hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
口腔内細菌叢と根尖性歯周炎の難治化との関係の検索

またそれらの細菌は同一患者の唾液および歯肉縁下プラーク試料からも検出された。試料採取および構成細菌のシーケンス解析ともに順調に進展していると考えられる。大阪大学歯学部附属病院を受診し、根管治療が必要と診断された外来患者に対してインフォームドコンセントを行い、33名の患者から本研究への参加に対する同意を得た。非難治性根尖性歯周炎症例のうち、根尖部透過像を認めない症例(10症例)および根尖部透過像を認めた症例(8症例)の根管内削片、唾液、ならびに歯肉縁下プラークを採取した。根管治療で治癒せず、外科処置に至った難治性根尖性歯周炎症例(16症例)のうち、3症例で根管内削片、根尖孔外バイオフィルム、唾液、ならびに歯肉縁下プラークを、13症例で根尖孔外バイオフィルム、唾液、ならびに歯肉縁下プラークを採取した。各試料中の細菌DNAを抽出し、構成細菌を次世代シーケンサーを用いて、16S rRNA遺伝子のV1-V2領域を標的としたシーケンス解析に供し、その構成細菌を網羅的に同定した。各試料の解析結果には個体差が認められたが、それらの平均値を算出することにより一定の傾向が認められた。非難治性根尖性歯周炎症例のうち、根尖部透過像を認めない症例の根管内試料では、Firmicutes門が全体の約51%、Actinobacteria門が全体の約25%を占め、根尖部透過像を認めた症例の根管内試料では、Firmicutes門が全体の約38%、Actinobacteria門が全体の約25%、Bacteroidetes門が17.6%を占めた。また、難治性根尖性歯周炎症例の根尖孔外バイオフィルム試料ではProteobacteria門が全体の約25%、Bacteroidetes門が全体の約21%、Actinobacteria門およびFirmicutes門が全体の約20%を占めた。一方、唾液および歯肉縁下プラーク試料では、非難治性根尖性歯周炎症例患者と難治性根尖性歯周炎患者間で大きな相違は認められなかった。臨床試料からの細菌DNAの抽出を複数試料でまとめて実施する方がコストおよび時間を削減できるため、翌年度にまとめて実施することとし、リアルタイムPCR用のプライマーの作成も翌年度に行うこととしたため。昨年度に発注した次世代シーケンスの納品が今年度4月になるため臨床試料が20試料収集できるごとに細菌DNAを抽出する。40試料採取できた段階でリアルタイムPCRを行い、歯周病および難治性根尖性歯周炎の原因であると考えられている細菌種の検出および定量を行う。また予定通り、ピロシーケンスを用いたメタゲノム解析を随時行う予定である。
蛍光プロ-ブを用いる単離胃粘膜細胞機能検査法の開発

1.胃粘膜から分離した壁細胞を用いて単一細胞における酸分泌亢進をACASワ-クステ-ションにより半定量化できることを示した。2.細胞内カルシウム動態を蛍光色素FuraIIを用いて測定し壁細胞活性化の指標としてこれが有用であることを報告した。特に膜受容体の活性化の際には何らかの細胞内カルシウムプ-ルの変動が認めらる可能性が示唆された。とくにCCK、ガストリンのように類縁するペプチドにおいてもそれぞれの膜受容体を介して細胞内のそれぞれ独立のカルシウムプ-ルからの遊離カルシウムが認められることを示唆する所見を得第75回消化器病学会総会及び消化管ホルモン研究会で報告した。またこれらの細胞内カルシウム動員にG蛋白質の存在が必要であることをNaFを用いた実験により明らかにでき今後この結果を学会報告する予定である。その機序をより詳細に検討するためにPermenlizeした細胞系での検討を行っているがデタ-ジェント処理によって細胞の反応性が喪失し所期の結果が得られていない。3.家兎胃粘膜から分離した粘膜細胞肥群をコラ-ゲンコ-トした培養皿に単層培養することに成功しその反応性及び細胞の性質を検討した。この結果は第76回消化器病学会総会に発表を予定している。4.蛍光膜電位プロ-ブ及び蛍光pH感受性プロ-ブによる刺激分泌過程の膜電位変化、細胞内pH変化は現在検討を開始したところでありまだ報告できる結果を得ていない。5.ヒト胃粘膜生検組織標本での検討の前にヒト胃手術材料を用いてヒト壁細胞の酸分泌刺激剤に対する反応性の特徴を明らかにした。その結果ヒトはヒスタミンに対して最も強い反応性を示しイヌよりもウサギやモルモットに近い性質であることが判明した。1.胃粘膜から分離した単一壁細胞での酸分泌機能をACASワークステーションを用いて検討し、ヒスタミン刺激酸分泌を単一細胞で測定することが可能であることを予備的実験ではあるが示すことに成功した。2.家兎胃粘膜より密度勾配超遠心分離法によって得られた胃小胞での酸分泌をアクリジンオレンジを用いて測定することができた。この結果の一部は第21回胃分泌研究会において発表する予定である。このように単に細胞レベルのみならず細胞下分画においても酸分泌機能の測定が螢光法により可能となった。現在酸分泌を担う酵素本体であるH^+・K^+-ATPase活性、胃小胞での酸分泌、および無傷の分離壁細胞での酸分泌の関連を検討中である。3.細胞内カルシウムを2波長同時励起システムを備えた分光螢光光度計で螢光指示薬FuraIIを用いて螢光測定し、各種酸分泌刺激剤による壁細胞内カルシウム濃度の変化を検討した。ヒスタミンが細胞内カルシウム動員効果を示すという研究知見は第74回日本消化器病学会大会、第30回日本消化器病学会大会、第1回上皮輸送研究会で発表した。またこの方法でガストリンとCCKによる壁細胞酸分泌反応が異なる受容体を介しているという新しい知見を得第75回消化器病学会総会で発表を予定している。そのほかこの手法を利用した多くの研究が現在進行中であり今后も多数の研究発表を行う予定である。このため本年度に予定していた壁細胞活性化に伴う膜電位変化、細胞内pHの変化を螢光指示薬を用いて検討することなどは今後に持ち越した。
放射光利用高速1次元ビームスキャンによる高画質単色X線撮影法

X線ビームを1次元的にし、1次元検出器と同時にスキャンする方式を高速化する方法を検討した。1次元ビームとしてベンディングマグネットや挿入光源ウイグラーから放出される放射光を用いた。1次元的な照射野から2次元X線画像を得る方法として2次元検出器の一部をスリット状にアクティブにしてこれをスキャンさせる方式を考えた。種々の組み合わせを検討した結果、2次元検出器としてIIとビデオカメラを組み合わせたものが高速化に適しており、実用化にも近いと考えられる。シャッター機構としてはX線ビームを検出器前面で1次元的に開閉しこれをスキャンする方法、IIの出力蛍光面のあとで光学的にシャッターを設けてこれをスキャンする方法が考えられる。またCCDの電子シャッターをライン状に配置し、スキャンしても原理的に同様な効果が期待できる。この方法により散乱線の影響を取り除き画像を取り込むことができる。またCCD面上でライン状電子シャッターを動作させる場合は高速に2次元画像を取り込むことができ、しかも患者を平行移動する必要はない。一方米国でK吸収端差分環状動脈造影用に開発されている1次元スキャン法は患者をスキャンすることによりこの方法を実現している。この方法では約1秒おきの画像しか得られず、また患者を急速に平行移動させる必要がある。日本で開発されているII+TVによる従来の2次元検出器法では秒間15枚の画像が得られ、患者の移動は不必要であるが、散乱線の影響が大きく大きな結晶を振動させる必要がある。これまで固定して用いられてきた放射光ビーム自体をスキャンできる可能性が示唆されている。本研究では放射光ビームスキャンを想定して、両者の長所を取り入れ、短所を取り除くシステムの構成を検討した。K吸収端上下のエネルギーに相当する格子面を交互に帯状に配置した分光結晶を用い、この結晶上に放射光ビームをスキャンさせると、一回のスキャンで高速にK吸収端上下1組のX線像が形成される。この場合の結晶と被写体の距離が入力ビームの幅とK吸収端上下のエネルギー差に依存することを示し、実用に当たって妥当な距離の範囲にあることを示した。ビームの電子的なスキャンとCCDカメラの制作は現段階では技術的・経済的な制約があり実現できないので、模擬的な系で実験を行った。電子をスキャンさせるかわりに、単結晶モノクロメータの角度を変えることによりスキャンしまたCCDの特殊シャッター機能は画像処理の上で空間的なウインンドウを設けることで実現した。この結果、散乱線が抑制され、コントラストが著しく改善されることが示された。散乱線の影響を抑えて画質をよくするために従来考案された「スキャンニングスリットX線撮像法」は、機械的なスキャン操作が行われるために動画像に向かないなど用途が限られるが、本研究ではこの方式を高速化する方法を検討した。1次元ビームとしては(a)X線管でスリット用いる方法、(b)放射光の挿入光源から放出される1次元的な照射野のX線を用いる方法がある。このような光源から2次元X線画像を検出する方法としては(a)1次元検出器をスキャンさせる方式、(b)2次元検出器の前方のスリット状にアクティブにしてこれをスキャンさせる方式が考えられる。上記方法の組み合わせを検討した結果、2次元検出器としてIIとビデオカメラを組み合わせたものが高速化に適しており、実用化にも近いことが示された。2次元検出器前のスリット状シャッタースキャン機構としては(a)X線ビームを検出器前面で1次元的に開閉する方法、(b)IIの出力蛍光面のあとで光学的にシャッターを設ける方法、(c)CCDの電子シャッターをライン状に配置する方法などを検討した。特にCCD面上でライン状電子シャッターを動作させる場合は高速に2次元画像を取りこむことができ、しかも患者や検出器を平行移動する必要はない。放射光利用K吸収端差分環状動脈造影の場合、これまで挿入光源から放出される1次元的な照射野の放射光は固定して用いられてきたが、放射光ビーム自体をスキャンできる可能性が示唆されている。K吸収端上下のエネルギーに相当する格子面を交互に帯状に配置した分光結晶を用い、一回のスキャンで高速にK吸収端上下1組のX線像が形成される仕組みを示した。この場合の結晶の配置と被写体との距離の関係を計算により求めた。その結果、結晶と被写体間の距離がK吸収端上下に対応する二つの結晶間の距離とK吸収端上下のエネルギー差に依存することを示し、実用に当たって妥当な距離の範囲にあることを示した。現在1336X1034の画素を持つCCDカメラにより画像取込を行うことが可能になり、模擬的な実験の準備段階である。

この方法により散乱線の影響を取り除き画像を取り込むことができる。またCCD面上でライン状電子シャッターを動作させる場合は高速に2次元画像を取り込むことができ、しかも患者を平行移動する必要はない。一方米国でK吸収端差分環状動脈造影用に開発されている1次元スキャン法は患者をスキャンすることによりこの方法を実現している。この方法では約1秒おきの画像しか得られず、また患者を急速に平行移動させる必要がある。日本で開発されているII+TVによる従来の2次元検出器法では秒間15枚の画像が得られ、患者の移動は不必要であるが、散乱線の影響が大きく大きな結晶を振動させる必要がある。これまで固定して用いられてきた放射光ビーム自体をスキャンできる可能性が示唆されている。本研究では放射光ビームスキャンを想定して、両者の長所を取り入れ、短所を取り除くシステムの構成を検討した。K吸収端上下のエネルギーに相当する格子面を交互に帯状に配置した分光結晶を用い、この結晶上に放射光ビームをスキャンさせると、一回のスキャンで高速にK吸収端上下1組のX線像が形成される。この場合の結晶と被写体の距離が入力ビームの幅とK吸収端上下のエネルギー差に依存することを示し、実用に当たって妥当な距離の範囲にあることを示した。ビームの電子的なスキャンとCCDカメラの制作は現段階では技術的・経済的な制約があり実現できないので、模擬的な系で実験を行った。電子をスキャンさせるかわりに、単結晶モノクロメータの角度を変えることによりスキャンしまたCCDの特殊シャッター機能は画像処理の上で空間的なウインンドウを設けることで実現した。この結果、散乱線が抑制され、コントラストが著しく改善されることが示された。
腸管炎症に関与する新規腸管内自然免疫細胞の機能解析

申請者はこれまでに、腸管粘膜固有層特異的に局在するCX3CR1highCD11b+CD11c+細胞が細胞接着分子ICAM1/VCAM1を高発現しエフェクターT細胞と結合する一方、IL-10/Stat3シグナル依存的にCD80/86の発現が低下することによりT細胞の増殖を誘導しないことにより腸管炎症を抑制することを明らかにし、制御性ミエロイド細胞(Mreg細胞)と名付けた。また、申請者らが同定したMreg細胞はFoxp3+ Treg細胞と同様に腸炎モデルマウスへの投与が治療効果を示すことが明らかとなっている。近年、自然免疫機構の活性制御が獲得免疫系の異常で起こる自己免疫疾患の誘発に関与していることが報告されており、炎症性腸疾患の新規治療法開発においては自然免疫系を中心とした発症原因究明の必要性が示唆される。そこで、本申請者は新規の腸管粘膜固有層内ミエロイド細胞サブセットによるT細胞活性化制御機構の解明を試みている。申請者は、研究期間を通じてCX3CR1high CD11b+C11c+制御性ミエロイド(Mreg)細胞が、細胞接着分子ICAM-1/VCAM-1を高発現することでT細胞と優位に結合する一方、IL-10/Stat3シグナル依存的にCD80/CD86の発現が抑制されているため結合したエフェクターT細胞に増殖刺激が誘導されず、腸管炎症抑制に機能していることを明らかにした(Proc Natl Acad Sci USA. 109 (13): 5010-5 (2012))。さらに、IBDモデルマウスであるLysM-cre; Stat3f/fマウスに野生型Mreg細胞を移入すると腸管炎症が抑制されることを明らかにし、IBDの発症にMreg細胞の異常が関与する可能性を示した。本年度は、腸管内恒常性維持におけるMreg細胞の役割を明らかにするため、「選択的細胞ノックアウト法」によりMreg細胞欠損マウスの作成を行なった。方法として、DNAマイクロアレイ解析からMreg細胞に特異的に発現するX遺伝子プロモーター下にflox配列ではさまれたneo-polyAを挿入し、その直下にDTA遺伝子を挿入したマウスをノックインマウスの作成法に従って作成した。このマウスでは、Creが作用し、flox配列で挟まれたneo遺伝子が排除されると初めてDTAが発現し、細胞死が誘導される。このマウスを、CX3CR1-creマウスと交配し、CX3CR1-cre;遺伝子X-DTAマウスを得ている。今後、CX3CR1-cre;遺伝子X-DTAマウスにおいて腸炎が自然発症するかもしくはDSS/TNBS腸炎に対する感受性を解析する予定である。慢性炎症性腸疾患は、我が国で急激に増加している難治性疾患であり病因の究明および効果的治療法の開発が望まれている。腸管免疫系の恒常性維持機構においてT細胞活性化の抑制機構は重要な役割を担っており、申請研究の開始時には腸管自然免疫細胞にT細胞の増殖を直接的に制御する細胞集団が存在するのかは不明であった。申請書の記載に沿って、23年度には腸管内においてT細胞増殖活性を制御する新規の自然免疫細胞サブセットCX3CR1highCD11b+CD11c+細胞(制御性ミエロイド細胞:Mreg細胞)の同定及び作用機序の解明を行い、Proc Natl Acad Sci USA. (2012)掲載が決定している。腸管組織において、T細胞の活性化を直接的に制御する自然免疫細胞の同定は世界初であり意義深いものと考える。Mreg細胞の機能はIL-10/Stat3シグナル依存的であり、炎症性腸疾患を自然発症するLysM-cre;Stat3flox/floxマウスへの野生型Mreg細胞投与が腸炎の症状を改善することより、Mreg細胞の機能不全がIBD発症に関与すること明らかにした。これらの知見を基にIBD治療法開発への応用が期待されている。また、申請書の記載予定よりも早く、in vivoにおけるMreg細胞の動態・機能解析を目的として、Mreg細胞特異的蛍光マウスやMreg細胞特異的欠損マウスを作成のための予備実験を開始した。我々はこれまでにDNAマイクロアレイ解析およびQ-PCR法により、大腸粘膜固有層内細胞においてMreg細胞にのみに高発現する遺伝子Xを同定した。今後は、遺伝子Xのプロモーター下に蛍光遺伝子venusもしくはジフテリアトキシンA(DTA)遺伝子を挿入したノックインマウスの作成を行う予定である。申請書に記載した、平成24年度実験計画1in vitroにおける分子機構の同定、2『選択的細胞ノックアウト法』を利用したCX3CR1highCD11b+CD11c+細胞欠損マウス作成の開始をともに行うことができているため。

2に関しては、当初対象としていた遺伝子Xのプロモーターを用いたCreマウスを作製したがタンパク質レベルでのCreの発現が確認されなかったことより、DNAマイクロアレイの結果を参考にして、新規遺伝子プロモーターを標的としたCreマウスの作成を試みている。腸管内においてT細胞増殖活性を制御する新規の自然免疫細胞サブセットCX3CR1highCD11b+CD11c+細胞(制御性ミエロイド細胞:Mreg細胞)の同定及び作用機序の解明を行いProc Natl Acad Sci USA. (2012)掲載が決定しており、当初計画した予定よりも早くMreg細胞特異的蛍光マウスやMreg細胞特異的欠損マウス作成を行うことができているため。「選択的細胞ノックアウト法」によりCX3CR1highCD11b+CD11c+細胞欠失マウスを作成する。まず、DNAマイクロアレイで発現の高かった遺伝子Yプロモーター下にCreを発現させたマウスを作成する。一方、CD11c, CD11bの遺伝子座に、flox配列ではさまれたneo-polyAを挿入し、その直下にDTA遺伝子を挿入したマウスをノックインマウスの作成法に従って作成する。このマウスでは、Creが作用し、flox配列で挟まれたneo遺伝子が排除されると初めてDTAが発現し、細胞死が誘導される。この両マウスを使用し、Y-cre;CD11c-DTAおよびY-cre;CD11b-DTAマウスを作成し、CX3CR1highCD11b+CD11c+細胞欠失マウスを作成する。次に、CX3CR1highCD11b+CD11c+マウスで、腸管粘膜固有層でのTh1/Th2/Th17あるいは制御性T細胞の数を解析する。また、腸管炎症が自然発症するかを観察するとともに、デキストラン硫酸塩により腸管炎症を誘導し、その病態変化を観察する。さらに、IL-17, IFN-&#61543;, IL-10などの遺伝子に蛍光たんぱく質遺伝子を組み込んだマウスを用いて、CX3CR1highCD11b+CD11c+細胞欠失マウスにおいて定常状態でこれら各自然免疫細胞サブセットおよびエフェクターT細胞、制御性T細胞が、腸管粘膜固有層のどの部位に局在しているかを解析する。また、上述の腸管炎症誘導の際にどのような動態を示すのかを、二光子励起顕微鏡を用いて観察する。これらの解析により、個体レベルでの腸管免疫系におけるCX3CR1highCD11b+CD11c+細胞の機能を明らかにする。(1)Mreg細胞特異的欠損マウスの作成;CD11c-DTRマウスと同様の方法でX遺伝子座にflox/neo-polyA/flox配列を挿入し、その直下にジフテリアトキシンA(DTA)遺伝子を挿入したノックインマウスの作成を行う。Mreg細胞はミエロイド系細胞であるため、作成したX gene-DTAマウスをLysM-creマウスと交配させることによりMreg細胞を特異的に欠損させたマウスを作成する。(2)Mreg細胞特異的蛍光マウスの作成;Mreg細胞特異的欠損マウスと同様の構築でDTA遺伝子をVenus遺伝子に置換しMreg
生理学的眼球運動検査による脊髄小脳変性症の平衡機能評価

6名のSpinocerebellar ataxia type 6(以下SCA6)患者と6名の健常人を対象に視線運動の解析・検討を行った。頭部を椅子に固定した状態では、smooth pursuit, VOR in thedark, VOR-cancellationの3課題を行った。Smooth pursuit課題は全てのSCA6患者において障害されていた。VOR in the dark, VOR-cancellation課題は重症度の強い患者においては困難であったが、全体の平均では健常者と有意差はなかった。頭部を固定せず自由に動かせる状態では、1.自由に視標を追跡するcomfortable condition、2.頭部と同期したレーザーポインタで視標を追跡するhead-laser task、3.頭部運動を主体として視標を追跡するuse-head taskの3つの課題について検討した。Comfortable taskではSCA6患者も健常者も頭部運動をほとんど用いない、眼球運動主体の視線運動をしており、SCA6は眼球利得が低いため、視線利得としては有意に障害されている結果であった。Head-laser taskとuse-headtaskではいずれも頭部利得の高い視線運動を行っていたが、頭部運動が大きくなるほど前庭動眼反射抑制が困難となる傾向にあった。そのため、頭部利得が相対的に低かったHead-lasertaskでは健常者との間に視線利得に有意差を認めなかったがuse-headtaskでは有意差を認めた。以上の結果より、小脳失調を認めるSCA6においては、頭部のなめらかな運動は障害されず頭部利得は保たれていたが、頭部と眼球の共同運動である視線運動においては有意に障害される結果であった。遺伝子学的検査によって診断されたSpinocerebellar ataxia type 6(以後SCA6)患者7名を対象にage-matchingした健常人との比較検討を行っている。まず、臨床学的に失調の重症度を国際分類であるICARSに基づいて判定した。その後、当科外来平衡機能検査室においてsaccade, smooth pursuitの測定および空間速度認知に関する課題を2つ計測している。解析はsaccade, smooth pursuitに関しては利得の平均を健常群と比較、速度認知課題は速度の短期記憶および再現を主題としたものを様々な異なる速度を用いて、分散の差を比較検討した。現在までの解析の結果では、臨床学的重症度とsaccade, smooth pursuitの利得の間に相関を認めるものの、それらと空間速度認知の間に明らかな相関は認めていない。このことは、空間速度認知は他の症状と異なる病態機序によって起こっている可能性を示唆している。また、saccadeの利得では健常群と差はないが、smooth pursuitでは有意差を認めた。空間速度認知課題では、いずれの課題においても空間上5°/sの速度を境界にして健常群との有意差を認める傾向にあり、5°/s以下の速度では健常群と有意差を認めず、それ以上では有意差を認める結果であった。今後さらに、この速度に近い速度での計測を重ねるとともに、眼球運動障害の影響を見るために、固視時と非固視時の比較検討する予定である。
顎関節における生理学的変調:顎位,早期接触,加齢

臼歯早期接触による顎関節領域での機能的変化を解明し、さらには病的状態や加齢の影響を比較するため、まずラット顎関節の生理的状態での応答特性を電気生理学的に検討した。実験に際しては、歯根膜機械受容器の研究で用いてきた、in vitro下顎-神経標本をもとに改良した、in vitro顎関節-神経標本を新たに開発した。動物舎にて飼育された、6週から7週齢のウィスター系雄性成熟ラットを用い、in vitro顎関節-神経標本を作製した。記録部位として耳介側頭神経から微小神経電図法の手法に従いタングステン針電極を用いて単一神経線維の活動電位を細胞外誘導して記録を行った。特に顎関節領域の機械受容器の方向特性について比較検討を行った。ラット下顎骨を吻側・尾側・腹側・背側の4方向に偏位させた場合の、顎関節機械受容器の方向特異性は見られなかった。次に恒常的に顎位を偏位させるための装置や偏位させる場合の顎関節領域の機械受容器の応答特性の変化について検討を加えた。まず、ダイナミックかつ持続的な変化に対する反応を見るために、後方への偏位を想定しTi-Niコイルスプリングを用いたヘッドギアーを作製した。ラットがこの装置を装着した状態で、どの様な変化が顎関節の機械受容器に生じるか検討を開始した。同時にラット臼歯にレジンを盛り、人為的な臼歯早期接触を作り出し、切歯を削合し続け開咬状態を維持したモデルを作製し、経時的に咬合の変化を観察を開始している。
変動水圧による砂地盤の強度低下と構造物の破壊に関する研究

1.変動水圧作用下における構造物周辺の地盤内応力分布特性について鉛直2次元砂層モデルを対象として基礎的な解析をおこない、変動水圧特性および砂層材料特性に対する応力変化特性を明らかにした。2.実際的な構造物として防波堤をとりあげ波浪による周辺地盤内の応力分布特性を解析し、円弧すべり解析により防波堤の安定性の評価を行った。その結果、波浪による水圧変動を考慮しない場合に較べて安全率が著しく低下することが示された。3.変動水圧作用下における構造物の破壊現象の例としてコンクリートブロックの沈下現象をとりあげ、その特性を実験的に検討し、変動水圧特性および構造物特性と沈下特性との関連を明らかにした。4.床固め下流部等に設置される護床工の沈下特性に対する鉛直上向浸透流の影響を実験的に検討し、浸透流が存在する場合には沈下量が著しく増大することが示された。5.段落ち直下流部の局所洗掘現象に関して理論的かつ実験的な検討を行った。その結果、段落ち下流部の洗掘現象に密接に関与する流れのパターンとしてもぐり噴流状態の流れと波状跳水状態の流れが存在するが、パターンの分かれる限界は上下流水位差が限界水深の2倍になる水理条件のところであり、それ以上になるともぐり噴流になることを明らかにした。また、非平衝式を用いた洗掘モデルにより、非定常洗掘過程が説明され、さらに、平衝最大洗掘深が高い精度で予測できることを明らかにした。6.海岸堤防前面の洗掘機構解明のための基礎として、現地海岸において波の遡上とそれに伴う砂層内の間隙水圧変化の測定を行った。その結果、砂層内においては短周期成分の振幅減衰が大きいこと、砂層表面近傍で間隙水が鉛直上向きに流れ、砂層の液状化現象が生起している可能性が高いことが明らかにされた。
トランスジェニックマウスを用いたp210^<bcr/abl>の機能解析

Philadelphia染色体(以下Ph^1染色体)は、慢性骨髄性白血病(CML)の約95%、急性リンパ性白血病の10-20%に認められる転座型染色体異常である。これは9番染色体との相互転座t (9; 22) (q34; q11)により生じ、この結果9番染色体上のc-abl遺伝子と22番染色体上のbcr遺伝子との融合遺伝子産物p210^<bcr/abl>が産生される事が病態の本質であると考えられる。我々はメタロチオネインをプロモーターとして用い、p210^<bcr/abl>のトランスジェニックマウス(以下MTp210^<bcr/abl>)を作製した。得られた6匹のファウンダーマウスのうち2匹に白血病の発症を認め、そのうち1匹から子孫に再現性良く白血病を発症する1ラインが確立された。しかし、白血病を発症するのは特定の1ラインのみであり、また発症する白血病は表面抗原及び遺伝子再構成による解析では全てT細胞性白血病に分類される。この特定の1ラインにのみ白血病が再現性良く起こる原因、及び発症する白血病が全てT細胞系である原因を導入したp210^<bcr/abl>の発現の組織分布の点から検討した。その結果、白血病を発症しないラインでは脳、腎臓といった非造血組織でのみp210^<bcr/abl>の発現が認められたのに対し、T細胞性白血病を発症するラインでは非造血組織である肺、心臓、肝臓、腎臓と共に造血組織である胸腺にp210^<bcr/abl>の高い発現を認めた。この結果は、胸腺における高いp210^<bcr/abl>の発現が繰り返すT細胞性白血病の原因となっている事を示唆すると共にp210^<bcr/abl>の生体内における造腫瘍性は造血組織特異的である事をin vivoの系を用いて初めて証明したものと言え、Ph^1染色体が血液系腫瘍に限って認められるという実際の臨床データにモデルマウスの面から根拠を与えるものである。
運動制御と学習に関わる感覚運動統合過程の神経基盤の解明

運動を遂行するとき末梢からの体性感覚情報の処理は,運動関連領域からのトップダウン的な修飾作用を受ける.この修飾作用は運動の遂行や運動課題の学習に応じて最適な刺激処理(可塑的な変化)が起こると考えられるが,その詳細なメカニズムは不明な点が残されている.そこで本研究では,体性感覚領域での感覚運動統合過程を調べるために,脳磁図(MEG)を用いて,二次体性感覚野のニューロン活動への随意運動遂行に関連するトップダウン的制御に注目した.身体の各部位からのフィードバック情報である体性感覚情報は,身体部位の反対側の一次体性感覚野に入力し,その後に両側半球の二次体性感覚野へと伝わる.一次体性感覚野の活動は,運動の遂行に関連して筋収縮部位からの入力には抑制がみられるが,反対側の非運動肢からの入力では変化がみられなかった.一方,両働性の活動がみられる二次体性感覚野では,運動肢と同側半球の二次体性感覚野の活動が増大した.皮質処理の初期過程である一次体性感覚野では,活動は抑制されるのに対して,より高次の感覚中枢である二次体性感覚野では促通することから,運動の遂行に対する感覚運動統合過程は,領域特異的な役割が存在することが分かった.また二次体性感覚野の活動は,必ずしも筋収縮部位からの入力に対して変動を示すものではないため,筋収縮部位からの体性感覚入力のみに変動がみられる一次体性感覚野とは異なり,身体部位間の統合といったより役割を担っていることが示唆される.また本年度には,反復的に磁気刺激を提示して皮質領域の興奮性を操作する経頭蓋磁気刺激法(TMS)を学ぶ事を目的として渡米し,米国の国立衛生研究所(NIH)において経頭蓋磁気刺激と脳波(EEG)を組み合わせて行う実験方法を習得し,現在予備的な実験を行っている.運動を遂行するとき末梢からの体性感覚情報の処理は,運動関連領域からのトップダウン的な修飾作用を受ける.この修飾作用は運動の遂行や運動課題の学習に応じて最適な刺激処理(可塑的な変化)が起こると考えられるが,その詳細なメカニズムは不明な点が残されている.そこで本研究では,体性感覚領域での感覚運動統合過程を調べるために,脳磁図(MEG)を用いて,二次体性感覚野のニューロン活動への随意運動遂行に関連するトップダウン的制御に注目した.身体の各部位からのフィードバック情報である体性感覚情報は,身体部位の反対側の一次体性感覚野に入力し,その後に両側半球の二次体性感覚野へと伝わる.一次体性感覚野の活動は,運動の遂行に関連して筋収縮部位からの入力には抑制がみられるが,反対側の非運動肢からの入力では変化がみられなかった.一方,両働性の活動がみられる二次体性感覚野では,運動肢と同側半球の二次体性感覚野の活動が増大した.皮質処理の初期過程である一次体性感覚野では,活動は抑制されるのに対して,より高次の感覚中枢である二次体性感覚野では促通することから,運動の遂行に対する感覚運動統合過程は,領域特異的な役割が存在することが分かった.また二次体性感覚野の活動は,必ずしも筋収縮部位からの入力に対して変動を示すものではないため,筋収縮部位からの体性感覚入力のみに変動がみられる一次体性感覚野とは異なり,身体部位間の統合といったより役割を担っていることが示唆される.また本年度には,反復的に磁気刺激を提示して皮質領域の興奮性を操作する経頭蓋磁気刺激法(TMS)を学ぶ事を目的として渡米し,米国の国立衛生研究所(NIH)において経頭蓋磁気刺激と脳波(EEG)を組み合わせて行う実験方法を習得し,現在予備的な実験を行っている.
バイオマス由来ポリオールの連続的シグマトロピー転位反応の開発と応用

医薬品をはじめとし、有機合成により安定供給が望まれる化合物は、近年その分子構造が急激に複雑化している。特に分子中の不斉点の数が大幅に増加しており、光学活性物質の安定的供給は性急な課題である。光学活性物質を合成する際の出発原料として、安価かつ大量に入手可能なバイオマス(糖、酒石酸など)が長年用いられてきた。しかし、バイオマス中には類似の水酸基構造が複数個存在し、その区別化のために、多数の保護基の着脱が不可欠であった。そのため、反応工程数の増加が避けられず、複雑化合物への応用に問題点をかかえていた。そこで、申請者はバイオマス由来の3つの水酸基を同時に利用する独自の連続転位反応を計画した。本研究では、バイオマス由来のトリオールを転位中に区別化する方法論の確立と、本法を利用した天然物合成を目的とした。本年度は、1バイオマス由来のトリオールを同時に利用する連続転位反応の開発、2開発した反応を用いた天然物合成の2点に取り組んだ。1: D-ガラクトースよりわずか2工程でトリオールを調製し、連続転位反応を検討した。その結果、3連続Overman転位体、3連続Claisen転位体を合成できた。本法により、同一のトリオールから、3つの連続したC-OならびにC-C結合を、それぞれ導入できた。2:昨年度、我々は連続的Overman/Claisen転位を鍵反応とした(+)-ネオステニンの全合成を報告している。本研究をさらに発展させるべく、ネオステニン全合成の終盤の化合物を共通中間体に設定し、類縁体(-)-ステニンの全合成を目指した。その結果、共通中間体より6工程にて、(-)-ステニンの全合成を達成できた。28年度が最終年度であるため、記入しない。本年度は、1バイオマス由来のトリオールを同時に利用する連続転位反応の開発、2開発した反応を用いた天然物合成、の2点に取り組んだ。1: D-グルコースよりわずか2工程でトリオールを調製し、連続転位反応を検討した。その結果、2連続不斉中心の構築に成功した。現在、3回目のシグマトロピー転位の適用を検討している。2:開発した連続的Overman/Claisen転位を鍵反応とした、生物活性アルカロイド(+)-ネオステニンの全合成に着手し、これを達成した。本法により、バイオマス由来の2つの水酸基を転位中に区別化し、同一反応容器内で2種類の異なる転位の適用が実現できた。鎖状の基質にて4つの不斉点を構築する本合成戦略は、ネオステニンの全合成における極めて独創的なアプローチである。また、ネオステニンは過去に2つの全合成例が報告されているが、いずれもラセミ体の合成であり、本合成が世界初の天然型光学活性体の全合成例となった。トリオールに対し、2種類の異なる転位を適用できた。また、開発した連続的Overman/Claisen転位により、天然物に対応する含窒素2連続不斉中心を一挙に構築し、(+)-ネオステニンの世界初となる不斉全合成を達成した。以上より、本研究課題はおおむね順調に進展していると判断した。

本法により、同一のトリオールから、3つの連続したC-OならびにC-C結合を、それぞれ導入できた。2:昨年度、我々は連続的Overman/Claisen転位を鍵反応とした(+)-ネオステニンの全合成を報告している。本研究をさらに発展させるべく、ネオステニン全合成の終盤の化合物を共通中間体に設定し、類縁体(-)-ステニンの全合成を目指した。その結果、共通中間体より6工程にて、(-)-ステニンの全合成を達成できた。トリオールに対する3回目の転位の適用、ならびに3回の連続転位反応のワンポット化に取り組む。同時に、開発した方法論の更なる有用性を示すべく、既に全合成を達成したネオステニンの類縁天然物の網羅的全合成を目指す。28年度が最終年度であるため、記入しない。
ゲノム・エピゲノム異常領域を指標とし肺癌治療を目指した新規標的遺伝子の同定と解析

癌による死因の最大の原因である肺癌の遺伝子異常を、マイクロアレイを用いて解析した。肺がん細胞株において遺伝子増幅および欠失が認められる染色体領域を明らかにし、遺伝子増幅領域の中から増幅に伴い発現が亢進している新規の肺癌関連遺伝子を同定した。また、肺がん臨床検体を用いた解析を行い、診断・治療に関わる因子の探索を進めた。肺癌においては、増幅・欠失などのゲノム異常とDNAメチル化・ヒストン修飾の異常により発現変化を起こすエピゲノム異常の両者が蓄積して悪性形質を獲得している。そこで、主に日本人由来の肺癌細胞株49株に対してin-houseゲノムアレイによりこれまでに絞り込んだ異常領域に対し、肺癌診断ツール・治療標的としての有用性を検討し、肺癌診断用のアレイの開発に向けた遺伝子のカタログ化を進めることを目的とした。今年度に実施した研究成果として、ゲノム解析では、1.肺小細胞癌に見出した第1番染色体短腕の新規遺伝子増幅領域に着目し、標的遺伝子としてTRIM33を同定した。肺小細胞癌細胞株にTRIM33を強制発現させると細胞増殖能は亢進し、反対にsiRNAによりノックダウンすると細胞増殖能は低下したため、TRIM33は治療標的として有用であると思われた。2.これまでのゲノム解析から、X染色体上にコピー数増加を認めた細胞株は49株中23株あった。これらにつき、X染色体を隙間なくカバーしたMCG X-tiling Arrayを用いてより詳細なゲノムコピー数異常解析を施行した。その結果、肺癌関連遺伝子探索のランドマークとなる遺伝子増幅・ホモ欠失を各4領域に検出した。一方、エピゲノム解析では、これまで確立してきた解析方法であるChIP on BAC-array法等が、癌の異常メチル化や神経疾患に関連したエピゲノム異常の探索において成果を上げている。以上により、今年度の研究目的は達成されたと考える。肺癌においては、増幅・欠失などのゲノム異常とDNAメチル化・ヒストン修飾などのエピゲノム異常の両者が蓄積して悪性形質を獲得している。そこで、主に日本人由来の肺癌検体を用いてゲノムアレイによる解析を行い、検出した異常領域に対し、肺癌診断ツール・治療標的としての有用性を検討し、肺癌診断用のアレイの開発に向けた遺伝子のカタログ化を進めることを目的とした。今年度に実施した研究成果として、ゲノム解析では、1.日本人由来の肺癌細胞株49株のゲノム解析により、肺小細胞癌に見出した第1番染色体短腕の新規遺伝子増幅領域の標的遺伝子TRIM33につき解析を進めた。TRIM33は、肺小細胞癌のみならず、肺非小細胞癌においても約半数の症例で非腫瘍部と比較して腫瘍部において発現が亢進していた。肺腺癌細胞株においてsiRNAによりTRIM33をノックダウンすると細胞の増殖は抑制されたため、TRIM33は肺非小細胞癌においても治療標的として有用であると思われた。またTRIM33は、乳癌など癌腫を超えて癌関連遺伝子として働いていると考えられた。2.細胞株のみならず肺腺癌臨床検体についてもゲノムコピー数解析をオリゴアレイを用いて行った。新規の遺伝子増幅領域が検出され、増幅に伴う発現亢進を示す新規肺癌関連遺伝子候補が同定された。一方、エピゲノム解析では、これまで確立してきたBAC-arrayを用いたエピゲノム解析法が、癌の異常メチル化の探索において成果を上げている。1.肺小細胞癌における1番染色体の新規増幅領域の標的として同定したTRIM33に関し、トランスジェニックベクターを作成し、TRIM33のトランスジェニックマウスの作成を進めている。2.非小細胞肺癌手術検体を用いたアレイCGH解析から3q26にlog2ratio 3.9の増幅を検出し、発生時や幹細胞において働くSOX2が、増幅に伴う発現亢進をしていることを確認した。肺腺癌120症例につき既知の分子マーカー(EGFR変異、KRAS変異、p53変異)の評価を行い、他の臨床病理学的因子を含めてSOX2発現レベルとの関連を調べたが、有意差は認められなかった。次に、縦隔リンパ節転移を認める肺癌手術症例から肺原発巣およびリンパ節転移巣を採取し、アレイCGHによりゲノムコピー数変化を比較した。その結果、リンパ節転移巣におけるゲノム変化は、原発巣の変化を非常に良く反映していることが確認できた。そこで、超音波気管支鏡下に未治療の肺小細胞癌リンパ節転移検体を採取し、アレイCGHによりゲノムコピー数解析を行った。その結果、1p,1q,3q,5p,6p,6q,8q,12q,17q,18q,19pに高頻度のコピー数増加を認めた。また、3p,4q,5q,10q,13q,15q,16p,16q,17p,22qに高頻度のコピー数減少を認めた。これらの結果は、以前行った肺小細胞癌細胞株での解析結果と良く一致していた。また、新規の増幅およびホモ欠失領域も検出され、標的となる遺伝子の同定を進めている。

3.当院における2007年から2009年までの非小細胞癌手術症例および気管支鏡生検症例404例につきALK免疫染色を行った結果、15例が陽性であった。そのうち10症例につきアレイCGHによりゲノムコピー数解析を行った。その結果、コピー数変化を認めた染色体領域数は020であった。ALK阻害薬の効果に関わる遺伝子の同定を進めている。
場の量子論および統計力学における数学的諸問題と無限次元解析

著者は,ボソンフェルミオンフォック空間上にドラーム型の作用素,ディラック型作用素,ラプラシアン等を導入し,これらの作用素をもとにした無限次元解析の理論を展開してきた(1987).今年度の研究も主にこの分野に関わるものであり,次に述べる成果が得られた:(i)非有界な相互作用項をもつディラック作用素およびラプラシアンのあるクラスに対して,その本質的自己共役性を証明した(以前の研究では,ディラック作用素の本質的自己共役性は仮定して理論が展開されていた.相互作用項が有界な場合は,この仮定はみたされることは容易にわかる.);(ii)上述の,著者の創始になる無限次元解析の理論の総合報告を書いた(雑誌「数学」(日本数学会編集,岩波書店),46巻(1994),pp.1-10,に掲載);(iii)この無限次元解析の形式を拡大し,応用することにより,P(φ)型のスカラー量子場の理論が超対称的な場の量子論へ拡大されることを構成的に証明した.これらの研究と関連して,次の研究も遂行された:(iv)場の量子論の数学的理論における歴史と現時点における問題点を展望する総合報告を書いた(雑誌「応用数理」(日本応用数理学会編集,岩波書店),3巻(1993),pp,34-48,に掲載);(v)部分的な破れをもつCCRの表現の研究.これは,外電磁場の中にある量子系のCCRの表現の問題であるが,まだ,最終的な結果が得られていない.(vi)反可換な自己共役作用素の研究(特にクリフォード代数との関連における)とディラック作用素の非相対論的極限への応用.著者は,ボソンフェルミオンフォック空間上にドラーム型の作用素,ディラック型作用素,ラプラシアン等を導入し,これらの作用素をもとにした無限次元解析の理論を展開してきた(1987).今年度の研究も主にこの分野に関わるものであり,次に述べる成果が得られた:(i)非有界な相互作用項をもつディラック作用素およびラプラシアンのあるクラスに対して,その本質的自己共役性を証明した(以前の研究では,ディラック作用素の本質的自己共役性は仮定して理論が展開されていた.相互作用項が有界な場合は,この仮定はみたされることは容易にわかる.);(ii)上述の,著者の創始になる無限次元解析の理論の総合報告を書いた(雑誌「数学」(日本数学会編集,岩波書店),46巻(1994),pp.1-10,に掲載);(iii)この無限次元解析の形式を拡大し,応用することにより,P(φ)型のスカラー量子場の理論が超対称的な場の量子論へ拡大されることを構成的に証明した.これらの研究と関連して,次の研究も遂行された:(iv)場の量子論の数学的理論における歴史と現時点における問題点を展望する総合報告を書いた(雑誌「応用数理」(日本応用数理学会編集,岩波書店),3巻(1993),pp,34-48,に掲載);(v)部分的な破れをもつCCRの表現の研究.これは,外電磁場の中にある量子系のCCRの表現の問題であるが,まだ,最終的な結果が得られていない.(vi)反可換な自己共役作用素の研究(特にクリフォード代数との関連における)とディラック作用素の非相対論的極限への応用.
担癌生体における免疫不全解明に関する基礎的検討-抗原提供、認識機構に関する研究-

消化器癌患者などの担癌生体ではmitogen responceなどのT細胞機能不全が見られるがこれが何に起因しているかは不明である。そこで今回、癌患者免疫不全発症機構の解明と消化器癌免疫療法開発の基礎研究となることを目的として、抗原提示、認識機構を検討した。まずB細胞腫瘍であるA20-HLをAPCとし、B細胞における抗原のprocessing過程、および、MHCclassIIとの会合過程を検討するため、抗原にOVA,TNP-OVAを用いてさらにEmetinを阻害剤として、OVAに特異的に反応するT clone(42・6A)によるIL-2産生量の変化を指標にして検討した。その結果、EmetinはOVAの抗原提示を特異的に阻害し、TNP-OVAの提示には影響が見られなかった。これは、pinocytosisによるprocessingとレセプターを介するprocessingとの間に何らかの違いがあることを示唆している。そこで次にこのT cloneが認識するOVA_<323・339>のアナログペプチドであるAKペプチドを用いて同様に検討した。その結果A20-HL細胞をOVA,TNP-OVAで抗原パルスし、これに42-6Aを反応させるとIL-2産生が見られるものの、抗原パルス時にAK peptideを6μM添加しておくとOVAに対するIL-2産生は抑制されたものの、TNP-OVAに対しては抑制が見られなかった。また、AKペプチドは他の抗原に特異的なT cloneの反応性を阻害しないこと、^<125>I-AKペプチドが20-HL表面のMHC classIIに結合していること、A20-HL細胞内での抗原processing過程には影響していないことなどから、Emetinによる阻害と同様の結果が想定された。そこで一般に細胞表面に存在するとされるTransferrinレセプターを利用した同様の試みを行ったが、transferrin-OVA作製は非常に困難であり、有意な結果が得られなかった。現在、palmitate-OVAを作製してさらに詳細に検討を行っている。癌には癌抗原がありこれが提示、認識されて増殖すると思われるため、この基礎研究を癌発生の基礎研究として推進する予定である。
スラヴ語スラヴ文学の比較対照研究の課題と方法

本研究課題は,5年ごとに行われる国際スラヴィスト会議の開催に合わせて,同会議に参加する日本代表団の報告論文の取りまとめとプレプリントの作成,および,日本におけるスラヴ語スラヴ文学研究の業績の網羅的調査とそれに基づいた研究文献目録の作成を目的とするものである.1998年度は,1993年から1998年にかけての5年間を対象に,日本全国の研究者(含む在日外国人研究者)延べ200名にアンケート調査を実施,合わせて,各種学術雑誌・刊行物の調査を行い『日本におけるスラヴ語スラヴ文学研究1993-1998』を編集刊行した.本研究課題は,5年ごとに行われる国際スラヴィスト会議の開催に合わせて,同会議に参加する日本代表団の報告論文の取りまとめとプレプリントの作成,および,日本におけるスラヴ語スラヴ文学研究の業績の網羅的調査とそれに基づいた研究文献目録の作成を目的とするものである.1998年度は,1993年から1998年にかけての5年間を対象に,日本全国の研究者(含む在日外国人研究者)延べ200名にアンケート調査を実施,合わせて,各種学術雑誌・刊行物の調査を行い『日本におけるスラヴ語スラヴ文学研究1993-1998』を編集刊行した.平成9年度における研究実績は以下の通りである。1.計画に従って4グループで課題を分担して研究を行い、全体会議において研究の進捗状況を確認・調整し、来年度の研究継続の準備を整えた。2.平成9年11月8日に東京で全体会議ならびに研究会を実施し、次の7編の報告が行われ、質疑・意見交換がなされた。「ロシア語における二重子音」(佐藤純一)、「最近のチェコにおけるスラヴ研究の状況」(千野栄一)、「ポーランド文学の現在」(沼野充義)、「方言分布から見たマケドニア語における人称代名詞の用法」(中島由美)、「ポーランド語の準男性人間名詞」(石井哲士郎)、「演劇性の諸相-エヴレイノフ、ピランデッロ、アルト-」(村田真一)、「アダム・ミツケェビッチの出自をめぐる仮設とその文学史的意義」(坂倉千鶴)。本研究課題は,5年ごとに行われる国際スラヴィスト会議の開催に合わせて,同会議に参加する日本代表団の報告論文の取りまとめとプレプリントの作成,および,日本におけるスラヴ語スラブ文学研究の業績の網羅的調査とそれに基づいた研究文献目録の作成を目的とするものである.以上の調査結果を取りまとめて,「スラヴ一般」・「東スラヴ」・「西スラヴ」・「南スラブ」に分類し,それぞれについて「言語」・「文学」・「文化一般」の3分野に下位分類,合わせて歴史的時代区分を加味した上で,著者別の索引を巻末に付した文献目録『日本におけるスラヴ語学文学研究1993-1998』を編集刊行した.
映画・ドラマを教材とした韓国語教育の基礎研究

本研究は韓国語教育における映画・ドラマの活用に対して実証的な側面から研究し、より効果的な指導を目指すものである。研究期間中には2つの授業モデルで合計4種類の教材を作成した。その教材を使用して6つのクラス、合計141名分の学習効果に関するデータを収集した。統制群のデータとの比較から、映画を教材とした授業は特にリスニング能力向上において顕著な効果が見られた。さらに、学習者の主観的に学習効果があったと感じる割合が高く、学習意欲も維持する効果があることが明らかになった。本研究は、韓国映画・ドラマを語学教材として活用するための基礎となるデータを整備し、授業実践を通じて効果を検証するものである。客観的なデータに基づいた指導法を確立することにより、質の高い韓国語教育を目指す。韓国語学習者の動機付けには映画・ドラマが大きな影響を与えている。本研究の調査では、映画・ドラマを動機付けとして挙げる学習者が全体の35%に上った。映画・ドラマは学習者が日常において触れる機会が多く、影響力の強いメディアである。言語教育の側面から見ると、映画・ドラマでは音声だけでなく視覚からも多くの情報を得られるため、非言語的なコミュニケーションや文化的な背景までを同時に学習することができる。このような優れた素材を教材として活用できれば、大きな学習効果が期待できる。本研究ではこのテーマに対し、1)基礎的資料の整備、2)授業モデルの立案・教材化、3)学習効果に対する調査という3つの側面からアプローチする。1)基礎的資料の整備は、a.研究文献および映像資料の収集、b.作品・場面選択の基準の明確化、c.授業に活用可能な作品・場面のデータベース化の3つの項目からなる。2)授業モデルの立案・教材化は整備した資料を活用し、実際の授業を念頭において構想を具現化するものであり、d.シラバスデザイン、e.教材作成の2つの項目からなる。3)学習効果に対する調査は授業モデルを実践した効果をアンケートとテストにより検証するものであり、f.学習者の動機付けと学習意欲の変化とg.言語能力の変化を測定することで学習効果を計る。時系列では、1)基礎的資料の整備→2)授業モデルの立案・教材化→3)学習効果に対する調査、という順序で進めて行く。学習効果の調査結果をフィードバックし、授業モデルと教材の改善を重ねていくことにより、3年の研究期間で指導法を確立することを目指す。研究期間中には2つの授業モデルに基づき4種類の教材を作成し、合計7クラス160名の学習者のデータを収集して学習効果の分析を行った。期間中の成果としては、論文4本(掲載決定も含む)をまとめ、学会等で6件の発表を行った。最終年度には本研究で得られたデータとその分析結果をまとめた研究報告書を作成した。報告書では、授業モデルと学習効果の関係性、および学習動機と学習効果の関係性という2つの観点から分析を行っており、映画教材の効果的な活用法について論じている。また、韓国語教育に活用可能な映画作品・場面に関するデータを整理し、順次ウェブ上で公開している。この他に、本研究テーマと間接的に関わる言語学的な研究として、平成26年刊行予定の国立国語研究所「述語構造の意味範疇の普遍性と多様性」プロジェクトの論集に「韓国語の語彙的自他交替:接辞-i/hi/li/ki-による派生の双方向性」というタイトルで論文掲載が決定している。本研究の結果、映画教材授業が学習動機の保持と学力向上という2つの側面で韓国語学習に肯定的な影響を与えていることが明らかになった。映画教材授業は従来型の授業と対比して、特に聞き取り能力の向上が顕著である。さらに、学習者の主観的な学習効果が高く、学習に対する意欲も保持する効果がある。本研究は韓国語の映画教材授業という先行研究の少ない分野において、複数の授業モデルを提示し、学習効果を実証的に分析している点に意義がある。管見では、韓国の先行研究においても映画教材授業の実証的な分析はなされていないため、本研究が提示するデータの重要性は非常に高い。したがって、本研究はこの分野の取り組みを発展させていく上での基礎を形成できたと考える。申請者の調査では、映画・ドラマを動機付けとして挙げる学習者が全体の35%に上った。