hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
細胞極性確立とmRNA局在のin vivo イメージング

ASH1 mRNAの局在にはmRNAの3 ́非翻訳領域、タイプVミオシンMyo4、アクチンの制御因子Bni1が必要である。ASH1 mRNAの娘細胞の先端への局在を生きた酵母細胞中で観察するため、U1A-GFP融合タンパク質とU1A結合部位をASH1に導入したU1Atag-ASH1遺伝子の発現プラスミドを構築した。この系を用いて、ASH1 mRNAと共局在するRNA結合タンパク質Khd1を見いだした。Khd1はASH1 mRNAのコーディング領域のN末側を介してASH1 mRNAと相互作用する。またその多量発現により、Ash1タンパク質の量が減少する。これらの結果から、Khd1はASH1 mRNAの局所的な翻訳制御の関与する可能性が示唆された。次に、RNA結合モチーフをもつMpt5タンパク質が、HO遺伝子のmRNA3 ́非翻訳領域に結合し、HO遺伝子の発現を抑制することを見いだした。mpt5変異株では野生型株では起きないHO遺伝子の発現が起きる。これらの結果から、HO遺伝子の母細胞特異的発現には、娘細胞特異的に局在する転写因子Ash1による転写開始での制御に加え、Mpt5によるHO mRNAの転写後の段階での制御も必要であることが明かとなった。今後は、Khd1,Mpt5などのRNA結合タンパク質と、ミオシン、アクチン等の細胞骨格系および翻訳系との相互作用を検討する予定である。本研究では、細胞極性の分子レベルでの研究が最も進んでいる出芽酵母を用いて、mRNAや細胞極性決定因子の局在のin vivoイメージングの系を確立し、その系を用いてmRNAの細胞内局在の分子機構機構および細胞極性の確立や維持に関与する因子のmRNA局在における機能を明らかにする。また、動物細胞から酵母相同遺伝子を機能的に分離することにより、動物細胞におけるmRNAの局在機構およびその細胞極性との関連を明らかにする。本年度は、酵母および培養細胞を用いた細胞極性、非対称分裂、mRNAの局在機構の解析から、以下の結果を得た。(1)細胞分裂時におけるASH1 mRNAの娘細胞の先端への局在を、生きた酵母細胞中で観察する系を用いて、ASH1 mRNAと共局在するRNA結合タンパク質Khd1を見出した。(2)Khd1がASH1 mRNAのコーディング配列内の領域に結合し、その翻訳を抑制することを明らかにした。(3)PufファミリーのRNA結合モチーフをもつMpt5が、HO mRNAの3'非翻訳領域に結合し、HO遺伝子の発現を抑制することを見出した。(4)NucleaseドメインをもつMkt1が、HO mRNAの3'非翻訳領域を介して、HO遺伝子の発現を正に制御することを明らかにした。(5)上皮細胞におけるタイトジャンクションの接着分子JAMの局在が、ネクチン-アファディン系の細胞間接着系によって決定されることを明らかにした。このように、本年度の研究は予想以上に進展し、当初の目的を達成することができた。
職場の温熱環境が女性の健康に及ぼす影響-末梢部皮膚血流量と身体バランスとの関係-

そこで、職場の温熱環境が女性の健康に及ぼす影響、特に冷え過ぎによる影響について明らかにすることを目的とした。銀行員と学生を対象として皮膚血流量と重心動揺の測定を行った。その結果を冷えを有する群(A群)と冷えを有しない群(B郡)により比較検討を行った。銀行員の一日の皮膚血流量を比較した場合、冷えを有しない群に比較して冷えを有する群は、昼食前、昼食後および終業時のいずれにおいても末硝部皮膚血流量が有意に低値を示している。これは学生の場合も同様であっった。特に、昼食後の皮膚血流量は有意に差が認められた。冷えを有しない群は昼食前に減少していた末梢部皮膚血流量が、昼食後には一旦その量が増加し回復を見せるが、冷えを有する群は、昼食後も低値を示したままである。以上のように、冷えを有する群は、冷えを有しない群に比較して、クーラーによる冷え過ぎの影響をより強く受けるということが明らかとなった。また、その冷えすぎによる影響は、疲労や身体不調に繋がる。女性の健康調査の結果と併せて検討を加えたところ、冷えを有する群(A群)と冷えを有しない群(B群)とに分類した場、四肢末梢の冷え感だけでなく、不眠、肩こり、便秘などの身体不調についても有意な差が認められた。さらに、重心動揺の結果については、冷えを有する群はクーラーの効いた部屋で終日過ごすことにより、身体のバランスが悪くなったものと考えられる。しかしながら、今回の結果は有意な差ではなかったので、今後さらに検討を加える必要がある。また、重心動揺の変化を疲労度の指標として有効であるかについても検討を要する。職場の温熱環境が就労女性の健康に及ぼす影響を明らかにするために、佐賀県内の銀行に勤務する女性(2050歳代)を対象として、健康調査及び皮膚血流等の測定を実施した。さらに、温湿度を調整した実験室内において、20歳代の女性10人を被験者として、皮膚血流量と重心動揺の測定を実施し、冷房環境下における疲労についての検討を実施している。銀行での測定により、冷房環境下で働く女性は何らかの身体不調を有する割合が高い、末梢部の皮膚血流量が有意に減少している等の結果が得られた。これについては、第72回日本衛生学会総会(平成14年3月2729日:三重大学)において研究成果を発表する。また、重心動揺については、皮膚血流量や疲労との関係について検討を行なっているところである。職場の温熱環境が女性の健康に及ぽす影響を明らかにすることを目的として、13年度は佐賀県内の銀行に勤務する女性(2050歳代)を対象に健康調査及ぴ皮膚血流量の測定を行った。14年度は13年度の結果を踏まえて、冷房による冷えの影響をより明確にすることを目的として、20歳代の女性10名を被験者とし、温湿度を調整した実験室内において皮膚血流量及び重心動揺の測定を実施した。測定は、冷房使用時の8月と冷房及び暖房を使用しない10月の2期に、午前9時から午後5時まで実施し、1被験者につき4回の測定を行った。その結果、皮膚血流量は、測定開始時の9時から11時の2時間で急激に減少し、冷房による冷えの影響が顕著であった。また、被験者を冷えの有無で分類して検討を行ったところ、冷え性である群(5名)と冷え性でない群(5名)との間に顕著な差が認められた。冷え性でない群は、一旦減少した皮膚血流量は昼食後には回復傾向を示したが、冷え性である群は食後も回復せず、冷え性でない群に比較して冷房による影響を受けやすいということが明らかとなった。

さらに、身体バランス(重心動揺)の変化についても両者の間に差が見られ、疲労度ついても差が生じているものと考えられるが、これについては15年度も引き続き実験を行なう予定である。今年度の研究結果は、昨年度に引き続き、日本衛生学会総会(平成15年3月27日29日:大分コンパルホール)において発表する。職場の温熱環境が女性の健康に及ぼす影響を明らかにすることを目的として、13年度は、佐賀県内の銀行に勤務する女性(20歳代から50歳代まで)を対象に健康調査及び皮膚血流量の測定を実施した。14年度は、13年度の結果を踏まえて、冷房によるひえの影響をより明確にすることを目的として、20歳代の女性10名を被験者として、実験室内において皮膚血流量及び重心動揺の測定を実施した。15年度は、13年度と14年度の測定結果の詳細な分析を行なうとともに、就労女性の妊娠期における職場環境の健康への影響(疲労を中心に)を明らかにすることを目的として、新たに調査を実施した。調査は、過去5年間に妊娠・出産の経験のある就労女性を対象とし、質問紙調査法で行なった。調査内容は、基本属性、健康状態について、妊娠前期・中期、後期の各期における体調及び体型の変化、職場環境を含む生活環境について、身体の冷えについて、衣生活についてとした。調査の結果から、妊娠期は体型・体調の変化に伴い心身への負担が掛かる時期であるが、働きながら妊娠期を過ごす女性にとってその負担は非常に大であることが明らかとなった。職種によっては特別に負担が掛かることも多く、職業による明確な差異が認められた。職場の温熱環境と身体の疲労感については、調査票の解析のみでは明確にはできなかったことから、これまでの皮膚血流量及び重心動揺の測定データとの分析を行なっているところである。調査結果については、平成15年、第50回、日本家政学会九州支部総会において発表した。
ヒト乳癌転移モデルにおける転移抑制物質・抗癌剤の浸潤・転移に与える影響の分析

ヒト乳癌培養細胞MCF-7にFGF-4およびlacZ遺伝子を導入したMKL-4細胞は、ヌードマウスに移植するとホルモン非依存性に急速増大する腫瘍を形成し、lacZ活性を利用した染色法によりリンパ節及び遠隔臓器転移を半定量的に検討することができる。この新しい転移モデルを用い以下の研究成果が得られた。1.リンパ節及び肺転移巣からのsublineの樹立に成功した。リンパ節転移巣由来のMKL-4-L1細胞をヌードマウスに移植すると、親株より増殖・転移能が亢進していることが示された。2.血管新生抑制物質TNP-470のMKL-4転移モデルにおける効果を血管新生、増殖、転移の3点から検討した。その結果、TNP-470を隔日、皮下投与すると、用量依存性に新生血管数、増殖速度、転移の頻度や広がりが抑えられた。3.乳癌の術後補助化学療法として汎用されている代謝拮抗物質UFTの効果も検討した。その結果、UFTを隔日、経口投与すると、用量依存性に増殖速度、転移の頻度や広がりが抑えられた。また、腫瘍内の壊死巣の増大も認められた。しかし、その効果は血管新生抑制物質TNP-470に比べるとやや劣り、また20mg/kg投与群ではマウス体重の減少が認められた。4.癌細胞浸潤抑制物質IIF-2の効果を検討した。その結果、IIF-2-アルブミン結合体を連日、腹腔内投与すると、in vivoでの浸潤能の低下および増殖抑制作用を伴わない転移抑制効果が示された。5.乳癌手術後の補助化学療法のモデルとして、このMKL-4転移モデルが使えるかどうかを検討するため、細胞接種後一定期間をおいて腫瘍を切除し、転移巣がその後どのように変化していくかを検討中である。pilot studyにおいて、腫瘍切除がその後の微小転移の進展を促進することが判明した。さらに、ヒト乳癌細胞の細胞生物学の研究に役立てようと、再発乳癌患者の癌性胸水から新しいヒト乳癌細胞株KPL-1、KPL-3Cを樹立した。ヒト乳癌培養細胞MCF-7に血管新生促進因子の一つFGF-4及びgenetic tagとして大腸菌lacZ遺伝子を導入したMKL-4細胞は,ヌードマウスに移植するとホルモン非依存性に急速増大する腫瘍を形成し,lacZ活性を利用した染色法によりリンパ節及び遠隔臓器転移を判定量的に検討することができる。この転移モデルを用い以下の研究成果が得られた。1.リンパ節及び肺転移巣からのsublineの分離に成功し,リンパ節転移由来のMKL-4-L1細胞がヌードマウスにおいて,親株より増殖・転移能が亢進していることを示した。このsublineの生物学的特徴については現在検討中である。2.血管新生抑制物質TNP-470のMKL-4転移モデルにおける効果を血管新生,増殖,転移の3点から検討した。その結果,TNP-470 10mg/kgまたは50mg/kgの隔日,皮下投与により,用量依存性に新生血管数(抗第VIII因子抗体染色),増殖速度,転移の頻度や広がりが抑えられた。導入されたFGF-4の活性を制御することにより増殖・転移能が弱められたことは,乳癌の悪性転化時に血管新生抑制物質が有効であることを示しており,臨床的にも極めて興味深い。3.代謝拮抗物質5-FUの誘導体であるUFTの効果も検討した。その結果,UFT10mg/kgまたは20mg/kgの連日,経口投与により,用量依存性に増殖速度,転移の頻度や広がりが抑えられた。また,腫瘍内の壊死巣の増大も認められた。しかし,その効果はTNP-470に比べるとやや劣り,また20mg/kg投与群ではマウス体重の減少が認められた。一方,腫瘍増殖の抑制が認められたマウスでは,明らかに転移が抑えられていることは興味深い。4.癌細胞浸潤抑制物質IIF-2を用いたpilot studyでは,in vivoでの浸潤能の低下作用(画像解析装置を用い分析)や増殖抑制効果をともなわない転移抑制効果が示されいおり,用量依存性などを現在検討している。5.乳癌手術後の補助化学療法のモデルとして,このMKL-4転移モデルが使えるかどうか検討するため,細胞接種後一定期間をおいて腫瘍を切除し,転移巣がその後どのように変化していくかを現在検討中である。

また、腫瘍内の壊死巣の増大も認められた。しかし、その効果は血管新生抑制物質TNP-470に比べるとやや劣り、また20mg/kg投与群ではマウス体重の減少が認められた。4.癌細胞浸潤抑制物質IIF-2の効果を検討した。その結果、IIF-2-アルブミン結合体を連日、腹腔内投与すると、in vivoでの浸潤能の低下および増殖抑制作用を伴わない転移抑制効果が示された。5.乳癌手術後の補助化学療法のモデルとして、このMKL-4転移モデルが使えるかどうかを検討するため、細胞接種後一定期間をおいて腫瘍を切除し、転移巣がその後どのように変化していくかを検討中である。pilot studyにおいて、腫瘍切除がその後の微小転移の進展を促進することが判明した。さらに、ヒト乳癌細胞の細胞生物学の研究に役立てようと、再発乳癌患者の癌性胸水から新しいヒト乳癌細胞株KPL-1、KPL-3Cを樹立した。ヒト乳癌培養細胞MCF-7に血管新生促進因子の一つFGF-4及びgenetic tagとして大腸菌lacZ遺伝子を導入したMKL-4細胞は,ヌードマウスに移植するとホルモン非依存性に急速増大する腫瘍を形成し,lacZ活性を利用した染色法によりリンパ節及び遠隔臓器転移を判定量的に検討することができる。この転移モデルを用い当該年度に以下の研究成果が得られた。1.乳癌の術後補助化学療法として汎用されている代謝拮抗物質ftorafurとuracilとの配合剤であるUFTの効果も検討した。その結果,UFT 10または20mg/kgの連日,経口投与により,用量依存性に増殖速度,転移の頻度や広がりが抑えられた。また,腫瘍内の壊死巣の増大も認められた。しかし,その効果は血管新生抑制物質TNP-470に比べるとやや劣り,また20mg/kg投与群ではマウス体重の減少が認められた。一方,腫瘍増殖の抑制が認められたマウスでは,微小転移が全く認められなかったことは興味深い。本研究結果は,論文として発表された。2.癌細胞浸潤抑制物質IIF-2の効果を検討した。その結果,IIF-2アルブミン結合体10または20mg/kgを連日,腹腔内皮投与すると,in vivoでの浸潤能の低下(IBAS画像解析装置を用た新しい解析法を考案)及び増殖抑制作用をともなわない転移抑制効果が示された。興味深いことに,腫瘍の血管新生能には全く影響が認められなかった。本研究結果は,論文として掲載予定となっている。3.乳癌手術後の補助化学療法のモデルとして,このMKL-4転移モデルが使えるかどうか検討するため,細胞接種後一定期間をおいて腫瘍を切除し,転移巣がその後どのように変化していくかを検討中である。pilot studyにおいて,腫瘍切除がその後の微小転移の進展を促進することが判明した。今後さらに,この術後転移モデルの開発に力を入れていく予定である。さらに,ヒト乳癌細胞の細胞生物学の研究に役立てようと,再発乳癌患者の癌性胸水から新しいヒト乳癌細胞株KPL-1, KPL-3Cを樹立した。本研究結果は,論文として掲載された。
変異グルコセレブロシダーゼによるパーキンソン病発症の病態機序の解明

534名のパーキンソン病症例および544名のコントロール例を対象として、Gaucher病の病因遺伝子であるglucocerebrosidase遺伝子(GBA)について、全エクソン、スプライス部位の網羅的なresequencingを行った。その結果、Gaucher病の発症に関与するGBAのヘテロ接合性変異の頻度(11種類の変異)が、パーキンソン病症例において有意に高値であることを見出した(パーキンソン病症例:9.4%、コントロール:0.37%、オッズ比:28.0、95%CI:4.3-238.3)。一方、Gaucher病の発症に関与しない変異については、パーキンソン病群,コントロール群でその頻度に有意差はなかった。さらに、GBA変異を有するパーキンソン病の多発家系(8家系)を見出し、これらの多発家系において、GBA変異が発症者問で、すべて共有されていることを見出した。さらに、GBA変異を有するパーキンソン病症例の平均発症年齢が52.5±7.4、GBA変異を有していないパーキンソン病症例の平均発症年齢が58.8±10.7と、有意に発症年齢が若年化することを見出した。このヘテロ接合性変異が、どのような機序をパーキンソン病発症に関与するかを明らかにすることを目的に、日本人パーキンソン病症例で頻度の高い変異(L444P,R210W)に着目して、トランスジェニックマウスの作成を進めた、L444P、R210Wを発現するfounderを得ることができ、今後、繁殖を進め、パーキンソン病の病態生理に関する生化学的な解析を進める予定である。パーキンソン病の遺伝的リスクファクターとしてGBA(glucocerebrosidase)遺伝子に着目し,534名のパーキンソン病症例および544名のコントロール例を対象として,Gaucher病の病因遺伝子である(GBA)について,全エクソン,スプライス部位の網羅的なresequencingにより,Gaucher病の発症に関与するGBAのヘテロ接合性変異の頻度が,パーキンソン病症例において有意に高値であることを見出した(オッズ比:28.0、95%CI:4.3-238.3)。さらに,国際的な共同研究により,GBAのヘテロ接合変異が,人種を超えて,パーキンソン病の強い遺伝的リスクとなっていることを証明した.この結果は,common di sease-common variants仮説ではなく,common disease-multiple rare variants仮説の重要性を証明するものである.この,common disease-multiple rarevariants仮説に立って,パーキンソン病発症のリスクファクターを解析するために,多数のパーキンソン病症例について,pooled DNAを調製し,barcode indexingの後に,次世代シーケンサーを用いてallele頻度を定量することにより,multiple rare variantsの検出を可能にする方法を開発した.GBAヘテロ接合変異の病態生理機序については,ライソソーム機能,特にミトコンドリアの品質管理(mitophage)に注目した生化学解析を開始した.赤字が今年度分です.ほかは昨年のものですのでご注意ください.パーキンソン病の遺伝的リスクファクターとしてGBA(glucocerebrosidase)遺伝子に着目し,534名のパーキンソン病症例および544名のコントロール例を対象として、Gaucher病の病因遺伝子である(GBA)について、Gaucher病の発症に関与するGBAのヘテロ接合性変異の頻度が、パーキンソン病症例において有意に高値であることを見出した(オッズ比:28.0、95%CI:4.3-238.3)。さらに,国際的な共同研究により,GBAのヘテロ接合変異が,人種を超えて,パーキンソン病の強い遺伝的リスクとなっていることを証明した.この結果は,common disease-common variants仮説ではなく,common disease-multiple rare variants仮説の重要性を証明するものである.common disease-multiple rarevariants仮説に立って,パーキンソン病発症のリスクファクターを解析するために,多数のパーキンソン病症例について,一次元のpooled DNAを調製し,barcode indexingの後に,次世代シーケンサーを用いてallele頻度を定量することにより,multiple rare variantsの検出を可能にする方法を開発した(J.Hum.Genet.(2010).さらに,二次元のpooled DNAを用いて,次世代シーケンサーによる解析を行い,高精度にrare variantsの分析ができる方法を開発した.
Ｘ線精密分光による銀河MeV宇宙線研究の開拓

フェルミ衛星やチェレンコフ望遠鏡により,GeV・TeVの銀河宇宙線陽子の情報が入手可能になった.一方,MeV宇宙線陽子のデータは地球のごく近傍を除いて未だ皆無である.この状況で,「すざく」の観測から申請者は,銀河面の中性鉄(6.4keV)輝線の起源がMeV陽子である事を発見した.そこで本研究は下記の目的の元,精密X線分光によるMeV銀河宇宙線陽子の研究を開拓する.2016年2月に「ひとみ」衛星の打ち上げに成功した.3月末に通信異常が発生し,最終的にそのまま「ひとみ」衛星は失われることになってしまった.痛恨の痛みである.一方で,私たちが担当したX線CCDカメラは軌道上で完全に動作した.観測した天体及び,搭載した校正線源を用いて軌道上でのキャリブレーションを行い,地上で予定していた性能が発揮することを確認した.今年度は,通信異常を起こす前に行った数個の天体の観測をもとにしたサイエンス論文と,X線CCDカメラのハードウェア論文を発表した.これとは別に「すざく」のアーカイバルデータを用いて,複数の超新星残骸からMeV宇宙線陽子による6.4keVの中性鉄輝線を検出することに成功した.この成果により,本課題の主要な目標を達成することに成功するとともに,投稿論文を作成し,無事アクセプトされた.わずか数個であったが,「ひとみ」衛星が観測して得たデータは非常に素晴らしいものであった.そこで,関係者の理解と努力により,代替機を打ち上げる計画の検討がはじまった.現時点で,X線マイクロカロリメーターと,X線CCDカメラを搭載することで検討が進んでいる.本研究も,このX線CCDカメラの再度実現へ向けて研究開発を進めることとした.今年度はその,ひとみ衛星用のCCDカメラに対して,代替機用のCCDカメラの改良を行った.ひとみ衛星搭載のX線CCDカメラの地上および機上でのキャリブレーションデータから,,特性関数の決定も行うことができた.全世界のユーザーが使用する解析ソフトに組み込みもほぼ終了した.「ひとみ」衛星自身は失われてしまった.そのため,「ひとみ」衛星を用いた本格的な観測研究を行うことはできなくなってしまったが,短期間で得られた観測データから予想以上の成果を上げることに成功し,10本の投稿論文として発表した.豊富に存在する「すざく」衛星のアーカイバルデータを用いて,超新星残骸W28などから6.4keVの中性鉄K輝線を検出した.スペクトルの透過幅や分子雲との位置関係から,MeV宇宙線陽子が起源であることを明らかにした.これに関する論文を2本発表した.ひとみ衛星用のCCDカメラのハードウェア論文を2本発表した.機上での問題点を明らかにし,その成果を元にした代替機用のCCDカメラの改良も進展している.「すざく」で得たデータの解析やNuSTAR等の衛星を用いて観測的研究を継続する.さらに,今年度の研究から分子雲との相互作用の重要性がわかってきた.代替機での精密分光観測の準備として,地上実験結果をもとにしたMeV宇宙線による鉄などの中性K輝線の輝線構造のモデル化を進める.また電波観測の研究者とも連携を取る.G166の野辺山45m鏡での観測の解析を進める.また,代替機用のX線CCDカメラの開発を進める.フェルミ衛星やチェレンコフ望遠鏡により,GeV・TeVの銀河宇宙線陽子の情報が入手可能になった.一方,MeV宇宙線陽子のデータは地球のごく近傍を除いて未だ皆無である.この状況で,「すざく」の観測から申請者は,銀河面の中性鉄(6.4keV)輝線の起源がMeV陽子である事を発見した.そこで本研究は下記の目的の元,精密X線分光によるMeV銀河宇宙線陽子の研究を開拓する.すざく衛星で得た,銀河面の中性鉄(6.4keV)輝線の起源がMeV陽子である事を示す論文を出版した.次にひとみ衛星搭載X線CCDカメラの地上キャリブレーションを行った.新たに開発した回転型X線発生装置を用いて,京大にて2014年度に取得したX線データの解析を行った.F-K,Ge-L, Ge-K, Fe-55, Ti-Kの各蛍光輝線での電荷転送効率,電荷注入によるゲイン回復とゲインのCCD面上での位置依存性を補正する関数を考案し,そのパラメータを用いた.この結果は修士論文としてまとめられた.得られた結果は,全世界のユーザーが使用する解析ソフトに組み込んだ.次に,ひとみ衛星の総合試験に参加し,熱真空や振動衝撃によって主にX線CCDカメラの性能に変化がないことを確認した.種子島に輸送後の試験も行い,X線CCDカメラの性能に変化がないことを確認した.2月17日に打ち上げを行い,ひとみ衛星と名付けられた.軌道上での天体および較正線源を用いたX線CCDカメラのキャリブレーションを行った.幾つか問題は発見されたが,観測に大きな支障はない.一方で,3月末に通信異常が起こったため,現在はひとみ衛星の観測ができない状況にある.ひとみ衛星搭載のX線CCDカメラの地上および機上でのキャリブレーションを,ほぼ予定通りこなし,特性関数の決定も行うことができた.全世界のユーザーが使用する解析ソフトに組み込みも順調である.フェルミ衛星やチェレンコフ望遠鏡により,GeV・TeVの銀河宇宙線陽子の情報が入手可能になった.

一方,MeV宇宙線陽子のデータは地球のごく近傍を除いて未だ皆無である.この状況で,「すざく」の観測から申請者は,銀河面の中性鉄(6.4keV)輝線の起源がMeV陽子である事を発見した.そこで本研究は下記の目的の元,精密X線分光によるMeV銀河宇宙線陽子の研究を開拓する.2016年2月に「ひとみ」衛星の打ち上げに成功した.3月末に通信異常が発生し,最終的にそのまま「ひとみ」衛星は失われることになってしまった.痛恨の痛みである.一方で,通信異常を起こす前に,数個の天体の観測を行うことに成功した.私たちが担当したX線CCDカメラは軌道上で完全に動作した.観測した天体及び,搭載した校正線源を用いて軌道上でのキャリブレーションを行い,地上で予定していた性能が発揮することを確認した.現在,CCDカメラのハードウェア論文と,CCDおよび他の観測装置を用いた観測論文を作成中である.これとは別に,「すざく」のアーカイバルデータを用いて,超新星残骸の投稿論文を作成し,無事アクセプトされている.わずか数個であったが,「ひとみ」衛星が観測して得たデータは非常に素晴らしいものであった.そこで,関係者の理解と努力により,代替機を打ち上げる計画の検討がはじまった.現時点で,X線マイクロカロリメーターと,X線CCDカメラを搭載することで検討が進んでいる.本研究も,このX線CCDカメラの再度実現へ向けて研究開発を進めることとした.今年度はその,ひとみ衛星用のCCDカメラに対して,代替機用のCCDカメラの改良点等を洗い出すことを行なった.ひとみ衛星搭載のX線CCDカメラの地上および機上でのキャリブレーションデータから,,特性関数の決定も行うことができた.全世界のユーザーが使用する解析ソフトに組み込みもほぼ終了した.「ひとみ」衛星自身は失われてしまった.そのため,「ひとみ」衛星を用いた本格的な観測研究を行うことはできなくなってしまった.しかし,「すざく」衛星のアーカイバルデータが豊富に存在し,これを中心にデータ解析を行うことで,研究活動を継続している.フェルミ衛星やチェレンコフ望遠鏡により,GeV・TeVの銀河宇宙線陽子の情報が入手可能になった.一方,MeV宇宙線陽子のデータは地球のごく近傍を除いて未だ皆無である.この状況で,「すざく」の観測から申請者は,銀河面の中性鉄(6.4keV)輝線の起源がMeV陽子である事を発見した.そこで本研究は下記の目的の元,精密X線分光によるMeV銀河宇宙線陽子の研究を開拓する.2016年2月に「ひとみ」衛星の打ち上げに成功した.3月末に通信異常が発生し,最終的にそのまま「ひとみ」衛星は失われることになってしまった.痛恨の痛みである.一方で,私たちが担当したX線CCDカメラは軌道上で完全に動作した.観測した天体及び,搭載した校正線源を用いて軌道上でのキャリブレーションを行い,地上で予定していた性能が発揮することを確認した.今年度は,通信異常を起こす前に行った数個の天体の観測をもとにしたサイエンス論文と,X線CCDカメラのハードウェア論文を発表した.これとは別に「すざく」のアーカイバルデータを用いて,複数の超新星残骸からMeV宇宙線陽子による6.4keVの中性鉄輝線を検出することに成功した.この成果により,本課題の主要な目標を達成することに成功するとともに,投稿論文を作成し,無事アクセプトされた.わずか数個であったが,「ひとみ」衛星が観測して得たデータは非常に素晴らしいものであった.そこで,関係者の理解と努力により,代替機を打ち上げる計画の検討がはじまった.
ウェストナイル脳炎媒介蚊の殺虫剤感受性調査と殺虫剤抵抗性の分子診断法確立

米国におけるウエストナイル熱の流行は2004年度も収まる気配がない。日本も依然として本ウイルス上陸の脅威にさらされている。そんな中で媒介昆虫として重要と思われるアカイエカ種群蚊について、殺虫剤感受性レベルを引き続き調査した。また、昨年度の研究で明らかになりつつある抵抗性機構についてさらに詳細なデータを蓄積した。日本各地で採集したアカイエカとチカイエカのコロニーを使い,5種の殺虫剤に対する幼虫の殺虫剤感受性を調べた。殺虫剤感受性系統アカイエカ洞穴に関するLC_<99> X 100に相当するエトフェンプロックス(5.7ppm),テメフォス(1.1ppm),フェニトロチオン(3.3ppm),ならびに「99%羽化阻害濃度X 100」に相当するジフルベンズロン(0.92ppm),ピリプロキシフェン(0.22ppm)の濃度において生存率5%以上のコロニー数は,アカイエカ(総試験数37)ではそれぞれ19,1,0,3,0,また,チカイエカ(総試験数17)ではそれぞれ7,1,0,2,6であった。昨年度までの研究で、アカイエカ抵抗性要因の一つとして作用点分子であるナトリウムチャネルの構造変異(kdr)が予想された。そこで、感受性低下の度合いが比較的大きかった林試の森系をエトフェンプロックスで7世代室内淘汰し、殺虫剤感受性の変化を観察すると共に左kdrの原因と予想されたSer999頻度の推移を観測した。エトフェンプロックスに対する感受性は淘汰を重ねるごとに低下し、7世代後には1500倍もの抵抗性レベルを示した。一方、Ser999をホモにもつ個体頻度は淘汰開始時に0%であったのが、7世代後には98%を占めた。これにより、Ser999はPhe999同様にエトフェンプロックス感受性に大きく関わっていることが示された。ピレスロイド剤抵抗性ネッタイイエカ(JPal-per系統)の抵抗性機構を解明する目的で、ピレスロイドの作用点であるナトリウムチャネルの構造解析を行った。すでに構造解析が行われた昆虫のナトリウムチャネルの構造をもとに縮重プライマーをデザインし、ネッタイイエカから調製したcDNAを鋳型としてRT-PCRを行った。その結果、約6000bpからなるナトリウムチャネル遺伝子の全長を明らかにした。これまでに多くの殺虫剤抵抗性昆虫で共通に見られるアミノ酸置換の有無を確認するためにこの遺伝子の一部を抵抗性系統で解析し、感受性系統と比較した。その結果、予想された位置のアミノ酸(ロイシン)がフェニルアラニンへと変化していることが分かった。さらに、複数のクローンについて解析を進めたところ、この典型的なアミノ酸置換はもたず、その近位に別のアミノ酸置換をもつハプロタイプが同一系統内に存在することがわかった。これらの遺伝子配列の相違を利用してそれぞれのハプロタイプをもつ個体の純化を試み、permethrinに対する感受性を測定したところ、大きな違いが認められなかった。したがって2つのアミノ酸置換は同等に薬剤親和性を低下させると推測された。今後の抵抗性分子診断法確立への足がかりになるとともに、作用点の殺虫剤結合領域の解明につながるものと考えられる。この他、東京都内数力所よりアカイエカとヒトスジシマカを採集し、殺虫試験に用いるためのコローニー化を行った。現在、各種殺虫剤の感受性を調査中である。ウエストナイルウイルスが日本に侵入した場合を想定し、重要と思われるアカイエカ種群蚊とヒトスジシマカについて、殺虫剤感受性レベルを調査した。また、抵抗性機構の推定をおこない、殺虫剤抵抗性に関連づけられる作用点遺伝子の構造変化を解析した。2003年は主に首都圏の市街地から採取したアカイエカ群19コロニーとヒトスジシマカ10コロニーについて、有機リン剤のフェニトロチオンとテメホス、ピレスロイド系のエトフェンプロックス、昆虫成長制御剤のピリプロキシフェン、ディミリンを使い、幼虫の殺虫剤感受性試験を行った。エトフェンプロックスを除いた各殺虫剤では、アカイエカ群、ヒトスジシマカのいずれも製剤の用法・用量に定められている有効成分の濃度以下で有効性を示し、試験を行った範囲に於いてはこれらの殺虫剤に高い防除効果が期待できるという結果であった。しかしながら、エトフェンプロックスを用いた試験では、アカイエカ群中の8コロニーについて、感受性系統のLC99×100の濃度をもってしても10%以上の生存が確認された。中でも渋谷で採集されたチカイエカに於いては著しい感受性の低下が認められ、20%を下回る死亡率であった。アカイエカ群におけるエトフェンプロックス抵抗性の原因を探るため、共力剤を用いた殺虫試験を行った結果、抵抗性の要因としてチトクロムP450酸化酵素系による解毒活性の増大が関与していることが明らかとなった。さらにピレスロイド剤の作用点であるナトリウムチャネルの構造解析を行ったところ、渋谷、市川で採集された抵抗性チカイエカでLeu999がPheに置換していることが、また公園等で採取された抵抗性アカイエカからは、同位置がSerに置換していることが明らかになった。これらのアミノ酸置換はすでに多くの殺虫剤抵抗性昆虫種からほぼ普遍的に見つかっていることから、これらがエトフェンプロックス抵抗性の要因となっていることが示された。

そんな中で媒介昆虫として重要と思われるアカイエカ種群蚊について、殺虫剤感受性レベルを引き続き調査した。また、昨年度の研究で明らかになりつつある抵抗性機構についてさらに詳細なデータを蓄積した。日本各地で採集したアカイエカとチカイエカのコロニーを使い,5種の殺虫剤に対する幼虫の殺虫剤感受性を調べた。殺虫剤感受性系統アカイエカ洞穴に関するLC_<99> X 100に相当するエトフェンプロックス(5.7ppm),テメフォス(1.1ppm),フェニトロチオン(3.3ppm),ならびに「99%羽化阻害濃度X 100」に相当するジフルベンズロン(0.92ppm),ピリプロキシフェン(0.22ppm)の濃度において生存率5%以上のコロニー数は,アカイエカ(総試験数37)ではそれぞれ19,1,0,3,0,また,チカイエカ(総試験数17)ではそれぞれ7,1,0,2,6であった。昨年度までの研究で、アカイエカ抵抗性要因の一つとして作用点分子であるナトリウムチャネルの構造変異(kdr)が予想された。そこで、感受性低下の度合いが比較的大きかった林試の森系をエトフェンプロックスで7世代室内淘汰し、殺虫剤感受性の変化を観察すると共に左kdrの原因と予想されたSer999頻度の推移を観測した。エトフェンプロックスに対する感受性は淘汰を重ねるごとに低下し、7世代後には1500倍もの抵抗性レベルを示した。一方、Ser999をホモにもつ個体頻度は淘汰開始時に0%であったのが、7世代後には98%を占めた。これにより、Ser999はPhe999同様にエトフェンプロックス感受性に大きく関わっていることが示された。
遺伝性筋萎縮性側索硬化症の遺伝子異常と運動ニューロン死

筋萎縮性側索硬化症(ALS)は、今日までその原因が充分には明らかにされていない進行性難治性筋疾患で、主として運動ニューロンの選択的細胞死を惹起して筋萎縮をもたらし、その予後が極めて不良でありながら有効な治療法は未だ確立していない。ALS発症者の5-10%は遺伝性で(FALS)、何らかの遺伝子異常によって発症すると考えられている。近年、白人大家系の研究により一部のFALSの責任遺伝子座が第21染色体長腕に存在することが明らかにされ、また1993年には細胞質内の活性酸素消去機構であるCu/ZnSOD(superoxide dismutase)遺伝子に点突然変異が見い出されてきて、これが一部のFALSの原因遺伝子であることが強く推定されるに至った。すでに以前の研究により日本人の家系を用いた予備的な研究によって2家系のCu/ZnSOD遺伝子に、これまで検討された150以上の白人家系でも見られていない症状の進行が極めて遅いなどの際立った臨床的特徴を持った新しい遺伝子変異(点突然変異)を見い出して報告している(H46R変異)。さらに本年度の本研究により、もう3家系においても、白人家系にはまだ報告のないCu/ZnSOD遺伝子の3つの異なった異常を見い出した。異なった遺伝子変異は、それぞれに特徴的な臨床所見を示しており遺伝子変異と臨床的特徴の関連が注目され、遺伝子異常による運動ニューロン死のメカニズム解明の足掛かりとなった。
低次元有機導体におけるアニオン秩序化効果と超伝導

(TMTSF)_2ClO_4はClO_4アニオンの秩序化が試料の冷却速度に依存し、急冷するとスピン密度波状態に転移するが、徐冷すると超伝導状態に転移する。このアニオンの秩序化を利用して冷却速度を変えることにより試料に乱れを導入することができる。本研究では、異方的導体における乱れの影響を明らかにするために、(TMTSF)_2ClO_4の金属及びSDW相において磁気抵抗、磁化率等を詳細に測定した。その結果、磁化率測定より求めた磁場侵入長の温度依存性より、(TMTSF)_2ClO_4の超伝導相は有限のギャップをもつ超伝導が実現されているとの結論を得た。又、様々な冷却速度における残留抵抗の測定結果より、冷却速度と非磁性不純物散乱の関係を定量的に明らかにした。さらに、金属及びSDW相における磁気抵抗の測定を行った。その結果、SDW相における磁気抵抗の異方性はSDWギャップに伴うホールと電子の有効質量の異方性として定量的に理解できることが分かった。金属相におても大きな磁気抵抗の異方性が観測されたが、その異方性はSDW相とは逆であり、又、その異方性は低温になるにしたがって著しく増大することを見いだした。現在の時点ではこの金属相の磁気抵抗の振舞いに関して適切な解釈をもっていないが、何らかの新しい散乱機構の存在を示唆するものであるのかもしれない。今後、様々な冷却速度における超伝導相において上部臨界磁場(H_<C2>)の測定を行い、ク-パ-対の波動関数の対称性と非磁性不純物の超伝導状態に果す役割をさらに調べるとともに、金属相の磁気抵抗の振舞いを詳細に調べ、低温で増大する磁気抵抗の異方性の起源を明らかにする。又、急冷した場合のスピン密度波相及び徐冷し強磁場を印加した場合の磁場誘起スピン密度波相におけるスピン密度波のダイナミクスを合わせて測定し低次元電子系に特徴的な超伝導相と磁気的相の関連を明らかにする。
色素体における物質集積機能とその発現の分子機構

色素体発達段階の初期および老化過程における澱粉粒の消長や色素体核の構造変化に注目し、色素体のシンク・ソ-ス関係の「逆転」や「解消」に関連した色素体構造の変化を調べた。イネの鞘葉および本葉は、葉の発達にともなって原色素体は澱粉粒を蓄積し一旦アミロプラスト化し、澱粉粒の消化とともに葉緑体に分化し光合成を開始する(シンク・ソ-ス関係の逆転)。この時期には原色素体核の著しい構造変化やDNA含量の大幅な増大が見られた。その後の葉緑体の老化にともない、DNA含量の急激な低下や葉緑体核の消失、さらに光合成膜系の崩壊が起こり、葉緑体は完全に光合成機能を失ってしまう(シンク・ソ-ス関係の解消)。これは、葉の老化の極初期(葉の黄化の直前)にZn^<2+>依存性の特殊なヌクレア-ゼ(13,51kDa)が増大し、葉緑体へ移行するためであることがわかった。葉緑体核の消失によって葉緑体の遺伝子発現能(mRNA合成能)は完全に葉緑体から失われてしまうことになる。このように、シンク・ソ-ス関係の逆転や解消の時期に、色素体核には消失をともなう著しい変化が見られ、色素体遺伝子の発現様式に著しい変化があることが予想された。色素体核レベルでの遺伝子発現の制御機構を解析するために、タバコ培養細胞(BYー2)から原色素体核また緑葉から葉緑体核を無傷単離し、<in>___ー<vitro>___ーで転写を続行させ、その転写産物を解析した。その結果、原色素体核と葉緑体核では個々の遺伝子の発現様式には大きな差異があり、またゲノムあたりの発現量でみると葉緑体核には原色素体核の十倍以上の発現量があった。このような著しい差異は従来からよく調べられているエチオプラストから葉緑体への発達段階では見られないものである。原色素体から葉緑体への発達段階でシンク・ソ-ス関係の逆転が起こっている。色素体のシンク・ソ-ス関係に果たす役割の変化は、色素体遺伝子発現様式の著しい変化をともなっていることが明らかになった。
栄養素による鶏の消化管運動の制御機構解明に関する研究

ニワトリにおいて中鎖トリグリセリド(MCT)が引き起こすそ嚢からの飼料飼料通過速度の遅延機構を明らかにする目的で研究を行った。まずMCTの投与経路により異なるのかどうかを調査した。その結果、MCTを経口で投与することにより遅延するが、腹腔に投与しても遅延しないことが判明した。次にこの遅延がMCTから産生された脂肪酸の影響かどうかを明らかにするために、アルカリによる緩和効果を調べた。しかしながらアルカリ処理により更に遅れることが判明した。次にドーパミン作動性神経の関与についてドーパミン受容体の拮抗薬を用いて調査したところ、その関与は少ないものと考察された。また交感神経の関与についても調べたが、交感神経を遮断すると飼料の通過が更に遅延することが判明した。迷走神経の切除手術を施し、迷走神経の関与を調べた。長鎖トリグリセリドを含む飼料の通過速度は迷走神経の切除により遅れたが、MCTによる飼料の通過速度は手術により影響を受けることはなかった。次いでどの部位の腸管神経叢が関与しているかを調べるために消化管各部位の脱神経を行った。筋胃の頭側神経網と外側結合部の脱神経によりMCTの通過速度はさらに遅延することが判明した。消化管部位よりアセチルコリンの遊離を促すシサブリドの投与やムスカリン受容体遮断薬であるアトロピンの投与でもMCTによる飼料速度の遅延は改善されず、むしろさらに遅れることが判明した。これらよりMCTによる飼料通加速度の遅延はコリン作動性神経を介していないことが明きらかとなった。また一酸化窒素の関与について一酸化窒素の自発的発生剤であるニトロフルシドナトリウム塩(SNP)を調査したところ、SMPの水準が高まるに連れて更に飼料の通過速度は遅延した。ニワトリにおいて中鎖トリグリセリド(MCT)は飼料脂質源として長鎖トリグリセリド(LCT)より優れる点を有するものの、相反する効果として飼料摂取量を低下させる。このMCTによる飼料摂取量の低下が如何なる機構により引き起こされるかを解明し、飼料摂取量を改善するような対策を施せば、現在の食肉事情に適した高蛋白質で低脂肪という高品質の食肉を効率よく産生できるものと確信している。しかしながら現時点ではMCTによる飼料摂取量の低下の一因がそ嚢における飼料の滞留によるものであり、それがどのような機構で起こり、またそれがどの消化管部位の運動抑制によるものかが明確にされていない。本年度の研究では、何故トリグリセリドを構成する脂肪酸の炭素鎖長の違いにより消化管運動に変化が起こるのかについて、特に消化管ホルモンの1つであるガストリンおよびそれにより分泌が促される胃酸の関与を調査した。プロトンポンプの阻害剤であるオメプラゾールを投与すると血中のガストリン濃度が上昇すると共に飼料の通過が遅延することが知られている。またMCTによっても血中ガストリン濃度は上昇する。そこで本実験はMCTによる飼料の遅延が血中ガストリン濃度の上昇によるもののかを確かめた。まずオメプラゾールの投与により血中のガストリンプールを予め高めておいた場合に、LCT飼料の飼料通過速度はMCT飼料と同程度まで遅延した。これがガストリン濃度の上昇によるものなのかあるいは胃酸分泌の低下によるものなのかを明らかにするために鳥類ガストリンを外因的に投与したところ薬理学的濃度のガストリン投与では飼料の通過速度は遅延したが、生理学的濃度では効果はなかった。胃酸の関与についてはオメプラゾール処理したものに塩酸を投与することで飼料の通過速度が速くなった。以上のことよりMCTによる飼料通過速度の遅延はガストリン以外の因子で制御されていると推察された。

まずMCTの投与経路により異なるのかどうかを調査した。その結果、MCTを経口で投与することにより遅延するが、腹腔に投与しても遅延しないことが判明した。次にこの遅延がMCTから産生された脂肪酸の影響かどうかを明らかにするために、アルカリによる緩和効果を調べた。しかしながらアルカリ処理により更に遅れることが判明した。次にドーパミン作動性神経の関与についてドーパミン受容体の拮抗薬を用いて調査したところ、その関与は少ないものと考察された。また交感神経の関与についても調べたが、交感神経を遮断すると飼料の通過が更に遅延することが判明した。迷走神経の切除手術を施し、迷走神経の関与を調べた。長鎖トリグリセリドを含む飼料の通過速度は迷走神経の切除により遅れたが、MCTによる飼料の通過速度は手術により影響を受けることはなかった。次いでどの部位の腸管神経叢が関与しているかを調べるために消化管各部位の脱神経を行った。筋胃の頭側神経網と外側結合部の脱神経によりMCTの通過速度はさらに遅延することが判明した。消化管部位よりアセチルコリンの遊離を促すシサプリドの投与やムスカリン受容体遮断薬であるアトロピンの投与でもMCTによる飼料速度の遅延は改善されず、むしろさらに遅れることが判明した。これらよりMCTによる飼料通過速度の遅延はコリン作動性神経を介していないことが明きらかとなった。また一酸化窒素の関与について一酸化窒素の自発的発生剤であるニトロプルシドナトリウム塩(SNP)を調査したところ、SMPの水準が高まるに連れて更に飼料の通過速度は遅延した。
認知症の早期診断を目的とした新しい認知機能検査法

研究のゴールは、認知症早期診断に用いる検査時間が短く感度が高い新しい検査法の研究開発である。3年間の研究期間と研究費があればさらに100名以上の被験者への検証実験実施とその画像診断法、問診法との相互検証、さらに検査装置の小型試作機の開発が行える。研究体制は、大学病院との共同プロジェクト(応募者が研究代表)で整っており、専門知識の共有、技術基盤構築、検証環境も確保され研究の実現実効性は高い。
マダラシミ概日時計の分子機構の解析

本研究は、マダラシミの概日時計分子機構を明らかにし、昆虫時計分子機構の理解を進めることを目的としている。本年度は、1.HR3及びE75の全長のクローニング、2.HR3及びE75の発現リズムの解析、3.HR3及びE75の機能解析及び、4.マダラシミの時計分子機構のモデル図の作成を行い以下の結果を得た。1.HR3及びE75の断片から設計したプライマーを用いてRT-PCRを行い、HR3及びE75の全長cDNAを得ることに成功した。HR3及びE75は、ショウジョウバエのそれらと同様にDNA Binding Domain、及びLigand Binding Domainを持ち、これらの機能領域のハエのHR3及びE75との相同性は61100%であった。この結果からHR3及びE75はハエのそれらと同様の核内受容体として機能することが示唆された。2.リアルタイムPCRによりHR3及びE75のmRNA発現量を検討したところ、共に明期の終わりから暗期の始めにピークとなるリズムを示すことが明らかとなり、マウスror及びfev-erbのmRNAの発現パターンと類似することが明らかになった。3.HR3及びE75の2本鎖RNAを作成し、マダラシミの腹部に注射したところ、多くの個体で脱皮が見られなくなり致死となった。また、生存した個体のそれぞれの遺伝子のmRNAレベルは有意に低下しており、恒暗条件下で歩行活動リズムが消失した。これらの事実から、HR3及びE75が概日リズムの形成に関与すると共にシミの個体発生にも不可欠な役割を持つことが示唆された。4.これまでに得られた結果から、シミの概日時計分子機構では、ハエと同様にtim,Clk,cycが不可欠な構成要素であるが、timがハエ型の発現制御を受けるのに対して、Clkとcycは哺乳類型の制御を受けることが明らかとなった。従って、昆虫概日時計のプロトタイプはハエ型の要素と哺乳類型の要素を併せ持つことが示唆された。計画していた全ての研究に着手することができ、HR3及びE75に関しては、現在論文にまとめている。今後は、クローニング及び、機能解析が不十分な時計遺伝子を中心に研究を進めたい。また、時計遺伝子産物に対する抗体作成を行い、時計細胞の同定やタンパク質レベルでの発現制御の検討も行う予定である。さらに、得られた結果を総合し、マダラシミにおける時計分子機構をより詳細に検討したいと考えている。本年度は、1.Td'timの全長のクローニング、2.Td'timの発現リズムの解析、3.Td'timの機能解析及び、4.rev-erbの取得と機能解析を行い以下の結果を得た。リアルタイムPCRによりTd'timのmRNA発現量を検討したところ、Td'timは明期の終わりから暗期の始めにピークとなるリズムを示すことが明らかとなり、ショウジョウバエのmRNAの発現パターンと類似していた。この結果は、上記のTd'timがショウジョウバエと類似の機能領域を持つ点と共に、Td'timの発現制御機構がショウジョウバエに類似していることを示唆している。Td'timの2本鎖RNA(dsRNA)を作成し、マダラシミの腹部に注射したところ30日以上に渡り恒暗条件下でのリズムが消失した。また、リアルタイムPCRにより注射した個体のそれぞれの遺伝子のmRNAレベルは有意に低下していた。これらの事実はRNAiがシミ時計遺伝子の機能解析に有効であることを示すと共に、Td'timがシミ概日リズムの形成に不可欠であることを示している。

従って、昆虫概日時計のプロトタイプはハエ型の要素と哺乳類型の要素を併せ持つことが示唆された。計画していた全ての研究に着手することができ、Td'timに関しては論文にまとめることができた。計画していた全ての研究に着手することができ、HR3及びE75に関しては、現在論文にまとめている。今後は、クローニング及び、機能解析が不十分な時計遺伝子を中心に研究を進めたい。また、時計細胞の同定や、抗体作成を行い、タンパク質レベルでの検討も行う予定である。さらに、得られた結果を総合し、マダラシミにおける時計分子機構の仮説を提出したいと考えている。また、時計遺伝子産物に対する抗体作成を行い、時計細胞の同定やタンパク質レベルでの発現制御の検討も行う予定である。さらに、得られた結果を総合し、マダラシミにおける時計分子機構をより詳細に検討したいと考えている。