hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
哺乳類初期発生の細胞コミュニティー

定量生物学の会第3回年会の開催をサポートした。哺乳類初期胚の本質的理解に向けて、初期胚を細胞コミュニティーとして捉え直すとともに、個々の細胞の成り立ちを遺伝子発現制御まで深めて理解する。総括班は、「哺乳類初期発生の細胞コミュニティー」の領域課題名のもと、各研究者が自由な発想を研究に反映し、様々な分野の研究者が相互に連携しながら、研究を進められる環境を整えることを目的としており、本年度以下の活動を行った。総括班会議の開催8月31日に東京大学において、11月24日、25日にあいち健康プラザにおいて総括班会議を行った。総括班員全員、文部科学省学術調査官の出席のもと、領域全体での研究の進捗状況、今後の進め方などについて議論を行った。班会議開催11月24日、25日に1泊2日の合宿方式であいち健康プラザ(愛知県大府市)において第4回領域班会議を行った。計画研究、公募研究の全ての研究代表者、分担者が口頭で研究の進捗状況を発表するとともに、ポスター発表を行い深夜まで議論を進め、領域内での情報の共有を進めた。インターネットを介した情報の共有ニュースレター第3報、第4報をWeb上で出版し、本領域の活動内容や、研究成果を広く一般に公開した。またホームページでは領域の活動内容を情報として公開した。哺乳類初期胚の解析法のマニュアルの作製領域内の研究者の有している哺乳類初期胚の解析の為の実験プロトコルなどの情報を共有するために、マニュアルとして出版を目指しており、その原稿を集めると共に、ファイルとしてまとめ、Webでの公開を開始した。研究集会での広報活動および研究手法の情報の共有一般に公開するセミナーを3回開催した。また、「建設的に考える会」「第4回定量生物学の会年会」に旅費などのサポートを行い、生物学の問題への新規のアプローチについて若手研究者が議論する機会への協力を進めた。哺乳類初期胚の本質的理解に向けて、初期胚を細胞コミュニティーとして捉えなおすとともに、個々の細胞の成り立ちを遺伝子発現制御まで深めて理解することが本新学術領域研究の目的である。総括班は、「哺乳類初期発生の細胞コミュニティー」の領域課題名のもと、各研究者が自由な発想を研究に反映し、様々な分野の研究者が相互に連携しながら、研究が進められる環境を整える事を目的とする。本年度は以下の活動を行った。1)総括班会議の開催:7月、11月に総括班会議を開催し、領域としての体制の整理を行い、本年度の領域活動の詳細を決定した。2)国際シンポジウムの開催:哺乳類初期発生の先端研究者だけでなく、周辺の研究領域の研究者を国内外から招聘し、7月に岡崎市において国際シンポジウムを開催した。海外からの参加者15名を含む98名の参加があった。本領域で行った研究成果を共有すると共に、今後の研究分野の発展を議論した。3)班会議の開催:公募研究、計画研究のそれぞれの研究内容を領域内で理解し、議論を深め、それぞれの研究をより高める為に、熊本県で11月に班会議を開催した。
実験室Ｘ線源によるナノメートル解像度三次元観察を目指した高感度Ｘ線顕微鏡の開発

本研究では、コンパクトな実験室X線源によって数nmスケールの空間分解能の三次元硬X線顕微鏡を将来的に実現するための基盤技術の確立を目指した。投影型X線位相差分顕微鏡を考案し、波動光学理論の構築、シミュレータの開発などを行った後、μmサイズX線源を利用した原理実証実験を行い、Fresnel回折を伴った吸収像、縞位相造、ビジビリティコントラスト像の三枚の独立な画像の取得に成功した。さらに、本着想を発展させたX線位相差分ラミノグラフィシステムを実現するための基盤技術の確立を目的として、微細加工技術を利用した微小ターゲットの開発、フレキシブルX線格子などの開発を行った。コンパクトな実験室X線源によって数nmスケールの空間分解能の三次元硬X線高感度顕微鏡を将来的に実現するための基盤技術の確立を目指した。本申請で提案する方法は、2009年に我々が提案した新しいタイプの硬X線位相差顕微鏡の着想をさらに発展させたもので、従来の方法にはない高感度の定量イメージングが実現できると期待される。本研究は、X線光学の知識と、先端的なX線光源技術、微細加工技術、および情報処理技術を駆使し、さらにエラストグラフィなどの新たなコントラスト形成技術を融合することによって、まずは百nmよりも高い空間分解能で、高感度あるいは短露光時間の硬X線顕微鏡の実現を目指すものである。平成24年度は、研究協力者とともに投影型X線Talbot位相差顕微鏡の開発を行った。まずはサブpmの光源サイズの実験室X線源によりX線Talbot差分顕微鏡によるFresnelホログラフィの実証実験を行った。プラスティック標準試料や、燃料電池内部に使用される可能性のある材料など実用的な観点から要望の高い試料を用いて描出性能の評価を行った。平成24年7月1日に研究代表者が東京大学新領域創成科学研究科から東北大学多元物質科学研究所に移るなど、本研究課題申請時には予想できなかった事態が生じたが、当初の計画通り、三次元位相イメージングのための投影型X線ラミノグラフィ顕微鏡システムの開発(光源の開発、位相格子の開発、X線波動光学シミュレータの開発、ラミノグラフィ三次元再構成アルゴリズムの開発)に着手するまでに至ることができた。本研究の成果は、2013年2月にRoyal Societyの主催で開催された国際ワークショップの招待講演、および2013年3月の日本物理学会、その他いくつかの出版物において発表された。平成25年度も引き続き、コンパクトな実験室X線源によって数nmスケールの空間分解能の三次元硬X線高感度顕微鏡を将来的に実現するための基盤技術の確立を目指した。本研究で開発を進めている方法は、2009年に我々が提案した新しいタイプの硬X線位相差顕微鏡の着想をさらに発展させたもので、従来の方法にはない高感度の定量イメージングが実現できると期待される。X線光学の知識と、先端的なX線光源技術、微細加工技術、および情報処理技術を駆使し、さらにエラストグラフィなどの新たなコントラスト形成技術を融合することによって、まずは百nmよりも高い空間分解能で、高感度あるいは短露光時間の硬X線顕微鏡の実現を目指すものである。平成25年度は投影型X線ラミノグラフィ顕微鏡システムの開発に着手した。マース東研X線検査(株)の研究協力者とともに投影型X線Talbot位相差顕微鏡の開発をさらに推進した。光源の開発については、物質・材料研究機構の三木一司グループリーダーとともに、微細加工技術でダイヤモンドウェハ上にタングステンの微小パターンを試作し、X線の空間コヒーレンス制御を目指した。回折格子の作製については、名古屋大学大学院工学研究科マイクロ・ナノシステム工学専攻の微細加工施設(ナノテクプラットフォーム)を利用し、開発を進めた。新規ラミノグラフィ三次元再構成アルゴリズムも鋭意開発中であり、最終年度の平成26年度に本システムによる三次元顕微イメージングの実現を目指す。平成26年度も昨年度に引き続き、コンパクトな実験室X線源によって数nmスケールの空間分解能の三次元硬X線高感度顕微鏡を将来的に実現するための基盤技術の確立を目指した。本研究で開発を進めている方法は、2009年に我々が提案した新しいタイプの硬X線位相差顕微鏡の着想をさらに発展させたもので、従来の方法にはない高感度の定量X線位相イメージングが実現できると期待される。X線光学の知識と、先端的なX線光源技術、微細加工技術、さらには情報処理技術を駆使して、さらには新たなコントラスト形成技術を融合することによって、まずは百nmよりも高い空間分解能で、高感度あるいは短時間露光の硬X線顕微鏡の実現を目指すものである。平成26年度は、微細加工技術を利用した光源の作製、本手法に用いる位相型回折格子の作製、新規解析プログラムの開発などを行った。光源の作製については、ダイヤモンドウェハ上にリフトオフなどの方法によりタングステンの微小パターンを作製することを試みた。

X線発生時に、このパターンに微小径電子線を照射するわけであるが、電子線照射時にタングステンパターンが破壊されない方法について試行錯誤を行った。位相格子の作製については、メンブレン中に数μm厚のAuのパターンを埋め込んだフレキシブルX線位相格子の開発を行った。この格子は、Si基板上にめっき技術により作製したAu格子パターンを、エポキシ系樹脂に埋め込み、さらに基板側をエッチングにより除去することによって作製可能であり、エポキシ樹脂の厚さが50μm程度であることから、自由に変形することができる。さらに、本課題で開発している手法のための解析プログラムの開発を行った。このプログラムは、従来のX線顕微鏡用の波動光学シミュレータを発展させたもので、試料によるFresnel回折の効果を正確に取り入れられていることが、実験によっても示された。26年度が最終年度であるため、記入しない。X線光学26年度が最終年度であるため、記入しない。平成24年7月1日に研究代表者が東京大学新領域創成科学研究科から東北大学多元物質科学研究所に移ったことに伴い、引越、X線発生装置設置の届出、実験装置立ち上げ、その他研究室立ち上げに伴う庶務などに数ヶ月以上を要したため、当初計画していた実験をすべて行うことが困難であった。当初の計画項目に優先順位をつけることで対応した。平成24年7月1日に研究代表者が東京大学新領域創成科学研究科から東北大学多元物質科学研究所に移ったことに伴い、引越、X線発生装置設置の届出、実験装置立ち上げ、その他研究室立ち上げに伴う庶務などに数ヶ月以上を要したことなどが、平成25年度にも尾を引いており、全体として計画が遅れ気味である。また、微細加工による光源の作製、回折格子の作製、新規アルゴリズムの開発については試行錯誤を要しており、当初の計画から遅れる要因となっている。投影型X線talbot位相差顕微鏡(三次元顕微ラミノグラフィ)の開発のさらなる推進を行う(光源の開発、位相格子の設計・開発、高速並列計算機による解析アルゴリズムの開発)。設計・開発した複数の光源および位相格子により、実際に光学系を組み立てる。はじめは比較的大きい光源サイズ、長い波長、小さいラミノグラフィック角で、投影型X線ラミノグラフィシステムの実現可能性を明らかにする。本年度は、第一段階としてサブμm空間分解能の位相イメージングを目指す。特に光源と光学素子については、リング状光源、およびリング状位相格子が不可欠である。リング状光源の実現方法として、電子ビームスキャン方式、リソグラフィによるターゲットパターニング方式、キャピラリー+リングスリット方式などを試みる。リング状位相格子については、多層膜+リソグラフィ方式、X線リソグラフィ用のマスク作製技術を応用した方式(フレキシブル位相格子)などを試みる。ラミノグラフィ三次元再構成アルゴリズムのさらなる高度化も行う。大きなラミノグラフィック角および少ない投影数でも定量的な再構成ができるようにするため、本研究では統計的方法やコンプレスドセンシングなどの最新の情報処理技術を積極的に取り入れてアルゴリズムの改良を進めていく。さらなる高空間分解能・高感度化の取り組みも開始する。
脳卒中後の歩行時における麻痺側荷重誘導方法の開発と効果の検証

脳卒中片麻痺患者に対して、非麻痺側膝関節を固定して歩行練習をすることによる神経生理学的効果、リハビリテーション効果に関して検討した。非麻痺側を固定して歩行練習を継続することによって、麻痺側に荷重が誘導され、麻痺側の立脚時間、歩行速度の増加が見られた。また、神経生理学的にも歩行中の荷重誘導によって、通常の歩行練習よりも脊髄上位からの神経伝達に変化をもたらすことが出来る可能性が示された。本年度は、脳卒中患者に対する非麻痺側膝関節を固定した状態での歩行練習前後の神経生理学的変化および継続的な介入による治療効果を検討した。神経生理学的変化においては、脳卒中患者ではシナプス前抑制が歩行練習前には減少している状態であったが、非麻痺側膝関節を固定した状態での歩行練習を10分間行った後には健常者と同じレベルまで増強した。通常の歩行練習らおいてはそのような変化は見られなかった。継続的な介入は8名の脳卒中患者(左片麻痺3名、右片麻痺5名)を対象に行った。対象者の歩行レベルは四点杖での介助歩行から杖なしでの独歩が可能なレベルであった。下肢のBrunnstrome recovery stage(以下BRS)はIIIVIであった。1週間毎に通常の歩行練習と、10分間の装具歩行を交互に継続して行い、ABABAのシングルケースデザインによって毎日の歩行レベル(FIM移動項目)、麻痺側立脚時間、歩行速度、Cadence、麻痺側下肢BRSの変化を5週間追跡した。その結果として、BRSがIIIIVと低く、介入前に麻痺側の立脚時間が非麻痺側と比較して80%以上低下している症例に関しては麻痺側立脚時間、歩行速度、Cadenceは介入期のほうが向上の勾配が大きかった。しかし、発症から6ヶ月以上経過した維持期の症例を対象にしたことから、BRSの変化は見られなかった。歩行レベルに関してもFIM移動項目で示される変化は見られなかった。これらのことから、非麻痺側膝関節を固定した状態での歩行練習は、歩行速度や麻痺側立脚時間の増加など歩行パラメーターの改善には寄与することが明らかとなった。今後は急性期、回復期の症例に対しても実施し、回復の推移を検討していく必要がある。本年度は脳卒中片麻痺患者に対して安全かつ効果的に行える介入方法、時間、頻度を決定するために健常若年者において、特に介入時間、頻度が歩行パターン、シナプス前抑制に与える影響を明らかにした。健常若年者に対しては、片側膝関節を固定した群と非固定群を設定し、実際の患者の歩行時間を想定した10分間のトレッドミル歩行を行わせた。歩行の前後で反対側前脛骨筋とヒラメ筋を遅延刺激した際のヒラメ筋H波の振幅の抑制程度を指標として、反対側下肢のシナプス前抑制の変化を検討した。結果として片側膝関節を固定した群では、非固定群と比較して、反対側下肢のシナプス前抑制が増強され、20分間にわたって継続していた。また、固定した群では固定と反対側下肢の立脚時間の延長が見られたことから、反対側下肢の荷重時間の増大がシナプス前抑制の変化をもたらしたことが考えられた。これによって脳卒中片麻痺患者の非麻痺側膝関節を固定した場合に、麻痺側下肢の異常な筋緊張、腱反射の抑制が行え、運動麻痺の回復に寄与する可能性が示された。脳卒中片麻痺患者に対しても非麻痺側膝関節を固定して、通常の理学療法時と同様の歩行を5分間行わせた(装具歩行)。また、固定しない条件でも同様の歩行を行わせた(通常歩行)。その前後で健常若年者と同様の方法で麻痺側下肢のシナプス前抑制を測定した。麻痺側の立脚時間においては、患者は歩行前は非麻痺側と比較して短縮していたが、装具歩行によって延長し、左右の立脚時間が同程度となった。脳卒中患者においては、歩行前はシナプス前抑制はわずかしか出現していなかったのに対し、装具歩行後には健常者と同じ水準までシナプス前抑制が増強した。これらの結果は脳卒中患者においても装具歩行によって、歩容の変化だけでなく、上位運動ニューロンからの下降性抑制の増加によって運動麻痺の回復に寄与出来る可能性を示すものであった。健常者に対する基礎実験に関してはほぼ完了し、脳卒中片麻痺患者に対して実施するための根拠に関しては示すことが出来た。また、脳卒中片麻痺患者に対して介入することによる神経生理学的変化に関しても一定の傾向を明らかにすることが出来た。しかし、患者に対してはまだ症例数が少なく、十分に信頼性のある結果となっていない。また、本来は脳卒中片麻痺患者に対して、非麻痺側膝関節を固定することによる歩行パターンの変化を動作解析によって、詳細に明らかにする予定であった。しかし、機材の調達の遅れや該当患者がリクルート出来なかった等の理由から動作解析に関しては十分に行えていない。平成24年度に得られている神経生理学的な知見をもとに、前年度に行えなかった脳卒中片麻痺患者に対しての非麻痺側膝関節固定下での歩行によるその後の歩行パターンの変化を詳細に明らかにする予定である。また、平行して非麻痺側膝関節を固定して歩行練習をする介入をシングルケースデザインで行う。

介入期間、休止期間を設けることによって介入による変化の程度を検証する。また、機能回復が十分であった患者とそうでなかった患者の歩行パターンを病巣、症状からも検討を行い、臨床における介入の適応症例についてより詳細に明らかにする予定である。今年度に自動関節角度計の購入を行う予定あったが、実験の進行と機材調達手続きの遅れのため購入が行えなかった。そのため次年度に大学内に自動関節角度計の部品を追加購入する予定である。また、今年度予定していた海外への出張に関しても行わなかったため、今年度助成金の使用額が予定よりも少なかった。次年度の研究成果の発表に関しては、日本体力医学会中国四国地方会(徳島、鳥取)、臨床神経生理学会(高知)、World Congress of Neurology(オーストリア)で学会発表を行う予定であり、旅費として使用する。その他成果の公表のための論文への掲載費、英文校正費に使用予定である。
緑内障濾過手術におけるリンパ管流の解析と制御

本年度は昨年度、一昨年度の研究内容を発展させ、マウス濾過手術モデルの解析をリンパ管のみから、遺伝子発現プロファイル全体に解析対象を広げた。その結果、マウス濾過胞モデルにおいて濾過胞部位で有意に発現が上昇したプローブを術後3日目で789個、術後7日目で871個検出した。Gene Ontology解析で術後3日目、7日目に共通してTリンパ球および好中球の遊走に関連する遺伝子発現経路の活性化が、術後7日目にコラーゲンの産生・分解経路の活性化が観察された。個々の遺伝子では、S100a8・S100a9といったアラーミン分子、サイトカインIl1b,プロテアーゼSerpinb2,増殖型ケラチンKrt16など創傷治癒時に結膜上皮で産生される遺伝子群の発現増加が著明であった。また、術後7日目においてムチン遺伝子Muc5ac,およびゴブレット細胞のマーカーGp2の発現量が有意に低下していた。これらの結果を日本眼科学会総会およびAnnual meeting of Associations for Vision Research and Ophthalmologyの年次総会で発表した。学会発表におけるディスカッションから内容を吟味して、論文を執筆し、現在学術雑誌に投稿中である。また、遺伝子発現プロファイルで特に興味深い結果を示したいくつかの遺伝子に関して、遺伝子改変マウスを入手し、濾過手術モデルを作成、その機能解析も施行した。また、濾過手術の結果にマクロファージが重要な役割を果たしている可能性が考えられたため、クロドロネートリポゾームを使用したマクロファージ除去モデルマウスを作成し、濾過手術に与える役割を検証した。それらの結果は、2019年度の日本眼科学会総会に発表予定で、現在準備を進めている。1.マウス濾過手術モデルを用いたリンパ管の変化の経時的観察:濾過手術によって結膜リンパ管が障害され、その後再生される経時的変化をリンパ管マーカー(Prox1)のレポーターマウスを用いて観察した。また同時に炎症細胞(リンパ球、マクロファージ)の浸潤について、免疫組織染色で観察した。2.濾過手術後の結膜リンパ管流と術後眼圧の関係:マウス濾過手術モデルにおいて、濾過胞のリンパ管を実験的に促進(リンパ管増殖因子の強制発現)し、濾過胞の形状や眼圧に与える影響を評価した。3.術後の炎症細胞浸潤がリンパ管流に与える影響:マクロファージを除去したマウス(クロドロン酸投与)を用いて濾過手術を施行し、マクロファージが濾過手術術後のリンパ管流に与える影響を検討した。4.毛細リンパ管からの房水吸収の解析:濾過手術術後にフルオレセインを前房内に注入し、毛細リンパ管からの房水吸収をin vivoイメージングにて観察した。5.濾過胞におけるVEGF-C過剰発現および発現抑制モデルの解析:濾過手術におけるリンパ管の役割を明らかにするため、Prox1-Cre-Tomatoマウスに濾過手術を施行し、マウスVEGF-Cを含んだペレットを留置し、濾過胞の維持状態、リンパ管の再生および新生と術後眼圧を対照群と比較検討した。その結果、VEGF-C投与はリンパ管のみならず、新生血管を濾過胞に誘導し、濾過胞の維持には貢献しない事が明らかになった。マウス濾過手術モデルの作成とリンパ管イメージングに関しては概ね、計画通りに進行した。Prox1-Cre-Tomato蛍光色素レポーターマウスをジャクソン研究所から導入し、濾過手術の前後におけるリンパ管の分布の変化を蛍光実体顕微鏡により可視化ことを現在試みている。蛍光量が予想より弱いので、撮影方法等の工夫を試みている。濾過胞におけるVEGF-C過剰発現および発現抑制モデルの解析に関しても、マウスVEGF-Cを含んだペレットを留置し、濾過胞の維持状態、リンパ管の再生および新生と術後眼圧を対照群と比較検討した。その結果、VEGF-C投与はリンパ管のみならず、新生血管を濾過胞に誘導し、濾過胞の維持には貢献しない事が明らかになった、今後VEGF-Cの特異性等に配慮して実験を継続してゆく。1.濾過胞におけるVEGF-C過剰発現および発現抑制モデルの解析:前年度に引き続きProx1-Tomatoマウスに濾過手術を施行し、マウスリコンビナントVEGFCの局所投与の効果を検証した。マウスリコンビナントVEGFC投与によって濾過胞部位の肥大が観察されたものの、期待された濾過効果の増大には繋がらないことが判明した。2.術後炎症とリンパ管流の解析:リンパ球を欠くNu/Nuマウスおよびクロドロン酸リポゾームを用いたマクロファージ除去マウスモデルに濾過手術を施行し、対照野生型マウスとの間で、濾過胞の維持状態、リンパ管の分布(ホールマウントLYVE-1免疫染色)と術後眼圧経過、術後組織における組織瘢痕化マーカー発現を比較した。nu/nuマウスでは野生型マウスとの間で有意な差は確認できなかった一方、マクロファージ除去マウスでは濾過胞の瘢痕化が有意に抑制されることが判明し、現在学会発表および学術雑誌への投稿を準備中である。3.術後炎症とリンパ管流におけるTh2型炎症とTh2サイトカインの役割:Th2リンパ球は組織線維化に関連するTh2サイトカインIL-4およびIL-13を発現し、またマクロファージの中でも組織修復・瘢痕化を促進するM2マクロファージの分化を誘導する。そこで、濾過胞におけるM2マクロファージのマーカー(Arg1, CD164)発現を解析し、浸潤マクロファージのサブタイプと術後のリンパ管流の変化並びに眼圧の関連を評価した。

その結果、濾過手術後の濾過胞では有意にM2マクロファージ関連遺伝子群の発現が亢進していることを発見し、現在濾過胞瘢痕化との関連を検証中である。濾過手術におけるリンパ管増生は眼圧下降に貢献しないことが判明した一方で、濾過手術におけるマクロファージの制御が濾過胞の形成に大きな役割を果たしているとの新規知見を得ることができた。当初の計画の実験は順調に施行しており、科学的な知見に基づいて仮説の一部修正、新たな実験の追加を行っており、概ね順調な進展と考えられる。本年度は昨年度、一昨年度の研究内容を発展させ、マウス濾過手術モデルの解析をリンパ管のみから、遺伝子発現プロファイル全体に解析対象を広げた。その結果、マウス濾過胞モデルにおいて濾過胞部位で有意に発現が上昇したプローブを術後3日目で789個、術後7日目で871個検出した。Gene Ontology解析で術後3日目、7日目に共通してTリンパ球および好中球の遊走に関連する遺伝子発現経路の活性化が、術後7日目にコラーゲンの産生・分解経路の活性化が観察された。個々の遺伝子では、S100a8・S100a9といったアラーミン分子、サイトカインIl1b,プロテアーゼSerpinb2,増殖型ケラチンKrt16など創傷治癒時に結膜上皮で産生される遺伝子群の発現増加が著明であった。また、術後7日目においてムチン遺伝子Muc5ac,およびゴブレット細胞のマーカーGp2の発現量が有意に低下していた。これらの結果を日本眼科学会総会およびAnnual meeting of Associations for Vision Research and Ophthalmologyの年次総会で発表した。学会発表におけるディスカッションから内容を吟味して、論文を執筆し、現在学術雑誌に投稿中である。また、遺伝子発現プロファイルで特に興味深い結果を示したいくつかの遺伝子に関して、遺伝子改変マウスを入手し、濾過手術モデルを作成、その機能解析も施行した。また、濾過手術の結果にマクロファージが重要な役割を果たしている可能性が考えられたため、クロドロネートリポゾームを使用したマクロファージ除去モデルマウスを作成し、濾過手術に与える役割を検証した。それらの結果は、2019年度の日本眼科学会総会に発表予定で、現在準備を進めている。平成29年度は、濾過胞におけるVEGF-C過剰発現および発現抑制モデルの解析前年度に引き続きProx1-Tomatoマウスに濾過手術を施行し、よりリンパ管への反応特異性の高い、リコンビナントVEGFーC (Cys156Ser)の局所投与の効果を検証する。術後炎症とリンパ管流の解析:リンパ球を欠くBALB/C-Rag2欠損マウスおよびクロドロン酸リポゾームを用いたマクロファージ除去マウスモデルに濾過手術を施行し、対照野生型マウスとの間で、濾過胞の維持状態、リンパ管の分布(ホールマウントLYVE-1免疫染色)と術後眼圧経過、術後組織における組織瘢痕化マーカー(3型コラーゲン、ファイブロネクチン、alpha-smooth muscle actin)発現を比較する。術後炎症とリンパ管流におけるTh2型炎症とTh2サイトカインの役割:
足場非依存性を標的とした癌治療法開発の基盤研究

癌転移の特性である足場非依存性能を治療の標的とするため、CDCP1による足場非依存性能の制御機構を明らかにする事を目的として研究をおこなった。本研究により、細胞外領域に存在するCUB2ドメインが細胞膜のCDCP1同種複合体形成に関与する事を発見し、さらにSrcチロシンキナーゼの活性化を介したCDCP1シグナルの制御に重要である事を明らかにした。また、CDCP1シグナル遮断による足場非依存性能の抑制に関して有効な低分子化合物を2つ同定し、マウス腹膜播種実験による胃癌細胞の転移を抑制する事に成功した。これら結果は、CDCP1が足場非依存性能を標的とした治療法に有用である事を示唆している。(1)癌の特性である足場非依存性に関与するCDCP1機能ドメインの解析肺がんにおけるCDCP1による足場非依存性の機能ドメインの解析をCDCP1細胞外ドメイン欠失変異体を用いて解析した。CDCP1 siRNAによるCDCP1発現抑制に伴う野生型および細胞外ドメイン欠失変異体の発現ベクター導入による機能回復実験により、欠失変異体では細胞運動能および足場非依存性能の機能回復ができないことから、CDCP1細胞外ドメインが肺がん細胞の運動能および足場非依存性能に重要である事を明らかにした。また、細胞外ドメイン欠失変異体はCDCP1の2量体形成を阻害し、リン酸化および癌化に関与するSrcの活性化を抑制することを発見し、2量体形成が足場非依存性に重要であることを明らかにした。現在は、CDCP1の2量体形成が細胞外ドメイン内に存在する3つのCUBドメインのどれによるものかを検討するため、各CUBドメイン欠失体の作成と大腸菌による各CUBドメイン蛋白質発現ベクターの構築を進めている。(2)足場非依存性に関与するCDCP1下流シグナル分子の網羅的解析CDCP1のC末端側にFLAG標識をしたベクターを用いてFLAG抗体による免疫沈降をおこなったが、細胞の浮遊及び接着状況による結合蛋白質の変化は、PKCdeltaの確認のみで、その他は明らかにはならなかった。今後は、チロシンリン酸化等を検査するなど出現バンドの性質を精査しなければいけない。また、CDCP1の両端にHAおよびFLAG標識した発現ベクターを作成しており、より結合蛋白質の精製を高め、検討する準備を進めている。機能ドメインの解析については細胞外ドメインの重要性を発見しており、機能には細胞外ドメインを介した2量体形成によるSrcの活性化が重要である事を証明しつつあり、順調に進んでいる。CDCP1結合蛋白質に関しては、現在条件検討等を進めており、現段階では以前に報告した結合蛋白質の検出には成功しており、ほぼ条件は検討できていると考えられ、今後は結合蛋白質の精製条件等が重要な問題となっていると考えており、おおむね順調と判断した。(1)癌の特性である足場非依存性に関与するCDCP1細胞外ドメインの探索CDCP1細胞外ドメイン欠失を用いた研究から、がん細胞の足場非依存性の制御にはCDCP1の細胞外ドメインによる同種2量体形成が必要である事を、昨年の実験計画で明らかにした。本年度はCDCP1細胞外ドメインをさらに詳細に調べるため、CDCP1細胞外ドメイン内に存在する3つの内、2つのCUBドメインに着目し、大腸菌により2つの異なるCUBドメインの蛋白質を発現させた。肺がん細胞にN末端にFLAG標識を付加したCDCP1蛋白質を用いてファーウエスタンをおこなったところ、CUB2ドメインにおいてFLAGを付加したCDCPとの結合が確認された。この結果は、CDCP1の細胞外ドメインの中でもCUB2ドメインが足場非依存性に重要であることを示唆している。肺がん細胞にCUB2蛋白質を添加した実験では、細胞の運動能を抑制することが明らかとなり、CDCP1依存的な機能に、CUB2ドメイン蛋白質が関与していることも明らかとなり、CUB2ドメイン機能の阻害が癌治療のシーズとなり得ることが示唆された。(2)足場非存性に関与するCDCP1下流シグナル分子の網羅的解析CDCP1のC末端にFALG標識を付加したベクターを用いての免疫沈降は、様々な条件で検討をおこなったが、昨年のPKCdeltaに加えて、以前報告してきたMT1-MMP及びSrc型キナーゼしか確認できなかった。細胞膜上のCDCP1にはPKCdeltaのみが結合する可能性も考えられたため、今後はCDCP1に結合するPKCdeltaに結合する因子が何かを検討することも考え、準備を進めている。CDCP1-PKCdelta結合の検証システムを確立し、シグナル遮断する低分子化合物の同定に成功した。(1)CDCP1機能ドメインの解析として細胞外ドメインの重要性を昨年示し、今年度でその細胞外ドメインに存在する3つのCUBドメインの内、N末端から数えて2番目のCUB2ドメインがCDCP1同士の結合に重要である事をファーウエスタンによって決定する事が出来た。さらに、CUB2ドメインがCDCP1依存的な機能である足場非依存性やがん浸潤能に関与する可能性を示唆する結果も得られている。(2)結合タンパク質は、これまでに報告のあるSrc型キナーゼ、PKCdelta及び、MT1-MMP以外の蛋白質は検出されていない。そこで、細胞内結合蛋白質に関しては、CDCP1下流のPKCdeltaに結合するタンパク質の検討に変更も考えている。細胞外及び細胞膜を介したCDCP1結合蛋白質に関しては、細胞を溶解する界面活性剤等の条件を色々と試行し再度検討を行なう予定でいる。

(3)足場非依存性シグナルに重要なCDCP1とPKCdeltaの結合を遮断する低分子化合物の同定に成功し、胃癌細胞のマウスへの移植における腹膜播種を抑制することに成功した。以上の結果から、概ね順調と判断した。癌転移機構の重要な要因の一つである足場非依存性に関与するCDCP1細胞外ドメインにおいて、3つあるCUBドメインの内のCUB2ドメインがCDCO1の2および3量体以上の同種複合体に重要である事を明らかにした。さらに、CUB2ドメイン蛋白質のみの添加は、癌細胞膜上のCDCP1の同種複合体を介したSrcfamily kinase (SFK)の活性を抑制して足場非依存性及び細胞運動能を抑制することを明らかにした。現在は、CUB2ドメインを含むCDCP1細胞外ドメインに結合する抗体を作成し、抗体療法の基盤研究を推進している。一方、SFK-CDCP1-PKCδを介したシグナルを遮断するために、CDCP1細胞内ドメインとPKCδ間の結合を検出するスクリーニング系を確立し、低分子化合物による結合阻害実験をおこなったところ、候補となる低分子化合物を2つ同定することに成功した。これらの低分子化合物が、胃癌細胞株の増殖と腹膜播種をin vivoで抑制することをマウス皮下注射および腹腔内注入時の薬剤添加実験で明らかにし、癌転移を標的とした新規の低分子化合物による治療法開発の基盤も確立することが出来た。面白いことに、小細胞肺癌細胞株においては、足場非依存性に関与するCDCP1の遺伝子座が欠失しながら足場非依存性を保持しているを発見した。よって、癌種によっては新規の足場非依存性制御因子が存在する可能性があり、癌転移治療開発における新たな標的因子同定が期待できる。癌転移の特性である足場非依存性能を治療の標的とするため、CDCP1による足場非依存性能の制御機構を明らかにする事を目的として研究をおこなった。本研究により、細胞外領域に存在するCUB2ドメインが細胞膜のCDCP1同種複合体形成に関与する事を発見し、さらにSrcチロシンキナーゼの活性化を介したCDCP1シグナルの制御に重要である事を明らかにした。また、CDCP1シグナル遮断による足場非依存性能の抑制に関して有効な低分子化合物を2つ同定し、マウス腹膜播種実験による胃癌細胞の転移を抑制する事に成功した。これら結果は、CDCP1が足場非依存性能を標的とした治療法に有用である事を示唆している。(1)CDCP1の2量体形成が細胞外ドメイン内に存在する3つのCUBドメインのどれによっておこなわれているかの検討を各CUBドメイン欠失体発現ベクターを用いた細胞実験と大腸菌による各CUBドメイン蛋白質を用いたファーウェスタンによるドメイン決定を進める。それが決定した時点でさらに細かくドメイン内領域をアラニンスキャンなどの方法で同定していく予定である。(2)CDCP1結合蛋白質は両端タグ付きHA-CDCP
後期高齢者におけるエピソード記憶障害の評価指標の開発

記憶障害の兆しを捉える指標として国際的に流通するロジカルメモリはウエクスラー記憶検査法(WMS)の下位項目として提供されており,日本では, WMS改訂版に準じて74歳までを対象とした標準化がなされている。一方, WMS-Rを完全実施するのではなくロジカルメモリのみ単独実施する方法(杉下, 2011:日老医誌)が,アルツハイマー病が疑われる高齢者を対象とした記憶評価等に利用されている。この場合,使用目的柄, WMS-R対象年齢以上の後期高齢者(75歳以上)への適用が望まれる。以上を踏まえ,高齢者に日本語版ロジカルメモリを単独実施した際の健常標準値を得ることを目指し,調査を行った。MCI(軽度認知障害)に代表される記憶障害の兆しを捉える指標として世界的に流通する『ロジカルメモリ課題』は杉下(2001)によって日本語版が提供されているが,その標準成績については74歳まで分が提供されているのみである.75歳以上人口の増加に伴い,ロジカルメモリを75歳以上に実施する機会が増えている現状を踏まえ,本研究では75歳以上の高齢者における日本語版ロジカルメモリ課題の標準成績を調査している.研究2年目にあたる25年度は,昨年度までにリクルートできていた東京地区の高齢者100名を対象にして本調査を行った.エントリー後の辞退者が9名生じたため,東京調査では最終的に91名分のデータを収集した.前年度の調査分と合わせて,得られた178名分のデータを確認し,データに欠損のある5名,神経精神疾患の既往歴のある4名,症候性の脳梗塞の既往歴のある4名,視聴覚障害のある3名,一部の課題成績が欠損している11名を除く151名を分析対象として選出するところまでを本年度中に行った.また,これまでに得られたデータを用い,高齢者の病前IQの推定ツールとして開発されたJapanese Adult Reading Test(JART)や前頭葉機能のスクリーニングツールとして流通するFrontal Assessment Battery(FAB)について,ロジカルメモリ, WAIS-III, MMSEなど神経心理学的検査間の相関関係を調べることによって,各検査の併存妥当性の判断に寄与する情報を報告した.MCI(軽度認知障害)に代表される記憶障害の兆しを捉える指標として世界的に流通する『ロジカルメモリ課題』について,日本の75歳以上の後期高齢者にも適用可能とするために, 70-74歳, 75-79歳, 80-84歳の健常標準値を提供することが本研究の目的である.初年度にあたる24年度は,名古屋地区および東京地区にて,研究参加者のリクルートを行った.名古屋地区で87名,東京地区で100名のエントリーを達成し,当初の必要をおおむね満たす研究参加者数を確保できた.これらのエントリー者を対象として地域別に,(1)標本抽出のための予備調査および(2)課題成績を取得する本調査を行う実施計画のもと, 24年度中に,名古屋地区での予備調査と本調査,東京地区での予備調査までを終えた.また,東京地区での本調査を開始し, 25年度4月現在,継続中である.これまでに得られたデータを中間解析したところ,ロジカルメモリの課題成績が,対象を75歳以上の後期高齢者に限定した場合も年齢と負の相関関係を示すことを確認した.この結果は,日本語版ではこれまで提供されていない75歳以上の高齢者についても年齢ごとに層化した標準成績を明らかにし,パーセンタイル変換表を作成する意義があることを示唆する.研究の目的である70-74歳, 75-79歳, 80-84歳で層化した健常標準値の提供について,妥当性を確認できたものと考える.MCI(軽度認知障害)等,記憶障害の兆しを捉える指標として国際的に流通するロジカルメモリ課題は杉下(2001)によって日本語版が提供されているが,その標準成績については74歳まで分が提供されているのみである.75歳以上人口の増加に伴い,ロジカルメモリを75歳以上に実施する機会が増えている現状を踏まえ,本研究では75歳以上の高齢者における日本語版ロジカルメモリの標準成績を調査している.研究2年目にあたる25年度は東京地区の高齢者100名を対象にして調査を行った.エントリー後の辞退者が9名生じたため,東京調査では最終的に91名分のデータを収集した.前年度の調査分と合わせて,得られた178名分のデータを確認し,種々の除外規準を踏まえ151名を分析対象として選出するところまでを行った.25年度には東京地区での調査を完了するとともに,名古屋,東京の両地区にて得られたデータを集約・解析するところまで行う予定であったが,年度途中に研究代表者が産休・育児休暇による研究休止を余儀なくされたため,続く26年度に遅延した計画分を行った.本研究では,解析対象を75歳以上の後期高齢者に限定した場合もロジカルメモリの課題成績と年齢との間に負の相関関係が認められたことから, 70-74歳, 75-79歳, 80-84歳の層別に健常標準値を提供することを目指しているが,そのためにより高齢の層と受けた教育年数が短い層のサンプリングを強化する必要が確認された.そこで27年4月までに25名分のデータを追加収集し,種々の除外規準を踏まえ14名を分析対象として採用している.

また,本研究によって作成されたデータベースを活用する試みとして,認知機能健常と操作的に定義される高齢者群の抽出を行い,運転技能に関する実験など,高齢者を対象とした研究のリクルートに協力した.MCI(軽度認知障害)等,記憶障害の兆しを捉える指標として国際的に流通するロジカルメモリ課題は,日本ではウエクスラー記憶検査法改訂版(WMSーR:杉下, 2001)の下位項目として提供されており,原版に準じて対象74歳までで標準化がなされている。一方, WMS-Rを完全実施するのではなくロジカルメモリを部分実施する活用法(杉下, 2011:日老医誌)で,アルツハイマー病が疑われる高齢者などを対象とした記憶障害の評価が行われることがある。この場合,使用目的柄,対象年齢以上の後期高齢者(75歳以上)への適用が望まれる。以上を踏まえ,高齢者,とりわけ75歳以上の後期高齢者に日本語版ロジカルメモリを部分実施した際の健常標準値を得ることを目指し,調査を行った。研究3年目にあたる27年度は,地域在住の高齢運転者を対象としたコホート調査の参加者にロジカルメモリを課すことで標本数の充足をはかった。28年3月までの登録者から, 65歳以上, MMSE > 20で,症候性の脳梗塞や精神神経疾患の既往歴のない100名を選出して標本に追加した。最終的に得られた標本(65-69歳67名, 70-74歳54名, 75-79歳・高卒相当51名, 75-79歳・大卒以上42名, 80-84歳22名, 85歳以上8名)から直後再生/遅延再生の平均値±標準偏差を算出したところ, 65-69歳層20.0±6.4/15.0±7.0, 70-74歳層19.4±5.7/14.8±5.9, 75-79歳・高卒相当層15.8±5.7/10.6±6.2, 75-79歳・大卒以上層18.2±5.5/11.9±6.3であった。なお各層50名を目標としたものの80歳以上については期間中に満たせなかった。参考値に留まるが80-84歳層16.6±6.1/10.9±5.9, 85歳以上層19.6±5.5/15.0±4.9の平均値±標準偏差であった。研究参加者の背景情報とロジカルメモリ成績および,他の認知課題とロジカルメモリ成績との関連を解析し,課題の特性を検討するところまでを年度内に行った。記憶障害の兆しを捉える指標として国際的に流通するロジカルメモリはウエクスラー記憶検査法(WMS)の下位項目として提供されており,日本では, WMS改訂版に準じて74歳までを対象とした標準化がなされている。一方, WMS-Rを完全実施するのではなくロジカルメモリのみ単独実施する方法(杉下, 2011:日老医誌)が,アルツハイマー病が疑われる高齢者を対象とした記憶評価等に利用されている。この場合,使用目的柄, WMS-R対象年齢以上の後期高齢者(75歳以上)への適用が望まれる。以上を踏まえ,高齢者に日本語版ロジカルメモリを単独実施した際の健常標準値を得ることを目指し,調査を行った。25年度途中に研究代表者が産休・育児休暇によって研究を休止したため当初計画から遅れる結果となり, 1年間の繰越金を生じた.
宗教的志向性と宗教トラブルに関する実証的研究

本研究の目的は、宗教的志向を有する現代人の動向と、そこで生じる宗教トラブルとの関係を実証的に解明することである。そのため本研究では、下記の3つの分野に大別される研究を行った。(1)まず理論的研究として、当該問題を取り扱う際の方法論として「内在的理解」を批判的に吟味。あわせて日本人の宗教性である「生命主義的救済観」に関しても、提唱されて四半世紀たった現代宗教状況に照らして検証を行った。(2)ついてデータベースの利用として宗教情報リサーチセンターの記事データを利用して、現代日本のカルト状況を瞥見した。(3)さらに事例研究として、オウム真理教を中心に、宗教の周辺に位置するスピリチュアルな状況について調査を行った。その結果、わかったことを記すと、(1)当該研究には内在的理解のようなミクロな視点が不可欠であるものの、当事者性に注目する限り、昔日の生命主義的救済観は現代において後退もしくは変容を迫られている。(2)現代宗教のトラブルの特徴はスピリチュアリティの侵害ということができ、それは、かつての新興宗教トラブルが、教義の妥当性、儀礼のいかがわしさ、人権侵害と結びつけられ語られてきたのと一線を画している。(3)さらに、スピリチュアリティを求める潮流が多くなりつつあるものの、スピリチュアルな希求を満たす体制は教育にも、医療にも、そして社会になく、そうすると、スピリチュアリティが商売にされ、利用され、侵害される危険性は今後も続く。その意味で現代は「スピリチュアリティの危機」の時代と言うことが理解できた。今年度の研究実績を整理すると次の点にまとめられる。(1)本研究に関わる発表・情報収集の一環でアメリカ宗教社会学会(ASR、8月に米国アナハイムにて開催)と国際宗教社会学会(SISR、8月にメキシコにて開催)に出席するとともに国内学会(日本宗教学会、「宗教と社会」学会、南山宗教文化研究所懇話会・シンポジウム)で発表を行なった。(2)基本資料の収集として、宗教情報リサーチセンターの利用をはじめ、いくつかのデータベースの活用によって、主要な宗教トラブルに関する瞥見を行い、宗教トラブルを引き起こす団体の掲げる主張と入信者の志向性をまとめ、次年度に作成するレポートの一部(400字×50枚)を完成させた。(3)具体的な調査地として龍ヶ崎のオウム対策連合協議会との接触を持ち、インタビューを行った(上記の国際学会での発題は、その報告の一部である)。しかし、調査過程で被調査者より研究差し止めの要請を受けるなど、当該研究遂行上の懸案事項に直面し、その報告については上記の国内学会にて報告した。同時に内閉的な宗教活動を行うも宗教トラブルに至っていない宗教団体の聞き取り調査を行った。以上の研究実績から、平成14年度において、より詳細な調査を行うとともに、宗教的志向性と宗教トラブルとの関係について研究成果を取りまとめていく。本研究の目的は、いわゆる「カルト」による宗教トラブルを瞥見し、そこで交わされるカルト側の「救い」の主張と、これを受容する信者側の宗教的志向性との関係を検討していくことである。ここでいう「宗教的志向性」とは宗教教団に所属せずに精神世界や生き方の模索・探求に関する啓蒙書、自己啓発や修養を目的とした講座・セミナーに強い関心を持っ志向性のことをいう。また「宗教トラブル」とは、上記のような志向性によって引き起こされた精神的・肉体的・経済的な被害のことを指す。本研究では主要カルト10団体を検討し、そこでは(1)現代医療のオルタナティブの示唆(病気治しし)、(2)運命、性格、人間関係の好転・改善が強調され、(3)現世との対決を主張する一方で、(4)現世からの撤退が説かれることがわかった。

だが、こうした「救い」の勧誘に端を発し、違法行為も認められ、社会から隔絶した形で自らの信念強化をはかったり、逆に現世に留まりながらも外界の情報を遮断する形で、実質的な現世からの精神的な隠遁を企てたりすることも見逃せない。こうしたカルトの主張に呼応する信者の宗教的志向性を検討すると、信者の宗教的志向性に関しては虚しさがその中核にあり、そこから自己変革や社会変革に向かうことが確認される。しかし、こうした展開は何もカルトに限ったことではなく、虚しさ、漠然とした不安、人生の意味を見出だせないといった志向性は、それが宗教的であるかどうかは別にして広く現代人に分有されている。個人主義の寄る辺ない状況での自分探しの空回りが、かえって自己抑圧を強いるカルトにたどり着かせている。そして、その背景にはあるのは、絶対的な価値観を失い、個々人がそれぞれの生きる意味や人生の目的を模索していかなかればならないといった、現代社会の価値相対主義なのである。以上の点を別記のような論文において発表した他、現在報告書作成中である。
口腔顔面領域を支配的有髄および無髄一次求心性促進入中枢投射に関する研究

実験動物としてラットを用いた。平成10年度は眼窩下神経と舌神経に関して、平成11年度および12年度は下歯槽神経などの他の三叉神経について、上記各トレーサーを注入して、それぞれの中枢投射に関して検索した。検索の結果、CB-HRPでラベルされた中枢終末は、尾側核ではI層、II層の内側、III、IV、V層に認められ、IB4-HRPではII層の外側に限局して認められ、いずれも体部位局在的に認められた。主知覚核、吻側核、中間核ではCB-HRPによるラベルは体部位局在的にそれぞれ認められ、IB4-HRPによるラベルでは、舌神経に注入した場合にはわずかに認められたが、眼窩下神経およびその他の神経に注入した場合には認められなかった。これらのことから、舌神経に含まれる無髄神経線維は、三叉神経知覚核群のより吻側部位の核にも投射していることが明らかとなり、口腔領域の痛みに関して、これら吻側部位の核も尾側核と同様に関与していることが推測された。CB-HRPでラベルされた中枢終末は、眼窩下神経と舌神経のいずれの場合でも、尾側核では、I層、II層の内側、III、IV、V層に認められた。より吻側部位の核、すなはち主知覚核、吻側核、中間核におけるCB-HRPによるラベルは、体部位局在的に認められた。一方、IB4-HRPでは、両神経ともに、尾側核のII層の外側に限局して認められた。IB4-HRPを舌神経に注入した場合には、吻側部位の核において、ラベルがわずかながらも認められたが、眼窩下神経に注入した場合には、認められなかった。これらのことから、舌神経に含まれる無随神経線維は、三叉神経知覚核群のより吻側部位の核にも中枢投射していることが明らかとなった。このことは、口腔領域の痛みに対して、尾側核と同様にこれら吻側部位の核も関与していることを示唆していると言える。今後、他の神経に関しても同様の方法で検索する予定である。ラットの眼窩下神経と舌神経に各トレーサーを注入し、それぞれの中枢投射を検索した。その結果、CB-HRPでラベルされた中枢終末は、尾側核ではI層、II層の内側、III、IV、V層に認められ、IB4ーHRPではII層の外側に限局して認められ、いずれも体部位局在的に認められた。主知覚核、吻側核、中間核ではCB-HRPによるラベルは体部位局在的にそれぞれ認められ、IB4-HRPによるラベルでは、舌神経に注入した場合にはわずかに認められたが、眼窩下神経に注入した場合には認められなかった。このことから、舌神経に含まれる無髄神経線維は、三叉神経知覚核群のより吻側部位の核にも投射している事が明らかとなり、口腔領域の痛みに関しては、これら吻側部位の核も尾側核と同様に関与していると考えられた。この結果は、すでに論文として報告している。現在、下歯槽神経などの他の三叉神経、あるいは口腔組織に分布する末梢神経に関して、上記の方法で検索中である。
胎児循環におけるエンドセリン1(1-31)およびヒト肥満細胞キマーゼの生理と病理

[成績](1)全ての症例において,子宮筋,胎盤,臍帯標本中にhMC陽性細胞の発現が認められた.しかし,重症妊娠中毒症例では,正常妊娠例に比べ子宮筋においてはhMC陽性細胞が著明に増加しており逆に胎盤絨毛,臍帯間質部では陽性細胞が著しく減少していた.(2)子宮動脈はKCl添加により、組織湿重量1gあたり252±185g(n=48)と強い収縮反応を示したが、臍帯動脈の収縮力は48.4±35.3g(n=23)と有意に(p<0.0001)弱かった。ET-1による子宮動脈の収縮はKClの53.8%であったが、ET-1(1-31)では8.4%と有意に(p<0.005)弱かった。臍帯動脈では、ET-1およびET-1(1-31)による収縮がそれぞれKClの105%および153%と、特にET-1(1-31)に対し強い反応性を示した。(3)ET-1(1-31)に対する子宮筋の収縮力は重症妊娠中毒症症例が,正常妊娠症例に比して有意に強かった.しかし臍帯動脈の収縮力は重症妊娠中毒症症例において有意に弱かった.[結論](1)hMCが,妊娠子宮および胎児胎盤系に存在することが確認された.重症妊娠中毒症例では,胎児胎盤系においてhMCの産生を抑制されていることは胎児に対して防御的に働いている可能性が推測された.(2)臍帯動脈の収縮反応の調節は、子宮動脈とは異っており、特にET-1(1-31)の役割が大きいと考えられる.(3)重症妊娠中毒症においては,胎児循環が収縮物質に対して何らかの防御機構が働いていることが示唆された.1.本研究ではヒト子宮および胎児胎盤系とヒト肥満細胞性キマーゼとの関連性を明らかにするため,当科にて妊娠経過に異常を認めない帝王切開症例5名より説明と同意を得た上で子宮筋,胎盤及び臍帯の一部を採取し,子宮筋,胎盤,臍帯各組織中のヒト肥満細胞性キマーゼ及びエンドセリン-1(ET-1)(1-31)の発現を免疫組織学的に比較検討した.全ての症例において,子宮平滑筋細血管周囲,胎盤絨毛血管周囲,臍帯平滑筋周囲にそれぞれ存在する肥満細胞において,ヒト肥満細胞性キマーゼ及びエンドセリン-1陽性細胞の発現が認められた.これによりヒト肥満細胞性キマーゼが,妊娠子宮および胎児胎盤系に存在することが確認され,胎児胎盤循環系に何らかの影響を与える可能性が示唆された.2.正常妊娠において,新しい血管作動性物質であるエンドセリン-1(ET-1)(1-31)の胎児循環における役割を明らかにする目的で,臍帯動脈および子宮動脈に対する血管収縮作用を検討し,ET-1(1-21)と比較した.子宮動脈はKC1添加により、組織湿重量1gあたり276.9±33.7g(n=36)と強い収縮反応を示したが、臍帯動脈の収縮力は214.2±111.6g(n=21)と有意に(p<0.0001)弱かった。ET-1(1-21)による子宮動脈の収縮はKC1の61.0±10.1%であったが、ET-1(1-31)では8.49±3.1%と有意に(p<0.005)弱かった.臍帯動脈では、ET-1(1-21)およびET-1(1-31)による収縮がそれぞれKC1の153.8±18.8%および156.0±39.5%と、有意差は認められなかった.このことは臍帯動脈の収縮反応の調節は、体血管とは異っており、特にET-1(1-31)の役割が大きいと考えられる。(3)ET-1(1-31)に対する子宮筋の収縮力は重症妊娠中毒症症例が,正常妊娠症例に比して有意に強かった.しかし臍帯動脈の収縮力は重症妊娠中毒症症例において有意に弱かった.[結論](1)hMCが,妊娠子宮および胎児胎盤系に存在することが確認された.重症妊娠中毒症例では,胎児胎盤系においてhMCの産生を抑制されていることは胎児に対して防御的に働いている可能性が推測された.

(2)臍帯動脈の収縮反応の調節は、子宮動脈とは異っており、特にET-1(1-31)の役割が大きいと考えられる.(3)重症妊娠中毒症においては,胎児循環が収縮物質に対して何らかの防御機構が働いていることが示唆された.