hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
プロテオーム解析によるNASH(非アルコール性脂肪性肝炎)疾患マーカー探索

脂肪肝を高頻度で伴う肝疾患であり、NASH(非アルコール性脂肪性肝炎)との類似性について注目されているにC型肝炎について新規マーカーの報告を査読付き英文誌に発表した(PLoS One. 2011Feb 25 ; 6(2) : e17309.)。また、本研究より得られたNASH血液マーカー候補については国内出願のみならず、最終年度までに国際出願まで至った。このNASH血液マーカー候補については最終年度の早い段階で論文を作成し投稿した。NASH研究において壁の一つとなっていたのは、研究対象とする試料が得難いヒト由来サンプルであったり、ヒトとは種差の存在する動物由来のサンプルであった点であった。研究代表者の確立したin vitro NASHヒト培養細胞モデルにより、この点は1.ヒト由来の細胞より試料を得ることができる。遺伝子や代謝経路の種差を乗り越えることができる。2.培養細胞系のため、安定かつ大量の試料の調整が可能。といった意味で解決することができた。これにより、当該年度で実施したプロテオーム解析を用いた疾患マーカー探索・validationのために試料をどんどん投入する事ができたと同時に、貴重なヒト由来試料を節約する事が出来た。具体例を挙げると、ある分子が疾患マーカーたりうるかvalidationを行う局面では本研究ではwestern blottingなど抗体を用いたvalidationを行っている。抗体の反応条件は抗体ごとに異なり、良いvalidationのためには何種類もの予備検討が必要となるが、これをヒト由来試料ではなく、in vitro系由来試料で行うことが可能であった。これは患者血中の疾患マーカー探索において特に有用であった。当該年度にプロテオーム解析で抽出された各候補分子それぞれについて、このようなvalidationは必須であり、来年度以降の研究実施が円滑に行われる目処がついたものと考えている。やや実施計画が前倒し気味であるが、既にいくつかの候補についてはNASH患者血清、コントロール血清を用いたvalidationが進行しており、その一つは疾患特異性、臓器特異性について有望な結果が得られており臨床的有用性についてさらなるエビデンスを得るべく実験を重ねている。研究代表者の確立したin vitro NASHヒト培養細胞モデルにより見出された、いくつかのたんぱくにおいて、疾患特異性、臓器特異性で疾患マーカーとして有望な結果が得られた。平成22年度は主にそのいくつかのたんぱくが、疾患マーカーたりうるかvalidationを行った。実際にNASH患者血清と健常コントロール血清を使用し、western blotなど抗体を用いてvalidationをしている。一つの候補たんぱくにおいては、非常に優良な結果が得られたため、臨床検査試薬の大手メーカー「ニットーボーメディカル株式会社」と共同で特許を出願中である。特願2010-1377095号「非アルコール性脂肪肝炎検出および/または鑑別用マーカー、非アルコール性脂肪肝炎を検出および/または鑑別する方法およびそれらに用いるキット」出願年月日・2010年6月17日。このたんぱくは、臨床検査の現場での実用化を目指し研究を継続している。その他の候補たんぱくにおいても、現在同様の手法でvalidation作業を継続中である。NASH(非アルコール性脂肪性肝炎)研究において壁の一つとなっていたのは、研究対象とする試料が得難いヒト由来サンプルであったり、ヒトとは種差の存在する動物由来のサンプルであった点であった。これにより、当該年度までに実施したトランスクリプトーム・プロテオーム解析を用いた疾患マーカー探索・validationのために試料をどんどん投入する事ができたと同時に、貴重なヒト由来試料を用いてピンポイント的な実証を行うことが出来た。これは患者血中の疾患マーカー探索において、十分な予備検討を行ってから貴重な患者由来試料の検討ができるという面で特に有用であった。NASH患者血清、コントロール血清を用いたこのようなvalidationの結果、高い肝疾患特異性が期待でき、また臨床的有用性についても最大の課題である単純性脂肪肝とNASHとの鑑別に有望なNASH血中マーカ-候補を見出した。これは当該年度までに特許の国内・国際出願を行っている。また、このNASH血液マーカー候補については当該年度の早い段階で論文を作成して投稿を行っている。
幕末・明治期における文学と図像の相互比較研究

本研究では、天保期(1830-44)から明治時代前半にいたるまでに文学と視覚芸術がいかなる相互関係の中で進展し、文化領域を築き上げたかを具体的に検証し、評価することを目的とした。とくに幕末から明治10年代にいたる同時代の人物を描いた肖像画と、それらに対する知識人・政治運動家たちの思考と利用状況に焦点を絞って調査。次の領域に沿って、俯瞰できる形で整理し、分析をした。(1)肖像と漢詩文の相互関係(2)獄中志士と肖像(3)「美人図」に寄せる賛詩賛文。幕末・明治初期の資料調査と収集を続けながら、整理と分析を行った。とくに幕末から明治10年代にいたる同時代の人物を描いた肖像画と、それらに対する知識人・政治運動家たちの思考と利用状況に焦点を絞って調査を行った。次の項目に沿って積み上げてきた研究を充実させ、俯瞰できる形で整理し、分析をした。(1)肖像と漢詩文から時代を捉える肖像画における模倣と同時代性肖像画に寄せる詩文と和歌の実態と位置づけ(2)獄中志士と肖像吉田松陰著『照顔録』と第二次幕長戦争肖像画詩賛の修練江戸護送と松陰遺影-自賛の制作および転写(3)肖像写真に寄せられる献辞肖像写真と漢詩写真の裏書き調査幕末・明治初期の資料調査と収集を続けながら、整理と分析を行った。(1)肖像と漢詩文から時代を捉える肖像画における模倣と同時代性肖像画に寄せる詩文と和歌の実態と位置づけ(2)獄中志士と肖像吉田松陰著『照顔録』と第二次幕長戦争肖像画詩賛の修練江戸護送と松陰遺影-自賛の制作および転写(3)肖像写真に寄せられる献辞肖像写真と漢詩写真の裏書き調査本研究では、天保期(1830-44)に始まって幕末時代前半にいたるまでに文学と視覚芸術がいかなる相互関係の中で進展し、文化領域を築き上げたかを具体的に検証し、評価することを目的とした。(1)肖像と漢詩文から時代を捉える肖像画における模倣と同時代性肖像画に寄せる誌文と和歌の実態の位置づけ(2)獄中志士と肖像吉田松陰著『照顔録』と第二次幕長戦争肖像画詩賛の修錬江戸護送と松陰遺影-自賛の制作および転写(3)「美人図」に寄せる賛詩賛文渡辺崋山《芸妓図》賛文にみる被写体の実存への言及と時局論画題詩としての「美人図」詩収集と分析幕末から明治維新期肖像写真と漢詩とのジャンル交流肖像写真の裏書き調査
外傷による動脈性勃起障害の病態解明-新しい薬物療法の確立をめざして-

我々はラットの動脈性ED(erectile dysfunction)モデルを用いて、vardenafil慢性投与によるED改善メカニズムを血流動態学および組織学面から検討した。勃起機能の評価は海綿体神経刺激による海綿体内圧変化を調べた。その結果、vardenafil投与によって陰茎海綿体への側副血行路の発達と海綿体平滑筋の構造保持が確認され、動脈性EDラットの勃起機能が改善された。【目的】動脈性の血管病変によって、どの程度陰茎海綿体が影響を受けるか動物モデルで検討した。【方法(1)】内腸骨動脈結紮による段階的な陰茎虚血モデル(ウサギ)を作成し、摘出した海綿体平滑筋の弛緩反応を評価した。結紮後、3日、1、4週間で陰茎海綿体を摘出し、平滑筋張力測定記録解析装置を用いて、アセチルコリンによる内皮依存性弛緩反応と電気刺激によるNO作動性神経による弛緩反応、NOドナーであるニトロプルシッドの弛緩反応を比較した。コントロール群はシャム手術群とした。【結果(1)】陰茎海綿体は、局所的な動脈閉塞に伴う虚血早期に内皮機能障害を呈することが明らかとなった。しかしながら、動脈閉塞が長期に及ぶとsham群と同程度にまで内皮依存性弛緩が回復したため、何らかの修復機構もしくは代替機構の存在が示唆された。また、長期間閉塞状態が続いても、NOドナーによる反応や神経刺激に伴う弛緩にほとんど影響が無かったため、陰茎が虚血に陥っても海綿体平滑筋のNO-cGMP系や海綿体内神経機能は温存されると考えられた。【方法(2)】内腸骨動脈結紮による動脈性EDモデルラットモデルを作成し、その勃起機能を検討した。結紮後、3日、1、4週間で海綿体神経を電気刺激し、海綿体内圧を測定した。また、電気刺激後、陰茎海綿体を摘出し、その海綿体平滑筋の各種NOS(nitric oxide合成酵素)のm RNAの発現を調べた。【結果(2)】勃起機能(海綿体内圧/平均体血圧,勾配)は3日結紮群で低下し1週間,4週間でも低下したままであった。結紮群のnNOS, eNOS mRNAは3日間で発現が減少し、1週間、4週間では回復傾向が見られた。以上の結果より、急性の動脈性EDモデルでは、早期に陰茎海綿体の内皮細胞障害が観察され勃起機能の低下が見られた。また、受傷後数週間経過するとその内皮細胞機能は回復傾向にあったが勃起機能の低下は回復せずEDの状態であった。今後、内皮細胞機能が回復しているにもかかわらず勃起機能が回復しない理由を突き詰めるとともにバイアグラなどPDE-5阻害剤の投与を受傷後早期に行い、勃起機能の回復が可能かどうか検討する予定である。【研究の目的】本研究の目的は、限局性の動脈血管病変により、どの程度陰茎海綿体平滑筋が影響を受けているかを調べ、外科的治療法や海綿体トレーニングに代わる新しい治療法を検索することである。受傷直後から連続的に陰茎海綿体を拡げ、虚血状態から開放してやれば、低酸素状態による陰茎海綿体のダメージを最小限に抑えることができ、動脈性EDを非侵襲的に治療できる可能性がある。平成20年度は以下の事柄に焦点を絞り明らかにした。A)内腸骨動脈結紮による段階的な陰茎虚血モデル(ラット)を作成し、摘出した海綿体の組織学的な評価をするとともに、ニトロプルシッドによる人工勃起を作り出し、結紮による機能的な変化を調べる。B)陰茎虚血モデル(ウサギおよびラット)から摘出した陰茎海綿体平滑筋のnNOS、eNOSの発現遺伝子および蛋白質発現について明らかにする。C)陰茎虚血モデル(ラット)に持続的にPDE-5阻害剤を服用させ、その効果を機能的・組織学的に検討する。【結果】A)限局性の動脈血管病変によって陰茎海綿体の海綿体内の平滑筋/コラーゲン比が減少していた。C)持続的にPDE-5阻害剤を服用させることで勃起機能の回復が見られた。以上、外傷性EDの治療に持続的なPDE-5阻害剤の投与が有用であることが示唆された。
ラット脊髄後角痛覚情報伝達に対するエンドモルフィン作用の解析

本研究の目的は、内在性オピオイドペプチドであるエンドモルフィン-1(EM-1)および-2(EM-2)が、脊髄膠様質細胞において痛覚情報伝達をどのように制御しているのかをシナプスレベルで調べることである。本年度の研究としては、ラット脊髄膠様質細胞にパッチクランプ法を適用して保持膜電流に対するEM-1とEM-2の作用の詳しい解析を行った。-70mVの保持電位においてEM-1とEM-2は濃度依存的に外向き膜電流を誘起し、そのEC_<50>値は各々130μM、150μMであった。また、EM-1とEM-2電流は共にμ-オピオイド受容体の阻害剤であるCTAP(1μM)によって抑制された。K^+チャネル阻害剤の作用については、Ba^<2+>と4-aminopyridine (4-AP)により同程度に抑制され、tetraethylammoniumは作用しなかった。ペプチダーゼ阻害剤Diprotin A (30μM)はEM-1とEM-2電流に相反的に作用し、EM-1電流は約30%抑制され、EM-2電流は約20%増強された。以上の結果より、EM-1およびEM-2は脊髄膠様質細胞においてμ-オピオイド受容体の活性化を介してBa^<2+>、4-AP感受性のK^+チャネルの開口によって膜を過分極し、膜の興奮性を押えることで末梢からの痛覚情報伝達の抑制に寄与していると考えられる。また、今回Diprotin Aに対するEM-1とEM-2の作用に違いがみられ、このことが行動実験における両者の鎮痛作用の違いに関与している可能性が示唆された。ごく最近、EM-1とEM-2が共に局所刺激により誘起されるGABAおよびグリシン作動性抑制性シナプス後電流の振幅を抑制する結果を得ている。この作用はEM-1とEM-2が膠様質細胞の膜興奮性に及ぼす作用を考える際に抑制性シナプス伝達も含めて考慮しなければならないことを示しており、今後の研究課題である。本研究の目的は、痛覚情報の伝達制御に重要な役割をもつ脊髄膠様質細胞において内在性オピオイドペプチドであるエンドモルフィン-1(EM-1)およびエンドモルフィン-2(EM-2)が痛覚情報伝達をどのように制御しているのかをシナプスレベルで調べることである。本年度の研究計画は、電気生理学的な手法を用いてラット脊髄スライス標本における膠様質細胞の膜電流および興奮性シナプス後電流に対するEM-1とEM-2の作用を解析することである。まず、EM-1およびEM-2の投与による保持膜電流の変化を調べた。その結果、-70mVの保持電位において、調べた細胞の約50%でEM-1とEM-2(各1μM)の両方で外向き電流が観察された[EM-1:23.3±2.7pA(n=60)、EM-2:23.0±2.0pA(n=50)]。また、これらの作用は濃度依存的であった。さらに、逆転電位を調べた結果、EM-1で-97±3.6mV、EM-2で-97±2.4mVとなった。これはK^+チャネルの平衡電位とほぼ一致したことから、K^+チャネルの関与がより明らかとなった。次に、シナプス前終末からのグルタミン酸の自発放出によって引き起こされる興奮性シナプス後電流(sEPSC)に対するEM-1とEM-2(各1μM)の作用を調べた。その結果、sEPSCの発生頻度が両者により減少した[EM-1:58±6%(n=23)、EM-2:57±64%(n=24)]。一方、EM-1とEM-2の両方でsEPSCの振幅に変化は見られなかった(EM-1:93±3%(n=23)、EM-2:96±4%(n=24))。このことより、EM-1およびEM-2はシナプス前終末からのグルタミン酸放出を抑制していることが明らかとなった。行動実験においてEM-1とEM-2の鎮痛作用に差があることが報告されているが、今回の脊髄膠様質細胞における電気生理学的な実験結果においてはEM-1とEM-2の作用に違いは見られなかった。今回の結果より、EM-1とEM-2は脊髄膠様質細胞において膜を過分極させることで膜の興奮性を抑え、また、神経終末からのグルタミン酸放出を抑制することが明らかとなったが、これらの作用はいずれも末梢からの痛覚情報伝達の抑制に寄与すると考えられる。

ペプチダーゼ阻害剤Diprotin A (30μM)はEM-1とEM-2電流に相反的に作用し、EM-1電流は約30%抑制され、EM-2電流は約20%増強された。以上の結果より、EM-1およびEM-2は脊髄膠様質細胞においてμ-オピオイド受容体の活性化を介してBa^<2+>、4-AP感受性のK^+チャネルの開口によって膜を過分極し、膜の興奮性を押えることで末梢からの痛覚情報伝達の抑制に寄与していると考えられる。また、今回Diprotin Aに対するEM-1とEM-2の作用に違いがみられ、このことが行動実験における両者の鎮痛作用の違いに関与している可能性が示唆された。ごく最近、EM-1とEM-2が共に局所刺激により誘起されるGABAおよびグリシン作動性抑制性シナプス後電流の振幅を抑制する結果を得ている。この作用はEM-1とEM-2が膠様質細胞の膜興奮性に及ぼす作用を考える際に抑制性シナプス伝達も含めて考慮しなければならないことを示しており、今後の研究課題である。
単一直径リポソームによるタンパク質機能解析のためのマイクロ流体デバイス

本研究では、直径の揃ったリポソームを効率的に作成するデバイスを検討した。第一に、従来法を含めてリポソームの調整に関して検討した。リポソームの作成には、従来、水和法と呼ばれる方法が用いられてきた。まず、脂質をクロロホルムなどの揮発性の有機溶媒に混入させ、ガラス面にたらした後、有機溶媒を完全に乾燥させ脂質だけの膜にする。その後、水を徐々に加えることによって、脂質膜をガラス面から引き剥がし、リポソーム膜を作成するという手法であった。また、エレクトロフォーメーションと呼ばれる、リン脂質膜で覆われた基板に電圧を印加することによって、膜を剥離させ、一層の脂質2重膜で構成されたリポソームを得る方法があった。これは、他の一般的な方法に比べ、一枚膜構造を得られやすい、比較的大きさが揃っている、などの特長があった。本研究では、まずこれらの2つ方法についてMEMS技術との整合性も含めて検討した。その結果、どちらもジャイアントリポソームが作成できるが、水和法の場合、リポソームの中にリポソームが存在する頻度が多く、また膜の厚さにもムラがあるように観察されることが分かった。次に、これらの研究を踏まえて、新規なリポソーム作成技術を創出するために、マイクロ流体デバイスを利用してエマルジョンを作成する要領で、均一直径のリポソームを作成する方法を試みた。マイクロ流路の濡れ性を変化させることで、W/O/Wのエマルジョンを作成することが一般的であるが、本研究では、同軸のFlow-Focusingデバイスを作成することで、濡れ性を変化させることなくW/O/Wエマルジョンを作成することに成功した。今後、ベシクル内のオイル層を薄くしていくことによって、リポソームのような脂質2重膜ベシクルが作成できる。さらにマイクロ流体デバイスが均一直径のベシクル作成には適している。したがって、これらの技術を利用することで、均一直径リポソーム作成への足がかりができたと考えている。本研究の目的は、直径の揃ったリポソームを効率的に作成するマイクロ流体デバイスを実現することである。リポソームは脂質2重膜で水溶液を包含した球体である。細胞膜と同様の構造を持ち、膜の密閉性が高いため、ドラッグデリバリ用のカプセルや、人工細胞モデルとして幅広く利用されている。本研究では、単一直径のリポソーム膜に膜タンパク質や薬剤を導入するデバイスの実現を目指す。本年度は、リポソーム調整法の検討を行なった。これは、まず、脂質をクロロホルムなどの揮発性の有機溶媒に混入させ、ガラス面にたらした後、有機溶媒を完全に乾燥させ脂質だけの膜にする。その後、水を徐々に加えることによって、脂質膜をガラス面から引き剥がし、リポソーム膜を作成するという手法である。また、エレクトロフォーメーションと呼ばれる、リン脂質膜で覆われた基板に電圧を印加することによって、膜を剥離させ、一層の脂質2重膜で構成されたリポソームを得る方法がある。他の一般的な方法に比べ、一枚膜構造を得られやすい、比較的大きさが揃っている、などの特長がある。本年度は、まずこれらは2つ方法について検討した。その結果、どちらもジャイアントリポソームが作成できるが、水和法の場合、リポソームの中にリポソームが存在する頻度が多く、また膜の厚さにもムラがあるように観察された。

そこで、エレクトロフォーメーションをマイクロチャンネルを利用して実施するシステムの研究を行なった。シリコーン樹脂であるPDMSを利用して微細な溝を形成し、透明電極(ITO)で被覆されたガラス基板を用いて流路を作成した。その結果、流路内に脂質膜を塗布後、電圧をかけることによって、リポソームが作成可能であることが分かった。本研究では、膜タンパク質の機能解析のために、直径の揃ったリポソームを効率的に作成し操作するマイクロ流体デバイスを検討する。リポソームは脂質2重膜で水溶液を包含した球体である。細胞膜と同様の構造を持ち、膜の密閉性が高いため、ドラッグデリバリ用のカプセルや、人工細胞モデルとして幅広く利用されている。本研究では、リポソーム膜に膜タンパク質を導入することで、各種の膜タンパク質の挙動を個別に解析できるデバイスへの応用を探る。昨年度までに、リポソーム調整法の検討を行なった。リポソームの作成には、水和法やエレクトロフォーメーションを検討した。エレクトロフォーメーションは、他の一般的な方法に比べ、一枚膜構造を得られやすい、比較的大きさが揃っている、などの特長があるため、エレクトロフォーメーションをマイクロチャンネルを利用して実施するデバイスの研究を行なった。シリコーン樹脂であるPDMSを利用して微細な溝を形成し、透明電極(ITO)で被覆されたガラス基板を用いて流路を作成し、流路内に脂質膜を塗布後、電圧をかけることによって、リポソームが作成可能であることが分かってきた。本年度は、このマイクロ流体デバイスを利用してエマルジョンを作成する要領で、均一直径のリポソームを作成する方法を試みた。マイクロ流路の濡れ性を変化させることで、W/0/Wのエマルジョンを作成することが一般的であるが、本研究では、同軸のFlow-Focusingデバイスを作成することで、濡れ性を変化させることなくエマルジョンを作成することに成功した。以上、本研究で検討した2種類の方法を駆使することによって、均一直径のリポソームが作成できる可能性を示すことができたと考えている。
企業会計審議会における政策形成プロセスの研究

本研究は,企業会計審議会(BAC)によるIFRS適用に関する問題を社会・経済政策の一環として捉え,2008年2015年の間における,BACによる強制適用の推進という政策形成から任意適用の促進という政策転換に至るまでの一連のプロセスを対象に,新制度論における制度の形成・変化のフレームワークを用いて,「政策および制度はどのように,そしてなぜ形成されるのか」を明らかにするものである.2018年度は,1分析フレームワークの精緻化,2IFRS強制適用をめぐるBACの見解や動向,および当該問題に関わるアクター(政府,産業界,金融界,会計プロフェッション,財務諸表利用者等)の見解や動向の調査にもとづいた,IFRS強制適用に関わる問題の全体像の描写,3社会ネットワーク分析実施に向けたBACメンバーの職歴等の調査,そして4テキスト分析実施に向けた審議会議事録の整理,を行うことを予定していた.上記1については,それを常に行う必要があるが,概ね順調に進んでいる.上記3と4は既に終了している.また,上記2については,一部のアクターに対する検討が済んでおらず,2019年度に実施する予定である.以上の調査をもとに,2018年度には,2つの研究を行った.一つはBACの意向を受けてその政策を実施するASBJの2013年2016年の基準開発活動を対象として,その組織構造および中心的利害関係者の環境認識にもとづいて分析した研究である.もう一つは,2008年2012年までのBACの活動をASBJとの関係性に焦点を当てて分析した研究である.前者は,2019年5月にPaphos(Cyprus)で開催されるEAAにおいて,また後者は同年6月にSiena(Italy)で開催されるWorkshop on Accounting and Regulationにおいてそれぞれ研究報告を行う予定である.「研究実績の概要」にて既述したように,分析手法の開拓および分析視角の精緻化は,常にその動向を捉える必要があるが,社会ネットワーク分析を実施するためのBACメンバーの職歴等やテキスト分析を実施するための審議会議事録の整理といったデータ整理は終了している.ただし,IFRS強制適用をめぐる問題の全体像を把握するという課題に対して一部のアクターに対する検討が済んでおらず,2019年度に実施する予定であることから,概ね順調に進展していると考えている.2019年度では,2018年度に引き続いて,IFRSの任意適用促進が図られた時期の,BACメンバーの職歴等の調査および審議会議事録の整理を行う.それらに取り組むと同時に,2018年度に実施し,そして一部は2019年度に実施する予定の,IFRS強制適用をめぐる問題の全体像を把握したうえで,「2008年2011年の間,BACの強制適用推進は,どのようにして展開されたのか?それはなぜか?」の分析を実施する.さらに,2020年度では,2つの分析,「2011年2012年の間,BACの強制適用推進の回避は,どのようにして展開されたのか?それはなぜか?」と「2013年以降,BACの任意適用増加という政策の転換は,どのようにして展開されたのか?それはなぜか?」の分析を実施したうえで,本研究のまとめを行う.本研究は,企業会計審議会(BAC)によるIFRS適用に関する問題を社会・経済政策の一環として捉え,2008年2015年の間における,BACによる強制適用の推進という政策形成から任意適用の促進という政策転換に至るまでの一連のプロセスを対象に,新制度論における制度の形成・変化のフレームワークを用いて,「政策および制度はどのように,そしてなぜ形成されるのか」を明らかにするものである.2018年度は,1分析フレームワークの精緻化,2IFRS強制適用をめぐるBACの見解や動向,および当該問題に関わるアクター(政府,産業界,金融界,会計プロフェッション,財務諸表利用者等)の見解や動向の調査にもとづいた,IFRS強制適用に関わる問題の全体像の描写,3社会ネットワーク分析実施に向けたBACメンバーの職歴等の調査,そして4テキスト分析実施に向けた審議会議事録の整理,を行うことを予定していた.上記1については,それを常に行う必要があるが,概ね順調に進んでいる.上記3と4は既に終了している.また,上記2については,一部のアクターに対する検討が済んでおらず,2019年度に実施する予定である.以上の調査をもとに,2018年度には,2つの研究を行った.一つはBACの意向を受けてその政策を実施するASBJの2013年2016年の基準開発活動を対象として,その組織構造および中心的利害関係者の環境認識にもとづいて分析した研究である.もう一つは,2008年2012年までのBACの活動をASBJとの関係性に焦点を当てて分析した研究である.前者は,2019年5月にPaphos(Cyprus)で開催されるEAAにおいて,また後者は同年6月にSiena(Italy)で開催されるWorkshop on Accounting and Regulationにおいてそれぞれ研究報告を行う予定である.「研究実績の概要」にて既述したように,分析手法の開拓および分析視角の精緻化は,常にその動向を捉える必要があるが,社会ネットワーク分析を実施するためのBACメンバーの職歴等やテキスト分析を実施するための審議会議事録の整理といったデータ整理は終了している.ただし,IFRS強制適用をめぐる問題の全体像を把握するという課題に対して一部のアクターに対する検討が済んでおらず,2019年度に実施する予定であることから,概ね順調に進展していると考えている.

2019年度では,2018年度に引き続いて,IFRSの任意適用促進が図られた時期の,BACメンバーの職歴等の調査および審議会議事録の整理を行う.それらに取り組むと同時に,2018年度に実施し,そして一部は2019年度に実施する予定の,IFRS強制適用をめぐる問題の全体像を把握したうえで,「2008年2011年の間,BACの強制適用推進は,どのようにして展開されたのか?それはなぜか?」の分析を実施する.さらに,2020年度では,2つの分析,「2011年2012年の間,BACの強制適用推進の回避は,どのようにして展開されたのか?それはなぜか?」と「2013年以降,BACの任意適用増加という政策の転換は,どのようにして展開されたのか?それはなぜか?」の分析を実施したうえで,本研究のまとめを行う.次年度使用額が生じた主な理由は,データ整理(テキスト分析実施のための基礎データ作成および利害関係者の言説にもとづく環境認識の把握)のために人件費・謝金を計上していたが,その事前準備に時間がかかったためである.上記データ整理のための人件費・謝金(2018年度75,000円程度)は2019年度に実施する予定である.
タンパク質合成に利用されないアミノ酸の骨格筋タンパク質合成と分解の調節

タンパク質合成に利用されないシトルリン処理したC2C12筋管細胞におけるタンパク質分解抑制は主にオートファジー/リソソーム系の活性減少によるものであった。また、4E-BP1のリン酸化も増加したことから、シトルリンはmTOR系に作用することが示唆された。またこのとき細胞内のアルギニン濃度は増加しなかったので、シトルリン単独で作用することが考えられた。リジンの代謝産物であるサッカロピン処理したC2C12筋管細胞では、リジン同様にタンパク質分解が抑制され、オートファジー/リソソーム系が阻害された。この調節にはAkt/mTOR系が関わっていることが示唆された。C2C12筋芽細胞をコンフリエントになるまで培養し筋管細胞に分化させ、培地中に放出された3-メチルヒスチジン(MeHis)量から細胞のタンパク質分解を評価する系を構築した。10mMのシトルリンを添加した培地おいて細胞からのMeHis放出速度、オートファジー活性、細胞内のアミノ酸濃度を測定した。しかし、リジンやロイシンではこの方法でMeHisを測定できたが、シトルリン添加ではHPLCによる測定が妨害物質によりできなかった。イオン交換樹脂による精製などを試みたが、測定することはできなかった。この点については別の方法による培養、測定を26年度に実施する。オートファジー活性はシトルリン添加で有意に減少し、分解の抑制が示された。このとき、細胞中のアルギニン濃度はほとんど増加せず、タンパク質分解抑制作用がシトルリンによるものであることが示唆された。廃用性筋萎縮におけるシトルリンの作用を明らかにするために、まず尾部懸垂時における骨格筋萎縮の経時変化を検討した。ラットの尾部を体が30度の角度になるように7日間懸垂した。その結果、骨格筋タンパク質の分解速度や分解酵素系活性は懸垂開始2から3日に顕著に増加し,その後懸垂前のレベルに戻ることが明らかになった。このとき、給与しているタンパク質量やシトルリンの投与は、懸垂による分解亢進を抑制することはできなかった。今後、懸垂解除後におけるシトルリンなどの飼料への添加効果を検討する。クレアチンを0.5%含む10%カゼイン食は、ラットの骨格筋タンパク質の翻訳因子である4E-BP1とS6K1のタンパク質発現から評価した合成、MeHis放出速度から評価した分解には影響を及ぼさなかった。C2C12筋管細胞にクレアチンを5mMになるように添加した系では、細胞からのMeHis放出速度を低下させたが、その割合はロイシンやリジンに比べ小さく、これらのアミノ酸のような顕著な分解抑制作用は認められなかった。シトルリンはタンパク質を構成しないアミノ酸であり、尿素回路の代謝中間体である。先の研究で、シトルリンにはロイシンと同様に骨格筋タンパク質の代謝回転を制御する可能性を示唆した。本研究では、シトルリンの骨格筋萎縮に及ぼす影響をより詳細に解析するために、まず分解抑制に対して効果があるのはシトルリンかその代謝産物であるアルギニンかどうかについて検討した。ラットにシトルリンあるいはアルギニンを経口投与したところ、シトルリン投与により、骨格筋タンパク質の分解が投与後16時間で抑制された。一方、アルギニン投与では顕著な分解抑制作用は認められなかったことから、シトルリンが直接分解を抑制する可能性が示唆された。血中のシトルリンおよびアルギニン濃度はシトルリン投与後高いレベルで維持されたが、アルギニン投与ではほとんど増加しなかった。したがって、シトルリンは投与後に長時間シトルリンとアルギニン濃度を維持できる効果があることが示唆された。シトルリンは安全性の高いアミノ酸であり、本実験結果は臨床的な応用も期待できる。シトルリンの分解抑制作用をオートファジーの調節因子であるLC-3IIの発現とユビキチン化タンパク質のウエスタンブロットから解析したところ、前者はシトルリン投与後にLC3-IIの比率が減少したが、ユビキチン化タンパク質には変化がなかった。したがって、シトルリンが主にオートファジー/リソソーム系の阻害によるものと考えられた。次に筋萎縮モデルとして尾部懸垂を施したラットでシトルリンの効果を検討した。1日間尾部懸垂したラットにシトルリンを投与したが、分解抑制作用は認められなかった。またシトルリン添加食を摂取しているラットでも尾部懸垂による筋萎縮を抑制できなかった。以上より、尾部懸垂初期の筋萎縮にはシトルリンは効果がないことが示されたが、さらに詳細な検討が必要である。タンパク質合成に利用されないアミノ酸であるシトルリンの骨格筋タンパク質分解と合成に及ぼす作用を明らかにするために、前年度に確立したC2C12筋管細胞を用いた系で検討した。

シトルリンは濃度依存的にオートファジー活性を抑制したが、ユビキチンリガーゼの遺伝子発現には影響を与えなかった。また、mTORの活性を表すS6K1と4E-BP1のリン酸化も増加させ、さらにその上流であるAktのリン酸化を促進した。以上の結果から、シトルリンは筋管細胞においてオートファジー-リソソーム系の活性をdown-regulationすることでタンパク質分解を抑制し、翻訳段階の活性をup-regulationすることで合成を促進することが示された。この調節にはAktを介してmTORが関与していることが示唆された。シトルリンの代謝産物であるアルギニンではこれらの作用が明確に示されなかったことから、分解抑制、合成促進作用はシトルリンそのものによる作用であることが考えられた。リジンの代謝産物であるサッカロピンのタンパク質分解に対する影響をC2C12細胞を用いて検討した。サッカロピンはリジンと同様にオートファジー活性を阻害することで分解を抑制することが、オートファジーマーカーである活性型LC3の発現と、分解により生じた3-メチルヒスチジンの放出速度から明らかになった。一方、細胞内のリジン濃度はサッカロピン添加で増加しなかったことから、サッカロピン単独でも分解抑制作用があることが示された。このようなタンパク質合成に利用されない代謝産物による調節は、ロイシンの代謝産物であるHMB以外では初めての知見である。尾部懸垂モデルを使ったin vivoの系でシトルリンの作用を検証した。ラットと7日間の尾部懸垂を施し、廃用性筋萎縮を誘導した。1%シトルリン添加食を与えた尾部懸垂ラットでは、筋肉量などの回復はみられなかった。栄養化学C2C12筋管細胞における評価法はリジンを中心に確立することができた点が本年度の大きな成果である。しかしシトルリン添加培地では、他のアミノ酸では問題がなかったのにも関わらず,HPLCにおけるMeHisの保持時間に妨害するピークが検出され、分解速度を測定できず、予定通りの検討はできなかった。一方、分解系の評価はおおむね予定通り実施でき、成果を挙げることができた。廃用性筋萎縮モデルである尾部懸垂モデルにおいて、懸垂時の骨格筋タンパク質の分解、合成の経時的な変化をみたところ、予想以上に早い時期に分解亢進が認められた。しかし低栄養で認められたタンパク質やシトルリンによる分解抑制は認められず、萎縮も軽減できなかった。シトルリンの効果という点では懸垂解除後の作用を検討する必要が生じたので、26年度に実施する。シトルリンの骨格筋タンパク質分解抑制作用については再現性よく確認することができた。その作用についてシグナル伝達の側面からの解析も実施できた。さらに、代謝産物であるアルギニンによると考えるよりも、シトルリンに作用があると考える方が妥当である結果を得た。しかし、in vivoで解析した場合は常に尿素回路による相互の変換があるため明確にはできない。これについては25年度に研究を進める。以上の研究結果は、おおむね研究実施計画通り進展したと考えられる。尾部懸垂モデルにおけるシトルリンの骨格筋萎縮抑制作用については、予想に反して明確な効果を認めることができなかった。
鳥類・齧歯類を対象とした侵襲性の少ない脳活動の計測技術の確立

本研究は、齧歯類・鳥類等の実験動物において非侵襲的な脳測定技術を確立することが目的である。結果、齧歯類(マウス)を用いて脳幹誘発電位を非侵襲で計測することに成功した。また、鳥類(ジュウシマツ)を用いて侵襲的な神経細胞記録から局所電場電位を記録しミスマッチ電位と相同であることが確認できた。齧歯類についてはこの技術を行動実験と併用することが可能である。鳥類については非侵襲性を高めて応用範囲を広げてゆく予定である。本研究は、ヒトの事象関連電位と比較しうるような認知的指標となる集合電位を動物において非侵襲的に得ることを目的とする。これが可能になれば、ヒトと動物の認知過程を行動だけではなく脳波の挙動から比較できるようになり、比較認知科学の進展に有益である。初年度は、ヒトにおけるP300のような、新奇性検出(オドボール課題)に対応する電位を動物から得ることができるかどうかをマウスとトリ(ジュウシマツ)で検討した。マウスにおいてはクリックに対する聴性誘発電位を録り、つぎにオドボール課題に進むことを計画したが、聴性誘発電位の記録が難しかったため、現在のところ目標に達していない。しかし、超音波計測の技術が改善し、聴性誘発電位の記録には成功したため、遅れは取り戻せると期待できる。現在用いている方法は、頭皮に電極針を刺すだけなので侵襲性は低い。トリにおいては、当研究室において単一神経細胞記録の技術が確立されていたため、まずはこの技術によりオドボール課題に応答する神経活動が得られるかどうかを検討した。トリの歌を分析して短い要素を選び、90%提示される音と10%しか提示されない音への応答の違いを検討した。結果、聴覚応答を示した神経細胞のうち25%程度がオドボールにも応答することがわかった。複数の単一細胞の集合電位と対応するとみられるフィールド電位も同時に記録してあるため、このデータから事象関連電位に対応する成分を探す作業を進めている。この方法は侵襲性が高いため、次年度以降、侵襲性の低い方法に移行する必要がある。本研究は鳥類・ほ乳類において侵襲性の少ない脳計測技術を開発しようとするものである。26年度は、マウス(ほ乳類)を用いて聴性誘発電位の計測に成功したこと、ジュウシマツ(鳥類)を用いて聴覚野からのフィールドポテンシャルの記録に成功し、さらに事象関連電位としてミスマッチネガティビティと同様な性質を持つ電位を得ることに成功した。以上について詳述する。マウスにおいては、イソフルランの麻酔を施した後、耳介の後部の皮膚に27ゲージの注射心を差し、聴性誘発電位を記録することができた。記録した電位を40回以上加算平均して得られた波形は、頭皮を開いて頭蓋上から記録したものと同様な波形を持ち、これよりマウスの聴覚閾を推定することができた。この波形を用いて、音刺激の異同弁別が記録できるかどうかを検討している。ジュウシマツにおいては、ウレタン麻酔後、中間的なインピーダンスを持つ電極を聴覚野に刺入し、聴覚応答を記録した。オドボール課題により得られた波形を25回以上加算平均すると、ヒトにおいて同様な課題で得られたミスマッチネガティビティと同様な陰性波で、250ミリ秒前後にピークをもっていた。また、同時に得られた単一細胞記録データを複数のニューロンについて平均しても、同様な性質を持った波形が得られた。今後は手続きをより単純にして侵襲性をさらに減らすことが必要である。生物心理学今年度は、マウスにおける聴性誘発電位の記録に難航した。誘発電位は取れるのだが、それにより聴覚測定が可能なほどの精度が出なかった。その原因として、用いた電極やフィルター設定が適切ではなかったことが考えられる。また、音響計測に用いた装置が正確に作動していなかったことも原因である。このため、この分野における第一人者である台湾大学生命科学院教授である嚴宏洋氏の指導を得て、これらの点を改善した。また、校正済みの超音波計測用の装置を導入して刺激・記録システムを正しく測音した。以上の努力により、聴性誘発電位の記録が可能になったので、おおむね順調と言える。マウスにおいては、聴性誘発電位の記録法を確立した後、マウスの自然発声を刺激としてオドボール課題を試みる。マウスのオスの求愛の歌の中に、マウス幼体の隔離声を埋め込み、その声に対してオドボール様応答ができるかどうかを検討する。また、ピッチの異なる音についてのオドボール応答を記録し、自然音声への応答と比較する。トリにおいては、フィールド電位に対応するような電位を単一細胞記録の総和から得られるかどうか検討し、また、それらの電位をより簡便で非侵襲的な方法で得る方法を確立する。
蝸牛血管条辺縁細胞におけるスフィンゴミェリンによるKCNQ1の調節機構の解明

これまで、スフィンゴミエリン(SM)代謝によるK+チャネルであるKCNQ1の発現制御が示唆されている(Lu et al., 2012)。本研究は、これを細胞レベルで証明するために行われた。主な結果:1)SM合成酵素(SMS1)阻害剤であるD609の投与により、KCNQ1/KCNE1電流密度が低下した。2)SMS1shRNAにより、電流密度が減少し、電位依存性は変化しなかった。3)SMS1の過剰発現はshRNAと逆の効果を齎した。4)PKD阻害剤がshRNAと同様に電流を抑制し、両者が非加算的であった。よって、SMS1によってKCNQ1/KCNE1が正に制御されることが初めて明らかとなった。本研究では、スフィンゴミェリン(SM)によるカリウムチャネルであるKCNQ1の調節機構を解明することを目的にしている。従来の知見では、SMがKCNQ1に直接作用するか否かは不明なため、まず単一の細胞でスフィンゴミェリン合成酵素(SMS1)活性を操作して、KCNQ1活性に変化が見られるかを検討した。そのために、カリウムチャネルを低いレベルで発現しているHEK293-T細胞をモデルに用いた。この細胞にKCNQ1とそのベータサブユニットを同時に発現させると、対照群に見られない、ゆっくりと活性化し、不活性化しない電流が見られ、典型的なKCNQ1電流と同定できた。SMによるKCNQ1電流の調節の有無を調べるために、SMS1の活性を変えることで調べることにした。まず、SMS1の阻害剤であるD609の効果を調べた。結果、D609が電流密度を対照群の30%以下に低下させた。また、電流の活性化が早くなり、対照群の電流に見られる変曲点の存在が消失した。これらの変化は、SMS1活性を抑制すると、KCNQ1の発現や性質が変化することを示唆している。しかし、D609はホスホリパーゼ阻害活性も持つため、より特異的にSMS1活性を制御する必要がある。そこで、SMS1の発現を特異的に抑制するshRNAを作成し、それによるKCNQ1の変化を調べた。結果、KCNQ1電流密度は30%以上有意に(n=25, p<0.05)低下した。一方、電流のキネティックスは変化しなかった。以上のことより、SMS1活性がKCNQ1の性質を変えずに、形質膜における密度を調節することが強く示唆された。本研究では、スフィンゴミェリン(SM)によるKCNQ1の調節機構を解明することを目的にしている。カリウムチャネルを低いレベルで発現しているHEK293-T細胞をモデルに用いた。これまで、1)この細胞にKCNQ1/KCNE1電流の導入、2)SMS1阻害剤であるD609による電流密度の低下と電流の性質の変化、3)SMS1の発現を特異的に抑制するshRNAによる電流密度の低下、を示し、SMS1活性がKCNQ1/KCNE1チャネルの性質を変えずに、形質膜における密度を調節することが強く示唆された。本年度では、まず、SMS1の強制発現によって、KCNQ1/KCNE1チャネルの形質膜における密度が増加することを示した。これにより、SMS1活性がKCNQ1/KCNE1チャネル密度を調節することが確実の現象として証明した。そのメカニズムを調べるために、SMS1に調節されるDAGに注目し、PKDの阻害剤を投与したところ、電流密度が顕著に低下した。このPKDによる電流密度の低下がSMS1による調節と同一の信号伝達系であるか否かを調べるために、SMS1ノックダウンとPKD抑制による効果が加算的であるか否かを検討した結果、非加算的であることが判明し、PKDはSMS1の下流にあることが示唆された。本研究では、スフィンゴミェリン(SM)によるKCNQlの調節機構を解明することを目的にしている。従来の知見では、SMがKCNQlに直接作用するか否か不明であるため、単一の細胞でスフィンゴミェリン合成酵素(SMS1)の活性を操作して、KCNQ1/KCNE1活性に変化が見られるかを検討した。カリウムチャネルの発現レベルが低いHEK293T細胞をモデルに用いた。昨年まで、1)この細胞へのKCNQ1/KCNE1電流の導入、2)SMS1阻害剤であるD609による電流密度の低下と電流の性質の変化、3)SMS1発現を特異的に抑制するshRNAによる電流密度の低下、の三つを示し、SMS1活性がKCNQ1/KCNE1チャネルの性質を変えずに、密度を増加させることが強く示唆された。さらに、そのメカニズムを調べるために、SMS1が触媒する反応の産物の一つであるDAGに注目し、DAG依存性キナーゼPKDの役割を調べたところ、電流密度を変えることが判明した。また、PKD阻害剤とSMS1shRNAの効果は非加算的であったため、PKDはSMS1の下流で働くと示唆された。

本年度において、これらのことをさらに確かめるために、別のPKD阻害剤を用いても同様な結果が得られることを示し、また、DAGアナログであるPMAの効果を調べた。PMAは電流密度を変えなかった。これは恐らくPMAはPKDのみならず、PKCも活性化させるためと考えられる。研究のすべての結果はAmerican Journal of Physiology-Cell Physiologyに受理され、公表されることとなった。これまで、スフィンゴミエリン(SM)代謝によるK+チャネルであるKCNQ1の発現制御が示唆されている(Lu et al., 2012)。本研究は、これを細胞レベルで証明するために行われた。主な結果:1)SM合成酵素(SMS1)阻害剤であるD609の投与により、KCNQ1/KCNE1電流密度が低下した。2)SMS1shRNAにより、電流密度が減少し、電位依存性は変化しなかった。3)SMS1の過剰発現はshRNAと逆の効果を齎した。4)PKD阻害剤がshRNAと同様に電流を抑制し、両者が非加算的であった。よって、SMS1によってKCNQ1/KCNE1が正に制御されることが初めて明らかとなった。上記研究実績の概要から、本研究は、SMS1がKCNQ1/KCNE1チャネルを調節することを確実に示し、また、そのメカニズムの一端を示すことができた。研究の計画段階では、SMが果たしてKCNQ1/KCNE1チャネルを調節するかどうかは全く不明であったことを考えると、ここまで研究がおおむね順調に進展していると言える。神経科学ノックダウン実験やオーバーエクスプレッション実験では、メッセンジャの変化などの確認実験を行う。また、SMS1によるKCNQ1/KCNE1チャネルの調節機構を更に追求し、論文発表を行う。本研究は、スフィンゴミェリン合成酵素(SMS1)を欠損させたマウスにおいて、蝸牛血管条辺縁細胞のKCNQ1発現量が低下する知見を背景に、スフィンゴミェリンによるKCNQ1の調節機構を解明することを研究目的にしているが、これまでの知見では、KCNQ1に対するスフィンゴミェリンの作用は直接的なのか、間接的なのか不明である。上記研究実績の概要から分かるように、昨年度の研究により、単一の細胞で、SMS1活性の操作がKCNQ1活性の変化に繋がることを示してきた。これは、KCNQ1に対するスフィンゴミェリンの作用は単一の細胞の細胞内シグナル伝達系による直接的な作用であることを強く示唆している。従って、これらの知見は本研究で提案した仮説を証明し、これからの研究を推進するための礎を作ったと言える。これは本研究提案を推進していく上で、最も重要なことである。よって、当初計画した研究がおおむね順調に進展していると言える。平成26年度に、SMS1とKCNQ1/KCNE1の関係の分析を行い、その結果をもとに、スフィンゴミエリン分析を行うとともに、論文発表する予定であったが、スフィンゴミエリン分析の結果がジアシルグリセロールの関与が示唆されたため、計画を変更し、ジアシルグリセロールの解析を行うことにしたため、未使用額が生じた。昨年度の研究により、SMS1活性がKCNQ1の性質を変えず、形質膜における密度を調節することを示してきたため、今後まず、これまでと同様なモデル細胞を用いて、SMS1活性の変化がどのようにKCNQ1の活性の変化に繋がるかを探索していく。一方、実際の蝸牛血管条辺縁細胞において、SMS1活性とKCNQ1活性がリンクしているかを知ることが重要である。それを調べるために、蝸牛血管条のin vitro標本を作製し、探索を行う。
完全積分可能系の代数的研究

(1)Calogero-Sutherland-Moser(CSM)模型の拡張として、2種類の変形長距離相互作用ポンテンシャルを考え、それらに対する多体Schrodinger方程式の厳密解を得た。これらは、それぞれHermite多項式およびLegendre多項式の多変数化になっており、これらの直交多項式を陽に表現する簡単な公式を発見した。(2)離散的な可積分系のひとつであるVolterra模型の多成分化となっている力学系を考え、Bogoyavlensky階層と名づけて研究した。これは「格子W代数」と呼ぶべき代数構造を有する可積分方程式系で、これらの多ソリトン解を生成する頂点演算子を具体的に構成した。(3)磁場中のネマティック液晶の平衡状態を記述する方程式は、サイン・ゴルドン方程式の静的な場合と同じもので、このとき「巻き数=0」が安定状態に相当するのに対して、「巻き数=±1」は準安定状態を表す解であることが判明した。また準安定状態から安定状態への緩和はある「鞍点解」を経由して起きることがわかった。(1)Calogero-Sutherland-Moserモデルに代表される量子多体問題の一般化を考えた。具体的には長距離相互作用ポテンシャルとして2種類の変形を考察し、それらに対する多体シュレ-ディンガー方程式の厳密解を得た。こららは、それぞれHermite多項式およびLegendre多項式の多変数化になっており、多変数の直交多項式の例を与えるものである。特に、量子学的な摂動論の類似物として、これら直交多項式を陽に表現する簡単な公式を発見した。これらの直交多項式系は、メゾスコピック系に対するランダム行列理論に応用することが出来る。これらによる、コンダクタンスの普遍ゆらぎに対する寄与について、現在研究中である。(2)結合型可積分系について、様々な可能性を検討している。特に、講演をお願いした岩尾、井上両氏からは有益な知見を教えていただいた。彼らによる結合型の変形KdV方程式や、ボルテラ方程式は「結合型可積分系の理論」の端緒を与えている。現在、これらの系のポアソン構造や、サインゴルドン系の多成分化などについて研究中である。(1)Volterra模型は、離散的な可積分方程式系のひとつとしてよく知られている。この系は一方でその代数的構造に着目すると、「格子W_2代数」というポアソン構造を持っている。これの多成分化、すなわち「格子W_N代数」の構造を持つ離散的な可積分方程式を考えた。これは「Bogoyavlenskyヒエラルキー」と呼ばれている離散方程式系に他ならず、この系の持つ隠れた対称性が格子W_N代数であることを見いだした。また、この方程式系を広田型双一次方程式に変形し、そのソリトン解を生成するバ-テックス演算子を具体的に構成した。(2)磁場中におけるネマチック液晶の平衡状態を記述する方程式は、サインゴルドン方程式の静的な場合と同じものである。この解釈によると、「巻き数=0」の解が通常のフレデリックス転移を記述する安定状態の解となっている。これに対して、「巻き数±1」に相当する解は未だ議論されたことはなく、計算の結果「準安定状態」を記述する解であることを見いだした。このような状態を実験的に実現する方法を提案した。これらの結果は現在、日本物理学会欧文誌に投稿中である。準安定状態から安定状態への緩和過程は、非平衡状態の統計力学としても理論的に興味深い問題であり、現在研究中である。(1)磁場中におけるネマティック液晶の平衡状態を記述する方程式は、サインゴルドン方程式の静的な場合と同じものである。この解釈によれば「巻数=0」の解が通常のフレデリックス転移をあらわす安定状態の解となっている。これに対して、「巻数=±1」に相当する解は未だ議論されたことはなく、調べた結果「準安定状態」を記述する解であることが判明した。また、準安定状態から安定状態への緩和は、3次元的な変形によって、ある鞍点解を経由して起こることがわかった。この場合の緩和率の計算について、現在投稿準備中である。(2)初年度に考察した直交多項式の問題のうち、「ルジャンドル型」に相当する場合について、新たな発展があった。すなわち、これのq-変形版が、4次元ゲージ理論における「Nahm方程式」の解になっていることがわかった。
精神疾患を有する人の家族における、ベネフィット・ファインディングの関連要因の解明

本研究は、1)精神疾患患者の家族のベネフィット・ファインディングの構成要素(ドメイン)を明らかにすること、2)精神疾患患者の家族のベネフィット・ファインディングに寄与する要因を明らかにすることを目的として行う。精神疾患患者の家族を対象としたベネフィット・ファインディング評価尺度を作成し、信頼性・妥当性を検討するとともに、因子分析によりベネフィット・ファインディングの構成要素(ドメイン)を明らかにする。さらに、ベネフィット・ファインディングに影響を与える要因を検討する。
ラット受精卵の凍結保存法に関する標準化とネットワークの構築

ラット受精卵の凍結保存法のうち、瞬時に凍結させるガラス化法(Vitrification法)の簡便法はまだ確立していない。さらに国内において実用的にラット受精卵の凍結保存を行っている施設の実体は全くわかっていない。以上の事からこの研究では次の事を目的とした。1.従来の緩慢法を用いたラット受精卵凍結方法の標準的方法を示す。2.ラット受精卵凍結のガラス化法(Vitrification法)を開発する。3.効率の良いラット受精卵の採取法を確立する。4.国内におけるラット受精卵凍結保存の実態を調査し、データベースを構築し、公表する。また保存施設間の情報交換のネットワークを作る。ラットの緩慢法による受精卵凍結保存は、やはり水野らが報告した2細胞期胚凍結法が優れている。この方法は、2細胞期という早期に採卵するために凍結可能胚が多いことと、細胞が2つしかないために胚の善し悪しの判定が容易であることのためである。一方、ラット胚のガラス化法は、一つの方法を研究分担者の平林真澄が1990年に発表した。凍結保護物質は90%VS1(18%DMSO,14%アセトアミド,9%プロピレンアルコール,5.4%ポリエチレングリコール)を用い、1段階法と2段階法を行ったが、より簡便な2段階法では保存効率は大幅に低下した。また葛西孫三郎が行った方法は、凍結保護剤としてフィコール、蔗糖、エチレングリコールを用い1段階法で行ったが、EG濃度が30%の所で良好な生存性が認められた。しかし今後さらに改良の余地がある。ラット受精卵の採取法は、石川尚明が誘起排卵剤を体重当たりで一定にした量を投与することにより、効率のよい採卵法を示した。また山崎は近交系ラットからの誘起採卵率の系統間の差異を示した。またわが国のラット受精卵凍結保存の実体の調査とデータベースの作成に関しては、研究代表者が参加している科学研究費総合(A)「わが国の実験動物遺伝子資源の国際的有効利用のための情報システムの確立」半田班によって現在行われており、重複を避けるためにこの班では行わなかった。本研究では実用的なラット受精卵の凍結保存方法を確立するために次の事を目的とした。1.従来の緩慢法を用いた各種のラット受精卵凍結方法を検討し、凍結方法の標準的方法を示す。4.国内におけるラット受精卵凍結保存の実態を調査し、分与可否を含めてこれらの情報のデータベースを構築し、公表する。初年度を終了し、次の研究を行い、さらに継続中である。1)現在までに発表されているラット受精卵凍結の緩慢法について、我々の方法と比較検討した。2)ラット受精卵凍結のガラス化法に用いる溶媒の組成について各種成分を検討している。3)ラット受精卵の採取方法について(1)幼弱ラットをPMSG(妊馬血清性性腺刺激ホルモン)とhCG(ヒト胎盤性ゴナドトロピン)を用いて過排卵を誘起させ、各近交系による系統差を調べている。