hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
抗癌剤の作用におけるASK1の関与

リンパ性白血病細胞株のJurkatに、いずれもC末端側にEGFPを付けた野生型およびdominant negativeに働く変異型ASK1を発現させるexpression vectorを導入し安定発現株を得たところ、変異型ASK1発現株の一つに抗癌剤に対して著しく抵抗性のものが得られた。ただし、EGFPを指標としflow cytometryを用いて変異型ASK1蛋白質の発現量を検討したところ他の安定発現株と比べてその量は多くはなかった。抗癌剤抵抗性Jurkatは、doxorubicin、vincristine、AraC等、作用機序の異なる種々の抗癌剤およびH_2O_2処理によってアポトーシスを起こす細胞の割合が親株の10分の1以下であった。また、抗癌剤抵抗性Jurkatは極めてアポトーシスを起こしにくいが、種々のストレスに対する細胞周期の変化はほとんど親株と同様であることが、細胞周期の分布をPI染色、アポトーシスをTUNEL法で検出する2次元のflow cytometryにより明らかとなった。従って、細胞周期停止とアポトーシスは異なる経路で制御されていて、変異型ASK1が後者の経路のみを抑制することが示唆された。低濃度の抗癌剤を60-72時間という比較的長期間作用させることによって細胞周期の停止が起こるが、アポトーシスは惹起されず、細胞は次第にネクローシスを起こした。抗癌剤抵抗株ではこの様なネクローシスも起こりにくく変化しており、アポトーシスとネクローシスが一部の経路を共有していることが予想された。白血病細胞株Jurkatにwild-typeまたはdominant-negativeのASK-1-EGFPの発現plasmidをtransfectし、G418存在下で培養してstableの細胞株を樹立した。これらの細胞株において、mutant ASK-1のtransfectantは、wild-typeのそれに比べてdoxorubicin、Ara-C等の抗癌剤による12-24時間の処理後のアポトーシスが60%程度に低下していた(TUNEL法)。抗癌剤への感受性の差異がASK-1の不活性化によることを生化学的に示す目的で、wild-typeおよびmutant ASK-1のtransfectantでの抗癌剤によるp38,JNKのリン酸化をphosphospecific antibodyを用いたWestern blottingで検討した。dominant-negativeのASK-1-EGFPの発現細胞ではp38およびJNKのリン酸化が少ない傾向が認められたが、ASK-1の活性化を十分には抑制していない可能性も考えられた。現在、IRES vectorを用いてEGFPとの融合型でないmutant ASK-1を発現したJurkat細胞を樹立中で、これを用いて同様の方法で抗癌剤感受性へのASK-1の関与を確定する予定である。
フレッシュコンクリートの材料分離挙動に関する物性論的アプローチ

本年度は、粒子集合体における粒子の実際の動きを把握するための3次元可視化実験を継続し、この結果を解析して研究分担者(李)が開発したフレッシュコンクリートの研究手法と力学構成則に必要な検証・修正を加え、修正した力学構成則を適用して、静的および動的条件下での粒子移動について理論解析、数値解析および実験検証を行うことを計画した。これらの計画に対する実績を以下に示す。1.粒子変位挙動に関する2次元および3次元の解析結果を基に、研究分担者(李)が提案したフレッシュコンクリートの多相構造モデルを検証し、粒子群ごとの移動を定量化することによって、フレッシュコンクリートの力学構成則を修正した。2.検証した多相モデルに基づいて、粒子間の相互作用を考慮した粒子群ごとの移動がもたらすせん断ひずみを定量化して、フレッシュコンクリートの粗骨材の分離ひずみと静的せん断応力の関係式、すなわち分離構成則を誘導した。また、得えられた分離構成則を用いて、高流動コンクリートが間隙部を通過する場合における粗骨材の滞積現象および閉塞メカニズムを定量的に解明した。これらの成果については投稿準備中である。3.得られた力学構成則に基づいた動的粘塑性サスペンション要素法によって、振動力が作用する場合における粗骨材の沈降分離および粗骨材の寸法・形状の影響について解析的な考察を進めていると同時にこれまでに得られた理論的考察結果を実験的に検証するための実験装置の設計・試作に着手した。
自己細胞由来誘導性血小板成長因子剤によるパーソナル治療

血小板には、止血・凝固作用に加え、含有する複数の成長因子による創傷治癒促進作用がある。現在、患者自身の血小板を濃縮して利用する多血小板血漿が臨床応用されているが、その調整は不安的であり効果も一定ではない。近年、自家細胞をソースとした血小板作成が可能となり、核を含まない血小板は、最も臨床応用に近い素材の1つとして注目されている。われわれはiPS細胞よりも安全に線維芽細胞をソースとした血小板作成に成功し(Matsubara et al. Blood 2012)、止血・凝固作用、マウスでの創傷治癒促進作用を確認してきた。本研究では、自己細胞由来誘導性血小板を臨床応用する疾患の選定とプロトコールの決定、必要な安全性の検証を行い、血小板に含まれる成長因子による、パーソナル治療剤の臨床応用に向けた最終的な検証を目的とする。平成28年度は、糖尿病モデルマウスを選択し創傷に大量培養したヒト線維芽細胞由来血小板を投与して創傷治癒能力の判定を行った。平成29年度は、臨床応用にむけたヒト線維芽細胞由来血小板の投与方法の検討やヒト線維芽細胞由来血小板の作製過程における安全性確認として既存の試料から次世代シーケンサーによる有害な突然変異のチェックを行った。また、より実際の臨床応用の仕方にそった治験に向けて、非臨床安全性試験のための試料獲得準備やそのための倫理申請を行った。平成30年度は、非臨床安全性試験を実行する予定である。また今後は、治験計画の策定を行っていく予定である。動物実験の成果をもとにProof of Conceptを取得したと考え、臨床応用に向けた安全性試験を行っていくことにした。手始めに既存の試料から次世代シーケンサーによる有害な突然変異のチェックを行い、作製プロトコールの安全性が確認できたことから、臨床応用のための治験に向けて、まずは信頼性基準を得るための非臨床安全性試験を行ってい行くことにした。現時点では、作製工程の品質管理の検討や実際の臨床応用でターゲットとなる正常成人からの脂肪を入手するための倫理申請やこれを材料にしたヒト線維芽細胞由来血小板の作成経路の決定を行った。引き続き、治験の策定準備をすすめていく予定である。POCを取得できた時点で、治験を目標に研究を進めていくことにしている。まずは信頼性基準の獲得を目指し、PMDAとの相談から対面助言を行い、非臨床安全性試験を作製工程と品質の両面から行っていく。すでに実際の臨床応用でもちいる正常成人の脂肪を入手する倫理審査は通過しており、1例目を終えヒト線維芽細胞由来血小板の作製に至ったところである。引き続き症例数を重ね、品質管理や安全性確保の検討を行った後、治験プロトコールの策定を行っていく。
乳酸の代謝活性によるミトコンドリア膜乳酸輸送タンパク質の適応変化

本申請課題では、ヒトがより効率よくエネルギーをつくり、またエネルギーを使っているのかに注目した。特に乳酸をエネルギー源として捉え、乳酸の細胞間移動を司るタンパク質について研究をおこなった。結果から、このタンパク質が増えれば、ヒトはより効率良くエネルギーを利用することが可能であると示唆された。この様な知見は、健康増進の為の運動などについても、有用であると期待される。本研究の目的は、生体がより効率よくエネルギーをつくるために、解糖系代謝と酸化系代謝を結ぶ乳酸に注目し、乳酸の代謝調節を解明することである。この研究課題について、本研究は2年間に渡る実験実施を計画している。その初年度となる平成19年度には、特に以下の課題について取り組んだ。・代謝活性モデルの測定評価システムの構築本研究では実験動物を用いて、生体内のエネルギー代謝活性における乳酸の有効利用について検討する。そのために本年度は、実験動物の骨格筋よりミトコンドリアを単離精製し、そこからmitMCTを定量するための測定評価システムの構築に取り組んだ。骨格筋からのミトコンドリアの抽出方法については、申請者が2004年に在籍していたA.Bonen教授の研究室より、その詳細な情報を提供して頂いた。彼らの研究室は2007年に、骨格筋からミトコンドリアを抽出する方法(Journal of Physiology.582,1317-35)を、高精製度で達成しているが、その方法を本研究課題において再現すべく、課題に取り組んだ。まず本年度の上半期には、ミトコンドリア抽出と酸化能力測定に必要な器材や消耗品などを揃えることに努めた。特に実験機器については、所属するセンターだけではなく、東京大学・八田研究室にも多大なる協力を頂いた。さらに本年度の下半期には、実際にミトコンドリアの抽出を試行した。実験では、東京大学で動物を飼育し、実際に摘出した骨格筋を用からミトコンドリアを抽出する方法を確定することが出来た。本年度の計画目標であった、代謝活性モデルの測定評価システムを構築することが達成された。これらの結果をふまえて、次年度には、実験動物を用いて、代謝活性を変化させたモデルを作成し、骨格筋におけるミトコンドリア膜乳酸輸送タンパク質の適応変化を検討する。本研究の目的は、生体内のエネルギー代謝において、解糖系代謝と酸化系代謝を結ぶ乳酸の代謝調節を解明することである。そこで、乳酸を細胞の内外へ輸送するタンパク質に注目し、このタンパク質(MCT)が何によって増減するのか、その適応のメカニズムについて検討を行った。さらに、細胞膜に存在するMCTについてだけではなく、ミトコンドリア膜にMCTが存在するのかについても分析を行った。この点において、本研究は非常に独創的であり、かつ学術的にも重要性が高いものであるといえる。実験結果から、1)MCTがミトコンドリアに局在する可能性が示唆された。また解糖系の活性化によって、1)細胞膜のMCTは増加する、2)ミトコンドリアのMCTも増加する可能性が示唆された。これらの結果から、ミトコンドリアにMCTが存在すれば、生体は解糖系と酸化系とをより効率よく連携させることが可能であるといえる。加えて、解糖系の終末物質である乳酸が、生体内において新たな意味を持つ可能性が示唆された。それは2つのエネルギー代謝系を結ぶ重要な役割をもつということである。本研究によって、生体の代謝を調節する細胞膜タンパク質について、その適応変化の一部が解明された。この基礎的な研究結果は、我々がより健康に生きるうえで、懸念されているエネルギー代謝の諸問題と関連付けることができる。それらは、栄養摂取、運動(療法)、さらに生活習慣病といった身近な問題である。この点において、本研究は非常に重要な意義をもつものであると考えられる。
日本の映画興行に関する歴史的考察―テレビ産業成立以降の映画産業の可能性をめぐって

本研究は、テレビ産業成立以降の1950年代から70年代において、映画興行に惹起した問題と、それに対する興行者たちの対策を解明するものであり、映画文化を支えていく、これからの興行活動に有益な視座を提供することを目的としている。以上の研究を遂行するため、早稲田大学演劇博物館、日本大学芸術学部図書館、松竹大谷図書館などを訪れ一次言説資料の収集にあたった。また、手付かずで放置されている神戸映画資料館の膨大な資料の整理を前年から継続しておこない、その結果、これまで映画研究者が手にすることができなかった、多くの貴重な一次資料の発掘に成功した。さらに、こうした文献調査だけでなく、前年度に続き当時の映画界の状況を知る映画関係者に、聞き取り調査を実施した。今年度は、松竹関西支社長・大角正氏から話を聞き、過去だけでなく現在の映画興行の実情についても多くを学んだ。1960年代から映画産業は衰退し始め、70年代に入ると、大手映画会社が相次いで倒産し、映画会社の経営は大きな変化を強いられることになった。その変化がどのようなもので、そして今に至るのかをということを大角氏の話を参考に、みずから調査を重ねた。その成果として、現在、「邦画5社の興行戦略-1960年代以降の斜陽化のなかで」という論文を執筆している。また、岩波書店から執筆依頼を受け、昨年1月に提出した論文「興行者たちの挑戦-1950年代から60年代の日本の映画産業」では、今年度におこなった新たな調査情報を、改訂を重ねるなかで盛り込み、より充実した論文を書き上げた。その結果、昨年9月に刊行された『観る人、作る人、掛ける人(日本映画は生きている第3巻)』に採録された同論文は、編集委員会諸氏から高い評価を得ることができた。以上の研究を遂行するため、まず取り掛かったことが、映画興行の仕事に従事する映画会社、映画館経営者の当時の動向を記した一次言説資料を収集することだった。主に神戸映画資料館、早稲田大学演劇博物館、日本大学芸術学部図書館、松竹大谷図書館に赴き、一次資料の調査・収集にあたった。そのなかで、神戸映画資料館には特に興味深い資料が多数存在することがわかったが、それらの資料が未整理のまま散在している状態であったので、その問題を解決すべく、膨大な書籍・雑誌等を整理しながら、意中の資料を探す作業に従事した。さらに、こうした文献調査だけでなく、当時の映画界の状況を知る映画関係者に、聞き取り調査を実施した。映画会社の松竹で長年セールスマンを務め、映画館への作品の売り込みをしていた方からは、映画が製作された後の、配給ならびに興行の仕事の過程を詳しく教わった。一方で、映画作品を買い付ける側である映画館主の方からは、映画館の経営に関わる全般的な話を聞き、相次いで映画館が閉館していく状況下でどのような対策を講じたのかを詳しく話してもらった。他にも、多くの映画関係者に取材をし、有益な情報を提供してもらった。こうした聞き取り調査によって、収集した文献には記されていなかった事実、不明だった点が判明し、研究の精度向上が図られた。以上の研究の成果を、2009年度の日本映画学会において口頭研究発表をおこなった。さらに、2010年1月には、今年刊行予定の映画学叢書『日本映画は生きている(単行本全8巻)』(岩波書店)第3巻に寄稿し採録が決定した。
高圧下におけるタンパク質の結晶化過程のその場観察

1.高圧その場観察システムを立上げた。現有の倒立型透過位相差顕微鏡にあわせて、ダイヤモンドアンビルセルを設計した。その圧力測定に、レーザーによるルビー蛍光シフトを利用するシステムを付加し、コンピューターで自動計測ができるようにした。2.HEWリゾチームの核形成の圧力による制御の可能性を見出した。ダイヤモンド・アンビルセル内でリゾチーム結晶核を形成させ、温度一定の条件下で圧力を変化し、圧力増大とともに核の数が減少することを見出した。これは、核の多発することを制御する上で重要な発見である。3.HEWリゾチームの溶解度の圧力依存性の発見25±0.2°Cに温度を固定し、圧力を510MPaから0.1MPaに減圧することで、リゾチーム単結晶(正方晶系)が成長することが観察された。即ち、リゾチームの溶解度は圧力増大にともなって増加することがはじめて明らかとなった。4.HEWリゾチームの晶癖変化の圧力依存性を見出した。(101)面と(110)面の成長速度の比は圧力増大とともに単調増加し、C軸に長い単結晶となる。1高圧その場観察システムの立ち上げ(1)現有の倒立型透過位相差顕微鏡上に載せるダイヤモンドアンビルの設計と作製を行った。(2)圧力計測装置の作製を行った。そのため、アルゴンレーザーによるルビーの蛍光シフトを精度よく測定できるよう、パーソナルコンピュタを用いるソフトを作った。これにより、圧力の自動計測が行えるようになった。しかし、リゾチームが酵素活性をもつのは常圧から5kbarまでとされているので、現在、圧力精度をより向上させる工夫をしている。2リゾチームの結晶化過程の観察(1)試薬の純度により、結晶化が左右されることが明らかとなったのでいくつかのメーカーのものをテストし、好条件のものを見出した。(2)高圧実験の前に、常圧でのリゾチームの結晶成長の特長を実験で調べ、正方晶系と斜方晶系の両結晶を自由に育成できるようにした。(3)核形成を制御するため、多数の下地結晶を用いて、エピタオシーの有無を調べた。しかし、良いエピタキシー関係は見出せなかった。3高圧力下での実験(1)リゾチーム倍液をダイヤモンドアンビル中で加圧した。常に多数の核が形成された。これらの核が合体し、アメーバー状となって凝固した。X線でラウエ写真を撮ったが回析斑点は全く出ず、アモルファスであった。圧力はリゾチームをゲル化させるようである。(2)まず、常圧下でリゾチーム単結晶の周囲の濃度分布を調べ、高圧下の同様な実験の下準備をしている。そのため、薄いセル中に溶液と結晶を入れ、光干渉法で干渉縞のシフトを測定している。3.HEWリゾチームの溶解度の圧力依存性の発見25±0.2°Cに温度を固定し、圧力510MPaから0.1MPaに減圧することで、リゾチーム単結晶(正方晶系)が成長することが観察された。即ち、リゾチームの溶解度は圧力増大にともなって増加することがはじめて明かとなった。
新生代を通した太平洋の溶存酸素極小層の消長

東赤道太平洋で行われたIODP PEAT航海で得られた堆積物を検討した結果,東赤道太平洋の海域では,新生代を通して溶存酸素極小層の下限が少なくとも水深2700m以浅であったことが見出された。また,東北地方に分布する第三紀マンガン酸化物のOs同位体を分析した結果,北西太平洋においては,マンガン酸化物の元素の起源になった溶存酸素極小層は数Maに渡って発達した可能性が示された。昨年度は,研究代表者・分担者が二つの航海(IODP Exp.321航海Pacific Equatorial Age Transect, JAMSTEC平成20年度深海調査航海)に乗船し,新生代の堆積物およびマンガンクラストを採取する,ということが重要な計画であった。しかし,前者の航海は,原油高騰等の理由により,今年度に延期となった。そのため,赤道太平洋海域におけるデータは得られていない。一方, JAMSTEC航海の方は海況にも恵まれ,多くの水深から多数のマンガンクラスト試料が得られた。船上において,水深ごとのクラストの厚さの分布等の予察的なデータが得られたが,現在のところ,試料採取地点付近における溶存酸素極小層との関連は見いだされていない。また,基礎的な項目についての記載は,現在実施中である。さらに,これまでのデータベースから,様々な海域,水深,時代から得られたマンガン酸化物を対象として,時空分布の見直しを行った。これにより,過去一億年間の大洋では,特に深層域において,マンガン酸化物の沈殿は継続されていたこと,が認識された。ただし,現在の手法では,時間分解能が不十分なため,マンガン酸化物の成長史における成長停止の時期の特定は曖昧なままである。この点は今年度の課題であり, Os同位体を用いた年代決定を行う予定である。以上の成果の詳細については, 2009年1月の古海洋シンポジウム,および2009年3月のPrecambrian World 2009において公表し,世界の最先端の研究者と議論を重ねることができた。昨年度,研究代表者は研究航海(IODP Exp.321航海Pacific Equatorial Age Transect : PEAT)に乗船し,新生代の堆積物の記載・採取を行った。この航海および姉妹航海であるExp.320航海の結果,東赤道太平洋の海域では,新生代を通して溶存酸素極小層の下限が少なくとも水深2700m以浅であったことが確認できた。さらに,堆積・続成環境に関しては,後期中新世から鮮新世にかけて,大量のドロマイトが生成されたことが明らかとなった。現在その詳しい成因および時空分布については検討中である。また,得られた堆積物のうち,後期中新世の炭酸塩堆積物については,約10万年の時間解像度でOs同位体比を分析中であり,同時代の海水Os同位体比の復元がなされつつある。これまでの低時間解像度の分析では同時代の海水Os同位体比は単調に上昇すると考えられていたが,今回の分析により,複雑な変化パターンの存在が認識できた。これらの解析を進めることより,各種海洋イベントおよび気候イベントと海洋の垂直循環の関係が明らかにできると考える。また昨年に継続して,各種データベースから,様々な海域,水深,時代から得られたマンガン酸化物を対象として,時空分布の見直しを行った。このなかから代表的なマンガン酸化物を抽出後,その成長史を復元することから,IODP Exp.320航海および321航海の堆積物記録から明らかにできなかった溶存酸素極小層の上限について,制約条件を与えたいと考える。昨年度からの継続で,研究代表者が乗船した研究航海(IODP Exp.321航海Pacific Equatorial Age Transect:PEAT)により得られた中後期中新世の遠洋性炭酸塩堆積物を対象にOs同位体比,Re,Os濃度の分析を行った。分析した時代は14Ma11Ma,分析頻度は約4万年である。硝酸-過酸化水素溶出部のRe濃度は0.0212pg/g間の値をとり,極めて大きく変化した。Os同位体比については,全岩,硝酸-過酸化水素溶出部について分析したが,両者において有意な相違は見いだせず同じ値を有していた。このことは,今回分析したような遠洋性炭酸塩堆積物では,微量に含まれるケイ酸塩砕屑物からのOsの寄与は極めて小さいことを意味している。また,先に示したRe濃度が非常に高い層準では,Os同位体も高く,堆積後の187Reから187Osへの壊変が反映していることが明らかとなった。高Re層準において,良好なアイソクロンが得られることは,埋没・続成過程でRe-Os系が閉鎖系に保たれていたことを示唆している。187Reからの壊変分を考慮したOs同位体比は,14Maから11.8Maにかけて高くなり,そこから11Maに向かい徐々に低くなっている。

これらの傾向は,これまで公表されている,より荒い時間の精度の海洋Os同位体比の変化で示された単調な上昇とは明らかに異なっている。このことは海水のOs同位体比が「全地球的な寒冷化→大陸の侵食量の増加→大陸起源Osの海洋への大規模な流入」というような単純な図式では説明できないことを意味する。
減数分裂期の相同組換え開始機構の解明

我々真核生物の多様性は、配偶子形成過程における減数分裂を通して、父親と母親由来の染色体DNAを混ぜ合わせることで、保証されている、この混ぜ合わせは、広く保存されたDNA切断酵素Rec12/Spo11蛋白質が染色体上の特定の領域(ホットスポット)に結合することで、DNAの切断が起こり、相同組換えというメカニズムを利用して開始される。しかし、この酵素がどのような分子機構で染色体に結合し、活性化されるのかよく分かっていない。本研究は、モデル系として優れた分裂酵母を用いてRec12/Spo11複合体を生化学的に抽出し、その構成要素を質量分析によって同定し、あわせてその制御機構を明らかにし、真核生物における普遍的な多様性獲得のメカニズム解明を目指してした,これまでに大きく分けて下記3点についての知見を得た。1.分裂酵母DNA組換え開始酵素Rec12複合体の単離(基本的な分子機構の解明)2.DNA組換え開始複合体と染色体高次構造の分子間相互作用とその局在機構の解明(空間的制御機構の解明)3.DNA組換え開始複合体はDNA複製チェックポイントの制御下にある(時間的制御機構の解明)今後これらの知見を基礎として、真核生物に普遍的なDNA組換え開始機構の解明へつながると考えている、その応用的な側面として、我々を含めた高等真核生物における配偶子形成異常の原因究明、あるいは農業資源における生産性向上につながる育種開発、有用化合物含成のための遺伝的資源の開発があげられる。我々真核生物の多様性は、配偶子形成過程における減数分裂を通して、父親と母親由来の染色体DNAを混ぜ合わせることで、保証されている。この混ぜ合わせは、広く保存されたDNA切断酵素Rec12/Spo11蛋白質が染色体上の特定の領域(ホットスポット)に結合することで、DNAの切断が起こり、相同組換えというメカニズムを利用して開始される。本研究は、モデル系として優れた分裂酵母を用いてRec12/Spo11複合体を生化学的に抽出し、その構成要素を質量分析によって同定し、その制御機構を明らかにし、真核生物における普遍的な多様性獲得のメカニズム解明に寄与するものである。本年度は、Rec12/Spo11を中心とした相同組換え開始酵素複合体のプロテオミクス解析から着手した。これまでに"Rec12/Spo11を始め、減数分裂の組換えに関与すると思われる数種類の蛋白質にエピトープタグを付加した株を作製し、同調的に減数分裂を誘導する系においてこれらの蛋白質を安定に発現する系を確立し、蛋白質複合体の精製を行った。その結果、分裂酵母とは遺伝的に遠位に位置する生物種、出芽酵母において発見されたSpo11結合因子を含め、複数の蛋白質が同定された。さらに詳しく調べたところ、これらの複合体にはRec12/Spo11を中心とした複合体と、これとは異なる複合体の2種類の複合体が協調してDNA切断を行っている可能性が浮上してきた。現在、これらの複合体の時空間的相互作用について解析をすすめ、DNA切断の開始メカニズムを明らかにする予定である。本研究は、モデル系として優れた分裂酵母を用いてRec12/Spo11複合体を生化学的に抽出し、その構成要素を質量分析によって同定し、あわせてその制御機構を明らかにし、真核生物における普遍的な多様性獲得のメカニズム解明を目指している。昨年度は、Rec12/Spo11を中心とした相同組換え開始酵素複合体のプロテオミクス解析から着手し、種間を越えてよく保存された2種の複合体が存在することを見出した。本年度はさらに、これらのDNA切断複合体の1つが、染色体高次構造を形成する因子と分子間相互作用を示すことが分かった。これの意味するところは、減数分裂期のDNA切断部位は、局所的なDNA配列やクロマチン構造のみならず、高次の染色体構造と協調して制御されていることを示唆している。実際、この構造タンパク質を欠損した細胞では、ゲノムワイドでDNA切断因子群の局在に異常が認められた。現在、構造タンパク質とDNA切断複合体の相互作用の詳細について解析をしており、DNA切断開始メカニズムをマクロの視点から明らかにすることを目指している。

1.分裂酵母DNA組換え開始酵素Rec12複合体の単離(基本的な分子機構の解明)2.DNA組換え開始複合体と染色体高次構造の分子間相互作用とその局在機構の解明(空間的制御機構の解明)3.DNA組換え開始複合体はDNA複製チェックポイントの制御下にある(時間的制御機構の解明)今後これらの知見を基礎として、真核生物に普遍的なDNA組換え開始機構の解明へつながると考えている、その応用的な側面として、我々を含めた高等真核生物における配偶子形成異常の原因究明、あるいは農業資源における生産性向上につながる育種開発、有用化合物含成のための遺伝的資源の開発があげられる。
新規血管虚血負荷装置の開発と新しい虚血シグナルの同定および虚血血管再生遺伝子治療

本研究は、新しい血管虚血負荷装置の開発と、それを用いた内皮細胞での虚血応答遺伝子発現プログラムを明らかにし、その知見を虚血血管再生遺伝子治療に応用することをその目的とする。昨年度は、内皮細胞において虚血刺激によりその遺伝子発現が誘導されることが知られている血管新生因子VEGF(VascularEndothelial Growth Factor)に注目し、その遺伝子発現のシグナル機構を低酸素チャンバーを用い検討した。その結果、虚血シグナルを考える上で、酸化LDLやLysoPCのシグナル伝達に関与する経路の重要性を明らかにした。本年度は、虚血刺激のもう一つの重要なコンポーネントであるずり応力(shear stress)の低下について、平行平板型ずり応力負荷装置を用い検討した。ずり応力の増加により、血管拡張ペプチドであるC型ナトリウム利尿ペプチド(CNP)及びアドレノメジュリン(AM)の発現が亢進し、一方血管収縮ペプチドであるエンドセリン(ET)及びその産生に関与するエンドセリン変換酵素(ECE)の発現は低下した。これらのずり応力の内皮由来血管作動性ペプチド発現制御は、酸化ストレスそのものであるH202によりmimicされた。更に、ずり応力を低下させることにより、ET、ECE発現が上昇することも明らかにした。従って、虚血シグナルを考える上で、血流の減少によるずり応力の低下に伴う酸化ストレスの変化が重要であることが明かとなった。更に、ずり応力の低下によりその発現の低下するCNPのアデノウィルスを用いた血管への遺伝子導入により、血管平滑筋細胞の増殖抑制・分化誘導及び内皮細胞の再生の促進が起こることが明かとなり、CNPの虚血血管再生遺伝子治療への応用の有用性が示唆された。本研究は、新しい血管虚血負荷装置の開発と、それを用いた内皮細胞での虚血応答遺伝子発現プログラム(虚血応答遺伝子群及び新たな虚血応答エレメントの同定)を明らかにすることをその目的とする。本年度は、内皮細胞において虚血刺激によりその遺伝子発現が誘導されることが知られている血管新生因子VEGF(Vascular Endothelial Growth Factor)に注目し、その遺伝子発現のシグナル機構を低酸素チャンバー及び平行平板型ずり応力負荷装置を用い検討した。VEGFは、培養ヒト冠動脈由来内皮細胞において、2%酸素刺激によりその発現が亢進したが、その発現誘導は動脈硬化病変形成に重要である酸化LDL及びその主成分であるリゾフォスファチジルコリン(Lyso PC)によりmimicされた。しかしながら、ずり応力負荷そのものではVEGF発現に著明な変化は認められなかった。また、実際のヒト冠動脈動脈硬化病変において、病変の進展に伴って障害内皮細胞においてVEGF発現が亢進していることを免疫組織化学的に証明した。以上の結果は、虚血シグナルを考える上で、酸化LDLやLysoPCのシグナル伝達に関与するNF-κBやAP-1活性の重要性を示唆している。更に、内皮細胞にVEGFを作用させると、血管収縮、血管増殖に対し促進的に働くエンドセリンの分泌及び、マクロファージ等血球の内皮への接着、遊走を促進する接着因子VCAM-1やケモカインであるMCP-1の発現が抑制されることも明らかにした。従って、虚血による内皮細胞の変化を考える上で、虚血刺激そのものにより生ずる変化とともに、虚血により誘導されるVEGF等虚血応答内皮由来生理活性物質による作用も重要であることが考えられた。
補体C3による組織レニン・アンジオテンシン系の活性化から高血圧病態形成

ゲノム編集ZFN法でC3 KO SHRを樹立し、血圧、腎内RA系を検討した。SHRでは塩分感受性高血圧を示したが、C3 KO SHRでは認めなかった。SHRの腎髄質でレニン、KLF-5発現が亢進し、E-カドヘリン発現が低下し、腎尿細管で上皮間葉化(EMT)が起こっていたが、C3 KO SHRでは抑制されていた。C3 KOマウス由来MSCからVSMCへの分化過程でC3に依存したレニン発現を認めた。腎内Ang IIはSHRの塩分負荷で増加したが、C3 KO SHRでは抑制されていた。補体C3はSHRで腎尿細管上皮のEMTによる腎内RA系を亢進し、SHRの塩分感受性高血圧に関与している事が示された。我々はSHRの間葉系組織で、補体C3が組織RA系の活性化から高血圧病態形成に関与する機序を明らかにする目的で新しい遺伝子改変技術であるジンクフィンガーヌレアーゼ(ZFN)法でC3遺伝子をノックアウトしたSHR (C3 KO SHR/Izm)を作成した。C3 KO SHRでのC3α鎖の消失と血清CH50の低下を確認した。WKY, SHR, C3 KO SHRの血圧をTail cuff法とテレメトリー法で測定したところ、SHRでは食塩負荷にて血圧が上昇したが、C3 KO SHRでは血圧が上昇せず、SHRの食塩感受性高血圧に補体C3が腎臓内RA系の活性化を介して関与している事が判明した。出生1日目、8週目、20週目の腎臓のHE染色では糸球体傷害係数(GIS)、尿細管傷害係数(TIS)はいずれもSHRでWKYより高く、C3 KO SHRで低下していた。大動脈中膜の脱分化マーカーSM emb染色は生直後から20週齢までSHRで髙発現していたが、C3 KO SHRでは発現が減弱していた。腎髄質のレニン発現はSHRで髙発現し、C3 KO SHRでは発現が減弱していた。腎髄質のEカドヘリン発現はSHRで発現が低下し、C3 KO SHRでは発現が保たれており。SHR腎髄質のRA系活性化は補体C3が腎尿細管上皮を間葉化(EMT)を起こしていることによると考えられた。Real time PCRによる腎髄質のl-カルデスモン、KLF-5、レニン発現はSHRで髙発現で、C3 KO SHRで低下していた。In vitroで糸球体メサンジウム細胞はSHRでオステオポンチンを髙発現し、C3 KO SHRで低下し、補体C3はSHRのメサンジウム細胞を脱分化していると考えられた。以上よりSHR間葉細胞で髙発現している補体C3は高血圧病態に関与していると考えられた平成27年度内にWKY, SHRおよびC3 KO SHR由来腎糸球体メサンジウム細胞をシービング法にて単離、培養に時間がかかったため、in vitroでの細胞実験は計画通り進んでいない。WKY, SHRおよびC3 KO SHRの塩分負荷での組織傷害、腎髄質免疫染色などのin vivo実験は、C3 KO SHRホモ同士の交配をさせ、実験に供するまで時間がかかる。またテレメトリーでの血圧測定において、プローブが大きいため、48週齢のラットでのテレメトリープローブはマウス用を植え込んでおり、その準備に時間がかかった。我々はSHRの間葉系組織で、補体C3が組織RA系の活性化から高血圧病態形成に関与する機序を明らかにする目的でジンクフィンガーヌレアーゼ(ZFN)法でC3遺伝子をノックアウトしたSHR (C3 KO SHR/Izm)を作成した。SHRでは食塩にて血圧が上昇したが、C3 KO SHRでは血圧が上昇せず、SHRの食塩感受性高血圧に補体C3が関与している事が判明した。平成28年度はC3がSHRの食塩感受性高血圧に関わる機序を検討した。WKYに比しSHRでは尿中ノルエピネフリン排泄量が著明に増加し、C3 KO SHRでは増加はみられなかった。SHRの腎髄質では上皮細胞のマーカーのE-カドヘリン発現が低下し、EMTが起こっており、同時にレニン発現が亢進していたが、C3KO SHRではみられなかった。SHRの腎髄質では合成型形質マーカーL-カルデスモン、間葉系組織を合成型に変換する転写因子KLF-5 mRNAの発現は高く、C3 KO SHRでは低下していた。レニン発現を刺激する転写因子LXRαmRNA発現はSHRで発現亢進を認めた。腎内Ang II産生は正塩、高塩ともSHRで高く、C3 KO SHRで低下していた。in vitroではSHR由来メサンジウム細胞(MC)では増殖が亢進し、合成型形質マーカーオステオポンチンmRNA発現は亢進していたが、C3 KO SHR由来MCでは抑制されていた。このようにSHRでは補体C3が髙発現する事により、WKYラットに比較して間葉系組織が脱分化しており、血管平滑筋細胞やメサンジウム細胞の増殖が亢進し、さらに補体C3は腎尿細管上皮をEMTにより間葉化して、腎内レニンの発現亢進からAng IIを産生しRA系の活性化をおこし、求心交感神経系活性を刺激し、塩分感受性高血圧を起こし、心血管リモデリングおよび腎硬化症に引き起こしていると考えられた。

平成28年度内にWKY, SHRおよびC3 KO SHR由来腎臓からシービング法にて糸球体メサンジウム細胞を単離培養し、サブコンフルエントで無血清にて細胞の形質として合成型形質変換マーカーのオステオポンチン発現を評価した。SHR由来メサンジウム細胞ではWKYやC3 KO SHR由来メサンジウム細胞に比較して、著明に亢進している事が明確になった。C3がSHRの間葉系細胞を合成型にしている事が分かり当初の仮説と合致していた。またin vivo実験でもWKY, SHRおよびC3 KO SHRに塩分を負荷し、組織傷害をMasson、HE染色にてGIS、TISを評価し、腎髄質免疫染色にてE-カドヘリン、αSMAの染色でSHRではEMT現象が起こっており、C3 KO SHRでは抑制している事が判明しin vivo実験も順調に進んだ。【方法】ラットC3に対するZFN mRNAをSHR受精卵にマイクロインジェクションし、C3 KO SHRを系統樹立し、WKY, SHR, C3 KO SHRに正塩および高塩食で血圧をTail cuff法およびテレメトリー法で測定した。腎臓を取り出し組織学的評価、形質変換マーカーSMemb、レニン、KLF-5、E-カドヘリン発現を評価した。腎内Ang IIはRIAにて測定した。In vitroではWKY, SHR, C3 KO SHRの腎臓よりメサンジウム細胞(MC)を単離培養し、増殖能、形質発現を評価した。【結論】補体C3はSHRで間葉系組織を合成型形質に変換、また腎尿細管上皮のEMTによる腎内RA系を亢進し、SHRの塩分感受性高血圧に関与している事が示され、SHRの高血圧の発症、病態の一義的因子であると考えられた。ゲノム編集ZFN法でC3 KO SHRを樹立し、血圧、腎内RA系を検討した。SHRでは塩分感受性高血圧を示したが、C3 KO SHRでは認めなかった。SHRの腎髄質でレニン、KLF-5発現が亢進し、E-カドヘリン発現が低下し、腎尿細管で上皮間葉化(EMT)が起こっていたが、C3 KO SHRでは抑制されていた。C3 KOマウス由来MSCからVSMCへの分化過程でC3に依存したレニン発現を認めた。腎内Ang IIはSHRの塩分負荷で増加したが、C3 KO SHRでは抑制されていた。補体C3はSHRで腎尿細管上皮のEMTによる腎内RA系を亢進し、SHRの塩分感受性高血圧に関与している事が示された。WKY/Izm、SHR/IzmおよびC3 KO SHR/Izmの腎皮質腎メサンジウム細胞を単離しても、それぞれのストレインの培養細胞速度に差があるため、実験に供する充分な細胞の確保が不安定なため、今後は増殖の遅いWKYおよびC3 KO SHRは、繰り返しメサンジウム細胞を単離、培養する。また、テレメトリー法による直接血圧測定での植え込みプローブは14週齢以降のラットで使用出来るが、46週齢ではマウスのプローブを用いる事とする。今回SHRの塩分感受性血圧上昇に補体C3による腎内RA系亢進が関与していることが明らかになった、そこで今後はC3と塩分感受性に焦点をあて実験を行っていく。間葉系幹細胞(MSC)が平滑筋に分化する際、SHRで高発現しているC3が脱分化した平滑筋に留めるためレニンを産生し、高血圧病態を形成していることを検討する。WKY, SHR, C3 KO SHR高血圧学2017年3月に学会発表のための旅費を使用したため、最終的な金額の調整が間に合わずに繰越金が生じた。消耗品費として使用予定。
量子ドット・ナノ共振器融合系における電子・光子相互作用の制御に関する研究

量子ドット(QD)とフォトニック結晶(PC)ナノ共振器の結合系は,高効率単一光子光源や量子情報処理素子などの,固体共振器量子電磁力学デバイスのプラットフォームとして注目されている.意図しない位置にQDが存在すると損失や系の誤動作の原因となるため,QDとPC構造の相対位置を調整するためのQD位置検出技術が必要不可欠である.そこで,QDのフォトルミネッセンス(PL)を光学顕微鏡によって直接イメージングしてその位置を検出し,その位置にナノ共振器を作製する手法を開発した.今年度では,この手法を用いて位置合わせされた量子ドットとナノ共振器が強結合状態にあることを確認し,得られた結合定数から位置合わせ精度を見積もり,本手法のもつ高い位置合わせ精度を裏付ける結果を得た.分子線エピタキシーを用いて成長した,AIGaAs犠牲層と低密度(106個/cm2)QDを含むGaAsスラブをもつウェハを用いて,QD・ナノ共振器間の位置合わせを行った.ナノ共振器形成後,試料上のナノ共振器について,その共振波長を変化させながらPLスペクトルを測定した.測定は4Kで行い,共振波長を変化させるためには,窒素ガス堆積による実効屈折率変化を利用した.QDとナノ共振器のスペクトルが交差するとき,両者の反交差が確認された.これは両者が強結合状態にあることを意味する.スペクトルの分裂幅67pmから見積もられる結合定数は57.5μeVで,これは理論的に得られる最大値76.4μeVの75.2%に相当する.共振器内での電界強度から位置ずれ量を見積もると,37nmとなる.このことから,本位置合わせ技術によって非常に高い精度でQDとナノ共振器の位置を合わせることができたといえる.固体,特に半導体中での発光体と光共振器の量子物理的な相互作用は,物理的な興味だけでなく,高効率単一光子光源や量子情報処理素子といった新しい応用が期待され,注目を集めている.本研究では発光体としてInAs/GaAs自己形成量子ドット,光共振器としてGaAs2次元フォトニック結晶ナノ共振器を用いて,半導体中での発光体・共振器間相互作用の発現,観測及びその制御を目指している.量子ドットとナノ共振器の相互作用の強さは,量子ドット・ナノ共振器間の空間的な位置関係と,量子ドットの発光波長とナノ共振器の共振波長の差に依存する.本研究で用いるInAs/GaAs自己形成量子ドットはStranski-Krastanov成長モードを利用して作製され,その位置および発光波長は一般に制御不可能なパラメータである.従って,量子ドット・ナノ共振器間の空間上および波長軸上での位置関係を制御する技術は極めて重要である.そこで本年度は,量子ドットの作製後に個々の位躍および発光波長を高精度に検出するための測定システムの開発を行った.本システムでは個々の量子ドットの発光イメージを高感度カメラで撮影し,試料上に形成した基準マークからの相対位置を元に量子ドットの位置を検出し,発光スペクトルを分光器によって測定することで発光波長を検出する.このシステムを用いて量子ドット・ナノ共振器間の位置・波長合わせを行い,確かに両者の空間上および波長軸上での位置関係を制御できることを示した.今後は本システムによる位置・波長合わせを用いた量子ドット・ナノ共振器結合系を作製する上で重要となる,極低密度かつ高品質な量子ドットの成長条件を探索していく予定である.本研究では,発光体としてInAs/GaAs自己形成量子ドット,光共振器としてGaAs2次元フォトニック結晶ナノ共振器を用いた半導体中での発光体・光共振器間相互作用の発現,観測及び制御を目指している.昨年(平成22年度)我々は,量子ドットとナノ共振器の相互作用の強さを決める,量子ドット・ナノ共振器間の空間的な位置関係と,量子ドットの発光波長とナノ共振器の共振波長の差を制御するために,量子ドットのフォトルミネッセンス発光の光学イメージングおよび分光測定による量子ドット・ナノ共振器間の位置・波長合わせ手法を開発・実証した.今年度は,本手法の位置検出アルゴリズム改良などによる位置検出精度の向上と,統計的な評価を目的とした測定システムの自動化を行う一方で,本手法を用いて量子ドット・ナノ共振器結合系を作製する上で重要となるもう一つの要素である,MBE法を用いた極低密度量子ドットの成長条件探索を行った.

ここで極低密度とは,一般的な2次元フォトニック結晶ナノ共振器の光閉じ込め効果が現れるために必要なフォトニック結晶領域の大きさである10μm角に量子ドットが1個程度となる,10^6個/cm^2以下の密度を指す.この程度の密度であれば,デバイス応用において重要なフォトニック結晶導波路との融合に際して損失の原因となる,導波路内に存在する意図しない量子ドットを排除することができる.量子ドットの原料となるインジウムの供給量を減少させるという比較的素直なアプローチによって,安定して目標値以下に密度を下げることはできたが,フォトルミネッセンス発光像で暗く見える場所からも発光スペクトルが得られる,フォトニック結晶スラブ表面に多数の微小な穴が生じる,などの問題に遭遇した.様々な成長条件を検討したところ,量子ドットそのものの成長条件に加えて,量子ドットをスラブ内部に埋め込むためのキャップ層の成長条件が大きな影響を及ぼすことを見出した.量子ドット(QD)とフォトニック結晶(PC)ナノ共振器の結合系は,高効率単一光子光源や量子情報処理素子などの,固体共振器量子電磁力学デバイスのプラットフォームとして注目されている.意図しない位置にQDが存在すると損失や系の誤動作の原因となるため,QDとPC構造の相対位置を調整するためのQD位置検出技術が必要不可欠である.そこで,QDのフォトルミネッセンス(PL)を光学顕微鏡によって直接イメージングしてその位置を検出し,その位置にナノ共振器を作製する手法を開発した.今年度では,この手法を用いて位置合わせされた量子ドットとナノ共振器が強結合状態にあることを確認し,得られた結合定数から位置合わせ精度を見積もり,本手法のもつ高い位置合わせ精度を裏付ける結果を得た.分子線エピタキシーを用いて成長した,AIGaAs犠牲層と低密度(106個/cm2)QDを含むGaAsスラブをもつウェハを用いて,QD・ナノ共振器間の位置合わせを行った.ナノ共振器形成後,試料上のナノ共振器について,その共振波長を変化させながらPLスペクトルを測定した.測定は4Kで行い,共振波長を変化させるためには,窒素ガス堆積による実効屈折率変化を利用した.QDとナノ共振器のスペクトルが交差するとき,両者の反交差が確認された.これは両者が強結合状態にあることを意味する.スペクトルの分裂幅67pmから見積もられる結合定数は57.5μeVで,これは理論的に得られる最大値76.4μeVの75.2%に相当する.共振器内での電界強度から位置ずれ量を見積もると,37nmとなる.このことから,本位置合わせ技術によって非常に高い精度でQDとナノ共振器の位置を合わせることができたといえる.研究開始当初は量子ドットそのものの成長条件が重要であると考えていたが,研究を進めたところ,同一の条件で成長した量子ドットでも,キャップ層の成長条件の違いで最終的な試料の特性が大きく変化することが明らかになった.試料作製上の極めて重要な指針が得られたと言える.量子ドットのみならずキャップ層も含めた条件探索をさらに進め,量子ドット・ナノ共振器結合系の作製により適した量子ドットを作製していく.さらに,得られた良質の量子ドットを用いて,デバイス応用を視野に入れた,導波路等を組み合わせた複雑な構造へと展開していく.この際,改良された位置・波長合わせ手法を用いて,量子ドット・ナノ共振器間相互作用の統計的な評価を行っていく.
無機多孔体の細孔内を反応場とした2,6-ジイソプロピルナフタレンの選択的合成

ナフタレンのプロピレンによるアルキル化での生成物分布の熱力学的組成を明らかにするために形状選択性が発現しないシリカアルミナ触媒を用いて反応を行ったところ、反応初期には配向性によりalpha-位に置換基を有する異性体が多く生成するが、熱学的にはbeta-位に置換基を有する異性体の方が安定であるため、ナフタレン転化率が増加すると異性化により2-IPN(イソプロピルナフタレン)、2,6-および2,7-DIPN(ジイソプロピルナフタレン)の選択率が向上することが示された。しかし熱学的には2,6-DIPNと2,7-DIPNがほぼ等しい選択率でしか得られないことが明かとなった。モルデナイト触媒を用いてナフタレンのプロピレンによるアルキル化反応を行うと、反応初期から分子径の小さい2-IPN、2,6-および2,7-DIPNが高い選択率で生成し、形状選択性が発現していることが示された。しかも2,6-DIPNの選択性はシリカ・アルミナ比の増加とともに向上することが明かとなった。XPS測定の結果より、シリカ・アルミナ比の高いモルデナイト触媒ほど外表面酸点の反応への寄与が小さくなることが示唆された。このことより、モルデナイト触媒の細孔内では2,7-DIPNよりも2,6-DIPNが選択的に生成すると結論した。モルデナイト触媒が2,6-DIPNの生成に高い選択性を示す原因を明らかにするために、2-IPNの不均化およびプロピレンによるアルキル化を行い、生成物分布を比較したところ、反応初期の2,6-DIPNの選択性には相違は見られなかった。またDIPN混合物の吸着実験を行ったところ、2,7-DIPNに比べて2,6-DIPNが選択的に吸着することが示された。以上のことより、モルデナイト触媒で2,7-DIPNよりも2,6-DIPNが選択的に生成するのは、拡散速度の違いによる生成物規制のためであると結論した。
被爆者看護にあたった看護婦の体験

1945年8月6日広島に世界で初めての原子爆弾が武器として使用された。この原爆による被害者(以下被爆者)に対する救護活動を行なった看護婦の体験をオーラルヒストリー法により研究を行った。データは、面接により収集し、データは録音テープに記録し逐語記録を行った。18名の方から面接のデータを収集できたが、看護婦としての役割を担っていなかった1名を削除し、17名のデータを使用した。逐語記録されたデータを時間の流れに沿って整理しカテゴリー化した。参加者の内訳は、6名、8月6日広島市内の病院に勤務しており、自身も直接被爆を体験することになりながらも救護活動を行なった方であった。その他の6名は隣接の県から、救護のために広島市内または、臨時の救護避難所へ召集され救護活動を行なった方であった。残りの4名は、勤務先の病院へ被爆者が搬送され、搬送患者の救護にあたった方で、1名は婦人会からの応召に応えて救護を行なったものであった。データは、「8月5日夜から8月7日朝まで(直接被爆者)」「連絡を受けて広島へ向かう(間接被爆者)」「終戦まで」「軍の解散と被爆軍人の帰省」「枕崎台風」「復興」に分けられた。参加者のほとんどが、直接被爆・間接被爆の違いに関わらず、脱毛、歯齦出血、貧血、倦怠感、下痢などの被爆症状が見られ、長期に救護活動に携わることはできなかった。亡くなっていく患者たちと同じ症状が自分の体に出現し始めたとき、死を覚悟しなければならず、その後の人生にも被爆者であると言うことが影響を与えた。参加者のほとんどが軍人被爆者の看護を行なった看護婦であり、一般市民を対象として救護・看護を行なっていなかったというデータの偏りがあった。しかし、広島は軍都であったこと、一般市民よりお国のために働いていた軍人が治療の優先であった社会的時代的背景からこのような偏りは当然ではないかと考える。1.文献レビュー本研究の枠組みを創るための文献レビューを行っている。主な検索文献は,フェミニズム,軍国主義,戦争と女性,看護婦の歴史,広島の歴史,戦争と看護婦,原爆に関連するものである。今後,収集した文献を何回も読み直し,概念枠組みの洗練をはかる予定である。2.研究方法論・分析日本の看護の歴史研究においては,公文書を中心とした実証主義の研究が主であり,オーラルヒストリー法を用いた研究は行われていない。一方,西洋圏の歴史研究においては、実証主義の研究だけでなく、構築主義であるオーラルヒストリーの研究も盛んに行われている。そこで,2002年2月の末に渡豪し,フリンダース大学のDr Trudy Rudge氏と研究手法を討議し,研究の分析法に対する示唆を得た。3.データ収集1945年8月6日より1945年12月末までの期間に,広島の被爆者を看護した体験を持つ看護婦を、日本赤十字岡山県支部,同鳥取県支部,同山口県支部,大阪被爆者の会,浜田被爆者の会(島根),広島赤十字原爆病院の関係者および研究者の縁故者に紹介を依頼した。結果18名の研究対象者をご紹介いただき、第1回目の面接調査を行った。対象者の半数以上が,県外に在住していたため、研究対象者宅まで出向き面接を行ない,面接にかなりの時間を要した。

対象者の承諾を得てテープ録音し,現在これらの面接録音を文字に起こす作業を行っている。今後,分析を開始する。来年度は、データ分析,論文の作成を行う予定である。1945年8月6日広島に世界で初めての原子爆弾が武器として使用された。この原爆による被害者(以下被爆者)に対する救護活動を行なった看護婦の体験をオーラルヒストリー法により研究を行った。データは、フェイストウフェイスにより収集し、面接は録音テープに記録した。18名の方から面接のデータを収集できたが、看護婦であっても家族や身内を探すために広島にやってきた方で救護を行なっていなかった2名をデータからはずし、16名の方のデータを使用した。参加者の内訳は、6名、8月6日広島市内の病院に勤務しており、自身も直接被爆を体験することになりながらも救護活動を行なった方であった。その他の6名は隣接の県から、救護のために広島市内または、臨時の救護避難所へ召集され救護活動を行なった方であった。残りの4名は、勤務先の病院へ被爆者が搬送され、搬送患者の救護にあたった方であった。データは、「8月5日夜から8月7日朝まで(直接被爆者)」「連絡を受けて広島へ向かう(間接被爆者)」「終戦まで」「軍の解散と被爆軍人の帰省」「枕崎台風」「復興」に分けられた。参加者のほとんどが、直接被爆・間接被爆の違いに関わらず、脱毛、歯齦出血、貧血、倦怠感、下痢などの被爆症状が見られ、長期に救護活動に携わることはできなかった。亡くなっていく患者たちと同じ症状が自分の体に出現し始めたとき、死を覚悟しなければならず、その後の人生にも被爆者であると言うことが影響を与えた。参加者のほとんどが軍人被爆者の看護を行なった看護婦であり、一般市民を対象として救護・看護を行なっていなかったというデータの偏りがあった。しかし、広島は軍都であったこと、一般市民よりお国のために働いていた軍人が治療の優先であった社会的時代的背景からこのような偏りは当然ではないかと考える。