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デルフィニウムの花色多様性に関する液胞内メカニズムの解明

デルフィニウムはアントシアニンの7位が複雑な修飾を受けることにより、濃青色の花色を呈している。これまでの研究結果から、アントシアニンの7位にグルコースとベンゾイル基が1つずつ交互に2回繰り返して結合している構造のビオルデルフィンまでの修飾酵素遺伝子を同定している。一方で、アントシアニンの7位にグルコースが3つ連続して結合した構造以降のシアノデルフィンにいたる修飾酵素遺伝子については未同定のままである。今年度までの研究から、ビスデアシルシアノデルフィンをアクセプター、液胞内での糖およびアシル基供与体であるpHBGをドナーとして花からの粗酵素による酵素活性の検出を試みたが、生成物の活性は得られなかった。さらにシアノデルフィンを蓄積している様々な品種を集めて、pHBG(p-ヒドロキシベンゾイルグルコース)をドナーとして花から抽出した粗酵素でのシアノデルフィンに至る酵素活性の検出を調査したが、どの品種においても新規生成物の活性は確認されなかった。これらの結果から、ビオルデルフィン以降のアントシアニンの修飾では、pHBGはドナーとして働いておらず、他の糖供与体およびアシル基供与体の存在が考えられた。このため、まず、ビオルデルフィンを蓄積している品種とシアノデルフィンを蓄積している品種での花における低分子化合物の比較解析を行なった。この結果、pHBGのグルコースの先にもう一つグルコースが結合した構造の存在が示唆された。さらに、これまでに報告例がない新規のアントシアニン構造の存在も示唆された。この構造はビスデアシルシアノデルフィンに一分子だけベンゾイル基が結合した構造であり、特定の育種系統のみで見られる構造であることが考えられた。デルフィニウムの主要アントシアニン構造にはデルフィニジンの7位がポリアシル化された構造のビオルデルフィンとさらに複雑な構造のシアノデルフィンと呼ばれる分子種がある。デルフィニウムの青色はこの複雑なアントシアニン構造が液胞内において積層構造を形成することで深みのある濃い花色を呈していることが知られている。本研究ではビオルデルフィンからシアノデルフィンにいたる修飾酵素遺伝子の同定とその液胞内での花色多様性を産み出すメカニズムを解明することを目的に研究を行っている。当該年度はシアノデルフィンの前駆体と考えられるアントシアニン分子種を主要アントシアニン分子種としている品種を同定し、そのアントシアニンの精製方法を確立した。また、これまで液胞内での配糖化およびアシル化はアシルグルコースを糖供与体としていることを示していたが、グルコースが2分子結合した有機酸においても反応が進むことを新たに見出した。また、他の植物と同様にデルフィニウムではアントシアニンと共存することで色調を変化させる効果をもつ色調変調物質の存在が示唆されていた。特に色調減退物質の報告例はこれまで他の植物での1例しかなく、デルフィニウムにおいては未同定である。そこでこの色調減退物質の同定に向けた単離精製を行った。品種間での蓄積物の比較により色調減退物質の候補化合物を7種類単離し、そのうちの1種において色調減退効果があることを確認し、その物質の単離精製方法を確立した。アントシアニン修飾酵素遺伝子および色調減退物質の同定に向けて、今後は単離した分子種の構造を同定することで関連する遺伝子の同定および液胞内メカニズムの解明に臨む。ビオルデルフィンからシアノデルフィンにいたる修飾酵素遺伝子の単離およびで同定に向けて、酵素反応の確認で必要となる糖受容体の単離精製を進めた。シアノデルフィンはアントシアニン7位のグルコースに1-3結合でグルコースが2つ連結した部位をもつ構造をしている。これまでの解析から、シアノデルフィンの前駆体と考えられるビオルデルフィンに2分子のグルコースが結合したアントシアニン構造を主要色素としている品種を確定した。デルフィニウムは開花時期や生育時の天候により花の主要アントシアニンの構造が変わることがあり、当初当該分子種の単離を予定していた品種においてサンプリング時期が変わるとアントシアニンの組成が変わることがわかった。しかし、新たに蓄積物を解析した品種においてビオルデルフィンに2分子のグルコースが結合したアントシアニンを主要蓄積物としている花を100 g以上サンプリングすることができたので、そのアントシアニンを大量精製し、構造の同定を行う。今後はこのシアノデルフィン前駆体を単離精製し、酵素反応の糖受容体として利用することでシアノデルフィンにいたる修飾経路の解明を目指す。また、白色デルフィニウム品種において、開花時に白色の花が経時変化により青味を呈する現象の解明に向け研究に着手した。植物色素ではコピグメント効果と呼ばれるアントシアニンと他の低分子化合物が生体内で積層構造を形成することで花色に変化を与える現象が知られており、近年にスイートピーにおいて花色を減退させる効果をもつコピグメント物質が報告された。このため、デルフィニウムにも色調減退物質が存在することが示唆されたため、候補と考えられる7つの低分子化合物を単離精製した。アントシアニンと単離物との混合液の吸光度を測定した結果、特定の単離した画分で色調が減退することが示された。今後はその化合物の構造解析を行う。濃青色の花色をもつデルフィニウムには7位がポリアシル化された複雑な構造のアントシアニンが蓄積している。これまでの結果より、アントシアニンの基本骨格であるデルフィニジンへの糖や有機酸の修飾は主に液胞内環境で起こっていると考えられる。

これまでにビオルデルフィンと呼ばれる7位が糖と有機酸により直鎖状に修飾された構造を合成する酵素遺伝子群は明らかにしたものの、さらに糖鎖が枝分かれした構造のシアノデルフィンにいたるまでの酵素遺伝子群は不明なままである。このため、本研究ではシアノデルフィンを合成する酵素遺伝子群の同定を目的として研究を行っている。これまでに多くの植物種においてアントシアニン構造に対する修飾酵素遺伝子が同定されているが、グルコースが3つ連続して修飾した構造はシアノデルフィンしか報告例がなく、この糖鎖合成の酵素遺伝子の単離は難しいことが予測された。まず先に糖鎖にアシル基や糖を修飾する酵素遺伝子の単離および同定を進めている。前年度にビオルデルフィンに2分子のグルコースが修飾された構造のアントシアニン(ビスデアシルシアノデルフィン)を主要の蓄積物とする品種を同定した。さらにそのアントシアニンを受容体、pHBGをアシル基・糖供与体の基質としてシアノデルフィンを蓄積している品種の花から粗酵素を抽出して、シアノデルフィンまでの構造を合成できるか確認した。その結果、シアノデルフィンやビスデアシルシアノデルフィンに有機酸が結合した反応産物は得られなかった。目的の生成物が得られなかった原因として、アシル基受容体の基質として使用しているビスデアシルシアノデルフィンはシアノデルフィンを合成する際の基質ではないこと、ビオルデルフィンからシアノデルフィンにいたる際のアシル基および糖供与体がpHBGではないこと、の2点が考えられた。ビオルデルフィンを合成する配糖化酵素遺伝子であるAA7BG-GT1 (BGGT1), GT2 (BGGT2)の2遺伝子が組換え酵素実験により同定されていたが、BGGT1, 2の両遺伝子の欠損品種が見つかっていなかったため、遺伝学的証明がされていなかった。前年度までに育種家の方の協力により、BGGT1, 2の二重欠損体品種見つけることができたため、各遺伝子配列および酵素活性を確認し遺伝学的証明を行い論文にまとめた(Ishii et al., J Plant Physiol., 2017)。次にビオルデルフィンに2分子のグルコースが結合したアントシアニンであるビスデアシルシアノデルフィンを恒常的に蓄積しているデルフィニウム品種を同定したため、ビスデアシルシアノデルフィンの単離を行った。まず、シアノデルフィンを合成する酵素遺伝子群の単離・同定としてはじめに糖鎖にアシル基を修飾する酵素遺伝子の同定を目指した。ビオルデルフィンを合成するアシル基転移酵素としてアシルグルコースをアシル基供与体に利用するSCPL2遺伝子が同定されているため、はじめにビスデアシルシアノデルフィンの糖鎖にアシル基を転移させる酵素がSCPL2であるか確認を行った。反応の受容体としてビスデアシルシアノデルフィン、アシル基供与体としてpHBGを使用し、各品種の花から粗酵素を抽出して酵素活性の検討を行った。その結果、どの品種の粗酵素を使用した場合においても反応生成物の検出にはいたらなかった。反応産物が得られなかった原因として、シアノデルフィンが合成される経路がビオルデルフィンの構造を介さないこと、または反応に必要とするアシル基・糖供与体がpHBGではないことが推察された。
20世紀のアメリカ文学における日本の民話の受容と意義

本年度は、20世紀前半のアメリカ文学と映画における日本民話の受容および、狐の嫁入りや狐が女に化ける民話のモチーフを取り上げたアメリカ人作家に関わる資料を収集し、研究を進めることができた。ジャポニズム、人類混血に対する偏見、黄禍論、オリエンタリズムに影響された文化的な背景を参照しつつ、収集した資料を分析し、口頭発表の形で研究成果の発表を行った。その実績の概要は以下の点に集約できる。【1.資料の収集・整理と検討】東京都の国立国会図書館を訪れ、19世紀末から20世紀初頭に至るまでの日本を舞台とした小説や民話の編集を執筆したアリス・メイベル・ベーコン、ジョン・ルーサー・ロング、メアリー・マクニール・フェノロサ、フランシズ・リトル、スーザン・バラルド、エドワード・グレイなどのアメリカ人作家に関わる資料および学術論文を収集した。【2.関連書籍の購入】民話・おとぎ話研究の新たな動向に着目する学術評論、20世紀のアメリカ文学や映画における日本のイメージ・日本民話の受容に関する書籍を購入し、幅広く研究を行った。妊娠に伴う健康上の事情や、大学の担当授業数の増加などにより、当初より計画していた海外出張を延期し、アメリカ議会図書館やジョージ・イーストマン・ハウス国際写真映画博物館での一次資料の調査や複写収集を行うことが叶わなかったため。平成28年度は狐の嫁入りや狐が女に化ける民話のモチーフを取り上げた20世紀のアメリカ文学や映画に関する資料を収集し、研究課題に関する理解をさらに深めることができた。アメリカの文化的な背景における日本の民話の受容を徹底的に検討をするため、5月に東京都の国立国会図書館を訪れ、19世紀後半から20世紀初頭までに英訳されてアメリカの読者に紹介された日本の民話に関する資料を収集した。そして、民話とおとぎ話研究に携わる書籍を購入し、幅広く研究を行った。その結果、現在まで収集した一次資料や学術的な評論を分析し、本研究が完成した後出版する予定である学術専門書の第二章「The Flip Side of Madame Butterfly: From Oriental Vampires toAmerican Ladies」を執筆することができた。この章では、1900年代から1920年代までのアメリカ文学に焦点を当てて、ジョン・ルーサー・ロングやオノト・ワタンナの小説および、ロイド・イングラハムによるジョン・ルーサー・ロング作品の映画化における日本の民話の描写と意義について考察した。特に、日本の民話からインスピレーションを受けた作品におけるジャポニズム、人類混血に対する偏見、黄禍論、オリエンタリズムの影響を検証した。その作品の中に登場する<女に化けるアジアの狐>と20世紀初頭のアメリカの<新しい女>( New Woman)の描写と19世紀後半から英米文学の作品の中で頻繁に登場する吸血鬼の姿の関連性を実証することができた。出産および育児休業に備え、平成28年7月1日から研究を中断した。そのため、アメリカ議会図書館での資料の調査を行うことは叶わなかった。まずはテキサス大学オースチン校ハリーランサムセンターを訪れ、同センターが所蔵するジョン・ルーサー・ロングの未発表の作品や手紙の中で日本と関係のあるものを探し、多数の日本民話のアダプテーションを発見することができた。その後、アメリカ合衆国カンザス州ローレンス市に本部を置くカンザス大学のスペンサー図書館を訪れ、SF小説家コードウェイナー・スミスの作品における東アジアの民話の影響について調査を行った。また、同大学の教授であるSF女性作家キジ・ジョンソン氏に会い、彼女をインタビューすることができた。インタビューの中で、『今昔物語』の説話に基づいている小説を執筆したジョンソン氏は、自分の作品における日本の民話やおとぎ話の役割について考察した。その後、ヨーロッパへ移動し、ロンドンの大英図書館のアーカイブでアンジェラ・カーターの日記やノートなどを調べて、日本の民話の影響に関わる資料を発見した。20世紀後半の米英文学における日本民話の受容を深く理解するため、西洋の童話のみならず、日本の民話からもインスピレーションを受け、文学的および文化的な境界を横断したカーター氏に関する検討が欠かせないと考えられる。研究の再開から経過した7カ月間でそれぞれの図書館で収集された資料は、今後の研究課題に大変役立つもので、研究論文、学術専門書(今は執筆中)、研究発表に利用される予定である。出産および育児休業に伴う事情、大学における研究・教育活動などにより、研究資料の収集等を行うための海外出張が計画していた期間より遅くなったため。【1.基本的研究体制】前年度に引き続き、アメリカ文学における日本民話の受容に関わる資料の整理、分析を行い、研究成果を発表する。特に、20世紀後半のアメリカ文学を研究対象とし、米国の戦後社会における<モデルマイノリティ>としての日系アメリカ人のイメージと6070年代のフェミニズム運動の影響を踏まえて、狐に関わる民話の受容を検討していきたい。【2.研究成果発表】村井まやこ神奈川大学教授と共に、国際学術会「Re-Orienting the Fairy Tale: Contemporary Fairy-Tale Adaptations across Cultures」(おとぎ話のリオリエンテーション-文化横断的アダプテーションのいま)を実施する予定である。これは、欧米、アジアをはじめ世界各国の関連分野の専門家が神奈川大学に集い、現代文学におけるおとぎ話と民話のアダプテーションと受容について討議する機会となる。この中で、自らの研究成果を発表し、新たな視点を得るべく関連分野の専門家らと議論を実施、意見交換を通して本研究課題に関する知見と情報を得て、さらに研究を深める推進力にしたい。

前年度に引き続き、平成29年度はエレン・ステイバーの『Shadow of the Fox』(1994年)と『The Fox Wife』(1995年)、キジ・ジョンソンの『The Fox Woman』(2000年)と『Fudoki』(2003年)などの20世紀後半21世紀初頭のアメリカ文学作品に焦点を当てて、狐に関わる日本の民話の受容を検討したい。特に、民話研究の新たな動向に着目する学術評論を参考にしながら、キジ・ジョンソンやエレン・ステイバーが作成した日本の民話の改作におけるフェミニズム運動、ポストコロニアル理論、ヒューマン・アニマル・スタディ(人間と動物の研究)の影響を分析する予定である。そして、二週間ほど米国へ渡り、アメリカ議会図書館、ジョージ・イーストマン・ハウス国際写真映画博物館などで、日本の民話を取り上げたアメリカ人監督の映画やアメリカ人の学者と来日宣教師の叙述に関する資料を収集したい。アメリカ文学におけるアジアの民話研究に携わる研究者と交流するために、ハワイ大学を訪れる予定である。29年度の研究の背景にはジェンダー研究、ポストコロニアル理論、比較文学などがあるので、多角的な視点から民話・童話の現代的な翻案を吟味する研究者のネットワークを構築するのが最重要事項である。ハワイ大学で、クリスティーナ・バッキレーガを中心とする研究グループが、現代アメリカ文学におけるフェミニスト童話やマイノリティーの伝統的な民話の翻案に関する調査を行い、その結果を様々な雑誌や学術専門書に発表してきた。したがって、ハワイ大学へ行って、現地で最新の研究動向の情報を持ち、アジア系アメリカ人の文化混合に関する比較研究に重心を置いているハワイ大学の図書館で資料を収集する予定である。前年度に引き続き、平成30年度は20世紀後半から現在に至るまでのアダプテーションに焦点を当てて、Nora Okja Keller、Hiromi Goto、Larissa Laiなどのアジア系アメリカ人作家およびアジア系カナダ人作家による東アジアの民話の改作を分析する予定である。特に、その作家が描写する狐の姿とアジア系アメリカ人のアイデンティティ問題の関連性を明らかにしたい。また、アメリカのグラフィックノベルの中で欧米の童話と共に次第に日本の民話が再創造される現在の傾向を分析する予定である。具体的に述べると、Fairy-Tale Studiesの視点からNeil GaimanとBill Willinghamによるアダプテーションについて考察したい。新しい資料の収集および分析を行う一方、様々な方法で研究成果を公開する予定である。昨年は神奈川大学の教授である村井まや子氏と共に、神奈川大学で共催者として開催した国際学会「Re-Orienting the Fairy Tale: Contemporary Fairy-Tale Adaptations across Cultures」の成果を研究書として出版する予定である。そのため、研究書の編集作業および序論の執筆を行う予定である。
橋梁－車両系の動的応答解析とモンテカルロ法を用いた疲労設計用衝撃係数の定式化

現在,鋼道路橋の疲労設計に用いられている指針では,疲労設計用衝撃係数として道路橋示方書における規定の1/2の値を用いてよいとされている.その根拠として既往の実験結果を示しているが,この値が適切に疲労損傷度に対する動的効果を考慮しているかは必ずしも明確ではない.そこで,本研究では,単一走行車両による動的応答解析とモンテカルロシミュレーションを組み合わせた疲労設計用衝撃係数算定法を用いて,支間長,路面状態,車両速度,車両モデルの違いによる衝撃係数の変化を明らかにし,振動数比の関数として定式化された新たな疲労設計用衝撃係数を提案した.昨年度は,2自由度系にモデル化した単軸車両モデルによる動的応答解析とモンテカルロシミュレーションを組み合わせた疲労設計用衝撃係数算定プログラムを作成し,車両質量を確率変量とした場合の試算を行った.その際,橋梁の支間長,路面の状態,車両速度を変化させ,それぞれの値が衝撃係数に与える影響を検討した.しかし,一部に誤りがあることが今年度の検討で判明した.そこで今年度は,まず,プログラムを修正して同様な検討を再度実施した.次に,2軸4自由度の車両モデルを用いた解析が可能なプログラムを新たに作成し,車両モデルの影響についても検討した.さらに,衝撃係数の算出結果を用い,疲労設計用衝撃係数を主要なパラメータの関数として定式化することを試みた.今年度得られた主な結果は以下のとおりである.(1)衝撃係数は,支間長が40mのときに最も大きな値となり,道路橋示方書や疲労設計指針とは異なる傾向を示した.これは橋梁と車両の固有振動数比によるものであるということを明らかにした.また,路面状態による動的効果の変化が著しいため,供用後の維持管理レベルに合わせた衝撃係数の設定が望ましいことを指摘した.(2)車両速度が20km/hおよび40km/hのときは同じような傾向を示したが,80km/hのときは若干異なる傾向を示した.路面状態が良い場合は車両速度が増加するにしたがって衝撃係数も大きくなるが,路面状態が悪い場合は車両速度が増加するにしたがって衝撃係数は小さくなった.1軸2自由度車両モデルを用いた時より2軸4自由度車両モデルを用いた時の方が,橋梁の応答が増加し,衝撃係数も大きくなった.(3)算出された衝撃係数に基づいて定式化を行い,将来の維持管理レベル別に主要なパラメータの関数として定式化された新たな疲労設計用衝撃係数を提案した.昨年度は,一昨年度開発した2自由度系にモデル化した単軸車両モデルによる動的応答解析とモンテカルロシミュレーションを組み合わせた疲労設計用衝撃係数算定プログラムの誤りを修正し,車両質量を確率変量とした場合の試算を行った.その際,橋梁の支間長,路面の状態,車両速度を変化させ,それぞれの値が衝撃係数に与える影響を検討した.次に,2軸4自由度の車両モデルを用いた解析が可能なプログラムを新たに作成し,車両モデルの影響についても検討した.今年度はそれらの成果をThe 12th Japan-Korea Joint Symposium on Steel Bridgesで発表した.また,構造工学論文集にも投稿したが,掲載されなかった.昨年度実施した検討が大型トラックのみを対象とするものであったため,今年度は複数の車両タイプが混在する実交通流により近い検討が可能となるようプログラムの修正を行い,考慮する各車両タイプの混入率を変化させた解析を行うことで,代表的な数種類の交通条件に対する疲労設計用衝撃係数を算定する予定であった.しかし,数値解析を実施するために必要な各車両タイプのばね定数や減衰の情報がタイムリーに入手できなかったため,プログラムの修正は一応完成したものの,十分な数値解析的検討が実施できず,設計実務に利用可能な疲労設計用衝撃係数の定式化には至らなかった.以上のように,今年度の研究実績が十分なものとはならなかったため,土木学会全国大会や土木学会西部支部研究発表会での研究発表もできなかった.現在,鋼道路橋の疲労設計に用いられている指針では,疲労設計用衝撃係数として道路橋示方書における規定の1/2の値を用いてよいとされている.その根拠として既往の実験結果を示しているが,この値が適切に疲労損傷度に対する動的効果を考慮しているかは必ずしも明確ではない.そこで,本研究では,単一走行車両による動的応答解析とモンテカルロシミュレーションを組み合わせた疲労設計用衝撃係数算定法を用いて,支間長,路面状態,車両速度,車両モデルの違いによる衝撃係数の変化を明らかにし,振動数比の関数として定式化された新たな疲労設計用衝撃係数を提案した.現在の道路橋示方書(以下,道示)では,疲労を照査すべき限界状態のひとつとしており,具体的な照査方法が鋼道路橋の疲労設計指針(以下,指針)に示されている.道示における衝撃係数の算定値は,支間長のみの関数として与えられており,指針では道示の値の1/2を疲労設計用の衝撃係数として用いてよいと規定されている.しかしながら,この値が疲労損傷度に対する動的効果を適切に表しているか否かは必ずしも明確ではない.そこで今年度は,2自由度系にモデル化した単軸車両モデルによる動的応答解析とモンテカルロシミュレーションを組み合わせた疲労設計用衝撃係数算定プログラムを作成し,車両質量を確率変量とした場合の試算を行った.その際,橋梁の支間長,路面の状態,車両速度を変化させ,それぞれの値が衝撃係数に与える影響を検討し,以下のような結果を得た.(1)支間長20m,30m,40mに対して衝撃係数を算定したところ,道示の規定とは逆に,支間長が長くなるにつれて衝撃係数が小さくなった.

(2)衝撃係数の値は,路面状態によって大きく変化し,指針の規定する値と比べて安全側となったのは,路面状態が「極良」の場合のみであった.(3)車両速度も衝撃係数に対して一定の影響があり,速度20,40,60km/hに対する衝撃係数の変化は単調ではなく,40km/hで最大となった.(4)今回解析を行ったほとんどのケースで,現在指針にて規定されている値よりも大きな衝撃係数が算出され,指針の規定する値では路面の状況によっては疲労損傷に対する走行車両の動的効果を過小評価している可能性があることが明らかとなった.今年度は,判明した解析プログラムの誤りを修正し,昨年度と同じ条件で再解析を実施した.その後,橋梁上を重量が確率的に変化する2軸車両が走行する場合について疲労設計用衝撃係数の検討を行うための解析プログラムを開発し,代表的な条件で疲労設計用衝撃係数を算定した.また,これらの成果の一部を土木学会年次学術講演会,土木学会西部支部研究発表会,The 5th International Conference on New Dimensions in Bridges, Flyovers, Overpasses & Elevated Structures等で発表した.当初計画では「多軸車両モデルも考慮できる疲労設計用衝撃係数解析システムを構築し,より現実的な構造条件,交通流条件に対して疲労設計用衝撃係数を算定するとともに,成果を国内外のシンポジウム等で口頭発表する」ことを到達目標としていた.昨年度の検討に一部誤りがあったためプログラムを修正のうえ再解析を実施したことから,より現実的な条件で解析を実施するという点では当初計画よりやや遅れてしまったが,これまでに得られた解析結果に基づき,疲労設計用衝撃係数の定式化を試みた点は計画より進捗している.以上のことから,おおむね順調に進展していると判断した.計画書に記した今年度の到達目標の通り,橋梁上を重量が確率的に変化する1種類の車両が走行する場合について疲労設計用衝撃係数の検討を行うための基本的な解析プログラムを開発し,スパンの異なる数種類の標準的な鋼鈑桁橋を対象に疲労設計用衝撃係数の検討を行うことができたため.次年度請求する研究費を利用し,より現実的な構造条件,交通流条件に対して疲労設計用衝撃係数を算定し,設計実務に適用可能な疲労設計用衝撃係数を構築する.また,前年度の成果を国内外で発表するとともに,研究の最終年度として,過去2年間の成果を取りまとめた論文および報告書を作成する.さらに,一連の研究成果を取りまとめた論文を国内外の論文誌に投稿する.次年度請求する研究費を利用し,多軸車両モデルも考慮できる疲労設計用衝撃係数解析システムを構築し,より現実的な構造条件,交通流条件に対して疲労設計用衝撃係数を算定するとともに,成果を国内外のシンポジウム等で口頭発表し,研究の方向性について議論を行う.当初計画通り,記録メディア等の消耗品,国内で3回程度,国外で1回の発表を行うための旅費,外国語論文校閲費用,研究補助に対する謝金,汎用FEM解析ソフトウェアの保守費,報告書作成,研究成果の投稿料等に使用する予定である.当初計画通り,記録メディア等の消耗品,国内で3回程度,国外で1回の発表を行うための旅費,外国語論文校閲費用,研究補助に対する謝金,汎用FEM解析ソフトウェアの保守費等に使用する予定である.
環の分離拡大とガロア理論

環の分離拡大とガロア拡大の理論は,環拡大の研究において重要な役割を果す分野である。それはまた,環のガロア理論へと発展してきたが,その理論は環拡大の種類によって未解決の問題を残している。従来より,環のガロア理論は可換環の場合と非可換環の場合に分けて研究されてきた。ここでは,至としてこの二方面の研究成果について述べる。[1]可換環の無限ガロア理論.可換環のガロア理論の研究は,有限ガロア理論から出発して,無限ガロア理論へと発展し,筆者による直既約環の無限ガロア理論,Magid(USA)による直既約環上の非直既約無限ガロア拡大の理論等が開発された。このMagidによるガロア理論はガロア群の現れないガロア理論であるが,筆者はある種の場合にはガロア群が現れることを見出し,そのガロア群を用いたガロア基本定理を見出し,それを証明した。これはガロア群を用いたガロア理論としては現時点で一番一般的なものである。[2]非可換環の多項式型ガロア拡大非可換環のガロア理論は多様性があり,また困難な問題を多く含んでいる。そのために,この方面の研究は色々な角度,視点からなされている。筆者は多項式型のガロア拡大においてガロアの基本定理を発見し,それを証明した。その証明は簡明で,基本定理は利用価値の高いものである。
地熱地域における温度アレー観測による地震時応力場変化に関する研究

九重火山地域において、噴気温度・温泉温度と地震観測を同時に行い、温度変化の特徴を明らかにするとともに、温度変化と地震発生との関係について検討した。その結果、以下のようなことが明らかになった。温度変化について(1)噴気・温泉温度は複雑な変化を示すが、ゆっくりとした長周期変動と急激な短周期的変動が存在することが明らかになった。(2)ゆっくりとした長周期的変動は、離れた観測点においても共通に見られる場合も多く、地下熱源の変動を反映していると推定される。また、その変動は火山活動の推移に関して重要な情報を与えるものと考えられる。(3)急激な短周期的な変動には2種類あり、1つは降水に影響を受けたもの、もう1つは地震発生に関係している可能性がある。地震発生変化について(1)群発地震に伴って噴気温度が変化した例が認められる。しかしながら、まだ例が十分でなく、今後更にデータを増やす必要がある。地熱地域における地震発生と噴気温度変化との間には十分な相関関係があってもよいと考えられるが、現在までの所、それを裏付けるデータは必ずしも十分ではない。両者の関係は、地下における地熱流体の流動プロセス解明に重要な貢献が期待されるので、今後とも観測研究を継続して行きたい。研究対象地域である九州中部地域の九重火山およびその地域周辺において、噴気孔・温泉合わせて9カ所に温度連続記録計を設置し、サンプリング間隔10分で観測を継続し、温度変化データを取得した。一方、地震計は九重火山周辺地域4カ所(うち2カ所は臨時的に観測)に設置し、九重火山およびその周辺地域に発生する地震を観測した。得られた温度変化パターンは2種類に分けられた。1つはゆっくりとした長期的な変化傾向であり、もう1つはパルス的な短時間内の変化である。長期的な温度変化は、地下からの熱供給の変化すなわち火山活動の変化を反映するとともに、一部の観測点では気温の日変化・年変化が反映されることが明らかにされた。一方、短時間のパルス的変化には、地震発生に伴うものと降水の影響を受けたものの2種類があることが明らかにされた。地震発生に伴うものは、地震発生後温度低下が生じたが、その後、地震前の値に回復した。降雨に関係するものは、「降水量」と「温度低下あるいは回復に要する時間」とがよい相関を示すことから、降雨の影響を定量的に把握することができた。観測期間中、九重火山およびその周辺地域では、従来しばしば観測された比較的規模の大きい群発地震は発生せず、広域に展開された各温度観測点に共通の温度変化は観測されなかった。しかしながら、小規模な群発地震活動に伴って、九重火山中心部に設置した温度記録計ではパルス的温度変化が記録された。この変化は地震動により噴気通路が一時的に閉じたがやがて回復したものと理解された。すなわち、温度変化には地震に伴う応力場変化が反映されていることが確認された。さらに、各観測点における温度変化発生の時刻差から、九重火山中心部の噴気地域に地下から火山ガスを供給する通路の構造(ネットワークシステム)の一部が明らかにされた。研究対象地域である九州中部地域の九重火山およびその地域周辺において、噴気孔・温泉合わせて7カ所に温度連続記録計を設置し、サンプリング間隔10分で観測を継続し、温度変化データを取得した。一方、地震計は九重火山周辺地域5ヵ所(うち2カ所は臨時的に観測)に設置し、九重火山およびその周辺地域に発生する地震を観測した。観測期間中、九重火山およびその周辺地域では、前年同様、従来しばしば観測された比較的規模の大きい群発地震は発生せず、広域に展開された各温度観測点に共通の温度変化は観測されなかった。九重火山中心部では噴気地域の地下1km深以浅に地震が多発するゾーンが見出されるが、1日数個程度のマグニチュードマイナス1以下の微小地震の発生が定常的に発生しており、まれに小さな群発地震が発生するようである。来年もさらに観測を継続する。今年から、地中埋設型の傾斜計の連続記録が利用できるようになったので、もし適当な規模の群発地震が発生すれば、応力場変化と温度変化との関係がより明瞭になることが期待される。
網羅的遺伝子解析手法を用いたゲフィチニブ耐性化機序の解明

資金責任者らが半年間の長期ゲフィチニブ曝露によってEGFR遺伝子陽性肺癌細胞株PC9より作成したゲフィチニブ耐性細胞株PC9 GRを用いてメチル化及びmRNAの網羅的解析を行った。その結果、感受性株と比較して耐性株においてDNAメチル化が亢進し、mRNAの発現が低下しており、メチル化の変化がゲフィチニブの耐性化との関与が考えられる遺伝子を候補遺伝子(s100p、klotho、c10orf116、RASSF1A、IGFBP3、)として同定した。さらにその候補遺伝子の中から、IGFBP3、klotoho、s100pを中心に解析を行った。結果としてわずかではあるが、klothoやs100pが耐性化に関与していることが考えられ、siRNAを用いたknock downによって感受性株がわずかに耐性化することが示唆された。ひとつひとつのメチル化に伴う耐性化への影響は少ないものの、多数集まることで細胞株の耐性化に寄与している可能性が考えられた。同結果について今後論文投稿予定としている。資金責任者の海外留学に伴い本科研費に基づく研究に関しては一旦終了となった。klothoに関しては、同細胞株の主要耐性化機序として報告済みのFGF2-FGFR1活性化との関与も考えられ、関連性について評価を予定している。また、既に解析を終えているHCC827肺癌細胞株での同様な解析と照らし合わせてより普遍性の高い実験を行っていく予定としている。
プログラマブルデバイスを用いた制御・演算アルゴリズム評価実験システムの構築

研究目的:ディジタルシステムの制御回路設計や演算アルゴリズムを短時間で実習する環境を提供することを目的とし、プログラマブルデバイスの一つであるFPGA(Field Programmable Gate Array)を用いた実習システムを構築した。その例として種々のソーティングアルゴリズムをハードウェア記述言語を用いてプログラミングし、それを可視化するための表示回路を製作し、その動作確認を行った。研究実施計画:1.論理回路の基礎である種々の演算アルゴリズムに対しハードウェア記述言語を用いて回路記述を行い、2進数で与えられた入力の値を7Seg-LEDに10進数で表示させる2つの変換アルゴリズムについて演算速度、回路面積等の評価をする。2.ソーティングアルゴリズムを例として、簡単なアルゴリズムであるバブルソート、選択ソート、挿入ソート、高速なアルゴリズムであるクイックソート、ヒープソート、マージソートなど種々のアルゴリズムをプログラマブルデバイスで実現し性能比較をするとともに処理ステップ毎に可視化できるようなハードウェア構成とする。また、特徴などを解説できる資料の作成を行う。研究結果:1. 2進数で与えられた値を10進数に変換する方法として、一般的に考えられる減算法と高速な計算ができるシフト演算法の2つについてプログラミングし、FPGAで動作させることによって演算速度の違いを体感できるシステムを構築することができた。また、論理シミュレーションによって2つのアルゴリズムの動作速度やハードウェアの使用面積などを評価でき、短時間で効果的な実習を可能とすることができた。2.種々のソーティングアルゴリズムについてプログラミングし、論理シミュレーションによって演算終了までの演算速度の比較を行うことができるとともに、演算過程および3段階前までの演算履歴を可視化できるシステムを製作し、アルゴリズムだけでなく表示システムの制御と併せて学習できる実習環境を提供することができるシステムを構築できた。
ｉｎ　ｖｉｖｏ分子イメージングによる肺アミロイドーシス新規診断法の確立

肺アミロイドーシスの診断には、生検により組織を採取しコンゴレッド染色でアミロイドの沈着を証明するしかない。しかし生検は侵襲が大きく、コンゴレッド染色も熟練を要して困難であり診断がつかない場合が多い。近年、アルツハイマー病患者に対して非侵襲的にPETなどで脳内のアミロイドの沈着を撮影する技術が開発され、臨床応用されている。そこでこの技術が肺アミロイドーシスにも使えないかと考え研究を行った。研究は実際の患者に投与する計画と動物モデルを作成し投与する計画の二本立てで行った。動物モデルの作製は成功し、これにアミロイド蛍光プローブTHK-265を投与し、肺に沈着したアミロイドを撮影することに成功した。ブレオマイシン塩酸塩投与後にアミロイド投与を行ったモデルを作成し、マウス尾静脈からPETプローブ蛍光化合物を静注し、取り出した肺組織切片にアミロイドが染色し得るかを顕微鏡下で確認した。雄のマウス(C57BL/6J)に対しブレオマイシン塩酸塩投与後アミロイドβ蛋白経気道投与モデルを作成し、マウス尾静脈から蛍光化合物BF227を静注した。1時間後肺を取り出しパラフィンブロック並びにパラフィン切片の作製、化合物の染色と免疫染色との一致の再確認のため、同一切片で肺アミロイドーシスマウスおよびコントロールマウスの肺の組織を二重染色した。肺アミロイドーシスモデルマウスはできており、BF227と免疫染色は一致を示していました。それと同時に広く肺アミロイドーシス患者をリクルートする作業に着手。稀少疾患であり、診断治療が難しいため学会に手症例報告されることが多い。そこで日本呼吸器学会をはじめ日本老年医学会などの様々な学会に参加し、そこで肺アミロイドーシス症例を発表してる主治医に直接コンタクトを試みる。多くは死亡症例であることを確認する。また、研究協力者の工藤幸司教授によりBF227のみならず、次年度以降に投与が予定されるPETプローブTHKの人で投与した時の安全性について検証された(Alzheimer's Resaerch & Therapy 2014, 6:11)。したがって次年度以後の近赤外線で可視化できなおかつPETでも可視化できるプローブへとの橋渡し的研究がなされた。前臨床段階として実際に肺にアミロイドが沈着したとき、アミロイドプローブによって生体のままそれを可視化できるのかの検証が必要である。そこでマウスにおいて肺にアミロイドが沈着している動物モデルの作成を試みた。8週齢C57BL6の雄マウス(体重約2830g)をコントロール群(4匹)、ブレオマイシン群(3匹)、Aβ1-42群(5匹)、Aβ1-42+ブレオマイシン群(6匹)に分け、経気道的にアミロイドを投与した。アミロイドは1Aβ1-42(ペプチド研究所)の瓶を遠心にかけて薬品を瓶底にまとめる。2遠心機から取り出し、瓶の横などに薬品がついていないことを確認する。3Aβ1-42を最小単位で購入した場合、リン酸カリウム緩衝液を投与する。4遠心をかけて改めて瓶の底に薬剤溶液をまとめる。5超音波で瓶底に集まった薬剤を粉砕する(約10秒)。6シェイカーで撹拌し、アミロイド溶液使用時に超音波で瓶底に集まった薬剤を再度粉砕する。以上1から6の過程で調整した。肺を摘出し、ホルマリン溶液に入れ、24時間後採取サンプルをパラフィン固定し、HE染色及びコンゴーレッド染色し、アミロイドの肺への沈着を観察した。途中での脱落は、Aβ1-42群1匹、Aβ1-42+ブレオマイシン群2匹であった。コンゴーレッド染色での結果は、Aβ1-42群では1匹において沈着を認めたが、Aβ1-42+ブレオマイシン群では4匹の全てのマウスで認めた。以上の結果よりブレオマイシンにて肺に炎症を起こしたところにアミロイドを投与した方が、アミロイドが効率的に肺に沈着することが判明した。肺アミロイドーシスの診断は結核や肺癌などの他の結節影との鑑別が難しく、死後剖検にて明らかになることが多い。そこで生前に肺アミロイドーシスの診断をつけるべく、アルツハイマー病診断に近年盛んに利用されているアミロイド蛋白に結合する蛍光PETプローブを用い、肺に沈着したアミロイドをin vivoで描出することを試みた。

前年度までの研究でただ単に経気道的にアミロイドを投与するよりも、ブレオマイシン(BLM)にて肺に炎症線維化を惹起した状態でアミロイドを投与した方がアミロイドの定着率がよいことがわっていたので、In vivo肺アミロイドーシスモデルマウスとしてはBLM plus Aβ1-40を投与したマウス、コントロールマウスとしてはBLM plus potassium phosphate buffer(PBS)を投与したマウスを用いた。肺アミロイドーシスモデルマウスとコントロールマウス両者に対しTHK265(1mg/kg)を尾静脈から投与し、パラフィン切片にて免疫染色および尾静脈からのTHK265の染色との一致の確認を行った。組織切片・細胞の接着力を向上させたMASコートスライドガラスを用い、乾燥をスライド乾燥伸展器で行い、模擬染色作業で剥離することなく顕微鏡下で組織を確認できた。この過程で蛍光染色技術の確認のためリンパ脈管染色を行い形態観察を行った。次に肺アミロイドーシスモデルマウスとコントロールマウス両者における近赤外線イメージングイメージングをし、Ex vivoの評価を試みた。Clairvivo OPT plusを使い,蛍光ラベル化されたTHK265プローブを生体内の肺に沈着したアミロイドに集積させ,プローブの動態を体外から空間的・時間的にモニタリングできた。肺アミロイドーシス患者1名に大学に来てもらい本研究の趣旨について説明を行った。内容を理解していただいたものの、仙台にてPET撮影を行うまでの同意には至らなかった。呼吸器病学2014年1月1日研究代表者海老原覚の東邦大学医学部リハビリテーション医学研究室教授就任に伴い、仙台から東京へ研究室の移動を余儀なくされた。また、共同研究者である東北大学工藤幸司研究室と物理的に離れてしまい一時的に研究を中断せざるを得なかった。しかし、現在は新しい研究室も軌道にのりはじめ、研究再開している。また、工藤研究室との連携方法も改善・確立され物理的距離はほとんど問題にならなくなってきた。本年度はマウス肺にアミロイドを沈着させることができることを確認した。さらにそのような処置の後でもマウスは生存していることを確認した。今回施した処置は1ブレオマイシン群及びブレオマイシン+Aβ1-42群は、マウスを腹腔内麻酔処理後、気管を露出させる。2留置針を挿入して、ブレオマイシン溶液を留置針から肺へ投与する。3ブレオマイシン投与後、アミロイド溶液をAβ1-42群とブレオマイシン+Aβ1-42群のマウスに対して腹腔内麻酔処理後、気管を露出させ留置針を挿入して、アミロイド溶液を留置針から肺へ投与する。3アミロイド溶液投与後5日後、腹腔内麻酔後気管を露出させサーフロー留置針挿入後、マウスが吸気時にホルマリン溶液を投与する。4ホルマリン溶液が肺の末梢に浸潤したら、留置針挿入付近を結紮糸で気管を軽く縛っておき、留置針を抜くとすぐに結紮糸を強く縛る。5結紮後気管上部から肺を摘出し、ホルマリン溶液に入れ、その後ホルマリン溶液を回す。6採取サンプルをパラフィン固定し、HE染色及びコンゴーレッド染色し、アミロイドの肺への沈着を観察する、というような過程を経ている。その過程がアミロイド沈着に有効な手法であることを見出したことより、今後のこの研究が大きく進むことが予想されるブレークスルーであったと思われる。また、工藤研との共同研究体制が確認されたことの意味も大きい。アミロイドの溶解法の状況とかがすぐさま教示され実験施行に無駄がないことが改めて分かった。これまで使用していたアミロイドに結合するPETプローブBF227は近赤外線で蛍光発色しずらいことが判明。そこで実績のあるTHK265を用いて再検証する。
歯周病原性細菌の付着因子の遺伝子工学的研究

歯周病原性細菌Eikenellacorrodensの菌体表層に存在するレクチン様の高分子量複合体(LS)について遺伝子工学的解析を行った。精製LS(500kDa以上)を還元下加熱処理することにより、SDS-PAGE上で約300kDaと45kDaの2本のバンドが検出された。そこで、この45kDa蛋白のN末端アミノ酸配列を決定し、これを基にPCRを行った。得られたDNA断片(69bp)から、サザンハイブリ法やPCR法による染色体walkingを行い、45kDa蛋白をコードする遺伝子領域(約2kb)を得た。DNA塩基配列およびそれから予想されるアミノ酸配列より、45kDa蛋白質はNeisseria属のポーリンと高い相同性が認められ、またグラム陽性細菌の外膜蛋白に特有の構造も認められた。一方、E.corrodens遺伝子ライブラリー(7-20kbの挿入断片を含む)を作製し、LSのもつ付着・凝集活性を阻害する抗LSモノクローナル抗体を用いてイムノスクリーニングを行った。その結果、約1,200株から3つの陽性クローンが得られ、これらのクローンからはいずれも抗LS抗体に特異的に結合する25kDaの蛋白質の発現が認められた。これらのクローンからプラスミド(15-18kb)を分離し、マッピング解析や欠失解析などにより25kDa蛋白の発現に必要な領域1.2kbを特定した。現在、クローニングされた遺伝子の解析と遺伝子産物の解析により、これらの蛋白質の構造及び機能を研究すると同時に、他の構成蛋白のクローニングを試みている。
核酸およびその構成成分の選択的アルキル化と関連反応の研究

1)リボフラノース1位へのエンジイン鎖の導入1-0-アセチル-2,3,5-トリ-0-ベンゾイル-β-D-リボフラノース(1)からプロパルギルβ-D-リボフラノシド2を、β-選択的にほぼ定量的な収率で合成した。化合物2の保護基をつけかえたあと1-クロロ-4-トリメチルシリル-1-ブテン-3-インを反応させてエンジイン誘導体3を合成した。リボース環2位との間で閉環させることが今後の課題である。2)リボースの1位または2位へ導入したアリル基の官能基変換1-0-アセチルリボース1からアリルβ-D-リボフラノシド4を選択性よく定量的な収率で合成した。ひき続いて5位に1-ナフトイル基および1-ナフタレンスルホニル基をもつブロモアセチル誘導体6および7を合成した。同様の経路で2-C-アリルアラビノフラノシド誘導体5から、ブロモアセチル誘導体8および9を合成した。上に述べた化合物6、7、8および9を用いてオリゴデオキシリボヌクレオチド21merの開裂を検討したところ、主としてGの位置でヌクレオチド鎖の切断がおきていることを示唆する結果がえられた。
白血球活性化抑制による動脈硬化治療を目指した臨床薬理学研究

動脈硬化性疾患や心血管イベント発生の「主犯」は炎症であると考えられている。これまで申請者らはインスリン抵抗性、2型糖尿病と動脈硬化の関連からこれらの病態で上昇する遊離脂肪酸に注目し、遊離脂肪酸負荷がヒトで内皮機能障害を惹起すること、この内皮機能障害は白血球活性化を伴い、その抑制は内皮機能障害を改善することを示した。ここから炎症のもっとも上流である白血球活性化の適切な抑制が心血管イベント抑制に貢献すると考え、遊離脂肪酸負荷による白血球活性化、レニン-アンジオテンシン活性化と抗炎症薬コルヒチンの抑制について複数の臨床薬理学的研究を行った。内臓肥満はインスリン抵抗性や血管内皮障害を介して動脈硬化を促進するが、その病態には脂肪細胞からの遊離脂肪酸が介在する炎症反応亢進が大きく関与している。われわれは遊離脂肪酸上昇によるヒト白血球活性化やアンジオテンシンII産生能亢進、血管内皮機能障害、好中球活性化によるミエロペロキシダーゼ遊離と内皮細胞での一酸化窒素のavailability低下などを報告してきた。コルヒチンの標的臓器は白血球であることを考えると、この遊離脂肪酸負荷白血球活性化/内皮機能低下実験系は抗炎症作用の評価に適していると言えるが適切な用量を設定するためにはコルヒチンの組織内濃度とさまざまな指標を用いた白血球活性化抑制作用の関連も検討する必要がある。8名の健常者においてコルヒチン0.5mgを1日1回、一週間投与し、投与前と投与後1時間、24時間、48時間に血中及び白血球中のコルヒチン濃度、脂肪酸負荷前後での白血球のアンジオテンシンII産性能を測定した。コルヒチン濃度は白血球を分離し、さらに多核球と単核球に分離しLCMS/MSで測定した。脂肪酸負荷は白血球の活性化をきたし、好中球中のアンジオテンシンII産性能が有意に亢進した。酵素別に検討するとキマーゼ、カテプシンGを介した産生能は亢進しているが、アンジオテンシン変換酵素を介した産生は亢進していなかった。コルヒチン投与後はこれらの産生亢進は認められず、コルヒチンの白血球活性化抑制作用によりアンジオテンシンII産生亢進も抑制されたものと考えられる。白血球内コルヒチン濃度は48時間後も高値であり、アンジオテンシンII産生亢進もそれに呼応して48時間まで認められている。コルヒチン濃度測定やex vivoでのアンジオテンシン産性能測定はすでに確立されており、特に問題なく進展している。1.投与後の薬物動態について知見を得た。今後得られたデータによるpopulation pharmacokineticsの解析、シミュレーションを実施する予定である。本研究からコルヒチンは白血球に長時間にわたり存在し、白血球中における半減期も40-50時間と長く、0,25mg/日投与でも投与168時間まで白血球中から検出される。0.25/0.5mgのAUC比は0.5であった。これらの結果から血中濃度が測定不能となっても白血球中にはコルヒチンは長時間存在し、長期間投与を考慮すると0.25mg投与が0.5mgよりも安全で有効性は同等である可能性もあり、あらためて用量設定試験が必要と考えらえた。2.健常人を対象とした探索的薬物動態/薬力学試験を実施した。コルヒチン0.5mg/日投与は遊離脂肪酸負荷による実験的白血球活性化及び白血球におけるアンジオテンシンII産生能を抑制した。また血中CRPや好中球活性化の指標とされている血中へのミエロペロキシダーゼの遊離もコルヒチンにより抑制された。3.コルヒチン投与後に遊離脂肪酸負荷を行い、白血球のタンパクを抽出し、炎症に関連するタンパクの解析を進めている。LCMS/MSでのコルヒチン血中濃度、白血球中濃度の測定、マイクロチャネルによる白血球活性化測定、アンジオテンシンII産生能評価など予定した実験について概ね問題なく実施されている。これまで申請者らはヒト血管内皮機能の研究を行っていたが、とりわけインスリン抵抗性、2型糖尿病と動脈硬化の関連からこれらの病態で上昇する遊離脂肪酸に注目し、遊離脂肪酸負荷がヒトで内皮機能障害を惹起すること、この内皮機能障害は白血球活性化を伴い、その抑制は内皮機能障害を改善することを示した。ここから炎症のもっとも上流である白血球活性化の適切な抑制が心血管イベント抑制に貢献すると考え、抗炎症薬コルヒチンの動脈硬化抑制作用について複数の臨床研究を行った。平成29年度は健常人における薬物動態試験、遊離脂肪酸負荷による白血球活性化に関して薬物動態・薬力学研究を前年度からの継続として実施し、白血球内コルヒチンの薬物動態及び薬物動態と薬力学の関連を明らかにした。白血球活性化作用の一つとして白血球内のレニンーアンジオテンシン系活性をアンジオテンシンII産性能で評価し、遊離脂肪酸負荷による亢進とコルヒチンによる抑制を示した。また冠動脈疾患患者にコルヒチンの短期間投与が血管内皮機能を改善することを示した。

これまで申請者らはインスリン抵抗性、2型糖尿病と動脈硬化の関連からこれらの病態で上昇する遊離脂肪酸に注目し、遊離脂肪酸負荷がヒトで内皮機能障害を惹起すること、この内皮機能障害は白血球活性化を伴い、その抑制は内皮機能障害を改善することを示した。ここから炎症のもっとも上流である白血球活性化の適切な抑制が心血管イベント抑制に貢献すると考え、遊離脂肪酸負荷による白血球活性化、レニン-アンジオテンシン活性化と抗炎症薬コルヒチンの抑制について複数の臨床薬理学的研究を行った。脂肪酸負荷後の白血球炎症性蛋白の解析を行い、コルヒチンによるシグナルの抑制について検討を行う。本年の研究ではex vivoの検体を用いたが今後はin vitro実験系での検討も進める。白血球タンパクの解析を中心に、コルヒチンによる白血球活性化抑制のシグナルについてより詳細な検討を進める。コルヒチンの効果の指標となるマーカーについて探索的な検討を進める。白血球活性化抑制と血管内皮機能改善の関連について実際に動脈硬化性疾患患者でのin vivo研究を実施する。臨床薬理学、応用薬理学解析の一部が翌年実施となったため。実験はほぼ予定通り進行しているが一つの演題が学会で採択されておらずその分旅費の支出が予定よりも少なくなった。翌年実施するデータ管理、解析に用いる。実験用消耗品に使用予定
アリストテレスのポイエ-シス論-自然の時間と悲劇の時間-

昨年度からの研究成果をふまえて、今年度は「『詩学』における時間の問題」を扱った。具体的には、つぎの二つの点からその問題の考察を試みた。(1)悲劇の解読においては、人間存在に本質的・不可避的につきまとう不確実性・運命を「哲学的」にどのように語り、意味づけるかが、いわば常道のひとつとなっている。たしかに、『オイディプス王』を読む(観る)者にとって、その展開と結末には有無を言わせぬ迫真性がある。しかし、悲劇の「鑑賞」という角度からではなく、悲劇の「創作」という視点から、悲劇の悲劇性を解明しようとすれば、当然のことながら、作品の核となる「物語」[出来事の組立て]という構成要件に着目しなくてはならない。ところが、「物語」という観点から見たとき、われわれにとって意外なのは、現存するギリシア悲劇作品中の最高峰と目される『オイディプス王』をAr.は最高とはみなしていない、という点である。そしてアテナイ人もまた、『オイディプス王』を悲劇競演において第一位に推さなかった。この奇妙な一致はいかなる事態をわれわれに告げているのか、それを追跡するさことによって、Ar.の悲劇論の特徴ひいては人間理解(このことは、ソポレクスを高く評価した思われるプラトンの場合と比較すれば、より一層鮮明となろう)を考察した。(2)他方Ar.は優れた悲劇作品を生物になぞらえる。必然的な一貫性を保つことによって、「ひとつの大きさをもつもの(生物)」となるとき、悲劇作品は、Ar.が生物学的探求において見出したような、秩序性を顕著する。Ar.の哲学に通底するこの地平を析出することによって、われわれはそこに、〈悲劇の時間〉の成り立ちを見ることができ、人間にとって時間のもつ意味も看取できると思われる。なお、この概要に基づく研究成果は、(1)と(2)との関連を考慮するかたちで、近く公表される予定である。本年度は、『自然学』における時間、つまり、<自然における時間>を考察した。主たる対象としては、運動に関するゼノンのパラドクス(運動論駁)を扱った。(なお、この成果の一部はすでに日本哲学会大会において口頭発表され、さらに「「ゼノンの逆理」とアリストテレス」と題して『哲学』(日本哲学会編)に掲載される予定である。)その成果は以下のように要約できる。ゼノンは運動の存在を論駁する議論を提示する。そしてアリストテレスはその議論への反論を試みる。その最終的議論において援用されるのが、可能態(デュナミス)-現実態(エネルゲイア)という対概念であるが、それと密接に関わってくるのが<時間>の問題である。従来の解釈では、パラドクスと時間との関係が的確には捉えれていなかったように思われる。この点を補うべく、論文では、ゼノンのパラドクスに対するアリストテレスの応接において時間の捉え方がどのように推移・転換していくかを追跡した。そこから浮かび上がってきたのは、われわれの日常的な時間表現に見られる二重構造である。すなわち、「いま・・・している」といった、パラドクスで問題となる表現で使用される<今>には、じつは、<今日><今月><今年>のように、自然的・秩序的な円環構造をもった時間がパラメーターとして作動しているのである。われわれがゼノンのパラドクスに陥るのも、こうした自然的な--と同時<人間>のあり方を深部で規定してもいる--時間への配慮を見失うからにほかならないと考えられる。