hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
標的遺伝子組み換えと胚盤胞相補法によるサイトカイン受容体遺伝子の機能解析

1 IL-7レセプター遺伝子の単離IL-7レセプターのcDNAを既知のDNA配列を参考にしてPCRにより単離した。次に、得られたcDNAをプローブとして129系マウスgenomicライブラリー200万個より染色体遺伝子を単離し、制限酵素地図作製およびDNA配列決定により遺伝子のエクソン・イントロン構造を明らかにした。IL-7レセプター染色体遺伝子は8個のエクソンから成り全長40kbの領域にまたがっていることが明らかとなった。Cモチーフを含む第2エクソンをneo遺伝子に置き換えたベクター(A)とWSモチーフを含む第5エクソンと膜貫通領域を含む第6エクソンを同時にneo遺伝子に置き換えたベクター(B)を作製した。どちらのベタク-においてもIL-7レセプター分子は完全に不活されると考えられた。ネガティブ選択としてはHSV-TK遺伝子を用いた。2相同組み換え体の単離ES細胞(E14.1.B8)にエレクトロポレーションによりDNAを導入し、G418とFIAUにより細胞を選択し生き残ったコロニーを単離し、相同組み換えの有無をサザン法により解析した。その結果、1回目のスクリーニングでAベクターでは119個中1個の相同組み換え体が得られたが、Bベクターでは104個調べたが得られなかった。2回目のスクリーニングはAベクターに集中し、145個中2個の相同組み換え体が得られた。3キメラマウスの作成最初に得られたES細胞は形態が悪かったのでサブクローニングし、良い形態のサブクローンを2個をC57BL/6J-Ly-5.1マウスの胚盤胞に注入しキメラマウスの作成した。その結果、その内の1クローンからキメラマウスが得られた。今後、残る2クローンを胚盤胞に注入する予定である。
不活性ガスを含む水性泡消火法の立体火源への応用に関する研究

ハロン消火・CO_2消火・強化泡消火に替わる新しい消火法として,環境への影響が小さい水性泡に不活性ガスを閉じ込めた水性泡消火法を開発し,船舶の機関室や立体駐車場などへの本消火法の応用を念頭に研究を行った.立体火源配置可能な燃焼装置および不活性ガス-泡消火装置を作成し,1)立体的に配置した小型プール火災の燃焼率の測定および火炎性状の観察,2)不活性ガス種,ガズ流量,水流量,発泡倍率を変えた消火実験,を行った,1)より,火源が立体的に配置されている場合,2つの火源の燃焼率に差が生じ,上側に配置したプール火災の燃焼率が増加する.2つの火源間での放射伝熱計算を行ったところ,実験において生じた燃焼率の増加傾向は説明できず,火源規模によっては流れ場の変化による対流の影響も大きいことがわかった.放射・対流共存伝熱計算を行ったところ,実験で得られた傾向が得られ,火源の大きさによる立体火源の燃焼率増加傾向を説明することができた.2)より消火時間が最小となる最適のガス流量・液流量の組み合わせが存在し,発泡倍率が増加すると泡の強度は弱くなり,火炎に近づくとすぐに崩壊して内部の不活性ガスが火炎に流入するため消火性能は高いが,反面泡の流動性,保持率が悪くなることがわかった,本研究により得られた立体火源の特性から,上側に位置する火源の燃焼率が高く,立体火源への本消火法の適用には,より泡強度が強く,流動性の良い泡により効率的に上側火源に泡を供給することが必要である.3)ガス流量・液流量をコントロールすることにより泡径を変化させた消火実験,を行った結果,泡径を1mm程度と小さくすることで流動性が増し,消火性能が向上した.よって,泡径が小さく,流動性の高い泡を上側火源へと供給することにより,不活性ガスを含む水性泡消火法を立体火源に適用することが可能であることがわかった.ハロン消火・CO_2消火・強化泡消火に替わる新しい消火法として,環境への影響が小さい水性泡に不活性ガスを閉じ込めた水性泡消火法を開発し,船舶の機関室や立体駐車場などへの本消火法の応用を念頭に研究を行った.立体火源配置可能な燃焼装置および不活性ガス-泡消火装置を作成し,1)立体的に配置した小型プール火災の燃焼率の測定および火炎性状の観察,2)不活性ガス種,ガズ流量,水流量,発泡倍率を変えた消火実験,を行った,1)より,火源が立体的に配置されている場合,2つの火源の燃焼率に差が生じ,上側に配置したプール火災の燃焼率が増加する.2つの火源間での放射伝熱計算を行ったところ,実験において生じた燃焼率の増加傾向は説明できず,火源規模によっては流れ場の変化による対流の影響も大きいことがわかった.放射・対流共存伝熱計算を行ったところ,実験で得られた傾向が得られ,火源の大きさによる立体火源の燃焼率増加傾向を説明することができた.2)より消火時間が最小となる最適のガス流量・液流量の組み合わせが存在し,発泡倍率が増加すると泡の強度は弱くなり,火炎に近づくとすぐに崩壊して内部の不活性ガスが火炎に流入するため消火性能は高いが,反面泡の流動性,保持率が悪くなることがわかった,本研究により得られた立体火源の特性から,上側に位置する火源の燃焼率が高く,立体火源への本消火法の適用には,より泡強度が強く,流動性の良い泡により効率的に上側火源に泡を供給することが必要である.3)ガス流量・液流量をコントロールすることにより泡径を変化させた消火実験,を行った結果,泡径を1mm程度と小さくすることで流動性が増し,消火性能が向上した.よって,泡径が小さく,流動性の高い泡を上側火源へと供給することにより,不活性ガスを含む水性泡消火法を立体火源に適用することが可能であることがわかった.ハロン消火・CO_2消火・強化泡消火に替わる新しい消火法として,環境への影響が小さい水性泡に不活性ガスを閉じ込めた水性泡消火法を開発し,船舶の機関室や立体駐車場などへの本消火法の応用を念頭に研究を行った.本年度は,立体火源配置可能な燃焼装置および不活性ガス-泡消火装置を作成し,1)立体的に配置した小型プール火災の燃焼率の測定および火炎性状の観察,2)不活性ガス種,ガス流量,水流量,発泡倍率を変えた消火実験,を行った.以上の結果,以下の知見を得た.イ)2つの小型プール火災を水平に配置したときの燃焼率は互いのプール火災の距離によって影響を受け,互いの距離が近いほど燃焼率は増加する.ロ)上記イ)の場合の火炎はある距離まで合体し,火炎の間欠周期は単一プール火災のそれに比べ減少する.ハ)2つの小型プール火災の水平方向距離を一定として,垂直方向にずらして配置した場合,2つのプール火災の燃焼率に差が生じ,上側に配置したプール火災の燃焼率が増加する.ニ)上記ハ)の場合の火炎性状は,下側の火炎が上側の火炎に引き寄せられるように傾斜する.この火炎性状の変化が燃焼率の差異をもたらす主な原因であると推測される.ホ)液流量一定のもとで,単一プール火災の消火時間は不活性ガス流量の増加とともに減少するが,ある流量以上では一定となる.ヘ)ガス流量一定のもとでの消火時間は水流量の増加とともに減少するが,ある流量以上で一定となる.上記ホ)とヘ)より消火時間が最小となる最適のガス流量・液流量の組み合わせが存在する.ト)

発泡倍率が増加すると泡の強度は弱くなり,火炎に近づくとすぐに崩壊して内部の不活性ガスが火炎に流入するため消火性能は高いが,反面泡の流動性,保持率が悪くなる.最適な発泡倍率はおよそ200300倍である.次年度以降は複数個のプール火災が立体的に配置されている場合の消火実験を中心に検討を行う.本年度は水平ならびに垂直方向に立体的に配置された複数の小型プール火災を用いた立体火源の燃焼特性を実験的に検討した.水平ならびに垂直方向に立体的に配置された小型プール火災の燃焼特性,とりわけ互いの火炎の干渉による燃焼率の変化ならびに火炎高さの周期的な変化および火炎形状について単一のプール火災と比較検討した.実験の結果,水平ならびに立体的に配置した小型プール火災について,以下のことがわかった.1:燃料種に関わらず複数プール火災の1容器あたりの燃料消費速度は,一定距離までは単一プール火災の燃料消費速度よりも大きくなる.n-ヘプタンとメタノールを比較した場合,n-ヘプタン火炎では燃焼容器間の距離が増加しても,メタノール火炎より燃料消費速度の増加が長く続く.2:火源を立体的に設置した場合では,下部容器より上部容器の燃料消費速度が大きい.また,火源を水平に設置した場合と立体的に設置した場合では,燃料消費速度は立体的に設置した場合の方がとりわけ上部容器について遠方まで影響が生ずる.3:一様火炎モデルを用いた放射熱計算ではn-ヘプタン火炎の放射熱はメタノール火炎に比べて著しく大きく,また遠方まで影響する.しかしながら,燃料消費速度の増加傾向は放射熱の計算とは振る舞いが異なる.4:燃焼容器間の距離がごく近い場合には,火炎は融合する.この際,火炎の振動周波数は小さくなる.また,n-ヘプタンの複数火災について,垂直距離が増加すると特に上部容器の火炎では,火炎に乱れが生じ,火炎高さは低くなる.さらに上下容器の火炎の振動は同期する傾向がある.本年度の研究により立体火源の燃焼特性が明らかとなったので,次年度は立体火源を用い不活性ガスを含む水性泡により消火実験を行い,その消火効果を確かめる.火源規模による立体火源の燃焼特性の変化を定量的に検討するために,複数火源相互の伝熱機構についてモデル化を行い検討した.放射伝熱によるモデルでは,実験で見られた上部火源の燃焼促進を十分に評価することはできなかった.よって,放射に加え対流による上部火源への熱供給を加えたモデルに修正したところ,実験に近い計算結果が得られた.このモデルをもとに火源規模を変化させて計算を行い,立体火源による燃焼促進効果の火源規模による変化を明らかにした.以上の検討の結果,立体火源においては上部火源がより燃焼率が高くなることから,消火泡を効果的に上部火源へと供給することが効果的な消火に不可欠であることがわかった.不活性ガスを含む水性泡消火法を立体火源に適用するに当たり,特に上部火源への消火泡の効果的な供給を考慮すれば,液流量を増して流動性を持たせ,泡径を小さくして泡強度を高めた消火泡とする必要がある.泡径を変化させて消火実験を行うため,サクション型二流体ノズルを用いた発泡器を試作した.本ノズルに供給する液流量・ガス流量.ノズルチップ穴径を変化させることにより,泡径を変化させることができた.本試作ノズルを用いて泡径を110mmまで変化させて消火実験を行ったところ,泡径1mmで最も高い消火性能を示した.この高い消火性能は1)泡径が小さいため泡強度が高く,火炎基部により近い位置で泡が崩壊し消火ガスを放出したこと,2)泡の流動性が高く,すばやく火炎基部に到達したこと,の2点が要因であると考えられる.また,泡径の小さい発泡条件では液流量が大きく流動性の高い泡となり,ノズルから噴出させ遠方へ輸送することが可能であった.
両親媒性クラウン化合物の合成と,その単体及び分子集合体の機能の利用に関する研究

目的とする両親媒性クラウン化合物の構造とその界面化学的諸物性の関連を評価するためには、きめめ細かいクラウン化合物の分子設計が肝要である。本研究者らは、今回、重要な鍵化合物となるアルコキシメチルヒドロキシクラウンエーテルとその出発原料となるグリコールジグリシジルエーテルの簡便な合成法の開発に成功した。その一方で、この化合物の他にも本研究者らが既にその合成法を確立している各種官能期をもつクラウン化合物から多くの新規な長鎖アルキル-鎖型並びに二鎖型クラウンエーテルを合成した。一鎖型については、水溶液中の界面諸物性を測定し、親水基の構造の違いによるミセル形成能の差異を調べた。また、水溶液中における量点は、同じ分子組成をもつものであっても親水基の構造によって大きく変化することを認めた。アルカリ金属塩化物存在下での量点挙動では、クラウン環の側鎖に水酸基をもつものが、メトキシ基をもつものに比べて塩析効果を受けやすく、その程度は錯形成能の大きい18-クラウン-6誘導体で特に顕著であった。このように水溶性の調節に際して親水基構造の分子設計の重要性が示唆された。一方、二鎖型の化合物では、超音波照射下での水中における分散系の安定性について検討した。一部のものについては、その分子集合体の粒度分布を明らかにするとともに透過型電子顕微鏡によって、これらの分子集合体が安定な二分子膜から成っていることを明らかにした。クラウン環のもつ機能の最大の特徴は、その陽イオンに対する選択的錯形成能である。本研究者らは、クラウン環を基本骨格とする化合物をイオンキャリヤーとして、陽イオンとその錯形成能に関与する部位に窒素原子を導入することにより、pH制御可能なアルカリ金属イオン能動輸送系を開発した。この結果は単体の物性に関するものであるが、二分子膜におけるる選択的膜透過制御への利用の基礎的知見を与えている。
混合フォーマット光通信システムにおける複数フォーマット一括再生機能の研究

本計画においては、異なる変調フォーマットの信号が混在する光ファイバ通信システムにおいて動作する、光信号波形再生機能を始めとする光信号処理機能の実現が主題である。対象とした信号処理機能は、可変パルス幅機能を有する波形再生パルス幅変換、単一波長信号を多波長信号に分配する波長マルチキャスティング、波長信号を時分割信号に変換す多重方式変換、光信号歪みの補正機能を有する光信号の遅延を制御する光可変遅延線等で、これらの機能を、強度変調に加えて位相変調信号に対して適用し、特性の検証と評価を行った。その結果、これらの機能の多くが、変調信号の種類に依存せず良好に動作することが明らかになった。本計画においては、異なる変調フォーマットの信号が混在する光ファイバ通信システムにおいて変調フォーマットに依存せず動作する、光信号波形再生機能を始めとする光信号処理機能の実現が目的である。本年度は、強度変調もしくは位相変調信号に対するマルチキャスティング等の信号処理機能に対する検討を中心として、以下のような成果を得た。まず、光ファイバ中のラマン散乱による光パルス圧縮機能と、光ファイバの四光波混合による波形変換機能の組合わせにより、nonreturn to zero(NRZ)強度変調信号に対して、これをreturn to zero(RZ)信号に変換して複数波長へマルチキャスティングする機能を構成し、ビットレート10 Gb/sのNRZ強度変調信号に対して、周波数間隔400 GHzの4波長信号へのマルチキャスティングを行い、変換後のパルス幅を12.17 psから4.68 psの間で可変出来る機能を実現し、信号品質を変換前と比較して向上させる波形再生も併せ持つ波長マルチキャスティング機能が実現可能であることを実証した。次に、上記と同様な光ファイバ中のラマン散乱による光パルス圧縮機能と、光ファイバの四光波混合による波形変換機能の組合わせにより、RZ強度変調信号を周波数間隔400 GHzの6波長信号へ波形変換を行いマルチキャスティングを行う機能を構成し、ビットレート10 Gb/sのRZ強度変調信号入力に対して、変換後のパルス幅を8.42 psから2.67 psの間で可変出来るパルス幅可変波長マルチキャスティングに成功している。さらに、RZ位相変調信号を光時分割(OTDM)信号に合波するために必要となる位相変調信号のための光信号パルス幅圧縮機能を光ファイバ中のラマン散乱により実現し、ビットレート10 Gb/s、パルス幅20 psのRZ位相変調信号をパルス幅3.2 psまで位相情報を保持しつつ圧縮することに成功し、ビットレート40 Gb/sのOTDM信号を高信号品質で生成することが可能となった。主目的である混合フォーマット一括再生機能については現在検討中であるが、位相変調信号と強度変調信号のそれぞれに対する再生機能についてはある程度実現を見ているため、上記のように評価した。本年度は、強度変調もしくは位相変調信号に対する多重方式変換や信号の時間タイミング調整機能に対する検討を中心として、以下のような成果を得た。まず、光ファイバの非線形現象によるスペクトル広がりを利用した、波長多重信号から時分割多重信号への強度変調方式に対する信号形式変換を、信号品質が劣化した波長多重信号に対して適用を試みた。劣化した信号は汎用単一モード光ファイバによる信号伝送により生成し、伝送の有無による信号品質の評価を行った。ビットレート10 Gb/sの二波長からなる劣化した波長多重信号に対しては、片方のチャンネルに関しては信号品質の評価が不可能な程度に品質が劣化していることが判明した。なお、波長多重信号から時分割多重信号への信号形式変換については、位相変調信号についても検討を行っている。次に、信号の時間タイミングを低歪みで可変調整できる、光フーリエ変換を利用した光ファイバ遅延線を構成する際の位相変調を、光ファイバにおける相互位相変調により実現する手法を提案し、これを実現するための実験系を構成し、特性を評価した。ビットレート10 Gb/sの強度変調もしくは位相変調形式の光信号に対して、波長変換を組合せたフーリエ変換を行うことで信号の時間遅延の可変を試み、波長変換の際の波長を20 nm可変することによって、時価遅延量を最大3 nsまで可変出来ることを実証した。実用的観点から重要である、劣化した信号に対する変換機能についての検討を行う必要が生じた。そのため、主目的である混合フォーマットに対する処理機能については、一時的に中断せざるを得なくなったので、上記のように評価した。信号形式変換と光ファイバ可変時間遅延線については概ね順調に進捗している。本年度は、強度変調もしくは位相変調信号に対する多重方式変換や信号の時間タイミング調整機能と、光信号配信に対する検討を中心として、以下のような成果を得た。光ファイバの非線形現象により発生する広帯域パルス光のスーパーコンティニアム光を用いた、波長多重信号から時分割多重信号への形式変換を位相変調信号に対して試みたところ、先行の強度変調信号と比較して信号品質の大きな劣化が見られた。これは、スーパーコンティニアム光生成過程のスペクトル広がりに伴い発生する時定数の短い位相雑音の影響であることが明らかになった。波長多重信号から時分割多重信号への形式変換は、光ファイバのもうひとつの非線形現象である四光波混合を用いても可能であることから、四光波混合を用いた形式変換も試みた。この手法においては、強度変調信号に対して良好な形式変換が可能であることがわかった。

信号の時間タイミングを、信号の歪みを抑制しつつ可変調整できる、光フーリエ変換を利用した光ファイバ遅延線においては、強度変調もしくは位相変調信号の三波長の波長多重信号に対する可変遅延を試みた。全てのチャンネルに対して信号波形劣化の少ない変換特性を実現し、最大遅延量±2 nsの可変遅延に成功した。ひとつの信号を多数の波長の信号に転写する波長マルチキャストの実現を、信号光と二波長クロック光に光ファイバの四光波混合を適用することで試みた。強度変調信号に対しては19波長、位相変調信号に対しては10波長への波長マルチキャストを、高い信号品質で実現し、先行研究よりも多数の波長チャンネルへの波長マルチキャストに成功した。本計画においては、異なる変調フォーマットの信号が混在する光ファイバ通信システムにおいて動作する、光信号波形再生機能を始めとする光信号処理機能の実現が主題である。対象とした信号処理機能は、可変パルス幅機能を有する波形再生パルス幅変換、単一波長信号を多波長信号に分配する波長マルチキャスティング、波長信号を時分割信号に変換す多重方式変換、光信号歪みの補正機能を有する光信号の遅延を制御する光可変遅延線等で、これらの機能を、強度変調に加えて位相変調信号に対して適用し、特性の検証と評価を行った。その結果、これらの機能の多くが、変調信号の種類に依存せず良好に動作することが明らかになった。今年度の成果を踏まえ、波形再生に加え、時間遅延制御などの新たな機能に関しても検討を進めていく。具体的には、波長多重信号の時分割信号への変換に際した波形再生機能や、時間遅延に際しての波形歪みを補正可能な可変遅延機能などの検討を行う。得られた研究成果は、適宜学会口頭発表や国際会議発表、学術論文誌への投稿を行うことにより、公開に努める。今年度の成果及び進捗状況を踏まえ、種々の信号処理機能についてのより深い検討を進めていく。具体的には、多重方式変換における波形再生機能や、可変時間遅延線における波形再生機能、劣化した信号に対する変換機能、混合フォーマットに対する信号処理機能等の課題についての、より詳細な評価を行う。得られた研究成果は、適宜学会口頭発表や国際会議発表、学術論文誌への投稿を行うことにより、公開に努めていく。光ファイバ光学当該年度に購入予定の光学部品などの消耗品の一部を、納入時期の都合により次年度の改めて購入することになったため、些少ではあるが次年度使用額が発生した。当該年度に破損・消耗を見込んでいた光学部品など消耗品が予想よりも良好な特性を保持しており、これらの交換に見込んでいた経費が節約出来たため、次年度使用額が発生した。次年度使用額がに関しては、次年度に行う実験系構成にに際して必要となる光学部品の購入のための資金の一部とする。次年度使用額に関しては、次年度に行う実験系の構成や、破損・消耗に際して交換が必要となる光学部品の購入のための資金の一部とする。
精神神経疾患のゲノムエピジェネティクスに関する研究

DNAメチル化による制御(エピジェネティック制御)は、DNA配列の一次遺伝情報を変えることなく遺伝子の形質発現の多様性を生み出すメカニズムとして、高等生物の発生・分化において巧妙に利用されている。X染色体の不活化やゲノムインプリンティングは最も解明が進んでいるエピジェネティクス分野で、各遺伝子領域に含まれるCpG islandの5-メチルシトシンが直接、遺伝子の転写活性の制御に関与することが証明されている。精神神経疾患のエピジェネティクスに関する報告はほとんどないことから、本研究では統合失調症や気分障害などの病態にDNAメチル化の異常が関与するかどうかを明らかにすることを目的とした。解析はオリジナルなゲノムアレイスクリーニングシステムを用いた。このアレイでは、ホメオボックス転写因子や細胞増殖・アポトーシスの情報伝達に関与するシグナル分子などの遺伝子発現に直接関与するプロモーター領域のCpG islandのメチル化状態を簡便に検出できる。プローブには、患者および対照の血液から得たゲノムから既報に則りメチル化断片を調製し、それぞれCy3またはCy5蛍光ラベルしたものを用いた。このスクリーニングにより、複数のプロモーターCpG island領域で傾向強度の変化が検出された。これらの遺伝子領域について、bisulfiteシーケンス法を用いて個々のCpGのメチル化状態の解析を行うことで、ゲノムメチル化に有意な差異がある遺伝子領域を数個同定することに成功した。現在、これらの遺伝子について、転写量やタンパク質発現を解析している。これらの成果に関連する知見は皆無で、極めて新規性に富むと考えられる。なるべく早い機会に公表したい。精神神経疾患のエピジェネティクスに関する報告はほとんどないという状況をふまえ、本研究では、統合失調症や気分傷害などの病態にDNAメチル化の異常が関与するかどうかを明らかにすることを目的とした。その第一段階として、オリジナルなゲノムアレイスクリーニングシステムを用いた。このアレイは、遺伝子発現に直接関与するプロモーター領域のCpG islandのメチル化状態を簡便に検出できるもので、ホメオボックス転写因子や細胞増殖・アポトーシスの情報伝達に関与するシグナル分子などのプロモーターCpG islandを搭載している。プローブは、患者および対照の血液から得たゲノムから既報に則りメチル化断片を調製し、それぞれCy3またはCy5蛍光ラベルしたものを用いた。このスクリーニングシステムを用いてメチル化状態を検索した結果、いくつかのプロモーターCpG island領域で、患者特異的な変化が検出された。現在、bisulfiteシーケンス法により個々のCpGのメチル化状態の解析を進めている。同時に、患者間で同様の傾向が認められるかどうかについて、例数を増やして検討している。
実験的糖尿病ラット口蓋粘膜における膠原線維構築の走査電子顕微鏡的研究

本年度は実験動物に雌性SD系ラットを用い、1)糖尿病が口蓋粘膜の膠原線維構築に及ぼす影響、および2)糖尿病が創傷治癒過程に及ぼす影響を検索するためのデータとなる基礎的研究を行った。1)に関しては、ストレプトゾトシン(STZ)を投与することにより実験的糖尿病ラットを作製しこれを実験群とした。この実験群を一定期間飼育した後、屠殺し標本とした。対照群としては、STZを投与せず同一条件下で飼育したラットを用いた。2)に関しては歯科治療上最も一般的な創傷である抜歯窩の治癒過程を対照とし、まず正常な抜歯窩治癒過程の観察を行った。麻酔科でラットの下顎第1臼歯を抜去し、その後一定期間ごとに屠殺、標本作製を行い、抜歯窩の骨性治癒過程における石灰化と膠原線維構築の変化を観察した。観察方法としては、膠原線維のみをin vivoにおける状態を保ちつつ剖出でき、広範囲にわたって立体的、かつ広い範囲の倍率で観察できることからアルカリ-水浸軟-走査電顕法を用いた。すなわち、潅流固定と浸漬固定を行うことにより組織を充分に固定した後、室温の2Mの水酸化ナトリウム水溶液により組織を浸軟し、さらに室温の蒸留水中に置くことにより硬組織と膠原線維以外の組織成分を除去した。その後、導電染色を施し通法に従って脱水、臨界点乾燥、スパッタコーティングを行った後観察に供した。その結果、1)では実験群では口蓋粘膜が萎縮傾向を示し、なおかつ糖代謝異常の状態をかなり色濃く反映する組織構造であることを示唆する結果が得られた。2)では抜歯窩の骨性治癒過程において、石灰化の進行に伴い膠原線維構築も変化していく様相が観察された。今後は観察方法を増やしさらに詳細に検討していく予定である。
ヒト顎関節円板における酸性ムコ多糖体の局在・分布の解析

前方転移に伴う顎関節円板の変性過程を明らかにするため、まず変性過程のゴールとしての関節円板の石灰化に着目した。ヒト顎関節円板の石灰化には少なくとも二つの機序が示唆されることを第7回日本顎関節学会総会において報告した。すなわち穿孔の見られた関節円板では、穿孔部に隣接した関節円板下面に軟骨様骨が形成されていた(骨化)。一方、穿孔の見られなかった関節円板では後方肥厚部と中央狭窄部との移行部の中層において膠原線維の走向の乱れ、硝子様変性および軟骨細胞の集蔟を認め、その部位に石灰化が生じていた(異所性石灰化)。そこで、後者の穿孔の見られない関節円板における変性過程をさらに追究するため、学生解剖実習屍体より剖出した245顎関節円板のうち、前方転位が見られ、かつ穿孔を伴わず、また軟X線写真にて明かな石灰化の見られない8個体16円板を対象とした。まず、関節円板を内外側正中で矢状断し、内側半分を標本とした。標本を通法に従いパラフィン包埋し、関節円板正中矢状面中央から内側に向かって厚さ5μmで各標本につき200枚の連続矢状断切片を作成し、H-E、トルイジンブルーpH2.5,4.1,7.0染色、抗ケラタン硫酸抗体を用いたABC法による免疫染色を施し、病理組織学的に検討した。その結果、2標本(12.5%)において顎関節円板の後方肥厚部から中央狭窄部の移行部の中層に、膠原線維の走向の乱れ、かつトルイジンブルーpH4.1,7.0および抗ケラタン硫酸抗体にも濃染する部分が認められた。同部位は既報において異所性石灰化が認められた領域とほぼ同一部分と考えられ、顎関節円板の変性過程において石灰化に先立つ変化の1つとして、硫酸化GAGの集積が起こっていることを示すものと言える。なお、1標本においては円板後方肥厚部の下面にもトルイジンブルーpH4.1,7.0および抗ケラタン硫酸抗体に濃染する領域が見られた。1)平成7年度では,学生解剖実習屍体より剖出した245顎関節円板を対象に,軟X線写真にて石灰化病変の有無と部分を調査し,石灰化部の病理免疫組織学的検索を行った。2)軟X線写真にて11円板(4.5%)に石灰化病変が認められ,その4例に円板の穿孔が見られた穿孔のなかった7円板の石灰化部位は1円板を除き,後方肥厚部から中央狭窄部にかけての中層に位置していた。穿孔の見られた円板では,穿孔部に隣接した。これら円板の石灰化部をEDTA脱灰し,H-E,トルイジンプル-PH2.5,4.1,7.0染色,コラーゲンI.II型の免疫組織化学的染色(ABC法)を施し鏡検した。3)穿孔の見られた円板では軟骨細胞が集簇しており,一部で軟骨様骨を形成し骨化が見られた。穿孔のなかった円板では,軟骨細胞はわずかに散在しているのみで,膠原線維が変性し硫酸基を有するGAGの集積の結果,異所性石灰化に至ったと考察した。学生実習用屍体はアルコールないしホルマリン前処理がなされているため,各種GAGにおいて検出感度に影響を与えていることが判明した。そこで,新鮮標本を得るために,病理解剖屍体からの摘出を準備中である。平成7年度の研究から,関節円板のGAG解析は円板の変性の重要なマーカーとなる可能性を示唆させた。

同部位は既報において異所性石灰化が認められた領域とほぼ同一部分と考えられ、顎関節円板の変性過程において石灰化に先立つ変化の1つとして、硫酸化GAGの集積が起こっていることを示すものと言える。なお、1標本においては円板後方肥厚部の下面にもトルイジンブルーpH4.1,7.0および抗ケラタン硫酸抗体に濃染する領域が見られた。
極薄ゲート酸化膜の原子層制御形成技術の開発

極薄ゲート酸化膜の形成過程に関して、高分解能電子エネルギー損失分光法(HREELS)および走査型トンネル電子顕微鏡/分光法(STM/STS)を用いて、初期酸化過程および酸化膜構造緩和に与える水素と不純物原子の効果を明らかにした。得られた主な結果を以下に示す。(1)水素終端Si(100)表面においては、表面に存在するSi-H結合がSi-O-Si結合の結合角に変化を与え、構造緩和がより促進されることがわかった。さらに、酸化膜表面上に存在するSi-H結合が、Si原子の二つのバックボンドが酸化されることにより安定化することが明らかとなった。すなわち、酸化膜上および酸化膜内のSi-H結合はSi表面上と比較して、結合エネルギーが大きくなっている。(2)高ボロン濃度Si(100)基板の酸化において、不純物濃度がSiO_2膜の構造緩和に影響を与えることが明らかとなった。すなわち、B原子の存在は構造緩和を促進する。この効果は、Si-0-Si結合のSi原子をB原子に置き換えたことによる構造的な影響ではなく、電子的な効果と考えられる。(3)水素終端Si(111)表面における酸化に伴うストレスは、主に表面のSi-O-Si結合角を広げることにより緩和されていることを見出した。特に、表面シリコン原子の3本のバックボンドに2個あるいは3個の酸素原子が吸着するとSI-O-Si構造の緩和が顕著に起こり、最表面のSi-H結合を持つシリコン原子を持ち上げる。(4)高ボロン濃度Si(100)表面において、表面に偏析したボロンが形成する特徴的な構造を観察し、CITS測定時の電流像より表面偏析ボロン構造が2種類に区別されることを見出した。さらに、低濃度基板では準安定な酸素吸着サイトが、ボロンにより安定化されることがわかった。この結果は、ボロンドーピング濃度で表面応力を変化させることにより、酸素吸着サイトを制御できることを示している。ULSIデバイスの基本的構成要素であるMOSFETは、Si/SiO_2界面における電子輸送現象を利用した素子であるため、Si/SiO_2界面の急峻性及び構造の空間的揺らぎは、スイッチング特性や耐電圧、移動度などのデバイス特性に大きく影響を及ぼす。本研究の目的は、膜中に欠陥などの存在しない30A^^・の完全なSiO_2膜を形成することである。原子スケールで良く制御されたSiO_2構造及びSi/SiO_2界面の実現には、シリコン酸化膜を原子層で形成する技術を確立することが不可欠であり、そのためにシリコンの初期酸化過程及びそれに与える水素や不純物原子の影響を理解することが重要となる。平成9年度は、高分解能電子エネルギー損失分光法(HREELS)を用いて、酸化に伴うSiO_2構造の緩和過程とそれに与える水素の効果について明らかにした。主な結果を以下に述べる。SiO_2膜のネットワーク構造をHREELS法により調べた結果、その構造緩和過程が、次に述べるように膜厚の増加に伴う場合と熱処理による場合において異なることを見出した。すなわち、酸化の進行に伴う膜厚の増加に対しては、酸化膜は、主としてSiO_4正四面体間の結合角を変化させることにより、内部歪みを解消する。それに対して、熱処理による構造緩和は、SiO_4正四面体内の構造変化、すなわちSi-O結合距離の減少に起因すると考えられる。また、表面吸着水素が酸化膜構造に与える影響は、酸化膜厚2ML以下の初期にのみ観察され、表面吸着水素は酸化膜の構造を緩和させる効果を持つことを明らかにした。

本年度得られた結果は、シリコン酸化膜形成時の酸化膜の構造緩和過程に関する全く新しい知見であり、なおかつ極薄酸化膜のデバイス特性制御を行う際の重要な基礎物性データとなる。極薄ゲート絶縁膜の形成過程とそのネットワーク構造に関して、本年度はシリコン酸化膜の局所構造に着目して、Si-O-Si結合の振動状態を高分解能電子エネルギー損失分光法(HREELS)を用いて調べることにより、その構造緩和過程を明らかにした。本年度に得られた主な結果は以下の通りである。(1)水素終端表面においては、表面に存在するSi-H結合が、Si-O-Si結合の結合角に変化を与え、構造緩和が上り促進されることが分かった。(2)酸化膜表面上に存在するSi-H結合は、Si原子の二つのバックボンドが酸化されることで安定化することが明らかとなった。すなわち、酸化膜上および酸化膜内のSi-H結合は、Si表面上に比較して結合エネルギニが大きくなっており、700°C以上の高温まで安定に存在する。(3) p^+-Si(100)基板の酸化において、不純物濃度がSiO2膜の構造緩和に影響を与えることが明らかとなった。すなわち、B原子の存在は構造緩和を促進する。この効果は、Si-O-Si結合のSi原子をB原子が置き換えたことによる構造的な影響ではなく、電子的な効果と考えられる。(4)原子的に平坦な酸化膜を形成するためには、酸素原子によるエッチングの効果を抑える必要があることが明らかとなった。具体的には、室温でSi(100)基板に1原子層程度の酸素原子を吸着させた後に高温で酸化を行うことにより、0.07nm以下のラフネスを持つ酸化膜を形成できる。極薄ゲート酸化膜の形成過程と酸化膜の構造緩和過程に関して、本年度は特に水素や不純物原子の与える効果に着目した。具体的には、Si-O-Si結合の振動状態を高分解能エネルギー損失分光法(HREELS)を用いて調べることにより、酸化膜の構造緩和過程に与える水素の効果を明らかにした。さらに、走査型トンネル電子顕微鏡/分光法(STM/TS)装置を用いて高濃度ドープシリコン基板表面のリアルタイム観察を行うことにより、初期酸化過程に与えるボロン及びリン原子の影響を解明した。本年度得られた主な結果を以下に示す。(1)水素終端Si(111)表面における酸化に伴うストレスは、主に表面のSi-O-Si結合角を広げることにより緩和されていることを見出した。特に、表面シリコン原子の3本のバックボンドに2個あるいは3個の酸素原子が吸着するとSi-O-Si構造の緩和が顕著に起こり、結果として最表面のSi-H結合を持つシリコン原子を持ち上げる。それに対してSi(111)清浄表面は、表面に存在するストレスのために酸化の極初期においてSi-O-Si結合角を広げていることを明らかにした。(2)高リン濃度Si(100)表面のSTM像において、リンに特有な表面構造は確認されなかった。また、酸素の吸着過程は、低濃度基板の場合とほとんど同様であった。これは、表面に偏析したリンが脱離することによると思われる。(3)高ボロン濃度Si(100)表面において、表面に偏析したボロンが形成する特徴的な構造を観察し、CITS測定時の電流像より表面偏析ボロン構造が2種類に区別されることを見出した。
古英語・中英語にみるラテン語動詞構文の英語統語法化

2018年度はまず、本務校である東京女子大学で開催された日本英文学会におけるシンポジウム『聖書の英語ーその特異性と普遍性』を企画していたので、古英語期を担当し、「詩編行間注釈書にみるキリスト教用語の古英語訳」と題して、一対一でない古英語訳、シンタクスを考えた訳の存在を指摘、当該研究の成果の一部を発表した。その2か月後の6月には、近代英語協会での『英語話法に関する史的研究』と題したシンポジウムに参加、「古英語文献における直接・間接話法」と題して、詩における話法に加え、ラテンを訳す際に見られる、間接話法の形を借りた直接話法の存在を指摘した。さらに8月末にはScotland,Edinburgh大学において行われた国際歴史英語学会において、否定の意味を持った動詞がとる節の内部に現れる否定の要素について発表、この現象は古英語のシンタクスの特徴であるという、従来言われていなかった主張を行った。この学会では、Edinburgh大学のB.Los教授やM.Laing教授をはじめ、Glasgow大学のC.Howe教授など、ラテンと古英語・中英語の関係を専門とする教授たちとかなりの時間会談する機会を得た。また、Scotlandから戻っての一週間はLondonとOxfordでの写本研究に時間を使って、当該研究及びキリスト教語彙を扱う次のモノグラフの準備も行った。発表の成果は順次活字にしていく予定である。国内・国外での発表を通じて、当該研究の成果の一部を専門分野の研究者たちに知らしめて来たので、かなりのフィードバックは得られたと思う。また発表内容は順次活字にして公表するので、研究の終了までにはさらに発表の機会が得られると思う。2018年度は迂言用法に関するモノグラフと、当該研究の成果の一部を発表した2017年Leeds大学での国際会議のproceedingsの出版という2つの仕事を完成させることができたので、この後もさらに多くの機会をとらえて、従来の研究が成しえていない古英語文法の真の姿を描くという目標を達成すべく努力していく。2019年度にはポーランドでの国際英語正教授学会があり、国際委員としての仕事の他、その本会の前のMedieval Symposiumと本会とで、2つの論文を発表する予定である。また、London, Oxford, Cambridgeでの写本研究も予定している。さらに、スペインとポーランドの別の学会でも発表する予定がある。さらに国内でも日本英語学会と日本中世英語英文学会とで発表すべく応募しているので、これらの発表により、当該研究を完成し、その成果を広く受け入れてもらうべく努力していく。現在、ヨーロッパの複数の学術雑誌のreviewerを務めているので、新しい研究に触れる機会も幸いにして多く、当該研究の完成に役立つと期待している。初年度としてはかなり有意義な使い方ができた。まず5月末から6月初めにかけて、ノルウエーのスタヴァンゲルで開催された中英語学会において、ウイクリフ訳聖書のEarlier Versionに見られるex-dativeに対する前置詞toの過剰使用について発表、これはすでにproceedingsに掲載が許可され、印刷を待っている。次に私自身が主催する歴史英語学会(SHELL)をイギリス、リーズ大学のInternational Medieval Congressの中の6つのセッションを借りて開催、世界中から18名の発表者を募って中世英語・文学・文化についての論文発表を行った。これについては現在、ミュンヘン大学名誉教授のHans Sauer氏とともに編纂中で、この5月には印刷し、ドイツから出版する。夏休みの間は執筆に専念し、Periphrases in MedievalEnglishを書き上げ、現在ドイツからの出版待ちの状態である。さらに11月にはポーランドで行われた歴史英語学会において発表、古英語聖書の詩編におけるラテン語の影響について、時代と方言、それに注釈者の特徴について比較した。これもまたポーランドの学術誌に発表の予定である。このように、初年度としては非常に良いテンポで研究を進めることができたので、次年度における発展、最終年度での著書としての出版に向けて努力する。2018年度はすでに国内でのシンポジウムの発表が2つ、国外での研究発表が2つ、予定されている。さらに2019年度は国外で2つの発表の予定が決まっているので、できるだけ本研究課題の成果を発表していくのと、少なくとも著書1冊と論文数編により成果を公表するつもりである。先に記したように、これまでのところ研究課題に関する発表は、今までの研究の成果とこれからの問題提起の両面から行っており、出版にまでつながっている。本年度はまず日本英文学会のシンポジウムを企画しているため、そこで聖書の英語の特異性と普遍性と題して、行間注釈書に見る語彙・表現の選択の余地を強調する。ラテン語がもとにあると、それを忠実に、一対一の表現で訳していくと考えがちであるが、ラテンが持っていた文法的形態を持たない古英語が、その持てる範囲でどのような表現を選び出すかを、実例をもって示していく。そののち、近代英語協会からシンポジウムの参加を呼びかけられているため、現代のような句読法を持たぬ古英語が、直接話法と間接話法を写本の中でどのように区別したかを提示する。また8月末にはエディンバラ大学で開かれる国際歴史英語学会(ICEHL)での発表が決まっているため、ラテン語にない要素を古英語が創作し、それが中英語まで引き継がれていく様子を実例をもって解説する予定である。そののちロンドンとオックスフォードで写本研究を行う。

2018年度はまず、本務校である東京女子大学で開催された日本英文学会におけるシンポジウム『聖書の英語ーその特異性と普遍性』を企画していたので、古英語期を担当し、「詩編行間注釈書にみるキリスト教用語の古英語訳」と題して、一対一でない古英語訳、シンタクスを考えた訳の存在を指摘、当該研究の成果の一部を発表した。その2か月後の6月には、近代英語協会での『英語話法に関する史的研究』と題したシンポジウムに参加、「古英語文献における直接・間接話法」と題して、詩における話法に加え、ラテンを訳す際に見られる、間接話法の形を借りた直接話法の存在を指摘した。さらに8月末にはScotland,Edinburgh大学において行われた国際歴史英語学会において、否定の意味を持った動詞がとる節の内部に現れる否定の要素について発表、この現象は古英語のシンタクスの特徴であるという、従来言われていなかった主張を行った。この学会では、Edinburgh大学のB.Los教授やM.Laing教授をはじめ、Glasgow大学のC.Howe教授など、ラテンと古英語・中英語の関係を専門とする教授たちとかなりの時間会談する機会を得た。また、Scotlandから戻っての一週間はLondonとOxfordでの写本研究に時間を使って、当該研究及びキリスト教語彙を扱う次のモノグラフの準備も行った。発表の成果は順次活字にしていく予定である。国内・国外での発表を通じて、当該研究の成果の一部を専門分野の研究者たちに知らしめて来たので、かなりのフィードバックは得られたと思う。また発表内容は順次活字にして公表するので、研究の終了までにはさらに発表の機会が得られると思う。2018年度は迂言用法に関するモノグラフと、当該研究の成果の一部を発表した2017年Leeds大学での国際会議のproceedingsの出版という2つの仕事を完成させることができたので、この後もさらに多くの機会をとらえて、従来の研究が成しえていない古英語文法の真の姿を描くという目標を達成すべく努力していく。2019年7月には国際英語正教授学会(IAUPE)がポーランドで開催されるため、国際実行委員としての役割と、Medieval Symposiumとmain conferenceの両方で発表し、また司会を務めることになっているため、その機会をとらえて本研究課題の完成に向けた活動を考えている。写本はすべてイギリスにあるため、その夏にもう一度写本研究の為の渡英も行って、執筆内容の完全さを目指すつもりである。ラテン語との比較が常に必要とはいえ、詩についてもCynewlfianなどは含めねばならないし、行間注釈書はeditionsのある13versions + Paris Psalterも加える必要がある。さらに、自由訳と共に逐語訳に近い注釈書、その中間に属するBenedictine Ruleなども資料として使う必要があるため、最終年度はできるだけ課題の完成に力を注ぎたい。語彙の比較に関する研究の出版の目途は立っているが、syntaxに関する研究を何としてもやり遂げたい。2019年度にはポーランドでの国際英語正教授学会があり、国際委員としての仕事の他、その本会の前のMedieval Symposiumと本会とで、2つの論文を発表する予定である。
ボルボックス非モデル種のOTOKOGI遺伝子を用いた雌雄同体・異体種の進化解明

ホモタリック種Volvox africanusとヘテロタリック種V. reticuliferusは非常に近縁なので、ホモ・ヘテロタリックの進化を解明する格好の材料である。本研究ではボルボックスのホモタリック種でMID/OTOKOGIオーソログを初めて明らかにした。また、これら2種を含む系統ではヘテロタリックからホモタリックが進化したと推定された(Hanschen et al. 2017, Evolution)。従って、ヘテロタリックの祖先種のオスからホモタリック種のV. africanusが進化したという仮説を提唱した(Yamamoto et al. 2017, PLoS ONE)。群体性ボルボックス目は性の進化研究のモデル生物群と考えられており、卵生殖で500以上の細胞をもつボルボックス(Volvox)が頂点である。本属は形態的に4節に分類され(Smith 1944, Trans. Am. Microsc. Soc.)、細胞間の原形質連絡を欠くMerrillosphaera節のV. carteriが最も良く研究されている。Starr (1971, Cont. Phycol.)はMerrillosphaera節の"V. africanus"を世界各地から収集し、有性生殖の4タイプを報告した。Coleman (1999, PNAS)はITS2配列の解析からヘテロタリック雌雄異体の"HeDタイプ"がホモタリックの3タイプと姉妹群を形成することを明らかにした。しかし、現在ホモタリック株は入手できず、入手可能なHeDタイプの株も古いので、OTOKOGI遺伝子に着目した研究は停止していた。最近、我々は琵琶湖から無性群体の形態からV. africanusと同定される複数の培養株を確立した。有性生殖はStarr (1971)のホモタリックで同一の株で雌雄同体群体と雄群体を作る"HoM+mタイプ"とHeDタイプであった。両タイプは分子情報ならびに接合子と群体の細胞外基質の形態で識別された。Starr (1971)は両形態を観察していないが、Smith (1944)以前の原記載を含む世界各地からのV. africanusの報告を基にすると、今回のHoM+mタイプはV. africanusで、HeDタイプは新種であると結論された。また、これらの2種から縮重プライマーを用いてOTOKGIホモログを得た。雌雄異体と雌雄同体の近縁なボルボックス2種の新規培養株を確立し、それぞれからOTOKOGIホモログを得ることができた。また、これら2種の分類学的成果は論文となった。ボルボックス系列の有性生殖には,同型配偶・異型配偶・卵生殖の3様式が存在する。単細胞同型配偶クラミドモナスのマイナス交配型決定遺伝子として発見されたminus-dominance (MID)遺伝子(Ferris & Goodenough, 1997)のオーソログは,卵生殖ボルボックスのモデル種Volvox carteriでは雄株にのみ存在し,生殖細胞の精子束への分化に関与する(Ferris et al. 2010, Geng et al. 2014)。V. carteriは,雌雄が遺伝的に決定するヘテロタリック種である。ボルボックスには、同一株内に両方の性を持つホモタリック種も存在するが,MIDの存在は報告されていない。本研究ではホモタリック種である,V. carteriに近縁なV. africanusと,系統的に大きく離れるV. ferrisiiのMIDオーソログを決定し,その発現を解析した。系統解析の結果、MIDの系統は生物種の系統関係と一致した。また、ボルボックスのホモタリック2種はボルボックス科のヘテロタリック種と大差のない同義・非同義置換率を示した。Genimic PCRとサザンブロットにより、ヘテロタリック種V. reticuliferusにおけるMIDはシングルコピーで雄株にのみ存在することが確認された。一方、ホモタリック種V. africanusのMIDは2コピーあることが示唆された。また群体別の半定量的RT-PCRにより,V. africanus雄群体でのMID発現の上昇,両性群体での減少が明らかになった。これはRNAレベルでMID発現に差の見られなかったV. carteriとは異なる結果であり,ホモタリック種においてヘテロタリック種とは別のMID発現制御が働いていることが示唆された(Yamamoto et al.投稿中)。ボルボックスの雌雄同体種からはじめてMID配列を得て、進化生物学的解析が実施でき、雌雄同体がMIDの発現制御に関連していることを示すことができたから。本研究ではホモタリック種V. africanusとヘテロタリック種V. reticuliferus、ならびに、これら2種とは系統的に大きく離れた「ホモタリック雌雄同体」V. ferrisiiのMID/OTOKOGIオーソログを探索した(Yamamoto et al. Nozaki[員数9, 9番目]2017, PLOSONE 12: e0180313)。その結果、これらホモタリック2種でMID/OTOKOGIオーソログの存在を明らかにした。

また、得られたホモタリック2種とボルボックス科ヘテロタリック数種のMID/OTOKOGIの外群からの同義・非同義置換率を調査したところ、同レベルの機能的制約がMID/OTOKOGIに働いていることが示唆され、ボルボックスのホモタリック種とヘテロタリック種に共通の「精子形成」というMID/OTOKOGIの機能が推測された。また、ホモタリックV. africanusにおけるmRNAの群体別の発現解析から、雌雄同体群体ではMID/OTOKOGIの発現が抑制されることが明らかになった。更に、ボルボッス系列全体の祖先状態再構成(Ancestral state reconstruction)を実施して生殖形質の進化方向を推測した。その結果、ボルボックス系列の祖先状態再構成を実施し、これら2種を含む系統ではヘテロタリックからホモタリックが進化したと推定された(Hanschen et al. Nozaki[員数6, 5番目], Evolution 72-2: 386)。従って、ヘテロタリックの祖先種のオスからMID/OTOKOGI発現調節機能を獲得してホモタリック種のV. africanusが進化したという仮説を提唱した(Yamamoto et al. 2017)。ホモタリック種Volvox africanusとヘテロタリック種V. reticuliferusは非常に近縁なので、ホモ・ヘテロタリックの進化を解明する格好の材料である。本研究ではボルボックスのホモタリック種でMID/OTOKOGIオーソログを初めて明らかにした。また、これら2種を含む系統ではヘテロタリックからホモタリックが進化したと推定された(Hanschen et al. 2017, Evolution)。従って、ヘテロタリックの祖先種のオスからホモタリック種のV. africanusが進化したという仮説を提唱した(Yamamoto et al. 2017, PLoS ONE)。抗ボルボックスOTOKOGIの特異的抗体を作製する。得られた抗体を用いたウエスタンブロット解析により、MID-OTOKOGIタンパク質の発現パターンの解析を実施する。また、2種のプロモーター領域を含んだOTOKOGIホモログをVolvox carteriのメス株にVcMIDを導入し、メスの卵に相当する細胞が精子形成するかどうか検証する。今後、Volvox reticuliferusとVolvox africanusのMID抗体の作製および抗体を用いた細胞内発現解析実施する。また、ゲノム解読データからボルボックスの雌雄同体種と異体種の進化に迫る予定である。進化生物学ボルボックスのホモタリック種のRNAseq発現解析とOTOKOGI抗体を作製する予定であったが、試料の調整に時間がかったため。28年度に雌雄同体を形成するVolvox africanusの雌雄異体種V. reticuliderusのOTOKOGI抗体を作製する予定であったが、抗体調整の条件検討に時間がかかり、計画を変更し、抗体を作製し、抗体を用いた細胞内局在解析を行わないことにしたために未使用額が生じた。ボルボックスのホモタリック種のRNAseq発現解析とOTOKOGI抗体を作製するための委託・物品費に使用する。