hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
キタヨコエビ科端脚類(節足動物門:甲殻綱)の生息場所の多様化と適応

キタヨコエビ科内の系統関係およびキタヨコエビ科の系統的位置を明らかにするために,キタヨコエビ科の7種を含む3上科6科17種の28S rRNAおよび16S rRNAの塩基配列を決定し,系統樹を作成した.その結果,科レベルではキタヨコエビ科およびMesogammaridaeの単系統性が強く支持された.一方,上科レベルで見ると,ヨコエビ上科は単系統にはならず,上科レベルで分類学的再検討を行なう必要があることが明らかになった.また,海水域から淡水域への侵入および淡水域から海水域への二次的な侵入は,キタヨコエビ科内においてのみならず,ヨコエビ類全体で独立に何度も生じていることが示唆された.しかし,浸透圧調節器官の形態には顕著な差あるいは生息環境による傾向などは見られなかった.キタヨコエビ科のオオエゾヨコエビ属内の系統関係を明らかにするために,オオエゾヨコエビ属の2亜属12種のCOIおよび12S rRNAの塩基配列を決定し,系統樹を作成した.その結果,亜属レベルではアナンデールヨコエビ亜属の単系統性が強く支持された.また,琵琶湖固有のナリタヨコエビと諏訪湖および河口湖に分布するスワヨコエビは,形態的にも遺伝的にも差がないことから,両種は極めて近年に種分化したか,同種である可能性が高いことが示唆された.琵琶湖から諏訪湖・河口湖へは多数の魚種が移植されていることから,ナリタヨコエビはそれらの魚種とともに琵琶湖から諏訪湖・河口湖へ移入されたのかもしれない.以上述べたことに加えて,キタヨコエビ科のトゲオヨコエビ属のリビジョンを完成させ,これまで混乱していた本属の分類を明らかにし,1新種を記載した.トゲオヨコエビ属の分類学的再検討トゲオヨコエビ属は日本、中国、ロシア、カナダそしてアメリカに分布するキタヨコエビ科の1属である。これまでに10種が記載されている。今回、北海道の2河川から本属の未記載種1種が見つかった。本未記載種は、第1触角の鞭状部に各節2個の感覚器(aesthetascs)をもつ点で特徴的であったが、既知種の原記載論文は多くが不十分であるため、標本の観察が不可欠であった。そこで、日本各地から採集した標本に加え、カナダ自然博物館からタイプ標本を含む多数個体の標本を借用し、研究に用いた。標本が手に入らなかった2種を除く既知種8種の再記載を行うと共に、日本産の未記載種を新種として詳細に記載した。この結果は、現在投稿準備中である。テングノウニヤドリ属の分類学的研究テングノウニヤドリ属はテングヨコエビ科のヨコエビで、世界から3種D.echinoicus、ナミテングノウニヤドリD.obsolescens、D.echinoidesが知られている。本属では、D.echinoicusがチシマオオバフンウニの棘間に生息することが報告されている。今回、北海道室蘭市、登別市、福島町沿岸のエゾバフンウニから本属の1種Dactylopleustes sp.が見つかった。本種は、形態的にD.echinoidesに似ていたが、正確な同定を行なうためにD.echinoidesのタイプ標本を観察する必要があった。そこで、カナダ自然博物館所蔵のD.echinoidesのタイプ標本を借用し、詳細な観察を行った結果、北海道産のDactylopleustes sp.は未記載種であることが分かり、記載論文を発表した。キタヨコエビ科の分子系統学的研究キタヨコエビ科のうち材料の得られた10種を用い、分子系統解析を行なった。まだ予備的実験段階であるが、オオエゾヨコエビ属の単系統性などが支持される結果が得られた。今後更に種数を増やして解析を行う予定である。・キタヨコエビ科の中で最も種数の多いトゲオヨコエビ属の全種の標本を観察し,北海道から得られた1新種Eogammarus itotomikoae sp.nov.および日本新記録種2種E.barbatus(Derzhavin,1965), E.tiuschovi(Derzhavin, 1927)の記載を含むトゲオヨコエビ属のリビジョンを完成させた.これにより,日本産トゲオヨコエビ属は5種になった.・本州・四国の間隙水から得られた所属不明のヨコエビ3種の分類学的研究を行い,2新科2新属を設立した.これらは,形態的には地下水性のメクラヨコエビ科に似ていたが,分子系統解析の結果,ヨコエビ上科に属することが分かった.また,触角上のcalceoliの形態が高次分類群レベルの分類に有用であることが確認できた.・キタヨコエビ科内の系統関係およびキタヨコエビ科の系統的位置を明らかにするために,キタヨコエビ科の7属を含む3上科7科の28SrDNAの塩基配列を決定し,系統樹を作成した.その結果,キタヨコエビ科の単系統性が支持された.また,ヨコエビ類において,海から淡水域への侵入は独立に何度も生じたことが示唆された.生息環境の異なるキタヨコエビ科9種の鰓の表面構造を,走査電子顕微鏡を用いて観察したが,構造上の違いは見られなかった.加えて,鰓の切片標本を作製し観察を行ったが,これらにも構造上の違いは見られなかった.

キタヨコエビ科内の系統関係およびキタヨコエビ科の系統的位置を明らかにするために,キタヨコエビ科の7種を含む3上科6科17種の28S rRNAおよび16S rRNAの塩基配列を決定し,系統樹を作成した.その結果,科レベルではキタヨコエビ科およびMesogammaridaeの単系統性が強く支持された.一方,上科レベルで見ると,ヨコエビ上科は単系統にはならず,上科レベルで分類学的再検討を行なう必要があることが明らかになった.また,海水域から淡水域への侵入および淡水域から海水域への二次的な侵入は,キタヨコエビ科内においてのみならず,ヨコエビ類全体で独立に何度も生じていることが示唆された.しかし,浸透圧調節器官の形態には顕著な差あるいは生息環境による傾向などは見られなかった.キタヨコエビ科のオオエゾヨコエビ属内の系統関係を明らかにするために,オオエゾヨコエビ属の2亜属12種のCOIおよび12S rRNAの塩基配列を決定し,系統樹を作成した.その結果,亜属レベルではアナンデールヨコエビ亜属の単系統性が強く支持された.また,琵琶湖固有のナリタヨコエビと諏訪湖および河口湖に分布するスワヨコエビは,形態的にも遺伝的にも差がないことから,両種は極めて近年に種分化したか,同種である可能性が高いことが示唆された.琵琶湖から諏訪湖・河口湖へは多数の魚種が移植されていることから,ナリタヨコエビはそれらの魚種とともに琵琶湖から諏訪湖・河口湖へ移入されたのかもしれない.以上述べたことに加えて,キタヨコエビ科のトゲオヨコエビ属のリビジョンを完成させ,これまで混乱していた本属の分類を明らかにし,1新種を記載した.
1950-60年代日本文学の英語訳に関する基礎的研究

1968年の川端康成のノーベル賞受賞は、日本近代文学が「世界文学」の仲間入りを果たした画期的な出来事であったが、そこに至るまでには占領期のGHQ検閲における翻訳に始まり、50年代の冷戦期の日米関係を反映した日本文学の英語翻訳ブーム等が存在していた。この共同研究は、こうした文学の翻訳のありようを文学的のみならず歴史的・社会的に多角的な方面から追求し、50年代においては、政治的・商業的な状況に配慮しようとする出版人と、その意図と交渉を続けつつ翻訳作品を選択し翻訳する翻訳者たちのせめぎ合いが存在したことを明らかにした。本研究では、戦後から1960年代にかけて、日本の近代文学が世界の主要な文学となっていく過程を、英語への翻訳の生産・出版・流通に焦点を宛てながら歴史的に研究することを目的としていた。特に、1968年の川端康成のノーベル文学賞受賞に至る査読過程に関する新資料の収集によって、日本文学の英語訳に関する研究の新領域を切り拓くことを主眼としていた。本研究の初年度である今年度は、基礎資料の発掘・収集・整理を重点的に行う年と位置づけ、多くの収穫があった。まず、研究代表者の榊原理智が統括し、研究分担者のロバート・キャンベル、十重田裕一、塩野加織との協議のもとに、研究協力者である読売新聞東京本社の待田晋哉文化部記者のスウェーデン・アカデミーのノーベル図書館訪問を企画・実施した。情報開示請求によって得られた新事実として重要なものは次の二点である。1選考に先立つ1963年の時点においては、三島由紀夫が日本人候補者の中でもっとも受賞の可能性があったこと2その具体的な選考の過程のなかに、三島由紀夫『宴のあと』を翻訳したドナルド・キーンの英語訳に関する記述があり、英語訳が選考過程に重大な影響を与えていること。これらは、待田記者の署名記事として読売新聞に発表されたほか、その学術的考察として、十重田が「ノーベル文学賞60年代の選考ー三島、日本人候補の最有力」(『読売新聞』2014年1月28日朝刊12版)にまとめた。他に、川端康成の作家研究の一部としてキャンベルと十重田が座談会に出席し、その成果が「《座談会》浅草を語る」『文学』第14巻・第4号(岩波書店、2013年7月)として出版され、十重田の論文「「浅草紅団」の新聞・挿絵・映画ー川端康成の連載小説の方法ー」『文学』第14巻・第4号(岩波書店、2013年7月)にも結実している。本研究では、1950年代から1960年代にかけて、日本の近代文学が世界の主要な文学となっていく過程を、英語への翻訳の生産・出版・流通に焦点を宛てながら歴史的に研究することを目的としていた。本研究の二年目となる今年度は、前年度の資料蒐集をもとにして幾つかの成果をあげた。まず、2014年7月29日に、海外からカリフォルニア大学ロサンジェルス校のマイケル・エメリック教授、国内から上智大学の河野至恩教授を招いて、研究代表者榊原と、研究分担者キャンベル、十重田、塩野の全員が参加し「<世界>を通して見る日本文学・日本文学研究」と題した国際ワークショップを行った。また、研究代表者の榊原が、1950年代の近代日本文学の翻訳に携わった北米の商業出版社がどのように冷戦下の政治体制と関わりながら、翻訳を通して日本のイメージを作り出していったかに関する発表を、タイ王国チュラロンコーン大学で行った。さらに、榊原は占領期小説における翻訳の問題を理論的に考察した論文を、研究分担者の十重田は、翻訳が大きな役割を果たす占領期のメデイア検閲に関する研究を、『検閲の帝国ー文化の統制と再生産』(紅野謙介他編新曜社、2014年)に寄稿した。十重田はその成果を日本とフランスにおいて研究発表と講演の形で発表している。引き続き基礎資料の発掘・収集・整理にも務め、多くの収穫があった。代表者榊原の統括の下、研究分担者の塩野が米国コロンビア大学図書館に所蔵されている、50年代の中心的翻訳者であるドナルド・キーンの出版社との書簡等の資料の予備調査を行い、今年度により本格的調査ができるように準備をした。本研究では、1950年代から1960年代にかけて、日本の近代文学作品が北米において英語に翻訳されることで、世界の主要な文学となっていく過程に着目し、翻訳の生産・出版・流通等から多角的に研究することを目的としていた。本研究の最終年度にあたる今年度は、前年度の資料蒐集を引き継いでさらに資料を蒐集するとともに、翻訳理論に関する意見交換を米国在住の研究者と行った。研究代表者の榊原は、1954年に発表された、谷崎潤一郎の『陰翳礼讃』の英語翻訳の過程を証査した論文をまとめ、2016年8月に『谷崎潤一郎読本』(翰林書房)より刊行予定である。谷崎作品は『陰翳礼讃』が翻訳された後、続けて英語翻訳が出版されており、これらが60年代に入って谷崎がノーベル賞候補になっていくことへの布石であったことが確認された。さらに7月に、1950年代における英語翻訳の問題と日本の英語圏における表象についての研究発表を、Asian Studies Conference Japanにおいて行う予定である。研究分担者十重田は、戦前期から1950年代に連なる日本文学と映画の関係を俯瞰したコラムをCambridge History of Japanese Literature (Cambridge University Press)に英語で執筆し、戦後の日本文学と米国との関係を多角的にみる研究を英語圏においても発表した。

研究分担者塩野は昨年度コロンビア大学で行った予備調査で蒐集した資料、および今年度榊原のアメリカ出張で蒐集した資料の整理・データ化を行った。また、榊原と研究分担者の十重田が昨年執筆した占領期検閲と戦後小説の翻訳についての論文は、それぞれ韓国語に翻訳され、ぷるん歴史社より刊行された。1968年の川端康成のノーベル賞受賞は、日本近代文学が「世界文学」の仲間入りを果たした画期的な出来事であったが、そこに至るまでには占領期のGHQ検閲における翻訳に始まり、50年代の冷戦期の日米関係を反映した日本文学の英語翻訳ブーム等が存在していた。この共同研究は、こうした文学の翻訳のありようを文学的のみならず歴史的・社会的に多角的な方面から追求し、50年代においては、政治的・商業的な状況に配慮しようとする出版人と、その意図と交渉を続けつつ翻訳作品を選択し翻訳する翻訳者たちのせめぎ合いが存在したことを明らかにした。申請時には、平成25年度を基礎資料の発掘・収集の時期と位置づけ、11950年代60年代において英語で翻訳出版された作品・作家等についての資料を収集調査し、整理とデータ化を行うこと、2当該時期に翻訳出版に携わった関係者らに聞き取り調査を行うこととし、次年度である26年度に、ノーベル文学賞の選考過程の研究を行うとしていた。しかし、1958年から62年の選考過程に関する資料を入手できたため、次年度の中心的段階であるノーベル賞選考過程と、日本人作家候補の研究が計画より先行する形となった。今年度は、当初初年度の目的としていた1950年代60年代における日本文学の英語翻訳に関する研究が大きく前進した。国際ワークショップでの日本文学と世界文学の関わりについての生産的な議論が行われたほか、本格的な論文化には至っていないが、冷戦期における翻訳者と出版社の関係、編集者の意図等に関する新たな事実を発掘しつつあり、日本人作家がノーベル賞候補として考慮されるに至る前段階にも、さまざまな動きがあることが確認された。この「前段階」の研究によって、初年度に行ったノーベル賞選考過程の研究がより意味を持ってきたと考えている。また、前年度の報告でも述べたように、資料を蓄積した成果として、著名な翻訳者であるドナルド・キーンやエドワード・サイデンステッカー以外にも、日本国内における日本文学の英語訳の動きが活発であったことを確認しており、それらが対象とする読者や販売のルート、編集者の意図等に関しても、論文化する準備をしている。戦後特に占領期における日本文学、文学理論、翻訳論最終年度となる27年度は、初年度に行ったノーベル賞選考過程および候補作家の研究と、26年度の成果である、50年代60年代の翻訳と英語圏メディアの状況の研究とを結び合わせていく段階であると考える。前年度に引き続いて、資料蒐集・整理を継続するほか、その資料をもとに、1950年代60年代の日本近代文学の英語訳ブーム支えた出版社・翻訳者・作家へのインタビューの準備を積極的に進めたい。それによって、翻訳対象となった文学作品についてa.誰の/b.どのような意図で/c.いかなる作品が取捨選択されたのか/d.どのような編集方法や販売戦略があったのか/e.より大きな政治・社会状況との関わりがどのような形であったのか、等の検証を具体的に行い、単独の作家研究の観点では捉えることのできない、日本近代文学の世界的流通の内実を明らかにしたいと考えている。
活性酸素と一酸化窒素のクロストークからみた腹膜機能障害

本研究では,長期CAPD療法による腹膜機能低下(主に限外濾過障害)に,活性酸素とNOの相互関係が関与するとの仮説をたて検証した。腹膜障害時のNO産生異常腹膜硬化が進行すると,eNOSを発現した血管が増加し,障害部位に存在する浸潤細胞にiNOS発現を認めた。しかし,CAPD排液中のNOx量は,腹膜機能(障害程度)と相関を認めなかった。クロルヘキシジン誘発腹膜障害ラットにおいても,NOS発現の増加を認めた。しかし,リアルタイムでNO量を測定すると増加は認めなかった。このモデルラットにおいて,ニトロチロシンの蓄積が確認された。高ブドウ糖濃度下で培養した中皮細胞は,活性酸素の産生が増加する。この条件下にNOの補酵素であるBH4添加により,活性酸素産生の抑制を認めた。腹膜障害が形成される過程に,活性酸素とNOの相互作用の関与を明らかにした。鉄代謝異常と酸化ストレス鉄は毒性の強いHydroxyl radical生成反応の触媒として作用する。この作用はトランスフェリンやフェリチンとの結合により回避されている。鉄は腹膜障害度と相関が無く,腹膜の血管と,細胞浸潤の見られる部位に沈着を認めた。血管内皮にはフェリチンとHO-1の染色が観察された。同様に腹膜障害度に一致して酸化ストレスマーカーである4-HNE修飾蛋白と80HdGの染色も血管壁で観察された。ラット腹膜炎モデルにおいても,炎症細胞浸潤部位に鉄の存在を認めた。低pHでは遊離鉄が増加することが知られている。長期間の酸性透析液使用により細胞内の遊離鉄が増加し,炎症の持続により局所での鉄代謝異常を惹起し活性酸素を生成し,腹膜や腹膜血管における酸化ストレスの亢進,動脈硬化促進機序に関与すると推測される。腹膜炎モデルにおいて腹膜透過性亢進除水能低下に,サイトカインやプロスタグランジンだけでなく,血管拡張作用の強い一酸化窒素(Nitric Oxide : NO)の関与が推測されている。NOと活性酸素は相互に反応(クロストーク)し病態を形成する。本研究では,長期CAPD療法による腹膜機能低下(主に限外濾過障害)に,活性酸素とNOの相互関係が関与するとの仮説を立て検証した。腹膜障害時のNO産生異常腹膜組織を用いて,NO合成酵素(NOS)の発現を検討した。腹膜硬化が進行すると,eNOSが発現した血管が増加し,障害部位の浸潤細胞にiNOS発現を認めた。クロルヘキシジン誘発腹膜障害ラットにおいても,NOS発現増加を認めるが,リアルタイムでNO量を測定すると増加は認めなかった。炎症部位では,活性酸素はNOと同時に生成される。活性酸素はNOを強力に消去する一方,NOと反応し細胞毒性の高いペルオキシ亜硝酸イオン(ONOO^-)を産生する。腹膜障害モデルラットでも,ニトロチロシンの蓄積が確認された。以上より,腹膜障害では,活性酸素によるNO消去と,細胞毒性の高いペルオキシ亜硝酸イオン産生が認められた。酸化ストレスとNO産生異常NOS活性化にはTetrahydrobiopterin(BH4),FMN,FAD,NADPHなどの補酵素と二量体化が必要である。高ブドウ糖濃度下では,このBH4の低下によりNOSはNOを産生せず活性酸素を産生する。高ブドウ糖濃度下で培養した中皮細胞にBH4添加すると,活性酸素産生の抑制を認めた。まとめ活性酸素とNOの相互作用により腹膜障害が形成される。

今回の結果は,腹膜機能検査・保護作用を有する透析液開発の糸口となると考える。腹膜炎モデルにおいて腹膜透過・亢進や除水能低下に,サイトカインやプロスタグランジンだけでなく,血管拡張作用の強い一酸化窒素(Nitric Oxide : NO)の関与が推測されている。NOと活性酸素は相互に反応(クロストーク)し病態を形成する。本研究では,長期CAPD療法による腹膜機能低下(主に限外濾過障害)に,活性酸素とNOの相互関係が関与するとの仮説をたて検証した。鉄代謝異常と酸化ストレス鉄は毒性の強いHydroxyl radical生成反応の触媒として作用する。この作用はトランスフェリンやフェリチンとの結合により回避されている。今回,長期腹膜透析療法が鉄代謝へ影響し,酸化ストレスによる腹膜障害に関与を検討した。腹膜透析患者の腹膜生検組織(80例)を用いて,鉄沈着,フェリチン蛋白,ヘムオキシゲナーゼ(HO-1),脂質・核酸の酸化ストレスマーカー4-HNE修飾蛋白と80HdGの存在を組織化学的に検討した。また,クロルヘキシジン誘発腹膜障害ラットにおいても同様に検討を加えた。鉄は腹膜障害度と相関が無く,腹膜の血管と,細胞浸潤の見られる部位に沈着を認めた。血管内皮にはフェリチンとHO-1の染色が観察された。同様に,腹膜障害度に一致して酸化ストレスマーカーである4-HNE修飾蛋白と80HdGの染色も血管壁で観察された。ラット腹膜炎モデルにおいても,炎症細胞浸潤部位に鉄の存在を認めた。低pHでは遊離鉄が増加することが知られている。長期間の酸性透析液使用により細胞内の遊離鉄が増加し,炎症の持続により局所での鉄代謝異常を惹起し活性酸素を生成する機序が推測される。この鉄代謝異常により生成された活性酸素は,腹膜や腹膜血管における酸化ストレスの亢進,動脈硬化促進機序に関与し腹膜障害を形成すると寄与する。
栄養シグナルによる成長と代謝制御の解析

本研究の目的は、栄養状態の変化に応じた成長と代謝調節の制御機構を理解することである。多細胞生物の発育過程は、栄養状態といった外部環境の変化に応じて、柔軟に個体成長を調節できる。申請者は、モデル生物ショウジョウバエを用いて、栄養シグナルに応じたインスリン様ペプチドの機能調節機構を解析することで、生物個体に備わっている恒常性維持機構の理解を目指した。本研究の成果により、栄養状態に応じたインスリン様ペプチドの発現調節機構を詳細に明らかにした。さらに、この発現調節は、最適下限の栄養条件下において個体成長を維持する上で重要な役割を果たしていることを明らかにした。本研究提案は、栄養状態に応じた個体成長と代謝調節のシグナル伝達という生体が持つ普遍的な分子基盤を理解するために、細胞生物学・生化学的手法、遺伝学的手法、および生理分泌学的手法を組み合わせて、多角的な研究を展開する。平成26年度は、成長と代謝を調節するインスリン様ペプチド(Dilp)の遺伝子発現制御機構について解析を行った。申請者はこれまで、栄養依存的に転写レベルで制御されているDilp5遺伝子に着目し、その発現に関与する転写因子DacとEyを同定した。さらに、以下の予備結果を得ている。栄養状態に応答して局在・機能が制御されている転写因子Foxoがdilp5の発現に関わる。dilp5発現は、Foxoの上流シグナルとしてチロシンリン酸酵素型受容体Alkが機能している。Alk受容体の分泌性リガンド分子Jebは、IPCではなく神経細胞に由来する。アミノ酸シグナルに関わるTor複合体の機能は、脳グリア細胞で重要である。本申請では、上記の予備結果を踏まえて、栄養状態に応じた細胞内の応答変化および組織間相互作用を分子レベルで解析した。インスリン産生細胞(IPC)に働きかけるリガンドJebを産生分泌している神経細胞種を同定する目的で、Gal4系統のスクリーニングを行った。その結果、アセチルコリン陽性細胞でJebを発現抑制すると、Jebの発現と共にdilp5の発現が低下することが明らかになった。さらに、一部のアセチルコリン産生細胞は、dilp5発現細胞の周囲にあり、Jebを発現していることが免疫染色実験により確認された。次に、グリア細胞に由来し、アセチルコリン陽性細胞で産生されるJebの発現・分泌を制御しうる因子を探索した。その結果、グリア細胞で産生されるDilp6がアセチルコリン陽性細胞に作用し、Jebを介したdilp5の発現制御に関わることを明らかにした。(岡本ら、投稿準備中)。本研究提案は、栄養状態に応じた個体成長と代謝調節のシグナル伝達という、生物個体が持つ普遍的な分子基盤を理解するために、細胞生物学・生化学的手法、遺伝学的手法、および生理学的手法を組み合わせて、多角的な研究を展開する。成長と代謝を調節するインスリン様ペプチド(Dilp)の遺伝子発現制御機構と血糖トレハロース代謝の生理的重要性について解析を行った。平成27年度は、栄養シグナルに応じてインスリン産生細胞で発現し体液中に分泌されたDilp5がグリア細胞に働きかけ、Dilp6の発現を誘導し、自身の発現を正に制御するフィードバック機構が存在することを明らかにした。さらに、dilp5欠損変異体の表現型を詳細に解析した。その結果、dilp5欠損変異体は貧栄養条件下においてインスリンシグナルが低下し、成長阻害と発育遅延を引き起こすことを明らかにした。これらの結果は、栄養状態に応じたdilp5の発現調節は、最適下限の栄養条件下において個体成長を維持する上で重要な役割を果たしていることを明らかにした(岡本ら、2015)。また、インスリンシグナルがどのように「成長」と「代謝」のバランス調節を行っているのかを理解する目的で、血糖レベルの調節機構に着目した。哺乳類インスリンによる血糖値調節と同様に、ショウジョウバエDilpもしくはインスリンシグナルの異常により、体液中の糖分であるトレハロース濃度が上昇することが知られている。平成26年度に、トレハロースを欠損する変異体を作成し、トレハロース代謝調節は、栄養状態の量と質の変化に対する環境適応に重要な役割を果たしていることを報告した(松田ら、2015)。平成27年度は、トレハロース分解酵素の変異体を作成し、トレハロース代謝が体液量の水分調節と乾燥耐性に重要な役割を果たすことを見いだした(吉田ら、投稿中)。その結果、栄養依存的なdilp5の発現制御に関わる細胞間シグナルを同定し、さらに発現細胞の絞り込みを行った。平成27年度は、栄養依存的に発現分泌されるDilp5が、グリア細胞でのインスリンシグナルに与える影響を検討する目的で、幼虫を基本栄養培地から飢餓培地へ移し替えて、各ステップの経時的な変化を検討した。さらに、dilp5欠損変異体の表現型を詳細に検討した。これらの研究を通して、組織間シグナルを介した多段階の制御による栄養依存的なdilp5の発現制御機構の全貌が明らかになった。さらに、栄養状態の変化に応じたdilp5の発現調節は、最適下限の栄養条件下において個体成長を維持する上で重要な役割を果たしていることを明らかにした。さらに、血糖トレハロースの代謝が、栄養状態の変化に対する適応に加えて、体液量の水分調節や乾燥耐性に関わることを明らかにした。申請書に記載した「研究の目的」に対して、順調に進展していると判断する。

本研究の目的は、栄養状態の変化に応じた成長と代謝調節の制御機構を理解することである。成長と代謝の両方を制御する重要な内分泌ホルモンであるインスリン様ペプチドの作用は、栄養状態により厳密に制御されている。インスリンシグナルがどのように「成長」と「代謝」のバランス調節を行っているのかを理解する目的で、血糖レベルの調節機構に着目した。哺乳類インスリンによる血糖値調節と同様に、ショウジョウバエにおいてもインスリンシグナルの異常により、体液中の糖分であるトレハロース濃度が上昇することが知られている。平成26年度に、トレハロースを欠損する変異体を作成し、トレハロース代謝調節は、栄養状態の量と質の変化に対する環境適応に重要な役割を果たしていることを報告した(松田ら、2015)。平成27年度は、トレハロース分解酵素の変異体を作成し、トレハロース代謝が体液量の水分調節と乾燥耐性に重要な役割を果たすことを見いだした(吉田ら、Sci Rep, 2016)。平成28年度は、血糖トレハロース代謝の生理的重要性について、解析を行った。トレハロース分解酵素の変異体は、栄養環境の変化に対して適応能が極端に低下していることを見いだした。具体的には、糖分の減少のみならず、蛋白源の低下に対しても幼虫期での致死性を示した。また、蛋白源の低下に対する適応能の低下は、トレハロース分解酵素の変異体で生じる高トレハロースが主要な原因であることをも明らかにした(八杉ら、Sci Rep, 2017)。また、インスリン受容体の新規点変異体を用いて、栄養環境変化に対する適応能を検討した。その結果、餌中の糖分に対する蛋白源の比率が低下すると、幼虫初期に致死性を示すことを見いだした(未発表)。これらの結果より、インスリンシグナルやその作用点の一つである血糖代謝の調節が、栄養環境変化に対する適応に重要な役割を果たすことを明らかにした。多細胞生物の発育過程は、栄養状態といった外部環境の変化に応じて、柔軟に個体成長を調節できる。申請者は、モデル生物ショウジョウバエを用いて、栄養シグナルに応じたインスリン様ペプチドの機能調節機構を解析することで、生物個体に備わっている恒常性維持機構の理解を目指した。本研究の成果により、栄養状態に応じたインスリン様ペプチドの発現調節機構を詳細に明らかにした。さらに、この発現調節は、最適下限の栄養条件下において個体成長を維持する上で重要な役割を果たしていることを明らかにした。平成26年度は、成長と代謝を調節するインスリン様ペプチド(Dilp)の遺伝子発現制御機構について解析を行った。その結果、栄養依存的なdilp5の発現制御に関わる細胞間シグナルを同定し、さらに発現細胞の絞り込みを行った。さらに、栄養依存的に発現分泌されるDilp5が、グリア細胞でのインスリンシグナルに与える影響を検討する目的で、幼虫を基本栄養培地から飢餓培地へ移し替えて、各ステップの経時的な変化を検討している。
感情の喚起に及ぼす身体機能に関する健康心理学的研究‐身体感覚を中心として

まず、情動と身体感覚の関連について検討した結果、情動により感じる身体感覚の部位や強弱には特異的な特徴があることがわかった。次に不安について取り上げ、不安と身体接触の際の手の圧の感覚の関連について検討した。その結果、不安が高いほど接触圧が低く、それは訓練により制御できることもわかった。さらに身体接触の際に皮膚に起こる振動について測定した結果、「なでる」場合「1/fゆらぎ」をもつ周波数が生じていた。今年度は、情動に伴う身体の変化について測定する尺度を作成した。大学生(280名)に対し、6種類の情動(怒り、恐怖、喜び、嫌悪、悲しみ、驚き)を感じた際の身体的変化について、自己報告による調査を実施した。その結果、情動に伴う身体感覚の頻度は,恐怖で最も高く,嫌悪では最低だった。次に6種類の情動に伴う身体感覚の身体部位に関して,クラスター分析(x^2測度・グループ内平均連結法)を行い,身体部位の度数パターンが類似の情動をクラスターにまとめた。その結果,喜びと悲しみは類似しており,そこから,嫌悪,驚き,怒り,恐怖の順に類似度が下がっていくことがわかった。次に、情動に伴う身体感覚を測定する尺度を開発し,その妥当性と信頼性について検討した。因子分析の結果、3因子で14項目が採用された。第1因子は全身や手足の収縮や震え,顔面の紅潮に関するものであることから,“自律神経の変化"と命名された。第2因子は“顔が歪む"“眉間にしわがよる"といった内容から,“表情筋の収縮"と命名された。第3因子は身体の脱力状態に関する内容から,“身体の脱力"と命名された。合計14項目の内的整合性を示すα係数は,全体で.82であり,尺度としての信頼性が高いことが示された。さらにこれらの身体感覚が感情の主観的体験に及ぼす影響を検討した結果、“自律神経の変化"を知覚するほど、感情に巻き込まれる傾向があることがわかった。これらの結果から、情動により特異的な身体感覚のパターンがあること、そしてそれと感情との間には、密接な関連があることが明らかにされた。今年度は、感情と身体感覚の関連について、特に身体接触の観点から検討を行った。その際、特に身体接触が重要視される場面や職種として看護場面を選択し、不安や緊張が高まると考えられる、患者の体位変換を行う際の触れ方について検討を行うこととした。看護学生が患者役の大学生の体位変換を行うという不安を喚起させる場面において、どのような身体感覚をもつのか、について検討した。さらに体位変換を行う際の触れかたについて、手の平の3点(中指先(A)、薬指付け根(B)、手の平(C))の接触圧を測定した。このとき、実験前後で動作法を行う実験群と行わない統制群とで比較を行った。実験の結果実験群では、動作法を行う前のプリテストでは、いずれの学生もAで大きな接触圧の加圧が認められ、BとCではほとんど加圧がみられなかったのに対して、動作法後のポストテストでは、逆にAとBではほとんど加圧がみられず、Cに大きな負荷が認められた。一方、動作法を行わない統制群では、BとCでの加圧が相対的に高かった。この実験の問題意識は、身体の延長線上に開発されたさまざまな機器や道具を中心とした医療現場の中で、看護の本質的な意味がないがしろにされてきており、気付かないうちに「さわる」とか、「腕をつかむ」ということになっているかもしれないことへの危機感がある。このような状況の中でも、動作法をすることによって、自分の身体感覚という確固たる拠り所を保つことができれば、患者に「ふれる」という看護の原点に立ち戻ることができる可能性が示唆された。今年度は、感情と身体感覚の関連について、身体接触の仕方による感情の喚起の違いについて検討した。被験者は大学生12名(男性6名、女性6名)であり、ペアを組ませた者同士はすべて友人関係にあった。心理指標として気分調査表(坂野ら、1994)を用いた。被験者には同性同士それぞれペアで1組ずつ実験に参加させ、2者ともに着座の状態で一方に相手の手の平を以下の3種類の触れ方で接触させた。触れ方は「撫でる」、「擦る」、「タッピングする」であり、各々の触れ方で1分ずつ触れてもらった。「撫でる」とは手の平を相手の手に密着させてやや圧をかけながら1秒に1往復させ、「擦る」とは指の内側部分全体を相手の手に軽く接触しながら同じ速度で往復させ、「タッピング」は同じ速度で相手の手を軽くリズミカルに叩いた。それぞれの3種類の触れ方による、接触圧の違いについて確認した。さらに3種類の接触前後に気分調査表への記入を求めた。実験の結果、得られたデータをexcelを用いて高速フーリエ変換し、各周波数ごとにパワースペクトルを算出した。

その結果、「撫でる」触れ方で触れられた者の皮膚は、1/fゆらぎの特性をもつことがわかった。それに対して、「擦る」と「タッピング」による皮膚の振動には、この特性はみられなかった。さらに、気分調査表の3因子について因子別に平均得点を算出し、実験後から実験前の変化量について、「触れ方」と「触れる一触れられる」を要因とする2要因の分散分析行った。1/fゆらぎの振動は、人間に快適感を与え癒しやリラクセーションの効果があることが知られている。本実験の結果から、「撫でる」ことにより皮膚にはこの快適感をもたらす1/fゆらぎが発生していることから、この振動を皮膚の受容器が受容し、それが脳に伝達された結果として快適感がもたらされる可能性が示された。
歩行開始期における他者の心の理解の発達に対する自己覚知および母親の感情鏡映の影響

平成30年度は生後1014ヶ月児の自己感受性計測プログラムの開発に取り組み,そのプログラムに視線探知装置(アイトラッカー)を導入することを試みたが,アイトラッカーを用いて自動的に測定できるプログラムを構築することができなかった。本研究の目的は,母親の情動鏡映的な関わりが乳児の情動に対する自己感受性を高めて,それが1歳後半のときの他者の心の理解に促進的に関与するという仮説を抱え,自己感受性の発達は母親の関わりと他者の心の理解の発達の間を取り持つ媒介的な働きがあることを実証することである。それゆえ,本研究では独自に自己感受性を計測するプログラムを構築して実際に計測することが最も重要な課題である。これまでに,タッチスクリーンを用いて,乳児が口を動かすとタッチスクリーン上の左右のどちらかの帽子が点滅し,点滅中の帽子に乳児自身が触れると帽子から動物が飛び出すというプログラムを作成し,生後1014ヶ月児にそのプログラムを提示して,乳児が何試行目から自主的に口を動かして帽子から動物を飛び出させようとするようになるのかを検討した。しかしながら,なかなか適切な乳児の反応を得ることができず,スクリーン上の適切な場所とタイミングで触ることは乳児には難しいと考え,平成30年度は点滅する帽子を注視することで動物が飛び出るようにするプログラムを作成し直すことを試みた。アイトラッカーを購入して,現在も,乳児用のアイトラッキングのためのキャリブレーション・プログラムと注視データを活用した自己感受性のプログラムを検討している。平成27年度は,乳児の表情変化に対する自己覚知のしやすさを測定する方法の開発に取り組んだが,その方法の試験的調査には至らなかった。しかし,プログラム完成の目処はついている。乳児の表情変化(顔の口や目の開閉)に随伴してタッチスクリーン上に手がかり刺激が提示され,それが点滅している間に乳児が触れると強化刺激が出現するというプログラムである。自分の体の動きに気づいているかを確認する課題としては鏡像課題(Gallup, 1970)や自己の運動を遅延提示する課題(Rochat & Morgan, 1995),また自分が原因になっていることに気づけるかを確認する課題として自分が重石になって動かせないカートをどうするかをみる課題(Moore et al.,2007)がある。これらの課題は6ヶ月未満児あるいは18ヶ月齢周辺の課題である。しかし近年,12ヶ月児に適用できる自己覚知課題としてWatson et al.(2011)が,表情(情動表出)変化に気づいているかを確認する課題を開発した。ただし,彼ら以外の研究者はこれを追試・報告していない。また,乳児の表情や情動表出に対する母親の感情鏡映的関わりが乳児の自己覚知を発達させるという本研究の仮説において,この課題は表情に対する乳児の自己覚知を直接測定できる重要な測度となる。平成28年度では,昨年度内に達成できなかった,測定プログラムによる試験的調査を実施する予定である。その調査で,1歳の乳児であれば何試行目で手がかり刺激にタッチするという正解反応を示すのかを確認して,条件の設定を調整する。また,乳児と母親のペアの参加を募り,母子のやりとりを観察して母親の感情鏡映的関わりを測定するとともに,子どもに測定プログラムを適用して表情に対する自己覚知のしやすさを計測することで,本研究の仮説の一部を検証する予定である。プログラムの作成に時間がかかった。本研究ではプログラム作成においてMatLabとPsychtoolboxを用いたが,プログラムに誤作動が生じて原因を特定したり修正したりして,予定以上に時間を要した。平成28年度は,乳児の自己覚知のしやすさを計測するためのプログラムが完成し,実際に乳児とその保護者にそのプログラムを用いた実験的調査に参加いただいた。プログラムは,乳児の口の開閉に随伴してタッチスクリーン上に手がかり刺激が提示されて,それが点滅している間に乳児がその刺激にタッチすると強化刺激が出現するというものである。このプログラムはWatson et al.(2011)のプログラムに倣っているが,Watson et al.では手がかり刺激への注視によって強化刺激が出現するのに対して,本研究のプログラムでは手がかり刺激へのタッチによって強化刺激が出現する。このプログラムに対する12ヶ月周辺の乳児の反応を記録・観察したが,Watson et al.の研究結果のように手がかり刺激への応答は見られず,乳児自身の口の開閉によって手がかり刺激が提示されることに気づいているか否かを明確に捉えることができなかった。おそらく,視線反応とタッチ反応の差異によるものと思われる。また平成28年度は,自己覚知の実験に参加した乳児は引き続き18ヶ月時に他者の心の理解の課題を実施する計画であったが,自己覚知の計測が十分でないために,そこに至らなかった。平成29年度では,より多くの乳児の参加を対象月齢の幅を広げて募集する予定である。また,実験的調査の前に母親と乳児のやりとりを観察しているが,そのやりとりの中で見られる母親の感情鏡映的関わりを計測し,乳児の自己覚知のしやすさとの関連性を検討する予定である。さらに,18ヶ月時点での他者の心の理解の課題を実施し,他者の心の理解が自己覚知や母親の感情鏡映とどのように関連するかを検討する。自己覚知の計測プログラムは完成してデータを収集しているが,予想していた乳児の応答反応があまり見られずデータ収集を継続しており,平成28年度の計画である18ヶ月時点での他者の心の理解の課題までは実施していない。

計画では,乳児の自己覚知に母親の感情鏡映が関与するのか,他者の心の理解に自己覚知や母親の感情鏡映が関与するのかについてデータ分析をする予定であったが,そこに至っていない。平成29年度は,生後1014ヶ月の乳児に対する自己感受性の計測を引き続き行ったが,結果的には分析可能なデータを収集するには至らなかった。課題内容は,乳児が口を動かすと,タッチスクリーン上の左右のどちらかの帽子が点滅し,点滅中の帽子に乳児自身が触れると帽子から動物が飛び出すというものである。昨年度の反省より,様々な動物が出てくるように設定し,帽子も乳児がタッチしやすいように大きく表示をした。この測定課題から,乳児が自分の口の動きによって帽子が点滅をして動物を出現させることができることに気づくようになるのかを把握するのであるが,乳児が積極的に口を動かそうとする様子は殆ど見られなかった。一方,スクリーン上中央の女性が口を開くと帽子が点滅してそこに触れると動物が出てくるという条件では,多くの乳児が帽子を触ろうとする傾向がみられたが,点滅中に触るのは難しいようであった。こうした乳児の反応から,1スクリーン上の適切な場所とタイミングで触ることは乳児には難しいこと,2「乳児の開口ー帽子点滅」の連合と「帽子点滅へのタッチー動物出現」の連合の2つを学習することが乳児には困難であること,3乳児はスクリーンに興味をもつほどに口を動かさなくなること,が理由で有効データを収集できなかったと考える。29年度の計画では,上記の計測による自己感受性のほかに,乳児と母親のやりとりの中で見られる母親の感情鏡映的関わりを計測したり,生後18ヶ月になって再び他者欲求理解(自己と他者では欲求・好みが異なることの理解)の課題を実施したりして,「母親の感情鏡映的関わり→自己感受性の高さ→(自己の状態を通して他者の状態を理解することを繰り返し経験して)他者欲求の理解しやすさ」という因果関係を想定した分析を行う予定であった。しかし,乳児の自己感受性のデータを収集できなかったため,18ヶ月時点の調査も実行しなかった。自己感受性の計測において分析可能なデータが得られていない。その理由を考慮し,現在までに,乳児の口の動きを誘発するためにスクリーン上の女性の口がランダムなタイミングで動くというプログラムを作成し,今後検討する予定である。そのほかに,乳児と母親のやりとりの中で見られる母親の感情鏡映的関わりを計測したり,生後18ヶ月になって再び他者欲求理解(自己と他者では欲求・好みが異なることの理解)の課題を実施したりすることも予定であったが,自己感受性の分析可能なデータがなければ母親の関わり方や18ヶ月時の欲求理解との関連も検討できないため,計測・実施には至っていない。平成30年度は生後1014ヶ月児の自己感受性計測プログラムの開発に取り組み,そのプログラムに視線探知装置(アイトラッカー)を導入することを試みたが,アイトラッカーを用いて自動的に測定できるプログラムを構築することができなかった。本研究の目的は,母親の情動鏡映的な関わりが乳児の情動に対する自己感受性を高めて,それが1歳後半のときの他者の心の理解に促進的に関与するという仮説を抱え,自己感受性の発達は母親の関わりと他者の心の理解の発達の間を取り持つ媒介的な働きがあることを実証することである。
ホスファチジルセリンが制御するリサイクリングエンドソームの機能の解明

前年度までに、リサイクリングエンドソームのホスファチジルセリン(PS)近傍蛋白質をBirA*法により同定し、同定した蛋白質の中に細胞増殖を制御する転写コアクチベーターYAPおよびYAPを負に制御するHippo経路の蛋白質が含まれていることを見出していた。平成29年度は、リサイクリングエンドソームのPSとYAP・細胞増殖との関連を検討し、以下の結果を得た。(1)リサイクリングエンドソームの細胞質側脂質層のPS量を制御するPSフリッパーゼATP8A1(PSをルーメン側脂質層から細胞質側脂質層にフリップする酵素)のノックダウンにより、細胞増殖が低下すること、YAPの不活化体(リン酸化体)が増加すること、YAPキナーゼであるLats1の活性化体(リン酸化体)が増加することを見出した。(2)リサイクリングエンドソームの細胞質側脂質層のPSによってリサイクリングエンドソームに局在化するevectin-2のノックダウンにより、細胞増殖が低下すること、YAPの不活化体(リン酸化体)が増加すること、YAPキナーゼであるLats1の量が増加することを見出した。同様の結果が、evectin-2結合タンパク質として申請者が同定したNedd4 E3リガーゼ(Itch、WWP1、WWP2)のノックダウンによっても認められていることから、evectin-2/Nedd4 E3リガーゼ複合体によるLats1の分解が示唆された。(1)および(2)の結果は、Nature Communicationsに公表した。(3)リサイクリングエンドソームのPS近傍蛋白質の中に14種類のprotein phosphataseが含まれていたが、その中の幾つかがYAP・Hippo経路を制御する可能性を見出した。リサイクリングエンドソームの新しい機能として、YAPの活性化を通じた細胞増殖の制御を見出した。またその分子機構として、リサイクリングエンドソームのPSによるYAPの脱リン酸化制御およびYAPキナーゼLats1の量の制御があることを明らかにした。リサイクリングエンドソームの新しい機能を見出したことに加え、その分子メカニズムまで示唆することができたことから、当初の計画以上に研究は進展しているものと評価する。リサイクリングエンドソームのPSが如何にYAPの脱リン酸化(活性化)を制御しているのか、その機構を明らかにする実験を進めて行く。特に、申請者が同定したリサイクリングエンドソームのPS近傍蛋白質の中には14種類のprotein phosphataseが含まれていたが、そのうちの幾つかがYAPを正に制御している可能性を既に見出しており、最優先で検討を行う。YAP経路の異常な活性化は細胞のがん化と密接につながっていることが知られている。がん細胞において、申請者が同定したYAPを正に制御する蛋白質(evectin-2、ATP8A1、Nedd4 E3リガーゼ)をノックダウンし、がん細胞の増殖能を低下させることができるか検討する。実施計画に従い、平成28年度は以下の3項目について実験を遂行した。(1)リサイクリングエンドソーム(RE)に局在する新規蛋白質の同定:ビオチン化酵素BirA*を、申請者が作製したホスファチジルセリン(PS)選択的認識プローブ2xPH(evectin-2のPHドメインをタンデムにつなげることで、PSへの結合力を飛躍的に高めたもの。主にREにターゲティングする。)に融合させたコンストラクトを発現させることで、生きた細胞内でREのPS近傍蛋白質をビオチン化することに成功した。ビオチン化された蛋白質をアビジンビーズで回収し、次いで質量分析により網羅的に解析したところ、前年度までの解析結果とあわせて、約350種類の蛋白質を同定することができた。その中には、細胞増殖を正に制御する転写コアクチベーターYAPおよびYAPを負に制御するHippo経路の蛋白質が含まれていた。(2)REに局在するユビキチンE3リガーゼによるYAP/Hippo経路の制御:PS依存的にREに局在するevectin-2の結合分子として、申請者はユビキチンE3リガーゼItch、WWP1、WWP2を同定している。これらE3リガーゼのノックダウンを行ったところ、細胞増殖の低下、YAPの不活性化体であるリン酸化YAPの量が増加、YAPのキナーゼであるLats1の量が増加すること、が明らかになった。よって、これらE3リガーゼがYAP/Hippo経路の制御に重要な働きをしていることが示唆された。(3)ASPP1/ASPP2によるYAPの制御:YAPの脱リン酸化酵素と示唆されているASPP1/ASPP2をノックダウンしたが、細胞増殖に顕著な影響は認められなかった。PS近傍蛋白質を網羅的に質量分析で同定できたこと、さらに同定されてきた蛋白質の1つであるYAP転写コアクチベーターが、REに局在するNedd4 E3リガーゼーの制御を受けていることを明らかにすることができたことから、研究は順調に進展しているものと考える。さらに、Nedd4 E3リガーゼが、YAPの負の制御系であるHippo経路の中核分子であるLats1を分解していることまで突き止めることができたことから、当初の計画以上に研究は進展しているものと評価する。

平成29年度は、リサイクリングエンドソームのPSとYAP・細胞増殖との関連を検討し、以下の結果を得た。(1)リサイクリングエンドソームの細胞質側脂質層のPS量を制御するPSフリッパーゼATP8A1(PSをルーメン側脂質層から細胞質側脂質層にフリップする酵素)のノックダウンにより、細胞増殖が低下すること、YAPの不活化体(リン酸化体)が増加すること、YAPキナーゼであるLats1の活性化体(リン酸化体)が増加することを見出した。(2)リサイクリングエンドソームの細胞質側脂質層のPSによってリサイクリングエンドソームに局在化するevectin-2のノックダウンにより、細胞増殖が低下すること、YAPの不活化体(リン酸化体)が増加すること、YAPキナーゼであるLats1の量が増加することを見出した。同様の結果が、evectin-2結合タンパク質として申請者が同定したNedd4 E3リガーゼ(Itch、WWP1、WWP2)のノックダウンによっても認められていることから、evectin-2/Nedd4 E3リガーゼ複合体によるLats1の分解が示唆された。(1)および(2)の結果は、Nature Communicationsに公表した。(3)リサイクリングエンドソームのPS近傍蛋白質の中に14種類のprotein phosphataseが含まれていたが、その中の幾つかがYAP・Hippo経路を制御する可能性を見出した。リサイクリングエンドソームの新しい機能として、YAPの活性化を通じた細胞増殖の制御を見出した。またその分子機構として、リサイクリングエンドソームのPSによるYAPの脱リン酸化制御およびYAPキナーゼLats1の量の制御があることを明らかにした。リサイクリングエンドソームの新しい機能を見出したことに加え、その分子メカニズムまで示唆することができたことから、当初の計画以上に研究は進展しているものと評価する。平成28年度の成果として、全く予想していなかったREと細胞増殖との関連が示唆された。今後は、質量分析で同定されてきた蛋白質の中から、特にHippo/YAP経路を制御する可能性がある蛋白質に着目して、優先して解析を進めて行く。ASPP1/ASPP2のノックダウンにより細胞増殖に影響が認められなかったことは、protein phosphataseのリダンダンシーによる可能性が考えられるので、BirA*法によって同定したprotein phosphataseには特に着目して解析を行う。また、REのPS量に種々の方法により干渉した時に、細胞増殖に影響が出るかを評価することで、PSが細胞増殖に関与しているかどうかも明らかにする。リサイクリングエンドソームのPSが如何にYAPの脱リン酸化(活性化)を制御しているのか、その機構を明らかにする実験を進めて行く。特に、申請者が同定したリサイクリングエンドソームのPS近傍蛋白質の中には14種類のprotein phosphataseが含まれていたが、そのうちの幾つかがYAPを正に制御している可能性を既に見出しており、最優先で検討を行う。YAP経路の異常な活性化は細胞のがん化と密接につながっていることが知られている。
イオン感応性ケミカル・バイメタルの開発

アルカリ感応性ケミカルバイメタルの応答範囲を広げるため、さらに検討した結果、組成がペラルゴン酸20%、DOP40%、PVC40%で膜厚が0.6mmの物が再現性が良く、応答範囲が広い事がわかった。この膜を用いて、各種のアルカリ溶液に対する応答性を調べた結果、弱アルカリでは応答性が少し落ちることがわかった。また、プロピルアミン濃度が濃くなると逆方向の応答性を示した。これは、強アルカリでは反応速度が水中での水酸イオンの拡散律速によるのに対して、弱アルカリ溶液ではPVC膜の界面の拡散層中で弱アルカリがペラルゴン酸により中和される。このため、界面のpHが低下し、未解離のペラルゴン酸濃度が高くなるため、ペラルゴン酸のPVC膜中かの溶出が低下するためと考えられる。このことは、界面でのイオン平衡と拡散を考慮したディジタルシュミレ-ションによって確認した。プロピルアミン濃度が濃い場合は水層中のプロピルアンモニウムイオン濃度が高いため、ペラルゴン酸イオンとイオンペア-を生成する。このイオンペア-は電荷が中性であり、かつ親有機性であるため再びPVC膜中に溶解するため変位量が減少しているからである。Kelex100を用いた銅イオンに感応するケミカルバイメタルは0.21mMの銅イオンが測定できるなど、感度が良かったが、0.2mM以下では応答を示さないという欠点を持っていた。この原因としては、銅イオン濃度が低い場合は、生成したキレ-トが、感応膜中に再溶解するためと考えられる。この欠点を改良するために、反応物質としてLIX26を用いたケミカルバイメタルを開発した。このケミカルバイメタルは0.2mMまで良好な応答性を示し、KELEX100の場合と比べて感度が5倍向上した。また、このケミカル・バイメタルは銅イオンの下水の排水基準である3ppmを直接測定できる感度があることがわかった。
モノクローナル抗c-kit抗体による胎生・新生マウス皮膚マスト細胞の解析

モノクローナル抗c-Kit抗体(ACK2)投与と非投与のC57BL/6新生マウスの皮膚を用いて真皮のマスト細胞を観察した。実験はACK2投与を生後0、2、4、6、8日隔日投与、生後0、1、2日連日投与、生後0日、生後2日、生後4日、生後6日、生後8日にそれぞれ一回投与して生後10日に採取した皮膚と、ACK2を生後0日または生後0、1日連日投与して生後0、1、2、3、4、6、8、10日に採取した皮膚について検索した。トルイジンブルー染色標本を作成したマスト細胞を数えた。酵素抗体法を施行し真皮内c-Kit陽性細胞を数えた。電顕的にもマスト細胞を観察した。また、TUNEL法に準じたアポトーシス検索も行った。C57BL/6新生マウスの真皮のマスト細胞数は生後0日が一番多く生後10日で最も少なくなっった。また、ACK2投与群とACK2非投与群とは有意な差がなかった。真皮内c-Kit陽性細胞数も同様の結果であった。また、HE染色、電顕観察でもマスト細胞にアポトーシスなどの異常はみられず、TUNEL法に準じたアポトーシス検索でも陽性所見はみられなかった。胎生マウスについては現在検討中である。