系では、ヒトET_A受容体についてalternative splicingの検討を行い、exon 4およびexon 3と4の脱落により多様なmRNAが生じることを明らかにした。RASでは、作用が未だ不明なAIIタイプ2(AT_2)受容体の検討を行い、腎メサンギウム細胞で接触抑制に伴って著しく発現が亢進し、AT_1受容体に拮抗して増殖抑制的に働くこと、遺伝性高血圧ラット腎臓で発現低下を来すことより高血圧発症へ関与する可能性を示した。またヒト子宮筋では妊娠に伴って著しく発現低下し、妊娠子宮筋肥大に関与する可能性が示された。さらにマウスレニン遺伝子(Ren-2)導入トランスジェニックラット心臓でのNP発現を検討し、負荷に対して増加反応が減弱しており、この高血圧の病態にNP系の調節異常が関与する可能性を示した。本研究ではこれをさらに解明するため、特にナトリウム利尿ペプチド(NP)系、エンドセリン(ET)系、レニン-アンジオテンシン系について、これらの遺伝子変異動物を含め、分子生物学的に解析することを目的とした。さらに、アデノウイルスを用いた血管への遺伝子導入の予備的検討として内皮細胞でのCNP過剰発現によりG1 arrestを誘導し、またCNP刺激がアンジオテンシンII(AII)と拮抗して増殖抑制的homeobox因子であるGaxを誘導することを明らかにし、これら種々の因子の相互作用により血管リモデリングが制御される可能性を示した。ET系では、ヒトET_A受容体についてalternative splicingによるmRNAの多様性の検討を行い、exon 4およびexon 3と4の脱落により多様なmRNAが生じることを明らかにした。現在これらNPやETの過剰発現系の検討に加え、受容体欠損動物についても解析中である。

AII受容体については、欠損マウスの検討から血圧調節への意義は示唆されるものの作用が未だ不明なタイプ2(AT_2)受容体の検討を行い、腎メサンギウム細胞で接触抑制に伴って著しく発現が亢進し、AT_1受容体に拮抗して増殖抑制的に働くこと、また遺伝性高血圧ラット腎臓で発現低下を来すことより高血圧発症へ関与する可能性を示した。また、ヒト子宮筋では妊娠に伴って著しく発現低下し、その結果妊娠子宮肥大に関与する可能性が示された。
クモ膜下出血後の脳血管攣縮の病態における免疫学的反応の関わり

クモ膜下出血(SAH)後に発生する脳血管攣縮の病態に、免疫学的反応が関与している、という実験的仮説の下に、犬のクモ膜下出血モデルの脳血管攣縮に対して免疫抑制剤であるcyclosporineを用いてその治療効果をみたところ、脳血管攣縮の程度を軽減できる結果が得られた。そこでこの実験をさらに進めるために、新しい免疫抑制剤であるFK-506を用いて脳血管攣縮に対する治療効果を調べた。また、補体の関与を調べる目的で、未治療群、治療群で血中の補体(C_3,CH_<50>)の変化を調べた。さらに、攣縮血管を摘出しisometric tension studyでFK-506の薬理学的特徴を明らかにするとともに、免疫組織染色で血管壁のガンマグロブリンの沈着の程度を検討することにした。雑種成犬をsham群(自家血の代わりに生理食塩水を注入)、SAH群、FK-506治療群I(0.15mg/kg筋注)、II(0.3mg/kg筋注)に分け、血管撮影で脳底動脈の血管径を計測した。SAH群、治療群I,IIにおいてはsham群に比較し、有意に血管径の縮少がみられた。SAH群、治療群I,IIにおいては有意差はみられなかった。血中の補体値については、sham群、SAH群、治療群I、IIにおいて有意な差は認めなかった。Isometric tension studyでK^+とphorbol ester(protein kinase Cの刺激薬)の収縮に対するFK-506の薬理効果を見たが、全く血管拡張効果は見られなかった。免疫組織染色では、残念ながらこれといった見るべき結果が得られなかった。こうした結果から、同じ免疫抑制剤でもcyclosporineとFK-506では脳血管攣縮に対する治療効果は全く異なっていることが分かった。この相違点は両者の免疫抑制効果、特にinterleukine 2の産生抑制効果に差が見らるためそれに基ずくものと考えられる。今後こうした差異を明らかにすることによって、脳血管攣縮に関与している免疫学的反応がどういったものであるかさらに解明できるものと思われる。クモ膜下出血(SAH)後に発生する脳血管〓縮の病態に免疫学的反応が一つの役割を果している、というのが実験的仮説である。この仮説を検証するために、脳血管〓縮に対する免疫抑制剤による治療を動物実験モデルに行なった。すでにわれわれはcyclosporineによる実験を行なっており、仮説支持の結果を得ているので、今回は新しい免疫抑制剤であるFK-506を用いて実験を行なった。雑種成犬をsham群,SAH群,治療I群(0.15mg/kg/day筋注),治療II群(0.3mg/kg/day筋注)に分けた(各群10匹)。SAHはDay0とDay3に自家血3mlを大槽内に注入する“two hemorrhagemodel"を用いた。血管撮影はDay0,Day7に行ない、脳底動脈径を測定した。血管撮影上の脳底動脈を上中下に3等分し、各々の中点での径を測定し、脳血管〓縮率(Day7の血管径/Day0の血管径×100(%))を求め各群で比較検討した。さらにDay0,Day7で血中補体第3因子(C_3),血清補体価(CH_<50>)を測定した。

Day7で犬をsacrifice後、脳底動脈を摘出し直ちに凍結し、免疫組織染色用に保存した。現在までの測定によると、脳血管〓縮率はsham群97.2±5.6%,SAH群58,2±4.9%,治療I群57.2±5.5%,治療II群59.2±6.2%で、t-検定ではSAH群と両治療群との間に差はみられなかった。又C_3値,CH_<50>値でも4群間で全く差がみられなかった。これらの結果より,FK-506で抑制される免疫反応はSAH後の脳血管〓縮の発生における病態には関与していないものと思われる。今後摘出した標本において免疫グロブリンの沈着を調べるために免疫組織染色を行なっていきたい。さらに治療に用いたFK-506をin vitro studyに用いて、isometric tension studyを行ない,薬剤の薬理学的作用について研究を行ないたい。クモ膜下出血(SAH)後に発生する脳血管攣縮の病態に、免疫学的反応が関与している、というのがわれわれの実験的仮説である。この仮説を検証をするために、犬を用いたSAHモデルを作成し、新しい免疫抑制剤である、FK-506を用いて脳血管攣縮の抑制効果を検討した。その結果、Sham群、SAH群、FK-506治療群I(0.15mg/kg投与)、FK-506治療群II(0.3mg/kg投与)で、脳血管攣縮の程度には全く有意差を認めなかった。これはわれわれが先に発表したcyclosporineによるデータと大きく異なっている。この違いがどの様な機序から生じるのかは全く明らかではないが、cyclosporineとFK-506では免疫抑制機序、特にインターロイキン2の産生抑制機序が異なっているとの報告があり、こうした違いによって実験結果に差を生じたのかもしれない。次に正常犬脳底動脈を摘出し、FK-506を用いてisometric tension studyを行った。治療群におけるFK-506の血中濃度はほぼ5×10^<-8>10^<-7>モルの範囲にあるので、76.0mMK^+溶液による収縮とphorbol esterによる収縮に対してFK-506を10^<-8>10^<-5>モルまで累積的に作用させ、その収縮抑制効果をみた。しかし、FK-506には、全くこれらの収縮に対する抑制効果はみられなかった。今後の計画は、上記の四群の脳底動脈を摘出し、瞬間凍結して保存してあるので、血管壁の変化、ガンマグログリン沈着の程度などを免疫組織学的に検討する予定である。クモ膜下出血後の脳血管攣縮の病態に、免疫学的反応が関与している、というのがわれわれの実験的仮説である。この仮説を検証するために、犬を用いたクモ膜下出血モデルを作成し、新しい免疫抑制剤である、FK-506を用いて脳血管攣縮の抑制効果を検討した。既に報告したように、残念ながらFK-506には、以前われわれが報告したようにcyclosporineでみられたような脳血管攣縮抑制作用は見られなかった。この両者の免疫抑制剤による効果の差については、これ異常深く追求して検索していないが、恐らくはinterleukine-2の産生抑制機序が異なっているためであろうと思われる。FK-506の血管におよぼす薬理学的効果についてはisometric tension studyを用いて検討し、既にその結果については報告したが、FK-506には直接的には血管の拡張効果、収縮効果は見られないことがわかった。
氷盤群中の構造物に作用する氷荷重シミュレーションプログラムの開発

北極圏において豊富な石油・天然ガス資源の存在が明らかとなり、国内外で関心が高くなっている。しかしながら、北極海域では海氷や氷山による脅威から発見された油ガス田の開発はあまり進んでいない。掘削等に用いられる浮体式構造物はその位置を保持する必要があるため、氷海域での開発には、その周囲で砕氷船が海氷を細かく砕く作業を行うことが一般的に考えられている。しかし、それよって生成された小氷盤群中の構造物に作用する氷荷重の推定技術は十分に確立されていない。本研究では数値シミュレーションによる氷荷重推定手法開発を目的とし、多数の小氷盤による相互作用および氷盤破壊に関して注目している。本年度は、昨年度に作成した氷荷重シミュレーションプログラムに氷盤の破壊影響を取り入れた。小さな剛体要素同士を完全拘束し、1枚の氷盤として扱っている。氷盤の破壊は圧縮とせん断および曲げ破壊を考え、拘束部に作用する力が氷盤強度から換算した閾値を超えた時に拘束を解くことで表現した。そして、過去に所属機関で実施した氷海水槽試験を再現したシミュレーションを行い、氷荷重や氷盤の挙動および破壊の様子について比較した。氷海水槽試験にて氷盤の破壊が発生した氷況において、破壊影響を考慮せず計算を行った場合に数倍のピーク荷重を示したのに対し、当該手法により実験結果と同程度の妥当なピーク荷重が得られた。また、構造物まわりの氷盤挙動や堆積も数値シミュレーション上で再現できており、破壊の様子も曲げ破壊が卓越するという氷海水槽試験と同じ傾向を示した。現状ではシンプルな氷盤形状に限定されているため、今後任意の形状へ拡張することで更なる発展が期待できる。本研究成果の一部を国際シンポジウムにて発表し、来年度にも国際学会にて発表予定である。本年度は、多数の剛体運動を物理法則に即して効率的に計算できる物理ベースモデリング手法により氷盤破壊を考慮しないプログラムを作成した。構造物周りの流れはポテンシャル流れを適用している。過去に所属機関で実施した氷海水槽試験を再現したシミュレーションを実施し、計算に必要な時間刻みや反発係数等のバリデーションを行った。そして、4種類の氷況において構造物に作用する氷荷重シミュレーションを実施し、氷海水槽試験データと比較を行った。結果から、それぞれの氷況で発生する氷荷重は試験データと類似の傾向を示した。また、シミュレーションの初期条件や氷盤の破壊影響等により平均・最大荷重をそれぞれ過小および過大評価することが分かり、本手法に対する改善点やノウハウを得ることができた。併せて、氷盤の破壊モデルに関する文献調査および検討を実施した。本年度に計画していた物理ベースモデリング手法を用いた氷荷重シミュレーションと破壊モデルの検討を実施し、基盤となるプログラム開発の成果が得られたことから、おおむね順調に進展していると判断した。本年度に作成したプログラムを基に、エネルギー保存則ベースによる破壊影響と3次元個別要素モデルによる破壊影響を適用し、開発を進める。

また、氷海水槽試験データや公表されている実機データと適宜検証を実施し、改良を行う。運動解析ソフトウェアおよび旅費が当初の想定よりも安価に調達できたため、文献調査費等に充てる予定である。
さく葉標本を利用した、薬用植物のDNA鑑別のためのプラットフォーム構築

近年、生薬や天然物医薬品の基原鑑別において、DNA鑑別の手法が用いられるようになってきたが、データベースに登録された配列の正確性は保証されておらず、形態学的に正しく同定された基原植物のDNA情報の収集が求められている。本研究では、高知県立牧野植物園の協力のもと、生薬の基原植物種およびその近縁種のさく葉標本の提供を受け、そのDNAから複数領域の塩基配列情報を取得して、分子系統学的解析を行う。昨年度取得したBupleurum属植物の核ITS領域のDNA配列情報を用いて分子系統学的解析を行った結果、最尤法及び最大節約法において植物種のクラスターを確認することができた。さらに、本年度は、新たにCoptis属植物のさく葉標本90検体を入手し、実験プロトコールに従いDNA抽出と配列情報の取得に取り組んだ。研究全体を通して、Cimicifuga属及びActaea属、Bupleurum属、Coptis属という重要生薬の基原種とその近縁種について、形態学的鑑別を経たさく葉標本のDNA情報を得るとともに、GenBankデータベースに既収載の配列情報との比較を行った。本研究成果により、薬用植物のDNA鑑別に資するプラットフォームの基礎を築くことができた。今後、得られた配列の登録を進め、関連分野の研究者との情報共有に努めたい。近年、生薬や天然物医薬品の基原鑑別において、DNA鑑別の手法が広く用いられるようになってきたが、データベースに登録された配列の正確性は保証されておらず、形態学的に正しく同定された基原植物のDNA情報の収集が求められている。初年度は、さく葉標本試料からの効率的なDNA抽出とPCRを行うための最適な条件を検討し、実験プロトコールを確立した。高知県立牧野植物園にて、Cimicifuga属及びActaea属植物のさく葉標本123検体とBupleurum属植物のさく葉標本155検体からDNA抽出用の試料を採取した。このうち、アジア産C. foetida 9検体とA. spicata 3検体からDNAを抽出し、ITS領域、rbcL遺伝子、trnH-psbA領域、trnL-F領域、matK遺伝子の配列を確認した。同時に、1950年代に採取された試料からもDNA情報の取得が可能であることが明らかになった。職務多忙とシーケンサー故障のため、研究開始時に設定した予定よりも進捗状況は遅れている。一方で、DNA調製やPCR条件の検討は完了し、実験プロトコールは完成しているため、遅れているDNA情報の収集ステップについては、比較的容易にスケジュールの再構築が可能であり、研究計画全体を通しての研究成果に与える影響は少ないと考えている。今年度は、初年度に確立した実験プロトコールに従い、Cimicifuga属及びActaea属植物のさく葉標本123検体からのDNA抽出と核及び葉緑体遺伝子の配列情報の取得を試みた。全検体からのDNA情報取得には至らなかったが、約80の検体からDNAを抽出することができた。領域によってはDNAの増幅・解読が難しいものも存在した。得られた葉緑体rbcL領域の配列を用い、分子系統学的解析を行った結果、最尤法及び最大節約法による分子系統樹において、植物種のクラスターを確認することができた。同時に、海外で採取・鑑別された標本から得た配列は、同種のクラスターから外れる傾向が高く、これは、形態鑑別法や命名法の不一致による可能性が考えられた。全ての検体に対し、核ITS領域、葉緑体のrbcL遺伝子、trnH-psbA領域、trnL-F領域、matK遺伝子のDNA配列を解読してきたが、増幅や解読の難しい領域があり、100を超える検体数の多さも相まって、想定以上の作業量が必要となった。本年度は、新たにBupleurum属植物のさく葉標本からのDNA抽出と核及び葉緑体遺伝子の配列情報の取得に着手するとともに、DNAの増幅・解読率向上を目指し、実験手順やプライマー配列の改良を試みた。一方で、文献や専門家の意見に基づき植物の学名についての調査を進めた結果、学名は時代や国、学界等によって異なることが明らかになり、さく葉標本に記載された分類学名と生薬の基原植物種名のブリッジングには、より多くの課題が存在することが明らかになった。

国立研究機関として最優先で対応すべき緊急の業務が複数発生したことに加え、研究所の移転が重なり、研究遂行のための時間と場所、実験機器を十分に確保することができなかった。近年、生薬や天然物医薬品の基原鑑別において、DNA鑑別の手法が用いられるようになってきたが、データベースに登録された配列の正確性は保証されておらず、形態学的に正しく同定された基原植物のDNA情報の収集が求められている。本研究では、高知県立牧野植物園の協力のもと、生薬の基原植物種およびその近縁種のさく葉標本の提供を受け、そのDNAから複数領域の塩基配列情報を取得して、分子系統学的解析を行う。昨年度取得したBupleurum属植物の核ITS領域のDNA配列情報を用いて分子系統学的解析を行った結果、最尤法及び最大節約法において植物種のクラスターを確認することができた。さらに、本年度は、新たにCoptis属植物のさく葉標本90検体を入手し、実験プロトコールに従いDNA抽出と配列情報の取得に取り組んだ。研究全体を通して、Cimicifuga属及びActaea属、Bupleurum属、Coptis属という重要生薬の基原種とその近縁種について、形態学的鑑別を経たさく葉標本のDNA情報を得るとともに、GenBankデータベースに既収載の配列情報との比較を行った。本研究成果により、薬用植物のDNA鑑別に資するプラットフォームの基礎を築くことができた。今後、得られた配列の登録を進め、関連分野の研究者との情報共有に努めたい。初年度に設定した実験プロトコールに従い、引き続き、Cimicifuga属植物及びBupleurum属薬用植物のさく葉標本試料を収集し、DNA抽出と塩基配列解読を行う。引き続き、実験プロトコールに従い薬用植物のさく葉標本からのDNA抽出と配列解読を行う。増幅・解読する遺伝領域を絞り込み、作業の迅速化を図る。引き続き、実験プロトコールを改良し作業の効率化を図りながら、薬用植物のさく葉標本からのDNA抽出と配列解読を行う。職務多忙とシーケンサー故障により、研究の進捗状況に遅れが生じたため。進捗がやや遅れており、新たな試料の調達に至らなかった。高価な試薬をキャンペーン時に定価より安く購入できた。研究計画が遅延したため、事業期間の延長許可を得て、来年度も研究を継続する。初年度に予定していた123検体のDNA情報の収集について、実施できなかった100検体のDNA抽出と塩基配列解読を行う。平成28年度に調達を予定していた試料検体を用意する。必要な試薬を購入し、機器メンテナンスを行う。
高次元ネバリンナ理論の交差理論的側面の研究

平成16年度の研究実績概要は以下の通り。1、準アーベル多様体への正則曲線に対する第二主要定理を野口(東大数理)、Winkelmann(仏Nancy大学)両氏と共同で、精密な形で証明し、それを対数的不正則数が次元以上の多様体に対して応用することで、そのような多様体に対する複素双曲性の研究に応用した。この結果はアーベル多様体の正則曲線を使った新しい特徴付けにも応用できる。現在、準アーベル多様体の場合にも同様の特徴付けを得るべく共同研究を継続している。2、次にコンパクトな設定において、アーベル多様体へ一般的有限射を持つ多様体に対する、Griffiths-Lang-Vojta予想を証明した。これは、必ずしも代数的非退化とは限らない正則曲線も扱う第二主要定理である。応用として、アーベル多様体へ一般的有限射を持つ一般型多様体に対しては、Langの定義した特殊集合が確かに真部分代数的集合になることを証明することが出来る。3、全複素平面上で定義された劣調和函数(またはそれらの差)に対する増大度の問題を考察した。この方面でとても興味深い問題にNevanlinna予想がある。この予想解決のためには、新しいアイディアが必要になると思われ、その点にも興味がある。現在までのところ、いくつかの知見を得ることはできたが、未だ解決に至る道筋はついていない。来年度以降も継続して研究を続けていく。4、また、今年度に新しく始めた研究に、複素双曲多様体への正則曲線に対する除外集合の特徴付け、という問題がある。この研究のねらいは新しい函数論的零集合を明確に定義し、それにまつわる諸現象をできるだけ統一的に理解できるような理論を構築することである。これも来年度以降の研究テーマとして継続したい。本研究課題のテーマである、Nevanlinna理論の交差理論的側面に関して以下の二つの研究をした。1.値分布論の発生当時からの中心的な話題に有理型関数の第二主要定理がある。この定理を「摂動」できるか?別の言い方では、ターゲットをsmall functionに拡張できるか?という問題がある。もともとはR.Nevanlinnaによって1920年代に予想されたもので、その後、1960年代のC.Chuang、1980年代のN.Steinmetz, C.Osgoodらの研究によっで部分的に解決されていた。今回、私はこの問題を完全に解決することが出来た(論文校正中)。この結果の代数的類似が同時に証明でき、結果としてP.Vojtaによって予想されていた関数体上の曲線の高さ不等式を最良評価で証明できた。また、これらの結果の応用として1980年代にA.Eremenkoによって予想されていた有理型関数を係数とするある種の関数方程式に関する予想も証明できた。2.アーベル多様体をターゲットとする正則曲線に対して第二主要定理を証明するには、正則曲線のジェットリフトに対するある種の構造定理が必要である。今回、例えばMoving targetに対する第二主要定理など、いくつかの技術的な結果を確立してその構造定理を証明した。これら二つの研究は、いずれも第二主要定理型の不等式を導く一般的な枠組みである、「Wronskian定式化」では証明できない不等式を扱っており、個別的な現象であっても今のところ一般論では手の届かないところで求めたい不等式を得ることに成功したところに意義があると思う。目下、上記研究の一般化及び応用を研究している。特に代数多様体の分類理論において重要な小平次元との関連でsmall functionを捉えてみたい。本年度の研究実績は以下の通り。1本年度は曲線束に対する「相対的第二主要定理」を証明した。これは、昨年度から引き続き研究している動標的に対する第二主要定理の分岐個数関数に相当する部分、及び関数体上の曲線に対するボイタ不等式を共に導く一般的な評価式である。また、この評価式を使って有理関数の高階微分の(ある単純な規則で数えた)零点の数と、元の有理関数の異なる極の数の間に単純な評価式が成立することを証明した。このような評価式は、これまで論じらちれることがなかったように思われるが、様々な状況的証拠から、さらに単純で興味深い評価式に一般化出来るのではないかと思われる。2当該研究者は以前にアーベル多様体への正則曲線に対して打ち切り個数関数を使った第二主要定理を証明した。本年度は野口潤次郎(東大数理)、J.Winkelmann(仏Nancy大学)両氏と共同でこの結果を準アーベル多様体の場合に拡張した。ポアンカレの既約性定理などが準アーベル多様体に対しては成立しないために証明に於いて技術的な問題を解決しなければならなかった。応用として、70年代にアメリカ人研究者によって予想されていた、射影空間から幾つかの因子を除いた空間の双曲性に関する予想をより一般的な形で解決することが出来た。3楕円曲線の分岐被覆面に関連した、普遍定数に関して若干の新しい結果を得た。この定数は双曲空間の「絶対性」からユークリッド空間の相似変換を制約する定数と関連して、興味のあるものであるが、未だ公表するほどにはまとまっておらず、このテーマは来年度以降に持ち越される。

この結果はアーベル多様体の正則曲線を使った新しい特徴付けにも応用できる。現在、準アーベル多様体の場合にも同様の特徴付けを得るべく共同研究を継続している。2、次にコンパクトな設定において、アーベル多様体へ一般的有限射を持つ多様体に対する、Griffiths-Lang-Vojta予想を証明した。これは、必ずしも代数的非退化とは限らない正則曲線も扱う第二主要定理である。応用として、アーベル多様体へ一般的有限射を持つ一般型多様体に対しては、Langの定義した特殊集合が確かに真部分代数的集合になることを証明することが出来る。3、全複素平面上で定義された劣調和函数(またはそれらの差)に対する増大度の問題を考察した。この方面でとても興味深い問題にNevanlinna予想がある。この予想解決のためには、新しいアイディアが必要になると思われ、その点にも興味がある。現在までのところ、いくつかの知見を得ることはできたが、未だ解決に至る道筋はついていない。来年度以降も継続して研究を続けていく。4、また、今年度に新しく始めた研究に、複素双曲多様体への正則曲線に対する除外集合の特徴付け、という問題がある。この研究のねらいは新しい函数論的零集合を明確に定義し、それにまつわる諸現象をできるだけ統一的に理解できるような理論を構築することである。これも来年度以降の研究テーマとして継続したい。
セマフォリン分子のマクロファージ活性化制御による抗腫瘍効果の解明と癌治療への応用

腫瘍内微小環境形成において腫瘍随伴マクロファージ(TAM)が重要な役割を果たしている。そこで、TAM活性の分子基盤を解明することでTAMを標的とする治療法の開発が癌根治という新たな治療戦略に繋がることが期待される。申請者は最近セマフォリン分子Sema7AがM2 typeマクロファージの活性を制御し、免疫恒常性維持に重要な役割を果たしていることを明らかにした。更に、マクロファージに発現するSema6DがM1/M2への極性化を制御するとの知見を得た。本研究では、癌細胞移植マウスモデルを用い、セマフォリン分子をターゲットにする腫瘍組織微小環境形成に対する分子メカニズムを解明し、セマフォリン分子機能障害抗体を用いた抗腫瘍に対する治療効果を検討する。そこで、当年度の研究実施計画の1)腫瘍内微小環境におけるTAMのメタボリズム及び代謝産物の網羅的解析及びSema6Dの役割検討及び2)TAMの代謝制御による癌細胞の増殖及び腫瘍微小環境形成機構の解析を行なった結果、Sema6D遺伝子を欠損したTAMの脂質の取り込み及び脂質代謝経路が顕著に抑制されていた。さらに、TAMのマーカー分子であるCD206の発現レベルが低下していた。一方、抗癌活性を持つ炎症性マクロファージの浸潤が認められ、腫瘍の増殖が減少する結果が得られた。これらの結果により、Sema6Dシグナルのマクロファージの脂質代謝を制御し、TAM分化を促進に関与することが明らかとなった。当年研究実施計画の通りの研究を実施し、その結果、来年度の研究実施計画に進められる状況へ進めている。平成29年、平成30年度の研究成果に基づいて、平成31年度の研究実施計画であるSema6D機能障害抗体の作成及びシグナル分子阻害剤を見つけるスクリーニングを行う。適切な阻害剤が発見されたら、抗腫瘍免疫に対する治療効果を検討する研究を行う予定である。マクロファージは、組織恒常性の維持に重要な役割を荷っている。この機能を実行するには、マクロファージが存在する様々な組織内にある実質細胞の機能状態を監視する能力を持たなければならない。腫瘍は、組織構造や細胞構造など、異常発達した器官の特徴を数多く示す。正常な組織や器官のマクロファージと同様、腫瘍のマクロファージも、いくつかの主要な恒常性機能を果たすことで腫瘍の維持と増殖を可能にしている。しかし、腫瘍とマクロファージ間でのコミュニケーションに関わるシグナルについては、よく分かっていない。本研究では、ヒト腫瘍組織に浸潤してきたTAMにSema6Dが高発現し、Sema6D欠損マクロファージのM2 typeへの分化異常を示す知見を得た。マクロファージのM1/M2分化制御におけるSema6Dの役割だけではなく、腫瘍内微小環境形成におけるTAMと癌細胞のcell-to-cell contactについてのSema6Dによる制御機構を明らかにすることと、マウス癌細胞移植モデル或いは大腸癌モデルを用いSema6D機能障害抗体の治療効果の検討を行う。そこで本研究では、`腫瘍内微小環境形成においてSema6Dによる抗腫瘍免疫応答の制御機構の解明と新たな癌治療法の開発'を目的とする。初年度では、骨髄由来マクロファージのM1/M2極性化を制御するSema6Dの生物学作用機構の解明を目標とし、研究計画の通り、研究成果が得られた。i)マクロファージにおけるSema6Dのリガンド分子の同定、ii)マクロファージにおけるSema6Dの細胞内シグナル解析を検討した。i)では、従来ニワトリ胎児の心臓形態形成の過程にSema6Dに対する結合パートナーとして同定されたPlexin-A1欠損マウスの骨髄由来マクロファージを用い、M1/M2極性化を検討した結果、c-Ablと言うチロシンキナーゼがSema6Dの細胞内領域に結合することが明らかになった。さらにM1/M2分化の過程にリコンビナントSema6D-FcをSema6D欠損マクロファージに加え、マクロファージにおけるSema6Dの逆行性シグナルの関与性を検討した。その結果、外因性Sema6Dを加えてもSema6D欠損マクロファージのM2分化機能異常の減少が回復できなかった。ii)では、Sema6Dの細胞質内領域に結合する分子を同定を行なった。まず、Sema6Dの膜近位部に存在するtyrosine kinaseと結合領域に点突然変異を導入した後、Sema6D欠損マクロファージに導入し、マクロファージの極性化を検討した。その結果、マクロファージにおいてSema6Dは受容体として機能し、細胞内のc-Ablを活性化しM2マクロファージの分化に重要であることを明らかにした。