hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
「食の豊かさ」概念指標と評価尺度の開発　地域特性に沿った子どもの健全育成のために

研究代表者の所属先が変更になったため、特に年度初めにおいて研究のための時間が確保できなかった。本研究は、食の側面から、子どもの健全な育成を目指して、これまで主観によってのみ語られることが多く、系統的に研究されてこなかった「食の豊かさ」ということばに着目している。食行動や摂取量だけではない多様な側面から、子ども期における「食の豊かさ」の要素について検討し、コンセンサスを得られた概念を構築し、「食の豊かさ」を評価するための尺度を開発することを本研究の目的としている。平成28年度には、食の専門家への食の豊かさに関するインタビュー、また、小学5年生の女児及び小学生の子どもを持つ保護者を対象に食の豊かさに関するフォーカスグループディスカッションを実施した。平成29年度には、小学5年生の男児を対象に、食の豊かさに関するフォーカスグループディスカッション及びアンケート調査を追加で実施した。平成30年度において、平成28年度及び29年度の結果を基に研究者間で議論し改定したアンケート調査を用いて小学校5年生にアンケート調査を実施した。また、キーワードを「食の豊かさ」とし、新聞記事を含めて文献検索を行った。本調査の協力校の選定及び調整に時間を要し、本年度までに一部の調査を終えることができなかった。このことに伴い、調査終了後のとりまとめ及び研究成果の発信を今年度終えたいと考える。平成29年度は、平成28年度に実施した専門家へのインタビューから得られたキーワードについて、質的な検討を深める。また、平成28年度にパイロット的に実施した小学生と小学生の子どもを持つ保護者を対象にしたフォーカスグループディスカッションの結果を分析し、アンケートを改良する。改良したアンケートを用いて、同一県の中で、市区の中心部と郊外に居住する各小学生と小学生の子どもを持つ母親を対象にフォーカスグループディスカッション及びアンケート調査を実施する。その後、「食の豊かさ」と心身の状態及び地域差を検討するために、国内10地域300名の小学生を対象に、開発した食に関するアンケート、SDQ(Strengths and Difficulties Questionnaire,子どもの強さと困難さについての質問紙)、Kid-KINDLR (Revised Children Quality of Life Questionnaire for 8 to 12-years-olds,適応性の測定のために開発された質問紙)及び身長と体重のデータを得る。得られたデータを分析し、情報を発信する。平成28年度及び29年度の結果を基に、アンケート項目を選定し、小学校5年生とその保護者を対象にまずは食の豊かさの項目の妥当性に関するアンケート調査を実施する。その後、アンケート項目を修正し、食の豊かさと心身に関するアンケート調査を実施、それらの関連について検討する。
痛覚伝導路とその調節機構についての形態学的研究

痛みの情報は、一次求心性線維により脊髄後角I、II層で後角ニューロンに伝達され、更に視床へ伝達される。大筋でこれは確定しているがその情報伝達の形態的基盤、即ち回路網の詳細は不明であり、脊髄レベルでの抑制系の作用部位についても不明な点が多々ある。我々は痛覚伝達の調節機構に関しニワトリ後角で研究を進めてきた。H8、9年度の研究で、以下の点が明らかになった。1.一次求心性線維より上行路の起始細胞への情報伝達回路網について。1)サブスタンスP(SP)含有終末を密に受ける上行路起始細胞は、頸膨大部のみならず、胸髄、腰膨大部にも分布し、脊髄の縦軸方向ほぼ50umに一個の割合で出現した。2)背中に皮切による慢性の痛み刺激を与え、脊髄後角I、II層のSP免疫反応性を経時的に調べると、皮切直後はSPが減少し次に逆に高くなり、次にやや低くなり、再び高くなる、という二相性の変化が起きた。2.後角における痛みの抑制機構。1)後角II層のシナプス糸球体においてグリシン含有ブトンは一次求心性線維に対しシナプスを形成していること、および一部はGABAと共存していることを二重標識法で明らかにした。2)シナプス糸球体で一次求心性線維とシナプスを形成するエンケファリン(Enk)含有ブトンは樹状突起であることをMAP2とEnkの二重標識法で示した。3)シナプス糸球体の構造を凍結割断法により観察し、中心終末のP面には前シナプス膜P面に特徴的な構造と後シナプス膜に特徴的な膜内粒子の集合部が接して存在する部位があることを示した。これは両方向性シナプスを示唆する膜内粒子の配列の初めての観察像である。3.一次求心性線維から脳幹への伝導路について。1)Ao^^>およびC線維の後角I,II層における終止を調べるために、脊髄神経節にHRPを注入し、標識の見られた無髄の軸索と細い有髄の軸索およびブトンの数例を光顕で撮影後再包埋し電顕で観察すると、シナプス糸球体の中心終末となり、その中の一例は包埋後標識法によりSPの標識を示した。2)脳定位固定装置を使用する準備実験として、脳幹部の定位置での連続切片を作製し、数種の染色を行ない、核の構成を解析中である。痛みの情報は、一次求心性線維により脊髄後角I、11層で後角ニューロンに伝達され、更に視床へ伝達される。我々は痛覚伝達の調節機構に関しニワトリ後角で研究を進めてきたが、今年度は以下の点が明らかになった。

1.一次求心性線維より上行路の起始細胞への情報伝達回路網について1)SP含有終末を密に受ける上行路起始細胞は、頚膨大部のみならず、胸髄、腰膨大部にも分布すること、脊髄の縦軸方向ほぼ50μmに一個の割合で出現することを明らかにした。2)脊髄後角1,11層のSP含有終末の慢性の痛み刺激による変化を知るために、3群(1群6羽)のニワトリで背中に皮切を与えた後、経時的にSP免疫反応性を検索した。その結果、皮切直後はSPが減少し次に逆に高くなり、次にやや低くなり、4日目頃には最も高くなりその後徐々に減少するという二相性の変化が起きることが明らかななった。後角における痛みの抑制機構1)後角11層のシナプス糸球体においてグリシン含有ブトンが一次求心性線維に対してシナプスを形成していることを免疫細胞化学的にPAP法とProtein A-金法を組み合わせて証明した。2)シナブス糸球体で一次求心性線維とシナプスを形成するエンケファリン(Enk)含有ブトン、が樹状突起である軸索であるか明らかでなかった。今回樹状突起のみに存在するMAP2とEnkの分布を比較し、シナブス糸球体のEnk含有ブトンは樹状突起であり、上行路起始細胞とシナブスを形成するEnk含有ブトンは軸索であることを示唆する結果が得られた。3.脳幹への上行路に関しては、ニワトリ脳脊髄定位固定装置を製作し、予備実験中である。我々は痛みの情報が一次求心性AδおよびC線維により脊髄後角I,II層に伝えられた後、どのような調節を受けて上行路の起始細胞に伝達されるかを形態学的に明らかにするためにニワトリ後角において研究を進めている。今年度は以下の点が明らかになった。1.抑制性介在ニューロンの回路と作用点について。1)エンケファリン(ENK)含有介在ニューロンのサブスタンスP(SP)含有一次求心性線維に対する後角内回路網における配置を知るために二重蛍光標識後共焦点レーザー顕微鏡により観察し、I層で頭尾方向に走るENK線維の一部はSPを共存することを示した。シナプス糸球体内のENK含有樹状突起は共存を示さず、このことは後角ENKニューロンに二種類あることを示す。電顕的にも、SPとENKを共存する軸索終末が1層の大型ニューロン上にaxodendritic synapseを形成することを示した。2〉シナプス糸球体の構造を凍結割断法により観察した。中心終末のP面には前シナプス膜P面に特徴的な構造と後シナプス膜に特徴的な膜内粒子の集合部が接して存在する部位があった。これは両方向性シナプスを示唆する膜内粒子の配列の初めての観察像である。3)シナプス糸球体内の神経要素の一部で、GABAとグリシンが共存していることが、電顕的に免疫細胞化学の二重標識法により示された。2.一次求心性線維から脳幹への伝導路について。1)AδおよびC線維の後角I,II層における終止の詳細を調べるために、脊髄神経節にHRPを注入した。標識の見られた無髄の軸索と細い有髄の軸索およびブトンの数例を光顕で撮影後再び包埋して電顕で観察すると、シナプス糸球体の中心終末となっていた。またその中の一例に包埋後標識法によりSPの標識を示す例が得られた。2)脳定位固定装置を使用する準備実験として、脳幹部の定位置での連続切片を作製し、数種の染色を行ない、核の構成を解析中である。
イディオタイプ・ネットワ-クを応用した免疫療法の基礎

腫瘍免疫における抗イディオタイプ(Id)抗体の応用に関し基礎的検討を行なった。抗Id抗体を利用し血中腫瘍関連抗原(TAA),あるいは抗TAA抗体の測定法の開発(J.Clin.Lab.Analysis 5:14,1991)あるいは,抗原ー抗体反応におけるconformational structureの解析などに成果を得た。一方,抗Id抗体をantigen specific immunomodulatorとして用いたactive immunotheropyは新しい癌免疫療法の可能性をもっている。そこで多数確立した抗Idモノクロ-ナル抗体(MoAb)を利用し,イディオタイプ・マッピング,抗Id抗体の誘導する免疫応答を検討した。その結果,腫瘍関連抗原系においてもイディオタイプネットワ-クが存在することを癌胎児性抗原(CEA)系を用いて報告した(Cancer Res.51:2599,1991)。CEA上のペプチドをエピト-プとするMoAb(Ab1)を用いて作製した抗Id MoAb(Ab2)のなかに血清学的に抗原の内部イメ-ジ(internal image)を有するものが存在していた。すなわちinternal image保有抗Id MoAb M7ー625(Ab2)はAb2特異的抗・抗Id抗体(Ab3)を誘導し,このAb3は(1)抗原CEAと反応(binding assay,Western blot analysis),(2)Ab1と抗原CEAとの反応に競合(Ab1 like Ab3),また(3)Ab2がCEAと類似の挙動をとるなどの成績を得た。さらに,この抗Id MoAb M7ー625の可変部領域をクロ-ニングするとheavy chain variableregion(V_H)complementarydetermining region(CDR)2およびlight chain(V_L)・CDR3に抗原CEAと高いアミノ酸ホモロジ-を有することを示唆する成績を得た。internal imageを有する抗Id MoAbはin vivoにおける移植腫瘍細胞に対し,DTH反応を主体とした抗腫瘍効果,ワクチン効果を示した。さらにnu/nuマウスにおいて抗Id MoAbを投与した群のみ,CEA保有細胞のチャレンジに対し抗原に反応する抗体産生を認めた。以上の結果から抗Id抗体を用いることによりidiotypenetwork systemに抗原特異的免疫賦活が可能であり,新しい癌免疫療法(active immunotherapy)の一つとして期待される。
移植腎長期生着のための病理組識学的検討-調節性T細胞との比較において

本研究では長期生着した移植腎(とくに20年以上)に対し生検を行い、種々の分子の発現を免疫組織化学、In situ hybridization等の手法を用いて解析し、同時に末梢リンパ球におけるregulatoryT細胞の比率と比較することにより、長期生着の組織学的および免疫学的特性を見出すとともに、得られた結果から長期生着の手段を検討しようとする計画であった。しかし研究を進めるにつれ、移植腎に障害を与える大きな要因として、シクロスポリン、プログラフといった投与されている免疫抑制剤カルシニューリンインヒビター(CNI)の影響が大きな問題となることがわかってきた。現時点で研究の対象を20年以上生着症例に限定するとCNI使用以前の症例となってしまい、この大きな要因が除外されてしまうこととなる。そこで当初の計画より対象を若干修正し、移植後10年後を中心としたCNI継続投与症例とし、16例(平均生着期間10年、7-14年)の腎移植症例に対し移植腎生検を行い、HE, PAS, PAM, MTC染色により検討を行った。その結果、生検の組織像は、いずれも種々の程度の糸球体の硬化閉塞、細動脈壁の肥厚、間質の繊維化、尿細管密度の低下を認めた。原疾患の再発を疑われるものもあったが、糖尿病性の変化は比較的軽度であった。CNIによる変化としては細動脈中膜の肥厚など慢性血管毒性が目立った。CNI長期投与による腎毒性回避のため、導入期の抗体製剤の投与や他の新たな併用薬使用による、CNIの減量・中止が必要であると考えられた。本研究では長期生着した移植腎(とくに20年以上)に対し生検を行い、種々の分子の発現を免疫組織化学、In situ hybridization等の手法を用いて解析し、同時に末梢リンパ球におけるregulatoryT細胞の比率と比較することにより、長期生着の組織学的および免疫学的特性を見出すとともに、得られた結果をから長期生着の手段を検討しようとする計画であった。そこで当初の計画より対象を若干修正し、移植後10年後を中心としたCNI継続投与症例とし、今までに7例(平均生着期間10年、7-14年)の腎移植症例に対し移植腎生検を行い、HE, PAS, PAM, MTC染色により検討を行った。その結果細動脈壁の肥厚や間質の繊維化といったCNI投与によると思われる種々の程度の組織障害のあることがわかってきた。今後はさらに症例数を増やし(目標30例)移植腎生検を行い、免疫組織化学、In situ hybridization、末梢リンパ球におけるregulatoryT細胞の比率との比較も含め解析を進めていく予定である。

そこで当初の計画より対象を若干修正し、移植後10年後を中心としたCNI継続投与症例とし、16例(平均生着期間10年、7-14年)の腎移植症例に対し移植腎生検を行い、HE,PAS,PAM,MTC染色により検討を行った。その結果、生検の組織像は、いずれも種々の程度の糸球体の硬化閉塞、細動脈壁の肥厚、間質の繊維化、尿細管密度の低下を認めた。原疾患の再発を疑われるものもあったが、糖尿病性の変化は比較的軽度であった。CNIによる変化としては細動脈中膜の肥厚など慢性血管毒性が目立った。CNI長期投与による腎毒性回避のため、導入期の抗体製剤の投与や他の新たな併用薬使用による、CNIの減量・中止が必要であると考えられた。
歯冠修復物の電気的辺縁漏洩診断法の開発-立体的辺縁漏洩解析による臨床応用への展開

本研究は,我々が考案した電気的辺縁漏洩診断法の信頼性を検討し,口腔内における辺縁漏洩の客観的な臨床診断法を確立することを目的として,実際の辺縁漏洩の状態を3次元的にとらえた立体的辺縁漏洩解析法を確立し,電気的辺縁漏洩診断法による評価結果と比較検討したものである.まず,立体的辺縁漏洩解析法の手法を確立した.具体的には,ヒト抜去大臼歯の歯頚部に円形窩洞を形成し,コンポジットレジンを充填した.そして,歯質を100μmごとに削除し,窩洞断面を露出させた後,高倍率実体顕微鏡による窩洞各断面の画像採得とその画像による窩壁の間隙発生部分の立体画像構築を行った.その結果,間隙は歯根側窩洞辺縁部および窩底部に多く認められることがわかり,画像採得条件やデータ処理方法の検討を含め,立体的辺縁漏洩評価法が確立できた.つづいて,電気的辺縁漏洩診断法による評価結果と立体的辺縁漏洩解析法による実際の辺縁漏洩量の関係をin vitro実験系で解析した.すなわち,ヒト抜去大臼歯の歯冠部に円形窩洞の形成を行い,コンポジットレジン充填を施した.その後,窩洞形成前,充填物研磨後,10000回まで400gの荷重負荷後に,修復物辺縁部のコンダクタンス変動量の測定を行った.さらに,試料の色素浸透と窩洞面の削除,窩洞断面の画像採得,立体画像構築を行って,実際の辺縁漏洩量を求めた.その結果,電気的辺縁漏洩診断法による辺縁漏洩の評価結果と実際の辺縁漏洩量は相関していることがわかった.ついでビーグル犬での電気的な辺縁漏洩の評価結果と辺縁漏洩量の関係の検索を行ったが,現有備品ではコンダクタンス測定時の負荷電圧が小さく,ノイズが多数発生することから,in vivo実験系への応用は今後の課題として残った.しかし,本研究により,立体的辺縁漏洩解析法の確立と修復物の辺縁漏洩の評価に対する電気的辺縁漏洩診断法の有用性が実証された.本研究は,我々が考案した電気的辺縁漏洩診断法の信頼性を検討し,口腔内における辺縁漏洩の客観的な臨床診断法を確立することを目的として,実際の辺縁漏洩の状態を3次元的にとらえた立体的辺縁漏洩解析法を確立し,電気的辺縁漏洩診断法による評価結果と比較検討したものである.まず,立体的辺縁漏洩解析法の手法を確立した.具体的には,ヒト抜去大臼歯の歯頚部に円形窩洞を形成し,コンポジットレジンを充填した.そして,歯質を100μmごとに削除し,窩洞断面を露出させた後,高倍率実体顕微鏡による窩洞各断面の画像採得とその画像による窩壁の間隙発生部分の立体画像構築を行った.その結果,間隙は歯根側窩洞辺縁部および窩底部に多く認められることがわかり,画像採得条件やデータ処理方法の検討を含め,立体的辺縁漏洩評価法が確立できた.つづいて,電気的辺縁漏洩診断法による評価結果と立体的辺縁漏洩解析法による実際の辺縁漏洩量の関係をin vitro実験系で解析した.すなわち,ヒト抜去大臼歯の歯冠部に円形窩洞の形成を行い,コンポジットレジン充填を施した.その後,窩洞形成前,充填物研磨後,10000回まで400gの荷重負荷後に,修復物辺縁部のコンダクタンス変動量の測定を行った.さらに,試料の色素浸透と窩洞面の削除,窩洞断面の画像採得,立体画像構築を行って,実際の辺縁漏洩量を求めた.その結果,電気的辺縁漏洩診断法による辺縁漏洩の評価結果と実際の辺縁漏洩量は相関していることがわかった.ついでビーグル犬での電気的な辺縁漏洩の評価結果と辺縁漏洩量の関係の検索を行ったが,現有備品ではコンダクタンス測定時の負荷電圧が小さく,ノイズが多数発生することから,in vivo実験系への応用は今後の課題として残った.しかし,本研究により,立体的辺縁漏洩解析法の確立と修復物の辺縁漏洩の評価に対する電気的辺縁漏洩診断法の有用性が実証された.われわれは,従来から口腔内における辺縁漏洩の客観的な臨床診断法を確立するため,浸透探傷法の応用による新たな電気的辺縁漏洩診断法を考案し,基礎的研究を進めてきた.本研究は,色素浸透後の微小な辺縁漏洩の状態を連続的にとらえた立体的辺縁漏洩解析法を確立し,in vitroとin vivoにおける実験系で電気的辺縁漏洩診断法による評価結果と比較検討して,口腔内の修復物に対する本診断法の実用化を目指すものである.本年度は,間隙の発生部分を立体的に表す辺縁漏洩評価法の確立をめざして,高倍率実体顕微鏡とコンピュータ解析による間隙発生部分の立体画像構築と間隙量の評価を試みた.すなわち,健全ヒト抜去大臼歯の頬側または舌側の歯頚部に円形窩洞を形成し,象牙質接着システムによる歯面処理後,コンポジットレジンを充填した.そして,歯冠部から歯の長軸と垂直に歯質を削除し,100μmごとに窩洞断面を露出させた.その後,高倍率実体顕微鏡にて窩壁における間隙の有無を観察し,窩洞の各断面の画像を採得した.

その画像を用いて間隙発生部分の立体画像構築を行った結果,間隙は歯根側窩洞辺縁部および窩底部に多く認められ,窩洞表面積に対する間隙発生部の割合はClearfil Liner Bond IIΣ(クラレ)で41.7±6.3%,Single Bond (3M)で38.2±3.9%であることがわかった.これまでの研究で,画像採得条件やデータ処理方法の検討を含め,立体的辺縁漏洩評価法が確立できた.現在,この立体的辺縁漏洩評価法によって,電気的辺縁漏洩診断法による辺縁漏洩の評価結果と実際の辺縁漏洩量の関係をin vitro実験系で解析している.本研究は,口腔内における辺縁漏洩の客観的な臨床診断法を確立することを目的として,色素浸透後の微小な辺縁漏洩の状態を連続的にとらえた立体的辺縁漏洩解析法を確立し,われわれが考案した電気的辺縁漏洩診断法による評価結果と比較検討して,口腔内の修復物に対する本診断法の実用化を目指すものである.研究期間の最終年度になる本年度は,電気的辺縁漏洩診断法による辺縁漏洩の評価結果と,昨年度に基礎的実験を行ってin vitro実験系で確立した立体的辺縁漏洩解析法による実際の辺縁漏洩量の関係を,in vitro実験系で解析した.すなわち,ヒト抜去大臼歯の頬側または舌側の歯冠部に,規格窩洞形成器で円形窩洞の形成を行い,通法にしたがってコンポジットレジン充填を施した.その後,電気的に辺縁漏洩の状態を評価するため,窩洞形成前,コンポジットレジン填塞物の研磨後,10000回まで400gの荷重負荷後に,修復物辺縁部のコンダクタンス変動量の測定をそれぞれ行った.さらに,試料を色素浸透に供し,100μmごとに露出させた窩洞断面の画像から立体画像構築を行って,実際の辺縁漏洩量を求めた.その結果,電気的辺縁漏洩診断法による辺縁漏洩の評価結果と実際の辺縁漏洩量は相関していることがわかった.引き続いてビーグル犬での電気的な辺縁漏洩の評価結果と辺縁漏洩量の関係の検索を行ったが,現有備品ではコンダクタンス測定時の負荷電圧が小さく,ノイズが多数発生することから,in vivo実験系への応用は今後の課題として残った.しかし,本研究により,立体的辺縁漏洩解析法の確立と,修復物の辺縁漏洩の評価に対する電気的辺縁漏洩診断法の有用性が実証され,臨床応用には電圧および周波数の最適化が重要であることが判明した.
巨大ひずみによる結晶粒超微細化に関する転位-結晶塑性シミュレーション

セル構造およびサブグレインの自己組織化を表現する反応一拡散方程式を導出し,転位の反応速度係数および拡散係数を各すべり系の活動状況を考慮してモデル化した.また,反応一拡散モデルの簡素化を図り,応力の増加に伴って拡散係数のみを変化させることにより転位パターニングを表現した.さらに,転位密度の基準値を幾何学的に必要な(GN)結晶欠陥密度から推定することによって,変形場と転位場を連成させたマルチスケール結晶塑性モデルを構築した.本モデルを用いて,結晶の変形に対するFEM解析および転位組織形成に対するFDM解析を行い,すべり系の活動状況に対応した転位パターンを再現した.さらに,巨大圧縮ひずみを付与したFCC多結晶平板を想定し, FCC結晶の12すべり系を考慮した擬似3次元結晶塑性解析を行った.その結果,サブグレイン壁に沿った小傾角粒界が大角化してマイクロバンドが発現し,マイクロバンドで囲まれたサブグレイン群がラメラ状サブディビジョンへ発展する過程を再現した.以上の数値解析に基づいて,巨大ひずみによって誘起される超微細粒の創製メカニズムの初期プロセスについて考察した.一方,微細粒金属の特異な力学特性を表現するために,転位の微視構造,結晶粒構造および巨視構造という3階層を橋渡しするトリプルスケール転位-結晶塑性モデルを構築した.その際,低転位密度の微細粒では塑性変形の素因となる転位の枯渇から流れ応力が変形の初期において-時的に増加することを表現できる新たな臨界分解せん断応カモデルを提案した.また,全転位密度の定義には, GN転位密度およびGN不適合度を採用した.以上のモデルを用いて,初期粒径および初期転位密度の異なるFCC多結晶に対してFEM解析を実施し,超微細粒金属における寸法効果ならびにFCC微細粒焼鈍材に発現する降伏点降下現象およびLuders帯の伝ぱを再現した.セル構造およびサプグレインの自己組織化を表現する反応-拡散方程式を非平衡放系の熱力学的体系に則する形で導出し,転位対の消滅率および不動転位の蓄積率の増減を考慮した転位の反応速度係数ならびに転位の拡散係数を各すべり系の活動状況およびすべり系間の相互作用を考慮してモデル化した.また,転位の回復率を考慮した結晶の硬化係数に,反応一拡散方程式から得られる不動転位密度のみならず,幾何学的に必要な(GN)結晶欠陥の情報をも反映させたマルチスケール結晶塑性モデルを構築した.さらに,本モデルを用いて,結晶の変形に対するFEM解析および転位組織形成に対するFDM解析を行い,両解析を連成させることにより,すべり系の活動状況に対応した転位パターンを再現した.さらに,巨大圧縮ひずみを付与したFCC多結晶平板を想定し,FCC結晶の12すべり系を考慮した擬似3次元結晶塑性解析を行った.粒内における結晶方位の変化およびGN転位の蓄積状況を可視化し,高転位密度状態のサブグレイン壁に沿った小傾角粒界が大角化してマイクロバンドが発現し,さらにマイクロバンドで仕切られたサブグレイン群がラメラ状のサブディビジョン組織へ発展する過程を再現した.上記の数値解析の結果に基づき,巨大圧縮ひずみによって誘起される超微細粒の創製メカニズムの初期プロセスについて考察し,強圧縮段階において,多数のすべり系が同時にかつ活発に活動することで超微細粒の形成が促進されるといった知見を得た.セル構造およびサブグレインの自己組織化を表現する反応一拡散方程式を導出し,転位の反応速度係数および拡散係数を各すべり系の活動状況を考慮してモデル化した.また,反応一拡散モデルの簡素化を図り,応力の増加に伴って拡散係数のみを変化させることにより転位パターニングを表現した.さらに,転位密度の基準値を幾何学的に必要な(GN)結晶欠陥密度から推定することによって,変形場と転位場を連成させたマルチスケール結晶塑性モデルを構築した.本モデルを用いて,結晶の変形に対するFEM解析および転位組織形成に対するFDM解析を行い,すべり系の活動状況に対応した転位パターンを再現した.さらに,巨大圧縮ひずみを付与したFCC多結晶平板を想定し, FCC結晶の12すべり系を考慮した擬似3次元結晶塑性解析を行った.その結果,サブグレイン壁に沿った小傾角粒界が大角化してマイクロバンドが発現し,マイクロバンドで囲まれたサブグレイン群がラメラ状サブディビジョンへ発展する過程を再現した.以上の数値解析に基づいて,巨大ひずみによって誘起される超微細粒の創製メカニズムの初期プロセスについて考察した.一方,微細粒金属の特異な力学特性を表現するために,転位の微視構造,結晶粒構造および巨視構造という3階層を橋渡しするトリプルスケール転位-結晶塑性モデルを構築した.その際,低転位密度の微細粒では塑性変形の素因となる転位の枯渇から流れ応力が変形の初期において-時的に増加することを表現できる新たな臨界分解せん断応カモデルを提案した.また,全転位密度の定義には, GN転位密度およびGN不適合度を採用した.以上のモデルを用いて,初期粒径および初期転位密度の異なるFCC多結晶に対してFEM解析を実施し,超微細粒金属における寸法効果ならびにFCC微細粒焼鈍材に発現する降伏点降下現象およびLuders帯の伝ぱを再現した.
細菌由来シグナル分子AI-2が原生生物の代謝及び病原性に与える影響の解明

細菌はシグナル分子AI-2を介して周囲の細菌と情報交換を行なっている。本研究室では以前、原生生物と細菌を共培養するとAI-2濃度が上昇する現象を発見し、微生物間相互作用においてAI-2量の変動が起こることを明らかにした。一方、AI-2が原生生物に対してどのような影響を与えるかは知られていない。本研究ではAI-2添加下でアメーバおよび繊毛虫を培養し、非添加下と性状を比較した。その結果、固体(寒天培地)上ではアメーバの運動速度が上昇することが明らかとなり、アメーバはAI-2濃度を感知して自身の運動性を上昇させることが示された。細菌由来のクオラムセンシング物質AI-2が原生動物に対してどのような影響を与えるかを検証するため、AI-2存在下における原生動物の表現型試験を実施した。試薬であるAI-2(OMM Scientific, USA)は当初予定通り入手することができ、実験に供した。原生生物のアメーバ(Acanthamoeba castellani strain)および繊毛虫(Tetrahymena thermophila)はいずれもPYG培地にて培養して用いている。アメーバは当初予定していたC3アメーバに加え、本研究室が保有する土壌由来アメーバ(S13WT、共生細菌を保有)およびその誘導株(S13RFP、共生細菌を除菌;S13HS-T3、別種の共生細菌を再感染)の4種にて比較している。既報(Bansal et al., Appl Microbiol Biotechnol 2008)に基づき、AI-2濃度は0.001mM, 0.01mM, 0.1mMの3段階(および陰性対称)に設定した。アメーバ、繊毛虫ともに、増殖速度(12時間ごとの細胞数カウント)や運動性(顕微鏡下での観察)においては、濃度変化に伴う有意な変化は認められなかった。アメーバにおけるシスト化誘導実験においても有意な変化はみられなかった。FITCラテックスビーズを用いた貪食・取り込み能比較においては、一部で変化が認められたため、現在三重測定を行なって有意な差かどうかを検証中である。現時点においては、クオラムセンシング物質AI-2が原生動物に与える影響を明らかにできていない。今後、タンパク発現実験や細胞障害性試験を行なうことで、他の側面から影響の解明を試みる。共同研究者として参加している基盤研究(A)「熱帯アフリカにおける畜産由来薬剤耐性菌発生の実態把握と対策の提案(16H0276716)」において、当初は1回のみの海外渡航を計画していたが、計画変更により2回の渡航が必要となった。渡航に伴う準備および海外滞在、並びに帰国後の検体処理による作業時間不足のため、研究実施計画に含めていたタンパク発現試験に着手できていない。また、表現型試験の三重測定も一部作業中である。原生生物と細菌の共培養により、細菌の情報伝達物質AI-2の培養液中濃度が上昇することが既報で知られている。本研究では、AI-2が原生生物に与える影響を検証するため、AI-2曝露下(0uM[control], 1uM, 10uM, 100uM)で培養した原生生物(アメーバおよび繊毛虫)の性状を観察し、非曝露下の性状と比較した。増殖速度の比較では、72時間まで有意な違いはみられなかった。FITC標識ビーズを用いた貪食試験では、アメーバとAI-2の組み合わせにおいて、曝露後30分まではAI-2 100uM添加時にcontrolと比べて貪食能が高かったが、その後は差がみられなかった。繊毛虫では貪食能に差はなかった。アメーバの病原性変化を調べるためにアメーバと培養細胞の共培養も実施したが、AI-2の添加によって細胞障害性に差はみられなかった。このように、液体中ではAI-2曝露による差を検出することができなかったため、固体上での性状観察に焦点を移し、アメーバを寒天培地上にスポットした際の性状を検証した。AI-2存在下で前培養したアメーバを寒天培地にスポットし、タイムラプス撮影でアメーバの移動速度を観察した結果、AI-2の濃度依存的に運動性が上昇した。このことから、細菌由来のAI-2を感知したアメーバは活発に動き、餌となる細菌を求めて移動すると考察された。さらに、既製品と細菌由来のAI-2を比較するため、GFP発現大腸菌とアメーバを混合してから寒天培地にスポットしたところ、アメーバの移動経路に沿って大腸菌が発育し、培地上に花が開くようなパターンが描出された。SEM撮影により、アメーバ表面に細菌が付着している様子が観察された。以上より、原生生物と細菌の相互作用を解明するためには、既報にある液体中での比較よりも、原生生物の本来の生息環境に近い固体上での検討が重要であることが考えられた。

表現型試験は5月までに終了し、6月中にタンパク発現試験を行なう。以降は申請書に基づき、転写レベルでの確認、ノックダウン系の作出、細胞障害性への影響を検討する。今年度も9月および2月に研究に伴う海外渡航が予想されるため、年度前半におおむね作業が終えられるよう実験予定を組むことを考えている。細菌学研究計画の遅れにより、タンパク解析実験を実施できなかった。そのため、実験にかかわる試薬および外注代が発生しておらず、使用額に残金が生じた。実施できていないタンパク解析実験を行なうため、持ち越した次年度使用額を支出予定である。
男性の尿路・性器・肛門悪性腫瘍とヒトパピローマウイルスとの関連性についての検討

研究目的:近年、ヒトパピローマウイルス(HPV)が誘因となる子宮頚癌以外の腫瘍とHPVとの関連性について、世界的に注目されている。HPV感染が関連するとされる肛門癌組織を用いたHPV感染率の検討や分子細胞学的検討は多数行われるようになった一方、男性における肛門HPV感染に関する疫学調査は未だ少なく、本邦においてはほとんど行われていない。陰茎癌に対しても同様である。前立腺に関しては、今まで前立腺組織を用いたHPV感染の検討はほとんど行われておらず、癌および良性疾患での感染率の比較を行うことは意義あるものと考えられる。研究方法: 1.男性陰茎癌患者について陰茎癌組織におけるHPV感染の有無を調査する。2.男性前立腺疾患患者について前立腺組織におけるHPV感染の有無を調査する。3.男性間性交渉者(Men who have sex with men ; MSM)患者から採取した肛門擦過検体・尿検体を用いて、HPV感染の有無を調査する。さらに、肛門HPV感染と性活動、患者背景(その他の性感染症、ヒト免疫不全ウイルス(HIV)感染、HIVウイルスコピー数、CD4陽性細胞数、尿路HPV感染など)の関連性について検討する。研究成果: 1.各協力施設より、陰茎癌組織検体を収集するに至った。2.前立腺組織を用いて免疫組織染色によるHPV感染の有無を調査する方法については確立したものの、個別の検体に関する検討については実施するには至らなかった。3. MSM135例での検討において肛門HPV感染率は83.2%と非常に高く、特にhigh risk HPV感染が高率にみられ、HPV16型感染が最多であった。尿路HPV感染も尿道炎既往に比して35.2%と高率にみられた。最終受動肛門性交6ヶ月以内が肛門へのhigh risk HPV感染の独立した危険因子であった。
イタリアにおける共和制都市国家の美術に関する包括的研究

本研究では、イタリア各地に都市国家が誕生して互いに競合しながら繁栄した1315世紀に、共和制都市国家が聖俗の建築内に注文した美術作品において、都市政府の政治理念や立場がいかに表象されたかを解明することを試みた。特に、各時代における共和制都市政府と司教の力関係の変化に注目しながら、都市が聖遺物を有する守護聖人の図像の確立と変遷を中心に明らかにした。平成21年度は、共和制都市国家の守護聖人とその崇敬に関する基本文献を読み進め、フィレンツェ大聖堂で11世紀頃から崇敬が盛んになった司教聖ゼノビウスの崇敬と、それに関わる美術作品(ビガッロの画家の《聖ゼノビウス祭壇前面飾り》、ギベルティの《聖ゼノビウスの櫃》ほか)に関する調査を主に進めた。聖ゼノビウスは数少ないフィレンツェ出身の聖人であり、同聖人の後継者たる歴代のフィレンツェ司教が最も効果的と思われる時機を狙って移葬を繰り返すことで関心を集めていた。だが、聖人がギベッリーニの立場をとる家柄の出身だと信じられていたことから、グエルフィ党による都市政府は聖ゼノビウスを都市の第一の守護聖人に掲げなかったことが明らかになった。また、フィレンツェでは、都市政府内で勢力をふるった毛織物組合と毛織物商組合が、大聖堂と洗礼堂の造営と管理に加えて聖遺物の獲得にも積極的に関与したという点に着目し、フィレンツェ大聖堂における聖遺物収集と聖人崇敬における司教および都市政府の関与の実態を明らかにした。聖遺物収集と聖人崇敬の管理に都市の俗人が積極的に関与するという現象は、共和制の都市国家に顕著に見られ、都市国家の形成期に聖遺物と聖人崇敬が果たした役割を解明する上で重要な手掛かりとなる。都市の守護聖人を表した美術作品を分析することにより、都市政府の政治理念や立場を示すメッセージを読み取り、従来は看過されてきた無名あるいは逸名の美術家の作品を美術史研究の対象として取り込むというという点に、本研究の意義がある。平成22年度は平成21年度に引き続き、共和制都市国家の守護聖人とその崇敬に関する基本文献を読み進め、さらにフィレンツェ大聖堂で崇敬された聖人および11世紀頃から崇敬が盛んになった聖ゼノビウスについての文献調査を主に行った。聖ゼノビウスは初期キリスト教時代にフィレンツェ教会を創設した重要な聖人であり、都市の守護聖人として崇敬された。だが、ギベッリーニの貴族の出自かつ司教だったというその属性から、1315世紀には、ギベッリーニの追放を望むコムーネ政府、ゼノビウスの子孫と伝えられるギベッリーニ派のジローラミ家、教会の特権の衰退を阻止しようとするフィレンツェ教会の各々の利害関係の中で崇敬が発展する。こうした繊細な利害関係の中で注文された聖ゼノビウスにまつわる美術作品は、当然のことながら注文者の立場を明瞭に反映したものであった。フィレンツェのシンボルである百合を手にした姿で表現されたり、聖アンブロシウスとの関係が強調されたりと、注文者の立場の違いが図像の違いとして現れていることが明らかとなった。聖遺物収集と聖人崇敬の管理に俗人が積極的に関与するという現象は、共和制の都市国家に顕著に見られ、都市貴族と教会側からコムーネ政府へと権力が移行していく経緯と並行して生じている。よって、都市の守護聖人を表した美術作品を分析することにより、教会やコムーネ政府の政治理念や立場を示すメッセージを読み取り、従来は看過されてきた無名の美術家の作品を美術史研究の対象として取り込むという点に、本研究の独創性と意義がある。平成23年度は、共和制都市国家の守護聖人とその崇敬に関する基本文献をさらに読み進め、フィレンツェで崇敬された聖ゼノビウスについての調査を1215世紀の共和制政府と司教と都市貴族の関係を中心に実施した。同聖人は、初期キリスト教時代にフィレンツェ教会を創設した司教である。フィレンツェに聖遺物が遺る聖人という点では、同地の最初の殉教者である聖ミニアトゥスもいたが、同聖人の崇敬は歴史的に神聖ローマ皇帝との関係が深かったことから、共和制都市国家時代のフィレンツェでは大聖堂に聖遺物の遺る聖ゼノビウスが重視された。聖ゼノビウスは同都市の出身だったと伝えられ、子供の蘇生の奇蹟を起こしたとされる場所や移葬の最中に奇蹟が起きた場所など、市内に多くの痕跡を残していた。遅くとも13世紀末までには、ローマで叙任された新しいフィレンツェ司教がこうした痕跡のいくつかを訪ねるという入市式の儀式が整えられ、ゼノビウスは理想の司教のモデルとされていく。だが、その入市式の中で新しい司教が最初のミサを行なったのは、サン・ジョヴァンニ洗礼堂の、共和制政府を構成する中産階級の人々の守護聖人である洗礼者ヨハネの祭壇おいてであった。共和制都市国家時代のフィレンツェでは、このように各時代の政治情勢および司教と政府の関係性により、司教聖ゼノビウスに期待される役割は変化し続けた。聖遺物と聖人崇敬の管理と促進に俗人が積極的に関与するという現象は、共和制都市国家に顕著に見られ、都市貴族と教会側から都市政府へと権力が移行していく経緯と並行して生じている。

そのため、都市の守護聖人を表わした美術作品を分析することにより、教会や都市政府の政治理念や主張を示す含意を読み取り、従来は看過されてきた無名の美術家の作品を美術史研究の対象として取り込むという点に、本研究の独創性と意義がある。平成24年度は、共和制都市国家の守護聖人とその崇敬に関する基本文献をさらに読み進め、フィレンツェで崇敬された聖ゼノビウスを表象した1415世紀の美術作品を調査し、1215世紀のフィレンツェ共和制政府と司教の関係に留意しながら分析を進めた。聖ゼノビウスは初期キリスト教時代にフィレンツェ教会を創設した司教で、同都市の守護聖人として篤く信仰された。一般に、司教聖人を造形化する際には司教冠、大外衣、司教杖を持つ姿で表わされるが、聖ゼノビウスの場合はそれに加えてフィレンツェのユリの紋章、ポポロの紋章、共和国のシンボルのマルゾッコ(獅子像)、≪受胎告知≫のイメージと共に表わされ、聖ゼノビウスと一目で識別できる図像が1330年代に確立する。これは同聖人と共和制都市国家フィレンツェとの結びつきが強調されるようになったことを意味する。同時期のトスカーナ地方の共和制都市国家においては、都市の重要な聖遺物の管理の権限を政府が教会側から奪うという現象が見られたことから、こうした現象が聖人の図像に影響を及ぼしたと考えられる。従って、14世紀、とりわけコムーネ政府の権力が司教の権力を凌ぐようになった133080年代の政治・社会的状況に注目し、同時期に制作された聖ゼノビウスを含む作品の調査を進めた。1380年頃にジョヴァンニ・デル・ビオンドが大聖堂のために制作した≪玉座の聖ゼノビウス≫には、聖人とユリの紋章に加えて8人の美徳の擬人像と3人の悪徳の擬人像が描き込まれている。聖人像と美徳と悪徳の擬人像の組み合わせが稀有であることから、シエナ政庁に133839年にアンブロージョ・ロレンツェッティが制作した≪善政の寓意≫及び≪悪政の寓意≫の図像と比較し、本作品が理想的な司教像と共和制都市国家フィレンツェの守護者のイメージを重ね合わせていることを指摘した。1115世紀の共和制都市国家で崇敬された守護聖人の数がきわめて多く、守護聖人を造形化した際の典拠を特定するのに想像以上の時間を要しているため。24年度が最終年度であるため、記入しない。本研究は、中部イタリアの共和制都市国家フィレンツェ、シエナ、ルッカ、ピストイア等を対象に、都市政府が聖俗の建築内に注文した美術作品において、都市政府の政治理念や立場が表象されるメカニズムを解明することを目的として取り組んでいる。ここに挙げた都市国家の中でもフィレンツェは、初期キリスト教時代から布教の拠点となり、1314世紀にはギベッリーニとグエルフィの抗争の中心となり、中部イタリアの他の都市が抱えたあらゆる問題が既に内在していた。そこで、最終年はより明確で発展的な議論を行なうために、フィレンツェに焦点を当て、同地での都市貴族、司教、都市政府の関係性の中で守護聖人にかかわる美術作品の分析を進めていく。
国際開発協力人材育成のための海外実地研修手法の開発

研究成果報告書は、5部から構成されている。第I部は、多様な海外実地研修(Overseas Fieldwork=OFW)の全体像に関する事例研究で、名古屋大学大学院国際開発研究科(GSID)の正規カリキュラムとして中国(第1章、2001年)、タイ(第2章、2002年)、韓国(第3章、2003年)で実施したOFWにおける新たな試みの成果と課題報告である。中国でのOFWからは、新規開拓の困難さ、官僚主義的な手続き、情報入手の困難さ等の中で、運営上・教育上いかなる対応が必要となったかわかる。タイでのOFWでは、2つの試みがなされた。第1に開発のプロが実施する調査と報告書作成までの手順を雛形としたプログラムが組まれ、第2に学生をテーマ別とサイト別の両グループに所属させた。この方式は学生の学習量と内容が豊富になるという反面、教官の負担が大きいという結果になった。韓国でのOFWは、学生の自主性を重した柔軟なプログラムを試みたこと、途上国から先進工業国への移行過程を見ることが出来たという特徴を持った。また比較検討の対象として、第4章では国際開発高等教育機構(FASID)のフィールドワーク・プログラムが、第5章では比較的少人数で調査目的を絞ったカンボジアにおけるGSIDのフィールドワークのケースが、第6章では主にNGOの協カを得る方式のバングラデシュにおける実施可能性が報告されている。第II(第7章-第12章)では、海外実地研修の運営の実際について、参加経験のある教官から具体的かつ様々な問題点の指摘と提言、学生の評価を扱っている。第III部は、教育カリキュラムにおける海外実地研修の位置づけの検討である。GSIDが実施している国内実地研修(DFW)との連携の検討(第13章)、国際開発系大学院の教育における海外研修の位置づけ(第14章)、英国での状況(第15章)が報告されている。第IV部(第16章)は、内外の関係者を招いて興味深い議論が展開された平成15年10月開催のワークショップ成果の要旨である。第V部は、OFWの事前調査と教材開発の事例として、2002年タイの資料を収録している。第一年次である本年度は、手法開発に必要なデータ・資料の収集と、当研究科の10年にわたる海外実地研修経験の文書化をおこない、その予備的分析から来年度の手法開発のための実験的な枠組みを導き出すことを主な活動とした。1.本年度の海外実地研修において手法開発のための実験的試みとして、対象国を初めて中国とし、従来のPCMに代えてアンケート調査、グループレポートに代えて個人レポートを課した。この結果を参加者へのアンケートによって資料化し、3月上旬に中国の研修協力校より教官を招いて検討会を催した。2.来年度の海外実地研修地を実験的手法の導入が比較的容易なタイとし、1月に実施した事前調査、および中国での研修結果を踏まえて、サイト別グループとディシプリン別グループの途中組み替え、先輩学生による指導、学生によるロジスティクスの実務分担、といった実験的手法を盛り込むこととし、準備を開始した。3.これまで口頭で伝えられてきた海外実地研修の実務ノウハウの文書化を開始し、概要を示す手引き書を作成した。

PCM実施研修を含む実務マニュアルもほぼ完成しており、来年度の早い時期に刊行する。4.名古屋大学大学院国際開発研究科以外で実施されている海外実地研修について比較のための情報を収集した。FASIDの実施する研修について今年度の参加者4名に参加記録を執筆させた。また、学生が運営する「アジア農村研究会」実施の研修については同会代表に、講演および研修・実務内容を執筆していただいた。来年度の早いうちにディスカッションペーパーの形で刊行予定である。タイ国チュラロンコン大学の研修についても同大学教官への聞き取りにより情報を収集した。5.比較材料を増やすために、当研究科の海外実地研修の対象地としてバンクラデッシュを考え、3月末に予備調査を行った。本年度は、タイ国コンケン県において海外実地研修を10月に実施したが、従来の手法に加えて次のような様々な実験的手法を導入した。1)5月より開始した事前講義および学生による調査計画作成、さらに10月の実地研修時に、博士課程後期の院生数名を教官監督のもとに講師・アドバイザーとして使用した。2)開発系の専門家が実際に行う現地調査・発表の形態・スケジュールを採用し、学生に体験させた。3)ディシプリンの意識化を目的に、すべての参加学生をディシプリン別グループとサイト別グループに両属させた。4)双方向学習の環として、調査サイトにてデリバリー発表、国際理解教育の1コマ授業を提供した。5)本学以外から海外実地研修及びタイの専門分野として分担者梅村(琉球大学)、馬場(三重県立看護大学)の2名が海外実地研修に参加し、現地での手法等の調査を行った。このほか従来の方法を充実させる形で、事前研修時にタイ国チュラロンコン大学から4名の講師を招聘し、講義と指導を依頼した。以上の手法の導入はおおむね効果的で、とくに1)と2)については参加学生へのアンケート、インタビューから明らかであり、また5)は運営面で効果を発揮した。この成果の暫定的報告として11月16日に当研究科で公開の発表会(担当:桃木(大橋))をもち、さらに当研修の比較対象として国際開発高等教育機構のフィールドワークについて、11月8日に鈴木直喜清泉女子大助教授を招いて研究会をもった。このほか比較対象としての韓国での予備調査を2003年1月中旬に実施した。その後参加学生のレポート作成が終了した2003年1月末に参加学生に対しアンケートを実施し、3月4日に研究代表者・分担者の反省会をもった。本年度は、8月に18日間、33名の学生の参加を得て、韓国晋州において海外実地研修を実施した。従来の手法を踏まえつつ、次のような新たなアプローチを試みた。(1)「開発の中間モデル」として韓国の地方都市を研修の対象地とした。この新たな試みの利点は、第1に、韓国は途上国から先進国への移行過程にあり、韓国の開発の歴史と現状を学ぶことで一層具体的な開発の将来像を描くことが出来る、第2に、日本の開発経験と比較することで開発プロセスの多様性を理解できることである。(2)問題発見型のアプローチを重視した。ともすれば、参加者は事前研修で析出した問題の解決を実地研修において探ろうとする傾向が見られるが、現場で何が問題なのかを虚心坦懐に探るというトレーニングを重視した。(3)ワーキング・グループの自主性を重視した。調査のアレンジに関する能力開発を重視し、グループごとの運営に自主性をもたせ、スケジュールもある程度弾力化した。
蘇生後脳障害に対する新規ミトコンドリア標的型治療薬の開発と治療効果の検証

活性型ビタミンB1(TPP)を内封したMITO-Porterに細胞導入ならびにミトコンドリア移行能を有するオクタアルギニン(R8)を搭載したR8-MITO-Porter (TPP)を調製し、神経芽細胞腫SH-SY5Y細胞を用いて、細胞内局在の観察および治療効果を検証した。蛍光標識を施したR8-MITO-Porter (TPP)を細胞に添加し、共焦点レーザースキャン顕微鏡を用いて細胞内動態を観察した。観察結果に基づき、粒子径・機能素子修飾量を調整しミトコンドリア送達能を最適化した。さらに、R8-MITO-Porter (TPP)添加後の細胞内のATP産生量を測定した。その結果、R8-MITO-Porter (TPP)投与群においてATP産生量を顕著に上昇させることが確認され、本戦略によるミトコンドリア機能回復が実証された。続いて、マウス心停止蘇生モデルに対し、このR8-MITO-Porterを用いた蘇生実験を行った。今回はMITO-PorterにS2ペプチドを修飾したS2-MITO-PorterとR8-MITO-Porter、対照(vehicle投与)の3群で比較検討した。投与タイミングは自己心拍再開1分後とし、蘇生後10日間のマウス生存率と神経学的スコアをモニタリングした。その結果S2-MITO-Porter群は対照群とほぼ同等の生存率となった。一方、R8-MITO-Porter群では対照群と比較して、生存率および神経学的スコアの改善が見られたものの、統計学的有意差は認めなかった。2018年度は、マウス心停止蘇生モデルにおけるR8-MITO-Porterの治療効果の検証を開始した。現在は、その実験結果をもとにR8-MITO-Porterの粒子内ビタミン濃度、粒子径、粒子表面修飾素子の調整とマウスモデルにおける最適化を行っている段階である。培養細胞のミトコンドリア機能回復効果が最も高かったR8-MITO-Porterをメインdrugとし、マウスモデルにおける脳免疫組織学的評価、脳PDH活性、脳ミトコンドリア呼吸能測定を行う。水溶性ビタミンであるビタミンB1(VB1)を封入したミトコンドリア標的型ナノカプセル(VB1-MITO-Porter)調製プロトコルを確立した。ナノカプセル調製はReverse Phase Evaporation Vesicle法を用いた。本プロトコルは、水溶性ビタミンを効率的に封入する調製プロトコルの基盤技術になり得る。神経細胞(SH-SY5Y細胞)での細胞内導入能をフローサイトメトリーを用いて評価し、SH-SY5Y細胞に取り込まれやすい最適なナノカプセル組成を見出した。さらに、ミトコンドリア移行率を共焦点レーザー走査型顕微鏡を用いて観察評価したところ、ミトコンドリアへの効率的な移行が観察された。このVB1-MITO-PorterをSH-SY5Y細胞に投与後、継時的にATP産生能を評価したところ、VB1単独投与群と比較して有意にATP産生能を増強することを確認した。2017年度は作製したVB1-MITO-Porterのマウス蘇生モデルにおける治療効果検証を前倒しで行った。引き続き、MITO-Porterの改良(粒子径、粒子表面修飾素子等)と、神経芽細胞腫SH-SY5Y細胞および、マウス蘇生モデルにおける治療効果検証を継続して行っていく。2017年度の当初実施計画は、VB1-MITO-Porterの構築と神経芽細胞腫SH-SY5Y細胞における治療効果の実証である。現在、VB1-MITO-Porterの作製手法は確率している。In-vivoにおいてはVB1-MITO-Porterは、VB1単独投与と比較して、神経芽細胞腫SH-SY5Y細胞ミトコンドリアにおけるATP合成能を1.5倍に上昇させることを確認している。さらにMITO-Porterの粒子内ビタミン濃度、粒子径、粒子表面修飾素子を調整することにより、マウス蘇生モデルにおける最適化を行っている段階である。

2018年度は、マウス心停止蘇生モデルにおけるR8-MITO-Porterの治療効果の検証を開始した。現在は、その実験結果をもとにR8-MITO-Porterの粒子内ビタミン濃度、粒子径、粒子表面修飾素子の調整とマウスモデルにおける最適化を行っている段階である。VB1-MITO-Porterのマウス蘇生モデルにおける治療効果の検証を継続する。具体的には、蘇生後の生存率及び神経学的スコアでMITO-Porterの治療効果判定を行い、この結果をフィードバックするこによりVB1-MITO-Porterのカスタマイズを行う。さらに、VB1-MITO-Porterの投与が、蘇生後のマウス脳組織における神経細胞の脱落、変性と炎症細胞の浸潤を抑制するのかを明らかにする。培養細胞のミトコンドリア機能回復効果が最も高かったR8-MITO-Porterをメインdrugとし、マウスモデルにおける脳免疫組織学的評価、脳PDH活性、脳ミトコンドリア呼吸能測定を行う。2017年度の当初計画に、研究打ち合わせのための旅費を算入していたが、実際は使用しなかった。次年度は繰越分を旅費に計上する予定である。2018年度の当初計画に、マウス脳組織免疫学的評価の経費を算入していたが、使用しなかった。次年度に算入する予定である。