hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
アリ類における進化的キャパシターHsp90を介した表現型進化機構の解明

生物の表現型は、Hsp90を介した遺伝的変異の蓄積と解放、適応的な変異の固定を経て進化しうると提案されている。本研究では寒冷地に適応進化したカドフシアリの無翅女王を対象として、この進化過程の検証を試みた。この無翅女王は冬期の低温に対するhsp90発現の応答が、祖先表現型である有翅女王に比べて弱いことが示され、蓄積した遺伝的変異を解放しやすい状態であると示唆された。また、有翅女王及び無翅女王の遺伝的差異を明らかにするため、RAD-seqを実行した。今後、そのデータを用いて、無翅女王の進化過程で固定された適応的な遺伝的変異をスクリーニングできると期待される。表現型進化を引き起こす機構の1つとして、進化的キャパシターを介した遺伝的変異の蓄積と解放、そして適応的な遺伝的変異の固定という一連のプロセスが考えられている。本研究では寒冷地特異的に出現するカドフシアリの無翅女王を対象として、上記の表現型進化の機構を解明する。本種は日本全国に分布し、有翅女王と無翅のワーカーからなるコロニーを形成するが、寒冷な地域では無翅女王とワーカーで構成されるコロニーがみられる。これは寒冷適応に伴って有翅女王から無翅女王の進化が起こったと考えることができる。そこで、祖先的な表現型である有翅女王と派性的な無翅女王の遺伝的差異をゲノムワイドに、あるいはトランスクリプトームレベルで比較することで遺伝的差異を明らかにする。現在、リファレンスゲノムの決定とRAD-seqライブラリー、そしてRNA-seqライブラリーを構築している。上記の解析で明らかになる遺伝的差異は進化的キャパシターであるHsp90を介して蓄積・解放された可能性がある。従ってHsp90のRNAiによる機能阻害を行うことで、Hsp90による遺伝的変異の蓄積と解放を実験的に再現できると考えた。しかしながらインジェクションによる幼虫へのRNAiは死亡率が高く、Hsp90機能を阻害することはできなかった。そこで、阻害剤であるゲルダナマイシンの経口投与および塗布実験を行ったが、羽化不全が引き起こされ、こちらの実験もHsp90機能を阻害することはできなかった。Hsp90はシグナル伝達関連因子を標的として変異を蓄積することが知られている。そこで数種のアリでカースト分化に重要な役割を果たす幼若ホルモン(JH)シグナルに注目し、JH類似体であるピリプロキシフェン処理を行った。その結果、無翅女王の分化が幼若ホルモン塗布により抑制されることが示され、無翅女王分化においてJHシグナルが重要な役割を果たすことが示唆された。ゲノム配列の決定、RAD-seq、RNA-seqといった次世代シークエンサーを用いた解析のためのライブラリー構築が遅れている。本種は体サイズが小さく、抽出できるゲノムDNAやtotal RNA量が少ないため、ライブラリー構築のための最適な実験条件設定が難しいことが理由としてあげられる。PCR増幅を伴うプロトコールでのライブラリー構築などを試みる。一方でピリプロキシフェンの塗布実験では、JHシグナルを介したカースト分化の抑制効果を確認することができた。以上のように遅れている部分と当初の計画以上に進展している部分があることから、平成28年度の進捗状況はやや遅れていると判断した。本研究では寒冷地特異的に出現するカドフシアリの無翅女王を対象として、上記の表現型進化機構の検証を試みた。本種は日本全国に分布し、主に有翅女王と無翅のワーカーからなるコロニーを形成する。しかし北海道では無翅女王とワーカーで構成されるコロニーが報告され、寒冷適応に伴って有翅女王から無翅女王への進化が起こったと示唆されている。本年度はまず、複数地点での野外採集を行い、岐阜の高山域では無翅女王のコロニーが有翅女王のコロニーと同所的に分布すること、そして愛媛の高山域には無翅女王のコロニーのみ分布することを明らかにした。これにより、無翅女王は寒冷気候に適応することが強く支持された。これらの有翅女王と無翅女王の形態的特徴は、いずれの個体群においても共通であった。続いて、北海道個体群と岐阜個体群の両タイプのコロニーを対象に冬期の低温ストレスに対するhsp90発現の応答を調べたところ、両個体群に共通して、無翅女王のコロニーの方が発現応答が弱いことが示された。この結果は、無翅女王のコロニーの方が蓄積した遺伝的変異を解放しやすい状態であることを示唆している。各個体群の有翅女王及び無翅女王、合計96個体を対象にRAD-seqライブラリーを作成し、RAD-seqを実行した。今後、そのデータを用いて有翅女王と無翅女王間の遺伝的差異をゲノムワイドに解析することで、無翅女王の進化過程で固定された適応的な遺伝的変異をスクリーニングできると期待される。

今後、そのデータを用いて、無翅女王の進化過程で固定された適応的な遺伝的変異をスクリーニングできると期待される。前年度までの進捗状況を踏まえ、平成29年度は下記の通りに研究を推進する。リファレンスゲノムの決定からRAD-seq、RNA-seqを実施し、有翅女王と無翅女王の遺伝的差異をゲノムレベルとトランスクリプトレベルで比較する。それにより、有翅女王から無翅女王への進化に伴って固定された遺伝的変異を明らかにする。また、ゲルダナマイシン投与によるHsp90の機能阻害を行い、カースト分化率への影響を評価するとともに、カースト分化過程の個体からRNAを抽出しておく。RNA-seqの解析結果をもとにカースト特異的な発現遺伝子を特定し、それらの遺伝子発現パターンに対してHsp90の機能阻害が及ぼす影響を評価する。この時、JHシグナル関連遺伝子の発現パターンに対する影響についても注目する。これらの解析により、進化的キャパシターHsp90による無翅女王のカースト分化への寄与について検証する。生態進化発生学,昆虫発生学次世代シークエンサーを使用した解析が始められなかったため、それらに必要な費用を次年度に繰り越した。それ以外の費用については当初の計画通りに執行できた。平成29年度には、繰り越した費用を利用して次世代シークエンサーを利用した解析を実施する。それ以外の費用については当初の計画どうりに執行する。それらの解析により、無翅女王の進化に伴うゲノム配列の変化やトランスクリプトームの変化を明らかにすることが期待される。
海外経済協力政策の実現に向けた、「社会課題解決型」ＢＯＰ支援事業の構築と展開

日本企業が海外協力政策の一環として実施する、BOP(低所得者層)支援事業の重要性を検証した。ガーナやメキシコ、グアテマラ等におけるBOPビジネスを現地リサーチし、その成果を米国の学会(SBE)や、日本の経営倫理学会、日本マネジメント学会などで発表、論文・書籍などを通じて世界に情報を発信した。この活動を通じて、関係する組織の社会的責任の実践を基礎としたBOP支援事業の構築と展開について、企業や行政、NGOなどに提起した。その結果、官民、NGOそして支援先の現地社会が、相互にサスティナビリティと価値を享受した。日本社会の発展と世界の社会的課題解決の発展に寄与することを検証・確認することができた。平成24年度の研究活動の概要は以下の通りである。1.24年8月までに、23年9月にリサーチしたガーナでのシェアバターにかかわるBOPビジネスの論文をまとめた。2.24年8月2日5日に米国のボストンで開催の「Society for Business Ethics(米国経営倫理学会)」にて、BOPビジネスに関する研究成果の発表。論文の執筆他学会報告の準備をした。3.海外出張(学会報告、研究取材)1米国,7月31日8月1日:ワシントンDCにて国際NGO「Conservation International」本部を訪問、環境保護に対するNGOの活動を取材、2米国、ボストン:24年8月5日上記学会にて報告:テーマはA study of strategic CSR and the BOP business practiceーFrom the perspective of organizational sustainabilityー、3グアテマラ:8月6日12日伊藤忠関連会社Unexグアテマラ社取材、グアテマラのコーヒー農園、加工場(ウエットミル、ドライミル)、有機栽培農園、スターバックスコーヒー産地、スターバックスC・A・F・Eプラクティスの実施状況、アロテナンゴ農業組合、レインフォレストアライアンス加工場をそれぞれ取材、4メキシコ:8月13日19日メキシコヤクルト本社、工場、販売会社、プエブラヤクルト(代理店)の取材、およびヤクルトレディーへの密着取材(同行販売でマーケットリサーチ)※8月20日帰国、21日成田着平成25年度の研究活動の概要は以下の通りである。1.平成25年12月にニュージーランドへ出張、主な業務は1Christchurchの震災復興に関する企業や行政の取り組み、街づくり支援についてUniversity of Canterburyの准教授2名と意見交換。2011年2月22日に発生したChristchurch大震災、その後の企業や行政、NGOの果たすCSR活動および、CSV活動について打ち合わせ、東日本大震災の復興支援などに関する情報提供を行った。2Aucklandで、Massey Universityの准教授と研究書籍の出版に関する打ち合わせ、2015年春に英国から出版の予定。出版内容はCSR,BOPビジネス、CSVなどを中心とし、筆者は平成24年8月に米国のボストンで開催の「Society for Business Ethics(米国経営倫理学会)」にて発表したBOPビジネスに関する論文をもとに、執筆の予定。すでに原稿は提出すみである。3環境や自然保護活動についてのニュージーランドのDOC(Department Of Conservation:環境保護庁)の活動視察。2.近江商人の「三方よし」の考え方のルーツを研究し、今後の日本におけるCSVの研究活動に生かすため、2013年12月に近江、彦根などを現地取材。3.論文・書籍の執筆、および学会発表の準備(詳細は「11.研究発表」にて記載)このように、研究活動が論文や書籍、シンポジウムなどの業績にも生かされており、広く科学研究費を生かした研究活動として反映され、貢献している。平成23年度の研究活動の概要は以下の通りである。1.4月8月:海外経済協力政策と社会課題解決型BOPビジネスに関する先行研究として文献研究を行い、その上で、次の通り海外の現地リサーチを実施した。2.海外の現地リサーチ活動(1)リサーチ期間:平成23年8月16日平成23年8月30日(15日間)(2)用務先:ワシントンDC(ワールド・カカオ財団:WCF本部)、ガーナ(アクラ<WCFアクラオフィス、タマレ<NGOアフリカ2000ネットワーク現地>、クマシ<NPOソース・トラスト現地>)(3)研究テーマと研究活動の詳細:研究テーマは「アフリカのガーナにおけるシェアバタービジネスと、カカオ・ビジネスに関わる研究」。具体的には以下の通りである。まず、米国ワシントン・DCを訪問。ガーナでのカカオ・ビジネスの視察とヒアリングの前に、ワシントンDCのWCF本部にてビル・ガイトン代表から世界のカカオ・ビジネスの現状と課題についてヒアリングを実施。次にガーナでは、シェアバタービジネスに関して、アクラにてNGOアフリカ2000ネットワークにシェアバターに関わるNGOの活動についてヒアリングを実施。その後タマレへ移動し現地サグナグリでシェアバター工場を視察、現状と今後の課題などをヒアリング。さらに、カカオ・ビジネスでは、クマシで英国商社アルマジャロのビンス・マッカラー氏にカカオ流通全般についてヒアリング。その後現地のワサ・アクロポンでNPOソース・トラストの現地集荷場、カカオ農園を視察した。

アクラに戻りガーナの国営貿易商ココ・ボードで世界との取引要領についてサミュエル・タキー氏にヒアリング。あわせて、WCFアクラオフィスのムバロ・ニディヤリーダーから、ガーナにおけるカカオ農民へのWCFの支援活動についてヒアリングを実施した。当研究における「BOPビジネスの現状と課題の抽出」について、初年度に引き続き文献研究を実施し、これまでの先行研究を俯瞰した。その上で8月にワシントンD.C.で自然保護団体のNGO(コンサベーションインターナショナル)を取材し、スターバックスのコーヒーシェードに関する取組をリサーチすることができた。その後、グアテマラにあるスターバックスの農園を取材し、現地住民の生活支援と環境保護活動、さらにはサプライチェーンとの連携などをリサーチし抱える課題も把握することで、ほぼ2年目の目的は達成したと考える。その間、論文や書籍の執筆、日米の学会やシンポジウムで研究成果の発表、マスコミなどへの掲載など、広く社会に研究成果を情報発信し貢献した当研究における初年度の目的である、「BOPビジネスの現状と課題の抽出」について、文献研究を実施し、これまでの先行研究を俯瞰した。その上でワシントンD.C.で世界のカカオ市場を取材し、ガーナでの現地リサーチを通じて、カカオ・サスティナビリティとシェアバターに関するBOPビジネスの現状をリサーチすることができた。そこでは支援先現地の状況や支援企業が抱える課題も把握することで、ほぼ初年度の目的は達成したと考える。またこの内、カカオ・サスティナビリティについては既に24年3月末に論文としてまとめ、駿河台経済論集に掲載されている。さらに、24年3月9日には日本経営倫理学会のシンポジウム「グローバルCSRとBOPビジネス」でパネル・チェアからの問題提起も行い、学会と産業界に貢献した。最終年度の25年度は大別して以下の通り計画している。1.24年度7月までに、昨年のリサーチ結果であるメキシコヤクルトによるグロ-バルCSRとBOPビジネスにかかわる論文をまとめる。2.上記内容を盛り込んだ内容で『人にやさしい会社ー安全・安心、絆の経営』として白桃書房から出版(2013年4月)。3.「時代と共に歩む、経営倫理20年の軌跡と将来展望」を加筆修正し、英語論文としてまとめJournal of Business Ethicsに投稿する予定。4.昨年8月に米国のボストンで学会「Society for Business Ethics」で発表した論文を、英語書籍としてニュージーランドMassey Universityの研究者と共同出版を計画。
部位特異的脂質化抗原と核酸からなるリポソームによるがんワクチンの開発

がん細胞の目印である抗原を投与し、免疫細胞を抗原特異的に活性化させるがん免疫療法は、副作用が最小限のがん治療法として注目される。抗原は、生体内での安定性が低く、投与後速やかに消失する。この課題を克服するには、血中滞留性の向上に実績がある脂質二重膜(リポソーム)への抗原係留が有効であるため、タンパク質への係留部位(脂質)の導入を本研究では行なっている。抗原は、その高次構造が免疫細胞の認識に重要であるため、変性しない条件で部位特異的に脂質修飾を施す必要がある。そこで本研究では、架橋酵素トランスグルタミナーゼ(MTG)の触媒機能と、その人工基質となる独自の両親媒性脂質化ペプチドを用いて、部位特異的抗原脂質化技術を確立している。本年度の脂質化ペプチドの分子設計においては、MTGが塩基性アミノ酸に囲まれたKを認識することに着目し、親水性のRHK基質配列にのみG3Sを介して脂質を融合して両親媒化することで、脂質化ペプチド基質の水への溶解性向上およびMTG反応性のさらなる向上に成功した。この独自設計の両親媒性脂質化ペプチドは、MTGが認識可能なQを融合したモデル緑色蛍光タンパク質(LLQG融合GFP)に対して高効率に(80%以上)脂質化ペプチドが修飾される。上記脂質化ペプチドをMTG反応でLLQG融合GFPにラベルして得た脂質化GFPは、細胞膜と相互作用させて、細部膜への係留能力を評価した。細胞膜表面へEGFPの蛍光が観察され、特に蛍光が明瞭となったのは、アルキル鎖長の長いC18、嵩高いコレステロールを修飾したGFPであった。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。本年度は、部位特異的な脂質化タンパク質調製法の確立に向けた、MTG基質脂質ペプチドの合成とMTG反応(特定のリジン(K)とグルタミン(Q)を連結する酵素反応)の最適化を研究実施計画通りに行った。MTG基質脂質ペプチド(K側)として、まずC14-MRHKGS及びC14-G3S-MRHKGSを合成し、種々のQ側基質融合タンパク質(高感度緑色蛍光タンパク質: EGFP)とMTG反応させることで、MTG反応性を評価した。この結果EGFPのC末端にLLQG配列を融合した、LQ-EGFPが最も脂質化ペプチドと反応性が高く、脂質化ペプチドと反応させるための最適アミノ酸配列は、LLQGと判明した。脂質化ペプチドとLQ-EGFPの複合体(脂質化EGFP)の細胞膜係留能力を比較すると、C14-MRHKGSとC14-G3S-MRHKGSで脂質化した場合では、C14-G3S-MRHKGSで脂質化したEGFPの方が細胞膜への係留能力が高い結果が得られた。このことから、申請者は、細胞膜への係留には、G3S部位が重要と考え、G3S近傍のアミノ酸と細胞膜係留能力との関係を、新規脂質化ペプチドC14-XGnS-MRHKGS (X:任意のアミノ酸)を合成して検証した。検証した結果、GnSにおけるグリシン(G)数が増えるほど細胞膜係留能力が増大し、Xにプロリン(P)を導入して分子間の水素結合を緩和すると、細胞膜係留能力が大幅に低下した。以上より、LQ-EGFPに対するMTG反応性を十分に示すC14-GnS-MRHKGS (n = 3-5)が、自己組織化による細胞膜係留を十分に有し、脂質化ペプチドとして最適化された。また、脂質部位、MRHKGSの最小化も行い、脂質化ペプチドのさらなる改良も行った。以上までの内容をまとめて、特許を出願し、論文としてまとめている最中である。本年度は、研究計画実施通りにMTG基質脂質ペプチドの合成とMTG反応の最適化を達成した。当初の予定では、FYPLQMRGのみをEGFPのQ側基質とする予定だったが、LLQGなど他のQ-tag配列も並行して検討することで、LLQG配列が脂質化ペプチド(lipid-MRHKGS)とのMTG反応性が最大隣、最適Q-tag配列であることが分かった。さらに、K側基質も、C14-MRHKGS及びC14-G3S-MRHKGSだけでなく、C14-GnS-MRHKGS、C14-PGnS-MRHKGSを検証した。検証した結果、脂質化ペプチドとLQ-EGFPの複合体(脂質化EGFP)における細胞膜への係留には、GnSにおけるグリシン(G)数が増えるほど細胞膜係留能力が増大し、プロリン(P)を導入して分子間の水素結合を緩和すると、細胞膜係留能力が大幅に低下することを発見した。以上より、脂質化ペプチドはGnSの自己組織化によって、細胞膜係留を十分に有することで、研究実施計画では予想しなかった新たな知見を得た。さらに脂質部位のアルキル鎖長や、コレステロール、ビタミンなどの脂肪酸以外の脂質も検証し、C18もしくはコレステロールを用いることで、細胞膜係留能力がさらに向上すること、MRHKGSを短縮化した、脂質化ペプチド配列の最適化も完了し、分子設計の最適化まで進展している。

この課題を克服するには、血中滞留性の向上に実績がある脂質二重膜(リポソーム)への抗原係留が有効であるため、タンパク質への係留部位(脂質)の導入を本研究では行なっている。抗原は、その高次構造が免疫細胞の認識に重要であるため、変性しない条件で部位特異的に脂質修飾を施す必要がある。そこで本研究では、架橋酵素トランスグルタミナーゼ(MTG)の触媒機能と、その人工基質となる独自の両親媒性脂質化ペプチドを用いて、部位特異的抗原脂質化技術を確立している。本年度の脂質化ペプチドの分子設計においては、MTGが塩基性アミノ酸に囲まれたKを認識することに着目し、親水性のRHK基質配列にのみG3Sを介して脂質を融合して両親媒化することで、脂質化ペプチド基質の水への溶解性向上およびMTG反応性のさらなる向上に成功した。この独自設計の両親媒性脂質化ペプチドは、MTGが認識可能なQを融合したモデル緑色蛍光タンパク質(LLQG融合GFP)に対して高効率に(80%以上)脂質化ペプチドが修飾される。上記脂質化ペプチドをMTG反応でLLQG融合GFPにラベルして得た脂質化GFPは、細胞膜と相互作用させて、細部膜への係留能力を評価した。細胞膜表面へEGFPの蛍光が観察され、特に蛍光が明瞭となったのは、アルキル鎖長の長いC18、嵩高いコレステロールを修飾したGFPであった。上記の新規ペプチド(lipid-G3S-RHK)Sを用いてラベルした脂質化タンパク質は、生体内での安定性をvivo実験で検証する段階にまで至っている。得られたC18-OVAの構造は、動的光散乱から分子形態を評価し、C18-OVAのみで自己組織化している場合はそのまま、自己組織化していない場合は、リポソームを添加してリポソーム上にC18-OVAを係留させる。このとき、自己組織化したミセル内にアプタマーもしくは抗体Fc標識アプタマーを封入できるか検討する。OVA係留ミセルの分子設計が最適化された後、ミセル投与によるOVA特異的ながん細胞傷害性を検証するため、共同研究先の九州大学後藤・神谷研究室にてin vivo概念実証を行う。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
発話におけるアウトプットモニタリングに基づく幻聴メカニズムの解明

統合失調症は、自己主体感(自分自身が行動を起こしているという感覚)の障害であると考えられている。また、「自分が発話している」という感覚の障害であると言われている幻聴と、「自分が考えている」という感覚の障害であると言われている思考吹入の関係について、「発話=自分の考えをアウトプットすること」という観点から関係が深く、両者を検討する必然性がうかがえる。●研究1:大学生約100名を対象とし、ソースモニタリング課題を用いて発話の自己主体感に関わる要因について検討した。参加者は、単語を「聴く」「発話する」「内言する」「口真似する」のいずれかでインプットした後、モニタリング段階ではそれぞれの単語を「発話したか否か」について答えた。その結果、発話をイメージすること、口を動かすこと、声のフィードバックが得られること、その声が自分の声と同じであることが、それぞれ「発話した」判断に関わることが明らかになった。この結果の一部はQJEPに投稿し、受理された。●研究2:大学生約200名を対象とし、DRMパラダイムを用いて、幻聴傾向と思考吹入の関係について検討した。DRMパラダイムは、学習時に提示しないクリティカル語(ねむい)と、15語の連想語からなるリストで構成されている。被験者はリスト語(ベッド、おやすみ、おきる、つかれた、ゆめ、さめる、いびき、ふとん、いねむり、ひるね、あんらく、あくび)を学習し、後に再認を求められた。その結果、幻聴傾向とクリティカル語虚再認率に正の相関が見られ、幻聴傾向が高いと思考吹入が起こりやすいことが示唆された。この結果はConsciousness & Cognitionに投稿し、受理された。□研究の背景幻聴は,統合失調症患者自身の発話内容,もしくは内言であることが示されている(McGuigan,1966)。それを踏まえて,ソースモニタリングの観点から,幻聴の生起,抑制メカニズムを明らかにするための研究を行った。具体的には,幻聴研究において,現在まで行われていた研究は,「自分の発言を"他人の発言だ"」と誤判断する過程の検討であった(e.g.,Bentall,1990)。この過程を細分化して、さらに詳しく,「現実には自分が発言したにもかかわらず"自分は発言していない"」と誤判断する過程に着目して検討した。○研究1・まず健常大学生180名を対象に、幻聴様体験をたずねる尺度(AHES)を作成した。この成果を心理学研究誌に投稿し、現在修正後採択決定である。その後、世界中の研究者に用いられることを目標に、短縮版幻聴様俐験尺度を作成し、さらに幻聴メカニズムについて質問紙調査をもとに検討した。その結果、幻聴には、音楽や内言が起源となる幻聴と妄想が起源となる幻聴に分類できることが明らかになった。そして、音楽や内言が起源となる幻聴と、陽性統合失調症の要因として挙げられる「」が妄想が起源となる幻聴を説明することが明らかになった。この結果は、現在Psychiatry Researchに投稿中である。○研究2・まず健常大学生50名を対象に幻聴傾向と、「言ったかどうか」というソースモニタリングの関係について検討した。学習時に、PCのモニタ上に呈示された単語を「発声」「口真似」「想像」のうちのどれかで学習させた。その後、モニタリング時に、各々の単語を「学習時に発声したかどうか」についてたずねた。その結果、発声>口真似>想像の順に、「発声した」と判断する傾向が高くなった。この結果は、学習時に得られた発声の自己主体感(自分が声を出しているという感覚)が、その後の「発声したかどうか」の指標となることを示唆するものであり、今後ソースモニタジング課題を用いて、発話の自己主体感を検討できる可能性を示唆すると考えた。この結果は、現在Quatery Journal of Experimental Psychologyに投稿し、現在修正中である。「研究の目的」幻聴は,統合失調症患者自身の発話内容,もしくは内言であることが示唆されている(McGuigan,1966)。つまり,統合失調症患者は,「自分が発話している」という感覚に異常があるため,自分の発話を他者の発話であると判断すると考えられている。また,統合失調症患者だけでなく,健常者にも,幻聴経験があることが報告されている。申請者の目的は,健常者を用いて,ソースモニタリング(ある出来事が現実であるか想像したことなのかを判断するプロセスのこと)の観点から,幻聴の生起,抑制メカニズムを明らかにするための研究を行うことであった、つまり,「自分が発話したか想像しただけか」という記憶判断を用いて,自分が発話しているという感覚が得られる要因について検討した。「具体的内容」尺度的作成健常者の幻聴傾向を測定する質問紙AHESを作成し,信頼性妥当性を検討した。この結果は「心理学研究」に掲載された。実験PCのモニタ上に単語を呈示し,その後,「発話」「口真似」「想像」のうちのいずれかの教示を呈示した。参加者は教示に従って,「発話」「口真似」「想像」を行った。また,「発話」した場合,時々,その声がオンラインで音程変換されてフィードバックする条件も設置した。複数の単語について,「発話」「口真似」「想像」のいずれかで学習した後,各単語について「発話したか否か」の記憶実験を行った。

その結果,「想像」<「口真似」<「発話」の順に「発話した」と判断する傾向が高くなり,さらに発話した場合,音程変換された単語より,変換されていない単語のほうが「発話した」と判断する傾向が高くなった。つまり,自分の発話に関するフィードバックが多ければ多いほど,それが自分の予測したものと等しければ等しいほど「発話自己主体感」は得られやすいことが示唆された。個人差研究実験で得られた結果を,幻聴測定尺度AHESを用いて分析した結果,幻聴傾向が高い人は,より「自分が発話したかどうか」の判断が不正確になることが明らかになった。この結果はQuartery Journal of Experimental Psychologyに投稿,再審査中である。統合失調症は、自己主体感(自分自身が行動を起こしているという感覚)の障害であると考えられている。また、「自分が発話している」という感覚の障害であると言われている幻聴と、「自分が考えている」という感覚の障害であると言われている思考吹入の関係について、「発話=自分の考えをアウトプットすること」という観点から関係が深く、両者を検討する必然性がうかがえる。●研究1:大学生約100名を対象とし、ソースモニタリング課題を用いて発話の自己主体感に関わる要因について検討した。参加者は、単語を「聴く」「発話する」「内言する」「口真似する」のいずれかでインプットした後、モニタリング段階ではそれぞれの単語を「発話したか否か」について答えた。その結果、発話をイメージすること、口を動かすこと、声のフィードバックが得られること、その声が自分の声と同じであることが、それぞれ「発話した」判断に関わることが明らかになった。この結果の一部はQJEPに投稿し、受理された。●研究2:大学生約200名を対象とし、DRMパラダイムを用いて、幻聴傾向と思考吹入の関係について検討した。DRMパラダイムは、学習時に提示しないクリティカル語(ねむい)と、15語の連想語からなるリストで構成されている。被験者はリスト語(ベッド、おやすみ、おきる、つかれた、ゆめ、さめる、いびき、ふとん、いねむり、ひるね、あんらく、あくび)を学習し、後に再認を求められた。その結果、幻聴傾向とクリティカル語虚再認率に正の相関が見られ、幻聴傾向が高いと思考吹入が起こりやすいことが示唆された。この結果はConsciousness & Cognitionに投稿し、受理された。
ポリアミンと左巻きDNAの相互作用に関する構造科学的研究

N1-(2-(2-aminoethylamino)ethyl)ethane-1,2-diamine PA(222)やN1-(2-(2-(2-aminoethylamino)ethylamino)ethyl)ethane-1,2-diamine PA(2222)はZ-DNAのマイナーグルーブに非常に結合しやすくマイナーグルーブバインダーとしてZ-DNAを非常に安定化することがわかった.さらにこれらの11種類のポリアミンとd(CG)_3とを複合体にして高塩濃度化で4°C、10°C、20°Cで結晶化し20°Cで非常に塩濃度をあげて結晶化している.これらを調べることによってポリアミンのZ-DNAに対する役割、安定化作用などを詳細に調べる.安定化機構がわかればこれまで8塩基対以上の結晶化が困難と言われてきたZ-DNAの長鎖の結晶化を行う.B-Z転移機構、Z-B転移機構を明らかにするためにB型DNAとZ型DNAの混合型d(CGCGCGCGCGAATTCGCGCGCGCG)_2,d(CGCGCGCGAATTCGCGCGCG)_2とd(CGCGCGAATTCGCGCG)_2などのDNAの構造を明らかにしようと考えている。B-Z混合型のDNAの構造はこれまでに世界中で結晶化は試みられているがわれわれの結晶化の例以外に報告はない。われわれはマイナーグルーブバインダーであるポリアミンをこれらの長鎖のDNAと複合体にし不安定化の要素になっている大きなマイナーグルーブのキャビティをこのポリアミンで埋めDNA全体の構造を安定化させることを考えている.そこでわれわれは長鎖の左巻きDNAのX線結晶解析に成功している。はわれわれが発見したグルーブバインダーポリアミンはきっちりとZ-DNAのマイナーグルーブに結合して大きなマイナーグルーブを埋めてDNA全体の構造を安定化している.これを応用して長鎖のDNAの結晶化、B-Z-B junction構造の結晶化を行う。現在すでにこの方法を用いて世界最長のDNAの結晶化に成功しており長鎖のDNAの構造やB-Z-B junction構造などが次々に明らかにされればDNAの構造化学に大きな展開をもたらすと考えている.N1-(2-(2-aminoethylamino)ethyl)ethane-1,2-diamine PA(222)やN1-(2-(2-(2-aminoethylamino)ethylamino)ethyl)ethane-1,2-diamine PA(2222)はZ-DNAのマイナーグルーブに非常に結合しやすくマイナーグルーブバインダーとしてZ-DNAを非常に安定化することがわかった.さらにこれらの11種類のポリアミンとd(CG)_3とを複合体にして高塩濃度化で4°C、10°C、20°Cで結晶化し20°Cで非常に塩濃度をあげて結晶化している.これらを調べることによってポリアミンのZ-DNAに対する役割、安定化作用などを詳細に調べる.安定化機構がわかればこれまで8塩基対以上の結晶化が困難と言われてきたZ-DNAの長鎖の結晶化を行う.B-Z転移機構、Z-B転移機構を明らかにするためにB型DNAとZ型DNAの混合型d(CGCGCGCGCGAATTCGCGCGCGCG)_2,d(CGCGCGCGAATTCGCGCGCG)_2とd(CGCGCGAATTCGCGCG)_2などのDNAの構造を明らかにしようと考えている。現在すでにこの方法を用いて世界最長のDNAの結晶化に成功しており長鎖のDNAの構造やB-Z-B junction構造などが次々に明らかにされればDNAの構造化学に大きな展開をもたらすと考えている.私たちはd(CGCGCG)とN-(2-aminoethyl)-1,4-diamino-butane(PA(24))complex、d(CGCGCG)とspermidine(PA(34))complex、d(CGCGCG)とthermospermine(PA(334))complex、d(CGCGCG)とN^1[2-(2-amino-ethylamino)-ethyl]-ethane-1,2-diamine(PA(222))complex、d(CGCGCG)とthermine(PA(333))complex、d(CGCGCG)とN^1-{2-[2-(2-Amino-ethylamino)-ethylamino]-ethyl}-ethane-1,2-diamine PA(2222)の結晶化を高塩濃度条件下で行った。

d(CGCGCG)とPA(333)complexとd(CGCGCG)とPA(2222)complexの結晶化については4°Cと20°Cの2種類の条件下での結晶化を行いX線結晶構造解析を行った。スーパコイルにZ-DNAを導入する際には今回、私たちが解析した短いDNAではなく非常に長いZ-DNAが必要になるZ-DNAはマイナーグルーブが非常に大きいためZ-DNAが長くなればなるほどマイナーグルーブのキャビティが大きくなり構造が崩れやすくなることがわかっている。そこで私たちはd(CGCGCGCGCGCG)にPA(2222)を4当量混ぜ結晶化を10°Cで行ったところ非常にきれいなヘキサゴナル状の結晶を得ることができた。既に高エネルギー加速器研究機構とSPring-8で1.5Åまでのデータ測定も終わり現在解析中である。この構造が解析されれば長鎖のDNAの安定化に大きな示唆を与えるとともにB-Z転移機構にも大きな示唆を与えられることが示唆されている。私たちはこれらのデータをもとにB型とZ型の混ざった構造を持つDNAの結晶化を検討した。これらの構造が明らかにされればB-Z転移機構が明らかにされるのはもとよりスーパコイリングの機構を解明できることで世界中から注目されている研究である。私たちは既にこれらの結晶化を行うことができ3.0Åまでのデータは得られている。現在、高分解能のデータを得るための結晶化を検討中である。更に私たちはDNAからRNAへの転写の機構を解明するためDNAとRNAの複合体の結晶作成に挑んでいる。これは世界でも類を見ない非常に難しい結晶化でこの2年以内に結晶化することを検討している。私たちはこれまでに28種類のポリアミンと左巻きZ-DNAとの複合体の結晶化に成功し、非常に高分解能のデータを得ている.それらのデータと計算機科学的データ及び物理化学的データから私たちは左巻きDNAの安定化に関わる因子を発見し様々な左巻きDNAの結晶化に成功してきた.私たちが結晶化できたのはモノアミンではmethyl amineとd(CGCGCG)の複合体(4°C、10°C、20°C)、ethylamineとd(CGCGCG)の複合体(4°C、10°C、20°C)、ジアミンではカダベリンとd(CGCGCG)の複合体(4°C、10°C、20°C)、プトレッシンとd(CGCGCG)の複合体(4°C、10°C、20°C)、トリアミンではスペルミジンとd(CGCGCG)の複合体(10°C)、PA(24) N^1-(2-Amino-ethyl)-butane-1,4-diamineとd(CGCGCG)の複合体(10°C)、テトラアミンではサーミンd(CGCGCG)の複合体(4°C、10°C、20°C)、PA(222) N^1-[2-(2-Amino-ethylamino)-ethyl]-ethane-
全身性強皮症の病態形成におけるフラクタルカインの関与とその治療法の開発

全身性強皮症(SSc)は皮膚をはじめ肺,食道などの硬化を来す自己免疫疾患である.その病因は不明であり,有効な予防法も治療法も確立されていない.我々は血管内皮細胞上に発現するケモカインであるfractalkineのreceptor(CX3CR1)を世界に先駆けて同定し,CD14+単球,CD16+NK細胞,CD8+T細胞上に発現していること,およびfractalkineが従来のケモカインと異なり接着分子として作用することを報告した。前年度に続き,NK細胞の血管内皮細胞との接着や内皮傷害におけるfractalkineの関与およびインターフェロンガンマ産生における効果を検討した.1)可溶型fractalkineはfibonectinやICAM-1に対するNK細胞接着を増強した.2)fractalkine遺伝子を導入した血管内皮細胞は,NK細胞との接着を増強した.3)fractalkineは濃度依存性にNK細胞の顆粒放出を増強し抗腫瘍細胞殺傷能を増強した.4)NK細胞はfractalkine発現細胞を著明に殺傷した.これらの結果は,炎症反応により産生されたサイトカインで活性化した血管内皮細胞がfractalkineを発現し,NK細胞やCD8陽性T細胞の接着増強を誘導すること,その際に活性化細胞により血管内皮細胞が傷害されること,遊送した細胞はfractalkineにより活性化され,IFN-γを組織中で産生することを示している.すなわち,強皮症病変部でのフラクタルカインの発現は,血管内皮傷害と皮膚におけるTh1型の免疫反応を惹起していると考えられる,強皮症の病態形成にフラクタルカインが深く関与していると考えられた。全身性強皮症(SSc)は皮膚をはじめ肺,食道などの硬化を来す自己免疫疾患である.その病因は不明であり,有効な予防法も治療法も確立されていない.我々は血管内皮細胞上に発現するケモカインであるfractalkineのreceptor (CX3CR1)を世界に先駆けて同定し,CD14+単球,CD16+NK細胞,CD8+T細胞上に発現していること,およびfractalkineが従来のケモカインと異なり接着分子として作用することを報告した.今回,NK細胞の血管内皮細胞との接着や内皮傷害におけるfractalkineの関与を検討した.1)可溶型fractalkineはfibonectinやICAM-1に対するNK細胞接着を増強した.2)fractalkine遺伝子を導入した血管内皮細胞は,NK細胞との接着を増強した.3)fractalkineは濃度依存性にNK細胞の顆粒放出を増強し抗腫瘍細胞殺傷能を増強した.4)NK細胞はfractalkine発現細胞を著明に殺傷した.これらの結果は,炎症反応により産生されたサイトカインで活性化した血管内皮細胞がfractalkineを発現し,NK細胞やCD8陽性T細胞の接着増強を誘導すること,その際に活性化細胞により血管内皮細胞が傷害されること,遊送した細胞はfractalkineにより活性化され,IFN-γを組織中で産生することを示している.すなわち,強皮症病変部でのフラクタルカインの発現は,血管内皮傷害と皮膚におけるTh1型の免疫反応を惹起していると考えられる.強皮症の病態形成にフラクタルカインが深く関与していると考えられた,これらの結果をもとに,皮膚や組織の硬化におけるフラクタルカインの役割を引き続き検討中である.全身性強皮症(SSc)は皮膚をはじめ肺,食道などの硬化を来す自己免疫疾患である.その病因は不明であり,有効な予防法も治療法も確立されていない.我々は血管内皮細胞上に発現するケモカインであるfractalkineのreceptor(CX3CR1)を世界に先駆けて同定し,CD14+単球,CD16+NK細胞,CD8+T細胞上に発現していること,およびfractalkineが従来のケモカインと異なり接着分子として作用することを報告した.

今回,NK細胞の血管内皮細胞との接着や内皮傷害におけるfractalkineの関与を検討した.1)可溶型fractalkineはfibonectinやICAM-1に対するNK細胞接着を増強した.2)fractalkine遺伝子を導入した血管内皮細胞は,NK細胞との接着を増強した.3)fractalkineは濃度依存性にNK細胞の顆粒放出を増強し抗腫瘍細胞殺傷能を増強した.4)NK細胞はfractalkine発現細胞を著明に殺傷した.これらの結果は,炎症反応により産生されたサイトカインで活性化した血管内皮細胞がfractalkineを発現し,NK細胞やCD8陽性T細胞の接着増強を誘導すること,その際に活性化細胞により血管内皮細胞が傷害されること,遊送した細胞はfractalkineにより活性化され,IFN-_γを組織中で産生することを示している.すなわち,強皮症病変部でのフラクタルカインの発現は,血管内皮傷害と皮膚におけるTh1型の免疫反応を惹起していると考えられる.強皮症の病態形成にフラクタルカインが深く関与していると考えられた.全身性強皮症(SSc)は皮膚をはじめ肺,食道などの硬化を来す自己免疫疾患である.その病因は不明であり,有効な予防法も治療法も確立されていない.我々は血管内皮細胞上に発現するケモカインであるfractalkineのreceptor(CX3CR1)を世界に先駆けて同定し,CD14+単球,CD16+NK細胞,CD8+T細胞上に発現していること,およびfractalkineが従来のケモカインと異なり接着分子として作用することを報告した.前年度に続き,NK細胞の血管内皮細胞との接着や内皮傷害におけるfractalkineの関与およびインターフェロンガンマ産生における効果を検討した.1)可溶型fractalkineはfibonectinやICAM-1に対するNK細胞接着を増強した.2)fractalkine遺伝子を導入した血管内皮細胞は,NK細胞との接着を増強した.3)fractalkineは濃度依存性にNK細胞の顆粒放出を増強し抗腫瘍細胞殺傷能を増強した.4)NK細胞はfractalkine発現細胞を著明に殺傷した.これらの結果は,炎症反応により産生されたサイトカインで活性化した血管内皮細胞がfractalkineを発現し,NK細胞やCD8陽性T細胞の接着増強を誘導すること,その際に活性化細胞により血管内皮細胞が傷害されること,遊送した細胞はfractalkineにより活性化され,IFN-γを組織中で産生することを示している.すなわち,強皮症病変部でのフラクタルカインの発現は,血管内皮傷害と皮膚におけるTh1型の免疫反応を惹起していると考えられる.強皮症の病態形成にフラクタルカインが深く関与していると考えられた。
ＢｉｒｔーＨｏｇｇーＤｕｂｅ症候群のＦＬＣＮ遺伝子解析と肺嚢胞形成分子機構の解明

気胸・多発性肺嚢胞を契機にBHDSが疑われた日本人Birt-Hogg-Dube症候群(BHDS)患者のFLCN遺伝子診断を継続して行い、診断症例数は200例を超えた。日本人に多い変異はexon11のc.1285dupC、exon12のc.1347_1353dupCCACCCT、exon13のc.1533_1536delGATGであった。本邦初の変異、ゲノム欠失の症例も複数確認した。BHDS患者とコントロールの肺線維芽細胞を比較したところ、増殖能は差はなかったが、BHDS線維芽細胞の遊走能は低下していた。フォリキュリン遺伝子発現量には差はなかったが、蛋白量はコントロールに比べ有意に減少していた。遺伝子変異が見られなかった患者13人に対してはゲノム欠失の有無をリアルタイムPCRを用いて評価したが、いずれもゲノム欠失例は見られなかった。BHDS症例の気胸手術時に切除される肺組織の一部から11例、原発性肺癌により肺葉切除術を受ける症例の非癌部肺組織の一部から9例(コントロール)、肺線維芽細胞を培養し、増殖能、遊走能とゲル収縮能を検討した。その結果、増殖能はBHD症例とコントロールで差はなかったが、コントロールに比べBHDS線維芽細胞の遊走能は有意に低下していた。BHDS症例肺線維芽細胞におけるFLCNの発現を検討したところ、リアルタイムPCR法による遺伝子発現解析ではコントロールとの間に有意差を認めなかったが、ウエスタンブロット法によりFLCN蛋白量を検討した結果ではコントロールに比べ有意に減少していた。一方、TGF-β、Fibronectin1、COL1A2などの細胞遊走能や接着に関与する遺伝子についてBHDS肺線維芽細胞で有意な発現量の低下を認め、さらにTGF-β、Fibronectinについては培養上清中の蛋白量の減少も確認できた。ヒト胎児肺線維芽細胞株HLF-1を用いshRNAによるFLCN遺伝子ノックダウンを行った結果、増殖能には影響はなかったが遊走能が有意に低下した。一方、HLF-1に野生型FLCNを過剰発現させると遊走能が亢進したが、変異型FLCNを過剰発現させても変化はなかった。気胸・肺嚢胞を契機にBHD症候群が疑われた日本人Birt-Hogg-Dube症候群(BHDS)患者のFLCN(フォリキュリン)遺伝子検査を継続して行い、診断症例総数は220例を超えた。BHDS症例の気胸手術時に切除される肺組織の一部から11例、原発性肺癌により肺葉切除術を受ける症例の非癌部肺組織の一部からコントロールとして9例、肺線維芽細胞を培養した。これらの肺線維芽細胞を用いて増殖能、遊走能とゲル収縮能を検討した。その結果、増殖能にはBHD症例とコントロールで差はなかったが、コントロールに比べBHDS線維芽細胞の遊走能は有意に低下していた。BHDS症例の肺線維芽細胞におけるFLCNの発現を検討したところ、リアルタイムPCR法による遺伝子発現解析ではコントロールとの間に有意差を認めなかったが、ウエスタンブロット法によりFLCN蛋白量を検討した結果ではコントロールに比べて有意に減少していた。ヒト胎児肺線維芽細胞株HLF-1を用いてshRNAによるFLCN遺伝子ノックダウンを行った結果、増殖能には影響はなかったが遊走能が有意に低下する事を確認した。分子生物学遺伝子検査の検体は全国から定期的に寄せられており、診断症例数を順調に増やすことができた。また、DHPLC法とダイレクトシーケンス法よりもハイスループットな診断法を求め、現在既にFLCN変異が確定した患者ゲノムに対してMLPA法とFLCNタンパク質のウエスタンブロットを行い、結果の正確性と迅速性及び再現性などについての検討を行うことが出来た。遺伝子検査の検体は全国から定期的に寄せられており、診断症例数を順調に増やすことができた。また本年度は、BHDS症例の肺線維芽細胞と肺癌患者の非癌部肺線維芽細胞を用いた増殖能、遊走能とゲル収縮能の比較検討や、細胞遊走能や接着に関与する遺伝子の発現量測定など、新しい試みも行う事ができた。BHDS患者肺線維芽細胞、shRNAによりFLCN遺伝子をノックダウンした肺線維芽細胞、変異型FLCN遺伝子を過剰発現させた肺線維芽細胞らについて遺伝子発現プロファイルを網羅的に解析する。

24年度に線維芽細胞の増殖に関わるTGFβシグナルに関連のあるサイトカイン(TGFβ1&2、TGFβreceptor、inhibin βA chain、SMAD3など)や細胞外基質タンパク質(collagen、elastin、fibronectinなど)をリアルタイムPCR法で検討し、BHDS患者肺線維芽細胞と対照肺線維芽細胞ではそれら分子の発現がやや異なる傾向を認めた。今後は、FLCN遺伝子発現が影響する他の分子を広く同定する目的で、発現解析用マイクロアレイにより遺伝子発現プロファイルを明らかにする。日本人BHDS症例で高頻度に検出される4種類の変異型FLCN遺伝子(exon7のc.769_771delTCC、exon11のc.1285dupC、exon12のc.1347_1353dupCCACCCT、exon13のc.1533_1536delGATGの4種類)をクローニングし、コントロール肺線維芽細胞あるいはHFL-1に強制発現させ細胞機能への影響を検討する。変異型FLCN遺伝子を発現させた対照肺線維芽細胞あるいはHFL-1の機能(遊走、ゲル収縮能、増殖能)を検討し、野生型FLCN遺伝子を対照として過剰発現させたHFL-1の細胞機能と比較検討する。BHDS患者肺線維芽細胞、shRNAによりFLCN遺伝子をノックダウンした肺線維芽細胞、変異型FLCN遺伝子を過剰発現させた肺線維芽細胞らについて遺伝子発現プロファイルを網羅的に解析する。急遽産休者の業務代行となったため、予算を大きく考えていた細胞培養実験及びマイクロアレイ実験を予定通りに行えなかった。本年度実施を計画していた細胞培養実験、マイクロアレイ実験を行う予定である。BHD症候群患者のFLCN遺伝子診断は本年度も継続して行うため、PCR、DHPLC、DNAシーケンス、リアルタイムPCRなど診断に必要な一連の試薬を購入する(80万程度)。FLCN遺伝子発現が影響する分子を網羅的に同定するため、アフィメトリクス社よりヒト遺伝子発現解析用マイクロアレイ及び試薬セットを購入する。
神経ペプチド(VIP)による免疫寛容の誘導と実験的ぶどう膜炎の抑制機構の解明

研究者は、近年免疫抑制物質として脚光を浴びている神経ペプチトの一種であるVIPに着目し、VIPを失明率の高いヒト難治性ぶどう膜網膜炎のモデルである、実験的自己免疫性ぶどう膜網膜炎(EAU)マウスに腹腔内投与し、検討を行った.VIPを腹腔内に投与するとEAUマウスが70%の割合で予防され,遅延型過敏反応も同時に抑制された.次にEAUが発症する前の7日間、発症した後の7日間に各々VIPを腹腔内投与したところ,陽性対照群と比較して両群ともに同程度の割合でEAUが抑制可能であった。またVIPとともに培養したマクロファージは,そのマクロファージを腹腔内移入されたEAUの発症を抑制でき,遅延型過敏反応も抑制することができた.一方,VIPで刺激されたマクロファージでは,膜表面の補助刺激分子の一種であるB7分子が抑制されている傾向にあった,VIPによるEAUの抑制は過去の他の自己免疫疾患モデルの系からTh2細胞の関与が予想されたため,WP刺激マクロファージからのIL-10産生の測定を試みたが有意な結果は得られなかった。これらの結果より,1)前房水成分の一種であるVIPは,遅延型過敏反応を抑制できることから抗原特異的な免疫抑制が働いていると考えられ,眼内という局所においても炎症を抑制することが可能であり,2)EAUが発症してからもVIPによる抑制がかかることから,ヒト難治性ぶどう膜網膜炎の治療に応用できる可能性がより広がったと考えている.さらに3)VIPを用いたマクロファージによる治療によりEAUが抑制できることから,VIPが細胞を介して抑制に働くことが解明されただけではなく,ヒトぶどう膜網膜炎に対する細胞治療にまで応用できると思われる.神経ペブチドであるVasoactive intestinalpeptide(VIP)は前房水中に存在していることが知られており、Th1型T細胞の増殖反応を抑制することが近年明らかとなってきた。今回我々はVIPを用いて実験的自己免疫性ぶどう膜網膜炎(EAU)の抑制効果について検討を行った。実験方法として、網膜抗原であるIRBPの合成ベブチドをCFAとともにC57BL/6マウスに免疫し同日より1日おきにVIPの腹腔内投与を行い、また他の実験ではIRBP免疫後8日目よりVIPの投与を開始した。対照群に対してはPBSを投与した。免疫後21日目に屠殺し眼球を摘出、VIPの抑制効果について組織学的検討を行った。同時にTh1型T細胞の機能を反映するといわれているIRBPに対する遅延型過敏反応(DH)についてもVIP投与群および対照群について検討した。さらにVIPと共培養を行った腹腔内惨出マクロファージ(PEC)によるEAUの抑制効巣を検討した。実験結果は、対照群に比較してVIP投与群においてEAUの発症率および炎症スコアの有意な抑制が認められ、また免疫後8日目よりVIP投与した群でも同様の効果を認めた。またIRBPに対するDHの反応もVIP群にて有意な低下がみられた。さらにVIPと共培養を行ったPECを投与された群においてもEAUの発症抑制および軽減化がみられた。これらの実験データからVIPおよびVIP刺激PECはEAUの発症抑制および炎症の軽減効果を有すると考えられ、ヒト難治性ぶどう膜炎への臨床応用が期待された。これらの結果より,1)前房水成分の一種であるVIPは,遅延型過敏反応を抑制できることから抗原特異的な免疫抑制が働いていると考えられ,眼内という局所においても炎症を抑制することが可能であり,2)EAUが発症してからもVIPによる抑制がかかることから,ヒト難治性ぶどう膜網膜炎の治療に応用できる可能性がより広がったと考えている.さらに3)VIPを用いたマクロファージによる治療によりEAUが抑制できることから,VIPが細胞を介して抑制に働くことが解明されただけではなく,ヒトぶどう膜網膜炎に対する細胞治療にまで応用できると思われる.
がん患者のコントロール感覚を支える看護介入の検討〜看護者が捉えるがん患者のコントロール感覚の実態と課題〜

看護者が、治療を受けたがん患者のコントロール感覚をどのように捉え、看護を提供しているかを明らかにし、さらにがん患者のコントロール感覚を支える看護援助に関しての課題を明らかにするために、以下のことを行った。まず、昨年度のインタビューの結果を踏まえて、インタビューガイドの見直しを行い、看護者が捉えるがん患者のコントロール感覚と提供している看護を明らかにするためのインタビューガイドを作成した。そして、がん看護に3年以上携わっており、経験年数5年以上の看護職者に対して個別に半構成的な面接を行った。データの逐語録を作成し、看護者が捉えているがん患者のコントロール感覚、および提供している看護に関係する内容を抽出して分析を行った。看護者は、がん患者が自分のペースで自分らしく闘病できることが力を発揮できることにつながると捉えており、患者のその人らしさを理解し、その人のペースを守るために、看護の基本的な技術を駆使しようと奮闘していた。さらに、患者とともに目標を共有すること、目標に向かって患者とともに取り組む姿勢が重要であると認識していることが明らかになった。一方で患者が力を発揮できるような関わりができていないと感じている看護者も多く、自分自身の行っている看護に自信が持てない現状が浮き彫りにされた。がん患者のコントロール感覚を支える看護援助を明確にしていくためには、看護者自身が行っている看護を振り返り、患者にとってもたらす意味や効果を考える機会を作り出していくことが重要であろう。看護者が、治療を受けたがん患者のコントロール感覚をどのように捉え、看護を提供しているかを明らかにするために、以下のことを行った。まず、がん患者の体験に関する国内外の書籍、またがん看護に関する国内外の文献および平成11年12年にがん患者から収集したデータを基礎資料として、看護者が捉えるがん患者のコントロール感覚と提供している看護を明らかにするためのインタビューガイドを作成した。そして、がん看護の専門家3名に対して個別に半構成的な面接を行った。看護者はがん患者が自分らしく闘病できることが力を発揮できることにつながると捉えており、患者の自分らしさを理解するために、看護の基本的な技術を駆使していることが明らかになった。がん患者のコントロール感覚を支えるためには、日常的に行っている看護の意味を熟慮していくことの重要性が示唆された。次年度は、現在の分析をさらに進めながら、対象者数を20名程度まで増やして、がん患者のコントロール感覚を支える看護援助に関しての課題を明らかにしていくことを計画している。