hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
センサペグボードの開発と有用性の検討

開発したペグボードと解析ソフトは、ミリ秒単位でペグの移動および手のペグ間の移動、それらの移動時間の変動、ペグ落下の検出などが正確に検知できる装置およびソフトであることが確認された。これにより今までまったく明らかとなっていなかった個々のペグや手の移動時間に関するより詳細な検討が可能となった。得られた結果をまとめ9月にスイス・ローザンヌ市で開催された国際学会(European Congress of NeuroRehabilitation 2017)、および別府市で11月に開催された国内学会(第38回バイオメカニズム学術講演会)にて発表し、その内容を研究報告(proceedings paper & abstract)として公表した。また、30年度に予定している障害者の指運動機能評価への可能性を検討するために2月にタイ・バンコク市で開催されたパーキンソン病研究サミットに参加し、リハ医学専門の医師および研究者との意見・情報交換を行った。これらの活動と平行して、ペグ操作における把持力の計測を目指した力覚センサ内装型の小型ペグおよびセンサ内装の4穴式のペグボードの設計と試作とデータ解析用のMatlabソフトの開発も完了し、30年度に予定している本実験の準備を整えた。研究は、すべておおむね予定通り進んでいるが、運動肢の左右差を検討する上で左利きの被験者の数を増やした方が賢明であることが国際学会での発表後の質疑応答で指摘された。現時点での左利き被験者数は健常青年で4名であったので、本年度中に左利き健常青年の数を合計15名程度にまで増やす追加実験を実施することにした。その他は、順調に進展していると判断している。本年(最終年)度は、(1)左利きの健常若者を対象にデータ収集と解析、(2)把握力と持ち上げ力(接面せん断力)の計測可能なペグの開発とそれを用いてのデータの収集および解析、(3)学会での成果報告、(4)高次脳機能障害者でのデータ収集、さらに(5)論文作成を行うことの5点を目的とした。まず、左利きの若者被験者(20名)によるデータを収集、解析した。左利きでは、ペグ移動およびペグ反転の双方において左手(利き手)の方が右手よりもペグ移動時間が有意に短くなることが判明した。一方、ペグへの到達時間の左右差は小さかった。右利き者での結果と併せて考えると、利き手は、微細な物体の動的操作において有利であるが、目の前の目標物への到達運動においては、その差は小さいことが判明した。次に、小型の把握力・持ち上げ力同時計測機能を備えたペグ(重量:17g)を試作し、6名の若者被験者でデータの収集を行った。持ち上げ時の把持力のピークおよび持ち上げ後の平均把握力は、移動距離に依存して増大(1.72.4N)した。持ち上げから移動中の平均把握力も1.4から2.1Nとなった。これらの把握力増大は、持ち上げと移動運動における加速度の増大によるものと推察された。持ち上げ力様相からは、移動後にボード上の穴差し込みでペグがボードに接触(衝突)する場面が多発することが確認された。ペグ移動時間が到達時間に比べて長くなることに、それが関わっていることが明らかとなった。学会発表は、6月にチェコ共和国プラハにおいて開催されたThe World Congress of Biomedical Engineeringにおいて28年度までの成果を報告した。高次脳機能障害者を対象とした研究は、協力の得られた2医療機関で、現在データ収集を行っている。。また、28年度までの研究成果の論文作成も進行中である。
経済成長論に関する実証研究

Solowモデルにおいて収束を考えるとき、時間tにおける有効労働1単位当りの国民所得を、初期と定常状態におけるその所得、そして、収束速度と時間tによって表せる。従来の研究では、定常状態における労働1人当たりの国民所得を、利用可能なデータから求めた投資率や人口成長率などの変数から推定した。そこで、私は、利用可能な1人当り国民所得のデータからのみ、収束過程を推定する方法を提唱する。収束過程の式を、変形するなどいくらかの操作を施し、定常状態が明示的に出てこない様にする。そして、適切な形で誤差項を仮定すると、入手できる1人当り所得のデータからだけで、各国の収束速度を推定できる。また、この方法により、従来の研究に使われている(人口成長率+技術進歩率+減価償却率)のデータに、測定誤差が含まれているかどうかも検定できる。上記の方法は、福島大学経済学部DPとして作成中である。また、提唱した方法を用いて、実証分析を行う予定である。
実践共同体としての花街--「古都」の空間再編と「祇園らしさ」の変容

本研究は、戸籍上の夫をもたず、子が母方の姓を名乗る祇園町の商家の、女が家長を継承するという特性に着目する。民俗学の商家研究において、血縁よりも系譜を重視する特性は指摘されてきたが、女性が家長として経営を担う例は極めて珍しい。本研究の成果は、文化人類学における親族・家族研究のみならず、現代社会の親族関係について考える上で重要な意味をもつ。本年度は、(a)京都市内に位置する花街(祇園甲部・祇園東・上七軒・宮川町・先斗町)、特に東山区に位置する花街・祇園甲部を調査対象とした現地調査と(b)文献調査を行った。聞き取り調査では、個々の女将たちがいかなる実践によって「地味な商売」を実現しているのか、女将たちの商いを支えてきた旦那制度がかつていかに機能していて、現在はいかに機能していないのかという点を中心に検討した。これらの調査で得られたデータに平成25年度の調査で得られた知見をくわえて、2014年3月に博士論文「女の町」の〈芸〉一花街・祇園町に関する女性史学的研究」を先端総合学術研究科に提出する。本研究は、京都市東山区に位置する花街・祇園甲部を、生業・出自・土地という3要素を基盤として成立する芸能サービス(広義の〈芸〉)を提供する実践共同体として分析することを目的としている。具体的には、「花街・祇園という共同体の成員--特に芸能を継承するために「実践共同体」を形成する芸妓・舞妓たち--がソト(京都という都市空間)からどのような期待を受け、その期待に対して自らの〈芸〉をいかに変容させていくのかを分析する。(a)フィールドワークによる人類学的分析と(b)史料分析による歴史学的分析の両面から都市における芸能集団のエスノグラフィを記述し、博士論文として2012年度に提出する。本年度は、(a)フィールドワークを主として調査を行った。博士論文の中心となる学校法人・八坂女紅場学園(博士予備論文での分析対象)の生徒=現役の芸妓への長期的なインタビューの予備調査である。具体的には、(1)祇園甲部のお茶屋と(2)お茶屋の客として花街に関わるA氏のお座敷の2カ所で参与観察を行った。芸妓の労働の場に関わることで、ライフヒストリーの背景をより正確に理解することを目的としている。具体的にはその業態やお茶屋の経営者および客たちとの関係を築くことで、職業技術を身につけていくプロセスを記録した。(2)については、その成果を2011年度の日本文化人類学会第45回研究大会にて発表予定である。(b)史料分析については、『立命館大学生存学研究センター報告16』(2011年10月出版予定)に掲載予定の論文のために、戦後の芸妓屋営業者が労働省に対して起こしたアクションの同時代史料を中心に収集を行っている。この論文は、博士論文第3章となる予定である。本年度は、現地調査、文献研究、研究コーディネート、学会発表、国外学会発表という4つの項目について成果をあげた。これらの研究の進展を受けて、当初の研究計画および博士論文の構想について、必要な修正を行った。博士論文「『女の町』の家・労働・空間-花街・祇園の戦後史における<芸>に関する歴史人類学的研究」(2012年3月提出予定)は、花街・祇園の戦後史を家・労働・空間の3つの観点から学際的に記述するものである。本研究の成果は、文化人類学における親族・家族研究において重要な意味をもつものである。本年度は、日本文化人類学会において国内学会に一定の成果を還元するとともに、オーストラリア国立大学のJapanese Studies Graduate Summer Schoolにおいては、海外にむけた英語での研究発信を行った。また、文献研究の成果は、論文「芸妓という労働の再定位-労働者の権利を守る諸法をめぐって」に結実した。本論文の掲載誌である『歴史から現在への学際的アプローチ』においては、編集をつとめ、執筆者のコーディネートおよび編纂作業の経験を積んだ。調査については、(a)京都市内に位置する花街(祇園甲部・祇園東・上七軒・宮川町・先斗町)、特に東山区に位置する花街・祇園甲部を調査対象とした現地調査と、(b)文献調査を行った。(a-1)お茶屋の女将・芸妓へのインタビューでは、文献調査で知りえた情報を、当事者の経験から検証することを目的として調査した。また昨年から引き続き、(a-2)お茶屋の参与観察および(a-3)お座敷の参与観察も継続している。(b)文献調査については、終戦を経てGHQの政策のもとで、娼妓とどのように弁別されていったのかを明らかにするため、労働基準法などの法文テクストを収集した。

本年度は、(a)京都市内に位置する花街(祇園甲部・祇園東・上七軒・宮川町・先斗町)、特に東山区に位置する花街・祇園甲部を調査対象とした現地調査と(b)文献調査を行った。聞き取り調査では、個々の女将たちがいかなる実践によって「地味な商売」を実現しているのか、女将たちの商いを支えてきた旦那制度がかつていかに機能していて、現在はいかに機能していないのかという点を中心に検討した。これらの調査で得られたデータに平成25年度の調査で得られた知見をくわえて、2014年3月に博士論文「女の町」の〈芸〉一花街・祇園町に関する女性史学的研究」を先端総合学術研究科に提出する。本年度は、主として現地調査の進展により、博士論文の構想を具体化することができた。また、海外での研究発表を経験することで、英語による発表・ディスカッションの技術を身に着けることができた。文献調査については、その成果を論文「芸妓という労働の再定位-労働者の権利を守る諸法をめぐって」にまとめることができた。本論文は、次年度に天田城介編『体制の歴史』(出版社未定、2012年3月刊行予定)に大幅に改稿の上で掲載予定である。博士論文「『女の町』の家・労働・空間-花街・祇園の戦後史における<芸>に関する歴史人類学的研究」執筆のため、主としてフィールドワークと聞き取り調査からなるデータ収集、そして論文執筆を行う。本年度の調査によって、博士論文の重要な要素である「家」という問題が浮上した。次年度以降の調査では、文化人類学における親族・家族研究、日本の民俗学における商家の研究などを参照しつつ、母から娘へと継承されるお茶屋の家長の位について分析する。戸籍上の夫をもたず、子が母方の姓を名乗る祇園町の「家」の男女分業を分析することは、戦後の日本社会における家族のありかたを逆照射することにつながるものと思われる。
哺乳類卵外被を形成する糖タンパク質の種類は動物種によって異なり,よって精子認識機構も異なると考えられる。ブタとウシでは,卵外被はZP2,ZP3,ZP4の3成分からなりZP3/ZP4複合体が精子結合活性を示すため,精子認識機構は類似している可能性がある。ウシZP3,ZP4の精子結合部位を調べた結果,ZP3の前半部分とZP4の後半部分が結合に関与することが示唆された。一方,ブタではZP3の後半部分とZP4の前半部分が関与することが示唆された。ブタとウシとで精子結合部位が異なることは卵外被の立体構造が異なることを示すのかもしれないが,この点については今後の課題である。哺乳類卵子を包む透明帯は,3ないし4種類の糖タンパク質からなる網目状構造をもち,受精の時に精子と種選択的に結合するが,この結合については透明帯の糖鎖部分が関わるとする糖鎖説とタンパク質骨格部分の立体構造が関わるとする超分子構造説が唱えられている。マウスZP3が単独で精子結合活性を示すのに対し,ブタおよびウシではZP3/ZP4複合体が活性を示し各々単独では活性を示さない。平成21年度は,ウシZP3/ZP4複合体の精子結合部位の同定を目指し,各糖鎖付加部位変異体やサブドメインをバギュロウイルス-Sf9細胞系で発現させ,複合体形成の有無と精子結合活性を調べた。その結果,ZP3のZPドメイン前半部とZP4のZPドメイン後半部とが弱いものの相互作用し精子結合活性を示すことがわかった。ZP4のN結合型糖鎖は精子結合には必要ないことがわかった。ブタの場合之ZP4のN結合型糖鎖が精子結合に関与することから,透明帯の精子結合部位は近縁の哺乳類間でも異なることが示唆された。今後ウシZP3のN結合型糖鎖の精子結合への関与の有無を検討する必要がある。マウスZP3のZPドメイン前半部が繊維形成能を有するという報告があるが,ウシZP3のZPドメイン前半部同士間の相互作用は検出できなかった。ZPドメインの機能が動物種間で異なることが示唆された。ブタ精子ADAM2が透明帯結合因子の一つであるという報告に基づき,結合機構の解明を目指した。特異抗体を作製しブタ精子からの部分精製法を見出した。ゲルろ過により高分子複合体を形成していることが示唆された。部分精製したADAM2は透明帯との結合機構の解明に利用できると期待される。哺乳類卵子を包む透明帯は,3たいし4種類の糖タンパク質からなる網目状構造をもち,受精の時に精子と種選択的に結合する。この結合機構については透明帯の糖鎖部分が関わるとする糖鎖説とタンパク質骨格部分の立体構造が関わるとする超分子構造説が唱えられている。平成22年度は,ウシZP3/ZP4複合体の精子結合部位の同定を目指し,ZP3の糖鎖付加部位変異体やサブドメインをバキュロウイルス-Sf9細胞系で発現させ,複合体形成の有無と精子結合活性を調べた。その結果,ZP3のN末端側サブドメインのN結合型糖鎖はZP4との相互作用には必要ないが,精子結合活性には必要であることがわかった。ブタの場合ZP4のN末端側サブドメインのN結合型糖鎖が精子結合に関与することから,透明帯の精子結合部位は近縁の哺乳類間でも異なることが示唆された。ADAM3ノックアウトマウスの精子が透明帯に結合できないという報告に基づき,マウスADAM3とマウスZP2,ZP3をSf9細胞で発現させ,共沈法で相互作用を調べた。その結果,ADAM3はZP2とは共沈したがZP3とはほとんど共沈しなかった。このことから,ADAM3は先体反応後の精子と透明帯との相互作用に係わる可能性が示唆された。X線結晶解析のためにウシZP4前駆体をSf9細胞で発現させたところ,モノマーであった。ブタZP3のC末端側サブドメインを卵巣卵から精製したところダイマーであった。これらの結晶化条件検討を開始したが結晶はまだ得られていない。哺乳類卵子を包む透明帯は,3ないし4種類の糖タンパク質からなる網目状構造を持ち、少なくとも試験管内では精子との種選択的結合に必要である。ブタおよびウシではZP3/ZP4複合体が精子結合活性を示し、各々単独では活性を示さない。目的1としてブタおよびウシについてZP3/ZP4複合体の精子結合領域の同定を試みた。
ウシZP3のN結合型糖鎖がZP3/ZP4複合体の精子結合活性に必要であることを種々の組換え体を作製することによりあきらかにした。ZP3のヒンジ部について種々の欠失変異体を作製したところ0結合型糖鎖付加部位を含む領域の欠失でZP4との相互作用が失われるとともに精子結合活性も失われた。よって、O結合型糖鎖も精子結合へ関与する可能性は否定されず、今後は、欠失ではなく糖鎖付加部位の変異によりO結合型糖鎖の精子結合への関与を調べる必要がある。ブタZP3/ZP4複合体については組換え体作製が進まなかったが、天然の透明帯をリシルエンドペプチダーゼ消化し、産物をゲルろ過クロマトグラフィーで分画したところ、ZP4のN末端領域とZP3のC末端領域を含む分画が精子結合活性を示した。よってブタではこれらの領域が精子結合領域であることが示唆された。今後、組換え体による同定も進める必要がある。目的2として透明帯糖タンパク質の高次構造決定を試みた。組換えブタZP3およびZP4のジスルフィド結合パターンは天然ブタZP3およびZP4と同じであることがわかった。ウシZP4について、成熟体よりも前駆体の方が凝集性が低く結晶化により適していると考えられたが、タンパク質結晶はまだ得られていない。ウシZP3前駆体を試験管内プロセシングにより成熟型へ変換させることを試みた。前駆体は予定通りプロセシングされたもののプロペプチドが強く成熟型に相互作用しており、プロペプチドを解離除去する条件を今後検討する必要がある。
糖脂質の機能と組織化学的局在特に発生過程における変化

ラット各臓器、特に消化管と腎組織における糖脂質の分布について、共焦点レーザー顕微鏡観察並びに包埋前染色法による電顕的検索をおこなった。ラット各臓器を4%ホルムアルデヒドおよび1%グルタルアルデヒドにて固定した後、未凍結切片(厚さ40μm)を作製し、各種糖脂質(GM1、GD2、GD3、GQ1b、GT1b、Gb3等)に対するモノクローナル抗体にて13日間処理した。一部はHRP一ウサギ抗マウスIgG, M標識後、DAB反応を経てEpon包埋し、透過電顕観察した。また一部は、Cy3-ヤギ抗マウスIgG, Mにて標識後、共焦点レーザー顕微鏡下にて観察した。光顕レベルで消化管の各部位ごとに染色性を比較すると、食道と胃では全体的に反応性が低かったが、神経叢領域で抗GQ1b等に陽性所見を認めた。小腸では多くの抗体で陽性反応を呈し、特に外縦筋層は抗GD2、抗GM1等に、またアウエルバッハ神経叢は、抗GQ1b、抗GD2、抗GM1等に強い陽性所見を認めた。その一方で、小腸上皮は、絨毛と陰窩とでは反応性が異なり、絨毛では一部の上皮細胞が抗GM1や抗GD3に陽性であったのに対し、陰窩の腺上皮細胞では抗Gb3グロボシドに強い陽性反応が認められた。結腸の腺上皮細胞も抗Gb3陽性であった。これら腸上皮における糖脂質の発現パターンは、発生・分化の過程で微妙に変化することも確認された。電顕的には、特に陰窩上皮細胞の抗Gb3反応陽性部位が、基底側壁部細胞膜並びにゴルジ層板であることが確認された。小腸外縦筋細胞における抗GD2、抗GM1陽性部位は形質膜とカベオラであった。また、アウエルバッハ神経叢における抗GQ1b陽性部位は神経細胞体周囲の一部の神経終末であった。更に、腎糸球体では、足細胞の足突起先端部にGb3グロボシドの特徴的な分布が認められ、基底膜との相互作用や濾過機能への関与が注目された。また、糖尿病を自然発症する系統であるGKラットでは、腎糸球体での糖脂質の発現が上昇することも確認された。糖脂質はラット各臓器の細胞ごとに特徴的な分布を示し、各種細胞機能を解析する上でよい指標になると期待された。ラット各臓器、特に消化管壁における糖脂質の分布について、共焦点レーザー顕微鏡観察並びに包埋前染色法による電顕的検索をおこなった。ラット各臓器を4%ホルムアルデヒドおよび1%グルタルアルデヒドにて固定した後、未凍結切片(厚さ40μm)または凍結切片(厚さ10μm)を作製し、各種糖脂質(GM1、GD2、GD3、GQ1b、GT1b、Gb3等)に対するモノクローナル抗体(生化学工業)にて13日間処理した。一部はHRP-ウサギ抗マウスIgG, M標識後、DAB反応を経てEpon包埋し、透過電顕観察した。

光顕レベルで消化管の各部位ごとに染色性を比較すると、食道と胃では全体的に反応性が低かったが、神経叢領域で抗GQ1b等に陽性所見を認めた。小腸では多くの抗体で陽性反応を呈し、特に外縦筋層は抗GD2、抗GM1等に、またアウエルバッハ神経叢は、抗GQ1b、抗GD2、抗GM1等に強い陽性所見を認めた。その一方で、小腸上皮は、絨毛と陰窩とでは反応性が異なり、絨毛では一部の上皮細胞が抗GM1や抗GD3に陽性であったのに対し、陰窩の腺上皮細胞では抗Gb3グロボシドに強い陽性反応が認められた。結腸の腺上皮細胞も抗Gb3陽性であった。電顕的には、特に陰窩上皮細胞の抗Gb3反応陽性部位が、基底側壁部細胞膜並びにゴルジ層板であることが確認された。小腸外縦筋細胞における抗GD2、抗GM1陽性部位は形質膜とカベオラであった。また、アウエルバッハ神経叢における抗GQ1b陽性部位は神経細胞体周囲の一部の神経終末であった。糖脂質は消化管壁の各部位・各細胞ごとに特徴的な分布を示し、各種細胞機能を解析する上でよい指標になると期待された。ラット各臓器、特に消化管と腎組織における糖脂質の分布について、共焦点レーザー顕微鏡観察並びに包埋前染色法による電顕的検索をおこなった。ラット各臓器を4%ホルムアルデヒドおよび1%グルタルアルデヒドにて固定した後、未凍結切片(厚さ40μm)を作製し、各種糖脂質(GM1、GD2、CD3、GQ1b、GT1b、Gb3等)に対するモノクローナル抗体にて13日間処理した。一部はHRP-ウサギ抗マウスIgG, M標識後、DAB反応を経てEpon包埋し、透過電顕観察した。また一部は、Cy3-ヤギ抗マウスIgG, Mにて標識後、共焦点レーザー顕微鏡下にて観察した。これら腸上皮における糖脂質の発現パターンは、発生・分化の過程で微妙に変化することも確認された。更に、腎糸球体では、足細胞の足突起先端部にGb3グロボシドの特徴的は分布が認められ、基底膜との相互作用や濾過機能への関与が注目された。糖脂質はラット各臓器の細胞ごとに特徴的な分布を示し、各種細胞機能を解析する上でよい指標になると期待された。
抑制性シナプス伝達の可塑性の生理的意義

1.シナプス伝達は神経活動依存的に変化し、それが記憶や学習の基礎的要素の1つと考えられている。我々は前研究課題(基盤研究C,11670036)において、シナプス後ニューロンの脱分極により内因性カンナビノイドが放出され、それが抑制性シナプス前終末のカンナビノイド受容体(CB1)を活性化し、伝達物質の放出を抑制することを明らかにした。本研究では、この内因性カンナビノイドを介する逆行性シナプス伝達調節についてさらに詳しく解析し、その生理的意義の解明を目指した。2.ラット海馬ニューロンの単離培養系を用い、興奮性および抑制性シナプス伝達が内因性カンナビノイドによりどのように調節されているのかを比較した。その結果、内因性カンナビノイドによる逆行性シナプス伝達調節は興奮性シナプスにおいても見られるが、抑制性シナプスに比べ、カンナビノイド感受性がかなり低いことが判明した。(J. Neurosci.,2002)3.また、脱分極以外の内因性カンナビノイド放出条件について調べたところ、I型代謝型グルタミン酸受容体の活性化は、(1)単独で内因性カンナビノイドの放出を引き起こしうること、(2)脱分極による内因性カンナビノイドの放出を促進すること、が判明した,(Eur. J. Neurosci.,2002)4.さらに、ムスカリン性アセチルコリン受容体もまた、I型代謝型グルタミン酸受容体と同様に、内因性カンナビノイドの放出を促進することが判明した。(Eur. J. Neurosci.,2003,in press)5.以上の結果より、シナプス後ニューロンの活動(脱分極および代謝型グルタミン酸受容体やムスカリン性アセチルコリン受容体の活性化)は、まず、そのニューロンへの抑制性入力を選択的に抑制し、ニューロンの興奮性を高める方向に作用すると考えられた。我々は前研究課題(基盤研究C, 11670036)にて、シナプス後ニューロンの脱分極により引き起こされる抑制性シナプス伝達の一過性抑圧のメカニズムを明らかにした。すなわち、シナプス後ニューロンの脱分極により、内因性カンナビノイド(脳内マリファナ様物質)が合成・放出され、それが抑制性シナプス前終末のカンナビノイド受容体を活性化し、伝達物質の放出が抑制される。本研究では、このような内因性カンナビノイドを介する逆行性シナプス伝達調節についてさらに詳しく解析し、その生理的意義の解明を目指した。2.ラット海馬ニューロンの単離培養系を用い、興奮性および抑制性シナプス伝達が、シナプス後ニューロンの脱分極およびカンナビノイド受容体アゴニストにより、どのような影響を受けるのかを比較した結果、内因性カンナビノイドによる逆行性シナプス伝達調節は興奮性シナプスにおいても見られるが、抑制性シナプスに比べ、カンナビノイド感受性がかなり低いことが判明した。(J. Neurosci., 2002)3.内因性カンナビノイドの合成・放出に影響をおよぼす因子について調べたところ、I型代謝型グルタミン酸受容体の活性化は、(1)単独で内因性カンナビノイドの合成・放出を引き起こしうること、(2)脱分極による内因性カンナビノイドの合成・放出を促進すること、が判明した。(Eur. J. Neurosci., 2002)4.以上の結果より、シナプス後ニューロンの活動(脱分極および代謝型グルタミン酸受容体活性化)は、まず、そのニューロンへの抑制性入力を選択的に抑制し、ニューロンの興奮性を高める方向に作用すると考えられた。

1.シナプス伝達は神経活動依存的に変化し、それが記憶や学習の基礎的要素の1つと考えられている。我々は前研究課題(基盤研究C,11670036)において、シナプス後ニューロンの脱分極により内因性カンナビノイドが放出され、それが抑制性シナプス前終末のカンナビノイド受容体(CB1)を活性化し、伝達物質の放出を抑制することを明らかにした。本研究では、この内因性カンナビノイドを介する逆行性シナプス伝達調節についてさらに詳しく解析し、その生理的意義の解明を目指した。2.ラット海馬ニューロンの単離培養系を用い、興奮性および抑制性シナプス伝達が内因性カンナビノイドによりどのように調節されているのかを比較した。その結果、内因性カンナビノイドによる逆行性シナプス伝達調節は興奮性シナプスにおいても見られるが、抑制性シナプスに比べ、カンナビノイド感受性がかなり低いことが判明した。(J.Neurosci.,2002)3.また、脱分極以外の内因性カンナビノイド放出条件について調べたところ、I型代謝型グルタミン酸受容体の活性化は、(1)単独で内因性カンナビノイドの放出を引き起こしうること、(2)脱分極による内因性カンナビノイドの放出を促進すること、が判明した。(Eur.J.Neurosci.,2002)4.さらに、ムスカリン性アセチルコリン受容体もまた、I型代謝型グルタミン酸受容体と同様に、内因性カンナビノイドの放出を促準することが判明した。(論文投稿中)5.以上の結果より、シナプス後ニューロンの活動(脱分極および代謝型グルタミン酸受容体やムスカリン性アセチルコリン受容体の活性化)は、まず、そのニューロンへの抑制性入力を選択的に抑制し、ニューロンの興奮性を高める方向に作用すると考えられた。
渦鞭毛藻細胞内に発見された新たな共生体痕跡核ゲノムの解読

細胞内共生した緑藻と紅藻が葉緑体化した「二次共生」の過程で、ほとんどの共生藻は葉緑体以外の細胞内構造を失った。しかし、クロララクニオン藻とクリプト藻は高度に縮退したゲノムをふくむ共生藻痕跡核〔ヌクレオモルフ;NM〕を保持しているため、二次共生に伴う共生藻核ゲノム縮退の中間段階モデルとして研究されてきた。一方で、ゲノム縮退過程をより詳しく理解するには縮退段階の異なるNMゲノムが有効だが、NMをもつ新たな真核藻類は過去30年間発見されていなかった。本研究では、NMをもつ新奇渦鞭毛藻TRD-151株およびMRD-132株を対象に、二次共生に伴う共生藻核ゲノムの進化の共通原理を解明することを目標とした。H29年度までに検出したTRD-151株およびMRD-132株の共生緑藻由来遺伝子群についてさらに詳細に解析した。その結果、どちらの渦鞭毛藻においてmRNA合成、タンパク質合成、DNA複製に関わる共生緑藻由来タンパク質(ハウスキーピングタンパク質)は、宿主渦鞭毛藻ゲノムよりもNMゲノムにコードされる傾向が強いことが判明した。その一方、細胞内の代謝に関わる共生緑藻由来タンパク質は、宿主渦鞭毛藻ゲノムとNMゲノム双方にコードされていると予想された。これは、渦鞭毛藻細胞が共生緑藻を葉緑体として統合する過程で遺伝子の機能カテゴリー毎に、共生体ゲノムから宿主ゲノムへ転移のしやすさが異なることを示す。NMをもつクロララクニオン藻とクリプト藻においても、宿主ゲノムー共生体ゲノム間で遺伝子転移について、同様の傾向が報告されている。また、TRD-151株およびMRD-132株で検出された共生緑藻由来タンパク質の一部は、宿主ゲノムと共生体ゲノムの両方にコードされていることが判明した。これは2種の渦鞭毛藻において宿主ゲノムー共生体ゲノム間で遺伝子転移が完結していないことを示唆する。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。H28年度では、TRD-151株とMRD-132株からNMをふくむ葉緑体を粗精製した。この葉緑体サンプルからDNAを抽出し、全ゲノム増幅したのち、イルミナHiSeq2500を用いてシーケンスを行った。並行して、NMゲノムにおけるタンパク質コード領域の正確な推測を目指し、2種の渦鞭毛藻細胞の全mRNA配列を網羅的に決定した。その後、配列相同性とAT含量を手掛かりに、NMゲノム由来のmRNA配列を選別した。TRD-151株とMRD-132株の祖先細胞は、共生したPeidnomonas属の緑藻を葉緑体化した。従ってPeidnomonas属の緑藻の核ゲノムは、渦鞭毛藻細胞内で葉緑体化する以前の共生緑藻ゲノム、即ちNMゲノムの祖先的状態に極めて近い可能性が高い。そこで渦鞭毛藻NMゲノムとの比較を最終目標として、H28年度はPedinomonas属緑藻P. minorゲノム解析と網羅的mRNA配列データ解析を行った。緑色渦鞭毛藻2株は、その細胞を強く遠心すると、NMをふくむ葉緑体と渦鞭毛藻核を分離できる。そこでそれぞれの培養細胞を遠心することで葉緑体と渦鞭毛藻核を分離したサンプルを取得した。粗葉緑体サンプルから核酸を精製、ゲノム増幅処理を行い、イルミナ社シーケンサーでの解析を行った。十分な量の配列データを取得できなかったこと、大量の核ゲノムの混入していることが判明したため、葉緑体と核の分別方法を改良する必要があることが判明した。ペディノ藻P. minorについては培養細胞からDNAサンプルを調製し、ゲノム解析を行った。

H29年度では、TRD-151株とMRD-132株からNMをふくむ葉緑体サンプルから抽出したDNAから得たシーケンスデータと渦鞭毛藻細胞から抽出した全RNAから得た網羅的mRNAシーケンスデータを解析した。葉緑体サンプル(NMを含む)からゲノムデータを得たが、まだ渦鞭毛藻核ゲノムの混入があり、NMゲノムの全容を解明するに足るデータとは言えなかった。一方網羅的mRNAシーケンス解析からのデータは十分量取得できた。このデータから再構築したmRNA配列それぞれをクエリとしてBLAST解析し、自由生活性緑藻遺伝子に高い相同性を示した配列を取得した。さらに緑藻由来mRNA配列を、コドン第一文字目とコドン第三文字目のAT含量に基づきプロットしたところ、AT含量が異なる2つのグループに分けることができた。これまでゲノム解析されたオルガネラや細胞内共生体などがもつ縮退したゲノムでは、共通してAT含量の低下が観察されてきた。これに基づけば、相対的にAT含量が高いmRNAは渦鞭毛藻ゲノムに移行した緑藻遺伝子からの転写物、AT含量の高いmRNAがNMゲノム中の遺伝子からの転写物であると予想した。H28-29年度で行った緑色渦鞭毛藻TRD-151株とMRD-132株のNMゲノム解読は、やや難航している。渦鞭毛藻の核は巨大であることが知られており、細胞内共生過程で縮退したと考えられる緑藻由来NMゲノムと比べて圧倒的に存在量が多い。電子顕微鏡観察からNMは葉緑体に付随しおり、NMを含む葉緑体と渦鞭毛藻核を分離することにより、核ゲノムの混入をできるだけ防ぐ方法を模索した。一方で単離した葉緑体サンプルに含まれるDNAサンプルは微量であり、イルミナシーケンスを行うためにはゲノム増幅が必須である。顕微鏡下で核と葉緑体が分離していることは確認しているが、今回シーケンスデータから検出された渦鞭毛藻核ゲノム配列は、葉緑体サンプルに混入した一定量の核ゲノムが増幅された結果であると考えられる。今後葉緑体サンプルと渦鞭毛藻核の分離方法をさらに改良し、ゲノムシーケンスを行う。一方網羅的mRNAシーケンスの解析から、効率的にNMゲノムにコードされる緑藻遺伝子を予測することができた。今後これらのNMゲノムからの転写物を手掛かりにすることで、NMゲノム断片を探索することが可能となろう。細胞内共生した緑藻と紅藻が葉緑体化した「二次共生」の過程で、ほとんどの共生藻は葉緑体以外の細胞内構造を失った。しかし、クロララクニオン藻とクリプト藻は高度に縮退したゲノムをふくむ共生藻痕跡核〔ヌクレオモルフ;NM〕を保持しているため、二次共生に伴う共生藻核ゲノム縮退の中間段階モデルとして研究されてきた。一方で、ゲノム縮退過程をより詳しく理解するには縮退段階の異なるNMゲノムが有効だが、NMをもつ新たな真核藻類は過去30年間発見されていなかった。本研究では、NMをもつ新奇渦鞭毛藻TRD-151株およびMRD-132株を対象に、二次共生に伴う共生藻核ゲノムの進化の共通原理を解明することを目標とした。H29年度までに検出したTRD-151株およびMRD-132株の共生緑藻由来遺伝子群についてさらに詳細に解析した。その結果、どちらの渦鞭毛藻においてmRNA合成、タンパク質合成、DNA複製に関わる共生緑藻由来タンパク質(ハウスキーピングタンパク質)は、宿主渦鞭毛藻ゲノムよりもNMゲノムにコードされる傾向が強いことが判明した。その一方、細胞内の代謝に関わる共生緑藻由来タンパク質は、宿主渦鞭毛藻ゲノムとNMゲノム双方にコードされていると予想された。
戦後日本における政治・経済変動が教育労働運動に与えた影響に関する研究

関連文献・史資料の収集・吟味:日教組の運動の範囲が多岐にわたるため、大学院生や学部生にアルバイトとして利用しながら、7つの作業グループのそれぞれの主題に沿った関連文献・史資料の収集・吟味を体系的に行った。2、日教組所蔵史料の検討と整理:研究の基礎史料を利用可能な状態にしていくため、平成30年度は過去のプロジェクトにおいてデジタル化した資料を再整理しつつ、新たに当面の研究に必要な史料を選定してデジタル化作業を行った。役員選挙関係、国民教育研究所関係、全国教研・教文関係を中心に、デジタル化すべき史料を選定した。単組史料も部分的に行った。3、1954年の中央執行委員会の議事録に綴じ込まれた中根式速記の史料を、昨年度に引き続き、速記解読者に依頼して解読作業を進めてもらった。4、聞き取り調査:日教組OB及び文部省OBに対し手の聞き取り調査をおこなった。記録はテープ起こしと編集作業を行い、ご本人の確認を経て、聞き取り資料として確定させた。5、全体会合:全員が集まる研究会を定期的に開催し、本研究課題に関連する分野の専門家をゲスト・スピーカーとして招聘してレクチャーを受けながら、7つの作業グループから、順次、研究報告をしてもらった。また、全体会では、研究全体の進め方について協議を行った。6、チーム会合・グループ会合:2つのチーム、7つのグループごとに、定期的な会合をもち、具体的な課題に向けた研究を進めた。7、学会発表:日本教育学会、教育史学会などにおいて研究成果の報告を行った。学会発表をふまえて、論文化と編著書の刊行に向けた打ち合わせも行っている。また、学会誌等に載りにくい主題の論考等を集めて、第二次報告書を編集・印刷した。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。1、関連文献・史資料の収集・吟味:日教組の運動の範囲が多岐にわたるため、大学院生や学部生にアルバイトとして利用しながら、7つの作業グループのそれぞれの主題に沿った関連文献・史資料の収集・吟味を体系的に行った。2、日教組所蔵史料の検討と整理:研究の基礎史料を利用可能な状態にしていくため、平成28年度は過去のプロジェクトにおいてデジタル化した資料を再整理しつつ、新たに当面の研究に必要な史料を選定してデジタル化作業を行った。1947-50年代の日教組書記局作成史料を中心とした作業と、古書店等で入手した同種の史料とを作業の対象にした。3、聞き取り調査:中央執行委員会や書記局にいた日教組OB数人、単組の元委員長など、キイ・パーソンに聞き取り調査をおこなった。4、全体会合:全員が集まる研究会を定期的に開催し、本研究課題に関連する分野の専門家をゲスト・スピーカーとして招聘してレクチャーを受けながら、7つの作業グループから、順次、研究報告をしてもらった。5、チーム会合・グループ会合:2つのチーム、7つのグループごとに、定期的な会合をもち、具体的な課題に向けた研究を進めた。6、学会発表:日本教育学会の部会で研究成果の報告を行った。学会発表をふまえて、論文化に向けた打ち合わせも行っている。研究計画の1年目にあたる平成28年度は、全体としては順調に進み、研究成果として、いくつかの学会発表と論文とをまとめることができた。第1期第3期の3つのグループから執筆者を選定して、『大原社会問題研究所雑誌』第693号で特集を組んでもらって投稿、掲載した。また、教研集会の分析グループと第2期グループは、それぞれ共著論文をまとめることができた。史料の整備という面でも、本年度は順調に作業が進行した。過去2年度分の日教組の所蔵する非公開史料の閲覧・整理作業を進め、可能な予算の範囲内で新しくデジタル化が必要な資料を選定して、デジタル化の作業を進めた。また、日教組OBなど、聞き取り調査が終了しているものについては、ヒアリング記録として2冊の資料集の形にまとめた。全体会では、現時点で整理・収集した資料を用いて、各グループから報告者を出して、報告・議論するとともに、何人かのゲスト・スピーカーの講演・報告をもとにした議論を行った。ただし、研究の過程で、追加で聞き取りが必要な調査と新しい史料の発見もあり、ともに膨大なデータの整理に手間がかかっているため、今後の研究の積み残しの課題として残っている。残った課題については、次年度以降の研究に進展につなげていきたい。2、日教組所蔵史料の検討と整理:研究の基礎史料を利用可能な状態にしていくため、平成29年度は過去のプロジェクトにおいてデジタル化した資料を再整理しつつ、新たに当面の研究に必要な史料を選定してデジタル化作業を行った。教育制度検討委員会(第一次・第二次)関係及び1950年代後半期の中央執行委員会プリントなどを対象にした。

3、1954年の中央執行委員会の議事録に綴じ込まれた中根式速記の史料を発掘してデジタル化を行うとともに、速記解読者に依頼して、解読可能性について検討をしてもらった。4、聞き取り調査:日教組OB及び文部省OBに対し手の聞き取り調査をおこなった。記録はテープ起こしと編集作業を行い、ご本人の確認を経て、聞き取り資料として確定させた。5、全体会合:全員が集まる研究会を定期的に開催し、本研究課題に関連する分野の専門家をゲスト・スピーカーとして招聘してレクチャーを受けながら、7つの作業グループから、順次、研究報告をしてもらった。また、全体会では、研究全体の進め方について協議を行った。6、チーム会合・グループ会合:2つのチーム、7つのグループごとに、定期的な会合をもち、具体的な課題に向けた研究を進めた。7、学会発表:日本教育学会、教育史学会などにおいて研究成果の報告を行った。学会発表をふまえて、論文化に向けた打ち合わせも行っている。また、学会誌等に載りにくい主題の論考等を集めて、第一次報告書を編集・印刷した。研究計画の2年目にあたる平成29年度は、全体としては順調に進み、研究成果として、グループや個人でのいくつかの学会発表と論文とをまとめることができた。また、第1期グループ及び第3期グループに関しては、ある程度全体像を描くことが可能な段階になって来たので、2冊の本の出版に向けての打ち合わせも進行している。本の出版にあたっては書き下ろしの章も含まれるため、研究メンバーで課題を分担して分析と執筆を進めている。史料の整備という面でも、本年度は順調に作業が進行した。日教組の所蔵する非公開史料の整理・リスト作成作業を進め、過去3年度分のデジタル化された史料には可能な範囲で件名索引を作成する作業を進めている。また、予算の許す範囲内で新しくデジタル化が必要な資料を選定して、新たなデジタル化に向けたリスト作りなどの作業を進めている。また、日教組OBなど、聞き取り調査が終了しているものについては、ヒアリング記録としてまとめるべく編集作業中である。全体会では、現時点で整理・収集した資料を用いて、各グループから報告者を出して、報告・議論するとともに、何人かのゲスト・スピーカーの講演・報告をもとにした議論を行った。ただし、研究の過程で、追加で聞き取りが必要な調査と新しい史料の発見もあり、ともに膨大なデータの整理に手間がかかっているため、今後の研究の積み残しの課題として残っている。残った課題については、平成30年度の研究で急いで進めていきたい。関連文献・史資料の収集・吟味:日教組の運動の範囲が多岐にわたるため、大学院生や学部生にアルバイトとして利用しながら、7つの作業グループのそれぞれの主題に沿った関連文献・史資料の収集・吟味を体系的に行った。2、日教組所蔵史料の検討と整理:研究の基礎史料を利用可能な状態にしていくため、平成30年度は過去のプロジェクトにおいてデジタル化した資料を再整理しつつ、新たに当面の研究に必要な史料を選定してデジタル化作業を行った。役員選挙関係、国民教育研究所関係、全国教研・教文関係を中心に、デジタル化すべき史料を選定した。単組史料も部分的に行った。3、1954年の中央執行委員会の議事録に綴じ込まれた中根式速記の史料を、昨年度に引き続き、速記解読者に依頼して解読作業を進めてもらった。
リモートセンシングによる海氷の厚さ・動態の監視と北海道沿岸の氷量予測に関する研究

衛星マイクロ波放射計による海氷厚の推定手法の精度向上,並びに北海道沿岸の氷量予測モデル開発を目的として,以下の研究・観測を行った.本年は特に,衛星データとの比較検証を行うため,電磁誘導式(EM)氷厚計を用いて,北極海,南極海,オホーツク海において海氷厚データを取得した.・北極域における国際観測プロジェクトACSYS-ABSIS 2003に参加し,グリーンランド海おいて大気・海洋・海氷調査を行った.・北海道工業試験場と共同で電気伝導度式氷厚計の改良・実験を行った.・EM氷厚計の使用方法を習得するため,アラスカ大学と共同でアラスカ州バローの沿岸定着氷の厚さを測定した.・オーストラリア南極海海氷観測プログラムARISE2003に参加し,海氷調査を行った(H15.9-11月)・巡視船そうやのオホーツク海南部におけるアイスパトロールに参加し,積雪・海氷の物理情報を取得した.また,オーブコムブイを氷上に設置し,陸上レーダや衛星データの検証データを取得した.・サロマ湖氷上において気象・海氷・海洋観測を行った.上記の研究活動を行った結果,以下の知見が得られた.・EM氷厚計は,厚さ0.7m3.5mの平坦氷あるいは軽度の変形氷において5%の精度,3.5m5mの重度の変形氷においては10%程度の精度で厚さを測定できることがわかった.また,Multi-rafted modelを新たに開発したことで,従来よりも重度の変形氷の厚さ推定精度が飛躍的に向上した.・EM氷厚計の実測データから,これまでのビデオ観測法では得られなかった厚い変形氷のデータも多数得られることができた.そのため,衛星データから氷厚を推定する際に厚さスケールの見直しを行うことができ,精度向上に繋がった.・GPSを搭載し測定間隔の短いオーブコムブイを用いて海氷移動観測を行った結果,これまでよりも精度が良く詳細なデータを得ることができた.本年度は北海道大学低温科学研究所附属流氷研究施設において研究に従事し,衛星マイクロ波放射計による海氷厚の推定手法の精度向上,並びに北海道沿岸の氷量予測モデル開発を目的として,以下の研究・観測を行った.1.宇宙開発事業団のプロジェクト「IARC-NASDA情報システム及び衛星データを利用する北極圏研究」のメンバーとして,アラスカ大学北極圏研究センターに約半年間滞在し,北極海周辺の衛星データの取得・解析及び現地研究者との意見交換を行った(H14.59月).2.北海道工業試験場と共同で電気伝導度式氷厚計の開発・実験を行った(平成14年5月15年3月).3.オホーツク海の海氷生産と気象条件の関係を把握するために,サハリン・チャイボ湾に無人気象観測機器を設置した(H14.10月).4.海上保安庁の砕氷型巡視船そうやのアイスパトロールに参加し,氷上観測を行って積雪・海氷の物理情報を取得した.この際に複数のアルゴスブイを氷上に設置し,これまで得られていなかった沿岸の海氷移動の実測データを得た.これと同期して北大流氷研の沿岸レーダで10分間隔の流氷観測を行った(H15.2月).5.サロマ湖氷上において気象・海氷・海洋観測を行った(H15.23月).上記の研究活動を行った結果,以下の知見が得られた.・アルゴスブイと沿岸レーダの流氷漂流観測より,沖合20マイル以内の海氷は平均時速約1マイルという早い速度で海岸線と平行に移動し,それよりも沖にある氷は前者の半分程度の速度で渦運動を繰り返しながら沿岸に近づくことがわかった.・積雪の無い薄氷域において,衛星マイクロ波放射計から推定した氷厚と無人気象・海洋観測や氷厚計の実測データから熱力学・力学モデルを用いて推定した氷厚を比較した結果,両者に良い一致が見られ,マイクロ波による氷厚推定手法の精度が評価できた.衛星マイクロ波放射計による海氷厚の推定手法の精度向上,並びに北海道沿岸の氷量予測モデル開発を目的として,以下の研究・観測を行った.本年は特に,衛星データとの比較検証を行うため,電磁誘導式(EM)氷厚計を用いて,北極海,南極海,オホーツク海において海氷厚データを取得した.・北極域における国際観測プロジェクトACSYS-ABSIS 2003に参加し,グリーンランド海おいて大気・海洋・海氷調査を行った.・北海道工業試験場と共同で電気伝導度式氷厚計の改良・実験を行った.・EM氷厚計の使用方法を習得するため,アラスカ大学と共同でアラスカ州バローの沿岸定着氷の厚さを測定した.・オーストラリア南極海海氷観測プログラムARISE2003に参加し,海氷調査を行った(H15.9-11月)・巡視船そうやのオホーツク海南部におけるアイスパトロールに参加し,積雪・海氷の物理情報を取得した.また,オーブコムブイを氷上に設置し,陸上レーダや衛星データの検証データを取得した.・サロマ湖氷上において気象・海氷・海洋観測を行った.上記の研究活動を行った結果,以下の知見が得られた.・EM氷厚計は,厚さ0.7m3.5mの平坦氷あるいは軽度の変形氷において5%の精度,3.5m5mの重度の変形氷においては10%程度の精度で厚さを測定できることがわかった.また,Multi-rafted modelを新たに開発したことで,従来よりも重度の変形氷の厚さ推定精度が飛躍的に向上した.・EM氷厚計の実測データから,これまでのビデオ観測法では得られなかった厚い変形氷のデータも多数得られることができた.

そのため,衛星データから氷厚を推定する際に厚さスケールの見直しを行うことができ,精度向上に繋がった.・GPSを搭載し測定間隔の短いオーブコムブイを用いて海氷移動観測を行った結果,これまでよりも精度が良く詳細なデータを得ることができた.
アイデンティティと「穢れ」：原始キリスト教会形成プロセスにおける「他者」の受容

本研究は、最初期のキリスト教のアイデンティティ形成の「内的構造」を明らかにすることを目的とする。旧約聖書および第二神殿時代のユダヤ教文献、原始キリスト教会の異邦人受容にとって重要な文献であるパウロ書簡やルカ文書の分析によって、原始キリスト教会が「他者」と「穢れ」をどのように位置づけつつアイデンティティを形成したのか、外的見取り図のみでは捉えきれない他者受容の内的構造を解明することを目指す。
新型分割イントロンのスプライシング機構と進化多様性の解明

原始的真核生物の一候補であるGiardiaintestinalisのゲノム中に存在する、transスプライシングにより切り出される新型分割イントロンに関する分子進化学的な解析をを行い、スプライシング機構の多様性と進化に関する知見を得た。まず、Giardiaおよび近縁種における通常および分割イントロンの分布を探査し、近縁種であるKipferliaにおいて複数の分割イントロンを発見した。また、Giardiaのスプライセオソーム構成因子を他の真核生物のデータと比較して分割イントロンのtransスプライシングに関与する因子を探るために、スプライセオソームの単離と精製を目指す実験を行った。Giardiaゲノムデータに対してmRNA配列をマッピングすることで、これまでの研究では見つかっていない分割および通常イントロンを探索する作業を進め、複数の分割・通常イントロンの候補を特定した。しかしながら、現時点で実験的な検証結果が得られた候補は存在していない。そのため、平行して探索アルゴリズムを改良するための方法論の検討を行った。Giardiaのスプライセオソームを精製するために、予備的解析として研究開始前年度にスプライセオソーム構成因子である3種類のタンパク質SmD1, SmD3, Lsm1にFLAGタグを付したコンストラクトをGiardiaに発現させることに成功していた。H27年度はこれらのうちSmD1の形質転換体の解析を行った。その結果、SmD1遺伝子がプラスミドの状態でGiardia培養細胞内に維持されていること、SmD1遺伝子のmRNAが発現していること、組換えSmD1が発現し核に局在していることが明らかとなった。さらに、タグアフィニティーカラムによる精製を行ったところ、タグを付したSmD1は検出されたが回収率が極めて低く、SmD1と相互作用するスプライソソーム構成タンパク質を同定するには至らなかった。分割・通常イントロンともに新たなものを検出できていない。検出のための方法論の問題がある一方、Giardiaの既存のゲノム・トランスクリプトームデータのクオリティの問題も考えられる。FLAGタグ付きSmD1形質転換体におけるタンパク質発現量が低く、スプライセオソーム構成因子の網羅的精製の実験に失敗している。次世代シーケンサーによって得られた大量のゲノム・トランスクリプトームのデータをもとに、分割イントロンの候補を探索するためのプログラムを開発し、既存のGiardiaのデータに適用してその有効性を検証した。Giardiaにおいて既知の4つの分割イントロンを高いスコアで検出できることが分かったが、その他にも同程度のスコア値にて10個ほどの遺伝子が検出できたたため、現在、それらが真の分割イントロンであるかどうかを検証している。これまでに、スプライセオソーム構成因子であるタンパク質SmD1, SmD3, Lsm1にFLAGタグを付したコンストラクトをGiardiaに発現させることに成功していたため、それらを維持しながら基本的な解析を進めた。さらに、Giardiaの培養量をH27年度の3倍程度にまでスケールアップして、タグ付きSmD1に対するタグアフィニティーカラム精製によりSmD1と相互作用するタンパク質の網羅的同定を試みた。タグ付きSmD1の回収率を向上させることができたため、質量分析を行ったが、他生物で良く保存されているスプライセオソーム構成タンパク質の同定には至らなかった。Giardiaのスプライセオソーム構成タンパク質のレパートリーが哺乳類や酵母のものとは著しく異なっている可能性が示唆されたため、哺乳類・酵母で共通の50個程度のタンパク質それぞれに対して、Giardiaやその他の代表的な真核生物でのホモログを探索した。それをもとに、Giardiaにホモログが存在すると考えられた30個程度のタンパク質についてアライメント解析を行った。その結果、一部の例外を除きほとんどのタンパク質はホモログであることが判明した。したがって、スプライセオソームのコアとなるタンパク質についてはGiardiaでも保存されているものと考えられた。分割イントロンを検出するためのプログラムの開発と、Giardiaを含めた真核生物全体でのスプライセオソーム構成因子の進化を議論するための分子進化学的解析の面では、確実に成果をあげることができたと考えられる。しかしながら、Giardiaのスプライセオソームを精製するための実験的研究に関しては、大きな進捗が見られず、実験方法や実験計画の面で多くの課題を残す結果となった。フォルニカータ生物群に属する寄生性鞭毛虫Giardiaのゲノムデータに対してトランスクリプトームデータをマッピングすることにより、これまでに見つかっていない分割イントロンの候補を特定した。その一部が200コピーほどある表面抗原タンパク質VSPであったため、現在、ゲノムレベルでの詳細な解析を進めている。Giardiaに近縁な自由生活性フォルニカータ鞭毛虫であるKipferliaとDysnectesについても分割イントロンの有無を調べ進化学的な比較をするために、次世代シーケンサーを用いてそれぞれのゲノム・トランスクリプトームデータを得た。Kipferliaについて、トランスクリプトームデータをゲノムデータにマッピングし、独自に開発した分割イントロン探査プログラムを適用したところ、Giardiaよりも多くの遺伝子に分割イントロンの候補を特定できた。それらの一部について、分割イントロンをまたいだ位置に作成したプラーマーを用い、ゲノムDNAとcDNAそれぞれを鋳型とするPCRを行ったところ、cDNAを鋳型とする場合のみに予想長のバンドが得られたことから、実際に分割イントロンが存在することが示唆された。

一方、Kipferliaゲノムには、約120,000の通常型シスイントロンが存在し、GiardiaやSpironucleus(フォルニカータ寄生虫)のイントロンよりもはるかに多いことが明らかとなった。KipferliaはGiardiaやSpironucleusの分岐よりも早く分岐した生物であるため、自由生活性の祖先段階において存在した膨大な数のイントロンが寄生虫への進化の過程で失われたものと考えられた。現在、Kipferliaの分岐の後に分岐し、GiardiaやSpironucleusにより近縁なDysnectesのゲノム・トランスクリプトームデータを用いた同様の解析を進めている。原始的真核生物の一候補であるGiardia intestinalisのゲノム中に存在する、transスプライシングにより切り出される新型分割イントロンに関する分子進化学的な解析をを行い、スプライシング機構の多様性と進化に関する知見を得た。まず、Giardiaおよび近縁種における通常および分割イントロンの分布を探査し、近縁種であるKipferliaにおいて複数の分割イントロンを発見した。また、Giardiaのスプライセオソーム構成因子を他の真核生物のデータと比較して分割イントロンのtransスプライシングに関与する因子を探るために、スプライセオソームの単離と精製を目指す実験を行った。コンピュータ解析によるイントロンの検出方法に関し、探索アルゴリズムの改良を行う。改良したアルゴリズムでも新たな分割・通常イントロンが検出できない場合には、次世代シーケンス解析により、Giardiaのゲノム・トランスクリプトームのディープシーケンシングを行い、探索されるデータベースのクオリティを向上させた上で、改良アルゴリズムを適用する。FLAGタグ付きSmD1形質転換体からのSmD1タンパク質の大量精製に努める。並行してSmD1のFLAGタグの位置をN末側からC末側に移したコンストラクトを作り、同様の形質転換体を得て解析を進める。さらにFLAGタグ付きLsm1形質転換体についても解析を進める。分割イントロンを検出するためのプログラムの開発研究については、Giardiaのデータでほぼ問題なく動作することが分かったので、今後は他生物に関しての適用可能性を検討する。Giardiaの近縁種には分割イントロンが存在する可能性が高いため、Giardiaと同じくフォルニカータ生物群に属する自由生活生物であるKipferliaに関して、次世代シーケンサーを用いたゲノム・トランスクリプトーム解析を行い、そのデータをもとにプログラムの妥当性を検証する。さらに、GiardiaやKipferliaにおいて候補となった遺伝子に関して、それらが確かに分割イントロンであることを実験的に検証する。Giardiaのスプライセオソームを精製するための実験については、方法論と実験計画の再検討をする必要がある。