hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
特定健診事業における歯周病とメタボリックシンドロームの関連性についての横断的研究

歯科検診希望者1038名を対象に、CPI(地域歯周疾患指数)およびGCF(歯肉溝浸出貯留液)バイオマーカーとMSおよびMS関連指標との関係について検討した。結果として、CPIとGCFバイオマーカーの発現との関係は、有意な関係は認めなかった。また、MSおよびMS関連指標の所見の有無別でGCF検査値を比較した結果、ASTは腹囲、MSで有意差を認めた(P<0.05)。さらに、MSおよびMS関連指標とCPIおよびGCFバイオマーカーとの関係をロジスティック回帰分析した結果、それぞれにおいて有意差は認めなかった。結論として、CPI、GCFバイオマーカーとMSおよびMS関連指標との関連性は認めなかった。【方法】健診医療機関の協力を得て、人間ドックへの受診者のうち、歯科検診希望者を対象とした。MS関連指標としては、肥満(BMI≧25、腹囲≧男性85cm、女性90cm)、高血圧(収縮期血圧≧130mmHg又は拡張期血圧≧85mmHg)、脂質異常(TG≧150mg/dl、HDLーC<40mg/dl)および高血糖(空腹時血糖≧110mg/dl)を陽性とした。歯周病の指標は、歯周ポケットの有無(CPI≧スコア3;有、CPI≦スコア2;無)にて評価した。また、GCF中のラクトフェリン(LF)、α1 -アンチトリプシン(AT)、アスパルテートアミノトランスフェラーゼ(AST)の定量的分析を行い、各種指標に関して、統計学的に検討を加えた。【結果】対象者は1038名であった。歯周ポケットの有無とGCFバイオマーカーの発現との関係は、有意な関係は認められなかった。MSおよびMS関連指標の所見の有無別でGCF検査値を比較した結果、ASTは腹囲、MSで有意差を認めた(P<0.05)。さらに、MS関連指標とCPIおよびGCFバイオマーカーとの関係をロジスティック回帰分析した結果、それぞれにおいて明らかな有意差は認められなかった。【考察】CPIおよびGCFバイオマーカーとMSおよびMS関連指標との関連性は認められなかった。しかしながら、埴岡らの報告らではGCF中のバイオマーカーとMSとの関連性を示され、歯周組織の炎症応答とMSとの関連性が示唆されている。今後は、GCFバイオマーカー等の再検討を行い、再度研究する必要があると考えられた。平成24年12月平成25年3月の約4ヶ月間、一般財団法人京都工場保健会にて人間ドック受診者のうち歯科健診希望者1226名(男性741名、女性485名、平均年齢62歳)に対して、歯科健診{CPI:Community Periodontal Index(地域歯周疾患指数)、GCF:Gingival Crevicular Fluid(歯肉溝滲出貯留液)バイオマーカー検査、歯周病原菌の定量検査)と問診(喫煙、飲酒の状況など:歯周病ならびにメタボリックシンドローム(以下、MS)の修飾因子やMSの診断基準に関する既往歴や服薬歴など)・歯科保健に関するアンケート調査を実施、人間ドックでのMSに関連する検査項目(身体測定、BMI、血液化学検査、血糖検査、血圧測定等)を抽出した。なお本研究は、京都府立医科大学倫理審査委員会(RBMRーC478)および京都工場保健会倫理審査委員会にて承認を得た同意書の内容を被験者に説明、承諾を得た上で実施した。今後、歯周病とMSとの関連性ならびに歯科健診での歯肉溝バイオマーカー検査の有用性について疫学的に検討を加える。また、歯科健診とJ-MICC Study(日本多施設共同コーホート研究)参加者への歯科保健に関するアンケート調査を実施、地域の歯科保健への意識について検討を加える。これにより、歯周病とMSとの関連性(両疾患の診断基準に係わる項目同士の関連、例えば、バイオマーカーと腹囲との関連など)が明らかになり、歯周病治療を行うことで、MSの予防や発症リスクの軽減、症状増悪の防止に役立つ可能性がある。また、MS治療が、同様に歯周病の予防や発症リスクの軽減、症状増悪の防止につながる可能性がある。そして、さらにMSに関係する糖尿病や動脈硬化性心疾患などの発症リスクを軽減することができると考える。平成24年度に約4ヶ月間歯科健診を実施し、歯科健診希望者1226名(男性741名、女性485名、平均年齢62歳)に対して、歯科健診{CPI:Community Periodontal Index(地域歯周疾患指数)、GCF:Gingival Crevicular Fluid(歯肉溝滲出貯留液)

バイオマーカー検査、歯周病原菌の定量検査)と問診(喫煙、飲酒の状況など:歯周病ならびにMSの修飾因子やMSの診断基準に関する既往歴や服薬歴など)・歯科保健に関するアンケート調査を実施、人間ドックでのMSに関連する検査項目(身体測定、BMI、血液化学検査、血糖検査、血圧測定等)を抽出した。現在、データ整理を行い、より詳細に疫学的に検討を加える準備段階である。今後の研究の推進方策として、平成24年度に約4ヶ月間歯科健診を実施得られた1226名分の歯科的データ、問診(喫煙、飲酒の状況など:歯周病ならびにMSの修飾因子やMSの診断基準に関する既往歴や服薬歴など)・歯科保健に関するアンケート調査結果やMSに関連する検査項目(身体測定、BMI、血液化学検査、血糖検査、血圧測定等)の全身検査データを用いて、以下に示す項目について疫学的な検討を加える。1歯周病とMSとの関連性について2歯科健診での歯肉溝バイオマーカー検査の有用性について3歯科健診とJ-MICC Study参加者への歯科保健に関するアンケート調査結果を評価、地域の歯科保健への意識についてなお本研究の統計解析は、解析ソフト(SPSS Statistic 17.0)を使用する。成果結果は、京都府立医科大学附属病院ホームページ、広報誌(京都府民だより、かもがわ等)、学会で定期的に情報を公表する。歯肉溝バイオマーカー検査は平成25年4月に分析完了の為、平成24年度研究費を次年度に使用する。また、成果結果は、京都府立医科大学附属病院ホームページ、広報誌(京都府民だより、かもがわ等)、学会で定期的に情報を公表する。
金属表面上の活性酸素による炭化水素の酸化

まずエネルギー的に高い活性な酸素原子の前駆体としてN_2Oを選び,その光解離反応についての知見を得ると共に,これによって生成される活性酸素の引起こす金属表面上での反応について研究を行った。N_2Oを82Kで単分子層吸着させたPt(111)表面に紫外光を照射すると,N_2Oは解離し酸素原子と窒素分子を生成する。窒素分子は表面との相互作用が小さいため表面から脱離する。励起光として193nm(6.4eV)の紫外光を用い,脱離する窒素分子の並進エネルギー分布を飛行時間分析から求めた結果,平均の並進エネルギーとして0.75と0.26eVという高いエネルギーを有した2つの速度成分があることがわかった。このようなN_2の高い並進エネルギーを考慮すると,解離直後に酸素原子も大きな余剰エネルギーを持つと考えられ,これを表面に完全に散逸させる前に他の吸着種と反応を起こす可能性がある。そこで,この可能性を探る目的で化学吸着した酸素原子とN_2Oとの共吸着系に紫外光(193nm)を照射した。その結果,N_2Oの光解離で生じた酸素原子の一部があらかじめ強く化学吸着している酸素原子を表面上から引き抜き酸素分子として脱離することを見出した。この酸素原子の結合反応には1eV程度の活性化障壁が存在することが知られており,光解離によって生成された酸素原子はこれを乗り越えるのに十分なエネルギーを有していることがわかる。このようなエネルギー的に高い酸素原子とメタン等との反応を引起こすためには、メタンを金属表面に効率よく吸着させるために40K以下の表面温度を達成しなければならない。これに関してはこれまで使用してきた液体窒素による冷却を行っていたサンプルホールダーを改良し、He小型冷凍機を用いたタライオスタットを試作し、その見通しを得つつある。
微小血管抵抗に及ぼす白血球の影響

本研究では、白血球が微小血管の血管抵抗を上昇させるメカニズムについて流体力学的に調べた。動物実験による観察から、次の3つの白血球に特徴的な現象が血管抵抗上昇に関係していると考えられる:(1)毛細血管内で、遅い白血球の背後に赤血球が次々たまって赤血球の高密度の流れ(赤血球列)ができる、(2)白血球が微小血管入り口で長時間滞在するか、詰まってしまう、(3)白血球が細静脈の壁の上を転がり、粘着する。まず、動物実験では、生体内微小血管における白血球の挙動の観察と血管抵抗の計測を行った。数値解析では、上記3つの現象について、個々の挙動が血管抵抗に与える影響を定量的に評価した。1.動物実験:麻酔下のラット腸間膜の微小血管内血流を生体顕微鏡で観察し、ビデオ画像に取り込んだ後それを再生して、白血球の挙動を詳細に調べた。また、ラット筋肉の微小血管系を取り出し、血球を全く含まない液、赤血球、白血球をそれぞれ含む液、赤血球と白血球を含む液の4種類の還流液を流して、圧-流量関係を計測し、それぞれの場合の血管抵抗を測定した。その結果、白血球と赤血球の相互作用が重要であることが示された。2.数値解析による血管抵抗の評価:(1)(3)のそれぞれの現象について、微小血管内の流れを数値的に解析し、白血球の挙動が微小血管の血管抵抗をどの程度増加させるかを、定量的に評価した。(1)の解析結果は、ガラス管を用いて得られた実験結果をよく説明し、生理的な白血球数のとき血管抵抗は白血球がない場合の2.5倍程度まで増加する可能性を示唆した。(2),(3)の解析では、白血球が活性化すると血管抵抗が顕著に上昇する結果が得られ、特に(3)については動物実験結果と定量的に一致して、細い血管ほど上昇の割合が大きいことが示された。白血球が存在することによって微小血管の血管抵抗が大きく増加するという最近の実験結果を説明するために、本研究は、白血球が微小血管の血管抵抗に及ぼす影響について流体力学的に検討し、血管抵抗上昇のメカニズムの解明を目指している。本年度は、以下に示す、動物実験で観察されている微小血管内の白血球の特徴的な挙動のそれぞれについて、剛体粒子を白血球のモデルとして用いて、微小血管内における流れの様子および血管抵抗の値を数値的に求めた。まず、(a)微小血管内を遅く移動する白血球に速い赤血球が次々追いつき、白血球背後に赤血球の高密度の列(赤血球列)が形成されることの影響を調べた。白血球を大きな球状粒子、赤血球を小さな球状粒子として微小管内におけるこれらの粒子の運動を解析した。赤血球は白血球を追い抜くことができないため、白血球の後ろに血管中心軸からずれて互い違いに高密度に並ぶ。この赤血球列の形成により、白血球を含まない場合に比べ、血管抵抗は30%近く上昇する結果が得られた。次に、(b)活性化された白血球が静脈壁に粘着することの影響を調べた。楕円体形状の白血球モデルが血管壁に粘着している場合の流れを数値解析した結果、血管抵抗は著しく増加し、特に血管径が小さいほどその増加は顕著であることが分かった。得られた値は動物実験の測定値と良い一致を示した。

最後に、(c)白血球の変形性は赤血球に比べ劣るため、微小血管に入るのに一定の時間を要することの影響を調べた。正常な白血球では血管抵抗の上昇はほとんど無視できるが、活性化された白血球では微小血管入口部付近での滞在時間が長くなる結果、血管抵抗を10%以上増加させる可能性が示唆された。本研究は、白血球が微小血管の血管抵抗に及ぼす影響について流体力学的に検討し、白血球に起因する血管抵抗上昇のメカニズムの解明を目指している。本年度は、1.動物実験により、生体内微小血管における白血球の挙動を観察し、2.それぞれの現象の白血球周りの血液流れについて数値解析を行って、流れ場を求めた。1.動物実験:麻酔下のラット腸間膜の微小血管内血流を生体顕微鏡で観察し、白血球が観察された箇所をビデオ画像として取り込んだ。それを再生して、微小血管内における白血球の挙動を調べた。a)赤血球列の形成:赤血球に比べサイズが大きく変形性の劣る白血球は、毛細血管内で赤血球より遅い速度でしか移動できない。従って、毛細血管内の白血球に速い赤血球が次々追いつき、白血球背後に赤血球の高密度の列(赤血球列)が形成されるのが観察された。毛細血管の一点において、光強度の時間変化を測定することにより、赤血球列の長さとの関連を検討した。b)白血球の血管壁上の転がりと粘着:細静脈の血管壁近傍に白血球が現れ、管壁上を転がったり、管壁に粘着するのが観察された。白血球の転がりの速さと周囲の赤血球速度との間には正の相関が見られた。白血球の細静脈壁への粘着は、血管湾曲部や粘着白血球の背後など起こり易い部位があるように観察された。c)白血球の活性化の影響:FMLPの投与により白血球を活性化させると、粘着白血球の数は著しく増加した。2.数値解析:毛細血管内の赤血球列の形成と白血球の細静脈壁への粘着現象のそれぞれの場合について、微小血管内の流れを数値的に解析した。血液流れが粘着白血球に及ぼす応力を詳しく調べた結果、白血球表面の応力分布は粘着白血球の配置の仕方、血管径に大きく依存することが分かった。血管抵抗について、管径、白血球数等のパラメータ依存性を検討しているところである。本研究は、白血球が微小血管の血管抵抗を上昇させるメカニズムを流体力学的に解明することを目指している。本年度は、1.実験データを整理し、従来の研究成果と合わせて、生体内微小血管内における白血球の挙動をまとめ、2.白血球の個々の挙動が血管抵抗に与える影響を数値解析により定量的に調べて、最も重要な因子について検討した。1.実験データのまとめ:白血球に関係した3つの現象:a)毛細血管内における白血球背後の赤血球列の形成、b)白血球の細静脈壁への粘着現象、c)白血球の活性化の影響、のそれぞれにつき、生体内微小血管内における白血球の挙動を整理した。2.血管抵抗の評価:a)、b)、c)のそれぞれの場合について、微小血管内の流れを数値的に解析し、白血球の挙動が微小血管の血管抵抗をどの程度増加させるかについて、定量的に評価した。a)の解析結果は、ガラス管を用いて得られた実験結果をよく説明し、生理的な白血球数のとき血管抵抗は白血球がない場合の2.5倍程度まで増加する可能性を示唆した。b)の解析結果は動物実験結果と定量的に一致し、白血球の血管壁への粘着によって血管抵抗は2倍程度までなりうることが分かった。c)について、微小血管入り口近傍における白血球の停滞は血管抵抗に数%十数%程度の寄与を与えることが分かっている。以上から、細く長い毛細血管ではa)の寄与が重要であり、直径が10ミクロンのオーダーの細静脈ではb)の寄与が大きいことが推察される。今後、この解析を血管網に広げることが必要であろう。
幾何フラストレーション磁性体としての銅水酸化物の合成と電場効果

高温超伝導のメカニズムとして関連が指摘されている量子スピン液体状態の解明や、未知の磁性現象の発見を目指し、幾何フラストレーション系磁性物質である銅水酸化物誘導体の合成、構造決定、磁気測定を主に実施する。さらに、銅水酸化物や配位高分子磁性錯体の構造的特徴に着目し、電場印加による構造歪の誘起に基づく磁気的変調を示す磁性体の探索を行う。
電場応答性液体を用いたソフトマシン用デバイスに関する研究

電場を印加すると固化し、除去すると再び流動化する流体をエレクトロレオロジー(ER)流体と呼ぶ。また、絶縁性液体に高電場を印加すると、流体内部に二次的な循環流が発生することがあり、これを電気流体力学(EHD)効果と呼ぶ。本研究の目的は、この2つの現象を応用して、液体モータなどソフトマシンを構築するために新規流体デバイスの設計基盤を確立することにある。1.2種類のER流体を開発した。1つは、メソポーラスシリカに銅フタロシアニンをドープした粒子であり、細孔へのドーピングだけで顕著ER効果が発現することを明らかにした。2つ目は高分子のブレンド粒子を分散した流体であり、単独ではER効果を示さない高分子でも溶融ブレンドするとER効果が発現することを明らかにした。2.ER流体は2枚の平行電極間に挟まれて電場が加えられるが、1枚の平板上に櫛形電極を形成してその上のER流体に電場を印加したところ、表面に波状の周期パターンが形成された。周期はER流体の厚さにより変化することを示し、粒子の電気泳動とER効果に起因する鎖状構造の形成の2つの複合効果によることを明らかにした。3.一方が自由に回転する2枚の円板上に放射状の電極を形成し、間隙にER流体を挟み、円板上を回転するかのように時間差をつけて電圧を印加したところ、円板が回転運動することを示した。電極間の鎖状構造が電場方向に配列しようとするため円板が回転するものであり、ERモータの基礎となる。4.絶縁性液体に直流の高電圧を印加すると、内部にジェット流が生じ、高速の循環流が発生することが知られているが、このジェット流を水中で発生させることに成功した。また、これを応用してインクジェットデバイスを試作した。絶縁性液体のEHD流動に関しては秒速数cmオーダーと説明されているが、秒速1m以上の高速ジェットの発生についてシミュレーションで再現することに成功した。電場を印加すると固化し、除去すると再び可逆的に流動化する流体をエレクトロレオロジー(ER)流体と呼ぶ。本研究は、この2つの現象を応用して、液体モーターやマイクロポンプなどソフトマシンを構築するために必要な新規流体デバイスの設計基盤を確立することにある。1.電場によるER流体の固化は基本的には粒子の誘電分極に起因するものであるが、粒子表面の導電状態も重要な要因となる。そこで、導電性付与のため、メソポーラスシリカに銅フタロシアニンをドープして、表面修飾によるER性能向上を試みた。その結果、細孔へのドーピングだけで顕著なER効果が発現することを明らかにした。これは機能分離型のER粒子を設計するための基盤となるものである。2.通常、ER流体の評価を行う場合、静止状態で電場を印加してから、せん断流動を与えるという手法をとる。しかし、多くのERデバイスでは、流動場にある流体に電場を印加して制御を行う構造となっている。したがって、流動中のER流体に電場を印加したときの応答性に関する知見が必要となる。針状粒子分散系のER効果について検討した結果、静置下より振動せん断下で電場を印加した方が顕著なER効果が発現することを見出した。針状粒子が形成する鎖構造の密度が流体力学的相互作用より増大したためと考えられる。

3.絶縁性液体に直線の高電圧を印加すると、液体内部にジェット流が生じ、高速の循環流が発生することが知られているが、このジェット流を水中で発生させることに成功した。また、これを応用してインクジェットデバイスを試作した。水中においてノズル先端に高電圧を印加するだけで、ジェット下流が発生するので、ポンプやモーターなど新規流体デバイスに応用できると考えられる。電場を印加すると固化し、除去すると再び可逆的に流動化する流体をエレクトロレオロジー(ER)流体と呼ぶ。また、絶縁性液体に高電場を印加すると、流体内部に二次的な循環流が発生することがあり、これを電気流体力学(EHD)効果と呼ぶ。本研究は、この2つの現象を応用して、液体モータやマイクロポンプなどソフトマシンを構築するために必要な新規流体デバイスの設計基盤を確立することにある。1.電場によるER流体の固化は基本的には粒子の誘電分極に起因するものであるが、粒子内部構造および表面の不均一性が重要な要因となる。単独ではER効果を示さないポリビニルアルコールとポリエチレングリコールを溶融して調製したブレンド粒子をシリコーンオイルに分散した不均一流体系においてER効果が発現することを見いだした。これはER粒子設計法に関する新しい手法を提供するものである。2.昨年度の研究で、針状粒子分散系のER効果においては、静置下より振動せん断下で電場を印加した方が顕著なER効果が発現することを見出し、針状粒子が形成する鎖構造の密度が流体力学的相互作用より増大したためと推論したが、顕微鏡観察によりこのメカニズムの妥当性を確認した。3.絶縁性液体に直流の高電圧を印加すると、液体内部にジェット流が生じ、高速の循環流が発生することが知られているが、このジェット流を水中で発生させることに成功した。これを応用して水に高電圧を印加しただけで作動する液体モータを開発した。さらに水をノズルから噴射できるインクジェットデバイスを開発した。これらデバイスの性能について検討し、メチルアルコールやエチルアルコールでも作動することを確認した。電場を印加すると固化し,除去すると再び可逆的に流動化するエレクトロレオロジー(ER)流体と高電圧印加により流体内部に発生する電気流体力学(EHD)的2次流れの2つの効果を応用して柔らかいER流体デバイスと多様な作動媒体により機能するEHDデバイスを開発することを目的とするものである.1.ER流体は通常2枚の平行電極間に挟まれた状態で電場が印加されるが,1枚の平板上に櫛形電極を形成してその上に置かれたER流体に電場を印加したところ,ER流体表面に波状の周期パターンが形成された.このときの周期は電極上のER流体の厚さにより変化することを見い出し,粒子の電気泳動とER効果に起因する鎖状構造の形成の2つのメカニズムの複合効果であることを明らかにした.2.一方が自由に回転する2枚の円板上に放射状の櫛形電極を形成し,その間隙にER流体と挟み,円板上を回転するかのように櫛形電極に時間差をつけて電圧を印加したところ,電極円板自身が回転運動することを明らかにした.電場中で形成される鎖状構造は常に電場方向に配列しようとするため電極円板が回転するものであり,新しい流体デバイスをしてのERモータの基礎となる.3.絶縁性液体に直流の高電圧を印加すると,液体内部にジェット流が生じ,これを用いてモータやインクジェットなどの新規流体デバイスを開発した.
長寿変異マウスを用いた老化の分子機構の解明

我々は、RNA結合蛋白質Mex3Bの欠損マウスが野生型と比較して寿命が有意に延長し、さらに細胞老化も阻害されていることを見出した。本研究は、Mex3Bの下流で細胞老化に重要な役割を担う遺伝子を網羅的に同定し、個体老化と細胞老化の分子制御機構を明らかにすることを目的とする。昨年度改良した全ゲノム的な探索法により以前よりも多くの因子を候補因子として同定することができ、さらにその中には分泌タンパク質も存在することが判明した。我々はこの中で、機能未知な分泌タンパク質NTに着目し、生物学的機能の解析を行った。その結果、NTの発現量はヒト線維芽細胞IMR90においてRas強制発現による老化誘導により増加すること、さらにこの増加はMex3Bのノックダウン(KD)により緩和することがReal time RT-PCRにより明らかになった。また、NTをKDすると、Ras強制発現による老化誘導が緩和されていた。以上の結果から、NTは老化を誘導する機能を有することが示唆された。続いて、NTが分泌タンパク質であることを確認するため、IMR90の培養上清中に存在するNTの量を質量分析器にて検討した。その結果、NTは培養上清に存在し、さらにその存在量はRas強制発現による老化誘導によって増加する一方で、Mex3BのKDにより減少する傾向にあった。以上の結果より、NTは老化を誘導するSASP様に機能する分泌タンパク質であると考えられた。昨年度行った改良法による全ゲノム的な探索の結果、Mex3Bの下流で細胞老化を制御すると考えられる因子が多数同定され、その中にはSASP様に働きうる分泌タンパク質も存在した。当初の探索法では、1絞り込みに使用したCLIP-seqとRNA seqにおいて用いた細胞が異なっていたこと、2老化誘導量の評価基準として用いた老化マーカー遺伝子p16の発現量はIMR90では低レベルであること、の2点が問題であったと考え、改善を試みた。具体的には、CLIP-seqをIMR90を用いて再度実施することで実験データを取り直し、またp16に代わる老化マーカー遺伝子としてp15を採用した。その結果、以前のスクリーニングよりも多くの遺伝子を候補因子として抽出することに成功し、その中にSASP様に機能することが期待されるNTも含まれていた。引き続き、本年度同定されたMex3Bの下流で老化を制御すると考えられるNTの生物学的機能の解明を行う。具体的には、NTがSASP様に機能しうるかを検討するため、NTを強制発現またはNDしたIMR90の培養上清もしくはリコンビナントのNTをIMR90に添加し、老化の変化を検討する。さらに、NTがSASP様に機能していた場合、その受容体の探索も試みる。また、個体レベルにおいて老化が誘導される条件下における同定因子の発現変動を明らかにすることで、生理的な老化制御における同定因子の重要性の評価を行う。加えて、動物個体における寿命およびインスリン感受性における標的因子の重要性を明らかにするため、標的因子の欠損マウスの作製を行う。続いて、Mex3BがNTの発現を制御する分子機構を明らかにする。Mex3BはNT mRNAの3'UTRに結合すること、Mex3BのKDによりNT mRNAの発現が抑制されることから、転写後制御の可能性を第一に考えて解析を行う。

我々は、RNA結合蛋白質Mex3Bの欠損マウスが野生型と比較して寿命が有意に延長し、さらに細胞老化も阻害されていることを見出した。近年、細胞老化(Senescence)と個体の老化を結びつける現象としてSenescence-Associated Secretory Phenotypes(SASP)が注目されている。我々はこれまでの研究で、Mex3BがSASPにおいて細胞外放出されるタンパク質群のmRNAに結合していることを見出している。本年は、CLIP-seq、RNA seqおよびsiRNAライブラリーを用いた全ゲノム的な探索を行い、Mex3Bの下流で細胞老化に重要な役割を担う遺伝子を網羅的に同定し、個体老化と細胞老化の分子制御機構を明らかにすることを目的として研究を進めた。その結果、Mex3Bの下流で老化を担う候補因子を数種類同定することに成功したが、SASP様に働きうる分泌タンパク質は存在しなかった。そこで、探索法の改良に取り組み、再度全ゲノム的な探索を行った。今後は、改良法により同定した因子の生物学的機能を明らかにすると同時に、Mex-3Bによる同定因子の発現制御機構、および同定因子による老化制御機構を明らかにしていきたいと考えている。引き続き、本年度同定されたMex3Bの下流で老化を制御すると考えられるNTの生物学的機能の解明を行う。具体的には、NTがSASP様に機能しうるかを検討するため、NTを強制発現またはNDしたIMR90の培養上清もしくはリコンビナントのNTをIMR90に添加し、老化の変化を検討する。さらに、NTがSASP様に機能していた場合、その受容体の探索も試みる。また、個体レベルにおいて老化が誘導される条件下における同定因子の発現変動を明らかにすることで、生理的な老化制御における同定因子の重要性の評価を行う。加えて、動物個体における寿命およびインスリン感受性における標的因子の重要性を明らかにするため、標的因子の欠損マウスの作製を行う。続いて、Mex3BがNTの発現を制御する分子機構を明らかにする。Mex3BはNT mRNAの3'UTRに結合すること、Mex3BのKDによりNT mRNAの発現が抑制されることから、転写後制御の可能性を第一に考えて解析を行う。本年度改良した探索系を用いて得られた因子の生物学的機能を明らかにする。具体的には、当該因子を強制発現あるいはノックダウンした時に生じる老化の変化をReal time RT-PCRを用いて老化マーカー遺伝子の発現変動などから評価する。また、この同定因子がMex3Bの下流で老化を制御するのかを検討するため、Mex3Bをノックダウンした時に同定因子を強制発現もしくはノックダウンすることでレスキュー実験を行い、その時の老化の変化を検討する。また、細胞レベルおよび個体レベルにおいて老化が誘導される条件下における当該因子の発現変動を明らかにすることで、生理的な老化制御における重要性の評価を行う。加えて、動物個体における寿命およびインスリン感受性における当該因子の重要性を明らかにするため、当該因子の欠損マウスの作製準備に取り掛かる。
胎児剔出法による実験的ラット卵黄嚢腫瘍の発癌ならびに増殖機構の解析

妊娠ラットの胎児剔出により、卵黄嚢腫瘍および胚細胞関連腫瘍の誘発が可能である。その際、RT1不適合ラット間では腫瘍の誘発がみられないことが明らかとなった。RT1不適合ラットにおける胎児膜を追跡し、組織学的検討を加えるとともに、腫瘍誘発に対する内分泌環状変更の影響を検討し、次の結果を得た。1.同系交配ラット、同種交配ラットのいずれにも胎児摘出15日目に微小卵黄嚢腫瘍か見出された。RT1不適合同種交配ラットではその後、微小卵黄嚢腫瘍が消失するものとみられる。2.胎児膜と同系ラット睾丸内に直接注入すると、軟骨組織は出現したが、卵黄嚢腫瘍およびその他の奇形腫成分は認められなかった。3.両側卵巣剔出は、卵黄嚢腫瘍誘発に促進的に作用し、テストステロン、hCGの各ホルモン投与+卵巣剔出群は、これらホルモンの単独投与群よりも明らかに腫瘍の発生および腫瘍の大きさの増加が速やかであった。4.テストステロン、hCG投与群における腫瘍の大きさは、対照群に比し、明らかに小さかった。5.テストステロン、hCG以外のホルモン、例えばプロゲステロン投与群は、対照群との間に有為な増殖のちがいを認めなかった。6.いずれの実験群においても、24週という観察機関の中で、全く腫瘍の発生を認めなかったのは、わずか(021%)で、141頭中123頭(87.2%)に腫瘍の発現をみた。ホルモン投与のみでは、腫瘍の発現を完全に抑制することは不可能であった。7.各実験群に発生した腫瘍の組織像には、処置による差は認められず、いずれの群にも定形的卵黄嚢腫瘍の像が認められた。ヒト性腺のみならず,性腺外にも発生することの知られる卵黄嚢腫瘍の実験モデルとして,妊娠ラットに胎児剔出術を行い,卵黄嚢腫瘍に加え,絨毛上皮腫,奇形腫を高率に誘発することが可能となった.本年度はこれら腫瘍の誘発条件の再吟味を行い,(1)ラットの主要組織適合系の異る組合せでの交配を行い,経時的に胎児剔出後妊娠子宮壁に残置せしめた胎児膜がどのような変化を示すか.(2)腫瘍発生に関する起源細胞の存在していると考えられる胎児膜を同系同種ラットのいろいろな部分に移植し,腫瘍が誘発されるかどうか.を観察し,次の知見を得た.1.胎児剔出後に経日的に切開部子宮壁を組織学的に調べてみると,既に15日にして,ミニアチュア卵黄嚢腫瘍ともいうべき病変が,同系交配ラットにも,同種交配ラットにも見出された. RT1(ラットの主要組織適合系)の異なる交配ラットの胎児剔出では卵黄嚢誘発腫瘍は認められないことから,同種交配ラットにみられた初期病変はそのまゝ退縮するものと考えられる.2.胎児膜を妊娠子宮壁に留置することにより,腫瘍の誘発がおこるので,腫瘍誘発の起源細胞は胎児膜に存在すると考えられる.胎児膜を細切して,同系ラットの腹壁皮下,睾丸内に注入してみると,腹壁皮下注入群では,注入部に,変性壊死胎児膜を中心とした肉芽腫の形成をみたのみであった.一方睾丸内に直接注入した群では,明らかな軟骨組織の発現が認められたが,軟骨以外の組織成分や卵黄嚢腫瘍をはじめとする腫瘍の誘発を生じなかった.ラットの主要組織適合抗原(RT1)の適合したラット間で交配を行い、その妊娠14日以前に胎児を剔出し、胎児膜を子宮壁に残置せしめることにより、ヒト胚細胞生腫瘍に一致する卵黄嚢腫瘍、繊毛癌、奇形腫が高率に誘発されることが明らかにされた。

これらの腫瘍が妊娠という、内分泌学的には極めて大きな変化を背景として出現することから、その発現・増殖に内分泌環境の関与のあることが想定された。本年度は、胎児剔出後に種々の性ホルモンを投与し、また、性腺である卵巣剔除を行い、これらの腫瘍の発生・増殖がどのような影響を受けるかを検討し、次の結果を得た。1.本法による腫瘍誘発に、両側卵巣剔出は促進的に作用し、テストステロン、ヒト繊毛性ゴナドトロピンの各ホルモン投与、卵巣剔出群はこれらホルモン単独投与群よりも明らかに、腫瘍の発生および腫瘍の大きさ(平均直径)の増加が速かった。2.テストステロン、ヒト繊毛性ゴナドトロピン投与群における腫瘍の大きさは対照群に比し、明らかに小さかった。3.テストステロン、ヒト繊毛性ゴナドトロピン以外のホルモン、例えばプロゲステロン投与群は、対照群との間に有意な増殖のちがいを認めなかった。4.いずれの実験群においても24週という観察期間の中で、全く腫瘍の発生を認めなかったのは、わずか(021%)で、141頭中123頭(87、2%)に腫瘍が発現し、ホルモン投与のみで、腫瘍の発現を完全に抑制することはできなかった。5.各実験群に発生した腫瘍の組織像の間には、特に有意の差は認められなかった。
IKZF1による眼表面炎症制御機構の解明ならびに新規抗炎症治療薬への応用

本研究では、IKZF1を介した眼表面炎症制御機構の解明を行い、下記を明らかとした。1)ヒト皮膚ならびに眼表面上皮には、IKZF1が構成的に発現していることを、遺伝子レベル、タンパクレベルで明らかとした。2)IKZF1発現を制御する因子として、TLR3のリガンドであるウイルス由来の二本鎖RNA(polyI:C)を同定した。つまり、培養細胞を用いた解析で、TLR3のリガンドによりIKZF1遺伝子の発現が上昇することを明らかとした。3)IKZF1によって制御される因子として複数のサイトカイン・ケモカインを同定した。具体的には、各種遺伝子改変マウスの表皮細胞の網羅的遺伝子解析を行い、IKZF1により制御される因子を多数同定した。また、これら遺伝子制御は、遺伝子改変マウスを用いた解析のみならず、ヒト培養上皮にsiRNAを用いた解析によりも証明できた。4)各種遺伝子改変マウスを用いたIKZF1による眼表面炎症制御ネットワーク機構の詳細な解析として、結膜上皮ならびに皮膚表皮等上皮特異的にIKZF1を強発現させたIKZF1 Tgマウス(K5-Ikzf1-EGFP Transgenic Mice)を組織学的、免疫学的に解析し、皮膚ならびに眼表面粘膜、口腔粘膜等、皮膚粘膜炎症が自然発症することを、形態的にも組織学的にも明らかとした。さらに、遺伝子間ネットワークとしてIKZF1とTLR3、ならびに、EP3間のネットワークの存在を明らかとした。本研究の最終目標は、“上皮細胞による眼表面炎症制御機構の解明"にある。IKZF1は、リンパ球等の免疫細胞に発現しその分化増殖にかかわっていることが報告されている。申請者は、眼表面上皮にもIKZF1が発現し、眼表面炎症制御に関わっていることを世界で初めて見出した。本研究では、IKZF1による眼表面炎症制御機構を解明し、新規抗炎症治療薬への応用を目指す。平成28年度には、IKZF1による眼表面炎症ネットワーク機構の解析を目的に、培養細胞を用いた制御因子の解析を行い、ヒト培養眼表面上皮細胞においてIKZF1がTLR3のリガンドであるpolyICの刺激によりその発現が誘導されることを明らかとした。また、現在、培養細胞を用いたIKZF1発現抑制系を確立するために、様々な手技を試している。一時的な発現抑制系の確立の方法としては、siRNAの方法を試しており、iRNAの細胞内導入には、lipofectaminを用いて行っている。導入の確認は、GFPで行い、siRNAには、各種一種類のsiRNAで構成されるapplied biosystem社製のものならびに複数のsiRNAが入ったSigma-Aldrich社製のMISSION(R) esiRNAの両方を試している。さらに、ケラチン5をプロモーターとしてIKZF1遺伝子を導入したベクターを用いた、ケラチン5特異的IKZF1強発現マウス(K5-Ikzf1-EGFP Tg Mice)、つまり結膜上皮ならびに皮膚表皮等上皮特異的にIKZF1を強発現させたマウスが眼表面炎症を含んだ皮膚粘膜炎症を生じることより、その病態を組織学的に解析しており、炎症細胞の同定も進んでいる。培養細胞を用いたIKZF1発現抑制系を確立がや予定していたより時間がかかっており、研究の進行はやや遅れている。IKZF1は、リンパ球の分化に重要な転写因子であることが報告されている。研究代表者は、リンパ球だけではなく、表皮細胞や眼表面上皮細胞(結膜上皮)にも、IKZF1のmRNAや蛋白が発現しており、TLR3のリガンドであるpolyI:C刺激により、その遺伝子発現が著明に上昇することも見出した。また、表皮細胞や結膜上皮などの粘膜上皮に特異的に発現しているケラチン5をプロモーターにして、表皮や眼表面上皮等の粘膜上皮にIKZF1を過剰発現させたマウス(上皮IKZF1Tg)を作成して、解析を行い、その結果、上皮IKZF1Tgは、脱毛を伴う皮膚炎症や、眼表面を含んだ粘膜炎症を自然発症することを見出した。組織学的解析においても、上皮IKZF1Tgの皮膚には、明らかな炎症細胞浸潤を認めた。また上皮IKZF1Tgで、たびたび、眼瞼結膜や口腔粘膜、爪囲に炎症細胞浸潤が認められることも見出した。さらに、上皮IKZF1Tgに、接触性皮膚炎を誘導したところ、野生型マウスと比較して炎症細胞浸潤が有意に増加することも見出した。これは、上皮IKZF1Tgでは、皮膚炎症が重症化しやすいことを示唆している。また、末梢血のT細胞をFASCで解析したところ、上皮IKZF1Tgでは野生型に比べて、Th1(IFN-γ)、Th2(IL-4)の割合が、CD4とCD8の両方で増加していた。また、Th17(IL-17)に関しても、CD4で有意に増加していた。マウスを用いた機能解析の結果、IKZF1は、眼表面を含んだ皮膚粘膜制御に大きく関与していることが示唆された。遺伝子改変マウスの解析も、遺伝子改変培養細胞を用いた解析も予定通り進行している。2)IKZF

1発現を制御する因子として、TLR3のリガンドであるウイルス由来の二本鎖RNA(polyI:C)を同定した。つまり、培養細胞を用いた解析で、TLR3のリガンドによりIKZF1遺伝子の発現が上昇することを明らかとした。3)IKZF1によって制御される因子として複数のサイトカイン・ケモカインを同定した。具体的には、各種遺伝子改変マウスの表皮細胞の網羅的遺伝子解析を行い、IKZF1により制御される因子を多数同定した。また、これら遺伝子制御は、遺伝子改変マウスを用いた解析のみならず、ヒト培養上皮にsiRNAを用いた解析によりも証明できた。4)各種遺伝子改変マウスを用いたIKZF1による眼表面炎症制御ネットワーク機構の詳細な解析として、結膜上皮ならびに皮膚表皮等上皮特異的にIKZF1を強発現させたIKZF1 Tgマウス(K5-Ikzf1-EGFP Transgenic Mice)を組織学的、免疫学的に解析し、皮膚ならびに眼表面粘膜、口腔粘膜等、皮膚粘膜炎症が自然発症することを、形態的にも組織学的にも明らかとした。さらに、遺伝子間ネットワークとしてIKZF1とTLR3、ならびに、EP3間のネットワークの存在を明らかとした。IKZF1発現抑制系の確立のためのsiRNAの手技は確立できているので、IKZF1発現抑制のために用いるIKZF1 siRNAを多数試してみる必要があり、現在実施中である。今後は、IKZF1による炎症制御が、そのような因子を介しているのかについて、遺伝子改変マウスを用いた解析する予定である。培養細胞を用いたIKZF1発現抑制系を確立がや予定していたより時間がかかっており、研究の進行はやや遅れているが、多種類のsiRNAを試して、この問題を打開し、予定通り研究を進める予定である。遺伝子改変マウスの組織の解析に思った以上に費用が掛からなかったが、今後のIKZF1による炎症制御に関与する因子の同定については、想定以上の費用が掛かることが明らかとなっている。また、最終年度は、国内国外の学会で成果発表を行う予定であり旅費も使用する予定である。平成29年度に入って多種類のsiRNAを購入し、持ち越した研究費を使用する予定である。
希土類アルコシンドを用いる触媒的炭素-炭素結合生成反応の開発と不斉合成への展開

希土類は、近年安価に純度の高いものが供給されるようになったが、希土類元素の特性を活用した反応の開発など有機合成化学における利用は未だに不十分である。本研究は、種々の希土類錯体を合成してその特性を明らかにすると共に、希土類の高配位能を利用して触媒的不斉合成反応へと展開することを目的としていた。4年度に本申請者らは、希土類アルコキシドの塩基性を見いだし、光学活性希土類錯体を用いる触媒的不斉ニトロアルドール反応の開発に成功した。5年度は触媒的不斉ニトロアルドール反応の応用としてラセミ体として市販されている降圧剤ピンドロール不斉合成を以下に示す合成ルートで達成するとともに、光学活性希土類錯体の構造をX線結晶解析を活用して決定した。種々の希土類アルコキシド、例えばイットリウムアルコキシド[Y_3(O-t-Bu)_8C1]やランタナムアルコキシ[La_3(O-t-Bu)_9]がα-ハロメチルケトンとアルデヒドの縮合反応、分子内アルドール反応、シアノシリル化反応、ニトロアルドール反応、マイケル反応を触媒することを見いだした。一方、希土類アルコキシドの合成的有用性を増大させるべく、光学活性希土類アルコキシドの調整を検討した。まず最初に、触媒的不斉ニトロアルドール反応への展開をめざし、不斉ランタナム錯体の調整を詳細に検討した。種々の錯体中、LaCl_3・7H_2Oとビナフトールリチウム塩、NaOHから調整した錯体(オリゴメリックな構造と推定している)がニトロアルドールを高いenantiomericexcessで与えることを見いだした。以下にシクロヘキサンカルボキサアルデヒド1__-を用いた結果を記す。平成5年度は、上記触媒的不斉ニトロアルドール反応の医薬品合成への展開、不斉触媒の構造決定と反応機構の解明へと発展させていきたい。さらに、不斉マイケル反応や不斉アルドール反応の検討も開始したい。昨年度までに本申請者らは、希土類アルコキシドの塩基性を見いだし、光学活性希土類錯体を用いる触媒的不斉ニトロアルドール反応の開発に成功していた。本年度は触媒的不斉ニトロアルドール反応の応用としてラセミ体として市販されている降圧剤ピンドロールの不斉合成を以下に示す合成ルートで達成した。
セメント系材料の水和・劣化プロセスを網羅したマルチスケール力学モデルの開発

本研究は、セメント系材料の材料劣化前後の力学挙動をセメント固相の変化から解明し,実験と数値解析を駆使しながらそれらの関連性を統一的に評価可能なマルチスケール力学モデルを構築することを目的としている。2018年度では、次に示す実験的・解析的研究を行った。実験的研究では、セメントペーストの力学特性を同定する上で最適な前処理方法(水和停止+乾燥処理)を決定、W/Cと前処理環境の相対湿度によるセメントペーストの力学特性評価を行った。その結果、乾燥処理におけるRHに応じて曲げ強度が4倍以上変化することを明らかにするとともに、水和停止をしなければ乾燥処理において乾燥収縮の影響によって力学特性が大きく低下することを明らかにした。また、硝酸アンモニウム溶液を用いたCa溶脱後のセメントペーストの固相の変質を評価した。固相の変質として、TG-DTAおよびSEM/EDSによって水酸化カルシウム量とCa/Si比を測定して断面内の劣化分布を評価した。断面内の劣化分布がある状態でのCa溶脱後のセメントペーストの力学特性の同定は成功した。解析的研究では、複合相モデルの開発と連成解析システムの枠組みの再構築・高度化を図った。特に、当初の計画を前倒しして簡略化した熱力学的相平衡計算を導入したCa溶脱と硫酸劣化のシミュレーションを開発して、Ca溶脱、硫酸劣化、硫酸塩劣化による固液相の変質プロセスを簡易に再現できることを確認した。当初計画より実験的研究の進捗が芳しくないものの、解析的研究の進捗が想定より早かったことから概ね順調に進展していると考えている。2018年度では、断面内の劣化分布の存在が力学特性に及ぼす影響を評価および除去する方法を確立することに想定より時間を要した。その解決策として、硝酸アンモニウム溶液による浸漬実験後に水酸化カルシウム飽和溶液に試験体を浸漬する方法を考案して、C-S-H中のCa量の分布を除去できることが概ね実証されている。これに加えて、モルタルのスケールにおけるCa溶脱と硫酸劣化による固相の変質と力学特性の変化を同定する。また、この実験的研究の結果に基づいて、セメントペーストおよびモルタルのスケールにおける力学モデルの開発を行う。さらに、単一相・複合相モデルによって構築した解析モデルによって連成解析システムを用いて固相の変質および力学特性の変化を予測し、その再現性と妥当性を実験的研究の結果を用いて検証をする予定とする。
種特異的な哺乳類受精時におけるカルシウムオシレーション誘起機構の解明

本研究で同定されたウマPLCzは,それまでほ乳類で報告されてきた最も高い活性をもつヒトPLCzよりもさらに高い活性をもつことを明らかにした.またウマPLCzを注入し,ブタ円形精子細胞注入卵の発生能を向上させることにも成功した.一方,卵減数分裂に重要な役割を持つpolo like kinase 1が少なくともブタにおいてIP3Rの発現量を制御していることを初めて明らかにした.以上のことから,精子側因子(PLCz)および卵側因子(IP3R)ともに動物種ごとに異なる活性および制御機構を持ち,それぞれの動物種に特有な活性・機能がかみ合うことで,受精現象が引き起こしていることが明らかとなった.本年度は受精時のCa2+放出に重要な役割を持つ小胞体上のイノシトール3リン酸受容体タイプ1(IP3R1)についてブタ卵およびマウス卵を用いて検討を行った.まず,体内および体外で成熟させたブタ卵におけるIP3R1の発現量,リン酸化量および局在について検討した.その結果,両区間に発現量,リン酸化量および局在には差がないことが明らかとなった.しかし,マウス卵ですでに報告されており,受精時のCa2+放出に重要であると考えられていたIP3R1の卵細胞膜付近でのクラスター形成は,ブタ卵では認められなかったことから,両種間には異なるIP3R1の制機構が存在している可能性が考えられた.また,IP3R1の制御にかかわる因子を同定する目的で,卵の成熟に重要な役割をもつことが知られているp34cdc2 kinase,MAPKおよびPlk1について,それぞれの阻害剤であるroscovitine, U0126およびBI2536でブタ卵を処理し,IP3R1の発現量に及ぼす影響を検討した.その結果,roscovitineおよびU0126はIP3R1の発現量に影響を及ぼさなかったが,BI2536は処理濃度依存的にIP3R1の発現量を著しく減少させた.このことから少なくともブタ卵においてはPlk1がIP3R1の発現に関与していることが考えられた.さらに受精時のCa2+シグナルが,その後の胚発生にどのような影響を及ぼしているのかについて,シンシナティ小児病院(Dr. SK Dey)で特に着床時に果たす役割について検討をした.その結果,受精時にPLCzによって加水分解されたPIP2により産生されたジアシルグリセロールが,着床時のシグナルに関わっている可能性が考えられた.本研究で同定されたウマPLCzは,それまでほ乳類で報告されてきた最も高い活性をもつヒトPLCzよりもさらに高い活性をもつことを明らかにした.またウマPLCzを注入し,ブタ円形精子細胞注入卵の発生能を向上させることにも成功した.一方,卵減数分裂に重要な役割を持つpolo like kinase 1が少なくともブタにおいてIP3Rの発現量を制御していることを初めて明らかにした.以上のことから,精子側因子(PLCz)および卵側因子(IP3R)ともに動物種ごとに異なる活性および制御機構を持ち,それぞれの動物種に特有な活性・機能がかみ合うことで,受精現象が引き起こしていることが明らかとなった.受精時において卵内にて誘起されるCa2+イオンの反復的上昇は,精子内に存在する卵活性化因子phospholipase C zeta(PLCz)によって引き起こされると考えられている.PLCzの同定および機能解析はマウス・ヒトでは行われているが,大動物においてはほとんどされていない.本年度は各動物種のPLCzの機能を比較・検討する目的で,はじめにウマを用い,未だ同定されていないウマPLCz遺伝子クローニングと機能解析を行った.ウマ精巣由来のcDNAを作製し,ウマゲノムDNAの配列より作製したプライマーを用いてウマPLCζの遺伝子クローニングを行った.また,ウマ凍結融解精子を用いてウエスタンブロッティングおよび免疫蛍光染色を行った.ウマ,ヒト,ウシ,マウスPLCzのcRNAを作製し,マウス成熟卵に注入しCa2+濃度の変化を測定・比較した.また細胞内での局在を明らかにする目的で,蛍光タンパク質と融合したウマPLCz cRNAを作製しマウス成熟卵に注入し観察した.RT-PCRにより全長1917 bpの産物が得られ,シークエンス解析の結果より,多種のPLCzと高い相同性を示したことから,我々が得たPCR産物はウマPLCzであると考えられた.また,ウェスタンブロッティングの結果からウマPLCzは精子内でタンパク質として発現していること,免疫蛍光染色の結果より精子頭部および尾部に局在することが確認された.さらにウマPLCz cRNAの注入により,Ca2+イオンの反復上昇が誘起され,その頻度は他種のPLCzよりも高い割合を示した.また卵内においてPLCzは核を除く卵細胞質内に広く存在していた.以上のことから,ウマPLCzは他動物種のPLCzと比較して高い活性をもつことが始めて明らかにされた.初めてウマPLCzの遺伝子クローニングには成功した.それらの結果の一部はすでに英文による学術誌に投稿し,掲載が決定している.一方ドメインごとの活性比較については十分検討できておらず,次年度に行う予定である.IP3受容体の局在に焦点を当て,マウス,ブタ等の異なる動物種の卵を用いて,どのような因子がIP3Rの局在および機能を制御しているかを明らかにする.それぞれMPF,MAPKおよびpolo-like kinase 1(Plk1)の阻害剤であるroscovitine,U0126およびBI-2536を添加した培養液でそれぞれの種の卵を培養し,IP3受容体の局在変化を免疫蛍光染色を用いて明らかにする.

さらにCa2+オシレーションの生物学的な意義を明らかにする目的で,Ca2+オシレーションが誘起された(されなかった受精卵)を胚移植し,Ca2+オシレーションが母体への着床・妊娠の維持および出産まで及ぼす影響についてin vivoおよびin vitro解析を行う.これらの研究の一部は,哺乳類の着床・妊娠に関して多くの研究実績をもつアメリカ合衆国シンシナティ小児病院のDr. Deyのもとで行う.該当なし