hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
日本刀の「美」の科学的解明とそれに基づく新しい作刀評価・設計法の提案と実証

平成30年度における本申請研究は,国宝や重要文化財に指定される日本刀,並びに現代刀匠による新作日本刀のそれぞれの図録を参照することを通じて,デジタルアーカイブ分析に基づく「形状美」,すなわち,日本刀形状の特徴抽出を継続して実施した.加えて,新作日本刀を対象に地鉄の要素が評価(審査)結果に及ぼす影響の解明を試み,これらの結果を踏まえて,新作日本刀の2次元設計,並びに現代刀匠と刀剣研師の協力による第1次作刀に成功した.具体的な実施項目は次のとおりである.(1)日本刀の「形状」「反り」「刃文」「地鉄」「樋」等を対象にしたデジタルアーカイブの継続と特徴分析及び解明:日本刀の製作を特徴づける一つの作刀法である「相州伝」に着目し,国宝や重要文化財に指定される日本刀の特徴をレーダチャートによって解析するとともに,現代刀匠による作品も同様に解析した.それを通じて,現代における審査会において重要視されると考えられるポイントを継続して整理した.とりわけ,地鉄については現在刀匠による作品を評価する講評文のテキストマイニング分析を試みることによって,審査結果に及ぼす地鉄の重要要素の抽出を行った.(2)新作日本刀の作刀に資する科学的考察に基づく押し形の設計と第1次作刀の実施:現代刀匠による多数の作品と審査結果を数値解析と統計(加重平均法)の観点から考察することを通じて,科学的アプローチによる押し形設計を試みた.具体的には,現代刀匠による新作日本刀の図録データから日本刀の形状について,「内挿法」と「近似法」の双方を適宜用いることによって,「樋」を除く全ての要素に至るまでの2次元設計(図面作成)に成功した.そして,設計図面,並びに上記(1)における地鉄の分析結果を作刀を依頼する刀匠並びに刀剣研師へ提出し,第1次作刀に成功した.そして,本年5月に開催される日本刀展覧会に向けた審査出品を果たした.研究実績の概要で記したとおり,おおむね順調に進展している.とりわけ,平成30年度における最大の課題である科学的考察に基づく新作日本刀の設計と第1次作刀に成功し,現在,審査出品を果たしたことは大きな成果であると判断している.最終年度となる平成31年度(令和元年度)においては第1次作刀の審査結果を踏まえた第2次作刀に挑むことになる.申請調書にも記載したとおり,多様な専門を有する人的ネットワークを活用しつつ,独創性ある本研究を進展させる.平成29年度における本申請研究は,日本刀の図録からのデジタルアーカイブ分析に基づく「形状美」,すなわち形状の特徴抽出を図るとともに,全体バランスの最適化としての「機能美」に取り組んだ.具体的な実施内容は以下のとおりである.(1)日本刀の「形状」「反り」「刃文」「地鉄」「樋」等のデジタルアーカイブと特徴分析・解明:日本刀の特徴の一つ「相州伝」に着目し,国宝や重要文化財に指定される日本刀の特徴をレーダチャートによって解析するとともに,現代刀匠による作品も同様に解析した.それを通じて,現代における審査会において重要視されると考えられるポイントを整理した.(2)刀匠・高名評価者・一般人による日本刀の視点(見所)解析:日本刀の知識の異なる方々を対象にして,それぞれがどのような視点をもって日本刀を観察(あるいは鑑賞)されるかを心理科学手法によって明らかにした.具体的にはDEMATEL法とサーストン法の2種類の手法を用いて解析することによって,刀匠と高名評価者,さらには一般人が主観的に評価する日本刀の美しさや魅力としての姿・刃文・地鉄・時代性・品位の相関の可視化に成功した.(3)新作日本刀の作刀に資する押し形の設計:上記(1)の結果に基づいて,現代刀匠による多数の作品と審査結果を数値解析と統計の観点から分析することを通じて,科学による押し形設計を試みた.具体的には刀剣形状を詳細な部分に至るまで高次関数による数式化を自動で行うプログラム開発に成功し,それを用いて統計的な処理を行うことによって,現時点で最適と考えられる押し形を設計した.研究実績の概要で記したとおり,おおむね順調に進展している.作刀依頼に至るまでの研究スケジューリングを調整した結果として,申請調書に記した実施順番と異なる部分(平成30年度実施内容を前倒ししての実施)はあるが,すべて想定の範囲内であり,とりわけ平成29年度(第1年度)において日本刀の科学的アプローチとしての「押し形」設計に至ったことは大きな成果であると判断したい.現在,さらに緻密かつ詳細部位に亘る設計を行っているところである.平成30年度における本申請研究は,国宝や重要文化財に指定される日本刀,並びに現代刀匠による新作日本刀のそれぞれの図録を参照することを通じて,デジタルアーカイブ分析に基づく「形状美」,すなわち,日本刀形状の特徴抽出を継続して実施した.加えて,新作日本刀を対象に地鉄の要素が評価(審査)結果に及ぼす影響の解明を試み,これらの結果を踏まえて,新作日本刀の2次元設計,並びに現代刀匠と刀剣研師の協力による第1次作刀に成功した.具体的な実施項目は次のとおりである.(1)日本刀の「形状」「反り」「刃文」「地鉄」「樋」等を対象にしたデジタルアーカイブの継続と特徴分析及び解明:日本刀の製作を特徴づける一つの作刀法である「相州伝」に着目し,国宝や重要文化財に指定される日本刀の特徴をレーダチャートによって解析するとともに,現代刀匠による作品も同様に解析した.それを通じて,現代における審査会において重要視されると考えられるポイントを継続して整理した.

とりわけ,地鉄については現在刀匠による作品を評価する講評文のテキストマイニング分析を試みることによって,審査結果に及ぼす地鉄の重要要素の抽出を行った.(2)新作日本刀の作刀に資する科学的考察に基づく押し形の設計と第1次作刀の実施:現代刀匠による多数の作品と審査結果を数値解析と統計(加重平均法)の観点から考察することを通じて,科学的アプローチによる押し形設計を試みた.具体的には,現代刀匠による新作日本刀の図録データから日本刀の形状について,「内挿法」と「近似法」の双方を適宜用いることによって,「樋」を除く全ての要素に至るまでの2次元設計(図面作成)に成功した.そして,設計図面,並びに上記(1)における地鉄の分析結果を作刀を依頼する刀匠並びに刀剣研師へ提出し,第1次作刀に成功した.そして,本年5月に開催される日本刀展覧会に向けた審査出品を果たした.研究実績の概要で記したとおり,おおむね順調に進展している.とりわけ,平成30年度における最大の課題である科学的考察に基づく新作日本刀の設計と第1次作刀に成功し,現在,審査出品を果たしたことは大きな成果であると判断している.最終年度となる平成31年度(令和元年度)においては第1次作刀の審査結果を踏まえた第2次作刀に挑むことになる.申請調書にも記載したとおり,多様な専門を有する人的ネットワークを活用しつつ,独創性ある本研究を進展させる.申請調書にも記載したとおり,多様な専門を有する人的ネットワークを活用しつつ,独創性ある本研究を進展させる.申請調書に記載したとおり,本研究では日本刀の作刀評価・設計法の実証として,現代刀匠に科学によって設計した押し形に基づいて作刀を依頼し,それの審査会出品を果たすとともに,第三者評価を受けることを一つの目的としている.本申請研究の採択後,間接経費もあって,当初予定していた直接経費が減額されたことを受けて,平成30年度(第2年度)に実施する第1次作刀のための予算を確保するため,平成29年度(第1年度)の予算使用をできる限り削減したためである.したがって,次年度使用額を生じたが,研究は計画通りに進展しており,特段の問題は無いと判断している.申請調書に記載したとおり,本研究では日本刀の作刀評価・設計法の実証として,現代刀匠と刀剣研師に科学的アプローチによって設計した押し形に基づいて作刀及び研磨を依頼し,それの審査会出品を果たすとともに,第三者評価を受けることを一つの目的としている.本申請研究の採択後,間接経費もあって,当初予定していた直接経費が減額されたことを受けて,平成30年度(第2年度)と平成31年度(令和元年度)(第3年度・最終年度)に実施する第1次・第2次作刀用の予算をそれぞれ確保するため,平成29年度(第1年度)の予算使用をできる限り削減したためである.したがって,次年度使用額が生じているが,研究は計画通りに進展しており,特段の問題は無いと判断している.
神経細胞におけるシアル酸重合体の多様性と生物機能の解析

シアル酸重合体とは、シアル酸同士が2数十残基結合した構造である。胎仔脳において、神経細胞やグリア細胞におけるNCAM上のポリシアル酸構造の研究はよく行われており、反接着分子として機能することにより、脳の発達に深く関わることが知られている。一方、脳内での免疫機構を司るマクロファージ様の細胞であるミクログリア上のシアル酸構造に関してこれまで解析が全くなされていなかった。我々はマウス新生児脳のプライマリーカルチャーおよびノミクログリア細胞株を用いて、ミクログリア細胞にジシアル酸構造だけでなくポリシアル酸が存在することを明らかにした。また、ミクログリア細胞はその活性化によって、神経組織に対し、trophicに働いたり、toxicに働くことが知られているが、その機構について詳しくはわかっていない。そこでミクログリアの機能におけるポリシアル酸構造の関わりを明らかにするために、まず、ミクログリア細胞株を用いて、活性化状態におけるポリシアル酸の変動を明らかにすることとした。LPSおよびIL4刺激という二つの異なる活性化状態におけるポリシアル酸構造の変動を、免疫染色および我々の開発したオリゴ・ポリシアル酸の化学的検出法により解析した。その結果、ミクログリア細胞のポリシアル酸はLPS刺激により速やかに消失すること、またIL-4刺激においてはそのポリシアル酸量が増加することが明らかになった。これまで、ポリシアル酸の消失は、脳の発達に伴う数週間から数ヶ月にわたる変動と考えられていたが、ミクログリアにおけるポリシアル酸の速やかな消失は、分単位という非常に素早い変化であった。このような素早い変動はポリシアル酸の研究のおいて初めての例である。また、この急激な消失はポリシアル酸がミクログリアの活性化に関わりがあることを示唆する。オリゴシアル酸はb, c-シリーズのガングリオシドと共通なエピトープあること、b, c-シリーズのガングリオシドは神経系の構築に重要な役割を果たすことからオリゴシアル酸含有糖タンパク質を同定することはオリゴシアル酸やその担体タンパク質の新機能解明に直接繋がる。本研究でシアル酸重合体の修飾をうけた糖タンパク質の同定およびその存在様式を明らかにすることを目的にオリゴシアル酸含有糖タンパク質の担体タンパク質の同定を行った。マウス脳における生化学的な解析の結果、CD166の他に、カドヘリン、シナプトフィジンがジシアル酸を持つことが今回明らかになった。脳内での免疫機構を司るマクロファージ様の細胞であるミクログリア上のシアル酸構造に関してこれまで解析が全くなされていなかった。今回、シアル酸重合体構造の存在を検証した。マウス新生児脳のプライマリーカルチャーおよびミクログリア細胞株を用いて、ポリシアル酸に対する抗体とオリゴ・ポリシアル酸を特異的に切断するエンドシアリダーゼ、およびジシアル酸に対する抗体を用いて、細胞染色およびウエスタンブロットによる免疫化学的な解析を行った結果、ミクログリア細胞にはジシアル酸構造だけでなくポリシアル酸が存在することが初めて明らかになった。また、これまで明らかになっているポリシアル酸含有糖タンパク質であるNCAMとCD36のタンパク質に対する抗体を用いた免疫沈降実験により、ミクログリア細胞には、NCAMとCD36が共に存在しており、両者ともポリシアル酸修飾を受けていることを明らかにした。
単原子操作に基づいた新奇ナノクラスターの創製と評価

1.Atom tracking法とFeed Forward技術を用いて室温における熱ドリフトを補償することによって、原子間力顕微鏡(AFM)を用いた周波数シフト・マッピングによる元素同定法を開発した。それにより、(Pb,Sn)/Si(111)-(√3×√3)表面の3元素を同定できることを示した。2.(Pb,Sn)/Si(111)-(√3×√3)の3元素混在表面で、非接触原子間力顕微鏡(NC-AFM)による原子凹凸や、個々の原子の周波数シフト・カーブ測定による共有結合力について周辺原子種効果(化学配位効果)を測定して、原子凹凸への周辺原子種効果は非常に強くまた元素依存性があるが、共有結合力への周辺原子種効果は弱く元素依存性も弱いことを明らかにした。3.Si(111)-(7×7)表面でのSiアドアトムの空孔への水平原子操作を探針高さ一定モードで行うことによって、室温における原子操作が確率的に起こることを実証した。また、探針を試料に近づけることによって100%まで確率を増やせることを確認した。4.Si(111)-(7×7)表面上で周波数シフト・マッピングを行うことによって探針先端の異方性を評価する手法を開発した。Siアドアトム上でのフォース・カーブの最大引力値を与える距離よりも探針を試料に近づけると、表面の対称性を破るマッピングが得られ探針先端の異方性を評価できる。この探針先端の異方性は(交換型)水平原子操作に影響を与えると考えられる。1.原子間力顕微鏡を用いてSi(111)-(7×7)表面のSiアドアトムの水平原子操作を行い、同時にフォーススペクトロスコピー測定により、探針先端とSiアドアトムとの相互作用力を測定し、水平原子操作が比較的弱い引力で引き起こされることを突き止めた。また、室温での熱エネルギーが水平原子操作のために必要である熱活性型の原子操作であることを明らかにした。さらに、理論計算との比較により、探針先端の原子がSiアドアトムを引っ張り上げることによって、下地の原子との結合を弱め、原子移動のためのエネルギー障壁が下げられるということを明らかにした。計算されたエネルギー障壁は、実験結果をよく説明することが分かった。2.4属元素であるSi, Sn, Pb原子の3種類が混在した表面を原子間力顕微鏡で観察し、フォーススペクトロスコピーによる元素識別を行った。この試料は、走査型トンネル顕微鏡や原子間力顕微鏡の凹凸像からでは3元素が識別できないことが知られている。それぞれの化学結合力を測定すると、値が探針に強く依存するものの、Si原子に対するSn原子とPb原子の化学結合力の比をとると、それぞれ77%,59%となり探針に依らない不変量になることを発見した。これを利用することによって、画像の全ての原子に対して3原子種を明確に識別することに成功した。また、3属元素であるIn原子でも同様の実験を行い、比が72%になることが分かり、この元素識別法が半導体中のドーパント・不純物の元素同定に応用できることが明らかになった。
現代日本の議院内閣制に関する理論的・実証的研究

本研究は,現代日本の議院内閣制の作動を,(1)近年の議院内閣制の制度改革,(2)制度の制約の中で効用最大化をめざす政治アクターの相互作用,(3)政治過程に注目しながら,理論的・実証的に研究することを試みている.具体的には,1)リーダーシップ,政官関係,マス・メディアと内閣の存続の分析,2)内閣と官邸の組織と運営,3)議院内閣制と衆参ねじれ国会の関係,4)与党内問題としての信任関係,に焦点を当てて分析を行った.その成果を,『議院内閣制』(シリーズ日本の政治1)東京大学出版会,2015として刊行した.本研究は,現代日本の議院内閣制の作動を,(1)近年の議院内閣制の制度改革,(2)制度の制約の中で効用最大化をめざす政治アクターの相互作用,(3)政治過程に注目しながら,理論的・実証的に研究することを試みる.具体的には,次の4つに焦点を当てる.1)リーダーシップ,政官関係,マス・メディアと内閣の存続の分析,2)内閣と官邸の組織と運営,3)議院内閣制と衆参ねじれ国会の関係,4)与党内問題としての信任関係.当該年度では,3)議院内閣制と衆参ねじれ国会の関係,4)与党内問題としての信任関係,を中心に分析を進めた.具体的には,ねじれ国会における首相の頻繁な辞任問題について,それが,必ずしも議院内閣制の辞任の制度的理由には該当せず,いわば,首相が追い込まれて,いやになって辞任する場合が多く,辞任してもねじれ国会の事態はまったく変わらず後継首相は同じ苦境に直面するだけであり,その意味で辞任するだけの価値のないことを明らかにした.首相が辞任しなければならない制度的理由は,(1)総選挙の敗北,(2)不信任決議(案の提出),(3)参議院選の敗北,(4)党首選の敗北,(5)自発的辞任の5つだけであり,これは,内閣の存続条件である(1)衆議院(下院)における多数派の支持,(2)政権党(連合)内における内閣支持,のうちいずれか1つが満たされなくなるときに対応する.これらの成果を含めて,議院内閣制に関する日本および比較政治学的分析をまとめた単著の執筆に取りかかっており,来年度中に完成させて刊行する予定である.本研究は,現代日本の議院内閣制の作動を,(1)近年の議院内閣制の制度改革,(2)制度の制約の中で効用最大化をめざす政治アクターの相互作用,(3)政治過程に注目しながら,理論的・実証的に研究することを試みている.具体的には,1)リーダーシップ,政官関係,マス・メディアと内閣の存続の分析,2)内閣と官邸の組織と運営,3)議院内閣制と衆参ねじれ国会の関係,4)与党内問題としての信任関係,に焦点を当てて分析を行った.その成果を,『議院内閣制』(シリーズ日本の政治1)東京大学出版会,2015として刊行した.本研究は,現代日本の議院内閣制の作動を,(1)近年の議院内閣制の制度改革,(2)制度の制約の中で効用最大化をめざす政治アクターの相互作用,(3)政治過程に注目しながら,理論的・実証的に研究することを試みる.具体的には,次の4つに焦点を当てる.1)リーダーシップ,政官関係,マス・メディアと内閣の存続の分析,2)内閣と官邸の組織と運営,3)議院内閣制と衆参ねじれ国会の関係,4)与党内問題としての信任関係.当該年度では,1)リーダーシップ,政官関係,マス・メディアと内閣の存続の分析,および,2)内閣と官邸の組織と運営,を中心に,データ収集と聞き取り調査と分析に取りかかった.まず,内閣存続の数量分析を行うためのデータの収集・整備を進めた.具体的には,首相の日程データを朝日新聞の首相動静記事をもとに作成し,1980年の鈴木善幸内閣から2012年の野田佳彦内閣まで32年分をテキスト・データ・ファイルとして整理した.予備的にテキスト・マイニングの手法を用いて首相が面会する政治家・官僚を所属府省,役職をもとに分類し,接触頻度を算出して,首相がどの範囲のアクターたちとより頻繁にコミュニケーションを取り,また,どの政策分野により関心が強く,したがって首相が多くの時間をかけるかを分析する手がかりとする.次に,内閣官房および内閣府に勤務した経験のある一般職公務員退職者の方を対象に,研究代表者,連携研究者が内閣官房の組織,運営について詳細な聞き取りを行った.本研究は,現代日本の議院内閣制の作動を,(1)近年の議院内閣制の制度改革,(2)制度の制約の中で効用最大化をめざす政治アクターの相互作用,(3)政治過程に注目しながら,理論的・実証的に研究することを試みている.具体的には,1)リーダーシップ,政官関係,マス・メディアと内閣の存続の分析,2)内閣と官邸の組織と運営,3)議院内閣制と衆参ねじれ国会の関係,4)与党内問題としての信任関係,に焦点を当てて分析を行った.最終年度は,5月にルートヴィッヒ・マクシミリアン大学(ミュンヘン)における研究ワークショップにおいて,日本のねじれ国会における立法の生存分析について研究報告を行い,また,ドイツ連邦議会調査(ベルリン)を行った.さらに,これまでの研究成果をまとめ,その一部を『議院内閣制』(シリーズ日本の政治1)東京大学出版会,2015として刊行した.政治学データ収集に関してはすでに昨年度に終了しており,今年度は一部について分析を進めた.

研究のとりまとめ作業として,議院内閣制に関する単著を執筆中であり,研究機関が終了する来年度末までに刊行する予定である.内閣の存続分析を行うためのデータ収集に関しては,きわめて順調に進行している.首相動静データは必要な30年分についてすべて作成・整理を終えることができた.内閣と官邸の組織がどのように整備されてきたかに関しては,内閣官房及び内閣府に勤務経験のある要職を務めた一般職公務員退職者の方から聞き取り調査できたことが収穫だった.今後も,聞き取り調査を続けていきたいと考えており,貴重な人材とのつながりができたことは,本研究にとって重要であると考える.平成26年度には,当初の研究計画では,分析および研究論文の公表・書籍化と一般向けの発信を掲げているが,基本的に,それに従い,分析および研究成果の取りまとめを行い,単著の執筆および刊行を進める.また,新聞等のメディアにも積極的に発信する.また,当初計画では平成25年度中に海外調査を行う予定だったが,当方および相手方との調整の結果,最終年度である平成26年度初めに,海外の研究者の主催する議会研究のワークショップに参加して,本研究の成果の一部を英文のペーパーとして報告し,意見交換する予定を立てている.平成25年度以降は,研究実績の概要で説明した1)および2)を継続するとともに,3)および4)についても,理論分析と実証分析を進め,補充のデータ収集,聞き取り調査などを行う予定である.また,2001年中央省庁再編に伴う制度変更の定性的分析を行い,首相を取り巻く官邸と内閣の制度的環境がどのように変化したか,また,首相がどれほど時間的・制度的に制約が強くリーダーシップがふるいにくいかについて,検証する.そして,特に4)について,これまで主に憲法制度として検討されてきた内閣と国会の信任関係を,政治の実態に即して,政治学的に分析する.従来,信任関係は内閣を批判する野党が提出する不信任決議案の与党による否決にのみ注目されてきたが,むしろ重要なのは,与党内が内閣支持で結束していない場合である.この時,信任関係は与野党問題ではなく,与党内問題である.この点に着目して,従来の議論を変える研究を進めたい.当初計画では平成25年度中に海外調査を行う予定だったが,当方および相手方との調整の結果,最終年度である平成26年度初めに,海外の研究者の主催する議会研究のワークショップに参加して,本研究の成果の一部を英文のペーパーとして報告し,意見交換する予定を立てている.最終年度である平成26年度初めに,海外の研究者の主催する議会研究のワークショップに参加して,本研究の成果の一部を英文のペーパーとして報告し,意見交換する予定を立てている.研究費は,補充のデータ収集および入力整理のための事務作業のほか,資料の収集,購入,聞き取り調査費用などに充てる.
セマンティックウェブ技術を用いた遺伝素材の交配・解析系統の選定を支援するシステム

育種の効率化を図る上で、交配親やゲノムワイド関連解析における解析対象の選定は重要である。遺伝素材となる作物の系統・形質の情報を公開しているDBのうち、品種登録HPとジーンバンクには、親子関係にある多数の系統が相補的に登録されている。一方、セマンティックウェブ技術では共通の識別子を介して情報同士が連結される。親子関係にある系統情報に対してこの技術を適用すると、二つのDBに分かれて登録されていても、親子関係を介して網羅的な系譜情報が自動的に構築され、また各系統に付随する形質情報が体系化される。以上の技術と生成されるデータを利用し、育種親や解析系統の効率的な選定を支援するシステムを構築する。
アフリカの熱帯熱マラリア流行国シエラレオネにおける原虫遺伝子の進化に関する考察

アフリカの熱帯熱マラリア流行国であるシエラレオネの首都フリータウンにある病院と連携を取って,熱帯熱マラリア患者の血液サンプルを集めた。そのサンプルからDNAを抽出し,ワクチン候補抗原として有望視されているタンパク遺伝子cspを読んだ。とりわけT cellレセプターとして知られているResion IIとResion IIIと呼ばれる部分を詳細に読み取り,アミノ酸配列に置き換えて各株間の変異を比較した。その結果(1)シエラレオネの熱帯熱マラリア原虫cspのResion IIおよびResion IIIから20種類以上の変異型が記録された。(2)これらは以前我々が調査した東南アジアの熱帯熱マラリア原虫cspと異なった変異型であった。これらの結果から,CSPをワクチンとして使用するときには,アフリカで頻度の高い変異型とアジアで頻度の高い変異型について別個にワクチンを用意した方が良いのではないかと考察した(論文投稿中)。マラリアの検査とともにG6PD活性の検査も実施し,多くのG6PD欠損血液を得た。従来アフリカ人から多く報告されていたA変異型(376A>G)およびA-変異型(202G>A,376A>G)がシエラレオネ人からも多く見つかったが,それらに加え新規のG6PD変異型を見いだすことができた。この新規変異型はG6PDA変異型である376A>Gに加え,311G>Aの変異が起きていた。すなわち2ヶ所のアミノ酸が置換しているものと思えた(104Arg>His,126Asn>Asp)。この変異型をG6PD Sierra Leoneと命名し論文報告をおこなった。アフリカの熱帯熱マラリア流行国であるシエラレオネの首都にある病院と連携を取って,熱帯熱マラリア患者の血液サンプルを集めてもらった。そのサンプルからDNAを抽出し,ワクチン候補抗原として有望視されているタンパク遺伝子csp遺伝子を読んでいった。そのなかでとりわけT cellレセプターとして知られているResion IIとResion IIIと呼ばれる部分を詳細に読み取り,アミノ酸配列に置き換えて各株間の変異を比較した。75サンプル余り読んだ途中経過として(1)シエラレオネの熱帯熱マラリア原虫のCSPのResion IIおよびResion IIIには多様性が認められた。その変異型は20種類以上に上った。(2)先年調査した東南アジアにおける熱帯熱マラリア原虫CSPのResion II, Resion IIIの成績(Jalloh et al. 2006)と比較したところ,これまでとは異なった変異型が認められた。また東南アジアにおけるよりさらに多くの変異型が分布していた。このことはシエラレオネにおいては,蚊とヒトとの伝播サイクルが頻繁に回っていて,原虫の遺伝子に新規の変異が次ぎ次ぎと生み出されていることを示唆している。このような状況においては,たとえばCSPをワクチンとして使用する以前に,まず媒介蚊を減らす努力を行なうべきではないかと考える。また同じ血液サンプルを用いてグルコース6リン酸脱水素酵素(G6PD)の活性を検査し,活性低下者を見つけ出した。欠損者のG6PD遺伝子を読み取り,従来アフリカ人のG6PD欠損者から報告されているG6PD A-およびG6PD A+の2型を見いだした。そのサンプルからDNAを抽出し,ワクチン候補抗原として有望視されているタンパク遺伝子csp遺伝子を読んだ。そのなかでとりわけTcellレセプターとして知られているResion IIとResion IIIと呼ばれる部分を詳細に読み取り,アミノ酸配列に置き換えて各株間の変異を比較した。その結果(1)シエラレオネの熱帯熱マラリア原虫のcspのResion IIおよびResion IIIには多様性が認められた。その変異型は20種類以上あった。(2)以前我々が調査した東南アジアの熱帯熱マラリア原虫cspと比較してさらに多くの変異型が分布していた。マラリアの検査とともにG6PD活性の検査も実施したところG6PD欠損者が男子の10%超存在した。DNA分析を行なってみると,従来アフリカ人から多く報告されていたG6PD A+(376A>G)およびG6PD A-(202G>A, 376A>G)がシエラレオネ人からも多く見つかったが,それらに加え新規のG6PD変異型を見いだすことができた。この新規変異型はG6PD A+の変異である376A>Gに加え,311G>Aの変異が起きていた。すなわち2ケ所のアミノ酸が置換しているものと思えた(104Arg>His, 126Asn>Asp)。

(2)これらは以前我々が調査した東南アジアの熱帯熱マラリア原虫cspと異なった変異型であった。これらの結果から,CSPをワクチンとして使用するときには,アフリカで頻度の高い変異型とアジアで頻度の高い変異型について別個にワクチンを用意した方が良いのではないかと考察した(論文投稿中)。マラリアの検査とともにG6PD活性の検査も実施し,多くのG6PD欠損血液を得た。従来アフリカ人から多く報告されていたA変異型(376A>G)およびA-変異型(202G>A,376A>G)がシエラレオネ人からも多く見つかったが,それらに加え新規のG6PD変異型を見いだすことができた。この新規変異型はG6PDA変異型である376A>Gに加え,311G>Aの変異が起きていた。すなわち2ヶ所のアミノ酸が置換しているものと思えた(104Arg>His,126Asn>Asp)。この変異型をG6PD Sierra Leoneと命名し論文報告をおこなった。
触覚による顔認知の神経基盤-晴眼者と視覚障害者の比較

他者に理解しやす顔表情の表出は円滑なコミュニケーションに重要な役割を果たす。しかし視覚障害者が表出した顔表情は、晴眼者の表情に比べて認識することが難しいとされている。晴眼者は顔を触るだけで個人や表情を識別できるので、触覚を用いた顔表情の学習によって、より認識しやすい顔表情の表出ができる可能性がある。しかし触覚による顔の認識を支える神経基盤についてはよく分かっていない。例えば視覚による顔の認識には、後頭葉・側頭葉の特異的なシステムの役割が重要であるが、このシステムが多感覚的な顔認識に関わるかどうかはよく分かっていない。さらに視覚障害者で顔認識に関わるこのシステムが発達し、維持されているかどうかも不明である。本研究は顔認知に関わる神経基盤の多感覚性と可塑性について明らかにしようとするものである。平成21年度は顔認知に関する神経基盤の多感覚性を明らかにした(Kitada, et al., 2010 NeuroImage)。そこで平成22年度は顔認知に関わる神経基盤の可塑性について検討した。視覚障害者を対象に心理物理学実験を行い、視覚障害者でも識別できることを明らかにした。さらに機能的磁場共鳴法(fMRI)を用いて、顔表情の識別に関わる脳活動を先天的な視覚障害者(先天盲)と晴眼者で比較した。その結果、晴眼者の視覚と触覚による顔表情の識別に関わる大脳皮質領域(紡錘状回・中側頭回・下側前頭前野)は、先天盲による顔表情の識別でも活動することを明らかにした。この結果は視覚経験に依存せず、顔表情の認識に関わる神経基盤が発達および維持されることを示している。他者に理解しやすい顔表情の表出は円滑なコミュニケーションに重要な役割を果たす。しかし視覚障害者が表出した顔表情は、晴眼者の表情に比べて認識することが難しい。ヒトは触るだけで個人や表情を識別できるので、触覚を用いた顔表情の学習によって、より認識しやすい顔表情の表出ができる可能性がある。視覚による顔の認識には後頭葉・側頭葉の特異的なシステムの役割が重要であるが、このシステムが多感覚的な顔認識に関わるかどうかはよく分かっていない。さらに視覚障害者で顔認識に関おるこのシステムが発達し、維持されているかどうかも不明である。本研究は心理物理学的手法と機能的核磁気共鳴画像法(fMRI)を駆使して、顔認知に関わる神経基盤の多感覚性と可塑性について明らかにしようとするものである。平成21年度は晴眼者を対象に視覚と触覚による顔表情の認知課題を実施し顔認知に関わる神経基盤の多感覚性について実験を行った。その結果、後頭葉・側頭葉とさらに、下側前頭前野・下側頭頂小葉が視覚と触覚による顔認知に関わることを明らかにした(Kitada et al., NeuroImage 2010)。この結果は、視覚を使わなくても顔表情が認識できるだけでなく、同じ神経基盤が関与することを示している。さらに視覚障害者と晴眼者を対象に、顔表情の識別課題を行ったところ、顔の表情認識の成績は視覚経験にあまり左右されないことを示した。この結果は、ヒトの顔表情の認識に関わる脳内システムが視覚経験に依存されない可能性を示しており、平成22年度の研究によってさらにこの仮説を検証する予定である。
1型糖尿病発症を制御するHybrid Tregの同定

1型糖尿病の完治を目指すには、自己の膵β細胞の分化と自己免疫の制御の双方が不可欠である。本研究は、自己免疫の制御に、CXCR3というケモカイン受容体を発現した免疫制御性T細胞(Hybrid Treg)が、1型糖尿病の発症を効率的に制御することを明らかにした。さらに、1型糖尿病患者末梢血リンパ球のHybrid Tregは加齢性の増加が少なく、HLA DR9を有する場合にインスリンペプチド特異的なIL-10産生性が低いことも見出した。免疫染色によるHybrid Tregの局在の同定20週齢の雌NODマウスにおいて、膵臓を採取し、免疫染色を行い、Hybrid Tregの膵島における局在を検討した。CXCR3とCD4、Foxp3とCD4の二重染色による評価をそれぞれ行い、膵島の周囲に局在することが判明した。また、CXCL10は主に膵ベータ細胞に、また、CXCL9は膵島周囲の血管内皮に、さらに、CXCL11は単球系の細胞にそれぞれ発現していた。Hybrid Tregの分布の検討NODマウスのCXCR3陽性脾細胞、および、CXCR3陰性脾細胞をフローサイトメーターにてソートアウトし、それぞれをNOD-scidマウスに養子移入した後、8週後に屠殺し、CXCR3陽性細胞の分布を検討した。CXCR3陽性脾細胞のみ膵島周囲に浸潤し、CXCR3陰性脾細胞は、全く膵島には認められなかった。さらに、CXCR3陽性脾細胞を移入されたレシピエントの膵島にのみ、Foxp3陽性細胞を認めた。すなわち、膵島局所への遊走には、CXCR3が必要であることが判明した。なお、CXCL10、CXCL9、CXCL11については、1)と同様の結果であった。CXCR3陽性CD4細胞による糖尿病発症抑制の検討NODマウスからCXCR3陽性CD4細胞とCXCR3陰性CD4細胞とをフローサイトメーターにてソートアウトし、それぞれ、糖尿病発症NODマウスの脾細胞とともにNOD-scidマウスに養子移入し、それぞれの発症抑制効果を検討した。現在のところ、CXCR3陽性CD4細胞を移入した場合に発症抑制傾向である。今後、数を増やすとともに、CYを投与したNODマウスにおける検討も並行して行っている。NODマウスにCY(サイクロフォスファミド)を投与する発症促進システムにおいて、Hybrid Tregを移入することによって、糖尿病発症を抑制するかどうかを検討した。この際、免疫制御性T細胞の細胞表面マーカーとしてCD25を使用し、CD25陽性CD4陽性細胞分画を免疫制御性細胞として扱った。NODマウスからCD25陽性CD4細胞(Hybrid Tregを含む分画)とCXCR3ノックアウトNODマウスからCD25陽性CD4細胞(これらは全てCXCR3陰性)とをソートアウトし、それぞれ、CYを投与したNODマウスへ細胞移入し、糖尿病発症に与える影響を検討した。CY投与11日目の時点で、NODマウスからのCD25陽性CD4細胞移入群では、全く発症がなかったのに対して、CXCR3ノックアウトNODマウスからCD25陽性CD4細胞移入群では、30%に発症を認め、発症率にも有意な差を認めた。したがって、糖尿病発症抑制には、Hybrid Tregの存在が必要であることが示された。次に、NODマウスならびにCXCR3ノックアウトNODマウス由来のCD25陽性CD4細胞を抗原提示細胞とともに膵島関連の自己抗原(GAD(グルタミン酸脱炭酸酵素)、インスリンペプチド)および、対照として無関係の抗原にて刺激し、その抗原特異性を検討した。Preliminaryな検討では、NODマウス由来のCD25陽性CD4細胞は、GADに対してIL-10を産生することが示唆された。さらに、膵島抗原特異的Hybrid Treg同定のため、フローサイトメーターにて膵島抗原に反応した細胞のみをソートアウトして、そのT細胞受容体の同定を試みており、Valfa2に着目して検討中である。本研究は、自己免疫の制御に、CXCR3というケモカイン受容体を発現した免疫制御性T細胞(Hybrid Treg)が、1型糖尿病の発症を効率的に制御するかどうかを明らかにし、その分画中の膵島抗原特異的な細胞を同定することを目的とした。1型糖尿病患者、もしくは、対象として、インスリン使用中の2型糖尿病患者より、インフォームドコンセントを取得し、末梢血リンパ球を採取した後、膵島関連自己抗原(GAD(グルタミン酸脱炭酸酵素)、各種インスリンペプチド、インスリン蛋白)および、対照として無関係の抗原(PPD)にて刺激し、ELISPOT法を用いて、その抗原特異的反応性を検討した。刺激時の抗原濃度は、5-10 μg/mlとし、2448時間の培養を行った。

GADでは明確な違いは認めなかったが、インスリンペプチドのうち、インスリンB鎖の10-24 HLVEALYLVCGERGFの部分を用いた場合に、1型糖尿病患者のうち、HLA DR9を保有する患者は、保有しない患者に比して、有為にIL-10産生性が低かった。さらに、同じHLA DR9を有していても、1型糖尿病患者は、2型糖尿病患者よりも有為にIL-10産生性が低かった。Hybrid Tregの数については、2型糖尿病では、加齢とともに増加したが、1型糖尿病では、そのような現象は認めなかった。現在、Hybrid Tregの抗原特異性について、さらに詳細に検討中である。今年度最大の目標であったHybrid Tregによる糖尿病発症抑制が、in vivoの系において示されたことから、順調に進展していると判断できる。24年度が最終年度であるため、記入しない。今後は、Hybrid Tregの膵島抗原特異的丁細胞機能の検討が主たるものになる。その抗原特異的T細胞反応の検出には、従来、細胞内サイトカイン染色のシステムを用いてきた。しかしながら、このシステムの限界は、一度に多くの反応性を検討することが困難であり、非常に多くの時間を要することである。そこで、現在、ELISPOT法のシステムを導入しつつあり、これを主体に抗原特異的反応性を検討する予定である。ELISPOT法で多くのペプチドに対する反応をスクリーニングし、絞られたペプチドで再度、細胞内サイトカインのシステムに戻すことを計画している。
光励起半導体マイクロキャビティレーザーにおける励起方式と発光制御

共振器中で起こる自然放出は、発光媒体の共振器擬モードへの結合により制御される。平板形微小共振器の擬モードは、ファブリィ・ペロ-共振器の共鳴ビームの開き角で規定され、その半径は共鳴次数、反射鏡反射率などで与えられる。また対応する出力ローブの開き角は、モード半径と波長により定まる回折角で与えられる。さらにこのモードのスペクトル的な広がりは、共振器の縦方向での共鳴幅で与えられる。半導体量子井戸を活性媒質とする場合について、これらを実験的に検証した。使用サンプルは1λ(=962nm)のGaAsスペ-サの中央部にIn_0._2Ga_0._8Asの量子井戸を3層備えたもので、光励起により常温で測定した。スペクトル幅およびモード半径について理論との相当の一致が得られた。ただしモード半径は自然放出光の開き角から推定した。このサンプルは励起入力150mwに至るまで発振に至らなかったので、その理由を半導体量子井戸利得スペクトルのキャリア濃度依存性を考慮して考察した。励起入力とともにキャリア濃度が増加するが、これに伴って利得ピーク波長は短波長側へシフトし、共振器共振波長からずれて行き、また、共振器共振波長における利得は飽和する傾向を示すことが、モデル計算により示された。さらに、使用サンプルの分布ブラッグ反射鏡は、AlAsとAl_0._2Ga_0._8Asにより構成された反射率95%のものであったが、発振に至らなかった理由としてこの反射率が低すぎた可能性も考えられたので、自然放出結合係数のモード体積を介しての反射鏡反射率依存性をも考慮して最適反射率の計算を行い、95%は最適値より低い値であったことを見いだした。
腎虚血再灌流障害過程におけるユビキチン・プロテアソーム系の機能解析と臨床応用

大動脈手術手技中に生じる腎虚血再灌流を模倣する為の両側腎動脈遮断によるブタ腎虚血再灌流モデルを確立した。Control群についで術前にプロテアソーム阻害薬であるBortezomib 1.3mg/m2を経静脈的に投与した群において各種サンプルを採取した。腎障害度評価は全身血でNGALをELISA法により測定し各尿細管毎に病理学的スコアリングを行い比較評価した。PPAR-γ及びその標的遺伝子であるLXR-αの発現は免疫染色によって定性real-time RT-PCR法により定量評価を行った。下流の転写調節因子であるNFκ-B, AP-1, NFAT, STAT-3に対しても定性・定量評価を行った。大動物(ブタ)腎虚血再灌流モデルにおける評価体重約30kgの大動物(ブタ:WL大ヨークシャー×ランドレース)を用いて、大動脈手術手技中に生じる腎虚血再灌流を模倣するための両側腎動脈遮断による腎虚血再灌流モデルを確立した。全身麻酔下に、両側腎動脈を1時間遮断するプロトコールとした。虚血直前、1時間遮断後再灌流直前、再灌流後1時間、2時間、3時間、4時間の6ポイントで全身血、腎静脈血、尿、腎組織を採取し評価を行っている。全身麻酔中は経時的に膀胱温、体血圧及び静脈血酸素飽和度をモニタリングし、膀胱温は3738°Cを保持するよう管理した。Control群についで、術前にプロテアソームインヒビターであるBortezomibを投与した群において各種サンプルを採取している。腎障害度評価は全身血でNGAL(急性腎障害の早期バイオマーカー)をELISA法により測定し、加えて各尿細管毎に病理学的スコアリングを行い比較評価している。PPAR-γ及びその標的遺伝子であるLXR-αの発現は免疫染色によって定性、real-time RT-PCR法により定量評価を行っている。また、下流の転写調節因子であるNFκ-B, AP-1, NFAT, STAT-3に対するブタに交差する抗体の選定と局在検討を進めている。同時にPPAR-γノックアウトマウス作成のためにPPAR-γのエキソン領域をLoxp配列で挟んだマウスと全身性Creトランスジェニックマウスを交配・繁殖させる準備を進めているところである。ブタを用いた大動物腎虚血再灌流実験系を用いて、腎虚血再灌流障害過程におけるユビキチン・プロテアソーム系の、PPAR-γを含む各種転写因子発現及び腎障害度への影響解析の検討を行っているところである。体重約30kgのブタを吸入及び静脈麻酔にて全身麻酔し、開腹の上、両側腎臓及び腎動静脈を剥離露出させる。両側腎動脈を選択的にclampし、1時間の虚血時間の後、declampすることにより再灌流を開始する。Sample採取のtime pointとしては虚血前、1時間虚血後、再灌流1時間後、2時間後、3時間後、4時間後の計6ポイントし、それぞれで全身血、spot尿、腎静脈血及びWedge resectionにより腎組織を検体として採取した。腎障害度の評価としては、従来からのBUN,Creに加え、比較的time courseで反応を見せる急性期腎障害バイオマーカーであるNGALを使用することとし、ブタにおいても定量化できることを確認した。病理学的検索においてはより正確にATI(Acute tubular injury)を評価する染色法を検討し、MT染色野口変法を採用した。尿細管障害を4段階に評価し、腎組織ないの領域別にスコアリングし、比較検討することで客観的な評価を可能とした。また腎虚血再灌流障害過程に関連すると考えらえるNFκ-B,AP-1,NFAT,STAT-3などの各種転写因子に対するブタ組織における抗体選定と局在検討を行っている。大動物(ブタ)腎虚血再灌流モデルにおける評価体重約30kgの大動物(ブタ:WL大ヨークシャー×ランドレース)を用いて、大動脈手術手技中に生じる腎虚血再灌流を模擬するための両側腎動脈遮断による腎虚血再灌流モデルを確立した。Bortezomibの投与量・投与経路については、未治療の多発性骨髄腫に対するヒトへの用量を参考に、1.3mg/m2を経静脈的に投与するプロトコールとした。スコアリングは形態変化が軽度のものから03に点数付けし、腎皮質浅層及び深層からそれぞれ15尿細管ずつをランダムに選択し、スコア23の障害の強い尿細管の割合を算出し比較評価する方法とした。

PPAR-γ及びその標的遺伝子であるLXR-αの発現は免疫染色によって定性、real-time RT-PCR法により定量評価を行っている。また、下流の転写調節因子であるNFκ-B, AP-1, NFAT, STAT-3に対するブタに交差する抗体を選定し、局在検討を終え、PPAR-γ及びLXR-αと同様に定性・定量評価を進めている。小動物腎虚血再灌流モデルにおける評価PPAR-γノックアウトマウス作成のためにPPAR-γのエキソン領域をloxP配列で挟んだトランスジェニックマウスと全身性Cre発現トランスジェニックマウスとを交配・繁殖を試みているが成功至っていない状況である。引き続き小動物実験系の確立を目指すとともに、大動物実験系での比較検討から結論を導き出すことが今後の研究展開に関して重要となる。外科系臨床医学、心臓血管外科学Bortezomibの投与経路や投与量、病理スコアリング法の検討や、下流転写調節因子に対するブタに交差する抗体の選定に時間を要しているため。上記のように、腎虚血再灌流障害過程におけるユビキチン・プロテアソーム系の、PPAR-γを含む各種転写因子発現及び腎障害度への影響解析を行うための動物モデルの確立および評価法の確立が進んでいるものの、結果を出すまでに至っていないという点でやや遅れているという評価とした。対象とする各種転写因子に対して、ブタ組織で確実にworkする抗体選定と事前の局在検討の重要性が実験を進めていくうえで認識され、慎重に評価を進めていることも一因となっている。PPAR-γノックアウトマウスの作成および小動物腎虚血再灌流障害モデルの確立を行い、大動物実験系と同様の評価を進めていく。その結果に基づき、最終的に大動物実験系でプロテアソームインヒビターの投与法等の検討を行っていく方針である。現在施行中の各種転写因子に対する抗体選定と局在検討をさらに進め抗体の決定と局在の確認を終了させる。それをもとにプロテアソームインヒビターBortezomibを投与した腎虚血再灌流群とControl群の転写因子発現および腎障害度を評価し、比較検討する。また、必要であれば免疫染色やRNA,Proteinの定量評価も追加検討する予定とする。同時にPPAR-γノックアウトマウスの作成を開始する。具体的にはPPAR-γのエキソン領域をLoxP配列で挟んだマウスと全身性Creトランスジェニックマウスを交配・繁殖させて行うことを考えている。小動物実験系での腎虚血再灌流モデルの確立も行う。PPAR-γノックアウトマウスを用いた小動物腎虚血再灌流実験系においてBortezomibを投与し、同様に評価を進めることで、ユビキチン・プロテアソーム系の影響を検討する。マウス購入およびノックアウトマウス作成に使用すべき額が未使用である為。小動物実験系作成のための、マウス購入およびノックアウトマウス作成の為に使用する予定である。次年度使用額は、当初計画していたPPAR-γノックアウトマウスの作成を次年度に延期することによって生じたものであり、実験動物として、LoxP配列マウス及びCreトランスジェニックマウスの購入に必要な経費として平成25年度請求額と合わせて使用する予定である。
臓器移植におけるキメラ成立機序とドナー免疫担当細胞遊走現象の意義

肝移植における生着延長あるいは寛容成立条件をドナー由来免疫担当細胞移入の面から解析することを目的として、雑種成犬及びビ-グル犬を用いて同種肝移植を施行した。ドナー犬より末梢血リンパ球及びドナー骨髄細胞を分離採取した。1)ドナー末梢血リンパ球は2-7×10^8個採取可能であった。ドナー骨髄細胞は肋骨より、2-6×10^8個採取可能であった。末梢血リンパ球は昨年同様凍結保存を行った。2)同種肝移植後のレシピエント犬にドナー骨髄細胞を移植当日に2×10^8個を経静脈的に投与した。また、免疫抑制剤としてFK506を0.05mg/kgを2週間連日静脈内投与を行った。無処置のコントロール群の生存日数は6-13日間(n=5)、およびFK506単独投与群の生存日数は8-33日間(n=5)に対して、ドナー骨髄細胞を移入した実験群でも約30日間生存したが、免疫寛容の誘導は現在まで得られなかった。骨髄細胞の移入個数、投与経路とその時期についてさらに検討を要する結果となった。同種犬肝移植後の免疫寛容誘導あるいは長期の免疫生着延長効果を獲得する目的で、リポソーム化FK506の効果も検討した。3)リポソーム化FK506を0.05mg/kgを2週間連日静脈内投与した実験群の生着日数は32日から250日と著明な生着延長効果を認めた。また、5頭中3頭は200日以上生存し、ほぼ免疫寛容状態の成立が得られた。リポソーム化FK506は肝臓と脾臓に取り込まれ易く、局所免疫抑制効果の観点からも優れた製剤であると考えられ、臨床応用に期待される。本年度は雑種成犬及びビーグル犬を用いて同種肝移植を施行した。また、ドナー犬より末梢血リンパ球及び腸間膜リンパ節よりリンパ球を分離採取した。1)肝移植実験のコントロール群の生存日数は7-10日で、出血死、腹膜炎以外は全例拒絶反応で死亡した。このことより、ドナー、レシピエントの組み合わせはほぼMHCincompatibleと考えられた。移植肝のAspiration Cytologyを施行し検討したが、移植犬の状態により経日的採取はやや困難であったが、長期生存犬の場合には可能と考えられた。2)末梢血リンパ球や腸間膜リンパ節リンパ球は1×10^9以上採取可能で凍結保存状態も良好であった。移植前に、ドナー、レシピエントのClassIタイピング及びDNA-DLAタイピングは本年度は手技上の問題で困難であったが、現在さらに、条件を変えて検討中である。また、ドナー肝組織からのコラゲナーゼ消化によるリンパ球採取は酵素濃度の条件を検討中であり、現在採取細胞数は十分量ではない。3)肝移植実験はコントロール群の作成は良好であり、種々の細胞サンプル採取、保存も問題なく行いえている。免疫抑制剤投与群も作成可能であると考える。4)ドナー、レシピエントのClassIタイピング、DNA-DLAタイピングは今後手技上の問題点を解決しなければならない。ドナー、レシピエントのMHCの反応性については今後MLRによる反応性により組み合わせを決める方法も検討する予定である。移植肝からのAspiration Cytologyは一応採取可能であり、このサンプルもMLRに応用可能と考えられる。本年度は雑種成犬及びビ-グル犬を用いて同種肝移植を施行した。また、ドナー犬より末梢血リンパ球及びドナー骨髄細胞を分離採取した。1)ドナー末梢血

リンパ球は2-7×10^8個採取可能であり、ドナー骨髄細胞は肋骨より、2-6×10^8個採取可能であった。末梢血リンパ球は昨年同様凍結保存を行った。2)同種肝移植後のレシピエント犬にドナー骨髄細胞を移植当日に2×10^8個を経静脈的に投与した。また、免疫抑制剤としてFK506を0.05mg/kgを2週間連日静脈内投与を行った。無処置のコントロール群の生存日数は7-10日間、およびFK506単独投与群の生存日数は14日間に対して、実験群では約30日間生存したが、免疫寛容の誘導は現在まで得られていない。3)DLAの検索は条件を試行錯誤を行っているところであり、その際に必要であるドナー・レシピエントの末梢血リンパ球のMLR反応はその反応性が認められているので、更にDLA検索を続けている。4)骨髄細胞の移入による肝移植における免疫寛容の導入は、生着延長効果がみられているものの、未だ困難であり、骨髄細胞の移入個数、投与経路とその時期についてさらに検討を要する。骨髄細胞移入群の生着延長期間中に、移植肝のAspiration Cytologyにより湿潤細胞を採取し、ドナー由来かどうかの決定をDLAの差異より検討しなければならい。また、レシピエントをresponderとするMLR反応性の検討も必要である。最終年度も雑種成犬及びビ-グル犬を用いて同種肝移植を施行した。また、ドナー犬より末梢血リンパ球及びドナー骨髄細胞を分離採取した。1)ドナー末梢血リンパ球は2-7×10^8個採取可能であった。ドナー骨髄細胞は肋骨より、2-6×10^8個採取可能であった。無処置のコントロール群の生存日数は6-13日間(n=5)、およびFK506単独投与群の生存日数は8-33日間(n=5)に対して、ドナー骨髄細胞を移入した実験群でも約30日間生存したが、免疫寛容の誘導は現在まで得られなかった。骨髄細胞の移入個数、投与経路とその時期についてさらに検討を要する結果となった。同種犬肝移植後の免疫寛容誘導あるいは長期の免疫生着延長効果を獲得する目的で、リポソーム化FK506の効果も検討した。1)リポソーム化FK506を0.05mg/kgを2週間連日静脈内投与した実験群の生着日数は32日から250日と著明な生着延長効果を認めた。また、5頭中3頭は200日以上生存し、ほぼ免疫寛容状態の成立が得られた。リポソームFK506は肝臓と脾臓に取り込まれ易く、局所免疫抑制効果の観点からも優れた製剤であると考えられ、臨床応用に期待される。