hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
スピン標識-イオンキャリヤーをプローブとする脂須二分子膜輸送系の構築

銅は必須重金属元素の1つであるが,これが細胞膜を通過し,生体内に取り込まれる機構については不明な点が多い.本研究ではリポソームをモデル生体膜とし,これを長鎖アルキル基を有するアザクラウンエーテルで修飾し,脂須膜外層部の銅錯体と内層部のアザクラウンエーテルとの間の銅イオン交換反応のKineticsをESR法によって研究した. (石津)またKinaticsの詳細を研究するためにストップドフロー共振器を考察し解折を行った(向井)これらの研究により銅(II)イオンの取り込みはそれぞれ値の異なった擬一次反応速度定数をもつE並進反応で進行し,リポソーム外水相のpH,担体銅錯体(グリシン,及びポリグリシン)錯体の安定度,錯体の形式電荷,疎水性に強く依存することを明らかにした.また別に長鎖アルキルを有するドキシルラジカルをドープレ,これと銅(II)錯体の磁気的相互作用の解折から銅(II)イオンの取り込みを行うサイトの分布に関する知見をえた.合成レシケンを用いてリポソームをつくり脂須層の相転位によって銅(II)イオンの取り込みが如何なる影響を受けるか検討した.この研究により,銅(II)イオンの取り込みには脂須膜表面における銅(II)イオイの交換のみならず,脂須層における銅錯体の拡散が重要であることが明らかとなった.以上の脂須膜中の銅イオンの輸送の挙動を理解するための物理的モデルの考案とこれによる解折を行った.最後にこの様な銅(ハ)イオンの取り込みが共存するNi(ハ)イオンによって大きな影響を受けることより,銅(II)イオンが輸送される原動力は脂須膜中のアザクラウンと銅(II)イオンの錯形成能の大きさであることが明らかとなった.銅は必須重金属元素の1つであるが,これが細胞膜を通過し,生体内に取り込まれる機構については不明な点が多い.本研究ではリポソームをモデル生体膜とし,これを長鎖アルキル基を有するアザクラウンエーテルで修飾し,脂須膜外層部の銅錯体と内層部のアザクラウンエーテルとの間の銅イオン交換反応のKineticsをESR法によって研究した. (石津)またKinaticsの詳細を研究するためにストップドフロー共振器を考察し解折を行った(向井)これらの研究により銅(II)イオンの取り込みはそれぞれ値の異なった擬一次反応速度定数をもつE並進反応で進行し,リポソーム外水相のpH,担体銅錯体(グリシン,及びポリグリシン)錯体の安定度,錯体の形式電荷,疎水性に強く依存することを明らかにした.また別に長鎖アルキルを有するドキシルラジカルをドープレ,これと銅(II)錯体の磁気的相互作用の解折から銅(II)イオンの取り込みを行うサイトの分布に関する知見をえた.合成レシケンを用いてリポソームをつくり脂須層の相転位によって銅(II)イオンの取り込みが如何なる影響を受けるか検討した.この研究により,銅(II)イオンの取り込みには脂須膜表面における銅(II)イオイの交換のみならず,脂須層における銅錯体の拡散が重要であることが明らかとなった.以上の脂須膜中の銅イオンの輸送の挙動を理解するための物理的モデルの考案とこれによる解折を行った.最後にこの様な銅(ハ)イオンの取り込みが共存するNi(ハ)イオンによって大きな影響を受けることより,銅(II)イオンが輸送される原動力は脂須膜中のアザクラウンと銅(II)イオンの錯形成能の大きさであることが明らかとなった.
分子動力学計算を用いて解明するＦ１－ＡＴＰａｓｅ回転のしくみ

F1-ATPaseは、ATP(生体内のエネルギー分子)の合成・分解を担っている。この酵素は、軸回転という構造変化を通して、その機能発現に至る。申請者は、この回転型分子モーターについて、その動作機構の解明に取り組んできた。一連のF1-ATPaseの回転は、基質であるATPのイベント(ATP結合、生成物解離)によって引き起こされる。F1-ATPaseの軸回転の全貌を知るには、これらの過程を個別に解明する必要がある。研究手法としては、蛋白質の構造変化を原子レベルで追跡でき、その構造変化を自由エネルギーという変化量で定量的に測れる分子動力学計算を用いた。これまでの申請者の研究により、両方の(ATP結合、生成物解離によって引き起こされる)回転ステップのメカニズムが明らかになった。どちらの構造変化においても、構造変化が自発的におこる発熱的な自由エネルギー地形であった。さらに両ステップとも、ATPaseファミリーに普遍的に存在するWaklerモチーフというアミノ酸のグループが、全体の大きな構造変化を引き起こすトリガーの役割を果たしていることも分かった。このATPaseに共通のアミノ酸モチーフが構造変化に重要な役割を果たしているという結果は、他のATPaseファミリーにおいても、同様な構造変化のメカニズムを持つことを示唆する。また、このシミュレーションの過程では、既存の実験結果とも整合する精度で、未だ構造が明らかになっていないstateについても予測できた。以上の結果は、多くの学術論文や、総説、学会などの機会で発表させて頂いた。26年度が最終年度であるため、記入しない。特別研究員としての研究課題は、F_1-ATPase分子モーターの回転作用機構を明らかにすることである。採用一年目は、まず、F_1-ATPaseのαβサブユニット2量体のATP加水分解後の構造変化を自由エネルギー計算を用いて明らかにしようと試みた。ATP加水分解後のβサブユニットはClosed構造から(βDp)Half-Closed構造(βHc)になることが一分子実験により分かっている。また、このATP加水分解後の構造変化の過程では、ヌクレオチドの状態も議論の対象になっている。磁気ピンセットを用いた別の一分子実験からは、ATPが加水分解した後、その生成物であるリン酸は直ちに抜けずにATP反応部位に留まっている可能性が高いことが示されている。しかし、リン酸がATP反応部位に残ることでどれくらい安定なのかという定量性や、なぜ留まる必要があるのかという理由は分かっていない。したがって、このATP加水分解後の構造変化について、リン酸がATP反応部位に残っているパターン(ADP+Pi)とそうでないパターン(ADPだけ)の2つの状態で、アンサンブルサンプリング法を用いたシミュレーションを行い、自由エネルギー地形を得ることにした。実際に計算を開始してみると、自由エネルギー地形の収束が予想以上に遅く、結果的に膨大な計算量が必要であった(総計算時間5μs)。最終的には、それらの妥当な自由エネルギー地形を得ることができ、リン酸が活性部位に留まる場合、どれくらいClosedからHalf-Closedの構造変化に有利であるかを定量的に示すことができている。今後、原子レベルで解析を行い、この構造変化の詳しいメカニズムや、多くのATPaseが普遍的にもつ2次構造がATP加水分解後の構造変化に果たす役割を明らかにする予定である。またここで得られる2量体構造変化のメカニズムは、現在計算中のF_1-ATPase全体の構造変化にも重要な示唆を与えることができると考えている。回転式モーター蛋白質であるF_1-ATPaseは、ATPase活性をもつβサブユニットの構造変化によって中心軸を回転させている。そのβサブユニットは2つの異なる駆動力により、構造を変化させている。一つは、ATP結合によるもので、もう一つは、ATP加水分解によるものである。前者による構造変化は、すでに明らかにした(Y. Ito et al., JACS 2011)。したがって後者による構造変化を、採用1年目から取り組んできた。このβサブユニットの加水分解による構造変化には、3つの重要な問題が含まれている。1つ目は、1分子実験で存在が実証されているものの、いまだ原子レベルでの構造が解かれていないHalf-Closed構造。2つ目は、ATP加水分解後、生成物であるリン酸がいつ解離するかという問題。3つ目は、もう一つの生成物ADPで、この解離のタイミングは同定されているものの、そのメカニズムについては明らかになっていないことである。そこで、我々は、アンサンブルサンプリング法(分子動力学、MD計算の一つ)を用いて、その構造変化を実現した。その結果を既存の実験データと比較したところ、シミュレーションで得られた構造変化のパスは、非常に妥当であった。そこで、上に記した3つの重要な問題について、重点的に解析を進めたところ、そのすべてにおいて解を得ることに成功した。得られた結果は、F_1-ATPase研究上、重要かつ新たな情報であり、また、我々の最終目的であるモーター全体の回転機構に対しても、大きな手がかり与える。さらに、その構造変化のメカニズムでは、ATPaseファミリーに共通する2次構造が、構造変化の重要な部分を担っており、F_1-ATPase以外にも、膨大に存在するATPase蛋白質の構造変化について、示唆を与える可能性がある。以上の結果は、学術雑誌へ投稿すべく準備を進めている。

一連のF1-ATPaseの回転は、基質であるATPのイベント(ATP結合、生成物解離)によって引き起こされる。F1-ATPaseの軸回転の全貌を知るには、これらの過程を個別に解明する必要がある。研究手法としては、蛋白質の構造変化を原子レベルで追跡でき、その構造変化を自由エネルギーという変化量で定量的に測れる分子動力学計算を用いた。これまでの申請者の研究により、両方の(ATP結合、生成物解離によって引き起こされる)回転ステップのメカニズムが明らかになった。どちらの構造変化においても、構造変化が自発的におこる発熱的な自由エネルギー地形であった。さらに両ステップとも、ATPaseファミリーに普遍的に存在するWaklerモチーフというアミノ酸のグループが、全体の大きな構造変化を引き起こすトリガーの役割を果たしていることも分かった。このATPaseに共通のアミノ酸モチーフが構造変化に重要な役割を果たしているという結果は、他のATPaseファミリーにおいても、同様な構造変化のメカニズムを持つことを示唆する。また、このシミュレーションの過程では、既存の実験結果とも整合する精度で、未だ構造が明らかになっていないstateについても予測できた。以上の結果は、多くの学術論文や、総説、学会などの機会で発表させて頂いた。26年度が最終年度であるため、記入しない。今年度には、αβ複合体の構造変化に関わる自由エネルギー計算を実施した。予想以上に収束に時間がかかってしまったため、計算量は膨大になったが、有意義な結果を得ることができた。2量体の計算と解析は終了し投稿するだけになっている。さらに、最後の目標である、F1-ATPase全体の構造の計算も終了し、こちらは今年度解析に取り掛かり論文にまとめ上げる予定である。1年目に得られたαβサブユニット2量体の計算データを解析し、論文にまとめることと、同時並行してF_1-ATPase全体の計算を遂行する。最終目標のモーター全体の構造変化については、30万原子という膨大な原子数のシステムに対し、すでに2μ秒の平衡MD計算が終了している。これについては、現在データ解析中である。しかし、蛋白質の構造変化は、非常に遅い時間スケールで起こるため2μ秒では、完全に構造変化を追跡できていない可能性もある。そこで、行った平衡MDとは別に、別の手法でも、モーター全体の構造変化に取り組む予定である。
口腔扁平上皮癌における樹状細胞の動態と血管内皮増殖因子(VEGF)に関する研究

種々の癌細胞が血管内皮増殖因子(VEGF)を産生し、血管増殖を促すとともに、免疫系の細胞の分化および機能を抑制し、担癌生体の腫瘍免疫機構から逃れ、増殖、進展することがいわれている。口腔扁平上皮癌においても癌細胞にVEGFの局在が認められ、リンパ節転移症例においてその頃向が強いことを我々は示しているが、症例を重ね検討した結果、同様の結果を得た。また、腫瘍免疫機構で中心的役割を演ずる樹状細胞(DC)について、S100タンパク陽性DCおよびCD1a陽性DCはVEGF発現と反比例するものの、CD83陽性DC数は少ないながらも増加する傾向がみられた。そこでin vitroにおけるDCへの分化誘導系でVEGFの影響を確かめたところ、タンパク、核酸レベルでCD83の発現の増強が認められた。各種口腔癌由来培養株(HSC-2,-3,-4,Ca-9-22,KB)についての検索では、免疫細胞化学的に血管内皮増殖因子(VEGF)はいずれの培養株でも認められ、各株における培養上清中のVEGFの濃度はELISA法により、経時的に増加することが示された。また、これら培養上清の添加により、末梢血単球のDCへの分化は著しく抑制され、その程度はrhVEGFを添加した場合よりも著明であった。このことからIL-10やTGF-βといった他の抑制因子の存在が想定され、ELISA法により検索したところ、いずれの培養株においてもIL-10は検出できなかったものの、TGF-βは微量ながら認められ、経時的に増加することが示された。口腔癌患者からの細胞株の樹立については、口腔癌患者個々の癌組織の抗癌剤感受性検査が優先され、物理的に得ることはできなかった。さらにVEGFレセプター(VEGFR)の発現について免疫組織学的に検索したところ、VEGFR1,2および3とも扁平上皮癌組織に陽性所見がみられ、口腔扁平上皮癌ではVFGF/VEGFR系のオートクライン機構が存在する可能性が考えられた。[口腔扁平上皮癌の原発巣および所属リンパ節におけるDCサブセットの検索]口腔扁平上皮癌52例のパラフィン切片を用い、免疫組織学的に樹状細胞(DCs)を検索した。原発巣および近接組織ではS100^+>CD1a^+>CD83^+の順でDCsが認められた。所属リンパ節非転移症例に比較して、転移症例では、近接組織におけるS100^+DCsおよびCD1a^+DCsが少なく、逆に原発巣ではCD83^+DCsが多く認められた。所属リンパ節では、S100^+DCsおよびCD1a^+DCsは非転移症例と比較して転移症例で有為に少なく、逆にCD83^+DCsは転移症例で多く認められた。[口腔扁平上皮癌原発巣におけるVEGF発現とDCs浸潤の検索]癌組織におけるVEGF発現の増加に伴い、S100^+DCsおよびCD1a^+DCsは減少していたが、逆にCD83^+DCsは増加していた。[各種口腔癌培養株におけるVEGFの発現および分泌の検索]各種口腔癌培養株(HSC-2,-3,-4,Ca9-22,KB)いずれの培養株においてもVEGFの発現、分泌が認められ、Ca9-22に最も強くみられた。[ヒト末梢血単核球(PBMC)からのDCの分化誘導とVEGFレセプター(VEGFR)発現の検索]

PBMCから単球を分離し、IL-4とGM-CSFによりDCsを分化誘導し、免疫細胞学的に確認するとともに、VEGFR-1の発現を免疫細胞化学的およびwestern blotting法により認めた。[口腔癌細胞培養上清および合成VEGFのDC分化誘導に対する影響]培養上清中に分泌型VEGFが最も強く認められたCa9-22の培養上清および合成VEGFのDCの分化誘導に対する影響をin vitroで検索し、著しく抑制的に作用することを認めた。樹状細胞(dendritic cell, DC)の分化誘導に対する口腔癌細胞由来抑制因子の検索では、各種口腔癌由来培養株(HSC-2,3,4,Ca-9-22,KB)を用い、免疫細胞学的に血管内皮増殖因子(VEGF)がいずれの培養株でも認められ、各株における培養上清中のVEGFの濃度はELISA法により、経時的に増加することが示された。また、これら培養上清の添加により、末梢血単球のDCへの分化は著しく抑制され、その程度はrh VEGFを添加した場合よりも著明であった。このことからIL-10やTGF-βといった他の抑制因子の存在が想定され、ELISA法により検索したところ、いずれの培養株においてもIL-10は検出できなかったものの、TGF-βは微量ながら認められ、経時的に増加することが示された。口腔癌患者からの細胞株の樹立については、口腔癌患者個々の癌組織の抗癌剤感受性検査が優先され、物理的に得られてないのが現状である。DCを用いた細胞免疫療法の基礎的研究としては、in vitroでいかに純度の高いDCが得られるかが課題で、文献に従った末梢血単球にIL-4とGM-CSFを添加する系では80%程度の純度しか得られず、magnetを用いた方法で検討を続けている。その他口腔癌組織中、癌組織に隣接する組織および所属リンパ節におけるDC数は、特にリンパ節転移症例において減少するものの、CD83陽性細包数は少ないながらも増加する傾向がみられ、また、VEGFがリンパ節非転移症例より転移症例で強陽性を示すことから、in vitroでDCへの分化誘導系でVEGFの影響を確かめたところ、タンパク、核酸レベルでCD83の発現の増強が認められた。また、VEGFレセプター(VEGFR)について免疫組織学的に検索したところ、扁平上皮癌組織にも陽性所見がみられ、さらに詳細に検討している。種々のがん細胞が血管内皮増殖因子(VEGF)を産生し、血管増殖を促すとともに、免疫系細胞を不活性化し、担癌生体の腫瘍免疫機構から逃れ、増殖、進展することがいわれている。口腔扁平上皮癌においてもVEGFが産生され、とくにリンパ節転移症例においてその発現が多いことを我々は示しているが、さらに症例を重ねて検索し、同様の傾向が示された。また、口腔扁平上皮癌におけるVEGF発現と、免疫機構において中心的役割を演ずるとされる樹状細胞との関係において、S100タンパク陽性樹状細胞数およびCD1a陽性樹状細胞数はVEGF発現が増強する例で少なくなる傾向にあった。このことはがん細胞が産生するVEGFが樹状細胞の分化を抑制するとの従来の報告と一致する結果であったが、CD83陽性樹状細胞数についてはその絶対数は少ないながらも増加する傾向にあった。このことから、末梢血単核球にGM-CSFおよびIL-4を作用させ、樹状細胞を分化させるin vitroの系を用い、rhVEGFを作用させたところ、in vivoの結果と同様の現象をみた。
日本の話芸における「おかしみ」の理解の研究法　－笑いの文化差の視点から－

日本の落語に代表される話芸は洗練された文化・言語が含まれ日本語教育において利用価値が高い。そこで日本語学習者を対象にした落語会を開催し、アンケート調査やインタビュー調査により学習者の受け取り方の概観を捉えた。さらに学習者の視聴場面の映像を分析し、個々の笑いの起こる位置についての研究を行った。また、小咄の映像を利用して、あらすじ、字幕、理解の難しい言語および非言語情報のクイズおよび解説、面白いと感じたところ、難しいと感じたところを可視化できるシステムなどを搭載した落語eラーニング教材を開発し、その有効性を検証した。日本の話芸には、落語、漫才、講談などがあるが、聞き手は、話し手の言語、非言語情報を受け取り、話し手の描く世界と共有するために豊かな想像力が求められる。面そこには文化を超えた普遍的な面と、日本独自の文化背景に根ざしたものがある。何を白いと捉えるかは、文化により異なる部分も大きい。その違いを明らかにすることにより異文化間コミュニケーションの理解を助けることができると考える。本研究では、日本の話芸の中心の一つである「おかしみ」について、どのような要因で共通の感覚になりうるのかについて考える。本年度進めた研究は以下のとおりである。1.ユーモア感覚や話芸に関して、特に文化による違いに関して先行研究の調査を行った。2.本研究で用いる調査材料を、落語の小噺を題材とすることにした。落語は、外国語教育で多く用いられる「ロールプレイ」の視点から見れば、一人で何役も演じる特徴を持ち、世界でもユニークな話芸であると言える。また十秒程度から数分の長さで完結する小噺には、様々なタイプものが含まれ、「おかしみ」の要因をより明確にできると考えた。3.研究協力者のプロの落語家に依頼し、留学生を聴衆として口演を実施した。言葉の面白さを中心とするもの、表情、しぐさなど視覚的な面白さを中心とするもの、人間の性格など普遍性を面白さとするもの、話の筋の意外性に訴えるものなど、10数本の小噺を収集した。4.映像を編集し、すべての文字化を行った。映像に合わせて字幕として入力した。5.日本語学習者にインタビューの形式で、話の分かりやすさ、難しさ、面白さについて調査を行い、それを受けて理解を助けるための問題や説明の提示の仕方について提案した。昨年度に引き続き、「日本の話芸」における「おかしみ」に関して、調査材料の充実と、日本語教育、会話分析、コンピュータによるCALL研究の各側面から研究を進めた。調査材料の作成に関しては、研究協力者であるプロの落語家に依頼し、留学生を対象とした口演会を2回開催した。演者と聞き手の反応を、複数の方向からのビデオ録画およびICレコーダー録音を行い、映像は利用しやすいように編集し音声は文字化した。今年度は、日本語学習者のための解説を加えたほか、特に落語の地域差(方言)の違いによる笑いとその理解に焦点を当てるため、上方落語と江戸落語が比較できるよう同じ内容の小噺10本を収集した。これらの調査材料を使って、会話分析の手法を用いて、日本語学習者が落語を視聴しながらどのようなふるまいをするかを映像・音声の面から検討し笑いを引き起こす要因を明らかにした。CALLプログラムについては、利用のしやすいインターフェースについて日本語母語話者および日本語学習者に対する試行調査を行い、改善を加えた。日本の話芸を日本語教育においてどのように利用できるかに関しては留学生に対するインタビューおよびアンケートにより調査を実施した。また日本語学習者が落語を理解できるようになるためのスキャフォールディング(足掛かり)として、適切なクイズや解説のあり方についての検討を行った。グローバルコミュニケーション教育センター日本語教育論集(2016年3月)のほか日本語教育学会秋季大会(2015年10月)、CASTEL/J(2015年8月)、筑波大学グローバルコミュニケーション教育センター日本語教育部門FD研究会(2015年11月)における発表を行った。また「第3回文化とことばのコラボレーション」(2016年1月)を主宰し、本研究成果を発表するとともに、日本語学習者や大学院生を中心に発表や意見交換の場を提供した。CALLプログラム開発は、昨年度の問題点を改善しほぼ完成することができた。コンテンツに関しては予定以上の映像、音声素材の収集を行うことができた。調査材料をCALLプログラムに載せる作業に時間がかかり、そのため調査データの収集に関してはやや遅れている。昨年度までの研究を継続して、日本語教育、会話分析、コンピュータによるCALL研究の各側面から、研究を行った。日本語教育に関しては、関崎博紀、三谷絵里、トロフィモワ・オクサーナ各氏の協力を得て、研究を進めた。日本の話芸の中で、日本語学習者が理解しにくい原因の一つに日本文化の中で育った子供たちが折に触れ接してきた童話や童謡などの背景知識の欠如がある。今年度は、小咄の中から「きつね」「たぬき」に関して抱くイメージの違いを取り上げた。日本人及び日本語学習者に対する調査、各国の民話などからの調査を行ったところ、海外では「たぬき」のイメージの難しさなどに気づいた。Anthropology of Japan in Japanの研究会において、研究成果の発表を行い参加者との話し合いの中で、日本文化や話芸における「おかしみ」を日本語学習者に伝える難しさを再確認した。会話分析の側面からは、調査材料を利用して「ぼけ」と「つっこみ」やそれ以外のおかしみを生じる要因に関して、日本語学習者の笑いについての研究をさらに深めた。

上方落語協会の林家染雀師を研究会に招き、専門的立場から日本の話芸の特徴、上方落語の特徴、言葉などに関して、留学生からの質問に答える形で、情報提供をいただき、CALLプログラムの解説に取り入れた。CALLプログラムについては、音声の文字情報の提示の仕方について検討を行った。また落語を研究している日本語教育専門家を研究協力を依頼し、CALLプログラムの充実を図った。研究を進める中で必要性が明らかになった日本文化に関する理解のための研究およびコンテンツ作成を加えたため予定が遅れた。サンプルとして予定していた落語家からの情報収集も時間の折り合いが合わずコンテンツの収集ができなかった。CALLプログラムのWEBページの作成に時間がかかり完成まで至らなかった。それにともないCALLプログラムを利用した調査が十分に行えなかった。学習者の理解や反応を知るために、面白いと感じたところ、難しいと思ったところでクリックするボタンなど斬新な方法を取り入れた。コンテンツは、4人の落語家による約20の小咄が搭載されている。日本語学習者に理解しにくいところとして、日本独特のジェスチャーや「かけことば」の解説を丁寧に加え、また絵を多用して理解を深められるようにした。さらに同じ小咄を上方ことばと江戸のことばで提供し方言の学習ができるような工夫も加えた。コンテンツは、三谷絵里、トロフィモワ・オクサーナ両名の協力を得て内容を充実させた。「RASIL」の評価を検証するために、日本語学習者に試用しインタビュー調査を行った。これに関してはCASTEL/Jの研究会において発表を行うとともに、著書(Yamada他2018)にまとめた。会話分析の手法を用いた研究として、留学生が落語を聞いて、どこでどのような反応を示すかについて、映像および音声から「笑い」についての分析を進めた(Bushnell 2017)。3月には台湾において、研究会を開催した。落語家の柳家さん喬師匠と音曲の柳家小菊師匠が台湾大学および国立政治大学の日本語教育研究者・日本語学習者に対してそれぞれの話芸を実演し、その後学習者に落語に対するアンケート調査を実施し分析を行った。日本の落語に代表される話芸は洗練された文化・言語が含まれ日本語教育において利用価値が高い。そこで日本語学習者を対象にした落語会を開催し、アンケート調査やインタビュー調査により学習者の受け取り方の概観を捉えた。さらに学習者の視聴場面の映像を分析し、個々の笑いの起こる位置についての研究を行った。また、小咄の映像を利用して、あらすじ、字幕、理解の難しい言語および非言語情報のクイズおよび解説、面白いと感じたところ、難しいと感じたところを可視化できるシステムなどを搭載した落語eラーニング教材を開発し、その有効性を検証した。日本語学習者の理解を問うための適切なプログラムが構築できず予定より遅れている。平成28年度は、非母語話者の落語の研究者にも加わってもらい、日本文化の特殊性と普遍性と笑いの違いに焦点を当てて研究を進める。具体的には1.平成27年度に作成した地域差(上方落語と江戸落語)の調査材料を利用して、笑いの違いや日本語学習者の理解に関して検討する。
肺癌に対するANPの抗腫瘍及び抗転移作用についての分子機構の解明

心房性ナトリウム利尿ペプチド(ANP)は、現在急性心不全治療薬として使用されており、これまでに我々はハイリスク肺癌手術症例に対して術中より3日間低用量のANPを持続投与することによって、術後心肺合併症を有意に軽減できることを報告している。肺癌は根治手術後であっても術後早期に再発することが多いが、術後早期(2年以内)無再発生存率を調べた結果、ANP投与群では非投与群(手術単独群)と比較して良好な成績を得た(UMIN4880)。本成績は、ANPが癌転移において抑制的に制御する可能性を示唆するものである。本研究の目的は、ANPの抗転移効果について、そのメカニズムを明らかにすることである。我々はANPの受容体である、グアニル酸シクラーゼA(GC-A)受容体が体内で豊富に発現している血管内皮細胞に注目した。GC-A受容体を持たないマウスメラノーマB16/F10のマウス尾静脈注入による血行性肺転移モデルを作製し、ANP投与群と生理食塩水群に分けて観察したところ、ANP投与群では生食群と比較して肺転移が顕著に少なかった。続いて血管内皮特異的GC-Aノックアウトマウスを作製し、同様の実験を行ったところ、野生型マウスと比較して肺転移が顕著に多く、血管内皮特異的GC-A過剰発現マウスでは、逆に肺転移が顕著に少ない結果を得た。以上よりANPが宿主血管内皮細胞のGC-A受容体を介し、癌転移抑制効果を発揮したと考えられた。心房性ナトリウム利尿ペプチド(ANP)の癌転移予防効果について、その作用機序を明らかにし、臨床応用への具体的道筋を示すことが本研究の目的である。申請者は、B16マウスメラノーマをマウス尾静脈に注入する肺転移モデル(2週間観察モデル)を作製し、ANP投与群と生食群で比較検討したところ、本細胞株はANPの受容体であるGC-Aの発現を認めないにも関わらず、ANP投与によって肺転移が顕著に抑制された。次に、血管内皮特異的GC-Aノックアウトマウスに対して同様の実験を行ったところ、野生型マウスと比較して肺転移が顕著に多く、血管内皮特異的GC-A過剰発現マウスでは、逆に肺転移が顕著に少なかった。以上の結果より、ANPの癌転移抑制効果について、宿主側の血管内皮細胞が果たしている役割は極めて大きいと考えた。さらに、固形癌の自然血行性転移に対する有効性を評価する為、マウス乳癌(4T1)及び大腸癌(Colon26)を同所移植した固形癌モデルを作製し、ANP群と生食群に分けて約4週間観察したところ、ANP群では主病巣の大きさは変わらなかったものの、肺転移が有意に少なかったことから、ANPが手術不能な担癌患者に対しても、抗転移療法としての有効性を発揮できる可能性が示された。ANPの癌転移抑制効果は、血管を制御することによって、癌転移を予防するメカニズムである。癌細胞そのものを標的とせず、癌微小環境のうち、血管制御を主体とした本治療法は、既存の抗がん剤治療と比較して、安全性が高く、かつ今までにない革新的な治療を提供できる可能性がある。この詳細なメカニズムの解明に向けて、さらに研究を推進していきたいと考えている。心房性ナトリウム利尿ペプチド(ANP; Atrial Natriuretic Peptide)は、申請者が所属する国立循環器病研究センターの寒川賢治研究所長らによって単離同定された心臓ホルモンであり、現在急性心不全治療の第一選択薬として臨床応用されている。我々は肺癌手術の際、ハイリスク症例に対して術中より3日間ANPを持続投与することによって、術後心肺合併症を有意に軽減できることを論文報告し、積極的に使用している。

肺癌は、術中散布された遊離癌細胞の着床転移によって、根治手術後であっても早期に再発することが多いことが知られているが、術後早期(2年以内)無再発生存率を調べた結果、ANP投与群では非投与群(対照群)と比較して良好な成績であった本研究の目的は、ANPの抗転移作用について、その具体的な作用機序を明らかにすることである。申請者はANPの受容体であるGuanylyl Cyclase-A (GC-A)が高発現している数種類のヒト癌細胞株に対してANPを直接添加する実験を行ったが、直接的な腫瘍増殖抑制効果は認められなかった。そこで我々は、全身臓器の中でGC-Aが最も豊富に発現している血管内皮細胞に着目した。結果、ANPが血管内皮細胞のGC-A受容体を介して、血管内皮細胞の癌細胞との接着を抑制することで癌細胞の着床転移を著明に抑制し得ることをin vitro, in vivo実験系にて確認することができた。ANPの抗転移効果について、標的となる臓器(血管)が特定できたこと、さらにはその効果について、in vitro及びin vivoの系で確認できたことから、当研究について概ね順調に進展していると考えられる。今後は標的となる血管内皮細胞において、ANPがどのような働きをしているのか、より詳細な機序の解明を進めていく予定である。詳細な機序解明の為、血管内皮細胞のin vitroの系における定量PCR法、Western blot法を用いた解析を行う予定であり、それに必要な物品を購入予定である。また平成23年度中に行った研究成果については、積極的に国内外に学会発表を行う予定であり、出張費用を計上予定である。
チャに大量に含まれるメチル化カテキンの進化的意義

茶葉には、カテキン類であるエピガロカテキンガレート(epigallocatechin gallate; EGCG)が乾燥重量で5ー8%含まれている。このように茶葉に大量にカテキン類が含まれている究極要因として、これらのカテキン類が茶樹の天敵である害虫に対する防御物質として機能している可能性がある。本研究では、「カテキン類が昆虫の天敵微生物に対する感受性を増大させる」という仮説を検証した。その結果、茶害虫であるチャノコカクモンハマキは、EGCG添加により顆粒病ウイルス(バキュロウイルス科)に対する感受性が増大することが明らかになった。茶葉には、メチル化カテキンの一種であるエピガロカテキンガレート(Epigallocatechin gallate : EGCG)が乾燥重量の約5-8%含まれている。メチル化カテキンは、ポリフェノールの一種で酸化防止作用があり、特にチロシナーゼ阻害剤として働くことが知られている。チロシナーゼは、昆虫の生体防御機構を担っているフェノール酸化酵素(Phenol Oxidase: PO)の活性化カスケードにおいて重要な役割を果たす酵素であり、茶葉に含まれるメチル化カテキン(チロシナーゼ阻害剤)を摂取した昆虫は、ウイルスなどの天敵微生物に対する感受性が増大することが予想される。本研究は、茶がEGCGを獲得し天敵微生物に対する感受性を高めることで昆虫からの食害を防いでいる、という仮説を検証した。本研究では、茶を常食するチャノコカクモンハマキと、近縁種であるが茶を宿主植物としないリンゴコカクモンハマキの2種の昆虫を用い、EGCGを加えた条件で両種の重要な天敵である核多角体病ウイルス(NPV)に対する感受性を調査した。その結果、チャノコカクモンハマキではEGCGを添加してもNPVに対する感染致死率に差はなかったが、リンゴコカクモンハマキでは、EGCGの添加濃度に依存して感染致死率が増大した。一方、両種ともEGCG添加の有無による幼虫期間や蛹重に有意差はなかった。このことから、EGCGが昆虫のウイルス感受性を増大することが示された。チャノコカクモンハマキは、EGCGによる感受性増大を回避する何らかの機構を持つため、宿主植物として茶に適応している可能性が示唆された。茶葉には、カテキン類であるエピガロカテキンガレート(Epigallocatechin gallate; EGCG)が乾燥重量で5-8%含まれている。このように茶葉に大量のカテキン類が含まれている究極要因として、これらのカテキン類がチャの天敵である茶害虫に対する防御物質として機能している可能性がある。そこで、まず仮説1「カテキン類が昆虫の天敵微生物に対する感受性を増大させる」を検証した。茶を宿主植物とするチャノコカクモンハマキと近縁種であるが茶を宿主植物としないリンゴコカクモンハマキの2種の昆虫(ハマキガ科)を用いてEGCGを添加したエサを摂食させた幼虫にバキュロウイルス科の核多角体病ウイルス(Adoxophyes honmai NPV; AdhoNPV)と顆粒病ウイルス(A. orana GV; AdorGV)をそれぞれ接種し、その感受性がEGCGの添加により増進するかどうかを調査した。その結果、AdhoNPVに対する感受性にはEGCGの添加による有意な感染増進は2種とも認められなかった。一方、AdorGVについてはチャノコカクモンハマキではEGCGによる有意な感染増進が認められたが、リンゴコカクモンハマキに対しては認められなかった。次に、仮説2「カテキン類が昆虫の発育におけるコストになる」を検証した。上記の2種の昆虫にEGCGを摂食させ蛹重および幼虫期間を調査した。その結果、幼虫期間については2種ともEGCG摂食により幼虫期間に有意な延長はみられなかった。またEGCG摂食によりチャノコカクモンハマキにおいては有意な蛹重の減少は見られなかったが、リンゴコカクモンハマキにおいては逆にEGCG摂食により蛹重の増加が見られた。これらのことから、仮説2は棄却されたが、仮説1すなわちEGCGはチャノコカクモンハマキのAdorGVに対する感染増進作用を持つということが示された。昆虫病理学チャノコカクモンハマキとリンゴコカクモンハマキ幼虫を用いた生物検定により、メチル化カテキンの一種であるエピガロカテキンガレート(EGCG)と核多角体病ウイルスを同時に接種する実験系を確立することができた。その結果、リンゴコカクモンハマキ幼虫ではEGCGの添加濃度に依存して感受性が増大する事が示されたが、チャノコカクモンハマキではその傾向は見られなかった。すなわち、本研究における仮説を支持する結果が得られた。一方、EGCGの添加によって両種とも幼虫期間や蛹重に有意差はなかった。このことから、EGCGの摂取は、両種の適応度に影響しないことが示された。また、海外研究協力者であるバレンシア大学のSalva Herrero博士を招聘し、生体防御関連酵素活性の測定方法について技術的な情報交換ができた。

そのため、平成25年度に計画していた生物検定を行うことができたため、本研究はおおむね順調に進展していると言える。上記のように、材料となる昆虫種の飼育法も安定し、実験手法についても確立できたため、今後はさらに反復を重ね、さらにEGCGの接種濃度等も検討して生物検定を繰り返し実験データの完成を目指す。また、この結果を踏まえて、EGCG感染増大のメカニズムについての研究を進めるとともに、茶葉とリンゴ葉を用いて両種を飼育する実験を行う予定である。次年度も継続する課題であるため次年度使用額を残した。次年度の研究計画にある茶葉を用いた試験において、茶粉末を購入する予定であったが、茶の収穫が5月頃であるため、茶粉末購入に必要な金額を確保する必要があった。次年度使用額を用いて、茶粉末等を購入する計画である。
知的障害児のためのeラーニング教材開発

今回の研究は,知的障害児が,自分のペースで主体的にコンピュータを活用し,分かりやすく学習を進められるeラーニング教材を開発し,その利用可能性について検討した。具体的には,F特別支援学校の教科「課題」の学習場面において,ひらがな50音の読みの習得を目標としている知的障害児(2名)を対象にeラーニング教材を使用した学習を行った。eラーニング教材例:(1)平仮名で書かれた単語(その児童にとって身近な物や人物の名称)と音声,画像を見聞きする。(2)多数(その児童の実態に合わせた数)の画像の中から,平仮名で書かれた単語と同じものを選択する。その結果,(1)画像や音声の効果によって,落ち着きのなかった児童の興味関心を持続させ,離席が減り,集中して学習に取り組むようになった。(2)入力装置に大型スイッチを取り付けた自作マウスやタッチパネルを使用し操作を単純化することによって,受け身になりがちだった児童が主体的にコンピュータを操作するようになった。(3)一人一台のパソコンを使ったeラーニング教材によって児童が自分のペースで学習に取り組むことができるため,能力差のある複数の知的障害児を一人の教員が支援する場合において,それぞれの学習状況を把握しやすくなった。(4)画像や文字を児童の実態に応じてアレンジしやすいために,個に応じた教材を作成することができた。これらのことにより,対象児2名が,平仮名50音(1名は「を」は未習得)を読むことが出来るようになり,知的障害児の学習場面においてのeラーニング教材の有効性が認められた。また,作成した教材は校内LANによってより多くの知的障害児の学習に活用できるようにした。障害児教育においては,eラーニング教材を使用していく上で,ソフトのみならず,その操作性を簡単にするそれぞれの児童の実態に応じた入力装置の工夫がeラーニング教材開発につながった。
胚乳由来の3倍体育成法の確立とインプリント遺伝子の解析による胚乳分化機構の解明

クロミノウグイスカグラ(ハスカップ)の胚乳を培養することにより、植物体再生法を開発することができた。得られた植物体は、胚乳と同じ倍数性を持つことが分かった。この研究により、胚乳が植物体再生能を保持することが明らかとなった。『胚乳の植物体再生能』のメカニズムを明らかにするために、ゲノムインプリンティングに着目し、胚乳で発現するfertilization independent endosperm(FIE)遺伝子のクローニングを行った。胚乳培養過程のインプリント遺伝子の発現解析により、胚乳の植物体再生のメカニズムが明らかになることが期待される。ハスカップの倍数性育種を進めるために、2倍体の胚乳が3倍性の組織を形成することに着目し、胚乳を組織培養することによる3倍体植物の再生について研究を行った。受精後の胚乳発達の過程を組織切片により解析し、その情報をもとに胚乳を摘出して組織培養を行った。培地に添加する植物成長調節物質の濃度と組成を試験し、不定芽再生条件を検討した。受粉後の経過時間を追って胚乳発達過程を調査した結果、受粉4週間後以降にデンプンの蓄積が見られたことから、これより以前の胚乳を摘出して組織培養を行った。植物成長調節物質等の胚乳培養の培地条件を検討したところ、胚乳からカルスを経由して植物体再生させる培養条件を見出した。得られた植物体は胚乳由来の核相を示した。本研究により、栄養貯蔵器官のみにしか分化しないと考えられていた胚乳が遺伝的な可塑性を持ち、胚と同様に植物体になる能力を保持していることを明らかにした。この成果をもとに、胚乳培養による植物体再生の効率化や他の植物種への応用のための研究を進めた。植物体再生能を切り口に胚乳形成の機構を明らかにするため、胚乳で特異的に発現する遺伝子の発現を解析し、培養過程で起きる変化を解析した。ゲノムインプリンティング(遺伝的刷り込み:遺伝子制御機構の一つ。ほ乳類で発見された現象で、片方の親から受け継いだ遺伝子のみが発現する機構。植物では胚乳のみで報告)の現象に着目し、そのホモログの一つFIE(fertilization independent endosperm)のクローニングを行った。現在、この遺伝子の発現パターンを胚乳の培養過程で解析中である。胚乳が植物体再生能を保持することを証明するために、ハスカップを用いて胚乳の培養条件の検討を行った。胚乳の発達段階と培養に用いる植物成長調節物質について試験を行ったところ、ベンジルアミノプリンとインドール酪酸を組み合わせ培地において胚乳がカルスを経由して植物体再生することを明らかにした。また、得られた不定芽の伸長にはジベレリンが有効であった。この研究により、胚乳が遺伝的可塑性を持ち、従来考えられていた栄養貯蔵器官にのみ分化するのではなく、植物体再生能を保持することが分かった。この植物体再生は、胚乳が本来持つ分化プログラムが培養条件によって書き換えられることによって生じると仮定した。胚乳を高度に特異化させている現象としてゲノムインプリンティングに着目し、胚乳で発現するFIE(fertilization independent endosperm)の解析を進行中である。また、胚乳は雌性配偶子と雄性配偶子が2:1で受精して生じることから、胚乳で起きる分化プログラムにおける雄性配偶子側の寄与について研究を着手した。まず、雄性配偶子の形成過程について解析し、花粉管内で生じる二つの精細胞のうちどちらが胚乳となるかについて追究した。このために、花粉管内で雄原細胞から精細胞が形成されるタイミング、花粉管内で形成されるmale germ unit(MGU)の細胞的的解析をフローサイトメトリーおよび間接蛍光抗体法を用いて進めた。二細胞性のアルストロメリアとキルタンサスをモデルに用いて研究を進めたところ、花粉発芽を誘導する液体のin vitro培養系で同調的に雄原細胞から精細胞が形成されることが分かった。また、MGU形成後に二つの精細胞において微小管に蓄積量が異なることを明らかにし、この微小管の蓄積量が精細胞の異型化の一因であることを示した。現在、精細胞の運命(どちらが卵細胞と融合し、どちらが胚乳のもととなる中央細胞と融合するのか)を決めるファクターについての仮説モデルを構築中である。これまでの研究でハスカップの胚乳を組織培養することにより、植物体を再生させる手法を開発することができた。発達段階にある胚乳を摘出し、ベンジルアミノプリン(BAP)とインドール酪酸(IBA)を培地に添加することが重要であることが分かった。さらに胚乳の持つ再生能を検証するために、胚乳の培養条件の検討を行った。

クロミノウグイスカグラ(ハスカップ)とミヤマウグイスカグラの種間交雑に由来する胚乳を培養したところ、カルスを経由して不定根の再生が観察された。植物体の再生には至っていないが、種間交雑に由来する胚乳においても、形態形成能を保持することが明らかとなった。この研究により、胚乳が遺伝的可塑性を持ち、従来考えられていた栄養貯蔵器官にのみ分化するのではなく、植物体再生能を保持することが分かった。この『胚乳の植物体再生能』のメカニズムを明らかにするために、この植物体再生は、胚乳が本来持つ分化プログラムが培養条件によって書き換えられることによって生じると仮定した。胚乳を高度に特異化させている現象としてゲノムインプリンティングに着目し、胚乳で発現するFIE(fertilization independent endosperm)遺伝子の全長をクローニングすることができた。また、胚乳は雌性配偶子と雄性配偶子が2:1で受精して生じることから、胚乳で起きる分化プログラムにおける雄性配偶子側の寄与についても解析を進めた。以上の結果を統合し、胚乳の分化機構について考察を行った。
東日本大震災アーカイブから自然災害アーカイブへの転換に関する研究

本研究では,震災アーカイブから自然災害アーカイブへの転換を図るために,自然災害記録の整理分類及び利活用の方法を明らかにするとともに,今後の資料増大を見据えた災害記録の整理分類の自動化方法を明らかにし,成長かつ持続可能な自然災害アーカイブの構築の方法を確立することを目的とする.本年度については,(1)自然災害に関係する歴史災害資料及び自然災害資料の整理分類方法,及び(2)自然災害全般のメタデータスキーマの設計の2つについての課題研究を分担者とともに行った.研究課題(1)については,各自治体が策定している地域防災計画や東日本大震災関連の復旧・復興計画及び関連資料について項目の洗い出しを行った.また,合わせて図書館分類方法の項目の洗い出しを行った.これらの項目から自然災害に関係するものを精査し,項目の分類分けを実施した.歴史災害資料については,分担者と議論を重ねながらさらに項目分類の精査を実施した.研究課題(2)については,東日本大震災デジタルアーカイブの各団体(国立国会図書館や宮城県多賀城市,岩手県などの震災デジタルアーカイブ構築団体)が作成しているメタデータスキーマを収集するとともに,公開されている震災デジタルアーカイブのメタデータも合わせて収集し,それらを分析及び特徴を抽出した.日本以外の震災デジタルアーカイブについては,インドネシアのスマトラ地震関係のメタデータスキーマを一部取得し,同様に特徴の抽出を行った.さらに,研究課題(1)で行った整理分類の項目から不足しているメタデータの整理を実施した.自然災害全般のメタデータの設計の検討において,東日本大震災の震災デジタルアーカイブの調査を実施していたが,東日本大震災の震災デジタルアーカイブで2番目に資料が多い,宮城県図書館が管理運営を行っているアーカイブ宮城が度重なるシステム停止により,調査が思うように進まなかった.そのため,国内の事例がまとまる前に,海外の事例を調査することは困難と判断し,インドネシアの渡航を次年度の繰り越すこととした.平成30年度については,平成29年度に実施できていないインドネシアの調査などについて年度前半で早急に進める.また,29年度の研究課題1と研究課題2をさらに範囲を広げて分析や再精査を行い,整理分類方法の更なる発展と拡張性高いメタデータスキーマの作成を目指す.本研究では,震災アーカイブから自然災害アーカイブへの転換を図るために,自然災害記録の整理分類及び利活用の方法を明らかにするとともに,今後の資料増大を見据えた災害記録の整理分類の自動化方法を明らかにし,成長かつ持続可能な自然災害アーカイブの構築の方法を確立することを目的とする.本年度については,(1)自然災害に関係する歴史災害資料及び自然災害資料の整理分類方法,及び(2)自然災害全般のメタデータスキーマの設計の2つについての課題研究を分担者とともに行った.研究課題(1)については,各自治体が策定している地域防災計画や東日本大震災関連の復旧・復興計画及び関連資料について項目の洗い出しを行った.また,合わせて図書館分類方法の項目の洗い出しを行った.これらの項目から自然災害に関係するものを精査し,項目の分類分けを実施した.歴史災害資料については,分担者と議論を重ねながらさらに項目分類の精査を実施した.研究課題(2)については,東日本大震災デジタルアーカイブの各団体(国立国会図書館や宮城県多賀城市,岩手県などの震災デジタルアーカイブ構築団体)が作成しているメタデータスキーマを収集するとともに,公開されている震災デジタルアーカイブのメタデータも合わせて収集し,それらを分析及び特徴を抽出した.日本以外の震災デジタルアーカイブについては,インドネシアのスマトラ地震関係のメタデータスキーマを一部取得し,同様に特徴の抽出を行った.さらに,研究課題(1)で行った整理分類の項目から不足しているメタデータの整理を実施した.自然災害全般のメタデータの設計の検討において,東日本大震災の震災デジタルアーカイブの調査を実施していたが,東日本大震災の震災デジタルアーカイブで2番目に資料が多い,宮城県図書館が管理運営を行っているアーカイブ宮城が度重なるシステム停止により,調査が思うように進まなかった.そのため,国内の事例がまとまる前に,海外の事例を調査することは困難と判断し,インドネシアの渡航を次年度の繰り越すこととした.平成30年度については,平成29年度に実施できていないインドネシアの調査などについて年度前半で早急に進める.また,29年度の研究課題1と研究課題2をさらに範囲を広げて分析や再精査を行い,整理分類方法の更なる発展と拡張性高いメタデータスキーマの作成を目指す.
先スペイン期アンデス文明における競合と社会変化

H18年度は特別研究員としての最終年度であるため、これまでの発掘調査で得られた諸資料を分析し、その結果を総合することを試みた。これまでに発掘したペルー国アンカシュ県ネペーニャ谷下流域のセロ・ブランコ遺跡とワカ・パルティーダ遺跡は、層位・土器分析ならびに一連の放射性炭素年代測定(東京大学年代測定室)等によって、少なくとも形成期の中期(セロ・ブランコ期:1100-800cal.BC)から後期前半(ネペーニャ期:800-450cal.BC)にかけて、同時に活動していた神殿であったことが確認された。これは、形成期における近接する複数の神殿間の時間的前後関係を実証した数少ない研究の一つであり、形成期後期の海岸地方では唯一の事例となる。同時期に活動していた両神殿の関係については、土器、建築のプラン・技法、図像、その他希少品等の分析結果から判断して、少なくとも形成期中期には、各々が異なる集団に属し、しかも支配・被支配関係などではなく、互いに独立した関係にあったものと推定された。動植物遺存体の分析(ペルー国立トルヒーヨ大学生物考古学研究所)では、形成期中期の終わりから後期初頭にかけて、それまでの根菜類(マニオク、ジャガイモ)に加わる形でトウモロコシが初めて導入されたことが判明した。これらは、ラクダ科動物やイヌ、魚介類等と共に、神殿に関わる儀礼の一部としてのフィースティングに際して供されたものであることが、遺物分析と民族誌例の比較などから導き出された。また、遺物の包含層中における密度の推移から、フィースティングはトウモロコシの導入と平行して活発になったことが明らかになった。形成期後期は海岸における大規模神殿群が次々に放棄された時期として知られており、例外的に生き残ったネペーニャの神殿では社会の危機感や緊張を和らげるために頻繁ないし大規模なフィースティングが催された可能性があるだろう。2004年度は、今後の研究の土台として、アンデス文明形成期(2500-50 BC)における近接する諸神殿の関係を探るため、ペルー北部中央海岸地方ネペーニャ河谷下流域に位置する2つの神殿遺跡にて、発掘調査を実施した。2002年に続いて2回目の発掘となるセロ・ブランコ遺跡では、前回提案した予備的編年を補完する形で、建築・壁画・土器資料ならびに絶対年代試料を充実させた。これによって、これまでペルー北部中央海岸地方に欠けていた編年研究の主柱を打ち立てられる見通しがついた。それは下に述べるワカ・パルティーダ遺跡をはじめとする近隣諸遺跡とのあらゆる比較研究の基盤として、必要不可欠な成果であった。また、副基壇にて儀礼的廃棄場ないし饗宴場と思われる特殊な遺構を掘り出したが、これは形成期神殿の機能解明に重要な発見である。これまで全く手付かずであったワカ・パルティーダ遺跡は、セロ・ブランコ遺跡から3km程度離れた対岸に位置する。建築・有機物ともに保存状態の良好な遺跡であった。発掘した土器の予備的分析から判断して、少なくとも形成期後期(800-250 BC)にはセロ・ブランコと活動時期が重なっていると思われる。また、主に神話的人物・動物をモチーフとする複数の多彩色壁画・多彩色円柱、石彫を発見した。とりわけ多彩色壁画は大型(最大2x6m)かつ保存状態が良好で、それ自体学術的に非常に貴重な発見であるのみならず、アンデス文明形成期における近接する諸神殿の関係を探るという調査目的に対して、既に壁画資料のあるセロ・ブランコ遺跡との比較分析を可能にするという点で、極めて貴重な成果である。この壁画等の発見に関しては、現地諸事情から判断して、2005年度の調査まで現地新聞等による発表を控えている(下記の「成果を公表を見合わせる必要がある場合」には当てはまらない)。昨年度に引き続き、アンデス文明形成期(2500-50 BC)における近接する諸神殿の関係を探るため、ペルー北部中央海岸地方ネペーニャ河谷下流域に位置するワカ・パルティーダ神殿遺跡にて、第二次発掘調査を実施した。ワカ・パルティーダ遺跡は、2002年と2004年に発掘したセロ・ブランコ遺跡から2km程離れた対岸に位置する。昨年の調査では、両遺跡が同時期であることが示唆され、また、ワカ・パルティーダ遺跡にて複数の多彩色壁画・多彩色円柱、石彫などの重要な発見があった。2005年の発掘調査では、まずワカ・パルティーダ遺跡の編年を充実させ、両遺跡が同時期であることを確定することによって、両神殿の政治的・経済的関係を探るため基礎が固められた。今後のそして現在進行中の諸分析によって、関係の内容に迫る予定である。一方、さらなる多彩色壁画と、巨大な猫科動物のレリーフの発見も、今回の特筆すべき調査成果であった。特に後者は、単体の動物ないし人物を表現した粘土レリーフ(高浮き彫り)としては、現存する古代アンデス史上最大の例となり(約3×4m)、またその保存状態も比類なきほど良好であった。これらは、既に図像資料のあるセロ・ブランコ遺跡との比較分析に有用であるばかりでなく、さらには、形成期宗教イデオロギーの中心として扱われることの多かった高地のチャビン・デ・ワンタル大神殿の石彫群とも、その規模・様式・複雑さ等において比肩するものであり、チャビンの重要性を相対的に引き下げるものかもしれない。なお、ワカ・パルティーダの調査成果は、ペルー国の最大手新聞El Comercio紙(11月13日)にて異例なほど大きく(表紙+見開き全面)とりあげられ、のちに我が国のメディアでも紹介された。