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ヤマトタケル説話の文化資源化をめぐる享受史の開拓

当該年度は、ヤマトタケル説話に関連する銅像・記念碑について、建立経緯の解明や現況確認、さらには享受の在り方に関して、主に実地踏査による研究を行うことを中心とした。また、西日本方面における地方史誌・郷土史蹟に関しての詳細な情報収集とともに、東日本方面については、『古事記』『日本書紀』双方に登場する「酒折宮」(山梨県甲府市)にみられる史蹟等の背景を明らかにすることも目標とした。前者の銅像・記念碑に関しては、まず、「赤丸浅井神社」(富山県高岡市)付近に現存する銅像を調査し、「明治紀念之標」(兼六園・石川県金沢市)とは造型の相違点が複数みられることが判明し、台座部分に戦没者の名を刻んだプレートが設置されていることから、「忠魂碑」としての役割を担っていることをも捉えることができた。また、富山県内において、ヤマトタケル銅像を御神体として奉斎する神社も調査し、地域における信仰や祭礼のあり方をも明らかにし得た。この他、「神功皇后銅像」(入善神社・富山県下新川郡)等、北陸方面における日本神話に関する銅像の調査にも努め、特に戦前に撮影された資料との比較では、当時とほぼ変わらずに現存している傾向にあることをも把握し得た。さらに、北陸方面以外では、比較的新しい銅像である、JR井田川駅・ロータリー(三重県亀山市)と、三峯神社を調査し、製作者や設置母体を明らかにした。後者の西日本方面における地方史誌・郷土史蹟に関する情報収集では、山陰方面における「矢留の荒神様」(鳥取県倉吉市)の他、「白鳥神社」(香川県東かがわ市)や、地名「鶴羽」「鶴羽神社」(香川県さぬき市)、四国方面にもヤマトタケルに関する民間伝承がみられることを把握した。東日本方面では、「酒折宮」における石碑の踏査などを実施した。ヤマトタケル説話を題材とする銅像・記念碑に関しては、すでに全体の建置数を把握できている。また、2018(平成30)年度に予定していた北陸方面の銅像、及び三峯神社(埼玉県秩父市)やJR井田川駅・ロータリー(三重県亀山市)の新銅像等に関する実地調査をも、計画通りに実施しており、建立経緯の解明と享受の全体像も明らかになりつつある。今後も、関連する研究文献等と照合していくことにより、さらに進展しうるものと考えている。各地域の郷土史誌・郷土史蹟における民間伝承に関しても、全体の状況を把握し終えている。その上で、『古事記』『日本書紀』等において、一切触れられていない四国方面に、ヤマトタケルに関する民間伝承や伝承地が複数見出されることは、大きな成果と考えられる。さらには、江戸期におけるヤマトタケル説話の享受を捉える上で、本居宣長『古事記傳』以前において、「酒折宮」及び山梨県出身の国学者等の果たした役割が大きいことをも把握し得た。以上に掲げた複数の成果を踏まえ、本研究課題は、当初の計画通り、順調に進展していると捉えている。2019(令和元)年度には、当該年度の研究に基づき、西日本方面における、ヤマトタケル説話に関する民間伝承・伝承地を中心に、さらなる文献調査及び実地調査を進めていくこととする。また、当該年度に引き続き、他の文化資源を用いた比較を、積極的に行うこととする。例えば、関連する図書の挿入写真や、観光絵葉書等を、より多く把握していきたいと考える。当該年度は、既に準備を終え、研究成果を蓄積している、ヤマトタケル説話を題材とする銅像・記念碑に関する建立経緯の解明と、享受の在り方に関する研究を行うことを中心とした。また、予備研究として、翌年度に予定している地方史誌・郷土史蹟に関する情報収集を、当該年度にも適宜実施していくことも目標とした。前者の銅像・記念碑に関しては、日本最古の銅像とされる「明治紀念之標」(兼六園・石川県金沢市)と同型の銅像が、増山城跡(富山県砺波市)や赤丸浅井神社(富山県高岡市)付近に設置されていたことを捉えた。後者の銅像については、現存しており、かつ「忠魂碑」としての役割を担っていた様子も、郷土史誌により把握している。加えて、この他に、富山県内では、同型の銅像を、御神像として奉斎する神社が存在していることをも明らかにした。さらには、比較的最近の銅像設置例として、平成24年5月、JR井田川駅・ロータリー(三重県亀山市)に、地元民の要請により、ヤマトタケル像の建置されていることが判明した。後者の地方史誌・郷土史席に関する情報収集では、まずは全体像の把握として、最新の『角川日本地名大辞典』及び『日本伝説大系』を軸に、ヤマトタケル関係記事を、都道府県別に調査した。結果として、両書における北限及び南限を明らかにするとともに、全国で最も多く伝説や奉斎神社等を有する地域を把握することができた。また、ヤマトタケルは、『古事記』において、出雲(島根県)の在地有力者であったイズモタケルを討ち取ったが、当該の山陰方面のように、中央及びヤマトタケルの征討に抵抗した地域におけるヤマトタケルの伝承の様相や、奉斎神社に関しても、明らかにし得た。ヤマトタケル説話を題材とする銅像・記念碑に関しては、すでに全体の建置数を把握できたものと考えている。かつ地方史誌の記述により、昭和期までに建立された銅像については、経緯の解明と享受の様相も進んでいる。以上の点から、平成30年度に、未見となっている北陸方面及び三重県亀山市の新銅像等に関する実地調査を行うことや、関連する文化資源との比較により、さらに進展しうるものと考えている。

郷土史誌・郷土史蹟における民間伝承に関しても、全体の状況を把握し終えている。さらには、『古事記』『日本書紀』「風土記」といった上代文献に記載のないヤマトタケルの子孫を記した後代の文献及び在地伝承についても、ほぼ明らかにし終えた。この成果の一部については、実地調査をも行っており、平成30年度に刊行される『先代旧事本紀』に関する書籍において、その詳細を報告している。また、郷土史蹟に関する研究として、ヤマトタケル伝承に登場する樹木の様相の把握、特にその種類が25種を超すことを明らかにした点も、大きな成果と考えられる。その上で、現在、広く知られている、「走水観音(舟守観音)」(神奈川県横須賀市)を、ヤマトタケルの妃・オトタチバナヒメの「御像」とみなす伝承を辿っていくと、本居宣長『古事記傳』が発生源であると目されることをも判明した。以上に掲げた複数の成果を踏まえ、本研究課題は、当初の計画通り、順調に進展していると捉えている。当該年度は、ヤマトタケル説話に関連する銅像・記念碑について、建立経緯の解明や現況確認、さらには享受の在り方に関して、主に実地踏査による研究を行うことを中心とした。また、西日本方面における地方史誌・郷土史蹟に関しての詳細な情報収集とともに、東日本方面については、『古事記』『日本書紀』双方に登場する「酒折宮」(山梨県甲府市)にみられる史蹟等の背景を明らかにすることも目標とした。前者の銅像・記念碑に関しては、まず、「赤丸浅井神社」(富山県高岡市)付近に現存する銅像を調査し、「明治紀念之標」(兼六園・石川県金沢市)とは造型の相違点が複数みられることが判明し、台座部分に戦没者の名を刻んだプレートが設置されていることから、「忠魂碑」としての役割を担っていることをも捉えることができた。また、富山県内において、ヤマトタケル銅像を御神体として奉斎する神社も調査し、地域における信仰や祭礼のあり方をも明らかにし得た。この他、「神功皇后銅像」(入善神社・富山県下新川郡)等、北陸方面における日本神話に関する銅像の調査にも努め、特に戦前に撮影された資料との比較では、当時とほぼ変わらずに現存している傾向にあることをも把握し得た。さらに、北陸方面以外では、比較的新しい銅像である、JR井田川駅・ロータリー(三重県亀山市)と、三峯神社を調査し、製作者や設置母体を明らかにした。後者の西日本方面における地方史誌・郷土史蹟に関する情報収集では、山陰方面における「矢留の荒神様」(鳥取県倉吉市)の他、「白鳥神社」(香川県東かがわ市)や、地名「鶴羽」「鶴羽神社」(香川県さぬき市)、四国方面にもヤマトタケルに関する民間伝承がみられることを把握した。東日本方面では、「酒折宮」における石碑の踏査などを実施した。ヤマトタケル説話を題材とする銅像・記念碑に関しては、すでに全体の建置数を把握できている。また、2018(平成30)年度に予定していた北陸方面の銅像、及び三峯神社(埼玉県秩父市)やJR井田川駅・ロータリー(三重県亀山市)の新銅像等に関する実地調査をも、計画通りに実施しており、建立経緯の解明と享受の全体像も明らかになりつつある。今後も、関連する研究文献等と照合していくことにより、さらに進展しうるものと考えている。各地域の郷土史誌・郷土史蹟における民間伝承に関しても、全体の状況を把握し終えている。その上で、『古事記』『日本書紀』等において、一切触れられていない四国方面に、ヤマトタケルに関する民間伝承や伝承地が複数見出されることは、大きな成果と考えられる。
CFRP寸法のミクロンオーダー制御とその長期信頼性

CFRPの面外変形に最も支配的である吸湿変形を調査し,その特徴を理解した.CFRPの面外変形に最も支配的である吸湿変形を調査し,その特徴を理解した.CFRPの長所は比強度・比剛性が優れていることであるが,それのみならず,他の材料と比べて極めて低い熱膨張率を有することも,大きな特徴の一つである.従って,CFRP積層板は激しい温度変化を受ける人工衛星のアンテナリフレクタや望遠鏡の主鏡への適用が検討されている.これらの精密構造物は高精度の寸法が要求される.例えばアンテナやセンサーでは,鏡面に対して波長の数分の十(回折限界)から20分の1(散乱損失)の面精度が要求されるといわれている.遠赤外線の波長は0.4μm数百μmであるので,0.110μmRMSの面精度が必要となる.望遠鏡の主鏡ではそれと同程度あるいはそれ以上の面精度が保持されなければならない.そのため,様々な環境においてミクロンオーダーで寸法保持を保障する設計を検討することは工学的に重要である.しかしながらCFRPは母材が高分子で構成されており,環境変化により10μmレベルの想定外の変形を引き起こすことが報告されており,精密構造部材への適用は想定されていない.21年度ではこの変形の最も大きな要因が吸湿変形であることが明らかとなった.CFRP積層板を高温多湿環境に曝し,変形量と時間の関係を定量的に調査し,吸湿膨張係数,水分の拡散係数を異方性を考慮して非常に正確に定量化することができた.したがって,CFRPの水分吸着に対する対処,ある条件で放置した場合の吸水変形などが把握できた.そして,その他の定量化すべき要素の実験には取りかかっている.概ね当初の計画通り研究が遂行されていると言える.炭素繊維強化プラスチック(CFRP)は比強度,比剛性,対熱変形に非常に大きな優位性を有する材料であり,特に耐熱変形に対しては線膨張係数をゼロに設定できる特徴的な材料であるため,今後の航空宇宙分野での適用がさらに広がると期待されている.CFRPの母材である高分子材料が時間依存性を有するため,CFRPに微視的な経時変形は「つきもの」という見解が一般的であり,衛星搭載用ミラーなどの非常に精密な部材への適用は想定されていなかった.そこで本研究にて,CFRPの精密さの向上およびその長期保証について,そのメカニズムなどがミクロンオーダーにて明らかにされたその一つに,従来明らかにされていなかった「対称積層板にも関わらず,非対称な面外変形(鞍型変形)を起こす」という問題を繊維の配向角のずれをパラメータとして,解析,実験を行うことで,そのメカニズムを明らかにし,形状を予測できるようになった.このことは21年度の成果の一つである.一方で,樹脂の粘弾性特性に依存するCFRP構造物の経年変形を予測するために,粘弾性挙動をモデル化し,その定数を取得した.マトリクスは汎用のエポキシ樹脂と宇宙用のシアネート樹脂を用いた.さらに,樹脂の自己収縮現象であるフィジカルエージングについても調査を行った.これらの結果から,フィジカルエージングが進行すると粘弾性挙動も変化する相関関係があることがわかり,21年度にはその一部が明らかになったが,課題はまだ残したままである.
食品異物及びカビ伝播の原因となる食菌性昆虫はカビ毒産生能を亢進する

目的:チャタテムシに注目し、その食菌性のメカニズムについて体内環境から探索することにした。カビを栄養源としながらカビ毒の影響を受けないチャタテムシには消化管内の環境、消化酵素、腸内細菌によりカビを不活性化させる仕組みがあるのではないかと考えられる。これを明らかにするためにチャタテムシが食べる真菌をAspergillus versicolorと仮定し、消化管内の環境、消化酵素、腸内細菌によってA. versicolorの増減で影響力を判断することにした。方法:A. versicolorをPDA培地で1週間培養し、一定量を採取した。次にA. versicolorをpH10.1の弱アルカリ性の溶液(消化管内の環境)、チャタテムシの糞から単離したOchrobactrum anthropiをPDB培地で培養した際の培養上清液(腸内細菌)、セルラーゼ溶液(消化酵素)、チャタテムシを粉砕し作製した虫体抽出液にそれぞれ一定時間反応させ、A. versicolorの生存率を検討した。対照として各検体を反応させていないA. versicolorを用いた。結果: pH10.1の弱アルカリ性の溶液(消化管内の環境)を用いた実験では対照と比べ、検体の方が生存率が減少したが18時間反応後では175.5%増加した。チャタテムシの糞から単離したO. anthropiをPDB培地で培養した際の培養上清液を用いた実験では生存率が減少した。セルラーゼ溶液を用いた実験では対照と比べ、生存率が減少した。以上の結果により消化管内の環境、腸内細菌、消化酵素のどの事象においてもA. versicolorの生存率が減ることが判明した。しかし完全に死滅することはなく生存菌体を糞とともに排出している可能性があることからカビ毒産生能を獲得する可能性が考えられた。昨年度の成果により、当初予定していた菌の体内動態が解明されてきた。特に腸内細菌において抗真菌性物質を産生していることが確認された。そのため、おおむね順調に進んでいると思われる。目的:今年度は、繰り返し食菌されることによる真菌側のトランススクリプションの可能性を、ステリグマトシスティン産生遺伝子を対象に、リアルタイムPCRにより測定を行う。方法:ステリグマトシスティン産生遺伝子を有しているが、産生はしていない真菌、Aspergillustabacinusを用いる。ヒメマキムシにA.tabacinusを食菌させ、糞を採取する。糞の外側を殺菌したのち、PDA培地で3ー4日間培養する。ここで培養した菌をさらに食菌させ、糞中の同真菌を培養させる。この作業を5ー6回繰り返す。同時に各培養から、菌体を採取しRNAを抽出する。cDNAにもどし、リアルタイムPCRをもちいて、毒素産生遺伝子の発現量の変化を測定する。いままでにステリグマトシスティン産生に関わる遺伝子として14種類明らかになっていることから、代表的な7種を選んで実験対象とする。予想される成果:前年度までに食菌性昆虫の体内では、摂取された真菌は消化酵素、pH,腸内細菌の抗真菌物質など多くのストレスにさらされていることが明らかになったので、そのストレスがカビ毒産生に影響するかを検討し、環境へのカビ毒産生真菌の危険性を明らかにする。

方法:ステリグマトシスティン産生遺伝子を有しているが、産生はしていない真菌、Aspergillustabacinusを用いる。ヒメマキムシにA.tabacinusを食菌させ、糞を採取する。糞の外側を殺菌したのち、PDA培地で3ー4日間培養する。ここで培養した菌をさらに食菌させ、糞中の同真菌を培養させる。この作業を5ー6回繰り返す。同時に各培養から、菌体を採取しRNAを抽出する。cDNAにもどし、リアルタイムPCRをもちいて、毒素産生遺伝子の発現量の変化を測定する。いままでにステリグマトシスティン産生に関わる遺伝子として14種類明らかになっていることから、代表的な7種を選んで実験対象とする。予想される成果:前年度までに食菌性昆虫の体内では、摂取された真菌は消化酵素、pH,腸内細菌の抗真菌物質など多くのストレスにさらされていることが明らかになったので、そのストレスがカビ毒産生に影響するかを検討し、環境へのカビ毒産生真菌の危険性を明らかにする。今年度予定していた論文執筆に対する投稿料や英文校閲代が未使用となったが、来年度論文投稿する際に使用する予定である。
ダイクシス，アナファーに基づくテクストの構成原理についての機能類型論的研究

本研究では,テクスト構造と文構造の形成する共通の原理としてのダイクシス,アナファーについて研究を行った。談話状況からの直接アクセスに基づくダイクシスは,「直接経験」の言語化,テクストという場で一度概念化を経た情報処理の仕組みであるアナファーは,貯蔵された「知識」の反映であるという仮説にもとづき,ドイツ語,日本語における文法,テクスト構成の記述を行った。また,タイ語や英語などの言語についてもミュンヘン大学の研究グループと国際共同研究を行い考察を進めた。研究初年度である25年度は、ドイツの海外連携研究者との共同研究(ワークショップ、研究打ち合わせ)を通して、関連する諸概念を整理し、計画全体の出発点を確認した。研究初年度の主な研究実績は、以下のとおりである:2013年9月(札幌、北海道大学):国際共同ワークショップの開催:当科研費を使い、ドイツの若手研究者3名とともに日本国内での催された国際研究集会を開催(企画、運営、発表)した。また日本独文学会秋季研究発表会において関連するテーマでシンポジウムを企画、参加を行った。2014年2月(ミュンヘン、ミュンヘン大学)ミュンヘン大学ライス教授、アブラハム教授らと共同ワークショップを企画、運営、発表を行った。関連する研究テーマについて、共同で研究書を刊行するために、打ち合わせを行った。内容:ダイクシス、アナファーに関わる文法現象(Tanaka 2011で詳述)は、その枠組みとなる概念が、研究者間で多少異なって理解されている。また、これらの概念と類似した概念は、数多く提案されている。本年は、上述した研究集会、研究打ち合わせを通して、これらの概念を整理し、関連する現象について分析を進めた。海外の研究者と研究交流を通じていくつかの新しい知見を得ることができた。ドイツ語の方言に身られる諸現象について、その話し言葉的な特徴からも、ダイクシス表現が多様され、ダイクシス的な指示が顕著なものとなっていることがわかった。同様に、タイ語とドイツ語の研究者からは、タイ語においても、ダイクシス表現、指示が顕著であり、テクストの構造もヨーロッパ言語の書き言葉のそれとは大きく異なることが報告された。これらの初年度の研究成果をもとに研究二年目となる26年度は、さらなる研究を進めていくつもりである。本研究では,「テクスト構造と文構造に共通の原理としてのダイクシス,アナファーが言語ごとに異なった強さで文法化されている」というTanaka (2011)の観察を出発点に,研究を進めているが,研究二年目の26年度は,典型的に文レベルの現象として記述される諸現象(動詞定形二位,格表示)が,文のレベルを越え,テクスト構成に有機的に関与していることを示すことを目指した。そのため,25年度末(3月)から26年度にかけ,ドイツ語の定形二位の機能と日本語との対応関係に関する研究発表を国内外の研究集会で5回にわたっておこなった(ミュンヘン,京都,広島,札幌,葉山,うち三回は25年度中)。これと平行する形で,文レベルの構成機能を担っている格表示が広く文を越えた現象を表示していることを言語対照によって明らかにする論文を発表し(26年度3月),またその形態的な特質を明らかにする研究発表をドイツ・ハノーファー大学で行った(26年3月)。また,ダイクシス,アナファーの対照研究を行うために,ミュンヘン大学ライス教授,同アブラハム教授,同ツェーマン博士らと二回(26年9月,27年3月)にわたって集中的な討議を行った。その成果は,27年度に予定しているミュンヘン大学言語学サマーアカデミーの場で国内外の研究者に提示することを予定している。また,ミュンヘン大学ライス教授とは,本研究を支える基本的概念をまとめるために共同研究をすすめているが,その一つの成果として,同教授の著書「Sprachphilosophie」(言語哲学)の翻訳を進めている。本年度8月には,これらの成果を総合的に公開するためにミュンヘン大学においてサマーアカデミーを実施する予定である。研究最終年度にあたる27年度は,当初予定どおり,テクスト構造と文構造に共通する原理としてのダイクシス,アナファーについての言語横断的研究の成果を各種国際,国内研究集会にて発表(一部国際共同発表)を行い,その成果を内外に公開し,さらなる国際共同研究へと繋げることを行った。27年度の研究発表の中心となったのは,本補助金に一部助成された国際共同研究として27年8月に行った,ミュンヘン大学における国際ドイツ語言語学サマーコースおよびそれに引き続き開催されたワークショップであった。これらの研究集会では,同大学ライス教授,アブラハム教授をはじめ,ツェーマン博士,スラチャイ博士,クリタ博士らとともにダイクシスを中心とした講演を行い,議論を行った。またこの講演は,若手育成のサマーコースとして行われたものであるが,ここには,ドイツ,日本を中心とした各国の若手研究者が参加し,活発な議論を行った。この場で,研究代表者は,本計画研究の成果としての研究発表を三回にわたって行った。これに引き続いて行われたワークショップでも,関連するテーマでの研究発表を行った。これらの研究集会の成果は,ドイツの言語学関連の出版社として名高いBuske社から論集を公刊するべく,現在準備を行っている。研究代表者は,この論集でも編集主幹として前書きおよび本論の論文一本を執筆した。国内では,27年10月に鹿児島大学で行われた日本独文学会研究発表会において,本計画研究関連の研究発表を行った。また,本計画研究を締めくくるものとして,28年2月にミュンヘン大学で行われた国際シンポジウムにおいて招待講演を行った。

本講演についても,現在論集の編纂が行われており,28年度中に公刊される見込みである。本研究では,テクスト構造と文構造の形成する共通の原理としてのダイクシス,アナファーについて研究を行った。談話状況からの直接アクセスに基づくダイクシスは,「直接経験」の言語化,テクストという場で一度概念化を経た情報処理の仕組みであるアナファーは,貯蔵された「知識」の反映であるという仮説にもとづき,ドイツ語,日本語における文法,テクスト構成の記述を行った。また,タイ語や英語などの言語についてもミュンヘン大学の研究グループと国際共同研究を行い考察を進めた。研究はおおむね順調に進展している。本研究の中心となる「テクスト構成の原理」であるダイクシスの各言語における機能を記述するために,一見してダイクシスとは無関係に思われる文法現象(定形二位,格表示)を精査することにより,そのテクスト構成の働きを明確にするという試みを行ったが,それは,計5回に上る研究発表に結実している。また,ドイツを中心とする研究者と研究交流を進めているが,その成果として,研究発表,研究書の翻訳を進めており,また,成果発表のための国際集会の共同開催を計画している。これらの点に関しては当初の研究計画で構想していたものを上回るものと考えられる。若干遅れ気味なのは,具体的なテクストの分析であるが,これについても,本夏の国際集会で内外の研究者と情報を交換し,具体的な成果を出していく予定である。ドイツ語言語学上述のように,本年夏には,ドイツ・ミュンヘン大学で国際研究集会としてサマーアカデミーの実施を計画しているが,その場において,ダイクシス,アナファーを中心としたテクストおよび文構成原理の言語類型論的なセクションを実施し,ドイツ,日本,タイ,台湾などの研究者とともに共同研究を進める予定である。また,共同研究の成果の一つとして研究書の翻訳を完成させたい。この翻訳には日本国内の複数の研究者も携わっており,本研究の枠組みを越えた国際共同研究へと発展させることを計画している。国際研究集会における三度の研究発表や、研究文献の公刊などを通して、海外の研究者との研究交流は予定したものよりも大幅に進捗したと思われる。その一方で、研究成果の公開は、まだ途上であり、今後の進展が期待される。本計画研究を遂行するための基礎的な部分は、本年の研究により十分な成果が得ることができ、言語における指示ストラテジーの異なりという本研究の基本となる仮説が修正され、より具体的な形での検証基準が明確になった。今後は、ドイツ語、日本語などの経験的なデータの分析を進めることにより、仮説の有効性を検証していく。25年度に計画していたドイツとの研究交流旅費について、25年度は、研究計画を修正して先方からの渡日により、研究交流を行ったため、研究代表者の渡航費が必要なくなったことによる。また、25年度中の研究成果の執筆が年度内に間に合わず、外国語校閲の謝金が26年度の執行となった。26年度については、25年度に当初予定していた研究代表者のドイツにおける研究交流および資料収集を実施する予定である。そのため、研究代表者の渡航費として、25年度未使用分を使用する予定である。
口腔がん発生の原因となるARE-mRNA制御機構破綻の機序解明

本研究は、口腔がんの発生原因となるARE-mRNAの核外輸送・安定化の機序を解明することを目的としている。AREに結合しARE-mRNAの輸送・安定化に関わるHuRと、HuRに結合するpp32およびpp32r1との相互作用を検討した。その結果、HuR-pp32r1の複合体は核外に輸送され、pp32r1がカスパーゼを抑制することによりHuRの分解が制御されていた。これらの結果により、pp32r1の持つ発がん活性が解明された。本研究は、口腔がん細胞におけるARE-mRNAの核外輸送及び安定化の機序を解明し、ARE-mRNA制御システムを標的とした新しいがんの治療法を開発することを目的としている。そのためにARE-mRNAに結合するHuRの挙動がどのように細胞のがん化に寄与しているかを解析し、それらを制御することにより新しいがんの治療法を開発することである。本年度はHuRと結合するタンパク(HuR AP)をFLAGタグ付きのHuRを用いて単離を試みたが、良い結果が得られず、HuR APとして知られているpp32とそのファミリーpp32r1について解析を進め、以下のような新しい知見が得られた。口腔がんではpp32r1の発現が高いことが明らかになった。さらにpp32r1を発現した口腔がん細胞はソフトアガー中で大きなコロニーを形成し、pp32r1が口腔がん細胞を悪性化することも見出した。2)pp32、pp32r1によるHuRの分解HuRはpp32と結合し核外輸送され、細胞質でcaspaseにより分解され、そのことがpp32の持つがん抑制機構であると考えられている。我々はpp32r1を強制発現した細胞では細胞質でのHuRの分解が少なく細胞質に蓄積し、pp32が発現している細胞と逆の結果が得られた。この結果は、pp32ががん抑制活性を持ち、pp32r1が細胞がん化活性を持つことと相関している。次にpp32、pp32r1とHuRタンパクとの結合を検討した。その結果、両タンパクともHuRと結合し、pp32r1の方がより強く結合することが明らかになった。以上の結果は、pp32r1の発現が多くなると、HuRはpp32r1と結合しその分解を免れ、細胞がん化に寄与することを示している。昨年度はHuRと結合するタンパクpp32とそのファミリーpp32r1について解析を進め、pp32r1がHuRの分解を抑制することを見出した。本年度は昨年度行った解析をさらに詳細に進め以下の様な新しい知見が得られた。1)pp32r1の局在:口腔がん細胞のpp32およびpp32r1の局在を解析した。その結果pp32は主に核に存在し、pp32r1は核と細胞質両方に局在することが明らかになった。2)pp32ファミリーとがんの悪性度:昨年度はpp32r1が口腔がん細胞の足場非依存性増殖能を活性化することを見出した。本年度はpp32を発現させたがん細胞はソフトアガー中で増殖が抑制されることを見出し、pp32ファミリーで足場非依存性増殖能などのがんの悪性度が制御されることがわかった。3)pp32ファミリーによるHuR分解制御: HuRはpp32と結合し、細胞質でcaspaseにより分解され、そのことがpp32の持つがん抑制機構であると考えられている。そこで我々はcaspaseの活性に与えるpp32r1の影響を検討した。その結果、pp32r1はcaspaseの機能を抑制することがわかり、pp32r1はcapaseの働きを制御することによりHuRの分解を抑制することがわかった。以上の解析よりpp32r1はHuRの発現量を維持することで細胞がん化に寄与することが示唆され、今後pp32r1のノックダウン等によるがんの治療法の開発が期待できる。口腔がん細胞におけるARE-mRNAの核外輸送・安定化を解明する目的のため、初年度はARE-mRNAに直接結合してその輸送に関わるHuRタンパクと結合する、pp32とpp32r1について口腔がん細胞を用いて解析した。これらのタンパクはARE-mRNAの安定化やHuRの局在に影響することが明らかになり、今後これらの分子の解析を介して口腔がん細胞でのARE-mRNAの挙動を解明するきっかけができた。24年度が最終年度であるため、記入しない。
悪性リンパ腫予後因子の免疫組織化学的評価システムの構築に関する研究

本研究の目的は、悪性リンパ腫の予後との関連が期待される蛋白群の発現について、特にアポトーシス関連蛋白を中心に、臨床検体を対象に免疫組織化学的な検討を行うことにある。悪性リンパ腫のルーチン検索として一般的な病理検査室で検討を行ない得る実用的な予後評価システムを模索する。細胞内のアポトーシスのシグナル伝達を調節するBc1-2,Bc1-X, Bax, XIAP, FLIP, survivin, p53等の発現について、びまん性大細胞型B細胞性リンパ腫(DLBCL)症例の臨床病理学的因子、組織形態学的因子との相関を検討した。高齢発症のリンパ腫においては比較的若年発症に比較してアポトーシス抑制が乏しい傾向にあり、Bc1-X, Baxの発現が高い傾向にあった。また、胚中心細胞型の形質を示すDLBCLは非胚中心細胞型のものに比べ、アポトーシス抑制が乏しい傾向にあり、Bax, XIAPの発現が高く、FLIPの発現が低い傾向にあった。その他、初発/再発、bc1-2陽性例/陰性例の間でも発現パターンの違いを確認した。最終的な予後との相関は検討中である。リンパ腫の腫瘍発生に関与する、比較的限られた種類の蛋白の免疫組織化学的な検討によっても、リンパ腫の臨床病理学的な層別化を行なうことが可能であることが示唆される。現在、悪性リンパ腫の予後因子としては、臨床的指標を基にしたInternational Prognosis Indexが最も一般的に用いられている。本研究の目的は、分子生物学的手法により悪性リンパ腫の予後との関連がが期待されている蛋白群の発現について、臨床検体を対象に免疫組織化学的な検討を行い、一般病理検査室における予後因子評価としての実用性を検討することにある。B細胞の増殖に対して抑制性に作用するBACH2蛋白の発現について、びまん性大細胞型リンパ腫(以下DLBCL)108例を対象にして免疫組織化学的に検討したところ、高発現例を32.4%、低発現例を67.6%に認めた。高発現群は低発現群に比し有意に良好な無再発率、全生存率を示した。BACH2の高発現は多変量解析においても独立した予後因子となることが示された。DLCBLはMLの中で最も頻度の高いsubtypeである一方、多様な遺伝子プロファイルをもつ腫瘍が混在する不均一な集団であり、本研究で得られたデータは、臨床上、症例の層別化治療に有用である。
高齢者の孤独感に対するコラージュの有効性の検証

本研究の目的は、高齢者の孤独感を緩和する方法として、コラージュの有効性を検証することである。具体的な目的は、1.高齢者の孤独感の程度によるコラージュの特徴を明らかにすること、2.高齢者の孤独感に対するコラージュの有効性を検証することである。近年、孤独感が高齢者の健康に影響を及ぼす要因のひとつであることが報告されている。そのため、健康問題に関わる専門職者にとって、孤独感を抱えているにも関わらず、表出できていない高齢者を見出し、対処困難な高齢者の孤独感を緩和する支援が重要である。平成2830年度にかけて、質問の内容を理解し回答が可能、3分程度の立位保持が可能な通所介護サービスを利用している65歳以上の地域在住高齢者に対して、コラージュを実施してもらい、質問紙調査(孤独感・ソーシャルサポート・ソーシャルネットワーク・フェイススケール)と血圧・脈拍・自律神経機能の測定を実施した。コラージュは、コラージュ・ボックス方式で実施した。クロスオーバーデザインとし、調査対象者を2群(「介入先行群」・「介入後行群」)に分け、「介入先行群」はコラージュを1か月に1回(計3回)実施し、「介入後行群」は今まで通りの通所介護サービスのプログラムを続けてもらった。「介入先行群」のコラージュ終了後に入れ替えを行い、「介入後行群」にも同様にコラージュを実施した。調査対象者は4施設32名であった。全てのプログラムに参加できた21名を分析対象とした。平成30年度では、作成したコラージュ作品から高齢者の孤独感の程度による特徴を分析し、質問紙調査と自律神経機能の測定結果からコラージュの有効性について分析を進めた。平成28年度から平成29年度にかけて介入研究を実施する予定で計画していたが、調査対象者の体調不良等で予定していた日程で調査を実施することができず、平成30年度(2018年度)まで調査期間を要することになった。さらに、2018年度に研究結果をまとめ、学会発表する予定であったが、研究者の業務多忙により、データの分析および研究結果をまとめることに時間を要してしまった。そのため、進捗状況として遅れている状況である。これらのことから、論文投稿および報告書の作成、報告書の研究協力施設への郵送、学会での発表を今後予定している。平成28年度から平成30年度にかけて実施したコラージュ作品から、地域在住高齢者の孤独感の程度により、どのような特徴が表現されているのかを分析していく予定である。また、調査対象者に実施した質問紙調査および自律神経機能の測定結果から、地域在住高齢者がコラージュを制作することが、高齢者の孤独感に対して有効性が認められるかについて分析を進め、まとめていく予定である。平成28年度は、質問の内容を理解し回答が可能、3分程度の立位保持が可能な通所介護サービスを利用している65歳以上の地域在住高齢者に対して、コラージュを実施してもらい、質問紙調査(孤独感・ソーシャルサポート・ソーシャルネットワーク・フェイススケール)と血圧・脈拍・自律神経機能の測定により評価した。本研究は前向き介入研究とし、同一対象者で異なるプログラムを比較することができるクロスオーバーデザインとした。コラージュ方式はコラージュ・ボックス方式とし、1グループ4名で研究対象者を2群(「介入先行群」・「介入後行群」)に分け、「介入先行群」はコラージュを1か月に1回(計3回)実施し、「介入後行群」は今まで通りの通所介護サービスのプログラムを続ける、「介入先行群」のコラージュが終了後に入れ替えを行い、「介入後行群」にも同様にコラージュを実施する計画とした。平成28年度は、協力施設との日程調整と調査対象者の選定を行い、研究を開始したところであり、今後は平成29年度にかけて介入研究を継続し、作成したコラージュ作品から高齢者の孤独感の程度による特徴を分析するとともに、コラージュの有効性について研究結果をまとめていく予定である。平成28年度から平成29年度にかけて実施する介入研究である。年間計画にそって研究が進められているため、おおむね順調に進展している。平成29年度は、平成28年度から引き続き、質問の内容を理解し回答が可能、3分程度の立位保持が可能な通所介護サービスを利用している65歳以上の地域在住高齢者に対して、コラージュを実施してもらい、質問紙調査(孤独感・ソーシャルサポート・ソーシャルネットワーク・フェイススケール)と血圧・脈拍・自律神経機能の測定を実施した。「介入先行群」のコラージュ終了後に入れ替えを行い、「介入後行群」にも同様にコラージュを実施する計画を継続して実施した。

平成28年度と平成29年度で4施設30名の調査対象者に対して介入研究が終了したため、平成30年度では、作成したコラージュ作品から高齢者の孤独感の程度による特徴を分析するとともに、質問紙調査と自律神経機能の測定結果からコラージュの有効性についてまとめていく予定である。平成28年度から平成29年度にかけて介入研究を実施する予定で計画し、平成29年度までに4施設30名の調査対象者への介入が終了した。年間計画にそって研究が進められているため、おおむね順調に進展している。本研究の目的は、高齢者の孤独感を緩和する方法として、コラージュの有効性を検証することである。具体的な目的は、1.高齢者の孤独感の程度によるコラージュの特徴を明らかにすること、2.高齢者の孤独感に対するコラージュの有効性を検証することである。近年、孤独感が高齢者の健康に影響を及ぼす要因のひとつであることが報告されている。そのため、健康問題に関わる専門職者にとって、孤独感を抱えているにも関わらず、表出できていない高齢者を見出し、対処困難な高齢者の孤独感を緩和する支援が重要である。平成2830年度にかけて、質問の内容を理解し回答が可能、3分程度の立位保持が可能な通所介護サービスを利用している65歳以上の地域在住高齢者に対して、コラージュを実施してもらい、質問紙調査(孤独感・ソーシャルサポート・ソーシャルネットワーク・フェイススケール)と血圧・脈拍・自律神経機能の測定を実施した。コラージュは、コラージュ・ボックス方式で実施した。クロスオーバーデザインとし、調査対象者を2群(「介入先行群」・「介入後行群」)に分け、「介入先行群」はコラージュを1か月に1回(計3回)実施し、「介入後行群」は今まで通りの通所介護サービスのプログラムを続けてもらった。「介入先行群」のコラージュ終了後に入れ替えを行い、「介入後行群」にも同様にコラージュを実施した。調査対象者は4施設32名であった。全てのプログラムに参加できた21名を分析対象とした。平成30年度では、作成したコラージュ作品から高齢者の孤独感の程度による特徴を分析し、質問紙調査と自律神経機能の測定結果からコラージュの有効性について分析を進めた。平成28年度から平成29年度にかけて介入研究を実施する予定で計画していたが、調査対象者の体調不良等で予定していた日程で調査を実施することができず、平成30年度(2018年度)まで調査期間を要することになった。さらに、2018年度に研究結果をまとめ、学会発表する予定であったが、研究者の業務多忙により、データの分析および研究結果をまとめることに時間を要してしまった。そのため、進捗状況として遅れている状況である。これらのことから、論文投稿および報告書の作成、報告書の研究協力施設への郵送、学会での発表を今後予定している。平成29年度は、平成28年度から引き続き研究を継続していく予定である。そして、作成したコラージュ作品から高齢者の孤独感の程度による特徴を分析するとともに、コラージュの有効性について研究結果をまとめていく予定である。平成28年度から平成29年度にかけて実施したコラージュの作品から高齢者の孤独感の程度による特徴を分析するとともに、調査対象者に実施した質問紙調査、自律神経機能の測定結果から、コラージュの有効性についてまとめていく予定である。
PCR法を利用した両生類胚の背腹軸決定因子の探索

本研究の目的は、両生類の初期胚における背腹軸の決定に関与する因子の分子的実態を探ることにある。そのため、differential display of PCR法を8-16 cell stageのXenopus胚に適用することを試みた。まず、8-16 cell stageのXenopus胚を背腹に分けてサンプリングするため、ジェリー層を除去した2-cell stageの胚をCa^<++>,Mg^<++> freeのPBS中で発生させ8-16 cell stageに達した段階で受精膜をはずし、各部域ごとの割球に解離して集め液体窒素を用いて急速に凍結保存することを試みた。次に、それぞれの凍結サンプルからグアニディウムチオシアネートを用いて、酸性フェノール、クロロホルム抽出法で、トータルRNAを得た。これらのRNAを出発点として、polyA primerを使ってのcDNAへの逆転写、polyTおよびランダムprimerを用いてのPCR、その産物の電気泳動による解析を試みつつある。残念ながら現時点において常に背側だけに特異的に出現する安定した産物はえられていない。今後これを繰り返し試み、目的の(背側に特異的なmRNA)の検出に勤める予定である。一方で、上記方法で得られたcDNA断片をプローブにしてスクリーニングするために、8-16 cell stageのXenopus胚からcDNAライブラリーを作製した。その結果、10^6程度のpfa/mlのライブラリーを得ている。また、上記の方法で何等かの因子が得られた時の、バイオアッセイの方法(のXenopus初期胚へのマイクロインジェクション、Xenopus初期胚を材料としたin situハイブリダイゼーション)の確立も同時にを試みつつある。
相互作用活性化エネルギーに基づく蛋白質制御剤の創出

細胞増殖シグナルに関わるがん標的分子ERK2と、その既知薬剤であるFR、CAY、SCHを選択し、速度論パラメータにおける温度依存性を解析した。FRとの相互作用においては、その変異体解析の結果、遷移状態では結合サイト周辺で脱水和、及び分子内相互作用の切断による構造の緩みが起きていることが示唆された。さらにCAYとSCHの解析から、遷移状態における活性化エンタルピーはより不利に、一方活性化エントロピーはより有利に変化し、両者のエネルギー差の大きさと、阻害濃度や解離速度定数の低さに因果関係があることが示唆された。当該年度では、extracellular signal-regulated kinase 2(ERK2)をモデル蛋白質として、その既存の薬剤との熱力学、速度論解析を行った。特に相互作用における活性化エネルギーに関する物理化学的解析を行い、構造情報と照らしながら、その分子認識メカニズム(遷移状態)の解明を行った。まず、野生型のERK2 (WT)とFR間の相互作用のSPR法で測定し、遷移状態、終状態それぞれの熱力学的パラメーターを算出した。その結果、終状態ではエンタルピー得かつエントエロピー損である熱力学的プロファイルが観察された。一方で遷移状態では、終状態に比べて、エントロピーの不利な寄与が小さいことが明らかとなった。(2)アミノ酸残基レベルでの精密解析ERK2ーFR間相互作用の結合サイト周辺において、終状態の結合形成には関係がないと想定されるアミノ酸をアラニンに置換した化合物を8種類作製し解析を行った。終状態の熱力学的パラメーターを比較すると、野生型と間で有意な差が存在しない変異体が多かった。このことは、アラニンに置換されたアミノ酸残基は終状態の結合形成には関わっていないことを示唆する。一方で、遷移状態の熱力学的パラメーターを参照すると、変異体は野生型に比べてΔH‡が減少し、ΔS‡が増大するという傾向が確認された。以上は、変異により置換されたアミノ酸残基が遷移状態において熱力学的な役割を果たしている可能性を示唆する。結合サイト周辺のアミノ酸残基をアラニンに置換することで、ΔH‡が減少し、ーTΔS‡が増大したことから、遷移状態におけるERK2の挙動は以下のように推測できる。すなわち、遷移状態では、結合サイト周辺のアミノ酸残基が分子内で形成していた結合が緩み、同時に化合物が接近することで脱水和が起こる。終状態では、分子内の結合は元に戻り、再び水和され、結合が完了するというモデルが考えられる。ERK2とリガンド間の遷移状態解析を行うにあたり、その相互作用の定量的な速度論解析が必要となる。そこでSPRを用いて、ERK2のセンサーチップへの固定化最適化を行い、再現性の高い速度論解析可能な系の構築に成功した。さらに活性化エネルギー解析を行うために、会合速度定数、解離速度定数の温度依存性を再現よく定量的に解析できる実験系の構築にも成功した。これに伴い、複数種のアミノ酸変異体に対する活性化エネルギー解析を実行することができた。以上のように、蛋白質とリガンド間の相互作用における活性化エネルギー解析を行うための基盤となるアッセイ系の構築ができた。本研究では,二状態反応におけるエネルギー遷移モデルを仮定し,プロセスに関する熱力学を定量的に解析し,そのから薬剤設計の新たな指針を提案することにチャレンジした。モデル蛋白質ー低分子薬剤として,細胞増殖シグナルに関わるがん標的分子ERK2と,その既知薬剤であるFR180204(FR, Ki=140 nM),CAY10561(CAY, Ki =2.0 nM),SCH772984(SCH, Ki =0.12 nM)を選択し,蛋白質ー低分子間結合の速度論パラメータにおける温度依存性を解析した。結合速度定数konをEyringの式から遷移状態に関する活性化エネルギー(ΔH‡, ΔS‡, ΔG‡)を得た。ERK2とFRの相互作用においては,その変異体解析の結果,遷移状態では結合サイト周辺で脱水和,及び分子内相互作用の切断による構造の緩みが起きていることが示唆された。さらにCAYとSCHの解析から,遷移状態におけるΔH‡はより不利に,一方ΔS‡はより有利に変化し,両者のエネルギー差の大きさと,阻害濃度や解離速度定数の低さに因果関係があることが示唆された。このように本研究は,蛋白質ー低分子薬剤間の相互作用おけるプロセスの一部を,速度論解析による活性化エネルギー変化から明らかにした。さらに,この活性化エネルギーには結合自由エネルギー変化ΔG=ΔHーTΔSにおけるΔSに関わる指標が含まれていることが示唆された。標的分子に対する薬剤設計において,Structure-based drug design(SBDD)はΔH制御に威力を発揮しているが,本研究より明らかとなったプロセス熱力学による観点は,Process-based drug design(PBDD)としてΔS制御の可能性を秘めているかもしれない。

次年度では、以下のポイントに注視して、ERK2とリガンド間相互作用メカニズムの解明に挑む。(1)他の阻害効果の異なる既存薬剤について活性化エネルギー解析を行う。(2)ERK2に対する低分子スクリーニングを実施し、ヒット化合物の取得を目指す。(3)物理化学的パラメータを活用して、薬剤と相互作用における蛋白質の動きとヒットバリデーションへの応用を検証する。創薬物理化学
戦後日本における地域アイデンティティの再編と地域伝統芸能に関する歴史社会学的研究

本研究課題では,戦後日本の地域社会における地域アイデンティティの再編成という問題について,地域社会における民謡や民俗芸能といった伝統芸能の変容とそれをとりまく文化的エージェントの関係性の分析を手掛かりとして明らかにすることを行った。戦後日本社会における地域アイデンティティの(再)編・地方新聞社・民謡及び民俗芸能研究者・商工会や青年会議所・保存会等)が取り結ぶ関係性とその変容を分析することを通じて,歴史社会学的に明らかにした。戦前期の1930年代に始まり,昭和30年代に起こった民謡ブームから,1990年代以降の民俗行政のバックアップを得て,各地で伝統芸能を用いた地域活性化を図ろうとする動きまでを,主に滋賀県湖南・湖東各地といった滋賀県のフィールドに寄り添い,近年活発化している江州音頭の県単位でのイベント化や観光化,地域アイデンティティの構築といった状況から,その一方での狭い各地域(字レベルの)までにおける江州音頭の併存状況を中心に,芸能の変容や併存するそれぞれの芸能の違いを確認し,その変化や差異が発生した社会的要因や場の違い,人間関係や諸エージェント間のネットワークによって成立しているかについて明らかにすると共に,そうした芸能の併存状況が一方では意識的・無意識的な芸能の使い分けや,また他方でそれぞれの芸能集団相互の対立や違和と,それぞれのネットワーク間の社会関係との結びつきについて明らかにした。こうした戦後における民謡・民俗芸能を手がかりとした地域社会のマクロ状況の変容に関する研究は希少であり,また現在にまで至る地域社会の戦後の社会変容を考える上で,極めて重要性の高いものであると考えられる。平成18年度においては、戦後日本の地域社会における地域アイデンティティの再編成という問題について、地域社会における民謡や民俗芸能といった伝統芸能の変容とそれをとりまく文化的エージェントの関係性に即して明らかにする上での、基礎的な調査を行った。具体的には文化財行政・観光産業・地方新聞社・民謡及び民俗芸能研究者・商工会・民俗芸能保存会等が取り結ぶ関係性とその変容を分析することを通じて、歴史社会学的に明らかにする作業を、主に滋賀県彦根市・東近江市における江州音頭、および北海道江差町における江差追分の事例に即して調査を行った。それぞれの地域における地域社会の近代化の中で、戦後における観光客誘致の活動や地域活性化という文脈において、それぞれの民謡や芸能が変容していったのか、またそれは地域社会における郷土意識の変化とどのように結びついていたのかについて、滋賀県においては地域の盆踊りであった江州音頭が、戦後において地域振興に向けた動きの中でその唄や踊りが再編されていくプロセスについて歴史的な調査を行うと共に、地域の盆踊りとしての江州音頭と「江州音頭フェスティバル」に代表される地域のイベント的なフェスティバルとの関係性について、関係者からのインタビューを中心として調査を行った。また江差町においては「追分会館」の設立と江差追分全国大会というフェスティバルが創出されるプロセスについて、資料面での洗い出しを行うと共に、会館やフェスティバル関係者を中心に、インタビュー調査を実施した。これらの成果を通じて、地域を代表する芸能なるものが「中央」との関係性の中で、またそればかりでなく地域社会における重層的なアイデンティティの関係性の中で形作られてゆき、また逆に人々のアイデンティティを変容させていくというプロセスについてその輪郭を描き出すことができた。
子宮体癌の転移・発生機序に関する基礎的解析

初年度では子宮体癌の転移に関連があると考えられるC-erbB-2遺伝子産物の受容体について、その発現の調節についての研究を行なった。まず体癌の転移リスク因子と考えられるエストロゲン非依存性増殖についてc-erbB-2発現との関連を調べた結果、エストロゲン依存性株ではc-erbB-2の発現がフォルボールエステル(TPA)にて容量依存的に刺激されるのに対し、非依存性株では常にc-erbB2発現が高く、TPAに不応性であることを発見した。最近ではc-erbB-2受容体の細胞外領域にエストロゲンが結合すること、そしてその後チロシンリン酸化活性が上昇することが明らかにされたが、この系はエストロゲン非依存型株では機能していないことが示唆される成績を得ている。さらにc-erbB-2遺伝子の5′flanking領域では、非定型的なエストロゲン結合領域があるが、この塩基配列がエストロゲン受容体と結合することを明らかにした。この結合領域の機能的意義については現在検討中である。1)リンパ節転移を特徴づける蛋白発現:転移能を獲得した株では全て親株にはないLECAM-1を発現し、転移株はリンパ節に特異的なhoming受容体を持つことが明かとなった。さらには基底膜蛋白nidogenの強い発現(mean±SD=300±75%、p<0.05、対親株比)が転移性株に特異的に見られ、これらの転移性細胞における基底膜の産生能の亢進が強く示唆された。さらに興味あることに転移性株ではERが親株の1/3にまでに減少しており、逆にPRは消失していた。ErbB-2は転移株により強く(mean±SD=250±80%、p<0.05)発現していた。一方EGFR,CD44,MT-MMP,ERCC,AMFR,FASは親株、転移性株いずれも同様に強い発現があり、これらの機能はむしろ原発巣での癌細胞の浸潤という特性に関係するものと推測した。2)転移性の体癌株、頸部腺癌株、卵巣癌株におけるc-erbB-2のプロモーター領域に親株とは異なるpolymorphysmを検出した。gel retardation assayでは、EREに結合する複数の蛋白を検出した。これらの結合はcoldのEREのみならず、c-erbB-2のプロモーター領域に存在する3つのERE(♯1:GGTCA ACGGATCC,♯2:GGTCAGGGGCTCC,♯3:GGTCATGGTGGCA)を含むoligomerによっても抑制され、これらの蛋白のERE結合が特異的であることが確認された。3)臨床へのフィードバツク:臨床症例における検討では転移リンパ節において高いnidogenの発現とERの発現低下を確認した。LECAM-1は背景のリンパ球に発現があるため特異的な発現パターンは確認できなかったが、転移巣から樹立した体癌株(n=2)ならびに卵巣癌株(n=3)ではLECAM-1発現が見られた。これに反して原発巣からの樹立株(n=3)にはこのリンパ節homing受容体は検出されなかった。c-erbB-2のプロモーター領域の解析では体癌(n=25)の56%,卵巣癌(n=28)の46%そし頸部腺癌(n=15)の53%に健常組織あるいは原発巣では見られないpolymorphysmを発見した。これらの症例は癌種を問わず予後不良症例でり、とくに多型性にmtslの欠失がこのplymorphysmに伴う症例では早期に肺、肝などへの遠隔転移が起こる傾向を確認した。一方癌抑制遺伝子mtslの欠失は、腫瘍に隣接する健常組織では検出されず、原発巣では全体症例の10%に認めたが、転移巣では50%で検出した。リンパ節転移の選択的治療への応用:nude mouseにおいてErbB-2に対するmonoclonal抗体、CB-11+cisplatin群に有意の生存期間の延長を得た(buffer=CB-11:45日、cisplatin単独:52日、CB-11+cisplatin:63日、n=15、p<0.05)。このことから抗体によるErbB-2の細胞外domainを抑制することで転移性腫瘍のcisplatinに対する感受性が亢進することが示された。またERを導入し過剰発現させた転移性の体癌株では、腫瘍接種から大動脈リンパ節転移を伴った癌性腹膜炎発症までの時間が有意に延長し(平均35vs67日、p<0.05)、ERを過剰発現することで転移能の低下が起こることが観察された。Ishikawa株(ISIW)よりestrogen非依存性株(EIIL)を分離し、これをnude mouse皮下に接種した。接種部位に発生した腫瘍を切除後、局所再発と全身転移を来たしたmouseより腹水ならびに転移巣から転移性EIIL(mEIIL)を得た。(1)分離したmEIILはnude mouse腹腔内への投与で100%癌性腹膜炎と肝転移を起こしたが、親株であるISIWでは癌性腹膜炎と肝転移は見られなかった(n=10,p<0.001,χ^2分析)。(2)原発巣、転移巣のmEIILはErbB-2を免疫組織学的に発現しており、さらに肺においては腫瘍塞栓も認められ、血管内にある腫瘍塊にもErbB-2染色が陽性であった。

(3)RT-PCRで検討したErbB-2の発現は原発巣、転移巣で有意に高く(p<0.05)またnidogenの発現は転移巣で最も高かった(p<0.05)。(4)aromataseの発現はin vivoにおいてのみ認められた。またEGF受容体(EGF-R)発現はin vitro,in vivoいずれにおいても同様で、原発巣と転移巣の間には差を認めなかった。(5)in vitroのestrogen(E)非存在下ではEIILは複数のE responsive bindingdomain結合蛋白を発現しているが、一旦in vivoに移植された後は単一のERのみを発現した。今回我々はEIILから転移形質を有する亜株mEIILを分離した。この転移能はnude mouseの継代移植で保たれており、形質として固定されたと考えられ転移の成立の研究に有用と考える。