hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
細菌叢と真菌叢の統合的解析で切り拓くサイレージ微生物制御の新機軸

アンプリコン解析、予測メタゲノム、ネットワーク解析という新しいアプローチで、サイレージの微生物制御に革新的な知見を提供する。実態調査を基本に研究を進め、細菌と真菌を組合わせた混合微生物製剤のパイロット試験まで実施する。微生物叢の統合的理解およびそれを基にしたサイレージ調製の高度化手法を提示することが到達目標である。
ヒトとチンパンジーの母子関係における「葛藤」にかんする比較発達研究

本研究は、比較発達心理学的研究であり、ヒトに特有な母子相互作用の生成過程とその進化的基盤を解明に寄与することを目的としている。ヒト母子とチンパンジー母子との相互交渉の発達を、自然および直接、かつ多面的に比較しようとするものである。特に、母子関係における「葛藤(コンフリクト)」という側面に焦点を当て、ヒト健常児、ヒト障害児、チンパンジー健常児とその母親の間で展開されるコミュニケーション行動を比較する。平成19年度は、当初の計画では、ヒト障害児母子とチンパンジー障害児母子ヒトにおける「葛藤」に関する縦断的研究を実施する予定だったが、平成17年度に対象としていたチンパンジー障害児が死亡したため、観察は中断した。ヒト障害児母子の観察は19年度後期より開始することができたが、現在も継続中である。また、これまでに引き続き、ビデオ記録をもとに母子相互交渉について行動学的に徹底した定性的記述をおこなった。ヒト乳幼児とその母親、チンパンジー乳幼児とその母親、各3組の母子について収集したビデオ記録の中から「母子コンフリクト」場面を抽出し、データ分析を継続している。「母子コンフリクト」場面における情動的コミュニケーション行動、特に、乳幼児の「むずかり」や「泣き」といった苦痛な表情や発声に着目し、分析を進めた。こうした情動的コミュニケーション行動から、乳幼児の攻撃性や回避性、指向性の増加や減少、母子関係の変化におけるダイナミズムを捉え、母子それぞれのコンフリクト行動のレパートリーを明らかにした。平成17年度および18年度で遂行した研究の結果を比較し、こうした結果を平成19年5月に人間の心の霊長類的起源-比較認知科学国際シンポジウム2008-で発表予定である。本研究は、比較発達心理学研究であり、ヒトに特有な母子相互作用の生成過程とその進化的基盤の解明に寄与することを目的としている。ヒト母子とチンパンジー母子との相互交渉の発達を、自然、直接かつ多面的に比較しようとするものである。特に、母子関係における「葛藤(コンフリクト)」という側面に焦点をあて、ヒト健常児、ヒト障害児、チンパンジー健常児とその母親の間で展開されるコミュニケーション行動を比較する。平成17年度は、ヒトおよびチンパンジー健常児の母子間における「葛藤」にかんする縦断的観察をおこなった。ヒト母子の観察は、中部学院大学子育て支援センターに通う母子に協力を得て、「身体接触場面」、「物を介した場面」の観察を重点的におこなった。両場面共に定期健診と発達相談前の待ち時間を利用して、母子のみが過ごす部屋において、(1)母親が子どもを抱いている状態、(2)母親が子どもを抱いていない状態、(3)母親のみにおもちゃを与えた場面、(4)子どものみにおもちゃを与えた場面について各5分間ビデオ記録をおこなった。チンパンジー母子の観察は、京都大学霊長類研究所の共同利用研究として遂行した。生後0歳から蓄積されてきた自然観察によるビデオ記録から、「摂乳場面」、「身体接触場面」を抽出して母子相互作用にかんする行動目録を作成した。生後4ヶ月間の摂乳場面における頻度や持続時間の結果をMizuno et al.(2006)にまとめた。また、生後1歳から4歳における摂乳場面を抽出し、(1)摂乳開始の合図、(2)母子接触の開始と終了時間、(3)摂乳回数、(4)摂乳開始と終了時間、(5)摂乳終了の合図、(6)摂乳状況、(7)アイコンタクトの有無について分析した。その結果、発達に伴う摂乳頻度および摂乳時間の減少がみられ、また、生後2年頃からは摂乳頻度と母親の生理周期との関係性が明らかとなった。平成18年度は、昨年度に引き続き、ビデオ記録をもとに母子相互交渉について行動学的に徹底した定性的記述をおこなった。また、これまでに蓄積したビデオ記録をもとにその過程について詳細に記述した。ヒト乳幼児とその母親、チンパンジー乳幼児とその母親、各3組の母子について、(1)母親のみに物(おもちゃ等)を与えた場面、(2)子どものみに物を与えた場面について各5分間ビデオ記録を月12回ビデオ記録を実施した。また、了解を得たヒト母子については、それぞれの自宅で実験および観察を実施した。上記の手続きで収集したビデオ記録の中から「母子コンフリクト」場面を抽出し、データ分析を継続している。こうした結果を、平成18年7月にはメルボルンで行われたInternational Society for the Study of Behavioral Developmentで発表した。

ヒト母子とチンパンジー母子との相互交渉の発達を、自然および直接、かつ多面的に比較しようとするものである。特に、母子関係における「葛藤(コンフリクト)」という側面に焦点を当て、ヒト健常児、ヒト障害児、チンパンジー健常児とその母親の間で展開されるコミュニケーション行動を比較する。平成19年度は、当初の計画では、ヒト障害児母子とチンパンジー障害児母子ヒトにおける「葛藤」に関する縦断的研究を実施する予定だったが、平成17年度に対象としていたチンパンジー障害児が死亡したため、観察は中断した。ヒト障害児母子の観察は19年度後期より開始することができたが、現在も継続中である。また、これまでに引き続き、ビデオ記録をもとに母子相互交渉について行動学的に徹底した定性的記述をおこなった。ヒト乳幼児とその母親、チンパンジー乳幼児とその母親、各3組の母子について収集したビデオ記録の中から「母子コンフリクト」場面を抽出し、データ分析を継続している。「母子コンフリクト」場面における情動的コミュニケーション行動、特に、乳幼児の「むずかり」や「泣き」といった苦痛な表情や発声に着目し、分析を進めた。こうした情動的コミュニケーション行動から、乳幼児の攻撃性や回避性、指向性の増加や減少、母子関係の変化におけるダイナミズムを捉え、母子それぞれのコンフリクト行動のレパートリーを明らかにした。平成17年度および18年度で遂行した研究の結果を比較し、こうした結果を平成19年5月に人間の心の霊長類的起源-比較認知科学国際シンポジウム2008-で発表予定である。
活性・抑制型反応拡散方程式系の定常解構造に関する研究

FitzHugh-Nagumo型楕円型方程式系の境界値問題に関連して次の2つについて研究を行った.数直線上の区間(0,1)上の境界値問題-(ε^2)u_{xx}=u(a(x)^2-u^2)を考える.境界条件はNeumann境界条件で,a(x)>0なる関数で,ε>0は十分小さい定数.非定常問題で拡散を無視した場合の常微分方程式の考察から,a(x)と-a(x)は2つの安定な状態を表し,非線形項は双安定と呼ばれる.a(x)が定数関数の場合,安定な定常解は定数しかないということが知られていたが,a(x)が定数でなく,有限個の極小点をもち,各極小点で2回微分が0でない場合,2000年にNakashimaによって,任意の極小点のまわりに遷移層をもつ解の存在が示されている.ここで遷移層とは,この場合,非常に狭い範囲で解の値が-a(x)からa(x)あるいはa(x)から-a(x)に変化する形状をいう.そこで,本研究ではa(x)が極小値をある区間Iでとっている場合,区間Iのまわりに遷移層をもつ解を構成できるかという問題について研究を行った.本研究では変分方に基づいた優解・劣解の方法を用いることにより,遷移層をもつ解の存在を示すことができた.2.unbalancedな双安定反応拡散方程式の定常問題原点中心の単位球上で境界値問題-(ε^2)Δu=h(|x|)^2(u-a(|x|))(1-u^2)をNeumann境界条件で考える.同じくε>0は十分小さく,h>0,-1<a<1である.以前の研究により,a(r)=0となるrの集合の前後でaが符号を変えている場合,対応するエネルギーを最小にする解は,球対称であり,その集合のまわりに-1から1あるいは1から-1へ狭い範囲で急激に値をかえる遷移層を持つことが知られていた.本研究では,ある区間I上でa(r)=0となり,その区間の前後でaが符号を変えている場合.遷移層ができる位置に関して,h(r)がどのような影響を受けるかに関する研究を行ったところ,r^{N-1}h(r)をその区間Iで一番小さくするrのまわりに遷移層ができることを示すことができた.FitzHugh-Nagumo型楕円型方程式系の境界値問題に関連して次の2つについて研究を行った.数直線上の区間(0,1)上の境界値問題-(ε^2)u_{xx}=u(a(x)^2-u^2)を考える.境界条件はNeumann境界条件で,a(x)>0なる関数で,ε>0は十分小さい定数.非定常問題で拡散を無視した場合の常微分方程式の考察から,a(x)と-a(x)は2つの安定な状態を表し,非線形項は双安定と呼ばれる.a(x)が定数関数の場合,安定な定常解は定数しかないということが知られていたが,a(x)が定数でなく,有限個の極小点をもち,各極小点で2回微分が0でない場合,2000年にNakashimaによって,任意の極小点のまわりに遷移層をもつ解の存在が示されている.ここで遷移層とは,この場合,非常に狭い範囲で解の値が-a(x)からa(x)あるいはa(x)から-a(x)に変化する形状をいう.そこで,本研究ではa(x)が極小値をある区間Iでとっている場合,区間Iのまわりに遷移層をもつ解を構成できるかという問題について研究を行った.本研究では変分方に基づいた優解・劣解の方法を用いることにより,遷移層をもつ解の存在を示すことができた.2.unbalancedな双安定反応拡散方程式の定常問題原点中心の単位球上で境界値問題-(ε^2)Δu=h(|x|)^2(u-a(|x|))(1-u^2)をNeumann境界条件で考える.同じくε>0は十分小さく,h>0,-1<a<1である.以前の研究により,a(r)=0となるrの集合の前後でaが符号を変えている場合,対応するエネルギーを最小にする解は,球対称であり,その集合のまわりに-1から1あるいは1から-1へ狭い範囲で急激に値をかえる遷移層を持つことが知られていた.本研究では,ある区間I上でa(r)=0となり,その区間の前後でaが符号を変えている場合.遷移層ができる位置に関して,h(r)がどのような影響を受けるかに関する研究を行ったところ,r^{N-1}h(r)をその区間Iで一番小さくするrのまわりに遷移層ができることを示すことができた.
統合失調症の前頭葉病変の成立機序とその治療薬についての基礎的・臨床

1)思春期前後(5,8,及び11週令)のラット前頭葉組織の遺伝子発現を、RT-PCR法で検討した。その結果、髄鞘関連遺伝子の発現について、統合失調症と同じ方向の変化が観察された(Matsuoka et al,2010;松岡ら,2010)。2)幼若期にグルタミン酸受容体の1つであるNMDA受容体に拮抗作用を有するMK-801を投与して、思春期前後に、プレパルス抑制と前頭葉GABAニューロン数の測定を行った。その結果、プレパルス抑制の障害(Uehara et al,2009,2010)と前頭葉GABAニューロン数の減少が認められた。動物モデルに対して、新薬候補物質を投与し、プレパルス抑制障害が改善し(Seo et al,2008)、前頭葉GABAニューロンの減少も改善することを見出した(投稿中)1)思春期前後(5,8,及び11週令)のラット前頭葉組織の遺伝子発現を、RT-PCR法で検討した。動物モデルに対して、新薬候補物質を投与し、プレパルス抑制障害が改善し(Seo et al,2008)、前頭葉GABAニューロンの減少も改善することを見出した(投稿中)(1)思春期前後の前頭葉の発達に伴う遺伝子発現の変化:5, 8,及び11週令のラット前頭葉の組織の遺伝子発現を、RT-PCR法で検討した(論文準備中)。その結果、とくに髄鞘関連遺伝子についての有意な発現の変化が認められた。ついで、統合失調症モデルラットについても検討を進めている。(2)前頭葉の組織学的変化を改善し得る治療薬の検討:まず、動物モデルの開発を行った。幼若期(生後710日)にNMDA受容体に拮抗作用を有するMK-801を投与して、思春期前後、すなわち、生後35-38日と56-59日に、プレパルス抑制の測定を行った。その結果、プレパルス抑制の障害が認められ、この結果を論文として公表した。(1)思春期前後の前頭葉の発達に伴う遺伝子発現の変化:5,8,及び11週令のラット前頭葉の組織の遺伝子発現を、RT-PCR法で検討した(論文投稿中)。(3)上記のモデルラットについて、神経保護作用のある新規薬剤を投与して、前頭葉のGABA神経細胞数の変化を計測した。結果は、集計中である。(1)思春期前後の前頭葉の発達に伴う遺伝子発現の変化:5,8,及び11週令のラット前頭葉の組織の遺伝子発現を、RT-PCR法で検討した。その結果、とくに髄鞘関連遺伝子の発現について、統合失調症と同じ方向の変化が発達に伴って観察された(Matsuoka et al, 2010;松岡ら,2010)。これは統合失調症の神経発達障害仮説を支持する所見である。(2)動物モデルの開発:神経発達障害仮説とグルタミン酸受容体機能低下仮説に基づいて、統合失調症の動物モデルの開発を行った。幼若期(生後710日)にグルタミン酸受容体の1つであるNMDA受容体に拮抗作用を有するMK-801を投与して、思春期前後、すなわち、生後35-38日と56-59日に、プレパルス抑制と前頭葉GABAニューロン数の測定を行った。その結果、統合失調症患者と同様のプレパルス抑制の障害、および前頭葉GABAニューロン数の減少が認められた。この結果の一部は論文として公表し(Uehara et al, 2009, 2010)、その一部は、現在、投稿中である。これらの結果は、本動物モデルの妥当性を示すと考えられる。(3)動物モデルに対して、新薬候補T-817を投与し、プレパルス抑制障害が改善することを観察した(Seo et al, 2008)
外国人患者へのケアの現場で何が起きているのか？－日本人看護師の感情体験の分析－

本研究の目的は,外国人患者のニーズと彼らへのケアに伴う日本人看護師の感情体験を明らかにし,両者の関係構築の実態を浮き彫りにすることである.文献検討では,文化的な介入プログラム(教育介入,QOLの向上を目的とした直接介入,長期に渡る服薬管理)において,知識量の増加,生理学的所見の改善,服薬アドヒアランスの向上がみられることが明らかとなった.在日外国人を対象としたグループインタビューでは,外国人に対する受診システムの情報提供の不備,看護師・医師の先入観の存在等が明らかとなった.日本人看護師の感情体験については分析途中であるが,看護師の批判的思考態度と外国人患者に対する感情との関連が示唆された.本研究の目的は、外国人患者へのケアに伴う日本人看護師の感情体験を分析し、外国人患者と日本人看護師間の関係構築プロセスの実態を解明することである。研究方法は、野中・樋口(2010)が示した在日外国人と看護師の関係構築プロセス(図1)に着目し、看護師が外国人患者との関わりをためらう段階に焦点を当て、帰納的にアプローチを行う。具体的には、エスノグラフィーの手法を用いる。感情に関する研究の多くは、実践を振り返って想起された体験をインタビューもしくは調査用紙よって把握し、分析する方法であるが、これらの方法は、自尊心や看護のアイデンティティに関わる負の感情のデータは語られにくいこと、時間の経過とともに忘れてしまう感情をキャッチすることが困難であることが予想された。認知に焦点を当てた方法だけでは実践の現場を捉えることは難しいと考えたからである。インタビューのほか、参加観察を行うことで、可能な限りリアルタイムに近い感情をキャッチする。フィールドワークにおいては、現場の具体的な事象を概念で説明することが必要となる。そのため、初年度は、関連する用語の概念分析を行っている。文化を考慮した看護(Culturally Congruent Care)の概念モデルを示した藤原(2008)は、先行要件や概念属性に価値観や文化の「違い」を挙げている。この「違い」を認識する過程には、看護師が相手の文化的背景をどのように捉えているかを知る必要があるが、文化的背景が何を指すのか、その概念は様々であり、疾患をもつこと自体を文化的背景として捉えている研究もみられた。そこで、Rodgers(1989a)のアプローチを用い「文化的背景」の概念分析を行うべく、文献の精読中である。本研究の目的は、外国人患者へのケアに伴う日本人看護師の感情体験を分析し、外国人患者と日本人看護師間の関係構築プロセスの実態を解明することである。研究方法は、野口・樋口(2010)が示した在日外国人と看護師の関係構築プロセスに着目し、看護師が外国人患者との関わりをためらう段階に焦点を当て、帰納的にアプローチを行う。当初、エスノグラフィーの手法を用いて調査を行う予定であったが、観察やインタビューでは、タイムリーなデータはキャッチできるものの、自尊心や看護のアイデンティティに関わる負の感情は語られにくいことが予想されたため、量的調査を行うこととした。今年度は「看護における文化の概念および関連概念の文献検討」を行った。文献検討では、文化的介入がどのような成果をもたらしているのかに着目し、CINAHLとCOCHRANEをデータベースとして医療・看護における文化の概念について分析を行った。対象文献は、ほぼすべてがRandomized Controlled Trialであった。介入内容は、知識提供などの教育介入プログラム、生活習慣の改善やQOLの向上を目的とした直接介入プログラム、長期に渡る服薬管理における介入であった。教育介入プログラムでは、対象者と同一の言語による知識・教材提供、伝統的慣習や文化的価値観を尊重した関わりがあった。直接介入プログラムや服薬管理では、対象者と同一文化の出身者によるカウンセリングやグループワーク、セッションが行われていた。また、教会など文化的コミュニティ地域での介入が行われていた。こうした文化的介入の成果として、知識量の増加、生活行動の変容に伴う生理学的所見の改善、服薬アドヒアランスの向上が認められた。文献検討の結果、成果が挙げられた文化的介入の内容から文化の概念や関連概念の内容が明らかになった。研究結果の詳細は、2015年ICNにて発表予定である。本研究の目的は、外国人患者へのケアに伴う日本人看護師の感情体験を通し、外国人患者と日本人看護師間の関係構築プロセスの実態を解明することである。研究方法は、野口・樋口(2010)が示した在日外国人と看護師の関係構築プロセスに着目し、看護師が外国人患者との関わりをためらう段階に焦点を当て、帰納的にアプローチを行った。当初、参加観察を行う予定であったが、自尊心や看護のアイデンティティに関わる負の感情は語られにくいことが予想されたため、調査方法を再検討した。研究1.日本の看護師による外国人患者への看護の現状を患者の立場から明らかにする在日外国人22名を対象に、グループインタビューを実施した。1グループ56名、在日期間は19年、出身国はイタリア、カナダ、韓国、ジャマイカ、タイ、ロシア、ウズベキスタン、中国、トルコ、フィリピン、フランス、マレーシア、アメリカ、ポーランド、インド、カナダであった。インタビューの結果、在日外国人患者は、言語の問題に加え、母国と異なる日本の受診システムにより効率的な受診行動をとることが困難な状況にあることから、言語への対応に加え、日本の受診システムの理解に向けた情報的支援の必要性が明らかとなった。

また、日本の医師・看護師と、在日外国人患者との間には先入観に基づくコミュニケーションバリアが存在していたことから、患者への先入観を排した積極的な関わりによってコミュニケーションバリアを解放する必要が示唆された。研究2.日本人看護師による外国人患者への看護を看護師の感情の視点から明らかにする外国人患者への看護を経験した看護師を対象に、質問紙による全国調査を実施した。外国人患者受入認証医療施設や在留外国人の多い自治体に設置の病院を中心に、155施設に研究協力依頼を行い、45施設から承諾が得られた。質問紙は1253件配布し、584件を回収、データを分析中である。本研究の目的は,外国人患者のニーズと彼らへのケアに伴う日本人看護師の感情体験を明らかにし,両者の関係構築の実態を浮き彫りにすることである.文献検討では,文化的な介入プログラム(教育介入,QOLの向上を目的とした直接介入,長期に渡る服薬管理)において,知識量の増加,生理学的所見の改善,服薬アドヒアランスの向上がみられることが明らかとなった.在日外国人を対象としたグループインタビューでは,外国人に対する受診システムの情報提供の不備,看護師・医師の先入観の存在等が明らかとなった.日本人看護師の感情体験については分析途中であるが,看護師の批判的思考態度と外国人患者に対する感情との関連が示唆された.研究方法の検討にともない、当初は時間を要したが、文献検討の成果により次の調査の準備にとりかかることができている。看護学質問紙調査票の項目の検討を行い、全国の医療機関に勤務する看護師を対象とした調査を実施する予定である。また、6月のICN(ソウル)にて文献検討の成果発表を行う。当初は、フィールドアクセスの準備までを予定していたが、概念分析に時間を要しているため。研究方法を再検討した結果、研究STEPの順序に変更が生じ、予定していたフィールドワーク(インタビュー)を延長したため。概念分析では、関連学問分野も網羅し、概念間の関連性を検討する。その結果を踏まえ、フィールドワークについて、データ収集のスケジュールを組み直す予定である。研究STEPの変更により、量的調査を実施後、フィールドワーク(インタビュー)を実施する。したがって、昨年度から内容を検討している調査票を完成させ、発送等量的調査の準備を継続する。フィールドワークに伴い、データ収集に関連した機器の購入を予定していたが、フィールドへのアクセス時期が予定よりも延長され、備品の購入予定が延期されたため。研究対象フィールドの確定後に次年度予算と併せてデータ収集・管理に必要なパソコンおよび周辺機器を購入予定である。また、フィールドアクセスのための旅費が必要となる。
粘菌の新奇遺伝子(dia1,dia2)を用いた,増殖/分化の切り換え機構の解明

1.dia1に関する形質転換体の解析から、dia1の機能とcAMPシグナル伝達系との間には負のフィードバックが成立することがわかった。この結果から、DIA1はPS点からの分化の進行にブレーキをかけ、すべての細胞を形態形成に参加させる役割を担っているのではないかと推測される。そして、DIA1とcAMPシグナル伝達系は負のフィードバック関係にあり、PS点特異的に発現する遺伝子の多くが分化に促進的であることとは対照的であり、PS点での分子機構に新たな視点が与えられた。2.アンチセンスRNAによるdia2発現抑制株(dia2^<AS>細胞)では細胞集合に顕著な異常が観察される。しかしながら、この発生異常はcAMPのパルスによって救済できた。これによって、DIA2が粘菌細胞の集合期におけるcAMPシグナル伝達系において重要な役割を果たすことが明らかにされた。DIA2タンパク質は細胞内において小胞に局在していることが判明し、DIA2の機能が集合期におけるcAMP分泌である可能性が示唆された。3.dia1遺伝子のプロモーターは興味深い特徴をもち、fkbp2遺伝子と対をなしてプロモーター領域を共有し、このプロモーター領域は増殖/分化の切り換えに伴って転写方向を切り替えていた。EMSAとプロモーターデリーションによる解析の結果、増殖期と分化期においてこのdia1/fkbp2プロモーター領域には異なるDNA結合タンパク質が結合すること、そしてその標的配列はAAACTGATTAGCTCGATCCCCTであることを突き止めた。なお、この領域は増殖期においてfkbp2遺伝子の発現を活性化する機能をもつ。さらに、fkbp2転写開始点から118bp上流域がfkbp2とdia1の発現に必須であることが明らかとなった。4.dia1/fkbp2プロモーターの特徴を利用したマーキングシステムの確立によって粘菌細胞の増殖から分化への状態変化を可視化することに成功した。このシステムを用いた実験からアデニル酸シクラーゼ(ACA)、三量体Gタンパク質βサブユニット(Gβ)の増殖/分化の切り換えにおける新奇の役割を見い出した。本年度においてはdial遺伝子のプロモーター領域の解析において大きな進展があった。細胞性粘菌のゲノムプロジェクトの進行に伴い、プロモーター領域を含むdialの近傍配列が明らかにされた。詳細な調査の結果、dialは別の遺伝子(fkbp2)とプロモーター領域(およそ600bp)を挟み、かつ5'末端を向かい合わせる形で存在していた。この構成はいわゆる双方向性のプロモーターによく見られるものであり、一般にこの種のプロモーターによって制御を受ける両側の遺伝子は似通った発現様式を示すことが知られている。そのため、dialとfkbp2の発現との関連性に興味を持ち、粘菌細胞の増殖/分化の切り換えの際における両者の発現について調査した。驚くべき事に、fkbp2の発現は増殖期特異的であり、分化の開始に伴い著しく減少していく一方、分化特異的な発現を示すdialはfkbp2の発現の減少とは全く逆に分化の開始とともに発現量は増大していた。すなわち、両遺伝子の発現は粘菌の増殖/分化の切り換えと共に切り換えられていることがわかった。ゲルシフトアッセイをつかってfkbp2/dialプロモーター領域に結合するタンパク質を調査したところ、粘菌細胞の増殖期と分化期において異なるDNA結合タンパクがプロモーター領域に結合することが確認できた。さらにそれらのタンパク質がプロモーター内において高度に保存されている反復配列(AAACTGATTAGCTCGATCCCCT)に結合することを明らかにした。私の研究しているもう一つの遺伝子、dia2の解析については、アミノ酸配列から小胞体移行シグナルを持つことは推測されていた。しかしながら、実際に小胞体へ行くのか移行したとしてもその後どのような挙動を示すのか判然としていなかった。今年度になり、DIA2-GFP融合タンパク質を細胞性粘菌内で発現させる事に成功したのでその挙動をGFPの蛍光を指標にして調べてみた。その結果、DIA2-GFP融合タンパク質は細胞外に分泌されている事がわかった。

さらに、fkbp2転写開始点から118bp上流域がfkbp2とdia1の発現に必須であることが明らかとなった。4.dia1/fkbp2プロモーターの特徴を利用したマーキングシステムの確立によって粘菌細胞の増殖から分化への状態変化を可視化することに成功した。このシステムを用いた実験からアデニル酸シクラーゼ(ACA)、三量体Gタンパク質βサブユニット(Gβ)の増殖/分化の切り換えにおける新奇の役割を見い出した。
GaNバルク単結晶へのZnO薄膜の全方位的エピタキシャル電析

様々な結晶面のシリコン高ドープ導電性窒化ガリウム(GaN)バルク単結晶を回転ディスク電極に設置し、亜鉛塩水溶液中の溶存酸素の還元反応により、酸化亜鉛(ZnO)をヘテロエピタキシャル電析することを試みた。各GaN電極のKCl水溶液(70°C)中でのI-V曲線より、GaNの酸素還元反応(ORR)に対する活性は、(10-11)>(1-100)〓(11-20)>(10-12)>(10-13)>>(0001)の序列であることがわかった。一方、塩化亜鉛を含む水溶液中で各GaN単結晶上にZnOを電析したところ、いずれのGaN単結晶上でもZnOがヘテロエピタキシャル成長していることがわかった。ZnO(11-22)面に対するXRDωスキャンより、そのエピタキシーは(1-100)>>(10-11)〓(10-13)>(11-20)>(10-12)>(0001)の序列で、ほぼORRに対する電極活性の序列に沿い、ORRに対する活性の高い電極であるほどZnOエピタキシーが向上することがわかった。また、高い過電圧では核密度が上昇するものの、ランダムに析出しやすくなることがわかった。GaN(0001), GaN(1-100)およびGaN(11-20)バルク単結晶上での酸素還元反応に対するI-V曲線を測定し、70°Cにおける標準反応速度定数(k^0)を求めた。k^0はGaN(0001)上で1.3×10^<-15>cm s^<-1>, GaN(1-100)で7.2×10^<-9> cm s^<-1>,およびGaN(11-20)で3.3×10^<-8> cm s^<-1>であったことから、酸素還元反応に対する活性は、GaN(11-20)>GaN(1-100)>>GaN(0001)であることがわかった。各GaN電極上にZnOを析出し、そのSEM, XRD 2θ-θスキャンおよびZnO(10-12)に対するωスキャンを調べたところ、どの電極上でもZnOがエピタキシャル成長していることがわかり、バルクGaN単結晶基板上でのZnOヘテロエピタキシャル電析に成功した。ωスキャンにおいてZnOに帰属するピーク成分の半価幅を求めると、GaN(0001)上で1.04°,GaN(1-100)で0.712°,およびGaN(11-20)で0.852°であった。半価幅からZnOのエピタキシャル成長の度合いは、GaN(1-100)>GaN(11-20)>GaN(0001)の順で高いと考えられるが、これは酸素還元反応に対する活性の大小とは異なっていたことから、このレベルはその他基板自体のmosaic spreadや、GaNとZnOの格子ミスマッチの違いの影響もあると考えられる。今後GaN(10-11),(10-12), (10-13)上へのZnOの電析と併せて、ZnOのエピタキシーを決める因子を調べていく予定である。十分活性化されたGaN(0001),GaN(1-100),およびGaN(11-20)バルク単結晶上での酸素還元反応(ORR)に対するI-V曲線から、Koutecky-Levich解析より、70°Cにおける標準反応速度定数K^0を、GaN(0001)上で8.3×10^<-14>cm s^<-1>,GaN(1-100)上で1.6×10^<-6>cm s^<-1>,GaN(11-20)で6.0×10^<-6>cm s^<-1>と求めた。このことよりORRに対する活性は、GaN(11-20)>GaN(1-100)

>>GaN(0001)であることがわかった。このORRの活性の違いを、各結晶面上でのMott-Schottkyプロットにより明らかにすることを試みた。高周波と低周波でのC^2-ηカーブの比較より、各結晶面上に異なる電位範囲で表面準位が存在していることがわかり、これを介したトンネル効果による電子授受が結晶面ごとのORRの活性相違を生み出しているものと考えられる。GaN(0001),GaN(1-100),GaN(11-20)、およびGaN(10-11)に対してZnOを電析し、その薄膜をSEM、およびXRD2θ-θと、ZnO(10-12),(11-22)面に対するωスキャンにより分析したところ、どの電極上でもZnOがエピタキシャル成長していることがわかり、バルクGaN単結晶基板を用いた全方位的単結晶ZnO薄膜のヘテロエピタキシャル電析に成功した。そのエピタキシャル成長の度合いを評価する方法として、ωスキャンにおける半価幅を指標にしようとしていたが、対象とする測定結晶面によって、測定される半価幅の傾向が異なるということが今回わかったため、その評価方法の妥当性や別の方法については、現在検討中である。これまで検討してきたGaN(0001),(1-100),(11-20)面に加え、今年度はGaN(10-11),(10-12),および(10-13)面に対しても、酸素還元反応(ORR)に対する活性評価とZnOエピタキシャル電析を試みた。十分活性化したそれぞれのGaN単結晶面上でI-V曲線を測定し、Koutecky-Levich解析より、70°Cにおける標準反応速度定数k^0を求めたところ、その序列は、(10-11)>(1-100)≧(11-20)>(10-12)>(10-13)>>(0001)であることがわかり、ORRに対する活性もその序列であることが分かった。またそれぞれのGaN結晶面にZnO薄膜を電析し、その構造をSEMおよびXRD 2θ, ZnO(11-22)面に対するωスキャンによって調べたところ、各結晶面に沿った表面形態およびXRDパターンを確認することができ、所期の通りZnO薄膜の全方位的エピタキシャル電析に成功した。ωスキャンの序列より、そのエピタキシーは結晶面ごとに、(10-11)>>(1-100)≧(10-13)>(11-20)>(10-12)>(0001)であることがわかり、ほぼORRに対する活性の系列に沿うことがわかった。その序列が完全にORRに対する活性と一致しないのは、基板自体のmosaic spreadや格子ミスマッチがその要因であると考えられる。また、電極活性(k^0)が高い結晶面ほど高密度に核形成が起こり、ZnOのエピタキシーが向上する一方で、電解過電圧(η)が大きいとその核の乱雑さが増し、ZnOのエピタキシーが低下することがわかった。したがって、ZnOのエピタキシー向上にはk^0の高い電極を用いることが最も有効であることが明らかになった。
新しいヒト幹細胞アッセイ法を用いた抗腫瘍戦略

われわれは、ヒト幹細胞を評価するため、新規免疫不全動物を開発した。これまでの免疫不全動物としてnudeマウスおよびscidマウスが頻用されていたが、それぞれ獲得免疫系のみが不全状態であるため、細胞株の生着は認めたがprimary細胞の生着、増殖に関する評価が困難であった。われわれは、scid変異にIL2受容体γ鎖のnull変異をバッククロスしたマウスを開発することによって、獲得免疫系だけではなくNK細胞活性をはじめとする自然免疫系の機能異常を作ることに成功した。この新規免疫不全動物を新生児期にレシピエントとして用いた異種移植系においては、ヒト造血幹細胞が、これまでのモデルと比較して有意に高率な生着を認め、種々のヒト造血、免疫細胞を産生することが確認された。マウス体内で構築された免疫系は、相互に協同して抗体産生等、機能的に働くことが証明された。このヒト免疫系を有するマウスは、腫瘍関連抗原特異的抗体産生やペプチド特異的ワクチンの開発に有用であると期待される。一方、正常幹細胞の機能を測定するだけでなく、病的幹細胞の存在を明らかとするために、われわれは、患者由来白血病細胞の生着を試みた。正常造血細胞と同様、白血病細胞も免疫不全マウスの造血組織において極めて高い生着率を得た。さらに重要なことに、マウスにおいて形成された白血病は、白血病細胞の一部を構成するに過ぎないCD34+CD38-細胞という限定された細胞分画からのみ出現することが明らかとなった。このことから、白血病幹細胞の存在が示唆された。この白血病幹細胞分画をターゲットとした抗白血病療法の開発に取り組んでいる。2003年度は、新規免疫不全マウスを用いてヒト幹細胞の定量的アッセイ法の改良を続けるとともに、造血幹細胞、前駆細胞の解析に加えて、非造血組織を構成する細胞への分化を検討した。造血系においては、臍帯血由来CD34+CD38-とCD34+CD38+の二つの細胞集団の能力を比較した。前者は、長期に渡って生着率を維持するだけではなく、2次生着能力=自己複製能力を有することから造血幹細胞と考えられた。一方、CD34+CD38+は、高率な短期生着が認められるものの長期生着に従って生着率が低下する傾向があり、主に前駆細胞分画(short-term progenitor cell)を含むことが示唆された(Ishikawa et al.Leukemia)。一方、非造血組織における多分化能の検討においては、肝細胞への分化がヒト臍帯血CD34+細胞から認められた(Ishikawa et al.Ann NY Acad Sci)。これらの肝細胞は、RT-PCRおよびWestern blotの結果から、アルブミン合成能において機能的に働いていると確認された。最近は、さらに心筋細胞への分化も証明し、ヒト臍帯血細胞の、将来の再生医療への応用が期待される。一方、白血病幹細胞の同定のために、異なる白血病細胞を移植することでその生着率を確認した。これまで、AML(M1,2,4,6,7)とALL(T-ALL,B-ALL)を移植したが、全ての白血病において高率な生着率を認めた。これらは、2次移植を行うことでleukemic stem cell/leukemia-initiating-cellの同定に繋がると考えられる。また、白血病患者由来T細胞が高率な生着が認められ、白血病の形成(leukemogenesis)ばかりではなく、白血病への免疫療法、特にgraft-versus-leukemiaeffectを解析する良いモデルと考えられた。
不用なアンモニア性窒素を用いた分別土中木くずの循環系分解システムの構築

本研究では,分別土などの災害に伴って発生する土砂を土木資材として有効利用するため,土砂に混入している木くず等有機炭素の簡便な削減方法を開発する。削減の方法としては生物分解させることを採用し,木材腐朽菌の働きによって木くず等有機炭素の削減を目指す。無滅菌状態での繁殖可能性を確認し,菌が繁殖するのに最適な温度と含水率を把握することで,土砂堆積現場でも適用できると考える。また,既往の研究によると窒素の添加によって木材の分解率が向上するとされているため,本研究では,窒素源として硝酸の添加による分解速度の向上を評価する。また,木材腐朽菌の繁殖条件の一つとして,酸素が必要であるとされている。土砂堆積現場での土砂中への酸素の供給は限られているため,分解の過程において酸欠を起こすことが懸念される。そのため,木材腐朽菌の働きによってどの程度の酸素を消費するのか確認を行う。木材腐朽菌が繁殖するのに最適な条件は,培養温度30°C,含水率60%であることが示された。また,窒素源として硝酸塩の添加による分解速度の向上を評価したが,硝酸塩を添加した試料ほど分解速度は低下し,木材腐朽菌の繁殖に硝酸塩は不適切であることが判明した。今後は違う窒素源を添加することによって分解速度を評価する必要があると考えられる。そして,酸素消費速度を測定し,分解の過程において土砂中が酸欠を起こさないか確認した。土砂中に木くずが8%以上含まれている場合,木質腐朽菌によって消費される酸素を確保するために,通気パイプなどを設置する必要があると考えられた。酸素進入深さが0.3 mなら,パイプ1本で上下0.3 mに酸素が供給されるとして,0.3×2 = 0.6 mおきにパイプを設置すれば,好気ゾーンを確保できることが示された。木材腐朽菌による木くずの分解速度や,速度に影響を与える因子についての基礎的なデータが得られている。これによって,目的の土砂中木くず含有量を達成するために必要な時間が計算できるようになった。また,木くずの好気的分解時に必要な酸素量の概算や,それを確保するための方策についても議論できている。以上から,研究課題はおおむね順調に進展していると考える。現時点ではビーカーレベルの実験であるため,より大型の規模や現場に近い環境での実験に進む必要がある。ビーカー実験は次元が無いため,カラムに試料を充填し,上部から降水があるような深さ方向を考えた1次元の実験に進む必要がある。また,木くずだけを用いた基礎的な実験を行っているため,実際の土壌と混合し,無滅菌とした現場を模擬した環境での実験に進む。本研究では,分別土を土木資材として有効利用するために,有機炭素削減方法を開発する。削減方法として堆肥化に着目した。木の堆肥化時には窒素が欠乏するために時間がかかることが知られており,適切な窒素量を添加すれば堆肥化が速まるはずである。一般的には,堆肥化開始時点の炭素/窒素重量比(C/N比)が2540にあれば,堆肥化がスムースに進行するとされているため,最適な窒素添加量が決定しうるはずである。また,費用面を考慮しても,効果があり,かつ最小限の窒素添加量の決定が必要である。そこで本研究では,木くず堆肥化の促進に必要な窒素(塩化アンモニウム)量の定量的決定を行った。分別土に対する塩化アンモニウムの添加量を変化させ,堆肥化による有機炭素削減に効果のある最少添加量を求めた。粒度調整した粉砕木質(0.4250.850mm)を容器内に入れた。また,堆肥化による有機炭素の減少は微生物の好気的分解によるため,密閉容器の蓋には,直径2mm程度の通気穴を開け,好気性菌を植種し,含水率を適切に調整・制御し,また栄養塩を添加した。塩化アンモニウム濃度を7段階設定(C/N比:201000)した。インキュベータ内に静置し,培養温度を35°Cとし,設定期間後の有機炭素量を測定した。一部の添加量では,窒素添加により木質分解が促進されることが分かった。C/N比80での添加時が最も木質分解の効果が高かった。具体的には,有機炭素減少速度が,無添加時-0.00021 (g -C/g-C0・d)からC/N比80添加時0.0005(g -C/g-C0・d),無添加時0.00037 (g -C/g-C0・d)からC/N比80添加時0.00061(g -C/g-C0・d)(CHN元素測定による算出)と上昇した。しかし,繰り返し測定不実施のため有機炭素減少率において時間経過に対し明確な増減を示さなかった。今回の研究では,当初の予定通りTOC計測定・CHN測定による炭素減少速度算出結果を用いて窒素添加量と有機炭素減少速度との関係を明らかにした。

また,既往の研究によると窒素の添加によって木材の分解率が向上するとされているため,本研究では,窒素源として硝酸の添加による分解速度の向上を評価する。また,木材腐朽菌の繁殖条件の一つとして,酸素が必要であるとされている。土砂堆積現場での土砂中への酸素の供給は限られているため,分解の過程において酸欠を起こすことが懸念される。そのため,木材腐朽菌の働きによってどの程度の酸素を消費するのか確認を行う。木材腐朽菌が繁殖するのに最適な条件は,培養温度30°C,含水率60%であることが示された。また,窒素源として硝酸塩の添加による分解速度の向上を評価したが,硝酸塩を添加した試料ほど分解速度は低下し,木材腐朽菌の繁殖に硝酸塩は不適切であることが判明した。今後は違う窒素源を添加することによって分解速度を評価する必要があると考えられる。そして,酸素消費速度を測定し,分解の過程において土砂中が酸欠を起こさないか確認した。土砂中に木くずが8%以上含まれている場合,木質腐朽菌によって消費される酸素を確保するために,通気パイプなどを設置する必要があると考えられた。酸素進入深さが0.3 mなら,パイプ1本で上下0.3 mに酸素が供給されるとして,0.3×2 = 0.6 mおきにパイプを設置すれば,好気ゾーンを確保できることが示された。木材腐朽菌による木くずの分解速度や,速度に影響を与える因子についての基礎的なデータが得られている。これによって,目的の土砂中木くず含有量を達成するために必要な時間が計算できるようになった。また,木くずの好気的分解時に必要な酸素量の概算や,それを確保するための方策についても議論できている。以上から,研究課題はおおむね順調に進展していると考える。測定試料の多さから繰り返し測定を行うことができず,有機炭素減少率において時間経過に対し明確に持続した増減を示さなかった。また,予想していたよりも有機炭素を削減することができる重量が少なかった。このため,今後の課題として,今回木質分解の効果が高かったN/C比付近での繰り返し測定や堆肥化処理以外の手法の検討を行う必要がある。現時点ではビーカーレベルの実験であるため,より大型の規模や現場に近い環境での実験に進む必要がある。ビーカー実験は次元が無いため,カラムに試料を充填し,上部から降水があるような深さ方向を考えた1次元の実験に進む必要がある。また,木くずだけを用いた基礎的な実験を行っているため,実際の土壌と混合し,無滅菌とした現場を模擬した環境での実験に進む。
ＶＡＶ１－Ｒａｃ１－ＰＡＫ１経路の制御による卵巣癌の新たな治療戦略の開発

卵巣癌は、婦人科悪性腫瘍のなかでも予後不良疾患であり、比較的早期癌であるI-II期症例であっても20-30%の患者はこの疾患で死亡する。このような状況のなかで新規治療戦略の開発は喫緊の課題となっている。VAV1は本来骨髄系の細胞にのみ発現している分子である。臨床検体の検討ではこのVAV1が卵巣癌に発現すると、とくに早期卵巣癌において予後不良因子となることを明らかにした。さらに研究成果からは、VAV1が卵巣癌の浸潤転移に重要な役割をになっている上皮間葉移行に関与していることを明らかにした。VAV1とその関連する細胞内シグナル経路を制御することは卵巣癌の新たな治療戦略となる可能性がある。【VAV1発現はE-cadherin transcriptional factor:Slugの発現を促進する。】我々は先に卵巣癌細胞株(SKOV3)にVAV1発現ベクターを導入しVAV1恒常的発現細胞株(SKOV3-VAV1)を樹立している。このSKOV3-VAV1はVAV1発現に依存してE-cadherin発現が低下することを解明しており、さらなるメカニズムを解明するためにE-cadherinの転写因子であるSlug Snail発現の検討をおこなった。その結果、特にSlug発現の促進がタンパクレベル及びmRNAレベルで認められた。また、このSlug発現はVAV1-siRNAによるVAV1発現の抑制とともに低下していくことから、VAV1がこれら転写因子を誘導することで、E-cadherin発現の低下を誘導し、卵巣癌の上皮間葉移行に関与してくる可能性を示唆している。【VAV1のE-cadherin発現抑制はVAV1-Rac1の経路を介していない】VAV1のSlugを通じたE-cadherinの発現制御が、VAV1-Rac1の経路を介しているかどうかを、Rac1阻害剤をもちいて検討した。当初はRac1阻害剤によりE-cadherinの発現が回復することを予測していたが、Rac1阻害剤ではE-cadherinの発現を回復することはできなかった。VAV1にはRac1を通じた経路以外にも作用する経路が知られており、VAV1-Rac1経路以外の経路がE-cadherinの発現制御にかかわっている可能性が示唆された。平成24年度、卵巣癌細胞株SKOV-3にVAV1発現遺伝子を導入し、VAV1恒常発現細胞株を樹立した。更に、VAV1恒常発現株でE-cadeherin発現が低下することを明らかにしている。平成25年度はこのE-cadherin発現がタンパクレベルでの分解促進によるものなのか、転写レベルでのものなのかを明らかにする目的で、E-cadherinのmRNA発現をリアルタイムPCR法にて検討した。リアルタイムPCRの結果はVAV1発現依存性にE-cadherin mRNA発現の低下を認めるといった結果であった。【VAV1のE-cadherin発現低下は転写制御因子であるSnail Slaugを介している】卵巣癌は、婦人科悪性腫瘍のなかでも予後不良疾患であり、比較的早期癌であるI-II期症例であっても20-30%の患者はこの疾患で死亡する。【VAV1発現は卵巣癌early-stage (stage I-II)の予後に影響を与える。】科研申請時において我々は進行期I-IV期卵巣癌ではVAV1-PAK1陽性群と陰性群で全生存期間、無増悪生存期間に有意差があることをすでに知見として得ていたが、免疫染色の結果を再度検討したところ、I-II期の早期卵巣癌においてVAV1発現陽性のみでも陰性群に比し全生存期間、無増悪生存期間が有意に低下することを新たに見いだした、この事はVAV1-Rac1-PAK1の経路を介さないVAV1の分子生物学的活性が早期卵巣癌の予後に影響を与える可能性を示唆している。【VAV1発現は抗癌剤感受性試験には影響をあたえない】我々は先に卵巣癌細胞株(SKOV3)にVAV1発現ベクターを導入しVAV1恒常的発現細胞株(SKOV3-VAV1)を樹立しており、この細胞にたいする抗癌剤感受性試験をおこなった。パクリタキセル、シスプラチンなどの感受性試験をおこなったが、結果として感受性に差は認めていない。【SKOV3-VAV1はmorphologyに影響を与えた】SKOV3がVAV1恒常発現によりどのように変化を受けたかと調べるため、3D cultureをおこなっている。野生株が桑実状に増殖できたのにたいし、SKOV3-VAV1は桑実状に組織構築することができなかず、細胞間接着の脆弱性を示唆した。【SKOV3-VAV1はVAV1発現に依存性にE-cadherin発現を低下させた】SKOV

3-VAV1の3D cultureの結果から、細胞間接着に注目した我々は、E-cadherin発現について検討をおこなった。ウェスタンブロット法によりE-cadherin発現はVAV1発現に依存して低下を認め、VAV1導入が卵巣癌の上皮間葉移行に関与する可能性が示唆された。研究期間全体を通じて実施した研究の成果【VAV1タンパク発現は早期卵巣癌の予後に悪影響を与える】I-II期卵巣癌46症例のVAV1発現を免疫組織学的に検討した。VAV1発現陽性群では全生存期間、無増悪生存期間が有意に低下することを新たに認めている。【VAV1恒常発現はSKOV3のMorphologyに影響を与える】婦人科腫瘍VAV1発現が卵巣癌の予後に影響をあたえる原因として注目したE-cadherin制御の分子学的メカニズムの一端が明らかになり、今後の展望に期待がもてる。しかしながら、VAV1がどのような経路を介してE-cadherinの制御を行っているかは、明確ではなく。今後さらなる検討が必要と考える。EMTに関連する他のマーカーである、N-cadherin,Vimentin発現についても検討が必要であり、さらにはMMP,Fibronectinといった、浸潤に寄与する因子についても随時検討が必要と考える。VAV1のE-cadehrin発現調節のメカニズムの一部を明らかにすることができた。E-cadherinの調節機構はがん細胞の転移機構と密接な関係を持っており、予後と密接に関連する因子と考えられる。先の研究で、VAV1発現の有無が卵巣癌の予後と関わることを明らかにしているが、その分子生物学的裏付けが一部なされた事は評価できると考える。論文として研究成果を報告できた事も大きい。一方で、E-cadherinの転写因子の制御をどのシグナルを通じて行っているのかは明らかでなく、今後の研究課題としたい。卵巣癌の予後に与える影響として当初、想定されていたのはVAV1-Rac1-PAK1経路の活性化であったが、免疫染色の結果はVAV1単独発現でも卵巣癌の予後に影響を与えることを示唆していた。今回、SKOV3-VAV1ではVAV1発現に依存してE-cadherinの発現低下を認めているが、Rac1阻害剤の使用でE-cadherinの発現の回復は認められず、E-cadherin発現の制御にVAV1-Rac1-PAK1経路が関与していないこと推測される。VAV1のE-cadherin低下とそれにともなう上皮間葉移行は、いままで予想していた経路以外から生じている可能性があり、今後の展開に期待が持てる。VAV1がどのようにE-cadherinの制御をおこなっているかは、明らかにすべく、考えられるpathwayに対して、タンパク発現の検討をおこなう。また、各種阻害剤でE-cadherinの発現が戻るかどうかを検討し、VAV1のEMTに対する影響が制御できるかどうかを検討していく。VAV1からどのようなシグナル経路でE-cadherin転写因子の調節が行われているのかを明らかにしたいと考えている。各種シグナル因子の発現を検討したい。さらには、細胞株の網羅的解析としてメチル化解析などもあわせて行う予定である。また、タンパクレベルでの調節機構を再度検討したいと考えている。具体的にはE-cadherinのユビキチン化が行われているのかどうかの検討をしたいと考えている。