hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
地域在住高齢者の視覚障害予防:追跡研究による死亡及び介護状態との関連

高齢者の視覚障害が将来のADL低下、要介護状態、死亡などの望ましくないアウトカムに与える影響については、とくにcommunity-basedな知見が不足している。65歳以上の地域在住高齢者を対象とする本コホート研究の結果、視覚障害は男女ともに将来のADL依存と関連していた。男女統合解析の結果では、調整済RRとその95%信頼区間は、1. 60(1. 05-2. 44)であった。本研究は,感覚器をターゲットしたcommunity-basedな疫学研究であり,3年間の計画期間によるコホート・デザインによって,1)地域在住高齢者の感覚器障害の罹患率の把握,2)視力障害・視覚機能低下に関与する環境危険因子の同定,3)視力障害・視覚機能低下が死亡及び介護状態に与えるインパクトの定量化,を目標としている.この達成のため,本年度は地域に設定した65歳以上の高齢者から構成されるコホート集団に対して,以下の調査を実施した.本年度は地域を二分した半数の地区住民を対象としている.(1)視覚機能評価:視力検査(近見視力,遠見視力),眼底検査(3)生活機能・社会機能評価:Activity of Daily Living(老研式活動能力指標点数,Katzの基本的ADL),QOL,活動能力(Up&Go test,5m歩行,歩行姿勢解析等)(4)危険因子の評価:糖尿病指標測定(血糖値,HbA1c値等),栄養状態(血清アルブミン測定,栄養調査等),ライフスタイル要因評価(喫煙,飲酒等),循環器疾患リスク要因測定(血圧,血清脂質等),疾病罹患・服薬状況(5)多面的機能簡易評価質問票また本研究のエンドポイント(死亡,転居,介護認定,入院,入所等)となる情報の入手も行った.なお,本研究の成果の一部は国際学会にて報告した.本研究は,感覚器をターゲットしたcommunity-basedな疫学研究であり,3年間の計画期間によるコホート・デザインによって,1)地域在住高齢者の感覚器障害の罹患率の把握,2)視力障害・視覚機能低下に関与する環境危険因子の同定,3)視力障害・視覚機能低下が死亡及び介護状態に与えるインパクトの定量化,を目標としている.本年度は昨年度と同様に、地域に設定した65歳以上の高齢者から構成されるコホート集団に対して,以下の調査を実施した.本年度は地域を二分した半数の地区住民を対象としている.(1)視覚機能評価:視力検査(近見視力,遠見視力),眼底検査(3)生活機能・社会機能評価:Activity of Daily Living(老研式活動能力指標点数,Katzの基本的ADL),QOL,活動能力(Up & Go test,5m歩行,歩行姿勢解析等)(4)危険因子の評価:糖尿病指標測定(血糖値,HbA1c値等),栄養状態(血清アルブミン測定,栄養調査等),ライフスタイル要因評価(喫煙,飲酒等),循環器疾患リスク要因測定(血圧,血清脂質等),疾病罹患・服薬状況(5)多面的機能簡易評価質問票また本研究のエンドポイント(死亡,転居,介護認定,入院,入所等)となる情報の入手も行った.研究結果をコホート参加者、地域に還元すべく、報告会を実施した。本研究では、地域コホートの4年追跡調査を実施し、日本人地域在住高齢者集団における感覚器障害とQOL・ADLの関連性を明らかにすることを目的とした。本解析では、死亡ないしADL依存をアウトカムありと定義した。なお、ADL依存とは、施設入所、介護認定、Katzの基本ADLで一つ以上の依存、のどれか一つでも満たせばADL依存があったと考えた。65歳以上の地域在住高齢者801名(男性337名、女性464名)を対象とする解析の結果、視力障害に関しては、男女ともにアウトカムとの関連が示唆された。男女統合解析の結果では、調整済リスク比とその95%信頼区間は、1.60(1.05-2.44)であった。なお、男女による交互作用の検討では、p=0.904と交互作用を認めなかった。一方、聴力障害に関しては明確な性差がみられ、交互作用の検討では統計学的に有意(p=0.006)な性による交互作用を認めた。すなわち、男性ではアウトカムとの関連(調整済みRR=3.10,95% CI=1.43-6.72)が観察されたが、女性では関連がなかった。上記のように、地域在住高齢者を対象とした本コホート研究の結果、視力障害、聴力障害といった感覚器の障害が、将来の死亡、ADL低下といった望ましくないアウトカムと関連することが示された。これまでわが国で特に不足してきた、感覚器障害に関するCommunity-basedなエビデンスを示すことができたと考えている。
プラスミドDNAの細胞への直接導入法の検討

DNAの細胞への直接導入に関する基礎的知見を得るためのプロトプラストの融合に関する条件は、先ず電極への付着は2MH_2、50V/cm以上の交流電場において付着ができ、交流電圧750V/cmでパールチェーンが出来た。1.25KV/cm以上になると電極からプロトプラストが離れにくくなる現象が生じた。異種間のプロトプラストの接着は、先ず一種類のプロトプラストを融合チャンバー内に入れ2MH_2,125V/cmの交流電場により電極に付着させ、次に別種のプロトプラストをチャンバーに送入し、交流電圧250V/cmを加えることにより可能となった。この状態の所へ直流パルス電圧10KV/cm、パルス幅6μsec、で融合を起すことが出来た。融合率は最大10%であった。融合を阻害するプロトプラストの回転は交流電圧250V/cm以下で停止した。本研究に供した装置は手作りであり、操作性には検討を要する点がある。また融合に必要な交流電圧、パルス電圧を得るためには、融合チャンバーの電極を極端に狭くしなければならず(4050μcm)、チャンバー作成上及び融合操作において困難を生じた。融合チャンバーは完全密閉型であり、非無菌的雰因気下においても無菌状態を保つことが可能であること、また異種のプロトプラストの接着が交流電圧を変えることにより簡単に作り出せること等が非常に優れた点と考えられる。1.食用担子菌(ヒラタケ,タモギタケ)を用いてDNA単離に適した培養方法の検討.担子菌の生活環で試料として検討に値するものは菌子と子実体が考えられる;菌子は一次菌糸は二次菌糸があり,子実体では原基,幼子実体,成熟子実体,また傘,茎,などの部位別の試料が考えられる.今回の実験では二次菌糸,成熟子実体(全体を利用)の試料について検討した.必要試量約700gであり,菌糸の液体培養では500mlのコルベンで約20gの菌体が出来35本の培養を必要とし,多くの労力を要した.子実体は栽培瓶で約10本で必要量から得られたので以後はこの条件で実験を行った.2.各種試料からのミトコンドリアDNAの単離,テンサイ,ヒトヨタケのミトコンドリア単離方法を参考にして実験を行ったが,いずれの手法を用いてもDNAは分解を起していた.現在のところ確実な分離法は確立していない.この分解は担子菌中のDNAアーゼ活性が高いために起こるものと考えられる.今後はこれらの事を考慮して,例ば,プロとプラストにした後でDNA単離処理行うなど,検討して行く考えである.3.電気泳動によるDNA分析,上述の理由により,完全なDNAの泳動パターンは得られていないか,操作の途中で例ば制限酵素処理をしないで泳動した場合には通常の泳動方向と逆の方向に流れることを生じた.これらの現象はザルコシルの量を多くすると正常の方向に流れる.これについても検討の余地がある.4.特定遺伝子の単離とクローニングは出来なかったので,来年度に行う予定である.DNAの細胞への直接導入に関する基礎的知見を得るためのプロトプラストの融合に関する条件は、先ず電極への付着は2MH_2、50V/cm以上の交流電場において付着ができ、交流電圧750V/cmでパールチェーンが出来た。異種間のプロトプラストの接着は、先ず一種類のプロトプラストを融合チャンバー内に入れ2MH_2、125V/cmの交流電場により電極に付着させ、次に別種のプロトプラストをチャンバーに送入し、交流電圧250V/cmを加えることにより可能となった。

融合を阻害するプロトプラストの回転は交流電圧250V/cm以下で停止した。本研究に供した装置は手作りであり、操作性には検討を要する点がある。また融合に必要な交流電圧、パルス電圧を得るためには、融合チャンバーの電極を極端に狭くしなければならず、(4050μcm)、チャンバー作成上及び融合操作において困難を生じた。融合チャンバーは完全密閉型であり、非無菌的雰囲気下においても無菌状態を保つことが可能であること、また異種のプロトプラストの接着が交流電圧を変えることにより簡単に作り出せること等が非常に優れた点と考えられる。
牛複合性呼吸器疾患の画像および分子生物学的病態評価と高張食塩液治療の確立

産業動物医療において、牛複合性呼吸器疾患(BRDC : Bovine Respiratory Disease Complex)は発症率が非常に高く経済的損失が大きいため子牛下痢症と並ぶ2大疾病として注目されている。BRDCの治療プログラムを確立するためには、細菌学的アプローチと平行して病態生理学的解明を行うこと、また呼吸機能の改善を目的とした治療方法を抗生物質療法に併用することが必要である。本研究はBRDC症例に対して、気管支鏡による画像診断、微量元素、エンドトキシン動態を中心に病態生理学的評価および高張食塩液の臨床薬理学的効果を評価した。その結果、(1)デキストラン加高張食塩液(HSD)が脳循環に対し高い効果があることを明らかにし、HSDが救急医療現場において頭蓋内圧降下薬として高く期待できる。(2)エンドトキシン試薬の溶媒として自家血清を用いて溶解後1560分以内にボーラス投与すれば血清中エンドトキシン活性値が臨床症状の発現時期(30分後)をピークとし、さらにチャレンジ後12時間以上高値を維持することを確認した。(3)Mycoplasma性気管支肺炎子牛ではFischer比が健常子牛よりも有意に低値であり、分岐鎖アミノ酸を強化した栄養輸液剤の適応が望ましい。(5)Mycoplasma感染したBRDC重症例では、気道内でエンドトキシンが著増しており、その一部が血漿中へ移行しているため、血中移行したエンドトキシンによって全身徴候が増悪する。(6)血液中エンドトキシン活性値のモニタリングは甚急性乳房炎の予後および治療効果の判定に有用であることを明らかにした。これらの研究成果は、BRDCの治療プログラムを構築する上で極めて有用な情報である。(1)呼吸器疾患子牛の血清アミノ酸動態の検討肺炎子牛では健常子牛と比較してほとんどの血清中必須アミノ酸濃度が低値を示していること、また、肺炎子牛のフィッシャー比((Ilu+Leu+Val)/(Tyr+Phe))が健常子牛の6.58±4.60に対して1.67±0.94と有意に低値を示し、ヒトと同様に呼吸筋の過剰運動による筋肉疲労が示唆された。(2)マイコプラズマ検査咽口頭ぬぐい液による肺炎起因筋の検査と並行してBALF中のマイコプラズマをPCRにより検出したところ、21頭全てのBALF液からMycoplasma bovisが検出された。また、Mycoplasma bovis以外でもMycoplasma bovirhinitsなどの複合感染症例も多く、現在は血清型解析中である。子牛の複合性呼吸器疾患は経済的損失が大きく、適切な治療プログラムの構築が望まれている。本研究では、本学動物病院に来院した呼吸器疾患ウシの血清、鼻汁、咽喉頭ぬぐい液および気管支肺胞洗浄液(BALF)を用いてウシの複合性呼吸器疾患の病態解明を行うとともに、高張食塩液による呼吸改善効果が著効を示す子牛側因子を解析する。平成22年度は、マイコプラズマ性肺炎子牛20頭、マイコプラズマ陰性健常子牛19頭から胸部超音波およびレントゲン画像、血清およびBALFを得た。これらの検体を用いてBALF中微量元素測定を実施した。また野外調査用データおよびサンプルを得た。(1)呼吸器疾患子牛のBALF中微量元素濃度の比較(2)子牛の下痢症において高張食塩液が著効を示す子牛側因子の解析子牛疾病(下痢症および呼吸器疾患)において、高張食塩液による体液補充および呼吸機能改善効果により著効を示す子牛の因子解析(野外調査・レトロスペクティブスタディ)を行うため、長野県農業共済組合より高張食塩液療法を行った49頭の臨床記録簿および血液サンプルを入手した。平成23年度に当該動物の血液および血清学的検査を行うとともに、統計学的に高張食塩液が著効を示す子牛側因子の解析を実施する。

LPS投与による肺水腫モデルおよび血清中エンドトキシン活性値評価方法の確立オハイオ州立大学獣医学部生産動物医療研究室においてLPS投与による安定した血液量減少(20%の循環血液量減少)および肺水腫モデルが確立されている。23年度はオハイオ州立大学において当該モデル作製技術を習得するとともに、同大学において血中ハプトグロブリン結合Matrix Metallo proteinase-9を指標とした炎症マーカの評価および米国サウスキャロライナ州のチャールズリバー社エンドトキシン研究所において血中ゴンドトキシン活性値の測定方法を確立した。牛では緩衝物質(プロテアーゼ)の影響により通常の前処理では実用的な添加回収率が得られなかったことから、前処理方法、測定条件の検討を行った。その結果、80°C、10分の加温処理、Kinetic Turbidi metric(KTA)による測定がもっとも満足のいく方法であることを確認した。さらに、血清のみならず牛生乳中エンドトキシン活性値の測定条件についても同様に確立した。本方法を用いてLPSの投与方法の違いによる肺水腫モデルの血清中エンドトキシン活性値の経時的変化を検討した。その結果、エンドトキシン試薬の溶媒として自家血清を用い溶解後1560分以内にボーラス投与すれば血清中エンドトキシン活性値が臨床症状の発現時期(30分後)をピークとし、さらにチャレンジ後12時間以上高値を維持することが確認され、再現性の高いモデルを割く出することが可能であった。なお、平成24年度にはこの病態モデルを用いてエンドトキシン活性値を指標に高張食塩液の呼吸器に及ぼす薬効薬理試験を実施する予定である。マイコプラズマ陽性の牛呼吸器複合性疾患(BRDC)21症例の肺胞洗浄液(BALF)および血漿中エンドトキシン活性値をマイコプラズマが陰性で呼吸器症状を呈していない20頭の子牛と比較した。その結果、BRDCのBALF中エンドトキシン活性値は97.12±170.61 EU/mLであり、対照群の2.38±2.68 EU/mLよりも有意に高値を示した(p<0.001)。ROC解析によりBALF中エンドトキシン活性値によるBRDCの診断能を評価したところ、BALF中エンドトキシン活性値が6.05 EU/mLよりも高値であればマイコプラズマ陽性BRDCと診断できる(p<0.001, AUC=0.933, Se=81.3%, Sp=84.6%)。また、BRDC子牛の血中エンドトキシン活性値は0.334±0.352 EU/mLであり、対照群の0.067±0.0184 EU/mLよりも有意に高値を示した(p<0.001)。従って、マイコプラズマ陽性BRDCでは、気管支内のエンドトキシン活性値が著増し、これが血中にも反映していた。従って、BRDCは呼吸不全に対する治療だけでなく、エンドトキシン由来の全身性炎症反応に対する治療が必要である。高張食塩液(HSS)療法で治癒(n=57)した甚急性乳房炎症例の初診時における血清中エンドトキシン活性値は健常牛のそれと有意な差は認められなかったが、発症後1週間以内に死廃した予後不良牛(n=12)では健常および治癒群よりも有意に高値を示した。また、初診時に重度のショック症状を呈した20頭の甚急性乳房
低速原子散乱による絶縁体表面原子イメージ画像のリアルタイム測定

低速原子散乱分光装置を用いて絶縁体表面第1原子層から第3原子層に位置する原子構造をイメージ画像で観察するための研究を行いました。イメージ画像のためのデータ収集が、できるだけ短時間で終わるよう試料を設置するマニュピュレータ開発を中心に実施しました。試料は、360度全方位に回転できるようになり、様々な角度から観たデータを収集できるようになりました。イメージ像の画像分解能によりますが、30分程度で収集できるところまで研究が進みました。本研究では、低速原子散乱分光法により絶縁体表面原子のイメージ画像をリアルタイムで測定することを目的としています。試行錯誤の結果、イメージ画像を安定して測定するためには、試料を載せるマニュピュレーターが強固で安定して動くものではなければならないことに気が付きました。原子ビームは、電気的に中性なため、電場、磁場で偏向することはできません。イメージ画像をとるためには、試料を様々な方向に傾けて、試料自体を回転させることを必要とします。また、試料を加熱処理した後に原子イメージ画像を測定することも視野にいれました。そこで、原子イメージ画像が安定してとれるマニュピュレータを作ることを重要視しました。メーカーと話し合い、こちらの要望がかなえられるマニュピュレータができあがりました。マニュピュレータは、超高真空中で使用できるようベイキング温度130°Cに耐えられ、かつ、ステッピングモーターで安定して働く仕様とし、ステッピングモータの制御プログラムも応じたものに書き換えられました。得られた絶縁体の原子イメージ画像を含めて関係学会で発表を行いました。絶縁体の表面原子イメージ画像を得るためには、試料の設置が、実験中において常に安定していることを必要とします。このため、試料を載せるマニュピュレーターの重要性を認識し、この部分を中心に研究を行いました。当初、この点の認識は、あまりありませんでしたが、試料設置が安定することで、得られるイメージ画像にぶれがなく、安定した画像が得られることに気がつきました。一方で、申請段階で利用を予定していましたポジンションセンシィティブ型MCPが、国内での販売停止がなされていることを採択後に知りました。そこで、同MCPの利用を取りやめると同時に安定したイメージ画像を撮るために試料を載せるマニュピュレータについて本研究を勧めました。平成28年度は、低速原子散乱装置の試料ホルダー部分の改良を行った。従来、試料交換をするためには、試料ホルダーを含むマニュピュレーター全体を超高真空チェンバーから外す作業をしなければならなかった。つまりマニュピュレータと超高真空チェンバーをつなぐボルトとナットをすべて外して、いったん大気にしなければならなかった。その後に試料を交換し、再度、マニュピュレータを超高真空チェンバーとをボルト、ナットによりつなぎ、真空ポンプで真空を引き、約150°Cの温度で超高真空チェンバーを約2日間ベイキングし、ベイキング終了後に冷却作業及びガス出し作業をするという一連の工程であった。この工程を遂行するのに要する期間は、3ー4日間を要した。この期間を短縮して試料交換ができるようにするために物品等を購入した。購入物品は、LLチェンバー(Load Lockチェンバー)とその付属品であった。超高真空チェンバーとは、別にLLチェンバーを設けた。LLチェンバーは、直径約150mm、長さ340mmの円筒形を基本形状としている。この基本形状にLLチェンバー内部を見るための窓等がつけられている。試料は、ロードロックで交換する仕組みとなっている。最初に超高真空チェンバーから試料をLLチェンバーへ移動させる。移動にロードロックを利用する。その後、LLチェンバー内部から試料を取り出し、新しい試料をLLチェンバーに取り付け、ロードロックにより試料を超高真空チェンバーへ移動させる。ただし、試料交換の際において微妙な位置調整をするためのxy-ステージを購入することはできなかったため、試料交換に30分ほどを要するが、従前と比較すると相当な時間短縮ができることとなった。これにより絶縁体試料表面の原子イメージマッピングがしやすくなった。今後は、短時間で絶縁体の原子イメージ画像をとることへの工夫、及び、実際に得られた実験データから、表面第1第3原子層における表面源氏構造解析について研究を行います。平成27年度に絶縁体単結晶試料の購入をしました。試料から得られる絶縁体の原子イメージ画像をとり、さらには、絶縁体の表面原子構造解析を行っていきます。原子イメージ画像を効率よく撮るためには、試料の設置の段階も大切になってきます。この点を含めて、より短時間で絶縁体の原子イメージ画像をとること、及び、表面原子の構造解析について研究を進めます。表面科学申請段階で購入予定をしていたポジションセンシティブ型MCPが国内での販売収支となったことを採択後に知りました。そこで、同MCPを用いた研究に代わり、他の方法での原子イメージ画像をリアルタイムで撮ることを考えました。その際に安定した画像を撮るためには、マニュピュレータが安定して働くことの重要性をあらためて認識しました。そこで、主としてマニュピュレータの開発と購入に予算を使用しました。

次年度への持ち越し金額は、1円です。これは、物品の本体価格および消費税の支払いにおいて生じた金額です。研究を見直して次年度に使用額を持ち越さなければならなかったという特段の理由はありませんでした。上記、「理由」で述べた通り、次年度に使用額を持ち越さなければならなかった意図はありませんでした。全額1円については、平成28年度の研究計画において活用いたします。
行動制御の発達に関する社会的要因の検討

行動制御とは、ある目標に到達するために不適切な行動を抑制し、適切な行動を選択・実行する過程である。この能力は就学前に著しく発達することが知られている。近年の研究は、この能力が他者の心的状態を推測する能力(心の理論)と発達的に連関していることを示しているが、両者の関係がいかなる様相を呈するかについては明らかにしていない。研究初年度の平成18年度では、他者の行動や心的状態が子どもの行動制御に極めて強い影響を与えることを実験的に証明し、心の理論が行動制御の能力の発達に寄与している可能性を示した。研究2年目の平成19年度においては、さらなる証拠を集めることにより、この可能性について検討した。具体的には、ヒト以外の様々な行為者の行動が子どもの行動制御に影響を与えるか否かを検討した。使用した行為者は、ロボットやアンドロイド、貴学図形など多岐にわたった。このような検討を行ったところ、ロボットは子どもの行動制御にほとんど影響を与えなかった。アンドロイドや幾何学図形は子どもの行動制御に影響を与えたが、ヒトと比べるとその影響は著しく小さかった。これらの結果は、他者の行動が子どもの行動制御に影響を与えるとする初年度の成果を追認するとともに、子どもに影響を与えるのは、ヒトに限るという可能性も示した。これは、心の理論が行動制御の発達に寄与するという主張にもつながるのかもしれない。本研究では、他者の行動や心的状態が子どもの行動制御にいかなる影響を与えるかを実験的に検討し、その証拠を集めることによって、行動制御の能力と心の理論の関係を解明することを目的とした。具体的には、京都市内および福岡市内の保育園にて、他者の行動が子どもの行動制御にどのような影響を与えるか、また、他者の心的状態によってその影響は異なるのかを、2つのルールを含むカード分類課題を用いて実験的に検討した。最初の実験では、他者の行動が、年少の子どもの行動制御に一定の影響を与えることを確認した。次の実験では、他者の心的状態を操作した際に、他者が子どもに異なった影響を与えるかどうかを調べた。その結果、他者の行動が意図的である場合や、他者が自分の行動に確信を持っているときには、子どもの行動制御は影響を受けやすいのに対し、他者の行動が偶発的であったり、他者が自分の行動に確信を持っていない場合は、子どもはあまり影響を受けなかった。これらの結果は、他者の行動の背後にある心的状態を適切に推測することが、子どもの行動制御に影響を与えていることを示唆しており、心の理論が行動制御の発達に影響を与えるという仮説を支持するかもしれない。
心拍変動のスポーツ活動のための有効利用

本研究の目的は、心拍変動(HRV)の解析によって得られる指標(HRV解析指標)のスポーツ活動への有効利用の可能性を探ろうとするものである。本研究は、(1)ボート競技日本代表選手の海外合宿期間中の心拍変動の推移、(2)自転車競技選手の漸増的運動負荷テストにおける心拍変動応答、(3)女子陸上競技長距離選手のフィールド漸増的運動負荷テストにおける心拍変動応答から構成されている。HRV解析指標を用いたコンディションの把握の可能性に関しては、研究(1)において、起床時の安静HRV解析指標(SD1, HF)の推移より、鍛練期から調整期に移行することにより心拍変動が増大し副交感神経活動が高まることが示され、トレーニングプロセスにおけるHRV解析指標の推移にもとづくコンディションの把握の可能性が示唆された。漸増的運動負荷テストにおけるHRV解析指標の応答に関しては、研究(2)において、SDlミニマムの現象として捉えられるHRV閾値が多くのケースで認められる可能性が示唆されたが、HRV閾値と乳酸閾値との間に明確な関係性は認められなかった。また、研究(3)において、漸増的運動負荷テストにおける周波数解析の手法によるHRV解析指標の応答に関して、個々の選手に固有の応答パターンがある可能性や、トレーニング状態がHRV解析指標(LF)の応答のありように反映する可能性が示唆された。漸増的運動負荷テストにおけるHRV解析指標の応答をアスリートのトレーニング状態の把握に利用ためには更なる研究が必要と考えられる。平成18年度は、A:心拍変動(HRV)を用いたパフォーマンス能力評価およびトレーニング強度設定の可能性、B:HRVによるアスリートの心身のコンディションの把握の可能性について研究を進めた。Aに関しては、HRV閾値のコンセプト(Neumannら、2001)に着目して、HRV閾値現象がとらえられるかどうか、HRV閾値が捉えられるとすれば、HRV閾値に対応する運動強度・血中乳酸濃度・心拍数はどのような値を示すか、またHRV閾値と乳酸閾値の関係性はどのようなものかという点を中心に検討を行った。この研究では、SD1ミニマムの現象として捉えられるHRV閾値が多くのケースで認められる可能性が示唆されたが、HRV閾値現象は乳酸閾値よりも高い強度で捉えられる傾向が認められるものの乳酸閾値との間に明確な関係性を確認するにはいたらなかった。アスリートのパフォーマンス能力の評価やトレーニング強度設定に関してHRV測定を用いることが出来るかどうかについては平成19年度の研究において被験者を増やし検討をさらに進める必要がある。Bに関しては、パイロット研究として、ボート競技の日本代表選手の世界選手権前の海外合宿期間中および大会期間中の約2ヶ月間の起床時の安静HRVを継続的に測定・解析し、その推移を検討した。この研究では、SD1およびHFの推移から、ハードなトレーニングの持続する鍛練期から調整期(いわゆるテーパリングの期間)に移行することにより心拍変動が増大し副交感神経活動が高まることが示唆された。これらの結果も踏まえ、平成19年度の研究において多くの事例について検討を重ねる計画である。平成19年度は、漸増的運動負荷テストにおける心拍変動応答に重点を置いて研究を進めた。この課題に関しては、前年度より、HRV閾値のコンセプト(Neumannら、2001)に着目して、HRV閾値現象がとらえられるかどうか、HRV閾値が捉えられるとすれば、HRV閾値に対応する運動強度・血中乳酸濃度・心拍数はどのような値を示すか、またHRV閾値と乳酸閾値の関係性はどのようなものかという点を検討課題としてきた。平成19年度は、前年度の自転車競技選手を対象にした実験結果を踏まえ、陸上競技の大学生女子長距離選手を対象にし、フィールド(陸上競技用400mトラックを利用)で実施される漸増的運動負荷テストにおける心拍変動解析指標の応答にいて検討を行った。

前年度の自転車競技選手を対象にした研究では、SD1ミニマムの現象として捉えられるHRV閾値に焦点を当てたが平成19年度の女子長距離選手を対象とした研究では、SD1とそれ以外の心拍変動解析指標であるLF、HF、LF/HFについても漸増的運動負荷テストにおける応答を調べた。前年度の研究では、SD1ミニマムの現象として捉えられるHRV閾値が多くのケースで認められる可能性が示唆されたが、HRV閾値と乳酸閾値との間に明確な関係性を確認するにはいたらなかった。平成19年度のHRV閾値に関する研究においても、得られた結果はほぼ同様であった。これらの平成18・19年度の結果から、一部の研究者が示唆している「漸増的運動負荷テストにおけるHRV閾値を含むSD1の応答を利用することで、漸増的運動負荷テストにおける乳酸閾値を含む血中乳酸濃度の応答の代替ができる可能性がある」という考えにもとづき心拍変動をトレーニング現場で活用するのは困難であると判断された。しかし、女子長距離選手の漸増的運動負荷テストにおけるLF、HF、LF/HFの応答に関して、個々の選手に固有の応答パターンがある可能性や、トレーニング状態がそれらの指標の応答のありように反映する可能性も示唆された。これらの結果を踏まえるならば、アスリートの運動負荷応答特性やトレーニング状態の把握を目的にする際には、漸増的運動負荷テストにおいて血中乳酸濃度測定と心拍数・心拍変動測定を併用するのが有効と考えられる。
高品質電子ビーム非破壊診断装置としての回折放射光利用に関する実験的研究

電子ビームのエネルギーが50GeV以上になった場合、Far-field(wave zone)approximationのため測定光学系が巨大になる問題がある。この問題を解決するためにDisphase Targetと呼ぶ新しい標的方式を導入して、その有効性を計算と実験により確認している。2005年度は実験と理論的な考察により研究を進めた。本研究開発では電子ビームが標的スリットを通過するだけで、測定干渉パターンから電子ビームサイズおよび電子ビーム軌道変動を1ミクロン以下の高精度で得ることが目的である。高感度測定に必要なCCD検出器等を購入したので、検出器の感度を上げて、一回の電子ビーム通過で電子ビームサイズが得られるように装置を改良した。2005年度中に瞬時非破壊測定を成功させる予定であったが、Background等の除去とデータ解析の改良が必要であることが判明した。多くの実験データを取り終えたので、解析後実験結果に関する論文投稿を行う予定である。Disphase Target実験に関する研究では、理論上の取り扱いに誤りがあり現在新しいモデルを提案するために考察を開始した。実験データは計算と良い一致を示しているが、そこから電子ビームサイズを導く方法論に問題がある。2004年度は金属薄膜にスリットを高精度で製作して、スリット中心を電子ビームが通過する実験を行い、上下のスリット端部からの回折放射光の干渉パターンを高精度で測定できることを世界で始めて示した(Physical ReviewLetters, Volume 93,244802-1,10 December 2004)。金属薄膜はシリコン板(厚さ200ミクロン)に金を1ミクロン厚で蒸着して、製作した。スリットは化学的な方法により260ミクロン幅になるように製作を企業に依頼した。スリットのある標的の平面度等をレーザー干渉計で測定した結果、平均表面粗さは20nm程度であることが確認できた。これにより上下のスリット両端部からの500nm可視光による干渉測定にこの金属薄膜標的は十分満足するものであった。この測定ではミラー、コリメータ、光電子増倍管(PMT)を使ったので、干渉測定に十数分間のデータ蓄積を行っている。このため電子ビーム軌道変動等の影響があるものと考えている。この研究開発では電子ビームが標的スリットを通過するだけで、測定干渉パターンから電子ビームサイズおよび電子ビーム軌道変動を1ミクロン以下の高精度で得ることが目的である。現状では検出器の感度が不十分なために多数回の電子ビーム通過からの回折放射光データを蓄積して、基礎的な実験を行っている。既に、高感度測定に必要な部品等を購入したので、2005年度は検出器の感度を上げて、一回の電子ビーム通過で電子ビームサイズが得られるように装置を改良する。2005年の秋までに瞬時非破壊測定を成功させる予定である。
ピレンエキシマー発光を利用した画期的なSNP検出チップの開発

本研究では、ビスピレン構造を有するユニットを核酸塩某に導入し、その向かいに特定の塩基が来たときにのみエキシマーを形成するようなプローブの開発を行った。実際にビスピレンユニットを含むプローブの開発に成功し、ピレンエキシマー発光により標的DNAの有無を確認できた。本研究はビスピレン構造を有するユニットを核酸塩基に導入し、その向いに特定の塩基が来たときにのみエキシマーを形成し発光するようなプローブを合成することで、従来にない新規SNPs検出法を開発することを目的としている。平成19年度は、ます、実際にビスピレンユニットを含む核酸塩基を用いてピレンエキシマーによりビスピレンユニットの向かい側の標的塩基を識別できる分子の設計が可能であるかの検討を行った。マクロモデル等の計算ソフトを用いて分子モデリングを行った結果、オリゴヌクレオチド鎖中で目的の配列をピレンエキシマー発光により識別可能な化合物がデザインできた。そこで実際に何種類かの分子の合成を試みた。途中、化合物の溶解性などの問題点も見られたが、第一のピレンユニットを含む新規ヌクレオシドモノマーの合成に成功した。続いて得られたモノマーユニットをDNA自動合成機を用いてオリゴヌクレオチド鎖へと導入した。HPLCにより単離・精製を行い、MALDI-TOFMSで目的物が得られていることを確認した。本研究を進める過程で、溶解度の問題から、目的とするビスピレンユニットを含むプローブを作製するためには、まず第一のピレンユニットを含むオリゴヌクレオチド鎖を合成し、その後ポストDNA修飾により第二のピレンを導入する方が良いことがわかったため、平成19年度に本研究全体で鍵となるピレンユニットを含むヌクレオチド鎖を既に得られたことは非常に大きな成果であったと考えられる。現在第二のピレンユニットの導入に関する検討を行っており、目的のプローブが得られ次第、塩基識別能の検討を行う予定である。平成19年度までに、化合物のデザインおよび第一のピレンユニットを含む新規ヌクレオシドモノマーの合成を完了し、オリゴヌクレオチド鎖への導入に成功していた。そこで平成20年度はポストDNA修飾の手法を用いて、オリゴヌクレオチド鎖への第二のピレンユニットの導入の検討を行った。これらのピレンユニットは、溶媒に対する溶解性が極めて悪かったが、種々条件検討を行った結果、DNA鎖への導入に成功した。続いて、得られたプローブDNAを用いて、DNA一塩基変異の識別能の評価を行った。フルマッチの標的DNA及び一塩基ミスマッチを含む標的DNAとハイブリダイズさせて蛍光スペクトルを測定した結果、フルマッチの配列のDNAの時に最も強い蛍光発光が見られ、一塩基識別能があることがわかった。しかしながら、当初の予測とは異なり、エキシマー発光が見られなかったことから、長波長での一塩基変異の検出には至っていない。今後は、モノマーユニットのリンカー部位の最適化を行い、フルマッチ配列のときにのみエキシマー発光が見られるようなプローブへと改良していきたいと考えている。
心理療法家の専門性と職業環境の国際比較

申請時の研究計画に基づき、海外の心理臨床家への半構造面接による調査を企画し、平成20年度はアメリカと韓国、平成21年度はスイスとフィンランド、平成22年度はオーストリアを調査対象地として面接調査を行い、調査票と録音データを収集した。面接調査は研究計画で設定した規模で実施でき、資格や就業形態、勤務内容、想定される賃金、他職種との連携のイメージについて、心理臨床家の生の声を得ることができた。音声データは逐語記録化され質的分析が行われた。・平成20年度は心理臨床家の職業環境と他専門職との連携に関する調査項目の選定、各項目と連携の具体例の英文化を行い、アメリカと韓国でインタビュー調査を実施した。・まず5月10月にかけて、臨床心理士、精神科医がインタビュー項目案を作成した。項目には、年齢、性別、資格の種類と資格取得後の経歴、心理臨床家としての職域、勤務形態、臨床の対象とアプローチ、想定される平均的な賃金、専門職としての独立性、他専門職との連携の取り方と工夫、医師との連携でジレンマが生じうる事例への意見、専門職としての満足度、地域文化との関係、以上の項目が設定された。・当初は9月11月にアメリカ・テキサスA&M大学、11月3月に韓国での調査を計画していたが、受け入れ先との調整の結果、アメリカは2月下旬、韓国は3月下旬にそれぞれ研究者2名が訪問し、現地にてインタビュー調査を実施し、録音資料を得た。・アメリカ・テキサスA&M大学では精神科医3名、クリニカル・サイコロジスト7名、その他1名、計11名にインタビューできた。韓国ではソウルで活動する心理療法家の協力を得て、心理療法家5名にインタビューを実施できた。・調査実施時期が当初予定より遅くなり、調査時期も近接したため、録音資料の文書化、日本語訳、データベース化と項目の見直し作業は、平成21年度に継続実施することとなった。以上、インタビューの構造を策定し、英文化したこと、各国で活躍する心理療法家の生の声が収集でき、貴重な一次資料が得られたことが本年度の成果である。・平成21年度は昨年度の調査と同じ質問項目を用いて、フィンランドとスイスにおいて心理臨床家の職業環境と他専門職との連携に関するインタビュー調査を実施した。・質問項目は年齢、性別、資格の種類と資格取得後の経歴、心理臨床家としての職域、勤務形態、臨床の対象とアプローチ、想定される平均的な賃金、専門職としての独立性、他専門職との連携の取り方と工夫、医師との連携でジレンマが生じうる事例への意見、専門職としての満足度、地域文化との関係、とした。・調査受け入れ先との調整の結果、フィンランドは2月下旬、スイスは3月下旬にそれぞれ訪問し、現地にてインタビュー調査を実施し、録音資料を得た。・フィンランドではヘルシンキ及びユヴァスキュラで活動する心理療法家7名、スイスではチューリヒ中心部で活動する心理療法家(ユング派分析家を含む)4名の協力が得られた。・ヨーロッパでは臨床心理専門職のEU共通資格制度を策定する作業が進んでおり、加盟国の臨床心理家にとっての手応えも聴取できた。・調査実施時期が当初予定より遅くなり、調査時期も近接したため、録音資料の文書化、日本語訳、データベース化は引き続き平成22年度に継続実施することとなった。・上記調査と並行して、アメリカと韓国のデータの文書化、データベース化を進めている。以上、第二次海外調査を実施し、ヨーロッパで活躍する心理療法家の生の声が収集でき、貴重な一次資料が得られたことが本年度の成果である。「心理療法家の専門性と職業環境の国際比較」の最終年度として、研究資料の整理と分析を進めるとともに補足調査先の選定と調整を行った。はじめ、ドイツを補足調査候補として9月頃に実施するべく調査の準備を進めていたが、諸般の事情から候補地を再設定することとなり、オーストリアを補足調査地に再決定し、調査先と日程を調整した結果、平成23年2月に訪問調査を実施することとなった。補足調査にはウィーンのジグムンド・フロイト大学の協力が得られ、我々研究グループが作成したフォーマットに沿った半構造化面接を実施するとともに、当大学が中心となって進めている心理療法家のヨーロッパ統一資格制度の仕組みや進展の状況についてもインタビューすることができた。オーストリアは精神分析発祥の国であり、心理療法家の法制度も整っている点に特色がある。インタビューの結果から、心理療法家の専門性の意識は高く、法的にも守られている安心感が高いことがわかった。また、心理療法家の訓練の基準としては、必ずしも「修士」学位にはこだわらす、むしろ充分な長さと質をそなえた訓練システム(最低5年)であることを重視する視点が示された。上記補足調査と並行して、これまで得られたデータのテキスト化、概念の整理と分析を進めた。これら成果を「調査成果報告書」として総括する作業を続けている。
加齢と性ホルモンによる唾液分泌調節系への影響と唾液腺組織の変化に関する検討

唾液分泌障害はその多くは唾液分泌低下による口腔乾燥症状であり、その原因としてはシェーグレン症候群、放射線照射の副作用の他、加齢による唾液腺実質の萎縮や腺細胞自体の分泌能の低下が考えられる。男女を比較した場合女性の方が加齢と腺実質の萎縮の相関関係は高いことが判る。女性でも閉経を境に口腔乾燥症状が著明となってくる。卵巣を摘出した動物(ラット)実験では耳下腺実質の減少は認められるが、顎下腺ではその変化は極めて少ない。ヒト唾液腺でも手術時に得られた組織の検討から同様に顎下腺の変化は少ない。高齢者の萎縮した耳下腺組織の電子顕微鏡像は腺房細胞、筋上皮細胞ともリポフスチン顆粒やライソゾームが目立つが、腺組織の萎縮や細胞自体の微細レベルの変化が必ずしも分泌能と相関しないのも事実である。残存腺細胞の分泌予備能に起因するのかもしれないが、今後の検討課題である。一方、唾液腺症は非腫瘍性、非炎症性に両側唾液腺腫脹を来すが、摂障害すなわち拒食症や過食症に起因する唾液腺症の耳下腺腺房細胞分泌顆粒は微細レベルで大きく、電子密度の低いいわゆるpale granule typeの形態を呈する。これらのことより、摂食障害に関連する唾液腺症は持続する分泌刺激とくに唾液蛋白の放出を促進するβ受容体刺激が背景にあることが推測される。唾液腺腫脹を来たす疾患のうち唾液腺症は非炎症性、非腫瘍性に両側の腫脹を示すのが特徴である。種々の原因で起こるが、拒食症や女性の性ホルモンの異常で発症する。我々の検討した50症例のうち27症例は摂食障害に基づくもので耳下腺の他顎下腺腫脹を示す症例が多くみられた。とくに耳下腺では腺房細胞の膨化が著明で電顕的に腺房細胞内分泌顆粒の増加と芯を含まぬ一相性の電子密度の低い顆粒が特徴であり,若年者では筋上皮細胞内リポフスチン顆粒が中高年者の如く多数認められた。一方,顎下腺では電顕レベルでの変化は正常者に比較して少い。免疫組織学的に正常及び唾液腺症の耳下腺腺房両方にアミラーゼ合成が同様に行われていることが判明した。また腺房細胞にはエストローゲンリセプターが存在し,性ホルモンが唾液分泌や分泌顆粒の形成過程に何らかの調整を行っていると考えられる。閉経後の女性には口内乾燥を訴える例が多く唾液分泌量を左右すると考えられるが、顎部手術に採取した耳下腺、顎下腺では耳下腺脂肪変性が目立つものの後者では明らかでなかった。実験的に卵巣摘出を行ったラットにおいても顎下腺組織の変化は少かった。同じ実験ラットについて電顕的,免疫組織学的検討を引き続き行っている。唾液中には種々のたん白,イオン,酵素が含まれているが,Na,K,Ca,H等は各々腺房細胞より分泌、あるいは導管系で分泌・吸収され調節されていることが考えられる。これらの調節異常は唾石の形成や,唾液の酸・アルカリの調節異常を引き起こすと推定される。これらは唾液腺の炎症や加齢による腺実質の変化,導管系の変化の影響を受けると考えられる。イオン調節系の検討としてNa,K-ATPase,Na-Ca交換系たん白,H-K-ATPaseの局在について組織化学,免疫組織化学的に検討を行った。Na,K-ATPaseはK-NPPase法とNa,K-ATPase抗体を用いたABC法で検討を行った。Na-Ca交換系はcardiac typeの抗体を用い,H-K-ATPaseと共にABC法にて検討した。Na,K-ATPaseは線条部導管基底側に存在し,H-K-ATPaseとNa-Ca交換たん白は線条部導管細胞から小葉間導管に至る比較的太い導管系に存在することが判明した、腺房細胞には明らかな局在は認められなかった。

これらの結果より線条部導管ではNaの再吸収とKの分泌が行われ,さらにHとKの交換及びNaとCaの交換輸送が行われこれらの唾液中のイオン濃度とPHの調節が行われていることが推測された、但しNa-Ca交換系とH-K-ATPaseの細胞内,細胞膜の詳細な局在は今後の検討課題である。唾液分泌障害はその多くは唾液分泌低下による口腔乾燥症状であり、その原因としてはシェーグレン症候群、放射線照射の副作用の他、加齢による唾液腺実質の萎縮や腺細胞自体の分泌能の低下が考えられる。男女を比較した場合女性の方が加齢と腺実質の萎縮の相関関係は高いことが判る。女性でも閉経を境に口腔乾燥症状が著明となってくる。卵巣を摘出した動物(ラット)実験では耳下腺実質の減少は認められるが、顎下腺ではその変化は極めて少ない。ヒト唾液腺でも手術時に得られた組織の検討から同様に顎下腺の変化は少ない。高齢者の萎縮した耳下腺組織の電子顕微鏡像は腺房細胞、筋上皮細胞ともリポフスチン顆粒やライソゾームが目立つが、腺組織の萎縮や細胞自体の微細レベルの変化が必ずしも分泌能と相関しないのも事実である。残存腺細胞の分泌予備能に起因するのかもしれないが、今後の検討課題である。一方、唾液腺症は非腫瘍性、非炎症性に両側唾液腺腫脹を来すが、摂食障害すなわち拒食症や過食症に起因する唾液腺症の耳下腺腺房細胞分泌顆粒は微細レベルで大きく、電子密度の低いいわゆるpale granule typeの形態を呈する。これらのことより、摂食障害に関連する唾液腺症は持続する分泌刺激とくに唾液蛋白の放出を促進するβ受容体刺激が背景にあることが推測される。
偏光走査近接場光学顕微鏡による結晶性高分子薄膜の局所構造評価

平成9年度は、ポリエチレン球晶薄膜およびポリエチレン単結晶を調整し、その走査フォース顕微鏡および偏光下での近接場光学顕微鏡(SNOM)観察を行った。重量平均分子量、Mw=520kの多分散ポリエチレンの1wt%p-xylene溶液よりポリエチレンの薄膜を調整した。この薄膜を通常の偏光顕微鏡で観察したが、明確な球晶構造は観察されなかった。この薄膜のトポグラフィー像および偏光SNOM像(透過モード)を、近接場光学顕微鏡を用いて観察した。光源として、アルゴンレーザー(波長488nm)を用いた。偏光観察の場合、光ファイバーに入射直前にλ/4板を挿入して、プローブからの出射光を直線偏光にした。またフォトマル直前の検光子は直交ニコルの状態にセットした。この条件での偏光比は1:20であった。トポグラフィー像の中心の明るい部分は球晶の核に相当し、暗い部分は成長したラメラが衝突した球晶界面である。非偏光状態ではSNOM像のコントラストは不明確であったが、偏光状態では球晶の界面が明確になった。また偏光子と検光子の方向にマルターゼクロス様の暗い部分が観察された。ポリエチレン単結晶は、折り畳み結晶の基本単位であり、その構造を理解することは高分子材料の構造・物性制御と関連して極めて重要である。重量平均分子量、Mw=32kの単分散HDPEの0.01wt%p-xylene溶液を調製し、self-seeding法により単結晶を調製した。単結晶析出溶液をシリコンウエハ-あるいはスライドガラス上に滴下して観察試料を調製した。透過電子顕微鏡観察で観察された像と対応したAFM像が観察された。また中央部には中空ピラミッドの崩壊による高さ数十nmのひだが観測された。単結晶の厚みは12nmであった。また一部にらせん成長が観察された。一枚の板状晶の水平力顕微鏡観察により、単結晶表面での分子鎖折りたたみ構造を検討した。隣接するセクターで水平力のコントラストが観察された。これはMw=32kの単結晶表面で分子鎖が規則的に折りたたまれていることを示している。この単結晶についてクロスニコル状態、透過モードでSNOM観察を行ったポリエチレン結晶はc軸を光軸とする単軸性の結晶であり、板状晶では光軸は板状晶に垂直であるため一枚の板状晶部分ではSNOMのコントラストは明確ではなかった。一方、らせん成長した単結晶の頂上部分は明るく、光学的異方性の存在が観察された。
肥満2型糖尿病モデルdb/dbマウスにおける糖尿病発症の分子機構の解明

本研究は2型糖尿病の発症機構解明のため、自然発症肥満2型糖尿病モデルであるdb/dbマウスを用いて、膵β細胞機能不全の機構の解明を試みた。膵ラ氏島の組織学的、生理生化学的検討とともに膵β細胞選択的な遺伝子発現プロファイリングを行うことによって機能悪化の分子機構について解析を行った。また食事介入、薬剤介入により機能改善をはかり、その際の分子機構の解明を試みた。その結果、db/dbマウスでは、6週齢以降、著明な体重増加、血糖値上昇、高インスリン血症を認め、10週齢以降はインスリンの代償機転が十分に機能せず、顕著な高血糖を呈した。また膵ラ氏島組織は18週齢では繊維化が進み膵β細胞量の明らかな減少を伴う著明な萎縮を認めた。介入マウスでは、このような組織学変化は明らかに抑制され、免疫組織学的検索でもインスリン分泌細胞は有意に保存された。また血糖値も非投与動物と比べて明らかに改善されるとともに、高インスリン血症の改善をみた。食事介入、薬剤介入による膵ラ氏島機能保護効果の機構を明らかにするため10週齢から12週齢の2週間介入し、生化学マーカーの変動とともにLCM法を用いた膵ラ氏島選択的な遺伝子発現プロファイル解析をおこなった。その結果、食事介入による膵β細胞機能保護の分子機構として、抗酸化ストレスを介するアポトーシス抑制が示唆された。一方、ピオグリタゾンについては、PPARγアゴニストとしての直接効果に加えて、糖脂肪毒性改善を介する間接的効果によって膵β細胞機能保護に働くことが強く示唆された。その結果、db/dbの体重・空腹時血糖・インスリン値は他群より有意に高かった。LCM法で得られたインスリン遺伝子発現は、8週齢ではdb/+で他群より有意に増加した。8週齢db/dbでは、増殖・アポトーシス関連遺伝子発現が増加したが、12週齢では増殖促進遺伝子発現は低下し、アポトーシス促進遺伝子発現が増加していた。一方、アポトーシス抑制遺伝子であるbcl-2はdb/mにおいて高発現を認めた。10-16週齢間でdb/m、m/mに高脂肪食(HF)負荷を行ったところ、体重はHF群で有意に増加し、ipGTTにおいて血糖値には有意差を認めなかったが血中インスリン値はHF群で増加し、特にdb/m群でその増加は顕著であった。以上より、db遺伝子ホモ接合体マウス(db/db)では肥満を伴う糖尿病発症をみるものの、db遺伝子ヘテロ接合体マウスでは糖尿病発症を抑制する代償性機構が存在することが分子レベル及びインスリン分泌反応で明らかになった。一方、アポトーシス抑制遺伝子であるbc1-2はdb/mにおいて高発現を認めた。10-16週齢間でdb/m、m/mに高脂肪食(HF)負荷を行ったところ、体重はHF群で有意に増加し、ipGTTにおいて血糖値には有意差を認めなかったが血中インスリン値はHF群で増加し、特にdb/mでその増加は顕著であった。以上より、db遺伝子ヘテロ接合体マウスでは糖尿病発症を抑制する代償性機構が存在し、db遺伝子ホモ接合体マウス(db/db)ではその代償機構の破綻により膵β細胞機能不全におちいることが明らかになった。
NMRによるモルテン・グロビュール構造の解析

1. NMRによるウマβラクトグロブリン(ELG)の天然構造解析^<15>N標識ELGの異種核相関三次元NMR測定を行い、天然状態でのNMR信号の帰属をほぼ完了した。化学シフト、核オーバーハウザー効果の解析により推定されるELGの立体構造はウシβラクトグロブリンの結晶構造とよく一致した。2. ELGのモルテン・グロビュール(MG)構造の解析MG状態で主鎖アミドプロトンの水素交換を行った後、天然構造へとリフォールドさせて、二次元NMRスペクトルを測定する方法により、ELGのMGで水素結合を形成している領域を同定した。その結果、天然構造においてA、F、G、Hストランドを形成する領域、およびC末端のへリックスに相当する領域に水素交換反応に対する保護がみられ、この領域がMG状態においても天然と同様の立体構造を形成しているものと推定された。また、天然構造でCストランドに相当する領域には弱いけれども一次構造に沿って連続的に水素交換に対する保護が観測され、MG状態ではこの領域に非天然のαヘリックスが形成されている可能性が示唆された。この点を確認するため、Proline ScanningMutagenesis実験を行ったが、プロリン置換体の多くは天然構造を獲得できず、ジスルフィド結合異性体を分離するのが困難であったため、Cys66とCys160をAlaに置換した変異体を作成し、これをベースにプロリン置換を導入する実験を行っている。
感染性DNAクロ-ンを用いたHIV/SIVの病原性と変異の解析

サルに感染可能なHIVー1および発症に関与するHIVー1の遺伝子を同定するために以下の実験を行った。昨年度迄に行ったHIVー1とSIVの各遺伝子機能の比較から、互換性があることが判ったので、1.HIVー1とSIVAGMとのキメラクロ-ン株10株を作成した。そのうち8株はヒトCD4細胞でよく増殖したが、細胞によっては相違がみられ、そのトロピズムを決めているのが、gag、polといった5'領域であることが判った。しかし残念ながらこれらのクロ-ンはサルPBLまたサルには感染しなかった。2.そのため次にSIV^<MAC>を用いて変異クロ-ン4株とHIVー1とのキメラクロ-ン5株を同様に作成し、ヒトCD4細胞とサルPBLにおける増殖を調べた。その結果サルPBLへの感染増殖にはSIV^<MAC>とのVTR,gag、pol、vifといった5領域が重要であることが判った。SIV^<MAC>のenvではなくHIVー1envを持つものが、サル細胞への感染性を示したことは興味ある知見であった。現在、サルPBLへの感染性を決めているSIV^<MAC>遺伝子領域の詳しい同定を続けている。またこのクロ-ン接種ザルで感染が成立した徴候がみられている。このクロ-ンはHIVー1envを持っていることから、HIVー1envによる試作感染防御ワクチンの有効性確認のためのサルを用いた攻撃接種用ウイルスとして使用可能となる。元来の目標であるサルに感染可能なHIVー1の作成については、HIVー1envといった3'領域について作成した。病原性および変異については現在、これらのクロ-ン接種サルを用いて進行中である。