hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
超平面配置の理論とその応用

これは、多重自由配置に真の幾何学的意味を与えることになり、その大きな目標に接近している。本研究は,超平面配置の研究とその応用であるが,特に,鏡映配置、および,その多重配置を深く理解することを通じて、多重自由配置、および、自由配置の幾何学的・組合せ的意味を解明することを目標に研究し,以下の実績を挙げた.1.どのような重複度に対しても,多重超平面配置になるような超平面配置にはどのようなものがあるか,という問に完全な回答を与えた.すなわち,そのような超平面配置(totally free arrangement)は,本質的に2次元以下であることを示した.(Abe-Terao-Yoshinaga)これは,自由多重超平面配置のひとつのextreme caseであり,多重超平面配置の自由性を論ずる上で避けて通れない基本的な問題である.2. Coxeter配置に対しては.定数重複度の超平面配置の対数的微分の作る加群に接触度によるフィルター付けが入り,いわゆるHodge filtrationと一致することは,研究代表者により証明されているが,実は,このフィルター付けが負の重複度を持った多重Coxeter配置についても構成できることを示した. (Abe-Terao)これにより,すべてのCoxeter配置について, contact-order filtrationとHodge filtrationを結ぶ関係が明白になった.これは, Coxeter配置の多重自由性が,負の重複度をも含めて,多重自由重複度の言葉で明示的に記述されることを示している.3. Coxeter配置に対して多重に接する微分加群に作用する原始微分の共変微分のずらし写像としての役割を決定した.特に, 2.で述べた共変微分が,多重超平面配置に極をもつ対数的微分型式全体の自己同型写像を与えていることを示した.
難分解性蒸煮・爆砕リグニンの酵素的分解

1.リグニン試料の調整と科学的性質:サワグルミ材小片を20kg/cm_2の水蒸気圧下6分間処理後急速に解圧し,繊維状となし,混在するヘミセルロースを熱水抽出後, 1%水酸化ナトリウム液で室温下にてリグニンを溶出し,減圧乾燥後精製を行った.リグニンのモデル物質としてはコニフェリルアルコールの脱水素重合物(DHP),フェルラ酸,バニリン酸等を用いた.上記によって得られた爆砕リグニンの平均分子量は約10,000であった.またその分子量分布は標準的リグニンMWLと近似していた.2.リグニン試料の前処理と酵素反応:当初,爆砕リグニンは高温高圧にさらされるため変質が著しいものと予想していたが,処理時間が短かったためか,殆ど変質していないことがわかった.したがって,酵素反応を受けやすくするための前処理は省略して直ちに次項の実験に入った.3.リグニン試料の酵素による分解:リクニン分解酵素の一種であるラッカーゼIIIと爆砕リグニン間の反応を調べたところ,僅少ながら低分子化が起こっていることがわかった.反応条件は温度28°C, pH4,酵素濃度0.04%,反応時間48時間である.今後この条件を改善することにより,分解度を上昇させることは可能である.4.リグニン試料の細菌類による分解:爆砕リグニンの溶出に1%の水酸化ナトリウムを用いることから,好アルカリ細菌を用いての分解がきわめて好都合である.この観点からリグニン分解性の好アルカリ細菌のスクリーニングを行い,有望株として数種を得た.その1つN-6株は爆砕リグニン及びDHPに反応するとともに,フェルラ酸バニリン酸を比較的すみやかに分解消失し,芳香核開裂の能力を有することが推察された.1.リグニン試料の調整と科学的性質:サワグルミ材小片を20kg/cm_2の水蒸気圧下6分間処理後急速に解圧し,繊維状となし,混在するヘミセルロースを熱水抽出後, 1%水酸化ナトリウム液で室温下にてリグニンを溶出し,減圧乾燥後精製を行った.リグニンのモデル物質としてはコニフェリルアルコールの脱水素重合物(DHP),フェルラ酸,バニリン酸等を用いた.上記によって得られた爆砕リグニンの平均分子量は約10,000であった.またその分子量分布は標準的リグニンMWLと近似していた.2.リグニン試料の前処理と酵素反応:当初,爆砕リグニンは高温高圧にさらされるため変質が著しいものと予想していたが,処理時間が短かったためか,殆ど変質していないことがわかった.したがって,酵素反応を受けやすくするための前処理は省略して直ちに次項の実験に入った.3.リグニン試料の酵素による分解:リクニン分解酵素の一種であるラッカーゼIIIと爆砕リグニン間の反応を調べたところ,僅少ながら低分子化が起こっていることがわかった.反応条件は温度28°C, pH4,酵素濃度0.04%,反応時間48時間である.今後この条件を改善することにより,分解度を上昇させることは可能である.4.リグニン試料の細菌類による分解:爆砕リグニンの溶出に1%の水酸化ナトリウムを用いることから,好アルカリ細菌を用いての分解がきわめて好都合である.この観点からリグニン分解性の好アルカリ細菌のスクリーニングを行い,有望株として数種を得た.その1つN-6株は爆砕リグニン及びDHPに反応するとともに,フェルラ酸バニリン酸を比較的すみやかに分解消失し,芳香核開裂の能力を有することが推察された.
7,8-ジヒドロキシフラボンのNASHにおける病態改善メカニズムの解明と治療応用

本研究の目的は、ヒト非アルコール性脂肪肝炎(NASH)のモデルであるメラノコルチン4受容体ノックアウト(MC4R-KO)マウスを用いて、BDNF受容体であるTrkBに対するアゴニストの7,8-ジヒドロキシフラボン(7.8-DHF)によるNASH病態改善作用およびそのメカニズムを解明することである。野生型マウスとMC4R-KOマウスに高脂肪食を負荷し、同時に7,8-DHFを与えた群と、与えなかったコントロール群を作成し、20週間後に肝臓、骨格筋、脂肪、血液などの検体採取を行った。MC4R-KOマウスは、野生型マウスに比べ、20週間後に有意に体重が増加した。しかし、MC4R-KOマウスで7,8-DHFを与えた群と与えなかった群の間には、20週間後の体重や肝重量、内臓脂肪重量には両群間で有意差を認めなかった。肝組織像では、7,8-DHF群で脂肪沈着や線維化面積が軽減している傾向がみられたが、有意差は認めなかった。また肝線維化に関わるTGF-β1、MMP2、Col1a1の肝組織中mRNA発量は、両群間で有意差を認めなかった。血液生化学検査でも、AST、ALT、中性脂肪、総コレステロール値に有意差を認めなかった。NASHモデルにおける7,8-DHFの病態改善効果はかなり限定的であり、新規治療法として開発を進めていくのは困難と考えた。しかし、MC4R-KOマウスはヒトNASHの全身病態に酷似しており、NASHモデルマウスとして非常に有用性が高いことが確認できた。これまでの基礎データを活用しながら、現代社会のライフスタイルに即して少量アルコール負荷を加えたNASHモデルも追加作成し、NASH発症への少量アルコールの関与とそのメカニズムにつき解析する計画に変更し、解析を進める方針とした。NASH発症への少量アルコールの関与とそのメカニズムにつき解析する方針へと計画を軌道修正した。MC4R-KOマウスに高脂肪食とアルコール濃度5%、10%、または20%を含む水を与えたアルコール負荷群を8週間飼育し、体組成変化や脂質代謝、炎症マーカー、ERストレスマーカーにつき検討した。20%アルコール群では、体重増加は他の群に比べ有意に低く、肝重量も低い傾向だった。5%および10%アルコール群では、体重増加はコントロールとほぼ同様だったが、肝重量は増加傾向で、白色脂肪重量は減少しており、アルコール負荷により全身の脂肪分布が変化していることを見出した。肝組織中の脂質代謝関連遺伝子のmRNA発現をみたところ、10%アルコール群はコントロールと5%アルコール群に比べ、脂質異化(PPARa、CPT-1a)、脂質合成(SREBP1c)、VLDL分泌(MTP)に関連する遺伝子発現が全て亢進していた。計画修正に伴い進捗状況としては遅れているが、現時点で新たな知見が得られてきている。計画修正に伴い進捗状況としては遅れているが、興味深い新たな知見が得られてきており、現行の計画で進めていく方針である。今後、アルコール負荷群とコントロールの肝組織と白色脂肪組織を用いて、CAGE(cap analysis of gene expression)法にて、網羅的な遺伝子発現の変化を解析する予定である。脂質代謝だけでなく、糖質代謝、炎症マーカー、ERストレスマーカーなどの遺伝子発現と病態との関連につき解析を進める予定である。このうち興味深い遺伝子発現変化を示すものについては、蛋白発現やその発現制御メカニズムについても検討を進めたい。しかし、MC4R-KOマウスはヒトNASHの全身病態に酷似しており、モデルマウスとして非常に有用性が高いことが確認できた。これまでの基礎データを活用しながら、現代社会のライフスタイルに即して少量アルコール負荷を加えたNASHモデルも追加作成し、NASH発症への少量アルコールの関与とそのメカニズムにつき解析する計画に変更し、準備を進めている。過去の脂肪肝モデルマウスに対する7,8-DHFの脂肪蓄積改善効果の報告や、7,8-DHFの作用メカニズムに基づいた理論的背景があるにも関わらず、NASHモデルマウスであるMC4R-KOマウスにおいては、7,8-DHFの病態改善効果は想定よりかなり弱かった。

薬剤投与量は至適と思われ、各種条件変更しても十分な治療効果を得ること難しいことが想定されるため、これ以上の7,8-DHFに係る追加検討は、時間・労力・費用の面で妥当ではないと判断した。しかし、今回得られたヒトNASHの全身病態に酷似しているMC4R-KOマウスの基礎データを活用しながら、現代社会のライフスタイルに即して少量アルコール負荷を加えたNASHモデルも追加作成し、NASH発症への少量アルコールの関与とそのメカニズムにつき解析する計画に変更し、準備を進めている。本研究の目的は、ヒト非アルコール性脂肪肝炎(NASH)のモデルであるメラノコルチン4受容体ノックアウト(MC4R-KO)マウスを用いて、BDNF受容体であるTrkBに対するアゴニストの7,8-ジヒドロキシフラボン(7.8-DHF)によるNASH病態改善作用およびそのメカニズムを解明することである。野生型マウスとMC4R-KOマウスに高脂肪食を負荷し、同時に7,8-DHFを与えた群と、与えなかったコントロール群を作成し、20週間後に肝臓、骨格筋、脂肪、血液などの検体採取を行った。MC4R-KOマウスは、野生型マウスに比べ、20週間後に有意に体重が増加した。しかし、MC4R-KOマウスで7,8-DHFを与えた群と与えなかった群の間には、20週間後の体重や肝重量、内臓脂肪重量には両群間で有意差を認めなかった。肝組織像では、7,8-DHF群で脂肪沈着や線維化面積が軽減している傾向がみられたが、有意差は認めなかった。また肝線維化に関わるTGF-β1、MMP2、Col1a1の肝組織中mRNA発量は、両群間で有意差を認めなかった。血液生化学検査でも、AST、ALT、中性脂肪、総コレステロール値に有意差を認めなかった。NASHモデルにおける7,8-DHFの病態改善効果はかなり限定的であり、新規治療法として開発を進めていくのは困難と考えた。しかし、MC4R-KOマウスはヒトNASHの全身病態に酷似しており、NASHモデルマウスとして非常に有用性が高いことが確認できた。これまでの基礎データを活用しながら、現代社会のライフスタイルに即して少量アルコール負荷を加えたNASHモデルも追加作成し、NASH発症への少量アルコールの関与とそのメカニズムにつき解析する計画に変更し、解析を進める方針とした。NASH発症への少量アルコールの関与とそのメカニズムにつき解析する方針へと計画を軌道修正した。MC4R-KOマウスに高脂肪食とアルコール濃度5%、10%、または20%を含む水を与えたアルコール負荷群を8週間飼育し、体組成変化や脂質代謝、炎症マーカー、ERストレスマーカーにつき検討した。20%アルコール群では、体重増加は他の群に比べ有意に低く、肝重量も低い傾向だった。5%および10%アルコール群では、体重増加はコントロールとほぼ同様だったが、肝重量は増加傾向で、白色脂肪重量は減少しており、アルコール負荷により全身の脂肪分布が変化していることを見出した。
強風・高波浪条件下における砕波帯での漂砂観測と数値モデルによる推算に関する研究

・これまでに申請者らが開発を行ってきた広域海浜流・漂砂系の結合3次元数値モデルを用いて,上越・大潟海岸を対象とした流れおよび地形変化の再現計算を試みた.これまでにも,本数値モデルの精度の検証は行われており,流れの計算結果に関しては再現性がかなり高いものの,地形変化に関しては定性的な適合性は確認されているものの,定量的な精度は十分とは言えない.そこで,定量的な精度の向上を試みた.しかし,地形変化計算の対象とした領域は砕波帯汀線付近の波,流れ,漂砂が非常に複雑な領域であり,swash zone(遡上域)での漂砂量の推定がこの領域での漂砂量・地形変化の計算結果に大きく影響するため,swash zoneの影響を考慮することのできる漂砂モデルへの改良が必要であることが明らかとなった.・上記のように,数値モデルでの詳細な地形変化予測,特に汀線近傍での予測は非常に困難であるため,数値モデルの岸側境界条件の推定に援用することを目指して,過去の計測結果や波浪,潮汐などの外力情報を用いた汀線変化傾向の予測を試みた.その結果,波浪条件だけでなく潮位変動も汀線変化に大きく影響していることが判別分析から明らかとなった.・これまでに得られている漂砂量に関する計測結果は波浪条件が限られているため,再度,沿岸域での漂砂量計測を試みた.詳細な対応は確認できないものの,波浪条件の変動に伴って浮遊砂が間欠的に発生しており,前年度の数値計算で得られた漂砂の間欠的な発生が観測でも確認できた.本数値モデル(漂砂モデル)の定量的な精度をさらに向上することにより,現実的な短期地形変化の推定が可能になると考えられる.京都大学防災研究所大潟波浪観測所の観測桟橋を援用し,レーザー式濃度計(LISST-25),ADCP,超音波式波高計,超音波式風速計を用いた強風・高波浪条件下における波浪・海浜流・海上風・漂砂の総合的な観測を実施した.また,ADCPの反射強度を用いた現地での浮遊砂濃度の鉛直分布計測の可能性も試みた.それにより,以下の成果が得られた.・砕波帯内の水深約7m地点における波浪,海浜流の鉛直分布,漂砂,海上風の同時計測データセットが得られた.・ADCPのエコー反射強度とレーザー式濃度計による計測結果の比較から,エコー反射強度による浮遊砂濃度の推定を試みた.その結果,ADCPエコー反射強度と浮遊砂濃度との間には対応関係があり,エコー反射強度から浮遊砂濃度の鉛直分布を間接的に推定することがあると考えられる.しかし,高波浪時の砕波帯内においては,砕波による海面からの気泡が大量に混入するため,エコー反射強度と濃度計による計測結果の双方にいて,気泡の影響を除去することが必要であり,詳細な波浪(砕波)や混入気泡の条件(情報)を得ることが必要であった.また,申請者らが開発を行ってきた3次元海浜流モデルに,沿岸域での波浪と(波浪と海上風による)流れの影響を考慮できるBailardの漂砂モデルと漂砂の質量保存則を組み合わせた広域海浜流・漂砂・海浜変形の統合モデルの構築を行い,上記の計測データによる計算結果や,現地での深浅測量結果の再現を試み,その適用性を検討した.レーザー式濃度計(LISST-25),ADCP,超音波式波高計および超音波式風速計を用いた日本海沿岸での強風・高波浪条件下(冬季季節風下)における波浪・海浜流・海上風・漂砂データの解析を行い,海岸侵食,海底地形変化に影響を及ぼす漂砂の発生機構の解明を試みた.また,これまでに申請者らが開発を行ってきた流れの3次元数値モデルに,Bailardの漂砂量式を用いた漂砂・地形変化モデルを結合することにより,広域海浜流・漂砂系の結合数値モデルの構築し,このモデルを上越・大潟海岸の大潟波浪観測所観測桟橋周辺に適用し,本結合数値モデルの適用性および現地での漂砂・海底地形変化の発生機構を検討した.数値モデルの適用性に関しては,流れ,海底地形の計測結果と計算結果の比較から,定量的な精度(特に漂砂量と地形変化)に関しては十分とは言えず,さらにデータ解析による現地での漂砂現象の把握やモデルの改良が必要である.しかし,計算結果の定性的な適合性は確認され,本モデルによる計算結果から,ストームの来襲に対応して漂砂が急激に発生し,その時だけに顕著な地形変化が生じ,ストームの来襲毎に段階的に地形が変化することが確認された.また,太平洋岸での現地観測結果からは,台風による強風・高波浪条件下および台風接近前後のうねり来襲時における気象・海象条件の把握を試みた.日本海岸とは異なり,遠方で発生した台風の影響が沿岸域に及ぶため,強風条件と高波浪条件の発生が前後する場合が生じ,台風経路の違いによる気象・海象条件の特性の把握が必要であることが明らかとなった.今回の観測では,現地での浮遊砂濃度の直接計測が困難であったため,ADCPの反射強度を用いた浮遊砂濃度の鉛直分布計測への試みは実施できなかった.・これまでに申請者らが開発を行ってきた広域海浜流・漂砂系の結合3次元数値モデルを用いて,上越・大潟海岸を対象とした流れおよび地形変化の再現計算を試みた.これまでにも,本数値モデルの精度の検証は行われており,流れの計算結果に関しては再現性がかなり高いものの,地形変化に関しては定性的な適合性は確認されているものの,定量的な精度は十分とは言えない.

そこで,定量的な精度の向上を試みた.しかし,地形変化計算の対象とした領域は砕波帯汀線付近の波,流れ,漂砂が非常に複雑な領域であり,swash zone(遡上域)での漂砂量の推定がこの領域での漂砂量・地形変化の計算結果に大きく影響するため,swash zoneの影響を考慮することのできる漂砂モデルへの改良が必要であることが明らかとなった.・上記のように,数値モデルでの詳細な地形変化予測,特に汀線近傍での予測は非常に困難であるため,数値モデルの岸側境界条件の推定に援用することを目指して,過去の計測結果や波浪,潮汐などの外力情報を用いた汀線変化傾向の予測を試みた.その結果,波浪条件だけでなく潮位変動も汀線変化に大きく影響していることが判別分析から明らかとなった.・これまでに得られている漂砂量に関する計測結果は波浪条件が限られているため,再度,沿岸域での漂砂量計測を試みた.詳細な対応は確認できないものの,波浪条件の変動に伴って浮遊砂が間欠的に発生しており,前年度の数値計算で得られた漂砂の間欠的な発生が観測でも確認できた.本数値モデル(漂砂モデル)の定量的な精度をさらに向上することにより,現実的な短期地形変化の推定が可能になると考えられる.
後期ヴィクトリア朝文芸雑誌上にたどる模倣と盗作の問題意識

2018年度の研究成果は、次にあげる二つである。ひとつは、2018年12月25日に刊行された『ディケンズとギッシングー底流をなすものと似て非なるもの』(大阪教育図書)に収められた論文「文人としての英雄ーディケンズの敢闘精神とその継承者」である。本論文では、当該研究課題において考察の中心となっている職業作家の著作権意識の変遷のなかで、その分岐点になっているとも捉えられるディケンズの社会活動に注目したものである。早くから職業作家としての商業的成功を収めたディケンズは、作家の社会的地位の向上を目指して、イギリスでは初となる「作家協会」を設立することを構想した。しかし、中期ヴィクトリア朝の出版業界はディケンズのように作家業だけで経済的安定を望めるほどの作家は少なく、作品を出版するということは一種の投機のようなものと認識されていたため、ディケンズの構想は実を結ぶことなく頓挫した。本論文では、ディケンズのそうした構想がどのような状況から生まれたものであるのかを分析したうえで、のち後期ヴィクトリア朝において、その構想が引き継がれ実現していく過程を考察した。もうひとつは、2018年10月20日に徳島大学において開催された、日本ハーディ協会第61回大会シンポジウムでの研究発表である。「誌上シンポジウムCandour in English Fictionを考える」と題されたシンポジウムにおいて、「ウォルター・ベザントのプロフェッショナリズム」というタイトルで研究発表を行った。発表内容は、ディケンズの構想した「作家協会」を1884年に創設させることに成功したベザントの職業意識に注目し、後期ヴィクトリア朝における職業作家の社会的立場の変化を考察した。以上、2018年は論文と研究発表において、当該研究課題の時代的文脈を整理した2017年度から考察を深め、個人作家レベルでの変化を分析した。2018年度は、論文と研究発表という形で研究成果を公開することができた。また、2018年9月においては、大英図書館へ赴き一次資料の閲覧、収集を実施した。それにより、ディケンズやベザントといった、当時の文芸雑誌を活躍の場とした作家の記事を収集することができ、議論の詳細を辿ることができた。また、2019年3月には『The Wellesley Index to Victorian Periodicals 1824-1900』という高額図書のCD-ROMを購入し、当時の主要な文芸雑誌をインデックス化した資料を考察に活用できるようになった。そのため、2019年度は一次資料に基づいたより具体的な議論が進められる予定である。まだ一次資料の詳細にあたれてはいないが、現代階ではおおむね順調に研究課題に取り組めているといえる。2019年度は、文芸雑誌上の議論において見受けられる「盗作」をめぐる問題意識のあり方を、ヴィクトリア朝の中期から後期にかけての著作権意識の変化の過程に関連づけて、より考察を深化させていく。前年度3月に購入した『The Wellesley Index to Victorian Periodicals 1824-1900』(CD-ROM版)を活用し、plagiarism(盗作)、authorship(著作権)、professionalism(プロフェッショナリズム)などをキーワードとして、当時の議論を整理していく。その際に必要となる資料収集作業は、本年度の夏に大英図書館へ赴くことで進めていく。また、当該研究課題の最終年度となるため、研究成果の公表する場を、所属する日本ヴィクトリア朝文化研究会や日本英文学会での研究発表などといった形で実施する予定である。平成29年度の研究成果は、次にあげる二つである。ひとつは、2017年7月31日に刊行された『広島経済大学創立50周年記念論文集』に収められた論文「後期ヴィクトリア朝の文学市場における著作権意識の変遷」である。本論文では、文芸作品の知的所有権をめぐる実に多くの議論のなかで、職業作家という存在が社会的に認められてきた19世紀後半の後期ヴィクトリア朝という時期に注目し、著作権という概念の萌芽が、職業作家の当然の権利として主張されるようになっていく一過程を辿った。本論文は、当該研究課題において中心的な考察対象である「盗作」についての問題意識と表裏の関係にある著作権意識を、通史的観点から振り返り、その変遷過程を整理したものである。もうひとつは、2018年度刊行予定の大阪大学英文学会叢書『カット!ー英米文学に切り込むー』に収められる予定の論文「切り貼りの文学ー後期ヴィクトリア朝文学市場における盗作擁護のレトリックー」である。本論文では、1880年代から90年代にかけて急速に民主化した後期ヴィクトリア朝の文学市場において、当時の定期刊行物上で散見された、文学作品における「盗作」の是非をめぐる活発な議論を辿り、盗作擁護派の主張の真意を考察した。本論文は、当該研究の中心的な課題に取り組んだものである。大英図書館に赴いて収集した文芸雑誌の記事を整理し、考察を加えた。以上、平成29年度は両論文において、当該研究課題の時代的文脈を明らかにしようと努めた。平成29年度は、2本の論文を研究成果として公開することができた。また、2018年2月末から3月にかけては、大英図書館へ赴き一次資料の閲覧、収集を実施した。それにより、文芸雑誌上の議論の詳細を、より正確に辿ることができるようになった。まだ、必要な一次資料の収集は残っているが、現段階ではおおむね順調に研究課題に取り組めているといえる。

2018年度の研究成果は、次にあげる二つである。ひとつは、2018年12月25日に刊行された『ディケンズとギッシングー底流をなすものと似て非なるもの』(大阪教育図書)に収められた論文「文人としての英雄ーディケンズの敢闘精神とその継承者」である。本論文では、当該研究課題において考察の中心となっている職業作家の著作権意識の変遷のなかで、その分岐点になっているとも捉えられるディケンズの社会活動に注目したものである。早くから職業作家としての商業的成功を収めたディケンズは、作家の社会的地位の向上を目指して、イギリスでは初となる「作家協会」を設立することを構想した。しかし、中期ヴィクトリア朝の出版業界はディケンズのように作家業だけで経済的安定を望めるほどの作家は少なく、作品を出版するということは一種の投機のようなものと認識されていたため、ディケンズの構想は実を結ぶことなく頓挫した。本論文では、ディケンズのそうした構想がどのような状況から生まれたものであるのかを分析したうえで、のち後期ヴィクトリア朝において、その構想が引き継がれ実現していく過程を考察した。もうひとつは、2018年10月20日に徳島大学において開催された、日本ハーディ協会第61回大会シンポジウムでの研究発表である。「誌上シンポジウムCandour in English Fictionを考える」と題されたシンポジウムにおいて、「ウォルター・ベザントのプロフェッショナリズム」というタイトルで研究発表を行った。発表内容は、ディケンズの構想した「作家協会」を1884年に創設させることに成功したベザントの職業意識に注目し、後期ヴィクトリア朝における職業作家の社会的立場の変化を考察した。以上、2018年は論文と研究発表において、当該研究課題の時代的文脈を整理した2017年度から考察を深め、個人作家レベルでの変化を分析した。2018年度は、論文と研究発表という形で研究成果を公開することができた。また、2018年9月においては、大英図書館へ赴き一次資料の閲覧、収集を実施した。それにより、ディケンズやベザントといった、当時の文芸雑誌を活躍の場とした作家の記事を収集することができ、議論の詳細を辿ることができた。また、2019年3月には『The Wellesley Index to Victorian Periodicals 1824-1900』という高額図書のCD-ROMを購入し、当時の主要な文芸雑誌をインデックス化した資料を考察に活用できるようになった。そのため、2019年度は一次資料に基づいたより具体的な議論が進められる予定である。まだ一次資料の詳細にあたれてはいないが、現代階ではおおむね順調に研究課題に取り組めているといえる。本年度は、文芸雑誌上の議論において見受けられる「盗作」をめぐる問題意識のあり方を、実際に雑誌に作品を投稿していた職業作家による個別の意識に関連づけて、より包括的な考察を進めていく予定である。そのために、文学の商売としての側面に意識的であったディケンズを起点として、1884年に作家協会を設立したベザントに至るまで、個別の作家の職業意識を、先行文献を参照して辿っていく。その際に必要となる資料収集作業は、本年度の夏に大英図書館へ赴くことで進めていく。
CD8陽性T細胞によるエイズウイルス増殖機構

無症候HIV-1キャリア末梢血CD8陽性T細胞には、HIV増殖を抑制する機能がある。この現象はAIDS発症後は減弱しており、明らかなCD4陽性細胞数の低下を伴わないことから、無症候期維持に重要な因子介在性の生体防御機構であると考えられている。本研究の目的は、この無症候期に存在するウイルス増殖抑制性CD8陽性T細胞の作用機序を明かにし、AIDS発症時の抑制機構破錠のメカニズムを探ることである。まず、CD8陽性細胞のHIV増殖制御を検定するため、無症候HIV感染者末梢血リンパ球を用いた試験管内HIV感染実験系を確立した。さらに判定を単純化するためにdideoxy nucleoside(ddN)を用いて試験管内再感染を排除する実験系を作成した。これらを用いて無症候HIV-1感染者の末梢血リンパ球でのHIV-1複製を調べた。この結果、実験株HIV-1の初回複製サイクルはウイルス粒子産生に至るが、その後急激に産生が減少し、2回目以後の複製サイクルは強く抑制されることが分かった。これは基本的には培養中の再感染の抑制が主体であり、このメカニズムは子孫ウイルスの感染性の低下によることが示唆された。CD8陽性T細胞の除去により、この抑制は完全に阻止され、抑制には感染細胞とCD8陽性T細胞の細胞接触が不可欠であった。これらのことから、細胞障害性T細胞とは異なるが細胞接触を必要とする新しいメカニズムの存在が示唆された。
外科手術療法と抗腫瘍エフェクター移入療法の併用による新しい消化器癌治療法確立の試

さらに胃癌患者から得た脾細胞からもinterleukin 2(IL-2)存在下で臨床病期にかかわらず非癌患者の脾細胞と同様か、それ以上の活性を有するLAK細胞を誘導できることも確認した。すなわち脾臓内でのLAK前駆細胞は坦癌末期まで温存されている可能性が高くこのエフェクターの臨床応用も充分可能を考えられた。そこで臨床応用をめざして抗腫瘍活性を高め、さらに大量のエフェクターを得るための条件も検討し、その結果、抗腫瘍活性を低下させずに細胞数を約十倍に増加させることが可能であることがわかった。さらにその応用例として切除不能肝癌患者の脾細胞からLAK細胞を誘導し、これを肝動脈内カテーテルより移入して一過性ではあるが血中α-fetoprotein値の著明な低下を認め、抗腫瘍効果が認められた例も報告した。このようなエフェクターをin vitroで誘導するのではなくもっと効率的に担癌生体内で誘導させようと考えてマウスのモデルでIL-2の脾内注入を行ない、通常の静脈内投与や腹腔内投与よりも有効であることも確認した。現在さらにその臨床応用として消化器癌根治手術時に脾動脈注を行ないここからIL-2を持続投与して効率よく生体内でLAK細胞を誘導する方法を検討中である。
メタノール処理を伴うクリーンコール製造法の開発

本研究では安価なクリーンコール製造プロセスの開発を目的として、メタノールを利用した穏和な石炭前処理を伴う選炭法を検討した。14種類の石炭が室温で所定時間メタノール中で処理された。メタノール処理した石炭は粉砕されやすくなり、圧縮破壊強度も半分程度に低下した。ボールミルによる粉砕性は未処理単に比べて著しく高くなった。例えば、試料をボールミルで5分間粉砕したところ0.15mm以下の粒子の含有割合は、Yang-song炭,Ebenezre炭,Datong炭,Newland炭およびRamagundu炭に対してそれぞれ、20.8から50.3%、44.4から87%、32.6から42.6%および2.0から6.4%に増加した。メタノール前処理による粉砕性向上効果は全ての石炭において認められたが、効果の程度は炭種によって異なった。すなわち、もともと粉砕されにくい石炭においてメタノール処理の効果が大きいことが明らかとなった。走査型電子顕微鏡観察によって、メタノール処理によって石炭中には多数の亀裂が生ずることが分った。CC-SEM観察から、メタノール処理した石炭を選炭することによって、鉱物質を効率よく単離出来る可能性があることが分かった。粉砕石炭を比重分離したところ、メタノール処理によって有機質回収率および鉱物質除去率が向上することが分かった。例えば、Yang-song炭の場合、灰分除去率をそれぞれ85、90,95%とすると、有機質回収率は未処理炭の場合、それぞれ78、59、32%であるのに対し、メタノール処理炭の場合はそれぞれ92、80、53%となった。また、メタノール処理を施すことにより、粒子径の小さい範囲の比重1.6以上のフラクションでのFe2O3の含有割合が多くなり、処理によってより選択的な粉砕が行われることが分かった。処理炭中の有機硫黄を捕捉するためにはカルシウムの添加が必要となる。カルシウム化合物と石炭チャーとの高温下での相互作用を明らかにした。CaOはチャー中の炭素質と950°C程度から反応を開始し、1600°C付近では顕著な黒鉛化促進効果を発現した。実験に用いたいずれの炭種においても、メタノール処理することにより圧縮破壊強度の低下、粉砕性の向上が認められた。楊村炭の場合、処理炭の粉砕特性はメタノール処理時間に依存し、処理時間が長いほど、粉砕されやすくなった。メタノール処理の効果は炭種に依存し、大同炭の場合、粉砕特性は処理時間にほとんど影響されなかった。また、粉砕時間を変えた実験から、未処理炭では表面粉砕が、処理炭では体積粉砕が進行することが示唆された。SEM観察から処理炭には多くの亀裂が生じていることが分かり、メタノール処理によって粉砕性が向上した原因の一つは、処理によって石炭内部に亀裂が生じたことによるものと考えられる。本研究では安価なクリーンコール製造プロセスの開発を目的として、メタノールを利用した穏和な石炭前処理を伴う選炭法を検討する。本年度は、高度選炭を実現するため、石炭中に存在する鉱物質の分散状態をCCSEMにより調べるとともに、粉砕後の試料中の鉱物質の分離状態に対するメタノール処理の効果を検討した。更に、鉱物質除去するための分離法として、カラム浮選法および比重分離法を実験的に検討した。1)メタノール処理によって石炭の粉砕性が著しく向上することが使用した中国炭においても顕著に認められた。

2)未処理石炭およびメタノール処理石炭を粉砕した後、CCSEMによって観察したところ、メタノール処理を施すことにより石炭質を含まない無機鉱物質のみからなる粒子が増加することが明らかとなり、メタノール処理を行うことによって粉砕時に鉱物質は石炭質から効率よく単離されることが分かった。3)メタノール処理による鉱物質の分離効果は、鉱物質の種類に依存せず、Kaolinite,Pyriteなどの主要な鉱物質で顕著に認められた。4)メタノール処理した石炭を用いてカラム浮選や比重分離を行うことにより、石炭質回収率および鉱物質除去率を向上させることが出来る。例えば、脱灰率を90%に設定すると、石炭質回収率は、未処理炭では59%であるのに対し、メタノール処理炭では80%となり、処理の効果が顕著に認められた。本研究では新規なクリーンコール製造プロセスの開発を目的として、メタノールを利用した緩和な石炭前処理を伴う選炭法を検討している。石炭をメタノールで前処理すると、石炭質の機械的強度が低下して紛砕され易くなり、更に石炭質と鉱物質との界面での密着性が緩和され、紛砕時に鉱物質が効率よく分離除去されることが期待できる。そこで本年度は、本処理法を幅広い炭種に適応させるために9種類の石炭を用いてメタノール処理を行い、炭種の影響を検討した。更に、高度選炭を実現するため、紛砕後の石炭粒子に含有される鉱物質及び硫黄分の分布状態を篩い分けおよび比重分離した試料について調べた。また、これまでの検討により、メタノール処理によって石炭中に含まれる微量金属が溶出することが確認できたため、6種類の石炭を用いて、金属溶出に対するメタノール処理の影響を明らかにした。研究成果を以下の通りである。1)いずれの炭化度の石炭においても、メタノール処理の効果は認められる。処理の効果は元々紛砕しにくい石炭において大きい。2)メタノール処理の効果は、石炭粒子径が大きい場合に顕著である。3)メタノール処理を行うことによって、鉱物質の選択的紛砕が行われ、粒子径が小さく比重の大きなフラクションに鉄分が多く含まれる。4)メタノール処理を施することにより、紛砕後、硫黄分は小さな粒子径のフラクションに濃縮される。5)メタノール処理中に金属の一部は溶出し、FeおよびCaの溶出量が多い。本研究では安価なクリーンコール製造プロセスの開発を目的として、メタノールを利用した穏和な石炭前処理を伴う選炭法を検討した。石炭を粉砕後、鉱物質を分離することによって石炭質を回収する場合、石炭質と鉱物質との界面で粉砕することができれば、高効率な選炭プロセスが可能となる。本処理法の効果に対する炭種の影響を検討するとともに、鉱物質及び硫黄分の分布状態について調べた。12種類の石炭を用いてメタノール処理の粉砕性向上効果に対する炭種の影響を詳細に吟味した。試料をボールミルで5分間粉砕したところ、未処理炭の場合に比べて処理炭の粒子径は著しく小さくなり、メタノール前処理による粉砕性向上効果が全ての石炭において認められた。未処理炭と処理炭の粉砕試料の250μm以下の重量割合の比(X_<treat>(-250μm)/X_<untreat>(-250μm))をメタノール処理の効果とすると、処理の効果とX_<untreat
子宮内胎児発育遅延における胎盤アミノ酸輸送の研究

1:正常妊娠,子宮内胎児発育遅延,妊娠高血圧症候群(子宮内胎児発育遅延の合併なし),妊娠高血圧症候群(子宮内胎児発育遅延を合併)の胎盤systemA活性の比較検討。正常コントロールとして正常妊娠の胎盤(n=9),症例群として子宮内胎児発育遅延(n=5),妊娠高血圧症候群(子宮内胎児発育遅延の合併なし:n=10),妊娠高血圧症候群(子宮内胎児発育遅延を合併:n=5)の新鮮胎盤の小絨毛片を採取した。これら4群の胎盤小絨毛片における経時的system A活性(20,30,40,60,120,180,240分間)を調べ比較検討した。また,小絨毛片の組織傷害を評価するため,培養液中の乳酸脱水素酵素を測定した。(結果1)正常胎盤に比較して,子宮内胎児発育遅延の胎盤の小絨毛片におけるsystem A活性は全ての時間で有意に低下していたが,子宮内胎児発育遅延の合併に関わらず,妊娠高血圧症候群の胎盤ではsystem A活性の低下は認められなかった。また,子宮内胎児発育遅延を合併した妊娠高血圧症候群の胎盤小絨毛片では子宮内胎児発育遅延に比較してsystem A活性は全ての時間で有意に高かった。(結果2)培養液中に放出された乳酸脱水素酵素は,4群間において有意差は認められなかった。2:angiotensin IIとangiotensin II type 1 receptor(AT1-R blocker)が4群の胎盤のsystemA活性に与える影響の検討。angiotensin IIは正常妊娠の胎盤(n=3),症例群として子宮内胎児発育遅延(n=3),妊娠高血圧症候群(子宮内胎児発育遅延の合併なし:nニ3),妊娠高血圧症候群(子宮内胎児発育遅延を合併:n=3)の4群全ての胎盤小絨毛片のsystem A活性を低下させた。また,このsystem A活性の低下は,AT1-R blockerにより阻害された。angiotensin IIはAT1-R活性化により胎盤のsystemAアミノ酸輸送清性を低下するが,子宮内発育遅延においてみられるsystem Aアミノ酸輸送活性の低下がAT1-R活性化によるものか,今後更なる検討が必要である。system A活性が直線的に増加する時間の範囲を知るため、経時的にNa依存性のC^<14>-MeAIBの取り込み実験を行った。Insulinはsystem A活性を上昇させ、またouabainはsystem A活性を低下させた。angiotensin IIで処理した小絨毛片ではコントロールに比べてC^<14>-MeAIBの取り込みが低下しており、その取り込み低下はAT1-R blockerにより阻害された。Angiotensin IIは用量依存性にsystem A活性を低下させた。小絨毛片の健常性の評価のため培養液中に放出された乳酸脱水素酵素の濃度を調べた。2:AT1-R活性化によるsystem A活性の低下と活性酸素障害の関連性の評価angiotensin IIによるsystem A活性の低下は抗酸化物質により抑制されなかった。3:AT1-R活性化によるsystem A活性の低下とNa^+-K^+ ATPase活性の関連性の評価Na^+-K^+ ATPase活性をouabain(1mM)により阻害されるRb^<86>の小絨毛片への取り込みの程度により評価した。AT1-R活性化によりNa^+-K^+ ATPase活性は低下した。4:AT1-R活性化によるsystem A活性の低下と小絨毛片内の血管収縮の関連性の評価1:正常妊娠,子宮内胎児発育遅延,妊娠高血圧症候群(子宮内胎児発育遅延の合併なし),妊娠高血圧症候群(子宮内胎児発育遅延を合併)の胎盤systemA活性の比較検討。
アポリポ蛋白Eを標的としたアミロイドーシス診断法開発の基礎検討

アミロイドーシスの診断は生検によりなされるが、これは侵襲的であること以外に生体のアミロイド沈着量、その局在を評価できない欠点がある。本研究では、すべてのタイプのアミロイド沈着に存在する成分、アポリポ蛋白E(アポE)に注目し、標識抗アポE抗体を投与することによりアミロイド沈着の局在診断の可能性を検討することを目的とした。背景には、アミロイド沈着内で断片化したアポE部分を特異的に認識するモノクロナル抗体を得ていたこと、ヒトアポEを発現するノックインマウスを供与されたことによる。抗体のF(ab)2化やアイソトープ標識の基礎検討を経て、標識抗体をアミロイドーシス惹起マウスに投与した。アミロイドーシス含マウスの脾、肝、腎、消化管に放射活性は有意に高く集積すし、組織学的にも脾のアミロイド沈着部分に弱いながら結合することが確認され、抗体がin vivoでアミロイド沈着に結合することが示された。ただし、流血バックグラウンドの放射活性が高く、イメージングへの応用には進むことができなかった。またアミロイド沈着への取り込みにより抗体の半減期が短縮することを期待したが、当該マウスでその成績は得られなかった。この抗体投与による、アミロイドーシス予防効果、沈着吸収の促進効果は確認されなかった。成績を全体的に考察するとこの戦略の妥当性は示唆されたが、抗体の親和性が弱いことが懸念され、現在のところは複数の抗体を採取して、再検討する段階である。ヒトへの応用についてはマウスレベルでのさらなる検討が必要と考える。本研究の最終目的はイムノターゲッティングによるアミロイド沈着の体内診断法開発である。アポリポ蛋白Eは、全ての型のアミロイド沈着に存在していることから、体内診断や治療の標的となる可能性がある。今年度は、ヒトアポリポ蛋白Eを発現するマウスに炎症刺激を与えAAアミロイドーシスを惹起する系の確立を検討し、すでに樹立してある断片化ヒトアポリポ蛋白Eに対するマウスモノクロナル抗体YK-2をアミロイド担マウスに投与し、アミロイド沈着に結合するかを免疫組織化学的に検討した。三菱化学生命科学研究所、藤田博士より給与されたヒトアポリポ蛋白Eのアイソフォーム2,3,4型それぞれを発現するマウスにアミロイドを惹起したところ、2型の系列で易誘発性であった。これはアポEの血中濃度も高いことに符号していた。その後の実験には2型アポE発現マウスを用いた。投与された抗体YK-2は脾臓のアミロイド沈着周囲に検出され、抗体が確かに組織へ到達、結合することが示された。さらに、抗体を125I標識し、組織への集積をみた実験では、対象マウスに比べ、アミロイドマウスの脾臓、肝臓、腎臓、小腸の各臓器で有意に高い集積を認め、特異的な結合が示唆された。しかし、血液や実質臓器の残存放射活性も高く、抗体のクリアランスを速める工夫が必要と考えられた。今後はアイソトープ標識実験における抗体の低分子化の検討、体表シンチグラフィーへと発展させたい。アミロイドーシス治療の一つとしてアミロイド成分に対する抗体の応用が、アルツハイマー病などで試行されている。本研究では全ての型のアミロイド沈着内に存在するとされるヒトアポリポ蛋白E(アポE)に注目し、これを標的としたアミロイドの局在診断、治療を目指した。昨年度と本年度の研究で、既に作製してあるヒトアポEの断片部位を認識するマウスモノクロナル抗体、YK-2をアイソトープ標識して、アミロイドーシスを惹起したヒトアポEノックインマウスに投与し、抗体がアミロイド組織に到達することを確認した。この結果をフランス、ツールにおける国際アミロイドーシスシンポジウムで発表した。それまでの結果から、抗体は確かに結合するものの比較的早期に解離することが示唆され、これは抗体の結合力によるものと考えた。

よって本年度は抗体の結合力を間接的に評価する目的で、抗体投与によりこのマウスのアミロイドーシス惹起が抑制されるか調べた。実験条件はマウスにAEF(アミロイド促進因子)とアジュバントを腹腔投与し、4日後より週1回、計6週にわたり抗体を皮下投与するというものであったが、充分な抑制効果は得られなかった。よって本抗体の結合力は強くないものと推察された。本研究では全ての型のアミロイド沈着内に存在するとされるヒトアポリポ蛋白E(アポE)に注目し、これを標的としたアミロイドの局在診断、治療を目指した。一昨年度の研究で、既に作製してあるヒトアポEの断片部位を認識するマウスモノクロナル抗体、YK-2をアイソトープ標識して、アミロイドーシスを惹起したヒトアポEノックインマウスに投与し、抗体がアミロイド組織に到達することを確認した。昨年度は抗体投与によりマウスのアミロイドーシス惹起が抑制されるか調べたが充分な抑制効果は得られなかった。以上の結果を考察して、研究全体のストラテジーは正しいが、抗体YK-2のアミロイド組織内アポEへの結合力が充分ではないと判断した。そこで本年度は結合力の充分な抗アミロイド抗体を取得することを目的とした。ヒトアポE発現マウスに通常の方法でアミロイドーシスを惹起し、沈着臓器を取り出し、水抽出法でアミロイド線維を調整した。これをBalb/cマウスに免疫し、ヒトアポE、またはヒトアポEが会合したアミロイド組織成分を異物と認識して抗体を誘導することを期待した。ポリクロナル抗体のレベルでは免疫源に反応することを確認しているが、モノクロナル抗体としては取得のための実験中であり、現時点では初期スクリーニングの段階で有望なクローンは得られていない。今後もモノクロナル抗体取得を続け、その結合力の評価には分子間相互作用解析装置(ビアコア)を使用する予定である。
ショウジョウバエα７様アセチルコリン受容体の集積機構

神経伝達物質受容体のシナプスへの集積は、正常なシナプス機能の発現に重要な役割を果たす。シナプスにおける細胞内足場タンパク質のみならず、シナプス間隙に局在する細胞外タンパク質によっても、受容体のシナプス局在が制御を受けていることがわかっている。研究代表者らは、ショウジョウバエにおけるシナプス間隙タンパク質Hikaru genki (Hig)が中枢アセチルコリン受容体(AchR)の局在制御を行っていることを示してきた。しかしながら、具体的にどのようにHigがAchRの局在を制御しているかは不明であった。これまでの研究において、以下の点が明らかにされていた。hig機能喪失型突然変異体ではDα6とDα7 AchRサブユニットのシナプス局在レベルの低下が見られる。興味深いことに、hig変異体におけるDα6局在レベルの低下は、Dα5 AchRサブユニットの機能喪失型変異体によって回復する。また、Dα5単独変異体においても、Dα6およびDα7のシナプス局在レベルが野生型と比較して上昇する。このことから、Dα5は他の受容体サブユニットの局在レベルを調節する因子であると考えられ、H29年度に見出したHigによるDα5のエンドサイトーシス制御がこれに関与すると考えられる。hig変異体におけるDα5変異は、Dα6サブユニットのシナプス局在レベルの上昇のみならず、hig変異体が示す表現型である活動性の低下や寿命の短縮も救済する。これらのことから、アセチルコリン受容体のシナプス局在レベルの低下が、hig変異体が示す活動性の低下と寿命短縮の原因であると考えられた。本年度の研究において、hig変異体においてDα6またはDα7を過剰発現させることで、hig変異体の寿命短縮を一部救済することを見出し、上記の考察を裏付ける結果を得た。以上により、AchR局在制御におけるHigの役割の一端を明らかにした。私たちは、ショウジョウバエにおけるシナプス間隙タンパク質Hikaru genki (Hig)が中枢アセチルコリン受容体(AchR)の局在制御を行っていることを示してきた。これまでの研究で、hig機能喪失型突然変異体ではDα6とDα7 AchRサブユニットのシナプス局在レベルの低下が見られることがわかっていた。興味深いことに、hig変異体におけるDα6局在レベルの低下は、Dα5機能喪失型変異体によって回復する。Dα5, Dα6, Dα7は、いずれも脊椎動物のα7受容体と相同性が高いα7様サブユニットである。Higがどのようにこれらα7様受容体を制御しているかを明らかにすることを本研究の目的とした。リアルタイムPCRを用いてDα6の発現量を調べたところ、Dα5変異体において顕著な増加は見られなかった。このため、Dα5変異が他の受容体サブユニットの発現レベルを代償的に上昇させるということはなく、他の理由でDα6シナプス局在レベルが上昇すると考えられた。本年度の研究において、hig変異体脳においてDα5を強制発現させると、Dα5の異常なエンドサイトーシスが引き起こされることを見出した。同様の現象はDα6およびDα7の強制発現では起こらず、HigはDα5のエンドサイトーシスを制御することでAchRシナプス局在レベルを調節していると考えられた。本研究により、シナプス間隙タンパク質によるAchR局在制御メカニズムの一端が明らかになることが期待される。本研究課題は、シナプス間隙タンパク質Higによるアセチルコリン受容体(AchR)局在制御メカニズムの解明を主題としている。これまでに、hig機能喪失型突然変異体では、Dα6とDα7 AchRサブユニットのシナプス局在レベルの低下が見られていた。また、hig変異体におけるDα6のシナプス局在レベルを回復させるサプレッサー変異としてDα5変異体が得られていた。Dα5, Dα6, Dα7は、いずれも脊椎動物のα7受容体と相同性の高いサブユニットであり、これらの間での相同性も高い。本研究は、これらサブユニットの局在制御の解明を目的としているため、これらの間で交差しない特異抗体が必要である。これまでに用いていた抗体の特異性を、それぞれのNull変異体および過剰発現個体を用いた染色により確認した結果、Dα5抗体およびDα7抗体は、いずれもDα5とDα7両方を認識することがわかった。このためそれぞれを特異的に認識する抗体を新たに作製するために、これまでと異なる部位のペプチドを抗原として再度抗体作製を行った。その結果、各サブユニットと交差しない特異抗体をそれぞれ得ることに成功した。これにより、3種類のサブユニットを染め分けることが可能となった。また本年度においては、hig変異体下でDα5を強制発現させるとDα5が異常なエンドサイトーシスを引き起こすことを見出しており、このことはHigを介したAchR局在制御メカニズムを解明する上で重要な知見を与えると考えている。各α7様受容体の特異抗体を用いた解析により以上の点の詳細を明らかにし、平成30年度中に本研究内容を論文にまとめる予定である。

神経伝達物質受容体のシナプスへの集積は、正常なシナプス機能の発現に重要な役割を果たす。シナプスにおける細胞内足場タンパク質のみならず、シナプス間隙に局在する細胞外タンパク質によっても、受容体のシナプス局在が制御を受けていることがわかっている。研究代表者らは、ショウジョウバエにおけるシナプス間隙タンパク質Hikaru genki (Hig)が中枢アセチルコリン受容体(AchR)の局在制御を行っていることを示してきた。しかしながら、具体的にどのようにHigがAchRの局在を制御しているかは不明であった。これまでの研究において、以下の点が明らかにされていた。hig機能喪失型突然変異体ではDα6とDα7 AchRサブユニットのシナプス局在レベルの低下が見られる。興味深いことに、hig変異体におけるDα6局在レベルの低下は、Dα5 AchRサブユニットの機能喪失型変異体によって回復する。また、Dα5単独変異体においても、Dα6およびDα7のシナプス局在レベルが野生型と比較して上昇する。このことから、Dα5は他の受容体サブユニットの局在レベルを調節する因子であると考えられ、H29年度に見出したHigによるDα5のエンドサイトーシス制御がこれに関与すると考えられる。hig変異体におけるDα5変異は、Dα6サブユニットのシナプス局在レベルの上昇のみならず、hig変異体が示す表現型である活動性の低下や寿命の短縮も救済する。これらのことから、アセチルコリン受容体のシナプス局在レベルの低下が、hig変異体が示す活動性の低下と寿命短縮の原因であると考えられた。本年度の研究において、hig変異体においてDα6またはDα7を過剰発現させることで、hig変異体の寿命短縮を一部救済することを見出し、上記の考察を裏付ける結果を得た。以上により、AchR局在制御におけるHigの役割の一端を明らかにした。3種類のα7様AchRサブユニット(Dα5, Dα6, Dα7)のうち、Dα5のみがHig非存在下で異常なエンドサイトーシスを引き起こすことが本年度の研究で明らかになった。hig変異体脳では、Dα5, Dα6, Dα7いずれのサブユニットもシナプス局在レベルが低下している。しかしながら、免疫組織学的解析から、HigはDα6とは直接相互作用しないことを示唆するデータが得られた。このため、Dα6はHigによって間接的に制御を受けていると考えられる。アセチルコリン受容体はホモまたはヘテロ5量体を形成し、Dα5, Dα6, Dα7もヘテロ複合体を形成することが示唆されている。このため、hig変異体では、Dα5のエンドサイトーシスに伴い、ヘテロ複合体を形成するDα6の局在レベルが低下すると考えられる。以上の点を明らかにするために、今後の研究予定としては免疫共沈降実験を主に行っていく。2016年に報告した論文では、Dα6の免疫沈降によりHigが共沈降することを示していたが、これはDα5/ Dα6複合体を介したものであった可能性がある。そこで、Dα5変異体サンプルにおいて同様のDα6免疫沈降実験を行うことで、Higの共沈降に変化が見られるかどうかを調べる。また、強制発現させたDα6はhig変異体においても正常に局在することがわかっている。