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非化石資源のみから構成される木質材料の開発

非化石資源由来の物質であるクエン酸を接着剤成分として各種木質材料の開発を行った。木質成形体は木粉や樹皮粉末をエレメントとしてクエン酸粉末と共に金型を用いて熱圧成形して得た。パーティクルボードはクエン酸とスクロースの混合溶液を接着剤として作成した。合板は粉末塗布による作成を行った。得られたそれぞれの木質材料は、物性を評価することにより、最適製造条件を明らかにした。本課題では、接着剤りに非化石資源由来の物質を用いて新規木質材料を創成することを目的としている。本年度はクエン酸を接着剤に用い、木粉や樹皮粉末による木質成形体の作成を試みた。【実験方法】原料として、アカシアマンギウム(A. mangium)やスギ(Cryptomeria japonica)の木部および樹皮の粉末を用いた。これらの粉末とクエン酸粉末を所定量熔器へ加え、振盪させて混合粉末とした。この粉末を各種金型へ充填したのち、ホットプレスで熱圧し、木質成形体を得た。得られた成形体について曲げ試験、吸水試験、煮沸繰り返し試験、FT-IRによる化学構造解析などを行った。【結果および考察】アカシア木粉を用い、熱圧温度を200°Cとした場合のクエン酸含有率と曲げ特性の関係を調べた結果、クエン酸を添加すると強度が向上し、20wt%の場合で最も高い曲げ強度(36MPa)を示すことが明らかとなった。煮沸繰り返し試験でも20wt%の場合で優れた耐水性を示した。熱圧温度について検討したところ、曲げ試験では180°Cのときに最大強度(39MPa)を示すことが分かった。一方、成形体の耐水性は熱圧温度が高くなるにつれて改善される傾向が認められた。アカシア樹皮粉末を使用した場合、成形体は得られるものの、全体的に木粉の場合よりも低い物性を示すことが分かった。スギの木粉や樹皮粉末を用いた成形体は、アカシアの場合と同程度の強度を示すことが見出された。煮沸繰り返し処理後の成形体のFT-IRスペクトルを観察したところ、1730cm^-1付近の強いピークが確認された。これにより、クエン酸のカルボキシル基が木粉の水酸基とエステル結合していることが推測された。以上の結果、クエン酸を用いることによって良好な物性を有する木質成形体が得られることが明らかとなった。これは、新しい木質材料開発の一つの方向性を示していると考えられる。本課題では、接着剤に非化石資源由来の物質を用いて新規木質材料を創成することを目的としている。本年度はクエン酸とスクロースを溶解した水溶液を接着剤としてパーティクルボードを製造し、各種製造条件が物性に及ぼす影響を詳細に検討した。【実験方法】パーティクルは、リサイクルチップを篩にかけて一定サイズに分級したものを用いた。接着剤は、前年度の結果からクエン酸の他にスクロースの添加が有効と考え、クエン酸・スクロース水溶液とした。クエン酸とスクロースの割合を検討するため、重量比を100:00:100までの5水準を用意した。接着剤塗布量は540wt%、熱圧温度は140240°C、目標密度0.41.0g/cm^3、マット含水率は2水準変化させた。熱圧時間については10分とした。比較としてpMDI接着剤(添加率8wt%)によるパーティクルボード(目標密度0.8g/cm^3)も作製した。得られたボードについて、3点曲げ強度試験、剥離強度試験、寸法安定性試験を行い、さらに良好な物性を示したボードについて、耐蟻性試験および耐朽性試験を行った。【結果および考察】クエン酸とスクロースの最適重量比を検討したところ、1:3が最も優れた物性を示すことが分かった。また、接着剤塗布量は2030wt%、熱圧温度は200°C、目標密度は0.8g/cm^3が最適であり、マット含水率は10%以下に抑えることが有効であった。最適製造上条件で作製したボードは、pMDI接着剤で作成したボードと比較すると、曲げ強度は劣るものの、曲げヤング率、はく離強度、吸水厚さ膨張率は同等かそれ以上の値を示すことが分かった。また、耐蟻性や耐朽性は、pMDI接着剤で作成したボードと同程度の性能であることが認められた。以上の結果から、クエン酸とスクロースによる接着剤で優れたパーティクルボードを製造できることが認められ、木質材料の脱化石資源化の可能性を示すことができた。本課題では接着剤に非化石資源の物質を用いて新規木質材料を創成することを目的としている。本年度はクエン酸を接着剤とした合板の作成を行い、製造条件が物性に及ぼす影響を検討した。【実験方法】単板は30×30×0.3cmのスギロータリー単板を用いた。接着剤はクエン酸を主剤とし、適宜、糖類やリグノセルロース粉末を添加した。

クエン酸は60メッシュパスの粉末を用い、単板上に粉末塗布した。製造条件は、圧締圧力を1MPaとして、熱圧温度を180240°C、熱圧時間を315分、塗布量を20200g/cm3まで変化させた。得られた合板から引張せん断試験片を作成し、常態接着力を調べると共に、煮沸繰り返し試験による耐水性評価を行った。また、クエン酸と糖類との反応性についても検討した。【結果および考察】接着強度に及ぼす熱圧温度の影響を検討した結果、220°Cまでは常態強度や耐水強度の向上が認められ、それ以上の温度では220°Cの場合と同等であることが分かった。そこで、熱圧温度を220°Cとして熱圧時間を変化させたところ、10分が最適熱圧時間であることを見出した。熱圧条件を220°C、10分、1MPaとしてクエン酸塗布量を変化させた結果では、60g/m2以上塗布しても著しい接着性の向上は認められなかった。したがって、本研究でのクエン酸粉末塗布による最適製造条件は塗布量60g/m^2で220°C、10分、1MPaであることが明らかとなった。次に、接着性能を向上させる試みとして、塗布量を60g/m^2一定としてクエン酸の代わりにスクロースやグルコースといった糖類の添加や、木粉や樹皮粉末の添加を行った。その結果、糖類の添加が常態接着強度の向上に幾分効果的であることを見出した。以上、今年度は合板製造に対するクエン酸接着の基礎的な知見が得られ、クエン酸を用いた木材接着技術に対して重要な結果が得られたと考える。
神経系小胞体ストレスのニコチンとNGFによる防御機構の応用的比較研究

神経変性疾患の新規治療法の開発を目指し、神経系小胞体ストレスのニコチンとNGFによる防御機構を分子レベルで比較することを目的とした。ニコチンは小胞体ストレスの最初期段階で小胞体ストレスの発生を抑制したが、NGFは小胞体シャペロンGRP78の発現を加速上昇させて小胞体ストレスを軽減・防御した。さらに、cAMPレベルを上昇させるフォルスコリンがニコチンと同様の機構で小胞体ストレスを防御した。従って、これらの作用を共存させれば、相加・相乗効果が出ることが示唆された。近年の日本では、人口の高齢化が急速に進み、高齢化社会への医学的な対応が急務となっている。特に、アルツハイマー病やパーキンソン病などの神経変性疾患のような不可逆的で治療法が確立されていない難病に対する対応は急務である。これら神経変性疾患において、脳内の一部の神経細胞が、小胞体ストレスにさらされることにより、アポトーシス(プログラム細胞死)によって死滅することが知られている。我々は、モデル神経細胞であるPC12細胞を用いて、小胞体ストレス誘導型アポトーシスの実行機構と、神経成長因子(NGF)による同アポトーシス抑制機構の研究を行って来たが、最近、ニコチンも小胞体ストレス誘導型アポトーシスを防御することを見出した。本研究では、神経系小胞体ストレスのニコチンとNGFによる防御機構を分子レベルで詳細に比較することを目的とした。本年度はまず、ニコチンが小胞体ストレスのどの段階を抑制するのかを詳細に解析した。その結果、ニコチンは小胞体ストレスの最初期段階で、つまり小胞体ストレスセンサー蛋白質の活性化以前の段階で、小胞体ストレスそのものの発生を抑制することにより、小胞体ストレス誘導型アポトーシスを防御することを見出した。一方、NGFは、小胞体ストレスに対する応答機構は抑制できず、むしろ小胞体シャペロンGRP78の発現を加速上昇させ、生じたGRP78が折り畳み不良蛋白質をフォールディングし直すことによって、小胞体ストレスを軽減させることがわかった。以上のことから、ニコチンとNGFは、神経細胞における小胞体ストレスを抑制・防御する機構が異なることが判明した。したがって、両者または両者の作用機構を増進させる方策を共存させれば、相加・相乗効果が出ることが示唆された。前年度に、ニコチンが小胞体ストレスの最初期段階で、つまり小胞体ストレスセンサー蛋白質の活性化以前の段階で、小胞体ストレスそのものの発生を抑制することにより、小胞体ストレス誘導型アポトーシスを防御することを見出した。今年度は、NGFによる小胞体ストレス軽減・防御作用において、小胞体シャペロンGRP78の発現を加速上昇させる機構を詳細に解析した。GRP78遺伝子のプロモーターの欠失変異体解析から、ERSE1-3配列が小胞体ストレス応答のみならず、NGF応答に関わっていることが判明した。ERSE内のNF-Y結合配列とATF6/XBPI結合配列の両方とスペーサー配列がNGF応答に重要であることも分かった。以上のことから、NGFによる神経細胞における小胞体ストレス抑制・防御機構がニコチンによる機構とは全く異なることが判明した。

前年度に、NGFによる小胞体ストレス軽減・防御作用において、小胞体シャペロンGRP78の発現を加速上昇させる機構を詳細に解析した。GRP78遺伝子のプロモーターの欠失変異体解析から、ERSE1-3配列が小胞体ストレス応答のみならず、NGF応答に関わっていることが判明した。ERSE内のNF-Y結合配列とATF6/XBPI結合配列の両方とスペーサー配列がNGF応答に重要であることも分かった。今年度は、NGF、ニコチン以外にforskolinが小胞体ストレスを防御することを明らかにした。その機構は、NGFの様にGRP78の発現を加速上昇させるのではなく、ニコチンの様にGRP78の発現を抑制するものであった。以上のことから、forskolinによる神経細胞における小胞体ストレス抑制・防御機構が、NGFによる機構とは全く異なり、ニコチンと同様に小胞体ストレスの最初期段階で小胞体ストレスの発生を抑制することが判明した。従って、2者または3者の作用を共存させれば、相加・相乗効果が出ることが示唆された。
グリア細胞由来の新しいTrophicFactorの精製と中枢神経系での生理的役割

本研究では、C6グリア腫細胞が、神経成長因子(NGF)とは異なる新しい神経栄養因子を分泌することを見いだし、その作用を、培養下の胎児脳細胞に対して調べた。得られた知見は以下の通りである。1.C6グリア腫細胞を無血清培地とマイクロキャリヤーを用いて旋回培養した。得られた条件培地を濃縮し、GCMとした。2.胎令16日目のラット胎児より大脳を取り出し、トリプシン、DNaselで細胞を分散した。ポリリジンコートしたシャーレに細胞を、1.5-2×【10^5】cells/【cm^2】の密度で捲き、無血清培地を用いて培養を開始した。培養開始後24時間では、GCMによる細胞の生存の差はみられなかったが、7-10日目になると、GCMを添加しない場合、細胞がほとんど死滅した。GCMを加えた場合には、細胞の増殖が促進され、また、神経繊維のネットワークが形成され、CAT活性、グルタミン酸脱炭酸酵素活性および、AChE活性が著しく増加した。培養系に混在する増殖性の強いグリア細胞の影響を除くために、培養開始後3日目より1日間、10μM Ara-Cを添加すると、GCM非存在下では、Ara-C処理により多くの細胞が死滅したが、GCM存在下では、Ara-C処理後、かなりの細胞の死滅にもかかわらず、2-3日で神経繊維のネットワークが形成され、CAT活性が著しく増大した。これらの結果より、脳神経細胞の生存、分化が、GCMに含まれるTrophic Factorにより、直接、維持、促進されることが明らかになった。3.GCMに含まれるTrophic Factorの精製をゲルろ過(Biogel-P200)により試みた。その結果、分子量約4万の画分が、胎児脳細胞の初代培養において、神経細胞の生存分化に対する促進効果を示した。この画分および、GCMの有する、生理活性は、いずれも、トリプシン処理、あるいは熱処理(95゚C,30min)により消失した。このことより、GCMに含まれるTrophic Factorは蛋白質であると考えられる。
受援力向上と減災：災害時に誰かに助けてもらうためのツール「DARECA」の開発

・災害が発生したとき誰に助けて欲しいかを事前に書き留めておくことは減災につながる。「DARECA」に書き込むことで、もしものための備えをしているという安心感が得られる。財布や非常用持出袋に入れた「DARECA」を確認すれば、誰に助けを求めればよいかがわかる。災害時、途方に暮れている人の「DARECA」を一緒に確認すれば、必要な援助につなぐことができる。本研究の目的は、災害時に助けを求める「誰か」を書き留める「DARECA」を開発することにより、住民の受援力を向上し減災につなぐことである。
新生児低酸素性虚血性脳症におけるマイクログリアの機能解析と臨床応用への基礎的研究

難治性HIEへの治療戦略として、豊かな神経生物学的可塑性を誘起し神経回路再編等を促す包括介入治療法開発を目指し、発達診断法およびライフイベントの影響を可視化する技術の開発を試みた。乳仔期マーモセットの行動を記録し信号処理により発達日齢依存的に変動する因子の探索を行った。また、併行して、NICU臨床における応用試作技術の同様な探索を行った。比較行動学的な検討を行った結果、体表温度のリズム性が認められ始めており、若齢ほどリズム性が曖昧である可能性が示唆された。また、哺乳・養育に係わるなど社会イベント依存的な変動の可能性が定量的変動として示唆された。利用したセンサー技術および信号処理技術の有用性を、今後、検証して行く予定である。当該年度は、これらの国際学会報告活動にも注力した。国際ストレス行動学会アジア地域会議(山口)の主催を行い、約100名の参加者を得た。また、国際霊長類学会(ナイロビ)でマーモセット・シンポジウムにおける講演を行った。生体分子動態を伴う認知・精神などの人間特有な高次神経機能研究において、霊長類における比較検証は必須であることを同意する一方、国際的にいっそう高まる倫理的配慮に関して、先端研究者らと徹底して議論を行い、国際研究者間・同領域における均衡点を共有することの重要性が再確認された。脳室周囲白質軟化症(PVL)は、早産児脳障害の一つで脳性麻痺の主因であり、未だ有効な治療法は確立されていない。PVLの主病態は低酸素・虚血や感染による未熟なオリゴデンドロサイト(preOL)の細胞死とその後の分化障害と推測されている。PVLに対する治療法の開発を目的として、我々のグループは低温療法が低酸素・虚血に対するpreOLの細胞死を軽減することをこれまで報告してきた。一方、PVLの発症部位である脳白質にはpreOLだけでなく、グリア細胞の一つであるミクログリア(MG)が生理的に集積して脳発達に寄与している。病態下ではMGが炎症性サイトカインや脳保護因子を産生する機能が明らかになり、PVLに至る過程を修飾している可能性が報告されている。今回、低温療法のpreOL保護効果にMGを介した仕組みがあるかどうかPVLのラットモデルにMGを除去できる薬剤クロドロネート含有リポソーム(Clo-lipo)を用いて調べた。生後4日目SDラット右側脳室にリポソームを注射した。48時間後の生後6日目に低酸素虚血処置(左総頸動脈を結紮離断、酸素濃度6.0% 30分間暴露)を施行した。また、低酸素時期に合わせて、低体温(31±1.0°C)を導入した。処置5日後、ミエリン塩基性蛋白(MBP)の発現を指標として白質傷害の程度を組織学的に評価した。リポソーム脳室注射48時間後、Clo-lipo群はコントロールリポソーム(Con-lipo)群と比較し、Iba1陽性細胞の数が有意に減少していた。低酸素虚血処置5日後、Clo-lipo+低体温群では、Con-lipo+低体温群と比較して、MBP染色が有意に脱落した。Clo-lipo群(MG除去群)で低温療法の保護効果が低下したことより、(1)低温療法はMGに作用すること、(2)MGが低温下で白質保護的に機能する可能性が推測された。野生型マウスでのPVL動物モデルの作成については、当初の予定とは異なり現在まで作成に至っていないものの、コモンマーモセットの施設内交配については目途がつきつつあり、出生後の麻酔下手術の手法についても確立しつつある。この解決のために治療法を探索する動物モデルが重要である。特に、中枢神経システムの疾患を対象とする多くの治験研究では、齧歯類をモデル動物とする基礎研究で得られた結果が臨床的には適用不可となる事例が後を絶たず、ヒトが属す霊長類の同モデルの確立は必須であると考えられる。平成29年度から本報告書申請期まで、PVLの前段階として知られる周産期に発症する低酸素性虚血性脳症(hypoxic-ischemic encephalopathy:HIE)についての霊長類モデルの開発と検証を進めて来た。本施設内に保有するコモンマーモセット(CM)の施設内繁殖系を用いて、CM新生仔の低酸素chamber飼育と一過性脳虚血モデルの条件を、齧歯類モデルの他所研究例を参照し、その試行と生理学的検証を行った。既に我々が発見した候補薬物の投与により中枢神経系への保護作用があるか否かを検討するモデルとして、その再現性と適切な症状改善等の変化を確認し得る定量評価系の開発を目指し、当該年度に施設内繁殖で得ることができた4頭を対象に薬剤未投与の状態で、HIEの関連症状についての神経行動学的検証方法を探索し、検証を行った。乳幼児神経システム発達の臨床医学的マイルストーンとして知られる抗重力運動パターンの出現齢指標に相同とみなしている、本施設の先行研究に基づく霊長類モデルを参照し、その評価系を適用した。今後、本4頭の結果を含み、統計的検討を行い、同モデルの検証を踏まえ、薬理学的検討を行う予定である。対象のCM新生仔4頭のうち、2頭を低酸素chamber飼育群、2頭を通常空気chamber飼育群(対照)とした。

約30°Cに保温し柔らかい吸水性シートをひいた温湿度、風速、酸素濃度計測器モニター付きのchamber室内を約5%、もしくは20.8%酸素濃度に制御を行い、いずれも出生確認後の半日程度以内の個体を30分間滞在させた。滞在中の近赤外式生体血流酸素飽和度SpO2、脈拍数、および、赤外画像センサーによる非接触体表温計測を行った。両群共に、chamber飼育負荷後に、負荷前の酸素飽和度SpO2や脈拍数に戻ることを確認した。同飼育負荷の前後に、抗重力運動評価系計測を行った。同評価系は、四肢把持に基づく抗重力運動において、その把持力の確認と共に、身体運動位置や同運動の認知心理学的な質的定量評価を行うことを目的としている。CM新生仔は生得的な神経作用として、一定の把持力を有し父母胴体に自発的にしがみつくことができる。そこで、父母から分離し6.5cm直径の円柱側面につかまらせ、側面を地面近位に置く位置を初期設定とし、2分間の行動を追跡する先行知見から、出生直後は抗重力方向、すなわち、地面に対して垂直上方を指向する運動傾向が認められている。本評価系を4頭に試行した結果、飼育負荷前後とも、全頭の四肢把持による抗重力運動の達成である円柱上側面到達を認めた。一方、低酸素飼育群は抗重力運動の達成までの時間が長い個体がいた。さらに、空気飼育群の一頭が、垂直下位方向への頭部指向を一部示した。難治性HIEへの治療戦略として、豊かな神経生物学的可塑性を誘起し神経回路再編等を促す包括介入治療法開発を目指し、発達診断法およびライフイベントの影響を可視化する技術の開発を試みた。乳仔期マーモセットの行動を記録し信号処理により発達日齢依存的に変動する因子の探索を行った。また、併行して、NICU臨床における応用試作技術の同様な探索を行った。比較行動学的な検討を行った結果、体表温度のリズム性が認められ始めており、若齢ほどリズム性が曖昧である可能性が示唆された。また、哺乳・養育に係わるなど社会イベント依存的な変動の可能性が定量的変動として示唆された。利用したセンサー技術および信号処理技術の有用性を、今後、検証して行く予定である。当該年度は、これらの国際学会報告活動にも注力した。国際ストレス行動学会アジア地域会議(山口)の主催を行い、約100名の参加者を得た。また、国際霊長類学会(ナイロビ)でマーモセット・シンポジウムにおける講演を行った。生体分子動態を伴う認知・精神などの人間特有な高次神経機能研究において、霊長類における比較検証は必須であることを同意する一方、国際的にいっそう高まる倫理的配慮に関して、先端研究者らと徹底して議論を行い、国際研究者間・同領域における均衡点を共有することの重要性が再確認された。ミクログリアのPVLへの関与の解明に向けた研究を継続して行う。ミクログリアの数や形態変化の観察にとどまらず、ミクログリアの状態を表すマーカーとしてM1マーカー(細胞傷害、炎症性)であるIL-1β, iNOS, TNFやM2マーカー(細胞保護、抗炎症性)であるArginase-1, IL-10ならびにOL保護因子であるIGFに着目し、免疫組織学的染色やフローサイトメトリーを用いてミクログリアの機能解析を行う。また、PVL児の神経学的予後が不良な原因を解明するために、マウスを長期飼育してローターロッドなどを用いた行動実験を行い、ミクログリアの組織学的所見とマウスの表現型・発達所見を照合し、PVL発症後のミクログリアの機能解析を行う予定である。
金属イオン-非イオン界面活性剤によるRNAの位置特異的切断反応

pre-tRNAの自己切断活性が見い出され、pre-tRNAのイントロン切除が起こっていることが明らかにされている。特に、イントロンをもつArabidopsis tRNA^<Tyr>では非イオン界面活性剤の系でもスプライシングエンドヌクレース依存性切断が起こると考えられることから、RNA酵素とともに生命の進化に大きな関係があるものと考え、これら切断反応の作用機序を詳細にすることも目的とする。イントロンを含むpre-tRNA^<Tyr>に対するイントロン切除を確認するために、まずモデル反応としてピリミジン-A間で切断が起こるようなRNA13mer(GUUUCGUACAAAC)を用いてスプライシング反応に必須であるMg^<++>存在下、切断反応に要求される最適条件を検討した。その結果Mg^<++>濃度、5μM、pH7.8、反応温度37°Cの条件下で最高の切断活性を示した。また実際にArabidopsis th aliana tRNA^<Tyr>をT7転写により構築し、上記で述べた条件下でイントロンの切除を試みたところ、主にtRNA^<Tyr>のU_<49>-A_<50>、U_<38>-A_<39>間で切断が起り、5'-_<39>AGACGCAGAU-U_<49>-3'のイントロン部位が切除されることをはじめて明らかにした。さらに、イントロン部位が切除された。5'-末端tRNA^<Tyr>と3'-末端tRNA^<Tyr>を高濃度のMg^<++>の存在下で反応させたところ再結合が起こることがわかった。一方、この切断に非イオン界面活性剤が要求されることから、AとUをN^<15>、C^<13>安定同位体を導入した5'-GCGGGAGCGUACCUCCCAC-3'、19merを合成し、NMRでその二次構造を確認したところ、ヘアピン型構造を形成することがわかった。また、切断反応に対しても二次構造としてはヘアピン型構造が要求されることがわかった。さらに非イオン界面活性剤は切断部位のUA配列に直接作用してそのコンフォメーションを変化させていることから、切断され易い構造に変化されるのに界面活性剤が関与するものと思われる。
法医剖検材料における熱ショック蛋白質の免疫組織化学による基礎的検討

頸部圧迫や損傷死体において、抗ユビキチン抗体を用いた免疫組織化学染色を試みたところ、熱刺激を受けていない死体の肝細胞核内に、ユビキチンの証明された例がいくつか存在した。抗ユビキチン抗体のうち、ポリクローナル抗体では比較的多数の症例で陽性反応がみられたことから、非特異的反応の影響を除くため、同じ症例でモノクローナル抗体についても試みた。その結果、頸部圧迫群でその半数に陽性反応を認めたが、圧迫の手段や死体所見からは陰性例とに違いを見出すことはできなかった。失血死ではモノクローナル抗体に対し8例中弱陽性3例があったに過ぎない。但し、陰性例が心臓や頸動脈損傷など、極めて短時間で死亡したと思われる例であるのに対して、頭部外傷を伴っていた小児例を除く陽性例2例はいずれも受傷後死亡までに数十分以上を経過したと思われる例であった。また、頭部損傷群でも、受傷から死亡までの具体的な経過時間は不明であるが、脳挫傷自体はあまり高度ではなく脳ヘルニアが死因となるような状態、即ち受傷から死亡までの経過時間が比較的長いと思われた例で陽性に染色された。ところで受傷から死亡まで数時間以上の、いわゆる臨床上あるいは剖検上『ショック』と診断できるようなケースでは、ポリクローナル抗体でもユビキチンの反応は陰性か極めて弱かった。このような例では、当初からユビキチンの誘導が少ないのか、一旦核内に移動あるいは生成された後、再び消失したのかは不明である。いずれにせよ、ショック蛋白質とう名はつけられているものの、同蛋白質の出現はあくまでも細胞レベルでの反応結果としてであり、個体レベルでの『ショック』とは直接関係なく、この点、剖検例にHSPを利用するにあたり注意が必要であろう。分子量8.5kDの熱シヨック蛋白質ユビキチン(Ub)を、剖検例(焼死、被虐待児、窒息死、出血死、中毒死)のホルマリン固定パラフィン包埋した各臓器について免疫組織化学的に検索した。焼死例においては、Ubは主として細胞核に局在して認められ、特に火災に遭遇後も一定時間生存したと考えられる軽度焼損死体では、諸臓器において細胞核に強陽性であった。しかし焼死に深く関与する一酸化炭素ヘモグロビン濃度と、本抗原の出現の強さには相関性は認められなかった。また虐待により死亡した幼児においても、焼死体と同様に細胞核に局在するUbが検出された。さらにUbの核内発現の過程およびその機序を明らかにするために、ラットを用いて実験的な検索をおこなった。その結果、頚椎脱臼、一酸化炭素中毒死、酸素欠乏、過剰麻酔、出血および45,55°Cの温水による加温の条件下に処置し屠殺後したラット臓器のホルマリン固定パラフィン包埋組織材料では、加温終了後30,60分で肝臓と腎臓の実質細胞核にUbの出現を認めた。しかし加温以外の処置を施した臓器では、Ubは検出されなかった。この加温により出現したUbは、焼死および虐待児例における出現様式と極めて類似したものであった。またラットの肝臓と腎臓を摘出後直ちに45,50°Cの温水で加温すると、1020分後に細胞核にUbが検出されたが、60分以降は認められなかった。さらに摘出後、室温に10分以上放置した後加温した肝臓および腎臓では、Ubは検出されなかった。以上の検索結果から、Ubは生前あるいは死亡直後における外界からの強い熱刺激により細胞核に誘導される事が明らかになった。剖検材料のパラフィン包埋細織切片におけるUb染色は、生体の生前における強いストレスを推測する一つの手段として有用な方法となりうる可能性が明らかになり、法医診断学的な重要性が示唆された。

いずれにせよ、ショック蛋白質とう名はつけられているものの、同蛋白質の出現はあくまでも細胞レベルでの反応結果としてであり、個体レベルでの『ショック』とは直接関係なく、この点、剖検例にHSPを利用するにあたり注意が必要であろう。
ヒトのエネルギー代謝及び深部体温と睡眠の関係

体温は昼間に高く、睡眠中に低い24時間周期のリズムを示すが、エネルギー代謝量は体温と比例すると考えられ、睡眠中の体温下降はエネルギー保存に役立っていると推定される。しかし、睡眠中の体温下降やノンレム睡眠あるいはレム睡眠とエネルギー代謝量の関係は実験によって確認されたわけではない。そこで今回、健康正常者において直腸温とエネルギー代謝量のそれぞれの日内リズム、さらに徐波睡眠と直腸温およびエネルギー代謝量との関係を検討した。対象は1927歳の健康な男子医学部生14名であり、直腸温は1分間隔で連続48時間測定した。エネルギー代謝量の測定は覚醒中で3時間毎に30分間、睡眠中は1分間隔で行った。さらに、同時に入眠前から自然覚醒まで睡眠ポリグラフ記録を行った。直腸温リズムの平均最適周期は23.3時間、平均頂点位相は18時35分であった。エネルギー代謝量に関してもサーカディアンリズムを認め、直腸温リズムと比較して約90分の位相の先進を認めた。一方、エネルギー代謝量は昼間が夜間より有意に高かった。睡眠中は深睡眠へ移行するにつれて代謝量は低下し、徐波睡眠中が最も低下したが、レム睡眠中はstage2より高かった。入眠時あるいは徐波睡眠開始時の直腸温が高い者ほど、一夜の徐波睡眠出現量および出現率は高かった、また、入眠後の直腸温の下降が大きい者ほど、エネルギー代謝量の下降は大きく、徐波睡眠時平均エネルギー代謝量は低かった。さらに、徐波睡眠出現率が高い者ほど、徐波睡眠時平均エネルギー代謝量は低かった。以上の結果は、徐波睡眠がエネルギー保存的な役割を持っている可能性を示唆した。すなわち、徐波睡眠中に視床下部の温度受容容器がエネルギー代謝量を低下させることによって体温を下降させ、エネルギーを節約していると推定される。
準能動型すべり軸受変形装置の試作

本研究は、固定形状の軸受メタルを用いたすべり軸受け支持のロータでは困難な運動状況下において、可変構造の軸受メタルを持つ準能動型すべり軸受を用いた有効な振動制御法の検討を目的としている。前年度の研究で、任意の軸受形状に変形可能な軸受メタル変形装置の試作を行ったが、構造が複雑になる、十分な精度を得られないという問題点があった。そこで本年度は装置の単純化のため、装置をモデル化し各作動条件に対する安定性の高い軸受メタルの最適形状を数値解析により検討した。具体的には、軸受メタルを1箇所変形・2箇所変形・3箇所変形の3パターンについて変形箇所を変え、偏心角が0°となるような軸受メタル形状を求めた。このとき、油膜の圧力分布、温度分布および軸受メタルの弾性変形を連成し解析を行った。解析により得られた最適形状の軸受メタル、および真円軸受を用いたジェフコットロータモデルの安定限界速度を油膜動特性より求め比較を行った。結果、以下の所見を得た。・ゾンマーフェルト数0.0150.の範囲で、偏心角0°とする変形位置と変形率を求めることができた。・偏心角を0°とすることで安定限界速度の上昇が見られた。しかし、油膜動特性の大幅な変化は得られなかった。また、シュミレーションで得られた所見を実験的に検証するため、磁気軸受を用いたすべり軸受動特性測定装置の試作を行った。装置は回転軸、2つの8極型ラジアル磁気軸受、スラスト磁気軸受、モータ、非接触式変位センサ、すへり軸受からなる。非接触式変位センサにより検出した軸の変位信号を制御器であるPCに取り込み、算出された制御信号をDCサーボアンプにより制御電流に変え磁気軸受に与えている。このとき、精度のよい制御を実現するためにリアルタイム処理が可能なRealTimeLinuxを導入した。制御系にはPID制御を用い、回転軸が安定に浮上することを確認した。すべり軸受は負荷能力が高い,耐衝撃性・振動減衰性に優れるなどの特性を持ち,回転機械の軸受として広く使われている.現在,すべり軸受の安定性向上のための研究が多く存在するが,それらは固定形状の軸受メタルを用いた軸受を対象としており,実時間における作動条件の変化に対応できないという問題がある.このような固定形状の軸受メタルを用いたすべり軸受支持のロータでは振動制御が困難な運転状況下において,可変構造の軸受メタルをもつ準能動型すべり軸受を用いた有効な振動制御法を検討する.その第一段階として,本研究では軸受すきまを任意形状に変形可能な軸受の試作を行った.まず,軸受形状を任意の形状に変形可能な軸受メタル変形装置を試作した.具体的には,厚さ1mm,リン青銅製の柔軟な軸受メタルの周方向に微小位置決め制御が可能な積層型圧電素子を等間隔で12個配置した.また,調整ネジにより積層型圧電素子が軸受メタルに接するように位置調整が出来るようにした.軸受メタルの変形方法はPCからDA変換ボードを用いて変位制御信号を出力し,パワーアンプにより電圧増幅して圧電素子に印加することにより実現した.このときの変位制御信号は,変形させようとする軸受形状をフーリエ級数により表現し,各積層型圧電素子の位置の変位を求め,予め測定した各積層型圧電素子に印加される電圧とそれによる変位との関係から求めている.次に,今回試作した軸受メタル変形装置の性能評価をおこなうために軸受メタル変形量測定装置を作成した.具体的には,ステッピングモータを用いて非接触式変位センサを軸受メタル内面に沿って一定角速度で回転させる装置を作成した.このときの回転制御にはRT-Linuxを用いた.非接触式変位センサの出力は1.8°毎にAD変換ボードによりPCで取得した.この装置により,積層型圧電素子による軸受メタルの変形を確認した.本研究は、固定形状の軸受メタルを用いたすべり軸受け支持のロータでは困難な運動状況下において、可変構造の軸受メタルを持つ準能動型すべり軸受を用いた有効な振動制御法の検討を目的としている。

非接触式変位センサにより検出した軸の変位信号を制御器であるPCに取り込み、算出された制御信号をDCサーボアンプにより制御電流に変え磁気軸受に与えている。このとき、精度のよい制御を実現するためにリアルタイム処理が可能なRealTimeLinuxを導入した。制御系にはPID制御を用い、回転軸が安定に浮上することを確認した。
アフガニスタンおよびパキスタン出土仏教写本の研究

本研究は、1990年代の初頭、アフガニスタンのバーミヤン渓谷東部のザルガラーン地区、およびパキスタンのギルギットから発見され、ノルウェーのスコイエン・コレクションを主とする世界各地のコレクションと研究機関に引き取られた、大量のインド語仏教写本類について、海外の研究協力者とともに解読研究を行い、テキストと翻訳を出版することを目的とした。写本類を解読するために国際共同研究が立ち上げられ、本研究に先立つ研究の成果としてすでに数巻の研究報告書がオスロより出版されているが、今回の5年間の研究期間を通して解読が継続され、その成果として新たな研究成果報告書が2016年にオスロより出版される予定である。本研究は、1990年代にアフガニスタンのバーミヤーン渓谷およびパキスタン東部のギルギットから新たに発見されたインド系諸語による仏教写本類に対して、ヨーロッパおよび米国の研究協力者と共に解読研究を行ってインド語テキストを作成し、解説と翻訳を付して出版を目指すものであるが、平成23年度はサンスクリット語による『法句経』の写本断簡類、および『長阿含経』写本の一部、さらにガンダーラ語による『賢劫経』の写本断簡類を中心とする解読研究を主として行った。まずノルウェーのスコイエン・コレクションに含まれる、アフガニスタンより出土した、大衆部系教団が伝承したと思われる、因縁物語付きの『法句経』写本の断簡類、および大乗経典であるガンダーラ語の『賢劫経』写本の断簡類について、カリフォルニア大学バークレー校のステファン・バウムス博士を招聘して共同で解読研究を行い、『賢劫経』写本の断簡類については最終的なテキストと英訳を作成した。前者はギルギット・バーミヤーン第1型文字で樺皮に書写されたサンスクリット語写本であり、後者はカローシュティー文字で貝葉に書写されたガンダーラ語写本である。またギルギットから発見された説一切有部教団の伝承した『長阿含経』写本について、独ライプチヒ大学のグドルン・メルツァー博士を招聘して、その第三篇「戒蘊品」に含まれる二つの経典に対して共同で解読研究を行い、テキストを作成した。23年度の研究において特筆すべきは、今まで類例のなかったカローシュティー文字によるガンダーラ語大乗経典写本の全貌をほぼ明らかにすることができたことである。本研究は、アフガニスタンのバーミヤーン渓谷およびパキスタン東部のギルギットから、1990年代の中頃に新たに発見され、世界各地のコレクションに所蔵される大量の仏教写本類に対して、海外の研究協力者と共に解読研究を行い、その研究成果として得られる仏教文献のサンスクリット語およびガンダーラ語テキストと翻訳の出版を目指すものである。平成25年度は、ガンダーラ語による大乗経典断簡類の解読と同定作業、さらにサンスクリット語の『長阿含経』写本を中心とする教団文献類の解読を継続して行った。(1)まず、ノルウェーのスコイエン・コレクションおよび我が国の平山郁夫コレクションに含まれる、カローシュティー文字によるガンダーラ語の大乗経典写本断簡類について、海外の研究協力者と共に出版を目指す解読作業を継続して行った。その結果、『賢劫経』『菩薩蔵経』『集一切福徳三昧経』に続く、第4の大乗経典の存在が明らかとなった。新発見断簡は『観察諸法行経』との類似性を持つが、対応する漢訳とチベット語訳の存在しない未知の大乗経典である。(2)次に、平山郁夫コレクションおよび米国のアダムス・コレクションに所蔵される、説一切有部教団が伝承した、パキスタンのギルギット出土と伝えられるサンスクリット語の『長阿含経』写本について、出版のための解読研究を前年度に引き続いて行った。25年度は、『長阿含経』に含まれる二つの『ローヒトヤ経』の梵文校訂テキスト作成に続いて、『トリダンディ経』の再解読へと進んだ。なお、新発見の『観察諸法行経』に類似したガンダーラ語大乗経典断簡については、25年9月に開催されたドイツ東洋学会(ミュンスター大学)、および25年9月の日本印度学仏教学会(島根県民会館)において研究発表を行った。本研究は、1990年代にアフガニスタンのバーミヤーン渓谷およびパキスタン東部のギルギット地域から新たに発見されたインド系諸語による仏教写本類に対して、ヨーロッパおよび米国の研究協力者と共に解読研究を行ってインド語テキストを作成し、解説と翻訳を付して出版を目指すものである。本目的を達成するために、平成24年度は、サンスクリット語による『長阿含経』写本に含まれる『ローヒトヤ・スートラ』(第2経)の解読とテキスト校訂、さらにガンダーラ語による『菩薩蔵経』の写本断簡類を中心とする解読研究を主として行った。(1)米国のアダムス・コレクションに含まれる、パキスタンのギルギットから発見された根本説一切有部教団の伝承した『長阿含経』の樺皮写本について、その第三篇「戒蘊品」に含まれる二つの『ローヒトヤ・スートラ』のうち、第2経に対して解読研究を行い、パーリ語ヴァージョン、漢訳文献と比較し、テキストを作成した。(2)アフガニスタンのバーミヤンより出土した、ガンダーラ語の『菩薩蔵経』の貝葉写本断簡について、オスロ大学のイェンス・ブロールヴィック教授、同大学の研究員フレドリック・リーランド博士を招聘して共同で解読研究を行い、さらに『菩薩蔵経』のネパール系サンスクリット語写本の対応箇所を同時に解読して、ガンダーラ語断簡のテキストを作成した。さらに解読の副産物として、ネパール系写本の第5章、第6章のサンスクリット語テキストを作成した。

24年度の研究において特筆すべきは、ガンダーラ語文献と直接対応箇所のあるサンスクリット語文献を参照することが可能となり、両テキストの相違点について原文にあたって直接比較検討できたことである。本研究は、アフガニスタンのバーミヤーン渓谷およびパキスタン東部のギルギットから、1990年代の中頃に新たに発見され、世界各地のコレクションに所蔵される大量の仏教写本類について、海外の研究協力者と共に解読研究を継続的に行い、その研究成果として得られる仏教文献のサンスクリット語およびガンダーラ語テキストと翻訳の出版を目指すものである。平成26年度は、カローシュティー文字で書写されたガンダーラ語写本断簡類の解読と同定作業、さらにブラーフミー文字で書写されたサンスクリット語の『長阿含経』写本を中心とする教団文献類の解読を継続して行った。(1)まずノルウェーのスコイエン・コレクションおよび我が国の平山郁夫コレクションに含まれる、カローシュティー文字によるガンダーラ語写本断簡類について、海外の研究協力者と共に出版を目指す解読作業を継続して行った。中でも、元のカローシュティー文字を消してブラーフミー文字による何らかの論典が書写された特異な貝葉写本断簡(パリンプセスト)について分析を進め、その成果について2014年8月にオーストリアのウィーン大学で開催された第17回国際仏教学会において発表した。なお、同月にスイス・ローザンヌ大学で行われた第二回ガンダーラ語写本ワークショップに参加して海外の研究者達とガンダーラ語写本研究の現状について意見を交換した。(2)次に、平山郁夫コレクションおよび米国のアダムス・コレクションに所蔵される、説一切有部教団が伝承した、パキスタンのギルギット出土と伝えられるサンスクリット語の『長阿含経』写本について、出版のための解読研究を前年度に引き続いて行った。平成26年度は、『長阿含経』に含まれる『ローヒトヤ経』の梵文校訂テキスト作成を終えたので、『トリダンディ経』の梵文校訂テキスト作成へと進んだ。本研究は、1990年代の中頃にアフガニスタンのバーミヤーン渓谷およびパキスタン東部のギルギットから新たに発見され、世界各地の研究機関および個人コレクションに引き取られた大量のインド語仏教写本類について、海外の研究協力者と共に解読研究を継続的に行い、その研究成果として得られる仏教文献のサンスクリット語およびガンダーラ語テキストと翻訳の出版を目指すものである。平成27年度は研究の最終年度であったが、未解読のまま残されていたカローシュティー文字とブラーフミー文字で書写されたガンダーラ語とサンスクリット語の大乗経典写本類の解読と同定作業、さらにブラーフミー文字で書写されたサンスクリット語の『長阿含経』写本を中心とする教団文献類の解読を継続して行った。(1)まずノルウェーのスコイエン・コレクションおよび我が国の平山郁夫コレクションに含まれる、カローシュティー文字によるガンダーラ語写本とブラーフミー文字によるサンスクリット語写本類について、海外の研究協力者と共に解読作業を継続して行った。(2)平山郁夫コレクションおよび米国のアダムス・コレクションに所蔵される、説一切有部教団が伝承した、パキスタンのギルギット出土と伝えられるサンスクリット語の『長阿含経』写本の解読研究を前年度に引き続いて行った。平成27年度は、長阿含経』第3篇の第1経である『トリダンディ経』の梵文校訂テキスト作成を他文献との比較対照の上で行った。
北部九州地方における儒学思想の基礎的研究

本研究では、江戸時代中期に北部九州地方で活躍した儒医学者・亀井南冥(1743-1814)を中心に、「筑前亀井家」の全容解明への基礎的作業を試みた。2011・2012年度は、主に九州管内に所蔵されている亀井家とその周辺の史料調査を行った。2013・2014年度は、その調査結果に基づく社会への還元(口頭発表、シンポジウム、論文等)を実施し、一定の成果を得たが、九州以外の他地域に関する調査には課題を残した。今年度は、北部九州地方の儒学者に関する基礎知識を習得しながら、個別事例の検証を行った。福岡藩関連については、貝原益軒の高弟・竹田家に関する学術関連の動向を瞥見する未見史料の翻刻・解説を作成中である。事例研究としては、中津藩医村上家史料の検討(業績参照)を行った。村上家六代目玄秀(延享2・1745ー文化15・1818)に関しては、既に2007年度の医学史料叢書により、その後半生について言及し、藩に出仕していた時期を中心として解明を試みた。その結果、藩出仕の詳細や五代藩主奥平昌高の妻に対する診療の様子、息子・玄水の久留米藩留学の経緯などを瞥見した。しかしながら、玄秀が藩に出仕する以前の事績に関しては史料も乏しく、先行研究でも触れられておらず依然として不明瞭である。本稿では、村上玄秀が明和六(1769)年に作成したとされる「論語聞書」について検討し、青年期の玄秀の事績についての解明を試みることで、学者の修学状況を例示した。彼の論語修養は、荻生徂徠(1666ー1728)『論語徴』の引用が多いことから、玄秀の論語解釈に徂徠学が影響を及ぼしていることが判明した。しかしながら玄秀自身が「徂徠学派」であるか否かは、本人の言及など未見の部分が多いので、現状で結論を出してしまうのは早計であろうと思われる。玄秀の後半生に於いて、徂徠学と医学がどのように関わっているのかということは、中津藩全体の儒学史を概観し論じる必要があると思われる。また2013年2月、南榮技術學院(台湾・台南市)において、現在までの科研課題研究の進捗状況と今後の課題について口頭発表を行った(「北部九州地方の儒学」)。平成25年度は当該研究課題の基礎的調査をすすめながら、一般市民に還元する成果としてシンポジウム(「シンポジウムin久留米真木和泉守の思想をたずねてー幕末から明治初期、欧米からの外圧を前に日本人はどう生きたかー」2013年7月21日於久留米大学)を行った。これは、北部九州地方の儒学思想が、幕末維新期に及ぼした影響を解明する手段のひとつとして、久留米の神官・真木和泉守(1813ー64)を事例に、基調講演(「真木和泉守が現代に投げかけるもの」)とパネルディスカッション(代表者発表「真木和泉守の修業過程」、共同研究者(島)「真木和泉守の国家構想」ほか2名)を実施したものである。研究代表者は、神官である真木和泉守の思想基盤が、国学だけでなく儒学にも影響を受けていることを述べ、彼の儒学の師が亀井南冥の学統であることを検証した。同シンポジウムは、2014年に水天宮(久留米市)にて執り行われる真木和泉守没後150年大祭のプレイベントととしての位置づけもあり、水天宮及び周辺自治体の協力を得た結果、250人以上が参集し盛況のうちに終了した。研究成果(論文など)としては、「村上家の人物交流ー所蔵掛幅を素材としてー」(中津市歴史民俗資料館分館医家史料館叢書XIII『人物と交流III』中津市教育委員会、2014年3月、所収)を発表した。これは、同資料館分館村上医家史料館所蔵の掛幅(11点の史料貼付)を素材として、中津藩の医家・村上家と近隣の学者との交流を瞥見したものである。貼付された個々の史料の関連性は管見に及び限り不明であるが、日出藩儒の帆足万里(1778ー1852)や杵築の大儒・三浦梅園(1723ー89)らとの新たな関係性が確認された。学会発表では、南榮科技大學(台湾・台南市)にて開催された「異文化交流國際學術検討會」(2014年3月14日)にて研究発表を行った。(研究代表者・吉田)江戸時代中期に北部九州地方で活躍した亀井南冥(1743ー1814)を中心に、「筑前亀井家」の全容解明を行うことは、北部九州地方における儒学思想が、近世から近代へ連続する過程を検証することができる。

このことを念頭に置き、平成23年度は関連史料の調査を行った。主な調査の内容は、(1)(財)亀陽文庫・能古博物館(福岡市西区)の調査、(2)長崎歴史文化博物館(長崎市)所蔵頴原家関係資料調査、(3)久留米市民図書館(福岡県久留米市)所蔵和漢書調査の3点である。(1)は亀井南冥・昭陽関連史料約500点(典籍類含む)の悉皆調査(次年度も継続)、(2)は亀井家の門人で、五島(現長崎県五島市)にて医業に従事した頴原家関係資料(約50点)の調査、(3)は和漢書のうち、久留米有馬藩旧蔵(約15000冊)の概要調査である。特に(3)は次年度以降亀井家関連資料の抽出を行う予定である。(研究分担者・島)熊本藩校時習館の訓導であった木下犀潭(18051867)は、江戸で佐藤一斎、松崎慊堂に学び、塩谷宕陰、安井息軒、山田方谷、佐久間象山らと交流、帰藩後は、自身の私塾で全国各地から集まった多数の書生を教育した。2011年秋、木下犀潭の子孫宅に保存されていた犀潭の日記を始め、関連史料を総て写真撮影し、その解読に取り掛かった。(研究分担者・大島)近世肥後の儒医・村井琴山とその背景について、京都大学、大阪府立中之島図書館等で調査を行った。調査、ならびに複写や購入等で史料収集を行った成果をもとに、現在、琴山の宗教観、博物観、医学観等について分析を進めている。また、藩校時習館で訓導を務めた儒者・辛嶋蘭軒とその背景について、熊本県文化企画課松橋収蔵庫で2度にわたって調査を行った。調査、ならびに複写や購入等で史料収集を行った成果をもとに、現在、辛嶋蘭軒についての連名論文を執筆中である。平成26年度は、当該研究課題の基礎的調査を補填しながら、課題の最終報告へ繋がる調査研究を行った。「村上春海の紀行文ー『諸雑用記』を中心にー」(『人物と交流IV』所収)では、村上医家史料館(大分県中津市)所蔵の史料を検証した。中津村上家は、代々中津藩医を勤仕する家(春海は8代目、180893)である。史料の内容は、1「京都より帰路日記、2「(仮)富士登山記」、3「江戸御滞留中御到来」、4「(仮)日光東照宮道中記」、5「(仮)金銭書き上げ(備忘)」、となる。富士登山(富士詣)は、「富士講」信者を中心に広まっていったようである。他の宗教や教育(藩校)とは違い「富士講」自体は江戸幕府の統制には含まれていなかったようで、当時は比較的自由に登山が可能であったと考えられる。検証の結果、1と2は同時期のことが記されていると考えられ、それを踏まえたうえで、富士登山や日光参詣の詳細(同行人や支出、食事の献立やその値段など)を丹念に精読することが、中津藩士だけでなく、当時の旅行(紀行)の様子を検証する上で肝要であると思われる。「春庵文稿(和文篇)」(『久留米大学文学部国際文化学科紀要』所収)は、福岡藩儒で貝原益軒の高弟竹田春庵(16611745、名は定直、字は子敬、春庵はその号)が記したものである。子孫も代々その職を継ぎ、4代目竹田定良(173898)は福岡藩の藩校創設に尽力した。春庵は、益軒の最高の助手・共同研究者として共著・校正、さらに浄書役を買って出た人物である。同文稿は北部九州地方の儒学を体系化する上での基礎史料となろう。招聘講演では、「北部九州の医学と久留米大学」という演目で研究成果の中間報告を行った(南榮科技大學、台湾・台南市)。1927年に発足した九州医学専門学校(現久留米大学)が同地域に根差した経緯を、江戸時代の医学(北部九州地域)を概観しながら平易に解説した。日本思想史本研究を遂行する最も重要な意義は、九州儒学思想伝播過程の事例として、「亀井家関連史料」の悉皆調査にある。(財)亀陽文庫・能古博物館(福岡市西区)の亀井南冥・昭陽父子関連の所蔵資料のうち、関係書簡約50点の写真撮影及び調査に関しては、写真撮影などの基礎調査は終了し、今年度悉皆調査を遂行中である。九州大学附属図書館所蔵「竹田文庫」は、貝原益軒の高弟であり代々福岡藩儒として仕えた竹田家(初代・定直)
抗MuSK抗体陽性重症筋無力症の治療薬の探索～新規モデル動物を用いた解析～

本研究では、疾患動物モデルを用いて抗筋特異的キナーゼ(MuSK)抗体陽性重症筋無力症(MuSK-MG)に対して真に有効な治療薬を探索した。MuSK-MGは抗アセチルコリン受容体抗体陽性重症筋無力症とは発症機序が大きく異なるため、従来から対症治療薬として用いられているコリンエステラーゼ阻害薬の用量は可能な限り抑え、むしろ3,4-ジアミノピリジンの使用を中心に変えていくべきであるという治療方針の根拠が得られた。抗MuSK抗体による重症筋無力症(MuSK-MG)は、急激な症状の悪化や筋萎縮に至る重症ケースが多いため、早急に治療の方針計画を立てる必要がある。しかしながら、現在の治療指針は抗AChR抗体による重症筋無力症に合わせて策定されているため、成因の全く異なるMuSK-MGの病態に必ずしも適さない可能性がある。本研究では、申請者が作製したMuSK-MGの動物モデルを用いて、MuSK-MGに対して真に有効な治療法・治療薬を探索・検討し、新たな治療指針を提言することを目的とする。前年度までの成果から、MuSK-MGは神経筋シナプスの形態・機能の維持機構が破綻することで発症することが明らかとなってきた。従って、神経筋シナプスの維持機構を解明することが、MuSK-MGの病態機序の理解と新規治療法の探索に重要であると考えられた。平成24年度は、MuSK-MGの発症によって神経筋シナプスで生じる遺伝子発現の変化を網羅的に解析するため、ポストシナプス近傍に存在するサブシナプス核から転写されるmRNAを特異的に分離精製する遺伝子改変マウスの作製を行った。神経筋シナプス領域で遺伝子発現レベルが高いアセチルコリン受容体のイプシロンサブユニットのプロモーター配列をクローニングし、EGFP-L10a (L10aはリボソームタンパク)融合遺伝子の上流に配置して、遺伝子改変マウス作製のためのベクターを作製した。作製したベクターを培養筋芽細胞株のC2C12に導入して分化誘導を行うと、筋管の形成に伴ってEGFPの発色が核と細胞質に認められ、遺伝子改変マウスのベクターが適切に作製できたと考えられた。現在、このベクターを用いて遺伝子改変マウスを作製中である。抗MuSK抗体による重症筋無力症(MuSK-MG)は、急激に症状が悪化したり筋萎縮に至る重症ケースが多いため、早急に治療の方針計画を立てる必要がある。本研究では、申請者が作製したMuSK-MGの画期的な新規動物モデル(100%の確率で同調して疾患を発症する)を用いて、MuSK-MGに対して真に有効な治療法・治療薬を探索・検討し、新たな治療指針を提言することを目的とする。平成23年度は、MuSK-MGの新たな対症治療薬の探索を目的として、Kチャネル阻害薬の3,4-ジアミノピリジン(DAP)の効果を解析した。MuSKタンパクを免疫して重症筋無力症を発症させたマウスに3,4-DAPを投与し、反復神経刺激による筋活動電位の減衰率の変化からその有効性を評価した。その結果、減衰率の劇的な減少だけでなく、活動電位の振幅にも大幅な増加が認められたことから、3,4-DAPが筋の易疲労性を改善し、最大発揮筋力を増加させる可能性が示された。さらに、発症したマウスから横隔膜を採取し、神経筋シナプスの刺激伝達に対する3,4-DAPの効果をin vitroで直接的に評価した結果、3,4-DAPは主に、運動神経終末からアセチルコリンの放出量を増加させて神経筋シナプスの刺激伝達を改善させていることが明らかとなった。MuSK-MGの病態はポストシナプス側の感受性低下だけでなく、プレシナプス側の機能低下にも起因していると考えられているため、3,4-DAPはMuSK-MGの対症治療薬として有効である可能性が示された。作製した動物モデルの解析や治療薬の評価を含めて、これらの成果を様々な学会で発表し、さらに複数の論文として公表することができたため、順調に進展していると考えている。作製した動物モデルの解析から、MuSK-MGは神経筋シナプスの形態・機能の維持機構が破綻することで発症することが明らかとなってきた。MuSKはポストシナプス側に発現している分子であるが、その機能抑制による障害はポストシナプスだけでなくプレシナプスにも及んでいる。これは、正常時にはポストシナプスからプレシナプスへと作用するtrophic factorが存在し、シナプスの機能・形態を維持している可能性を示していることから、神経筋シナプスの維持機構を解明することが、MuSK-MGの病態機序を理解する上で重要であると考えている。従って、今後は遺伝子改変マウスと疾患動物モデルを組み合わせて神経筋シナプスの維持機構を解明し、MuSK-MGの新規治療法を探索することを考えている。

MuSK-MGを発症させた遺伝子改変マウスの筋から神経筋シナプスで特異的に発現している遺伝子を精製し、マイクロアレイ法、次世代シークエンサーによるmRNA配列解析により疾患特異的に発現が増減変動する遺伝子を解析する。さらに、Gene Ontology解析、パスウェイ解析から神経筋シナプスの維持機構に関与する遺伝子群のネットワークを同定していく予定である。