hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
高齢者の自立生活支援を目的とする生活環境整備に関するの開発人間工学的研究

高齢者への効果的な情報伝達を目的として、短期記憶における色と形の影響(基本的6色×6形)について検討した。健常高齢者群(平均61.6歳)の短期記憶の正解率は、若者群(平均21.9歳)のそれと比較すると大きな差異が認められるが、記憶しやすいように補助を与えてあげると正解率は大きく向上した。高齢者にとって記憶しやすい色と形の組み合わせがあり(赤、黒と丸、三角など)、高齢者への標識などに工夫が必要であることが明かになった。また、短期記憶タスク時の脳波を計測し、短期記憶成績への影響について検討した。高齢者にとって必要な動作環境を予測するため、単眼動画像からの3次元物体の復元に関する研究、ならびに単眼ステレオ視による立体形状計測のためのカメラモーションの推定研究を行った。高齢者にとって快適で安全な照明環境を構築するため、薄暮時での自動車前点灯状況の実態調査、ならびに夜間などの高齢者の見え方に関する基礎研究を行った。運動機能の低下する高齢者にとって、生活上必要な動作においても生理的負担が大きい場合がある。使いやすい冷蔵庫の設計を目的として人間工学的検討を行った。また、上肢の押引動作を対象とした屈伸運動時の生理的負担を測定した。関節可動域に障害を持つ高齢者が増えている。日常動作時の障害状況を把握するため、入浴動作を症例事例として3次元動作解析し、問題解決のためのコンピュータシミュレーションを行い障害に応じた補助具設計のための基礎研究を行った。人口の4分の1が高齢者となる高齢社会は目前にせまっており、高齢者の視覚、心理、生理特性を明かにし、高齢者自身が自立した生活が営めるよう、前年度に継続して基礎的研究を行うとともに応用的研究をおこなった。高齢者にとって短期記憶情報の保持が重要な課題である。高齢者が記憶しやすいサイン、標識などのへの応用を目的とし、短期記念における色と形の影響ならびに、それらサイン情報を視覚刺激時、記銘時、記憶保持時における脳波活動を高齢健常者と高齢障害者間で比較することによって記憶に関わる大脳活動の一端を検討した。タッチパネルによる操作形態が増えているなかで、その操作性に関する問題も指摘されている。同じ操作条件下でのタッチパネルと従来の機械式ボタンとの操作性の比較を、高齢者および若年者について行なった。その結果、数値の入力にかかる時間および誤答率は両世代ともキーボードに比べてタッチパネルで増加する傾向にあった。また、高齢者では主観的な操作感にあまり差がなかったものの、タッチパネルを必要以上の力で押す傾向が見られた。阪神・淡路大震災時の照明設備の被害実態を明らかにするとともに、避難行動を担保する屋外照明の必要照度について被験者を用いて検討を行った。その結果、避難時の街路照明の所要水平面照度131xが得られた。これは、JISの交通量の少ない住宅街路の街路照明基準に相当するが、大阪府下の街路照明の実態はそのレベルに達していないことが分かった。高齢者の視認機能の低下、広域停電の影響を考慮すれば、ソーラー電源の設置とともに51xの確保が望まれる。
機能的ゲノム解析による卵巣がんの新規治療標的の探索

卵巣がんにおける新規治療標的の探索を目的にしてがん遺伝子Mycの高発現と合成致死作用を持つ遺伝子を大規模siRNAスクリーニングで検索した。Hit分子はデータベースおよびネットワーク解析によるbioinformatics解析による絞り込みとin vitroおよびin vivoでの検証実験を通じて、CK1e、WEE1、Aurora A、FURINを新規治療標的の候補分子として同定した。本研究では卵巣がんにおける新規治療標的の探索を目的にして、がん遺伝子Mycの高発現と合成致死作用を持つ遺伝子を大規模siRNAスクリーニングを行う。Hit分子に関しデータベースおよびネットワーク解析を行った。これらの解析結果とスクリーニング結果、および低分子阻害剤の有無を検討し現在までにカゼインキナーゼ1e、WEE1、オーロラキナーゼAを対象分子として同定している。また卵巣がんの進展を評価できるモデルとしてin vivo imaging systemを使用してきたが、これに加えて小動物CT(日立アロメディカル)や小動物用MRIを使用した。本年度までの研究成果は以下のとおりである。(B):c-Myc発現量により選んだ6種の卵巣がん細胞株を用いsiRNAスクリーニングを行った。細胞生存率はPromega社のCell Titer Gloで細胞処理し、Luminescence測定値をコントロールとの相対生存率として計算した。siRNAスクリーニング後に1スクリーニング結果、2低分子阻害剤の有無、3がん形質との既知の関連情報の3基準をもとに検証実験にすすむ遺伝子を選択しネットワーク解析を行った。本研究では卵巣がんにおける新規治療標的の探索を目的にして、がん遺伝子Mycの高発現と合成致死作用を持つ遺伝子を大規模siRNAスクリーニングで検索した。Hit分子に関しデータベースおよびネットワーク解析によるbioinformatics解析を加え、昨年度までに同定したカゼインキナーゼ1e、WEE1、オーロラキナーゼAに加えて、FURINを新規治療標的の候補分子として同定した。(A):卵巣がんモデルとしてin vivo imagingsystemによる癌性腹膜炎モデルを用いて低分子阻害剤の効果を検討した。さらに小動物CT(日立アロメディカル)や小動物用MRIを使用した検討も加えて、多角的にがん性腹膜炎の状態を評価した。(B):c-Myc依存性細胞株TOV112Dとc-Myc非依存性細胞株CaOV3で新規大規模siRNAスクリーニングを行った。siRNAスクリーニング後に1スクリーニング結果2低分子阻害剤の有無3がん形質との既知の関連情報の3基準をもとに検証実験にすすむ遺伝子を選択しネットワーク解析を行った。それらの検討を踏まえて、新規治療標的分子としてセリンプロテアーゼであるFURINを見出した。FURINは低分子阻害剤によるin vitroでの検討も行い、c-Myc依存的な細胞増殖阻害のメカニズム検討を行い、現在は論文投稿準備中である。本研究は卵巣がんにおける新規治療標的の探索を目的にして、がん遺伝子Mycの発現量の多寡に注目して大規模siRNAスクリーニングによる機能的ゲノム解析を行うものある。基礎的な研究は正常核型をもつ新生児包皮から樹立された細胞HFFとその細胞にc-Mycを強制発現させたHFFc-Mycとの対比でスクリーニングを行った。このスクリーニングは独立に2回行われたが、高い再現性を得ることができた。Hitとなった分子に関しては生物情報学的な解析を行った。具体的にはIngenuity pathway analysisで分子間の既知の結びつきを網羅的にネットワーク解析し、それぞれの分子の関連を抽出、さらにそれらの分子をデータベースで解析する事により正常卵巣組織と卵巣がん組織での発現をRNAレベルおよびタンパクレベルで比較検討した。これらの解析結果とスクリーニング結果、およびリン酸化酵素であれば阻害剤の有無を検討して、in vitroおよびin vivoでの検討対象とする予定である。現在までにカゼインキナーゼ1e、WEE1、オーロラキナーゼAを対象分子として同定している。またin vivoで非侵襲的・継時的に卵巣がんの進展を評価できるモデルとしてin vivo imaging systemを使用してきたが、これに加えて小動物CT(日立アロメディカル)や小動物用MRIの使用を検討している。上記に加えて、同様の大規模スクリーニングを卵巣がん治療で最も問題となる「薬剤耐性」の克服に応用できるかどうかも検討した。現在までに種々のin vitroで薬剤耐性を獲得した卵巣がん細胞のペアーが報告されている。その中でも我々はA2780細胞とA2780CP70細胞でスクリーニングを行う予定である。すでに大規模スクリーニングは終了し、現在はマイクロアレイ解析のためのチップ購入などの準備を進めているところである。研究の最も重要なprimary screeningが成功して、十分な候補遺伝子群が抽出できた。これらの遺伝子群には、今までc-Mycとの関連が知られている分子と役割の不明な分子群が混在している。これは研究の道筋が正しい事と、今後の研究の発展により新規治療標的を発見できる可能性が高い事を示していると考えている。スクリーニングに使用している細胞株のストックが順調に進んでいる。また動物実験モデルとして小動物CTおよび小動物MRI、IVISの使用の準備が進み、一部は予備実験が成功している。

当大学で大規模スクリーニングの準備が進み、使用機器の講習会等を通じて予備実験の準備が進んでいる。当初の研究計画に沿って、スクリーニングで候補分子として絞り込んだ遺伝子に関して、検証実験としてin vitroとin vivo両方で治療標的分子としての適性を確認する。次年度使用額は今年度の研究を効率的に推進したことに伴い発生した未使用額であり、平成25年度請求額と合わせ、平成25年度の研究遂行に使用する予定である。次年度使用額は、今年度の研究を効率的に推進したことに伴い発生した未使用額であり、平成24年度請求額と合わせ、次年度に計画している研究の遂行に使用する予定である。
改良型MD(CXD)法を用いた骨塩定量と下顎残余成長量の予測

骨塩量が下顎成長段階を知るための有効な指標になりうるのではないかと考え、MD法を改良したcomputed X-ray densitometry(CXD)法について検討を行った。資料として初検査時6歳から19歳までの女子199名,男子68名,計267名の1年間隔で縦断的に撮影された各対象者23枚の側面頭部X線規格写真,アルミニウム階段入り手部X線写真および同時期に計測された身長値を用いた。これらの計測値により骨塩量や下顎骨の年間変化量を求めて検討を行った。その結果,1.骨塩量ΣGS/Dは第二手骨長・骨幅や身長の増加ピークに約2年遅れてピークを示した。2.思春期において下顎骨全体長の増加量は,身長,ΣGS/D,第二中手骨骨幅・骨長と正の有意な相関を示した。3.顔面形態と骨塩量とに一定の関係を見出すことはできなかった。4.思春期において下顎骨全体長の年間増加量は,女子では初検査時の身長,ΣGS/D,MIC,第二中手骨長と,男子ではΣGS/Dと負の有意な相関を示した。しかし,思春期性成長ピーク前では有意な相関を示す項目はなかった。5.CXD法各パラメータを説明変数として重回帰分析を行った場合,女子に比べて男子では思春期後期で重相関係数0.70.9の高い値を示していた。6.得られた重回帰式を下顎骨全体長の年間増加量の予測に当てはめた場合の誤差は女子では0.51.0mm,男子では1.02.0mm程度であった。以上のことから,CXD法による骨塩量の測定は下顎骨成長予測への可能性を示すものとして注目される。特に,思春期性成長ピークを過ぎた思春期後期においては個体の成熟段階の評価や顎骨の予測に,従来より試みられてきた身長増加様相や手骨の骨化イベントの評価では得られない情報を含んだ成熟度指標と考えられた。また,CXD法を発展させ,パーソナル・コンピュータを用いた骨塩量解析システムについても考案した。資料として,東北大学歯学部附属病院矯正科に通院し,成長観察中にある女子128名の研究開始時(Stage 1)と1年後(Stage 2)の縦断的な側面頭部X線規格写真,アルミニウム階段入り手部X線写真および身長計測値を選択した.この中には,初経発来時期を基準とした骨塩量の年間増加量の検討を行うため,初経発来時期の明確な12,13歳の38名が含まれている.これらの資料をもとに,下顎骨全体長(Cd-Gn),身長(BH),CXD(Computed X-ray Densitometry)法による骨塩量(ΣGS/D)の年間増加量および相関を求めた.骨塩量の測定は骨塩定量検査装置(ボナライザー)を用い,第二中手骨で行った.次に,128名中110名を骨塩量の増加のピークを示した12歳を基準として2群に分類し,それぞれの群において骨塩量に関する指標を説明変量とし,下顎骨全体長の年間増加量を目的変量とする重回帰式を作成し,残りの18名に適用して重回帰式の信頼性の検討を行った.また,初経発来時期の明確な女子38名を用いて,初経と骨塩量の関係について調べた.

その結果,1.骨塩量の年間増加のピークは身長および下顎骨のそれよりやや遅く,12歳前後に認められ,そのピークは初経の発来時期とほぼ一致していること,2.下顎骨全体長の年間増加量と,Stage 1の骨塩量およびStage 2までの変化量との相関は,11歳以前と比べて12歳以後はより高い相関を示したこと,3.12歳以後の下顎骨全体長の年間増加量とStage 1の骨塩量各指標との重相関係数は0.8以上であり,予測値と実測値の差は0.5mm程度であること,がわかった.今後,さらに2年後の資料を採得し,予測精度をあげたいと考えている.また,これらと平行してパーソナル・コンピュータを用いたより汎用性にある骨塩定量システムの構築を行っている.資料として初検査時6歳から19歳までの女子199名,男子68名,計267名の1年間隔で縦断的に撮影された各対象者23枚の側面頭部X線規格写真,アルミニウム階段入り手部X線写真および同時期に計測された身長値を採取した.これらの計測値より骨塩量や下顎骨の年間変化量を求めて検討を行った.その結果,1.女子においては,下顎骨全体長の増加量と12.013.9歳群で身長,骨塩量ΣGS/D,第二中手骨骨幅・骨長と正の有意な相関を示した.男子においては,10.015.9歳群で身長,第二中手骨骨長・骨幅と有意な相関を示した.2.顔面形態と骨塩量変化様相とに一定の関係を見出すことはできなかった.3.下顎骨全体長の年間増加量と初検査時との相関について,女子では,12.013.9歳群で身長,ΣGS/D,MCI,第二中手骨長と,16.019.9歳群で身長と負の有意な相関を示した.男子では14.015.9歳群でΣGS/Dと,16.019.9歳群でΣGS/Dと負の有意な相関を示した.しかし,女子では10.111.9歳群以前,男子においては12.013.9歳以前に有意な相関を示す項目はなかった.4.CXD法各パラメータを説明変数として重回帰分析を行った場合,女子に比べて男子では12.0から19.9歳群で重相関係数0.70.9の高い値を示していた.5.得られた重回帰式を下顎骨全体長の年間増加量の予測に当てはめた場合の誤差の平均値は女子では0.51.0mm,男子では1.02.0mm程度であった.以上のことから,CXD法による骨塩量の測定は下顎骨成長予測への可能性を示すものとして注目される.特に,思春期性成長ピークを過ぎた思春期後期においては個体の成熟段階の評価や顎骨の予測に,従来より試みられてきた身長増加様相や手骨の骨化イベントの評価では得られない情報を含んだ成熟度指標と考えられた.
循環流動層を適用したヒートポンプの無着霜蒸発器の開発に関する基礎研究

近年、寒冷地における空気熱源式ヒートポンプの需要が急速に高まっている。しかし、寒冷地においては、低温空気からの採熱となるため、伝熱面温度が0°C以下となり、霜が付着成長し、伝熱性能は低下する。そこで、本研究では流動層の粒子によって伝熱面上に付着成長している霜層を取り除く機構を明らかにするため、流動層内に単一円管を挿入し、流動化粒子として硅砂を用い、伝熱面温度、空気温度、空気湿度及びガス空塔速度を種々変えることにより付着成長する霜の性状を変化させ、霜の性状の違いによって除霜特性がどのよう変化するのかを考慮した。その結果、流動層中に置かれた単一円管まわりに付着成長する霜層の状態は4つに分類できた。(1)霜が付着していない状態(2)薄い氷の層が電熱管の周囲を覆っている状態(3)薄い氷の層の上に硅砂が付着している状態、硅砂は簡単に手で取れる状態である。(4)ベトベトした霜層内に硅砂がくい込んだ形の硅砂と霜の混合氷結多孔質が生成している状態。しかし、このような流動層熱交換器には除霜能力があるが、流動層の気泡相の中には空気中の水蒸気が存在し、前述のように操作条件によっては着霜する可能性がある等の問題点がある。そこで著者らは、流動層に比べ空気流れの少ない移動層内に蒸発器を置くと、着霜が生じないのではないかと考え、循環流動層を熱交換器に適用した粒子循環型熱交換器(特許出願中)の流動、伝熱及び除霜特性について実験的に検討を行った。この粒子循環型熱交換器はライザーと移動層から構成されており、この間を粒子が熱媒体として循環するものである。その結果、ある空塔速度には最大粒子循環器が存在し、終末速度の大きい硅砂の方がAl粒子より大きな空塔速度を必要とした。また移動層内の伝熱系数の値は流動層の場合により2/31/2小さくなった。更にいずれの粒子を用いても熱交換器表面には着霜は認められなかった。
電気自動車，ハイブリッド自動車用スイッチトリラクタンスモータの高精度トルク制御

スイッチトリラクタンスモータ(SRM)はレアアースが必須の永久磁石を用いないので、コストの点で優位だが、原理的に発生トルクとモータ電流が比例しないため、制御が困難である。本研究では、SRMの用途をEV, HEVに限定し、これらにふさわしいSRMの制御方式を探求した。その結果、磁束弱め制御をはじめとして最大トルク制御、最大効率制御などの方式を確立した。また、これら制御を運転状況に応じて適切に切り替えて、全動作範囲で良好な運転を可能にした。1.供試モータの特性測定・当年度購入したSRMのドライブ装置の作成について、本モータの電圧・電流・速度・オン角・オフ角および発生トルクの特性を全動作領域に亘り、モータ単体試験により測定中2.供試モータのFEM解析・SRMの理論的特性解析に基づき探索動作点範囲の絞込み済みで、供試SRMの断面の最適領域区分をほぼ確定した。この結果を実験との比較により検証開始3.EV, HEVのドライブ用として、各動作領域に於ける最適な制御方式の確立・最大トルク制御、最大効率制御、最適制動力制御、最適充電制御方式の案出し、既有の制御系解析シミュレータによる検証済・2.のFEM解析プログラムと3のモータシミュレータの合体するため、両プログラムのインターフェイスを作製済(理由)当年度購入したSRM(スイッチトリラクタンスモータ)と負荷用モータの据え付け、連結において、両モータの回転軸のアラインメントの精度の確保に想定以上の時間を要した。アラインメントの精度不足は、特に高速回転時に危険なため、安全確保のため慎重を期した。このため、当初予定していた、負荷装置を用いた実験の一部が未達となった。1.模擬実験装置の製作・スイッチトリラクタンスモータとそれに連結した負荷機械(SPM型永久磁石モータ)よりなる模擬実験装置の開発をおおむね終了した。・・EV, HEV両用の自動車としての負荷特性を模擬できるドライブプログラムのため、自動車の簡易走行パターンを取り入れたシミュレータを開発中・解析結果と実験の比較による検証について、必要に応じ、FEM解析の再試行および最適化:実験結果とFEM解析結果との比較において、やや誤差が大きいことと、1回のシミュレーションに時間がかかりすぎるため、FEM解析のプログラムを改良中である。2.通常走行および高速走行領域でのドライブ制御法の確立:制御アルゴリズムの開発・モータ印加電圧を最大化するためのドライブ用インバータの1パルスモード制御方式を開発済・弱め磁束制御単独の制御アルゴリズムの策定:従来の制御方式である双曲線の許容最大動作ライン上での制御アルゴリズムの開発済。許容最大動作ラインより下での最適動作点の探索を開始した。3.自動車エンジンモデル、オルタネータ、およびバッテリーより構成されるバッテリー充電システムの、シミュレーション言語VHDL-AMSを使用したシミュレータの基本アルゴリズムの開発済。現在、このシミュレータと、当研究で開発した回路シミュレータである「回路解く蔵」とを連成させるための、VHDL-AMS言語と、「回路解く蔵」のネットリストの互換用プログラムを開発中初年度のスイッチトリラクタンスモータと負荷モータの連結が遅れたため、実験装置にかかわる実験と制御アルゴリズムの開発に多少遅れが出ている解析結果と実験の比較による検証において、FEM解析のとの誤差がやや大きいことと、1回のシミュレーションに非常に時間がかかるため、これらを改良しているため1.スイッチトリラクタンスモータとそれに連結した負荷モータ(SPM型永久磁石モータ)よりなる模擬実験装置の開発を終了した。2.負荷モータによりEVおよびHEVの自動車としての負荷特性を模擬するため、自動車の簡易走行パターンを取り入れたシミュレータを開発した。3. 2.の制御アルゴリズムを1.の模擬試験装置のコントローラにインストールし、総合試験装置を作り上げた。4.弱め磁束制御単独の制御アルゴリムの策定:従来の制御方式である双曲線の許容最大動作ラインより下での最適動作点を、FEM解析および実験により探索し、テーブル化した。このテーブルをオンラインで検索することにより、高速運転時の弱め磁束制御を3.の試験装置で実施し、一定の効果を確認した。今期間の研究では、テーブルを用いたが、これを理論的に定式化することは、今後の研究課題である。並行して、1パルスモード制御の併用も行い、良好な動作を確認した。5.総合試験:EV, HEVのドライブ用として、各動作領域に於ける最適な制御方式、具体的には、最大トルク制御、最大効率制御、最適制動力制御、最適充電制御および弱め磁束制御方式を1.の模擬試験装置でそれぞれ行い、おのおの効果を確認した。各制御方式の切替期間に於いて、モータ電流や発生トルクなどに多少の動揺が生じる場合があることを確認している。これは軽微なものであるが、その解消方法は今後の研究課題である。また、今研究期間を通じ、各段階での実験における各種改良により、スイッチトリラクタンスモータの発生トルクの脈動を抑制する回路方式、制御方式も開発した。★模擬実験装置の製作・SRM

モータとそれに連結した負荷機械(SPM型永久磁石モータ)よりなる模擬実験装置の開発・EV, HEV両用の自動車としての負荷特性を模擬できるドライブプログラムの開発とHEV専用の、ガソリンエンジンの動作特性データを組み込んだドライブプログラムの開発★各動作領域に適した発生トルク制御方式の確立・上記の合体版シミュレータにて、を組み込むプログラムを開発自動車の簡易走行シミュレータの開発弱め磁束制御単独の制御アルゴリズムの確立弱め磁束制御とモータ印加電圧の最大化つまり1パルスモード制御の併用制御方式の確立総合試験パワーエレクトロニクス
ペプチドニューロンによる神経回路機能修飾の分子・細胞メカニズム

神経修飾作用を持つと考えられる終神経GnRHペプチドニューロンを用い、それらがペプチドニューロン・クラスターと言う機能単位として特徴的入出力を形成している点に着目して解析を行った。ペプチドニューロン・クラスターの特性:GnRHニューロン同士の相互作用の電気生理学的基盤につきダブルパッチクランプを用いて解析した結果、ギャップ結合を介した電気的カップリングとGnRHペプチドの自己・傍分泌を介したクラスター内の細胞間相互作用の実態が明らかになった。終神経GnRHニューロンへの感覚入力:感覚受容器で受容された環境の変化がGnRHニューロンに入力する機構を解明するため、GluRやGABARを介するシナプス入力がペースメーカー活動に対して及ぼす影響を電気生理学的に解析した。その結果、通常の成体脳ではあまり見られないGABA_ARを介する興奮性シナプス伝達がこの感覚入力に関与していることを示唆する結果が得られた。単離培養ニューロンを用いた解析:終神経GnRHニューロンの複雑な神経突起を平面上に再構成させ、Ca^<2+>イメージング、神経活動記録、GnRH放出の電気化学測定・膜容量測定による開口放出の定量化などを行うために、TN-GnRHニューロンの単離培養系の開発を行った。その結果、健全に成長する神経突起を持った単独あるいは数個のGnRHニューロンを数日間単離培養できるようになった。GnRHニューロン機能を調節する新規ペプチドキスペプチンニューロン系の解析:各種の分子遺伝学的ツールの使えるメダカを用いて、GnRHニューロンに直接投射してそれらの活動を調節する可能性のあるkisspeptinペプチドの配列と産生ニューロンの脳内分布を解析し、その遺伝子発現が動物の生殖状態に密接に関連すること、脳内ニューロン分布に顕著な性差が存在すること、等を非哺乳類で初めて明らかにした。動物は多様な環境の変化に対応して適応的かつ合目的的に柔軟に応答する能力を備えている。我々は、神経回路の機能・特性に柔軟性を持たせる重要な役割を演じているのがペプチド神経系であると考えている。本年度は、神経修飾作用を持つと考えられる終神経GnRHペプチドニューロンを用い、それらがペプチドニューロン・クラスターと言う機能単位として特徴的入出力を形成している点に着目して多角的手法を用いて解析を行った。ペプチドニューロン・クラスターの特性:GnRHニューロン同士の相互作用の電気生理学的基盤につきダブルパッチクランプ、電気化学記録、Ca^<2+>イメージングを、分子生物学的基盤につきパッチクランプ単一細胞RT-PCR等を用いて解析した結果、ギャップ結合を介した電気的カップリングとGnRHペプチドの自己・傍分泌を介したクラスター内の細胞間相互作用の実態が明らかになった。TN-GnRHニューロンへの感覚入力:感覚受容器で受容された環境の変化がTN-GnRHニューロンに入力する機構を解明するため、GluRやGABARを介するシナプス入力がペースメーカー活動に対して及ぼす影響を電気生理学的に解析した。その結果、新規GluRを含む複数種のGluRを介する興奮性シナプス伝達や、通常の成体脳ではあまり見られないGABAARを介する興奮性シナプス伝達がこの感覚入力に関与していることを示唆する結果が得られた。単離培養ニューロンを用いた解析:終神経GnRHニューロンの単離培養系の開発を行った。その結果、健全に成長する神経突起を持った単独あるいは数個のGnRHニューロンを数日間単離培養することができるようになった。この実験系を用いて、神経修飾物質としてのGnRHペプチドの開口放出とその調節機構について電気生理学、電気化学およびイメージングなどの同時記録を含めて、厳密な生理学的解析が可能となった。
Ras、RhoファミリーGTPaseの細胞内部位特異的な活性化の解析とその応用

1.骨格筋細胞でのインスリン依存性糖取込み誘導のシグナル伝達系におけるRac1の機能解析、2.クラスリン依存性受容体エンドサイトー`シスのRac1による抑制機構の解析を行なった。1.に関しては、ラット筋芽細胞株L6を用いて、Rac1の活性型変異体の異所性発現による糖輸送担体GLUT4の細胞膜への移行、siRNAによる内在性Rac1の発現抑制よるインスリン依存性のGLUT4の細胞膜への移行の阻害などを見い出した。さらにこれらをin vitroで分化誘導した筋管でも確認するとともに、マウス骨格筋において検証を進めた。また、骨格筋特異的なRac1ノックアウトマウスを作製し、インスリン依存性のGLUT4の細胞膜への移行について検討する準備を進めた。2.に関しては、ヒト子宮頸癌由来HeLa細胞を用いて、まず、Rac1の活性型変異体の異所性発現によるトランスフェリン受容体エンドサイトーシスの抑制、siRNAによる内在性Rac1の発現抑制によるトランスフェリン受容体エンドサイトーシスの促進を示した。さらに、このシグナル伝達系においてRac1の制御に関与するグアニンヌクレオチド交換因子としてOst-IIIを同定した。また、Ost-IIIを負に制御する結合タンパク質として、γ-アミノブチル酸受容体結合タンパク質(GABARAP)を同定した。これらの研究に加え、3.ホスホリパーゼCεのマウス個体での生理機能の解析、4.Rap1に対するグアニンヌクレオチド交換因子RA-GEF-1、RA-GEF-2の機能解析も行った。とくに4.に関しては、脾臓B細胞のインテグリン依存性細胞接着が、腫瘍壊死因子αの下流で、M-Ras/RA-GEF-2/Rap1からなるシグナル伝達系によって制御されていることを培養細胞系とノックアウトマウスの系を用いて示した。平成17年度は、主として、筋細胞でのインスリン依存性糖取込み誘導のシグナル伝達系におけるRac1の機能解析を行なった。まず、筋細胞株L6をインスリン刺激すると、ホスファチジルイノシトール3-キナーゼ(PI3K)依存的に細胞膜表面でRac1が活性化されることを明らかにした。一方、Rac1の活性型変異体を異所性発現させると糖輸送担体GLUT4の細胞膜への移行が誘導されることも見い出した。さらに、siRNAにより内在性Rac1の発現をノックダウンすると、インスリン依存性のGLUT4の細胞膜への移行が阻害されることが明らかとなった。以上の結果より、Rac1の活性化がGLUT4の細胞膜への移行にとって必要十分であることが示唆された。さらに今年度は、PI3K依存性の細胞膜表面でのRac1の活性化を制御するグアニンヌクレオチド交換因子FLJ00068を同定した。実際、FLJ00068の活性型変異体は、インスリン刺激なしでも細胞膜表面のRac1を特異的に活性化し、GLUT4の細胞膜への移行を誘導した。一方、siRNAによって内在性FLJ00068の発現をノックダウンすると、GLUT4のインスリン依存性の細胞膜への移行が阻害された。また、Rac1やFLJ00068の活性型変異体によるGLUT4の細胞膜への移行の誘導の際には、セリン・トレオニンキナーゼAktの活性化はみられなかったが、阻害剤を用いてAktの活性を完全に阻害すると、GLUT4のインスリン依存性の細胞膜への移行は誘導されなくなることから、GLUT4の細胞膜への移行の誘導には、Aktのインスリン依存性活性化は必須ではないが、刺激非依存性の弱い活性は必要であることが示唆された。平成18年度は、1筋細胞でのインスリン依存性

糖取込み誘導のシグナル伝達系におけるRac1の機能解析、2受容体エンドサイトーシスのRac1による抑制機構の解析を行なった。1に関しては、ラット筋芽細胞株L6を用いて、昨年度までにインスリン刺激依存的な細胞膜表面でのRac1の活性化、Rac1の活性型変異体の異所性発現による糖輸送担体GLUT4の細胞膜への移行、siRNAによる内在性Rac1の発現のノックダウンによるインスリン依存性のGLUT4の細胞膜への移行の阻害などを見い出していた。今年度は、これらをin vitroで分化誘導した筋管でも確認するとともに、マウス骨格筋において検証を進めた。さらに、骨格筋特異的なRac1ノックアウトマウスを作製し、実際に骨格筋でのRac1の発現の著しい低下を認めたので、インスリン依存性のGLUT4の細胞膜への移行について検討する準備を進めている。2に関しては、ヒト子宮頸癌由来HeLa細胞を用いて、まず、Rac1の活性型変異体の異所性発現によるトランスフェリン受容体エンドサイトーシスの抑制、siRNAによる内在性Rac1の発現のノックダウンによるトランスフェリン受容体エンドサイトーシスの促進を示した。さらに、このシグナル伝達系においてRac1の制御に関与するグアニンヌクレオチド交換因子として、OstのスプライスバリアントであるOst-IIIを同定し、この分子が核周辺部位において特異的にRac1を活性化していることを明らかにした。また、Ost-IIIを負に制御する結合タンパク質として、γ-アミノブチル酸受容体結合タンパク質(GABARAP)を同定した。
バラ科植物における自家不和合性関連遺伝子の同定と解析

<BACクローンを用いたSFBBの単離>以前の報告では花粉S遺伝子の候補は1ハプロタイプあたりリンゴで2クローン、ナシからは3クローン得られているが、実際には更に多数のSFBB様配列があることがわかってきた。そこでリンゴ'Florina'のBACライブラリーよりSFBB遺伝子をプローブに用いスクリーニングを行い、SFBBを単離したところ、20のSFBBが単離された。Sハプロタイプの帰属を検定したところS3ハプロタイプに帰属するものが10クローン、S9ハプロタイプに帰属するものが9クローン、Sハプロタイプ特異性がないものが1クローンであった。これらのSFBBがS遺伝子座と連鎖しているかどうかをS3-RNaseおよびS9-RNaseを用いて後代検定したところ、239系統の後代で全てのSFBBが完全に連鎖していることが明らかになった。さらにこれらの遺伝子の発現を解析したところ、すべてのSFBBが花粉で特異的に発現していることが明らかになった。これらの配列を基に系統樹を作製したところ、これらの配列はハプロタイプごとにクラスターを形成するのではなく、ある配列には異なるハプロタイプの配列が近くに位置するという傾向が明らかになった。もし、SFBBが認識には関係しないのであれば配列はランダムに変異すると考えられるため、このような系統関係は見られないと考えられた。S-RNaseタイプの自家不和合性では通常1ハプロタイプあたりS-RNase遺伝子と花粉S遺伝子が1クローンずつ存在すると考えられており、今回のように多数のSFBB様遺伝子がS遺伝子座に連鎖し、かつ花粉特異的に発現している例は初めてである。今後はこれらのSFBBが実際に自家不和合性に関わっているのかどうかを明らかにする予定である。これらの内容を投稿し、現在審査中である。<リンゴS-RNaseを用いた新規S遺伝子型決定法の開発>リンゴは自家不和合性を有するためリンゴの栽培現場では人工授粉を行って結実させている。この人工授粉はリンゴの栽培上短期的に最も多くの労働力を有する作業であり、新たに育成した品種やS遺伝子型が未知の品種に関してS遺伝子型を決定することは栽培・育種上重要な情報である。以前までにリンゴではSハプロタイプ特異的プライマー法を用いたSハプロタイプ決定法を用いていたが、DNAの量や質による偽陽性/偽陰性がしばしば問題になってきた。この点に関してCAPS法を用いれば偽陽性/偽陰性の問題を解決できる。そこで今回リンゴで知られている22のSハプロタイプを判定できる新規のCAPS法を開発した。今回開発した方法を用いることでより確度の高いS遺伝子型判定ができると考えられた(Kim et al.2009 Mol Breeding)。<ナシ形質転換体の作製>ナシおよびリンゴから単離された花粉S遺伝子候補SFBBを用い、これらの遺伝子が実際に花粉S遺伝子としての機能を持つかどうかを明らかにするために形質転換実験を行っている。この実験は最終的に形質転換体の花粉が和合化するかどうかを検定するため、形質転換体の花芽形成が必要であるがナシ・リンゴは木本植物であるため通常開花が遅い。そこで、SFBB遺伝子と同時に開花抑制遺伝子の発現抑制カセットをアグロバクテリウム法を用いてセイヨウナシ'バラード'に導入した。これらのカセットを導入した系統に関してはさらに培養を続け、花芽が付き次第自家授粉を行い自家不和合性の有無を解析する。
肝癌免疫遺伝子治療ウイルスベクターの基礎的研究

本年度はレンチウイルスに関する研究を中心に研究を進めた。HBVの表面蛋白を発現するベクターとしてS蛋白のS, M, Lに対応するベクターを作製した。HBVウイルスではこれらの蛋白が一定の比率で表面蛋白を構成していることが知られているため、これらの蛋白の比率を変えて検討した。またHCVに関してはE12, E1p7, E2, E2p7のそれぞれの組み合わせの共感染とE12,E1p7の単独感染にてウイルスを作製して検討した.またこれらの蛋白の発現についてはHBVに関しては市販のHBs抗体を用いたWestern blotを用い,HCVに関してはT7を用いたin vitro transcription and translationにて確認したところ良好な蛋白発現がみられた.これらの系を用いレンチウイルスベクターを作製したがこれらのベクターでのレポーター遺伝子の発現は認められなかった.今回検討したHBV, HCVいずれも培養細胞感染系が一般的ではなく,その検出感度も低いため培養細胞系への感染実験システムが確立されているダックB型肝炎ウイルス(DHBV)を用い検討した.HBVと同様にpreSとS蛋白を発現するベクターを作成して,その蛋白発現をウエスタンブロットにて確認した.その後ダック肝細胞の初代培養細胞を作製し,これらの細胞に作製したウイルス感染させluciferase assayにて検討した.コントロールのVSV-Gの表面蛋白を有するウイルスでは良好な発現を確認できたが,DHBV S蛋白を表面に発現するウイルスとその組み合わせでは発現は確認できなかった.これらの検討でレンチウイルスのパッケージを含めた更なる検討が必要であると考えられた.単球走化活性因子(MCP-1)発現アデノウイルスベクターをMCP-1のcDNAをCAGプロモーター下に入れ、アデノウイルスベクターAxCAMCP-1を作製した。発現に関しては培養細胞系のin vitroの系でウイルスの量依存性にMCP-1の産生を確認できた。MCP-1の抗腫瘍効果増強作用の確認のためにin vitroの系でヒト肝癌由来HuH7細胞に単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ(HSV-tk)を発現するアデノウイルスAxA2ATKと共感染させて検討を試みたが、アデノウイルス量の調整に難渋し、現在最小抗腫瘍効果を認めるAxA2ATKにAxCAMCP-1を感染ウイルス量を変えて検討している。レンチウイルスに関しては、C型肝炎ウイルスの感染クローンであるHCV-1aのcDNAを有するpCVH77とB型肝炎ウイルスの感染クローンであるHBVadrのcDNAを有するpBHB4よりそれぞれの表面蛋白をコードするpreSからS, E1からp7についてHBV, HCV併せて6つのCMVプロモーター下発現プラスミドを作製しそれぞれの蛋白の発現をin vitro蛋白翻訳系で確認し、レンチウイルス作製を試みた。コントロールとしてVSV-G蛋白を発現するプラスミドpMD.Gを用いた。作製したウイルスはウイルス価が低いため、セントリコンを用いた限界濃縮法にて濃縮した。これらのウイルス上清により培養細胞HuH7細胞へのin vitroの感染実験を行った。感染のレポーターとしてはLacZを用いたが、発現量が少ないためか感度が低いため、Firefly luciferaseをレポーターとして用いたところ、コントロールのVSV-Gを有するウイルス上清は発現を認めたが、HBVとHCVの蛋白を有すると考えられているウイルス上清では活性は認められなかった。このためHBVとHCVの蛋白にさらに工夫を加えて検討する予定である。愚痴唖的には、HBVに関してS蛋白のS, M, Lに対応するベクターを作り、それぞれ異なる比率でウイルスを作製、HCVに関しては、E1-2と続いたものやE1,E2の共感染などである。またHCVに関してはE12, E1p7, E2, E2p7のそれぞれの組み合わせの共感染とE12,E1p7の単独感染にてウイルスを作製して検討した.またこれらの蛋白の発現についてはHBVに関しては市販のHBs抗体を用いたWestern blotを用い,HCVに関してはT7を用いたin vitro transcription and translationにて確認したところ良好な蛋白発現がみられた.これらの系を用いレンチウイルスベクターを作製したがこれらのベクターでのレポーター遺伝子の発現は認められなかった.今回検討したHBV, HCVいずれも培養細胞感染系が一般的ではなく,その検出感度も低いため培養細胞系への感染実験システムが確立されているダックB型肝炎ウイルス(DHBV)を用い検討した.HBVと同様にpreSとS蛋白を発現するベクターを作成して,その蛋白発現をウエスタンブロットにて確認した.その後ダック肝細胞の初代培養細胞を作製し,これらの細胞に作製したウイルス感染させluciferase assayにて検討した.コントロールのVSV-Gの表面蛋白を有するウイルスでは良好な発現を確認できたが,DHBV S蛋白を表面に発現するウイルスとその組み合わせでは発現は確認できなかった.これらの検討でレンチウイルスのパッケージを含めた更なる検討が必要であると考えられた.
疾患マーカーの迅速・高感度・同時多項目測定法の開発：蛍光磁性ビーズによる実現

疾患診断における迅速性や感度、特異度の向上に向けて、蛍光磁性ビーズを利用した疾患マーカーの同時多項目免疫測定法の開発を目指した。まず、種類の異なる蛍光色素を個別に封入した複数の蛍光磁性ビーズを開発した。次に、抗体固定化蛍光磁性ビーズと抗原固定化プレートの組合せによる競合測定法を開発した。更に、異なる蛍光色素を封入した蛍光磁性ビーズ2種を利用して、2項目の疾患マーカーの同時免疫測定を試みた。蛍光のクロストークを補正することにより正味の疾患マーカーの濃度の測定が可能となった。同時免疫測定においても磁気捕集により10分以内に測定可能であることが示された。これまでの研究で、蛍光と磁性の両方の機能を有するナノサイズのビーズを利用することによって疾患マーカーを迅速かつ高感度に免疫測定する方法を開発してきた。本研究では、疾患診断における感度や特異度の更なる向上に向けて、種類の異なる蛍光色素を個別に封入した複数の蛍光磁性ビーズを開発し、それら複数の蛍光磁性ビーズを使った疾患マーカーの迅速・高感度・同時多項目測定の実現を目標としている。当該年度は以下の3項目について取り組んだ。(1)種類の異なる蛍光色素を個別に封入した蛍光磁性ビーズの開発:磁性ビーズへの封入に適した蛍光色素としてストークスシフトが大きく極性が低いチオフェン骨格の分子を数種類選定した。封入実験の結果、いずれも10,000個以上もの分子が1個の磁性ビーズに封入できていることが確認できた。(2)低分子疾患マーカーの免疫測定法の確立:低分子疾患マーカーを測定するために蛍光磁性ビーズを利用した競合測定法の検討を行った。抗原固定化蛍光磁性ビーズと抗体固相化プレートの組み合わせと、抗体固定化蛍光磁性ビーズと抗原固相化プレートの組み合わせを比較した結果、後者の組み合わせにおいて高感度測定の可能性が示唆された。(3)蛍光磁性ビーズを利用した迅速・高感度・同時多項目測定の確立:上記で作製した異なる蛍光色素を封入した蛍光磁性ビーズ2種を利用して、サンドイッチ法による2項目の疾患マーカーの同時免疫測定を試みた。免疫反応の後、各々の蛍光磁性ビーズの蛍光波長に合わせた光学フィルタを通して蛍光強度を測定した結果、他方の疾患マーカーの存在によっても蛍光強度が高くなることが確認できた。この原因として、他方の蛍光磁性ビーズからの蛍光も光学フィルタを通して検出するクロストーク現象が生じたためと考えられ、予め算出した補正値によるクロストーク補正により正味の疾患マーカーの濃度を定量することが可能となった。これまでの研究において、蛍光と磁性の両方の機能を有するナノサイズのビーズを利用し、この蛍光磁性ビーズの磁気捕集により抗原抗体反応を迅速化することで、疾患マーカーの免疫測定を迅速かつ高感度に測定する方法を開発してきた。本研究では、疾患診断における感度や特異度の更なる向上にむけて、蛍光磁性ビーズを使った疾患マーカーの迅速・高感度・同時多項目測定の実現を目標とした。まず、疾患マーカーの同時多項目測定に向けて、種類の異なる蛍光色素を個別に封入した複数の蛍光磁性ビーズを開発した。蛍光色素としてストークスシフトが大きく極性が低いチオフェン骨格の分子を数種類選定して磁性ビーズに封入した結果、いずれも30,000個以上の分子が1個の磁性ビーズに封入できていることが確認できた。次に、低分子の疾患マーカーを測定できるようにするために蛍光磁性ビーズを利用した競合測定法の開発を行った。抗体固定化蛍光磁性ビーズと抗原固定化プレートの組合せにおいて、蛍光磁性ビーズの磁気捕集反応により測定時間10分以内に疾患マーカーを定量可能であることを確認した。この際に、蛍光磁性ビーズに固定化されている抗体量を少なくすることによって高感度に疾患マーカーが測定できることが明らかとなった。更に、上記で作製した異なる蛍光色素を封入した蛍光磁性ビーズ2種を利用して、2項目の疾患マーカーの同時免疫測定を試みた。測定の結果、蛍光のクロストーク現象により他方の疾患マーカーの存在によっても蛍光強度が高くなることが確認できた。これに対しては、予め算出した補正値によるクロストーク補正により正味の疾患マーカーの濃度を定量することが可能となった。この同時免疫測定においても蛍光磁性ビーズの磁気捕集反応により測定時間10分以内に疾患マーカーが定量可能であることが示された。当該年度の目標である、(1)種類の異なる蛍光色素を個別に封入した蛍光磁性ビーズの開発、(2)低分子疾患マーカーの免疫測定法の基礎的検討、(3)蛍光磁性ビーズを利用した迅速・高感度・同時多項目測定の基礎的検討について研究を行い、ほぼ全てにおいて当初の目的を達成した。病態検査学(2)低分子疾患マーカーの免疫測定法については、抗体固定化蛍光磁性ビーズと抗原固相化

プレートの組み合わせによる競合測定法において迅速測定と高感度測定の両立を目指して改良を進めると共に、多項目測定に向けてサンドイッチ法と同等手順での測定可能性も模索する。(3)蛍光磁性ビーズを利用した迅速・高感度・同時多項目測定については、タンパク質疾患マーカーのサンドイッチ測定法と上記の低分子疾患マーカーの競合測定法の組み合わせでも同時多項目測定できることを確かめる。さらに確立した同時多項目測定法を用いて(4)検体からの複数の疾患マーカーの同時多項目測定が可能であることを確かめる。実験中の洗浄操作などのばらつきを抑えて安定して検討を進めるためにプレートウォッシャーを購入して実験を行う予定であったが、別途検討により磁石を用いて蛍光磁性ビーズを洗浄する方法での洗浄効果が得られため、プレートウォッシャー購入を見送った。最終目標である検体からの複数の疾患マーカーの同時多項目測定に向けて量が必要である蛍光色素や抗体などの消耗品の購入に充てる予定である。
電子移動メディエーターを用いた高感度薬物モニタリングシステムの開発

不斉認識能を有する電子移動メディエーターとして、強い酸化力を有するニトロキシル化合物の分子内にキラル残基を導入したデカヒドロキノリン型、カンファー型、スピロ環型キラルニトロキシル化合物を合成し、ラセミの二級アルコール類およびアミン類に対する不斉認識能を検討した。その結果、基質として光学活性な二級アルコールであるR-およびS-1フェニルエタノールを用いてエナンチオ選択的酸化能を調査したところ、デカヒドロキノリン型は全くエナンチオ選択性を示さず、カンファー型はわずかであるが、エナンチオ選択性を示した。一方、スピロ環型は分子内の不斉炭素の絶対配置の違いにより、R-体あるいはS-体と選択的に反応した。また、このスピロ環型キラルニトロキシル化合物は光学活性なアミン類に対しても同様に高いエナンチオ選択性を示した。次に、この電子移動メディエーターに金原子と強く結合することが可能なように、分子内に硫黄元素を含むスピロ環型キラルニトロキシル化合物を合成し、金電極表面に自己組織化単分子膜を形成させた。このキラルニトロキシル化合物修飾金電極は光学活性な二級アルコール類およびアミン類に対しても同様に高いエナンチオ選択性を示すとともに、高速液体クロマトグラフィーの電気化学検出器の作用電極部分に組み込むことが可能であり、薬物モニタリングシステムに応用できることが示唆された。また、外郭にニトロキシルラジカル基を有するニトロキシルラジカルデンドリマーを合成し、電極反応挙動をサイクリックボルタンメトリーより検討したところ、分子の大きさや内殻の構造が電気化学的持性に影響を与えないことが分かった。アルコール類の電解触媒酸化反応においては、外郭のニトロキシルラジカル基が増加するにつれ反応速度が加速した。このことから、メディエーターを単分子で電極上に固定化させるよりも、デンドリマーなどのような高分子にメディエーターを固定化し集合体化することにより、高感度化がはかられることが示唆された。不斉認識能を有する電子移動メディエーターとして、強い酸化力を有するニトロキシル化合物の分子内にキラル残基を導入したキラルニトロキシル化合物を合成し、ラセミ二級アルコール類に対する不斉認識能を検討した。従来のスピロ環を有するキラルニトロキシル化合物はニトロキシルラジカル部分とそれを取り巻く置換基の環境から安定性等に問題があることから、新たにデカヒドロキノリン型のキラルニトロキシル化合物の合成を行い、R-およびS-1-フェニルエタノールに対するエナンチオ選択的酸化能を検討した。その結果、R-体、S-体ともアセトフェノンに酸化されエナンチオ選択性を示さなかった。一方、カンファーを不斉源としたキラルニトロキシル化合物の合成をも行い、R-およびS-1-フェニルエタノールに対するエナンチオ選択的酸化能を検討したところ、R-体、S-体ともアセトフェノンに酸化されたが、R-カンファー由来のキラルニトロキシル化合物はR-体、S-カンファー由来のキラルニトロキシル化合物はS-体を優先的に酸化し、わずかであるがエナンチオ選択性を示した。また、外郭にニトロキシルラジカル基を有するニトロキシルラジカルデンドリマーを合成し、その電極反応挙動をサイクリックポルタンメトリーにより検討したところ、分子の大きさや内殻の構造が電気化学的特性に影響を与えないことが分かった。このことから、メディエーターを単分子で電極上に固定化させるよりも、デンドリマーなどのような高分子にメディエーターを固定化し集合体化することにより高感度化がはかられることが示唆された。

このことから、メディエーターを単分子で電極上に固定化させるよりも、デンドリマーなどのような高分子にメディエーターを固定化し集合体化することにより、高感度化がはかられることが示唆された。
外傷性脳損傷者の家族に対するWebを用いた問題解決プログラムの有効性

外傷性脳損傷者を介護する家族が適応状態に至るためには、適切な問題解決を行えるようになることが必要である。在宅で脳損傷者を介護する家族は、病院で開催される家族プログラムに参加することが困難なことも多いため、先行研究と問題解決療法の研修を基にWebを用いた問題解決プログラムを構築した。5名のボランティアに試験的にプログラムに参加してもらったところ、問題の明確化に関して有効性が推察され、本格的な運用の示唆を得た。平成26年度は、以下のことを行った。2.外傷性脳損傷者の家族介護者の問題解決プログラムの一部となる方略を検討するため、近畿大学および大阪大学の教員が主催する研修会に参加し、資料を得た。その結果、与えられたプログラム(課題)を遂行するだけでは十分ではなく、プログラムを提供する側と受ける側のやり取りの必要性が明らかになった。3.外傷性脳損傷当事者・家族会のメンバーである協力者から意見を聴取した。経験の中で自分なりの問題解決法を身につけることができるようになるため、そのプロセスを分析し、プログラムにしていくことが有効ではないかとの示唆を得た。平成27年度は以下のことを実施した。1.外傷性脳損傷者の家族介護者の問題解決プログラムの方略を構築するため、近畿大学および大阪大学の教員が主催する問題解決のワークショップに再度参加し、コンテンツ作成の手がかりを再確認した。2.問題解決のためのプログラムの試案を作成した。Step1:外傷性脳損傷者の家族介護者が問題に対し、望ましい状態(どうなったらよいか)を入力し、送信する。Step2:研究者が受信したことを返す。Step3:研究者が推奨する問題解決策を複数提示する。Step4:家族介護者は研究者が提示した問題解決策の中から適切だと思う項目を選択して送信する。Step5:家族介護者が問題解決策を実施し、その結果を研究者に送信する。研究者は実施結果を評価する。問題および解決策は、当事者・家族会の会員からしばしば指摘される問題状態と解決策を複数設定する。家族介護者が、自分にあてはまる問題を順にいくつか選択し、上記のStepを実施する。最後に、その家族介護者が自身がもっとも気にかけている問題を抽出し、解決策も自身で作成するという方法で上記Stepを実施する。3.同じサイト内のコンテンツの充実を図った。外傷性脳損傷者の家族介護者の問題を解決するためのプログラムとは直接的には関係しないが、問題解決のプログラムへの参加者を確保するためには、サイト利用者を増やすことが必要である。このため、当事者の認知機能を維持・改善するためのドリル形式のコンテンツを作成した。予算との関係からサイトの管理を委託していた会社の変更を行うこととなった。それに伴い、作業が遅れた。問題解決のプログラムのコンテンツ作成に時間を要した。平成26年度は、問題解決療法ワークショップに参加し、問題解決のプロセスと介入方法を実体験した。それを基に、Web上で実施するための課題・方法を検討した。また、外傷性脳損傷者の家族会に参加して家族の話を聴講することにより、家族の抱える問題を把握した。平成27年度は、問題解決プログラムのステップを検討して試案を作成した。また、問題解決の具体策として使用が考えられる、コンテンツ(学習ドリル)について、ドリルをダウンロードして使用できるように、充実を図った。平成28年度は、問題解決プログラムをコンテンツとしてWeb上にアップした。5名のボランティアをリクルートし、プログラムに参加してもらった。結果として、以下のことが分かった。家族は自分の抱える問題の表現が困難である。目標や現状を述べていくうちに、問題が明確になる。問題が適切に表現できない要因として、脳損傷者自体の問題、主介護者の問題、家族全体の問題など複数の問題が絡んでおり、現状が適切・客観的に理解できないということが考えられる。問題が表現できて具体策が具体的に出てくると、行動に結びつくが、Web上では面接と異なり、傾聴・共感などのスキルを使うことができないため、具体的な情報を引き出すまでに時間を要す。問題の焦点化し、狭い範囲にすると解決に結びつく。Webの限界はあるが、相談する場所がない、相談者が遠方であるという家族にとっては、特に、問題を明確化する点と結果を評価する際に第三者の介入が必要であり、効果がある。今後、本格的にプログラムの使用と調査を実施する。所属が変わったことで、共同研究者との連携および作業の遂行に支障をきたした。平成25年度までに構築したシステム(外傷性脳損傷当事者を対象としたコンテンツ)の充実に時間を要した。今回充実させたコンテンツは、当事者に課題を提示し、Web上で回答を得るものであり、このシステムは、本研究のテーマである問題解決プログラムの実施とその反応を得る方法に用いるため、不可欠であった。問題解決のコンテンツはほぼ完成したため、外傷性脳損傷当事者・家族会、リハビリテーション病院の外来等で参加募集者を募り、実施・評価の部分に着手する。プログラムの実施は6か月程度を予定しているため、年度内に成果が得られる予定。

サイト内に入るにはログインIDおよびパスワードが必要リハビリテーション看護平成27年度は、前半で外傷性能損傷者を介護する家族員を対象とした問題解決プログラムを作成する。年度後半で外傷性脳損傷者当事者・家族会のメンバーである家族員に作成したプログラムを概観してもらい、修正・追加箇所について意見をもらう。修正後、Webシステムに取り込み、試験運用する。家族会のメンバー有志に参加してもらい、出された意見によってコンテンツの修正を行う。問題解決プログラムのコンテンツ作成は行ったが、作業の遅れから修正作業が終了しなかったため、修正分の予算が次年度使用額67,116円として生じた。平成26年度は、旅費として30,000円を計上していたが、遠方の協力者(外傷性脳損傷当事者・家族会会員からの聞き取りを行うことができず、旅費の使用がなかった。ただし、システム充実に必要な経費が増えたため、旅費の一部をそちらに回し、次年度使用額23,480円を生じた。今年度早期にトライアル・修正を行う予定であり、67,116円を使用する。平成27年度に遠方の協力者を訪問し、試作のプログラムについて意見を求めるために23,480円を使用する。