hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
人工ガスハイドレートと電解質ナノ流体の分子化学

分子性細孔をもつナノポーラス結晶中で安定化された巨大な1次元水ナノクラスターにメタンやXeなどを閉じ込めると、室温でもガスハイドレートを形成し、20気圧ぐらいの高圧では、ハイドレートの中に多量のXeやメタンのガスを可逆に吸蔵できることが分かった。一方、ナノ細孔中の水クラスターに電解質イオンを導入すると、そのイオン伝導性はバルクの水溶液と同じぐらい高くなり、恐らくナノ細孔中を規則正しくイオンが並んだことによるコヒーレントな相互作用が発現するものと考えている。直径1.6 nmの一次元ナノチャネル構造をもつ分子性多孔質単結晶に閉じ込められた水クラスター(WNT: water nanotube cluster)は、融解ー凝固の相転移挙動をもち、壁面の相互作用で融解状態でも安定なWNTのクラスター構造をもつ。一般に、ガスハイドレートは低温/高圧下で存在する得意な構造をもつ不安定な氷構造から作られているが、空孔型のWNTを調整し、ガス分子を挿入するだけで、ガスハイドレートを形成し、常温常圧で安定化するものと考えている。CH4の代わりにXeを導入した場合、室温付近での気体の吸蔵・放出が可逆に観測された。このWNTを用いて、水から氷への速度論的な凝縮反応を利用して、CH4やH2などのエネルギーガスを安定化させれば、常温常圧で吸蔵・放出するガスハイドレートの研究行うことが可能である。特に今年度はXeを用いた人工ガスハイドレートを用いて湿度変化による安定性や取り込み量などの研究を行った。低い湿度ほど水分子の代わりにXeの取り込み量が増加するのが観測された。一方、電解質水溶液は、水和したイオンの素早い移動のため電気の良導体である。このWNT内に電解質塩を任意の割合で溶かし込むことに成功した。この擬1次元ナノ電解質水溶液は、ナノ流体(Nano fluidics)として素早い超イオン伝導性やプロトン伝導性を示すだけではなく、電解質イオンを動かすことによって、力学的なエネルギーを電気エネルギーに変換することができる。この現象を達成するための、結晶の合成研究を行った。初年度は特に合成研究や人工ガスハイドレートの合成実験を主に行っている。しかし、当初、計画に合った湿度と温度とガス圧力を制御できるセルの構築は、助成金が足りなかったため実現できていない。特に人工メタンガスハイドレートあるいは水素ハイドレートの、湿度制御を行った挿入時のメタンや水素のガス圧力を求めることが困難であり、別の手法で測定できる機材の開発を考えている。一般に、ガスハイドレートは低温/高圧下で存在する得意な構造をもつ不安定な氷構造から作られているが、湿度を調整することによって空孔型のWNTを調整し、ガス分子を挿入するだけで、ガスハイドレートを形成し、常温常圧で安定化するものを作ることに成功した。平成28年度はXeハイドレートを室温で形成することは分かっているので、CD4を用いて、室温付近での気体の吸蔵・放出が可逆にできる物質の開発を行った。このWNTを用いて、水から氷への速度論的な凝縮反応を利用して、CH4のエネルギーガスを安定化させれば、常温常圧で吸蔵・放出するガスハイドレートの研究行うことが可能である。一方、電解質水溶液は、水和したイオンの素早い移動のため電気の良導体であるが、これがナノメートルオーダーの限られた1次元空孔のWNT中で電解質塩を任意の割合で溶かし込むことに成功した。しかも、このWNTは、ハロゲン化物イオンの塩を溶かし込むことはできるが、その他の陰イオンを溶かし込めないというイオン選択性をもつことを明らかにできた。このことを利用すればイオン透過型のデバイスができるであろう。電解質イオンの導入によって、水分子自体の個数が少なくなるため、あるいは水和によって構造化するため、プロトン伝導度は低くなるが、電解質イオンの移動によって電導性が3桁近くも大きくなっているものと考えられる。現在、共同研究によって直流での測定を行う予定である。1.5 nmのサイズをもつ準1次元ナノチャネル細孔をもつ分子性多孔質結晶に巨大な水分子クラスター(WNT)を安定化することに成功した。このWNTは湿度を調節することで抜けやすい中心部分の水分子のみ取り除くことが可能で有り、その空間を有するWNTにXeやCH4をー20°Cで大気圧で閉じ込めることに成功したと考えている。一方、このWNTに電解質イオンを導入した実験で交流インピーダンスを使ってその電導性を測ることに成功した。また、本年度の実験によってこのWNTでは、取り込まれる電解質イオンの厳密な選択性を発現することが明らかになってきた。すなわち、電解質のアニオンにハロゲン化物イオン以外のアニオンを用いた場合、カチオンもアニオンも取り込むことができないことが分かった。また、ハロゲン化物イオンを用いたカチオンでも、Mg2+ような2価のカチオンは全く取り込むことができないことが分かった。これらが、イオンクラスレートハイドレートの生成できるイオンに沿っているのは興味深い事実である。

一般に、ガスハイドレートは低温/高圧下で存在する得意な構造をもつ不安定な氷構造から作られているが、空孔型のWNTを調整し、ガス分子を挿入するだけで、ガスハイドレートを形成し、常温常圧で安定化することを見出した。CH4の代わりにXeを導入した場合、室温付近での気体の吸蔵・放出が可逆に観測された。このWNTを用いて、水から氷への速度論的な凝縮反応を利用して、CH4などのエネルギーガスを安定化させた結果、常温常圧でCH4の吸蔵・放出するガスハイドレートの研究を行った。一方、電解質水溶液は、水和したイオンの素早いイオン移動のため電気の良導体である。このWNT内に電解質塩であるNMe4Clを任意の割合で溶かし込むことに成功し、そのイオン伝導度と結晶構造解析に成功した。この擬1次元ナノ電解質水溶液は、ナノ流体(Nano fluidics)として素早い超イオン伝導性やプロトン伝導性を示し、電解質イオンを動かすことによって、力学的なエネルギーを電気エネルギーに変換することができる。この現象を構造科学的に研究して、そのメカニズムについて考察した。その結果、1MのKCl溶液のイオン伝導度が、バルク水の電解質とほとんど同じ伝導を示すことが明らかになった。これは、数百ナノの細孔内に閉じ込めたイオン移動がバルクのイオン移動よりも遅くなることに反していることになり、ナノオーダーで高度に組織化された単結晶内をイオンが動くため、コヒーレントな力が働いていると判断した。分子性細孔をもつナノポーラス結晶中で安定化された巨大な1次元水ナノクラスターにメタンやXeなどを閉じ込めると、室温でもガスハイドレートを形成し、20気圧ぐらいの高圧では、ハイドレートの中に多量のXeやメタンのガスを可逆に吸蔵できることが分かった。一方、ナノ細孔中の水クラスターに電解質イオンを導入すると、そのイオン伝導性はバルクの水溶液と同じぐらい高くなり、恐らくナノ細孔中を規則正しくイオンが並んだことによるコヒーレントな相互作用が発現するものと考えている。メタンガスや水素ガスの導入圧力を、ボンベ圧とした湿度・温度制御封入装置の開発を行って、人工メタンハイドレートに実際のミニボンベを使用したメタン貯蔵能を比較検討してみることを計画している。固体のNMRによるCD4やC13H4、あるいはD2などの同位体を用いた測定では、確かにガスが入ることを確認できるが、同位体自身でできたガスは非常に高価であるため、圧力をかけられるだけの購入予算がない。あとは単結晶であるのでXray結晶構造解析によって、内部のハイドレートクラスター構造の変化から、導入されたガス量などを推測できると考えられるが、湿度とガス圧を変化させたサンプリング装置が必要である。ナノ流体の方の研究は、順調に合成方法の確立が成功し、ナノチャネル細孔に導入できる電解質量をコントロールすることに成功した。これは急遽、購入したイオンクロマトグラフィーでハロゲンイオン量を定量できたことが成功につながった。まずは導入した電解質量と伝導性の関係を求めることを目指している。まず、人工ガスハイドレートについては、固体NMRサンプル管内の湿度を化学湿度調整法によって調製し、室温での湿度依存性によるXeやCH4の取り込み量の温度変化を記録する。
高速時分割トラッキングによる一千万個細胞群の個体識別システム

平成19年度は主として,1.複数細胞の高速時分割トテッキングアルゴリズム開発,2.複数細胞への高速フォーカシングアルゴリズム開発,の2点を行った.1.複数細胞の高速時分割トラッキングアルゴリズム二次元的に分布する光学顕微鏡下の複数の対象を,視野スキャンを行いながら高速に個体を識別し,長時間に渡って各個体を追跡するアルゴリズムを構築した.複数対象の識別は平成18年度に開発した,複数細胞の高速認識アルゴリズムを利用して行い,その各個体位置をデータベースに登録し,スキャンごとにその各個体位置を更新することで,細胞の移動などにも対応可能なアルゴリズムを構築した.また,実際にこのアルゴリズムをC言語を用いて実装し,毎秒1000枚の画像を計測可能な高速ビジョンと,自動ステージとを組み合わせてイースト菌を対象としてその評価実験を行った.その結果,対象の画像が安定して計測できる場合は機能するが,スキャンに伴い対象がフォーカス面から外れてしまうという問題が顕在化した.2.複数細胞への高速フォーカシングアルゴリズム開発1.で細胞への高速オートフォーカスが必須であることがわかったため,視野内に複数の細胞が存在しても,対象に高速にオートフォーカス可能なアルゴリズムを開発した.平成18年度に開発した細胞単体に対するオートフォーカスアルゴリズムを拡張し,視野内に複数の細胞がいても,それらの回折像情報を抽出してオートフォーカスを可能とする画像処理アルゴリズムを開発した.実際に開発したアルゴリズムをC言語を用いて実装し,イースト菌群を顕微鏡下で高速にスキャンしながら,対象にフォーカスを合わせ続けることが可能であることを確認した.平成18年度は主として,1.複数細胞の高速認識アルゴリズム開発,2.細胞への高速フォーカシングアルゴリズム開発,の2点を行った.1.複数細胞の高速認識アルゴリズム光学顕微鏡に取り付けた高速ビジョンにより得られた顕微鏡視野内に存在する複数の細胞の像を計算機に取り込み高速に処理・ラベリングすることで個々の対象を認識するアルゴリズムを構築した.高速ビジョンは一秒間に1000フレームの画像を取得してくるため,画像の処理・ラベリングに許される時間は1/1000秒である.この短い時間ですべての処理を終わらせるために,複数のCPUで並列実行可能なラベリングアルゴリズムを開発した.また,カタユウレイボヤ(Ciona intestinalis)の精子群の位相差像に開発した画像処理アルゴリズムを適用したところ,一画面中に100個程度までであれば,1ms以内に複数個体を識別可能であることを確かめた.画像処理はデュアルコア,デュアルCPUを持つ計算機で行った.2.細胞への高速フォーカシングアルゴリズム研究代表者がこれまで開発してきたオートフォーカスを行う手法に基づき,細胞の位置をこれまでより広範囲・高精度に推定する手法を構築した.この手法は細胞の回折像に含まれる細胞と焦点面との位置関係の情報を用いて細胞の奥行き方向位置を推定するものである.本年度は回折像からの情報の抽出手法を改良し,これまでの手法に比べて広い範囲に分布する細胞について精度よく位置を推定することを可能とした.また,実際にイースト菌を対象にしたフォーカシング実験から,対象の奥行き方向位置を1ms以内,1μm以内の精度で推定可能であることを確認した.平成19年度は主として,1.複数細胞の高速時分割トテッキングアルゴリズム開発,2.複数細胞への高速フォーカシングアルゴリズム開発,の2点を行った.1.複数細胞の高速時分割トラッキングアルゴリズム二次元的に分布する光学顕微鏡下の複数の対象を,視野スキャンを行いながら高速に個体を識別し,長時間に渡って各個体を追跡するアルゴリズムを構築した.複数対象の識別は平成18年度に開発した,複数細胞の高速認識アルゴリズムを利用して行い,その各個体位置をデータベースに登録し,スキャンごとにその各個体位置を更新することで,細胞の移動などにも対応可能なアルゴリズムを構築した.また,実際にこのアルゴリズムをC言語を用いて実装し,毎秒1000枚の画像を計測可能な高速ビジョンと,自動ステージとを組み合わせてイースト菌を対象としてその評価実験を行った.その結果,対象の画像が安定して計測できる場合は機能するが,スキャンに伴い対象がフォーカス面から外れてしまうという問題が顕在化した.2.複数細胞への高速フォーカシングアルゴリズム開発1.で細胞への高速オートフォーカスが必須であることがわかったため,視野内に複数の細胞が存在しても,対象に高速にオートフォーカス可能なアルゴリズムを開発した.平成18年度に開発した細胞単体に対するオートフォーカスアルゴリズムを拡張し,視野内に複数の細胞がいても,それらの回折像情報を抽出してオートフォーカスを可能とする画像処理アルゴリズムを開発した.実際に開発したアルゴリズムをC言語を用いて実装し,イースト菌群を顕微鏡下で高速にスキャンしながら,対象にフォーカスを合わせ続けることが可能であることを確認した.
相互作用の分類・評価と機能開発のためのＡＩＭ２元関数解析法の確立と応用

弱い相互作用から強い相互作用全体を統一的かつ有効に解析できる方法を模索し、AIM2元関数解析法を提案した。本法は理論化学者の活用が中心であったAIMを、その厳密性を損なうことなく実験化学者がより容易に取扱えるようにした画期的な方法である。Hb(rc)をHb(rc) - Vb(rc)/2 (=(h/2π)2/8m)∇2ρb(rc))でプロットし、最適化構造のデータからは相互作用の静的特性が、最適化構造周辺における摂動構造のデータからは相互作用の動的特性が得られる。本法を適用し、広範な水素結合や超原子価結合等について解析・評価および分類を行った。新規化合物の開拓には、弱い相互作用を巧みに自在に操ることである。弱い相互作用の本質を的確に解析し、分類・評価する方法が不可欠となる。Baderらが提案したAIM(Atoms-in-Molecules、法は、相互作用の分類に活用されつつあるが、本質的な活用は容易ではない。最近我々は、実験化学者の立場から実験結果を自らのイメージで解析・評価できることを念頭に、AIM2元関数解析法を考案・提唱した。この解析法が物質科学や機能性物質の創製・開発における静的および遷移状態等の動的特性を解明するのに有用であることを実証し、種々の現象に応用することが目的である。この成果は実験化学者が容易に自らの系の相互作用を解析・評価ができ、高性能な物質の創製への挑戦の強力な助けとなる。平成23年度は以下を中心に研究を行った。1.水素結合は、実態はあるが相互作用の分類には含まれていない。二量化や分子内水素結合、分子間水素結合、DNAの二重らせん構造に重要な役割を果たす多水素結合(モデル化を活用)やC-H---π相互作用、新しい非共有結合として着目されているハロゲン結合についてPOM法およびNIV法を適応し、AIM2元関数解析が有用な手段であることを実証した。2未だ明らかにされていない水素結合とファン・デル・ワールス相互作用との境界を明らかにし、その付近の特性解明を行った。3超原子価結合および拡張超原子価結合は、様々な化合物の物性や化学反応、触媒機構に重要な役割を果たしている。相互作用系のモデルとなる超原子価結合および拡張超原子価結合を有する化合物群の合成を行った。4合成した化合物群の物性測定を行った。5.合成化合物および既報化合物の計算化学による物性計算とAIM解析を行った。6有機化学、生化学、薬学、物性物理学等における既報のX線結晶構造解析のデータの収集と整理を行った。物質科学を発展させ新規化合物を開拓するためには、弱い相互作用の本質を的確に解析・評価し、自在にかつ巧みに操ることが求められる。Baderが提案したAIM (Atoms-in-Molecules Method)は、化学結合および相互作用の特性を評価・分類できる方法として注目を集めてきた。しかし本質的な活用は容易ではない。申請者らは、実験化学者の立場から測定結果や物性を自身のイメージで解析を行うために、AIM2元関数解析法を提唱し、相互作用全体を統一的に評価・分類できる基本的な解析法として確立してきた。しかしながら、化学現象全体を有効に解析するためには、本法をより高度な解析法として確立するという挑戦的な課題が浮上してきた。本研究の目的は、AIM2元関数解析法を物質科学の発展と新奇な物質創製に挑戦できる解析法として発展・確立することである。具体的には、(1)相互作用の動的特性に関連して新規な摂動構造作成法を提案し、AIM2元関数解析法をさらに高精度化し、(2)不安定化学種や結晶中の相互作用を含めて有効な解析法として確立する。水素結合は、その実態はあるが相互作用の分類には含まれていない。平成25年度は、平成24年度に引き続き、二量化や分子内水素結合、分子間水素結合、DNAの二重らせん構造に重要な役割を果たす多水素結合やC-H---π相互作用、新しい非共有結合として着目されているハロゲン結合についてPOM法およびNIV法を適応し、AIM2元関数解析が有用な手段であることを実証した。また多環状化合物の結合状態や相互作用を解明するためNIV法を適応し、AIM2元関数解析が有用な手段であることを実証した。Baderらが提案したAIM (Atoms-in-Molecules)法は、相互作用の分類に活用されつつあるが、本質的な活用は容易ではない。

最近我々は、実験化学者の立場から実験結果を自らのイメージで解析・評価できることを念頭に、AIM2元関数解析法を考案・提唱した。この解析法が物質科学や機能性物質の創製・開発における静的および遷移状態等の動的特性を解明するのに有用であることを実証し、種々の現象に応用することが目的である。この成果は実験化学者が容易に自らの系の相互作用を解析・評価ができ、高性能な物質の創製への挑戦の強力な助けとなる。平成24年度は以下を中心に研究を行った。1.水素結合は、実態はあるが相互作用の分類には含まれていない。二量化や分子内水素結合、分子間水素結合、DNAの二重らせん構造に重要な役割を果たす多水素結合(モデル化を活用)やC-H---π相互作用、新しい非共有結合として着目されているハロゲン結合についてPOM/NIV法を適応し、AIM2元関数解析が有用な手段であることを実証した。2.超原子価結合および拡張超原子価結合は、様々な化合物の物性や化学反応、触媒機構に重要な役割を果たしている。相互作用系のモデルとなる超原子価および拡張超原子価結合を有する化合物群を合成し、合成した化合物群の物性測定を行った。3.合成化合物および既報化合物の計算化学による物性計算とAIM解析を行った。4.有機化学、生化学、薬学、物性物理学等における既報のX線結晶構造解析のデータの収集と整理を行った。5.遷移状態(TS)における相互作用の評価と分類を行うため、TSおよび固有反応座標(IRC)構造を用いて、NIV法によるAIM2元関数解析を行った。目的は、ほぼ順調に達成できており、論文にもまとめることができている。しかし、水素結合とファン・デル・ワールス相互作用との境界をはっきりさせるために必要な計算法を見出したが、実際の計算は完結していない状況である。25年度が最終年度であるため、記入しない。1については二量化や分子内水素結合、分子間水素結合についてほぼ満足いく成果が得られた。論文でも発表した。またDNAの二重らせん構造に重要な役割を果たす多水素結合については現在報文にまとめているところである。C-H---π相互作用やハロゲン結合についても概ね成果を得ている。2については、化合物合成は順調に進んでいる。現在X線結晶構造解析を行うべく、単結晶を作成中である。3については、前年度と同様、合成化合物および既報化合物の計算化学による物性計算とAIM解析を行った。4については、有機化学、生化学、薬学、物性物理学等における既報のX線結晶構造解析のデータの収集と整理を行った。莫大な量のデータ整理システムを考案中である。5については、取りかかって間がなく、十分な時間をかけていない状況である。しかし、現在のところ大きな艱難はない。水素結合とファン・デル・ワールス相互作用との境界をはっきりさせるための計算を完結させることについては大きな問題はないと認識している。申請書に記載の2012年度の計画通り推進していく予定である。もう少し、5の遷移状態(TS)における相互作用の評価と分類を行うため、TSおよび固有反応座標(IRC)構造を用いて、NIV法によるAIM2元関数解析を行う必要があるが、申請書に記載の2013年度の計画通り推進していく予定である。
ストレスがIL-1βを放出させる機序の解明：うつ病治療の新たなターゲットを探して

ストレスはうつ病発症の重要なリスク因子であり、動物においてストレスは脳神経を萎縮させ、神経新生を抑制することでうつ状態を誘発することが知られる。我々は(i)ストレスが脳内で過剰なグルタミン酸を放出させること、また(ii)それに引き続くATPの誘導を介して(iii) NLRP3が活性化されることで炎症性サイトカイン(interleukin-1β等)が脳内で産生され(脳内炎症)、(iv)神経新生の抑制を生じる結果(v)うつ状態を引き起こす、ことを明らかにした。これらの治験から、ATP-P2X7-NLRP3を介した経路がうつ病治療の新たなターゲットになる可能性を示した。ストレス状況下では脳内でATPが放出され、ATPはマイクログリアに危険信号として感知されて炎症促進性物質を放出し、細胞障害およびうつ病様の行動を呈することをこれまで明らかにしてきた。本研究ではATPがどのようにしてストレスにより放出されるのか、ATPの放出源の同定とその制御を目的としている。これまでの研究によりストレスはATPと同時に興奮性神経伝達物質であるグルタミン酸も放出することが分かっている。グルタミン酸はシナプスにおいてアストロサイトによって取り込まれることが知られており、またアストロサイトはグリオトランスミッターとしてATPを利用することから、アストロサイトがATPの放出源との仮説を立て研究を進めている。平成25年度はまずマイクロダイアリシス法を用いて、アストロサイトの機能を薬理学的に制御しながら放出されるATP等を測定する計画を立てていた。しかし実験動物保護の観点、また研究スピード促進の観点から、まずこれらの現象をin vitroで観察し、その結果を元に動物レベルで検証するという方針に計画を変更した。平成25年度はC6グリオーマ細胞および初代アストロサイトの培養系を確立し、そこへグルタミン酸を投与したところ、ATPの上昇が確認された。また現在、アストロサイトの機能を薬理学的に抑制することで、グルタミン酸反応性のATP放出が抑制されるか確認しているところである。これらが確認された後、実験動物に応用し、アストロサイト機能抑制下でストレスによるATPの放出が抑制されるかどうか確認する。また心的なストレスを簡便に測定する方法として末梢コルチゾールがある。この度、グルタミン酸放出抑制剤であるリルゾールをラットに投与したところ、ストレスによるコルチゾールの上昇が抑制されたことから、個体レベルにおいても過剰なグルタミン酸の関与がストレス源となる可能性が考えられた。本研究では、ストレスがどのようにして脳内でIL-1betaをはじめとする炎症性物質を産生させるのか、その機序の解明と新たな治療戦略の構築を目的としている。我々はこれまでに(i)ストレスが脳内で過剰なグルタミン酸を放出させること、また(ii)それに引き続くATPの誘導を介して(iii) NLRP3(細胞内受容体)が活性化されることで炎症性サイトカイン(interleukin-1beta等)が脳内で産生され(脳内炎症)、(iv)神経新生の抑制を生じる結果(v)うつ状態を引き起こす、ことを明らかにしてきた。興味深いことに、NLRP3は身体の様々な物質、例えばグルコースやアミロイドbetaなども感知し、IL-1betaの放出をはじめとした炎症を引き起こし糖尿病やアルツハイマー病等の身体疾患を増悪させる。糖尿病やアルツハイマー病はうつ病と高率に併存する疾患であり、従ってNLRP3がストレスや生体内危険物質(誘発因子)と、うつ病や身体疾患(疾病)を結びつける共通因子ではないかという、「NLRP3インフラマソーム仮説」を我々は提唱した(Brain Behav Immun, 2013)。このようにNLRP3が過剰に活性化されることで様々な疾患を呈する可能性が考えられることから、現在NLRP3を直接制御する薬剤の効果と安全性を検討している。ごく最近NLRP3の活性化阻害剤であることが示されたbeta hydroxybutyrate(BHB)を用いて調べた結果、BHB投与群は有意に抗うつ効果が見られることが分かった。またグルタミン酸の放出抑制剤であるリルゾールもまたストレス誘発性のコルチゾールの上昇を抑えることができた。現在、引き続きうつ病の新たな治療法の確立に取り組んでいる。うつ病の生物学的研究当初の計画では実験動物を用いてマイクロダイアリシス実験を行う予定であった。しかし細胞を用いた研究にて、生体内で起こると予想される現象が確認できたことから、今後スムーズにin vivo研究に移行できることが期待される。また当初は初年度の計画に組み込まれていなかったATPの制御機構について、未だ実験動物を用いてATPを測定することはできていないものの、コルチゾールという指標を用いてその成果を確認することができた。

以上のことから総じて研究は概ね順調に進展していると判断された。平成26年度は、先のin vitroで証明されたことをマイクロダイアリシス法を用いてin vivoで検証する。マイクロダイアリシス法は既に平成25年度にセットアップされている。これを用い、ストレス状況下におけるグルタミン酸濃度およびATP濃度の変化と、グルタミン酸放出抑制剤(リルゾール)投与下でのそれぞれの変化、またアストロサイト機能抑制剤(フルオロ酢酸)でのATPの変化を測定する。さらにIL-1β、IL-6、TNFαといったサイトカインについては微量であり当教室では測定が困難であるため、Lundbeck社と共同して行うことを計画している。また同様の条件下での行動解析を当教室およびYale Universityとで共同で行う予定である。予定よりも物品が安く購入できたため。平成26年度は、すでにマイクロダイアリシスのシステムが構築されていることから、助成金はプローブや試薬などの消耗品の購入に使用する。
抜去毛包移植と他家無細胞真皮を利用した複合上皮組織の作製

1.無細胞真皮を得るために、現在世界で使用されている米国のアロダームと韓国のシュアダームを購入した。2.両者をHE染色、Fibronectin、Collagen IV、Lamininの免疫組織染色を施行すると、コラーゲンの構築、基底膜の残存がアロダームが優れていることが判明したため、当実験にはアロダームを使用することとした。3.神戸大学形成外科には実験室がなく、まず部屋を確保し、クリーンベンチ、感熱滅菌器、冷却遠心機、インキュベーター、凍結保存容器、実験台などの大型器具を購入設置に1年を費やし、実験施設・機器を調えた。4.神戸大学倫理委員会に培養表皮・培養口腔粘膜、培養毛包角化細胞と無細胞真皮使用の許可を申請し、平成15年初頭に承諾を得、将来の自家培養移植へのステップを踏んだ。5.毛包角化細胞の培養方法を確立させるために、抜去毛包と顕微鏡下切除毛包のどちらが効率がよいか調べたところ、前者は本人の負担がなく無尽蔵に提供できるが細菌感染の危険性が高く、後者は本人の負担があり毛包提供に制限があるものの細菌感染の危険性が低いことが判明した(第2回日本再生医療学会で報告)。6.アロダームの基底膜成分の免疫組織染色にて、上記のうちLamininのみが存在することが判明したため、アロダームをLamininでコーティングし毛包移植を試みたが、生着はしても細胞播種までは至らなかった。7.その後、他の基底膜成分によるコーティングも試みたが細胞播種までには至らなかった。現在、新しい細胞接着因子であるアタッチンとコーティングマトリックス前処理にて検討中である。8.一方、アロダームを利用した培養複合口腔粘膜の作製は神戸大学でも成功し、倫理委員会を通過後臨床応用に踏み切り現在も症例を重ねている(第47回日本形成外科学会総会で報告)。9.平成15年秋に島津社のガスクロマトグラフィーを購入、3ヶ月で機器の設定が完了し、試みに毛包と毛髪の脂肪酸解析を行った。その結果、パルミチン酸が両者に多く存在すること、必須脂肪酸は毛髪にはほとんど存在しないことが判明した(第3回日本再生医療学会、第10回ケロイド・肥厚性瘢痕研究会で報告。また、今夏の2nd World Wound Healing Societyで報告予定)。10.培養複合口腔粘膜移植患者から数ヶ月後一部採取し、この膜脂肪酸解析を行い正常粘膜に復したか否かを検討するため、現在サンプリング中である。5月、韓国のハンスバイオメド社を訪問し、同社の研究協力を得て無細胞真皮であるアロダーム(米国産)とシュアダーム(韓国産)を取得しました。白人種であるアロダームと黄色人種であるシュアダームの組織を染色し、真皮の構築が前者でより保たれていることを確認し、移植材料として将来の複合上皮作製にはアロダームが優れていると判断しました。

クリーンベンチ、乾熱滅菌器、冷却遠心器とインキュベーター購入後、まず、皮膚表皮と口腔粘膜上皮の培養をスタートさせることができ、その設定条件を整えました。同時に、凍結保存容器を購入することで、培養細胞の長期保存システムを確立させました。その後、1.自家培養表皮移植の臨床応用とその評価、及び、2.培養複合口腔粘膜の臨床応用およびその評価、を神戸大学倫理委員会に提出し、12月に承認を得て、臨床応用を開始することができました。1.は、毛包細胞の培地とほぼ同じである表皮角化細胞の培地使用の許可を得るためのステップ、2.は、無細胞真皮(アロダーム)使用許可を得ることによって、本研究の課題である将来的な毛包細胞との複合上皮作製のためのステップとして重要です。現在、皮膚基底膜成分であるタイプ7コラーゲン、フィブロネクチン、ラミニンがアロダームの基底膜部分に存在するか否かを免疫組織学的に検討中であり、加えて、自身のヒゲを抜去し、アロダームへの移植条件を確立するために、タイプ4,7コラーゲン、フィブロネクチン、ラミニンが毛包移植生着に必要か否かを検討しています。これらの基底膜成分をアロダームへ前処理して毛包を移植中ですので、本年度中に最適成分を決定し、その至適条件を確立させる方向で実験を進めています。さらに、皮膚及び口腔粘膜線維芽細胞をメニコンより提供を受けたコラーゲンスポンジに3次元培養をしています。これらの培養真皮上に毛包細胞、表皮角化細胞、口腔粘膜角化細胞を移植、重層化させ、組織学的に検討を加え、上皮系と間葉系の相互作用を検討する予定です。口腔粘膜歯肉角化細胞を上皮系、他家無細胞真皮を間葉系とする培養複合口腔粘膜が神戸大学の倫理委員会を通過した後、約1年で10症例の患者さまに移植させることができました。その経過と結果は今春(4月7日9日、於東京都)の第47回日本形成外科学会総会・学術集会にて報告します(培養複合口腔粘膜の臨床応用)。移植後の臨床経過から、問題なく生着させることができたため、本研究課題である将来の毛包移植による複合皮膚上皮の臨床応用の可能性が膨らんできました。実験室内で培養皿への毛包移植が可能となり、タイプ7コラーゲン、ラミニン、フィブロネクチンによるコーティングを試みましたが、抜去毛包を生着させることはできても、角化細胞の播種まで完成させることができませんでした。そこで、新しい細胞接着因子であるアタッチンとコーティングマトリックス前処理にて現在検討中です。一方、平成15年度予算の島津社の14Bガスクロマトグラフィーを5月オーダーし、10月に完成し機器のセットアップ後、スタンダードの設定を行い、12月からまず毛包と毛髪のサンプルを予備実験として組織内・細胞膜内19種の脂肪酸組成を解析しました。その結果、毛包・毛髪内ともに必須脂肪酸が通常の皮膚表皮よりも少なく、かつ、16:0(パルミチン酸)が過剰に含まれていることが確認された。この結果は、3月23日25日(於幕張)の日本再生医療学会にて報告する予定です(毛包および毛髪の脂肪酸組成解析)。さらに、先の口腔複合粘膜の移植後の患者さまから生着後6ヶ月経過したのち、移植部の生検を兼ねて本来の口腔粘膜組織に回復しているか否かを検討するためにサンプリングを行い、ガスクロマトグラフィーに供する予定です。
内服用ルゴール液のカプセル充填による易服用化

【研究目的】服薬アドヒアランスの維持は、薬物治療を行う上で重要な課題である。内服用ルゴール液は放射性ヨウ素を用いた画像診断時の甲状腺保護などに汎用されるヨウ素製剤である。液剤であるため剤形的には幅広い層の患者に使用できる一方、苦味や刺激臭が強く服用困難を訴える患者も多く存在する。そこで、本研究ではルゴール液をカプセルに充填し、味、臭いが漏出しない「ルゴール液カプセル」を作製し、このカプセルの製剤としての安定性を確認することにより、ルゴール液カプセルの臨床における有用性を評価した。【研究方法】安定性評価のため下記の項目について試験を行った。またカプセルの材質(ゼラチンまたはHPMC(ヒドロキシプロピルメチルセルロース))、ルゴール液の溶媒中水分濃度、カプセル保管時の温度(4°Cまたは室温)・遮光条件が安定性に及ぼす影響を検討した。試験期間はいずれも28日間とし、経時変化を測定した。(1)カプセル外観の変化の評価カプセルの変形、内容物の漏出等の有無を目視により判定した。(2)カプセル内の有効ヨウ素濃度の定量内服用ルゴール液中の有効ヨウ素含量を352nmにおける吸光度を測定し定量した。【研究成果】ゼラチンカプセルで調製したサンプルは全て試験期間中に内容物の漏出等の外観変化が認められた。一方、HPMCカプセルを用いて作製したサンプルでは、封入するルゴール液の溶媒を90%グリセロールとし、水分濃度を低下させた条件下では試験終了時まで外観に変化は見られず形状が維持された。またこれらのHPMCカプセルのサンプルにおいては、温度、遮光条件に関わらず、ルゴール液中の有効ヨウ素濃度に大きな変化が見られなかった。このことから、HPMCカプセルを使用し、ルゴール液中の水分含量を低く保つことで、ルゴール液のカプセル充填、ならびに長期保存は可能であることが示唆され、本製剤はルゴール液の服薬アドヒアランス向上において臨床上有用であると考えられた。
大気中でのイオン誘発核生成の定量的解明：反応素過程実験からのアプローチ

イオンが誘発する微粒子核生成の初期過程であるクラスターイオン生成について実験的研究を行った。反応経路を制限するために、クラスターイオン生成の種イオンの生成および選別を行う領域とクラスターイオンを生成・成長させる領域を分離した実験装置を開発した。H3O+(H2O)nクラスターイオンについて、結合水分子数が1個変化する際のギブスの自由エネルギー変化の測定を行い、我々の手法は従来の測定にくらべて安定な精度の良い測定結果を得られることがわかった。NO+イオンを種イオンとする場合、水素分子を緩衝ガスにして、種イオンに含まれる準安定状態のNO+イオンが及ぼす影響を大きく減少させた実験を行えるようになった。イオンが誘起する大気エアロゾル形成過程をその初期過程のクラスターイオン生成の詳細な研究を通して明らかにすることが、研究の目的である。本年度は、大気中に存在しうる簡単な正イオンを種イオンにして生成される水クラスターイオンの測定を目的として、主に下記の装置開発を行った。1.十分な量の種イオンを得るために、種イオンの生成・質量分離装置の改良を行った。その結果、種イオン総量が約10倍増加し、実験を短時間で行えるようになった。2.クラスターイオン生成部である移動管内の温度や電場の均一性を改善するために、移動管部品の改良を行い、またイオン移動管の温度調節機構の製作を行った。この研究で用いる温度範囲での温度調整が問題なく可能となった。これらの装置開発の進行にともない、主に下記の予備実験を行った。1.移動管にヘリウムガスを満たし、その中でのアルゴンイオンの移動速度を測定した。イオンの移動速度は、移動管内の物理条件を敏感に反映し、移動管の性能チェックに適する。既知の実験値をほぼ再現しており、十分な性能を持つことを確認した。2.移動管を不飽和の水蒸気ガスで満たし、希ガス原子イオン、窒素分子イオン、水分子イオンを種イオンとし、水クラスターイオン生成の予備実験を行った。いずれも、H_3O^+イオンに水分子が結合したクラスターが測定された。これから、種イオンへの電子の移動で水分子の正イオンが生成し、このイオンと水分子の反応でH_3O^+イオンが生成した後に水分子が結合していくと考えられる。この過程は窒素雰囲気中での水クラスターイオン生成過程として指摘されていたが、この予備実験でも明らかに示されている。以上の予備実験の結果をふまえ、今後イオンが誘起するエアロゾル形成の初期過程の解明やクラスターイオンの自由エネルギー測定を目指す。イオンが誘起する大気エアロゾル形成過程の初期過程であるクラスターイオン生成の過程を研究し、大気エアロゾル形成について明らかにすることが目的である。初年度における研究結果を踏まえ、さらに測定の安定化へ向けて下記の装置改良を行った。1.イオン移動管へのガス導入系の改良、特にガス混合系統での不純物混入の低減。2.クラスターイオン測定部と実験パラメーターのモニター類の統括データ収集系の形成。これらの改良はほぼ成功し、ガス混合系統での不純物混入の低減は、より良いデータを得ることを可能にしたと考えている。このように、計画していた装置改良がほぼ成功したことを受け、主に下記の実験による成果を得た。1.ガス温度ごとにイオン移動管内の電場を変化させ、結合分子数ごとのクラスターイオンの生成量分布の電場への依存性を詳しく測定した。この電場への依存性を用いて、結合分子数が1個異なるクラスターイオン間のゼロ電場での生成比を求めた。各温度で生成されるH_3O^+イオンに水分子が結合したクラスターイオンについて、ゼロ電場での生成比を安定に測定した。2.結合分子数が1個異なるクラスターイオン間の生成比とイオン移動管内部の水蒸気分圧から、結合分子数が1個異なるクラスターイオン間のギブスの自由エネルギー変化を、各ガス温度に対して求めることができた。この自由エネルギー変化の温度依存性は従来の実験結果と比べてもスムーズであり、システム全体の安定性が比較的良いことを示唆すると考えている。3.室温よりも高温での測定において、H_3O^+イオンに水分子が結合したクラスターイオン以外に、H_2O^+イオンに水分子が結合したクラスターイオンも少量ながら、1個1個水分子が付着する過程で生成されていることがわかり、これらの自由エネルギー変化導出の可能性を見出した。以上の結果を論文発表する方向で準備を進めているところである。平成24年度研究費で実施した研究の成果は以下のようになる。1. H3O+(H2O)nクラスターイオンの結合水分子数の変化に伴うギブスの自由エネルギー変化についての測定を高温側に拡張するために、400K程度まで昇温できる高温対応のイオン移動管の開発を行った。高温対応

イオン移動管のテストはほぼ成功したが、本測定の開始後すぐ、質量分析器の故障や検出素子の劣化などによってデータの取得できない時期が生じた。これらの修理を行って、約320Kから約400Kまでの温度範囲においてH3O+(H2O)nクラスターイオンの結合水分子数が変化するときの自由エネルギー変化を前年度まで行った233Kから328Kでの測定と同程度の良い精度で得ることができた。2.種イオンをNO+とする実験を本格的に行った。NO+イオンはその電子基底状態と寿命の長い電子励起状態が混じって生成されることが知られている。イオン移動管の特徴を利用し、クラスターイオン生成部に加える電場条件を通常の実験から変えることで、励起状態が引き起こすクラスターイオン生成の反応経路の違いに関する寄与を見積もることができた。また、緩衝ガスの種類によってこの励起状態の寄与が変化することが実験的に分かった。これらの知見は今後の測定に活用する予定である。3.(H2O)n+クラスターイオンの生成について、イオン移動管にD2OをH2Oの代わりに導入して実験を行ったところ、残念ながら(H2O)n+クラスターイオンの生成については確定的なことは言えないことがわかった。計画していた装置の改良はおおむね成功し、想定していた性能向上や操作性向上を達成した。それにより、試行実験も含めて、計画していた実験をおおむね行うことができた。その結果、実績概要欄に記載したような実験成果を得ることができた。25年度が最終年度であるため、記入しない。これまでの研究結果を受けて、H_3O^+イオンなど簡単な分子イオンに水分子が結合したクラスターイオンについての測定を継続することを中心に研究を進める予定である。とくに、クラスターイオン形成の第一段階に近いにもかかわらず従来の研究では測定値のばらつきの大きい、結合水分子数がより小さいものについて、現状よりも高温での測,定を行うことを考えている。想定している温度範囲では特に大きな困難は予想していないが、イオン移動管周辺に使用する材料の耐熱性に問題があれば、現状の材料から変更することで対応できると考えている。
第三世代制限増殖ウイルスベクターを用いた瀰漫性胸膜中皮腫に対する新規治療法の開発

アスベストによる悪性胸膜中皮腫は、診断時にすでに広範囲に進展し、根治手術が不可能であることが多い。予後はきわめて不良で、1年生存率が50%、2年生存率が20%であるといわれている。我々は、悪性胸膜中皮種に発現が高く、正常胸膜に発現の無い遺伝子: CREBBP/EP300 Inhibitory Protein 1(CRI1)に注目し、当該遺伝子プロモータを用い、中皮腫特異的に目的遺伝子を発現するアデノウイルスベクターを開発した。ルシフェレース発現型コンストラクトを用いたプロモータ解析によりCRI1プロモータは、中皮腫細胞株で有意な転写活性を示し、正常胸膜細胞では活性低値であった。当該プロモータのdeletion constructを用いた転写活性解析により同定した中皮腫特異的転写活性部位:5'--138/+84-3'(転写開始部位を+1とする)によりプログラム細胞死誘導遺伝子Bid (BH3 interacting domain death agonst)ならびにアデノウイルス初期遺伝子E1Aを発現するリコンビナントアデノウイルスAd-CRI1-138 4x/BidおよびAd-CRI1-138 4x/E1Aはin vitroにおいて中皮腫細胞株に特異的細胞死を誘導する一方、正常中皮細胞また正常肺線維芽細胞株での細胞障害は認められなかった。また当該二種アデノウイルスは、ヌードマウスにおける中皮腫皮下腫瘍に対して有意な腫瘍増殖抑制効果を示した。本検討により、CRI1プロモータプロモータを用いたアデノウイルスの中皮腫治療用ベクターとしての有用性が示された。EST cluster解析により同定された新規癌遺伝子CRI1(CREBBP/EP300 inhibitory protein 1)は,胸膜中皮腫において発現増強することが報告されている。我々は、胸膜中皮腫の新規治療法開発を目的とし,CRI1 promoterを用いた中皮腫特異的目的遺伝子発現システムの作製を行った。胸膜中皮腫細胞株(MSTO211H,H2452,H2052,H28)肺癌細胞株(A549,H322)ヒト正常中皮細胞,ヒト正常胸膜,正常肺における胸膜中皮腫マーカー:CRI1,Calretinin,WT1,Mesothelinの蛋白発現をWestern blot法にて解析した。またこれらの遺伝子のpromoterによるluciferase発現constructを作製し,転写活性を測定した。さらに当該promoterによりGFPを発現するRecombinantadenoviralvectorを作製し,その発現検討を行った。Calretinin,WT1,Mesothelinは中皮腫細胞のみならず,一部の正常中皮,胸膜内に発現を認めた。対してCRI1はこれらの正常細胞・組織内での発現は陰性であった。CRI1は胸膜中皮細胞株において高い転写活性を示す一方,正常中皮および正常胸膜で低値であった。対してCalretinin,WT1,Mesothelin promoterはこれらの正常細胞において優位な転写活性を示した。Ad-CRI1/GFPは,胸膜中皮腫にGFPを誘導し,正常中皮および胸膜で発現陰性であった。Calretinin,WT1,Mesothelinは胸膜中皮腫に特異度が高く,他腫瘍との鑑別診断に有用であるが,一部の正常胸膜および中皮細胞での発現と優位な転写活性が認められた。一方,CRI1 promoterのこれらの細胞・組織における転写活性は低値であり,当該promoterまたはその中皮腫特異的転写elementを用いた発現システムは,正常肺および胸膜に低障害で,安全性の高い胸膜中皮腫遺伝子治療を可能とすることが推察された。
腎細胞癌におけるＴＫＩ耐性獲得機序の解明

染色体や遺伝子発現異常による高血管新生は、直接の薬物療法(チロシンキナーゼ阻害剤)耐性機序ではなく、高血管新生-微小環境との相互作用が耐性機序の要因であると考えた。また、これら耐性反応の一部は可逆性(もとに戻る性質)であった。以上の研究結果より、チロシンキナーゼ阻害剤耐性腎細胞癌の克服は、腫瘍微小環境へのアプローチや他の治療法との併用など、これまでとは異なる新規治療戦略が必要と考えられた。外科手術不能転移性腎細胞癌に対してチロシンキナーゼ阻害剤(TKI)を含めた分子標的療法が第1選択とされている一方で、TKIの効果は限定的である。我々のこれまでの研究結果より、TKI耐性機序の一因としてhyperangiogenesisが関連していると考えていた。しかし、Sorafenib耐性転移性腎細胞癌患者から樹立した細胞株、786-O腎癌細胞株をもとに製作されたin vitroでSorafenib耐性を示す786-O-Sora-resistant株、高腫瘍形成能をもつhyperangiogenicな786-O-H1株、さらにはこれをもとに製作された786-O-H1-Sora-resistant株、いずれにおいてもin vitoではHyperangiogenicであり、Sorafenib耐性を示すが、マウスの腎臓に同所移植をしたin vivoモデルではSorafenibによる抗腫瘍効果が認められた。つまり、in vivoでの耐性は認められなかった。染色体や遺伝子発現異常によるHyperangiogenesisは、直接のTKI耐性機序ではなく、Hyperangiogenesis-微小環境との相互作用がTKI耐性機序の要因であると考えた。また、これらTKI耐性反応の一部は可逆性であった。以上の研究結果より、TKI耐性腎細胞癌の克服は、腫瘍微小環境へのアプローチや他の治療法との併用など、これまでとは異なる新規治療戦略が必要と考えられた。外科手術不能転移性腎細胞癌に対してtyrosine kinase inhibitor(TKI)を含めた分子標的治療が第1選択とされつつある。一方で、TKIの効果は限定的であり、耐性機序は解明されていない。我々はこれまでTKI耐性転移性腎細胞癌の患者から新たな細胞株を樹立し、複数の染色体異常から各種血管新生因子が著明に高発現していることを確認した。このことより、TKI耐性機序の一つとしてhyperangiogenesisが関連していると考えられた。本研究では、この細胞株を用いて、TKI耐性獲得の機序を解明するとともに、より高発現している血管新生因子を選択し、次なる標的分子を同定することで、より効果のある治療を行っていくことを目的としている。TKI耐性転移性腎細胞癌の患者から樹立した細胞株はin vitroにおいて、Sorafenibに対して耐性を示した。一方、本細胞ををマウスの腎臓に同所移植をし、Sorafenib強制経口投与を連日行った結果、Sorafenibによる明らかな抗腫瘍効果が認められた。また、本細胞はin vitroでの培養で、Sorafenib暴露を一定期間休止すると、Sorafenib細胞増殖抑制効果が可逆性に復帰した。このことから癌細胞自身によるTKI耐性機序は可逆性であることが示唆された。TKIリチャレンジ効果のひとつの機序の可能性がある。また、これらの結果から微小環境による耐性機序も示唆される。TKI耐性患者から樹立した細胞株において、in vitro耐性が確認されたにもかかわらず、in vivo同所移植モデルでは、耐性が解除されていたことは予想外の結果であった。以上の事実から、耐性機序の可逆性と微小環境変化による耐性機序のふたつの側面から再考する必要がある。上記の結果から、耐性機序として可逆性と微小環境変化を考慮する。耐性時と耐性解除時で比較検討することで、可逆耐性機序を解明する。このことで、耐性をコントロールする因子を検証する。Micro array試薬、plasmid調節、shRNA試薬、RT-PCR試薬、抗体製作、免疫組織化学試薬、実験動物および飼料等
日本語・中国語・タイ語受動文の比較統語論研究及びデータベースの構築

本科研プロジェクトでは、日本語、中国語、タイ語の受動文の統語構造について検討した。日本語の受動文については、直接受動文、間接受動文、所有受動文の統語構造について考察した結果、直接受動文と所有受動文の派生に関しては、動詞句内からの名詞句移動が関与するのに対し、間接受動文には関与しないことを支持する新たな証拠を提示した。中国語とタイ語の受動文については、派生に独立受動形態素が関与するものについて検討し、それらの形態素の統語特性について、日本語の束縛受動形態素の統語特性との比較対象も行いつつ明らかにした。平成25年度は、前年度における中国語の受動文に関する研究を基に、タイ語の受動文の統語構造に関する詳細な検討を行った。受動形態素thùukを用いた受動文の統語構造に関する研究は一定数あるものの、対象句の移動の有無、動作主句の統語特性を含め、不明な点が多い。そこで、本年度の研究では、照応表現、数量詞、否定極性表現等を用いることにより、受動文の統語構造について検討した。文献調査だけでは十分なデータを得ることが困難である為、平成24年度の予備調査に引き続き、タイのマヒドン大学アジア言語文化研究所において調査を行った。同研究所のIsara Choosri氏及び大学院生の協力を得て、タイ語受動文に関するデータを収集した。さらに、タイ語受動文と中国語受動文に関する比較統語論の視点からの分析に基づき、両言語の受動文の統語面での類似点及び相違点、特に、受動形態素の特性に関する考察を行った。また、タイ語と中国語の受動文に関する比較統語論の視点からの成果を、マヒドン大学アジア言語文化研究所の言語学コロキアムにおいて報告し、参加者から、データ及びその分析に関する有意義なコメントを頂くことができた。平成24年度は、先ず、日本語の受動文に関する統語論の観点からの先行研究、さらに、比較統語論の立場からの受動文に関する先行研究を検討し、論点整理することにより、今後3年間で検討すべき研究課題を再確認した。次に、日本語受動文の統語構造及び受動形態素の特性について詳細に検討した。先行研究を参考にしつつ、直接受動文、間接受動文、所有者受動文という3つのタイプの受動文の統語的振る舞いについて考察し、それぞれの受動文の統語構造及び受動形態素の特性に関する詳細な検討を行った。特に、所有者受動文の振る舞いについて、Kubo (1992),長谷川(2007)を基に、直接受動文及び間接受動文との比較・対照を行った。以上の検討に基づき、日本語の受動文データベースの作成に着手した。中国語受動文に関しては、Ting (1998)、Huang (1999)を始めとする先行研究を手掛かりに、受動文の統語的振る舞いについて、さらには、統語構造及び受動形態素の特性について考察を行った。特に、中国語受動形態素、bei (被)を用いた受動文を中心に研究を進めた。日本語と異なり、中国語の受動形態素は、独立形態素として現れる。すなわち、中国語における受動文は、対象句>受動形態素>動作主句>動詞という配列になり、受動形態素は、対象句と動作主句の間に現れる。タイ語の受動形態素も同様に独立形態素であり、受動文の語順も中国語と全く同じである。中国語の受動文に関する詳細な考察により、タイ語の受動文との比較・対象を行う準備が整った。平成26年度は、タイ国内の政情不安により、当初予定していたタイ国マヒドン大学アジア言語文化研究所における、さらなる調査を実施することが出来なかった。その為、平成24年度及び25年度において収集した調査結果について詳細な検討を行った。特に、平成25年度に収集したタイ語の受動文に関するデータを基に、対象句の移動の有無について、また、受動文中の他の文要素との統語関係について、イディオム、照応表現、数量詞、否定極性表現等を用いたデータに基づき検討を行った。その結果、対象句の移動を示す事実を確認することができたが、一方で、中国語同様に、対象句の基底生成分析を支持する事実も存在することが分かった。なお、タイ語の受動文は、中国語や日本語のそれとは異なり、意志を持つ有性名詞句が主語位置に要求される為に、中国語や日本語では可能な受動構文が得られないこともあり、検証困難なケースがあることも判明した。このタイ語の特性は、受動態形態素の統語特性を反映していると考えられ、平成27年度にさらなる検討を行う予定である。さらに、平成26年度の後半では、日本語と中国語の所有受動文の統語構造について、特に、主語位置に現れる所有者句の統語特性について考察を行った。何れの統語構造についても、移動分析と基底生成分析が存在するが、移動分析を支持する事実について、日本語については尊敬語化の事実を基に考察を行った。平成27年度は、中国語の移動分析を支持する事実について今後検討する予定であると同時に、タイ語の所有受動文の事実及びその統語特性についても検討する予定である。平成27年度は、先ずは日本語の受動文の統語構造に関する検討を行った。尊敬化表現等を用いて、受動文の主語位置への移動の有無、また、その移動の起点について明らかにすることにより、Kubo(1990)やHasegawa (2009)において提案されている直接受動文と所有受動文との並行性を示すと同時に、これら2種類の受動文と間接受動文との違いを明らかにした。さらに、二重他動詞を所有受動文に用いることにより、二重他動詞文内の複数の内項の統語位置について検討した。