hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
放置リスク評価に基づく里山林・人工林からの撤退シナリオ

農作物(C4植物)利用は現代ヒグマの特徴であること、道東でとくに利用割合が高いことが明らかになった。今後、とうもろこしの作付面積や地理条件による影響を分析する。・人工林におけるリスク評価とポテンシャル評価:人工林の風倒リスクモデルの改良を行うとともに、人工林の混交林化ポテンシャルの評価を行った。人工林の風倒リスクモデルはこれまでのロジスティック回帰モデルから、マシーンラーニングによる推定手法に改めることにより、データのばらつきや欠損値による影響を最小限に抑え、また、非線形パターンの抽出に成功した。風倒確率に影響を与えうる変数として、立木密度、広葉樹密度、樹高、傾斜角、地形露出度、最大風速を用意したが、いずれの変数の定義域に対しても、天然林より人工林で風倒確率が高いことが確認された。人工林の混交林化ポテンシャル評価は、4973年生の高齢級トドマツ人工林における広葉樹稚樹の個体数調査により行った。林分の施業履歴・種子供給源・立地環境を説明変数として、GLM(一般化線形回帰モデル)による統計解析を行った結果、風散布型ではスギ・ヒノキ人工林と同様に周囲の天然林から近いほど稚樹個体数が多くなった。鳥散布型の稚樹は間伐からの年数が浅い林分で個体数が増加し、間伐によるギャップの形成が鳥類による散布を促進していると考えられた。・里山林におけるリスク評価:ヒグマによる農作物被害を引き起こす要因を解明するため、北海道渡島半島地域を対象に、主要な被害農作物であるコーンの利用割合を、大腿骨の安定同位体比を用いた食性分析から推定した。メスのコーン利用については、個体情報や生息地環境との特徴的な関係が認められなかったが、オスについては、社会的に優位な体サイズの大きい個体が、森林に隣接した人気の少ない農地に出没して、多くのコーンを利用していることが明らかになった。これより、ヒグマの農作物利用形態は個体間で大きく異なり、農作物がヒグマの社会において重要な食物資源となっていることが明らかになった。人工林のリスク評価については、風況モデルの専門家と、マシーンラーニングの専門家の協力を得て、予定していた以上の成果を上げることができた。人工林の混交林化ポテンシャルの評価についても、他のプロジェクトの支援を得て十分なデータセットで解析が可能となり、予定していた成果を上げることができた。いっぽうで、混交林化ポテンシャルについては、地域差を考慮した考察が未だ不十分であり、来年度の課題としたい。里山林におけるリスク評価については、「ヒグマのヒトへの依存度」を主要な被害農作物であるコーンで評価することとした。個体情報とコーン利用の割合の関係を解析することは比較的容易だったが、環境要因との関係を解析することは、生息域の特定ができないことから困難であった。解析手法には細かな課題を含むが、結果が示唆するものは非常に興味深い。来年度は、課題を解決していくなかで、具体的な撤退シナリオの提案を行いたい。北海道における里山林放置リスクの一つである、ヒグマ(Ursus arctos)の農作物利用(獣害)に着目した。農地における人とヒグマの軋轢に関する研究の多くは、農地の周辺環境のみに着目してきた。これらの研究は被害対策を講じるうえで極めて重要である一方、どのような特徴を持つ個体がより農作物を利用するかは未解明であった。そこで、本研究ではヒグマの骨コラーゲンを対象とした安定同位体比分析手法とGISによる空間解析により、過去に捕獲されたヒグマの個体の特徴と捕獲地点周辺の環境要因がヒグマの農作物利用に与える影響について解析した。
オートファゴソーム形成の素過程:初期と終期の解析

本研究は細胞内たんぱく質分解現象であるオートファジーに関してその制御機構の詳細を明らかにすることを目的とした。特にその分解基質を隔離する膜構造体オートファゴソームの形成時の、その時空間的な制御に注目した。その結果、オートファジーに関わることが知られていたリン脂質、ホスファチジルイノシトール三リン酸(PI3P)が局所的に生成消失することがオートファゴソーム形成の制御に深く関わることを見出した。特に哺乳類で初めてオートファジー特異的なPI3Pの産出に関わるホスファチジルイノシトール3-キナーゼ複合体のサブユニットとしてAtg14Lを同定した。Atg14Lの欠損細胞はオートファゴソームの形成に欠損を示す。Atg14Lを含むホスファチジルイノシトール3-キナーゼ複合体はAtg14L依存的に小胞体へとリクルートされ、このリクルートの可否がオートファジー能とよく一致したことより、小胞体においてPI3Pがオートファジー有同時に産生されることが必須であることが証明された。またPI3Pの分解に関わるホスファチジルイノシトール3-ホスファターゼMTMR3の機能欠損がオートファゴソームの形成を誘導することを見出した。これらの結果より、小胞体におけるキナーゼとホスファターゼのバランスがオートファジー制御の必須ポイントであることを提唱した。細胞内の大規模な分解機構であるオートファジーには多くの蛋白質が関与している。とくにAtgと呼ばれるオートファゴソームの形成に関与する一群の分子群が存在し、我々を含めこれまで多くの研究がなされてきた。今回、このオートファゴソームの形成にホスファチジルイノシトール3リン酸が深く関わることを明らかにした。ほ乳細胞で今まで知られていなかったAtg14L蛋白質を同定した。これはBeclin-1, hVps34ホスファチジルイノシトール3キナーゼ、hVps15プロテインキナーゼと複合体を形成し、そのノックアウト細胞では、オートファゴソームの形成が完全に停止していた。またホスファチジルイトシトール3ホスファターゼの優勢阻害変異体を発現することで、局所的なホスファチジルイノシトール3リン酸濃度が上昇し、オートファジーが始まることが明らかとなった。これらの結果より、キナーゼのホスファターゼのバランスにより、局所的なホスファチジルイノシトール3リン酸濃度が調節され、オートファジーの誘導に重要であることが示された。
繊維強化複合材料の引き抜き成形とオンラインプリフォーム成形に関する研究

組物は使用する繊維の本数、繊維束1本のフィラメント数によってその寸法を変化させることができる。したがって、少ないフィラメント数および繊維束本数で組物を作製することにより微視的組物が得られる。微視的組物は一本の繊維束として取り扱うことができ、微視的組物を用いて繊維加工品が作製できる。微視的組物技術を用いることにより、長繊維強化熱可塑性複合材料を作製することが可能である。すなわち強化繊維とマトリックス樹脂から構成される微視的組物を用いて繊維加工品を作製し、熱を加えて成形することにより熱可塑性複合材料を作製することができる。熱可塑性複合材料の材料設計における問題点は含浸の困難さであり、これまで開発されてきた材料においては、材料の含浸距離の選択範囲に限界が見られた。しかしながら、微視的組物技術を用いて強化繊維とマトリックス繊維の距離を短くすることにより、含浸が困難であった熱可塑性複合材料において高い含漫性が得られる。微視的組物は強化繊維がマトリックス樹脂を包含した状態で取り扱うことができるので、強化材に成形性を考慮した機能性を持たせ得ることができる。本研究では、GF/PAビームの引き抜き成形において、微視的組物を用いることを考え、金型設計のための基礎データを得るため、一方向複合材料および平打組物複合材料を作製し、微視的組物の構造および成形条件(成形時間、成形温度、成形圧力)が成形品の含浸状態および力学的特性に及ぼす影響について検討した。また含浸挙動の関する理論式を誘導した。その結果、微視的組物を用いて作製した熱可塑性複合材料は、優れた含浸性を示すことが確かめられた。また、成形条件が力学的特性に及ぼす影響について検討した結果、適した成形条件を得るための指標が得られた。すなわち強化繊維とマトリックス繊維から構成される微視的組物を用いて繊維加工品を作製し、熱を加えて成形することにより熱可塑性複合材料を作製することができる。しかしながら、微視的組物技術を用いて強化繊維とマトリックス繊維の距離を短くすることにより、含浸が困難であった熱可塑性複合材料において高い含浸性が得られる。微視的組物は強化繊維がマトリックス繊維を包含した状態で取り扱うことができるので、強化材に成形性を考慮した機能性を持たせ得ることができる。本研究では、GF/PPビームおよびCF/PEEKビームの引き抜き成形において、強化繊維とマトリックス繊維を組むことによって作製した微視的組物を強化材として用いることを考え、金型設計のための基礎データを得るため、一方向複合材料および平打組物複合材料を作製し、微視的組物の構造および成形条件(成形時間、成形温度、成形圧力)が成形品の含浸状態および力学的特性に及ぼす影響について検討した。

また、成形条件が力学的特性に及ぼす影響について検討した結果、適した成形条件を得るための指標が得られた。組物は使用する繊維の本数、繊維束1本のフィラメント数によってその寸法を変化させることができる。したがって、少ないフィラメント数および繊維束本数で組物を作製することにより微視的組物が得られる。微視的組物は一本の繊維束として取り扱うことができ、微視的組物を用いて繊維加工品が作製できる。微視的組物技術を用いることにより、長繊維強化熱可塑性複合材料を作製することが可能である。すなわち強化繊維とマトリックス繊維から構成される微視的組物を用いて繊維加工品を作製し、熱を加えて成形することにより熱可塑性複合材料を作製することができる。熱可塑性複合材料の材料設計における問題点は含浸の困難さであり、これまで開発されてきた材料においては、材料の含浸距離の選択範囲に限界が見られた。しかしながら、微視的組物技術を用いて強化繊維とマトリックス繊維の距離を短くすることにより、含浸が困難であった熱可塑性複合材料において高い含浸性が得られる。微視的組物は強化繊維がマトリックス繊維を包含した状態で取り扱うことができるので、強化材に成形性を考慮した機能性を持たせ得ることができる。本研究では、GF/PPビームおよびCF/PEEKビームの引き抜き成形において、微視的組物を用いることを考え、金型設計のための基礎データを得るため、一方向複合材料および平打組物複合材料を作製し、微視的組物の構造および成形条件(成形時間、成形温度、成形圧力)が成形品の含浸状態および力学的特性に及ぼす影響について検討した。その結果、微視的組物を用いて作製した熱可塑性複合材料は、優れた含浸性を示すことが確かめられた。すなわち強化繊維とマトリックス樹脂から構成される微視的組物を用いて繊維加工品を作製し、熱を加えて成形することにより熱可塑性複合材料を作製することができる。微視的組物は強化繊維がマトリックス樹脂を包含した状態で取り扱うことができるので、強化材に成形性を考慮した機能性を持たせ得ることができる。本研究では、GF/PAビームの引き抜き成形において、微視的組物を用いることを考え、金型設計のための基礎データを得るため、一方向複合材料および平打組物複合材料を作製し、微視的組物の構造および成形条件(成形時間、成形温度、成形圧力)が成形品の含浸状態および力学的特性に及ぼす影響について検討した。
外傷治癒後や術後にみられる局所の炎症病態および痛覚過敏のメカニズムの解明

【目的】先制的な交感神経ブロックが複合性局所疼痛症候群、Complex Regional Pain Syndrome (CRPS)の痛みを予防しうるかどうかを動物実験で確かめること、また、CRPSの痛みに対する交感神経ブロックの治療効果の不安定さの原因を明らかにすることを目的とした。そのために、CRPS宿態の交感神経依存性について、病態時期や動物の系統による違いがあるかどうかを調べた。また、末梢機構の多様性を探るため、痛覚線誰活動に対する交感神経伝達物質ATPの作用の詳細を調べた。さらに、CRPS Type I関連疾患である糖尿病性ニューロパチーにおける末梢機構を明らかにした。【結果と結論】1、先制的交感神経ブロックは炎症モデル動物の足部の炎症発生を抑制したが、痛覚線維活動に対するノルアドレナリンの興奮作用は抑制しなかった。CRPS Type Iの発生機構における末梢機序の複雑さが明らかとなった。2.CRPS Type IIモデル動物の血中ノルアドレナリン量は病期によってかなり変動することが明らかとなった。交感神経ブロックの効果のばらつきは、満期による交感神経依存性の違いによる可能性が示唆された。3、炎症モデル動物の痛覚線維活動に対するATPの作用は、低濃度では抑制的に高濃度では促進的であることが分かった。交感神経依存性の疼痛発現にはATP単独では寄与していない可能性が高いことが明らかとなった。4.CRPS Type Iモデル動物の痛覚線維活動に対するノルアドレナリンの興奮作用には明らかな系統差がみられた。交感神経ブロックの効果のばらつきは、個体間の交感神経依存性の違いによる可能性が示唆された。臨床的実験来年度のCRPS患者を対象とした実験の予備実験として、健常成人(6人)を対象に環境順応室において実験を行った。1)交感神経系活動の指標として、(1)血圧、(2)心拍数、R-R間隔ゆらぎ、(3)皮膚温、(4)脳波、(5)瞳孔径を測定した。2)初期環境(大気圧・温度22°C、湿度50%)から高温(温度27°Cまたは30°C)、低温(温度15°Cまたは10°C)環境に曝露し、交感神経活動指標の変化を観察した。低温曝露では明らかな、高温曝露では緩やかな指標の変化がみられ、これらの環境曝露が健常成人の交感神経活動を興奮させる有効刺激であることが分かった。また、この効果は個体間に若干のばらつきがあり、環境ストレスに対する自律神経系の反応に個人差があることが分かった。動物実験1)足関節腔内にアジュバントを投与し作製した単関節リウマチモデルラットを初期環境(大気圧・温度22°C、湿度50%)から低温(温度15°C)、低気圧(大気圧より20mmHg減圧)環境に曝露し、足底部皮膚に見られる痛覚過敏の程度の変化を観察した。両曝露ともに、痛みの指標であるvon Frey毛に対する逃避反応の増加が観察された。2)アジュバント投与による慢性炎症ラットから伏在神経-皮膚標本を作製した。伏在神経の微小線維束から皮膚痛覚線維の単一神経放電を導出し、受容野に熱刺激を行ない交感神経伝達物質であるATPを受容野へ局所灌流しその効果をみた。結果として、ATPの熱反応に対する作用は濃度によって異なり、低濃度では皮膚痛覚受容器の興奮性を抑制し、また細胞障害により組織に生じうる高濃度ではその興奮性を高める作用があることが明らかとなった。【目的】先制的な交感神経ブロックが複合性局所疼痛症候群、Complex Regional Pain Syndrome(CRPS)の痛みを予防しうるかどうかを動物実験で確かめるために、CRPS病態の交感神経依存性について、病態時期や動物の系統による違いがあるかどうかを調べた。【方法】

1、坐骨神経損傷ラットを作製し、右頚静脈留置カテーテルより連日採血を行い、血中ノルアドレナリンの定量を高速液体クロマトグラフィー法で測定した。シャム手術のラットを対照群とし、経日変動を比較した。2、Sprague-Dawley(SD)系とLewis系ラットを用い、アジュバント投与による慢性炎症ラットを作製した。伏在神経-皮膚標本を用い、皮膚痛覚線維活動に対するノルアドレナリン投与の興奮作用における両系統ラットの違いを調べた。【結果と結論】1、CRPS Type IIモデル動物(坐骨神経損傷ラット)の血中ノルアドレナリン量は病初期(術後5-6日)に最高値を示すが、7日以後は健常ラットと同程度まで低下した。よって、交感神経の活動は病期によってかなり変動することが明らかとなった。交感神経ブロックの効果のばらつきは、病期による交感神経依存性の違いによる可能性が示唆された。2、CRPS Type Iモデル動物(慢性炎症ラット)の痛覚線維活動に対するノルアドレナリンの興奮作用は、SD系よりもLewis系で強く現れ、明らかな系統差がみられた。交感神経ブロックの効果のばらつきは、個体間の交感神経依存性の違いによる可能性が示唆された。
14-3-3/MSF蛋白における選択的シグナルあるいはペプチド認識機構の解明

14-3-3蛋白質ゼータ(14-3-3ζ)は、ミトコンドリア膜輸入促進因子(MSF)と呼ばれ、ミトコンドリア外膜複合体(TOM)群に、生合成されたミトコンドリア蛋白質を引き渡す役割を演じる。ここでのMSFの機能は、新生蛋白質の正確な選別機能でありプロテインターゲッティングを行うペプチド認識機構である。本研究では、このMSFの立体構造が膜側受容体であるTOM20とどのように相互作用するのかを、結晶構造解析を行うことにより構造生物学的に研究することを目的とした。ラット肝臓MSFスモールサブユニットを発現する形質転換大腸菌約40gからMSF精製試料を約20mg得ることができた。結晶化条件は、緩衝液20mMTris-HCL,pH7.5,0.2M NaCl,蛋白質濃度15mg/ml、沈殿剤PEG3350、25°Cで針状結晶を得ることができた。第3世代放射光であるアンジュレータ光を用いたESRFおよびSPring-8での回折実験の結果、結晶学的データは、a=b=73.16,c=113.56Å,P6122,Z=12であった。MSF(あるいは14-3-3蛋白)はシグナルペプチドの認識(リン酸化部位との結合)において2量体を形成することが提唱されていたが、この構造でもC末端を切断しつつ、しかし2量体形成を維持していることが示された。これはシグナルペプチド認識という機能を損なった場合でも、MSFが細胞内で存在する要因、あるいはMSFが持つ本質的な4次構造構築のシステムであると考えられる。2量体は、N末端から点在する正あるいは負電荷を帯びたアミノ酸領域がお互いを相補するように向かい合って形成されている。
強調された相互作用を有する二次元カーボンネットワークの構築

多環芳香族化合物は光学的・電子的物性から興味がもたれている。新規な合成シントン・合成法の開発は新規な多環芳香族化合物の合成に直結することから重要である。昨年度、報告者はテトラエチニルナフタレンの合成に成功している。その結果を踏まえ今年度はテトラエチニルナフタレンの渡環環化反応による新規縮環芳香族化合物への変換を検討した。1.ビス[10]アヌレンおよびゼトレンの合成の試み報告者の前所属研究室ではテトラデヒドロジナフト[10]アヌレンの合成とヨウ素による渡環環化によるゼトレン誘導体への変換を報告している。本研究ではビス(テトラデヒドロジナフト[10]アヌレン)の合成とその渡環環化反応によるビスゼトレンへの変換を目指した。今年度は昨年度に合成したビス[10]アヌレンの前駆体となるテトラエチニルナフタレンからビス[10]アヌレンへの変換を検討した。分子内及び分子間での薗頭反応の検討を行ったが、目的物は得られなかった。現在は別のルートによって合成を行うことを計画している。2.テトラキス(フェニルエチニル)ナフタレンの合成とその渡環環化反応テトラキス(フェニルエチニル)ナフタレンの合成を行った。そのX線構造解析からは4つのフェニルエチニル基がナフタレン平面内で分子の外側へ開く構造とナフタレン骨格がねじれる二つの配座異性体が観測された。このものとヨウ素を反応させたところ一方の二つのアセチレンの間で渡環環化した生成物が得られた。現在、反応条件の最適化を行っている。新奇な多環芳香族化合物の合成およびその特性の解明を目指し、以下の研究を行った。1.中心部に異なるサイズの環を有する三つ葉型縮環アヌレノアヌレンの合成デヒドロ[n]アヌレン(n=6, 12, 18)の周囲に[14]アヌレンを縮環したアヌレノアヌレンを合成した。UV-Vis、蛍光スペクトルからその吸収特性は中央のアヌレン環によって大きく影響を受けることが確かめられた。2.ビス(テトラデヒドロ[10]アヌレン)の合成研究報告者の所属研究室ではジナフトテトラデヒドロ[10]アヌレンの合成と渡環環化によるゼトレン誘導体への変換を見出している。報告者はその拡張系となるビス(テトラデヒドロジナフト[10]アヌレン)の合成を目指し、新規なテトラデヒドロジナフト[10]アヌレンの効率的合成法を検討した。新たな合成経路としてアセチレン架橋されたナフトアルデヒドの分子内McMurryカップリング、生じたジオールの塩素化、続く脱離反応によるゼトレンの合成を検討した。その結果、McMurryカップリングで得られたジオールの塩素化の段階が困難でありこの経路による合成を断念した。現在、異なる方法を用いたビス(テトラデヒドロ[10]アヌレン)の合成を行っている。3.オクタデヒドロジベンゾ[12]アヌレンの反応性の検討近接位に強制されたアセチレンの反応性の調査の一環として、オクタデヒドロジベンゾ[12]アヌレンの反応性を検討した。その結果、臭素を作用させると二種類のインデノフルオレン誘導体が高収率で得られることが分かった。現在、反応性の詳細を調査している。新奇な縮環芳香族化合物の合成およびその特性の解明を目指し、以下の研究を行った。1.ビス(テトラデヒドロジナフト[10]アヌレン)の合成研究報告者の所属研究室ではテトラデヒドロジナフト[10]アヌレンの合成とヨウ素による渡環環化によるゼトレン誘導体への変換を報告している。ビス[10]アヌレンは末端アセチレンとヨウ化アリールとの分子間もしくは分子内薗頭反応によって得られると考えた。いずれの合成経路においても1,4,5,8-テトラエチニルナフタレンが鍵中間体となる。これまでにテトラエチニルナフタレンは合成例がないことから、その合成の検討を行った。その結果、文献既知のジブロモナフトキノンからのアセチリドの付加、脱水、薗頭反応により合成できることを明らかにした。ビス[10]アヌレンの前駆体合成まで完了しており、現在ビス[10]アヌレンへの変換を検討している。2.オクタデヒドロジベンゾ[12]アヌレンの反応性の検討昨年度、オクタデヒドロジベンゾ[12]アヌレン([12]DBA)に臭素を作用させると二種類のインデノフルオレン誘導体が高収率で得られることを明らかにした。X線構造解析とNMR測定からこれらはヘキサブロモジヒドロインデノ[1,2-b]フルオレン(アンチ形)とヘキサブロモジヒドロインデノ[2,1-a]フルオレン(シン形)であることが確かめられた。これらは加水分解により対応するジケトンへと変換された。[12]DBAとヨウ素との反応ではアンチ形の生成物のみが得られることが報告されているが、同反応を追試したところ少量のシン形生成物の存在を確認した。これらの結果を合わせて、臭素とヨウ素を用いた場合の反応性の相違を検討した。

多環芳香族化合物は光学的・電子的物性から興味がもたれている。新規な合成シントン・合成法の開発は新規な多環芳香族化合物の合成に直結することから重要である。昨年度、報告者はテトラエチニルナフタレンの合成に成功している。その結果を踏まえ今年度はテトラエチニルナフタレンの渡環環化反応による新規縮環芳香族化合物への変換を検討した。1.ビス[10]アヌレンおよびゼトレンの合成の試み報告者の前所属研究室ではテトラデヒドロジナフト[10]アヌレンの合成とヨウ素による渡環環化によるゼトレン誘導体への変換を報告している。本研究ではビス(テトラデヒドロジナフト[10]アヌレン)の合成とその渡環環化反応によるビスゼトレンへの変換を目指した。今年度は昨年度に合成したビス[10]アヌレンの前駆体となるテトラエチニルナフタレンからビス[10]アヌレンへの変換を検討した。分子内及び分子間での薗頭反応の検討を行ったが、目的物は得られなかった。現在は別のルートによって合成を行うことを計画している。2.テトラキス(フェニルエチニル)ナフタレンの合成とその渡環環化反応テトラキス(フェニルエチニル)ナフタレンの合成を行った。そのX線構造解析からは4つのフェニルエチニル基がナフタレン平面内で分子の外側へ開く構造とナフタレン骨格がねじれる二つの配座異性体が観測された。このものとヨウ素を反応させたところ一方の二つのアセチレンの間で渡環環化した生成物が得られた。現在、反応条件の最適化を行っている。
新規イオンチャネルTRPV1が歯周炎病態形成に及ぼす影響

歯肉上皮細胞は、物理的なバリアとして機能するだけではなく、細菌に対して免疫応答を誘導することで生体防御の最前線として重要な役割を果たす。近年同定された新規イオンチャネルであるTRPチャネルタンパクは炎症性疾患への関与も報告されている。本研究において、歯肉上皮細胞にTRPV1が遺伝子レベル・タンパクレベルで発現していることが確認され、TRPV1を介したシグナリングが細胞増殖能に関与していることが明らかとなった。これらのことより、歯周炎の病態形成におけるこれらのタンパクの関与が示唆された。ヒト歯肉組織中におけるTRPチャネルタンパク遺伝子の発現解析およびその局在我々は昨年度までにヒトの歯肉組織中にTRPV1が遺伝子レベルで発現していることをPCR法にて確認しており、タンパクレベルでの発現とその局在に関して検討を行った。インフォームドコンセントの得られた患者より歯周外科手術時もしくは抜歯時に歯肉組織を採取、パラフィン切片を作製し、TRPV1に特異的な抗体を用いて免疫染色を行った。その結果、歯肉組織においてもTRPV1が発現していることがタンパクレベルでも確認され、その発現は上皮細胞層で優位であることが明らかとなった。この結果は、先に報告したマウスの歯周組織での発現傾向と同様のものであった。神経ペプチドのひとつであるCGRPに注目し、骨芽細胞・破骨細胞分化に及ぼす影響を解析した。骨芽細胞様細胞株MC3T3-E1および破骨細胞様細胞株RAW264.7の培養時にCGRPリコンビナントタンパクにて刺激を行い,骨芽細胞分化と破骨細胞分化に関して評価した。骨芽細胞分化に関してはアリザリンレッド染色にて、CGRPの有無による分化の差は認められなかった。一方で、破骨細胞分化はCGRPにより抑制されることが確認された。またpit assayによって、CGRPがLPS誘導性の骨吸収を抑制することがin vitroで明らかとなった。十分な研究時間を確保できたため。歯周病歯周炎の病態形成におけるTRPチャネルタンパクの機能解析(in vivoにおける解析)我々が以前確立した歯周炎モデルマウスの方法を参考に、P. gingivalisの口腔内感染を行う。8週齢のマウスに抗生剤を含む水を10日間投与し、抗生剤を除いた水を3日間与えた、2%カルボキシメチルセルロースを含むPBSで調製したP. gingivalis全菌体を3日に1度、計10回、フィーディングニードルを用いて経口的に感染させる。感染終了時に安楽死させ、サンプルの回収、解析を行う。1)各種TRPノックアウトマウスにおける検討マイクロCTによる歯槽骨吸収を測定、歯肉組織を採取しmRNAを抽出し、炎症性サイトカインおよびケモカインの遺伝子発現をReal-time PCR法にて解析する。歯槽骨吸収量と炎症性サイトカイン発現の違いにより歯周炎の重症度を比較検討する。また歯周組織の脱灰組織標本を作製し、細胞増殖マーカーであるKi67およびPCNAの免疫組織染色による細胞増殖の評価を行う。当初予定した参考文献の購入が行われなかったため。次年度に参考文献の購入を行う予定。
微細構造からエボラウイルスの複製機構を解明する

申請計画に従い、二つの大きな研究課題1)転写因子VP30による転写・複製制御機構の解明、2)ヌクレオカプシド輸送機構の解明、を達成するために共同研究先であるドイツ国と所属研究室である京都大学ウイルス・再生医科学研究所のそれぞれで研究を進めた。昨年度は2/3の期間をドイツに滞在し、共同研究先のBSL-4研究施設で下記の研究を進めた。研究課題1)については、転写因子VP30をリン酸化するキナーゼを世界に先駆けて同定し、その作用機序を解明することができた。この研究によりエボラウイルスは一次転写・二次転写を最適に行うためにVP30のリン酸化をスイッチすることが示唆された。研究課題2)については4つの小目標を構築した。1細胞侵入過程のライブイメージング法の構築、2組換えウイルスの構築、3ヌクレオカプシドの形成・輸送に関わるウイルスタンパク質の同定、4非感染性ライブイメージング法の応用、についてそれぞれ研究を進めた。1、2は本邦では行うことができないので、ドイツ国のBSL-4実験施設を用いて研究を行なった。これはBSL-4使用許可を持つ申請者の強味を生かした研究と言える。また残りの期間は所属研究室で研究を進め、3では前駆研究で構築した非感染性ライブセルイメージングシステムを用いて、ヌクレオカプシドの形成と輸送に関わるウイルスタンパク質をドメインレベルまで同定することができた。4では特異的治療薬の候補となりうる宿主因子の同定を試みた。1), 2)-3,4の研究成果については基礎データが集まったので、今年度中に国際誌に発表したいと考えている。以上のように、当初の研究計画以上の進展が得られた1年であった。申請計画では、エボラウイルスの複製機構を微細構造から解明するために、二つの研究の柱を準備していた。一つ目は、転写因子であるVP30に注目して転写・複製制御機構を解明することであり、二つ目は、転写・複製の鋳型となるヌクレオカプシドの形成機構と輸送過程を微細構造から解明することであった。一つ目の課題の核心は、VP30を特異的にリン酸化するキナーゼをどのように同定するかであった。そのためにVP30と相互作用する宿主因子を免疫沈降法で網羅的に回収し質量分析法で解析した。この際に候補となったキナーゼが複数あったため、“真のファクターを特定することが難しかった。また、VP30がリン酸化されることの生物学的意義が明確にはわかっていなかった。これを解決するために、リン酸化の状態が異なる複数のVP30変異体を準備し、被リン酸化部位を持つ変異体に特異的に相互作用したキナーゼに注目することで、50個以上あった候補を10個以下に減らすことができた。さらに、組み換えタンパク質発現系を構築しin vitroで解析することで、VP30をリン酸化する酵素を直接的に同定することができた。続いてin vivoの機能解析により、VP30のリン酸化が一次転写に重要であることがわかった。これまでにVP30の脱リン酸化が二次転写に必須であることがわかっているので、エボラウイルスはVP30のリン酸化を制御することで、自身の増殖を最適化していることが示唆された。同定したキナーゼの阻害薬がEBOVの特異的治療薬になる可能性があるので、今後も研究を継続したい。また二つ目の研究内容についても、輸送機能が異なるヌクレオカプシド様構造を構築することで、ヌクレオカプシドの輸送に関わる宿主因子を明らかにするための基盤が整った。以上のように著しい研究内容の進展があったので、当初の計画以上に進展していると自己評価した。研究課題1)転写因子VP30による転写・複製制御機構の解明については、キナーゼ阻害薬やキナーゼ認識部位をブロックする薬剤などを用い、VP30のリン酸化を介した抗ウイルス薬開発の基盤を構築したいと考えている。研究課題2)ヌクレオカプシド輸送機構の解明については、昨年度に引き続き4つの小目標に分けて研究を進める。1細胞侵入過程のライブイメージング法の構築については、2で構築した蛍光タンパク質組換えウイルスを用いることで、感染初期から十分なシグナルを検出することができた。今後は、この過程におけるヌクレオカプシドと種々の宿主因子との相互作用をライブイメージングで解明したいと考えている。これらの感染性ウイルスを用いた研究は引き続きドイツ国で行う予定である。3ヌクレオカプシドの形成・輸送に関わるウイルスタンパク質の同定では、ヌクレオカプシドの輸送に必須である3つのウイルスタンパク質のうち、1つのタンパク質で、輸送に重要なドメインを同定できた。このドメインに変異を入れたタンパク質を用いることで、輸送能力が異なるヌクレオカプシド様構造を構築することができた。今後は、このヌクレオカプシド様構造の変異体を用いて、介在する宿主因子の違いを解明したいと考えている。4非感染性ライブイメージング法の応用として、ヌクレオカプシドの輸送に関わる宿主因子を解明するために、今後は遺伝子サイレンシング法を用いて網羅的に解析を進める。さらにエボラウイルス以外のウイルスについても、ライブイメージングモデルを構築したい。具体的にはエボラウイルスと同様に出血熱を起こすBSL-4病原体であるアレナウイルス科のラッサウイルスを考えている。ヌクレオカプシドを蛍光タンパク質で標識することで、その形成・輸送過程を可視化したい。さらにこれらの過程を阻害する因子を同定することで、治療薬の開発に貢献したいと考えている。申請計画に従い、二つの大きな研究課題

1)転写因子VP30による転写・複製制御機構の解明、2)ヌクレオカプシド輸送機構の解明、を達成するために共同研究先であるドイツ国と所属研究室である京都大学ウイルス・再生医科学研究所のそれぞれで研究を進めた。昨年度は2/3の期間をドイツに滞在し、共同研究先のBSL-4研究施設で下記の研究を進めた。研究課題1)については、転写因子VP30をリン酸化するキナーゼを世界に先駆けて同定し、その作用機序を解明することができた。この研究によりエボラウイルスは一次転写・二次転写を最適に行うためにVP30のリン酸化をスイッチすることが示唆された。研究課題2)については4つの小目標を構築した。1細胞侵入過程のライブイメージング法の構築、2組換えウイルスの構築、3ヌクレオカプシドの形成・輸送に関わるウイルスタンパク質の同定、4非感染性ライブイメージング法の応用、についてそれぞれ研究を進めた。1、2は本邦では行うことができないので、ドイツ国のBSL-4実験施設を用いて研究を行なった。これはBSL-4使用許可を持つ申請者の強味を生かした研究と言える。また残りの期間は所属研究室で研究を進め、3では前駆研究で構築した非感染性ライブセルイメージングシステムを用いて、ヌクレオカプシドの形成と輸送に関わるウイルスタンパク質をドメインレベルまで同定することができた。4では特異的治療薬の候補となりうる宿主因子の同定を試みた。1), 2)-3,4の研究成果については基礎データが集まったので、今年度中に国際誌に発表したいと考えている。以上のように、当初の研究計画以上の進展が得られた1年であった。申請計画では、エボラウイルスの複製機構を微細構造から解明するために、二つの研究の柱を準備していた。一つ目は、転写因子であるVP30に注目して転写・複製制御機構を解明することであり、二つ目は、転写・複製の鋳型となるヌクレオカプシドの形成機構と輸送過程を微細構造から解明することであった。一つ目の課題の核心は、VP30を特異的にリン酸化するキナーゼをどのように同定するかであった。そのためにVP30と相互作用する宿主因子を免疫沈降法で網羅的に回収し質量分析法で解析した。この際に候補となったキナーゼが複数あったため、“真のファクターを特定することが難しかった。また、VP30がリン酸化されることの生物学的意義が明確にはわかっていなかった。これを解決するために、リン酸化の状態が異なる複数のVP30変異体を準備し、被リン酸化部位を持つ変異体に特異的に相互作用したキナーゼに注目することで、50個以上あった候補を10個以下に減らすことができた。さらに、組み換えタンパク質発現系を構築しin vitroで解析することで、VP30をリン酸化する酵素を直接的に同定することができた。続いてin vivoの機能解析により、VP30のリン酸化が一次転写に重要であることがわかった。これまでにVP30の脱リン酸化が二次転写に必須であることがわかっているので、エボラウイルスはVP30のリン酸化を制御することで、自身の増殖を最適化していることが示唆された。
ビルディングブロック型計算システムにおけるチップブリッジを用いた積層方式

誘導結合チップ間無線インタフェース(Through Chip Interface:TCI)を用いて小規模なチップを多数結合し、多様な大規模システムを構築する「ビルディングブロック型計算システム」のチップブリッジを用いたシステム統合方式について研究する。既に開発された複数のLSIチップを、チップ自体をブリッジとすることにより組み合わせ、様々な機能、性能、エネルギー要求を満足するシステム構成の構築法を確立することを目的とする。具体的には、安価なボンディングを用いて多数のチップを組み合わせる積層手法、ソフトウェアからアナログ技術までを駆使して性能、電力をチューニングする手法、チップ内のスイッチとアクセラレータを統合する機構について研究する。2018年度は、TCIを用いたIP(Intellectual Property)の動作検証と、実チップテストを行うためのTCITesterチップを開発した。このチップは、ルネサスエレクトロニクス社65nmプロセスを利用して、3mm X 3mmのサイズで実装した。TCIを装備する様々なチップの上に装着し、その電気的特性を計測し、連続運転試験を行うことができる。他のチップ上に積層するのに先立ち、開発したTCI Tester同士を積層し、TCI IPの転送可能周波数、電源ドロップを計測し、TCI IPを組み込む場合の指針を得た。また、TCI IPを装備したKVSチップ、SNACCチップ、CCSOTBチップそれぞれの単体性能を実チップで計測した。また、積層を行った場合の発熱の時間経過を計測するTHERMO2の積層を行った。様々なチップ積層の可能性を探るため、熱解析ツールの改良を行った。TCI Testerは設計通り稼働し、TCI Tester同士を積層したシステムを計測することにより、最大転送周波数、電源ドロップの程度を具体的に計測し、上から下への転送性能に比べてて下から上への転送性能が低い原因がインダクタの配置と電源メッシュが原因であることを明らかにした。また、TCI Tester同士の積層では8時間以上の連続転送を達成した。TCIを積層した各チップもそれぞれ単体で稼働し、実チップによる計測を行うことができた。積層時の発熱の問題を解析するため、一般に用いられている解析ツールHOT SPOTを改良し、TCIを用いてずらして積層し、周辺を液体で完全に覆った場合の解析を可能にした。また、このツールをGithubにより公開した。さらに実チップで発熱解析を行うTHERMO2を開発したが、積層時に電源ショートが起きる問題が発覚した。この原因を解析した結果、TCI積層を行う場合に必要となるチップ表面のコーティング手法が明らかになった。また、部分的に動作したチップにより、実チップ解析も行うことができた。このように実装上のトラブルに見舞われながらも、貴重な経験を獲得し、予定通りの進捗状況である。TCI Testerを、自分同士ではなく、今まで開発したチップのうちのいくつかと積層することで、それぞれのチップのTCIの性能と動作条件を明らかにする。また、マイクロプロセッサとTCI IPを搭載したGeyserTTとニューラルネットワークアクセラレータSNACCの積層システムを稼働に持っていく。他にも、可能であれば、GeyserTTとキーバリューストアアクセラレータKVS、粗粒度再構成デバイスCCSOTB2との積層システムも稼働を試みる。THERMO2を用いた熱解析は、積層を行った際の電源ショートの原因を完全に明らかにすると共に、3層以上での熱解析を試みる。積層手法についての理論的な研究は、TCIを用いたApproximate Communicationに関する研究に着手し、その効果の可能性を探る。

積層時の発熱の問題を解析するため、一般に用いられている解析ツールHOT SPOTを改良し、TCIを用いてずらして積層し、周辺を液体で完全に覆った場合の解析を可能にした。また、このツールをGithubにより公開した。さらに実チップで発熱解析を行うTHERMO2を開発したが、積層時に電源ショートが起きる問題が発覚した。この原因を解析した結果、TCI積層を行う場合に必要となるチップ表面のコーティング手法が明らかになった。また、部分的に動作したチップにより、実チップ解析も行うことができた。このように実装上のトラブルに見舞われながらも、貴重な経験を獲得し、予定通りの進捗状況である。TCI Testerを、自分同士ではなく、今まで開発したチップのうちのいくつかと積層することで、それぞれのチップのTCIの性能と動作条件を明らかにする。また、マイクロプロセッサとTCI IPを搭載したGeyserTTとニューラルネットワークアクセラレータSNACCの積層システムを稼働に持っていく。他にも、可能であれば、GeyserTTとキーバリューストアアクセラレータKVS、粗粒度再構成デバイスCCSOTB2との積層システムも稼働を試みる。THERMO2を用いた熱解析は、積層を行った際の電源ショートの原因を完全に明らかにすると共に、3層以上での熱解析を試みる。積層手法についての理論的な研究は、TCIを用いたApproximate Communicationに関する研究に着手し、その効果の可能性を探る。
Pdpn-cKOマウスを応用した口腔組織由来CAFの癌幹細胞ニッチ形成機構の解明

癌幹細胞ニッチをつくる癌関連線維芽細胞cancer-associated fibroblasts, CAFは転移環境を整備する。Podplanin, PDPNはCAFの有力な機能分子候補である。PDPN陰性の線維芽細胞がCAFでは陽性となる理由として、PDPNのアクトミオシン重合促進機能はPDPN発現細胞を緊縮させるためと考えられている。本研究では、申請者が初めて樹立したPdpn cKOマウスを担癌マウスに応用し、PDPNが癌間質細胞の運動と増殖における役割を追求した。Pdpn cKOマウスに発生したCAFはワイルドタイプCAFと比較してニッチ形成能力が低いため、移植腫瘍の増殖と転移の効率が悪いことが予想される。C57BL/6N-TgH(Pdpn)fl/flとB6.Cg-TgN(Col1a1-Cre)1HaakからC57BL/6-R26R;Col1a1-Cre;PdpnΔ/Δを作出しC57BL/6(WT)と比較した。C57BLハプロタイプ同系腫瘍として、肺への高転移能を示すルイス肺がん由来細胞株Ex-3LL、血管内への高浸潤性を示すルイス肺がん由来細胞株Int-3LL、マウスメラノーマB16-F10-Lucの移植マウスでは、癌間質径と間質血管数はWTよりPdpn cKOで低かった。また転移率と生存率はWTよりPdpn cKOで低下した。ADCC・CDC活性誘導性マウスFcキメラ型ラット抗マウスPDPN抗体投与腫瘍移植マウスでは、Pdpn cKOマウスと同様に癌間質径・間質血管数の減少と生存率の上昇が見られた。現在、腫瘍細胞移植マウスの腫瘍間質からCAFを単離し、腫瘍細胞・血管内皮細胞と共培養して、WT由来とPdpn cKO由来のCAFで増殖効率の差とこれに関わる遺伝子を検討している。当該年度は、新規抗体の開発ならびにcKOマウス由来骨芽細胞の確立を行った。抗体の開発に関して、ヒト口腔扁平上皮癌細胞株が発現する腫瘍特異的podoplaninエピトープを認識する癌特異抗体Cancer specific Monoclonal antibodyCasMab LpMab-23を開発し、舌ガン患者に対するスクリーニングを行った結果、舌ガン患者には本抗体陽性のものと陰性のものが見られ、LpMab-23陽性腫瘍は頚部リンパ節転移と局所再発が有意に多く、術後5年無病生存率が有意に低下すること、頚部リンパ節転移腫瘍には陽性のものが有意に多いことを明らかにするとともに、予後予測因子として極めて有用であることを報告した。本抗体によって染色される癌関連線維芽細胞cancer-associated fibroblasts CAFは非常に少なく、本研究課題であるCAFが発現しているpodoplaninは、腫瘍が発現しているpodoplaninとは、抗原決定基が異なっていることも明らかとなった。すなわち、腫瘍細胞におけるpodoplaninの機能は、血小板膜タンパクCLEC2との結合で、これによって腫瘍周囲に血小板を凝集させることで免疫細胞から逃れること、また、腫瘍周囲に増生する線維性結合組織を産生するCAFにおけるpodoplaninの機能は、細胞骨格のリアレンジメントにより、細胞の運動機能を亢進させることという予測に沿うものとなった。そこで、申請者が確立したpodoplaninフロックスマウスとCol1a-Creマウスとの交配によって、線維芽細胞や骨細胞におけるpodoplaninの発現がcKOされることが予想されるマウスの作出に着手した。現在、このマウスのジェノタイピングと頭蓋冠細胞の収集が終了し、podoplanin cKO骨芽細胞の樹立を目指している。当該年度は、まず口腔扁平上皮癌とCAFにおけるpodoplaninの発現を、新規抗体の開発によって検討した。抗体の開発に関して、ヒト口腔扁平上皮癌細胞株が発現する腫瘍特異的podoplaninエピトープを認識する癌特異抗体LpMab-23を開発し、舌ガン患者に対するスクリーニングを行った結果、舌ガン患者には本抗体陽性のものと陰性のものが見られ、LpMab-23陽性は頚部リンパ節転移と局所再発が有意に多く、術後5年無病生存率が有意に低下することを明らかにするとともに、新規開発抗体が予後予測因子として極めて有用であることを報告した。本抗体陽性のCAFは非常に少なく、本研究課題であるCAFが発現するpodoplaninは、腫瘍が発現するpodoplaninとは抗原決定基が異なっていることも明らかとなった。そこで、申請者が開発したpodoplaninフロックスマウスとCol1a-Creマウスとの交配によって、線維芽細胞や骨細胞におけるpodoplaninの発現がcKOされることが予想されるマウスの作出に着手した。このマウスの開発が成功すれば、担癌マウスとして利用し、podoplanin陰性(podoplanin cKO)および陽性(wild type)マウスに移植した腫瘍の成長分析により、CAFにおけるpodoplaninの機能を解明できる。Col1a-Creマウスとの交雑系作出は成功し、研究の進捗状態は良好であると判断した。申請者は福岡歯科大から岡山大に異動したが支障なく遂行し、当初計画通りである。

本研究では、申請者が初めて樹立したPdpn cKOマウスを担癌マウスに応用し、PDPNが癌間質細胞の運動と増殖における役割を追求した。Pdpn cKOマウスに発生したCAFはワイルドタイプCAFと比較してニッチ形成能力が低いため、移植腫瘍の増殖と転移の効率が悪いことが予想される。C57BL/6N-TgH(Pdpn)fl/flとB6.Cg-TgN(Col1a1-Cre)1HaakからC57BL/6-R26R;Col1a1-Cre;PdpnΔ/Δを作出しC57BL/6(WT)と比較した。C57BLハプロタイプ同系腫瘍として、肺への高転移能を示すルイス肺がん由来細胞株Ex-3LL、血管内への高浸潤性を示すルイス肺がん由来細胞株Int-3LL、マウスメラノーマB16-F10-Lucの移植マウスでは、癌間質径と間質血管数はWTよりPdpn cKOで低かった。また転移率と生存率はWTよりPdpn cKOで低下した。ADCC・CDC活性誘導性マウスFcキメラ型ラット抗マウスPDPN抗体投与腫瘍移植マウスでは、Pdpn cKOマウスと同様に癌間質径・間質血管数の減少と生存率の上昇が見られた。現在、腫瘍細胞移植マウスの腫瘍間質からCAFを単離し、腫瘍細胞・血管内皮細胞と共培養して、WT由来とPdpn cKO由来のCAFで増殖効率の差とこれに関わる遺伝子を検討している。本年度は、CAFにおけるpodoplaninの発現がcKOされることの予想されるB6コンジェニックのCol11-Cre; PdpncKOマウスを作出した。現在、このマウスのジェノタイピングと頭蓋冠からの細胞の収集が終了し、podoplanin cKO骨芽細胞の樹立を目指している。骨細胞は通常、podoplaninを発現する。そこで、Col11-Cre; Pdpn cKOマウス骨細胞のpodoplanin cKOを確認するため、頭蓋冠から骨芽細胞を収集、石灰化培地で培養して骨細胞に分化させる。これがpodoplanin陰性であれば、次にこのPdpn cKOマウスにB6マウス由来の転移性メラノーマ細胞株B16F10を移植、その移植効率と生存曲線をワイルドタイプB6マウスと比較する。同時に、CAFにおけるpodoplaninの発現を、cKOマウスとワイルドタイプで比較する。In vitro段階での成功が見込まれたので、いよいよ担癌マウスの作製とデータ収集のため動物実験委員会申請に着手する予定である。所属機関の変更(福岡歯科大学→岡山大学)に伴い、研究倫理審査等実験開始に伴う環境の整備・調整に時間を要した。研究の進捗は予定通りであるが、現在、備品に関して、本研究計画の実施に必要であり、申請者に教室に設置されていないもの、形式が古く精度に欠けるもの、狭小で実験進行に支障を来すため、できれば拡張したいものについて、限られた資金でどの程度購入が可能か、実験の進捗状況と他の予算を含めて勘案・折衝している。
相手の同質性が幼児の他者の心の理解に及ぼす影響

本研究では,幼児が他者の心を理解する際に,相手が自分と同じグループに所属しているかどうかが相手の心の推測の正確性に影響を及ぼすかどうかを検討する。これまでの研究では,子どもは自分と同じ好みの他者と関係性を続けていきたいと考えることがわかっており,関係性を続けていきたいと考えることと,その相手の心を理解することの正確性に関連があるかどうかについても検討を行う。2018年度は幼児が自分と同じような好みをもつ他者とそうでない他者とのどちらと関係性を構築したいと考えるかについて検討を行った。その内容は、幼児に事前に好きな食べ物や遊びなどについて聞き取りを行った。その後、実験者が操作する2体のパペットに対して、子どもは実験者のサポートを受けながらインタビューを行った。その際に、1体のパペットは完全に子どもと同じ好みである回答を行い、もう1体のパペットは子どもとは異なる好みの回答を行った。その後、次の遊びでどちらのパペットと続けて遊びたいかを子どもに質問した。その結果、多数の子どもが自分と同じ好みであるパペットと続けて遊びたいと回答した。この結果から、幼児期の子どもは自分の好みと同じである他者に対して関係性を構築・維持したいと考えるということが示唆された。本研究の意義としては、幼児が相手によって社会的なつながりを持とうとする動機に差があるということを明らかにした点があげられる。また、この知見は、教育現場等で友人づくりに困難を示す子どもたちの友だちづくりへのサポートに活かすことができると考えられる点で重要である。例えば、他の子どもの好みなどに明確にフォーカスをあてることで友人になりたいという動機を高められる可能性がある。また、大人が子どもに関わる際も、好みが同じであるということが重要なポイントとなる可能性がある。さらに、この研究は本研究課題の主目的である相手が属する集団によって他者の心の理解に影響があるかを検討するための予備実験としても重要である。本研究成果は日本発達心理学会第30回大会で発表しており、「発達研究」に掲載が決まっている。初年度に予備実験を終了することができ、本実験の目処が立っているため。今後は、関係性を構築・維持したいと考える自分と同じである他者の心の理解について検討するために夏期休暇と冬期休暇を利用して実験を行う。実験では,幼児を最小集団条件パラダイムを用いて集団の意識を強めた後に,同じ集団の他者の心の理解を問うという内容で行う。