hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
Cross flow dragに基づく船体流体力の推定法に関する研究

港湾等において船舶が離接岸を行う場合のように,大きな斜航角を伴って運動する船舶に作用する流体力はCross flowによる成分が主体となる。このようなCross flow dragについて,実験により計測を行って検討した例はあるが,理論的な推定法について検討した研究例は国内外を問わずほとんど見られない。従って,大きな斜航角を伴って運動している場合に船体に作用する流体力を推定することは、港湾内等における航行船舶の安全性の観点から重要であると考えられる。本研究においては,特異点分布法を適用して,船体横断面形状をフレームライン上に分布させた束縛渦により表した。また,船体から剥離する渦層は断面から流出する離散的な自由渦を用いて表現し,渦の減衰を考慮したモデルを導入することにより,船体に作用する流体力を推定する方法について検討を行った。本研究において開発を行った推定法に基づいて,s.s.5 1/2の横断面を対象として船体に作用する流体力の推定を行い,剥離した渦の減衰率を表すパラメータγの値の変化の影響について検討を行った結果,本研究で計算対象とした船型についてはγ=10.0と選ぶことにより,比較的精度良く船体に作用する流体力の推定ができることを示した。また,s.s.5 1/2の横断面を対象とした検討をもとに,全横断面について同様に流体力の推定を行い,横運動時の船体に作用する全横力を推定した結果,船首尾付近において推定精度にやや問題があるとは思われるが,比較的精度良く船体に作用する横力を推定できるものと考えられる。
多糖とカーボンナノチューブの超分子融合による新規バイオ・ナノ材料群の創成

セルロースは天然に最も大量に存在する生分解性材料であり、持続可能な文明社会の構築に必要不可欠なエコマテリアルである。このセルロースを直接化学修飾することにより、有用な高機能性セルロース群を創成することを目指し研究を行った。本課題の研究により、セルロースの6位のみに望みの機能性基を導入するための普遍的な手法の開発とともに、実際にオリゴ糖鎖を導入によってタンパク質認識能を付与したセルロースの合成等に成功した。我々は天然多糖であるβ-1,3-グルカンの中でも、土壌細菌が産生する多糖としてもっとも安価に市販されているカードラン(側鎖なしの直鎖状β-1,3-グルカン)に注目した。まずはカードランを塩化リチウム存在下N,N-ジメチルホルムアミド(DMF)中で一晩加熱処理し、難溶性のカードランをDMFに均一分散させることに成功した。次にこのカードランのDMF溶液を室温まで冷却したのち、窒素雰囲気下にてトリフェニルホスフィンを加えてカードラン中の一級水酸基のみを活性化させた。約6時間の活性化の後、四臭化炭素を加えて室温で24時間攪拌することにより、カードランの一級水酸基のみを位置特異的かつ定量的にアジド基へと変換することに成功した。ここで実験開始当初、何度ブロモ化の実験を行っても定量的なブロモ化が困難であることがわかったが、これはトリフェニルホスフィンによる一級水酸基の活性化が不十分であることに原因があることを条件検討によって明らかにし、十分活性化に時間をかけることで、定量的なブロモ化が再現性よく進行することを明らかにした。次にこのブロモ化カードランをジメチルスルホキシド(DMSO)に溶解させ、85°Cにて過剰量のアジ化ナトリウムと処理することにより、定量的にアジド化が進行することも確認した。ここでも当初は80°C・24時間の条件でなかなか定量的なアジド化が進行しなかったが、反応温度を85°Cに上げ、反応時間も36時間にのばすことで定量的なアジド化が再現性よく進行することを明らかにした。天然多糖の中でも、植物の細胞壁成分として天然に大量に存在し、最も安価かつ生分解性の多糖として有用であるセルロースに注目し、これを直接化学修飾することによって有用な高機能性セルロース群を創成することを目指し研究を行った。まずはセルロース(平均重合度280)を塩化リチウム存在下N,N-ジメチルアセトアミド(DMAc)中で一晩加熱処理し、難溶性のセルロースをDMAcに均一分散させることに成功した。次にこのセルロースのDMAc溶液を室温まで冷却したのち、窒素雰囲気下にてトリフェニルホスフィンを加えてカードラン中の一級水酸基のみを活性化させた。約6時間の活性化の後、四臭化炭素を加えて室温で24時間攪拌することにより、セルロースの一級水酸基のみを位置特異的かつ定量的にブロモ基へと変換することに成功した。さらには得られたブロモ化セルロースをDMAcおよびDMSO混合溶媒中にてアジ化ナトリウムと反応させることにより、セルロースの一級水酸基のみを位置特異的かつ定量的にアジド基へと変換したアジド化セルロースを合成することに成功した。ここで実験開始当初、アジド化の反応進行にしたがって溶媒に対する溶解度が低下し、反応溶液の不均一化する現象が見られたものの、反応中の反応溶液にDMSOを適宜追加することにより反応溶液を均一に保ったまま反応を完遂させることに成功した。得られたアジド化セルロースを三重結合を有するオリゴ糖誘導体とクリックケミストリー条件下にてカツプリングすることにより、オリゴ糖を6位に有するセルロース誘導体の合成に成功した。得られたオリゴ糖修飾セルロースは特定にタンパク質と選択的かつ強く相互作用することが明らかとなった。つまり、本研究によって確立させたスキームにより、セルロースにオリゴ糖由来の細胞認識性を付与できたことになる。このセルロースを直接化学修飾することにより、有用な高機能性セルロース群を創成することを目指し研究を行っている。昨年度までの研究により、まずはセルロースを塩化リチウム存在下N,N-ジメチルアセトアミド(DMAc)中で一晩加熱処理しすることで均一分散させ、更に窒素雰囲気下にてトリフェニルホスフィンさらには四臭化炭素で処理することにより、セルロースの一級水酸基のみを位置特異的かつ定量的にプロモ基へと変換することに成功した。またこの後アジ化ナトリウムと反応させることにより、セルロースの一級水酸基のみを位置特異的かつ定量的にアジド基へと変換したアジド化セルロースを合成することに成功した。得られたアジド化セルロースを三重結合を有するオリゴ糖誘導体とクリックケミストリー条件下にてカップリングすることにより、オリゴ糖を6位に有するセルロース誘導体の合成に成功した。

本年度は新たに異なるスペーサー構造を有するオリゴ糖鎖モジュールに加え、核酸やカーボンナノチューブとの認識能を有するデオキシチミジンモジュール、さらには高い水溶性を付与させることを目的にした四級アンモニウムカチオンモジュールなど、様々な機能性モジュールを同時に導入したセルロース誘導体の合成を行った。特にデオキシチミジンモジュールと四級アンモニウムカチオンモジュールを同時に導入したセルロース誘導体はカーボンナノチューブと相互作用し、水溶性の多糖/カーボンナノチューブナノハイブリッドを与えることが分かった。
植物液胞膜の2種プロトンポンプの分子構造と細胞生物学的特性

植物液胞膜には種々の選択的物質輸送系が存在し、物質集積、細胞質イオン濃度の調節などの液胞機能を支えている。本研究はとくに液胞膜のH^+-ATPaseとH^+-輸送性ピロホスファターゼ(H^+-PPase)の2種プロトンポンプおよび水分子チャネルと考えられるタンパク質に焦点を当て個々の分子の解析をすすめ、生理的変動についても分析した。1精製したH^+-PPase(73kD)をリポソームに再構成し、73kDタンパク質のみで無機ピロリン酸に依存したH^+輸送能を示すことが立証できた。このことは一次構造中に基質分解部位とH^+輸送に関与する部位が存在することからも支持される。H^+-PPaseは緑色植物共通の酵素であることも明らかにした。2液胞膜ATPaseの触煤サブユニット(68kD)のcDNAから推定される一次構造は他の植物、動物、微生物の対応するサブユニットと類似性が高いこと、また数種の植物から液胞膜ATPaseを精製し比較したところ、共通するサブユニットと、種特異的なものがあることが明らかになった。3液胞膜に高疎水性タンパク質(23kD,VM23)を見いだし、部分アミノ酸配列および抗体反応性から、VM23が水分子チャンネルとして知られるタンパク質と同種であることを明らかにした。VM23は植物種により分子種が異なり、シャジクモなど一部の種はVM23を欠いていた。VM23の有無はH^+-ATPase、H^+-PPaseの機能に直接的な影響を持たないことを確認した。これらの知見をVM23の生理機能解明の手掛かりとしたい。4液胞型H^+-ATPaseとH^+-PPase、VM23は種子タンパク質顆粒の膜にも存在することを、酵素活性と免疫ブロット、免疫電子顕微鏡観察により明らかにした。これらのタンパク質は乾燥種子にはほとんど存在せず、発芽過程で誘導合成される。これらの新知見はタンパク質顆粒の液胞化を分子レベルで示すものであり、発芽種子は液胞膜物質輸送系の誘導局在化機構、生理的応答の仕組を理解するモデル実験系であると考えられる。
集配活動の効率化による都市環境・交通問題への影響分析

物流交通に起因する都市問題、特に、環境問題・交通問題の緩和・解決に焦点を当て、企業の物流コスト抑制効果を考慮した上で、情報化・共同化・物流拠点整備の観点から物流合理化策の効果と成立に関して検討を行った。その際、前年度に構築されたシミュレーションモデル(配車配送行動モデル)が拡張され、道路網上の交通混雑や環境負荷量が、より精緻に算定可能となるように改良された。具体的には、道路網上の各リンクの時間帯別走行速度、走行台数、排出量原単位などをモデルの中に組み込むことにより、CO_2排出量や道路網上の車両存在台数が時間帯ごとに算出できるようになり、交通混雑・環境負荷量の経時的変化を明示できるようになった。このモデルを用いて、配車配送計画システムの高度化が都市環境・交通問題に与える影響について分析した結果、交通情報システムを援用した確率論的配車配送計画システムなど、配車配送計画システムの高度化が、環境負荷抑制および交通混雑緩和に寄与することが示された。また、共同輸配送の有効性に注目し、配車配送行動モデルの中に共同輸配送モデルを組み込むことにより、都市内共同配送の成立要因について基礎的考察を行った。その際、都市内共同配送が交通環境に及ぼす影響についても分析した。さらに、共同輸配送などの物流合理化策を実施する上で、物流ターミナル整備が有効となることから、物流ターミナルの配置についても考察した。その結果、都市内共同配送の成立要因(道路網特性、顧客特性、物流ターミナルの最適配置)や効果(総走行時間削減、物流コスト抑制)が明らかになり、行政の金銭的補助が都市内共同配送の成立に効果的であることも確認された。以上の分析を通して、配車配送計画の高度化、共同輸配送、物流ターミナル整備などの、都市環境・交通問題の緩和・解決に寄与する都市内集配送システムの構築に向けて、適切な方向性を示すことができた。都市内集配送に関する各企業の配車配送計画は、対象地域内の道路網上の所要時間を予測した上で策定される。そのような状況下での、配車配送計画問題を定式化し、効率的な求解法の適用を試みた。集配車のデポ出発時刻と顧客訪問順序を決定する配車配送計画問題は、厳密解法による求解が困難である。したがって、ヒューリスティック手法を用いて効率的に近似最適解を求める必要がある。そのため、ヒューリスティック手法の一つである遺伝的アルゴリズムを適用するとともに、求解効率を高めるパラメータ設定について検討した。対象道路網上のリンク所用時間予測の際には、ある一定期間内のリンク所用時間を固定値で捉えるか(確定論的モデル)、平均と分散を考慮した変動値で捉えるか(確率論的モデル)によって配車配送計画モデルは相違する。両モデルを通じて得られた集配送行動の相違を確認するとともに、シミュレーションモデルを介して集配送行動のパフォーマンスを比較することにより、配車配送計画システムをどのレベルまで高度化すればよいかについて考察した。さらに、都市内集配活動の効率化に資する物流拠点整備にも注目し、その最適配置を求める方法論を確立した。この最適配置モデルは、複数の評価指標を同時に考慮することが可能であるとともに、交通量配分手法を組み込むことにより、道路網上での交通状態の変化も明示的に考慮することができる。これらのモデルを有効なものとするには、都市内集配送の行動主体である企業の意向や意思決定を無視することはできない。そのため、物流関連企業へのヒアリング調査等に基づいて、都市内集配送に関する企業の意思決定プロセスについて基礎的考察を行った。その結果、共同輸配送や物流拠点整備を内包した、都市環境・交通問題の緩和・解決に寄与する都市内集配送合理化策に関して、有効な基礎的知見が得られた。
幹細胞とコラーゲン架橋を導入した無細胞真皮マトリックスによる結合組織の再生

無細胞真皮マトリックス:Acellular Dermal Matrix:ADMにはさまざまな結合組織を再生させうる可能性があるが、移植後の吸収が問題となる。本研究ではADMの吸収を抑制する方法として、脂肪組織由来幹細胞と架橋処理の効果についてラットのモデルで検討した。ADMによる皮下組織再生は幹細胞により促進された。架橋処理は移植後の吸収を抑制したがADMへの血管新生をも抑制した。ADMによる腱再生では幹細胞によりADMの吸収と炎症反応が抑制された。ADMへの架橋処理も移植後の吸収を抑制したが幹細胞の効果より劣った。ADMの移植安定性の向上には幹細胞の組み込みが有効である可能性が示唆された。無細胞化した皮膚真皮(無細胞真皮マトリックス:Acellular Dermal Matrix:ADM)の主成分であるI型コラーゲンは、生体における普遍的な結合組織線維である。よってADMは皮膚以外のさまざまな結合組織を誘導しうる移植材料としてその効果が期待されているが、一方ADMには移植後の組織吸収が避けられない。ADMの移植後の組織吸収を抑制しより安定した移植特性を得る方法としては、幹細胞の組み込み、ADM(コラーゲン分子)の架橋、他の細胞外マトリックス成分の付加などが考えられる。平成23年度研究者は、ADMへの脂肪組織由来幹細胞の組み込みおよびADMの架橋処理により、ADM移植後の安定性が向上するかどうかについて、ラットのアキレス腱欠損モデルとラットの皮下移植モデルを用いて検討した。【方法】Fischerラットの背部分層皮膚をTrypsin処理にて無細胞化しADMを作製した。Fischerラットの鼠径部Fat padからcollagenase処理によって脂肪組織由来幹細胞を分離・培養し、第3系代の細胞をADMに組み込んだ。ADMの架橋は低濃度のグルタールアルデヒド処理により行った。幹細胞を組み込んだADMと架橋処理ADMをそれぞれFischerラットのアキレス腱切除部と背部皮下に移植した。【結果】移植4週後、腱再生・皮下組織再生ともに幹細胞組み込みADMが最も優れており、架橋処理ADMがそれにつぎ、未処理ADMでは炎症あるいは吸収が強く認められた。【結論・意義】以上の結果からADMに対する幹細胞の組み込みと架橋処理が、移植後の安定性を増強する可能性が示唆された。本研究結果は、無細胞化した同種組織を用いた組織再生治療の可能性を拡大する意義を有するものと考えられる。無細胞真皮マトリックス:Acellular Dermal Matrix:ADM)の主成分であるI型コラーゲンは生体における普遍的な結合組織線維である事から、ADMによる皮膚真皮を含めたさまざまな結合組織を誘導しうる移植材料としてその効果が期待されている。しかしADMには移植後の変性や組織吸収が避けられない。平成25年度、研究者はADMへの脂肪組織由来幹細胞の組み込みおよびADMの架橋処理が、ADMの移植後の安定性を向上させるかどうかにつき、ラットのアキレス腱欠損モデル、ラットの皮下移植モデル、ラットの腹膜再生モデルを用いて検討した。Fischerラットの鼠径部Fat padからcollagenase処理によって幹細胞を分離・培養し、第3系代の細胞をADMに組み込んだ。ADMの架橋は低濃度glutaraldehyde処理により行った。幹細胞を組み込だADMと架橋処理ADMをそれぞれFischerラットのアキレス腱切除部、背部皮下、腹膜欠損部に移植した。【結果】移植4週後、腱再生・皮下組織再生共に幹細胞組み込みADMが最も優れており、架橋処理ADMがそれにつぎ、未処理ADMは炎症あるいは変性吸収が認められた。腹膜再生では幹細胞の効果、架橋処理の優位性は認められなかった。【結論・意義】以上の結果からADMに対する幹細胞の組み込みや架橋処理が、移植後の安定性向上に貢献する可能性が示唆された。本研究結果は、同種無細胞化真皮マトリックスを用いた種々の結合組織再生の臨床応用の可能性を示す意義を有するものと考えられる。このことからADMは皮膚以外のさまざまな結合組織を誘導しうる移植材料として、その効果が示唆されてきた。しかしADMは移植後の組織吸収が避けられない。ADMの移植後の組織吸収を抑制し、より安定した移植特性を得る方法としては、ADM(コラーゲン分子)の架橋、他の細胞外マトリックス成分の付加、種々の細胞成分の組み込みなどが考えられる。

平成23年度、研究者は、ADMに脂肪組織由来の体性幹細胞を組み込むことで、ADMの移植後の安定性が向上するかどうかについて、ラットのアキレス腱欠損モデルを用いた検討を行った。【方法】Fischerラットの背部分層皮膚(18/1000 inch)をTrypsin処理にて無細胞化しADMを作製した。Fischerラットの鼠径部Fat padからcollagenase (type I)処理によって幹細胞を分離・培養し、第3系代の細胞をADMに組み込んだ。幹細胞を組み込んだADMをFischerラットのアキレス腱切除部(1cm長)に移植した。幹細胞を組み込まないADMの移植を対照とした。移植後4週の腱再生を、肉眼的、組織学的に検討した。【結果】幹細胞を組み込むことで、移植ADMに対する炎症細胞浸潤が抑制され、より正常腱に類似した腱再生が認められた。【結論・意義】以上の結果からADMに対する幹細胞の組み込みが、移植後の安定性を増強する可能性が強く示唆された。本研究結果は、無細胞化した同種組織を用いた組織再生治療の可能性を拡大する意義を有するものと考えられる。本研究において平成23年度に達成しえた諸点は以下の通りである。1皮膚の完全な無細胞化すなわち無細胞真皮マトリックス(Acellular dermal matrix: ADM)の作製.2 ADMの組織学的・免疫組織学的評価. 3脂肪組織由来幹細胞の分離培養・脂肪組織由来幹細胞の凍結保存.4 ADMへの幹細胞の組み込みと移植後の細胞同定. 5 ADMのラット腱移植モデルと皮下移植モデルの確立6幹細胞を組み込んだADMの腱欠損部、皮下への移植.7幹細胞を組み込んだADMによる組織再生の評価. 8コラーゲン架橋処理ADMの作製. 9コラーゲン架橋処理ADMの腱欠損部、皮下への移植. 10コラーゲン架橋処理ADMによる組織再生の評価. 11脂肪由来幹細胞とコラーゲン架橋処理がADMの移植特性に与える影響についての定量的比較分析.以上のように本年度で達成あるいは確立しえた諸点は、ほぼ当初の研究計画に沿ったものであるので、上記の区分(2)であると考えられた。本研究において本年度(研究補助初年度)に達成しえた諸点は以下の通りである。1皮膚の完全な無細胞化すなわち無細胞真皮マトリックス(Acellular dermal matrix: ADM)の作製.2無細胞真皮マトリックスの性状評価. 3脂肪由来幹細胞の分離培養・脂肪由来幹細胞の凍結保存.4 ADMへの幹細胞の組み込み、移植4週後の細胞同定. 5ラット・アキレス腱欠損・移植モデルの確立6幹細胞を組み込んだADMの腱欠損部への移植とその分析.7 ADMによる腱組織再生における幹細胞の効果.
メチルアルギニン誘導体とメタボリック症候群発症リスクに関する職域疫学研究

某企業の定期健康診断を受診した男性社員を対象に内因性NO合成酵素阻害物質である「非対称性ジメチルアルギニン」(ADMA)血中濃度を測定したところ、ADMAは年齢、血圧、脂質指標などの各種生活習慣病や脳卒中発症リスクと関連した。しかしながら、将来のメタボリック症候群発症予測因子とはならなかった。さらに高コレステロール血症患者にコレステロール低下薬を投与すると、将来の血圧上昇が抑制される可能性があることを明らかにした。本年度は、昨年度測定を行った血清非対称性ジメチルアルギニン(ADMA)濃度と、メタボリック症候群の診断を構成する各種生活習慣病との関連性について、横断的検討を行った。上記測定を行った1168人から、女性や40才未満の者などを除いた769人を対象とした。その結果、血清ADMA濃度は年齢(r=0.14, p<0.001)、BMI(r=0.15, p<0.001)、拡張期血圧(r=0.12, p=0.001)、総コレステロール(r=0.07, p=0.042)、LDLコレステロール(r=0.09, p=0.013)、HDLコレステロール(r=-0.10, p=0.008)、中性脂肪(r=0.13, p<0.001)と有意な相関を認めた。また、高血圧、脂質異常症、喫煙習慣を有する者においてADMAは有意な高値を示した。さらに、近年欧米において血清ADMA値が脳卒中のリスク因子となりうるとの報告がなされていることから、最近我が国で報告された脳卒中発症リスクスコア(Stroke 2013; 44: 1295-302)と血中ADMAとの関連性を検討した。その結果、脳卒中リスク分類が低、中、高と上昇につれADMA値は上昇し(p<0.001 for trend)。さらに、複数の交絡因子で調整した多重ロジスティック回帰分析では、ADMA4分位最高分位における脳卒中ハイリスクに対するオッズ比は2.47(p=0.049)と有意な高値を示した。以上から、血清ADMA値はメタボリック症候群の診断を構成する各生活種運病と有意に関連し、さらに脳卒中発症リスクとも有意に関連する可能性が示唆された。本結果はJ Neurol Sci誌に公表を行った。【目的】本研究は、メタボリック症候群発症における内因性一酸化窒素阻害物質である非対称性ジメチルアルギニン(ADMA)の関与について、疫学的手法を用いて検討することである。研究初年度である本年度は、某企業の健康診断縦断データおよび保存血清を用いて、ADMAの測定を行うことを目的とした。【方法】某精密機器開発事業所における2005年度定期健康診断において、本研究参加および血清保存について文書による承諾を得られた1169人(平均44±7才、男性1084人)を対象に、保存血清を用い高速液体クロマトグラフィ(HPLC)法によってADMAの測定を行った。【結果】検体量不足のため測定が困難であった男性1人を除いた1168人について、ADMAの測定を行った。ADMAの平均値は全体で0.45±0.08nmol/mlであり、男性0.45±0.05nmol/ml、女性0.47±0.22nmol/ml(男女有意差なし)であった。ADMAは年齢と有意な正の相関を認めた(r=0.13、p<0.001)。本年度は本研究計画最終年度として、本研究1年目に測定した血清中非対称性ジメチルアルギニン(ADMA)濃度とメタボリック症候群(MetS)発症リスクとの関係性について、健診縦断データを用いて検討した。某企業に所属し、2005年健康診断の時点でMetSを認めない848人(平均年齢43才)を対象に、向こう4年間の健康診断データを追跡しMetSの新規発症を調査した。2005年健康診断時に採取した保存血清を用い測定を行ったADMA濃度と、MetS新規発症との関連性を分析した。その結果、単変量モデルでは、ADMA高値群においてMetS発症リスクの上昇を認めたが(ハザード比1.58、95%信頼区間1.06-2.36)、C反応性蛋白(CRP)を初め他の共変量を含めた多変量モデルにおいては、ADMAとMetS発症リスクとの有意な関連性は認められなかった。逆にCRP高値は、多変量モデルにおいてADMAや他の交絡因子とは独立した有意なMetS発症予測因子となった(ハザード比1.75、95%信頼区間1.12-2.74)。以上から、ADMAはCRPを上回るMetS発症予測マーカーとはなり得ないという結論を得た。本研究成果は、IJC Metabolic & Endocrine誌(2014; 5: 42-47)にて報告した。我々がこれまで行ってきた関連する研究から、血中コレステロール低下薬であるHMG-CoA還元酵素阻害

薬(スタチン)はADMAを低下させることを明らかにした。ADMAは血圧調節に悪影響を及ぼすことから、スタチンの投与は血圧調節に好影響を与える可能性が考えられる。そこで我々は、次に、プラバスタチンによる心血管疾患一次予防効果を検証したMEGA Studyデータベースを利用し、プラバスタチンによる高血圧発症予防効果を検討した。その結果、プラバスタチン投与により高血圧発症リスクを約10%低下させる可能性が示唆された。予防医学研究2年次として、当初の計画通りの解析作業を進めることができた。さらに本解析から得た知見について医学専門誌における公表もなされ、研究達成度としては順調に進展していると言える。研究所年度の目標であったADMAの測定が終了したため、研究は概ね順調であると判断する。研究最終年次(3年目)として、血清ADMA濃度がメタボリック症候群発症の予測因子となるかについて、データ解析と論文化を行う。研究2年目は、対象者の向こう4年にわたる経時的健康診断データを分析し、メタボリック症候群の新規発症と血中ADMA濃度との関連性を疫学的に明らかにする。また、かかる分析が終了し次第、国内外の学会で発表を行うべく応募を進めるとともに、英文論文執筆を開始する。研究費は、上述のデータ分析(統計解析)のための専用ソフトウェアの購入および学会発表(出張費、参加費)、論文投稿(英文校閲費、投稿料等)に用いる。ソフトウェアはJMPを予定する(15万円前後)。国内外学会出張・参加に30万円、論文作成投稿関係に5万円程度を想定する。
霊長類ゲノムにおけるL1ファミリー反復配列の成立と進化の分子機構

ヒト及び霊長類ゲノムに存在する大型の分散反復配列L1ファミリーについて解析した.既に我々はL1が逆転写酵素をコードする配列から由来し, RNAを介して分散するレトロポゾンの一種であることを示した.先ずL1の転移後の進化速度について検討した.Bグロビン遺伝子下流のL1配列を各種の霊長類間で比較した結果, L1は偽遺伝子と同じ程度の速さで変異を蓄積していることが判明した.このことは大半のL1配列は転移後は機能を失っていることを示唆するものである.また,この解析の過程で類人猿においては進化速度が低下していることが示唆された.L1は現在もゲノムの中で転移している証拠があるので,上の結果はゲノム中には転移能力を持つ少数の活性型L1が存在することを示唆している.この活性型L1を見い出すことがL1転移機構を理解する上に重要である.我々はL1の5 ́下端付近にC6配列が多いことに注目した, CG配列はメチル化の標的配列であり,活性型遺伝子はCG配列に富むことが知られている.従ってCG配列の多いL1を見い出すことにより活性型L1を同定できると考えられる.我々はCG配列を含む認識配列を持つ制限酵素BssHIとNarIを用いてヒトDNAを切断し,その中から,両酵素によって同時に切断されるL1配列がゲノム中に3050コピー存在することを認めた.これらの配列をクローン化しその塩基配列を決定したところ予想通り高いCG含量を持っていた.現在,この配列をもとに活性型L1クローンの同定を試みている.また,活性型L1を人工的に作成するため,ヒトβグロビン遺伝子下流のL1のタンパク質コード領域内に見られる翻訳停止コドンを人為的に除き約1200アミノ酸をコードする配列を作成した.ヒト及び霊長類ゲノムに存在する大型の分散反復配列L1ファミリーについて解析した.既に我々はL1が逆転写酵素をコードする配列から由来し, RNAを介して分散するレトロポゾンの一種であることを示した.先ずL1の転移後の進化速度について検討した.Bグロビン遺伝子下流のL1配列を各種の霊長類間で比較した結果, L1は偽遺伝子と同じ程度の速さで変異を蓄積していることが判明した.このことは大半のL1配列は転移後は機能を失っていることを示唆するものである.また,この解析の過程で類人猿においては進化速度が低下していることが示唆された.L1は現在もゲノムの中で転移している証拠があるので,上の結果はゲノム中には転移能力を持つ少数の活性型L1が存在することを示唆している.この活性型L1を見い出すことがL1転移機構を理解する上に重要である.我々はL1の5 ́下端付近にC6配列が多いことに注目した, CG配列はメチル化の標的配列であり,活性型遺伝子はCG配列に富むことが知られている.従ってCG配列の多いL1を見い出すことにより活性型L1を同定できると考えられる.我々はCG配列を含む認識配列を持つ制限酵素BssHIとNarIを用いてヒトDNAを切断し,その中から,両酵素によって同時に切断されるL1配列がゲノム中に3050コピー存在することを認めた.これらの配列をクローン化しその塩基配列を決定したところ予想通り高いCG含量を持っていた.現在,この配列をもとに活性型L1クローンの同定を試みている.また,活性型L1を人工的に作成するため,ヒトβグロビン遺伝子下流のL1のタンパク質コード領域内に見られる翻訳停止コドンを人為的に除き約1200アミノ酸をコードする配列を作成した.
フランス近代文学における非人間の詩学

近代フランス文学では、とりわけ詩の分野で、詩人不在という現象が明確になってゆく。抒情の言葉がもはや実在人物の心情から発生するのではなく、非人格化の過程で模索されるようになるのだ。ランボーの「私とは一個の他者だ」、マラルメの「発話する人間としての詩人の消滅」」など、詩人自身がこの非人格化の過程に意識的であったことを示す言葉は多い。だが、これらの詩人が同時に散文詩というジャンルを創設、発展させた詩人たちであること、非人格化の過程は抒情詩においてだけでなく、ヴァレリー、プルースト、ブルトン、カミュ、サルトル、ブランショ、クロード・シモン、ロブ=グリエなどの作家たちの散文にも広く見られることはまだ十分に意識されていない。フランス近代の散文において、この非人格化の過程がとりわけ散文作品においてどのように現れるのかを明らかにすることがこの研究の目的である。昨年は、夢と覚醒という二つの状態の境界で、〈私〉がどのような状態にあるのかという点に着目、その成果の一部を研究代表者が『目覚めたまま見る夢』という単著にまとめた。また、異なった領域間でこの問題がどのように扱われているのかを検討するため、メルロ=ポンティがコレージュ・ド・フランスでの講義草稿として残したヴァレリー論(1953年)を読み解く作業を行った。この講義草稿(『言語の文学的使用法の探究』)を出版したベネデッタ・ザッカレッロ先生に来日していただき、メルロ=ポンティ研究者である廣瀬浩司氏、加國尚志氏、佐野泰之氏、ヴァレリー研究者の山田広昭氏、森本淳生氏、井上直子氏に参加していただき、2019年3月に研究会を開催した。今度その成果をまとめて行く予定である。以上のような研究で得た知見をさらに発展させ、今後も人文科学のさまざまな研究領域と文学研究との接点を探りながら、近代文学を批判的に再検討するより強固な足場を見出していく所存である。フランス近代の散文に見られる〈非人間化〉という現象が、本研究の検討課題である。作品をほとんど全面的に人間的事実のフィクションから構成するという十九世紀の写実主義の方法への反発が、二十世紀の芸術家たちには広汎に見てとれる。それが具体的にどのように展開されたのかをめぐって、本年度は以下の研究を進めた。1)声をめぐるテクノロジー(電話、無線、ラジオ、オーディオ)の進展は、言葉によって表象される世界に根本的な変化をもたらした。とりわけ非人称の声、誰のものでもない声がそこでは大きな役割を果たした。同時に、二つの世界大戦によって、現実を前に言葉を失ったり、記憶が欠落したりといった容易に言葉にできない状況に数多くの人間が直面するようになり、どうすればその状況を表現できるかという疑問が正面から問われるようになった。こうした問題をめぐって、早稲田大学の鈴木雅雄氏と共同で進めていた研究を論文集として上梓した(塚本昌則・鈴木雅雄編『文学と声ー拡張する身体の誘惑』平凡社、2017年、584p.)。2)パリ第十大学のウィリアム・マルクス先生に日本に来ていただき、文学の危機をめぐる講演会・ゼミなどの研究交流を行った。近代文学が陥っている危機的状況は、「文学」という概念が歴史の産物であり、その概念が現況にはそぐわなくなっていることを示している。しかし人が読み、書くことをやめることはない。新しく求められている読み書き能力がどのような形態のものでありえるのかを考えた。3)ヴァレリーの『カイエ』をめぐって、ソルボンヌ大学ミシェル・ジャルティ教授を中心に進める研究チームに参加、草稿の活字化・注釈などの作業を行った。4)眠りのうちに人格が解体され、溶解し、目覚めた時に再び同じ人格が構成されるプロセスについて、二十世紀文学では多様な表現がなされている。これをめぐる研究を開始し、成果を学術雑誌に発表しはじめた。研究開始時に思い描いていたいくつかの課題については、具体的に分析を進めることができた。ヴァレリーにおける非人間化の問題を、声というテーマ、また夢と眠りというテーマにおいて、詳しく検討することができた。これらの検討を通して、二十世紀の散文において、非人間化という傾向がどのように現れるのか、そこにどのような意味があるのかという疑問について、考察を深めることができた。ただ、散文詩については、すでに研究の蓄積が膨大にあり、すぐに新しい成果を出すことは難しい状況である。二十世紀の散文の特質を掘りさげてゆくことで、十九世紀末から発展するこの詩の形式に関して、新たな知見を得ることができるのではないかという見通しをもっている。この見通しを具体化することが、今後の大きな課題として残されている。

フランス近代の散文において、この非人格化の過程がとりわけ散文作品においてどのように現れるのかを明らかにすることがこの研究の目的である。昨年は、〈声〉が個人を超える広がりを持っていることに着目、書かれた声、録音された声、音声詩、民謡・古歌、誰のものとも言えない内なる声等々、文学における声の諸相に着目、鈴木雅雄氏(早稲田大学)と共同で研究を行い、その成果を『声と文学ー拡張する身体の誘惑』と題する論文集として刊行した。さらに、夢と覚醒という、個人のなかで人格の意識がゆらぐ状態に着目、「放心の幾何学」と題する一連の論考に取り組み、とりわけヴァレリー、プルースト、ブルトン、サルトル、バルトにおける非人間の詩学について研究、目覚め際の自分が誰なのかわからない、すぐに消える儚い瞬間に、これらの作家が汲み尽くせない言葉の源泉を見出していたことを明らかにした。分担研究者の中地義和氏が、ノーベル賞作家ル・クレジオ氏を始め、重要な講演会を数多く開催し、この点でも大いに刺激を受けた。今後はこうした研究で得た知見を綜合し、近代文学を批判的に再検討するより強固な足場を見出していきたい。近代文学、とりわけ十九世紀末以降の文学では、個人を単位とする近代市民主義小説の限界がさかんに叫ばれるようになる(ミシェル・レーモン『小説の危機』等)。近代文学においては、小説、抒情詩、戯曲という文学ジャンルが主流となり、個人に焦点を当て、社会、他者との関係、さらに人生における理想との関係において、どれほど苦悩を重ね、障害を乗りこえてゆくのかを記述することが、中心的な営みとなった。ところがその個人が空虚なものとみなされるようになり、そこに言葉の源泉となる苦悩と歓喜の中心が見出せないという認識が急速に広がってゆく。第一次世界大戦は、その意味で十九世紀文化の核心にあった方法論を破壊したと言えるかもしれない。われわれの課題は、小説という社会認識、人間観察の手法の行き詰まりに一見みえるこの状況から、どれほど多様な、新たな散文の手法が編みだされたか、それらの試みの根底にあるものが世界に対するどのような認識なのかを探ることである。ここまでは〈声〉という捉えがたいものの研究、さらに眠りと覚醒の境界という主題論的研究から、この問題に取り組んできた。論文集を刊行、また後者についてはこれまで発表してきた論考をひとつのまとまった形にしようと努力している過程である。その意味で研究計画はほぼ順調に進展している。だが、自分たちの課題をより深く捉えなおすために、ここで検討した視点だけでは不十分なことは明かであり、今後さらに努力を重ね、問題をより多角的・重層的に捉える視座を築く必要を感じている。研究をさらに発展させるため、他の研究者との連絡をより緊密に取り、新たな研究領域の開拓にも務めたい。近代フランス文学では、とりわけ詩の分野で、詩人不在という現象が明確になってゆく。抒情の言葉がもはや実在人物の心情から発生するのではなく、非人格化の過程で模索されるようになるのだ。ランボーの「私とは一個の他者だ」、マラルメの「発話する人間としての詩人の消滅」」など、詩人自身がこの非人格化の過程に意識的であったことを示す言葉は多い。だが、これらの詩人が同時に散文詩というジャンルを創設、発展させた詩人たちであること、非人格化の過程は抒情詩においてだけでなく、ヴァレリー、プルースト、ブルトン、カミュ、サルトル、ブランショ、クロード・シモン、ロブ=グリエなどの作家たちの散文にも広く見られることはまだ十分に意識されていない。
脂質分子集合体ベシクルの一重膜および多重膜形成エネルギーに関する化学熱力学的研究

中性リン脂質および酸性リン脂質を研究対象物質として選び,これらの脂質が組織化する分子集合体の形状ならびに熱力学的安定性の相違を熱測定と電子顕微鏡観察から追跡した。(1)中性リン脂質,phosphatidyl-choline(一般にPC)は超音波照射によってエンタルピーの高い小さいサイズ,一重膜ベシクルを形成するが,不安定性のために34重膜のベシクルを経て,多重膜ベシクルへの安定化を試みることを明らかにした。なほ,この研究において安定化中途過程に出現するベシクルの構造とゲル-液晶相転移との相関関係を明らかにした。さらに超音波エネルギーを与えることで多重膜ベシクルが如何に不安定化するかをエンタル項から解明した。(2)酸性リン脂質,phosphatidylglycerol(PG)はpH3よりも大きいpH領域で負電荷を有することが知られている。従って,塩(対イオン)無添加の状態では,静電的効果によってこの脂質は無限に水に膨潤し,多重層形成が不可能になることが明らかにされている。そこで01000mMのNaCl共存下での研究を開始したが,Na^+イオンのPG負電荷のシャヘイ効果はゲルおよび液晶相温度で著しく異なることを明らかにした。すなわち,ゲル温度では負電荷へのNa^+の結合はこの温度での熱処理によって徐々に強められ,最終的にはこの結合は円柱状の結晶性二分子膜構造の超分子集合体を形成することを明らかにした。これまでの研究からはNa^+結合の程度はPGの水への膨潤を抑制する程度であると報告されていたが,我々の研究からは,Co^<2+>,Mg^<2+>と同様のシャヘイ効果をNa^+が有することを初めて明らかにした。この超構造体は液晶相温度ではNa^+からPG負電荷から解するために,もとのMLV構造に変えることも明らかにされた。又,MLVゲルから超構造体への移行過程を電子顕微鏡観察から解明した。1.酸性リン脂質,phosphaticlylglycerol(PG)を先ず,対象物質として選び,種々の塩濃度において多重膜ベシクルを形成し,これらのベシクルの集合形態の移行過程を現有の高感度示差走査熱量計を用いて,ベシクルの有するゲル-液晶相転をモニタ-することで追跡した。この熱測定実験と平行して,形態変化が著しいと見なされるベシクルについては,ネガティブ染色法による顕微鏡撮影を行ない,形態変化をより明確にした。以上の研究によって明らかにされた成果を要約する:i)PGの多重膜ベシクルは液晶相温度での熱処理によって100nmサイズの一重膜ベシクルに移行した後に,大きいサイズ(500nm)のベシクルを経てヘリックス構造を有する円筒状の棒状ベシクルに移行した。この移行過程の速度は塩濃度に依存し,高温濃度はこの速度を低下させた。ii)i)の実験結果を基にして,多重膜ベシクルから一重膜ベシクルへの移行に伴われるエネルギ-(エンタルピ-)を科研費で購入した高感度恒温型反応熱量計を用いて測定した。iii)その結果,PG1モル当りについて2Kcalに相当するエネルギ-が放出されることで多重膜から一重膜ベシクルへの移行が達成されることが明らかにされた。この結果は,中性脂質PCの結果とは全く異なり,一重膜ベシクルの方がより熱力学的に安定であることを示す。2.中性リン脂質,phosphaticlylethanolamine(PE)を次に対象物質として選んだ。

これはPCリン脂質ほど親水頭部のサイズは大きくなく,調製された小さいサイズの一重膜ベシクルは直ちに,大きいサイズ(100nm)の一重膜ベシクルに移行した。その後,このベシクルも上述のPGと同様にさらに大きいサイズに移行した後に,ヘリックス構造を有する棒状ベシクルに至った。中性リン脂質および酸性リン脂質を研究対象物質として選び,これらの脂質が組織化する分子集合体の形状ならびに熱力学的安定性の相違を熱測定と電子顕微鏡鎖観察から追跡した。(1)中性リン脂質,phosphatidylcholine(一般にPC)は超音波照射によってエンタルピーの高い小さいサイズ,一重膜ベシクルを形成するが,不安定性のために34重膜のベシクルを経て,多重膜ベシクルへの安定化を試みることを明らかにした。なほ,この研究において安定化中途過程に出現するベシクルの構造とゲル一液晶相転移との相関関係を明らかにした。さらに超音波エネルギーを与えることで多重膜ベシクルが如何に不安定化するかをエンタル項から解明した。(2)酸性リン脂質,phosphatidylglycerol(PG)はpH3よりも大きいpH領域で負電荷を有することが知られている。従って,塩(対イオン)無添加の状態では,静電的効果によってこの脂質は無限に水に膨潤し,多重層形成が不可態になることが明らかにされている。そこで0100mMのNaCl共存下での研究を開始したが,Na^+対イオンのPG負電荷のシャヘイ効果はゲルおよび液晶相温度で著しく異なることを明らかにした。すなわち,ゲル温度では負電荷へのNa^+の結合はこの温度での熱処理によって徐々に強められ,最終的にはこの結合は円柱状の結晶性二分子膜構造の超分子集合体を形成することを明らかにした。これまでの研究からはNa^+結合の程度はPGの水への膨潤を抑制する程度であると報告されていたが,我々の研究からは,Ca^2,Mg^<2+>と同様のシャヘイ効果をNa^+が有することを初めて明らかにした。この超構造体は液晶相温度ではNa^+からPG負電荷から解するために,もとのMLV構造に変えることも明らかにされた。又,MLVゲルから超構造体への移行過程を電子顕微鏡観察から解明した。
薬剤フリー環境において抗生物質耐性能がもたらす微生物間相互作用および群集動態変化

黄色ブドウ球菌Staphylococcus aureusの自然耐性株を取得するため、各種抗生物質存在下で培養をおこなった。その結果、野生株(Newman株)よりも有意に生存・増殖能が向上し、薬剤耐性が向上した株を複数得た。特に、緑膿菌Pseudomonas aeruginosaの産生する抗菌性二次代謝産物であるpyocyaninについても自然耐性株を取得した。緑膿菌と黄色ブドウ球菌の両種間の相互作用における株レベルでの多様性を明らかにするため、各種臨床分離株を用いて様々な組み合わせで共培養をおこない、増殖や二次代謝産物産生能への変化を解析することで相互作用プロファイルを解析した。緑膿菌PAO1株に対し、黄色ブドウ球菌の臨床株(メチシリン感受性株(MSSA)2株、耐性株(MRSA)3株の計5株)を作用させ、互いの増殖への影響を評価したところ、緑膿菌の増殖に黄色ブドウ球菌の存在は影響を及ぼさなかったが、緑膿菌は黄色ブドウ球菌の生育を阻害した。緑膿菌による生育阻害作用の効果は黄色ブドウ球菌の株によって異なったものの、薬剤耐性株であるかどうかとは関連が無かったことから、緑膿菌の産生する抗菌性二次代謝産物に対する感受性は薬剤耐性と特に相関はないと考えられた。一方で、黄色ブドウ球菌との共培養において、緑膿菌の二次代謝産物(pyocyanin)産生能が緑膿菌単独培養時に比べて変化し、さらにその変化は共存する黄色ブドウ球菌の株によって異なった。このことから、黄色ブドウ球菌は緑膿菌によって生育を阻害されながらも、緑膿菌の代謝に影響を及ぼしていることが示され、その作用も株レベルで多様性があることが明らかになった。翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。
白血病幹細胞の維持と再発・治療抵抗性に関わる遺伝学的基盤の解明

近年、急性白血病の治療成績には大きな進展が認められたが、白血病の治癒率は未だ50%に満たない。本研究では、白血病の治癒率向上の原因となっている難治性白血病および再発・治療抵抗性白血病の遺伝学的な基盤を解明することを目的として、次世代シーケンスを用いた白血病(とくに難治性白血病)の網羅的な変異解析を行うとともに、同定された新規変異標的について多数症例を用いた標的シーケンスを行った。その結果、コヒーシン複合体、SETBP1の変異を含む多数の新規変異標的遺伝子を同定し、これらの多くが難治性白血病と関連すること、また、主要な標的遺伝子の変異の同定により白血病のより正確な予後予測が可能なことが示された。1)全エクソンシーケンスによる難治性白血病における治療標的変異分子の同定に関して、本年度、20例の急性骨髄性白血病(AML)について、全エクソンリシーケンスを行い、AMLにおけるRNAスプライシング因子(二次性AMLの約25%,Yoshida K,et al.,Nature,2011)、その他のエピゲノム制御因子を含む新たな遺伝子変異の同定に成功した(投稿中)。とくに、前者については、その機能的な解析も含めて、RNAスプライシングに関わる一群の因子の変異ががんで変異を来していることを初めてあきらかにした成果であり、世界的に極めて高く評価されている。2)治療抵抗性・再発に関わる白血病の遺伝的多様性の解析については、初診時および再発時両方の試料が保存されているAML5例についてゲノムDNAを抽出し、全エクソン解析を行った。これらの解析結果からは、1)再発時にはしばしば初発時に認められる遺伝子変異に加えてあらたな遺伝子変異が付け加わること、従って変異遺伝子数の増加がみとめられること、2)一方、これまでの解析からは、初発時に変異が生ずる遺伝子と再発時に変異がみとめられる遺伝子には明確な特異性は認められないこと、また、再発時に出現する新たな変異はしばしば初診時に既にマイナークローンとして検出されることが明らかとなった。3)220例のJALSG保存試料について高速シーケンサを用いた80遺伝子のターゲットシーケンスを行い、これまで白血病で報告されている遺伝子の包括的な解析を行った。今後の予後解析等を含めて臨床パラメータとの関連解析によって、白血病の再発や治療抵抗性に関わる遺伝子変異の同定が期待される。平成25年度は、急性骨髄性白血病(AML)の大規模コホートを対象として、H24年度までの解析で新たに同定したコヒーシン、PHF6、BCOR/BCORL1等を含むAMLの主要な標的遺伝子51遺伝子について、次世代シーケンサを用いたdeep sequencingによる網羅的な変異解析を行い、変異の頻度と分布、予後との相関を検討した。解析に用いたコホートはJapan Adult Leukemia Study Group (JALSG)AML201研究で治療された急性前骨髄性白血病を除く197例のAML患者で、RT-PCR法による腫瘍な関連転座の解析も併せて行った。解析の結果44遺伝子に計505個の遺伝子変異が同定された。10%を越える変異頻度を示す遺伝子はFLT3, NPM1, DNMT3A, CEBPA, KITを含む5つのみで、変異頻度の少ない多数の遺伝子が変異の標的となっており、変異の観点からAMLの多様性が示唆された。これらの変異は、年齢、核型、白血球数、CR率や予後、他の遺伝子変異と有意な相関が認められることから、変異と臨床像との間の密接な関連が示唆された。とくにTP53変異、MLL-PTD変異、DNMT3A変異, FLT3-ITD変異、RUNX1変異を有する症例は予後不良で、難治性白血病の遺伝子マーカーとして有用であると考えられ、実際これらの変異に基づいて患者のリスクの層別化が可能であることが示された。一方、コヒーシンを含む新たに同定された変異の生物学的機能の解析についてもin vitroの検討を行ったが、その白血病における意義についてはマウスモデルを用いたより詳細な解析が必要と考えられた。経時的な変異の解析とこれに基づく数理モデルの構築については十分な検討に至らず今後の課題として残された。難治性急性骨髄性白血病(AML)の再発に関わる遺伝子変異を探索する目的で、初発時、再発時、および正常(寛解期)DNA検体の得られる種々の病型を含む成人再発AML 33例(t(8;21):10例, t(15;17):8例, FLT3-ITD: 10例,正常核型ないしMLL-PTD: 5例)について、全エクソン解析を行った。同定された変異候補についてはすべてサンガーシーケンスによる検証を行った。正常核型AMLを除く各病型で5-10個の非同義置換を伴う体細胞変異が同定された。

一方、正常核型AMLでは25-35個の変異が同定された。t(8;21)転座陽性AML(N=10)の解析では計92個の非同義置換変異が同定された。うち47変異は初発・再発に共通する変異であったが、10変異は初発時のみ、35変異は再発時のみに認められる変異であった。KIT, TET2, TTN,およびMGAの変異が繰り返し認められた。FLT3-ITD陽性AML(N=10)ではDNMT3A, WT1, RUNX1 and IDH1遺伝子を含む50個の遺伝子に計60個の非同義置換変異が同定され、うち38遺伝子は初発・再発で共通する遺伝子であった。急性前骨髄球性白血病(N=8)では, 61遺伝子に計63 mutationsが同定された。MLL-PTD AML(N=5)では, 42遺伝子に変異が認められ、うち、24遺伝子が初発時と再発時で共通していた。APL以外の症例では再発時クローンは初発時に認められた主要なクローンに由来していたが、APLの4例では初発時と再発時で全く異なるクローンに由来することが確認された。一方、再発ALLについては現時点で7例の解析が完了している。今後同定された変異をより多数のコホートが確認することによりこれらの臨床的、生物学的な意義を明らかにする。1)AMhのゲノム解析については、既に予定の30例のうち当初の計画を上回る20例について解析が完了し、新たな遺伝子変異が複数同定されている。2)BarCodeシーケンスについてはJALSGコホート220例について80遺伝子を標的としたターゲットシーケンスが終了している。ただし、技術的な問題(サンプル処理の自動化システムのトラブル)から、変異のSangerシーケンスによる検証および予後を含めた相関解析は年度内に完了することができず、3ヶ月程度の遅れが生じている。3)エビゲノム解析については、資金的な問題から今回の研究の主要項目として遂行することは不可能と考えられた。ただし、本年度の解析によって、エピゲノム制御に関わる新たな遺伝子変異が多数同定されており、白血病におけるエピゲノム異常が本質的にこれらのエピゲノム制御に関わる遺伝子変異による可能性が示唆された。このことは本分野における重要な発見であって、本研究の趣旨に成果であると考えられる。25年度が最終年度であるため、記入しない。現時点では、再発AMLについては当初の計画の30例を越える症例のエクソンシーケンスが完了しているが、ALLについては解析試料の収集が困難で、現時点で7例の解析にとどまっている。また当初予定の大規模コホートのシーケンスについてはJALSG検体192例について82遺伝子を対象とした変異解析が終了しているが、解析遺伝子数に比較して症例数が未だ少ないため、相対的な統計的解析力が低下しており、今後さらに症例数を増やした解析が必要である。現在解析中である。当初計画したエピジェネティクな異常の網羅的な解析については、現時点では未だChIPシーケンスの基礎的検討が終了したのみで、再私有年度に残された課題である。1)3年間の交付基準額の当初の申請の70%となったことから、研究計画の一部については変更が必要と考えられる。当初の申請で計画したA)B)C)の3つの項目のうち、C)の遂行については他の競争的資金の獲得を図ることとして、研究をA)B)に集約することが必要である。