hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
環境感覚を支える植物液胞動態とその適応機構

地上部におけるミロシナーゼ集積細胞(ミロシン細胞)の維管束に沿った分化にPIN1のエンドサイトーシスが関与していることを示した。地下部でのERボディの発達にセンチュウ感染応答が関与することを見出した。細胞内環境の維持と変動は、細胞内で生じるあらゆる生理機能の基盤的要素であり、無機イオン・代謝物質やタンパク質の濃度・分布として捉えることができる。本研究では、温度、塩ストレス時の水・イオン環境、必須栄養素のリン酸への応答、さらに病原体や共生微生物に着目し、細胞膜、および小胞体から液胞につながる単膜系オルガネラの構成要素である膜構造、構成タンパク質、あるいは低分子量代謝物質や無機イオン類が、これらの外部環境の変化に対してどのように変動するかを明らかにし、その分子機構を解析することを目的とした。平成25年度の研究成果として、1.アフリカ原産のセントポーリアの葉で、急激な温度降下により生じる柵状細胞の傷害が液胞膜の破壊によることを明らかにし、それが細胞内へのCa2+の流入によって引き起こされることを明らかにした。2.低リン環境で生育したシロイヌナズナ根が高リン環境に遭遇した際に短時間で発現する遺伝子にGFPをつないだ形質転換体を作成し、実際にリン遭遇に際し遺伝子発現が上昇することを確認した。また、ポプラが落葉時にリンを回収する機構についても解析を進め、冬季に幹に有機リン酸化合物としてフィチン酸が貯蔵されることを明らかにした。3.生物環境(病害)対する細胞応答系として、葉のオイルボディが抗菌物質を生産することを見いだした。通常オイルボディは脂質の集積部位として知られているが、今回葉のオイルボディの新たな機能が明らかになった。また、外部環境に対する細胞応答として、植物器官の屈性応答反応の調節を担っている組織を同定した。平成26、27年度の研究成果として、1.アフリカ原産のセントポーリアの葉で、急激な温度降下により生じる柵状細胞の傷害が液胞膜の破壊によることを明らかにし、それが細胞内へのCa2+の流入によって引き起こされること、Ca2+の流入は機械感受性イオンチャンネル阻害剤が効果をもち、柵状細胞に強く発現する機械感受性イオンチャンネルとしてセントポーリアのMCAチャンネルの配列情報を明らかにした。また、形質転換体作成のために無菌植物からの再生系の確立に成功した。2.低リン環境で生育したシロイヌナズナ根が高リン環境に遭遇した際に短時間で発現する遺伝子の解析を進め、異なるリン濃度での応答過程の解析を行った。また、ポプラが落葉時にリンを回収する機構についても解析を進め、冬季に幹にフィチン酸が貯蔵されることと、ポプラ体内でのリン動態を明らかにした。3.生物障害に関与する細胞応答系として、ミロシン細胞の分化機構を明らかにした。
海産外来寄生虫のインパクトーエビヤドリムシ科甲殻類を例に

北米西海岸では外来寄生者であるエビヤドリムシ科甲殻類Orthione griffenisによりアナジャコ類が激減して、その共生者群集も絶滅に瀕している。様々なエビヤドリムシの種を用いてこのグループの寄生生態を明らかにした。調査した全てのエビヤドリムシ類では、幼生が宿主の小型個体に着底して共に成長することが明らかになったが、O. griffenisは大型宿主個体へエビヤドリムシが着底することが、最大の相違点であった。エビヤドリムシ類の生活史における、宿主への脱皮戦略、性転換についても明らかにし、また、アナジャコ類を宿主とする多様な共生者の生態も併せて報告を行った。現在、北米西海岸ではアナジャコ類の個体数が激減して、その共生者も絶滅に瀕しているが、その原因はアジアからの外来寄生者であるエビヤドリムシ科甲殻類Orthione griffenisの影響であることが明らかになってきた。日本でO. griffenisの生態を調査するとともに、アナジャコ類に寄生する他のエビヤドリムシ類の生態を調査し、なぜこの種が侵略的外来種となったかを明らかにする。さらに、クルマエビ類に寄生するエビヤドリムシ類を調査し、将来、外来寄生虫としてアメリカ海域へ侵略する危険性を検討する。本年度も、昨年度に続いて、エビヤドリムシ類Orthione griffenisの分布調査を行った。エビヤドリムシ類相の豊富な奄美大島での採集を試みたが、新たな標本を得ることはできなかったため、本種の分布についてまとめあげ論文の作成に着手した。エビヤドリムシ類の寄生生態の一般化を行うため、ヨコヤアナジャコUpogebia yokoyaiとコブシアナジャコUpogebiasakaiiが同所的に分布する土佐湾の干潟において、昨年度に引き続き両種の定期定量採集を続け、4年分のデータから3種のエビヤドリムシ類の生活史を明らかにした。着底期幼生であるクリプトニスクス幼生は、小型のアナジャコ類にのみ寄生しており、宿主利用のタイミングは宿主の着底期と一致することが明らかになった。有明海のニホンスナモグリの採集標本を調査した結果、2種のエビヤドリムシ類の寄生が確認され、やはり、宿主利用のタイミングは宿主の着底期と一致することが明らかになった。これらは、米国におけるO. griffenisの生態とはまったく異なっており、本種の着底に関する生態が侵略的外来種となった可能性が高い。さらに、エビヤドリムシ類が宿主の脱皮時にどのような適応的行動をとるのかをまとめ、論文を作成中である。日本でO. griffenisの生態を調査し、宿主個体群への影響の日米の相違を明らかにして、なぜこの種が侵略的外来種となったかを明らかにする。本年度は、日本においてエビヤドリムシ類Orthione griffenisの分布を、これまで採集していた標本調査と新たな採集調査により明らかにした。本種は、瀬戸内海、土佐湾、八代海、東シナ海に広く分布し、宿主特異性も高くはなく、複数種を利用するが、寄生率は普通種であるGyge ovalisに比べて著しく低いことが明らかになった。エビヤドリムシ類の寄生生態の一般化を行うため、ヨコヤアナジャコUpogebia yokoyaiとコブシアナジャコUpogebiasakaiiが同所的に分布する土佐湾の干潟において、両種の定期定量採集を行った。その結果、3種のエビヤドリムシ類が採集され、G. ovalisはヨコヤアナジャコにのみ寄生し、Progebiophilus sp.2とUpogebione bidigitatusはコブシアナジャコにのみ寄生することが明らかになった。これは、米国におけるO. griffenisの生態とはまったく異なっている。クルマエビ類に寄生するParapenaeon japonicaについても調査を行い、結果を解析中である。なぜこの種が侵略的外来種となったかを明らかにすることが本研究の目的である。これまでに得たさまざまなエビ類を宿主とするエビヤドリムシ類の生態データを解析したところ、全ての種で、クリプトニスクス幼生の着底が宿主の小型個体にほぼ限定されていることが明らかになった。これは、米国のO. griffenisの事例とは異なっていることから、エビヤドリムシ類の着底プロセスに着目する必要があった。そこで、エビヤドリムシ類の付着を防ぐ第5胸脚によるクリーニング行動について比較したところ、米国のアナジャコ類も日本のアナジャコ類も同様の行動が見られ、形態的にも顕著な違いは発見されなかった。

すなわち、宿主のクリーニング行動やクリーニング脚の違いによって、米国のアナジャコ類がO. griffenisに寄生されやすいわけではないことが示唆された。そこで、エビヤドリムシ類の寄生生態の一般化を行うため、日本のヨコヤアナジャコUpogebia yokoyaiに寄生するGyge ovalisを用いて、宿主への感染時期やプロセスの解明に注力した。その結果、G. ovalisが着底の前に、背甲内に内部寄生し、それにより宿主の掃除行動を抑制している可能性が示唆された。さらに、G. ovalisの雌を実験的に取り外すと、残された雄が雌へ性転換することも発見された。信頼性の高い結論を得るためには、来年度、これらの新知見を十分な例数を用いて結論する必要がある。現在、北米西海岸ではアナジャコ類が激減して、その共生者も絶滅に瀕しているが、その原因はアジアからの外来寄生者であるエビヤドリムシ科甲殻類Orthione griffenisの影響であることが明らかになってきた。様々なエビヤドリムシの種を用いて生活史を明らかにすることにより、なぜこの種が侵略的外来種となったかを明らかにすることが本研究の目的である。昨年度までの結果でアナジャコ類、スナモグリ類に寄生するエビヤドリムシ類では、クリプトニスクス幼生が宿主の小型個体に着底して共に成長することが明らかになっているが、例外的に、大型の宿主個体にエビヤドリムシの小型個体が寄生している例も見られた。このような事例が、O. griffenisのように大型宿主個体へエビヤドリムシが着底したのか否かを区別するため、エビヤドリムシ類の生活史において、メスが死亡した場合に、残されたオスが性転換を行い新たなオスを迎えるかどうかを検証した。高知県浦ノ内湾で採集した5種172個体のエビヤドリムシ類で、メスを取り除きオスを鰓室に残す実験を行った結果、全ての種の41個体でオスの体長と体幅が肥大化した。特に、例数の多いIone cornutaとProgebiophilus sp.では、肥大化した個体が、移植後徐々に雌の形態に体を変態させ、1か月ほどで通常の雌と変わらない形態になり、性転換をしたと考えられた。また、実験個体を浦ノ内湾に垂下飼育したところ、新たにオスの着生が認められた。性転換中の個体は、形態的にメスと区別が可能であり、野外のサンプルで大型の宿主個体にエビヤドリムシの小型個体が寄生している事例の多くは、この性転換現象のためであることが確認された。すなわち、O. griffenisのような大型の宿主個体に着底する生活史特性は、エビ類を宿主とするエビヤドリムシ類では極めて特異であることが示された。北米西海岸では外来寄生者であるエビヤドリムシ科甲殻類Orthione griffenisによりアナジャコ類が激減して、その共生者群集も絶滅に瀕している。様々なエビヤドリムシの種を用いてこのグループの寄生生態を明らかにした。調査した全てのエビヤドリムシ類では、幼生が宿主の小型個体に着底して共に成長することが明らかになったが、O. griffenisは大型宿主個体へエビヤドリムシが着底することが、最大の相違点であった。エビヤドリムシ類の生活史における、宿主への脱皮戦略、性転換についても明らかにし、また、アナジャコ類を宿主とする多様な共生者の生態も併せて報告を行った。
二つの形成体因子ＣｈｏｒｄｉｎとＮｏｇｇｉｎの協調的な背腹軸パターンの安定化

脊椎動物の背腹軸は、オーガナイザーから分泌される二つの背側化因子Chordin、Nogginの濃度勾配に従って構築される。しかし、これらは同じBMP阻害活性を保持しており、何故二種類の分子が背腹軸形成に必要か明らかにされていない。本研究課題では、これら二つの分子が胚内で異なる空間分布を示すことを明らかにした。Chordinは分解速度が早く急勾配を形成するが、Nogginは分解速度が遅く緩勾配を形成する。さらに、Chordinの分解を介して、胚サイズ依存的にChordinの濃度勾配が適切に制御されることを明らかにした。本研究課題では、これら二つの分子が胚内で形成する空間分布に注目して研究を行った。濃度勾配の形状は主に産生・拡散・分解によって制御されている。発生過程においては、これら3つの要素が同時並行的に動的に変動していると考えられるが、定量的な解析を困難にしている。そこで、産生量が一定のChordinまたはNoggin勾配を人工的に胚内に形成し、背腹軸の再構成系を構築した。その結果、Chordin(急勾配)とNoggin(緩勾配)は胚内において異なる勾配形状を示す事が明らかとなった。このような、勾配形状の違いを示す可能性として拡散または分解の違いが考えられる。そこで、ChordinとNogginの拡散速度、分解速度を定量したところ、Chordinは拡散速度、分解速度が早く不安定であった。一方、Nogginは拡散速度、分解速度が遅く、非常に安定であった。このように、同じ活性を示す二つの分子が異なる空間分布を示すことにより、異なる制御機序に寄与している可能性が考えられる。ChordinにはChordin分解酵素が存在し、さらにこの分解酵素に直接結合し阻害するSizzledが知られている。そこで、背腹軸の再構築系を用いてSizzledを過剰発現し、Chordinの分解速度を遅くしたところNogginと同様の勾配形状を示した。これらの結果は、Nogginと異なり、Chordinは分解を介して動的に勾配形状を変動している可能性を示している。実際、このようなChordin勾配の即応性により、胚サイズ依存的にChordin勾配の形状が適切に構築される過程を明らかにした。本年度はChordinとNogginが異なる空間パターンを制御する機序を明らかにするために、濃度勾配の形状を規定する拡散・分解に注目して解析を行った。1.拡散拡散係数の算出には、FCS(蛍光相関分光法)及びFRAP(光退色後蛍光回復法)を用いて解析を行った。いずれの場合も、Tgfβのシグナルペプチドを付加した分泌型eGFPの後ろに目的蛋白質(ChordinまたはNoggin)を融合し、細胞間隙における各々の蛋白質の拡散速度を定量した。その結果、NogginはChordinに比べ拡散速度が非常に遅く、Chordinは分泌型eGFPと同程度の速い拡散速度を有する事が示された。2.分解Hisタグを付加したChordin及びNogginを培養細胞に強制発現させ、培養上清に分泌した各々の蛋白質をNiビーズにより精製した。その後、等量の精製蛋白質を胞胚期の胞胚腔にインジェクションし、インキュベーションした後に溶解し各々の蛋白質を免疫沈降後、ウェスタンブロティング法により検出した。Noggin蛋白質は6時間インキュベーションした後も安定であったが、Chordinは30分後には約半量の蛋白質が分解された。このことから、NogginはChordinに比べ、in vivoにおいて非常に安定である事が示された。これらの結果から、Chordinは速い拡散速度を有するが分解速度が大きいため急勾配を形成し、一方、Nogginは拡散速度が遅いにも関わらず分解速度が非常に小さいため緩勾配を形成している事が明らかとなった。このような蛋白質の質的な違いにより、ChordinとNogginは異なる空間パターンを制御している事が示された。当初の予定通り、本年度においてChordinとNogginの質的な違いを明確にした。また、Chordin分解酵素の阻害因子として機能しているSizzledの拡散および分解を定量し、Sizzledは速い拡散速度を有し、分解速度が遅いため緩勾配を形成していることを見いだした。これらの結果は本プロジェクトで仮定しているLong-range feedback modelと合致しており、定量結果をもとにモデルに各々の濃度勾配を導入することが出来る。また、このモデルを介して、ChordinとNogginがどのようにして頑強な背腹軸パターン形成を構築しているのか解析が可能である。BMP応答のプロモーターを用いたイメージングに関しては、in situレベルで内在性のBMP活性依存的にLuciferaseが応答する事を確認している。

ただし、Luciferaseを用いたリアルタイムイメージングに関しては、発光強度が微弱なためBMPシグナルの応答を検出する事が出来ていない。この問題を解決するために、近年開発されたNanoLucまたはBRET(生物発光共鳴エネルギー移動)を用いて、高発光化することにより検出感度を上昇させる。一方、βCatenin-MOにより完全腹側化させた胚を用いて、BMP活性の強度と各々のマーカーの発現レベルを定量的に解析した。これらの定量結果をin situのデータに当てはめる事により、in situの発現領域とBMP活性レベルを相対的に評価する事が可能である。さらに、これらを統合し数理モデルの構築を試みる。最初にNogginを除いたChordinとSizzledの関係に注目し、背腹軸が再現されるモデルの構築を試みる。さらに、このモデルに様々な摂動を与え、実験結果と比較する(Chordin-MOによる腹側化、Sizzled-MOによる腹側化)。次に、このモデルにNogginの勾配条件(小さな拡散速度と分解速度)を導入し、Chordinの分解および背腹軸パターン形成に与える影響を評価する。特に、Nogginの緩勾配がどのようにしてSizzledを介してChordinの勾配を制御し、頑強な背腹軸パターン形成を保証しているのか解析を行う。該当なし
日本の近代都市形成・計画史の比較検証研究-都市計画の遺産と課題に関連して

2年度にわたって実施した研究実績は、(1)研究参加者による資料収集と考察、(2)インタビューによる研究先覚者の語り収集、(3)公開研究会の開催、(4)都市の歴史的空間の扱いを西欧との比較で考察、である。(1)研究参加者による資料収集と考察・わが国の都市計画・開発の歴史を体系的に把撞、20世紀における到達点・成果を明らかにする・市区改正・国と地方・理念と手法・戦後復興・人事交流と技術比較・変化をどうみるか、事例(典型都市・比較都市)、制度創設に関わった人、行政史料(市史・上水道史・消防史・街路図)・事例研究については、東京、名古屋、土浦、京都、大阪、徳山、さいたま、福岡、岩見沢、金沢・地方都市における戦前期の計画事業を網羅して、相互に比較検討、1.道路拡幅(電車敷設)事業、2.(耕地整理)区画盤理事業、3.その他特筆すべき事業、特に3点に限定して主要な都市について網羅的に調べる。・具体的な都市について、いままで(20世紀を通して)その都市について都市形成史(都市計画の結果を含む)がどのように語られてきたか市史あるいは文献名のチェック、市史・文献を紐解き、記述の内容をワークシートとして作成する・都市形成に関連した時代区分、従来の都市形成論へのコメント、新たな都市形成論の提示(2)インタビューによる研究先覚者の語り収集(3)公開研究会の開催下記のような公開研究会を都市形成・計画史小委月会と本科研費支援による近代日本都市形成・計画史比較-検証研究会共催で6回瀾催し、多くの情報や知見を得た。第6回都市形成・計画史公開研究会「都市形成・計画史の観点七金沢市を検討する」、第7回都市形成・計画史公開研究会「都市形成・計画史の観点で名古屋市を検討する」、第8回都市形成・計画史公開研究会「東京と郊外の原風景-原風景と都市形成/都市計画の原風景-」、第9回都市形成・計画史公開研究会「都市形成・計画史の視点で地方産業都市を検証する」、第10回都市形成・計画史公開研究会「都市再建プランの国際比較-日英比較を中心として」、第11回都市形成・計画史公開研究会「日本の郊外(その原型と変容)」(4)都市の歴単的空間の扱いを西欧との比較で考察特に西欧の歴史的都市、例えばプラハ等を調査し、そこで実施されている都市空間の扱いについて考察した。今年度における研究実績は(1)研究参加者による資料収集と考察、(2)インタビューによる研究先覚者の語り収集、(3)公開研究会の開催、である。(1)研究参加者による資料収集と考察・わが国の都市計画・開発の歴史を体系的に把握、20世紀における到達点・成果を明らかにする・東京・横浜・大阪・地方(京都・名古屋・金沢・・)市区改正・国と地方・理念と手法

・戦後復興・人事交流と技術比較・変化をどうみるか、事例(典型都市・比較都市)、制度創設に関わった人、行政史料(市史・上水道史・消防史・街路図)事例研究については、以下の都市、東京、名古屋、土浦、京都、大阪、徳山、さいたま、福岡、岩見沢、金沢地方都市における戦前期の計画事業を網羅して、相互に比較検討1.道路拡幅(電車敷設)事業2.(耕地整理)区画整理事業3.その他特筆すべき事業この3点に限定して主要な都市について網羅的に調べる。具体的な都市について、作業1いままで(20世紀を通して)その都市について都市形成史(都市計画の結果を含む)がどのように語られてきたか市史あるいは文献名のチェック、市史・文献を紐解き、記述の内容をワークシートとして作成する(書かれている時代、その記述内容、ヴォリュームー大まかな字数と写真図版等、内容の傾向)都市形成に関連した時代区分、従来の都市形成論へのコメント、新たな都市形成論の提示(2)インタビューによる研究先覚者の語り収集(3)公開研究会の開催今年度は下記のような公開研究会を都市形成・計画史小委員会と本秘研費支援による近代日本都市形成・計画史比較検証研究会共催で4回開催し、多くの情報や知見を得た。第6回都市形成・計画史公開研究会「都市形成・計画史の観点で金沢市を検討する」第7回都市形成・計画史公開研究会「都市形成・計画史の観点で名古屋市を検討する」第8回都市形成・計画史公開研究会「東京と郊外の原風景-原風景と都市形成/都市計画の原風景-」第9回都市形成・計画史公開研究会「都市形成・計画史の視点で地方産業都市を検証する」2年度にわたって実施した研究実績は(1)研究参加者による資料収集と考察、(2)インタビューによる研究先覚者の語り収集、(3)公開研究会の開催、(4)都市の歴史的空間の扱いを西欧との比較で考察、である。(1)研究参加者による資料収集と考察・わが国の都市計画・開発の歴史を体系的に把握、20世紀における到達点・成果を明らかにする・市区改正・国と地方・理念と手法・戦後復興・人事交流と技術比較・変化をどうみるか、事例(典型都市・比較都市)、制度創設に関わった人、行政史料(市史・上水道史・消防史・街路図)・事例研究については、東京、名古屋、土浦、京都、大阪、徳山、さいたま、福岡、岩見沢、金沢・地方都市における戦前期の計画事業を網羅して、相互に比較検討、1.道路拡幅(電車敷設)事業、2.(耕地整理)区画整理事業、3.その他特筆すべき事業、特にこの3点に限定して主要な都市について網羅的に調べる。・具体的な都市について、いままで(20世紀を通して)その都市について都市形成史(都市計画の結果を含む)がどのように語られてきたか市史あるいは文献名のチェック、市史・文献を紐解き、記述の内容をワークシートとして作成する・都市形成に関連した時代区分、従来の都市形成論へのコメント、新たな都市形成論の提示(2)インタビューによる研究先覚者の語り収集(3)公開研究会の開催下記のような公開研究会を都市形成・計画史小委員会と本科研費支援による近代日本都市形成・計画史比較検証研究会共催で6回開催し、多くの情報や知見を得た。第6回都市形成・計画史公開研究会「都市形成・計画史の観点で金沢市を検討する」第7回都市形成・計画史公開研究会「都市形成・計画史の観点で名古屋市を検討する」第8回都市形成・計画史公開研究会「東京と郊外の原風景-原風景と都市形成/都市計画の原風景-」第9回都市形成・計画史公開研究会「都市形成・計画史の視点で地方産業都市を検証する」
糖化最終産物の受容体を介した歯周病と糖尿病の悪化メカニズムの解明

S100タンパク質は歯肉上皮細胞においてIL-8を誘導する。s100を48時間作用させた群ではヒト歯肉上皮細胞(HGEC)のIL-8産生量はS100未刺激群のそれと比較して1. 5倍程度であった。また、1. g/ mlのS100タンパク質をHGECに6時間作用させることでコネキシン43の産生は誘導される。しかし、10. g/ mlのS100タンパク質を24時間HGECに作用させるとコネキシン43の産生は要請された。その他、歯周病原細菌であるPorphynomonas gingivalisはHGECの糖化最終産物の受容体を介してIL-8の産生を誘導する可能性がある。糖化最終産物(AGE)の受容体(RAGE)を介した歯周病悪化のメカニズム解明のために、まず、歯肉上皮細胞、歯周靭帯由来線維芽細胞、および骨髄由来間葉系幹細胞におけるRAGEの発現を確認した。しかし、歯肉線維芽細胞にはその発現は確認できなかった。また、RAGEのライガンドであるS100を歯肉上皮細胞に作用させLI-8の発現と細胞間コミュニケーション能への影響を調べた。歯肉上皮細胞におけるIL-8の発現は、S100タンパクの作用によって増加していた。細胞間コミュニケーション能は、S100タンパクを低濃度(0.5μg/ml)で短時間作用(6時間)させると亢進していた。一方で、高濃度(10μg/ml)で長時間作用(24時間)させると抑制されていた。そのメカニズムを解明するために、細胞間コミュニケーションを担うギャプジャンクションの構成タンパクであるコネキシンの発現へのS100タンパクの影響を調べた。低濃度(0.5μg/ml)で短時間作用(6時間)S100タンパクを歯肉上皮細胞に作用させたところ、その発現は増加しており、高濃度(10μg/ml)で長時間作用(24時間)S100タンパク作用させるとその発現は減少していた。IL-8は歯肉上皮細胞のコネキシン発現を抑制するという報告があるため、この実験系で発現したIL-8の最高濃度(300pg/ml)を歯肉上皮細胞に作用させたところ、コネキシンの発現には影響していなかった。このことは、S100タンパクは歯肉上皮細胞に作用し、直接的にコネキシン発現を抑制することで、細胞間コミュニケーションを調節しているのではないかということが確認できた。つぎに、RAGEのリガンドの骨芽細胞への影響を調べるために、腸骨由来間葉系幹細胞にS100タンパクと同時に骨分化培地を作用させ、石灰化能を調べた。S100タンパクを事前に作用させても、間葉系幹細胞の骨芽細胞への分化は影響していなかった。糖尿病の歯周炎を悪化のメカニズムの一つとしてRAGEを介した、そのリガンドの作用が重要な役割を果たしている可能性が示唆された。糖尿病と歯周病の関連性は密接であることは近年周知の事実である。しかし、そのメカニズムに関しては炎症性サイトカインの関与は調べられているが、その他のメカニズムに関する研究は少ない。そこで、炎症と糖尿病において重要な役割を担っていると言われている糖化最終産物受容体(RAGE)とそのリガンドであるS100タンパク質に焦点を置き、糖尿病と歯周病との相互作用について検討した。歯周病患者の歯肉におけるS100タンパク質の発現は健全歯肉と比較して、その発現は増加していた。歯周病原細菌(Actinobacillus actinomycetemcomitan)は歯肉組織においてS100タンパク質の発現を誘導した。また、そのSlOOタンパク質を歯肉上皮細胞に作用させたとごろ、高濃度のS100タンパク質はRAGEを介して細胞間コミュニケーション(GJIC)を低下させる。しかし、低濃度のS100タンパク質は短期間の作用ではGJICを促進させる結果が出た。高濃度でのGJICの変化はそれを担っているギャップジャンクションの構成タンパクであるコネキシンの発現が低下していることが関与していると考えられる。低濃度のS100タンパク質がGJICを促進していることは、ギャップジャンクションの発現量ではなく、ギャップジャンクションのリン酸化がGJICを促進している結果を得た。また、炎症性サイトカイン(IL-8)発現は、時間、濃度依存的に増加していた。IL-8はGJICを低下させるという報告があるが、今回の実験結果ではIL-8の発現は関与していないという結果が出た。歯周病原細菌によって誘導される歯肉上皮のS100タンパク質は炎症性サイトカインを誘導する一方で、細胞間接着装置の一つであるギャップジャンクションを介した細胞間コミュニケーションに影響を与えることが示唆された。
集中定数部と分布定数部をもつ系に対する最適レギュレータの構成法とその性質

集中定数部と分布定数部をもつ系の中から特に中立型と遅れ型のむだ時間系を選び,最適レギュレータの構成法とその性質について検討しました.従来,むだ時間系に対して最適レギュレータを構成するためには無限次元リカッチ方程式の解を用いて定めた状態フィードバックによるのが一般的でした.しかし無限次元リカッチ方程式は解くことが難しく,実プラントに状態フィードバックを実装することも容易ではありませんでした.これに対して本研究では,有限次元線形行列不等式の解を用いて定めたメモリーレスフィードバックにより,あらかじめ指定された指数安定度を有する最適レギュレータを構成できることを明らかにしました.ディジタルコンピュータを用いると,有限次元線形行列不等式は無限次元リカッチ方程式に比べて簡単かつ効率的に解を求めることができます.またメモリーレスフィードバックは状態フィードバックのような内部変数のメモリーや実時間積分演算を必要としないので,実プラントへの実装も容易になります.そのような意味で本研究により,設計も実装も容易な最適レギュレータができるようになりました.またむだ時間を含まない場合には,最適レギュレータは制御系として望ましいかずかずの性質を備えていることが知られています.本研究では,上述の方法によって中立型むだ時間系に対して構成される最適レギュレータの性質について調べました.その結果,むだ時間を含まない場合の最適レギュレータと同様に1/2以上無限大のゲイン余裕と±60度以上の位相余裕をもつことが保証されるとか,パラメータ変動に対する低感度特性を有するなど,望ましい性質をもつことが明らかになりました.また,中立型むだ時間系に対してコスト保証制御系を構成できることも明らかとなりました.集中定数部と分布定数部をもつ系の中から特に中立型と遅れ型のむだ時間系を選び,最適レギュレータの構成法とその性質について検討しました.従来,むだ時間系に対して最適レギュレータを構成するためには無限次元リカッチ方程式の解を用いて定めた状態フィードバックによるのが一般的でした.しかし無限次元リカッチ方程式は解くことが難しく,実プラントに状態フィードバックを実装することも容易ではありませんでした.これに対して本研究では,有限次元線形行列不等式の解を用いて定めたメモリーレスフィードバックにより,あらかじめ指定された指数安定度を有する最適レギュレータを構成できることを明らかにしました.ディジタルコンピュータを用いると,有限次元線形行列不等式は無限次元リカッチ方程式に比べて簡単かつ効率的に解を求めることができます.またメモリーレスフィードバックは状態フィードバックのような内部変数のメモリーや実時間積分演算を必要としないので,実プラントへの実装も容易になります.そのような意味で本研究により,設計も実装も容易な最適レギュレータができるようになりました.またむだ時間を含まない場合には,最適レギュレータは制御系として望ましいかずかずの性質を備えていることが知られています.本研究では,上述の方法によって中立型むだ時間系に対して構成される最適レギュレータの性質について調べました.その結果,むだ時間を含まない場合の最適レギュレータと同様に1/2以上無限大のゲイン余裕と±60度以上の位相余裕をもつことが保証されるとか,パラメータ変動に対する低感度特性を有するなど,望ましい性質をもつことが明らかになりました.また,中立型むだ時間系に対してコスト保証制御系を構成できることも明らかとなりました.集中定数部と分布定数部をもつ系の中から特に中立型むだ時間系を選び,最適レギュレータの構成法とその性質について検討しました.従来,中立型むだ時間系に対して最適レギュレータを構成するためには無限次元リカッチ方程式の解を用いて定めた状態フィードバックによるのが一般的でした.しかし無限次元リカッチ方程式は解くことが難しく,実プラントに状態フィードバックを実装することも容易ではありませんでした.これに対して本研究では,有限次元線形行列不等式の解を用いて定めたメモリーレスフィードバックにより,ある2次形式評価関数に対する最適レギュレータを構成できることを明らかにしました.ディジタルコンピュータを用いると,有限次元線形行列不等式は無限次元リカッチ方程式に比べて簡単かつ効率的に解を求めることができます.またメモリーレスフィードバックは状態フィードバックのように内部変数のメモリーや実時間積分演算を必要としないので,実プラントヘの実装も容易になります.そのような意味で本研究により,設計も実装も容易な最適レギュレータができるようになりました.またむだ時間を含まない場合には,最適レギュレータは制御系として望ましいかずかずの性質を備えていることが知られています.本研究では,上述の方法によって中立型むだ時間系に対して構成される最適レギュレータの性質について調べました.その結果,むだ時間を含まない場合の最適レギュレータと同様に1/2以上無限大のゲイン余裕と±60度以上の位相余裕をもつことが保証されるという,望ましい性質をもつことが明らかになりました.集中定数部と分布定数部をもつ系の中から特に中立型むだ時間系と遅れ型むだ時間系を選び,メモリーレスフィードバックを用いた最適レギュレータの構成法とその性質について検討を行いました.これまでの研究で,中立型と遅れ型のむだ時間系に対してメモリーレスフィードバックにより最適レギュレータを構成できるということがわかっています.しかし得られる閉ループ系の安定度については何も保証されていませんでした.そのため,きわめて即応性の悪い制御系ができてしまう可能性もありました.

そこで本年度の研究では,ディジタル計算機によって容易に求められる有限次元線形行列不等式の解を用いて,あらかじめ指定された指数安定度を有する最適レギュレータを構成できることを明らかにしました.またむだ時間を含まない場合には,最適レギュレータは制御系として望ましいかずかずの性質を備えていることが知られています.そこで本研究では,上述の方法によって構成される最適レギュレータの性質について調べていきました.そして本年度の研究の結果,それらのレギュレータもむだ時間を含まない場合の最適レギュレータと同様に,評価関数の最適値が初期状態から計算できるという性質があることがわかりました.また遅れ型のみならず中立型むだ時間系においても,それらのレギュレータの一巡伝達関数は円条件を満たし,プラントのパラメータ変動に対すそ低感度特性をもつことが明らかとなりました.さらに不確かな中立型むだ時間系に対して,コスト保証制御系が構成できることも明らかとなりました.
ニコチンに対するグリア応答-中枢ニューロン保護機点として

ニコチン型アセチルコリン受容体の活性化が,虚血中枢ニューロンの保護作用を示すかどうかを検定する目的で以下の実験を行った。(実験1)ニコチン型アセチルコリン受容体α7サブユニットに対する作動物質GTS-21(510mg/kg)をスナネズミの5分間一過性前脳虚血モデルにおいて虚血負荷前30分に腹腔内投与を行った。虚血再灌流後7日目に深麻酔下に動物を屠殺,海馬の組織検定を行ったところ,CA1ニューロン数が(正常値116±2.7,虚血群10±3.7に対し)GTS-21投与虚血群では,67±18(10mg/kg),9±1.5(5mg/kg)であった。GTS-21による用量依存的なニューロンの虚血障害防禦作用が示された。この実験条件での脳温の変動は,虚血負荷後45時間にわたり12°Cであり,上記保護効果には低脳温によるものが含まれていることもうかがわせた。(実験2)スナネズミ海馬CA1領域にマイクロダイアリシスプローブを装着し,上記虚血条件下での細胞外グルタミン酸濃度の推移を分析した。虚血5分値のグルタミン酸レベルは,虚血前値の約18倍であり,GTS-21投与はそのレベルに何らの影響を与えないもののようであった。(実験3)スナネズミ海馬のスライスを作製し,あらかじめCa^<2+>蛍光色素rhod-2を取り込ませて,無酸素・無グルコースの人工虚血灌流に切り替えると,海馬CA1領域に選択的なCa^<2+>動員が誘発された。GTS-21 50μM存在下では,Ca^<2+>動員の潜時の有意の延長(270秒より319秒へ)とratio値の低下がみられた。これらの事実から,アセチルコリン受容体の活性化には,Ca^<2+>動員抑制による虚血障害防禦作用があることが明らかとなった。
有機溶媒中で働く脂質修飾酵素の開発

本研究は、酵素表面を脂質分子で被覆することによりイソオクタンなどの疎水性有機溶媒に可溶化し、有機溶媒中で働く新規な工業プロセス触媒を開発することを目的として行い、以下の成果を得た。1)リパーゼの水溶液と脂質分子の水溶液を混合し、析出する沈殿を集めた。得られた粉末は酵素の親水性表面が疎水的な脂質分子で被覆されているので、水には溶けず、ベンゼン、イソオクタン、エーテルなどの有機溶媒にのみ可溶となった。現有の高速液体クロマトに設備備品として購入した紫外可視検出器とデュアルポンプを接続して、脂質修飾酵素中のたんぱく含量を測定した。2)酵素としてリパーゼを選び、脂質修飾リパーゼを作製し、イソオクタンなどの疎水的な有機溶媒中で、1-フェニルエタノールと脂肪酸のエステル化反応を行い、R-体の1-フェニルエタノールのみが不斉選択的にエステル化されることを確かめた。すなわち、脂質修飾リパーゼはエステル化反応を利用してラセミのアルコールを光学分割できる触媒になった。3)脂質修飾コレステロールオキシダーゼを作製し、有機溶媒中でコレステロールのコレステノンへの位置選択的酸化反応を行った。従来の水溶液中の反応ではコレステロールの難水溶性のためほとんど反応が進行しないが、有機溶媒中では、高濃度で反応を行うことができた。得られた粉末は酵素の親水性表面が疎水的な脂質分子で被覆されているので水には溶けず、ベンゼン、イソオクタン、エーテルなどの有機溶媒にのみ可溶となった。設備備品として購入した紫外可視検出器とデュアルポンプを液体クロマトグラフィーに接続して、脂質修飾酵素中のたんぱく含量を測定した。3)脂質修飾コレステロールオキシダーゼを作製し、有機溶媒中でコレステロールのコレステノンヘの位置選択的酸化反応を行った。
潰瘍性大腸炎と一酸化窒素合成酵素との関連性に関する研究

[目的・方法]活動期潰瘍性大腸炎(UC)では、主にinducible typeの一酸化窒素合成酵素(以下、iNOS)を経由し一酸化窒素(NO)が発生するといわれている。NOは、数秒で代謝されるため、生体中で検出するのは難しい。そのため、本研究ではUCの病態とその進展にNOがいかに関与するかを検討するため、抗ヒトiNOS抗体およびiNOScDNA probeを作製し、UC患者の腸管組織を用いてiNOSの発現、分布について免疫組織学的に検討を行った。また、UC患者血清を用いてNOの代謝産物であるNO_2^-,NO_3^-の測定も行った。[結果・考察]UCの活動期の患者血清のNO_2^-,NO_3^-濃度は正常コントロールに比べ有意に高値であり、UCの活動期では全身においてNO産生の亢進が考えられた。作成したiNOS抗体はELISA法およびWestern blot analysisで特異性を確認した。活動期UCの生検組織を用いたWestern blot analysisでは、分子量130KDにbandがみられ、組織中にiNOSタンパクが確認された。iNOS抗体を用いた検討では潰瘍性大腸炎患者の活動期の潰瘍底又は潰瘍周囲に出現した炎症性細胞1000個あたり450±30個のiNOS陽性細胞が認められた。非活動期および正常部位でiNOSの発現はほとんど認められなかった。これら、iNOS陽性細胞は形態的特徴および免疫二重染色から好中球,マクロファージ,繊維芽細胞,血管内皮および血管平滑筋であった。さらに、in situ hybridization法でも同様の細胞にmRNAの局在が認められた。以上より、UCの活動期にはmRNAレベルおよびタンパクレベルでiNOS発現が認められた。このことは、UCではIL-1β,TNF-α等のサイトカインやエンドトキシンの産生亢進が報告されており、これらの刺激により誘導されたiNOSがNOを介して、UCの病態に重要な働きをしている可能性が示唆された。
制御性T細胞を用いた抗腫瘍免疫の増強効果に関する研究

腫瘍を効率よく排除するために自己あるいは腫瘍抗原に対して反応するTリンパ球数を増加させることが必要である。申請者らは自己・腫瘍抗原に反応するTリンパ球を増加させる方法としてCD4+CD25+制御性Tリンパ球(Treg)に着目した。従来の研究により、Tregは自己応答性Tリンパ球および抗腫瘍に必須であるCD8陽性Tリンパ球の活性化の抑制に寄与していることが知られている。そこで本申請ではマウス腫瘍移植モデルでTregの抗腫瘍免疫への関与を明らかにすること、またTregを無力化することで抗腫瘍免疫を増強しうる戦略を考案することを研究目標とした。平成14年度は、Tregをあらかじめ除去することで癌ワクチン効果が増強するか否かを検討することと、Tregに特異的に発現する分子を見いだすことを研究目標とした。TregのマーカーとしてはCD25が用いられるが、活性化したTリンパ球もCD25を発現するためにそれ以外のTreg特異的なマーカーを見出すことはTregをin vivoで消失させる際に非常に有用である。申請者らは、Tregを除去することにより癌ワクチン効果が増強することをマウス腫瘍移植モデルで明らかにした。また、定法によりTregを認識するハイブリドーマを作製し、Tregに特異的に反応する数種類のハイブリドーマを樹立した。現在その認識分子についてはさらなる解析を遂行中である。
ニホンナシとリンゴの属間雑種による果樹新品種の創成

ニホンナシ及びリンゴにお互いのもつ有用遺伝子を導入する目的で,正逆交雑を行い,胚培養法,不定芽誘導法,実生法を用いて育成した属間雑種の生育特性,交配親和性,病害抵抗性及び果実品質について調査した。得られた属間雑種の表現形質は母本に類似している反面,新梢も葉におけるアトシアニンの発現性や父本の台木に対する接ぎ木親和性の向上も認められた。花芽が多く着手した系統については,蕾期にニホンナシ及びリンゴの栽培品種の花粉を受粉して,交配親和性を検討した結果,これらの雑種は,多くナシやリンゴの品種の花粉と不親和性を示す系統が多く.また,同じS遺伝子型の品種間でも親和性に差異がみられるなど,複雑な交配親和性を示した。一方,ナシ黒星病,リンゴ斑点落葉病に対する検定を行ったところ,ナシを母本とした雑種では,両病に対する遺伝子分離が様々に現れるが,リンゴを母本としたものでは,両病に対してほとんどすべて抵抗性を示した。また,リンゴ黒星病については,リンゴを母本とする雑種のうち1系統が,ナシ黒星病については,ナシを母本とする雑種のうち3系統が,それぞれ抵抗性を示した。結実した雑種果実の形態は,一般に母体に類似していたが、これらの中には大玉で糖度の高い有望系統もみられ,糖及び有機酸の組成も,ニホンナシとリンゴの中間的な組成を示す系統も認められた。1.ニホンナシとリンゴの属間雑種の生育特性とアイソザイム分析による遺伝解析(伴野.建石)これまでに育成された110系統余りの属間雑種について、新梢や葉の形態的特性,アントシアニンの発現性,ナシやリンゴの台木に対する接ぎ木親和性,光合成特性等を調査した。これらの結果から、属間雑種個体の表現形質は母本に類似している反面,アントシアニンの発現性や父本の台木に対する接ぎ木親和性の向上等、父本の遺伝子もかなり導入されていることが明らかになった。また,これらの属間雑種の光合成活性は、自根樹では低いものの,接ぎ木によって母本と同程度に回復することも明らかになった。一方,これらの属間雑種の表現形質が両親の中間を示さず、むしろ母本に類似する原因について明らかにするために、パーオキシダーゼ及びエステラーゼのアイソザイムの発現について解析した。その結果,属間雑種における両酵素の遺伝子発現は、表現形質と同じように,母本の遺伝子が強く現われるが、ニホンナシを母本とする系統において、表現形質に父本のリンゴの遺伝子が強く発現しているものでは、リンゴの特徴的なバンドが強く発現する傾向が認められた。属間雑種におけるナシ黒斑病,リンゴ斑点落葉病,リンゴ黒星病の検定と遺伝解析(田平)これらの属間雑種について、上記の病害に対する検定を宿主特異的毒素及び胞子接種にて行なった。その結果,ナシ黒斑病,リンゴ斑点落葉病について、ナシを母本とした雑種では、両病に対する遺伝分離が様々に現われるが、リンゴを母本としたものでは、両病に対してほとんどすべて抵抗性を示した。また,リンゴ黒星病については、ナシを母本とするものでは、すべて抵抗性を示し、リンゴを母本とするものでも28系統のうち、7系統が抵抗性と判定された。1.属間雑種の生育特性と果実品質の比較調査並びに遺伝解析(伴野・建石分担)これまでに育成された100系統余りの属間雑種について,昨年度に引き続き,生育特性及び接ぎ木親和性を調査した。2年間にわたる接ぎ木親和性の調査から、一般に、属間雑種を接ぎ木繁殖する場合,その母本の属と同じ台木で親和性が高いことが判明した。一方,これらの雑種は,昨年,早いもので育成6年目を迎え,そのうち,ニホンナシを母本とした11系統及びリンゴを母本とした1系統の合計12系統が初めて開花・結実した。

花芳が多く着生した系統については,蕾期にニホンナシ及びリンゴの栽培品種の花粉を受粉して,交配親和性を検討するとともに,結実した果実については収穫期に果実品質を調査した。その結果,これらの属間雑種は,大半のナシやリンゴの品種と不親和性を示すものが多く,同じS遺伝子型の`新水'と`幸水'でも親和性に差異がみられるなど,複雑な交配親和性を示した。また,ナシを母本とした雑種の果実は,一般にナシに類似していたが,糖度も1314度と高い系統が多く,リンゴのように果皮にほとんどさびがみられず,果皮が滑らかで,香りが強い系統もみられた。さらに,属間雑種におけるアイソザイムの遺伝子型を明らかにする目的で,ニホンナシ品種及び交雑系統について,各酵素のアイソザイム分析を行ない,各酵素の遺伝子型を決定することができた。2.属間雑種におけるリンゴ及びナシ黒星病の検定と遺伝解析(田平分担)これらの属間雑種について,上記の病害に対する検定を胞子接種法で行なった。その結果,リンゴ黒星病については,リンゴを母本とする雑種のうち,1系統が抵抗性と判定された。1.属間雑種の生育特性と果実品質の比較調査(伴野・建石分担)これまでに育成された100系統余りの属間雑種について,昨年度に引き続き,生育特性及び接ぎ木親和性を調査した。2年間にわたる接ぎ木親和性の調査から,一般に,属間雑種を接ぎ木繁殖する場合,その母本と同属の台木で親和性が高いが,父本と同属の台木でも良好な生育を示す系統も認められた。一方、これらの雑種は育成7年目を迎え,そのうちニホンナシを母本とした23系統及びリンゴを母本とした7系統が開花・結実した。花芽が多く着生した系統については,蕾期にニホンナシ及びリンゴの栽培品種の花粉を受粉して,交配親和性を検討するとともに,結実した果実については,収穫時に果実品質を調査した。その結果,これらの雑種は,多くのナシやリンゴの品種の花粉と不親和性を示すものが多く,また,同じS遺伝子型の品種間でも親和性に差異がみられるなど,複雑な交配親和性を示した。結実した雑種果実の形態は,一般に母本に類似していたが,これらの中には大玉で糖度の高い有望系統もみられ,糖及び有機酸の組成も,ニホンナシとリンゴの中間的な組成を示す系統も認められた。2.属間雑種におけるリンゴ及びナシ黒星病の検定(田平分担)これらの属間雑種について,上記の病害に対する検定を昨年度に引き続き,胞子接種法で行なった。その結果,リンゴ黒星病については,リンゴを母本とする雑種のうち1系統が,ナシ黒星病については,ナシを母本とする雑種のうち3系統が,抵抗性と判定された。
筋萎縮性側索硬化症におけるミクログリア介在性の炎症機転の解析

1.ALSに対するミクログリア関連炎症機転の解析と治療法の開発孤発性ALS42例、孤発性SPMA12例、その他の非炎症性神経疾34例の髄液上清中の27種のサイトカイン・ケモカインの多項目同時測定を行った。また3群間での濃度の比較と有意差を認めた項目に関して、髄液サイトカインと臨床スコアとの相関を解析した。ALS患者群ではMCP-1と重症度を示すALSFRS-Rとの間では負の相関を認め、MCP-1と髄液蛋白濃度との間で正の相関を認めた。また、MIP-1βとALSFRS-R、罹病期間との間で正の相関、進行の速さを表すdisease progression rateとの間には負の相関を認めた。重症度高いほど髄液中MCP-1濃度が高く、重症度低いほど髄液中MIP-1β濃度が高いことが考えられた。これまでの報告で我々はALSにおいてMCP-1は運神経細胞障害的作用をもつと報告しており、MCP-1と逆相関を示しているMIP-1βには運動神経保護的作用を持つ可能性が考えられた。また、ALS髄液中で上昇していたVEGFについて検討した。6例のALS患者とコントロール6例の脊髄剖検材料を用いて、免疫染色を行いVEGFとその転写因子であるHIF-1α、およびVEGFレセプターの発現の局在を検討し、デンシトメトりーにて比較した。ALS脊髄の前角細胞ではコントロールと比較して、VEGFの発現が低下し、HIF-1αの発現が充進しており、前角細胞のデンシトメトリーにおいても有意差を認めた。また、ALS脊髄においてはアストロサイトにおいてVEGFの発現の充進を認めた。VEGFレセプターに関しては、Control群と比較してALS脊髄において、発現が低下し、デンシトメトリーでも有意差を認めた。ALS運動神経細胞では組織内虚血やIL-1β,TNF-αなどの炎症性サイトカインにより誘導されたHIF-1αからVEGFの産生に至る過程の障害、およびVEGFレセプターの発現低下によるVEGFの機能不全が運動神経細胞死に関わっている可能性があると考えられた。1. ALSに対するミクログリア関連炎症機転の解析と治療法の開発
妊娠期におけるセルフケア行動と看護介入モデルの検討

1.妊娠期のセルフケア行動の測定と健康評価、看護介入(1)助産院における妊娠期のケア都内、近郊、北陸地方の助産院4ヵ所において妊娠期のケアについて調査食事、運動、身体の観察の仕方、冷えの予防と温熱療法、安産に向けた健康管理、などの項目が抽出された。(2)セルフケア行動に関する評価尺度は信頼性・妥当性の検討が十分とはいえず、健康評価尺度の有効性が見出された。(3)看護介入においてはその評価としてのエビデンスが十分とはいえないが、(1)におけるケアの実施により、安全でかつ産婦と家庭の満足度の高い出産となることが経験上明らかである。しかし、看護介入の評価としてのエビデンスは十分とはいえず、効果の検証が必要である。2.出産施設の違いによる妊娠期のケアと分娩結果に関する国内外の文献検討(1)海外の結果The Cochrane Libraryによるシステマティックレビュー2編と進行中のプロトコール1編の検討を行なった。家庭的施設分娩vs.一般的施設分娩のシステマティックレビューにおいては、いくつかの項目において家庭的施設分娩にわずかな利点が認められた。ケアの評価は、出産場所の評価から、施設内機能別システム評価、ケア提供者の職種の違いを含むケア提供内容へと変化している。(2)国内の結果助産院と病院の比較を検討したところ、国内における現状ではエビデンスとなる客観的データが十分とはいえない。今後のアウトカム指標として、安全性と快適性の両面からの指標を用いた研究が望まれる。(3)妊娠期の看護介入妊娠期のセルフケア行動は、助産師のケア内容に大きく影響を受けており、看護介入の評価としてのアウトカム指標が見出された。《第1段階》国内外の妊産褥婦のケアに関する看護関連の文献を収集し、レビューした。・疾病管理とは異なる妊娠期のヘルスニーズの把握《第2段階》対象者選択のための諸施設の予備的調査・産科病棟・外来を有する病院、産婦人科、混合病棟・外来を有する病院、助産所のケアの施設間の質的な違いを明らかにした。特に、病院、助産院を選択する妊産婦の選択理由と出産情報の取り方とその内容を調査した。各施設を利用する妊産婦とその家族の消費者ニーズ、および医療従事者に求められているケアを把握したうえで、妊産婦同士の情報交換、ネットワークの実態を調査した。地域に根ざした子育て広場の活動、メーリングリストを活用した出産・育児支援サイトによるネットワークづくりを通し、具体的な活動報告を収集した。《第3段階》各施設で働く助産師を中心とする医療スタッフ、サポートチームの実態調査・医療的介入の有無にかかわらず、妊産婦が安心して妊娠期を過ごし出産に臨めるような看護のサポート体制について報告発表から情報収集した。妊娠中の健康管理、妊娠期の意志決定、家族の出産立会い、バースプランに対して助産師はどこまで対応できているのか、妊産婦のニーズと助産師の必要と考えているケアとに違いはないか、調査中である。・現在、具体的な施設訪問とインタビューの準備段階である。妊娠中の妊婦のセルフケア行動を測定するための、主要概念と尺度について検討した。看護領域で通常使用されるオレムのセルフケア看護アプローチや、保健医療領域で用いられるセルフケア支援の考え方では、母体と胎児の健康に配慮しながら出産を迎える妊娠中という特殊な条件のもとにおけるセルフケア行動を測定するのには限界があった。そこで、妊婦のセルフケア行動に限定した尺度を検討した。「セルフケア行動意図尺度」「セルフケア行動動機付け評定尺度短縮版」(2004真鍋ら)の尺度が開発され信頼性・妥当性が検証されている。臨床において妊娠期にスクリーニングする目的で使用するには簡便で実施可能であり支援につなげるために有効なツールではあるが、妊婦の実際の行動とその背景にある信念、妊娠・出産に対する期待、自分自身の健康状態の知覚などを詳細に分析するにはいくつかの課題を残すことがわかった。看護介入に生かすためには行動そのものの他に何らかの動機付けを測定することに変わりはないが、その項目を厳選させていくために海外文献も含め、再度検討していく必要がある。妊娠期の健康管理の研究を進めてきたが、病院・助産院などの施設によりそのサポートに違いがあることが明らかとなった。妊娠期の看護介入(助産ケア)を評価するためには、ケアの受け手である妊婦とその家族、ケアを担っている助産師の双方の視点が重要であり、その情報収集と調査からいくつかの知見が得られた。病院に比べて助産院を希望する家族は、妊娠・出産に対して自ら産む姿勢が強く見られ、自分自身の健康管理が出産・育児のアウトカムにつながることから、専門家に依存することなく生活行動の改善を図っていた。一方、病院を選択した家族は、異常が起きた時の医療施設の対応に安心感を抱いており、主体的に出産するというよりはむしろ施設のシステムに自分を合わせるという行動が見られた。これは、研究対象者を選択する際に考慮すべき点であり、施設間の違いを含めて調査した方がより妊婦のセルフケア行動が把握できるということが新しく見出された。研究対象者のサンプリングにあたり、病院を2施設、助産院を3施設選び出し、外来に訪れる妊婦の数、妊娠期のケア内容、施設の倫理委員会等の情報を得て現在検討中である。

(2)セルフケア行動に関する評価尺度は信頼性・妥当性の検討が十分とはいえず、健康評価尺度の有効性が見出された。(3)看護介入においてはその評価としてのエビデンスが十分とはいえないが、(1)におけるケアの実施により、安全でかつ産婦と家庭の満足度の高い出産となることが経験上明らかである。しかし、看護介入の評価としてのエビデンスは十分とはいえず、効果の検証が必要である。2.出産施設の違いによる妊娠期のケアと分娩結果に関する国内外の文献検討(1)海外の結果The Cochrane Libraryによるシステマティックレビュー2編と進行中のプロトコール1編の検討を行なった。家庭的施設分娩vs.一般的施設分娩のシステマティックレビューにおいては、いくつかの項目において家庭的施設分娩にわずかな利点が認められた。ケアの評価は、出産場所の評価から、施設内機能別システム評価、ケア提供者の職種の違いを含むケア提供内容へと変化している。(2)国内の結果助産院と病院の比較を検討したところ、国内における現状ではエビデンスとなる客観的データが十分とはいえない。今後のアウトカム指標として、安全性と快適性の両面からの指標を用いた研究が望まれる。(3)妊娠期の看護介入妊娠期のセルフケア行動は、助産師のケア内容に大きく影響を受けており、看護介入の評価としてのアウトカム指標が見出された。