hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
プロスタグランジン合成酵素の機能と反応に関する計算科学的解明

本研究では、プロスタグランジン類の生合成を司る酵素の機能と反応について検討した。(1)プロスタグランジンH2合成酵素(シクロオキシゲナーゼ):本研究では、シクロオキシゲナーゼ2型の酵素(COX-2)によるアラキドン酸の水素引き抜きの段階では、活性化エネルギーが、基質の立体配座に依存することをQM/MM法で明らかにした。(2)リポカリン型プロスタグランジンD合成酵素:プロスタグランジンD合成酵素の反応について検討し、システイン残基のチオラートイオンがエンドペルオキシド酸素に攻撃する経路を見いだした。比較としてビリン還元酵素と基質複合体の結合状態を明らかにした。本年度は、以下の研究を行った。(1)シクロオキシゲナーゼ触媒の反応に関する計算化学的研究COX中のヘムの酸化で生じるチロシルラジカルのアラキドン酸基質のC-H水素引き抜きで開始する反応機構を、酵素の全原子と水も含めQM/MM(ONIOM)法や分子動力学法などを用いて解明を行っている。基質と結合したあとの律速段階は、アラキドン酸のプロトン引き抜き段階であることを示したほか、その後の、最初の酸素の結合反応の位置選択性(11位の炭素と結合)について、遷移状態における酸素とSer530残基との水素結合が制御していることを示した。(2)プロスタグランジンD合成酵素の構造に関する計算化学的研究基質であるプロスタグランジンH2と、リポカリン型プロスタグランジンD合成酵素との複合体の分子動力学計算(AMBER)を行った。シミュレーションの結果より、PGH2がL-PGDSの活性部位近傍に位置する複合体構造を得ることができた。また、タンパク質主鎖のCαの座標に対して主成分分析を行うことによって、この異性化反応の位置選択性に関わる相互作用を示す残基を特定した。計画通り進捗しており、とくに、前者のシクロオキシゲナーゼの反応機構の検討は、酸素結合後の中間体の配座解析を残すのみとなっている。後者のリポカリン型プロスタグランジンD合成酵素のプロジェクトに関しては、計算結果が出たものの実験結果(NMRスペクトルや基質アナログとの結合定数)の比較に関して課題がある。本年度は、プロスタグランジンD合成酵素の反応機構のQM/MM計算を中心に行った。マウス由来リポカリン型プロスタグランジンD合成酵素と基質アナログU46619の複合体のNMR構造をもとに、ONIOM-EE計算を行った。この酵素の活性部位にあるCys65残基は周囲に存在するヒドロキシ基をもつアミノ酸であるSer45、Thr67、Ser81と水素結合ネットワークを形成することによって、活性化されることが実験によって明らかとされている。PGH2異性化反応によるPGD2合成の反応機構に関する理論的検討は、以前当研究室により行われた。この理論的検討では、チオレートイオンをMeS-としたモデルが用いられ、チオレートアニオンがPGH2の11位の炭素に結合した水素に求核攻撃することによって反応が容易に進行することを示唆していた。一方、11位の炭素に結合したエンドペルオキシドの酸素原子にチオレートアニオンであるシステインが求核攻撃、続いて周辺のヒドロキシ基を持つアミノ酸を介したプロトン移動により反応が進行する経路も求まったが、エネルギー的には不利であった。本研究では、NMR結晶構造に対して、Cys65の残基はチオレートアニオン状態であることを仮定し、NMR構造のU46619をPGH2に置換して、ONIOM-EE計算を行った。その結果、モデル系の量子化学計算とは異なり、後者の反応経路の方がエネルギーに有利であることを示した。反応経路を決めるのに酵素の効果が現れたことを示している。現在は、MMフレキシブル領域の検討を行っている。シクロオキシゲナーゼ触媒によるアラキドン酸のPGG2への変換反応については、引き続き検討中である。大規模系の計算でかなり難しい課題なので、論文執筆まで至っていないが、H29年度が最終年度なので、結果に結びつくように努力する。研究期間内、生化学的および医学的にたいへん重要であるプロスタグランジン合成酵素の反応メカニズムについて、計算科学的な検討を行った。(1)シクロオキシゲナーゼ触媒の反応:シクロオキシゲナーゼによる、アラキドン酸からプロスタグランジンH2生合成反応に関して、基質のアラキドン酸との複合体のMDシミュレーション(AMBER力場を使用)、基質のプロトン引き抜きにおける立体選択性(13位のpro-S水素のみ引き抜く)およびアラキドン酸のα鎖およびω鎖の配座の影響、プロトン引き抜き後のアラキドン酸の位置選択的酸素添加反応のQM/MM法計算を行い、成果を投稿に向けて準備中である。QM/MM計算においては、酵素を構成するアミノ酸残基の静電的影響を取り入れたONIOM-EE法を用いた。(2)リポカリン型プロスタグランジンD2生合成反応およびプロスタグランジンF2生合成反応について、基質であるプロスタグランジンH2および酵素を含めたQM/MM計算を現在も検討中である。いずれも、NMRスペクトルおよびX線結晶構造解析に基づいた立体構造を用いた。基質のエンドペルオキシド酸素にチオラートイオンが求核攻撃した遷移状態など、いくつかの遷移状態が求まった。リポカリン型プロスタグランジンD2合成酵素に関するQM/MM計算に関して、QM領域に、システインと水素結合するセリンなどのアミノ酸残基側鎖を取り入れることが必須であることが明らかになった。酵素を構成するアミノ酸残基の静電的影響を取り入れた構造最適化計算を現在行っている。

本研究では、プロスタグランジン類の生合成を司る酵素の機能と反応について検討した。(1)プロスタグランジンH2合成酵素(シクロオキシゲナーゼ):本研究では、シクロオキシゲナーゼ2型の酵素(COX-2)によるアラキドン酸の水素引き抜きの段階では、活性化エネルギーが、基質の立体配座に依存することをQM/MM法で明らかにした。(2)リポカリン型プロスタグランジンD合成酵素:プロスタグランジンD合成酵素の反応について検討し、システイン残基のチオラートイオンがエンドペルオキシド酸素に攻撃する経路を見いだした。比較としてビリン還元酵素と基質複合体の結合状態を明らかにした。今後に関しては、シクロオキシゲナーゼの反応機構検討を完成させ、論文作成に取りかかる。さらに、5-リポキシゲナーゼのアラキドン酸の酸化反応と比較する。5-リポキシゲナーゼについては、アラキドン酸が結合したX線結晶構造解析が報告されており、それを用いる。プロスタグランジンD合成酵素のプロジェクトについては、引き続き、NMR解析や、部位特異的突然変異導入法などとの実験結果と照らし合わせる。COX-2触媒の反応機構の研究成果はまとめ、L-PGDS触媒のPGD2異性化反応機構については、NMRで決めた結晶構造に依存するので、分子動力学シミュレーションの条件などさらに検討したい。理論・計算化学、理論有機化学本年度、56,000円弱の剰余が生じたが、これは人件費・謝金の使用が予定よりも少なく0ですんだためと考えられる。本研究は、本年度も含めて3年間行われる予定であり、計画では、来年度も、引き続き研究で必要な物品の購入に使用する必要が生じたため。研究遂行のため、学内外の計算機サーバー(岡崎国立研究機構・計算科学研究センターの計算機も含む)を用いており、新たに計算機の購入にまで至らなかった。そのため、支出は少なかった。来年度は、剰余分を研究に必要なソフトウエアおよび消耗品の購入を行いたい。H29年度は、成果の発表(招待講演)のため、カナダ・Parry Soundで行われる6th Georgian Bay International Conference on Bioinorganic Chemistry (CANBIC-6)に出張する計画をすでに立てた。そこでは、トロントで行われるカナダ化学会年会にも参加し情報収集も行う予定である。さらに、研究に必要な計算機やソフトウエアの購入に用いる予定である。
アポトーシスを司るエンドヌクレアーゼ、DNase_γの活性制御機構

アポトーシスは、細胞が自身のDNAをその死に先立ち積極的に切断することに特徴付けられる。本研究においては、このDNAの断片化を触媒するDNase_γの活性化機構を明らかすることを目的とした。DNase_γはプリカーサーペプチドを持つ不活性型前駆体として合成され、成熟型のDNase_γに変換されることが明らかとなっている。そこで細胞レベルにおけるDNase_γの活性制御機構を解析するため、まず前駆体型と成熟型DNase_γのHeLaS3細胞への導入を行った。成熟型DNase_γを導入した細胞はすべてDNAがラダー状に分解され死滅し、完全長DNase_γを導入した細胞には変化はみられなかった。そこで前駆体型として導入されたDNase_γのアポトーシスに伴う活性化を調べるため、完全長DNase_γの安定発現株を作製し解析を行った。HeLaS3細胞はアポトーシス誘発によりDNAラダーの出現は観察されないが、HeLaS3/DNase_γ細胞においては細胞死に伴うDNA断片化が観察された。また、細胞内DNase_γ活性を調べたところ、DNase_γは生細胞においてすでに活性型として存在するが、アポトーシスの進行に伴い核画分におけるDNase_γ活性の上昇が観察された。DNase_γ-GFP融合タンパクを用いてDNase_γの局在変化をさらに解析したところ、DNase_γは生細胞において核膜内に存在しており、アポトーシスの誘発に伴い細胞質に放出され、C末端核移行シグナル依存的に核内へと移行することが明らかとなった。以上の結果より、DNase_γはアポトーシスの誘発に伴い活性化されDNA断片化を触媒すること、DNase_γはアポトーシス誘発以前に活性型として核膜内に存在するが、この正しい局在にプリカーサーペプチドが重要であること、DNase_γの活性化の本体は、核膜から核内への局在変化であることが明らかとなった。本研究においては、この実行過程の中心的酵素であるDNAの断片化を司るエンドヌクレアーゼ、DNaseγの翻訳後の活性化機構を明らかすることを目的とした。cDNAの解析から、DNase γはプリカーサーペプチドを持つ前駆体として合成されることが明らかとなっている。そこでプリカーサーペプチドによる活性制御の可能性を検討するため前駆体型及び成熟型のGST-DNase γ融合タンパクを作製しそれぞれのDNase活性を調べたところ、成熟型のDNase γにのみDNase活性が検出された。すなわちDNasc γの活性制御機構の第一段階はペプチダーゼ/プロテアーゼによるプリカーサーペプチドの切断であることが明らかとなった。さらに細胞レベルにおけるDNase γの活性制御機構を解析するため、まず前駆体型と成熟型DNase γのHeLa S3細胞への導入を行った。成熟型DNase γを導入した細胞はすべてDNAがラダー状に分解され死んでしまったが、完全長DNase γを導入した細胞には変化はみられなかった。そこで前駆体型として導入されたDNase γのアポトーシスに伴う活性化を調べるため、完全長DNase γの安定発現株を作製し解析を行った。HeLa S3細胞はアポトーシス誘発によりDNAラダーの出現は観察されないが、HeLa S3/DNase γ細胞においては細胞死に伴うDNA断片化が観察された。また、核内のDNase γ活性をアクティビティーゲル法を用いて調べたところアポトーシスの進行に伴う活性上昇が観察された。以上の結果より、細胞レベルにおいてDNase γがアポトーシスに伴い活性化されDNAを切断すること、さらにプリカーサーペプチドが生細胞における正しい局在、不活性化に重要であることが示された。

以上の結果より、DNase_γはアポトーシスの誘発に伴い活性化されDNA断片化を触媒すること、DNase_γはアポトーシス誘発以前に活性型として核膜内に存在するが、この正しい局在にプリカーサーペプチドが重要であること、DNase_γの活性化の本体は、核膜から核内への局在変化であることが明らかとなった。
胆道閉鎖症における肝胆道組織の初代培養と不死化細胞株の樹立

胆道閉鎖症(Biliary Atresia;BA)患児から手術時に採集した肝胆道組織を用い、初代培養を試みた。初代培養細胞にヒトパピローマウイルスのE6・E7遺伝子を導入し、不死化細胞株を樹立した。細胞株のcharacterizationを行うと、その起源は胆管上皮細胞であった。また病因への自然免疫の関与を検討する目的で、BAの肝組織におけるToll-like receptorの発現を解析をした。その発症機転には自然免疫系統の異常が関与する可能性が示唆された。当該年度に経験した胆道閉鎖症(BA)3例・先天性胆道拡張症3例の肝・胆道組織を用い、初代培養を試みた。線維芽細胞のシートにマイトマイシン処理を行なったfeeder layer上に、破砕した組織片をまき、implant後1/3/5日に培養液を交換、細胞の立ち上がりを観察した。結果、培養開始後5日で胆嚢組織砕片から上皮細胞様の細胞群が生着した。現在、この細胞群にアデノウイルスを感染させてE6/7遺伝子を導入し、不死化を試みている。培養環境を微調整しながら、至適条件を検討している。一方、胆管を結紮したBalb/C mouseを使って、肝・胆嚢・胆管から初代培養を試み、34種類の細胞群の培養に成功した。上皮細胞様の形態を示すものが含まれており、上記と同様な方法で不死化を試みている。次年度はコロニーassayとFACS scanにて細胞群を単離することを目指し、これらのcharacterizationを行なう。上記実験と並行し、BA発症への自然免疫の関与を検討中である。昨年度は臨床検体(肝組織)を用い、自然免疫のkey receptorであるToll-like receptor (TLR2,3,4,7,8,9)とその下流に位置する炎症性サイトカイン(TNFαなど)・interferon induced protein (MxA)の遺伝子発現を、real time PCRを用い検討した。BA群でTLR7/8およびTNFαの発現が有意に高く、発症に自然免疫が関わること、triggerとして一本鎖RNAが何らかの役割を担っていること、が示唆された。次年度は、樹立した不死化細胞株のうち、免疫担当細胞である樹状細胞と胆管上皮細胞を用い、研究を進める。TLR7/8のリガンドで細胞を刺激し、そのresponse(下流遺伝子群の発現)を、control群と比較する。当該年度に経験した胆道閉鎖症(BA)2例、先天性胆道拡張症4例の肝胆道組織を用い、初代培養を試みた。マイトマイシン処理したfeeder layer上に破砕した組織片を撒くと、implant後5日で上皮細胞様の組織が立ち上がる。その培養効率は培養液の種類により異なり、培養4日目までkeratinocyte growth medium、以後Dalbeco's mediumに変更すると良好であった。FCS濃度は5%とし、継代は培養7日めに1回のみ可能であった。初代培養開始後3日目のmedium交換時からアデノウイルスに感染させE6/7遺伝子を導入すると、数種類の細胞が不死化される。光学・電子顕微鏡所見、CK8/19による免疫染色、アルブミン/γ-glutamylltransferaseの発現解析などから、不死化細胞の一つが胆管上皮細胞である可能性が示唆された。また胆管結紮マウスの肝胆道組織の不死化細胞群にコロニー法を試み、3種類の細胞群が単離された。現在そのcharacterizationを行っている。上記実験と並行し、BA発症への自然免疫の関与を検討している。臨床肝検体を用い、Toll-like receptor(TLR)と、その下流のカスケードに含まれるINF-α/interleukin-6/MxAのmRNAの発現レベルをreal time PCR法で検討した。結果、BA群ではTLR8の発現量がコントロール群より有意に高く、かつ初回手術時採取検体では再手術時採取検体より、TLR2/8の発現が有意に高発現であった。さらに1歳未満症例では、BAのIL-6発現量が高い傾向がみられた。BAの発症に、自然免疫系の異常が関与している可能性が示唆された。
モノクローナル抗体によるPodocyteの化生遺伝子同定と半月体形成機序の解析

本研究の目的はモノクローナル抗体を指標として糸球体腎炎での半月体構成細胞の同定と対応分子の機能を明らかにし、その形成機序を分子レベルで解明するものである。報告者らは、これまでに糸球体上皮細胞(podocyte)が培養条件により化生し、マクロファージ様の形質を獲得することを報告した。また、その細胞を抗原としてモノクローナル抗体の作成を試み、モデル腎炎での半月体構成細胞に強く反応する2種類の抗体(mAbOS-3,mAbOS-6)を得た。昨年度の研究により、傷害機序の異なる2つの半月体形成性糸球体腎炎のラットモデルでmAbOS-3陽性の糸球体上皮細胞がそれぞれの半月体に証明され、糸球体上皮細胞が半月体形成に重要な役割を果たしていることが示唆された。本年度はさらに抗基底膜抗体による半月体形成性糸球体腎炎ラットモデルでmAbOS-3に加えてmAbOS-6およびモノクローナル抗体ED-1,OX-1,anti-podocalyxin等と半月体構成細胞との反応性を検索し、次の結果が得られた。2)半月体に観察されるマクロファージは、ED-1とmAbOS-3あるいはmAbOS-6に対する反応性の相違によりいくつかのサブセットに分けられる。3)半月体の線維化により、半月体構成細胞のmAbOS-3抗原が減少する。以上の結果により、半月体は糸球体固有細胞であるボーマン氏嚢上皮細胞および糸球体上皮細胞と外来性マクロファージのいくつかのサブセットから形成されることが強く示唆された。また、mAbOS-3対応抗原の発現が半月体の変化と密接に関連していることも示唆された。mAbOS-3およびmAbOS-6対応抗原遺伝子のクローニングには至らなかったが、さらに検討を重ねcDNAの同定と対応分子の生理機能を明らかにし、半月体形成の機序解明に向けてさらに研究を推進する予定である。報告者らは、これまでに糸球体上皮細胞が特定の培養条件により化生し、マクロファージ様の形質を獲得することを報告した。また、その細胞を抗原としてモノクローナル抗体の作成を試み、モデル腎炎での半月体構成細胞の一部に強く反応する2種類の抗体(mAbOS-3, mAbOS-6)を得た。本研究の目的は半月体形成性糸球体腎炎の進展機序を糸球体上皮細胞の生理・機能の変化、すなわち形質の変化という側面より捉え、半月体形成に関わる機構をモノクローナル抗体を指標として分子レベルで解明するものである。本年度は正常ラット糸球体よりmRNAを抽出し、モノクローナル抗体を用いて対応cDNAのクローニングを実施した。一方、抗Thy1モノクローナル抗体(mAb1-22-3)によるメサンギウム増殖性腎炎ラットモデルでmAbOS-3対応抗原の発現を免疫組織学的に検索した。モノクローナル抗体対応遺伝子の検索に関しては、正常糸球体での対応抗原の発現が弱いこともあり、現時点でクローニングには至っていない。一方、mAb1-22-3惹起腎炎での解析では、mAbOS-3対応抗原が比較的早期の半月体で発現することが判明した。また、蛍光抗体二重染色法および免疫電顕によりmAbOS-3対応抗原を発現する細胞は抗基底膜抗体惹起腎炎同様に糸球体上皮細胞であることが示された。この結果により、半月体の形成には傷害部位にかかわらず、糸球体上皮細胞が大きく関与している可能性が示唆された。今後、mAb対応抗原は糸球体以外の多くの腺組織にも発現することから、それらの臓器および半月体からのmRNAの抽出によりcDNAのクローニングを検討するとともに、in vivoとin vitroでのmAbOS-3対応抗原発現機構ついて比較解析することで、糸球体上皮細胞の半月体形成に果たす役割を明確にする予定である。

mAbOS-3およびmAbOS-6対応抗原遺伝子のクローニングには至らなかったが、さらに検討を重ねcDNAの同定と対応分子の生理機能を明らかにし、半月体形成の機序解明に向けてさらに研究を推進する予定である。
トキの営巣環境整備のための基盤研究:景観と局所スケールでの営巣場所選好性の解明

【意義・目的】トキは,かつて日本全国に分布していたが,野生絶滅してしまった。このトキの野生復帰を目指した放鳥が,2008年から新潟県佐渡島で始まっている。野生復帰を成功させるためには,トキの生息環境を整備することが必要であるが,餌場整備が官民一体となって進められてきたのに対し,営巣環境については過去の知見に乏しく,整備も進んでいない。このためトキの営巣場所についての知見を集め,営巣環境の整備と創出につなげることが不可欠である。そこで本研究では,以下の2点を明らかした。1)景観スケールにおいて,トキの営巣適地予測モデルを作成し,佐渡島内において重要な営巣地となりうる林を抽出した。2)局所スケール(林内)において,トキが営巣した樹木と営巣していない樹木の比較を行うことで,トキが好む営巣木の特徴を明らかにした。【方法】佐渡島に再導入されたトキは,2010年春に5ペアが,再営巣を含め計7か所の林に営巣した。2011年春には,7ペアが計10か所の林に営巣した。なお,同一ペアによる再営巣では,新旧の営巣林が空間的に近い傾向が認められた。そこで疑似反復を避けるため,景観スケールでの解析では,各ペアが最初に営巣した林のみを解析の対象とした。解析にはプログラム(MaxEnt)を用い,営巣林周辺の景観要素(餌場,森林,人工物の面積等)を基に,佐渡島内での営巣適地を抽出した。【結果】1)営巣適地予測モデルによると,トキの営巣に適した林は,平野部,特に水田と林がモザイク状に混在する谷戸地形に多いことが明らかとなった。2)林内におけるトキの営巣木選択には,樹種選好性は認められず,ギャップまたは林縁部近くの大径木,あるいは林冠からの突出木を選好していることが明らかとなった。これは,一般に大きな木は頑健で架巣しやすく,周囲の林冠が密閉していない木では巣への出入りもしやすいためと考えられた。
プロテインキナーゼ活性化による細胞内サイトカイン産生に関する研究

ヘルパーT(Th)細胞は、サイトカインの産生様式および担う免疫反応により、2種類のサブセットに分けられる。Th1はIL-2、IFN-γなどのよる細胞性免疫、Th2はIL-4、IL-10などによる液性免疫を担っている。ヒトにおける研究は、サイトカイン血中濃度が現在の測定系では検出感度以下となるために十分には進んでいない。本研究では、まず、Protein Kinase C activatorであるPMAとIonomycinでリンパ球を刺激することにより、ELISAで測定可能なレベルのサイトカインを血漿中に分泌させることも可能であるかどうかを検討した。方法は末梢血をヘパリンの入った容器に採取し、PMAとIonomycinを加え、4時間96時間培養し、血漿中に分泌されたサイトカインをELISAで測定した。刺激する前の血漿中サイトカイン濃度は全てELISAの測定感度以下であった。刺激後12時間後より上清(血漿)中のサイトカインは検出可能となり、24時間後にピーク値を示した。以上よりヘパリン採血した末梢血をそのままPMAとIonomcinと共に培養することにより、血漿中のサイトカイン濃度がELISAで測定可能になることが明らかとなった。さらにこの方法を用いた具体的な応用例として、妊娠・出産によるサイトカイン産生能の変動を調べた。リンパ球によるサイトカイン産生能はIL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10全て出産後1-6か月の時期に著明に亢進していることが明らかになった。このことはなぜ自己免疫疾患が妊娠中軽快し、出産後に発症・増悪するのかという疑問に答える結果であった。以上の研究により、プロテインキナーゼを活性化することによりリンパ球のサイトカイン産生能を測定できることが明らかになった。本測定法は自己免疫性疾患、アレルギー疾患の病態解明などの検討にも有用であると考えられる。
Holliday構造DNAの分岐点移動反応の顕微鏡による直接観察

DNAの転写、合成、分解、巻き戻し、組換えなどの機能を担う蛋白質の多くは、ヌクレオチドを加水分解したときに得られるエネルギーを使って、DNA分子に沿って動きながら機能する分子モーターである。これらのDNA分子モーターの動作原理は、これまでに多くの研究がなされている筋収縮、細胞運動、細胞内物質輸送などに関わる運動蛋白質分子モーターとは異なると考えられ、非常に興味深い。そこで本研究では、1分子イメージング、1分子操作、1分子計測法技術を使い、DNA分子モーターの動きのメカニズムを明らかにすることを目的とする。その中で私は相同組換えの中間体である十字型構造をしたHolliday構造DNAの分岐点移動を光学顕微鏡により直接検出することを試みている。Holliday構造DNAの分岐点移動にはRuvA-RuvB蛋白質複合体が関与している。RuvAがHolliday構造を認識する蛋白質でRuvBがモーター蛋白質である。これまでに観察に必要な十分な長さのHolliday構造DNAを作製した。このHolliday構造DNAは片側がスライドガラス基盤に固定し、もう片側には磁気ビーズをつけることができるように細工をした。そして、今回作製したHolliday構造DNAをスライドガラス上に固定し、磁石でDNAを引っぱり上げ、そこにRuvA、RuvB蛋白質を加え、RuvAB-Holliday構造複合体を形成させ、エネルギー源であるATPを加え、ビーズの回転を観察した。これまでにいくつかのビーズの回転運動を観察することができた。現在、論文に投稿中である。これらのDNA分子モーターの動作原理は、これまでに多くの研究がなされている筋収縮、細胞運動、細胞内物質輸送などに関わる運動タンパク質分子モータとは異なると考えられる。さらに、相同遺伝子組換えでは、複数のDNAモーターが時間的、空間的に協調し機能をするなど、非常に興味深い。しかし、現在それらはほとんど明らかになっていない。これまでに観察に必要な十分な長さの十字型構造をしたHolliday構造DNAを作製した。このHolliday構造DNAは片側がスライドガラス基盤に固定できるように、そしてもう片側には磁気ビーズをつけることができるように細工をした。そして、今回作製したHolliday構造DNAをスライドガラス上に固定し、磁石でDNAを引っぱり上げた。そこにHolliday構造DNAの分岐点移動反応を行うRuvA、RuvB蛋白質を加え、RuvAB-Holliday構造複合体を形成させ、エネルギー源であるATPを加え、ビーズの回転を観察した。今後さらに多くの観察例を得ることにより、これまでの生化学的解析からでは測定が困難であった分岐点移動反応の速度や1分子のATPの加水分解にともなって移動するDNAの長さ、活性化エネルギーの測定を行い、RuvA-RuvB蛋白質複合体よるHolliday構造DNAの分岐点移動反心のメカニズムを明らかにしていきたい。今後さらに多くの観察例を得ることにより、これまでの生化学的解析からでは測定が困難であった分岐点移動反応の速度や1分子のATPの加水分解にともなって移動するDNAの長さ、活性化エネルギーの測定を行い、RuvA-RuvB蛋白質複合体よるHolliday構造DNAの分岐点移動反応のメカニズムを明らかにしていきたい。

これらのDNA分子モーターの動作原理は、これまでに多くの研究がなされている筋収縮、細胞運動、細胞内物質輸送などに関わる運動蛋白質分子モーターとは異なると考えられ、非常に興味深い。そこで本研究では、1分子イメージング、1分子操作、1分子計測法技術を使い、DNA分子モーターの動きのメカニズムを明らかにすることを目的とする。その中で私は相同組換えの中間体である十字型構造をしたHolliday構造DNAの分岐点移動を光学顕微鏡により直接検出することを試みている。Holliday構造DNAの分岐点移動にはRuvA-RuvB蛋白質複合体が関与している。RuvAがHolliday構造を認識する蛋白質でRuvBがモーター蛋白質である。これまでに観察に必要な十分な長さのHolliday構造DNAを作製した。このHolliday構造DNAは片側がスライドガラス基盤に固定し、もう片側には磁気ビーズをつけることができるように細工をした。そして、今回作製したHolliday構造DNAをスライドガラス上に固定し、磁石でDNAを引っぱり上げ、そこにRuvA、RuvB蛋白質を加え、RuvAB-Holliday構造複合体を形成させ、エネルギー源であるATPを加え、ビーズの回転を観察した。これまでにいくつかのビーズの回転運動を観察することができた。現在、論文に投稿中である。
Bacteroides gingivalisの血清学的性状と型別分布について

成人型歯周炎患者63名の歯周ポケットから分離したB.gingivalis 126株と、同菌の標準菌株である381,hara1,ATCC33277の合計129株を用いてB.gingivalisの血清学的性状について検討を行った。先ず、用いた菌株のうち、数株について、全菌体に対する家兎免疫血清を作成した。得られた抗血清と上記129株間で定量凝集反応や、菌株の超音波処理抽出抗原を用いてゲル内拡散法を行い、B.gingivalisの抗原分析を実施した。吸収試験を繰り返した結果、4種類の因子血清が得られ、B.gingivalisは血清学的に均一ではなく、少なくとも4種類の特異抗原の存在することが明らかになった。またこの特異抗原の存在は、免疫電気泳動法によっても確認された。以上の結果から、B.gingivalisは、それが有する特異抗原により、IIV型の4血清型に分類された。人口腔内でのB.gingivalisの血清型別分布について調べたところ、同一口腔内より分離される菌株は、1つの血清型に属する場合が多く、63名中I型菌のみ分離された者が22名(34.9%)、II型菌のみの者が7名(11.1%)、III型菌のみの者4名(6.3%)、IV型菌のみの者22名(34.9%)であった。また、同一口腔内から2つの血清型菌の分離された者が2名(3.2%)にみられた。血清型別が異なっても、血球凝集能や、その他の生化学的性状には差は認められなかった。しかし、B.gingivalisの病原因子として注目されているコラゲナーゼ活性やプロテアーゼ活性には血清型別間に違いが認められ、コラゲナーゼ活性はII型菌、プロテアーゼ活性はIV型菌に、特に強い活性が認められた。抗生物質の感受性は、血清型別間に、特に差は認められなかった。なお、今後B.gingivalisの血清型別を一そう明確にするために、同菌の特異抗原の分離、精製を実施するべく準備を進めている。
肺癌患者における術前リハビリテーションの意義に関する研究

開胸術予定肺癌患者に万歩計を用いた家庭リハビリを行い、家庭リハビリが耐運動能の向上に有効かどうかを検討した。1.対象:開胸術予定肺癌患者14例とした。2.方法:万歩計を用いてリハビリ前の1日歩数を1週間測定し、術前平均1日歩数を求めた。術前平均1日歩数の2倍以上の歩数を歩くよう指示した。リハビリ期間は3週間以上を目標とした。リハビリの前後に肺機能と段階的運動負荷試験を行った。3.結果:リハビリ後の最大酸素摂取量(maxVO2)または、静脈血乳酸値が2.2mmol/Lの時点での酸素摂取量(La-2.2VO2:empirical anaerobic threshold)がリハビリ前に比し、5%以上改善した症例は8例(有効群)、5%以下であった症例は6例(無効群)であった。リハビリ無効の原因はリハビリ期間の不足(1例)、1日歩数の増加率の不足(2例)、肺癌の進行(2例)、合併心疾患(1例)などが考えられた。有効群8例のリハビリ中の一日歩数は術前の2.5(]S.Y+-[)1.8倍であった。肺機能はFVC(3.04(]S.Y+-[)1.00>3.25(]S.Y+-[)0.93L:p=0.02)とVC(3.13(]S.Y+-[)0.97>3.35(]S.Y+-[)0.99L:p=0.0018)はリハビリ前後で有意に増加したが、FEV1.0(1.90(]S.Y+-[)0.70>1.94(]S.Y+-[)0.68L/s)とMVV(73.1(]S.Y+-[)26.3>75.2(]S.Y+-[)27.7L/min)は有意な変化を認めなかった。運動負荷試験においてはmaxVO2/BSA(636(]S.Y+-[)181→705(]S.Y+-[)168ml/min/m^2:P=0.0008),maxO2-pulse/BSA(4.64(]S.Y+-[)1.23→5.17(]S.Y+-[)1.13ml/m^2:P=0.0011)、および、La2.2VO2/BSA(452(]S.Y+-[)88→504(]S.Y+-[)108ml/min/m^2:P=0.0052)はともに有意に上昇した。以上より約3週間の万歩計を用いた家庭リハビリで耐運動能の改善が得られることが明らかとなった。O2pulse、empiricalATの改善から循環の改善であることが示唆された。

運動負荷試験においてはmaxVO2/BSA(636(]S.Y+-[)181→705(]S.Y+-[)168ml/min/m^2:P=0.0008),maxO2-pulse/BSA(4.64(]S.Y+-[)1.23→5.17(]S.Y+-[)1.13ml/m^2:P=0.0011)、および、La2.2VO2/BSA(452(]S.Y+-[)88→504(]S.Y+-[)108ml/min/m^2:P=0.0052)はともに有意に上昇した。以上より約3週間の万歩計を用いた家庭リハビリで耐運動能の改善が得られることが明らかとなった。O2pulse、empiricalATの改善から循環の改善であることが示唆された。本研究の始めの計画ではリハビリは病院のリハビリ室で外来患者として1週間に5日行う予定であったが自宅が遠方のため毎日の通院ができないこと、まや自宅で自主的なリハビリをしていることがりこの部分の評価が出来ないことなどから万歩計を用いた家庭でのリハビリに変更した。1.対象:術前の肺癌患者とした。2.方法:万歩計を用いてリハビリ前の1日歩数を1週間測定し、平均1日歩数を求めた。平均1日歩数の2倍以上の歩数を歩くよう指示し、1週間毎に外来にて歩数のcheckとmotivationの目的でtreadmillで運動負荷を行った。3週間以上のリハビリができた症例を評価可能症例とした。リハビリの前後に肺機能と段階的運動負荷試験を行い機能改善が見られるか検討した。3.結果:4例に大して家庭リハビリを行った。平均年齢は65歳(男3、女1)、リハビリ前の平均1日歩数は6281歩で平均26日間(21-30)、219%の歩数で家庭リハビリができた。リハビリ前後の肺機能はFVC(3.5±1.3→3.6±1.2L),FEV1.0(2.1±0.8→2.2±0.8L/s),MVV(78.7±31.6→84.0±31.2L/min)は有意な変化を認めなかった。運動負荷試験においては最大酸素摂取量(VO_21086±465→1212±423ml/min),O_2-pulse-max(7.8±2.9→8.8±2.5ml)、および、静脈血乳酸血が2.2mmol/Lの時点での体表面積当たりの酸素摂取量(La-2.2VO_2/BSA474±112→510±148ml/min/m^2)はともに有意に上昇した。以上より約3週間の万歩計を用いた家庭リハビリで運動能の改善が得られることが明らかとなった。O_2-pulse-max、La-2.2VO_2/BSAの改善から循環の改善であることが示唆された。今後さらに症例を重ね検討する予定である。また、運動能の改善が肺切除術後のmorbidity,mortalityの改善に有効かどうか検討する予定である。開胸術予定肺癌患者に万歩計を用いた家庭リハビリを行い、家庭リハビリが耐運動能の向上に有効かどうかを検討した。1.対象:開胸術予定肺癌患者13例とした。2.方法:万歩計を用いてリハビリ前の1日歩数を1週間測定し、術前平均1日歩数を求めた。術前平均1日歩数の2倍以上の歩数を歩くよう指示した。リハビリの前後に肺機能と段階的運動負荷試験を行った。3.結果:リハビリ後の最大酸素摂取量(maxVO2)または、静脈血乳酸値が2.2mmol/Lの時点での酸素摂取量(La-2.2 VO2:empirical anaerobic threshold)がリハビリ前に比し、5%以上改善した症例は8例(有効群)、5%以下であった症例は5例(無効群)であった。無効群のうち2例はリハビリ中の歩数がリハビリ前の歩数の1.0と1.1倍であり、リハビリがほとんどできていなかった。他の2例はVC,FVC,FEV1,MVVのすべてが低下しており肺癌の進行が考えられた。最後の1例は僧房弁疾患を合併していた。有効群8例のリハビリ中の一日歩数は術前の2.5±1.8倍であった。有効群の肺機能はFVC(3.04±1.00→3.25±0.93 L:P=0.02)とVC(3.13±0.97→3.35±0.99L:P=0.0018)はリハビリ前後で有意に増加したが、FEV1.0(1.90±0.70→1.94±0.68 L/s)とMVV(73.1±26.3→75.2±27.7 L/min)は有意な変化を認めなかった。

運動負荷試験においてはmaxVO2/BSA(636±181→705±168ml/min/m^2:P=0.0003),max-O2-pulse/BSA(4.64±1.23→5.17±1.13ml/m^2:P=0.0011)、および、La-2.2 VO2/BSA(452±88→504±108ml/min/m^2:P=0.0052)はともに有意に上昇した。以上より約3週間の万歩計を用いた家庭リハビリで耐運動能の改善が得られることが明らかとなった。
顕在的な冠詞がない言語における名詞句の統語構造と意味解釈の研究

今年度は昨年度(まで)に提案した諸々の仮説の妥当性をより子細に検討すること,またそれらをより一般的な視点から修正,統合することを目指し,研究を行った.今年度も昨年度に引き続き,名詞句の統語構造については,主にロシア語の出来事名詞句の構造を検討することでアプローチした.出来事名詞の項構造をより詳細に記述した上で,従来検討していなかった現象を用いて統語構造の妥当性を検討した.その結果,提案した統語構造を若干修正することで,出来事名詞句内の束縛現象や量化詞の解釈に関わる現象を説明できることが分かった.また,英語とロシア語における属格名詞句の出来事名詞に対する前置の可否についてロシア語の所有形容詞も射程に入れ,より詳細な検討を加えた.出来事名詞の統語構造についての仮説と属格名詞句の前置についての仮説を,名詞句の最上位の節点はNPなのかDPなのかというより一般性の高い問題のもとで,統合させた.定性・特定性の意味解釈については,昨年度着想した定性(・特定性)の意味解釈はDPがなくともなされるという仮説を,仮説を保証する記述的な事実の掘り出しと検討を行った.具体的には,数詞と所有代名詞/形容詞を含む句の最大解釈を基に,存在文における定性制約,否定属格現象にかかる制約,語順に関わる制約から上記の仮説が支持されることを示した.定性・特定性の意味解釈についても,名詞句の最上位の節点はNPなのかDPなのかというより一般性の高い問題に関連付けることができた.コーパスの構築については,今年度中にアノテーションまで終了させることはできなかったが,今年度は日本語とロシア語のアライメントを取る作業を完了させた.平成30年度が最終年度であるため、記入しない。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。今年度は主に出来事名詞を扱い,名詞句の構造にアプローチした.ロシア語の出来事名詞句内に現れる具格動作主の名詞句の統語的位置,認可方法を束縛の現象から明らかにした.また,ロシア語と同様の統語構造が日本語の出来事名詞句についても適用可能であることを示し,それが文レベルの構造と並行性があることを指摘した.さらに,ロシア語と英語における属格名詞句の前置の可否は,各言語におけるDPの有無に起因しているという仮説を提案した.なお,本研究の出来事名詞句の構造では,その一部に態に関わる機能投射(VoiceP)を想定するが,これは筆者の従来の研究と拮抗的ではなく,両立可能であることも確認された.上記の成果は,各段階に応じて,いくつかの国際会議で発表し,現在論文を投稿中である.(特)定性の意味解釈については,ロシア語,日本語で異なる方向からアプローチした.ロシア語の(特)定性の意味解釈については,数詞と所有代名詞を含む名詞句の最大解釈の可否に注目することで,定性の意味解釈がDP領域でなされていないことを示すと考えられるデータが得られた.これについて意味論からの理論的考察を進めた.また,日本語の(特)定性については,国立国語研究所との共同研究として,『現代日本語書き言葉均衡コーパス』への情報構造アノテーションの結果をもとに当該名詞句の文末からの距離をモデル化した.これらの成果については,現在学会での発表へ向け準備中である.コーパスの構築については,日本語については『現代日本語書き言葉均衡コーパス』への情報構造アノテーションの成果を利用することとし,ロシア語についてはその翻訳版を用いることとした.今年度は,国立国語研究所との共同研究として,上記のアノテーションについて国際会議で発表し,論文を投稿した.また,予定していた分のデータ(PNコアデータ16ファイル)のロシア語翻作業を完了させた.申請時の研究計画からは異なる方向からのアプローチではあるものの,冠詞のない言語における名詞句の統語構造(機能範疇の有無,多寡),定性・特定性の意味解釈という本研究課題の中心的な問題について,十分に研究を進めることができた.研究課題にとっては周辺的ではあるものの,具格動作主の統語上の位置と認可の方法についても明らかにすことができたのは大きな成果であった.このように大きな進展があった一方,コーパスの構築については若干の遅れが見られる.この点を考慮しても,全体としてはおおむね順調に進展しているといえる.今年度は昨年度(まで)に提案した諸々の仮説の妥当性をより子細に検討すること,またそれらをより一般的な視点から修正,統合することを目指し,研究を行った.今年度も昨年度に引き続き,名詞句の統語構造については,主にロシア語の出来事名詞句の構造を検討することでアプローチした.出来事名詞の項構造をより詳細に記述した上で,従来検討していなかった現象を用いて統語構造の妥当性を検討した.その結果,提案した統語構造を若干修正することで,出来事名詞句内の束縛現象や量化詞の解釈に関わる現象を説明できることが分かった.また,英語とロシア語における属格名詞句の出来事名詞に対する前置の可否についてロシア語の所有形容詞も射程に入れ,より詳細な検討を加えた.出来事名詞の統語構造についての仮説と属格名詞句の前置についての仮説を,名詞句の最上位の節点はNPなのかDPなのかというより一般性の高い問題のもとで,統合させた.定性・特定性の意味解釈については,昨年度着想した定性(・特定性)の意味解釈はDPがなくともなされるという仮説を,仮説を保証する記述的な事実の掘り出しと検討を行った.

具体的には,数詞と所有代名詞/形容詞を含む句の最大解釈を基に,存在文における定性制約,否定属格現象にかかる制約,語順に関わる制約から上記の仮説が支持されることを示した.定性・特定性の意味解釈についても,名詞句の最上位の節点はNPなのかDPなのかというより一般性の高い問題に関連付けることができた.コーパスの構築については,今年度中にアノテーションまで終了させることはできなかったが,今年度は日本語とロシア語のアライメントを取る作業を完了させた.理論面については,昨年度に引き続き,出来事名詞(句)の構造について考えることで名詞句の構造(DPや他の機能投射の有無,多寡)にアプローチすることを考えている.昨年度は,ロシア語-英語間における属格名詞句の出来事名詞に対する前置の可否の違いが,各言語の名詞句の統語構造の違い(DPの有無)に起因しているという仮説を提出したが,この仮説の妥当性を示すにあたっては,まだ曖昧な部分や検討すべき事項が多くある.今年度はこれについてより深く検討し,仮説を精緻化する予定である.これについては昨年国際会議で発表しているため,今年度より詳細な検討をした上で,論文にまとめることを予定している.さらに,昨年度は,数詞と所有代名詞を含む名詞句の最大解釈の可否に注目することで,定性の意味解釈がDP領域でなされていないことを示すと考えられるデータが得られた.昨年度中に一定程度は意味論からの理論的考察を進めたが,今年度は仮説の妥当性を検証するためのより有効なテストを探し,より精緻に考察,検討を行う予定である.これについては国際会議での発表を通じて,他の研究者からの意見を得たい.実証面については,コーパス構築に向けロシア語の日本語からの翻訳データに対して,(特)定性のアノテーション作業を行う予定である.アノテーション作業完了後に,日本語コーパスとロシア語コーパスのアライメントを取り,パラレルコーパスを完成させる.それを用いてロシア語,日本語の名詞句の(特)定性に関して対照を行う.平成30年度が最終年度であるため、記入しない。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
医用微細素子の成形を目的とする鍛圧・切削複合成形システムの開発

(1)研究の背景と目的近年の医療の高度化に伴い,医用工具の重要性が高まっている.医用工具の多くは複雑でその製作には熟練と相当の時間を要し,概して高価である.本研究はこうした問題を克服することをねらいとする.(2)研究成果上記の対策として新たな成形システムの開発を行った.システムは,鍛圧加工ステージと切削加工ステージ及び回転金型ステージ,及びこれらと座標系を共通化した材料支持ステージからなる.材料支持ステージ上の材料が各加工ステージで加工される.本システムは座標系が共通であり,高い加工精度が容易に得られる特徴を持つ.鍛圧加工ステージは打抜き,穴あけ,切り欠き等のせん断,及び圧縮鍛造加工が可能で大きな成形を短時間で成し遂げることができる.回転金型ステージでは単純形状工具の回転機能により複雑形状製品をせん断創成できる.切削は型成形が苦手な自由形状を主にエンドミルで加工する.ここでは医用微細鉗子を加工例として取り上げその有効性を検討し,微細製品の加工に効果的であることが確認された.しかし,複雑な製品に対してはさらなる検討の必要性が指摘され,そこで微細切削システムが付け加えられた.複雑形状部分の創成はエンドミルが一般的であるが,工具製作の観点から寸法に限界がある.そこで細い丸棒を斜めにカットした「はすかい工具」を開発し目的に供した.工具寸法は15-25μmであり,空気軸受機構を用い50,000-100,000rpmで駆動された.そして工具寸法にほぼ等しい幅の微細溝の創成加工に成功した.このほか,加工時に生じるバリ対策として,磁気研磨法が検討され,新たなメディアとしてグリッドを用いる方法が提案された.そしてその有効性が実験的に確認された.(1)研究の背景と目的近年の医療の高度化に伴い,医用工具の重要性が高まっている.医用工具の多くは複雑でその製作には熟練と相当の時間を要し,概して高価である.本研究はこうした問題を克服することをねらいとする.(2)研究成果上記の対策として新たな成形システムの開発を行った.システムは,鍛圧加工ステージと切削加工ステージ及び回転金型ステージ,及びこれらと座標系を共通化した材料支持ステージからなる.材料支持ステージ上の材料が各加工ステージで加工される.本システムは座標系が共通であり,高い加工精度が容易に得られる特徴を持つ.鍛圧加工ステージは打抜き,穴あけ,切り欠き等のせん断,及び圧縮鍛造加工が可能で大きな成形を短時間で成し遂げることができる.回転金型ステージでは単純形状工具の回転機能により複雑形状製品をせん断創成できる.切削は型成形が苦手な自由形状を主にエンドミルで加工する.ここでは医用微細鉗子を加工例として取り上げその有効性を検討し,微細製品の加工に効果的であることが確認された.しかし,複雑な製品に対してはさらなる検討の必要性が指摘され,そこで微細切削システムが付け加えられた.複雑形状部分の創成はエンドミルが一般的であるが,工具製作の観点から寸法に限界がある.そこで細い丸棒を斜めにカットした「はすかい工具」を開発し目的に供した.工具寸法は15-25μmであり,空気軸受機構を用い50,000-100,000rpmで駆動された.そして工具寸法にほぼ等しい幅の微細溝の創成加工に成功した.このほか,加工時に生じるバリ対策として,磁気研磨法が検討され,新たなメディアとしてグリッドを用いる方法が提案された.そしてその有効性が実験的に確認された.1.研究の背景と目的本研究の目的は医用微細素子の成形を対象とする切削・鍛圧複合加工システムの構築と,その機能検証を通して広く世間に貢献できる技術の開発である.主たる狙いは高生産性と成形多様性(加工の高自由度)にある.医用素子は形状が複雑微細であり,製造工程は煩雑で生産経費も高い.高生産性を誇るプレス成形(せん断・鍛造)と加工自由度の高い切削の組み合わせにより,上に述べた問題の多くを解決しようとするものである.2.研究成果2.1システムの構築鍛圧加エステージと切削加工ステージ及び回転金型ステージ,及びこれらと座標系を共通化した材料支持ステージからなる加工システムを構築した.材料支持ステージ上の材料が各加工ステージで加工される.座標系が共通であり,高い加工精度が容易に得られる特徴を持つ.2.2システムの機能と性能鍛圧加エステージは打抜き,穴あけ,切り欠き等のせん断,及び圧縮鍛造加工が可能で大きな成形を短時間で成し遂げることができる.回転金型ステージでは単純形状工具の回転機能により複雑形状製品をせん断創成できる.切削は型成形が苦手な自由形状を主にエンドミルで加工する.検討項目は成形能力と成形精度である.成形自体は従来技術に負う部分が多く特に問題がない.加工精度は材料の加工位置指定精度と工具の精度及び剛性に依存する.特に前者の影響が大きく,これは各駆動系が持つ誤差の集積となり誤差伝搬則より計算される.本システムでは12μm以下と計算された.医用微細素子は多岐に渡るが,多種多様な形状をもった製品を特定し,具体的機能検証を行った.ここでは医用鉗子部品であるグリッパを対象とした.

これはワイヤ側面の歯切り,歯切り部のえぐり(スプーン状成形),平坦部創成,さらに外径打抜き等で完成するものである.構築されたシステムを用いた成形実験より,複雑且つ多様な形状創成が可能なこと,精度は計算値内に収まることが確認された.また微細切削用の工具としてはすかい工具を提案しその実用性を調べた1.研究の背景と目的複雑で微細形状の医療工具を安価にしかも安定して製作することを目的として,鍛圧加工と切削加工を複合させたシステムの開発を行っている.本年度は特に微細切削システムを重点とする研究が主体である.2.鍛圧・切削複合加工システム開発したシステムは鍛圧加工システムと微細切削加工システムからなる.鍛圧加工システムはマイクロタレット方式加工要素と回転金型打抜き要素から構成され,これは大変形部分の加工を分担する.さらに複雑で鍛圧が不得手とする部分を担当するのが微細切削加工システムであり,最小15μmの溝加工を可能とするものである.3.微細切削加工システムの開発と微細切削機構の研究本年度の最重要課題である.複雑形状部分の創成はエンドミルが一般的である.しかし,工具製作の観点から最小寸法は100μmが限界である.そこで,細い丸棒を斜めにカットした「はすかい工具」を開発し,当初の目的に供した.本工具を用いて15μm程度の超微細な形状の創成に成功した.この工具は加工性能をある程度犠牲にして微細化を優先させたものであり,従来工具に比べれば加工機構も相当異なると考えられる.こうした事情より,はすかい工具による切削機構について検討し,以下の結論を得た.はすかい工具による推奨切削条件は基本的には慣用工具の場合に準ずるが,切削性能が低いため,加工機械の剛性,材料保持に工夫が必要であること,切削における塑性変形成分が大きいので,バリ処理が重要であることが知れた.さらに加工面粗さの解析がなされた.さらにはすかい工具による切削で問題となるバリ処理方法についても併せ検討した.