hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
オリゴ糖鎖ライブラリーによる細胞表層のグライコフォームデザイン

硫酸化オリゴ糖は,細胞表面の糖タンパク質や糖脂質糖鎖に発現し,細胞接着や炎症反応に関与している.そこで,酵素法による硫酸化オリゴ糖の合成法の開発を試みた.Bacillus circulans β-D-ガラクトシダーゼの6-スルホガラクトシル化反応による特異な硫酸化二糖合成法を開発した.本酵素は,4-メチルウンベリフェリル6-スルホβ-D-ガラクトピラノシドを供与体基質とし,6-スルホガラクトシル基をGlcNAcに転移する反応を触媒した.その結果,HPAEC-PAD分析によりS6Galβ1-4GlcNAcとその構造異性体であるS6Galβ1-6GlcNAcが供与体基質あたり総収率は49%,モル比は1:3.5で生成することが明らかとなった.グルコースを受容体とした場合,その位置選択性は著しく変化し,S6Galβ1-2Glcが主に生成すると共にβ-(1-1)α,β-(1-3),β-(1-6)異性体が生成し,総収率は74%であった.Glcα-OMeを受容体として用いると,本酵素は41%の総収率で主にS6Galβ1-2Glcα-OMeがそのβ-(1-6)構造異性体とともに生成した.両反応ともに,β-(1-2)結合2糖の生成が優先的に起こった.対照的に,Glcβ-OMeを受容体に用いるとβ-(1-3),β-(1-6)二糖が生成し12%の低収率であった.これらの結果から,β-D-ガラクトシダーゼが触媒するS6Gal転移反応は,受容体基質のアノマー水酸基の立体配置に大きく依存することが示唆された.フコースを含むオリゴ糖鎖は,血液型抗原やガン糖鎖抗原として見出され,また受精卵の発生過程にも関与していることが明かとなっている.そこで,Le^x[Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc]の効率的な酵素合成を行うために,各種動物血清中のフコシルトランスフェラーゼ活性のスクリーニングを試みた.その結果,ニワトリ血清中に高いフコシルトランスフェラーゼ活性を見出した.しかしながら高いフコシダーゼ活性を含んでいたので,DEAEセファロースによる部分精製を行ったところワンステップでフコシダーゼを除去することができた.また,反応液中にウシ血清アルブミンや界面活性剤を添加することにより効率よくフコシル化反応を行うことが可能であった.この様にして得られた知見を基に,Le^x構造を有するオリゴ35糖[Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc, Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ-pNPおよびGalβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glcの効率的な合成を行うことができた.起源の異なるβ-D-ガラクトシダーゼを触媒素子とし,その特異な糖鎖交換反応を活用して複合糖質の分子認識に関わる最小単位であるGal-GlcNAcおよびGal-GalNAcのガラクトシル2糖単位の系統的かつ実践的な酵素合成プロセスを確立した.さらにガラクトシル2糖単位を出発原料として,α-L-フコシダーゼやN-アセチルヘキソサミニダーゼなどのエキソグリコシダーゼの糖転移反応を駆使して,血液型糖鎖抗原エピトープ,ムチン型糖鎖コア構造やヒトミルクオリゴ糖・スフィンゴ糖脂質共通コア構造などのオリゴ34糖のオリゴ糖鎖ライブラリーの充実をはかることができた.また,数種のエンドグリコシダーゼによる糖転移反応を見出し,オリゴ糖の効率的なプロック合成法という新しい手法を開拓した.一方,Trichodermareesei由来のセルラーゼを触媒素子としてその特異な転移・縮合反応を利用し,ラクトースとアルコール類(C_1C_<12>)を一段階の反応で直接結合させたアルキルβ-ラクトシドの合成に成功した.これらは,環境適合型の新たなバイオサーファクタントとしての応用に期待が持たれている.さらに,本酵素は,ラクトースとグリセロールとの効率的な結合反応をも触媒することが明らかとなっており,本ラクトシル誘導体は新たなグリセロ糖脂質生産のための素材として有効利用が期待できる.この様にして量産してきた2糖単位を高い反応効率で,簡便にポリグルタミン酸の側鎖に導入する方法を開発した.また,これまでは極めて困難であった人工糖鎖高分子の分子量や糖鎖導入率の精密制御についてもある程度可能となる手法を確立した.この様な構造の明確な糖鎖を導入した人工糖鎖高分子は,様々な生体分子との特異的な親和性を発現することが実証され,新しい分子認識素材としての応用展開が今後期待される.硫酸化オリゴ糖は,細胞表面の糖タンパク質や糖脂質糖鎖に発現し,細胞接着や炎症反応に関与している.そこで,酵素法による硫酸化オリゴ糖の合成法の開発を試みた.Bacillus circulans β-D-ガラクトシダーゼの6-スルホガラクトシル化反応による特異な硫酸化二糖合成法を開発した.本酵素は,4-メチルウンベリフェリル6-スルホβ-D-ガラクトピラノシドを供与体基質とし,6-スルホガラクトシル基をGlcNAcに転移する反応を触媒した.

その結果,HPAEC-PAD分析によりS6Galβ1-4GlcNAcとその構造異性体であるS6Galβ1-6GlcNAcが供与体基質あたり総収率は49%,モル比は1:3.5で生成することが明らかとなった.グルコースを受容体とした場合,その位置選択性は著しく変化し,S6Galβ1-2Glcが主に生成すると共にβ-(1-1)α,β-(1-3),β-(1-6)異性体が生成し,総収率は74%であった.Glcα-OMeを受容体として用いると,本酵素は41%の総収率で主にS6Galβ1-2Glcα-OMeがそのβ-(1-6)構造異性体とともに生成した.両反応ともに,β-(1-2)結合2糖の生成が優先的に起こった.対照的に,Glcβ-OMeを受容体に用いるとβ-(1-3),β-(1-6)二糖が生成し12%の低収率であった.これらの結果から,β-D-ガラクトシダーゼが触媒するS6Gal転移反応は,受容体基質のアノマー水酸基の立体配置に大きく依存することが示唆された.フコースを含むオリゴ糖鎖は,血液型抗原やガン糖鎖抗原として見出され,また受精卵の発生過程にも関与していることが明かとなっている.そこで,Le^x[Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc]の効率的な酵素合成を行うために,各種動物血清中のフコシルトランスフェラーゼ活性のスクリーニングを試みた.その結果,ニワトリ血清中に高いフコシルトランスフェラーゼ活性を見出した.しかしながら高いフコシダーゼ活性を含んでいたので,DEAEセファロースによる部分精製を行ったところワンステップでフコシダーゼを除去することができた.また,反応液中にウシ血清アルブミンや界面活性剤を添加することにより効率よくフコシル化反応を行うことが可能であった.この様にして得られた知見を基に,Le^x構造を有するオリゴ35糖[Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc, Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ-pNPおよびGalβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glcの効率的な合成を行うことができた.
子どもの言語獲得における韻律情報の役割-日本語・英語のあいまい文を通して

本研究は、言語機能の関与が仮定されている性質の獲得過程の検討を通じて、言語機能および言語獲得機構・運用機構の解明への貢献を目指した。具体的には、言語機能の属性に関わる言語現象についての提案の調査後、再構築効果に関する知識と関係節の知識について幼児に実験を行い、被験児が大人と同質の統語知識を持つことや、構造構築時に韻律情報より統語知識を優先させることを明らかにした。これにより、言語機能や子どもの文解析のしくみに関する提案を行った。本研究の目的は、(1)言語理論・言語獲得研究における知見をもとに、日本語や英語などを母語とする子どもを対象に、言語機能に関連する性質の獲得過程を検討すること、特に、あいまい文の理解を実証的に調査することにより、言語獲得においで韻律情報が果たす役割を追究すること、それにより、(2)言語機能における統語部門と関係の解明、および言語獲得機構と運用機構の解明を目指すことにある。本年度における研究成果は以下のとおるである。1.日本語の照応形「自分」を含むあいまいを用い、ある句が発音される位置と解釈される位置が異なる際に起こる「再構築効果」の獲得について、日本語を母語とする3-4歳児に実験を行い検証した。テスト文は、文頭へのかきまぜを受けた埋める込み節を伴っており、「自分」の先行詞として主節主語と埋め込み主語の2つの可能性を持つ。結果は、3歳から再構築効果に関して大人と同様の知識を持つこと示し、言語機能の初期状態に関する仮説に支持を与えた。2.主要部内在型関係節と(英語タイプの)関係節の解釈可能性を持つあいまい文を用い、日本語を母語とする3-4歳児の韻律情報の使用について予備実験を行った。子どもがあいまい性の解決のために韻律情報を用い得るかどうかは、現在のところ決定的な結果は得られていない。本予備実験で用いたテスト文の解釈は韻律を手掛かり決定されるが、実験結果は、子どもは大人同様には韻律情報を有効利用しないことを示唆した。この結果が3歳児の理解を正しく反映しているのか、実験上の不備により生じたのか、についてさらに検討し、その上でより大規模な実験の実施が必要であることが判明した。今後は、本年度残された課題や新たな課題に取り組むことで、言語獲得・理解にどのような新しい事実を提示できるか、また、言語機能に対しどのような証拠が与えられるかを追究する予定である。本研究は、言語理論および言語獲得研究における知見をもとに、特に幼児のあいまい文の理解を実証的に調査することにより、言語獲得において韻律情報が果たす役割を追求しながら、言語機能に関連する性質の獲得過程を検討する試みである。これにより、言語機能における統語部門と音韻部門の関係の解明、および言語獲得機構と運用機構の解明への貢献を目標とした。本年度における主な研究成果は以下のとおりである。前年度に行った予備実験の結果および英語や日本語の理論・獲得・理解に関する文献調査をもとに、日本語の主要部内在型関係節(以下、内在型)と英語タイプの関係節(以下、英語型)の解釈可能性を持つあいまい文を用いて、日本語を母語とする3-4歳児における内在型と英語型の知識の有無、および韻律情報の使用に関する実験を行った。その結果、実験参加児が大人と同等の内在型および英語型の知識を持つことが明らかになり、これらの獲得には言語機能の属性が関与しているという主張を支持した。同時に、参加児がこの種のあいまい文の統語構造を決定する際に、韻律情報よりも助詞に関する統語知識を優先的に用いる傾向が見られた。さらに、子どもがあいまい文の解釈において大人と同じ選好を持つことから、3-4歳児がすでに大人と同じ文解析のメカニズムを持つという提案を支持する結果となった。この研究成果は、平成20年9月に米国で行われた言語獲得に関する学会(GALANA)で口頭発表し、多くのフィードバックを得た。本研究の遂行により、あいまい文の解釈において、大人が(最終的に文法的と判断できるが)一時的に困難な方の構造が、子どもにとっても困難である(あるいは非文法的と判断する)点にさらに着目する必要性が生じ、この新たな課題が言語獲得機構と運用機構の有機的連関の解明に示唆を与える可能性を示した。
ウイルスセンシング経路の遺伝的多様性がウイルス性肝疾患の進展に及ぼす影響の検討

DNAウイルスであるB型肝炎ウイルス(HBV)とRNAウイルスであるC型肝炎ウイルス(HCV)では、感染初期のウイルス認識機構が異なっている。本研究では、感染初期に重要な分子群の遺伝子多型について検討を行った。近年、HBVの感染レセプターとして見出されたNTCPの機能的アミノ酸変異S267Fを解析したところ、日本人では稀であり、感染成立や病態進展における重要性を示唆する結果は得られなかった。また、HCVセンサーとして知られるRIG-Iの発現量調節性SNPについて解析した結果、HBVセンサーとしても機能する可能性が示唆された。ウイルス性慢性肝炎の病態進展に関わる遺伝子多型が最近のゲノムワイド関連解析により明らかとなってきたが、それらは自然免疫系の重要性を示唆していた。また、機能的な解析からも、DNAおよびRNA両ウイルスのセンシング機構の全容と重要性が明らかとなりつつあるが、その遺伝的多様性とウイルス性肝炎の病態進展との関連は明らかになっていない。本研究では、ウイルスセンシング機構の遺伝的多様性(SNP)あるいはウイルス側の因子や他の環境要因との間の相互作用を遺伝学的側面から解明し、そのパスウェイ全体としての病態への寄与を評価することで、臨床に有用な情報を得ることを目的とする。これまでのGWAS研究を活かしつつ、大規模なサンプルおよび詳細な臨床情報収集を行った。体内に侵入したウイルスが肝細胞内に取り込まれる際に利用するウイルスレセプター、細胞内のウイルスセンシング、それに引き続いて起こる免疫応答経路の候補遺伝子を抽出した。具体的には、HBVレセプターの最有力候補として注目されるNTCP、HBV/HCV両ウイルスのDNA/RNAセンサーの可能性が指摘されているRIG-I、さらにTLRファミリー、それに引き続いて動くインターフェロン誘導遺伝子群(ISGs)、IRFやSTATファミリー、インターロイキン、サイトカイン群について、発現量調節に関わるSNPやその遺伝子を含むゲノム領域をカバーするタグSNPを適宜選択し、SNPタイピングを行っている。NTCPの遺伝子多型(S267F)はアジア人に特有のものであるが、日本人ではアレル頻度が約1%と低率であり、慢性感染やHBV-DNA量、肝発癌との有意な関連は検出されなかった。RIG-Iについては両ウイルスの持続感染との関連が示唆された。追認試験により再現性の確認を行いながら、相互作用の解析やパスウェイとしての評価を進める予定である。ウイルスセンシング機構の遺伝的多様性とウイルス側因子や他の環境要因との間の相互作用に注目した遺伝学的解析から、各分子やパスウェイの病態への寄与を評価することを試みる研究である。初年度から収集を続けているゲノム試料を利用して、ウイルス感染免疫応答経路の候補遺伝子について、遺伝子多型解析を実施した。より多くの症例についてInvader法にてタイピングを行い、SNPアレル頻度について表現型との関連について統計学的有意性を検討した。また、遺伝子多型間の相互作用なども含めた解釈を試みた。具体的には、HCV感染時の免疫応答に重要な役割を果たすHLA-DQやIFNL4あるいはIL28B、インターフェロン誘導遺伝子の一つであるOAS1の遺伝子多型間の相互作用や遺伝子発現量への影響についても、興味深い知見を得た(HCV持続感染におけるIFNL4とHLA-DQの遺伝子多型間相互作用.第101回日本消化器病学会総会)(HCV慢性感染肝組織内でのOAS1発現は自身近傍のSNPよりもIL28B近傍のSNPにより強く調節される.第51回日本肝臓学会総会)。新規HBVレセプターNTCPについてもより詳細な検討を行った。アジア人特有かつアジア人の間でも頻度差のある機能的アミノ酸変異S267Fについて、二千例超の日本人B型慢性肝炎群のSNPタイピングを行ったが、HBV感染成立や病態進展における重要性を示唆する結果は得られなかった(The Liver Meeting 2015. San Francisco)。さらに、NTCPを含む100kbの領域から選定した15個のタグSNPを検討したが、ここでもNTCPの重要性を示すような結果は得られなかった(APASL2016. Tokyo)。これらの他にも、いくつか興味深い知見が得られており、追認試験、相互作用解析などをさらに進める予定である。ウイルスの認識から免疫応答に至る経路にのった遺伝子群について、遺伝子多型解析による重要性の評価を試みている。利用可能なゲノムDNAサンプルはHBVおよびHCV慢性感染者のいずれも予定の2,000例を超えており、現在も引き続き収集中である。また、予定通り候補遺伝子群について、各遺伝子座位から解析候補SNPを選定し、SNPタイピングを実施した。解析する表現型との有意な関連が確認できたSNPについては、再現性確認のための追認試験を随時行っている。また同時に、単一SNPごとの解析にとどまらず、複数の相互作用に着目した解析を進めており、単一SNP解析のみでは見えてこなかった興味深い知見がいくつか確認できたため、学会発表を行った。ここまでは予定通りの進捗状況である。HCV感染時の免疫応答に重要な役割を果たすHLA-DQとIFNL4あるいはIL28Bとの相互作用を示唆する結果を得るとともに、後者とインターフェロン誘導遺伝子の一つであるOAS1近傍の遺伝子多型とが独立してOAS1遺伝子発現量を調節していることを明らかにしてきた。最終年度には、HCVジェノタイプ1感染者3,500例を追加で解析し、やはりHLA-DQとIFNL4の遺伝子多型の相互作用の可能性を示唆する結果を確認することができた。

対して、ジェノタイプ2感染者1,600例の検討では、相互作用を示唆する結果は確認されず、両遺伝子多型の相互作用はHCVジェノタイプによって異なるものと考えられた。直接作用型抗ウイルス薬(DAA)におけるIFNL4多型の意義を検討して、薬剤耐性変異ウイルスとの相関関係を見出していたが、その情報を参照することでDAA治療がより有効に施行可能であることを明らかにした。新規HBVレセプターNTCPの機能的アミノ酸変異S267Fについて解析を行った結果、日本人におけるアレル頻度は1%前後と低く、HBV感染成立や病態進展における重要性を示唆する結果は得られなかった。最終年度には、RIG-Iについて発現量調節性SNPについて解析を行った結果、HBV感染との関連を認め、RIG-IがRNAウイルスであるHCVのみならず、DNAウイルスであるHBVに対してもセンサーとして機能する可能性を支持する結果を得ることができた。HCV感染成立においてmiR-122の重要性が知られているが、HBV感染において血清中miRNAと相互作用するSNPも検索した結果、有望なものを同定することはできなかった。上述のように、ウイルスセンシング機構を中心に遺伝的多様性とウイルス側因子や他の環境要因との間の相互作用に注目した遺伝学的解析を行い、複数の興味深い結果を得ることができた。DNAウイルスであるB型肝炎ウイルス(HBV)とRNAウイルスであるC型肝炎ウイルス(HCV)では、感染初期のウイルス認識機構が異なっている。本研究では、感染初期に重要な分子群の遺伝子多型について検討を行った。近年、HBVの感染レセプターとして見出されたNTCPの機能的アミノ酸変異S267Fを解析したところ、日本人では稀であり、感染成立や病態進展における重要性を示唆する結果は得られなかった。また、HCVセンサーとして知られるRIG-Iの発現量調節性SNPについて解析した結果、HBVセンサーとしても機能する可能性が示唆された。ウイルスセンシング経路にのった遺伝子群に絞って、遺伝的多型の解析を試みている。利用可能なゲノムDNAサンプルはHBVおよびHCV慢性感染者のいずれも予定の2,000例を超えており、現在も引き続き収集中である。また、予定通り数十の候補遺伝子群について、100を超える解析候補SNPを選定した。すでに一部のSNPでは、SNPタイピングを実施しており、ここまでは予定通りの進捗状況である。解析候補として選定されたSNPについて、これまでのスクリーニングから有望なものをさらに絞り込んで、独立したサンプルセットを用いた追認試験へと進め、再現性の確認を行う。さらに、高密度なSNPタイピングやシークエンスで真の責任SNPを決定する。得られたSNPジェノタイプの結果については、病態進展との関連を慎重に解析する。解析に際しては、従来の関連解析の手法に加えて、より詳細な臨床情報(ウイルス情報を含む)を組み込んだ、各因子間の相互作用(SNP-SNP、SNP-環境因子)を検出する方法を探索する。その相互作用を含めた上で、ウイルスセンシング経路全体としての病態(表現型)への寄与度を明らかにし、臨床応用に有益な情報を引き出す。
マウス有根歯・常生歯の萌出開始シグナルと分子制御機構

本研究では、マウス歯列における歯根形成と萌出に関わる組織形態形成、細胞動態、分子局在を包括的に解析することを長期課題として、特に、ヘルトヴィッヒ上皮鞘(HERS)の機能的役割とその運命を探る目的で、歯根形成開始から対合歯との咬合に至る萌出過程を通した上皮細胞の表現型の推移を免疫組織化学により検討した。歯根表面を覆う上皮鞘の組織構築を直視するうえでは3次元観察が必須となるため、免疫染色によるサイトケラチン陽性を上皮マーカとした組織立体構築に時間軸を加えた4次元形態観察により、歯根表面と歯根膜組織でのHERS由来の上皮細胞の空間局在を視覚化した。さらに、HERS由来の上皮細胞の動態と運命を明らかにする目的で、上皮細胞の組織立体構築像のうえで歯根表面との位置関係に基づき上皮細胞集団を分画する3次元形態計測法を確立した。これらの組織観察と3次元形態計測に基づく観察結果から、HERSは歯髄腔と歯根膜腔を隔壁するとともに、FGF産生を介して象牙芽細胞系譜の分化誘導に働くことが確かめられた。HERS増殖活性の維持と停止にはEGF、IGFの刺激受容が関わっており、上皮形質や細胞活性の維持にはセロトニンによる刺激受容が関与している。歯根形成の開始直後にHERSは歯冠部エナメル上皮から分断され、形成途上の歯根表面ではHERS由来の上皮細胞は互いに連結したネットワークを維持することなく、大小の細胞集団として分散し、その一部は細胞間接着分子の発現停止と基底膜分解をともない歯根膜腔へ遊離する。有細胞性セメント質の形成が始まる時期には、上皮形質を保ってセメント基質に埋入された細胞も出現する。歯根膜組織に遊離したHERS由来の上皮細胞の運命として、一部はラミニン陽性の基底膜に囲まれてマラッセ上皮遺残として存続するとともに、基底膜を失った上皮細胞は上皮間葉転換に至ることが推定された。今後、これらの細胞動態の制御に関わる分子機構の解明を目指している。本研究では、ゲノム情報と歯胚形成関連遺伝子の情報が集積されているマウス歯胚を対象として、歯冠形成完了前から顎骨内の萌出期におけるエナメル上皮と歯小嚢細胞での遺伝子発現と表現型を解析し、萌出開始シグナルとなる分子間ネットワークを明らかにする。本年度においては切歯・臼歯の顎骨内での萌出過程を詳細に検討する目的で、胎生15日から生後4週齢までの動物試料について、μCT立体構築による歯胚の形態形成と顎骨内での位置移動を追跡した。このμCT立体構築では組織形状の観察に加えて、濃淡レベルに基づき歯根形成前線(低石灰化領域)を3次元マッピングする方法を開発した。萌出開始シグナルの発信源としてエナメル上皮細胞および歯小嚢構成細胞に注目して、18種類の抗体による免疫組織化学を実施し、ヘルトウィヒ上皮鞘の伸展・分断に至る上皮マーカの発現推移を明らかにした。歯根形成と萌出現象に関わる分子機能の解析に向けて、野生型マウスへの体内埋入型浸透圧ポンプによるビスフォスフォネートの持続投与実験を行い、組織アレイ法による連続組織切片の作製・上皮マーカ免疫染色・画像入力による組織立体構築法を確立した。

歯の萌出にともなう歯槽骨改造については、破骨細胞マーカのTRAP/アザン二重染色の組織立体構築により、破骨細胞活性(細胞数、単核と多核、骨表面への付着)を指標とした立体形態計測法を確立した。本年度の研究成果により、顎骨空間での臼歯の歯根形成・石灰化にともなう分子マーカの局在を対応付けることが容易となった。現在、萌出開始シグナルに働く分子種を同定する目的で、凍結薄切標本のmicrodissectionにより歯小嚢組織の分離採取とmRNA発現のリアルタイムPCRの条件決定を目指している。歯根形成の開始時には、歯冠形成を終えた内外エナメル上皮が歯頸部で屈曲し、その上皮先端が伸展して歯乳頭と歯小嚢を隔てるヘルトヴィッヒ上皮鞘(HERS)に分化する。本年度においては、マウス臼歯の歯根形成期におけるHERSの機能的役割とその運命を探る目的で、歯根形成開始から対合歯との咬合に至る萌出過程を通した上皮細胞の表現型の推移を免疫組織化学により検討した。免疫染色によるサイトケラチン陽性を上皮マーカとした組織立体構築に時間軸を加えた4次元形態観察により、歯根と歯根膜空間でのHERS由来の上皮細胞の空間局在を視覚化した。さらに、HERS由来の上皮細胞の動態と運命を明らかにする目的で、上皮細胞の組織立体構築像のうえで歯根表面との位置関係に基づき上皮細胞集団を分画する3次元形態計測法を確立し、局在位置別での細胞計測によりHERS由来の上皮細胞集団の動態を解析した。その結果、HERSは歯髄腔と歯根膜腔を隔壁するとともに、FGF産生を介して象牙芽細胞系譜の分化誘導に働くことが確かめられた。HERS増殖活性の維持と停止にはEGF、IGFの刺激受容が関わっており、上皮形質や細胞活性の維持にはセロトニンによる刺激受容との関連が示唆された。HERS由来の上皮細胞の運命として、歯根表面では上皮細胞は互いに連結したネットワークを維持することなく、大小の細胞集団として分散すること、その一部は細胞間接着分子の発現停止と基底膜分解をともない歯根膜腔へ遊離し、有細胞性セメント質の形成時期では上皮形質を保ってセメント基質に埋入されることを確かめた。歯根膜組織に遊離したHERS由来の上皮細胞は、一部はラミニン陽性の基底膜に囲まれてマラッセ上皮遺残として存続するとともに、基底膜を失った上皮細胞は上皮間葉転換に至ることが推定された。
原子状水素を用いた希釈窒化物混晶への水素修飾とN-H結合の制御

希釈窒化物半導体GaInNAsの有機金属気相成長(MOCVD)時の重要な課題の一つである水素原子混入に起因した半導体物性変調効果について、炭素等の他の外因不純物の影響から切り分け、実験的側面から様々な知見を得た。水素付加によるGaInNAs太陽電池特性の劣化はキャリア密度上昇、および新たに生成される深準位欠陥に起因するものであり、水素原子を脱離させることにより特性の改善が可能であることを示した。この結果は、GaInNAsデバイスの高品質化に向けた重要な知見といえる。本研究課題では申請者らのグループが開発した不純物含有の少ないGaInNAs半導体試料に対し意図的に水素付加することによって、従来研究では困難であった外因不純物の影響をなくし、GaInNAs結晶中に形成される窒素水素結合と半導体物性との相関を実験的側面から評価することを目的としている。本年度は分子線エピタキシー法により製膜したGaInNAs単接合太陽電池試料への水素添加条件を変化させることにより、水素添加量と太陽電池特性との相関について検討した。その結果、(1)水素添加プロセスの温度と水素混入量の相関、および(2)水素混入量と光キャリア収集効率との相関関係が得られた。さらに、(3)窒素雰囲気下でのアニールによる水素脱離と、それに付随した光キャリア収集効率の改善効果について明らかにした。これらの結果は結晶中への水素混入に起因するキャリア濃度の増加を示唆しているものと考えられる。GaInNAs混晶中の窒素-水素(N-H)結合を調べるため当初予定通りフーリエ変換赤外分光評価装置を導入した。評価上必要となる試料構造要件について検討を行い、試料構造設計への指針を得た。また、GaInNAs製膜時の原子状水素供給において、成長温度および窒素組成が水素混入量に対して特に大きく影響を及ぼすパラメータであることを明らかにした。次年度は、上記の指針を基にGaInNAs試料の赤外吸収スペクトルを評価解析し、水素混入量との関連を詳細に調べる。また、電気的、光学的物性との相関についても検討を行う。分子線エピタキシー法により製膜したGaInNAs混晶への水素の添加および脱離手法を確立でき、さらに太陽電池特性におけるキャリア収集過程の考察とも一致する結果が得られている。今年度導入したフーリエ変換赤外分光評価において、評価上必要となる試料構造設計については完了しており、また水素添加量の制御に関連する製膜パラメータに関しても指針が得られていることから、この点に関して次年度初期段階に評価が完了できると考えている。また、電気的、光学的評価に関しては保有システムにおいて問題なく評価可能である。よって達成度は概ね順調と判断する。本研究課題では申請者らが開発した不純物含有の少ないGaInNAs半導体試料に対し意図的に水素付加することによって、従来研究では困難であった外因不純物の影響をなくし、GaInNAs結晶中に形成される窒素水素結合と半導体物性との相関を実験的側面から評価することを目的としている。前年度得られた水素付加・脱離と太陽電池特性(キャリア収集プロセス)との相関について、本年度は容量電圧測定およびアドミッタンス分光測定を用い詳細な評価を行った。水素付加前と比較して付加処理後ではキャリア収集特性の劣化が見られたが、この要因としてアンドープGaInNAs層中のキャリア密度が増加すること、並びに深準位欠陥が生成されることを明らかにした。さらに窒素雰囲気下でのアニールプロセスによる結晶中からの水素原子の脱離と、キャリア密度および深準位欠陥の低減との相関を確認することができた。また、前年度から引き続きFTIR法によるN-H結合形成に起因した赤外吸収評価の検討を進めた。水素付加の有無によらずN-H結合に起因した吸収スペクトルの有意な変化は見られなかった。基板層の薄化やATR配置による赤外シグナルの増強も試みたが同様であった。このことから、本研究で実施した不純物含有の少ないGaInNAs結晶への水素付加手法においては、従来のMOCVDやCBE法で製膜されたGaInNAs結晶中で報告されるN-H結合密度と比較して、FTIR法の検出感度以下と著しく低いことが示唆される。現時点においてはN-H結合の有無に関してこれ以上の言及は難しいが、今後の課題として、付加する水素量をさらに増加させた場合の検討や、他製膜法との比較を進めることにより結晶中で水素がどの様な状態で取り込まれているかを明らかにすることは意義深いものであると考えられる。GaInNAs薄膜試料の作製、並びに赤外吸収スペクトル評価を引き続き進める。製膜条件を制御することにより水素添加量を増加させ、2桁程度の幅で大きく変化させた試料シリーズを作製、評価する。また、実施計画に沿って電気的、光学的測定を行い多面的にN-H結合の物性解明を進める。半導体工学、結晶成長、半導体デバイス装置選定時に、取扱いメーカーの割引キャンペーンのタイミングで当初予定よりも低価格で装置調達が出来たため。
フローサイトメトリーを用いた短期間で評価可能な抗癌剤感受性試験の開発

フローサイトメトリーを用いた短期間で評価可能な抗癌剤の感受性試験の開発を試みた.フローサイトメーターの故障整備の遅れのため研究は当初の予定より大幅に遅れたが,以下のことが明らかになった.1:泌尿器科悪性腫瘍のprimary cultureは,腎,膀胱,睾丸の腫瘍については機械的分散を行い,培地にRPMI-1640+10%胎児牛血清を用いることで比較的安定して行える.この際に線維芽細胞の混入が問題となる.2:抗癌剤としてAdriamecin, Cisplatinを用いたが,その効果による細胞形態の変化は核の崩壊ないし核の濃縮として認められ,いずれも24時間以内に認められる.3:フローサイトメトリーで測定した抗癌剤によるDNAヒストグラムの変化は細胞形態の変化より早期に起きているが,腎,膀胱腫瘍では一つの腫瘍がDNA量のことなる複数のクローンよりなるDNA polyploidyを示すことが少なくないことが明らかとなり,そのために,単クローンのヒストグラムについての解析プログラムしか無い現状では,実際に定量的な細胞動態の解析のできるものが限られるという結果であった.そのため,抗BrdU抗体を用いた細胞動態解析も必要であるということで,現在,その至適測定条件を検討中である.4:ルミノフォトメーターを用いたATP量の測定は, 1×10^4個というごく少数の細胞で可能であり,トリパンブルーを用いたviability判定と良く相関した.本法は簡便でかつ短時間で行えるという利点を合わせ持っている.今回の研究では,フローサイトメーターの故障に加え整備に長期間を要したため,初期の目的であるDNAヒストグラム,細胞動態,細胞形態上の細胞死に至るまでの変化を同時に比較しながら明らかにし,抗癌剤の感受性試験への応用を行うところまではできなかったが,今後も本研究を継続し,本感受性試験を完成させたい.フローサイトメトリーを用いた短期間で評価可能な抗癌剤の感受性試験の開発を試みた.フローサイトメーターの故障整備の遅れのため研究は当初の予定より大幅に遅れたが,以下のことが明らかになった.1:泌尿器科悪性腫瘍のprimary cultureは,腎,膀胱,睾丸の腫瘍については機械的分散を行い,培地にRPMI-1640+10%胎児牛血清を用いることで比較的安定して行える.この際に線維芽細胞の混入が問題となる.2:抗癌剤としてAdriamecin, Cisplatinを用いたが,その効果による細胞形態の変化は核の崩壊ないし核の濃縮として認められ,いずれも24時間以内に認められる.3:フローサイトメトリーで測定した抗癌剤によるDNAヒストグラムの変化は細胞形態の変化より早期に起きているが,腎,膀胱腫瘍では一つの腫瘍がDNA量のことなる複数のクローンよりなるDNA polyploidyを示すことが少なくないことが明らかとなり,そのために,単クローンのヒストグラムについての解析プログラムしか無い現状では,実際に定量的な細胞動態の解析のできるものが限られるという結果であった.そのため,抗BrdU抗体を用いた細胞動態解析も必要であるということで,現在,その至適測定条件を検討中である.4:ルミノフォトメーターを用いたATP量の測定は, 1×10^4個というごく少数の細胞で可能であり,トリパンブルーを用いたviability判定と良く相関した.本法は簡便でかつ短時間で行えるという利点を合わせ持っている.今回の研究では,フローサイトメーターの故障に加え整備に長期間を要したため,初期の目的であるDNAヒストグラム,細胞動態,細胞形態上の細胞死に至るまでの変化を同時に比較しながら明らかにし,抗癌剤の感受性試験への応用を行うところまではできなかったが,今後も本研究を継続し,本感受性試験を完成させたい.フローサイトメーターの故障整備のため研究は計画より大幅に遅れたが、以下のことが明かとなった。1.泌尿器科悪性腫瘍の短期細胞培養は、腎,膀胱,睾丸の腫瘍については機械的分散を行い、培地にRPMI-1640+10%胎児牛血清を用いることで比較的安定して行える。この際に線維芽細胞の混入が問題となる。2.抗癌剤の効果による細胞形態の変化は核の崩壊ないし核の濃縮として認められ、いずれも24時間以内に認められる。3.フローサイトメトリーで測定した抗癌剤の接触により起るDNAヒストグラムの変化は細胞形態の変化により早期におきているが、腎,膀胱の腫瘍では、1つの腫瘍がDNA量の異なる複数のクローンよりなるDNApolyploidyを示すものが少なくないことが明らかとなり、そのために定量的な細胞動態解析のできるものが少ないという結果であった。今後、抗BrdUrd抗体を用いた細胞動態解析が必要と考えられ準備中である。4.ルミノフォトメーターを用いたATP量の測定は1×【10^4】個の細胞で可能であり、ATP量は細胞のviabilityとよく相関する。本法は簡便でかつ短時間で行える利点を合せもっている。次年度には、2,3の結果に癌細胞のATP量の測定結果も加えて解析し、癌細胞の抗癌剤の接触によってもたらされるDNAヒストグラム、細胞動態細胞形態上の細胞死に至るまでの変化を明かにし、抗癌剤の感受性試験への応用を図る計画である。
過労定量化を目指したバイオマーカーの探索

疲労状態を客観的に定量化することは未だに確立されていない。ラット疲労モデル動物において疲労負荷により下垂体での形態異常が見られることから、疲労負荷を与えたラットの末梢血中における下垂体ホルモン変化を調べたところ、α-Melanocyte stimulating hormone(α-MSH)の上昇が認められた。この結果をさらにヒトへと発展させ、著しい疲労感を呈する慢性疲労症候群(Chromatic Fatigue syndrome ; CFS)についてα-MSHの血漿中濃度を調べたところ、CFS群は健常者群より有意にα-MSHの値が高いことが示された。α-MSHは過労のバイオマーカーの一つになることが明らかにされた。本研究では、疲労モデル動物から得られた分子メカニズムを手がかりに、過労のバイオマーカーの探索を行った。水の張ったケージで飼育することでラットに疲労負荷をかけるモデルを用いた。このモデルでは、疲労負荷後、通常ケージに戻して飼育することで身体能力などにおいて回復が見られている。疲労負荷をかけたラットの脳下垂体中間葉において分泌亢進像が観察された知見をもとに、中間葉から分泌される下垂体ホルモンα-Melanocyte stimulating hormone(以下、α-MSH)およびβ-endorphinの末梢血中における濃度を測定し、通常時および疲労時における濃度変化を検討した。疲労負荷3日目、5日目においてα-MSHおよびβ-endorphinの濃度上昇を確認し、これらは回復時にはコントロール値までに戻ることも確認できた。さらに、これらホルモンの上昇は、食事制限による体重減少では伴わないため、疲労負荷によるものであると考えられた。また、疲労負荷時にドーパミンアンタゴニストを投与するとこれらホルモンの濃度上昇が抑制され、これら二つのホルモンは疲労負荷時に下垂体より分泌されていることが示唆された。つぎに、α-MSHおよびβ-endorphinの抗炎症性作用に注目し、疲労時に見られる免疫力の低下について検討を行った。疲労負荷時および回復期にLPSを腹腔内投与し、炎症性サイトカイン(IL-6、TNF-α)、抗炎症性サイトカイン(IL-10)および一酸化窒素の産生能の変化を調べた。IL-6およびTNF-αのLPS応答性は、疲労負荷により抑制され、逆に回復期に過剰応答を示していた。また、回復期において一酸化窒素が通常よりも著しく産生されることがわかった。過労負荷を3日間かけたラット(過労モデルラット)の下垂体中間葉では、メラノトロフのホルモン産生分泌の亢進が観察され、末梢血中のα-melanocyte stimulating hormone(以下α-MSH)の上昇が観察される。さらに5日間まで過労負荷が延びると、下垂体中間葉のメラノトロフは長期に渡る過剰な活性化により一部が変性に至る。そこで本研究では、過労ラットで見られる末梢血中α-MSHの変動が、慢性的な疲労下にあるヒトにおいても観察されるかどうかを検討した。対象は、慢性疲労症候群(Chronic Fatigue Syndrome,以下CFS)と診断され罹病期間10年以内で、研究の趣旨を理解して同意を得られた患者の血漿55検体を選抜した。コントロール群には、性別比、年齢分布を揃えた健常者の血漿30検体を用いた。血漿中α-MSHの濃度は、Radio Immuno Assay(RIA)にて測定を行った。血漿中α-MSH濃度はCFS群では18.0±7.6g/mL、コントロール群では14.5±5.7pg/mLを示し、CFS群のほうが有意に高い値を示した(p<0.05)。さらにCFS群におけるα-MSH濃度と罹病期間との間に有意な逆相関が見られた(p<0.05,rs=-0.27)。罹病期間に対して5年以内と510年の2群にわけたところ、5年以内の群(n=27)では20.7±6.9pg/mLを示し、健常人の値よりも有意に高い値が見られた(p<0.01)。一方、510年の群では15.6±7.4pg/mLを示し、健常人の値と有意な差が見られなかった。これらの結果は、α-MSHが早期(罹病5年以内)の慢性疲労症候群を診断するバイオマーカーの一つになること示唆する。また、今回ヒトで得られた結果は過労モデルラットの結果と同様であり、過労ラットによる疲労研究の有用性を支持した。
チンパンジー、新世界サルを用いたC型肝炎のRNA干渉による遺伝子治療

(1)新世界サル(タマリン)の霊長類を用いたsiRNA発現AAV8の有効性・安全性の検討新世界サルであるタマリンに対しハウスキーピング遺伝子であるSOD1遺伝子に対するAAV8shRNA発現ベクターを1x10^<13>v.g./kg,1x10^<12>v.g./kgのウイルス投与量で経静脈的に全身性に投与し、投与3週間後に解剖を施行した。遺伝子が肝臓に導入されていることを確認するために肝臓から抽出したDNAを使用し導入遺伝子に対するPCRによる半定量を行ったところ、投与量に依存して導入遺伝子の存在が認められ、さらに発現したsiRNAの細胞内でプロセスされたアンチセンス鎖をnorthern blottingで確認できた。一方、血液・組織学的に肝障害を始めとする有意な副作用は認められなかった。しかし、siRNAの発現量はタマリンの1/30のウイルス量を投与したマウスの1/3程度の発現しか得られず、肝臓におけるSOD1の発現抑制効果は今回の実験では認められなかった。(2)肝臓への新たなデリバリー方法としてビタミンEをsiRNAのアンチセンス鎖5'末端に直接結合した新規のベクターを開発した(Toc-siRNA)。Toc-siRNAのマウスへの投与はマウスを1日絶食後に経口投与して、尾静脈からアポBに対するToc-siRNAを静注し、48時間後に肝臓を取り出して、定量RT-PCRによりアポB遺伝子のmRNAの抑制、Northern blotでsiRNAの細胞内プロセス、肝細胞内をsiRNAに標識したCy3の蛍光信号を認めた。また、安全性としてToc-siRNA投与後の血算、生化学に加えて、投与3時間後の血清中IFN-α値をELISAにより、肝臓でのIFN-βの誘導を定量RT-PCRにより検索していずれの副作用も認められなかった。1)タマリンでのGBV-B肝炎モデルでのsiRNAによる治療実験siRNAに化学修飾することにより、インターフェロンを誘導しない修飾方法を見出したので、マウスにて実証の後、タマリンによるGBV-B肝炎モデルでのsiRNAによる治療実験を行った。1,3x10^8GEのGBV-Bの接種後、3回/週GBV-Bに対する20mg/kg化学合成siRNAをカチオニックベクターに包埋して下肢の静脈から投与したところ、治療群において投与6週後transaminasesの低下傾向を認めた。今後ウイルス抑制増殖効果について評価する。2006年6月にscAAV-8を用いたshRNAの全身投与にて、遅発性の致死的な重篤な肝障害があるとの重要な報告された(Grimm D, Nature 441;537-541,2006)。この肝障害は導入したsiRNAの発現量に依存し、複数の異なった標的遺伝子に対するshRNAにおいて生じており、複数のmicroRNA(miRNA)の低下を伴っていた。我々もマウスにおいて同様の肝障害を経験しているが、scAAVではなくて1x10^<12>ssAAV(尾静脈からの投与)を用いることにより、明らかなshRNA毒性を認めず、肝臓で有効な標的遺伝子の発現抑制に成功した。過剰なshRNAは細胞毒性を引き起こす可能性があるが,shRNAの発現を適切に調節すれば,副作用なく有効なRNAi効果が得られると考えられる。今後、このAAV8を用いてshRNAによるウイルス抑制増殖効果について評価したい。(1)新世界サル(タマリン)の霊長類を用いたsiRNA発現AAV8の有効性・安全性の検討新世界サルであるタマリンに対しハウスキーピング遺伝子であるSOD1遺伝子に対するAAV8shRNA発現ベクターを1xlO^<13>v.g./kg,1x10^<12>v.g./kgのウイルス投与量で経静脈的に全身性に投与し、投与3週間後に解剖を施行した。

遺伝子が肝臓に導入されていることを確認するために肝臓から抽出したDNAを使用し導入遺伝子に対するPCRによる半定量を行ったところ、投与量に依存して導入遺伝子の存在が認められ、さらに発現したsiRNAの細胞内でプロセスされたアンチセンス鎖をnorthern blottingで確認できた。一方、血液・組織学的に肝障害を始めとする有意な副作用は認められなかった。しかし、siRNAの発現量はタマリンの1/30のウイルス量を投与したマウスの1/3程度の発現しか得られず、肝臓におけるSOD1の発現抑制効果は今回の実験では認められなかった。(2)肝臓への新たなデリバリー方法としてビタミンEをsiRNAのアンチセンス鎖5'末端に直接結合した新規のベクターを開発した(Toc-siRNA)。Toc-siRNAのマウスへの投与はマウスを1日絶食後に経口投与して、尾静脈からアポBに対するToc-siRNAを静注し、48時間後に肝臓を取り出して、定量RT-PCRによりアポB遺伝子のmRNAの抑制、Northern blotでsiRNAの細胞内プロセス、肝細胞内をsiRNAに標識したCy3の蛍光信号を認めた。また、安全性としてToc-siRNA投与後の血算、生化学に加えて、投与3時間後の血清中IFN-α値をELISAにより、肝臓でのIFN-βの誘導を定量RT-PCRにより検索していずれの副作用も認められなかった。
情報通信産業の競争・規制の理論・実証研究:ユニバーサル・サービス政策を中心に

研究実施計画に沿って次のような研究を実施した。(1)日本のFTTHサービスの需要調査のアンケート調査表の作成日本のFTTHサービスの需要動向を分析するために、インターネットWeb上で、ランダム・サンプリング調査を実施します。そのために何度も予備的なプレテストを実施しなければなりません。そこで、FTTHサービスの需要動向に関するアンケート調査票を作成しました。(2)日本のFTTHサービスのアンケート調査の実施作成された調査票を基にWebアンケートを実施しました。アンケートの規模は「RP(顕示選好)」の分析用に2000サンプル程度、「SP(表明選好)」の分析用に200サンプル程度が必要です。このアンケート結果を基に、日本のBBサービスの需要動向を計量経済学的に分析しました。(3)日本のFTTHサービスの需要動向の計量経済学的分析消費者の実際の選択から得られるRP分析と消費者の仮想的な選択から得られるSP分析を併せて実施しました。その際、計量経済ソフトを用いて、離散的選択モデル(入れ子ロジット・モデルなど)で日本のFTTHサービスの需要動向を解析しました。以上の分析を通じて、日本のFTTHサービスの需要構造を明らかにし、ユニバーサル・サービス政策に関して積極的に提言を行いました。研究実施計画に基づき、情報通信産業のユニバーサル・サービスを経済学的に考察しました。特に、今年度はADSL・CATVインターネット、FTTHのようなブロードバンド・インターネット・アクセス・サービスの需要動向について実証研究を行いました。同サービスは世界に先駆け日本で初めて本格的に普及しており、その意味で研究テーマの国際性が高い分野です。研究成果は各種学会、各種シンポジウム等で口頭発表された後、別紙の通り、学術雑誌に掲載されています。特に、研究テーマの国際性に鑑み、研究成果を英文学術雑誌に掲載することに留意しました。最後に主要な研究結果の要旨を掲載します。近年、日本のブロードバンド(BB)・インターネット・アクセス・サービスは急速に普及し、世界の先頭を走っています。しかし、その需要代替性を計量経済学的に分析した研究は未だありません。この研究は離散的選択モデルを用いて、日本のBBサービスを分析した初めての試みであります。入れ子ロジット・モデルを用いて推定した結果、次のようなことが判りました。第一に、ナローバンド(NB)とBBの間には明確なカテゴリ化があります。第二に、需要価格自己弾力性に注目すると、ADSLは非常に非弾力的で独立性が高く、CATVもFTTHもまだそれほど弾力的ではありません。第三に、ADSLはまだ中速度ADSLが圧倒的多数を占め、価格・速度共に非弾力的であります。しかし、高速度ADSLは価格・速度共に非常に弾力的であり、CATV・FTTHとの競合性は高まると予想されます。研究実施計画に基づき、情報通信産業のユニバーサル・サービスを第三世代携帯電話ならびにIP電話の2つのサービスについて実証分析しました。第一に、第三世代携帯電話(3G)の実証研究であるが、次のようなことが判った。離散選択モデルを用いて、携帯電話、PHSなど移動体通信サービスの加入需要分析を行った。特に、本論文の主要な興味は、新興サービスである3Gと成熟サービスである2Gの間でどのような代替性が働いているかを分析することである。料金に関しては、3Gと2Gの間で明確な相違が見てとれた。3Gは弾力的であるが、2Gは非弾力的である。これは、3Gサービスが今なお普及の途上にあり、料金の変化に対して感応的である一方で、2Gサービスは十分に成熟し、料金の変化に対して非感応的であることを表している。機能面で見ると、ウェブ閲覧や動画送受信の利用が3Gの選択確率に大きな影響を与えているという証拠は発見できなかった。これらの発見は、3Gのポテンシャルを活かした利用がまだ十分ではないことの証左かもしれない。しかし、携帯電話サービスは日進月歩であり、3G本格的普及の元年である2004年の分析結果が、このまま2005年以降に当てはまるとは考えにくい。経時的な追跡調査が必要であろう。第二に、IP電話の実証研究であるが、次のようなことが判った。(1)我々は現在のIP電話はインターネット接続サービスの付属機能であり、固定電話の代替財とまでは考えられていないという仮説を検証した。確かに、我々の計量分析の結果、IP電話との併用も含めて、固定電話を支持する選択者が80%強存在し、現時点では即時に固定電話を解約し、IP電話に移行するような事実は認められない。(2)我々は条件さえ整えば固定電話からIP電話への移行が広がるのではないかという仮説を検証した。その結果、固定電話との併用も含めて、IP電話を利用するという選択者が50%を超え、その際IP電話が普及するかどうかのポイントはIP電話の品質・機能が固定電話並みに保証されるかどうかであることが判った。具体的にはOAB-JタイプのIP電話が廉価に提供されるようになれば、固定・電話からIP電話への移行は一気に広がるように思われる。

(2)日本のFTTHサービスのアンケート調査の実施作成された調査票を基にWebアンケートを実施しました。アンケートの規模は「RP(顕示選好)」の分析用に2000サンプル程度、「SP(表明選好)」の分析用に200サンプル程度が必要です。このアンケート結果を基に、日本のBBサービスの需要動向を計量経済学的に分析しました。(3)日本のFTTHサービスの需要動向の計量経済学的分析消費者の実際の選択から得られるRP分析と消費者の仮想的な選択から得られるSP分析を併せて実施しました。その際、計量経済ソフトを用いて、離散的選択モデル(入れ子ロジット・モデルなど)で日本のFTTHサービスの需要動向を解析しました。以上の分析を通じて、日本のFTTHサービスの需要構造を明らかにし、ユニバーサル・サービス政策に関して積極的に提言を行いました。