hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
キレート配位子を利用した多孔性セラミック－有機相ナノ複合気体分離膜の創製

当該年度は,TiO2-ZrO2-キレートゾルを用いた気体分離膜の作製と評価を予定していたが,昨年度に前倒しで製膜と評価を行った結果,透過性が低いことが明らかとなったため,本年度は,膜性能向上に必要な膜構造の制御について検討を行った.最終年度に向けて高性能な膜作製のための指針が得られるところとなり,また,膜材料に存在する有機基に関するキャラクタリゼーションも行うことができたことから,概ね順調に進展していると判断される.1.TiO2-ZrO2-キレート剤複合膜による気体透過特性およびナノろ過評価有機キレート剤としてドーパミンおよびイソプレナリンを用いて調製したゲル粉体試料は,298 KにおいてTiO2-ZrO2試料よりもCO2吸着量が大きい値を示した.これはキレート配位子に含まれるアミノ基がCO2とアルキルアンモニウムカーバイトを形成するなどしてCO2親和性を発現したためであると思われる.これら材料を用いて作製したTiO2-ZrO2-有機キレート配位子複合膜は,TiO2-ZrO2膜と比較して,分子ふるい性の発現が確認された.しかし,その選択性は高いとは言えず,ガス分離膜としての応用は難しいと判断された.そこで,キレート剤としてイソオイゲノールおよび2,3-ジヒドロキシナフタレンを加えた膜を空気中500°Cで焼成することで有機キレート剤をテンプレートとするセラミック膜を作製した.これらの膜は,分画分子量2000程度の分画性能を示し,ナノろ過膜としての応用可能性が示された.2.分子動力学法による有機物・セラミック複合膜構造の作製と透過シミュレーションBIOVIA社製MATERIALS STUDIOを用いて有機官能基とTiO2セラミック相を有する構造を再現し,膜細孔表面との相互作用が異なる複数の分子の非平衡分子動力学膜透過シミュレーションを行った.透過分子-膜表面官能基相互作用が大きい場合には透過流量は減少し,細孔径の増加および官能基密度の低下に伴い粘性流れに近づく傾向を示した.ナノ細孔内においては,細孔表面からの相互作用の影響により透過流量が変化することが示された.また,透過分子が十分に拡散できない場合や立体障害の影響を大きく受ける場合,および透過流体が層状構造のような特異な構造となる透過状態では連続流体としての透過モデルを適用できないことが明らかとなった.有機キレート剤は窒素雰囲気下350°Cで焼成することでセラミック膜中に残存した.アルミナ基材にTiO2-ZrO2-Dopamineゾルをコーティングした膜の35°CにおけるCO2/N2透過率比は20を示し,ガス分離膜の作製が可能であることが示された.一方,有機キレート剤をテンプレートとするTiO2-ZrO2膜は,分画分子量2,000程度の分画性能を示し,ナノろ過膜としての応用可能性が示された.圧力勾配存在下の非平衡分子動力学透過シミュレーションより,ナノ細孔内においては,細孔表面からの相互作用の影響により透過流量が変化することが示された.・TiO2-ZrO2-キレートゾルを用いた製膜,気体透過性評価CO2分離材料としての有用性は認められ,また分子ふるい的な気体分離膜の作製が可能であることは明らかとなったため,今後はゾルの調整条件(ゾル粒径)や製膜条件(温度)の最適化を図って,高性能な気体分離膜の作製を試みる.特に二酸化炭素透過選択性およびオレフィンガス透過性に着目し,評価用装置を必要に応じて整備する.・キレート由来有機物のキャラクタリゼーションTiO2-ZrO2-キレートゲルを化学的に分析し(FT-IRなど)残存有機官能基や化学結合の様子を評価する.キレートの種類や焼成条件(温度・雰囲気)により有機物相にどのような違いが現れるかを検討し,様々な仕様のTiO2-ZrO2-キレート複合膜の気体透過特性との関連を明らかとする.・分子動力学法による有機物・セラミック複合膜構造の作製と透過シミュレーション
膜内切断(RIP)プロテアーゼの細胞機能

1,RsePの解析:大腸菌表層ストレス応答を司る転写因子シグマEの活性化は、抗シグマ因子RseAの二段階切断(DegSが細胞外ドメインを、RsePが膜貫通領域を切断)が必要とされてきた。一方、我々の過去の遺伝学的解析から、シグマEの活性化機構としてDegSに依存しない経路があること、また、その経路に於いてはRsePの細胞外に存在するPDZドメインが重要な役割を担うことが示唆されていた。折しも他の研究グループから、RsePの2つのPDZ(PDZ-NとPDZ-C)のうちPDZ-CがRseAの一段階目の切断末端と相互作用し、そのことが二段階目の膜内切断に必要であるという新たなモデルが提唱された。この結果は我々の過去の研究結果と対立していたため、その点も踏まえてPDZドメインの詳細な解析を行った。その結果、他のグループが重要であるとしたPDZ-CおよびRseAの切断末端はin vivoに於いてはRseAの膜内切断には必須でないことが示された。また、架橋実験から、PDZ-Nと相互作用する何らかの因子が存在することが示唆された。この結果は、我々が提唱してきたPDZ-Nのリガンドを介したRsePの活性制御モデルを裏付けるものであり、また、リガンドの同定に向けた重要な足がかりとなることが期待される。以上の成果は、シグマE活性化におけるプロテオリシス・カスケードの制御機構とその意義をより総合的に、かつ正確に理解する一助となるものと思われる。2.GlpGの解析:大腸菌GlpGプロテアーゼの切断モチーフの同定をシステマティックな変異解析により進行させている。これまでに得られている結果から、最近報告された基質認識の「コンセンサス」配列とは異なるパターンが浮かび上がりつつある。天然の基質同定のための手がかりとしても期待出来る。S2PファミリープロテアーゼであるRsePは細胞質膜を超えたシグナル伝達を担う膜内切断プロテアーゼであるが、H21年度の研究から、我々は、これまで知られていなかったRsePの第二の生理機能を見いだした。分泌蛋白質はN末端にシグナル配列を持った形で合成され、膜透過に伴いこのシグナル配列が切断除去され、本体は細胞外へ遊離し、シグナル配列は膜内にとどまる。原核生物に於いて膜内にとどまったシグナル配列の代謝についてはほとんど知られていなかったが、我々は大腸菌に於いてはRsePが膜内におけるシグナル配列切断を中心的に担うことを見いだした。枯草菌に於いてもS2Pホモログがシグナル配列の膜内切断に関与することを見いだし、シグナル配列の膜内切断に於けるS2Pの普遍的重要性が示された(論文投稿準備中)。シグナル配列の膜内切断は生体膜の品質維持に必要であり、また、切断後のポリペプチドが生理機能を発揮する例も幾つか知られている。この重要なプロセスについて、多くの教科書には「原核生物のシグナル配列膜内切断はSppAと呼ばれるプロテアーゼが担っている」と記載されているが、本知見は、この基礎的な知見に関する誤解を修正するものである。本知見により、シグナル配列の膜内切断を伴う生理機能(膜の品質管理やフェロモン分子の産生など)の分子レベルでの理解がさらに進む物と期待される。1)枯草菌GlpGホモログYdcA欠失により生育阻害が起こることを見いだした。今後、他の膜内プロテアーゼの変異との組み合わせでこの生育阻害にどのような変化が見られるか観察し、GlpGファミリープロテアーゼの機能解析を推進する。
E型肝炎ウイルスの増殖機構および病原性の解析

E型肝炎ウイルス(HEV)に感染したブタ肝臓より組織乳剤を作成し、PLC/PRF/5細胞に感染させ、本細胞で増殖可能なHEV株83-2を取得した。この83-2株からHEVの感染性クローンを作成し、本クローンの構造蛋白領域をレポーター遺伝子と置き換えたHEVレプリコンの作成に成功した。特に、レポーター遺伝子としてルシフェラーゼを持つレプリコンは、ウイルスの細胞内での増殖を感度よくモニターできる系として用いることができる。現在、LOPAC化合物ライブラリをHEVレプリコン導入後のPLC/PRF/5細胞に添加し、ウイルス増殖を抑制する化合物のスクリーニングを行っており、同定された化合物の作用からHEV増殖メカニズムの解析を行う予定である。また、reverse geneticsの手法によりHEVの感染性を規定する領域の解析、感染細胞内でのウイルス複製機構の解析も実施している。一方、PLC/PRF/5細胞にHEVを感染させ、抗HEV抗体を用いて蛍光抗体染色を行うと、長期間培養後もHEVに感染していない細胞が見られ、この細胞株はヘテロな集団であることが推測された。そのため、single cell cloningを行い、クローニングされた多数の細胞株についてHEVの感染性を調べたところ、増殖性のない細胞株が複数見出された。このスクリーニングにより取得できた、HEVが感染できる細胞とできない細胞の性状を比較解析することにより、宿主側でHEV感染に重要な役割を果たすと考えられる因子の解析を行っている。現在、感受性細胞からcDNAライブラリを構築し、このライブラリを非感受性細胞に導入し、感受性になった細胞に導入された遺伝子を解析することで、HEVの細胞への感受性を規定している因子の同定を進めている。本株はgenotype 3であった。全長を5つのフラグメントに分割してRT-PCRによりcDNAを取得し、連結して全長cDNAを構築した。5'端に導入したT7 promoterを用いて全長RNAを合成した後、PLC/PRF/5細胞にエレクトロポレーションにより導入したところ、導入後1週間から培養上清中にHEV抗原蛋白(ORF2、キャプシド蛋白)の分泌が観察され、このRNAは細胞内で増殖することが確認された。また、この培養上清をnaiveなPLC/PRF/5細胞に添加したところ、2週間目から培養上清中にHEV抗原蛋白の分泌が確認されたことから、本クローンは感染性を有することが確認できた。このようにHEVの感染性クローンを取得することができたため、今後は本クローンを用いたreverse geneticsの実験を行い、特にHEVの感染性を規定する領域の解析、感染細胞内でのウイルス複製機構の解析を行うことを予定している。一方、PLC/PRF/5にHEVを感染させ、抗HEV抗体を用いて蛍光抗体染色を行うと、長期間培養後もHEVに感染していない細胞が見られ、この細胞株はヘテロな集団であることが推測された。そのため、single cell cloningを行い、クローニングされた多数の細胞株についてHEVの感染性を調べており、これらの細胞株の中で効率よくHEVが感染できる細胞を選択し、培養細胞系の確立を目指す。また、感染できる細胞とできない細胞を比較解析することにより、宿主側でHEV感染に重要な役割を果たすと考えられる因子の解析を行いたい。E型肝炎ウィルス(HEV)に感染したブタ肝臓より組織乳剤を作成し、PLC/PRF/5細胞に感染させ、本細胞で増殖可能なHEV株83-2を取得した。

5'端に導入したT7promoterを用いて全長RNAを合成した後、PLC/PRF/5細胞にエレクトロポレーションにより導入したところ、このRNAは細胞内で増殖することが確認された。また、この培養上清をnaiveなPLC/PRF/5細胞に添加したところ、2週間目から培養上清中にHEV抗原蛋白の分泌が確認されたことから、本クローンは感染性を有することが確認できた。この樹立されたHEVの感染性クローンを用いてreversegeneticsの手法によりHEVの感染性を規定する領域の解析、感染細胞内でのウイルス複製機構の解析を実施している。また、LOPAC化合物ライブラリをHEV RNA導入後のPLC/PRF/5細胞に添加し、ウイルス増殖を抑制する化合物のスクリーニングを行っている。同定された化合物の作用からHEV増殖メカニズムの解析を行う予定。一方、PLC/PRF/5細胞にHEVを感染させ、抗HEV抗体を用いて蛍光抗体染色を行うと、長期間培養後もHEVに感染していない細胞が見られ、この細胞株はヘテロな集団であることが推測された。そのため、single cell cloningを行い、クローニングされた多数の細胞株についてHEVの感染性を調べたところ、増殖性のない細胞株が複数見出された。このスクリーニングにより取得できた、HEVが感染できる細胞とできない細胞の性状を比較解析することにより、宿主側でHEV感染に重要な役割を果たすと考えられる因子の解析を行っている。E型肝炎ウイルス(HEV)に感染したブタ肝臓より組織乳剤を作成し、PLC/PRF/5細胞に感染させ、本細胞で増殖可能なHEV株83-2を取得した。この83-2株からHEVの感染性クローンを作成し、本クローンの構造蛋白領域をレポーター遺伝子と置き換えたHEVレプリコンの作成に成功した。特に、レポーター遺伝子としてルシフェラーゼを持つレプリコンは、ウイルスの細胞内での増殖を感度よくモニターできる系として用いることができる。現在、LOPAC化合物ライブラリをHEVレプリコン導入後のPLC/PRF/5細胞に添加し、ウイルス増殖を抑制する化合物のスクリーニングを行っており、同定された化合物の作用からHEV増殖メカニズムの解析を行う予定である。また、reverse geneticsの手法によりHEVの感染性を規定する領域の解析、感染細胞内でのウイルス複製機構の解析も実施している。現在、感受性細胞からcDNAライブラリを構築し、このライブラリを非感受性細胞に導入し、感受性になった細胞に導入された遺伝子を解析することで、HEVの細胞への感受性を規定している因子の同定を進めている。
ローマ帝政初期におけるイタリア自治都市の社会と経済

ローマ帝政期における都市ローマの住民に対する食糧供給は、皇帝によって特別に配慮されていたことから、比較的に安定していた。一方、都市ローマ以外のイタリア半島に数多く存在していた自治都市は、行政的、財政的に中央政府から独立していたことから、食糧供給に対する配慮も各自治都市が独自に行っていた。しかし、各自治都市が「配慮」を行う実行者とはならず、富裕な市民による「施与」行為に大きく依存していた。一般的には施与者は都市の官職選挙に立候補しており、支持という「見返り」を期待して施与を行っている。しかし、政治的「見返り」以外の見返りを期待して施与を行った者たちも存在した。蒐集したラテン碑文史料から分かったことは、彼らは元奴隷である被解放自由人であるということである。彼らは帝政期においては経済的に豊かであったが、社会的信用がなく、常に「疑い」の対象であったことから、政治活動から除外されていた。すなわち、彼らにとって施与による政治的「見返り」は実際的に意義がなかったであろうと考えられる。ラテン碑文史料を分析した結果、さらにその者たちの多くに「都市参事会員身分標章」が賦与されていたことも分かった。これは身分標章のみの賦与であり、都市の政治的指導者たちの集団である都市参事会員に実際に就任するというものではなく、外見的に「都市参事会委員」と同等にするというものである。すなわち、自治都市における食糧確保の手段として、身分標章が何らかの役割を果たしていたであろうことが分かった。
対属性仮説に基づく結合問題の解決と多次元情報統合過程のモデル化

人間はさまざまな情報から総合的に認知や判断を行うが,「脳において別々に処理される異種情報がどのように統合されるのか」という問題(結合問題)は,組み合わせ爆発の問題を伴うため,基本的ながら未解明である.本研究では,「2属性ずつ統合された複数の脳内表現に基づいてさまざまな処理が行われる」という対属性仮説の検証実験と,それに基づく多次元情報統合のモデルの構築,およびその応用を行った.その結果,視覚情報処理に関して対属性仮説を強く支持する結果を得た.これによって組み合わせ爆発問題を解消できるだけでなく,応用上も有用であることを明らかにした.人間はさまざまな情報から総合的に認知や判断を行うが,その過程をよく反映する一般的な数理モデルは知られていない.その根本には,「脳において異種情報がどのように統合され,それがどう処理されて認識や行動に至るのか」という結合問題が未解決であり,生物学的・心理学的に妥当な理論すらないという状況がある.本研究では,我々が提唱した「視覚的物体の認識や記憶は,色・形・動きなどの属性を二つずつ統合した複数の表現に基づいて行われる」という対属性仮説の妥当性を実験的に実証すると共に,その一般化を図る.これらを通じて結合問題の理論的困難さを解決すると共に,人間の情報統合過程を反映した多次元情報統合の数理モデルを構築することを目的にしている.平成26年度は,主に視覚特徴統合における対属性仮説の検証を行った.3つの属性からなる8種類の刺激と4つの反応キーとを連合する課題について,学習曲線及び反応時間を調べたところ,反応が3属性の組合せで決まる場合の方が,2属性のみで決まる場合に比べて学習及び反応がより難しいこと,属性を空間的に分離して提示すると一つの物体として提示したときよりも学習が難しいことが明らかになった.この結果は,全属性を統合した物体表現ではなく,注意によって2属性ずつが結合した表現が反応と連合されるという対属性モデルを支持する.このことは,3属性以上が直接結合した表現は,長期的な学習なしには作られないことを強く示唆しており,これまで以上に強い対属性仮説の根拠となるものである.そのほか,対属性仮説に基づいた価値判断の数理モデルの実験的な検証や,それを強化学習に応用した研究を行い,それぞれ十分な成果を得た.人間はさまざまな情報から総合的に認知や判断を行うが,その過程をよく反映する一般的な数理モデルは知られていない.その根本には,「脳において異種情報がどのように統合され,それがどう処理されて認識や行動に至るのか」という結合問題が未解決であるという状況がある.本研究では,我々が提唱した「視覚的物体の認識や記憶は,色・形・動きなどの属性を2つずつ統合した複数の表現に基づいて行われる」という対属性仮説の妥当性を実験的に実証すると共に,その一般化を図る.これらを通じて結合問題の理論的困難さを解決すると共に,人間の情報統合過程を反映した多次元情報統合の数理モデルを構築することを目的にしている.平成27年度は,26年度に引き続き視覚特徴統合における対属性仮説の検証を行った.まず,3属性を含んだ刺激と反応の連合学習の実験において,異なる属性を別々の窓に表示すると反応選択時間が長くなった一方で,2属性ずつ組み合わせて3つの窓に提示したときには有意な差は出なかった.また,提示方法に関係なく,3属性で決定する反応の方が2属性だけで決定する反応よりも学習と実行が共に難しかった.後者の結果は,3属性うち「模様」を「位置」に変えても変わらなかった.以上の結果は,全属性を統合した物体表現ではなく,注意によって2属性ずつが結合した表現が反応と連合されるという対属性モデルを支持するとともに,それが属性の種類によらない普遍的な性質であることを示唆する.これらの成果は,国際会議で発表した.そのほか,対属性仮説に基づいた価値判断の数理モデルの妥当性を検証するために,服装のカラーコーディネートに関する実験を行った(現在結果の分析中).また,これをパターン識別や強化学習に応用した研究について国際雑誌に論文を発表した.視覚特徴統合に関する対属性仮説を支持する証拠が積み重ねられつつあり,既に成果の一部は高インパクトファクター(5.578)の学術誌に掲載済みである.その後の成果も国際会議で発表するなど,順調に進展している.応用研究に関しても,学術論文3編および国際会議論文1編という十分な成果を挙げた.ただし,目標である結合問題の最終的な解決にはまだ至っておらず,人間の多次元情報統合の数理モデルの構築も不完全である.人間はさまざまな情報から総合的に認知や判断を行うが,その過程をよく反映する一般的な数理モデルは知られていない.その根本には,「脳において異種情報がどのように統合され,それがどう処理されて認識や行動に至るのか」という結合問題が未解決であるという状況がある.本研究では,我々が提唱した「視覚的物体の認識や記憶は,色・形・動きなどの属性を2つずつ統合した複数の表現に基づいて行われる」という対属性仮説の妥当性を実験的に実証すると共に,その一般化を図る.これらを通じて結合問題の理論的困難さを解決すると共に,人間の情報統合過程を反映した多次元情報統合の数理モデルを構築することを目的にしている.平成28年度は,まず視覚特徴統合における対属性仮説を検証実験を補強するものとして,3属性を含んだ刺激を繰り返し見たときに,それらを統合した脳内表現が形成されるかどうかを調べる実験を行った.

その結果,何度も見た3特徴の組合せ(習熟刺激)は,新しい組合せ(新規刺激)よりも反応と結び付けやすかった一方で,2特徴の組合せ刺激の場合には習熟刺激と新規刺激の差は見られなかった.また,3属性刺激を2属性ずつ組み合わせて3つの窓に提示した場合にも,習熟刺激と新規刺激の差は見られなかった.以上の結果は,同じ刺激を何度も繰り返し見た場合には3属性を統合した脳内表現が形成されるが,それ以外の刺激の場合には2属性ずつしか統合されないことを示しており,対属性仮説を強く支持するものである.そのほか,対属性仮説に基づいた価値判断の数理モデルの妥当性を検証するため,服装のカラーコーディネートに関する実験と分析を行った.その結果,人間の好みの度合い(嗜好関数)は要素ごとの好みの線形和では十分に表現することができず,二つの要素の組ごとの好みの和としてよりよく表現されることを明らかにした.視覚特徴統合に関する対属性仮説を支持する証拠をさらに固めることができ,成果の一部は高インパクトファクター(5.578)の学術誌に掲載済みである.その後の成果も国際会議で発表するなど,順調に進展している.応用研究に関しても,学術論文3編および国際会議論文1編という十分な成果を挙げた.当初計画では本年度中に研究を完了する予定であったが,本年度に得られた大きな研究成果についてはまだ論文発表に至っていないため,研究期間を1年延長することとした.人間はさまざまな情報から総合的に認知や判断を行うが,その過程をよく反映する一般的な数理モデルは知られていない.その根本には,「脳において異種情報がどのように統合され,それがどう処理されて認識や行動に至るのか」という結合問題が未解決であるという状況がある.本研究では,結合問題の理論的困難さを解決するものとして我々が提唱した「視覚的物体の認識や記憶は,色・形・動きなどの属性を2つずつ統合した複数の表現に基づいて行われる」という対属性仮説の妥当性を実験的に実証すると共に,その一般化を図った.平成2628年度に,複数の属性からなる8種類の刺激物体と4種類の反応キーとの対応を学習する課題などを用いて,いくつかの実験を行った.その結果はすべて対属性仮説を支持するものであり,有力な国際雑誌において論文発表した.また,対属性仮説に基づいた価値判断の数理モデルの妥当性を検証するために,服装のカラーコーディネートに関する実験を行い,学会発表を行った.そのほか,この考えをパターン識別や強化学習に応用した研究について国際雑誌に論文発表した.平成29年度は,「位置」という特別な特徴を含む場合の統合過程について調べた結果を論文発表した.この論文は日本視覚学会から高い評価を受け,鵜飼論文賞を受賞した.また,平成28年度に実施した対属性仮説に関する新たな検証実験の結果を論文にまとめ,有力な国際雑誌に投稿後,査読コメントに対応するための修正作業を行った(現在再投稿中).そのほか,服装のカラーコーディネートに関する実験と分析を進めた.より多くの被験者から得たデータを分析した結果,価値判断の仕方自体にかなりの個人差があり,対属性仮説に基づくモデルに合致する人もいれば,線形モデルで説明できる人もいるという興味深い事実が判明した.これについては今後更に研究を深めていく予定である.人間はさまざまな情報から総合的に認知や判断を行うが,「脳において別々に処理される異種情報がどのように統合されるのか」という問題(結合問題)は,組み合わせ爆発の問題を伴うため,基本的ながら未解明である.
頭頸部腫瘍に於ける癌抑制遺伝子の研究-P53遺伝子の臨床応用-

1.頭頸部悪性腫瘍パラフィン包埋標本から採取したDNAをtemplateとしPCRをおこないP53点突然変異をdirect sequensingするとともに、主要蛋白のP53変異をcordする部分での腫瘍抑制機能の非活性化を検討した。その結果、(1)下咽頭癌ともras遺伝子と同様にP53の変異が確認された。(2)喉頭及び舌・口腔の前癌状態のものではP53変異を示したものはなかった。2.前癌状態から発癌までの各時期の採取組織切片を利用して舌・口腔癌、咽頭癌、喉頭癌についてP53モノクローナル抗体を使用した病理組織的な検討とPCR法によるP53の点突然変異の検出感受性を比較するしたところ、(1)癌化したものについては何れも検出されたがその陽性率には差が見られた。(2)P53モノクローナル抗体を使用した病理組織的な検索では前癌状態のものや異型の強いものでは正常に較べて陽性率が高値であった。3.In situ hybridizationにてm-RNAの増幅を細胞レベルで見ることにより発現部位を同定するとともに、PCR-In situ hybridizationにて感受性を増幅した。(1)In situ hybridizationにて検出が不可能であった病例や前癌状態のものでもPCR-In situ hybridizationにより検出可能になったものが見られた。(2)しかし、PCR-In situ hybridizationだけではP53の腫瘍抑制機能の非活性化を証明できなかった。4.P53の非活性化と臨床的予後との関係を検討した(1)喉頭声門癌ではT病期とともに陽性率が増加、T1aとT1bの間で陽性率に差がみられた。(2)咽頭癌では局所再発や遠隔移転のみられたものには陽性率が高い傾向を示した。(3)咽頭癌では化学療法の効果の少なかったものに陽性が多い傾向がみられた。変異p53の発現は分子生物学的パラメータとして、臨床的な癌治療の指標に有用となるものと考えた。これらの結果は、日本耳鼻咽喉科学会総会、頭頸部腫瘍学会総会にて報告し、日本耳鼻咽喉科学会誌に現在投稿中である。
サトイモの交雑育種に関する基礎的研究

本研究では,サトイモの交雑育種のための基礎的資料を得ることを目的として実験を行い,以下に示す成果を得た。まず,バングラデシュ産の二倍体野生サイトモを用いて、花粉母細胞の減数分裂と花粉稔性を調査した結果,こちらの減数分裂が比較的正常であることならびに花粉稔性が比較的高いことが明らかとなった。次に,開花および結実の様相の調査と人工交配を行った。その結果,供試した野生サトイモは,よく開花・結実し,得られた種子は発芽して実生を生じることが明らかとなった。以上の結果から,供試した野生サトイモが高い種子繁殖能力をもつことがわかった。また,この実験において多くの自殖および交雑実生を得ることができた。次に,得られた実生を用いて染色体数の調査を行った。自殖および交雑のいずれの実生においても,三倍体の出現を低頻度ながら確認し,サトイモの三倍体が二倍体の自殖および交雑によって出現したことが実証できた。さらに交雑によって得られた三倍体の実生についてアイソザイム分析を行った結果,これらの三倍体の出現が非還元性の雌性配偶子と還元性の雄性配偶子の接合による場合と非還元性の雄性配偶子と還元性の雌性配偶子の接合による場合とがあることが明らかとなった。次に,日本産および外国産のサトイモ品種・系統についてアイソザイム分析を行った結果,わが国の子芋用品種(三倍体)の成立について若干の知見を得た。最後に,サトイモ品種・系統の組織培養による保存法および凍結保存法の検討を行った結果,茎頂培養による長期保存が可能であることならびに凍結保存法としては簡易凍結法が有効であることが示された。1.バングラデシュ産二倍性野生系統の花粉母細胞の減数分裂・花粉稔性調査及び自殖実生の作出供試した9系統の花粉母細胞の染色体の対合型は14IIと13II+2Iのみで,巨大花粉は認められず,酢酸カ-ミン染色花粉率も67%以上であった.これらの結果から,二倍体間の交雑による三倍体の出現に非減数性雄性配偶子が関与している可能性は低いものと推測された.また,自殖した23系統のうち,21系統で自殖種子が得られ,調査した12系統の種子発芽率は3390%であった.2.組織培養及び凍結による保存法の開発(1)バングラデシュ産野生系統の茎頂をMS寒天培地1mlを入れたプラスチック製試験管に1個づつ植え付け、プラスチック容器内に密封し,25°C,15°C,5°C及び変温(25°C,15°Cに各10日間,その後5°C)の4温度条件と12時間日長照明及び連続暗黒の2光条件とを組合わせて1年間培養した.その結果,生存率は25°C・照明区が最も高く,84.6%で,次いで,15°C・照明区が62.5%であった.(2)`筍芋'の茎頂由来のカルスを継代培養開始3日後に,ABA10mg/lとプロリン100mMを添加した培地で2日間培養して耐凍性を付与し,塩化カルシウムを50mM添加した凍害防御液及び洗浄液で処理することにより,カルス細胞をほぼ100%生存させることが可能となった.しかし,側芽の凍結保存法を確立するには至らなかった.3.アイソザイム分析

野生系統及び栽培品種・系統(日本産:40品種,バングラデシュ産:107系統,タイ産:20品種・系統,中国産:11品種,韓国産:1品種,インド産:1系統,計180)についてグルタミン産オキザロ酢酸アミノ基転移酵素(AAT)のアイソザイム分析を行った結果,日本産の三倍体品種のみに認められた遺伝子座Aat-3の対立遺伝子aは、外国産野生系統では認められず,栽培品種・系統で認められた.この結果から,対立遺伝子aは三倍体サトイモの栽培品種・系統の何らかの実用形質と関連があることが推察された.本研究では,サトイモの交雑育種のための基礎的資料を得ることを目的として実験を行い,以下に示す成果を得た.まず,バングラデシュ産の二倍体野生サトイモを用いて,花粉母細胞の減数分裂と花粉稔性を調査した結果,これらの減数分裂が比較的正常であることならびに花粉稔性が比較的高いことが明らかとなった.次に,開花および結実の様相の調査と人工交配を行った.その結果,供試した野生サトイモは,よく開花・結実し,得られた種子は発芽して実生を生じることが明らかとなった.以上の結果から,供試した野生サトイモが高い種子繁殖能力をもつことがわかった.また,この実験において多くの自殖および交雑実生を得ることができた.次に,得られた実生を用いて染色体数の調査を行った.自殖および交雑のいずれの実生においても,三倍体の出現を低頻度ながら確認し,サトイモの三倍体が二倍体の自殖および交雑によって出現したことが実証できた.さらに交雑によって得られた三倍体の実生についてアイソザイム分析を行った結果,これらの三倍体の出現が非還元性の雌性配偶子と還元性の雄性配偶子の接合による場合と非還元性の雄性配偶子と還元性の雌性配偶子の接合による場合とがあることが明らかとなった.次に,日本産および外国産のサトイモ品種・系統についてアイソザイム分析を行った結果,わが国の子芋用品種(三倍体)の成立について若干の知見を得た.最後に,サトイモ品種・系統の組織培養による保存法および凍結保存法の検討を行った結果,茎頂培養による長期保存が可能であることならびに凍結保存法としては簡易凍結法が有効であることが示された.
赤穂浪士事件をめぐる諸資料・諸文献の整理と事件の文芸化に関する研究

1,昨年度(平成10年度)に引き続き、赤穂浪士事件に関する資料の閲覧と調査、および収集をおこなった。東京での国会図書館・東京大学総合図書館等の調査をはじめ、京都・大阪・名古屋等への出張調査がこれに該当する。当科学研究費補助金によって、多数の複写物および、写本『赤穂鐘秀記』などを資料として購入することができた。2.資料のデータベース化について、浮世草子に関しては、赤穂浪士物の第一作である『傾城武道桜』(宝永2刊)本文のデータを完了し、『傾城播磨石』(宝永4刊)・『傾城伝授紙子』(宝永7刊)・『忠義武道播磨石』(宝永8刊)等についてもデータ化の作業を遂行中である。実録に関しては、最初期のものと思われる『介石期』のデータベース化を終え、本文の異同について調査中である。また、上記『赤穂鐘秀記』や私費にて購入した『赤穂精義内侍所』・『新撰大石記』についても随時データ化を行っている。特に享保初年頃までに成立したと思われる『新撰大石記』については、『介石記』を頻繁に引用しており、当事における『介石記』に記事に対する信頼性を窺わせるものであり、より精査をおこなうことを予定している。3.平成11年度の東京芸術大学における総合講義におけて(平成11年12月17日)において、事件の虚構化のプロセスと文芸化という観点から論じた。一般的に事件が様々な情報によって肥大化していくパターンによって説明できる部分と、赤穂事件特有の虚構化の様子について解説をしたものである。本年度は主として赤穂浪士事件,およびその周辺資料の収集に努めた。まつはその一環として,名古屋に一泊二日,大阪に一泊二日の調査旅行をおこない資料調査をおこなった。また静岡大学教育学部の杉田昌彦助教授の助言等を得るため,東京大学への出張を依頼し,資料の整理および解読,研究の方向性についての打ち合わせを行なった。また東京大学総合図書館所蔵のものを中心として,複写資料を作成し,資料の整理に努めた。以上採択が平成10年末であったため,資料を収集整理することに終始し,それらを利用しての研究活動にまでは至らなかったが,集めた資料および『赤穂義人纂書(赤穂義士資料大成)』所収の実録類,あるいは赤穂市史編纂室編集による『忠臣蔵』所収の歴史史料および文芸資料,そのほか赤穂浪士事件に関する諸資料集より適宜今後の研究にとって必要なものについて優先順位を付し,科学研究費補助金によって購入したパーソナルコンピュータを用いて入力し,データベース化を開始している。本来は特に実録類の場合,既翻刻の活字と図書館等に所蔵されている諸本とを比較技合し,本文の生成・流布の形態を見分け,それによって事件の伝播した経緯を見定めていくべきであるが,現在のところは,その前段階として,そうした作業の基礎となる資料のデータベース化を急いでいる。
交通事犯への量刑対応からみた刑法の現代的機能の考察

交通事犯への適切な量刑対応にとっては、個別の事案における刑の加重要素・軽減要素の的確な分析に加えて、適正な法定刑を定めた犯罪類型の制定が重要な意義を有する。近時、「社会の安全の確保」、「国民の持つ不安解消」などの視点から、刑事規制に対する要請がこれまでになく強まっている。交通事犯の「重罰化」はその象徴ともいえる。本研究は、まず、この交通事犯に関する量刑について理論的検証を加え、刑法に対する国民の要請に応える諸要因の内実、およびその理論的根拠を解明することを目的とするものである。その際には、アメリカ法との比較検討もあわせて行うことにしている。(1)自動車大国アメリカにおける交通事犯に対する刑事的対応に関して、わが国では各論的な研究がこれまでほとんどなされていないこと、また、(2)アメリカ法における量刑については、いわゆる量刑ガイドラインを検討する必要があるが、同ガイドラインにおける具体的な量刑因子の分析がこれまで十分になされていないこと、がその理由である。また、量刑ガイドラインの具体的な検討を介することにより、平成21年度から開始される裁判員裁判における量刑のあり方について有意義な示唆を得ることも、研究目的の1つとして考えている。このような観点から、平成21年度は、文献調査を中心として、アメリカにおける交通事犯に対する近時の立法動向を調査した。それと並行して、量刑ガイドライン制定の背景や、現在の問題状況に関する調査研究も行った。これらは、いずれも、平成22年度に行う予定の、現在のわが国における「重罰化」対応の意義や妥当性を検討する際の、比較法的研究のための準備作業と位置づけられるものである。平成22年度は、前年度に引き続き、アメリカにおける量刑理論の分析を行い、いわゆる医療モデルの失敗から公正モデルへの移行というアメリカの刑罰論の趨勢における、量刑ガイドラインの有する基本的意義を明らかにした。さらに、アメリカにおける交通事犯に対する刑事実体法の対応の変遷について分析を行った。それにより、交通死傷事故に対して、一方では、処罰の確実性を確保するために「交通致死罪」という通常の殺人罪より軽い犯罪類型が設けられつつも、他方で、悪質交通事犯に対しては、極端な無謀に基づく謀殺罪(「第2級謀殺」(second degree murder))の適用をも辞さないというアメリカにおける実態を明らかにすることができた。これは、従来、業務上過失致死傷のみで交通事犯に対応してきたわが国のあり方と比較した場合、重要な示唆を与えるものであると考える。以上の比較法的考察と並行して、わが国における危険運転致死傷罪の意義について、若干の解釈論を通して、検討を行った。具体的には、危険運転致死傷罪が、交通事犯を過失犯としてのみ論ずるわが国刑法のあり方の不十分さを踏まえ、「結果的加重犯の一種」とされる危険運転致死傷罪について、純粋な故意犯ではないが、なお過失犯として堤えることが不十分という、いわば中間領域にあたる行為を適切に処罰するための犯罪類型として積極的な意義が与えられるべきで、そのような観点から、各構成要件要素についての解釈がなされるべきであることを明らかにした。そして、以上の検討を踏まえて、わが国における交通事犯に対する対応の意義および問題点に関して、危険運転致死傷罪の適正な解釈のあり方を中心として、適切な量刑対応を行うべきことを研究結果として提言している。
インボリュート歯車形状のDXFファイル自動作成・描画ソフトの開発

本研究では,汎用プログラミング言語であるVisual Basicを用いて,インボリュート歯車形状のDXFファイル自動作成・描画ソフトの開発を行った.ソフトの基本的な動作イメージは,歯車のモジュールと歯数を指定することで,歯車の形状を点群として求め,次にこの点群をDXFファイル形式で繋げ,連続線であらわされる輪郭形状として出力するというものである.始めにパラメータを歯車のモジュールと歯数とし,インボリュート関数を用いてインボリュート曲線上の点群を抽出する計算過程を求めた.次にこの計算過程を基本として,歯一つ分の形状を点群として求める計算過程を求め,さらにこの歯一つ分の点群を,歯数に応じた回転角と回数で回転コピーすることにより,歯車全体の形状を決める点群を求めるという一連の計算過程を確立した.続いてこれらの点群を繋げ,歯車の輪郭形状をDXFファイル形式で出力するプログラムを組んだ.これらの流れを,本ソフトでは,(1)パラメータの入力,(2)計算の実行,(3)ファイルの保存という3段階で実行できるようにした.次に本ソフトで出力したDXFファイルを元にマシニングセンタで加工した3個の歯車(モジュール:1,歯数:26)の歯型誤差,歯筋誤差,歯溝の振れを計測した.歯型誤差と歯筋誤差はいずれの歯車も0等級(最高等級)という結果となった.歯溝の振れは平均で3等級となったが,加工の段取りの見直しで改善できると考える.以上より,本プログラムでは実用に足りる歯車の歯形形状を出力できたと言える.改善点としては,輪郭形状の描画機能を完成させる必要がある.また,転位係数等のパラメータを付加し,より様々な歯車形状の出力に対応できるようにしたい.更に,Visual Basicよりも高速で計算ができるVisual C++でのプログラムの書き換えも検討したい.本研究では,汎用プログラミング言語であるVisual Basicを用いて,インボリュート歯車形状のDXFファイル自動作成・描画ソフトの開発を行った.ソフトの基本的な動作イメージは,歯車のモジュールと歯数を指定することで,歯車の形状を点群として求め,次にこの点群をDXFファイル形式で繋げ,連続線であらわされる輪郭形状として出力するというものである.始めにパラメータを歯車のモジュールと歯数とし,インボリュート関数を用いてインボリュート曲線上の点群を抽出する計算過程を求めた.次にこの計算過程を基本として,歯一つ分の形状を点群として求める計算過程を求め,さらにこの歯一つ分の点群を,歯数に応じた回転角と回数で回転コピーすることにより,歯車全体の形状を決める点群を求めるという一連の計算過程を確立した.続いてこれらの点群を繋げ,歯車の輪郭形状をDXFファイル形式で出力するプログラムを組んだ.これらの流れを,本ソフトでは,(1)パラメータの入力,(2)計算の実行,(3)ファイルの保存という3段階で実行できるようにした.次に本ソフトで出力したDXFファイルを元にマシニングセンタで加工した3個の歯車(モジュール:1,歯数:26)の歯型誤差,歯筋誤差,歯溝の振れを計測した.歯型誤差と歯筋誤差はいずれの歯車も0等級(最高等級)という結果となった.歯溝の振れは平均で3等級となったが,加工の段取りの見直しで改善できると考える.以上より,本プログラムでは実用に足りる歯車の歯形形状を出力できたと言える.改善点としては,輪郭形状の描画機能を完成させる必要がある.また,転位係数等のパラメータを付加し,より様々な歯車形状の出力に対応できるようにしたい.更に,Visual Basicよりも高速で計算ができるVisual C++でのプログラムの書き換えも検討したい.
新規高周期14族元素カテネートおよびヘテロカテネートポリマーの設計

前年度までにアニオン開環重合によって合成したテトラフェニルシロールとテトラシランの交互共重合体のEL素子特性について評価した。ITO/ポリマー(100nm)/Mg:Agの単層型素子を作製し、ポリマーのELスペクトルを測定したところ、ELスペクトルは蛍光スペクトルとほぼ同じであり、発光極大は488nmの青色の領域であった。なお最大発光輝度は20Vで5cd/m^2であった。またポリメチルフェニルシランから作製したEL素子比較では約20Vまではほぼ同じ電流密度であるもの、20V以上ではシロールポリマーの電流密度が増加した。これはシロール環によるポリマーの電子輸送特性の向上によるものと考えられた。しかしながら素子の安定性や発光輝度などに課題があった。そこでテトラフェニルシロール環より蛍光発光が大きい2,5-ジフェニルシロール環のポリマー主鎖への導入を試みた。モノマーとなる2,5-ジフェニルシロールとテトラシランのスピロ化合物は1,1-ジフルオロシクロペンタシランと1,4-ジリチオ-1,4-ジフェニルブタジエンとの反応により合成することが出来た。しかし、このもののアニオン開環重合を種々の条件で試みたが重合しなかった。そこでアニオン種との反応について精査したところスピロ体とアニオンは反応するもの重合活性種となるアニオンではなくアリルアニオンとして安定化されたアニオンが生成するのみであった。またホール輸送層としてポリシランではなくカルバゾールとした新規なシロール誘導体を合成しそのEL素子特性についてもあわせて評価した。
I型糖尿病根治を目指した膵β細胞再生への直接変換系の再編成

1型糖尿病の根治を目指し、従来はインスリン分泌膵島様細胞をつくるのにレトロウイルスベクターを利用していたが、ウイルスベクター以外の安全な方法でインスリンを供給する細胞を作り出す方法を見出した。この手法は、元来インスリンを発現しない体細胞から内在性のインスリン発現を誘導できる強力な直接分化転換(ダイレクトプログラミング)法であり、これまで細胞株を含めてさまざまな体細胞を用いて、リプログラミング後僅か48時間後に内在性インスリン発現が上昇することを見出した。更にこの現象は、胎児線維芽細胞(MEFs)などのマウスの体細胞のみならず、線維芽細胞・グリオーマ細胞株などヒト体細胞など種を超えて広く適応できることが確認された。また膵β細胞の分化促進剤と膵内分泌前駆細胞マーカーを新たに見つけ、僅かな細胞から効率良く膵島様細胞をつくり出すことができ、ヒトへの臨床応用に向けさらに一歩んだといえる成果が得られた。マウスMEFs由来の膵島様細胞をストレプトゾトシン(STZ)投与した1型糖尿病モデルマウスの腎皮膜下へ移植した結果、有意に高血糖の低下が認められ、糖負荷試験ならびにHbA1c値の有意な改善効果が観察された。特筆すべき点は、直接分化転換後の膵島様細胞は試験管内で長期培養において癌化などの腫瘍形成が認められなかった。さらにより安全性の高い技術として改良を重ねて、将来ヒト体細胞から多くの患者さんを根治できる再生医療技術の開発に繋がることが期待される。1型糖尿病モデルマウスへの移植実験において、ストレプトゾトシン(STZ)の投与量や個体差のばらつきが予想外に多く、安定化させるために多くのマウスと労力を費やした。さらなる条件検討を要するため、個体マウスを用いた実験の最適化にもう少し時間を要するため。マウスの系統と体重・週齢毎にSTZの投与条件を詳細に設定したのちに移植実験を行う予定である。これらの詳細な条件設定により、より精確で有用な研究成果の取得と臨床治験に向けた安全性の高い技術の開発に繋がることが期待される。I型糖尿病の治療において、インスリン注射や膵島移植が広く行われているが、患者負担が大きいことやドナー不足・移植による拒絶応答など全ての患者に満足のいく治療を提供できないのが現状である。最近、幹細胞から膵β細胞を作る新たな再生医療アプローチ法が期待されており、ヒトiPS細胞やES細胞等の幹細胞から膵β細胞への最新誘導プロトコ-ルが昨年報告され(Melton et al, 2014, Kiefer et al, 2014)、糖尿病の再生医療の実現に向け見通しが立ってきたといえる。しかしながら、これらのアプローチ法は分化誘導の効率や腫瘍化コントロールの課題が残されている。本研究の目的は、直接変換によって高効率で体細胞から膵島様細胞の作製方法を確立すること、作製した膵島様細胞を免疫不全糖尿病モデルマウスに移植し、血糖改善できることを示し、直接変換のしくみを明らかにすることを目的としている。申請者らは、マウス胎児繊維芽細胞(MEF)等の体細胞を用いたダイレクトリプログラミングによる膵β細胞の作製手法は、僅か2週間で約80%の高効率でインスリン産生細胞の作製を再現できることが示された。さらにグルコース応用によるインスリン分泌が誘導されること、またこれらの細胞を糖尿病モデルマウスに移植した結果、血糖の改善効果が認められた。以上より、従来のiPS/ES細胞を用いた手法に比べて、約半分の期間で細胞が作製できることから、将来的に膵島様細胞を提供することによって、I型糖尿病患者が必要とする「根治治療を実現」に繋がることが期待される。実験材料の入手等に支障がなく、実験条件の設定と再現性の確認に多少時間を要することがあるが、おおむね適切な研究計画のもとに進行しているため。

今後は体細胞から膵β細胞への直接変換の効率をさらに上げるとともに、再構成による直接変換のしくみを明らかにするため、リプログラミング因子の動態ならびに遺伝子発現制御に関わる役割を明らかにするため、リプログラミング因子の各ドメインの機能をリプログラミングの誘導効率から解析を行う予定である。リプログラミング因子のドメイン機能を明らかにした上で、LC-MS/MS解析によるリプログラミング因子に会合する因子を同定し、より詳細な分子機序を明らかにする予定である。マウスの系統と体重・週齢毎にSTZの投与条件を詳細に設定したのちに移植実験を行う予定である。これらの詳細な条件設定により、より精確で有用な研究成果の取得と臨床治験に向けた安全性の高い技術の開発に繋がることが期待される。直接変換系の構築を行い、細胞レベルではその有効性が十分に確認できたが、実験動物を用いた実験においては、STZ投与効果に関するマウス個体のバラツキや薬剤投与の実験条件によっては期待される結果を検証することが困難であったため、マウスへのSTZ投与の条件を見直す必要がある。従って、本研究課題の実用性を確認するためには、期間延長が必要であるため、費用差額が生じた。
イノラートの新規合成法と新反応の開発

イノラートアニオンの化学に関して以下の研究を行った。1. α-ブロモ、及びα、α-ジブロモエステルを基質としたイノラートアニオンの新規合成法を確立し、その簡便性、一般性、高効率性を実証した。本方法論はエステルジアニオンを中間体とする全く新しい方法論であり、これによってイノラート化学開拓の突破口を開くことができた。2.イノラートとカルボニル化合物との反応:イノラートとアルデヒド及びケトンとの反応を精査した。その結果、β-ラクトンエノラートの生成が確認され、その反応性も明らかにすることができた。すなわちこの中間体は強い求核活性が有るために引き続く連続反応への展開が可能であることを見出した。3. β-ラクトンの合成:先に述べたβ-ラクトンエノラートをプロトン化することで各種βラクトンが生成することを確認した。4.新規高選択的オレフィン化反応:イノラートとカルボニルとの反応で生成したβ-ラクトンエノラートを室温まで昇温することで電子環状反応が生じて開環し、E選択的にオレフィン(α、β不飽和カルボン酸)が生成した。このオレフィン化反応は従来法では制御が困難な4置換オレフィンの立体選択的合成にも応用可能であることもわかった。本反応は定法であるHonor-Emmons反応に匹敵あるいは凌駕する選択性、反応性、簡便性、汎用性を示し有機合成上きわめて有用であると考えられる。5. β-ラクタムの合成:イノラートと電子吸引性基を有するイミンとの反応で、β-ラクタム環を合成することに成功した。またプロトン化剤を工夫することでその立体選択性も制御することができた。
新しいヒト由来のGTP結合蛋白質の精製とその生化学的,細胞生物学的機能の解析

1.Hrab2遺伝子は4個のGTP結合領域をもつ25kDaのGTP結合蛋白質をcodeしている.2.ヒト・マウス雑種細胞DNAのサザンブロット分析では,ヒトrab2遺伝子は第8染色体上に座位していた.3.各種のヒト培養細胞において,3.5,2.4および1.4kbのHrab2転写体が認められた.サルおよびマウス培養細胞では,2.4および1.4kbのみが認められた.これらのrab2転写体に相手する複数のcDNAクロ-ンでは,3'非翻訳領域の長さと構造に違いが認められ,転写終結またはpoly A付加部位の違いによって異なるHrab2転写体が生成されるものと考えられた.4.マウス個体では,脳,腎,睾丸の順でHrab2 RNAの発現が高かったが,いずれの臓器でも発現していた.5.細胞内Hrab2 RNAはβーactin RNAと同定度に安定であった.血清添加刺激によって,Hrab2の発現レベルが低下した.従ってHrab2は"houseーkeeping gene"の一種であると考えられた.6.Hrab2 cDNAを大腸菌で発現させ,Hrab2蛋白質に対する特異的ウサギ抗血清を作製し,アフィニティ精製した本抗体を用いて分析したところ,マウス,ラット,サルおよびヒトの培養細胞で24および25kDaのrabー2蛋白質が検出された.24および25kDaのrabー2蛋白質はともにリン酸化されていたが,25kDaの分子はより高度にリン酸化されていた.7.ラット褐色腫PC12細胞とヒト神経芽細胞腫MB3細胞では24および25kDaのrabー2蛋白質が検出され,ヒト腫瘍細胞HeLaおよびKOBK101では25kDaのrabー2蛋白質のみが検出された.1.Hrab2遺伝子は4個のGTP結合領域をもつ25kDaのGTP結合蛋白質をcodeしている.2.ヒト・マウス雑種細胞DNAのサザンブロット分析では,ヒトrab2遺伝子は第8染色体上に座位していた.3.各種のヒト培養細胞において,3.5,2.4および1.4kbのHrab2転写体が認められた.サルおよびマウス培養細胞では,2.4および1.4kbのみが認められた.これらのrab2転写体に相手する複数のcDNAクロ-ンでは,3'非翻訳領域の長さと構造に違いが認められ,転写終結またはpoly A付加部位の違いによって異なるHrab2転写体が生成されるものと考えられた.4.マウス個体では,脳,腎,睾丸の順でHrab2 RNAの発現が高かったが,いずれの臓器でも発現していた.5.細胞内Hrab2 RNAはβーactin RNAと同定度に安定であった.血清添加刺激によって,Hrab2の発現レベルが低下した.従ってHrab2は"houseーkeeping gene"の一種であると考えられた.6.Hrab2 cDNAを大腸菌で発現させ,Hrab2蛋白質に対する特異的ウサギ抗血清を作製し,アフィニティ精製した本抗体を用いて分析したところ,マウス,ラット,サルおよびヒトの培養細胞で24および25kDaのrabー2蛋白質が検出された.24および25kDaのrabー2蛋白質はともにリン酸化されていたが,25kDaの分子はより高度にリン酸化されていた.7.ラット褐色腫PC12細胞とヒト神経芽細胞腫MB3細胞では24および25kDaのrabー2蛋白質が検出され,ヒト腫瘍細胞HeLaおよびKOBK101では25kDaのrabー2蛋白質のみが検出された.1.トヒ由来の新しいGTP結合蛋白質を支配するcDNAクロ-ン、Hrab2について、その発現と転写体の解析を行った。各種のヒト培養細胞のRNAについてノ-ザンブロット分析を行ったところ、いずれの細胞でも3.5、2.4、1.4kbの転写体が認められた。サルおよびマウス培養細胞では、2.4および1.4kbのみが認められた。これらのHrab2転写体に相当する、ヒト単球培養細胞U937由来の複数のcDNAクロ-ンについて塩基配列を分析したところ、3'非翻訳領域の長さと構造に違いが認められた。一方、マウスの個体レベルでは、脳で発現が最も高く、ついで腎、睾丸で高かったが、いずれの臓器でも発現していた。2.血清無添加で24時間以上培養したヒト2倍体細胞MRC-5において、Hrab2の発現レベルが低下することおよび1の結果から、Hrab2は、いわゆる"house-keeping gene"の一種であることが示唆された。3.ヒト・マウス雑種細胞DNAのサザンブロット分析によって、ヒトHrab2遺伝子は第8染色体上に座位することを明らかにした。4.Hrab2の塩基配列から予想されたアミノ酸配列をもとにオリゴペプチドを合成し、それを抗原としてウサギ抗血清を得た。本cDNAを発現ベクタ-に組み込んで導入した大腸菌の抽出液についてウエスタンブロット分析を行ったところ、Hrab2は約25キロダルトンのペプチドをコ-ドしていることが明らかにされた。次年度以後、本抗血清を用い、またHrab2蛋白質の精製も試み、本蛋白質の生化学的活性、細胞内局在、機能などについて検討する。2.マウス個体におけるHrab2の発現は悩で最も高く,ついで腎,睾丸で高かったが,いずれの臓器でも発現していた.3.各種のヒト培養細胞で3.5,2.4および1.4kbの3種のHrab