hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
植物エピゲノミクスで解き明かす遺伝子内修飾の機能と制御

ヒストン修飾H3K4(ヒストンH3のリジン4)メチル化は、進化的保存性の高いクロマチン修飾である。H3K4には、メチル基の数によって区別される三段階のメチル化状態H3K4me1,2,3がある。本研究ではH3K4me1,2,3それぞれが特異的に減少したようなシロイヌナズナ変異体群を用いて、H3K4me1,2,3の比較解析からH3K4メチル化の機能を探る。
地球の自転によるコリオリ・力を利用した地球上移動体の自己検知スピード・センサ

表記課題の実現を目指して,次のような検討を行ない,遂にその目的を達成した。その様子は次の通りである。1)先年のコリオリ・力検出に関しての感度不足を次のように解決した。先年の問題点は水晶圧力センサの周波数カウンターの桁あらさが主要因であった事を確認し,原理は同じでも検出方法を変えて検討した。すなわち,水晶センサを内蔵し,ノイズ除去対策を施した,東洋通信機(株)の特殊圧力計を適用した。また,コリオリ・力検出の質量部もより簡素化なるように改良した。その結果,本システムは数km/secの速度検出も可能な事を確認した。更に基礎実験において確かに地球の自転をとらえ直線スピード検出が可能となった事を確認した。2)実際に乗用車に搭載し,実験し,その基本特性を確かめた。ただし,この場合は特性値にバラツキがみられた。自動車のショックの影響が入った結果とも思われる。将来はこの点の対策が必要である。3)付加質量片持ばり圧電振動子の回転型スピード・センサについても引続き考察を行ない,確かに地球の自転をとらえた事が確認できた。現在の目的達成度は80%程度と認識される。本構成では,スリップ・リング無しでも回転体の動きを圧電的に検出できる事が大きな特長である。すなわち,構造もシンプルで小型化より期待できるので,具体的なスピード検出に向け,今後も研究継続を計画している。4)コリオリ・力利用センサにおいて表記課題に包含される他構成についても大きな成果を達成した。具体的には次のことに集約される。○水平式の高精度水晶ジャイロが完成した。○世界初とみなされる3軸検出の水晶3脚音さジャイロを実験的にも確認した。○1チップタイプの(1軸ジャイロ/1軸加速度)検出のモーション・センサも実現できることを明らかにした。将来は,これらは上記スピード・センサと並用されるものであり,互いにその機能を補完することによって,より機能的なセンサ・システムとなる。本研究成果はそのような目的に活用される。表記仮題の実現を目指して、次のような検討を行った.1)コリオリ・力を利用する原理から,本年は先ず其の基本的検討を行った.即ち,コリオリ・力を圧電振動子の周波数変化として検出する構成を検討した.厳密な意味では加速度センサとなるが屈曲共振系と縦振動系のどちらが効果的か実験した.其の結果,屈曲系の好ましいことを確かめた.この事をもとに2)実用的な形状と思われるセンサの考案を行った.更に,3)コリオリ・力利用のスピード・センサのより効果的な形状を考察した.これらは次年度の実験的検討の準備となる.4)コリオリ・力利用において、表記タイトルに包含されるジャイロ・センサについては(1) 3次元ジャイロ・センサの構成、(2)ジャイロ・センサの高感度対策(3)ジャイロ・センサの総合的解説、などについて,各種学会において報告した.5)次年度はより成果のあがる活動としたい.表記仮題の実現を目指して、次のような検討を行った.1)コリオリ・力を利用する原理を基に、本年も昨年度に引き続き、其の基本的検討を行った.即ち,先ず付加マス片持ち張り振動子に働くコリオリ力を水晶圧力センサの周波数変化で検出する事を試みた.

その結果、試作センサは自動車が120Km/時間、程度にならないと搭載車速度は検出できなかった.感度上昇対策が今後の課題となった.2)次に、その付加マス片持ち張り振動子を回転させる考案の基礎実験を行なった.その結果、地球の自転によるコリオリ力が感度良く選出できた.今後はこれを小型に製作し、車に搭載した実機・実験が必要になった.すなわち,コリオリ力・利用のスピード・センサは実現できる事を確信した.3)上記2)の構成に関して,容量変化検出型のスピード・センサも検討したが、圧電の電荷(電圧)検出型の方が高感度となることが確認された.すなわち,次年度は圧電方式に集中すべきことが確かめられた.4)コリオリ・力利用センサにおいて、表記タイトルに包含されるジャイロ・センサについては本年もいくつかの構成を具体化し、学会に報告した.表記課題の実現を目指して,次のような検討を行ない,遂にその目的を達成した。その様子は次の通りである。1)先年のコリオリ・力検出に関しての感度不足を次のように解決した。先年の問題点は水晶圧力センサの周波数カウンターの桁あらさが主要因であった事を確認し,原理は同じでも検出方法を変えて検討した。すなわち,水晶センサを内蔵し,ノイズ除去対策を施した,東洋通信機(株)の特殊圧力計を適用した。また,コリオリ・力検出の質量部もより簡素化なるように改良した。その結果,本システムは数km/secの速度検出も可能な事を確認した。更に基礎実験において確かに地球の自転をとらえ直線スピード検出が可能となった事を確認した。2)実際に乗用車に搭載し,実験し,その基本特性を確かめた。ただし,この場合は特性値にバラツキがみられた。自動車のショックの影響が入った結果とも思われる。将来はこの点の対策が必要である。3)付加質量片持ばり圧電振動子の回転型スピード・センサについても引続き考察を行ない,確かに地球の自転をとらえた事が確認できた。現在の目的達成度は80%程度と認識される。本構成では,スリップ・リング無しでも回転体の動きを圧電的に検出できる事が大きな特長である。すなわち,構造もシンプルで小型化もより期待できるので,具体的なスピード検出に向け,今後も研究継続を計画している。4)コリオリ・力利用センサにおいて表記課題に包含される他構成についても大きな成果を達成した。具体的には次のことに集約される。○水平式の高精度水晶ジャイロが完成した。○世界初とみなされる3軸検出の水晶3脚音さジャイロを実験的にも確認した。○1チップタイプの(1軸ジャイロ/1軸加速度)検出のモーション・センサも実現できることを明らかにした。将来は,これらは上記スピード・センサと並用されるものであり,互いにその機能を補完することによって,より機能的なセンサ・システムとなる。本研究成果はそのような目的に活用される。
バイオ医薬品生産を可能とする「スーパーミミズ」の開発～新規宿主開発への挑戦～

ミミズを活用したバイオ医薬品生産工場の開発を目指し,ミミズの一部を用いて遺伝子工学技術の開発を行ってきたが,生存率,形質転換効率が低いという課題があった.そこで,基層培地や遺伝子導入条件の最適化などを行い,生存率,形質転換効率の向上を目指した.その結果,初期条件と比較して,生存率は5.9倍,形質転換効率は1.5倍にまで向上し,完全体創生に繋がる結果を得た.バイオ医薬品とはヒト疾患の治療を目的として遺伝子組換えにより開発されたインスリン等の治療薬を指す.インスリンは大腸菌で生産可能だが,エリスロポエチン(貧血治療薬)等の糖タンパク質は,大腸菌では生産出来ず,糖鎖修飾が可能である動物細胞を利用する.しかしながら操作が複雑となり高コストになるという問題点があった.そこで,これらを解決しうる新規宿主としてミミズに着目し,ミミズを活用したバイオ医薬品生産工場の開発を目指した.しかしながらミミズの遺伝子工学技術は未開発であった事から,本研究では2年間で以下の項目を達成する事を目標とした.平成27年度:1.形質転換体取得率の向上((1)個体生存率,(2)形質転換効率の向上,(3)全く新しい手法による形質転換法の開発.平成28年度:雑菌数を低減させる飼育培地の開発,),2.完全体組換えミミズの創生,3.形質の子孫への伝搬の確認.平成27年度は1について実施した.一連の形質転換系に用いるミミズの飼育培地から検討し,最適な培地を決定すると共に,飼育時における雑菌数の低減にも成功した.さらに遺伝子導入時の各種条件の最適化を一部達成した事により,個体生存率は当初の約4.5倍にまで飛躍的に向上し,形質転換効率も約2倍に向上した.また,導入した遺伝子もPCRで検出し,組込まれている事を確認した.成果発表として学会発表を海外1件,国内2件,国内シンポジウムでの発表を1件実施した.平成27年度計画では,上述の1(3)全く新しい手法による形質転換法の開発,を実施する予定であったが,ミミズの飼育条件及び遺伝子導入時の各種パラメーターの最適化に時間を要したため,計画を一部変更し,現在開発した手法をさらに最適化していくことを優先させた.結果として1(3)は実施できなかったが,現行手法の改善により,生存率が当初の約4.5倍と飛躍的に向上し,形質転換効率も約2倍に向上させたことは大きな成果であり,基本的には順調に進展していると考えている.ミミズを活用したバイオ医薬品生産工場の開発を目指し,本課題ではミミズの遺伝子工学技術の開発を目指してきた.本課題では2年間で,ミミズ形質転換効率の向上,新規形質転換法の開発,完全な組換え体を創出することを目的としてきた.平成27年度は形質転換体取得率の向上に主として取り組み,平成28年度は,引き続き形質転換効率の向上に取り組むと共に,全く新しい手法による形質転換法の開発及び完全体組換えミミズの創生に挑戦した.形質転換時のエレクトロポレーション条件の最適化により,個体生存率は平成27年度の67%から88%にさらに向上したが,形質転換効率は19%から16%程度に落ち着いた.本結果より,さらなる形質転換効率向上にはもう一つの条件である組織再生時間が重要である事が示唆された.次に,エレクトロポレーションを用いない全く新しい形質転換法の構築に挑戦したが,現在までに成功に至っていない.また,完全体組換えミミズ創製に向けた研究において,尾部で構築した導入法を応用し,頭部の形質転換を試みたところ,一部に導入の形跡が見られたが,現在までに断定できる結果は得られていない.頭部組換え体は遺伝子導入したルシフェラーゼの活性測定までに約1ヶ月程度要し,非常に時間がかかる事から,今後も更なる継続研究が必要である.成果発表としては,査読無し論文2報,招待講演1件,国際会議での発表1件,学会発表1件,展示会(イノベーションジャパン)での発表1件を実施した.総括として,萌芽研究としてスタートした本研究は,チャレンジングな内容を多分に含みながらも,根幹であったミミズ形質転換効率の向上に成功し,成果は平成29年度基盤研究(C)の獲得に繋がった.従って,さらに研究を進めていく事により,ミミズを用いたバイオ医薬品生産工場開発の基盤を整備する.ミミズを活用したバイオ医薬品生産工場の開発を目指し,ミミズの一部を用いて遺伝子工学技術の開発を行ってきたが,生存率,形質転換効率が低いという課題があった.そこで,基層培地や遺伝子導入条件の最適化などを行い,生存率,形質転換効率の向上を目指した.その結果,初期条件と比較して,生存率は5.9倍,形質転換効率は1.5倍にまで向上し,完全体創生に繋がる結果を得た.今年度はかなりチャレンジングな内容となっており,特に子孫への伝搬の有無に関しては生殖細胞や卵等へ積極的に導入を試みる.そのためにも形質転換効率の向上は必須であり,前年度実施出来なかった新規手法開発を実施すると共に,さらなる現行法の最適化に取り組む.応用生物化学
胃悪性リンパ腫の予防と治療に関する基礎的および臨床的研究

胃初発MALTリンパ腫の再燃を押さえるため、血液中のCD20/CXCR3陽性Bリンパ球をタ-ゲットとした新しい治療体制の構築を目指した。未治療のMALTリンパ腫18例で検討したところ、放射線治療後のこの細胞の減少率によって再燃の有無に違いがあった。このことから、MALTリンパ腫の血液中のこのBリンパ球を押さえることは、再燃を減らすために有効ではないかと考えた。しかし、正常ボランティア10名の値を計測したところ、細胞数、細胞の割合とも放射線治療前のMALTリンパ腫患者のそれを上回るという結果になった。CD20/CXCR3陽性Bリンパ球をMALTリンパ腫の予防や治療へ応用するためには根本的な改善策が必要と考えられる。平成22年度は,マルトリンパ腫初発例の末梢血を治療前後で採取し,表面マーカー解析を行い,CD20・CXCR3陽性細胞割合を評価するための症例蓄積を主に行った。残りの検体は凍結保存することとした。また,生検標本に対して,免疫染色を含めた予備実験を適宜行った。胃に発生したマルトリンパ腫症例では除菌前後でのCD20・CXCR3陽性細胞をみる予定としていたが,放射線治療に紹介になる時点で,既に除菌療法が行われていたり,除菌不応例などが紹介されたりと統一性が困難と判断し,発生部位を問わずに放射線治療前後での末梢血液中CD20・CXCR3陽性の推移をみていくこととした。昨年度は多くの症例蓄積を期待していたが,新患数が予想よりも少なく,今後の研究が予定通り遂行できるかが危惧される。放射線治療が如何に安全かつ良好な治療成績をえることを示すことができれば,多くのマルトリンパ腫症例が放射線治療に紹介されると判断し,胃悪性リンパ腫における放射線治療の長期予後を検討する研究を行った。2010年4月に横浜で開催された日本医学放射線学会総会に於いて「胃悪性リンパ腫放射線治療の長期観察結果」の演題名で口演発表を行い,胃MALTリンパ腫に対する長期予後について報告した。今回の研究で予想しているように,5年後の全身再燃率は13%程度であるが,10年と長期でみると約27%と非常に効率であることを示した。本研究の継続が必要な状況であることを改めて示す結果であった。胃初発非ホジキンリンパ腫(MALTリンパ腫、非MALTリンパ腫)の予防と新しい治療体制の構築を目指してMALTリンパ腫のマーカ-として血液中のCD20/CXCR3陽性Bリンパ球の測定を試みた。当初の予測より患者数が減っているが、その理由は先にリツキシマブの投与がなされている場合が少なくないことである。それでも、未治療のMALTリンパ腫17例について、放射線治療前後に血液中のCD20/CXCR3陽性Bリンパ球の測定を試みることができた。その結果、放射線治療前に比べて放射線治療後の測定結果で、その減少数が50%以上の8例では再燃はなかったが、50%以下であった9例のうちば2例に再燃が見られた。また、全17例に死亡例はなかった。このことから、MALTリンパ腫のマーカ-として血液中のCD20/CXCR3陽性Bリンパ球の測定は再燃の予測に関し、臨床的に意味のあることではないかと考えられるにいたっている。なお、非MALTリンパ腫(その多くはびまん性大細胞型のB細胞リンパ腫)ではリツキシマブを併用したCHOP療法後に放射線治療を行い、優れた成績が得られているが、放射線治療の総線量を40Gyから30Gyに減らして再燃が増えないか、また合併症が減少するかを検討中である。再燃の無、合併症の発生とも治療後しばらくしてからでないと結論が出せない性質のものであるところから、今年度は解析を見送った。共同研究者の病理学の大島教授はWHO分類では別の組織型として扱われている末梢性T細胞性リンパ腫濾胞型と血管免疫芽球性T細胞リンパ腫について病理組織所見を検討し、連続性を示唆する所見が得られたことから同一のものとして取り扱われるべきものとの見解を得ている。胃初発MALTリンパ腫は生存率は高いが再燃の多い疾患であることから、再燃を押さえる新しい治療体制の構築を目指した。MALTリンパ腫の再燃に深い関係を有することを我々がすでに明らかにした血液中のCD20/CXCR3陽性Bリンパ球をターゲットとした。未治療のMALTリンパ腫18例(年齢22歳から77歳、平均64.9歳)について、放射線治療前後に血液中のこのリンパ球の測定を試みた。

その結果、治療前に比べて放射線治療後の測定結果で、その減少数が50%以上の8例では再燃はなかったが、50%以下であった9例のうち2例で再燃が見られた。このことから、MALTリンパ腫の血液中のこのBリンパ球を押さえることができれば、再燃を減らすことが可能ではないかと考えた。念のため、正常人の値を計測することにした。ボランティア10名(年齢28歳から48歳、平均38.5歳)の血液中のこのリンパ球を測定したところ、細胞数、細胞の割合とも放射線治療前のMALTリンパ腫患者のそれを上回るという意外な結果になった。対象患者の年齢の違いなど、考慮すべき点はあるにしても、残念ながらこのままではCD20/CXCR3陽性Bリンパ球をMALTリンパ腫の治療へ応用することは難しいと判断せざるを得なかった。なお、非MALTリンパ腫(その多くはびまん性大細胞型のB細胞リンパ腫)ではリツキシマブを併用したCHOP療法後に放射線治療を行い、優れた成績が得られている。しかしながら、放射線治療後に胃粘膜障害が出現することがあり、その頻度(20%程度)や時期(12ヶ月から24ヶ月の間)、さらには治療法についてもまとめ、報告した。胃のMALTリンパ腫の患者数が予測した人数より少ない。その理由としては先にリツキシマブの投与がなされている場合が少なくないことである。24年度が最終年度であるため、記入しない。胃のMALTリンパ腫の患者数が予測した人数より少ないことから、久留米大学病院の患者だけでなく、共同研究者のいる名古屋市立大学病院や九州大学病院でも積極的に放射線治療前後に血液中のCD20/CXCR3陽性Bリンパ球の測定を試みる。
島孤産灰長石巨晶中の微小包有物の精密分析と起源マグマの推定

この研究では、南九州の竹島、中部地方の保基谷岳火山、伊豆弧火山に産する灰長石巨晶にターゲットを絞り、それらの結晶学的、鉱物化学的、岩石学的研究を実施した。その結果、各火山産の灰長石からは、Ca成分が高く均一に近い組成で、Feを含む端成分が少量認められた。また結晶内に微細なFeの包有物(自然鉄等)が確認され、還元環境下での生成を示唆している。また一部の灰長石結晶から、結晶構造においてSi, Alが無秩序配列をする準安定な結晶の存在が明らかになり、灰長石巨晶の生成が融点付近での圧力や温度の急激な振動によるオストワルド成長が推定された。このことは、灰長石生成条件に関して強い制約条件を与える。日本列島の島孤に散在的ではあるが、多くの火山で普遍的に産する灰長石巨晶について、伊豆ー小笠原孤、および九州ー琉球孤の火山を中心に灰長石の特徴、特に化学組成、鉱物学的・結晶学的特徴を調べ、また今まであまり明確にされていなかった微小包有物(鉱物、そのほか)について焦点をあて、研究を実施した。25年度は主に、九州ー琉球孤の火山の調査と試料採取、各種分析、および伊豆小笠原弧の以前に採取されて試料についての研究を行った。伊豆孤での三宅島産灰長石結晶からはかんらん石、Caに富む輝石の微結晶や自然銅等のプレート状結晶が認められた。また、同様に八丈島産の灰長石結晶についても再度分析を試みた。これらの結果は以前の結果(Nishida et a., 1994)の結果と大きくは変わらなかったが、自然銅以外の微小の包有物を確認できたが、EPMAによる同定には至らなかった。。また九州ー琉球孤の、特に鹿児島県竹島の灰長石の採取、および化学分析・結晶構造解析等を実施した。その結果Feに富む結晶(自然鉄?)などの微小結晶を確認できた。一部にはS(硫黄)も含む場合があることから、鉄の硫化物が存在する可能性も示された。これらに加え、灰長石巨晶の結晶学的特徴について考察を行った。その結果、1つの結晶内でも結晶構造に関するゾーニングが有る可能性が示された。また、一部の灰長石についてはSr同位体比の分析も行い、母岩の値との比較も行った。その結果は、従来の結果同様、誤差の範囲で灰長石結晶と母岩(玄武岩)の値が一致することが確認された。また結晶のコアとリムでも同様の同位体比が測定された。今年度は、伊豆弧、三宅島、および九州ー琉球弧、また中部地方菅平近郊の火山において灰長石巨晶および母岩の岩石学的、鉱物学的、地球化学的研究を試みた。伊豆七島の三宅島赤場暁に産する灰長石巨晶中心部の劈開が無くガラス質な部分を単結晶構造解析したところ、長石の結晶構造の四面体席を占有するAlとSiが完全に無秩序配列した構造であることが判明した。通常灰長石においてはアルミニウム排除則によりAlとSiは秩序配列しているが、今回はじめて準安定な状態を示す長石の新しい構造が示された。鹿児島県竹島産灰長石巨晶について、結晶化学的な分析をおこなった。その結果、竹島産灰長石巨晶は、同じく鬼界カルデラの薩摩硫黄島に産する灰長石巨晶とほぼ同様の結晶化学的特徴を有することが判明した。さらに巨晶の元素面分析から、結晶成長形に沿って配列した微小包有物に対応して比較的大きな組成変動が見られるものの、それ以外のほとんどの部分では極狭い組成範囲での波動累帯構造が見られることが明らかになった。長野県、菅平西方の第三紀後期の保基谷岳火山に産する淡黄色を示す灰長石を含む火山岩類の研究を実施した。灰長石巨晶は箱根火山産の結晶と同様な色、形態を示した。また元素分析の結果An90-92で結晶のゾーニングがあるにもかかわらず均一であった。本研究の目的でもある微小包有物は確認できたが、分析できるサイズではなく、顕微鏡下での確認にとどめた。また、灰長石結晶を砕き、洗浄した後、粉末にしICP-MSで元素分析した結果、Fe,Zn,Cu等の元素が検出された。この分析には問題点(微小包有物やメルトインクルージョンなどを全て除いているとは限らないなど)もあるため、再度行うことを考えているが、結晶構造中に上記元素が含有している可能性も示唆された。日本列島の島弧火山において、限られた層準ではあるが多くの火山で普遍的に産する灰長石巨晶ついて、九州南部および伊豆ー小笠原弧、中部地方、菅平近傍の保基谷岳火山を中心に、灰長石の形、色調、化学組成、結晶学的、鉱物学的特徴を調べ、また、巨晶中に包有される微小結晶等について分析を試みた。最終年度に実施した研究成果:鹿児島県竹島産および鬼界カルデラの薩摩硫黄島火山に産する灰長石巨晶について結晶科学的な分析から、同様な化学組成(An89-93)を有し、巨晶の元素面分析結果から、結晶成長形に沿って配列した微小包有物に対して比較的大きな組成変動が見られたが、それ以外の多くの部分では極狭い組成範囲での波動累帯構造が見られることが判明した。その微小包有物はFeを含む硫化鉱物あるいは自然Feであることが推定された。

また伊豆弧、三宅島産の灰長石巨晶からは、Caに富む微小輝石結晶や自然Cuの板状結晶が確認されたが、硫化鉱物は確認できなかった。菅平近傍の保基谷岳火山(5 Ma)からは淡黄色の灰長石が観察され、元素分析からは、累帯構造は見られるものの、An=90-93の均一な組成,およびFeO wt.%=04-0.6%の比較的高いFeの存在が確認できた。この結果からは、長石のAlのサイトへのFe3+の置換が推定された。微小鉱物は存在は確認できたが、鉱物種までの同定にはいたらなかった。本研究における各火山における灰長石巨晶にはFeなどの元素を含む端成分が存在すること、およびそれらの量比が結晶の色などに表れる可能性明らかになった。また微小包有物では、硫化鉱物(Feの硫化物)が確認できる場合があり、それらは巨晶形成時のマグマの組成を反映している可能性が示された。またSr同位体比の部分測定結果は、灰長石が個々の火山の中ではprimaryなマグマからの生成が確認できた。この研究では、南九州の竹島、中部地方の保基谷岳火山、伊豆弧火山に産する灰長石巨晶にターゲットを絞り、それらの結晶学的、鉱物化学的、岩石学的研究を実施した。その結果、各火山産の灰長石からは、Ca成分が高く均一に近い組成で、Feを含む端成分が少量認められた。また結晶内に微細なFeの包有物(自然鉄等)が確認され、還元環境下での生成を示唆している。また一部の灰長石結晶から、結晶構造においてSi, Alが無秩序配列をする準安定な結晶の存在が明らかになり、灰長石巨晶の生成が融点付近での圧力や温度の急激な振動によるオストワルド成長が推定された。このことは、灰長石生成条件に関して強い制約条件を与える。島弧火山の代表である日本列島に産する第三紀第四紀の火山のある噴出物に特徴的に産する灰長石巨晶(アノーサイトメガクリスト)については、多くの記載やいくつかの研究がされてきたが、その結晶の成因に関しては未だ正確な結論には至っていない。今回、この研究で実施してきた伊豆弧、中部日本、九州ー琉球弧の火山に産する岩石学的、地球化学的、結晶学的研究を通して、今まで明確にされていなかった部分も明らかになってきた。結晶学的研究では、灰長石の元素配列に関すること、結晶面との包有物の分布の関連性などが明らかになってきた。また、微小のFeを含む硫化物の存在が明らかになり、その生成条件などが限定されてきた。また、保基谷岳産の灰長石等には微小包有物以外にもFe,Zn, Cuなどの遷移元素の存在が明らかになってきた。それらの結果は、巨晶生成時の親マグマを推定する上で重要な手がかりになると考えられる。また母岩の化学組成などの分析も行い、マグマ混合の可能性が示唆された点は、新しい成果である。また、結晶の色(淡黄色白色)は、伊豆弧の火山産の結晶の色調と明らかに異なっており、含有する微量の遷移元素の存在が重要であるとの推測ができた。ただ、包有物の直接分析が、一部の硫化物を除き、今まで充分に行えて来なかった点は今後の課題でもあり、今後工夫して進めることを考えている。また同位体分析も局所的に行えなかった点が問題点として残るが、この点も工夫して分析を試みる。岩石学、岩石化学、年代学今後は、今までの成果を基に、九州ー琉球弧火山、伊豆弧火山、中部地方の火山などの灰長石巨晶について、詳細観察、EPMA分析、ICP-MS等を用いた分析を引き続き行い、包有物の種類や形態等も含め、研究を行っていく。また、結晶構造や結晶の形態に関する分析や解析も引き続き行って行く。火山ごとに形態、色、結晶構造等、異なった灰長石結晶が産出していることについても、比較研究を行って行く。包有物と結晶構造、形態との関連性は興味にある問題であり、結晶の成長と親マグマの化学組成の関係を探る上で重要である。
乳児に適用される補聴器の機能の選択・評価・推薦方略

乳児期での聴覚障害児の発見ができるようになった。乳児に特有の外耳道の狭さに着目し,外耳道内の音圧をベースに聴力の把握を行い,また補聴器特性の評価を行う方法について実証的研究を行った。加えて,デジタル補聴器に特有の指向性マイク,雑音抑制機能の乳児への適用の可否について,音響的側面と明瞭度から評価を行った。1.目的:乳幼児の実耳特性(RECD値)を考慮したノンリニア補聴器の特性評価法の開発と適用を目的とした。3.成果:本研究の主たる成果は、以下の2点である。(1)インサートイヤホンによって測定した各耳の反応閾値を、2ccカプラ内音圧レベルに換算することにより、反応閾値とノンリニア補聴器の出力特性を直接、比較することが可能となった。(2)補聴器装着時とインサートイヤホン装着時のイヤモールドによる実耳特性は、同一とみなせる。したがって、本研究の手法により、乳幼児のRECD値の大小に関わらず、反応閾値と補聴器の出力特性を同じデシベル尺度上で比較させることが可能になった。本手法は、特に乳幼児のノンリニア補聴器の適合において、補聴器装用下の閾値測定からは読み取ることができない閾値上の増幅特性を評価可能にした点、および乳幼児特有の実耳特性の算入に関わる問題を解決した点において、意義がみとめられる。乳児の生活音響を収集するためにSAM(実音場録音評価システム)自体の評価を行った。乳幼児の生活環境音を防音室内で再生し,SAMを接続したコンピュータによりSAMの分析能力を評価した。この結果,音圧について本研究に必要な正確さで表示できること,さらにノイズのみ,音声のみ,ノイズ+音声と言った環境分析機能についても必要な能力を持っていることが明らかになった。また同時に本研究に使用する乳児の生活環境音の録音を済ませることができた。乳児へのデジタル補聴器適合の上では、閾値上の増幅特性の評価が必要である。インサートイヤホンによって測定された聴覚閾値(dBHL)を音響カプラ内音圧レベル(2ccdBSPL)へ換算させる手法が考案され、乳児23名に適用された。本手法により、乳児におけるノンリニア補聴器の閾値上の出力特性が評価可能となった。乳児の小さな外耳道容積が補聴器の特性に与える影響値を把握するための基礎的検討を行った。成人1名を対象に、音響条件を変えた2種のイヤモールドを用いて「カプラ利得+RECD(実耳-カプラ差)+MLE(マイクロホンの位置による影響値)=REAG(外耳道内の補聴器の利得)」となるか推定法を検討した。RECD値の測定精度が利得推定に影響することが示された。乳児と成人では外耳道容積が大きく異なるため、乳児へのデジタル補聴器の特性処方においては実耳の音響特性を組み入れることが重要となる。新たな手法としてインサートイヤホンによる実耳測定法を導入し、さらに0歳児の補聴器装用による聴覚的発達を質問紙によって追跡した。(2)インサートイヤホンによるRECD測定法を0歳児に試み、乳児に適用可能であることを明らかにした。(3)補聴器を装用した乳児の聴覚的発達を追跡的に評価することを目的に「0歳からの聴覚発達質問紙;日本語版EASD (early auditory skill development for special populations)質問紙」を作成した。本質問紙は、補聴器装用児を含めた乳児の聴覚的発達を経時的に評価する上で有用であった。また,実生活場面での補聴器の雑音抑制機能の評価を行った。乳児に適用されるデジタル補聴器の特に雑音抑制機能について,その使用の可否が研究者によって分かれている。これらの議論では,雑音抑制機能によって,生活環境音をも抑制し,聴覚障害乳児の聴覚学習を妨げる可能性が考えられている。生活環境音が雑音抑制機能によって,抑制されるレベルと,さらに特に音声入力時と音声無入力時の違いによる抑制効果の比較を行った。これらの結果,従来の純音信号ではなく,実音声などの複合音を入力信号とした出力特性の測定・評価も重要性が示唆された。掃除機,道路交通騒音,レストラン,自動車内環境に8本のマイクを設置し,生活環境音を録音,これを防音室内の8つのスピーカより再生し,補聴器の雑音抑制機能の評価を行った。この結果,生活環境音によって,その効果の違いが見られたが,明瞭度に有意差を見ることができた。本研究により,複合音信号によりデジタル補聴器のカプラ内出力特性を測定し、乳児の補聴器の機能の選択に有用な示唆が得られた。
抗ガングリオシド抗体による神経細胞機能障害の機序解明

我々は、これまで神経栄養因子受容体Trkが如何に細胞膜脂質特に酸性糖脂質であるガングリオシドにより機能制御されているのかを主に脂質ラフトの観点から神経系細胞の培養系から明らかにしてきた.これまでの予備的検討から、GBS患者血清中に存在する抗ガングリオシド抗体は必ずしも均一のものではない可能性が示唆されている.こうした血清は、神経栄養因子受容体機能を異なる方向に制御している可能性を見出している.こうした知見の元に、抗GMl抗体陽性の血清を用い、この自己抗体の高親和性NGF受容体であるTrkチロシンキナーゼ機能に及ぼす影響を我々が既に作成したTrkを高発現する細胞系(PCtrk Cell)を用いてスクリーングした.さらに、今年度は同じ脂質ラフト中に存在する中性糖脂質に対する抗体活性をGBS患者を除く種々の神経疾患患者血清でスクリーニングした.この検討をスムースに行うためサーマルブロッティング法によりPVDF膜に転写した各中性糖脂質を抗原として陽性血清を探索した.その結果、1)リガンドであるNGFに対するTrkのチロシン自己リン酸化反応を抑制するもの、影響を与えないもの、増強させる血清に分かれる事が判明した.2)この受容体レベルでの影響が確かに細胞内に伝わっていることを確認するため、そのキナーゼカスケード中下流に存在するMAPKへの影響を調べた結果確かに受容体レベルでの情報がその下流に伝達されていることを確認した.3)さらに、患者血清の中で活性化させるもの、抑制的に作用するもの、変化させないものの3群の代表的血清を用いて脂質ラフト構造に対する影響を検討した.その結果、こうした血清は脂質ラフト構造をダイナミックに変化させる可能性を見出した(論文作成中).4)ある種の自己免疫疾患に辺縁系脳炎を合併した5症例患者血清に抗中性糖脂質抗体を発見した.さらに、GBS様神経症状を呈した後辺縁系脳炎の臨床像を呈した患者血清にも同様の抗体活性を認めた(一部はArchNeuro1,2005で報告した).5)この中性糖脂質抗体は、グルコシルセラミド及びガラクトシルセラミドをPVDF膜上で認識し、実際の細胞培養系でもグルコシルセラミドを認識すること、6)Trkのリガンドに対する反応性を増大させ、NGF単独に比しに明らかにPCtrk Cellからの神経突起伸張反応を惹起させた(FEBS Lett,2006).現在、この新規抗体の詳細な細胞生物学的効果の検討を始めている.我々は、これまで神経栄養因子受容体Trkが如何に細胞膜脂質特に酸性糖脂質であるガングリオシドにより機能制御されているのかを主に脂質ラフトの観点から神経系細胞の培養系から明らかにしてきた.これまでの予備的検討から、GBS患者血清中に存在する抗ガングリオシド抗体は必ずしも均一のものではない可能性が示唆されている.こうした血清は、神経栄養因子受容体機能を異なる方向に制御している可能性を見出している.こうした知見の元に、抗GMl抗体陽性の血清を用い、この自己抗体の高親和性NGF受容体であるTrkチロシンキナーゼ機能に及ぼす影響を我々が既に作成したTrkを高発現する細胞系(PCtrk Cell)を用いてスクリーングした.さらに、今年度は同じ脂質ラフト中に存在する中性糖脂質に対する抗体活性をGBS患者を除く種々の神経疾患患者血清でスクリーニングした.この検討をスムースに行うためサーマルブロッティング法によりPVDF膜に転写した各中性糖脂質を抗原として陽性血清を探索した.その結果、1)リガンドであるNGFに対するTrkのチロシン自己リン酸化反応を抑制するもの、影響を与えないもの、増強させる血清に分かれる事が判明した.2)この受容体レベルでの影響が確かに細胞内に伝わっていることを確認するため、そのキナーゼカスケード中下流に存在するMAPKへの影響を調べた結果確かに受容体レベルでの情報がその下流に伝達されていることを確認した.3)さらに、患者血清の中で活性化させるもの、抑制的に作用するもの、変化させないものの3群の代表的血清を用いて脂質ラフト構造に対する影響を検討した.その結果、こうした血清は脂質ラフト構造をダイナミックに変化させる可能性を見出した(論文作成中).4)ある種の自己免疫疾患に辺縁系脳炎を合併した5症例患者血清に抗中性糖脂質抗体を発見した.さらに、GBS様神経症状を呈した後辺縁系脳炎の臨床像を呈した患者血清にも同様の抗体活性を認めた(一部はArchNeuro1,2005で報告した).5)この中性糖脂質抗体は、グルコシルセラミド及びガラクトシルセラミドをPVDF膜上で認識し、実際の細胞培養系でもグルコシルセラミドを認識すること、6)Trkのリガンドに対する反応性を増大させ、NGF単独に比しに明らかにPCtrk Cellからの神経突起伸張反応を惹起させた(FEBS Lett,2006).現在、この新規抗体の詳細な細胞生物学的効果の検討を始めている.我々は、これまで神経栄養因子受容体Trkが如何に細胞膜脂質特に酸性糖脂質であるガングリオシドにより機能制御されているかを神経系細胞の培養系から明らかにしてきた.我々のグループの予備的な検討では、GBS患者血清中に存在する抗ガングリオシド抗体が必ずしも均一のものではなく、こうした神経栄養因子受容体機能に全く異なる影響を与え得る可能性を見出している.こうした知見の蓄積のもと、抗GM1抗体陽性の血清を用いこの自己抗体の高親和性NGF受容体であるTrkチロシンキナーゼ機能に及ぼすこれら自己抗体の影響をTrkを過剰発現する我々が樹立した細胞系(PCtrk cells)を用いてスクリーニングした.

その結果、1)リガンドであるNGFに対するTrkのチロシン自己燐酸化反応を、抑制する患者群、変化を与えない群、むしろ増強させる群に分かれる事を見いだした.2)この挙動が確かにTrkを始点とする細胞内情報伝達系にも伝わっている事を確認するため、キナーゼカスケードの下流に位置するMAPKへの燐酸化状態を調べたところ、同様に抑制する患者群、変化を与えない群、むしろ増強させる群に分かれた.そこで、各群の臨床的特徴・差異について調べると、抗体価、脱随型、軸索型という臨床的特徴と相関する可能性が示唆された.3)さらに、GBS様臨床症状を示しながら抗GM1抗体陰性の患者について抗中性糖脂質抗体のスクリーニングをするとそれが陽性を示す一群の患者を抽出することが出来た.これら患者には、脳炎様症状と深部腱反射亢進亢進が見られた(Arch Neurol 2005).現在、これら血清についてもその細胞生物学的作用とシグナル伝達系に及ぼす影響についても検討を開始しているところである.我々は、これまで神経栄養因子受容体Trkが如何に細胞膜脂質特に酸性糖脂質であるガングリオシドにより機能制御されているのかを主に脂質ラフトの観点から神経系細胞の培養系から明らかにしてきた.これまでの予備的検討から、GBS患者血清中に存在する抗ガングリオシド抗体は必ずしも均一のものではない可能性が示唆されている.こうした血清は、神経栄養因子受容体機能を異なる方向に制御している可能性を見出している.こうした知見の元に、抗GMl抗体陽性の血清を用い、この自己抗体の高親和性NGF受容体であるTrkチロシンキナーゼ機能に及ぼす影響を我々が既に作成したTrkを高発現する細胞系(PCtrk Cell)を用いてスクリーングした.さらに、今年度は同じ脂質ラフト中に存在する中性糖脂質に対する抗体活性をGBS患者を除く種々の神経疾患患者血清でスクリーニングした.この検討をスムースに行うためサーマルブロッティング法によりPVDF膜に転写した各中性糖脂質を抗原として陽性血清を探索した.その結果、1)リガンドであるNGFに対するTrkのチロシン自己リン酸化反応を抑制するもの、影響を与えないもの、増強させる血清に分かれる事が判明した.2)この受容体レベルでの影響が確かに細胞内に伝わっていることを確認するため、そのキナーゼカスケード中下流に存在するMAPKへの影響を調べた結果確かに受容体レベルでの情報がその下流に伝達されていることを確認した.3)さらに、患者血清の中で活性化させるもの、抑制的に作用するもの、変化させないものの3群の代表的血清を用いて脂質ラフト構造に対する影響を検討した.その結果、こうした血清は脂質ラフト構造をダイナミックに変化させる可能性を見出した(論文作成中).4)ある種の自己免疫疾患に辺縁系脳炎を合併した5症例患者血清に抗中性糖脂質抗体を発見した.さらに、GBS様神経症状を呈した後辺縁系脳炎の臨床像を呈した患者血清にも同様の抗体活性を認めた(一部はArch Neurol,2005で報告した).
古代ギリシア建築におけるコリントス式オーダーの研究

1.地中海世界から中央アジアまでのコリントス式オーダーのデータ・ベースを構築した。2.データ・ベース作成により、同オーダーに関する諸問題点を明らかにし、それらの個別テーマの研究を深め、またその造形を通しての地中海世界国際関係の研究を行った。3.オーダーの起源を考察し、葬祭と関係が深く強く聖的性格を帯びていることを解明した。4.オーダーを造形タイプ分けし、さらにドーリス式、イオニア式オーダーとの対比からコリントス式オーダーの本質的特異性を明らかにした。5.ギリシア世界でのオーダーの完成形であるアテナイのオリンピエイオンの柱頭の考察を、特にギリシア世界の小アジアの及びエピダウロスのトロスの柱頭との比較により行った。6.同オリンピエイオン柱頭がギリシア世界からローマ世界へのオーダーの伝播の要でもあることを示し、ローマ世界のウィトルウィウス『建築十書』の「カノン柱頭」との比較により、その造形的本質とギリシア・ローマ国際関係の一側面を明らかにし、美術史学会全国大会で発表した。7.同オリンピエイオンのローマ人建築家コッスティウスの設計能力に注目してギリシア・ローマ建築史の中に位置づけ、建築史学会全国大会で発表した。8.都市ローマのPorticus Octaviaをオーダーの観点から東西国際関係の中に位置づけた。9.東西文明の交差点キリキア地方のオルバのゼウス神殿のコリントス式柱頭の造形の考察を通し、この地でのセレウコス朝とプトレマイオス朝の国際関係を解明し、地中海学会全国大会で発表し、2本の論文として公刊した。10.コリントス式柱頭をもつミレトスのブーレウテリオンをギリシア・ローマ・シリア国際関係の中に初めて位置づけ、ヘレニズムイスラーム考古学研究会で発表し論文に纏めた。11.同ブーレウテリオンをミレトスの格子状都市計画の中に位置づけ、ヒッポダモス式都市計画について新知見を得た。1、コリントス式柱頭の起源について考察した。特に、都市コリントスのある少女の墓碑の周囲に伸びた美しいアーカントスの葉を模してコリントス式柱頭が創造されたとする説に関し、アーカントスの葉が葬祭の性格を強く帯びていることをいくつもの事例から例証し、コリントス式が起源において葬祭と関係が深いことを示した。柱頭が起源にもつこの聖的性格が、この後の柱頭の建築史的意義を大きく決定することとなる。2、コリントス式柱頭には実に様々な形態が存在するので、ウィトルウィウスのカノンと先行研究Rouxによる自由タイプとノーマルタイプとの類型を踏まえ、その形態を定義した。さらに、ドーリス式とイオニア式との対比において、コリントス式の特異性を明示した。3、古代ギリシア時代の全地中海域から中央アジアにかけての広範な地域における全てのコリントス式オーダーのカタログ化に着手した。在ローマ・ドイツ考古学研究所等において現在までに成された個々の研究あるいは発掘報告書を渉猟し、コリントス式柱頭の事例のある都市の名、建物名、建物の用途、事例のある部屋の用途、建設年代、事例の寸法、以上の建物のプランと事例の図面、文献出典などの諸項目から成るデータ・ベースを構築中である。現在のところ、300件ほどの事例を見つけた。データ・ベースは随時拡張充実させている。さらに事例を時間軸にそって並べ、建築タイプ、柱頭が内部にあるか外部にあるかなどといった様々な検討課題による考証も開始した。4、エジプトにコリントス式柱頭はおそらく既に紀元前4世紀から存在し、関係が深いことを示した。特にアレクサンドリアのコリントス式柱頭の発展の様相については、さらに考証が必要なことが判明した。5、ギリシア・ヘレニズム世界からローマ世界へのコリントス式柱頭の伝播についても考証を始めた。

特に、都市ローマのPorticus Octaviaに関して考察をした。1.古代ギリシア時代地中海域から中央アジアにかけてのコリントス式オーダーのデータ・ベース作成を進めた。昨年度来の約300例についてはよりデータを充実させ、今年度はさらに約100例を追加した。その上で、特に重要あるいは従来の研究の盲点であった以下の3点に関し研究を行った。2.神殿外部にコリントス式を初採用したアテナイのオリンピエイオンの柱頭は、ヘレニズム君主的派手好みの造形化であり、それゆえにローマ皇帝の嗜好に合致しローマ建築へ大きな影響を与えた。ギリシア世界におけるコリントス式オーダーの完成例であり、ギリシアからローマへの造形伝播の要であったことから最重要課題であるこの柱頭について、小アジアの柱頭、エピダウロスのトロスの柱頭、ウィトルウィウス『建築十書』の「カノン」等との比較を行い、その造形的特徴とギリシア・ローマの造形的国際関係の一側面を明らかにした。この研究は'02年5月25日の美術史学会全国大会発表に応募し採択された。その後に同学会雑誌に投稿予定。3.オリンピエイオンは古代地中海の壮大な国際関係の具現化である。シリア王の奉献によりギリシアに建てられたこの神殿の建築家コッスティウスはローマ人であった。名前が知られているこのローマ最初の建築家について考察し、彼が選ばれた理由と出目を明らかにし、ギリシア・ローマ建築史の中に位置づけた。この研究は'02年4月20日の建築史学会全国大会発表に応募し採択された。4.キリキア地方は東西文明の交差点にあたる重要な国際舞台だが従来研究が等閑視されてきた。同地方のオルバのゼウス神殿のコリントス式柱頭の考察を通して、この地に於けるヘレニズム時代のセレウコス朝とプトレマイオス朝の関係を明らかにした。この研究は'02年6月22日の地中海学会全国大会発表に応募し採択された。1.古代地中海世界から中央アジアにかけてのコリントス式オーダーのデータ・ベースを作成した。これら約400点の事例を纏めることにより、同オーダーの理解と、その造形を通しての古代地中海世界国際関係の解明の為に、下記5つの観点が重要であることが判明した。それらに関し以下の研究を行いその成果の発表を行った。2.コリントス式として神殿外部に初採用されたアテナイのオリンピエイオンの柱頭は、その完成度と華麗さ故にギリシア建築からローマ建築への造形伝播の要となり、以降現代までの建築へ大きな影響を与えた。この神殿を特にそのローマ人建築家コッスティウスの設計能力に注目して建築史の中に位置づけた。4月20日に建築史学会全国大会発表で発表した。3.オリンピエイオンの柱頭はギリシア世界でのコリントス式の完成例である。この柱頭を、ギリシア世界の小アジアの柱頭及びエピダウロスのトロスの柱頭と、ローマ世界のウィトルウィウス『建築十書』の「カノン」と比較して、その造形的本質と、ギリシア・ローマ国際関係の一側面を明らかにした。5月25日に美術史学会全国大会で発表し論文に纏めた。
外国語の知識が母語に関するメタ言語能力に与える影響についての理論的・実証的研究

本研究は2つの目的を持つ。第一の目的は外国語の学習において身につけた知識が母語に関するメタ言語能力の発達に正の影響を与えるか否かを探ることである。第二の目的は母語に関するメタ言語能力と外国語に関するメタ言語能力が共通の認知機構に根ざすものであるか否かを探ることである。外国語の知識が母語に関するメタ言語能力の発達に正の効果を与えることが実証できれば、認知科学的な意義だけでなく、外国語教育の意義とその在り方に重要な影響を与え、社会的インパクトが期待できる。さらに、メタ言語能力について新たな視点(母語と外国語に関するメタ言語能力の関連)から検討することによってブレークスルーをもたらす可能性がある。
ゲノム上で相補的に重複している遺伝子間の発現に関する研究:保護蛋白質及びリン脂質転送蛋白質遺伝子の同時発現が及ぼし合う影響について

私たちは、これまでヒトにおいて、保護蛋白質及びリン脂質転送蛋白質遺伝子が互いに相補的に重複して存在していることを明らかにした。そこでマウスにおいても両遺伝子が同様な位置関係で存在していることを明らかにするために、マウスBACライブラリーに対しスククリーニングを行った。その結果、両遺伝子を同時に含むBACクローンを単離する事が出来た。得られたBACクローンのDNAを鋳型としてPCR法によりに、両遺伝子のエクソンを全てカバーするDNA断片を増幅し、両遺伝子のエクソン-イントロンの構成を解析した。マウス保護蛋白質遺伝子は全長約6.5kbからなり、15エクソンより構成されていた。またリン脂質転送蛋白質遺伝子は、約18kbの長さを有し、16エクソンから構成されていた。両遺伝子はポリA附加シグナルを含む3'-非翻訳領域が、互いに逆方向に66塩基重複して存在していた。上記の様な、互いにアンチセンスの関係にある両遺伝子同士が、その発現に際しどの様に影響し合っているかを、発現実験により明らかにするために、まず両遺伝子のcDNAをマウス由来のcDNAライブラリーから単離した。これらのcDNAを用いて、発現コンストラクトを作製した。マウス保護蛋白質cDNAを発現ベクターに組み込む際に、両遺伝子の相補的重複部分を含んだ完全長cDNAを組み込んだもの、及び重複部分を欠損させ、発現ベクター由来のポリA付加シグナルを利用して、それぞれの重複部分が欠損したmRNAが転写される様にデザインした発現コンストラクトを作製した。さらに、保護蛋白質の欠損症であるガラクトシアリドーシス患者由来で、内在的な保護蛋白質が存在しない株化線維芽細胞に、上記2種類のコンストラクトを導入し、ネオマイシン耐性選択をおこない、恒常的に保護蛋白質を発現している細胞株をそれぞれ樹立した。この細胞株にマウスのリン脂質転送蛋白質発現コンストラクトをそれぞれ導入し、一過性にリン脂質転送蛋白質を発現させた。この系では、アンチセンスでの重複の有無による有為な差は認められなかった。今後さらに、個々の細胞レベルでの影響が見えるような系を作製して、検討して行きたい。そこでマウスにおいても両遺伝子が同様な位置関係で存在していることを明らかにするために、マウスBACライブラリー対しスククリーニングを行った。現在、得られたBACクローンのDNAを鋳型としてPCR法によりに、両遺伝子のエクソンを全てカバーするDNA断片を増幅し、両遺伝子のエクソン-イントロンの構成を解析中であるが、これまでのところで、両遺伝子の3'-末端の重複範囲は明らかとなっている。上記の様な、互いにアンチセンスの関係にある両遺伝子同士が、その発現に際しどの様に影響し合っていつかを、発現実験により明らかにするために、両遺伝子のcDNAを単離する必要がある。そこでマウス由来のcDNAライブラリーをスクリーニングした。保護蛋白質及びリン脂質転送蛋白質遺伝子の蛋白コーディング領域全体と、3'-末端にポリAが付加されたcDNAを、それぞれ単離した。

マウス保護蛋白質cDNAを発現ベクターに組み込む際に、両遺伝子の相補的重複部分を含んだ完全長cDNAを組み込んだもの、及び重複部分を欠損させ、発現ベクター由来のポリA付加シグナルを利用して、それぞれの重複部分が欠損したmRNAが転写される様にデザインした発現コンストラクトを作製した。さらに、保護蛋白質の欠損症であるガラクトシアリドーシス患者由来で、内在的な保護蛋白質が存在しない株化線維芽細胞に、上記2種類のコンストラクトを導入し、ネオマイシン耐性選択をおこない、恒常的に保護蛋白質を発現している細胞株をそれぞれ樹立した。この細胞株に、マウスのリン脂質転送蛋白質発現コンストラクトをそれぞれ導入し、一過性にリン脂質転送蛋白質を発現させたが、この系では、アンチセンスでの重複の有無による有意な差は認められなかった。今後さらに、個々の細胞レベルでの影響が見えるような系を作製して、検討して行きたい。私たちは、これまでヒトにおいて、保護蛋白質及びリン脂質転送蛋白質遺伝子が互いに相補的に重複して存在していることを明らかにした。そこでマウスにおいても両遺伝子が同様な位置関係で存在していることを明らかにするために、マウスBACライブラリーに対しスククリーニングを行った。その結果、両遺伝子を同時に含むBACクローンを単離する事が出来た。得られたBACクローンのDNAを鋳型としてPCR法によりに、両遺伝子のエクソンを全てカバーするDNA断片を増幅し、両遺伝子のエクソン-イントロンの構成を解析した。マウス保護蛋白質遺伝子は全長約6.5kbからなり、15エクソンより構成されていた。またリン脂質転送蛋白質遺伝子は、約18kbの長さを有し、16エクソンから構成されていた。両遺伝子はポリA附加シグナルを含む3^1-非翻訳領域が、互いに逆方向に66塩基重複して存在していた。上記の様な、互いにアンチセンスの関係にある両遺伝子同士が、その発現に際しどの様に影響し合っているかを、発現実験により明らかにするために、まず両遺伝子のcDNAをマウス由来のcDNAライブラリーから単離した。これらのcDNAを用いて、発現コンストラクトを作製した。この細胞株に、マウスのリン脂質転送蛋白質発現コンストラクトをそれぞれ導入し、一過性にリン脂質転送蛋白質を発現させたが、この系では、アンチセンスでの重複の有無による有為な差は認められなかった。