hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
非アルコール性脂肪肝炎における幹細胞関連遺伝子の発現状況と発癌機構の解明

1)非アルコール性脂肪肝炎(NASH)の肝組織では、Nanogは85%、EpCAMは45%に発現を認めた。2)肝線維化の軽度群(20%)と高度群(80%)の比較では、高度線維化群でEpCAM発現が高度であった。癌部でのNanog発現増強例はNASH-肝癌(HCC)に有意であり、NASH-HCCでの発癌機構に重要であると考えられた。3)iTRAQを用いた蛋白の相対定量解析で、現在までに約4000例の蛋白を抽出した。現在、個々の蛋白の相対比較を行い、有意性の検討を行っている。わが国では今後非アルコール性脂肪肝炎(NASH)が増加し、肝癌(HCC)の発生母地としても高頻度となると予想される。NASHからのHCC発生には、多能性幹細胞や初期胚など未分化な細胞に発現する遺伝子(stemness遺伝子)が発現亢進し癌化や増殖に関与していると考えられ、NASHを基盤とした肝癌幹細胞の同定と肝発癌における役割の解析は重要である。多くの肝癌は慢性的に炎症の持続した背景肝より発生するが、ウイルス性とNASHやアルコールなどの代謝性の要因による炎症では炎症の主座が異なる。HCVでは門脈域を中心とした持続性の炎症反応により線維化が進展・結合するのに対し、NASHの線維化は中心静脈周囲から始まり、細線維が実質内に出現していくことが特徴である。また、C型肝炎由来のHCC (HCV-HCC)では臨床的にはAFP、PIVKA-IIなどの腫瘍マーカーが上昇するが、NASH由来のHCC (NASH-HCC)では上昇しないことも多く、またPIVKA-IIの上昇を先に認めるなどの相違があり、少なくとも2系統の発癌経路があると推察している。しかし、HCC組織ではほぼ同様のphenotypeを示す。我々は外科切除標本を用い、stemness markerを免疫組織染色しNASH-HCCとHCV-HCCの異同を比較検討することで、NASH特有の発癌関連遺伝子を探索する。肝細胞は自己再生能を有し肝切除などの傷害時にはstem cellが再生に寄与すると推定されている。Stem cellはヘリング管に局在し、必要に応じて胆管や肝細胞の再生に関与すると考えられている。この再生過程での異常が肝癌の発生起源となっているという仮説や癌幹細胞のみが肝癌となるという仮説が提唱されているが、解明されていない。そこで非アルコール性脂肪肝炎による肝癌(NASH-HCC)とその非癌部で発現亢進するstemness遺伝子がコードする蛋白に着眼し、炎症や線維化進展機序を明らかにするとともに肝癌の早期診断ならびに肝癌治療の確立を目的とする。NAFLDの進展に関しては、肝組織所見でのバルーニングが注目されてきたが、肝線維化が予後を規定することが報告された。すなわち、肝線維化抑止が肝癌の予防の上でも非常に重要であるため、線維化進行抑止を目指して研究を行う。対照はC型肝炎による肝炎を基盤に発症した肝癌(HCV-HCC)とし、発現蛋白を比較するとNanogやEpCAMなどの癌幹細胞マーカー発現を肝切除標本を用いて検討したところ、NanogはNASH-HCCにより発現し、EpCAMは線維化の程度と相関し発現することを見出した。今後は、癌部・非癌部におけるstemnessがコードする蛋白発現を網羅的に検討する予定である。HCV-HCCとNASH-HCCでの発現蛋白の相違を研究し、NanogはNASH-HCCにより発現し、EpCAMは線維化の程度と相関して発現することを見出すことが出来たため。われわれは肝切除標本を用いて、NanogやEpCAMなどの癌幹細胞マーカー発現を検討した。C型肝炎による肝炎を基盤に発症した肝癌(HCV-HCC)と非アルコール性脂肪肝炎による肝癌(NASH-HCC)を比較し、NASHに特有のマーカーとなるかも検討した。NanogはNASH-HCCにより発現し、EpCAMは線維化の程度と相関し発現することを見出した。すなわち、肝線維化抑止が肝癌の予防の上でも非常に重要である。これらstemness遺伝子がコードする蛋白を含めたNASHの線維化や肝癌に関与する蛋白発現を検討するために、肝切除時に摘出した肝癌の癌部・非癌部の凍結標本の一部をホモジナイズし、iTRAQを用いた相対定量で解析した。iTRAQとは、2004年にAppliedBiosystemsのPhilip L. Rossらが発表したもので、複数のサンプル間でタンパク質の存在量を網羅的に比較することができる。現在までに約4000例の蛋白を抽出し、有意性の検討を行っている。

HCV-HCCとNASH-HCCの肝切除標本を用いて、胚性幹細胞の特徴である多分化能と自己複製能の維持に関与するstemness遺伝子であるNanogやEpCAMなどの癌幹細胞マーカー発現、酸化的DNA傷害マーカー8-OHdG発現を癌部、非癌部の免疫染色で検討した。染色結果の評価は10-<50 %の染色細胞を認めるものを弱陽性、50%以上を強陽性とした。1. Nanogは細胞質に発現し、非癌部での陽性率は、弱陽性NASH-HCC 15%/ HCV-HCC 5 %、強陽性85%/ 95 %、癌部では弱陽性25%/ 15 %、強陽性15%/ 0 %で、強陽性例は全例癌部にsteatohepatitic (SH)の特徴を呈するSH-HCCであった。8-OHdGは核に染色され、非癌部では弱陽性60%/65%、強陽性20%/20%、癌部では陽性30%/35%、強陽性50%/45%であった。EpCAMは細胞膜に発現し、非癌部弱陽性25%/41.7%、強陽性10%/41.7%、癌部弱陽性5%/8.3%、強陽性5%/8.3%であった。2.線維化の程度別比較では、Nanog、8-OHdGには差がなく、軽度線維化群でEpCAM弱陽性0%/60%、強陽性0%/20%、高度線維化群弱陽性6.3%/85.7%、強陽性50%/14.3%であった。4.線維化の軽度群(20%)と高度群(80%)の比較では、高度線維化群でEpCAM発現が高度であった。基礎肝疾患によって発現するstemness markerの有意性に相違が認められた。肝病態の進行に伴い幹細胞マーカー陽性細胞が増加することから、NASH傷害肝の肝再生に幹細胞が関与しているものと推察された。手術残余標本での非癌部・癌部に発現するstemness遺伝子がコードする蛋白発現を免疫染色ならびにiTRAQを用いた相対定量で解析する予定である。iTRAQとは、2004年にAppliedBiosystemsのPhilip L. Rossらが発表したもので、複数サンプル間でタンパク質の存在量を網羅的に比較することができる。肝臓病学1.発現亢進しているNanogやEpCAMが、炎症の進展や発癌にどのように関与しているかを検討するため、ターゲットとなる下流の分子を探索する。例えば、細胞周期を正に制御するサイクリンやサイクリン依存性キナーゼおよび負に制御するサイクリン依存性キナーゼ阻害分子などの発現を検討する。また、検討数の増加のために臨床検体に加えマウス検体も合わせて検討していく。2.ミトコンドリア機能異常が発癌機構に関与すると推定されているが、NASHでは明らかではない。NASHではインスリンシグナル異常・酸化ストレスが発癌に関与していると想定されるため、stemness遺伝子とミトコンドリア機能異常による発癌機構仮説を臨床検体とin vitroの実験で検証し、NASHからのがん発症のメカニズムに基づいた介入法の開発につなげる。3.さらに、今後発癌機構が明らかになった際には、in vivoでの検証を施行する予定である。肝組織から蛋白の抽出をするにあたり、現在、倫理委員会の審査を行っているため、次年度に繰り越すこととなった。臨床検体を用いているため採取に時間がかかり、病理標本作成や抗体の条件検討に時間を要したため。手術残余標本での非癌部・癌部に発現するstemness遺伝子がコードする蛋白発現をiTRAQを用いた相対定量で解析する予定である。
ソ連極東の工業企業における労働関係に関する日ソ共同研究の企画研究

一連の研究活動は、ソ連の崩壊と独立国家連合の形成をみる期間と一致したので、共同研究の相手方の動きを接近観察し、共同研究の可能を広げる諸要因と、反対に,共同研究のために慎重な対応が必要な諸要因を知り、今後の共同研究組織の足掛かりを得ることが出来た。個別に列挙すると,1.旧ソ連科学アカデミ-極東支部ハバロフスク経済調査研究所メンバ-によるこれまでの主要研究業績の一覧表を手に入れることが出来た。これはこれまでは組織図は示されても、そこに生きる具体的研究者像が隠されていたかの国については、新しい成果である。2.共同予定の研究者に直接に面談し、それぞれの資質を、相手方の研究代表者から聞くだけではなく、直接に評価することができた。3.旧ソ連側に従業員アンケ-ト調査に実績のある研究員がいることを確認し、直接に討論できた。4.労働関係に関し、彼らによって行われたアンケ-ト調査票を手に入れた。5.今後の共同研究対象の選定作業にかかせぬ企業名リストが、新しい電話番号簿の形で入手できた。6.アンケ-ト表をいかに構成するかに関して、ポ-ランド調査の経験も加味して、点検できた。7.旧ソ連側が、労働者、事務員、技術職員の階層による態度差について、それが今後に展開される多様な企業形態に影響する仕方について、関心を持っているのを確認した。8.日本側ティ-ムの新しいメンバ-を発見した。9.ソ連の崩壊で相手側の研究ティ-ムの組織が不安定になる可能性と、同時に、相手方の研究者と調査対象を、日本側のリ-ドで、これまでのソ連の研究者の行動様式の枠を破った、純粋なアカデミズムの関心からの研究に組み込む可能性とが明らかになった。
ライフスタイルの客観的評価のための生体情報の検討

大学の職員551名,一年生1422名を対象に,食生活の生化学的情報としてスポット尿のNa及びNから食塩及び蛋白質摂取量を推定した。また喫煙量の指標としての血清チオシマネ-ト(以下,SCN)の有用性を検討した。結果は以下のようであった。1.推定食塩摂取量の平均は,男は職員,学生とも16g,女は職員12g,学生8gであった。食塩摂取10g,未満の者は男は両群とも27%,女は職員40%,学生74%であった。食塩摂取と血圧との間の相関係数は,職員0.172,学生0.221であり,両者の関連は学生において強い傾向であった。2.推定蛋白摂取量の平均は,男で職員78g,学生89g,女は両群とも約60gであった。学生女について蛋白摂取とヘモグロビンとの間にある程度の関連がみられた。3.職員男の自己申告による喫煙者と非喫煙者とを判別する血清SCNの分割値として,感度91%,特異性88%であった55μmol/lに設定した。4.職員男の非喫煙群のSCN平均33に比べて喫煙群の平均は99と3倍も高かった。5.喫煙本数別にSCN分割値55以上の者は,職員男では110本で56%,1120本で96%,21本以上では100%であった。学生男では21本以上でも57%にとどまった。6.自己申告による喫煙者率とSCNから判別した喫煙者率とを比較すると,両者近似したものであったが,女及び男学生18才においてはSCNから判別した喫煙者率が申告によるものよりも高かった。長崎大学職員の定期健診時に,尿検査用のスポット尿中のNa,K,尿素態窒素及びクレアチニンを,また血清チオシアネ-トを測定した。男416名,女139名についてのスポット尿中のNa及び尿素態窒素のクレアチニン比に,性,年令,身長,体重を用いたクレアチニン1日排泄予測値を乗じてそれぞれ食塩摂取量(換算係数2.24)及び蛋白質摂取量を推定した。推定食塩摂取量の平均は男16.9g,女11.7gであった。男女計で10g未満が30%,1015gが29%,1520gが18%,20g以上が23%であった。最大血圧140以上または最小血圧90以上の高血圧境界域以上の者は549名中72名(13%)であったが,肥満度(Broca変法)95未満でかつ推定食塩摂取7.5g未満の者20名中では1名(5.0%),肥満度115以上でかつ食塩摂取22g以上の23名中では8名(34.8%)が高血圧境界域以上であった。男318名の血清チオシアネ-ト値(SCN)の平均は138±42μmol/lであった。アンケ-トで得られた喫煙の有無(喫煙者125名,39%)あるいは1日平均喫煙本数とSCNとの間の関連を検討した。非喫煙者と喫煙者とを判別するSCN値の分割点として,感度(喫煙者のうち分割点以上の人の割合)と特異度(非喫煙者のうち分割点未満の人の割合)との和が最大となった135μmol/lを設定した。感度90.4%,特異度88.1%であった。喫煙者の喫煙本数群別のSCN135μmol/l以上の割合は,10本未満群で44%,1020本群で84%,2030本群で95%,30本以上群では100%であった。

血清SCN値の喫煙の客観的な指標としての有甲性が認められた。大学一年生1422名を対象に,スポット尿のNa,N,クレアチニンから食塩及び蛋白質摂取量を推定した。また喫煙量の指標として血清チオシアネ-ト(以下,SCN)を測定した。昨年度の職員と併せての成績の概要は以下のとうりであった。推定食塩摂取量の平均は,男は職員,学生とも16g,女は職員12,学生8gであった。その分布で10g未満は男は両群とも27%,女は職員40,学生74%であった。高血圧境界域以上の出現率は職員,学生とも14%であったが,推定食塩摂取群と肥満度群別にみると,食塩過多かつ肥満群では職員40,学生28%と高率であり,総体的には学生において食塩の影響が強くでていた。推定蛋白摂取量の平均は男で職員78,学生89g,女は両群60g程度であった。学生女についてヘモグロビン12g/dL以上と未満者群別の推定蛋白摂取の分布は貧血群が低値にあり,蛋白所要量の80%程度である50g未満が正常群で25,貧血群で50%であった。蛋白摂取とHbとの相関係数は0.12であった。職員男の自己申告による喫煙群と非喫煙群の血清SCNの度数分布から両者の分割点として感度91%,特異度88%とその和が最大となった55μmoL/Lを設定した。職員男で喫煙本数別のSCN55以上の割合は10本以内で56,1120本で96,21本以上では100%であったが,学生男では21本以上でも57%にとどまった。自己申告による喫煙率は男が職員39,学生19%,女職員4,学生0.4%であった。SCN55以上は男で両群とも申告によるもの同率程度であるが,女は職員18,学生13%と申告によるものよりも高かった。申告に偽りの可能性もあるが,食事などSCNに影響する他の因子の存在も考えられる。
急性膵炎の発症機序の解明:ガストリン リリ-ジング ペプチドおよび分泌細胞内カルシウムの役割

ガストリンリリ-ジングペプチド(GRP)の膵外分泌への影響を調べその作用様式を解明し,急性膵炎発症への関与を明らかにしようとした。ペントバルビタ-ルで麻酔した大の上腹部を歪中切開し,主膵管にカニュ-レを挿入流出する膵外分泌量を計測した。膵臓は他の生体臓器から独立させ大腿動脈より導びいたヘパリン化血液にて潅流した。GRPを0.1ー3nmol/kg膵十二指腸動脈に動注しても膵外分泌には何らの作用を起さなかった。GRP0.3ー3nmol/kgを大腿静脈内に静注した場合,用量依存的に膵外分泌の増加を起した。GRPにより流出する膵液は,蛋白質に富み,重炭酸濃度には影響を及ぼさなかった。この反応はコレシストキニン(CCK)の作用と類似していたが,セクレチンやガストリンの反応とは異なっていた。Lー364,718(選択的なCCK拮抗薬)とDーArg^1DーPro^2,DーTrp^<7.9>,Leu^<11>ーsubstance P(GRP拮抗薬),アトロピンはGRPによる反応を抑制したが,フェント-ルアミン,プロプラノロ-ル,SCH23390(Dー1拮抗薬),シメチジンなどの拮抗薬に対しGRPの作用は影響を受けなかった。血清中のCCK濃度をRIA法にて測定すると,刺激前は6.1±4.2pmol/mlであったのがGRP3nmol/kg静注1分後には,2.1倍,3分後には3.1倍と有意に増加したが,15分後にはコントロ-ル値にもどっていた。以上の結果より,GRPは犬膵外分泌刺激作用を有しており,その作用は間接的であり少なくとも一部は内因性のCCKを遊離することにより発現していることが示唆された。GRPの分泌細胞内カルシウムへの影響については,現在Furaー2を使用して実験中でありまだ結果を得ていない。
超高強度β型チタン合金溶接部の材質改善に関する研究

本研究はβ型チタン合金とその溶接部の材質改善を行うとともに一層の材質強化を目指したものである。1.時効硬化したβ型チタン合金をティグ溶接すると熱影響部において硬度の低下つまり軟化域が生じる。これはα相の固溶のためであることを明確にした。そして溶接後773Kで86.4ks時効処理すると、溶接熱影響部は母材にくらべはるかに硬化した。その原因を詳細に調べるため、溶接部を想定した熱処理を行った結果、1573Kと溶接ボンド部に相当する高い温度で溶体化処理した場合、従来の1073K溶体化材にくらべ673Kおよび773Kでの時効硬化速度および硬化が大なることが判明した。しかしボンド部近傍は結晶粒が粗大化し、粒界破壊が生じ易く、しかも伸びが極端に小さくなることがわかった。2.本合金とその溶接部の一層の材質強化を計るため、673Kで時効し、そして773Kで時効する二段時効処理、および溶体化処理後,圧延加工し、そして時効処理をおこなう加工熱処理を考案した。これらの熱処理により時効硬化が一層促進され、通常の時効処理にくらべ短時間でしかも高強度,高硬度が得られた。3.水素誘起割れにおける組織および水素の挙動について検討した。その結果、溶体化処理材では、β相組織であり、水素はβ相中にかなり固溶され、水素化物は生じにくいが、溶体化処理後、673K、および773kで時効処理した試料はα+β組織となり、水素はβ相中に主に侵入し、そして微細なα相中へ拡散し、α相中に水素化物が生じて,水素誘起割れが生じた。この事象はα+β組織のTi-6AI-4V合金と同事象であった。これらのことから時効した高硬度、高強度β型チタン合金は水素化物を生成しやすく、とくに溶接部のごとく時効硬化が促進された領域は顕著に水素誘起割れが生じることがわかった。本年度はβ型チタン合金であるTiー15Vー3Crー3Al合金溶接部の組織と靱性におよぼす時効処理の影響をアコースティックエミッション(AE)測定、X線回折および薄膜による透過電子顕微鏡観察によって調べた。得られた結果を要約すると次のようになる。1.Tiー15Vー3Crー3Al合金は溶体化処理のままでは強度が低いが、753Kでの時効処理により超高強度化を計っている。時効処理した本合金をティグ溶接した。その結果、溶接部は結晶粒の粗大化および軟化が生じて母材にくらべ強度および靱性がかなり劣化した。2.溶接部の材質劣化の原因を明確にするため、時効処理した試片を真空熱処理炉を用いて溶接熱影響部各部の組織を作製した。組織観察の結果溶体化温度の増加とともにβ結晶は粗大化した。粗大粒の試片はβ単相で伸びが良好になるはずであるが、逆に低下し、これは粒界破壊が生じるためであることが判明した。3.これを改善するため溶体化処理後、時効処理を行った。すなわち、573Kから773Kの種々の温度で種々の時間、時効処理を行った。その結果高温時効では溶体化温度の影響はあまり見られないが、低温時効では溶体化温度の増加とともに時効硬化が助長され、これはX線回折および透過電子顕微鏡観察等から、時効に伴いα相の析出分布形態の相違によるものであることが判明した。

しかし溶接熱影響部では母材に比べ、強度が改善されるが、逆に靱性および伸びの劣化が生じるため、適正な時効処理条件の確立を検討している。4.さらにα+β=相組織のTiー6Alー4V合金とTiー1.5Vー3Crー3Al合金との組織の相違について調べ、α相の分布形態およびβ相の形態の強度および靱性への役割について検討し、そして水素誘起割れにおけるα相の分布形態についても検討を行っている。本年度は、β型チタン合金の水素誘起割れにおける水素の侵入、水素化物の析出挙動と組織との関係を調べ、さらに二段時効および加工熱処理により一層の材質強化したβ型チタン合金を開発した。1.時効硬化したβ型チタン合金を溶接すると熱影響部においてα相の固溶がおこり、硬度の低下つまり軟化域が生じる。そこで溶接後773Kで86.4Ks時効処理をすることにより溶接熱影響部は母材よりも硬化した。そこで溶接部を想定した熱処理を行った結果、1573Kと溶接ボンド部に相当する高い温度で溶体化処理した場合、従来の1073K溶体化材にくらべ673Kおよび773Kでの時効硬化特性が促進された。その原因はX線回折により、α相の体積率の増加およびα相の格子定数の減少およびα相の微細なためてあることが判明した。2.水素誘起割れにおける組織および水素の挙動について検討した。その結果、溶体化処理材では陰極電解で水素添加をした場合、β相組織であり80K付近にβ相中の水素によるSnoekピ-クが生じ、水素はβ相中に固溶されるが、水素化物によるピ-クは生じなかった。溶体化処理後、673K,および773Kで時効処理した試料はα+β組織であり水素添加した場合80K付近にβ相中の水素によるSnoekピ-クおよび180ー230K付近に水素化物によるピ-クが生じ、X線回折においても水素化物の回折ピ-クが観察された。この事象は私共が報告しているα+β組織のTiー64lー4V合金と同事象であった。これらのことから時効した高硬度、高強度β型チタン合金は水素化物を生成しやすく、とくに溶接部のごとく時効硬化が促進された領域は顕著に水素誘起割れが生じることがわかった。3.溶接部の時効特性を母材と同様に改善する熱処理を考案し、さらには二段時効および加工後時効処理をおこなう加工熱処理によりさらに高強度、高硬度のβ型チタン合金が得られた。
コンテクストの異なる話者間の相互理解を促進する意図補完機構を備えた統計的機械翻訳

本研究「コンテクストの異なる話者間の相互理解を促進する意図補完機構を備えた統計的機械翻訳」は,より円滑な多言語間コミュニケーションや情報収集を目的とし,話者が持つ暗黙の意図を自動補完する日英,日中間の機械翻訳の実現を目指すものである.採用1年目には,未知の単語からの定義文生成を目的とし,入力単語の関連語の定義文を原型とし,それを編集することで定義文生成を行う新しい定義文生成モデルを提案した.採用2年目では,まず当該技術を機械翻訳へ導入することを目指し,より詳細な評価・分析を行った.その結果,(1)前年度までに利用していた訓練・評価用データセットは辞書資源(WordNet/GCIDE)から作られており,実際の対話において問題となりやすいエンティティ(例:人名,地名,楽曲や映画のタイトル)の定義文生成に用いることができないこと,(2)文化的・社会的コンテクストの差異によって理解が難しくなる表現は単一の「単語」だけでなく,複数の単語から構成される「句」も多く存在すること,(3)文脈ごとに適切な定義文は異なること,が判明した.本研究が目的とする「話者の意図を補完する機械翻訳」を実現するためには,上記の3問題を解決することが必要不可欠となる.そこで,採用2年目には意図補完機構の翻訳システムへの導入に先駆け,前述した3つの課題の対処に取り組んだ.まず,エンティティの定義文を生成することを可能とするため,Wikipediaを活用し世界最大規模の学習用・評価用データセットを新たに構築した.次に,採用1年目に設計した定義文生成モデルの拡張に取り組んだ.新たに提案したモデルは「単語」だけでなく「句」の定義文生成も可能であり,さらに文脈ごとに異なる定義文を生成可能である.最後に,上記のデータセットおよび提案手法を論文としてまとめ,トップ国際会議であるNAACL2019に採択された.平成30年度が最終年度であるため、記入しない。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。本研究は、より円滑な多言語間コミュニケーションや情報収集を目的とし、話者が持つ暗黙の意図を自動補完する日英、日中間の機械翻訳の実現を目指すものである。話者があることばを使う意図は、そのことば(単語)に対して適切な定義文を提示することで、聞き手に伝達できる。そこで、本研究は単語に対して定義文を付与することを考える。既知の単語については辞書等の資源から定義文が容易に入手できるため、本課題が焦点を当てるのは未知の単語(未知語)への定義文付与である。しかし、離散的なシンボルである単語から、その単語の定義文を直接予測することは極めて難しい。そこで本研究では、まず単語に連続的なベクトル表現(単語ベクトル)を割り当て、そのベクトルから定義文を予測する間接的な方法の研究開発を行う。本年度は未知の単語の定義文をニューラルネットワークにより生成する手法に関する研究開発を行った。具体的には、辞書に含まれる定義文の頻出パターン(例:"Capital of ..."や"Currency unit in ...")を手がかりとして活用する方法を検討した。従来の手法が「入力単語→定義文」への変換として定義文生成の問題を解くのに対し、本手法は「定義文→他の定義文」への編集として問題を定式化し、この考え方をニューラルネットに基づくモデルに実装した。このモデル及び再実装した既存手法の比較実験により、提案手法が既存手法よりも高い性能(機械翻訳で使用される自動評価指標BLEUで0.62ポイントの改善)で定義文を生成できることを確認した。本年度の研究開発により、サブタスク「固有名詞の定義文生成」に関する既存手法・提案手法の実装および比較実験がおおむね完了した。より詳細なモデルの分析および手法の改良に関しても検討・実験を進めており、全体として順調に進展している。本研究「コンテクストの異なる話者間の相互理解を促進する意図補完機構を備えた統計的機械翻訳」は,より円滑な多言語間コミュニケーションや情報収集を目的とし,話者が持つ暗黙の意図を自動補完する日英,日中間の機械翻訳の実現を目指すものである.採用1年目には,未知の単語からの定義文生成を目的とし,入力単語の関連語の定義文を原型とし,それを編集することで定義文生成を行う新しい定義文生成モデルを提案した.採用2年目では,まず当該技術を機械翻訳へ導入することを目指し,より詳細な評価・分析を行った.その結果,(1)前年度までに利用していた訓練・評価用データセットは辞書資源(WordNet/GCIDE)から作られており,実際の対話において問題となりやすいエンティティ(例:人名,地名,楽曲や映画のタイトル)の定義文生成に用いることができないこと,(2)文化的・社会的コンテクストの差異によって理解が難しくなる表現は単一の「単語」だけでなく,複数の単語から構成される「句」も多く存在すること,(3)文脈ごとに適切な定義文は異なること,が判明した.本研究が目的とする「話者の意図を補完する機械翻訳」を実現するためには,上記の3問題を解決することが必要不可欠となる.そこで,採用2年目には意図補完機構の翻訳システムへの導入に先駆け,前述した3つの課題の対処に取り組んだ.まず,エンティティの定義文を生成することを可能とするため,Wikipediaを活用し世界最大規模の学習用・評価用データセットを新たに構築した.次に,採用1年目に設計した定義文生成モデルの拡張に取り組んだ.

新たに提案したモデルは「単語」だけでなく「句」の定義文生成も可能であり,さらに文脈ごとに異なる定義文を生成可能である.最後に,上記のデータセットおよび提案手法を論文としてまとめ,トップ国際会議であるNAACL2019に採択された.平成30年度は、平成29年度に検討を行った単語の定義文生成手法の(1)多言語への拡張、および(2)機械翻訳システムへの導入を行う。(1)前年度に取り組んだ定義文生成手法は同一言語内で「単語→定義文」への変換をする方法である。この変換を言語を横断して行う(例:英語の単語から日本語の定義文を生成する)方法の研究開発を行う。(2)上記の定義文生成の方法を機械翻訳システムへ導入し、「よりわかりやすい」機械翻訳技術の研究開発を行う。具体的には、未知語の説明を行いつつ翻訳するシステムを目指す。このシステムに対して従来の評価指標を用いた自動的な性能評価を行うことはできないため、必要に応じて人手評価を行う。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
加齢依存性第1減数分裂不分離と変異型SYCP3

21番染色体のトリソミーは出生児のダウン症候群の原因となるが、他の染色体の数的異常症(異数性)の多くは重篤であり、妊娠早期に流産という転帰をとる。多くの異数性の過剰染色体は、(1)母親由来、(2)第1減数分裂由来、(3)母親の加齢に依存して頻度が増加する、という3つの特徴を有する。卵子形成の第1減数分裂は胎生期から思春期以降の排卵までの間、第1減数分裂前期で長期間停止するため、この期間に染色体の分離になんらかの影響が生じると考えられる。わたしたちは、異数性による流産を繰り返していると思われる習慣流産の患者で、第1減数分裂時の相同染色体の対合に関与するシナプトネマ複合体の蛋白をコードするSYCP3遺伝子の変異を同定した。この変異のひとつはスプライシング部位の変異により第8イントロンの残存をきたし、C末端の変異型SYCP蛋白を産生する。この第8イントロンの残存した転写物は、正常ヒト精巣でもわずかにみられる。健常人でもこのC末端の変異蛋白が産生され、その加齢による蓄積によって、習慣流産患者と同等の病態をきたすという仮説が成り立つ。前年度は、正常マウス性腺でも同じイントロンの残存した転写物が見られることを証明したが、蛋白レベルでは変異蛋白は検出できなかった。本年度は、国外の業者から購入したヒト卵巣サンプルでも同じく第8イントロンの残存した転写物が見られることをRT-PCRにて示した。そこで、ヒトのイントロン残存型蛋白に対するC末端のペプチド抗体を作成し、蛋白レベルでの検出を試みたが、検出できなかった。染色体の数的異常症(異数性)はダウン症候群のような先天性奇形症候群の原因となるが、多くはさらに重篤であり妊娠早期の流産となる。多くの異数性の過剰染色体は母親由来であり、第1減数分裂由来であり、母親の加齢に依存して頻度が増加する。卵子形成の場合、第1減数分裂は胎生期に始まり、第1減数分裂前期でいったん停止し、その思春期以降の排卵までの間、長く停止している。この期間に卵子に染色体の分離に影響するなんらかの不都合が生じると考えられる。わたしたちは、異数性を繰り返す習慣流産の患者で、第1減数分裂時の相同染色体の対合に関与する蛋白をコードするSYCP3遺伝子の変異を同定した。この変異のひとつはスプライシング異常により第8イントロンの残存をきたし、C末端の変異蛋白を産生する。わたしたちは正常ヒト精巣でもわずかにSYCP3遺伝子の第8イントロンの残存がみられることを発見した。健常人でもこのC末端の変異蛋白が産生され、その加齢による蓄積によって、習慣流産患者と同等の病態をきたす可能性がある。本年度は、正常マウス性腺でのSYCP3遺伝子の発現を解析し、ヒトよりも量的に少ないが、同じイントロンの残存が見られることを証明し、マウスがモデルとして使える可能性を示した。マウスのイントロン残存型転写物から産生されると想定されるC末端の変異型蛋白のC末端のペプチド抗体を作成し、その有用性を検討した。強制発現させた蛋白を認識することが判明したが、内在性の蛋白は検出できなかった。
アポトーシス誘導シグナル伝達系制御を介した抗癌剤耐性卵巣癌治療の試み

アポトーシス誘導シグナル伝達系の制御による抗癌剤耐性卵巣癌治療の基礎的知見を得ることを目的とした本研究から以下の結果を得た.1.p53遺伝子導入による抗癌剤感受性への影響(1)p53蛋白機能が抑制されているHeLa細胞およびSK-OV-3細胞ではp53遺伝子導入により細胞増殖抑制とCDDP感受性増強がみられたのに対して,CDDP耐性HeLa細胞(HeLa/CDDP細胞)では細胞増殖抑制もCDDP感受性増強もみられなかった.(2)HeLa細胞,HeLa/CDDP細胞,SK-OV-3細胞でp53遺伝子導入によるpaclitaxel(PTX)の感受性増強はみられなかった.(3)SCIDマウスへのSK-OV-3細胞移植腫瘍を用いた検討では,AxCAp53とCDDPとの併用による著明な腫瘍増殖抑制とBax蛋白発現の増強を認めた.2.抗癌剤とp53遺伝子導入併用によるアポトーシス誘導とアポトーシス関連遺伝子・蛋白の変化(1)equitoxic doseのCDDP,VP-16によるアポトーシス誘導時,SK-OV-3細胞ではp53遺伝子下流のBax蛋白発現の増強が観察され,AxCAp53導入によりDNA断片化を生じ,抗癌剤との併用によりDNA断片化率は上昇し,Bax蛋白発現はさらに増強した.一方,HeLa細胞,HeLa/CDDP細胞においては,抗癌剤曝露によるBax蛋白発現の増強はみられなかった.AxCAp53導入またはCDDPとの併用によりp53蛋白の過剰発現がみられたが,ICE遺伝子の発現とDNA断片化はHeLa細胞においてのみ認められた.(2)HeLa/CDDP細胞はPTXに対する随伴感受性を示したが親株に比較してDNA断片化は軽度であった.また,HeLa細胞,HeLa/CDDP細胞でPTXとAxCAp53併用によるDNA断片化の増強はみられず,Bax蛋白発現の変化も観察されなかった.以上の成績から,CDDP耐性細胞はp53依存性および非依存性にアポトーシス耐性に陥っていること,PTXによるアポトーシスはp53非依存性経路を介している可能性が示唆された.本研究によりp53が不活化されCDDP耐性を示す卵巣癌に対するp53遺伝子導入とCDDPとの併用療法の有用性が示された.またp53非依存性にアポトーシスを誘導するPTXがp53欠損卵巣癌の有効な治療法となり得る可能性が示唆された.アポトーシス誘導シグナル伝達系の制御による抗癌剤耐性卵巣癌治療の基礎的知見を得ることを目的とした本研究から以下の結果を得た.1.p53遺伝子導入による抗癌剤感受性への影響(1)p53蛋白機能が抑制されているHeLa細胞およびSK-OV-3細胞ではp53遺伝子導入により細胞増殖抑制とCDDP感受性増強がみられたのに対して,CDDP耐性HeLa細胞(HeLa/CDDP細胞)では細胞増殖抑制もCDDP感受性増強もみられなかった.(2)HeLa細胞,HeLa/CDDP細胞,SK-OV-3細胞でp53遺伝子導入によるpaclitaxel(PTX)の感受性増強はみられなかった.(3)SCIDマウスへのSK-OV-3細胞移植腫瘍を用いた検討では,AxCAp53とCDDPとの併用による著明な腫瘍増殖抑制とBax蛋白発現の増強を認めた.2.抗癌剤とp53遺伝子導入併用によるアポトーシス誘導とアポトーシス関連遺伝子・蛋白の変化(1)equitoxic doseのCDDP,VP-16によるアポトーシス誘導時,SK-OV-3細胞ではp53遺伝子下流のBax蛋白発現の増強が観察され,AxCAp53導入によりDNA断片化を生じ,抗癌剤との併用によりDNA断片化率は上昇し,Bax蛋白発現はさらに増強した.一方,HeLa細胞,HeLa/CDDP細胞においては,抗癌剤曝露によるBax蛋白発現の増強はみられなかった.AxCAp53導入またはCDDPとの併用によりp53蛋白の過剰発現がみられたが,ICE遺伝子の発現とDNA断片化はHeLa細胞においてのみ認められた.(2)HeLa/CDDP細胞はPTXに対する随伴感受性を示したが親株に比較してDNA断片化は軽度であった.また,HeLa細胞,HeLa/CDDP細胞でPTXとAxCAp53併用によるDNA断片化の増強はみられず,Bax蛋白発現の変化も観察されなかった.以上の成績から,CDDP耐性細胞はp53依存性および非依存性にアポトーシス耐性に陥っていること,PTXによるアポトーシスはp53非依存性経路を介している可能性が示唆された.本研究によりp53が不活化されCDDP耐性を示す卵巣癌に対するp53遺伝子導入とCDDPとの併用療法の有用性が示された.またp53非依存性にアポトーシスを誘導するPTXがp53欠損卵巣癌の有効な治療法となり得る可能性が示唆された.アポトーシス誘導シグナル伝達系の制御による抗癌剤耐性卵巣癌治療の基礎的知見を得ることを目的として,シスプラチン(CDDP)耐性細胞株およびp53欠損卵巣細胞株SKOV-3細胞用いた実験から以下の知見を得た.1.P53遺伝子導入による抗癌剤感受性への影響(1)P53蛋白機能が抑制されているHeLa細胞およびSKOV-3細胞ではp53遺伝子(AxCAp53)導入により細胞増殖抑制とCDDP感受性増強ががみられたのに対して,CDDP耐性HeLa細胞(HeLa/CDDP細胞)では細胞増殖抑制もCDDP感受性増強もみられなかった.(2)HeLa細胞,HeLa/

CDDP細胞,SKOV-3細胞でAxCAp53導入によるpacitaxelの感受性増強はみられなかった.2.抗癌剤とP53遺伝子導入併用によるアポトーシス誘導とアポトーシス関連遺伝子・蛋白の動向(1)equitoxic doseのCDDP,VP-16によるアポトーシス誘導時,SKOV-3細胞ではp53遺伝子下流のbax蛋白発現の増強が観察され,AxCAp53導入によりDNA断片化を生じ,抗癌剤との併用によりDNA断片化率は上昇し,bax蛋白発現はさらに増強した.一方,HeLa細胞,HeLa/CDDP細胞においては,抗癌剤暴露によるbax蛋白発現の増強は認められず,AxCAp53導入またはCDDPとの併用によりp53蛋白の過剰発現がみられたが,ICE遺伝子の発現とDNA断片化はHeLa細胞においてのみ認められた.(2)HeLa/CDDP細胞およびCDDP耐性上皮性卵巣癌細胞KFr細胞は共にpaclitaxelに対する随伴感受性を示したが,いずれも親細胞に比較してDNA断片化は軽度であった.また.HeLa細胞,HeLa/CDDP細胞でpaclitaxelとAxCAp53併用によるDNA断片化の増強はみられず,bax蛋白発現も観察されなかった.また,paclitaxelによりc-Mos遺伝子・蛋白の発現増強がHeLa細胞で観察された.以上の成績から,CDDP耐性細胞はp53依存性および非依存性にapoptosis耐性に陥っていること,paclitaxelによるアポトーシスはp53非依存性シグナル伝達系を介している可能性が示唆された.現在,アポトーシス耐性癌細胞の耐性解除を目的としてp53非依存性アポトーシスシグナル伝達系の可能性が示唆されているgadd 153遺伝子の発現状況を検索中である.アポトーシス誘導シグナル伝達系の制御による抗癌剤耐性卵巣癌治療の基礎的知見を得ることを目的として、シスプラチン(CDDP)耐性細胞株およびp53欠損卵巣癌細胞株SK-OV-3細胞を用いた実験から以下の知見を得た。1.P53遺伝子導入による抗癌剤感受性への影響(1)p53蛋白機能が抑制されているHeLa細胞およびSK-OV-3細胞ではp53遺伝子(AxCAp53)導入により細胞増殖抑制とCDDP感受性増強がみられたのに対して、CDDP耐性HeLa細胞(HeLa/CDDP細胞)では細胞増殖抑制もCDDP感受性増強もみられなかった。(2)HeLa細胞、HeLa/CDDP細胞、SK-OVー3細胞でAxCAp53導入によるpaclitaxelの感受性増強はみられなかった。2.抗癌剤とp53遺伝子導入併用によるアポトーシス誘導とアポトーシス関連遺伝子・蛋白の動向(1)equitoxic doseのCDDP、VP-16によるアポトーシス誘導時、SK-OV-3細胞ではp53遺伝子下流のBax蛋白発現の増強が観察され、AxCAp53導入によりDNA断片化を生じ、抗癌剤との併用によりDNA断片化率は上昇し、Bax蛋白発現はさらに増強した。一方、HeLa細胞、HeLa/CDDP細胞においては、抗癌剤暴露によるBax蛋白発現の増強は認められず、AxCAp53導入またはCDDPとの併用によりp53蛋白の過剰発現がみられたが、ICE遺伝子の発現とDNA断片化はHeLa細胞においてのみ認められた。(2)HeLa/CDDP
好中球の接着調節機構に関与する新規分子GPI-80のトポロジー解析

本研究の目的は、新規GPIアンカー型蛋白質であるGPI-80の好中球細胞内局在と、接着分子であるβ2インテグリン(CD18)の活性化に伴うGPI-80の動態変化を、形態学的側面から明らかにすることである。凍結超薄切片を用いた高分解能の免疫蛍光顕微鏡法を軸に、好中球において、GPI-80の局在を解析してみると、非刺激時は主に細胞内の顆粒様コンパートメントに存在しているが、fMLP刺激による好中球の活性化に伴い、GPI-80は移動し、細胞表面に発現されることが明らかとなった。次にCD18の局在を解析してみると、GPI-80と同様に、非刺激時は細胞内の顆粒様コンパートメントに、刺激により細胞表面に移動することがわかった。本研究の目的は、最近同定された新規GPI-アンカー型蛋白質であるGPI-80の好中球細胞内局在と、接着分子であるインテグリンの活性化に伴うその動態変化を明らかにすることである。先ず好中球におけるGPI-80分子の分布様式の解析を、凍結超薄切片を用いた免疫細胞化学法を軸に進めた。準超薄切片を用いて非刺激時の好中球におけるGPI-80の局在を観察してみると、光学顕微鏡上、細胞内に顆粒状の分布を認めた。細胞内のどの小器官に局在しているか、特に主要な細胞内顆粒であるアズール顆粒(ライソゾーム)と特殊顆粒との鑑別を行うため、アズール顆粒とGPI-80、特殊顆粒とGPI-80の2重免疫染色を試みた。免疫染色からGPI-80分子は、上記2大顆粒と異なる局在が示された。このことは、最近のGPI-80の生化学的研究結果から予測される分子局在様式と非常によい一致を示しており、第3の新しい細胞内顆粒(または小胞)に存在する可能性が示唆された。ところが、新規顆粒様構造は100nm前後径の小型細胞内小器官であると推測され、500nm厚の準超薄切片を用いた解析では解像力が不十分であり、解析法の再検討を迫られた。この検討過程で、胎盤もモデル材料の一つとして用い、種々の免疫細胞化学法を検討した。検討の結果、100nm以下の凍結超薄切片を用いた免疫細胞化学法とCCDカメラを導入した画像解析による高分解能の形態解析法の開発に成功した。この手法の導入によりGPI-80を含む細胞内小器官の同定・二次元分布様式・他の分予との相互関係を高解像力で明らかにすることが可能となった。現在この手法を用いてGPI-80分子の細胞内局在と動態解析を精力的に進めている段階である。好中球において、CD18の局在を解析してみると、非刺激時は主に細胞内の穎粒様コンパートメントに存在しているが、fMLP刺激によるCD18(好中球)の活性化に伴い、CD18は移動し、細胞表面に発現されることが明らかとなった。次にGPI-80の局在を解析してみると、CD18と同様に、非刺激時は細胞内の穎粒様コンパートメントに、刺激により細胞表面に移動することがわかった。CD18の活性化に伴うGPI-80の動態変化を明らかにするために、GPI-80とCD18の2重染色を試みればよいわけであるが、これら分子に対する入手可能な抗体を検討した結果、特異性が高く、かつ免疫細胞化学に応用可能な抗体は、どちらともマウス・モノクローナル抗体であったため、同一種の抗体を用いて2重染色することは、困難であった。最近、同一種の抗体を用いて行う新しい多重標識法として、Zenon法(Molecular Probes社)が報告され、我々はこの方法を導入して、解析を進めた。GPI-80とCD18の2重染色から、fMLP刺激により細胞表面に移動した両分子は、全てではないが、共局在を示した。今回の結果と、生化学的報告(J Immunol 162:4277,1999)を考え合わせると、GPI-80は、CD18の活性化(好中球の活性化)に伴い、巨分子レベルでは、GPI-80とCD18が直接接触(GPI-80がCD18を直接修飾)していることが示唆された。

トポロジー解析に新しい手法を開発し導入する必要性に迫られたことに伴い、好中球一培養血管内皮細胞の相互作用解析が遅れ、その一部は課題として残された。
朝鮮通信使迎送体制と対馬藩宗家

平成26年度(PD採用第2年度目)においては、研究課題「朝鮮通信使迎送体制と対馬藩宗家」の遂行のため、前年度収集済みの対馬藩主の役割に関する『朝鮮通信使記録』ならびに博士論文の成果の一部をもとに、韓国国際学術大会での口頭発表(韓国語)に重点を置き研究を進めた。報告者は韓国京畿大学校(京畿道水原市)主催の同校博物館特別展“圖路"記念国際学術大会『韓・中・日古道路の人文学的再照明』に招聘され「日本における朝鮮通信使迎接と道路」という題目で、日本での朝鮮通信使研究の成果を発表する機会を得た。同発表では近世日本に来訪した全12回の通信使のうち、初回の第5回までに焦点を絞り、約30か所の陸路接待地(宿泊地・昼休地)を分析・整理した。その結果、使節接待地が第3回以降に固定化されたことを実証、徳川幕府の宿駅制度の確立時期と通信使の陸路接待地の定着時期とが重なっていることを明らかにした。加えて江戸往来道中、対馬藩宗家が通信使護行のため旅程をともにし、同じ接待地で宿泊・昼休をとったことを紹介、史料の豊富な延享5年(1748)の事例から通信使宿舎・藩主本陣を確認し(「海陸朝鮮人宿附」『延享信使記録』など)、宿駅施設(本陣・脇本陣)のほか城下町で、大人数を収容する寺院が多用されていたことも指摘した。発表内容は主催校趙炳魯氏の退官記念論集に寄稿する予定である。また同大会は、朝鮮側史料の本格的活用や歴史地理学の立場からの通信使移動の比較事例にも触れられ、新たな史料・手法による研究の可能性を見出すことのできる貴重な機会であった。そのほか高月観音の里歴史民俗資料館、一宮市立尾西歴史民俗資料館でも31点(965丁、1巻、40枚)の通信使や雨森芳洲、対馬藩関連史料を収集した。今後これらをもとに、対馬藩家臣団の編成や宝暦期対馬藩の請負人馬について分析・検討を継続していきたい。26年度が最終年度であるため、記入しない。平成25年度(PD採用第1年度目)においては「朝鮮通信使迎送体制と対馬藩宗家」という研究課題の遂行のために(1)朝鮮通信使迎送体制下における対馬藩主の役割の分析・検討を重点的に行った。本研究を進めるに当たり、まず慶應義塾大学三田メディアセンターにて、ゆまに書房刊行のマイクロフィルム版『朝鮮通信使記録』所載の史料を閲覧し対馬藩主ならびに信使奉行(通信使護行の総責任者)の「道中毎日記」を複写・精読する作業を行った。この『朝鮮通信使記録』の調査により、明暦期(第6回、1665年)から宝暦期(第11回、1764年)にかけて20点を超える「道中毎日記」が残っていることが確認され、うち正徳・享保期を中心に全10点・全1463丁分が複写・収集済みである。実際に複写・収集した史料から江戸を目指す集団が、1将軍献上用の馬・鷹、2先荷(献上品)、3対馬藩主行列、4朝鮮通信使行列、5以酊庵輪番僧行列、6荷馬・人足に大分されることが確認された。なお朝鮮人と行列通行を支える日本人との間で、言葉・文化の問題によるトラブルも多発し、その交渉・調整役のため、対馬藩主や家臣団が1、2時間で駆けつけられる距離で護行・随行していたことも判明した。通信使行列と対馬藩主行列の通行順については、正徳・享保期に次第に定式化していく様相をみせる。明暦・天和期の段階で、通行順序が曖昧・不定であった一方、正徳期には参向・下向ともに通信使行列が先行し対馬藩主行列が後に従う独特の順序になる。享保期以降は人馬の差し支えや大河・山中の危険な場所のみ順序を入れ替えるが、基本的に対馬藩主行列の後、通信使行列が続く形に定着していく。以上のように、通信使行列や対馬藩主行列の通行順が正徳・享保期に試行錯誤の上、定着していくことからも、乗馬役の事例同様、朝鮮通信使迎送体制の再整備の一端がうかがえる。これらの研究・分析は正徳期の新井白石の改革の影響等を追加調査した後、学会発表・論文化する予定である。

加えて江戸往来道中、対馬藩宗家が通信使護行のため旅程をともにし、同じ接待地で宿泊・昼休をとったことを紹介、史料の豊富な延享5年(1748)の事例から通信使宿舎・藩主本陣を確認し(「海陸朝鮮人宿附」『延享信使記録』など)、宿駅施設(本陣・脇本陣)のほか城下町で、大人数を収容する寺院が多用されていたことも指摘した。発表内容は主催校趙炳魯氏の退官記念論集に寄稿する予定である。また同大会は、朝鮮側史料の本格的活用や歴史地理学の立場からの通信使移動の比較事例にも触れられ、新たな史料・手法による研究の可能性を見出すことのできる貴重な機会であった。そのほか高月観音の里歴史民俗資料館、一宮市立尾西歴史民俗資料館でも31点(965丁、1巻、40枚)の通信使や雨森芳洲、対馬藩関連史料を収集した。今後これらをもとに、対馬藩家臣団の編成や宝暦期対馬藩の請負人馬について分析・検討を継続していきたい。26年度が最終年度であるため、記入しない。平成25年度中、(1)朝鮮通信使迎送体制下における対馬藩主の役割については、おおよそ予定の史料を収集し分析することができた。また(2)対馬藩家臣団の編成に関しても長崎県立対馬歴史民俗資料館や韓国国史編纂委員会にて「奉公帳」をはじめとする関連史料を調査・収集中である。博士論文執筆・提出の関係で一部、弘前市立図書館等の国内調査ができなかったが、平成26年度の計画に組み込み実施する予定である。特になし平成26年度以降は、朝鮮通信使迎送体制下における(2)対馬藩家臣団の編成、ならびに(3)宝暦期対馬藩の請負人馬に関する史料収集・分析を行う。ただし対馬藩家臣団の分析に用いる一連の「奉公帳」に関連し、平成25年度の調査により目録の記載項目で把握できなかった丁数について、1点分で300丁を超える分厚いもの含まれることが判明した。よって調査対象が非常に厖大な量に膨れ上がると見込まれるため、しばらくは享保期以降に時期を限定し調査・分析を行うこととする。なお東京大学史料編纂所所蔵の「宗家文書」の中にも「江戸藩邸日記」等の関連史料が存在するため、併せて調査・閲覧を試みる。
自己組織化ペプチドによる細胞－エレクトロニクス材料界面の構築

二次元原子薄膜材料は、高速かつ高感度にシグナルを取得できる次世代エレクトロニクス材料として注目されている。このようなエレクトロニクス材料の電極特性を損なうことなく、高感度に細胞からのシグナルを取得するには、生体適合性の高い小分子を用いた新しい電極界面の設計が必要となる。ペプチドは、化学合成が可能な生体分子で、特定の材料表面に自己組織的に結合できる一方、多彩な生理活性を有し、細胞のシグナル伝達などに関わるリガンドや受容体と相互作用することで細胞の機能制御にも関与する。これより、細胞ーエレクトロニクス材料の界面分子としてペプチドに着目した。本研究では、エレクトロニクス材料および細胞に対して親和性を有する複合ペプチドを設計することで、特定の材料表面にペプチドが自己組織的に結合することで細胞界面を構築し、細胞ダイナミクスを電気化学的に計測することを目的としている。本年度は、グラフェンと同様の表面構造をもつ薄層グラファイトに着目し、ペプチド溶液を滴下するだけで材料表面への自己組織化による細胞認識ペプチド界面の構築について検討した。材料表面に安定して結合するペプチドを設計し、細胞親和性ペプチドとの複合ペプチドを作製することで、ペプチド界面上での細胞培養が可能となった。顕微鏡を用いた細胞の挙動解析においても、培養皿と同様に細胞遊走が確認された。また、種々の細胞親和性ペプチドを利用することでペプチド配列による細胞形態の制御が可能であり、細胞親和性ペプチド界面が細胞機能の発現において重要であることが示唆された。電極材料および細胞に対して親和性を示すペプチド配列をリンカーを介して連結させた複合ペプチドを作製することで、エレクトロニクス材料表面での細胞解析が可能となった。このペプチド界面は安定性を有し、2日間の細胞培養においても機能を保持していたことから、有用な細胞界面を構築できたと評価した。ナノシート材料であるグラフェンと同様の表面構造を有する薄層グラファイトに着目し、ペプチドによる細胞ー材料界面の構築による細胞の挙動解析を引き続き進める。細胞親和性ペプチドについて細胞との結合に重要となるアミノ酸残基や結合に必須な配列を解析することで、細胞に損傷を与えずに材料表面での細胞機能計測を可能とするペプチド配列の探索をさらに検討する。