hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
CRFニューロン蛍光可視化動物を用いた視床下部局所回路調節メカニズムの解明

コルチコトロピン放出因子(CRF)ニューロン蛍光可視化マウス(CRF-Venus)を用い視床下部に入力する神経伝達物質による局所回路調節機構を明らかにした.グルタミン酸(glu)作動性およびGABA作動性ニューロンがCRFニューロンに入力し,ノルアドレナリンは視床下部のglu作動性局所回路を媒介してCRFニューロンを活性化することが明らかにされた. CRF-VenusマウスゲノムからNeoカセットを除去することによりVenus発現強度と特異性が増強された.このマウスを用いVenus免疫組織化学によりマウス脳内CRFニューロンの分布が世界で初めて明らかにされた.相同組換えによりCRF遺伝子座にVenus(強化型黄色蛍光タンパク質)をノックインしたマウス(CRF-Venus)のPVHにおいてCRFニューロンとVenusニューロン分布は概ね一致していたが,二重免疫蛍光法を用いた詳細な検討を行った結果かなりの細胞において両者の発現に不一致が認められた.そこで,Venusノックインベクターに挿入されたネオマイシン耐性遺伝子(pgk-Neo)カセットのコンストラクトがCRF(および/またはVenus)発現に影響を及ぼしている可能性を疑った.このカセットを除去したマウス(CRF-VenusDeltaNeoマウス)を作成したところ,今度はCRFニューロンのほとんど全てでVenusの発現が観察された.したがって,CRF発現とVenus発現の不一致にはpgk-Neoが関与していたものと考えられる.CRFニューロン蛍光標識マウスでPVHを含む急性スライスを作成し,Venus陽性ニューロンにガラス電極を当てwhole-cell clamp法により電位固定モードでVenusニューロンから電流信号を観察した.Venusニューロンからは興奮性後シナプス電流(EPSC)と抑制性後シナプス電流(IPSC)の両者が観察され,前者はGlu作動性,後者はGABA作動性入力であることが確かめられた.また,Venusニューロンで観察されたEPSC頻度が神経伝達物質ノルアドレナリンで有意に増加した.ノルアドレナリンはHPAを刺激することが知られるが,本実験によりCRFニューロンへのGlu作動性入力を増強させることがそのメカニズムの一つであることが明らかにされた.しかしながらノルアドレナリンがどのニューロンに作用してVenusニューロンのEPSC頻度を増加させるかは未だ明らかでない.これについては現在検討中であるが,最近の検討でノルアドレナリンの作用はalpha-1アドレナリン作動性受容体によって媒介されることが明らかにされた.GABA作動性IPSCについても現在性格づけを行っているところである.CRFニューロンはストレス応答系を統括する司令塔であるが,視床下部回路の基本的な動作原理は未だ明らかでない.我々の作成した新規マウス(Itoi et al., endocrinology 155, 4054-4060, 2014)を用い,蛍光可視化されたCRFニューロンにおいて電気生理学的手法を用いPVH内調節局所回路の検討を行った.灌流液中ピクロトキシン存在下で-60 mV電位固定下に興奮性シナプス後電流(EPSC)が観測された. seroronin (5-HT)添加によりEPSC頻度が増加し, CNQXとAP5の添加によりEPSCが全て遮断された. TTXにより5-HT惹起性EPSC頻度増加が抑制された.Gタンパク質共役受容体アンタゴニストGDP-beta-Sのピペット内添加によって5-HTの効果は抑制されなかった.5-HT1A,7受容体アゴニスト8-OH-DPAT添加によりEPSC頻度が増加し, 5-HT7受容体アンタゴニストSB269970存在下では5-HT添加によりEPSC頻度が度が増加しなかった.したがって,5-HTは5-HT7受容体を介しCRFニューロンへのGlu酸作動性入力を発火依存的に増加させ,5-HTの直接作用はpresynapticであるものと考えられた.一方,灌流液中CNQXとAP5存在下で抑制性シナプス後電流(IPSC)が観察された5-HT添加によりIPSC頻度が減少し, gabazineの添加によりIPSCが全て遮断された.TTXにより5-HTのIPSC頻度減少作用は抑制された.5-HT2作動薬DOIによりIPSC頻度が減少し,5-HT2C阻害薬RS102221により5-HTの効果が阻害された.GDP-beta-Sのピペット内添加によって5-HTの効果が抑制された.したがって,5-HTの作用の一部は5-HT2C受容体を介しCRFニューロンへのGABA作動性入力を発火依存的に減少させるものと考えられた.また,CRFニューロンから逆行性伝達物質がpresynapticに働く可能性が示唆された.今年度の研究により,5-HTがPVH内局所回路を介してCRFニューロンの活動性を上昇させることが明らかにされた.従来の分子生物学的研究から5-HTによるCRFニューロン調節が示唆されていたが,今回Glu作動性およびGABA作動性入力を介して5-HTがCRFニューロン調節を行うことが世界で初めて明らかにされた.したがって,ほぼ当初の計画通りに研究を進めることができた.

コルチコトロピン放出因子(CRF)ニューロン蛍光可視化マウス(CRF-Venus)を用い視床下部に入力する神経伝達物質による局所回路調節機構を明らかにした.グルタミン酸(glu)作動性およびGABA作動性ニューロンがCRFニューロンに入力し,ノルアドレナリンは視床下部のglu作動性局所回路を媒介してCRFニューロンを活性化することが明らかにされた. CRF-VenusマウスゲノムからNeoカセットを除去することによりVenus発現強度と特異性が増強された.このマウスを用いVenus免疫組織化学によりマウス脳内CRFニューロンの分布が世界で初めて明らかにされた.平成26年度の研究において,Venus陽性ニューロンを用いてノルアドレナリンの作用メカニズムを検討することに成功した.ノルアドレナリンはグルタミン酸作動性EPSC頻度を増加させたが,振幅や減衰時間には影響をおよぼさず,presynapticの作用であることが示唆された.またaipha-1アドレナリン受容体拮抗薬プラゾシンによりノルアドレナリンの効果が阻害されたことから,aipha-1受容体によって媒介されることが明らかにされた.26年度は,CRF-Venusノックインマウスゲノムからpgk-Neo配列を除去し新たなマウス(CRF-VenusDeltaNeoマウス)の作成に成功し,ほぼ全てのCRFニューロンを蛍光可視化することができるようになった.このマウスのVenus発現ニューロンの分布について詳細な組織学的性格づけを行ったのち,平成27年度中に国際誌に出版予定である.このように,当初意図したよりも研究が進展している.平成28年度は次の実験を行う予定である:1. Ca2+イメージング:CRFニューロンにFura2添加後,灌流液中にノルアドレナリンまたは5-HTを加え,細胞内Ca2+の変動を観察する.whole cell clampを行い,Ca2+の変動が発火に同期して発生することを確認する.Aキナーゼ,C-キナーゼ,Gタンパク阻害薬を用いてCa2+によって媒介される細胞内現象を解明する.2. CRF-iCreマウスのPVHにウイルスベクターを用いてCRFニューロン選択的にChR2を発現させる.急性スライスを作成し光照射によりCRFニューロンを発火させる.CRFニューロンから逆行性に放出される伝達物質を同定し,その作用メカニズムを明らかにする.神経内分泌学平成27年度は次の実験を行う予定である:1. Ca2+イメージング:CRFニューロンにFura2添加後,灌流液中にノルアドレナリンを加え,細胞内Ca2+の変動を観察する.同時に(Venus陽性)CRFニューロンからwhole cell clampによりcurrent clamp modeで電位計測をおこない,Ca2+の変動が細胞発火と同期することを検証する.さらに,Aキナーゼ,CキナーゼやGタンパク阻害薬を用いてCa2+によって媒介される細胞内現象を解明する.2.ノルアドレナリン作動性入力に加え,セロトニン(5-HT)作動性入力が(Venus陽性)CRFニューロンに及ぼす効果を検討する.また,5-HT受容体阻害薬や受容体選択的アゴニストを用いてどの受容体によって5-HTの作用が媒介されるかを明らかにする.次年度使用額は,今年度の研究を効率的に推進したことにより発生した未使用額であり,平成28年度の研究遂行に使用する予定である.次年度使用額は,今年度の研究を効率的に推進したことにより発生した未使用額であり,平成27年度請求額とあわせ,平成27年度の研究遂行に使用する予定である.
代数的組合せ論の研究

2 Steiner system(つまりt-(v,k,l)デザイン)に関する次の新しい不等式が得られた(論文準備中)。これはP.J.Cameronが与えた不等式の改良になっている。tが隅数の時v≧(t+1)(k-t+1)+(k-t)がなりたつさらに等号がなりたつのは4-(23,7,1)がt-(2t+3,t+1,1)に限る。またtが奇数でv>(t+1)(k-t+1)とあるとv≧(t+2)(k-t+1)がなりたつ2 Steinersystem(つまりt-(v,k,l)デザイン)に関する次の新しい不等式が得られた(論文準備中)。またtが奇数でv>(t+1)(k-t+1)とあるとv≧(t+2)(k-t+1)がなりたつ
アジア・太平洋地域変動帯の地質学的研究ー特にニュージーランド南島のテクトニクスー

アジア・太平洋地域に分布する変動帯の中で,西裕日本外帯とニュージーランド南島の詳細な比較調査研究をもとにして造構場の全体像を総合的・実証的に検討し,その地質構造発達史を解明することを主要な目的にしている.特に,昨年度の予備調査結果を踏まえて,ニュージランド南島オタゴ南西部のミルトン地域に分布する『Chrystalls Beach Complex』の地質精密調査を主調査地域とし,本地域との関連で北島南部並びに南島北中央部の主としてメランジェ帯の調査研究をも実施し,西南日本外帯の付加体との類似点並びに相異点を明確にし,両変動帯のテクトニクスを解明することを目的した.本調査研究地域は,研究分担者であるオタゴ大学のD.S.Coombs教授及びC.A.Landis助教授と共にプロジェクトを組み,昭和62年度(昭和62年10月20日12月18日)の本調査を実施した.主な調査研究地域はオタゴ南西部のクリスタルズ・ビーチ(Chrystalls Beach)地域とオタゴ北部のアカタラワ(Akatarawa)地域を重点的に調査した(第1図).クリスタルズ・ビーチ地域は,南島のダニーディン市南西約50キロメートルに分布するケープルス帯に属し,海岸線に沿って広く露出している(第1図).本地域のケープルス帯は南部のパンペリー石ーアクチノ閃石帯から,北部の黒雲母帯へ変成度が上昇する弱変成帯であり,付加体コンプレックスとして注目されている.構成岩類は,砂岩・泥岩を主体とするタービダイト質の互層部と枕状溶岩やハイアロクラスタイトの玄武岩質岩石・チャート・酸性凝灰岩(?)からなる遠洋性半遠洋性の互層部に分けられる.地質調査は主として海岸線に沿って行なわれ,ルート・マップと地質断面図の作成がほぼ完了した.随所に微化石(主として放散虫)及び大型化石を産するが,現在までに時代を正確に決定する化石は得られておらず,今後の研究にゆだねられる.変形作用については,今回の調査研究により5つの変形時相を識別することができ,南部より北部へ向かって変形の程度が上昇していくことが明らかになった.また,北部のハースト・シスト帯と変形構造は連続していることもほぼ確実になった.一方,アカタラワ地域は,ダーニーディン市の北約120キロメートルに位置し(第1図),現地調査と採集された試料について種々の方法で検討した結果,これまでトーレス帯に含まれていた"ペルム系"はハースト・シスト帯に含められるべき地質体で,しかもメランジェであることが明らかになった.アジア・太平洋地域に分布する変動帯の中で,西裕日本外帯とニュージーランド南島の詳細な比較調査研究をもとにして造構場の全体像を総合的・実証的に検討し,その地質構造発達史を解明することを主要な目的にしている.特に,昨年度の予備調査結果を踏まえて,ニュージランド南島オタゴ南西部のミルトン地域に分布する『Chrystalls Beach Complex』の地質精密調査を主調査地域とし,本地域との関連で北島南部並びに南島北中央部の主としてメランジェ帯の調査研究をも実施し,西南日本外帯の付加体との類似点並びに相異点を明確にし,両変動帯のテクトニクスを解明することを目的した.本調査研究地域は,研究分担者であるオタゴ大学のD.S.Coombs教授及びC.A.Landis助教授と共にプロジェクトを組み,昭和62年度(昭和62年10月20日12月18日)の本調査を実施した.主な調査研究地域はオタゴ南西部のクリスタルズ・ビーチ(Chrystalls Beach)地域とオタゴ北部のアカタラワ(Akatarawa)地域を重点的に調査した(第1図).クリスタルズ・ビーチ地域は,南島のダニーディン市南西約50キロメートルに分布するケープルス帯に属し,海岸線に沿って広く露出している(第1図).本地域のケープルス帯は南部のパンペリー石ーアクチノ閃石帯から,北部の黒雲母帯へ変成度が上昇する弱変成帯であり,付加体コンプレックスとして注目されている.構成岩類は,砂岩・泥岩を主体とするタービダイト質の互層部と枕状溶岩やハイアロクラスタイトの玄武岩質岩石・チャート・酸性凝灰岩(?)からなる遠洋性半遠洋性の互層部に分けられる.地質調査は主として海岸線に沿って行なわれ,ルート・マップと地質断面図の作成がほぼ完了した.随所に微化石(主として放散虫)及び大型化石を産するが,現在までに時代を正確に決定する化石は得られておらず,今後の研究にゆだねられる.変形作用については,今回の調査研究により5つの変形時相を識別することができ,南部より北部へ向かって変形の程度が上昇していくことが明らかになった.また,北部のハースト・シスト帯と変形構造は連続していることもほぼ確実になった.一方,アカタラワ地域は,ダーニーディン市の北約120キロメートルに位置し(第1図),現地調査と採集された試料について種々の方法で検討した結果,これまでトーレス帯に含まれていた"ペルム系"はハースト・シスト帯に含められるべき地質体で,しかもメランジェであることが明らかになった.
p53標的遺伝子の単離・機能解析とそのがん治療法開発への応用

がん抑制遺伝子p53は、ほぼすべてのがんの半数以上に変異の認められる遺伝子であり、配列特異的な転写因子をコードしている。従って、その標的遺伝子の転写活性化を通してその機能を発揮すると考えられているが、生理機能の全貌は未だ明らかとなってはいない。p53の生理機能の全貌解明のためにその標的遺伝子の単離と機能解析を行った。本年度はALDH4遺伝子およびSTAG1遺伝子を単離し、その機能を明らかとした。ALDH4はプロリン代謝を枯渇させる働きを介してアポトーシスを負に制御し、同じくp53によって発現誘導され、プロリン代謝をリサイクルさせる働きを介してアポトーシスを正に制御するPOX遺伝子と拮抗することにより、細胞の生存に深く関わる可能性を見出した。また、STAG1は活性型p53-121Fによって特異的に発現誘導され、p53-121Fの強力なアポトーシス誘導活性をメディエートする、新しいアポトーシス実行分子である事実を明らかとした。このように、p53はかなり多くの標的遺伝子を様々な状況に応じて使い分け、その多彩な生理機能を巧妙に制御することで細胞の安全な生存を維持しているものと考えられる。p53の生理機能の全貌解明のためには、p53標的遺伝子の全単離が不可欠であると考えられる。また、p53の生理機能の正確な理解は、p53を用いた遺伝子治療を劇的に改善しうるとともに、新しいがん治療法の開発につながると考えられる。
メゾスコピック構造形成のためのフリーラジカル制御

半導体物質であるシリコンを中心にそのメゾスコピック構造形成プロセスを高精細に制御するために、分光エリプソメトリー、FTIR-ATR、STM-AFM(電気化学的制御)、IR-RASなどの「その場観測」の情報をもとにして、フリーラジカルによる表面化学反応の制御を試みた。得られた主な成果を列挙すると:(1)分光エリプソメトリーによるその場観測と水素原子など、活性化学種による化学アニーリング効果により、高品質アモルファス・シリコンの光学ギャップを1.55eV-2.10eVまでの広い領域で制御する中距離構造制御法を開発した。(2)フッ素と水素の関与する表面化学反応を制御し、400°C以下の温度でガラス基板上に高品質多結晶シリコン薄膜を制御する新技術を開発した。(3)-110°Cの低温基板上にプラズマで生成されたシリルラジカルから流動性の高いポリマー状薄膜を形成し、nanometerサイズの形状を持つシリコン微細構造形成プロセスを開発すると共に、その表面反応過程をFTIR-ARTによるその場観測結果から解析した。(4)シランのプラズマ分解で生成されるフリーラジカルの定量的把握と表面化学反応の制御の系統的検討結果より、アモルファス・シリコン薄膜の欠陥消滅機構、およびキャリアー移動度の改善のための構造制御を可能にした。(5)シリコン結晶(111),(110)のHF,NH_4F溶液による化学エッチング機構について、電気化学的に制御されたSTM-AFMによる原子オーダー観測結果の解析から、反応優先サイトを解明すると共に、高性能化学エッチング技術を開拓した。(6)AFMカンチレバ-を使った機械的原子操作と水素原子による構造制御を併用し、nanometerサイズのシリコン結晶を指定位置に生成する方法を開発し、一電子トンネル効果、可視光発光など量子ドット効果を確認した。物質の高機能化を目的とし、その構造形成時にフリーラジカルを用いて、メゾスコピック構造を制御するための基礎研究を行った。たとえば、分光エリプソメトリによる「その場観察」とシミュレーションりより、ガラス基板上でのシリコン多結晶成長機構の観測と、その原子状水素による構造緩和促進効果を確認し、高品質多結晶シリコン薄膜作製の足掛かりを得た。さらに、塩素を含むフリーラジカルを用いて光劣化を低減した高品質アモルファスシリコン膜の作製に成功した。また、全反射赤外吸収分光法(FTIR-ART)によるシリコン表面の原子レベルでの「その場観察」下で、低温(-40°C)基板上にシランのプラスマ分解で生成したラジカルを用い膜堆積を行い、重合反応によるポリシラン生成を確認した。この結果、極めて高い流動性を利用した形状制御のための新しい膜堆積技術である高流動性プラズマCVD法のプロセス原理の一端が明かにされた。水溶液中でのin situ STM観測を行ないHF及びNH4F溶液におけるエッチング結果から、p-Si(111)面では水素原子で終端された1x1構造が観測され、Si(100)面では、原子レベルで平坦なステップ・テラス構造の形成が実測され、シリコン結晶のウエットエッチングでのメゾスコピック構造形成過程の観測に成功した。さらに、プラズマ分解により生成されるシリルラジカルの堆積表面での付着・構造形成時の欠陥生成・消滅過程の動力学解析と、それにもとづく指針より、10^<14>cm^<-3>台の低欠陥濃度のアモルファスシリコンの作製に成功した。また、Si量子ドット構造形成を目標として、水素ラジカルによるシリコン表面の選択エッチング挙動の検討もすすめられた。SiH3ラジカルを前駆体とする

a-Si:H構造形成過程における原子状水素が構造形成に与える効果について、エリプソメトリーによるその場観測結と特性評価の結果から:低温(100C)基板上では原子状水素の浸透により、固相での構造緩和が促進され、<2.1eVまでの高品質・高安定広ギャップa-Si:H膜がえられ、高温(300C)では結晶化を促進するとの結果をえた。また、基板上での表面反応を赤外反射吸収法で観察し、欠陥生成過程をモデル化解析し、高品質a-Si:H膜の作製指針を建てた。また、前駆体励起法、イオン種による表面励起により特性の飛躍的改善に成功した。同様に、SiH3の低温(-90C)から高温(200C)までの凝集過程をFTIR-ATRでのその場観測、およびAFMによる表面形状の観測からポリシラン形成過程を解析し、プロセス技術に応用可能な低温時の流動性の起源を明かにした。また、VHFプラズマを用いるシリコンナノクリスタル作製では、気相における結晶化促進でナノメータシリコン結晶の作製に成功し、その蛍光発光を観測した。さらに、STMを用いシリコン単結晶の化学エッチング過程のその場観測の結果、n-Si(001)面のNH4F溶液中のエッチングでは、ステップおよびキンクから優先的な溶解がおこることを確認し、それぞれの溶解速度を実測した。このように、シリコンを中心に物質の構造形成過程を原子・分子サイズで実時間観測し、積極的にその構造をフリーラジカルのもつ化学エネルギーを利用して、メゾスコピックレベルで制御することが実現されはじめた。半導体物質であるシリコンを中心に、物質構造形成プロセスを原子レベルでその場観察すると共に、その構造をフリーラジカルを用いメゾスコピックサイズで制御し、新機能を発現を目指した研究を行った。その成果を要約すると:シリコン網目への水素ラジカルの浸透により誘起される固相における構造緩和を利用して、高品質wide-gap(<2.1eV)a-Si:H膜作製に成功した。このwide-gap a-Si:H膜は低欠陥(Nso<10^<16>cm^<-3>)で高い光伝導を示と共に、電子・正孔の輸送特性にも優れている。また、FTIR-ATR法による低温(>-95°C)におけるシリコン表面反応をその場観測すると共にその化学反応過程を検討し、表面形状平坦化はポリシラン化合物に因ることを明らかにすると共に、SiO_2への酸化過程も解明した。同様に、シランのプラズマ分解によるa-Si:H膜作製過程にシース電位を精細に制御すると、電子・正孔のドリフト移動度が1桁向上する成果を得た。さらに、プラズマ中でのラジカルによるが化学反応制御により、粒径3-15nmの球状ナノ結晶シリコンの作製とその形状制御に成功した。その結果、量子サイズ効果による蛍光発光と共に、単一電子トンネル現象も観察できた。また、分光エリプソメトリーによるその場観測と水素ラジカルによるシリコンの構造緩和促進効果を利用し、ガラス基板上への種結晶生長(1)多結晶シリコンエピタキシ成長(2)プロセスからなるTWO STEP多結晶シリコン成長法を開発した。種結晶として、固相成長で作製した(220)配向したテクスチャーの選択することで、表面自己組織化反応が促進される。さらに、酸化還元電位制御下で)電気化学走査トンネル顕微鏡観察によるNH4F溶液中でのn-Si(111)結晶の化学エッチングプロセスを原子をレベルで解明した。
人体およびダミ-による水泳とび込み事故発生メカニズムの解明と指導マニュアルの作成

前年度は,主に事故の際の衝撃量を測定し、その危険性について検討した。本年度はそのような事故を防止するための条件を明らかにするため,高速度VTRにより画像分析を実施した。画像分析については解析例が少ないため,事例を増加してより確度の高い分析を行った。また,水中での姿勢や動作のとり方によって,安全か危険かのボーダーに関与すると思われるため,より詳明な分析や結果の吟味を行った。また,とび込み動作のパターン分類を,小学校低学年から中高生および大学生まで含めた被験者を対象として,主に連続写真,VTR撮影を実施した。これらによって,とび込み動作の習熟や動作パターンの特徴を明らかにし,初心者から上級者までのパターンを分類することによって飛び込みの良否を決定するポイントを特定した。これらの成果をふまえて,適切,かつ段階的な指導手順(マニュアル)を作成した。最後に本研究2年間の成果を総括し,各分担者の担当部分毎に報告論文を作成し,共同でマニュアル作成を実施し,パソコンDTPにより報告書の編集,作成を行った。尚,研究代表者の合屋十四秋は9月1日より在外研究員として渡米したため,代表者を松井敦典に変更してプロジェクトをすすめた。(1)プール底材の衝突緩衝能力本実験では、材質よりもむしろ緩衝材の厚さに比例して衝撃力が減少するすることがわかった。また、人体の飛び降りによるプール底材への緩衝能力には一定の傾向はみられなかったが、絶対的な衝撃力は人体に大きな負荷量となることが推察された。(2)ダミーによる飛び込みシミュレーション本実験では、スタート台高の違いが衝撃力に及ぼす影響は小さく、むしろ水抵抗や人体の緩衝性、入射角などの衝撃の大小に関与する要素を考えると、水底衝突時の入射角や入水時の姿勢、入水後の反り返り動作等の技能の介入の予知が大きいと考えられた。すなわち、水中での姿勢や動作のとり方によって安全か危険かのボーダーが大きく分かれることが示唆された。(3)映像解析による飛び込み姿勢の分析飛び込み姿勢をノーマルなものと危険な状態を招くと考えらる3姿勢のシミュレーション実験を行った。その結果、股関節を屈曲させたままの姿勢とそれに近いもう1つの姿勢では、頭部の最大深度は1.0mから2.0mにまで達することが明らかになり、水深の浅いプールでは水底へ衝突する可能性が大きいことが示唆された。すなわち、踏切時の股関節角度を伸展させながら水中へ入水することの大切さが確認された。(4)今後の課題と計画水中での姿勢や動作のとり方によって安全か危険かのボーダーが決定すると思われるため、より詳細な分析や結果の吟味を行う。また、飛び込み動作のパターン分類を小,中,高校生および大学生までを含めた被検者を対象として主に、35mm連続写真撮影およびVTR撮影を行い、飛び込み動作の習熟の様子や動作パターンの特徴を明からにする。前年度は主に事故の際の衝撃量を測定し、その危険性について明らかにした。本年度はそのような事故を防止するための条件を明らかにするため高速度VTRにより画像分析を実施した。画像分析については解析例が少ないため、事例を増やしてより確度の高い分析と考察を行なった。また、水中での姿勢や動作のとり方によって、安全か危険かのボーダーに関与すると思われるため、より詳明な分析や、結果の吟味を行なった。また、とび込み動作のパターン分類を小学校低学年から中高校生および大学生まで含めた被験者を対象として、主に連続写真・VTR撮影を実施した。これらによって、飛び込み動作の習熟や動作パターンの特徴を明らかにし、初心者から上級者までのパターン分類をすることによって飛び込みの良否を決定するポイントを特定した。これらの成果をふまえて、適切かつ段階的な指導手順(マニュアル)を作成した。
マイクロマシニングにより作製したマイクロエンジン構造体の高温疲労試験技術の確立

第一年度で試作した完全両振りマイクロ曲げ疲労試験装置を用いて、マイクロ構造体の設計の際に必要となる、シリコンマイクロ構造体の疲労寿命を求めた。具体的には、一定荷重の下で、単結晶シリコン製マイクロ試験片の繰り返し疲労試験を実施し、S-N曲線を実験的に求めた。本研究で新開発した完全両振り曲げ疲労試験装置は、一軸PZTアクチュエータ上に設置したマイクロ試験片を、光てこ検出機構上に設置したツインカンチレバーによって挟み込んだ状態で、繰り返し往復運動させることで曲げ応力を同マイクロ試験片に付与する機構となっている。マイクロ試験片に生じる曲げ応力は、原子間力顕微鏡技術に基づいた光てこ検出機構によって、作動電圧値として出力される。本研究においては、ハード設計、システム設計、およびシステム制御プログラムを一貫して新開発することで、高精度な荷重制御の下でマイクロ試験片の繰り返し疲労試験を実施できるようにしている。第二年度においては、ICP-RIEを用いたドライエッチング法で作製した、厚さ6m、幅30m、長さ100mの片持ちはり型シリコンマイクロ試験片の繰り返し曲げ疲労試験を実施した。ここで、マイクロ試験片の長手方向は単結晶シリコンの<110>方向に、また、繰り返し荷重を受ける試験片表面は(100)面としている。繰り返し疲労試験の結果、同一応力下においては、試験片寸法が小さくなるほど疲労寿命が長くなる傾向が見られた。これは準静的曲げ試験結果と定性的に一致するものであった。一方、片振り繰り返し疲労寿命と完全両振り繰り返し疲労寿命との差違は、試験データ数が少なかったため、明確に見られなかった。今後、試験データ数を増やして、繰り返し負荷モードの違いが疲労寿命に及ぼす影響を、実験的に明らかにする必要があるといえる。本研究課題の第一年度にあたる本年度は,マイクロマシニングにより作製したシリコンマイクロ試験片を用いた完全両振り曲げ疲労試験装置を設計・試作した.具体的には,システム設計,駆動制御プログラム,ならびに予備試験片による駆動システムの検証を行った.本研究において新開発した完全両振り曲げ疲労試験装置は,一軸PZTアクチュエータ上に設置されたシリコンマイクロ試験片を,ツイン・カンチレバーによって挟み込んだ状態で,繰り返し往復運動させ,曲げ応力を同試験片に加える機構となっている.マイクロ試験片に生じる曲げ応力は,AFM(Atomic Force Microscope)技術に基づいた光センシング式荷重検出システムを用いることにより,差動電圧として検出できるように設計・開発した.同装置は,ツイン・カンチレバーを有する荷重検出機構,精密位置決め用PZT-xyステージ,マイクロ試験片駆動用一軸PZTアクチュエータ,および粗動用xyzステージから構成されている.試験装置本体は外乱の影響を遮断するため,チャンバー内に格納できるように設計した.また,駆動制御プログラムを開発し,Visual C++言語によるプログラム内で荷重のフィードバック制御を実現している.これにより,応力一定下での完全両振り曲げ疲労試験が可能となった.本試験装置による荷重計測および変位制御の信頼性を検証するため,シリコンマイクロ試験片を用いて準静的曲げ試験を実施した.試験で得られたシリコンのヤング率は理論値とほぼ一致し,本装置の駆動システムが設計通りに開発されたことがわかった.次年度においては,マイクロ試験片周辺に超小型ヒーターを設置し,高温疲労試験を実施する予定である.第一年度で試作した完全両振りマイクロ曲げ疲労試験装置を用いて、マイクロ構造体の設計の際に必要となる、シリコンマイクロ構造体の疲労寿命を求めた。本研究で新開発した完全両振り

曲げ疲労試験装置は、一軸PZTアクチュエータ上に設置したマイクロ試験片を、光てこ検出機構上に設置したツインカンチレバーによって挟み込んだ状態で、繰り返し往復運動させることで曲げ応力を同マイクロ試験片に付与する機構となっている。マイクロ試験片に生じる曲げ応力は、原子間力顕微鏡技術に基づいた光てこ検出機構によって、作動電圧値として出力される。本研究においては、ハード設計、システム設計、およびシステム制御プログラムを一貫して新開発することで、高精度な荷重制御の下でマイクロ試験片の繰り返し疲労試験を実施できるようにしている。第二年度においては、ICP-RIEを用いたドライエッチング法で作製した、厚さ6μm、幅30μm、長さ100μmの片持ちはり型シリコンマイクロ試験片の繰り返し曲げ疲労試験を実施した。ここで、マイクロ試験片の長手方向は単結晶シリコンの<110>方向に、また、繰り返し荷重を受ける試験片表面は(100)面としている。繰り返し疲労試験の結果、同一応力下においては、試験片寸法が小さくなるほど疲労寿命が長くなる傾向が見られた。これは準静的曲げ試験結果と定性的に一致するものであった。一方、片振り繰り返し疲労寿命と完全両振り繰り返し疲労寿命との差違は、試験データ数が少なかったため、明確に見られなかった。今後、試験データ数を増やして、繰り返し負荷モードの違いが疲労寿命に及ぼす影響を、実験的に明らかにする必要があるといえる。
低酸素が心臓形態形成期の胎児心血行動態に及ぼす影響について

本研究では、心臓形態形成期にあたる妊娠初期の胎児が低酸素に対して示す心血行動態を、小動物用超音波高感度イメージングシステムを用いてマウス母体内で観察した。胎仔心筋に強く発現しているカリウムチャネル、IKrチャネルをブロックするフェニトインを用い胎仔を徐脈にすることで、胎仔低酸素モデルを作成した。組織低酸素マーカーを用いて組織低酸素を評価し、低酸素誘導性因子(HIF-1)関連の遺伝子発現で胎仔内血流再分布を評価した。本研究では、心臓形態形成期にあたる妊娠初期の胎児が低酸素に対して示す心血行動態を、小動物用超音波高感度イメーシジングシステムを用いてマウス母体内で観察する。妊娠初期の胎児が低酸素に対して示す心血行動態を明らかにすることに加え、これまで胎児の低酸素と関連づけられてきた薬剤を母体投与し、実際の心血行動態に与える影響を明らかにする。福島県立医科大学動物実験委員会に動物実験計画書を提出し、審査にて承認を得た後に、実験準備を行った。本実験では、小動物用超音波高感度イメーシジングシステムを用いて胎児心血行動態を観察するが、手技が難しいため、これまで使用経験のない動物実験実施者に対して手技の伝達を行った。また、胎児・胎盤・子宮の酸素分布については、低酸素マーカーpimonidazole hydrochloride (HypoxyprobeTM-1)を静脈内投与して、確認することを予定しており、この薬剤の調整を行い、実際にマウスに投与して酸素分布を染色できるかどうかの確認を行っている。本研究では、心臓形態形成期にあたる妊娠初期の胎仔が低酸素に対して示す心血行動態を、小動物用超音波高感度イメージングシステムにて母体内で観察し、低酸素プローブ等を用いて組織学的にも検討することを目的としている。平成26年度は、母体へのフェニトイン投与を用いて胎仔徐脈を誘発し、胎児心血行動態の観察を行った。フェニトインを妊娠在胎日齢11.5の母体マウスに投与し、イメージングシステムを用いて胎仔心血行動態を観察した。フェニトインが胎仔徐脈を引き起こすことは、摘出心筋を用いたin vitro実験で示され、胎仔心筋細胞のHERGチャネル電流(IKr)の阻害が機序として推測されているが、in vivoでの観察は本研究が初めてとなる。フェニトインの投与量を50mg/kg、75mg/kg、100mg/kgとして胎仔の薬剤投与前後の心拍数を評価したところ、75mg/kg以上を投与した妊娠マウスの胎仔が徐脈に陥ることが判明した。75mg/kg投与12時間後の観察では、心停止に陥っている胎仔も観察され、拍動が見られた胎仔に限って平均心拍数を検討しても、投与前175拍/分から、投与後54拍/分に低下していた。このときの母体フェニトイン血中濃度は22micro g/mLであり、臨床上用いられる1020micro g/mLをわずかに上回る程度であった。現在、徐脈に伴い低酸素に陥った心臓形態形成期の胎仔が、どのような心血行動態をとるのかを、小動物用超音波高感度イメージングシステム、および組織低酸素マーカーpimonidazole hydrochlorideを用いた組織学的検討を元に研究中である。胎児は低酸素に対して高い耐容性を有し、選択的血管収縮により、より多くの血流を生命維持に必要な組織へ供給させる血流再配分を起こすことが知られている。しかし、妊娠初期の胎内観察研究はない。母体を低酸素環境に曝すことなく胎仔を低酸素環境に置く方法として、胎仔心筋に強く発現している遅延整流カリウムチャネルの中のIKrチャネルをブロックするフェニトインを使用した。母体に皮下注するフェニトイン量を50mg/kg、75mg/kg、100mg/kgと変えて母体および胎仔血行動態を観察すると、母体の心拍数に有意差はなかったが、胎仔の心停止率は用量依存性に上昇し、心停止していない胎仔の心拍数も用量依存性に低下することが示された。また、ドプラ法による体内血流量観察でも、胎仔の頸動脈および背側大動脈血流量は用量依存性に低下した。組織低酸素の状況を組織低酸素マーカーpimonidazole hydrochlorideを用いて評価した。生理食塩水投与群に比して、フェニトイン投与群で胎仔組織は低酸素状態であることが示されたが、胎仔内の血流再分布まで明らかにすることはできなかった。そのため、最終年度は組織低酸素で誘導される血管内皮細胞増殖因子(vascular endothelial growth factor: Vegf)を用いて、血流再分布を評価することを試みた。現在までの検討では、フェニトイン投与前後で頭部組織のVegfに変化を認めなかったが、体部組織のVegfの発現は増加しており、心臓形成期の妊娠初期胎仔においても血流再分布の存在が示唆された。さらにVegfの検討を進めるとともに低酸素で誘導されるmicroRNAについて検討を加える予定である。

組織低酸素マーカーを用いて組織低酸素を評価し、低酸素誘導性因子(HIF-1)関連の遺伝子発現で胎仔内血流再分布を評価した。計画段階では、母体マウスを低酸素換気下に置き、胎仔の低酸素環境を作成する予定であったが、小動物用超音波高感度イメージングシステムによる心血行動態測定法の伝授、および組織低酸素マーカーの免疫染色法の確立に時間を要したため、これをスキップし、臨床上の重要性が高いと考えられるフェニトインの作用を優先して研究した。In vivoの観察で、臨床上用いられる血中濃度付近で、胎仔徐脈が引き起こされるという新しい知見が得られたが、妊娠マウスに対する至適投与量の決定に時間を要し、在胎日齢による差異や胎児内血流再分布の評価までは至っていない。また、組織低酸素マーカーの免疫染色についても対照群との差が明確ではなく、染色法の調整を行う必要があった。小児科学母体心血行動態を変化させずに、胎仔徐脈を引き起こすフェニトインの至適投与量が決定したので、この実験系を用いて心臓形態形成期にあたる妊娠初期の胎仔が低酸素に対して示す心血行動態を評価していく。組織低酸素マーカーの免疫染色について染色法の調整を行い、組織学的な検討を加えていくが、不十分な可能性があり、組織低酸素を表すサイトカインやマイクロRNAを用いた評価も追加検討する。これらの評価法が確立した後に、IKrチャネル阻害薬であるニフェカラントまたはソタロールを用いた確認評価を行い、同様のチャネル阻害作用があり、臨床で用いられることが多い抗菌剤や抗てんかん薬の胎仔に対する作用を確認する。小動物用超音波高感度イメージングシステムによる心血行動態測定法および組織低酸素マーカーの免疫染色法の確立に時間を要したため、平成26年度はフェニトイン投与による評価に留まったため。低酸素マーカーpimonidazole hydrochloride (HypoxyprobeTM-1)の調整と染色に問題ないことが確認できたら、母胎低酸素、カフェインおよびアデノシン受容体拮抗薬について、胎生日齢11.5胎仔を用いて、低酸素の分布をコントロールと比較して評価する。その後、胎児を低酸素状態にすることがin vitroで証明されてきた薬剤(抗不整脈薬のニフェカラント、抗てんかん薬のフェニトイン・フェノバルビタール)について、小動物用超音波高感度イメーシジングシステムと低酸素マーカーと用いて評価する。フェニトインを用いた胎仔低酸素の評価が確立後、予定している薬剤について順次、実験を行っていく。また、組織評価について、サイトカインやマイクロRNAを用いた評価も予定しており、次年度使用額をこれに充てる。今年度は、倫理委員会の承認を待っての実験開始となり、また、低酸素マーカーpimonidazole hydrochloride (HypoxyprobeTM-1)の調整を行っている段階にあり、動物に対する低酸素負荷まで至っていないため、動物にかかる使用がなかったため。動物実験の開始に伴い、多くの動物および麻酔用ガスの購入費用が見込まれる。今年度の遅れについては、実験日数を増加させることを予定している。
脳における食欲調節物質と性ステロイドホルモンの相互作用の解明

平成10年度の研究により、ラット脳において、摂食促進ペプチドであるニューロペプチドY(NPY)と摂食抑制ペプチドであるレプチンが、視床下部室傍核の大型細胞核(mPVN)において相互作用、あるいは、共に視床下部背内側核(DMN)の神経活動を上昇させることで摂食量を調節している可能性を報告した。これを受けて平成11年度は、この作用が脳内に複数のサブタイプが存在しているNPY受容体のうち、どのタイプの受容体を介して発現されている現象なのか検討した。摂食行動と関係が深いとされているY_1受容体に注目し、この受容体に対する競合拮抗剤を投与してNPYの作用を一部抑制した。これらの動物にNPYを投与し、単位時間当たりの摂食量の変化と脳内神経活動の上昇部位をc-Fosの免疫組織化学染色によって検討した。また、本研究の立案当初、食欲調節物質と性ステロイドホルモンの相互作用部位として想定した乳頭前核腹側核(PMv)の生理機能解明研究の一環として、複数の系統の雌マウスのフェロモンを雄マウスに暴露させ、雄マウス脳のPMvにおける神経活動変化をc-Fosの免疫組織化学染色によって比較検討した。その結果、(1)平成10年度に明らかにしたmPVNにおけるNPYとレプチンの相互作用による摂食量の変化は、複数存在するNPY受容体のうちY_1受容体を介した現象であることが示唆された。一方、(2)雄マウスのPMvは、副嗅球と同様、鋤鼻器のフェロモン受容によってその神経活動が有意に上昇していることが判明した。このことは、フェロモンによる化学情報の受容に端を発する神経活動の制御に、アンドロゲンが直接的に関わっていることを示している。今後は、食欲調節機構として嗅覚にも着目して、食欲調節機構に対する性ステロイドホルモンの相互作用機構をさらに解明していく考えである。交付申請書の「研究の目的」で記載した通り、当初は、食欲抑制物質(レプチン)と性ステロイドホルモンの相互制御部位として乳頭前核腹側核(PMv)を想定した。しかし、10年度最初の実験として、レプチンをラットの側脳室内に注入して神経活動上昇マーカーであるc-Fosの出現を検討したところ、他の研究者によって報告された結果とは異なり、PMvにおけるc-Fos出現性に変化が認められなかった。従って、PMvに対するレプチン作用に研究を絞る前に、報告者自ら、摂食調節物質の相互作用が行われている脳部位を確認する必要があると判断した。そこで、成果を出せなかった上記実験に引き続き、(1)ラット側脳室内に、レプチン、食欲促進物質(NPY)、およびMPY受容体阻害剤をそれぞれ単独および同時投与し、それによる摂食量変化とc-Fosによる脳内活動部位を検討した。また、(2)PMvの生理的機能の解明を進めるため、交付申請書で記載したプロジェステロン受容体のPMvにおける分布を検討した。その結果、(1)レプチンとNPYは、主に視床下部室傍核や視床下部背内側核で相互作用していることが判った。さらに、PMvがこれらの相互作用を受けている部位とは断定出来ないことが判った。この研究成果は学会で発表し、雑誌に投稿中である。また、(2)PMvには少量ながらプロジェステロン受容体(PR)が存在しており、さらに、その細胞は一酸化窒素合成酵素(NOS)を含んでいることが明らかとなった。この研究成果は現在投稿準備中である。摂食行動と性ステロイドホルモンとの関係を、PMvに対するレプチンの作用という点から解明することは難しくなったが、PMvにPRとNOSが分布していることが判明した。PMvは嗅覚との関係が注目されるため、今後は食欲調節機構として嗅覚にも着目し、食欲と性ステロイドホルモンの相互作用を解明していく。

このことは、フェロモンによる化学情報の受容に端を発する神経活動の制御に、アンドロゲンが直接的に関わっていることを示している。今後は、食欲調節機構として嗅覚にも着目して、食欲調節機構に対する性ステロイドホルモンの相互作用機構をさらに解明していく考えである。
通性嫌気性細菌の中心代謝経路を制御するmRNAクロストーク

古典的なセントラルドグマにおいて単にタンパク質の鋳型として考えられてきたmRNAが、他のmRNAと塩基対形成して発現を制御することが明らかになってきた。本研究では、大腸菌やサルモネラをはじめとする通性嫌気性腸内細菌科細菌のTCAサイクル酵素群をコードするsdhCDAB-sucABCDオペロンmRNAの3'末端領域から生成するsmall RNA RybD (SdhXと命名)が、酢酸キナーゼをコードするackA mRNAの翻訳開始領域と塩基対形成して、翻訳を抑制することを明らかにした。サルモネラにおいてsucD 3'末端領域を削除もしくは一塩基変異を導入した変異株ではC末端にFLAGを付加したAckAのタンパク質量が増加することをウェスタンブロット解析で示した。さらに、GFP翻訳融合レポーターを用いた発現解析により、サルモネラではackAに加えて嫌気性フマラーゼをコードするfumBと、ackAに隣接する機能未知遺伝子yfbVが同様のメカニズムで制御されることを示した。しかしながら、大腸菌ではfumBとyfbVが塩基対形成領域の変異により制御されていないことを部位特異的変異導入により実証した。一方、大腸菌ではsucD 3'末端領域が新たにギ酸デヒドロゲナーゼをコードするfdoGとカタラーゼをコードするkatGと塩基対形成する塩基配列を獲得し、転写後レベルで制御していることを明らかにした。以上から、RNA制御因子の標的mRNAにおける変異の蓄積が転写後制御の欠落を、mRNAの3'末端領域における変異の蓄積が新たな標的mRNAの制御能の獲得を引き起こし、中心代謝経路のmRNAネットワークが多様化することが示唆された。以上の研究成果を2018年12月にNucleic Acid Research誌に論文発表した。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。本研究は、古典的なセントラルドグマにおいて単にタンパク質の鋳型として考えられてきたmRNAが、他のmRNAと塩基対形成して発現を制御することが明らかにする。大腸菌やサルモネラをはじめとする通性嫌気性腸内細菌のTCAサイクル酵素群をコードするsdhCDAB-sucABCDオペロンmRNAの3'末端領域が、実際に酢酸キナーゼをコードするackA mRNAの翻訳開始領域と塩基対形成して、翻訳を抑制することを今年度明らかにした。ackAはサルモネラ、大腸菌で共通して制御される遺伝子であり、特にSucDが誘導される酢酸を炭素源とする好気培養条件において顕著に発現が抑制されることをウェスタンブロットにより明らかにした。研究課題1について当初の計画通り、大腸菌とサルモネラにおいてsdhCDAB-sucABCDオペロンmRNAの3'末端領域が、酢酸キナーゼをコードするackA mRNAの翻訳開始領域と塩基対形成して、翻訳を抑制することをが実証された。研究課題2では、当初予想していたサルモネラのfumBに加えて、大腸菌、サルモネラで異なる遺伝子セットが制御されるという予期していない結果を得ることができた。研究課題3に必要な変異株の作成を完了した。

以上から、RNA制御因子の標的mRNAにおける変異の蓄積が転写後制御の欠落を、mRNAの3'末端領域における変異の蓄積が新たな標的mRNAの制御能の獲得を引き起こし、中心代謝経路のmRNAネットワークが多様化することが示唆された。以上の研究成果を2018年12月にNucleic Acid Research誌に論文発表した。古典的なセントラルドグマにおいて単にタンパク質の鋳型として考えられてきたmRNAが、他のmRNAと塩基対形成して発現を制御することが明らかになってきた。本研究では、大腸菌やサルモネラをはじめとする通性嫌気性腸内細菌のTCAサイクル酵素群をコードするsdhCDAB-sucABCDオペロンmRNAの3'末端領域から生成するsmall RNA RybD (SdhXと命名)が、酢酸キナーゼをコードするackA mRNAの翻訳開始領域と塩基対形成して、翻訳を抑制することを明らかにした。サルモネラにおいてsucD 3'末端領域を削除もしくは一塩基変異を導入した変異株ではC末端にFLAGを付加したAckAのタンパク質量が増加することをウェスタンブロット解析で示した。さらに、GFP翻訳融合レポーターを用いた発現解析により、サルモネラではackAに加えて嫌気性フマラーゼをコードするfumBと、ackAに隣接する機能未知遺伝子yfbVが同様のメカニズムで制御されることを示した。しかしながら、大腸菌ではfumBとyfbVが塩基対形成領域の変異により制御されていないことを部位特異的変異導入により実証した。一方、大腸菌ではsucD 3'末端領域が新たにギ酸デヒドロゲナーゼをコードするfdoGとカタラーゼをコードするkatGと塩基対形成する塩基配列を獲得し、転写後レベルで制御していることを明らかにした。研究課題1と2について当初の計画が達成された。研究課題3について、各培養条件におけるSucDタンパク質とSdhX small RNAの発現量、さらに標的mRNAのAckAの発現量には相関が見られなかっため、計画当初は予想していなかった複雑な転写後調節が行われていることが示唆された。研究課題3について、作成した変異株の解析に加え、in vitro翻訳系の解析を行う。研究課題4は、2016年9月にMelamedらによって大腸菌のRNA相互作用領域を網羅する結果がMolecular Cellに発表されたため、予定していた部分は中断する。前年度に予定していた発現解析に用いるプレートリーダーを購入できなかったため、今年度購入する。これに伴い、今年度予定していた高解像度蛍光顕微鏡およびFISH用蛍光プローブの購入を来年度以降に延期する。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。sdhCDAB-sucABCDオペロンmRNAの転写後調節機構をより詳細に解析する。
中世法会をめぐる学問とそれを表白する言説に関する基礎的研究

「法華八講」と総称された営みは、国家的意義を持つものから、私的に行われたものまで、さまざまな様式をもって行われていた。「八講」において、<論義>とともに重要であったのが<説法>である。<説法>に関する論究は、これまで、<表白><施主段>に鎮められた、美辞麗句や因縁に関して行われ、講師の文学的素養を指摘するものであった。しかし、経典の解釈を講説する<経釈>は、教学の拠り所とする経論・釈義を原拠として、宗派における経典理解が提示され、<論義>とも関わって講じられていたことを確認し得るなど、「八講」における眼目の一つであった。本研究では、「八講」と総称される「法会」において講説された<経釈>から、「直談」と称された営為に至るまで、『法華経』を唱導した、さまざまな場における講説の実態を、現存する資料を紹介しつつ明らかにした.<説法>を伝える文献を調査するとともに、平安時代から鎌倉・室町時代における経典解釈の方法を整理すると、聴衆(施主)となった階層が拡大するなかで、<説法>そのものも変遷を遂げたことが解明できた。一部の知識階層を聴衆(施主)とした古代から、時代が下るにつれて幅広い階層が聴衆(施主)とされるなか、<説法>は経典そのものを「わかりやすい表現」をもって解説するものに変容していった。人々は、伝統的な<説法>すなわち大陸伝来の経典解釈(経典そのもののについて解説するのでなく、経典を段落分けし、それぞれの段落について「要旨」を述べる)から、経典そのものに解き明かされるところを「知る」ことを求めるようになったと考えられる。日本人の精神史にも関わって、問題提起を行う結果となっていることを付言しておきたい。本年度は、中世法会をめぐる学問を明らかにするために、東大寺図書館に蔵される『東大寺円照上人行状』の輪読を開始した。本研究では、現存する説法資料のなかでも、中世の<説法>と<論義>の実態をよく伝えていると考えられる『草案集』を解読することを予定していたが、平成15年6月12日に準備会として蓑輪・曽根原・大島が集まり、法会をめぐる学問を考えるには、中世の僧坊、さらには学侶の学問と活動の実態を明らかにすることこそ急務であるという結論に至った。鎌倉時代の学侶の生涯が語られる『東大寺円照上人行状』の輪読を行うこととした所以である。なお、輪読にあたっては、日本女子大学文学部教授・永村眞氏と愛知学院大学文学部教授・福島金治氏に加わっていただき、専門的知識の提供を願うこととした。本年度輪読は、平成15年9月7日・11月8日・平成16年1月10日・3月13日に日本女子大学において行い、上巻の翻刻作業とともに、注釈の方法など決定した。また大島は、研究代表者として、東大寺図書館における原本調査、ならびに、原本のカラー写真を入手するための撮影(光楽堂に依頼)をすませるとともに、本文の電子化を行った。加えて、<説法>の研究をすすめるために、神奈川県立金沢文庫の保管される『釈門秘鑰』の原本調査を行うとともに、写真撮影をすませた。次年度は、写真を用いて翻刻作業をすすめることとする。

本研究は、古代から宗教儀礼として営まれていた「法会」の実態を、その眼目であった「論義」と「説法」の言説、さらには寺院を取り巻く諸相(経済・構成ほか)に照らして明らかにすることで、日本中世の文化(宗教・文学など)や政治・経済など考究するものである。本年度は、昨年度に引き続いて東大寺図書館蔵『円照上人行状』を読み進めるべく、注釈作業を行った。また研究代表者と分担者は各々に、研究課題を考究するために必要な、文献資料の伝存状況を調査・収集するべく、寺院そのほか(東大寺・東寺観智院・醍醐寺・勧修寺・真福寺・神奈川県立金沢文庫など)において、聖教を中心とする文献資料の調査・収集を行った。その調査報告ならびに研究成果を交換するために、4月24日・9月17日・1月19/20日に集会をもった。また、蓑輪・曽根原・大島は研究成果を公表するために世界宗教学会IAHR東京大会(3月27日於高輪プリンスホテル)において、「論義」「説法」「神祇」に関する口頭発表を行った。このほかにも大島は、仏教文学会近江大会において新出の説法資料成菩提院所蔵『悟抄』を紹介し、日本中世における唱導の構造を明らかにする口頭発表を行っている。「法会」をめぐる研究課題は、研究代表者が専門とする日本文学に限らず、国語学・宗教学・日本史・日本思想史ほか、広範囲な学問領域をもって為されるべきことが提唱され始めている。しかし、本課題を考究するために必要な文献は公刊されていないことが多く、大島ほか、未翻刻資料の公刊に努めるべく、神奈川県立金沢文庫保管『釈門秘鑰』の公刊ほか、いくつか作業中であることを記しておく。平成17年度も昨年度に引き続き、研究課題とする<論義>と<説法>をはじめとする、法会において表白された言説を伝える文献の伝存状況を個々に調査・確認するとともに、その収集と解読に携わった。研究代表者・大島は、<説法>を伝える文献を調査するとともに、平安時代から鎌倉・室町時代における経典解釈の方法を整理し、聴衆(施主)となった階層が拡大するなかで、<説法>がいかに変遷していったかについて、その具体的な言説を提示しつつ解読した。<説法>の変遷、その言説の変遷には、それを求めた聴衆(施主)の意識が投影されており、日本人の精神史にも関わる問題を提起することができた。また研究分担者・蓑輪は、<論義>の実態を『法勝寺御八講』(東大寺図書館所蔵)に記録された言説に基づいて明らかにした。<説法>と<論義>は、学侶が日々の研鑽を披露するべく、さまざまな場において営んだことのみ知られていた。が、その実態や具体的な言説に関しては、これまで明らかにされてこなかった。そのため、寺院を中心として、数多く所蔵される聖教をいかに整理し目録化し、さらにいえば保存に臨むかが明確でなかった。本年度の研究実績は、そういった文献を解読し整理するうえにも、基礎となるべき知見を提示し得るものである。なお本年度は、本研究の最終年である。研究報告書作成に向けて意見交換を行った結果、平成15年後から昨年度にかけて輪読をすすめた『東大寺円照上人行状』(東大寺図書館所蔵)については、本書を読みすすめるために必要な基本文献が不足していることは言うに及ばず、本書を注釈するために、さらなる準備を要するものと判断した。注釈作業を今後も継続するために、大島は研究代表者として、研究費を新たに申請している。