hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
マウス肝発癌の初期遺伝子変化

正常肝細胞が肝癌細胞に変化する過程ではどのような遺伝子変化が起るのかについてはほとんど解っていない。本研究ではこのような現状にふまえて、研究対象をマウス肝癌に絞って遺伝子変化を解析し、その知見をヒト肝発癌のメカニズムの解析に役立てることを目標としている。実験的マウス肝発癌は確立された発癌モデルであり、またマウスは遺伝子情報が豊富であること、短期間に多数繁殖するために遺伝学的解析が容易であること、細胞培養が容易であることなどの利点がある。本研究グループではこのような利点を活かしてマウス肝発癌の分子機構を新しい分子遺伝学的手法を用いて様々な角度から解析した。本年度は、以下の点が明らかになった。1. RLGS法、MS-RDA法によりマウス肝癌でメチル化の異常を示す多数のDNA断片が検出された。その中には癌抑制遺伝子の可能性のあるmac25を含むものが見られ、肝癌ではこの遺伝子の発現が低下していた。また、上記のDNA断片から未知の遺伝子が多数検出された。2. MSM及びC3HマウスのRLGSマップ完成した。これを応用してC3HxMSMF1マウスのDEN誘発肝癌でも多数の欠失スポットを検出した。5.マウス肝癌ではβ-cateninのmutationが高頻度に見られ、この変化は多段階発癌の後期に起ることが明らかになった。ヒト肝癌の主な原因は肝炎ウィルスによることは論を待たないが、正常肝細胞が癌細胞に変化する過程ではどのような分子的変化が起こるのかについてはほとんど判っていない。本研究ではこの様な現状にふまえて、研究対象をマウス多段階肝癌モデルに絞り、発癌初期からの分子変化を解析し、その知見をヒト肝発癌のメカニズムの解明に役立てることを目標としている。本年度は、以下の諸点を明らかにした。1.マウス肝癌では多数の遺伝子にメチル化の異常が起こっている。3.B6C3F1,C3B6F1マウス肝癌由来細胞株では第4染色体のLOHが高頻度に見られ、肝癌嫌発系のB6のalleleが特異的に欠損する。4.マウス肝癌細胞の初代培養では第15及び第19染色体のtrisomyが見られる。しかし、肝癌細胞株で高頻度に見られる第4染色体の欠失は見られない。5.活性酸素によるDNA障害を防止する8-oxo-d GTPaseはマウス肝で強く発現しており、この遺伝子をknockoutすると自然肝発癌率が上昇する。6.日本産野生マウスMSMは肝発癌耐性である。また、C3HxMSMF1マウスではC3Hと同様に高感受性を示す。ヒト肝癌は肝炎ウィルスの感染による慢性肝炎,肝硬変に続いて発生することから肝炎ウィルスが主たる癌原因子であることは明らかであるが,正常肝細胞が癌細胞に変化する過程ではどのような遺伝子変化が起こるのかについてはほとんど判っていない。特に,初期肝癌については既知の癌遺伝子,癌抑制遺伝子の異常はほとんど検出されていない。本研究ではこのような現状にふまえて,研究対象をマウス肝癌に絞って遺伝子変化を解析し,その知見をヒト肝発癌のメカニズムの解明に役立てることを目標としている。実験的マウス肝発癌は確立された発癌モデルであり,またマウスは遺伝子情報が豊富であること,短期間に多数繁殖するために遺伝学的解析が容易であること,細胞培養が容易であることなどの利点がある。本年度は,以下の諸点を明らかにした。2.化学発癌剤で誘発した肝癌では,低メチル化を示すDNA断片に高頻度にretrotransposonが含まれている。また,高メチル化を示す断片には両親のalleleがメチル化しているものが含まれる。3.肝癌ではRLGS法により多数のallelic imbalance、メチル化異常、増幅を示すスポットが検出され、それらは主に第2,7,8,12及びX染色体に連鎖している。4.肝癌では正常肝で全く発現していないL-1 receptor antagonistが発現している。5.肝癌で異常を示すDNA断片を用いて遺伝子をクローニングするためにマウス正常組織DNAからBACライブラリーを作製した。

これを応用してC3HxMSMF1マウスのDEN誘発肝癌でも多数の欠失スポットを検出した。5.マウス肝癌ではβ-cateninのmutationが高頻度に見られ、この変化は多段階発癌の後期に起ることが明らかになった。
高血圧症の早期診断と予防医学に対する尿検査の有用性の検討

【研究目的】本研究では,高血圧症の早期診断と予防医学における臨床検査の役割として,「高血圧治療ガイドライン2009」に取り上げられている尿中微量アルブミンに代わる腎機能障害の早期診断が可能な保険適応内の検査法を探る.特に,日常検査で簡便かつ,安価である尿沈渣検査による各種円柱の検出意義に着目する。各種円柱の検出頻度を高血圧症患者の臨床像と比較検討することで心血管イベントのリスク評価に役立つ可能性を検討する.【研究方法】(1)対象症例から得られた尿検体について尿定性検査,尿化学定量,尿沈渣検査を実施する.(2)(1)の測定結果との関連性について調べ,特に尿微量アルブミンと尿沈渣結果から得られる硝子円柱について比較検討を用いて詳細に検討する.(3)大規模な縦断的研究の実施の準備をする.東大病院腎臓内分泌内科外来患者のうち高血圧症患者から得られた尿検体を使用する.【研究成果】(1)尿沈渣検査における硝子円柱の検出.日常検査では,尿沈渣検査は,顕微鏡検査と自動分析装置により測定に大別される.両者を比較すると自動分析装置では,明らかに検出が低値であった.(2)尿蛋白定性の陰性群における硝子円柱の検出.尿微量アルブミン陽性検体では,顕微鏡検査にて硝子円柱を52%検出した.(3)高血圧症患者における硝子円柱の検出.尿蛋白定性の陰性群では,顕微鏡検査にて硝子円柱を40%検出,尿蛋白定性の陽性群では,75%検出した.【結語】高血圧症患者における硝子円柱の検出は腎機能障害の早期診断に繋がる可能性がある.【研究目的】本研究では,高血圧症の早期診断と予防医学における臨床検査の役割として,「高血圧治療ガイドライン2009」に取り上げられている尿中微量アルブミンに代わる腎機能障害の早期診断が可能な保険適応内の検査法を探る.特に,日常検査で簡便かつ,安価である尿沈渣検査による各種円柱の検出意義に着目する。各種円柱の検出頻度を高血圧症患者の臨床像と比較検討することで心血管イベントのリスク評価に役立つ可能性を検討する.【研究方法】(1)対象症例から得られた尿検体について尿定性検査,尿化学定量,尿沈渣検査を実施する.(2)(1)の測定結果との関連性について調べ,特に尿微量アルブミンと尿沈渣結果から得られる硝子円柱について比較検討を用いて詳細に検討する.(3)大規模な縦断的研究の実施の準備をする.東大病院腎臓内分泌内科外来患者のうち高血圧症患者から得られた尿検体を使用する.【研究成果】(1)尿沈渣検査における硝子円柱の検出.日常検査では,尿沈渣検査は,顕微鏡検査と自動分析装置により測定に大別される.両者を比較すると自動分析装置では,明らかに検出が低値であった.(2)尿蛋白定性の陰性群における硝子円柱の検出.尿微量アルブミン陽性検体では,顕微鏡検査にて硝子円柱を52%検出した.(3)高血圧症患者における硝子円柱の検出.尿蛋白定性の陰性群では,顕微鏡検査にて硝子円柱を40%検出,尿蛋白定性の陽性群では,75%検出した.【結語】高血圧症患者における硝子円柱の検出は腎機能障害の早期診断に繋がる可能性がある.
技術者育成を志向したサービスラーニングによる教育効果の定量解析

従来の専門家育成教育は、「専門家を志望する学生」と「その専門知識に精通した教育者」で構成された閉鎖的な集団内で進められていた。本研究では、異なる文化を持つ他者との創発的な課題解決を目指した経験学習プログラムであるサービスラーニングに着目し、サービスラーニングが専門家育成にもたらす効果を定量的に検証することを目的としている。具体的には、専門家育成教育を志向したサービスラーニングにおける学生の学習過程と教育効果を定量的に解明することを狙いとしていた。4年計画の最終年度として、平成30年度は、これまでに実施してきたサービスラーニングプログラム(熊本県立大学「もやいすと育成プログラム」)の成果の定量的な検証を行った。具体的には、サービスラーニングの活動中に、学生が誰とどのようなやりとりを行いながら、何を学び、どのような能力を向上させるか(学生の学習過程と教育効果)を測定した。その結果、学生は一緒に活動したメンバーや地域住民、プログラムに参画した学生アシスタントのそれぞれから学びを獲得し、汎用的能力や地域貢献意欲、地域における就業意欲を向上させている可能性が示唆された。本研究の当初の調査対象は、技術者育成を志向した教育プログラムであったが、調査の継続が難しくなったことから、平成28年度より地域貢献人材としての専門家育成教育プログラムである熊本県立大学の全学サービスラーニング授業科目「もやいすと育成プログラム」への調査を開始した。本年度に得られた研究成果は現在、学術誌へ投稿準備を行っている。特に本研究では、技術者育成教育プログラムとして実施されるサービスラーニングに着目し、学生の学習過程と教育効果を定量的に測定することを狙いとしていた。3年計画の1年目として、平成27年度は専門家育成教育を志向したサービスラーニングにおける学生の学習過程と教育効果の定性的調査を行った。具体的には、サービスラーニングの活動中に、学生が誰とどのようなやりとりを行いながら、何を学び、どのような能力を向上させるかについて、参与観察やインタビュー調査を行った。また、サービスラーニング活動終了後、学生の正課授業への取り組みにどのような変化があったかを、インタビュー調査で検討した。調査対象として当初予定していた技術者育成教育志向のサービスラーニングプログラムに加え、その他の専門課程教育プログラムとして実施されているサービスラーニングについても調査協力を得られることになり、両者への調査を実施することができた。これらの調査で得られた結果と、先行研究の知見および既存尺度を統合しながら、次年度は専門家育成教育としてのサービスラーニングにおける学生の学習過程と教育効果を測定する尺度を開発し、定量的調査に着手する予定である。3年計画の1年目である本年度は、当初の計画通り、定量的な調査を行うための予備的調査として定性的調査を実施した。調査対象として当初検討していた技術者育成教育志向のサービスラーニングプログラムに加え、その他の専門課程教育プログラムとして実施されているサービスラーニングについても調査協力を得られることになり、専門教育としてのサービスラーニングの総合的な教育効果について検討を進める体制が整った。3年計画の2年目として、平成28年度は、専門家育成教育を志向したサービスラーニングにおける学生の学習過程と教育効果を検討する定量的調査を行った。具体的には、サービスラーニングの活動中に、学生が誰とどのようなやりとりを行いながら、何を学び、どのような能力を向上させるかについて、前年度に実施した定性的調査の結果および先行研究の知見や既存尺度を統合しながら学生の学習過程と教育効果を測定する尺度を開発し、質問紙調査を行った。調査対象として当初予定していた技術者育成教育志向のサービスラーニングプログラムへの調査継続が難しくなったため、あらたな調査対象として、地域貢献人材としての専門家育成教育プログラムとして実施されているサービスラーニングプログラムへの調査を開始し、専門教育としてのサービスラーニングプログラムの教育効果を総合的に検討することとした。これらの調査で得られた結果を総括し、次年度は、専門家教育志向のサービスラーニングプログラムがもたらす教育効果とその過程を理論的に解明する。3年計画の2年目である本年度は、当初の計画通り、定量的な調査を行うための尺度開発と質問紙調査を実施した。調査対象として当初検討していた技術者育成教育志向のサービスラーニングプログラムへの調査継続が難しくなったため、あらたに別の専門家育成教育プログラムとして実施されているサービスラーニングに調査協力を依頼し、専門教育としてのサービスラーニングの総合的な教育効果について検討する体制を整えた。本研究では、異なる文化を持つ他者との創発的な課題解決を目指した経験学習プログラムであるサービス

ラーニングに着目し、サービスラーニングが専門家育成にもたらす効果を定量的に検証することを目的としている。具体的には、専門家育成教育を志向したサービスラーニングにおける学生の学習過程と教育効果を定量的に解明することを狙いとしていた。4年計画の3年目として、平成29年度は、これまでに実施してきたサービスラーニングプログラム(熊本県立大学「もやいすと育成プログラム」)の成果を整理し、定量的な検証に用いる測定尺度の精緻化を行った。具体的には、サービスラーニングの活動中に、学生が誰とどのようなやりとりを行いながら、何を学び、どのような能力を向上させるか(学生の学習過程と教育効果)を測定する尺度の精緻化を行った。本研究の当初の調査対象は、技術者育成を志向した教育プログラムであったが、調査の継続が難しくなったことから、平成28年度より地域貢献人材としての専門家育成教育プログラムである熊本県立大学の全学サービスラーニング授業科目「もやいすと育成プログラム」への調査を開始し、平成29年度も引き続き実施した。次年度は、専門家育成志向のサービスラーニングプログラムがもたらす教育効果とその過程を理論的に解明する。4年計画の3年目である本年度は、定量的な調査を行うための尺度の精緻化を行った。調査対象である専門家(地域貢献人材)育成プログラムの実施担当者との連携体制も構築されており、平成29年度は実施成果のヒアリングも滞りなく行うことができた。従来の専門家育成教育は、「専門家を志望する学生」と「その専門知識に精通した教育者」で構成された閉鎖的な集団内で進められていた。本研究では、異なる文化を持つ他者との創発的な課題解決を目指した経験学習プログラムであるサービスラーニングに着目し、サービスラーニングが専門家育成にもたらす効果を定量的に検証することを目的としている。4年計画の最終年度として、平成30年度は、これまでに実施してきたサービスラーニングプログラム(熊本県立大学「もやいすと育成プログラム」)の成果の定量的な検証を行った。具体的には、サービスラーニングの活動中に、学生が誰とどのようなやりとりを行いながら、何を学び、どのような能力を向上させるか(学生の学習過程と教育効果)を測定した。その結果、学生は一緒に活動したメンバーや地域住民、プログラムに参画した学生アシスタントのそれぞれから学びを獲得し、汎用的能力や地域貢献意欲、地域における就業意欲を向上させている可能性が示唆された。
霊長類の側坐核-腹側被蓋野経路の選択的制御による価値判断のメカニズム解明

平成29年度は、行動課題のセットアップに費やした。また、これまで蓄えてきたAp-Av課題遂行中のマルチサイト記録のデータの、解析、出版を行った。現在までのところ、共著論文を3報発表し、また、筆頭著者の論文の改訂を行っている。特に、「霊長類の悲観的な価値判断の固執を引き起こす神経メカニズムの解明」に焦点を当てて解析を行い、線条体局所回路の操作で、繰り返し回避が有意に発生することを突き止めた。この現象は、もう一つの不安回路である帯状回皮質の刺激では見られないもので、大脳基底核の辺縁系回路に特徴的な機能であることが示唆される。このことから、線条体の中の不安回路の異常活動は、強迫性障害にみられる固執を、不安と同時に誘導する可能性がある。不安障害や強迫性障害の脳内メカニズムはこれまで、ヒトの臨床研究、機能MRIやPETを用いたヒトの脳画像研究などを中心に行われている。これにより、強迫性障害はセロトニンやドーパミンなどの神経修飾物質との関りが示唆されてきた。一方で、強迫性障害は腹側線条体、側坐核、内包といった大脳基底核の局所領野をターゲットとしたDBSによっても改善することから、大脳基底核には強迫性障害に特徴的にかかわる局所回路がある可能性がある。本研究では、ヒトと相同な脳構造を持つマカクザルに対して、葛藤課題訓練し、数理モデルを導入し、価値判断の固執という現象を同定した。こうした価値判断の固執は、強迫性障害にとどまらず、意思決定に一般にみられる現象で、特に行動の柔軟性にかかわる、意思決定の重要な要素である。来年度は、これらの実験データをもとに、側坐核に焦点を当てて研究を行う。29年度が最終年度であるため、記入しない。
放射線誘発アポトーシスシグナルの低酸素による抑制と低酸素細胞増感剤の影響

本研究では固形腫瘍由来のがん細胞で放射線によるTNF受容体の過剰発現が関与するカスパーゼ8、3依存性のアポトーシス経路が存在するかどうかを明らかにする目的で行った。さらにはFAS-LやTRAILによる放射線増感が起きるかどうかについても検討した。ヒト前立腺がん由来細胞LNCaP、DU145、ヒト乳腺がん由来MCF-7、ヒト肺癌由来細胞A549、ヒト胃癌細胞MKN45、MKN28にX線を照射すると、DU145細胞を除いて全ての細胞で細胞膜表面へのFASの発現のX線照射による増強が観察され、DR5については全ての細胞でX線照射による高発現が観察された。さらに、FASアゴニスト抗体であるCH11とDR5に対するリガンドであるTRAILを培地に加えたところ、対応する受容体の発現が見られた細胞に対して、放射線によるアポトーシス誘導が増強した。さらに、MKN45細胞では放射線誘発FASとDR5発現はN-アセチルシステイン(NAC)の放射線照射後の培地への添加で抑制され、リガンドによる放射線誘発アポトーシス増感も消失した。以上のことは多くの固形腫瘍細胞でも放射線照射によりレドックス機構が関与する機能的デスリセプター発現を起こす事を示している。したがって、今後、放射線照射後の細胞内の活性酸素種生成やグルタチオンとその関連酵素を検討することが重要であると考えられる。今回の結果は、放射線によって発現するデスレセプターを標的とした増感方法の可能性を示すものである。
有機磁性材料の構築を目指したポリジアゾ化合物の集積合成

多数の三重項カルベン分子を互いに強磁性相互作用するように連結することにより、有機強磁性体につながる高スピンポリカルベンが実現できると期待される。本研究では、実用的な強磁性材料となるポリカルベンを構築するために、安定な三重項カルベンユニットを開発するとともに、多段階カップリング反応によるポリジアゾ体の合成と、その光照射により発生するポリカルベンの特性化を行った。また、逐次的薗頭反応に有効な、イオン液体を溶媒とするワンポット反応を検討した。多数の三重項カルベン分子を互いに強磁性相互作用するように連結すれば,有機強磁性体につながる高スピンポリカルベンが実現できると期待される。本研究では,実用的な強磁性材料となるポリカルベンを構築するために,個々の三重項カルベンユニットの安定化の検討を進めた。三重項カルベンは元来極めて不安定な化学種であり,2個のフェニル基で共鳴安定化されたジフェニルカルベンでも寿命はわずか2μsである。以前我々は,ジフェニルカルベンの四つのオルト位にブロモ基を導入すると立体保護効果のために半減期が16秒まで伸びることを見出した。ここではさらに立体効果の大きなヨード基を導入したジアゾメタンを合成し,光照射により発生する三重項カルベンの特性を評価した。ヨード基の立体効果を最大限に発揮させるには,ジフェニルカルベンの四つのオルト位をすべてヨード基で置換するのが望ましいが,カルベン前駆体であるジアゾ体の合成が立体障害のため著しく困難になる。このため本年度は,まず2個のヨード基と2個のブロモ基を持つジアゾ体を合成した。このジアゾ化合物への光照射により発生する化学種の分光学的特性化,捕捉剤との反応速度,捕捉生成物の分析を行い,この化学種がジアゾ体に対応した構造をもつ三重項カルベンであることを確認した。その減衰は非常に遅く,室温での半減期は24秒であった。この結果から,ヨード基の立体効果がカルベンの長寿命化に有効に働くことが示された。多数の三重項カルベン分子を互いに強磁性相互作用するように連結すれば、有機強磁性体につながる高スピンポリカルベンが実現できると期待される。実用的な強磁性材料となるポリカルベンを構築するために、個々の三重項カルベンユニットの安定化の検討を進める必要がある。1.昨年度までにジフェニルカルベンのテトラブロモ体およびジブロモジヨード体の発生を検討し、半減期がそれぞれ16秒および24秒であることを示した。本年度は立体保護効果より大きくするために4つのヨード基をオルト位に配したジフェニルカルベンを検討したところ、予想通り著しく安定(半減期18.4分)であることが明らかとなった。この結果、ヨード基の顕著な立体的カルベン保護効果が実証された。2.ジフェニルカルベンを安定化するもう一つの手段として、巨大なパラ位置換基を用いてカルベン中心炭素を覆うことによる立体保護を検討した。種々の巨大な炭化水素置換基をパラ位に導入した前駆体ジアゾメタンを合成し、その光分解によるカルベンの発生を検討した結果、剛直な三次元構造をもつトリプチシル基で保護されたカルベンの寿命は10秒に達することが示された。パラ位置換基は前駆体ジアゾメタン合成の最終段階で導入することが可能であるため、それ以前の合成ステップを立体障害の影響を受けずに進めることが可能であり、立体保護基を持つジアゾメタンの効果的な合成法方針が確立できた。3.ジアゾメタンの光分解に対するマイクロリアクターの有用性を確認するために、マイクロフォトリアクター装置を立ち上げ、今後フロー系の効果を検討するための環境を整えた。1.フローリアクターの利用は反応集積化の有効な手段である。本研究では、立体保護基を持つジフェニルカルベンの反応挙動をフローリアクターにより検討した。バッチ系(ベンゼン溶液)で前駆体ジアゾメタンに光照射した場合には、主生成物の一つとして9,10-ジアリールフェナントレンが得られた。これは発生したカルベンの2量化により生成したテトラアリールエテン中間体が環化した結果と考えられるが、この中間体は検出されなかった。一方、フロー系で光照射した場合には、バッチ条件に比べて1/40の短時間で脱窒素が完了し、テトラアリールエテン中間体の生成をNMR分析により確認できた。これは、フロー系による短時間照射による光反応条件を用いたため、テトラアリールエテン中間体の二次的光反応が抑制された結果と考えられる。これにより、フローリアクターがカルベンが関与する反応系で光に敏感な生成物を得るために有効であることが示された。2.カルベン前駆体であるジアゾ化合物を段階的に多数連結してポリジアゾ化合物を合成するには、各段階の連結反応を高収率で能率的に行わなければならない。そのための合成手段として、イオン液体中での薗頭カップリング反応が有効と期待される。そのための予備時実験として、i)

パラ位にヨード基を持つベンゾフェノン誘導体に対するTMSアセチレンの薗頭カップリング、ii)TMS基の除去、iii)得られたアセチレンと1,3,5-トリヨードベンゼンとの薗頭カップリング、の3段階合成について、イオン液体[BMIM][Tf_2N]を溶媒とするワンポット合成を行い、期待されたデンドリマー型トリケトンを得ることに成功した。これにより、多段階クロスカップリングの時間的反応集積化によるポリジアゾ化合物合成の基盤が確立できた。高スピンポリカルベンの前駆体であるポリジアゾ化合物の効率的合成を目指して、複数回の薗頭カップリングのワンポットでの実施を検討した。効率的かつ選択的に連結を行うため、前者ではイオン液体を溶媒として用い、後者では「分子三脚」の自己組織化単分子膜を用いた。以下にその要点を述べる。イオン液体中でのデンドリマー形成反応:4-ヨードベンゾフェノンから、1)トリメチルシリルアセチレンとの薗頭カップリング、2)脱保護反応、3)トリヨードベンゼンとの薗頭カップリングの3段階を、[BMIM][Tf2N]を溶媒として行った。イオン液体の使用により、薗頭反応で通常必要な銅塩が不要になるだけでなく、脱保護段階で用いるMeOHの影響を受けずにそのまま3段目のカップリングが実施可能となり、第1世代デンドリマーが得られた。同様に第2世代デンドリマーの合成もイオン液体中で検討した結果、各段階を個別に実施した場合において良好な収率が得られることを確認した。単分子膜上での分子伸長:アダマンタン骨格の3つの橋頭位にCH2SH基を結合した「分子三脚」は、Au基板上で3個のS-Au結合を形成して強固な自己組織化単分子膜を形成する。各三脚分子の上部にヨードフェニル基をもつ単分子膜では、ヨード基が基板面から垂直に伸びているため直線状分子をカップリング反応により連結して分子を上方へ逐次伸長することが可能である。本研究では、薗頭カップリングによる1段階伸長、及び1)薗頭反応、2)脱保護反応、3)薗頭反応から成る3段階伸長を検討した結果、それぞれ収率77%および32%(3段階の総合収率)で進行することが示された。本研究では、長寿命三重項ジアリールカルベンに対応するモノジアゾ化合物を反応集積化の手法を活用して多数結合し、ポリジアゾ化合物を合成する。これを光照射により脱窒素化することにより高スピン安定ポリカルベンを発生させ、その磁気特性を評価する。平成24年度はこの目的で研究を進め、以下の成果を得た。1.モノジアゾ化合物のカップリング反応によるポリジアゾ化合物の合成カップリング反応の継手となる置換基と立体保護基を併せ持つジフェニルジアゾメタンの薗頭カップリング反応を行い、ネットワーク構造を持つポリジアゾ化合物を合成し、その光照射脱窒素により高スピンポリカルベンを発生することに成功した。原料のモノジアゾ体の構造を変えることにより重合度が5及び約70のポリジアゾ体が得られ、それぞれに極低温条件で光照射してポリカルベンを発生させた。SQUID測定の結果、スピン量子数がそれぞれS = 4.39、18.1と求まり、高スピン種が発生していることが確認された。2.イオン液体中での薗頭カップリング反応による集積合成ジアゾ化合物のモデルであるケトンを用いて2段階の薗頭カップリング反応をワンポットで行い、第2世代デンドリマー型トリケトンの合成を検討した。平成24年度は第1段階の薗頭カップリング反応まで到達した。
ニホンナシの'みつ症'多発系統に特異的な遺伝子発現および遺伝子産物の探索と解析

ニホンナシのみつ症は,果肉部が水浸状となり日持ち性の低下や果肉の褐変をもたらし,商品価値を著しく低下させる重大な生理障害である.これまで,みつ症の発生に関する遺伝子についての報告は無かったが,前年度までに本研究において,みつ症感受性品種'豊水'果実のcDNAサブトラクションを行い,みつ症組織および健全組織に特異的に発現する遺伝子群の部分配列を明らかにした.本年度は,みつ症への関連が疑われる同遺伝子群について,リアルタイムPCR法を用いて品種や果実の発達段階の違いによる発現量の変化を網羅的に解析した.その結果,みつ症組織で強発現するメタロチオネイン遺伝子は, '豊水'以外のみつ症感受性品種においても未熟果の段階で発現が上昇することが明らかとなった.また,メタロチオネイン遺伝子の部分配列からプライマーを合成し,ゲノム上での配列を決定したところ,本遺伝子には約100bpのイントロンが挿入されていることが明らかとなった.さらに,インバースPCR法によって,本遺伝子の全コード領域を明らかとし,取得した配列に基づいてメタロチオネインタンパク質のアミノ酸レベルでの分類および機能の推定を行った。その結果,本遺伝子がコードするタンパク質は,メタロチオネインのなかでもタイプ3に分類され,バナナの果実においては成熟に伴って発現が高まることが明らかとなった.本研究において,みつ症に関連する可能性が高い遺伝子がはじめて特定されたことから,今後,同遺伝子とみつ症果の発生との関わりをより詳細に解明することで,みつ症果発生の遺伝的メカニズムの解明が期待できる.ニホンナシ果実のみつ症は果肉部が成熟にともない水浸状を呈する生理障害であり,発症した果実は果肉の褐変や,日持ち性の低下などにより,商品価値が著しく低下するため問題となっている.本申請課題では,みつ症抵抗性は異なるが,遺伝的背景が類似している兄弟系統間において,果実における発現遺伝子の違いや,遺伝子産物であるタンパク質合成の差異を詳細に比較し,みつ症の発現に関わる遺伝子を逆遺伝学的に検討するための新たな知見の獲得を目指している.ニホンナシの果実において,みつ症の発生程度のみを効率的に比較するためには,材料個体における,樹体生理や環境要因によるみつ症発生への影響を極力低減させる必要がある,本年度は,ニホンナシ`豊水'×`南水'および`豊水'×`豊月'のF_1系統を材料として用いて,みつ症が発生するステージの検討を行った.その結果,両交雑組み合わせとも感受性系統は8月中旬以降にみつ症を発生することが明らかになった.また,感受性系統はいずれも比較的大型果であり,明らかに果肉先熟の傾向を示していることが明らかになった.さらに,みつ指数が3以上の重症果の発生は,感受性系統でのみ観察された.特に`豊水'×`南水'のF_1である16-17系統と16-24系統の間には顕著なみつ指数の変異が観察された.したがって,これらの系統が,来年度以降,みつ症果の発生機構を検討するうえでの有望な材料となりうる可能性が示唆された.一方,cDNAサブトラクション法による差時的,特異的発現遺伝子の選別を目的として,`豊水'果実を材料として,みつ症発生果と健全果で果肉特異的に発現する遺伝子のcDNAライブラリーを作製した.現在,cDNAサブトラクション法により,みつ症発生時に差時的,特異的に発現する遺伝子の選別を行なっている.ニホンナシのみつ症は,果肉部が水浸状となり日持ち性の低下や果肉の褐変をもたらし,商品価値を著しく低下させる重大な生理障害である.ニホンナシ品種`豊水'は果実品質に優れるが,みつ症を発生しやすいためみつ症果が市場に流通し,しばしば問題となる.これまで栽培温度などの環境要因,袋掛けや剪定などの栽培要因およびエチレンやジベレリンなどの植物ホルモンの影響など様々な研究が行われ,みつ症発生を抑制する要因および助長する要因の検討が行われてきた。しかしながら,みつ症の発生に関する遺伝子についての報告は無い.本年度は,みつ症感受性品種`豊水'のみつ症組織および健全組織を用いたcDNAサブトラクションを行い,みつ症組織および健全組織に特異的に発現する遺伝子を明らかにし,それらの解析を行った.`豊水'果実を用いてみつ症組織および健全組織からHot borate法により全RNAを抽出した.Poly(A)+RNAに精製した後,cDNAサブトラクションを行った.次いで,サブトラクションサンプルのPCR産物を,クローニングおよびシークエンスした.得られたcDNAライブラリについてはBLAST解析により相同性検索を行った.両方向のサブトラクションおよびクローニングにより,みつ症組織に特異的な遺伝子を2クローン,健全組織で特異的なmRNAを32クローン選抜した.これらの配列についてBLAST解析を行った結果,既知のmRNAと相同性の高い配列が,みつ症組織特異的mRNAで2種類,健全組織特異的mRNAで12種類選抜された.残りの20種類については新規の遺伝子であった.来年度以降は,選抜された遺伝子について,その機能と,みつ症果の発生との関連性を解析していく予定である.ニホンナシのみつ症は,果肉部が水浸状となり日持ち性の低下や果肉の褐変をもたらし,商品価値を著しく低下させる重大な生理障害である.

これまで,みつ症の発生に関する遺伝子についての報告は無かったが,前年度までに本研究において,みつ症感受性品種'豊水'果実のcDNAサブトラクションを行い,みつ症組織および健全組織に特異的に発現する遺伝子群の部分配列を明らかにした.本年度は,みつ症への関連が疑われる同遺伝子群について,リアルタイムPCR法を用いて品種や果実の発達段階の違いによる発現量の変化を網羅的に解析した.その結果,みつ症組織で強発現するメタロチオネイン遺伝子は, '豊水'以外のみつ症感受性品種においても未熟果の段階で発現が上昇することが明らかとなった.また,メタロチオネイン遺伝子の部分配列からプライマーを合成し,ゲノム上での配列を決定したところ,本遺伝子には約100bpのイントロンが挿入されていることが明らかとなった.さらに,インバースPCR法によって,本遺伝子の全コード領域を明らかとし,取得した配列に基づいてメタロチオネインタンパク質のアミノ酸レベルでの分類および機能の推定を行った。その結果,本遺伝子がコードするタンパク質は,メタロチオネインのなかでもタイプ3に分類され,バナナの果実においては成熟に伴って発現が高まることが明らかとなった.本研究において,みつ症に関連する可能性が高い遺伝子がはじめて特定されたことから,今後,同遺伝子とみつ症果の発生との関わりをより詳細に解明することで,みつ症果発生の遺伝的メカニズムの解明が期待できる.
ES細胞由来奇形腫のゲノム不安定化の解析

多能性幹細胞であるES細胞やiPS細胞の臨床応用においては、多種多様な細胞系譜への効率的な分化誘導法の確立と共に、それらのゲノム・エピゲノム安定性維持が不可欠である。本研究では、「ES細胞が奇形腫を形成する過程およびin vitroでの増殖・分化過程におけるゲノム不安定化とその機構、ならびにその制御」の解明を目的とする。21年度で解明された成果とその意義を以下に列挙する。1.マウスES細胞をある条件下で継代培養すると、初期にDNA2重鎖切断が生じ、染色体不安定化・増殖停止が認められ、その後パイルアップコロニーが形成される。このコロニーを形成する形質転換細胞は、p53に変異が導入され造腫瘍能も高く、がん幹細胞様細胞と考えられる。ES細胞を幹細胞のモデルとして、幹細胞からがん幹細胞が直接生じることが示唆された。がん幹細胞の研究においても興味深い。2.ES細胞に特異的に発現し、奇形腫の発生とも関わる、恒常活性型のERasの転写制御について、プロモーターを同定し、Nanogが転写制御に関わることを明らかにした。さらに、イントロン1に強力なエンハンサーの存在することが判明した。ERas転写制御機構を明らかにした意義は大きい。3.ES細胞に高発現している機能未知の遺伝子の1つであるDPPA4は活性クロマチンに結合し、ES細胞のstemnessに関わっていることは既に明らかにした。今回、DPPA4タンパク質はN末端側でDNAとC末端側でコアヒストンH3と結合し、リンカーヒストンH1と類似のmobilityを示すことを解明した。DPPA4がES細胞のクロマチン構造を変換させることが示唆された。万能細胞ともいえるES細胞やiPS細胞の臨床応用においては、多種多様な細胞系譜への効率的な分化誘導法の確立と共に、それらのゲノム・エピゲノム安定性維持が不可欠である。20年度で解明された成果とその意義を以下に列挙する。このコロニーを形成する形質転換細胞は、p53に変異が導入されており、がん幹細胞様細胞と考えられる。2.マウスES細胞をactivin Aで4日間、さらにEGF/FGF2/HGFで4日間培養することによって、肝芽細胞様細胞の分化に成功した。これら肝前駆細胞を胎齢14.5日のマウス胎仔肝臓にex utero法にて直接移植し、5日後(胎齢19.5日)に検定したところ、分化・増殖していることが判明した。本培養条件下では奇形腫は生じなかった。3. ES細胞に特異的に発現し、奇形腫の発生とも関わる、恒常活性型のERasの転写制御について、プロモーターを同定し、NanogとKlfファミリーたんぱく質が結合することを明らかにした。
初期ロマン主義及び初期ドイツ観念論における宗教理論の形成過程に関する研究

まず基礎作業として、初期ロマン主義および初期ドイツ観念論の諸思想に関してこれまでにドイツにおいてなされた研究の成果を可能な限り収集することに努めた。設備備品費は、当初の計画に沿ってこのために使用された。以上の基礎作業の上に立って「ドイツ観念論最古の体系計画」において構想された「新しい宗教」、ならびにシュレ-ゲルの「神話について語る」等における「新しい神話」の構想の内容を検討した。その際、個々の文献、個々の思想家を個別的に取り扱うのではなく、それらが共通の思想的な基盤の上に成立した点に注目し、その共通性、相互影響にとくに注意を向けた。またそのような構想を準備した思想(レッシング、ヘルダー、ノヴァーリス)と、それが与えた影響(シェリング、ヘーゲル、ヘルダーリン)をも視野に入れながら考察を行った。この研究を通して明らかになった事柄の一つとして、初期ロマン主義、初期ドイツ観念論のなかで模索された宗教理論が、いわゆる「汎神論論争」、「無神論論争」の検討、批判的な受容から成立してきた点を挙げることができる。ヤコ-ビによるレッシングの「スピノザ主義」批判を契機として引き起こされた「汎神論論争」と、神を道徳的世界秩序として捉えたフィヒテの立場をめぐってなされた「無神論論争」の、それぞれの論争点を明らかにし、かつそれがシュレ-ゲルやシュライエルマッハ-、ヘーゲルやシェリングの宗教理論の形成にどのような役割を果たしたかを解明することを次の課題としたい。
マレーシア・サバ州の両生類インベントリー再評価

2003年から2005年にかけて、サバ大学、サバ公園局のメンバーの協力を得てマレーシア・サバ州のクロッカー山脈国立公園、タワウヒルズ公園、タビン野生生物保護区、キナバル国立公園において両生類インベントリーの再評価の調査を行った。その結果、数種の未記載種が発見され、調査された全地域について多くの分布が初めて記録された。音声学的な情報によって新種の発見率が上がり、録音されたカエルの鳴き声を用いることが地域の分布情報を集める上で極めて有効であった。実際に、Leptolalax属の新種や、Megophrys属のサバ州初記録の種は、鳴き声をもとに発見された。また、Meristogenys属の未記載の隠蔽種の発見や、Staurois属の1隠蔽種の分類学的検討には、生化学的な手法が大きく貢献した。生化学的な手法は、混乱の極致にあるMeristogenys属の幼生と成体の対応付けにも有効であった。従来は、標本が蓄積され、形態変異の比較が可能となった結果、多くの隠蔽種が発見されてきたが、現在は、音声学的および生化学的手法がカエル目のインベントリーの作成に貢献するようになった。アシナシイモリ目についても、今回の調査でCaudacaecilia属の抱卵が初めて観察され、属の有効性について議論を行う等の成果を得た。今回調査された地域が、それぞれの国立公園や保護区内のきわめて限られた範囲でしかないことを考えると、サバ州では更に高い両生類多様性が残されていると期待される。種数累積曲線からみて、サバ州産の種数は今後も増加することが予想され、近い将来に完全なインヴェントリーを完成することは無理であろう。しかし、急速に生息地が失われつつあるので、本調査で用いられたような手法を用いて、より精度の高いサバ州産両生類相インヴェントリーの早急な作成が望まれる。マレーシア連邦サバ州のクロッカー山域国立公園において、両生類相のインベントリー調査を行い、次のような成果を得た。(1)この地域では初記録となる、アシナシイモリ2種を発見した。捕獲されたのはすべて幼生であるため、種名の同定はできないが、この地域の目録にカエル目以外の両生類が初めて加わることになった。(2)現地の野外で録音された、ホソウデナガガエル属Leptolalaxの繁殖音(鳴き声)を声紋分析した結果、新種と考えられるものが2種含まれていることが判明した。この結果についての論文原稿は受理され、印刷中である。(3)ボルネオハヤセガエル属Meristogenysの成体および、幼生を多数採集し、形態観察とDNA分析を行うことにより、成体と幼生の対応づけに成功した。また。これまでに記載されているものよりも、はるかに多くの遺伝的に異なる集団が認められ、新種と考えられるものが少なくとも、2種は含まれていることが分かった。(4)ボルネオハヤセガエル属は、かつてハヤセガエル属Amolopsに含まれており、現在も独立属とみなすことに否定的な考えもある。今回の調査で得られた試料と、これまでの科研費によって蓄積されているボルネオ以外の真正ハヤセガエル属などの試料とを用いてDNA分析を行った結果、広義のハヤセガエル属は多系統であるが、ボルネオハヤセガエル属は単系統をなすので、独立属とすべきという結論が得られた。

(5)このような、鳴き声の録音や、幼生の採集を含む野外での調査結果と、室内実験の結果を併せて、クロッカー山域国立公園の両生類の多様性を見直したところ、既知の63種が、69種に増大した(9.5%の増大)。これまで調査が良くなされ、多様性が解明していた地域にも、形態だけでは区別の極めて難しい隠蔽種が、まだ多数存在していることが実証されたことになる。また、これまで目録に加えられた種数の増加率から見て、今後も両生類の多様性は増大することが予想された。マレーシア連邦サバ州のタビン野生生物保護区およびタワウヒルズ国立公園において、両生類相のインベントリー調査を行い、次のような成果を得た。(1)タワウヒルズ国立公園において、この地域では初記録となるアシナシイモリの1種を発見した。捕獲されたのは亜成体と幼生であったが、Caudacaecilia属の一種であり、サバ州からは属としても初記録であることが分かった。本属は染色体数も報告がなかったために核型の調査を行った。その結果は論文としてまとめて現在投稿中である。(2)サバナガレガエルStaurois natatorに見られた大小の2型について遺伝的な関係を調査した結果、小さい方が隠蔽種であることが分かった。他種との系統関係を調べた結果および文献調査から、隠蔽種に対しては、現在シノニムとされているS.parvusを復活させるべきであると考えられた。(3)ボルネオハヤセガエル属Meristogenysの成体および、幼生を多数採集し、形態観察とDNA分析を行うことにより、成体と幼生の対応づけを更に進めた。これまでに記載されているものよりも、はるかに多くの遺伝的に異なる集団が認められ、新種と考えられるものが含まれていることが分かった。(4)タビン野生生物保護区では25種の両生類を確認した。そのうち2種が現地では初報告の種であり、これまでに確認された種数は34種となった。タワウヒルズ国立公園においては初報告のアシナシイモリ1種を含め39種の両生類を発見して、確認種数を52種とした。これまで調査が良くなされ、多様性が解明していた地域にも、調査が不十分であったり、また形態だけでは区別の極めて難しい隠蔽種がまだ多数存在していることが実証されたことになる。また、これまで目録に加えられた種数の増加率から見て、今後も両生類の多様性は更に増大することが予想された。マレーシア連邦サバ州のキナバル国立公園およびクロッカー山脈国立公園において、両生類相のインベントリー調査を行った結果、以下のような成果が得られた。(1)キナバル国立公園のサヤップにおいて、この地域では初記録となるアシナシイモリを発見した。捕獲されたのは幼生であり、確かな同定はできなかったが、900mという高標高で採集されたのは珍しい記録であった。(2)キナバル山周辺のMeristogenys kinabaluensisの幼生が、尾の毒腺の有無に関してクロッカー山脈のものとは異なっていることが明らかになった。DNA解析の結果、両者には遺伝的にも差が認められ今後分類学的に詳細に調査する必要がある。(3)昨年までの本研究の結果、ホソウデナガガエル属の未記載種の存在が明らかにされていたが、そのうちの一種がポーリンでLeptolalaxpictusと同所的に生息することを確認した。(4)これまでボルネオ島のサラワク州でしか知られていなかったMegophrys dringiをクロッカー山脈において発見した。同属のM.kobayashiiが短い時間しか鳴かないのに対し、本種は比較的長い時間鳴き続けるなど音声学的に大きく異なっていた。
マルチモーダル音声認識・合成によるインターフェースの構築

人間が関わるコミュニケーションにおいては、視覚と聴覚情報の担う役割が非常に大きい。このため,人間に優しいヒューマンインターフェースを実現する上で,視覚・聴覚を融合したマルチモーダルインターフェースの開発が重要な課題となっている。このようなマルチモーダルインターフェースの一つとして,音声と唇動画像による「バイモーダル音声認識」と,任意の文字テキストから自然な音声と唇の動きを同時に生成する「バイモーダル音声合成」を,「バイモーダル音声入出力システム」として統一された枠組の中で実現することを目指し,以下のような研究を行った.・唇画像データベースの作成:音節または音素を単位とするHMM作成のために必要な唇画像を音声と同期して収録した。また,同期収録音声に基づいてラベル付けを行った。・唇動画像による音声認識唇のためのHMMの学習法について検討し,新たに提案した位置の正規化学習が効果的であることを示した.・唇動画像の生成については,輪郭モデルを用いるものと,画像ベースのものとを並行して,検討した.いずれにおいても,これまでに提案したHMMからのパラメータ生成アルゴリズムを用いることにより,良好な唇動画像を生成できることを確かめた.・以上の成果に基づいて,「入力音声に同期した唇動画像を生成するシステム」,「テキストから,音声と唇動画像を同時に生成するシステム」などを構築し,それらの有用性を示した.人間が関わるコミュニケーションにおいては,視覚と聴覚情報の担う役割が非常に大きい。このようなマルチモーダルインターフェースの一つとして,音声と唇動画像による「バイモーダル音声認識」と,任意の文字テキストから自然な音声と唇の動きを同時に生成する「バイモーダル音声合成」を,「バイモーダル音声入出力システム」として統一された枠組の中で実現することを目指し,以下のような研究を行った.●唇画像データベースの作成:音節または音素を単位とするHMM作成のために必要な唇画像を音声と同期して収録した。●唇動画像による音声認識唇のためのHMMの学習法について検討し,新たに提案した位置の正規化学習が効果的であることを示した.●唇動画像の生成については,輪郭モデルを用いるものと,画像ベースのものとを並行して,検討した.いずれにおいても,これまでに提案したHMMからのパラメータ生成アルゴリズムを用いることにより,良好な唇動画像を生成できることを確かめた.人間が関わるコミュニケーションにおいては、視覚と聴覚情報の担う役割が非常に大きい。・唇動画像による音声認識唇のためのHMMの学習法について検討し,新たに提案した位置の正規化学習が効果的であることを示した.・唇動画像の生成については,輪郭モデルを用いるものと,画像ベースのものとを並行して,検討した.いずれにおいても,これまでに提案したHMMからのパラメータ生成アルゴリズムを用いることにより,良好な唇動画像を生成できることを確かめた.・以上の成果に基づいて,「入力音声に同期した唇動画像を生成するシステム」,「テキストから,音声と唇動画像を同時に生成するシステム」などを構築し,それらの有用性を示した.
造血幹細胞の増殖・未分化維持機構における癌抑制遺伝子PTENの役割

種々の血管増殖因子、造血因子やサイトカイン刺激はPI3Kを活性化させる。PI3Kはリン脂質であるホスホイノシチド-4,5-2燐酸(PIP2)をホスホイノシチド-3,4,5-3燐酸(PIP3)に変換し、PIP3はAktを活性化させることによって細胞増殖、アポトーシス抵抗性、細胞遊走能亢進に働く。PTENはPIP3を主な基質とするホスファターゼでこの経路を負に制御する癌抑制遺伝子である。我々は血液幹細胞や血管内皮細胞幹細胞におけるPTENの機能を解析するために、まずはTie2CreTgマウスとPTENfloxマウスを交配し、ヘマンギオブラストレベルでPTENを欠損させた。このヘテロ変異マウスは、VEGFやAng-1などの血管成長因子に対する血管新生能や腫瘍血管新生が亢進し、このために腫瘍の増殖速度が亢進していた。ホモ変異マウスは、壁細胞の集積不全のために、血管のリモデリング障害をきたし、出血をきたして胎生11日までに全例死亡した。またこれらの原因として、種々の血管成長因子の発現変化や接着因子の変化などの下流の分子異常を特定した。このようにPTENは血管新生や、血管形成に重要な分子であることをはじめて見出した(投稿中)。しかしながら、このマウスでは胎生中期までに全例死亡したために、血液幹細胞におけるPTENの機能解析は困難であった。そこでMX1Cre Tgマウスを用いて、polyI:Cを投与することによって、PTENを造血細胞でほぼ100%欠損させることに成功し、造血幹細胞が増加していることを見出した。種々の成長因子からの刺激はPI3Kを活性化し、PI3KはPIP2をPIP3に変換することによって下流のAktを活性化し、細胞増殖、アポトーシス抵抗性に働く。癌抑制遺伝子PTENはPIP3をその主な基質とし、この経路を負に制御する。これまでにPTENの下流ではβ-cateninやp21などの分子の発現が変化することが報告されており、これら分子は未分化性に関与することが知られている。PTEN欠損マウスは胎生早期に致死となることから、我々はPTENfloxマウスを作成し、種々の臓器でPTENを欠損させた。神経細胞でPTENを欠損させると、神経幹細胞の未分化性が維持されることが報告されており、また我々は生殖細胞でPTENを欠損させたところ、未分化な細胞のマーカーを持つ細胞が増加すること、始原生殖細胞からのEG細胞の形成率が著しく高いことから、PTENの欠損はやはり生殖細胞においても未分化性を維持させていることを報告した。今回我々はヘマンギブラストレベルでPTENを欠損させて、造血幹細胞、血管内皮細胞におけるPTENの機能を解析することを目的に実験を行った。Tie2Creを用いてPTEN欠損マウスを作製したところ、マウスは未分化(VEGFR+,CD31-)な原始血管叢のみの血管で血管腔は拡大し、血管のリモデリングが傷害されて中小のサイズの血管は認められなかった。また心筋は菲薄化し、血管には壁細胞の集積は認められず、脆弱で、胎生11日までに全例出血によって死亡した(投稿準備中)。これらマウスはコンディショナルに欠損させてもやはり胎生早期に死亡したため、血液幹細胞におけるPTENの役割の解析は困難であった。そこで、MX1Creを用いて検討することにし、現在交配を開始している。
なぜ,学習意欲が低いのか:外国語学習者の動機づけを高める指導方略の開発

本研究では,動機づけを高める要因(動機づけ要因)を特定し,そのような要因と動機づけとの関連を,対象となった調査協力者の全体傾向と個人差の観点から検討した。次に,動機づけ要因を取り入れた教育介入を一定期間にわたって実施し,その効果を同じく全体傾向と個人差の観点から検討した。さらに,これらの研究から得られた教育実践的知見を踏まえた英語教育プログラムの開発,具体的には,英語運用能力判断基準(Can-Doリスト)の策定と,それに基づいた教材開発,カリキュラム設計を行った。第二言語・外国語教育に限らず,教育学,心理学など幅広い分野における動機づけ研究を概観し,外語学習者の動機づけ要因に関する分類・整理を行った。その成果をもとに,予備調査を通じて,質問紙尺度の開発に取り組んだ。次に,上記の動機づけ要因を意図的に取り入れた教育実践的介入を行い,その効果について検討した。より具体的には,スぜーキシグ,冒ライテ辱ングの授業を対象とじて,自己決定理論に基づいだ教育介入を一定期間にわたって行い.その効果を全体傾向と個人差の観点から検証した.スピーキングに関する研究については田中・廣森て(2007),ライティシグに関する研究についてはHiromori(2007),田中・廣森・山西・広瀬(2007)にまとめた。従来の動機づけ研究は,対象となる学習者の全体傾向を議論することに終始しており,個人差に応じた適切な学習支援を行う上では十分な示唆を提供できずにいた。それに対して,上記の研究では,学習者の動機づけ特性に応じて,求められる学習支援のあり方が異なる可能性があるということを,実際のデータをもとに示した。さらに,先述した一連の研究から,動機づけは文脈依存性が高いことが明らかとなった。したがって,そのような動機づけの特性をよりミクロ的な視点からえるため,タスクに対する取り組み(具体的には,特定のタスクに対する期待や価値といった認知的評価)と動機づけの関連についても調査を行った。その成果については,廣森(2007)にまとめた。昨年度に実施した研究(例えば,廣森(2007))から,効果的な教育介入を志向する上では,動機づけの文脈依存性を考慮する必要があることが明らかになった。そこで今年度は,外国語学習者の動機づけを"Situation-specific"な側面からより詳細に検討することを研究の目的とした。より具体的には,実際の学習場面における動機づけを"Pre-decisional phase"(意志決定前段階)と"Post-decisional phase"(意志決定後段階)から成り立つものとして捉え(Heckhausen, 1991 ; Heckhausen & Kuhl, 1985),両者の関連を調査対象となる学習者の全体傾向と個人差の観点から調査することとした(例えば,廣森(2008), Hiromori(2009))。研究調査の結果として,特定の学習活動に対する目標を設定し,その遂行を可能にする意図を形成する段階と,形成された意図を実行に移し,目標達成に向けた行動に実際に従事する段階は密接な関連を有することが明らかになった。従来の動機づけ研究が主たる対象としてきた前者("Pre-decisional phase")に加え,後者("Post-decisional phase")も同じ研究の枠組みに組み込むことにより,より統合的に動機づけのプロセスを捉えることが可能になり,ひいては,より効果的な学習指導の展開につなげることが可能になるものと期待する。本年度は,これまでの動機づけ研究で得られた成果を踏まえ,そこから効果的な外国語(英語)の指導に向けた具体的示唆を導き出すことを目的とした。以下では,その概要を3点にまとめる。(1)行動の目標や目的(質的側面)を規定する「動機」外国語学習における動機の構造を記述・説明した研究は,社会心理学的なアプローチによる研究,教育心理学的なアプローチによる研究,新たな展開を志向した研究のように進展してきた。これらの研究からは,さまざまな理論で論じられている複数の動機をバランスよく有すること,言い換えれば,多様な学習動機を持つことの重要性を指摘することができる。(2)前者に加え,実際の行動の強さ(量的側面)を規定する「動機づけ」多様な学習環境において,動機づけがどのように発達・変化するのかを記述した研究,ならびに動機づけのプロセスに影響を与える諸要因を明らかにした研究などが見られる。これらの研究からは,学習動機を継続的に持ち続けること,ならびに動機づけに肯定的な影響を与えると想定される要因をうまく利用することの重要性を指摘することができる。(3)行動の質的・量的側面への介入を志向する「動機づける」どのようにすれば外国語学習への動機づけを高めることができるのか,言い換えれば,外国語学習者を動機づける理論の構築といった,より実際的な問題を直接的に扱った研究が増えつつある。これらの研究からは,いくら効果的だと思われる指導法が開発されたとしても,それらが唯一絶対だと考えるには慎重になるべきであり,個人差を踏まえた指導こそがより求められるということを指摘することができる。