hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
重症薬疹(SJS,TEN,DIHS)の長期予後と既往歴

SJSとTENは2015年に指定難病となり、新しい臨床調査個人票は2017年度に厚労省で入力開始され、2018年に利用申請の受付が開始される予定であったが、2019年に延期された。指定難病データベースも分析予定である。1.重症薬疹(SJS、TEN、DIHS)のレセプトデータは入手した。併せて健康診断結果のデータも入手した。回復後の長期予後と発症前の詳細な罹患歴や薬剤投与歴を確認する。いずれも最大10年間について確認する。2. SJSとTENの全国疫学調査を開始し現在回収中である。2007年実施した全国調査結果と比較する。3. SJSとTENは2008年10月に重症多型滲出性紅斑(急性)として厚労省難治性疾患政策研究事業治療研究対象疾患となった。医療費の自己負担分軽減のため申請時に提出される臨床調査個人票データは20092014年分が厚労省に累積されており、利用申請し入手した。SJSとTENは2015年に指定難病となり、新しい臨床調査個人票データは2018年に利用申請の受付が開始される予定であったが、延期されたので、2019年度に利用申請する。1.入手したレセプトデータと健康診査結果を用いて重症薬疹(SJS、TEN、DIHS)回復後の長期予後と発症前の詳細な罹患歴や薬剤投与歴について最大10年間の確認をする。健康診断結果も加えて分析する。2.SJSとTENの全国疫学調査を継続し、2007年に実施された全国調査結果と比較する。DIHSについては過去に実施した全国調査結果を再分析する。3.指定難病臨床調査個人票データベースは厚労省で入力作業が進められ2018年度よりデータの使用が可能になる予定であったが、利用申請の受付は2019年度に延期されたため、今年度利用申請し分析を開始する。2020年度はSJSとTENのレセプトデータ、現在進行中の全国疫学調査と過去の全国調査結果、指定難病データベースの4種類のデータソースを用い、DIHSは2013年の全国調査とレセプトデータの2種類を用いて重症薬疹(SJS、TEN、DIHS)の長期予後と既往歴の確認を行った結果をまとめ、発表する。本年度は自分で作業を行ったため人件費の支出がなかった。来年度はデータ整理のために人件費を支出する予定である。
HIV-1インテグレースの感染初期過程における機能の多様性

目的:本研究では、種々の正常人末梢血由来のリンパ球およびマクロファージを感染標的細胞として用いてHIV-1インテグレース変異株を解析し、インテグレースの新たな機能(核移行機能等)の有無を検討することを目的とした。方法:HIV-1インテグレース内の燐酸化酵素のターゲットとなりうるモチーフあるいはその他の保存アミノ酸に点変異を導入した変異HIVを作製し、各変異の影響を種々のヒト末梢血由来のリンパ球あるいはマクロファージを感染標的細胞としてもちいてウイルス学的に解析した。核移行機能の検討は、その機能が知られているVpr欠損HIV-1を核移行欠損コントロールウイルスとして用い、HlV-1感染成立において核移行機能を強く要求されると考えられる非分裂細胞としてヒト末梢血単核球由来のマクロファージを感染標的細胞として用いた。結果:1.PKCあるいはCKIIによるインテグレースのリン酸化の関与に関しては、若干の組み込み反応の低下が認められる(T66,T93)ものも得られたが、criticalではないと思われた。2.HIV-1インテグラーゼのNLSと考えられていたKRKモチーフ(K186-188)は、機能的には核移行ではなく逆転写反応に関与しているものと考えられた。3.Y143G変異体は、MDMにおいて感染効率が顕著に低下するという、vpr欠損変異体に酷似した表現系を示し、非分裂細胞における感染効率維持に重要なアミノ酸であることが示された。また、GFP-融合インテグレースはHeLa細胞内において強い核極在性を確認した。考察:HIV-1の感染初期過程におけるインテグレースの新たな機能として、プレインテグレーション複合体の核内移行と逆転反応の完結に関与している可能性が示唆され、両反応は互いに相関しておこるように思われた。またNLSドメインに関しては、再検討の必要性が示された。
皮膚の毛細血管・AVA血流量増加と食物摂取時の体温

食物摂取は体熱産生の亢進を引き起こし体温上昇の結果、体温調節反応に影響する。本研究では、手指を冷水浸漬したときの寒冷血管拡張反応(CIVD)中の皮膚血流量、皮膚温などの生理学的応答におよぼす食事摂取(700kcal)の効果、および同一熱量で異なる食物組成(高炭水化物食:C、高蛋白質食:P)の効果を無摂取(N)と比べて明らかにすることを目的とした。実験は室温25±0.5°C、湿度40±3%に調節された人工気象室で、健康な成人7名を被験者として行った。食後60分、5°C冷水浸漬直前の口腔温は無摂取に比べC,Pいずれを摂取した場合も0.2°Cの上昇であり、組成の違いによる差は認められなかった。指皮膚温の変化はCIVD指数(冷水浸漬中最低温を示した時点から上昇した毎分皮膚温-毎分水温の合計)では食事摂取により高値を示し、P摂取ではNに比べ有意に高かった。この上昇の原因はCIVD発現開始時間の短縮(C,Pで有意)、CIVD発現温度の上昇(Pで有意)、浸漬中の最高皮膚温の上昇(Pで有意)であり、CIVD幅には差が見られなかった。レーザー・ドップラー血流計にて測定した指皮膚血流量は、CIVD時には著明に増加しその大きさはC>P>Nの順であった。浸漬中の皮膚血流量は三条件間に差が認められなかった。一方、浸漬後にはP>C>Nの順となりNとC,NとPそれぞれの条件間差は有意であったが、食物組成の違いによる差異は認められなかった。静脈閉塞法による指の全血流量測定との同時計測も試みたが、極度の低水温のため正確な測定は困難であった。しかし、低皮膚温のため、この血流量増加の大部分は動静脈吻合(AVA)血流量であろうと推察される。いずれの食事条件でもCIVD発現時には指皮膚血流量の著増が観察され、食物摂取による体温、皮膚温の上昇に起因する僅かな皮膚(AVA)血流量の増加が、浸漬中の皮膚温の上昇、CIVD指数の亢進につながったと考えられる。各種温熱環境条件下で、顔面および四肢の皮膚血流量が食物摂取により、如何に修飾されるか解明することを目的に行なった。食物を摂取した時(摂取時)と、摂取しない時(絶食時)に全身のサーモグラムを立位にて撮影し、その画像から前面、背面の計21ケ所について皮膚温を測定した。その結果、絶食時に比べ700kcal摂食時に皮膚温の上昇が観察された部位は、体幹部前面(胸・腹部)、手掌、大腿、下腿、足、背部であった。特に手掌、足、背部では著明な上昇が観察され、AVA血流量の増加が示唆された。これに対し、摂食による効果が認められなかった部位は、顔面、前腕、手背であった。これらの中には、各皮膚部位で前面と背面で著しい差異のあった例があり、個人による特徴的な変化が複雑に絡み合っていることが示唆された。今回の実験では、個人内変動の大きさも考慮するため、同一個人について各条件に実験を4回ずつ繰り返し観察した結果、環境条件等その他の要因が一定であれば個人内変動は極めて小さいことが判明した。摂食による体熱出納の変化時でも、心拍数、血圧には有意な変化が観察されなかったことより、摂食による循環系への負荷は極めて小さいことが示唆された。今年度の結果から、AVAの存在する手、足の皮膚温変化が著明であったが、顔面では全体として解析した結果、有意な変化は認められなかった。AVAが存在する顔面の限局された部位について、再度サーモグラムを詳細に検討を進めている。

静脈閉塞法による指の全血流量測定との同時計測も試みたが、極度の低水温のため正確な測定は困難であった。しかし、低皮膚温のため、この血流量増加の大部分は動静脈吻合(AVA)血流量であろうと推察される。いずれの食事条件でもCIVD発現時には指皮膚血流量の著増が観察され、食物摂取による体温、皮膚温の上昇に起因する僅かな皮膚(AVA)血流量の増加が、浸漬中の皮膚温の上昇、CIVD指数の亢進につながったと考えられる。
腎微小循環および尿細管糸球体フィードバックに対するエンドセリンの効果

1.強力な血管収縮ペプチドであるエンドセリン(ET)-1の昇圧量を全身的に投与しても尿細管糸球体フィードバックに変化はない.これは腎局所でETに拮抗する血管拡張性因子の放出があり,ETの作用が修飾されるためである可能性がある.今回の研究では,ETを直接,尿細管腔内に潅流し,糸球体血行動態に対する影響を検討した.3.ATF単独では,EPFRは非潅流時の28.6±5.1から14.9±4.6nl/minと有意に減少し,潅流中止後は28.8±5.8nl/minと完全に前値に復した.4.10^<-6>MのET-1を加えたATFの潅流で,EPFRは29.9±4.6から0.5±0.7nl/minと著明に減少し,潅流中止後も0.4±0.8nl/minであった.10^<-9>あるいは10^<-8>MのET-1では,EPFRに変化はなく,10^<-7>MのET-1の潅流では中間の態度を示し,EPFRは26.0±3.2から7.3±4.7nl/minに減少し,潅流中止後13.0±4.7nl/minに回復した.6.尿細管と糸球体の唯一の接点は傍糸球体装置であることから,ET-1が密集斑から傍糸球体装置を通り,血管外膜側から糸球体細動脈に作用する可能性が考えられる.また,この作用はカルシウムチャネルの活性化以外の機序を介するものである可能性も示唆される.1.強力な血管収縮ペプチドであるエンドセリン(ET)-1の昇圧量を全身的に投与しても尿細管糸球体フィードバックに変化はない.これは腎局所でETに拮抗する血管拡張性因子の放出があり,ETの作用が修飾されるためである可能性がある.今回の研究では,ETを直接,尿細管腔内に潅流し,糸球体血行動態に対する影響を検討した.3.ATF単独では,EPFRは非潅流時の28.6±5.1から14.9±4.6nl/minと有意に減少し,潅流中止後は28.8±5.8nl/minと完全に前値に復した.4.10^<-6>MのET-1を加えたATFの潅流で,EPFRは29.9±4.6から0.5±0.7nl/minと著明に減少し,潅流中止後も0.4±0.8nl/minであった.10^<-9>あるいは10^<-8>MのET-1では,EPFRに変化はなく,10^<-7>MのET-1の潅流では中間の態度を示し,EPFRは26.0±3.2から7.3±4.7nl/minに減少し,潅流中止後13.0±4.7nl/minに回復した.6.尿細管と糸球体の唯一の接点は傍糸球体装置であることから,ET-1が密集斑から傍糸球体装置を通り,血管外膜側から糸球体細動脈に作用する可能性が考えられる.また,この作用はカルシウムチャネルの活性化以外の機序を介するものである可能性も示唆される.
野生オランウータンを対象とした社会的知性仮説の検証

本研究では「群れで生活する他の霊長類と比べて、より遠くにいる他個体のおかれた状況や他個体の意図を理解する為に、オランウータンは高い認知能力を用いている」という申請者が着想した新たな仮説を検証することが目的である。本年度は現地での調査許可の更新の為、平成23年45月に10日間、マレーシアに渡航するとともに、果実季(平成23年8月)および非果実季(平成24年10月、平成25年2月および平成25年3月)に計4回、38日間マレーシアに渡航し、マレーシア国サバ州のダナムバレー森林保護区において、フィールドワークに従事した。フィールドワークは、2名の調査補助者と研究者で1組の追跡チームを編成し、熱帯雨林の中で野生のオランウータン追跡し、行動観察の記録とGPSデータを収集した。またオランウータンの行動に影響を与える生態学的な要因として、地域の果実生産量を調べるために、落下果実を拾って結実した木の本数と種類を定量的に測定する「落下果実センサス」を調査補助者が毎月行い、資料を収集した。マレーシアでフィールドワークをしている期間以外は、日本において、今まで収集した行動観察記録、写真や映像、およびGPSデータの整理、入力、分析を作業をすすめた。今まで主に現地で使用していたノートパソコンが壊れた為、今年度新たに1台ノートパソコンを購入した。また収集した資料の整理とパソコンへの入力作業のために、謝金を支払って調査補助者を日本国内において雇用した。昨年度から本年度5月までは出産育児の為に採用を中断したので、本年度が実質1年目にあたる。研究再開後、7月にインドネシアで開催された国際ワークショップで発表し、9月に京都で開催された国際霊長類学会で発表を行い、共同研究者らと打ち合わせを行った。年度後半には共同研究者と共著論文を執筆すると共に、非果実季(平成22年10月11月および平成23年12月)に計28日間マレーシアに渡航し、マレーシア国サバ州のダナムバレー森林保護区において、フィールドワークに従事した。フィールドワークは、4名の調査補助者と研究者で2組の追跡チームを編成し、熱帯雨林の中で野生のオランウータン2個体を同時に追跡するという手法を用いた。これにより、(1)オランウータンは他個体から何m離れた場所で、その個体に接近するかしないか、を決めるのか、(2)他個体に接近するかしないかを決定する生態学的、社会的要因は何か、を明らかにするための、行動観察の記録とGPSデータを収集した。今まで使用していたGPSとビデオカメラが故障した為に、今年度新たに1台づつ購入した。また本調査の資料収集は、2個体を同時に追跡するという方法をとるため、申請者単独では不可能である。この為、現地にて訓練された調査補助者が最低でも4人必要なので、謝金を支払って雇用した。本年度は年度前半に、現地での調査許可の更新の為、平成23年45月に2週間、マレーシアに渡航するとともに、共同研究者とオランウータンの文化的行動や、果実生産量と霊長類の生息密度の比較に関する共著論文などを執筆した。また果実季(平成23年6月7月)および非果実季(平成23年11月12月および平成24年23月)に計4回、38日間マレーシアに渡航し、マレーシア国サバ州のダナムバレー森林保護区において、フィールドワークに従事した。今まで使用していたノートパソコンでは、ハイビジョン・ビデオカメラで撮影した映像の再生・編集を行うのに非常に時間がかかった為に、今年度新たに1台ノートパソコンを購入した。

本年度は現地での調査許可の更新の為、平成23年45月に10日間、マレーシアに渡航するとともに、果実季(平成23年8月)および非果実季(平成24年10月、平成25年2月および平成25年3月)に計4回、38日間マレーシアに渡航し、マレーシア国サバ州のダナムバレー森林保護区において、フィールドワークに従事した。フィールドワークは、2名の調査補助者と研究者で1組の追跡チームを編成し、熱帯雨林の中で野生のオランウータン追跡し、行動観察の記録とGPSデータを収集した。またオランウータンの行動に影響を与える生態学的な要因として、地域の果実生産量を調べるために、落下果実を拾って結実した木の本数と種類を定量的に測定する「落下果実センサス」を調査補助者が毎月行い、資料を収集した。マレーシアでフィールドワークをしている期間以外は、日本において、今まで収集した行動観察記録、写真や映像、およびGPSデータの整理、入力、分析を作業をすすめた。今まで主に現地で使用していたノートパソコンが壊れた為、今年度新たに1台ノートパソコンを購入した。また収集した資料の整理とパソコンへの入力作業のために、謝金を支払って調査補助者を日本国内において雇用した。本年度は、計5回53日間マレーシアに渡航し、ダナムバレー森林保護区にて野外調査を行い、資料を収集しました。また常駐している現地調査助手2名が、1年間継続して資料収集を行いました。さらに、共同研究者とともに、論文の執筆や学会や研究会等で研究発表を行いました。以上のように資料収集と研究発表に関しては順調に進展しましたが、本年度は、研究代表者が体調を崩すことが多かった為に、日本での調査データの整理、GISソフトウェアによるデータの分析を、当初予定していたようにすすめることができませんでした。今年度は、体調管理に細心の注意を払い、マレーシアでの野外調査を継続するとともに、昨年までに収集した調査データの整理・分析をすすめます。遅れている資料整理・分析を迅速にすすめる為に、必要に応じて謝金を払って補助者を雇い、資料整理を行います。また6月に横浜で開催される日本熱帯生態学会、7月に名古屋で開催される日本霊長類学会、11月に東京で開催される日本人類学会等で研究成果を発表する予定です。さらに本年度後半には、共同研究者らと、オランウータンの遊動距離や遊動ルートに関する論文を執筆、投稿する予定です。
柔軟なナノサイズ反応場を提供する配位子の開発と遷移金属触媒反応への応用

本年度は,昨年度に引き続き,柔軟なエチレングリコール鎖をもつ含窒素複素環カルベン配位子を活用する触媒反応開発を進めた.その結果,この配位子がパラジウム触媒を用いる塩化アリール類の宮浦ホウ素化反応に有効に機能することを見出した.この反応は鎖が短い配位子ではほとんど反応が進行しないことから,エチレングリコール鎖が創り出す大きな反応空間が極めて重要であることを明らかにした.一方で,配位子を使い分けることにより生成物の選択的合成が可能となる反応開発に主眼を置いた研究も平行して進めた.その結果,1,2-ジエン(アレン)を基質とした銅触媒によるシラカルボキシル化反応を検討したところ,1つの基質から異なる2つの生成物がそれぞれ選択的に得られるカルボキシル化反応を見出した.1,1-2置換アレン(1)を基質,ケイ素源としてPhMe2Si-B(pin),銅触媒前駆体として酢酸銅1水和物を用いて配位子の検討を行ったところ,かさ高い2座配位子であるrac-Me-DuPhosを用いた反応ではビニルシラン構造をもつカルボン酸(2)とアリルシラン構造をもつカルボン酸(3)の混合物が72%の収率で得られた.このとき,2がほぼ選択的に得られる結果となった.一方で,単座配位子であるトリシクロヘキシルホスフィン(PCy3)では,3が優先して得られる結果となった.この条件を元に種々検討した結果,銅の前駆体をCuCl/NaOAcに変更し,溶媒としてTHFを用いたとき3が高収率かつ高選択的に得られることが分かった.26年度が最終年度であるため、記入しない。26年度が最終年度であるため、記入しない。今回,繰り返し単位が12ならびに17のPEG鎖を導入した含窒素複素環カルベン(NHC)配位子を合成し,柔軟なエチレングリコールの鎖長が鈴木ー宮浦反応に与える影響を検証することにした.4-クロロトルエンとフェニルボロン酸を用いるカップリング反応において,1.0 mol%のパラジウム触媒存在下,リン酸カリウムを塩基とし,THF中45度の反応条件で配位子の検討を行った.エチレングリコール鎖を全くもたない(1)では反応は進行しなかった.以前に我々が開発したテトラエチレングリコール鎖を導入した配位子(2)ではわずかに反応が進行した.ここで,繰り返しが平均12のPEG鎖をもつ配位子(3)では中程度の収率となり,繰り返し17のPEG鎖を有する配位子(4)をもつパラジウム触媒で反応が効率良く進行することが分かった.このようにPEG鎖が長くなると活性が向上するという非常に興味深い結果が得られた.一方,配位子の当量を2倍にすると反応は停止した.本反応において,パラジウム/配位子の比は極めて重要な要素であることを示している.また,1にPEG鎖をもつ部分構造を添加しても反応が進行しないことから,配位子周辺部に長いPEG鎖が保持されていることが必要であることが分かった.ONIOM計算により求めた(4)を有するパラジウム錯体の最適化構造では,鎖が配位中心を覆うようなかさ高い構造が比較的安定であることが分かった.本年度は,昨年度に引き続き,柔軟なエチレングリコール鎖をもつ含窒素複素環カルベン配位子を活用する触媒反応開発を進めた.その結果,この配位子がパラジウム触媒を用いる塩化アリール類の宮浦ホウ素化反応に有効に機能することを見出した.この反応は鎖が短い配位子ではほとんど反応が進行しないことから,エチレングリコール鎖が創り出す大きな反応空間が極めて重要であることを明らかにした.一方で,配位子を使い分けることにより生成物の選択的合成が可能となる反応開発に主眼を置いた研究も平行して進めた.その結果,1,2-ジエン(アレン)を基質とした銅触媒によるシラカルボキシル化反応を検討したところ,1つの基質から異なる2つの生成物がそれぞれ選択的に得られるカルボキシル化反応を見出した.1,1-2置換アレン(1)を基質,ケイ素源としてPhMe2Si-B(pin),銅触媒前駆体として酢酸銅1水和物を用いて配位子の検討を行ったところ,かさ高い2座配位子であるrac-Me-DuPhosを用いた反応ではビニルシラン構造をもつカルボン酸(2)とアリルシラン構造をもつカルボン酸(3)の混合物が72%の収率で得られた.このとき,2がほぼ選択的に得られる結果となった.一方で,単座配位子であるトリシクロヘキシルホスフィン(PCy3)では,3が優先して得られる結果となった.この条件を元に種々検討した結果,銅の前駆体をCuCl/NaOAcに変更し,溶媒としてTHFを用いたとき3が高収率かつ高選択的に得られることが分かった.26年度が最終年度であるため、記入しない。本申請では「柔軟な触媒反応場の構築とそれらを利用した高活性触媒の開発」を目的とする.本年度は,自由度が高く柔らかい構造をもつポリエチレングリコール鎖を導入した柔らかい反応場の構築し,この反応場における触媒反応性を検証することを狙い,期待通り,エチレングリコール鎖の長さによって触媒活性が大きく変化することが分かった.

今後は,今年度得られた知見をさらに展開する.すなわち,規則正しい分岐構造をもつデンドリマーの中心に触媒反応点として含窒素複素環カルベン配位子を導入した「中心部機能化型」を基本とし,デンドリマー構造の周辺部に官能基修飾を施した複合機能化デンドリマー触媒を開発する.外表面に,酸化還元応答部位(フェロセン,キノン,メチルビオロゲン誘導体など)を導入して電子プール(またはホール)とすることで.触媒中心の酸化還元反応の制御に利用する.また,酸塩基応答部位を導入し,水中のpH勾配を利用することを試みる.
ペルオキシソームのプロテオーム解析-その機能と病態の全容解明に向けて-

ペルオキシソームの機能と病態の全容を解明することを目的として、ペルオキシソームのプロテオーム解析を行った。さらに新規タンパク質についてはその機能解析を行うとともに、ペルオキシソーム病におけるペルオキシソームタンパク質の変動を解析した。以下に新たな知見を示す。1.ラット肝より精製したペルオキシソームをSDS-PAGE後トリプシン処理し、LC-MS/MSで分析そた。その結果、新規タンパク質5種を含む65種のペルオキシソーム構成タンパク質を同定した。またその中には、RAB2、VAP-A, Bなどペルオキシソームの形成に関わることが予想されるタンパク質が見出された。2.新規タンパク質として、ペルオキシソーム型Lonプロテアーゼ、aminoglycosidephosphotransferaseドメインをもつAI987948、endozepine-related proteinホモログ、ribonucleaseと相同性をもつtumor-related protein、オルガネラの分裂に関わることが予想されるCGI-135related proteinを発見した。3.ヒトLonプロテアーゼをクローニングし、大腸菌で発現精製した。本酵素は変性タンパク質をATP依存的に分解し、ペルオキシソームタンパク質の品質管理を担う可能性が示唆された。4.ペルオキシソーム膜上に12種のペルオキシソーム形成因子を同定した。Pex3pはPex16p、Pex19pと相互作用し、ペルオキシソーム形成に重要な機能をもつ可能性を示した。5.副腎白質ジストロフィー(ALD)患者線維芽細胞において、ミスセンス変異をもつABCタンパク質ALDPの多くは、ペルオキシソーム膜上に検出されないこと、生合成後プロテアソームで急速に分解されることを発見した。新規タンパク質ならびにペルオキシソームの動態に関わるタンパク質については、動物細胞における過剰発現やsiRNAによるノックダウンにより、それぞれの機能を解析する予定である。ペルオキシソームを構成する全タンパク質を同定することを目的として、ラット肝よりNycodenz gradient centrifugationでペルオキシソームを調製し、さらに抗PMP70抗体ビーズで精製した。このペルオキシソーム分画をSDS-PAGE後、ゲルを2mm幅に断片化し、タンパク質の限定分解を行い、LC-MS/MS法で構成タンパク質の一斉分析を行った。その結果、以下の新しい知見を得た。1.精製ペルオキシソーム分画にはミトコンドリアや小胞体の混入はほとんどないことが明らかになった。未同定のタンパク質14種を含む、約100種類のペルオキシソーム構成タンパク質を約100種類同定した。2.未同定のタンパク質の1つは、その部分アミノ酸配列から大腸菌やミトコンドリアに存在するLonプロテアーゼと相同性が高いことが明らかになった。本タンパク質のC末端アミノ酸配列に対する抗体を作製し、その細胞内局在性を蛍光抗体法と免疫電顕で検討した。その結果、ラット肝ならびにヒト繊維芽細胞において、ペルオキシソームマトリックスに局在することが実証できた。3.Lonプロテアーゼファミリーに属するこのタンパク質は、ペルオキシソームタンパク質の品質管理を担う可能性が考えられる。この仮説を実証するため、ヒトcDNAライブラリーから遺伝子をクローニング中である。4.さらにペルオキシソーム膜を精製し、構成タンパク質の同定を進めている。またヒトペルオキシソーム病におけるペルオキシソーム構成タンパク質の変化を解析するため、ヒト繊維芽細胞ペルオキシソームの精製、分析条件を検討している。ペルオキシソームのプロテオーム解析ならびに新たに同定されたタンパク質の解析を行い、以下の新知見を得た。1.ラット肝よりペルオキシソームを精製後、Na_2CO_3法で膜分画を調製し、ペルオキシソーム膜を構成するタンパク質の網羅的解析を行った。その結果、20種のペルオキシソーム膜タンパク質を同定した。

その内、12種がペルオキシソー形成因子(Pex)、3種がABCタンパク質、2種が脂肪酸CoA合成酵素、3種がトランスポーターと推定されるタンパク質であった。また、これらタンパク質の量比も推定可能になった。主たるペルオキシソーム膜構成タンパク質の構成が初めて明らかになった。2.昨年度、ペルオキシソームマトリックスにペルオキシソーム型Lonプロテアーゼが存在することを発見した。本年度、ヒト肝cDNAライブラリーより本遺伝子をクローニングし、大腸菌での大量精製系ならび哺乳動物細胞系を構築した。Lonプロテアーゼファミリーに属するタンパク質は、変性タンパク質を分解し、タンパク質の品質管理を担う可能性が推定されている。よって、ペルオキシソーム型lonプロテアーゼもこのような機能をもつかどうか興味深い。3.さらに新規タンパク質として、aminoglycosidephosphotransferaseドメインをもつacyl-CoA dehaydrogenaseを発見した。本酵素がペルオキシソームの脂肪酸β酸化にどのように関与するか興味深い。また、ペルオキシソーム膜にVAMP-associated protein A,B,C、Rab2,14が存在することが明かとなった。ペルオキシソーム形成に関与する可能性が示唆される。4.ヒトペルオキシソーム病(Zellweger syndrome、副腎白質ジストロフィー)におけるペルオキシソーム構成タンパク質の変化と病態との関連性を明らかにするため、ヒト繊維芽細胞より高純度のペルオキシソームを精製する条件を検討している。ペルオキシソームのプロテオーム解析ならびに新たに同定されたタンパク質の解析を行い、以下の新知見を得た。1.新規ペルオキシソーム型lonプロテアーゼは、ヒト遺伝子を大腸菌で大量発現させることにより、ATP活性をもつことを明らかにした。現在、ラット肝ペルオキシソームならびに安定過剰発現ヒト肝癌細胞HuH7を用い、lonプロテアーゼの基質特異性ならびに生理的意義を検討している。2.ペルオキシソーム形成因子Pex3Pは、生合成されたペルオキシソーム膜タンパク質と結合したPex19pを認識し、ペルオキシオーム膜タンパク質のペルオキシソーム膜への挿入を介助している可能性を示した。3.ALD患者線維芽細胞において、ミスセンス変異をもつある種のALDPはペルオキシソーム膜上に検出されないこと、生合成後急速にプロテアソームで分解されることを見出した。4.ペルオキシソームの脂質代謝
血液細胞分化に関与する転写因子の相互作用

本研究は、血液細胞分化における遺伝子発現調節機構を解明することを目的として、赤血球などの細胞に分化していく上で必要な転写調節因子GATA-1と未分化状態を維持するために必須な転写因子c-Myb、および両転写因子に共通な転写仲介因子CBPの相互作用を生化学的、機能的に解析を行った。レポーターアッセイによりGATA-1とc-Mybの相互作用を調べたところ、GATA-1とc-Mybとは互いの転写活性化能を抑制しあうことがわかった。この相互抑制の機構を調べるために試験管内結合実験を行った結果、1)GATA-1とc-Mybとは直接に相互作用する、2)GATA-1とc-Mybとは共通の転写仲介因子CBPに競合的に結合し、いずれか一方だけがCBPを利用することができる、ことが明らかとなった。以上の結果は、CBPを介在したGATA-1とc-Mybとの相互抑制が赤血球分化に重要な役割を果たしていること、換言すれば、分化の進行に従って順次発現してくる転写調節因子が相互に転写活性化能を抑制しあうことにより遺伝子発現が正しく制御され、細胞分化が実現していることを示唆している。つまり、分化段階特異的に発現する転写調節因子には、1)高発現しているとき自身の標的遺伝子の発現をONにする、2)その分化段階の前後で発現する転写調節因子が誤って転写開始複合体に組み込まれ不適当な遺伝子発現が起きないようにする、という二つの機能が存在すると考えることができる。今後、試験管内での実験および細胞株を用いた実験により検証された転写因子間相互抑制が生体内でも機能していることを個体レベルなど、より正常な血液細胞分化を反映する系において証明する実験を行うと同時に、c-Mybを含む転写複合体、及びGATA-1を含む転写複合体の構成をtwo hybrid法などにより明らかにし、相互抑制機構の詳細を明らかにしていきたい。血液細胞は未分化な造血細胞から最終的に機能する細胞へとの分化することにより産生される。この過程において、多くの転写因子が極めて重要な機能を担っていることが明かにされている。赤血球系の分化を例にとると、未分化な段階においてはc-mybがそして分化した段階においてはGATA-1が機能している。c-mybが必要な段階からGATA-1が必要な段階へと分化する過程において、これらふたつの転写因子が相互に影響をおよぼしあうかどうかの検討を行った。その結果、c-MybとGATA-1は相互にその機能を抑制することが明かとなったので、この抑制の分子機構の解析をおこなった。c-Mybは転写の仲介因子CBPを介して転写の活性化をおこなうことが知られていたので、GATA-1も同様にCBPを仲介因子として利用するのではないかと考え、しらべたところ、予想どおり、GATA-1もCBPを仲介因子として利用しうることが明かとなった。GATA-1のCBPとの結合部位をしらべたところ、c-MybのCBPへの結合ドメイン(KIXドメイン)のすぐアミノ末端側に存在するC/H1ドメインにGATA-1が結合することがわかった。c-MybとGATA-1は同時にCBPに結合することができないと考えられ、二つの転写因子のCBPへの競合的結合により、相互の機能抑制がおこなわれているものと考えられた。
堆積相微生物燃料電池による水田での発電とそれが土壌環境とメタン放出に与える影響

水田に設置した堆積相微生物燃料電池(SMFC)による発電は、日中に光合成微生物に生産された酸素により促進された。この促進は、正極上に光合成微生物が多い湛水期間中に顕著だった。クローンライブラリー解析により、正極上からは多様な光合成微生物が検出された。一方、負極からは新種と思われる電流発生細菌を分離することに成功した。また、SMFCは湛水期間における水田からのメタン放出を増大させることが分かった。本研究では、水田に設置した堆積相微生物燃料電池技術(sediment mincrobial fuel cell ; SMFC)の起電力に対する光の影響について明らかにするとともに、水田へのSMFCの設置が土壌環境に与える影響、さらには水田からのメタン放出に与える影響について明らかにすることを口的として実験を行った。SMFCは、負極を湛水した水田土壌中に埋設し、正極を土壌表面に設置して、正極と負極を間に抵抗を挟んで銅線を用いて接続することで構築した。正極の中心には丸い穴を開けておき、ここに水稲の苗を移植した。SMFCの発電量は、日中に高く、夜間に低下するという日変化を示した。夜間でも照明を当てると発電量が上昇したことから、発電量の日変化は日光照射量に影響を受けているものと思われた。日中に正極を遮光すると大幅に発電量が低下したが、水稲を遮光してもほとんど低下しなかったことから、正極への光照射が重要であると思われた。除草剤(光合成微生物の光合成阻害剤)を散布すると日中でも発電が阻害され、また、田面水にエアレーションすることで夜間の発電量の低下をある程度防ぐことができることから、光合成微生物の光合成により生じる酸素がSMFCにおける発電に重要な役割を果たしていることが示唆された。光合成微生物量の指標となるクロロフィル量を正極上で調べたところ、田面に日光がよく当たる稲作前半に高く、水稲が生育して田面を覆ってしまい田面に日光があまり届かなくなる稲作後半には低くなった。正極への光照射量が発電量に与える影響は稲作前半に大きく、稲作後半には小さくなり、クロロフィル量の変化とよく対応していた。SMFCの設置が水田土壌中の環境要因や水田からのメタン放出量に及ぼす影響についても調べた。昨年度の結果から、水田に設置したSMFCの発電量は光条件に大きく影響を受け、日光が正極に当たると発電量が高くなることが分かった。その理由として、正極上に付着した光合成微生物の光合成により生じた酸素が、正極における電子処理反応を促進することが考えられた。酸素の影響を調べるために、暗条件下での発電量を、エアレーションの有無で比較したところ、エアレーション無しよりも有りで発電量が高いレベルで維持された。また、正極の位置や形状が発電量に与える影響を調べたところ、正極の位置と形状の両方が発電量に影響することが示唆された。どのような微生物が正極上で発電に関与しているのかを明らかにするために、正極上に発達する微生物群集の構造を明らかにするために、SSUrRNA遺伝子塩基配列に基づいた群集構造解析を行った。その結果、単細胞性藻類やシアノバクテリアを含む多様な光合成微生物が正極上に生息していることが明らかになった。光合成微生物の分離にも取り組み、数株の単細胞性藻類やシアノバクテリアを純粋分離することに成功した。水田に設置したSMFCの負極で発電に関与している微生物の分離にも取り組んだ。負極のからは、Clostridium属やBacillus属に近縁な細菌が多数分離され、それらの特徴付けを進めた。その結果、Clostridium subterminaleに99%以上の16S rRNA遺伝子配列類似性で関係づけられたAN3株は、明らかな発電性を示すことが分かった。今後、他の菌株についても発電生の有無を確認していく予定である。水田に設置した堆積層微生物燃料電池(sediment microbial fuel cell, SMFC)における発電量は、暗条件下では低く、明条件下で高くなり、光の照射により発電量が高くなることが確証された。以前の研究では、藻類の光合成阻害剤を添加することで発電が阻害されたことから、この明条件下での発電量の増大は、光合成微生物によるものと考えられた。光合成微生物が正極反応を促進することができるかどうかを確認するため、負極槽に電流生産微生物を、正極槽に光合成微生物(昨年度に正極より分離した)を接種したリアクター型MFCを用いて発電実験を行い、光照射の有無により発電量がどのように変化するかを調べた。その結果、光合成微生物を正極槽に添加して光照射することで、発電量が明らかに増大することが分かった。この結果は、正極反応促進能力の高い光合成微生物を分離して利用することで、バイオカソードを構築できる可能性を示唆しているものと思われた。昨年度に負極から分離した菌株については、16S rRNA遺伝子の塩基配列に基づいた系統解析を行った。数菌株について系統解析を行ったが、いずれもClostridium属に配属された。

正極および負極における微生物の多様性と機能について解明するためには、分子的手法により群集構造解析をさらに行うとともに、もっと多くの菌株を分離してその性質を明らかにする必要がある。水田へのSMFCの設置は、水稲の生育に影響しなかったが、水田土壌中におけるメタン生成量を増大させ、結果として水田からのメタン放出量をわずかに増加させた。SMFCの実用化に向けて、水田土壌中におけるメタン生成量の増大を防ぐ方策が必要であることが分かった。SMFCの発電量は小さかったが、直列に多数のSMFCを繋ぐことで、容易に10 Vを超える電圧を得ることができた。交付申請書の「研究の目的」に記載した研究実施計画に概ね沿って研究を実施することができた。現在のこところ、研究を遂行する上で大きな障害となる問題は生じていない。24年度が最終年度であるため、記入しない。今後は、これまでに得られた結果の再現性を確認するとともに、以下の内容について研究を行う予定である。1.水田に設置した堆積相微生物燃料電池の負極から分離した発電生微生物の特徴付けを進める。また、新たに発電生微生物の分離を試みる。2.正極から分離した光合成微生物が発電に与える影響について明らかにする。3.堆積相微生物燃料電池の設置が水田生態系に与える影響について明らかにする。現在のところ、研究を遂行する上で大きな障害となる問題は生じていない。
電子線超音波顕微鏡の基礎と半導体素子評価への応用

高耐圧・高電力・スイッチング用、及び、ダーリントン型npn.Siトランジスタ・チップ(Trチップ)を試料に用い、コレクタ(c)-エミッタ(e)間、又は、C-べース(b)間にバイアス電圧を印加して、電子線超音波顕微鏡(EAM)と走査型電子顕微鏡(SEM)とで、同一場所をその場観察し、EAMを用いてどの様な電子線超音波顕微鏡の像が得られ、深さ方向の観察出来る範囲は何に依り定まるか、更に、半導体素子の評価への応用について研究した。その結果、(1)電子線超音波像(EAI)のコントラストはバイアス電圧に依存して変化する。(2)転位線がb領域からのみ観察され、e領域からはバイアス印加方法の如何(c-e,又は、c-b間印加)に関わらず観察されない。転位線はTrチップの電気特性不良の場合に観察された。この転位線はb層拡散工程での誤操作から製造中にb層に発生したもので、c-e間の耐電圧を低下させた一因であることが分った。以上のことは、(3)EAMが半導体素子評価に応用出来る事を示している。EAMにより観察出来る深さは、SEMの各種モードの像と比較して、(4)EAMがSEMよりも深い領域を観察出来ることが分った。電子線の断続周波数を1MHz、吸収電流を一定、試料にTrチップを用いて観察し、試料表面のAl電極(約6μm厚)の下に埋込れたSi【O_2】層(約2.5μm厚)を加速電圧(HV)が35kV以上の条件で観察することが出来た。(5)EAMの観察深さは、HVと試料物質とで定まるエレクトロン・レンジ(ds)に比例しており、上記の場合、dsの約60%が観察可能であることが分った。(6)電子線の断続周波数を1MHz、試料にSi・Trチップを用いた場合、EAMの分解能は約2.5μm(理論値に近い)を得た。これは試料ホルダ、プリアンプを中心とする信号検出・増中系の改良によるS/Nの向上に依り実現出来たものである。以上の結果は以下に発表した。(Jpn.J.Appl.Phys.25(1986)Suppl.25-1.p194,ibid Suppl.26-1,to be published)高耐圧・高電力・スイッチング用、及び、ダーリントン型npn.Siトランジスタ・チップ(Trチップ)を試料に用い、コレクタ(c)-エミッタ(e)間、又は、C-べース(b)間にバイアス電圧を印加して、電子線超音波顕微鏡(EAM)と走査型電子顕微鏡(SEM)とで、同一場所をその場観察し、EAMを用いてどの様な電子線超音波顕微鏡の像が得られ、深さ方向の観察出来る範囲は何に依り定まるか、更に、半導体素子の評価への応用について研究した。(Jpn.J.Appl.Phys.25(1986)Suppl.25-1.p194,ibid Suppl.26-1,to be published)
慢性関節リウマチにおけるHLA-DRB1対立遺伝子と骨破壊進行度の関連性について -在宅ケア-との併用調査-

過去に当科に通院し、過去のX線像が保存されているが、現在は通院できていない慢性関節リウマチ患者(306例)の消息について調査し、電話で応答した。所在不明例、死亡例、遠方転居例や当科での診察拒否例を除き、当科まで自力で診察を受けた来てくれた症例は23例、往診を行った症例は14例であった。この中、往診を行った症例については、本補助金により購入したポ-タブル型X線撮影機材を使用した。この調査によって長期経過に伴うレントゲン上の変化とHLA-DRB1対立遺伝子型との関連性が観察でき、本研究に有用なデータが加えられた。その結果、我々の対照症例は352例に増加し、両方の対立遺伝子にリウマチの感受性遺伝子(HLA-DRB1*0405,0101)を有する群(S/S群)は58例、片方の対立遺伝子にのみ感受性遺伝子を有する群(S/N群)は171例、どちらの対立遺伝子にもそれを有しない群(N/N群)は128例となった。骨破壊進行度の最終段階であるgrade Vの平均罹患年数はS/S群では9.7年、S/N群では18.6年、N/N群では19.4年と、S/S群では他の群より早期にgrade Vに至る事がより明白になった。今後は、現在、当科近郊に存在しながら、通院に障害のある患者について、往診とともに本機材を使用しレントゲン撮影を行う予定である。
分散マルチメディアデータ処理

・群馬大学で開発した時区間概念データモデルを適用して医療データベースを構築することについて,City大学のMcCann等と共同研究をした.McCann等は,実用的視点からモデルを関係データベースシステムを使用して実装した.一方,群馬大学ではオブジェクトデータベースシステムを使用して実装した.そこで,両方の実装する上での技法の違いによる性能や作成の容易さ等の問題点を議論した.・異機種からなる計算機クラスター環境の下で,マルチメディアデータを高速に並列分散処理する実践的アルゴリズムを開発した.具体例として,画像データを対象にして,並列処理するための画像データの分割アルゴリズム,データベースを分散環境にレプリカする効果などをシミュレーションで解析した.・さらに,画像処理履歴を再利用するために半構造データモデルを用いてデータベース化する方法を提案した.これにより,専門家が作成した画像処理方法を非専門家の利用者がデータベースから検索して利用できる.この研究では,異機種分散環境を統合するCORBAの技法を採用して,分散して存在する画像データ,画像処理関数,画像処理履歴などをすべてオブジェクトとして捉えるモデルで実現している.・Dowlingは,マルチメディアデータベースにとって重要なデータ可視化技法について検討すると共に,3次元ユーザインタフェースをVRMLで実装する手法について議論した.一方,Morrisはマルチメディアドキュメントのモデル化技法について研究し,データベースヘの応用について討論した.・五十嵐,横内はそれぞれ分散アルゴリズムや分散システムのセキュリティ,マルチメディアデータを統一的に扱うためのデータ型の理論的枠組みについて研究した.・群馬大学で開発した時区間概念データモデルを適用して医療データベースを構築することについて,City大学のMcCann等と共同研究をした.McCann等は,実用的視点からモデルを関係データベースシステムを使用して実装した.一方,群馬大学ではオブジェクトデータベースシステムを使用して実装した.そこで,両方の実装する上での技法の違いによる性能や作成の容易さ等の問題点を議論した.・異機種からなる計算機クラスター環境の下で,マルチメディアデータを高速に並列分散処理する実践的アルゴリズムを開発した.具体例として,画像データを対象にして,並列処理するための画像データの分割アルゴリズム,データベースを分散環境にレプリカする効果などをシミュレーションで解析した.・さらに,画像処理履歴を再利用するために半構造データモデルを用いてデータベース化する方法を提案した.これにより,専門家が作成した画像処理方法を非専門家の利用者がデータベースから検索して利用できる.この研究では,異機種分散環境を統合するCORBAの技法を採用して,分散して存在する画像データ,画像処理関数,画像処理履歴などをすべてオブジェクトとして捉えるモデルで実現している.・Dowlingは,マルチメディアデータベースにとって重要なデータ可視化技法について検討すると共に,3次元ユーザインタフェースをVRMLで実装する手法について議論した.一方,Morrisはマルチメディアドキュメントのモデル化技法について研究し,データベースヘの応用について討論した.・五十嵐,横内はそれぞれ分散アルゴリズムや分散システムのセキュリティ,マルチメディアデータを統一的に扱うためのデータ型の理論的枠組みについて研究した.●金森と天笠(研究協力者,群大院D3)は,8月末にCity大学に行き,群馬大学で開発をしているマルチメディアデータを管理するための時空間データベースシステムについての研究を報告し,今後の研究について打ち合わせをした.●五十嵐は,12月始めにCity大学を訪問し,並列分散処理アルゴリズム,分散システムのセキュリティについて最近の研究成果を報告すると共に,Dowling等とこれらについて理論的側面からの研究打ち合わせを行った.●McCannは,1月末に群馬大学を訪問し,昨年8月の打ち合わせに基づき開発している音楽のためのマルチメディアデータベースシステムの研究成果について報告した.このシステムはインターネットを通して利用できるところに特徴がある.●横内は,2月末にCity大学を訪問し,Emmerich等とマルチメディアデータを統一的に操作できるデータ型の理論的枠組について議論し,今後の研究の進め方について打ち合わせをした.●有次は,異機種分散環境において画像データを高速処理するための並列分散処理システムについて研究した.異機種を統合するためにCORBAの技法を適用し,並列処理するための画像データの分割アルゴリズムや並列処理におけるデータベースのレプリカの効果などについて研究した.次年度は,有次,Dowling,Emmerich等の研究成果をお互いに報告し,議論するためにそれぞれ各大学を訪問する計画である.また,メンバーがお互いに協力して得た成果を協同研究として発表する予定である.・金森と有次は,11月中旬にCity大学を訪問し,群馬大学で開発した時区間データモデルを医療データベースに適用することについてMcCann等と打ち合わせた.McCann等は,実用的視点からモデルを関係データベースシステムを使用して実装した.一方,群馬大学ではオブジェクトデータベースシステムを使用して実装しているので両方の技法の違いによる性能等の問題点を議論した.・有次と金森は,異機種からなるクラスター環境の下で,画像データを並列分散処理するアルゴリズムを開発した.異機種を統合するためにCORBAの技法を適用し,並列処理するための画像データの分割アルゴリズム,データベースを分散環境にレプリカする効果などをシミュレーションで解析した.さらに,画像処理履歴を再利用するために半構造データモデルを用いてデータベース化する方法を提案した.これらの結果について,有次は9月始めにCity大学を訪問し,McCann等と研究打ち合わせを行った.・DowlingとMorrisは,9月に群馬大学を訪問した.Dowlingは、マルチメディアデータベースにとって重要なデータ可視化技法について講義すると共に,3次元ユーザインターへースをVRMLで実装する手法について我々と打ち合わせた.一方,Morrisはマルチメディアドキュメントのモデル化技法について講義し,データベースへの応用について討論した.・五十嵐,横内はそれぞれ分散アルゴリズムや分散システムのセキュリティ,マルチメディアデータを統一的に扱うためのデータ型の理論的枠組みについて研究した.これらについて,9月にDowlingとMorrissが群馬大学を訪問した際に討議した
心臓外科における総合的輸血後肝炎予防対策 (Auto transfus ionなど)

心臓外科手術の際他家血輸血に伴う肝炎をはじめとする種々の輸血後合併症を予防するために自己血利用を総合的に研究した。1.術前自家血冷凍保存:術前自家血採血を行い、手術に際し使用した。この適応症例は30Kg以上の小児、成人で重症度はNYHAIII度までとした。冷凍自家保存量は4001200cc (平均874.8CC)で無輸血手術可能であった例では800cc以上の採血を行っていた。2.術中自家血輸血: (1)人工心肺残留血濃縮再利用、この方法ではヘパリン除去は出来ないものの血球全成分、タンパク、凝固因子を含めて濃縮し、返血再利用できるAuto transfusionとして有用な方法で初期の症例に主として利用してきた。(2)セルセーバ濃縮血再利用、セルセーバを用い術中、術野全出血(人工心肺血を含む)を再利用でき再利用率としては(1)より多い。ヘパリンも完全に除去できるかわりにタンパク、凝固因子も除去され、主に血球成分のみの利用となり、主として後期の症例に利用してきた(平均837.3cc再利用)。(1)、(2)それぞれの方法の長所、短所を考えると人工心肺終了前後にセルセーバ濃縮血を利用する方法が有効であると考えている。3.術後ドレーン貯留血再利用:胸腔内でのdefibrinogenesisがあるが血球成分は十分に残っており空気塞栓を予防する装置を内蔵させたポンプを開発し、閉鎖回路として利用してきた。46例に使用し平均324ccの術後出血の再利用が可能であった。細菌感染、重症溶血の合併症はみられなかった。以上の方法により全体での他家血輸血は2448ccから1458ccへと減少し、術後肝炎発症率は従来の44.7%から9.4%へと激減し、きわめて有効であった。しかし、この期間中に2例のGVHDによる死亡例を経験し、1例は術後家族血(新鮮血)、1例は保存血を使用した。この予防には他家血輸血のみならず保存血にもradat ionの照射が重要で、さらに発症原因予防について今後の検討が必要であると考えている。開心術後の輸血後肝炎発症率は高率であり、その予防に最大限の努力を払う必要がある。非A非B型肝炎の原因が不明であるため治療法、予防法は確立されておらず、各種の自家血輸血を始めとした総合的輸血後肝炎予防対策が不可欠である。1.術前自家血輸血:患者本人からの冷凍自家血保存は適応を比較的riskの良い単弁置換術まで拡大し、輸血後肝炎はかなりの高率で予防でき、極めて有用な方法と思われた。2.術中自家血輸血:(1)人工心肺残留血濃縮再利用は溶血,赤血球抵抗,腎機能,血液節減効果免疫学的検討など44例の検討から安全性を確認し、自家血輸血として有用な手段であることを示し、ほぼ全例に施行している。殊に、輸血後肝炎予防効果はフエレーシス血漿との併用で肝炎発症は44.7%から14.3%へ有意に減少した。(2)Sorenson

systemによる術中自家血輸血は12例の胸部大動脈瘤手術に施行、溶血,腎機能,凝固系,塞柱症,感染などの面を検討し安全性を確認したが、心臓手術への適応拡大は極めて希な血液型を有した症例に限った。3.術後自家血輸血:術後縦隔ドレーン血再利用による術後自家血輸血は前述の症例にlife-savingな効果を得ることができた。縦隔ドレーン血性状の検討では、十分な活性凝固時間の延長、細菌培養陰性から、安全性に問題はないと考えられるが、溶血が認められる点、凝固活性化物質の存在の可能性が問題となる。4.その他:今後、血液節減からみたcardioplegia法の見直しをblood cardioplegiaとcrystalloid cardioplegiaの比較から行う。開心術後の輸血後肝炎を始めとする他家血輸血にもとずく合併症の予防および血液剤減の目的で,以下の如く術前,術中,術後に一連の手段を行った.1)術前自家血採血:患者本人から予定手術日の1ヶ月以内まで400800ccの採血を行い,冷凍保存し,人工心肺終了後に使用した.適応範囲を60才以下,人工心肺時間120分までに拡大できた.2)術中自家血輸血:(1)人工心肺残留血濃縮再利用は人工心肺時間180分以内の全症例に行ったが,この再利用血中には術中使用したヘパリンが除去されないまま存在し,プロタミン中和後も出血傾向が残るため,昭和62年10月よりセルセーバ4による術中出血及び人工心肺残留血再利用を10例について行った.この結果出血傾向はなくなりさらに, 1例あたり500ml2000mlの範囲でH+55%に濃縮した血液を返血出来た.(2)術前自家血採血を行っていない症例でも麻酔導入後,人工心肺装着前に200400ccの自家血液を採取し,人工心肺中のH+を1820%をすることにより術前自家血採取と同様の効果を得た.3)術後自家血輸血:術後の胸腔内ドレーン血の性状の検討から安全性を確認し, 7月より10例に200400ccの返血を行うことが出来,臨床的にも感染,溶血などの合併症はなく,血液剤減に有用で,今後の術後出血の際の血液剤減に有用であると思われた.以上の方法により他家血の無輸血症例の適応が拡大し,輸血症例においてもその血液使用の剤減がとくにセルセーバ使用例で十分に期得できた.今後長期予後における肝炎その他の合併症の発生とともに検討を行う.開心術後の輸血後肝炎をはじめとする他家血輸血に基づく種々の合併症予防、血液使用削減を目的とし、種々の方法により総合的検討を行った。対象を30kg以上の小児、重症成人例にまで拡大し、術前、術中、術後の血液使用節減を行った。(1)術前、自家血採血:手術予定1ケ月前まで4001200ccの自己血を採血、日赤の協力を得て手術日まで保存を行っていたが、昭和63年10月から日赤の都合で約3ケ月間保存が出来ず術直前(1週間術日)採血しており、400600ccの保存を行い対処した。現在日赤保存血収容の関係上1ケ月前までの血液保存は400cc/1人となっている。(2)術中自家血輸血:術中に術野および人工心肺残留血をすべてセルセーバーで処理し、輸血を行い、平均837ccの返血を行うことが出来、無輸血手術症例は32.5%となった。(3)術後胸腔内ドレーン血の回収:回収装置を1台追加講入することが出来、術後46例の患者に術後胸腔ドレーンよりの出血を返出することが出来るようになり、平均324ccの出血を返血出来た。この間に細菌感染、重症溶血の発生は認めなかった。(4)昭和63年10月より新鮮血に対し、1500radのradationを使用前に行うことが本学輸血部放射線科の協力を得て出来るようになった。