hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
メニエール病におけるホルモン分泌・自律神経機能の日内リズムに関する研究

メニエール病症例を対象に、心拍数や血圧変動解析から経時日内変化を日内リズムの指標として、メラトニンをはじめとした内分泌ホルモンの日内変動を比較検討し、メニエール病におけるリズム障害の有無を研究した。メニエール病患者における唾液中メラトニン濃度の日内分泌リズムをsingle cosinor法を用いて健常成人と比較検討した。また、ストレス、睡眠時間なども調査し、相関性を検討した。6点の標本採取により、その濃度の日内リズムはSingle cosinor法を用いることで、平均値、振幅、頂点位相(最大値になる時刻)で規定される。メラトニン濃度測定にはRIAkitを用いて、唾液中蛋白濃度に対するメラトニンの相対濃度を使用した。メニエール病群(n=13)ではメラトニン濃度の平均値が0.8±0.3pg/mg振幅が1.0±1.2pg/mgで健常成人群の3.1±2.4pg/mg、4.7±1.0pg/mgに比べて有意に低い値であった。また、頂点位相は22.2±3.4hrで、健常成人の25.9±1.9hrとの間に有意な差はなかったが、個々のばらつきは有意に大きい結果となった。ストレスや睡眠時間との相関性はなく、また、臨床データ(聴力、CP%、罹病期間)との相関性も認めなかった。片頭痛はメラトニンと関連性があり、またメニエール病とは類似の病態を持つ可能性が示唆されているため、片頭痛の有無によるメラトニン濃度の違いを検討した。片頭痛の既往があるメニエール病症例のほうが、片頭痛なしの症例に比べてメラトニン濃度が低い傾向がみられた。このことから、メニエール病症例においてはメラトニン産生分泌低下があるとともに、pineal circadian irregularityが存在すると考えられた。序説:禁煙増加するストレス病症例においては、生体リズム障害がその背景因子として存在する可能性がある。メニエール病においても、その発症には時刻関連性が示唆されており、その発症メカニズムに生体リズム障害の関与が考えられる。そこで、日内リズムの表現型であるメラトニン(松果体ホルモン)を用いて検討した。方法:対象はメニエール病症例13名である。6、9、12、17、21、23時において、唾液を専用容器を用いて採取した。測定にはRIAkitを用いて、唾液中タンパク濃度に対するメラトニンの相対的濃度を測定した。また、single cosinor法を用いて、24時間における平均値、振幅、頂点位相を計測した。また同時に、ストレススコアー、睡眠時間、起床時聞などを質問表によりアンケートした。結果:平均値は0.8±0.3pg/mg、振幅は1.0±1.2pg/mgで健康成人群(3.1±2.4、4.7±1.0)に比べて、有意に低かった。頂点位相は23.2±3.4hrで、健常成人群(25.9±1.9hr)に比べて、2群で有意な差はなかったが、その分散は有意にメニエール病群で大きかった(P=0.04)。聴力レベル、CP%、ストレススコアーなどとメラトニン濃度との間に有意な相関は見られなかった。考察:メニエール病症例においては日内リズム障害、とくにpineal circadian irregularityが存在する可能性が示唆された。
TLR発現制御におけるCFTR遺伝子変異の影響と分子シャペロンの役割

1.転写レベルでのTLR発現制御機構の解明最近,我々は,CFTRに変異を持つ嚢胞性線維症(Cystic Fibrosis : CF)患者由来の上皮細胞において,TLR2,TLR4およびMD-2の発現量が先天的に上昇していることを見出し,CF患者において細菌感染による炎症応答反応が増強することを明らかにした.本年度は,どのようなメカニズムでTLR2の発現が上昇しているかについて検討した.その結果,DNAメチル化阻害剤である5-azacytidineを用いた実験から,CF細胞におけるTLR2の発現上昇にはTLR2遺伝子プロモーター領域のDNAメチル化が関与していることが示唆された.以上の結果より,CFTR遺伝子変異によって細胞内のepigeneticな遺伝子変化が引き起こされTLR2遺伝子の発現上昇が起こり,その結果,細菌感染による炎症反応の増強が起こりやすくなる可能性が示唆された.2.タンパク翻訳後レベルでのTLR発現制御機構の解明N型糖鎖を認識しさまざまなタンパク質のプロセッシングに関与しているER分子シャペロンCalnexin, Calreticulinのアデノウイルス発現系(Ad-CNX, Ad-CRT)を構築した.また,TLR4-WTおよびTLR4-299/399(細胞膜上に発現しないTLR4の変異体)の細胞内挙動を検討するためのGFP融合タンパク発現ベクターの作製を行った.さらに,TLR4,TLR4/MD-2,TLR4/MD-2/CD14をexogenousに恒常的発現するCHO細胞およびTLR4-YFP, TLR4-YFP/MD-2をexogenousに発現するHEK293細胞を入手し,各種実験を開始した.現在までのところ,免疫蛍光法および免疫沈降法を用いた実験の結果,TLR4の細胞内プロセッシング機構にCNX, CRTの両分子が関与している可能性を示唆するデータを得ている.次に,LPS処理によって引き起こされるTLR4 endocytosisが,どのような経路を介して起こるかを検討した.その結果,nystatin処理によってTLR4 endocytosisは阻害され,chlorpromazineによって阻害されなかった.したがって,TLR4 endocytosisはcaveolaeを介した経路で起こることが示唆された.1.転写レベルでのTLR発現制御機構の解明最近,我々は,CFTRに変異を持つ嚢胞性線維症(Cystic Fibrosis : CF)患者由来の上皮細胞において,TLR2,TLR4およびMD-2の発現量が先天的に上昇していることを見出し,CF患者において細菌感染による炎症応答反応が増強することを明らかにした.本年度は,どのようなメカニズムでTLR2の発現が上昇しているかについて検討した.その結果,DNAメチル化阻害剤である5-azacytidineを用いた実験から,CF細胞におけるTLR2の発現上昇にはTLR2遺伝子プロモーター領域のDNAメチル化が関与していることが示唆された.以上の結果より,CFTR遺伝子変異によって細胞内のepigeneticな遺伝子変化が引き起こされTLR2遺伝子の発現上昇が起こり,その結果,細菌感染による炎症反応の増強が起こりやすくなる可能性が示唆された.2.タンパク翻訳後レベルでのTLR発現制御機構の解明N型糖鎖を認識しさまざまなタンパク質のプロセッシングに関与しているER分子シャペロンCalnexin, Calreticulinのアデノウイルス発現系(Ad-CNX, Ad-CRT)を構築した.また,TLR4-WTおよびTLR4-299/399(細胞膜上に発現しないTLR4の変異体)の細胞内挙動を検討するためのGFP融合タンパク発現ベクターの作製を行った.さらに,TLR4,TLR4/MD-2,TLR4/MD-2/CD14をexogenousに恒常的発現するCHO細胞およびTLR4-YFP, TLR4-YFP/MD-2をexogenousに発現するHEK293細胞を入手し,各種実験を開始した.現在までのところ,免疫蛍光法および免疫沈降法を用いた実験の結果,TLR4の細胞内プロセッシング機構にCNX, CRTの両分子が関与している可能性を示唆するデータを得ている.次に,LPS処理によって引き起こされるTLR4 endocytosisが,どのような経路を介して起こるかを検討した.その結果,nystatin処理によってTLR4 endocytosisは阻害され,chlorpromazineによって阻害されなかった.したがって,TLR4 endocytosisはcaveolaeを介した経路で起こることが示唆された.
めっきプロセスのゼロエミッション化

無電解めっき法惇電子部品工業等で広く用いられている製膜技術の一つであるが,めっき浴が不安定であり寿命が短く,さらにその廃液は錯化剤,還元剤を含むため通常の廃液処理が困難であり,環境負荷が大きい技術と言える。本研究では,これまでの廃液処理という考え方ではなく,めっきプロセスのゼロエミッション化の観点から,無電解めっき廃液を電気めっきに利用し,その後さらに無電解めっきに利用する新しいめっきシステムの可能性について,次亜りん酸を還元剤とする無電解ニッケルめっきを例として検討した。その結果以下の諸点を明らかにした。1.亜りん酸を50g/dm^3を含む無電解ニッケルめっき老化液を用いて,電気めっきを行った結果電流密度3040mA/cm^2,浴pH34の条件で,P含有率1213w%の光沢のある良好なめっき膜が得られる。また電流効率は70数%以上でこのオーダーは工業的観点からも十分満足できる値である。2.錯化剤であるくえん酸ナトリウムの増大は電流効率を著しく減少させるが,めっき浴にニッケルイオンをフィードすることにより電流効率を70w%以上に上昇させることができる。3.無電解ニッケルめっき液の老化の主たる原因である亜りん酸は,電気めっきを行うことによりめっき膜中にリンとして固定,除去されることから,電気めっき後のめっき浴を再び無電解めっき浴として利用できる可能性がある。4.本研究の結果,無電解めっきと電気めっきを組み合わせためっきプロセス,すなわちゼロエミッションを指向した新しいめっきプロセスを提案した。5.今後は,本研究で提案しためっきプロセスを実際のめっきプロセスに対する適用性について検討し,さらにニッケル以外の種々の無電解めっきに対して検討する予定である。
細胞間伝播を導くタウの細胞外放出の分子機構の解明

近年タウの凝集が細胞間を伝播することでタウ病理が進展する機構の存在が明らかになったが、そのメカニズムは十分明らかになっていない。本研究では、タウの細胞間伝播において、細胞内在化し核となって新規タウ凝集を促進する活性をseeding活性と定義し、これを指標とすることで伝播を担うseedタウの細胞外分泌機序を明らかにすることを目標とした。Seeding活性の検出にはCFP、YFPがそれぞれ融合したRDを発現し、凝集体形成依存的にFRETを生じるタウbiosensor細胞を用いることにした。まずP301S変異型全長タウを過剰発現する細胞に対し、タウ線維を導入することで、タウ凝集体を形成する伝播のドナー細胞を作成した。その培養上清をタウbiosensor細胞に添加したところ、FRETが生じ、タウの細胞間伝播が細胞外腔を介して生じることが確かめられた。Seeding活性は高分子量域に特異的に検出され、モノマーとは異なるタウ分子によって伝播が生じていることが示唆された。さらに培養上清を抗タウ抗体によってimmunodepletionすると、seeding活性が減少し、タウの伝播は抗体と結合可能なフリーなタウ分子によって生じていることが考えられた。その一方でドナー細胞培養上清のexosome画分においても、seeding活性が検出され、exosomeを介した細胞間伝播も示唆された。本研究によって、タウの細胞間伝播には抗タウ抗体が直接結合可能なフリーなタウによるものと、抗体が結合できない細胞外小胞exosomeによって生じる伝播の少なくとも二種類のパスウェイが存在することが明らかになった。Seed tauのexosome非依存的タウな分泌機構は未だ不明であり、今後明らかにしていく必要がある。28年度が最終年度であるため、記入しない。NFTの細胞間伝播における鍵経路であるタウの放出のメカニズムを明らかにするために、近年細胞質タンパク質の分泌経路の一つとして知られているexosomeやectosomeなどの細胞外小胞の関与を検討し、内因性タウの9割以上が、これらの細胞外小胞に依存しない経路で分泌をうけていることを明らかにした。このような細胞外小胞に依存しないタウの分泌経路についてさらに検討するために、初代培養神経細胞から分泌されたタウを生化学的に解析し、細胞外においてタウは断片化型と全長型で存在していることを見出した。さらにin vivoマイクロダイアリシス法を用いて回収したマウス脳間質液中のタウについても同様の結果を得た。細胞外の全長型タウは細胞内のタウと異なり、複数のサイトにおいて脱リン酸化を受けた状態で存在していることも明らかになった。さらに神経活動を亢進すると、タウの分泌が上昇するだけでなく、分泌に先行して、細胞内のタウが脱リン酸化することから、タウの分泌と脱リン酸化に何らかの関連があることが示唆された。さらに、exogenous seedを添加することで、タウオパチー患者で見られるタウの細胞内蓄積を再現した培養細胞モデルを構築し、モノマー型タウだけでなく、高分子量型タウも細胞外へ分泌されていることを見出し、異常型タウの分泌機構を解析する準備が整った。平成27年度の研究実施計画は1exogenous seedの添加により、培養細胞内にタウ凝集体を形成する、NFT伝播の細胞モデルを利用し、高分子量の異常型タウの分泌を検出する実験系を構築すること、2このような異常型タウの分泌におけるexosomeや神経活動の役割を明らかにすることとしていた。1に関してはseed添加によりタウ凝集体を形成した細胞からモノマー型タウに加えて高分子量型タウの分泌を検出することができ、異常型タウの分泌メカニズム解析につなげることができた。またexosomeに関しては内因性のタウ分泌の90%以上がexosome非依存的に分泌されていることを明らかにした。2の神経活動と高分子量異常型タウ分泌との関係を検討するには至らなかった一方で、野生型の初代培養神経細胞を用いた検討で神経活動がタウの分泌に先行して細胞内タウを脱リン酸化することが見出され、exosomeなどの細胞外小胞を介さないタウの分泌メカニズム解明につながる可能性のある新知見が得られたため、おおむね順調に進展していると判断した。

本研究によって、タウの細胞間伝播には抗タウ抗体が直接結合可能なフリーなタウによるものと、抗体が結合できない細胞外小胞exosomeによって生じる伝播の少なくとも二種類のパスウェイが存在することが明らかになった。Seed tauのexosome非依存的タウな分泌機構は未だ不明であり、今後明らかにしていく必要がある。細胞外小胞を介した分泌経路がタウ分泌の経路の主要なパスウェイではないことが示唆されたことに加えて、神経活動がタウの分泌上昇とともに、タウの脱リン酸化を生じるという実験結果が得られた。そこで今後は神経活動依存的なタウ分泌と脱リン酸化の因果関係について明らかにしていく。またタウオパチー患者で見られる細胞内タウ蓄積を再現する神経細胞を構築し、神経活動と高分子量異常型タウの分泌の関連について検討をすすめる。28年度が最終年度であるため、記入しない。
羊水由来細胞を応用した組織マクロファージ再構築による萎縮唾液腺の再生

本研究の目的は、周産期付属物である羊水から採取した細胞群を培養・応用することで障害あるいは機能低下唾液腺の効果的な再生方法を開発することである。免疫寛容能が非常に高いと考えられる羊水由来の細胞群に我々が培ってきた特殊な培養法を応用し、唾液腺障害モデルマウスに投与することで、障害を受けた唾液腺組織再生への有効性を明らかにする。我々は周産期由来の細胞、特に羊水中に含まれる単核球成分を採取・培養し、組織マクロファージを移植することで障害あるいは機能低下唾液腺を再生する計画であった。院内倫理委員会から研究の承諾を得た後、当院産婦人科と連携し、予定帝王切開手術で周産期産物の採取方法を確立した。その後、予定帝王切開手術でヒト羊水、羊膜、臍帯、臍帯血を採取し、それぞれ単核球を分離し、解析を行った。目的の羊水中は想定より胎児の角質が多く含まれており、単球分離は困難であり、また羊水中に含まれる単核球成分も少量であった。またフローサイトメトリーの結果でも目的のマクロファージ表面マーカー(F4/80+、CD45+、CXCR1、CD169、CD11b,CD206)の発現はほとんどなかった。また羊膜上の細胞を採取したが、羊膜および臍帯には単核球より幹細胞が多く、単核球の採取はこちらも困難であった。そこで我々が培ってきた特殊培養方法(5G培養)を用いて羊水中の単核球成分の培養を試みたが目的のマクロファージの培養は困難であった。そこで我々は臍帯血に着目し、単核球を分離、マクロファージの培養を試みている。様々な因子を使用し、現在形態上はマクロファージの発現を認めている。現在解析途中であり、移植に最適なマクロファージの培養方法を思案している段階である。また羊水中に存在している単核球の最適な採取方法を模索している段階である。組織移植は2年目に引き継ぐ予定である。羊水中に含まれる単核球を採取し、それを培養する予定であったが、羊水中には胎児の角質が多く含まれており、想定より単核球成分の抽出が困難であった。しかしながら当初の予定とは違うが臍帯血から抽出した単核球では良好な解析結果となっている。最適な羊水からの単核球抽出方法も思案している最中である。以上の事を踏まえると当初の計画よりはやや遅れているが、着実に進んでいると考えられる。【単核球の採取】現在、臍帯血由来の単核球成分の採取は確立しているが、本来の目的である羊水中の単核球成分の採取はまだ確立していない。胎児の角質が多いため予定帝王切開で採取可能な羊水では単核球分離は困難であるため、妊娠16週ころに実施される羊水検査で採取できる羊水から単核球分離し、抽出・培養が可能か確認を行う。【唾液腺への定着・免疫寛容能の解析】上記培養で抽出した羊水や臍帯血由来のマクロファージを、放射線照射モデルマウスに直接投与し、唾液腺へのマクロファージ定着の確認を行う。それと同時に免疫寛容能を確認するため唾液腺組織中のTリンパ球を抽出し、活性化リンパ球の表面抗原をフローサイトメトリーにて解析する、また唾液腺中の炎症サイトカインや遺伝子発現をELISA法、RT-PCR法などで解析する。【唾液腺再生能の解析】回収した細胞を申請者らのグループが既に確立している頭頸部放射線照射による唾液線萎縮モデルマウスに対して直接投与を行い、組織Mφを中心とした羊水、臍帯血由来の細胞による血管新生や抗炎症作用などの組織再生効果の有効性を明らかにし、既に申請者らによって臨床研究が進められている末梢血由来細胞との効果の比較検討を行う。

様々な因子を使用し、現在形態上はマクロファージの発現を認めている。現在解析途中であり、移植に最適なマクロファージの培養方法を思案している段階である。また羊水中に存在している単核球の最適な採取方法を模索している段階である。組織移植は2年目に引き継ぐ予定である。羊水中に含まれる単核球を採取し、それを培養する予定であったが、羊水中には胎児の角質が多く含まれており、想定より単核球成分の抽出が困難であった。しかしながら当初の予定とは違うが臍帯血から抽出した単核球では良好な解析結果となっている。最適な羊水からの単核球抽出方法も思案している最中である。以上の事を踏まえると当初の計画よりはやや遅れているが、着実に進んでいると考えられる。【単核球の採取】現在、臍帯血由来の単核球成分の採取は確立しているが、本来の目的である羊水中の単核球成分の採取はまだ確立していない。胎児の角質が多いため予定帝王切開で採取可能な羊水では単核球分離は困難であるため、妊娠16週ころに実施される羊水検査で採取できる羊水から単核球分離し、抽出・培養が可能か確認を行う。【唾液腺への定着・免疫寛容能の解析】上記培養で抽出した羊水や臍帯血由来のマクロファージを、放射線照射モデルマウスに直接投与し、唾液腺へのマクロファージ定着の確認を行う。それと同時に免疫寛容能を確認するため唾液腺組織中のTリンパ球を抽出し、活性化リンパ球の表面抗原をフローサイトメトリーにて解析する、また唾液腺中の炎症サイトカインや遺伝子発現をELISA法、RT-PCR法などで解析する。【唾液腺再生能の解析】回収した細胞を申請者らのグループが既に確立している頭頸部放射線照射による唾液線萎縮モデルマウスに対して直接投与を行い、組織Mφを中心とした羊水、臍帯血由来の細胞による血管新生や抗炎症作用などの組織再生効果の有効性を明らかにし、既に申請者らによって臨床研究が進められている末梢血由来細胞との効果の比較検討を行う。
主観的評価理論の企業内部人事データに基づく実証分析

本年度は、(1)主観評価がマルチタスクインセンティブを付与するために使われているか、及び(2)主観評価におけるバイアスが、離職などのコストをもたらすかに関する研究を行った。実証分析は、日本有数の自動車販売会社の人事データ、販売実績データ、及び課長ー販売員の組み合わせデータをすべて接合することにより行った。目的(1)に関しては、新人比率をメンタリングの重要度を表す指標としてもちい、さらに法人率を長期顧客関係の重要度を表す指標として用い、これらの指標が高い場合、評価をつける際の売り上げに付与されるウエイトが減ることを示した。これは、一般的なマルチタスク・プリンシパルーエージェントモデルの理論的含蓄と一致する。目的の(2)に関しては、評価推定式の残差をバイアスの指標として用い、残差が負の場合、離職の確率が高く、評価に対する満足度が低いことを示唆した。これは、主観評価のバイアスがモラルを低下させ、離職を増加させているという仮説と一致する。研究概要にのべた論文を執筆し、Singapore Management Universityにて論文を発表した。これらのコメントを基に、論文を修正し、海外学術誌に論文を投稿したところである。今後の研究の推進方針に関しては、以下の2つのタスクにフォーカスする。まず第一であるが、論文を学術誌に投稿した。この投稿に対する返答が数か月後に帰ってくる。帰ってきた後、もしRevise and resubmitであったとしたら、レフェリーのコメントに答えて、いち早く論文を学術誌にアクセプトさせることを目標とする。もし、掲載不可になったとしたら、その場合もレフェリーのコメントを反映させていち早く再投稿へと持っていく。第二であるが、上に述べた論文から派生した新たなトピックに関して論文を書き始める。その新たなトピックとは、店長が販売員に与える影響の実証研究である。我々のデータの強みは、店長ー販売員の組み合わせが分かることである。さらに、店長はある程度の年数いると、配属が変わるため、店長固定効果が推定可能である。よって、この論文のための推定、及び執筆を進める。現在のコンピュータ、時々問題が起こるようになっているため、コンピューターを購入する予定であったが、これを引き延ばした。。携帯用のプロジェクターやプリンターなどの物品の購入を先延ばしにすることにしたため、若干の余りが生じた。本年度は、それらの物品の購入を行う。様々な推定に対応するように、速度の速いコンピューターを購入する予定である。
細胞内情報伝達系を包括的に標的とした新規腎癌治療法開発のための研究

私たちは腎癌の80%以上を占める淡明細胞型腎癌の原因は癌抑制遺伝子であるvon Hippel-Lindau(VHL)遺伝子の不活性化であることを今まで報告してきました。しかし、VHL遺伝子の不活性化が生じた癌細胞がどのようにして生体内の制御をはずれて自律的に増殖を始め、最終的に癌を引き起こすのか、そのメカニズムの詳細は不明でした。今回、私達は細胞の増殖や、形態、運動性を制御すると言われている肝細胞成長因子(HGF/SF)の受容体型チロシンキナーゼであるMET蛋白が淡明細胞型腎癌細胞内で高発現し常に活性化していることを明らかにし、さらに、このMET蛋白の活性が腎癌細胞に正常VHL遺伝子の再導入することによって抑制されることを明らかにしました。また、正常VHL遺伝子の再導入すると、MET蛋白の活性を介して細胞間接着構造に変化を起こすことも同時に明らかにしました。そこで腎癌細胞内のMET蛋白の活性をK252aによって阻害したところ、細胞の増殖や造腫瘍1生が抑制されました。以上の結果を踏まえると、VHL遺伝子の不活性化が生じると、MET蛋白の活性化が引き起こされ、その結果、腎細胞が正常上皮の細胞間接着機能を失い、自律的な増殖、運動性、しいては造腫瘍性が誘導されることが、腎細胞癌の発生メカニズムの一つと考えられました。現在は、MET蛋白に対する特異的阻害剤が臨床的に腎癌の治療薬となりうるのではないかと考え、その可能性について検討中です。私たちはVHL遺伝子の異常が起きた際のヒト腎癌細胞内の変化を俯瞰的に観察し、新たな知見をいくつか見出してきました。その中でも注目すべきは、淡明細胞型腎癌の原因であるVHL遺伝子産物の不活性化が、細胞の増殖、形態、運動性などに関わる様々な細胞内情報伝達系を制御するきわめて重要な細胞内分子であるタイプの異なった複数のチロシンキナーゼの活性を誘導しているという点です。今回、私達は肝細胞成長因子の受容体であるMET蛋白というチロシンキナーゼが、VHL遺伝子産物の不活性化によって活性化されることを明らかにしました。さらに、MET蛋白を含む数種類のキナーゼ活性を阻害することが知られているK252aという薬剤が樹立されたヒト腎癌細胞786-0,UMRC-3,UMRC-6の増殖を阻害すること、ヌードマウスにおけるUMRC-3の造腫瘍性を阻害することも明らかにしました。そして、この効果が受容体型チロシンキナーゼであるMET蛋白の活性を抑制することを介していることを実証するために、SiRNAを用いて腎癌細胞におけるMET蛋白の発現を抑制したところ、予想通り腎癌細胞の増殖が抑制されることを明らかにしました。また同時に、手術で得た臨床検体を用いて腎細胞癌組織内におけるMET蛋白の発現、活性化を測定したところ、腎癌組織内では進行度、悪性度に関わらす、常に一定の割合でMET蛋白は高発現、活性化していることを明らかにしました。以上の結果から、MET蛋白はヒト腎癌の発癌において重要な役割を果たしており、腎癌の新たな治療標的となる可能性があると思われ、平成18年度はその詳細について検討を進めていく予定です。今回、私達はこのVHL遺伝子の不活性化が、肝細胞成長因子(HGF/SF)の受容体型チロシンキナーゼであるMET蛋白の活性化を引き起こすことを明らかにしました。

このMET蛋白はHGF/SFによって活性化されると、様々な細胞の増殖を引き起こし、運動性を誘導することが知られていたため、VHL遺伝子の不活性化によってMET蛋白が活性化されることによって癌細胞が自律的に増殖、浸潤を引き起こすのではないかと予測されました。そこでMET蛋白の活性を特異的に阻害する薬剤を腎癌細胞に投与したところ、腎癌細胞の増殖や運動性、造腫瘍性が抑制されることをを明らかにしました。また、本当にMET蛋白による細胞内シグナルを阻害することで腎癌細胞の増殖が抑制されるのか確認するために、SiRNAを用いて腎癌細胞内のMET蛋白の発現を阻害したところ、やはり腎癌細胞の増殖は抑制されました。さらに、実際に手術で摘出した標本を用いて腎癌組織中のMET蛋白の活性化状態を調べたところ、70%以上の腎癌組織中で正常腎組織と比較してその活性が亢進していることを明らかにしました。以上の結果を踏まえると、VHL遺伝子の不活性化が生じると、MET蛋白の活性化が引き起こされ、その結果、腎細胞の自律的な増殖、運動性、しいては造腫瘍性が誘導されることが、腎細胞癌の発生メカニズムの一つと考えられました。現在は、MET蛋白に対する特異的阻害剤が臨床的に腎癌の治療薬となりうるのではないかと考え、その可能性について検討中です。
宇宙におけるカオス現象と階層構造

宇宙(コスモス)の形成進化を理解することは人類(ミクロコスモス)の究極の目的の一つであるが、近年急速に発展した非線形力学系理論の考え方を駆使して、宇宙構造を解明し、宇宙素粒子の創成から地球環境までの生々流転を理解することを目標に重点領域研究を企画する準備を行った。結論として、重点領域研究の申請は、池内了教授を代表者として国立天文台から提出することとなった。本研究には関連する専門分野が多いので、集中的な討論集会以外に大小9の研究会や専門的作業集会において、天体カオス現象研究のあり方について討論を行った。これらの集会を時間順に以下に列挙する。1.恒星非動径振動作業会(8月野辺山電波天文台)2.天体差動回転研究会(8月京大)3.JNLTの光学撮像装置研究会(9月木曽天文台)4.太陽系研究会(9月京大)5.天体カオス系研究会(11月国立天文台)6.天体差動回転研究会(12月名大)7.質量放出星作業会(12月野辺山電波天文台)8.銀河分布画像処理作業会(2月近畿大)9.不規則変光星作業会(3月岡山天体物理観測所)。重点領域研究の申請に関しては、1.天体カオス現象の研究は宇宙観の形成に不可欠であり、重点領域研究に適当である。2.統計力学、流体、生物物理等で力学系理論とかかわりを持つ数学者物理学者等を加えた研究者構成とする。3.ワークステーションを拠点校に設置して各分野間研究交流を円滑にする。4.研究の申請は事務組織のある国立天文台で池内了教授を代表者とするのが適当である。新しい学問分野を開拓するには博物学的手法が有効であるが、次頁の文献(1)は博物学の数学的方法論を提唱した。その具体的な例として、典型的なカオス系と目される不規則変光星の研究を世界に呼びかける目的で文献(2)を論文として出した。その他本研究と関連する研究は数多いが、各研究会報告にゆだねることとする。
大気中一酸化炭素の高精度測定とその循環の研究

平成12年度には、平成11年度に開発した高精度CO濃度測定システムを用いて広範な観測を実施した結果、以下のような成果が得られた。(1)日本上空の対流圏における高度別のCO濃度の季節変化が明らかになった。CO濃度の季節変化の振幅は約90ppbvであり、極小値は8-9月に、極大値は3月に現れた。CO濃度の極小は、主に夏季に強まるOHラジカルとの消滅反応によるものと考えられる。CO濃度の季節変化は対流圏上層でも明瞭であり、振幅は高度と共に単調に減少することが判明した。(2)日本上空におけるCO濃度の年平均値は、地表におけるそれぞれの放出を反映して、0-2kmで最も高く、8km-対流圏界面で最も低い値を示した。CO濃度の年平均値では非常に大きな鉛直勾配が見られ、0-2kmと8km-対流圏界面とでの差は、平均65ppbvであった。(3)西太平洋域における船舶を用いた観測によって、緯度に応じたCO濃度の季節変化の違いが明らかになった。季節変化の振幅も北緯30度付近において約125ppbvと最大になり、南北に向かって小さくなる。北半球中高緯度では極大、極小値は3月上旬から5月上旬、及び8月上旬から9月上旬に現れる。CO濃度の季節変化の振幅は南北両半球において大きく異なり、南半球では2040ppbvと小さくなる。(4)二次元光化学大気輸送モデルを用いて、西太平洋域において観測された地表のCH4及びCO濃度から、それぞれの地表面フラックスを同時に推定することを試みた。推定されたCH4及びCOの全球年放出量は、それぞれ540TgCH4/year、1220TgCO/yearであり、それぞれの70及び73%は北半球における放出であった。CH4及びCOのOHラジカルとの反応による年消滅量はそれぞれ520TgCH4/year及び2140TgCO/yearと推定され、従ってCOの年消滅量の約40%はCH4の酸化消滅に伴うCO生成によって相殺されていることが示唆された。平成11年度には、一酸化炭素濃度の高精度測定システムの開発と、高精度標準ガスの製造に重点を置き、以下のことを実施した。(1)高精度一酸化炭素測定のために、ガスクロマトグラフを改造し、ディテクタの電気的なノイズを最小限に抑えることに成功した。さらに、デッドボリュームがほとんど無いガス導入系を開発することにより、ごくわずかなサンプル量でも、コンタミネーションの無い分析が可能となった。(2)新たに重量法によって一酸化炭素の標準ガスを製造した。濃度の正確な決定のために、製造の各段階の原料ガスの品質を厳しくチェックした。あらかじめ原料の不純物成分を測定し、製造時の不純物の効果を補正した。製造した標準ガスを、新たに改造したガスクロマトグラフを用いて、繰り返し分析を実施した結果、ディテクタの良好な直線性と再現性が確認された。繰り返し標準ガスを分析することによって得られた精度は、改造以前の5倍以上になり、1ppbv以下を達成した。また、従来の標準ガスとの相互検定を実施した結果、従来の不純物補止が不完全であったことが判明し、今回の実験によってより信頼性の高い濃度スケールが確立された。(3)今回開発された高精度一酸化炭素濃度測定システムを用いて、大気中の一酸化炭素濃度観測を開始した。従来より航空機を用いて、上空の空気資料を定期的に採集している東北大学理学部と協力し、日本上空の対流圏内における鉛直分布や、高度別の季節変動などが解明されつつある。

CH4及びCOのOHラジカルとの反応による年消滅量はそれぞれ520TgCH4/year及び2140TgCO/yearと推定され、従ってCOの年消滅量の約40%はCH4の酸化消滅に伴うCO生成によって相殺されていることが示唆された。
遊戯性のメタコミュニケーションの発達過程の検討

本プロジェクトは、親と乳児との戯れ合い場面に焦点を当て、0歳後半から1歳半までにおける他者の心情の読みとりの発達過程を縦断に探ろうとするものである。戯れ合い、特に、驚かしたり(e.g.、「いないいないばあ」)、騙したり(e.g.、物を隠して「な-い」)、くすぐったり、脅かしたり(e.g.、「食べちゃうぞ-」)する親の遊戯的な「からかい」(playfulteasing)を、子どもたちはいつ頃からどのような文脈で楽しむのかを明らかにし、遊戯性のメタコミュニケーションの発達過程を検討した。しかし、戯れ合いのやりとりは実験観察室での統制条件下や、家庭場面でも観察者が傍らにいる状況では起きがたい。そこで本研究では、親自身に育児記録として親子のやりとりをビデオ撮影をしてもらう「ビデオ育児日記」という手法を考案し、採用した。15組の母子が、資料を提供してくれた。この方法論の成功が本研究の大きな成果といえる。得られた資料から戯れ合いのエピソードのプロトコールを作成した。それらから以下の結果を得た。(1)既に6か月の時点で親子のユ-モラスなやりとりが認められ、戯れ合いへの親和性(incident affinity)が発達初期から存在することが示唆された。(2)8-10か月では、いわば子どもの好みに対する親の誤信を伝えるような、親の個々の働きかけへの子どもの選択的な笑いが観察された。(3)10-12か月頃からは、親の働きかけ(例えば、くすぐり)が子どもとの葛藤を招いた場面で、突然子どもが「愛想笑い」を示したことで、その後のやりとりがし遊戯的なものに転換した事例が認められた。最後に、10か月以降では、子どもの親への遊戯的からかいの事例がいくつか認められた。以上から、親子という親しい関係の基底には「一体感The Space of“WE"」・「情動的満足感」を求めるメカニズムのあることが考察された。本研究の目的は、家庭での親と乳児との戯れ場面での間主観的心情理解の成立過程とその発達的変化を縦断的に明らかにすることである。したがって、本研究が成立するためには、その前提条件として戯れ合いが起きている場面を記録できるような方法論の確立が必須である。本年度の主たる目標はこの点にあった。従来の家庭場面の観察法は、多くの場合、対象となる親子とほとんど面識のない観察者がビデオカメラを家庭に持ち込み、部屋の片隅から所定の場面を記録撮影するという手続きに拠ってきた。しかし、このような他人の注視下にあるという状況では、観察対象者、とりわけ親の側は、社会的評価不安から、社会的通念上「好ましいと思われる」「真面目な」やりとりを展開しようとすると考えられる。だが、「戯れ合い」は、むしろ、このような評価不安の懸念のない親しい他者との間でしか生じないコミュニケーションスタイルといえよう。そこで、本研究では、ビデオカメラを貸し出し、「ビデオ育児記録」として親自身が自分と対象児とのとのやりとりを撮影するという方法を採用した。具体的手続きは次の通りである。参加家庭:生後6か月の乳児のいる20家庭観察期間:対象児の月齢6か月12か月までの半年間、毎月30分60分間。観察場面:母子での遊び場面(一部父子・兄姉を含む)。撮影方法:部屋の片隅に三脚に乗せたビデオカメラを起き、家庭にあるテレビをモニターとして、親自身が自分と対象児とのやりとりを録画記録した。

この方法論によって、すべての参加家庭から自然な母子の「戯れ場面」を成功裡に得ることができた。つまり、戯れ合いという現象の一般性が確認された。参加家庭の半数からは、父、及び、兄姉との戯れ合いの資料も得られた。この結果、いくつかのケースでは対象児と家族全員との関わりについての分析もまた可能となった。本プロジェクトは「ビデオ育児日記」と称し、親自身に子どもの日常でのやりとりをビデオ録画してもらうという方法をとっている。今年度は昨年度に続き、1歳代になった子どもたちとその家族20世帯に継続して協力を得、12、15、18か月時点での家庭内での父母・同胞と対象児との自然なやりとりを観察した。同時に、昨年度収集した612か月までの資料の分析をした。本プロジェクトの目的は、親しい関係での共感性(intersubjectivity)の成り立ちを探ることである。具体的には、対象児とその家族との戯れ合い、葛藤(子どもの不従順、親の誤解)場面での意図の共有に至る過程、葛藤の解消過程を明らかにすることである。今年度の成果として上げられる点は以下である。第一に、本プロジェクトに参加した父母の全員から対象児と戯れ合う場面の資料が得られた点である。とりわけ、親が子どもをじらす、突然の行為で驚かす、子どもの期待をはぐらかすなどのふざけっこ・からかい(playful teasing)を用いたやりとりは、0歳後半から今年度観察した1歳半までのどの年齢段階でも認められた。しかも子どもたちもこのgameを楽しむ傾向にある。つまり、子どもたちは、親に突然驚かされたり、要求をじらされたり、期待をはぐらかされたりされているにもかかわらず、そのような親の働きかけを楽しんでいたといえる。このことから、対象とした乳児は親の遊戯の意図を理解できることが示唆される。第二に、葛藤場面は1歳代ではしばしは観察された。その資料からは、それが子どもの不従順、または、親が子どもの意図を誤解したことに始まったにせよ、葛藤の表出後、突然、どちらかが愛想笑いを示す、話題を変える、おどけるなどの和解への働きかけをすること、そのことで最終的には楽しさの共有へ至ることが見いだされた。以上の成果から、親しさの基底には共感性維持のメカニズムがあることが示唆された。本プロジェクトは、親と乳児との戯れ合い場面に焦点を当て、0歳後半から1歳半までにおける他者の心情の続みとりの発達過程を縦断に探ろうとするものである。戯れ合い、特に、驚かしたり(e.g.、「いないいないばあ」)、騙したり(e.g.、物を隠して「な-い」)、くすぐったり、脅かしたり(e.g.、「食べちゃうぞ-」)する親の遊戯的な「からかい」(playfulteasing)を、子どもたちはいつ頃からどのような文脈で楽しむのかを明らかにし、遊戯性のメタコミュニケーションの発達過程を検討した。しかし、戯れ合いのやりとりは実験観察室での統制条件下や、家庭場面でも観察者が傍らにいる状況では起きがたい。そこで本研究では、親自身に育児記録として親子のやりとりをビデオ撮影をしてもらう「ビデオ育児日記」という手法を考案し、採用した。15組の母子が、資料を提供してくれた。この方法論の成功が本研究の大きな成果といえる。得られた資料から戯れ合いのエピソードのプロトコールを作成した。それらから以下の結果を得た。
ネパールのパタン王宮における塔の復原研究

この研究は,1934年の地震で倒壊・消失したパタン王宮の4基目の塔の形態を明らかにするものである。倒壊前の王宮の写真蒐集,実測調査,塔の類例の抽出をもとに,この塔を復原すると,ム-ル・チョク南棟中央のアガン寺と近似する規模の三重塔であることが明らかとなった。塔の呼称は供米を捧げる寺の意であり,ブジャー・マンディールと呼ぶ。王宮のほぼ中央に位置し,ナサル・チョク南棟上階のテラスに建ち,王宮前広場に西面する。構造形式は三重とも異なる形式の屋根を採用し,初層が正方形,二層が正方形の四隅を切り落とした八角に近い形,三層が円形平面である。マンディールの形式は,建物の上部に載るチョク一体型に分類できる。円形の層塔はカトマンズ王宮に現存するが,三重とも異なる形式の屋根を持つ層塔は,他の王宮においても類例がない。この塔の形態は,カトマンズ盆地における現存遺構から見る限り,唯一のものである。最上層に円形を採用し,より完全な形を積み上げてゆくこの形式には,特別な意味が込めているものと考えられる。この塔は小塔でありながら,4階建の建物の屋上テラスに載り,大塔デグ・タレと並ぶその外観は,重厚である。すなわち,ブジャー・マンディールは,ネパールの層塔建築の発展過程を解明する上で貴重な存在といえる。なお,ブジャー・マンディールの屋根頂部にはガジューが載るが,倒壊前の写真からは,その形を特定することが難しい。ガジューは,マンディールの宗教的性格と外観復原上,重要な意味を含むものであり,その類型化が急務となっている。この研究は、1934年の地震で倒壊・消失したパタン王宮の4基目の塔の形態を明らかにするものである。今年度の研究実績は以下の通りである。(1)地震前の状況は20世紀半ばに出版された研究書に紹介されているが、現地調査においてこの塔の写真を確認し、その一部を印画焼付で入手した。また、撮影者とカメラの調査を行い、撮影に用いたカメラ機種を特定した。さらに、撮影範囲を目視により確認し、カメラの位置を推定した。(2)この塔はブジャ・マンディールと呼ばれる三重塔で、ム-ル・チョク北棟上階の北隣に建っていた。位置は王宮のほぼ中央にあり、その規模はアガン寺と近似する。大塔デグ・タレと並ぶその外観は重厚であり、他の王宮においても類例がないこと、ネパールの層塔建築の発展過程を解明する上で貴重な存在であること、を明らかにした。なお、単眼カメラで撮影された塔の写真と実測図を基に、塔の高さをコンピューター上で数値的に求める可能性を検討したが、現在の収集資料と実測図から撮影試写体の実寸法を測るには、数値の誤差が大きく、困難であることがわかった。このため、次年度においては、ム-ル・チョク北棟上階の平面の実測値と現存の層塔の類例を基に、形態復原を試みることにした。同時に、ム-ル・チョク北棟上階東側に建つ三重塔タレジュの階下についても調査する必要性が生じた。王宮の地震前の状況を示す資料を入手し,三重塔ブジャー・マンディールの位置および構造を明らかにした。王宮広場に面するその外観は重厚であり、その形式は他の王宮においても類例がないこと、ネパールの層塔建築の発展過程を解明する上で貴重な存在であること、を指摘した。

今年度は,写真から三重塔の高さをコンピューター上で数値的に求める可能性を再度検討したが,写真測量技術を応用して,地震前後の写真から塔の実寸法を求めるには、現在の収集資料からは数値の誤差が大きく難しいと判断された。そこで,写真と実測値を基に模型による規模の検討を行い,塔を復原した。また,マンディールの形式を確認するため,ム-ル・チョク北凍上階東側に建つ三重塔タレジュの階下についても調査した。ム-ル・チョク北凍の両翼に隣接して建つ2つの層塔は,ブジャー・マンディールがチョク一体型,タレジュ寺がチョク接続型であることが明らかになった。さらに,1934年の地震でム-ル・チョク北凍に西側半分は大きな被害を受けたが,この塔が建つナサル・チョク南凍上階のテラスまでは,その後ほぼ同形式に復原された。
「生活科・総合的な学習」指導の力量形成に関する教育臨床的研究

本研究は、「生活科・総合的な学習の時間」領域の実践研究に焦点化して調査研究を行い、充実した実践を生み出す教師の指導力・指導性の在り方を明らかにし、その成果をこれからの教員養成・教師教育の現場で活用していくことをめざした。この教科領域で展開されている指導法やカリキュラム開発の過程の特質を解明した。さらに、申請者が担当・実施している教師教育論、生活科指導法および総合的な学習に関連する専門科目において、上記の検討で明らかになった知見を教材化・カリキュラム化して実施し、その評価・分析を行った。今年度は、奈良女子大学附属小学校(以下附小)の「しごと」学習(「総合的な学習の時間」に相当)の参観とそこで記録した授業の分析を行い、そこで展開されている指導法やカリキュラム開発の特質を明らかにした。これをふまえ、生活科・総合的な学習の時間の領域で、充実した実践を創り出している教師の指導力・指導性の構造解明を試みた。具体的には、奈良の附小の杉澤学教諭の学級5年月組6年月組で展開されていた「自分たちのくらしとエネルギー」を考える「しごと」学習を追いながら、子どもが自律的な探究学習を進めて行く時の学習展開の豊かさとそのカリキュラムの意義を考察した。この学習では、体験学習(合宿)、調べ学習(図書、ネット情報や記事などの資料収集)、調査学習(フィールドワーク、インタビュー、質問紙調査)、番組作成と発信など、多くの活動が取り込まれ、このような活動を通じて子どもたちは自律的に学びながら、自らの問いを創り出し、その問いにそった探究を進めて自分の意見を創り出していた。ここでは、子どもの生活に寄り添い、子どもと共に創り出していく学習の展開そのものが、創造的カリキュラムの創出につながっていることがわかる。子どもたちはそれそれの生活経験や独自学習に反映されている個々の子どものこだわりなどを基盤として、それぞれの学習を自律的に深めていくので、自ずとその独創性や創造性が発揮される。それらを、学級の場で相互に持ち寄って進めていく奈良の学習法による共同的な学習の展開の中には、あらかじめ想定できない学習の発展が見られることがある。学習の行き詰まりや浅さには適宜指導を加えることは言うまでもないが、そのような子どもと共に作る柔軟なカリキュラム展開のなかには、教師主導のカリキュラムにはない学習の質や豊かさがあることが指摘できると考える。今年度は、フィールドワーク体験学習の原理的研究と奈良女子大学附属小学校のしごと学習(「生活科」及び「総合的な学習の時間」に相当)の記録を元にした実践分析を行った。これらをふまえ、生活科・総合的な学習の時間におけるフィールドワーク体験学習の充実に資する知見を得ることをめざした。特に、充実したフィールドワーク体験学習の成立の要件とそれに向けた指導の在り方を考える上で、体験を表現する言語活動に着目した。体験を表現することには、子どもたちが生活世界や体験のフィールドで得たものの価値を自ら構築し、自覚し、定着させる意味があると考える。この点を深く検討するために、子どもたちが見た(体験した)ものやことを「書く(記述する)」活動の中に、どのような教育的意義があるのか、どのような学びの成立が期待できるのかを考察した。さらに、今日行われているフィールドワーク体験学習の指導の課題にも触れて、今後の研究課題も提示した。このような研究を踏まえて、2012年に奈良女子大学附属小学校で実施された「奈良さんぽ」の「しごと」学習の展開を対象に検討を加え、フィールドワーク体験学習における充実した学習の有り様を探究し、そのような学習が成立するための手立てや条件について明らかにした。自律的学習の実践として定評のある奈良女附小のフィールドワーク体験学習で生み出される学習の豊かさをしめした。フィールド先でのメモ記録の充実、調べ学習の深化、劇表現にみる学びの身体化など、本実践の意義とそのような実践を生み足すに至った要因について考察した。上記のような研究成果を、担当している教職科目や専門科目の教材とし、教師のこの領域の指導力の育成・向上に活用した。今年度も昨年度に引き続き、フィールドワーク体験学習の原理的研究と奈良女子大学附属小学校のしごと学習(「生活科」及び「総合的な学習の時間」に相当)の記録を元にした実践分析を行った。今年度は、さらにフィールド先として、長野県・伊那市立伊那小学校を加えた。これらを踏まえて、生活科・総合的な学習の時間におけるフィールドワーク体験学習の充実に資する知見を得ることをめざした。これらの研究実績を、今年度は担当している専門科目「総合学習の原理と方法」の教材とし、学生に還元して、学生と共にフィールドワーク体験学習の意義についての探究を行った。具体的には、学生を伴って、東京都北区の紙の博物館・飛鳥山博物館に出かけ、紙すきで作成した紙をもとに作品をつくるなど、紙をテーマにした総合的な学習のカリキュラム開発に活用できそうな知見や体験を重ね、将来の教師のこの領域の指導力の育成・向上を図ることをめざした。また、同じくこの授業では、学生の調べ学習や体験学習の成果をまとめて、プレゼンテーションを行い、その内容や意義についての探究を行うような議論をすることができた。今年度は、上記のような教師の指導力、カリキュラム開発力の力量形成に焦点化して研究活動を行うこととした。この研究成果を、現在論文として執筆しているが、あるものやあるテーマに関わって調べたり考えたりする活動は学生にとっても好評で、意欲的に活動に取り組む姿がみられたことは特筆すべきことと考える。

本研究は、「生活科・総合的な学習の時間」領域の実践研究に焦点化して調査研究を行い、充実した実践を生み出す教師の指導力・指導性の在り方を明らかにし、その成果をこれからの教員養成・教師教育の現場で活用していくことをめざした。この教科領域で展開されている指導法やカリキュラム開発の過程の特質を解明した。さらに、申請者が担当・実施している教師教育論、生活科指導法および総合的な学習に関連する専門科目において、上記の検討で明らかになった知見を教材化・カリキュラム化して実施し、その評価・分析を行った。昨年度は、本研究課題に関する複数の論文執筆をおこなったものの、予定していた論文の完成には一部至らなかった。昨年度の研究成果を踏まえて、本研究のもう一つの主題である教員養成教育への還元の実施検証を行い、最終年度である本年度にその成果をまとめたい。教育学上記の状況のように、研究計画よりやや遅れが生じているので、最終年度である本年度は具体的にスケジュールを細かく刻んで研究計画の実施を確実に行いながら、最終年度のまとめを作成したい。学会発表のために、研究成果としてレジュメにまとめる作業は行ったが、学術論文としてまとめる時間がなく、研究成果として公表に至っていない。また、この成果を次年度の埼玉大学の教員養成教育へと還元するための準備を行ったが、その成果もまとまったものとは言えないので、次年度の準備も含めて早々に作業を行いたい。上記の状況のように、やや研究計画より遅れを生じているので、今後は研究計画を具体的にスケジュールに載せ、申請課題の研究計画の展開を促進したい。
β-グリカンを認識・結合する領域を利用した蛋白質二次元集積化法の開発研究

本研究の目的はセルラーゼ等のβ-グリカン結合領域を蛋白質工学的に改変して、β-グリカンとの結合を自由自在に制御することであり、これによってバイオ素子やバイオセンサーあるいはバイオターゲッティング素子に利用するための知見を得ることである。糸状菌T.reeseiセルラーゼで唯一セルロース結合領域(CBD)を有しないEG IIIのN末端にセロビオハイドロラーゼI(CBH I)のCBDを、またC末端にCBH IIのCBDを、リンカーとともに結合させた2種のキメラ体遺伝子を構築し、S.pombeで発現させたが、いずれもCMCを基質としたエンド型活性のある形で分泌発現された。これらを精製し、結晶セルロースヘの結合を確認後、各種基質に対する相対活性を測定したところ、特にCBH IのCBDをC末端に結合させたキメラEG IIIのBMCCに対する活性が大幅に上昇した。現在、これらの結果の動力学的な解析を行うとともに、native EG IIIが協奏作用を示すCBHの共存下での結晶セルロース分解能力などを測定することによって、CBDの特性(セルロースの認識・結合能)を評価している。T.reesei由来の全長53kDaのα-L-アラビノフラノシダーゼ(AF53)のC末端約18kDaが欠けた35kDaの短縮型酵素(AF35)は、低分子の合成基質には活性を示すにも拘わらず、高分子キシランに対する活性がなく、かつキシランに対する結合能も欠けており、C末端約18kDa部分にこれまでに報告のない新規なXBDが含まれていることが明らかになった。つぎに、AF53遺伝子をS.pombeで発現させた(27μg/m1)。現在、18kDa部分のC末端側をどこまで短縮すればキシラン結合能力が喪失されるかを検討している。今後、XBD単独で機能することを確認するとともに、N末端側を短縮させた変異体のキシラン結合能を検討することにより、XBDとしての最小領域を確定させる予定である。