hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
占領期都道府県軍政資料の収集・整理及び分析とその効果的な公開利用方式の確立

(3)研究全体会議(ブロック合同会議も含む)は、計3回開催し(02午7月13日、同10月26日、03年1月25日)、研究会活動の方針と作業内容と年次計画、米国での資料集・複製資料の配布の状況、分担者・研究協力者の分担、概要作成の様式と統一表記法などについて討議と確認を行った。また九州・中四国・関西3ブロツクの西日本地域合同会議(12月2223日・九州大学)と関東ブロック会議(2003年3月8日)では資料読解論の研究会をもった。現在.研究協力者を含めて40名以上が資料整理と解読にあたり、概要作成の準備に入ったところである。(4)目録の原稿づくりなどの業務と研究会事務(名簿管理・メール連絡など)のためノート型パソコンを2台購入した。長野県短期大学と独協大学法学部に1台づつ配置した。(5)詳細目録作成は外注であるが資料整理に時間がかかっているため入力は進んでいない。(1)前年度に「占領期都道府県軍政資料」(MG資料)を収集(コピー)したが(約3万8000枚)、このうちコピー漏れ・コピーミスなどの取り直しが1割程度あった。また沖縄の軍政資料の収集が残っていたので、米国国立公文書館で2003年8月17日(日)9月8日(月)にかけて(実働23日)、荒敬、石田雅春(広島大学大学院生)、下條かおり(九州大学大学院生)、官田光史(同)がこの作業にあたった。取り直しに時間がかかり、3分の1ほどの分を次回にまわすことになった。(2)現在、各ブロック研究会に、概要作成の研究協力者の分を含めてMG資料を2セット、研究協力者に担当県分1セットを配布済みである。(3)研究全体会議は、計2回開催した(03年7月56日、04年1月31日、ともに立教大学)。後述のように7月6日は九州・中四国両ブロック合同会議と重なったため両ブロックでは代表を派遣した。第1回全体会議では本年度の計画、米国での資料収集、複製資料の配布、担当県の確認、概要の書式と表記法など方針の打ち合わせを行い、2回目はそれらの進捗状況などを確認した。またブロック研究会は、関東ブロック(03年4月5日、立教大学)、北海道・東北ブロック(同5月1718日、宮城婦人会館)、東海・北陸ブロック(同6月15日、岐阜県歴史資料館)、九州・中四国両ブロック(同7月6日、九州大学)、関西ブロック(7月26日、神戸市東灘区民センター)、同(04年1月10日、同前)で開催された。各研究会では、研究協力者の大半がMG資料の読解に不慣れのため、同資料と地方占領組織についての勉強、また分担の確認、作業計画などが話し合われ、進捗状況の点検も行われた。研究協力者は現在約46名であるが(分担者を除く)、資料解読と概要作成が進められている。(4)研究会の事務には、(1)名簿や勤務表の管理と連絡などと、(2)概要のとりまとめや用語の統一化など実質的な作業事務がある。とくに(2)は全国各府県の概要を集積して管理する必要があるため、大容量のノート型パソコン1台を購入した。(5)概要の作成は、研究協力者を中心に現在、進行中であるが、たとえば長野県については、下書き原稿が完成している。(1)海外調査では、昨年度に「占領期都道府県軍政資料」(MG資料)のコピー漏れ・コピーミスなどの取り直しを行ったが、時間がかか6たため、その作業の3分の1ほどが残った。本年度は引き続いてその作業を、代表の荒敬と瀬畑源(一橋大学大学院生)の2名が米国国立公文書館で8月8日22日(23日日本着)にかけて(実働日9日)行った。資料の取り直しと関連資料(写真など)で約2000枚を収集し、また関連の英文文献も購入した。(2)全体会議は、計2回開催した。第1回は2004年7月10日(13名参加・立教大学)にもち、とくに「概要」作成の状況を点検し、「訳語一覧」を改めて検討した。第2回は、2005年2月5日(13名参加・豊島区民センター会議室)にもち、「概要」の作成状況をブロックごと担当者ごとに点検した。
腱組織形成時におけるヒストンメチル化酵素G9aの役割

腱細胞の分化機構について様々な報告があるが、エピジェネティック制御については不明な点が多い。本研究ではヒストンメチル化酵素であるG9aに着目し、生体での腱細胞分化におけるG9aの機能を調べることを目的とする。腱組織におけるG9aの機能を調べるため、Sox9-CreマウスとG9aflox/floxマウスを交配して、G9a conditionalノックアウトマウスを作出して解析を行った。生後3週齢のG9a conditonalノックアウトマウスではコントロールマウスと比較して、咬筋付着部、前脚、膝、尾などの腱組織が形成不全を示したことから、G9aが腱の発生に重要な役割を果たしている可能性を見出した。腱組織におけるG9aの発現を確認し、腱細胞の分化における解析を進めた。発生期においてSox9プロモーターの活性により腱組織でCreリコンビナーゼが機能することを確認するため、Sox9-Cre;Rosa26-LacZマウスの解析を行ったところ、腱組織においてLacZ陽性細胞を確認したことから、腱細胞でCreリコンビナーゼが機能していること確認した。次に免疫組織化学を用いて腱組織におけるG9aと1型コラーゲンの発現を調べた。発生期のコントロールマウスの腱細胞でG9aの発現が認められたが、G9a conditonalノックアウトマウスではG9aの発現が減少していた。また1型コラーゲンの発現も同様に、コントロールマウスと比較して、G9a conditonalノックアウトマウスで発現の減少が認められた。さらにin situ hybridizationを行い、腱組織におけるTenomodulinのmRNAの発現を調べたところ、コントロールマウスと比較してG9a conditonalノックアウトマウスで発現が減少していた。以上の結果より、G9aが腱組織の発生過程において重要である可能性が示唆された。発生や分化において、細胞系譜特異的な遺伝子発現に加え遺伝子周辺のヒストンやDNAの翻訳後修飾を介したエピジェネティックな制御の関与が考えられている。腱細胞の増殖と分化機構については多くの知見が得られているが、エピジェネティック制御については不明な点が多い。本研究ではヒストンH3の9番目のリジン残基(H3K9)のメチル化酵素(H3K9MTase)であるG9aに着目し、生体での腱細胞形成におけるG9aの機能を調べることを目的とし、G9a conditionalノックアウトマウスを作出した。G9a conditionalノックアウトマウスの作出はSox9-CreマウスとG9a flox/floxマウスの交配で行った。まず発生においてSox9陽性細胞由来の腱細胞が存在することを確認するために、Sox9-Cre;Rosa26-LacZマウスの腱組織を解析した。LacZの組織染色より腱組織でLacZの局在が観察され、腱細胞がSox9陽性細胞由来であり、Cre recombinaseが腱細胞で機能していることを確認した。次に生後3週齢のG9a conditionalノックアウトマウスの腱組織の解析を行ったところ、G9a conditionalノックアウトマウスはコントロールマウスに比べ、咬筋付着部、前脚、尾、膝などの腱組織で形成不全を示した。また胎生期の腱組織を組織学的に解析するためにヘマトキシリン・エオジン染色を行ったところ、コントロールマウスと比較してG9a conditionalノックアウトマウスの腱組織で形成不全が認められた。以上の結果より、G9aが発生過程で腱の発生に重要な役割を果たしている可能性が示唆された。G9aおよびH3K9m2のの免疫組織学的検討に時間がかかってしまい、分子生物学的な検討には至らなかった。現在は抗体濃度、反応時間等の条件検討を行っている。現在、腱細胞の分化機構について多くの報告がされているが、遺伝子発現時のエピジェネティック制御については不明な点が多い。腱組織におけるG9aの機能を調べるため、Sox9-CreマウスとG9a flox/floxマウスを交配して、G9a conditionalノックアウトマウスを作出して解析を行っている。昨年度までに、生後3週齢のG9a conditonalノックアウトマウスではコントロールマウスと比較して、咬筋付着部、前脚、膝、尾などの腱組織の形成不全を示したことより、G9aが発生過程で腱の発生に重要な役割を果たしている可能性を見出した。本年度は、腱組織におけるG9aの発現を確認し、腱細胞の分化における解析を進めた。これらの結果より、G9aが腱組織の発生過程において重要である可能性が示唆された。本年度は免疫組織

化学およびin situ hybridizationを用いて腱細胞分化マーカーの発現を解析する予定であったが、条件検討に時間を要し、in vitroによる解析を行うことができなかった。腱細胞の分化機構について様々な報告があるが、エピジェネティック制御については不明な点が多い。本研究ではヒストンメチル化酵素であるG9aに着目し、生体での腱細胞分化におけるG9aの機能を調べることを目的とする。腱組織におけるG9aの機能を調べるため、Sox9-CreマウスとG9aflox/floxマウスを交配して、G9a conditionalノックアウトマウスを作出して解析を行った。生後3週齢のG9a conditonalノックアウトマウスではコントロールマウスと比較して、咬筋付着部、前脚、膝、尾などの腱組織が形成不全を示したことから、G9aが腱の発生に重要な役割を果たしている可能性を見出した。腱組織におけるG9aの発現を確認し、腱細胞の分化における解析を進めた。発生期においてSox9プロモーターの活性により腱組織でCreリコンビナーゼが機能することを確認するため、Sox9-Cre;Rosa26-LacZマウスの解析を行ったところ、腱組織においてLacZ陽性細胞を確認したことから、腱細胞でCreリコンビナーゼが機能していること確認した。次に免疫組織化学を用いて腱組織におけるG9aと1型コラーゲンの発現を調べた。発生期のコントロールマウスの腱細胞でG9aの発現が認められたが、G9a conditonalノックアウトマウスではG9aの発現が減少していた。また1型コラーゲンの発現も同様に、コントロールマウスと比較して、G9a conditonalノックアウトマウスで発現の減少が認められた。さらにin situ hybridizationを行い、腱組織におけるTenomodulinのmRNAの発現を調べたところ、コントロールマウスと比較してG9a conditonalノックアウトマウスで発現が減少していた。以上の結果より、G9aが腱組織の発生過程において重要である可能性が示唆された。今後免疫組織化学を用いて、コントロールマウスとG9a conditionalノックアウトマウスの腱組織におけるG9およびH3K9me2の発現局在の検討を行う。またコントロールマウスと比較して、G9a conditionalノックアウトマウスで腱組織の低形成が認められることにより、腱のマーカー分子である1型コラーゲンおよびテネイシンCの免疫染色を行い、G9aが腱マーカー分子発現に与える影響について検討を行う。次年度は、腱関連分子のScleraxisおよびTenomodulinの発現をin situ hybridizationを用いて解析し、発生期におけるG9aの腱細胞分化に与える影響について調べる予定である。
HPV陽性頭頸部癌におけるDNAメチル化を指標とした発癌メカニズムの解明

ヒト乳頭腫ウイルス(human papillomavirus: HPV)は、子宮頸癌や頭頸部癌などの発癌に関与している。特に欧米では若年層の性活動の活発化、多様化により、HPV関連の頭頸部癌が著明な増加傾向を示している。本邦においても、HPV関連の頭頸部癌が増加すると予想され、HPV感染の持つ意味合いはますます重要になってくると考えられる。本研究では、これまでの頭頸部癌とは生物学的に異なった腫瘍であるHPV陽性頭頸部癌を対象に、ジェネティックおよびエピジェネティックな解析を行い、DNAメチル化が重要な役割を果たしていることを明らかにした。本邦においても、欧米の流れを追従しHPV関連の頭頸部癌が増加すると予想され、HPV感染の持つ意味合いはますます重要になってくると考えられる。一方、HPV陽性頭頸部癌は非喫煙者、非飲酒者に多く、従来の頭頸部癌とは異なる臨床像を呈している。つまりHPVによる独自の発癌メカニズムが働いていることが示唆される。本研究では、これまでの頭頸部癌とは生物学的に異なった腫瘍であるHPV陽性頭頸部癌を対象に、エピジェネティックな検討することによって、その発癌メカニズムを解明することを目的としている。当科にて加療した頭頸部扁平上皮癌症例70例を対象にヒト乳頭腫ウイルス(HPV)の検出を行った。対象症例の原発部位別では下咽頭27例、喉頭18例、中咽頭16例、口腔9例である。性別は男性62例、女性8例で、年齢の中央値は63歳であった。病期分類ではステージIIが6例(8%)、ステージIIIが10例(14%)、ステージIVが54例(74%)と進行癌が大部分を占めた。手術もしくは生検にて採取された検体は、速やかにー80度で保存し、その後DNAを抽出した。HPVの検出とタイピングはPCR Human Papillomavirus Detection SetおよびPCR Human Papillomavirus Typing Set(共にタカラバイオ株式会社)を用いた。対象症例71例中、8例(11%)にHPVの感染を認め、いずれも中咽頭癌であった。中咽頭癌のみでは16例中8例(50%)にHPVが検出された。HPVのタイピングの結果はタイプ16が7例、タイプ33が1例であった。頭頸部癌においてHPVの感染やTP53遺伝子変異は重要な働きをしていると考えられる。今回我々は、中・下咽頭癌、喉頭癌についてHPVおよびTP53遺伝子の解析を行い、予後との関連を検討した。対象は当科にて化学放射線療法を施行した病期III、IVの中・下咽頭、喉頭扁平上皮癌67例(下咽頭癌31例、中咽頭癌20例、喉頭癌16例)である。ハイリスクHPVの検出はPCR法にて、またTP53変異の検出はDirect sequencing法を用いて行った。ハイリスクHPVは11例(16.4%)で検出され、すべて中咽頭癌であった。またp53の遺伝子変異は41例(61.2%)に認められ、部位別では下咽頭癌で21例(67.7%)、中咽頭癌で8例(40.0%)、喉頭癌で12例(75.0%)に認められた。予後との関連では、HPV陽性群、TP53 wild type群、TP53 mutant群の順で良好であった。頭頸部癌においてHPV感染およびTP53の変異といったgeneticな変化は重要な予後規定因子になりうると考えられ、将来の個別化治療に役立つ可能性が示唆された。頭頸部扁平上皮癌症例71例中、8例(11%)にHPVの感染を認め、いずれも中咽頭癌であった。HPV感染の有無と腫瘍の亜部位との関係をみてみると、HPV陽性中咽頭癌では口蓋扁桃7例、舌根1例であったが、陰性症例は口蓋扁桃1例、舌根2例で、その他の5例は後壁、軟口蓋であった。これまでの報告と同様、口蓋扁桃と舌根がHPV感染と強い関連があることが示された。喫煙状態との関連を見ると、HPV陽性症例は非喫煙者が6例、喫煙者もしくは過去の喫煙者が2例であったが、HPV陰性症例では非喫煙者が1例、喫煙者もしくは過去の喫煙者が7例であった。HPV陽性症例は有意に非喫煙者が多い傾向が認められた。またHPV感染の有無とT分類、N分類、病期分類との関連は認められなかった。サンプルの収集は順調であったが、HPV解析がやや遅れてしまった。頭頸部癌においてHPVの感染や、DNAメチル化、TP53遺伝子変異は重要な働きをしていると考えられる。我々はすでに頭頸部癌におけるHPV感染の重要性を報告してきた。特に中咽頭癌においては、約半数の腫瘍がHPV陽性であり、予後が良好であった。

今回は、中・下咽頭癌、喉頭癌についてHPVの検出およびTP53遺伝子の解析を行い、予後との関連を検討した。対象は当科にて化学放射線療法を施行した病期III、IVの中・下咽頭、喉頭扁平上皮癌67例(下咽頭癌31例、中咽頭癌20例、喉頭癌16例)である。ハイリスクHPVの検出はPCR法にて、またTP53変異の検出はDirect sequencing法を用いて行った。全症例のうち、ハイリスクHPVは11例(16.4%)で検出され、すべて中咽頭癌であった。またp53の遺伝子変異は41例(61.2%)に認められ、部位別では下咽頭癌で21例(67.7%)、中咽頭癌で8例(40.0%)、喉頭癌で12例(75.0%)に認められた。予後との関連では、HPV陽性群、TP53 wild type群、TP53 mutant群の順で良好であった。頭頸部癌においてHPV感染およびTP53の変異といったgeneticな変化は、重要な予後規定因子になりうると考えられた。頭頸部癌ではDNAメチル化といったepigeneticな変異が重要な役割を果たしているが、HPV感染やTP53変異などのgeneticな変化もまた、重要な発癌メカニズムを担っていると考えられる。ヒト乳頭腫ウイルス(human papillomavirus: HPV)は、子宮頸癌や頭頸部癌などの発癌に関与している。特に欧米では若年層の性活動の活発化、多様化により、HPV関連の頭頸部癌が著明な増加傾向を示している。本邦においても、HPV関連の頭頸部癌が増加すると予想され、HPV感染の持つ意味合いはますます重要になってくると考えられる。本研究では、これまでの頭頸部癌とは生物学的に異なった腫瘍であるHPV陽性頭頸部癌を対象に、ジェネティックおよびエピジェネティックな解析を行い、DNAメチル化が重要な役割を果たしていることを明らかにした。サンプルの収集は順調であり、また実験手技についても、特に問題は生じていない。1.HPV陽性頭頸部癌におけるDNAメチル化の解析2.HPV感染の有無およびメチル化の程度と治療成績、予後との関連を検討耳鼻咽喉科頭頸部癌今後は、以下の点を明らかにする予定である。1 HPV陽性頭頸部癌における網羅的なエピジェネティック解析を行う。2新たに同定されたHPV感染の程度と治療の効果予測や予後との関連を調べることにより、臨床応用の可能性を検討する。サンプル収集についても順調に進んでおり、またHPV検出の手技についてもすでに我々が実験に用いている方法であるので、特に問題なかった。一部のDNAサンプルにおいて、解析結果が不明確なものがあったが、再実験により問題ないことが確認された。サンプルの準備は順調であったが、HPV解析が遅れたため、解析にかかる費用が少なかった。また外注検査も予定していたが、実際に外注検査が必要な症例は少なかった。サンプルからのDNA抽出およびHPVの検出が順調に進んだため、再実験などが少なかった。また解析不能の場合には、外注検査も想定していたが、実際にはそのようなケースは少なかった。今後はHPV解析、DNAメチル化解析を行う予定であり、そのための試薬の購入、実験に費用がかかる予定である。また研究結果は国際学会など学会発表を行う予定である。今後は対象症例のサンプル数を増やすと同時に、DNAメチル化の解析を行う。抽出したDNAはBisulfite処理を行った後、メチル化の有無をPCR (methylation specific PCR、MSP)で検出する。臨床検体の解析ではリアルタイムPCRをもちいたQuantitative MSP(QMSP)にて遺伝子のメチル化の有無、程度を測定する。
ヒトにおける薬物代謝を予測する新規代替試験法の開発

1.ヒト胎児の主要なP450であるCYP3A7のcDNAを導入したトランスジェニック(Tg)マウスにCYP3A7の基質(薬物)を投与し、その代謝物の血中濃度を測定することにより代替法としての有用性を検討した。すなわち、Tgマウスにミダゾラムを投与し、血清中のミダゾラムの代謝物レベルをHPLCで測定した。その結果、野生型マウスと比べ、ミダゾラムの1'-位水酸化代謝物のレベルは有意に高かった。2.現在までにP450を安定に発現する培養肝細胞株は得られていない。p53欠損マウスのいくつかの臓器の細胞は形態を維持した状態で長期培養可能であることから、肝細胞についてP450を安定に発現する細胞株の樹立を試みた。すなわち、CYP3A7を導入したTgマウスとp53欠損マウスを交配し、その肝細胞から培養細胞株を樹立した。このTgマウスはマウスメタロチオネインプロモーターの制御下でCYP3A7を発現するため、亜鉛による誘導的発現が可能である。樹立した培養肝細胞において培地に塩化亜鉛を添加することによりCYP3A7mRNAが発現することをノーザンブロット分析で明らかにした。また、CYP3A7の酵素活性を7-プロポキシクマリンを基質として測定したところ、塩化亜鉛を添加したときのみ活性が認められた。これらのことより、CYP3A7を安定に発現する肝細胞株が樹立できたことが示された。この方法を応用すれば、ヒト酵素導入Tgマウスとp53欠損マウスを交配するだけで、目的のヒト酵素を発現する培養細胞株を得ることができ、非常に有用であると考えられる。1.ヒトの薬物代謝酵素の大量調製ヒトにおける主要な薬物代謝酵素であるチトクロームP450(CYP)を大量に発現させ、調製する系について検討した。ヒトCYP1A2、CYP2E1およびヒトの胎児に特異的に存在するCYP3A7各分子種のcDNAをそれぞれ組み込んだ組み換えバキュロウイルスを作製し、昆虫細胞株Sf9細胞、Bm6細胞およびカイコ幼虫に感染させ、培養細胞およびカイコ個体両方でP450蛋白質の発現に成功した。また、ヒトCYP2C9およびCYP2D6の酵母での発現にも成功した。CO差スペクトル解析およびイムノブロット分析の結果より、それぞれ目的のP450蛋白質が発現していることを確認した。現在、発現させたそれぞれの蛋白質の酵素活性について検討中である。2.ヒトの薬物代謝酵素を発現する培養細胞系の樹立チャイニーズハムスター由来CHL細胞にNADPHチトクロームP450還元酵素(fP_T)とヒトCYP1A2またはCYP2E1のcDNAを導入し、安定的に発現する細胞株を樹立した。また、ヒトの2種類のN-アセチルトランスフェラーゼ(NAT)、NAT1およびNAT2cDNAを導入し、fP_TとNAT1またはNAT2を安定的に発現する細胞株、更に、fP_T、CYP1A2とNAT1またはNAT2を安定的に発現する細胞株を樹立した。3.トランスジェニック(Tg)マウスを用いた研究CYP3A7cDNAを導入したTgマウスを作出し、CYP3A7の発現を検討した。その結果、肝臓で発現しているものを初めとして、各組織での発現のパターンが異なる7系統を確認した。この内の1系統のTgマウスと野生型マウスについて各臓器の重量を比較した結果、Tgマウスにおいて腎臓、肝臓(雄性のみ)および子宮は野生型より有意に重く、一方、精巣は軽量であった。現在、Tgマウスの催奇形性物質のスクリーニングへの応用について検討中である。薬物代謝酵素発現系について毒性学的側面からの検討・評価を行なった。

即ち、FAD-モノオキシゲナーゼ(FMO、酵母に発現)はMPTP, TIQなどパーキンソン病様症状誘発物質を代謝した。CYP2E1あるいはCYP3A7を導入したCHL細胞はがん原物質・変異原物質に対して親株に比べ高い感受性を示した。またCYP1A2とN-アセチルトランスフェラーゼ(NAT)導入CHL細胞株は両者が共存するときにのみヘテロサイクリックアミンに高い感受性を示しそれらの活性化に両者が必要であることを示し、これらの発現系が毒性学的試験系として応用可能であることを示した。さらに、CYP3A7の機能をin vivo測定系で評価できる代替法として、申請者が作出したCYP3A7導入トランスジェニックマウスを用いて検討した。このマウスの肝ミクロゾーム画分を用いてアフラトキシンB_1の活性化能が非導入マウスより顕著に高く、導入CYP3A7が機能していることをin vitroで立証できた。さらに、DNAへの直接のアダクト形成が高頻度であることを検証中である。また、培養細胞中では全てのCYPは発現していない。そこで遺伝子導入により、CYPを安定的に発現する細胞系を作成した。すなわち、CYP3A7導入マウスをP53欠失マウスと交配させることでCYP3A7導入/p53欠失マウスを樹立させた。このマウス肝細胞から、CYPを安定的に発現する不死化細胞を樹立出来る可能性があり、鋭意検討中である。以上、本研究は計画に沿って順調に推移している。1.ヒト胎児の主要なP450であるCYP3A7のcDNAを導入したトランスジェニック(Tg)マウスにCYP3A7の基質(薬物)を投与し、その代謝物の血中濃度を測定することにより代替法としての有用性を検討した。すなわち、Tgマウスにミダゾラムを投与し、血清中のミダゾラムの代謝物レベルをHPLCで測定した。その結果、野性型マウスと比べ、ミダゾラムの1′-位水酸化代謝物のレベルは有意に高かった。2.現在までにP450を安定に発見する培養肝細胞株は得られていない。p53欠損マウスのいくつかの臓器の細胞は形態を維持した状態で長期培養可能であることから、肝細胞についてP450を安定に発現する細胞株の樹立を試みた。すなわち、CYP3A7を導入したTgマウスとp53欠損マウスを交配し、その肝細胞から培養細胞株を樹立した。このTgマウスはマウスメタロチオネインプロモータの制御下でCYP3A7を発現するため、亜鉛による誘導的発現が可能である。樹立した培養肝細胞において培地に塩化亜鉛を添加することによりCYP3A7mRNAが発現することをノーザンブロット分析で明らかにした。また、CYP3A7の酵素活性を7-プロポキシクマリンを基質として測定したところ、塩化亜鉛を添加したときのみ活性が認められた。これらのことより、CYP3A7を安定に発現する肝細胞株が樹立できたことが示された。この方法を応用すれば、ヒト酵素導入Tgマウスとp53欠損マウスを交配するだけで、目的のヒト酵素を発現する培養細胞株を得ることができ、非常に有用であると考えられる。
中間エネルギー領域における180度方向中性子生成断面積に関する実験的研究

大阪大学核物理研究センターRCNPにおいて、180度方向の陽子入射核反応に対する炭素、鉄及び金ターゲットからの中性子生成二重微分断面積を測定した。測定結果は量子分子動力学QMDモデルを用いた粒子・重イオン輸送計算コードPHITSの計算結果と良く一致した。中性子エネルギースペクトルをフィッティングすることで、2つの蒸発成分と前平衡成分からなることを示唆し、核データ評価で利用される運動源模型のパラメータ核温度を導出した。本研究では、大阪大学核物理研究センターRCNPのサイクロトロン加速器施設のビーム・スウィンガー・マグネットを用いて、180度方向の陽子入射核反応に対する中性子微分断面積の測定と運動源模型の構築を行うことを目的とする。平成20年度は、150MeVの陽子ビームとリチウム、鉄、鉛のターゲットを用いて、本測定のための環境整備及び試測定を行った。具体的には有機液体シンチレータの中性子検出器の前面に鉄ブロックのシャドーバーを設置し、中性子・γ線の床・壁散乱の影響を調べた。その結果、バックグラウンドの主な成分はγ線であることがわかり、波形弁別により良く弁別することができた。また床・壁散乱の中性子のエネルギーは主に1MeV以下で、中性子検出器の測定可能範囲である1MeV以上の中性子を精度良く測定できることがわかった。試測定で得られた180度方向の中性子生成断面積を、量子分子動力学QMDモデルおよび核内カスケードモデルBertiniによる計算結果と比較した。Bertiniモデルに比べて核子-核子の相互作用を精密に計算できるQMDの結果は、中性子放出に関する核温度を良く再現することがわかった。これらの成果から、RCNPにおいて180度方向の中性子測定が可能であること、運動源模型に必要な核温度を得られることがわかった。今後、異なる入射エネルギー・ターゲット核種を用いて中性子生成断面積を収集し、運動源模型に必要な系統的なパラメータを得る見通しを得たことは大変意義深い。平成21年度は、前年度のテスト測定の結果を受けて、140MeVの陽子ビームと薄い炭素、鉄、金ターゲットを用いて、中性子生成二重微分断面積の本測定を行った。中性子やガンマ線等の床・壁散乱の影響は30cm厚さの鉄シャドーバーを検出器前面に設置することで調べた。中性子エネルギー導出は飛行時間法を用いた。解析の結果、中性子エネルギー1MeV以上の180度における精度良い断面積データを得ることができた。実験データを粒子・重イオン輸送計算コードPHITSに含まれる核内カスケードモデル(QMD, JAM)及び評価済み核データ(JENDL-HE, LA150)と比較した。鉄と金ターゲットに関して、計算結果はJAMモデルを除いて良く一致した。JAMモデルは核内の核子-核子の相互作用を十分に記述できていないために、高エネルギー中性子の放出が抑えられることがわかった。炭素ターゲットに関しては、すべての計算によるエネルギースペクトルの形状が実験データを再現しなかった。また、実験のスペクトルデータは4-10MeV付近に小さな肩を持つが、計算はいずれも再現しなかった。今までこのようなデータが出ていないことから、実験データを再度チェックする一方で新しい物理現象が期待される。来年度は得られたデータを運動源模型で解析し、論文投稿及び核データ国際会議2010での口頭発表を行い、成果を世界に広く発信する。平成21年度に測定したエネルギー140MeVの陽子入射による炭素、鉄及び金ターゲットからの180度方向の中性子エネルギースペクトルは主に以下の3つの成分からなることがわかった。1)中性子エネルギー4MeV以下における蒸発過程からのスペクトル、2)中性子エネルギー4MeVから10MeVにおける蒸発過程からのスペクトル、3)中性子エネルギー10MeV以上の前平衡過程からのスペクトル。特に1)と2)の蒸発過程成分が2つに分かれる過程は今までの180度方向以外の測定データでは見られない事象である。また180度方向の中性子エネルギースペクトルを3つのマクスウェル型の関数の和からなる運動源模型でフィッティングを行った。その結果、140MeVの陽子入射による180度方向の中性子生成スペクトルに関して、運動源模型のパラメータである核温度を導出することができ、粒子輸送計算コードにおける核反応モデルの改良のための指針を与えた。
ポーランド政治システムにおける議会の位置

自由な選挙によって選ばれる議会を中心とした政治システム(議会制民主主義)の形成は、「民主化」という観点から見ればひとつの到達点である。しかし、議会制民主主義というシステムそれ自体は、同時に「いかなる民主主義か」という新たな問いを内包している。ポーランドをふくむ旧東欧諸国においては、1989年を境に、「いかに民主化するか」という問題から「いかなる民主主義か」という問題へと焦点が移動したのは確かであるが、後者の問題が89年以前からすでに顔をのぞかせていたことも見逃すことはできない。本研究では、以上のような関心から、89年以降のポーランドの3つの議会、すなわち89年6月、90年10月、93年9月の選挙によって選ばれた議会の姿を、(1)社会における政治的分岐を議会構成に反映させる政党システムと選挙制度、(2)いずれも国民による民主的選挙を正統性根拠とする大統領と議会との関係、(3)議会的決定を直接民主主義と立憲主義という別個の方向から制約するレフェレンダムと違憲審査制、(4)議会外の社会的勢力としての労働組合およびカトリック教会と議会との関係という「いかなる民主主義か」にかかわる諸論点と、(5)国有企業の私有化と(6)新憲法の制定という、民主主義のメカニズムを通じて決定されるべき体制転換期の主要争点に即して描き出すことを試みた。さらに、97年9月の選挙によって議会構成が大きく変わり、民主左翼同盟とポーランド農民党による連立政府に代わって、連帯選挙行動と自由同盟による連立政府が成立した。前議会までに上記の(6)は解決され、(5)も主要な争点ではなくなりつつあるが、(1)から(5)までの問題はなお継続している。とりわけ、「連帯」労組を背景とする連帯選挙行動が与党第1党になったことによって、(4)が従来にも増して鋭い問題になる可能性がある。このような見通しをもちつつ、9月の選挙をめぐる政治状況と選挙結果の分析をおこなった。
波浪中抵抗増加の直立壁仮定と実船型への適用に関する研究

本研究では波浪中抵抗増加の反射波抵抗増加成分においてブラントネス係数と喫水周波数影響係数の直立壁仮定に着目する。1年目では船首の水面上形状が直立壁に近い船型と、船首部を変更した船型で水槽試験を行う。その結果より直立壁の仮定について理論的考察を行い、船首部を変更した船型にも適用できるようなモデルの改良を検討する。2年目では1年目の検討を踏まえて船首部をさらに変更し水槽試験を行い、波浪中抵抗増加の推定法を検討・検証する。以上より水面上形状が従来とは異なる船型に対しても適用できる波浪中抵抗増加のモデルを開発する研究である。
アメリカ女性作家にみる性差と身体の表象の系譜―ケイト・ショパンの作品を中心に

本研究の目的は、19世紀後半から20世紀初頭にかけて、アメリカ合衆国の社会と文化に大きな影響を与えた、優生学に基づく身体に関する思想や言説が、女性作家作品における女性の身体の表象にどのように作用したのかについて、ケイト・ショパンを中心に考証することで、当時の性差と身体に関する規範に対する女性作家の反応と戦略を明らかなものとすることである。ショパンの作品と、同時代の女性作家の作品の比較分析を踏まえ、アメリカ女性文学の原点にある問題を突き止め、現在の女性文学を読み直す通時的な視点と、女性文学の理解と分析に関する新たな視点を提供することにより、現代社会へのアクチュアルな問いかけを試みるものである。
ネココロナウイルス感染の識別とネコ伝染性腹膜炎ウイルスの感染増強作用に関する研究

野外で流行しているネココロナウイルス感染の識別と中和活性を保有するMAbのネコ培養マクロファ-ジでの感染増強作用の有無を調べた。ネココロナウイルス感染の識別はTypeIのネコ伝染性腹膜炎ウイルス(F1PV)には反応しないMAbを用いた競合ELISA法およびHPV TypeII79ー1146株を攻撃ウイルスとした中和試験により実施した。競合ELISAの特異性は、TypeIおよびTypeIIのFIPVを実験感染して得た血清を用いて調べた。合計1079例の血清についてFIPD抗体の有無をIFAで調べた結果、237血清が抗体陽性であった。これら237血清のうちFIP京症ネコで42例中13例(31%)が80%以上のELISA阻止率を示し、病院外来ネコでは125例中14例(10.1%)が同様の阻止率を示した。これらの血清では中和抗体価も高い値を示した。しかし、IFA抗体陽性健康ネコ57例では、すべてが30%以下の阻止率を示し、中IFA抗体陽性健康ネコ57例では、すべてが30%以下の阻止率を示し、中和抗体価も10倍以下であった。IFA陽性で、走合ELISAと中和試験陰性の血清をTypeIのFIPV感染と考えると、発症ネコでは約3割がTypeIIの感染と考えられた。しかし、抗体陽性の健康ネコでは明らかにその率は低下したいた。すなわち、FIPV TypeIIのウイルス感染は発症率が高いことを示唆すルものと思われた。ネコ株化細胞でFIPV79ー1146株に対して中和活性を示すMAbのネコ培養マクロファ-ジでの中和活性を調べた。異なるエピト-プを認識するMAb(no.5ー6ー2,7ー4ー1,6ー4ー2)のうち、5ー6ー2はマクロファ-ジでも株化細胞と同様に中和作用しか示さなかった。しかし、No.6ー4ー2,7ー4ー1のMAbは反応の程度により中和反応と感染増強作用のまったく逆の反応性を示した。すなわち、原液ではウイルスの増殖を完全に阻止したが、1:10希釈で逆にウイルスの感染を増強した。さらに原液のMAbでも反応直後では感染が増強された。これらのMAbsの認識するエピト-プの位置と感染増強作用の強さには関連性が認められた。
炎症・アレルギー性物質の長距離大気輸送及びその生物活性の解明

炎症・アレルギー性物質の長距離大気輸送の実態を明らかにするため、大気粉塵の捕集法、粉塵中のエンドトキシンとタンパク質の抽出法及び分析法について検討した。また、検討した方法を用いて、中国大陸からの長距離輸送の影響が大きいと考えられる九州北部地域において大気粉塵を捕集し、エンドトキシン、タンパク質、水溶性イオンによる大気汚染に関する調査を行った。その結果、九州北部地域では黄砂飛散時にエンドトキシンの濃度が顕著に上昇することが明らかになった。福岡県太宰府市において、PM2.5用インパクターを装着したハイボリウムサンプラーを用いて、2014年5月より大気粉塵をPM2.5とそれ以外の粒子(粗大粒子)にわけて2015年3月まで捕集した。捕集に用いるフィルターについて検討した結果、市販のフィルターではエンドトキシンが検出されるが、加熱処理することにより,エンドトキシンが検出限界以下までていかすることがわかった。捕集した粉塵からエンドトキシンを抽出する方法、すなわち(1)精製水を用いる振とう抽出、(2)精製水を用いる超音波抽出、(3)Tween 20を用いる超音波抽出をについて検討した。その結果、(3)Tween 20を用いる超音波抽出によりエンドトキシンが最も効率的に抽出されることがわかった。PM2.5と粗大粒子からTween 20を用いる超音波抽出により得た抽出物についてエンドトキシンを分析した結果、分析したいずれの試料からもエンドトキシンが検出され、その量は大気粉塵の捕集時期により変動するものの、いずれの時期においても、PM2.5より粗大粒子に多く含まれていることがわかった。また、加熱処理したフィルターについてタンパクについて分析した結果、検出限界以下であった。上記(1)から(3)の方法についてタンパクの抽出効率を検討した結果、抽出方法による差がないことがわかった。Tween 20がタンパク分析に与える影響について検討した結果、分析結果に影響しないことがわかった。PM2.5と粗大粒子からTween 20を用いる超音波抽出により得た抽出物についてタンパクを分析した結果、分析したいずれの試料からもエンドトキシンが検出され、その量は大気粉塵の捕集時期により変動するものの、いずれの時期においても、粗大粒子よりPM2.5に多く含まれていることがわかった。ハイボリウムエアサンプラーを用いて2015年4月から11月まで1週間分ずつ毎月4週間、微小粒子(PM2.5)と粗大粒子(PM2.5以外の浮遊粒子)を福岡県太宰府市において捕集した。また、同地点において2015年12月から2016年3月まで総浮遊粒子(TSP)を24時間分ずつ同装置を用いて捕集した。2014年5月から2015年4月に捕集した微小粒子と粗大粒子についてエンドトキシンとタンパク質の分析を行った。その結果、エンドトキシン濃度は、粗大粒子においては1.027.8 mEU/m3であり、微小粒子においては0.313.2 mEU/m3であり、ほとんどの週においてエンドトキシン濃度は微小粒子より粗大粒子において高かった。粗大粒子におけるエンドトキシンンの月毎の平均値は5月、9月、11月に高く9.714.9 mEU/m3であった(2015年10月は微小粒子、粗大粒子とも捕集しなかった)。一方、タンパク質濃度は、粗大粒子においては33300 ng/m3であり、微小粒子においては9703391 ng/m3であり、すべての週において粗大粒子より、微小粒子において高濃度であった。北京市(中国)において2013年から2014年の4カ月に毎月5日、24時間分ずつ捕集したTSPについてエンドトキシンとタンパク質を分析した。その結果、エンドトキシン濃度はほとんどが200 mEU/m3以上でありタンパク質濃度は1.6μg/m3以上であり、風上域である中国において日本よりエンドトキシン、タンパク質とも濃度が高く長距離輸送が起こる可能性が示唆された。炎症・アレルギー反応に関与することが報告されているエンドトキシン及びタンパク質の大気中での年内変動(2014年5月2015年4月)を明らかにすることができた。また、日本の風上域である中国においてエンドトキシン、タンパク質とも高濃度であることがわかり長距離輸送が起こる可能性を明らかにすることができた。長崎県佐世保市において2016年3月から2017年2月までの1年間にわたり、ハイボリウムエアサンプラーを用いて大気粉塵を捕集し、大気粉塵中のエンドトキシンおよびタンパク質を測定した。大気粉塵は、平成26年度と平成27年度の福岡県太宰府市にける調査の結果、高濃度のエンドトキシンが検出された9月から11月と高濃度の黄砂が飛散することの多い3月から5月については、ほぼ毎日捕集し、それ以外の月は原則として各月の第2週目に5日間分ずつ捕集した。その結果、大気中のエンドトキシン濃度は5、9、10月に高く、特に9月と10月に高濃度の日が多数みられた。また、各大気粉塵について黄砂の指標であるCa2+濃度を測定した結果、5月に高濃度のCa2+が検出され、黄砂が飛散したと考えられた日に高濃度のエンドトキシンが検出されたことから、エンドトキシン濃度の上昇に黄砂の飛散が関与した可能性が高いと考えられた。一方、タンパク質はエンドトキシンとは異なり、日間変動はみられるものの濃度変化は小さく、特に高濃度の日が多い月は見られなかった。

アレルギー性鼻炎の原因となる花粉由来のタンパク質が多く飛散したと予想される3月から5月に捕集した大気粉塵についてポリアクリルアミドゲル電気泳動を行ったが、顕著なタンパク質によるバンドは検出されなかった。TNF-α遺伝子プロモーター領域の発現を検出するヒト細胞試験系を用い、大気粉塵抽出物の活性を試験した結果、エンドトキシン濃度の高い抽出物にTNF-αプロモーター活性が検出された。今後、秋季におけるエンドトキシン濃度の上昇のヒト健康への影響について検討する必要があると考えられた。炎症・アレルギー性物質の長距離大気輸送の実態を明らかにするため、大気粉塵の捕集法、粉塵中のエンドトキシンとタンパク質の抽出法及び分析法について検討した。また、検討した方法を用いて、中国大陸からの長距離輸送の影響が大きいと考えられる九州北部地域において大気粉塵を捕集し、エンドトキシン、タンパク質、水溶性イオンによる大気汚染に関する調査を行った。その結果、九州北部地域では黄砂飛散時にエンドトキシンの濃度が顕著に上昇することが明らかになった。大気粉塵の捕集方法が確立し、順調に捕集が行われている。大気粉塵中のエンドトキシンとタンパクの抽出方法が確立した。大宰府において捕集したPM2.5と粗大粒子について、エンドトキシンとタンパクを分析した結果、分析方法は試料中の微量なエンドトキシンとタンパクを分析するのに十分な検出感度を有していることがわかった。2015年度に捕集した試料についてエンドトキシンとタンパク質の分析を行い年内変動の規則性について検討する。TSPについて分析を行うとともに、後方流跡線解析により空気塊の移動経路を推測し長距離輸送の影響について検討する。また、大気粉塵試料の炎症性サイトカイン誘導能を測定する。当初の計画通り研究を実施する。公衆衛生学昨年度捕集した試料についてエンドトキシンとタンパクの分析を行う。また、今年度も同様に粉塵を捕集し、昨年度の試料と結果を比較し、大気中のエンドトキシンとタンパクの量の季節変動の規則性について検討する。当初の研究計画通り研究を実施する。当該年度計画していた研究が、当初計画した予算よりもわずかながら少額で実施でき、次年度実施に必要と考えられたため。昨年度計画していた研究が、当初計算した予算よりもわずかながら少額で実施でき、次年度実施に必要と考えられたため。平成28年度に使用する予定。平成27年度に使用する予定。
有機合成試薬としてのビスマス化合物の開発と新しい合成反応への応用

ビスマスを用いる有機合成について検討した結果、以下の事実が明らかになった。1.トリブチルビスマスを用いるエステル化反応:トリブチルビスマスを酸素雰囲気下、酸クロリドあるいはカルボン酸と反応させると、対応するブチルエステルが収率よく得られた。2.触媒量のビスマストリフラートを用いる立体選択的アルドール縮合反応:三塩化ビスマスとトリフルオロメタンスルホン酸から容易に得られるビスマストリフラートを触媒量用い、シリルエノールエーテルと種々のアルデヒドを反応させると、アルドール生成物が収率よく得られた。なおこの反応ではエリトロ体のアルドール生成物が選択的に得られることが明らかになった。また、酒石酸ジエチルエステルを不斉な配位子として不斉アルドール反応を試みたが、得られた生成物は12%e.e.であった。3.金属ビスマス存在下、プロパルギルブロミドとアルデヒドとの反応:金属ビスマス存在下、プロパルギルブロミドと種々のアルデヒドを反応させると、アレン誘導体とアセチレン誘導体の混合物が得られた。4.三塩化ビスマスを用いるエポキシドの開環反応によるβ-アミノアルコールの合成:三塩化ビスマスの存在下、エポキシドを芳香族アミンと反応させると対応するβ-アミノアルコールが得られることが明らかになった。5.不斉ビスマス触媒を用いるアルデヒドの不斉シアノ化反応:触媒量の三塩化ビスマスあるいはビスマストリフラートを用いて、トリメチルシリルシアニドを種々のアルデヒドと反応させると、シアノヒドリンのシリルエーテルが定量的に得られた。光学活性な酒石酸ジエチルエステルから調製した不斉ビスマス触媒を用いてこの反応を試みたところ、58%の光学収率で光学活性シアノヒドリンが得られた。6.三塩化ビスマスを用いるアリルトリメチルシランとアルデヒドからのピラン誘導体の合成:三塩化ビスマスの存在下、アリルトリメチルシランと2モルのアルデヒドを反応させると、ピラン誘導体が得られた。7.三塩化ビスマス-亜鉛系を用いるイミンのアリル化反応:三塩化ビスマス-亜鉛系を用いて、アリルブロミドをイミンと反応させると、ホモアリルアミンが得られた。1.トリブチルビスマスの化学一酸素雰囲気下、トリブチルスマスを用いる酸クロリドやカルボン酸のエステル化反応-トリアルキルビスマスは今まで有機反応にはほとんど使われてこなかった。そこでトリブチルビスマスを合成し、その反応性を検討した。その結果トリブチルビスマスと種々の酸クロリドの混合物中に酸素を注入し、室温で反応させたところ、収率よく対応するカルボン酸ブチルエステルが得られた。さらに酸クロリドのかわりに種々のカルボン酸を用いて反応を行なった場合にも、収率よくカルボン酸ブチルエステルが得られることが明らかになった。この反応機構を明らかにするため、^<18>0_2存在下でこれらの反応を行なった。酸クロリドを用いた場合には、得られるエステルに^<18>0が導入されるが、カルボン酸を用いた時には、得られるエステルには^<18>0は導入されなかった。これらのことから、酸クロリドとカルボン酸を用いた場合では対応機構が異なるもと思われるが、詳細については検討中である。

2.触媒量のビスマストリフラートを用いる立体選択的アルドール縮合反応三塩化ビスマストリフルオロメタンスルホン酸から容易に得られるビスマストリフラートを触媒量用い、塩化メチレン-78°Cでアセトフェノンのシリルエノールエーテルと種々のアルデヒドを反応させたところ、収率よく対応するアルドール生成物が得られた。次にプロピオフェノンの(Z)-シリルエノールエーテルを用いて、種々のアルデヒドとの反応を検討したところ、エリトロ体が選択的に得られることが明らかになった。ビスマスを用いる有機合成反応の開発について検討した結果、以下の事実が明らかになった。1.金属ビスマス存在下、プロパルギルブロミドと種々のアルデヒドを反応させると、アレン誘導体とアセチレン誘導体の混合物が得られた。2.三塩化ビスマスの存在下、エポキシドを芳香族アミンと反応させると対応するβ-アミノアルコールが得られることが明らかになった。3.触媒量の三塩化ビスマスあるいはビスマストリフラートを用いて、トリメチルシリルシアニドを種々のアルデヒドと反応させると、シアノヒドリンのシリルエーテルが定量的に得られた。光学活性な酒石酸ジエチルエステルから調製した不斉ビスマス触媒を用いてこの反応を試みたところ、58%の光学収率で光学活性シアノヒドリンが得られた。4.三塩化ビスマスの存在下、アリルトリメチルシランと2モルのアルデヒドを反応させると、ピラン誘導体が得られた。5.三塩化ビスマス-亜鉛系を用いて、アリルブロミドをイミンと反応させると、ホモアリルアミンが得られた。
HAMの臨床免疫学的病態における異常リンパ球活性化機構とOX40,gp34の役割

(A)HAM患者の末梢血リンパ球を培養すると,多くの症例でCD8陽性細胞が優位に増殖しCD4/CD8比が次第に低下した.またCD4/CD8比の低い症例ほど痙性対麻痺が重症であった.OX40,gp34はCD4,CD8いづれの培養T細胞においても経時的に発現が増加したが,IL-2RαはCD8優位に発現した.培養で増殖するCD8陽性細胞は,培養細胞中に発現が誘導されるHTLV-I抗原に対する細胞障害性Tリンパ球と考えられており,この免疫応答能がHAMの脊髄の炎症性病変形成となんらかの関連を持つものと思われる.(B)Tリンパ球の分化増殖の場である胸腺におけるOX40,gp34の発現を,正常および重症筋無力症胸腺(MG)で検索したところ,OX40は髄質,gp34は皮髄境界部の髄質側の円形細胞に散在性に発現していた.MGに特徴的な所見は,胚中心(GC)周囲の髄質ではOX40陽性細胞が極めて多数みられ,GC内にはgp34陽性細胞がみられたことである.OX40,gp34はT-B interactionによる抗体産生促進に関与しており,この所見はMGの胸腺内での活発なT-B interactionを示唆するものであり,患者の抗アセチルコリン受容体抗体の産生を促しているのかもしれない.(C)OX40,gp34の活動性の炎症性病変における発現を検討するため,炎症性筋疾患(多発筋炎10例,肉芽腫性筋炎5例)の生検筋を用いて免疫組織化学法にて解析した.多発筋炎全例でOX40陽性単核球を認め,浸潤単核球における割合は血管周囲では13.7%,筋内膜では2.7%であった.gp34陽性細胞はより低頻度に認めた.肉芽腫性筋炎では,組織の線維化の著しい長期経過例を除く4例で,OX40陽性細胞が肉芽腫内の単核細胞の7.8%にみられた.したがって,炎症性筋疾患におけるOX40陽性細胞が病巣形成に関与している可能性が考えられた.一方,いずれの症例でもgp34陽性の血管内皮細胞はみられず,OX40/gp34系のリンパ球と血管内皮との接着因子としての役割は確認できなかった.HTLV-I associated myelopathy(HAM)における活性化T細胞マーカーOX40とそのリガンドgp34の発現とその役割を検討した.1)菅村らは、細胞株での検討によりHTLV-ItaxがOX40およびgp34をtransactivateすることを報告している。今回HTLV-I関連疾患であるHAMにおけるこれら分子の発現を明らかにするため、HAM、キャリアーおよび対照群の末梢血単核球の、培養前後のCD4あるいはCD8陽性細胞におけるOX40、gp34およびIL-2R αの発現をモノクローナル抗体を用いてフローサイトメーターにて2-カラー解析した.培養後OX40とgp34は、CD4、CD8陽性細胞いずれにおいても発現が増加した.OX40は常にCD4優位に発現した.培養前はIL-2R αいずれの群でもCD4優位に発現したが、9日間培養後はHAMとキャリアーではCD8優位、対照群ではCD4優位の発現となった.HAMの培養細胞のうち、特にblastoid cellsでOX40、gp34、IL-2R αのいずれも発現が増加していた.OX40の発現は、IL-2R α陽性細胞の1040%程度の頻度でみられた。2)我々はこれまでに、HAMの末梢血リンパ球に特徴的なspotaneous proliferation(SPP)は、シクロスポリンAや抗CD25抗体などIL-2/IL-2R系を阻害することにより抑制されることを明らかにしてきた。そこでHAMおよび健常成人の末梢血リンパ球を抗OX40,gp34抗体の存在下で培養し、^3H-thymidine取り込みアッセイにより、これらの抗体のHAMのSPPへの抑制の有無を検討したが、SPPの抑制はみられなかった。しかしながら、PHAで刺激した健常成人の末梢血リンパ球の増殖反応は、抗OX40抗体のみでは抑制されないが、同時にこれら2つの抗体を加えると50%程度抑制された。3)慢性関節リウマチや実験的アレルギー性脳脊椎炎では、OX40が急性期の病変部位に浸潤しているCD4陽性リンパ球に選択的に発現しており、自己免疫疾患のエフェクター細胞のマーカーとなりうる。今回、発症後10年を経過したHAM剖検脊椎およびコントロール脊椎(筋萎縮性側索硬化症)の凍結切片を、抗OX40,gp34抗体を用いて免疫組織染色を行った。これらは慢性期のHAM病変であり血管周囲に軽度の単核球浸潤がみられたが、OX40、gp34陽性細胞はみられなかった.以上、OX40/gp34はIL-2/IL-2R系とは性質の異なる活性化マーカーであることが示唆された.またHAMの病変部位におけるOX40の役割に関しては、より発症早期の症例での検討が必要と思われた。(A)HAM患者の末梢血リンパ球を培養すると,多くの症例でCD8陽性細胞が優位に増殖しCD4/CD8比が次第に低下した.またCD4/CD8比の低い症例ほど痙性対麻痺が重症であった.OX40,gp34はCD4,CD8いづれの培養T細胞においても経時的に発現が増加したが,IL-2RαはCD8

優位に発現した.培養で増殖するCD8陽性細胞は,培養細胞中に発現が誘導されるHTLV-I抗原に対する細胞障害性Tリンパ球と考えられており,この免疫応答能がHAMの脊髄の炎症性病変形成となんらかの関連を持つものと思われる.(B)Tリンパ球の分化増殖の場である胸腺におけるOX40,gp34の発現を,正常および重症筋無力症胸腺(MG)で検索したところ,OX40は髄質,gp34は皮髄境界部の髄質側の円形細胞に散在性に発現していた.MGに特徴的な所見は,胚中心(GC)周囲の髄質ではOX40陽性細胞が極めて多数みられ,GC内にはgp34陽性細胞がみられたことである.OX40,gp34はT-B interactionによる抗体産生促進に関与しており,この所見はMGの胸腺内での活発なT-B interactionを示唆するものであり,患者の抗アセチルコリン受容体抗体の産生を促しているのかもしれない.(C)OX40,gp34の活動性の炎症性病変における発現を検討するため,炎症性筋疾患(多発筋炎10例,肉芽腫性筋炎5例)の生検筋を用いて免疫組織化学法にて解析した.多発筋炎全例でOX40陽性単核球を認め,浸潤単核球における割合は血管周囲では13.7%,筋内膜では2.7%であった.gp34陽性細胞はより低頻度に認めた.肉芽腫性筋炎では,組織の線維化の著しい長期経過例を除く4例で,OX40陽性細胞が肉芽腫内の単核細胞の7.8%にみられた.したがって,炎症性筋疾患におけるOX40陽性細胞が病巣形成に関与している可能性が考えられた.一方,いずれの症例でもgp34陽性の血管内皮細胞はみられず,OX40/gp34系のリンパ球と血管内皮との接着因子としての役割は確認できなかった.