hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
高精細顕微干渉パターンの画像処理によるヘッド媒体すきま測定装置の開発

マイケルソン干渉光学系,ハイビジョン画像撮影系,フリンジフォローイング系,ディスク回転系で構成される測定装置を構成するとともに,Windows NT環境におけるハイビジョン画像処理の構築,およびフリンジフォローイングによる再現精度の向上を実現し,摺動中のスライダの3次元挙動を測定して,装置としての性能を確認した.さらに,フリンジフォローイング系の制御信号を用いて,オンラインでスライダの二次元姿勢の計測が可能であることを確認した.1)干渉光を二分割して,CCDとPSDの受光面において,同時に干渉縞を観測し,PSDの出力信号により参照面を駆動する方法により,CCD面上の干渉縞を固定するフリンジフォローイング機能付きのマイケルソン干渉光学系を構成し,これを用いてヘッド起動時の三次元挙動,接触摺動期間中のすきま変動量が高精度に測定可能であることを確認した.2)200万画素のハイビジョンと64MBの画像ボードで画像撮影系,およびWindows環境で動作する画像処理プログラム(多段の平滑化処理,尾根線抽出処理,複数縞の平均化処理,縞パラメータ/平面パラメータ変換処理)を完成させて,画像計測によるすきま測定を実現した.3)縞画像固定制御中のフリンジフォローイング信号が,対象面の動きそのものである点に着目し,この信号を用いてオンラインですきま変動を測定する方法の実現性を確認した.まず,PSDを二個配置して,縞の位置と傾き,および縞の位置と間隔を固定する二つの方法について,再現性の向上を比較評価した.また,参照面を二重化して,位置固定用と間隔固定用を,それぞれ独立に駆動する機能分離型多重フォローイングを開発した.この方法は,連成がなくまた帯域の向上に有効であり,変位とピッチ角の同時測定が可能であることを確認した.また,三重化による三次元の同時オンライン計測への拡張法を提案した.マイケルソン干渉光学系,ハイビジョン画像撮影系,フリンジフォローイング系,ディスク回転系で構成される測定装置を構成するとともに,Windows NT環境におけるハイビジョン画像処理の構築,およびフリンジフォローイングによる再現精度の向上を実現し,摺動中のスライダの3次元挙動を測定して,装置としての性能を確認した.さらに,フリンジフォローイング系の制御信号を用いて,オンラインでスライダの二次元姿勢の計測が可能であることを確認した.1)干渉光を二分割して,CCDとPSDの受光面において,同時に干渉縞を観測し,PSDの出力信号により参照面を駆動する方法により,CCD面上の干渉縞を固定するフリンジフォローイング機能付きのマイケルソン干渉光学系を構成し,これを用いてヘッド起動時の三次元挙動,接触摺動期間中のすきま変動量が高精度に測定可能であることを確認した.2)200万画素のハイビジョンと64MBの画像ボードで画像撮影系,およびWindows環境で動作する画像処理プログラム(多段の平滑化処理,尾根線抽出処理,複数縞の平均化処理,縞パラメータ/平面パラメータ変換処理)を完成させて,画像計測によるすきま測定を実現した.3)縞画像固定制御中のフリンジフォローイング信号が,対象面の動きそのものである点に着目し,この信号を用いてオンラインですきま変動を測定する方法の実現性を確認した.まず,PSDを二個配置して,縞の位置と傾き,および縞の位置と間隔を固定する二つの方法について,再現性の向上を比較評価した.また,参照面を二重化して,位置固定用と間隔固定用を,それぞれ独立に駆動する機能分離型多重フォローイングを開発した.この方法は,連成がなくまた帯域の向上に有効であり,変位とピッチ角の同時測定が可能であることを確認した.また,三重化による三次元の同時オンライン計測への拡張法を提案した.測定装置の基本設計を行い,製作を開始するとともに,画像撮影系のハイビジョン化とコンピュータ環境のWindowsNTへの移行,およびこれらに伴う画像処理プログラムの改変作業などのソフト開発を完成させた.1.マイケルソン干渉光学系:無限遠補正方式のリニーク型マイケルソン干渉光学系を採用することとした.これは,物体面側と参照面側に同一仕様の対物レンズを配置して,その後焦点位置に光源像を結像して,平行光を物体面と参照面に照射するように構成したものである.各光学部品の調整の結果,拡大して(最大倍率20倍)等傾角の干渉縞パターンを形成することが可能となった.また,無限遠補正方式の採用により,干渉光を2分割して,一方をCCDカメラに,他方をPSDに導入することにより,それぞれの受光面に同一の干渉縞を形成することが可能となった.2.フリンジフォローイング系:PSD出力を増幅して,精密ピエゾアクチュエータにより,参照面を駆動することにより,干渉縞パターンを画面上に固定することが可能となった.3.ハイビジョン画像撮影系:空間分解能を向上するために,画像撮影系にハイビジョン方式(200万画素)を導入するとともに,画像処理のコンピュータ環境をMS-DOSからWindowsNTに移行させた.ハイビジョン化により,尾根線の品質が飛躍的に向上した.4.画像処理手順:新環境のもとで空間フィルタによる平滑化処理,縞の階調強度を放物線最小二乗近似して尾根線として検出する尾根線検出処理,複数の尾根線を用いて平均化により縞パラメータの精度を向上する平均化処理などの画像処理プログラムを開発した.5.処理の自動化:これらの一連の処理手順を自動化し,大容量の画像データを連続的に採取することが可能となった.

また,画像切り取り処理などを,すべて自動化することが可能となり,画像採取・画像処理の操作性が大幅に向上した.前年度に基本構成を完了した測定装置を用いて,実験を本格化して問題点を抽出するとともに,縞位置を画面に固定するためのフリンジフォローイング系を二次元に拡張して,位置と傾きの二次元同時検出が可能であることを確認した.さらに三次元化のため拡張法を提案した.1)干渉縞位置をPSDにより検出し,これを用いて参照面を駆動するフリンジフォローイング系について,縞位置固定に加えて縞幅も一定にするために,PSDを2個配置し,一つの出力により位置を固定し,二つの出力の差により縞間隔を固定するように,センシング系を構成した.2)参照面を駆動する系として,従来の一個のPZTアクチュエータ(チューブスキャナ)により,位置と傾きの同時駆動を行う場合には,PZTの作動距離と帯域確保の両立が困難であり,またPZTの曲げ共振の低下などの困難性が大きいことが判明した.これを解決するために,参照面を二重化して,全反射ミラーを2個に増やし,それぞれのミラーによって,平行駆動と傾き駆動を独立に行う方式を考案した.この方式は,連成の問題がなく,また目的に応じた最適なアクチュエータ構造を選択できる特長をもつ.3)上記の方式を採用した二次元フリンジフォローイング系を構成し,制御特性の評価を行った.チューブスキャナでは,曲げ共振の制限により追従帯域400Hz程度まであったが,本式の採用により,3μのディスク面ぶれに対して1500Hzまで帯域を向上させることが可能となった.4)本方式による測定法の精度を確認するために,ディスク面ぶれの測定結果を従来の光ファイバ反射検出方式と比較して,両者がよく一致することから,本方式の有用性を確認した.5)三次元化への拡張法として,3個のPSD,3個の参照面を用いて,平行変位,ピッチ角,ロール角を同時に測定する装置構成を提案した.
地方中小自治体における高齢者在宅生活支援システム構築方法に関する比較事例研究

○本研究の目的は、1「生活支援活動」参加住民の量的拡大に焦点を絞り、2地方中小自治体の地域特性を踏まえた「生活支援システム」構築方法を定式化することで、「住民互助」の強化に貢献することにある。○生活支援活動に実績を有する地域から、都市都心、都市郊外、農村計3地区を調査対象として抽出。「構築主体」(地域包括支援センター、社会福祉協議会)、「実施主体」(地区社協、自治会)、「地域住民」に対する聞き取り調査及び質問紙調査を通して、生活支援の仕組みと課題、活動参加の現状と意欲に関する比較分析を行う。○本研究成果の活用により、地域特性を踏まえた生活支援システムの構築および参加住民の量的拡大が可能となる。
次世代技術を用いた腎糸球体ポドサイトと末梢ニューロンを傷害する疾患遺伝子探究

末梢神経細胞と腎糸球体ポドサイトは終末分化した細胞であるため、変性・脱落を生じやすい。これらの細胞の健全な営みに必要な共通の生物学系路がわかれば、腎不全や神経変性症の病態理解に貢献できる。本研究ではネフローゼ(FSGS)と末梢ニューロパチー(CMTDIE)を発症した3症例の原因遺伝子を次世代シークエンサーを用いて探索した。その患児はいずれもINF2のミスセンス変異のヘテロ接合体であった。同じINF2変異でもFSGSとCMTを合併する病型を来すものは、腎糸球体限局型(FSGSのみ)の変異部位に比較し、N端側に分布していた。現在発現実験を行い変異の生物学的効果を検討している。[背景]神経変性症と腎糸球体硬化症は長期療養を要する難病で、病態解明が待たれている。[目的]難病の治療開発の最初のステップとして末梢ニューロンと腎糸球体ポドサイトの2系統に共通する機能・構造維持のための必須因子を明かにする。[意義・期待される効果]同じ疾患遺伝子でも変異の部位によって、ポドサイト障害に加えてニューロン変性を合併する例があることがわかった。現在変異体を培養細胞に発現させて、変異が細胞レベルでどのような影響を与えているのか(アクチン再構築、細胞周期など)を調べている。このことは腎障害の進展機序の以外に神経細胞の変性・腫瘍化に関するメカニズムの解明に貢献する可能性がありさらなる検討を行っている。[背景]我が国の小児期腎不全の原因調査では、先天腎尿路奇形が45%、FSGSが35%で、欧米に比較して糸球体疾患が多い(小児腎臓病学会1998-2005)。小児FSGSの多くは無症候性であるが、疾患は多因子で病因の見極めが難しい。[目的]本研究では、これらの先天性腎疾患でも腎外症状(末梢神経変性、聴力、視力障害)を合併する症候性、家族性の症例を収集して、腎とそれ以外の臓器に共通する生物学的な機能類似点から疾患遺伝子パスウェイを推測し、原因を探索する。2)候補遺伝子の意義付け:候補遺伝子のヒト組織での局在を、免疫組織染色法で検討した。発現実験を行い、変異体の細胞生物学、生化学的特性を検討した。[意義・重要性]CMT病合併FSGSの2症例においてアクチン制御蛋白であるFormin-2をコードするINF2 (inverted formin 2)遺伝子のミスセンス変異のヘテロ接合体であることを見いだした。また国内外のセミナー(小児科学会、アジア小児研究カンファレンス、小児腎臓病学会で当該研究に関する発表を行い、領域研究者と症例の病因究明に関する調査・解析方法について討論を行った。1)臨床症状の多様性を生じる分子機構の解明同じINF2変異でもアミノ酸置換の部位によって、腎糸球体限局型の疾患(FSGSのみ)と、腎糸球体硬化CMTを合併する病型(CMT+FSGS)の2つの臨床像に分かれてくることは興味深い。ドメインにより会合する分子群に棲み分けがあるため、変異がどのドメインに生じるかにより機能障害の表現型・重症度に差を生じると推測される。INF2に会合する分子群の実体やそのシグナル伝達機序がわかれば、腎(ポドサイト)、末梢ニューロン(軸索・シュワン細胞)の機能や構造維持の理解が深まり、治療開発につながると考える。2)未知の疾患遺伝子の探索欧米のCMTを合併する病型(CMT+FSGS)の30症例の検討(Boyer O, NEJM 2011)でも、2-3割は原因が不明である。我が国でもまだ未解析の3症例があり、INF2以外の分子異常が関与する可能性について検討する。1)臨床調査と検体収集引き続き症例の調査を継続する。まだ検討が不十分な多臓器障害について脳神経画像(MRI)、神経電気生理、腎生検所見、聴力検査、などの情報を収集してデータベース化する。2)疾患遺伝子の探索全エクソーム解析(50Mb)をしても、ゲノム反復配列を含むゲノム領域はキャプチャー効率が低いため、変異検出に見逃しを生じる可能性がある。また現行の次世代シークエンサー技術は100bpのショートリードであるため、10bpを越えるようなIndelは検出できない。そのため細胞遺伝学マイクロアレイや、場合によっては全ゲノムシークエンス、Sangerシークエンスの併用をしてそれぞれの検査の利点を生かし相互補完的に変異探索を行う。
細胞の動的３次元パターニングによるオンチップ臓器へ挑戦

動物実験を代替する手法として,マイクロ流体デバイスにおける微小組織構築(Organ-on-a-chip)が注目されている.しかし,そのためには,マイクロ流路内での細胞や微小組織を操作するための技術が必要である.本研究では,マイクロ流路内での高度な3次元微小組織構築に向けて,研究者の提案する「ラベルフリー磁気アセンブリ法」の有用性を検証した.特に,磁石アレイを用いた細胞パターニングおよび電磁石デバイスを用いた微小組織の操作を実証した.本年度は,1辺が10mm程度のチャンバーを用いて,磁気アルキメデス効果に基づく細胞パターニングを検証した.まず,ラインアンドスペース状に細胞をパターニングするために適した磁石アレイの配置について,磁場解析により検討した上で,細胞パターニング実験をおこなった.磁場解析は2次元モデルにより行い,磁束密度および磁力の分布を求めた.磁石アレイには,幅方向に磁化したネオジム磁石(幅1 mm,高さ5 mm,奥行き50 mm)を15枚用いた.各磁石のN極とS極が向かい合うように,すなわち磁石が互いに引きつけ合うように配置した場合は,高さ方向において磁力と重力が釣り合う等高線が,磁石の中央および両端においてチャンバー底面より低くなった.従って,0.5 mmおきのライン状にパターニングすることが予想される.しかし,等高線の形が左右対称ではないため,細胞の密度に偏りが生じる可能性がある.そこで,磁石と磁石の間に0.1 mmの非磁性体のスペーサーを挟むこととした.その結果,スペーサーの上部おいてのみ,磁力と重力の等高線はチャンバー底面を下回った.これにより,パターニングの間隔は1.1 mmとなるが,均一なライン&スペース状にパターニングすることが予想される.そこで,今後,後者,磁石が引きつけ合うように配置しその間に0.1 mmのテフロン製のスペーサーを挟んだものを,磁石アレイとして用いることとした.次に,比重および磁化率が細胞とほぼ同等な蛍光ポリスチレンビーズを用いてパターニングが可能なことを確認した上で,マウス繊維芽細胞NIH3T3を用いてパターニング実験を行った.まず,チャンバー底面へライン&スペース状へ細胞パターニングが可能であることを確認した.次に,予めチャンバー底面で細胞を培養した上に,細胞を播種し,ライン&スペース上にパターニング可能であることを実証した.当初の予定通り,チャンバー底面における細胞上への細胞パターニングに成功した.H27年度は,磁気アルキメデス効果に基づくラベルフリー細胞パターニングを検証した.H28年度はそれに引き続き,スフェロイド(細胞塊)の形成およびその操作・配置技術について検討を行った.まず,スフェロイドをアレイ状に形成するため,N極とS極が交互に並んだ磁石アレイを作製した.次に,シリコンゴムで作製した流路に,厚みが0.2mmのガラス板をプラズマボンディングにより接着することで,マイクロ流路チップを作製した.このマイクロ流路チップの下に磁石アレイを設置することで,流路内に複数の細胞凝集体を同時に形成することに成功した.次に,この細胞凝集体を2時間程度培養し,それぞれが1つのスフェロイドとなった後に,磁石アレイを外し,単一のネオジム磁石をスフェロイドに近づけた.その結果,スフェロイドはネオジム磁石に反発し移動した.以上により,ネオジム磁石を用いて,マイクロ流路内におけるスフェロイドが操作可能であることが示された次に,2対の電磁石を用い,電流制御によるスフェロイドの位置操作について実証した.まず,磁場解析によって,各電磁石のコイルに印加する電流の大きさと生成する磁束密度勾配の関係を解析した.それにより,各コイルに印加する正弦波電流の振幅と角度を変化させることで,磁束密度最小の点の位置を制御することができることが分かった.最終的には,解析結果を基にチャンバー内でスフェロイドの位置制御を行った.磁場解析から予測されたスフェロイドの位置と,実験結果には若干のズレはあったものの,ほぼ任意の位置に移動させることに成功した.マイクロ流路内における微小生体組織の構築に向けて,磁気アルキメデス効果に基づくラベルフリー細胞操作技術に基づき,H27年度に細胞パターニング,そして,H28年度に微小組織であるスフェロイドの操作と基盤技術の確立に成功した.しかし,最終目標である臓器を模した微小組織の構築には至らなかった.本年度は,磁気走査による細胞パターニングを実証した.従来の細胞パターニング技術は,基本的に,予めパターニングを決めておく必要があり,その変更は困難であった.そこで,任意形状かつパターニングが変更可能な細胞パターニング手法として,磁気アルキメデス効果に基づくラベルフリー細胞操作を利用した磁石走査法を提案した.本手法では,培地に常磁性化合物を添加し,細胞を相対的に反磁性体化することで,細胞に磁場に反発する性質を付与する.この状態で細胞懸濁液を含むチャンバーの下部で磁石を走査すると,磁場に反発する細胞は磁石が通った領域から除去されることになり,細胞がパターニングされる.実験開始直後にチャンバー全体に分散していた細胞は時間の経過に伴い重力によって底面上へ沈降していくが,磁石の走査経路上の細胞は,磁場により斥力を受け,走査経路上からその内側および外側に移動し,パターニングできることを確認した.

また,従来手法では必須であった細胞接着分子のパターニングを必要としないため,細胞上での細胞パターニングも可能である.同様の実験を,コンフルエントにまで培養した細胞シート上で行い,共焦点顕微鏡で観察した.その結果,細胞上に細胞がパターニングされていることが確認できた.以上のように,本研究全体を通して,磁気アルキメデス効果に基づくラベルフリー細胞操作を応用し,パターニング,微小組織構築および微小組織の操作を実証し,本手法の有用性を検証することに成功した.動物実験を代替する手法として,マイクロ流体デバイスにおける微小組織構築(Organ-on-a-chip)が注目されている.しかし,そのためには,マイクロ流路内での細胞や微小組織を操作するための技術が必要である.本研究では,マイクロ流路内での高度な3次元微小組織構築に向けて,研究者の提案する「ラベルフリー磁気アセンブリ法」の有用性を検証した.特に,磁石アレイを用いた細胞パターニングおよび電磁石デバイスを用いた微小組織の操作を実証した.フォトリソグラフ等によりマイクロ流路を作製し,その流路内部における細胞パターニングを実証する.特に,血管内皮細胞を用いた血管網構築を目指す.また,磁石を自動ステージにより操作することによる,パターニングの自動化も検討する.これまでに確立した基盤技術を用いて,H29年度は生体に近い複数種の細胞からなる微小組織の構築に取り組む.ナノマイクロシステム細胞パターニングの検証にあたり,蛍光観察のための顕微鏡が必要であったが,選定等に時間を要し,購入できなかったため.2年目以降の研究計画にあるマイクロ流体デバイスを作製するために新たな微細加工設備の立ち上げる予定であったが,研究代表者が学内業務により十分な時間が取れず,遅れてしまった.パターニングの実証にあたり蛍光観察が必須となるため,そのための必要な顕微鏡,光源,フィルター等の購入を予定している.次年度使用額は,微細加工および細胞培養関連の消耗品購入,実験補助員の雇用費用などに使用する.
多次元系イオンビーム・プラズマ不安定の非線形発展と乱流遷移

プラズマにおける不安定性の成長と飽和,乱流への遷移,そして構造の形成に関する知見を得るため以下の課題について研究を行った.1.2次元イオンビーム・プラズマ不安定性の発展と非線形過程2次元イオンビーム・プラズマ系の波動を記述する方程式は,流体近似でδx(δxφ-δxφ+δx^1φ+δxφ^2)+δy^2φ+(δ^3/2)δx^2n=0,δx^2n-δx^2φ=0......(1)と表わされる.ここでαはビームの密度と速度に依存するパラメーターで,ビームの非線形順は無視してある.線形安定な場合(α<3/2),線形の3つのモードに対応した3種のソリトンが存在し,そのうち2つは正のエネルギーを,残りが負のエネルギーをもつため,相互作用に関与する波がすべて成長する爆発型不安定性や,エネルギーを交換する崩壊型不安定性が可能で,有限時間で爆発するパルス解や,分裂するソリトン解を構成できる.しかし,これらの不安定相互作用のみならずビームのバチングによる線形不安定(α<3/2)でさえ,ビーム捕提によってしか安定化されないので, (1)式では非線形発展の全過程を追うことができず,粒子コードによるシミュレーションが必要なことがわかった.2.ドリフト波不安定と渦構造の形成構造形成に関する流体コードによるシミュレーションを次の系で行った.α+(1-∇_1^2+k∂y)φ+〔∂y+k∂y^2-δ(∂y-v〓_1^2)〓_1^2〕φ=〔(Z×〓φ)〓〕〓_1^2φ得られたシナリオは不安定成長→パラメトリック不安定の励起と渦の発生→渦の融合とスペクトルの逆カスケード→モードン形成である.プラズマにおける不安定性の成長と飽和,乱流への遷移,そして構造の形成に関する知見を得るため以下の課題について研究を行った.1.2次元イオンビーム・プラズマ不安定性の発展と非線形過程2次元イオンビーム・プラズマ系の波動を記述する方程式は,流体近似でδx(δxφ-δxφ+δx^1φ+δxφ^2)+δy^2φ+(δ^3/2)δx^2n=0,δx^2n-δx^2φ=0......(1)と表わされる.ここでαはビームの密度と速度に依存するパラメーターで,ビームの非線形順は無視してある.線形安定な場合(α<3/2),線形の3つのモードに対応した3種のソリトンが存在し,そのうち2つは正のエネルギーを,残りが負のエネルギーをもつため,相互作用に関与する波がすべて成長する爆発型不安定性や,エネルギーを交換する崩壊型不安定性が可能で,有限時間で爆発するパルス解や,分裂するソリトン解を構成できる.しかし,これらの不安定相互作用のみならずビームのバチングによる線形不安定(α<3/2)でさえ,ビーム捕提によってしか安定化されないので, (1)式では非線形発展の全過程を追うことができず,粒子コードによるシミュレーションが必要なことがわかった.2.ドリフト波不安定と渦構造の形成構造形成に関する流体コードによるシミュレーションを次の系で行った.α+(1-∇_1^2+k∂y)φ+〔∂y+k∂y^2-δ(∂y-v〓_1^2)〓_1^2〕φ=〔(Z×〓φ)〓〕〓_1^2φ得られたシナリオは不安定成長→パラメトリック不安定の励起と渦の発生→渦の融合とスペクトルの逆カスケード→モードン形成である.
ストレス応答系の人為的修飾と生体防御反応への積極的介入に関する研究-分子生物学的ストレス応答における薬理学的調整法の実用化に向けて-

Stress応答を修飾できた薬剤はDoxorubicinとGeranylgeronylacetoneの2剤であった。その他、Herbimycin A,Futhan,DCIC,Sulindacの効果も検討したが、肝のPreconditioningという面では期待した効果を確認できなかった。Doxorubicinについては静脈全身投与後48時間で肝内にHSP72,HSP73を誘導することができ、虚血耐性も熱ショックPreconditioningに劣らない効果を確認した。Geranylgeranylacetoneは経口投与が可能であり、それ自身でHSP72を肝内に誘導することはなかったが、熱ショックPreconditioningによる負担を軽減するという意味では、HSP72を誘導するために必要な時間を短縮し、熱ショックストレスによる効果を増強することが可能であった。その他、Hert shock preconditioningの効果を増強する方法として、反復ストレス前処置に効果があった。また、虚血前処置による虚血耐性獲得のメカニズムにアデノシン増加が関係し、アデノシンA2レセプター刺激剤投与で同じ効果が得られることが判明した。GGA前投与によりHSP72の誘導に必要な熱ショック負荷は15分間から5分間に短縮可能となった(Western法、直免疫染色)。さらにこの短時間熱ショック前処置においても充分な温阻血耐性(生存率、肝関連酵素、H.E.染色組織像の改善)を肝に付与した。またラジカルによる変性蛋白質であるHNE修飾蛋白質生成の軽減は、阻血再潅流に伴う酸化ストレス障害が蛋白質レベルでは修復されていることを示した。この現象はHSP72の分子シャペロンとしての機能が関与していると考えられた。またGGA前投与ラットに15分間の熱ショック負荷を加えるとHSP72はさらに強く誘導され(Western法)、HSP72陽性肝細胞の増加、個々の肝細胞の誘導量の増加が認められた(免疫染色)。この場合は、さらに長時間の温阻血に対する耐性を獲得できることが判明した。しかしGGA単回投与はHSP72誘導に必要な熱ショック温度を低下させることはできず、即ちサーモセンサー・トリガーの閾値を下げることはできなかった。これらのメカニズムの経緯を分子生物学的手法にて解析中である。以上より、胃粘膜保護剤GGAが肝HSP72誘導に関し薬理学的修飾をもたらすことが判明した。即ちHSP72の肝への誘導操作が薬理学的修飾により人為的に調整可能なことを意味した。臨床応用に具現化するためには、より強力なHSP72誘導修飾剤(GGA誘導体)の開発は重要であり、次年度の重点テーマと認識している。またHSP70以外のFamilyに関しての誘導も検討していく予定である。GGAと肝再生の研究においては、HSP72、HSP47とDesmin、βsm-Actin、Collagen type 3の動きに着目し、Nothern法、in situhybrization法、Brdu法にて検討している。この分野においては薬理学的人為的熱ショック蛋白誘導の調整により肝再生をコントロールできるかを目標として次年度に進む。本研究はStress応答を薬剤で修飾しその効率化を図ることが目的でった。その薬剤として期待されるものはDoxorubicinとGeranylgeranylacetoneの2剤であった。Geranylgeranylacetoneは経口投与が可能であり、それ自身HSP72を肝内に誘導することはなかったが、熱ショックPreconditioningによる負担を軽減するという意味では、HSP72を誘導するために必要な時間を短縮し、熱ショックストレスによる効果を増強することが可能であった。残念ながら、熱ショックストレスの温度閾値をさげることはできなかった。今回の研究の結果から考察すると、薬剤そのものでPreconditioningを行えたDoxorubicinはその抗癌剤としての作用を減弱する方向に発展させることで、また、Geranylgeranylacetoneは熱ショック以外のStressorとでもPreconditioningを増強できるかどうか等を検討してゆくことで、臨床応用可能な薬剤開発に期待できる。肝再生におけるHSPの働きに関しては再生時におけるHSP72,HSP47,3型コラーゲン、デスミンの発現をmRNAレベルで検討をおこなった。

この結果、HSP72とデスミンは肝切後18時間で、HSP47は48時間で、3型コラーゲンは96時間で増加し、その後次第に減少することが判明した。これらの動きをさらにどのように修飾すれば肝再生をさらに促進できるかの検討は今後に持ち越された。
マカク細胞から見たヒト細胞の老化と寿命

本研究の目的は、申請者らが分離したマカク細胞系列を材料とし、細胞の老化と脱老化(不死化)の過程を調べ、マカクをヒトの細胞老化モデルとして確立し、ヒト細胞の持つ細胞死の特性を明らかにすることである。材料としては、マカク付着系細胞(線維芽細胞・上皮細胞)の初代培養から分裂停止(あるいは、不死化)に至る細胞をもちい、その性状を詳細に解析することから着手した。また系統比較のため原猿のギャラゴの付着系細胞の継代をおこなった。マカクの細胞はin vitroで培養をおこなうと一定の分裂回数の後分裂停止(M1期)に至るが、M1期を越えてさらに分裂するものが3系統あった。それらの細胞は継代後期には、いずれもp53遺伝子に異常を持っていた。突然変異の導入がp53の機能喪失をもたらすかを調べるため、下流のp21の発現を調べた。細胞にUV照射を施し、p53を誘導、p21発現誘導をmRNA発現量からモニターした。その結果、p53は機能していないことが確認され、これら細胞はp53の機能解析研究に良い材料となることが示された。一方、ギャラゴの細胞については、既に継代数は100代を越し、樹立したとみなせた。しかし、高PDL細胞は、テロメア長とその減少パタンに関しM1を越えたマカクの細胞とも異なり、更なる解析が待たれた。ニホンザル腎由来の細胞を長期継代したところ、自立増殖し樹立が確認された。この細胞は、サイトケラチン18陽性・プロリルハイドキシレースα陰性の上皮細胞の特徴を示した。テロメレース活性は陽性でSV40は陰性であった。また、p53遺伝子コード領域には異常は見いだされなかった。ソフトアガー内で増殖し、足場非依存性を示した。現在800代以上分裂を続け、細胞の不死化状態からの離脱研究に有効な資材として確立するとともに、遺伝子発現解析の受容細胞として有効利用の可能性が期待される。現在、トランスフェクション実験の条件について、検討している。それらの細胞は数10回分裂を重ね分裂停止に至るが、その場合アポトーシスの様相を呈することが判明した。継代後期には、いずれもp53遺伝子に異常を持ち、p53の異常が導入される前後を解析することで、M1期、並びに、不死化の研究に貢献できる材料として期待される。
チオアミドクリック反応による多様な機能分子導入と生体系への展開

本研究では、我々が最近開発した新規なクリック型の化学反応(チオアミドとスルホニルアジドの選択的反応)を生体系に展開することを目的とする。研究2年目となる今年度は、次の2点について重点的に研究を展開した。(1)チオアミドとスルホニルアジドが関与する光化学反応の検討・・・生体分子のチオアミド化法の1つに、光反応によるチオアミドの導入を予定している。これに先立ち、チオアミドやスルホニルアジドそのものの光化学反応特性を把握する必要がある。様々な溶媒を用いて、チオアミドやスルホニルアジドそのもの、また、それらの混合溶液の光化学反応を追跡した。その結果、水中において、チオアミドとスルホニルアジドそれぞれは光照射(高圧水銀灯)に安定であったのに対し、それらの混合溶液ではクリック反応の劇的な促進が示唆された。(2)チオウレアを用いた新規クリック型反応の開発・・・(1)における光化学反応の検討途中に偶然ではあるが、チオウレアもクリック型反応の基質となりうる基礎的知見が得られた。チオアミドの代わりにチオウレアを用いる、チオウレアとスルホニルアジドのクリック型反応は前例がなかったため、研究開始当初の計画には無かった項目ではあるが、世界初となる新規な化学反応を検討することにした。その結果、単純なチオウレア骨格は反応性に乏しいものの、置換基を導入したチオウレアでは様々なスルホニルアジドとクリック型の反応が進行することがわかった。本成果は論文としてまとめて投稿し、現在審査中である。次年度の生体分子への展開に向けて、光化学反応の基礎的知見を順調に得られたのみならず、新規なチオウレア型の化学反応も開発できた。また今年度は発表論文こそ無かったものの作成した論文は現在審査中であり、特許に関しては出願時期こそ本研究開始前ではあったものの、今年度に関連特許2件を取得できた。さらに、フッ素導入型のスルホニルアジドの製品化に向けて、国内試薬会社へ2種類の化合物を提供することもできており、順調に研究を展開できていると判断できるため。今後は次の3点に関して重点的に研究を展開する予定である。(1)生体分子へのクリック反応の検討・・・当初予定していた次の3つの生体分子のチオアミド化法(a)有機化学的な官能基変換、(b)光化学反応によるチオアミドの導入、(c)生体が元々持っている同化経路機構の利用、に関して、これまでに作成したスルホニルアジドやチオアミド誘導体を用いて、順次研究を展開する。(2)チオアミドとスルホニルアジドの光化学反応・・・今年度得られた新たな基礎的知見として、クリック型反応の光照射による促進が得られた。この知見も前例が無く、確定できれば世界初の成果となるため、本クリック反応の光化学特性に関して詳細に検討する。(3)チオウレアとスルホニルアジドの新規クリック型反応の展開・・・今年度開発した新規クリック型反応に関して、応用展開を検討する。まずは、「(1)生体分子へのクリック反応の検討」における生体分子のチオアミド化法と同様の戦略で、チオアミドの代わりにチオウレアを生体分子へ導入することを検討する。研究初年度には、次の3点について重点的に研究を展開した。(1)求電子性の高いスルホニルアジド誘導体の合成・・・クリック反応速度の向上を目指し、フッ素を導入したスルホニルアジド誘導体を設計・合成した。市販の化合物から3段階の誘導化で、収率よく二官能性の誘導体が合成できることを確認した。末端がカルボキシ基およびアミノ基の誘導体を作り分け、さらにダンシルなどの蛍光分子を連結することに成功した。(2)合成したフッ素導入型スルホニルアジドのクリック反応における速度論評価・・・本研究で新たに開発したフッ素導入型のスルホニルアジド誘導体を用いて、チオアミドとの反応における反応速度をNMR(核磁気共鳴)法により評価した。フッ素を導入していない参照化合物と比較したところ、フッ素を導入していない場合の半減期が2日程度と遅かったのに対し、フッ素導入型では半減期が90分となり、飛躍的に反応性が向上したことを確認できた。得られた反応速度は、クリック反応の中で一般的によく知られているHuisgen反応(銅触媒を用いるアセチレンとアジドの生体直交性反応)と同程度のものであった。従って、生体系への展開が可能なツールを得ることができたと判断した。(3)生体分子のチオアミド化・・・生体分子のチオアミド化法として(a)有機化学的な官能基変換、(b)光反応によるチオアミド基の導入、(c)生体が元々持っている同化経路機構の利用、の3戦略を展開予定である。初年度には有機化学的な官能基変換として、アミノ酸と糖分子のチオアミド化を行った。アミノ基の直接チオアミド化と、カルボキシ基をチオアミドに変換する合成法を確立できた。また光反応に利用するジアジリン誘導体の合成にも着手した。クリック反応の速度を向上させるべく設計したフッ素導入型のスルホニルアジド誘導体を当初の計画通り合成でき、狙った通り反応速度が劇的に向上することを確認できた。この化合物については国内試薬会社が興味を示してくださっており、現在、製品化に向けての試薬提供の準備を進めている。

また、開発したフッ素導入型のスルホニルアジドに関しては、特許を出願するに至っており、順調に研究を展開できていると判断できる。さらに、次年度以降の生体系への展開に向けて、生体分子のチオアミド化も計画通り進めることができているため。本研究では、我々が最近開発した新規なクリック型の化学反応(チオアミドとスルホニルアジドの選択的反応)を生体系に展開することを目的とする。研究2年目となる今年度は、次の2点について重点的に研究を展開した。(1)チオアミドとスルホニルアジドが関与する光化学反応の検討・・・生体分子のチオアミド化法の1つに、光反応によるチオアミドの導入を予定している。これに先立ち、チオアミドやスルホニルアジドそのものの光化学反応特性を把握する必要がある。様々な溶媒を用いて、チオアミドやスルホニルアジドそのもの、また、それらの混合溶液の光化学反応を追跡した。その結果、水中において、チオアミドとスルホニルアジドそれぞれは光照射(高圧水銀灯)に安定であったのに対し、それらの混合溶液ではクリック反応の劇的な促進が示唆された。(2)チオウレアを用いた新規クリック型反応の開発・・・(1)における光化学反応の検討途中に偶然ではあるが、チオウレアもクリック型反応の基質となりうる基礎的知見が得られた。チオアミドの代わりにチオウレアを用いる、チオウレアとスルホニルアジドのクリック型反応は前例がなかったため、研究開始当初の計画には無かった項目ではあるが、世界初となる新規な化学反応を検討することにした。その結果、単純なチオウレア骨格は反応性に乏しいものの、置換基を導入したチオウレアでは様々なスルホニルアジドとクリック型の反応が進行することがわかった。本成果は論文としてまとめて投稿し、現在審査中である。次年度の生体分子への展開に向けて、光化学反応の基礎的知見を順調に得られたのみならず、新規なチオウレア型の化学反応も開発できた。また今年度は発表論文こそ無かったものの作成した論文は現在審査中であり、特許に関しては出願時期こそ本研究開始前ではあったものの、今年度に関連特許2件を取得できた。さらに、フッ素導入型のスルホニルアジドの製品化に向けて、国内試薬会社へ2種類の化合物を提供することもできており、順調に研究を展開できていると判断できるため。スルホニルアジドに関しては、開発したスルホニルアジドの二官能性の特長を生かし、様々な蛍光分子などの機能性分子を連結したスルホニルアジドを開発する。そしていくつかの生体分子とクリック反応を実施できた段階で、論文としてまとめる予定である。また反応性を向上させたスルホニルアジド誘導体の生体直交性に関して、アミノ基やチオール基などとの反応性を精査する。また生体分子のチオアミド化に関しては、生体小分子からチオアミド化を試みているので、ペプチドやオリゴヌクレオチドなど、徐々に生体高分子へと展開する。また同化経路の利用も視野に入れ、シアル酸のチオアミド誘導体の作成を実施する。さらに光反応を利用した生体分子のチオアミド化に向けた準備として、チオアミドやスルホニルアジドそのものの光化学反応性についても検討を開始する。今後は次の3点に関して重点的に研究を展開する予定である。(1)生体分子へのクリック反応の検討・・・当初予定していた次の3つの生体分子のチオアミド化法(a)有機化学的な官能基変換、
N-ビニルアセトアミド誘導体から得られる新規な感熱応答性高分子

本研究では、N-ビニルイソブチルアミド(NVIBA)や、N-ビニルアセトアミド誘導体を合成し、ラジカル重合により新規な水溶性感熱応答性高分子への誘導、及びその感熱応答性発現メカニズムを検討することを目的としている。これまでに、アルキル基の炭素数の異なるN-ビニルアセトアミド誘導体を合成し、基本的な重合性、共重合性を明らかにし、新規な感熱応答性高分子へ誘導した。また氷点から沸点までの幅広い温度範囲での下限臨界溶液温度(LCST)の制御、新規な感熱応答性ヒドロゲルへの研究も発展させた。最終年度の9年度はN-ビニルアセトアミド系の高分子と類似の構造を持つN-イソプロピルアクリルアミドに代表されるアクリルアミド系の高分子とのLCSTの相違についての解明を示差走査熱量計(DSC)を用いて検討した。更にNVIBAマクロモノマーを合成し、ポリスチレン核を持つ水分散性高分子ナノスフェア表面に感熱応答性素子の誘導、またポリエチレン等の汎用性高分子へ感熱応答素子をグラフト重合させ、その挙動について検討した。まず、DSCにより水和状態を観測することで、結合水に起因する融解ピークが明らかに異なり、また自由水も結合水の影響を受けていることが示唆された。これよりモノマー単位での親水基と水との水素結合及び疎水性水和がポリマーの水和に非常に重要であることが示唆された。次に、NVIBAマクロモノマーを連鎖移動剤を用いることで合成し、ナノスフェアの粒径を分子量を変化させることで制御した。またLCST以上でナノスフェアのサイズが小さくなることを明らかとした。さらに、コロナ放電処理によりポリエチレン表面に感熱応答素子のグラフト重合が可能であった。また帯電圧測定より大気圧中でもLCST以上で表面が疎水性になることが明らかとなり、温度変化によるポリエチレンの表面改質が可能であるとの結論を得た。N-ビニルイソブチルアミド(NVIBA)のポリマーが新規な感熱応答材料であることを明らかにした後、N-ビニルアセトアミド合成法と同様な手法で、NVIBAモノマーを合成した。次に、ラジカル重合性を明らかにした。さらに、N-ビニルアセトアミド、そして、アクリルアミド、スチレン、酢酸ビニル等の汎用性ビニルモノマーと共重合した。NVIBAの重合性はN-ビニルアセトアミドに類似し、非共役型のビニルモノマーであることも明らかになり、この組み合わせでの共重合は理想共重合であることが分かった。他の誘導体として、N-ビニル-n-ブチルアミド、N-ビニルイソバレルアミド、N-ビニル-n-ヴァレルアミドを合成した。全て、出発物質のアミドのアルキル基を換えることで得られた。これらについても、重合と共重合を行った。このようにして得られた重合体および共重合体の分子量、高分子構造等を調べ、さらに、水溶液中で曇天を濁り度測定により調べた。また、同時にDSCにより曇天測定と水和熱測定を行った。特に重要な知見として、1)N-ビニルアセトアミド誘導体を出発物質として、ラジカル重合により新規な感熱応答性高分子が得られ、シャープな曇天を持つこと、2)多く研究例のあるN-イソプロピルアクリルアミド(NIPAAM)の重合体(曇天は32°C)と同じ分子式(炭素、水素、窒素、酸素の数が同じ)を示す

NVIBA重合体の曇天は39°Cであり、高分子側鎖のアミド基の水和構造が感熱応答性高分子の挙動に重要であることが明らかとしたこと、3)N-ビニルアセトアミド誘導体モノマーの組み合わせにより、氷点から沸点まで、任意の温度で感熱応答させるシステムを構築できることが上げられる。その他、NIPAAMポリマーを用いた新規なシステムを検討し、次年度研究の準備を行った。本研究では、N-ビニルイソブチルアミド(NVIBA)やN-ビニルアセトアミド誘導体を合成し、ラジカル重合により新規な水溶性感熱応答性高分子への誘導、及びその感熱応答性発現メカニズムを検討することを目的としている。これまでに、アルキル基の炭素数の異なるN-ビニルアセトアミド誘導体を合成し、基本的な重合性、共重合性を明らかにし、新規な感熱応答性高分子へ誘導した。また氷点から沸点までの幅広い温度範囲での下限臨界溶液温度(LCST)の制御、新規な感熱応答性ヒドロゲルへの研究も発展させた。最終年度の9年度はN-ビニルアセトアミド系の高分子と類似の構造を持つN-イソプロピルアクリルアミドに代表されるアクリルアミド系の高分子とのLCSTの相違についての解明を示差走査熱量計(DSC)を用いて検討した。更にNVIBAマクロモノマーを合成し、ポリスチレン核を持つ水分散性高分子ナノスフェア表面に感熱応答性素子の誘導、またポリエチレン等の汎用性高分子へ感熱応答素子をグラフト重合させ、その挙動について検討した。まず、DSCにより水和状態を観測することで、結合水に起因する融解ピークが明らかに異なり、また自由水も結合水の影響を受けていることが示唆された。これよりモノマー単位での親水基と水との水素結合及び疎水性水和がポリマーの水和に非常に重要であることが示唆された。次に、NVIBAマクロモノマーを連鎖移動剤を用いることで合成し、ナノスフェアの粒径を分子量を変化させることで制御した。またLCST以上でナノスフェアのサイズが小さくなることを明らかとした。さらに、コロナ放電処理によりポリエチレン表面に感熱応答素子のグラフト重合が可能であった。また帯電圧測定より大気中でもLCST以上で表面が疎水性になることが明らかとなり、温度変化によるポリエチレンの表面改質が可能であるとの結論を得た。
多次元トンネル効果と複素古典力学

系の多次元性はトンネル効果に根底的影響をおよぼす。特に系が非可積分系の場合にはカオス集合の存在による極めて複雑なトンネル現象がおこり<カオス的トンネル効果>とよばれる。この研究では古典力学をフルに複素領域に拡張した<半古典理論>を用いて、カオス的トンネル効果の基本機構が研究された。(1)カオス存在下でのトンネル効果があるクラスの量子写像に対して研究された。精力的な数値的研究によってトンネル効果に本質的に寄与する軌道はその形状からラピュータ鎖とよばれる極めて限られた集合に属す事が示された。このような集合の数学的意味が複素力学系理論の結果と数値的に得られた主張を組み合わせる事によって研究された。主要な結果はラピュータ鎖の閉包が前方ジュリア集合J^+と前方充填ジュリア集合K^+に挟まれるという主張である。他方J^+=K^+と推論され、これが正しければ、ラピュータ鎖の外枠がJ^+である事を意味する。動的障壁をトンネルした波動関数はJ^-の実成分に沿って形成される。これらの事実はトンネル波動関数の主要成分はカオス集合に稠密なサドルの複素化安定多様体-不安定多様体に嚮導されてトンネルする事を意味する。(2)あるクラスの障壁トンネル過程に焦点をあて、多次元障壁トンネル過程に特徴的な複雑なトンネル効果を支配する不変的機構が解明された。先ず複素半古典理論が強相互作用領域においても純量子論の波動行列を再現できる事が確認された。強相互作用領域ではトンネル成分には複雑な干渉フリンジが現れる。更に、複素安定-不安定多様体に嚮導された複素トンネル軌道がフリンジトンネル効果を支配するが示された。このような機構は古典的なインスタントン機構に代わる、全く新しい描像を提供する。数学的にはこの機構は軌道の多価性を保証する<動く特異点>の発散的な移動と密接に関係づけられる事が判明した。極めて異なる上記トンネル過程が複素化安定-不安定多様体を使った共通の機構に支配されるのは驚くに値する。多次元トンネルを特徴づけるこのような機構の発見はこのプロジェクトの目覚しい成果である。複素力学系理論的解明が進んでいるエノン系の動的トンネル現象と複素力学系の数学的構造の関係の探求に着手した。トンネル現象に中心的に寄与する軌道の作用に関して絶対収束する集合としてトンネル効果で中心的役割を果たすラピュータ集合を定義すると複素力学理論の重要な成果であるBedfoord-Smillieの収束定理が使えてラピュータ集合内でジュリア集合が稠密であることがほぼ証明された。目下、証明の精密化と実際の数値実験での比較実証を行っている。物理的に寄与する軌道の数学的分類が正しければ、カオス的トンネル効果の中心集合が複素空間でのカオスがその上に存在するジュリア集合とほぼ等価であることが言えそうで、その精密化にとりくんでいる。一方、多次元障壁トンネル現象に現れる真性多次元効果の機構が解明されつつある。複素トンネル軌道には必ず特異点が存在し、特異点が発散的挙動を示す初期点(臨界点)の存在がトンネル効果の真性多次元効果として結果する機構が数値的に解明された。

この特異点近傍に必ずトンネル軌道が存在し、それに発する軌道が複素ヘテロクリニック交差による透過反射リーマン面の融合によって、複数個のトンネル軌道を帰結し、その間の干渉がフリンジとしてトンネル成分に観測されることが判明した。まだ、研究はまだ数値的実証の段階にあるが、今後、その数理的解構造の解明をめざして研究を進展させたい。複素力学系理論的解明が進んでいる動的トンネル現象と複素力学系の数学的構造の関係を探求した。標準的なカオス系として多項式写像系をとると、動的障壁トンネル現象に中心的に寄与する我々がラピュータ集合とよぶ軌道集合を適切に定義する事によってラピュータ集合内でジュリア集合が稠密であることが証明され速報文献(Shudo, Ishii and Ikeda)として発表された。理想カオス極限として反可積分極限と双曲性が成り立つ場合をモデルとしてジュリア集合が実際に量子確率どう反映されるか、更に、非理想的な回転領域が存在する混合相空間でトンネル問題におけるジュリア集合の物理的役割等を目下検証中である。今後多項式写像系からより現実的な系、例えば標準写像系やトンネルイオン化系の混合相空間トンネルの問題にジュリア集合の概念がどう拡張されるかも今後の重要な問題である。一方、複素領域半古典理論の方法によってフリンジトンネル効果と我々が呼ぶ、多次元系特有の障壁トンネル現象に現れる真性多次元効果の機構の一般性をチャネル周波数が小さい場合に証明することに成功し速報文献(Takahashi and Ikeda)として発表した。多次元障壁トンネルモデルを時間摂動系で近似して、その断熱近似解を構成し、それを用いて、特異点が発散する初期位相(臨界点)の存在を証明した。更にトンネルに寄与する軌道が必ず臨界点近傍を通過する事を示し、初期位相の空間で特異点が近傍通過時に発散的に移動し、その為に同じトンネル分枝上で透過成分から反射成分へのスイッチが起こること、同時に多数のブランチが同程度にトンネルに寄与する事が証明された。このような多トンネル経路の同時寄与は従来のインスタントン描像によるトンネル効果と全く異なる機構でおこる事が明確になった。昨年度の報告で"カオス的トンネル集合(我々がいうLaputa集合)がJulia集合内で稠密である"という重要な定理を報告した。これは数学的な外枠を与える結論であり、本年度の課題はその内容を埋めてゆく事である。特に懸案の問題であった回転領域におけるJulia集合と複素トンネルイオン化軌道の関係が解明されつつある。結果は周期的摂動によって発生したカオス領域に存在する不安定周期軌道の複素安定・不安定多様体がトンネルイオン化に決定的役割りを果たす事を強く示唆しており、従来のトンネル理論とまったく異なる立場からの理論が打ち立てられる事が大いに期待できる。回転領域は完全可積分域ともつながる。可積分域との関係を解明するため、回転領域のトーラスを複素領域に解析接続し複素トーラスの情報からトンネル問題を考察した。複素回転領域の自然境界の特異点解析によって、真正特異的な可積分性の破れを補修し逆にインスタントン理論を準可積分領域へ拡張する可能性を追究している。連続時間系のモデルとして周期的摂動を受ける障壁トンネル問題の準断熱領域の理論がほぼ完成し、ここでも不安定周期軌道の複素安定-不安定多様体の決定的役割りが明らかにされた。
宮廷儀礼に関する指図・絵図の史料学的研究

本年度は完成年度であることを鑑みて、科学研究費報告書の目次・体裁を意識しつつ史料の収集とデータ整理につとめた。これまで行ってきた作業のうち、まとまりのある、かつ一定の成果をもつものとして、I.平安鎌倉期の古記録に記された指図・絵図の当該記事データベース、II.国立公文書館所蔵「押小路家文書」にみえる指図・絵図データベース、の二つを取り上げることにした。それぞれが約500件前後からなるデータベースであり、今後の活用が期待される。Iについては、昨年度までにある程度の形を整えていたので、追加補充という形でデータを補い、今年度はむしろ先行研究の整理と、本研究の分析にもとづいた考察を加えることに主眼をおいた。結果として「装束指図」という命名やその他の指図の分類、指図の作成・活用・伝承という実態面について、先行研究を批判的に継承しつつ、独自の見解を提示することができた。IIについては、昨年度に引き続き国立公文書館に調査に赴き、指図・絵図の当該箇所を、マイクロ撮影の紙焼き複写という形ですべて入手し終えた。データベース作成時に気付いた点を、解説としてまとめている。さらに平安期の指図・絵図を考えるうえで有益な指図を、国立公文書館の掲載許可のもと計6点紹介している。平安期の記事にみえる指図に相当するものと考えられる江戸期の指図を見つけるなど、前近代の宮廷儀礼に共通する指図論を見通すことができた点でも、きわめて重要な成果であった。本年度は儀式指図・絵図類に関する史料目録の作成と、写真撮影による収集につとめた。まずは、手元にある平安時代から鎌倉時代の古記録より、「指図」「絵図」記事をデータベース化した。約600件の記事からなる。単独で伝来する指図・絵図では、その制作過程までを知ることは困難であるが、日記に挿入される指図・絵図を検討し、前後の記事をあわせて読んだことで、儀式指図がどのように作成・利用・転写されるのかを具体的に追跡することができた。その成果については、儀式指図の史料論となる論考を予定している。つぎに、史料所蔵機関に存在する史料群について所在調査を行った。主なものは、(1)押小路家文書(国立公文書館所蔵)、(2)『諸公事指図』上・下(徳大寺家旧蔵・東京大学史料編纂所所蔵)、(3)菊亭家文書(京都大学附属図書館所蔵)である。(1)については、指図・絵図の該当部分をデータベース化した。通常の文書目録は文書名の列記にとどまるが、本データベースは、各文書の中に指図・絵図が挿入されているか否か、その形態などを、さらに詳細に記したものである。指図・絵図の所在索引として使用に堪えるものを今後も作成することで、本研究の便宜をはかり、さらに儀式指図・絵図研究の進展を期したいと考えている。なお指図・絵図の現物については、そのうち半分をマイクロ撮影の紙焼き写真の形で入手した。平成18年度予算により残り半分を入手する予定である。(2)については、すべてをマイクロ撮影の紙焼き写真の形で入手した。内容検討は関係文献のさらなる調査を行ったうえでの今後の課題である。(3)については、目録がほぼ完成している。図書館備え付けの図書カードしかない状態であったが、本研究によりパソコンデータとして仕上げている。平成18年度はそのデータをもとに、速やかに図書館に調査願を提出し、現物との照合および内容に関する調査を予定している。本年度は、昨年度から継続して指図・絵図目録の増補、および史料所蔵機関における指図・絵図の実見と史料収集につとめた。とりわけマイクロ撮影の紙焼き史料の収集において大きな成果があり、それは以下の通りである。国立公文書館......押小路家文書にみえる指図・絵図の収集。全93冊にわたる一通りの通覧が済み、指図・絵図の掲載箇所および全体の分量を確認することができた。そのうえで、ほぼ全てをマイクロ撮影の紙焼きの形で入手した。残りは次年度に調達予定である。東京大学史料編纂所......徳大寺家旧蔵文書に含まれる、江戸時代の宮廷儀礼に関する史料を実見し、指図を確認した。これらは未紹介史料である。マイクロ撮影の紙焼きの形で入手した。宮内庁書陵部......即位儀礼の役割分担を列記した『天祚礼祀職掌録』の最良伝本を閲覧し、手元の史料を校閲した。即位儀礼に関する指図と照合するための史料である。東京国立博物館......資料館所蔵の『旧儀式画帖』の全てを、マイクロ撮影の紙焼きの形で入手した。これは江戸末期の制作ながら、宮廷儀式を式次第と絵画とで示した貴重な史料として、一部の研究者の間で走られていたが、その全貌は学界に未紹介である。現在、目録を作成しているところである。指図・絵図を入手することは、思った以上に撮影と入手の手続きに困難をともなうことを、昨年度から痛感していたが、それでも上記のような未紹介の史料群を入手することができ、目録作成と図の読解とによる研究成果には、大いに期待ができる。また、これまで平安時代から中世を主に視野としてきたが、近世においても指図・絵図が、日記や文書の記事と密接に連関して一つの儀式の全貌を示している事例を見つけることができた。