hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
糖分子鎖集合体

平成11年度の成果キーワードは昨年と同じ(小林)硫酸化がラクトースおよびフコースを側鎖にもつ共重合体型の糖鎖高分子を簡便な戦略により合成し、これがセレクチンファミリーと特異的に結合することを見出した。糖鎖クラスター効果をうまく利用する新しい概念を提出した。(秋吉)疎水化多糖が水中で会合した微粒子が、シクロデキストリンの添加により、微粒子の崩壊とともに、複合化したタンパク質の活性を保持したままで効率よく放出することを見出し、分子シャペロン類似機能を発現するシステムを開発した。(宮本)リビングラジカル重合法により、糖含有ポリビニルエーテル型マクロモノマーの規制重合を行い、両親媒性の樹状多分岐糖鎖高分子を合成した。枝部分外側の糖含有セグメントの存在するために、短鎖のモデル高分子を比較して、異なった物性および機能を持つことを明らかにした。(楠本)ヘパリンの部分構造に相当する二糖、三糖ならびに二糖の集合体を合成し、これらの合成糖鎖誘導体と血小板の結合能を精密に調べ、この血小板/ヘパリンの結合は、顕著なクラスター効果を発現した。一つのレセプターと複数単位の糖鎖リガンドとの結合が動的な平衡状態にある結果生じたものであると考えた。(原田)シクロデキストリンを各種ポリマーと包接錯体を形成させ、その両端を嵩高い置換基で閉じたあと、隣接する水酸基をエピクロルヒドリンで結合し、その後に両端の嵩高い置換基を切り離して、中のポリマー鎖を除去して、チューブ状ポリマーを合成した。この分子チューブが特異な機能を発揮することを明らかにした。(明石)糖鎖をコロナにもつコア-コロナ型ポリスチレン微粒子を調製し、不溶性高分子上では高い効率で糖鎖-タンパク質の認識が起こることを明らかにした。これを利用して、グロボトリオース固定化ポリスチレン微粒子を調製してベロ毒素捕捉効果を調べた。人工複合糖質高分子の吸着挙動を定量的に解析するため、水晶発振子マイクロバランス(QCM)を用い、ラクトースを機能素子とする2つのポリマーについて固体表面上への吸着挙動やレクチンとの相互作用を調べた。また、従来型の糖鎖高分子は、ポリスチレンやポリアクリルアミドといった比較的柔軟な高分子主鎖骨格を有しており、側鎖の三次元的な配向は全く制御されていない。そこで、剛直な4回らせん構造をとりやすいポリイソシアニドに着目し、糖鎖置換フェニルイソシアニドの合成とその重合を行った。剛直な糖鎖高分子の固体基板上への吸着挙動や、糖鎖を三次元的に配向制御することが分子認識部位に及ぼす効果について検討した。(小林)水溶液中で集合体を形成する疎水化多糖にシクロデキストリンを加えると会合が可逆的に制御できることを見出した。分子認識機能を有する糖鎖を疎水化多糖に結合させることにより、新しい薬物運搬システムを構築できた。(秋吉)グルコース含有両親媒性共重合体が高次の構造形成することを見つけて連鎖配置の影響を明らかにした。N-アセチルグルコサミン含有ブロック共重合体を合成しレクチンとの相互作用を調べた。(宮本)チオグリコシドをドナーとする化学的グリコシル化と加水分解酵素の糖転移活性とを併用して、硫酸化多糖へパリンの部分構造の構築と活性糖鎖の集合化を行った。(楠本)ポリアクリルアミドの側鎖構造をシクロデキストリンが厳密に認識していることを明らかにし、新しい抗原抗体複合体モデルを構築した。(原田)硫酸化グリコースを側鎖にもつ高分子とフィブリノーゲン蛋白質との相互作用を表面プラズモン共鳴により解析した。(明石)(小林)水晶発振子を用いて、単糖、2糖、3糖および5糖結合ポリスチレン型糖鎖高分子の吸着挙動を解析した。2糖結合ポリスチレン型糖鎖高分子が特に強く疎水性表面に吸着することが分かった。GM3単分子膜の表面圧一表面積曲線の解析から、Gb3糖鎖結合ポリスチレンの水溶液中が、GM3糖鎖とGb3糖鎖の間で強い分子間結合が働いていることを見つけた。(秋吉)シクロデキストリンの分子認識により、疎水化多糖の水中での会合を可逆的に制御できることを見つけた。蛋白質との相互作用を制御し、分子シャペロン類似機能を発現するシステムを開発した。ガラクトース残基修飾疎水化プルランに抗ガン剤ネオカルチノスタチンクロモフォアを取り込ませたナノ微粒子が、ガラクトースレセプターの存在する細胞系においてのみ高い細胞毒性を示し、薬物運搬体として有効に機能することが分かった。(宮本)ニトロキシルラジカルを用いたリビングラジカル重合法により、糖含有スチレンおよびアクリレート誘導体の規制重合を行った。また、構造の明確な単分散糖鎖高分子を親水性部位に有する新規糖脂質を合成することに成功した。さらに、銅錯体を触媒としたリビングラジカル重合法により、糖含有メタクリレート誘導体の規制重合が可能であることを明らかにした。(楠本)チオグリコシドを用いる選択的糖鎖形成反応と、選択的に除去可能な種々の保護基とを活用して、ヘパリンの部分構造に相当する二糖、三糖ならびに二糖の集合体を合成した。これらの合成糖鎖誘導体と血小板の結合能を精密に調べて、結合に関与する構造要因を解析した。

また加水分解酵素の糖転移活性を利用する糖鎖合成法の効率化を試みて、数種のニトロピリジル誘導体がドナーとして優れた性質を有することを見出した。(原田)シクロデキストリンが親水性のポリマーだけでなく、ポリイソブチレンやポリエステルなど疎水性のポリマーとも包接錯体を形成することを見いだした。この際、ポリマーが水に不溶のためにポリマーを加熱し、融解させた後、シクロデキストリンの水溶液を加え、超音波を照射して錯体を得た。(明石)ポリNVAを加水分解して表面にアミノ基を誘導し、ラクトースラクトンと反応させることにより表面にガラクトースを有するポリスチレンナノスフェアを合成した。糖結合ナノスフェア上の糖鎖認識性をレクチンタンパク質RCA120を用いて、粒子凝集による濁度変化および、Enzyme Linked LectinAssays(ELLA)法によって評価した。平成11年度の成果キーワードは昨年と同じ(小林)硫酸化がラクトースおよびフコースを側鎖にもつ共重合体型の糖鎖高分子を簡便な戦略により合成し、これがセレクチンファミリーと特異的に結合することを見出した。糖鎖クラスター効果をうまく利用する新しい概念を提出した。(秋吉)疎水化多糖が水中で会合した微粒子が、シクロデキストリンの添加により、微粒子の崩壊とともに、複合化したタンパク質の活性を保持したままで効率よく放出することを見出し、分子シャペロン類似機能を発現するシステムを開発した。(宮本)リビングラジカル重合法により、糖含有ポリビニルエーテル型マクロモノマーの規制重合を行い、両親媒性の樹状多分岐糖鎖高分子を合成した。枝部分外側の糖含有セグメントの存在するために、短鎖のモデル高分子を比較して、異なった物性および機能を持つことを明らかにした。(楠本)ヘパリンの部分構造に相当する二糖、三糖ならびに二糖の集合体を合成し、これらの合成糖鎖誘導体と血小板の結合能を精密に調べ、この血小板/ヘパリンの結合は、顕著なクラスター効果を発現した。一つのレセプターと複数単位の糖鎖リガンドとの結合が動的な平衡状態にある結果生じたものであると考えた。(原田)シクロデキストリンを各種ポリマーと包接錯体を形成させ、その両端を嵩高い置換基で閉じたあと、隣接する水酸基をエピクロルヒドリンで結合し、その後に両端の嵩高い置換基を切り離して、中のポリマー鎖を除去して、チューブ状ポリマーを合成した。この分子チューブが特異な機能を発揮することを明らかにした。(明石)糖鎖をコロナにもつコア-コロナ型ポリスチレン微粒子を調製し、不溶性高分子上では高い効率で糖鎖-タンパク質の認識が起こることを明らかにした。これを利用して、グロボトリオース固定化ポリスチレン微粒子を調製してベロ毒素捕捉効果を調べた。
柔軟かつ利便性の高いアクセス制御機能を備えたプログラミング言語

最終年度では,動的言語のアクセス制御を実現するために必要となる静的解析記述として,抽象解釈に基づく情報流解析技術の研究を行った.具体的にはコンパイル先の低レベルな中間表現の解析では正確に読み取れないプログラムの振舞いを解析するために,ソース言語レベルの実行を織り交ぜることにより解析の精度を保証する新たな仕組みを考案した.研究期間全体では,静的な型システムを持つプログラミング言語においてアクセス制御に必要となる基本機能の設計,動的な言語に対して同様の機能を提供する手段の設計と実装を行った.具体的には,アクセス制御論理に基づいたIoT向け分散型アクセス制御フレームワークをLua言語上で実現した.提案するアクセス制御論理によって,分散型アクセス制御で必要となる複雑な機能を厳密な論理体系上で推論・検証可能な形式で定式化し,その表現力によって,ユーザは簡潔かつ柔軟なアクセス制御ポリシーの記述が可能である.本研究課題で開発した言語処理系およびフレームワークは,従来用いられている主要なアクセス制御機構であるアクセス制御リストやケーパビリティなどを含む広範囲な制御ポリシーをカバーできるものであると考えている.アクセス制御の実現に必要となる単純な仕組みをプログラミング言語の言語機能として組み込むことで,開発者自身が各システムやアプリケーションに適したアクセス制御のロジックをプログラム中に記述できるような言語の設計を行った.具体的には,Javaの実行モデルに対しアクセス制御機能を追加した拡張オブジェクト指向言語を提案した.オブジェクト指向言語の基本的な実行の仕組みとアクセス制御のための仕組みを結びつけることで,「システムが資源へのアクセスを正しく制御する」ことを,外部サービスやブラックボックス化された専用の機構に依存せず,「基本的な言語機能が正しく実装されている」ことだけに依存し保証できることが,提案言語の特徴である.アクセス制御論理をベースとするプログラミング言語の核となる言語機能の設計とプロトタイプ実装をほぼ完成させている.また,実応用アプリケーションや,アクセス制御に関するOSレベルの現実的サポート状況についてもサーベイを行い,提案する言語機能を用いることで,それらのアプリケーションの簡潔化・堅牢化・モジュール化が可能かどうかについての検討も同時に進めている.前年度では,静的な型システムを持つプログラミング言語においてアクセス制御に必要となる基本機能の設計を行ったが,本年度は,動的な言語に対して同様の機能を提供する手段の設計と実装を行った.具体的には,アクセス制御論理に基づいたIoT向け分散型アクセス制御フレームワークをLua言語上で実現した.提案するアクセス制御論理によって,分散型アクセス制御で必要となる複雑な機能を厳密な論理体系上で推論・検証可能な形式で定式化することができ,またその表現力によって,ユーザは簡潔かつ柔軟なアクセス制御ポリシーの記述が可能となる.本フレームワークは,従来用いられている主要なアクセス制御機構であるアクセス制御リストやケーパビリティなどを含む広範囲な制御ポリシーをカバーできると考えている.アクセス制御論理をベースとするプログラミング言語の核となる基本機能の設計,およびプロトタイプ実装を行っている.アクセス制御論理で記述された制御ポリシーを基にアクセスの可否を判定する推論モジュールの能力には改善の余地があり,精度・速度の両面での向上を図っている段階である.また,より幅広い制御ロジックやポリシーを簡潔に記述できるよう,基本機能に基づいたより抽象度の高いレイヤーを基本機能上の拡張ライブラリとして実現するための検討も進めている.最終年度では,動的言語のアクセス制御を実現するために必要となる静的解析記述として,抽象解釈に基づく情報流解析技術の研究を行った.具体的にはコンパイル先の低レベルな中間表現の解析では正確に読み取れないプログラムの振舞いを解析するために,ソース言語レベルの実行を織り交ぜることにより解析の精度を保証する新たな仕組みを考案した.研究期間全体では,静的な型システムを持つプログラミング言語においてアクセス制御に必要となる基本機能の設計,動的な言語に対して同様の機能を提供する手段の設計と実装を行った.具体的には,アクセス制御論理に基づいたIoT向け分散型アクセス制御フレームワークをLua言語上で実現した.提案するアクセス制御論理によって,分散型アクセス制御で必要となる複雑な機能を厳密な論理体系上で推論・検証可能な形式で定式化し,その表現力によって,ユーザは簡潔かつ柔軟なアクセス制御ポリシーの記述が可能である.本研究課題で開発した言語処理系およびフレームワークは,従来用いられている主要なアクセス制御機構であるアクセス制御リストやケーパビリティなどを含む広範囲な制御ポリシーをカバーできるものであると考えている.提案する言語機能のうち,とくにメソッド呼出しに関するリフレクション機能のより堅牢かつ効率の良い実装方法について検討を行いたい.また,アプリケーションコード中でのアクセス制御に関する部分をより宣言的に記述するための言語拡張なども予定している.特に後者の言語機能の拡張にあたっては,関連分野で広く適用されている各種の静的検査・解析手法と組み合わせることで,堅牢かつ実行効率の良い機能を実現したい.初年度に開発したJavaプラットフォーム上で動作するアクセス制御機構と本年度提案した動的なフレームワークを融合し,動的な言語の持つ柔軟性と静的な言語の持つ堅牢性,高効率性を併せ持つような統一的なシステムの設計を行うことで当該研究の最終的な成果物を完成させる予定である.具体的には,本年度のLuaフレームワークが実行時に行っているいくつかの処理をScalaの型システム上で(型レベルプログラミング等で用いられている手法を用いることにより)表現することにより,コンパイル時の事前処理として済ませられる手法を検討したい.基金であるため,今回のような少額(1万円以下)は繰り越しても支し障えないと確認済みです.当該研究費は基金であり,数万円程度の少額であれば使いきる必要がないと理解している.次年度の物品等の購入に合わせて使用する予定である.少額であるため,次年度計画に変更ありません.
アパレルの国際競争力の強化を目指した３Dバーチャル工業用ボディの開発と性能評価

3Dでスキャンした人体形状や類型化されたグループの平均形状のデータをそのままボディとして用いるのではなく、ドレスボディのようにゆとりの入った形状に変換したものを用いると、より効率良くパターン設計ができると考えられる。そこで、a)ヌードボディとドレスボディを3D計測し、断面を比較するb)ボディ制作者・ボディメーカー等の聞き取りを行うc)研究室所蔵の体表の伸縮データを再検討するなどして、ゆとりを入れる場所と量について検討した。この結果を参考に、LookStailorXで既存のヌードボディに対して、適量のゆとりを入れたガーメントを作成した。このヌードボディとガーメントデータの差分を利用して、HBM-Rugleでモーフィングによる変形を試みた。腕付根位の周囲長で2cm、5cm、8cmのゆとりが入るように変換したボディを基に、タイトフィットのパターンを作成し、厚地のトワルで実験着を作成した。モーフィングで変換した断面図を観察すると、意図した箇所にゆとりを付与できていた。また、製作した実験着の外観には不自然なつれや余り皺はなく、衣服圧の検討からは、ゆとり2cmでも日常の小さな動作には対応できることが分かった。さらに、体格が違う男性や子どもにも同様にモーフィングを行ったところ、意図した箇所にゆとりを付与できており、汎用性があることが予想された。一方、昨年度までは、体型の分類のため、体幹部と下肢部に分けて相同モデルを作成し、解析してきた。全身のモデルは腋下や股下の欠損があり、計測器に付属したソフトの補間では、この部位が実際の位置よりも下方でつながれ、寸法算出や着装シミュレーションの際に問題が生じていた。そこで、ジェネリックモデルやランドマーク位置を工夫することで、これらの位置が正しく表現できる相同モデル作成が可能にした。この方法を用いて、今までに計測したデータをモデル化している。申請の段階で、29年度以降を以下のように計画している。7個人の3次元計測データや解析によって算出した類型化されたボディを工業用ボディに加工する。これに先立ち、データ工業用ボディとヌードボディの差について、市販されているボディの調査を行う。この結果や動作による体表の伸びを考慮し、3次元のデータを動作のためのゆとりを入れた工業用ボディに変形・加工する。8作成したデータをアパレルの3DーCADに入れ、原型を作成したうえで、9伸縮性の少ない生地で衣服を製作し、試着を行う。被験者に動作を行ってもらい、圧力センサーや筋電計や動作分析によって捉え、付与したゆとりの量や位置が適切であったかを評価する。10これを受けて、ボディを修正し、適切なゆとりの入れ方を一般化し、3次元計測データから工業用ボディを設計するための方法を明らかにする。11研究内容を公表する開発した3Dのボディは条件を定めた上で、デジタルデータの形で公開する。現在は9の段階まで、完了しており、本年度は9の段階の例数を増やして、検証し10の段階の一般化について検討したいと考えている。夏ごろまでに実験を終えるとともに、公表に向けてまとめていきたい。また11では3Dのボディのデータベース化を考えているが、研究実績に書いたように、データの欠損等の不都合を改良して、相同モデル化し整理を進めている。そこで、論文作成等についてはやや遅れ気味ではあるが、研究としてはおおむね順調に進んでいると判断している。本年度は申請書に書いた、以下の部分を行う予定にしている。9試作したバーチャルボディを基にして作った原型を伸縮性の少ない生地で製作し、試着を行う。9から10の段階について、上半身については予備実験を行っているので、今年は例数を増やして検証したい。一方、下半身については、スカート用のボディで脚部を省略する以外、ほとんどゆとりを入れないことが分かったので、ゆとりを付与せず下半身を類型化した結果が適当であるか検証し、そのバーチャルボディの作成を行う。11について、本研究や別の研究課題で計測してきた1000人以上のデータの相同モデル化を行いバーチャルボディとして活用できるように整えたい。そして、一連の研究を論文にまとめ、公表したい。本研究では、アパレル用3D-CADが普及し、各国で収集された人体の3次元データがバーチャルボディとして利用されていくことが予測されるが、3次元計測データの解析に基づいた科学的なボディ開発やその手法は未だ確立されているとはいえない。本研究では、1これらの基礎となる人体の3次元形状解析を行った上で、2これに適切なゆとり量を加味して、効率的な衣服設計ができるバーチャルボディおよびボディを設計することを目指している。まずは1の衣服設計用のバーチャルボディ設計のために、日本人の体幹部と下肢の形状の類型化を行うために、29年度までに、現有のデータと併せて20歳代から70歳代までの各年代のデータを収集することにしていた。28年度に約300名の計測を行うことができ、女性は600名、男性は約400名のデータがそろった。また、このデータを用いて体型の類型化の予備解析を行った。

具体的には、3次元データから体幹部の相同モデルを作成し、主成分分析によって個人差の要因を特定した。この主成分得点を用いてクラスター分析を行うことで、体型の類型化を試みた。衣服設計の立場から女性5クラスター、男性7クラスターに分類して、そのグループの平均形状の算出を行った。これらの形状からグループの特徴を明らかにするとともに、その出現頻度について、年齢ごとに集計した。その結果、男女とも20歳代に多くみられる体型、60歳代以上に多くみられる体型が存在したが、それぞれのクラスターはいずれの年齢群にも混在していること、中年では特に各クラスターに分散していることが分かった。このことからサイズだけでなく、体型の差に配慮した衣服設計や生産が必要であるといえる。研究計画では、29年度までに、現有のデータと併せて20歳代から70歳代までの各年代のデータを収集することにしていたが、28年度に約300名の計測を行うことができ、女性は600名、男性は約400名のデータがそろった。また、このうち女性の体幹部は180名、下肢部は240名分、男性の体幹部は250名分のデータを用いて体型の類型化の予備解析を行った。すなわち、3次元データから体幹部の相同モデルを作成し、主成分分析によって個人差の要因を特定した。衣服設計の立場から女性5クラスター、男性7クラスターに分類できた。この過程で、各年齢層の人数を一定にし、被験者数が200名を超えると解析結果が安定することが分かった。そのため、データ収集のための大規模な人体計測は28年度で終えることとし、29年度は残りのデータの解析と補足のデータ収集をして、3D-CADへの組み込みや論文作成、さらには次年度のゆとりに関する研究に備えて予備解析に着手したい。そのため、おおむね順調に進展していると判断した。ISOやIEEEなどでは人体の3次元計測データやバーチャルボディ評価の規準化が進められている。アパレル用3D-CADが普及し、各国で収集された人体の3次元データがバーチャルボディとして利用されていくことが予測される。しかし、国際的にも3次元計測データの解析に基づいた科学的なボディ開発やその手法は未だ確立されているとはいえない。そこで、本研究ではこれらの基礎となる人体の3次元形状解析とボディとしての要件を満たす動作適合について検証することを目的としている。昨年度までに目標人数の人体計測データを採取し、当該年度は20歳から79歳までの男女の身体を上半身と下半身に分けて主成分分析を行い体型の個人差が出現する要因を抽出し、その主成分得点に基づいたラスター分析によって体型の類型化を行った。このクラスター(体型グループ)ごとに平均形状を算出したり、身体寸法の基本統計量を求めるなどして、その特徴を明らかにした。そのうえで、年齢層ごとに類型化したがどの程度の割合で存在するのかを算出して、年齢と体型との関係について検討した。その結果、年齢層によって各グループの出現頻度は異なり、体型と年齢との関係が示唆された。しかし、各グループはおよそいずれの年齢でも見られ、特に3050歳代では各グループが混在していた。
アメリカン・ルネッサンスにおける同時代ヨーロッパ思想のインパクト研究

本研究の主な研究成果として、日本アメリカ文学会の研究誌である『アメリカ文学研究』第46号に掲載された「"Clap eye on" Captain Pe(g)leg/Ahab-メルヴィルによる『白鯨』の原稿修正と反ナショナリズムの衝動」、並びに、日本英文学会の研究誌である『英文学研究』に投稿中の「アメリカン・ダイアレクティクスの行方」が挙げられる。前者では、デカルトによる精神と身体=「モノ」の二項対立がエイハブというキャラクターにどのような形で取り入れられているのかという発想から、メルヴィルのテクスト創作が文章という「モノ」に対する不安定な対応であり、その表れとして『白鯨』の原稿修正が位置づけられるとする前提を設定した。これを前提に、『白鯨』の修正が当時の政治状況と密接な関係において展開しており、メルヴィルは母国アメリカの民主党イデオロギーから脱却するために、当初のピークォド号の船長Peglegから片足の船長という役柄をエイハブに移したと論じた。この片足の扱い自体がメルヴィルの身体=「モノ」に対する不安定な対応、並びに、テクストに対する不安定な対応を表している。即ち、デカルトの精神論では解決できない身体=「モノ」の存在論的な重さにメルヴィルは気付いていたのである。後者の論文では、カントからショーペンハウエル、ヘーゲルと続く西洋思潮の流れに、エマソンやソロー、ホーソーン、メルヴィルの思想を対置し、特にホーソーンとメルヴィルを総合的に比較したものである。カントにとっての現象は主体の内面の反映であり、「モノそれ自体」は成立しない。これはエマソンやホーソーンにも共有された現象観である。だが、ホーソーンはへスター・プリンとパールの姿によって、欲望や罪の象徴となりながらもその精神現象としての存在から離脱しようとする客体を描いた。メルヴィルが『白鯨』において共感したのはこのような精神の反映となりきれない客体、上述の言葉で言うと身体=「モノ」の諸相であった。しかしながら、ホーソーンはそうした不気味な「モノ」としての客体に気づきながらも、ヘーゲル流の弁証法によってその領域からの発展的脱却を図る。一方のメルヴィルはその領域へ囚われることの根源的な魅力に取りつかれている。彼らそれぞれの最終小説作品、『大理石の牧神』と『ビリー・バッド』にみられるのは、現実を精神の反映として捉えきれない主人公が弁証法的に成長するか、あるいは、元の領域に留まったまま美を表現するに至るかの、その大きなギャップである。メルヴィルのビリーが後者に該当するのは言うまでもない。精神の主体的な働きに還元することなく美が立ち現れる様は、ベルグソンの言う記憶の創造作用を思わせる。年次計画では、まず、平成19年度はホーソンとメルヴィルを対象に、(A)伝記的アプローチ、(B)テクスト分析、(C)コンテクスト研究、の3つのアプローチのうち、アプローチ(A)、(B)を実施した。

着目した伝記的局面としては、(1)超絶主義者を介したホーソンとカント哲学の出会い、(2)エリザベス・ピーボディを介したホーソンとフレーベル言語学の出会い、(3)ホーソンを介したメルヴィルとカント哲学の出会い、(4)ホーソンのフレーベル言語学への傾倒に対するメルヴィルの反応、(5)メルヴィルによるダーウィン受容、が中心であった。具体的な作業としては、思想家、作家双方の著作の精読が中心であった。また、テクスト分析において思想と文学を比較する軸として、「『モノ』=身体と精神の関係性」を設定し、ヨーロッパ思想から吸収した主体と客体の関係が、ホーソンとメルヴィルによっていかなる形に変容させられたかを考えた。研究成果としては、まず「アメリカン・ダイアレクティクスの行方」が挙げられる。この発表において、ホーソンとメルヴィルの散文としての最終作を比較し、カントらヨーロッパ思想からの影響を受けたと思われる現象観の変容や、ヘーゲルとはまた様態の違う弁証法的認識論を展開していく様を明らかにした。その中で特に力点を置いたのは、フレーベルやピーボディからの影響と思われるホーソンの教育観の位置づけであった。また、本研究で探求した「『モノ』=身体と精神の関係性」を応用し、現代作家であるポール・オースターのCity of Glassを題材として、『九州アメリカ文学』に研究論文を掲載した。本研究は、アメリカン・ルネッサンス作家と同時代のヨーロッパ思想との関係性を綿密に分析、調査し、同時代のヨーロッパ思想から作家への影響を、その経路を特定したうえで明確化することを主な目的としている。その際、作家たちがどのようなコンテクストにおいて、ヨーロッパ思想にどう向き合ったのかも明らかにしてきた。平成20年度は、エマソンとソローを対象に、重要な伝記的事実に着目し、作家がヨーロッパ思想をどのような経緯で知り、それに対してどのような考えを持ち、どう対処したのかを明らかにした。伝記的事実としては、(1)コールリッジやカーライルによるカント哲学の伝達、(2)エマソン、ソローによるダーウィン進化論の受容、(3)エマソンのヘーゲル受容、(4)ソローと経験主義哲学を中心的に扱った。(3)についてはロバート・ゴードンによる研究を参考にした。成果発表としては、九州のエマソン、ソロー研究のリーダーである高橋勤氏と組み、日本ナサニエル・ホーソーン協会の九州支部大会でシンポジウムを行った。このシンポジウムでは、ホーソーンとメルヴィルのテクストにおいて、彼らが互いにヨーロッパ思想の知識をすり合わせていた形跡が読み取れることを示した。高橋氏とは、ホーソーンのソロー観、エマソン観について論議した。また、本研究で蓄積したベルグソンやメルロ=ポンティらヨーロッパ思想の知見を生かし、"Stream(ing) of Musical (Un) Consciousness: Signifying Process against Definer's Community in Toni Morrison's Beloved"を発表した。
マイクロＲＮＡの輸送マシナリーの解明と軸索機能における役割

脆弱X症候群の原因遺伝子産物である脆弱X精神遅滞タンパク質(Fragile X Mental Retardation Protein: FMRP)のマイクロRNA輸送機構の解明の目的で、大脳皮質神経細胞をニューロンボール法で培養し、FMRPの成長円錐内の挙動を解析した。軸索ガイダンス因子の一つであるセマフォリン3A (Sema3A)刺激により成長円錐内のFMRPが減少するがAgo2は減少しなかった。このFMRP特異的減少は逆行性輸送に関与するダイニンの阻害剤であるEHNAでは阻害されないが、ユビキチンE1酵素阻害剤であるPYR-41、あるいはプロテアソーム阻害剤MG-132で阻害されないことから、逆行性輸送ではなく、ユビキチン-プロテアソーム系によるFMRP特異的な分解が関与することが示唆された。さらに、Sema3A刺激により成長円錐内のユビキチン化が亢進することを抗ユビキチン化タンパク質抗体FK2による染色で確認した。我々が以前、軸索に局在することを報告したマイクロRNA-532 (miR-532)はFMRPと相互作用することがCLIP解析で報告されている。そこで、Sema3A刺激による同マイクロRNAの局在変化を解析した。Sema3A刺激がmiR-532の成長円錐内での局在を低下させる傾向が認められた。従って、FMRPのユビキチン-プロテアソーム系による分解がマイクロRNAを減少させ、翻訳を開始させる可能性が考えられる。25年度が最終年度であるため、記入しない。マイクロRNA (miRNA)の輸送機構の解明の第一段階として、まず、miRNA結合タンパク質であるArgonaute 2 (Ago2)及びFragile X Mental Retardation Protein 1 (FMRP)の神経軸索及び成長円錐における局在を検討した。Ago2及びFMRP共に軸索、成長円錐に局在しており、特に、成長円錐では中央付近のドメインに集積するだけでなく、葉状仮足内でもAgo2-FMRPの共局在が粒子状に観察された。FMRPファミリーの他のメンバーであるFragile X RelatedProtein 1, 2 (Fxr1P、2P)も軸索、成長円錐における局在が見られた。FMRPはモータータンパク質に結合し、樹状突起内で輸送されていることが知られている。mCherry-FMRPを作成し後根神経節や海馬神経細胞に導入したところ、活発に軸索輸送されていることを確認した。さらに、細胞外刺激としてセマフォリン3A (Sema3A)を投与したところ、FMRPが成長円錐内で減少することを見いだした。この減少はプロテアソーム阻害剤で抑制されることから、ユビキチン-プロテアソーム系が関与することが示唆された。従って、FMRPは定常状態では軸索-成長円錐内を行き来しているが、Sema3A刺激により成長円錐でユビキチン化され、分解される可能性がある。この機構がmiRNAの局在と機能発現にどのような役割を果たしているか次年度に検討する予定である。同じ大学の生命医科学研究科(生命ナノシステム科学研究科から今年度に改組)に医学研究科から今年度に転科することが昨年八月に決定され、その改組と新研究室発足の準備に追われた。また、生命医科学研究科の動物施設が未整備で、FMRPをコードする遺伝子Fmr1のノックアウトマウスの飼育が可能な状況ではなかった。これらの理由で、特にノックアウトマウスを使った実験ができずに計画がやや遅れ気味である。本年四月から生命医科学研究科にPIとして赴任し、研究環境が整備され、新たに学生と共に研究体制が充実する予定である。動物施設に関しては八月頃には整備され、ノックアウトマウスを用いた実験が開始される予定である。
日本語‐ウイグル語機械翻訳のための電子辞書の作成

本研究では、ウイグル語-日本語両言語間の機械翻訳のためのウイグル語-日本語、日本語-ウイグル語電子辞書を作成するために、(1)本研究者らがすでに作成した「IPAL計算機用日本語基本動詞辞書」をベースにした日本語-ウイグル語電子辞書(約1200単語)ならびに(2)飯沼英二著「ウイグル語辞典」穂高書店(約15000単語)を電算入力したものを統合し、一括電算処理可能な形にした。・単語数:約17000・辞書の形式:\<uウイグル語見出し語>\<品詞>\j(<日本語訳>)^*(\ue<ウイグル語用例>\je<日本語用例>)^*.ここで、u,j,ue,jeは、\と\で区切られている部分を識別するために付けたタグである。また、ウイグル語の表記には英語アルファベットを用いた。ただし、ウイグル語アルファベットは、32文字であり、足りない文字の代わりに、それに近い発音の文字の前に`!'を付けたものを用いた。・品詞の付与:元の辞書には品詞の付与がないため、品詞情報を加えた。・訳語のチェック:元の辞書がウイグル語-中国語の辞書をもとにして作られているので、訳語に妥当性を欠くものがあったので、それをチェックし修正した。・例文の妥当性のチェック:例文には、二次翻訳による不適切さの他、現状にあわないものもあったので、必要な部分を改めた。・日本語-ウイグル語電子辞書の作成:ウイグル語-日本語辞書から、逆辞書を作ることによって作成する予定である。・辞書記述言語の設計:電子辞書は、新項目の追加、内容の変更、データの再利用などが容易にできることが求められる。このため、文法が形式的かつ単純明解であり、機械的処理に適しかつ辞書作成者ならびにユーザー共に使いやすい辞書記述言語を(仮称DicScript)を設計した。DicScriptは、レジストリベース(項目やタグなどの形式的記述を登録する)、構文チェッカー(あるデータ項目は、文法に合っているかどうかのチェック)、インタフェース(各項目にアクセスする関数群)、入力シート(データや項目の入力と追加が会話的にできるGUIシステム)の機構を持っている。DicScriptの実装は現在進行中である。
高等学校における古典教育不振の原因究明と解決について

1戦後の高等学校の国語教科書所収の古典教材の調査とデータベース化古典教材論は作品レベルではなく、所収されている部分レベルで行うべきであるとの観点から、教科書所収教材の調査を行った。昭和22年度から平成元年度の教科書の調査を終了したが、データベース化については、作品レベルでのデータベースが発表されたので、それとの整合性を持たせるための調整ができていない。2古典教育の実践・研究文献目録の調査とデータベース化文献の収集は終了したが、データベース化は昭和60年度発行の文献まで進んでいる。シソ-ラスを構築していなかったことから、項目別の検索可能な状態にはなっていない。3入試問題と教科書教材の指導内容の比較同一教材を対象とすることを前提としていたが、対象教材が少なく、一般性を持たせることができないことに気づいた。そこで入試問題に見られる出題内容と学習参考書の編集内容との比較を行い、その上で教科書の学習の手引きとの比較を行うことに変更した。学習参考書の文献収集が予定外であったことから、入試問題との比較は着手できなかった。4今後の研究展開対象をある教材に絞り、教科書教材史、実践研究史が可能であることは発表予定の研究成果によって明らかにできた。そこでは教材研究と国文学研究の乖離を指摘している。また教科書における古典教材編纂の史的研究は平成7年11月の全国大学国語教育学会で発表を行い、教材選択が拡大の一途を辿っているわけではないことを明らかにした。入試問題と古典の教育的意義との分裂の実証的な検証については未だ十分ではない。
ヒト幹細胞から機能的3次元心筋組織の構築法および移植法の開発

本研究では、ヒトiPS細胞由来心筋から、細胞凝集現象であるスフェロイド形成およびスフェロイドを立体構築し機能的かつ臨床にて心不全を治癒せしめる心筋構造体を作成する基盤技術開発を行った。ヒトiPS細胞由来心筋をベースに、内皮細胞や、線維芽細胞、神経細胞などを混合させ、機能的心筋組織型スフェロイドを作成する条件を模索した。また、組織型スフェロイドを、立体的に効率よく構築できる3次元化システムの開発を行った。細胞配合の条件検討、および、効率的3次元化システムにて、簡便に円筒形の立体構造体を作る技術をえた。得られた構造体は、心血管系に必要な細胞外マトリックスを十分に有していた。本年度の実験進捗状況であるが、前半期に京都大学iPS細胞研究所(CiRA)のプロトコールを用いてSNLフィーダー細胞の準備および、ヒトiPS細胞(201B7株)の維持培養技術を確立した。また後半期は、そのヒトiPS細胞の心筋分化技術確立後を見据えて、市販されているヒトiPS細胞由来心筋細胞を用いて、スフェロイドを作製し、解凍後の日数や拍動日数(平均30日程度)などを確認した。そして解凍3週間目にスフェロイド同士の融合を試みて、翌日と5日後にCa蛍光色素を反応させたところ、翌日には融合してもスフェロイド同士の蛍光輝度の同期は確認できなかったものが、5日後には融合に加え、蛍光輝度の同期も確認できた。これは将来的にさらに多くのスフェロイドを融合させても電気的同期が期待できる可能性が示された。またヒトiPS細胞由来の心筋細胞・内皮細胞、ヒト初代培養の皮膚線維芽細胞は混ぜると、心筋100%のスフェロイドと比べ、凝集が改善することは確認できており、今後はその細胞比率などの検討が必要である。3次元化グラフト作製後の動物移植を見据え、まずはSDラット(10週齢)を用いて心筋梗塞(AMI)作製を行った。より確実・安全に作製できる手技を確立した後に、Nude rat(SCID,10週齢,オス)を用いてAMIモデル作製を行った。Nude ratに関しては、少なくとも5匹中4匹は心臓前壁の壁運動低下を確認し、AMIの確立を行い、5匹とも死亡はなかった。設備拡充等:技術補助員2名によるヒトiPS細胞の大量培養や免疫染色などの手技操作増加に応じて、新たにクリーンベンチを拡充した。さらにスフェロイドや組織病理などの機能評価目的の蛍光顕微鏡などを購入した。我々は、古典的細胞凝集現象であるスフェロイドを用いて、心筋再生を目指してきた。スフェロイドは心筋以外にも線維芽細胞や血管内皮細胞などと様々な細胞を任意の比率で配合することにより、より機能的なスフェロイドを作製することが可能であり、前年度ではヒト皮下線維芽細胞および血管内皮細胞の比率を変更することにより、スフェロイド作製後の拍動開始までの日数や拍動維持日数が異なることを報告した。心筋細胞と配合する線維芽細胞の評価を行った。ヒト人工多能性幹細胞(HiPS)由来の心筋細胞にヒト心室筋由来の心臓線維芽細胞(NHCFB)とヒト皮下線維芽細胞(NHDFB)をそれぞれ40%の比率で配合し、拍動数と収縮率のスフェロイド形成1ヶ月後までの経時的評価を行った。そして、収縮率はスフェロイド周囲の任意の6点を選び、動画解析ソフトを用いて、その6点を追尾することにより評価した。結果は両群が拍動を開始してから3週間目までの平均拍動数および収縮率はそれぞれ以下の通りであった(図1、2)。少なくとも拍動数と収縮率に限れば、線維芽細胞によってスフェロイドの動態には大きな影響はしないものと思われた。従って、ヒト線維芽細胞の選択に関しては、パラクライン因子などの細胞より分泌されるサイトカインや成長因子などによる違いや細胞外マトリックス産生の違いによるグラフト形成能の相違により選択していく必要があることが示唆された。ヒト幹細胞由来心筋細胞はこれまで我々が扱ってきた、ラット胎児心筋細胞やmouseES細胞由来の心筋細胞と比較し、拍動した心筋組織型スフェロイドを形成しにくく時間を要した。また最適化にも時間がかかっている。自ラボでiPS細胞からの心筋分化、選別を試みたが手技が難しく、効率も悪いため、業者から直接購入する手法がよいと思われた。平成28年度は、ヒト幹細胞由来心筋細胞の3次元化について、細胞外マトリックスの解析を行った。細胞凝集時に、心血管系の細胞が凝集する際に産生される、細胞外マトリックスの存在有無と、その分布、経時的な変化を、免疫染色を用いて解析した。血管内皮細胞、血管平滑筋細胞、繊維芽細胞を前年度までのデータと、立体化技術で円筒形の血管あるいは心室様の形態に構築し、培養液で1-7日間培養し、Day1,3、7日目でホルマリンで固定して、組織学的な評価、解析を行った。コラーゲンType1,3,4,5,8、vWf,αSMAなどの免疫染色を行った。対象として、内胸動脈、ラット心筋、下肢静脈などを染色し、その分布とECM発現の違い、類似点を比較検討した。Type1、Type8の発現が本手法による立体構造体では少なく、これらのたんぱく質産生には単純な細胞の凝集のみでは不十分であることが示唆された。

また、血管内皮細胞も投与した細胞の割合に比べ発現がすくなく、不規則であり、Day3、Day7と培養するにつれむしろ減少する傾向にあった。これは、培地に内皮細胞増殖因子を添加していないことが大きな要因の一つではあるが、混合させた、血管平滑筋細胞などがの細胞間相互作用で内皮が増殖することを予想していたため今後の実験で、増殖因子の添加と量の相関を解析する必要がある。細胞凝集現象のみで立体化した構造体は、ECMを産生しているが、機能的に心筋組織と同等のマトリックスとなるにはまだ不十分で、細胞外的環境やサイトカインの添加、培養期間のさらなる検討、改良が必要と考えられた。研究代表者の野口が、平成28年度に佐賀大学から熊本大学へ異動した。その直後に熊本大地震が発生し、研究基盤の構築にかなりの時間を要しているため当初の研究計画から大幅におくれている。本年度は、パッチ状三次元化した組織型パッチを各時系列で、細胞外マトリックスの産生能などを解析した。ヒト血管内皮細胞および血管平滑筋細胞、ヒト皮膚繊維芽細胞など、心・血管を構成している主たる細胞を用いて、三次元化した組織型スフェロイド(細胞凝集塊)を形成。大量の血管組織型スフェロイドを立体構築して血管壁構造もしくは円筒形の血管構造体を作成した。構造体をDay1、Day3で固定し血管を構成する細胞外マトリックスなどの組織学的評価を行い、心筋組織や動脈と、形態、タンパク質発現の有無、分布などを画像評価、比較した。比較する事で真の心臓・血管組織に必要なタンパク質発現の有無、発現条件などを模索するのが目的である。解析項目はHE染色、マッソン染色、EVG染色、コラーゲンTypeI、III、IV、V、VII、αSMA、vWfを染色解析した。Day1、Day3のグラフト内には、細胞周囲にコラーゲンのI、III、IV、Vの発現を認めた。少量かつ正常な血管と比較し分布も日規則的であった。また、内皮細胞は、内皮として血管構造体の内膜を裏打ちするようには分布せず、構造体の内部に未熟な血管網構築をするように分布した。αSMAの産生も、内胸動脈と比較すると明らかに不足していた。細胞のみから、三次元化した心血管パッチの作成方法を開発した。簡便な操作で心臓型パッチや、血管型パッチ、あるいはそれらをさらに簡便に加工することで得られる円筒形の血管型組織を細胞のみで作ることに成功し、三次元化した構造体は作成後数日で、細胞外マトリックスの産生はみとめるものの、まだまだ条件検討が必要であった。今後の課題としてサイトカイン添付・条件検討、シェアストレスなどの負荷により、構造体は生物学的活性を発現させさらに成熟させる技術が必要と考える。本研究では、ヒトiPS細胞由来心筋から、細胞凝集現象であるスフェロイド形成およびスフェロイドを立体構築し機能的かつ臨床にて心不全を治癒せしめる心筋構造体を作成する基盤技術開発を行った。ヒトiPS細胞由来心筋をベースに、内皮細胞や、線維芽細胞、神経細胞などを混合させ、機能的心筋組織型スフェロイドを作成する条件を模索した。また、組織型スフェロイドを、立体的に効率よく構築できる3次元化システムの開発を行った。細胞配合の条件検討、および、効率的3次元化システムにて、簡便に円筒形の立体構造体を作る技術をえた。得られた構造体は、心血管系に必要な細胞外マトリックスを十分に有していた。ヒトiPS細胞の導入が当初より遅れたため、心筋スフェロイドにおける機能解析(多種細胞配合比率やそれぞれの拍動率など)がまだ不十分である。現在、ヒトiPS細胞の心筋への分化系統確立を試みているところである。
非上場会社の利益調整に関する実証研究

利益調整に関する先行研究は,日本企業の当期純利益の分布には,ゼロ付近で極めて不規則な不連続性が存在することを示している。これは日本企業の経営者が,損失回避の利益調整を積極的に行っていることを意味する。本研究では,日本企業に特有の2つの制度的な特徴がこの利益調整インセンティブを生み出していると予測する。具体的には,(1)税コストと(2)金融機関との結びつきの強さが利益調整の動機となることを予測し,特に非上場企業において,その傾向は顕著になるという仮説を設定した。分析を行った結果,仮説は支持されることが明らかとなった。本研究の目的は,わが国の非上場企業の利益調整行動を実証的に解明することであった。具体的には,非上場企業の利益調整行動を上場企業と比較することによって,非上場企業の利益調整の特徴を検出ことを目的とする。日米における先行研究のほとんどは,上場企業を分析対象としたものであり,非上場企業の裁量的会計行動に関してはほとんど解明されていない。本研究では,税コストや金融機関との結びつきの強さといった日本特有の要因が,利益調整を誘引する(しない)主要な要因となるという仮説を設け,その実証分析を行う。上記のような目的を達成するために,本年度では,研究実施計画にしたがって,(1)先行研究のサーベイと(2)調査方法の設定を実施した。(1)では,国内外の主要なジャーナルをサーベイすることによって,本研究の関連領域となる先行研究の解題に努めた。サーベイを行った結果,非上場企業の利益調整を分析した研究は存在するが,日本特有の要因となる税コストや金融機関との結びつきの強さに着目した研究はほとんど存在せず,本研究の分析視角が新規性の高いものであることが改めて確認された。(2)では,先行研究のサーベイを通じて,本研究の分析目的に適合したリサーチ・デザインの検討が行われた。具体的には,裁量的発生高の分析,利益分布アプローチ,単一の会計項目の分析,といった複数の利益調整を検出する分析手法の中から,利益分布アプローチをベースにした分析が最も本研究の仮説検証に向いていることが明らかとなった。次年度以降では,設定したリサーチ・デザインにしたがってサンプルを収集し,実証分析を行うことが課題となる。本研究では,税コストや金融機関との結びつきの強さといった日本特有の制度的要因が,利益調整を誘引する(しない)主要な要因となるという仮説を設け,その実証分析を行う。上記のような目的を達成するために,本年度では,研究実施計画にしたがって,(1)実証分析の実施と(2)ワーキング・ペーパーの執筆を行った。(1)では,昨年度に計画したリサーチ・デザインにしたがって分析を行った。その結果,本研究が設定した仮説と概ね整合的な結果が得られた。わが国の損失回避の利益調整行動は,他国と比較してより顕著であることが知られているが,これは(1)税務会計と財務会計の結びつきの強さ,(2)銀行依存度の強さ,という2つの制度的特徴によって説明されることが明らかになった。さらに,このような利益調整は予測どおり,上場企業よりも非上場企業のほうが顕著であることが示された。(2)では,このような結果のより深い解釈を行い,ワーキング・ペーパーの執筆を行っている。次年度以降では,ワーキング・ペーパーを完成させ,国内外の学会やワークショップで報告を行うことを予定している。そして論文のブラッシュ・アップを図った上で,ジャーナルへの投稿を予定している。本研究の課題は,非上場企業の利益調整行動を上場企業と比較することによって,非上場企業の利益調整の特徴を検出することであった。税コストと金融機関との結びつきの強さが,利益調整を誘引する(しない)主要な要因となるという仮説を設け,その実証分析を実施する。具体的な研究プロセスとしては,(1)先行研究の検討,(2)調査方法の設定,(3)実証分析の実施,(4)ワーキング・ペーパーの作成と学会発表,および(5)ジャーナルへの投稿という手順を設定した。前年度までに,当初の計画通り,(1)から(3)までの手順は終了している。(3)の実証分析では,(a)税コストが高い企業ほど,税コストを削減するためにわずかな利益を計上する,(b)金融機関との結びつきが強い企業ほど損失を回避する,という利益調整を実施することがわかった。これらの結果は,我々の仮説を支持するものであった。

最終年度となる本年度は,(4)の手順にしたがってワーキング・ペーパーを執筆し,その成果は「The Effect of Institutional Factors on Discontinuities in Earnings Distribution: Public Versus Private Firms in Japan」として公表した。これはSSRN(http://papers.ssrn.com/sol3/papers.cfm?abstract_id=2069698)よりダウンロード可能となっている。また論文のブラッシュ・アップを図るため,ニューヨーク大学とイエール大学を訪れ,当該研究の専門家から貴重なコメントをもらった。現在は,会計研究のトップ・ジャーナルに投稿を済ませており,(5)の手順まで完了している。当初の予定どおり,実証分析を終了し,ワーキング・ペーパーの執筆に入っている。24年度が最終年度であるため、記入しない。本年度の課題であった実証分析では,事前の予測どおりの分析結果が得られたため,現状では大きな問題点は抱えていない。当初の研究計画どおり研究を遂行する予定である。平成24年度の初めには,英文でのワーキング・ペーパーを完成させ,国内外の学会やワークショップで報告を行う。年度内には,ジャーナルへの投稿を予定しているため,学会等で得られた意見を参考にしてワーキング・ペーパーの改善作業を行う。
健常な歯周組織の指標となる細菌の検出キットの開発

近年、次世代シークエンサーなどによるメタゲノム解析における報告の中でRothia dentocariosa(R.d)が歯周健常者に有意に認められるとの報告が多数散見される。これは、歯周病学的に健常な細菌叢の理想的なバランスを崩した結果、R. dが歯周病罹患者歯肉溝の細菌叢で相対的な減少が認められた可能性が考えられる。従って、全菌体に占めるR.dの割合を調査することは、歯周病学的に健常な細菌叢をはかる指標となり得ることが考えられた。すなわち、R.dの菌数はリアルタイムに歯周組織状態を把握できるため、既に開発したR.d選択培地の組成を応用して臨床の場で簡便に実施できる検査キットの開発を行った。R.dは培地中に含まれている高濃度スクロースを分解し酸を産生する性状を応用し、改良した培地の組成にpH指示薬であるブロモクレゾールパープル(BCP)を添加した選択液体培地を作製した。チューブに本選択液体培地を分注したものを検査キットの試作品とした。そして歯周炎患者30名、歯肉炎患者15名、および健常者30名からペーパーポイントにて歯肉溝浸出液を採取し、本キットを用いて同菌の定量的検出を行うとともに、従来の選択平板培地による検出結果と比較検討を行うことにより、本検査キットが有用であるか否かを調査した。選択性は従来の選択培地を改良することで顕著に歯肉溝浸出液中の目的外菌は抑制された。本検査キットにBCPによる色調変化によってR.dの菌数を正確に定量可能であることが確認された。これらの結果から、本検査キットは歯肉溝浸出液試料からR.dを定量的に検出することができ、臨床において歯周組織状態を正確にモニタリングすることが可能であり、診断・治療・予後の判定に活用できると推察された。平成29年度はR. dentocariosaが健常な歯周組織の指標となる細菌であることの検証を行った。歯肉溝滲出液を対象としているために本学部の倫理審査委員会にて審査後、承認を得た。対象者は本学部付属病院に来院した患者とし、歯周病学的に健常な者、歯肉炎罹患者、歯周炎罹患者の歯肉溝滲出液を歯周ポケット内にペーパーポイントを10秒間挿入し採取した。試料を採取したペーパーポイントをTris-HCl buffer含有滅菌チューブに浸漬し、超音波にて分散後、10倍段階希釈を行い、各々の培地に塗抹、拡散、培養後colony-forming unitsを算定した。総菌用培地として1% YeastExtract添加BHI寒天培地を使用し,37°C、48時間ローソク培養を行った。Rothia属分離用培地として、R . dentocariosa選択培地を使用し37°C、3日間好気培養を行った。さらにリアルタイムPCR法により試料中のR . dentocariosaの定量を行い、前述の培養法の結果と比較検討した。より簡易なもので、コストパフォーマンスに優れ、検出感度および精度が高く、臨床の場で実用可能な検査キットの開発を目的としているために、試作品を作製し、実際に臨床で本キットが有用であるか否かを確認した。検出キットの組成は、申請者が開発したR . dentocariosa選択培地を応用した選択液体培地にR . dentocariosaが分解可能な炭水化物とpH指示薬を添加したものである。これに試料採取したペーパーポイントを挿入し、37°C、好気培養を行い、R . dentocariosaの糖分解能を応用したpH指示薬による色調変化によって、基準値と菌数を設定したカラーチャートにしたがって判定することが可能であった。R. dentocariosaの発育・培養に関しては、事前に文献等の調査および予備実験を行っていたために、研究に供するR. dentocariosaの培養特に問題なく行うことが可能であった。また抗菌薬感受性試験を行った結果、R. dentocariosaが感受性を示さず、代表的な口腔細菌が感受性を示す抗菌薬を複数見つけることが出来たことで、スムーズに唾液等の口腔試料を対象としたR. dentocariosaを分離・検出するための選択培地の開発はスムーズに行うことが可能であった。さらには、申請者らはこれまでにAggregatatibacter actinomycetemcomitans、Corynebacterium matruchotii、Microbacterium属菌、Rothia mucilaginosa、Rothia aeriaなどといった病原性をもった口腔細菌を分離・検出するための複数の選択培地を開発した経験があり、これらのことも本研究課題が概ね順調に進展している理由として挙げられる。