hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
日本の国際関係論における「ゆがみ」の発見とその意味-「観察批判論」からの接近

初年度の平成30年度には、2000年度以降に刊行された日本国際政治学会編集の『国際政治』に掲載された論文のうち、コーディング結果の最終判断を残し、2015年から2011年までの掲載論文の全てにつきコーディングを完了させた。これに加えて、当該論文の著者の経歴(CV)データも収集した。理論パラダイムや方法論の分布と研究課題の分布の関係性についての本格的なデータ解析および、他国のデータとの比較やTRIPサーベイ・データとの比較は、これからであるが、特定の理論パラダイムに依拠しない研究が多いことや、理論を記述するための道具としてのみ使う論文が多いことなど、幾つかの特徴は可視化された。また昨年度は、合計で4回の研究打ち合わせを行った。まず7月末に、研究補佐員を対象とするコーディング研修を実施し、それと並行して、研究代表者と研究分担者の間で第1回の研究打ち合わせを開催した。そして11月初頭には、連携研究者も交えて、第2回の研究打ち合わせを日本国際政治学会年次大会と併せて開催し、データ構築の進捗状況を確認するとともに、各自の研究テーマに関して意見交換を行った。さらに11月末には、研究代表者および研究分担者がベルリン自由大学に赴き、同大学で同類の研究を行っている研究者と意見交換を行った。その結果、今後日本とドイツの比較分析を共同で実施し、その成果を本年度新潟県で開催される日本国際政治学会年次大会の部会で発表することが合意された。これを受けて、同学会の企画委員会に研究報告の企画案を提出したところ、審査の上承認された。年度末には、初年度の研究成果の総括を行うため、連携研究者を交えて研究会を開催し、今後の研究の進め方について意見交換を行った。引用文献のコーディングまでは、手が回らなかった。また2017-2018年のTRIPサーベイへの回答率が低かった(前回は190の回答に対し、今回は87の回答)ことが年度途中に判明したことにより、理論パラダイムの分布と回答者が重視する研究者の国籍分布との関係や、米国起源の理論の日本の国際関係論研究への影響などを定量的に測定すること、そして日本が直面する外交課題への関心が研究課題の選択に与える影響を定量的に評価することは容易ではなくなった。また人道支援と環境問題などに関する傾向についても、最新のTRIPサーベイのデータを使うことで、どの程度確定的なことが言えるのかは不透明となった。けれども、本研究の中核にある『国際政治』の掲載論文のコーディングに関しては、順調に進んでいる。また、このデータに著者の経歴(CV)データが加わったことで、たとえば、著者の欧米への留学経験と特定の欧米起源の理論パラダイムを支持する傾向との関係や、大学院教育を受けた時期と依拠する方法論の傾向との関係などが明らかにされる可能性が生まれたことは、大きな収穫となった。またTRIPサーベイ・データに関しても、前回のものと組み合わせて使うことで、パターンに一貫性があるものと、そうでないものに分けることができると予測されるため、一貫性のあるものに関しては、日本が直面する外交課題への関心が研究課題の選択に与える影響を定量的に評価することは可能であろう。したがって、たとえば、安全保障への関心の程度と、非軍事的な問題領域を研究課題として選ぶ傾向との相関関係を測定することは可能であると考えらえる。何れにしても、その土台となる学術論文データが予定通り収集できたことの意義は大きい。本年度は、学術論文データ・セットを完成させ、それと過去2回のTRIPサーベイ・データを合わせることにより、(1)理論パラダイム・方法論の分布と研究課題の分布との関係、および(2)研究課題の分布と日本を取り巻く国際政治状況との関係について解析を行う予定である。とくに前者に関しては、客観的データである学術論文データと、主観的なデータであるTRIPサーベイ・データを比較し、両者の間の違いがどこにあるかを明らかにする。これと並行して定性的な分析も進め、夏季休暇中に本年度最初の研究会を開催し、各自の研究成果を共有する。本年度の前半は、上記の(1)と(2)の課題を中心に研究を進め、ベルリン自由大学の研究チームが実施する同類の研究プロジェクト(Global Pathways Project)で得られた結果との比較を、同プロジェクトのPIの協力を得て、行う。そして本年度10月には、このプロジェクトのPIであるベルリン自由大学のL.マチス氏を本研究課題の連携研究者として日本に招聘し、日独両研究チームの共同研究の成果を日本国際政治学会年次大会の「グローバル化する国際関係論研究における『ゆがみ』現象ー日独の比較からー」と題する部会で報告する。また本研究の連携研究者の1人である立命館大学の安高啓朗氏には、日本における批判理論研究の特色について上記のデータを基に分析していただき、分析結果を当該部会で報告していただくことを予定している。本年度の後半は、引用文献データの収集を行いつつ、環境および人道主義の分野などにおける定性的な分析を代表者、分担者および連携研究者のそれぞれが実施し、年度末に開催する研究会でその成果を報告する。

理論パラダイムや方法論の分布と研究課題の分布の関係性についての本格的なデータ解析および、他国のデータとの比較やTRIPサーベイ・データとの比較は、これからであるが、特定の理論パラダイムに依拠しない研究が多いことや、理論を記述するための道具としてのみ使う論文が多いことなど、幾つかの特徴は可視化された。また昨年度は、合計で4回の研究打ち合わせを行った。まず7月末に、研究補佐員を対象とするコーディング研修を実施し、それと並行して、研究代表者と研究分担者の間で第1回の研究打ち合わせを開催した。そして11月初頭には、連携研究者も交えて、第2回の研究打ち合わせを日本国際政治学会年次大会と併せて開催し、データ構築の進捗状況を確認するとともに、各自の研究テーマに関して意見交換を行った。さらに11月末には、研究代表者および研究分担者がベルリン自由大学に赴き、同大学で同類の研究を行っている研究者と意見交換を行った。その結果、今後日本とドイツの比較分析を共同で実施し、その成果を本年度新潟県で開催される日本国際政治学会年次大会の部会で発表することが合意された。これを受けて、同学会の企画委員会に研究報告の企画案を提出したところ、審査の上承認された。年度末には、初年度の研究成果の総括を行うため、連携研究者を交えて研究会を開催し、今後の研究の進め方について意見交換を行った。引用文献のコーディングまでは、手が回らなかった。また2017-2018年のTRIPサーベイへの回答率が低かった(前回は190の回答に対し、今回は87の回答)ことが年度途中に判明したことにより、理論パラダイムの分布と回答者が重視する研究者の国籍分布との関係や、米国起源の理論の日本の国際関係論研究への影響などを定量的に測定すること、そして日本が直面する外交課題への関心が研究課題の選択に与える影響を定量的に評価することは容易ではなくなった。また人道支援と環境問題などに関する傾向についても、最新のTRIPサーベイのデータを使うことで、どの程度確定的なことが言えるのかは不透明となった。けれども、本研究の中核にある『国際政治』の掲載論文のコーディングに関しては、順調に進んでいる。また、このデータに著者の経歴(CV)データが加わったことで、たとえば、著者の欧米への留学経験と特定の欧米起源の理論パラダイムを支持する傾向との関係や、大学院教育を受けた時期と依拠する方法論の傾向との関係などが明らかにされる可能性が生まれたことは、大きな収穫となった。またTRIPサーベイ・データに関しても、前回のものと組み合わせて使うことで、パターンに一貫性があるものと、そうでないものに分けることができると予測されるため、一貫性のあるものに関しては、日本が直面する外交課題への関心が研究課題の選択に与える影響を定量的に評価することは可能であろう。したがって、たとえば、安全保障への関心の程度と、非軍事的な問題領域を研究課題として選ぶ傾向との相関関係を測定することは可能であると考えらえる。何れにしても、その土台となる学術論文データが予定通り収集できたことの意義は大きい。本年度は、学術論文データ・セットを完成させ、それと過去2回のTRIPサーベイ・データを合わせることにより、(1)理論パラダイム・方法論の分布と研究課題の分布との関係、および(2)研究課題の分布と日本を取り巻く国際政治状況との関係について解析を行う予定である。
軟骨細胞におけるRGD構造を持つコラーゲン結合蛋白(RGD-CAP)の発現と機能

本研究は,細胞とコラーゲンとの相互作用を仲介する蛋白としてのRGD-CAPの軟骨細胞増殖分化における役割探究を目的としており,これまでに以下のことを明らかにした。(1)ニワトリ胸骨軟骨cDNAライブラリーからRGD-CAPの完全長cDNAを単離し,全塩基配列を決定した。ニワトリRGD-CAPのcDNAは680個のアミノ酸に翻訳され,4つの繰り返し構造を持ち,またC端近傍にはインテグリン認識部位であるRGD配列が存在した。(2) recombinantRGD-CAP蛋白を大腸菌で発現させ、それに対する抗血清を用いたWestern blot法によってニワトリ胸骨軟骨培養細胞について調べた結果、Conditioned Medium中でのRGD-CAP量はTGF-β添加により経時的に増加し,先にブタ軟骨細胞で観察されたTGF-βによるmRNAの増加と一致した。ニワトリ胚の頚椎において軟骨が分化する過程でRGD-CAPは基質形成層から肥大層にかけて多く分布していた。(3) I型、II型,III型,V型コラーゲンを共存下でrecombinant RGD-CAPのウサギ関節軟骨細胞の伸展に対する影響と初期接着に対する影響を検討したところ,細胞の初期接着にはRGD-CAPとコラーゲンはそれぞれ独立して作用するが、細胞伸展には両者が協調的に作用して細胞外基質の高次構造を改変し、効果を発揮していると考えられた。(4)これらの作用はEDTAで阻害され、2価の金属イオンにより亢進し,RGD-CAPの細胞接着及び細胞伸展促進作用はインテグリンを介すると推察された。(5)各種,抗インテグリン抗体を用いた実験により、RGD-CAPは細胞と直接結合し,細胞膜上のレセプターとしてα1,α5,β1インテグリンを介することがすることが判明した。(6)異なる数のる繰り返し構造を持つrecombinant RGD-CAPタンパク断片を用いることにより、4個の繰り返し構造のうち特に2個の繰り返し構造が重要であることが判明した。本研究では,軟骨細胞においてコラーゲン線維や他の接着分子に結合して,細胞と細胞外との間のシグナル伝達などに関与し細胞機能を制御している可能性を持つ新しい蛋白としてRGD-CAP(RGD-containing collagen-associated protein)と命名した64-66kDa蛋白に注目し、その構造解析および機能解明を行ってきた。これまでブタ軟骨細胞よりコラーゲン結合性蛋白として単離されたRGD-CAPの部分アミノ酸配列はヒトで見いだされたTGFβ誘導性の蛋白(βig-h3)と類似性が高い事が判明したのでこの塩基配列に基づきPCRプライマーを設計し、ブタ軟骨細胞由来のmRNAを用いRT-PCR反応によるcDNA断片を得、これをプローブとしてブタおよびニワトリ軟骨細胞cDNAライブラリィからそれぞれ完全長のcDNAを得、それらの全構造を決定している。これまで構造解析から、この分子種の一次構造はヒト、マウス、ブタ,ニワトリで非常に高く、この分子が生体において重要な未知の機能を持っている蛋白であることを示している。これらのcDNAを用いて大腸菌での発現系で大量の発現蛋白を得ることにも成功している。今後、これらのcDNAや発現蛋白を用いて主にブタ、ウサギ、およびニワトリの肋軟骨及び肋軟骨細胞培養系について以下のような手順で研究を進める予定である。1.発現蛋白に対する抗体を作製し、免疫染色による組織分布について調べる。2.発現蛋白とコラーゲンやその他の細胞外基質分子との結合性の相互作用を調べる。

3.発現蛋白をコラーゲンなどと組み合わせて培養容器をコートしたものへの軟骨細胞の接着性を調べる。4.他の様々な増殖因子などによるRGD-CAP分子の調節機構について検討する。本研究は,細胞とコラーゲンとの相互作用を仲介する蛋白としてのRGD-CAPの軟骨細胞増殖分化における役割探究を目的としており,これまでに以下のことを明らかにした。(1)ニワトリ胸骨軟骨cDNAライブラリーからRGD-CAPの完全長cDNAを単離し,全塩基配列を決定した。ニワトリRGD-CAPのcDNAは680個のアミノ酸に翻訳され,4つの繰り返し構造を持ち,またC端近傍にはインテグリン認識部位であるRGD配列が存在した。(2) recombinantRGD-CAP蛋白を大腸菌で発現させ、それに対する抗血清を用いたWestern blot法によってニワトリ胸骨軟骨培養細胞について調べた結果、Conditioned Medium中でのRGD-CAP量はTGF-β添加により経時的に増加し,先にブタ軟骨細胞で観察されたTGF-βによるmRNAの増加と一致した。ニワトリ胚の頚椎において軟骨が分化する過程でRGD-CAPは基質形成層から肥大層にかけて多く分布していた。(3) I型、II型,III型,V型コラーゲンを共存下でrecombinant RGD-CAPのウサギ関節軟骨細胞の伸展に対する影響と初期接着に対する影響を検討したところ,細胞の初期接着にはRGD-CAPとコラーゲンはそれぞれ独立して作用するが、細胞伸展には両者が協調的に作用して細胞外基質の高次構造を改変し、効果を発揮していると考えられた。(4)これらの作用はEDTAで阻害され、2価の金属イオンにより亢進し,RGD-CAPの細胞接着及び細胞伸展促進作用はインテグリンを介すると推察された。(5)各種,抗インテグリン抗体を用いた実験により、RGD-CAPは細胞と直接結合し,細胞膜上のレセプターとしてα1,α5,β1インテグリンを介することがすることが判明した。(6)異なる数のる繰り返し構造を持つrecombinant RGD-CAPタンパク断片を用いることにより、4個の繰り返し構造のうち特に2個の繰り返し構造が重要であることが判明した。
保育実践ビデオ映像記録批評による「良い保育」観の国際比較(日・英・独・米・仏語圏カナダ)

1.「保育実践」映像資料の回収イギリス、アメリカ、カナダの保育者養成者より、それぞれ(1)3-4歳児クラスの典型的一日の映像(約2時間-未編集)、(2)交換視聴用保育実践ビデオ(教員養成者の視点で(1)を35分前後に編集したもの)、計2本の提供を受けた。ビデオ制作(撮影・編集)技術上の巧拙や添付情報の多寡などから、「良い保育観」や「保育実践の質」に関して、各国から同質・同量の情報を得たとは言い難いが、目標をほぼ達成した。2.ビデオ交換視聴コメント収集海外の実践については、日本の保育者養成関係者より、一カ国につき1ないし3通のコメントを得た。日本については、ビデオ提供を受けた国から順に、交換視聴用ビデオ(東京の私立幼稚園3歳児クラスを取材、35分に編集)、英文資料、質問票を発送。ビデオ制作を断念したドイツからの2通を含め、平成10年3月までに、計11通の返答を得た。他方、同ビデオについては、日本の関係者より、その映像の「日本の保育としての典型」度や「『幼稚園教育要領』の体現」度に関わる疑義が提起された。3.ビデオ交換視聴を通しての異「保育文化」理解映像視聴をデータ収集の手段とした先行研究に、有名なトービンの「3つの文化の就学前教育機関」(TobinJ.J.;Pre-school in Three Cultures,1989.)がある。本研究においても、異文化社会の保育実践映像の視聴を通して、視聴者の「保育的価値」を語ってもらうことができ、「映像について語る」という方法の有効性は確認できた。しかも本研究では、研究者自らが外国に出向いて撮影・取材したトービンの場合と異なり、それぞれの保育文化を生きる者によって映像が提供されている。いわば、自画像の相互批評だったわけで、参加各国の情報提供者にとっても、異文化の眼を通して己の「保育的価値」を省察する機会となった。1.研究対象4ヶ国の情報提供者(保育者・教員養成官と現場保育者)に宛て英文研究趣意書を作成。情報提供者を選定し、承諾を得た。研究の進展状況は以下の通り。(1)カナダ、アメリカは、留学中の日本人研究者(以下、協力者)に研究計画の論評と、情報提供者の選定、計画遂行時の連絡一切について協力を依頼。安全確保等の理由から、市販・私製を問わず子どもの映像資料の入手は困難なこと、日本に存在するような保育者養成向け市販ビデオはないなどの情報を得た。しかし協力者の築いた人脈に加えて、本研究の目的や保育実践のビデオ映像資料交換に対する関心は高く、平成8年10月までに適当な養成校教官を、平成9年1月までに映像取材現場を確保。2月3月に撮影と編集完了。(2)英・独については、申請者自身が9月の定期試験期間中に渡航。ロンドン大学教育学部元児童発達学科長オードリー・カ-チス氏と、ドイツ青少年研究所の上級研究員エルシェンブロイヒ博士に研究計画のレビューと情報提供者の選定を依頼。両氏の論評内容は録音。撮影許可は問題ないが、両国の保育者養成事情、撮影・編集機材の普及度の低さなどから、人材上の難しさを指摘された。イギリスでは予算の許す範囲でプロ・カメラマンの技術を導入。ドイツは、教官との連絡が帰国後に途絶え、大きく立ち遅れたことと、提示された報酬相場額と計画全体の予算額の都合から、研究計画の第2年次分のみの参加を促す。2.各国の保育・保育者養成事情の文書資料は、米・加・英・独とも必要十分に収集済み。申請者がレビュー受けた際には、口頭情報や関係文書の提供も受けた。3.日本の保育実践ビデオは最新のデジタル・ビデオ・カメラを購入。3月に申請者が協力園に通い、撮影完了。予想以上に鮮明な映像で、保育の日常を収録できた。編集は次年度早々、申請者自前の機材で行なう予定。ヨーロッパのパル方式への変換およびその逆変換については、マルチ・ビデオ・デッキを購入ずみ。

本研究においても、異文化社会の保育実践映像の視聴を通して、視聴者の「保育的価値」を語ってもらうことができ、「映像について語る」という方法の有効性は確認できた。しかも本研究では、研究者自らが外国に出向いて撮影・取材したトービンの場合と異なり、それぞれの保育文化を生きる者によって映像が提供されている。いわば、自画像の相互批評だったわけで、参加各国の情報提供者にとっても、異文化の眼を通して己の「保育的価値」を省察する機会となった。
初代クェーサー探査による超巨大ブラックホールの形成と宇宙再電離の研究

本研究では、すばる望遠鏡の大集光力と広視野撮像機能、及び特殊なフィルターを組み合わせることによって初期宇宙に存在するクエーサーの探査を主眼においた。これまでの観測によって、暗い赤方偏移6付近の遠方QSOを2つ発見した。これは従来の典型的なQSOよりも100倍暗い種族であり、形成途上のものである可能性が高い。同時に光度関数の暗い側を決定するためのよいサンプルであり、サーベイの有効体積を詳細に計算することで、ブラックホールの形成モデルに制限を与える可能性がある。関連して、初期大規模構造、銀河間物質についての観測研究においても新たな知見を得た。本研究では、A)赤方偏移6.5を超える超遠方QSOの発見、B)赤方偏移6付近の遠方QSOの特に暗い種族を多数検出すること、の2大目的を達成するために、すばる望遠鏡の1)大集光力と2)広視野撮像機能、及び3)特殊なフィルターを用いる。この3つの有効な手段を組み合わせる手段を持っているのは現在われわれのグループだけである。われわれは、本研究のための予備観測として、実際にすばる望遠鏡の観測時間を獲得し、その実効性の検証を行ってきた。残念ながら平成23年、すばる望遠鏡にて不慮の事故があり、本研究の手法の有効性を確認する予備観測が実行されないまま終了してしまった。この研究進行の遅れをとりもどすため、平成23年度分科研費を繰り越した上、平成24年初頭に他の望遠鏡(ケック望遠鏡・VLT)を用いた観測を行った。このうちVLTの観測においては天候不順により予定されていた観測を行えないまま終了してしまったが、ケック望遠鏡における観測においては天候にも恵まれ1つの明らかな赤方偏移6の遠方QSOを発見することができた。このQSOはこれまで発見された同時代のQSOに比べて5等も暗いもので、成長過程の超巨大ブラックホールを内包している可能性がある。今後の観測次第では、超巨大ブラックホールの成長モデルに制限をつけることが期待される。また再電離のトポロジーに関わる重要な問題として最遠方にある原始銀河団を発見することができた。30個以上の赤方偏移6に位置するメンバー銀河候補を持つこの高密度領域において少なくとも8個の銀河について分光同定することに成功した。この銀河団はこれまで発見された銀河団の中で最遠方に存在するものである。この銀河団内の速度構造を調べたところ、非常に未発達の銀河団とも、既に十分発達した銀河団とも、両方の解釈の成り立つユニークなものであることがわかった。本研究では、1.赤方偏移6.5を超える超遠方QSOの発見、2.赤方偏移6付近の遠方QSOの特に暗い種族を検出すること、の2つの目的を達成するために、すばる望遠鏡の(1)大集光力と(2)広視野撮像機能、及び(3)特殊なフィルターを用いるという、この3つの有効な手段を組み合わせる手段を持っているのは現在、研究代表者のグループだけである。研究代表者らは、本研究のための予備観測として、これまでにすばる望遠鏡/ケック望遠鏡/VLTの観測時間を獲得し、その実効性の検証を行ってきた。これまでの観測によって、暗い赤方偏移6付近の遠方QSOを2つ発見し、平成25年度はこの発見の統計的信頼度、サンプルの完全性の検証、独立な選択法による検証、初期宇宙における個数密度の評価などを行った。この成果についていくつかの学会で成果発表を行った。この2個のQSOについて近赤外追観測を行い、MgII輝線の線幅からブラックホール質量の決定を試みたが、残念ながら天候に恵まれず、この観測の成果は得られなかった。引き続きこの方向性を追求してゆく。また、遠方QSOの形成に大きく関与する初期大規模構造の観測について一定の成果が挙がり、海外研究者と協力した理論モデル予測との比較も加えて現在論文を執筆中である。遠方QSOを用いた吸収線系の研究について論文を発表した。平成26年3月からはいよいよ本観測が開始され、平成26年度中にある一定のデータが獲得される予定であるが、内外の研究者と詳細なサーベイ計画の立案、画像処理の問題点の洗い出し、有効な選択方法の開発と確立、追観測の方針決定などについて議論を重ねた。これらの検討では本観測における研究代表者らの行ってきた予備観測での経験が活かされた。特に有効な選択方法については、新しい手法の開発にほぼ成功し、この手法によってより完全なサンプルの獲得できることを立証し、赤方偏移3-5にかけてのQSOにも十分適用できることを示した。本研究では、A)赤方偏移6.5を超える超遠方QSOの発見、B)赤方偏移6付近の遠方QSOの特に暗い種族を検出すること、の2大目的を達成するために、すばる望遠鏡の1)大集光力と2)広視野撮像機能、及び3)特殊なフィルターを用いる。

この3つの有効な手段を組み合わせる手段を持っているのは現在われわれのグループだけである。われわれは、本研究のための予備観測として、実際にすばる望遠鏡/ケック望遠鏡/VLTの観測時間を獲得し、その実効性の検証を行ってきた。平成23年度にはすばる望遠鏡にて不慮の事故があり、本研究の手法の有効性を確認する予備観測が未実行で終了してしまったが、平成24年度には、他の望遠鏡(ケック望遠鏡・VLT)を用いた観測を行い、暗い赤方偏移6付近の遠方QSOを2つ発見した。この成果についていくつかの学会で成果発表を行った。これは従来の典型的なQSOよりも100倍暗い種族であり、形成途上のものである可能性が高く、QSOおよびブラックホールの形成モデルに強い制限を与える可能性がある。同時に光度関数の暗い側を決定するためのよいサンプルであり、サーベイの有効体積を詳細に計算することで、ブラックホールの形成モデルに制限を与える可能性がある。さらに、この2個のQSOについて近赤外追観測を行えばMgII輝線の線幅からブラックホール質量を決定することができるため、このための来年度のすばる観測時間を獲得した。また、効率的な新観測装置を用いてその手法を大規模かつ系統的に応用する本観測の準備に向けて内外の研究者と討議を繰り返し、詳細なサーベイ計画を立案し、計画提案書の作成に参加した。われわれの行ってきた予備観測での経験を基に、色選択の不定性や、混入天体の性質、狭帯域の有効活用のしかたなどについて予備研究を行った。本研究では、A)赤方偏移6.5を超える超遠方QSOの発見、B)赤方偏移6付近の遠方QSOの特に暗い種族を検出すること、の2つの目的を達成するために、すばる望遠鏡の1)大集光力と2)広視野撮像機能、及び3)特殊なフィルターを用いる。この3つの有効な手段を組み合わせる手段を持っているのは現在研究代表者らのグループだけである。研究代表者らは、本研究のための予備観測として、これまでにすばる望遠鏡/ケック望遠鏡/VLTの観測時間を獲得し、その実効性の検証を行ってきた。これまでの観測によって、暗い赤方偏移6付近の遠方QSOを2つ発見し、平成26年度は、この成果についていくつかの学会で成果発表を行うとともにこれまでの成果をまとめ学会誌に発表した。これは従来の典型的なQSOよりも100倍暗い種族であり、形成途上のものである可能性が高い。この2個のQSO以外にも、可能性の高い候補天体が3個存在するので、引き続き追観測を実行してゆく。初期大規模構造の観測については新たな広視野データにおける成果が挙がり、海外研究者と協力した理論モデル予測との比較も加えて現在論文執筆中である。本観測の初期データがリリースされ、最初の候補天体の選出を行った。これらは追観測による結果の確定を待っている状況である。これらの検討では本観測における研究代表者らの行ってきた予備観測での経験が活かされた。特に有効な選択方法については、新しい手法の開発にほぼ成功し、この手法によってより完全なサンプルの獲得できることを立証した。26年度が最終年度であるため、記入しない。銀河天文学26年度が最終年度であるため、記入しない。
分子デザインに基づくDNA折り畳みとクロマチン調節機構の解析

ヌクレオソームにおけるDNAの折り畳み現象を解明するため、溶液中でカチオン性凝縮剤を用いる長鎖DNAのコイル⇔グロビュール折り畳み相変化を用いてシミュレートする基礎研究を前年度に引き続き行った。凝縮剤の構造デザイン手法により、既に明らかにしているカチオン電荷の空間的な関係,疎水性相互作用,キラリティー,インターカレーションなどがもたらすDNA折り畳み過程の調整メカニズムに基づいて、より生物親和性の大きな物質であるプテリジン系化合物やオリゴペプチドによるDNA折り畳み活性を研究した。さらに、3価のポリアミンであるスペルミジンによるDNA折り畳みに対する、生体内に存在するナトリウムイオンやカリウムイオンなど+1価陽イオンの共存効果を研究した。結果として、プテリジン系DNA凝縮剤による強力なDNA折り畳みの機構や、分子内相分離中間体を経て折り畳まれる段階的機構、中間体を経ることなく一気に折り畳まれてしまうOn/Offスイッチ型機構の発現についての知見を得ることができた。ナトリウムイオンの存在はカリウムイオンより強くDNA折り畳みを阻害することが分った。これらの結果については既に一部論文に発表した。さらに生物親和性の大きなDNA折り畳み剤を創製するためにチロシン水酸化酵素などのタンパクと結合するプテリジンをベースにした化合物のデザインに着手した。その結果得られた成果を発表した。この他、キラリティーの違いがDNA折り畳み転移に及ぼす効果について、+2価から4価の電荷をもった様々にキラル修飾された凝縮剤を合成しその活性を調べた。一部アセチル化修飾したオリゴペプチドを使い、アセチル化がもたらすDNA折り畳み転移における効果を調べる研究に着手した。これらの結果については今後得られる結果と合わせて発表する予定である。ヌクレオソームにおけるDNAの折り畳み現象を解明するため、溶液中でカチオン性凝縮剤を用いる長鎖DNAのコイル⇔グロビュール折り畳み相変化を用いてシミュレートする基礎研究を行った。凝縮剤の構造デザイン手法により、既に明らかにしているカチオン電荷の空間的な関係,疎水性相互作用,キラリティー,インターカレーションなどがもたらすDNA折り畳み過程の調整メカニズムを研究した。DNA折り畳み活性の大きな4価のポリアミンであるスペルミンと活性の小さな2価の1,3-ジアミノプロパンにそれぞれ2種類のプテリジンを結合させて合成したプテリジン-ポリアミン複合体は、+電荷が1ずつ減少しているにも関らずもとのポリアミン同等以上の活性を示すことを明らかにした。さらにDNAにインターカレーションするプテリジン-ポリアミン複合体は、単独DNA分子鎖上に部分的に凝縮した状態を形成する分子内相分離中間体を経て折り畳まれるメカニズムを通ることを見出した。これらの結果については既に論文に発表した。インターカレーションのような二重ラセンへの結合がDNA折り畳みに及ぼす効果を理解するために、1,3-ジアミノプロパンの片方のアミノ基を選択的にアシル化した化合物を合成しその効果を検討中である。一方、キラリティーの違いがDNA折り畳み転移に及ぼす効果について、既に両光学異性体間で大きな差が見つかったポリアンモニウム凝縮剤の電荷を2価から4価に増やすと凝縮能における光学異性体間の差がなくなってしまうことを見出し論文発表した。このような現象が一般的なものかどうか、またDNAの凝縮に差を及ぼすキラル分子認識のメカニズムを明らかにするために異なるC2キラリティーをもったポリアミンを使い研究中である。

結果として、プテリジン系DNA凝縮剤による強力なDNA折り畳みの機構や、分子内相分離中間体を経て折り畳まれる段階的機構、中間体を経ることなく一気に折り畳まれてしまうOn/Offスイッチ型機構の発現についての知見を得ることができた。ナトリウムイオンの存在はカリウムイオンより強くDNA折り畳みを阻害することが分った。これらの結果については既に一部論文に発表した。さらに生物親和性の大きなDNA折り畳み剤を創製するためにチロシン水酸化酵素などのタンパクと結合するプテリジンをベースにした化合物のデザインに着手した。その結果得られた成果を発表した。この他、キラリティーの違いがDNA折り畳み転移に及ぼす効果について、+2価から4価の電荷をもった様々にキラル修飾された凝縮剤を合成しその活性を調べた。一部アセチル化修飾したオリゴペプチドを使い、アセチル化がもたらすDNA折り畳み転移における効果を調べる研究に着手した。これらの結果については今後得られる結果と合わせて発表する予定である。
不全心筋における細胞内情報伝達系と細胞内カルシウム動態の変化

心不全において収縮不全と拡張不全の原因となる筋小胞体機能異常について検討を行った。筋小胞体のCa取込みを司るATP依存性CaポンプであるSERCAを過剰発現させた遺伝子改変マウス(SERCA-TG)と、SERCA抑制タンパクであるサルコリピンを過剰発現させた遺伝子改変マウス(SLN-TG)を用いた。筋小胞体のCa取込み速度はSERCA-TGでは増大、SLN-TGでは低下した。両者とも筋小胞体の最大Ca貯蔵量やCa放出、Caリークは不変であった。収縮張力はSERCA-TGで増大、SLN-TGで低下した。Ca取込みの変化は筋小胞体のCa貯蔵や放出機能には影響しないことが明らかとなった。細胞内Ca2+動態は心筋興奮収縮連関の中心的な役割を果たしている。近年、心不全時には細胞内Ca2+動態異常が生じることが指摘されている。不全心筋では、Ca2+動態の障害により、心筋細胞内がCa2+過負荷となり心筋収縮・拡張不全が将来されることが示唆されている。しかし、心不全時の細胞内Ca2+動態の分子機構をより生理的な状態で調べた報告は少なく、未だ明らかでない点が多い。我々は、心不全モデル動物を作成し、対照群と比較することにより、心不全時に生じる細胞内Ca2+動態異常の分子メカニズムを解明することを目的としている。平成24年度は心不全モデルである横行大動脈狭窄による圧不可モデルマウスの作成を行い、作成法の確立に尽力した。心不全においてはレニンアンジオテンシン系が亢進し治療薬としてACE阻害薬が著効することが知られており、対照群マウスのアルドステロン、レニン、アンジオテンシンI、アンジオテンシンIIの測定を行った。測定した血中濃度(n=4)はそれぞれ、アルドステロン443±116 pg/ml、レニン15.75±6.652 ng/ml/時間、1375±330.4 pg/ml、2450±412.3 pg/mlであった。また、平成24年11月に米国ロサンゼルスで開催された米国心臓学会に参加することで、国内外の同じフィールドの研究者たちと討論する機会を得られた。対照群である正常マウスのデータを正確に採取し手法に習熟しておくことで、貴重な心不全モデルである横行大動脈狭窄による圧不可モデルマウスのデータを正確に採取することが可能になり、かつより精度の高い比較検討が可能とし心不全進展の分子メカニズムの解明に導くことにつながる。当初我々は、心不全モデル動物として横行大動脈狭窄による圧負荷モデルマウス作成を行い、対照群と比較することにより心不全時に生じる細胞内Ca2+動態異常の分子メカニズムを解明することを目的としていた。しかし、実験を行うに足るモデル動物を作成することができなかった。そこで、細胞内Ca2+動態に重要な役割を果たし、また、心不全時にはその機能変化から収縮・拡張障害や致死性不整脈発症が生じる事が示唆されている心筋筋小胞体の機能について検討を行った。心筋筋小胞体機能は主としてCa2+取り込みポンプであるSERCAと放出チャネルであるリアノジン受容体が司っている。このSERCA機能を低下させたマウスと亢進させたマウスを用いて、心筋筋小胞体におけるSERCAとリアノジン受容体の関係について評価した。心筋筋小胞体のCa2+取り込みを低下させたモデルとしてSERCAを抑制するタンパクであるサルコリピンを過剰発現させたマウスを、Ca2+取り込みを亢進させたマウスとしてSERCAを過剰発現させたマウスを用いて実験を行った。SERCA過剰発現マウスでは心筋筋小胞体のCa2+取り込み速度は上昇し、一方でサルコリピン過剰発現マウスでは心筋筋小胞体のCa2+取り込み速度は低下していた。しかし、両者とも心筋筋小胞体内の最大Ca2+量は不変であり、また、リアノジン受容体を介したCa2+放出、Ca2+リークも不変であった。以上から、心筋筋小胞体のCa2+取り込み速度の変化はCa2+放出には影響を与えないことが示された。この結果から、不全心筋においてSERCAの発現が低下したことにより心筋筋小胞体のCa2+取り込みが低下した際に、SERCAを治療のターゲットとすることで心筋筋小胞体のCa2+放出機能に影響を与えずに異常を来した細胞内Ca2+動態を改善できる可能性があることが示唆された。細胞内Ca2+動態は心筋興奮収縮連関の中心的な役割を果たしている.

近年,心不全時には細胞内Ca2+動態異常が生じることが指摘されている.不全心筋では,Ca2+動態の障害により,心筋細胞内がCa2+過負荷となり心筋収縮・拡張不全が招来されることが示唆されている.しかし,心不全時の細胞内Ca2+動態の分子機構をより生理的な状態で調べた報告は少なく,未だ明らかでない点が多い.我々は,心不全モデル動物を作成し,対照群と比較することにより,心不全時に生じる細胞内Ca2+動態異常の分子メカニズムを解明する事を目的としている.平成23年度は心不全モデル動物である横行大動脈狭窄による圧負荷モデルマウスの作成に難渋したため、作成法の確立に尽力したことと、対照群である正常マウスにおける心機能の評価を行った.対照群である正常マウスにおいて,(1)心エコーにより心機能評価を行った.正常マウス(n=6)では左室拡張末期径3.27±0.12 mm,左室収縮末期径1.90±0.13 mm,左室収縮率80.1±2.1%の所見であった.(2)多細胞乳頭筋標本による細胞内Ca2+動態及び収縮機能を評価した.Ca2+感受性発光タンパクエクオリンを正常マウス乳頭筋に圧注入して収縮張力と細胞内Ca2+濃度を同時測定したところ,正常マウス(n=8)では収縮張力2.71±0.23 mN/mm2,最大細胞内Ca2+濃度1.58±0.11uMであった.対照群である正常マウスのデータを正確に採取することが今後の心不全モデルとの比較検討を可能とし,それにより正常心機能から心不全へ進展する分子メカニズムの解明を導く.心不全モデル動物である横行大動脈狭窄による圧不可モデルマウス作成に難渋していることが達成を遅らせているが、ある程度のめどは立ってきている。対照群である正常マウスにおけるデータ採取は順調に進められており、また、米国心臓学会で得られた知見などをもとに新たな評価項目として、アルドステロン、レニン、アンジオテンシンI、アンジオテンシンIIの測定を行った。対照群である正常マウスにおけるデータの採取は(1)心エコーにより心機能評価を行い,左室拡張末期径,左室収縮末期径,左室収縮率及び内径短縮率などデータを評価できた.(2)Ca2+感受性発光タンパクであるエクオリンを正常マウス乳頭筋に圧注入して収縮張力と細胞内Ca2+濃度を同時測定することで,多細胞乳頭筋標本による細胞内Ca2+動態及び収縮機能を評価できた.また,本来平成24年度以降に行う予定であった(3)細胞内Ca2+動態に関わるCa2+関連タンパクのウエスタン免疫染色法を用いた生化学的評価も進めることができている.一方で,心不全モデル動物である横行大動脈狭窄による圧負荷モデルマウスの作成に難渋していることが研究の進行をやや遅らせている.平成24年度もある程度は予定した課題をクリアしていくことが可能であったが、やはり心不全モデル動物である横行大動脈狭窄による圧不可モデルマウス作成に難渋していることが達成を大きく遅らせてしまっていることは事実である。しかし、ある程度のめどは立ってきており、今後エフォート率を上げていくことで対応していく予定である。平成23年度は使用予定経費に残金が生じたが,平成24年2月に発注した試薬が3月末までに納入されなかったためであり,少額を除いては本来はほぼ予定通り使用できていたはずである.平成24年度については,対照群である正常マウスにおける心機能評価は予定通り進んでいるため,これまで通り進めていき,本年はサポニン処理スキンド標本を用いた筋小胞体機能の評価及び細胞内Ca2+動態に関わるCa2+
乾癬の発症におけるサイトカインの関与および治療への応用

乾癬病変部における好中球の表皮内浸潤は,乾癬およびその類縁画面に特徴的な現象であり,好中球の表皮への遊走を促す様々な因子解析が行われてきた.近年,リンパ球,マクロファージなどの炎症細胞だけでなく,表皮細胞,線維芽細胞,血管内皮細胞などの皮膚を構成している細胞も各種サイトカインを産生し,免疫反応に関与することが明らかになり,これらのサイトカインを含めたケミカル・メディエーターの解析も広範に行われるようになってきた.IL-8は,乾癬の病変形成の初期に好中球の表皮内への遊走に先行してみられる活性化されたTリンパ球の表皮内浸潤を促し,乾癬病変に特徴的である好中球の表皮内浸潤に中心的な役割を演じている。炎症の進行に伴い,病変部表皮内に浸透してきた血清中の補体成分の角層との接触により,補体系の主として第二経路が活性化され,強力な白血球遊走活性のあるC5aアナフィラトキシンを生じる.これらペプチド性白血球遊走因子以外に,アラキドン酸由来のLTB_4も病変部で産生され,乾癬病変部における炎症が増幅される。さらに,乾癬病変部では,単球遊走因子MCP-1も産生され,マクロファージの浸潤を促している。乾癬皮疹の局面内では病変は一様でなく,中央部は炎症反応が弱く,辺縁に行くに従い反応が激しくなる.Tリンパ球,好中球の遊走もそれに伴い消長がある。病変の拡大につれ,局所での炎症反応の推移があることをうかがわせる。乾癬病変部における好中球の表皮内浸潤は,乾癬およびその類縁疾患に特徴的な現場であり,好中球の表皮への遊走を促す様々な因子解析が行われてきた。近年,リンパ球,マクロファージなどの炎症細胞だけでなく,表皮細胞,線維皮細胞,血管内皮細胞などの皮膚を構成している細胞も各種サイトカインを産生し、免疫反応に関与することが明らかになり、これらのサイトカインを含めたケミカル、メティエーターの解析も広範に行われるようになってきた。IL-8は,乾癬の病変形成の初期に,好中球の表皮内への遊走に先行してみられる〓性化されたTリンパ球の表皮内浸潤を促し,乾癬病変に特徴的である好中球の表皮内浸潤に中心的役割を演じている。炎症の進行に伴い、病変部表皮内に浸透してきた血清中の補体成分との接触により、補体系の主として第二経路が活性化され、強力な白血球遊走活性のあるC5aアナフィラトキシンを生じる。これらペプチド性白血球遊走因子以外に,アラキドン酸由来のLTB_4も病変部で産生され、乾癬病変部における炎症が増幅される。さらに、乾癬病変部では,単球遊走因子MCP-1も産生され,マクロファジーの浸潤を促している。乾癬皮疹の局面内では、病変は一様ではなく,中央部は炎症が弱く,辺縁に行くに従い,反応が激しくなる。Tリンパ球,好中球の遊走もそれに伴いがある。
家族性パーキンソン病責任遺伝子産物LRRK2の膜局在性とその意義の解析

電子顕微鏡を用いた解析からLRRK2が細胞内で膜上に存在することは報告されているが、詳細な性状解析はなされていなかった。本研究において、LRRK2の一部は界面活性剤可溶画分に回収され、LRRK2阻害剤で細胞を処理すると、LRRK2がLAMP1陽性リング状構造物に集積した。また、chemical-inducedlocalization実験系を用い、LRRK2をオルガネラ膜上に強制的に移行させる実験系を確立した。家族性パーキンソン病の責任遺伝子のひとつであるLeucine-rich repeat kinase 2(LRRK2)は、可溶性タンパク質であるが、細胞内のミトコンドリアや輸送小胞などの膜上に局在することが知られている。しかしながら、膜局在の意義はよくわかっていない。LRRK2を過剰発現するHEK293細胞を細胞質画分と膜画分に分画したところ、いずれの画分にもLRRK2が存在することが確かめられた。また、それぞれの画分からLRRK2を免疫沈降し、そのキナーゼ活性を解析したところ、いずれの画分でも同程度の活性を有することが明らかになった。最終年度において、両画分に存在するLRRK2の二量体化をBlue-Native PAGE法により検討したが、特に差異は認められなかった。LRRK2の膜局在の意義を解析するため、低分子化合物であるAP21967依存的にLRRK2を膜に局在させるchemical-induced localization(CIL)実験系を確立した。これは、mTORのFRBドメインとFKBPがrapamycin存在下で特異的に相互作用する性質を利用している。初年度において、2xFKBP-LRRK2-2xMycを恒常発現するHEK293細胞を樹立した。最終年度では、LRRK2を各種オルガネラに移行させたときのオルガネラや細胞の形態変化を観察した。この細胞にFis1-FRB、TOMM20-FRBを過剰発現させると、LRRK2がミトコンドリア膜上に移行した。Lyn-FRBの共発現では細胞表面膜の細胞質側、PMP34-FRBではペルオキシソーム、LAMP1-FRBではリソソームの膜上にLRRK2が移行した。しかしながら、LRRK2のキナーゼ活性依存的に形態変化などを生じたオルガネラはなかった。まず、FRBドメインを各種膜局在シグナルと融合させたものをHEK293細胞に過剰発現させ、同時に改変型FKBPを融合させたEGFPを共発現させた。細胞をrapamycinアナログであるAP21967で処理すると、目的の細胞内小器官の膜上にEGFPが局在化した。さらに、2xFKBP-LRRK2-2xMycを恒常発現するHEK293細胞を樹立した。この細胞にFis1-FRB、TOMM20-FRBを過剰発現させると、LRRK2がミトコンドリアに膜上に移行した。これらの実験系を用いて、LRRK2を積極的に特定のオルガネラに局在させたときのLRRK2の活性や性状の変化を追究することができる。初年度の計画として、培養細胞の生化学的分画を行い、それぞれの画分でのLRRK2のキナーゼ活性を解析すること、およびCIL実験系を確立することを挙げた。いずれの実験についても順調に進行し、生化学的に分画された画分において、LRRK2のキナーゼ活性は異ならないことを明らかにし、およびLRRK2をミトコンドリアなどの膜上に強制的に局在化させることに成功した。生化学的分画により細胞質画分と膜画分を分離し、それぞれにおけるLRRK2キナーゼ活性を測定したが、いずれの画分でも同程度の活性を示した。この結果から、LRRK2の細胞内局在はキナーゼ活性に影響しない可能性が示唆された。しかしながら、より詳細にオルガネラを分離すれば、特定のオルガネラ膜上でのみ活性化されている可能性を検証できるため、イオジキサノール密度勾配遠心法で詳細に分画することを試みる。

CIL実験系については、一過性の共発現ではLRRK2とFRBドメインの共発現効率が低かったことから、LRRK2の恒常発現細胞にFRBドメインを一過性発現することにした。本年度確立したCIL実験系を用いて、LRRK2の膜局在の意義について、キナーゼ活性のみならず、近年LRRK2の活性発揮に重要であると報告されているGTP結合や2量体形成についても検討を行う。これらの研究の遂行により、LRRK2の膜局在がどのような意義を有するか明らかにする。該当なし
契約の清算と原状回復の不能に関する基礎的研究

契約が無効(取り消された結果、当初から無効であったとされる場合を含む)ないし解除された場合において、契約にもとづき給付が履行されていたとき、契約の清算として、給付は返還されなければならない。しかし、目的物の滅失等により、給付を返還することができない場合は、どのように扱われるべきかが問題になる。この問題は、一般に、2017年5月26日に成立した「民法の一部を改正する法律」による改正後の民法のもとでは、価値償還義務構成(返還できない給付の価値を金銭で償還する)によって解決されると考えられている(但し、明文の規定が設けられたわけではない)。本研究は、価値償還義務構成を前提とし、1価値償還義務が認められる根拠、2価値償還義務の要件(給付を返還することができない場合のうち、どのような場合に価値償還義務が認められるか)・内容(償還すべき価値はどのようにして定まるか)について検討し、各清算原因による相違点を明らかにすることを目的としている。初年度である2018年度は、外国法の調査・検討を行った。特に重点をおいて検討したのは、2002年以降のドイツでの議論である。ドイツでは、2002年に債務法が改正され、契約が解除された場合については、価値償還義務に関する明文の規定が設けられている。そこでは、価値償還義務の要件・内容についても規定されている。これに対し、契約が無効ないし取り消された場合は、改正の対象とはされておらず、改正前と同様に、不当利得の一般法によって規律されている。しかし、解除法の改正は、無効の議論にも影響を与えている。そこで、これらに関する議論を中心に、調査・検討を行った。また、上記のように、ドイツの解除法に関する規定を参考にするためには、ドイツと日本において、どのような場合に解除が認められるのかを比較検討することも必要になる。この点についても、調査を行った。初年度は、ドイツにおいて、解除法の改正が無効の議論にどのような影響を与えたかー解除に関する規定の立法趣旨がどのように理解されており、それが、無効の場合にどこまで及ぶと考えられているかーを参照することにより、ドイツにおいて、1価値償還義務が認められる根拠、2価値償還義務の要件・内容に関する問題に、清算原因の違いがどのように影響すると考えられているかを把握することができた。また、これらの議論と2001年以前の議論との関係を検討することで、ドイツにおける議論の変遷を整理することもできた。本研究を進めるうえで、ドイツ法は、最も重要な比較法的検討の対象である。初年度にドイツ法を集中的に検討することで、残り2年間の研究の方向性を見出すことができた。次年度は、引き続き外国法の調査検討を進め、調査対象の範囲を広げる(なお、今年度は、学説の調査を主としていたが、次年度は、裁判例の調査も行う)。それらの外国法の検討の結果から、この問題について、どのような分析の枠組みが得られるかを検討していく。

また、これらの議論と2001年以前の議論との関係を検討することで、ドイツにおける議論の変遷を整理することもできた。本研究を進めるうえで、ドイツ法は、最も重要な比較法的検討の対象である。初年度にドイツ法を集中的に検討することで、残り2年間の研究の方向性を見出すことができた。次年度は、引き続き外国法の調査検討を進め、調査対象の範囲を広げる(なお、今年度は、学説の調査を主としていたが、次年度は、裁判例の調査も行う)。それらの外国法の検討の結果から、この問題について、どのような分析の枠組みが得られるかを検討していく。
結腸直腸癌における高酸素・高圧酸素併用化学療法の有効性について

低酸素環境でHIF1αが高発現する大腸癌細胞株DLD1、HCT116を用いて抗がん剤感受性の変化を検討を引き続き行った。抗がん剤は消化管がんで使用されることが多い5FU、シスプラチン、オキサリプラチン、SN38、セツキシマブを用いて行った。すべての薬剤で、低酸素環境では抗がん剤の感受性が低下する傾向であったが、HCT116ではSN38、セツキシマブ使用時の再現性が乏しく再実験中であり、DLD1ではSN38、セツキシマブ、シスプラチン、5FU使用時の再現性が乏しく再実験中である。このため研究予定はかなり遅延している。また3D培養を簡易に施行できることは確認できたが、低酸素条件下での3D培養実験には至っていない。一方、大腸がん組織でのHIF1αの免疫染色に関しては、ほとんどの症例で染色ができず条件検討中である。2D培養における低酸素環境下での抗がん感受性試験に関して、再現性が乏しい結果が出たため、再実験中である。本研究は2D培養による低酸素環境下での実験データが必要であり、全体の実験施行が停滞している。また、免疫染色に関しても大腸粘膜における染色の各種設定が決まらず遅延している。2D培養の抗癌剤感受性試験に関しては、現在再実験中のものを確実に終了させ、3D培養の実験に移る。免疫染色に関しては、自動免疫染色を検討中であり、自動免疫染色法で染色できない場合は、中止とし、他実験に集中する。大腸癌細胞株において低酸素条件でHIFが高発現する細胞株であるHCT116、DLD1を用いて抗癌剤感受性試験を行っている。オキサリプラチンに関しては、ほぼ終了しており、低酸素条件下では、通常条件下での培養よりIC50の上昇を認めており、低酸素条件では抗癌剤感受性の低下を認めた。他剤に関して実験施行中であり、ほぼ同様であるが、まだ実験のばらつきが有り、データが一定で無い。高圧酸素チャンバーは、各種気体(純酸素、5%酸素など)を使用し、設備の問題の無いことや培養が問題なく行えることを確認している。また、3D培養に関しては、以前のモデルでは、特殊培地で特殊培養液をもちいているが、本研究ではSCIVAX社ナノカルチャープレート、住友ベークライト社PrimeSurfaceを用いて特殊な培養液や装置なしに3D培養が可能であることを確認した。さらに低酸素プローブによる低酸素領域の描出を確認できているが、細胞内局在がはっきり示せていない状況である。抗癌剤感受性試験がやや遅れ気味である。理由は予備実験での使用する薬剤濃度の設定が、各薬剤毎に微妙に異なり、既報の論文とも差があることが有り時間がかかっている。低酸素環境でHIF1αが高発現する大腸癌細胞株DLD1、HCT116を用いて抗がん剤感受性の変化を検討した。抗がん剤は消化管がんで使用されることがい多い5FU、シスプラチン、オキサリプラチン、SN38、セツキシマブを用いて行った。すべての薬剤で、低酸素環境では抗がん剤の感受性が低下する傾向であった。現在3D培養での抗がん剤感受性試験の準備中であり、既存の方法より簡便に3D培養を行うことができた。また、低酸素プローブにより低酸素領域の描出を試みた。通常環境下では低酸素領域は存在しないが。酸素濃度を下げていくと低酸素領域が拡大することが分かった。さらに高圧酸素培養をするため、ステンレス製の培養チャンバー(3気圧まで可)を用意し、1気圧で1週間の培養が可能であることを確認した。一方、大腸がん組織でのHIF1αの免疫染色に関しては、設定決定に至っていない。以下の複数の理由による。1)大腸癌組織でのHIF1αの免疫染色の設定が決まらない。2)抗がん剤感受性試験は予想以上にばらつきがあり、実験回数が多くなってしまった。3)高圧酸素チャンバーに使用するボンベの納品が遅い。細胞実験が多いため、各種実験を同時に行うことで、予定期間に間に合わせる。免疫染色は費用が許せば自動免疫染色を検討する。抗がん剤感受性試験に関しては、3d培養での実験に移るが、通常培養のデータを参考にすることで効率を上げる。

2D培養の抗癌剤感受性試験に関しては、現在再実験中のものを確実に終了させ、3D培養の実験に移る。免疫染色に関しては、自動免疫染色を検討中であり、自動免疫染色法で染色できない場合は、中止とし、他実験に集中する。当初パソコンとマイクロプレートリーダーを購入する予定であったが、実験の消耗品を優先的に購入したため購入できなくなった。このため次年度に繰り越すことになった。初年度は通常の培養後に3D培養を施行する予定であったが、培養実験の精度が不十分であり、相当量の実験を予想数より施行することになった。このため前年度で培養用の実験試薬(培養液、ウシ血清アルブミンなど)がかなり必要となり30万円ほど予想より使用することになった。この全体の実験の遅れのため初年度に使用するはずであった培養機器(高額なものは3D培養機器)を2年目に購入したため、次年度使用額が発生した。研究の施行が遅延しており、それに伴い実験資材の購入が遅れているため。また未使用額については実験資材購入費に充てる予定である。消耗品を優先的に購入するが、可能であればパソコン、マイクロプレートリーダーを購入する予定である。