hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
単射性を持つ関数型プログラムの逆関数プログラム生成に関する研究

●他グループで提案された逆化手法の一部であるLR解析を利用した決定化手法を改良し,その手法が生成に失敗していた例題に対し,改良後の手法が逆化に成功することを確認した.本結果については次年度に国際会議で発表する予定である.●関数定義を末尾再帰型に変換する手法である継続渡しスタイルへの変換について,一階プログラム上での既存手法を調査し,匿名関数を含んだ中間結果を経由しない直接的な変換を項書換え系上で定式化し,その正当性を証明した.本結果は,前述の末尾再帰型関数の逆化手法とまとめて,次年度に論文誌に投稿する予定である.本年度の取り組みにより,ベンチマークにあるプログラムに対して停止性と決定性を持つ逆関数定義を生成できる逆化手法の枠組みを構築し,その変換サービスの提供を開始した.本研究の目的である単射関数の逆化を実現するために,本年度は逆化コンパイラで生成された書換え系を決定化する手法の開発に取り組んだ.一般には,逆化で得られた関数定義は適用に関して決定的でないため,関数の計算を保持しながら,関数定義を部分的に具体化することで決定的にする変換を提案した.具体的には,ナローイング計算を用いて関数定義を展開し,計算結果を得られる可能性がある展開に必要な具体化を関数定義に適用することで,関数に期待された計算を保持しながら関数定義を部分的に具体化する.この方法は必ずしも関数定義を決定的にできるわけではないが,逆化の評価に利用されるベンチマークに逆化を適用した際には,結果の関数定義が決定的でない場合に,決定的な定義に変換できることを確認した.一方,提案手法でも決定的にできない例も存在する.そのような例の中には提案手法では本質的に決定的にできない場合もある.そのような場合の決定化手法を開発するため,文脈自由文法を中間結果として利用する逆化手法の改良も行った.関数型言語の計算モデルである項書換え系を対象とした逆化では,出力を項書換え系にするために紐解き変換(unraveling)を適用することができる.しかし,紐解き変換は条件付き項書換え系から項書換え系への近似的な変換であり,一般には計算に関して健全ではない.逆化で得られたプログラムの性質を解析するために紐解き変換で項書換え系へ変換して性質を解析できるように,紐解き変換が健全になる十分条件を明らかにした.その十分条件を既存の結果,および条件付き項書換え系から項書換え系への別の変換と比較を行い,既存の結果をまとめた論文を出版するに至った.本年度の取り組みにより,性質のよい逆関数プログラムを生成する枠組みの構築およびその実装を公開するに至った.その一方で,現在の実装は計算モデルである項書換え系を対象としており,本年度に予定していた実際の関数型プログラムへの適用する変換を実装できなかった.しかし,この部分のみが本研究課題の目標を達成するために残された課題であり,次年度に十分達成できるので,おおむね順調に進展している.24年度が最終年度であるため、記入しない。次年度は本研究課題の最終年度であるので,本年度の成果を国際会議や論文誌に投稿し発表し,成果をまとめる.本研究課題の目標を達成するために残された課題は実装したツールが実際の関数型プログラムに対応するように,前処理・後処理の変換を実装することである.
チロシンキナーゼとイノシトールリン脂質情報伝達系のクロストークの解明

チロシンキナーゼとイノシトールリン脂質情報伝達系のクロストークを解明するため、チロシンリン酸化部位を認識して結合するSH_2含有蛋白の解析と情報伝達機序を調べた。1.ホスホリパーゼCγ1のSH_2領域のホスホリパーゼC活性阻害PLCγ_1とPLCγ_2のSH_2/SH_3領域をを大腸菌に発現し、タンパクを精製した、この蛋白を使用してPLC活性への影響を調べたところ、すべてのPLCアイソザイムの活性を強く阻害した。この阻害はプロテアーゼ処理で消失した。この阻害活性はPLCγのSH_2にのみ特異的で、PIキナーゼやSrcのSH_2では認められなかった。更にPLCγのSH_2に特異的なペプチド部分を合成し効果を調べたところ、YRKMRLRYという合成ペプチドをPLC活性を強く阻害した。この事実はPLCγ型ホスホリパーゼCは自己の活性を自身でコントロールしていると考えられた。2.新しいSH_2蛋白AshのcDNAクローニングSH_2を持つ蛋白によく保存されている領域より推定した合成オリゴヌクレオチドプローブを使ってヒト繊維芽細胞のcDNAライブラリーより新しいSH_2蛋白Ashをクローニングした。Ashは28Kの蛋白でSH_3-SH_2-SH_3の配列を持つAshは活性化したEGF受容体に結合し,その結合にはSH_2領域が必須であった。Ashのアンチセンスを発現させると細胞の増殖が停止することからAshは受容体チロシンキナーゼの下流であり、Rasの上流に位置していると考えられた。
高校と大学のアーティキュレーションに寄与する新しい大学入試についての実践的研究

平成11年度に東北大学、九州大学、筑波大学にアドミッションセンターが発足した。平成12年度に北海道大学に高等教育総合開発センター入学者企画研究部が発足した。これらの部局では、AO入試の企画・実施を担当するとともに、大学入試について大学の立場から研究を行っている。本研究では、主に国立4大学の大学入試研究組織と大学入試センター研究開発部が協力し、平成12年度から(北大からは平成13年度より研究分担者として参加)高校と大学のスムーズな接続という観点から、現在の我が国における大学入試のあり方について調査、研究を行ってきた。具体的には、(1)高校と大学のアーティキュレーションに関する実態調査(2)諸外国の入学者選抜に関する調査(3)東北大学、丸州大学、筑波大学、北海道大学のAO入試結果の分析(4)日本における入試の実態調査等が研究課題である。各年度において、年度ごとの研究成果を中間報告書にまとめ、最終年度には研究成果報告書を作成した。それぞれ「共同研究」と「個別研究」に分かれる。全研究期間を通して行った共同研究は「AO入試の実施状況に関する調査」と「海外調査」である。平成12年度には「国立大学のAO入試」と題するシンポジウムを企画し、その成果を平成13年度中間報告書に記載した。さらに、各大学の個別研究では、面接評価の研究(北海道大学)、高校と大学の教育接続を重視した試験問題開発研究(東北大学)、秋季入学に対する調査研究(筑波大学)、AO選抜による入学者に関する追跡調査(九州大学)、アドミッション・ポリシー等の調査研究(大学入試センター)など、多岐に渡る研究を行い、その成果を収録した。平成11年度から東北大学、九州大学、筑波大学でアドミッションセンターが発足し、国立大学のAO入試が始まった。現状では、同じAO入試の看板で実施されている入試の内容は収拾がつかないほど多様である。本研究では国立3大学のアドミッションセンターと大学入試センター研究開発部が協力し、高校教育と大学教育のスムーズな接続という観点から、AO入試を中心とした新しい大学入試を実践的データに基づいて研究することを目的とする。具体的には、(1)高校と大学のアーティキュレーションに関する実態調査(2)アメリカ合衆国を中心とした諸外国の入学者選抜に関する調査(3)東北大学、九州大学、筑波大学のAO入試結果の分析(4)日本における入試の実態調査(5)入試改革に関する意識調査等が研究課題であるが、初年度となる今年度は、平成12年度にAO入試を行った大学に対してアンケート方式と訪問調査からなる実状調査を行った。その結果、AO入試の多様性がデータから裏付けられることとなった。また、カナダ・アメリカ・オーストラリア・ニュージーランド・韓国の大学入学者選抜を調査した。カナダ・アメリカでは主にインターネットを利用した志願受付の状況など、オーストラリア、ニュージーランドでは1990年代に始まった入試改革の状況を、韓国では2002年度導入予定の新しい大学入試制度について情報収集を行った。さらに、本研究に参加の各大学・機関のAO入試等に関する個別の研究を加え、中間報告書としてまとめた。具体的には、(1)高校と大学のアーティキュレーションに関する実態調査(2)諸外国の入学者選抜に関する調査(3)菓北大学、九州大学、筑波大学、北海道大学のAO入試結果の分析(4)日本における入試の実態調査(5)入試改革に関する意識調査等が研究課題である。2年度目となる今年度は、.平成13年度にAO入試を行った大学に対して、,アンケート方式による実情調査を行った。ここ1年のAO入試の広がりとその特徴がデータにより裏付けられた。また、韓国の大学入学者選抜を調査した。

ソウル、及び、地方都市の7大学を訪問したが、各大学とも2002年度導入予定の新しい大学入試制度を先取りし、それぞれの事情の下に新しい制度に適応する努力をしていた。さらに、本研究に参加の各大学・機関のAO入試等に関する個別の研究を加え、本年度の研究成果をまとめた中間報告書を近々発表の予定である。平成11年度に東北大学、九州大学、筑波大学にアドミッションセンターが発足した。平成12年度に北海道大学に高等教育総合開発センター入学者企画研究部が発足した。これらの部局では、AO入試の企画・実施を担当するとともに、大学入試について大学の立場から研究を行っている。本研究では、主に国立4大学の大学入試研究組織と大学入試センター研究開発部が協力し、平成12年度から(北大からは平成13年度より研究分担者として参加)高校と大学のスムーズな接続という観点から、現在の我が国における大学入試のあり方について調査、研究を行ってきた。具体的には、(1)高校と大学のアーティキュレーションに関する実態調査(2)諸外国の入学者選抜に関する調査(3)東北大学、九州大学、筑波大学、北海道大学のAO入試結果の分析(4)日本における入試の実態調査等が研究課題である。最終年度となる今年度は、平成14年度にAO入試を行った大学に対して、アンケート方式による実情調査を行った。3年間ほぼ同一の様式で継続調査を行い、年度によらずに安定したAO入試の傾向を把握することができた。また、ヨーロッパの大学入学者選抜を調査した。オランダ、オーストリア、イタリアの大学、及び、教育関連機関を訪問した。各国とも高等教育の大衆化への対応とEUの共通枠組みに合わせた国内制度の再構築に腐心している様相が伺えた。さらに、本研究に参加の各大学・機関のAO入試等に関する個別の研究を加え、本年度の研究成果をまとめた研究成果報告書を作成した。
マラリア原虫感染時における樹状細胞の発生分化プログラムに関する研究

Plasmodium berghei ANKA(PbA)感染における脾臓内のcDCならびにpDCの細胞数の変動とそのメカニズムについて解析し、cDC, pDCとも細胞数が感染前と比較して有意に減少することが明らかになった。type Iならびにtype II interferonsがマラリア感染後のcDCの活性化、それに伴う細胞死に重要な役割を果たすことを明らかにした。マラリア感染を経験することで徐々にマラリア感染に抵抗性を持つようになることが知られているが、その詳細なメカニズムはいまだ不明である。PbA感染後ピリメタミンで治療したマウスでは脾臓cDCが有意に増加数することを明らかにした。前年度に引き続き、マラリア感染時における樹状細胞(DC)のホメオスタシス機構のより詳細な理解のため、マウスマラリアPlasmodium berghei ANKA (PbA)感染における脾臓内のconventional DC(cDC)ならびにplasmacytoid DC(pDC)の細胞数の変動について解析した。その結果、PbA感染によりcDC, pDCとも細胞数が感染前と比較して有意に減少することが明らかになった。また、cDC, pDCともマラリア感染に伴い強い活性化が確認された(cDC:CD80,CD86,CD40 pDC:PDC-TREM,CD86発現)。よりアポトーシスに特化するため、活性型caspase-3発現を検討した。その結果、cDC、pDCともにPbA感染後、DCの活性化に伴って、活性型caspase-3が有意に増加していた。Type I IFNの影響を調べるため、type I IFNの受容体であるIFNARの阻害抗体をPbA感染マウスに投与しDCに与える効果を検討した。その結果、cDCにおけるCD80, CD86発現が有意に減少し、それに伴い、cDCにおける活性型caspase-3発現が減少し、cDCの細胞数減少が回復した。typeI IFNがcDCの活性化に大きな影響があることが明らかになった。これらの結果からPbA感染時にcDCはIFN依存的に成熟化が進み最終的にcaspase-3の活性化が起こり死にいたると考えられる。マラリア感染における脾臓内のconventional DC(cDC)ならびにplasmacytoid DC(pDC)の細胞数の変動について解析した。マウスマラリアPlasmodium berghei ANKA (PbA)感染赤血球をC57/BL6マウスに腹腔内にうつことで感染させた。また、cDC, pDCともマラリア感染に伴い活性化が確認された(CD80, PDC-TREM発現)。Brdu取り込み実験の結果から、マラリア感染でcDCのturnoverには有意な差が見られなかった。活性型pan-caspase発現をフローサイトメトリーにより解析を行った結果、cDCにおいて活性型pan-caspaseが有意に増加しており、活性化後アポトーシス機構により細胞数が減少すると考えられた。pDCの活性型caspase発現については引き続き検討中である。IFN-γKOマウスで同様の解析を行った結果、IFN-γKOマウスではcDCの活性化(CD80発現)が抑制されておりcDC細胞数の減少も抑制されていた。pDCの活性化については、IFN-γKOマウスではマラリア感染後に見られるPDC-TREMの発現上昇は抑制されておらず、pDC細胞数の減少は抑制されなかった。脾臓内のcDC, pDCの細胞数の減少については別のマウスマラリアPlasmodium yoelii 17XLをC57/BL6マウスに感染させたときも同様に確認された。このようなマラリア感染時におけるDCの細胞数の減少はマラリア感染で見られるさまざまな病態発症と関連するものと考えられる(Tamura, Infection and Immunity, 2011, Tamura, submitted, 2012)。マラリア感染における脾臓内のcDCならびにpDCの細胞数の変動について解析した。Plasmodium berghei ANKA (PbA)感染によりcDC, pDCとも細胞数が感染前と比較して有意に減少することが明らかになった。また、cDC, pDCともマラリア感染に伴い活性化が確認され、cDC、pDCともにPbA感染後、DCの活性化に伴って、活性型caspase-3が有意に増加していた。type I IFNの受容体であるIFNARの阻害抗体の投与実験、ならびにtype II IFNであるIFN-γの欠損マウスで同様の解析を行った結果、cDCの活性化が抑制されておりcDC数の減少も抑制されていた。

これらの結果からマラリア感染時にcDCはIFN依存的に成熟化が進み最終的にcaspase-3の活性化が起こり死にいたると考えられる。このようなマラリア感染時におけるDCの細胞数の減少はマラリア感染で見られるさまざまな病態発症と関連するものと考えられる(Tamura et al., Parasite Immunology, p87, 2014 ,Tamura, 2015,投稿中)。マラリア感染を経験することで徐々にマラリア感染に抵抗性を持つようになることが知られているが、その詳細なメカニズムはいまだ不明である。マラリア抵抗性に大きな役割を果たすcDCに着目し、PbA感染後ピリメタミンで治療したマウス脾臓におけるcDC数の検討を行った。またその前駆細胞である骨髄中のCDP、pre-cDCについても同時に解析した。その結果、マラリア感染治療により脾臓cDC数が有意に増加することが明らかになった。cDC前駆細胞数には変化が見られなかった。マラリア感染治療により脾臓内での前駆細胞から成熟cDCへの分化に影響が見られることが示唆された。寄生虫学PbA感染だけでなく、PyL感染でもcDC,pDC細胞数の減少や、caspase-3の活性化が明確に示され、これらの現象がマラリア感染で一般的にみられると証明された。また、IFNがマラリア感染時のcDCの活性化に極めて重要であることが明らかになり、論文化の目処がついた。マラリア(PbA)感染時におけるcDC, pDCの細胞数の変動について新しい知見が得られた。また、そのメカニズムについても、まだ解析中ではあるが、一定の進展が見られた。マラリア感染後に見られるDCの細胞数減少:一定の結論が得られたので、論文作成、投稿、出版の予定である。マラリア感染におけるCDP、preーcDC、Ly6Chighmonocyteの解析:CDP、pre-cDC、Ly6Chighmonocyteをフローサイトメトリー法により同定し、骨髄、末梢血、脾臓におけるそれらの細胞数をマラリア感染において経時的に解析する。Plasmodium berghei ANKA(PbA)感染における予備的実験は既に部分的に行っている。Plasmodiumyoeliiなど他のマウスマラリア感染でも同様に解析する。細胞数だけでなくCDPに特徴的に発現するflt3、M-CSFRなどのサイトカイン受容体の発現量も確認する。CDPは活発に増殖する細胞であることが既に報告されているが、CDPをFACSによって精製し、PI染色によりCDPの細胞周期を測定し、マラリア感染を通じてCDPの細胞分裂速度に変化があるかどうか検討する。骨髄細胞のDCへの分化能:マラリア感染マウスの骨髄細胞をGM-CSF, Flt3Lでin vitroで培養し、DCの細胞数や機能を解析する。マラリア感染後に見られるDCの細胞数減少pDCの細胞数減少についてはアポトーシスによるのか不明なのでさらに解析する。cDCのアポトーシス増加についてはtype I interferonの関与を解析するため、anti-IFNAR antibodyの投与によるtype I interferonシグナル経路の阻害による効果を検討する。
デンドリマー光増感剤を内包した刺激応答性遺伝子送達キャリアの創製

難治性疾患に対する遺伝子治療への期待が高まる中、安全かつ効率の良い遺伝子デリバリーシステムの開発が鍵を握る。本研究では、全身投与型遺伝子デリバリーシステムとして、光を利用して細胞内動態を制御した高分子ミセル型遺伝子ベクターの開発を目的とする。エンドソーム膜に局在した光増感剤は、光を照射することにより一重項酸素を産生しエンドソーム膜を破壊する。本研究では光増感剤としてデンドリマーフタロシアニンを使用している。前年度に引き続き、高分子ミセルを形成するブロック共重合体として、生体適合性ポリマーであるポリエチレングリコール(PEG)、光増感剤を担持し効率の良いエンドソーム脱出を達成するPAsp(DET),プラスミドDNAと安定な相互作用を行うPLysからなるPEG-PAsp(DET)-PLysトリブロック共重合体を用い、その高分子ミセル化挙動の最適化を行った。アガロースゲル電気泳動、ゼータ電位測定、高速液体クロマトグラフィーの結果をふまえ、トリブロック共重合体/光増感剤/プラスミドDNA三元系の安定性向上を目指し、種々の検討を行い、三元系ならではの特徴を見出すに至った。培養細胞に対する遺伝子導入実験の結果から、光をトリガーとして効率的な遺伝子導入が可能であることが示された。また、それの発展課題として、酸化還元に応答して遺伝子や生体由来高分子、あるいは薬剤を放出するシステムをデザインした。具体的には、高分子型中空ナノ粒子を構成するポリマーにジスルフィド結合を導入したものを作成した。このような微粒子は、細胞内還元環境のみならず、光増感剤と組み合わせることで、光照射後に発生する活性酸素にも応答することが期待され、遺伝子発現や薬剤の徐放などに応用が可能である。当初予定した内容を達成するのみならず、得られた研究成果を応用して新しい材料を開発することができた。目的は十分達成された。まずは高分子ミセルを形成するブロック共重合体として、生体適合性ポリマーであるポリエチレングリコール(PEG)、光増感剤を担持し効率の良いエンドソーム脱出を達成するPAsp(DET)、プラスミドDNAと安定な相互作用を行うPLysからなるPEG-PAsp(DET)-PLysトリブロック共重合体の合成に成功した。アガロースゲル電気泳動、ゼータ電位測定、高速液体クロマトグラフィーを用いた高分子ミセルの物性評価により、トリブロック共重合体は光増感剤とプラスミドDNAの二つの機能性分子を同時に内包することが確認できた。培養細胞に対して遺伝子導入実験を行ったところ、PEG-PLysジブロック共重合体の系と比較して、光照射を行うことにより100倍近く高い遺伝子導入効率を達成することができた。また共焦点顕微鏡を用いた高分子ミセルの細胞内動態観察により、光照射が効率の良いエンドソーム脱出を誘起していることを確認することができた。前年度に引き続き、高分子ミセルを形成するブロック共重合体として、生体適合性ポリマーであるポリエチレングリコール(PEG)、光増感剤を担持し効率の良いエンドソーム脱出を達成するPAsp(DET)、プラスミドDNAと安定な相互作用を行うPLysからなるPEG-PAsp(DET)-PLysトリブロック共重合体を用い、その高分子ミセル化挙動の最適化を行った。アガロースゲル電気泳動、ゼータ電位測定、高速液体クロマトグラフィーの結果をふまえ、トリブロック共重合体/光増感剤/プラスミドDNA三元系の安定性向上を目指し、種々の検討を行い、in vivoにおける安定性の評価を行った。培養細胞に対する遺伝子導入実験の結果から、光をトリガーとする遺伝子導入効率の高さには疑いの余地がなく、今年度の成果を基にさらに安定性向上の最適化を図ることで、in vivoでの活性向上を実現できるものと考えられる。

アガロースゲル電気泳動、ゼータ電位測定、高速液体クロマトグラフィーの結果をふまえ、トリブロック共重合体/光増感剤/プラスミドDNA三元系の安定性向上を目指し、種々の検討を行い、三元系ならではの特徴を見出すに至った。培養細胞に対する遺伝子導入実験の結果から、光をトリガーとして効率的な遺伝子導入が可能であることが示された。また、それの発展課題として、酸化還元に応答して遺伝子や生体由来高分子、あるいは薬剤を放出するシステムをデザインした。具体的には、高分子型中空ナノ粒子を構成するポリマーにジスルフィド結合を導入したものを作成した。このような微粒子は、細胞内還元環境のみならず、光増感剤と組み合わせることで、光照射後に発生する活性酸素にも応答することが期待され、遺伝子発現や薬剤の徐放などに応用が可能である。当初予定した内容を達成するのみならず、得られた研究成果を応用して新しい材料を開発することができた。目的は十分達成された。
社会経済の構造転換時代における地方中核産業都市の地域再生方策に関する日独比較研究

日本とドイツの国際比較により、産業構造転換により工業系・住居系土地利用の大規模かつ急激な転換に伴う様々な課題を抱える地方中核産業都市を対象とし、ストックの有効利活用及びダウンサイジングも踏まえた今後の地方中核産業都市の地域再生のあり方について検討を行った。縮小を目指した計画手法、建物・インフラ撤去に対する助成、公民の多様な連携の必要性等、成長時代とは異なる計画手法構築が求められている。本研究では日独の国際比較により、今後の少子高齢化社会の急激な進展と併せて、産業構造転換に伴う地域社会経済環境の変化により工業系・住居系土地利用の大規模かつ急激な転換に伴う様々な都市計画上の課題を抱えることが予想される地方中核産業都市を対象とし、都市全体における工業系の土地利用転換及び住宅地ストックの有効利活用及びダウンサイジングも踏まえた総合的再編成の方向性を検討し、今後の地方中核産業都市の地域再生のあり方について検討することを目的とする。平成19年度は下記の調査を実施した。日本は日立市を対象とし、戦前期から戦後にかけての地域中核企業を中心とした市街地形成プロセスの歴史的経緯につき、市史・町史や主力企業の経営構造の変遷、都市内の産業構造の変遷、人口構造の変遷、都市基盤整備の変遷及び住宅地整備の変遷などの基礎的情報を整理した。ドイツについても以下の対象都市について地域中核企業を中心とした市街地形成の歴史的経緯の整理を行った。旧西独・ルール工業地帯の都市については炭鉱・製鉄産業の中核都市であるエッセン市を中心に、市史や主要中核企業(テュッセン・クルップ社)の歴史等により基礎的知見を整理した。東西ドイツ統合に伴う産業構造転換と急激な人口減少等の課題を抱えている旧東独地域の都市についてはマクデブルグ市を対象として調査を実施した。更に、日独の調査対象都市において、自治体による総合長期計画や各種の政策方針に係る行政文書等について経年的に資料を収集し、人口減少・需要縮小時代に対応した都市・地域再生方針の方向転換等の位置づけの変遷とその背景等の詳細を整理した。特にドイツについては、ダウンサイジング型の趣旨をもつ都市地域再生方策、社会都市プログラム、東及び西の都市改造プログラムの事例に相当するものについて資料を収集した。本研究では日本とドイツの国際比較により、今後の少子高齢化社会の急激な進展と併せて、産業構造転換に伴う地域社会経済環境の変化により工業系・住居系土地利用の大規模かつ急激な転換に伴う様々な都市計画上の課題を抱えることが予想される地方中核産業都市を対象とし、都市全体における工業系の土地利用転換及び住宅地ストックの有効利活用及びダウンサイジングも踏まえた総合的再編成の方向性を検討し、今後の地方中核産業都市の地域再生のあり方について検討することを目的とする。平成20年度は、日本については、日立市(日立製作所企業城下町)及び宇部市(宇部興産企業城下町)を事例とし、地域中核企業の社有地のと都市構造の変遷の関係性、公営住宅・社宅地等における跡地の発生状況と用途利用転換の動向を確認し、住宅ストックの再編成の方策の検討を実施した。また、ドイツについては、減築(ダウンサイジング)を踏まえた地域再生に係るマスタープランの策定や空き地空き家の実態等の資料収集のために、現地視察とインタビューを実施した。対象都市は、人口減少や産業構造転換による様々な問題を抱えており、連邦レベルでの都市地域再生プログラムを実施しており一定の成果をあげている都市の中から、旧東独の都市についてはライプチッヒ市(住宅団地の減築事例、産業跡地再生事例)、マクデブルグ市(IBA都市改造(Stadtumbau)のモデルプロジェクト例)、ハレ市、及びまた旧西独からはノルドラインヴェストファーレン州の諸都市(ゲルゼンキルヘン市等:「西の都市改造」プログラム対象地区)を選定し、都市再生の現状についてインタビュー及び資料収集を実施した。平成21年度は、日本については、宇部市(宇部興産企業城下町)及び太田市、大泉町を事例とし、地域中核企業の社有地のと都市構造の変遷の関係性、跡地の発生状況と用途利用転換の動向を確認し、また特に太田市、大泉町では企業城下町的性格をもった特定中核企業の従業者中心のコミュニティの居住者属性の再確認ともに、ブラジル人等を中心とした移民を如何に地域社会に統合するかという問題についての現状を調査した。また、ドイツについては現地視察とインタビューを実施し、対象都市として、人口減少や産業構造転換による様々な問題を抱えており、連邦レベルでの都市地域再生プログラムを実施しており一定の成果をあげている都市の中から、ベルリン市やノルドラインヴェストファーレン州の諸都市(ゲルゼンキルヘン市、ドルトムント市、デュイスブルグ市、エッセン市等)を選定し、都市再生の現状についてインタビュー及び資料収集を実施した。
バイオインフォマテクスの構造予測にもとづいた神経栄養因子の一塩基多型の機能解析

ヒトゲノムプロジェクトの成果として一塩基多型SNPの存在が明らかになり、疾患の予測に有用な遺伝子マーカーとしての期待が強まった。しかし、SNPがどのような分子メカニズムによって疾患が引き起こすかはまだ不明である。最近我々は、脳由来神経栄養因子BDNFのSNP(Val/Met置換)がBDNFの分泌を減少させると同時に、ヒトのエピソード記憶力を低下させることを報告した。本研究では、前もって行ったコンピューターシュミレーションの結果、BDNF遺伝子上のVal/Met置換が「神経細胞死レセプターp75」との結合ドメインに位置することを予測した。この予測に基づいてこの変異が我々の神経疾患の進行つまり神経細胞死に影響するかを調べた。最初に、Val型およびMet型BDNFのリコンビナント蛋白質を大腸菌によって大量調整した。蛋白質の精製は付加したHisタグによって行い、精製蛋白質のまき戻しはTAPS法によった。巻き戻し後の構造をCDスペクトルによって確認した後、蛋白質の濃度決定をBDNFのELISAによって行った。以上のように調整したVal型およびMet型BDNFを用いて次の細胞死アッセイを行った。神経細胞死レセプターp75を高発現している小脳顆粒神経細胞に神経細胞死を低濃度のカリウムによって誘導すると同時に各SNPのBDMF(100ng/ml)を添加した。その結果、Met型BDNFの添加群がVal型BDNFの添加群より有意に生存が維持されることが見いだされた。つまり、Val/Met置換を起こすSNPは神経細胞死誘導ストレスに対する脆弱性に耐性である可能性が示唆された。
ラット聴覚けいれんに伴う脳内GABA及びグルタミン酸神経系の形態学的変化

生後16日齢のWistar系雄性あるいは雌性ラットにベルを用いた音刺激(122-125dB)を12分間与えた(priming)。対照群のラットは,音刺激装置内に12分間滞在させるのみで,ベルは鳴らさない(セッション1)。セッション1終了後,28日齢の時点で比較的微弱な音刺激(約100dB)を12分間与える。この刺激によりprimingラットも対照群のラットもwild running(WR)あるいはgeneralized tonic-clonic seizures(GTCS)を示さなかった(セッション2)。セッション2終了後,ラットをホームケージに戻し,90分後にペントバルビタール(100mg/kg, i.p.)による深麻酔下で潅流固定後脳を摘出し,その後の免疫組織化学法(Fos単染色,Fosと他の蛋白との2重染色)に供した。灌流固定は(1)生食,(2)0.2%ピクリン酸を含む3%パラホルムアルデヒド燐酸緩衝液,(3)10%スクロース燐酸緩衝液を用い,脳を摘出した。取り出された脳は,後固定後,ミクロトームにより凍結切片とし,蝸牛神経核,下丘,上丘を含む切片を作製した。Fos単染色の結果,primingラットでは,約100dBの音刺激により,対照群との比較で高いFos発現が認められた(特に蝸牛神経核,下丘で顕著)。Fosとの2重染色においては,GABA及び3種類のNMDA受容体サブユニット(NR1,NR2A,NR2B)に対する計4種類の抗体のなかからひとつを組み合わせて免疫染色を施行した。実験自体は終了したが,その結果の持つ意義等については現在考察中であり,今後学会・学術雑誌等で発表予定である。生後16日齢のWistar系雄性あるいは雌性ラットにベルを用いた音刺激(122-125dB)を12分間与える(priming)。対照群のラットは、音刺激装置内に12分間滞在させるのみで、ベルは鳴らさない(セッション1)。セッション1終了後、28日齢に達したラットに同様の音刺激(122-125dB)を1分間与える。これまで行った予備実験の結果において、すべてのprimingラットが音刺激によりwild running(WR)を示した。また,一部のprimingラットはgeneralized tonic-clonic seizures(GTCS)に発展した(GTCS群)。GTCSに発展しなかったprimingラットをWR群とした。対照群のラットにも同様の音刺激を1分間与え、その間の行動観察を行った(セッション2)。セッション2終了後,ラットをホームケージに戻し、90分後にペントバルビタールによる深麻酔下で潅流固定後脳を摘出し,その後の免疫組織化学法(単染色及び2重染色)に供した。灌流固定後、脳を摘出した。取り出された脳は、後固定後、ミクロトームにより凍結切片とし、下丘と上丘の2箇所を含む切片を作製した。Fosとの2重染色においては,GABA及び3種類のNMDA受容体サブユニット(NR1,NR2A, NR2B)に対する計4種類の抗体のなかからひとつを組み合わせて免疫染色を施行した。対照群との比較において,GTCS群の下丘,上丘のいずれの部位においても有意なFos蛋白発現の増加がみられた。WR群の下丘においても有意なFos発現の増加が観察された。しかしながら,上丘のDpGにおけるFos発現には対照群と比べて有意な増加は認められなかった。

下丘,上丘いずれの部位においても,痙攣に伴い発現したFos陽性細胞全体の3 4割がGABAを含んでおり,2 3割はNMDA受容体を有していることが明らかとなった。生後16日齢のWistar系雄性あるいは雌性ラットにベルを用いた音刺激(122-125dB)を12分間与えた(priming)。対照群のラットは,音刺激装置内に12分間滞在させるのみで,ベルは鳴らさない(セッション1)。セッション1終了後,28日齢の時点で比較的微弱な音刺激(約100dB)を12分間与える。この刺激によりprimingラットも対照群のラットもwild running(WR)あるいはgeneralized tonic-clonic seizures(GTCS)を示さなかった(セッション2)。セッション2終了後,ラットをホームケージに戻し,90分後にペントバルビタール(100mg/kg,i.p.)による深麻酔下で潅流固定後脳を摘出し,その後の免疫組織化学法(Fos単染色,Fosと他の蛋白との2重染色)に供した。灌流固定は(1)生食,(2)0.2%ピクリン酸を含む3%パラホルムアルデヒド燐酸緩衝液,(3)10%スクロース燐酸緩衝液を用い,脳を摘出した。取り出された脳は,後固定後,ミクロトームにより凍結切片とし,蝸牛神経核,下丘,上丘を含む切片を作製した。Fos単染色の結果,primingラットでは,約100dBの音刺激により,対照群との比較で高いFos発現が認められた(特に蝸牛神経核,下丘で顕著)。Fosとの2重染色においては,GABA及び3種類のNMDA受容体サブユニット(NR1,NR2A,NR2B)に対する計4種類の抗体のなかからひとつを組み合わせて免疫染色を施行した。実験自体は終了したが,その結果の持つ意義等については現在考察中であり,今後学会・学術雑誌等で発表予定である。
身体の意識化からみた心身症とその治療技法の検討

本研究は、身体の意識化という点から心身症に対する代表的な治療法である自律訓練法の特徴を検討することを目的とした。研究1では、36名の大学院生に対して、4日間の講習期間で標準練習6公式の訓練を行った。訓練の開始前と第二公式終了時と講習終了時に、それぞれ19個の形容詞対からなる身体感覚の評定尺度を実施した。ターゲットとなる評定対象は、公式に対応した6つの部位に意識と注意を加えた合計8つであった。多次元尺度構成法を用いて分析したところ、ターゲットの分化が認められ、自律訓練法による身体の認知の分化が確認された。研究2では、バイオフィードバック訓練の手続きと比較検討する目的で、自律訓練法実施群と身体への注意集中群を設定し、身体の認知的な分化の違いを検討した。被験者は、大学生31名でランダムに2群に振り分けた。訓練は一週間間隔で2回練習に参加するというものであった。研究1と同様に多次元尺度構成法で分析を行ったところ、自律訓練法群では、明確な分化は認められなかったのに対し、注意集中群ではある程度分化していることが認められたものの、その分化に意味のあるようなまとまりは認められなかった。これは、注意集中のみでも分化は可能と思われるが、自己の身体を統合するには自律訓練法のような認知的な枠組みも必要と思われた。研究3では、一般の成人13名に対して約2ケ月間自律訓練法を実施し、その前後での身体意識化尺度(Body awareness questionnaire)の変化を検討した。その結果、参加者個別の得点では改善の認められるところも多く示されたが、全体として統計的には有意ではなかった。またこの研究では、心身症患者の身体の意識化の変化を検討することも目的としたが、現在のところ十分なサンプルが得られておらず、統計的な検討はなされていない。今後継続して検討を行っていくところである。
緊張レベルを用いた大型船操縦訓練の効率向上化に関する研究

心身が緊張すると、末梢血管が収縮し血流量が減少する。そして、末梢部の体温が部分的に低下すると言われている。このことから、末梢血流量や末梢部体温を測定することにより、被験者の緊張レベルが推定できる。一方、大型船の操縦訓練は、大型スクリーンに映し出したCG風景を見ながら実施している。しかし、操縦の習熟度合いやうまさは、被験者によってかなり違いがある。そこで、被験者の習熟度合いによって、与える訓練シナリオの難易度を決める手だての必要性を感じている。というのは、訓練シナリオに対し、被験者の習熟度が上がっていれば、本人の緊張レベルは高まらず飽いていることを示すことになろう。又、被験者の習熟度に見合わない難易度の高いシナリオを課せば、緊張レベルが鰻登りとなることが予想できる。そこで、被験者の習熟度に合った、又は習熟度を高める方向の難易度シナリオを、この緊張レベルでもって、チューニングする手法を研究した。通常人は緊張すると、呼吸数、心拍数といった値も変化する。しかし、これらの値は、連続的な時系列としては測定できない。さらに、交感神経と副交感神経が拮抗的に作用してこれらの値は変化するので、はたして緊張することによって値が連動したか否かは分離して測定しにくい。これらに比べ、末梢部の血流量(指尖脈波という)や、顔面体温は連続測定が可能で、緊張レベルの推定に適している。しかし、指尖脈波は被験者が腕を動かすと心臓との相対位置が変わるため血流量が変化してしまう。そうなると、計測容易なパラメータではあるが、手を動かすことによるミスリードも多いということになる。そこで、補完的に顔面体温による計測も追加して総合的に訓練対象者の緊張レベルを計測した。赤外線カメラを用いて大型船操縦訓練時の被験者の緊張を測定できれば、訓練生の操縦習熟度に応じた訓練シナリオの難易度を選択できる。つまり、同訓練シナリオに対して、繰り返し実施しても訓練生の緊張レベルが高い場合、同訓練生にとって難易度が高すぎであると考えられ、何度やっても成功体験が得られず、チャレンジをあきらめてしまうかもしれない。また、訓練生にとってあまりにも簡単なシナリオである場合や、あるいは習熟度が上がった結果、難なくこなせるようになった場合等は、緊張レベルがあがらず飽きていることを示している。そこで、訓練生の習熟度に応じた難易度にするために、訓練生の訓練シナリオに対する反応である緊張レベルが一種のセンサーとして使えないか、その可能性を本研究では追求する。今年度得られた知見や観測時の留意点等を箇条書きしてみる。1.赤外線カメラの映像は、温度が高い部分は白く、低い部分は黒く映る。2.その映像を画像分析してみると、画素のRGB値の平均値は温度に比例する。3.赤外線カメラの映像ノイズ除去のため、センサーが定時毎にリセットされてしまう。その対策として、映像視野中に2つの定温点を置き、その2定温点のRGB値の平均値から比例配分で対象点の温度を推定するとした。4.得られた人の顔付近の表面温度の推移から、指数関数的なモデルにて、0から5の緊張レベルを推定した。5.操船訓練中の緊張レベルを測定してみると、訓練当初は、終始緊張が続く。シナリオに慣れてくると、要所で緊張し、他は気を抜いているような緊張レベルの時系列となる。さらに、訓練を進めると操船の要所での緊張も減少し、マンネリの様相を呈してくる。そのあたりが、シナリオを一段レベルアップさせるタイミングではないかと考えられる。

このことから、末梢血流量や末梢部体温を測定することにより、被験者の緊張レベルが推定できる。一方、大型船の操縦訓練は、大型スクリーンに映し出したCG風景を見ながら実施している。しかし、操縦の習熟度合いやうまさは、被験者によってかなり違いがある。そこで、被験者の習熟度合いによって、与える訓練シナリオの難易度を決める手だての必要性を感じている。というのは、訓練シナリオに対し、被験者の習熟度が上がっていれば,本人の緊張レベルは高まらず飽いていることを示すことになろう。又、被験者の習熟度に見合わない難易度の高いシナリオを課せば、緊張レベルが鰻登りとなることが予想できる。そこで、被験者の習熟度に合った、又は習熟度を高める方向の難易度シナリオを、この緊張レベルでもって、チューニングする手法を研究した。通常人は緊張すると、呼吸数、心拍数といった値も変化する。しかし、これらの値は、連続的な時系列としては測定できない。さらに、交感神経と副交感神経が拮抗的に作用してこれらの値は変化するので、はたして緊張することによって値が連動したか否かは分離して測定しにくい。これらに比べ、末梢部の血流量(指尖脈波という)や、顔面体温は連続測定が可能で、緊張レベルの推定に適している。しかし、指尖脈波は被験者が腕を動かすと心臓との相対位置が変わるため血流量が変化してしまう。そうなると、計測容易なパラメータではあるが、手を動かすことによるミスリードも多いということになる。そこで、補完的に顔面体温による計測も追加して総合的に訓練対象者の緊張レベルを計測した。
ヒト歯根膜細胞における破骨細胞分化抑制因子の発現

本研究では,根尖性歯周炎におけるサイトカインネットワーク破綻の機序を明らかにするために,まず,ヒト歯根膜細胞におけるOCIFの発現について検討した.矯正学的理由で抜歯した小臼歯より無菌的に歯根膜を摘出し,組織片より増殖してきた細胞を実験に供試した.歯根膜細胞における破骨細胞分化抑制因子(Osteoclastogenesis-inhibitorty factor:OCIF)mRNAの発現をReverse transcriptase-polymerase chainreaction(RT-PCR法)により解析したところ,5人の異なるドナーから得られた歯根膜細胞すべてにおいて,OCIF mRNAの発現が認められた.さらに,炎症惹起物質によるサイトカイン発現誘導のメカニズムについて検討したところ,ヒト歯根膜細胞においては,Prevotella intermediaのリポ多糖(LPS)の刺激により,OCIF mRNA発現の抑制傾向が認められた.以上の結果より,根尖性歯周炎における歯槽骨吸収には歯根膜細胞が発現するOCIFが関与している可能性が示唆された.今後,RT-PCR法により得られた遺伝子発現の結果をノーザンブロット法により定量化し,種々の炎症惹起物質によるOCIF遺伝子発現動態について詳細に検討し,さらに,OCIF遺伝子発現に関わる転写因子についても解析する予定である.本研究では,根尖性歯周炎におけるサイトカインネットワーク破綻の機序を明らかにするために,まず,ヒト歯根膜細胞におけるOCIFの発現について検討した.矯正学的理由で抜歯した小臼歯より無菌的に歯根膜を摘出し,組織片より増殖してきた細胞を実験に供試した.歯根膜細胞における破骨細胞分化抑制因子(Osteoclastogenesis-inhibitorty factor:OCIF)mRNAの発現をReverse transcriptase-polymerase chainreaction(RT-PCR法)により解析したところ,5人の異なるドナーから得られた歯根膜細胞すべてにおいて,OCIF mRNAの発現が認められた.さらに,炎症惹起物質によるサイトカイン発現誘導のメカニズムについて検討したところ,ヒト歯根膜細胞においては,Prevotella intermediaのリポ多糖(LPS)の刺激により,OCIF mRNA発現の抑制傾向が認められた.以上の結果より,根尖性歯周炎における歯槽骨吸収には歯根膜細胞が発現するOCIFが関与している可能性が示唆された.今後,RT-PCR法により得られた遺伝子発現の結果をノーザンブロット法により定量化し,種々の炎症惹起物質によるOCIF遺伝子発現動態について詳細に検討し,さらに,OCIF遺伝子発現に関わる転写因子についても解析する予定である.
1α位水酸化酵素の発現調節機構の解析と腎不全時への応用

本研究の初年度は、マウス胎仔腎に対してwhole mount in situ hybridization(ISH)法を用い、25位水酸化ビタミンDの代謝酵素である1α位水酸化酵素遺伝子と24位水酸化酵素遺伝子の発現部位を検討した。その結果、1α位水酸化酵素の発現は腎内側部を中心とした尿細管上皮に認められ、24位水酸化酵素は、腎表層部を中心とした尿細管上皮に発現していた。今年度は、両酵素の発現部位の相違をより直接的に検出するために、2重染色プローブを用いたISH法による検討を行った。また、尿細管における24位水酸化ビタミンDの取り込みに必須の役割をするメガリンの発現を合わせて検討した。15.5日齢の胎仔腎において、10^<-4>M forskolin,10^<-8>M 1,25(OH)_2D_3を同時添加し、2重染色プローブを用いたwhole mount ISH法を行った。両酵素を同時に発現する細胞は認められなかった。また、メガリンの発現をRT-PCRにより検討したところ、ビタミンD代謝酵素の発現より早く、胎齢11.5日より発現が認められた。whole mount ISH法によりメガリンの発現部位は1α位水酸化酵素に類似していた。メガリンは、腎発生初期より発現していることおよびその発現部位が1α位水酸化酵素に類似していることより、胎生期においてもビタミンD代謝に重要な働きをしているものと考えられた。24位水酸化酵素の発現部位はメガリンの発現部位とは異なることから、1,25(OH)_2D_3により発現誘導された24位水酸化酵素は、25位水酸化ビタミンDよりも1,25(OH)_2D_3を基質として水酸基の付加を行うことが示唆された。25位水酸化ビタミンD-1α位水酸化酵素遺伝子(1α位水酸化酵素遺伝子)がクローニングされ、発現レベルの検討が可能になったが、プロモーター活性の研究は十分ではない。申請者らは、ヒトの1α位水酸化酵素遺伝子のプロモーター部位をBAC libraryを用いてクローニングし、種々の長さの転写開始点上流フラグメントのもつ活性を検討し、転写開始点15kbp内にプロモーター活性が存在することを確認した。転写活性は腎由来細胞に導入したときに高活性を示した。活性型ビタミンDの添加により、1α位水酸化酵素遺伝子プロモーター活性は25-50%程度低下したが、最短プロモーターにおいてもある程度の転写活性抑制が見られたことから、転写活性抑制を担う特定部位の同定には至らなかった。マウス胎仔腎器官培養系を用いて、ネフロンの形成に伴う1α位水酸化酵素遺伝子の発現を検討した。15.5日齢の胎仔腎を用いた検討では、1α位水酸化酵素の発現は、検討した10^<-6>M-10^<-4>M forskolin添加、添加後3時間-24時間の範囲内で用量依存的、時間依存的に誘導された。1α位水酸化酵素の発現時期としては、胎齢135日以降の腎において、無刺激条件下での発現とforskolinによる発現誘導が認められた。1α位水酸化酵素は、ビタミンD代謝物の測定より推定されていた時期より早期である腎器官形成の初期より発現するものと考えられた。25位水酸化ビタミンD-1α位水酸化酵素遺伝子がクローニングされ、発現レベルの検討が可能になった。胎齢11.516.5日のマウス胎仔より摘出した腎臓をculture insertにのせ、15%FCSを含むDMEM中で培養を行った。48時間ごとに培養液を交換し、1週間以上培養可能でネフロン形成が続行されることを確認した。無刺激あるいはforskolinを添加した培養腎よりtotal RNAを抽出し、ビタミンD受容体(VDR)、1α位水酸化酵素の発現をRT-PCRにより検討した。1α位水酸化酵素遺伝子の蛋白コード領域のアンチセンスプローブをDIG(digoxigenin)ラベルし、whole mount in situ hybridizationを行った。14.5日齢の胎仔腎を用いた検討では、1α位水酸化酵素の発現は、検討した10^<-6>M-10^<-4>M forskolin添加、添加後3時間-24時間の範囲内で用量依存的、時間依存的に誘導された。1α位水酸化酵素の発現時期としては、胎齢13.5日以降の腎において、無刺激条件下での発現とforskolinによる発現誘導が認められた。in situ hybridization法による検討では、1α位水酸化酵素遺伝子の発現はforskolin添加時に腎内側部を中心とした尿細管上皮において認められた。VDRについては、胎齢13.5日より発現がみられ、10^<-8>M1,25(OH)_2D_3添加により発現が増強された。1α位水酸化酵素は、ビタミンD代謝物の測定より推定されていた時期より早期である腎器官形成の初期より、尿細管上皮に限局して発現することが明らかとなった。

本研究の初年度は、マウス胎仔腎に対してwhole mount in situ hybridization(ISH)法を用い、25位水酸化ビタミンDの代謝酵素である1α位水酸化酵素遺伝子と24位水酸化酵素遺伝子の発現部位を検討した。その結果、1α位水酸化酵素の発現は腎内側部を中心とした尿細管上皮に認められ、24位水酸化酵素は、腎表層部を中心とした尿細管上皮に発現していた。今年度は、両酵素の発現部位の相違をより直接的に検出するために、2重染色プローブを用いたISH法による検討を行った。また、尿細管における24位水酸化ビタミンDの取り込みに必須の役割をするメガリンの発現を合わせて検討した。15.5日齢の胎仔腎において、10^<-4>M forskolin,10^<-8>M 1,25(OH)_2D_3を同時添加し、2重染色プローブを用いたwhole mount ISH法を行った。両酵素を同時に発現する細胞は認められなかった。また、メガリンの発現をRT-PCRにより検討したところ、ビタミンD代謝酵素の発現より早く、胎齢11.5日より発現が認められた。whole mount ISH法によりメガリンの発現部位は1α位水酸化酵素に類似していた。メガリンは、腎発生初期より発現していることおよびその発現部位が1α位水酸化酵素に類似していることより、胎生期においてもビタミンD代謝に重要な働きをしているものと考えられた。24位水酸化酵素の発現部位はメガリンの発現部位とは異なることから、1,25(OH)_2D_3により発現誘導された24位水酸化酵素は、25位水酸化ビタミンDよりも1,25(OH)_2D_3を基質として水酸基の付加を行うことが示唆された。
家畜の中枢食欲制御機構における神経伝達物質とインスリンの役割に関する研究

中枢にインスリンおよびその受容体が存在していることが知られているが、その役割に関しては不明な点が多い。本研究ではインスリンの中枢食欲制御における役割を明らかにすることを目的として、インスリンの中枢投与が採食量、血中インスリン濃度、血糖値、および視床下部ノルドレナリン神経の活性に与える影響を調べた。Wistar系雄ラット(体重350g)を環境温度24°C下で飼育し、実験に供した。実験1では、インスリンの中枢投与が食欲に及ぼす影響を調べるため、24時間絶食させたラットの側脳室にインスリン(100および200mU)を投与し、2時間の採食量を測定した。その結果、両インスリン投与区において採食量が有意に増加した。実験2では、インスリン(100および200mU)を側脳室に投与し、投与前後に腹大動脈に留置したカテーテルから20分毎に血液を採取し分析に供した。その結果、両投与区においてインスリン投与直後から血中インスリン濃度が増加したが、その増加割合は200mU投与区の方が大きかった。また、両投与区においてインスリン投与直後から血糖値が減少したが、その減少割合は200mU投与区の方が大きかった。実験3では、インスリン(100および200mU)を側脳室投与し、投与前後の視床下部(室傍核および腹内側核)ノルアドレナリン神経の活性変化をマイクロダイアリシス法を用いて調べた。その結果、インスリン200mU投与直後にノルアドレナリン濃度が増加し、時間の経過とともに減少した。これらの結果から、中枢投与したインスリンは血糖値の低下を介して採食行動を刺激すると考えられる。また、インスリンが視床下部ノルアドレナリン神経を活性化し、食欲を刺激する機序の存在が示唆された。
Chediak-Higashi症候群の病態解明-病因候補遺伝子のクローニング及び患者解析-

患者の遺伝子解析を行うためにヒトRab4ゲノム遺伝子をクローニングし、エクソン-イントロン境界近傍の遺伝子構造を明らかにした。この結果ヒトRab4ゲノム遺伝子は7つのエクソンにより構成され全長17.4Kb以上にわたっていた。この情報をもとに日本人Chediak-Higashi症候群患者2名のヒトRab4遺伝子解析を行った。しかし調べた限りにおいて異変は発見できず本遺伝子が本当に原因遺伝子であるかどうかが問題となった。そこで本症候群のモデル動物であるベ-ジュマウスの遺伝子解析を試みることにした。まず解析を行うためにマウスRab4cDNAのクローニングを行った。マウス肝cDNAライブラリーより、ヒトRab4cDNAをプローブとしてクローニングしたところ、8個のクローンを単離した。その内最長のクローンの遺伝子構造を解析した。こうして得られたマウス肝Rab4cDNAは全長1428bpで、蛋白翻訳領域は639bp 213アミノ酸のをコードしていた。またヒトRab4cDNAとは核酸で約83.2%、アミノ酸で98%のホモロジーを有していた。この情報をもとにベ-ジュマウスにおける肝メッセンジャーRNAを分離してRT-PCRによりRab4cDNAの遺伝子解析を行った。しかし変異を見つけることが出来ず、結論として本症候群の原因遺伝子として本遺伝子によるものとは考えにくいと思われた。ここまで解析したところ、C.M.PerouらによりNature Genetics誌上1996 July vol 13 p303-308にChediak-Higashi症候群の原因遺伝子として他の遺伝子を単離したとの報告があり、本遺伝子がChediak-Higashi症候群の原因遺伝子である可能性は少なくなったと考えられた。