hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ハチ毒メリチンの発痛作用

蜂に刺されると、痛いと感じ、刺された部位が赤く腫れる。痛みのメカニズムを解明するため、ハチ毒主要成分のメリチンを利用した研究を計画した。メリチンを健康被検者の前腕皮内への微量投与すると、投与直後に痛みが誘発され、それに続いて、投与周辺部の皮膚温が上昇することをサーモグラフィーを利用して確認した。皮膚温の上昇はリドカインゲル前塗布により抑制されることから、メリチンによる皮膚温の上昇は無髄C線維を介する軸索反射であると推測した。帯状庖疹後神経痛は、感覚脱失があるにも関わらず、激しい自発痛とアロディニアが生じる場合がある。アロディニアのない群では、メリチン投与による皮膚温の上昇が見られなかったが、アロディニアのある群では投与部位周辺の皮膚温の上昇が確認された。このようなメリチンテストを施行することにより、C線維の損傷を検査することができ、治療方針を決定に役立てられる可能性が示唆された。健康被検者の前腕にメリチンを注入すると、手掌の皮膚温は、メリチン注入後、痛みの時間経過に対応して一過性に下降し、その後、注入前より上昇した。手掌温の下降は体性交感神経反射であり、下降に続く上昇は交感神経活動の解除によるものであると示唆された。ハチ毒全体およびメリチンをラットの足底に注入すると、注入部位周辺の皮膚温が上昇したが、アパミンを注入したときは、上昇がみられなかった。メリチンを後根神経節および坐骨神経に注入すると、皮膚温が上昇した。メリチンによる皮膚温の上昇は神経性の反応であり、無髄C神経線維終末から放出されるCGRPによって生じる皮膚温の上昇も、体性交感神経反射も痛みによって誘発される反応である。本研究で、サーモグラフィーを利用して、痛みに伴う皮膚温の変化の広がりと程度を解析した。メリチンの微量注入は、副作用を伴ずに人およびラットで実施できるテストであることがわかり、今後痛みの研究に寄与できることを確認した。ハチ毒に含まれる発痛物質のメリチンを健康被検者の前腕皮内への微量投与すると、投与直後に痛みが誘発され、それに続いて、投与周辺部の皮膚温が上昇することをサーモグラフィーを利用して記録し、熱画像処理プログラムを使って解析をした。この皮膚温の上昇はリドカインゲル前塗布により抑制されることから、メリチンによる皮膚温の上昇は無髄C線維を介する軸索反射であると推測した。メリチン投与による皮膚温の上昇のメカニズムをさらに検討するために、ラットで、サーモグラフィー記録を試みた。ラットの足底にメリチンを皮下投与した場合も、ヒトと同様に皮膚温の上昇が確認できた。メリチンによる皮膚温の上昇が軸索反射によるか、血管に対する直接作用であるかを明らかにするために、メリチンを後根神経節に注入した場合も足底部の皮膚温の上昇が見られた。従って、メリチンによる皮膚温の上昇は血管への直接作用ではなく、軸索反射成分が含まれることが確認できた。帯状疱疹後神経痛は、感覚脱失があるにも関わらず、激しい自発痛とアロディニアが生じる場合がある。アロディニアとは、通常痛みを誘発しない非侵害刺激による痛みである。帯状疱疹後神経痛患者のうちアロディニアのない群では、メリチン投与による皮膚温の上昇が見られなかったが、アロディニアのある群では投与部位周辺の皮膚温の上昇が確認された。アロディニアのない帯状疱疹に投射するC線維は損傷を受けているために、C線維を介する軸索反射性の皮膚温の上昇が見られず、C線維の一部が存続しているアロディニアのある帯状疱疹患者では、軸索反射性に皮膚温が上昇すると考えられる。これらの結果から、これまでの生理学的機能検査では、C線維の損傷を検査することができなかったが、このようなメリチンテストを施行することにより、C線維の損傷を検査することができ、治療方針を決定に役立てられる可能性が示唆された。

メリチンによる皮膚温の上昇は神経性の反応であり、無髄C神経線維終末から放出されるCGRPによって生じる皮膚温の上昇も、体性交感神経反射も痛みによって誘発される反応である。本研究で、サーモグラフィーを利用して、痛みに伴う皮膚温の変化の広がりと程度を解析した。メリチンの微量注入は、副作用を伴ずに人およびラットで実施できるテストであることがわかり、今後痛みの研究に寄与できることを確認した。ミツバチの毒には、メリチンやアパミンを含む多くの成分が含まれる。ハチ毒による痛みについて研究するために、平成11年度には、ヒトの前腕およびラットの足底皮膚にメリチンを微量注入すると、神経性に皮膚温が上昇することを確認した。平成12年度はそれらの研究をさらに発展させた。ハチ毒全体およびメリチンをラットの足底に微量注入すると、注入部位周辺の皮膚温が上昇したが、アパミンを注入したときは、上昇がみられなかった。発痛物質はアパミンではなく、メリチンであることが再確認された。また、メリチンを後根神経節および坐骨神経に注入すると、足蹠は浮腫を伴わずに皮膚温が上昇した。メリチンによる皮膚温の上昇は血管に対する直接作用ではなく、神経性の反応であることが確認された。健康被検者では、メリチンによって誘発される痛みと注入部位の皮膚温上昇には時間差がある。皮膚温上昇は痛みよりも遅れて始まる。そこで、前腕にメリチンを微量注入し、交感神経の分布が多い手掌の皮膚温の変化をサーモグラフィーで記録した。手掌、特に指尖の皮膚温は、メリチン注入後、痛みの時間経過に対応して一過性に下降し、その後、注入前より上昇した。メリチン注入前の手掌温度には著しい個人差があったが、皮膚温の低い被検者ほど下降に続く上昇が大きかったので、10分後には皮膚温のばらつきが減少した。手掌温の下降は体性交感神経反射であり、下降に続く上昇は交感神経活動の抑制解除によるものであると示唆された。無髄C神経線維終末から放出されるCGRPによって生じる皮膚温の上昇も、体性交感神経反射も痛みによって誘発される反応である。メリチンの微量注入は、副作用を伴ずにヒトおよびラットで実施できるテストであることがわかり、今後痛みの研究に寄与できることを確認した。
中国の越境的移動・境界侵犯・異種混交より生成する新しい「社会」に関する実証研究

移動・越境・混交に関する調査研究から得られた理論的知見として、例えば以下のものがある。(1)構造(時空、慣習、記憶、予期)や意味(指し示すもの/指し示されないもの)への着眼から、生成と消滅を繰り返す本来的に非平衡的な差異が平衡するその均衡点に、「持続可能な社会」=「共生の作法」が展望できる。(2)中国雲南保山回族の共生の作法にみる「言説の資源」が、状況的な自己呈示と自己記述を可能にし、異なるものが共存するための意味の選択を支えている。(3)移動のなかの共在的あるいは同時的な〈場所〉の実践的な組み合わせが、新しい社会システムを生み出す上でのひとつの源泉となっている。本研究の目的は、越境的な移動がもたらす境界侵犯や異種混交を通じていかなる社会が生成しているのかを明らかにすることである。中間的な成果として以下の知見を得た。雲南保山Y村の調査では明清四大イスラーム漢文訳著家・馬注(1640-1711)に関連した資料を収集している。当地域の回族は、馬注の墓や故郷、伝承などの発見や、馬注思想の発揚を通じてまちづくりをおこなっている。彼らが漢族との「共生の作法」を模索していく基盤には、1「言説の資源」(話し方や書き方など自己表出、自己呈示の適切な選択を可能にする資源)、2この「言説の資源」のストックとフローを可視化する「地域」、3「歴史の逆説性」(解釈を通じて受難の歴史を反転させ誰に対しても居場所が開かれた世界を求めていく志向が「言説の資源」の方向を規定していく)などが存在する。内モンゴル錫林郭勒盟D旗H合作社の事例では、1資本や資源をめぐる中心と辺境の時空間の圧縮と輻輳、2中央による現地住民当事者の排除、3生活や環境問題打開のために、民族の伝統的知識や社会関係資本をもつキーパーソンが、話し合い、参加、能力、地域などを制度化していくなかで発揮している問題解決能力を分析した。一方、越境する民族からそもそも民族性とは何かを問うために北京のモンゴル人二世へインタビュー調査を継続している。中国残留日本人が多く居住していた黒竜江省F県の調査では、海外(とくに日本)流出と外国人の流入、現地での異文化共存の実態に対する理解を深めた。また、長崎の華僑・華人調査からは、異文化が生み出す観光価値を活用した観光戦略を分析している。さらには、日本の再生産領域(家族)における国際移動の実態と地域の国際化について現地調査を行い、国際結婚家族に対する支援のあり方を検討した。本研究の目的に照らしてみた場合、研究の進捗状況は次のように整理できる。(1)回族、モンゴル族、華僑・華人、「中国帰国者」による都市農村間および国家間の広範囲にわたる越境的移動の実態把握について、とくに移動の動機、その社会的・歴史的背景、送出地と移入先の関係、血縁や地縁、同窓などを媒介とした移住連鎖、移入先での先住者と移入者の関係、家族や民族、国家関係などに関して一定程度明らかにしている。(2)移動の境界侵犯と異種混交に対する人びとの規範と実践の解明について、とくに雲南保山回族の「共生の作法」や黒竜江省F県の異文化共存の実態、長崎華僑・華人による伝統文化の再生による観光業の興業とそれを通じた人びとの相互行為や創発特性などについて、一定程度の解明が進んでいる。このことは、グローバル行為の規範や実践という理論的課題に対しても示唆を与えてくれるものである。(3)国際結婚という再生産領域におけるトランス・ナショナルな移動が「国民的市民社会」(市民権よりも国籍に重きを置く市民社会)における親密圏の変容と公共的世界やコミュニティの再編を促し、グローバリゼーションにおける新たな社会の生成に導いていく可能性を明らかにしつつある。(4)以上のような研究成果に基づき、他者をめぐる表象やディスコースに対する越境的移動の影響を考察することができる。すなわち、他者不在の「思想としてのアジア主義」を批判的に検討し、誰に対しても居場所が開かれた新たな社会モデルの提起を考える上で貴重な材料となり得るものである。本研究の目的は、越境的な移動がもたらす境界侵犯や異種混交を通じて、グローバリゼーションのなかでいかなる社会システム(コミュニケーションを基盤的作動とすることで、環境との境界が設定され区分されるシステム)が生成しているのか、相互行為と制度の存在論的かつ認識論的なデュアリティを分析枠組みにして、構造(時空、慣習、記憶、予期)への着眼から明らかにすることである。成果として以下の知見を得た。前年度に引き続き、明清四大イスラーム漢文訳著家・馬注(1640-1711)に関連する資料を収集し、雲南保山の回族が漢族との「共生の作法」を模索する基盤として、1「言説の資源」(自己呈示の適切な選択を可能にする意味の蓄積)、2「言説の資源」のストックとフローを可視化する共在的および同時的な「場所」、3「歴史の逆説性」(解釈を通じて受難の歴史を反転させ誰に対しても居場所が開かれた世界を求めていく志向性)が、将来は再び現前化するかもしれない第三者(国家や異民族)に対する予期・備えになっていることを明らかにした。

また、1媽祖や鄭成功にまつわる儀礼(構造)に帰属して環境の複雑性縮減に努める相互行為と制度、2中国残留日本人が多く居住する黒竜江省の移民の実態、3長崎と函館の華僑社会の構造とネットワーク、飲食文化の伝播と受容のメカニズム、4僑郷の歴史的社会的記憶・記述・構築、5日本・韓国の国際結婚家族支援と、トランスナショナルあるいはナショナルな家族、6中国北京市の「民族コミュニティ」に住む少数民族二世の社会文化的統合(言語、配偶者選択、文化的アイデンティティ)などについて明らかにした。本研究の目的(越境がいかなる社会システムを生成しているのかを明らかにすること)に照らして見た場合、研究の進捗状況は次のように整理できる。すなわち、2年間に渡る海外調査研究を通じて、定住よりも移動に、RootsよりもRoutesに分析の焦点を当てることで、以下のような展望を得るに至った。1移動のなかの共在的あるいは同時的な〈場所〉の実践的な組み合わせが、新しい社会システムを生み出す上で必要な源泉であること、2こうした〈場所〉の組み合わせを、相互行為と制度のデュアリティと、それを媒介する構造(時空、慣習、記憶、予期)から明らかにする方法論が必要であること、3〈場所〉を現存の境界線上を生き続ける姿に見出す視点から、事象、時空、社会にまつわる意味、すなわち、差異と同一性、以前と以後、自己と他者などが絡み合う社会システムのあり方や、翻って人間のポジショナリティについての理解を、存在論的、認識論的な土台にまで遡って深めることができること、4社会的現実としてのカテゴリーと、存在論的な思考の堅い枠組み(時空、人格、実体など)とを批判的に交叉させることで、カテゴリーと親和的なRootsではなく、むしろカテゴリーを越えるRoutesの機制を焦点化でき、ここから、文化の差異が分節化される際のプロセスや契機への方法論的な接近が可能になること、5差異が輻輳したり置換されたりする多様性とそれへの参画のなかに、今後の社会システムの規範的なあり方を探求する方法論的な鍵が横たわっていることなど、これらいくつかの新たな展望を導き出すことができたことを根拠として、本研究は「おおむね順調に進展している」と自己評価するものである。本研究の目的は、グローバリゼーションにともなう移動の高まりと境界侵犯・異種混交のなかで、社会が再帰的に更新し続ける姿を、実証的および理論的に捉えることである。そのための方法として、東アジア各地で現地調査を実施したり、社会システム理論ー生命/意識の心身二元論に対する第三の領域としての「コミュニケーション」が、その作動において閉じることで環境との開放的境界を設定し、自己記述を通じて境界を更新していくーからの考察を行ったりした。研究成果として、(1)構造(時空、慣習、記憶、予期)や意味(指し示すもの/指し示されないもの)への着眼から、生成と消滅を繰り返す本来的に非平衡的な差異が平衡するその均衡点に、「持続可能な社会」=「共生の作法」が展望できること、(2)雲南保山回族の共生の作法にみる「言説の資源」が状況的な自己呈示を可能にする意味の選択にかかわっていることを説明した。また、(3)雲南保山の都市開発(農地収用)によるモスク・コミュニティの物質的、空間的な消失が、第三者(国家や漢族)に対する意識の変化をもたらしていること、(4)タイ・チェンマイの雲南系ムスリムにみる共生の作法、(5)ラオス・ビエンチャンの新移民とチャイナタウンの形成、(6)約100万人の在日中国人のうち3割を占める中国東北出身者の移住、職業、アイデンティティ、適応、(7)第5、6世代の世代深度を有する老華僑社会の変容ー開港都市長崎と函館の現在、(8)中国残留日本人の移民の実態、(9)北京モンゴル人2世の調査ー北方少数民族成人2世の民族性、
ヒト根尖性歯周炎における根尖孔外への細菌侵襲の実態と宿主の応答

根尖性歯周炎は歯髄壊死に陥った根管系に口腔内の細菌が感染し、これらの細菌を主体とする病原性物質が根尖孔より根尖歯周組織に漏出することにより発症すると考えられている。したがって、どのような細菌が根尖孔の付近に生息し、どのように根尖歯周組織を侵襲するのかは、根尖性歯周炎の病因論のみならず、新しい治療法・診断法を開発する上で重要である。そこで今回、感染根管における根尖部の細菌を免疫組織学的に検討するとともに、走査型電子顕微鏡(SEM)で微細形態学にも検討した。感染根管の根尖部には様々な細菌が生息していたが、特にS.sanguis, P.nigrescens/P.intermedia, S.mutans, L.plantarum, L.caseiが高頻度に検出された。さらに根尖孔外ではL.plantarum, S.mutans, P.nigrescens/P.intermediaが高頻度に検出され、根尖部の細菌叢と根尖孔外に侵出した細菌が関連することが強く示唆された。特にL.plantarumは根尖孔外での検出頻度が最も高く、根尖性歯周炎の原因菌として注目される。SEMで根尖部を観察した結果、根尖孔外の細菌はバイオフィルムを構築しており、免疫応答など宿主の防御機構から逃れて生息していることが示された。この事実は、根尖孔外すなわち生体内に細菌が生息し、常に宿主と細菌が接して慢性病変を形成していることを意味している。さらに根尖孔外の細菌は根管内からの細菌の集団と連なった像が観察されたことにより、根尖部の細菌と根尖孔外の細菌が関連するという上記の免疫組織学的手法による結果を超微細形態学的にも裏付けた。根尖孔外の細菌は、根管の拡大・清掃による通常の根管治療では治癒しない、いわゆる難治性の根尖性歯周炎の原因としても重要と考えられ、根尖孔内外の感染実態のさらなる研究が望まれる。根尖性歯周炎は歯髄壊死に陥った根管系に口腔内細菌が感染し、根管内よりこれらの細菌を主体とする病原性物質が根尖歯周組織に漏出することのより惹起される。従って、感染根管ではどのような細菌が根管系のどこに棲息しているか、またどのような場合に根尖性歯周炎を惹起するのかなど、その感染実態を明らかにすることは、病態の把握さらには予後の判定において重要であると考えられる。そこで今回、感染根管の細菌、特に根尖性歯周炎の成立に重要な役割を果たしていると考えられる根尖部の細菌を、免疫組織学的手法を用いて同定するとともに、それらの局在について検討を加えた。歯髄死と診断された歯で、臨床上抜歯の適応症と判定された23歯を被験歯とした。採集した試料は直ちにhalf-karnovsky溶液にて固定し、キシレンに置換した後、疎水性MMA樹脂に包埋して厚さ2.5ミクロンの薄切連続切片とした。切片の一部は根管内の全ての細菌を確認するためにBrown-Brenn染色を施し、他は酵素抗体法による免疫染色を施して、光学顕微鏡による観察に供した。また、5試料は走査型電子顕微鏡による観察に供した。Brown-Brenn染色の結果、観察試料の82.1%の根尖部の根管内に球状菌や桿菌の集団が認められた。酵素抗体法によりその細菌種を同定したところ、検出頻度の高かった菌種はS.sanguis,P.nigrescens/P.intermediaであった。

根尖孔外への細菌の侵出が認められたのは10症例で、根管内より根尖孔外に球菌や桿菌の集団が認められた。また、根尖孔周囲をSEMにて観察したところ、5試料中4試料の根尖孔外に球菌や桿菌の集団が認めら、根管内から根尖孔外に連なっている像も観察された。これらの細菌は網目状に構造物や粘液様構造物によって被覆されており、バイオフィルムとの関連が強く示唆された。根尖性歯周炎は歯髄壊死に陥った根管系に口腔内の細菌が感染し、これらの細菌を主体とする病原性物質が根尖歯周組織に漏出することにより発症する。したがって根管内の病原性物質の徹底除去、すなわち根管の機械的清掃・拡大および消毒により高い確率により治癒するとされる。しかしながら、臨床的には通常の根管治療によっても治癒しない難治症例が存在する。どのような細菌が根管系のどのような場所に残存した場合に難治症例になるのかは、臨床的に興味が持たれるのみならず、根尖性歯周炎の病因論にとっても重要である。そこで今回、根尖性歯周炎の難治化に最も関連していると考えられる根尖部、特に根尖孔付近に残存する細菌を免疫組織学的手法を用いて同定し、その局在性を検討すると共に、走査型電子顕微鏡(SEM)で微細形態学的にも検索した。難治性歯周炎と診断され、抜歯もしくは外科的処置の適応となった20歯を用いて検討した結果、15歯に根尖孔外への細菌の溢出が認められた。特にL. plantarum, S. mutans, P. gingivalis, P. nigrescens/P. intermediaが高頻度に検出された。一方、A. viscosus, E. alactolyticum, E. faecalis, P. endodontalisは検出されなかった。SEMで根尖部を観察した結果、根尖孔外の細菌はバイオフィルムを構築しており、免疫応答など宿主の防御機構から逃れて棲息していることが示された。さらに根尖孔外の細菌は根管内からの細菌の集団と連なった像が観察された。根尖孔外の細菌は、根管の拡大・清掃による通常の根管治療では治癒しない、難治性の根尖性歯周炎の原因になる得ることが示された。
高脂血症治療薬；スタチンを応用した象牙質形成促進作用を持つ新規覆髄材の開発

スタチンはメバロン酸経路の上流にあるHMG-CoA還元酵素を抑制しコレステロール産生の抑制することが報告されている。歯髄幹細胞(Dental Pulp Stem Cell : DPSC)でも同様の作用機序であるか検討するため,HMG-CoAの下流に位置するメバロン酸を用いた。培地にスタチン1μMとメバロン酸1mMの濃度で同時に添加し,MTS法で細胞増殖に与える影響を検討した。その結果,5日目にスタチン単独での細胞増殖抑制効果が消失していることを確認した。またスタチンはメバロン酸経路の中間産物の抑制により,Rho経路を介し細胞周期をG1/S期で停止させることが報告されている。そこで細胞周期に与える影響を検討するため,スタチン1μM添加し3日間培養したDPSCをPIにて染色後,FACSを用い解析を行った。その結果,G0/G1期への集積像およびG2/M期ピークの減弱が観察された。以上の結果よりDPSCにおけるスタチンの作用はメバロン酸-Rho経路を介していることが示唆された。2,イヌを用いた覆髄モデルの作製本研究の臨床モデルは,歯髄に近接したカリエスが考えられる。そこで本研究ではビーグル犬(1歳齢)の犬歯を用い覆髄モデルを作製した。歯の遠心面がら近心に向け歯科用5倍速エンジンで窩洞の形成を行い,通常の歯科用覆髄剤を用い覆髄処置を行い,歯科用セメントを用い窩洞の充填を行った。1か月後に組織を回収し,通法に従い組織標本を作製した。その結果,安定して歯髄に近接した窩洞を形成できていることが確認された。次に,このイヌ覆髄モデルを用い,スタチンの象牙質形成効果を検討した。つまり,スタチン2mMならびにPBSを各10μlを含むコラーゲンスポンジを覆髄剤として窩洞内に設置し,歯科用セメントにて充填した。1か月後に組織を回収し,組織標本を作製しHE染色を行なった結果,2mMのスタチンに有意な象牙質形成促進作用は認められなかった。1,スタチンの至適濃度の検討初めに,スタチンの歯髄幹細胞(Dental Pulp Stem Cell : DPSC)に対する至適濃度を細胞増殖,アポトーシス,細胞骨格形成に与える影響を指標に再度確認した。その結果,10μMの濃度では細胞増殖が抑制され,トリパンブルー染色陽性の死細胞の割合が増加した。次に,スタチンが細胞骨格形成に与える影響を,細胞内アクチンファイバーの構造変化を指標に評価した結果,1μMでは軽度ではあるが細胞骨格形成は抑制され,10μMでは強度に細胞骨格形成が抑制され,細胞に為害性があることが確認された。これらの結果より,DPSCの細胞培養でのスタチンの至適濃度は0.11μMであることを確認し,今後の実験は,この濃度範囲にて行った。2,炎症環境下におけるスタチンがDPSCに与える影響の検討これまでに,in vitroにおいてスタチンがDPSCの分化を促進することを明らかにしてきた。しかし,本研究で想定される臨床モデルでは,歯髄にカリエスが近接し歯髄に炎症が惹起されていると考えられる。そこで炎症環境下をin vitroで再現するために,TNF-α刺激下にて実験を行った。その結果,TNF-α刺激下においてもスタチンは細胞増殖を抑制した。また,定量性PT-PCRにてアルカリフォスファターゼならびにオステオカルシン遺伝子の発現を指標に象牙芽細胞分化に与える影響を検討したところ,TNF-α刺激の有無に関わらず,スタチンの象牙芽細胞分化促進効果は変わらなかった。来年度は,スタチンの象牙質形成促進作用の機序を詳細に検討するとともに,in vivoにおけるスタチンの象牙質形成促進能をイヌを用いた直接覆髄モデルにて検討する予定である。

次に,このイヌ覆髄モデルを用い,スタチンの象牙質形成効果を検討した。つまり,スタチン2mMならびにPBSを各10μlを含むコラーゲンスポンジを覆髄剤として窩洞内に設置し,歯科用セメントにて充填した。1か月後に組織を回収し,組織標本を作製しHE染色を行なった結果,2mMのスタチンに有意な象牙質形成促進作用は認められなかった。
先島地域の狩猟採集社会および農耕社会における人間と環境との相互作用の解明

沖縄県西表島・宮古島における先史時代遺跡と近世遺跡を選択して、考古学班は現地発掘調査成果を行い、遺構・遺物の分析や土壌分析を実施した。同時に生物学班は、先史貝塚および近世の廃棄土壙からの出土貝類についての生態調査、現代の海産資源の獲得状況等に関する聞き取り調査と廃棄物の実態調査を実施した。相互の調査成果を付き合わせると、狩猟採集民と農耕民では海産資源へのアプローチが対照的であること、海産資源に対する環境負荷は共に大きいものの、採取法や頻度が異なるために異質であることや、農耕民の場合には陸上動植物への環境負荷が非常に大きく、島嶼部にあっても人為景観化が顕著なことを解明した。本研究は八重山地域における狩猟採集経済社会の段階と水稲農耕社会の段階とにおける周辺環境との相互作用の差違および共通性を解明すべく実地研究を進め、島嶼部という外部の社会的要因を受けにくい閉鎖的環境のもとで把握される様相はモデル化が容易であるという特性を活かし、人類史の枠組みとして調査成果の再構成を目指すものである。同時に考古学・生物学という各専門領域を横断したところに掘り下げるべき課題を設定し、学際的融合型の実地調査・研究を構築している。考古学は3チーム・生物学は1チームの全4チーム構成であり、西表島地域の網取遺跡・祖内遺跡および周辺環境の調査を軸とし、比較対象として宮古島の長墓遺跡の調査を行っている。このような調査体制のもと、八重山地域における原始古代から近世にかけての人類の活動が周辺環境に与えた影響および人為景観の具体像の把握を目指すものである。本年度は次の諸項目にわたる現地調査および分析作業を分担実施した。1先史時代遺跡の調査(北條・ハドソン担当)(1)西表島網取遺跡において先島先史時代の遺構を検出すべく、地中レーダー探査を伴う発掘調査を実施し、先史時代貝塚・石蒸し炉と推定される集石遺構等を確認した。(2)宮古島長墓遺跡の発掘調査を実施し、貝層中から貝玉・サメ歯製品などの人工遺物・人骨・多数の貝類と獣骨を検出した。これらの調査結果をふまえ、出土貝類・獣骨類等食物残滓類の組成を検討中である。2初期水稲農耕遺跡の調査(北條・田崎担当)(1)網取遺跡において近世の水田遺構を調査し、水洗選別によって炭化米・水田雑草種子の出土を確認した。また祖納地区では、中世近世の水田層をボーリング調査によって確認した。さらに朝鮮半島における近世農書を資料調査するとともに、中世近世の集村型の集落構造を通時代的に比較するため、西日本地域における弥生時代の密集型大規模集落を分析し、その成果を公開した。3人間活動と関わる周辺環境生物類の生態調査(上野・河野担当)西表島の周辺環境を特徴づけるサンゴ礁・内湾・河口干潟・水田等の湿地環境および過去の集落跡において、今年度は水鳥類・ゲンゴロウ類・オカヤドカリ類、シャコガイ類の分布・生態調査を実施した。これらの生物群は、人間が過去のある時点から継続的に改変し、あるいは維持してきた自然環境と連動するかたちで分布域や個体数およびサイズを拡大し、また狭めてきたことが明確なデータとして把握された。1先史時代遺跡の調査(北條・ハドソン担当)(1)西表島網取遺跡では先島先史時代の集石遺構および貝塚の調査を実施し、併せて所見の整理を行った。(2)宮古島長墓遺跡では同時代の貝層中から人工遺物、多数の貝類と獣骨を検出した。出土貝類・獣骨類等食物残滓類の自然科学的分析を本格化させた。2初期水稲農耕遺跡の調査(北條・田崎担当)(1)網取遺跡において近世の水田遺構を調査し、幹線用水路のほか溜井となる可能性の高い遺構を発見するに至った。(2)西表島・祖納地区では埋没水田の発掘調査を実施した。その結果15世紀の土石流に埋没した中世に遡る水田跡を確認し、湧水利用の小区画水田による水稲耕作が比較的安定して行われていることを解明した。同時に、日本列島と朝鮮半島南部の遺跡形成における埋積状況の変遷から気候条件をはじめとする長期的な環境変動を捉え、環境変動と農耕化のプロセスの相関性を具体的に把握した。3周辺環境生物類の生態調査(河野担当)水稲栽培の拡大や放棄、農法の変遷など人間活動によって直接的間接的な影響下にある湿地環境において、水鳥類相やゲンゴロウ類相とその季節的消長に関する分布特性を調査し明らかにした。

また水稲栽培と漁労等を基盤として生活を営み、近世から続いた海岸集落跡地(網取集落)において、沖合から集落に持ち込まれて投棄される貝殻を利用するオカヤドカリ類の分布特性と宿貝利用を通して、人間生活ならびに個体群の増減との関係を調査し、廃村後の個体群動態を予測した。(1)沖縄県西表島網取遺跡の発掘調査では、初期水田遺跡の水源・供給施設の全体構造解明を目的として調査を実施した。その結果、溜井とその堰堤となる石積みを検出し、併せて用水路の取水施設を確認できた。石積みは17世紀代の4a層田面に対応する。さらに石積みの下面は津波痕跡で覆われており、その直下に15世紀から16世紀後半の田面と推定される5a層が確認された。すなわち網取遺跡における初期水田跡は中世に遡ることと、近世の水田開発との間には津波による水田遺構全体の破壊を介在する、という歴史的経緯が内在する可能性が高いことが明らかとなった。出土遺物にも恵まれ、放射性炭素年代測定結果を補強する材料を入手できた。このような津波痕跡の検出は環境と人類との相互作用の解明を目指す本研究にとって、予想外の展開に結びつくものであり、きわめて重要である。(2)宮古島長墓遺跡の調査成果については、網取遺跡の先史時代貝塚における貝種の組成との比較検討をおこなうべく、全点の同定・計測を実施し、復元される漁労形態を生息域との関係のもとに整理した。その結果、先史時代においても交易に特化した漁労が存在した可能性が浮き彫りになった。(3)沖縄県西表島祖内遺跡の発掘調査では、中世に遡る水田跡を確認した。目下年代・花粉分析等の分析を進めながら、検出遺構の性格を追求中である。(4)八重山諸島、特に西表島における近世の水稲農耕の拡大・維持、農業形態の変遷、さらに放棄による乾燥化など、人間活動等に伴う湿地環境の変遷を背景に、それらの環境に生息するゲンゴロウ類の水生生物相や水鳥相の現状を明らかにした。また水稲栽培を行う海岸集落に生息する大型オカヤドカリと漁労採集生活によって投棄される貝殻の宿貝利用との関係を明らかにした。(1)考古学部門:北條と田崎は網取遺跡における初期水田調査を実施し、2010年度に中世期の津波痕跡の可能性が指摘された水田層下層に広がる"サンゴ礫堆積"の性格究明を目指した。その結果は、本堆積が人為的なものであることが判明し、津波堆積である可能性は否定されることとなった。その反面、水田層とは別に畠跡とみられる畝状遺構を検出し、本遺跡をとりまく人為景観の問題を整理することに成功した。このほか田崎は、2009年度に実施した祖納地区の埋没水田出土の炭化米の放射性炭素年代測定を行い、直上の土石流堆積層下面出土の中森式土器とあわせ、下層水田の時期を14世紀と特定できた。また、網取遺跡や宜野湾市新城下原第2遺跡、九州・瀬戸内地域、朝鮮半島南部の当該期の水田遺構及びの農具との比較検討に進め、沿海部湿地の環境変遷、湿地利用の契機、小区画水田、耕作形態などの側面から、琉球列島地域における稲作農耕の特性を考察した。一方マーク・ハドソンは宮古島長墓遺跡の現地調査を実施し、先史時代前期に遡る人骨資料等の発掘と分析および出土貝類の分析を2010年度から継続して実施した。(2)生物学部門:河野は『八重山地方の海岸集落における漁労採集習慣とオカヤドカリ類の関わり・廃村後40年を経過した旧網取集落跡周辺における大型オカヤドカリの分布特性と宿殻利用』に関する論文投稿準備と、これに比して現在も集落と漁労習慣が継続している「鳩間島のおける大型オカヤドカリの宿貝利用」、並びに全く人の生活しない無人島「仲ノ神島におけるオカヤドカリ類の分布と宿貝」に関する論文投稿を行なった。
全身性エリトマトーデス発症におけるArl8bの役割

低分子量G蛋白質Arl8bがウイルスや細菌のRNA成分を認識するToll-like Receptor 7(TLR7)と会合し、TLR7の機能を制御していることを明らかにした。そして全身性エリテマトーデス(SLE)のマウスモデルBXSB.Yaa、MRL/lprとTMPD投与によるSLEの発症においてArl8bの重要な役割を明らかにした。これはArl8bが形質細胞様樹状細胞(pDC)においてTLR7依存的に産生されるtype1 Interferonの産生に関わることと関係がある。さらにMRL/lprマウスにおいてはArl8bが制御性T細胞を調節してSLEの発症に関わっていることを明らかにした。全身性エリトマトーデス(SLE)は発症の9割以上が女性に認められ、多くの臓器に障害をもたらす自己免疫疾患である。しかし、いまだ発症のメカニズムが明らかにされておらず、メカニズムを解明してより良い治療法をもたらすことが求められている。SLEのモデルマウスにおいてSLEの発症にToll-like receptor 7 (TLR7)が重要な役割を果していることが報告されている。我々はTLR7に特異的に会合する分子Arl8bを同定した。Arl8bはlysosomeに局在するsmall G proteinで、樹状細胞においてTLR7の機能を調節している。特に形質細胞様樹状細胞においてTLR7刺激による1型インターフェロンの産生が著しく抑制されていた。このArl8bのノックアウトマウスをSLEのモデルマウスMRL-lpr/lprと交配すると、野生型のマウスでは30週までに約半数がSLEを発症して死亡する。しかしノックアウトマウスではSLEを発症せず全く死亡しないことが明らかになった。さらに、他のSLEの発症モデルにおいて検討を行った。BALB/cマウスに、免疫賦活剤として使用されるプリスタンを腹腔に投与すると3-4ヶ月でSLEを発症して約半数が死亡する。しかし、BALB/cのArl8bノックアウトマウスはSLEの兆候は殆どなく、全く死亡しなかった。このことからArl8bがSLEの発症と関わっていることが示唆された。このノックアウトマウスを用いてSLEの発症のメカニズムを解明する。Arl8bはlysosomeに局在する低分子量Gタンパク質で、樹状細胞においてTLR7の機能を調節している。このArl8bのノックアウトマウスをSLEのモデルマウスMRL-lpr/lprと交配すると、野生型のマウスでは約30週までに約半数がSLEを発症して死亡するのであるが、殆んど全くSLEを発症しなかった。SLEの指標である血清中の抗核酸抗体の値が低く、腎臓への抗体の沈着も著しく低下していた。脾臓肥大はArl8bノックアウトマウスでは著しく抑制されており、Flow cyometryにて解析すると、B220陽性の異常T細胞の増強が強く抑制されていた。そして、その原因がCD4陽性CD25陽性Foxp3陽性の制御性T細胞にあることを明らかにしつつある。これらのことからArl8bがどのようにして制御性T細胞を制御しているのか、何らかの因子が存在するのかをArrayを用いて解析する。さらに、このような殆んど全く症状が出ないという表現型はTLR7ノックアウトのMRL-lpr/lprマウスでは認められないことから、Arl8bがTLR7以外の受容体を調節してこのような表現型につながっている可能性が高いため、Arl8bと会合して制御性T細胞の分化や増殖に関わっている受容体を明らかにしていく予定である。MRL-lpr/lprに戻し交配したArl8bノックアウトマウスの脾臓肥大、リンパ節腫脹、皮膚炎の解析はある程度十分に行うことができた。Flow cytometerを用いた解析では、Arl8bノックアウトマウスにおいて、B220陽性の異常T細胞の増強が強く抑制されていることを観察し、制御性T細胞の割合も野生型のMRL-lpr/lprと比べて著しく高いことが明らかとなった。樹状細胞やマクロファージにおいてもArl8bノックアウトマウスにおいて野生型と異なるところがあるので、より詳しい解析を行う予定である。重要な点は、Arl8bが制御性T細胞の調節に関わっているということが明らかとなってきたということである。次にどのように調節しているのかを明らかにする。このように達成度としては良好と思われる。Toll-like receptor 7(TLR7)は病原体の核酸RNAを認識して活性化し、免疫応答を誘導する。特にウイルスのRNA成分を認識して1型インターフェロンを産生し、抗ウイルス反応を生体に惹起させる。抗ウイルス反応のため1型インターフェロンを大量に産生する細胞は形質細胞様樹状細胞(pDC)であり、病原体からの防御に重要な役割を果たしている。我々はTLR7に特異的に会合して、TLR7の反応を制御している分子を同定した。その分子はライソソームに局在する低分子量G蛋白質であるArl8bであった。

Arl8bの遺伝子を改変し、Arl8bの遺伝子発現が全く認められないArl8b Gene Trap(Arl8bGt)マウスを用いて解析するとArl8bGtのpDCはインフルエンザに対して1型インターフェロン産生が顕著に低下した。Arl8bはPLEKHM2と会合してライソソームの順行性輸送に関わっているため、PLEKHM2のノックアウトマウスのpDCで検討すると1型インターフェロンの産生がTLR7依存的に減少していた。このことからArl8bによるTLR7を含んだライソソームの輸送が、1型インターフェロンの産生と関係していることが明らかとなった。この結果はNature communicationに投稿している。さらにTLR7は自己の生体内のRNA成分にも反応して全身性エリテマトーデス(SLE)への関与が報告されている。そのため、Arl8bGtマウスとSLEのモデルマウスであるMRL-lprとBXSB-Yaaマウスと交配したところ、全くSLEが発症しなかった。さらにプリスタン投与によるSLEの発症モデルにおいてもArl8bGtマウスでSLEは発症しなかった。これらの結果はJournal of Experimental Medicineに投稿準備中である。Arl8bGtマウスとSLEのモデルマウスMRL-lprマウスを交配すると、SLEの発症は殆んど認められなくなることが明らかとなった。脾臓肥大やリンパ節腫脹も著しく抑制されており、全身性の炎症が抑制されていた。MRL-lprマウスはT細胞の細胞死に関わっているFAS遺伝子の変異により、T細胞の死が抑えられ異常なT細胞が著しく増加することが知られている。しかしArl8bGtマウスにおいては異常なT細胞の増強が著しく抑制されていた。その原因を検討すると制御性T細胞が野生型に比べて割合が著しく高いことが明らかとなった。そして、我々の研究結果からArl8bが制御性T細胞の調節の機構に関わっている可能性が示唆された。SLEのモデルマウスだけでなく、C57BL/6においてもArl8bGtマウスは野生型マウスに比べて制御性T細胞の割合が高いことが明らかになりつつある。さらにもう一つのSLEのモデルマウスBXSB-Yaaマウスにおいても脾臓肥大やリンパ節腫脹が全く認められなかった。このことから、BXSB-Yaaマウスにおいても制御性T細胞の著しい増加があるものと考えられる。さらにSLEのモデルマウス以外でT細胞が関わる自己免疫疾患モデルの実験的自己免疫性脳脊髄炎での解析も予定している。我々はMRL-lprマウスにおいて野生型マウスでは週齢が進むとともに制御性T細胞の割合が減少することを認めた。しかし、Arl8bGtマウスでは週齢が進んでも制御性T細胞は殆んど減少しないことが明らかになりつつある。Arl8bGtマウスにおける制御性T細胞の機能に関してはこれから検討予定である。機能に違いが認められた場合Arl8bGtの制御性T細胞の遺伝子発現を野生型の制御性T細胞と比較する。さらにArl8bに会合するT細胞内の分子を同定し、Arl8bが制御性T細胞を調節する機構を明らかにする予定である。
中枢神経系悪性リンパ腫に特異的な遺伝子異常の機能解析と新規分子標的治療の開発

我々のグループの先行研究で報告した、中枢神経系に原発する悪性リンパ腫(Primary Central Nervous System Lymphoma; PCNSL)において全身性悪性リンパ腫と比較して高頻度の変異が認められた遺伝子のうち、特にPCNSLで高頻度(全身性悪性リンパ腫で10-30%の頻度であるのに対しPCNSLで100%)であった癌原遺伝子PIM1の変異がPCNSLの腫瘍原性においてどのような役割を果たしているのかを解明し、PCNSLに対する新規分子標的治療法を開発する事を目標として研究を開始した。2016年(初年度)は、まず臨床で特に繰り返し高頻度に認められたPIM1遺伝子変異の機能解析を開始し、それらのうち、一部については活性型変異である可能性が示唆された。2017年度、および2018年度はこれらの活性型変異が疑われたPIM1変異につき更なる機能解析ならびに発がんメカニズムへの関与についての検討を行い、今回検討を行った活性型変異体ではPim-1の局在変化を通じて細胞死抑制がもたらされる可能性が示唆された。さらに、中枢神経系に原発した悪性リンパ腫が全身へ転移した場合、逆に全身性のびまん性大細胞性B細胞リンパ腫(DLBCL)が中枢神経系に転移再発した場合、それぞれの病巣における遺伝子変異のプロファイルにどのような変異が生じているかを知ることにより、同じDLBCLである中枢神経系と全身他臓器の腫瘍の発生と進展に関する知見が得られる可能性があり、本研究のコンセプトの一部として当科における標本と、共同研究施設である横浜市立大学での症例の標本を収集し、パネル解析を行っている。PIM1遺伝子変異の腫瘍原性について評価するため、特に臨床サンプルで高頻度に認められたPIM1変異体を作製しHeLa細胞株に導入、シグナル下流の評価としてPim-1の既知の基質であるBAD (Bcl-2 associated death promoter)のPim-1によるリン酸化をウエスタンブロットで評価した。その結果、特にK115N変異体を導入した細胞で野生型と比較してBADのリン酸化の亢進を認めた。更にK115N変異が細胞死誘導にもたらす影響を検討するため、GFP-タグ付き野生型PIM1およびK115N変異体をそれぞれBADを内在性に発現するヒト神経芽細胞腫細胞株であるNagai細胞に導入し、血清除去下でのカンプトテシン処理による細胞死誘導をGFP陽性細胞の死細胞染色で評価を行ったところ、PIM-1野生型と比較してK115N変異体発現細胞で細胞死誘導の抑制を認めた。また、PIM-1野生型およびK115N変異体におけるPIM-1の細胞内局在を評価するため、PIM1野生型ならびにK115N変異体を導入したHeLa細胞で免疫染色法ならびに細胞分画法による検討を行ったところ、K115N変異体で野生型と比較してPim-1の細胞質分画の上昇を認めた。更にK115N変異体ではPim-1のバンドの上方偏位が認められたため、バンドの上方偏移に関与する翻訳後修飾について検討した結果、K115N変異体では糖鎖阻害剤である2-デオキシ-D-グルコースの投与によってバンドの上方偏移の解除が認められ、更に糖鎖阻害剤であるツニカマイシンの投与によってK115N変異体でPim-1の細胞質局在の低下を認め、K115N変異体において糖鎖付加がPim-1の細胞質局在に関わっている可能性が示唆された。中枢神経系と全身でのDLBCL病巣間の変異解析は現在進行中で、特異的な変異を検出した。PIM-1変異体による細胞死の抑制がBADのリン酸化に依存しているものかどうかを、野生型PIM1ならびにK115N変異体を導入した細胞株で、BADのsiRNAによるノックダウン、BADの細胞死誘導に対する優勢変異体の導入、もしくはPIM阻害剤を用いた検討等で行う予定である。更に、ヒトDiffuse Large Bcell lymphoma培養細胞株もしくはヒトPCNSL培養細胞株に対して既に作成済のウイルスベクターを用いて各PIM1変異体の導入を行い、一連の実験結果が再現可能かどうか検証を行う予定である。中枢神経系と全身でのDLBCL病巣間の変異解析を継続し、特徴ある変異のプロファイルを探索する。また中枢神経系へのホーミングに関与する可能性が示唆される変異が検出されれば、細胞内での機能解析を計画する。我々のグループの先行研究で報告した、中枢神経系に原発する悪性リンパ腫(Primary Central Nervous System Lymphoma; PCNSL)において、全身性悪性リンパ腫と比較して高頻度の変異が認められた遺伝子のうち、特にPCNSLで高頻度(全身性悪性リンパ腫で10-30%の頻度であるのに対しPCNSLで100%)であった癌原遺伝子PIM1の変異がPCNSLの腫瘍原性においてどのような役割を果たしているのかを解明し、未だ有効な治療法の存在しないPCNSLに対するな新規分子標的治療法を開発する事を目標として研究を開始した。現在、これらの活性型変異が疑われたPIM1変異につき更なる機能解析ならびに発がんメカニズムへの関与についての検討を進めており、in-vivo実験に向けての準備も行っている。PCNSLの発生起源及び転移メカニズムを解明する目的で、PCNSLの全身転移または全身DLBCLからの脳転移患者において、脳内及び他臓器における腫瘍標本の収集を準備している。

PIM1遺伝子変異の腫瘍原性について評価するため、まず、特に臨床サンプルで高頻度に繰り返し認められたPIM変異体cDNAを、PIM1 (short form)を用いて作製し、それぞれHek293T細胞およびヒト神経膠芽腫細胞株であるT98G細胞に導入して、各PIM-1変異体の発現量をウエスタンブロットで解析した。また、シグナル下流の評価として既知のPIM-1の基質であるBAD (Bcl-2 associated death promoter)のPIM-1によるリン酸化を評価するため、BAD内在性発現が確認されたヒト神経芽細胞腫細胞株であるNagai細胞に野生型および変異体PIM1を導入し、ウエスタンブロットで評価した。その結果、特にK115N変異体を導入した細胞では、野生型と比較してPIM-1発現の上昇とシグナル下流のBADのリン酸化の亢進が認められた。また、K115N変異が細胞死誘導にもたらす影響を検討するために、GFP-タグ付き野生型PIM1およびK115N変異体をそれぞれNagai細胞に導入し、血清除去下でのカンプトテシン処理による細胞死誘導を、GFP陽性細胞の死細胞染色で評価を行ったところ、PIM1野生型と比較してK115N変異体発現細胞では細胞死誘導の抑制が認められた。また、PIM1野生型およびK115N変異体におけるPIM-1の分解速度の差を評価するため、PIM1野生型ならびにK115N変異体を導入したT98G細胞でシクロヘキシミド追跡実験を行ったところ、K115N変異体で野生型と比較してPIM-1分解の遅延が認められた。更に、K115N変異体では野生型と比較してPP2A (Protein phosphatase 2A)との結合が低下していることが免疫沈降法で明らかになったことから、PP2AがPIM-1の分解遅延に関わっている可能性が示唆された。我々のグループの先行研究で報告した、中枢神経系に原発する悪性リンパ腫(Primary Central Nervous System Lymphoma; PCNSL)において、全身性悪性リンパ腫と比較して高頻度の変異が認められた遺伝子のうち、特にPCNSLで高頻度(全身性悪性リンパ腫で10-30%の頻度であるのに対しPCNSLで100%)であった癌原遺伝子PIM1の変異がPCNSLの腫瘍原性においてどのような役割を果たしているのかを解明し、未だ有効な治療法の存在しないPCNSLに対する新規分子標的治療法を開発する事を目標として研究を開始した。2016年(初年度)は、まず臨床で特に繰り返し高頻度に認められたPIM1遺伝子変異の機能解析を開始し、それらのうち、一部については活性型変異である可能性が示唆された。2017年度は、これらの活性型変異が疑われたPIM1変異につき更なる機能解析ならびに発がんメカニズムへの関与についての検討を進めた。その結果、特にK115N変異体を導入した細胞では、野生型と比較してPIM-1発現の上昇とシグナル下流のBADのリン酸化の亢進が認められ、細胞死誘導の抑制が認められた。さらにPIM-1分解の遅延が認められた。また、K115N変異体では野生型と比較してウエスタンブロットにてPIM-1のバンドの上方偏移が認められ、K115N変異体において糖鎖付加がPIM-1の分解遅延に関わっている可能性が示唆された。
炎症性微小環境に起因する胃癌の悪性化進展機構の解明と抗悪性化療法の開発

慢性炎症に伴う炎症性微小環境は胃癌発生の重要な危険因子である。本研究では、炎症性微小環境の線維芽細胞やマクロファージが胃癌の悪性化進展過程に促進的に関与することを明らかにした。さらに、癌特異的に増殖して癌抑制遺伝子p53を誘導する腫瘍融解アデノウイルス製剤OBP-702が胃癌の腹膜播種性転移を強力に抑制する新たな治療戦略となる可能性を明らかにした。慢性胃炎に伴う炎症性微小環境は胃癌発生の重要な危険因子である。しかし、胃癌の浸潤や転移などの悪性化進展における炎症性微小環境の関与は不明である。我々は、これまで炎症性微小環境による大腸癌・線維肉腫の発生や悪性化進展機構の解明を行い、癌抑制遺伝子p53、FHITの発現誘導による癌細胞への細胞死の誘導や悪性化進展の抑制効果について検証してきた。本研究では、胃癌の悪性化進展過程における炎症性微小環境の関与とその分子機構を明らかにし、癌抑制遺伝子p53の誘導による癌幹細胞と微小環境を制御する新たな抗悪性化療法の開発を行う。平成26年度は、分化度の異なるヒト胃癌細胞株4種類(高分化型腺癌(MKN7)、中分化型腺癌(MKN74)、低分化型腺癌(MKN45)、未分化型スキルス癌(KatoIII))と微小環境を構成するヒト線維芽細胞株2種類(WI-38、FEF3)との相互作用について検証した。まず、4種類の胃癌細胞株を無血清培地で48時間培養し、細胞成分を除いた無血清培地をそれぞれ回収した。各胃癌細胞株由来の無血清培地でヒト線維芽細胞株WI-38、FEF3を5日間培養し、線維芽細胞の活性化について形態学的変化や癌関連線維芽細胞マーカー(&#61537;-SMA、FAP)の発現をウェスタンブロット法で検証した。高分化型胃癌細胞株MKN7と中分化型胃癌細胞株MKN74由来の無血清培地の処理によって、ヒト線維芽細胞株WI-38、FEF3は活性化を示す筋線維芽細胞株様の紡錘形で密に収縮した形態変化を示し、&#61537;-SMAの発現は増加したが、FAPの発現は変化しなかった。一方、低分化型胃癌細胞株MKN45と未分化型スキルス胃癌細胞株KatoIII由来の無血清培地の処理によって、線維芽細胞株は活性化を示す形態変化やマーカーの発現増加を認めなかった。本研究では、胃癌の悪性化進展過程における炎症性微小環境の関与とその分子機構を明らかにし、癌抑制遺伝子p53の誘導による胃癌細胞と微小環境を制御する新たな抗悪性化療法の開発を行う。平成27年度は、Intestinal type(腸型)のヒト高分化型胃癌細胞株MKN7が誘導する活性化線維芽細胞がMKN7の遊走能に及ぼす影響と炎症性サイトカインの関与について検討した。MKN7無血清培養上清を添加してヒト線維芽細胞株FEF-3に活性化線維芽細胞を誘導した際の培養上清を再びMKN7に添加した場合、MKN7の遊走能は有意に上昇した。活性化線維芽細胞が分泌する炎症性サイトカインTGF-βでMKN7を処理した場合、形態学的に紡錘形に変化したためEMTの誘導を介して間葉系形質を獲得している可能性が示唆された。次に、炎症性微小環境を構成するマクロファージ細胞株RAW264.7がMKN7の悪性化進展に及ぼす影響を検討した。炎症性微小環境に存在する3種類のマクロファージ(M0型、M1型、M2型)を想定し、3種類のRAW264.7(未処理(M0型)、LPS/IFN-γ処理(M1型)、IL-4処理(M2型))を作成した。3種類のRAW264.7をMKN7と共培養した場合、全てのタイプのRAW264.7がMKN7のE-カドヘリン発現を低下させ、炎症性微小環境に存在するマクロファージがMKN7にEMTを誘導する可能性が示唆された。次に、我々が開発したテロメラーゼ依存的に制限増殖して癌抑制遺伝子p53を誘導するアデノウイルス製剤OBP-702とすでに臨床応用されているp53を誘導する非増殖型アデノウイルス製剤Ad-p53を用いて、ヒト胃癌細胞株に対するin vitroでの抗腫瘍効果を検討した。全ての胃癌細胞株において、OBP-702はAd-p53よりも強力な抗腫瘍効果を示した。平成27年度は、Intestinal type(腸型)のヒト胃癌細胞株が誘導する活性化線維芽細胞が胃癌細胞の悪性化進展を誘導する事と炎症性サイトカインの関与を明らかにした。炎症性微小環境を構成するマクロファージが胃癌細胞の悪性化進展を誘導する事を明らかにした。ヒト胃癌細胞に対してp53を誘導するOBP-702はすでに臨床応用されているAd-p53よりも強力な抗腫瘍効果を起こす事を明らかにした。今後、胃癌細胞の悪性化進展に対するOBP-702やAd-p53を用いたp53誘導療法のin vivoでの治療効果やその分子機構を明らかにする事が期待され、計画はおおむね順調に進展していると評価できる。