hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
小児期にみられる肝炎後再生不良性貧血における造血障害機序の研究

肝炎後再生不良性貧血(再不貧)における先行する肝炎の原因ウィルス、末梢血リンパ球や骨髄CD34陽性細胞におけるFas/Fasリガンド系を介したアポトーシス、患者におけるHLA DRの分布について検討した。新たにわが国において激症肝炎ウィルスの原因であることが判明したE型肝炎ウィルスについて16例の患者血漿を用いてHEVlgM、HEVlgGを検討したが陽性例はみられなかった。肝炎後再不貧患者の末梢血CD3,CD4,CD8リンパ球におけるFas抗原の発現は、特発性再不貧患者や健常人コントロールと比較して統計学的にも有意に増加しており、とりわけCD4陽性リンパ球において顕著であった。骨髄CD34陽性細胞においても肝炎後再不貧患者は健常人や特発性再不貧患者と比較して発現の増加を認めた。肝炎後再不貧患者において、骨髄CD34陽性細胞を純化し、抗Fas抗体およびIFN-γを添加してコロニー形成能(CFU-GM, BFU-E)を検討したところ、抗Fas抗体の添加により、コロニー数の減少が観察された。以上の結果から肝炎後再不貧患者における造血障害の機序として、Fas/Fasリガンド系を介したアポトーシスの亢進が関与していると考えられた。特発性再不貧患者については正常人コントロールと比較してHLA DR2を所有する頻度が高いことが知られている。今回、肝炎後再不貧患者(n=30)、特発性再不貧患者(n=60)、正常人コントロール(n=250)についてHLADRの分布を検討した。肝炎後再不貧患者においては、特発性再不貧患者や正常人コントロールと比較して統計学的に有意にDR9を所有する頻度が高いことが判明した。(RR=4.1,P<0.05)。肝炎後再生不良性貧血患者における末梢血リンパ球の減少や造血障害の機序としてFas/Fasリガンド系を介したアポトーシスの応進が関与している可能性について検討した。肝炎後再生不良性貧血患者(n=11),特発性再生不良性貧血患者(n=16)および健常人の末梢血リンパ球におけるFas抗原の発現をフローサイトメトソーで検討した。CD3,4,8陽性リンパ球におけるFas抗原の陽性率は、肝炎後再生不良性貧血患者においては健常人や突発性再生不良性貧血患者と比較して統計学的にも有意に増加していた。とりわけCD4陽性リンパ球において顕著であった。骨髄CD34陽性細胞においても肝炎後再生不良性貧血患者は健常人や特発性再生不良性貧血患者と比較して発現の増加を認めた。肝炎後再生不良性貧血患者において、骨髄CD34陽性細胞を純化し、抗Fas抗体およびIFN-γを添加してコロニー前成能(CFU-GM,CFU-E,,BFU-E)と検討したところ、抗Fas抗体の添加により、コロニー数の減少が観察された。以上の結果から肝炎後再生不良性貧血患者における造血障害の機序として、Fas/Fasリガンドを介したアポトーシスの応進が関与していると考えられた。特発性再生不良性貧血患者については一般人口と比較してHLADR2を所有する頻度が高いことが知られている。今回、肝炎後再生不良性貧血患者(n=30)、特発性再生不良性貧血患者(n=60)、正常人コントロール(n=250)についてHLAの分布を検討した。肝炎後再生不良性貧血患者においては、特発性再生不良性貧血患者や正常人コントロールと比較して統計学的に有意にDR9を所有する頻度が高いことが判明した。(RR=4.1,p<.05)。

肝炎後再生不良性貧血(再不貧)に先行する肝炎の多くは激症型であり、その原因ウィルスの同定が試みられていきた。当科のこれまでの検討でもnon Anon BnonC型であり、新たに肝炎ウイルスと同定されたG型肝炎ウィルスやTTVウィルスの関与も否定された。本年度になってこれまで我が国では存在しないと考えられていたE型肝炎ウィルスが、一部の激症型肝炎の原因となりうることが判明した。E型肝炎の感染経路は経口感染であり、患得援護再不貧の患者の多くは輸血歴がないことから、原因ウィルスの候補となりうる。肝炎後再不貧(n=16)、特発性再不貧(n=7)、正常人コントロール(n=7)のHEVlgM抗体、HEVlgG抗体を検討した。あわせてパルボB19lgG抗体、B19lgM抗体についても検討した。それぞれの抗体の陽性率は、HEVlgM(肝炎後:0/16、特発性0/7、正常人0/7)、HEVlgG(肝炎後:0/16、特発性0/7、正常人0/7)、パルボB19lgM抗体(肝炎後:0/16、特発性2/7、正常人0/7),パルボB19lgG抗体(肝炎後:11/16、特発性6/7、正常人2/7)であった。今回の結果からE型肝炎ウィルスが肝炎後再不貧に先行する肝炎の原因ウィルスである可能性は否定できると考えられた。パルボB19については、肝炎後再不貧患者において抗体保有率は高いが特発性再不貧患者も同様であり。原因ウィルスとは考えにくい。肝炎後再不貧に先行する肝炎の原因は不明であり、さらなる検討が必要である。
高分子薄膜内のナノ粒子２次元配列構造形成機構の解明及び構造制御指針の確立

シリコン基板上にスピンコーティング法により塗布された表面修飾セリアナノ粒子を含むポリスチレン(PS)薄膜,及びこれを加熱した際の薄膜内のナノ粒子の空間構造を, TEM及びSPMにより観察した。結果として,ナノ粒子は,加熱前,PS薄膜表面上に単粒子層からなる2次元構造を形成するが,この薄膜をPSのTg以上に加熱すると2次元構造を維持したまま薄膜表面から基板側に移動した。ここでは,加熱前後におけるPS薄膜中のナノ粒子の空間構造に及ぼす溶媒/有機修飾鎖及び有機修飾鎖/高分子間の相互作用の影響を明らかにした。また,以上のナノ粒子の移動メカニズムについて考察した。本研究では,高分子ナノコンポジット薄膜材料の設計・制御,特にナノ粒子の薄膜内空間構造の設計・制御指針の確立に資するため,超臨界水熱法により合成した有機分子表面修飾無機ナノ粒子を内包する固体基板上の高分子薄膜を対象として,ナノ粒子の薄膜内空間構造に及ぼす諸因子の影響を検討する。さらに,得られた知見に基づき,申請者らが発見した薄膜内2次元配列構造の形成メカニズムを解明するとともに,ナノ粒子/高分子薄膜/基板複合系の状態図を提示する。本年度は以下の項目を実施した。(1)本研究の目的を達成するための手段,すなわちナノ粒子の合成法,薄膜調整法,ナノ粒子の薄膜内空間構造観察法(TEM, AFM)を確立した。(2)超臨界水熱法により合成したオレイン酸修飾CeO2ナノ粒子を添加したポリスチレン(PS)ナノコンポジット薄膜を対象として,薄膜の熱アニーリング前ではナノ粒子は薄膜表面に偏析し,PSのTg以上で加熱するとナノ粒子は2次元構造を維持したまま基板側に移動することをTEM観察により示すとともに,ナノ粒子の空間構造に及ぼす基板の濡れ性,ナノ粒子濃度,初期膜厚の影響を明らかにした。また,PS薄膜中のナノ粒子の移動メカニズムの解明に資するため,熱アニーリングに伴う残留溶媒の物質移動及び薄膜表面のモルフォロジー変化に及ぼすナノ粒子濃度,初期膜厚の影響を検討した。(3)(2)の現象のメカニズムを明らかにするための理論的手段として,3成分系のCahn-Hilliard方程式を基礎に,溶媒蒸発に伴うナノコンポジット薄膜の構造形成シミュレーションコードの開発に着手した。本年度は以下の結論を得た。(1)ポリスチレン(PS)に対するCeO2ナノ粒子の濃度が10 wt%の場合に関し,表面修飾有機分子をデカン酸あるいはオレイン酸とし,トルエンあるいはシクロヘキサンを溶媒としてSi基板上に製膜(スピンキャスト)した直後の薄膜表面のナノ粒子の構造を走査型プローブ顕微鏡(SPM)で観察した。いずれの条件の場合も,ナノ粒子は薄膜表面に島状の凝集体を形成し,その平均凝集体径はオレイン酸に比較しデカン酸の方が,またシクロヘキサンに比較しトルエンの方が大きかった。この理由を修飾有機分子と溶媒との親和性の違いによるものと考え,平均凝集体径をχパラメータにより整理した。(2)オレイン酸修飾ナノ粒子/PSコンポジット薄膜断面の透過型電子顕微鏡(TEM)観察により,加熱に伴う薄膜内のナノ粒子の移動過程,すなわち加熱初期にナノ粒子は薄膜表面に存在するが,その後薄膜中を表面から基板側にゆっくりと移動し,最終的に薄膜の途中で停止する過程を詳細に検討した。(3)ナノ粒子濃度が高いほど,加熱前の薄膜表面のナノ粒子の被覆率は高いが,加熱による薄膜中のナノ粒子の移動距離は,濃度に依らずほぼ同じであることが分かった。また,ナノ粒子表面の有機修飾鎖の種類に依らず,ナノ粒子は加熱により薄膜中を移動した。(4) SPMによる薄膜表面の観察からも,加熱によりナノ粒子が薄膜中に取り込まれる,すなわち薄膜表面から基板側に移動することを確認できた。研究実績に示すように,本研究を遂行するために必要な試料調整法,ナノ粒子の薄膜内空間構造の観察法等を確立し,ナノ粒子の空間構造といくつかの影響因子との関係を明らかにできたこと,さらには現象のメカニズムを解明するために,実験だけでなく数値シミュレーション手法の開発にも着手したことを考慮し,上記のように判断した。化学工学今後は以下の点を重点的に実施する。(1)高分子ナノコンポジット薄膜のアニーリングに伴いナノ粒子が2次元構造を維持したまま薄膜中を移動する現象のメカニズム解明を目指し,実験及び数値シミュレーションの両観点から検討を行う。

(2)ナノ粒子/高分子薄膜/基板複合系の状態図を作成するために,ナノ粒子表面の有機分子修飾鎖の種類及び被覆率,ナノ粒子濃度,高分子の種類及び分子量,溶媒の種類,薄膜の厚さ,さらには薄膜作製時の蒸発速度等の影響因子を変化させ,各因子と薄膜内ナノ粒子空間構造あるいは薄膜表面モルフォロジーとの関係を明らかにする。
7〜9世紀の朝廷儀式と和歌・歌謡の研究

2年目の本年度は、昨年度以来の研究内容を継承する一方で、これまでの研究成果を踏まえ、3篇の論文と1冊の著書を発表することが出来た。「山部赤人の方法と時代状況」(国文学研究136)は、8世紀前半の歌人・山部赤人の作歌に特徴的に現れる方法を、彼が活躍した時代状況と関わらせて論じたもの。ここで論じた時代状況は、一言で言えば「風流の流行」ということであるが、これは律令制の完成に伴い、時代が保守化してゆく状況と、聖武天皇の即位が要求した持統朝の記憶の喚起といった事柄が複合するところに生じた現象と捉えられる。「朝川渡る」(明日香風82)は、但馬皇女の和歌の解釈に関する論であるが、皇女歌にある「朝川」の「朝」という時間を、律令官制における「朝」という時間の意味に関わらせてみた。「由義宮歌垣の意義と歌謡」(萬葉182)は、称徳天皇が催した由義宮行幸において挙行された歌垣行事で披露された歌謡の歌詞と催事じたいの意義とを関わらせて論じたもの。聖代を称揚するときに好んで祥瑞が利用されたことと、「淵も瀬も」の歌詞は連動すると考える。著書『古代和歌』では、本研究の成果を総合的に取り入れつつ、政治史・状況史的な観点を積極的に導入しながら、上代和歌史の記述を試みたものである。*朝廷儀式に関する、文学・歴史学分野における最新の文献(単行書・雑誌掲載論文)の購入・複写などの手段による収集。*『内裏儀式』の元日宴会記事の検討。・他の日本古代の儀式書(『内裏式』『貞観儀式』...)との比較検討。・その他、関係史料(六国史・『延喜式』...)の記述との相互関係の検討。・中国の史料(唐令・『通典』『唐開元礼』...)の記述との比較検討。・以上の検討をとおした、儀式の構造の把握と、他儀式との比較検討(一般化・差異化双方の観点による)。*奈良朝後期平安朝前期(『古今和歌集』成立まで)の、『万葉集』『古今和歌集』関連人物の経歴を一覧にする年表の作成。・『万葉集』関係についてはほぼ終了。引き続き『古今集』関係の入力の開始。・政治、杜会・文化関係事項も合せて掲げ、人物の動向と時代背景との関連への配慮。・ハイパーテキスト化の試行。*儀式と言語表現の具体的な関わり方の実例の1つとして、神護景雲4年(=宝亀元年・770)の歌垣催事における、儀礼の政治的背景と歌謡の関係について考察を試み、その成果の一部を、11月に開催された万葉学会大会(於筑波大学)で口頭発表。
心房細動に伴う電気的リモデリングと細胞膜ATP感受性K+チャネル

心房細動に伴う電気的リモデリングの成立へのATP感受性K^+(KATP)チャネルの関与を検討するために、Kir6.2ノックアウト(KO)マウス摘出灌流心房筋標本を用い実験を行った。野生型およびKir6.2KOマウスの摘出灌流心の左心房から微小電極法で活動電位を記録し、5時間の高頻度刺激負荷時の活動電位の変化を観察した。野生型の心房では高頻度刺激によって緩やかに活動電位持続時間が延長した。Kir6.2KOの心房では高頻度刺激開始後早期より著明に延長し、その後対照値レベルに復した。心房筋細胞のKATPチャネルの活性化は高頻度に興奮した心房筋細胞活動電位波形の変化に影響を与える。心房細動の慢性化には,心房筋細胞の高頻度,不規則な電気的興奮によってイオンチャネルの量的,質的変化が生じ,心房細動が再発しやすい電気生理学的状況,すなわち,電気的リモデリングが起きる事が知られている。しかしながら,心房細動に伴う電気的リモデリングの詳細な分子機序の解明および予防手段の確立はなされていない。本研究ではK_ATPチャネル遺伝子欠損マウスを用いて心房細動に伴う電気的リモデリングの成立にK_ATPチャネルの活性化がどのような影響を与えるかを検討し,心房細動の停止,再発の予防手段の確立に寄与する事を目的として実験を行った。野生型マウスより心臓を摘出し,ランゲンドルフ心を作成した。心房の高頻度刺激を行い,左房から単相活動電位(MAP)を記録しようとしたが,安定した記録を得る事が出来なかった。そこで,野生型(WT)および心筋細胞膜K_ATPチャネルが欠損しているKir6.2KOマウスの左房を表面灌流し,微小電極法によって活動電位記録を行った。900回/分の頻度で3時間の高頻度刺激を行い,心房より活動電位を記録し,その経時的変化を検討した。WTマウス心房活動電位は時間が経過すると共に活動電位振幅が低下すると共に,活動電位持続時間が延長した。一方,Kir6.2KOマウスの心房活動電位においても同様の活動電位変化が観察された。この事からおそらくL型Ca^2+チャネルおよびK^+チャネルのダウンレギュレーションが起きている事が示唆された。しかしながら,対照時において既に活動電位幅がWT標本に比してKir6.2KO標本で明らかに長かった事から,WT標本においてK_ATPチャネル活動が亢進している事が示唆された。そこで,再度ランゲンドルフ方式の心筋灌流標本を更に表面灌流し,より生理的な状況で高頻度刺激を行い,微小電極法によって活動電位の経時的変化を検討するという機能的研究を再度継続中である。心房細動のように心房筋細胞が高頻度で興奮した際、活動電位が徐々に変化し電気生理学的特性が変化し、いわゆる電気的リモデリングが起きるとされているが、その成立にATP感受性K^+(K_<ATP>)、チャネルが関与するか否かは十分明らかにされていない。そこで我々は、心筋細胞膜K_<ATP>チャネル機能が欠失しているKir6.2ノックアウト(KO)マウス摘出灌流心房筋標本を用い電気生理学的検討を行った。野生型(WT)およびKir6.2KOマウスのLangendorff灌流心に微小電極法を適用し、15Hzの高頻度電気刺激を5時間維持しながら左心房より活動電位を記録し、90%再分極時点での心房活動電位持続時間(APD_<90>)について解析を行った。さらにK_<ATP>チャネル阻害薬やL型Ca^<2+>チャネル括抗薬存在下の活動電位についても検討を行った。5時間高頻度刺激負荷前後の心房筋イオンチャネルmRNAについてPCR法を用いて検討した。高頻度刺激下ではWTマウス心房筋標本のAPD90はほとんど変化が見られなかったが、Kir6.2KOマウス心房筋標本では一過性に延長した後、回復した。K_<ATP>チャネル阻害薬処置のWTマウス心房筋標本でもAPD_<90>は延長した。またL型Ca^<2+>チャネル括抗薬で処置するとWTおよびKir6.2KOマウス心房筋標本で観察されたAPD_<90>変化は消失した。高頻度刺激によってCav1.2のmRNAは変化しなかったが、Kv1.5のmRNAはWTおよびKir6.2KOマウス心房筋の両者において減少した。心房頻拍時のK_<ATP>チャネルの活性化は活動電位持続時間を修飾して細胞内Ca^<2+>過負荷を調節し、その電気生理学的特性変化に影響を与える可能性が示唆された。
生態系機能と不飽和土壌水分・溶質移動を考慮した乾燥地での持続的最大生産量の提示

生態系機能評価および不飽和土壌水分・溶質移動パラメータのより簡便な推定方法について注力し研究を行った。生態系機能評価は、レジリエンス及びレジスタンスという指標を用いた。レジリエンスは、干ばつや大雨のあった翌年、平年並みの気象条件の時の植物指数(EVI)と比較して、植物指数がより高くなって、植物がいつもより繁茂している状態なのか、それとも前年の干ばつや大雨の影響をうけて、平年以下の植生なのかどうかを評価した指標である。レジスタンスは、干ばつおよび大雨のあった年が平年並みの気象条件の時の植物指数と比較して大きい(繁茂している)か小さいかを示した指標である。これまで、レジリエンスおよびレジスタンスは、フィールドワークを中心とした、評価式が提案されていたが、本研究では、衛星データを用いて、グローバルに評価するために、EVIのデータを用いて、レジリエンスおよびレジスタンスを評価する式を世界で初めて提案した。また、本研究では、これまで生物多様性といった、生物的な要素でのみ評価されていた、生態系機能について、非生物的な要素である、気象条件や土壌タイプ、土地利用履歴といった指標も取り入れ、評価した。これによって、生態系機能は生物多様性だけでなく、土壌タイプや土地利用履歴に大きく依存していることが示された。一方で、乾燥地の多くが位置する草原生態系では、特に干ばつにおいて生物多様性がレジスタンスに寄与することが示された。翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。衛星データを用いたグローバルなResistance/Resilienceの算出を行った。その結果、気象条件が10-25%程度の確率で起こる干ばつや洪水に対しては生物的な環境要素がResistance/Resilienceに大きくかかわっていたが、Extreme Climateである、200年に5回程度の気象条件では、多くの地域で標高が主要な要素であった。一方で、平年並みの気象では、水資源に関わる要素が主要素であり、気象の程度(SPEIの程度)によって、Resistance/Resilienceの依存する環境変数が変わることが明らかになった。これまで、生物多様性はResistance /Resilienceを改善することが指摘されていたが、本研究により、生物多様性が改善できるResistance/Resilienceはその気象の程度に依存し、200年に5回起きる程度の発生確率の干ばつや洪水に関して、ほとんど寄与しないことが明らかとなった。“生態系機能と不飽和土壌水分・溶質移動を考慮した乾燥地での持続的最大生産量の提示"のため、生態系機能に関する全球データの整理を行った。生態系機能の評価について、気候変動、特に極端現象を考慮するため、干ばつだけでなく、洪水にも着目して評価を行った。干ばつや洪水のイベント前後の植生指数から生態系機能を評価する計算式を提案し、現在、その成果を執筆中である。また、乾燥地における土壌と植生の関係について、荒廃地の回復過程から考察を行った論文も発表している。論文の執筆と同時進行で、不飽和透水係数に関するグローバルなデータセットの準備も進めており、今後の研究成果が大いに期待されるところである。関係するグローバルデータの収集、解析を進め、最新の将来気候を複数使って(マルチCM)、既存の作物生産モデルを改良し、生態系機能や不飽和の土壌水分・溶質移動を組み込み、持続的な最大可能生産量を概算する。具体的には、人口、農地、食糧自給率に関して、時系列分析を行い、人口、農地、食糧自給率のバランスの取れた範囲、閾値について明らかにする。・そして、人口増加に対して、将来必要となる食糧の概算量に対して、必要となる農地面積について試算する。各国の水資源状況について整理した上で農地面積を算定し、将来の農地面積として作物生産モデルの入力値とする。・生態系機能を考慮した持続的な新規農地配置アルゴリズムを作成する。不飽和透水係数は既存研究をレビューし、土壌分類ごとにまとめる予定である。グローバルの土壌分類データはFAOのWorld Reference Base for Soil Resourcesを利用する予定である。これらのデータを用いて、土壌ごとの不飽和透水係数を与える。

そして、主要な作物についての水分・溶質に関するストレス応答関数パラメータについて、レビューを行い、既存の作物生産モデルにストレス応答関数を組み込む。翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。
「観測ビッグデータ同化」による大地震時のリアルタイム避難者分布推定技術の開発

本研究では,まず,大地震時の物的被害や避難者一人ひとりの行動を記述する精緻な都市内広域避難シミュレーションに基づく,計算量の少ないAI行動モデルの構築手法を開発する。次に,観測ビッグデータ(大規模携帯電話GPSデータや被害情報)を用いたデータ同化により,AI行動モデルに基づく予測結果を補正し,リアルタイムに避難者分布を推定する手法を開発する。さらに,実際の観測データに適用し本手法の有用性を示すとともに,観測時間間隔やシミュレーションの計算時間間隔が,リアルタイム性や推定精度に及ぼす影響も明らかにする。
イオン液体を利用した高分子微粒子機能化法の確立とその応用

本研究では,新規な環境適応型媒体・機能性物質として注目されているイオン液体を利用した高分子(複合)微粒子材料創製の新展開に挑戦した。主にイオン液体を媒体とした微粒子合成とイオン液体自体をモノマーとしたポリイオン液体(PIL)の合成を行った。イオン液体中では比較的低温にて高結晶無機物が得られることを利用して,熱に弱い高分子との複合化に成功した。PILでは,初めてミクロンサイズの単分散な微粒子形態への制御に成功し,汎用ポリマーとの複合化および界面科学的考察によりその内部構造制御法を明らかにした。さらに,イオン液体を用いたセルロース粒子の作製にも挑戦し,多孔質構造を有する粒子合成に成功した。本研究は,新規な環境適応型媒体・機能性物質として注目されている"イオン液体"を利用した高分子微粒子材料創製の新展開に挑戦することを目的としている。初年度にあたる本年度は,特にイオン液体中での高分子と無機物とのハイブリッド粒子の合成に焦点を当てて検討に取り組んだ。本申請者はこれまでに,ポリスチレン(PS)シード粒子存在下,イオン液体中でのアルミニウムイソプロポキシドのゾル-ゲル反応により,PSの熱分解温度以下の比較的低温で結晶性アルミナ粒子,及びコアシェル型PS/結晶性アルミナ複合粒子の合成に成功している。この知見を基に,本研究では,複合粒子の機能性材料としての応用を見据え,比較的高い熱伝導率を有する酸化マグネシウム(MgO)に着目し,イオン液体中における硝酸マグネシウムのゾル-ゲル反応によりPS/MgO複合粒子合成を試みた。PSシード不在下,比較として2-プロパノール及びイオン液体中にてゾル-ゲル反応を行ったところ,いずれの系においても期待された結晶性MgOではなく,水酸化マグネシウム[Mg(OH)_2]の生成が確認された。しかしながら,イオン液体系で得られたMg(OH)_2のほうが高結晶性であった。さらに,両系の水酸化物を熱処理するとMgOに転移することも確認したが,熱処理前同様,イオン液体系のほうが高い結晶性を保持していた。PSシード存在下,同様の条件でゾル-ゲル反応を行ったところ,2-プロパノール系ではMg(OH)_2の単独結晶が生成し,複合粒子が得られなかったのに対し,イオン液体系では副生微粒子が若干観察されるものの,滑らかな表面を有する複合粒子を得られた。その内部構造は,超薄切片の透過型電子顕微鏡観察により,PSをコア,Mg(OH)_2をシェルとするコアシェル構造を形成していることが明らかとなった。また,熱重量分析より,複合化されたMg(OH)_2は17%と算出され,理論値と良い一致を示した。本年度は,イオン液体(IL)部をラジカル重合基の側鎖として有するILポリマー(PIL)に焦点を当てた。特に,1分散重合によるミクロンサイズで単分散なPIL微粒子の合成,21で得られた粒子を用いて,汎用モノマーとシード分散重合を行う複合粒子の合成,3PILの乳化重合への適用とその重合条件の最適化,の3点を軸として検討を進めた。1ILモノマー[MTMA][TFSA]を用いて分散重合を行ったところ,汎用モノマー系の知見を適用することができたが,安定剤濃度による影響が少なかったことは,IL系特有である。また,ILはアニオン交換により溶解性など物性が簡便に変化させることができる特徴的な性質を有しているが,得られたエマルションにLiBrを添加したところ,アニオン交換によりポリマーの溶解性が変化し,エマルションが透明な溶液になる様子が観察され,ILポリマー粒子は塩刺激応答性を有することが明らかとなった。21で作製したP[MTMA][TFSA]粒子を用いてスチレンやメタクリル酸メチルなどの汎用性モノマーのシード分散重合を行い,複合化によるモルフォロジイなど界面化学的検討を行った。3[MTMA][TFSA]を乳化重合へ適用したところ,通常用いられるアニオン性乳化剤を添加すると,それらと[MTMA][TFSA]の間でアニオン交換が生じたため,粒子の安定性が低下し,凝集体を形成してしまった。そこでノニオン性乳化剤を用いたところ,汎用モノマー系よりも非常に少ない乳化剤量系で安定なエマルションが得られた。さらに,得られたPoly([MTMA][TFSA])粒子のゼータ電位を測定したところ,ノニオン性の乳化剤を用いているにも関わらず,強い正の電荷を示した。この高い表面電荷を利用し,無乳化剤乳化重合への適用を試みたところ,重合条件を調整することによりILポリマー微粒子の作製に成功した。

本研究は,新規な環境適応型媒体・機能性物質として注目されている“イオン液体"を不均一系での高分子微粒子合成媒体に適応し,コロイド及び,界面化学の観点から水や有機媒体系と比較によりその特徴を明らかにするなかで,通常の媒体とは異なる不均一系での機能性高分子微粒子合成概念を確立することを目的としている。本年度は特に,水やほとんどの有機媒体に不溶なため,形状制御や加工は困難であったセルロース微粒子に焦点を当てた。イミダゾリウム系イオン液体のイオン液体が前処理を施すことなく100 ̊C程度の加熱で簡便に溶解させることが報告されて以来,セルロースの新たな加工媒体として期待されている。申請者らは,セルロース微粒子の形態制御を目的とし,セルロースのイオン液体溶液の分散滴を作製後,分散滴からイオン液体を除去,セルロースを析出させることでセルロース微粒子の作製を試みた。用いるイオン液体希釈剤やそれらの放出条件により,作成されるセルロース粒子の形態は大きく異なった。真球状粒子が得られた条件にて,分散滴からのイオン液体及び希釈剤の放出過程(=セルロースの析出過程)を経時観察したところ,分散滴成分の9割以上が放出されセルロースが析出しても,分散滴の大きさは変わらず,光学顕微鏡では観察されないナノ構造体を形成している可能性が示唆された。本年度に設備備品として購入した紫外可視近赤外分光光度計を用いたところ,析出したセルロース粒子は260 nm付近に吸収ピークが認められ,微細構造の存在が明らかとなった。さらに,凍結乾燥を行い,SEMにて観察すると,緻密構造ではなく非常に微細な多孔質構造が観察された。この微細構造は溶媒の毛細管圧によって容易に破壊されたが,凍結乾燥条件を整えることにより生成したセルロース多孔質粒子は,強度が大きく,セルロース複合材料創成の可能性を示すことができた。イオン液体中での粒子表面の電荷を測定するため,当初予定していた設備を変更するなどあったが,計画通りにイオン液体中での複合粒子の合成および無機物とのハイブリッド粒子の合成に成功した。さらに,当初の計画には無かったがイオン液体を媒体としてだけでなく,重合部位をもったイオン液体モノマーの合成を行い,それを用いた高分子微粒子の合成にも成功するなど,本年度は3報の学術論文と20件の学術講演を行うなど,おおむね順調に進展しているといえる。25年度が最終年度であるため、記入しない。微細構造の可能性は間接的に示されていたものの確証が得られずにいたが,本年度導入した紫外可視近赤外分光光度計によりその存在が示され,凍結乾燥機を用いたことにより,微細構造を観察することも可能となった。また,昨年度に検討テーマのひとつとして着手したイオン液体ポリマーに関する検討においても,汎用ポリマーと同様の扱いでの複合系を中心に検討に取り組み,コアシェル構造など複合粒子のモルフォロジイ制御に関する重要な知見を得ることができている。今後は,当初の計画通りに,もう一つの検討課題であるイオン液体中にて感温性を示す高分子を用いた機能性ゲル微粒子の合成および機能制御を推進する。また,本年度,成功した汎用ポリマー粒子とイオン液体中での無機物との複合粒子を発展させ,今年度用いたイオン液体中でのゾルゲル法による無機酸化物の合成を詳細に検討してその生成メカニズムを解明すると同時に,イオン液体中での速い脱水素反応を利用して窒化ホウ素などの機能性無機物質との複合化も検討する。さらに本年度新たに成功したイオン液体ポリマー粒子の検討を深化させ,シード分散重合法による汎用ポリマーとの複合化も検討する。
マクロファージによる死細胞貪食・分解の分子機構

リン脂質はフリッパーゼの作用により細胞膜の外膜と内膜の間で非対称的に分布している。この非対称的な分布は細胞がアポトーシスに陥った場合や活性化された場合、スクランブラーゼの作用により崩壊する。本研究では2個のP4-typeATPase(ATP11A, ATP11C)をフリッパーゼ、TMEM16familyの5個のメンバー(16C、16D, 16F, 16Gおよび16J)をCa^<2+>によって活性化されるスクランブラーゼ、XKRfamilyの3個のメンバー(Xkr4, Xkr8およびXkr9)をアポトーシス時にカスパーゼによって活性化されるスクランブラーゼとして同定した。また、アポトーシス細胞の貪食はフォスファチジルセリン受容体による捕食過程とインテグリンあるいはMerTKを介した取り込みの2段階からなることを見いだした。動物はその恒常性を維持するため、毎日大量の細胞をアポトーシスにより死滅させる。この過程ではカスパーゼが活性化され、細胞内蛋白質を分解、細胞に死をもたらす。死細胞はphosphatidylserine(PS)をその表面に暴露し、マクロファージにより、認識・貪食・分解される。DNase IIはマクロファージ・リソソームで死細胞DNAを分解するが、この酵素を欠損するマウスはマクロファージに未分解DNAを蓄積し、これにより活性化されたマクロファージから分泌されたTNFにより関節炎を発症する。本年度、この関節炎の発症にはリンパ球が関与していないこと、関節では炎症性サイトカイン遺伝子(IL-6,II-1β,TNF)がお互い活性化し合っていること、これら3個のサイトカインのうちどのサイトカインの作用を止めても関節炎の発症は抑えられることを見いだした。また、Ca-イオノフォアで処理することにより細胞表面に一過的にPSが暴露されること見いだし、このことを利用してPSを強く暴露する細胞株を樹立した。そしてこの細胞より発現クローニング法によりCaに応答してPSを細胞表面に暴露させるscramblaseの同定に成功した。この分子はTMEM16Fと呼ばれる膜貫通領域を8個持つ蛋白質であり、TMEM16Fを強制発現した細胞ではCaによるPSの暴露が促進され、ノックダウンした細胞ではPSの暴露が抑制された。血小板が活性化された際、その表面にはPSが暴露され、PSを介して血液凝固因子が血小板に結合、凝固反応がスタートする。TMEM16Fは血小板でのPSの暴露に関与する分子であること、Scott Syndromeと呼ばれる血友病に似た症状を示す病気の患者ではこの分子に変異が導入されていることを見いだした。TMEM16Fは大きなファミリーを形成している。今後、それぞれのメンバーがどのような生理的役割を持っているか明らかにする必要があろう。死細胞はphosphatidylserine (PS)をその表面に暴露し、マクロファージにより、認識・貪食・分解される。私達は昨年、細胞をCa2+-イオノフォアで処理すると細胞表面に一過的にPSが暴露されること見いだし、このことを利用してPSを強く暴露する細胞株を樹立した。そしてこの細胞より発現クローニング法によりCaに応答してPSを細胞表面に暴露させるscramblase、TMEM16Fの同定に成功した。この分子はTMEM16Fと呼ばれる膜貫通領域を8個持つ蛋白質であり、TMEM16Fを強制発現した細胞ではCa2+によるPSの暴露が促進され、TMEM16Fをノックダウンした細胞ではPSの暴露が抑制された。一方、この分子の409番のアミノ酸がアスパラギン酸からグリシンに変異した分子を発現する細胞はCa2+イオノフォアによる処理なく、PSを露出した。すなわち、この細胞はアポトーシスに陥ることなくPSを露出していた。そこでこの細胞がマクロファージによって認識されるかどうか検討したところ、低温下ではマクロファージに結合するが37°Cで培養するとマクロファージには結合せず、貪食もされないことを見いだした。このことは死細胞の貪食にはPS単独では不十分であり別のシグナルが必要であることを示唆している。一方、私達は浮遊系の細胞にインテグリン、PS受容体Tim4を発現することにより死細胞の貪食系を再現した。そして、Tim4は死細胞との結合に関与しているがこの分子のみでは貪食はおこらず、貪食にはインテグリンの関与が必須であることを見いだした。アポトーシスではカスパーゼが活性化され、死細胞はフォスファチジルセリン(PtdSer)をその表面に暴露する。マクロファージはこのPtdSerを"eat me"シグナルと認識し、これを貪食・分解する。これまでにPtdSerに結合し、マクロファージによる死細胞の貪食を促進する分子として数多くの分子が報告されているが、その関係は明らかでない。それら分子のうち、Tim-4と受容体型チロシンキナーゼMerTKをともに発現するマウス腹腔マクロファージは強い貪食能を持つこと、死細胞の貪食には両分子がともに必要なことを見いだした。Tim4はアポトーシス細胞を結合する過程、MerTKは貪食の過程に必要であった。ところで、赤血球は骨髄や脾臓に存在する赤芽島で増殖分化する。

そして、その最終過程では、核が細胞膜に囲まれた形(pyrenocytesと呼ばれている)で放出され、PtdSerを暴露、赤芽島の中央に存在するマクロファージによって貪食される。私達はこの過程をin vitroで再現することに成功し、MerTKがPtdSerを介したpyrenocytesの貪食に必須であることを示した。ところで、本来細胞膜の内側に存在するPtdSerはどのようにして細胞の外側に暴露されるのであろうか。私達は以前、活性化された血小板でPtdSerの暴露を引き起こすスクランブラーゼTMEM16Fの同定に成功したが、この分子は10個のメンバーからなるファミリーの一員である。そこで、TMEM16ファミリーメンバーをTMEM16F欠損細胞に導入し、16F以外に16C, 16D, 16G, 16JにCa2+に応答してリン脂質をスクランブルさせる能力が存在することを認めた。一方、私達は新たにXkr8と呼ばれる6回膜貫通領域を持つタンパク質をアポトーシス時に活性化されるスクランブラーゼとして同定した。アポトーシスではカスパーゼが活性化され、死細胞はフォスファチジルセリン(PtdSer)をその表面に暴露する。マクロファージはこのPtdSerを“eat me"シグナルと認識し、これを貪食・分解する。本来細胞膜の内側に存在するPtdSerはどのようにして細胞の外側に暴露されるのであろうか。私達は昨年度、Xkr8と呼ばれる6回膜貫通領域を持つタンパク質をアポトーシス時に活性化されるスクランブラーゼとして同定した。ヒトやマウスのXkrファミリーは9個のメンバーから成り立っているが、これらそれぞれをXkr8欠損細胞株に導入することにより、Xkr8以外にXkr4、Xkr9がカスパーゼによって活性化されるスクランブラーゼであることを見いだした。Xkr8が普遍的に様々な組織で発現されているのに対し、Xkr4は脳、Xkr9は胃や腸に特異的に発現されていた。一方、ヒトハプロイド細胞株KBM7細胞に、レテロウイルスを用いて網羅的に変異を導入、フリッパーゼ活性(蛍光で標識されたPtdSerを取り込む活性)が減弱した細胞株を樹立、この細胞でのレテロウイルス導入部位を次世代シークエンス法で同定、P4-タイプのATPaseであるATP11CとそのシャペロンCDC50Aをフリッパーゼとして同定した。この分子の中央部には3カ所のカスパーゼ認識配列が存在し、アポトーシス時に切断、失活した。すなわち、アポトーシス時にフリッパーゼであるATP11Cはカスパーゼにより失活、スクランブラーゼであるXkr8はカスパーゼにより切断されることにより活性化されることが明らかになった。ところで、アポトーシス細胞はATPやUTPなどのヌクレオチドを分泌、これがマクロファージなどの貪食細胞をリクルートすると報告されている。ところでアポトーシス細胞の貪食は炎症を惹起しないと報告されているが、細胞外に放出されたATPやUTPは炎症を引き起こすことが知られている。そこで、アポトーシス細胞の上清を用いてマクロファージを処理すると、抗炎症性の遺伝子の発現が認められた。
B細胞初期分化増殖におけるC-Fosがん遺伝子の機能解析

本研究は、過剰のc-FosによるB細胞初期分化抑制とアポトーシス誘導の機序を明らかにすることを目的として誘導型c-fos遺伝子をもつMx-c-fosマウス由来の胎仔肝細胞をPA6ストローマ細胞とIL-7を用いたInvitroの系で培養してB細胞を分化させる。B細胞のいろいろな分化段階(A-Eステージ)に発現誘導剤を加えて外因性c-Fosの発現を誘導する。その時に見られる幼若B細胞でのアポトーシス誘導をTUNEL法で解析した。その結果、一部の幼若B細胞がTUNEL反応を示した。このアポトーシスに陥った幼若B細胞の分化段階を、幼若B細胞の各分化段階に表現される細胞表面抗原に対する蛍光モノクロナール抗体を用いてFACSにより解析したところ、このB細胞はCD43陽性のpro-B細胞であった。そこでつぎに幼若B細胞の増殖過程におけるc-Fosの抑制効果を細胞周期のレベルで検討した。すなわち、c-Fosの過剰発現を誘導することにより増殖の停止した幼若B細胞の細胞周期をFACSにより解析した。その結果、c-fosの発現誘導から48時間後にはG2/M期の細胞数が増加したことから、この期での細胞周期のブロックが明らかになった。さらに、c-Fosの標的遺伝子を解析する目的で幼若B細胞を分化させた後に、c-Fosの過剰発現を誘導することにより増殖の停止した幼若B細胞中のアポトーシスを誘導するFasやBax、細胞死を阻害するBcl-2やBcl-Xの発現を解析した。しかし、これらの遺伝子の発現の異常は見られなかった。ところがIg遺伝子の遺伝子組み換えを活性化するRag-1やRag-2遺伝子の発現が抑制されていたことから、pro-B細胞はその細胞内でのIg遺伝子の組み換えが異常となることにより死滅することが示唆された。
マツ枯損防止のための新戦略構築

材線虫病の進行を診断・解析するために、アコースティックエミッションとビデオモニタにより仮道管内の水切れ過程を詳細に検討した。その結果、正常なマツでは水切れが回復するが、ザイセンチュウの侵入したマツでは不可逆的な水切れが起こることが見出された。この不可逆的な水切れ(エンボリズム)が水不足の原因となってマツは枯れると結論された。実学的な立場から、アカマツの抵抗力を高めることを目標に薬剤試験を行った。芽生えを用いた線虫接種試験では、薬剤をスクリーニングすることにした。その結果、材線虫に対するマツの抵抗力を高める新規誘導抵抗性薬剤を見出すことができた。次に、材線虫病制御に対するスチルベノイドの有効性を3年生苗木を用いて試験した。誘導抵抗性薬剤処理後、材線虫接種をした苗木では、枯れの遅延や枝の付け根で停止する個体が見られた。一方、薬剤処理等によるスチルベノイドの蓄積は、当年枝ではほとんど見られないが、1年枝やその付け根の節部分に観察された。その含有量は正常心材相当の高濃度であり、材線虫の移動を止めることが示唆される。スチルベソイドの材線虫に対する効果は、樹幹ではなく、節で達成できると結論した。また、スチルベノイド生成能力が個体間で異なることも示唆された。スチルベノイドを指標とした材線虫耐性個体の選別が可能と考えられる。スチルベノイド生成が材線虫病制御に有効であることが示唆されたので、スチルベノイド生合成の鍵ステップであるスチルベン合成酵素遺伝子をクローン化し、これを大腸菌内で発現させて機能することを確認した。したがってクローン化した遺伝子をマツにもどして高発現させることによりマツに材線虫抵抗性が賦与できると期待される。以上の結果を総合すると、机上の空論でない「マツ枯損防止のための新戦略」として、スチルベノイド生成を通じたマツの抵抗力増強と材線虫病制御が可能と結論した。ストレス処理をしたアカマツ芽生えの根から、新たにmRNAを抽出後cDNAライブラリーを作成した。スチルベン合成酵素遺伝子のプローブでクローンを拾い,塩基配列を解析した.スチルベン合成酵素遺伝子は,8種類以上の発現が確認できた.また,同時にカルコン合成酵素遺伝子の発現が確認できた.したがって,これらの遺伝子は,マルチジーンファミリーを形成しており,ストレスによって種々のスチルベン合成酵素遺伝子は発現する.アカマツの抵抗性という観点からも多種類のスチルベン合成酵素遺伝子が存在することは興味深い.クロマツ苗木の枯損防止試験(於いて熊本):草本植物の病害虫抵抗性を高めることが知られている2,6-dichloroisonicotic acidを合成し,材積m3当たり20gおよび50gの原体をクロマツ苗木に樹幹注入した.マツノザイセンチュウを接種して枯損防止効果を調査したが,試験木全てが枯死し,薬剤の効果は認められなかった.線虫耐病性として選抜されたアカマツの2系統の苗木に材線虫を接種した結果、線虫は選抜苗木の中では動きが鈍く、非選抜苗木に比べ有為に抵抗性が認められた。耐病性苗木では、枝の数が非選抜苗木に比べ有為に多いことが明らかになった.材線虫病の進行を診断・解析するために、アコースティックエミッションtろビデオモニタにより仮道管内め水切れ過程を詳細に検討した。

その結果、正常なマツでは水切れが回復するが、ザイセンチュウの侵入したマツでは不可逆的な水切れが起こることが見出された。この不可逆的な水切れ(エンボリズム)が水不足の原因となってマツは枯れると結論された。実学的な立場から、マツの抵抗力を高めることを目標に薬剤試験を行った。芽生えを用いた線虫接種試験では、薬剤をスクリーニングすることにした。その結果、材線虫に対するマツの抵抗力を高める新規誘導抵抗性薬剤を見出すことができた。次に、材線虫制御に対するスチルベノイドの有効性を試験した。材料としては3年生苗木を実験材料として選んだ。誘導抵抗性薬剤処理後、材線虫接種をした苗木では、枯れの遅延や枝の付け根で停止する個体が見られた。一方、薬剤処理等によるスチルベノイドの蓄積は、当年枝ではほとんど見られないが、1年枝やその付け根の節部分に観察された。その含有量は正常心材相当の高濃度であり、当年枝に接種されたザイセンチュウはこれらの組織を通過しにくいと推定される。スチルベノイド生成が材線虫病制御に有効であることが示唆されたので、スチルベノイド生合成の鍵ステップであるスチルベン合成酵素遺伝子をクローン化し、これを大腸菌内で発現させて機能することを確認した。以上の結果を総合すると、机上の空論でない「マツ枯損防止のための新戦略」として、スチルベノイド生成を通してマツの抵抗力増強と材線虫病制御が可能だと考えられる。
腎病変進行性予知の為の新しい糸球体細胞障害マーカーの開発

前年度のヒト生検材料に関する予備的検索の意味付けを更に深める目的で今年度は再度動物実験モデルにおける、より長期にわたる材料検索を行うと共に、ヒト生検材料の症例数を増やすことを意図した。抗糸球体基底膜抗体投与WKYラットを半月体形成性腎炎モデルとして用い、また片腎Wistarラットへの単クローン抗Thy-1抗体を投与して不可逆性硬化性腎病変モデルを作製した。蛍光抗体法を中心に上皮細胞障害マーカーとしてのOS-3,メサンギウム細胞障害マーカーとしてppVWF各対応抗原の動態を検索した。糸球体内OS-3陽性細胞は抗基底膜抗体投与2時間後の時点では変化が認められないが3日後にはsegmentalな陽性所見を認めこれは7日後、14日後とその範囲を拡げるが2ヶ月後にはむしろ減弱した。比較的新鮮な病変における、半月体病変予知マーカーであることが再確認された。ヒト生検材料における検索では昨年度に引き続き4例中1例に陽性所見を認めた。但し昨年の1陽性例との間に共通点は見い出せず、他施設での半月体形成性腎炎症例についても検討をして症例数増加の努力を更に続ける必要がある。なお、ppVWFにおいても7日後から陽性となり、8週後にわたって、糸球体内に陽性細胞が観察された。ヒト生検材料における陽性例は少なくメサンギウム増殖性腎炎における障害マーカーとしての意味付けに関しては再度検討する必要がある。正常wistarラット単離糸球体培養によりマクロファージ様細胞(MC)を調整して抗原としてBALB/Cマウスに免疫した。単クローン抗体(mAb)を定法により作成後、培養MC・正常ラット腎、馬杉腎炎腎(半月体形成性腎炎腎)を対象としたスクリーニングを行い陽性mAbOS-3がクローニングされた。腎糸球体上皮細胞、メサンギウム細胞各障害モデルとしては抗糸球体基底膜抗体のWKYラットへの静注による半月体形成性腎炎、抗Thy-1mAb-22-3の片腎摘出ラットへの静注による不可逆性硬化性腎病変モデルが各々用いられた。nAbOS-3は半月体形成性腎炎においてその細胞性半月体を染色し、その上ポドカリクシン陰性となる糸球体上皮細胞とも反応することが確認され、糸球体上皮細胞の新しい障害マーカーになる可能性が示唆された。またヒト生検材料への予備的検索において、4例の半月体形成性腎炎中1例にて動物モデル類似の陽性パターンが観察され、少なくとも病的糸球体に関してはヒト材料との交差反応性が確認された。今後は例数を多くして組織像、病態との比較によりその意義の詳細を明らかにしたい。次にppVWFについても同様のヒト林料で予備的検索を行ったところ、OS-3陽性例とは異なる検体で1例陽性が認められた。細胞核周辺を示唆した動物モデルと類似のパターンであった。ppVWFについてはIgA腎症等、メサンギウム増殖性病変の例数を増やして来年度は更に検索を進める予定である。
成人T細胞性白血病(ATL)におけるp14/ARFの解析

【対象】成人T細胞性白血病(ATL)の細胞株9種類(MT1、MT2、HUT102、OKM3T、F6T、K3T、Oh13T、S1T、SU9T01)、15例の慢性、急性、リンパ腫性ATLの末梢血、またはリンパ節より抽出したDNA、RNAを用いて、遺伝子異常を検討した。正常対照として正常人リンパ球、陰性コントロールとしてK562細胞を用いた。また、蛋白発現の研究では11例のリンパ腫性ATLのリンパ節を検討した。対照として正常人およびATL以外のリンパ腫患者のリンパ節を検討した【結果】1.DNAの異常:PCR法を用いてp14/ARF遺伝子DNAの欠失を調べた。細胞株OKM3Tで欠失していた。臨床検体でも検討中である。2.RNAの異常:RT-PCR法を用いてp14/ARF遺伝子の発現を調べた。細胞株OKM3Tで発現がみられず、S1Tでは発現が弱かった。プロモーター領域のメチル化をmethylation specific PCRで検討中である。臨床検体でもRNAの発現を検討中ある。3.p14/ARF蛋白発現の検討:臨床検体でp14/ARFの蛋白を発現していたのは1例のみであった。他のリンパ腫でも発現していなかった。p14/ARFの下流に位置するMDM2やp53蛋白の発現とp14/ARF蛋白の発現は相関が見られず、また悪性度による有意差も認められなかった。4.p53蛋白高発現の症例で遺伝子変異を検討したが、検索した範囲では異常は認められなかった。【考察】ATLでは一部の細胞株でp14/ARFのDNAの欠失、RNA発現の低下が認められたことから、ATLにp14/ARFの異常が関与している可能性が示唆された。また、殆どの臨床検体でp14/ARFの蛋白発現は認められなかった。これらの検体でRNAが十分発現しているとすれば、translation不良、または速やかな蛋白分解などが考えられる。また、MDM2にはp14/ARF以外の制御機構が存在すると考えられる。多数のATL臨床例でp14/ARFの関与、予後などをを解明する必要がある。【結果】2.RT-PCR法を用いてp14/ARF遺伝子の発現を調べている。現在までに得られた結果では正常人リンパ球、白血病細胞株ともにp14/ARFの発現レベルは低い。3.免疫染色を用いてATLの臨床検体におけるp14/ARF、MDM2、p53、MIB1の蛋白発現を検討した。リンパ腫型ATL10例中1例で核で弱く染色され、核小体ではさらにそれよりやや濃く染まった。残りの9例では全く染まらなかった。以上より、多くのATL細胞ではp14/ARF蛋白を発現していないと考えられる。p14/ARFの標的蛋白であるMDM2はATLを除く高悪性度リンパ腫の一部で発現が見られたのに対し、ATLでは10例全例で染色されず、発現レベルは低いと考えられた。

MDM2のさらに下流に位置するp53の蛋白発現レベルは一定の傾向を示さず、ATL以外のリンパ腫と発現レベルに有意差を認めなかった。細胞増殖の指標であるMIB1の発現はATL以外の高悪性度リンパ腫より低い傾向にあった。【現在までの考察】p14/ARFの発現はATLにおいて低いが、その下流の蛋白であるMDM2、p53とp14/ARFの相関は認められていない。また、細胞増殖の指標であるMIB1の発現はATL以外の高悪性度リンパ腫より低い傾向にあることから、ATLにおいては細胞周期およびその関連蛋白のみでは説明できない別の因子が悪制度を規定していると考えられる。【対象】【結果】1.DNA異常:PCR法でエクソン2の欠失を判定した。homozygousに欠失していたのは陰性コントロールのK562とOKM3Tであった。2.RNAの異常:RT-PCR法を用いてp14/ARF遺伝子の発現を調べた。発現していたのは正常人リンパ球、MT1、HUT102、OKM3T、K3T、S1Tで、発現していないのは陰性コントロールのK562とMT2、F6T、Oh13T、SU9T01であった。【現在までの考察と今後の方針】MT2、F6T、Oh13T、SU9T01はp14/ARFのDNAが存在しているにも拘わらすRNAが発現していないことから、転写障害と考えられる。その機序としてプロモーター領域のメチル化が考えられる。現在メチル化をmethylation specific PCRで検討している。またOKM3TはDNAが欠失していたがRNAは発現していた。我々はDNAはエクソン2の後半で見ており、一方、RNAはRT-PCRでエクソン1からエクソン2の前半までを見ている。したがってOKM3Tではエクソン2の前半まではDNAが存在しており、そこまではRNAも発現していると考えられる。p53蛋白の発現はp14/ARFのRNAの発現と相関しなかった。その理由としてp14/ARFの蛋白発現の違いによるものやp53の遺伝子異常によるものなどが考えられる。今後は臨床検体を用いてこれらの検討を続けていく予定である。【対象】成人T細胞性白血病(ATL)の細胞株9種類(MT1、MT2、HUT102、OKM3T、F6T、K3T、Oh13T、S1T、SU9T01)、15例の慢性、急性、リンパ腫性ATLの末梢血、またはリンパ節より抽出したDNA、RNAを用いて、遺伝子異常を検討した。正常対照として正常人リンパ球、陰性コントロールとしてK562細胞を用いた。また、蛋白発現の研究では30例のリンパ腫性ATLのリンパ節を検討した。対照として正常人およびATL以外のリンパ腫患者のリンパ節を検討した【結果】1.RNAの異常:RT-PCR法を用いてp14/ARF遺伝子の発現を調べた。数種類の細胞株で発現がみられなかった。2.臨床検体での検討:RT-PCR法を用いてp14/ARF遺伝子の発現を検討したところ、多くの症例で発現が認められた。3.メチル化の検討:RNAを発現していなかった細胞株と臨床検体でp14/ARFプロモーター領域のメチル化をmethylation specific PCRで検討した。メチル化されている例は少なかった。4.p14/ARF蛋白発現の検討:殆どの臨床検体でp14/ARFの蛋白発現は認められなかった。p14/ARFの下流に位置するMDM-2蛋白の発現も殆どの臨床検体で陰性であった。【考察】
金属担持触媒によるエタンからエチレン及び芳香族化合物への転換

天然ガスの第2成分であるエタンは、シェールガスや石油随伴ガスの利用が進み、安価な化学原料として注目されている。現在、エタンの利用は熱分解によるエチレンの製造に限られている。これは、エタンが安定な炭化水素であり、反応に多大なエネルギーを消費するためである。そこで、効率的なエタン転換技術の確立のために、代表的な反応である、エタンからエチレンあるいは芳香族炭化水素を生成する反応に用いる固体触媒の研究を行う。エタンを効率的に転換できる触媒を設計することで、従来よりも省エネルギーで付加価値の高い化学品の生産を行うことができる。
食事摂取量と寒気の程度を用いた菌血症診断予測による抗菌薬適正使用への介入

本研究は、救急外来ないし総合診療科外来を受診し、血液培養検査を施行した16歳以上の患者を対象とした多施設共同前向き観察研究(他施設においても同様の外来受診患者が対象)である。除外基準は、疎通困難な意識障害を呈し、かつ代諾者が不在の場合とする。全対象患者に対して問診票により1寒気の程度、2食事摂取量を確認し、同時に年齢・性別・既往歴・受診経路・抗菌薬使用の有無、および来院時のバイタルサインさらには血液培養検査実施時の白血球数・CRPを評価し、外来診療における菌血症診断予測ルールを作成する。最終的には本ルールを用いて、東京消防庁救急受診ガイドへの追加導入やスマートフォン用アプリの開発を目標とする。