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諸学の相関から見た啓蒙主義詩学史－「模倣の詩学」の情動面を中心に－

研究は詩学に「転換を生み出しうる機制」の考察となり、潜在的な理論的振れ幅を記述することとなった。情動や想像力の扱いや、それらの対象や構築物の複雑性は学問によって想定が異なることで、詩学の記述装置側の想定に連動して、詩学に親和的な学問が変わることが分かった。また、物語と物語のせめぎ合いから情動が発生する場合、どのような種類の物語がそれに関わっているか、真理の一義性と表現の多様性のどちらをより志向しているかによって、諸学の相関という観点と詩学との関係が見て取れるとの見解に達した。初年度となる平成22年度は、まず、文献収集のための書誌情報の整備を始めた。対象は、18世紀ドイツにおける詩学、美学、医学、修辞学、哲学といった分野の専門書が中心で、そこにそれについての2次文献が加わる形となった。また、実際の文献収集にも着手した。9月にベルリンにおいて集中的な調査・収集を行った他、ドイツからの文献購入や国内所蔵資料の取り寄せによって、研究の基盤整備を進めた。理論面では、啓蒙主義時代の「模倣の詩学」の変化について、詩学のテクストを並置して系譜を描くのではなく、諸学の相関とその構造的転換という次元にまで掘り下げて記述する方向性の下、特に「模倣の詩学」の情動面に光を当てる出発点として、この時代には、理性によって情念を抑制しようとする哲学的な情念論もあれば、人の心を動かすために情念を巧みに活用しようとする修辞学的な情念論もあったことをまず視野に入れた上で、「カタルシス」という形で情念の浄化を行う悲劇の情動論的契機の位置付けを探ろうとした。「カタルシス」は本来医学用語で、こうした情動操作の効果は治癒的と言えるが、書誌的な確認により、この時代の情動論が心身問題というマターを中心に医学の分野に浸透していることや、近年そうした医学的な情動論が注目を集め、それが<人間学の誕生>という物語に還元される形で研究されてきていることが明確になってきた。そのため、詩学や関連する諸学の情動論について論点を整理し、その豊かな具体相を明らかにすることで、模倣の詩学は近代美学に取って代わられたとする<近代美学の誕生>という物語への還元とともに、こうした<人間学の誕生>という物語への還元を同時に相対化することが本研究の進むべき方向性ではないかとの仮説的見解に到った。(このことを5月刊行の『ドイツ啓蒙主義研究』に掲載する論文で実例とともに述べるべく現在準備中である。)昨年度から始めた文献収集のための書誌情報の整備、並びに実際の文献収集を継続した。ベルリン国立図書館で行った文献収集では、電子的に複写されてPDF化されているものが館内で自由にダウンロードできるようになっていたため、収集の効率が飛躍的に上がった。短い期間で電磁的に数ギガ単位の一次文献を収集できた。それに加えて、入手困難な二次文献を手作業や委託の形で複写した。ベルリンでの一次文献の収集が膨大な量になったため、その後の書籍購入は二次文献中心の形に切り替えた。理論面では、昨年度の成果を年度の早い時期に論文にした。模倣の詩学は近代美学に取って代わられたとする<近代美学の誕生>という物語への還元とともに、こうした<人間学の誕生>という物語への還元を同時に相対化することが本研究の進むべき方向性であろうということを述べた。その後は特に、ヴォルフの追放と復帰というドラマが展開されたハレという都市に重点を置いて、敬虔主義と合理主義の争いを背景に、主として、敬虔主義の影響を受けた詩学の情動論的な側面について考察した。情念を病のように捉える観念、情動を不可欠の精神的契機と見る思考、情動を積極的に活用しようという発想があるなかで、敬虔主義の影響という点では、情動面を重視する姿勢が確認され、霊感的な詩作やその詩の受容での同化効果、友情という詩の素材の同化的特徴、「崇高」という素材の異化効果にその特徴を認めた。そうした詩学は、スイス派の詩学と親和性があり、ゴットシェートと対立することで時代の理論的振幅の片方の極を形成していた。これらの論点を5月刊行の『ドイツ啓蒙主義研究』に掲載予定の文章で整理する予定で、現在その準備中である。とりわけ理論的考察では、模倣説の転換機制の記述をめぐって考察を深めた。

「人間学の誕生」や「近代美学の誕生」という思想史の物語は、諸学の相関のなかで、医学、生理学と哲学、心理学が統合する方向性や、哲学から美学を切り分けて論じる方向性を象徴的に捉えることで暗黙の大きな物語を語る形式を採っているように見えるが、諸学に対する規範的学問の存在が諸学の連関の弛緩と関わっている様を広い視野で観察すると、医学を哲学から切り離す流れも見て取れたり、学問として切り分けたとしても共通基盤があることが依然として見て取れたりするため、個別の動きを時代の象徴だとして大きな物語を語る手法には疑問も残る。今年度特に取り組んだ、敬虔主義を背景としたハレの思想風景では、神学が合理主義哲学を吸収する一方で、宗教的な背景をもつ修辞学的な議論が、真理は一つでも表現は多様という論によって、広義の悟性の能力論は取り込みながらも、哲学的な規範詩学の思考に対峙する形となっていた。その作用詩学では、友情信仰に見られる同化性、崇高概念に見られる異化性が、ともに敬虔主義の風土で育まれた宗教的な精神基盤を物語として前提としていて、それが、模倣説が転換していくなかで、情動と想像力をつなぎ合わせている回路になっているように思われた。詩学書のなかで諸学の連関を見極めるという点でも、具体的な議論で模倣の詩学の情動論的な側面に着目するという点でも、新たなタイプの物語論を作って、それによって説明するという今後の研究の方向性を得た。「物語による構造分析」とでも言うような、「物語」を説明原理として用いて、物語の変容、複数の物語のせめぎ合い、物語の入れ子構造がもたらす効果という視点で、当時の議論や用語法を再解釈して整理することができるのではないかという結論に到った。3年目の今年も文献収集を継続した。9月にベルリン国立図書館で行った作業では、PDF化されている一次文献を主たる収集対象とした。約200点を調査対象とし、ウェブで世界的に公開されていると確認されたものや日本で入手可能と判明したものを除く形で、多くの資料を効率よく入手できた。その後、二次文献中心の書籍購入によって収集を補完した。集められた数多くの文献や今後目配りすべき文献に対して、学問領域や使用用語などの補助的情報の整理という点で工夫を加えたいと考えているが、詩学とその隣接領域の文献を並置してそのつながりとして学際性を見るのではなく、あくまでも詩学書のなかの立論において他の学問との間の影響関係を見るのが本研究の探る学際性であるというように基本認識を修正し、その下での方策を検討している。理論的考察においては、とりわけ、ヴォルフの形而上学を議論の土台としていると思われる、あるいは親和性が高いと思われる医学者E.A.ニコライの「情念」論と哲学者ズルツァーの「感情」論を比較することで、異なる学問領域を横断するところで、想像力の作用の仕方が異なることを確認した。ニコライの場合は観念が射影のように情念を喚起するという比較的単純な議論の仕方をしているが、ズルツァーはむしろ対象が複合的なものの場合に成立する感情について議論している。この構図が詩学における模倣説の段階性の議論、つまり、単純な模写的な模倣と高度な連関を創出する模倣を比較する構図にそのまま通じていると考え、12月の講演において口頭発表した。また、チューリッヒのスイス派、ライプツィヒのゴットシェート派に対するハレのピューラの関係についての考察を、論争や影響作用史を背景にした形の整理から、土台としている学問を背景にした形の整理に遷移する方向で進めた。これについては、次号の『ドイツ啓蒙主義研究』に掲載する予定で、現在その準備中である。資料収集は当初の想定以上に捗っている。書誌情報、文献に関するキーワードなどの補助的情報の整理には工夫が必要と考えている。理論的考察では、詩学と医学の接点に目を向けて、「人間学の誕生」という物語の相対化をより探る必要がある。25年度が最終年度であるため、記入しない。文献収集は、ベルリンでの作業が予想以上のハイペースになっていて、全体的に非常に順調と言える。
白色光源と高精度波長選択フィルターによる大気中構造材料劣化損傷評価への挑戦

本研究においては,地球温暖化防止対策に資する次世代エネルギー機器の高効率化に不可欠な,機器動作環境の過酷化(高温高負荷化)に起因して生じる構造材料の強化微細組織のナノスケールでの崩壊過程の大気環境中における可視化技術の開発に挑戦した.地球温暖化防止対策を推進する上で,二酸化炭素排出の主要因であるエネルギー機器の高効率化は必須課題であり,動作環境の高温化と例えばタービン運転速度の高速化に伴う機器動作環境における力学的負荷の増加は避けられない.この使用環境の過酷化に伴い,機器の動作環境において構造材料内部で原子拡散が活性化し,強化機構が崩壊し突然破壊が生じるという現象の発生が研究レベルでは報告され始めている.本研究では高輝度白色光源を使用して構造材料表面を観察し,反射光を高精度フィルターを導入して波長選別し,各波長領域の画像を分離計測,比較することで代表元素の分布の変化を大気中で観察する技術の開発に成功した.金属元素固有の反射率の波長依存性に着目し,Ni基耐熱合金の非破壊組織観察,およびCr,Alの分光反射スペクトルを測定した.まず波長400500nmでNiのスペクトル強度が他の元素と比較して低下していることに着目し,開発した観察系で450 nm近傍の反射強度分布を測定することで大気中での微細組織変化観察が可能なことを実証した.次に耐熱合金系に添加されている代表元素としてCr,Alおよびそれらの酸化物についてスペクトル分析を行い,金属とその酸化物でそれぞれ特徴的なスペクトル形態変化が生じること,試験片表面の表面粗さは,スペクトル形態には著しい影響を及ぼさないことなどを確認した.さらに塑性変形の信仰に伴う表面粗さの変化も検出することに成功した.したがって本評価手法を適用することで,合金中の元素の偏析や局所酸化現象など大気中で微細組織変化観察を実現できる見通しが得られた.地球温暖化防止対策を推進する上で,CO2排出の主要因であるエネルギー機器の高効率化は必須課題であり,動作環境の高温化とタービン運転速度の高速化に伴う機器動作環境における力学的負荷の増加は避けられない.エネルギー機器に使用される耐熱合金では,様々な材料強化機構が適用され,単なる組成制御に留まらず,ナノスケールでの分散強化,析出強化などの微細組織制御が多結晶材料の結晶内部と結晶粒界いずれにも適用されている.しかし,使用環境の過酷化に伴い,機器の動作環境において構造材料内部で原子拡散が活性化し,強化機構が崩壊するという現象の発生が報告され始めている.最先端ガスタービンで使用されているNi基合金においてもタービンの遠心力による引張負荷と直交方向にナノメータオーダーの析出強化組織(Ni3Al:図中白色領域)が連結粗大化し,Ni基との境界近傍でき裂が発生し最終破断に到る.この組織変化は主としてAl原子のひずみ誘起拡散現象で生じることが明らかになっている.そこで,構造材料を構成する代表元素の光学的反射率の波長依存性に着目し,元素ごとに反射率が急減するあるいは増加する波長が異なることを応用し,高輝度白色光源を材料表面に照射し,特定の波長領域の反射光強度分布を測定することで,着目した元素の濃度分布を可視化できるという着想に至った.例えば,ガスタービン用の代表的な耐熱合金構成元素であるNiの光学反射率は,近赤外領域から可視光の約600 nm,の範囲ではほぼ一定であるが,600 nmから近紫外領域に向けて大きく減少する.一方上述したAlの反射率は近赤外から近紫外領域でほぼ不変である.したがって,波長628 nmのArレーザ光でNi合金を観察した結果と波長405 nmのGaNレーザで同一箇所を観察した画像を比較すると,電子顕微鏡画像と同質な情報を得ることができることを実証した.当初提案計画通り,高輝度白色光源を使用して構造材料表面を観察し,反射光を高精度フィルターを導入して波長選別し,各波長領域の画像を分離計測,比較することで代表元素の分布の変化を大気中で観察する技術の開発をに成功した.既存の共焦点レーザ顕微鏡の光源を高輝度白色光光源に変更し,紫外線対応の対物レンズ系と受光素子系を使用して耐熱合金内の特定元素の偏析,分布状況画像が取得可能であることを実証した.これにより高輝度白色光光源から波長選択することで特定波長のレーザ光光源と同等の観察が可能であることを確認できると考えている.本実験設備を応用して大気中で観察した耐熱合金の微細組織変化は,従来高分解能の電子顕微鏡を応用してしか得られなかった情報と同等の精度の情報であることを確認し,学会等で公表,議論し国内外から高い評価を得ている.以上の状況から,概ね順調に進展していると判断した.本研究においては,地球温暖化防止対策に資する次世代エネルギー機器の高効率化に不可欠な,機器動作環境の過酷化(高温高負荷化)に起因して生じる構造材料の強化微細組織のナノスケールでの崩壊過程の大気環境中における可視化技術の開発に挑戦した.地球温暖化防止対策を推進する上で,二酸化炭素排出の主要因であるエネルギー機器の高効率化は必須課題であり,動作環境の高温化と例えばタービン運転速度の高速化に伴う機器動作環境における力学的負荷の増加は避けられない.この使用環境の過酷化に伴い,機器の動作環境において構造材料内部で原子拡散が活性化し,強化機構が崩壊し突然破壊が生じるという現象の発生が研究レベルでは報告され始めている.

本研究では高輝度白色光源を使用して構造材料表面を観察し,反射光を高精度フィルターを導入して波長選別し,各波長領域の画像を分離計測,比較することで代表元素の分布の変化を大気中で観察する技術の開発に成功した.金属元素固有の反射率の波長依存性に着目し,Ni基耐熱合金の非破壊組織観察,およびCr,Alの分光反射スペクトルを測定した.まず波長400500nmでNiのスペクトル強度が他の元素と比較して低下していることに着目し,開発した観察系で450 nm近傍の反射強度分布を測定することで大気中での微細組織変化観察が可能なことを実証した.次に耐熱合金系に添加されている代表元素としてCr,Alおよびそれらの酸化物についてスペクトル分析を行い,金属とその酸化物でそれぞれ特徴的なスペクトル形態変化が生じること,試験片表面の表面粗さは,スペクトル形態には著しい影響を及ぼさないことなどを確認した.さらに塑性変形の信仰に伴う表面粗さの変化も検出することに成功した.したがって本評価手法を適用することで,合金中の元素の偏析や局所酸化現象など大気中で微細組織変化観察を実現できる見通しが得られた.本年度は高輝度白色光光源の出力光から高精度帯域選別光学フィルターを用いて半値幅30 nmの準レーザ光を取り出し,構造材料表面の反射率分布を測定(観察)する技術を開発する.耐熱合金に使用される代表的な特性波長としては,例えばAlは約850 nm(反射率極小),Crは約450 nm(反射率極大),Coは約350 nm(反射率急減)などが有効であることは理論的に確認している.そこで高精度帯域選別光学フィルターと各波長領域に感度を有するセンサを高輝度白色光源とシステム化し,各種損傷を受ける耐熱合金の微細組織変化の大気中観察の実現を目指す.中心波長が異なる帯域選別光学フィルター(バンドパスフィルター)を複数準備し,フィルターを交換しながら構造材料表面から得られる反射光の強度分布を連続的に測定する.それぞれの観察画像間の輝度分布変化を画像処理により抽出することで,着目している元素分布の変化の検出可能性を検討する.微小試験片には今後産業界で活用が期待される複数のNi基とCr-Mo鋼を使用し,次世代機器の使用環境における寿命試験を実施し,高温におけるクリープ疲労環境下における材料強度信頼性データベースの構築も図る.以上の研究により,機器動作環境の過酷化(高温高負荷化)に起因して生じる構造材料の強化微細組織のナノスケールでの崩壊過程の大気環境中における可視化技術の開発を実現する.
多様なタイプの休暇に関する実証的理論研究

多様なタイプの休暇制度に関して、平成6年度は実態調査、同7年度は比較法研究を行った上で、同8年度は、これれの調査研究を基盤にして、労働者個人の休暇権及び社会的文化的生活の充実、さらに自己実現との視点に立ち、まとめを行った。1多様なタイプの休暇を導入目的によって分類すると、(1)年休取得率の向上及び長期化をめざすもの(フレックス休暇等)、(2)年休取得率の向上を側面から促進するもの(病気休暇、積立保存休暇等)、(3)節目毎に心身のリフレッシュを図るもの(リフレッシュ休暇)、(4)自己実現を促進するもの(ボランティア休暇等)がある。これらは、その程度に差はあるが、徐々に普及しており、積極的な役割を果たしている。2休暇先進国であるドイツにおいて、年休が100%取得されているのは、(1)年休取得の計画性、(2)十分な要員配置、(3)多様なタイプの休暇の制度化、(4)労働者の余暇感及び勤労感、(5)低廉な施設の存在などの要因による。また、週労働時間が約35時間と時短が進んであり、休暇によらなくても自己実現できる時間が確保されている点も重要である。3多様なタイプの休暇は、今後、わが国が真の意味での「ゆとり社会」となるために、普及・定着されねばならない。その際、次の点が課題となる。第一に、休暇が会社中心ではなく、労働者を主体とした制度でなければならない。このためには、休暇を労働協約や就業規則に規定し、かつ制度内容及び付与基準を明確にしなければならない。第二に、年休の取得率を向上させなければならない。この実現と相まって多様なタイプの休暇も普及していくからである。第三に、労働者を個人として尊重し、自己実現を促進する企業風土を構築することである。1本研究においては、多様な休暇に関する文献及び調査資料を収集し、分析を行った。また、富士ゼロックス他6つの企業及び労働組合の聞き取り調査も実施した。こうした調査研究で現在までに明らかになったのは次の諸点である。すなわち、(1)普及率は各休暇によって異なるが、比較的多くの企業で導入されているのは、リフレッシュ休暇、介護休暇、育児休暇である。(2)多様なタイプの休暇の導入率は、大企業ほど高い。(3)労働省の、こうした休暇への関心は比較的高いが、実際に取得する労働者は、必ずしも多くない。これには、職場の人員体制のほか、取得要件、取得中の賃金保証の不十分さなどの原因が考えられる。(4)年休の取得率を引き上げるには、病気休暇の制度化が不可欠である。但し、これには年休と同様、賃金が保障され、かつ人事面での不利益取り扱いがないことが前提となる。多様な休暇が最も普及しているのは、富士ゼロックスであった。こうした休暇の制度化にあたって、モデルとなり得ると思われる。さまざまな休暇制度と年休との関係を明らかにすることも本研究の重要な課題であったが、その視角及び理論上及び実務上の問題点を析出するために、年休に関する最高裁判例の分析も行った。2多様なタイプの休暇制度に対する企業及び労働組合・労働者の関心は高く、導入率も徐々に高まっているが、制度上の不備(取得要件の厳しさ、賃金等の保障の不十分さなど)、休暇相互間の関係の不明確さ、特に使用者側における、労働者の権限としての休暇との捉え方の希薄さなど少なからぬ問題点が浮彫りになった。こうした問題の解決方法をさぐるには、さまざまな休暇が普及している外国の研究が不可欠であり、これが今後の課題と考えられる。

1 94年度の調査研究によって、わが国の多様なタイプの休暇には多くの問題点・課題のあることが明らかになったが、本年度は、これを踏まえて比較法研究を行った。2本年度の研究で得られて主な成果は以下の通りである。(1)ヨーロッパ諸国では、年休制度が充実しており、かつ完全取得されている。年休制度の発達には労働協約が重要な役割を果しており、また計画的に取得されている。安価なリゾート施設も完備しているなど、さまざまな点で年休を享受できる社会になっている。(2)年休を取得し得、また文化的社会的生活を享受できる前提として、病気休暇、看護休暇、教育休暇など多様な休暇が完備している点を指摘し得る。特に、何らの不利益を課せられることなく、かつ有給でそれを取得できる点は重要である。(3)余暇意識の違いも重要と考えられる。これは、ヨーロッパ諸国では、個人主義が確立しており、主体的に余暇設計する点が大きいと思われる。(4)年休と多様タイプの休暇とが一体となって労働者の生活の充実が図られていると考えられ、両者は統合的に捉えていく必要がある。3来年度は、実態調査及び比較法研究を踏まえ、労働者の休暇権及び社会文化的生活の充実との観点から、わが国において「ゆとり社会」を実現する方向を探る。法制論や法理論の提示が中心となるが、「企業社会」といわれるわが国の社会自体のあり方も検討していく予定である。多様なタイプの休暇制度に関して、平成6年度は実態調査、同7年度は比較法研究を行ったが、本年度はこれらの調査研究を基盤にして、労働者個人の休か研及び社会的文化的生活の充実、さらに自己実現との視点に立って研究を進めてきた。1多様なタイプの休暇を導入目的によって分類すると、(1)年休の取得率の向上及び長期化をめざすもの(フレックス休暇等)、(2)年休の取得率の向上を側面から促進するもの(病気休暇等)、(3)節目毎に心身のリフレッシュを図るもの(リフレッシュ休暇)、(4)自己実現を促進するもの(ボランテイア休暇等)がある。2多様なタイプの休暇の法的性格は、年休同様に一方的な意思表示で成立するか、それとも会社の承認を要する請求権型かは一概に決めることはできないが、実態調査によると後者が多い。次に、権利性を有するには、就業規則や労働協約に規定されており、かつ制度内容及び付与基準が明確でなければならない。付与にあたって会社の裁量が大きい場合には権利性を有するとはいえない。さらに、休暇の取得と人事考課との関係については、労働力の評価に関わる限りマイナス評価することもやむを得ないが、その取得促進という観点からすると、望ましくない。他方、富士ゼロックスではボランティアなど社会的貢献をした場合、プラス評価しているが、わが国では、協調性、適応力、バイタリティーなどやや抽象的な項目を取り入れて人事考課している点からこれも許される。3今後、多様なタイプの休暇を普及・定着させていくには、次の点が課題となる。第一に、まず年休の取得率を向上させることである。第二に、休暇が会社中心ではなく、労働者を主体とした制度でなければならない。第三に、労働者を個人として尊重し、自己実現を促進する企業風士を構築することである。第四に、真の意味での「ゆとり社会」を実現することである。
外珠皮・内乳の祖先器官推定に基づく被子植物の起源に関する研究

原始的被子植物アウストロバイレヤ目の胚珠・種子発生過程を観察した.その結果,本目においては幌型(左右対称)の外珠皮からコップ型(放射相称)の外珠皮が派生的に生じたことが明らかとなった.さらには,幌型の外珠皮を持っ胚珠からは珠孔-へそ複合体を持つ種子が,コップ型の外珠皮を持つ胚珠からは珠孔とへそが外種皮によって隔てられた種子が生じることが示され,これまでに知られている最古の被子植物化石は珠孔-へそ複合体を持つことから,幌型の外珠皮が原始的である可能性が示唆された.さらに被子植物の代表的な共有派生形質の1つである心皮の進化過程について検討した.心皮の形質状態の中では,袋状が原始的であると考えられているため,袋状心皮の形態形成を詳細に観察することは,心皮の進化過程を考える上で重要な意味を持つ.これまでの形態学的研究により,袋状の心皮形成は,心皮原基の花序軸に面した部分が貫入することで形成されると考えられてが,この貫入する部分に,向軸・背軸両側の組織が含まれるのか,向軸側組織のみなのかは明らかになっていなかった.そこで,原始的被子植物アンボレラからYABBY2相同遺伝子を単離し(AmbF1),その発現をin situハイブリダイゼーション法で観察することでこの問題の解決を試みた.その結果,AmbF1の発現は心皮,雄蕊,花被片,葉原基の向軸側で観察された.シロイヌナズナ・タバコにおいてYABBY遺伝子は側生器官の背軸側で発現していることが知られているが,アンボレラでの結果は,向軸-背軸に沿った発現をするものの,これと正反対であった.また心皮原基におけるAmbF1の発現に基づけば背軸・向軸組織の区別が可能で,貫入する部分が向軸側の組織のみであり,背軸側の組織を全く含まない事が示唆された.この結果は袋状心皮が,二つ折れ状態を経ないで生じた可能性を示唆している.原始的な被子植物において、外珠皮の形態を種子から推定できることを確かめるために、オーストラリアに固有のアウストロバイレヤ科・トリメニア科の成熟した種子を採集し、形態を詳細に観察した。前年度までに採集した発達段階にある胚珠・種子の観察結果と合わせて、現在論文を準備している。また原始的被子植物における外珠皮・珠孔の進化を推定するために、比較的進化した原始的被子植物であるモクレン科の外珠皮形成について観察し、「コップ型の外珠皮が少なくとも2つの経路で進化したこと」および「外珠孔を持つ胚珠は派生的」であることを明らかにした。(Yamada et al.,in press)。この仮説を化石記録からも確かめるためには、保存の良い種子化石を観察することが必要である。そこで北海道において鉱化した植物片を含む石灰質団塊を多数採集し、種子化石の単離を行っているが、現在までのところ良い種子化石は得られていない。さらには最も原始的な被子植物(ANITA)の1つであるスイレンの外珠皮が葉のように背腹性を持つことをINO相同遺伝子の発現様式から明らかにし、外珠皮が葉的器官と相同である可能性をさらに確かめた(Flowers meeting, Zurich;日本植物学会第66回大会,京都;Yamada et al.,投稿中)。また心皮の背腹性についても観察を行った。ANITAの1つであるアンボレラを用いてFIL相同遺伝子の発現様式を観察した結果、アンボレラの心皮ではシロイヌナズナの心皮と背腹性が逆転していることが明らかとなった。心皮が葉に由来すると考えられていることを考え合わせると、心皮の祖先器官として、背軸側に胚珠を乗せた葉的器官を想定しなければならないことになる。この仮説はこれまでの心皮の起源に関する仮説を覆すものであり、現在慎重に他の原始的被子植物も含めた検討を行っている。原始的被子植物アウストロバイレヤ目の胚珠・種子発生過程を観察した.その結果,本目においては幌型(左右対称)の外珠皮からコップ型(放射相称)の外珠皮が派生的に生じたことが明らかとなった.さらには,幌型の外珠皮を持っ胚珠からは珠孔-へそ複合体を持つ種子が,コップ型の外珠皮を持つ胚珠からは珠孔とへそが外種皮によって隔てられた種子が生じることが示され,これまでに知られている最古の被子植物化石は珠孔-へそ複合体を持つことから,幌型の外珠皮が原始的である可能性が示唆された.さらに被子植物の代表的な共有派生形質の1つである心皮の進化過程について検討した.心皮の形質状態の中では,袋状が原始的であると考えられているため,袋状心皮の形態形成を詳細に観察することは,心皮の進化過程を考える上で重要な意味を持つ.これまでの形態学的研究により,袋状の心皮形成は,心皮原基の花序軸に面した部分が貫入することで形成されると考えられてが,この貫入する部分に,向軸・背軸両側の組織が含まれるのか,向軸側組織のみなのかは明らかになっていなかった.そこで,原始的被子植物アンボレラからYABBY2相同遺伝子を単離し(AmbF1),その発現をin situハイブリダイゼーション法で観察することでこの問題の解決を試みた.

その結果,AmbF1の発現は心皮,雄蕊,花被片,葉原基の向軸側で観察された.シロイヌナズナ・タバコにおいてYABBY遺伝子は側生器官の背軸側で発現していることが知られているが,アンボレラでの結果は,向軸-背軸に沿った発現をするものの,これと正反対であった.また心皮原基におけるAmbF1の発現に基づけば背軸・向軸組織の区別が可能で,貫入する部分が向軸側の組織のみであり,背軸側の組織を全く含まない事が示唆された.この結果は袋状心皮が,二つ折れ状態を経ないで生じた可能性を示唆している.
充填型スクッテルダイト構造を持つ物質のミュオンスピン回転・緩和法による研究

当該研究では充填型スクッテルダイト構造を持つ物質についてのミュオンスピン回転・緩和法(μSR法)を用いた研究を行った。まずSmRu_4P_<12>では磁気八極子秩序の存在が提案されており、その磁気的状態がどのようなものであるかは大きな興味が持たれている。我々は以前見られていたように零磁場下、転移点以下で内部磁場が発生することを観測し、磁気双極子または磁気八極子の秩序状態にあることを確認した。さらに詳細な解析からこの内部磁場がT^α型の八極子モーメントによる可能性を提唱した。加えてこの八極子のダイナミクスに起因すると考えられる内部磁場の揺らぎを観測し、この揺らぎが極低温において抑制されることを見出した。次にPrFe_4P_<12>のナイトシフトの磁場印加角度依存性および温度依存性を詳細に測定し、NMR実験等から提唱されている電気十六極子の存在と矛盾のない結論を得たが、さらに詳細な検討が必要である。またPrOs_4Sb_<12>ではナイトシフトの磁場印加角度依存性の詳細な測定を行い、2回対称の変化をすることを観測した。これはミュオンの状態を知る大きな手がかりとなり、今後この結果に基づく定量的な解釈をしていくことが可能となる。さらに関連物質として、PrPb_3の研究を行い、ミュオンの位置に低温で大きな内部磁場が生じることを見出した。この内部磁場の大きさは特定の内部磁場の大きさの整数倍になるという、極めて得意な状態にあることを観測し、ミュオンと141Prの間のスピン結合、あるいはPrの八極子モーメントを考慮することで説明できるものと考えている。当該研究では充填型スクッテルダイト構造を持つ物質についてのミュオンスピン回転・緩和法(μSR法)を用いた研究を行っている。PrOs_4Sb_<12>では置換系(Pr_<1-x>La_y)(Os_<1-y>Ru_y)_4Sb_<12>において特異な超伝導状態と通常型超伝導がどのように入れ替わるかを調べた。その結果LaあるいはRuにより置換した系でもナイトシフトには変化がないことを観測した。それに対して時間反転対称性の破れにより生じる内部磁場に関してはLaへの置換によってはxの増加に伴い緩やかに減少していく一方でRu置換ではわずか10%の置換量で内部磁場が見られなくなることを見出した。またPrOs_4Sb_<12>でもナイトシフトの異方性の測定を行い、磁場を(100)と(111)に印加したときには類似の結果が得られることを見出した。これらの結果をもとにこの物質の特異な超伝導の理解を進めていく。SmRu_4P_<12>では磁気八極子秩序の存在が提案されており、その磁気的状態がどのようなものであるかは大きな興味が持たれている。我々は以前見られていたように零磁場下で転移点以下で内部磁場が発生することを確認し、磁気双極子または磁気八極子の秩序状態を確認した。さらに新たにその内部磁場が低温においてダイナミクスの変化を示すことを見出している。これまでも低温における異常は見られていたが、これが磁性によるものであることを示したのは本研究がはじめてである。またPrFe_4P_<12>のナイトシフト測定を行い、[100]方向に関してはNMR実験等から提唱されている電気十六極子の存在と矛盾のない結論を得た。これは今後詳細な実験を進め、さらに検証を行う予定である。
高齢化における都市と地方の人口動態に関する多世代重複型一般均衡モデル分析

本研究は日本の地方分権の過程で、並行して起きる高齢化に着目し、地方分権の際の諸政策が地方分権に与える影響を評価することを目的として研究を進めた。その際、人口動態に伴う人口や資本の動きを明示的かつ数量的に扱うため、多地域の多世代重複型一般均衡シミュレーションモデルの開発を行った。本モデルは都道府県レベルの人口を都市圏と地方圏の2地域に分け、完全予見の移行過程を考慮している点が特徴的である。また、データは国立社会保障・人口問題研究所『都道府県別将来推計人口(平成14年3月推計)』を用いて、5年ごとの日本の人口動態を考慮した。なお、完全予見であるため居住地域は経済に加わる時点で行われ、労働は居住地で行い、資本は地域間の収益が均一化されるように配分される。政府は地方政府と中央政府を考慮し、社会保障を含めた公的支出資金調達の役割を個別にモデル化している。また、可住面積を用いて、混雑効果や必要となる公的支出も考慮している。完全予見でかつ費用無しで移動できる静学モデルでは、人口移動は効用を均等化させるので、経済主体に地方分権における厚生格差の問題は発生しない。したがって、本モデルでは既に居住地域を決めて動くことのできない世代に厚生格差がある場合や新しい世代にも移動費用が存在する場合の移行過程における財政政策を考察した。その結果、資金調達の重心が地方政府に移ると、都市と地方の厚生格差の拡大と人口の都市流入もたらすが、地方消費税よりも地方労働所得税を中心にした方が比較的軽度であるとの結果を得た。また、中央の再分配政策は新しい世代の厚生にも負担を与えるので、それらの考慮も重要であることが分かった。現在も、複数の政策シナリオ結果の吟味を行っているほか、具体的な制度を含めるようモデルを拡張する方向で、政策の効率化等のインセンティブを含めた分析への可能性を模索している。今後、分析結果をまとめ、論文として発表する予定である。本研究は日本の地方分権の過程で、並行して起きる高齢化について、地方分権後の歳入、歳出、人口移動が、地方分権の結果に、どのような影響を与えるのかについて、シミュレーション分析することを目的としている。そのような目的の下で、本年度は基本モデルの作成に向けた理論的検討とモデル作成作業を行った。概要としては、地方分権の方向性に関する整理と、地方財政、人口移動に関する基本的な検討を通じて、分析に必要となる理論モデルについて吟味した。その結果、地域間の人口移動が自由に行われる場合を前提とした分析と移動コストが発生する場合とで、居住地に関する水平的公平性を考慮する方向で分析を進めることを重要な評価基準としてモデル構築に着手することになった。ただし、垂直的公平性についての検討についても、考慮する方向で分析を進めることになるので、それらについては地域間の財政力を含めた平等化の観点から引き続き検討を進める。その一方で、シミュレーションモデルに必要なプログラミングの基本モデルの作成作業を行った。世代重複型シミュレーションモデルにおいて、あまり行われていない地域間の人口移動の要素を導入したモデルを構築する必要があった。それらについて、今後の詳細な分析を可能にすることが期待される基本モデルの作成を行った。今後の分析に必要な基本モデルを単純な基本モデルの精緻化とその拡張が行われる。その際には現実的なデータを加えた移行過程を考慮する方向で引き続き分析を行うことを予定している。
多重αクラスター配位を基底とした不安定核およびハイパー核の構造と反応

本研究の目的は、α粒子(^4Heの原子核)を単位とした原子核のクラスター模型を考え、核子数が100に至る所まで系統的にその構造を調べるものである。平成15年-16年度の2年間での研究課題であり、今年は最終年度であるため、ここでは、この2年間の成果と今後の課題について下記で述べる。1.7αクラスター模型における^<28>Siの構造計算αクラスター模型での系統的な核構造計算を行うために最初に取り上げたのは、Si原子核である。^<28>Siの比較的低励起エネルギー領域(7MeV-10MeV)には,3^-,0^-,5^-という負のパリティを持った状態がバンド構造を持って存在している。これらの集団的状態は,当然ながらsd殻模型では表現できない。我々は,^<28>Siを7αクラスターの状態として考え,最近接対が多くなるような幾何学的配位を混合し,GCM計算を行った。その結果,まだ詳細な詰めはまだ残っているものの,^<28>Siの集団的構造がαクラスターの高分子状態として理解しうることを指摘した。同時に,D_<6h>の対称性のある2次元クラスター状態である「Rokka」状態を予言した。ここまでは、本研究成果として、平成15年のInternational Conferenceで発表した。Rokka状態から3次元状態への遷移は,その特異性から非常に小さいと考えられ,安定化することが予想される。この点については、現在、研究を進めている段階である。2.α+Λ系(Λ^^5He)のパイオン放出弱崩壊によるαの壊れ度合いの検出可能性α系にハイペロンを付加したときの核構造についても研究を進めている。その中でも最も単純なαΛの系であるΛ^^5Heハイパー核で,どの程度α粒子がαを保ったまま存在するかを議論した。最近の計算により,5体系のハイパー核の中でαは固くはなく,α粒子単独に比して,3MeV程度その束縛エネルギーを失っているという結果がある。このα粒子の壊れの程度を最近測定されたΛ^^5Heハイパー核のパイオン放出弱崩壊幅で観測することを考え、研究を行った。今年度は主に以下の研究を行い、国際会議、学会等で中間的な報告を行った。1.7αクラスター模型における^<28>Siの構造計算^<28>Siの比較的低励起エネルギー領域(7MeV-1OMeV)には、3^-,0^-,5^-という負のパリティを持った状態がバンド構造を持って存在している。これらの集団的状態は、当然ながらsd殻模型では表現できない。我々は、^<28>Siを7αクラスターの状態として考え、最近接対が多くなるような幾何学的配位を混合し、GCM計算を行った。その結果、まだ詳細な詰めはまだ残っているものの、^<28>Siの集団的構造がαクラスターの高分子状態として理解しうることを指摘した。同時に、D_<6h>の対称性のある2次元クラスター状態である「Rokka」状態を予言した。この状態から3次元状態への遷移は、その特異性から非常に小さいと考えられ、安定化することが予想される。今後、この状態が、どの程度安定に存在しうるかを議論する予定である。また、このモデルは、^<28>Siの状態を基底状態から高スピン状態まで統一的に扱えるメリットを持っている。相互作用等の詰めを行った上で、統一的な計算を行っていく予定である。2.α+Λ系(^5_ΛHe)のパイオン放出弱崩壊によるαの壊れ度合いの検出可能性α+Λの系である^5_ΛHeハイパー核で、どの程度α粒子がαを保ったまま存在するかを議論した。最近の5体計算により、5体系のハイパー核の中でαは固くはなく、α粒子単独に比して、3MeV程度その束縛エネルギーを失っているという結果が出ている。このα粒子の壊れの程度を最近測定された^5_ΛHeハイパー核のパイオン放出弱崩壊幅で見てみようという試みである。結果は、現在の測定誤差の範囲内ではα粒子の壊れを直接観測することはできない。しかし、4体系のΛハイパー核では、その崩壊様式を組み合わせることにより、ハイパー核の中の「芯核」の壊れの程度が観測可能な可能性もあり、これについて、今後研究を続ける予定である。

その結果,まだ詳細な詰めはまだ残っているものの,^<28>Siの集団的構造がαクラスターの高分子状態として理解しうることを指摘した。同時に,D_<6h>の対称性のある2次元クラスター状態である「Rokka」状態を予言した。ここまでは、本研究成果として、平成15年のInternational Conferenceで発表した。Rokka状態から3次元状態への遷移は,その特異性から非常に小さいと考えられ,安定化することが予想される。この点については、現在、研究を進めている段階である。2.α+Λ系(Λ^^5He)のパイオン放出弱崩壊によるαの壊れ度合いの検出可能性α系にハイペロンを付加したときの核構造についても研究を進めている。その中でも最も単純なαΛの系であるΛ^^5Heハイパー核で,どの程度α粒子がαを保ったまま存在するかを議論した。最近の計算により,5体系のハイパー核の中でαは固くはなく,α粒子単独に比して,3MeV程度その束縛エネルギーを失っているという結果がある。このα粒子の壊れの程度を最近測定されたΛ^^5Heハイパー核のパイオン放出弱崩壊幅で観測することを考え、研究を行った。
真空予冷を想定した水ストレスに対するキク切り花の生理的応答

本研究における主な目的は、真空予冷を想定した水ストレスに対するキク切り花の生理的応答を明らかにすることである。前年度の結果では、顕著な水ストレス状態に置かれたキク切り花の呼吸が増大する傾向が見られた。本年度は、実験室レベルの簡易真空予冷装置を作成し真空予冷前後の生理的応答を観察した。その結果、次の結果が得られた。1)真空コントローラおよびロータリポンプを用いて簡易真空予冷装置を作成した。真空チャンバ内の最低圧力は約4torrから約5torrとなり、そのときの試料のキク切り花(品種:ミヤビ)の品温は30分の予冷時間で約9°Cに低下した。得られた性能は、実験室レベルでの装置として十分なものであった。2)真空予冷によって生じる水ポテンシャルの変化を熱電対式サイクロメータを用いて測定した。真空予冷後、真空予冷区の水ポテンシャルは対照区の2倍程度に減少し、顕著な水ストレス状態にあることが明らかになった。3)真空予冷前後の水分分布を冷中性子ラジオグラフィによって可視化した。冷中性子ラジオグラフィは京都大学実験炉の冷中性子設備(CNS)を用いて行った。真空予冷後のラジオグラフィの画像にはスポット状に水分が減少した部位が認められた。すなわち、葉全体からの水分蒸発だけではなく、一部の組織破壊による水分減少が示唆された。4)葉緑素計(SPAD)によって真空予冷後の葉緑素量の経時変化を測定した。その結果、真空予冷区の葉緑素量は対照区より早く減少する傾向が見られ、真空予冷によって品質劣化が起こる可能性が示唆された。この品質劣化については今後の研究が必要であると考えられる。本年度の研究における主な目的は、真空予冷を想定した水ストレスに対するキク切り花の生理的応答を観察可能である計測システムを開発し、予備実験と本実験を行うことである。水ストレスに対するキク切り花の生理的応答を観察するため、水ストレスを与える低湿度環境チャンバ、およびその対照とした高湿度環境チャンバを備えたシステムを構築した。低湿度環境チャンバはシリカゲルを用いた除湿を用いて、また、高湿度環境チャンバは水中曝気による加湿装置を用いて内部湿度を調整した。設定温度20°Cでシステムの運転を行った時の両チャンバの相対湿度は、それぞれ、約40%および約95%となった。キク切り花の生理的応答は呼吸速度から、また試料に与えられた水ストレスの程度は蒸散速度から求めた。呼吸速度は赤外線ガス分析計で計測したCO_2放出量から、蒸散速度は電子上皿天秤を用いて求めた試料質量の変化から算出した。計測値の取得および計測機器類等の制御はパーソナルコンピュータを用いて行った。沖縄県産キク(品種:ミヤビ)を用い実験を行った結果、低湿度環境におかれた試料(以下水ストレス区)の蒸散速度は、高湿度チャンバにおかれた試料(以下対照区)と比較して常に数倍高く、48時間後の減量は約20倍であった。すなわち、水ストレス区は対照区と比較して顕著な水ストレス状態にあった。水ストレス区と対照区の呼吸速度の差は、実験経過とともに増大した。すなわち、水ストレス区では蒸散が進み水ストレスが起こるにつれて呼吸速度が高くなった。この結果は、水ストレスよる傷害で生理的応答が変化したことを示すと考えられた。以上、開発した計測システムを用いて水ストレスに対するキクの生理的応答を観察することが可能であった。
自己免疫性関節炎を自然発症するマウスモデルの確立とその解析

我々の維持している正常BALB/cマウスのコロニー中に関節腫張のみられるマウスを発見し、関節炎を自然発症するマウス系統を確立した。現在までに10世代を維持した結果、その遺伝形式は常染色体劣性であり、通常の飼育環境では、その遺伝的浸透率は100%であった。このマウス系統をSPF化したところ、発症頻度が低下し、関節炎発症に何らかの環境因子の関与が示唆された。この関節炎は、ひとの臥と酷似して、前後肢大小関節が対称的に関節腫張を起こし、病理学的にもパンヌスの出現から関節軟骨、骨の破壊に慢性的に進行する炎症性関節破壊であり、最終的に関節硬直に至る。血中に、高力価のリュウマチ因子、関節に特異的であるII型コラーゲンに対する自己抗体、また高ガンマグロブリン血症が高頻度に出現する点でも、ひとの臥と酷似している。この関節炎は、関節炎発症マウスの牌臓T細胞の移入によって正常BALB/cヌードマウスに養子移入できた。すなわち、この関節炎は自己反応性T細胞によって媒介される自己免疫病である。さらにC57BL/6と交配し、マイクロサテライトマッピングによって原因遺伝子の染色体上の位置を検索したところ単一部位にマッピングできた。現在・野生マウスMus musculus castancusと交配し、N2世代についてより詳細なマッピングを行ない現在原因遺伝子の位置クローニングを目指している。平行して行なっている免疫学的解析においては、関節炎発症マウスの骨髄細胞から成熟T細胞を除去後scidマウスに移入したところ、全例関節炎を発症した。即ちこの関節炎モデルでは、自己反応性T細胞を活性化する原因が関節抗原側ではなく、自己反応性T細胞の側(クローン排除等の制御機構)の異常にある可能性が示唆された。今後、疾患原因遺伝子の同定・解析により関節炎発症の分子的基礎を解明する計画である。我々の維持している正常BALB/cマウスのコロニー中に関節腫張のみられるマウスを発見した。これが遺伝子突然変異によると仮定し、関節炎を自然発症するマウス系統の確立をめざした。現在までに7世代を維持した結果、その遺伝形式は常染色体劣性であり、遺伝的浸透率は100%であった。このマウス系統をSPF化し、現在SPF後の発症頻度を検討している。ひとのRAと酷似して、前後肢大小関節が対称的に関節腫張を起こし、病理学的にもパンヌスの出現から関節軟骨、骨の破壊に慢性的に進行する炎症性関節破壊であり、最終的に関節硬直に至る。血中に、高力価のリュウマチ因子、関節に特異的であるII型コラーゲンに対する自己抗体、また高ガンマグロブリン血症が高頻度に出現する点でも、ひとのRAと酷似している。この関節炎は、関節炎発症マウスの脾臓T細胞の移入によって正常BALB/cヌードマウスに養子移入できた。すなわち、この関節炎は自己反応性T細胞によって媒介される真正の(authenticな)自己免疫病である。現在、野生マウスMusmusculus castaneusと交配し、N2世代についてより詳細なマッピングを行なっている。
前処置環境から受ける骨髄移植生着シグナル解明による生着促進法の開発

造血幹細胞の特徴は自己複製能と多分化能を有することであるが、その維持・調節のためには造血幹細胞を取り巻く周囲環境が重要な働きをすることが示されてきた。抗癌剤や放射線などによるストレスを加えると、造血幹細胞の細胞周期が活性化することが知られているが、そのメカニズムは不明な部分が多い。そこで本研究では、ストレスを受けた造血幹細胞が、骨髄環境からどのようなシグナルを受けて分裂・増殖するようになるのかを明らかにすることを目的とした。まず野生型マウス骨髄から造血幹細胞分画を分取し、定常状態、及び抗癌剤5-FUや放射線照射によるストレス負荷マウスにそれぞれ移植し、骨髄にホーミングした細胞についてRNA-seq法を用いて網羅的遺伝子発現解析を行った。結果として、ストレス負荷マウス骨髄内にホーミングした造血幹細胞において、コントロールと比較して、細胞周期に関連する遺伝子群が有意に発現上昇していることが明らかとなった。更に、変動遺伝子について上流解析を行うことにより、ストレス後環境から造血幹細胞側に複数の増殖因子シグナルが供給されていることが明らかとなった。更に我々は、これらのシグナルが骨髄内のどのような場所で供給されているのかを明らかにするために、前記移植の系において、骨髄内の生体イメージングによる詳細な解析を進めている。本研究のこれまでの結果から、抗癌剤及び放射線によるストレス負荷によって、骨髄環境が変化し、造血幹細胞に活性化シグナルを供給することが示唆された。本研究における最大の目的である、ストレス後環境から造血幹細胞に供給される増殖シグナルを見出している。また、生体イメージング技術を駆使することによって、骨髄内造血幹細胞の動態解析にも成功しているため。今後、骨髄内のどの細胞が増殖因子を産生するのかを明らかにしていく。更に得られた結果から、造血幹細胞の体外増幅法開発や、難治性白血病における白血病幹細胞をターゲットとした治療法開発への足掛かりとする。
発光ファージ法による重要植物病原細菌の迅速同定システムの開発

物病原細菌ナス科植物青枯れ病菌Ralstonia solanacearumに感染するファージを単離し、ファージゲノムのシークエンス解析を行い、この内、リゾチーム生産構造遺伝子相同領域領域のクローンを利用し、この領域に海洋細菌Vibriofisheriiのルシフェラーゼ遺伝子luxA, B遺伝子を融合させたマーカーエクスチェンジ用プラスミドを構築した。なお、この時点で既に、基質テトラデカナールを添加後発光する事を確認できたが、さらに、これをファージに相同組み換えで組換えファージを構築した。また、ファージ粒子をビオチンで標識し、これを青枯れ病菌に吸着させた後に、酵素標識ストレプトアビジンと作用させる事によって、10の2乗の青枯れ病菌を検出する事が出来た。カンキツかいよう病菌Xanthomonas axonopodis pv.citriでは、これに感染するCP1ファージについて、コートタンパク質遺伝子相同領域に上記luxA, Bを挿入したレポーターファージを用いる事により、また、直接臭化エチジウムで標識したファージ粒子を高いmoiで吸着させる事により、カンキツかいよう病菌を10の2乗まで検出できた。海洋細菌Vibriofisheriiの発光遺伝子群のうちluxAB(ルシフェラーゼをコード)構造遺伝子にプロモーターを含むカナマイシン耐性遺伝子を連結させたDNA断片に両端にTn3の逆向き繰り返し配列となるIRLとIRRを連結した遺伝子融合用カセットを持たせたプラズミドpIRL-YAB-15Kを作成した。このプラスミドは、Tn3トランスポゼースを持たせたpSSheの存在下でよく転移をおこす能力があることを確認した。このプラスミドを用いて溶原化植物病原細菌へのin vivo発光遺伝子融合系を構築した。本システムを用いて、モデル系大腸菌において、発光ファージを得ることが出来た。また、Erwinia chrysanthemi及びRalstonia solanacearumのファージを病斑部及び汚染土壌より分離し、これらの宿主範囲を確認した後、これらのファージDNAを分離し、その塩基配列を決定して、これらの遺伝子産物の機能を相同性検索により機能を推定した後、これらのクローンに上記luxABカセットをin vitroで挿入させて、これらの植物病原細菌に形質転換体に野生型ファージを感染させて、マーカーエクスチェンジによる発光ファージ分離システムも構築した。本法は、大腸菌モデル系で高い効率で発光ファージを得ることが出来ることを確認した。ナス科植物青枯れ病菌Ralstonia solanacearumに感染するファージを単離し、ファージゲノムのシークエンス解析を行い、この内、リゾチーム生産構造遺伝子相同領域領域のクローンを得た。この領域に海洋細菌Vibriofisheriiのルシフェラーゼ遺伝子luxA,B遺伝子を融合させたマーカーエクスチェンジ用プラスミドを構築した。この時点で既に、基質テトラデカナールを添加後発光する事を確認でき、これをファージに相同組み換えで組換えファージを構築する事が出来た。また、ファージ粒子をビオチンで標識し、これを青枯れ病菌に吸着させた後に酵素標識ストレプトアビジンによって、10の2乗の青枯れ病菌を検出する事が出来た。また、カンキツかいよう病菌Xanthomonas axonopodis pv. citriに感染するCP1ファージについては、コートタンパク質遺伝子相同領域に上記luxA,Bを挿入する事により、また、直接臭化エチジウムで標識したファージ粒子を吸着させる事により、カンキツかいよう病菌を10の2乗まで検出できるようになった。
菌糸イメージングによる、きのこ種菌劣化機構の解析

国内のきのこ栽培は、地域振興から健康増進、医薬原料まで多様な役割を持ち、特に育種された優良なきのこ品種は関連産業を大きく発展させている。しかし、種菌の継代培養を繰り返すことによって、収量をはじめとした優良な形質が減弱する種菌劣化が問題となっており、有効な対策方法が望まれている。本研究では、種菌劣化のメカニズムを菌糸のイメージングを用いて細胞生物学の面から解析することを目的とし、初年度である本年度はマイタケ、タモギタケ、ユキノシタ(エノキタケ野生種)の高収量・低収量を示す各菌株について、ミトコンドリア・酸化ストレス・菌糸伸長の動態を解析した。菌糸内のミトコンドリアを、膜電位に依存して集積するMitoTrackerCMXRosを用いて可視化・解析した結果、低収量を示す菌株では、きのこ種によって形状や程度に差があるもののミトコンドリアが集積している傾向が見られた。また、NBTアッセイにより活性酸素種の菌糸内蓄積を解析した結果、タモギタケ・ユキノシタでは低収量を示す株において、マイタケでは高収量を示す株においてより活性酸素種の蓄積が見られた。さらに、各きのこ種で菌糸の伸長速度を比較した結果、低栄養の培地で生育させた際に高収量と低収量の菌株間で伸長速度に差が生じることが明らかとなった。これらの結果から、菌糸の段階でのミトコンドリア活性や活性酸素種の蓄積、および低栄養環境下での成長能が菌株の収量性に関連性があり、その動態はきのこ種によって異なる可能性が示唆された。一方、蛍光免疫染色による観察では、同じきのこ種でも高収量と低収量の菌糸間で細胞壁の分解・透過化処理の進行度が明らかに異なるものが見られた。今後は細胞壁等の組成に差異がある可能性も含めて解析を進め、細胞骨格の動態を検証していく予定である。観察・解析に使用する蛍光顕微鏡が、当初8月納品予定のところ製造元の都合により延期となり、11月中旬に納入されたため、解析スケジュールに遅れが生じている。しかしながら、解析対象の3きのこ種各々に対して、高収量株・低収量株間に細胞生物学的特徴の差異を見出していることから、研究全体の進度として、遅れは少ない。きのこ菌糸の蛍光免疫染色の方法を確立し、細胞骨格の動態解析を行う。また、平成30年度の結果をもとに、きのこ菌糸細胞に化合物(ミトコンドリア機能阻害剤・酸化/還元剤・高/低栄養処理など)・物理的(高温/低温培養など)処理を施した林産試験場の保有菌株(マイタケ・ユキノシタ・タモギタケ)の菌糸について、劣化状態の再現と改善の可否、および細胞ダメージの軽減効果を検証し、種菌劣化の誘発因子を探索する。

きのこ菌糸の蛍光免疫染色の解析スケジュールに遅れが生じ、細胞壁分解・透過化処理の最適化後に使用する試薬の選定が後ろ倒しとなったため翌年度に繰り越した。繰越金は令和元年度の当該解析に使用する予定である。