hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
iPS細胞を用いたハイブリッド型人工神経による末梢神経欠損部の架橋実験

これまでわれわれは、Sehwann細胞と生体吸収性ポリマーチューブを組み合わせたハイブリッド型人工神経を作成し報告してきた。今回の研究において、1) ips紐胞から分化誘導させた神経系細胞が動揺に人工神経Lで三次元士音養可能であること、2) iPS細胞によるハイブリッド型人工神経をマウス坐骨神経欠損部に移植したところ、人工神経単独と比較し知覚機能、運動機能および組織学的に優位な神経再生が得られ、また自家神経移植と同等に末梢神経再生を促進することが明らかとなった。【目的】これまでわれわれは、培養schwann細胞と生体吸収性ポリマーチューブを組み合わせたハイブリッド型人工神経を作成し報告してきた。現在、iPS細胞(人工多能性幹細胞)が開発されiPS細胞から神経系細胞への分化誘導が可能となっている。平成21年度の目的は、iPS細胞を用いたハイブリッド型人工神経の作成のために、iPS細胞から分化誘導させた神経系細胞がこの人工神経上で三次元培養可能かどうか、その細胞特性について検討することであった。【結果】HE染色にてPN,SNともに人工神経の管腔内での生着が確認され、抗S-100抗体陽性、抗GFAP抗体陽性、抗oligodendrocyte抗体陽性の細胞を管空壁に認めた。その染色性は二つのneurosphereについて差違は認めなかった。すなわち、iPS細胞から分化誘導されたneurosphereは、人工神経上で3次元培養が可能であり、その多分化能は保持されたと考えられた。マウス(オス12週齢、80-100g)を用いて、坐骨神経に5mmの神経欠損部を作成し内径1mm長さ9mmの人工神経で架橋した実験モデルにおいて神経の再生について検討を加えた。まずマウス由来のiPS細胞より神経幹細胞から神経系細胞へと誘導した第2継代培養神経系細胞(Secondary Neurosphere細胞:以下SN細胞)を作成した。ついで、前述のSN細胞を、長さ9mm、内腔1mmの前述の人工神経上に播種し生着させた。培地は基本的には10%子牛血清添加F12Ham's培地とした。そして人工神経にSN細胞に播種させてから再度培養し、12週日目に人工神経を採取し、内層の共重合体スポンジ上のシュワン細胞の状態を、光学顕微鏡および免疫染色にて評価した。免疫染色法としては、シュワン細胞を特異的に染色する抗S-100抗体、シュワン細胞内に特異的に存在しグリアフィラメントを形成しているグリア線維酸性蛋白質(GFAP)に対する抗GFAP抗体、シュワン細胞が産生するlamininに対する抗laminin抗体を用いた。また、再生神経計測用にLFB染色も行った。そして組織学的に人工神経上でSN細胞の増殖の程度と再生神経の状態を評価した。その結果、マウスに移植後12週においてSN細胞付加人工神経は、付加しない場合と比べ有意に神経の再生を誘導した。(x^2検定)また機能的にも、TFI(Tibial Functional Index)を使用し比較検討したところ、SN細胞付加人工神経群は有意に良好な機能回復を示した。【iPS細胞より誘導された神経系細胞によるハイブリッド型人工神経と自家神経移植群との比較検討】実験系はこれまで同様にマウスを用いた末梢神経欠損部再建モデルを用いた。具体的にはマウス(オス12週齢、80-100g)を用いて、坐骨神経に5mmの神経欠損部を作成し内径1mm長さ7mmの人工神経で架橋した。架橋後12週目に坐骨神経を採取し、人工神経の中央・末梢端の横断切片についてHEおよびLFB染色を行った。神経の再生および血管の新生について、組織学的な評価項目は単位面積あたりの再生神経数、平均再生神経径、新生血管数、新生血管面積とした。研究協力者である山中伸弥(京都大学・ips細胞研究センター長)の協力を得てマウス由来のips細胞より神経幹細胞から神経系細胞へと誘導した第2継代培養神経系細胞(Secondary Neurosphere細胞:以下SN細胞)を、長さ9mm、内腔1mmの前述の人工神経上に播種し生着させた。そして人工神経にSN細胞に播種させてから再度培養し、マウスの神経欠損部に移植し先述のように12週目に人工神経を採取した。実験群としては、人工神経群(細胞付加なし)、ハイブリッド神経群(SN細胞付加)2群とした。以上の群について、神経再生の評価を機能的及び組織学的に行った。機能的評価としてTFI(Tibial Functuinal Index)を使用した。組織学的な神経再生の評価項目は単位面積あたりの再生神経数、平均再生神経径、新生血管数、新生血管面積とした。これらについて自家神経と比較検討することによってSN細胞付加による神経再生促進効果を評価した。その結果、人工神経群(細胞付加なし)に比べてハイブリッド神経群(SN細胞付加)では、移植後4,8,12週目のいずれにおいても統計学的に優位な差を認めた。
ホスファチジルイノシトール・グリカンの糖鎖構造解析

1.亜硝酸脱アミノ化とピリジルアミノ化の反応条件を設定するために、グルコサミンを用いて至適条件を検討した。50mM亜硝酸溶液中で25°C、16時間亜硝酸脱アミノ化し、次いで蒸発乾固の後、定法よりも穏和な条件でピリジルアミノ化を行い、40%の収率でグルコサミンから2,5-アンヒドロマンノースを得る系を確立した。2.ラット肝臓より、溶媒抽出によって脂質画分を調製し、前述の方法に従って亜硝酸による脱アミノ化を行い、目的のホスファチジルイノシトール・グリカン(PIG)から糖鎖部分を分離した。分離したオリゴ糖をピリジルアミノ化によって蛍光標識し、ゲル濾過によって過剰の試薬を除去した。こうしてクル-ドなPIG糖鎖画分を得た。還元末端糖分析の結果、ゲル濾過カラム体積の約100%に相当する部分に、2,5-アンヒドロマンノースを還元末端にもつオリゴ糖が検出された。このオリゴ糖を精製するために、まずサイズが分画HPLCで展開したところ目的の糖鎖は3.1グルコース単位の位置に溶出されてきた。さらに精製を進めるために、逆相HPLCに供したところ、単一ピークにまで精製することができた。3.得られたPIG由来ピリジルアミノ化オリゴ糖の構造解析を行った。酸加水分解して還元末端糖分析を行ったところ、2,5-アンヒドロマンノースが検出されたので、脱アミノ化前の還元末端は、グルコサミンだと推定された。さらに糖水解酵素消化と糖組成分析を行い、糖鎖構造解析を行った。
液体中の生体物質の粒子線照射反応ダイナミクスとその防護機構に関する研究

本年度の研究目的である「生体分子の放射線損傷における液体の水分子の役割」を解明するために以下の研究を実施した。生体分子として構造の異なる3種類のアミノ酸(グリシン、プロリン、ヒドロキシプロリン)を用いて、水溶液と気相の生体分子の照射実験との比較から、生体分子の損傷は、生体分子の周囲に存在する水分子によって抑制されることを明らかにした。水溶液と気相のアミノ酸分子への照射実験から、水溶液と気相で共通する結果として、高速重イオン照射したアミノ酸分子の解離は、アミノ酸分子内のC-Cα結合が最も切断されやすいことが分かった。気相標的の場合は、解離していない分子イオンの強度に比べて分解片の強度が高いことが分かった。一方、水溶液標的の場合は、原子状分解片が観測されなかった。1つのアミノ酸分子に付与されるエネルギー量をCore-and-Bondモデルを用いて計算すると、分子の分解度合いと1分子に付与されたエネルギー付与量には相関があることが分かった。気相標的の照射実験における分子の分解度合いとアミノ酸1分子に付与されたエネルギー付与量との関係を用いて、水溶液中でアミノ酸1分子に付与されたエネルギー付与量を求めた結果、気相の場合に比べておよそ半分に減少することが分かった。つまり、液体環境においては生体分子の解離が抑制されることが明らかになった。損傷の抑制の要因として、生体分子の周辺に存在する水分子へのエネルギー分散であると推定し、水溶液中でアミノ酸1分子に付与されたエネルギー付与量の値とアミノ酸分子への水分子の配位数から水1分子に分散したエネルギー量を算出すると、およそ6.5 eVとなった。研究の技術面での進展を図るために実験装置の改良に取り組み、液体の照射実験を行う真空散乱槽の真空度を良くするために、クライオポンプを自ら設計し従来の真空度に比べておよそ2桁向上させることに成功した。翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。
メタンガスを発酵原料とした有用物質生産菌取得法の開発

有用物質を生産するメタン資化性菌のスクリーニング法を開発した。メタン資化性菌が他の炭素源を利用できない点と、大腸菌等の一般細菌がメタンを利用できない点に着目した。炭素源を含まない平板培地に大腸菌等の検定菌を混合した平板培地を考案した。この培地に生育したメタン資化性菌が物質生産を行えばコロニー周辺に大腸菌が増殖して白く濁る。この培地を用いて実際に有用物質を生産するメタン資化性菌を取得した。申請者はメタン資化性菌の栄養特性を利用して、ターゲットを限定しない網羅的スクリーニング法を考案した。メタン資化性菌が他の炭素源を利用しない(できない)点と、大腸菌がメタン、メタノールを利用できない点に着目した。すなわち、炭素源を含まない平板培地にサンプルを塗布し、その上に大腸菌を混合した軟寒天を重層する。これをメタンガス存在下で培養することにより、平板上にメタン資化性菌のコロニーを形成させる。このコロニーのうち大腸菌が利用可能な【何か】を生産するものがあれば、コロニー周辺に大腸菌が増殖し、白く濁る。今年度はスクリーニングに最適な指標菌の選択、その濃度について検討を行い、アッセイ系の最適化を行った。その結果大腸菌に加えてセラチア菌を添加した場合において広いスペクトル、感度を有する検定培地を作成することに成功した。また培地の保存性も確認した。ついで、日本国内の水田を中心にサンプルを採取し、これを適宜希釈して検定培地に塗布して嫌気ジャーに入れ、ジャー内部のガスをメタン:空気=2:8(v/v)に置換して培養した。その結果周辺に大腸菌+セラチア菌の生育に伴う濁りを生じたコロニーをピックアップし、メタン存在下、無機塩寒天培地上で数回培養して純化し、保存した。具体的には、炭素源を含まない平板培地に検定菌を混合した寒天を重層する。ここに供試メタン資化性菌をスポットし、これをメタンガス存在下で培養することにより、平板上にメタン資化性菌のコロニーを形成させる。供試菌が検定菌の利用可能な【何か】を生産すれば、コロニー周辺に検定菌が増殖し、白く濁る。日本国内の水田を中心にサンプリングした土壌を20種ずつ混合して、無機塩培地30mLを加えた125mL容のバイアルビンにいれ、ヘッドスペースの空気を30mL引き抜き、同量のメタンと置換した。これを30°Cで振とう培養し1週間毎に3回植え継いだ。生育の見られたバイアルビン73本からそれぞれメタン資化性菌を各1ー5株分離し、昨年度選定した指標菌を用いたアッセイ用平板を用いて、コロニー周辺に白濁の見られた菌株を約10株分離した。最適な検定培地の制作に成功した。また、その培地を用いて、複数の候補株の取得に成功している。産業微生物資源学取得した候補株について、生産物の同定と生産条件の最適化を試みると同時に、権利化を行う。培地の最適化が想定よりも早く完遂できたため、実験に使用した消耗品が少なかった。今年度の検討結果より、スクリーニングや生産物の同定作業には予想よりも多くの労力を必要とするため、微生物化学に精通したの博士研究員の雇用を行い、作業を迅速に行う。
患者中心医療を促す医師・医学生のEmotional Intelligence分析

本研究は医療従事者に不可欠な共感的態度・対人関係能力などに係るEmotional Intelligence(邦訳は感情知性、心の知能など)に着目し、医学科学生のEIとコミュニケーション能力等の分析を試みた。また、医学科新入生を対象に医師となる理由を分析し、医師のプロフェッショナリズムに関する意識についても国際比較検討を行った。本研究では医学科学生と医師・研修医を対象としてEmotional Intelligence(EI)という概念に基づいた情意領域の測定を試みる。情意領域に対する介入教育の効果をEI測定によって分析し、また、EIが患者満足度や患者・医師関係と関連するという仮説を検証する。平成21年度の成果は以下の通りである。(1)医学科1年次学生約120名を対象として、情意領域教育カリキュラムである『患者家族との対話とグループ討論』、『医療倫理Cinemeducation』等を実施し、医師患者関係に対する学生の意識の受講前後の変化を用紙法で調査した。調査結果の自然言語処理技術による分析を進めている。長期に学生のEI値分析については測定法の準備を進めたが、実施には至らず次年度に取り組むこととした。短期的な効果のみならず、翌年以降におよぶ効果の検証を行こととした。(2)医師・医療従事者を対象とする8週間の医療コーチング・セミナーを企画し、平成22年度より実施する運びとなった。受講者のEIの測定法について準備中である。(3)平成22年度以降に実施予定の医師の共感的態度、患者満足度測定について研究計画の準備を進めている。(4)医学科学生の臨床実習における態度を含む評価方法について、全国80大学医学部を対象とする調査を企画し、実施した。平成22年度末時点で77大学から回答を得て,分析を進めている。本研究は医学科学生を対象としてEmotional Intelligence(EI)という概念に基づき、情意的領域の能力を分析することを目的とした。新たな研究目的として、医学教育において重視されている医師のプロフェッショナリズム関する国際比較調査をH22年度に企画した。H22年度の成果は以下の通りである。(1)EI分析として、H22年9月に医学科1年生を対象にEQSというEI分析シートを用いた調査を行った。調査は自由参加で回答は匿名とした(回答数約120)。(2)医学科1年次の早期医療体験実習に紅いて、医師を志す理由についてグループ討論を行った。この際、各学生が医師を志す理由を30ずつ書き出し、さらに相互にコメントを加えた。記載は匿名とした。この記載用紙のうち当該学生の同意を得たもののみ回収した。のべ3,000以上の手書き文が得られ、これをタイプして電子情報化してテキスト・マイニング法で分析することとした。(3)医師のプロフェッショナリズムに関する国際共同研究として、ドイツのフライブルク大学医学部のDr.Goetz Fabryと共同で、医学科新入生を対象とする意識調査(Professionalism Exercise)を企画した。プロフェッショナリズムに関する質問項目を既出論文から転用し、その邦訳版を用意した。調査をH23年4月に実施する予定とした。本調査に当たり施設内の倫理委員会に審査申請した。本研究は医学科学生を対象として、Emotional Intelligence(EI)という概念に基づき、情意的領域の能力を分析することを目的とした。新たな研究目的として、医学教育において重視されている医師のプロフェッショナリズム関する国際比較調査をH22年度に企画し、H23年度に実施した。H23年度の成果は以下の通りである。(1)医師のプロフェッショナリズムに関する国際共同調査研究として、医学科新入生を対象とする意識調査を企画し、東北大学医学科新入生を対象にH23年4月に調査を実施した(回答数約120)。本調査に当たり施設内の倫理委員会に研究の承認を得た。個人情報を削除した後、文書を英訳した。H23年末までに東北大学、ドイツの3大学、スイスの1大学、米国の1大学の医学科新入生から回答を得た。Dr.Fabryを訪問して打合せを行い、共同で比較分析を行った。(2)EI分析として、H22年に引き続き、H23年9月に医学科1年生を対象にEQSというEI分析シートを用いた調査を行った。また、卒後1年目の初期研修医を対象に同様の調査を実施した(回答数約15)。2年分のデータを電子入力し、分析に供した。(3)医学科1年次の早期医療体験実習において、H22年に引き続き、医師を志す理由についてグループ討論を行った。各学生が医師を志す理由を30ずつ書き出し、相互にコメントを加えた。記載は匿名とした。この記述用紙のうち当該学生の同意を得たもののみ回収した。2年間でのべ6,000以上の手書き文(約10万字)が得られ、これをタイプして電子情報化した。テキスト・マイニング法で分析した。
歯周組織恒常性維持の統合的理解とホメオダイナミクス－歯周治療・診断への新戦略－

歯周病および高脂肪食によるメタボリックシンドロームに対する疾患感受性が野性型マウスと比較して、変化するPLAP-1欠損マウス(PLAP-1KOマウス)において、歯周病に対する疾患感受性に最も重要な役割を担う組織の一つである歯根膜における表現型を詳細に解析した。その結果、PLAP-1KOマウスにおいては、歯根膜腔の体積が野性型マウスと比較して有意に高くなっていることが示された。さらに、歯根膜線維の走行および密度を解析するためにPicrosirius Red染色を行ったところ、PLAP-1KOマウスの歯根膜においては、コラーゲン線維が有意に疎になっていることが明らかとなった。さらに同歯根膜を走査型電子顕微鏡および透過型電子顕微鏡にて観察したところ、PLAP-1KOマウスの歯根膜においては、コラーゲン線維を繋ぐ3次元構造が不完全で断裂部分が認められ、コラーゲン原線維の直径が有意に大きく、コラーゲン線維形成に異常が認められることが明らかとなった。さらに、定量的な牽引力をかけることで、歯根膜の最大応力を解析したところ、PLAP-1KOマウスにおいては、野性型マウスと比較して、牽引に対する最大応力が有意に低下していることが明らかとなった。また、野性型マウスおよびPLAP-1KOマウスの歯根膜からmRNAを抽出し、マイクロアレイ解析を行うことで、PLAP-1遺伝子欠損による遺伝子発現の変化を網羅的に解析した。マイクロアレイ解析の結果、発現変化が著しい遺伝子について、歯根膜および全身臓器での発現を現在、解析を進めている。PLAP-1が、歯周病および全身疾患に対する疾患感受性において重要な役割を担う可能性について解明を進めており、おおむね順調に進展している。歯根膜線維形成におけるPLAP-1の役割についてin vitro実験系を用いてそのメカニズムを詳細に解析していく方針である。PLAP-1KOマウスの歯根膜組織から初代培養歯根膜細胞を単離・培養し、同細胞におけるin vitroでのコラーゲン線維形成能を野性型マウス単離歯根膜細胞と比較検討することで、PLAP-1分子のコラーゲン線維形成における機能を明らかとしていく。さらに、PLAP-1KOマウスと野性型マウスとの歯根膜組織における網羅的遺伝子発現解析の結果、発現量に有意な差がある遺伝子を同定し、同遺伝子の機能を解析することで、PLAP-1分子との機能・発現における関連性を詳細に解析していく予定である。歯根膜特異的遺伝子PLAP-1欠損マウス(PLAP-1KOマウス)は、これまでの研究結果から、TLRを介した炎症反応を負に制御する可能性が示唆されている。そこで、マウス上顎第2臼歯の歯茎部に絹糸を結束することで、実験的歯周炎を誘導した。その結果、5ー0号の絹糸による強度の炎症状態では、PLAP-1KOマウスと対照群である野性型マウスでは、その歯槽骨吸収量には差がないことが明らかとなった。一方、興味深いことに、8ー0号絹糸を用いて弱い炎症状態を惹起した場合、PLAP-1KOマウスにおいて野性型と比較して優位に高い歯槽骨吸収が誘導された。この結果から、微弱な炎症により誘導される実験的歯周炎に対してPLAP-1KOマウスの疾患感受性が高くなっていることが示唆され、PLAP-1の有する抗炎症作用に加え、歯根膜線維の構造や強度の維持に関与している可能性が考えられた。そこで、PLAP-1KOマウス歯根膜における細胞外基質関連遺伝子および炎症性サイトカインの発現をReal-time PCR法により野性型マウスと比較検討したところ、細胞外基質関連遺伝子については有意な発現量の差は認められなかった。一方、IL-1b遺伝子については、PLAP-1KOマウス歯根膜において、有意ではないものの、上昇傾向が認められた。

さらに、歯槽骨における破骨細胞数を観察したところ、有意にPLAP-1KOマウスでは、野性型マウスと比較して、破骨細胞数が上昇していることが明らかとなった。PLAP-1KOマウスを用いた実験的歯周炎モデル解析の結果、当初予定していたPLAP-1の骨吸収抑制作用が、炎症反応の強さにより変化する可能性が見出された。本研究の遂行上、この作用の本質を見極めることが必要であったため、研究方式を見直し、局所炎症部における遺伝子発現解析、炎症状態における細胞機能解析および硬組織関連分子・遺伝子との相関解析を行った。歯根膜線維形成におけるPLAP-1の役割についてin vitro実験系を用いてそのメカニズムを詳細に解析していく方針である。PLAP-1KOマウスの歯根膜組織から初代培養歯根膜細胞を単離・培養し、同細胞におけるin vitroでのコラーゲン線維形成能を野性型マウス単離歯根膜細胞と比較検討することで、PLAP-1分子のコラーゲン線維形成における機能を明らかとしていく。さらに、PLAP-1KOマウスと野性型マウスとの歯根膜組織における網羅的遺伝子発現解析の結果、発現量に有意な差がある遺伝子を同定し、同遺伝子の機能を解析することで、PLAP-1分子との機能・発現における関連性を詳細に解析していく予定である。PLAP-1KOマウスにおける歯周病および全身疾患に対する疾患感受性の制御メカニズムについて、PLAP-1が制御していると考えられるTGF-b、FGF-2等のサイトカインシグナルに着目して解析を進めていく。PLAP-1KOマウスにおけるTGF-bシグナル関連分子や遺伝子の発現を免疫組織学的解析および遺伝子発現解析により野性型マウスと比較検討する。さらに、同シグナル関連遺伝子・分子の歯周炎における関与を明らかとするために、実験的歯周炎モデルにおける発現解析を行う。また、PLAP-1KOマウスにおける歯根膜の微小構造における表現型解析を進めることで、PLAP-1の歯周組織恒常性維持機構における詳細な役割を明らかとしていく。
脳機能の可逆性判定における電気生理学的アプローチ

静脈麻酔剤ペントバルビタールを用いネコによる動物実験を行った。人工呼吸下にバルビタールによってひきおこされる脳機能低下状態を脳内各部(大脳皮質、視床、中脳網様体)における高周波数帯域脳波の分析結果を中心に検討した。バルビタールは経静脈に分割投与して、総量として10mg、50mg、100mg、150mg、200mgを投与した。皮質脳血流測定は制御差温式組織血流計を用いた。1.大脳皮質においては、バルビタール総量30mgまでは投与前コントロールに比しパワーの上昇を認め100mg投与以後低下を認めた。低投与量時のパワーの一過性上昇は脳波の速波化と一致した。この皮質におけるパワーの上昇はバルビタールによる直接賦活作用とは考えにくく、下記脳幹抑制による二次元的反応と考えられた。2.バルビタール投与時、定常状態においてはコントロールに比し段階的に脳血流の低下を認めた。すなわち、低投与量時においては脳波パワーと脳血流とは相関しなかった。3.視床、中脳網様体においては皮質で認められた低投与量時のパワーの上昇は認めず、容量依存的にパワーの低下を認めた。両者には強い負の相関関係が得られた。ただし視床、中脳網様体における薬剤に帯する反応は同一ではなく、中脳網様体においては150mgですでにローレンツ部分は消失し200mgでは平坦脳波に近いのに対し、視床では200mgにおいてなおローレンツ部分は残存しており、このことからバルビタールの主たる作用は中脳網様体すなわち脳幹賦活素の抑制作用にあることが示された。投与総量200mgにおいて視床においてのみパワーが残存していることは、脊髄からの上行系が関与していることは想像にかたくない。LD50が300350mg/kgであることからも今後さらに脊髄へ検討範囲を広げる必要があると考えられる。催てんかん薬剤ペンチレンテトラゾールを用いて動物実験を行った.脳の異常興奮状態にひき続きおこってくる機能低下状態,さらにその後の回復過程を,脳波・脳血流・頭蓋内圧を中心に経時的に把握し,その変動を分析した.1.広周波数帯域脳波の分析プレアンプ(AA6MKII)とシグナルプロセッサー(7T18)によって構成されたシステムの周波数特性は20kHz以下において-3dB以内であり, 1010kHzの周波数帯域における脳波を分析した.即ち,周波数分解脳12.5Hz,長さ1024点で32回の平均加算を行い,得られたパワースペクトラムを両対数表示させた.2.パワースペクトルパターン大脳皮質運動領からの直接導出脳波の分析結果は1/f^2ゆらぎを呈した.即ち両対数グラフ上,傾きと切片の2つのパラメーターで代表させうる直線に近似しえた.脳幹構造からの直接導出脳波の分析結果では皮質とは明らかに異なったパターンで, 1/f^αゆらぎ(α:02)とローレンツゆらぎの合成であることが想像された.文献拾集により実験式にあてはめることが可能であることが判明し,中枢神経における電気活動はすべて4つ以下のパラメーター表現しうることがわかった.3.催てんかん薬剤による脳波活動,脳血流,頭蓋内圧の変化発作波の出現とともに頭蓋内圧,脳血流は上昇し,終焉とともに下降した.私どもの脳波分析法によれば,本来電位レベルが低い周波数の高い脳幹部の電気活動の変化をより正確に把握しうるものと考えられた.即ち,視察不可能な電気活動をとらえることができた.重積状態4時間以内であれば,脳機能は可逆的であった.静脈麻酔剤ペントバルビタールを用いネコによる動物実験を行った。
エピゲノム修飾因子の機能解析による小児固形腫瘍の発症機構解明

腎明細胞肉腫は小児期に発生する悪性腎腫瘍の中では腎芽腫に次いで頻度が高く、BCL6 corepressor(BCOR)のC末端の約100塩基の重複(BCOR遺伝子内重複)が特徴的である。同様の遺伝子変異は小児の未分化肉腫や脳腫瘍の一部、子宮内膜間質肉腫の一部でも報告されている。BCORは転写抑制因子であるが、異性型PRC1(BCOR複合体)の一要素としても報告されている。本変異は、BCOR複合体形成に必要な機能ドメインを含む領域に存在することから、腫瘍発生に重要な役割を果たしていると考えられる。一方、BCOR遺伝子内重複に加えて、他のBCOR変異が様々な腫瘍で報告されており、本研究では、これらのBCOR変異・融合遺伝子による腫瘍発生機構解明を目的としている。本年度は、胎児期の腎由来細胞である293細胞に野生型BCOR、BOCR遺伝子内重複、MOCKを導入した安定発現細胞に対して、マイクロアレイ解析を行って発現解析を行った。野生型BCOR、BCOR遺伝子内重複で共通して発現が上昇するプローブ433個、共通して発現が低下するプローブ1014個が同定された。BCOR遺伝子内重複で特異的に発現が上昇するプローブは666個、低下するプローブは752個であり、後者には細胞膜に関連する遺伝子が多く含まれていた。BCOR遺伝子内重複は野生型BCORとは異なる遺伝子の発現を制御する可能性が示唆され、BCOR遺伝子内重複で特徴的に発現が低下するプローブにはヒストンのマイナーなバリアントが2個含まれており、それらが遺伝子の発現制御を介して腫瘍発生に関与している可能性があり、その腫瘍発生における意義を検討中である。小児の腎には、腎芽腫(ウイルムス腫瘍)とともに腎明細胞肉腫(CCSK)、腎ラブドイド腫瘍(RTK)、間葉芽腎腫(CMN)等の腫瘍が発生する。CCSKは、2番目に頻度が高く、BCL6 corepressor (BCOR)のC末端近傍の約100塩基の重複(BCOR遺伝子内重複)を共通の遺伝子異常として有する。BCORはBCL6 corepressorとして単離された転写抑制因子であるが、近年はポリコーム複合体の要素としても機能することが示されている。同異常は、BCORの、特にポリコーム複合体の1つであるBCOR複合体(異性型PRC1)の形成に必要な機能ドメインを含む領域に存在することから、BCOR遺伝子内重複がCCSKのドライバー変異である可能性が極めて高いと考えられる。一方、近年、ユーイング肉腫に類似した小円形細胞肉腫の多くに、BCORとCCNB3の融合遺伝子が存在することが報告された。また、多くの小児がん・血液がんでBCOR遺伝子の機能喪失型変異が報告されている。本研究では、これらのBCOR変異・融合遺伝子による腫瘍発生機序解明を目的とした。HEK293細胞に野生型BCOR、BCOR遺伝子内重複、BCOR変異、BCOR-CCNB3を遺伝子導入し、形質転換能をColony formation assay、focus formation assay等で解析し、細胞増殖能をWST assayにて検討したところ、BCOR変異及びBCOR-CCNB3導入細胞では細胞増殖能低下が低下していた。CCSKに特徴的に高発現な遺伝子の発現解析をrealtime PCR法にて解析したところ、代表的な遺伝子にはBCORあるいはBCOR変異体高発現では有意な変化が認められず、NIH3T3細胞にても同様に有意な発現変化は認められなかった。BCOR遺伝子内重複、BCOR-CCNB3による腫瘍発生は、発生母地の細胞環境に依存する可能性もあり、今後、他の細胞種も含めて解析を進めていく。HEK293細胞にmock、野生型BCOR、BCOR遺伝子内重複、BCOR変異、BCOR-CCNB3を遺伝子導入し、細胞増殖能をWST assayにて検討したところ、予想とは異なりBCOR変異及びBCOR-CCNB3導入細胞の細胞増殖能は低下した、また、現時点では、有意な形質転換能はみられていない。そのため、網羅的な遺伝子発現解析の前に、発現変化が予想されるCCSKで特徴的な遺伝子群の発現解析を先行させたところ、代表的な遺伝子群には有意な変化は認められなかった。NIH3T3細胞にも同様の遺伝子を導入したが、同様の結果であった。BCOR遺伝子内重複、BCOR-CCNB3による腫瘍発生は、細胞環境に依存する可能性が考えられ、そのため、当初予定していた網羅的遺伝子発現解析を延期し、さらに他の細胞株による解析も含めて考慮中のため、研究の進行がやや遅れている。腎明細胞肉腫は小児腎腫瘍としては腎芽腫に次ぐ頻度で、BCL6 corepressor(BCOR)のC末端の約100塩基の重複(BCOR遺伝子内重複)を共通の遺伝子異常として有する。BCORはBCL6 corepressorとして単離された転写抑制因子であるが、異性型PRC1(BCOR複合体)の要素として機能することも示されている。本変異は、BCOR複合体形成に必要な機能ドメインを含む領域に存在することから、腫瘍発生のドライバーと想定されている。一方、近年、ユーイング肉腫に類似した小円形細胞肉腫の多くに、BCORとCCNB3の融合遺伝子が存在することが報告されている。本研究では、これらのBCOR変異・融合遺伝子による腫瘍発生機構解明を目的としている。

NIH3T3細胞に、野生型BCOR、BCOR遺伝子内重複、BCOR変異、BCOR-CCNB3を遺伝子導入し、形質転換能をColony formation assayにて解析したが、いずれの遺伝子においてもcolony formationの明らかな促進はみられなかった。そこでA673(Ewing肉腫細胞)に野生型BCOR、BCOR遺伝子内重複、BCOR変異、BCOR-CCNB3を遺伝子導入し、腎明細胞肉腫に特徴的に高発現な遺伝子の発現解析をrealtime PCR法にて解析したが、有意な遺伝子発現変化は認められなかった。腎明細胞肉腫では、野生型のBCORが発現せず遺伝子内重複のみを発現することから、293細胞にBCOR遺伝子内重複を導入した安定細胞株を樹立、内在性のBCORをノックダウンし、遺伝子発現を検討している。HEK293細胞、NIH3T3細胞、A673細胞において、mock、野生型BCOR、BCOR遺伝子内重複、BCOR変異、BCOR-CCNB3を遺伝子導入し、腎明細胞肉腫で特徴的な遺伝子群の発現解析を行ったところ、代表的な遺伝子群には有意な変化は同定できなかった。BCOR変異による効果は、野生型BCORの発現や、BCORと関連する分子の発現との関係が重要とも考えられ、当初予定していた解析を延期し、当初予定していた細胞種と異なる細胞も用いて検討しており、研究の進行がやや遅れている。腎明細胞肉腫は小児期に発生する悪性腎腫瘍の中では腎芽腫に次いで頻度が高く、BCL6 corepressor(BCOR)のC末端の約100塩基の重複(BCOR遺伝子内重複)が特徴的である。同様の遺伝子変異は小児の未分化肉腫や脳腫瘍の一部、子宮内膜間質肉腫の一部でも報告されている。BCORは転写抑制因子であるが、異性型PRC1(BCOR複合体)の一要素としても報告されている。本変異は、BCOR複合体形成に必要な機能ドメインを含む領域に存在することから、腫瘍発生に重要な役割を果たしていると考えられる。一方、BCOR遺伝子内重複に加えて、他のBCOR変異が様々な腫瘍で報告されており、本研究では、これらのBCOR変異・融合遺伝子による腫瘍発生機構解明を目的としている。本年度は、胎児期の腎由来細胞である293細胞に野生型BCOR、BOCR遺伝子内重複、MOCKを導入した安定発現細胞に対して、マイクロアレイ解析を行って発現解析を行った。野生型BCOR、BCOR遺伝子内重複で共通して発現が上昇するプローブ433個、共通して発現が低下するプローブ1014個が同定された。BCOR遺伝子内重複で特異的に発現が上昇するプローブは666個、低下するプローブは752個であり、後者には細胞膜に関連する遺伝子が多く含まれていた。BCOR遺伝子内重複は野生型BCORとは異なる遺伝子の発現を制御する可能性が示唆され、BCOR遺伝子内重複で特徴的に発現が低下するプローブにはヒストンのマイナーなバリアントが2個含まれており、それらが遺伝子の発現制御を介して腫瘍発生に関与している可能性があり、その腫瘍発生における意義を検討中である。
天然染料の色彩ビッグデータの拡充と活用

天然染料で染められた染色物を分光測色計を用いて計測した。また合成染料で染められた標本的価値の高い染色物についても計測した。得られた色彩値(CIELAB、分光反射率)と染料名、染色方法などをデータベースに収録した。2017年3月31日時点のデータベース収録試料数は、天然染料が9,426,合成染料が6,119、不明なものが3,373、顔料が183である。これらのデータを分析し、天然染料と合成染料の色彩の違いを見出した。例えば、PANTONE FASHION HOME + INTERIORSの綿染色色票との色差計算による比較から、天然染料では染まらない合成染料の色を客観的に示すことができた。天然染料で染まる色彩について研究を進めた。具体的には、文献等から収集した、あるいは筆者の研究室で染めた天然染料染色物を分光測色計CM-2600dによって計測し、分光反射率およびCIELAB等色彩値を得た。その計測値を染料名・染色法・繊維種別等とともにデータベースに格納し、サンプル数の拡充を行った。天然染料で染まる色彩の特徴を見出すには、合成染料との比較が重要と考え、合成染料染色物もデータベースに含めた。このデータベースを活用すれば、「合成染料では染まるが天然染料では染まらない色を示す」、「キハダとウコンなど個々の天然染料の微妙な違いや複数の天然染料の混色で染まる色みを示す」、「目的の色を得るのに適した染料や染色法を検索する」など、従来は経験や勘に頼って行われてきたようなことが客観的データに基づいて可能となる。2016年4月時点のDB収録サンプル数は、天然染料で染められたもの9,081個、天然顔料で染められたもの101個、見た目は天然染料風だが実際に天然染料が使われているか不明なもの2,451個など、総数18,733個となっており、1年前と比較してほぼ倍増している。上述のように筆者の研究室でも染色を行って染色物を作成しているが、その目的はデータベースを拡充するための染色物を獲得するためだけではなく、天然染料の染色性や堅牢性、環境負荷軽減などの検討も目的としている。平成27年度はデータベースの現状報告と共に、それら天然染料に関する種々の知見の報告を学会発表として行っている。このデータベースは、まさに天然染料の色彩に関するビッグデータと言え、解析によって種々の興味深いことが明らかにできるため、現在も拡充と解析を続けている。予定通り分光測色計CM-2600dを購入し、その後の半年間は最大限に活用してデータベースの拡充を続けている。具体的には、これまでの数年間に獲得した染色物(自らの研究室で染色したものも多く含む)を分光測色し、CIELAB値や分光反射率等をデータベースに収録していった。追加したデータ数はおおよそ1万サンプルほどで、天然染料と合成染料は半々程度の割合である。これらサンプルの測定とデータベースの機能強化を中心に進めてきたが、これは当初の計画通りである。天然染料の色彩を客観データから定量的に捉え、合成染料の色彩との差異や天然染料の種類による色彩の違いなどを明らかにする研究である。この成果によって天然染料の現代的価値や使用する意義を明確にし、アパレル等企業や団体、個人レベルで日本発の優れた商品の開発や提案に供することができる。最終年度である平成28年度は、「1測色によるデータベースの拡充」、「2データベースを活用した天然染料と合成染料の色彩の区別」、「3天然染料の現代社会での価値の再考」、「4和服と天然染料の色彩の関係」などについて検討した。1本年度は市販の多数の合成染料染色物を購入し、測色をした。主なものとして京都の染色業者である山宗実業の「京の色3000色」とPANTONEの綿染色色票が挙げられる。データベースは項目を見直し、検索性を向上させた。また、染色物画像を撮影し、データベースに表示させられるよう現在も作業を続けている。2PANTONEの綿染色色票と天然染料の色彩を、全色票の色差計算から、天然染料で染まる色と染まらない色に仕分けした。本成果は6月の学会で発表し、その後論文を投稿すべく準備している。3天然染料の現代社会での価値を、日本の企業の天然染料に関する特許から考察した。それをもとに似た色の天然染料染色布、ハイブリッド(天然+合成)染料染色布、合成染料染色布を作成し、学生被験者の協力を得てどれが好まれるかを調査した。本研究は学生の卒論としてまとめた。4伝統的な現代和服の色彩を測色、あるいはCGソフトで抽出してまとめ、天然染料色彩データベースと比較した。伝統的な現代和服の色は天然染料の色彩は共通点もあるが、違いも多かった。これらの成果は学会の年次大会での発表の他に、奈良女子大学、神戸松蔭女子学院大学と本学の3大学協同プロジェクトである異分野交流会でも発表した。

例えば、PANTONE FASHION HOME + INTERIORSの綿染色色票との色差計算による比較から、天然染料では染まらない合成染料の色を客観的に示すことができた。データベースの色彩値は、これまでは主にMicrosoft OfficeのExcelを用いて行ってきたが、3D散布図の必要性等から、より専門性の高いソフトウェアを用いた解析の必要性が生じてきた。今後は科学的グラフ作成ソフトや統計解析ソフトを用いる予定である。染色物作成においては、天然染料に関するを情報検索を行い、より濃色に幅広い色が得られる手法について検討を進めていく。合成染料染色物の入手も継続して行う。天然染料、染色化学、繊維、色彩本研究課題において必要不可欠な物品である分光測色計CM-2600dが高額で、かつ応募の際に記載した金額から減額されて交付されることになったため、交付決定額と同額に近い支出となった。残金は僅かであったため、使える用途が限られ、CM-2600dのメンテナンス用の少額の物品を購入するにとどまり、残金が生じた。グラフ作成ソフト、統計解析ソフト、およびそれらのための計算処理能力の高いPC等の必要性が生じているため購入を検討する。染色物を作成するため、近年の天然染料の世界で多用される手法である染料微粉砕のためのビーズミルの購入も検討する。染色物や染料、繊維も購入する。
「楽な歩行」訓練が可能となる新型歩行器の開発およびその臨床評価

団塊の世代が高齢者となることで,4人に1人が高齢者という時代になった.社会保障費の増加のみならず,介護負担の増加も懸念される.これらの背景を受けて,高齢者や脳卒中患者向けのリハビリ介助ロボットを研究開発する.本研究においては,病院にて歩行リハビリのために用いられる歩行器を研究対象とする.従来型の歩行器は持ち手が固定されているため,脊柱の自然な回旋を妨げ,また体幹が前のめりになりがちで下肢に充分体重を載せることができず,二足歩行訓練に繋がらないという問題点がある.そこで,持ち手を移動可能な新規構造を有した歩行器を開発した.さらに,歩行器使用時の脊柱の変化をビデオカメラによる撮影で確かめた.持ち手を移動可能な,新規構造を有したリハビリ用歩行器を設計・製作した.持ち手にはigus社製のガイドレールを用い,支持手の移動の際,交互歩行器のように歩行器を持ち上げる必要が無いようにした.左持ち手の直進運動は三ツ星ベルト社製のタイミングベルトを介して,車軸へ回転運動として伝わるようにしている.一方,右持ち手はGates社製のダブルタイミングベルトを利用しており,左持ち手とは逆方向の動きを入力軸に伝える.これによって,左持ち手を前(後ろ)に動かしたとき,左持ち手は後ろ(前)に連動して動く.右持ち手を前に動かした場合と左持ち手を前に動かした場合とでは回転方向が変わるため,そのままでは歩行器は前進と後退を繰り返してしまう.そこで,タイミングベルトとINA社製のワンウェイクラッチを用いた新型機構を挿入することでこの問題の解決を図った.この機構は入力軸を左右どちらの方向に回転させても,一定方向の回転を出力することができる.モータでのアシストはまだ行っていないが,人の力で持ち手を交互に動かしたときに,実際に歩行器が前進することを確認した.この歩行器は,下肢に体重をかけながら脊柱を回旋し,交互に支点の手足を変更しながら体重移動を進める,後方交叉型斜対歩ができることを目的としている.本歩行器を導入することで,従来型の歩行器の問題点(持ち手が固定されているため,脊柱の自然な回旋が妨げられ,また体幹が前のめりになりがちになり下肢に充分体重を載せることができず,二足歩行訓練に繋がらない)は解消され,歩行器の後段階の訓練である杖有りや杖無しの歩行へスムーズに移行していける.また,歩行器の前段階訓練である平行棒を利用した訓練よりも使用者の適用範囲が広がる可能性がある.平行棒や歩行器に代わる新しい福祉機器と言える.本体の機械設計と製作は終わったが,採用したダブルタイミングベルトには摩擦や歯飛びの問題があることが実際に使用してみて分かったため,ダブルタイミングベルトの採用は取りやめて,現在代用としてシンプルに歯車の採用を検討している最中である.このように,ハード面に想定外の問題があったため,事前の計画よりも装置の完成が遅れている.同時並行して,北陽電機社製のレーザ測域センサによる歩行状態の分析手法,Microsoft社のKinectを用いた脊柱の状態の監視方法の確立を進めている.従来型の歩行器は持ち手が固定されているため,脊柱の自然な回旋を妨げ,また体幹が前のめりになりがちで下肢に充分体重を載せることができず,二足歩行訓練に繋がらないという問題点がある.そこで,持ち手を移動可能とすることで,自然な歩行に近い歩行訓練が可能な新型歩行器を開発した.様々な歩行形態をとれるので,持ち手の固定された従来の歩行器よりも対象者を増やすことができる.機構部分で改良を進めたため,開発初期よりも持ち手を動かすのに必要な力は少なくなったが,以前として数kgfの力は必要である為,引き続き滑り部分を減らし,転がり抵抗もできるだけ小さくする構造に改良していく.開発歩行器はリハビリ目的のために手動でも動かせるように設計しているが,レーザー測域センサによる脚姿勢の計測により,ステッピングモータを動力に自動で動かすことも可能である.開発歩行器を利用することで脊柱回旋に効果があるかどうかについて,ビデオカメラによる動作解析システムにて検証を行った.被験者は健常者2名である.検証の結果,従来歩行器を使用している際の脊柱は,脚の接地部分と肩を固定端とした両持ち梁構造と仮定でき,通常歩行時に比べ,不自然な回旋状態になっていることがわかった.一方,新型歩行器は肩・骨盤共にねじれており,通常歩行と同様,脊柱を脚の接地部分を固定端とした片持ち梁構造と見なすことができ,自然な脊柱回旋になっていることがわかった.北海道士別市立病院の澤口裕二医師に協力頂き,実際に高齢者に開発歩行器を触ってもらう機会ができた.被験者は養護老人ホーム(士別桜丘荘)の利用者5名と,特別養護老人ホーム(士別コスモス苑)の利用者1名である.利用時の様子をビデオカメラで撮影した.実用上,駆動抵抗,方向旋回性能および直進固定機能,高さ調節機構,持ち手の剛性,等に問題があることが判明したため,二次試作機の設計に反映していく.団塊の世代が高齢者となることで,4人に1人が高齢者という時代になった.社会保障費の増加のみならず,介護負担の増加も懸念される.

これらの背景を受けて,高齢者や脳卒中患者向けのリハビリ介助ロボットを研究開発する.本研究においては,病院にて歩行リハビリのために用いられる歩行器を研究対象とする.従来型の歩行器は持ち手が固定されているため,脊柱の自然な回旋を妨げ,また体幹が前のめりになりがちで下肢に充分体重を載せることができず,二足歩行訓練に繋がらないという問題点がある.そこで,持ち手を移動可能な新規構造を有した歩行器を開発した.さらに,歩行器使用時の脊柱の変化をビデオカメラによる撮影で確かめた.ギアによる装置の改良を5月中に終わらせる.また,モータと加速度センサおよびパウダーブレーキを追加したアシスト制御を7月までに終わらせる.共同研究先の病院の療法士と月に1回打合せを実施しているが,その際に使用感を確認してもらい,改良を進める.臨床評価が可能かどうかの相談も適宜実施していく.介護ロボット,福祉工学
水溶液中の分子動力学計算に基づくα-コノトキシン類の立体構造決定

NMR解析とSimulated annealing法により決定された構造を2517分子からなる水の箱に入れて初期構造とし、NMRより得られた拘束条件を加えて分子動力学計算を行った。その結果、通常のSimulated annealing法で得られた立体構造では明らかでなかったα-conotoxin MIの二次構造についての知見が得られた。すなわち、α-conotoxin MIはCys4-Cys8の領域で3(10)ヘリックス、Gly9-Tyr12の領域でタイプ(I)型ベータターンを形成することが明らかとなった。また、同様の活性を持ちX線解析により立体構造が明かとなっているα-conotoxin GIと比較したところ、主鎖の立体構造に関して完全に一致することがわかった。このことは、この共通構造が、α-conotoxin MIとGIが同様な活性を保持するのに重要であることを示している。また、この計算は、あらわに水分子を扱う分子動力学計算がペプチドの立体構造精密化に非常に有効であることを示している。コンピュータによるペプチドの立体構造構築の試みとして、α-conotoxin MIの配列を持つのびたペプチド鎖の水溶液中でのフォールデングシミュレーションを行った。その際、新たに用意したジスルフィド結合ポテンシャルと疎水結合ポテンシャルが、短時間で折り畳まれた構造を得るのに有効であることがわかった。さらに、複数得られた最終構造の中から、Ooiらにより報告されている水和エネルギーパラメータを用いて(1)で決定された立体構造に極めて近い構造を選び出せることがわかった。
坊刻書を中心とする明刊本書誌の研究

本研究の基礎であり、第一の課題でもある日本現存明版書誌の調査と収集については、正徳以前刊本と刊行者の明確な嘉靖以後刊本、特に坊刻本を中心に、約1200部の実査を行なうことができた。これによって、この十余年の間に蓄積した明版書誌は、すでに2000部に近づいており、明代出版史の定量的分析を可能にするだけの、堅実な史料的基礎を築きつつある、と言ってよいだろう。ただ収集された書誌の整理と目録化については、当初想定していたよりはるかに厖大な量の作業が必要で、過去に蓄積された分にまで溯っての整理は、ごく僅かしか行ないえていないのが実情である。収集した書誌を利用しての出版文化史研究は、研究発表の項に記した著書、論文中にまとめて発表した。このうち最終年度に発表した論文「明末清初の出版と出版統制(前編)」および「明代中期の出版と学術風気」の二篇は、前者が明末の坊刻本と清初のそれとの間に見られる不連続を、書物の形式と内容、また出版量から説明し、この急激な変化の背景には、出版をとりまく環境の変化、特に出版統制の問題が存在したに違いないことを明らかにしたものであり、後者の論文は明代中期の弘治・正徳年間になって、古典著作の再刊が一気に進みはじめる事実につき、まずその経緯を確認したうえで、そうした現象がなぜ明初には起きなかったのか、またこの現象を生ぜしめた学術風気とはどのようなものであったのかを明らかにしている。これら二篇の論文は、その史料的根拠を何よりもまず明版書の実物に、そこに見られる序跋や告白(宣伝文)などに求めており、まったく書誌研究があってはじめて著しうるものと言うことができよう。本研究が第一の課題とするのは、日本に現存する漢籍、とりわけ明版書書誌の解明と資料の蒐集、整理、公開であるが、本年度には以下のような成果を挙げることができた。まず書誌の解明については、金沢市立玉川図書館近世史料館所蔵漢籍の調査を行ない、約千二百部を検出してカードを採録、これにより他に伝本の知られぬ宋版漢書零本をはじめとする宋元明版、朝鮮版、春日版、五山版、古活字版といった古版を含む、同館所蔵漢籍の全貌が初めて明らかとなった。そしてこの書誌資料の整理と公開については、現在編目作業が進行中で、目録本.文はほぼ完成し、これに解説とすでに撮影ずみの書影を加え、公刊の予定となっている。なおこの目録は、史料館の意向により、同館より刊行されることになっているが、予算措置が来年度に行なわれるため、実際の刊行は再来年度となる。明版書書誌の整理と蒐集については、上記史料館蔵のもの四十余部のほか、各地図書館、文庫において二百四十部にのぼる資料を蒐集しえた。これにこれまで約十年の間、少しずつ集めていた明版書書誌を加えれば、現時点ですでに千部を越える書誌が蓄積されており、最終的には明代の出版情況全体を見通すための、堅実な基礎が築かれることになろう。またこうした書誌調査と資料蒐集を前提に、本年度はこれまでの研究をまとめ、『中国出版文化史-書物世界と知の風景-』を公刊した。本書の内容のうち、明代の出版文化に関する叙述は、たとえば出版経費と書価、また俗書による異説や異端的言説の伝播に関する問題など、その相当部分が明版書の実査によって得られた知見にもとづいており、本年度の研究成果を十分に生かすことができた。

本研究がもっとも中心的な課題とするのは、日本現存明版書の調査と書誌蒐集、およびその公開に向けた知見目録の編纂であるが、この点につき本年度においては、以下のような成果を挙げることができた。まず書誌の蓄積については、刊行書肆の明確な坊刻本、および明代前半の正徳以前刊本を中心に、約350部の書誌調査を行なった。この調査によって得られた資料中には、中国にも伝本が知られていないものの書誌も少なくなく、また昨年度、およびそれ以前に蒐集しえた所とあわせれば、その累積はすでに約1400件に達しており、明代出版史を定量的に分析するための堅実な基礎を築きつつある。また昨年度に行なった金沢市立玉川図書館蔵の漢籍調査については、図版、解説等を含めた目録原稿をほぼ完成しており、来年度に入って図書館当局の予算執行が可能となりしだい、公刊作業にかかる予定である。このほか、調査によって得られた資料を用いた研究としては、本特定領域の個別研究成果報告として、論文「明末清初の出版と出版統制(前編)」(400字約60枚)を著し、これを総括班に提出した。この論文は明末から清初へと時代が移るにしたがい、明末の出版に見られた商業性、通俗性、実用性、同時代性が著しく低下したことを説明し、その経緯を実例に即して具体的に解明するとともに、そうした現象が生じたゆえんにつき、当時の出版物に現れている文化・出版統制策の影を指摘し、更なる探求への糸口を示した。なおこの論文は、来年度に本特定領域の研究成果として刊行される論文集のうちに、明末清初の文化・出版統制を論ずる後編を加えて収録されることになっている。本研究のもっとも基礎的な部分であり、また第一の課題でもある日本現存明版書誌の調査と収集については、正徳以前刊本、および嘉靖以後刊本で刊行者が明確なもの、特に坊刻本を中心に、310余部の実査を行ない、その書誌を収集しえた。2001,2年度の特定領域研究で収集しえた書誌は約650部であるから、今年度における書誌の調査と収集は、前二年とほぼ同水準を確保しつつ、おおむね順調に推移したと言えるであろう。また特定領域研究が開始される以前に、すでに蓄積されていた書誌をこれに加えれば、その累計は約1650部となり、坊刻書を中心とする明版書誌の研究に対し、定量的分析を可能にするだけの堅実な資料的基礎を提供するという目的も、ようやく近づきつつある。ただし収集しえた書誌の整理と公開、すなわち知見書目化については、資料の急増に整理作業が追いつかず、過去に蓄積された分にまで遡っての目録化を実現するには、当初に予想された以上の時間が必要となってきている。なお本報告書に記載の研究発表のうち「旧書筆記(六)」は、今年度に新しく得られた知見を主要な根拠としつつ、明代後半における書価の問題を論じたものである。また同じく研究発表の項に記載した『金沢市立玉川図書館近世史料館蔵漢籍目録』であるが、これは2001年度に実施した調査結果を目録化したもので、すべて1300部たらず、1100O余冊を著録している。朱元明版や五山版、本邦旧しょう鈔本などの古版、善本を含む館蔵漢籍の全体を明らかにしたことは、日本現存漢籍書誌の研究にとって、ひとつの空白を埋めたものと評しうるであろう。なおこの目録の本文自体は、昨年度までに大体の完成を見ていためであるが、今年度にはこれを最終的に確定させるべく、必要な再査を行ない、その上で全体の解説と図版、図版解説を加え、更に索引を編纂してこれに附録した。本研究の基礎であり、第一の課題でもある日本現存明版書誌の調査と収集については、正徳以前刊本と刊行者の明確な嘉靖以後刊本、特に坊刻本を中心に、約260部の実査を行なうことができた.これによって、この十余年の間に蓄積した明版書誌は、すでに2000部に近づいており、明代出版史の定量的分析を可能にするだけの、堅実な史料的基礎を築きつつある、と言ってよいだろう。