hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
保育事業がそなえる貧困予防の機能・役割に関する歴史的研究

本研究の目的は第1に保育事業が果たした貧困予防に関する過去のエビデンスを収集、分析することであり、第2に「子どもの貧困」対策の1つとして再考するための歴史的な事実や知見を見出すことであった。主要な研究成果は次の3つである。第1に神戸市職員・生江孝之は日露戦争時の出征軍人児童保管所、戦後の戦役紀念保育会を指導した。第2に内務省嘱託・生江は、保育事業を育児事業の経費節減と貧児の家庭養育を実現する国家レベルの社会政策構想に反映した。他方、第3に大阪市の財団法人弘済会は保育所家庭会を通して、家庭の養育や教育の相談に応じ、悪習慣の改善を促した。本研究の目的は、保育事業が果たした貧困予防に関する過去のエビデンスを収集、分析し、「子どもの貧困」対策の1つとして再考するための歴史的な事実や知見の発見である。当初の研究計画では大正期・昭和期の財団法人弘済会の保育事業を対象としていたが、平成27年度中に研究枠組みの検討を重ねるなか、明治期にさかのぼる必要性が生じたため、日露戦争中・戦後の神戸市に焦点をあてた研究を行なった。具体的な研究成果として次の査読付き研究論文を発表した。1中根真(2016a)「財団法人戦役紀念保育会の保育事業構想ー地域福祉史研究の意義についてー」日本地域福祉学会『日本の地域福祉』第29巻、pp.43-532中根真(2016b)「出征軍人児童保管所の創設とその背景ー地域福祉としての保育の歴史的源流の1つとしてー」「地域福祉研究」編集委員会編『地域福祉研究』公4(通算44)号、pp.90-99第1論文は『戦役紀念保育会第一回報告書』(1908年)第1章「児童保育事業の要義と其必要」を詳しく検討し、保育所設立の必要が5つの必要(児童教育、軍人遺家族援護、家庭改良、生産力増殖、貧民防遏)から主張されていることを明らかにした。その上で、地域福祉史研究の意義として保育所設立の必要を包括的に論じていた点と内務省政策に対する先導性の2点に見出した。第2論文は神戸市における出征軍人児童保管所(1904年)が内務省のリーディング・ケースであった点に注目し、創設とその背景を詳しく検討した。具体的には神戸市婦人奉公会の創設経緯や児童保管所の概観をふまえ、児童保管所が現金扶助の抑制・低減を目的とし、その原動力は地域婦人が「女性の本分としての遺家族の救護」に「応分の力」を発揮できる場と機会を得たことにあると分析した。以上によって、明治期における保育事業の社会的・国家的な位置づけをある程度明らかにできたと総括できる。研究枠組みの検討には当初の計画以上に時間を要したが、大正期・昭和期の財団法人弘済会の保育事業を的確に捉えるためには、明治期の保育事業が社会的・国家的にどのように位置づけられていたかをふまえておく意義があったと考えている。日露戦争中・戦後対策としての保育事業という視点、つまり保育事業対象が軍人遺家族から生計困難家族に拡大され、一般化されたこと(保育事業の転化)は、大阪市における弘済会保育事業の分析にも有益である。なぜなら、先行研究では以上の保育事業の制度・政策的な経路が十分考慮されていなかったと考えられるからである。本研究の目的は、保育事業が果たした貧困予防に関する過去のエビデンスの収集・分析である。平成28年度も前年度に引き続き、大きくは3つの調査・研究を進めた。第1に、大正期大阪市社会事業行政について、『大阪市社会事業案内』(大阪市役所社会部、1922年3月刊行、全42ページ)を史料として、市民の社会事業理解の促進、社会事業情報の提供、「福祉教育」教材としての意味を明らかにした。結論的には自助主義や啓発による個人の完成を目的・手段に掲げる助役・関一の都市社会政策観と顧問・小河滋次郎の救済事業観(広義の教育事業)とは親和性をもったことから、各種施設や事業等の情報を提供し、活用を促す当該冊子はまさしく「福祉教育」教材であり、方面委員がその担い手であったことを明らかにした。第2に、昼間保育事業の先駆者・生江孝之の神戸市職員時代に焦点をあて、再評価を試みた。具体的には神戸市婦人奉公会発足の経緯、児童保管所の運営について要約し、生江が当初、保育事業のためではなく、救済事業の企画・立案者として採用されたこと、彼の保育事業構想は留岡幸助によって鼓舞され、非行予防が保育事業の主要目的であったことを明らかにした。第3に、20世紀初頭日本の社会政策構想における保育事業の位置について、『救済事業調査要項』(原胤昭編、中央慈善協会、1911年10月刊行、全98ページ)を史料として、児童保護事業に占める保育事業の位置づけ、内務省嘱託・生江孝之の影響を分析した。具体的には保育事業が「育児事業の病的膨張」の是正策として有望視され、経費節減と貧児の家庭養育を実現する「一挙両得の策」に位置づけられていたこと、また生江が幼児保育事業の箇所を執筆したと推察すれば、神戸市における一社会事業嘱託/社会事業家としての保育事業経験や欧米の知見が国家レベルの社会政策構想に反映されていったことを明らかにした。

前年度は「やや遅れている。」状態であったが、平成28年度は大阪市、神戸市という自治体レベルの検討に加え、国家レベルの社会政策構想の検討を行うことができたからである。つまり、当初の研究計画において分析対象としていた財団法人弘済会保育部とその保育事業について、創設前後の時代状況の解明をある程度進めることができたと考えている。本研究の目的は、保育事業が果たした貧困予防に関する過去のエビデンスを収集、分析し、「子どもの貧困」対策の1つとして再考するための歴史的な事実や知見を見出すことであった。得られた主要な知見は次の5点である。すなわち、1『戦役紀念保育会第一回報告書』(1908年)において、保育所設立の必要が5つの必要(児童教育、軍人遺家族援護、家庭改良、生産力増殖、貧民防遏)から主張されており、議論の包括性と内務省政策に対する先導性が見出された。2神戸市における出征軍人児童保管所(1904年)が内務省のリーディング・ケースであった点に注目し、創設と背景を検討した。児童保管所が現金扶助の抑制・低減を目的とし、その原動力は地域婦人が「女性の本分としての遺家族の救護」に「応分の力」を発揮できる場と機会を得たことにあった。3昼間保育事業の先駆者・生江孝之の神戸市職員時代に焦点をあて、再評価を試みた。生江が当初、保育事業のためではなく、救済事業の企画・立案者として採用されたこと、彼の保育事業構想は留岡幸助によって鼓舞され、非行予防が保育事業の主要目的であった。4『救済事業調査要項』(1911年)を史料として、児童保護事業に占める保育事業の位置づけ、内務省嘱託・生江孝之の影響を分析した。保育事業は「育児事業の病的膨張」の是正策として有望視され、経費節減と貧児の家庭養育を実現する「一挙両得の策」に位置づけられ、生江によって神戸市の保育事業経験や欧米の知見が国家レベルの社会政策構想に反映されていった。5大阪市における財団法人弘済会の『弘済会報』を分析した結果、保育所は家庭会を通して、よろず相談に応じ、家庭の躾や教育の指導・啓発を図り、悪習慣の改善ー買い食いの禁止や貯金奨励、児童の面前での夫婦喧嘩を控えるなどーを促し、家庭の「不足」を補い、親子の〈境遇〉改善をめざす「精神的指導」を展開した。本研究の目的は第1に保育事業が果たした貧困予防に関する過去のエビデンスを収集、分析することであり、第2に「子どもの貧困」対策の1つとして再考するための歴史的な事実や知見を見出すことであった。主要な研究成果は次の3つである。第1に神戸市職員・生江孝之は日露戦争時の出征軍人児童保管所、戦後の戦役紀念保育会を指導した。第2に内務省嘱託・生江は、保育事業を育児事業の経費節減と貧児の家庭養育を実現する国家レベルの社会政策構想に反映した。他方、第3に大阪市の財団法人弘済会は保育所家庭会を通して、家庭の養育や教育の相談に応じ、悪習慣の改善を促した。平成28年度は収集済みの史資料に依拠して、弘済会保育部の設置(1913年10月)以降、1926年までの大正期を分析対象として研究を推進する。ただし、この対象期間には米騒動(1918年8月)や方面委員の設置(1918年10月)、大阪市立託児所の開設(1919年78月)、大阪市社会部の設置(1920年4月)など、弘済会保育部の保育事業に影響を及ぼしたと考えられる契機が複数含まれいる。したがって、都市社会政策の全体と部分の関係にも留意しつつ、弘済会保育部の保育事業が果たした歴史的な役割を慎重に明らかにする。平成29年度は最終年度にあたるため、当初計画していた財団法人弘済会保育部とその保育事業に関する事例調査・研究を推進する。すでに収集済みの史資料は多数あるため、読みこみと分析を重ね、適宜、論文として発表する。ただし、研究遂行上の課題となるのは研究代表者の学部長就任(平成29年4月から2年任期)に伴う調査・研究時間の確保である。
口腔アレルギーの病態解明を目指した新しい免疫系シグナル伝達分子の同定と機能解析

Th2細胞はアレルギー炎症反応に重要な役割を果たす。しかし、Th2細胞にユニークなT細胞受容体(TCR)シグナル伝達についてはよく分かっていない。SWAP-70-like adapter of T cells (SLAT)は、TCR下流で働くグアニンヌクレオチド交換因子であり、T細胞の免疫応答を制御している。本研究では、Th2細胞から新たに見出したSLATのsplicing formを単離・同定し、TCRシグナル伝達における機能を解析することを目的とした。T細胞の分化過程におけるSLATの発現パターンを解析する中で、Th2細胞だけに特異的に発現する抗SLAT抗体で検出される新しい分子を見出した。Th2細胞から遺伝子を単離した結果、SLATを構成するエクソン2からエクソン7がalternative splicingにより欠如した遺伝子であることが判明し、SLAT2と命名した。次にSLAT2の機能解析を行った結果、SLAT2はSLATと同様にNFATの活性化上昇と、サイトカインIL-4の産生に関与することが示された。一方、SLATがもつICAM-1に対する細胞接着能の増強効果はSLAT2では損なわれていた。細胞骨格に及ぼす影響を解析した結果、SLATは細胞膜に局在しfilopodia形成に関与するのに対して、SLAT2は細胞質に局在し、短いfilopodiaの形成に関与することが明らかとなった。以上のことからTh2細胞から新たに見出したSLATのalternative splicing (SLAT2)の発現は、サイトカイン産生や細胞骨格形成などのT細胞エフェクター機能に影響を与えることが明らかとなった。翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。
発達年齢2歳の知的発達障害児における自己-他者認識の分化過程-縦断的研究-

本研究では,養護学校小学部に在籍する発達年齢2歳の知的発達障害児において把握された,自他の領域分化群4名および未分化群5名の,2群の発達プロセスについて,3年間の縦断的な検討を行った。その結果,自他の領域の分化過程と,積木構成課題や描画模写課題などにみられる認知発達,および検査場面や生活場面においてみられる言語発達との関連について,以下のことが示された。第1に,自他の領域未分化群においては,認知的能力は自他の分化過程に先行して発達し,その認知的能力の高さが,結果として自他の分化を惹き起こすことが示された。第2に,自他の領域分化群においては,すでに自他が分化していることが2歳頃の構成能力などの認知的能力の獲得を促進するが,自他の分化と対比的認識の形成や3歳以降の認知的能力の発達との関連があるとは考えにくい。対比的認識の形成や3歳以降の認知的能力の発達は,むしろ言語発達との関連があることが示された。これらの研究成果は「養護学校小学部に在籍する発達年齢2歳の知的発達障害児における自己-他者領域の分化過程-縦断的研究II:3年目の報告-」(鳥取大学教育地域科学部紀要教育・人文科学第1巻第1号)にまとめた。尚,現在4年目の実験を実施中であり,自他の分化レベルと鏡やビデオを用いた自己と他者の表情認知との関連,および発達年齢2歳の健常児における自他の分化過程との比較について検討し,明らかにしていく予定である。本研究では,発達年齢2歳の知的発達障害児において示された自己一他者の領域分化群4名と未分化群5名が,それぞれどのように自己と他者についての認識を分化させ,両者の関係性を発展させていくかについて,積木構成課題,描画模写課題に対する取り組みのプロセスの分析から,縦断的に検討し明らかにすることを目的とした。本年度は,特に,積木構成課題や描画模写課題において把握された“モデルの積木に自分の積木をくっつける"などの自他の認識の未分化な行為が,認知発達など発達の他の諸側面とどのように関連しながら,どのような発達的変化を示すのかについて,前回の実施からおよそ1年後の実験によって,縦断的に明らかにした。その結果,自他の領域の分化過程と認知発達との関連について以下の点が指摘された。第1に,積木構成課題「トラックの模倣」にみられる非対称的な2次元的構成能力は,自他の領域の分化過程に先行して発達することが示され,自他の領域の分化レベルと構成能力のレベルとの間に関連があるとは考えにくかった。第2に,「円模写」「十字模写」にみられる描画能力につていも,他の項目に比べて前回からの伸びが大きく,自他の領域の分化レベルとの関連があるとは考えにくかった。一方,描画方略の獲得については,自他の領域の分化レベルとの関連が示された。これらの研究成果は,「発達年齢2歳の知的発達障害児における自己-他者領域の分化過程-縦断的研究I-」(鳥取大学教育学部教育実践研究指導センター研究年報第8号)にまとめた。現在,3年目の実験を実施中であり,自己-他者認識の分化過程について,引き続き縦断的に明らかにしていく計画である。
カタユウレイボヤの胚発生におけるレチノイン酸の機能解析

カタユウレイボヤ(Ciona intestinalis)におけるレチノイン酸(RA)標的遺伝子Ci-Hox1の転写調節機構の解析から,Ci-Hox1のエンハンサーにはRA受容体が結合する配列RARE (retinoic acid response element)が二つあることが明らかとなった.一つは5'上流領域に存在するRAREであり,これはCi-Hox1の表皮エンハンサーを活性化している.もう一つは第2イントロン中に存在しているRAREであり,Ci-Hox1の神経索エンハンサーの活性化を担っている.表皮エンハンサー中のRAREに点突然変異を入れると,表皮でのエンハンサ「活性が完全に消失し,RAに対する応答性もなくなった.神経索エンハンサーを活性化するRAREが機能しない状態になると,神経索での発現は著しく減少したが,わずかな発現が認められた.そしてRAに対する応答性は消失した.このことから,神経索でのCi-Hox1の発現はRAではない別の因子によっても制御されていることが示唆された.以上のことから,Ci-Hox1の表皮における発現は完全にRAに依存して制御されており,神経索における発現はRA依存的なメカニズムとRA非依存的なメカニズムの両方で制御されていると考えられる.ホヤと同じ尾索動物に属するオタマボヤ(Oikopleura dioica)のHox1遺伝子の5'上流領域はカタユウレイボヤ胚において神経索でのエンハンサー活性を持つことが明らかとなった.また,このエンハンサーはRAによって活性化されることはなかった.このことから,上述したカタユウレイボヤにおけるRA非依存的な転写制御メカニズムがはたらいて,神経索での発現を引き起こしたのかもしれない.そうだとすれば,Hox1遺伝子のRA非依存的な転写制御機構がカタユウレイボヤとオタマボヤにおいて進化的に保存されていると推察される.Ci-Hox1はカタユウレイボヤ尾芽胚期において頭と尾の境界付近の表皮と神経管で発現する.本年度はCi-Hox1の神経管におけるエンハンサー解析を行なった.Ci-Hox1の第2イントロンにレポーター遺伝子lacZを繋げたコンストラクトをホヤ胚に導入すると神経管でlacZが発現した.またこの導入胚をレチノイン酸で処理すると神経管における発現が広範囲に広がった.つまり,Ci-Hox1の神経管におけるエンハンサーはCi-Hox1第2イントロン中に存在しており,レチノイン酸に対する応答性を持つことが分かった.また,第2イントロン中にRARE類似配列が見つかった.このRARE類似配列中に変異を導入すると,lacZ遺伝子の発現が弱くなり,レチノイン酸に対する応答性も消失した.これらのことからCi-Hox1の神経管における発現にもレチノイン酸が関与していることが明らかとなった.しかし,変異を導入した結果から,神経管での発現は弱くなるだけであり,完全に消失することはなかった.これらのことから,Ci-Hox1の神経管における転写は,レチノイン酸依存的な経路だけでなくレチノイン酸非依存的な経路によっても制御されていることが示唆された.ホヤと同じ尾索類に属するオタマボヤは,レチノイン酸の合成酵素も受容体も持たないのに,ホヤと似たパターンでHox1を発現する.本研究では,オタマボヤHox1(Od-Hox1)の5'上流配列を備えたレポーター遺伝子を作製し,これをホヤ胚に導入して,転写調節機構が保存されているかどうかを調べた.Od-Hox1のレポーター遺伝子は,ホヤ胚において神経索での発現をみせたが,レチノイン酸に対する応答性はなかった.Hox1遺伝予の神経索におけるレチノイン酸非依存的な発現は,ホヤとオタマボヤとで保存されているのかもしれない.カタユウレイボヤ(Ciona intestinalis)におけるレチノイン酸(RA)標的遺伝子Ci-Hox1の転写調節機構の解析から,Ci-Hox1のエンハンサーにはRA受容体が結合する配列RARE (retinoic acid response element)が二つあることが明らかとなった.一つは5'上流領域に存在するRAREであり,これはCi-Hox1の表皮エンハンサーを活性化している.もう一つは第2イントロン中に存在しているRAREであり,Ci-Hox1の神経索エンハンサーの活性化を担っている.表皮エンハンサー中のRAREに点突然変異を入れると,表皮でのエンハンサ「活性が完全に消失し,RAに対する応答性もなくなった.神経索エンハンサーを活性化するRAREが機能しない状態になると,神経索での発現は著しく減少したが,わずかな発現が認められた.そしてRAに対する応答性は消失した.このことから,神経索でのCi-Hox1の発現はRAではない別の因子によっても制御されていることが示唆された.以上のことから,Ci-Hox1の表皮における発現は完全にRAに依存して制御されており,神経索における発現はRA依存的なメカニズムとRA非依存的なメカニズムの両方で制御されていると考えられる.ホヤと同じ尾索動物に属するオタマボヤ(Oikopleura dioica)のHox1遺伝子の5'上流領域はカタユウレイボヤ胚において神経索でのエンハンサー活性を持つことが明らかとなった.また,このエンハンサーはRAによって活性化されることはなかった.このことから,上述したカタユウレイボヤにおけるRA非依存的な転写制御メカニズムがはたらいて,神経索での発現を引き起こしたのかもしれない.

そうだとすれば,Hox1遺伝子のRA非依存的な転写制御機構がカタユウレイボヤとオタマボヤにおいて進化的に保存されていると推察される.本年度は,カタユウレイボヤにおけるレチノイン酸標的遺伝子の転写調節の解析に重点を置いて研究を進めた.そのため,機能解析についてはあまり結果が得られなかった.しかし,その分だけ転写調節の解析が予定よりも進んだため,全体的に見ると,おおむね順調に進展している.今後は,カタユウレイボヤにおけるレチノイン酸標的遺伝子の機能解析を中心に研究を進める.また,オタマボヤとホヤにおけるHox1エンハンサーの転写調節についてもさらに研究を進める.それぞれがどのような転写因子によって制御されているのかを具体的に明らかにし,論文にまとめる.
セルロースを含むゲル状バイオマスの資源化

植物の種子からセルロースを含むゲル状バイオマスを調製し、構成多糖の化学構造、熱安定性、レオロジー特性等を解析した結果、酸性のキシランがセルロースとの会合に重要であること、ウロン酸の静電反発がゲルの形成に中心的な役割を果たしていること、二価の金属や水素結合もゲルの形成に関与していることを示した。また、キシラン鎖のウロン酸による置換の頻度がキシロース約2残基あたり1置換と異常に高いことを明らかにした。本研究は、セルロースの結晶化を阻害しゲル状を付与するために不可欠なセルロース以外の多糖の化学構造と機能、セルロースと安定なコンポジットを形成する仕組み及びセルロースを含むゲル状多糖コンポジットの生合成・形態形成に関与する遺伝子の特定を基礎として長さ・太さ・風合い・保水性等の人為的コントロールを可能とした品種改良をめざした未来型セルロース研究分野の創生を提供することを目的としている。本年度の研究においては、(1)種皮におけるセルロースを含むゲル状多糖コンポジットの形態観察の結果、バクテリアセルロースと比較して2.35倍細いことを見出し(下記一番目の論文)、(2)セルロースを含むゲル状多糖コンポジットの構成多糖間の相互作用を解析した(下記二番目の論文)。また、(3)種皮表層セルロース生合成に関与するCesAを中心とした遺伝子の同定を実施しつつ、(4)セルロース性種皮ゲル状繊維の長さ・太さ・風合い等を規定する遺伝子を特定し、(5)in situ hybridization法とreal time PCR法を用いてその発現の部位と発現量の時間・部位的変動の解明を試みた結果、先行するシロイヌナズナと合致しないことがわかった。さらに、(6)セルロースに対する親和性の高い共存多糖の詳細な化学構造解析を試み、(7)そのセルロースとの相互作用よるセルロースの結晶化阻害の原因解明の一助を得た(下記二番目の論文)。同時に、(8)ゲル状セルロースコンポジットのバイオマスとしての用途開発について概説し(下記三番目の論文)、(9)微生物による生分解性を有していることを証明し(下記学会発表論文)、セルロースを中心とした種皮ゲル状セルロースバイオマス工学への発展の基盤を構築した。ゲル状バイオマスの含有量が異なる植物の種子を低電圧走査型電子顕微鏡により解析した結果、いずれも種子の最外層の一層の細胞の内容物が起源であることを見出した。また、いずれのゲルも中性多糖と酸性多糖の複合体からなり、中性多糖は植物の種類により変化が大きいが、酸性多糖はいずれの植物についても4-O-メチルグルクロン酸をキシロース13残基当たり一分子、二位に置換した樹木起源とは異なり(1:810、モル比)分岐の極めて多いメチルグルクロノキシランであることを明らかにした。また、ゲル状バイオマスの粘弾性測定により、水中では弱いゲル状構造をとり、pHが510.5の範囲で高く、酸性や強アルカリ条件下で流動性が高くなることからウロン酸のカルボキシル基による静電反発がゲル状の元となっていることが示唆された。このことは、イオン半径の異なる中性のアルカリ金属塩を添加して粘度を測定した結果、アルカリ金属塩のイオン半径が大きくなるに伴って粘度が低下することからも支持された。さらに、尿素、グアニジン塩酸塩やナトリウムイソチオシアネート等の添加やカルシウムの溶脱により粘度低下がみられ、カルシウムの再添加により粘度が高くなることから、静電反発の他に、水素結合、疎水結合、カルシウムを介したエッグボックス状の架橋形成もまたゲル状を呈する原因となっていることもわかった。単離した成分と元のゲルの粘度測定の結果、酸性のメチルグルクロノキシランが粘度に主として寄与していることがわかった。示差走査熱量測定の結果、ゲル状を呈するとともに水分子が多糖分子と相互作用し束縛されていることもあわせて明らかにした。セルロースを含むゲル状バイオマスをヤドリギ、バジル及びサルビアの種子から調製し、原子間力顕微鏡により解析した結果、いずれも外皮細胞の内容物が起源であり、幅2-3nmのナノファイバーであることを見出した。また、いずれも中性多糖と酸性多糖の複合体からなること、中性多糖は植物の種に依存した変異が高いが、酸性多糖は共通してキシロースの2位で23残基当たりに4-0-メチルグルクロン酸が置換した分岐の極めて多いメチルグルクロノキシランであることを部分加水分解に続くオリゴ糖の分画と質量分析(MALDI/TOF/MS及びMS/MS分析)により世界で初めて証明することができた。また、ゲル状バイオマスの粘弾性解析により、ウロン酸のカルボキシル基による静電反発がゲル状に大きく寄与していることも証明した。その他、水素結合、疎水結合、カルシウムを介したエッグボックス状の架橋形成もまたゲル状を呈する原因となっていることも証明できた。

また、いずれのゲルも熱安定性は低く、150-180°C、5分のマイクロ波加熱でゲル中のセルロースと酸性キシラン間の結合が開裂し、完全に二層に分裂すること、及び不溶化物には主としてセルロースが含まれ、その純度は加熱温度の上昇とともに高くなることから、これらのセルロースを含む水和ゲルがゲル状を呈するためには、酸性キシランとセルロース間の相互作用が不可欠であることがわかった。さらに、不溶化したセルロースにはアラビノガラクタンが強固に水素結合により結合していることをも見出したことから、セルロースとヘミセルロースは複合的な会合体を形成して水分子を取り込みゲル化していることが結論として得られた。また、ヤドリギのゲル状多糖中のセルロースの生合成に関与する遺伝子を調査した結果、VaCesA1とVaCesA2の二種の遺伝子の関与が強く示唆され、ゲル状バイオマスの生合成の基礎的知見が得られた。
眼慢性移植片対宿主病における老化細胞とドナー間葉系幹細胞の役割と治療法の開発

平成26年度は眼慢性移植片対宿主病(GVHD)におけるドナー間葉系幹細胞(MSC)由来線維芽細胞と老化マクロファージの局在の解明を主な目的として研究を推進した。ドナーMSCとマクロファージの相互作用による眼GVHDの発症機構と病態形成の検討を追究するために下記検討を行った。b)次にドナーMSCまたはマクロファージのみをGFP B10.D2マウス骨髄細胞から分離し、造血細胞をレシピエント由来の野生型BALB/cマウス骨髄細胞から分離し,各細胞を同時にBALB/cレシピエントに移植した。移植後のMSCおよびマクロファージ浸潤細胞数、それぞれの細胞の局在、酸化ストレス及びp16 INK4A発現の検討を涙腺、結膜を用いて調べ、対照と比較した。MSC由来線維芽細胞にHSP47を、マクロファージにCD68をマーカーとして選択し検出した。全骨髄細胞移植後にXenoLight Rediject Inflammation Probeをレシピエント腹腔内投与し、発光する炎症細胞を可視化して対照と比較してGVHDにおいてマクロファージを中心とした炎症細胞の浸潤が対照に比して亢進していた。病理学的解析を併せ解析し、眼GVHD発症早期より老化マーカーp16を発現するマクロファージが涙腺および他の標的臓器に浸潤していることを確認した。1)眼GVHDの発症時期の免疫応答と線維化機構を検証するために、マクロファージおよびドナーMSCの遊走経路や病変部位での関わりを明らかにした。2)マクロファージがドナーMSCの遊走を促す因子を放出する可能性を追究しMSCの遊走に関わる標的分子およびMSCの活性化と線維化に関わる分子を特定を解析し、細胞老化にかかわる液性因子が慢性GVHDの線維化に関わる可能性が見出された。3)次に老化マクロファージが眼GVHDの発症にどのように関わるかを調べるため、老化マーカーであるp16INK4aの発現イメージングマウスの骨髄を単離して移植し、経時的に老化マーカーp16 INK4aを発現するマクロファージの浸潤経路を対照と比較して病態への関与を解析中である。。4)ドナーMSCの除去移植による有効性をマウスモデルで確認した。ドナーMSC除去移植により慢性GVHDの慢性炎症と線維化の大部分が抑制されることからと老化マクロファージの浸潤抑制も同時に効果がある可能性が考えられた。本研究成果の意義は、眼GVHDに加え他臓器GVHDや、眼類天疱瘡、Stevens Johnson症候群および生命必須の臓器である肝臓や肺における難治性線維化疾患の病態解明、新規治療法の開発と臨床応用への道を開く可能性がある。申請者は眼GVHDの線維化にドナー由来新鮮骨髄間葉系幹細胞(MSC)が主要な役割を担い老化マクロファージとの相互作用が関与する事を見いだした。ヒト眼GVHDの病態を反映するマウスGVHDモデルにより、次の点を追究した。1)眼GVHDにおけるドナーMSCとマクロファージの局在と相互作用の証明2) MSCと老化マクロファージの相互作用による眼GVHDの発症と慢性化の分子機構の解析本研究では、難治疾患である眼GVHDの病態解明と新規治療法の開発のためにマウスモデルを用いて発症時期の免疫応答と線維化機構を検証した。これまでにマクロファージおよびドナー間葉系幹細胞(MSC)の遊走経路や病変部位での関わりを明らかにした。MSCの涙腺や眼表面へ遊走に関わる分子にはサイトカインIL-6, IL-17,ケモカインCXCL9が見出された。培養涙腺線維芽細胞の細胞源として50%以上はMSCであることを確認した。病変局所における線維芽細胞の約40%はドナーMSC由来であることを確認した。MSC由来線維芽細胞の活性化と線維化に関わる分子にMHC class II, CTGF, HSP47を特定した。これらの指標を見出したことにより今後の新規治療の効果の検討をする際に重要であり意義があると考える。老化マーカーp16 INK4aを発現するマクロファージの浸潤経路を対照と比較して検討したところ、GVHDモデルマウスの発症初期の時期に涙腺の毛細血管からp16INK4aを発現するマクロファージが浸潤している事を確認した。電子顕微鏡および共焦点顕微鏡でMSC由来と思われる線維芽細胞とマクロファージの相互作用を高頻度に観察した。これまでにMSC除去移植により同様に涙腺における炎症と線維化の抑制を確認した。最終年度は抗IL-6受容体抗体投与により研究期間に見出した涙腺におけるサイトカイン、ケモカインの発現抑制とそれに伴う炎症と線維化の制御による病態の軽減を確認した。今後さらにドナーMSCと老化マクロファージの相互作用が眼GVHDを発症、慢性化をさせるメカニズム解明に繋がる可能性もあり新規治療法の開発と臨床応用に貢献できればと考える。平成26年度は1)眼GVHDにおけるドナーMSCとマクロファージの局在と相互作用について検討した。ドナーMSCの局在は涙腺導管周囲に認められ、マクロファージは病態発症初期の毛細血管内とその周囲に認められドナーMSCと相互作用を行っている可能性を見出した。当該年度の研究は順調に進展していると考えられる。1)今後、老化マクロファージがGVHDドライアイの発症にどのようにかかわるかを調べるために、老化マーカーであるp16INK4aの発現イメージングマウスの骨髄からマクロファージを単離して移植し、経時的に老化すると老化マーカーp16 INK4aを発現するマクロファージを検証し浸潤経路を対照と比較して病態への関与を解析する。

2)老化マクロファージが分泌する炎症性サイトカインの種類や局在を検討する。3)ドナーMSCまたはマクロファージの除去骨髄移植のうちMSCの除去移植による有効性、安全性をマウスモデルで確認した。ドナーMSC除去移植により慢性GVHDの慢性炎症と線維化の大部分が抑制されることからと老化マクロファージの浸潤抑制も同時に効果的に生じている可能性が考えられる。今後はマクロファージを選択的に除去する薬剤を使用して、マクロファージの除去移植後のレシピエントの炎症および線維化の程度を検証する。ドナーMSCと老化マクロファージによる相互作用が眼GVHDを発症、慢性化をさせるメカニズムをさらに明らかにする。4)MSCおよび老化マクロファージの中で特に抗原性が強い分画を見出し、選択的に除去して造血幹細胞移植ができるようにドナー移植細胞の最適化を図る。5)新規治療法の開発と臨床応用につなげるために内科との討論、連携を深める。将来の臨床試験のための倫理委員会申請書類、プロトコールを準備し倫理委員会申請および承認へむけた準備をする。眼表面免疫応答眼慢性移植片対宿主病におけるMSCと老化マクロファージの相互作用による免疫応答と線維化形成における分子機構の解明を予定している。a)マウスGVHDモデルの免疫応答を調べるため、末梢血炎症関連サイトカイン、制御性T細胞数の推移を移植前よりprospectiveに検討する。各分子の涙腺組織での発現と、MSC移植数およびp16陽性マクロファージ数の関連性を確認する。ひとおよびマウス涙腺組織には老化マーカーp16を発現する炎症性細胞浸潤を認めている。酸化ストレスを発現するマクロファージの浸潤(Kawai M, Ogawa Y, Sci Rep, 2013)の血液、組織での炎症性サイトカイン、制御性T細胞数の変化との関連を確認する。b)ドナーおよびレシピエントのマクロファージとMSCを共培養し、培養上清のELISAにてサイトカイン、ケモカイン、酸化ストレスを対照と比較検討する。他の検討方法として、マクロファージが分泌すると考えられるケモカインの存在下でのドナーMSCの遊走能を検討する。c)診断のために得られたヒト涙腺、結膜組織切片についても、老化マクロファージとMSCの局在と病態への関連の検討をする。平成27年度は計画どおりに研究がすすめられたが、年度の終了時点で262円の研究費が残った。残った262円は27年度に使用予定がなく28年度の消耗品用とした。。最後に未使用の9788円が残りましたが実験計画は順調にすすみました。残額は使用せず平成27年度に繰り越して今年度必要な消耗品に使用させていただきます。平成27年度に生じた繰越額は28年度消耗品として使用する。消耗品に使用予定です。
ユーモア理解の脳内基盤

ユーモア理解は,ポジティブな情動を高め,人間の高次な認知処理を促進すると考えられる。本研究では主に機能的磁気共鳴画像法を用い,4コマ漫画の文脈を理解する認知過程において,ユーモアがどの時点でどのように生起するのかを検討した。また行動実験による検討も加え,ユーモアが記憶に及ぼす影響を,ワーキングメモリの側面から検討した。その結果,面白さが認知過程に及ぼす効果が検証され,ユーモア理解には側頭葉と側頭・頭頂結合部,内側前頭部の活動がかかわる知見を得た。また,面白さの強度は,左右両側の小脳に反映されることも分かった。ユーモア理解は、ポジティブな情動を高め、人間の高次な認知処理を促進すると考えられる。本研究では、ユーモア理解の脳内機構を明らかにすることにより、認知処理過程の脳内機構、さらには認知処理過程において重要な役割を果たす注意制御にかかわる脳内メカニズムの解明をはかった。23年度では主に機能的磁気共鳴画像法(fMRI)を用い、4コマ漫画の文脈を理解する認知過程において、ユーモアがどの時点でどのように生起するのかを検討した。24年度にはさらに、行動実験による検討も加え、ユーモアが記憶に及ぼす影響を検討した。ここでは、特に、人間の認知機能に重要な役割を果たすワーキングメモリに及ぼす影響を探索した。その結果、面白さが高いと判断された4コマ漫画では、再認が言語、画像であってもともにワーキングメモリの遂行が高い結果が得られた。このように、面白さが認知過程に及ぼす効果が検証されたため、さらにその脳内機構を探索する検討を行なった。fMRIを用いた実験では参加者人数を重ねたうえで、4コマ漫画を継時的に提示して、脳の活動領域を測定した。その結果、漫画のストーリが展開する3コマ目において、右の上側頭溝、左の側頭・頭頂結合部、両側の側頭極の活動増強が認められ、4コマ目の画像提示では、そうした領域の活動に加えて、下前頭回、内側前頭回領域の活動増強が認められた。また、面白さの評定が高く評定された漫画は、低い漫画に比較して、両側の小脳の活動増強が認められた。このような結果から、ユーモア理解は、側頭葉、側頭・頭頂結合部と内側前頭部の活動がかかわる知見を得た。これらの領域は、自己認知、自己モニターリングの制御にも関連することから、両過程の関連が推察できる。さらに、面白さの判断には、小脳がかかわることが分かった。加えて、こうした領域は両側にまたがっている知見も得られた。本研究は、ユーモアの理解とその脳内基盤を明らかにすることを目的とした。ユーモア理解は、ポジティブな情動を高め、高次認知処理を促進すると考えられる。そのため、ユーモア理解の脳内機構を明らかにすることは、認知処理過程の脳内機構、さらには認知処理過程において重要な役割を果たすワーキングメモリの脳内メカニズムの解明にも重要であると考えられる。23年度では、従来のユーモア研究では1場面の画像などを用いて検討されてきたのに対して、4コマ漫画を用いて、文脈を理解する認知過程においてニューモアがいつ、どのように生起するのかを検討した。まず予備調査として、4コマ漫画の面白さの評定を行なった。この評定値をもとにした高低2種類の漫画を刺激材料として、面白さがワーキングメモリ遂行に及ぼす効果を検討した。この結果、面白さが高い漫画ではワーキングメモリの遂行が高い結果が得られた。脳画像測定にはfMRIを用いて、行動実験と同様に4コマ漫画を継時的に提示して、脳の活動領域を測定した。その結果、1コマ目、2コマ目の画像に伴う脳活動には、主に視覚領域を中心とした活動が認められたが、3コマ目、4コマ目の画像提示では、そうした領域の活動に加えて、異なる領域の活動が認められた。特に4コマ目の画像では、側頭頭頂接合領域(TPJ)や上側頭葉(STS)の活動増強が顕著となった。この結果から、このような領域がユーモアの理解と関連することが示唆された。23年度は、予定していた4コマ漫画を用いて、そのワーキングメモリ課題遂行に伴う行動実験およびfMRIを用いた脳イメージング実験ともに進めることができた。行動実験は、実験参加者の協力を得て、順調に実験を終えることができた。また、分析に関しても、実験協力者の援助を得て、終了することができた。本研究の途中成果については、23年のSociety for Neuroscienceの大会において、発表することができた。このように、実験に際しては、予想外の問題が発生することもなく順調に進展している。以上の点を踏まえて、(1)当初の計画以上に進展していると評価する。24年度は、23年度の成果をもとに、研究を一層進める計画である。

fMRIを用いた脳画像測定では、4コマ漫画の面白さの評定にもとづく高低2種類の漫画刺激に着目して、それぞれの漫画が引き起こす脳の活動の差を検討する計画である。脳活動は、1、2、3、4コマ目ごとに比較する。まず、面白さの評定による脳活動の差異が、継時的に提示される4コマ漫画の中で、どの時点で明瞭になるのかについて、コマごとに比較検討する。さらに、3コマ目、4コマ目で活動が認められたTPJやSTSの活動増強が、漫画の面白さの程度により、どのように変化するのかを調べる。こうした実験分析を中心として、4コマ漫画という、一連の刺激の理解のなかで、ユーモアの理解がかかわる過程を、明らかにする。このような計画をもとに、24年度では、ユーモアの理解とその脳内基盤の解明を目指す。23年度は物品購入を行わずに旅費に充当した以外は、ほぼ計画通りに予算執行し、残額は51714円となった。来年度の申請予算110万円と合わせた合計約115万円の使途であるが「物品費」に25万円、研究成果発表旅費等として「旅費」に30万円、実験参加者や学生アルバイトに対する謝金として「人件費・謝金」に20万円、fMRI施設使用料や英文校正代金として「その他」に40万円を支出予定である。
T細胞受容体複合体シグナルモチーフを介する情報伝達機構の解析

T細胞レセプターCD3複合体を介するシグナル伝達系を明らかにし、そのTCRシグナルが細胞分化や増殖を調節する機構を解明することを目指した。TCRを介するシグナル伝達系が、CD3ζと他のCD3分子の2つの異なるユニットに機能的に分かれることを明らかにした。生体内でも、ζ鎖ITAMを欠失した変異ζ鎖を有するマウスを樹立し解析した結果、ζ鎖を介するシグナルが未熟胸腺細胞の分化に重要であることが判明した。この両者のシグナル伝達系を明らかにするため、一方では活性化に伴ってリン酸化される蛋白の同定、他方では、ζやεに直接会合する分子のクローニングを行った。ζ鎖の構造に依存してリン酸化される90kd蛋白を同定した。また、west-western法を用いて3個の新たなCD3ε結合分子をクローニングした。その1つはトポイソメラーゼIIβであった。CD3ε、ζが核分画にも存在し、トポIIβと会合することを明らかにし、CD3εにのみ特異性を有する結合分子も得られた。また、リン酸化ITAMに会合する分子をクローニングする目的で、Lckでリン酸化したプローブを用いる試みや、エピトープを付加したリン酸化ペプチドを用いる試みは成功に至らなかった。これらは引き続き改良する課題としたい。TCRシグナルによる分化・増殖の解析として、TCR刺激による増殖抑制の機構およびT細胞分化における選択機構を解析した。増殖しているT細胞クローンは、ハイブリドーマ同様に、TCR刺激によってG1アレストが誘導され、サイクリンD3の減少がその主原因であることを明らかにした。IL-2による増殖シグナルの伝達において、TCRシグナルは、Jak3の発現を低下させることが判明し、IL-2の不応答性が誘導されている可能性を示した。また、分化の制御については、雄抗原特異的TCRトランスジェニックとζ鎖欠損マウスとの交配で得られたTCR発現とシグナル伝達能の低いマウスを作成し、その解析からTCRの発現レベルとそれに伴うシグナルの強さによって、ポジティブ・ネガティブ選択が調節されていることを明らかにした。TCR-CD3複合体を介するシグナル伝達系において、CD3γδεとζとがin vivoでも機能的に異なるシグナル伝達を誘導するか調べるために、シグナルモチーフを欠損させたζ鎖のトランスジェニックマウスを作製し、ζ欠損マウスとかけあわせた変異ζマウスにおけるT細胞分化を解析した。ζ欠損マウスでは、未熟、成熟胸腺細胞の両者が分化阻害を受けたが、変異ζマウスでは、成熟細胞のみに分化の亢進がみられたことから、ζモチーフを介するシグナルが未熟細胞の分化・増殖に重要なことが判明した。このことから、in vivoでもCD3γδεとζとは異なるシグナルモジュールを形成していることが示唆された。各々のシグナル経路に特異的な伝達分子をクローニングするため、CD3ε、ζの細胞内ドメインのGST融合分子を作製し、これを蛋白プローブとしてλgt11のT細胞cDNAライブラリーをスクリーニングした。リコンビナントLckを用いてζ、εをリン酸化し、リン酸化プローブを用いる試みも行ったが、効率の良いリン酸化は得られなかった。非リン酸プローブを用いて、CD3εに特異的に結合する分子を5個クローニングした。この内の1クローンは、トポイソメラーゼIIβのC末端側部分であった。

TopoIIβは、CD3ε,FcRγの細胞内領域とは結合するが、ζの細胞内領域とは結合せず、結合の特異性が存在した。TopoIIβ側は、C末端付近の活性調節領域付近に結合部位を同定した。CD3ε、ζが活性化に伴ってdetergentinsoluble分画に移行すること、およびTopoIIβはαと異なり、分裂にともなって細胞質にも局在するなどが判明した。in vivoでの会合およびT細胞活性化にともなってCD3εが膜から移行し、核内蛋白と結合する可能性を含め、その意義を解析している。また他の4クローンについても塩基配列決定、結合特異性と共にin vivoでの会合を解析中である。T細胞レセプター(TCR)・CD3複合体を介する抗原認識シグナルの伝達機構の解析のために、すでに明らかにした2つのシグナルユニットであるCD3ζとCD3εを介する新たなシグナル伝達分子を同定した。シグナルモチーフを有するζ鎖を介してチロシンリン酸化を誘導する90kd蛋白を同定した。この蛋白のリン酸化は、ζモチーフに依存し、TCR刺激でのみを誘導される新たな分子であると思われる。他方のユニットCD3εに結合する蛋白を2分子同定した。1つはトポイソメラーゼllβで、両者の結合領域を同定した。topollβは核内に局在しているが、我々はTCR活性化にともなってζ、εが核分画に存在し、topollβと会合することを初めて示した。もう1つの分子も、T細胞中でCD3εとのみ特異的に会合する未知の分子であることが判明した。一方、目的の1つであったリン酸化ζペプチドを用いた結合分子のスクリーニングは成功するにいたっていない。また、TCRシグナルによるT細胞増殖と文化の制御の解析を行った。増殖しているT細胞をTCR刺激すると細胞周期がG1で停止し増殖阻害が起こることがT細胞クローンでも確認された。これは、ハイブリドーマの場合と同様にサイクリンD3とそれに会合するキナーゼ活性が著しく抑制されるためであると思われた。増殖シグナルとの関係を解析した結果、TCRシグナルによってJak3が低下し、IL-2不応答性が誘導されている可能性を示唆した。一方、TCRシグナルの分化の制御については、雄抗原特異的TCRトランスジェニックとζ欠損マウスの交配マウスの解析を行い、TCRの発現レベルとシグナル伝達の強さを変化させることによって、ポジティブ・ネガティブ選択が変化しうることを初めて明かかにし、これまでペプチド濃度を変化させることによって示されてきたT細胞選択のアビディティーモデルを、T細胞の側から明らかにした。
非鉄製錬スラグの二次資源化に向けた革新的環境対応リサイクルプロセスの開発

28年度が最終年度であるため、記入しない。
植物化学療法の歯科医学への応用-食用植物性フラボノイドとアルカロイドの抗齲蝕・抗歯周病活性と適用後の口腔内保持性-

植物化学療法の歯科医学への応用を目的に、より安全な歯科薬物の創薬的研究として食用植物や機能性食品の有用成分に着目して、フラボノイドとアルカロイドを対象にした抗齲蝕・抗歯周病活性の検索、適用後の口腔内保持性、薬理作用と機序に関する一連を研究を行った。1.フラボノイド:(1)10数種の植物を検索し、抗齲蝕・抗MRSA薬としての可能性を秘めた数μg/mlのMICを示す抗菌活性物質を単離・同定した。(2)抗齲蝕活性緑茶カテキン類の有効性評価のため、唾液中カテキン類の一斉定量法を確立した。(3)本法は、薬理活性ポリヒドロキシフラボノイドのHPLC分析法の開発へとさらに発展した。(4)洗口後の口腔薬物動態学的解析を行い、抗齲蝕緑茶カテキン類が口腔内に保持されることを証明するとともに、その保持機序として口腔各部位への吸着を明らかにした。(5)対照としてクロルヘキシジンの口腔薬物動態を解析し、カテキン類の抗齲蝕効果を比較・評価した。(6)抗齲蝕・抗菌性フラボノイドの作用機序として、細菌細胞膜流動性の低下作用を解明した。(7)抗歯周病を目的に食用植物成分のコラゲナーゼ阻害活性を検索し、タマネギ外皮に活性を見い出した。活性成分の精製・単離・同定と抗歯周病作用の解析に関する研究は現在継続している。2.アルカロイド:(1)食用植物成分β-カルボリン類の抗菌活性を検索し、齲蝕・歯周病原性細菌の発育抑制活性を見い出した。(2)薬理活性β-カルボリン類のHPLC定量法を開発し、本法は飲食物や生薬の分析に有効に活用できた。(3)活性検索を調味料の機能性にまで展開した結果、醤油中にヒト血小板凝集抑制成分β-カルボリンを同定し、抗血栓薬としての可能性を追究した。(4)植物性飲食物が含むアセトアルデヒド縮合産物β-カルボリンに、麻酔薬との相互作用や精神疾患への関与の可能性を見い出した。β-カルボリンに着目した、慢性的飲酒患者の麻酔薬耐性あるいは小児自閉症の病態生化学に関する研究は現在継続している。抗齲蝕や抗歯周病を目指して植物化学療法を歯科医学へ応用するため、安全性に立脚した食用植物成分(Phytochemicals、PC)の分離精製・構造同定とその薬理活性の測定、ならびに方法論的開発と適用後のPCの口腔内保持性に関する定量的検討を行った。その結果、(1)ツバキ科植物緑茶葉の活性フラボノイドPC:カテキン類の齲蝕予防効果をin vivoで検討するため、唾液中カテキン類の特異的分離定量法を開発した(Talanta,in press)。カテキン類について、洗口実験から齲蝕予防が期待できる口腔内保持性を(J.Chromatogr.,703,253-258,1997)、pharmacokineticな検討から生体内動態を解明した(Anal.Pharmacol.,in press)。また、植物化学療法の対照として抗齲蝕薬クロルヘキシジンに関し、唾液中クロルヘキシジンのHPLC定量法を開発して、洗口実験から長時間の口腔内保持とその機序としての歯表面や頬粘膜細胞への吸着を明らかにした(Caries Res.,投稿中)(2)齲蝕原性細菌に対する抗菌性PCをマメ科植物から精製・単離し、活性本体のフラボノイドを同定した。研究の過程から、本PCはMRSAにも顕著な抗菌性を示すことを見い出し、抗MRSA薬としても利用できる可能性を明らかにした(Dent.Jpn.,in press)。(3)抗菌・抗真菌性アルカロイドPC:β-カルボリン類に関して、食用植物中含量を定量し、抗齲蝕・抗カンジダ薬としての利用価値を検討した(Phytochem.Anal.,投稿中)。Allium属食用植物の活性検索から、抗歯周病という機能性をタマネギに発見した。そこで、機能性食物としてのタマネギに着目して、歯周病の植物化学療法を確立すべく、その活性本体(コラゲナーゼ阻害PC)の精製・単離・同定・活性測定を現在継続中である。

(7)抗歯周病を目的に食用植物成分のコラゲナーゼ阻害活性を検索し、タマネギ外皮に活性を見い出した。活性成分の精製・単離・同定と抗歯周病作用の解析に関する研究は現在継続している。2.アルカロイド:(1)食用植物成分β-カルボリン類の抗菌活性を検索し、齲蝕・歯周病原性細菌の発育抑制活性を見い出した。(2)薬理活性β-カルボリン類のHPLC定量法を開発し、本法は飲食物や生薬の分析に有効に活用できた。(3)活性検索を調味料の機能性にまで展開した結果、醤油中にヒト血小板凝集抑制成分β-カルボリンを同定し、抗血栓薬としての可能性を追究した。(4)植物性飲食物が含むアセトアルデヒド縮合産物β-カルボリンに、麻酔薬との相互作用や精神疾患への関与の可能性を見い出した。β-カルボリンに着目した、慢性的飲酒患者の麻酔薬耐性あるいは小児自閉症の病態生化学に関する研究は現在継続している。植物化学療法を応用して安全性に優れた新規抗齲蝕薬・抗歯周病薬を開発するため、平成9年度に食用植物や生薬から単離・同定した物質について、適用後の口腔薬物動態学的検討、薬理作用機序の解析、ならびに定量のための方法論的開発を行った。その結果、(1)抗齲蝕活性緑茶カテキン類のヒト唾液中濃度の選択的分離定量法を確立し、齲蝕予防効果を示す口腔内保持性と生体内動態を解明した(Talanta,46,1998;歯薬療法,17,1999)。(2)その他の薬理活性フラボノイドに関し、特異的精製法と分離定量法を考案して、薬物動態学的・食品栄養学的実験に応用できる方法を開発した(J.Chromatogr.B,720,1998)。(3)化学的プラークコントロールの対照として、クロルヘキシジンのHPLC定量法を開発するとともに、洗口実験からその口腔内保持性の高さを証明した(Caries Res.,33,1999)。(4)活性検索過程において、マメ科植物から単離したフラボンがMRSAに抗菌性を示すことを発見し、抗MRSA植物化学療法の可能性を得た(Dent.Jpn.,34,1998)。(5)リポソームモデル膜とFluorescence Polarization法を用いて細胞膜流動性低下作用を解明し、緑茶カテキン類の作用機序を初めて明らかにした(Pharmacol.,印刷中)。(6)植物性薬理活性アルカロイドに関しても、食用植物と生薬中β-カルボリン類の定量的な分析薬理学的検討を行った(Phytochem.Anal.,印刷中;Chem.Pharm.Bull.,印刷中)。(7)生活廃棄物のリサイクルとして食物の機能性非食用部分を利用する発想から、タマネギ外皮に抗歯周病活性を見い出し、平成10年度は活性成分の粗精製まで終了した。平成11年度は、歯周病に対する植物化学療法を確立すべくさらに研究を発展させる予定である。植物化学療法を歯科医学に応用したより安全な新規抗齲蝕薬・抗歯周病薬の創薬研究として、平成910年度の研究成果に基づいた一連の研究を展開した結果、(1)薬理活性フラボノイドの作用機序として、抗齲蝕活性緑茶カテキン類と抗菌活性フラバノンの細胞膜流動性低下作用を解明した(Pharmacol.,59,1999;Phytomed.,印刷中)。(2)化学的プラークコントロールの対照として、クロルヘキシジンの口腔内保持性と比較しながら緑茶カテキンの抗齲蝕作用を評価した(Caries Res.,33,1999)。(3)様々な食用植物のコラゲナーゼ阻害活性を検索して、タマネギ外皮のフラボノイド性成分に活性を見い出した。現在、抗歯周病薬の創薬を目指した研究を展開中である。
グローバル皮革産業におけるネットワークの研究ーサンタクローチェを基点として

産業としての存続の可能性を探るためグローカルな立場から世界の皮革産地として知られるイタリアのサンタクローチェを研究しつつ、日本の皮革産業の生き残りの可能性を探る。サンタクローチェスッラルノと東京(台東区・墨田区)のとの比較分析をおこない日本の中小皮革産業が生き残る道を探る。1)原皮の入手経路と特徴、2)産業廃棄物処理手法、3)海外工場との分業体制、4)高級皮革製品メーカー(グローバル資本)とのコラボレーションの効果、の4点に絞り質的調査(qualitative research)をおこなう。