hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
天ぷらのおいしさ評価のための画像処理技術の開発

当初予定した画像処理技術の開発、ならびに撮影方法、官能検査方法、物性測定方法は順調に達成し、一定の結果を得ることができたため。本年度8月末より、在外研究によりアメリカ、メリーランド大学への1年間の留学が決まったため、計画にやや遅延が起こった。構築した画像処理、物性測定での定量評価法を検証するため、油温、衣の材料の配合等のパラメータを変え各種実験を行う。これにより得られたデータより、統計的手法を用い、調理過程、ならびに衣の画像特徴から相関を求め、天ぷらのおいしさ指標の確立を行う。そのために、さらに各種実験を行い、さらに最適な統計法の研究を行う。平成24年度では、水分蒸発量の推移計測方法を確立し、条件を変化させての実験、計測を行う。同時にできあがり評価を行い、調理過程とできあがり評価の相関関係を解明する。調理過程解析では、画像特徴量と一定時間間隔での水分蒸発量の推移データより、画像処理による水分蒸発量推移計測法を開発する。また、同時に調理条件を変化させ撮影実験、計測を行い、水分蒸発量推移計測法の検証を行うとともに、どのような水分蒸発過程をとるのがよいのか定量的評価を行う。できあがり評価では官能検査を行い、おいしい衣の条件を決定する。衣の物性測定を行い、その結果と衣の画像処理による凹凸特徴との相関関係を求め、衣のおいしさの定量的評価を行う。調理科学実験、画像処理実験を行うための実験用ノートPCを備品として申請する。消耗品としてサーバ保守、改良用電子部品、実験資料、ならびにサーババックアップ記録メディアを計上する。調査、情報収集、研究協力者との打ち合わせ、ならびに成果発表旅費を計上し、サーバ構築のための人件費を申請する。また、国内の研究会、ならびにFCV2014等国際会議にて調査研究、成果発表を行う。実験結果の大量の画像データを記録するファイルサーバを備品として申請する。消耗品として実験システムの保守、改良用電子部品、実験資料、ならびにサーババックアップ記録メディアを計上する。また、ViEW2012等国内の研究会、ならびにECCV2012、FCV2013国際会議他にて調査研究、成果発表を行う。
四辻善成の源氏学の形成と展開に関する基礎的研究

本年度も昨年度に引き続き、四辻善成『河海抄』を研究の中心的対象として扱い、現存諸本の基礎的調査、注釈が施される過程やその成立背景、後世への影響等について考察を進め、その成果として4本の学会発表と5本の論文投稿を行った。現存諸本の基礎的調査としては、『河海抄』巻九を対象として、これまで行われてこなかった注記内容からの系統分類を施すとともに、増補改訂による注釈内容の変化とその特徴についても解明した。また、東北大学図書館蔵旧制第二高等学校旧蔵本について、基礎的調査を報告するとともに当該本の特徴を提示した。さらに、諸本の比較を踏まえた上で、注記に見られる『宇津保物語』引用の特徴についても指摘した。成立背景に関しては、二条良基『年中行事歌合』との比較によって、『河海抄』編集に際しての二条良基文化圏との関係性を実証的に明らかにした。その結果、これまで『河海抄』が良基文化圏に影響を与えたとする従来説に対し、むしろ良基の多大なる影響下で『河海抄』が編集されていったことを指摘し、注釈書としての性格の再考を迫った。後世への影響としては、北村季吟『湖月抄』における『河海抄』引用の実態を浮かび上がらせた。『湖月抄』は『河海抄』を使用しながら注記編集を行ったと考えられていたが、注記内容を精査すると実際はすべて先行注釈書の孫引きによるものであり、季吟は『河海抄』に直接当たっていなかったと結論付けた。この他にも、三条西実隆による『三源一覧』の基礎的調査を行った上で、実隆の初期源氏学の様相を詳らかにし、後世善成の源氏学がどのように扱われていったのかという問題の一端を解き明かした。(抄録なし)(抄録なし)本年度は、四辻善成の源氏学の集成である『河海抄』について、諸本調査を行うとともに、注釈が施される過程やその背景について考察を進めた。本年度は、巻九と巻十一の注記内容を対象として『河海抄』の諸本を検証しなおし、諸本整理の方法、および注記における増補改訂の過程を示した。巻九に関しては、諸本を注記内容によって検証した結果、三系統とその他という四分類が可能でることを明らかにした上で、注記増補の特徴に迫った。この成果については、論文「『河海抄』巻九論一諸本系統の検討と注記増補の特徴一」としてまとめ、『中古文学』第91号(2013・5予定)に掲載されることが内定している。巻十一に関しては、注記に引用される『李部王記』の問題を踏まえつつ、諸本系統について再考を加えた。この成果として、第245回大阪大学古代中世文学研究会において「『河海抄』巻十一における諸本系統再考」と題する発表を行った。また、平成24年8月に行った東北大学大学附属図書館での調査では、戦禍によって行方不明となっていた旧制第二高等学校旧蔵『河海抄』を確認することが出来た。この旧制第二高等学校旧蔵本の特徴および諸本間における位置付け等については、論文「東北大学附属図書館蔵旧制第二高等学校旧蔵『河海抄』をめぐって」(河添房江編著『古代文学の時空』、翰林書房、2013・8予定)にて報告予定である。この他に、四辻善成の源氏学がどのように展開し、同時代以降どのように享受されていったかを明らかにすべく、学会発表(第4回大阪大学・チュラーロンコーン大学日本文学国際研究交流集会、「『河海抄』の『宇津保物語』引用一音楽関係記事を中心に一」、2013・3・21)、論文投稿(「『花鳥余情』『伊勢物語愚見抄』の後人詠注記-歌学から物語注釈への-過程-」、『詞林』第52号、大阪大学古代中世文学研究会、2012・10)を行った。

この他にも、三条西実隆による『三源一覧』の基礎的調査を行った上で、実隆の初期源氏学の様相を詳らかにし、後世善成の源氏学がどのように扱われていったのかという問題の一端を解き明かした。本年度は、『河海抄』の諸本系統を明らかにする上での、足掛かりとなる研究成果を発表することが出来た。また四辻善成の源氏学の形成に関わる、いくつかの事象について、その要因や背景についての調査を行うことが出来、次年度以降に学会発表・論文としてまとめることが期待出来るため。(抄録なし)『河海抄』の諸本系統については、次年度も継続して各地の文庫調査を行うとともに、他の巻における系統分類について検証を加えていく。また本文系統の分類と並行しながら、『河海抄』の注記が作成されていく過程について、その要因や時代的背景を踏まえつつ、考証していく。具体的には、『年中行事歌合』との接点を明らかにする。さらに、後世の『源氏物語』注釈書に『河海抄』が与えた影響についても考察を加える。具体的には『湖月抄』を中心に行う予定である。(抄録なし)
幼児の咬合力（咬む力）と身体機能および食育との関連性について

本研究は4,5歳児を対象に咬合力をはじめ身体機能の把握,男女の能力の比較を行った.咬合力,握力,立ち幅跳び,ボール投げ,TUG,25m走を実施した.分析の結果,全ての項目で男児の方が有意に値が高かった.男児の咬合力は,ボール投げ以外で有意な相関を示した.ステップワイズ重回帰分析により,抽出された項目は握力であった.女児の咬合力は全ての項目と有意な相関を示した.ステップワイズ重回帰分析により抽出された項目は握力とTUGであった.男児・女児ともに握力が咬合力との関連が示唆された.一方女児は握力に加え、TUGという下肢筋力・バランス・歩行能力、日常生活機能に関わる項目と関連することが示唆された.近年は子どもの身体の成熟が進んでいるものの,運動能力や体力は低下傾向にある.小学生以上の子どもに関しては毎年文部科学省が体力測定の全国平均を示しており,以前と比較して子どもの体力低下が明らかである.しかし幼児に関しては,体力に関する全国平均がみられず,以前と比較することが困難な状況である.また,「噛む」能力は小児期の訓練によって発達するといわれており,小学生になると永久歯の萌出とともに咬筋が活発に動き出し,下顎の骨が成長すると述べている.以上のことを考えると,子ども達の食生活の変化による軟食物嗜好傾向等が下顎の発達障がいにより不正咬合や低咬合力といった現象を引き起こしたり,脳血流量や脳の活性化を低下させるといった影響をおよぼすと考えられる.幼児期の咬合力や身体機能が,後の食生活や身体機能にも重大な影響をおよぼすと考えられる.そこで本研究では幼児期の「噛む」ことの重要性と身体機能との関連性について分析することを目的としている.昨年8月から9月にかけて、S県内の幼稚園・保育園にて咬合力をはじめとした身体機能測定およびアンケート調査を実施した.対象は4・5歳の幼児約150名であった.対象幼児は,測定に関して全ての項目の内容を理解でき,遂行できるという条件を満たした者である.平均年齢は5.5±0.6歳であった.またアンケート内容に関しては,各保護者に記載してもらった.測定項目は咬合力の他,握力,大腿四頭筋筋力,長座体前屈距離,立ち幅跳び,ボール投げ,Time Up And Go Testを実施した.得られた結果として幼児の成長過程において,咬合力と立ち幅跳びという下肢筋力・機能や,平衡機能を必要とする身体機能と下肢筋力である大腿四頭筋筋力が関係することが示唆された.日本では2000年に食育基本法が制定され、食育の推進が叫ばれているが、食育の内容に関しては、主に食物や栄養面に焦点が当てられている。しかし食べ物を食べるためには「食べたい」と感じ、「捕りこむ(捕食)・咬む(咀嚼)・飲み込む(嚥下する)」という精神的・身体的な過程が必要である。これは食事には必要不可欠な過程であり、食べ物をしっかり咬んで身体に取り入れ、消化・吸収することで本当の栄養になっていくものである。なかでも「咬む」という運動には、「食べたい」という気持ちから、口を開き、前歯でかみ切り、口唇で取り込み、舌の動きで奥歯にのせて「咬む」という過程がある。この「咬む」動作には、口周辺をはじめとした様々な筋力や身体機能等が必要となる。また幼児に関しては、全国的な咬合力および身体機能の平均値等が示されていない。そのため、現代の幼児の平均的な身体機能の発達を理解するためにも、多くの幼児に協力をしていただく必要がある。現代の日本の食事事情が急激に変化してきており,それに伴い,子ども達の体力が年々低下している.そのため,幼児の咬合力をはじめとした身体機能を測定し,現状を適切に把握すること,またその経過を追跡することが重要であると考える.そこで本研究は口頭指示が理解可能な4,5歳児に対して,咬合力をはじめとした身体機能を計測し,身体機能の把握,男女の能力の比較,また経年的に計測していくことで幼児の体力の推移等を把握することを目的として行ってきた.幼児の咬合力と身体機能の関係について,握力,立ち幅跳び,ボール投げ,TUG,25m走から検討した.対象は幼稚園・保育園合計4か所の4・5歳の幼児331名である.対象児のうち男児は173名(平均年齢5.5±0.6歳,平均身長111.4±5.2cm,体重18.3±2.2kg),女児は158名(平均年齢5.4±0.7歳,平均身長110.6±5.3cm,体重18.4±2.6kg)であった.2012年2014年の3年間にこの幼児達に対して,咬合力をはじめとした体力測定を行った.その結果,男児が女児より咬合力をはじめとした身体機能のすべての値が有意に高かった.男児・女児ともに握力という上肢の筋力が,咬合力により,関連することが示唆された.一方女児は握力に加え、Time up and go testという下肢筋力・バランス・歩行能力、日常生活機能に関わる項目と関連することが示唆された.すなわち幼児の咬合力については,男児と女児の咬合力に影響する因子に違いがあることが示された.今回313名の幼児の咬合力および身体機能の測定を行った.ただし,この結果が幼児すべてに該当するとは限らない.また幼児に関して,咬合力に関する研究自体が少ない状況である.

そのため本研究を一般化するために,幼児の対象者をさらに増やし,これからも長期にわたって縦断的に検証していく必要がある.本研究は4,5歳児を対象に咬合力をはじめ身体機能の把握,男女の能力の比較を行った.咬合力,握力,立ち幅跳び,ボール投げ,TUG,25m走を実施した.分析の結果,全ての項目で男児の方が有意に値が高かった.男児の咬合力は,ボール投げ以外で有意な相関を示した.ステップワイズ重回帰分析により,抽出された項目は握力であった.女児の咬合力は全ての項目と有意な相関を示した.ステップワイズ重回帰分析により抽出された項目は握力とTUGであった.男児・女児ともに握力が咬合力との関連が示唆された.一方女児は握力に加え、TUGという下肢筋力・バランス・歩行能力、日常生活機能に関わる項目と関連することが示唆された.昨年もS県・F県の保育園・幼稚園の幼児の皆様・先生方・保護者の方々に協力をいただき、8月から9月にかけて、咬合力および身体機能測定・アンケート調査を実施することができた。約140名のデータを収集することができた。今回は初めてF県の保育園にも協力をいただき、順調にデータ収集が進んでいる。今年度も同様のデータ収集を計画しており、継続して行う予定である。小児今年度も夏に同様のデータ収集を予定している。昨年は、測定内容の理解度の関係から、年長児のみを対象としたが、今年度は年中児にも協力していただき、幼児の咬合力・身体機能の状態の確認を行っていく予定である。そのため今年のデータは約200名分の収集予定である。昨年8月から9月にかけて、幼稚園・保育園にて咬合力をはじめとした身体機能測定およびアンケート調査を実施し,約150名の幼児さんの身体機能測定およびアンケート調査を行うことができた.測定およびアンケート調査に協力していただけたことで、咬合力と身体機能の関連について研究を進めることができ、幼児の身体能力の平均に関してもデータが揃ってきている状況である.26年度は、幼児の身体機能測定会の場所が佐賀市内4件・福岡市1件で、西九州大学の近隣であったため、交通費等の支出が少なくてすんでいる。27年度は、測定場所を増やす・拡大していく予定でいるため、そのための交通費等に使用したいと考えている。今年も夏に測定会およびアンケート調査を予定している.そのため約150人の幼児さんに協力をお願いする.ただし,昨年まではS県内のみの測定であったため,今年からは県外にも測定場所を拡大していきたいと考えている.そのためにも他県の幼稚園・保育園への測定依頼等を行っていく必要がある.大学測定会実施場所の交通費や、協力してくれた幼児へのお礼の品物代として。また、研究で得られた結果の論文発表時の交通費や雑誌掲載料等への使用を計画している。昨年度の測定に関しては,測定場所が県内であったことで交通費等が少額ですんだことや,協力していただいた幼児さんの人数が当初の予定より少なく、お礼の品にも費用がさほどかからなかったこと等が理由である.今年度は測定場所に関して県外も予定しているため,新規測定地への依頼のための交通費や,協力いただいた場合はお礼の品代として使用予定である.また,測定器具も追加で購入予定である.
幾何解析と超局所解析の新展開

本研究では、まずユークリッド空間におけるラドン変換の構造や性質について超局所解析の観点で見直し、ラドン変換をデータとする再生の可能性や一意性を考察する。特に不完全データの問題等の応用数学や実学とも関連する課題について波面集合を通じて考察する。研究が順調に進むようであれば、最先端分野であるテンソルトモグラフィーとよばれるある種のリーマン多様体上の測地的X線変換に関連した基礎研究に取り組む。
心肺蘇生後の脳血流維持におけるα_2動作薬およびCa拮抗薬の作用に関する研究

最初に、心肺蘇生後再灌流モデルの確立を目的とし、研究対象となる薬剤(α2作動薬等)の心肺蘇生に於ける効果を明確にするために、α1作動薬(フェニレフリン)単独使用により、電気的に心室細動を誘発した後の心肺蘇生を成功させるのに必要なフェニレフリンの使用量を決定した(40μg/kg-1回投与および10μg/kg/min-持続投与)。次に、心肺蘇生後の脳血管の薬物の生理学的変化(炭酸ガス濃度の変化)やα2作動薬(デキサメデトミジン)の反応性を明確にするために、先ず正常血管の反応性をペントバルビタール麻酔下の検討した。更に、中枢神経系での血管反応の相違を明らかにするために、脊髄血管との反応性の差を検討した。デキサメデトミジンは正常脳血管に対しては、ほぼ用量依存性に脳軟膜血管を収縮させた。炭酸ガス濃度の変化に応じては、脳血管(内頚動脈系)、脊髄血管ともほぼ同様の反応(濃度依存性血管拡張)を示したが、血管収縮薬に対する反応は、明らかに脊髄血管で大きかった。これから、脳血管内でも(椎骨動脈系)、反応性の差異がある可能性が示唆された。心肺蘇生後の再灌流モデルにおいて、脳血管径の測定、動脈血と上矢状洞からの静脈血の酸素含量、グルコース等の差や酸素摂取率等各種パラメーターを測定した。また、同条件で蘇生時にα2作動薬(デキサメデトミジン;2.5μg/kg)を投与し、脳血管径等各種パラメータの変化の相違を検討した。蘇生後、デキサメデトミジン投与群において、有意に単位時間あたりの不整脈の出現が抑えられ、血行動態は安定した。脳血管径の変化を含め、他のパラメーターには大きな相違は認められなかった。以上の結果から、α2作動薬(デキサメデトミジン)の心配蘇生後の脳循環維持効果は、全身の循環状態の安定に基ずく二次的なものである可能性がある。心停止および心肺蘇生成功モデルを用い,脳保護に有用であったと報告されているα2作用薬,Ca拮抗薬等の薬剤の心肺蘇生成功後の脳循環,脳代謝,体循環に与える影響を明らかにするために下記の実験を行った。1.麻酔下健常動物におけるα2作用薬,およびK channel開口薬(Ca拮抗作用をもつ)の脳血管に対する直接作用を検討するために,Closed Cnanial Window下に上記薬剤をWindow内投与を行った。クロニジン,デキサメデトミジン(α2作用薬)は用量依存性に脳血管を収縮させ,クロマカリム,レマカリム,ニコランジル(K channel開口薬)はそれぞれ用量依存性に脳血管を拡張させる。また,心肺蘇生のために用いるフェニレフリン(α1作用薬)の直接の脳血管に対する作用を検討した。フェニレフリンは軽度細静脈を収縮させるが,細動脈には影響をほとんど与えなかった。2.心肺蘇生・再潅流モデルの作製を行った。全脳虚血の際の脳蘇生限界時間を考慮し5分の心停止後に心肺蘇生を開始し,自己心拍出現までの時間,使用薬剤量等を検討した(I群)。また,早期に心肺蘇生蘇生を開始(2.5分後)したモデルを比較のために作製し(II群),同様の検討を行った。

さらに上記2群におけるClosed Cranial Windowによる脳血管径の測定,動脈血と上矢状洞からの静脈血の酸素含量,炭酸ガス分圧,グルコース等の差や酸素摂取率を測定し,脳代謝の状態を検討した。I群においてはII群に比し,血流再開後に細動静脈とも,より拡張をし,血管径が蘇生前の状態に戻るのにより時間を要した。I群では酸素摂取率の低下がより長時間持続した。3.今後,I,II群の双方において,クロニジン,デキサメデトミジン(α2作用薬),クロマカリム,レマカリム,ニコランジル(K channel開口薬)の影響を検討する予定である。心肺蘇生後の脳血管の薬物の生理学的変化(炭酸ガス濃度の変化)やα2作動薬(デキサメデトミジン)の反応性を明確にするために、先ず正常血管の反応性をペントバルビタール麻酔下の検討した。更に、中枢神経系での血管反応の相違を明らかにするために、脊髄血管との反応性の差をを検討した。デキサメデトミジンは正常脳血管に対しては、ほぼ用量依存性に脳軟膜血管を収縮させた。炭酸ガス濃度の変化に応じては、脳血管(内頸動脈系)、脊髄血管ともほぼ同様の反応(濃度依存性血管拡張)を示したが、血管収縮薬に対する反応は、明らかに脊髄血管で大きかった。これから、脳血管内でも(椎骨動脈系)、反応性の差異がある可能性が示唆された。心肺蘇生後の再灌流モデル(雑種成犬をペントバルビタール麻酔後、Closed Cranial Windowを作製し、開胸後電気的に心室細動を誘発し、5分後開胸心マッサージ、除細動およびフェニレフリンのbolusおよび持続投与により心肺蘇生を成功させる)において、脳血管径の測定、動脈血と上矢状洞からの静脈血の酸素含量、グルコース等の差や酸素摂取率等各種パラメーターを測定した。また、同条件で蘇生時にα2作動薬(デキサメデトミジン;2.5μg/kg)を投与し、脳血管径等各種パラメータの変化の相違を検討した。蘇生後、デキサメデトミジン投与群において、有意に単位時間あたりの不整脈の出現が抑えられ、血行動態は安定した。脳血管径の変化を含め、他のパラメーターには大きな相違は認められなかった。以上の結果から、α2作動薬(デキサメデトミジン)の心配蘇生後の脳循環維持効果は、全身の循環状態の安定に基ずく二次的なものである可能性がある。
岩石の破壊誘起電磁気現象発生機構の解明

岩石破壊時の新生面形成・摩擦発熱などの外的刺激に起因する荷電粒子放射の機構(フラクトエミッション,トライボエミッション)が,破壊誘起電磁気現象に及ぼす影響を評価することを目的として,(1)油圧式三軸変形試験機システムの設計・製作,(2)圧力容器内部での電磁界変動検出用アンテナの試作,および(3)岩石破壊に伴う電荷変動信号の解析をおこなった.【実験結果】一軸破壊実験,封圧下での三軸破壊実験どちらの場合においても,花崗岩試料にのみ主破壊前の変形加速ステージにおける顕著な電荷変動が認められた.また,微弱ながら幾つかの実験では,電荷変動と同期して電界の変動も認められた.電荷の発生にはAEの発生との明瞭な関連性が認められる.一方,石英を含まない試料(玄武岩,ハンレイ岩,カンラン岩,蛇紋岩)においては,主破壊に先行するAEの発生が認められるものの,電荷および電界に顕著な変動は認められたかった.これらのことから,主破壊前に計測される信号発生においては石英の圧電効果が主たる要因となっているものと考えられる.一方主破壊時には石灰岩を除く全ての試料において,顕著な電荷および電界の変動が認められた.花崗岩,ハンレイ岩で,破壊に伴って記録される電場変動信号のレベルに大きな差は認められない.また,MgOの破壊においては,信号の急激な変化を断続的に含む特徴的変動が認められた.この特徴はMgO結晶の強い劈開性に起因する可能性がある.【まとめ】今回の実験では,強圧電性結晶である石英を含まない岩石あるいは非圧電性結晶であるMgOの破壊に伴い,試料表面の電荷および電界の明瞭な変動が認められた.このことは,破壊により,試料近傍に圧電分極以外の原因で過渡的な電場が形成されたことを意味している.岩石破壊に伴う電磁気信号計測においては,破壊そのものに起因する電磁気現象が存在することを意識して今後の研究をすすめる必要がある.岩石破壊時の新生面形成・摩擦発熱などの外的刺激に起因する荷電粒子放射の機構(フラクトエミッション,トライボエミッション)が,破壊誘起電磁気現象に及ぼす影響を評価することを目的として,(1)油圧式三軸変形試験機システムの設計・製作,(2)圧力容器内部での電磁界変動検出用アンテナの試作,および(3)岩石破壊に伴う電荷変動信号の解析をおこなった.【実験結果】一軸破壊実験,封圧下での三軸破壊実験どちらの場合においても,花崗岩試料にのみ主破壊前の変形加速ステージにおける顕著な電荷変動が認められた.また,微弱ながら幾つかの実験では,電荷変動と同期して電界の変動も認められた.電荷の発生にはAEの発生との明瞭な関連性が認められる.一方,石英を含まない試料(玄武岩,ハンレイ岩,カンラン岩,蛇紋岩)においては,主破壊に先行するAEの発生が認められるものの,電荷および電界に顕著な変動は認められたかった.これらのことから,主破壊前に計測される信号発生においては石英の圧電効果が主たる要因となっているものと考えられる.一方主破壊時には石灰岩を除く全ての試料において,顕著な電荷および電界の変動が認められた.花崗岩,ハンレイ岩で,破壊に伴って記録される電場変動信号のレベルに大きな差は認められない.また,MgOの破壊においては,信号の急激な変化を断続的に含む特徴的変動が認められた.この特徴はMgO結晶の強い劈開性に起因する可能性がある.【まとめ】今回の実験では,強圧電性結晶である石英を含まない岩石あるいは非圧電性結晶であるMgOの破壊に伴い,試料表面の電荷および電界の明瞭な変動が認められた.このことは,破壊により,試料近傍に圧電分極以外の原因で過渡的な電場が形成されたことを意味している.岩石破壊に伴う電磁気信号計測においては,破壊そのものに起因する電磁気現象が存在することを意識して今後の研究をすすめる必要がある.本研究では,岩石破壊時の新生面形成・摩擦・発熱などの外的刺激に起因する,試料表面からの荷電粒子放射の機構(フラクトエミッション,トライボエミッション,エキソ電子放出)が,破壊誘起電磁気現象に及ぼす影響を評価することを目的とする.当該年度においては,(1)3軸圧縮試験システムの導入,および(2)岩石の摩擦時における電荷変動計測実験を行った.簡易型3軸圧縮変形試験システム封圧200MPa(2kbar)程度までの条件での岩石の破壊試験,および対向アンテナによる電界計測,試料表面の発生電荷計測が圧力容器内部で行えるような小型の試験システムを導入した.電磁気的計測を行うことを主たる目的とするため,圧力や荷重の載荷システムには,手動ポンプを利用して極力外部ノイズを避ける仕様を採用した.一般に,圧力容器を用いた岩石の試験システムは,大がかりで高価な油圧載荷システムを用いて行われる.本システムにおいては圧力容器の構造を検討し,内部にヨークシステムを採り入れることで載荷ライン等を最大限に簡素化した.導電性ダイアモンド圧子を電極として用いた摩擦実験における摩擦電磁気現象の計測花崗岩,斑レイ岩,石灰岩などの板状整形試料において,ピンオンディスク型の摩擦試験を行い,垂直加重を変化させた時の力学的性質の変化と,それに伴うAE信号,電荷発生強度等の信号変化の関係を調べた.電荷の検出においては,導電性ダイアモンド圧子部分を電極として用いた.

結果,試料中の石英の有無に関わらず,全ての試料において顕著な電荷発生が認められた.電荷発生のタイミングは,スティック・スリップに伴う垂直載荷重降下およびそれに伴うAE信号の発生と密接に関連している.又,電荷信号強度は,AE信号強度(イベント積算数)の増加に伴って線形に増加する関係が認められた.岩石破壊時の新生面形成・摩擦・発熱などの外的刺激に起因する,試料表面からの荷電粒子放射の機構(フラクトエミッション,トライボエミッション,エキソ電子放出)が,破壊誘起電磁気現象に及ぼす影響を評価することを目的として,(1)油圧制御システムの導入,(2)電磁界変動検出用アンテナの試作,および(3)岩石破壊に伴う電荷変動信号の解析をおこなった.油圧制御システムの導入70MPaまでの電動式油圧ポンプと200MPaまでの手動油圧ポンプを組み合わせることで,試験容器内の圧力を迅速に設定値まで昇圧できるシステムを構築した.電磁界変動検出用アンテナの試作静水圧下での電界,磁界測定をおこなうために,圧力容器内に組み込めるアンテナ2種類を試作した.電界変動計測システムは,岩石試料に対し近接して対向させた2枚の板状銅板電極(30mm×30mm)を2対配置して,電極間に誘起される電荷変動の検出する仕様とした。プリアンプの入力インピーダンスは計測する信号の信号源インピーダンスが大きいことと,信号線接続による損失を少なくするために1MΩに設定した(周波数帯域はDC70MHz,利得100).岩石破壊に伴う電荷変動信号の解析岩石破壊に伴い検出される電荷信号の性質を,センサーの特性も含め定量的に解析した.直径約20mmの岩石試料の破壊により誘起される電荷量は,放電時定数が約1msの積分回路で近似されるセンサー回路を用いた場合,約10^<-11>Cとなることがわかった.試料の断面積(約3cm^2)と破壊前の信号発生継続時間(約10s)の値を用いると過渡電流密度として10^<-12>A/cm^2の値が得られる.M=6の地震における典型的な震源域の面積(10^8m^2)を用いて震源での発生電流を見積もると,およそ1Aとなる.この値は,一般に言われている地表での電磁気異常観測データを説明するものとしては2桁程度小さい.
脳特異的に発現する新規H^+輸送体(ASPT)の欠損マウスの解析と欠損修復の試み

I.細胞外H^+濃度上昇に伴う情報伝達に関与する新たな機序を解明した。[1]細胞外アシドーシスは、L型Ca^<2+>チャンネルを活性化しJun-NH_2 terminal Kinase(JNK)のリン酸化を促進することで核内転写因子であるc-Junの発現を高めることを明らかにした。[3]中枢性化学受容機構を担う神経細胞の同定やその特性、受容機構のメカニズムについて現在までの研究の成果等を総説として書き著わした。これはCellular SigallingにReviewとして掲載された(Vol.17,799-808,2005)。II.脳特異的に発現する新規H^+/グルコース輸送体Past-Aは膜蛋白質の輸送に関与するCIN85と結合する。Past-Aは自身のProline-rich motif(PXXP)を通じてCIN85のSH3ドメインと結合することを明らかにした。CIN85(Cb1 interacting protein 85 kDa)は膜蛋白質、特にトランスポーターや受容体などのエンドサイトーシスに必須の分子である。このことはPast-Aの機能はCIN85によって制御されていることを示唆する。III.レセプター型チロシンキナーゼの情報伝達機構の解明レセプター型チロシンキナーゼを調節するアダプター蛋白質であるCIN85のユビキチン化がEGF受容体の分解を調節することを発見した。また、神経細胞は成長因子によって突起を伸展する際、成長因子受容体に結合し情報伝達を担なう分子であるPyk2やCblが、細胞膜上に存在するlipid raftsにリクルートされ複合体を形成しその機能を発現していることを発見した。IV.CIN85のノックアウトマウスを作製した。CIN85が関与するシグナル伝達の詳細を理解する目的で、CIN85ノックアウトマウスを作製した。このマウスの脳にはCIN85のタンパク質が発現していないことを抗CIN85抗体を使ったウェスタンブロット法にて確認した。1.ASPTの構造と機能の解明ASPTの解析から以下の構造と機能に関する知見を得た。[1]ASPTは751のアミノ酸で構成されており12回膜貫通型の構造を示す。[3]生体内で脳にのみ特異的な発現を示す。[4]細胞外環境の酸性化に伴い本遺伝子のVMSにおける発現が有意に高まる。2.CIN85のモノユビキチン化とEGF受容体の分解レセプターチロシンキナーゼの情報伝達に関与するアダプター蛋白質であるCIN85のユビキチン化の解析からEGF受容体の分解について以下の知見を得た。[1]CIN85はEGF刺激によってCb1を介してmonoubiquitination(モノユビキチン化)される。[2]CIN85のモノユビキチン化はCb1のRING finger domainとCIN85のカルボキシル末端とで行われる。[3]モノユビキチン化されたCIN85、polyubiquitination(ポリユビキチン化)されたEGF受容体、そしてCb1の複合体が一緒に分解過程へ移行する。1.ASPTの機能に関する研究成果我々が発見・命名した脳特異的に発現する新規H^+輸送体(ASPT)の細胞内ドメインにc-JunN-terminal Kinase(JNK)に結合するアミノ酸配列を発見した。この配列は^<455>KRPQTLAL^<462>で第6と第7膜貫通部位の間の細胞内に位置している。

このことからJNKがASPTの機能発現、細胞内情報伝達機構、Internalization、分解過程などに関与していることが示唆された。2.細胞外H^+濃度の上昇に対するJNKの機能に関する研究成果(研究発表:雑誌発表参照)(1)上記の発見から細胞外H^+濃度の上昇に対するJNKの挙動について検討した。培養した293cellsをpH7.40から6.60のH^+濃度の培養液で60分間培養した。H^+濃度の上昇に伴いJNKのリン酸化(phosphorylation)が有意に認められた。JNK自体の発現には変化はなかった。また、同じレベルでのキナーゼであるP38MAPKやP42/44ERKの発現・リン酸化にも変化はなかった。(2)このJNKのリン酸化機構に細胞内のCa^<2+>濃度の上昇が関与しているかを明らかにすうためにL型Ca^<2+>チャンネルの阻害剤であるNimodipineを用いてその影響を検討した。pH6.60での培養に対して10^<-6>M、10^<-5>Mのnimodipine処理では有意な抑制効果は認められなかった。10^<-4>Mのnimodipine処理はnimodipine非処理に比べて約40%c-Junの発現を有意に抑制した。以上得られた知見からASPTのH^+濃度上昇に伴う機能発現はASPTのJNK結合ドメインとリン酸化されたJNKとの相互作用によるものであることが示唆された。I.細胞外H^+濃度上昇に伴う情報伝達に関与する新たな機序を解明した。[2]中枢性化学受容機構を担う神経細胞の同定やその特性、受容機構のメカニズムについて現在までの研究の成果等を総説として書き著わした。これはCellular SignalingにReviewとして掲載された(Vol.17,799-808,2005)。II.脳特異的に発現する新規H^+/グルコース輸送体Past-Aは膜蛋白質の輸送に関与するCIN85と結合する。[1]Past-Aは自身のProline-rich motif(PXXP)を通じてCIN85のSH3ドメインと結合することを明らかにした。CIN85(Cbl interacting protein 85 kDa)は膜蛋白質、特にトランスポーターや受容体などのエンドサイトーシスに必須の分子である。このことはPast-Aの機能はCIN85によって制御されていることを示唆する。III.CIN85のノックアウトマウスを作製した。[1]CIN85ノックアウトマウスの作製に成功した。このマウスの脳にはCIN85のタンパク質が発現していないことを抗CIN85抗体を使ったウェスタンブロット法にて確認した。
日印・日本語教育支援プログラムの開発に関する基礎研究

本研究は、インドの日本語教育の現状が、学習者と企業のニーズに合っていないという指摘を踏まえ、その改善に向けて日印間のビジネス上の問題点を探ることを第一の目的とした。その上で、シラバスや日本語を教える際に必要となるリソースリストを開発し、具体的な支援の方向性を打ち出すことを第二の目的とした。インド3都市と日本(東京)でインタビューやPAC分析を行った結果、日本語それ自体に誤りがない場合でも日本人に誤解を与えてしまうインド人の言語行動が明らかになった。非言語行動においては、タイムマネージメントや責任の与え方など仕事のやり方やビジネス習慣の相違、人事評価の相違が摩擦の原因になっていた。さらに、インド人に説明をすることなく日本のやり方を踏襲することは、インド人の早期な退職につながることなどから、コミュニケーションの重要性が示された。通訳を伴うビジネスの場面では、双方の誤解を防ぎ、理解を助けるような橋渡し的な通訳の存在が重要であることが明確になった。一連の調査をもとに、仕事の現場で生じているさまざまな問題点を、行動分析や言語使用の点から整理し、製造業を例にシラバスやリソースリスト、能力記述文、通訳プログラム等を開発し具体的な支援の方向性を打ち出した。本研究は継続申請により、引き続き教材開発とその評価のための研究を行っていく。本研究は、インドの日本語教育の現状が、学習者と企業のニーズに合っていないという指摘を踏まえ、その改善に向けて日印間のビジネス上の問題点を探ることを第一の目的とする。その上で、シラバスや日本語を教える際に必要となるリソースリストを開発し、具体的な支援の方向性を打ち出すことを第二の目的とする。初年度は次の実態調査を予定通りに行った。(1)インド国内におけるビジネス・コミュニケーション上の問題点に関する調査では、デリー、バンガロール、プネの3都市で就労しているインド人と日本人を対象としたインタビュー調査とPAC分析のための調査を行った。業者は製造業、IT関連企業が主であった。問題点に関するさまざまなケース(事例)を収集し、データのカテゴリー化を行っている。一部を日本人側の葛藤の多様性と学びという観点で研究発表した。(2)日本語教育現場における実態調査上記3都市で日本語教育現場の課題(大学、日本語学校他)についてインタビュー、授業観察、PAC分析を行った。教育現場では教授法の知識が不足していること、ビジネスに関する情報を必要としていること、教師のビリーフが変わらず学習ニーズと現場で教えていることとの間に差が見られることなどがわかった。職務遂行の観点から実践を振り返ることと職務に焦点を当てた教えかたが重要であること、共生日本語の視点を持つことが肝要であることも見出された。成果の一部を学会・研究会、講演やセミナー等で発表した。本研究はインド人対象の日本語教育の現状が、学習者と企業のニーズに合っていないことを踏まえ、その改善に向けて、日印間のビジネス上の問題点を探ることを第一の目的とする。その上で、シラバスや日本語を教える際に必要となるリソースリストを開発し、具体的な方向性を打ち出すことを第二の目的としている。21年度は、企業と日本語教育現場において実態調査を行った。(1)ビジネス・コミュニケーション上の問題点に関する調査年々インドに進出する企業の数が増える中、日本国内で大手企業やJETRO等のHPや各種資料、セミナーを通して企業動向を把握した上で、研究対象に選定された企業(主に製造業とIT関連企業)についてインド(バンガロール)と日本(東京)でデータ収集を行った。主に、インド人ビジネス関係者と日本人ビジネス関係者に対する個別面接調査と、ビジネス関係者に対するPAC分析によるものである。文字おこしを行いデータベース化し、ケースメソッド等に基づき分析を進めた。(2)日本語教育現場における実態調査インド人に対する日本語教育現場に関しては、インド人教師と学習者双方に対する個別面接調査、授業観察等をバンガロールの教育機関で行った。日本人教師に対しては個別面接調査及びPAC分析をした。分析の結果、課題達成能力と問題解決能力の視点が教育現場に欠けていることなどが明らかになった。(1)と(2)で得られた知見を教材化するために、国内でパイロット調査を行った。その後日本語学習者対象と日本語教師対象のワークショップをそれぞれ開催し教材の効果を検討した。

その結果(一部)は、日本語教育学会(春季)、日本語教育世界大会(オーストラリア)で発表した。学会の現職者教師研修においても成果を取り入れ研修を行った。本研究は、年々日印関係が深まる中、インドの日本語教育の現状が、学習者と企業のニーズに合っていないという指摘を踏まえ、その改善に向けて日印間のビジネス上の問題点を探ることを第一の目的とする。その上で、シラバスや日本語を教える際に必要となるリソースリストを開発し、具体的な支援の方向性を打ち出すことを第二の目的とする。22年度は、以下の研究を行った。(1)インド国内におけるビジネス・コミュニケーション上の問題点に関する調査インド国内で就労しているインド人と日本人、国内在住のインド人(ブリッジ人材を含む)に関するデータ分析を行った。さらに、ビジネスで重要な役割を担う通訳に対して調査を行い、通訳(インド人)として必要な資質や求められる能力の解明を行い、アジアの枠組みで整理し世界日語教育大会等で発表した。(2)日本語教育現場における実態調査通訳に必要な能力の解明を踏まえ、インドの教育機関で使用されている現行シラバスの質的分析を通じて改善点を検討した。さらにインドの通訳養成プログラムをインド人教師等と計画、実験授業を行い検証し、成果と今後の課題を社会言語科学会で発表した。インドの日本語教育現場の現状を、インド人と日本人教師へのインタビューにより明らかにした。インド人に適した学習方法についての知識やリソース教材が不足していることが示されるとともに、これまでの調査研究からコミュニケーション能力と問題解決能力、課題達成の視点が重要であることがわかった。そこで教材の開発に取り組み、一部を論文や日本語教育学会で発表した。ビジネス日本語教育を活性化するために、日本語教育学会等と連携をし、ビジネス日本語研究会を国内でたち上げ、年3回の研究会を企画し教師間等のネットワークづくりを行った。
日本人的特性やQOLを考慮した虚血性心疾患患者の行動パターン修正プログラムの作成

虚血性心疾患(以下IHD)患者でタイプA行動パターン(以下タイプA)を示す患者の行動修正を目的に、日本人的特性やQOLを考慮した内容のプログラムを以下の手順で作成し、その過程から当該分野における特徴的な知見を得ることができた。(1)発症前はタイプAであったが発症後にタイプAを修正できた患者とできなかった患者の両方に面接を行い、それぞれの特徴的な点を導き出した。その結果タイプAを修正できなかった患者では、仕事に対して自分自身の徹底した信念をもっており、それが生きる上での支えになっていること、タイプAであり続けることがよくないことはわかっているが、タイプAである自分の存在価値は認めており、だからその行動パターンを変えたくない思いが自分の根底に存在していることが判明した。また患者がタイプAのままでいることが療養生活での必要な行動をとるということによい影響を及ぼしているのではないかとも示唆された。(2)(1)で得られた結果を参考にプログラムを作成した。プログラム作成にあたり、認知療法的アプローチと教育療法的アプローチの両方の利点を取り入れた。さらにストレス緩和を目的として、仕事時間内における有効な余暇の取り入れ方や余暇時間でのリラクゼーション技法の活用方法を取り入れたものとした。(3)(1)のタイプAを修正できなかった患者に外来受診時の待ち時間を利用してプログラム介入した。その際患者自身のタイプAの認識や行動修正できないという思いについての把握、行動修正への意欲および行動修正可能と思う行動の確認等も面接法で実施した。(4)(3)で得られた反応を参考にしながら、今までに行動修正についての指導を受けたことがないタイプAのIHD患者にプログラムに沿って介入し、どんな患者に対しても使用できる内容であるか、また改良すべき部分はどこかについて検討した。今後は作成したプログラムをより多くのIHD患者に使用しさらなる改良を加えることで行動修正の効果的な介入への手だてとしていきたい。金沢大学医学部附属病院第2内科循環器外来に定期的に通院している虚血性心疾患(以下CHD)患者で発症前はタイプAであったが発症後にタイプAを修正できた患者(7名)とできなかった患者(15名)の両方に面接を行い、それぞれの療養生活を細かくとらえながら、思考プロセス、感情、環境要因について分析し、それぞれの特徴的な点を導き出した。その結果、(1)タイプAを修正できた患者では、過去の自分の役割や責任を強調する、完全に自己肯定はしていないがとりあえず現在の自分を肯定している、仕事や子どもの成長過程に伴ったストレス、世代交代時の決断を病気の発症およびタイプAの理由にあげているといった概念が示された。(2)タイプAを修正できなかった患者では、現在の自分の療養生活に対して自信をもっている、物事はスケジュール通りに行わないと気が済まない、病気になったことで自分の中のタイプAの部分は減ってきているといった概念が示された。またタイプAが修正できていない患者においては療養生活における必要な行動がとれているのは、むしろ患者自身がタイプAのままでいるということがよい影響を及ぼしているのではないかとも示唆された。以上より今後は疾病のコントロール状況への影響も考慮しつつ、タイプAの中でも修正必要な部分と修正不必要な部分についての検討やどのような行動パターンが療養行動として望ましいのかを考慮した行動修正プログラムを検討し、患者への介入をしていきたい。虚血性心疾患(以下CHD)患者でタイプA行動パターンを示す患者に対し、行動修正のためのプログラムを作成した。プログラム作成にあたり以下のことを考慮した。(1)認知療法的アプローチと教育療法的アプローチの両方の利点を取り入れた。

(2)CHD発症後もタイプAであった患者の「自分の療養生活に対して自信を持っている」「物事はスケジュール通りに行わないと気が済まない」といった昨年度の研究で導き出された結果も考慮した。(3)タイプAとCHDとの関係において着目されているストレスとの関係についても着目し、ストレス緩和の方法についてもプログラムに取り入れていくこととした。また作成したプログラムは患者の外来受診時の待ち時間を利用して面接法で実施していくこととし、内容は(1)患者自身のタイプAの再認識(2)行動修正できないという思いについての把握(3)行動修正への意欲および行動修正可能と思う行動の確認といったことや、日本人的特性と特徴づけられる仕事中心のライフスタイルの中でのストレス蓄積の緩和目的としての(4)仕事時間内における有効な余暇の取り入れ方や余暇時間でのリラクセーション技法(筋弛緩法や自律訓練法、瞑想法など)の活用方法を取り入れたものとした。今後はこの作成したプログラムを患者への介入に実際に活用し、疾病のコントロール状況やQAL、行動修正に対する患者の認識などの推移を経過観察していきたい。本研究の初回面接調査(虚血性心疾患発症後もタイプA行動パターンを修正できなかった患者に「行動パターンを修正しなかったあるいはできなかったのはなぜか」についての面接調査と行動修正の必要性についての説明を実施)の3年後の時期にあたる今年度に、患者が実際の日常生活の中で自身のタイプAをどのようにとらえながら生きてきたかについて、再度面接調査を行った。その結果、患者は1.前回の面接時よりも仕事量を減らしていることを自覚している2.行動パターンがタイプAであることは生まれつきのものであり修正することは困難である3.修正することについて努力はしている、しかし日常生活上タイプAであることは必要な場合もあり、それで心臓もよい状態が続いているので今の生活で自分は満足しているといった共通の思いを抱いていることが示唆された。また患者の認知の歪みが行動修正できない理由と関係するのではないかとの予測から、患者自身にどの程度の認知の歪みが存在するのかについて、バーンズ(Burns, D.D.)の認知の歪みの10パターンを参考に評価し、患者の特性を導き出した。そして患者には認知の歪みはストレスを増悪させることを説明し、ストレス緩和のために日常生活のなかで休息時間をとる必要性およびそのときに簡単に取り入れることができると思われるリラクゼーション技法についての説明を行った結果、患者から良い反応を得ることができた。今後はこの作成したプログラムをより多くの虚血性心疾患患者に実際に使用していき、また患者は一度タイプBに行動修正できた後再度タイプAに逆戻りすることもありうることから、患者の観察、必要時の再指導を継続して行っていくことが課題である。
安定相および準安定相の共存する合金中の析出・溶解反応

ジユラルミンや超々ジュラルミンなどの実用高強度合金は準安定相による析出硬化現象を利用しているが,溶体化処理後の時効加熱処理によって準安定相の分布組織を制御し最適な機械強度特性を実現するためには安定相をも含めた各組織相の相変態に関する速度論的知見が重要である。本研究では、準安定相と安定相の溶解および成長反応とが同一合金中において同時に進行する固相反応の一般的な特徴を明らかにするために,Cu-Fe二元系をモデル系として選定しfcc-Cu母相中におけるfcc-Fe相からbcc-Fe相への相変態を速度論的立場より実験的に検討した。得られた結論を以下に示す。Cu-1.5mass%Fe合金に1273Kにおいて4hの均質化処理を施した後,973Kにおいて最長30hの時効加熱処理を行った。その際,準安定fcc-Fe相がfcc-Cu母相中にまず析出しはじめるがすぐに溶解反応が進行し,同析出相の粒径は2,4,8,14および24hの各時効時間において41,39,35,30および0nmと変化する。一方,これと平行して安定bcc-Fe相の析出反応が進行する。2,4,8,14および24hの各時効時間において,同析出相の粒径は62,78,88,90および91nmと変化し,最終体積率に対する各時間の体積率の比は0.18,0.3,0.55,0.85および1.0と増加する。その際,fcc-Fe相とfcc-Cu母相にはパラレル方位関係が成立し、bcc-Fe相はfcc-Cu母相とKurdjumov-Sachsの関係を維持するように生成する。
ヘモグロビンの構造変化のX線結晶解析

今年度の研究は次の四点である。1.時分割ラウエ法の最初の試料として、光でCOが解離し、COが解離してもあまり大きな構造変化を起こさず、COの解離で結晶がこわれず、COは比較的ゆっくり再結合するヘモグロビン(Hb)の候補であるα_2^<87His→Phe>(Fe-CO)β_2(Ni)を組換DNA法と化学修飾で作った。しかし、α^<87His→Phe>の大腸菌での発現効率が低く、最初の試料には適さないことがわかった。急遽α_2(Mg)β_2^<67Val→Ile>(Fe-CO)にのりかえ、これを作り、現在結晶化している。結晶が得られれば、3月のマシンタイムに、変異を導入していない試料とともに、測定にかける予定である。2.光解離性の架橋試薬BNBAを使って,HbをO_2非結合型(deoxyHb)の構造に固定することを試みた。cagedTstateを作る試みである。BNBAをdeoxyHbと反応させ、その中から2量体に割れなくなった部分を取出し、酸素平衡曲線を測定したところ、O_2が結合しにくくなった成分があった。β93のSH基と、近くのα鎖のLysとの架橋がねらいだったが、β93SHが使われずにβ鎖どうしに架かった可能性が高く、その場合は光解離性が失われているかもしれない。この架橋Hbの性質を明らかにする仕事を急いでいる。3.deoxyHbの硫安で作った結晶中で、分子間でイオン結合を作っているα鎖のGluとβ鎖のLysの片方を、電荷のないアミノ酸に置換した2種類のHbを組換DNA法で作った。まだ結晶化を試みていない。4.タンパク分子の結晶中での性質を直接調べる手段として、顕微分光光度計のもとで、単結晶のまわりのO_2濃度を変化させながら、光吸収スペクトルをとることで、酸素平衡曲線を測定できるようにした。
機能性人工薬物結合性タンパク質モジュールの創製と薬剤学的応用に関する研究

(1)apo-NCSにおけるクロモホア結合に関わるアミノ酸側鎖を探る目的で、apo-NCSのクロモホア結合ポケットの入り口部分に位置するアミノ酸であるSer98をそれぞれAla、Cys、Gly、Thrに置換したapo-NCSアミノ酸置換体を作製した。(2)蛍光法によるapo-NCS簡易測定評価系を用いて、疑似クロモホアであるEtdBrとapo-NCS変異体との結合能を評価した結果、よりクロモホアとの結合活性の高いapo-NCSアミノ酸置換体(S98G)が得られ、apo-NCSを基本骨格とした超天然型apo-NCSの創製に期待が持たれた。(5)ランダム化apo-NCS変異体遺伝子ライブラリーを用い、ファージディスプレイ法にてグリチルレチン酸反応性apo-NCS変異体を単離・選別した結果、反応性が付与されたクローンを得ることに成功した。今後は、単離したクローンのより詳細な構造解析を進めるとともに、in vitroおよびin vivoにおける解毒作用を評価する系を確立していく予定である。本研究は遺伝子工学的手法とプロテオーム技術を用いて、天然由来のクロモホア結合性タンパク質を改変し、天然物が持っていない高精密機能を有する超タンパク質を創製し、医薬品の適正使用への臨床応用を提供するための基礎的研究を行うことを目的とする。タンパク質複合型抗癌抗生物質ネオカルチノスタチン(NCS)は、113アミノ酸のポリペプチド(NCS-apo)とクロモホア(NCS-chr)で構成される。天然のNCS-apoの機能は、疎水性ポケットに化学的に不安定なNCS-chrを包接するタンパク質である。NCS-chrとの結合に関与するNCS-apoのアミノ酸残基はタンパク質内部の他の残基とは相互作用せずタンパク質のフォールディングに直接関わっていないことが多い。NCBI登録の1NCOを解析し、NCS-chrから5Å以内に位置するアミノ酸残基を抽出し、続いてKH Kimらが示したapoNCSのトポロジーダイアグラムを考慮し、変異を入れる領域A(Pro49Phe52)、領域B(Phe76Gly80)、領域C(Gln94Ser98)を決定し、対応する変異導入用プライマーをデザインした。Megaprimer site-directed mutagenesis法とover-lap extension PCR mutagenesis法を組合わせ、目的の変異ライブラリーを調製した。その際、鋳型DNA調製にDam methylase/DpnI法の導入を検討した結果、本法がライブラリーへの変異導入効率を向上させるために有効であることを明らかにした。調製したNCS-apo変異ライブラリーを大腸菌発現ベクターに挿入し、選別培養を行うことにより、エチジウムブロマイドに対して親大腸菌株に比べ、耐性を示す大腸菌数株の単離に成功した。現在、遺伝子配列解析を継続中である。(2)蛍光法によるapo-NCS簡易評価系を用いて、擬似クロモホアであるEtdBrとapo-NCS変異体との結合能を評価した結果、よりクロモホアとの結合活性の高いapo-NCSアミノ酸置換体(S98G)が得られ、apo-NCSを基本骨格とした超天然型apo-NCSの創製に期待がもたれた。(3)Megaprimer PCR mutagenesis法、overlap extension PCR mutagenesis法を用い、apo-NCSのクロモホア結合に関与すると思われる、領域A(49-52,PADF)、領域B(76-80,FLFDG)、領域C(94-98,QVGLS)の14アミノ酸側鎖のランダム化apo-NCS変異体遺伝子ライブラリーを作製した。(4)Megaprimer PCR mutagenesis法、overlap extension PCR mutagenesis法にdammethylation/DpnI digestionを組み合わせ、よりランダム変異導入効率のよいランダム化apo-NCS変異体遺伝子ライブラリーの作製に成功した。(5)ランダム化apo-NCS変異体遺伝子ライブラリーを用い、ファージディスプレイ法にてGA反応性apo-NCS変異体を単離・選別した結果、GA反応性が付加されたクローンC5-32、C5-37、C5-38、C5-41、C5-54を得た。