hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
動学的アプローチによる現代日本女性のライフコースの特徴とそのメカニズム

今後は特に性別職域分離に着目し、いわゆる女性職・男性職からの離職・再就職などのメカニズムをより詳細に解明することを目指す。当年度は主に学会報告,査読論文執筆,先行研究の探索を進め,博士論文に向けた下地を作ることに尽力した.学会報告に関しては,夏と冬に開催された数理社会学会にて報告を行い,女性の離職理由に関する類型化を社会調査データを用いた実証分析によって試みた.ポスター報告であったが,数理統計学に優れた多くの先生から有意義な助言をいただくことができた.また,査読論文については,キャリアにおける無業リスクに関する実証分析の論文を12月末に東北社会学会への投稿し,掲載が決定した.また,女性の労働時間の調整メカニズムに関する論文と性別職域分離構造の趨勢に関する論文の執筆を進めており,2019年度の夏を目途に投稿を目指している.また,東京大学社会科学研究所により実施されている,東大社研パネル研究会に所属し,社会調査の実査に関わり,また研究報告を行い,一定程度の貢献ができた.2019年も引き続き所属し,新サンプルを加えた大規模な実査が行われることが予定されている.自己評価としてはおおむね順調であるとしたが,欲を言えば当年度中に査読論文をもう一つ投稿できればよかったと考えている.ただし,投稿していない論文についても完成度は80%程度であるため,その点は及第点であると考えている.今年度の特に大きな課題としては,夏に控える国際学会での報告と社会調査の実査である.国際学会についてはライデンで行われるICASという学会への参加が決定しており,ここで日本の性別職域分離構造に関する趨勢についての報告を行う.ここで行う報告は女性のライフコースを捉えるための基本的な枠組みである,ジェンダーで分離された労働市場の構造を把握する試みであり,研究全体からみても重要な研究報告となる.もう一つの社会調査の実際に関しては,調査会社の女性モニターを用いてキャリア移動に関する調査を行う予定である.具体的には最終学歴を終えてから現在に至るまでの職歴をすべて尋ね,その上で結婚や出産などのライフイベントとその時期を同時に聞き,職歴とライフイベントとの結びつきを捉えるための調査を実施する.調査会社についてもすでに数社で見積もりを行っており,夏から秋頃に実査を行うことを予定している.また,2018年度に執筆を進めてきた論文を夏頃に投稿を行う.投稿先としては,社会調査協会の社会と調査,また家族社会学会の家族社会学研究を考えている.
強誘電体/半導体結晶整合ヘテロ構造の単結晶性膜作製と電子機能性開拓

(1)結晶整合した強誘電体/半導体へテロ構造の電子機能性開拓従来酸化物では実現されなかったpn接合を示すことを、様々な強誘電体へテロ構造の電流電圧特性を測定して示唆した。これを応用して、電圧パルスで接合特性が変調記録できるダイオードが作製可能であることを示した。さらに、トンネルpn接合を発見した。nm領域(単結晶粒域)の電圧電流特性を測定し、nmスケールでもショットキー障壁が電流を制限していることを示し、電流は転位などを集中的に流れ、原理的には強誘電体薄膜は十分なリーク電流特性を持ち得ることが示唆した。(2)強誘電体/半導体へテロ構造と微小強誘電体の理論ヘテロ構造中の強誘電体の自由エネルギーを求める一般的枠組みを構築し、強誘電体が有限なバンドギャップを持つことを考慮した強誘電体へテロ構造中の分極の安定性と分極値の理論を提案した。この理論は、実験の半導体内誘導電荷、絶縁体上の極薄膜強誘電相の安定性、高温超伝導体、吸収電流現象のように一方のキャリヤタイプしか持たない伝導層の強誘電体の伝導変調等を説明した。Siと強誘電体間に絶縁体を挿入しても分極は安定に存在しうろことを予測し、近年の分域構造の報告も説明できることを理論的に示した。また、電極がなくても強誘電体相が安定に存在する寸法極限は従来の理論に比べ著しく小さい。(3)強誘電体膜の新規な作成法としてのスパッターMBE法の提案と開発0.5-1mtorrでの(Ba,Sr)TiO_3単結晶薄膜を作製し、従来の(Ba,Sr)TiO_3エピ薄膜作製の基板温度の約半分の350°Cで極めて平坦なエピタキシャル薄膜を作製できた。本研究の目的は、物性物理学と電子工学の境界領域の研究という立場から、強誘電体薄膜の基礎的問題を解明し、将来の電子素子の工学課題を解決することである。第1目標は、申請者が既に提案している〈全ペロブスカイト強誘電体/半導体構造〉の物性開発とその発現機構の解明により、技術的萌芽を育てる。第2は、極薄膜単結晶粒の測定により、微小誘電体の極限物性と微細化の極限を解明する。特に、結晶整合した単結晶的強誘電体ヘテロ構造により、強誘電体本来の物性を抽出し膜厚依存性のモデルを提案する。従来よりこの予備検討をしてきたが、本年度は、この構造をエピタキシャル3次元ICに用いる提案を追加した。平成7年度に企業から大学に移籍し、本申請により研究体制を整備中である。まず、従来の薄膜の改良のため、新規なスパッター法が可能な装置を設計し、初期運転を開始した。これと並行して、今迄検討したPb(Ti,Zr)O_3やBaTiO_3等のABO_3型強誘電体に加え、層状構造や持ち半導体の格子定数により近いB_4Ti_3O_<12>をペロブスカイト半導体上にエピタキシャル成長した。この薄膜では、格子定数に極めて強い応力が認められ、結晶整合しやすいことが発見された。また、この薄膜を厳密に測定解析したところ、X線回折の標準データには疑問がもたれた。さらに、この電気特性はABO_3型とは異なり、電流のメモリー効果や緩和電流が小さいことが分かった。さらに、低ノイズ測定システムを作製しSiO_2/Siヘテロ膜を用いたモデル実験により、過去の強誘電体のサイズ効果の実験が誤りである可能性が示唆された。

また、微小領域の強誘電体物性を測定する装置を設計し、組上げと試運転を開始した。平成9年度は、強誘電体/半導体の安定性と電流伝導に関する統一理論を完成させ、また、今年度試運転を開始した上記の装置、薄膜作製装置による原子層レベルの層制御をした超薄膜の作製、微少領域の強誘電体物性を測定を開始する。本研究の目的は、物性物理学と電子工学の境界領域の研究からの、強誘電体薄膜の基礎的問題と将来の電子素子の工学課題の解明解決である。即ち、申請者の<全ペロブスカイト強誘電体/半導体構造>の物性開発と、微小誘電体の極限物性による微細化の極限解明である。特に、強誘電体FET(電界効果トランジスター)は研究が盛んであるが、Siを用いると記録保持せず実現されていない。これは、強誘電体微少化の原理的問題点が現われてるいる可能性が高い。一般にSiと強誘電体間に挿入する絶縁体を薄くすれば解決できると考えられているが、理論で従来の強誘電体理論の枠組みでは極めて困難であるとわかった。このため、ヘテロ構造中の強誘電体と磁性体の自由エネルギーを求める一般的枠組みを構築し、強誘電体ヘテロ構造中の分極の安定性と分極値の理論を提案した。鍵となる考えは、強誘電体を半導体と見做し、強誘電体の結晶構造と分極の対応関係を崩すことである。この理論は、実験の半導体内誘導電荷、絶縁体上の極薄膜強誘電相の安定性、高温超伝導体のように一方のキャリヤタイプしか持たない伝導層の強誘電体の伝導変調等を説明した。また、Siと強誘電体間に絶縁体を挿入しても分極は安定に存在しうることを予測し、吸収電流現象の問題も説明でき、その他の実用的に重要な構造に拡張して用いれる。また、強誘電体を過ぎる電流から、強誘電体の接合においてpn接合等が形成され、これにより電気特性が制限されることがわかった。特に、強誘電体のヘテロ構造でトンネルpn接合が発見された。これは、酸化物のpn接合では初めてのことであり、さらに、もし自発分極を影響を考えなければ、極めて長い範囲をトンネルすることになりトンネル現象として理解し難いという新しい現象である。強誘電体薄膜の基礎的問題を解明し将来の工学課題を解決する。申請者提案の〈全ペロブスカイト強誘電体/半導体構造〉の物性開発と、極薄膜単結晶粒の測定による微小誘電体の微細化の極限の解明をする。今年度は以下の結果を得た。1)スパッターMBEという方式を提案した。この方法で0.5-1 motorrでの(Ba,Sr)TiO_3単結晶薄膜の作製を行った。特に、従来の(Ba,Sr)TiO_3エピ薄膜作製の基板温度の約半分の350°Cで極めて平坦なエピタキシャル薄膜を作製できた可能性が高い。但し、その誘電率は、膜厚30-40nmで30-50と十分高くはないため検討を続行している。2) AFM装置を改造して、nm領域(単結晶粒域)の電圧電流特性を測定した。BaTiO_3、PbTiO_3系何れのエピ膜でも、明確なメモリー現象は見られなかった。しかし、nmスケールでもショットキー障壁が電流を制限していることが示唆された。また、電流電圧特性をスケーリングして、電流は転位などを集中的に流れ、原理的には強誘電体薄膜は十分なリーク電流特性を持ち得ることが示唆された。3)強誘電体は、従来酸化物では実現されなかったpn接合を示すことを、様々なヘテロ構造の電流電圧特性を測定して示唆した。これを応用して、電圧パルスで接合特性が変調記録できるダイオードが作製可能であることを示した。4)強誘電体が有限なバンドギャップを持つことを考慮すると、強誘電体をゲートとするFETの動作特性や結晶学的安定性が説明でき、さらに、近年の分域構造の報告も説明できることを理論的に示した。また清浄な強誘電体自由表面には、2次元縮退電子系ができる可能性を示唆した。
グリオーマ好発性トランスジェニックラットの解析

膠芽腫はヒト脳腫瘍の中で最も悪性度が高く、頻度も高い腫瘍で、その克服は医学上の大きな課題の1つである。膠芽腫は上皮成長因子受容体(EGFR)シグナル伝達系の異常活性化が腫瘍形成に密接に関連していると考えられており、我々は膠芽腫と分子遺伝学的背景の類似した脳腫瘍を好発する遺伝子改変ラットを開発し、それを用いてさまざまな実験をおこなった。それとともにヒト脳腫瘍の分子遺伝学的解析も進めて、双方の知見を相互的にフィードバックして脳腫瘍に関する新たな知見を得ることを目指し、いくつかの興味ある知見を得ることができた。S100β-v-erbB Tgラットの系統を維持しつつ、発生した脳腫瘍の組織並びに遺伝子サンプルの蓄積を通して研究基盤の整備充実を進めた。それと並行してp53ノックアウト(KO)ラットを導入し、交配して産仔を得た。脳腫瘍を発症した個体が順次発生しており、病理学的および分子遺伝学的解析を進めている。現在までのところ、v-erbBホモ接合性個体、v-erbBヘテロ接合性個体とは異なる表現型を示すことが判明している。また、得られた脳腫瘍とミクログリア/マクロファージの関連についても解析をおこなった。腫瘍関連マクロファージ(TAM)はヒトグリオーマを含む種々の腫瘍においてその存在が指摘されている。検討にはIba1, CD68, CD163, CD204、Ki-67に対する抗体を用いた。我々のTgラットに発生するmalignant gliomaはextra-axial positionに腫瘤を形成しやすいという特徴があるが、髄内発生のanaplastic oligodendroliomaも含めて非病変部よりも有意に多数のIba1陽性細胞の侵入を認め、それらの多くは活性型ミクログリアの形状を有していた。さらにIba1陽性細胞数と腫瘍のKi-67標識率は有意に正の相関を示した。CD204は壊死巣や血管増殖の盛んな領域で陽性細胞が出現し、CD68, CD163は弱陽性の細胞が散在性に認められ、つまりM2マクロファージマーカーの発現は弱く、この点はヒトグリオーマとはやや異なっていた。これらの結果は、ミクログリアと腫瘍細胞に何らかのシグナル応答の存在を示唆するものであり、ヒトではまだ行われていないミクログリアを介した免疫細胞治療の実験モデルとして本Tgラットの利用可能性が示唆された。S100β-v-erB Tgラットの系統を維持しつつ、発生した脳腫瘍の検体ならびに遺伝子サンプルの蓄積を通して研究基盤の整備充実を進めた。現在まで26世代まで兄妹交配による継代をおこなっているが、表現型に変化は認められず、優れた系統の脳腫瘍モデル動物であることが示されている。p53ノックアウトラットラットと交配して誕生した雑種個体はverbB遺伝子と変異p53遺伝子をそれぞれヘテロ接合性にもつ(S100β-verbB+/- p53+/-)が、これら38個体の観察を終えた。その結果、脳腫瘍の発生は約20%の個体にとどまり、その他の個体は軟部肉腫、癌腫、造血器腫瘍などを発症し、平均寿命は54wと、S100β-verbB+/+およびS100β-verbB+/-の個体と比較して生存期間が有意に短縮した。しかし、p53+/-の個体と平均生存期間がほぼ同様で、この時期にv-erbB+/-の個体の脳腫瘍の発症例は少ないことから、v-erbBとp53は共働することなく、それぞれの遺伝子変異の別個の作用によって脳腫瘍ないし全身の腫瘍を形成していたと考えられた。50週齢に達したv-erbB+/+個体に培養ラットミクログリア細胞株の脳内接種と放射線照射を併用した実験では、生存期間が延びる傾向が示されており、個体数を増やして解析を続けている。ラット脳腫瘍の解析の手掛かりを得るためにヒト脳腫瘍についても病理学的ならびに分子遺伝学的解析をおこなった。主な成果として、Olig2発現は低異型度びまん性グリオーマの組織学的および分子遺伝学的分類に役立つことを明らかにした他、類上皮型膠芽腫の分子遺伝学的解析、乏突起膠腫におけるα-internexinとCIC発現に関する解析などをおこなった。また稀なヒト脳腫瘍症例の臨床病理学的検討をおこなった。S100β-v-verbB Tgラットの系統を維持しつつ、発生した脳腫瘍の検体ならびに遺伝子サンプルの蓄積を通して研究基盤の整備充実を進めた。現在まで28世代まで兄妹交配による継代をおこなっているが、表現型に変化は認められず、優れた系統の脳腫瘍モデル動物が示されている。脳腫瘍の治療を目的に、担腫瘍状態にあるTgラットに化合物Xを静脈投与する実験を開始した。同化合物は投与後24時間の分析で腫瘍に対して薬理作用を発揮する有効濃度域に達した一方で、非病変部脳組織への有意な集積はみられず、優れたドラッグデリバリー性を示すことが示唆された。硬膜原発軟骨腫、視索原発グリオーマ、腺癌様化生を呈する悪性髄膜腫、グリオーマにおける変異型イソクエン酸脱水素酵素の発現解析、グリオーマにおけるcyclin D1とα-internexinの発現解析、multinodular and vacuolating neuronal tumorの免疫組織化学的検討などで、意義ある結果を得た。脳腫瘍治療実験において新しい取り組みを開始した。ヒト脳腫瘍に対する薬物治療は、薬物を経口、経

静脈的に投与するものが一般的であるが、非病変部への集積が様々な有害事象をもたらして、治療中止に追い込まれることも稀ではない。化合物Xは種々の薬効成分を運搬する能力の高いキャリア分子なので、これがin vivoの自発的に形成された脳腫瘍に選択的に集積することを見出したことは意義深い。ヒト脳腫瘍についてもいくつかの新知見を明らかにすることができ、脳腫瘍モデル動物研究とのクロストークを図る上でも一定の成果があった。S100β-v-erbB Tgラットの系統を維持しつつ、発生した脳腫瘍の検体ならびに遺伝子サンプルの蓄積を通して研究基盤の整備充実を進めた。現在までに30世代まで兄妹交配による継代をおこなっているが、表現型に特に大きな変化は認められず、優れた系統の脳腫瘍モデル動物であることが示されている。化学発癌されたげっ歯類の脳腫瘍(悪性膠腫)はBRAFの特定部位に変異が高頻度に見られるという先行研究を踏まえ、我々のTgラットにおいてBRAF変異の有無を解析したところ、1例も変異は検出されなかった。先行研究ではBRAF変異のある脳腫瘍はヒトでも実験動物でも局所浸潤性格が弱いことが指摘されており、我々のTgラットも組織学的な悪性度の高さに比して浸潤性格が弱いという特徴がみられるが、このような組織学的な類似があっても相互に異なる変異経路の活性化によることが示唆された。ラット脳腫瘍の解析の手掛かりを得るためにヒト脳腫瘍についても病理学的ならびに分子遺伝学的解析をおこなった。脊髄発生の高異型度グリオーマの遺伝子解析、鞍上部に発生した異型奇形腫様ラブドイド腫瘍の遺伝子解析、上衣腫から発生した異型奇形腫様ラブドイド腫瘍の遺伝子解析、視床下部過誤腫、破骨細胞様巨細胞を伴う類上皮膠芽腫の遺伝子解析、CD34高発現を示す小児低異型度グリオーマ、BRAF変異のない先行病変から発生したBRAF変異陽性類上皮膠芽腫の遺伝子解析、成熟奇形腫の神経成分における免疫表現型の未熟性の解析、乳頭状グリア神経細胞性腫瘍とロゼット形成グリア神経細胞性腫瘍の遺伝子解析をおこない、意義ある結果を得た。BRAFシグナル伝達経路に作用する分子標的薬が治療選択肢となる現在、個別の脳腫瘍におけるBRAF経路の活性化の判定は重要であり、多種多様な脳腫瘍においてその全貌を明らかにすることは意義がある。ヒトのある種の脳腫瘍においてBRAF変異が見出され、特徴ある臨床像ならびに病理像を明らかにした。げっ歯類の実験的脳腫瘍と我々のTgラットに発生する脳腫瘍には組織学的類似性がみられるが、前者はBRAF変異陽性で後者は陰性と差異がみられた。ヒトおよび実験動物の両面においてさらに詳細な層別化研究の必要性が示唆された。現在までに32世代まで兄妹交配による継代をおこなっているが、表現型に特に大きな変化は認められず、優れた系統の脳腫瘍モデル動物であることが示されている。培養ラットミクログリア細胞の経静脈投与と放射線照射で有意な生存延長効果があることを見出し、脳腫瘍治療における免疫治療の有用性が示唆された。
免疫チェックポイント機構による心不全の病態制御機構の解明

重症心不全患者において、左室補助人工心臓装着による左室の容量・圧不可の軽減が心機能の回復につながることが証明されているが、そのメカニズムについては十分理解されていない。また近年、PD-1/PD-L1などの免疫チェックポイント機構が大変注目されており、癌以外の病態にも寄与する可能性が示唆されているが、心不全の病態制御との関連は明らかではない。本研究では左室補助人工心臓装着後の心筋組織検体の解析および動物実験モデルを用いて、PD-1/PD-1経路による心不全の病態制御機構を明らかにし、重症心不全の新たな治療戦略を開発することを目的とする。
研削におけるインプロセスダイナミクス制御は加工に新たな機能を提供できるか？

研削加工における回転工具ならびに被加工物の使用方法について,加工中に動的に速度を可変制御するインプロセス速度制御法とその効果を検証する.このようなインプロセス制御の実現によって,仕上げ加工中の再生びびり振動の抑制,工作物表面のトポグラフィ制御,残留応力,熱応力といった表面品質の制御などを検証し,研削加工における回転工具まわりのダイナミクスコントロールによって新たな機能を提供できることを示したい.研削加工における回転工具ならびに被加工物の使用方法について,加工中に動的に速度を可変制御するインプロセス速度制御法とその効果を検証する.このようなインプロセス制御の実現によって,仕上げ加工中の再生びびり振動の抑制,工作物表面のトポグラフィ制御,残留応力,熱応力といった表面品質の制御などを検証し,研削加工における回転工具まわりのダイナミクスコントロールによって新たな機能を提供できることを示したい.
医学教育アウトカム評価法としてのカルテピアレビューシステムの確立

信頼性の確立している「診療録ピアレビューシステム」の基準連関妥当性を検討した。協力病院(関東・中部地方の3病院)の内科外来を新患受診し、3年目研修医13名が診療した患者65名(各研修医5名)の外来診療録を、評価者5名が病院を訪れて評価し、各病院の指導医が別に行った研修医評価との相関係数を解析した。「医療面接」(r=0.509)、「臨床推論」(r=0.585)、「概略評価」(r=0.306)等の相関は高く、「身体診察」(r=0.132)、「患者・家族への態度」(r=-0.089)の相関は低かった。主要な項目で基準連関妥当性が認められたが、診療録からは評価が困難な項目も明らかとなった。教育の評価には、インプット評価(実施された教育に対する評価)、アウトプット評価(終了時に獲得された能力の評価)、アウトカム評価(育成された人材の評価)の3種類がある。日本の医学教育は、インプット評価・アウトプット評価はなされているが、アウトカム評価はほとんどなされていない。そこで、我々は、アウトカム評価法の一つとして、「診療評価としてのカルテピアレビューシステム」を開発し、20112012年に東北地方の病院を対象に評価表・評価方法の信頼性を示した。今回は、「全国多施設で行った場合の信頼性・妥当性検討」「prospectiveな妥当性検討」「多国間で行った場合の信頼性・妥当性の検討」を計画した。平成25年度の第一の計画は、全国多施設で行った場合の信頼性・妥当性検討である。平成25年6月から平成26年2月にかけて、全国7施設を訪問し、うち4施設から協力の同意が得られ、1施設では倫理委員会でも承認が認められた。ただ、後述の理由で、カルテレビュー実施は延期となった。第二の計画は、平成26年度以降に予定している北米の施設との共同研究の準備である。まず、北米の1施設の医学教育関係者に研究の主旨を伝えて協力を求め、内容には賛同が得られたが、後述の理由でカルテレビューは困難と判断された。また、平成25年8月にプラハで開催されたAMEE(ヨーロッパ医学教育学会)でこれまでの研究内容をポスター発表して協力参加を募り、1施設からofferがあったが、後述の理由で保留となった。そこで、我々は、アウトカム評価法の一つとして、「診療評価としてのカルテピアレビューシステム」を開発し、20112012年に東北地方の病院を対象に評価表・評価方法の信頼性を示した(Tohoku J Exp Med. 233:189-95, 2014)。今回は、「全国多施設で行った場合の信頼性・妥当性検討」「OSCE、初期研修義務化の診療に及ぼした影響の解析」「多国間で行った場合の信頼性・妥当性の検討」を計画した。平成26年度の第一の計画は、「全国多施設で行った場合の信頼性・妥当性検討」と「OSCE、初期研修義務化の診療に及ぼした影響の解析」で、両者を同時に行う計画であった。しかし、平成25年度から26年度にかけて、全国11病院を訪問して協力を依頼したが、種々の理由で、3病院からしか協力の同意が得られず、対象数が足りないため後者は断念せざるを得なくなった。そこで、コアメンバー委員会で再検討し、「3年目研修医を対象にEPOC評価および指導医からの評価とカルテピアレビュー評価との基準連関妥当性をretrospectiveに検討する」方法に変更し、平成27年度に行う方針となった。第二の計画は、「多国間で行った場合の信頼性・妥当性の検討」である。平成26年8月にミラノで開催されたAMEE(ヨーロッパ医学教育学会)の会場で北米の病院の代表者と会って協力を要請するなどして進めているが、日米の病院システムの違いなどから、このままの形での実施は困難と判断され、検討を重ねている。医学教育アウトカム評価法の一つとして、「診療録ピアレビューシステム」の開発を計画し、今回、指導医による評価との基準連関妥当性を検討した。2014年4月2015年3月に研究協力病院(関東・中部地方の3病院)の内科外来を新患受診し、卒後3年目研修医13名が診療し、最終的に入院となった患者65名(1研修医あたり5名ずつ)の外来診療録を、評価者5名が病院を別々に訪れて、評価表(診療の質評価:5段階15項目)に基づいて評価した。別に、各病院の指導医が研修医13名のパーフォーマンス評価(5段階10項目)を行い、両者のピアソン相関係数をSPSSで解析した。研修医13名の「診療録評価」15項目平均点(5症例平均)の平均±標準偏差は3.26±0.19 (2.99-3.59)、「指導医による評価」10項目平均点の平均±標準偏差は3.75±0.81 (2.3-4.7)であった。「診療録評価(5症例平均)」15項目(C115)と「指導医による評価」

10項目(P110)の相関係数は、C1「医療面接」vsP1「病歴聴取」(r=0.509)、C9「EBMに従っている」vs P3「臨床推論」(r=0.585)、C8「治療が適切」vsP4「治療」(r=0.307)、C15「概略評価」vsP10「概略評価」(r=0.306)などで正の相関が得られた。一方、C3「身体診察」はP2「身体診察」(r=0.132)との相関は低く、P6「カルテ記載」(r=0.315)との相関の方が高かった。また、P7「患者・家族への態度」は、C12「患者へのempathy」(r=-0.089)やC13「患者・家族への説明」(r=-0.281)とは全く相関しなかった。主要な項目(医療面接、臨床推論、概略評価等)で高い基準連関妥当性が認められた。一方、診療録では評価が困難な項目(身体診察、患者医師関係など)も明らかとなった。信頼性の確立している「診療録ピアレビューシステム」の基準連関妥当性を検討した。協力病院(関東・中部地方の3病院)の内科外来を新患受診し、3年目研修医13名が診療した患者65名(各研修医5名)の外来診療録を、評価者5名が病院を訪れて評価し、各病院の指導医が別に行った研修医評価との相関係数を解析した。「医療面接」(r=0.509)、「臨床推論」(r=0.585)、「概略評価」(r=0.306)等の相関は高く、「身体診察」(r=0.132)、「患者・家族への態度」(r=-0.089)の相関は低かった。主要な項目で基準連関妥当性が認められたが、診療録からは評価が困難な項目も明らかとなった。第一の計画が遅れている最大の理由は、予定していた全国の研修病院からの協力がなかなか得られない点にある。平成25年度から26年度にかけて、全国11病院(国立病院機構関門医療センター、国立国際医療研究センター病院、諏訪中央病院、倉敷中央病院、亀田総合病院、市立堺病院、佐久総合病院、聖路加国際病院、河北総合病院、聖隷浜松病院、国立病院機構東京医療センター)を訪問して協力を依頼したが、3病院からしか協力の同意が得られなかった。理由はさまざまだが、study designの不備の指摘はほとんどなく、「他の事業(Joint Commission International)との偶然の重なり」「個人情報の扱い規定の(東北大学病院との)大きな違い」など、協力病院に関わるものが多く、条件の合った協力病院を地道にさがしていくしか方法はないと考える。第二の計画が遅れている理由には、構造的な問題が含まれる。平成25年度のAMEE(ヨーロッパ医学教育学会)でofferのあった北米(米国カンザス州)の1施設の代表と、平成26年8月にミラノで開催されたAMEEで会って、1時間以上議論し、協力を要請したが、日米の病院システムの違いなどから、このままの形での実施は困難と判断された。時間をかけてじっくり進めていく必要があると認識している。医学教育学第一の計画である「全国多施設で行った場合の信頼性・妥当性検討」に関しては、基本的な計画の変更はなく、下記に記すように、計画を一部修正して1年遅れで着々と進めていく方針である。ただ、第二の計画である「多国間で行った場合の信頼性・妥当性の検討」に関しては、進捗状況と予算の関係から(第一計画を優先するため)、今年度は中止する方針となった。最初に予定していた協力病院においては、倫理委員会の承認は予定通り得られたが、電子カルテ閲覧の段階で制約が生じたため、方法(カルテ選択基準等)の変更が必要となり、実施は延期となった。全病院同時に実施する予定のため、他施設の実施も保留となった。
重度熱中症における中枢神経障害の発症機構の解明と新規予防・治療法の開発

本検討の目的は熱中症モデルにおけるneuroinflammationの病態のメカニズムを明らかにすることであった。まず本研究ではいまだ確立されていなかったマウスの熱中症モデルを開発し、生理学的評価、血液学的評価、ミネラル補充の効果について明らかにした。さらに現在は酸化ストレスの評価や水素水を用いた新規治療法の開発に向けた検討を行っている。また、熱中症モデルにおいては腸管のダメージが組織学的に強かったことから重症熱中症モデルにおけるneuroinflammationと脳ー腸管によるsystemic inflammationとの関係について再検討している。本研究は環境因子起因性疾患である熱中症が近年増加していることを踏まえ、重度熱中症の発症機構と病態について特に予後に大きく影響する脳障害を中心に詳細に検討を行うことを目的に遂行している。さらにその原因のひとつと考えられているサイトカイン・フリーラジカルの病態への関与と新規抗フリーラジカル療法である水素による新規治療法の開発について検討を行う予定である。平成26年度は熱中症モデルにおけるサイトカインや酸化ストレスの計測を行う予定であった。しかし、至適な動物モデル作成に時間がかかったために、これらの計測は次年度に行うこととした。また、熱中症による脱水が研究結果に影響する可能性について検討する目的で以下の検討を行った。【方法】雄性成熟マウス(約30g)に埋め込み型体温計挿入し継続的に体温測定(5分間隔)をおこなった。暑熱曝露3時間前から飲水制限を実施し脱水状態とした。水飲水群[(n=7)脱水負荷後、暑熱曝露直後に水を30ml/kgを経口投与],経口補水液飲水群[(n=7)脱水負荷後、暑熱曝露直後にOS-1を30ml/kgを経口投与]の2群に分け、暑熱曝露(41°C, 60分,相対湿度80±10%)をおこなった。深部体温変化(曝露時最高体温・曝露後最低体温)・正常体温復帰時間について比較・検討した。次に、別の水飲水群(n=11)、経口補水液飲水群(n=11)について同様の暑熱曝露をおこない、曝露前・直後・6時間後に採血をおこない比較・検討した。【結果】経口補水液群では水飲水群と比較して正常体温復帰時間が有意に短縮した。血液検査では経口補水液群で水飲水群と比較して暑熱曝露6時間後のHb値の有意な低下を認めた。【結論】本検討から、平成27年度からの使用する動物モデルに補水液を飲用させることを検討している。本年度は主に熱中症モデルにおける生理学的評価、血液学的評価さらにはミネラル補充の効果について検討した。本検討によってヒト熱中症と動物モデルの類似性について評価し、今年度から行われる酸化ストレスの評価や水素水を用いた新規治療法の開発に向けた準備が整った。具体的にはマウス(約30g)に埋め込み型体温計挿入し継続的に体温測定(5分間隔)をおこなった。通常水飲水群,ミネラル含有補水液飲水群の2群に分け、暑熱曝露(41°C, 60分,相対湿度80±10%)をおこなった。また、、曝露前・直後・6時間後に採血をおこない、WBC, Hb, HCT, Pltについて比較・検討をおこなった。ミネラル含有補水液群では水飲水群と比較して正常体温復帰時間が有意に短縮し、血液検査では血管内脱水予防効果を認めた。本年度より熱中症における酸化ストレスの関与と水素水の効果について検討できる準備が整ったため。熱中症モデルにおける生理学的評価、血液学的評価、ミネラル補充の効果についての検討によってヒト熱中症と動物モデルの類似性については証明された。本年度は酸化ストレスの評価や水素水を用いた新規治療法の開発に向けた検討を行った。水素水についてはより高濃度の水素水晶を考慮すべく新規水素水作成装置を導入した。その結果、水素濃度にやや安定性がなく調整を行った。その結果、研究が当初の予定より半年程度遅れている状況である。そこで1年の期間延長して引き続き当該研究を遂行していく事となった。現在は実際の水素水投与時における生理学的評価、血液学的評価を行っている。現在までの結果については、学会発表を経て論文投稿準備中である。水素水の濃度設定などについて予定外に時間がかかったために進捗は遅れているが、すでに出ている結果などについては論文作成中であり、今後の研究については概ね予定通り進行すると考えている。【本検討の目的】検討では熱中症モデルにおけるneuroinflammationの病態のメカニズムを明らかにすること、さらに現在神経保護作用を有することで注目されている水素水の熱中症モデルにおける抗酸化ストレス効果、抗炎症効果を明らかにすることが目的であった。【結果】本研究のベースとなる熱中症モデルにおける生理学的評価、血液学的評価、ミネラル補充の効果についての検討によってヒト熱中症と動物モデルの類似性については証明された。平成28年度は酸化ストレスの評価や水素水を用いた新規治療法の開発に向けた検討を行った。しかし、水素水の安定した供給方法など検討の余地があったことにより平成29年度まで研究を延長した。H29年度は脳内の酸化ストレスと水素水の効果については検討したが、現在のところ明確な結果が得られていない。【今後の展望】

熱中症モデルの重症度と神経損傷さらにはneuroinflammationとの関係性をより明らかにする必要があり、今後も継続的に同研究を進めていく予定である。一方で中等症の熱中症モデルについては作成方法は確立し、安定しており現在投稿準備中である。また、熱中症が腸管に与える影響は組織学的にも強かった。今年度以降はさらに重症熱中症モデルを作成してneuroinflammationと脳ー腸管循環によるsystemic inflammationとの関係、さらには水素水の効果や抗炎症および抗酸化作用についても脳ー腸管循環に着目して再検討を行っていく予定である。本研究は機能水によって熱中症の予防が可能かについての検討であり、地球温暖化あるいは高齢化に伴う熱中症患者の増大が予測される中、極めて重要な課題であり、今後も積極的に研究の継続を行っていく。本検討の目的は熱中症モデルにおけるneuroinflammationの病態のメカニズムを明らかにすることであった。まず本研究ではいまだ確立されていなかったマウスの熱中症モデルを開発し、生理学的評価、血液学的評価、ミネラル補充の効果について明らかにした。さらに現在は酸化ストレスの評価や水素水を用いた新規治療法の開発に向けた検討を行っている。また、熱中症モデルにおいては腸管のダメージが組織学的に強かったことから重症熱中症モデルにおけるneuroinflammationと脳ー腸管によるsystemic inflammationとの関係について再検討している。本研究の予備実験として動物モデルについてはすでに確立していたが、熱中症の重症度のターゲットを重症熱中症と考えていたため、既存のモデルを少し変更することが余儀なくされた。その結果として至適モデルの作成に時間がかかった分、当初の予定であった、各種マーカーの計測ができなかった。平成27年度以降にこれらの検討を行っていく。平成28年度は予定通りに水素水の治療効果についての検討を開始するとともに、現在行っている酸化ストレス、抗酸化マーカー、各種サイトカインの計測を継続する予定である。平成29年度は28年度後半に行う予定であった、水素水の治療効果について検討する予定である。同時に酸化ストレスマーカー、抗酸化マーカー、各種サイトカイン測定と水素水投与による影響について継続検討を行う。救急医学平成27年度より重症熱中症モデルの脳における酸化ストレス、抗酸化マーカー、各種サイトカインの計測を順次行っていく予定である。可能であれば水素水を用いた新規治療法の開発についても行っていく予定である。予定していた酸化ストレス、抗酸化マーカー、サイトカインの計測が平成28年度にずれ込んだため。今年度行う予定であった研究の中で水素水投与による検討が含まれていたが、新規水素水作成装置の条件設定などによって研究に遅れが生じたために今年度は動物実験などについては研究の期間を延長して29年度に行うことになったため。モデル動物の確立に時間がかかり予定より研究が遅れてしまったため、当初に各種サイトカインや酸化ストレスマーカーの計測にかかる費用について次年度へ繰り越されたため。昨年度に予定していた酸化ストレス、抗酸化マーカー、サイトカインの残りの計測を本年度行う予定であ。
インスリン抵抗性を基盤とする心血管病における受容体結合因子の病態生理学的意義

1型アンジオテンシンII受容体(AT1受容体)の過剰活性化は、インスリン抵抗性を基盤とする高血圧・脂質異常症・糖尿病の発症・進展に関わる。AT1受容体への新規結合分子ATRAP(AT1 receptor-associated protein)について、組織局所での発現・活性化が、インスリン抵抗性を基盤とする高血圧・脂質異常症・糖尿病の発症・進展を制御できる、との仮説を検証するべく、病態モデル動物、組織特異的ATRAP発現制御動物などをもちいて、ATRAPの病態生理学的意義を生体レベルで明らかにし、ATRAPに着目した新規分子標的治療開発に向けた多面的な基礎的知見を得ることを目指す。1型アンジオテンシンII(Ang II)受容体(AT1受容体)の過剰活性化は、インスリン抵抗性を基盤とする高血圧・脂質異常症・糖尿病の発症・進展に関わる。AT1受容体結合分子(AT1 receptor-associated protein; ATRAP)は、AT1受容体活性化の内在性の制御因子としての可能性がある。本研究では、「組織局所でのATRAPの発現あるいは活性が、インスリン抵抗性を基盤とする高血圧・脂質異常症・糖尿病の発症・進展に関与し、ATRAPの発現制御によりインスリン抵抗性を基盤とする高血圧・脂質異常症・糖尿病を制御できるか」について検討し、新規治療への可能性を探るとともにATRAPの病態生理学的意義を調べた。アディポネクチンプロモーター制御下で作製した脂肪組織ATRAP高発現マウス(TG)では高脂肪食負荷による肥満病態において、野生型マウスよりインスリン抵抗性および白色内臓脂肪(WAT)の増大・炎症が抑制されるということが明らかになった。さらに、TGマウスではWATのp38 MAPK活性化抑制とNADPH oxidase構成因子の遺伝子発現増加抑制を伴い、AT1受容体の病的活性化が抑制された可能性が示された。また、褐色脂肪組織(BAT)の機能的変化についてはATRAP発現変化による影響を認めなかった。一方、アディポネクチンプロモーター制御下Cre-loxPシステムによる脂肪組織ATRAP発現抑制マウスでは、BATのATRAP発現低下がみられたが、高脂肪食負荷の検討において対照マウスとインスリン抵抗性をはじめ糖脂質代謝の表現型について有意な差を認めず、BAT機能への影響を認めなかった。以上から、食餌性肥満病態においてAT1受容体活性化に対するATRAPの機能的役割に関しては、BATよりもWATでの影響が大きいことが示唆された。インスリン抵抗性を基盤とする高血圧・脂質異常・糖尿病の発症において重要である肥満病態におけるATRAPの機能的意義を検討し、さらに骨格筋など他のインスリン標的臓器とATRAPの機能的意義について検討をすすめている。慢性Ang II刺激などの種々の病的刺激における各臓器の糖脂質代謝に関わる機能的変化と、ATRAP発現・活性調整がもたらす病態生理学的な影響についてさらに検討していく。慢性Ang II刺激などの種々の病的刺激における各臓器の糖脂質代謝に関わる機能的変化と、ATRAP発現・活性調整がもたらす病態
ヒトゲノム構造解析

21番染色体については国際協力のもと長腕の全塩基配列を決定し、新規遺伝子98種を含む225の遺伝子を同定した。5Mb以上にわたって遺伝子がほとんど存在しない領域の発見など染色体の特色を明らかにした。また11番、18番を中心に約180Mbのドラフトシーケンスを決定し解析した。21番・22番染色体の塩基配列に基づき、多数の新規遺伝子を発見した。また、膜貫通型プロテアーゼTMPRSS3が遺伝性聾DFNB8/B10の病因遺伝子だあることを解明した。低アルブミン血症を伴う遺伝性脊髄小脳変性症、良性家族性ミオクローヌスてんかんについて、強い連鎖不平衡を示す領域を同定し、疾患遺伝子の候補領域を絞り込んだ。染色体相互転座t(5;8)8(q35;q24.1)をもつSotos症候群(脳性巨人症)患者の5q35転座切断点から同疾患の候補遺伝子(SOTOS1)を単離した。11q23領域内に共通欠失をもつ乳癌、肺癌、子宮体癌、神経芽細胞腫の各領域計6Mbについてゲノム解析を行い、合計59遺伝子を同定した。肺癌、子宮体癌において体細胞遺伝子変異を起こしている遺伝子を見出した。膵臓がんの標的領域である6q21上の1-Mbの領域、10q25-q26上の100-kbの領域の塩基配列を完全解読した。ヒト遺伝子群約7,000種類について、放射線照射によるDNA損傷にどのように応答するかをSAGE法により解析し遺伝子発現パターンデータベースを構築した。人工染色体を用いた解析から70kb以上のアルフォイドDNAは機能的なセントロメア・クロマチン構造を形成することを示した。cDNA全長シーケンスの実験データを統合、比較的ラフな誤りを含む情報から実験データの誤りを特定、改善し、フレームシフトエラーを検出、自動修正したタンパク質予測を行うコンピューターシステムを構築した。Gバンドに一致したバンドごとに異なった色調で識別できる新しい染色体カラーバンディング法、spectral color banding(SCAN)法を開発し、染色体の由来をバンド単位で同定可能にした。多チャンネルキャピラリー電気泳動装置を用いたPLACE-SSCP法を泳動担体、解析ソフトウエアの開発を通し確立した。11番染色体長腕全域のNotI制限酵素地図をリンキングクローン法にて作成し完成した。全長83メガ塩基に達し、制限酵素地図としては最長のものである。長領域のシークエンス解析を行い、以下の成果を得た。1)ヒト21番染色体のダウン症必須領域1.4Mbのシークエンスを決定し、エキソン予測プログラム及び相同性検索プログラムを用いて遺伝子の検索を行った。更に、真の遺伝子である可能性の高いものについてcDNAクローニングを行い、遺伝子の全構造を決定した。その結果7個の遺伝子が見つかり、そのうち4個は新規遺伝子であった。2)免疫グロブリンλ遺伝子、及びH鎖遺伝子領域、各lMbの塩基配列を決めた。3)6番染色体HLA遺伝子群のクラスI領域計776kbの塩基配列の決定を行い、新発現遺伝子13個、新偽遺伝子6個を含む計38個の遺伝子を同定した。

また、本領域に298個のマイクロサテライトを見出したが、これらのうちの1つのトリプレットリピート配列がMICA遺伝子のコーディング領域に存在し、その1つの多型(6回繰り返し)がベ-チエット病と強い相関を示すことを見つけた。遺伝性神経性疾患に共通する発症機構として注目されているトリプレットリピート病について、病的に伸長したトリプレットリピートを効率よく検出できる方法(direct identification of repeat expansion and cloning technique,DIRECT)を開発し、脊髄小脳変性症2型(SCA2)の原因遺伝子を同定した。福山型筋ジストロフィー原因遺伝子の解析はD9S2107を含む100kb以下の領域に限定した。がん抑制遺伝子の単離をLOHの解析を中心に進め、乳がん等で詳細な共通欠失領域(3p21)をみつけた。ゲノム解析技術では、5′Cap構造に着目し、完全長cDNAを選択的に捕捉する方法論を開発した。またSSCP法の改良を行い、800bpまでのDNA断片中の変異を効率よく検出する系を確立した。11番染色体長腕全域のNotI制限酵素地図を基に、IDDM4,SCA5等の遺伝病がマップされている11q13領域の一部、約6MbのコンティグマップをP1,PAC,BACクローンを用いて作製し完成させた。その他、T細胞レセプターα/γ鎖遺伝子(1Mb)、14番染色体q32.1領域(約2Mb)、21番染色体21qcen-D21S190約2Mb領域等のコンティグ化を行った。ヒト21番染色体のシークエンス地図の作成を目指し、昨年度のダウン症必須領域(1.5Mb)に加え、本年度はSOD-1からAML-1に至る3.3Mbのシークエンス地図を完成させた。ヒト抗体VH遺伝子座の全塩基配列957kbを決定し、123個のV遺伝子断片、26個のD遺伝子断片を同定した。ヒトMHCクラスI領域1.3Mbについて塩基配列の決定を行い、34個の遺伝子を同定し、ベーチェット病の原因遺伝子を約100kb領域内に絞りこんだ。ゲノムシーケンシングを基盤として自己免疫疾患APECEDの原因遺伝子AIREを発見した。ポジショナルクローニング法により、9q31に存在する福山型先天性ジストロフィー原因遺伝子本体を単離し、ほとんどの患者は福山型新規遺伝子へのレトロトランスポゾンの挿入変異を持つことを明らかにした。t(2;8;3)を持つてんかん・自閉症患者の転座点の解析を行い、3番染色体上の転座点より遺伝子を単離した。この遺伝子はカルシウムイオンチャンネルと相同性を持つ。21番染色体セロトロメアα21-1領域由来YACをヒト培養細胞へ導入して形成された人工染色体の解析から、α21-1がセントロメア機能配列であることが判明した。高度に自動化された変異検出法として、キャピリ-電気泳動装置を用いたPLACE-SSCP法を確立した。1枚のプレートでバキューム操作のみで、プラスミドDNAを調整できる原理を開発し、それを応用して高速かつ大量にプラスミドを処理することができる高速大規模プラスミド調整機を作製した。DNAfiberFISH法で広範囲に分布する融合遺伝子の切断点を簡便、迅速なmappingを可能にした。ヒトllq22-23領域の一部、約15Mbの微細マップの作製とPACによるコンティグ化を行った。
Dopa含有新規内因性フェノールオキシダーゼ阻害ペプチドの機能構造解析

動物界に存在する蛋白質修飾構造として初めて見出されたフェノールオキシダーゼインヒビター(POI)に存在するDopa残基の役割を、その立体構造に対する影響も含めて明らかにする事を目的とし、そのジスルフィド結合架橋様式の決定、核磁気共鳴法を用いた構造決定、及び生化学的、有機化学的手法と計算機実験を組み合わせたPOIの構造的特性に関する研究を行なった。まず、NMR測定による3次元構造解析に先立ち、未修飾ペプチドに相当する[Tyr^<32>]POIのジスルフィド結合架橋様式の決定を行なった。すなわち、段階的酵素消化及びジスルフィド結合の部分還元アルキル化を併用し、酵素消化によって切断が困難である隣接Cys残基を含む2組のジスルフィド結合は、新規ジスルフィド結合架橋法にて合成したフラグメントペプチド標品を、酵素消化物と比較することにより同定し、本分子のジスルフィド結合架橋様式が、シスチンノット構造ファミリーに分類される魚食貝や蜘蛛の毒ペプチドと同一のトポロジーである事を明らかにした。次に高分解能NMR測定により得た結果を、今回明らかにした分子内ジスルフィド結合架橋様式を合わせて解釈する事により、その立体構造の解明も行い、dopa残基周辺に新規構造モチーフを見出した。in vitroでのリフォールディング実験において、未修飾残基(Tyr)を含むペプチドは妥当な回収率でnative POIに相当する単一の生成物を与えたのに対し、32位にdopa残基を有するペプチドを用い場合、天然物と一致しない複数のミスフォールドした生成物を与える事、又dopa残基を化学的に修飾する事によりこの性質が打ち消される事から、POIの機能を担う必須の残基であるdopa残基は、単なる翻訳後修飾に止まらず、合目的な機能構造構築のための鍵を握る事が考えられ、現在そのフォールディング過程を明らかにすべく実験を進めている。本年度は、フェノールオキシダーゼインヒビター(POl)に特異的なDopa残基の役割を明らかにする事を目的とした、高分解能NMR測定による3次元構造解析を行うにあたり、その対照となるべき未修飾ペプチドに相当する[Try^<32>]POlのジスルフィド結合架橋様式の決定を行ない、生化学的、有機化学的手法と計算機実験の組み合わせによりPOlの構造的特性に関して知見を得ることを試みた.[Tyr^<32>]POlは、確立した合成法に基づき調製し、これを用いて分子内ジスルフィド結合架橋様式を決定した。in vitroでのジスルフィド結合の再生を伴うリフォールディング実験において、[Tyr^<32>]POlは妥当な回収率でnative POlに相当する単一の生成物を与えたのに対し、32位にドーパ残基を有するペプチドを用いた実験では、天然物と一致しない複数のミスフォールドした生成物を与えた。架橋様式の決定は、段階的酵素消化及びジスルフィド結合の部分還元アルキル化を併用することにより行った。酵素消化によって切断が困難である隣接するCys残基を含む2組のジスルフィド結合は、新規ジスルフィド結合架橋法にて合成したフラグメントペプチド標品を、酵素消化物と比較することにより同定した。驚くべき事に、解析された分子内のジスルフィド結合架橋様式は、シスチンノット構造ファミリーに分類される魚食貝や蜘蛛の毒ペプチドと同一のトポロジーを有していた。さらに、決定されたジスルフィド結合架橋様式を束縛因子として考慮した分子動力学、及びエネルギー極小化計算によりPOlの分子構造を推定した。その結果、POlはインヒビター型シスチンノット構造ファミリーに属することが示唆された。このことは、POlが、イエバエ以外にも広い生物種にわたって存在する可能性を示唆するとともに、PO阻害以外の機能を有する可能性を示唆するものと考えられる。
慢性炎症における非翻訳RNAによるマクロファージダイナミクス制御機構の解明

マクロファージは心血管病の慢性炎症プロセスの進展に中心的な役割を果たす。本研究計画では、慢性炎症においてマクロファージを制御するncRNAを同定し、その機能を解析することを目的として検討を進めた。その結果、これまで報告されていない長鎖非コードRNA(lncRNA)を1000種以上同定した。また、多くのlncRNAがPU.1に結合することを見いだした。特に2種のlncRNAについて、マクロファージのLPS刺激における応答を制御することを見いだした。これらのlncRNAはin vivoにおいても、傷害刺激によって発現が誘導されることから、病態におけるマクロファージ機能を制御している可能性が高い。マクロファージはダイナミックに機能と形質を変化させ、心血管病の慢性炎症プロセスの進展に中心的な役割を果たす。しかしながら、そのダイナミズムを制御する分子機構はよく分かってない。非翻訳RNAは遺伝子発現に多面的に作用し、細胞機能を制御することが推測されているが、長い非翻訳RNA(lncRNA)の機能はほとんど分かっていない。短いmiRNAについてもマクロファージにおける役割は分かっていない。本研究計画では、慢性炎症においてマクロファージのダイナミクスを制御するncRNAを同定し、その機能を解析することを目的として検討を進めた。1グローバルなncRNAの同定とマクロファージ形質変化に伴う発現変化の解析を行った。培養マクロファージを刺激し発現RNAをRNA-seqならびにmiRNA arrayで解析した。2Ago2及びPU.1に結合するRNAをRIP-seq法によりグローバルに解析した。その結果、多くのlncRNAがPU.1に結合することを見いだした。3同定したmiRNA、lncRNAの機能解析をノックダウンと過剰発現を用いて進めた。4in vivoにおける意義の解析を進めるため、腎障害モデル、心不全モデル等のin vivoモデルにおける非コードRNAの発現を検討した。その結果、in vitroの系で同定した機能性lncRNAが組織傷害モデルでも発言していることを確認した。in vivoにおいても、傷害刺激によって発現が誘導されており、マクロファージ機能を制御している可能性が高い。
抗癌剤を目指したホスファターゼ阻害剤の開発

本研究は近年、様々な疾患との関連が明らかにされつつあるホスファターゼの中でも特にDNAダメージ応答において重要な役割を果たすPPM1D(Wip1)をターゲットにした非ペプチド性阻害剤の開発を目指したものである。非ペプチド性阻害剤は申請当時に最も高い阻害活性を示したチオエーテル環化ペプチドcyclo(F-pS-I-pY-DDC)とPPM1Dのドッキングモデルに基づきデザインした。その際、分子モデリングを利用して環状ペプチドとの立体構造を比較し、また構造最適化のスッテプにおける化学合成法を考慮して、最終的に2つの化合物をリード阻害剤としてデザインした。リード化合物の合成はコンビナトリアルケミストリーに最適な固相合成法を選択した。いずれのリード化合物も脱水縮合反応によるペプチド結合形成、還元アミノ化による2級アミンの形成、2級アミンとイソシアネートとの反応によるウレア結合形成で合成される。Fmoc-Ser(PO(OH)(OBzl))-OHのカルボン酸部位をCurtius転移反応を利用してイソシアネート体の合成を試みたが、酸アジド体の加熱還流時にリン酸基が脱離が認められたため、合成最終段階でリン酸基を導入する方法へと変更した。Kaiserテスト及びChloranilテストの他、各合成段階の樹脂を一部脱樹脂し、逆相HPLCにより反応をモニターした。合成の各スッテプでHPLCプロファイル上で異なる保持時間のメインピークが観測された。リン酸基修飾だけを残した化合物においても同様にメインピークが観測されたため、MALDI-TOF MSにより質量分析を行ったが計算値と一致するピークは観測されなかった。今後の課題としてESI-MSなど他のイオン化法による質量分析やMS/MSによる化学構造分析が必要と考えられた。