hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
贈与と交換の教育人間学的研究

平成19年2月、京都大学に提出し学位を認められた『贈与と交換の教育人間学-漱石と賢治における贈与=死のレッスン』を基にして、再構成して書き直した単著『贈与と交換の教育学-漱石、賢治と純粋贈与のレッスン』を、今年の2月に東京大学出版会より出版した。これは本研究の主題である「贈与と交換の教育人間学的研究」の集大成というべき成果である。このなかで以下のようなことを明らかにした。まず、教育の起源が交換ではなく、一切の見返りを求めない贈与する「最初の先生」の出現にあること、そしてその贈与は交換を基調とする共同体の道徳を侵犯し、共同体を超えた他者への倫理を生みだすことを、ソクラテス、イエスやシャカ、ニーチェのツァラトゥストラ、そして夏目漱石の『こころ』の先生などを手がかりに論じた。このことから、人はなぜ教えるのかという教育哲学の根源的な問いにたいする答えと、教えるということがはらむ思想的意味が明らかになった。またこの極限的な出来事というべき純粋贈与の在り方、そしてそれに関連する他者の在り方や他者への倫理を、宮澤賢治の文学作品を手がかりに明らかにした。さらにこのように明らかにされた教育の起源論から、教育が共同体のなかでの発達を目指すだけでなく、共同体を超えた生成変容を実現するものであることを明らかにした。この議論から「学校論」:「ボランティア論」「マナー論」を論じることで、日本の戦後教育学が共同体の教育に閉じられているという問題点を指摘し、他者に開かれた新たな教育の可能性を示した。贈与と交換の教育人間学的研究ということで、他者をめぐるメディアとしての絵本研究としては、「世界を開くクマの絵本」(『ビオストーリー』5号3月発行の予定この時点では未刊行)を執筆した。宮澤賢治の作品研究として「子どもの物語はどこから力を得ているのか-宮澤賢治の『雪渡り』におけるオノマトペの力」(刊行済み)、またより直接的に純粋贈与者としての賢治の誕生を描いた「風が贈与する生命の倫理と心象スケッチ-贈与と交換の教育人間学」(教育哲学会『教育哲学研究』93号5月発行の予定)を執筆した。特にこの後者では、賢治の贈与者への転回の秘密が、賢治の文学的手法である心象スケッチにあることを明らかにした。また直接的に贈与と交換をテーマとしたわけではないが、贈与と交換の背景となる生成と発達の原理に基づいて、幼児教育論の構築の可能性を明らかにした。また今年度に出版を予定していた原稿『贈与と交換の教育人間学-漱石と賢治における贈与=死のレッスン』は、すでに400字詰めで1000枚を超え、あとは結論部の執筆を残すのみとなった。年度内の完成はできなかったが、研究は前進しており次年度には出版できる見通しである。資料としては賢治の作品と研究および絵本を中心に収集が進んだが、人類学・民俗学のテキストの収集がはかどっていない。今年度は当初予定していた花巻・盛岡での実地踏査ができなかったが、齊藤博の『質屋史の研究』などが参考になり、あらためて賢治をめぐる地域経済調査を限定することができそうである。「贈与と交換の教育人間学的研究」は、たんに贈与と交換にかかわらず、蕩尽や供犠あるいは遊びにまで関わっている。それというのも遊びは、蕩尽や供犠などと同じく、有用性に向けられるはずのエネルギーと時間とを、豪奢にも無意味なものに費やす出来事であるからだ。とりわけ子どもという存在に関わる教育人間学では、遊びは重要な主題となる。そのような理由から、『意味の躍動する生とは何か-遊ぶ子どもの人間学』は、本研究課題にとって成果の一つと言うことができる。さらに本研究の中心的課題をあつかったものとして400字詰めで1000枚を超える原稿『贈与と交換の教育人間学-漱石と賢治における贈与=死のレッスン』をようやく完成させた。

この原稿は京都大学に提出され、この2007年3月23日博士論文として認められた。この博士論文では漱石と賢治の文学作品を手がかりに、教育における贈与と交換の次元が、これまで語られることのなかった角度から捉えられている。なおこの原稿は一部書き直して今年に出版される予定である。しかし残された課題も多い。とりわけ賢治における「与えること」と「受け取ること」のこだわりは未だ十分には捉えられていない。このことについては、一方で賢治のテキストを通して賢治の思想としての贈与と交換を捉えるとともに、他方での賢治の生きた世界理解を必要としている。あらためて現地に赴き調査をしたいと考えている。昨年2月、京都大学に提出し学位を認められた『贈与と交換の教育人間学-漱石と賢治における贈与=死のレッスン』を基にして、再構成して書き直した単著『贈与と交換の教育学-漱石、賢治と純粋贈与のレッスン』を今年の2月に出版した。これは本研究の目的である「贈与と交換の教育人間学的研究」の集大成というべき成果である。このなかで以下のようなことを明らかにした。まず、教育の起源が交換ではなく、一切の見返りを求めない贈与する「最初の先生」の出現にあること、そしてその贈与は交換を基調とする共同体の道徳を侵犯し、共同体を超えた他者への倫理を生みだすことを、ソクラテス、イエスやシャカ、ニーチェのツァラトゥストラ、そして夏目漱石の『こころ』の先生などを手がかりに論じた。この極限的な出来事というべき純粋贈与の在り方、またそれに関連する他者の在り方や他者への倫理を、宮澤賢治の文学作品を手がかりに明らかにした。さらにこのように明らかにされた教育の起源論から、教育が共同体のなかでの発達を目指すだけでなく、共同体を超えた生成変容を実現するものであることを明らかにした。そして、この議論から日本の戦後教育学が共同体の教育に閉じられているという問題点を指摘し、他者に開かれた新たな教育の可能性を示した。日本では贈与論を基にした教育学的研究はほかになく、また私の知る限り海外にもこのような研究はない。
舞楽曼荼羅供における舞楽のデジタル再現とその応用―丹生都比売神社を事例として―

本研究では、丹生都比売神社における舞楽曼荼羅供のデジタル再現を目指し、2018年度中に、その基礎的な部分となるコンテンツの作成を目指している。具体的には、舞楽曼荼羅供の舞台となった神社境内全体の3DCGによる再構築、舞楽舞台のデジタル再現、舞楽のモーションキャプチャ計測、舞楽演者のキャラクタモデル制作である。このうち、神社境内の再構築については、以前に作成した地形や建造物、植栽などを含む全モデルデータをブラッシュアップしつつ、VR用にデータ量を調整した。舞楽舞台については、現在丹生都比売神社には存在していないため、神奈川雅楽部の協力の下、現存しているものを参考としつつ、仮想的に再現をおこなった。舞楽のモーションキャプチャは、神奈川工科大学・小島一成准教授に協力を仰ぎ、実際の演者に協力を仰ぎ、舞楽の代表的な演目である「萬歳楽」「馬抜」のデータを計測した。この際、演者自身に聞き取り調査を行い、自身の舞楽に対する考えや想いを記録している。またキャラクタモデルの作成にあたっては、舞楽衣装の形状計測、テクスチャ用写真撮影をおこなった。これらのデータを基に、舞楽の演目の一部をCGアニメーションで再現したコンテンツの制作をおこなった。この成果は8月にイタリア・ミラノ市で開催された国際図学会(ICGG2018)の学会誌に採択され、同学会で報告されている。また2019年度に向けた事前準備として、舞楽曼荼羅供を代表するもう一つの要素である「庭讃」の撮影調査を神奈川県・観護寺にておこなった。2018年度は、おおむね当初の計画に進行しているといえるが、一部3DモデルをVRコンテンツに応用するため、制作手法を含めて見直しをおこなう必要があることが判明した。また、キャラクタアニメーションにおけるモーションキャプチャデータの制作工程が、スムーズに行えていないため、併せて今年度の課題としたい。2018年度末に研究代表者が重度の網膜剥離を発症したために、現在療養中である。大幅に視力が低下しており、現状ではCG制作を含めた目に大きな負担のある作業は困難な状況であるが、2019年9月に再手術が予定されており、ある程度の視力回復が見込まれる。上記の理由により、研究計画の大幅な変更および遅延を余儀なくされている。2019年度は病状の回復を図りながら、研究協力者と可能な限り計画を遂行していく努力をしつつも、前年度の課題整理および、2020年度に予定していた聞き取り調査等を前倒して、作業を進めていくこととしたい。
復腔鏡下Hill法迷走神経切離術における手技および胃・胆嚢運動機能に関する実験的検討

【目的と方法】本研究では,雑種成犬を用いて,腹腔鏡下に安全かつ迅速に迷走神経切離術を行うための手技開発をおこなった.その際,開腹手術で行われていたHill法迷走神経切離術(後幹切離+前技選択的近位迷切)を腹腔鏡下に行った.後幹切離が,胃および胆嚢運動機能に及ぼす影響に関する検討も併せて行った.【結果】手技開発の段階で大きな問題となったのは,雑種成犬では,後幹を切離するとき,高率に右胸腔にて開胸し,気胸となることであった.前枝の切離時に行う,胃流入血管の切離には超音波メス(55,500Hz:鋏状)が有用であった.この使用により,止血クリップが不要となったため,血管剥離の距離が短くて済み,結果的に,出血量の減少と,手術時間の大幅な短縮(平均118分から平均63分に短縮)をもたらした.アセトアミノフェンによる胃排泄能の測定は,経口投与法に問題があり,有意義なデータが得られなかった.このため,胃内視鏡検査により残渣量を6例に測定したが,6例中4例のイヌにおいて,中等度多量の残渣が観察された.経時的には術後約4週間で,全てのイヌで残渣の消失を認めた.胃排泄能障害は,一過性のものであることが示唆された.超音波検査法による胆嚢径の測定は,イヌでは胸腔が胆嚢の上に被さる影響で,良好なデータは得られなかった.かろうじて経時的変化を観察できた1例では,術後1週目にセオスニンによる胆嚢収縮は認められなかった.4週目でも胆嚢収縮は微弱であったが,3ヶ月後には術前の収縮率の50%程度に復帰していた.正確な運動機能評価には,測定法の改良が必要である.【目的と方法】本研究では,雑種成犬を用いて,腹腔鏡下に安全かつ迅速に迷走神経切離術を行うための手技開発をおこなった.その際,開腹手術で行われていたHill法迷走神経切離術(後幹切離+前技選択的近位迷切)を腹腔鏡下に行った.後幹切離が,胃および胆嚢運動機能に及ぼす影響に関する検討も併せて行った.【結果】手技開発の段階で大きな問題となったのは,雑種成犬では,後幹を切離するとき,高率に右胸腔にて開胸し,気胸となることであった.前枝の切離時に行う,胃流入血管の切離には超音波メス(55,500Hz:鋏状)が有用であった.この使用により,止血クリップが不要となったため,血管剥離の距離が短くて済み,結果的に,出血量の減少と,手術時間の大幅な短縮(平均118分から平均63分に短縮)をもたらした.アセトアミノフェンによる胃排泄能の測定は,経口投与法に問題があり,有意義なデータが得られなかった.このため,胃内視鏡検査により残渣量を6例に測定したが,6例中4例のイヌにおいて,中等度多量の残渣が観察された.経時的には術後約4週間で,全てのイヌで残渣の消失を認めた.胃排泄能障害は,一過性のものであることが示唆された.超音波検査法による胆嚢径の測定は,イヌでは胸腔が胆嚢の上に被さる影響で,良好なデータは得られなかった.かろうじて経時的変化を観察できた1例では,術後1週目にセオスニンによる胆嚢収縮は認められなかった.4週目でも胆嚢収縮は微弱であったが,3ヶ月後には術前の収縮率の50%程度に復帰していた.正確な運動機能評価には,測定法の改良が必要である.
ガーナ共和国の野生動物・家畜におけるクラミジア分布調査とゲノム多様性

ガーナ共和国に生息する野生動物・家畜において、ヒトや家畜の重要な病原体であるクラミジア分布調査と遺伝子型別を行い、国内では実施不可能な、多様な動物を対象とした包括的な実態調査を計画した。昨年度、ロストバゲージにより生じたトラブルにより解析を今年度に持ち越した、ガーナ北部の在来家畜の血液DNAの解析は、現地冷凍庫の故障により、実施できなかった(血液を用いた原虫の抗体保有状況調査は昨年度実施し、原著論文として報告できた)。そこで、今年度の渡航では、アクラ近郊で飼育される家畜・大型齧歯類(グラスカッター)、環境(土壌・水)から採材しクラミジア(動物)およびクラミジアと同様にヒトや家畜に病原性を示す細胞内寄生細菌である抗酸菌の保有状況の調査を行った。また、包括的な解析として、これら動物が保有する細菌叢を16Sアンプリコンシークエンスにより解析した。加えて、今年度は特に、これまでに行ったガーナの家畜、野生動物の糞便、吸血節足動物からクラミジア科(パラクラミジア科を含む)や他の細胞内寄生細菌、原虫のスクリーニングにおける、陽性検体の詳細な遺伝子型別を実施した。これにより、・野鳥、家畜の間で同一の遺伝子型のクラミジアが循環していること、・野生のグラスカッターに吸血しているダニがヒトや家畜の病原体を保有していること、・グラスカッターは、野生と飼育されているもので保有菌叢が異なること、などを明らかにすることができた。成果は、複数の原著論文として報告する予定である。また、日本国内で採材したクラミジア陽性検体を用いて、コピー数の少ない検体中から、これまでの16S rRNAや多様性の大きい表面抗原遺伝子(ompA)に加え、enoAやgltAなど複数のハウスキーピング遺伝子を解析する系を構築することができ、前述のガーナ調査の検体の解析に用いることができた。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。ガーナ共和国に生息する野生動物・家畜において、人や家畜の重要な病原体であるクラミジア分布調査と遺伝子型別を行う。国内では実施不可能な、多様な動物を対象とした包括的な実態調査を計画した。さらに、遺伝子型別に関して、野外検体からの直接全ゲノム配列解読による比較ゲノム解析までを目指す。1)ガーナの野生動物・家畜におけるクラミジア保有状況の実態調査事業開始前の3月に、別プロジェクトにてガーナに渡航した。当初計画では家畜のサンプルはアクラ近郊の市場で入手予定であった。ところが、ガーナ大カウンターパートより、野鳥採集予定ヶ所の麓の村に家畜が飼育されており、そこの家畜からの採材を提案された。カウンターパートの仲介の元、村人の協力が得られ、計画通り、野鳥、家畜(ヤギ、ヒツジ、ニワトリ)から採材を行うことができた。現地にて抽出したDNAを日本へ持ち帰り、クラミジアDNAの検出を試みた。各動物から予想以上の割合(いずれの動物からも20%以上)でクラミジアが検出された。現地で抽出したDNAの品質の問題により配列解析は当初難航したが、DNAの増幅酵素の使用、PCR反応に用いる酵素を検討することによって、改善されつつある。2)仮想野外臨床検体からのクラミジア濃縮と全ゲノム配列決定今年度は、クラミジア濃縮に用いる抗クラミジア単クローン抗体の性状解析と大量調製を行った。抗クラミジアLPS単クローン抗体を産生するハイブリドーマを大量培養し、硫安法を用いて濃縮を行った。また、全ゲノム配列決定には、ガーナで検出されるクラミジアの比較対象として、別プロジェクトで下痢症を呈する牛より分離したクラミジア2株の全ゲノム解析をスタートした。生物多様性の宝庫ともいわれるガーナ共和国に生息する野生動物・家畜において、人や家畜の重要な病原体であるクラミジア分布調査と遺伝子型別を行う。多様な宿主域を示すクラミジアは、自然界では様々な動物に保有されており、各種動物における保有状況の把握が重要である。予備調査の結果、ガーナの野生鳥類における、これまでとは全く異なる型のクラミジアの分布が示され、国内では実施不可能な、多様な動物を対象とした包括的な実態調査を計画した。1)ガーナの野生動物・家畜におけるクラミジア保有状況の実態調査今年度は、ガーナ大から研究員を1名受け入れ、国内で飼育される家畜におけるクラミジア保有状況調査を行った。結果、農場で飼育されている牛において、一定の割合で低病原性のクラミジアが分布していることを明らかにすることができ、学会発表を行った。研究員は帰国後、本国においてクラミジア調査を継続しており、我々が調査に赴くまでの体制構築に貢献してくれるものと期待している。9-10月の渡航時には、ガーナ大附属農場で飼育される家畜(山羊・羊)のクラミジアを始めとする病原単体保有状況調査を行った。予想よりも高い割合で、低病原性のクラミジア、ヘルペスウイルスなどが大学附属農場飼育家畜に分布していることが明らかとなった。今年度は、DNAの抽出法、PCRに用いる酵素の検討を行い、検出感度の向上を実現できた。粗放的に飼育されている家畜(昨年度調査結果)と、集約的に飼育されている家畜(今年度の調査結果)のデータから、ガーナの家畜におけるクラミジアの存在様式を考察するため、現在詳細な解析を行っている。2)仮想野外臨床検体からのクラミジア濃縮と全ゲノム配列決定濃縮に用いる単クローン抗体の調製法を検討した。現在、高力価の抗体を用いて、仮想野外臨床検体からのクラミジア濃縮を検討中である。カウンターパートと密に連絡をとりあい、検体の収集、解析が順調に進んでいるため。

生物多様性の宝庫ともいわれるガーナ共和国に生息する野生動物・家畜において、人や家畜の重要な病原体であるクラミジア分布調査と遺伝子型別を行う。多様な宿主域を示すクラミジアは、自然界では様々な動物に保有されており、国内では実施不可能な、多様な動物を対象とした包括的な実態調査を計画した。1)ガーナの野生動物・家畜におけるクラミジア保有状況の実態調査今年度は、9月中下旬にかけて調査渡航を行った。ガーナ大学附属農場で飼育される鶏(地域種)計100羽の糞便をサンプルとした。同農場に於いては、昨年度の調査でヤギ・ヒツジから一定の割合で低病原性のクラミジア(Chlamydia pecorum)が検出されたが、鶏の検体は全てクラミジア陰性であった。一昨年、郊外の集落で粗放的環境の元飼育されている鶏からは、同一集落で飼育されているヤギと同じC. pecorumが一定の割合で検出された。この際に検出されたC. pecorumは、いわゆる高病原性と呼ばれるクレードに配置されるものが多かった。一方、ガーナ大農場でヤギから検出されたC. pecorumは低病原性株と近い位置に配置された。高病原性株と低病原性株の間では宿主域も違う可能性が示唆された。また、近年、ダニなどの節足動物が保有するクラミジアの存在が報告された。今回の渡航では家畜に付着するダニからもDNAを抽出し、現在スクリーニングを行っている。2)野外臨床検体のMLSTおよび全ゲノム配列決定単クローン抗体を用いたクラミジアの濃縮に加え、野外臨床検体から粗抽出したDNA溶液について、宿主由来DNAを選択的に除去することにより、含まれる病原体を検出する精度および感度が向上するという報告がなされこの系の導入も検討した。抗体による濃縮、宿主由来核酸の除去2通りの方法により、MLSTやゲノム解析等、検出した株のより詳細な解析が可能になりつつある。計画通り、検出されるクラミジアの遺伝子型と由来宿主の関係を示唆するデータが得られ始めている。詳細な解析をするための体制も整いつつあり、今年度は最終年度としてまとめのデータが得られる見込みができているため。生物多様性の宝庫ともいわれるガーナ共和国に生息する野生動物・家畜において、ヒトや家畜の重要な病原体であるクラミジア分布調査と遺伝子型別を行う。多様な宿主域をもつクラミジアは自然界では様々な動物に保有されており、国内では実施不可能な、多様な動物を対象とした包括的な実態調査を計画した。1)ガーナの野生動物・家畜におけるクラミジア保有状況の実態調査今年度は9月に渡航し、ブルキナファソに近いガーナ北部で粗放的に飼育される在来家畜(ヤギ、ニワトリ)より採血を行った。DNA抽出をガーナ大で行う予定であったが、ロストバゲージにより、滞在時の予定を変更せざるを得なくなり、採取した材料は冷凍保存し、次年度(研究期間の延長申請を行った)渡航し解析することとした。昨年度、野生の大型齧歯類グラスカッターに寄生してダニを採取し、クラミジアを始め保有する病原体のスクリーニングを行った。クラミジア(パラクラミジア)は検出されなかったが、アナプラズマ属、エーリッキア属、バベシア属原虫が検出された。
YAGレーザー照射によるガラス中への希土類結晶ドット形成

本研究は、通常のNd : YAGレーザー(波長:1064nm)をテルライト系(TeO_2)およびビスマス系(Bi_2O_3)ガラス等に照射し、光機能性を有する希土類結晶ドットを作製すると共に、ドット形成のメカニズムを解明することである。なお、対物レンズ(x60)で集光し、レーザーの焦点がガラス試料表面にくるようにしてレーザー照射を行った。テルライト系ガラスで得られた成果は以下の通りである。(1)10BaO-10Sm_2O_3-80TeO_2系ガラスにレーザー照射(パワー:0.50.7W、照射時間:160s)を行うことにより、約345μmのドットが形成され、X線回折よりドットはSm_2Te_6O_<15>結晶相であることを明らかにした。また、レーザー照射をスキャンさせることによる、単結晶ライクな結晶ラインの作製にも成功した。(2)結晶粒径(偏光顕微鏡で観察)はレーザー照射時間の1/3乗に対して直線的に大きくなることから、Lifshitz-Slyozovモデルの適用が可能であり、レーザー照射による結晶成長は構成イオン(Ba^<2+>,Sm^<3+>,Te^<4+>)の拡散によって支配されていることを明らかにした。(3)10BaO-(10-x)Sm_2O_3-xLa_2O_3(orEr_2O_3)-80TeO_2ガラス(x=0,2,5)へのレーザー照射では、Sm_2O_3量の減少と共に結晶ドットの粒径は小さくなり、x=5の試料では結晶ドットの形成は偏光顕微鏡では観察されない。レーザー照射による結晶化はSm_2O_3量が8mol%以上必要である。ただし、ガラス試料を150°Cに加熱しながらレーザー照射を行うと、Sm_2O_3量が5mol%でも結晶化が起こる。このことは、YAGレーザー照射による結晶化が様々なガラス系へ適用できることを意味している。(4)結晶ドットのマイクロレーザーラマンスペクトル測定では、ピーク強度はガラスの場合と比べて顕著に大きくなるが、ピークの先鋭化は見られない。このことは、結晶ドットはSm_2Te_6O_<15>ナノ結晶からできていることを意味しており、レーザー照射での結晶化においても通常の電気炉による結晶化と全く同じ結晶化機構が成立していることが明らかになった。本研究は、通常のNd:YAGレーザー(波長:1064nm)をテルライト系(TeO_2)およびビスマス系(Bi_2O_3)ガラス等に照射し、光機能性を有する希土類結晶ドットを作製すると共に、ドット形成のメカニズムを解明することである。ビスマス系ガラスで得られた成果は以下の通リである。(1)Sm_2O_3-Bi_2O_3-B_2O_3系ガラスにおいて非線形光学結晶Bi_<0.7>Sm_<0.3>BO_3から成る透明な結晶化ガラスの創製に成功した。ビスマス系ガラスでは初めての発見である。(2)YAGレーザー(波長:1064nm)照射により、屈折率分布および結晶ドットの作製が可能である。10Sm_2O_<3.>30Bi_2O_<3.>60B_2O_3ガラスではレーザー照射により、結晶化ではなく屈折率分布が起こる。レーザーパワー1W、照射時間1(8160)16250秒では2(8160)1645μmの範囲で球状の屈折率分布領域の制御が可能である。(4)レーザー照射を走査(速度:5(8160)1625μm)させることにより、幅数μmの結晶ドットラインを書き込むことができる。(5)結晶ドットおよびラインのX線回折およびマイクロレーザーラマンスペクトル測定により、レーザー照射による生成する結晶相は熱処理の場合と同じBi_<0.7>Sm_<0.3>BO_3結晶である。個々の結晶ドットおよび結晶ラインから第二高調波が発生することを確認した。すなわち、光非線形性の結晶ドットの作製が可能になった。(6)Sm^<3+>と同様にYAGレーザーの基本波1064nmの光を吸収するDy_2O_3を添加した、12.5Dy_2O_<3.>30Bi_2O_<3.>57.5B_2O_3ガラスにおいてもSm_2O_3と同様な結晶ドットの形成を確認した。

また、レーザー照射をスキャンさせることによる、単結晶ライクな結晶ラインの作製にも成功した。(2)結晶粒径(偏光顕微鏡で観察)はレーザー照射時間の1/3乗に対して直線的に大きくなることから、Lifshitz-Slyozovモデルの適用が可能であり、レーザー照射による結晶成長は構成イオン(Ba^<2+>,Sm^<3+>,Te^<4+>)の拡散によって支配されていることを明らかにした。(3)10BaO-(10-x)Sm_2O_3-xLa_2O_3(orEr_2O_3)-80TeO_2ガラス(x=0,2,5)へのレーザー照射では、Sm_2O_3量の減少と共に結晶ドットの粒径は小さくなり、x=5の試料では結晶ドットの形成は偏光顕微鏡では観察されない。レーザー照射による結晶化はSm_2O_3量が8mol%以上必要である。ただし、ガラス試料を150°Cに加熱しながらレーザー照射を行うと、Sm_2O_3量が5mol%でも結晶化が起こる。このことは、YAGレーザー照射による結晶化が様々なガラス系へ適用できることを意味している。(4)結晶ドットのマイクロレーザーラマンスペクトル測定では、ピーク強度はガラスの場合と比べて顕著に大きくなるが、ピークの先鋭化は見られない。このことは、結晶ドットはSm_2Te_6O_<15>ナノ結晶からできていることを意味しており、レーザー照射での結晶化においても通常の電気炉による結晶化と全く同じ結晶化機構が成立していることが明らかになった。
インフラサウンド観測用動的圧力計測システムの開発

本研究は、インフラサウンドと呼ばれている20 Hz以下の空気振動を圧力の絶対値として計測するシステムの開発が目的である。大気圧付近の静的な圧力に関しては、20 ppm以下の不確かさでの圧力測定技術、および短期的には1 ppm程度の安定した圧力発生技術を保有している。一方で、動的圧力測定技術はこれまでに確立されていない。レーザ干渉計で測定した光学的距離の変化から圧力値の変化を求める方法により圧力の高速測定が可能と考えられる。そこで、本研究では高精度な静的圧力測定技術、安定した圧力発生技術と、光学的手法による高速測定を組み合わせることにより、高速高精度な新たな圧力計測システムを開発する。
腫瘍新生血管傷害療法を応用した膵がんに対する新規アプローチ

有効ながん科学療法が確立されていない膵がんに対し、これまでにないアプローチとして腫瘍新生血管傷害療法の応用に関する基礎研究を実地した。腫瘍新生血管傷害療法とは、血管新生阻害剤ではなう抗がん剤によって増殖性内皮細胞を殺傷し、がんの治癒を目指す治療法のことである。本研究では、腫瘍新生血管傷害療法の有効性を検討するに先立ち、ヒト膵がんの特性を反映する膵がん同所移植モデル動物を作成した。同所移植したがんを病理組織学的に解析し、ヒト膵がんと共通点が多い乏血管性のがんであることを明らかにした。次に腫瘍新生血管特異的ペプチド(Ala-Pro-Arg-Pro-Gly ;APRPG)をPEG鎖の先端に提示し、ドキソルビシンを包含した粒子径約150nmの腫瘍新生血管標的化リポソームを調整した。この標的化リポソームを膵がん同所移植モデルに静脈内投与し腫瘍内分布を検討した結果、一般的な長期血中滞留型リポソームが投与後時間の経過に伴って新生血管近傍に漏出したのに対し、標的化リポソームは新生血管の内皮細胞に局在した。同所移植モデルにおいて抗がん実験を実施したところ、標的化リポソーム投与群では対照群と比較して有意に高いがん治療効果が得られた。治療後のがんの凍結切片を作製し、治療効果の作用機序を免疫組織染色によって解析した結果、標的化リポソーム投与群において腫瘍内の血管密度が著しく低下していた。さらにTUNEL染色によってアポトーシス細胞を可視化したところ、標的化リポソーム投与によって血管内皮細胞および周囲のがんにアポトーシスが観察された。以上の結果より、難治がんとして知られ、従来型DDSでは薬剤の送達が困難な乏血管性の膵がんに対し、標的化リポソームを用いた腫瘍新生血管傷害療法の有効性が示唆された。難治がんである膵がんの克服を目標とし,これまでにないアプローチとして腫瘍新生血管傷害療法の応用に関する基礎研究を実施した.本研究のターゲットであるがんの血管新生という現象は,周囲の環境の影響を強く受けるため,実験モデルにおいては移植する箇所によってその性状が大きく異なることが知られている.そこで,まずヒト膵がんの特性を反映した実験系を構築することを目的とし,膵がん同所移植マウスの作成から着手した.具体的には,ヒト膵がん細胞SUIT-2をヌードマウスの膵尾部に移植し,適度に成長した固形がんを摘出して組織切片を作成した後,免疫組織化学染色によって血管の数や大きさを評価した.対照としてはSUIT-2細胞をヌードマウス皮下に移植したモデルを用いた.その結果,本研究の趣旨に合致した乏血管性の膵がん同所移植モデルの作成に成功した.次に,腫瘍新生血管特異的ペプチド(Ala-Pro-Arg-Pro-Gly;APRPG)をPEG鎖の先端に提示し,ドキソルビシン(DOX)を包含した粒子径約150nmのDOX封入APRPG-PEG修飾リポソームを調製し,その治療効果を同所移植モデルにおいて検討した.その結果,DOX封入APRPG-PEG修飾リポソーム投与群では,対照のDOX封入PEG修飾リポソーム投与群と比較して高い治療効果が得られた.この結果から本来リポソームにとって障壁となる新生血管密度が低いという特徴を上手く利用することにより,効果的な治療法に繋がる可能性があることが示唆された.現在,DOX封入APRPG-PEG修飾リポソームの作用機構を明確にすることを目的とし,リポソームの体内動態,組織内分布の解析等を実施中である.有効ながん科学療法が確立されていない膵がんに対し、これまでにないアプローチとして腫瘍新生血管傷害療法の応用に関する基礎研究を実地した。
著作権法と表現の自由に関する総合的研究

著作権と表現の自由との調整のあり方について、私的複製や間接侵害等の各論的な検討を行い、また、比較法的観点及び憲法的観点を踏まえて研究を進めた。さらに、著作権を含む知的財産権の保護と情報の自由利用との調整のあり方について研究を行った。研究の成果については既に学会発表や論文公表を行っている。さらに、今後は、本研究成果を前提として、著作権法における権利侵害判断に関する研究を行う予定である。昨年度に引き続き、著作権保護と表現の自由との調整が問題となる著作権法上の諸問題についての研究を行った。本年度は、特に、間接侵害、私的複製の問題を中心に研究を進めた。平成24年8月にはドイツにて間接侵害に関する調査及び資料収集を行い、その成果を論文にまとめて公表した(高林龍他編『現代知的財産法講座III知的財産法の国際的視座』参照)。同論文では、我が国の著作権法とドイツの著作権法とが侵害訴訟における被告適格について同様の規定を有するにもかかわらず、全く異なる理解を示していることを明らかにした上で、ドイツ著作権法の間接侵害の規律のあり方を参考にして、現在の我が国の判例・学説の問題点や課題を指摘し、間接侵害者に対しても差止請求を認めるべきことを主張しつつ、著作権者の実効的な救済と間接侵害者の予測可能性の確保とのバランスを実現するために、差止請求の相手方となるべき間接侵害者の範囲をいかに画するべきかについて、具体的な検討を行った。また、私的複製に関する研究については、その研究成果を踏まえ、平成25年4月の著作権法学会において私的複製に関するシンポジウムを開催し、司会を務めた。同シンポジウムでは、私的複製の権利制限の範囲が立法及び判例上徐々に縮減される傾向にある現状を指摘し、そのような傾向は私的複製をあくまで著作権者に不利益を及ぼさない範囲で権利制限を認めるという立法当時の考え方に由来するものであるが、著作権保護と表現の自由等の対抗利益との調整という観点からみた場合には問題があるということを指摘した。本年度は、著作権保護と表現の自由との調整が問題となる著作権法上の論点として、著作物の利用主体の認定判断についての検討を行った。具体的には、放送番組の録画視聴サービスの適法性について判断した我が国とドイツの最高裁判例を素材とした研究を行った。同研究では、ドイツの判例を参考にしつつ、行為者の予測可能性を確保する観点から、物理的な利用主体と規範的な利用主体の認定作業を峻別しつつ、規範的な利用主体の具体的な認定方法を明らかにした。同研究の成果は、論文にまとめ、既に公表している(学習院大学法学会雑誌49巻2号97ー142頁、ジュリスト1463号36ー42頁参照)。また、本年度は、昨年までの研究成果を踏まえて、著作権法を含む知的財産法の制度設計がいかにあるべきかについて、知的財産権の正当化根拠に遡った研究を行った。本研究では、近時、憲法学において、1憲法上の人権保障に国家の公益に基づく制度設計を覆す「切り札」としての意義を認める考え方、及び、2マスメディアの報道の自由を公共財としての自由な表現空間の確保という公益的な観点から正当化する考え方が主張されていることから、これらを参考にしつつ、知的財産法が、一方で、創作者の自律的な創作活動を支援するために、「切り札」としての創作者の権利(「自然権的権利」)を保護しつつ、他方で、創作活動の奨励を通じて公共財としての情報環境を整備するという公益目的を実現していることを明らかにした。その上で、創作者と他者の利益調整のあり方として、知的財産法が創作者の基本権を実現する段階では創作者の利益を優先的に保護すべきであるが、創作者の基本権の実現に必要なレベルを超えて公益的観点から創作者の利益を保護する場合には、他者の利益に十分配慮し、公益目的に即した合理的な保護が与えられるべきことを明らかにした。同研究の成果は、近日中に公表する予定である。本研究は、デジタルネットワーク時代において著作権保護と表現の自由との調整という観点から望ましい著作権法の制度設計のあり方を検討することを目的とするものであるが、こうした検討を行うためには、まず現行著作権法の下で、著作権保護と表現の自由との調整問題がどのような形で顕在化しているかを分析検討することが不可欠となる。そこで、平成23年度においては、著作権保護と表現の自由との調整が問題となる各論的テーマのうち、翻案とパロディの問題を取り上げて具体的な検討を行った。現在の著作権法は、著作者のオリジナリティの保護を重視し、翻案及びパロディについて著作権の保護を及ぼしているが、翻案及びパロディは原著作物にないオリジナリティを発揮する新たな表現行為としての性格を有しており、これに著作権の保護を及ぼすことは後発者の表現の自由及び国民の知る権利を制約する側面を持つ。したがって、著作者のオリジナリティの保護の観点から翻案及びパロディに対し著作権の保護を及ぼすとしても、単純な海賊版の場合と異なり、表現の自由に十分に配慮した形でその保護のあり方を決定することが必要となる。

こうした問題意識に立って、平成23年度は、従来の我が国の裁判例、学説の議論を検討し、ついで、この問題について議論の蓄積が豊富なドイツ法を参照するため、ドイツへの出張を行い、必要な資料収集及び意見交換を行った。その結果、ドイツでは我が国と比べて、翻案及びパロディに関してより表現の自由の保障に配慮した形で柔軟に著作権の保護内容が決定されていることが明らかとなった。研究代表者は、昨年度の著作権法学会において、本研究に関わる論点として、「私的複製」に関するシンポジウムの司会を務めたが、本年度は、その成果を、その後の判例・学説の動向も踏まえて、論文にまとめ、公表した(後述の研究発表を参照)。また、本年度は、これまでの4年間の研究成果を踏まえ、著作権法を含む知的財産権の制度設計のあり方がどうあるべきかを、知的財産法の存在根拠に遡って検討した。本研究では、知的財産法が、一方で、個人の自律的な創作活動を支援するために不可欠な創作者の精神的、人格的利益の保護を図りつつ、他方で、創作を奨励し、産業・文化の発展に寄与するとの公益的観点から、知的財産の保護を図るという二面性を有していることを明らかにした。また、前者の意味での知的財産の保護は、表現の自由の保障等と同じく基本的価値の実現を目的とするものであるため、社会的・公益的利益に比して優先的な保護が与えられるべきであるが、後者の意味での知的財産の保護は、産業・文化政策に基づくものであるため、社会的・公益的利益と調整しつつ、合理的な範囲で保護が認められるべきものであることを論証した。また、現在の知的財産法は、法人が知的財産権の主体となることを認めているが、本研究では、法人の権利を社会的・公益的利益を実現するための手段として位置づけ、その保護内容は、産業・文化政策的な観点から合理的に決定されるべきであることを論証した。このような本研究の成果は、既に論文にまとめ、公表している(後述の研究発表参照)。なお、本研究の成果は、知的財産権の保護範囲を考える上でも重要な示唆を提供するものである。幸いにも、研究代表者は、権利侵害判断の研究について科研費基盤研究(C)の交付内定を頂いたため、本研究終了後も、引き続き、本研究の成果を踏まえ、個別の知的財産法制のあり方についての研究を継続的に進めていきたいと考えている。知的財産法平成24年度は、平成23年度に引き続き著作権保護と表現の自由との調整が問題となる著作権法上の諸問題についての研究を行うと共に、憲法学における表現の自由に関する研究も行う予定であった。著作権法上の諸問題についての研究では、間接侵害と私的複製について研究を行うこととしたが、間接侵害については比較法の対象とするドイツ法の研究に多大な時間を費やすこととなったほか、私的複製については、平成25年4月の著作権法学会のシンポジウムを開催することが急遽決定し、その準備に時間を費やすこととなったため、憲法学における表現の自由の研究に十分な時間をかけることができなかった。とはいえ、間接侵害等に関する研究を遂行する中で、必要に応じて、憲法学における表現の自由に関する研究を進め、その知見を踏まえて間接侵害等の研究を行ったため、結果として、表現の自由の観点から著作権制度のあり方を再検討するという本研究の目的に即した研究活動を行うことができたと考える。この点を勘案して、「おおむね順調に推移している」との自己評価を行っている。
日常生活バイオフィードバックを用いた弁証法的行動療法スキル指導の効果研究

本研究の対象と目標人数は、境界性パーソナリティ障害患者10名である。無作為にウェアラブルデバイス(Hexoskin)を用いたバイオフィードバック介入群5名とバイオフィードバックを行わない対照群5名に分ける。大学病院の精神科外来からリクルートする。弁証法的行動療法で指導されるスキルのうち、特にマインドフルネススキルと情動調節スキルを中心とした個人スキル指導を各対象者に実施する。評価指標として、(1)性格特性(NEO-PI-R)、(2)マインドフルネススキル(Five Facet Mindfulness Questionnaire日本語版)、(3)精神状態(POMS2日本語版)を用いる。これらの自己記入式の尺度について、統計学的に介入群と対照群の群間比較を行う。ウェアラブルデバイスで得られた心拍数データを心拍変動解析を用いて解析し、同時に得られた呼吸数データも併せ、自己記入式尺度で得られた精神状態やマインドフルネススキルとの関連を評価する。平成30年度は、まずウェアラブルデバイスからの心拍数や呼吸数のデータをスマートフォン等でリアルタイムに観察できることを確認し、スキル練習時のデータの記録方法について研究代表者が自ら予備実験を行い、実際の対象者のデバイス使用時の問題点などを検証した。研究の成果としては、介入群1名と対照群1名に対して個人スキル指導を実施した。POMS2日本語版の総合的気分状態は両者ともに改善が見られた。一方、POMS2日本語版の「抑うつー落込み」因子について、バイオフィードバックによる介入を行った対象者では改善していたのに対し、介入を行わなかった対象者では改善が見られなかった。トラウマ記憶を持つ患者に対してマインドフルネススキルを指導した際に懸念される解離などの副作用を避けるため、虐待の既往やPTSDを併存する患者を研究対象者の除外基準に入れた結果、参加者のリクルートが遅れている。関連病院にも協力を要請し、患者のリクルートを急ぐ。ウェアラブルデバイスから得た数時間にわたる心拍数や呼吸数のデータは膨大なため、主に自宅でのマインドフルネススキル練習時の短時間データを心拍変動解析を用いて解析し、経時的な変化を調査する。当該年度に使用予定であった研究用の備品などが研究の遅れから使用されなかったため。
ヒト免疫細胞を組み込んだハイブリッド型人工皮膚モデルを用いた創傷治癒の研究

【目的】免疫細胞を導入したヒト皮膚モデルを使用することにより、実際の皮膚における創傷治癒過程をさらに詳細にシミュレーションする。【方法】Bellらの手法に準じて人工皮膚モデル検体を作製して行った。単球は採取した血液からLIMPHOPLEP^<TM>tube(コスモ・バイオ社)を用いて採取し、検体作製過程で人工皮膚モデル検体に導入した。人工皮膚モデル内での単球のマクロファージへの分化を抗ヒトマクロファージ抗原モノクロナール抗体AM-3Kで免疫組織化学染色を行い確認した。実験群(単球を加えた検体)、対照群1(単球を含まない検体)に対してCO_2レーザーを照射し人工的な創傷モデルを作製した。また、対照群2(単球を加えたがレーザー照射を行わなかった検体)とも比較した。各群をH-E染色、免疫組織化学染色(MCP-1,HAM56)し組織学的検討を加え定性を行った。HAM56により標識されたマクロファージ数を計測しχ^2独立性検定を行い定量した。【結果】H-E染色では照射1日目より角化層形成を認め、5日目にほぼ上皮化が完了した。しかし対照群2では5日目でも上皮化は乏しかった。次にHAM56染色では受傷後、活性化マクロファージの数が増え、創傷部のマクロファージだけでなく全体的に活性化していた。MCP-1染色では、照射1日目は角化細胞由来と思われるMCP-1を表皮層内に認め、日数経過でマクロファージ由来と思われるMCP-1を表皮・真皮境界部に認めた。対照群2では、表皮内に認め、境界部には認めなかった。対照群1では全経過においてMCP-1は認められなかった。【考察】単球を導入した人工皮膚モデルでは、従来の人工皮膚モデルに比べ上皮化が早い可能性が示された。マクロファージは損傷を受けた付近だけでなく、その周辺全体も活性化し創傷治癒に貢献していることが示され、創傷が存在しなければMCP-1を放出しないことが分かった。マクロファージは、創傷治癒機転において活性化、再活性化を繰り返すことが推察された。また角化細胞およびマクロファージが各々放出したと考えられるMCP-1が創傷治癒に関わっていることが確認されたが、その放出の仕方、時期も異なることから各々創傷治癒において異なる機序を有していることが示唆された。本研究において開発した新しい人工皮膚モデルは、従来の人工皮膚モデルと比較し特に炎症性変化の再現可能性を示しており、より生理的な環境を再現させたと考えられる。

本研究の目的は今まで使用してきた人工皮膚材料にさらに組織工学的手法を用いて免疫細胞を加えヒト皮膚モデルとし、これに対して創傷を作製して実際の皮膚における創傷治癒過程をシミュレーションして解明するとともに、その過程において培養液中に各種創傷治癒因子を付加して創傷治癒反応の変化を調べることである。本年度は単球を付加したヒト皮膚モデルにレーザーを照射して創傷を作成した後の創傷治癒過程について新たな指標となる免疫染色の抗体を導入してその変化を調べた。さらに標本内に単球を組み込むための基礎実験とその創傷治癒の変化についての病理組織的・免疫組織化学的検索は現在も継続中である。昨年度からこれらの成果を臨床応用するために人工皮膚モデルの改良を目的としてアミノ酸1%と水99%から構成される繊維構造を持ち、動物由来の材料や病原体が含まれず生体適合性に優れているペプチドハイドロゲルを担体として用いた培養皮膚を新たに開発して特許申請したが、本年度はさらに人工真皮、皮膚作製においては、合成担体であるペプチドハイドロゲルの合成の際にアミノ酸の種類と数を変えることにより細胞増殖促進機能を付加できることを報告した。具体的には培養真皮の担体として合成ペプチドハイドロゲルRADA16(50%)とRADA16にラミニン中のYIGSR接着ペプチドを付加したペプチドハイドロゲル(SDP)(50%)を混合したものを担体に使用した。新生児由来ヒト真皮線維芽細胞をペプチドハイドロゲルと混合して真皮層を作製して3週間培養した後、真皮層上に新生児由来ヒト表皮角化細胞を用いて表皮層を作製してさらに1週間培養した標本から病理切片を作製しHE染色と免疫組織化学染色を行った。また真皮内の線維芽細胞数、コラーゲン量、培養液中のコラーゲン量を定量した。このことにより担体自体に機能を組み込んで細胞の遊走、誘導、増殖分化、機能発現を制御できる可能性を示した。これらの成果を臨床応用するために人工皮膚モデルの改良を目的としてアミノ酸1%と水99%から構成される繊維構造を持ち、動物由来の材料や病原体が含まれず生体適合性に優れているペプチドハイドロゲルを担体として用いた培養皮膚を新たに開発して特許申請したが、本年度はさらに人工真皮、皮膚作製においては、合成担体であるペプチドハイドロゲルの合成の際にアミノ酸の種類と数を変えることにより細胞増殖促進機能あるいは細胞分化促進機能を付加できることを報告した。
ネットワーク環境での指導判断推論機構を持たせた汎用学習支援システムの研究

資格受験および学習支援のための汎用の学習支援システムを作成している。学習の教材としては初級システムアドミニストレータ受験対策のための教材を構築した。本システムはインターネット上で利用可能なシステムであり、学習者インタフェースとしてWebブラウザを利用して学習を行ない、教材をアクセスし回答を入力することによって個人の学習履歴を蓄積し、個人の学習状況にあわせて支援が行えるように学習者データベースを用意している。学習者がどの程度、対象とする資格を取得したいか、あるいは知識をどの程度身に付けたいのかを調べることによって学習支援システムの利用に影響すると考え、いくつかの調査および分析を行った。2000年10月15日初級システムアドミニストレータ試験を受験した2年生5名、受験しなかった6名の資格取得希望状況や各学習者の学習方略のテストを行った。また受験した5名については、受験まで学習支援システムの利用過程、筆記による模擬テスト、学習目標の達成動機を調査した。学習支援システム利用時の学習履歴、学習後の成績等含めて分析を行った。学習者が各自の理解度に応じてコンピュータを使った学習ができるようにシステムを構築している。C言語のプログラミング学習教材の問題データベースを構築し、インターネット上で利用できるCAIを作成した。教材の範囲としてはCプログラミングの判断文、繰り返し文とした。教材データベースは教材管理情報と問題情報からなる。また資格試験にも対応できるように初級システムアドミニストレータ受験対策用の教材も構築した。本システムはインターネット上で利用可能なシステムであり、学習者インタフェースとしてWebブラウザを利用して学習を行ない、教材をアクセスし回答を入力することによって個人の学習履歴を蓄積し、個人の学習状況にあわせて支援が行えるように学習者データベースを用意した。データベースとWWWを連携させることによりCAIを容易に作成することができ、学習履歴を取ることによって学習者に応じた学習支援が行え個別指導することが可能である。学習支援システムの構築は、教材や学習者情報のデータベースをMicrosoftAccessで構築し、WebサーバーはWindows NT Server上のInternet Information Serverを利用し、データベースとWebページの連携にはActive Server Pagesを使用した。本システムを実際に学生に利用してもらい、本システムのRDB連携の特性を活かして,学習者の問題選択パターンや、各個人あるいは利用者全体の各問題ごとの正解率、回答時間に関する分析、また学習者の上達度などを学習者に提示することができた。学習者に関する各種の支援を行なうことが可能になった。学習の教材としては、資格試験に対応できるように初級システムアドミニストレータ受験対策用の教材を構築した。本システムはインターネット上で利用可能なシステムであり、学習者インタフェースとしてWebブラウザを利用して学習を行ない、教材をアクセスし回答を入力することによって個人の学習履歴を蓄積している。個人の学習状況にあわせて支援が行えるように学習者データベースを用意している。今年度は本学情報システム学科の学生2年生(被験者)に対して本システムを利用してもらい学習履歴の収集を行った。被験者については1年生のときも本システムを利用している。また本システムの利用時期はほぼ2年間の授業が終わった段階で利用してもらった。今回の利用形態では2種類の学習方法により本システムを利用する実験を行った。1つのパターンは1週間続けてシステムを使用し、1週間休む形態、もう1つは、コンスタントに使い続ける形態である。両方のパターンの履歴情報より学習というものを記憶の分野からとらえ比較を行うことを試みた。現在、2つのパターンの履歴情報を分析中であり、この結果をもとに、学習と記憶についての分析を行う予定である。また被験者は1年生のときも本システムを利用しているため、2年間での学習効果を検討しているところである。以上の検討をもとに、次年度の研究では、学習支援システムの中に学習者に応じた支援環境を具体的に構築していく。また、今後は、新1年生、2年生の授業でも利用するとともに、利用に際して、学習者にアンケートを取ることを検討している。

本年度は、学習者がどの程度、対象とする資格を取得したいか、あるいは知識をどの程度身に付けたいのかを調べることによって学習支援システムの利用に影響すると考え、いくつかの調査および分析を行った。2000年10月15日初級システムアドミニストレータ試験を受験した2年生5名、受験しなかった6名の資格取得希望状況や各学習者の学習方略のテストを行った。また受験した5名については、受験まで学習支援システムの利用過程、筆記による模擬テスト、学習目標の達成動機を調査した。学習支援システム利用時の学習履歴、学習後の成績等含めて分析を行った。
逆遺伝学的アプローチによる疾患SNPの評価系の確立とその応用

疾患原因と判断された一塩基多型(SNP)を逆遺伝学的手法を用いて解析する実験系を計画し、今回CRISPR/Cas9システムを用いたSNPモデル細胞の作製方法を確立した。これにより交絡因子の影響を取り除き、細胞の遺伝的背景を揃えた状態で疾患SNPの比較実験を行うことが可能となった。その結果、片アリルもしくは両アリル性に同一SNPが導入された細胞を樹立し、それらは染色体不安定性を示した。全ゲノム解析により生活習慣病にも遺伝的要因があることがわかり、特に一塩基多型(SNP)が関連している事が明らかとなってきた。しかし、同定されたSNPを逆遺伝学的に検証する研究は立ち後れている。本研究では、SNPの逆遺伝学的解析を推し進めるため、特定の一塩基変異をもつヒト疾患SNPモデル細胞の作製法を確立し、細胞の遺伝的背景を揃えた状態で疾患SNPの比較実験を行うことを目的としている。既存の遺伝子変異導入法による一塩基改変効率は1%以下と非常に低く難しいことが大きな問題であったため、平成27年度は、より高効率で簡便な一塩基編集法を確立することを目標とした。さらに、ヒト高発がん性遺伝病ナイミーヘン症候群の原因遺伝子(NBS1)に一塩基編集を施したヒト疾患モデル細胞を作製することを計画した。高効率な一塩基編集法の開発については、CRISPR/Cas9システムを用いた。点変異ドナーとして一本鎖オリゴDNA(ssODN)を共導入し、一時的な薬剤選択により編集細胞を濃縮させた。組換え体の検出には制限酵素サイトを利用し、目的クローンの同定を行うことにより、約1ヶ月程度で一塩基編集細胞を作製することが可能になった。これは一塩基変異の逆遺伝学的解析をスピーディーに進める上で非常に有効な手段となる。また、本研究で確立した方法は熟練した技術を必要としないため、その点においても研究推進に有効である。この方法を利用し、NBS1遺伝子の一塩基編集細胞を4種類複数クローン作製することに成功し、両アリルに同じ一塩基変異が導入された細胞も得られた。これにより任意の一塩基変異による細胞影響を逆遺伝学的に解析することが可能となった。一塩基編集法を構築し、目的のSNPを有する疾患モデル細胞を作製した。これにより概ね順調に進展していると考えられる。大規模一塩基多型(SNP)解析による疾患関連SNPの探索が進められており、診断や治療への適用、個別医療の実現化が期待されている。しかし、患者由来細胞株を用いた検証では、遺伝学的背景の違いにより性質に差が生じる懸念がある。この問題を解決するため、本研究課題では、逆遺伝学的手法を用いた一塩基編集技術を用い、ヒトSNP導入細胞の樹立を試みた。昨年度は、CRISPR/Cas9システムと点変異を含む一本鎖オリゴDNA(ssODN)を用いた一塩基編集法を確立した。放射線感受性遺伝病ナイミーヘン症候群の原因遺伝子であるNBS1をモデルケースとしSNP導入細胞の作製を計画した。最終年度までに、5種類作製することに成功し、片アリルもしくは両アリル性に同一SNPが導入された細胞を複数クローン得ることができた。本年度はさらに、樹立したSNP導入細胞を用いた表現型解析を通じて、放射線影響解析を進めるための評価系を確立した。具体的には、コロニー形成法を用いて放射線致死感受性を検討し、サイトスキャンニング顕微鏡を用いた微小核形成頻度測定法により、放射線誘発染色体異常を評価し、任意のSNPによる細胞影響を逆遺伝学的に解析することが可能となった。SNP解析研究は将来的に、テーラーメイド治療/診断の実現に向けた基礎基盤研究となりえると期待される。本研究成果は、将来的に様々な疾患関連SNPに応用が可能であると考えられ有用である。今後は得られた疾患モデル細胞を用い、表現型解析やプロテオミクス解析を行い、各SNPについての影響について検討する。放射線生物学当初の計画では、組換え体の検出にはTaqmanプローブを用いたSNPタイピングを予定していたが、制限酵素サイトを利用した検出法の方が、判定が容易で安価であったため、Taqmanプローブの購入費が予定より少なく、当該金額が生じた。平成28年度では、プロテオミクス解析を行う予定であるので多額の費用が予想されるため、そちらの費用に充当する予定である。