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新たな簡易凍結徒手切片法を用いた動物組織を観察する実習の開発と高等学校での実践

新たに開発した「簡易凍結徒手切片法」を用い、動物・生命そのものに立脚し、多様な動物門の動物の組織を見る高等学校生物の実験を開発した。多様な動物を観察する長所を活かし、これまでにない動物の系統、進化、体の複雑さを実感する実験を作成した。具体的には、側生動物のカイメン、後生動物で二胚葉性の刺胞動物のヒドラ、前口動物で扁形動物のプラナリア、環形動物のミミズ、後口動物の脊索動物のナメクジウオ、脊椎動物に属するイモリ胚の体のつくりを、実物を通して観察できる実験となった。実際の動物の観察に加え、多様な動物の体のつくりを比較することで、動物界を俯瞰し、各動物の特徴が実感出来るものとなった。高等学校生物で、動物の組織の観察を伴う新規の実習を開発し、新課程の生物が知識に偏ることなく、「動物・生命そのものに立脚し、生徒の実感を伴う学習」となるようにする。新たに開発した「簡易凍結徒手切片法」を用いると、従来、煩雑さから全く実施されなかった動物組織を見る実験が実施できるようになったので、本研究では「生徒の活動を伴う、動物の特徴を総合的に理解する新規の実習」を複数開発することを目的とした。今年度は、動物の系統や、組織の複雑化の実習・授業案を作成した。この単元では、従来、図による教科書の内容説明が主な授業内容であったが、簡易凍結切片法を用いて様々な動物の組織構造を観察することで、実習による実感を伴った授業例を作成できた。材料として、カイメン、ヒドラ、プラナリア、ミミズ、イモリの内部構造が分かるプレパラートを作成して、演示資料とした。カイメンの組織から骨片や乱雑な細胞群、ヒドラの組織から細胞層や腸の存在、プラナリアの観察から多数の間充識細胞の存在、ミミズの組織から中胚葉に被われた真体腔の存在、イモリ幼生の組織から、神経管や太い脊索、腸や体腔の存在が観察できた。このように、細胞分化、胚葉形成、腸の分化、間充織の発達、真体腔の出現、体腔スペースの出現等、系統や進化の単元を実際の組織観察を通して実感を伴う実習例となった。京都府立城南菱創高等学校で、以上の動物に加え、ゾウリムシ、ウニの動物例を加えて、実験台毎に別の動物を配置し、生徒が順に回って各動物を観察・スケッチするサーキット形態の実習を行った。その後、動物の系統図と特徴をまとめる実習とした。以上のように、動物界や組織の複雑化を全体として理解する内容になったと思われる。高等学校生物で、動物組織の観察を伴う新規の実習を開発し、新課程の生物が知識に偏ることなく、「動物・生命そのものに立脚し、生徒の実感を伴う学習」となるようにする。新たに開発した「簡易凍結徒手切片法」は、従来、専用機器、高度な技術、煩雑な操作と時間を必要とした動物の組織実習を、極めて短時間に簡便に標本を作成できるようにした。この簡便さにより、どの学校でも普通に動物組織を観察できるようになり、生徒の実習課題や内容を大幅に広げた。特に、その煩雑さから対象がマウス等の実験動物に偏っていたが、様々な動物門に属する生物の組織を見る機会が得られた。多様な動物門の動物を実際に観察する長所を活かし、これまでにない動物の系統、進化、体の複雑化を実感する授業案を作成した。具体的には、カイメン、ヒドラ、プラナリア、ミミズ、イモリ幼生、ニワトリ胚の組織を観察し、各々、乱雑な細胞群、胚葉の出現と腸/体外消化、間充識組織の発達、真体腔と腸/血管の発達・体液と筋肉2層による運動、神経管/脊索の発達・腹腔/胸腔と内臓器官の発達を実際に確認できる教材が開発できた。動物の系統や進化の単元で、具体的な動物や実際の観察を伴う実習はほとんどなかったので意義は大きい。生物の学習の終わりに動物分類・系統の単元において、後生動物を俯瞰する内容とすると効果的であろう。H26年度の進捗について、第一は、脊椎動物の特徴を理解する動物として、脊索動物のナメクジウオの体と組織を観察し、イモリ幼生と比較し、脊索と神経等で脊索動物を実感を通して理解、腹腔の発達で内臓器官の充実が理解できるようにした。先の動物群にナメクジウオを加え、京都府立高校で実践した。第二は視覚器に注目し、昆虫の複眼を見るとともに、脊椎動物では、視細胞と色素細胞の機能を本質的に理解するためには、従来の哺乳類より、フナや両生類が適している結果を得た。特に、その煩雑さからマウス等の実験動物に偏っていたが、多様な動物門に属する生物の組織を見る機会が得られた。

多様な動物門に属する生物の組織を観察する長所を活かし、これまでにない動物の系統、進化、体の複雑さを実感する授業案、実験案を作成した。H25年度からH26年度にかけて、広く動物の系統を俯瞰するために、幅広い多様な動物を対象とした。具体的には、側生動物に属するカイメン、後生動物で二胚葉性の刺胞動物のヒドラ、前口動物の扁形動物のプラナリア、環形動物のミミズ、後口動物の脊椎動物に属するイモリ、ニワトリ胚の体のつくりを、実物を通して観察できる実験となった。このように、実際の動物本体の観察に加え、多様な動物の体のつくりを比較、観察することで、それぞれの動物の特徴が実感出来るものとなった。これまで動物の系統を広く俯瞰する実験はないため、類のない重要な実験が開発できた。最終年度に当たるH27年度は、さらに、脊索動物のナメクジウオを取り上げ、簡易凍結徒手切片法で、体の横断面の構造を観察する実験を開発した。この観察により、脊索動物の太い脊索が実際に観察でき、脊椎動物のイモリ胚、ニワトリ胚への連続性を実感する実験となった。H26年度まで、脊椎動物以外の動物門に属する動物が多かったが、本年度の観察により、後口動物の脊索動物を含むより広い充実した内容となった。新たに開発した「簡易凍結徒手切片法」を用い、動物・生命そのものに立脚し、多様な動物門の動物の組織を見る高等学校生物の実験を開発した。多様な動物を観察する長所を活かし、これまでにない動物の系統、進化、体の複雑さを実感する実験を作成した。具体的には、側生動物のカイメン、後生動物で二胚葉性の刺胞動物のヒドラ、前口動物で扁形動物のプラナリア、環形動物のミミズ、後口動物の脊索動物のナメクジウオ、脊椎動物に属するイモリ胚の体のつくりを、実物を通して観察できる実験となった。実際の動物の観察に加え、多様な動物の体のつくりを比較することで、動物界を俯瞰し、各動物の特徴が実感出来るものとなった。高等学校生物では、動物界の特徴を総合的に理解する実習はほとんどないが、簡易凍結徒手切片法を用いることで、各動物門の動物の存在、各動物門の動物の特徴、系統と進化を理解する実習が新たに考案できた。H25-H26年度の研究結果から、以下の内容を理解する実習を考案、実践した。カイメンの観察から、骨片や乱雑に散在する細胞、襟細胞、扁平細胞、アメーバ細胞、卵細胞といった細胞分化が理解できる。ヒドラの観察から、内胚葉や外胚葉といった胚葉の出現、腸の形成と体外消化、刺細胞や消化細胞など多様な細胞分化が理解できる。プラナリアの観察から、間充識組織の発達、間充識空間の出現と腸の発達が理解できる。ミミズの観察から、縦走、輪走の2層の筋肉層、中胚葉に覆われた真体腔の存在、腸管の発達、血管の存在、体液・体節構造と筋層による運動などが理解できる。ヌマエビの観察から、背側の腸管と腹側の神経管の配置、発達した筋肉層などが理解できる。ナメクジウオの観察から、脊索動物門の理解、脊索による体の支持、神経管/脊索/腸の配置が理解できる。イモリ幼生の観察から、頭部の中枢神経の発達、顎の出現、脊索による体の支持、体側中胚葉や臟側中胚葉に覆われた腸管と広大な腹腔/胸腔の存在が理解できる。これらの観察内容は、細胞分化、細胞接着、細胞層、細胞外基質、腸の分化、真体腔の発達、腹腔/胸腔と内臓器官の発達など、後生動物の体の基本的なつくりを理解できるものであり、私たちヒトの体の構造や成り立ち、機能を基本的に理解することへと繋がるものである。京都府立高校での実践により、サーキット形式による具体的な実習指導案を考案した。アンケート結果から、カイメン、ヒドラといった動物を見たり、学んだ経験がないことがわかり、これらの動物を実際に見る、理解する機会を提供する必要性がわかった。科学教育これまで、動物分類・系統と進化の単元で、新たに、多様な動物門に属する動物の体の組織構造を学ぶ実習案を立案することができた。
IκBのユビキチンリガーゼの同定

生理学的あるいは病理学的側面から、近年、転写因子NF-κBに対する注目が集まっている。NF-κBはその阻害タンパク質であるIκBのリン酸化、引き続き起こるIκBのユビキチン化、プロテアソームによる分解により、活性化状態となり、核に移行する。本研究では、IκBのユビキチン化の分子機構の解明を目的として、はじめにIκBのin vitroユビキチン化系を確立した。最近の報告で、IκBのユビキチンリガーゼE3のコンポーネントとしてF-boxタンパク質βTRCPが同定された。この分子は、Skp1、Cullin1タンパク質とともに複合体を形成し、SCF複合体と称されるE3のファミリーに属する。我々は、ユビキチン化活性化酵素E1、IκBkinaseのcatalyticなサブユニットIKKβ、βTRCP、Skp1、Cullin1および基質であるIκBをバキュロウイルス発現系により、ユビキチン結合酵素E2としてUBCH5を大腸菌の発現系により、大量発現させて、これを精製後、in vitroユビキチン化アッセイを行った。その結果、上記成分のみでは十分なユビキチン化が観察されなかったので、最近になりSCF familyのcomponentとして見つかったRoc1タンパク質が、このIκBのin vitroユビキチン化を促進するかどうかを検討したところ、Roc1存在下でユビキチン化が観察された。さらに、Cullin1の修飾因子としてユビキチン様タンパク質Nedd8が報告されているが、Nedd8修飾系の酵素群、APPBP-1、Uba3、UBC12およびNedd8のリコンピナントタンパク質を調製し、上記のIκBのユビキチン系に加えたところ、ユビキチン化が飛躍的に上昇した。細胞内ではこのNedd8修飾系によるユビキチンリガーゼの活性調節が、IκBキナーゼ系と共役して、NF-κB活性化の情報伝達に関与している可能性が考えられる。
漆に及ぼす微量金属成分の影響に関する研究

本研究の成果は下記の2章にまとめた。1。生漆と鉛及び銅粉末との反応生漆は特定の金属に触れると着色するため,発色に大きな影響を与える。そこで,本研究者はすでに生漆に及ぼす鉄,亜鉛,マンガンの影響を明らかにしていた。本報では,さらに鉛,銅金属粉末を加えて反応性を検討した。反応性は反応物ノアセトン及びメタノール抽出を行い,溶剤可溶となった金属量より求めた。静置反応,撹拌反応ともに鉛が活性であったが,銅はほとんど活性を示さなかった。鉛はメタノール可溶部よりアセトン可溶部に多く取り込まれていたが,銅では両部にほとんど差が認められなかった。これらは金属はウルシオールとは反応せず,反応にはラッカーゼ酵素を必要とする結果が得られた。2。生漆と混合金属粉末との反応本研究では,鉄,鉛,マンガン,亜鉛及び銅金属粉末,及びこれらの金属の2種混合粉末の生漆に対する反応性を撹拌反応を行って検討した。金属単独では,鉄,鉛,マンガン,亜鉛,銅の順で反応性が低くなるが,鉄に鉛,マンガンまたは亜鉛が混入されると鉄の反応性が低くなり,また,鉛にマンガンまたは亜鉛を混入すると,鉛の反応性が低くなった。他の金属のマンガン,亜鉛,銅の組み合わせでは,金属単独の時の反応性と同じで,その順位は入れ替わることはなかった。反応生成物の分析結果から,特にマンガンを用いた場合に酸化反応や核置換反応が起きていると推定される結果を得た。1。2。本年度の研究実施計画に基づき,下記の2項目について研究を行った。1。生漆の各種金属粉末の取り込み量について生漆は特定の金属に触れると着色するため,発色に大きな影響を与える。そこで本研究では鉛及び銅粉末の生漆に対する反応性を検討した。反応性は反応物のアセトン及びメタノール抽出を行い,溶剤可溶となった金属量を原子吸光光度計を用いて測定した。また,鉛はメタノール可溶部よりアセトン可溶部に多く取り込まれていたが,銅では両部にほとんど差が認められなかった。これら金属はウルシオールとは反応せず,反応するにはラッカーゼ酵素を必要とする結果が得られた。鉛との反応物の抽出溶剤による大きな違いは,アセトン可溶部にはジベンゾフラン誘導体が含まれ,メタノール可溶部には含まれないことが^1H-NMRスペクトルの結果から推察された。また,反応時間及び抽出溶剤を変えた反応物の可視吸収スペクトルの結果から錯体の変化も予想され,ジベンゾフラン誘導体を含む鉛錯体がアセトン可溶となったと推察される結果を得た。2。金属種による生漆の塗膜形成への影響を調べるための予備実験金属種の違いによる生漆の塗膜形成への影響を調べるための予備実験として,鉛粉末を用いて生漆の乾燥条件,粉末量と乾燥速度との関係等の検討を行っている。生漆は特定の金属に触れると黒っぽく着色するため,塗り上がりの発色に大きな影響を与える。したがって,漆の精製工程中はもとより,保存中や,使用する道具類にも,このような金属類を使用することは出来ない。生漆は金属粉末との反応を続けると,金属粉末がイオン化され,漆の主成分ウルシオールと錯体を生成する。この錯体生成が生漆の着色の原因と考えられる。したがって,金属粉末との反応により生漆の主成分ウルシオール中に取り込まれた金属量を測定することにより,生漆の反応初期のイオン化能を求めることが出来る。本研究では,鉄,鉛,マンガン,亜鉛及び銅の金属粉末,及びこれら金属の2種混合粉末の生漆に対する反応性を攪拌反応を行って明かにした。

金属単独では鉄,鉛,マンガン,亜鉛,銅の順で反応性が低くなるが,鉄に鉛,マンガンまたは亜鉛を混入すると,鉄の反応性が低くなり,また,鉛にマンガンまたは亜鉛を混入すると,鉛の反応性が低くなった。他の金属のマンガン,亜鉛,銅の組み合わせでは,金属単独の時の反応性と同じで,その順位は入れ替わることはなかった。混合金属系のイオン化傾向の組み合わせを考えると,イオン化傾向の高いもの程反応性は高くなっている。しかし,鉄と鉛の系では,鉄がイオン化傾向が大きく,例外的な結果となった。反応生成物の分析結果から,特にマンガンを用いた場合に酸化反応や核置換反応を含む複雑な反応を起こしていると推察される結果を得た。また,マンガン含有の生漆の乾燥時間は極端に悪くなった。
ノルエピネフリンの昇圧効果について(腎でのNa代謝について)

ノルエピネフリン(NE)は交感神経節末端より同神経の刺激により放出される。腎臓では近位尿細管周囲に同神経が分布しており、NEの昇圧作用は近位尿細管のNa-K-ATPaseの活性を亢進することにより、ナトリウム保持に働くことがその一因であると考えられる。NEはラット近位尿細管においてalphaとbetaのadrenergic受容体に作用するが、NE自体はラット近位尿細管のNa-K-ATPaseの活性を変化させなかった。alpha-adrenergic受容体のアゴニストは同酵素の活性を亢進させ、beta-adrenergic受容体のアゴニストは活性を抑制した。従ってNEは両者に対する作用を打ち消してしまうのである。neuropeptide Yは同Na-K-ATPaseの活性を亢進させるが、alpha-adrenergic受容体のアゴニストと(細胞内のカルシウムを増加させることにより)互いに協調しあって同酵素活性を亢進し、(細胞内のcAMPの経路を介する)beta-adrenergic受容体のアゴニストの作用を阻害した。以上よりNEはneuropeptide Yの存在下において、ラット近位尿細管のNa-K-ATPaseの活性を亢進させ、腎でナトリウム保持に作用し、昇圧作用を生じると考えられる。日齢40日のSprague-Dawleyラットより、近位尿細管をmicrodissectして、その基底側膜に有るNa-K-ATPase活性を^<32>P-ATPの水解を利用して測定した。Norepinephrineはそれ単独ではNa-K-ATPase活性を亢進させたり抑制したりしなかった。aアゴニストは活性を亢進し、βアゴニストは活性を抑制した。Norepinephrineはαとβの両方の受容体に働くことより、相殺されてしまうようである。交感神経節末端からはNorepinephrineと共にNeuropeptide Yが放出されるが、両者は協調作用がある。Neuropeptide Yは単独ではNa-K-ATPase活性を亢進させるが、αアゴニストの作用をより亢進させ、βアゴニストの作用を抑制させる。従って、NorepinephrineはNeuropeptide Yと協調して、Na-K-ATPase活性を亢進させて、腎でのナトリウム保持作用を発揮していると考えられる。
幹細胞の上皮分化過程におけるクローディン－６シグナルの機能

マウスF9幹細胞やマウスES細胞において、クローディンー6は他のタイト結合分子の発現を誘導し、成熟した上皮細胞へ分化誘導することが分かった。また、クローディンー6の細胞間接着部位への局在、クローディンー6の2番目の細胞外ドメインとC末端細胞質内ドメインの前半部分、特に196番目と200番目のチロシン残基が、上皮分化誘導能に重要であることを明らかにした。更に、クローディンー6は、SFKsと相互作用し、196番目と200番目のチロシン残基がリン酸化されることで、上皮分化誘導シグナルを惹起していることを明らかにした。タイト結合分子クローディンー6をF9幹細胞やマウスES細胞に発現させた結果、クローディンー6は他のタイト結合分子や微絨毛構成分子の発現を誘導し、成熟した上皮細胞へ分化させることを明らかにした。また、クローディンー6を細胞間接着部位から除外できる食中毒菌Clostridium perfringensの腸毒素(CPE)のC末ペプチド(C-CPE)を作製し、クローディンー6発現F9幹細胞、マウスES細胞に添加した結果、C-CPEによってクローディンー6による上皮分化が顕著に阻害されることが分かった。このことから、クローディンー6の細胞間接着部位への局在が上皮分化誘導に重要であることが示唆された。これらの成果は、論文にて発表した(Sugimoto, Tomikawa et al., Plos One, 2013)。次に、様々クローディンー6変異体を発現するF9幹細胞株を樹立した結果、細胞外EC2ドメインとC末端細胞質内ドメインが上皮分化誘導に重要であることが分かった。更に、C末端細胞質内ドメインに存在する4つのチロシン残基のアラニン置換体発現F9幹細胞株を樹立した結果、196番目と200番目のチロシン残基が上皮分化誘導に重要であることが示唆された。クローディンー6の上皮分化誘導シグナルにSrc-family kinase(SFK)が関与しているのではないかと考え、SFKの特異的な活性化阻害剤を用いたところ、クローディンー6による上皮分化が顕著に阻害された。また、クローディンー6発現F9幹細胞やマウスES細胞では、SFKの活性化が顕著に更新することが明らかとなった。更に、活性化SFKはクローディンー6と相互作用することや、上皮分化を誘導しない上記クローディンー6変異体では活性化SFKとの相互作用が減少することから、クローディンー6はSFKと相互作用し、196番目と200番目のチロシン残基がリン酸化されることで上皮分化シグナルを惹起していることが示唆された。Cldn6を過剰発現させたマウスF9幹細胞株(F9:Cldn6)では、他のタイト結合分子や微絨毛形成分子の発現と上皮様細胞への分化が誘導されるが、Cldn6の発現をsiRNAによりノックダウンすると、これらの分子の発現誘導が抑制され、上皮分化が見られなくなった。また、食中毒菌Clostridium perfringensの腸毒素(CPE)のC末ペプチド(CCPE)は細胞傷害作用がなく、クローディン-4とクローディン-6に特異的に結合して、これらのクローディンの発現量を保ったまま細胞間接着部位から除外できる食中毒菌Clostridium perfringensの腸毒素(CPE)のC末ペプチド(C-CPE)を作製し、F9:Cldn6へ加えた結果、他のタイト結合分子や微絨毛形成分子の発現誘導と上皮分化が顕著に阻害されることが分かった。また、Tet-onシステムにより、doxycyclineの添加によってCldn6が発現するF9幹細胞株(F9:L32T2 Cldn6)を樹立した結果、Cldn6の発現に伴って、他のタイト結合分子や微絨毛形成分子の発現が誘導され、上皮分化が起こることが明らかとなった。更に、マウスES細胞においても、上皮分化誘導時にCldn6の発現が誘導されることや、ES細胞にCldn6を過剰発現させると顕著に上皮分化が誘導されることが分かった。以上の結果から、幹細胞の上皮分化において、Cldn6は分化誘導を促すコーディネーターとして機能することが明らかとなった。Cldn6は幹細胞の上皮分化において重要な機能を示すことを、cell lineであるF9だけではなく、マウスES細胞においても同様の結果が得られたことは大きい。また、C-CPEの添加実験により、Cldn6の発現だけではなく、Cldn6がタイト結合領域に局在することが、Cldn6の上皮分化機能に重要であることを明らかにすることが出来た。次に、Cldn6の機能ドメインを解析するために、Cldn6の細胞外ドメイン部位や細胞質内ドメインの欠損体、細胞質内ドメインに存在するチロシン残基のアラニン置換体のコンストラクトを作製し、各種変異体Cldn6を発現させたF9細胞株を樹立した。

更には、SFK分子の一つであり、Cldn6のシグナル分子として機能することが示唆されているBlkについて、過剰発現細胞株(F9:Blk)やレンチウィルスを用いたshRNAベクターの導入によって、Blkを恒常的にノックダウンさせたF9:Cldn6細胞株(F9:Cldn6 shBlk)の樹立も終えている。以上のことから、現在までに研究目的の過半数を達成することが出来ており、今後の解析に使用するツールの準備を終えていることから、本研究はおおむね順調に伸展しているとした。まず、作製したCldn6の細胞外ドメイン部位や細胞質内ドメインの欠損体、細胞質内ドメインに存在するチロシン残基のアラニン置換体を発現させたF9細胞株を用いて、次の解析を進める。1)これらのCldn6変異体発現F9細胞が上皮分化を起こすかどうかを解析し、上皮分化誘導に必要なドメインの同定を行う。2)これらのCldn6変異体と活性化SFKが相互作用するかを、免疫沈降法により解析を行い、SFKとの相互作用部位の同定を行う。3)チロシンリン酸化抗体を用いて免疫沈降を行い、上皮分化過程において、Cldn6がチロシンリン酸化されるかを明らかにする。更に、各種Cldn6変異体を用いて、上皮分化過程におけるチロシンリン酸化状態を検討し、どの部位のチロシン残基がチロシンリン酸化されるかを明確にする。以上の結果から、Cldn6の上皮分化誘導機能におけるCldn6の活性部位を同定し、その部位がSFKとの相互作用に重要であるかなど、上皮分化シグナルのメカニズムを明らかにする。次に、Cldn6のシグナル分子として機能することが示唆されているBlkについて、過剰発現細胞株(F9:Blk)を用いて、Cldn6とBlkの相互作用を検討する。また、F9:Cldn6 shBlkの形態変化を観察し、Cldn6の上皮分化誘導シグナル分子としてBlkが関与しているかを明らかにする。更には、マウスES細胞において、上皮分化過程におけるBlk発現の有無や、Cldn6との相互作用の有無を明らかにする。以上の結果から、Cldn6の上皮分化誘導シグナル分子として、SFKの中でも特にBlkが機能していることを明確にする。次年度の研究費の使用について、次の様に計画している。1)Cldn6変異体発現細胞の解析、SFKとの相互作用を検討するための抗体、ウェスタンブロット解析試薬、免疫染色試薬に使用する。2)F9細胞やマウスES培養のための培地、血清など培養用試薬に使用する。3)マウス発生初期胚におけるCldn6やBlk発現の解析を行うため、マウスなどの実験動物の購入及び解析試薬に使用する。4)各種実験を遂行するために必須なプラスチック製品などの試薬に使用する。5)細胞への各種遺伝子導入の試薬として発現ベクター、大腸菌、プラスミド精製キット、遺伝子導入試薬が必要であり、その購入に使用する。6)本研究の成果発表のための学会旅費(日本病理学会と細胞生物学会を予定)と論文投稿時における投稿費に使用する。
過疎地域における共同納骨堂に関する文化人類学的研究

本研究では、過疎地域において集落主体で建設と管理に参与する共同納骨堂に焦点を当て、地域社会が墓とどのように関わっているのかについて実証的な研究を行った。共同納骨堂が集中する奄美大島宇検村では、個人あるいは家による墓祭祀に関するさまざまな問題を解消するために、共同納骨堂の建設を集落の一事業として位置付け、集落ごとの規模や資金といった諸条件に合致するモデルを周辺地域から選び出し、適合化させていることが明らかになった。本研究は、奄美大島宇検村における共同納骨堂の事例をもとに、建設を支える要因を文化的、社会構造的、経済的観点から明らかにすることを目的としている。そのため、共同納骨堂をめぐる人々の言説や実践を、対象地域の社会的コンテクストに基づいて微視的な視点からとらえる。平成26年度の研究実績は以下のとおりである。第一に、これまでに一定の調査実績と情報蓄積がある宇検村田検集落との対比において、人口や建設時期、建設資金等の点で特徴的な宇検村湯湾集落で重点的に聞き取り調査を行った。その結果、建設に至る経緯や計画実施の過程、資金の確保、利用者の規定といった基礎的な項目を把握することができた。第二に、昭和30年代から50年代にかけての人口減少率の多寡と共同納骨堂の所有集落が一致しない現状を考察するため、共同納骨堂をもたない複数の集落を対象として聞き取り調査を行った。調査では、墓や葬送をめぐる実践や言説にとどまらず、集落の社会背景や生活実態、経済状況、集落運営のあり方といった多方面から状況を把握するように努めた。これにより、共同納骨堂を建設しない状況を人々がどのように考え、理由づけているのかを考察するための参考資料を得ることができた。第三に、共同納骨堂の建設に際した他出者の関与を検討するための聞き取り調査を実施した。今年度は田検集落と湯湾集落の出身者へインタビューを行い、集落行事や共同納骨堂建設への参与のあり方、墓祭祀の実情を把握することができた。以上の平成26年度に行った研究を通して、共同納骨堂の建設に強い影響を与えている要因を明らかにするための参考資料を得ることができたと考えている。本研究の目的は、奄美大島宇検村における共同納骨堂の事例をもとに、建設を支える要因を多角的に検討し、地域社会が墓とどのように関わっているかを明らかにすることにある。平成27年度の研究実績は以下の通りである。第一に、宇検村における共同納骨堂建設の先駆けである田検集落の約40年にわたる維持管理のあり方に注目し、集落主体で行われる普段の清掃作業や記念式典の実施、大々的な改修工事、納骨状況の変化に関する情報を収集した。長期的にこの現象を捉えることで、その利点や欠点、地域での意味づけを考察するための参考資料を得られた。第二に、建設計画の頓挫から約20年を経て完成に至った湯湾集落では、実現までの経緯を辿り、合意の形成過程とその阻害要因を検討した。加えて、「一族」で利用する墓から家族ごとの納骨室へ分化していく様子から墓をともにする範囲の変化を、また誰がどのような条件で利用できるかを定める過程からは人々が考える集落の広がりを知るための手がかりを得られた。第三に、建設を成し得た要因や条件を補完するため、共同納骨堂をもたない久志集落を調査対象としたが、状況が一転し2015年末には完成に至った。隣接する瀬戸内町で生まれた比較的安く建設できる形式の納骨堂が彼らの計画に勢いを与えたことは、資金確保の重要性を窺わせる。集落の規模や資金といった諸条件に合致するモデルを選び、適合させていく過程を垣間見ることができた。第四に、共同納骨堂建設や集落行事の実施に際して、金銭的に大きな役割を果たす他出者と寄付の仕組みに注目した。特に豊年祭での寄付は集落運営の貴重な財源でもあり、共同納骨堂を管理する集落への感謝の気持ちとしても認識されていることから、集落と他出者をつなぐ結節点としての働きを看取できた。ただ、故郷の墓をいつまで志向するかという問題は集落の運営とも関わる問題であり、今後さらに研究を深めたい。現時点での研究課題の達成度については、「やや遅れている」とした。その理由として、第一に当初予定していなかった関東・関西地区での現地調査を充実させる必要性が生じたこと、第二におおむね順調に進展している現地調査に比べ、成果報告が不十分である現状が挙げられる。まず、申請当初の研究計画では、一週間前後の調査を年に3回ほど行い、必要に応じて短期の補足調査を行うとしていた。奄美大島で予定していた調査については、おおむね計画通りに進めることができたと考えている。ただ、研究を進めるうちに、申請時にはそれほど重視していなかった他出者への聞き取り調査をより充実させる必要性が生じたことから、平成27年度も昨年度と同様に関東・関西地区での調査を組み入れる予定である。そのため、現地調査に割く時間が予定よりも増えることが予想される。

大学の業務に支障をきたすことがないように取り組みたい。次に、研究成果の報告についてである。当初の予定でも、平成26年度は新しい調査対象地域でのインテンシブな聞き取り調査を予定しており、現地調査を重視していた。また、補助金の交付時期との兼ね合いから、本研究への取り組みは実質的に平成26年10月からとなった。こうした事情から、現地調査を優先的に実施したため、研究成果の報告が不十分となっている。平成27年度は学会や研究会での報告ならびに論文の投稿を行い、研究成果を社会へ発信していくように努めたい。27年度が最終年度であるため、記入しない。文化人類学平成27年度は以下の計画に基づき、研究を進める。第一に、研究の中心である宇検村田検集落に関して補足の聞き取り調査を行う。とくに、約40年間にわたる維持管理の変遷について情報を収集、整理する。第二に、中心事例である宇検村田検集落との比較対象として、宇検村湯湾集落での重点的な調査を行う。当初の研究計画では、人口動態や建設時期、建設資金等の点で特徴的な宇検村屋鈍集落を想定していた。しかし、2015年4月19日に落成式が行われる湯湾集落では、今まさに既存の墓から共同納骨堂へ遺骨を移す作業等が行われている最中であり、こうした墓をめぐる人々の諸実践をより動態的に関連付けて捉えることができる事例だと考え、比較対象を変更した。また、当該集落は、村内の他集落に比べ、集落外や村外からの入込者が多く生活している。こうした事情が、共同納骨堂の加入規定や金銭的ハンデ、管理作業への関与とどのように関係してくるのかを明らかにしたい。第三に、人口減少率の多寡と共同納骨堂の所有集落が一致しない現状を考察するため、共同納骨堂を持たない集落のうち、昭和3050年代の人口減少率が村内でもっとも高い宇検村久志集落での調査を行い、建設をなしえた要因や集落の条件を補完する。研究計画では佐念集落のみを想定していたが、あわせて取り上げることで、資料を補強したい。第四に、昨年度に続き、関東関西在住の宇検村出身者への聞き取り調査と、鹿児島県に在住する出身者への聞き取り調査をあわせて行う。
円形精子細胞を用いた産子の作出に開する発生工学的研究

哺乳動物の精子は精巣内での減数分裂後、数日から数週間かけて形態変化、および成熟を遂げることにより初めて受精能を獲得する。しかし染色体レベルでは、すでに減数分裂直後の精子発生系列細胞、いわゆる円形精子細胞(round spermatid)の段階で、成熟精子同様同様、半数体となっており、個体発生に関与する能力を有するはずである。本研究は、この点に着目し、円形精子細胞の未受精卵への核移植により受精卵を構築し、産仔を得ることを目的としたのものである。この1年間の研究は、マウスの実験系を中心に進め、精巣からの円形精子細胞と成熟卵子を電気膜融合させることにより、受精卵を構築することに成功した。融合パルスの前後に高周波交流電流を流すことにより、融合(受精)率は、当初の10%から25%へ向上できた。また、構築胚用の培養液の改良(グルタミン添加、グルコース減量など)により、発生率の高めることが出来た。融合後20時間の培養で、90%が2細胞期に発生した。融合と非融合卵子を培養下で確認することは出来ないため(固定標本では可能)、非融合卵子を含む475個の処理卵子を8匹の偽妊娠雌の卵管に移植した。その結果、3匹が妊娠し、6匹の円形精子細胞由来の仔が生まれた(毛色により確認)。現在追試中で、85個を2匹の偽妊娠雌に移植し、1匹が妊娠していると思われる。本研究の結果より、精巣中の円形精子細胞も成熟精子と同様、卵子との受精後、個体を産出する能力を有することが初めて明らかにされた。この発見は、ヒト男性不妊の治療および新しい遺伝子導入動物作成法の開発を進める端緒となるであろう。
合金原子クラスターの構造と相変態

本研究ではナノメータ尺度のCu-AuおよびFe-Ni合金のそれぞれ規則-不規則変態とマルテンサイト変態を高分解能電子顕微鏡観察と電子回折ならびにコンピュータシミュレーションによって調べべ、これらの相変態に及ぼすサイズ効果とその要因を考察した.先ず、Cu_3AuとCuAu合金の原子クラスターを真空蒸着法により作製し、それらの規則原子配列、欠陥構造および規則-不規則変態の特徴を調べた結果、それらはバルクと同様の結晶構造や欠陥構造を有するが、L1_2およびL1_0規則化にはそれぞれある臨界サイズが存在すること、また、合金原子クラスターの規則-不規則変態温度、T_Cはバルクと比べて数十K以上も低いことが明らかになった.そこで、このようなサイズ効果の要因をコンピュータシミュレーションにより検討した.Cu_3Au合金のL1_2規則化についてのコンピュータシミュレーションは粒径が2および3nmの、それぞれ321および1061個の原子を含むモデル結晶について行った.比較のため、単位胞を5個ずつ並べた立方体に周期境界条件を付加したバルク結晶についても行った.得られた主な結果は次の2点である:1)規則状態と不規則状態のエネルギー差はバルクより原子クラスターでより小さくなる;2)原子クラスターのT_Cはバルクと比べて著しく低く、ナノメータ領域でサイズに依存して更に低下する.これらの結果は得られた実験事実を矛盾なく説明する.一方、Fe-22.1-22.6at.%Ni合金の蒸着したままの試料は5nm以下の粒状あるいは島状で、bcc微結晶と恐らくFe-Ni複合酸化物の微結晶からなる.このような試料を773Kで加熱すると、平均粒径7nmの孤立したfccオーステナイトの微粒子だけとなった.このオーステナイト微粒子群は室温に冷却しても、また、電顕内で105Kに冷却してもなおほとんどがfccのままであった.この結果はFe-22.1at.%Ni合金の場合、同じ組成のバルクと比べてオーステナイトがおよそ400K以上も安定化することを示唆する.しかし、77Kで10日間保持するとそれらのオーステナイト粒子はマルテンサイトへ変態した.この実験結果は従来から言われているように、微粒子になるとマルテンサイト変態は起きない、のではなく、等温的に起きる可能性があることを示唆するものとして注目される.本研究ではナノメータ尺度のCu-AuおよびFe-Ni合金のそれぞれ規則-不規則変態とマルテンサイト変態を高分解能電子顕微鏡観察と電子回折ならびにコンピュータシミュレーションによって調べべ、これらの相変態に及ぼすサイズ効果とその要因を考察した.先ず、Cu_3AuとCuAu合金の原子クラスターを真空蒸着法により作製し、それらの規則原子配列、欠陥構造および規則-不規則変態の特徴を調べた結果、それらはバルクと同様の結晶構造や欠陥構造を有するが、L1_2およびL1_0規則化にはそれぞれある臨界サイズが存在すること、また、合金原子クラスターの規則-不規則変態温度、T_Cはバルクと比べて数十K以上も低いことが明らかになった.そこで、このようなサイズ効果の要因をコンピュータシミュレーションにより検討した.Cu_3Au合金のL1_2規則化についてのコンピュータシミュレーションは粒径が2および3nmの、それぞれ321および1061個の原子を含むモデル結晶について行った.比較のため、単位胞を5個ずつ並べた立方体に周期境界条件を付加したバルク結晶についても行った.得られた主な結果は次の2点である:1)規則状態と不規則状態のエネルギー差はバルクより原子クラスターでより小さくなる;2)原子クラスターのT_Cはバルクと比べて著しく低く、ナノメータ領域でサイズに依存して更に低下する.これらの結果は得られた実験事実を矛盾なく説明する.一方、Fe-22.1-22.6at.%Ni合金の蒸着したままの試料は5nm以下の粒状あるいは島状で、bcc微結晶と恐らくFe-Ni複合酸化物の微結晶からなる.このような試料を773Kで加熱すると、平均粒径7nmの孤立したfccオーステナイトの微粒子だけとなった.このオーステナイト微粒子群は室温に冷却しても、また、電顕内で105Kに冷却してもなおほとんどがfccのままであった.この結果はFe-22.1at.%Ni合金の場合、同じ組成のバルクと比べてオーステナイトがおよそ400K以上も安定化することを示唆する.しかし、77Kで10日間保持するとそれらのオーステナイト粒子はマルテンサイトへ変態した.この実験結果は従来から言われているように、微粒子になるとマルテンサイト変態は起きない、のではなく、等温的に起きる可能性があることを示唆するものとして注目される.本年度はCu_3AuおよびCuAu(配合組成)合金原子クラスターを真空蒸着法により作製し、それらにおける規則原子配列、欠陥構造および規則-不規則変態の特徴を高分解能電子顕微鏡観察と電子回折により調べ、構造ならびに相変態に及ぼすサイズ効果を検討した。真空蒸着後直ちに773Kで1時間焼鈍後のCu_3AuおよびCuAu合金膜は共にナノメータスケールの孤立した粒状で、その全体からの電子回折図形は共にfcc単相であることを示した。Cu_3Au合金微粒子を553Kで1時間加熱すると、電子回折図形にはL1_2型規則構造特有の反射が明瞭に現れた。およそ10nm径の粒子には逆位相境界も観察された。それらの規則反射は773Kまでの加熱中に消失した。これらの結果はCu_3

Au合金微粒子がバルクと同様に規則-不規則変態を起こし、結晶構造や欠陥構造の点でもバルクと同様であることを示す。しかし、{100}規則格子面に対応する格子縞は約4nmを下限にそれ以下の粒子には観察されなかった。また、規則-不規則変態温度、T_c、はバルクのそれよりおよそ90K低いことがわかった。CuAu合金微粒子を523Kで1時間加熱すると、その回折図形にはL1_0型規則構造特有の規則格子反射が明瞭に現れた。それから得られた軸比、c/a、は0.94で、バルクのCuAu合金の値、0.926、にほぼ一致した。しかし、(001)格子縞が観察された合金粒子の最小径は約6nmであった。また、CuAu合金微粒子のT_cはバルクのそれよりおよそ55K低いことがわかった。以上、本研究によりCu-Au合金のA1→L1_2およびA1→L1_0規則化にはそれぞれある臨界サイズが存在すること、また、合金原子クラスターの規則-不規則変態温度、T_c、はバルクと比べて数十K以上も低いことが明らかになった。今後はこのようなサイズ効果をもたらす要因をコンピュータシミュレーションにより検討する。本年度はFe-Ni合金原子クラスターのマルテンサイト変態を高分解能電子顕微鏡観察、制限視野電子回折および極微小領域電子回折(ナノ回折)法により調べる一方、Cu_3Au合金原子クラスターにおける規則-不規則変態のコンピュータシミュレーションを行い、規則-不規則変態に及ぼすサイズ効果の要因を考察した.Fe-22.1,25.2,28.6at.%Ni(化学分析値)合金を高周波誘導溶解法で作製し,これらをNaCl単結晶の劈開面上にあらかじめ堆積させた非晶質アルミナ膜上に室温で真空蒸着した.これらの試料に773Kで02時間電顕内で加熱処理を施した.as-depo試料は粒状あるいは島状で、bcc結晶とFe(-Ni)酸化物の微結晶からなる.このような試料を773Kで加熱すると、平均粒径数ナノメータのオーステナイト微粒子が得られた.これらは室温に冷却しても、また、電顕内で105Kに冷却してもなおfccのままであった.この結果はFe-22.1at.%Ni合金の場合同じ組成のバルクと比べてオーステナイトがおよそ400K以上も安定化することを示唆する.しかし、77Kで10日間保持した試料からの電子回折図形ではオーステナイトからの回折リングは完全に消失し、マルテンサイトから予想される位置にブロードな回折リングが出現した.この実験結果は本合金のマルテンサイト変態は従来から言われているように微粒子では起きない、のではなく、等温的に起こる可能性があることを示唆する.昨年度、Cu_3Au合金原子クラスターのL1_2規則化にはある臨界サイズが存在すること、また、その規則-不規則変態温度、T_C、はバルクと比べて数十Kも低いことを明らかにした.そこで、このようなサイズ効果の要因をコンピュータシミュレーションにより検討した.シミュレーションは粒径が2および3nmの、それぞれ321および1061個の原子を含むモデル結晶について行った.比較のため、単位胞を5個ずつ並べた立方体に周期境界条件を付加したバルク結晶についても行った.得られた主な結果は次の2点である:1)規則状態と不規則状態のエネルギー差はバルクより原子クラスターでより小さくなる;
歯髄炎の病態形成における象牙芽細胞の細菌侵襲に対する免疫機構の解明

歯髄炎の原因は細菌であり、歯髄固有である象牙芽細胞に発現した自然免疫に関与するレセプターと細菌性因子との相互作用について解析したところ、ラット由来の象牙芽細胞様細胞であるKN-3細胞においてPattern Recognition Receptor(PRR)の中でもNOD-1およびNOD-2の発現が認められ、PRR特異的リガンドあるいは炎症性サイトカインによりKN-3を刺激するとAlarminやケモカインの産生が認められた。またHMGB1についてはカテキンの添加によりその産生誘導が抑制された。本研究により歯髄炎の病態形成時に象牙芽細胞層においても固有の免疫機構が働いている可能性が示唆された。歯髄においてう蝕細菌の侵入を最初に認識するのは歯髄最表層部に位置する象牙芽細胞であり、象牙芽細胞層はう蝕細菌に対する第一の防波堤とも言える。上皮組織を欠いた歯髄において象牙芽細胞はその代表的な役割を担うことが予想され、歯髄の免疫応答開始において重要な役割を果たしていると考えられる。本研究は歯髄炎の病態成立における生体防御機構において、象牙芽細胞を主役とした自然免疫機構をう蝕細菌や細菌性因子と宿主側(象牙芽細胞)との相互作用の見地より解析しようとするものである。ラット由来の株化細胞で象牙芽細胞の特性を有したKN-3細胞を使用し、Pattern Recognition Receptorの発現をFACSにて解析したところ細胞内レセプターであるNOD 1およびNOD 2の発現を認めた。しかしながらTLR-2, TLR-4の発現はほとんど認められなかった。次にこれらのレセプターのリガンドやTNF-αでKN-3を刺激し、培養上清を回収し抗体アレイ法やELISA法を用いて解析したところ、TNF-αやNOD 1リガンドであるiE-DAP刺激において培養上清中のMCP-1, CCL20, CXCL3濃度の上昇が認められた。しかしながらiE-DAP以外のリガンド(Pam3CSK4, LPS)刺激においてこれらのサイトカイン濃度の上昇は認められなかった。また、各リガンドで刺激したKN-3からtotal RNAを回収しreal-time PCR法にて解析したところ、iE-DAP刺激において上記サイトカインのmRNA発現の増加が認められたが、その他の刺激においてmRNA発現の増加は認められなかった。上皮組織を欠いた歯髄において象牙芽細胞はその代替的な役割を担うことが予想され、歯髄の免疫応答開始において重要な役割を果たしていると考えられる。本研究は歯髄炎の病態成立における生体防御機構において、象牙芽細胞を主役とした自然免疫機構を解明しようとするものである。また、KN-3におけるPRRの発現をFACSにて解析したところ、細胞内レセプターであるNOD1およびNOD2の発現を認めた。次にこれらのレセプターのリガンドやTNF-αでKN-3を刺激し培養上清を回収し抗体アレイ法やELISA法にて解析したところ、TNF-αやNOD1リガンドであるiE-DAP刺激において培養上清中のMCP-1, CCL20, CXCL3濃度の上昇が認められた。また、各リガンドで刺激したKN-3からtotal RNAを回収しreal-time PCR法にて解析したところ、iE-DAP刺激において上記サイトカインのmRNA発現の増加が認められた。歯科保存学分野KN-3細胞を用いたin vitroの実験系については当該研究の目的に沿って順調に進んでいると思われる。しかしながら交付申請書に記載した研究目的の一つである、正常あるいは炎症歯髄組織中の象牙芽細胞層におけるPattern Recognition ReceptorおよびAlarminの発現検索については前年度から引き続き未だ進行が遅れている状況にある。これは歯髄炎に罹患した抜去歯の試料採集が滞っていることによる。正常歯髄組織を有する抜去歯については、矯正治療のための智歯や小臼歯の抜歯により試料を得ているが、カリエスを有し歯髄炎となった歯の抜歯は稀であり試料の採取が困難となっているためである。in vitroの実験系については当該研究の目的に沿って順調に進んでいると思われる。しかしながら交付申請書に記載した研究目的の一つである、正常あるいは炎症歯髄組織中の象牙芽細胞層におけるPattern Recognition ReceptorおよびAlarminの発現検索については未だ進行が遅れている状況にある。これは歯髄炎に罹患した抜去歯の試料採取が滞っていることによる。

臨床的に不可逆性歯髄炎と診断された歯髄組織におけるPRRとAlarminの発現を薄切切片を作製し免疫組織化学的解析を行い解析する。特に象牙芽細胞層におけるそれらの局在に重点をおいて検索する。KN-3細胞をAlarminで刺激し、炎症性メディエーターの産生について検討する。またその産生に関与するシグナル伝達経路を各阻害剤を用いて解析する。さらに、この条件下で抗菌物質(カテキンなど)を添加し、炎症性サイトカインやケモカイン産生に与える影響を検討する。KN-3細胞をPRR特異的リガンド(Pam3CSK4, E. coli LPS)あるいは炎症性サイトカイン(IL-1β, TNF-α, IFN-γ)で刺激し、その時のHMGB1以外のAlarmin発現を解析する。mRNA発現はRT-PCR法にて、蛋白発現はウエスタンブロット法にて、さらに培養上清中のAlarmin濃度をELISA法にて測定する。また、この条件下で抗菌物質(カテキン)を添加し、Alarmin産生に与える影響を検討する。さらに、この条件下においても抗菌物質(カテキン)を添加し、炎症性サイトカインやケモカイン産生に与える影響を検討する。昨年度の研究計画であった抜去歯試料の採取が引き続き難航している。このため薄切切片の作製および免疫組織化学的解析が未だ遂行できておらず次年度研究費が生じている。歯髄組織におけるAlarminの免疫組織化学的な発現解析を行うために研究費を使用する予定としている。昨年度の研究計画であった抜去歯試料の採取ができなかったため、薄切切片の作製および免疫組織化学的解析がいまだ遂行できておらず次年度研究費が生じている。したがってまずは歯髄組織におけるAlarminの免疫組織化学的な発現解析を行うために研究費を使用する予定としている。
漿液蛋白と細胞分裂能の有無からみた生後早期ラット耳下腺の粘液細胞の動態について

生後早期のヒトやラットの耳下腺にみられる粘液細胞の動態を調べる目的で、生後3-10日齢のWistar系ラットを用いて微細構造の観察および以下の染色を行った。粘液細胞が細胞分裂を行っているかどうかを明らかにするために、DNA合成期(S期)の細胞核に特異的に取り込まれるBromodeoxyuridine(BrdU)を用いて免疫染色を行った。また漿液細胞の分泌果粒中に特異的に存在するProtein B1が粘液細胞中にも存在するかどうか調べるために抗Protein B1抗体を用いて免疫染色を行い以下の所見を得た。粘液細胞に含まれる分泌果粒は、電子密度の低い明るい果粒や、明るい基質の中に電子密度の高い芯をもつ二相性の果粒であった。生後3日頃は明るい果粒が多数であったが、時間の経過とともに二相性の果粒が数を増していった。また二相性果粒の芯の部分の電子密度が徐々に高くなり、芯の大きさも増していったため、漿液果粒と非常に似た形態を示すものがみられるようになった。生後7日頃には電子密度の低い明るい果粒や二相性を示す粘液果粒と、均一で高い電子密度の漿液果粒が1個の細胞に混在している像が観察された。BrdU抗体による免疫染色を行ったところ、粘液細胞中に陽性反応を示す細胞核は認められなかった。抗Protein B1抗体による免疫染色を行ったところ、低い電子密度や二相性を示す粘液果粒のみを含む粘液細胞は反応しなかった。しかし生後7日頃にみられる粘液果粒と漿液果粒が混在している細胞では、粘液果粒も漿液果粒と同様に弱い陽性を示した。以上の結果から、粘液細胞が形態的に漿液細胞へと変化して行く過程で、Protein B1産生能を獲得することが明らかになったと思われる。さらに粘液細胞は細胞分裂能を持たないかあるいは非常に低い細胞であることから、漿液細胞とは異なり独自の発達を遂げる細胞である可能性が示唆された。
20世紀ロシア農民史研究

本研究(研究期間平成15平成17年度)は、約20名から成る日本・ロシア合同の研究チーム(うちロシア人研究者は7名、最終的には8名、研究代表者以外の正規の日本人共同研究者は6名)が、3年間で、20世紀全般にわたるロシア農民史を学界の最高の水準において総括しようとするものであった。具体的には、数年間の準備期間の後、2003年11月には静岡県裾野市において、2005年11月には東京大学経済学部において国際会議を開き、日ロ両側からの報告のあと討論をおこなった。「歴史と現代」の分野ではI.Koznova(20世紀史全般)、「コルホーズ以前の農民」の分野では、鈴木健夫(ストルィピン改革)、D.Kovalev、崔在東(同上)、梶川伸一(戦時共産主義期、ネップ)、浅岡善治(ネップ)、広岡直子(女性史)、S.Esikov(穀物調達)、奥田央(ネップ、集団化)、「コルホーズ農民」の分野では、N.Tarkhova(赤軍史)、V.Kondrashin(集団化と飢饉)、M.Glumnaya(スターリン体制下の農民)、G.Kornilov(20世紀穀物生産)、松井憲明(戦後農民史)、V.Naukhatskii「ポスト・ソヴェト期の農民」の分野では、野部公一(90年代農業改革)、武田友加(90年代貧困問題)、山村理人(90年代農業史)が中心となって研究に参加した。2回目の国際会議には、池田嘉郎(戦時共産主義期)とKondrashin(農民運動)も「コルホーズ以前の農民」のセッションに、田中まさき(ソ連映画史)も「コルホーズ農民」のセッションに参加した。全3年間の成果は、奥田央編『20世紀ロシアの農民世界(仮題)』(社会評論社、2006年刊行予定)の原稿が揃い、刊行に向けて準備中である。執筆者は、日本側10名、ロシア側8名である。平成15年度は、最も重要な催しとして、11月14日から17日まで静岡県裾野市の富士教育研修所において、「20世紀ロシア農民史」のテーマで、7名のロシア人研究者と12名の日本人研究者が参加した国際研究集会を開いた。研究集会においては、ロシア側より、1880年代から1920年代までのタンボフ県の農業について(S・エシコフ)、1930年代のコルホーズ農民の労働について(M・グルムナーヤ)、1960年代1990年代の農業の近代化と脱農民化(V・ナウハツキー)について報告があり、日本側から、革命前の農民共同体と農業諸改革について(鈴木健夫)、1920年代の農民通信員運動について(浅岡善治)、19世末から1920年代における農村女性の性について(広岡直子)報告があり、活発な討論がおこなわれた。研究集会においては、20世紀ロシア農民史の共同研究についての方針についても議論がなされた。報告と討論はすべてロシア語でなされ、報告は、H.Okuda(ed.),History of the Russian Peasantry in the 20th Century (volume 2). CIRJE, Faculty of Economics, University of Tokyo,Discussion Paper F-Series, 2004に公表された。研究代表者と研究分担者は別紙に記載された役割分担にしたがって個人研究にも従事した。平成16年度は、科学研究費にもとづく3年間の研究計画の2年目であるが、研究成果のとりまとめをおこなった。