hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
膵島移植超急性期の機械化学応答による膵島破壊シグナルのイメージングサイエンス

膵島移植における最重要課題の一つは、膵島移植後に起こる超急性期炎症反応による膵島破壊を防止して膵島機能を維持し生着率を向上させることである。我々は以下のような作業仮説を立てて実験を行った。「膵島移植時に全血暴露時、血小板凝集及び血液凝固反応により、膵β細胞に発現する温度感受性及び活性酸素感受性イオンチャネルであるTRPM2チャネル(TRPM2)が活性化し、TRPM2を介したCa反応が膵島細胞死の責任シグナルの一つとなる。」。ラットインスリン産生細胞(INS-1)に発現するTRPM2ノックダウン安定細胞株(KD-INS)を作製し、コントロール細胞との比較実験を様々な条件下で行った。全血、多血小板血漿(PRP)、フィブリノーゲン(FBG)に対するカルシウム(Ca)応答及び全血、多血小板血漿(PRP)により誘発されるINS-1細胞死を観察した。D-INS細胞の電気生理学的検討より、TRPM2の内因性リガンドであるADPRiboseにはほとんど反応しなかったが、電位依存性Caチャネル機能は保存されていた。KD-INS細胞では温度依存Ca応答及び過酸化水素に対するCa応答も有意に減弱していた。このKD-INS細胞を用いて全血、PRP、FBGに対するKD-INS細胞のCa応答及び全血、PRPにより誘発されるINS-1細胞死を観察した。INS-1細胞においてCa応答は、全血、PRP及びFBGによって誘発された。このCa応答は、インテグリン阻害ペプチドやTRPM2の非特異的阻害薬2-APBによって阻害された。KD-INS細胞では、全血、PRP、FBGに対するCa応答は減弱していた。更に、全血、PRPにより誘発される細胞死も有意に減少していた。膵島が血液と接触することによりTRPM2が活性化され、TRPM2を介したカルシウム応答が細胞死を惹起して膵島破壊につながることが示唆された。」。ラットインスリン産生細胞(INS-1)に発現するTRPM2チャネルノックダウン安定細胞株(KD-INS)を作製した。全血、多血小板血漿(PRP)、フィブリノーゲン(FBG)に対するCa応答及び全血、多血小板血漿(PRP)により誘発されるINS-1細胞死を観察した。KD-INS細胞の電気生理学的検討より、TRPM2チャネルの内因性リガンドであるADPRiboseにはほとんど反応しなかったが、電位依存性Caチャネル機能は保存されていた。KD-INS細胞を用いて全血、PRP、FBGに対するKD-INS細胞のCa応答及び全血、PRPにより誘発されるINS-1細胞死を観察した。このCa応答は、インテグリン阻害ペプチドやTRPM2チャネルの非特異的阻害薬2-APBによって阻害された。TRPM2チャネルを介したカルシウム(Ca)反応が膵島細胞死の責任シグナルの一つとなるどうか細胞イメージング法により検証した。多血小板血漿(PRP)により誘発される細胞死(赤)はKD-INS細胞ではほとんど惹起されず、INS細胞では多数の細胞で観察された。インスリン投与を必要とする、特に1型糖尿病患者にとって膵島移植は臨床的に非常に魅力的な方法であるが、その目的を達成するのは、様々な側面から困難であることがわかってきている。

その最重要課題の一つは、膵島移植後に起こる超急性期の炎症反応(instant blood-mediated inflammatory reaction; IBMIR)による膵島機能の喪失を防止することである。本研究の目的は、超急性期におけるIBMIRのトリガーとなる1)門脈内血液凝固反応を介した血管内膵島破壊シグナルの解析と2)遺伝子工学的手法を用いて膵β細胞、膵ラ氏島、個体レベルで膵島の破壊防止策及び膵島移植前処理法の基礎的検討を行うことにある。これまでに「膵島移植時に全血暴露時、血小板をはじめとした血小板凝集及び血液凝固反応により、膵β細胞に発現する温度感受性及び活性酸素感受性の環境センサイオンチャネルであるTRPM2チャネルが活性化し、TRPM2チャネルを介したカルシウム(Ca)反応が膵島細胞死の責任シグナルの一つとなる。」という作業仮説をもとに実験を遂行してin vitro実験では概ね作業仮説に基づく実験成果を得られている。偽膵島または膵島を用いて同様な結果が得られれば、膵島が血液と接触し、血液凝固因子フィブリノーゲン及びフィブリン網形成により膵&#61538;細胞TRPM2チャネルが活性化され、TRPM2チャネル介したカルシウム応答が細胞死を惹起して膵島破壊の一因となっていることが示唆される。細胞死防止方策を検討する手段としてtPA発現INS-1細胞を用いて一時的血栓予防を試みる。KD細胞と同様に細胞死が抑制できれば、凝固反応を介した細胞死は、化学シグナル基づく細胞死をよりも力学的応答に基づく細胞死が引き起こされることを示唆していることになる。両細胞モデルを用いて本年はin vivo実験を行う予定である。残額47,432に関しては実験試薬に購入に充てる予定である。
腎細胞癌における遺伝子異常の検索

我々は、腎細胞癌においてある特定の遺伝子に「遺伝子刷り込み異常」という後成的な遺伝子変化の異常が起こっていることを明らかにしているが、後成的な遺伝子変化の異常が腫瘍のどの様な生物学的特性とつながるのかは解明できていない。腎細胞癌の増殖様式をヌードマウスへの移植実験によって検討したところ、新規抗癌剤であるCPT-11が強い抗腫瘍効果を示し、将来的な臨床応用性が期待された。免疫療法に関してもinterleukin2(IL2)やinterferon(IFN)単独では充分な治療成績は得られていない。しかし、腎癌細胞とその腎癌患者の末梢血リンパ球とを用いた我々のin vitroの実験系では、IL2とIL7の併用によりIL2単独よりも強い殺細胞効果を示し、臨床応用の可能性が示された。また、脳転移がIL2の副作用として生じるのではなく、進行症例においては一定の割合で生じることも我々の研究で明らかになった。我々はアポトーシス関連遺伝子としてのFasシステムに注目し、腎癌細胞ではFasの高発現とFasを介したアポトーシスの誘導が起こり、そのアポトーシスがIFN-γによって増強されることを明らかにした。また、Fas ligandを遺伝子導入したマウス腎癌細胞を同系のマウスに移植すると腫瘍はリンパ球からの攻撃を免れて、より急速に増殖することが明らかになった。さらに、可溶性Fasが腎癌患者血清中に高濃度で検出され、腫瘍径と可溶性Fas値には正の相関があることが明らかとなった。この可溶性Fasは、早期診断や再発診断など臨床上有用なものとなることが期待された。腎細胞癌の生物学的特性を知る為には実際の腎細胞癌の臨床的解析が重要である。我々はまれな例ではあるが脳に転移する腎癌について臨床的検討を加えた。その結果、腎癌の脳転移は一般的腎癌に比較して、より男性に多く傾向がある事、前治療としてのインターフェロンやIL-2の投与が特に危険因子とはならない事を明らかにした。従来、我々の施設においても行なわれていたLAK療法と免役療法も脳転移の危険因子でない事が今回の我々の報告によって明らかとなった。当施設では進行肝癌に対して以前よりLAK療法、インターフェロン療法を積極的に行っているが、IL2を用いた治療法にはIL2の副作用がつきまとうため、この副作用を軽減して治療効果を向上させるべくIL7の併用両方の可能性をin vivoにおいて調べた結果非常に有効との結果を得た。治療に関する研究はこの様に順調に進行しているのが現状である。これら臨床的現象に伴う遺伝子変化の検索については新規に手術療法にて摘除した腎癌の凍結検体の保存とDNA・RNAの抽出およびその収集を行なっているところである。LOH解析の為には腫瘍部分からのDNAと正常組織(末梢血リンパ球でもよい)からのDNAが必要であり、現在そのbankingを行っているところである。新規症例だけで約30検体のbankingが終了している。腎癌特異的遺伝子の単離については、正常部分と腫瘍部分のRNAを用いてDifferential Display-RT-PCR法によりCloningを試みているところであるが、Cloningされた遺伝子断片のsequeuceを順に行っている。

しかし、腎癌細胞と腎癌患者の末梢血リンパ球とを用いた我々のin vitro実験系では、IL2とIL7の併用によりIL2単独よりも強い殺細胞効果を示し、臨床応用の可能性が示された。また、脳転移がIL2の副作用として生じるのではなく、進行症例においては一定の割合で生じることも我々の研究で明らかになった。我々はアポトーシス関連遺伝子としてのFasシステムに注目し、腎癌細胞ではFasの高発現とFasを介したアポトーシスの誘導が起こり、そのアポトーシスがIFN-γによって増強されることを明らかにした。また、Fas ligandを遺伝子導入したマウス腎癌細胞を同系のマウスに移植すると腫瘍はリンパ球からの攻撃を免れて、より急速に増殖することが明らかになった。さらに、可溶性Fasが腎癌患者血清中に高濃度で検出され、腫瘍径と可溶性Fas値には正の相関があることが明らかとなった。この可溶性Fasは、早期診断や再発診断など臨床上有用なものとなることが期待された。
遺伝子導入によるドーパミン受容細胞細胞内情報伝達機構の研究

ドーパミン系の異常はパーキンソン病に代表される多くの運動障害疾患を生む主な原因になっている。これまでの研究で二つのクラスの五つのサブタイプのドーパミン受容体がクローニングされてきたものの、ドーパミンレセプターの細胞内情報伝達機構に関しては不明な点が多い。本研究ではドーパミンD2受容体の脳細胞における細胞内情報伝達機構を明らかにすることを目的としている。そのために、D2受容体を発現する脳細胞の初代培養にD2受容体遺伝子を導入し、D2受容体の細胞内情報伝達機構を研究しやすい系の確立と共に、脳細胞における細胞内情報伝達機構の解明を目指した。具体的には、ラット線状体の初代培養細胞にD2受容体遺伝子を導入し、本来D2を発現する筈の淡蒼球に投射するエンケファリン性細胞を単一細胞RT-PCR法によって同定することにより、Ca2+チャネルに対するD2アゴニストの修飾作用を指標にD2受容体がどのG蛋白(Giクラスのどれか?)、そしてどのような細胞内2次情報伝達系を用いるのかを明らかにする。現在、研究は進行中である。ドーパミンD2受容体の脳細胞における細胞内情報伝達機構を明らかにするには、D2受容体を発現する異なる神経細胞を用い、比較検討することも一つの方法である。我々は視床下核細胞を用いて、線状体細胞での結果(文献3)と比較検討している。初歩的ではあるが、視床下核細胞においてのドーパミン受容体の細胞内情報伝達は線状体細胞と異なる可能性を示唆する結果が得られている。このことは異なる神経細胞においてドーパミン受容体は異なる細胞内情報伝達経路を用いる可能性を示唆している。線状体細胞のドーパミン受容体情報伝達経路を調べる過程で、そのK+チャネルに関する検討ができたので、論文にまとめた(Song et al.,J Neurosci.,1998,in press)。
磁性金属人工格子の熱電能とその磁場効果

エピタキシアル成長した磁性人工格子が作られるようになって,多くの興味ある現象が明らかになった。BAIBICHからは,Fe/Cr多層膜について,10KOeの磁場をかけることによって50%に及ぶ負の巨大なマグネトレジスタンスを観測した。その基礎的な物性物理の機構の解明とこの現象の応用に対して大きな期待が持たれている。我々はマグネトレジスタンスと合わせて,マグネトサーモパウワー(磁気熱電能)を液体ヘリウム温度領域から室温に至る温度範囲で,磁場をかけながら測定した。磁気熱電能の測定を行なったのは,磁性人工格子に対しては我々の測定が最初であった。磁気熱電能の挙動はマグネトレジスタンスの挙動と対応がよく,熱電能からも巨大マグネトレジスタンスを裏付けるものとなったが,これに加えて,磁気熱電能の符号に関しても新らしい情報を得ることができた。これは負であり,現在の理論の枠内ではまだ充分に説明が行なわれていない。更に新らしい理論解釈の必要があることになった。又,電気抵抗の温度変化を精密に測定したところT^2に比例する項を見付けた。純磁性金属でもT^2項が観測されているが,多層膜におけるT^2はこれよりも一桁も大きなものであった。これは多層膜の膜面において伝導電子が散乱される機構を直接に証明したことになると考えている。今迄扱った試料はFe/Cr,Co/Cu,Au/Co/Au/FeCoの三種のみであるので,より多種の磁性多層膜層において同様の実験を繰り返し,更に一般的な視点を明らかにするのが今後の課題である。
ビタミンB6の新しい抗炎症作用の解明とその応用に向けた基礎研究

ビタミンB6類のうち、ピリドキサル(PL)とピリドキサルリン酸(PLP)がマクロファージなどのIL-1β産生を抑制することを見出した。また、その分子機構としてPLやPLPが1トル様受容体シグナルによるTak1の活性化を阻害し、前駆体型IL-1βの発現を抑制すること、2NLRP3依存性のカスパーゼ1活性化を抑制し、IL-1βの前駆体型から成熟型への転換を抑制することを示した。さらに、マウスにPLやPLPを投与することで、リポポリサッカライド投与によるエンドトキシンショックが緩和されることを示した。以上より、ビタミンB6はIL-1βの産生を抑制し、炎症性疾患の予防に有効である可能性が示唆された。ビタミンB6はpyridoxal (PL)、pyridoxamine (PM)、pyridoxine (PN)およびそれらのリン酸化体からなる。ビタミンB6は抗炎症作用を持つと考えられているが、そのメカニズムについては十分解明されていない。我々はビタミンB6が炎症性サイトカインIL-1βの産生を抑制することを発見した。そこで、このビタミンB6の新しい抗炎症作用の分子機構の解明とIL-1βが関与する疾患の予防法の開発に向けた基礎研究を目的に研究を行い、以下の成果を得た。1. IL-1βの産生過程はNF-κBによるproIL-1βの発現とカスパーゼ1によるproIL-1βの成熟の二段階に分けられる。カスパーゼ1の活性化はNLRP3などがカスパーゼ1とインフラマソームと呼ばれる複合体が形成することで誘導される。本研究では主にマウス腹腔マクロファージをLPSで刺激することでNF-κBを活性化し、さらにATP、ニゲリシン、尿酸ナトリウム結晶などでNLRP3を活性化することでIL-1βの産生を誘導した。この実験系でLPS刺激前にPLあるいはpyridoxal phosphate (PLP)で細胞を処理すると、IL-1βの産生が著しく抑制された。PMやPNにはそのような効果がなかった。また、PLとPLPはLPS刺激によるTak1やIKKのリン酸化など、NF-κB活性化経路を阻害した。2.予めLPSで活性化したマクロファージをPLやPLPで処理し、その後NLRP3活性化刺激を加えた場合にもIL-1βの産生が抑制された。また、PLやPLPはproIL-1βの産生は抑制せず、カスパーゼ1の成熟を阻害した。この実験系でもPMやPNは有意な抑制効果を示さなかった。3. PLまたはPLP(20mg/kg)をマウス腹腔に投与し、2時間後に致死量のLPSを投与したところ、PLやPLPを投与しなかったマウスに比べ、生存率が有意に改善された。以上より、PLとPLPはNF-κBとNLRPインフラマソームの活性化経路を共に抑制することが判明した。また、PLやPLPは炎症性疾患の予防に有効である可能性が示唆された。免疫学
関節リウマチ滑膜の病変局所で産生される抗体の解析と「酵素抗原法」への応用

関節リウマチの病変滑膜で産生される抗体の標的抗原を明らかにするため、コムギ胚芽無細胞タンパク質合成系で構築したヒトタンパク質ライブラリから、患者血清および滑膜抽出液が反応するタンパク質を、AlphaScreen法により探索した。複数のタンパク質が検出された。検出シグナルの高かった一部のタンパク質を用いて、滑膜組織切片で酵素抗原法を行ったところ、2種の抗原で滑膜組織上の形質細胞に特異的な陽性像が認められた。組織抽出液を用いることにより、病変で産生される抗体の標的抗原の網羅的な探索が可能であることが明らかとなった。今年度は、コムギ無細胞タンパク質合成系で作製した2243種のビオチン化ヒト自己抗原タンパク質を対象に、関節リウマチ患者血清および滑膜ホモジナイズ上清中の抗体が反応する抗原タンパク質を、AlphaScreen法により探索した。その結果、複数のタンパク質において、シグナルが高値を示した。また、滑膜ホモジナイズ上清と血清における同一抗原に対する抗原抗体反応シグナルについて、一部の抗原で異なるパターンが認められたものの、組織抽出物でシグナルの高い抗原タンパク質は、血清でもシグナルが高い傾向が認められ、多くのタンパク質において、組織抽出物と血清が類似した反応パターンを示した。滑膜ホモジナイズ上清を用いた網羅的な抗原タンパク質の探索結果から、各患者においてS/N比が上位5種類のビオチン化タンパク質を選抜した。そして、重複を除いた合計18種類のビオチン化タンパク質をプローブとして、対応する患者滑膜組織の4%PFA固定後凍結切片を対象に、酵素抗原法を実施した。その結果、2種の抗原において、滑膜組織上の一部の形質細胞に特異的な陽性像が認められた。一方、他の抗原タンパク質では、ほぼすべての形質細胞が陽性であったり、形質細胞以外の細胞にも非特異的陽性像が認められたり、あるいは組織全体において陰性であり、特異的な陽性染色像は検出できなかった。以上のことから、滑膜ホモジナイズ上清など組織抽出物を用いることによって、病変局所で特異的に産生される抗体の標的抗原タンパク質の網羅的な探索が可能であることが明らかとなった。さらに、無細胞合成系で作製したビオチン化タンパクを、未精製の状態で、酵素抗原法のプローブとして使用できることが明らかとなった。昨年度は、関節リウマチの病変滑膜組織由来の抗体および血清抗体が反応する抗原を、コムギ無細胞系で作製したヒト自己抗原タンパク質を対象に検索した。検出された抗原のうち18種の抗原タンパクについて、酵素抗原法により、病変における抗体産生部位の局在証明を試みた。その結果、2種類のタンパクにおいて、陽性細胞が認められ、コムギ無細胞系により作製した抗原ライブラリと病変組織抽出物を利用して、病変局所で産生される抗体の標的抗原を同定できることを示した。今年度は、染色された細胞が形質細胞であることを確認するため、形質細胞マーカー(抗CD138抗体)と抗原タンパクによる二重染色を行った。その結果、抗原タンパクで染色される細胞にCD138陽性像が認められ、抗原タンパクで染色された細胞が形質細胞であることを示す補助的な結果が得られた。さらに、昨年度に解析対象とした抗原タンパク18種のうち、酵素抗原法で陽性反応が認められなかった16種について、染色性改善を期待して、精製タンパクを用いて酵素抗原法を実施した。しかし、粗精製タンパクと比較して、染色性の改善は認められなかった。一方、陽性反応が認められた2種のビオチン化抗原タンパク(FBXO2およびTRIM21)の特異性を検討するために、5例の関節リウマチおよび3例の変形性関節症の組織切片を対象として、酵素抗原法を実施した。その結果、TRIM21ではAlpha Screenで高いシグナルを示した患者組織でのみ陽性細胞が認められたが、その他の患者組織では形質細胞への陽性像が認められず、今回の解析では疾患特異性は認められなかった。一方、FBXO2では、Alpha Screenシグナルの低値の各患者組織においても形質細胞様の細胞に陽性像が認められた。組織切片上で特異的反応と非特異的反応の両方を検出している可能性が考えられ、今後の検証が必要である。
萎縮性胃炎とペプシノーゲン、細菌学的検査との関連に関する疫学的研究

萎縮性胃炎の罹患にHelicobacter pylori感染が関連しているかどうかを明らかにするため,症例対照研究を行った.症例群は,1995年に福岡県O町の基本健康検査を受診した者の中で,1991年,1992年の血清ペプシノーゲン値により萎縮性胃炎と判定されず,かつ1995年の測定で初めて萎縮性胃炎と判定された39名である.対照群は2回の検査で萎縮性胃炎と判定されなかった164名である.萎縮性胃炎の判定は,血清ペプシノーゲンI(PGI)と血清ペプシノーゲンII(PGII)の比PGI/PGIIが3未満とした.萎縮性胃炎罹患へのHelicobacter pylori感染のリスクをLogistic regression modelを用いて解析した.Helicobacter pylori感染の萎縮性胃炎罹患へのオッズ比は5.2(95%信頼区間:2.08-13.17)と有意な関連がみられた.そこで,Helicobacter pylori感染の萎縮性胃炎罹患への影響を年齢別、性別にみると,65歳未満では、オッズ比が7.6(95%信頼区間:2.09-27.85)と有意なリスクの上昇がみられた.しかし、65歳以上ではオッズ比が3.5(95%信頼区間:0.94-13.10)とリスクの高まりがみられたが、有意ではなかった.性別では、男性においてはオッズ比が1.4(95%信頼区間:0.30-6.10)であり有意な関連はみられなかったが、女性ではオッズ比が9.8(95%信頼区間:2.82-34.11)と有意なリスクの上昇を示した.以上から,Helicobacter pylori感染は萎縮性胃炎罹患へのリスク要因となり,その影響が男女で異なることが示唆された.萎縮性胃炎の罹患にHelicobacter pylori感染が関連しているかどうかを明らかにするため,症例対照研究を行った.症例群は,1995年に福岡県O町の基本健康検査を受診した者の中で,1991年,1992年の血清ペプシノーゲン値により萎縮性胃炎と判定されず,かつ1995年の測定で初めて萎縮性胃炎と判定された39名である.対照群は2回の検査で萎縮性胃炎と判定されなかった164名である.萎縮性胃炎の判定は,血清ペプシノーゲンI(PGI)と血清ペプシノーゲンII(PGII)の比PGI/PGIIが3未満とした.萎縮性胃炎罹患へのHelicobacter pylori感染のリスクをLogistic regression modelを用いて解析した.Helicobacter pylori感染の萎縮性胃炎罹患へのオッズ比は5.2(95%信頼区間:2.08-13.17)と有意な関連がみられた.そこで,Helicobacter pylori感染の萎縮性胃炎罹患への影響を年齢別、性別にみると,65歳未満では、オッズ比が7.6(95%信頼区間:2.09-27.85)と有意なリスクの上昇がみられた.しかし、65歳以上ではオッズ比が3.5(95%信頼区間:0.94-13.10)とリスクの高まりがみられたが、有意ではなかった.性別では、男性においてはオッズ比が1.4(95%信頼区間:0.30-6.10)であり有意な関連はみられなかったが、女性ではオッズ比が9.8(95%信頼区間:2.82-34.11)と有意なリスクの上昇を示した.以上から,Helicobacter pylori感染は萎縮性胃炎罹患へのリスク要因となり,その影響が男女で異なることが示唆された.1993年9月に福岡県のS町の40歳から69歳までの住民から、210名を無作為抽出して、食生活調査、血液検査を実施した。最終的には、167名(男85名、女82名)の調査協力が得られた。今回は、1)調査協力者(A群)と同年齢の全住民(B群)との生活習慣の比較、2)食生活調査におけるビタミン、食塩の結果をまとめる。1)生活習慣の比較男において、喫煙状況、肥満度は、A群、B群とも差はみられなかった。運動は、週2回以上する者の割合をみると、40歳から59歳まではA群が高く、60歳代はB群が高い傾向がみられた。飲酒は、毎日飲酒者の割合が、40歳代ではA群が高く、50歳から69歳までは差がなかった。女では、肥満度、飲酒状況は両群で差がみられなかった。喫煙者、週2回以上の運動者はB群が高い傾向がみられた。2)食生活調査ビタミンとして、レチノール、カロチン、ビタミンA、ビタミンCの1日の平均摂取量をみると、男では、レチノール、ビタミンAは50歳代が最も高かった。カロチンは、逆に50歳代が最も低い値を示した。ビタミンCは、年齢とともに増加傾向がみられた。女では、レチノールは50歳代が最も低く、カロチンは逆に50歳代が最も高い値を示した。ビタミンAは50歳代が最低のU字型を示した。

ビタミンCは、男性同様に年齢とともに、増加傾向がみられた。食塩は、男は女より高い値を示した。年齢別では、男は年齢別には、特に差はみられなかったが、女では、60歳代が最も低い傾向を示した。なお、ヘリコバクターピロリは現在、分析中である。食生活調査票の開発これまで、食生活調査は食物摂取頻度票を用いて実施されることが多いが、調査票の食品リストは、実際の食生活調査をもとに選定されることはほとんどない。そこで、長期食生活データから食品リストを選定し、より妥当な食物摂取頻度調査票の開発をおこなった。用いた食生活調査データは、34名の四季16週間の摂取記録法によるものである。毎日、献立内容、それに用いた食品、その目安量を記入してもらった。献立内容、食品はコード化し、目安量とともに、コンピュータに入力し、食生活調査データセットを作成した。各食品の成分表をもとに、各摂取食品ごとに、栄養価計算を行った。現在、これらのデータを解析中であるが、食品の選定の基礎となる各食品の出現頻度についてみると、34名の出現頻度上位120食品の累積頻度割合は、全食品出現頻度の約80%を占めることが明らかとなった。このことから、これら120食品を調査すれば、食生活状況がある程度評価できることが示唆された。萎縮性胃炎の罹患にHelicobacter pylori感染が関連しているかどうかを明らかにするため、症例対照研究を行った.症例群は,1995年に福岡県O町の基本健康診査を受診した者の中で,1991年,1992年の血清ペプシノーゲン値により萎縮性胃炎と判定されず,かつ1995年の測定で初めて萎縮性胃炎と判定された39名である.対照群は2回の検査で萎縮性胃炎と判定されなかった164名である.萎縮性胃炎の判定は,血清ペプシノーゲンI(PGI)と血清ペプシノーゲンII(PGII)の比PGI/PGIIが3未満とした.萎縮性胃炎罹患へのHelicobacter pylori感染のリスクをCox proportional hazardsmodelを用いて解析した.Helicobacter pylori感染の萎縮性胃炎罹患へのオッズ比は4.0(95%信頼区間:1.69-9.65)と有意な関連がみられた.そこで,Helicobacter pylori感染の萎縮性胃炎罹患への影響を年齢別、性別にみると,65歳未満では、オッズ比が5.5(95%信頼区間:1.61-18.52)と有意なリスクの上昇がみられた.しかし、65歳以上ではオッズ比が2.9(95%信頼区間:0.84-10.03)とリスクの高まりがみられたが、有意ではなかった.性別では、男性においてはオッズ比が1.3(95%信頼区間:0.32-5.17)であり有意な関連はみられなかったが、女性ではオッズ比が6.9(95%信頼区間:2.10-22.88)と有意なリスクの上昇を示した.以上から,Helicobacter pylori感染は萎縮性胃炎罹患へのリスク要因となり,その影響が男女で異なるなることが示唆された.
核膜孔複合体と輸送運搬体によるimportin輸送制御：細胞核機能から高次生命へ

真核細胞では、細胞内で発現するタンパク質のおよそ30%もの分子種が核内外を積極的に往来している。これら大部分のタンパク質の輸送は、Importinβファミリーと呼ばれる運搬体分子群によって担われ、ヒトには20種類以上存在する。しかし、それぞれのファミリー分子の基質情報が少なく、個々の輸送経路の機能同定が進んでいない。本研究では、Importinβファミリー分子の基質候補を同定し、その輸送経路の機能同定を試みた。我々は、核ー細胞質間輸送再構築系、安定同位体標識法(SILAC)、定量的質量分析法の3つを組み合わせた新しい基質同定系の樹立に成功していた。初年度は、TransportinとImportinβの輸送基質同定に工夫を加え、基質の同定効率を上げる条件を設定した。次年度から、11のImportinβファミリーが担う輸送経路の基質候補を、HeLa細胞を用いて同定した。3回のbiological replicateをとることによって、全て運搬体分子に対して、1000から2000の異なる分子種を定量し、それぞれの運搬体について100200分子の基質候補を同定した。この規模の基質候補を核内輸送反応の大部分に対して同定した結果は、これまでに例がなく世界初といえる。そのため、解析に用いた運搬体全ての基質候補を比較することで、運搬体によって運ばれる基質に機能的違いがあるかを調べた。その結果、1)それぞれの運搬体に特異的なGOtermが濃縮されること、2)70種類を越えるリボソームタンパク質のそれぞれが異なる運搬体の基質候補になること、3)全ての運搬体の基質候補に含まれるmRNAスプライシング因子は、異なる運搬体では異なる反応pathwayにマッピングされることがわかった。これらの結果から、Importinβファミリーのそれぞれは機能的に異なる基質を輸送することが考えられる。27年度が最終年度であるため、記入しない。真核細胞では核と細胞質の間で絶え間ない情報分子の交換がおこなわれている。このプロセスを担う核ー細胞質間分子輸送によって、細胞内で発現するタンパク質のおよそ30%もの分子種が核内外を積極的に往来すると考えられている。これら大部分のタンパク質の輸送は、Importinβファミリーと呼ばれる核ー細胞質間輸送運搬体分子群によって担われる。ヒトには20種類以上のImportinβファミリーが存在し、それぞれが異なる輸送基質を核内外に運ぶと考えられる。しかし、各ファミリー分子の基質情報が少ないため、それらが担う個々の輸送経路の機能同定が進んでおらず、核ー細胞質間分子輸送による細胞機能制御の仕組みが具体的になっていない。申請者らは、核ー細胞質間輸送の再構築、安定同位体標識(SILAC)、定量的質量分析の3つの手法を組み合わせた新しい網羅的基質同定系を樹立してきた。昨年度は、TransportinとImportinβの輸送基質候補の同定に様々な工夫を加え、同定効率を上げるための輸送反応条件や輸送基質抽出条件の詳細を検討した。また、質量分析装置の機種による定量的質量分析の感度を検討した。その結果、検出した約4000分子種の中から1000分子以上のタンパク質の軽いアミノ酸と重たいアミノ酸比[L(light)/H(heavy)]の定量ができた。ランク付けで、100200分子が基質候補として同定できることがわかった。本解析系を使った再現実験の有効性も確認した。その上で、Transportin-2、Transportin-SR、Importin-4、RanBP5、Importin-7、Importin-8、Importin-9、Importin-11、Importin-13、Exportin-4輸送運搬体10種が担う核内輸送反応の効率を確認し、それら全ての基質同定解析に向けた準備を完了させた。本研究課題の目標は、真核細胞がもつ多数の核ー細胞質間輸送経路の全体像を把握することである。

そのことで、細胞機能に重要な核ー細胞質間輸送反応が生命現象をどのように制御しうるのかといった問題を具体的に理解したいと考えている。目標達成の最初の大きなステップは、これまで明らかにされてこなかった細胞内に存在する多彩なImortinβファミリー運搬体のそれぞれが、どの因子を認識して核内外に運ぶのかといった点を明らかにすることである。昨年度までに、これまで成功の報告がなかったImportinβファミリーのハイスループット基質同定法を独自の方法で確立し、その解析法を用いて、Transportin-2、Transportin-SR、Importin-4、RanBP5、Importin-7、Importin-8、Importin-9、Importin-11、Importin-13、Exportin-4など、ヒト細胞に存在する主要なImportinβファミリーの核内輸送反応全ての基質同定を可能にする道筋をつけることができてきた。当初の研究目的をおおむね達成できていると考える。27年度が最終年度であるため、記入しない。今後は、昨年度に検討してきた解析の各ステップの詳細条件を踏まえ、全てのImportinβファミリー輸送運搬体が担う核内輸送経路の基質候補の同定をおこなう。基質候補の性質を調べることで、それぞれの運搬体が担う個々の輸送経路にどのような機能的違いがあるかを明らかにしていく。また、何故、これほど多彩な輸送経路が細胞に必要かを理解したい。新しい核内輸送シグナルの同定などは、他分野の研究者にとっても有用な情報になる。全ての運搬体に対する基質候補を同定してその機能解析の情報を踏まえて、Importinβファミリー運搬体のそれぞれが担う生理機能を制御する方法を検討していきたい。核ー細胞質間輸送という細胞内最大の情報交換システムによって細胞機能がどのように制御されるかを示すことで、これまで漠然としか認識されてこなかった細胞機能制御の概念を新たに提唱したい。
外部環境制御による生体分子モーターの自己組織化ネットワークの形態制御と機能発現

細胞内の生体分子モーターと細胞骨格は置かれた環境に応じて様々なネットワーク形態をとることにより,多様な機能を実現している.この設計指針を応用することにより,少ない種類のパーツで環境に応じた多様な機能を発現するマイクロロボットの実現が期待される.本研究では,外部環境を制御し,生体分子モーターと細胞骨格のネットワーク形態を誘導することにより,マイクロロボットに必要な多様な機能を発現させる方法論の確立を目指す.このために,生体分子モーターと細胞骨格を様々な形状のマイクロウェルやマイクロ構造体と相互作用させ,ネットワーク形態を制御し機能発現を行う.細胞内の生体分子モーターと細胞骨格は置かれた環境に応じて様々なネットワーク形態をとることにより,多様な機能を実現している.この設計指針を応用することにより,少ない種類のパーツで環境に応じた多様な機能を発現するマイクロロボットの実現が期待される.本研究では,外部環境を制御し,生体分子モーターと細胞骨格のネットワーク形態を誘導することにより,マイクロロボットに必要な多様な機能を発現させる方法論の確立を目指す.このために,生体分子モーターと細胞骨格を様々な形状のマイクロウェルやマイクロ構造体と相互作用させ,ネットワーク形態を制御し機能発現を行う.
潰瘍性大腸炎における自己大腸上皮細胞障害活性に関与するHLA拘束性の検討

大腸上皮細胞の分離培養に関してはBATEN A(FASEB 1992)らの方法に準じ2例において施行したが、継代培養に移行することは現在の所成功するに至っていない。このため潰瘍性大腸炎患者単核球及び多核白血球の血管内皮細胞とのHLA非拘束性反応を検討し、これら末梢血に対する免疫調節による局所炎症の制御の可能性に関して基礎検討を行った。【方法】正常(NC)20例、潰瘍性大腸炎(UC)14例・Crohn病(CD)4例の末梢血を採取し、比重遠心法にて白血球分画を、さらにEロゼット沈降法にて非T細胞分画を分離しこれをCell Disk上に固定した臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)と反応させ、産生されるIL-1b,TNFa,IL-8を測定した。さらに分離されたT細胞に関し抗CD3抗体刺激による、増殖能を検討した【結果】末梢血より分離された非T細胞培養液中でのIL-1b・TNFa産生量はNC群UC群ともに少なく両者間で差を認めなかったが、HUVECと反応させた場合NC群に比しUC群で有意に前炎症性サイトカインが産生され(NC:IL-1b/678±534pg・TNFa/38.3±28.8pg、UC:1b/1345±455pg・TNFa/670.8±327.2pg)、これは疾患活動性に関係しなかった。またIL-8はHUVEC反応系に関してNC・UC群間に差は認めなかった。一方末梢血中のT細胞増殖能に関してはNC群とUC群で有意な差は認めなかった。【考察】IBDの末梢血中には活動性に関係なく活動準備状態の顆粒球・単球が多数存在しておりHUVECと反応すると多量の前炎症性サイトカインを産生するが、T細胞においては明かな活性化は証明されなかった。この事実は、潰瘍性大腸炎において前活性化状態にある顆粒球・単球が血管炎を介して炎症の進展・拡大に大きな意義を持っていると考えられ、これらの細胞群を除去する事により炎症の進展を阻止する可能性が示唆された。
経済利益の政治的表現の実証研究

社会的集団によって異なる経済的利益は政治過程において,どのように自己主張されるのであろうか.日本では,経済問題を含め,政策決定過程における官僚が果たす役割のウエイトが高いといわれてきたが,近年,官僚制の影響力の衰退と政治家の影響力の増大がいわれている.とりわけ,政権政党である自民党の政務調査会の部会,調査会などで,政治家を通じた社会集団の政治的主張が顕著になりつつあるといわれている.本研究は過去20年間の自民党国会議員の特徴,属性,役職経験のどを政策決定過程における政治家の役割との関連において捉え,それらを体系的に明らかにすることを通じて,どのうように経済的利益が政治家を通じて政治的に表現されるか,その資源は何であるのか,官僚制から政治家への影響力の変化は何故起きたのかを実証的に明らかにしようとしたものである.自民党議員と政策決定に関する実証分析を通じて浮き彫りにされた事実は,第一に自民党が30年以上にわたる一党優位体制の下で,その組織が制度化することを通じ,「族議員」と呼ばれる議員集団が政治家に有利に寄与しているということである.第二には,政策決定過程への政治家の関与のあり方が従来「番犬型」であったのに対し,今日では両者が互いに対立し,緊張したものにさせる「猟犬型」の度合が高まっていることである.第三はこのような政治家の政策決定への関与が選挙での再選を最も大きな要因になっている.そこで,われわれは引続き,官僚制の側に焦点を当て,官僚制の自己主張のあり方の分析,政治家の側の問題などを探求と分析を続けることによって,日本の政治システムの全体像を明らかにする必要がある.その意味で本研究はこのような壮大なプロジェクトの第一歩を印したものであるということができるであろう.社会的集団によって異なる経済的利益は政治過程において,どのように自己主張されるのであろうか.日本では,経済問題を含め,政策決定過程における官僚が果たす役割のウエイトが高いといわれてきたが,近年,官僚制の影響力の衰退と政治家の影響力の増大がいわれている.とりわけ,政権政党である自民党の政務調査会の部会,調査会などで,政治家を通じた社会集団の政治的主張が顕著になりつつあるといわれている.本研究は過去20年間の自民党国会議員の特徴,属性,役職経験のどを政策決定過程における政治家の役割との関連において捉え,それらを体系的に明らかにすることを通じて,どのうように経済的利益が政治家を通じて政治的に表現されるか,その資源は何であるのか,官僚制から政治家への影響力の変化は何故起きたのかを実証的に明らかにしようとしたものである.自民党議員と政策決定に関する実証分析を通じて浮き彫りにされた事実は,第一に自民党が30年以上にわたる一党優位体制の下で,その組織が制度化することを通じ,「族議員」と呼ばれる議員集団が政治家に有利に寄与しているということである.第二には,政策決定過程への政治家の関与のあり方が従来「番犬型」であったのに対し,今日では両者が互いに対立し,緊張したものにさせる「猟犬型」の度合が高まっていることである.第三はこのような政治家の政策決定への関与が選挙での再選を最も大きな要因になっている.そこで,われわれは引続き,官僚制の側に焦点を当て,官僚制の自己主張のあり方の分析,政治家の側の問題などを探求と分析を続けることによって,日本の政治システムの全体像を明らかにする必要がある.その意味で本研究はこのような壮大なプロジェクトの第一歩を印したものであるということができるであろう.昭和60年度からの研究の継続であり、全体として順調に退展した。猪口と岩井の行なってきている自民党政調会の各部会・国会の各部会のメンバーシップのデータ作成は前年度に引き続いて行なっており、とりわけ1985-1986年のデーターについてはほぼ完成した。さらに、分析を進め、一部は雑誌論文としても発表した。1985-86年分の分析については次年度、研究書として刊行の予定である。それ以前のデータ収集分析は次年度にもちこす。田中は利益団体の分析を進めている。一部雑誌論文として発表した。次年度にも引き続き行なう予定である。いずれも経済利益をどのようなチャネルをつかって政治的に主張するかに焦点をあてている。
江戸歌舞伎における興行慣習の実証的研究

日本近世演劇の基盤資料整備を進めつつ、そこに立脚して江戸歌舞伎の芸能環境を実証的に追究した。文字を主体とする資料では、西尾市岩瀬文庫の江役割番付集の書誌調査と興行情報細目の抽出をおこなった。視覚資料である役者絵については、ホノルル美術館において、紅摺絵を中心に色摺技法を分析するとともに、フランス国立図書館をはじめとする諸機関において、役者絵本『絵本舞台扇』の諸本を比較調査した。上記役割番付や入手した役者絵にもとづきながら、特定の芸能環境として、江戸歌舞伎の興行慣習「曽我祭」関係資料を収集し、その実態を検証した。平成24年度は、国立国会図書館、早稲田大学演劇博物館、東京大学総合図書館、西尾市岩瀬文庫等の機関において、江戸歌舞伎における曽我祭関係資料の調査収集をおこなった。特に宝暦6年市村座上演『梅若菜二葉曽我』の興行過程を追究し、当該興行が曽我祭の可視化、年中行事化に大きな役割を果たしたことを見きわめ、本研究が目的とする芸能環境の考察、就中興行慣習の実態解明のために、有益な知見を得ることができた。宝暦期以後の曽我祭の展開についてさらに調査考察を加え、全体の成果を次年度に発表する予定である。西尾市岩瀬文庫の芝居番付写本には特に注目し、書誌、資料細目、書入を検討した。次年度にかけて、資料の成り立ちを考究する。また東京大学総合図書館所蔵芝居番付集の資料構成を分析するとともに、東京芸術大学附属図書館所蔵の音曲資料細目と興行情報との対照をおこなった。一方、役者絵(浮世絵)については、ホノルル美術館を訪問し、ミッチェナーコレクションの原本調査を実施した。機関との申し合せにより、宝暦期資料を集中的に閲覧し、錦絵前期の色摺技法の展開を仔細に吟味することができた。次年度も引き続き同種資料を調査し、データを追加し、当期役者絵を興行資料として利用する際の書誌的判断につき、まとめて報告する予定である。なおホノルル美術館でも、曽我祭関係資料を見いだした。国内外の主要機関において、諸種興行資料から役者絵までを幅広く調査することにより、本研究が基盤をおく一次資料の整備を進め、その所産を単著『近世中期歌舞伎の諸相』(和泉書院、2013年)に全面的に生かしたことも、本研究の実績の一部である。演劇研究にあたっては、戯曲分析のみならず、演者や観客や興行といった芸能をとりまく諸環境を含めて考察する観点を欠いてはならない。本研究では基盤資料の整備を進めつつ、そこに立脚して江戸歌舞伎の芸能環境を実証的に追究した。文字を主体とする資料では、西尾市岩瀬文庫所蔵の江戸役割番付集の書誌調査と興行情報細目の抽出を重点的におこなった。芝居番付は第一次の興行資料であり、その目録化は、当該分野にとってなお継続すべき作業である。視覚資料である役者絵については、まずホノルル美術館において、紅摺絵を中心に技法の検証をおこなった。原本の閲覧により、拙著『近世中期歌舞伎の諸相』掲載図版の改刻についても確認することができた。次にフランス国立図書館をはじめとする在パリの諸機関において、『絵本舞台扇』諸本の比較調査をおこなった。明和7年(1770)初版の『舞台扇』は、錦絵の技法を全面的に採用し、本格的な似顔表現に挑んだ彩色役者絵本であり、改版本や後印本など書誌関係が複雑である。これらの調査は、当期役者絵を興行資料として利用する際の基礎的手続きである。上記役割番付や役者絵にもとづきながら、特定の芸能環境ー曽我祭という、江戸歌舞伎の本質にかかわる興行慣習を解明するため、曽我祭の可視化に大きく貢献した宝暦6年(1756)市村座上演『梅若菜二葉曽我』について、所蔵機関をまたいで資料を収集し、その興行プロセスを分析するとともに、曽我祭上演の実態を検証した。本研究は、芝居番付、音曲正本・せりふ正本、役者絵(浮世絵)等の基礎資料に立脚して、江戸歌舞伎の芸能環境を実証的に追究するものである。平成24年度は、網羅的資料として東京大学総合図書館秋葉文庫『〔劇代集〕』を、インデックスの不足により利用が遅れているものとして東京芸術大学附属図書館の写本資料『〔江戸長唄浄瑠璃正本集〕』『〔宝暦明和長唄めりやす集〕』等を、資料の成り立ちについて解明を要するものとして西尾市岩瀬文庫の写本資料『〔扮苑〕』をとりあげ、書誌調査や興行情報の抽出、データ化をおこなった。また浮世絵では、ホノルル美術館ミッチェナーコレクションの原本調査により、色摺技法の展開をめぐる貴重な知見を得た。研究計画にもとづき、広範な資料調査を実現できたことから、本研究の資料整備面は順調に進展しているということができる。資料調査は所蔵機関単位でおこなわれることが多いが、本研究では特定の芸能環境、すなわち曽我祭という興行慣習の論究をも目的としている。曽我祭

可視化に大きく貢献した宝暦6年市村座『梅若菜二葉曽我』に着目し、所蔵機関をまたいだ調査をおこない、当該年度において、20点を超える関連資料を収集することができた。これらの資料により『梅若菜』の複雑な興行過程を解明しつつあるところから、芸能環境の追究という面でも、本研究は順調に進展しているということができる。25年度が最終年度であるため、記入しない。宝暦6年市村座『梅若菜二葉曽我』および曽我祭関係資料の調査収集は継続し、興行資料に加え、役者評判記、芝居年代記類、芝居随筆、観劇記録も対象とする。西尾市岩瀬文庫『〔扮苑〕』の書入は、観劇記録の一種として扱うことができる。平成24年度に収集した芝居番付を軸に資料の前後関係を同定し、『梅若菜』の興行プロセスを分析するとともに、狂言『梅若菜』の復元を試み、曽我祭上演の実態を検証する。合わせて宝暦期以後の上演例も考察し、当該興行慣習の成立と展開、変容の方向性を見きわめる。その上で曽我祭について判明するところを総合し、江戸歌舞伎の精神面を形づくる曽我狂言上演史と関わらせながら、本研究が目的とする芸能環境の解明を実現する。実証的研究の立脚点となる資料整備の面では、東京大学総合図書館秋葉文庫『〔劇代集〕』の仮目録化、および東京芸術大学附属図書館の写本資料『〔江戸長唄浄瑠璃正本集〕』『〔宝暦明和長唄めりやす集〕』等のインデックス化を実現し、報告書等に発表する。また西尾市岩瀬文庫の写本資料『〔扮苑〕』の識語や書入の調査考証をおこない、資料の成り立ちを探り、研究会などで発表をおこない、近接分野の研究者からの教示も仰ぐ。役者絵(浮世絵)については、平成25年度は、シカゴ美術館バッキンガムコレクションを中心に、調査受入を交渉する。引き続き宝暦期資料の閲覧を申請し、錦絵前期の色摺技法の展開を調査検討し、当期役者絵を興行資料として利用する際の書誌的判断につき、報告をおこなう。
敗血症性ショックにおける心室筋G蛋白の転写の解明と遺伝子治療

申請者はウサギおよびマウス敗血症動物を用いて,心血管系に発現するGsα蛋白の減少を減少させる原因として,ステロイド大量投与およびNF-kBデコイ核酸を用いた遺伝子治療を行い,NF-kB転写活性を抑制し,NF-kB転写活性がGsα蛋白の減少に部分的に関与することを見出した。また,活性酸素をスカベンジするエダラボンの投与により敗血症病態のGsα蛋白の減少を抑制できることを見出した。結果的にNF-kB活性を抑制すると,Gsα蛋白の減少を不完全ながらも抑制できることを心筋細胞で確認した。この研究過程で,NF-kBデコイ核酸の遺伝子導入効率の高かった肺と心房筋での細胞内情報伝達系の治療効果を検討した。心房筋ではNF-kB活性に依存して,ヒスタミン合成が高まる可能性を見出し,また,敗血症病態でヒスタミン受容体H_1受容体とH_2受容体が上昇することを見出した。NF-kBデコイ核酸の遺伝子治療により,心房筋におけるH_2受容体の転写亢進は完全に抑制でき,H_1受容体とヒスタミン合成酵素L-ヒスチジンデカルボキシラーゼの上昇とGsα蛋白の減少を抑制できることを見出した。また,敗血症では急性肺障害を合併するが,この新しい治療として,NF-kBデコイ核酸の遺伝子導入が有効であることを見出した。これらは,国内外の学会で多く講演し,現在,海外学会誌に投稿中である。リポポリサッカライド(LPS)100μg/kgを静脈内投与したウサギ敗血症性ショックモデルで心室筋Gsタンパクが転写段階で減少することにより陽性変力作用が減弱することを確認した。本年度の研究では更に心房筋でもGsタンパクが経時的に減少すること、アドレナリンβ受容体を介した陽性変時作用時のみならず、ヒスタミンH_2受容体を介した陽性変時作用も減じていることを確認し、転写因子NF-κβ阻害剤であるステロイド大量投与ではGsタンパク減少が改善しないことを見出した。現在、TNF-α抗体、macrophage migration inhibitor factor抗体を前投与し作成した敗血症性ショックモデルでGsタンパクの減少を阻止できるか否かを検討している。またNF-κβ領域のプロモーター活性を阻害するNF-κβデコイ核酸をリポゾーム法で導入し、心筋細胞内情報伝達系の変化を検討している。NF-κβ遺伝子治療法の確立にあたり、同遺伝子が肺に充分にとり込まれることにより、敗血症性ショックで生じる肺血管透過性亢進をこの遺伝子治療が改善する可能性を確認した。しかし心室筋Gsタンパクの減少は結果の完成を急ぐ必要があるが現在までのデータではこれらにより改善されない可能性が示唆されている。Gsタンパク量の変化を確認するにあたり、遺伝子導入技術として、リポゾーム法が有効であることをゲル・シフト法と組織免疫染色で確認しており様々な転写因らのアンチセンスオリゴヌクレオチドを前投与し、準備している段階にある。敗血症では心室筋のGs蛋白が転写段階で減少することで、アドレナリンβ受容体を介した陽性変力作用が減弱する。Gs蛋白が減少する転写調節機構を敗血症病態モデルの遺伝子治療で解明することを目標とした。ウサギに100μg/kgのリポポリサッカライドを静脈内投与したモデルの心室筋ではTNF-α、IL-1βが早期に上昇したが、これらの抗体を静脈内に前投与しても、ショックやGs蛋白の減少を抑制できなかった。DNA上のNF-kB領域を選択的に遮断するオリゴヌクレオチド(NF-k B ON)20塩基対(5'-CCTTGAAGGGATTTCCCTCC-3',3'-GGAACTTCCCTAAAGGGAGG-5')を作成し、アデノウイルスベクターやリボゾーム法で経静脈的に遺伝子導入したが、導入効率は肺や心房筋で高いものの、心室筋ではその約1/10に過ぎなかった。

このNF-k B ONを導入した敗血症心室筋ではGs蛋白減少に有意な抑制をかけることができず,導入効率の低さによると評価した。そこで遺伝子導入効率の高かった心房筋を選択し、Gs蛋白の量的変化を検討した結果、敗血症心房筋で約45%に減少することが確認でき、NF-k B ONで65%程度までに回復させることができた。本研究過程で、敗血症心房筋でヒスタミンH_1受容体やヒスタミン合成酵素が増加しているものの、Gs蛋白の減少により、ヒスタミンを介した心房筋の陽性変時作用が敗血症で減じることを見いだした。NF-kBの活性化が部分的ではあるがGsタンパク減少に関与することを見いだした研究成果となった。