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近畿地方村落の民俗的特質に関する調査研究

本研究課題は、民俗学的には従来あまり重視されてこなかった近畿地方の村落について民俗調査を実施し、その特質を明らかにするとともに、日本の村落社会における近畿地方村落の積極的な意義を提出することにあった。研究費の交付をうけた3年間にほぼ以下のような成果をあげ、ほぼ所期の目的を達成した。1.滋賀県内の北部(滋賀県伊香郡余呉町下丹生)と南部(滋賀県甲賀郡水口町貴生川地区)に重点調査地域を設定して、集中的な民俗調査を実施し、その対象村落の詳細な民俗誌を作成することができた。2.その他の近畿地方のいくつかの村落においても調査を実施し、滋賀県内の村落の調査結果が近畿地方の民俗として普遍性をもつかどうかを検証し、滋賀県の個別村落の民俗を近畿地方村落の代表例として一般化することができた。3.近畿地方村落の民俗的特質は、村落を強調する社会であり、その編成原理において把握すれば「衆」村落ということになる。個別の家・屋敷は明確でなく、集村形態で集中して、村落としての一体性を強調することと、村落内部の社会組織、社会関係における家を無視して個人を組織する「衆」組織の存在は対応するものであり、近畿地方村落の社会的特質を示すものであることが明らかになった。4.同様の特質は、宮座祭祀に集中的に示されており、その祭祀に登場する供物としての食物の種類が豊富なこと、製作方法が複雑なことは、やはり他地方に見られない。この供物としての食物とそれを供える宮座儀礼は、近畿地方村落の信仰面での特質を示し、その基盤には「衆」組織の原理が存在することも明らかになった。今後、近畿地方村落を把握する基本的枠組みとして「衆」村落を広く提唱したい。もっとも近畿地方的ともいうべき滋賀県の村落について、湖北・湖南および甲賀の各地域にそれぞれ調査対象村落を設定し、集中調査を実施した。その結果として、従来から予想していた村落構成、村落運営の特質を具体的に把握し、その歴史性をも史料調査によって明らかにすることができた。その重要な点は以下のごとくである。1村落の運営組織は行政的な面においては他地方の村落と同様の役職組織となっているが、村落生活に関する局面については村落独自の組織を形成していることが多い。甲賀郡水口町の各村落ではそれが顕著に発達している。十人衆とか十五人衆と呼ばれる、年齢順に就任する長老制の組織である。2村落の構成員が年齢順に就任する組織は長老制的なものとは限らない。湖北の下丹生では諸人十二人という組織があるが、これは青年層が年齢順に12人構成員となるものである。この個人が年齢順に組織に加わるという原則がこの地方の村落組織の大きな特色であり、日常的には種々の座席においても年齢順にすわる形にも示されている。3しかし、いわゆる年齢階梯制社会のように、年齢の上の者が下の者に対し権威があり、その上下によってものごとが運営されることは少ない。むしろ、組織の名称にしばしば「衆」が付けられているように、組織の構成員が集まり合議する点に特色がある。上下の組織でなく、衆議する横の組織であることが明らかとなった。4「衆」組織は近年は祭祀儀礼に活動が限定されてきているが、かつては村落運営全般において重要な位置を占めたことが明らかになった。特に近世においては「衆」組織が村役人よりも大きな役割をになった可能性も出てきたことは重要である。昨年度に引き続き,最も近畿地方的と考えられる滋賀県の村落に重点をおいて調査を実施した.

特に本年度は湖北地方といわれる滋賀県北部の山村ともいうべき村落について集中的な調査を行った結果,山村といえどもやはり近畿地方の特質が貫徹していることが明らかとなった.それは,集落形態における集村にはじまり,村落組織における年齢秩序に基づく「衆」組織である諸人(モロト)十二人衆による祭祀,選挙と籤引を併用した長老制,村落中心の年中行事等に示されているものである.その相互連関を湖北の一村落である伊香郡余呉町下丹生において集中調査を行って把握し,分析を行った.また,滋賀県以外の近畿地方村落についても,昨年度調査で得られた資料の整理検討を進め,近畿地方村落の特質と認められる「衆」組織が一般的であり,さまざまな地域差をもちながらも,基本的な構造においては顕著な共通性があり,それは関東地方やその他の地方との明確な相違を形成しているといえる.本年度の研究において新たに努力した点は,このような近畿地方的村落の特質ははたしてどこまで広がっているかを確認することであった.近畿地方の周辺部に位置する三重県四日市市の村落および岐阜県岐阜市の村落について,その点の確認調査を行った.その結果,滋賀県や奈良県で見られた「衆」組織はこれらの村落では顕著でないが,しかし集落形態の集村,村落中心の年中行事等においては関東地方やその他の地方とは異なり,近畿地方的な特質を示していることが明らかになった.したがって,近畿地方村落の民俗的特質についても,「衆」組織を中核にする地域とそうではない地域の地域的相違に注目し,それぞれの歴史性をより限定的に考察する必要が出てきたといえる.したがって,来年度はそのような地域差に注目しての歴史性の分析を進めることになる.本年度は、3年間交付を受けた本研究課題の最終年度にあたるので、基本的には研究の総括のための作業を進めた。それはほぼ以下の通りである。1.61年度、62年度に実施した、主として滋賀県内の村落についての収集資料を整理、検討した。そして、各人はそれぞれの研究分担課題に応じて、調査結果の分析をおこなった。2.その分析過程で、それぞれの最終的な研究課題を確定し、それについて研究成果を論文としてとりまとめることにした。すなわち、福田は近畿地方村落の民俗的特質そのものについての総合的な枠組を組み立てることとし、竹本は個別村落調査で得た近畿地方村落の特質の一つと考えられる宮座とそこにおける儀礼について集中的に分析を加えることとした。3.その分析および論文の執筆過程で生じた疑問点、問題点を確認するために、過去2年間に実施した村落を対象に短期的な現地調査を実施した。特に竹本は滋賀県伊香郡余呉町下丹生について2回にわたり確認調査をおこなった。4.その結果、福田は近畿地方村落の民俗的特質を「衆」組織の存在と理解した。そして、その特質を集落形態や村落の種々の社会関係との関連で統一的に把握し、村落を強調する社会としての近畿地方村落を象徴する用語であるとした。一方、竹本は近畿地方に豊かに伝承されている宮座祭祀に注目し、そこにおける供物について各地の資料に基づき分析をおこなった。そして、食物が宮座祭祀のなかで象徴的な意味をもつことを明らかにし、これまた近畿地方村落の特質であるとした。5.以上の結果を「研究成果報告書」として取りまとめ、印刷刊行した。
時間的様相の論理と意味論

これらの考察を通じて認識されてきたことは、時間様相とは、因果様相とも真理様相とも異なる独特の様相であり、世界の部分性に由来する存在論的な様相であるということである。まず第一に、時間様相における可能性は、矛盾を許容するという点で真理様相(および因果様相)における可能性よりも弱い可能性であり、したがってルイスタイプの様相論理、時制論理、超付値論理などの、古典論理のト-トロジーを保存するような論理学によってはその論理を捉えられないという結論を得た。そこで、時間様相の論理学として最も適切なものとして、部分論理にウカシェ-ヴィチの定義による様相演算子を加えた体系Lを提示した。また、時間様相は因果様相、真理様相に比べて最も外延的な様相であるので、その論理学に対する意味論としては、時間の分岐モデルに基づく可能世界意味論や超付値による意味論などの内包的な意味論を採る必要はなく、真理表による外延的な意味論が適用できるということを主張した。
歯原性・骨原性腫瘍の分子生物学的解析とその病理鑑別診断への応用

第一に歯胚及び良性歯原性腫瘍におけるエナメル基質蛋白(Amelogenin)及び基底膜成分の局在を免疫組織化学的に検索することにより,腫瘍細胞の機能分化の程度について検討した。エナメル基質蛋白(Amelogenin),基質膜物質の免疫組織化学的検索結果から,歯胚の硬組織形成には,これらの蛋白が重要な役割を演じていることが示唆された。エナメル上皮腫は形態的にはエナメル芽細胞に類似し,エナメル上皮線維腫はさらに歯乳頭様の間葉組織を持っているが,機能的にはエナメル基質蛋白合成能を有するまでは分化していない細胞であることが示唆された。第二に免疫組織化学的手法を用いエナメル上皮腫,悪性エナメル上皮腫における増殖細胞核抗原(PCNA)の分布,2種類の癌遺伝子産物(c-myc蛋白,ras蛋白),癌抑制遺伝子産物(p53)蛋白の発現と比較検討した。エナメル上皮腫再発時における増殖能の増加が示された。悪性エナメル上皮腫のPCNA陽性率はエナメル上皮腫に比し有意に高値を示した。エナメル上皮腫において,c-myc蛋白は細胞周期に依存して細胞内局在を変化させ,さらに細胞増殖に関与することが示唆された。一方,ras蛋白は細胞増殖への直接的な関与は無く,より分化した腫瘍細胞に局在することが示された。p53エナメル上皮腫2例,PCNA陽性率で高値を示したエナメル上皮腫2例でその発現を認め,これらの症例におけるp53蛋白の異常が示唆された。以上の結果から,エナメル上皮腫,悪性エナメル上皮腫において,本検索に用いた蛋白の量的変化あるいは局在分布が腫瘍組織の分化,増殖,あるいは悪性能を反映していると考えられた。歯原性腫瘍及びラット切歯に於けるAmelogenin mRNAの出現をIn situ hybridization法を用いて観察した。Probeは,ヒトAmelogenin plexiform typeから得られたAmelogenin mRNAをDigoxinin標識した。mRNAシグナルは胞巣辺縁部の高円柱細胞を主体とし,AOTでは,多くの細胞でmRNAのシグナルが認められた。従って,Ameloblastomaは遺伝子発現まで分化していることを示し,AOTは蛋白合成まで分化していることを示している。本年度は次の二つのテーマに重点をあて研究した。1)<目的>:歯胚及び良性歯原性腫瘍におけるエナメル基質蛋白及び基底膜成分の局在を免疫組織化学的に検索することにより,腫瘍細胞の機能分化の程度のついて検討した。<結果及び考察>:エナメル基質蛋白(アメロジェニン),基底膜物質の免疫組織化学的検索結果から,歯胚の硬組織形成には,これらの蛋白が重要な役割を演じていることが示唆された。腺様歯原性腫瘍は,歯乳頭細胞の欠如にも関わらず硬組織の形成を認めた。従って,腺様歯原性腫瘍の上皮細胞は,上皮-間葉相互作用無しにエナメル基質形成能を有するまで機能分化している可能性が示唆された。しかし,間葉系組織が存在しないことから正常のエナメル質構造を示さないことが考えられた。エナメル上皮線維歯牙腫及び歯牙腫の構成細胞は,歯胚にかなり類似した程度まで分化を示していると考えられた。

エナメル上皮腫は形態的にはエナメル芽細胞に類似し,エナメル上皮線維腫は更に歯乳頭様の間葉組織を持っているが,機能的にはエナメル基質蛋白合成能を有するまでは分化していない細胞であることが示唆された。2)<目的>:今回我々はマウス下顎頭軟骨を用いて,I,II,X型コラーゲン遺伝子の発現と局在をin situ hybridization法(ISH)により観察し,成長,加齢に伴う変化を検討した。<結果と考察>:I型コラーゲンのシグナルは,1週齢では下顎頭表層から成熟細胞層と肥大細胞層の境界付近までの細胞に強く見られたが,成長に伴い表層付近では明瞭なシグナルを示す細胞はは減少した.II型コラーゲンでは,成熟細胞層に強いシグナルを認め,成長に伴いシグナルを持つ細胞は減少した。X型コラーゲンのシグナルを持つ細胞も肥大細胞層菲薄化とともに減少し,内軟骨性骨形成のほぼ終了する9週齢になるとシグナルは認められなくなった。以上のように,下顎頭軟骨では成熟に向かうに従い,各型コラーゲン遺伝子を発現する細胞の部位的,量的な変化が生じることが明らかになった。中でもX型コラーゲンの発現は,内軟骨性骨形成と密接な関連性を持つことが示唆された。本研究では免疫組織化学的手法を用いエナメル上皮腫,悪性エナメル上皮腫における増殖細胞核抗原(PCNA)の分布と陽性率を検索し,さらに,2種類の癌遺伝子産物(c-myc蛋白,ras蛋白),癌抑制遺伝子産物(p53)蛋白の発現と比較検討した。PCNA染色結果から、濾胞型エナメル上皮腫と叢状型エナメル上皮腫では,増殖能を有する細胞の分布状態が異なることが示された。また,エナメル上皮腫再発時における増殖能の増加が示された。悪性エナメル上皮腫のPCNA陽性率はエナメル上皮腫に比し有意に高値を示した。エナメル上皮腫において,c-myc蛋白は細胞周期に依存して細胞内局在を変化させ,さらに細胞増殖に関与することが示唆された。一方,ras蛋白は細胞増殖への直接的な関与は無く,より分化した腫瘍細胞に局在することが示された。p53蛋白は,悪性エナメル上皮腫2例,PCNA陽性率で高値を示したエナメル上皮腫2例でその発現を認め,これらの症例におけるp53蛋白の異常が示唆された。さらに,p53蛋白陽性を示したエナメル上皮腫のc-myc蛋白,ras蛋白染色パターンは悪性エナメル上皮腫に類似したものだった。以上の結果から,エナメル上皮腫,悪性エナメル上皮腫において,本検索に用いた蛋白の量的変化あるいは局在分布が腫瘍組織の分化,増殖,あるいは悪性能を反映していると考えられた。歯原性腫瘍及びラット切歯に於けるAmelogenin mRNAの出現をIn situ hybridization法を用いて観察した。Probeは,ヒトAmelogenin plexiform typeから得られたAmelogenin mRNAをDigoxinin標識した。mRNAシグナルは胞巣辺縁部の高円柱細胞を主体とし,AOTでは,多くの細胞でmRNAのシグナルが認められた。従って,Ameloblastomaは遺伝子発現まで分化していることを示し,AOTは蛋白合成まで分化していることを示している。
音源方向推定および音源分離機能を有するロボットの擬似聴覚機能に関する研究

本研究では,人間聴覚をモデル化した周波数領域両耳聴モデル(FDBM)を用い,ロボット聴覚機能の一部である音源方向推定機能,音源分離機能を構築した.また,同時に実環境下において変動する伝達関数を,ロボット頭部を回転させることにより擬似的に推定し,FDBM内部のデータベースを更新することによって音源分離性能の改善を試みた.この結果,FDBMのデータベースを更新することにより分離信号のSNRを改善することができた.本研究では,人間聴覚をモデル化した周波数領域両耳聴モデル(FDBM)を用い,ロボット聴覚機能の一部である音源方向推定機能,音源分離機能を構築した.また,同時に実環境下において変動する伝達関数を,ロボット頭部を回転させることにより擬似的に推定し,FDBM内部のデータベースを更新することによって音源分離性能の改善を試みた.この結果,FDBMのデータベースを更新することにより分離信号のSNRを改善することができた.本研究の目的は環境雑音の存在する実環境下におけるヒューマノイドロボットの音声認識率を向上させることである。本システムの構築においては特にリアルタイム性を重要なキーワードとし、また、さまざまな環境においても性能劣化が少ないロバストなシステムを構築することが必要となる。これを実現するにあたっては音源分離アルゴリズムである周波数領域両耳聴モデル(FDBM)のデータベースを環境ごとに更新させる必要がある。本年度は研究の初段階として、まず、ダミーヘッドから得られる両耳聴信号からFDBMを用い、音源方向をリアルタイムに検出させるシステムを構築した。また、任意方向の音源をリアルタイムに分離するシステムを構築した。分離された信号はTCP/IP通信で音声認識用PCに伝送され、実時間で特定単語認識ができるようになっている。更に、ステッピングモータを用い、ダミーヘッドを回転させる機構を構築し、音源方向を検出すると同時に、音源方向にダミーヘッドを向ける仕掛けを作成した。この機構を利用することによりFDBMの核となる音源方向データベースを逐次更新することが可能となった。この結果、実環境における音源方向推定精度の向上を確認することができた。今後、ダミーヘッドの回転軸を2軸に拡張し、仰角方向の音源方向推定精度を高めていく予定である。更に、実環境にてデータベース更新による音源分離性能の評価実験を行う予定である。本研究では、人間聴覚の両耳聴モデル(FDBM)をロボット聴覚機能の一部として用い,観測信号から特定音声信号のみを分離し,人間とのコミュニケーションで非常に重要となる音声認識精度を向上させるロボット聴覚システムを構築することである。このシステムを構築するにあたって、(1)実時間音源分離・音声認識システムの構築(2)実環境下における音源方向推定性能の改善(3)実環境下における音源分離性能の改善、に関する研究を行ってきた。(1)においては音源分離アルゴリズムであるFDBMをリアルタイム処理させ目的音声を分離抽出した後、音源信号を音声認識システムJuliusに受け渡し、特定単語を認識させるシステムを構築した。一方、(2)および(3)の研究においては、同システムを実環境下で動作させるべくシステムの大幅な改良を行った。特に、FDBMは音源方向推定および分離を行うにあたり、データベースとして頭部伝達関数から算出されるIPD、ILDを利用しているが、環境の変化によりこのIPD、ILDが変動するため、環境に応じてこれらの値を更新することを試みた。この更新にあたっては、i)ロボットの頭部回転による更新、ii)ロボットに搭載したステレオカメラを用いた更新、の手法について検討した。この結果、両者ともにデータベースの更新に利用できることが確認され、音源方向推定性能および分離性能の改善が見られた。しかし一方で残響時間や背景雑音の影響によりデータベースの更新が難しい場合もあり、結果として性能改善が低くなるケースも見られる。今後はより多くの状況下で精度よく動作するデータベース更新アルゴリズムの開発を行う。
誘発変異頻度を規定する損傷トレランス経路の時空間的制御の分子基盤の確立

放射線や環境変異原によって引き起こされる重要な生物影響の一つは変異の誘発であり、その分子機構の解明は当該研究分野の重要課題である。誘発変異の主要な原因となる損傷トレランス機構は、損傷のあるゲノムDNAの複製を、損傷を除去することなく完了する分子機構であり、二つのサブ経路「忠実度の低い損傷乗り越えDNAポリメラーゼを介したTranslesion DNA synthesis(TLS)」と「忠実度の高いDNAポリメラーゼを介したTemplate switch (TS)」が存在し、DNA複製の補助因子であるPCNAのユビキチン化によって制御される。損傷部位でのTLSまたはTSへの振り分けは、変異誘発リスクに直結し、遺伝的安定性の維持に極めて重要である。本研究では、ユビキチン化PCNAを標的とする様々な因子の機能解析を通してTLSとTSの振り分けメカニズムを明らかにすることで、変異誘発のリスクを最適化する分子機構の解明を目指している。本研究は、次の三つの課題、1)ポリユビキチン化PCNAと相互作用する新規なTS制御因子の解析、2)ポリユビキチン化PCNAの脱ユビキチン酵素の同定と機能解析、3) PCNAのポリユビキチン化の時空間的制御機構の解析、に焦点をしぼり研究を推進している。本年度はそれぞれの課題について次の通り研究を行った。1)これまでの研究から、ポリユビキチン化PCNAと相互作用する新規制御因子、ポリユビキチン化PCNA相互作用因子(polyubiqui tinated PCNA interacting factor; PPIF)を同定している(未発表)。本年度は、PPIFの機能を破壊した培養細胞株を樹立した。2) HeLa細胞の抽出液中に見出されたポリユビキチン化PCNAの脱ユビキチン酵素、USP7の特徴を明らかにした。3) PCNAのポリユビキチン化の時空間的制御機構について明らかにした。研究成果の一部を論文に纏め発表した。計画通りに研究を推進する。
クールノー科学認識論の総合的解明

本研究は、19世紀のフランスの科学哲学者クールノーの科学哲学の全貌を描き出すことを目的としたものである。そのために、ほぼ彼と同時代に生きつつ彼とは異なった科学哲学を築き上げ、実証哲学の祖となったオーギュスト・コントの科学哲学との比較を出発点に研究を行い、しかる後に、同時代の科学的知見をクールノーがいかに吸収して自らの科学哲学を構築したかを研究した。こうした手法を通じて、クールノーの科学認識論の前提となる合理主義的な世界観を素描すると同時に、特に彼の「偶然」の哲学、ならびに「偶然」を扱う確率の哲学を素描した。また「偶然」を認める彼の哲学が、独自の生命哲学、社会哲学を可能にしたこと、ならびにその形成過程における論理展開を明らかにした。本年度の研究で代表者は、クールノーの先行者であるメーヌ・ド・ビランやイデオロジストとの関係を明らかにすることに研究を集中させてきた。その中で、実証主義の一員に数え上げられるクールノーが、因果性、力などの自然科学の基礎的諸概念の発生については、メーヌ・ド・ビランと近い心理学的な立場にあることを明らかにし、この点に、実証主義とスピリチュアリスムという19世紀フランス哲学界の二大潮流を調停しようとしたクールノーの独自性があることが明らかになった。また、クールノーとほぼ同時代に科学史の領域を開き、かつ社会哲学を構想するというクールノーと類似した営みを行ったコントの哲学とクールノーのそれとの比較研究も行った。その結果明らかになったのは、コントが生物学を社会学を準備するものと位置づけ、かつ複雑さにおいては社会学を上位に位置づけたのに対し、クールノーは数学と社会学とを単純なものと位置づけ、両者の中間に位置する生物学こそが最も複雑で困難であると考えていた点である。この生物学への評価の背景には、両者の数学観の違い、特に自然諸科学や社会諸科学への数学の適用の可能性に関する両者の見解の相違が存在する。すなわち、コントはその数学観からして、数学を他の学問に適用することに禁欲的であったのに対して、プロの数学者でありかっ経済学の書物を著しているクールノーは、社会諸学への数学の適用可能性に対して楽観的であったといえるのである。もっとも、クールノー最終的には、「生命」の概念を媒介とした超合理主義(Transrationalisme)を唱えるようになる。この方向は様々に評価できるが、さしあたって、ラヴェッソン的なスピリチュアリスムとの回帰とも見える。こうした側面をクールノー哲学の全体のうちにどのように位置づけるかが今後の課題の一つとなるだろう。本年度はクールノーの確率論の研究に本格的に取り組み、彼の確率論の主要著作である『偶然と確率の理論の詳解』(1841)ならびにその後の著作における確率論の諸部分の分析に取り組んだ。この中で明らかになったことは、第二次科学革命とも呼ばれる19世紀における確率論や統計学の変貌を前にして、クールノーがいかにしてこれら諸学を認識論的・存在論的に基礎付けようとしたかの手法の問題である。彼は一方で、「偶然」を実在論的に定義し、「偶然」に客観的な存在身分を与えようとし、そのことによって「隅然」の生じる確率を、実証科学の枠内で論じようとした。またこの考察において、彼がいわゆる物理的因果性と統計的規則性との区別に成功していることは、注目に値する。このことは同時代の実証主義者であるオーギュスト・コントと著しい対照をなしている。すなわちオーギュスト・コントはその科学哲学の前提の故に確率・統計に対して否定的な態度を取り続けたのに対し、クールノーはこれら諸学の認識論の基礎付けを行っており、この点で二人の実証主義者は大きく分かれて行く。これらの成果は既に、2008年6月に出版の決定している『エピステモロジーの可能性』(慶應大学出版会)のうちに発表されることとなっている。また、クールノーの偶然論を一般向けに詳解する「クールノーの偶然論」が、2008年5月、創文社のPR誌である『創文』に掲載されることが決定している。2008年度の研究においては、特にその確率の哲学に着目しつつ、クールノーの科学認識論の全体を描き出しその成果を発表することに研究を集中した。具体的には、19世紀フランスを主たる研究対象として、当時の自然科学(特に数学、統計学、経済学)の進展と対比しつつ学問としての「哲学」が置かれていた状況を描き出し、同時にクールノーが、カントやライプニッツを吸収しつつ、当時としては極めて独特な、自然界における不確実性を許容する科学認識論を創造していた次第を明らかにした。

クールノーは、一方で当時の数理科学の成果を吸収しつつ、極端な科学主義が提示する決定論的世界像に対して、いわゆるスピリチュアリスムの人びとが行っていたように単純に心理的場面での「自由」の存在を言い立てるのではなく、物理学を中心とする自然科学的世界像の中にも「偶然」的事象が入り込む余地があることを主張し、同時にこうした事象が発生する「確率」を計算する数学的手法を編み出している。本年度の研究は、このクールノーの確率の哲学の生成過程を明らかにし、その歴史的位置付けと重要性を明確にした。また付言すれば、クールノーの緻密な偶然論はわが国の九鬼周造の思想にも影響を及ぼしている。本年度の研究においては、九鬼周造の『偶然性の問題』とクールノーのテキストの比較を行い、クールノーが九鬼に及ぼした影響を浮き彫りにすると同時に、九鬼の偶然論の独自性を明らかにし、これを成果として公表した。
HIVキャリアーにおけるヒトヘルペウスイルス感染・再燃に関する解析

本研究では、主にタイ国におけるHIVキャリアーと非キャリアーにおけるヒトヘルペス6、7、8(HHV6、HHV7、HHV8)の感染動態について解析した。このうちHHV6の感染動態で興味深い知見が得られた(J.Infect.Dis.180:50-55,1999)。1)HIV陽性の母親から生まれた症例227例について生後6カ月および12カ月におけるHHV6の累積感染率を解析したが、HIV陽性となった子供ではそれぞれ11%および33%であったのに対して、HIV陰性であった子供ではそれぞれ28%および78%であった。またHHV6感染以前のCD4数がHHV6感染と相関していた。このことはHIVの感染動態が後のHHV6の感染に影響を与えるという意味で極めて興味深い。今後、HHV6サブタイプによる影響、HHV6陽性者におけるHIV感染におけるHIV感染の状況等の詳細な解析が期待される。HHV8に関してタイ国におけるHIV陽性/陰性者で皮膚病変について,抗HHV8抗体陽性率を検討した(Arch.Virol.143:1881-1892、1998)。HHV8が潜伏感染しているprimary effusion lymphoma(PEL)細胞(BCBL1、BC3)をもちいたIFAにより調べられた。HIV感染者において痒疹性丘疹、乾癬でそれぞれやく25%に何らかの抗HHV8抗体を有することが明らかになり、皮膚病変をもたないHIV陽性患者より優位に陽性率が高いことが判明した。このことは感染経路等を考える際に有用な情報であると思われた。またタイ国におけるHHV8浸淫率を大きな母集団(5001000人)での大規模調査がHIV陰性及び陽性者について進行中である。抗HHV8抗体は特に構造遺伝子についてEBVと交差することが指摘されているが、我々の研究室で発現させているHHV8に特異的な抗原を用いたウエスタンプロット法、EUSAなどによりさらにどのような抗原を認識しているのかを追跡中である。稲城らによるHHV8のK9遺伝子産物に対する特異的なモノクローナル抗体の作製とK9遺伝子産物の解析(J.Hum.Virol.2:63-71、1999)もこういったことに有用であると思われた。HHV-8はEBウイルス(EBV)と同様、ガンマヘルペスウイルス亜科に分類され、新しい発癌因子としての可能性が示唆されている。昨年我々は、HHV-8は日本人からも検出され、カポジ肉腫以外の増殖性皮膚疾患とも関連性を示すことを報告した。今回はタイ国の免疫不全ウイルス(HIV)感染者、特に皮膚疾患を伴うHIVキャリアーに注目し、それら患者でのHHV-8の動態に関して解析を行い、HHV-8の病原性について検討を行った。[材料と方法]タイ国の皮膚疾患を伴わないHIVキャリアー27名、各種皮膚疾患を伴うHIVキャリアー60名、健常人19名より未梢血を採取し、血漿と単核球を分離した。血漿中の抗HHV-8抗体価はHHV-8感染B細胞株(BCBL-1)を用いた間接蛍光抗体法にて、単核球からはPCR法によるHHV-8DNAの検出を行った。さらにHHV-8抗体陽性血漿については免疫沈降法にて、認識するHHV-8特異抗原の同定を試みた。

またHHV-8抗体とEBV抗体の交差反応性を検討するため、EBV抗体価の測定、EBV抗原との免疫沈降法も行った。結果、皮膚疾患を伴わないHIVキャリアーや健常人からはHHV-8DNAが検出されなかったが、皮膚疾患を伴うHIVキャリアー2/60名(3.3%)からはウイルスDNAが検出された。抗HHV-8抗体は皮膚疾患を伴わないHIVキャリアーの2/27名(7.4%)、皮膚疾患を伴うHIVキャリアーの15/60名(25%)から検出され、皮膚疾患を伴うHIVキャリアー群の方が抗HHV-8抗体陽性率が高かった。一方、健常人からの抗体検出は認められなかった。さらに抗HHV-8抗体陽性/陰性血漿とHHV-8感染/非感染細胞のlysateを用いた免疫沈降法にて、HHV-8抗体陽性患者血清中には約40KDと36^38KDのHHV-8特異的蛋白を認識する抗体が存在することが示された。以上の結果から、タイ国のHIV感染者においてもHHV-8感染が認められ、HIVキャリアーにおける皮膚疾患の発症にHHV-8が何らかの関連性を示す可能性が示唆された。本年度は、昨年度までに我々が報告してきた研究成果に基づきタイ国のHIV感染者におけるヘルペスウイルス(HHV-6,-7,-8)の動態、およびそれらのウイルス学的・遺伝子学的特性の解析を主な目的とし、種々の研究を遂行するなかで、下記に示す臨床的・基礎的研究成果を得た。1) HHV-6:タイ国の先天性HIV感染小児群におけるHHV-6感染率や初感染時期を検討したところ、正常小児群あるいはHIVキャリヤー母親からの非先天性HIV感染小児群に比べ、有意にHHV-6感染率が低下していること、HIVとHHV-6の重感染はHIV発症率やその進行程度を充進させる可能性があることなどを明かにした。2) HHV-7:タイ国HIV感染者におけるHHV-7の動態、ウイルス学的特性を明らかにする目的で、まずはじめにタイ正常人におけるHHV-7のウイルス特性を遺伝子レベルで解析した。その結果、ウイルスゲノムの制限酵素切断パターンを比較検討することで分離株間の分類が可能な領域をいくつか決定した。3) HHV-8:タイ国HIV感染者におけるHHV-8感染率、HIV合併症との関連性を明らかにする目的で、血清疫学を施行した。その結果、皮膚疾患を伴うHIV感染者の抗HHV-8抗体陽性率は皮膚疾患を伴わないHIV感染者に比し高値を示すことが明らかになった(Ayuthaya.PI.et.al.,Arch.Virol.1998 143:1881-92)。これら研究成果に基づき、HIV感染者におけるヘルペスウイルスの動態、病原性を含むウイルス学的特性を詳細に検討する研究基盤の整備を遂行中である。本研究では、主にタイ国におけるHIVキャリアーと非キャリアーにおけるヒトヘルペスウイルス6,7,8(HHV-6,HHV-7,HHV-8)の感染動態について解析中である。このうちヒトヘルペスウイルス6の感染動態で興味深い知見が得られた(J.Infect.Dis.180:50-55,1999)。本研究では、HIV陽性の母親から生まれた症例227例について生後6ヶ月および12ヶ月におけるHHVー6の累積感染率を解析したが、HIV陽性となった子供ではそれぞれ11%および33%であったのに対して、HIV陰性であった子供ではそれぞれ28%および78%であった。またHHVー6感染以前のCD4数がHHV-
固相の軽金属化合物からなる水素吸蔵放出反応系における熱力学特性の解明

本研究は,軽元素からなる水素貯蔵物質の水素吸蔵・放出反応について,平衡状態付近の組成分析を行い,その熱力学的特性を解明することを目的としている。対象とする反応はLiNH_2(リチウムアミド)+LiH(水素化リチウム)〓Li_2NH(リチウムイミド)+H_2(水素)であり,この反応は,アンモニアを媒介とした二つの素反応:から構成される。本年度は素反応(1)の熱力学特性を明らかにする目的で,以下の調査を行った。水素貯蔵物質の熱力学特性を調査する方法として,水素化・脱水素化過程の圧力-組成等温線(PCT)測定が一般的に用いられている。本研究では,この手法をリチウムアミドの生成反応に適用し,リチウムイミド/リチウムアミドの二相共存状態におけるアンモニアプラトー圧の温度依存性からリチウムアミドの熱力学特性を評価した。これらのプラトー圧のvan't Hoffプロットから上記の素反応(1)の反応熱及びエントロピー変化を評価した。さらに,リチウムアミドの標準生成エンタルピー,標準エントロピーを算出した。これまでの研究で,二つの素反応について得られた反応熱及びエントロピー変化を用いてGibbs自由エネルギー変化を考慮することにより,水素フロー雰囲気下でリチウムアミドの熱処理によって生成する物質の熱力学的安定性を理解することが可能となった。本研究は,軽元素からなる水素貯蔵物質の水素吸蔵・放出反応について,平衡状態付近の組成分析を行い,その熱力学的特性,及び反応機構を解明することを目的としている。対象とする反応はLiNH_2(リチウムアミド)+LiH(水素化リチウム)【tautomer】Li_2NH(リチウムイミド)+H_2(水素)であり,この反応は,アンモニアを媒介とした素反応から構成される。本年度は以下の調査を行った。1.上記の反応による放出ガスの組成を,赤外分光法およびガスクロマトグラフィーを用いて次のように定量分析した。ボールミリング処理により作製した混合試料LiNH_2+LiH+1mol%TiCl_3を400°Cまで昇温し,その過程において放出されたガスの赤外スペクトル,クロマトグラムを測定した。それぞれのピーク強度からアンモニア,および水素分圧を定量した結果,閉鎖系において放出されたアンモニア分圧は300°C以上から増加し,水素に対するアンモニアの分圧比は,300400°Cにおいて0.1%程度と見積もられた。2.素反応(LiH+NH_3→LiNH_2+H_2)の熱力学特性を明らかにする目的で,以下の調査を行った。(1)水素化リチウムをアンモニア雰囲気下でミリング処理した結果,室温において反応が進行し,リチウムアミドが生成した。(2)リチウムアミドを水素雰囲気下(10気圧),閉鎖系において300°Cで200時間熱処理した後,気相には6kPa程度のアンモニア分圧が存在することがラマン分光法による成分分析から明らかになった。また,熱処理後の試料の粉末X線回折プロファイルからは水素化リチウムを観測できなかったため,閉鎖系においては逆反応の進行が抑制されることが明らかになった。(3)水素フロー雰囲気下(1気圧)においてリチウムアミドの熱処理を行った結果,水素化リチウム及びアンモニアが生成したため,開放系においては逆反応が進行すると考えられる。対象とする反応はLiNH_2(リチウムアミド)+LiH(水素化リチウム)⇔Li_2NH(リチウムイミド)+H_2(水素)であり,この反応は,アンモニアを媒介とした素反応から構成される。本年度は素反応(LiH+NH_3→LiNH_2+H_2)の熱力学特性を明らかにする目的で,以下の調査を行った。1.水素化リチウムをアンモニア静圧下,室温において保持した後,ガスクロマトグラフィーを用いてガスの組成分析を行った。その結果,この処理によって上記の素反応が進行し,水素が生成することが明らかになった。このとき,予備処理としてボールミリングにより試料表面を活性化した水素化リチウムを用いることや,導入するアンモニアの圧力を増加することで,反応の進行率が著しく向上した。2.閉鎖系・水素雰囲気下においてリチウムアミドに熱処理を施し,生成したアンモニアと水素の混合ガスについて組成分析を行った。アンモニアのN-H伸縮振動及び水素のH-H伸縮振動のラマンスペクトルを測定し,その強度から各ガスの分圧を定量した。混合ガス組成の温度依存性から上記の素反応の熱力学特性である反応熱及びエントロピー変化を評価した。

これらのプラトー圧のvan't Hoffプロットから上記の素反応(1)の反応熱及びエントロピー変化を評価した。さらに,リチウムアミドの標準生成エンタルピー,標準エントロピーを算出した。これまでの研究で,二つの素反応について得られた反応熱及びエントロピー変化を用いてGibbs自由エネルギー変化を考慮することにより,水素フロー雰囲気下でリチウムアミドの熱処理によって生成する物質の熱力学的安定性を理解することが可能となった。
消化管運動調節に与るカハールの介在細胞の細胞組織学的研究

本研究では、消化管各部位に見られるICCのsubtypesの微細構造と特異的分布を明らかにすることを目的として、実験用げっ歯類を材料として以下のような検索を行った。2001年度:c-KIT免疫組織化学により、ラット胃幽門部のICCは筋層間神経叢、輪走縦走両筋層内に加えて、輪走筋最内層と粘膜下結合組織層との境界部に存在することを示した。c-kitに突然変異のあるWs/Wsラットでは、両筋層内のICCは消失していたが、筋層間神経叢と輪走筋最内層部のICCは観察された。Ws/Wsラットで特定のsubtypesが残存する意義についてICCの細胞学的異型性の観点から考察した。また、微細構造上シナップスと認められる構造が、両筋層内のICC、および平滑筋細胞に認められた。このことから、ラット胃幽門部の平滑筋は輪走筋、縦走筋ともICCを介する間接支配と、神経による直接支配との平行支配を受けるものと結論された。2002年度:免疫組織学的検索によりマウス胃における領域毎のICCの分布とgap junctionの密度について明らかにした。噴門、胃底、胃体(重層扁平上皮部)の輸走縦走両筋層には多くのICCが観察されたが、筋層間神経叢には認められなかった。筋層間神経叢のICCは胃体(腺上皮部)より出現し始め、幽門部には非常に密度高く観察された。一方、gap junction蛋白Cx43は、噴門、胃底、胃体(重層扁平上皮、幽門部を通じて、輸層筋層に散在性に観察されたが、胃体(腺上皮部)のICCの少ない部位では、高い密度で観察された。これらの観察より、マウス胃では、噴門、胃底、胃体(重層扁平上皮部)、幽門部の輪走筋層の細胞間の電気的結合度は弱く、豊富なICCが神経信号の伝達に介在するものと推定された。2003年度:c-KitおよびPGP9.5免疫組織化学染色を施したモルモット小腸全載伸展標本の共焦点レーザー顕微鏡観察により、神経、平滑筋、ICCの各subtypesとの三次元的関係を明らかにし、蠕動運動の運動単位にかかわるICCについて数量的に考察した。独立した細胞型として漸く認められて来たカハールの介在細胞(ICC)ついては、現時点の課題として、臓器や組織層の相違による細胞学的、機能的多様性の検証が挙げられるが、胃に関する微細構造学的報告は少なく、中でも縦走筋内のICCについては、全く知られていない。また、一般に消化管縦走筋では神経支配が乏しく、筋-筋間のgap junctionも無いか非常に少ないと報告され、これまで、筋運動の制御機構についても、充分に説明されていない。そこで、今年度の研究では、ICCによる間接支配を念頭に、ラット胃を材料として、幽門部筋層におけるICCの分布をc-KIT免疫組織化学により観察すると共に、縦走筋内ICCの微細構造について検索した。

ラット胃幽門部の筋層では、筋層間神経叢の周辺部に最も強いc-KIT陽性反応が見られ、輪走筋内、縦走筋内にも散在性に観察された。また、輪走筋最内層と粘膜下結合組織層との境界部にも認められたことは、胃の他の部位には無い特徴として注目に値する。縦走筋内のICCは豊富なミトコンドリア、中間径フィラメント、カヴェォラを含み、同種細胞間、平滑筋とgap junctionsを形成する点で、これまで報告されてきた輪走筋内のICCと共通する特徴もつことが示された。また、シナップス小胞を多量に含む神経終末と密接して観察された。他方、神経終末は平滑筋とも直接密接する像が観察された。このことより、ラット胃幽門部の縦走筋は、ICCを介する間接支配と神経による直接支配との平行支配を受けるものと推定された。そして、これは、従来、定説とされてきた自律神経系末梢部における支配様式に新しい視点を付加するものである。消化管の広い領域に亘って分布し、蠕動運動のペースメーカーや神経から筋への刺激伝達機能をもつカハールの介在細胞(ICC)は、各部位に固有な収縮、弛緩運動に関与していることが想定され、その詳細な解析は消化管運動の包括的理解の上で必須の課題である。本年度の研究では、胃の各領域、組織層におけるICCの分布を明らかにすると共に、ICC各亜型の細胞学的特性を知るため、正常およびc-kitに突然変異のあるW/Wvマウスの胃を材料に用い、ICCの分布とgap junction蛋白(Cx43)の分布密度について、免疫組織学的に検索した。その結果、正常マウス胃の噴門、胃底、胃体(重層扁平上皮部)の良く発達した輪走(CM)および縦走(LM)筋層には多くのICCが観察されたが、筋層間神経叢には認められなかった。筋層間神経叢(AP)のICCは胃体(腺上皮部)への移行部近傍より出現し始め、幽門部には非常に密度高く観察された。一方、gap junction蛋白Cx43は、噴門、胃底、胃体(重層扁平上皮部)、幽門部を通じて、輪層筋層に散在性に弱く観察されたが、胃体(腺上皮部)のICC-CMの少ない部位では、高い密度で観察された。これらの観察より、マウス胃では、ペースメーカー機能をもつICC-APの出現する胃体(腺上皮部)が自律的蠕動運動の起始部にあたると推定された。また、噴門、胃底、胃体(重層扁平上皮部)、幽門部の輪走筋層の細胞間の電気的結合度は弱く、豊富なICCが神経信号の伝達に介在するものと推定された。他方、W/Wvマウスでは、胃の全領域を通じてICC-CM, ICC-LMは欠損する傍ら、幽門部のICC-APは少数観察された。このことは、ICCの亜型によってc-kit/SCF系に対する依存性に相違のあることを示すものであり、今後の重要な課題と考えられた。消化管運動調節機構の解析を企図した多年に渡る腸管神経系の研究成果は、各種運動ニューロン、知覚ニューロン、介在ニューロン等を含む回路図を書き上げているが、カハールの介在細胞(ICC)が消化管蠕動運動のペースメーカーおよび平滑筋への興奮伝達機能を有することが明らかとなって来た現在、これに組み込むべきICCに関する詳細なデータが必要である。本研究では、このような観点からモルモットの小腸を材料として、ICCの形態計測学的検索を行った。試料は全域伸展標本としてc-KitおよびPGP9.5免疫組織化学染色を施し、共焦点レーザー顕微鏡により観察した。体重約300g、腸管の円周(平均20mm)の動物の空腸では、ICC-APは平面上で多方向に突起を伸ばす多極性の細胞で、突起の先端間の距離はしばしば200μmを越えるが、円周に沿った長さは平均約150μmで、円周あたりの数は約130個であった。
リンパ管形成におけるＦｏｘＯ１の機能解析

リンパ管形成過程はがんの転移や炎症への関与など多くの病気の進展に深くかかわっている。本研究ではFoxO1転写因子の欠損がリンパ管形成にどのような影響を与えるかを、尾のリンパ管形成過程のマウスモデルを用いて解析を行った。内皮細胞特異的にFoxO1を欠損したところ、内皮細胞の移動および増殖異常によるリンパ管網の形成異常が認められた。その原因遺伝子として、FoxO1欠損により最も発現が低下する遺伝子であるCXCR4を新たに見いだした。これらのことからリンパ管形成過程においてFoxO1遺伝子とその下流の遺伝子が重要な寄与をしていることが明らかになった。血管形成に関与する遺伝子の多くがリンパ管形成過程のいろいろな段階で関与することが知られている。FoxO1は、血管内皮細胞で欠損させると血管形成に異常が生じることが分かっている。このことからFoxO1もリンパ管形成過程に関与する可能性が高い。そこでTie2-CreERによりFoxO1を内皮細胞から欠損させたマウスを作成し、生後3,5,7日の尻尾の皮膚において、生後に起こる真皮のリンパ管形成過程を免疫組織化学法にて検討した。最初に、リンパ管内皮細胞にFoxO1タンパクが発現しており、タモキシフェン投与により消失することをFoxO1抗体を用いた免疫組織化学法にて確認した。LYVE-1抗体を用いた免疫組織化学法により、FoxO1を欠損させると明らかなリンパ管の形態異常がみられリンパ管が拡張傾向にあることが分かった。さらに詳しく調べるためにリンパ管網の分岐点数、増殖能、リンパ管内皮細胞数、アポトーシスを検討した。分岐点数についてはFoxO1欠損で有意に減少していた。このことからFoxO1はsproutingに関与していることが示唆された。またリンパ管面積当たりのBrdU陽性細胞数はFoxO1欠損で変化がみられず、リンパ管内皮細胞の数に相当するProx1陽性細胞数はFoxO1欠損で有意に減少していた。さらに抗cleaved caspase3抗体を用いてアポトーシスを検討したところFoxO1欠損によりリンパ管面積当たりのcaspase3陽性細胞数が有意に減少していた。これらのことからFoxO1欠損によりアポトーシスの抑制がおこることでリンパ管内皮細胞の総数が増え、さらに細胞の肥大がおこることでリンパ管の拡張が起こっている可能性が示唆された。生後のマウスの尻尾の皮膚リンパ管形成過程の解析についてはほぼ計画通り進んでいる。FoxO1欠損下リンパ管内皮細胞での遺伝子変動をみるために、生後のマウスの尻尾の皮膚リンパ管内皮細胞でのin situ hybridization法を用いたmRNAの検出を試みているが、皮膚組織と実験手技などの問題があり条件を検討中である。生後の皮膚でうまくいかない場合は胎生期の皮膚でのリンパ管形成過程を中心に検討することを考えている。胎生期の皮膚のリンパ管内皮細胞ではin situ hybridization法によるmRNA検出が可能であることを確認している。フォークヘッド型転写因子ファミリーの1つであるFoxOのうち、FoxO1は血管形成に必須の役割を持つことが知られている。血管形成に関わる分子の多くは、リンパ管形成の過程にも何らかの関与をしている場合が多いため、FoxO1のリンパ管形成過程への関与を、血管・リンパ管内皮細胞に特異的に欠損するマウスを用いて生後のマウスの尻尾皮膚でのリンパ管形成過程を詳細に検討した。最初に、欠損マウスにおいて、野生型のマウスの尻尾皮膚リンパ管で認められる6角形の網目状のリンパ管網の発達が異常になることを見出した。その原因を検討するため、ヒト皮膚リンパ管内皮細胞(HDLEC)を用いて、siRNAによりFoxO1の発現を抑制したときに発現抑制される遺伝子の同定をDNAアレイを用いて試みた。この過程で、著しい発現低下を示す遺伝子としてCXCR4を同定した。in vitroではHDLECにおいてFoxO1の抑制によりCXCR4のmRNAおよび蛋白の発現の抑制が起こっていることを確認した。同時に、トランスウエルアッセイにより、この発現抑制に伴いCXCR4のligandであるCXCL12に対するHDLECの遊走が抑制されることも明らかになった。さらにin vivoにおいてFoxO1を欠損するマウスのリンパ管内皮細胞においてCXCR4の発現が低下しているか否かを特異抗体を持いた免疫組織化学法により検討し、明らかな発現抑制が起こっていることが明らかになった。FOXO1欠損マウスの尻尾皮膚リンパ管形成の異常の同定と、それにかかわる遺伝子について、少なくとも1つの候補についてはin vitroとin vivoの両方から、かなりの部分を明らかにできた。本研究ではFoxO1転写因子の欠損がリンパ管形成にどのような影響を与えるかを、生後マウスの尾の真皮におけるリンパ管形成過程をモデルとして解析を行った。これまでにTie2-CreERマウスを用いて内皮細胞特異的にFoxO1を欠損することにより、リンパ管内皮細胞の移動および増殖異常によるリンパ管網の形成異常を認めていた。しかしTie2-CreERマウスによるFoxO1欠失は血球系の細胞にも影響が及ぶ可能性がある。このことからリンパ管内皮細胞におけるFoxO1の機能が必要であることをより明確に示すため、内皮細胞に特異性の高いVE-cadherin CreERマウスを用いて同様の解析を行った。

その結果、Tie2-CreERとほぼ同様のリンパ管形成の異常が観察されたことから、内皮細胞のFoxO1が尾の真皮リンパ管網形成過程に必要であることが示唆された。またヒト皮膚リンパ管内皮細胞を用いてDNAアレイ解析を行い、FoxO1欠損により最も発現が低下する遺伝子としてCXCR4を見いだした。この細胞を用いてFoxO1の発現抑制を行うとCXCL12に対するmigrationの異常が生じ、これがCXCR4の発現低下によることを確認した。さらにFoxO1欠損マウスの尾の真皮のリンパ管網内皮細胞ではCXCR4の発現がみられないことも確認された。これらのことからFoxO1欠損によるリンパ管形成の異常の一端は、CXCR4の発現低下によりリンパ管内皮細胞の移動がうまくいかないことによるものと考えられた。これらのことからFoxO1遺伝子とその下流の遺伝子がリンパ管形成過程に重要な寄与をしていることが明らかになった。リンパ管形成過程はがんの転移や炎症への関与など多くの病気の進展に深くかかわっている。本研究ではFoxO1転写因子の欠損がリンパ管形成にどのような影響を与えるかを、尾のリンパ管形成過程のマウスモデルを用いて解析を行った。内皮細胞特異的にFoxO1を欠損したところ、内皮細胞の移動および増殖異常によるリンパ管網の形成異常が認められた。その原因遺伝子として、FoxO1欠損により最も発現が低下する遺伝子であるCXCR4を新たに見いだした。これらのことからリンパ管形成過程においてFoxO1遺伝子とその下流の遺伝子が重要な寄与をしていることが明らかになった。胎生期のリンパ管形成過程を生後皮膚真皮のリンパ管形成の解析と同様に検討する。またリンパ管内皮細胞にsiRNAを用いたFoxO1のノックダウンを行い、FoxO1の発現の低下したリンパ管内皮細胞において変化している遺伝子の同定を行う。この情報を基に、これまでに得られたFoxO1欠損によりみられたリンパ管形成の異常の原因となる遺伝子の検討を行う。in situ hybridization法によりFoxO1欠損したリンパ管内皮細胞においてmRNA発現量に変動を示す遺伝子を同定する。もしそのような遺伝子が同定されたら、in vitroに戻してFoxO1による転写調整を受ける機構を解析する。リンパ管内皮細胞以外にも影響する特異的でないCreマウスを用いていることについて、論文投稿にあたり指摘を受けている。そのため他のCreマウスを用いた解析が必要なため、VE-cadherin Creマウスの導入を行い、in vivoでの表現型を再確認する。またCXCR4のプロモーター領域にFoxO1が作用する可能性をレポーターアッセイとChIPアッセイにより明らかにすることを試みる。これらができ次第、論文投稿を行う。形態形成実験条件の検討に時間がかかっているため、リンパ管内皮細胞の遺伝子発現解析にすすめていない。次年度に行う予定の遺伝子発現解析が高額であるため、次年度に持ち越した。