hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
新規癌抑制タンパク質p110γによる細胞癌化抑制メカニズムの解明

1,7種のヒト大腸癌細胞株においてp110γmRNAは発現していたが,p110γタンパク質が消失していたことから,p110γの発現がタンパク質レベルで調節される可能性が示唆された。2,ヒト大腸癌細胞株HCT116とDLD-1での強制発現実験系において,野生型p110γの発現はフォーカス形成能低下,軟寒天培地内でのコロニー形成低下,ヌードマウス皮下での腫瘍形成能の低下を引き起こした。また,点変異導入によるPI3K活性不活型p110γの発現は,野生型p110γ発現と同等の作用を示した。このれらことから,癌抑制作用に酵素活性は重要でなく,なんらかのタンパク質との会合が重要であることが示唆された。3,p110γのRas結合ドメイン,C2ドメイン,キナーゼドメイン,結晶構造解析により見いだされた特徴的なヘリカルドメインおよびN末端領域の,計5種類のp110γ部分断片の発現ベクターを構築し,これらの導入細胞にて,フォーカス形成能,コロニー形成能の評価を試みた。N末端領域,C2ドメイン,ヘリカルドメイン,キナーゼドメインに関しては,現在のところ安定な発現に成功しておらず,包括的な結論は導けないものの,p110γのRas結合ドメインのみの発現も全長p110γと同程度の,フォーカス形成能,コロニー形成能の低下が導かれるという予備的な知見を得た。4,しかしながら,野生型p110γの発現はKi-ras欠損DLD-1細胞の軟寒天培地内でのコロニー形成も抑制した。P110γによる抑制がRasとの結合を介しているかに関しては今後,Ras結合ドメイン欠失p110γの発現により検討されるべきである。5,野生型p110γを安定に発現するクローナルなDLD-1細胞株を得た。HCT116細胞では樹立が困難であった。
金属イオン選択吸着性セルロース誘導体の合成

6-クロロデオキシセルロースを原料として、ヒドラジノデオキシセルロース(HDC),カルボキシアルキルヒドラジノデオキシセルロース(α-およびβ-CAHDC)、アルキルアミノデオキシセルロース(AADC)、カルボキシメチルアミノデオキシセルロース(CNADC)などの金属イオン吸着性の官能基を有するセルロース誘導体を合成し、それらの合成条件について詳細に検討するとともに、合成したこられのセルロース誘導体を吸着剤として用いて、各種重金属イオンの希薄水溶液からの吸着挙動について検討した。いずれの吸着剤においても、水溶液のpHが酸性側から中性側に移行するにつれて、金属イオンの吸着量は急激に増加し、いちじるしいpHへの依存性が認められた。pHが一定の条件では、金属イオンの吸着量は、吸着剤の種類によらずCu^<2+>>Cd^<2+>>Co^<2+>>Ni^<2+>の順であり、いずれの吸着剤もCu^<2+>に対して高い吸着能を示した。また、これらの金属イオンの混合物を含んだ水溶液で、各種金属イオンに対する選択吸着性を調べたところ、いずれの吸着剤の場合もCu^<2+>に対する選択性がいちじるしく高いことがわかった。また、反応中間体としてより反応性の高いブロモデオキシセルロースの合成条件を確立するために、セルロースおよびそのモデルとしてのメチルβ-D-グルコピラノシドの均一系での臭素化を行ない、反応位置および反応条件の検討を行なうとともに、得られたブロモデオキシセルロースとチオールの反応を行ない、均一系での反応のほうが高い置換度の生成物が得られることを確認した。1.セルロース誘導体による重金属イオンの吸着においては、側鎖中のアルキル基で隔てられた2個のヘテロ原子と重金属イオンとの環状のキレートの形成が重要な役割を演じていると考えられる。そこでクロロデオキシセルロースとアルキルアミンとの反応により、側鎖中に1個のヘテロ原子しか含まない、長さの異なったアルキルアミノ基を有するセルロース誘導体を合成し、その重金属イオン吸着能について検討を行なった。これらのセルロース誘導体はいずれもCu^<2+>に対して選択性を示したが、側鎖中に2個のアミノ基を有するセルロース誘導体に比べてはるかに低い吸着能しか示さず、キレート環の形成が重金属イオンの吸着に重金属イオンの吸着に重要な役割を演じているが証明された。2.ヘテロ原子として酸素と窒素を含んだセルロース誘導体として、クロロデオキシセルロースとN-クロロコハク酸イミドとの反応により6-(γ-カルボキシブチルアミノ)デオキシセルロースを合成することができた。3.クロロデオキシセルロースよりも反応性にとむブロモデオキシセルロースの合成法として、セルロースのトリブロモイミダゾール/トリフェニルホスフィンによる臭素化があるが、そのさい高置換度ではその加水分解により3,6-ジブロモ-3,6-ジデオキシアロースと3,6-ジブロモ-3,6-ジデオキシグルコースとが生成する。その原因を解明するために、モデル実験を行ない、最初生成したジブロモアロシドが臭素化の間にジブロモグルコシドに変わることを明らかにした。1.6-クロロデオキシセルロースとグリシンエチルエステル塩酸塩との反応により、6位に選択的にグリシン残基を有するセルロース誘導体(CMADC)を合成し、その反応条件について検討するとともに、合成したCMADCを用いて、各種重金属イオンの希薄水溶液からの吸着挙動について検討した。いずれの金属イオンに対しても、水溶液のpHが酸性側から中性側に移行するにつれて、金属イオンの吸着量は増加し、pHへの依存性が認められ、同じpHでは吸着量はCu^<2+>>Cd^<2+>>Co^<2+>>Ni^<2+>の順であり、CMADCは中性領域ではCu^<2+>に対してとくに高い吸着性を示した。また、これらの金属を2種類ずつ含んだ水溶液で、各種金属イオンに対する選択吸着性を調べたところ、どのような組み合わせにおいてもCu^<2+>に対する選択性が著しく高いことがわかった。2.セルロースをLiBr-DMAc

溶媒系でN-ブロモコハク酸イミドによって臭素化し、得られた6-ブロモ-6-デオキシセルロースを8種類のチオールと反応させた。反応は、LiBr-DMAc溶媒系で均一系で行なったほうが、アルカリ水溶液中で不均一系で行なった場合よりもよく反応することがわかった。
中学校数学の構成的な論証学習カリキュラムに基づく,ディジタル教科書の開発と評価

本研究は,中学校数学における構成的な論証学習のためのカリキュラムに基づいて生徒が論証の導入期の学習を意欲的に進めることができるようになるために,オープンな場面でのフローチャート証明,及びクローズな場面においてフローチャート証明の構成及び修正を支援する学習コンテンツを授業実践での評価に基づいて開発・改善し,コンテンツからなる学習支援システムをディジタル教科書として構築した。本研究の目的は,中学校数学図形領域の構成的な論証学習カリキュラムに基づき,ディジタル教科書と学習指導解説書を作成し,授業実践における両者の有効性を検証することである。この目的を達成するために,教科書等の既存の論証問題を構成的な論証学習が可能なものに作り直し,作り直された問題についてFlashとデータベースによってインタラクティブな学習が可能なディジタル教科書を開発する。その上で,教育現場でディジタル教科書が活用されるために,学習指導解説書を作成する。本年度,ディジタル教科書作成の準備として,次の諸点に取り組んだ。・構成的な論証カリキュラムの改善カリキュラムのうち,中学校第1学年図形領域の「空間図形」及び中学校第2学年図形領域「図形の性質と証明」について改善を行った。「空間図形」では,直接証明と間接証明の素地形成のため,新たな教材を導入し,指導展開案を作成した。「図形の性質と証明」では,教材配列と学習活動の質を見直すことによって,証明を全体的に把握する図式をいかした単元展開案を改善した。・ディジタルコンテンツ及びホームページの作成中学校第1学年図形領域の「空間図形」カリキュラムに必要なディジタルコンテンツを作成した。コンテンツは次の4種類である:単元『空間図形』(全14時間)の展開(HTMLファイル),授業の指導展開(HTMLファイル),学習用ワークシート(pdfファイル),授業で利用される動的幾何ソフトのファイル,ソフトの利用の仕方が示された動画(Flash movie)。これらのコンテンツは,教師がダウンロードして授業に利用できるようにホームページとして整理されている。・コミュニティに基づく協働参加型研究(CBPR)方法論の理論的考察カリキュラム改善及びディジタル教科書の作成にあたって,大学の研究者と教育現場の実践者が協力し合うために,コミュニティに基づく協働参加型研究(CBPR)方法論について理論的考察を行った。その結果,CBPRの原則の視点から,最も重要な「パートナーシップ」については,すべての研究段階に研究者と実践者が協働で公平に活動する必要があるとともに,この必要性を満たすことによって,参加したすべての構成員の学びや力量形成が育まれるので,今後の教育現場と連携した共同研究に対し大きな影響がもたらされ得ることがわかった。本年度,ディジタル教科書作成として,次の諸点に取り組んだ。●ディジタル教科書(第I部)に用いる問題の選定第I部では,三角形の合同を導く場面において,生徒が三角形の合同を導くために必要な条件を探すことを通して,証明の基本的な枠組みの全体像を理解できるようにするために,合同な2つの三角形が辺や角を共有するかどうかなどに着目し証明構成の難易度を考慮し,中学校第二学年の教科書で扱われている問題から数題を選んだ。●ディジタル教科書(第I部)の試作第I部のディジタル教科書の基本設定は,問題場面を表す図と,フローチャート形式の証明からなる。両者をFlashで制作することによって,問題場面を表す図において,辺や角をマウスで選択し,フローチャートの該当箇所にドラッグすると,選択された辺や角が記号(例:∠ABC)で自動的に表示されるようにすることができた。また,フローチャート形式の証明の正誤を判断するために,すべての回答をデータベース化するとともに,誤りのある証明については,誤っている部分を画面上で指摘し生徒の学習を促進するように設定した。●公立中学校におけるディジタル教科書(第I部)の試用ディジタル教科書(第I部)を公立中学校の中学校第2学年の生徒20名が授業で試用した。その結果,すべての生徒が興味・関心を持って証明を自主的に学習できることが明らかになった。また,図に適した記号がフローチャートに表示されない場合があるなど,いくつかのバグを特定することができた。●ディジタル教科書(第II部)に用いる問題の選定第II部では,三角形の合同に基づいて辺や角の関係を導く場面において,生徒が辺や角の関係を導くために必要な条件を探すことを通して,三角形の合同に基づいて辺や角の関係を導く証明の基本的な枠組みの全体像を理解できるようにするために,合同な2つの三角形が辺や角を共有するかどうかなどに着目するとともに,証明構成の難易度を考慮し,中学校第二学年の教科書で扱われている問題等から数題を選定した。●ディジタル教科書(第II部)の試作第II部のディジタル教科書では,前年度作成した第一部の設計に加え,フローチャート証明の正誤判断において,結論からの解析的な正誤判断と,前提からの総合的な正誤判断がシステム上で統合されることによって,生徒がシステムの指示に応じて自分の解答を修正すると,そのなかで解析的/総合的な推論が促進されるようになっている。

●公立中学校におけるディジタル教科書(第II部)の試用ディジタル教科書(第II部)を公立中学校の中学校第2学年の生徒8名(2人×4組)が試用した。その結果,昨年同様,すべての生徒が興味・関心を持って,三角形の合同に基づいて辺や角の関係証明を自主的に学習できることが明らかになった。その一方で,生徒が結論から解析的に推論したり,前提から総合的に推論したりすることを一層促すために,正誤判断のシステムを改善する必要があることが特定された。(1)学習コンテンツの追加作成及び学習履歴機能の追加オープンな場面におけるフローチャート証明問題10題についてWeb上で利用可能なコンテンツとして作成した。各コンテンツではFlashの利用によって図から辺や角などをドラッグすると自動的に記号化されて入力できる等のユーザーフレンドリーなインターフェースが実現されている。また,データベースの利用によって学習者による解答の誤りの質に応じてフローチャート証明の修正が順序立てて促進される機能が実現されている。さらに,学習者がユーザーとして累積的に学習できるように,コンテンツ毎に個人の学習履歴を参照することが可能になっている。(2)システム利用による学習指導の解説書の作成オープンな場面におけるフローチャート証明のコンテンツからなるWebシステムが中学校の教育現場で活用されるために,CBPRの研究成果に基づいて大学と教育現場の間にネットワークを構築し,教師向けの解説書を協同で作成した。これには,フローチャート証明による指導案(9授業時間分),各時間のワークシート及び各授業におけるWebコンテンツの活用法が含まれている。特に,各指導案の作成にあたって従来の指導細案とは別に,写真や漫画等によって学習指導の進み方や展開をわかりやすくした「ビジュアル」版の指導案を作成した。(3)中学校における学習指導解説書の有効性に関する調査の実施平成21年度11月初旬から公立中学校4校第2学年(約500名)を被験者として,上記の学習指導解説書(開発途上版)に基づく一連の授業を実践し,統制群と実験群に対し質問紙調査を行った。調査問題にはフローチャート証明の構成に関する問題と,全国学力・学習状況調査の証明問題が含まれている。
ヒトHーras遺伝子のエンハンサー機能と発癌の相関

ヒトCーHaーras1遺伝子poly(A)付加部位の1kb下流に28bpを単位とする反復配列が存在する.この反復の程度は人によって異なり,ポリモルフィズムを示し,メンデルの法則に従って遺伝されることが知られていた.このポリモルフィズムとがん発症頻度との相関が報告されたが,反論もあり,統一的見解には到っていない.我々はcーHaーras1プロモーターCAT遺伝子を含むプラスミドを細胞にトランスフェクション後,neo^rトランスフォーマントを得る方法を用いてこの反復配列の機能を検討した結果,(1)反復配列はHーrasプロモーターからの転写を数倍促進し,その促進の程度は反復配列の数及び細胞タイプに依存する.(2)トランスフェクション後,プラスミドDNAの宿主クロモソームへ組み込まれるコピー数は,反復配列を挿入することによって上昇し,この効果も細胞タイプに依存する,ことを見出した.これらのエンハンサー様,及び組み換えのhot spot様の機能と発がん頻度との相関を解析するため,G.Saglio(イタリア,トリノ大)及びM.A.Pierotli(イタリア,国立がん研)の2つのグループより,乳がんと相関の認められる長さの反復配列を有するがん患者DNA及び悪性黒色腫と相関の認められる変異をもつ反復配列を有する患者DNAを入手し,Hーras遺伝子下流の反復配列をクローニングした.材料として使用できるDNA量が少ないため,いくつかの工夫を要し予想以上の時間を費やした.現在乳がんと相関の認められる長さの反復配列を2つクローニングすることに成功している.そのエンハンサー様活性を解析した結果,特に有意に高いエンハンサー様活性は見られなかった.組み換えのhotーspot様活性については現在検討中である.今後もう少し多くのサンプルのクローニングを行い,検討することが必要と思われる.ヒトCーHaーras1遺伝子poly(A)付加部位の1kb下流に28bpを単位とする反復配列が存在する.この反復の程度は人によって異なり,ポリモルフィズムを示し,メンデルの法則に従って遺伝されることが知られていた.このポリモルフィズムとがん発症頻度との相関が報告されたが,反論もあり,統一的見解には到っていない.我々はcーHaーras1プロモーターCAT遺伝子を含むプラスミドを細胞にトランスフェクション後,neo^rトランスフォーマントを得る方法を用いてこの反復配列の機能を検討した結果,(1)反復配列はHーrasプロモーターからの転写を数倍促進し,その促進の程度は反復配列の数及び細胞タイプに依存する.(2)トランスフェクション後,プラスミドDNAの宿主クロモソームへ組み込まれるコピー数は,反復配列を挿入することによって上昇し,この効果も細胞タイプに依存する,ことを見出した.これらのエンハンサー様,及び組み換えのhot spot様の機能と発がん頻度との相関を解析するため,G.Saglio(イタリア,トリノ大)及びM.A.Pierotli(イタリア,国立がん研)の2つのグループより,乳がんと相関の認められる長さの反復配列を有するがん患者DNA及び悪性黒色腫と相関の認められる変異をもつ反復配列を有する患者DNAを入手し,Hーras遺伝子下流の反復配列をクローニングした.材料として使用できるDNA量が少ないため,いくつかの工夫を要し予想以上の時間を費やした.現在乳がんと相関の認められる長さの反復配列を2つクローニングすることに成功している.そのエンハンサー様活性を解析した結果,特に有意に高いエンハンサー様活性は見られなかった.組み換えのhotーspot様活性については現在検討中である.今後もう少し多くのサンプルのクローニングを行い,検討することが必要と思われる.
看護師の夜勤・交代勤務負担軽減策としての勤務時間の上限規制に関する実証的研究

科学的根拠がないと言われてきた人事院判定の「月夜勤8回以内を目安(1965年)」や診療報酬における入院基本料の算定要件としての「月平均夜勤時間数の72時間以下(1996年)」について、看護師の安全、健康、生活の視点に立脚した疲労評価に基づき、夜勤・交代勤務者の勤務時間の上限規制を定め、あるべき夜勤・交代勤務の姿を提言しようとするのが本研究である。とくに多様な夜勤・交代勤務制と看護師の負担が高い12時間2交代制のロング日勤、さらには、今後増加するだろう夜勤専従勤務、オンコール勤務における1か月間の夜勤時間数の上限規制を策定することを目的とする。
葉細胞の分化に伴うプラスチドRNAポリメラーゼ遺伝子(rpo)の発現制御機構

1.イネ葉原基近傍におけるプラスチド遺伝子の発現パターンの解析イネは、発育の全期を通じて、葉原基の分化と葉の葉鞘からの抽出との間には、時間的に密接な関係が存在する。すなわち、任意の葉が葉鞘から抽出を開始する時期には、内部の成長点近傍に葉原基を含め発生段階が異なる4つの幼葉が常に存在する。葉鞘基部の縦断切片に対するin situハイブリダイゼーションを行なうことによって、葉原基から抽出を始めた葉までの5つの葉の発生段階(P1P5)における遺伝子の発現パターンを同時にモニターすることができる。virescent突然変異株v1の温度シフト解析から、プラスチドの転写・翻訳系遺伝子(rpo,rpsなど)がP4と呼ばれる葉の発生ステージに特異的に発現し、核遺伝子V_1がそれら遺伝子の発現を統御していることを明らかにした。この発生ステージは葉の空間的分化が終了し、機能的分化(光合成細胞への変換や気孔の形成など)が開始する段階に対応する。人為的にV_1遺伝子の働きをそのステージで阻害させた場合、プラスチドの転写・翻訳系遺伝子の発現のタイミングがずれることによって他のプラスチド遺伝子の発現制御が不能となり、正常な葉緑体への変換が停止した。2.rpo遺伝子の5'上流域の解析プラスチド遺伝子発現のトランジェントアッセイ法を用いて、プラスチド局在RNAポリメラーゼ遺伝子rpoの5'上流域を解析し、転写調節に関わる領域の同定を行った。
低侵襲な細胞操作用ナノツールのエクスチェンジャーシステムの構築

本プロジェクトでは,ナノマニピュレーションシステムのエンドエフェクタ交換の自動化を目指したナノツール・エクスチェンジャーシステム(NTExS)を提案した.本システムにより,主に,1試料室の大気開放を必要とせず,より短時間でナノツールの交換が可能,2ナノツールを手動で交換する必要がなく,作業ミスなどによるナノツールの破損などを回避,3ナノツールが劣化・破損した際に,予備のナノツールに交換,4複数のナノツールを連続的に利用,することが実現できる.本研究では,環境制御型電子顕微鏡内ナノマニピュレーションのためのナノツール・エクスチェンジャーシステムを構築し,細胞操作への応用を目的とした.本プロジェクトでは,細胞を利用した様々なニーズである,再生医療などの医学的ニーズ,細胞システム解明などの生物学的ニーズ,細胞計測・操作デバイスや細胞解析システムの実用化,ナノマニピュレーションシステムのエンドエフェクタ交換の自動化などの工学的ニーズに応える革新的かつ先端的な技術及び機器として,ナノツール・エクスチェンジャーシステムを構築する.これにより,試料室の開放を必要とせず,1異なるナノツールを自在に用いた細胞計測・操作,2ナノツールの劣化・破損の際の交換,3複数のナノツールを同時に利用した同時計測による計測間の短縮化を行うことができる.本研究では,環境制御型電子顕微鏡内で連続的かつ短時間にナノツールを交換するナノツール・エクスチェンジャーシステムを構築する.今年度は,昨年度の成果に基づいて,主に,モデル生物の線虫に対するインジェクション実験への応用に関して検討を行った.本プロジェクトでは,ナノマニピュレーションシステムのエンドエフェクタ交換の自動化を目指したナノツール・エクスチェンジャーシステム(NTExS)を提案した.本システムにより,主に,1試料室の大気開放を必要とせず,より短時間でナノツールの交換が可能,2ナノツールを手動で交換する必要がなく,作業ミスなどによるナノツールの破損などを回避,3ナノツールが劣化・破損した際に,予備のナノツールに交換,4複数のナノツールを連続的に利用,することが実現できる.本研究では,環境制御型電子顕微鏡内ナノマニピュレーションのためのナノツール・エクスチェンジャーシステムを構築し,細胞操作への応用を目的とした.本プロジェクトでは,細胞を利用した様々なニーズである,再生医療などの医学的ニーズ,細胞システムの解明などの生物学的ニーズ,細胞計測・操作デバイスや細胞解析システムの実用化,ナノマニピュレーションシステムのエンドエフェクタ交換の自動化などの工学的ニーズに応える革新的かつ先端的な技術及び機器として,ナノツール・エクスチェンジャーシステムを構築する.これにより,試料室の開放を必要とせず,1異なるナノツールを自在に用いた細胞計測・操作,2ナノツールの劣化・破損の際の交換,3複数のナノツールを同時に利用した同時計測による計測時間の短縮化,を行うために,環境制御型電子顕微鏡内で連続的かつ短時間にナノツールを交換するナノツール・エクスチェンジャーシステムを構築する.本年度に目的とした,ナノツール・エクスチェンジャーシステムの機構を基本的な駆動装置・原理・有効性を確認することができた.これまで構築してきた環境制御型電子顕微鏡内ナノマニピュレーションシステムでは,ナノツールを交換する際は,試料室を大気開放し,手作業で交換する必要があったが,試料室内でナノツールを連続的かつ短時間に交換するナノツール・エクスチェンジャーシステムを構築した.具体的には,各種ナノツールを装着可能なナノツールアダプタを開発し,ナノツールの交換方式を標準化した.ナノツールアダプタを介してナノツールを交換・回収するためのナノツール取り付け機構を開発し,ナノツールの固定・リリースが自在な装置を構築した.また,ナノツールをナノツールホルダ内にナノツールの使用目的・機能ごとに収納することで,ナノツールの交換を効率化する設計とした.また実際に細胞操作への応用として,イースト細胞を対象として,異なるナノツールを用いた細胞ピックアップ実験を実施した.今後は,構築したナノツール・エクスチェンジャーシステムを,実際の細胞解析へ応用する.具体的には,目的とするナノツールを使用するために,ナノツールアダプタを介して,ナノツール取り付け機構によりナノツールを装着し,細胞解析を行う.ナノツールの劣化が起きたり,異なるナノツールを用いて作業を行うために,ナノツールアダプタを介して,ナノツールボックス内に使用済のナノツールを回収した後に,新しいナノツールに交換する.使用目的に応じて連続的かつ短時間にナノツールを交換するために,ナノツールボックスに記録された各種ナノツールの交換情報を基に,ナノツール交換作業を効率化するためのシステムを構築する.主に下記の項目への使用を予定している.・ナノツール・エクスチェンジャーシステムをの装置の小型化・高精度化を行うための材料・機械部品など・ナノツール・エクスチェンジャーシステムの各種ツールの交換情報を電気的に取得するための装置を設計するための電気・電子部品など・ナノツールを作製するための材料・部品費など・環境制御型電顕内の作業に必要な固定部品,安全保護用品など・細胞培養・解析用物品など
神経系組織浮腫の新しい治療法

本研究は、現在までに特別な治療が確立されていない神経系組織浮腫への治療に対し、リンパ管を新生させるという新しいアプローチの開発を目的としていた。SEMA(semaphoring)3Fがリンパ管を特異的に抑制することから、神経系組織である網膜内に多く存在するSEMA3Fを用い、実際にSEMA3Fが病的リンパ管を抑制できるかどうかを検討した。角膜縫合による炎症誘導モデルにおいて、recombinant SEMA3Fを結膜下投与し、角膜内に発生するリンパ管を特異的に抑制できるかどうかを検討した結果、SEMA3F投与群で有意に角膜リンパ管新生が抑制できた。また我々の研究で炎症下においてマクロファージがリンパ管を形成することを証明しているが、マクロファージにもSEMA3Fの受容体であるNRP2が発現していることを確認することできた。さらにSEMA3Fでマクロファージを刺激したところ、リンパ管関連マーカーであるLYVE-1,Podoplaninの発現がウェスタンブロットによりタンパクレベルの発現がマクロファージ上で抑制されることを発見した。本研究は,現在までに特別な治療が確立されていない神経系組織浮腫への治療に対し,リンパ管を新生させるという新しいアプローチの開発を目的としている。SEMA3Fがリンパ管を特異的に抑制することから,神経系組織である網膜内に多く存在するSEMA3Fを用い,実際にSEMA3Fが病的リンパ管を抑制できるかどうかを検討した。平成19年度には,角膜縫合による炎症誘導モデルにおいて,recombinant SEMA3Fを結膜下投与し,角膜内に発生するリンパ管を特異的に抑制できるかどうかを検討した。その結果,SEMA3F投与群で有意に角膜リンパ管新生が抑制できた(血管新生は抑制されなかった)。また以前の我々の研究で炎症下においてマクロファージがリンパ管を形成することを証明しているが,現在までにマクロファージにSEMA3Fの受容体であるNP2が発現しているかどうかは知られていなかった。そこで我々はマウス腹腔内マクロファージを使用し,NP-2発現をRT-PCRによりRNAレベルで確認したところ発現を確認することできた。さらにSEMA3Fでマクロファージを刺激したところ,リンパ管関連マーカーであるLYVE-1,Podoplaninの発現がウェスタンブロットによりタンパクレベルの発現が抑制されることを発見した。このことよりSEMA3Fを選択的に抑制することによりリンパ管の新生を促進させ,神経系組織浮腫の軽減に大変重要であることが予想される。本研究は、現在までに特別な治療が確立されていない神経糸組織浮腫への治療に対し、リンパ管を新生させるという新しいアプローチの開発を目的としている。SEMA3Fがリンパ管を特異的に抑制することから、神経系組織である網膜内に多く存在するSEMA3Fを用い、実際にSE甑3Fが病的リンパ管を抑制できるかどうかを検討した。さらにSEMA3Fでマクロファージを刺激したところ、リンパ管関連マーカーであるLYVE-1, Podoplaninの発現がウェスタンブロットによりタンパクレベルの発現がマクロファージ上で抑制されることを発見した。平成20年度には我々はNRP2LacZマウス角膜に縫合し炎症を誘導し、それに伴うリンパ管を新生させNRP2の発現を確認したところ、角膜リンパ管にNRP2の発現が確認できた。このことから炎症におけるリンパ管新生も3Fを選択的に抑制することによりリンパ管の新生を促進させ、神経系組織浮腫の軽減に大変重要であることが予想される。
適応ファジー・ナビゲーションによる4足歩行ロボットの自律走行制御

4足歩行ロボットは環境への適応能力を有しているため、震災等による瓦礫の散在する環境下での生存者の探索・救援などの作業に有効であり、レスキューロボットとしての活躍が期待される。ただし、このような複雑で予想困難な環境での運用に対しては、4足歩行ロボットに環境適応移動能力を十分に発揮させることが極めて重要となる。本研究は、瓦礫の散在する環境下での生存者の探索・救援を行うレスキューロボットを実現するために、未知環境における4足歩行ロボットの自律ナビゲーションシステムの設計・構築を目的としている。本年度において、数学モデルが不確定でしかもセンサー情報が不足している自律知能移動ロボットのローカル的なナビゲーション手法として2種類のロバスト的な適応ニューロ・ファジー運動制御系を構築した。一つの運動制御系はファジー的反応をベースとするナビゲーション手法で、一般的なロボットアームの制御信号の生成に用いられている。もう一つのファジー的反応をベースとするナビゲーション手法は移動マニピュレータモデルに適応して、確率的ロードマップの2ノード間を連結するしなやかな軌道を生成・追従している。以上の研究で得られた研究成果が国際会議で発表され、なお未知環境における4歩行ロボットのための自律ナビゲーションシステムを構築する踏み台にもなっている。
悪性腫瘍に対する光化学反応による診断と治療に関する研究

われわれはこれまで、光感受性物質としてeosin yellow(eosin Y)を用いたpho-toradiation diagnosisが臨床的に食道癌および胃癌について可能であることを報告してきた。今回、eosin Yを光感受性物質とし、QスイッチNd-YAGレ-ザ-光線を励起光線とした二光子吸収によるphotoradiation therapy(PRT)について実験的に検討した。実験方法はマウス側腹部皮下に移植腫瘍Meth-A5×10^6個を注入し、7日後、各マウス腹腔内にEosin Y100mg/kg注入6時間後、腫瘍に対するPRTを施行した。QスイッチNd-YAGレ-ザ-光線(波長(1064nm)を励起光線とし、レ-ザ-光線は励起強度10mJ/pulse、総出力3W、2分間で、非接触的に腫瘍に対し照射した。なお、実験動物をPRT治療群、レ-ザ-光線照射単独群、eosin Y投与単独群および無処置群に分けた。各群について、処置前と処置後の各腫瘍体積(長径×短径^2)を計算した。そして、各群間で処置後の腫瘍体積の変化を算出・対比して、PRTの治療効果を検討した。結果:この実験中に死亡したマウスはいなかった。処置後1、2、4、8、14日目の腫瘍体積の平均値はPRT治療群では113、151、205、531および674、照射単独群では175、282、468、811および1919、eosin Y単独投与群では210、306、486、879および1746で、無処置群では227、287、482、840および2042であった。PRT治療群では他の3群に比して、処置後の腫瘍体積が有意に小さいことが認められた(P<0.05)。しかし、他の3群間に処置後の腫瘍体積の大きさに差はみられなかった。結論:Eosin YとNd-YAGレ-ザ-光線によるPRTはマウスに移植した移植腫瘍Meth-Aに対しては有効であった。
生体内輸送蛋白質を用いた難水溶性薬剤に対するドラッグ・デリバリー・システムの開発

リポカリン型プロスタグランジンD合成酵素(L-PGDS)は,疎水性低分子輸送蛋白質群であるリポカリンファミリーに属する蛋白質であり,様々な疎水性低分子に対して高親和性に結合する。申請者は,L-PGDSを用いた難水溶性薬剤に対するドラッグ・デリバリー・システムの構築を目指している。抗癌剤SN-38は,難水溶性であるため,臨床において,プロドラッグであるイリノテカンが用いられている。しかし,イリノテカンのSN-38への転換効率に個人差があること,イリノテカンはSN-38に比べて抗腫瘍活性が低いこと,重篤な下痢を引き起こすことから,SN-38の直接利用が望まれる。本研究では,L-PGDSによりSN-38を可溶化し,輸送することを目的とした。L-PGDSに対する難水溶性抗癌剤SN-38の結合親和性を調べるために,等温滴定型熱量測定(ITC)を行った。その結果,L-PGDSはSN-38を2分子結合し,解離定数K_dは59.2μMであることが分かった。また,SN-38のPBS中の濃度は,2mM L-PGDS存在下において,非存在下と比較して,300倍に上昇することが明らかになった。さらに,ヒト大腸がん細胞Colo201をヌードマウスの皮下に移植した異種移植モデルにおいて,腫瘍の体積が150mm^3に達した日から1日おきに8回,PBSまたはSN-38/L-PGDS複合体を投与し,腫瘍体積変化を測定した。その結果,PBS投与群と比較して,SN-38/L-PGDS複合体投与群は,腫瘍成長が有意に抑制された。本研究により,L-PGDSはSN-38の直接利用を可能にする有用な輸送体であることが判明した。開発される薬剤には,高い薬剤活性を有するにも関わらず,難水溶性であるために開発段階で除外されるものが多く存在する。これらの難水溶性薬剤に再び脚光を当てるため,生体内輸送蛋白質であるリポカリン型プロスタグランジンD合成酵素(L-PGDS)を用いた新規ドラッグ・デリバリー・システム(DDS)の構築を目指す。1.受容体ターゲットの場合は,L-PGDSと難水溶性薬剤の結合親和性と薬効との関係を調べることにより,最も効果的なDDSを可能にする結合親和性を決定する。申請者は,多次元NMR法により得られたL-PGDSの構造情報をもとに,疎水性ポケット内部の電気的な環境を変える21種類の変異体を,遺伝子組み換え技術により作製した。各変異体に対するGABA_A受容体作動薬であるdiazepam(DZP)の結合親和性を,Trp残基の蛍光消光実験を用いて決定した。これらの変異体なDZP複合体をマウス静脈内投与し,DZPのpentobarbital麻酔時間の延長効果を調べた結果,DZPに対する結合親和性が低いほど,薬効が上昇することが判明した。一方,2.がんターゲットの場合は,腫瘍に対して特異的に結合するペプチド配列をL-PGDSに導入することにより,腫瘍特異的な薬剤輸送を行う。新生血管の内皮細胞に発現する膜貫通蛋白質CD13を認識するペプチド配列,Asn-Gly-Arg(NGR)モチーフを,遺伝子組み換えによりL-PGDSのN,C両末端に導入し,インテリジェント人工蛋白質(iAP)を作製した。等温滴定型熱量測定により,作製したiAPが難水溶性抗がん剤を結合することが判明した。さらに,ヒト大腸がん細胞Colo201を移植したヌードマウス腫瘍モデルにおいて,iAP/抗がん剤複合体の抗腫瘍効果を検討中である。
化学物質の経卵曝露による鳥類の繁殖毒性および次世代影響試験法の開発

【鳥類の経世代繁殖毒性試験の開発と個体数減少の推計モデル作成】ニホンウズラ受精卵を用いた新しい経世代的な発生・繁殖毒性試験法の開発を行った.被検物質を卵内投与したウズラを性成熟させ,雌の産卵成績を検査した後に雌雄を同居させてペアリングし,各ペアから得られた卵の受精率および孵化率と,この卵から孵化した次世代の成長への影響を検討した.合成エストロジェンであるジェチルスチルベストロール(DES)5ng/g eggを投与された雌は,正常な卵を生む率が低く,最終的に次世代を残す率(適応度)が対照雌よりも有意に低くなった.また,DES投与雄からの雛に足指関節が動かないなどの形態異常が多く観察された.これらの結果を北米に生息するコリンウズラ(Colinusvirginianus)に外挿し,エストロジェン作用のある化学物質に汚染された地域を仮想して,生息するウズラの個体数変動を予測した.DES5ng/g eggに相当する外因性エストロジェンが卵内蓄積するような生息環境では,卵殻形成不全のみを原因としても,ウズラの個体数は経年減少し,4年でおよそ半分,14年後には元の個体数の5分の1になると試算された.【試験法の有用性検証】有機塩素系殺虫剤DDTの1成分であるo,P'-DDTの卵内投与によって,性成熟した雌に用量依存性の左側輸卵管の短縮と右側輸卵管の異常発達が観察された.さらに,o,p'-DDTは卵殻形成不全を引き起こし,100μg/g投与群では無産卵の雌や軟卵・無殻卵などの異常産卵が観察された.一方,DDTの主成分p,p'-DDTには明確な繁殖毒性作用は観察されなかった.本法はこれまでに提案されている鳥類毒性試験よりも正確に鳥類の繁殖能への影響を検出できるものと考えられた.【鳥類の経世代繁殖毒性試験の開発】ニホンウズラ受精卵を用いた新しい経世代的な繁殖毒性試験法の開発を行った.被検物質を卵内投与したウズラを育雛・性成熟させ,雌の産卵成績を検討した後に雌雄を1羽ずつ同居させてペアリングし,各ペアから卵を採取・孵卵して受精率および孵化率の検査を行った.さらに,孵化した次世代の雛を3週間育雛して成長への影響を検討した.合成エストロジェンであるジエチルスチルベストロール(DES)5ng/g eggを投与された雌は,正常な卵を生む率が低く,最終的に次世代を残す率(適応度)が対照雌よりも有意に低くなった.また,DES投与雄からの雛に足指関節が動かないなどの形態異常が多く観察された.【個体数減少の推計モデル作成】実験で得られた繁殖障害の結果を北米に生息するコリンウズラ(northem bobwhite)に外挿し,エストロジェン作用のある化学物質に汚染された地域を仮想して,生息するウズラの個体数変動を予測した.DES5ng/g eggに相当する外因性エストロジェンが卵内蓄積するような生息環境では,卵殻形成不全のみを原因としても,ウズラの個体数は1年目で20.2%減少し,4年でおよそ半分,14年後には元の個体数の5分の1になると試算され;観察された雛の弱体化や卵殻の破損リスクを考慮に入れると,生息数の減少はさらに加速すると考えられる.【試験法の有用性検証】o, p'-DDTの孵卵前投与によって,性成熟した雌に用量依存性の左側輸卵管の短縮と右側輸卵管の異常発達が観察された.さらに,o, p'-DDT投与は卵殻強度,卵殻重量および卵殻厚の減退といった卵殻形成不全を引き起こし,100μg/g投与群では無産卵の雌や軟卵・無殻卵などの異常産卵が観察された.本法はこれまでに提案されている鳥類毒性試験よりも鋭敏に鳥類の繁殖能への影響を検出できるものと考えられた.【鳥類の経世代繁殖毒性試験の開発と個体数減少の推計モデル作成】ニホンウズラ受精卵を用いた新しい経世代的な発生・繁殖毒性試験法の開発を行った.被検物質を卵内投与したウズラを性成熟させ,雌の産卵成績を検査した後に雌雄を同居させてペアリングし,各ペアから得られた卵の受精率および孵化率と,この卵から孵化した次世代の成長への影響を検討した.合成エストロジェンであるジェチルスチルベストロール(DES)5ng/g eggを投与された雌は,正常な卵を生む率が低く,最終的に次世代を残す率(適応度)が対照雌よりも有意に低くなった.また,DES投与雄からの雛に足指関節が動かないなどの形態異常が多く観察された.これらの結果を北米に生息するコリンウズラ(Colinusvirginianus)に外挿し,エストロジェン作用のある化学物質に汚染された地域を仮想して,生息するウズラの個体数変動を予測した.DES5ng/g eggに相当する外因性エストロジェンが卵内蓄積するような生息環境では,卵殻形成不全のみを原因としても,ウズラの個体数は経年減少し,4年でおよそ半分,14年後には元の個体数の5分の1になると試算された.【試験法の有用性検証】有機塩素系殺虫剤DDTの1成分であるo,P'-DDTの卵内投与によって,性成熟した雌に用量依存性の左側輸卵管の短縮と右側輸卵管の異常発達が観察された.

さらに,o,p'-DDTは卵殻形成不全を引き起こし,100μg/g投与群では無産卵の雌や軟卵・無殻卵などの異常産卵が観察された.一方,DDTの主成分p,p'-DDTには明確な繁殖毒性作用は観察されなかった.本法はこれまでに提案されている鳥類毒性試験よりも正確に鳥類の繁殖能への影響を検出できるものと考えられた.
難治性硬膜動静脈瘻に対する新たな治療：ベバシズマブの治療効果の解明

硬膜動静脈瘻の動物モデルを確立するために、0.2 mm以下の細径のスプリングコイルを作成して、マウスの総頚動脈に装着することで慢性脳虚血モデルを作成した。一ヶ月間にわたって大脳皮質における脳血流量の変化を、レーザー血流計を用いて測定した結果、マイクロコイル留置後に脳血流量は約35%に低下したが、30日後に約70%に回復した。組織学的には、海馬CA1領域の神経細胞に選択的脱落が生じること、脳梁白質のミエリンに変性が生じることを確認した。硬膜動静脈瘻の病態を解明する第一ステップとして、横-S状静脈洞硬膜動静脈瘻を有する患者における静脈洞の逆行性パターンと臨床症状との相関を多変量解析にて検討した。横-S状静脈洞硬膜動静脈瘻42例について検討を行なった結果、頭蓋内出血は皮質静脈逆流,静脈性梗塞はisolated sinus,認知機能障害は上矢状静脈洞の逆行性灌流,運動失調は直静脈洞の逆行性灌流と有意な相関が認められた。すなわち、逆行性灌流の流出パターンによって臨床像に違いが生じることが統計学的に明らかとなった。これらの結果は、第43回日本脳卒中の外科学会学術集会(STROKE2014)にて発表し、現在論文執筆中である。また、磁化率変化を強調したMRIの撮像法であるSWI (susceptibility-weighted imaging)を用いて、硬膜動静脈瘻における定量評価の有用性の検討を行なった。横-S状静脈洞硬膜動静脈瘻13例において、拡張した静脈を示すSWI低信号域が大脳半球全体に占める割合は、コントロール群よりも有意に高値であり、硬膜動静脈瘻患者のなかでも脳血管撮影上の静脈鬱滞が強い症例において著明に高値であった。この結果は、第30回NPO法人日本脳神経血管内治療学会学術総会にて発表し、現在論文執筆中である。さらに、硬膜動静脈瘻の動物モデルを確立するために、0.2 mm以下の細径のスプリングコイルを作成して、マウスの総頚動脈に装着することで慢性脳虚血モデル(15体)を作成した。一ヶ月間にわたって大脳皮質における脳血流量の変化を確認したのち、組織学的に海馬CA1領域の神経細胞に選択的脱落が生じること、脳梁白質のミエリンに変性が生じることを確認している。次年度は硬膜動静脈瘻の動物モデルを確立してベバシズマブの効果を検証する予定である。これらの結果は、第43回日本脳卒中の外科学会学術集会にて発表し、現在論文執筆中である。この結果は、第30回NPO法人日本脳神経血管内治療学会学術総会、国際脳卒中学会2015にて発表し、現在論文執筆中である。一ヶ月間にわたって大脳皮質における脳血流量の変化を確認したのち、組織学的に海馬CA1領域の神経細胞に選択的脱落が生じること、脳梁白質のミエリンに変性が生じることを確認した。これを基に硬膜動静脈瘻の動物モデルの作成を試みているが、まだ安定したモデルが確立していない。これが確立次第ベバシズマブの効果を検証する予定である。膜動静脈瘻の動物モデル作成に予想以上の時間を要している。膜動静脈瘻の動物モデルが高い再現性で確立し次第、本研究の主目的を達成する予定である。42症例について検討を行った結果、頭蓋内出血は皮質静脈逆流、静脈性梗塞はisolated sinus、認知機能障害は上矢状静脈洞の逆行性灌流、運動失調は直静脈洞の逆行性灌流と有意な相関が認められた。これらの結果は、第43回日本脳卒中の外科学会学術集会にて発表した。

また、磁化率変化を強調したMRIの撮像法であるSWI (susceptibility-weighted imaging)を用いて、硬膜動静脈瘻における定量評価の有用性の検討を行った。横-S状静脈洞硬膜動静脈瘻13例において、拡張した静脈を示すSWI低信号域が大脳半球全体に占める割合は、コントロール群よりも有意に高値であり、硬膜動静脈瘻患者のなかでも脳血管撮影上の静脈鬱滞が強い症例において著明に高値であった。この結果は、第30回NPO法人日本脳神経血管内治療学会学術総会、Internal stroke conference(2015.2ナッシュビル)にて発表した。さらに、硬膜動静脈瘻の動物モデルを確立するために、0.2 mm以下の細径のスプリングコイルを作成して、マウスの総頚動脈に装着することで慢性脳虚血モデル(15体)を作成した。一ヶ月間にわたって大脳皮質における脳血流量の変化を確認したのち、組織学的に海馬CA1領域の神経細胞に選択的脱落が生じること、脳梁白質のミエリンに変性が生じることを確認した。この成果は、American Association of Neurological Surgeons(2016.5.シカゴ)にて発表し、現在、論文を作成中である。硬膜動静脈瘻の動物モデルを確立するために、0.2 mm以下の細径のスプリングコイルを作成して、マウスの総頚動脈に装着することで慢性脳虚血モデルを作成した。一ヶ月間にわたって大脳皮質における脳血流量の変化を、レーザー血流計を用いて測定した結果、マイクロコイル留置後に脳血流量は約35%に低下したが、30日後に約70%に回復した。組織学的には、海馬CA1領域の神経細胞に選択的脱落が生じること、脳梁白質のミエリンに変性が生じることを確認した。臨床データの解析に予想以上の時間を要した。膜動静脈瘻の動物モデルが高い再現性で確立し次第、本研究の主目的を達成する予定である。硬膜動静脈瘻動物モデルの疾患再現性の検証を行う。その後は当初の予定どおり、ベバシズマブの静脈投与および局所投与群とコントロール群の比較を行い、新生血管阻害効果の評価を行う。脳神経外科学硬膜動静脈瘻動物モデルの疾患再現性の検証を行う。調達方法の工夫などにより、経費の節約ができたため。薬品(ベバシズマブ)・プラスチック・ガラス器具の購入に充てる。
エピジェネティック異常による造血器腫瘍発症機構の解明

ポリコーム遺伝子Ezh2がマウス急性白血病モデルにおいて白血病幹細胞の維持と分化抑制に機能することを明らかにした(Blood 120:1107, 2012)。一方で、実際骨髄球系腫瘍で機能喪失型変異が認められるEzh2遺伝子をマウスで欠損させるとMDS/MPNあるいはMDSを発症すること、Tet2変異やRUNX1変異と合わせると、その病態が優位に促進されることを確認し(J Exp Med 210:2627, 2013; Nat Commun 5:4177, 2014)、EZH2機能不全のMDS, MDS/MPNにおける病因論的意義を明らかにした。Ezh2欠損マウス、Tet2低発現マウス、ならびにこれらのコンパウンドマウスを作成し、移植後10ヶ月まで血液学的表現系を観察したところ、Ezh2欠損マウスはMDS/MPN様の病態をきたし、10ヶ月以内に半数が死亡することを確認した。これらのマウスは、MPNの特徴である髄外造血を伴った脾腫と、MDSの特徴である血球形態の異形成と無効造血に起因した貧血を呈した。驚くべきことに、Ezh2欠損マウスとTet2低発現マウスとのコンパウンドマウスは、MDS/MPNだけでなくMDS様の病態もきたし、Ezh2欠損マウスと比べMDS関連疾患発症の潜伏期間を著明に短縮させ、全マウスが10ヶ月以内に肺炎で死亡した。造血幹細胞/前駆細胞(LSK細胞)を用いてDNAマイクロアレイならびにgene set enrichment analysis (GSEA)を行った。予想通り、Ezh2標的遺伝子群は、Ezh2欠損下で発現が脱抑制していたが、興味深い事にEzh2欠損下ではEzh1が機能し、腫瘍の進展に不都合な癌抑制遺伝子群などの発現抑制を維持し、腫瘍発症に寄与している事が示唆された。DNAマイクロアレイと顆粒球/単球系前駆細胞(GMP)におけるH3K27me3の抗体を用いたクロマチン免疫沈降(ChIP)シーケンシングの結果から、Ezh2欠損下ではEzh1による代償作用で典型的な発生・分化制御遺伝子の転写抑制が維持されることが確認された。その一方で、Hmga2やPbx3といった直接的なEzh2の標的癌遺伝子群の発現抑制が解除されることも確認された。以上の研究成果により、MDS関連疾患の病態発症にEzh2が癌抑制遺伝子として機能することを世界で初めて証明した。さらに、EZH2とTET2遺伝子変異など、複数の共存する遺伝子変異が協調してMDS関連疾患の病態形成に寄与することを明らかにし、血液病学の分野における極めて意義の大きい知見を得ることができた。今年度は、造血細胞特異的にポリコーム群遺伝子Ezh2を欠損(Ezh2Δ/Δ)するマウスの長期観察を行い、骨髄異形成症候群(MDS)とともに骨髄増殖性腫瘍(MPN)様の症状を併せ持つMDS/MPN病態を発症することを確認した。この知見は、MDS, MDS/MPN患者においてEZH2をはじめとするポリコーム群遺伝子の機能喪失型変異が頻繁に認められる事実と一致するものであり、EZH2機能異常の疾患発症への関与を強く示すものである。さらに、Ezh2欠損細胞にMDSで認められるRUNX1変異遺伝子をウイルスを用いて発現させると、MDS病態が著明に促進されることを見いだし、その癌抑制遺伝子としての機能が明らかとなった。一方で、EZH2遺伝子変異はT-ALLにも高率に存在し、Eraly T-cell precursor (ETP)-ALLでは19%に変異が認められる。p53とEzh2を同時に血液細胞特異的に欠損するマウスを作成したところ、71%のマウスがETP-ALL様の病態を発症することを見いだした。このマウス腫瘍においては、白血病化を伴う胸腺腫・リンパ腫が認められ、腫瘍性T細胞の分化がDN12の段階で停止し、CD3の発現は細胞内にとどまり細胞外には発現されない。また、これらの未分化T細胞はc-Kitを発現することが観察されている。このデータは、ETP-ALL患者にPRC2関連遺伝子の変異が同定される知見によく符合するものである。以上のマウスモデルは、造血腫瘍の発症におけるEZH2の機能を解析する上で優れた系であり、この系を用いて様々な解析を進行中である。26年度が最終年度であるため、記入しない。血液内科学26年度が最終年度であるため、記入しない。MDS関連疾患の病態発症にEzh2が癌抑制遺伝子として機能することを世界で初めて証明した。

これらの成果は、論文として2-13に報告することができた。順調にEzh2欠損によるマウス造血器腫瘍モデルができており、予定通りの進行状況と考える。今後は、上述したモデルマウスにおけるDNAメチル化阻害剤の有用性と作用機序の解明を行う予定である。まず、MDS関連疾患を発症したコンパウンドマウスの骨髄細胞を、sublethal量の放射線を照射したレシピエントマウスに移植し、DNAメチル化阻害剤であるdecitabine投与群とPBS投与群に分け、移植後一ヶ月から投与を行う。治療効果の評価として、生存期間や血球減少の改善の有無を評価すると共に、LSK分画の細胞をサンプリングしDNAマイクロアレイ解析とDNA bisulfiteシークエンスを行う。これらの結果を併せて解析することにより、DNAメチル化阻害剤が治療効果をもたらす上で、重要な標的遺伝子群を同定する事を目指す。また、造血器腫瘍に関与する非蛋白コードRNAのプロファイリングとその機能解析を進め、造血器腫瘍のエピジェネティクスの理解を進めたい。平成25年度は予定通り以下の解析を行う。1造血器腫瘍におけるEzh2の癌遺伝子としての機能解析2造血器腫瘍におけるEzh2の癌抑制遺伝子としての機能解析Tet2hypo/hypoマウスのMDS/MPN様病態がEzh2の欠損によって著明に増強される機序を明らかにするために、1) DNAメチル化解析、2)ヒストンメチル化解析、3)遺伝子発現解析、4)エピジェネティック治療開発の可能性の検証、以上を行う。
フランス革命とヨーロッパ近代-帝国と国民国家

本研究プロジェクトは、遅塚忠躬/松本彰/立石博高編『フランス革命とヨーロッパ近代』(同文館、1996年)にまとめられた成果を継承し、ヨーロッパ近代についての総合的再検討をめざして、「帝国と国民国家」を統一テーマに設定した。3年間、ゲスト報告者を招いての合宿研究会やスペイン、バルセロナでのワークショップなど、多彩な研究活動を行い、このテーマについて多面的に明らかにしていくことができた。3年間の議論のなかで、とくに焦点になったのは以下の点である。1)「帝国と国民国家」について論ずる場合、各国語の国、国家、くに、国民、民族、人種などにあたることばの意味するものについて、そもそも何を意味するのか、実態との関係を問い、比較史的に検討することが不可欠であること、2)とくにヨーロッパでは古代以来の伝統を持つ「帝国(Imperium)」概念が、近代以降どのように変容し、また日本語の「帝国」概念とどのような関係にあるのか、を検討する必要があること、3)「国民国家」とは、主権、領土、国民を三要素として成立する近代国家概念とどのような関係にあるのか、が重要な論点になること、3)「帝国と国民国家」を問題にするにあたって、国家と戦争、とくにすべての国民に「国家のために死ぬ」ことを強制する20世紀の総力戦との関係を見据える必要があること。最近、ノラ『記憶の場所』、リーベン『帝国の興亡』、ネグリ/ハート『帝国』など、重要な本の翻訳が相次ぎ、「帝国と国民国家」をめぐる議論は、新しい段階に入りつつある。その点を確認しつつ、3年間の研究の総括をまとめるべく努力したい。本年度は、3年計画の初年度にあたるが、分担者全員が参加する研究会を三回、行った。それぞれの研究会のために研究打ち合わせを頻繁に行い、グループごとの準備会も行った。2000年9月に新潟大学において「ドイツとイギリスにおける帝国と国民国家」をテーマに、『「イギリス」であること-アイテンティティ探求の歴史』を編集した指昭博氏と、ドイツ人研究者ティノ・シェルツ氏をゲストに招いて研究会を行った。ドイツ史におけるドイツ史とオーストリア史の関係、イギリスにおけるイングランド史とブリテン史の関係など、基本的な問題について理解を深めることができた。10月には、慶応義塾大学において、研究分担者、遅塚忠躬、柳川平太郎の個別報告による研究会を行った。2001年2月には、湘南国際村において、言語問題を中心にフランスにおける「帝国と国民国家」について精力的に研究を発表している三浦信孝氏、第三共和制期の「国民形成」についての研究者である工藤光一氏を招いて、「フランスにおける帝国と国民国家」をテーマに研究会を行った。フランスにおける共和主義と帝国主義、フランスにおける多文化主義などについて、活発な議論を行った。本年度の研究を通じて、「帝国と国民国家」をめぐるドイツ史、イギリス史、フランス史における研究状況を確認し、今後の課題を明らかにする上で、かなりの成果をあげることができた。来年度は、スペインでのワークショップも予定しており、スペインを含めたヨーロッパ近代における「帝国と国民国家」をめぐる問題について、検討していきたい。本年度は、3年計画の一年目にあたる。交付申請書にも記載したように、本年度は、バルセロナ(スペイン)、ポンペウ・ファブラ大学において研究テーマについてのワークショップを行うことになっていたため、それを中心とした研究計画を立て、実行した。7月には、ワークショップの準備会を開催、各自の報告についての検討を行った。われわれの研究プロジェクトから9月のワークショップに参加したのは7名(松本、瓜生、佐々木、吉田、岩井、原、立石)であり、フォンタナ教授他、スペインからの参加者との研究テーマについての多彩な討論は、おおいに刺激的であった。その後、11月には、「ドイツにおける帝国と国民国家」再検討のために、大津留厚(神戸大学)、渋谷聡(島根大学)をゲストに研究会を開催した。