hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
液体-プラズマシステムを用いた高秩序コアシェル型ナノ粒子の創製

この結果,金-DNAコアシェル型ナノ粒子の光学的特性が自在に制御可能であることが明らかとなった.前年度までの成果に基づき,本年度は,気相-液相界面プラズマによる金ナノ粒子合成の際に重要な役割を果たす還元剤の種類を特定しナノ粒子合成メカニズムを解明するとともに,バイオ応用が期待される金ナノ粒子がコアでDNAがシェルである新規コアシェル型ナノ粒子を制御して合成し,さらにドラッグデリバリーへの応用を目指して,カーボンナノチューブ(CNT)への挿入実験を行った.1.気相-液相界面プラズマにより合成される金ナノ粒子の密度,直径の時間発展を詳細に調べることによって,金ナノ粒子合成にはプラズマによって形成される寿命の異なる2つのカテゴリーの還元剤が重要な役割を果たしていることを明らかにした.一つは,短寿命の還元剤であり,プラズマから照射される電子,紫外線,および高エネルギーイオンの液相への照射によって生成される二次電子,水素ラジカル,水酸化ラジカルである.もう一つが,長寿命の還元剤であり,プラズマ照射により液相で生成される過酸化水素(H_2O_2)である.これらの還元剤の生成をプラズマパラメータを変化させて制御することにより,コアシェル型ナノ粒子のサイズ,シェルとしてのDNAの被覆率,ナノ粒子の凝集度などを制御できることを明らかにした.2.高度に秩序化されたナノ粒子周期構造の実現およびドラッグデリバリーへの応用を目指し,CNTが塗布された基板へのバイアス(V_<DC>)印加によるプラズマイオン照射法を用いることによって,金コアーDNAシェルナノ粒子をCNT内部へ挿入する実験を行った結果,V_<DC>を正方向に増加させることによって,CNT内部およびCNTの束の隙間にナノ粒子が存在することが明らかとなり,本手法により金コアーDNAシェルナノ粒子を内包したCNT形成が可能であることを実証した.このようにして形成された金ナノ粒子とCNTの複合物質は,高効率の光電変換素子の創製のみならず,タンパク質高感度センシング等の幅広いバイオ・医療分野への応用が期待できる.
近代日本の景勝地の鳥瞰図に関する歴史地理学的研究

明治期から昭和初期に作成された、厳島、和歌浦、天橋立、富士山、耶馬溪などの景勝地の鳥瞰図について、その現存状況を調査し、データベースを作成するとともに、作成主体、作成目的などの資料的検討を行った。それをふまえて、同地域の「案内記」や「写真帳」などの関連資料や、近世の絵画資料を参考にして、鳥瞰図に描かれた内容を分析し、表現された景観の特質を明らかにした。本研究は、近代における厳島、和歌浦、天橋立、富士山、耶馬溪などの景勝地の鳥瞰図を悉皆調査し、その資料的検討を行うとともに、同時期に作成された「案内記」や「写真帳」を参考資料として、鳥瞰図に表現された景観の特質を明らかにすることを目的としている。本年度はこれらの鳥瞰図や「案内記」「写真帳」について、各種図書館や博物館(東京周辺および現地)、古書店にて資料調査を行い、内容の確認と現物や画像・コピーの収集を行うことに重点を置いて調査研究を行った。また、『江戸時代図誌』や『明治・大正図誌』などの近世・近代の鳥瞰図を数多く掲載した書籍を通覧することにより、日本の景勝地の鳥瞰図の全体像を把握することにも努めた。その結果、厳島に関しては、現存するほぼすべての鳥瞰図、「案内記」「写真帳」の内容を把握することができ、その一部は現物や画像を入手することができた。天橋立、耶馬溪については、従来ほとんど知られていない鳥瞰図を見出し、入手することができた。また、厳島については現地での景観調査も行い、東北地方の類似の景勝地である松島や象潟との比較を通して、鳥瞰図に描かれた景観の特質の一端を理解することができた。研究成果の公表としては、従来から研究を進めてきていた松島について、鳥瞰図や「案内記」「写真帳」に表現された景観の特色について考察を深め、学会発表(地理空間学会例会)を行うとともに、本年度に刊行した編著のなかにその内容を収録した。本年度は,昨年度に引き続き、これらの鳥瞰図や「案内記」「写真帳」について、各種図書館や博物館(東京周辺および現地)、古書店等にて資料調査を行い、内容の確認と現物や画像・コピーの収集を行った。その結果、厳島、富士山、耶馬溪に関して、現存するほぼすべての鳥瞰図、「案内記」「写真帳」の内容を把握することができ、主要なものについては現物や画像を入手することができた。厳島の鳥瞰図については、データベースをほぼ完成させ、作成主体などの資料的検討を十分に行うことができた。厳島の鳥瞰図の内容については、現地での景観調査も行い、東北地方の松島との比較を通して、描かれた景観の特質を解明することができた。その特質とは、明治・大正期の厳島の鳥瞰図では寺院がほとんど描かれておらず、桜が強調して描かれていることなどであり、それは明治前期の廃仏毀釈の影響や、明治期以降、桜がナショナルな景観の表象として人々に受け入れられていったことと関連していたと考えられる。研究成果の公表としては、厳島の鳥瞰図に描かれた景観の特質について、松島の事例と比較する形で学会発表(人文地理学会特別発表)を行った。そして、厳島の鳥瞰図の資料的検討と描かれた景観の特質に関しては、論文にまとめて公表した。本年度はこれらの地域に加えて、高野山と吉野山の鳥瞰図や「案内記」「写真帳」について、図書館や博物館、古書店等にて資料調査を行い、内容の確認と現物やデジタル画像・コピーの収集を行った。その結果、それらの現存状況を把握することができ、主要なものについては現物や画像を入手することができた。そして以上の各地域の鳥瞰図について、データベースを作成するとともに、作成主体などの資料的検討を引き続き行った。これらの資料調査や資料的検討をふまえ、各地域の鳥瞰図の表現内容の分析を行った。

その結果、富士山の鳥瞰図は山の景観そのものを主眼として描いたものはほとんどなく、大部分が「登山案内図」として、麓の登山集落や神社、登山経路を主眼として描いたものであること、高野山の図は単色刷りのものがみられるのに対して、吉野山の図はほとんどが多色刷りであり、それは厳島の場合と同様に桜を強調して表現するためであったと考えられること、ともに砂嘴の景観に特徴がある和歌浦と天橋立に関して、和歌浦の鳥瞰図は陸地から海の方を眺める構図が多いのに対して、天橋立は海から陸地の方を眺める構図が多く、これは前近代の絵画や絵図の表現が影響したと考えられること、などが明らかとなった。なお、研究期間の最後である本年度は、最終的な資料調査とデータベースの作成に重点を置いたため、論文の公表には至らなかったが、和歌浦と天橋立に関する鳥瞰図の資料的検討と表現された景観の特質に関しては、今後論文にまとめて公表する予定である。
天然物を原料とする新らたな高次合成法の開発

本年度は、下記8件について研究し、夫々成功した。1.5-ニトロフラン-2-カルボン酸メチルに1,2級のニトロアルカンと塩基を与えると5位のニトロ基が脱離し4位がニトロアルキル化される。このニトロ基は容易に消去でき、4位のアルキル化に成功した。2.1-フェニルスルホニル-3-クロロアセトンは酵母により不斉還元(ee98%)できた。これはエポキシドを経て3位を任意にアルキル化でき、脱硫によって不斉な任意の2-オールを合成する新方法を確立できた。3.前項のアルキル化体をジアニオンとし、1-ブロモ-2-アルケンとフェニル塩化セレンを与え、次いで酸化し塩基で脱スルホン化して、2-アルキル-5-(1′-メチレン)アルキル-3-ブテノリド類の合成法を開発した。4.β-位にトシル基をもつニトロアルカンをトリブチルスタナンと反応させるとこの2基が立体特異的にトランス脱離することを発見し、多置換オレフィンの立体選択的な新合成法を開発した。5.1-トシル-2-ニトロアルケンと1,3-ジエンのディールスアルダー付加が位置特異的であることを発見し、前項の脱離反応を適用して、1,2-ジアルキル-2,5-シクロヘキサジエン類の新合成法を開発した。6.α-トシルメチルアクリル酸アニリドのジアニオンにハロアルカンを与え、次に【H^-】でSn2'型の脱硫置換をすることにより、メタクリル酸のβ-位を任意にアルキル化する新しい方法を開発した。7.ニトロ脂環類は、ニトロ基のα位でのみマイケル付加を起こす。次にトリブチルスタナンでニトロ基を消去することにより、アクリル酸等へ脂環の位置選択的に導入する方法を開発した。8.三級ニトロアルカンボトリブチルスタナンの共存下にラジカル的マイケル付加反応を起こすことを発見し、3級アルキル基の新マイケル付加反応を開発した。上記8反応は何れも6095%の高收率を与える実用的なものである。
ダイオキシン類の毒性発現に係る新規の転写調節因子の同定

2378-tetrachlorodibenzo-p-dioxin(以下、ダイオキシン)およびその関連化合物(以下、ダイオキシン類)は、催奇形性や発がんプロモーター作用など多用な毒性を持つが、これらの毒性発現に係る遺伝子発現のメカニズムは未だに明らかではない。我々は、先にダイオキシン類の一つである3453'4'-pentachlorobiphenyl(PenCB)がPi class gulutathione S-transferase(GSTP1)遺伝子を初代培養ラット肝実質細胞中で発現することを見い出した。GSTP1遺伝子の発現調節機構を明らかにするために、この遺伝子の5'上流域の制御領域の同定をCATアッセイを利用して進めた。その結果、初代培養肝実質細胞におけるPenCBによるGSTP1遺伝子の発現促進にはGPEI領域が必要であることが明らかになった。GPEIにはフォルボールエステル応答領域様の配列が対称に並んでいる。サイオキシン類により活性化された新規のシグナル伝達系がGSTP1遺伝子発現の促進に寄与すると考えられた。初代培養肝実質細胞におけるGSTP1遺伝子発現はPenCBばかりでなく、上皮細胞増殖因子(epidermal growth factor,EGF)によっても引き起こされた。EGFやTGFαによるGSTP1遺伝子の発現にもGPEI領域が必要であった。EGFとTGFαはダイオキシン類と同じシグナル伝達系により、GSTP1遺伝子を発現することが示唆された。さらに、GPEI領域に結合するタンパク質の同定を、GSTP1遺伝子が常時発現している不死化ラット肝実質細胞の核抽出液を出発材料として進めた。32P標識したGPEIオリゴマーとこれに結合する核タンパク質を紫外線照射により結合し、タンパク質を2次元電気泳動により分離した後、GPEIに結合したタンパク質をオートラジオグラムで検出し単離した。現在、単離したタンパク質のトリプシン消化物の分子量をMALDI-TOF/MSにより決定し、データベースとの照合によりGPEIに結合するタンパク質の同定を進めている。最も毒性の強いコプラナーPCB同族体である33'44'5-pemtachlorobiphenyl(PenCB)はcytochrome P450-IAl(CYP-IAl)と同様にpi型glutathione S-transferase(GSTPl)を初代培養したラット肝実質細胞中に特異的に誘導する。しかし、GSTPl遺伝子の5'上流域にはAhレセプターの結合域であるxenobiotic responsiveelementは存在しない。我々はCATアッセイ法を利用して、GSTPl enhancer element(GPEI)と名付けられたエンハンサー領域がラット肝実質細胞におけるPenCBによるGSTPl遺伝子発現の促進に必要であることを明らかにした。GPEI領域内には2組のphorbol ester responsive element(TRE)様の塩基配列が対称に存在し、その塩基配列はantioxidant responsive elementに類似している。PenCBにより活性化される新規のシグナル伝達系がGPEI領域を介したGSTPl遺伝子の発現に関与していることが示唆された。そこで、シグナル伝達機構を明らかにするために、GPEI領域に結合する転写因子を同定する事とした。その予備試験として、PenCB処理あるいは対照の初代培養ラット肝実質細胞より核抽出液を調製し、32Pで放射標識した合成GPEIプローブを用いてゲルシフトアッセイを行った。その結果、1本のシフトバンドが検出され、このバンドの濃さがPenCB処理細胞の核抽出液では増強されていた。

PenCBによる転写促進活性が失われた変異GPEI領域をゲルシフトアツセイのプローブに用いた場合にはシフトバンドは検出されず、シフトバンドは特異的なGPEI領域への因子の結合を反映している、ものと考えられた。現在、共鳴プラズモン法を利用して、GPEI領域への因子の結合の解析を進めている。2378-tetrachlorodibenzo-p-dioxin(以下、ダイオキシン)およびその関連化合物(以下、ダイオキシン類)は、催奇形性や発がんプロモーター作用など多様な毒性を持つが、これらの毒性発現に係る遺伝子発現のメカニズムは未だ明らかでない。我々は、先にダイオキシン類の一つである3453'4'-pentachlorobiphenyl(PenCB)がPi class glutathione S-transferase(GSTP1)遺伝子を初代培養ラット肝実質細胞中で発現することを見い出した。GSTP1遺伝子の発現調節機構を明らかにするために、この遺伝子の5'上流域の制御領域の同定をCATアッセイを利用して進めた。その結果、初代培養肝実質細胞におけるPenCBによるGSTPI遺伝子の発現促進にはGPEI領域が必要であることが明らかになった。GPEIにはフォルボールエステル応答領域様の配列が対称に並んでいる。ダイオキシン類により活性化された新規のシグナル伝達系がGSTPI遺伝子発現の促進に寄与すると考えられた。初代培養肝実質細胞におけるGSTP1遺伝子発現はPenCBばかりでなく、上皮細胞増殖因子(epidrmal growth factor, EGF)によっても引き起こされた。EGFやTGFαによるGSTPI遺伝子の発現にもGPEI領域が必要であった。EGFとTGFαはダイオキシン類と同シグナル伝達系により、GSTP1遺伝子を発現することが示唆された。さらに、GPEI領域に結合するタンパク質の同定を、GSTP1遺伝子が常時発現している不死化ラット肝実質細胞の核抽出液を出発材料として進めた。32P標識したGPEIオリゴマーとこれに結合する核タンパク質を紫外線照射により結合し、タンパク質を2次元電気泳動により分離した後、GPEIに結合したタンパク質をオートラジオグラムで検出し単離した。現在、単離したタンパク質のトリプシン消化物の分子量をMALDI-TOF/MSにより決定し、データベースとの照合によりGPEIに結合するタンパク質の同定を進めている。
骨格筋でのアクアポリンとジストロフィン、ジストロフィン関連糖蛋白との相互関係

water channel proteinの1つで骨格筋にも存在するアクアポリン-4(AQP-4)の発現様式を正常骨格筋および筋ジストロフィー症において調べ,さらに骨格筋におけるAQP-4の生理的意義およびジストロフィン(DYS),α_1シントロフィンなどのジストロフィン関連糖蛋白(DAGs)との相互関係を抗ペプチド抗体,イムノブロット,免疫組織化学,アフィニティークロマトグラフィーを用いて調べることを目的とした.平成9年度は正常マウスとmdxマウスの骨格筋でのAQP-4の存在様式を調べた.免疫組織化学では正常マウスで筋細胞周辺が染色されたが,mdxマウスでは染色は著しく減弱していた.イムノブロットでは正常マウスで28kDa付近にバンドを認めたがmdxマウスでは減弱していた.本年度はアフィニティークロマトグラフィー,イムノブロットを用いてAQP-4およびDYS,DAGsとの相互作用を解析した.組織化学的に正常なヒト凍結生検筋を破砕し,緩衝液を加え可溶化し,さらに抗AQP-4抗体を加え反応させ,ブロッキングした抗IgG-celluloseとまぜて反応させた.遠心分離して得たペレットを洗浄用緩衝液で3回洗浄,さらにペレットに溶出用液を反応させ,遠心分離した.得られた上清に試料用緩衝液を加え,SDS-PAGEを行い,PVDF膜に転写後,抗DYS抗体,抗DAGs抗体と反応させた.抗AQP-4抗体を用いたアフィニティークロマトグラフィー得られたサンプルのイムノブロットでは抗DYS抗体と反応するバンドを認めた.この結果からAQP-4とDYSは何らかの相互関係をもっている可能性が推測されるが,今後さらに相互作用や生理学的意義を調べるためにペプチドを用いた阻害実験などを行う予定である.細胞膜に存在し,water transportに重要な役割を担っている6種類のwater channel (aquapolin)のうち,特に骨格筋に存在し,筋収縮に何らかの重要な役割をもつと考えられているaquaporin-4(mercurial insensitive water channel:MIWC)の存在,発現様式を正常骨格筋および筋ジストロフィー症にて調べ,骨格筋でのMIWCの生理的意義およびdystrophin,dystrophin関連(糖)蛋白との相互関係を検討するために,平成9年度は正常マウスとmdxマウスの骨格筋におけるMIWCおよびdystrophin,dystrophin関連(糖)蛋白の存在および発現様式を免疫組織化学,イムノブロットを用いて解析し,下記の結果をえた.1.抗MIWC抗体Hasegawaらが報告したMIWCのアミノ酸配列からpeptide synthesizerで,C末端領域(amino acids 287-301)のペプチドを合成し,ウサギ,羊に免役し,抗体を得た.2.免疫組織化学クリオスタットで薄切した凍結筋組織切片に,1次抗体として抗MIWC抗体を,2次抗体としてFITC標識免疫グロブリンを反応させ,蛍光顕微鏡で観察した.正常マウスでは筋細胞膜周辺が明瞭に染色されたが,mdxマウスでは染色は減弱していた.3.イムノブロットによるMIWCの解析破砕した凍結生検筋に10倍量の試料調整用緩衝液を加え,SDS-PAGEを行い,PVDF膜に転写後,抗MIWC抗体と反応させた.28kDa付近にバンドを認めた.平成10年度はアフィニティークロマトグラフィー,イムノブロットを用いてMIWCおよびdystrophin,dystrophin関連(糖)蛋白との相互作用を解析する.water channel proteinの1つで骨格筋にも存在するアクアポリン-4(AQP-4)の発現様式を正常骨格筋および筋ジストロフィー症において調べ,さらに骨格筋におけるAQP-4の生理的意義およびジストロフィン(DYS),α_1シントロフィンなどのジストロフィン関連糖蛋白(DAGs)との相互関係を抗ペプチド抗体,イムノブロット,免疫組織化学,アフィニティークロマトグラフィーを用いて調べることを目的とした.平成9年度は正常マウスとmdxマウスの骨格筋でのAQP-4の存在様式を調べた.免疫組織化学では正常マウスで筋細胞周辺が染色されたが,mdxマウスでは染色は著しく減弱していた.イムノブロットでは正常マウスで28kDa付近にバンドを認めたがmdxマウスでは減弱していた.本年度はアフィニティークロマトグラフィー,イムノブロットを用いてAQP-4およびDYS,DAGsとの相互作用を解析した.組織化学的に正常なヒト凍結生検筋を破砕し,緩衝液を加え可溶化し,さらに抗AQP-4抗体を加え反応させ,ブロッキングした抗IgG-celluloseとまぜて反応させた.遠心分離して得たペレットを洗浄用緩衝液で3回洗浄,さらにペレットに溶出用液を反応させ,遠心分離した.得られた上清に試料用緩衝液を加え,SDS-PAGEを行い,PVDF膜に転写後,抗DYS抗体,抗DAGs抗体と反応させた.抗AQP-4抗体を用いたアフィニティークロマトグラフィー得られたサンプルのイムノブロットでは抗DYS抗体と反応するバンドを認めた.この結果からAQP-4とDYSは何らかの相互関係をもっている可能性が推測されるが,今後さらに相互作用や生理学的意義を調べるためにペプチドを用いた阻害実験などを行う予定である.
農村共同体の社会ネットワークの果たす役割と農業投資行動に関する研究

研究を通じて、農地流動化に伴って形成された、担い手農家と土地持ち非農家との間の農地貸借関係をネットワークとして可視化することに成功した。可視化されたネットワークを分析した他に、他の地域での応用可能性についても議論を行った。十分な現地調査も実施し、分析結果と現実との整合性も確認した。ネットワークの解析については、理論研究の不備や計量経済学的分析の精緻化といった観点から、期間内の成果に不十分な点がある。今後の反省点としたい。本年度の目的はデータの収集と理論モデルの構築であった。データの収集については、必要な文献の購入・収集を完了した。また、分析対象となるGISについて、ソフトとともにデータを購入した。調査対象地域は研究計画では愛知用水土地改良区としていたが、ほかに、比較対象として従来研究対象としてきた千葉県や山形県の土地改良区も含めてデータの解析を進めているところである。一方で、理論モデルの構築については、十分な成果を得られていない。この点については、平成26年度に繰り延べて研究を続けなければならないとかg萎えている。農業用水路ネットワークの分析については、研究計画にある可視化と空間計量経済学的手法を用いた推計を進めることにしていた。現在、可視化と推計は終了しており、推計結果をもとに論文を作成中である。26年度はこの研究成果を公表することを第一の目標としていきたい。本年は、昨年度行った理論研究をベースにした論文の作成と、一年目の研究の積み残しとなってしまった農村の社会ネットワークの可視化・指標化に関する研究を実施した。2012年度まで調査を行ってきた山形県長井市を複数回訪れ、当時の分析結果から後の変化についても確認し、ネットワーク関係には大きな変動が生じていないことを確認した。ネットワークの可視化とそこから得られる農家情報の重要性について、筑波大学東京キャンパス文京校舎で2015年1月26日に行われた農業農村工学会農業農村整備政策研究部会第2回研究集会で「農地流動化の進展に伴う農家間関係の変化と水路情報の共有」と題して報告する機会を得た。この内容については現在農業農村工学会の雑誌に投稿中である。他に、愛知用水土地改良区をフィールドとして、農業用水のあり方に関するワークショップを実施したほか、アンケート調査も行った。その中では、農業用水の活用策と農家・非農家の関係を考慮する分析を行った。成果については3月29日に東京農工大学で行われた22015年度日本農業経済学会で個別口頭報告「農業用水の多面的機能に対するサービス科学的考察-潜在的需要の把握-」を行った。その内容は現在投稿中である。研究全体においては、理論研究の活用が十分になされなかった点、および、目標のひとつであった空間計量経済学を用いた分析成果の公表に至らなかった点が反省点である。これは引き続き研究課題としたい。26年度が最終年度であるため、記入しない。農業経済学26年度が最終年度であるため、記入しない。9月から特任研究員として東京大学で任用されたが、職務形態を裁量労働にしたところ、専従義務が週7日間で発生し、当該研究費を理由とする出張が不可能になった。そのため、現地で追加的な情報が収集できなかった。この点は26年度から任用形態を変更し、解決した。26年度は遅れを取り戻す形で研究を進めることが可能である。第一に、前述の農地貸借ネットワークに関する論文を完成・投稿することを目指す。次に、収集文献をもとに、協力ゲームの理論を用いた農業用水管理行動の理論的モデルの作成に取り掛かる。それをもとにした論文を作成し、公表することが第二の目標である。第三に、ネットワーク関係と投資行動との関連を考察することにしている。この点は、研究対象を含めて幅広く再検討し、実態調査等を行いつつ分析結果を公表することにしたい。
移植肝線維化に対してアンギオテンシンIIアンタゴニストは治療的効果があるか？

本研究は小児生体肝移植後の長期経過における移植肝線維化に対して、抗アンギオテンシンIIレセプター抗体が治療効果を発揮するかどうかについての研究である。本年の予定としては倫理委員会に本研究の妥当性について諮問しその後、対象患者の選定とインフォームドコンセントを行う予定としていた。術後経過の長い患者に対して降圧薬を投与するにあたり、動物実験での治療効果を確認しておく必要があると考え、マウスの肝線維化モデルを作成しアンギオテンシンIIレセプター抗体の線維化抑制効果につき検討する方針とした。2群の線維化モデルを作成、一つは4週齢のC57BL6雄性マウスに対して四塩化炭素(CCl4)、1mg/kgを1週に2回腹腔内投与、8週にわたり腹腔内投与した群、もう一群は総胆管結紮(Bile duct ligation: BDL)した群とした。肝線維化モデルを作成した後に犠死させ、血液および肝組織を採取し、シリウスレッド染色で肝線維化の有無を確認し、線維化が誘導されていることを確認した。現在、肝線維化モデルにおけるアンギオテンシンIIレセプターの血中および肝組織における発現を解析中である。
B細胞の分化初期に発現するZnフィンガー因子の遺伝子単離と解析

本研究では、B細胞の分化初期に発現するKruppel型Znフィンガー転写因子の遺伝子を単離・解析することを目的とし、モデル系としてLPSとIL-4で刺激したマウス脾細胞から、保存された配列を標的としたRT-PCR法により効率的に遺伝子単離を行なうシステムの確立を試みた。まず標的配列に対応する混合プライマーに、アンカー配列を付加したAnchored PCRを行ない、、目的とするZnフィンガー遺伝子を特異的かつ効率よく増幅することを可能とし、さらにベクターを改変し挿入する遺伝子とLacZ遺伝子の読み枠を合わせ、目的とする組み換え体をより効率よく選別できるようにした。現在までに65種類のZnフィンガー遺伝子を単離し、そのうち62種は未知であった。次にこれら多くのクローンの中から、特定の分化段階や刺激によって特異的に発現するようなものを選択するために、LPS/IL-4刺激あるいは無刺激のマウス脾細胞から、それぞれ同様にZnフィンガー遺伝子をRT-PCRにより調製したものけプローブとして、刺激した細胞由来の遺伝子ライブラリーをスクリーニングした結果、刺激により有意に発現が増強される遺伝子を単離することができた。この遺伝子は細胞癌化との関連性が示唆されており、機能的に大変興味深い。さらにこの遺伝子を含むいくつかのクローンの全長cDNAを単離したところ、Kruppel型Znフィンガー転写因子のサブファミリーにおいて、転写を抑制あるいは活性化することが示唆されている遺伝子の機能領域と、高い相同性を有する3つの新しい遺伝子が存在することがわかった(論文投稿中)。今後は、B細胞の初期分化をin vitroで誘導できる骨髄細胞あるいは胚性幹細胞培養系のようなきわめて少ない細胞を取り扱う系から、この高感度かつ簡便なZnフィンガー遺伝子の単離および選択システムにより、実際に新しい遺伝子の単離を試みるとともに、本研究で単離した遺伝子の転写に対する調節機能に関しても解析を行なっていく予定である。
食事の三大栄養素を考慮した１型糖尿病患者の血糖値制御の研究

本研究では,1型糖尿病患者の血糖値を一日中適切な範囲に維持するため,食後および夜間の糖代謝モデルと血糖値制御法について研究を行った.まず,食事時の血糖値変化を精確に推定するため,炭水化物,脂質,および蛋白質を含む食事に対する糖代謝モデルを構成した.また,食事の事前情報に基づいて食前からの最適なインスリン投与スケジュールを与えるフィードフォワード制御と食後の血糖値変化に基づいてインスリンを調節するフィードバック制御を組み合わせた血糖値制御法を提案し,食事時にアメリカ糖尿病学会が推奨する血糖値範囲での維持が達成できることを示した.さらに,睡眠時の血糖値上昇現象である暁現象のモデル化も行った.本研究では,1型糖尿病患者の血糖値を食後も含めて一日中適切な範囲に維持できる血糖値制御を実現することを目的としている.そのために,まず三大栄養素のうち最も血糖値への影響の大きい炭水化物中心の食事に対する血糖値制御法の検討,および他の栄養素である脂質と蛋白質の糖代謝への影響のモデル化のための検討を行った.得られた結果は以下のとおりである.1.炭水化物中心の食事のグリセミック指数,含まれる炭水化物の種類,食事時刻や食事量に基づいて,インスリンの食前のボーラス投与と食後のモデル予測制御による投与を組み合わせた血糖値制御法を提案した.また,この制御法により,グリセミック指数の異なる食事に対して血糖値を望ましい範囲に維持できることをシミュレーションにより確認した.とくに食後の血糖値上昇を十分に抑制するための食前のボーラス投与の時刻が,グリセミック指数に大きく依存することがわかった.ただし,高グリセミック指数の食事については,食事の時刻や量,食事内容が予定と異なる場合に低血糖となる可能性があるので,これらを考慮した制御法の開発が必要である.2.食事に含まれる脂質の糖代謝への影響としては,胃内容排出の遅延およびインスリン抵抗性への影響がとくに大きいことがわかった.また,糖代謝モデルにこれらの影響を加えたモデルにより脂質を含む食事時の血糖値変化をおおむね表せることがわかった.3.食事に含まれる蛋白質の糖代謝への影響としては,主に蛋白質の分解後の血糖値上昇が考えられ,食後ある程度の時間経過後グルコースバランスが血糖値上昇方向に変化するという形のモデル化を考えたが,それだけでは十分精確に血糖値変化を表すことはできなかったため,変化の表現方法やその他の影響を検討すべきであることがわかった.本研究では,1型糖尿病患者の血糖値を食後も含めて一日中適切な範囲に維持できる血糖値制御を実現することを目的としている.そのために,昨年度提案した食事の事前情報を利用した炭水化物中心の食事に対する血糖値制御法では不十分であった事前情報の誤差や患者のパラメータ変動に対するロバスト性および低血糖回避性能を改善するための制御法の検討,および食事に含まれる脂質の糖代謝への影響の詳細なモデル化を行った.得られた結果は以下のとおりである.1.食事時の血糖値制御法として,事前情報どおりの食事に対する制御性能と食前に予測した最適な血糖値変化からの誤差に対する制御性能が独立に調整できる血糖値制御法を提案した.また,設計に用いる制御対象モデルのパラメータのうち,胃内容排出の時定数を小さく選ぶことで,患者のパラメータ変動の影響を小さくすることができ,低血糖の回避が可能であることがわかった.ただし,高グリセミック指数の食事については誤差の影響が大きく,必ずしも食後2時間の血糖値を推奨範囲である80-180に維持できないことがわかった.さらなる制御法の改良を検討する必要があると考えられる.2.食事に含まれる脂質の糖代謝への影響の数式モデルとして,グリセミック指数を考慮に入れた炭水化物の消化吸収動態を含む糖代謝モデルに,脂質による胃内容排出の遅れおよびトリグリセリドと非エステル化脂肪酸のコンパートメントを付加したモデルを提案した.また,このモデルにより,炭水化物と脂質を含む食事に対する血糖値変化をおおむね表せることを確認した.血糖値制御法として,事前情報に対する制御性能と最適な血糖値変化からの誤差に対する制御性能を独立に調整できる方法を提案し,設計に用いるモデルパラメータを調整することにより,事前情報の誤差や患者のパラメータ変動に対するロバスト性の向上と,低血糖回避が可能となり,従来の血糖値制御システムでは達成できなかった食後の血糖値の推奨範囲での維持をほぼ達成できた.また,食後の血糖値の長時間の上昇を引き起こす食事に含まれる脂質の血糖値への影響をより正確に表すモデルを構築したことにより,炭水化物と脂質が含まれる食事に対する血糖値制御法および前の食事の影響が残った状態での食事に対する血糖値制御法の検討の準備が整った.本研究では,1型糖尿病患者の血糖値を食後も含めて一日中適切な範囲に維持できる血糖値制御の実現を目的として,食事に含まれる三大栄養素の消化吸収動態を含む糖代謝モデルの構成,食事に関する事前情報を利用した食事時の血糖値制御法の検討,夜間の糖代謝モデルの検討を行った.得られた結果は以下のとおりである.1.食事に含まれる脂質の糖代謝への影響の数式モデルとして,グリセミック指数を考慮に入れた炭水化物の消化吸収動態を含む糖代謝モデルに,脂質による胃内容排出の遅れおよび脂質に関する二つの分画を付加したモデルを提案した.また,このモデルにより,炭水化物と脂質を含む食事に対する血糖値変化をおおむね表せることを確認した.さらに,蛋白質の糖代謝への影響として蛋白質分解後の血糖値上昇を考え,食後のグルコースバランスが血糖値上昇方向に変化するモデルを構成したが,それだけでは精確に血糖値変化を表せず,他の要因を考慮すべきことがわかった.

2.炭水化物のみあるいは炭水化物と脂質を含む食事摂取時の血糖値制御法として,食事に関する事前情報に基づいた最適な制御とその制御による最適な血糖値変化からの誤差に対する制御が独立に行える血糖値制御法を提案した.また,設計に用いるモデルの胃内容排出の時定数を小さく選ぶことで,患者のパラメータ変動の影響を小さくすることができ,低血糖回避が可能であることがわかった.ただし,炭水化物のみの高グリセミック指数の食事については誤差の影響が大きく,必ずしも食後2時間の血糖値を推奨範囲である80-180mg/dLに維持できないことがわかった.3.夜間の血糖値上昇の原因の一つと考えられる成長ホルモンの糖代謝への影響をインスリンクリアランスの増加としてモデル化し,暁現象を表せる可能性を示した.また,モデル化が妥当であれば比例積分制御により,暁現象の抑制が可能であることを確認した.本研究では,1型糖尿病患者の血糖値を一日中適切な範囲に維持するため,食後および夜間の糖代謝モデルと血糖値制御法について研究を行った.まず,食事時の血糖値変化を精確に推定するため,炭水化物,脂質,および蛋白質を含む食事に対する糖代謝モデルを構成した.また,食事の事前情報に基づいて食前からの最適なインスリン投与スケジュールを与えるフィードフォワード制御と食後の血糖値変化に基づいてインスリンを調節するフィードバック制御を組み合わせた血糖値制御法を提案し,食事時にアメリカ糖尿病学会が推奨する血糖値範囲での維持が達成できることを示した.さらに,睡眠時の血糖値上昇現象である暁現象のモデル化も行った.グリセミック指数等を考慮に入れた炭水化物が中心の食事に対する血糖値制御法を提案し,その血糖値制御法により,従来は達成できなかった健常者に近い血糖値制御が可能であることを示せた.また,提案制御法で低血糖になりうる状況が把握でき,今後の血糖値制御法の改善すべき点が明確になった.また,食事に含まれる脂質の血糖値への影響については,胃内容排出遅延とインスリン抵抗性の変化により表せることが確認できた.さらに,食事に含まれる蛋白質の血糖値への影響については,グルコースバランスの変化としてモデル化することで,ある程度表すことが可能であることがわかったとともに,単純なパラメータの変更では不十分であるという問題点を明確にできた.まず,炭水化物のみの食事に対する血糖値制御法と食事に含まれる脂質の影響を考慮した糖代謝モデルに基づいて,低血糖回避が可能でできるだけ推奨範囲内に血糖値を維持できる炭水化物と脂質を含む単回の食事に対する血糖値制御法の検討を行う.つぎに,夜間の血糖値変化のモデルを覚醒状態と睡眠状態の特性,とくに起床時に起こる暁現象などのホルモンの影響を考慮に入れて構成する.また,このモデルに基づいて夜間の血糖値制御法を検討する.
成育限界期の胎児・早産児におけるコーチゾル分泌不全の病態解析

ヒツジ未熟胎仔において子宮内炎症がコーチゾル分泌能とその循環動態に与える影響を解析する計画を立てた.そこで対照群6例と炎症群6例のヒツジ胎仔に合計31回のCRH負荷試験を行った.液体クロマトグラフ質量分析法を用いたプロファイリング解析により,CRH負荷試験におけるACTH,コーチゾル,コルチゾン,アルドステロン,Dehydroepiandrosterone sulfateの経時的な濃度変化を測定した.その結果,対照群と比べて炎症群では,CRH負荷においてコーチゾルの産生が促進された.つまり炎症ストレスにより,3β-ヒドロキシステロイド脱水素酵素の活性が上昇する可能性が示唆された.本研究の目的は,胎盤から切り離されるストレスによって,成育限界期のヒツジ胎仔のコーチゾル分泌能とその循環動態が受ける影響を明らかにすることである.そのため今年度われわれは成育限界期である妊娠91-97日(ヒトの妊娠24-27週に相当)のヒツジ胎仔12頭を用いた慢性実験系を作成した.ヒツジ胎仔の出生前後に胎仔の心拍数,動脈圧,中心静脈圧,羊水内圧を連続監視しながらCRH負荷試験を行い,そのコーチゾル分泌能の経時的変化の解析を行った.また,同時にACTHの血中濃度測定用の検体も採取した.さらに12頭のうち5頭は出生前の炎症性ストレスが胎仔のコーチゾル分泌能に与える影響を解析するために,出生前にgranulocyte-colony stimulatingfactorの静注とendotoxinの羊水内注入を行い,子宮内炎症を惹起した.成育限界期のヒツジ胎仔の肺は著しく未熟であり,人工呼吸器では管理できないため,本研究では全てのヒツジ胎仔で出生後にわれわれが新規に開発したポンプレス人工胎盤システムを装着して行った.慢性実験を行った12頭のヒツジ胎仔の内,11頭で出生前のCRH負荷試験に成功した.そのうち2頭は未熟性が非常に強く延命が困難だったため,出生後のCRH負荷試験を施行できず,9頭から出生前後でのコーチゾル分泌能の経時的変化を解析する検体を採取できた.そのうち子宮内炎症を惹起させたのは5頭だった.今後採取した検体からコーチゾルとACTHの血中濃度を測定し,胎仔のコーチゾル分泌能の経時的変化を解析する予定である.本研究では成育限界早産児における副腎機能の発達過程と出生への適応過程を明らかにするため,妊娠93日(ヒトの妊娠25週相当)のヒツジ胎仔に炎症性もしくは虚血性ストレスのみならず,人工胎盤システムに接続する胎盤切離ストレスを負荷し,これらが胎仔のコーチゾル分泌能とその循環動態に与える影響を明らかにする.平成27年度には妊娠93日のヒツジ胎仔8例(炎症群2例とsham群6例)に人工胎盤システムを装着させて生理学的データならびに冷凍保存血漿を採取できた.胎生期ストレス負荷前後と人工胎盤装着中にCRH負荷試験を実施できた胎仔は5例,胎生期ストレス前後のみCRH負荷試験を実施できた胎仔は3例で,のべ21回のCRH負荷試験を実施できた.人工胎盤装着中に経時的に生理学的データならびに冷凍保存血漿を採取し,microsphere法で各臓器の血流量変化を測定できた胎仔は2例だった.胎仔の副腎皮質を抗3beta-hydroxysteroid dehydrogenase抗体で免疫染色し,副腎皮質移行層の成長を評価するための組織検体は8例全てから得られ,切片標本を作製した.平成27年度には妊娠93日のヒツジ胎仔8例(炎症群2例とsham群6例)に人工胎盤システムを装着させて生理学的データならびに冷凍保存血漿を採取できた.来年度,炎症群と虚血群が順調に増えればおおむね順調といえる.胎生期のどのような子宮内環境が胎児早産児の副腎機能の発達を促進もしくは抑制するのか,その病態生理の解析はまだ端緒についたばかりである.子宮内炎症が早産児の副腎機能を抑制する可能性が報告されているが,その具体的な抑制機構は明らかにされていない.そこで,本研究では成育限界の早産児における副腎機能の発達過程と出生への適応過程を明らかにするため,妊娠91-97日(ヒトの妊娠24-26週)のヒツジ胎仔に炎症性もしくは虚血性ストレスのみならず,人工胎盤システムに接続する胎盤切離ストレスを負荷し,これが胎仔のcortisol分泌能とその循環動態に与える影響を明らかにすることを目的にした.本研究は成育限界で出生する早産児の内分泌学的な適応もしくは適応不全についての基礎研究であるが,こうした成果を踏まえることによって,出生前の子宮内環境に応じた出生後のグルココルチコイド補充療法を,その病態生理に基づいて具体的に提案できる.平成28年度には妊娠95日のヒツジを用いて12回の実験を計画したが,2回は受胎が得られなかった.また2回は手技上の問題で実験を完遂できず,合計8回(炎症群6例とsham群2例)の実験からデータが得られた.胎生期ストレス負荷前後と人工胎盤装着中にCRH負荷試験を実施できた胎仔は4例,胎生期ストレス前後のみCRH負荷試験を実施できた胎仔は4例で,のべ22回のCRH負荷試験を実施できた.冷凍保存した血漿から100検体を選んで,ACTH, cortisol, cortisone, DHEA-S濃度を液体クロマトグラフ質量分析計にて測定した.胎仔副腎の組織

切片標本は8例全てから得られたため,前年度の切片標本と合わせて,胎仔の副腎皮質を抗3β-hydroxysteroid dehydrogenase抗体で免疫染色し,副腎皮質移行層の成長を今後評価する予定である.ヒツジ未熟胎仔において子宮内炎症がコーチゾル分泌能とその循環動態に与える影響を解析する計画を立てた.そこで対照群6例と炎症群6例のヒツジ胎仔に合計31回のCRH負荷試験を行った.液体クロマトグラフ質量分析法を用いたプロファイリング解析により,CRH負荷試験におけるACTH,コーチゾル,コルチゾン,アルドステロン,Dehydroepiandrosterone sulfateの経時的な濃度変化を測定した.その結果,対照群と比べて炎症群では,CRH負荷においてコーチゾルの産生が促進された.つまり炎症ストレスにより,3β-ヒドロキシステロイド脱水素酵素の活性が上昇する可能性が示唆された.慢性実験を行った12頭のヒツジ胎仔の内,11頭で出生前のCRH負荷試験に成功した.そのうち2頭は延命が困難だったため,出生後のCRH負荷試験を施行できず,9頭から出生前後でのコーチゾル分泌能の経時的変化を解析する検体を採取できた.そのうち子宮内炎症を惹起させたのは5頭だった.成育限界期のヒツジ胎仔は未熟性が非常に強く,高度な循環管理を要する.そのような状況下で9頭のヒツジ胎仔から検体が採取できたため,本研究は順調に進展していると思われる.胎児生理学今後は採取した検体からコーチゾルとACTHの血中濃度を測定し,胎仔のコーチゾル分泌能の経時的変化を解析するとともに,成育限界期のヒツジ胎仔を用いた慢性実験を継続し,検体数を増やしていく方針である.また,申請書には記載されていないが,ヒツジ胎仔の剖検で得られた副腎を用いて免疫染色を行い,コーチゾル分泌能とコーチゾル分泌能をもつ胎仔副腎の成人層の組織学的所見との対比を行い,コーチゾル分泌能の変化が組織学的にどのような変化でもたらされるのか解析する予定である.冷凍保存血漿を用いたホルモン測定では,commercial kitを用いた免疫抗体法では安定した測定値を得ることが難しかったため,ACTH, cortisol, cortisone, DHEA-Sなどの濃度測定ができなかった.そのためホルモン測定用の費用を次年度に繰り越した.タンデムMS法にてACTH, cortisol, cortisone, DHEA-Sなどのホルモン濃度を測定する予定である
糖尿病性微小血管障害でのｃ－ＳｒｃとＭＡＰキナーゼの役割解明と分子創薬

糖尿病性微小血管障害におけるc-SrcチロシンキナーゼとMAPキナーゼの関与の可能性について検討した。アンジオテンシンII (AII)は血管平滑筋細胞(RASMC)の増殖や遊走を介して血管系のインスリン抵抗性に関わっている。我々は、AIIによるRASMC遊走に対するSrc阻害薬PP2と、siRNAを用いたSrc遺伝子発現抑制の効果を検討した。SrcのsiRNAはPP2と同様にAIIによるのRASMCの遊走を強力に阻害した。これらの結果は、Srcチロシンキナーゼの薬理学的又は遺伝子的な阻害が、レニンーアンジオテンシン系の関わる糖尿病性微小血管障害の新たな治療標的になる可能性を示唆している。本邦では、予備軍も含めて1870万人ともいわれる糖尿病患者の増加に伴い、糖尿病性微小血管障害による網膜症や透析患者、下肢切断患者も急増しその対策は急務である。最近我々は、糖尿病性微小血管障害の根底をなすインスリン抵抗性に、ガン遺伝子産物c-Srcを介したMAPキナーゼの活性化が関与していることを明らかにした(Exp. Cell Res. 308:291-299, 2005)。本研究では、「糖尿病性微小血管障害の細胞内メカニズムとしてc-SrcとMAPキナーゼが重要である」という仮説を立て、その証明とc-SrcおよびMAPキナーゼの阻害による新しい糖尿病合併症の治療法を確立することを目標としている。脈管作動物質であるアンジオテンシンII(AII)は血管収縮やアルドステロンの放出刺激を介して高血圧を誘発するが、さらに血管のリモデリングや糖尿病性微小血管障害に関与することが知られている。そこで本年度はAII刺激による培養ラット大動脈平滑筋細胞(RASMC)内情報伝達系と細胞遊走におけるSrcチロシンキナーゼの役割について明らかにする目的で、Src阻害薬PP2とSrc siRNAを用いて、AII刺激によるMAPキナーゼ活性化に対する阻害効果と細胞遊走に対する効果を比較検討した。その結果、Src siRNAはRASMCにおけるAII刺激によるERK1/2活性化を中程度に抑制し、JNKの活性化の阻害はERK1/2の阻害より顕著であった。次に,Src siRNAによるAII刺激によるRASMCの遊走の阻害の程度はSrc阻害薬のPP2と同程度に強力であり、Src遺伝子のsilencingがRASMCの遊走阻害に効果を示すことが明らかになった。本研究成果より、AIIによる糖尿病性微小血管障害の進展にSrcが関与している可能性が高く、Srcが糖尿病合併症の治療ターゲットになりうることが示された。本邦での糖尿病患者の増加に伴い、糖尿病性微小血管障害による網膜症や透析患者、下肢切断患者も急増しその対策は急務である。最近我々は、糖尿病性微小血管障害の根底をなすインスリン抵抗性に、ガン遺伝子産物c-Srcを介したMAPキナーゼの活性化が関与していることを明らかにした。本研究では、「糖尿病性微小血管障害の細胞内メカニズムとしてc-SrcとMAPキナーゼが重要である」という仮説を立てて実験を行った。高血圧を誘発する脈管作動物質であるアンジオテンシンII (AII)は血管平滑筋細胞の増殖と遊走に関与しており、糖尿病性微小血管障害の発生にも関与している可能性がある。本実験計画で我々は、AII起因性のSrcチロシンキナーゼ、MAPキナーゼのERK1/2およびJNKの活性化、並びにrat aorta smooth muscle cell (RASMC)の遊走に対するSrcチロシンキナーゼ阻害剤PP2の効果を、SrcチロシンキナーゼsiRNAの効果と比較検討した。PP2はAII起因性のERK1/2及びJNKの活性化を阻害したが、SrcのsiRNAはより低濃度にてそれらを阻害した。また同時に、SrcのsiRNAはPP2と同様にAII起因性のRASMCの遊走を強力に阻害した。これらの研究成果より、遺伝子治療も含めたc-SrcおよびMAPキナーゼの阻害は、糖尿病性網膜症や糖尿病性腎症などの治療標的になりうる可能性が示された。またさらに追加して行った実験結果より、AIIによる細胞増殖を、新規糖尿病治療薬であるGLP-1アナログのexendin-4が抑制することを見い出した。この結果は、糖尿病治療薬の血糖降下作用以外の有用性を示すものであり、現在exendin-4のMAPキナーゼ阻害作用についてさらに検討を加えている。脈管作動物質であるアンジオテンシンII (AII)は血管平滑筋細胞の増殖と遊走を引き起こし、糖尿病性微小血管障害に関与している可能性がある。

以前に我々は、AII起因性のSrcチロシンキナーゼ、extracellular signal-regulated kinases 1/2 (ERK1/2)及びc-Jun N-terminal kinase (JNK)の活性化、並びにrat aortic smooth muscle cell (RASMC)の遊走をAII受容体拮抗薬オルメサルタンが阻害したことを報告した。また、Srcチロシンキナーゼ阻害剤PP2はオルメサルタンと同様にAII起因性のRASMCの遊走を強力に阻害した。そこで、AII起因性のRASMCの遊走におけるSrcチロシンキナーゼの関与について詳細に検討する目的で、Src siRNAをRASMCに遺伝子導入して実験を行った。その結果、Src siRNAをRASMCに遺伝子導入するとSrcチロシンキナーゼの発現量が約90%抑制された。そこでAII起因性のERK1/2及びJNKの活性化に対するSrc siRNAの阻害効果を検討した。その結果、Src siRNAはERK1/2活性化に対してよりもJNK活性化に対してより強い阻害効果を示した。さらに、AII起因性のRASMCの遊走に対するSrc siRNAの効果を検討すると、Src siRNAはPP2と同様にAII起因性のRASMC遊走に対して強力な阻害効果を示した。これらの結果は、Srcチロシンキナーゼの直接的な阻害がAII起因性の血管平滑筋細胞の遊走に対してERK1/2やJNKを阻害するよりも効果的である可能性を示している。Srcチロシンキナーゼの薬理学的又は遺伝子的な阻害が、糖尿病性微小血管障害などAIIが関与する病態に対する新たな治療法になる可能性がある。糖尿病における治療は、血糖値を降下させる糖尿病そのものの治療に加えて、糖尿病合併症の治療も同時に視野に入れてなされるべきである。特に糖尿病の重大合併症のひとつである微小血管障害は、その発症メカニズムもいまだ解明されておらず、大きな治療ターゲットとなる。脈管作動物質であるアンジオテンシンII(AII)は血管平滑筋細胞囎殖と遊走を引き起こし糖尿病性微小血管障害に関与していることが明らかになってきた。我々の研究から、細胞内分子として、Src、ERK、JNKなどが治療ターゲットとなりうることが明らかになってきた。しかし、その他の細胞内情報伝達分子の関与の可能性がないかより詳細に検討する必要性が生じた。そのため、本年度は本来in vivoでのモデル動物実験を施行する予定であったが、細胞内情報伝達分子をより詳細に検討するため、in vitroの細胞実験をさらに継続して行う予定である。脈管作動物質であるアンジオテンシンII (AII)は血管平滑筋細胞の増殖と遊走を引き起こし、糖尿病性微小血管障害に関与している可能性がある。今年度の我々の研究で、ERK、JNKやSrcチロシンキナーゼの薬理学的・遺伝子的な阻害が、AIIが関与する微小血管の新生を抑制する可能性が示唆された。糖尿病合併症にかかわる微小血管の新生を抑制するというアプローチで、ERK、JNKやSrc阻害薬が新たな糖尿病合併症の治療法になりうる可能性が示された。今年度の研究成果より、ERK、JNK阻害や、特にSrc阻害が糖尿病合併症の治療ターゲットになりうる事が確認され、この点でおおむね研究計画は順調に進展していると判断される。
企業会計制度の形成要因と市場および企業への経済的影響に関する実証研究

この研究は、日本の会計システムの制度的な変革過程を調査している。1950年代から1990年代の日本会計制度は米国の一般に認められた会計原則に強く影響されていた。2000年代から2010年代初頭では国際会計基準審議会が日本の会計制度変革により強い影響力をもっている。実証結果によれば、増大した外国人株式所有は、経営者が適時的情報開示を行うインセンティブにプラスの効果を与えている可能性がある。本年度の研究目的は、(1)会計制度の変更が企業行動に及ぼす影響、および(2)戦後の会計制度の創設過程を明らかにすることである。最初に、「金融商品に係る会計基準」(以下、金融商品会計基準という。)の改訂と有価証券投資の関係について調査した。有価証券の会計処理は、1999年の金融商品会計基準に基づき、(a)売買目的有価証券は時価で評価し、評価差額を損益計算書に評価損益として計上する、(b)満期保有目的債券は取得原価で評価する、(c)子会社株式および関連会社株式は取得原価で評価する、(d)その他有価証券は時価で評価し、評価差額を貸借対照表の資本の部に直接計上することになった。2001年に「銀行等の株式等の保有の制限等に関する法律」(以下、銀行株式保有制限法という。)が制定され、銀行等は株式保有を自己資本の範囲に制限された。大規模サンプルの調査の結果、金融商品会計基準に基づく「その他有価証券」の公正価値評価が銀行株式保有制限法を介して、銀行等と企業の関係の再構築をもたらしたことが明らかになった。次に、経済安定本部企業会計制度対策調査会が1949年に公表した「企業会計原則」の作成および改訂の過程を調査した。「企業会計原則」は、すくなくとも1980年代までは、会計基準設定の規範であり、企業会計制度対策調査会を引き継いだ企業会計審議会が会計基準を作成する権限を一貫して保持していることが明らかになった。本年度は、サンプル期間25年(1985-2009年)、銀行、証券、保険業を除く全上場企業のサンプルにもとづいて、決算短信制度が株式市場の価格形成に有効に機能しているかどうかを調査した。実証分析の結果、過去25年間にわたって、公表日、その翌営業日と翌々営業日の3営業日に、決算短信情報が統計的に有意に株価に織り込まれていることが明らかになった。異常リターンのボラティリティは決算短信公表日の翌営業日をピークとしている。これは決算短信が証券取引所の取引終了後に公表されることが多いからである。決算短信情報は公表日の翌営業日の株価におおむね反映される傾向にある。異常売買高もまた決算短信公表日の翌営業日がピークである。決算短信情報にもとづいた取引は、決算短信公表日、その翌営業日、翌々営業日に集中している。2000年以降、会計制度の改革、四半期報告書の開示、内部統制制度の導入、IFRSと日本会計基準のコンバージョンが相次いでいる。連結決算と個別決算の同時公表の割合は1999年の50%から2007年以降は100%になり、公表に要する日数も60日から40日に大幅に短縮されている。この間、情報作成者のコストは増大していると予想される。わが国の決算短信制度は実績情報と経営者の業績予想を同時に開示する。この決算短信制度は国際的にみて独自のものである。本研究の長期分析によれば、決算短信制度は過去25年にわたって株式市場の価格形成に有効に機能していることが明らかになった。政策投資目的保有株式、いわゆる持ち合い株式の開示が充実する一方で、純投資目的保有株式の開示は後退する傾向にある。企業会計審議会の「国際会計基準(IFRS)への対応のあり方に関する当面の方針」の答申をうけて、2014年、「財務諸表等の用語、様式及び作成方法に関する規則等の一部を改正する内閣府令」(平成26年3月26日内閣府令第19号)が公布され(同日施行)、連結財務諸表提出会社については2014年3月期から個別財務諸表開示の簡素化が進められた。これは経団連の主張とも一致する。この開示簡素化では、上場会社については有価証券明細表の開示が免除されることになった。この結果、会社が自発的に開示を行わなければ、純投資目的保有株式の銘柄、株式数、貸借対照表計上額などの情報が得られなくなっている。有価証券の長期投資のうち、政策保有目的投資の割合は、近年、減少傾向にある。このため純投資目的保有株式開示の相対的な重要性が高まっている。企業の投資行動をモニタリングするためには、数値情報等の開示が不可欠である。本研究の実証結果によれば、外国人投資家が市場に放出された持ち合い株式の主たる受け皿になっている。経営者と株式持ち合いの相手の情報非対称性の程度は比較的小さいと推察される。