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乳牛の起立不能症の病因と予防に関する研究

乳牛の分娩前後に発する起立不能症の本態は未だ解明されていないが、本症の約80%はCa剤に反応するいわゆる低Ca血症性の分娩麻痺である。よって本研究は、本症の主因と考えられる低Ca血症の病因の解明と予防法の確立を究極の目的として、次のごとき臨床的・実験的研究を行った。1.分娩後2日以内に起立不能に陥った乳牛23例を対象として、1.25(OH)_2D、PTH、CaおよびPiの血漿濃度を測定した。その結果、分娩後に起立不能を呈する牛の多くは血漿Ca濃度が低下し、Caの調節ホルモンである1.25(OH)_2DとPTHの血漿濃度は血漿Ca濃度の低下に反応して上昇していることが明らかとなった。2.本症に対するビタミンD_3(V+D_3)のアナログである1αOHD_3の予防効果を明らかにする目的で分娩前6時間から8日のホルスタイ種乳牛に500μgの本剤を投与した。その結果、分娩前6時間から2日の間に投与された本剤は分娩後の血漿1.25(OH)_2D濃度を上昇させて、血漿Ca濃度の低下を抑制したが、分娩前7と8日に投与された例では血漿Ca濃度の低下を抑制出来なかった。3.先の実験結果から、ジャージ種乳牛を用いて、分娩前1128時間に1αOHD_3500μgを投与し、1αOHD_3の作用機序を究明する目的で行なった結果、分娩前28時間以内に投与された1αOHD_3は、肝において急速に1.25(OH)_2Dに変換され、小腸のCa吸収を増大させることにより分娩後の血漿Ca濃度の低下を抑制し、同時にPTHの分泌も抑制することが明らかとなった。4.本症の病因と予防に関してV-D_3がいかなる役割を果たしているかについて、妊娠ラットをV-D_3投与とV-D_3欠乏群とに分けて基礎的に実験を行った。その結果、V-D_3がCa調節ホルモンに及ぼす影響は妊娠の進行に伴って質的に異なった反応を呈することが示唆された。以上、本症の発症には1.25(OH)_2Dの生成が重要な役割を果たしているとともに、その予防には合成1αOHD_3の分娩前12日の投与が有効と考えられた。分娩性起立不能性(Parturient Paresis)の発症要因を究明して行く中で、我々は低Ca血症に対して血中のPTHや1,25【(OH)_2】D濃度の上昇を示さない、いわゆるビタミン【D_3】抵抗性の症例のあることを見出した。よって、本研究はそれらの症例をさらに見出し、分娩性起立不能症の要因を明らかにすることを目的として、起立不能症の経歴を有する乳牛14頭を用いて、分娩前7日から分娩後3日目までの血漿の1,25【(OH)_2】

D,25OHD,PTH,Ca,i-PおよびMg濃度の推移を各個体ツごとに対照群(6頭)と比較して検討した。その結果、次のような成績が得られた。1.経歴牛14例中8例では、血漿1,25【(OH)_2】D濃度は血漿のCaおよびi-P濃度の低下に反応して上昇したが、他の6例中2例ではその上昇が遅れた。従って、これら2例においては25OHDの1α炭素位水酸化反応の遅延が推察された。2.経歴牛14例中6例では、血漿25OHD濃度は対照群と同様に、分娩前後で上昇する傾向にあった。3.経歴牛14例中8例では、血漿PTH濃度は対照群と同様に、血漿Ca濃度の低下に反応して上昇した。しかし、他の6例中2例においては上皮小体のPTH分泌機能の低下が推察された。4.経歴牛14例中10例では、血漿のCaおよびi-P濃度は、分娩前後で対照群より低下する傾向にあった。5.経歴牛14例中2例に本症の発症をみた。その中の1例では上皮小体のPTH分泌機能の低下が推察された。しかし、他の1例では、血漿Ca濃度の低下に対して、血漿のPTHおよび1,25【(OH)_2】D濃度は上昇していた。以上の成績から、大部分の分娩性起立不能性の経歴牛においては、血漿Ca濃度の低下に鋭敏に反応して血漿のPTHおよび1,25【(OH)_2】D濃度は上昇するが、少数例においては上皮小体機能不全や、PHおよび1,25【(OH)_2】Dの標的器官に対する抵抗性の存在が推察された。本研究は,非妊娠期と妊娠期ラットに投与されたビタミンD_3(V-D_3)が,生体のカルシウム動態とその調節ホルモンなどにいかなる影響を及ぼすかについて明らかにすることを目的として行なわれた.供試ラットは非妊娠期,妊娠中期および妊娠末期に分けられ,それぞれに対して2万IU/kgのV-D_3を筋肉内に投与した(V-D_3投与群).対照群は,オリーブ油を投与したものを用いた.いずれも代謝ケージにて生体のCa動態,血漿Ca, PTH濃度および甲状腺カルシトニン含有細胞(C細胞)の免疫組織化学的検索などについて, V-D_3投与後72時間まで観察した. 1.非妊娠期のV-D_3投与群における全身^<47>Ca残留率は,対照群のそれに比較して高くなる傾向を示した. 2.妊娠中期のV-D_3投与群における全身^<47>Ca残留率は,対照群のそれに比較して高くなる傾向を示した.一方,血液中^<47>Ca含有率と血漿CaおよびPTH濃度は低くなる傾向を示した. 3.妊娠末期のV-D_3投与群における全身^<47>Ca残留率は,対照群のそれに比較して低くなる傾向を示した.またV-D_3投与後72時間目において,尿中^<47>Ca排泄率は有意の高値を示す一方,血漿Ca濃度は有意の低値を示した. 4.V-D_3投与群における骨の^<47>Ca取り込み率は対照群のそれに比較して,非妊娠期,妊娠期を問わず高くなる傾向を示した.5.非妊娠期と妊娠末期のV-D_3投与群における甲状腺組織に占めるC細胞の割合は,対照群のそれに比較して低値を示す傾向にあった.以上のことから,ラットに投与されたV-D_32万IU/kgが生体のCa動態とその調節ホルモンに及ぼす影響は,妊娠の進行に伴って一定に変化するものではなく,妊娠の中期と末期ではそれぞれ質的に異なった反応を示し,それには妊娠中期における生体Ca poolのtumoverの増大が関与しているものと考えられた.本年度の研究は、ビタミンD欠乏が妊娠期のラットのCa動態にいかなる影響を及ぼすかについて明らかにすることを目的として行われた。供試ラット(9週齢)は対照群(10匹)、ビタミンD欠乏群(10匹)の2群に分け、それぞれコントロール飼料、低ビタミンD飼料を給与し、妊娠14日目に^<45>Caを経口投与し、妊娠20日目まで糞、尿、血液を経時的に採取した。妊娠20日目には大腿骨および胎子を採取し、それらの^<45>Ca取り込み量を測定した。1.^<45>Ca投与時における体内残留率曲線から得られた。^<45>Caの消化管吸収率は、ビタミンD欠乏群が対照群に比較して、有意に低い値を示した(P<0.01)。
金属-GaAs(001)界面のフェルミ準位ビンニング機構のSTM/STS研究

初年度に当初予定していた研究代表者が急遽一年間米国出張することきまり、分担者が代表を代行することになり、研究テーマを修正して着手した。即ち(1)GaAs(001)基板における金属In吸着研究、(2)InAs/GaAsヘテロエピタキシにおける量子ドット形成機構等である。前者のIn吸着については2つの新しい表面構造4x2/c(8x2)及び6x2/c(12x2)を発見した。そして高分解能STM像のバイアス電圧依存性から、可能な原子構造モデルを提案した。これら2つの構造の重要性はこれらを出現させてから、InAs成長させると、新しい層状成長モードで結晶育成することが判明したことで、これは高性能光学デバイス製作等への観点から重要な意義がある。後者については通常のMBE成長条件で1.6-3ML厚さのInAs蒸着した際に得られるInAs量子ドット形状やサイズの統計的分布測定を行った。ファセット面が(113)或いは(114)に集中していることが初年度の実験から判明したが、その後量子ドットの高分解能STM像を得ることが可能となり、それより(113)-4x1及び(215)-1x1ファセットモデルを提案した。これは量子ドット形成機構解明に有用なものと考えている。GaAs(001)面基板を用いて、種々の金属、半導体の被覆率を変化させている過程でInAs成長の際、量子ドットが自発的に形成される過程が走査トンネル顕微鏡(STM)で顕著に見られ、最初にこのプロセスを観察することから着手した。分子線エピタキシ-(MBE)装置はSTMとバブルを介して結合しており、MBEで作成した試料は大気に曝することなく、STM観察可能となっている。1.4MLのInAsをGaAs(001)上に成長させたとき、表面はInAs(2x4)構造で2次元成長するが、1.6MLInAsを成長させた所、平均高さ45Å、[110]方向の長さ190Å、[-110]方向の長さ250Åのドットが形成された。即ち1.4MLから1.6MLの間に2次元から3次元成長に変わる臨界膜厚があった。量子ドットサイズの[110]及び[-110]方向の大きさの被覆率依存性は1.6から2.4MLまでは殆ど変わらないのに対し、高さは徐々に増大した。観察した量子ドットのファセット面方位を統計的に調べると(114)面と(113)面に集中する傾向が明瞭に存在した。初年度に研究代表者が急遽一年間米国出張することとなり、分担者が代表を代行することになったため、やむなく研究テーマを修正し本年度は2つのテーマを取り上げた。即ち(1)GaAS(001)基板における金属In吸着研究、(2)InAs/GaAsヘテロエピキタキシにおける量子ドット形成等である。ファセット面が(113)或いは(114)に集中していることは、前年度で報告した通りであるが、その後量子ドットの高分解能STM像を得ることが可能となり、それより(113)-4x1及び(215)-1x1ファセットモデルを提案した。
ビザンツ帝国のソフトパワー戦略－9～12世紀を軸に－

今回の研究の出発点は、アドリア海北東岸ダルマティア地方や西地中海のサルディニア島など、ほとんどビザンツの支配が及んでいない遠隔地域の住民が、ビザンツの宗主権下にあることを主張し、皇帝の臣民としての地位を誇る態度を示していたことを不思議に思い、その要因を追求する必要があると思い至った点にある。ビザンツ帝国が自らの周囲に友好な勢力の圏域を構築するのに活用した、軍事力でも経済力でもないある種の「ソフトパワー」とはいかなるものであったのか、その実像を探求するために、現存する考古学的遺物(墓地の副葬品であった武器や工芸品、古銭など)、教会壁画などの美術資料も積極的に活用しつつ考察を進めていく計画である。
善と美の関係再構築に向けて－マルティン・ゼールにおけるよき生の倫理学を手掛かりに

マルティン・ゼールの美学を、主としてその著『現出することの美学』(2000)におけるカント、シラー、ニーチェ、アドルノらとの対決に依拠して、客観的認識か主観的感情か、感性的認識かイデア的認識か、美的対象は実在か仮象か、自然美の優位か芸術美の優位かといった、従来の美学思想の分類項目をすべて包括する美学として美学思想史上に位置づけた。これによってよき生の枠内における美的要素の意義について再検討する基礎を確立した。該当年度における研究実績は、主に以下の2件である。1.ミヒャエル・クヴァンテ著『人格ー応用倫理学の基礎概念』の翻訳出版(単訳、知泉書館、2013年12月20日発行、pp.1-314)2.玉川大学人文科学研究センター平成25年度第2回「公開講演会」:「美と倫理の関係再構築に向けて」、平成26年2月1日(土)15:0017:00この内、2は、三年間にわたる本研究の手順および予想される到達点を、西洋哲学、日本思想、芸術学など、各方面の研究者に提示し、計画の着実な進展に役立てようとしたものである。まず、本居宣長の審美主義、カントにおける美と倫理の峻別などを起点として、倫理への美の貢献可能性を論じるマルティン・ゼール美学ー倫理学の骨子を概略した。さらに、倫理的問題の発見原理にとどまらず、日常性を揺り動かし、新たな規範性の根拠として機能する美という、ゼール美学ー倫理学の核心的テーゼを踏まえつつ、非完結性の観点で芸術美よりも自然美に優位を与えている点に、ゼール環境倫理学の理論的根拠を突きとめることができた。また、共同体主義と対決し、道徳的規範によって保護されるべき領域の確定を価値倫理学に委ねるゼール倫理学を、リバタリアン的観点で解釈するための知見を得ることができた。このように自然の美学を説くゼールだが、その美学に基づく環境倫理学に関しては人格中心主義の立場を取っている。1は、ジョン・ロック以来、現代にまで及ぶ人格概念、とりわけ人格の同一性を巡る問題史的考察として傑出した文献である。なかでも、同書で語られる、人格とその他の存在を分断する「生命倫理学のギロチン」の恐怖が、人間に近い動物までを保護対象に含めようとするゼール環境倫理学の拡張主義的人格主義にも付き纏うことを察知させてくれる点は本課題の進展にとって重要である。2.ミヒャエル・クヴァンテ著『ドイツ医療倫理学の最前線:人格の生と人間の死』翻訳出版(高田純監訳、盛永審一郎・長島隆・村松聡・後藤弘志訳、リベルタス出版、2014年12月11日発行)この内、1は、明治期における人格概念の受容史を辿ることを目的としたものである。明治20年代中ごろまでに登場したPersonないしPersonalityの訳語候補を渉猟した上で、井上哲次郎および中島力造の尽力によって「人格」という訳語が定着するに至った経緯を確認した。そして、同時期に中島らによって導入されたT. H.グリーンの人格主義倫理学と江戸期儒学の修身論とのはざまに繰り広げられた井上、中島の格闘の中から、近代初頭における人格概念の日本的受容=変様の一断面を明らかにした。三年間にわたる当該研究課題の遂行において、この業績は、現代における善と美の関係の再構築に不可欠な「人格の自律」概念を、日本的文脈の中に繋ぎ止めるための鍵となるものであり、ドイツおよび中国での出版が予定されている。また、2は、人格の自律の具体的場面として医療倫理の現場に焦点を当てた、ドイツ応用倫理学分野における気鋭の研究者による好著の翻訳である。担当箇所は中でも終末期医療に関する倫理的問題を扱っており、美しく死ぬという日本的美学=倫理学を論じるための重要な視点を与えてくれるものである。この作業は、期待される研究成果の第三点に掲げた、衛生観念・美的是認/否認の感情などと混然一体となった原始的道徳感情の「現象学」構築に繋がるものである。マルティン・ゼール美学の根本特徴を主にその著『現出することの美学』(2000)に依拠して解明し、その思想を美学思想史上に位置づけ、よき生の枠内における美的要素の意義について再検討する基礎を確立した。1.ゼールにおける美的知覚の原型は感性的知覚にある。それは、認識的・実践的関心によって選別・固定化された諸現象を現在という瞬間において同時にすべて聞き取ること、諸現象の戯れとしての「現出すること」に自己目的的に寄り添うことにある。これによって、美はよき生の重要な一部をなすだけでなく、よき生の全可能性空間を開示し、価値倫理学および規範倫理学に材料を提供する。2.現在への佇みにおいて主観と客観とは、単一の知覚状況の両面でしかない。3.感性的知覚は、想像による仮象および(とくに芸術鑑賞における)イデア的意味による拡張を許す。4.人間の意のままにならない点で自然美に相対的優位が認められるとしても、自然美と芸術美とは緊密に結び合っており、その優劣を問うことは無意味である。以上の特徴を持つゼール美学は、客観的認識か主観的感情か、感性的認識かイデア的認識か、美的対象は実在か仮象か、自然美の優位か芸術美の優位かといった、美学思想の従来の分類項目をすべて包括的に自らの内に配置できるような美学である。

それはカント、シラーが理論と実践との和解を可能にする戯れの次元として模索し、ニーチェが規定不可能性と絶えざる自己創造の場として希求し、アドルノが非同一性の領域として承認した世界の一回性の次元を引き受ける。しかしその一方で、倫理学の美学化にせよ、美学の倫理学化にせよ、ニーチェを淵源とするポストモダンの審美主義的立場には与しない。以上の分析から、美学を理論的領域からも倫理的領域からも自立した領域として認めた上で、あらためて両領域との接点や交差のあり方を模索することの必要性を確認できた。マルティン・ゼールの美学を、主としてその著『現出することの美学』(2000)におけるカント、シラー、ニーチェ、アドルノらとの対決に依拠して、客観的認識か主観的感情か、感性的認識かイデア的認識か、美的対象は実在か仮象か、自然美の優位か芸術美の優位かといった、従来の美学思想の分類項目をすべて包括する美学として美学思想史上に位置づけた。これによってよき生の枠内における美的要素の意義について再検討する基礎を確立した。計画の進捗が予定よりも遅れている大きな要因として、平成26年度から平成27年度の二年間を任期として引き受けた教務委員長(教務・入試担当)という職務による多忙さを挙げざるを得ない。現在国立大学法人が直面している大学改革の推進および調整役として、この役職には少なからぬしわ寄せが生じているからである。平成25年度においては、計画全体の理論的基礎となるゼールの美学思想の特徴づけを行うことをめざしていたが、平成26年度の目標に掲げたゼールにおける〈善と美〉ないし幸福と道徳の関係理解、そしてその基礎となる〈よき生〉概念の考察を優先した。そこで平成26年度においては当初計画に立ち戻り、ゼールの美学上の主著『現象することの美学(Aesthetik des Erscheinens)』(Frankfurt/M., 2003)に展開された、美は知覚されるものか、感覚や想像力はどのような役割を担っているのか、個々の対象のみならず出来事や雰囲気、景観も美的知覚の対象となるのかといった問いをめぐるゼールの立場を整理した。また、ゼール倫理学を西洋哲学史の中に位置づけるに当たって重要となる三つの観点、すなわち1.カント、シラーにおける道徳性と魂の美しさ、2.シャフツベリー、ハチスンら道徳感覚学派における道徳の美学的基礎付け、3.ニーチェ、フーコーにおける倫理の美学化の内、1に着目して、ゼールの依拠する「現象の戯れ」概念の背景を辿る作業を進めた。ドイツ現代哲学、とくに現象学を中心とする価値倫理学、徳倫理学、人格論平成26年度当初において掲げた、ゼール美学を美学史上に位置づけるという課題に着手することはできた。なかでも「現象の戯れ」概念に依拠するゼール美学とカント、シラーの倫理学・美学との比較検討は、ゼールにおける善と美の関係理解の中核となるという感触を得ることができた。そこで最終年度である平成27年度においては、とくに同概念を認識論的および道徳的「無関心性」という観点と結び付けて、ゼールにおける善・正・美の独立性と相関性の解明という目標へ可能なかぎり近づいてみたい。
組織内血流量計測による、かみしめ時咀嚼筋の疲労と回復に関する研究

電解式組織血流計による測定値は、水素ガス発生のための電解パラメ-タ即ち電解電流量(Id)と電解時間(Td)によって変動するため、予め最適な電解パラメ-タを決定する必要がある。そこで昨年度検討したId=3μA,Td=30秒に加え、本年度は5μA,30秒7μA,30秒10μA,50秒の3パラメ-タを設定し、測定値の再現性を、安静時のみとかみしめを伴う場合で検討した。計12名の被験者の習慣性咀嚼測咬筋を測定対象とした。一方、筋組織中の電極のかみしめによる移動から測定誤差が生じる可能性もあるため、電極移動の少ない冷却による咬筋血流量の変化も、他の3名の被験者で測定した。その結果、安静時のみの測定値には日内変動はほとんど見られないが、10μA,50秒以外では日間変動が大きく、他日に測定した結果を比較するためには10μA,50秒が適当である。かみしめを伴う場合には、10μA,50秒以外では日内変動・日間変動が安静時に比べさらに大きくなる。それに対して、10μA,50秒の場合には、かみしめ後の血流量がかみしめ前に比べやや増加した。よって、かみしめ伴う場合に於いても10μA,50秒が適当である。しかし増加量は少なく、Xe希釈法によって報告されている急激な増加は確認出来なかった。この結果は第84回日本補綴歯科学術大会に於いて報告した。一方、冷却による血流量変化は良好に測定できた。よってこの血流計は、かみしめ等の電極移動が生じる可能性のある測定には不向きであると考えられる。さらに顎機能異常者への応用には、検討すべき問題点が多く残っていると考えられる。また、デ-タをA/Dコンバ-タを介してコンピュ-タ-に入力し、解析する自動解析システムを確立し、解析速度・精度の向上が得られた。電解式組織血流計で咀嚼筋血流量を測定するためには一定の電解条件(電解電流量I、電解時間T)の設定が必要なため、平成元年度では安静時A、かみしめ時B、かみしめ後の安静時Cでの血流量測定に最適な電解条件を検討した。水素発生量、組織傷害、測定時間を考慮して、I=3μA、T=30秒に設定して、被験者3名についてA,B,Cの測定区間で習慣性咀嚼側咬筋血流量を測定したが、測定値のバラツキに比べ血流の変化量は少なく、一定の傾向は見いだせなかった。この結果は第4回日本ME学会秋期大会で報告した。このバラツキの原因として、発生水素量が少ない為に拡散の影響を強く受けた。また、筋収縮による電極先端の移動が関係しているものと考えられた。そこでI=5μA、T=30秒さらにI=7μA、T=30秒さらにI=10μA、T=50秒という3つの電解条件を新たに設定し、同様の測定を行った。しかし、キセノンによる測定で報告されているようなCでの血流量増加という現象を確認できなかった。一方、電解条件を大きくしていくと、測定値のバラツキは小さくなるが、血流の変化量も小さくなることが判明した。これは、電極周囲の発生水素量が増加したために電極が血流の変化をとらえにくいものと考えられる。

もう一方の原因として、筋収縮による電極の移動による、電極先端と筋組織の接合関係の変化が考えられたため、安静時のみの血流量を前出の4つ電解条件で測定した。その結果、4つの条件ともに安定した結果が得られ、10μA、50秒では日を変えても同様の測定値が得られる傾向が認められた。従って、当血流計はかみしめなどの電極の移動を伴う測定は現時点では極めて困難と言える。そのため、筋収縮以外で筋の血流量が変化する場合として、温度変化に伴う血流量に注目し、臨床応用を検討中である。電解式組織血流計による測定値は、水素ガス発生のための電解パラメ-タ即ち電解電流量(Id)と電解時間(Td)によって変動するため、予め最適な電解パラメ-タを決定する必要がある。そこで昨年度検討したId=3μA,Td=30秒に加え、本年度は5μA,30秒7μA,30秒10μA,50秒の3パラメ-タを設定し、測定値の再現性を、安静時のみとかみしめを伴う場合で検討した。計12名の被験者の習慣性咀嚼側咬筋を測定対象とした。一方、筋組織中の電極のかみしめによる移動から測定誤差が生じる可能性もあるため、電極移動の少ない冷却による咬筋血流量の変化も、他の3名の被験者で測定した。その結果、安静時のみの測定値には日内変動はほとんど見られないが、10μA,50秒以外では日間変動が大きく、他日に測定した結果を比較するためには10μA,50秒が適当である。かみしめを伴う場合には、10μA,50秒以外では日内変動・日間変動が安静時に比べさらに大きくなる。それに対して、10μA,50秒の場合には、かみしめ後の血流量がかみしめ前に比べやや増加した。よって、かみしめを伴う場合に於いても10μA,50秒が適当である。しかし増加量は少なく、^<133>Xe希釈法によって報告されている急激な増加は確認出来なかった。この結果は第84回日本補綴歯科学会学術大会に於いて報告した。一方、冷却による血流量変化は良好に測定できた。よってこの血流計は、かみしめ等の電極移動が生じる可能性のある測定には不向きであると考えられる。さらに顎機能異常者への応用には、検討すべき問題点が多く残っていると考えられる。また、デ-タをA/Dコンバ-タを介してコンピュ-タ-に入力し、解析する自動解析システムを確立し、解析速度・精度の向上が得られた。
表面改質技術Scanning Cyclic Pressによる金属の疲労特性改善

軽く比強度の高い軽金属は構造用材料として活躍が期待されるが、強度・耐久性の低さから用途が制限されるため、これらを向上させるための表面改質技術の開発は重要な課題である。また、軽金属の疲労特性に関する研究は鋼に比べて少なく、将来的な信頼性・安全性を確保するためその破壊機構を把握する必要がある。本研究では、低荷重の振動圧縮負荷を金属に走査しながら与えることで表層組織を微細化する新しい表面改質技術Scanning Cyclic Pressを用い疲労特性改善を試みる。また、改質後の表面粗さ測定や組織観察から改善効果に及ぼす加工パラメータの影響を検討し表面改質を施した材料の疲労特性改善機構を明らかにする。
言語発達障害児におけるサイン言語の獲得しやすさに及ぼす認知的諸要因に関する研究

一般に手話は,聴覚障害児のみならず,知的障害児,自閉症児,発達性失語症児など,音声言語の獲得が困難な障害児にも学習されやすいといわれている。しかし障害児の中には,手話の学習でさえ容易ならざるものが少なくない。手話を元として作られるサイン言語は,それらの子どもたちのために考案されたものであり,手話をさらに平易化した手指動作により成り立っている。本研究の目的は,言語発達障害児に獲得されやすい手話に関して,記憶および表象化過程の心理学的知識に基づいた予測を立て,これらを実際のコミュニケーション指導の中に導入し,その結果の評価および検討を行うこと,またこれらの変数と認知機能の障害の種類程度との関係を解明することである。ここから得られた知見は,サイン言語の開発に貢献できるであろう。第1年次は,全体的傾向を見るため,実験的統制を行わず現場でのデータを集め,分析した。対象は,養護学校中学部に在籍する自閉症男児3名女児1名,養護学校小学部に在籍する知的障害・脳性マヒの男児1名,大学の発達相談に来所する5歳自閉症男児1名である。養護学校では研究協力者(養護学校中学部,小学部教諭各1名),大学においては学生スタッフが手話,音声言語の同時使用によるコミュニケーション指導を行った。第2年次は大学発達相談セッションにおいて,上記の自閉症男児1名の継続指導のほか,養護学校小学部に在籍する重度のダウン症児1名を新たに加え,同じく学生スタッフが自由遊び場面で同時法的なコミュニケーション指導を行った。本研究の当初の目的を達せられるのに十分な手話語彙の獲得が促進されなかったことから,用いられた機会利用型コミュニケーション指導の初期からの導入を含め,コミュニケーション指導における課題および問題点が論じられた。これらの知見のコミュニケーション指導への活用が期待される。研究協力者の養護学校小学部および中学部教諭各1名と協議し,使用する手話語彙の検討を行った。対象児は,本学発達相談に来所の5歳男児(自閉症,発語なし),養護学校小学部在籍の10歳男児(知的障害,脳性マヒ,有意味語なし),養護学校中学部在籍の自閉症児4名(13歳男児:発語なし,14歳男児:ほとんど発語なし,15歳男児:10ほどの単語を発語,14歳女児:発語なし)の計5名であり,いずれも言語発達障害を有する。手話の指導形態は,5歳児についてはプレイルームでの自由遊び場面で,手話に熟達した学生スタッフが同時法的かかわりを行った。小学部児童では,言語指導の時間において,担当教諭が1対1の同時法的かかわりを行った。また中学部生徒では,作業の時間(2児),国語の時間(1児),日常生活指導の時間(1児)に担当教諭が同時法的指導を行った。これらの対象児はそれぞれ発達課題も相違しており,また手話の獲得に効果的な指導場面の選定を重視させたため,実験室的な要因の統制は行わず,むしろ個々の対象児にとって最適な指導場面の選択を心がけた。おおむね週1回1時間弱,約6ヶ月間の指導の結果は次の通りである。すなわち,5歳児については,数個の家庭内で用いられる身振りのほかに,新たにスタッフの教えた「パン」の手話を模倣するようになった。養護学校小学部児童については,研究開始前から習得していた手話に比して新たな手話語彙の獲得は少なかったものの,5個の手話を模倣,1個の手話を自発できるようになった。中学部生徒については,一般に身体の一部に触れる形態の手話は獲得されるが,身体から離れ,または始点終点が明確でない手話の獲得はなされない傾向にあった。これらの結果は後続の研究計画に活用していく方針である。

一般に手話は,聴覚障害児のみならず,知的障害児,自閉症児,発達性失語症児など,音声言語の獲得が困難な障害児にも学習されやすいといわれている。しかし障害児の中には,手話の学習でさえ容易ならざるものが少なくない。手話を元として作られるサイン言語は,それらの子どもたちのために考案されたものであり,手話をさらに平易化した手指動作により成り立っている。本研究の目的は,言語発達障害児に獲得されやすい手話に関して,記憶および表象化過程の心理学的知識に基づいた予測を立て,これらを実際のコミュニケーション指導の中に導入し,その結果の評価および検討を行うこと,またこれらの変数と認知機能の障害の種類,程度との関係を解明することである。ここから得られた知見は,サイン言語の開発に貢献できるであろう。第1年次は,全体的傾向を見るため,実験的統制を行わず現場でのデータを集め,分析した。対象は,養護学校中学部に在籍する自閉症男児3名女児1名,養護学校小学部に在籍する知的障害・脳性マヒの男児1名,大学の発達相談に来所する5歳自閉症男児1名である。養護学校では研究協力者(養護学校中学部,小学部教諭各1名),大学においては学生スタッフが手話,音声言語の同時使用によるコミュニケーション指導を行った。第2年次は大学発達相談セッションにおいて,上記の自閉症男児1名の継続指導のほか,養護学校小学部に在籍する重度のダウン症児1名を新たに加え,同じく学生スタッフが自由遊び場面で同時法的なコミュニケーション指導を行った。本研究の当初の目的を達せられるのに十分な手話語彙の獲得が促進されなかったことから,用いられた機会利用型コミュニケーション指導の初期からの導入を含め,コミュニケーション指導における課題および問題点が論じら九た。これらの知見のコミュニケーション指導への活用が期待される。
アミノ酸のラセミ化を利用した歯からの年齢推定-高齢者領域の確立-

歯のアミノ酸ラセミ化反応を利用した年齢推定法は、正確な方法である。しかし高年齢帯での適用については研究されていない。2015年はサンプル処理効率を向上させるため、実験系のスケールダウンを主に取り組んだ。その結果、標準液および歯牙試料を使用して、スケールダウンの条件検討を行ったところ、Aspの検出量とD/L比の値の安定性を得ることは難しかった。この原因を探るべく、2016年はサンプル処理能力を上げるためにガスクロマトグラフィーにオートサンプラーを導入した。これらを用いた結果、年齢層によりその精度に差が見られ、高年齢層では実年齢と推定年齢の誤差が大きくなる傾向がみられた。歯牙のアミノ酸ラセミ化反応を利用した年齢推定法は大谷進先生により確立された方法(大谷法)であり、正確な方法として実際に鑑定依頼を受け実績を出している。それらの実績が示すように、年齢は、身元不明者が一体誰なのかを特定する一助となり、重要な情報の一つに挙げられている。実際に先の東日本大震災で年齢推定が行われたところもあったが、大谷法ではなく、咬耗を指標にして行う方法が採用されていた。これは大規模災害であり対象個体が多かったことも影響していると考えられるが、大谷法が全国に普及していないことは、大谷先生に年齢の鑑定依頼が来ていることが示されている。この原因として一つに、アミノ酸ラセミ体分離カラムの存在がある。我々が使用しているChrasil-Valが塗布された光学異性体を良好にそして短時間で分離するカラムは一般的に市販されておらず、有効に使用される機会を逃している。また大谷法は、歯牙の洗浄→象牙質の切り出し→破砕→加水分解→固相抽出→誘導体化の過程を経てガスクロマトグラフィーで評価を行っている。これらの過程において、扱う試料のボリュームが大きく、それに伴い必然的に試薬の量は多なることから、濃縮に時間を要することや使用機器が大きく、操作に煩雑性を生み出している可能性があり、多くの資料を可能な限り短い時間で結果を出すことを困難にしていた。またこれも普及していない原因ではないかと考えられた。「年齢推定」という観点のみに焦点を絞った方法とするならば、大谷法は改良の余地が残されている。高年齢帯を含めた標準曲線を作成するためには多くの資料を評価していく必要があるため、2015年度は方法の改良および標準化に向け実験を行った。「アミノ酸光学異性体分離カラム作成」について第99次日本法医学会学術全国集会で、Cyanopropyltriethoxysilaneで前処理した後Chrasil-Valを塗布することで、短時間で高精度に光学異性体を分離可能なカラムを作成したことを、学会発表を行うことができた。しかし方法の改良および標準化に向け以下のような実験を進めたが、安定したAspの検出量とD/L比を得るまで至らなかった。1,誘導体化効率上昇:大谷法では自家製濃縮乾燥機を使用していたが、サンプル濃縮乾燥機KD200(bms, Japan)を用いることで、濃縮乾燥の作業効率を上昇させた。2,固相抽出でスケールダウン検討:アミノ酸の検出量に比べ扱う歯牙試料のボリュームが大きかった。このことから歯牙試料を減量し、固相抽出剤(Dowex50W-X8 50-100(Sigma-Aldrich, Japan))でのスケールダウンを検討した。2,での標準液を用いて、D-AspとL-Aspの検出量とその比(D/L比)で評価を行ったところ、安定した検出量とD/L比の値を出すことは困難だった。3,固相抽出材の検討:3,においてAspの検出量とD/L比の値の安定性の観点から、固相抽出剤の変更を検討した。InertSep MC-1(GL Science, Japan)に対して、標準液および歯牙試料を使用し、様々なスケールで検討したところ、Aspの検出量とD/L比の値の安定性を得ることは難しかった。4,省略法の検討:煩雑な工程の観点から、本来の歯牙の洗浄→象牙質の切り出し→破砕→加水分解→固相抽出→誘導体化の過程を、固相抽出を省略した省略法の検討を行った。その結果、アミノ酸検出は可能だったが、クロマトグラムのベースラインは安定せず、D-AspとL-Aspの分離は不十分であったため、省略法は年齢推定法に不適当と判断した。年齢推定は、身元不明死体の個人同定の手がかりの一つとして重要な鑑定項目となっている。歯牙のアミノ酸を利用した年齢推定の方法は、アスパラギン酸の光学異性体であるD体とL体の比率を用いたラセミ化率を用いて年齢推定を行っていく方法である。この方法は鑑定に使用されおり、成果を挙げている。その一方で、全国の鑑定機関に普及していないのが現状である。その原因として、申請書および前年度の報告書にも記載したように、操作の煩雑性が挙げられ、改善の影響が考えられる。前年27年度では、1,スケールダウン検討におけるアスパラギン酸(Asp)の検出量の不安定性についての原因探索および、2,実用性の向上を行った上で、3,高年齢帯の標準曲線の作成を今年度の目標として掲げた。標準液にて検討を行ったところ、Aspの検出量が少なくなるほどD-Asp/L-Aspの値が高値を示した。この結果から、スケールダウンに伴う歯牙試料の減量は、年齢推定の標準曲線に影響を与える可能性が示唆された。

また歯牙試料を用いたところ、蒸留塩酸にて加水分解を行うことで、ガスクロマトグラムのベースラインが安定した結果が得られた。さらに、実用性の向上を図る一環として、オートサンプラーを導入した。その結果、時間を効果的に使用することに成功した。以上から、高年齢帯の標準曲線を作成するまでには至っていない。微量な物質を検出する必要があるため、正確性を重視した実験そして結果が求められる研究である。スケールダウン検討のためには、検出量を安定させる原因を明らかにすべく、実験過程の様々な条件を変化させながら、結果の分析を行っていく必要があった。しかし一回にこなせるサンプル数に限界があり、研究が捗っていない。本研究で行っているアミノ酸の前処理も含めると、結果を出すまで2日間を要する。山梨大学医学部附属病院歯科口腔外科の外来および外勤を本業としている現在、2日間まるまる研究に充てることは困難で、研究が前に進まない。実際に各工程をセパレートして実験を行ったが、同一歯牙を用いても異なるAsp検出量を示し、ガスクロマトグラムも異物を検出する頻度を上昇させ、再現性の悪い結果を認めた。そのため、全工程を連続的に行う必要がある。そしてガスクロマトグラフィーは、測定のために立ち上げる度にコンデションが変化することは周知の事実であり、連続的に分析し続けることができるメリットは大きい。そこで、エバポレーター購入のために保存しておいた資金を、オートサンプラーの導入に移行することを、年度末に決心した。導入することで、手動でガクスロマトグラフィーに注入していたところを、自動で注入することが可能となった。その結果、時間を効率的に活用することが可能となった。歯牙のアミノ酸ラセミ化反応を利用した年齢推定法において、昨年度に引き続き、固相抽出のスケールダウンの一環として、固相抽出マニホールドを導入した。大谷法では、既製品ではない特注のガラス管に、強陽イオン交換樹脂を充填し固相抽出を行っていた。固相抽出に広いスペースが必要である上に、収納にもスペースが必要であり、常設が余儀なくされていた。そこで、可撤式の固相抽出マニホールドを導入した。その結果、a.実験スペースが半分となり、b.収納できるようになり、c.既製品で実験できるようになった。その一方で、大谷法の自然落下に対し、このマニホールドは吸引式で固相抽出を行うため、吸引口に近いサンプルとそうでないサンプルとで落下速度が異なっていることが影響したのか、検出量にバラツキが認められた。繰り返しこのバラツキの調整を試みたが、是正方法を編み出すまでに至らなかった。そこで、大谷法を用いて高年齢帯における結果を出すことの優先順位を上げた。70歯において、アスパラギン酸のラセミ化率を求め、年齢との相関関係を分析したところ、全体として、D/L比と年齢の間には有意な高い相関が認められた(相関関係(R) =0.971、p<0.01)。一方で、60歳以上の歯牙31歯の相関係数は0.71と大幅に低下した(p<0.01)。また60歳未満の推定誤差は±3.6歳であったが、60歳以上の高年齢層においては±7.4歳を示し、年齢推定精度の低下を認めるも、有意差は認められなかった。本研究により、歯に含まれるAspのラセミ化を利用した年齢推定は、年齢層によりその精度に差が見られ、高年齢層では実年齢と推定年齢との誤差が大きくなる傾向がみられた。
痴呆疾患モデルに海馬特異的神経プロテアーゼ発現と行動学的変化との比較検討

ニューロプシンは海馬などの大脳辺縁系に局在するセリンプロテアーゼでありキンドリング刺激や海馬直接刺激により容易に変動する。またlong-term potentiation (LTP)ともよく相関を示すため記録関連物質の候補としてその存在意義がある。申請者らは痴呆性疾患とニューロプシン発現の相関を検討する目的でマウス両側総計動脈結紮による一過性脳虚血負荷およびdiethyldithiocarbamic acid (DDC)投与によるoxidative stress後の行動変化とニューロプシン発現との関連性を評価した。行動テストとしてはオープンフィールドテストを用い、ニューロプシン発現変動はin situ hybridization histochemistryを施行後オートグラフィー上のグレイン密度の定量にて計測した。オープンフィールドによる動物の活動性は10分間の一過性脳虚血後またはDDC投与後一週間目には非虚血群および生食投与群の動物に比し有意に約70%増加していた。DDC投与後一ケ月目にはこのような活動性の亢進はもはや観測されなかった。ニューロプシンmRNAはDDC投与後2時間目には発現亢進がやや観察されたがその後基準値に複し、一週間目には約50%に低下していた。同時に計測したtissueplasminogen activator(tPA)、manganses SODおよび72kd-heat shock protein(HSP72)nRNAはこれらの負荷後一週間目には基準値に複しており、ニューロプシンの発現低下は特異的と考えられた。従って、ニューロプシン発現低下と活動性の亢進とが相関している可能性が示唆された。一般に海馬可能の低下は空間認知機能の傷害として出現し、行動テストでは活動性の亢進として評価される。今回虚血負荷およびoxidative streeによるニューロプシン発現低下が活動性の亢進をもたらしたとも考えられ、脳卒中後の痴呆形成機構にも関与していることが示唆された。今後はニューロプシン産生抑制や投与実験によりその行動変化への直接関与を検討する必要性があると思われた。
多属性後悔理論の構築と実験による妥当性の研究

本研究課題は、意思決定の結果が多次元の要素によってあらわされるときの表現の構築ならびに、実験による妥当性の検証をおこなうことを目的としている。経済学の分析で合理的な選択基準となっている期待効用理論においては、意思決定の結果が貨幣の1属性のみで測られることが多く、より一般的なモデルの構築がもとめられている。当該年度の研究成果としては、大きく理論パートと実験パートに分けることができる。まず理論パートとして、多属性効用関数の医療経済学分野への応用が挙げられる。医療経済学は意思決定の結果を複数の属性で記述することにより、多くの知見を生み出している分野である。Fujii and Osaki (2019, Journal of Health Economics, Accepted)では、意思決定の結果を富の水準と健康状態という2つの属性で表現することにより、個人が複数の疾病に同時罹患する状況を緩和するための支払意思額の変化を考察している。他属性の効用関数における、富と健康水準の属性ごとの交差微分の方向により、個人がより多くの支払意思額を表明することを明らかにしている。また、実験パートとして意思決定における自由意志の程度と意思決定の遅延価値割引の関係を検討するための実験的検討をおこなった。遅延価値割引モデルとしては、双曲線型割引モデルと指数関数型割引モデルの様々な計量モデルを用意して、自由意志を操作した実験課題を用いたが、自由意志の要因と意思決定の遅延価値割引モデルについての明確な差異が見出されなかったことが挙げられる。理論パートにおいて、他属性効用関数における交差微分の符号により個人の意思決定が説明できることを明らかにした点が順調に進捗していると判断した理由である。この研究結果をまとめた論文が、医療経済学分野のトップジャーナルに受理されている点も評価される。あわせて実験パートにおいても個人の選好を測定することに着手できている点が評価できると考えられる。今後は他属性効用関数を実験手法を用いて計測することが重要になる。また、これらの結果について早めに取りまとめることで国際学会ならびに国際ジャーナルに投稿していきたい。本研究課題では、リスクと不確実性下における意思決定の結果が複数の属性であらわされるときの後悔理論(Regret Theory)の表現の構築、ならびに実験による検証を目的としている。本研究課題は、選好関係の表現を構築する理論パートと、実験によりその妥当性を検証する実証パートに大別される。1年目の研究成果として、理論パートでは先行研究の調査と表現を構築するために必要となる公理の構築に着手することができた。多属性後悔理論の表現として、各属性を効用関数で評価し、和の形で表現する加法表現、積の形で表現する積表現、和と積が混在する形の半分離表現に分類することができた。医療や金融などの応用を考える上で、どの表現を用いるかが重要となる。実証パートについては、1年目の目標を先行研究の調査、実験環境の整備、被験者プールの作成、アシスタントの育成としていた。先行研究の調査として、1属性の後悔理論で個人の選好を測定する手法が先行研究で示されていたことから、これを多属性に拡張しつつ属性間のトレードオフが計測できるかどうかの検討に入っている。実験環境の整備については、共同研究を実施する大学間で共通した実験環境を整備する必要があることから、タブレット端末とノート型PCを用いた移動型実験設備が設置できるかどうかの検討に入っている。最後に被験者プールとアシスタントの育成については、実験データをとる大阪産業大学、早稲田大学、筑波大学においてチラシ等で一定の被験者とアシスタント候補を集めることに成功している。1年目の目標であった、理論パート:先行研究の調査ならびに表現定理の構築に向けた公理の検討に着手実証パート:先行研究の調査ならびに実験環境の整備、被験者プールの確立に向けた準備がおおむね達成できたこれらの状況を踏まえて、おおむね順調に推移していると判断した。

あわせて実験パートにおいても個人の選好を測定することに着手できている点が評価できると考えられる。本研究課題では、理論パート実証パートに分けられる。まず理論パートでは、多属性後悔理論の表現定理を構築するための公理の検討、数学的な証明を中心に研究を進めていく。実証パートにおいては、公理を実験により検証するための準備に着手する。また、パイロット実験を実施し、スムーズな実験運営に備える。今後は他属性効用関数を実験手法を用いて計測することが重要になる。また、これらの結果について早めに取りまとめることで国際学会ならびに国際ジャーナルに投稿していきたい。大学間での移動型実験室を構想しているが、機材の選定に時間を要しているため、購入に至っていない。実験環境を整える意味でも早急に機材の選定と購入に着手したい。実験の謝金を計上していたが、パイロット実験のみを実施していて本実験による謝金が支出できていないため。
新規ガイダンス因子による神経新生と血管新生を組み合わせた脳梗塞再生法の開発

脳虚血後数日間の亜急性期には神経新生が盛んに行われ、神経機能の再生が試みられている。しかしながら新生神経細胞はやがて死滅してしまう。したがって、新生神経細胞を長期に渡り生存し、大脳皮質で神経細胞へと分化させることができれば、神経機能亢進につながると考えられる。我々は最近、神経新生領域で発現する新規神経軸索ガイダンス分子、Netrin-5を見出した(Yamagishi et al., Front Cell Neurosci, 2015)。Netrin-5は論文報告がほとんどなく機能未知だが、申請者は梗塞層新生血管、梗塞周囲層ミクログリア、側脳室→梗塞層へ移動中の新生神経細胞で強く発現上昇していることを見出した。したがって、1Netrin-5投与もしくは過剰発現による脳虚血時における再生治療の開発を試み、2Netrin-5ノックアウトマウスを作成しフェノタイプを解析した。1Netrin-5脳室投与の為のリコンビナント精製について:昨年度からNetrin-5リコンビナント作成には苦労しており、様々な工夫を試みた。N末端シグナル配列の変更やコザック配列の変更を試みたが、収量は増加しなかった。また、カイコでの作成を試みたが、全て不溶画分へ蓄積してしまい、抽出できなかった。2Netrin-5ノックアウトマウスの解析:Netrin-5が神経新生に関与しているか、ノックアウトマウスを用いて解析を行った。その結果、以下の2つのフェノタイプを見出すことができた。1つ目:嗅球におけるDCX陽性神経突起の短縮。2つ目:EdU陽性細胞の異所性移動。特に後者はヘテロマウスでも観察され、Netrin-5が新生神経細胞に対し、ガイダンス因子として機能していることを強く示唆している。1Netrin-5脳室投与の為のリコンビナントについてNetrin-5 cDNA(マウス)をCMVプロモーター下で発現するpIgplusベクターへとクローニングし、様々な変更を行った。上述の通り、機能的Netrin-5を取得することにはまだ成功していないが、ノックアウトマウスの解析が順調に進んでいるため、こちらに重点を置くようにした。2Netrin-5ノックアウトマウスの解析Netrin-5の全身性ノックアウトマウスはメンデルの法則に従って誕生し、発生上フェノタイプは特になく、日常的な観察でも行動異常は見られなかった。3ヶ月齢のマウスにおいて、嗅球におけるDCX陽性の幼若神経突起長について計測した。カテゴリーを50umずつ5段階に分けてカウントしたところ、ノックアウトマウスにおいては明らかに短い突起の割合が増えていた。また、EdUをインジェクションし、細胞移動について解析したところ、野生型とは分布が異なり、異所性のEdU陽性細胞が見られた。1Netrin-5脳室投与の為のリコンビナントについて引き続き、リコンビナントが得られるよう改変を行う。リコンビナントを得ることができれば、中大脳動脈結紮モデルを作成し、脳室内投与を試みる。そして、脳を固定し切片を作成して神経再生における機能を検討する。2Netrin-5ノックアウトマウスの解析上述した通り、嗅球におけるDCX陽性神経突起の短縮・EdU陽性細胞の異所性移動が見られたため、今後はこれらのフェノタイプについて、詳細に解析を行う。特にEdU陽性細胞がどのような細胞種であるか、各種マーカーを用いて同定する。また、脳梗塞モデルを作成し、EdU取り込み細胞の移動に関しても解析を行う。したがって、1Netrin-5投与もしくは過剰発現による脳虚血時における再生治療の開発を試み、2Netrin-5ノックアウトマウスの梗塞モデルを作製し、分子機能・病態発症メカニズムの解明を試みた。1Netrin-5脳室投与の為のリコンビナント精製についてHEK293細胞を用いてリコンビナントの精製を試みたが、残念ながら極僅かしかリコンビナントを得る事ができなかった。そこで、収量改善のため、プラスミドの改変を行った。・FLAGやMyc、His等小さなタグへの変更・pIgplusからpcDNA3やpcDNA4、pINFUSE等バックボーンの変更。しかしながら、どの条件においても放出されるNetrin-5は非常に僅かであり、十分量を得る事に成功していない。2Netrin-5ノックアウトマウスの解析Netrin-5のノックアウトマウスは新潟大学脳研究所との共同研究で作成された。ノックアウトマウスの中大脳動脈を結紮し、脳梗塞モデルを作成したが、ノックアウトマウスはC57BL/6バックグラウンドであるため、個体によってバラツキが見られ、定量的な解析が現段階では非常に困難である。1Netrin-5脳室投与の為のリコンビナントについてNetrin-5 cDNA(マウス)をCMVプロモーター下で発現するpIgplusベクターへとクローニングした。当該ベクターはFcタグが付加されるため、抗Fc抗体により可視化でき受容体との結合アッセイが容易となる。

HEK293細胞を用いてトランスフェクションし、培地から精製を試みたが、残念ながら極僅かしかリコンビナントを得る事ができなかった。そこで、多量のリコンビナントを得るため、プラスミドの改変を試みた。FLAGやMyc・His等小さなタグへの変更、pIgplusからpcDNA3やpcDNA4、pINFUSE等バックボーンの変更。しかしながら、どの条件においても、放出されるNetrin-5は非常に僅かであり、in vivoでの実験どころか、in vitroの実験を行うにも十分量を得る事ができなかった。2Netrin-5ノックアウトマウスの解析Netrin-5のノックアウトマウスは新潟大学脳研究所との共同研究で作成された。loxPで挟まれている為、PGK-Creで全身性の、Nestin-Creで神経系の細胞でノックアウトを行った。Netrin-5ノックアウトマウスは全身性ノックアウトマウスでもメンデルの法則に従って生まれてくる為、発生上フェノタイプは特にないと思われる。また、日常的な観察でも、行動異常は見られなかった。中大脳動脈を結紮し、脳梗塞モデルを作成したが、ノックアウトマウスはC57BL/6バックグラウンドであるため、個体によってバラツキが見られ、定量的な解析が現段階では非常に困難であった。脳虚血後数日間の亜急性期には神経新生が盛んに行われ、神経機能の再生が試みられている。しかしながら新生神経細胞はやがて死滅してしまう。したがって、新生神経細胞を長期に渡り生存し、大脳皮質で神経細胞へと分化させることができれば、神経機能亢進につながると考えられる。我々は最近、神経新生領域で発現する新規神経軸索ガイダンス分子、Netrin-5を見出した(Yamagishi et al., Front Cell Neurosci, 2015)。Netrin-5は論文報告がほとんどなく機能未知だが、申請者は梗塞層新生血管、梗塞周囲層ミクログリア、側脳室→梗塞層へ移動中の新生神経細胞で強く発現上昇していることを見出した。したがって、1Netrin-5投与もしくは過剰発現による脳虚血時における再生治療の開発を試み、2Netrin-5ノックアウトマウスを作成しフェノタイプを解析した。1Netrin-5脳室投与の為のリコンビナント精製について:昨年度からNetrin-5リコンビナント作成には苦労しており、様々な工夫を試みた。N末端シグナル配列の変更やコザック配列の変更を試みたが、収量は増加しなかった。また、カイコでの作成を試みたが、全て不溶画分へ蓄積してしまい、抽出できなかった。2Netrin-5ノックアウトマウスの解析:Netrin-5が神経新生に関与しているか、ノックアウトマウスを用いて解析を行った。その結果、以下の2つのフェノタイプを見出すことができた。1つ目:嗅球におけるDCX陽性神経突起の短縮。2つ目:EdU陽性細胞の異所性移動。
中世イタリアにおける都市同盟の研究

イタリアの都市同盟は、ドイツ・ハンザの経済的同盟と比較して、帝国支配に対抗する政治的な同盟と見られてきた。しかし、同盟結成の12世紀は都市が地域の中心地や国際的商業ネットワークの結節点として大いに発展を遂げた時期、特に、地中海-北イタリア-ヨーロッパに至る国際交易の流れが経済的繁栄をもたらした時期であった。皇帝側はこのことに注目したし、諸都市の同盟結成の背景にもこうした経済的動機が推測される。そこで、以下の当時の直接史料:1.皇帝側の国王証書、事績、年代記等(diplomata,gesta,cronaca etc.)、2.都市側の公的記録類(statuti,concordia etc.)、3.都市市民の書いた文書類(annales,cronica etc.)、4.文学的作品(Ligurinus,Carmen etc.)などの分析から次のことを明らかにした。1.皇帝側は関税徴収権、貨幣鋳造権などの特権の授与の仕方に一定の経済・財政的政策をもっていた。2.都市側も国際的な通商の流れにどう乗るか苦慮し、これまでの経済的権益を守る意味からも同盟を促進した。3.同盟の運営は軍事的守備が前提であったが、川・海の航行の自由や関税の相互免除など共存共栄の経済政策を持とうとした。4.他方、領域内の築城権、軍事権、徴税権、裁判権などは相互に尊重し、都市の領域の収斂度を出来るだけ高めようとした。5.コムーネや同盟を支えた都市の指導層では土地領主層だけでなく商人層(mercatores,negotiatores)の役割も大きくなり、血統貴族(nobilitas personae)は富による貴族(nobilitas divitiarum)に変わり金権階層(plutocrazia)が生れつつあった。6.領主層も投資家(stans)として海外で活動する商人(procertans)に資金を託して国際通商に参加し得る信用取引の技術(commenda,collegantia etc.)が発展していた。