hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
GISによる地域支援事業と地域ニーズのリアルタイム可視化システムの開発

今後、地域支援事業と地域ニーズの可視化システムの作成を行うが、データ収集のシステムはK-DiPSのノウハウを活用する。端末で収集するデータの内容については、現時点では東京都世田谷区、東京都新宿区、珠洲市、輪島市、金沢市の地域包括支援センターからの聞き取りを行い内容を検討している。なお、本研究では病院や介護系施設の立地、買い物難民等のデータも取り扱うことを検討している。またテキストマイニングによって分析することも検討している。これらの分析方法については、オープンデータを用いた分析を行い、平成30年度の下記学会にて、発表を行った。第29回日本在宅医療学会学術集会『テキストマイニングとGISによる47都道府県の医療計画の分析』、『数理モデルを用いた北信越地域における2025年の訪問介護・入浴・看護事業所の予測とGISによる地理的特徴の検討』、『地理情報システムを用いた山間部における食料品アクセス困難地域の地理的特徴の検討』。第77回日本公衆衛生学会総会『人口推計に基づく訪問系事業所立地数予測モデルの検討と地理情報システムによる分析』、『地理情報システムを用いた病床機能別病院立地地域における将来推計人工の検討』。平成30年度の半ばにはデータ収集に用いるシステムの開発を行う予定であった。事前に、端末で収集するデータの内容について、地域包括支援センターの職員から聞き取りを行って検討を進めているが、自治体との交渉が遅れたため十分な数の聞き取りが行えなかった。早急に自治体との交渉を進め、首都圏で一箇所、石川県内で一箇所聞き取りを進める。聞き取りが完了した時点で内容を分析し、システムで収集するデータ内容を決定し、システムの開発を行う。聞き取り調査と同時に、開発した情報収集システムを用いて実際にデータ収集及び実験を行う自治体との交渉を進めておく。平成28年度は、近年における地理情報システム(GIS)の活用方法および介護保険制度に関する資料の収集を行った。また石川県内の一部の地域包括支援センターに研究協力を依頼した。平成28年度の助成金は、主に上記の研究を遂行するための文献の購入費と学会等の旅費と参加費に当てられた。また、本研究の概要について『地域ケアリング』2017年4月号に掲載された。1.日本在宅医療学会、日本公衆衛生学会等の学術集会に参加し、GISおよび介護保険制度に関する資料の収集を行った。これにより、近年のGIS研究および介護保険制度のうち本研究に直結する、地域支援事業に関する各自治体の動向がわかった。2.石川県宝達志水町の地域包括支援センターに協力を依頼し情報提供を受けた。これは、調査内容の具体的な方向性が決定する一助となった。宝達志水町については、平成29年度に調査レジストリーへの参加を依頼する予定である。3.研究者自身がGISの操作方法を習得するためGISに関する文献を多数購入した。GISのアプリケーションについて、平成28年度はフリーソフトを用いて操作方法の初歩を学んだ。平成29年度には、実際に研究に用いるGISアプリケーションを購入する予定である。また本研究では経済分析を実施する予定であるが、経済分析用のアプリケーションについてはすでに購入済みである。4.本研究の概要について『地域ケアリング』2017年4月号に掲載された。本研究の概要を公開することで、調査レジストリーへの参加を自治体に呼びかける際の一助となると考えられる。情報収集に関しては順調に進んでいる。一部の自治体に調査への協力を依頼することができた。平成28年度には調査レジストリーとオンライン調査システムを作成する予定であったが、調査項目と調査対象の確定に想定以上の時間を要したため、その点は未達成であった。調査項目については、アウトラインを決定するところまでは至っており、共同研究者と詳細を協議の上、平成29年度の早い段階で確定する予定である。平成29年度はこれまで学会等で収集してきた情報を活かし、地理を活用した研究を行った。具体的には、GISと人口動態統計を用いて能登地域や甲信越地方の過疎地域における、将来的な介護系事業所の存在数について分析を行った。この分析によって、本研究のテーマである「地域ニーズ」の高い地域、つまり営利目的ではない法人等による活動の必要性が高いエリアを推定することができた。本研究の成果は、第28回日本在宅医療学会学術集会(『人口推計に基づいた能登地域における訪問介護・通所介護事業所の立地数に関する検討-地理情報システムを活用した分析-』、『GISを用いた訪問看護ステーション勢力圏における地域特徴の把握』)、および第76回日本公衆衛生学会総会(『地理情報システムと人口推計を用いた北信越地方の訪問系事業所立地数に関する検討』)にて報告した。なお、在宅医療学会にて報告した内容については、発表時と同名の論文2編として、『癌と化学療法VOL.45(2018)』に今年3月掲載された。現在は地域支援事業と地域ニーズを把握するためのツールの開発を開始しており、提携企業にはアプリケーションの開発について打ち合わせを行っている。また、アプリケーション(オンライン調査システム)のコンテンツについて、金沢市、羽咋市、輪島市、東京都文京区などの地域包括支援センター、介護関連事業所から聞き取りを行っている。30年度半ばにもアプリケーションのプロトタイプの検証を行えるように研究を進めている。アプリケーション(オンライン調査システム)の開発について、予定では平成29年度中に試作品を作成する予定であった。現在アプリケーションの雛形については準備ができているが、コンテンツの決定が遅れたため試作品の完成には至らなかった。30年度前半にコンテンツを決定し、半ばには試作品の完成を目指すこととする。

調査が遅れた理由としては、GISを用いた実態調査に時間を割いたためである。今後、地域支援事業と地域ニーズの可視化システムの作成を行うが、データ収集のシステムはK-DiPSのノウハウを活用する。端末で収集するデータの内容については、現時点では東京都世田谷区、東京都新宿区、珠洲市、輪島市、金沢市の地域包括支援センターからの聞き取りを行い内容を検討している。なお、本研究では病院や介護系施設の立地、買い物難民等のデータも取り扱うことを検討している。またテキストマイニングによって分析することも検討している。これらの分析方法については、オープンデータを用いた分析を行い、平成30年度の下記学会にて、発表を行った。第29回日本在宅医療学会学術集会『テキストマイニングとGISによる47都道府県の医療計画の分析』、『数理モデルを用いた北信越地域における2025年の訪問介護・入浴・看護事業所の予測とGISによる地理的特徴の検討』、『地理情報システムを用いた山間部における食料品アクセス困難地域の地理的特徴の検討』。第77回日本公衆衛生学会総会『人口推計に基づく訪問系事業所立地数予測モデルの検討と地理情報システムによる分析』、『地理情報システムを用いた病床機能別病院立地地域における将来推計人工の検討』。平成30年度の半ばにはデータ収集に用いるシステムの開発を行う予定であった。事前に、端末で収集するデータの内容について、地域包括支援センターの職員から聞き取りを行って検討を進めているが、自治体との交渉が遅れたため十分な数の聞き取りが行えなかった。当初、調査レジストリーを作成した後にオンライン調査システムを作成する予定であった。しかし、オンライン調査システムをある程度の形にしたものを用いた方が、レジストリーへの参加を呼びかけやすいことがわかった。平成29年度はオンライン調査システムの作成を先行させ、その試作品を用いて調査レジストリーへの参加を呼びかける予定である。具体的な進め方としては、1.調査項目を決定する、2.すでに研究協力を受けている自治体に調査のプレテスト(紙面)を実施する、3.プレテストで明らかになった改善点を踏まえてオンライン調査システムを作成する(携帯端末にインストールするアプリケーションを作成予定)、4.オンライン調査システムの実証実験、以上の4つのステップである。具体的な方策は次の通りである。1.実態調査の結果を踏まえて地域支援事業設置の優先地域を把握する。2.オンライン調査システムに盛り込むコンテンツを確定する。3.研究協力を受けている自治体に調査のプレテストを実施する。4.プレテストの結果をオンライン調査システムに反映する。5.オンライン調査システムの実証実験を行う。以上のステップである。早急に自治体との交渉を進め、首都圏で一箇所、石川県内で一箇所聞き取りを進める。
選択的表面修飾による刺激応答性2層構造ナノシートの創製と薬物キャリアへの応用

昨年度は、温度応答性ポリマーを酸分解性リンカーで架橋したハイドロゲルを層状ニオブ酸塩(NbO)の層間Iに修飾後、層間IIを剥離することでpHおよび温度変化に応答して単層への剥離や水中での相転移を起こす刺激応答性2層構造ナノシートの合成を達成した。今年度は、DDSキャリアのステルス性を担う2層構造ナノシートの表面への生体適合性ポリマー修飾を試みた。また、ナノシートの細胞取込を可視化するために蛍光性分子を2層構造ナノシートの層間に修飾することも併せて検討した。昨年度の検討を元に、NbOの層間Iに重合開始基を有するホスホン酸を修飾した後、層間IIにピレン環を有するホスホン酸を修飾した。その結果、XRD測定による層間距離の拡大やICP測定によるリン含有量の増加が逐次的に見られ、NbOの層間Iおよび層間IIに異なる有機ホスホン酸が修飾できたことを確認した。この修飾NbOを用い、表面開始原子移動ラジカル重合による層間Iへのポリアクリルアミド(PAAm)修飾を行ったところ、TG-DTAによる有機基由来の重量減少やXRD測定による積層構造の消失を確認した。また、TEMやAFM観察から層間剥離によるナノシート化を確認し、このナノシート分散水溶液は蛍光性と高い分散安定性を示した。この結果は、疎水性のピレン環を有しつつ、親水性のPAAm修飾によって水中で安定に分散できるナノシートとなっていることを示唆しており、生体適合性を有するPAAmが表面に修飾され、同時に蛍光性多環分子が層内に固定化された2層構造ナノシートの合成に成功したと考えられる。昨年度の成果と併せ、薬物キャリアに必要となる機能性分子を位置選択的に修飾した刺激応答性2層構造ナノシートの創製における基盤技術を確立できた。今年度は、位置選択的に表面修飾した2層構造ナノシートの合成を目指し、層状ニオブ酸塩(NbO)ナノシートのエッヂ表面へのホスホン酸修飾、および反応性の高い層間I表面への刺激応答性ハイドロゲル修飾を検討した。NbOとフェニルホスホン酸(PPA)を反応させた修飾体(PPA_NbO)について、XRDパターンではNbOと同様の回折線が観測された一方、IR分析やNMR分析からPPA修飾が確認された。このことから、NbOの層間に影響を与えずに最表面のみにPAAが修飾されたと考えられる。このPPA_NbOをテトラブチルアンモニウムヒドロキシ(TBAOH)水溶液に加え、積層構造を剥離することでエッヂ表面のみにPPAを修飾したNbOナノシートが作製できた。またPPA_NbOの層間Iに重合開始基を有するホスホン酸を修飾した後、酸分解性架橋剤(BDTM)とN-イソプロピルアクリルアミド(NIPAAm)を用いた表面開始原子移動ラジカル重合により、温度およびpH応答性を有するハイドロゲルを層間Iに修飾した(PNB_NbO)。IR分析やNMR分析からNIPAAmとBDTMの存在が確認され、XRDパターンでの規則的な層間距離を示す回折線が消失した一方でSEM像では板状結晶が観測されたことから、積層構造を維持しつつ層間で重合が進行したと考えられる。このPBN_NbOをTBAOH水溶液に加え、層間IIを剥離することでPBN_NbOナノシートを得た。PBN_NbOナノシートは、酸性条件ではAFM像におけるシート厚みが半減しており、pH変化に伴うBDTMの分解により2層構造から単層構造へと変化したことが示唆された。またPBN_NbOナノシート分散水溶液は、昇温に伴う濁度変化が確認され、温度応答性を持つことが示された。以上の結果から、目的の刺激応答性2層構造ナノシートの合成に成功したと考えられる。今年度は、層状ニオブ酸塩のエッヂ表面と層間I表面への位置選択的な修飾による刺激応答性2層構造ナノシートの合成を目標とし、酸性条件で2層構造から単層構造へと変化する温度応答性ナノシートを得ることができた。最終的な薬物キャリアの作製は、今年度のナノシート作製法を元に、反応性の低い層間II表面への生体適合性ポリマー修飾を追加することで可能となると計画しており、順調に作製における要素技術の確立を達成できている。

また、TEMやAFM観察から層間剥離によるナノシート化を確認し、このナノシート分散水溶液は蛍光性と高い分散安定性を示した。この結果は、疎水性のピレン環を有しつつ、親水性のPAAm修飾によって水中で安定に分散できるナノシートとなっていることを示唆しており、生体適合性を有するPAAmが表面に修飾され、同時に蛍光性多環分子が層内に固定化された2層構造ナノシートの合成に成功したと考えられる。昨年度の成果と併せ、薬物キャリアに必要となる機能性分子を位置選択的に修飾した刺激応答性2層構造ナノシートの創製における基盤技術を確立できた。今年度検討したPNB_NbOを用い、層間II表面へ生体適合性ポリマーを修飾した後に、層間IIから積層構造を剥離することで生体適合性を付与した刺激応答性2層構造ナノシートを作製する。このナノシートのハイドロゲル領域に薬物や蛍光試薬を担持させ、機能性薬物キャリアとしての利用を試みる。その際の薬物放出制御および生体適合性の評価として、培養細胞へのナノシート添加後の細胞生死判定や蛍光顕微鏡による観察からナノシートや薬物の細胞内分布を検討する予定である。今年度は、材料開発に重点を置くことになり、当初計画していた培養細胞を用いた材料の生体適合性の評価を行っていないため当該助成金に未使用額が生じた。次年度は、培養細胞を用いた生体適合性の評価に加え、翌年度に計画している薬物放出制御の評価と合わせて実施する予定であり、未使用額も合わせた使用計画としている。
気管支喘息発症における腸内Staphylococcus属の役割解明

近年気管支喘息と腸内細菌叢などの腸内環境との関連について報告があるものの、その詳細な制御機構は不明である。我々は先行研究により、喘息発症小児では1才時の糞便中Staphylococcus属が有意に増加していることを見出した。本結果は気管支喘息の発症に本属が寄与している可能性を示しており、本研究では気管支喘息発症における腸内Staphylococcus属の役割解明を目指す。
ホリデイ構造に特異的に働く枯草菌のDNA結合蛋白質の単離と機能解析

本研究の目的は枯草菌の相同組換えの後期過程、すなわちホリデイ構造が2本の相同な2本鎖DNAに分離する過程に特異的に働く種々の酵素をクローニングし、その機能をin vivo,in vitroで解明することにある。ホリデイ構造に特異的に働く大腸菌のエンドヌクレアーゼ、RuvCは良く研究されていて、RuvABと複合体を形成して働いていると考えられる。枯草菌はすでにそのゲノムシークエンスが完了したグラム陽性菌であり、そのゲノム中にホリデイ構造の交叉点移動に関係する大腸菌のRuvA・B蛋白質と相同性の高い遺伝子が発見されている。それに対して、ホリデイ構造の交叉点部分を特異的に切断するエンドヌクレアーゼについては大腸菌のホリデイ構造特異的エンドヌクレアーゼRuvCと相同性の高いものは枯草菌には存在しないことがわかっている。そこでアミノ酸配列レベルでは相同性がないものの、大腸菌のRuvCと同等の機能・活性をもつホリデイ構造に特異的に働くエンドヌクレアーゼが枯草菌にもあると考え、その単離を試みた。ホリデイ構造をとるDNAを保持したアフィニティーラテックス粒子を作製した。対数増殖期の枯草菌破砕液より抽出を試みたがヌクレアーゼ活性は検出できなかった。しかし、活性はないものの十字型DNAを保持するラテックス粒子に吸着する蛋白が抽出されており、構造を解析している。RuvC様酵素の単離に関しては現在大腸菌のRuvA,B,C欠失株また枯草菌のRuvA,B欠失株の解析と平行して進めるべく、計画進行中である。
骨粗鬆症モデル動物の骨量減少に対する植物性エストロゲンの効果

骨粗鬆症モデル動物の骨量減少に対する植物エストロゲンの効果【目的】大豆中にはゲニステイン等のエストロゲン様の構造を持つイソフラボンが含まれており、近年、骨密度との関係が注目されている。本研究では、大豆由来のイソフラボンであるゲニステインが骨、骨髄および生殖器でエストロゲン様作用を示すか否かを卵巣摘出マウスを用いて検討した。また、ゲニステインの骨芽細胞の増殖と分化に対する作用を検討した。【方法】(1)8週齢雌性マウスに偽手術(Sham)あるいは卵巣摘出手術(OVX)を施し、OVX群にゲニステイン(Gen;0.10.7mg/day),17β-エストラジオール(E2 ; 0.010.1μg/day)を2週間皮下投与後、子宮重量を測定すると共に、脛骨より骨髄細胞を採取した。B細胞の表面抗原B220に対する単クローン抗体を用い、Flow cytome toryによりBリンパ球造血を解析した。(2)OVX群にGenあるいはE2を4週間皮下投与して大腿骨を採取し、DXA法により骨密度を測定した。また、mCTスキャンによる大腿骨の3次元解析を行った。(3)骨髄間質細胞(ST2)及び骨芽細胞(MC3T3-E1)の増殖と分化(オステオポンチン、コラーゲン、RANKL、OCIFmRNA)に対するGenの作用を検討した。【結果】(1)OVX後骨髄中のB220陽性のプレB細胞が選択的に増加したが、Gen(0.5mg/day)及びE2の投与によりShamレベルまで低下した。(2)OVXにより低下した子宮重量は、Gen(0.10.7mg/day)を4週間皮下投与しても全く回復しなかった。E2の2週間の投与により子宮重量はShamレベルに回復した。(3)OVXにより大腿骨骨密度が低下したが、E2のみならずGenの投与により有意に回復した。一方、μCTスキャンによる解析では大腿骨遠位端の海綿骨はOVXにより著しい骨梁の断絶と消失が認められたが、これらの変化はGenの投与によりShamレベルまで回復した。(4)Genは骨芽細胞の増殖と分化には影響しなかったが、活性型ビタミンDによるRANKLの発現を抑制した。【結論】ゲニステインは、卵巣摘出マウスにおいて、子宮に全く作用することなく骨髄Bリンパ球造血の亢進及び骨密度低下を正常化した大豆イソフラボンは閉経後骨粗鬆症の予防に有効な栄養因子として重要視される。骨粗髭症モデル動物の骨量減少に対する植物性エストロゲンの効果[目的]大豆中にはゲニステイン等のエストロゲン様の構造を持つイソフラボンが含まれており、近年、骨密度との関係が注目されている。

一方、我々は卵巣摘出マウスでは、骨密度の低下と共に骨髄のB細胞が特異的に蓄積し、これらの変化はエストロゲンの補充投与により回復することを明らかにしてきた。本研究では、大豆由来のイソフラボンゲニステインが骨、骨髄および生殖器でエストロゲン様作用を示すか否かを卵巣摘出マウスを用いて検討した。[方法](1)8週齢雌性マウスに偽手術(Sham)あるいは卵巣摘出手術(OVX)を施し、OVX群にゲニステイン(0.10.7mg/day),17β-エストラジオール(E2;0.010.1μg/day)を2週間皮下投与後、子宮重量を測定すると共に、脛骨より骨髄細胞を採取した。B細胞の表面抗原B220に対する単クローン抗体を用い、Flow cytometoryによりBリンパ球造血を解析した。(2)OVX群にゲニステインあるいはE2を4週間皮下投与して大腿骨を採取し、DXA法により骨密度を測定した。また、μCTスキャンによる大腿骨の3次元解析を行った。[結果](1)OVX後骨髄中のB220陽性のプレB細胞が選択的に増加したが、ゲニステイン(0.5mg/day)及びE2の投与によりShamレベルまで低下した。(2)OVXにより低下した子宮重量は、ゲニステイン(0.10.7mg/day)を4週間皮下投与しても全く回復しなかった。E2の2週間の投与により子宮重量はShamレベルに回復した。(3)OVXにより大腿骨骨密度が低下したが、E2のみならずゲニステインの投与により有意に回復した。一方、μCTスキャンによる解析では大腿骨遠位端の海綿骨はOVXにより著しい骨梁の断絶と消失が認められたがこれらの変化はゲニステインの投与によりshamレベルまで回復した。[結論]ゲニステインは、卵巣摘出マウスにおいて、子宮に全く作用することなく骨髄Bリンパ球造血の亢進及び骨密度低下を正常化した。大豆イソフラボンは閉経後骨粗慰症の予防に有効な栄養因子として重要視される。骨粗鬆症モデル動物の骨量減少に対する植物性エストロゲンの効果[目的]大豆中にはゲニステイン等のエストロゲン様の構造を持つイソフラボンが含まれており近年、骨密度との関係が注目されている。本研究では、大豆由来のイソフラボンであるゲニステインが骨、骨髄および生殖器でエストロゲン様作用を示すか否かを卵巣摘出マウスを用いて検討した。また、ゲニステインの骨芽細胞の増殖と分化に対する作用を検討した。[方法](1)8週齢雌性マウスに偽手術(Sham)あるいは卵巣摘出手術(OVX)を施し、OXV群にゲニステイン(Gen;0.10.7mg/day),17β-エストラジオール(E2;0.010.1μg/day)を2週間皮下投与後、子宮重量を測定すると共に、脛骨より骨髄細胞を採取した。B細胞の表面抗原B220に対する単クローン抗体を用い、Flow cytome toryによりBリンパ球造血を解析した。(2)OVX群にGenあるいはE2を4週間皮下投与して大腿骨を採取し、DXA法により骨密度を測定した。また、mCTスキャンによる大腿骨の3次元解析を行った。(3)骨髄間質細胞(ST2)及び骨芽細胞(MC3T3-E1)の増殖と分化(オステオポンチン、コラーゲン、RANKL、OCIF mRNA)に対するGenの作用を検討した。[結果](1)OVX後骨髄中のB220陽性のプレB細胞が選択的に増加したが、Gen(0.5mg/day)及びE2の投与によりShamレベルまで低下した。
19～20世紀中央ユーラシアにおける越境と新疆ムスリム社会の文化変容に関する研究

本研究は、中国・中央アジア・ロシアなどでの海外調査による新史料の取得と、それらデータの分析を通して、1920世紀における中国新疆とロシア帝国領・ソ連領ムスリム地域の間の人的な移動と文化交流の実態を明らかにした上で、新疆のムスリム社会における文化変容の様態を究明した。それにより、政治的な条件に規定されつつ日常的なレベルで移動・移住が行われ、そのことが近代化を初めとする新疆の社会・文化変容に大きな作用を与えていたことを明らかにした。新疆(中国領中央アジア)は中国の政治的領域の一部である一方、主要な住民であるテュルク系ムスリムの諸民族は現在に至るまで言語・文化面の独自性を維持してきた。その背景には、19世紀後半20世紀半ばの歴史過程において、西方のロシア帝国領・ソ連領のムスリム地域から多大な文化的影響を受けたことがある。しかしその具体的な様相については、検討が進んでいるとは言い難い。そこで本研究は、海外調査による新規史料の取得と分析などの作業を通じて、これら地域と新疆の間の人的移動・交流の実態を明らかにした上で、新疆のテュルク系ムスリム社会における文化変容の様態を究明することを目的としている。それにより、広域的な越境移動のダイナミズムの中で新たな新疆近代史像を提示する。主な対象時期として、1880年代1910年代と1930年代半ば1960年代初頭という2時期を設定する。本年度の調査研究においては、19世紀後半20世紀初頭にかけての時期に、ロシア帝国領と新疆の間における越境移動の基本的な状況、とくに交易活動がどのように行われていたかについて基本的なデータの取得を図るとともに、194050年代におけるソ連ー新疆関係の政治的状況に関するデータの取得に従事した。前者に関しては、史料面でロシア側と清朝側の双方からのアプローチをとることにより、ロシアの文書館(ロシア国立歴史文書館、ロシア国立国民図書館など)と台湾の文書館(中央研究院近代史研究所档案館など)において関連する文書資料の調査・収集を共同で実施した。後者については、台湾の国史館などで作業に当たった。これらにより、新疆における文化変容を検討するための前提となる越境移動と政治状況に関わる基礎的なデータが蓄積されつつあり、その分析を進めることができた。初年度の調査研究においては、研究の手順である2段階、すなわち「1ロシア帝国領・ソ連領(主に中央アジアとタタルスタン)と新疆の間におけるテュルク系ムスリム諸民族の移動と交流の具体的な様相を明らかにする。2これらの移動・交流との関連性において、新疆のテュルク系ムスリムの社会における文化活動、とくに文字文化とそこで担われる思想的営為が、どのように展開し、変容してきたのかについて検討を加える。」のうち、主に1に関わる知見の基礎となる移動の実態とそれを規定してきた政治的条件に関する調査研究を実施した。それにより、ロシア帝国期のロシア領ー新疆・中央アジア間の交易の実態、また1940年代における国民政府と東トルキスタン共和国およびソ連との政治的関係、などに関する重要な知見が得られつつある。付随して、清朝時代における新疆のテュルク系ムスリムの民族と中国内地との歴史的関わりや、中国内地から新疆を経てロシア帝国領に移住した回民(ドゥンガン)の歴史意識などについて一定の検討材料が得られ、興味深い知見が明らかになりつつあることも注目される。また、平成27年12月には本科研の共同主催にて、合衆国・オーストラリア・台湾・カザフスタンなどから中堅・若手の研究者を招聘し、本科研のメンバーの一部も報告者として、国際学術会議「中央ユーラシアの変容における新疆」(1820世紀)を開催した。これにより、「越境」と変容の問題を含む、新疆史研究の現在最先端の到達点を把握することができた。中央ユーラシアにおける広域的な人的移動・交流の中で1920世紀における新疆地域社会の変動をとらえていくという、本研究課題の基本的な視角・方法が妥当なものであることを確認するとともに、今後の本研究を展開する上で有益な新知見が得られたことも収穫である。本年度の調査研究においては、昨年度の調査に引き続き、19世紀20世紀における、新疆と中央アジアの間の越境移動の基本的な状況に関する文字史料データの取得を図るとともに、実際の越境移動の実態と新疆・中央アジア両側の地域社会の具体相について把握するための実地調査・聞き取り調査を実施し、関連データの取得を図った。前者に関しては、台湾の文書館やヨーロッパの図書館において関連する文書史料・写本史料の調査・収集を実施した。

後者においては新疆のイリ地域とタルバガタイ地域での実地調査に基づき、越境移動を考える上でポイントとなる国境地帯の都市の地域性に対する理解を深化させるとともに、イリ地域から移住したタシュケント在住ウイグル人研究者からライフ・ヒストリーの聞き取り調査を実施した。これらにより、とくにイリを重点地域とする形で、越境移動を背景とする、新疆における文化変容を検討するためのデータの蓄積が進捗しつつある。前年度の調査研究においては、研究の手順である2段階、すなわち1ロシア帝国領・ソ連領(主に中央アジアとタタルスタン)と新疆の間におけるテュルク系ムスリム諸民族の移動と交流の具体的な様相を明らかにする。2これらの移動・交流との関連性において、新疆のテュルク系ムスリムの社会における文化活動、とくに文字文化とそこで担われる思想的営為が、どのように展開し、変容してきたのかについて検討を加えた。今年度の調査においては、1に関わる知見の基礎となる移動の実態とそれを規定してきた政治的条件に関する調査研究の継続・発展に加え、聞き取り調査や文献調査・収集を通して2へのアプローチを本格化させている。これにより、ロシア帝国期のロシア領ー新疆・中央アジア間の交易の実態、1940年代における国民政府と東トルキスタン共和国およびソ連との政治的関係などに加え、越境移動の具体的な状況とそれを背景とした新疆ーロシア・ソ連領両側の地域社会における文化動態に関わる重要な知見が得られつつある。付随して、宗教的な側面における越境移動と地域社会との関係、新疆のテュルク系民族と中国内地との歴史的関わり、などについて興味深い側面が明らかになりつつあることも注目される。また、平成27年12月に本科研の共同主催にて、本科研のメンバーの一部も報告者として開催した国際学術会議「中央ユーラシアの変容における新疆」をもとにした英文の論文集を、東洋文庫のTBRLシリーズの1冊として刊行すべく編集作業を進めてきており、最終原稿とりまとめに向けて、共同編著者の打合せも実施した。その結果、平成29年度中には、「越境」と文化変容の問題を含む、現状における新疆史研究の最先端の到達点を反映し、日本・合衆国・オーストラリア・台湾・カザフスタンの研究者を寄稿者とする刊行物の発行により、本科研の研究成果の一環を国際的に発信する目処が立っている。新疆(中国領中央アジア)は中国の政治的領域の一部である一方、主要な住民であるテュルク系ムスリムの諸民族は現在に至るまで言語・文化面の独自性を維持してきた。その背景には、19世紀後半20世紀半ばの歴史過程において、西方のロシア帝国領・ソ連領のムスリム地域から多大な文化的影響を受けたことがある。しかしその具体的な様相については、検討が進んでいるとは言い難い。そこで本研究は、海外調査による新規史料の取得と分析などの作業を通じて、これら地域と新疆の間の人的移動・交流の実態を明らかにした上で、新疆のテュルク系ムスリム社会における文化変容の様態を究明することを目的としている。それにより、広域的な越境移動のダイナミズムの中で新たな新疆近代史像を提示する。主な対象時期として、1880年代1910年代と1930年代半ば1960年代初頭という2時期を設定する。
低分子量ストレス蛋白質を標的にした新たな癌治療法の研究

肝細胞がんは既存の治療法のみで根治することは不十分であるため,肝発がんのメカニズムを解明し新たな治療法を確立することが急務となっている。近年,各種癌におけるストレス蛋白質(heat shock protein;HSP)の発現量と予後の関連性が報告されHSPが腫瘍の増殖と転移に関与しているこが推察されるに至り,HSPが癌治療における新たな標的として期待されている。既に私は48例の肝細胞がんの患者の手術標本を解析した結果,リン酸化HSP27の発現が低い程,肝がんのステージが進行していることを見いだし,HSP27のリン酸化が肝臓がんの病態と深く関わることを世界で初めて明らかにした。今回私は,低分子量HSPの一つであるHSP20に着目し,ヒト肝細胞がん摘出標本を用いて,腫瘍部およびその周囲の非腫瘍部における発現レベルを解析した。さらにHSP20発現レベルとHSP27のリン酸化レベルとの相関関係についても検討した,その結果,HSP20は肝細包がん患者の全症例において,腫瘍部,非腫瘍部ともに認められ,その発現レベルは,腫瘍部において非腫瘍部に比し低下していた。腫瘍部におけるHSP20の発現レベルは,腫瘍の進展(腫瘍径,脈管浸潤の有無,およびINM分類)に伴い低下していた。HSP20の発現レベルとSer-15のリン酸化HSP27のレベルとの間には有意な正の相関(r=0.505)を認めた。がん細胞におけるHSP20ならびにリン酸化HSP27の機能は明らかでは無い共にα-crystallin familyに属し,ヘテロ多量体を形成しうる両者は,肝細胞がんの進行に重要な役割を有する可能性が示唆された。私は,肝細胞がん患者の腫瘍部におけるHSP20発現レベルの低下が,腫瘍の進展と相関していることを示した。以上の知見から,肝細胞がん組織中におけるHSP20が,腫瘍の進展に対し抑制的な役割を果たす可能性が示唆された。
非コード作用ＲＮＡマシナリー形成・作用機構の１分子蛍光イメージング

RNA干渉は、20-30残基長の短いRNA鎖を含んだRISC(RNA-induced silencing complex)と呼ばれるRNA-蛋白質複合体(RNP)が、標的RNAを認識・切断する現象であり、細胞内の様々な制御に関わっている。本課題では、RNA干渉の分子機構を探る為に、蛍光1分子観察技術を用いて、リアルタイム観察を行った。本年度も引続きRISCの形成過程と、標的切断の過程の観察を行った。RISC形成過程では、Argonaute蛋白質(以下Ago)が短いRNA鎖(以下siRNA)がHsc70/HSP90を中心としたシャペロンの助けを借りて、取込まれるが、どの段階で、どのようにシャペロンが寄与しているのかは明らかではなかった。そこで、Ago、RNA鎖をそれぞれ蛍光標識して観察を行った。ガラス基板にAgoを固定し、蛍光標識RNA鎖やシャペロン等の必要因子を加えると、蛍光RNA鎖がAgoに取込まれ、RISCが形成される様を観察する事に成功した。解析の結果、シャペロンは、siRNA/Dicer-2/R2D2複合体がAgoに結合する時間を引き延ばす事でRISC形成効率に寄与していることが明らかになった。標的切断過程の観察では、蛍光標識した標的RNAをガラス基板上に固定し、蛍光標識RISCの相互作用と標的切断の様子を感sつした。その結果、RISCは2つのドメインを上手く使い分けて、効率的に切断を行っている事が明らかになった。25年度が最終年度であるため、記入しない。本年度は、RISCの形成過程と、標的切断の過程の観察を行った。RISC形成過程では、Argonaute蛋白質(以下Ago)に短いRNA鎖(以下siRNA)がHsc70 / Hsp90を中心としたシャペロンの助けを借りて、取り込まれるが、どの段階で、どのようにシャペロンが寄与しているのかは明らかでなかった。ガラス基板にAgoを固定し、蛍光標識RNA鎖やシャペロン等の必要因子を加えると、蛍光RNA鎖がAgoに取り込まれ、RISCが形成される様を観察することに成功した。詳細に解析を行った結果、シャペロンはsiRNA/Dicer-2/R2D2複合体がAgoに結合する時間を引き延ばす事でRISC形成効率に寄与している事が明らかになった。標的切断過程の観察では、蛍光標識した標的RNAをガラス基板上に固定し、蛍光標識RISCの相互作用と標的切断の様子を観察した。本研究では、蛍光1分子観察技術を用いて、RNA干渉の分子機構を理解する事を目標としている。初年度は、RISC形成や切断活性の1分子可視化に成功し、分子機構の一端が明らかになった。引続き、RNA干渉の分子機構を探り、多種多数の分子による協調反応機構の解明に努める。また、今後のより詳細な解析の為に基盤となる1分子観察技術の開発に努める。
マス・プロブレムとその次数構造

研究目的として挙げていたΠ01集合の弱次数全体の次数構造Pwの稠密性の問題の解決には至らなかったが,筆者は,PwがΣ11集合の弱次数構造と密接な関係にあることを見出し,その結果を国際会議CTFMにおいて発表した.前年度より,木原貴行氏との共同研究として行ったeffective strong nullnessの研究は,夏から秋にかけて深め,もともとの集合論の概念であるstrong nullnessの特徴付けなどを含む結果を得,論文にまとめ学術誌へ投稿した.strong nullnessの特徴付けは,ランダムネスの研究で培われた証明技法と計算可能性の相対化を用いることで示され,大変興味深い研究である.同氏とは,effectiveΔOn関数を含む関数のクラスや(<ω,1,tt)-還元可能性を含む様々な還元可能性に関して,Weihrauch還元可能性に関連した研究として,やはり夏から秋にかけて共同研究を行い,得られた結果を論文とし,学術誌へ投稿した.5月中旬から6月中旬にかけての米国での滞在,6月中旬から7月上旬にかけての英国での滞在により,様々な知識を吸収し,新しい研究の方向性を見出すことができた.米国では,ランダム性のPropagationという性質に関して,Hudelson氏,Simpson教授,横山啓太氏と共同研究を行い,論文を作成し学術誌に投稿した.また,秋から春にかけて,彭寧々氏との共同研究として,あるランダム性を別のランダム性により定義できるか否かを問い,研究をした.この研究は,Liang Yu教授がMartin-Loefランダム性について行っていた研究をさらに一般的に行ったものである.結果は論文にまとめ,現在,学術誌に投稿中である.また,冬から春にかけて,堀畑佳宏氏との共同研究として,文字列の理論の研究を行った.この研究は,Grzegorczyk教授とZdanowski氏の提出した未解決問題の肯定的解を与えた.結果は論文にまとめ,学術誌に投稿中である.研究目的の一つであったП^0_1マス・プロブレムの次数に関する性質を解明に関して,二種類の研究成果を得た.第一は稠密性の問題に関する成果で,W,及び,tl次数構造が稠密か否かという問題に関して,部分解を与えた.この部分解の証明の手法は,自然数の集合を入力として,その入力に相対的にП^0_1やП^0_2など,ある抑えられたの複雑さを持つ自然数上の関数の集合を出力とするオペレータを良い性質を持つように構成し,そのオペレータを使って稠密性の証拠となるП^0_1マス・プロブレムを構成するという手法である.望ましい性質を持つП^0_1マス・プロブレムを構成するために,上記のようなオペレータを経由する手法は独創的なものである.第二はП^0_1マス・プロブレムの「大きさ」を表す性質に関し,木原貴行氏との共同研究による成果である.集合論の分野で研究されていたStrong Nullnessという概念を計算理論の文脈でとらえ直し,П^0_1マス・プロブレムの性質として定義を与え,それがdiminutiveと呼ばれている他の概念と同値になることを示した.また,その性質を満たすП^0_1マス・プロブレムのW次数は,Martin-Loef乱数全体のw次数やDNRと呼ばれる関数全体のw次数と比較不可能になることを示した.もう一つの目的であった,より一般的な問題のクラスの探求に関しては,二種類の研究成果を得た.どちらも木原氏との共同研究により得られたものである.第一は,マス・プロブレムの間に導入されていた様々な還元可能性の概念を,定義域の分割やWeihrauch還元可能性により特徴づけたことである.この成果はマス・プロブレムの次数の研究とWeihrauch次数の研究に結びつきを与えるもので興味深い.第二は記述集合論の分野で研究されていたΔ^0_n関数(nは自然数)を計算可能性理論の文脈でとらえ直したものの定義を与え,その関数とlowと呼ばれる計算可能性理論の分野で考えられていた性質との関係を明らかにしたことである.導入されたΔ^0_nに対応する関数の集合は,記述の複雑さに関する階層を構成する.研究目的として挙げていたΠ01集合の弱次数全体の次数構造Pwの稠密性の問題の解決には至らなかったが,筆者は,PwがΣ11集合の弱次数構造と密接な関係にあることを見出し,その結果を国際会議CTFMにおいて発表した.前年度より,木原貴行氏との共同研究として行ったeffective strong nullnessの研究は,夏から秋にかけて深め,もともとの集合論の概念であるstrong nullnessの特徴付けなどを含む結果を得,論文にまとめ学術誌へ投稿した.strong nullnessの特徴付けは,ランダムネスの研究で培われた証明技法と計算可能性の相対化を用いることで示され,大変興味深い研究である.同氏とは,effectiveΔOn関数を含む関数のクラスや(<ω,1,tt)-還元可能性を含む様々な還元可能性に関して,Weihrauch還元可能性に関連した研究として,やはり夏から秋にかけて共同研究を行い,得られた結果を論文とし,学術誌へ投稿した.5月中旬から6月中旬にかけての米国での滞在,6月中旬から7月上旬にかけての英国での滞在により,様々な知識を吸収し,新しい研究の方向性を見出すことができた.米国では,ランダム性のPropagationという性質に関して,Hudelson氏,Simpson教授,横山啓太氏と共同研究を行い,論文を作成し学術誌に投稿した.

また,秋から春にかけて,彭寧々氏との共同研究として,あるランダム性を別のランダム性により定義できるか否かを問い,研究をした.この研究は,Liang Yu教授がMartin-Loefランダム性について行っていた研究をさらに一般的に行ったものである.結果は論文にまとめ,現在,学術誌に投稿中である.また,冬から春にかけて,堀畑佳宏氏との共同研究として,文字列の理論の研究を行った.この研究は,Grzegorczyk教授とZdanowski氏の提出した未解決問題の肯定的解を与えた.結果は論文にまとめ,学術誌に投稿中である.w次数構造等の稠密性の問題を解決するためには,新しい証明手法の開発が不可欠である.筆者は幾つかの証明手法を開発したが,それらにより完全解を与えることは未だ出来ていない.П^0_1マス・プロブレムが大きいことや小さいことを表す概念について,より理解を深める研究をしている過程で,当初,想定していなかった測度論や乱数の理論と結び付く興味深い結果が次々と得られ,束構造の性質としての研究にまで至らなかった.稠密性の問題に関しては,完全な解決に向けて,今後も引き続き研究を行う.П^0_1マス・プロブレムの「大きさ」を表す様々な概念が,当初は想定していなかった形で,乱数と深い関係があることが明らかになったので,今後は乱数についても研究を行う.平成24年度に研究を行う予定であった,Weihrauch次数が扱える問題たちに,マス・プロブレムと関連した記述の複雑さの階層を導入することに関して,Weihrauch次数が扱える問題たちに導入する記述の複雑さによる階層として,木原氏との共同研究により導入したlow_n関数やeffective Δ^0_n関数はよい階層をなしていることを既に明らかにした.後者でn=2のものは1次数と関連付けることができると予想しており,その研究を今後行う.
アルツハイマ-病に関連した遺伝子異常の解析

本研究においてはアルツハイマ-病の発症のメカニズムについて分子遺伝学的手法により、特にβアミロイドの形成メカニズムと家族性アルツハイマ-病家系の分析を行った。以下に主要な成果を列記する。1.βアミロイド前駆体(APP)からβアミロイドが形成される過程はアルツハイマ-病発症メカニズムのひとつであることが明らかとなった。即ち、APP遺伝子の717ValがIleに変更したためにアルツハイマ-病の発症する家系を発見した。717位はβアミロイド領域のすぐ近傍にあり、βアミロイド形成のプロセッシングの過程にこの変異が影響を与えていると考えられる。2.APP遺伝子に変異のない家族性アルツハイマ-病家系では21番染色体上の別の遺伝子(未知)が関与していることが示唆されている。この遺伝子の同定を目指して21番染色体のこの領域の物理地図の作成、及びYACなどにクロ-ン化されたDNAの分離を行った。3.βアミロイド沈着のモデル動物の作成を目指し、APP遺伝子を導入したトランスジェニックマウスを作成した。C末端の100アミノ酸を持つトランス遺伝子を導入したケ-スが有効なことが示唆された。4.3のケ-スと同様、βアミロイド沈着のモデル系として神経細胞へAPP遺伝子を導入し、その影響を調べた結果、神経細胞への分化に伴ってC末端100アミノ酸の断片は神経毒性を示すことが示唆された。5.老化モデルマウスSAMにおいて老化に伴ってAPPに反応性の沈着物が見られた。これも老人班形成のモデル系になるかもしれない。
アミノ基転移酵素およびその人工変異体の高次構造と作用機作の解析

補酵素がピリドキサミン5′-リン酸型の大腸菌アスパラギン酸アミノ基転移酵素(PMP-AspAT)について、高分解能X線構造解析を行った。回折強度データは高エネルギー物理学研究所の放射光を用い、巨大ワイセンベルグカメラで収集した。AspATは分子量44000のサブユニット2個からなる2量体で、2回対称軸を持っている。PMP-AspATの全体構造は、すでに構造決定した補酵素がピリドキサールリン酸でるAspAT(PLP-AspAT)と同じopen型であった。PMP-AspAT・succinateの全体構造は、PLP-AspAT・2-methylaspartateの構造とよく似ており、PMP-AspATもPLP-AspATと同様に、基質結合時にopen型からclosed型に分子全体が大きなコンホメーション変化を起こすことが明らかになった。基質を認識するArg292はopen型のPMP-AspATでは内側を向いており、PLP型とは異なっていた。PMP-AspAT・glutarateの全体構造は、予想に反してopen型であった。基質阻害剤であるglutarateは、活性部位の人口付近に存在し、closed型のPMP-AspATのsuccinateの結合様式とは大きく異なっていた。このことは、PMP-AspATとC_5基質である2-oxoglutarateの複合体は溶液中でopen型とclosed型の平衡ににあり、open型の複合体の方がより多いとの分光学的実験の結果と一致する。またこれはopen型AspAT複合体の3次構造決定の最初の例である。活性部位のPLPのO3と相互作用している、Asn194をAlaで置換したAsn194Ala、Asn194とTyr225を置換した2置換変異型酵素Asn194la+Tyr225PheのX線結晶構造解析を行った。失われたO3とAsn194の水素結合は、新たに水分子が入ることにより回復されていた。これがAsn194Alaが活性をかなり維持している理由である。また2置換変異型酵素はほとんど失活しているが、これはO3とTyr225の水素結合が失われ、O3上の負電荷がピリジン環内に流れ込み、シッフ塩基のpKaを上げたためである。これらの変異型酵素の全体構造は野生型と同じで、活性部位の構造も変異部分を除いて野生型と同じであった。アミノ基転移酵素はアミノ酸のアミノ基を2ーオキソ酸に転移して別のオキソ酸と新たなアミノ酸を生ずる反応を触媒する酵素である。補酵素はPLP(V.B6)である。この酵素の内の一つ、大腸菌アスパラギン酸転移酵素(Asp AT)はアミノ基をPLPに渡してオキザロ酢酸を生成する。活性部位のPLP近傍に在り、反応に大きく与っているTyr70、Tyr225、Arg292などを人工的に他のアミノ酸に置換した変異型酵素(ミュ-タント)Y70F,Y70W,Y225FおよびR292V酵素の高次構造と作用機作の解析を行った。これらの良質な結晶を作成しX線回折計や放射光を用いて回折デ-タを集めた。構造は分子動力学、分子力学、X線回折強度を併用して精密化した。Y70Fは野生型の15%、Y225Fは0.3%の活性を有す。Y70Fの構造はほぼ野生型と同じであり、F70のベンゼン環は野生型の場合と同じ位置に存在していた。このベンゼン環とC_5基質がよく相互作用しY70によって認識され得るということがモデルフィッティングから明らかとなった。ついで、Y70W酵素・基質類似物を結晶化し構造解析を行った。基質類似物は活性部位に存在していたがPLPとシッフ塩基を作っていない、という野生型との大きな差異が見出された。W70がバルキ-のため、その立体障害の効果によるものと考えられる。R292Vはアスパラギン酸に対する活性を失っているが、芳香族アミノ酸に対する活性が増大している。このミュ-タントの解析より、全体構造は野生型と似ていて、292位の電荷が消失しているにもかかわらずV292の側鎖は野生型の場合の側鎖と同じ位置に在るという注目すべき事実が判明した。Y225Fは活性が激減しているのに構造は余り変化していなかった。活性には水素結合や電子状態が効いている様である。他のアミノ酸転移酵素の結晶作成や構造解析を進めている。大腸菌のアスパラギン酸アミノ基転移酵素(AspAT)および基質アナログ2-メチルアスパラギン酸(2-MeAsp)との複合体、AspAT:2-MeAsPの高分解能(1.8A)X線構造解析を行なった。データは高エネルギー物理学研究所の放射光を用い、巨大ワイセンベルグカメラで収集した。AspATは分子量44000のサブユニット2個からなる2量体で、2回対称を持っている。各サブユニットは2つのドメイン(大ドメインと小ドメイン)からなる。AspATおよびAspAT:2-MeAspの構造解析から、基質結合時にこの酵素は小ドメインが大きく動き活性部位を閉じることがわかった。また活性部位の詳細な構造を決定できたので、反応の立体特異性の機構および反応の律速段階である基質からのα-プロトンの引き抜きまでの反応機構が明らかになった。

また大腸菌のAspATは高等動物AspATと異なり、アスパラギン酸だけでなく芳香族アミノ酸に対してもかなりの活性を示す。AspATの活性部位の構造を利用して、Trpを例にモデルフィッティングを試みた。Trpのインドール環はArg292の側鎖、lle17,Leu18と相互作用をしており、芳香族アミノ酸に対する活性を説明できた。Asp222は活性部位に存在する補酵素ピリドキサール-5'-リン酸(PLP)のN原子と静電相互作用をする。Asp222を中性アミノ酸に変えると失活するがGluに変えても30%の活性を保持する。つまり、Asp222はN原子上に正電荷を固定させる役割を持っていると推定される。これを証明するために変異型AspAT、PLPのN原子をメチル化したN-methylated PLP(N-MePLP)とAsp222Alaを組み合わせ、Asp222(N-MePLP)のX線解析を行なった。N-MePLPの回りのアミノ酸残基の配置は野生型の場合と大きな違いはなかったが、N-MePLPの配向は野生型とかなり異なっていた。それでも活性が回復することからPLPのN原子上に正電荷が局在化することが反応にとって重要でありAsp222はその役割を担っていることがはっきりした。補酵素がピリドキサミン5′-リン酸型の大腸菌アスパラギン酸アミノ基転移酵素(PMP-AspAT)について、高分解能X線構造解析を行った。回折強度データは高エネルギー物理学研究所の放射光を用い、巨大ワイセンベルグカメラで収集した。AspATは分子量44000のサブユニット2個からなる2量体で、2回対称軸を持っている。PMP-AspATの全体構造は、すでに構造決定した補酵素がピリドキサールリン酸でるAspAT(PLP-AspAT)と同じopen型であった。PMP-AspAT・succinateの全体構造は、PLP-AspAT・2-methylaspartateの構造とよく似ており、PMP-AspATもPLP-AspATと同様に、基質結合時にopen型からclosed型に分子全体が大きなコンホメーション変化を起こすことが明らかになった。基質を認識するArg292はopen型のPMP-AspATでは内側を向いており、PLP型とは異なっていた。PMP-AspAT・glutarateの全体構造は、予想に反してopen型であった。基質阻害剤であるglutarateは、活性部位の人口付近に存在し、closed型のPMP-AspATのsuccinateの結合様式とは大きく異なっていた。このことは、PMP-AspATとC_5基質である2-oxoglutarateの複合体は溶液中でopen型とclosed型の平衡ににあり、open型の複合体の方がより多いとの分光学的実験の結果と一致する。またこれはopen型AspAT複合体の3次構造決定の最初の例である。活性部位のPLPのO3と相互作用している、Asn194をAlaで置換したAsn194Ala、Asn194とTyr225を置換した2置換変異型酵素Asn194la+Tyr225PheのX線結晶構造解析を行った。失われたO3とAsn194の水素結合は、新たに水分子が入ることにより回復されていた。これがAsn194Alaが活性をかなり維持している理由である。また2置換変異型酵素はほとんど失活しているが、これはO3とTyr225の水素結合が失われ、O3上の負