hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
移植コーディネーターの質向上を目指す養成教育・継続教育プログラムの開発

移植コーディネーターの養成・継続教育の充実促進を目的に、国内外の現教育内容の分析と調査を実施した。養成に必要な教育内容として、医学的知識や技術、患者及び患者家族の精神的ケアの必要性が挙げられ、欧米の特徴として人工呼吸器の管理能力が重視されていた。また、継続に必要な要素として、定期的な専門教育の実施や、学会発表や論文報告等による最新の知見の習得が重要であることが挙げられた。このほか、円滑に仕事に取り組むための支援が、コーディネーター養成並びに継続意欲の促進に繋がり、危機的状況における自主性や洞察力、チーム医療におけるコミュニケーション能力といった資質を高める教育も重要であることが示唆された。本研究の目的は、移植コーディネーターの養成教育プログラムの充実促進に資するために、現在国内外で行われている移植コーディネーターの養成教育内容を分析し、より効果的で高度な養成教育プログラムの開発と継続教育システムの構築を目指すことである。平成24年度は、国内の移植関連団体等において行われている移植コーディネーターや移植医療に従事している者を対象とした講習および研修会に参加し、実際の教育や研修内容についての理解に努めた。レシピエントコーディネーターとドナーコーディネーターでは、必要とされる知識や技術が異なるものの、患者および家族への対応の在り方については、両者とも研修において十分な教育の時間が設けられていた。また、グループワークを取り入れることは、他施設と経験や意見を交換する機会となり、具体的なイメージへと繋がるため、教育方法として非常に効果的であることがわかった。しかし、参加者の施設によって、移植に対する理解やコーディネーターの認知、教育の充実度に差があり、移植コーディネーターが十分な教育・研修を受ける機会を得るには、所属する施設の理解や協力体制の整備が重要であると考えられる。さらに、移植実施経験が少ない施設のコーディネーターは、より充実した教育や研修、意見交換の機会を求めており、移植コーディネーターの養成には、教育内容の充実のみに留まらず、他施設のコーディネーターとの交流の場を設けることの必要性が示唆された。本研究の目的は、移植コーディネーターの養成・継続教育プログラムの充実促進に資するために、現在国内外で行われている移植コーディネーターに対する教育内容を分析し、より効果的で高度なプログラムの開発とシステムの構築を目指すことである。本年度は、移植コーディネーターの養成・継続に必要な教育及び支援について、海外の移植コーディネーターにアンケート調査及び面接調査を実施し、内容を検討した。移植コーディネーターの養成に必要とされる教育内容として、人体解剖学や急性・重症患者看護、人工呼吸器の管理等といった医学的知識や技術のほか、患者及び患者家族の精神的ケアの必要性を挙げており、特に欧米では脳死臓器移植が主であることから、人工呼吸器の管理能力を非常に重視しており、特徴的なものとしては、臓器提供に対する文化的感情や宗教観に関する教育が挙げられた。米国の一機関では、これらの教育のほかに臨地実習及び試験を含めて6ヶ月間の研修期間を設けていた。また、継続に必要な教育及び支援については、定期的な専門教育の実施のほか、国内外の学会や文献に関する情報提供、他施設との情報共有を行い、最新の知見を得ることが有用であることが挙げられた。このほか、円滑に仕事に取り組むための職場環境の整備や指導者及びスタッフからの協力等、充実した教育及び支援が、優れたコーディネーターの養成並びに継続への意欲の促進に繋がることが示唆された。移植コーディネーターは、医学的知識や技術のみならず、危機的状況における自主性や洞察力、チーム医療の一員としての高いコミュニケーション能力が求められていることから、このような資質を高めるための教育も重要になることが考えられた。平成23年度は、主に日本の移植コーディネーターに関する文献検討を行い、移植コーディネーターの役割と活動内容に関する理解や、移植コーディネーターの教育や研修に関する理解に努めた。また、移植後のレシピエントやその家族と面談する機会があり、移植コーディネーターと実際に関わった際に生じた思いや体験の中には、移植コーディネーターの対応の不十分さを指摘する意見が挙がり、患者対応時の医療従事者側の改善点が存在することが示唆された。さらに、移植先進国であるアメリカ合衆国に赴き、移植実施病院での移植手術や外来診察、ドナー病院での臓器摘出や搬送等、臓器移植の一連の流れについて現地の移植コーディネーターおよび移植医療従事者からの説明を受けながら見学し、アメリカ合衆国の移植医療の実際について知ることができ、日本とアメリカ合衆国の移植医療の相違や日本の課題等に関する意見交換も行った。日本の臓器移植ネットワークの一部に相当するアメリカ合衆国における臓器斡旋機関にも赴き、移植関連施設における移植コーディネーターの役割や活動内容についても知ることができた。移植コーディネーターという職業は大変特殊で難しい職務内容であるため、入職後に講習や研修コースが設定されており、アメリカ合衆国は多種多様な人種が存在する国柄もあって、多様なニーズに対応できるような人員配置や文化・宗教観の違いに応じた対応の画策等、対象者それぞれのニーズに沿うような工夫がなされていることがわかった。

このような点は、個々のニーズに沿うという点においては日本も参考にすべき部分であり、こういった細やかな配慮が患者および家族の精神的ケアや移植医療の普及に繋がると考えられる。一方、移植コーディネーターの離職年数は日本とさして変わらないという興味深い情報も得られた。大変困難な職務のため早期に離職する者が多く、日本も継続教育の重要性が考えられる。質問紙調査を実施し、プログラム開発の着手までを予定していたが、質問紙の内容を検討するまでに留まった。当初の研究計画では、研究初年度に移植コーディネーターや移植医療従事者およびレシピエントやドナー等に対して、質問紙および面接調査の実施を計画していた。しかし、一部のレシピエントおよび家族に対して面接調査を実施したものの、当該年度は質問紙および面接調査はほぼ実施できず、次年度以降に持ち越すことになった。次年度は、過去に移植を受けたレシピエントおよびドナーに対して質問紙調査および面接調査を実施し、患者側が求めている移植コーディネーターの資質や対応等について検討する。質問紙調査および面接調査により得られたデータと現在行われている移植コーディネーターの教育内容から、患者視点で必要とされる教育内容について検討し、新しい教育プログラムの開発を目指す。また、引き続き、文献の検討、移植関連学会への参加、国内外の研究関連機関との意見交換を行い、最新の知見を得ることによって効果的な研究計画の実施を図る。得られた成果については、関連学会や学術論文等により報告していく。次年度は、国内外の研究協力者および移植医療関係者と情報交換・意見交換し、質問内容について十分検討した上で、移植コーディネーターや移植医療従事者、さらにレシピエントやドナーおよびその家族等に対して、質問紙および面接調査を順次実施し、多方面の視点から得られたデータを基に、日本の移植コーディネーターが現在抱えている課題や求められている資質・対応等について抽出し、検討する。さらに、海外の移植コーディネーター教育プログラムと現行の日本の移植コーディネーター教育プログラムの内容の比較・検討を行うことで、新しい移植コーディネーター教育プログラムの開発の手掛かりを見出す。それらの結果を踏まえて、最終年度には、対象者のニーズに沿った継続的・包括的なケアを提供できるような新しい移植コーディネーター教育プログラムの開発に着手し、進捗状況に応じて、プログラムの実施・評価を目指す。また、次年度以降も引き続き、最新文献の検討、国内外の移植関連学会への積極的な参加、国内外の研究協力者および研究関連機関との定期的な連絡・意見交換を行うことで、新しい知見を得ると同時に、状況に応じて、研究計画の修正・再検討を行う。得られた成果については、関連学会や学術論文等により、順次発表していく。
３次元ナノポーラス構造を利用した低温焼結型微細接合技術の確立

200°C程度でも近隣同士の焼結が可能なナノポーラス材料に注目し、申請者らが有する材料表面の高機能化技術と加熱加圧接合プロセスを付加することで、本研究では焼結型接合に適したナノポーラス材料の確立と長期信頼性に優れた接合部の形成を目指し、研究を行った。その結果、ナノポーラス材料を利用し、高鉛含有はんだ以上の初期接合強度が得られ、長期信頼性にも優れた接合部形成が可能であることを示した。まためっき法を用いたナノポーラス構造の作製方法とそれを用いた接合プロセスの基礎的知見、VUV/O3表面処理による接合温度の低温化に対する基礎的知見を得ることができ、当初の計画を上回る成果を得ることが出来た。本年度は「低温焼結型接合に適したナノポーラス材料の確立」を目指して、Au-Ag二元系合金から作製可能な安定性の高いAuナノポーラス構造に注目し、鋳造法及びめっき法を用いてAu-Ag二元系合金を作製し、Auナノポーラス構造の作製をおこなうとともに、Auナノポーラス構造を用いた接合を試みた。その結果、具体的には以下のような結果を研究の成果を得た。鋳造法を用いたAu-Ag二元系合金では、Au-50mass% Agを作製し、選択溶解によりAuナノポーラス構造の作製を試みた結果、溶解時間や溶液濃度、溶液温度を変えることでナノポーラス構造を変化せることが可能であることを明確にし、10nm以下のリガメントサイズを持つAuナノポーラス構造の作製に成功した。さらに作製したナノポーラス構造を用いて、Cu/CuやAuめっき/Auめっきの接合実験を実施し、接合強度を評価したところ、25 MPa以上のせん断強度を得ることが可能であることが明確になった。まためっき法を用い検討についても、Au-Ag合金膜を作製し、選択溶解から得られるAuナノポーラス構造の作製検討や粒子の形態制御の検討を進めた。特にチオ尿素を錯化剤として用いたAu-Agを含む溶液の最適電解析出条件の検討を進め、約20 nmの粒サイズのAuナノーポーラス構造の作製に成功した。また、選択溶解前に熱処理を行い、その後に選択溶解を行うことにより、さらに微細な5 nmのナノホールの形成を確認した。鋳造法及びめっき法、それぞれで得られた結果については、ESTC2014(5th Electronics System-Integration Technology Conference、2014.09.16)で発表予定である。平成26年度以降に計画している表面活性化を使った低温接合実験の前準備として、Auナノポーラスシート構造から粉末状構造を作り、Au-Au同士で200°C以下の低温焼結接合に成功した。今年度、購入した低温・ドライ還元装置を立ち上げて実験評価も順調に行っている。本年度は、主に「高強度接合の創出に向けた接合プロセスの構築」を目指し、主に次の4点の取り組みを行った。1.接合パラメータが接合層の構造に与える影響を明確にする。2.従来のはんだ接合部を上回る接合強度を得るため、接合層構造と接合強度の関係を明確にする。3.めっき法を用い、2元系合金膜の作製手法を検討する。4.材料表面の還元技術や活性化技術の有効性を検討する。その結果、得られた主な結果は次のようである。1.接合温度が接合層の構造に与える影響は大きく、接合温度が高いほど、接合後のポーラス部分は大きく、粗な構造となり易い。2.選択溶解処理時間が短く、ポーラス層部分が微細であり、層厚さも薄い場合に高い接合強度が得られる。接合層構造と接合強度との間には密接な関係がある。3.めっき法を用いてAu-Ag合金膜を作製し、選択溶解から得られるAuナノポーラス構造の作製検討や粒子の形態制御の検討を進めた。チオ尿素を錯化剤として用いたAu-Agを含む溶液の最適電解析出条件の検討を進め、約20 nmの粒サイズのAuナノポーラス構造を確認した。熱処理により形態や接合強度に差がでることを確認した。4.めっき膜のゼーター電位測定結果から接合強度は電荷ではなく、形態に大きく影響を受けていると推定された。めっき法を用いた膜は他の同組成のバルク材やスパッタ膜に比較し、選択溶解時間を大きく低減できることをアノード分極測定から明らかにした。5.より低温で接合するためには、表面を清浄にすることが必須であると考えられ、材料表面の還元技術や活性化技術の適用可能性を検討した。新規エキシマUVの表面処理プロセスを使い、還元型の表面処理技術の効果について評価した結果、200°C以下で十分な接合強度が得られる低温接合技術が見えてきた。200°C程度でも近隣同士の焼結が可能なナノポーラス材料に注目し、申請者らが有する材料表面の高機能化技術と加熱加圧接合プロセスを付加することで、本研究では低温焼結型接合に適したナノポーラス材料の確立と長期信頼性に優れた微細接合部の形成を目指し、検討を行ってきた。本年度は、主に「ナノポーラス接合部の長期信頼性評価」を目指し、主に次の4点の取り組みを行った。1Agナノポーラスシートを用いた接合部の長期信頼性の評価2電気化学的手法を用いたAuナノポーラスシートの作成3めっき法を用いた2元系合金膜からのナノポーラス構造の作製4Auナノポーラス粉末への表面活性化処理の影響評価

その結果、得られた主な結果は以下のようなであった。1Agナノポーラスシートを用いたCu./Cu接合サンプルとAuめっき/Auめっき接合サンプルを250°C・大気中で1000 hまで高温放置試験を行った結果、Auめっきサンプルの場合には1000 h後も18 MPa程度のせん断強度を有し、十分に高温放置に対する信頼性があることが分かった。また-55°C150°Cの条件でSiチップとセラミックス基板を用いた接合体の熱サイクル試験を行ったところ、1500サイクル後も20 MPa以上のせん断強度を有していることが明確になった。以上より、Agナノポーラスシートを利用し接合条件を適切に選択することで、長期信頼性にも優れた接合部形成が可能であることが示された。2Auナノポーラスの作製について、電気化学的な手法を用い、一定の電位を印加しながらAu-Ag合金を選択溶解した結果、ポア間距離が6 nm程度の微細な3次元ナノポーラス構造を作製することができた。3微細な3次元ナノポーラス構造を利用しCu/Cu接合実験を行った結果、接合温度300度でも目標のせん断強度20 MPaを超える強度が得られ、より微細の3次元ナノポーラス構造を作製することで接合温度を下げられることが分かった。200°C程度でも近隣同士の焼結が可能なナノポーラス材料に注目し、申請者らが有する材料表面の高機能化技術と加熱加圧接合プロセスを付加することで、本研究では焼結型接合に適したナノポーラス材料の確立と長期信頼性に優れた接合部の形成を目指し、研究を行った。その結果、ナノポーラス材料を利用し、高鉛含有はんだ以上の初期接合強度が得られ、長期信頼性にも優れた接合部形成が可能であることを示した。まためっき法を用いたナノポーラス構造の作製方法とそれを用いた接合プロセスの基礎的知見、VUV/O3表面処理による接合温度の低温化に対する基礎的知見を得ることができ、当初の計画を上回る成果を得ることが出来た。接合パラメータが接合層の構造に与える影響の評価や接合層構造と接合強度の関係の明確化については、当初計画通りに達成することができた。更に、めっき法を用いた2元系合金膜の作製に関しては、2元系合金膜の作製のみに止まらず、めっき法によりAu-Ag合金膜を作製後、選択溶解を行い、Auナノポーラス膜が作製できることを明らかにするとともに、200°C以下の接合評価実験やゼータ電位測定を進めることができた。またエキシマUV装置を使った表面処理を行い、表面処理技術の効果まで検討を進めることができ、一定の成果が得られているため。27年度が最終年度であるため、記入しない。エレクトロニクス実装接合層構造が接合強度に与える影響が大きいことが分かったことから、よりナノポーラス構造を精度良く制御するために、定電位溶解によるナノポーラス構造の作製を試みる。さらにめっき膜によるナノポーラス構造と合わせて、それらを利用した接合体の評価を行っていく。さらにはAu-Ag合金以外の材料も検討対象とし、選択溶解ーナノポーラス構造の形成メカニズムについても解明していく。表面処理技術については、Auナノポーラス材料の表面状態を明確にし、200°C以下でも十分な接合強度が得られるメカニズムを明らかにする。当初、Auナノポーラス構造とCuナノポーラス構造の両方について検討を進める計画であったが、H25年度はAuナノポーラス構造のみに注目し、二元系合金の作製方法として鋳造法、めっき法ともに検討を行った。
競合内在性RNAからみたトロホブラストの遺伝子発現制御網解明と妊娠高血圧腎症予知

妊娠初期トロホブラストにおける競合内在性RNA(ceRNA)による遺伝子発現制御ネットワーク解明と、その鍵となるceRNAの機能を明らかにし、さらに、妊婦血漿ceRNAの変動解析を行い、PEの予知予防戦略としての基盤研究展開を目的として研究を行った。1ceRNAの機能解明:昨年度の妊娠初期絨毛のRNA-seq解析から絨毛外栄養膜細胞に有意に変動しているceRNAとして鍵となるintergenic型長鎖ノンコーディングRNA(lncRNA)であるH19 lncRNAの解析を進めた。H19は、miRNA-675のpri-miRNA(miRNAの前駆体)でもあり、絨毛外栄養膜細胞株(HTR-8/SVneoなど)に、miRNA-675を過剰発現させることにより、癌細胞の増殖、浸潤、血管形成などを促進するケモカインCXCL12の発現が上昇し、細胞浸潤を促進することを見出した。miRNA-675が標的遺伝子のうち、CXCL12の発現を上昇させる複数の遺伝子候補を見出し、標的遺伝子の検証を進めている。また、ゲノムから転写されたRNAが網羅的に測定・解析された公開データベース(FANTOM5)を、独自にデータ処理を行い、ヒト胎盤に発現しているlncRNAを網羅的に検索し、発現解析した。約2000種類のlncRNAが発現していることがわかった。他の組織・臓器との比較解析を進めている。2ceRNAによる新規PE予知因子開発:昨年に引き続き、サンプル採取を進めるとともに、予備解析として、PE胎盤におけるceRNAの発現解析を行った。予定されていた機能解析・バイオインフォマティクス解析はおおむね予定通り進めることができた。計画に沿って研究を進める予定である。妊娠初期トロホブラストにおける競合内在性RNA(ceRNA)による遺伝子発現制御ネットワーク解明と、その鍵となるceRNAの機能を明らかにし、さらに、妊婦血漿ceRNAの変動解析を行い、PEの予知予防戦略としての基盤研究展開を目的として研究をおこなった。1ceRNAの機能解明:倫理委員会の承認を得た娠初期中絶絨毛から分離した絨毛外栄養膜細胞(EVT)を用いて[対照として分離した絨毛先端部位を絨毛栄養膜細胞(CVT)とした]、MiSeq(イルミナ社)によるRNA-seq解析(mRNA、microRNA[miRNA]、long non-coding RNA [lncRNA])を行った。EVTとCVT間で、約1400種類のmRNA・lncRNA、約270種類のmiRNAの発現に有意差を認めた。有意に発現変動したRNAのうち、14染色体上のDLK1-DIO3領域のlncRNA(MEG3等)発現が著明に低下していることを見出した。この領域においてクラスターを形成しているmiRNA(54種類)のうち、45種類の発現も低下しており、低下したmiRNAに対して、約600種類の発現上昇を認めた標的mRNA候補を見出し、パスウェイ解析から、アクチン骨格系・インテグリン接着分子などを制御するシグナル経路が活性化していた。さらに、CVTと較べてEVTにおいてH19 lncRNAの発現が有意に上昇していることを見出した。H19はインプリンティング遺伝子(母親由来)であり、胎盤にも発現しているが、栄養膜細胞のEVT化により発現上昇する新知見を得た。2ceRNAによる新規PE予知因子開発:サンプル採取を進めた。予定されていたシーケンス解析・バイオインフォマティクス解析はおおむね予定通り進めることができた。見出されたlncRNAは、がん細胞でもその発現が有意に変動し、上皮間葉転換に関与する報告がなされている重要なceRNAである。よって、栄養膜細胞における機能解析を進めるための予備解析を進めている。
アルミニウム基複合材料の耐摩耗マイクロメカニズムの解明と材料設計指針の提示

複合材料の機械的性質に関する複合則や材料の設計指針が構築されているのに対し、耐摩耗性に関しては、未だ定まった設計指針が存在せず、試行錯誤による材料開発が行われている。昨年度、A2024アルミニウム合金にSiC粒子を含有し強化した、SiC粒子強化Al基複合材料(以下MMC)の変形過程と摩擦面上の強化材単体の破壊・脱落過程を解明した結果を基に、本年度は、荷重支持効果に及ぼす粒子径と体積含有率の影響を汎用P法非線形解析ソフトによって調べた。また、往復摩耗試験機を用いて、MMCのすべり速度と荷重に対する摩耗への影響について調査した。非線形解析によって、低い垂直分布荷重がかかる場合、低い体積含有率のMMCでは、荷重を支持するSiC粒子の数が少ないので、SiC粒子の大きさが荷重支持効果に影響を与える。高い体積含有率のMMCでは、粒子の大きさに依存しない。一方、高い垂直分布荷重がかかる場合、個々の粒子が支えられる荷重値を超えるため、SiC粒子の体積含有率の効果よりも、粒子径が大きく影響し、粒子径が大きい方が押し込まれにくくなることが明らかになった。また、往復摩耗試験機を用いて、MMCの摩耗に対する粒子径の影響について調べたところ、すべり速度、荷重の増加に対して、粒子径が大きくなることで、摩耗量の増加を抑制できることが明らかになった。また、摩耗面に生じるうねりの山部分と谷部分の高さの差を測定したところ、低荷重では、粒子径による違いはみられないが、ある大きさ以上の荷重になると、粒子径が大きい方が、山部分と谷部分の高さの差が小さくなることがわかった。昨年度の試験結果と、本年度の解析および往復摩耗試験によって、低荷重域では、粒子径よりも体積含有率の方が摩耗に対して影響が大きい。一方、高荷重域では、粒子単体の荷重支持効果が大きい粒子径が大きい場合が、耐摩耗性に大きく依存することが明らかになった。複合材料の機械的性質(弾性率・強度)に関する複合則や材料の設計指針が構築されているのに対し、耐摩耗性に関しては、未だ定まった設計指針が存在せず、試行錯誤による材料開発が行われている。本研究では、A2024アルミニウム合金にsic粒子を含有し強化した、sic粒子強化Al基複合材料の変形過程と摩擦面上の強化材単体の破壊・脱落過程を、ナノインデンテーション試験及びスクラッチ試験によってマイクロスケールで実験解析し、強化材単体が摩耗特性に果たす役割を荷重支持効果と凝着抑制の観点から研究した。ナノインデンテーション試験では、粒子の大きさによって、粒子が押し込まれる挙動が異なること、負荷荷重と押し込み深さの関係を3パターン(粒子の変形のみ、粒子の変形と粒子がマトリックス内に押し込まれる挙動、粒子が深く押し込まれる挙動)に分類できることを示せた。スクラッチ試験では、垂直荷重が増加するにつれて、粒子がマトリックス材の中に押し込められて凝着に至る挙動を示せた。また、粒子径、強化材の体積含有率によって、凝着に至る荷重値が異なることも明らかになった。以上の結果を総合し、スクラッチ試験におけるSiC粒子の深さ方向の挙動を、スクラッチこん深さと、ナノインデンテーションによる荷重支持効果の領域分けにより評価できることがわかった。また、ある深さにスクラッチこんが至るまでは、粒子とマトリックス両方の効果により、粒子が押し込まれて生じる凝着が発生しないことや、粒子間距離が粒子径の約2.3倍以下であれば、粒子間における凝着が生じなくなることが明らかになった。現在までは、実験解析により得られた結果から、粒子の挙動を明らかにしてきたが、今後は、粒子径と体積含有率それぞれの効果についてより明確にするため、数値的解析結果も合わせて、研究を進めていく予定である。

一方、高荷重域では、粒子単体の荷重支持効果が大きい粒子径が大きい場合が、耐摩耗性に大きく依存することが明らかになった。
歯周病原菌LPSと細胞内カルシウム濃度変化による細胞内シグナル伝達機構の解明

C3H/HeNマウスの全脾細胞を用いPAF(200μg/ml2ng/ml)による刺激を行い,細胞内Ca^<2+>濃度の変化を測定したところ2μg/ml濃度前後に於いて,細胞内Ca^<2+>濃度の変化が著しく減少した.また同じPAF濃度でcell数を5×1^6/ml,10×10^7/ml,1.5×10^7/mlに変えて測定したところ細胞内Ca^<2+>濃度の上昇値での差は認められなかった.しかし,cell数を減少させると測定開始時のベースラインに乱れが生じ,また同じcellをE. coliのLPS(内毒素)10μg/ml50μg/ml濃度で刺激したところ,細胞内Ca^<2+>濃度に変化が見られたのは,30μg/ml50μg/ml濃度の範囲であった.そこで,この変化がマクロファージではなくTcellおよびBcellにおいて行われているのを確認するため,G-10cellを採取し10%FCS含有serile RPMI1640中でE. coli (LPS) 30μg/mlの刺激を加え,0分,24時間,48時間にわたり、インキュベータ-(37°C,Co_2)で培養したものと,刺激していないものとをPAFおよびE. coli (LPS)にて前述の全脾細胞と同様の条件下で刺激を行い測定したところ,PAFにおいては,全脾細胞と同様な測定値を示した.E. coli (LPS)では,30μg/mlの濃度でわずかな細胞内Ca^<2+>濃度の上昇を示したものの,それ以下の濃度では反応が認められなかった.今後,これらの刺激が核内に伝達されることにより細胞増殖が起こりえるのか否かを確認するとともに,重度の歯周病における局所炎症部位からBcellのみを採取して細胞内Ca^<2+>濃度の測定および解析を行い,細胞内のシグナル伝達機構を解明して行く.C3H/HeNマウスの全脾細胞を用いPAF(200μg/ml2ng/ml)による刺激を行い,細胞内Ca^<2+>濃度の変化を測定したところ2μg/ml濃度前後に於いて,細胞内Ca^<2+>濃度の変化が著しく減少した.また同じPAF濃度でcell数を5×1^6/ml,10×10^7/ml,1.5×10^7/mlに変えて測定したところ細胞内Ca^<2+>濃度の上昇値での差は認められなかった.しかし,cell数を減少させると測定開始時のベースラインに乱れが生じ,また同じcellをE. coliのLPS(内毒素)10μg/ml50μg/ml濃度で刺激したところ,細胞内Ca^<2+>濃度に変化が見られたのは,30μg/ml50μg/ml濃度の範囲であった.そこで,この変化がマクロファージではなくTcellおよびBcellにおいて行われているのを確認するため,G-10cellを採取し10%FCS含有serile RPMI1640中でE. coli (LPS) 30μg/mlの刺激を加え,0分,24時間,48時間にわたり、インキュベータ-(37°C,Co_2)で培養したものと,刺激していないものとをPAFおよびE. coli (LPS)にて前述の全脾細胞と同様の条件下で刺激を行い測定したところ,PAFにおいては,全脾細胞と同様な測定値を示した.E. coli (LPS)では,30μg/mlの濃度でわずかな細胞内Ca^<2+>濃度の上昇を示したものの,それ以下の濃度では反応が認められなかった.今後,これらの刺激が核内に伝達されることにより細胞増殖が起こりえるのか否かを確認するとともに,重度の歯周病における局所炎症部位からBcellのみを採取して細胞内Ca^<2+>濃度の測定および解析を行い,細胞内のシグナル伝達機構を解明して行く.
マウス発生工学を用いた先天性水頭症モデル動物の開発

再現性の高い先天性水頭症のモデル動物はこれまでなく、水頭症の原因解明・新規治療法の開発には適切なモデル動物の開発が急務である。平成18年度の研究は以下のように進行した。2.上記のGFAPpro-TGFβ1-SV40トランスジェニックマウスの全脳RNAを用いてRT-PCR解析を行い、脳において変異型TGFβ1mRNAの発現が増加していることを確認した。3.抗TGFβ1抗体を用いてタンパクブロット解析を行い、2系統のトランスジェニックマウス脳において変異型TGFβ1蛋白質(12kDa)が増加していることを確認した。4.変異型TGFβ1の脳内発現レベルを上昇させるため、系統521、系統525についてhomoトランスジェニックマウスの作成を行った。heteroマウス同士の交配により、それぞれの系統につき約100匹の子孫を得た。合計約200匹を調べたが、典型的な先天性水頭症の発症は認めなかった。しかし系統521の中の1匹は生まれてすぐに頭蓋破裂で死亡した。本研究の結果、水頭症を起こす原因タンパクである変異型TGFβ1を脳内で安定的に発現するマウスをはじめて確立した。今後このトランスジェニックマウスを用いることにより、変異型TGFβ1発現による影響を胎生初期からの各発生段階の脳において分子形態学的に追跡することが可能になった。乳幼児水頭症の多くは先天性で、その成因や病態に関しては未だ未解明の点が多い。再現性の高い先天性水頭症のモデル動物はこれまでなく、水頭症の原因解明・新規治療法の開発には適切なモデル動物の開発が急務となっている。平成16年度の本研究は順調に進行し、以下のような研究成果をこれまでに得た。1.既に脳グリア細胞系列で遺伝子発現を起こす実績のあるGFAP遺伝子のプロモーターエンハンサー領域1.9kbの下流にLox P配列、EGFP遺伝子、Lox P配列、アミノ酸変異型TGFβ1遺伝子を順につないだ融合DNAを作製した。この融合DNAをマウス受精卵雄性前核へ顕微鏡下注入することによりトランスジェニックマウスを得た。2.全脳RNAを用いてRT-PCR解析を行い、期待どおり3系統とも脳においてEGFP mRNAの発現が強く起こっていることを見いだした。3.上記トランスジェニックマウスとCreレコンビナーゼトランスジェニックマウスを交配し、EGFP遺伝子が除去されたトランスジェニックマウスをこれまでに多数得た。4.全脳RNAを用いてRT-PCR解析を行い、TGFβ1トランスジェニックマウス脳において変異型TGFβ1mRNAの発現が起こっていることを見いだした。5.抗TGFβ1抗体を用いてウエスタンブロット解析を行い、TGFβ1トランスジェニックマウス脳において変異型TGFβ1蛋白質の過剰発現が起こっていることを見いだした。本研究の結果、水頭症を起こす原因蛋白である変異型TGFβ1を脳内で安定的に発現するマウスが確立された。今後このマウスを用いることにより胎生初期からの各発生段階の脳におけるEGFP mRNA・変異型TGFβ1mRNA・TGFβ1蛋白の発現をin situ hybridization法や免疫組織化学法を用いて追跡することが可能になった。平成17年度の本研究は順調に進行し、以下のような研究成果をこれまでに得た。2.上記トランスジェニックマウスとCD1マウスを交配し、導入遺伝子をheteroに持つトランスジェニックマウスをオス、メス各10匹ずつ得た。3.上記マウスの凍結脳切片を作成して、緑色蛍光に相当する波長を用いて蛍光観察を行った。トランスジェニックマウス脳内の広範な部位のグリア細胞において強い緑色蛍光蛋白質の発現が認められた。従って、このtransgene内のGFAPプロモーターはマウスの脳内で適切に働いていることが示唆された。4.前年度にCreトランスジェニックマウスとの交配により作成した変異TGFβ1発現型DNA(GFAPpro.-LoxP-TGFβ1)を持つマウスは水頭症を発症しなかった。そこで変異TGFβ1の発現レベルを上げるためhomozygousトランスジェニックマウスの作成を試みた。heteroマウス同士の交配により、現在までに約100匹の子孫が得られた。

しかし系統521の中の1匹は生まれてすぐに頭蓋破裂で死亡した。本研究の結果、水頭症を起こす原因タンパクである変異型TGFβ1を脳内で安定的に発現するマウスをはじめて確立した。今後このトランスジェニックマウスを用いることにより、変異型TGFβ1発現による影響を胎生初期からの各発生段階の脳において分子形態学的に追跡することが可能になった。
リポ蛋白質合成酵素を標的とした新規齲蝕予防戦略の基礎研究

細菌の細胞表層には、細胞膜と結合した形でリポタンパク質が存在し、生理的に、あるいは病原因子として重要な機能を果たすことが示唆されている。このリポタンパク質の細胞膜局在性を制御しているのがLgt酵素であり、成熟に関わっているのがLspA酵素である。本研究では、齲蝕原性細菌であるStreptococcus mutansを研究対象とし、この菌が持つ齲蝕病原性とリポタンパク質の関係を明らかにし、上述のLgt酵素、LspA酵素が新規標的分子となりうるかの検討を行った。現在、S. mutansのゲノムデータベース解析の結果から、約30種類のリポタンパク質の存在が示唆されているが、実際に機能解析がなされているのはMsmE,MalE,RnsBの3種類のみでいまだほとんどのタンパク質が機能未知の状態である。我々が着目したのは、Lgt酵素およびLspA酵素が一度に全てのリポタンパク質の制御を行う点である。すなわち、LgtあるいはLspA酵素の機能不全が約30種類存在する全てのリポタンパク質の機能を喪失させることから、S. mutansのLgtあるいはLspAの欠損株を用いて機能解析(齲蝕病原性に関わる)を野生株との比較により検討することで、それら病原性に関わるリポタンパク質の存在が推定できることにある。その後、各リポタンパク質の欠損株を作製、それらを用いて同様に機能解析を行うことで関連リポタンパク質を特定する。以上の手法を用いてS. mtuansの病原性解析を行った結果、今回、耐酸性への関与が想定されるリポタンパク質OpcC、ならびに先天免疫系における食作用回避への貢献が予想されるリポタンパク質PpiAの存在が浮かび上がった。現在、これらリポタンパク質がどのような機構によりこれら病原性に寄与するのか、遺伝子レベル・タンパク質レベルでの機能解析に取り組んでおり、さらに、リポタンパク質制御酵素とこれらリポタンパク質の関係解明に全力で取り組んでいるところである。S.mutans 109c株を野生株とし(WT)、WTおよびそのlgt遺伝子欠損株(△lgt)を用いて、齲蝕原性(バイオフィルム形成能、酸産生能、耐酸性能)を調べた。バイオフィルム形成能は、固層表面付着能、菌体外多糖合成能、グルカン依存性凝集能、抗菌物質産生能を調べることで評価した。ガラス管壁への付着能を調べた結果、WTと△lgtで有意な差は認められなかった。ショ糖からの菌体外多糖(グルカン、フルクタン)合成能に関して、ポリアクリルアミドゲルを用いてゲル内多糖検出を試みたが、有意差は認められなかった。グルカン依存性凝集をストレス環境下(加熱、アルコールなど)で検討した結果、WTおよび△lgtで有意差は認められなかった。他の口腔内細菌(S.gordonii, S. sanguinis, S. mitis, Actinomyces israelii)に対する抗菌物質産生の影響を調べたが、やはり両菌株の間に差は認められなかった。以上のことから、S.mutansの細胞表層リポ蛋白質の、バイオフィルム形成能における重要性は見出されなかった。次に、S.mutansの酸産生能を評価するために、各種糖類(オリゴ糖、麦芽糖、ショ糖)の利用について、細菌の発育速度を指標に検討を行った。ショ糖、グルコースを炭素源として培地に添加した場合では、WTおよび△lgtで有意差は認められなかったのに対し、オリゴ糖(メリビオースなど)、麦芽糖を用いた培地では、WTの発育速度は△lgtのそれよりも速いことが示された。しかし、細菌増殖後の最終pHを調べたところ、両菌株間で有意差は認められなかった。一般的に、S.mutansにおける重要な糖取り込み機構はPTS系であることが報告されているが、本研究結果は、S.mutansはそれ以外にも第2の糖類取込み機構が存在し、それにLgtの支配下にある細菌リポ蛋白質が重要な役割を果たしている可能性を示唆している。しかし、最終pHの結果からは酸の産生量には直接影響を及ぼしている可能性は低いと考えられそうである。

以上の手法を用いてS. mtuansの病原性解析を行った結果、今回、耐酸性への関与が想定されるリポタンパク質OpcC、ならびに先天免疫系における食作用回避への貢献が予想されるリポタンパク質PpiAの存在が浮かび上がった。現在、これらリポタンパク質がどのような機構によりこれら病原性に寄与するのか、遺伝子レベル・タンパク質レベルでの機能解析に取り組んでおり、さらに、リポタンパク質制御酵素とこれらリポタンパク質の関係解明に全力で取り組んでいるところである。
懐疑的解釈を超えてー現代英国における読みの実践ー

最終年度はとくに、平成30年8月までに計75名に対しておこなった個別インタビューの分析に力を注いだ。本研究で得られた、出版文化における複数の行為体の相互作用についての洞察は、平成31年度より開始する科研費基盤研究(C)「実証研究にもとづく受容論の刷新ー現代英国における文学テクストの生産・流通・受容ー」(19K00389)の着想につながった。一般読者にとっての読むことの意味を実証的に研究する目的で、6月と11月に渡英し、読書会と文学フェスティバルの参与観察、個人への聞き取り調査のほか、図書館司書への聞き取り調査や、図書館が閉鎖されたある村の図書貸出ボランティア活動の参与観察もおこなった。個人の読書実践については計22名の聞き取りをおこなうと同時に、うち複数の協力者とはメールや手紙でのディスカッションを続け、平成29年度に継続する調査の足がかりも得られた。また年間を通じて、一般読者向けの書評誌やラジオ番組の分析も進めた。また、拙論「抑圧と解放?ーヴィクトリア朝小説に見る生命、財産、友情、結婚」(井川ちとせ・中山徹編著『個人的なことは政治的なことージェンダーとアイデンティティの力学』(彩流社、平成29年3月、pp. 159-181)において、英文学研究において広く実践されてきた「徴候的読み」あるいは「懐疑的解釈」の問題点と「表層的読み」の可能性について検討をおこなった。拙論に加え「はじめに」(pp. 3-11)においても、編者として、学術研究が、反知性主義に陥ることなく、社会的役割を果たすための提言をおこなった。教育活動および学務との関係で、現地調査をおこなえる期間は限られ、聞き取り調査のスケジュール調整は容易でなかったものの、6月の予備調査で多くの方々の理解が得られ、11月に聞き取り調査を集中しておこなうことができたため。一般読者にとっての読むことの意味を実証的に研究する目的で、5月、8月、3月に渡英し、読書会の参与観察(7件)および個人への聞き取り調査(37名)を実施したほか、リヴァプールを拠点とする慈善団体を訪ね、学習部局副部局長と、団体のプログラムの成果の評価を担っている大学教授にインタビューをおこなった。後日、この団体が開いている読書会の観察もおこなった。大学の市民講座を見学し、参加者のなかからインタビュー協力者を募るなど、平成30年度に継続する調査の足がかりを得た。また、平成28年度より引き続き、一般読者向け書評誌やラジオ番組の分析をおこなった。ゲスト講師としてお招きいただいた7月の日本ロレンス協会シンポジウム(「情動、共感、D. H. Lawrenceとその周辺」)においては、「文学的経験と『多元的呑気主義』」と題し発表をおこなった。『古典アメリカ文学研究』で用いられた造語“pollyanalytics"(「多元的呑気主義」は岩崎宗治氏の名訳)に着想を得て、多元主義的社会における他者どうしの共生の可能性を探った。ロレンス作品のなかでは、おもに前掲書と『無意識の幻想』を参照しながら、過去およそ20年間の批評の情動的転回と言える動きを紹介しつつ、本研究課題のフィールドワークで得た考察を踏まえ、文学作品が共感にもとづく相互理解を育むことを自明視する近年の潮流を批判的に検討し、いわば「共感という素養ある読者」を想定したアプローチを唯一特権化する危険を指摘した。3月に刊行された論集『英国ミドルブラウ文化研究の挑戦』(中央大学人文学研究所編)では、共著者のうち5名とともに編集作業を担い、序文(共著)と「『ミドルブラウ』ではなく『リアル』ー現代英国における文学生産と受容に関する一考察ー」(単著)を寄稿した。拙論は、書評誌の分析と読書会の参与観察の分析に基づくものである。教育活動および学務との兼ね合いで、現地調査をおこなう時期や期間が限られ、聞き取りなどのスケジュール調整は容易でなかったものの、先方のご理解とご厚意により、おおむね順調に調査を進めることができたため。引き続き、年間を通じて各種書評誌やラジオ番組を購読・視聴し、分析をおこなうかたわら、渡英して読書会の参与観察や個人への聞き取りをおこなうほか、リヴァプールを拠点とするThe Reader Organisationを訪問し、プログラムの開発責任者Sophie Clarke氏および共同推進者の、リバプール大学教授Josie Billington博士への聞き取りを予定している。また、レスター大学で創作(creative writing)の指導をしているJonathan Taylor博士への聞き取りを予定している。H29年度中の研究成果を論考にまとめ、中央大学人文学研究所研究叢書より編著のかたちで発表する。引き続き参与観察および聞き取り調査、書評誌とラジオ番組の分析をおこないながら、平成30年7月9日から13日にかけてウェスタン・シドニー大学で開催されるSHARP(The Society for History of Authorship, Reading and Publishing)年次大会において、研究発表をおこなう。平成30年度の研究成果を論考にまとめ、『一橋ジャーナル』に投稿する。

H28年度は、勤務校の学務と、聞き取り調査対象者のスケジュールのすり合わせが容易でなく、2度の渡英の際は、それぞれ正味9日ずつの調査期間となり、支出額が予定を下回った。H28年度の調査で得られた人脈を頼りに、H29年度は夏季に英国でやや長めの調査をおこなう見込みのため、次年度使用額はおもに旅費に充てたい。
抗ヒトリンパ球レセプター抗体とレセプター遺伝子の作製による免疫療法の開発

1.(1)サンドイッチELISA法による可溶性FcεR2(IgE結合因子)の定量が可能となった。アレルギー疾患患者の可溶性FcεR2の増加と血清IgEの増加について相関を示唆するデータもでており、さらに検討を進めている。(2)各種ヒト細胞株へ導入してつくられた組換えIgE結合因子は、種々の異なった大きさの物ができ、それはIgE産生調節能にも差異のあることがわかった。2.(1)我々が作製した増殖誘導抗体YTAー1により、末梢血単核球の高親和性ILー2レセプター、およびYT細胞の中間親和性ILー2レセプターをdown-regulateし、ILー2R/p75を制御することがわかった。(2)YTAー1抗体による精製抗原の2次元電気泳動にて、p75分子以外に、p70、p35分子の3スポットが見られることが判明した。さらに、p75分子についてそのN末アミノ酸配列を決定した。そのcDNAクローニングを進めている。(3)YTAー1抗体により末梢血リンパ球及びLGLによるNK活性が増強することが確認された。LAK細胞の誘導にも効果がある知見も得ている。(4)各種疾患患者の末梢血単核球のYTAー1抗体による増殖誘導効果の差異の有無を調べた。肝癌患者、肝硬変の一部の患者と、またHAM患者、免疫疾患患者はYTAー1に対して低反応性を示した。ILー2Rシステムの異常を含む免疫不全状態のモニタリングへの応用をさらに検討中である。3.YTAー1抗体の他、よく似た作用のあるYTAー2抗体、ILー2の結合をpartialに阻害する抗体YTAー3、さらに、2B8、2B9等が得られており、抗ILー1レセプター抗体、抗TNFレセプター抗体に関しても、スクリーニング中である4.抗FcαR抗体の作製を試みて、IgA産生の調節機構及びIgA腎症に於けるその異常に関して解析中である。
胃癌の進展・転移に深く関与する6.0Kb c-met異常転写産物の分子クローニング

胃癌の進展・転移に深く関与する6.0Kb c-met異常転写産物の分子クローニングを(1)胃癌細胞株KATO-IIIのcDNAライブラリー、(2)pAP3 neoベクターを用いた胃癌細胞MKN-28の高分子量cDNAライブラリー、(3)ヒト正常末梢血genomic DNAライブラリーの各種遺伝子ライブラリーを用いて試みた。いずれのライブラリーからもpmetHプローブに陽性反応を示す数個のクローンを得ることが出来たが、6.0Kbのfull length cDNAはクローニングし得なかった。c-met cDNAの種々の部位に対するオリゴヌクレオチドプライマーを用いたRNA-PCR法による異常スプライシングの検索では、c-met cDNAの2265から2319位までの54塩基がスプライスアウトされた形のmRNAが胃癌ならびに正常胃粘膜において優位に発現されていることを明らかにした(Yokozaki,H.,et al.Oncology Reports,3,1996(in press))。しかしながら、これが、胃癌に特異的に発現される6.0Kb異常転写産物の発現を説明するものではなかった。3.胃癌における第7番染色体対立遺伝子欠失の解析胃癌におけるc-met癌遺伝子領域を含めた第7番染色体の対立遺伝子欠失について多数症例を用いた詳細な検討を行ったところ、第7番染色体短腕D7S95領域に対立遺伝子欠失を示す症例では有意に不良の予後を示すことが明らかとなり、この部位に胃癌の進展を抑制する新しい遺伝子の存在することが示唆された(Kuniyasu,H.,Yokozaki,H.,et al.Int.J.Cancer,59:597-600,1994)。1.平成5年度の研究実績(2)6.0Kb c-met異常転写産物の発現が確認されている胃癌培養株KATO-IIIより作製したcDNAライブラリーを既存のpmetHプローブにてスクリーニングしたところ,2種の陽性クローンを得,現在それらの塩基配列を決定中である.(3)c-met cDNAの種々の部位に対するオリゴヌクレオチドプライマーを用いたRNA-PCR法による異常スプライシングの検索では,c-met cDNAの2265から2319位までの54塩基がスプライスアウトされた形のmRNAが胃癌ならびに正常胃粘膜において優位に発現されていることが明かとなった.しかしながら、これが,胃癌に特異的に発現される6.0Kb異常転写産物の発現を説明するものではなかった.2.今後の研究の展開に関する計画(1)現在までにKATO-III株により2種の6.0Kb c-met異常転写産物陽性クローンを得ているが,従来の方法により作製されたcDNAライブラリーでは,高分子量cDNAを効率良くクローニングすることが困難であることが明かとなった.現在,大阪大学微生物研究所,野島博博士らの開発したpAP3neoベクターを用いた高分子量cDNAライブラリーを作製し,再クローニング中である.1.平成6年度の研究経過(2)前年度に胃癌培養株KATO-IIIcDNAライブラリーより得られた2クローンの塩基配列解析を行ったが,いずれもc-metの部分的配列を含むのみであり,full lengthの6.0Kb c-met cDNAは得られなかった。また、pAP3 neoライブラリーでのクローニングでも、同様の結果であった.(3)c-met cDNAの種々の部位に対するオリゴヌクレオチドプライマーを用いたRNA-PCR法による異常スプライシングの検索では,c-met cDNAの5'側で増幅困難な部位が存在することが明らかになった.2.平成6年度の研究の評価(1)現在までに,cDNAライブラリーからのクローニングを進めてきたが,標的となる転写産物が6.0Kbと大きくfull lengthのcDNAを得ることが困難であった.今後,ヒト末梢血リンパ球

genomic libraryよりのクローニング等,方法論の検討が必要とみなされた.(2)RNA-PCR法でc-met cDNAの5'側で増幅困難な部位が存在することより,6.0Kb異常転写産物が,c-metの5'側におけるスプライシングの異常によって生成される可能性が示唆された.1.平成7年度の研究経過(1)胃癌ならびに正常胃粘膜におけるC-met遺伝子スプライス変異体の解析を行い、これら組織においてはc-met cDNAのnt2265からnt2319までの小エクソンがスプライスアウトされた形のトランスクリプトが主として発現されていることを明らかにし、論文発表した(Yokozaki, H., et al. Oncology Reports, 3, 1996(in press))。(2)胃癌細胞株cDNAライブラリーならびにpAP3neoライブラリーのスクリーニングを前年度に引き続き継続したが、c-met6.0Kbトランスクリプトはそのサイズが大きいこととさらに稀少トランスクリプトであること等より、陽性クローンを得ることは出来なかった。(3)前年度より、ヒト抹消血白血球genomic libraryからのクローニングを試みたが、(2)と同様に陽性クローンを得ることは出来なかった。2.平成7年度の研究の評価以上の如く、通常の方法によってはc-met6.0Kb異常転写産物の分子クローニングは成功せず、long PCR等の高感度のRT-PCR法による直接クローニングの検討が必要なものと考えられた。
幼児の愛他心の発達におよぼす遊びと文化の影響

本研究の目的は、幼児の愛他心の発達におよぼす遊びと文化の影響を明らかにすることである。本目的を達成するために以下の2つの調査を行った。調査1「幼児の愛他心の発達におよぼすごっこ遊びの効果について」:愛知県H保育園4歳児20名を対象に、日常の保育場面での遊び形態による群分けを行った後、愛他性テスト(プリテスト)→ごっこ遊び→愛他性テスト(ポストテスト)を行った。愛他性テストでは、援助可能場面と分与可能場面における判断とその動機をたずねた。プリテストの結果、日常集団度の高いごっこ遊びを経験している幼児に「援助する」と答える者が多く、シールの平均分与数も多かった。またその動機も「共感的志向」に基づくものが多かった。しかし、全員参加のごっこ遊びを経験した後のポストテストでは、群間の差異が縮小する傾向がみられ、愛他心を育てる場としてのごっこ遊びの有効性が示唆された。調査2「幼児の愛他心と遊びにおける対人関係並びに文化とのかかわりについて」:愛知県T保育園4歳児20名(ペル-国籍児1名を含む)とカルフォルニア州C小学校キンダークラス21名を対象に、調査1と同様の愛他性テスト、遊び場面における対人関係の特徴と好きな遊びの観察、親や保育者の子育て観等についてのインタビュー調査を行った。その結果、遊び集団における円満な対人関係の構築が、愛他心の発達に影響をおよぼすことが示唆された。また、援助判断において日米間に差がみられ、米国の幼児は全員「援助する」と答えるとともに、援助方法が具体的であった。これは、日頃から他者を援助することや自分自身を守ることを積極的に学習していることのあらわれであり、責任感のある子どもを第一に望む親や保育者の子育て観の反映と考えられる。
新規なフリーフロー等電点電気泳動法による多成分タンパク質の同時連続分離

泳動室に形成させた陽極近傍で低く、陰極近傍で高いpH勾配上で、緩衝剤の選択により、適当にpHを調製した三成分混合タンパク質溶液を二つのpH位置から連続的に供給し、さらに二つの原料供給部間の循環流路の一部を交差させることで、低等電点タンパク質を陽極と陽極近傍から、中間等電点タンパク質を交差流路の中間位置から、さらに高等電点タンパク質を陰極近傍から、それぞれ単離製品として連続的に回収する方式の連続式等電点電気泳動分離装置を作製して、モデルタンパク質として牛血清アルブミン(等電点pI=5.1)、α-アミラーゼ(等電点pI=6.0)、牛血液ヘモグロビン(等電点pI=6.9)を選び、さらに緩衝剤としてジペプチドであるグリシルグリシン(等電点pI=5.7)とリジルグルタミン酸(等電点pI=6.1)、支持電解質として塩化カリウムを選んで原料溶液として、多成分タンパク質の連続分離実験を行った。始めに、ヘモグロビンとアルブミンの二成分の連続分離実験を行い、二成分の完全単離を実証するとともに、分離プロセスの数学モデルを構築した。次に、アミラーゼを加えた三成分系の実験を行った。この場合、低pH等電点を有する牛血清アルブミンと高pH等電点を有する牛血液ヘモグロビンは、純度95%以上で単離されたが、中間pH等電点を有するα-アミラーゼの製品純度は70%程度に止まっている。この原因として、ヘモグロビンとアルブミンの両端への輸送が完全に行われていないことが考えられるため、現在、純度の向上を目指して、緩衝剤の種類と原料供給位置を変化させつつ実験的検討を行っている。