hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
三対6筋の協調制御機能を有するロボットアームの動作特性に関する研究

本研究の着目点は三対6筋の協調制御機能であり,三対6筋とはヒト四肢の大腿部や上腕部に存在する各関節の拮抗一関節筋ペアと二つの関節に同時に関与する拮抗二関節筋ペアによる筋構成である.ヒト四肢の筋配列を模倣した三対6筋を有する二関節リンクモデルにより,静的条件下の力制御をおこなう筋の協調制御パターンが理論的および実験的に明らかになった.本研究はこの三対6筋の機能を有する能動的なロボットアームの開発を目指している.そこで,ヒトの歩行運動に着目し,静的条件下の力制御をおこなう三対6筋の協調制御パターンと動的な歩行の軌道の関係を明らかすることを試みた.ここではヒトの動作筋電図学的解析を用いて,下肢大腿部における三対6筋の協調制御パターンを皮膚表面双極誘導法を用いて明らかにし,その筋活動の変化と歩行における動的な筋活動の変化を比較した.しかし,歩行離床時の足関節の一関節筋の活動は歩行軌道に大きな影響を与えるため,ここでは,着床をしない空中における足関節の移動(模擬歩行)をおこなった.この模擬歩行での被験筋は皮膚表面から筋活動が計測可能な股関節の一関節筋である大殿筋,膝関節の一関節筋である内側広筋,大腿部前面の二関節筋である大腿直筋,大腿部後面の二関節筋である半腱様筋の4筋とし,被験者は20歳前後の健常男子6名とした.その結果,静的条件下の力制御をおこなう三対6筋の協調制御パターンの主働筋の推移と同じように,模擬歩行における軌道制御でも同じ筋活動の推移,すなわち,内側広筋から大殿筋,大殿筋から半腱様筋,半腱様筋から大腿直筋,大腿直筋から内側広筋と主働筋が変化することが明らかになった.これより,三対6筋の協調制御パターンと動的な歩行の軌道は密接な関係あることが伺え,歩行においても三対6筋の協調制御機能を考慮に入れた手法の必要性が明示できた.また,この三対6筋の活動による軌道はロボット工学的な理論解析とも一致した.ヒト四肢の筋配列を模倣した三対6筋を有する二関節リンクモデルにより,静的条件下の力制御を行う筋の協調制御パターンが理論的および実験的に明らかになった.着目した三対6筋とはヒト四肢の大腿部や上腕部に存在する各関節の拮抗一関節筋ペアと二つの関節に同時に関与する拮抗二関節筋ペアによる筋構成である.本研究は三対6筋の機能を有する能動的なロボットアームの開発を目指している.そこで,ヒトの歩行運動に着目し,静的条件下の力制御を行う三対6筋の協調制御パターンと動的な歩行の軌道の関係を明らかすることを試みた.特に,ここでは歩行における動作筋電図学的解析に注目し,歩行着床中の姿勢変化による抗重力方向の変化と三対6筋の活動の変化を明らかにした.解析に用いた歩行着床時の姿勢は前傾姿勢,正常歩行,後傾姿勢の3姿勢とした.これより,抗重力方向(着床姿勢)の変化に伴い,三対6筋の活動パターンが変化することが明らかになった.すなわち,抗重力筋である膝関節の一関節伸筋(内側広筋)は絶えず活動している状態で,前傾姿勢になると股関節の一関節伸筋(大殿筋)の活動が増加し,後傾姿勢になると大腿部前面の二関節筋(大腿直筋)の活動が増加することがわかり,抗重力方向の変化にともない,大腿部前面の二関節筋と股関節の一関節伸筋の間で筋活動の推移があることがわかった.この結果,この筋活動の推移は抗重力方向によって自動的に変化することが明らかになり,歩行パターンの生成に三対6筋の協調的な活動の推移があることがわかった.また,この筋活動の推移は静的条件下の力制御を行う三対6筋の協調制御パターンと密接な関係があることが伺えた.本研究の着目点は三対6筋の協調制御機能であり,三対6筋とはヒト四肢の大腿部や上腕部に存在する各関節の拮抗一関節筋ペアと二つの関節に同時に関与する拮抗二関節筋ペアによる筋構成である.ヒト四肢の筋配列を模倣した三対6筋を有する二関節リンクモデルにより,静的条件下の力制御をおこなう筋の協調制御パターンが理論的および実験的に明らかになった.本研究はこの三対6筋の機能を有する能動的なロボットアームの開発を目指している.そこで,ヒトの歩行運動に着目し,静的条件下の力制御をおこなう三対6筋の協調制御パターンと動的な歩行の軌道の関係を明らかすることを試みた.ここではヒトの動作筋電図学的解析を用いて,下肢大腿部における三対6筋の協調制御パターンを皮膚表面双極誘導法を用いて明らかにし,その筋活動の変化と歩行における動的な筋活動の変化を比較した.しかし,歩行離床時の足関節の一関節筋の活動は歩行軌道に大きな影響を与えるため,ここでは,着床をしない空中における足関節の移動(模擬歩行)をおこなった.この模擬歩行での被験筋は皮膚表面から筋活動が計測可能な股関節の一関節筋である大殿筋,膝関節の一関節筋である内側広筋,大腿部前面の二関節筋である大腿直筋,大腿部後面の二関節筋である半腱様筋の4筋とし,被験者は20歳前後の健常男子6名とした.

その結果,静的条件下の力制御をおこなう三対6筋の協調制御パターンの主働筋の推移と同じように,模擬歩行における軌道制御でも同じ筋活動の推移,すなわち,内側広筋から大殿筋,大殿筋から半腱様筋,半腱様筋から大腿直筋,大腿直筋から内側広筋と主働筋が変化することが明らかになった.これより,三対6筋の協調制御パターンと動的な歩行の軌道は密接な関係あることが伺え,歩行においても三対6筋の協調制御機能を考慮に入れた手法の必要性が明示できた.また,この三対6筋の活動による軌道はロボット工学的な理論解析とも一致した.
血小板減少症を伴う橈尺骨癒合症患者で同定されたEVI1変異体の機能解析

血小板減少症を伴う橈尺骨癒合症の患者、血小板減少症等血球異常のみの患者、橈尺骨癒合症のみの患者の検体を収集した。橈尺骨癒合症についても両側、片側、あるいは骨性癒合、線維性癒合など広範な表現型を持つ患者を解析対象とすることができた。検体としては血液のみならず頬粘膜細胞、爪、毛髪も収集した。DNAを抽出し、MECOMおよびHOXA11遺伝子の全エクソンおよび近傍のイントロンの塩基配列決定を行った。また、患者における臨床症状情報については、頻度の高い症状のみならず、これまで見過ごされていた症状の有無にも注目して臨床情報収集を続けている。また、モデルマウスの解析を行い、遺伝子変異導入個体でのgenotyping方法の確立、および表現型解析を継続した。ゼブラフィッシュをモデルとする解析を行うため、機器の購入・整備を行い、胚にmRNAやmorpholinoなどを導入する体制を整えた。Tg(CD41:GFP)(thrombocyteが蛍光標識されるトランスジェニックゼブラフィッシュ)を入手し、その胚に対してMECOMの野生型および変異型RNAを注入し、表現型の観察を継続している。また、mecomを対象としたmorpholinoを設計し、Tg(CD41:GFP)の胚に注入したところ、用量依存性に表現型の変化が観察された。より詳細な観察のための条件検討を継続している。また、CRISPR/Cas9によるmecomのノックアウト個体の作成も行い、genotyping方法の条件検討および表現型観察の条件検討を行っている。さらにF1, F2作成を行っている。モデルゼブラフィッシュの作成が確認できるまでに当初の予定よりも時間を要した。今後はモデルマウスの解析およびモデルゼブラフィッシュの解析を並行して進めていく予定である。変異が同定されない症例では新規原因遺伝子の可能性も考慮して全エクソーム解析を行う予定である。DNA収量が少ない検体については全ゲノム増幅を行うことを考慮している。患者で同定されたMECOMのバリアントを培養細胞に導入し、ルシフェラーゼアッセイにて転写調節に対する影響を解析した。その結果、既知の変異と同様の影響が見られた。バリアントの家系内でのsegregationの結果などと合わせ、論文投稿準備中である。また、モデルマウスの解析を行い、遺伝子変異導入個体での表現型を検討した。ゼブラフィッシュをモデルとする解析を東北大学内で行うため、機器の購入・整備を行い、胚にmRNAやmorpholinoなどを導入する体制を整えた。今後はTg(CD41:GFP)などのトランスジェニックラインに対して遺伝子操作を行い、病態解析を行う予定である。モデル生物として考慮していたゼブラフィッシュの飼育環境を確立するために当初の予定よりも時間を必要とした。今後はモデルマウスの解析を進め、次世代シークエンサーを用いた網羅的解析のみならず表現型の解析を進める予定である。当初ゼブラフィッシュ実験に必要な機器を購入する予定であったが、飼育システムの確立に予定より時間を必要としたため。

残額はゼブラフィッシュ実験用機器や消耗品購入等に使用する予定である。実験計画がやや遅れたため。物品費およびその他(マウス飼育の外部委託等)に使用する予定である。
低酸素トレーニングに対する循環代謝機能の経時変化とその効果の持続性に関する研究

本研究の目的は、異なる条件の低酸素トレーニングに対する循環・代謝諸指標の経時的変化とその効果の持続性について明らかにすることであった。その結果、低酸素環境下での運動は、短期間のうちに血圧、動脈スティフネスの低下といった心血管応答の改善、ならびに耐糖能の改善を誘発し、その効果は脱トレーニング8週後にも維持されることが明らかとなった。また、運動強度は50%VO2maxで十分効果があること、海抜2000mよりも2500m相当の環境の方がより短期間のトレーニングで効果が得られ、さらに2週間の脱トレーニングを挟んで反復しても、その効果は維持、あるいはさらに増大されることが明らかとなった。【目的】本年度の研究目的は、低圧低酸素環境下における運動トレーニングの強度の違いが、メタボリックシンドロームの危険因子の経時的変化、効果の持続性に及ぼす影響について明らかにすることであった。【方法】被検者は健康な成人男性12名(27±7歳)とし、50%VO2max強度(50%群)、または60%VO2max強度(60%群)でトレーニングを行う2群に分けた。トレーニングは、海抜2000m相当の低圧環境下において1回30分、週4日の頻度で、4週間行われた。トレーニング前後に、最大酸素摂取量、同一最大下強度運動(トレーニング前の50%VO2max強度)時の循環系応答、血中脂質、耐糖能等を測定した。【結果及び考察】トレーニング後、最大酸素摂取量は60%群のみ有意に増加した(P<0.05)。また、最大下運動時の循環応答については、両群ともにトレーニング開始2週後には、1回拍出量、心拍出量の有意な増大、および最低血圧、平均血圧、総末梢抵抗(血圧/心拍出量)の有意な低下(P<0.05)が観察され、これらの変化は、トレーニング終了まで維持された。また、脱トレーニング8週後においても、トレーニング後の値は維持された。これら心血管系応答の変化は、血管内皮機能の向上に伴う末梢血管抵抗、血圧の低下が、心臓ポンプへの負担を軽減させたことに起因すると考えられる。一方、血中脂質、耐糖能に関しては、もともと標準範囲であったためか、実験期間を通じて有意な変化は認められなかった。【結論】以上の結果より、低圧低酸素環境下での運動は、短期間のうちに末梢血管抵抗、血圧の低下、それに伴う1回拍出量、心拍出量の増大といった心血管応答の変化を誘発し、その変化は脱トレーニング8週後にも維持されることが明らかとなった。また、運動強度に関しては、50%VO2maxで十分な効果が得られることも明らかとなった。【目的】本年度の研究目的は、異なる低圧低酸素環境下での運動トレーニングが、メタボリックシンドロームの危険因子の経時的変化、効果の持続性に及ぼす影響について明らかにすることであった。【方法】被検者は健康な成人男性24名とし、常圧環境(常圧群)、海抜2000m相当(低圧1群)、2500m相当(低圧2群)の低圧環境でトレーニングを行う3群に分けた。トレーニングは、それぞれの環境における50%VO2max相当の強度で、1回30分、週3日の頻度で、8週間行われた。トレーニング前後に、同一最大下強度運動(トレーニング前の50%VO2max強度)時の循環系応答、耐糖能等を測定した。【結果】8週間のトレーニング後、常圧群においては何ら有意な変化は認められなかった。低圧1群においても、トレーニング開始4週後までは有意な変化は認められなかったが、8週後には最大下運動時の1回拍出量、心拍出量の有意な増大、および最低血圧、平均血圧、総末梢抵抗(血圧/心拍出量)の有意な低下(P<0.05)が観察された。しかしながら、耐糖能に関しては有意な変化は認められなかった。一方、低圧2群では、トレーニング4週間後で低圧1群と同様の循環系応答の有意な変化が認められ、さらに耐糖能についても有意な改善が認められた。また、低圧1群、2群ともに、脱トレーニング8週後においても、トレーニング後の値が維持された。【結論】以上の結果より、低圧低酸素環境下での運動は、常圧環境下のそれより短期間のうちに末梢血管抵抗、血圧の低下、それに伴う1回拍出量、心拍出量の増大といった心血管応答の変化、および耐糖能の改善を誘発し、その変化は脱トレーニング8週後までは維持されることが示された。また、その経時的変化も低圧低酸素のレベルによって影響され、海抜2000mよりも2500m相当の環境の方がより効果的であることも明らかとなった。【目的】本年度の研究目的は、25年度、26年度の結果より得られた至適条件を選択し、短期間トレーニングを間欠的に反復実施し、循環代謝諸指標の経時的変化、および効果の持続性について明らかにすることであった。【方法】被検者は健康な成人男性14名とし、無作為に2群に分けた。被検者は、常圧環境(常圧群)、または海抜2500m相当の低圧環境(低圧群)において、それぞれの環境で測定された50%VO2max強度で30分間の水中運動を4日間連続で実施した。さらに2週間の脱トレーニングを挟んで,同様の4日間連続のトレーニングを2期反復した。

トレーニング前後に、最大下強度運動時の循環系応答、血中脂質、耐糖能等を測定した。【結果】2期のトレーニング後、常圧群には、運動時1回拍出量の有意な増大を除き、他の指標に有意な変化は認められなかった。低圧群では、第1期トレーニング後に、運動時の1回拍出量、心拍出量の有意な増大、総末梢抵抗(平均血圧/心拍出量)の有意な低下が認められた。さらに、動脈スティフネスの有意な低下が認められ、それらの値は2週間の脱トレーニングを挟んでも、トレーニング終了まで変わらなかった。代謝指標、身体組成への影響としては、第1期トレーニング後に糖負荷試験によって評価されたインスリン感受性の有意な改善が認められ、体重、体脂肪率、腹膜前脂肪厚も有意に低下し、その効果はトレーニング後まで維持、あるいは増大傾向にあった。血中脂質は、トレーニング期間を通じて有意な変化は認められなかった。【結論】本結果より、海抜2500m相当の低圧環境ならば、比較的短期間のトレーニングにおいても動脈スティフネス、運動時末梢抵抗を有意に低下させ、耐糖能、身体組成の改善に対しても効果が得られること、また2週間の脱トレーニングを挟んで反復しても、その効果は維持、あるいはさらに増大されることが示唆された。本研究の目的は、異なる条件の低酸素トレーニングに対する循環・代謝諸指標の経時的変化とその効果の持続性について明らかにすることであった。その結果、低酸素環境下での運動は、短期間のうちに血圧、動脈スティフネスの低下といった心血管応答の改善、ならびに耐糖能の改善を誘発し、その効果は脱トレーニング8週後にも維持されることが明らかとなった。また、運動強度は50%VO2maxで十分効果があること、海抜2000mよりも2500m相当の環境の方がより短期間のトレーニングで効果が得られ、さらに2週間の脱トレーニングを挟んで反復しても、その効果は維持、あるいはさらに増大されることが明らかとなった。仮説通りの結果が出なかった指標もあったが、予定していた実験は概ね完遂でき、計画通りの実験を終えることはできた。運動生理学27年度は、短期間のトレーニングを一定の休息期間を挟んで反復実施し、それによる各指標の経時的変化、あるいは休息期間における効果の持続性について検討する予定である。実験条件としては、25年度、26年度の結果を踏まえ、低圧低酸素環境のレベル、短期間の日数など決める予定である。25年度は低圧チャンバーの改修工事があったため、当初予定よりも実験開始が遅れたが、年度末には概ね実験を終了し、一定の成果を得ることはできた。また、26年度の計画に向けて、研究機器、被検者・検者の確保など、研究遂行上問題なく進行している。26年度については、実験はほぼ計画通り進行できたが、消耗品が前年度の残品などで安価ですんだことや、謝金が予定よりも少なかったことから、残額が生じ、次年度の実験に回すこととした。26年度は、異なる低酸素条件下でのトレーニングを実施し、循環代謝諸指標の経時的変化、およびその後の脱トレーニングに対する効果の持続性に及ぼす影響について明らかにすることを予定している。さらに、最終年度の27年度については、25年度と26年度の結果を踏まえ、至適運動条件、至適環境下においてトレーニングを行い、短期間の効果についても検討を進める予定である。現在のところ、特に研究計画、研究課題を変更するような点はない。27年度の実験計画としては、より詳細な検討を進めるために、測定項目(特に血液検査)を増やすと同時に、主に消耗品の補充に当てる予定である。
医療ビッグデータを用いた慢性腎臓病新規治療戦略の開発

世界でも類を見ない速さで超高齢社会に突入した日本は、社会保障費の増大を中心に様々な問題を抱えている。現在、透析予備軍である慢性腎臓病(Chronic Kidney Disease; CKD)患者数は1,300万人以上と言われており、進行すれば透析が必要となる末期腎不全に至るのみならず、心血管疾患や悪性腫瘍のリスク増加にもつながる。このように、CKDを惹起・進展させないことは患者本人のみならず、医療経済学的にも非常に重要であり、CKDの病態解明と新規治療法の開発は喫緊の課題である。本研究の目的は、未だ治療薬が存在しないCKDに対する新規治療薬を医療ビッグデータを用いたデータベース解析と基礎的検証から探索することである。片側尿管結紮(Unilateral Ureteral Obstruction;UUO)誘導腎線維化モデルマウス(UUOマウス)の腎臓においてFXa前駆体FXとPARsの発現がsham群と比較して有意に増加していた。また、UUOマウスにFXa阻害剤を投与したところ、UUO誘導腎線維化や腎臓における細胞外マトリックス発現増加、マクロファージ浸潤、炎症性サイトカイン発現増加などを有意に抑制した。以上の結果から、FX-PARs経路がCKDの新規治療標的になる可能性が示された。データベース解析からFXa阻害剤使用患者において腎炎の報告割合が少ないことを明らかにした。UUOマウスの腎臓においてFX-PARs経路が活性化されており、FXa阻害剤投与UUOマウスにおいて腎線維化抑制効果や抗炎症効果など腎保護効果を確認することができた。以上の研究成果を論文(Horinouchi Y et al. Sci Rep. 2018)報告することができたため、当初の計画以上に進展していると考えられる。データベース解析と基礎的検証より抗凝固剤FXa阻害剤の腎保護効果特に腎線維化抑制効果や抗炎症効果が確認されたため、今後その腎保護効果の詳細なメカニズムについて検討を行う予定である。また、FXa阻害剤以外の腎保護薬の探索も行う予定である。3月に行われた学会の参加費や3月納品分については精算が4月に行われるため、未使用額が生じた。未使用額は4月に精算を行う予定である。
パウル・ツェラーンの抒情詩 ― 人間学と自然史のはざまに

この研究課題の目的は、一方でパウル・ツェラーンの詩作品を詳細に読み解きながら、他方でそれが、詩人自身が取り組んでいた「人間学」ならびに「自然史」の範疇と、どのようにかかわるのかを解明することにあった。その過程で、動物、植物を対象化する「自然史」に属する思考と、狂気、死によって限界づけられた現存在の「人間学」的な自己認識とが、Kreatur(「生き物」)のテーゼにおいて相互に収斂するさまをあらためて確認することができた。平成26年8月、9月には、予定どおりマールバッハ・ドイツ文学資料館において、主任司書アルノー・バルネルト博士と意見交換をおこなうかたわら、ツェラーンの詩作品と「自然史」の主題にかかわる文献、とりわけ詩人の遺したすくなからぬ蔵書を参看して、資料調査に従事した。他方で、日本オーストリア文学会例会において、シェイクスピアの『リア王』の狂気にちなんだツェラーンの詩についての講演をおこなった。フーコーを参照しつつ、「人間」の語があらわれる謎めいた詩行のなかに、人間理性の限界をこえたあらたな「人間学」への志向を看取することをこころみた。また、ルーマニア・ブカレスト大学ジョルジュ・グチュ教授の古希記念論集に、ツェラーンの詩「トートナウベルク」を対象とする論文を寄稿した。ハイデッガーの思想にかかわりつつ、そのナチスへの関与を暗示するこの詩のなかで、「人間学」的な志向がややもすれば「自然史」の領域へと偏倚していく、ツェラーンの詩作品の性格を浮かびあがらせることができた。なお研究課題と直接には連関しないが、ハンス・ディーター・ツィンマーマン『マルティンとフリッツ・ハイデッガー哲学とカーニヴァル』の日本語訳を完成し、刊行したことも付言しておいていいだろう。その訳出の過程において、ハイデッガーの思想のはらむ問題性に、なかんずく上記のツェラーンの詩作品に関係する主題に、理解を深めることができたのは、思いがけない収穫であった。平成27年度は、6月に、ツェラーンの抒情詩に関するドイツ語による論文および日本語による著書を各一点、公にしたが、これはいずれも当科研の研究課題がスタートする以前にシンポジウムでの口頭発表、およびドイツでの出版を経ていたものであった。ただし新たに稿を作成する過程で、あらためてこの詩人の作品がはらむ問題に、思いをいたすことができた。さらに7月、8月には、当初の「年次計画」にはなかったケルン大学への出張をおこなって、ドイツ文学講座のアーニャ・レムケ教授と意見を交換することができたのは、きわめて有益であった。それによって出張旅費の多くを費消した結果、12月、1月のウィーン大学およびオーストリア国立図書館における文献調査については、自己負担による渡航を余儀なくされたが、ウィーン大学クリスティーネ・イヴァノヴィッチ教授との意見交換、研究協力は予定どおり進捗して、「自然史」をめぐる一層の知見を得ることができた。「研究計画調書」の「年次計画」にも記したように、平成27年度は、ツェラーンにおける狂気と死のモティーフをとりあげて、「人間学」の準拠枠のなかで解釈することをこころみた。その意味で、ヘルダーリーン、ハイデッガー、ツェラーンにおける「中間休止」に関する浩瀚な著書のあるレムケ教授と意見交換を交わすことができたのは、予定外の収穫であった。国内では、ひきつづき東京大学、京都大学において、文献調査をおこなうなかで、必要な補足がなされつつある。当初、研究実施計画の段階において予定していたベルリン出張をとりやめることになったが、これは先方の研究協力者の事情を考慮したことによる。それにかわるものとして、平成28年9月10月にミュンヘン大学、さらに自己負担によって12月平成29年1月にチュービンゲン大学において、研究滞在をおこなった。ミュンヘンでは、その期間、受入教官のオリファー・ヤールアウス教授がたまたま不在であって、直接の意見交換はならなかったが、電子メールによって意思疎通をはかることができた。ミュンヘン大学図書館、バイエルン国立図書館での文献調査も支障なくおこなわれた。またチュービンゲンにあっては、受入教官のドロテー・キミヒ教授のみならず、ツェラーンの詩作品の実証的研究では斯界の第一人者であるバルバラ・ヴィーデマン博士と再会し、意見交換ができたことは、大きな収穫であった。またミュンヘン滞在中の平成28年10月にオーストリアのグラーツ大学で開催された、近代におけるドイツ語の発展に関するシンポジウムに参加した。定員の関係で口頭発表をおこなう機会にはめぐまれなかったが、主宰者のディートマール・ゴルトシュニッグ名誉教授の許可をえて、シンポジウムの成果をまとめる論集に、ツェラーンに関する論考を寄稿することができた。論集は今年中には刊行される予定である。本年度は、論文2点を公にするにとどまったが、これは3年におよぶ研究の成果を集約する作業に、多くの時間と努力を傾注していたためである。かくしてそれはようやく著書の形をとって、ドイツにおいて刊行される運びとなった。原稿整理その他になおいくばくかの時日を要するが、出版計画それ自体は、ヴュルツブルクのKoenigshausen & Neumann社から、基本的に承諾を得ている。

その過程で、動物、植物を対象化する「自然史」に属する思考と、狂気、死によって限界づけられた現存在の「人間学」的な自己認識とが、Kreatur(「生き物」)のテーゼにおいて相互に収斂するさまをあらためて確認することができた。「研究計画調書」の「年次計画」にも記したように、平成26年度には、主として動物、植物の形象をもちいたツェラーンの詩作品をとりあげて、その解釈をこころみた。その成果の一端は、すでに上記の論文において公にしたが、これは、最終的に企図している著書の重要な一章をなすことになろう。さらにツェラーンの詩作品を解釈する準拠枠として、従来の「哲学的人間学」を批判的に再検討していくなかで、その人間中心主義が破綻する局面において、「自然史」への推移を読みとろうとする意図も、マールバッハ・ドイツ文学資料館、および東京大学、京都大学の各図書館における文献調査によって、その正しさが立証されつつある。ひきつづき海外研究協力者との意見交換、ドイツ、オーストリアの国公立ないし大学図書館における文献資料調査を中心にして、研究をすすめていく方針である。ただし平成28年度は、当初、ベルリン自由大学への出張を予定しているのみであったが、ベルリン在住のゲーアハルト・ノイマン教授は高齢でもあり、研究協力の実があげられるかどうか、いささか懸念されるので、当初の予定にはなかったが、ノイマン教授のもとでかつて助手を務めたことがあるミュンヘン大学のオリファー・ヤールアウス教授との意見交換を、とりあえず今秋に予定している。さらに日程的に可能であれば、ベルリンその他への出張を、自己負担でおこなう所存である。ドイツ文学ひきつづき、海外の研究協力者との意見交換、ドイツ、オーストリアの国公立ないし大学図書館における文献資料調査を中心にして、研究をすすめていく方針である。ただし平成27年度は、当初、ウィーン大学およびオーストリア国立図書館への出張を予定しているのみであったが、7月、8月にケルン大学への出張をおこなう必要が生じ、科研費による旅費をこれに充当する関係で、当初計画にある12月、1月のウィーン出張は、科研費の予算枠を超えることになるが、これは自己負担によって、予定どおりおこなう所存である。
歯髄幹細胞のCD44を介した象牙芽細胞分化誘導メカニズムの解明

本研究の目的は歯髄幹細胞の象牙芽細胞への分化誘導メカニズムを明らかにすることで、歯髄幹細胞を効率的に象牙芽細胞へ分化誘導する方法を見出し、新規の覆髄剤の開発や、歯髄幹細胞を用いた歯牙再生へと繋げることである。次年度である本年度は、歯髄幹細胞の象牙芽細胞分化誘導のメカニズムからヒントを得て、新たな歯髄保護治療薬のスクリーニングを検討予定であった。そこで初年度から引き続き、ヒアルロン酸による歯髄幹細胞の象牙芽細胞への分化誘導メカニズムを検討した。その結果CD44のリン酸化がこのシグナル伝達で生じていることから、CD44のリン酸化を誘導する試薬が象牙芽細胞分化には必要である可能性が明らかとなった。また一方、ビタミンKなど多くの天然物質の骨格を構成しているナフトキノン誘導体に注目した。ビタミンK2同族体の一つであるメナテトレノンは,現在骨粗鬆症治療薬や止血薬として臨床で用いられ、骨の形成、組織の石灰化や血液凝固に関与することが知られていることから、ナフトキノン誘導体に歯髄幹細胞の象牙芽細胞への分化誘導能がないか検証した。その結果、ヒアルロン酸よりも有意に歯髄幹細胞の象牙芽細胞への分化誘導能がなるナフトキノン誘導体を発見した。研究計画通り、新たな歯髄保護治療薬のスクリーニングを検討を行った結果、有望な物質を見つけたためである。二つの研究を計画している。一つはナフトキノン誘導体がどのように歯髄幹細胞を象牙芽細胞へと分化誘導するのか、そのシグナル伝達を検討する。一つは、ラットモデルにおいて、露髄させた歯牙の覆髄剤としてナフトキノン誘導体が有用であるのか検証することである。動物モデルでの検証は時間がかかることが予想されるので、本年度中に結果が出せないことも予想されるが、予備実験から始める予定である。そのため、我々の初年度の研究計画初年度の研究計画に従い、まず成人臼歯より作製された歯髄幹細胞株(Dental Pulp Stem Cells, Adult Teeth: DP003F, ALLCELLS)を用いて、ヒアルロン酸によるCD44を介した象牙芽細胞分化誘導を詳細に検証した。方法としては事前の我々の研究より、ヒアルロン酸10μg/mLの刺激により、象牙芽細胞マーカーである、DSPPとDMP-1が誘導されることをウエスタンブロッティング法にて確認してあるので、象牙芽細胞分化誘導の主要なシグナル伝達経路であるAkt,、MAPKのリン酸化を検証し、ヒアルロン酸によりそれらのシグナル伝達経路が活性化されているかを検証した。その結果、ヒアルロン酸により歯髄幹細胞はAktとMAPKの双方のシグナルが活性化されていた。そこで、AktもしくはMAPKのシグナルを抑制した場合、象牙芽細胞への分化誘導が抑制されるか検証したが、それらのシグナルは象牙芽細胞への分化に直接影響していなかった。今後は、他のシグナル伝達経路を模索する一方、AktとMAPKのシグナル両方を同時に抑制した場合、象牙芽細胞への分化誘導が抑制されるか検証する。また、一方で、炎症状態におけるヒアルロン酸による象牙芽細胞への分化誘導への影響を検証するため、まずはCOX1とCOX2が検証できるように予備実験を行い、ウエスタンブロッティング法にて歯髄幹細胞のCOX1とCOX2を観察できるようになった。今後は、LPSもしくはIL-1betaなどで、炎症刺激を加えた場合の象牙芽細胞分化誘導への影響を検証する予定である。本研究の目的は歯髄幹細胞の象牙芽細胞への分化誘導メカニズムを明らかにすることで、歯髄幹細胞を効率的に象牙芽細胞へ分化誘導する方法を見出し、新規の覆髄剤の開発や、歯髄幹細胞を用いた歯牙再生へと繋げることであり、研究初年度は歯髄幹細胞の象牙芽細胞への分化誘導の詳細を明らかにすることと、炎症状態における象牙芽細胞分化誘導を検証する予定ではあった。しかしながら、両方の計画とも着実に進行してはいるものの、最終的な結論までには至っていない。

その結果、ヒアルロン酸よりも有意に歯髄幹細胞の象牙芽細胞への分化誘導能がなるナフトキノン誘導体を発見した。研究計画通り、新たな歯髄保護治療薬のスクリーニングを検討を行った結果、有望な物質を見つけたためである。歯髄幹細胞の象牙芽細胞への分化誘導メカニズムを解明するため、Akt、MAPK以外のシグナル伝達経路を模索する一方、AktとMAPKのシグナル両方を同時に抑制した場合、象牙芽細胞への分化誘導が抑制されるか検証する。また、炎症状態における歯髄幹細胞の象牙芽細胞分化誘導の検証に関しては、LPSもしくはIL-1betaなどで、歯髄幹細胞に炎症刺激を加えた場合の象牙芽細胞分化誘導への影響を検証する予定である。二つの研究を計画している。一つはナフトキノン誘導体がどのように歯髄幹細胞を象牙芽細胞へと分化誘導するのか、そのシグナル伝達を検討する。一つは、ラットモデルにおいて、露髄させた歯牙の覆髄剤としてナフトキノン誘導体が有用であるのか検証することである。動物モデルでの検証は時間がかかることが予想されるので、本年度中に結果が出せないことも予想されるが、予備実験から始める予定である。研究初年度は歯髄幹細胞の象牙芽細胞への分化誘導の詳細を明らかにすることと、炎症状態における象牙芽細胞分化誘導を検証する予定ではあったが、着実に研究は進行しているものの、予備実験の段階で停滞したため。初年度に引き続き、歯髄幹細胞の象牙芽細胞への分化誘導メカニズムを解明するため、主に、ウエスタンブロッティング用抗体を購入する予定である。「今後の研究の推進方策」通り、研究を進めるため研究消耗品で使用する予定である。
糖脂質の糖鎖に多様性を生み出す糖転移酵素遺伝子のクローニングと機能解析

糖転位酵素ホモログLARGEは2型膜蛋白質で、N末側にUDP-グルコース:糖タンパク質グルコース転移酵素(UGGT)、C末側にβ1,3-N-アセチルグルコサミン転移酵素(iGnT)とホモロジーを有する特徴的な構造をしている。UDP-グルコース:糖タンパク質グルコース転移酵素(UGGT)は糖蛋白質のフォールディングセンサーとしてER品質管理機構に関与するし、再グルコース化された糖蛋白質はER分子シャペロンであるカルネキシン/カルレティキュリンと結合することにより、フォールディングが完了するまでER内に滞留させる働きをしている(カルネキシンサイクル)。本年度はUGGTとホモロジーを有するLARGE蛋白質がカルネキシンサイクルに関与するを調べる目的で、LARGE蛋白質とカルネキシン/カルレティキュリンとの相互作用について検討した。FLAG-tagged LARGE遺伝子をCOS-7細胞に強制発現させて、anti-FLAG抗体を用いた蛍光抗体染色によりLARGE蛋白質の細胞内局在を検討したところ、小胞体(ER)特異的な染色パターンを示し、またERマーカーのカルネキシン、およびカルレティキュリンとco-localizeすることが判明した。さらに、LARGE蛋白質はEndo Hに対して感受性を持つことより、ER局在蛋白質である可能性が示唆された。293細胞を用いた安定発現系でFLAG-taggedLARGE蛋白質を発現させて、anti-Calreticulin,およびanti-Calnexin抗体で免疫沈降を行うと、LARGE蛋白質が特異的に共沈することを見い出した。また、他のER分子シャペロンのPDI,ERp58,およびBiPに対する抗体で免疫沈降してもLARGE蛋白質は共沈されなかった。LARGE蛋白質とCalreticulin,およびCalnexinとの共沈はグルコシダーゼ阻害剤のcastanospermine(CST)およびtunicamycin(TU)で処理を行っても阻害されなかったことから、蛋白-蛋白相互作用による複合体形成が示唆された。GST-LARGE融合蛋白と^<125>I-CRを用いた結合実験から、in vitroにおいてもLARGE蛋白質とCalreticulinとの特異的結合が観察された。また、Calreticulinとの結合にはLARGE蛋白質のUGGTドメインが必要であることが示唆された。本年度はラクトトリアオシルセラミド(Lc3)合成酵素であるβ1,3-N-アセチルグルコサミン転移酵素遺伝子のクローニングを試みた。唯一、クローニングされているβ1,3-N-アセチルグルコサミン転移酵素遺伝子(iGnT)とC.elegansのiGnTホモログのシークエンスを基にしたdegenerate PCR primerを作成し、ヒト胎児脳cDNAを鋳型にしてPCRクローニングを行った。その結果、今回クローニングした遺伝子はPeyrardらが報告したAcetylglucosaminyltransferase-like protein:LARGEの遺伝子と同一であった。LARGE遺伝子産物は2型膜蛋白質であり、coiled-coilモチーフが2ケ所、またN末側にグルコース転移酵素様ドメインとC末側にβ1,3-N-アセチルグルコサミン転移酵素様ドメインを持っている。LARGE遺伝子座は、大腸癌、卵巣癌、肺癌、髄膜腫において高頻度に染色体欠損が認められるヒト染色体22番上の22q12.3-q13.1の>1Mbpの広い領域に位置しているので、これらの腫瘍の癌抑制遺伝子の有力候補と考えられる。大腸癌の進展に伴い染色体q22の欠失の頻度が高まることがよく知られているので、進行度の異なるヒト大腸癌について、LARGE遺伝子の発現を検討したところ、良性のアデノーマおよび進行度の低い大腸癌では強く発現しているが、悪性大腸癌においてその発現が低下する。さらに染色体q22が欠失している悪性大腸癌では、full-length LARGE mRNAの割合が減少し、エクソン4をスキップするLARGE-S mRNAの割合が増加することを見い出した。さらに、LARGEおよびLARGE-S発現ベクターをCOS-7細胞に遺伝子導入して、各々の蛋白質を作らせてみたところ、LARGE-S蛋白はN末側のシグナルペプチド、膜貫通ドメイン、coiled-coilモチーフを欠く短い蛋白質が作られることを見い出した。293細胞を用いた安定発現系でFLAG-taggedLARGE蛋白質を発現させて、anti-

Calreticulin,およびanti-Calnexin抗体で免疫沈降を行うと、LARGE蛋白質が特異的に共沈することを見い出した。また、他のER分子シャペロンのPDI,ERp58,およびBiPに対する抗体で免疫沈降してもLARGE蛋白質は共沈されなかった。LARGE蛋白質とCalreticulin,およびCalnexinとの共沈はグルコシダーゼ阻害剤のcastanospermine(CST)およびtunicamycin(TU)で処理を行っても阻害されなかったことから、蛋白-蛋白相互作用による複合体形成が示唆された。GST-LARGE融合蛋白と^<125>I-CRを用いた結合実験から、in vitroにおいてもLARGE蛋白質とCalreticulinとの特異的結合が観察された。また、Calreticulinとの結合にはLARGE蛋白質のUGGTドメインが必要であることが示唆された。
イラン・イスラーム共和国における選択的人工妊娠中絶：障害者の生きる権利をめぐって

本研究では、イラン・イスラーム共和国における選択的人工妊娠中絶をめぐる議論と実践を、障害者の生きる権利に注目して分析する。これによって、選択的人工妊娠中絶と優生政策の連続性/非連続性を論じる欧米・日本の生命倫理の議論に異なる視点を提示すると同時に、現代イラン社会を理解することを目的とする。多角的な情報収集のため、以下の三つの視点からイランの状況を調査する。(1)政策決定機関/女性団体/障害者・患者団体/障害者家族団体/医療専門家団体など、互いに利益が相反する諸立場の主張、(2)実践の場の臨床的倫理問題、(3)選択的人工妊娠中絶が許可された疾患・障害をもって生まれた者たちの生活実態。1年間の研究期間延長後の最終年度にあたる2018年度は、成果発表に重点を置いた。(A)出版予定の論文等の内容を患者団体に確認してもらうことを目的に、9月に海外渡航をおこなった。(B)上智大学イスラーム研究センターの協力を得て、イランで選択的人工妊娠中絶の対象となる遺伝性疾患の一つ、重症型サラセミア患者の生活実態調査の結果を、イランにおける患者のアドヴォカシー活動の民族誌として英語で出版した。(C)重症型サラセミア患者の生活実態の調査で得た知見を、中東における共生とマイノリティをテーマとした公開シンポジウムで発表した。(D)本研究で調査対象とした重症型サラセミア/血友病の患者は、有効な完治療法がなく、慢性的な痛みを抱えて生活することから、イランでは「緩和ケア」の対象者として認識されている。これをふまえ、イスファハン医科大学・笹川平和財団の協力を得て緩和ケア/終末期ケアの共同研究を実施し、成果発表・意見交換の場として緩和ケア・セミナーを開催した(於・イスファハン医科大学)。以上の機会において、疾患・障害をもって生まれる/生活することに関連した倫理的議論について、有益な示唆を得ることができた。本年度は、イランと近隣イスラーム諸国における人工妊娠中絶、遺伝子診断、婚前スクリーニング、出生前診断に関して、医療の視点からの議論だけでなく、イスラーム法の見解をまとめた文献も広く調査した。また、ドイツやイギリス、日本の議論についても文献を渉猟した。現地調査としては、二回イランに渡航し、イランにおいて選択的人工妊娠中絶が許可されている遺伝性血液疾患、サラセミア/血友病の患者団体と、医療専門職等に対してインタビューをおこなった。また、イランの特殊性を理解するため、ドバイ、イスタンブール、アンタルヤ、チェンマイ、ロンドンのサラセミア/血友病患者団体と医療機関を訪問し、それぞれ患者と専門家にインタビューをおこなった。学術界の動向を知るため、国際学会にも参加した。さらに、サラセミアと血友病については、病態生理と患者の生活実態を理解するため、医学論文や患者の手記、各国の患者団体の活動も調査した。加えて、輸血や血液製剤使用による薬害や出生前診断時の誤診断に対する訴訟に関しても文献調査をおこなった。以上の調査で得た情報を踏まえて、翌年度に実施するサラセミア患者に対する質問紙調査を準備した。初年度は、関連する論点について、広範囲に渡る情報を収集したが、その中でも、特にサラセミア患者をめぐる議論について情報収集を進めることが出来た点が、研究の進展上、大きな転換点となった。中東地域においてはサラセミアの保因者数が多く、人工妊娠中絶、遺伝子診断、婚前スクリーニング、出生前診断をめぐる倫理的議論は、重症型のサラセミア患者の出生予防策に対する国の方針や国民の意識変化を抜きにして理解することはできない。サラセミアという疾患は、生後数ヶ月から一生涯輸血が必要となり、多くの合併症を起こすため、治療費が高額になる。この疾病の病態、起こり得る合併症や必要な医療的処置は国毎に変化するものではない。しかし、国によって可能な治療、入手可能な薬剤や病気に対する認知度が異なっており、患者の寿命や合併症の程度、社会活動への参加度、社会から受ける偏見や差別の深刻さに差がある。さらに、常染色体劣性遺伝であるサラセミアは、中東地域に広く見られるイトコ婚との関連が指摘されている。加えて、中東イスラーム地域では、医療技術の提供に際して、その技術のイスラーム法上の合法性が問題になるため、医療政策においてイスラーム法学者の見解が参照されている。以上のような様々な文脈が、各国での倫理的議論に反映されている。イランにおける選択的人工妊娠中絶をめぐる議論は、これらの論点に関する国際的な情報交換の中に位置している。従って、イランの状況を知るには、少なくとも近隣国との比較が必要と判断し、本年度は、UAE、タイ、イギリスの患者団体や専門家を訪問した。こうした経緯の中で、トルコにおいて患者団体との連絡調整が良好に進み、当初想定していなかった、トルコ・イラン間の比較を目的とした患者の生活・意識調査を実施する許可を取得することが出来た。

本研究では、イラン・イスラーム共和国における選択的人工妊娠中絶をめぐる議論と実践を、障害者の生きる権利に注目して分析する。これによって、選択的人工妊娠中絶と優生政策の連続性/非連続性を論じる欧米・日本の生命倫理の議論に異なる視点を提示すると同時に、現代イラン社会を理解することを目的とする。多角的な情報収集のため、以下の三つの視点からイランの状況を調査する。(1)政策決定機関/女性団体/障害者・患者団体/障害者家族団体/医療専門家団体など、互いに利益が相反する諸立場の主張、(2)実践の場の臨床的倫理問題、(3)選択的人工妊娠中絶が許可された疾患・障害をもって生まれた者たちの生活実態。前年度は、イランの他4カ国の患者団体や専門家を訪問し、サラセミアと血友病に関して、同じ遺伝性疾患をもつ人々でありながら、国によって大きく異なる状況を、国際的な議論と関連付けて理解する手がかりを得た。本年度は、これを踏まえながら、逆に一つの地域に住む一つの遺伝性疾患をもつ患者個々人の生活に迫ることを重視した。したがって、2016年度は、上記(2)と(3)に焦点をあて、選択的人工妊娠中絶の対象となる遺伝性疾患の一つ、重症型サラセミア患者の生活実態を知ることに重点を置いた調査を実施した。具体的には、イラン・イスファハーンの病院で参与観察と患者インタビューを実施すると同時に、重症型サラセミア患者を対象とした生活・意識調査(質問紙調査)をおこなった。また、本年度は積極的に学会発表と論文執筆もおこない、参加者や査読者から有益なコメントを得た。本年度は、5月と9月にイラン・イスファハーンの病院で参与観察と患者インタビューを実施すると同時に、重症型サラセミア患者を対象とした生活・意識調査(質問紙調査)をおこなった。また、11月にはトルコで現地調査をおこない、4都市のサラセミア協会に配布していた質問紙(トルコ語版)を回収し、結果を集計した。また、以下の学会で発表し、それぞれ、有益なコメントを得ることができた。国際人類学中東部会年次大会(8月、クラコウ)、国際障害学会(9月、ランカスター)、日本国際政治学会研究大会(10月、東京)、国際サラセミア協会国際大会中東部会(11月、アンマン)、アメリカ人類学会年次大会(11月、ミネアポリス)、東京外国語大学のワークショップ(12月、東京)、イラン研究会(3月、東京)。さらに、イスファハンのサラセミア患者の結婚とリプロダクションに関する論文を4本執筆した(現在査読後の修正中)。本年度は、サラセミア患者の個別事例を軸に疾患や障害をもって生きる権利に注目することで、選択的人工妊娠中絶だけでなく、より広い生命倫理の問題群に関する情報も得ることができた。これには、昨年度から文献調査を始めていた血液製剤を介したウィルス感染に対する損害賠償、出生前診断時の誤診断をめぐる訴訟、難病患者として難民申請をして欧米諸国に渡るイラン人のサラセミア患者の例や、最先端の医療を求めて欧米に渡ったサラセミア患者が新薬の被治験者となる状況などが含まれる。以上、現在までは概ね予定通りに研究が進捗している。
新規腫瘍進展性ケモカイン(BRAK)による抗腫瘍療法の研究開発

これまでに我々は,いくつかの癌腫においてCXCL14/BRAKが抗腫瘍作用を示すこと,また癌腫においてBRAKの分泌が抑制されていることを報告してきた。一方,RhoAとROCKは分泌過程の重要な制御因子であり,RhoA/ROCK経路の活性化は腫瘍の進展や転移を促進することが報告されている。そこで,我々は線維肉腫細胞におけるROCK阻害剤FasudilのBRAK分泌および抗腫瘍作用について検討した。我々は、TG-BRAKマウスにMC57細胞を移植し、分泌されたBRAKの抗腫瘍作用について検討した。さらに、我々はBRAKもしくはMOCKベクターを用いてMC57-BRAK(orMC57-MOCK)安定発現細胞を樹立した。MC57-BRAK細胞においてFasudil処理により有意に,かつ濃度依存的にBRAKの分泌が上昇した。Fasudilの腫瘍増殖への影響を検討するためにMC57-MOCK,MC57-BRAK細胞はWTマウスに移植された。Fasudil処理により,MC57-BRAK細胞移植群でのみ腫瘍増殖が阻害された。これらの結果から,FasudilがBRAKの分泌促進を介して線維肉腫の増殖を抑制したことを示しており,Fasudil療法の臨床領域における有用性を示唆している。さらに、我々はBRAKもしくはMOCKベクターを用いてMC57-BRAK (or MC57-MOCK)安定発現細胞を樹立した。Fasudilの腫瘍増殖への影響を検討するためにMC57-MOCK, MC57-BRAK細胞はWTマウスに移植された。本研究課題では,口腔扁平上皮癌において選択的ROCK阻害剤(Fasudil)投与によるRhoA/ROCK経路の恒常的な活性化の抑制が,抗腫瘍性ケモカインであるBRAKの分泌を促進して,腫瘍進展を抑制するという作業仮説を検証する事を目的としている。平成23年度は,実験計画に従い(1)口腔癌細胞におけるRhoA/ROCKの活性化およびBRAK分泌抑制の確認(2)BRAK分泌に関わるRhoA/ROCK下流分子の探索とFasudil処理によるBRAK分泌機構作用の検討を行った。はじめに,舌および口腔底由来の口腔扁平上皮癌細胞株(HNSCC : HSC-2, HSC-3, HSC-4)を播種し,ROCK選択的阻害剤Fasudil添加後,RhoA/ROCK経路の活性化およびBRAKの分泌量を検討したところ, HNSCCにおけるRhoA/ROCK経路の恒常的な活性化によりBRAKの分泌が抑制されていること,またFasudil添加によりBRAK分泌抑制が阻害されることを見出した。さらに,HNSCCを用いて,小胞分泌制御に関わると考えられるROCK下流分子のひとつであるコフィリンの脱リン酸化がFasudil投与時に抑制されることを,Wstern Blot法を用いて検討した。従って,HNSCCにおける恒常的なRhoA/ROCK経路の活性化はBRAKの分泌を阻害していることが確認された。また, RhoA/ROCK経路示唆される。次年度は計画に基づき,in vivoにおけるFasudilのBRAK分泌促進を介した抗腫瘍作用について検討する。

交付申請書に記載した研究目的の達成度は,おおむね順調であると考えられる。本研究申請時の実験計画(S-1-12)に記載した実験項目は期限内に実行され,仮説に基づく具体的な結果を得ることに成功した。また,次年度に計画している予備実験にも着手しており研究は順調に推移していると思われる。平成24年度は, in vivoにおけるFasudilの口腔扁平上皮癌進展抑制機構の解明を目的に実験を行う。(1)口腔扁平上皮癌細胞移植モデルを用いた, Fasudil投与による癌進展抑制作用の検討HSC-2, HSC-3, HSC-4細胞を培養し,ヌードマウス(胸腺が欠損したためにT細胞数の著しい減少が生じ、免疫系が阻害されているマウス)背部皮下にこれらの細胞を移植し,細胞定着後(1週間)にFasudilの腹腔および経口投与(50mg/kg/day)を1-2週間継続して行う。径時的に体重および抗腫瘍効果の判定として腫瘍径の測定を行いまた,実験24-2で免疫組織学的解析に用いる腫瘍組織検体を採取する。(2)Fasudil投与による口腔扁平上皮癌縮小作用メカニズムの検討Fasudil投与による口腔扁平上皮癌縮小作用を検討するため,実験(1)で採取したサンプルの免疫組織学的解析を行う。解析項目はBRAKの局在および分泌量の検討,またの細胞増殖の指標としてKi-67,および血管新生の指標としてCD31,von Willebrand factorの発現を免疫組織化学的に検討する。また,Fasudil投与によるBRAK分泌促進を介した腫瘍縮小メカニズムを検討するため,Directed In Vivo Angiogenesis Assay Inhibition Kit (Cultrex DIVAA)を用いてBRAKの口腔扁平上皮癌における血管新生能への影響を検討する。具体的な方法としては,ヌードマウス背部皮下にBRAKおよびVEGFを含むカプセル(angioreactor)を移植し, 9-15日後(新生血管埋入後)に回収し,血管内皮細胞を認識する抗体(FITC;血管内皮細胞)処理を行い,蛍光強度を測定することによりBRAKの血管新生抑制作用を検討する計画である。平成24年度においても,細胞培養実験および移植実験を頻繁に実施することが想定される。従って,細胞培養用品,分子生物学試薬,一般試薬およびプラスチック・ガラス器具等の消耗品は実験遂行に当たり必要かつ妥当である。また,【実験24-2 Fasudil投与による口腔扁平上皮癌縮小作用メカニズムの検討】で用いるCulutrex DIVAAはin vivoにおける血管新生能を定量的に計測することが可能なkitであり, BRAK分泌促進による腫瘍進展抑制作用には血管新生の抑制密接に関与すると推測されることから必須である。