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東北アジアにおける移民・移民労働者(外国人)のための教育活動にかんする実態調査

1)東アジアにおける移民・移民労働者の大規模な動きは、19世紀半ばのアヘン戦争以後に始まり、第二次大戦直後と、1980年代以後の今日第三のピークを迎えている。2)現在、この地域内で最も産業の成熟している日本と産業が最も未成熟なフィリピンとを両極として、〈発展途上国から先進国へ〉を基本的方向性とする人の流れができているが、近隣諸国間においては方向性が複雑化している。3)受け入れ側の事情としては、鉱工業・水産漁業等の労働力不足とともに家事労働者を求める主に中国系住民の志向をあげることができる。送り出しての事情としては、経済的サクセスストーリー実現の動機の他、開発独裁体制が続く中で「外国に出たい」と切に願うい中国人に顕著な動機とともに、英語能力が相対的に最も高く評価されている旧アメリカ領であることによって英語教育が最も徹底しているフィリピンのからの動きが特徴的である。4)受け入れ国において、教育的ケアは急速に前進している。香港ではアジア移民センターにおける一般情報提供、地域言語である広東語学習の教科書づくりや中国大陸からの移民に対する英語教育が、台湾では台湾人男性と結婚したインドネシア人等の配偶者とその子どもたちの中国標準語教育などが進みつつある。また日本では日本語学習支援にかんする交流活動、基本認識の整理、識字法等の法案作成の試みもなされるに至っている。ここでは、確実に多文化・多言語社会、市民社会の成熟へと向かっている。5)一方、言語的、文化的摩擦も依然として少なくない。その背景として〈中華思想〉というローカルなイデオロギーの役割を無視できない。文化概念としての〈中華文明圏〉を軸としてこの洗礼を受けれいない〈北狄〉〈南蛮〉などの人々を蔑視する基本的傾向に加えて、〈文化センター=西欧〉とする考えが加わり、差別を当然視する傾向も見られる。6)この傾向を克服するためには、各国経済の平準化と〈東アジア連合〉の実現が必要であり、また、この地域の伝統イデオロギーである儒学に内在する文化を理由とした差別感、老荘思想における自然主義の再評価など、新しい思惟形態の構築もまた、重要課題の一つである。7)また、活動交流の活発化、政府等への政策提言等の働きかけの強化のためには、国内、国外でのネットワークの強化が重要であるが、この点でフィリピン人と中国人のネットワークに相互扶助的要素が拡大している。韓国では、1994-95年段階に比べて、実際の支援状態、社会的世論、研究等の点で大きな展開があった。これには香港に拠点を持つ「アジア移民センター」のようなキリスト教ネットワークをはじめとする内的な動きのほかに、日本の状態からの影響と、金大中大統領の開放政策によるナショナリズムの弾力化の影響が見られる。日本では地域ベースの日本語ボランティア教室の増加のほか、ネットワークの強化による質的向上が見られ、学校での対応も移民の母語対応をのぞいて進みつつある。これには各政党が永住権を持つ外国籍住民の地方参政権に関する法案を提出したことや金大統領・小渕首相の合意の影響が大きい。

台湾では林寄清江教育部長らによる「学習権」「終身学習」政策が出、カトリック教会や一部の労組による支援に加えて、一部研究者が関心を持ち始めているが、労働部系の文化施設以外では、「九族」=マレー系先住民への対応の範囲にとどまっている。香港では、香港市民を親とする中国人の香港居住権を認める最終法院判決が出たが、実際の受け入れ計画は未定であり、教育・職業訓練面での対応は従来のままである。フィリピン系家庭内労働者の自助活動は拡充し、インドネシア人、タイ人の学習機会支援も活発になっている。マカオでは中国からの密入国移民が性産業で働き収監されるケースが増え、刑務所内での教育活動が重視されている。シンガポールでは、多民族政策がとられ「移民適応プログラム」が用意されているが、移民労働者対応は基本的になされていないので、課題となっている。総じてこれらを「国民教育」とその発展的解消の文脈に位置づける討論が求められている。(1)1970-80年代以後急速に増えた韓国、日本、台湾、香港、マカオ、シンガポールにおける移民・移民労働者(外国人)の背景は、これら諸国(地域)と周辺諸国(地域)とのあいだでの経済、科学技術、文化、社会制度などでの格差拡大を背景としている。(2)教育活動をふくむ住民としての受け入れについては、シンガポール、香港のイギリス型=非血統主義型と日本、韓国、台湾における儒教型=血統重視型とに分かれ、それは、シンガポール、香港における国家(準国家)レベルでの制度(準制度)としての移民適応プログラムの存在と、日本、韓国、台湾、マカオにおける制度化の立ち後れ、NGO主導という、二つの傾向に現れている。そして制度化が遅れている場合、地球規模のネットワークをもつキリスト教系団体の果たしている役割が小さくない。(3)しかし、1997年以後の香港における血統重視傾向と、1990年代以後の日本・韓国における外国籍市民への地方参政権付与立法化のように、両者が交差する動きが注目される。(4)シンガポール、香港でも、移民に対する一定の制度整備に比して、移民労働者への対応はきわめて不十分な状態にある。この点では、日本での地方自治体と市民活動の一定の成熟、香港での地方自治制度を支える市民活動の未成熟という事情がある。(5)移民労働者の場合、出身国への帰国再適応課題もとくに子どもの場合に重要であるが、総じてエスニックグループの独自活動に依存し、受け入れ国政府等の積極的対応がないために、日系ブラジル人の子どもたちのように困難に直面している場合もある。(6)受け入れ国での文化的多元性と独自性との融合指向は、日本、台湾、シンガポールに見られ、これは中華思想、華夷秩序意識からの脱皮の動きとして注目される。その際、日本のアイヌ、在日韓国・朝鮮人、台湾の「九族」、香港のフィリピン人などの役割が注目される。(7)以上のような動向の成熟のためには、各国での「国民国家」「国民教育」の成熟が地方自治体、「個人」、「市民の学習権」の発展、東アジア文化の複合性認識を促すことが重要であり、これは中国をふくむ今後の東アジア全体にとって大きな課題となる。そしてこの点では、域内各国の経験を吸収しながら日本が自らの軌跡を整理して、適切なリーダーシップをとることが期待されている。
炭酸ガス・温水の生体への影響に関する研究

炭酸ガス温水に身体を浸けると、炭酸ガスは皮膚から浸透し、その化学的作用としての強力な血管拡張作用によりその部位の血流が改善することが知られている。これまでに、人工炭酸泉浴剤については褥瘡の治療、パーキンソン病への影響、脳卒中に対する循環改善作用など様々な観点から研究してきた。平成12年度は、臨床応用を一つの目標とかかげた。実際の臨床的にも、腰痛症や慢性関節リウマチの疼痛に対し、実際に効果があることを、高濃度炭酸ガス温水浴と水道水温水をプラセーボとした対比実験で実証し、同雑誌63:173-180,2000.に報告した。加えて、脳卒中などの神経の痙縮に対する基礎的な研究として、温度刺激に対する神経の反応を、同雑誌63:143-150,2000.に発表し、知覚神経のうち持続鈍痛に関わるC繊維の閾値を上昇させることで疼痛が軽減することを示唆した。平成13年度の研究として、高濃度炭酸ガス温水浴の全身浴における体温の変化を、J.J.A.Phys.M.Baln.Clim.64:113-117,2001.で報告し、体温の上昇は著明で代謝・循環改善には有効であると示唆した。また、全身浴のみならず下肢の部分浴でも、代謝・循環改善が得られることを、同雑誌64:145-149,2001.で報告した。加えて、疼痛閾値の上昇について、平成12年度の前段階の実験である水道水温浴の温熱刺激の結果を踏まえ、今度は実際に炭酸ガス温水浴を用いて検討した。その結果、温度による疼痛閾値の上昇はあるものの、炭酸ガス温水の直接の神経に対する作用はなかった。したがって、炭酸ガス温水浴が良好に疼痛を改善させるのは神経に対する疼痛の直接の軽減ではなく、温熱による代謝・循環改善の要素が大きいことがわかった。その結果を、同雑誌64:191・199,2001.に報告した。次年度は、部分的な高濃度炭酸ガス温水浴でも効果があるのかどうかを検討することと、疼痛の軽減が神経にどの程度関与しているかを実験し検討報告する予定である。平成12年度は、高濃度炭酸泉浴の人体への体温への影響をみるために、健常成人を対象に深部体温などを指標に温熱分布を測定した。高濃度人工炭酸ガス温水は腎不全患者の人工透析膜を応用したガス透過性薄膜(三菱レイヨンエンジニアリングKK協力作製)を用いて、通常温浴に用いられる41°C温度で炭酸ガスとしては殆ど飽和状態の1000ppmの高濃度のものを作製した。その温水で足から胸部程度まで体を浸け外部にでている上胸部や上腕、頭部などの体温・深部体温を測定し水道水と比較した。また、心臓への影響をみるため血圧など循環器系のモニターも同時に測定し変化を観察した。次に、臨床では一部分だけ加温することがよく行われるので、下肢だけなど部分的な温浴でも効果があるかを調べた。温浴する部位は大腿部以下の下肢とし、同様にして胸部・上腕・頭部などの深部体温、表面皮膚温を指標に体温変化や循環器への影響を調べた。また、血流状態をレーザー組織血流量計などを用いて比較検討した。また、これらの実験研究と並行して、脳卒中患者などの痙縮に対する治療として有効かどうかを調べる目的で、温熱刺激に対する神経の反応を健常成人を用いて基礎的な面から調べた。

平成13年度は、基礎的な平成12年度の生理学的結果をもとに、腰痛患者や慢性関節リウマチなどの疼痛患者に同様な温水浴を行わせた。その効果の判定には、温度変化を客観的な指標にし、腰痛患者には本邦で広く用いられている整形外科腰痛得点表や、日常生活動作の点数、主観的疼痛点数などを温浴前後に行いその効果をみた。また、慢性関節リウマチには日常生活活動の点数のほかに、客観的QOLの指標としてのAIMSなどの評価と主観的疼痛の指標を施行し、その疼痛改善に対する効果をみた。加えて、疼痛に対する高濃度炭酸ガス温水浴の改善機序を解明するために、神経の疼痛閾値に対する作用を、高濃度炭酸ガス温水を用いて検討した。
磁気共鳴法による脳細胞膜脂質の微小環境の解析

脳細胞膜の微小環境解析を水分子の拡散現象に注目して行った。通常のMRIでは拡散現象は無視できるが、非常に強い傾斜磁場パレスを印加することにより水分子の微小な動きをとらえることが可能になり拡散係数の定量も可能となる。MR装置は、SISCO社製動物用MR SIS 200/400(4.7テスラ、40cm横置き型)を使用し、スピンエコー法(Tr2500msec Te 90msec)における180°パレスの前後に最大1.5G/cmのMPGパルスを印加した。1.Wistarラットにおける正常脳水分子拡散係数測定生体では頭部の固定程度で値が変動するため、ラット頭部固定装置を作製し、Wistarラットでは皮質/基底各/視神経/三叉神経のADCは0.66/0.74/0.99/0.46×10^<-3>mm^2/secであった。2.有機水銀中毒脳(Wistarラット)の拡散係数測定急性メチル水銀中毒ラットモデルを作製し、曝露前と曝露後2週間目に測定した。曝露後のADCは、基底核ではADC低下、視神経ではADC上昇を認め、前者は細胞内の浮腫を、後者はミエリン鞘崩壊による浮腫の所見と考えた。3.正常幼犬における拡散強調画像、拡散係数測定、拡散係数画像ラット同様固定に問題があるため、イヌ頭部固定装置を作製し、脳拍動による影響をなくすため、心電同期法を併用した。正常幼犬における皮質/白質/視床/内包/脳室内髄液のADCはそれぞれ1.12/1.18/1.10/1.40/2.54×10^<-3>mm^2/secであった。4.水頭症幼犬における拡散強調画像、換算係数測定、拡散係数画像体重1.5-2.5kgの幼犬を用い大槽にカオリンを注入して水頭症を作製した。脳室拡大が強くなるにつれ皮質と視床のADCは低下し、細胞外腔の減少や細胞内の浮腫の所見と考えられた。脳室周囲白質のADC上昇は早い拡散を示し間質性浮腫の所見であった。以上の結果から、水分子の拡散を定量することで細胞膜をとりまく微小環境の推定ができる可能性が示唆された。
前庭自律神経反射(前庭呼吸反射)に関与する、脳幹内中枢神経核の出入力経路の検討

内側延髄網様体(medullary reticular formation : MRF)が、前庭神経核の入力を受け、横隔膜や腹直筋などの呼吸筋へ投射することより、前庭呼吸反射における中継核であることは、これまで報告されてきた。近年では同じ呼吸を調節する筋群として、上気道筋にも関与することが考えられている。その中でも舌を前方へ突き出す働きを持つオトガイ舌筋の上位中枢もMRFにあるとされており、電気生理学的研究報告でも、全身麻酔下で正円窓電極挿入を施されたネコにおいて、意識下の状態で前庭を電気刺激させ、その際の呼吸筋(横隔膜、腹直筋、外斜角筋)、上気道筋(オトガイ舌筋)の誘発活動電位を調べている。この電気刺激でわずかな潜時で末梢筋電図を記録でき、この神経経路の存在が確認された。筆者も、シナプスを越えて逆行性に投射する特性を持つ、遺伝子操作されたPseudorabies Virus(PRV)を使用して呼吸筋、上気道筋の上位運動ニューロンの脳幹内分布の研究をアメリカ・ピッツバーグ大学にて行ってきた。引き続き前庭呼吸反射に関与する上気道筋2種類の形態学的研究を、PRVを使用して行おうとしたが、交渉を重ねたものの米国の検疫が厳しく、最終的にはこの2年で輸入に至らなかった。この間、前庭神経核とMRFとの線維連絡をWGA-HRPを使用した神経解剖学的研究を光顕的、電顕的に行っているが、有益なデータは得られていない。これまでの形態学的研究では、内側延髄網様体(MRF)内ニューロンが横隔膜、腹直筋などの呼吸筋に投射し、またこの網様体は前庭から多くのニューロンを受けていることがわかっている。つまりこの網様体・脊髄ニューロンが前庭呼吸反射に強く関与するものと考えられている。その上で、シロイタチのMRFにlidocaineを注入して機能的障害を作成し、横隔膜や腹直筋などの活動電位の変化を調べた。このMRFの不活化により各種呼吸筋活動電位のbase-lineが上昇し、これらニューロンが通常、抑制的に働いている事が示唆された。またこの前庭呼吸反射は、横隔膜などの呼吸筋以外にも、上気道筋もコントロールしていると言われている。その中でも舌を前方へ突き出す働きを持つオトガイ舌筋の上位中枢もMRFにあるとされている。しかしこの呼吸筋と上気道筋の関連についてはこれまで殆ど報告されておらず、シナプスを越えて逆行性に投射する特性を持つ、遺伝子操作されたPseudorabies Virus(PRV)をシロイタチの横隔膜、オトガイ舌筋に同時に打ち込み、両者の上位運動ニューロンの脳幹内分布及び投射ニューロンの分枝の有無について検討しこれを報告した。特に近年では睡眠時無呼吸症候群の要因として舌根沈下が知られてきており、この反射経路の障害によって無呼吸が惹起される可能性がある。今後はこのオトガイ舌筋に加え、同じ上気道筋として分類される後輪状披裂筋(声帯を開大させ上気道の開通性を高める)についても前庭からの入力に影響を受けるかどうかを検討する予定である。平成17年2月現在、まだアメリカ・ピッツバーグ大学からのPRVの輸入が完了しておらず、予備実験として順行性、逆行性に投射する特性を持つWGA-HRPの、後輪状披裂筋への注入を試みている。
脱中心的多言語領域としての「地中海文学」の構築

本研究課題「脱中心的多言語領域としての「地中海文学」の構築」は、21世紀以降の「世界文学」が西洋中心主義からの脱却を唱道しながらも、その桎梏を逃れていないという問題意識のもと、狭すぎる国民文学と広すぎる世界文学の中間域としての現代における「地中海文学」を構築する。
末端酸化酵素の基質酸化特異性とプロトンポンプにおける金属活性中心の役割

1。ヘム-銅オキシダーゼにはキノールを酸化するものとシトクロムcを酸化するものがある。その特異性を分子論的に考察する目的で、大腸菌のbo型キノールオキシダーゼのサブユニットIIの親水性ドメインを好熱菌シトクロムcオキシダーゼの対応する部分で入れ換えたキメラ酵素の遺伝子をプラスミド上に作成した。これをbo型およびbo型両方のキノールオキシダーゼを欠く大腸菌で発現させた所、遅いながら大腸菌は好気的に増殖した。これからキノールオキシダーゼとTMPDシトクロムcオキシダーゼの双方の活性を持つ膜をとることができた。2。好熱性バシラスで主に働く末端酸化酵素はcaa_3型シトクロムc酸化酵素である。しかしオルタナティブオキダーゼとしてヘムBとOのほか少量のヘムAが含まれているb(o/a)_3型酸化酵素はこの菌のシトクロムc-551を高い親和性で速く酸化することができる。この酵素は2つのサブユニット(56と20kDa)からなるが、そのブユニットIIには古細菌Sulfolobusで同定されたSoxABCDキノール酸化酵素のそれとともに膜貫通α-ヘリックスが1本しかなく、独自のサブグループを形成する。3。より低い酸素分圧で働くヘム銅オキシダーゼとしてcb型の酵素がある。Helicobacter pyloriではこの酵素が唯一の末端酸化酵素であることを見いだし、この酵素の精製した。4。好熱性バシラスのシトクロムc-551を枯草菌で発現するようにデザインされたプラスミドで枯草菌を形質転換したところ、好熱性バシラスのシトクロムc-551が約2.5nmol/mg程度発現した。1。2。3。4。
リボザイム(RNA)の機能発現機構の解明と機能制御方法の開発

1。ワトソンークリック型塩基対(G・CおよびA・U)、ダングリング・エンド、インタ-ナル・ル-ブなどの二次構造を形成するオリゴヌクレオチドを合成し、その吸光度変化からオリゴヌクレオチド二重らせんの融解挙動を追跡した。その結果、塩基対の形成または融解が、主に最近接の塩基対の種類に依存していることを見出した。また、ダングリング・エンドはコア-の二重らせん構造を安定化し、逆にインタ-ナル・ル-プは不安定化の傾向を示すこと、同じヌクレオチドからなるダングリング・エンドでも3'の方が5'よりも安定であること、インタ-ナル・ル-プの不安定性はヌクレオチドの種類や溶液の塩濃度に大きく依存することなどを明らかにした。2。上記の結果をもとに、RNAの二次構造の安定化エネルギ-を算出する方法の基盤となる最近接塩基対パラメ-タを決定した。このパラメ-タには、従来正確な値が求められいなかった非塩基対部位のパラメ-タも含まれている。3。最近接塩基対パラメ-タを用いて、テトラヒメナ・リボザイムの活性部位の安定化二次構造を決定した。さらに、その活性部位のP9部分を改変することによって、リボザイムの活性部位がより安定化することを示した。4。基質結合部位以外の反応に寄与するテトラヒメナ・リボザイムの構造部位を見つけるための手法として、蛍光性オリゴヌクレオチドを用いる手法を開発した。1。2。3。4。
「日本型中間管理職機能の現地人中間管理職への移転可能性とその範囲」に関する研究

1.在英及び在タイ日本企業の日本人トップと現地人中間管理職に対する質問紙調査と面談調査から得た資料の整理及び分析を8割方終わった段階で、いくつかの疑問点を調査対象企業及びその日本本社に確認するためのフォローアップ調査を行った。2.これらの作業を通じて得た情報に基づき論文を作成することが当初の計画であった。しかし、学界・実業界双方に対し説得力のある論文を書くためには、以下2点、すなわち、(1)日本企業における中間管理職機能の特質、および、(2)日本企業における「企業文化」の特徴、を明らかにすることが肝要と考えられたため、その方面の研究に迂回した。そのため、当初予定していた論文よりも内容が膨らむことになり、調査から得た情報を十分駆使した論文を作成することができず、中間的な研究成果を、多国籍企業研究会等で報告するに留まった。3.平成6年度中に、上記2点をふまえて、データを再構成し、それなりの論文にまとめることにしたい。
放射線性萎縮唾液腺に移植された生体骨髄由来幹細胞はどう挙動するか?

本研究課題は、放射線性唾液腺萎縮に対して、骨髄由来細胞の唾液腺移植による機能回復の効果と、そのメカニズムを明らかにすることを目的とする。具体的には、まず成体マウスの骨髄から採取した細胞を、放射線性障害により萎縮したマウス顎下腺へ移植し、移植された細胞の腺組織における挙動や、機能回復の過程を詳細に調べる。それにより、骨髄由来細胞の唾液腺上皮細胞への可塑性を正確に把握する。次に、骨髄由来細胞に含まれる骨髄単核球細胞や間葉系幹細胞といった分画を抽出し、それぞれを移植することで各分画の持つ機能回復への影響を評価する。それにより、骨髄由来細胞移植による機能回復のメカニズムを明らかにするとともに、臨床応用を想定した有効な細胞分画の探索を行う。本研究の意義は、放射線性組織障害に対して、患者の自己骨髄細胞を用いて、培養操作を伴わない生体幹細胞による治療基盤を確立することにある。本年度は、C3Hマウスを使用して、頭頸部に放射線照射を行なうことで、唾液腺萎縮マウスモデルを作出した。今後は、別途採択された挑戦的萌芽研究での研究にて、採取した骨髄由来細胞の静脈内投与、顎下腺直接投与、および併用投与などを行ない、移植条件の検討等を行っていく。これにより、骨髄由来細胞の唾液腺上細胞への可塑性を把握することができる。移植条件の最適化は、骨髄由来細胞に含まれる単核球や間葉系幹細胞の分画について、それぞれの分画の持つ機能回復への影響を解析する上で、重要である。本年度は、まずC3Hマウスを使用して、頭頸部に放射線照射を行なうことで、唾液腺萎縮マウスモデルを作出した。次に、採取した骨髄由来細胞の静脈内投与、顎下腺直接投与、および併用投与などを行ない、移植条件の検討を行なっているところである。これにより、今後骨髄由来細胞の唾液腺上細胞への可塑性を詳細に把握することができると思われる。又、移植条件の最適化は、骨髄由来細胞に含まれる単核球や間葉系幹細胞の分画について、それぞれの分画の持つ機能回復への影響を解析する上で、重要である。
重度変形性膝関節症における筋発揮張力と有限要素解析法を用いた新しい歩行解析

本研究課題は重度変形性膝関節症患者の歩行解析に下肢関節の筋発揮張力分析と膝関節面の応力分布を解析するCT画像を用いた有限要素解析法を融合し、膝関節の可動性や力学的負荷の特性を明らかにすることである。平成28年度及び平成29年度は有限要素解析法について膝関節モデルの作成に多くの時間を要した。平成30年度は平成29年度までに得られた歩行データとCT画像から健常者2名と重度変形性膝関節症患者1名のデータについて作成した膝関節モデルを実際にデータとマッチングさせ、その妥当性を検証しながら応力分布についての検討を行った。現在、上記の症例については概ね解析は終了し、解析方法及び結果についての再確認をしている段階である。有限要素解析で得られた結果については、今後学会発表、国際誌への投稿を行っていく予定である。また平成31年度は重度変形性膝関節症患者の解析数を適宜増やしていくことも検討している。Any Body Modeling Systemによる歩行中の筋発揮張力の検討については、平成30年度は平成28年度から取得した歩行データから解析を進め、健常者及び軽度変形性膝関節症患者と比較検証しながら、重度変形性膝関節症患者に関する筋骨格モデルによる歩行立脚期の筋発揮張力について学会発表を行った。変形性膝関節症患者についてのモデルの妥当性が課題となっているが、引き続き筋電図との比較検証を行うことによりその有効性を確認していく。平成28年度から29年度は有限要素解析及び筋骨格モデルの整合性や妥当性に関する検証に多くの時間を費やしたが、平成30年度は実際の症例に対する筋骨格モデルを用いた有限要素解析による応力分布の解析を実施した。重度変形性膝関節症の歩行データも順調に計測されており、今後は筋骨格モデル及び有限要素解析による応力分布の検討について症例数を適宜増やしていくことが可能である。そのため本研究課題はおおむね順調に進んでいる。本研究の今後の推進については、重度変形性膝関節症患者を対象とした歩行立脚期中の筋発揮張力及び有限要素解析により膝関節面に対する応力分布に関するデータを蓄積し、解析結果を順次学会発表や国際誌への投稿準備を行っていく。さらに、得られたデータ結果を基礎として変形性膝関節症患者の歩行立脚期における力学的負荷の軽減方法を考案していく。本研究課題は重度変形性膝関節症患者の歩行解析に、下肢関節の筋発揮張力分析と、膝関節面の応力分布を解析するCT有限要素解析法を融合させ、膝関節の可動性や力学的負荷の特性を明らかにすることである。本年度は重度変形性膝関節症患者より得られたCT画像から2名のCT有限要素解析法による膝関節モデルの作成を行った。次年度から行う予定である歩行中の膝関節への応力集中部位に関する検証に対して、本年度作成した膝モデルを利用し順次解析を進めていく予定である。また、筋発揮張力分析についてはAny Body Modeling Systemを今年度末購入した。現在、重度変形性膝関節症患者から得られた歩行データについて上記Modeling Systemを用いて順次解析中である。今年度の研究成果は「変形性膝関節症患者の歩行片脚支持期における関節運動と力学的負荷の関係ー重症度の違いからー」をテーマとし第43回日本臨床バイオメカニクス学会にて発表し、今後行うCT有限要素解析に関する基礎データとして考えている。しかしながら、Modeling Systemを今年度末購入し、歩行解析によるデータを順次解析中であるため、次年度はその結果をもとに研究成果の発表を行っていく予定としている。また、今年度のCT有限要素解析法による分析は膝関節モデルの作成を中心に進めており、次年度から順次応力集中に関する解析も進めていく予定である。平成28年度は2名の重度変形性膝関節症患者より得られたCT画像から有限要素解析法による膝関節モデルを作成した。本年度はそのモデルを利用し応力集中に関する解析を進めていく予定であったが、筋付着位置や材料特性などモデル作成における改善点がいくつか挙げられ、平成29年度はモデルの再作成に時間を要した。また、2名の重度変形性膝関節症患者のデータを利用する予定であったが、モデルの妥当性を検証するために健常膝との比較を行うこととした。現在、重度変形性膝関節症患者1名のデータと健常膝1名の歩行データに関しては取得済のため、次年度は有限要素解析における新しい膝モデルによる有限要素解析を行い、平成28年度に学会発表したデータを基礎データとして、歩行立脚期における膝関節面の応力分布を検証する予定である。また、Any Body Modeling Systemによる歩行中の筋発揮張力の検討については、今年度は解析を進められ健常者と軽度及び重度変形性膝関節症患者についての張力検討も同時に行っている。また、健常者を対象として筋電図とModelingについての比較検証を行い、モデルの妥当性を検証している。次年度はこれらのデータを国内の学会に発表していく予定である。今年度はデータに関するモデルの整合性、妥当性について多くの時間を費やした。次年度は今年度に得られた結果を発展させ、学会発表や国際誌への論文投稿を積極的に行っていく予定である。今年度は有限要素解析及び筋骨格モデルの整合性や妥当性に関する検証に多くの時間を費やした。そのため、上記2つのデータ解析という点では当初予定よりも若干遅れているが、歩行解析によるデータの収集は進められている。

本年度に費やしたモデルの検証により、筋骨格モデルへのデータの取り込みもスムーズになり、結果についても順次算出中である。また、有限要素解析についてもモデルの再検討が行われており、次年度から解析可能であると考えられるため、本研究課題はおおむね順調に進んでいる。本研究課題は重度変形性膝関節症患者の歩行解析に下肢関節の筋発揮張力分析と膝関節面の応力分布を解析するCT画像を用いた有限要素解析法を融合し、膝関節の可動性や力学的負荷の特性を明らかにすることである。平成28年度及び平成29年度は有限要素解析法について膝関節モデルの作成に多くの時間を要した。平成30年度は平成29年度までに得られた歩行データとCT画像から健常者2名と重度変形性膝関節症患者1名のデータについて作成した膝関節モデルを実際にデータとマッチングさせ、その妥当性を検証しながら応力分布についての検討を行った。現在、上記の症例については概ね解析は終了し、解析方法及び結果についての再確認をしている段階である。有限要素解析で得られた結果については、今後学会発表、国際誌への投稿を行っていく予定である。また平成31年度は重度変形性膝関節症患者の解析数を適宜増やしていくことも検討している。Any Body Modeling Systemによる歩行中の筋発揮張力の検討については、平成30年度は平成28年度から取得した歩行データから解析を進め、健常者及び軽度変形性膝関節症患者と比較検証しながら、重度変形性膝関節症患者に関する筋骨格モデルによる歩行立脚期の筋発揮張力について学会発表を行った。変形性膝関節症患者についてのモデルの妥当性が課題となっているが、引き続き筋電図との比較検証を行うことによりその有効性を確認していく。平成28年度から29年度は有限要素解析及び筋骨格モデルの整合性や妥当性に関する検証に多くの時間を費やしたが、平成30年度は実際の症例に対する筋骨格モデルを用いた有限要素解析による応力分布の解析を実施した。重度変形性膝関節症の歩行データも順調に計測されており、今後は筋骨格モデル及び有限要素解析による応力分布の検討について症例数を適宜増やしていくことが可能である。そのため本研究課題はおおむね順調に進んでいる。本研究課題の今後の推進については、当初予定していた通り、筋発揮張力を算出するAny Body Modeling Systemを利用して得られた筋発揮張力のデータをCT有限要素解析法に融合させ、歩行中の膝関節面に対する力学的負荷の部位について応力分布の検証と関節負荷軽減のための有効な手段の検討・効果検証を行っていく。本研究の今後の推進については、重度変形性膝関節症患者を対象とした歩行立脚期中の筋発揮張力に関するデータを収集し、解析結果を順次学会発表や国際誌への投稿準備を行っていく。またその結果をもとに、データを有限要素解析法に融合させ筋骨格モデルでは検証が困難である膝関節面に生じる応力集中の分布を検証し、変形性膝関節症患者の歩行立脚期における力学的負荷の軽減方法を考案していく。
デザインされる生態環境とその社会的影響に関する科学技術社会論的研究

本研究では、ゲノム編集やジーンドライブ、合成生物学などのライフサイエンスの革新により、様々な生物に対する人為的な介入が可能となり、生態環境がデザインされていく領域が拡大(デザイナーベビーの環境版)していく現代において、「社会と環境との関係性」をめぐってどのような課題が登場しつつあるのか、多様な社会変化に対する予期的理解と研究領域について明らかにすることを目的としている。2018年度においては、ゲノム編集技術(ジーンドライブなど)の農業環境分野への応用動向に関して、研究集会への参加や研究者へのインタビュー調査などにより情報収集を行うと共に、近年の新たな環境観として人新世(Anthropocene)をめぐる研究動向を把握した。人新世とは、人間活動が地球規模での環境変動をもたらしており、この意味で新しい地質年代に入りつつあるとする考え方で、不安定化する地球環境に対して、人間や科学技術の役割がますます重要になるという議論と結びつけて議論される。環境への人間の介入には大気化学から生態系まで様々な分野が想定されており、本研究で焦点を当てている生態環境への介入も含まれる。こうした生態環境への介入は、人工と自然の線引きを曖昧にしつつあり、こうした方向性は、「良き人新世」とよばれる言説として流布しつつある。また生態系への介入を可能とするゲノム編集技術に関しては、デュアルユース問題も具体的に議論されつつある点も明らかになった。来年度は、引き続き、国内外における研究者に対する調査(半構造化インタビュー)を行うと共に、ゲノム編集技術の開発および応用動向に関して、海外調査を実施する。また生態系に対する介入が様々な形でなされることで、国際間や地域間で環境保全や安全管理(ガバナンス)についての考え方が多様化していく可能性がある点に関して、海外の研究者との情報交換を企画する。本課題に関連して、ゲノム編集技術や合成生物学の研究動向および社会導入に関する議論について調査することができた。また生態環境のデザインなどの介入を正当化する言説として、人新世やエコモダニズムという概念が自然科学と人文社会科学を通じて議論されつつあることが見いだせた。これらの研究動向とその広がりを理解するという点に関しては、初年度に広く情報収集を行うことができた。しかし、その成果を論文化するという点では遅れていることから、「やや遅れている」と評価した。また生態系に対する介入が様々な形でなされることで、国際間や地域間で環境保全や安全管理(ガバナンス)についての考え方の多様化について海外研究者との情報交換等を通じて検討する。以上のような研究活動を通じて、こうした高度科学技術がどのような影響をもたらし、どのような問題として把握する必要があるのか(社会経済的課題、政策的課題、倫理的課題など)、多角的な理解をふまえて、課題整理を行う。その上でゲノム編集技術の環境分野での応用が社会の環境観にどのような影響をもちうるか、またそうした環境観が共有されることがどのような社会的・経済的・政策的含意をもつことになるのか、という点について検討し、人文・社会科学的視点およびレギュラトリー視点からの課題を明らかにする。最終的には、学術界や政策担当者に対して、考慮すべき論点や政策課題の提言など、社会的発信を行うことを視野に入れる。

来年度は、引き続き、国内外における研究者に対する調査(半構造化インタビュー)を行うと共に、ゲノム編集技術の開発および応用動向に関して、海外調査を実施する。また生態系に対する介入が様々な形でなされることで、国際間や地域間で環境保全や安全管理(ガバナンス)についての考え方の多様化について海外研究者との情報交換等を通じて検討する。以上のような研究活動を通じて、こうした高度科学技術がどのような影響をもたらし、どのような問題として把握する必要があるのか(社会経済的課題、政策的課題、倫理的課題など)、多角的な理解をふまえて、課題整理を行う。その上でゲノム編集技術の環境分野での応用が社会の環境観にどのような影響をもちうるか、またそうした環境観が共有されることがどのような社会的・経済的・政策的含意をもつことになるのか、という点について検討し、人文・社会科学的視点およびレギュラトリー視点からの課題を明らかにする。最終的には、学術界や政策担当者に対して、考慮すべき論点や政策課題の提言など、社会的発信を行うことを視野に入れる。当初、2018年度内に実施する予定であったウェブアンケート調査に関しては、専門家に対するインタビューが未了であったために、翌年度に実施することとした。また、海外出張(アメリカ)に関しては、別の予算による充当が可能となったため、本科研費からは支出しなかった。そのため次年度使用額が生じた。
ヒト癌で高発現するチロシンキナーゼ受容体hErkの信号経路と生物学的機能の解析

EphB2の信号伝達経路と生物学的機能を、培養細胞およびアフリカツメガエルを用いて検索した結果、以下の成果を得た。1 EphB2はアフリカツメガエルでは嚢胚後期から神経胚の時期に発現が誘導されていた。2アフリカツメガエルの初期胚にEphB2を注入すると、2次背側軸の形成がみられ、背側中胚葉の誘導が認められた。このEphB2による背側形成の信号伝達には、リガンドとの相互作用が必要であった。4上記3の信号伝達経路を検索したところ、EphB2にはSHアダプターであるNckや、PI3-キナーゼ調節サブユニットP85を介して、グアニンヌクレオチド交換因子であるPIXが結合していた。その結果PIXがPI3-キナーゼにより活性化され、低分子量G蛋白のCdc42やRaclをGTP結合型にすることで、PAKを活性化する機序がわかった。1 EphB2はリガンドのEphrin-B1の刺激により、培養細胞において、MAPキナーゼのうち、Erk1とJNKを活性化した。2 EphB2のErk1の活性化にはSHアダプターであるGrb2が、JNKの活性化にはNckが主に介在していた。3 EphB2はアフリカツメガエルでは嚢胚後期から神経胚の時期に発現が誘導されていた。4アフリカツメガエルの初期胚にEphB2を注入すると、2次背側軸の形成がみられ、背側中胚葉の誘導が認められた。5 EphB2による背側形成の信号伝達には、リガンドとの相互作用が必要であった。この信号伝達における、下流の蛋白の単離を試みている。
HIV-1複製を制御する宿主因子のゲノムワイドスクリーンによる包括的解明

1ヒト免疫不全ウイルスHIV-1の複製を制御することが知られている細胞因子TRIM5αとSOCS1にそれぞれ存在するSPRYドメインとSOCS boxの両者を有する細胞因子SPSB1に着目して、HIV-1複製への影響を調べたところ、組み込まれたプロウイルスの遺伝子発現を増強することがわかった。これをきっかけとして、SPSB1には転写因子AP1を介したレンチウイルスベクター産生量増強効果もあることがわかり、さらにヒトT細胞白血病ウイルス由来Taxタンパク質発現によるさらに強力なレンチウイルスベクター産生量増強効果も判明し、論文報告した。2 cDNA発現遺伝子ライブラリーを用いた実験で、HIV-1感染に必要な細胞因子Patz1を見出した。ヒトT細胞株MT4にcDNA発現遺伝子ライブラリーを導入後、自殺遺伝子HSV-TKを発現できるHIV-1ベクターNL4-3TKを感染させることで得られたHIV-1感染抵抗性細胞株から、Patz1というp53に結合する転写調節因子のアミノ末端側(Patz1dC)をコードするcDNAを回収した。Patz1dCを単独でMT4細胞に発現させるとHIV-1感染を強く阻害し、p53発現を欠くヒト肺癌細胞株H1299でPatz1遺伝子をノックアウトするとHIV-1ベクターの感染が著しく阻害された。MT4細胞でPatz1発現をノックダウンすると、ウイルス侵入後の逆転写過程が阻害された。Patz1ノックダウン細胞では、LongA、Short2種類のisoformを発現させて初めてHIV-1ベクター感染が回復した。このことは、Patz1がヘテロダイマーとして機能することを示唆している。以上のことから、Patz1はHIV-1の逆転写過程に必要な細胞因子であると結論し、論文報告した。1 HIV-1複製を制御する細胞因子についてはこれまでに、cDNA発現遺伝子ライブラリーから逆転写制御因子Patz1を発見、分子のドメイン構造にもとづくHIV-1複製の後期過程を促進するSPSB1の発見し、論文報告した。現在、遺伝子ノックアウトを起こすためのCas9発現ベクターとsgRNA発現ライブラリーを導入したヒトT細胞株MT4細胞にHIV-1を感染させ、生存したHIV-1感染抵抗性細胞を複数樹立することに成功した。それらの細胞で発現するsgRNA配列を一部同定したところ、HIV-1侵入に必要な細胞受容体CXCR4を標的とするsgRNAが含まれており、この実験系が期待通りに作動していることがわかった。2ウイルス粒子の出芽を抑制する機能を持つBST-2/Tetherinという細胞因子とそれに拮抗するレンチウイルスアクセサリータンパク質Vpuについての研究を行っている。HIV-1 Vpuは主にゴルジ装置でヒトBST-2とそれぞれの膜貫通ドメインを介して結合し、BST-2の細胞膜上での発現を抑制する。チンパンジーのBST2は例外的にサル免疫不全ウイルスSIVcpzのVpuではなくNefによって細胞膜上での発現を抑制されるが、他のサルに感染しているSIV由来Vpuはそれぞれの自然宿主サルのBST-2を抑制できる。興味深いことに、greater spot-nosed (GSN) monkeyに感染しているSIVgsnがヒトBST-2に膜貫通ドメインを介して結合できることが蛍光タンパク質を用いた実験でわかった。SIVcpzはSIVgsnと他のサル由来SIVとの組み換えによって生じたとされており、レンチウイルスの進化の過程で宿主制約因子BST-2との関係性がウイルスタンパク質Vpuにどのような影響を及ぼしたのか解析している。1 sgRNAが標的とする遺伝子がコードするタンパク質がHIV-1複製に必要であるかどうかを確かめるために、再度当該sgRNAを発現ベクターに組み込みCas9を発現するMT4細胞で発現させ、HIV-1複製が抑制されるかどうか再現実験を行う。遺伝子ノックアウトの確認は、western blotting法とDNAシークエンス法の両者で行う。MT4細胞で表現型が確認されれば、ヒト初代培養Tリンパ球あるいはマクロファージで同じ遺伝子ノックアウトによりHIV-1感染を抑制できるか、試験する。標的遺伝子産物が酵素である場合は、阻害剤の使用あるいは開発を試みる。2 SIVgsnがヒトBST-2に膜貫通ドメインを介して結合した結果、細胞膜上でのヒトBST-2発現を抑制することができるか、FACSを用いて解析する。もしヒトBST-2発現が抑制されていた場合は、SIVgsn由来Vpuがヒト細胞においてヒトBST-2発現抑制をとおしてHIV-1の放出を促進できるか、調べる。そのために、BST-2遺伝子をノックアウトしたHeLa細胞を作製し、同細胞ではSIVgsnの発現によって感染性ウイルス粒子の放出は変わらないが、ヒトBST-2あるいはBST-2gsnを同細胞に発現させた場合は、SIVgsn由来Vpu存在下でウイルス放出が促進されるかを、HIV-1ベクター感染に伴ってluciferaseを発現するTZM-blレポーター細胞を用いて解析する。ヒト

T細胞株MT4にcDNA発現遺伝子ライブラリーを導入後、自殺遺伝子HSV-TKを発現できるHIV-1ベクターNL4-3TKを感染させることで得られたHIV-1感染抵抗性細胞株から、Patz1というp53に結合する転写調節因子のアミノ末端側(Patz1dC)をコードするcDNAを回収した。Patz1dCを単独でMT4細胞に発現させるとHIV-1感染を強く阻害し、p53発現を欠くヒト肺癌細胞株H1299でPatz1遺伝子をノックアウトするとHIV-1ベクターの感染が著しく阻害された。MT4細胞でPatz1発現をノックダウンすると、ウイルス侵入後の逆転写過程が阻害された。Patz1ノックダウン細胞では、LongA、Short2種類のisoformを発現させて初めてHIV-1ベクター感染が回復した。このことは、Patz1がヘテロダイマーとして機能することを示唆している。以上のことから、Patz1はHIV-1の逆転写過程に必要な細胞因子であると結論し、論文報告した。1 HIV-1複製を制御する細胞因子についてはこれまでに、cDNA発現遺伝子ライブラリーから逆転写制御因子Patz1を発見、分子のドメイン構造にもとづくHIV-1複製の後期過程を促進するSPSB1の発見し、論文報告した。現在、遺伝子ノックアウトを起こすためのCas9発現ベクターとsgRNA発現ライブラリーを導入したヒトT細胞株MT4細胞にHIV-1を感染させ、生存したHIV-1感染抵抗性細胞を複数樹立することに成功した。それらの細胞で発現するsgRNA配列を一部同定したところ、HIV-1侵入に必要な細胞受容体CXCR4を標的とするsgRNAが含まれており、この実験系が期待通りに作動していることがわかった。2ウイルス粒子の出芽を抑制する機能を持つBST-2/Tetherinという細胞因子とそれに拮抗するレンチウイルスアクセサリータンパク質Vpuについての研究を行っている。HIV-1 Vpuは主にゴルジ装置でヒトBST-2とそれぞれの膜貫通ドメインを介して結合し、BST-2の細胞膜上での発現を抑制する。チンパンジーのBST2は例外的にサル免疫不全ウイルスSIVcpzのVpuではなくNefによって細胞膜上での発現を抑制されるが、他のサルに感染しているSIV由来Vpuはそれぞれの自然宿主サルのBST-2を抑制できる。興味深いことに、greater spot-nosed (GSN) monkeyに感染しているSIVgsnがヒトBST-2に膜貫通ドメインを介して結合できることが蛍光タンパク質を用いた実験でわかった。
細胞接着における糖鎖の変化とその意義

多細胞生物においては、個々の細胞は独立して存在しているのではなく、細胞同士が接着、あるいは細胞が細胞外マトリックス(ECM)に接着している。細胞接着は、細胞接着分子の分子間相互作用によって担われ、細胞の骨格形成、細胞移動、細胞分化•増殖を制御する。本研究は、E-カドヘリンを介した細胞同士間の接着が糖鎖修飾を通じて細胞ーECM間の接着を制御し、その意義と分子機構を解析した。近年、申請者らは、糖鎖遺伝子を用いて細胞の糖鎖を人為的に改変して細胞の性質を変換させる手法を用いて、糖鎖が単なる飾りではなく、さまざまな生物機能の発信源であることを明らかにしてきた。例えば、N-アセチルグルコサミン転移酵素V(GnT-V)を過剰発現させると実験的にもがん細胞の転移が促進することに対して、GnT-Vが作る糖鎖構造を、別の糖鎖遺伝子GnT-IIIの過剰発現によって糖鎖工学的に破壊すると、がんの転移が著しく抑制される。これらの変化は、糖タンパク質である接着分子インテグリンの機能改変によるところが大きいと考えられてきた。面白いことに、GnT-IIIはインテグリンの機能を制御することだけではなく、糖鎖を介してインテグリンと増殖因子受容体の超分子複合体形成にも影響を及ぼすことが最近明らかとなった(Kariya,Y.,et al.,J.Biol.Chem.285:3330-40,2010)。また、申請者らは、高密度培養システムを用いて細胞間接着によって特異的にGnT-IIIの発現誘導機構が正常乳腺上皮や乳がん細胞ともに存在することを確認した。驚いたところ、E-カドヘリンのアドヘレンス・ジャンクションを形成する一員であるβ-カテニンをノックダウンすると、予想に反してGnT-IIIの発現が上昇した。その結果は、細胞一細胞間接着の以外にもGnT-IIIの発現の調節機構が存在することが示唆された。今後、GnT-IIIの発現誘導機構を明らかにすることと同時に、細胞一細胞間接着と細胞基質間接着における糖鎖遺伝子の発現変化および糖鎖の本質的な機能の解明を目指す。これらの重要な糖鎖遺伝子の発現は、細胞間接着によって制御され、機能する。面白いことに、WntシグナルがGnT-IIIの発現に大事な役割を担っていることが最近明らかとなった(Xu, Q., et al., J. Biol. Chem. 286: 4310-8, 2011)。申請者らは、高密度培養システムを用いて細胞間接着によって特異的にGnT-IIIの発現誘導機構が正常乳腺上皮や乳がん細胞ともに存在することを確認した。即ち、WntシグナルはGnT-IIIの発現を抑制する。統合的に考えると、GnT-IIIの発現には、促進的に働く細胞-細胞間接着と抑制的に機能するWntシグナルという二つの調節機構が存在することが示唆された。今後、GnT-IIIの発現誘導機構をさらに明らかにすることと同時に、糖鎖発現の本質的な意義を解明する。これまでに細胞接着間のクロストークまたはEpithelial Mesenchymal Transition(EMT:上皮間葉移行)獲得の研究では、細胞内シグナル伝達や遺伝子の転写因子に研究が集中しており、糖鎖の役割に関する研究は殆ど行われていない。本研究は、申請者らの新規知見を踏まえ、これまでほとんど知られていない細胞接着・EMTによる糖鎖発現の変化とその意義を重点的に進めるところに最大の特色と独創性がある。細胞間接着と細胞-ECM間接着との相互作用は、初期胚発生や器官形成の過程だけではなく、がんの転移・浸潤の過程においても重要である。それらの過程はEMTと深く関わっている。EMTは、上皮細胞が間葉系様細胞に形態変化する現象であり、細胞間接着が弱くなる一方、細胞-ECM間接着が適度に促進されることが知られている。従って、細胞間接着により誘導された糖鎖遺伝子の発現とその機能解析は、細胞接着間のクロストークの理解に不可欠である。

これまで、申請者らは、E-カドヘリンを介する細胞間接着により特異的にGnT-IIIが強く誘導され、その結果、インテグリンの機能が低下し、細胞移動が抑制されることを見出している(Iijima,et al,JBC.281:13038,2006;Akama,et al.Proteomics 8;3221,2008)。また、最近、興味深いことに、β-カテニン/Wntシグナル経路はGnT-IIIの発現を逆に強く抑制することも分かった(Xu,Q.et al.,JBC 286:4310,2011)。これらのことから、E-カドヘリンを介した細胞-細胞間の接着が糖鎖変化を通じて細胞-Ecm間の接着を制御できる可能性が示唆された。実際、GnT-IIIの強制的な発現は、TGF-βにより誘導したEMTを強く抑制することが明らかとなった(Xu,Q.,etal.JBC in press,2012)。それらの結果より、GnT-IIIの細胞移動やがん浸潤・転移に抑制的に働くという分子機構が明らかとなった。今後、動物モテルを用いて検証して行く。これまでに細胞接着間のクロストークまたはEpithelial Mesenchymal Transition (EMT:上皮間葉移行)獲得の研究では、細胞内シグナル伝達や遺伝子の転写因子に研究が集中しており、糖鎖の役割に関する研究は殆ど行われていない。本研究は、申請者らの新規知見を踏まえ、これまでほとんど知られていない細胞接着・EMTによる糖鎖発現の変化とその意義を重点的に進めるところに最大の特色と独創性がある。本研究では、細胞接着などによる糖鎖遺伝子の発現の制御とその分子メカニズムに注目して解析した。主な結果は以下の通りである。1)細胞間接着やWntシグナル経路の中心分子であるβ-カテニンは、糖転移酵素GnT-IIIの発現に二重作用を持つことが分かった。因に、細胞間接着においては、β-カテニンはGnT-IIIの発現を誘導するが、Wntシグナル経路には逆に強く抑制する(Xu, Q. et al., JBC 286: 4310, 2011)。2)一方、逆にGnT-IIIの発現は、E-カドヘリンのturn overの延長やインテグリンの機能低下によりTGF-βで誘導したEMTを強く抑制することも明らかとなった(Xu,Q., et al.JBC 287:16563-74, 2012)。3)最近、TGF-βで誘導したEMTにおいては、alpha2,6シアリル転移酵素の発現が強く誘導され、インテグリンを介した細胞の移動などを促進することが明らかになった(Lu, J., et al.投稿中)。4)さらに、がん遺伝子GOLPH3は、alpha2,6シアリル転移酵素と相互作用し、インテグリン分子などのシアリル化を亢進させることでがん細胞の浸潤を促進することが分かった(Isaji, T., et al. JBC in revise)。それらの結果より、糖鎖構造が変化させることでがん細胞の浸潤・転移を制御できる可能性が示唆された。これまで、申請者らは、E-カドヘリンを介する細胞間接着により特異的にGnT-IIIが強く誘導され、その結果、インテグリンの機能が低下し、細胞移動が抑制されることを見出している(Iijima, et al. JBC. 281: 13038, 2006;Akama,et al. Proteomics 8: 3221, 2008)。また、興味深いことに、β-カテニン/Wntシグナル
癌細胞特異糖鎖抗原による慢性関節リウマチ患者に対する感作療法

我々は重症慢性関節リウマチ(RA)患者の破壊関節部骨髄中に癌細胞特有とされる糖鎖抗原dimeric Lex(di-Lex;III3FucV3FucnLc6)を保有する特異な骨髄球系カスケードが存在し強い組織破壊活性を持つことを見いだした。この異常な骨髄球系細胞を抑制することによって全身的な組織障害が抑えられるのではないかと企画し、糖鎖抗原を用いたRA患者の感作療法を試みた。抗原は米国ワシントン大学の箱守教授より提供されたヒトの癌細胞に特異的な糖脂質であるdi-Lex(dimeric fucose構造)、mono-Lex(monomeric fucose構造)、及びKATO-III由来の糖蛋白であるTCAを用いた。対象は1984-93年に阪大病院整形外科を受診した活動性リウマチ患者のうちの希望者である。第1例から我々の予想を超えた劇的なリウマチ症状の改善が認められ、引き続き多数例の検討を行った。当初は重症リウマチの治療法と考えていたが、症例を重ねるうちに軽症リウマチにはさらに有効であることを見いだした。軽症例も含めて全リウマチ患者に対する効果の解析を経過3カ月(3M)と6Mとに行った。有効例は2ng-TCAでは3M;6/12(50%),6M;7/11(64%)、50ng-TCAでは3M;25/40(63%),6M;20/30(66%)で多くの有効例を認めた。di-Lexの500ngでは3M;18/28(64%),6M;9/21(43%)でやはり多くの有効例を認めた。これに対し、mono-Lexの500ngでは3M;0/5(0%)と無効であった。尚、生理的食塩水を用いたPlaceboでは3M;3/17(18%)であった。副作用は約15%に認められた。皮疹、脱毛、口内炎などで、臨床検査値の変化は認めなかった。作用機序として最初は異常な骨髄球系細胞を抑えることを意図しており、そのような結果を得てきた。しかし軽症例にも有効であることより検討を広げた。その結果、di-LexあるいはTCAのもつ糖鎖構造そのものが、異常な免疫反応亢進の最初の段階を抑制(正常化)している結果を得た。感作療法の効果は全対象リウマチ患者の結果を3カ月(3M)と6Mに行い、更に連続して治療を続け臨床検討を行っている。正確に評価した有効性は昨年度までに報告したが2ng-TCA、50ng-TCA、di-Lexの500ngとも50%以上の有効性を示した。しかし、mono^--Lex500ngでは無効であった。皮疹その他の副作用は約15%に認められた。作用機序としては免疫機序惹起による異常な骨髄球系細胞を抑制は当初から認めていたが、更に軽症例にも有効であることより検討を広げた。その結果糖鎖構造そのものが注射に用いている用量で混合リンパ球反応(MLR)の亢進を抑制することを見いだした。