hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
新規エネルギー代謝調節因子による抗肥満メカニズムの解明

申請者は、高脂肪食を持続摂取しても肥満を呈さない高脂肪食耐性(diet-resistant ; DR)ラットの腸間膜脂肪組織を用いて、DR特異的に発現する遺伝子をDNAマイクロアレイにより網羅的に解析した。その結果、DRラットではペプチドホルモンであるグアニリン(Gn)とその受容体であるグアニル酸シクラーゼC(GC-C)がマクロファージに高発現していることを見出した。また、マクロファージ特異的にグアニリン/GC-Cを導入した遺伝子改変動物(ダブルTgラット)を作製し、同Tgラットにおいても高脂肪食耐性を示すことを明らかにした。以上の結果から、マクロファージのグアニリン/GC-Cシステムは、脂質代謝の制御を通じて脂肪蓄積抑制に機能することが示された。申請者は、高脂肪食を持続摂取しても体重増加を認めず、腸間膜脂肪蓄積のきわめて少ない高脂肪食耐性(diet-resistant ; DR)ラットに着目し、腸間膜脂肪組織のDNAマイクロアレイ解析によってDR特異的変動遺伝子を網羅的に解析した。その結果、DRラットでは、本来腸管上皮に発現しているペプチドホルモンであるグアニリンとその受容体であるGC-Cがマクロファージに高発現していることを見出した。これらの分子を発現しているマクロファージと初代脂肪細胞を共培養すると、脂肪細胞の脂肪滴蓄積が少なくなり、脂肪酸合成や脂肪滴形成に関わる遺伝子の発現が減少していた。また、同分子をsiRNAによりノックダウンしたマクロファージと脂肪細胞との共培養を行うと、脂肪細胞の脂肪滴蓄積抑制効果や、脂肪酸合成および脂肪滴形成に関わる遺伝子の発現低下作用は認められなくなった。これらのことから、マクロファージのグアニリン/GC-Cは、脂肪滴蓄積を制御していることが示唆された。マクロファージ特異的にグアニリン/GC-Cを導入した遺伝子改変動物(ダブルTgラット)を作製し、グアニリン/GC-Cと肥満との関連を検討した。Tgラットを普通食で飼育した場合には、摂取エネルギーや体重は野生型(WT)と差がなかったが、高脂肪食(HFD)で飼育した場合は、摂取エネルギーに差は認められないものの、Tgラットの体重はWTに比べ有意に低下していた。また、HFD Tgラットでは、脂肪細胞の肥大化を認めず、腸間膜脂肪組織の脂肪酸合成酵素および脂肪滴形成蛋白の発現低下に加え脂肪酸β酸化関連酵素の発現増加を認めた。さらに、HFD Tgラットは肝臓でも脂肪蓄積が減少していた。申請者は、高脂肪食を持続摂取しても体重増加を認めず、腸間膜脂肪蓄積のきわめて少ない高脂肪食耐性(diet-resistant ; DR)ラットを用いて、代謝特性と分子基盤に関する研究を進めている。DRラットの摂食行動、エネルギー代謝関連遺伝子の発現パターンやシグナル伝達を高脂肪食肥満(DIO)ラットや普通食(コントロール)ラットと比較し、DRの代謝特性を検討した。DRラットでは、脂肪酸合成関連酵素が低下し、脂肪酸β酸化関連酵素の発現が有意に増加していることが明らかになった。また、DR、DIO、コントロールラットの腸間膜脂肪組織を脂肪細胞分画と血管内皮、マクロファージ、白血球からなる細胞分画;stromal-vascular cell fraction(SVF)とに分け、DR特異的変動遺伝子の発現分画を調べた結果、DRラットで特異的に発現増加している遺伝子が、マクロファージ由来であることを明らかにした。さらに、DR特異的遺伝子を発現しているマクロファージと初代脂肪細胞を共培養することで、脂肪細胞の大きさや分化・増殖への影響を検討した。共培養した脂肪細胞は脂肪滴の蓄積が少なく、脂肪酸合成や脂肪滴形成に関わる遺伝子の発現が減少していた。また、DR特異的発現変動遺伝子をsiRNAによりノックダウンしたマクロファージと脂肪細胞との共培養を行うと、脂肪細胞の脂肪滴蓄積抑制効果や、脂肪酸合成および脂肪滴形成に関わる遺伝子の発現低下作用は認められなくなったことから、マクロファージのDR特異的発現変動遺伝子は、脂肪滴蓄積を制御していることが示唆された。現在、マクロファージにDR特異的遺伝子を導入した遺伝子改変動物(Tgラット)を用いて詳細な機能解析を進めている。DR特異的発現遺伝子を挿入した遺伝子改変動物(Tgラット)の作製は、平成24年度に作製予定であったが、すでにTgラットの作出および維持が出来ている。Tgラットの全身臓器の形態的観察、エネルギー代謝機構を解析し、同定したDR特異的発現物質のin vivoでの機能および新たな生理機能を解析する予定である。また、Tgラットから採取した細胞とDIOラットの脂肪細胞を共培養し、脂肪滴蓄積改善効果を検討する。

あるいは、Tgラットから採取した細胞をDIOラットに移植し、肥満改善効果を検討する。肥満改善効果が認められた場合は、さらに耐糖能やインスリン感受性など内分泌学的な評価を行う予定である。1)動物の維持費や特殊飼料の購入に用いる。2)レプチン、アディポネクチン、インスリンなどのホルモン動態を測定するためELISA関連の試薬を購入する。また、血清脂質を測定するための試薬および器具を購入する。3)脂質代謝・糖代謝関連物質の発現を遺伝子発現レベルで検討するため、定量PCRやウエスタンブロッティングなどを行うために必要な抗体・試薬・チップなどの消耗品を購入する。4)研究打ち合わせのためと研究成果発表のための旅費と学術誌に投稿する費用に用いる。
犯罪や非行に関与した知的障害者に対する施策形成に関する歴史的研究

本研究の目的は、犯罪や非行に関与した知的障害者に対する施策や処遇の形成過程を解明することである。これは、明治期の社会事業の全体像を明らかにすることに加え、福祉と更生保護の連携、地域福祉や障害者の地域移行支援の研究に資する今日的なテーマである。本研究の課題は二つあり、一つは、少年監獄における「出獄人保護」事業の仕組みが形成されていく経緯を明らかにすること。二つ目は、「出獄人」中に存在した知的障害者の生活実態や保護にかかわる取り組みを把握・分析することである。研究方法は、監獄編纂の年次統計書や監獄事業を扱った学会誌及び更生保護団体が発行する事業報告書等を分析対象とし、これらを実証的に検討する。
ライデマイスタートーション、モース理論による非可換不変量と3次元の幾何構造の研究

本年度は特に非可換な変換群を持つ被覆空間から3次元多様体の位相構造を捉えることを目的として、位相不変量であるReidemeister torsionが非可換な係数を持つ場合の同一曲面の間のhomology同境であるhomology cylinderへの応用、基本群の線形表現を与えられたときに定まるねじれAlexander多項式の次数に関する制限についての研究を行った結果,以下のように,homology cylinderの新しい研究手法が確立され、Alexander不変量の一つの基本性質が明らかになった。まず、曲面からの包含写像が基本群の(m+1)階の可解商上に同型写像を導くようなhomology cylinderとして、コンパクト有向曲面の間のm次homology cylinderを導入し、正数mと第1Betti数が正である曲面に対して、それらの成すモノイドとそのhomology同境群が通常のhomology cylinderに対するものとは異なる曲面の写像類群の拡大であることを示した。更に、全てのmと第1Betti数が正である境界付き曲面に対して、曲面群の同様の可解商に自明に作用する既約なm次homology cylinderたちの成すモノイドが無限ランクのアーベル群を商として持つことを示した。2.ねじれAlexander多項式の次数とThurston normの関係線形表現に対する精密化されたReidemeister torsionの双対定理を示した。帰結として、境界が空かトーラスからなる向き付け可能なコンパクト既約3次元多様体に対して、双対と共役である線形表現と全ての境界成分への制限が非自明となるような第1cohomology群の原始的な元に付随するねじれAlexander多項式の次数が、線形表現の次元と第1cohomology類のThurston normの積と偶奇性が等しいことが得られた。本年度は、特に非可換な変換群を持つ被覆空間から3次元多様体の位相構造を捉えることを目的として、位相不変量であるReidemeister torsionが持つ結び目のDehn手術の情報についての研究、3次元多様体の基本群の表現がなす空間の構造とその上の基本的な関数の振る舞いについての研究を行ったところ、以下のような成果があった。線形表現に対するReidemeister torsionからなる、結び目及び閉3次元多様体の不変量を構成し、そのDehn手術公式を導き、更に、2次元球面を底空間とするSeifert多様体に対して計算を行った。帰結として、Reidemeister torsionに関する、結び目がSeifert多様体を生ずるための必要条件を得た。これは以前に知られていた可換表現を用いた方法では判別不可能な例にも有効に適用され、Dehn手術を調べるための新しい手法を与えた。2表現空間上のTorsion体積要素とねじれAlexander関数の対称性についてReidemeister torsionを用いて、絡み目群のSL_2(C)-指標代数多様体(SL_2(C)-表現空間の共役作用による代数幾何学的商)の最低次元の各成分上に複素体積要素を標準的に構成し、これが当代数多様体上の自然な変換と適合的であることを示した。応用として、指標代数多様体上の関数と見做したねじれAlexander不変量がある大域的な対称性を持つことを明らかにした。この研究により、3次元多様体の指標代数多様体の構造の理解が前進し、基本群の表現に付随する不変量の新たな取扱い法が見出された。本年度は、特に非可換な変換群を持つ被覆空間から3次元多様体の位相構造を捉えることを目的として、主に位相不変量であるReidemeister torsionが非可換な係数を取る場合についての研究を行った。その結果、古典的なMorse理論の一般化であるサークル値Morse理論の見地からの不変量の記述、比較的係数の非可換性が小さい場合の不変量の具体的な計算法、応用法について、以下のような成果が得られた。閉多様体上にサークルに値を持つMorse関数が与えられたときに、非可換Reidemeister torsionが勾配ベクトル場の定める力学系のゼータ関数と臨界点が生成する複体の代数的torsionの積で表わされることを示した。これは可換な場合に知られていた公式の非可換な場合への一般化となっており、不変量の新しい側面が明らかになった。帰結として、higher order Alexander多項式と呼ばれる非可換Alexander多項式に対しても同様の分解公式が得られた。Reidemeister torsionを用いて、2階の交換子が消えるmetabelianと呼ばれるクラスに係数を持つ非可換Alexander多項式の最高次係数にあたる新しい不変量を導入し、その計算アルゴリズム及び空間がサークル上のファイバー束であるための必要条件を得た。また、Alexander加群は同じだが当不変量が異なる結び目の例、ファイバー束でないことを古典的なAlexander多項式では判定できないが当不変量によって判定できる例を与えた。これにより、これまで情報の抽出及び計算が困難であった非可換Alexander多項式の新しい応用可能性が生まれた。

まず、曲面からの包含写像が基本群の(m+1)階の可解商上に同型写像を導くようなhomology cylinderとして、コンパクト有向曲面の間のm次homology cylinderを導入し、正数mと第1Betti数が正である曲面に対して、それらの成すモノイドとそのhomology同境群が通常のhomology cylinderに対するものとは異なる曲面の写像類群の拡大であることを示した。更に、全てのmと第1Betti数が正である境界付き曲面に対して、曲面群の同様の可解商に自明に作用する既約なm次homology cylinderたちの成すモノイドが無限ランクのアーベル群を商として持つことを示した。2.ねじれAlexander多項式の次数とThurston normの関係線形表現に対する精密化されたReidemeister torsionの双対定理を示した。帰結として、境界が空かトーラスからなる向き付け可能なコンパクト既約3次元多様体に対して、双対と共役である線形表現と全ての境界成分への制限が非自明となるような第1cohomology群の原始的な元に付随するねじれAlexander多項式の次数が、線形表現の次元と第1cohomology類のThurston normの積と偶奇性が等しいことが得られた。
脂質修飾にスポットライトをあてたG蛋白質と光シグナリングの解析

交付申請書に記載の研究実施計画に沿って研究を遂行し、下記の成果を得た。Gtγ-C71stopノックインマウスの視細胞の解析:網膜光受容細胞のG蛋白質トランスデューシンの脂質修飾の役割を調べるため、イソプレニル化Cys残基を欠失したトランスデューシンγサブユニット(非修飾型Gtγ)を発現する組換えマウス(C71stopマウス)を用いて,以下の解析を行った。1)C71stopマウスの網膜より膜試料を調製して生化学的な解析を行い、発現しているGtγのC末端修飾の欠失を確認した。2)Gtγをはじめとする一群の光シグナル伝達系タンパク質の網膜における発現レベルを特異的抗体を用いて調べた結果、C71stopマウス網膜においてはGtαサブユニットの蛋白質発現量が野生型と比べて大きく減少していることが判明した。3)電気生理学的手法(ERG)を用いた個体レベルでの解析によりC71stopマウス網膜の光反応を調べたところ、視細胞(桿体)に由来する成分が野性型マウスの場合と比較して著しく減弱していることがわかった。概日光受容蛋白質メラノプシンの解析:前年度の研究により,時計組織であるニワトリ松果体には2種類のメラノプシン遺伝子(Opn4-1およびOpn4-2)が発現し,さらに各遺伝子につき2種類のスプライスバリアント(LおよびS)が存在することがわかっている。そこで,これらのスプライスバリアントを培養細胞HEK293において強制発現させ,発色団11-cis-retinalとの再構成を試みたところ,Opn4-1SおよびOpn-4-2L試料において色素の生成が確認された。さらに,これらの色素を粗精製して分光学的解析を行ったところ,それぞれの吸収極大波長は476nmおよび484nmと推定され,いずれのメラノプシンアイソフォームも青色感受性の光受容体であることが明らかになった。1.GtγC71stopノックインマウスの作製:網膜光受容細胞のG蛋白質トランスデューシンの脂質修飾の役割を調べるため、イソプレニル化Cys残基を欠失したトランスデューシンγサブユニット(非修飾型Gtγ)を発現する組換えマウスを作製した。具体的にはまず、マウスGtγ遺伝子のCys71(ファルネシル化部位)の位置に終止コドンを挿入し、翻訳産物がイソプレニル化に必要なCAAXモチーフを持たない(つまり翻訳後修飾を受けない)非修飾型Gtγに改変した。次に、この改変Gtγ遺伝子(C71stop)をターゲッティングベクターに組み込み、ES細胞における相同組換えを行った。この組換えES細胞株を用いて、Gtγ-C71stopノックインマウス(C71stopマウス)を作製した。さらに、このC71stop変異のホモ接合体を作製して網膜抽出液の電気泳動解析を行なったところ、発現しているGtγはイソプレニル化修飾を受けていないことが確認された。2.概日光需要蛋白質メラノプシン調製と光照射実験:メラノプシンーG_<11>経路の生化学的解析に向けて、HEK293細胞を用いた組換えメラノプシンの発現系を構築した。すなわち、ニワトリ松果体由来のメラノプシンcDNA(Opn44)を改変してHEK293に導入し、C末端に1D4タグを付加したOpn4-1蛋白質を強制発現した。この細胞に発色団11-cis-retinalを添加した後、界面活性剤を用いて蛋白質を抽出した。得られたOpn4-1試料の光照射実験を行ったところ、光感受性色素の生成が確認された。,一方、Opn4-1の重複遺伝子(Opn4-2)がニワトリ松果体において発現していることを見出した。さらに松果体由来のcDNAを詳細に解析したところ、Opn4-1およびOpn4-2それぞれに2種類のスプライスバリアント(LおよびS)が存在することが明らかになった。

そこで,これらのスプライスバリアントを培養細胞HEK293において強制発現させ,発色団11-cis-retinalとの再構成を試みたところ,Opn4-1SおよびOpn-4-2L試料において色素の生成が確認された。さらに,これらの色素を粗精製して分光学的解析を行ったところ,それぞれの吸収極大波長は476nmおよび484nmと推定され,いずれのメラノプシンアイソフォームも青色感受性の光受容体であることが明らかになった。
屋内外シームレスな位置情報サービスを提供するためのオープンプラットフォームの構築

本研究は、位置情報を利用したサービスを屋内外問わず提供できるようにすることを目的として「屋内外シームレス位置情報サービスオープンプラットフォーム(以下、本プラットフォーム)の構築を行った。具体的には、本プラットフォームの利用者となりうる鉄道駅や商業施設、スポーツ施設の関係者と共に要求仕様を明らかにし、GPSや準天頂衛星、BLEといった位置センサや空間情報基盤、RTKといった測位技術を適用し、屋内と屋外を意識することなく位置情報を収集・分析・可視化することの有用性を確認した。また、自治体職員などの方に利用頂き、専門技術を有せず位置情報サービスを提供可能な本プラットフォームの有効性を確認した。本研究は、様々な課題を解決するための位置情報を利用したサービスが広く普及することを念頭に置き、そのサービスを屋内・屋外問わず提供するために位置情報を収集し、分析し、可視化することが可能な「屋内外シームレス位置情報サービスオープンプラットフォームを構築することが目的である。今年度は、鉄道駅周辺や商業施設を主な対象として屋内外シームレス測位システムによる位置データの収集および管理に関する要求を明確にすると共に、位置データの分析・可視化の手法について有用性確認を行った。具体的には、対象とした東京駅や二子玉川駅などの駅周辺やいくつかの商業施設における位置情報サービスに関する需要をヒアリングおよびアンケートなどで調査を行い、その上で、必要だと考えられる位置データの収集及び管理に関する要求を整理した。そして、それをもとに、GPSや無線LAN、BLE、IMESに対応した受信機のような測位デバイスを用い、ヒトやモノの位置情報を取得し、異なる測位デバイスからの位置情報を統一的に扱い、その軌跡を3次元的に可視化し、その変化を動的に表示できるようにした。それによって、3次元的なヒトやモノの動きを分析する際の有用性を確認した。今年度は、鉄道駅周辺や商業施設、教育施設を主な対象として屋内外シームレス測位システムによる位置データの分析や可視化に関する要求を明確にすると共に、位置情報サービスに必要な屋内外の地図データ作成の設計と実証を行った。具体的には、対象とした東京駅や二子玉川駅などの駅周辺や幾つかの商業施設において取得した位置データを分析すると共に、屋内外の地図データを施設管理者から提供を受けたデータと実測によりOpen Street Mapなどを用いて3D地図の作成を行った。そして、それをもとに、GPSや無線LAN、BLE, IMESに対応した測位デバイスを用い、ヒトやモノの位置情報を取得し、異なる測位デバイスからの位置情報を統一的に扱い、その軌跡を3次元的に可視化した。その上で、それらの情報を活用した対象地の検索や目的地までの移動のための実証を行い、屋内外シームレスな位置情報サービスを提供するためのオープンプラットフォームの有用性を確認した。研究の目的に対し、平成27年度の研究計画として設定した内容については、屋内外シームレス測位システムによる位置データの分析および可視化に関する要求を明確にすると共に、位置データを活用するための地図に関する要求を明確にし、それらを活用したプロトタイプでの実証により屋内外シームレスな位置情報サービスを提供するためのオープンプラットフォームの有効性を確認することができ、予定通り成果を出せたと考えている。位置情報や地図情報、また、それらの組み合わせに対するニーズはその利用シーンによって多様なため、それらを踏まえた改善が必要であり、更なる検討を進める。今年度は、研究代表者が代表を務めている産官学合同の「位置情報サービスワーキンググループ」のモデル地区である二子玉川ならびに、新たに連携を始めた日産スタジアムにおいて、本プラットフォームの実証実験を行うと共に、その成果を踏まえてプラットフォームの改良を行なった。なお、二子玉川にはライズショッピングセンター内に、無線LANやIMES、BLEといったセンサーが常設されており、日産スタジアムにも、無線LANとBLEが常設されているため、それを活用した。技術的には、GPSと準天頂衛星による測位信号のみならず、それらを活用したRTK(Real-Time Kinematic)GNSS(衛星測位)の手法を導入し、より測位性能を向上させた上で、BLEおよびIMESを活用した屋内外シームレス測位を実現した。その上で、Open Street Mapなどによる地図を用いた位置情報サービスのプロトタイプを行うと共に、データの分析、可視化を比較的容易に実現可能なオープンソースのCARTOを統合することで、高度な専門的技術を有せずに位置情報サービスが提供なプラットフォームとして実証を行い、その有用性を確認することができた。また、そのプラットフォームを活用する上では、利用者が容易にデータを収集、分析できることが重要であるが、プラットフォームを構築するのに加え、その利用についてのチュートリアルへのニーズが高かったため、そのためのセミナーとワークショップを行った。その結果、自治体職員や普段空間情報を専門としていないような方々にもデータの入力や分析を行なって頂くことができるようになり、位置情報を利用したサービスの普及に寄与できる成果を確認することができた。

また、自治体職員などの方に利用頂き、専門技術を有せず位置情報サービスを提供可能な本プラットフォームの有効性を確認した。研究の目的に対し、平成26年度の研究計画として設定した内容については、屋内外シームレス測位システムによる位置データの収集および管理に関する要求を明確にすると共に、位置データの分析・可視化の手法について有用性確認を行うというところまで、予定通り成果を出せたと考えている。ただ、データの可視化の方法は、そのデザイン含め、意思決定に必要な可視化によって必要な情報は多種多様なため、更なる検討を進める。屋内外シームレス測位システムによる位置データの収集および分析・可視化の手法について、オープンプラットフォームのプロトタイプによる検証結果に基づく改良を行う。また、幾つかの利用シーンを想定した実証実験をおkない、実証実験の準備を行い、それぞれの条件でのオープンプラットフォームへの需要を明らかにする共にプラットフォームとして共通な設計にすべき点と、対象にとって設計に工夫が必要な点についても確認する。そして、それを踏まえた実証実験を行い、その有効性を評価する。総合領域屋内外シームレス測位システムによる位置データの収集および分析・可視化の手法について、有識者へのインタビューまたアンケートから得た知見を元に改良を行う。また、実証実験の準備を行い、幾つかの位置情報サービスから集めた位置データを本手法に適用し、実証実験によってその有効性を評価する。1.実証実験の計画・設計:実証実験での運用を行うために、平成26年度に構築した本プラットフォームのプロトタイプを対象に、GPSと準天頂衛星、IMESと無線LANといった2つの異種測位方式を組み合わせた条件での測位を行い、そこで取得した位置データを用い、本手法に適用する。2.実証実験場所を対象としたマップの作成:実証実験を行うには、対象エリアになる屋外と屋内のマップが必要となる。屋外であれば歩道が表現できる精度を確保する必要があり、屋内であればフロアごとに通路やお店の間仕切りが分かるマップが必要となるため作成する。3.実習実験場所を対象とした本手法の適用評価:実証実験の際には、実用的な利用シーンに適合した屋内外シームレスの測位をし、収集した位置データを繋ぎ合わせた結果を評価すると共に、分析・可視化した手法の有効性評価を行うことが重要である。研究者らは、既にリアルタイム防災システムや買い物支援ナビゲーションシステムなどの位置情報サービスを構築しているため、それらの位置情報サービスに適用し、評価することによって本研究の有効性を確認する。また、販売が予定されている通信キャリア等が収集しているビックデータ(位置データ含む)との比較分析をして、本研究の有用性を確認する予定である。
Ｐｈ陽性急性リンパ性白血病に対するＣＤ１９抗原特異的遺伝子改変Ｔ細胞療法の開発

難治性白血病に対する新規治療法として、白血病細胞の表面抗原を標的とした抗原特異的T細胞療法の研究が進んでいる。我々は、トランスポゾン遺伝子導入法および改良された培養技術を用いて、健常人の血液10mlから平均で1.3 x 10e8個と十分な数の抗原特異的T細胞を得ることに成功した。この抗原特異的T細胞は、難治性白血病の一つであるPh陽性急性リンパ性白血病に対し、薬剤耐性の有無にかかわらず強い抗白血病効果を発揮するだけでなく、白血病細胞と接触することで平均で37倍に増殖し、その機能も増強することがわかった。我々の開発した新規治療法は、難治性白血病に対し、新規の治療選択肢の一つとなる可能性がある。我々は4-D Nucleofector Systemを用いたトランスポゾン遺伝子導入法、および血清、細胞株、ウイルスを用いない独自のT細胞培養系を用いて、10mlの健常ドナー末梢血から平均で1.3 x 10e8個のCD19抗原特異的キメラ抗原受容体遺伝子導入(CD19-CAR)T細胞を得ることに成功した。得られたCD19-CAR T細胞数は臨床応用に耐えうる十分な数であった。このCD19-CAR T細胞と、Ph陽性急性リンパ性白血病細胞を7日間共培養したところ、CD19-CAR T細胞はEffector / Target比(E/T比)=1:5, 1:10において7つの細胞株すべてを除去し、E/T比=1:50においても白血病細胞を十分に減少させることを確認した。このCD19-CAR T細胞の抗白血病細胞効果はT315I変異の有無に関わらず同等であった。また、CD19-CAR T細胞は白血病細胞との共培養下において、20日間で平均37倍増殖し、2度の白血病細胞の曝露刺激によって、導入されたCD19-CAR遺伝子の発現、細胞表面TRAILの発現およびIL-2の産生のすべてが、2度とも増大することが確認された。トランスポゾン遺伝子導入法は、現在広く用いられているレトロウイルス遺伝子導入法と比較し安価であり、我々の開発したCD19-CAR T細胞を用いた細胞免疫療法は、薬剤耐性Ph陽性急性リンパ性白血病に対する新規の治療選択肢のひとつとなる可能性がある。トランスポゾン遺伝子導入法によってCD19CAR遺伝子は30%程度のT細胞に導入されていることが明らかとなった。また、低濃度血清下で腫瘍細胞株を一切使用しない培養系において、10ml由来の末梢血から平均で7.5x10e7個のT細胞を得ることに成功した。上記の培養系において作製したCD19CAR-T細胞はPh+ALL細胞に対し、特異的かつ強い細胞障害活性を有することが明らかとなった。また、このCD19CAR-T細胞はPh+ALL細胞の刺激により1週間で約7倍に増殖するとともに、CD19CARの発現強度も一過性に増幅し、刺激前と比較して最大で3倍程度までその発現が強まることが明らかとなった。さらにこのCD19CAR-T細胞とチロシンキナーゼ(TKI)高度耐性株3株を含む7つのPh+ALL細胞株を1週間混合培養し、CD19CAR-T細胞の長期的な抗腫瘍効果について、フローサイトメトリーを用いて評価を行った。共培養1週間後、CD19CAR-T細胞は非常に低いeffector/target比(E/T比=1:5, 1:10)において、TKI高度耐性株3株を含む7株すべてをフローサイトメトリーで検出できないレベルまで減少させることが明らかとなった。また、一部の細胞株に対しては、極めて低いE/T比(=1:50, 1:100)でも、Ph+ALL細胞を著明に減少させることが可能であることが明らかとなった。CD19CAR-T細胞が上記のようにPh+ALLに対し強い抗腫瘍効果を持つ背景を探るため、Ph+ALL細胞表面の副刺激分子に着目しフローサイトメトリーで解析を行った。その結果、Ph+ALLではTKI耐性株3株を含む7株すべてにおいて副刺激分子が高いレベルで発現している事が明らかとなった。この結果は、Ph+ALLのT細胞療法に対する感受性の高さを示唆していると考えられた。piggyBacトランスポゾン法を用いてCD19CARをT細胞に遺伝子導入した。遺伝子導入されたT細胞は低濃度血清下で、腫瘍細胞株フリーの培養系を用いて培養した。この実験系において健常のドナー3人から安定したCD19CAR-T細胞の培養に成功した。また、作製したCD19CAR-T細胞はPh+ALL細胞に対し、特異的かつ強力な細胞障害活性を持つことを明らかにした。また、In vitroの実験系において、このCD19CAR-T細胞は非常に低いEffector/Target比(1:5,1:10)においても、1週間の混合培養の後にほぼ完全にPh+ALL細胞を除去できることを明らかにした。

従って、「研究の目的」であるpiggyBac導入法によるCD19CAR-T細胞の開発と、CD19CAR-T細胞のPh+ALL細胞に対する有効性を明らかにすることについては、ほぼ達成されたと考えられるため。1)ヒトPh+ALLマウスモデルを用いた抗腫瘍効果の評価2)安全性の評価4週間以上in vitroで培養したCD19CAR-T細胞、およびCD19CAR-T細胞の移植後3か月経過したNOGマウスの末梢血を用いて、安全性の確認実験を行う。(a)研究支援者の中沢らが先に報告したゲノム網羅的解析法を用いてCD19CAR遺伝子の挿入部位を同定し、癌原遺伝子内あるいはその近傍への遺伝子挿入頻度を明らかにする(b)Biomed-2 multiplex PCR法を用いたT細胞受容体のクロナリティー解析を行う。3)自殺遺伝子を利用した遺伝子改変T細胞療法の安全性の向上1.前年度未使用額が生じた状況当初計画で見込んだよりも安価に研究が完了したため、次年度使用額(43,897円)が生じた。2.次年度の研究費使用計画次年度の研究費は前年度未使用額を含め、in vivoの実験のためのNOGマウス購入、CAR-T細胞の作成および解析のための遺伝子導入試薬、リンパ球培養培地、抗体の購入に使用する。また、本研究で得られた成果を発表するため日本血液学会等の学会参加旅費に使用する。
スピンフラストレーションを内在する金属錯体集合体を用いた交差相関物性の開拓

本研究では、金属錯体を用いたらせん構造を有するヘリケートの空間内にクラスターを内包したクラスターヘリケートに着目した。Hb pypzを配位子とする五核クラスターヘリケートは、らせん空間内に三角形型金属酸化物クラスター(M3O)を内包しており、M3O部位の幾何構造の対称性を反映した多様なフラストレーションを実現する。さらに、金属イオンの集積化による多段階の酸化還元特性を持つことから、様々な金属イオンを用いてフラストレーションを有する五核クラスター錯体を合成し、酸化還元を利用した物性発現を検討した。我々はこれまでに、直線型のπ共役系を有する多座配位子Hbpypz (= 3,5-Bis(2-pyridyl)pyrazole)を配位子とする集積型金属錯体が、特異な三重螺旋空間に二等辺三角形及び不等辺三角形型金属酸化物ナノクラスターM3(μ3-OH)あるいはM3(μ3-O)を内包する五核クラスターヘリケート型カチオン錯体を形成することを報告している。本研究では、この化合物をプロトタイプとして中心部位のM3(μ3-OH)あるいはM3(μ3-O)の対称性制御を試みた。対アニオンに厳密三回回転対称軸を有する[CrIII(ox)3]3- (ox2- = oxalate dianion)を用いた五核クラスターヘリケート型錯体[{M(μ-bpypz)3}2M3(μ3-OH)][Cr(ox)3] (M = Cu (1), Zn (2), Ni (3))及び[{Fe(μ-bpypz)3}2Fe3(μ3-OH)]2[CrIII(ox)3](OH)5 (4)のそれぞれ選択的合成に成功した。単結晶X線構造解析の結果、五核クラスターヘリケート型カチオン錯体の中心M3(μ3-OH)あるいはM3(μ3-O)部分は、錯体1及び錯体2では、二等辺三角形型構造を形成するのに対し、錯体3及び錯体4では、厳密な正三角形型構造を有することが明確に示され、対アニオンによる五核クラスターヘリケート型カチオン錯体における中心M3(μ3-OH)あるいはM3(μ3-O)部分の対称性制御に成功し、幾何学的フラストレーション系磁性体として有力な候補分子であることを明らかにした。直線型のπ共役系を有し、且つ、種々の金属イオンに配位及び架橋可能な4個の窒素原子部位を持つHbpypz (= 3,5-Bis(2-pyridyl)pyrazole)を有機多座配位子とする集積型金属錯体が、特異な三重螺旋空間に二等辺三角形及び不等辺三角形型金属酸化物ナノクラスターM3(μ3-OH)あるいはM3(μ3-O)を内包する五核クラスターヘリケート型カチオン錯体を形成することをこれまで報告している。この化合物をプロトタイプとして本年度は、Ru(II)イオンにbpypzーが3つ配位したオープンスペースを有するトリス体ユニット[Ru(μ-bpypz)3]を利用し、多核ナノクラスターの抱接を試みた。多核ナノクラスター源としてCu(II)イオンを用いて合成することで、[{Ru(μ-bpypz)3}Cu3(μ3-OH){Cu3(μ3-O)Cl3}(μ2-bpypz)3](PF6)2の新規七核錯体化合物を得た。単結晶X線構造解析の結果、[Ru(μ-bpypz)3]のオープンスペースに2つのCu(II)三角ナノクラスターCu3(μ3-O)及びCu3(μ3-OH)が包摂された分子構造を有することが明らかとなった。この錯体のカチオン部分の分子構造は、これまでのキャンディーラップ型と大きく異なり、片側だけが閉じられたブーケ状構造を有する。このように、一方は閉じられ、もう他方が開いた構造を有するブーケ状空間に多核ナノクラスターをトラップできた金属錯体はこれまでにほとんど報告例がなく、新規な電子・スピン状態の発現及び観測が期待できる。Hbpypzを配位子とする五核クラスターヘリケートは、らせん空間内に三角形型金属酸化物クラスター(M3O)を内包しており、M3O部位の幾何構造の対称性を反映した多様なフラストレーションを実現する。対アニオンに三回回転軸を有する[Cr(ox)3]3-を用いたヘリケートにおいては、M3O部位は正三角形となり、用いる対アニオン分子の対称性の調節によりカチオンユニットのM3O部分の対称性が制御可能であることを明らかにした。正三角形を形成したNiイオンの系においては、低温側で二等辺三角形を形成している系とは異なる挙動を示し、対称性の制御により磁性の制御も可能であることが示唆される。Feイオン系において、酸化数を決定するために、メスバウアーの測定を行った。溶媒の存在する条件で測定を行ったところ5つのFeイオンは全て2価であった。しかし、溶媒の存在しない条件で測定を行ったところ、5つのうち2つが3価、残りの3つが2価の混合原子価状態となることが明らかとなった。

また、Mn5核ーNi(mnt)2分子複合体においては、Ni部位が互いにスタッキングして、連続した一次元カラムを形成することが示され、高電気伝導性発現が期待される。また、VBS計算より、Mn五核ユニットにおいては三角クラスター部分の1つが3価で残りの4つが2価、Ni部位においてはモノアニオンとジアニオン2種類の酸化数のアニオンの存在が示唆され、分子内と分子間の2種類の混合原子価状態を有する系となっていた。本研究では、金属錯体を用いたらせん構造を有するヘリケートの空間内にクラスターを内包したクラスターヘリケートに着目した。Hb pypzを配位子とする五核クラスターヘリケートは、らせん空間内に三角形型金属酸化物クラスター(M3O)を内包しており、M3O部位の幾何構造の対称性を反映した多様なフラストレーションを実現する。さらに、金属イオンの集積化による多段階の酸化還元特性を持つことから、様々な金属イオンを用いてフラストレーションを有する五核クラスター錯体を合成し、酸化還元を利用した物性発現を検討した。特異的な磁気的スピンフラストレーション現象とそれより導出される新規交差相関物性の創出を目的とした本研究において、新しいトポロジーを持つ多核錯体の合成に成功したことは、新たなフラストレーション系の開拓への第一歩となるため本研究はおおむね順調に進展していると思われる。錯体化学来年度は、得られた錯体群の物性測定を行い、交差相関物性の開拓を目指す。特異的な磁気的スピンフラストレーション現象とそれより導出される新規交差相関物性の創出を目的とした本研究において、対アニオンによる五核クラスターヘリケート型カチオン錯体における中心M3(μ3-OH)あるいはM3(μ3-O)部分の対称性制御に成功したことは、新たな幾何学構造をもつフラストレーション系磁性体の構築が可能であることを示しており、本研究の大きな進展といえる。さらに、上記ヘリケートとは異なる対称性をもつフラストレーション系の構築にも着手しており、本研究はおおむね順調に進展していると思われる。今後は、得られたクラスターヘリケートの精密磁気測定誘電率測定等を行い、交差相関物性の開拓を目指す。旅費として予定していたが、学内予算で支出したため残額が生じた。外国出張旅費の一部として使用予定。
充填スクッテルダイト化合物の創製と新しい実験手法によるフェルミ面の研究

本研究の研究目的は,主として充填スクッテルダイト化合物の純良単結晶を育成し,その特徴的なカゴ状構造に起因した種々の物性をドハースファンアルフェン(dHvA)効果の実験から、フェルミ面などの電子状態を明らかにするとともに、カゴ状構造を持つ他の物性系を探索していくことである。本年度は、まず、首都大学・佐藤英行教授との共同研究で弱強磁性体LaFe_4As_<12>のドハースファンアルフェン効果の実験をおこない、そのフェルミ面を明らかにした。これまでのバンド計算が予想した結果とは異なっていた。その食い違いが弱強磁性の出現と関係しているのか、今後明にしていく必要がある。次に、他のカゴ状耕造を持つ物質として、Rh_<17>S_<15>,RCd_<11>(R:希土類元素)、YbIr_2Zn_<20>の単結晶育成とその物性研究を行なった。Rh_<17>S_<15>は超伝導転移温度Tc=5Kの超伝導体である。この系の超伝導特性を調べ、低いTcに比べ上部臨海磁場は約20Tと大きな値を持つことを見いだした。これは、Rh_<17>S_<15>の電子比熱係数が約100mJ/K^2molと大きな強相関系であり、Rhの大きな状態密度がフェルミ準位にあることを示していることと思われる。また、RCd_<11>およびYbT_2Zn_<20>は、それぞれ希土類元素がCdやZnによってカゴ状に取り囲まれ、隣同士の希土類元素が約67Aと比較的長くなっている。そのため、RCd_<11>では希土類元素の4f電子の局在的な性格が見られた。ところが、YbIr2Zn20の基底状態は4f電子が遍歴的な重い電子状態にあることがdHvA効果の実験から明らかとなった。これが、数多くのZnと4f電子との混成効果によるものなのか、今後の研究の課題となった。本研究の研究員的は,主として充填スクッテルダイト化合物の純良単結晶を育成し,その特徴的なカゴ上構造に起因した種々の物性をフェルミ面研究から明らかにすることである.これまでリン系を中心に多くの充填スクッテルダイト化合物のフェルミ画を明らかにしてきたが,ヒ素系やアンチモン系のスクッテルダイト化合物の研究は,まだ十分にはなされていない.その理由として,大型の純良な単結晶の育成が困難なごとが挙げられる.そこで,本研究では,フラックス法を財いた純良な単結晶の育成を進めるとともに,高圧合成法による単結晶育成を行なっている首都大学・佐藤英行教授のグループと協力し,ヒ素系・アンチモン系のスクッテルダイト化合物の単結晶を得る.さらに,カゴ上構造をもつ新たな物質の物性研究をおこなう.また,微小な単結晶でもドハースファンアルフェン(dHvA)振動の観測が可能なマイグロカンチレバー方式のdHvA検出システムの開発を進めることを本研究の目的とする.まず,本年度は,上記カンチレバー方式のdHvA検出システムの開発を行なった。その成果として,最近注目を集める鉄プニクタイト超伝導体LaFePOのフェルミ面の観測に成功した。単結晶育成で得られたLaFePOは辺が1mm,厚さ0.05mm程度の非常に薄く小さな単結晶であった.ピックアップコイルを用いた通常のdHvA振動・観測システムでは,dHvA振動は観測されなかったが,マイクロカンチレバー方式の観測システムによりdHvA振動が検出できた.LaFePOのフェルミ面は,その形状を反映して二次元的な円筒状フェルミ面をもつことを明らかにした.本研究の研究目的は,主として充填スクッテルダイト化合物の純良単結晶を育成し,その特徴的なカゴ状構造に起因した種々の物性をドハースファンアルフェン(dHvA)効果の実験から、フェルミ面などの電子状態を明らかにするとともに、カゴ状構造を持つ他の物性系を探索していくことである。

そのため、RCd_<11>では希土類元素の4f電子の局在的な性格が見られた。ところが、YbIr2Zn20の基底状態は4f電子が遍歴的な重い電子状態にあることがdHvA効果の実験から明らかとなった。これが、数多くのZnと4f電子との混成効果によるものなのか、今後の研究の課題となった。
補酵素再生系バイオセンサーを検出端とするフローインジェクション分析法の研究

補酵素NADと脱水素酵素を不溶性担体であるSepharoseに固定化した補酵素再生系を確立し,フローインジェクション分析(FIA)法への適用を行った.1.グルタルアルデヒド(GA)を用いたNADの直接固定化法を開発した. NADの固定化様式はGA活性化Sepharoseとの反応pHに依存した.酸性領域(pH3)ではGA活性化Sepharose上のαβ不飽和アルデヒドとNADのアデニン環環外アミノ基がメチロール型構造を形成して結合することが示唆された.中性領域(pH8)ではNADのリン酸部分が担体の正電荷との間でイオン的な相互作用により結合することが示唆された.pH8で固定化されたNADは高い補酵素活性を有していることが認められ,アルコールデヒドロゲナーゼ(ADH)との同時固定化に適用された.2.ADH, NADの同時固定化には,臭化シアン活性化SepharoseにヘキサメチレンジアミンとGAを各々3回反応させてスペーサーを導入した修飾ゲル(R_3-Seph)を用いた.同時固定化ゲルの再利用性はGAの反応時間に大きく依存していた.これはGAのアルドール縮合により形成される担体上の立体的な構造に起因すると考えられた.最適条件(各段階でのGA反応を5%濃度, 2時間)で調製したADH, NAD同時固定化ゲルは00.8mMエタノールに対しバッチ法での定量性が認められた.3.ADH, NAD,ジアフォラーゼ三者同時固定化ゲルを調製した.この場合にもGAの反応条件は再利用性及び活性に大きな影響を与えた. R_3-Seph調製の際の最適条件は, GA濃度20%,反応時間1時間であった.最適条件で調製した三者同時固定化ゲルを用いてFIA法によるエタノールの定量を行った. 0.10.5Mの範囲で濃度依存性が認められ,エタノール定量に十分な適用性を有することを確認した.補酵素NADと脱水素酵素を不溶性担体であるSepharoseに固定化した補酵素再生系を確立し,フローインジェクション分析(FIA)法への適用を行った.1.グルタルアルデヒド(GA)を用いたNADの直接固定化法を開発した. NADの固定化様式はGA活性化Sepharoseとの反応pHに依存した.酸性領域(pH3)ではGA活性化Sepharose上のαβ不飽和アルデヒドとNADのアデニン環環外アミノ基がメチロール型構造を形成して結合することが示唆された.中性領域(pH8)ではNADのリン酸部分が担体の正電荷との間でイオン的な相互作用により結合することが示唆された.pH8で固定化されたNADは高い補酵素活性を有していることが認められ,アルコールデヒドロゲナーゼ(ADH)との同時固定化に適用された.2.ADH, NADの同時固定化には,臭化シアン活性化SepharoseにヘキサメチレンジアミンとGAを各々3回反応させてスペーサーを導入した修飾ゲル(R_3-Seph)を用いた.同時固定化ゲルの再利用性はGAの反応時間に大きく依存していた.これはGAのアルドール縮合により形成される担体上の立体的な構造に起因すると考えられた.最適条件(各段階でのGA反応を5%濃度, 2時間)で調製したADH, NAD同時固定化ゲルは00.8mMエタノールに対しバッチ法での定量性が認められた.3.ADH, NAD,ジアフォラーゼ三者同時固定化ゲルを調製した.この場合にもGAの反応条件は再利用性及び活性に大きな影響を与えた. R_3-Seph調製の際の最適条件は, GA濃度20%,反応時間1時間であった.最適条件で調製した三者同時固定化ゲルを用いてFIA法によるエタノールの定量を行った. 0.10.5Mの範囲で濃度依存性が認められ,エタノール定量に十分な適用性を有することを確認した.1.NADの固定化NADをグルタルアルデヒド(GA)活性化Sepharose(GA-Seph)に直接結合させる方法を検討した。結合ヌクレオチド量はリンの定量により、また補酵素活性はアルコールデヒドロゲナーゼ(ADH)を用いて測定した。NADのGA-Sephへの固定化量は、pHにより大きく影響され、pH3とpH8では明らかにその結合様式に違いが認められた。水素化ホウ素ナトリウムによる担体上のアルデヒド基の還元、あるいは各種のアデニン含有ヌクレオチドの固定化量の比較等から、pH3において、GA-SephへのNADの結合は、担体上のアルデヒド基とNADのアデニン環環外アミノ基との間で生じていることが示唆された。一方、pH8においては、AH-Sephに直接NADが結合することからその結合がイオン的な相互作用であるものと考えられた。pH3及びpH8で固定化されたNADのVmaxは遊離のNAD(1.0)に対して各々0.51及び0.85であり、十分な補酵素活性を有していることが認められた。2.ADHとNADの同時固定化酵素・補酵素間の共役効率の向上のためにヘキサメチレンジアミン(HMDA)及びGAを交互に反応させることによりスペーサーを導入した。導入されたスペーサー長は、ADH,NAD同時固定化ゲルの再利用性に大きな影響を有していた。即ち、HMDAとGAの反応をCNBr-活性化Sepharaseに3回繰り返すことにより調製した【R_3】-Sephが、再利用性及び調製に要する時間の点から、最適なスペーサー長を有していると考えられた。

さらに、【R_3】-Sephの再利用性はGAの反応条件に大きく依存していることが認められた。最適条件でGAを反応させて調製した【R_3】-Sephはエタノールに対する5回の繰り返し測定後も活性の減少は認められず、エタノールに対して十分な定量性を有していた。
社会科(歴史)・第一言語・第二言語の相互育成のための統合カリキュラムと教材の開発

本研究では,言語少数派の子どもたちが第一言語と第二言語(日本語)の学習を進めると同時に歴史学習に取組み,出身国と日本の双方の歴史観を吟味しながら自らの価値観を形成できるカリキュラムの開発を目指した。具体的には,中国語を第一言語とする生徒を対象とし,日本史と中国史,中国語と日本語での学習を統合し,認知的な言語活動を保障する統合的なカリキュラム作成の枠組みを策定し,支援案と教材案を作成した。本研究の目的は、年少者日本語教育において、学校現場を含めより多くの修学支援場面での実践の手立てとなる教科内容の理解、L1とL2の伸長を図るための統合的なカリキュラムと教材を開発することである。具体的には、現在日本語指導が必要な外国人児童生徒の上位を占める中国語L1話者を対象とし、日本史と中国史を関連付け、L1(中国語)とL2(日本語)で学習を進めるという方法で実施するカリキュラムと教材の開発を行う。カリキュラムと教材の試案作成→試行→評価→完成という段階を踏むことで、汎用性と継続性を見込めるカリキュラムの開発を目指す。平成22年度は社会科(歴史)と第一言語と第二言語の相互育成のための統合カリキュラムと教材の試案づくりを行った(尚、申請書の研究計画書通り、平成22年度はカリキュラムと教材の作成を主たる目的とし、学会や論文等の発表は行っていない)。具体的な作業は、研究協力者とともに行っており、まず、日本と中国の中学校における歴史学習の内容について勉強会を開き、それぞれで行われている自国の歴史教育の概要を把握した。次に、それぞれの歴史学習で重視されている日本史と中国史に関する学習内容を踏まえた上で、特に両国間の歴史で関連性のある事象や概念に着目して整理し、当該カリキュラムで取り扱う学習項目を抽出した。次に、それらを学ぶための具体的な授業案と指導法、教材について検討を重ね、試案を作成した。現在までに、一部試案をもとに試行を進め、利用者のフィードバックを得て見直し、改訂を行っている。また、指導上の具体的な指南となる手引き書の作成も併せて行っている。手引き書の作成は申請時の研究計画書には含めていなかったが、汎用性と継続性のあるカリキュラム開発を目指す上で外国人児童生徒の学習指導に携わる者にとってより利用しやすい形でリソースを提供することが重要であると考え、含めることとした。平成23年度は引き続き試案を試行し、評価を行い、カリキュラムと教材の完成を目指す。本研究は、文部科学省(2011)の調査で日本語指導が必要な外国人児童生徒の上位を占める中国語L1のJSL生徒を対象とし、日本史と中国史を関連付け、L1とL2(日本語)で学習を進めるという方法において、日本史と中国史、中国語と日本語での学習を統合し、認知的な言語活動を保障する統合的なカリキュラム作成の枠組みを検討し、支援案と教材を作成する。社会科はその国の社会や文化、価値観が強く反映され(Chamot&O'Malley1994:263)、特に日中のように歴史認識等の問題を抱える生徒にとっては、双方の歴史観を吟味しながら自らの価値観を形成できるカリキュラムの開発には意義があると考える。平成22年度から平成23年にかけて日本と中国の中学校の歴史教科書を基に学習項目の選定と支援案(授業案)の作成を行った。(1)日本と中国の中学校の歴史の教科書から各国の歴史を理解する上で重要な学習内容を抽出し優先すべき学習項目を検討する、(2)学習項目について「何のために、何を、どのように学べるようにするか」という観点から関連付ける部分を選定する、(3)総合問題として二国史を関連付け、生徒が自分なりの意味の形成ができるように問いを設ける、(4)二国史をどのように関連付けられるか具体的に授業展開を想定しながら支援案を策定するという手順で行った。平成23年度に試行し、参与観察と支援者と生徒のやりとりを分析し、支援案の改善点を検討し、さらに(1)日本語と中国語での学習内容において関連・共通事項を明確化する、(2)個々の事象・名称よりも全体を捉える事を優先する、(3)両国史を学ぶことによって子ども自身にとっての「意味」を見出せるようにする、(4)支援案には核となる問いだけでなく前段階となる問いも明示する、(5)学習活動を言語認知プロセス(Hall1996:68-69)に照らし合わせることに留意し支援案と教材を作成した。