hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
霊長類(マーモセット)脳梗塞に対するヒトiPS細胞由来神経幹細胞を用いた移植治療

脳梗塞の再生医療は、霊長類の実験なしに、齧歯類の実験のみで臨床試験が開始され、多くが頓挫している。そこで、霊長類の脳梗塞モデルを作成し、神経幹細胞(NS/PC)移植を行って一連の評価系を確立する。これまでの研究で、マーモセットに対する低侵襲の一過性右中大脳動脈閉塞(MCAO)モデルを確立し、小動物用MRIと小動物用PETを用いてペナンブラを推定し、移植治療のターゲットを決定できるようになった。細胞移植では、マーモセット胎児由来のNS/PCを2匹に移植し、ントロール1匹と比べ機能回復が促進するかどうか行動評価および画像評価にて調べた。現在、脳切片の組織学的評価を行っており、論文作成中である。マウス脳梗塞に対するマウス及びヒトiPS細胞由来神経幹細胞(iPSC-NS/PC)移植により機能回復が促進することが近年明らかになってきており、また中枢神経系の疾患として脊髄損傷では、サルに対するヒトiPSC-NS/PC移植により、その安全性および有効性が確認されている。しかし、脳梗塞では、霊長類を用いた実験の報告がない。臨床応用に際し重要である、前臨床研究の最終段階としてのサル脳梗塞に対するヒトiPSC-NS/PC移植を行うことで、その安全性および有効性を検討する。これまでの検討で、マーモセットに対する低侵襲の一過性右中大脳動脈閉塞(MCAO)モデルを確立し、小動物用MRIと小動物用PET(positron emission topography)を用い、マーモセットの脳梗塞および脳内の代謝変化の観点からin vivoにおいて霊長類脳内の虚血後の自然経過を観察し、MRIとPETの差からペナンブラを推定し、移植治療のターゲットとできるようになった。マーモセット脳梗塞を作成し、亜急性期(1014日)において細胞移植を行うにあたり、依然として解明されていないマーモセットの免疫機構の問題があり、免疫抑制剤の使用を含め、検討事項が増えてしまうため、まず同種のNS/PCの移植を行うことで、その治療効果を研究することとした。移植部位はPET撮影を用いて評価し、脳梗塞巣の辺縁とする。移植細胞はマーモセット胎児のNS/PCとした。観察期間は自然回復の見られる56週とし、移植群がコントロール群と比べ、機能回復が促進するかどうか行動評価および画像評価にて調べた。その後、組織学的評価を行っている。今後、移植後長期飼育も行い、腫瘍化の有無など、安全性も評価する。【低侵襲一過性中大脳動脈閉塞(MCAO)モデル作成】ヒトの病態に近似した開頭を必要としない低侵襲脳虚血モデル、すなわち血管内手術による中大脳動脈閉塞(MCAO)モデルを作成する。成熟マーモセット(年齢半年以上5年未満、体重およそ300g)を使用し、全身麻酔下に右頚部動脈を剖出し、外頸動脈から内頸動脈を経由し右MCAに塞栓糸を挿入、喫入させる。術中画像検査にてMCAに血流が無いことを確認し、3時間閉塞させた。血流遮断後、塞栓糸を抜去し縫合閉創した。術後経時的に頭部MRI撮影と行動学的評価した。【脳梗塞モデルに対する定位手術での細胞移植療法】ヒトにおける脳梗塞巣は、責任血管や側副血行路の違いで様々な場所に生じうる。移植治療に当たり正確な部位に細胞を注入する必要がある。マーモセットでも同じく、移植部位の決定とそこへの細胞の注入が必要となるため、PET-CTとMRI画像を融合させた画像にて定位的に細胞を移植した。移植細胞としてはマーモセット胎児由来の神経幹細胞を100万個とした。移植後のPETにて腫瘍化は認めず。56週間でサクリファイスし、脳切片を現在評価中。なお、移植個体は2匹、コントロールは1匹としている。

マウス脳梗塞に対するマウス及びヒトiPS細胞由来神経幹細胞(iPSC-NS/PC)移植により機能回復が促進することが明らかになり、また中枢神経系の疾患として脊髄損傷では、サルに対するヒトiPSC-NS/PC移植により、その安全性および有効性が確認され、脳梗塞も脊髄損傷も臨床試験が行われ始めている。しかし脊髄損傷と違い脳梗塞では、霊長類を用いた実験の報告がないまま臨床試験が開始され、多くが頓挫している。治療効果の解明のため霊長類モデルが必要とされているが、一般的な方法が依然として開発されていない。そこで霊長類の脳梗塞モデルを作成し、神経幹細胞(NS/PC)移植を行い、一連の評価系を確立する。これまでの研究でマーモセットに対する低侵襲の一過性右中大脳動脈閉塞(MCAO)モデルを確立し、小動物用MRIと小動物用PET(positron emission topography)を用い、マーモセットの脳梗塞および脳内の代謝変化の観点からin vivoにおいて霊長類脳内の虚血後の自然経過を観察し、MRIとPETからペナンブラを推定し、移植治療のターゲットとできるようになった。細胞移植では、マーモセットの免疫機構が未解明のため、免疫抑制剤の使用などの問題を避け、同種であるマーモセット胎児由来のNS/PCを用いた。治療時期は臨床応用を見据えた亜急性期(1014日)とした。移植部位は脳梗塞巣の辺縁とした。移植細胞はマーモセット胎児由来のNS/PCを培養・増殖させ100万個とした。移植個体は2匹、コントロールは1匹とした。移植後のPETにて腫瘍化は認めなかった。観察期間は自然回復の見られる56週とし、移植群がコントロール群と比べ、機能回復が促進するかどうか行動評価および画像評価にて調べた。6週間後サクリファイスし、脳切片を評価。現在、組織学的評価を行っており、論文作成中である。脳梗塞の再生医療は、霊長類の実験なしに、齧歯類の実験のみで臨床試験が開始され、多くが頓挫している。そこで、霊長類の脳梗塞モデルを作成し、神経幹細胞(NS/PC)移植を行って一連の評価系を確立する。これまでの研究で、マーモセットに対する低侵襲の一過性右中大脳動脈閉塞(MCAO)モデルを確立し、小動物用MRIと小動物用PETを用いてペナンブラを推定し、移植治療のターゲットを決定できるようになった。細胞移植では、マーモセット胎児由来のNS/PCを2匹に移植し、ントロール1匹と比べ機能回復が促進するかどうか行動評価および画像評価にて調べた。現在、脳切片の組織学的評価を行っており、論文作成中である。【低侵襲一過性中大脳動脈閉塞(MCAO)モデル作成】ヒトの病態に近似した開頭を必要としない低侵襲脳虚血モデル、すなわち血管内手術による中大脳動脈閉塞(MCAO)モデルを作成する。成熟マーモセット(年齢半年以上5年未満、体重およそ300g)を使用し、全身麻酔下に右頚部動脈を剖出し、外頸動脈から内頸動脈を経由し右MCAに塞栓糸を挿入、喫入させる。術中画像検査にてMCAに血流が無いことを確認し、3時間閉塞させた。血流遮断後、塞栓糸を抜去し縫合閉創した。術後経時的に頭部MRI撮影と行動学的評価した。【脳梗塞モデルに対する定位手術での細胞移植療法】
パーコレーションを考慮した杭貫入・引抜時の地盤の支持力発現機構とメゾ・モデル化

本研究の主な研究成果は以下のようである。1)粒状材料の弾塑性挙動について検討するために、2次元個別要素法(DEM)を用いて、粒状性地盤材料の変形・破壊挙動の解析を行った。従来は難しかった個別要素法による密度の大きく異なった供試体の作成に成功した。2)顕著な非線形変形挙動の発現が粒状材料内部に形成される微細構造(メゾ・スケール)・不規則格子(クラスター)のパーコレーションの発展・損失に強く支配されていることが示された。さらに、粒子間すべりに対する安定性と粒子に発現される回転抵抗度に着目した。粒状材料の破壊現象は安定な微細構造の消失に依存しすることを明らかにした。また、構造の消失とともに粒子間の回転抵抗が動員されることがわかった。密度や過圧密の違いは粒子の回転抵抗の発揮によって実現され、ゆる詰め状態や過圧密では高い回転抵抗が発揮されることがわかった。また、揺る詰め状態では安定な微細構造の割合は極端に低いことが明らかになった。3)粒状材料中の応力誘導異方性をファブリックテンソルを用いて調べた結果、主応力比の平方根に従って異方性が発達することが明らかになった。また、除荷時と再載荷時の異方性の発展は履歴の影響を受けヒステリシスに変化するとともに降伏点付近で大きく変化することがわかった。4)静的貫入・引抜き時の地盤の変形・破壊挙動に関する模型実験および数値解析により測定し、密度、拘束圧の影響について調べた。また、杭周面摩擦の影響についても調べた。杭周辺地盤の局所化の観察以外に、地盤の変形・破壊挙動を詳細に調べた。杭の支持力算定で良く言われているように、杭直下と杭端面上部との平均的算定法や周面摩擦と先端支持力との重ね合わせは成立せず、地盤の非線形性と杭周辺地盤同士の相互作用の考慮が必要であることを明らかにした。周面摩擦と先端支持力の非線形な相互作用のメカニズムを明らかにした。本年度の主な研究成果は以下のようである。1)弾塑性力学における降伏面、限界状態、下負荷面、等方・移動硬化について検討するために、2次元個別要素法(DEM)を用いて、粒状性地盤材料の変形・破壊挙動の解析を行った。従来は難しかった個別要素法による密度の大きく異なった供試体の作成に成功することで種々の地盤の支持力解析などへの個別要素法の適用範囲を広げた。マクロスケールにおける顕著な非線形挙動の発現が粒状材料内部に形成される微細構造(メゾ・スケール)・不規則格子(クラスター)のパーコレーションの発展・損失に強く支配されていることが示された。さらに、粒子間のすべりに対する安定性と粒子に発現される回転抵抗度に着目した。密度や過圧密の違いは粒子の回転抵抗の発揮によって実現され、揺る詰め状態や過圧密では高い回転抵抗が発揮されることがわかった。これらの結果から、粒状材料の破壊は急速な安定構造の消失によって引き起こされ過圧密の影響をもたらす動員された回転抵抗の保持と急速な安定構造の消失との拮抗が過圧密の解消をもたらすことが明らかにした。2)静的貫入・引抜き時の地盤の変形・破壊挙動に関する模型実験および数値解析により測定し、密度、拘束圧の影響について調べた。杭周辺地盤の局所化の観察以外に、地盤要素の変形・破壊挙動を詳細に調べた。これらの結果から杭の支持力算定で良く言われているように、杭直下と杭端面上部との平均的算定法や周面摩擦と先端支持力との重ね合わせは成立せず、地盤の非線形性と杭周辺地盤同士の相互作用の考慮が必要であることを明らかにした。

4)静的貫入・引抜き時の地盤の変形・破壊挙動に関する模型実験および数値解析により測定し、密度、拘束圧の影響について調べた。また、杭周面摩擦の影響についても調べた。杭周辺地盤の局所化の観察以外に、地盤の変形・破壊挙動を詳細に調べた。杭の支持力算定で良く言われているように、杭直下と杭端面上部との平均的算定法や周面摩擦と先端支持力との重ね合わせは成立せず、地盤の非線形性と杭周辺地盤同士の相互作用の考慮が必要であることを明らかにした。周面摩擦と先端支持力の非線形な相互作用のメカニズムを明らかにした。
数学基礎論とブ-ル代数値解析学

この研究では、数学的構造とそれを表現している言語などの形式的体系について、意味構造と形式的表現の両者にかかわる性質を中心に研究を進めてきた。具体的には、公理的集合論や帰納的関数論そして数理論理学ですでにある程度満足のゆく形まで理路が整理されている結果を、さらに広い範囲の代数や解析的な対象に値を持つような体系に応用しようとするものである。これには、例えばブ-ル代数を値に持つ集合論の中で、通常の代数や解析の結果が何を意味しているか。こういった概念に関係して、古典的にはっきりと意味のある位相空間とか、群の部分群のなす順序から自然に定まる位相、さらに一般の推移関係から生ずる順序などについての結果が得られた。こういった結果や対象の中には、例えば位相空間の完備化とかコンパクト化の中の点としての、双対空間の元などがある。双対空間の点は、ひとことで言えばフィルタ-とかイディアル、あるいは何個かの算法で閉じた系ないしは集合であり、もとの空間の連続関数はその完備化の点まで自動的に延長できる。勿論、値のとるべき空間の完備化においての意味である。超準解析などでは、いわゆるコンパクト性定理というモデルの理論の定理が用いられるが、これらは離散的または完全不連結といった空間の完備化と関数の延長としてとらえられる。また、非常に大きな有限の数の性質など、関数の増大の度合いと、計算量やアルゴリズムの複雑性、さらには特定の性質の集まりでの識別不可能性の問題など計算の理論の中心的な課題について引き続き研究を続けてゆきたいと思う。
ＨＴＬＶ－１　にコードされる　ＨＢＺ　タンパク質による宿主機能制御の解析

ヒトT細胞白血病ウイルス1型(HTLV-1)は成人T細胞白血病(ATL)やHTLV-1関連脊髄症の原因となるレトロウイルスであり、特にATLは発症後その半数が1年以内に死亡する悪性度の高い疾患である。これまでに、ATL患者由来のT細胞に例外なく発現するウイルス由来因子としてHTLV-1 bZIP factor (HBZ)が同定されており、HBZこそがATL発症に必須な因子であると推測されている。本年度は、HBZの宿主細胞内での生理機能を明らかにすることを目的として研究を行なった。我々のグループはHBZと相互作用する宿主因子を網羅的に探索するため、酵母ツーハイブリッド法を行ない、ヒトセントロメアに存在し、染色体の構造形成に関与するとされているCENP-Bを同定した。共免疫沈降法により、HBZとCENP-Bの相互作用は酵母内のみならず、それぞれを一過性に動物細胞内に発現させた場合、HTLV-1感染T細胞株を用いた場合でも確認された。さらに、詳細を解析した結果、HBZとCENP-Bはそれぞれ互いの中央領域を介して相互作用することを見いだした。これまでにCENP-BはC末端に存在する二量体化領域を介してホモ二量体を形成し、N末端に存在するDNA結合領域を介してα-サテライトDNAに存在するCENP-B boxへ結合することが報告されている。CENP-BとHBZを共発現させた場合、CENP-Bの二量体化量は変化しなかったが、CENP-BのDNA結合能は顕著に抑制することを見いだした。また、クロマチン化されたDNAにおいても同様の結果が得られた。また、HBZはCENP-B依存的なヒストンH3K9のトリメチル化修飾亢進能を強力に阻害することが明らかとなった。26年度が最終年度であるため、記入しない。ヒトT細胞白血病ウイルス1型(HTLV-1)のウイルス感染が原因となって発症する疾患として成人T細胞白血病(ATL)が挙げられる。近年、ATL患者由来のT細胞に例外なく発現が認められるウイルス由来因子としてHBZが同定されており、HBZこそがATL発症に深く関与することが示唆されている。これまでに、HBZは通常核に存在するが外界からのストレス刺激によって発現誘導されるGADD34と細胞質において相互作用し、細胞増殖などに関与するリン酸化酵素のmTORシグナルを活性化することを見出している。平成24年度は、HTLV-1感染T細胞株(MT-1細胞)を用いた内在性HBZの挙動、およびHBZによるGADD34の機能抑制を介した宿主細胞への影響について検討した。MT-1細胞をDNAアルキル化剤(MMS)で処理し、内在性GADD34を発現誘導させた場合、通常核画分に存在するHBZタンパク質が細胞質画分で認められた。一方、HBZの核外輸送を阻害し、MMSで処理した場合ではHBZの局在に変化は認められなかった。また、HTLV-1非感染T細胞株にレンチウイルスベクターを用いてHBZタンパク質を恒常的に発現させる細胞株を作成した。GADD34を発現誘導させた場合、空ベクターを発現するコントロールの細胞株と比較して、HBZ安定発現株ではmTORシグナルの抑制効果を減弱させることを見いだした。しかし、核外輸送を阻害した場合、HBZはmTORシグナルの活性化を示さないことから、HBZは細胞質においてGADD34の機能を抑制していることが強く示唆された。さらに、近年GADD34は飢餓状態時において発現が上昇することでmTORシグナルを抑制し、細胞構成成分の分解機構の一つであるオートファジーを誘導することが報告されている。今回、HBZ安定発現株を血清飢餓状態に晒した場合、GADD34を介したオートファジーの誘導が顕著に阻害されることが明らかとなった。今回、宿主細胞質におけるHBZの機能は初めての報告であり、今後ATL発症機構を明らかにするためには核と細胞質の包括的な研究が重要であると言える。ヒトT細胞白血病ウイルス1型(HTLV-1)は、成人T細胞白血病(ATL)、HTLV-1関運脊髄症(HAM/TSP)の原因ウイルスである。これまでに、HTLV-1プロウイルスのマイナス鎖にコードされる因子としてHTLV-1bZIP factor (HBZ)が同定されている。HBZは他のHTLV-1由来の因子と異なり、ATL患者において例外なく発現が認められており、さらにHAM/TSPの重症患者ではHBZの発現量が顕著に増加していることが報告されており、HBZはHTLV-1に関連した疾患の発症に何らかの影響を与えていると示唆されているが、その細胞内での機能は未だ不明な点が多い。平成25年度は、我々のグループでHBZが宿主細胞の核内にのみならず、細胞質においても機能制御を果たすということを初めて報告した。さらに、以前酵母ツーハイブリッドスクリーニングを用いて同定していた細胞質因子cullin1 (CUL1)とHBZとの関係性に着目して研究を行なった。CUL1はE3ユビキチンリガーゼであるSCF複合体を構成する因子で、HBZは動物細胞内においてCUL1と相互作用することを見いだした。さらに、CUL1はユビキチン様タンパク質であるNEDD8によって活性化されることが知られている。HBZを過剰発現させた場合、CUL1のNEDD化が上昇することが明らかになった。

しかし、興味深いことに、SCF複合体との結合によって分解される因子はCUL1が活性化されるにも関わらずその分解が抑制された。また、この現象はHTLV-1感染細胞および、HTLV-1非感染T細胞にレンチウイルスベクターを用いて恒常的にHBZを発現させた細胞株においても同様の結果が得られた。今後は、この矛盾点を解決すべく、SCF複合休に与える影響などを解析していきたい。ヒトT細胞白血病ウイルス1型(HTLV-1)は成人T細胞白血病(ATL)やHTLV-1関連脊髄症の原因となるレトロウイルスであり、特にATLは発症後その半数が1年以内に死亡する悪性度の高い疾患である。これまでに、ATL患者由来のT細胞に例外なく発現するウイルス由来因子としてHTLV-1 bZIP factor (HBZ)が同定されており、HBZこそがATL発症に必須な因子であると推測されている。本年度は、HBZの宿主細胞内での生理機能を明らかにすることを目的として研究を行なった。我々のグループはHBZと相互作用する宿主因子を網羅的に探索するため、酵母ツーハイブリッド法を行ない、ヒトセントロメアに存在し、染色体の構造形成に関与するとされているCENP-Bを同定した。共免疫沈降法により、HBZとCENP-Bの相互作用は酵母内のみならず、それぞれを一過性に動物細胞内に発現させた場合、HTLV-1感染T細胞株を用いた場合でも確認された。さらに、詳細を解析した結果、HBZとCENP-Bはそれぞれ互いの中央領域を介して相互作用することを見いだした。これまでにCENP-BはC末端に存在する二量体化領域を介してホモ二量体を形成し、N末端に存在するDNA結合領域を介してα-サテライトDNAに存在するCENP-B boxへ結合することが報告されている。CENP-BとHBZを共発現させた場合、CENP-Bの二量体化量は変化しなかったが、CENP-BのDNA結合能は顕著に抑制することを見いだした。また、クロマチン化されたDNAにおいても同様の結果が得られた。また、HBZはCENP-B依存的なヒストンH3K9のトリメチル化修飾亢進能を強力に阻害することが明らかとなった。26年度が最終年度であるため、記入しない。実際にHTLV-1感染細胞株におけるHBZの細胞質での機能解析を行うことができた。これまでにHBZは核内における機能解析のみであったが、今回細胞質における宿主因子の機能制御という点で初めての知見が得られた。昨年度明らかにしたHBZの核外輸送における追加データを得ることができた。また、新たな宿主細胞質因子とHBZとの関係性を見いだすことができた。細胞質におけるHBZの役割は未だ我々のグループ以外から報告がないため、非常に重要な知見を与えられるものであると考えている。今後はGADD34以外の宿主細胞質因子との相互作用を中心に解析を行う。これまでにHBZと相互作用する宿主因子の網羅的探索を行なった結果、アセチル化を制御する因子、細胞質から核へのシグナル伝達に重要なアダプタータンパク質など多数の細胞質因子群を同定している。それらの機能に対するHBZの影響を明らかにする。
硝酸イオンバイオセンサーの開発と水界中窒素除去技術の確立

富栄養化を防止するには、水界中の窒素濃度を下げることが重要である。そのためには、まず水中の窒素濃度を簡易に検出して、一般の市民が水中の窒素濃度に関心を持つようにすることが必要である。そこで、硝酸還元酵素を用いて、水中の硝酸イオンを亜硝酸イオンに変換し、それを発色させて検出する硝酸イオンバイオセンサーを開発した。このバイオセンサーは、少なくとも5ppmの硝酸イオンが検出できることが判明した。硝酸イオンは沈殿等の手法で水中から除去できないので、水中の硝酸イオンを除去するには、植物の窒素吸収能力を高める工夫が有効である。その目的で、ヨシにグルタミン合成酵素(GS2)遺伝子を導入し、根の窒素吸収能力を高めることに取り組み、最終的には窒素吸収速度が15-20倍高く、生長量が3倍高いヨシを育成することができた。GS2はプラスチドに局在するので、植物のGS2含量を高めるには、葉緑体形質転換法が有効と考えられる。そこでイネGS2遺伝子をタバコ葉緑体に遺伝子導入したところ、通常のタバコより30-40倍多く発現するタバコを育成することができた。葉緑体形質転換法によると、コサプレッション現象もなく、また花粉による飛散もないので、より有効に植物の窒素同化能を改善することができる。わが国の河川・湖沼及び地下水中の硝酸性窒素が次第に増加してきており、その原因は茶・野菜畑に施用される肥料、畜産排水、および生活・産業廃水中の窒素の増加による。水界中の硝酸塩濃度の増加は、単に富栄養化を促進するだけでなく、幼児のメトへモグロビン血症や発ガンの原因となり、国民の健康上大きな問題となっている。この問題を解決するために、1)硝酸イオンバイオセンサーをつくり、誰もが簡便に精度よく水界中の硝酸塩濃度を測定できるようにする、2)植物の窒素吸収過程の鍵酵素のーつであるグルタミン合成酵素について、高い酵素活性を持つ植物を調べその遺伝子を単離し、形質転換により高い窒素吸収能をもつ植物をつくる、3)ヨシ群落の脱窒作用を実測し、水質浄化の方策を立てる、ことの3つの目的で研究を開始した。今年度の研究成果は次の通りである。1)ホウレンソウの硝酸還元酵素(Nitrate Reductase,NR)cDNAを酵母(Pichia pastoris)に遺伝子導入して、NRタンパク質の発現に成功した。発現べクターにはメタノール誘導性のpPICZAを用いた場合に発現量が多いことが分かった。発現したNRタンバク質は、野生型酵素と比較して同等の比活性を有していた。また、分子量も同一であった。モリブデンコファクターを補給する目的で、酵母の祖抽出液にホウレンソウ抽出液を加え一夜インキュベートすると、活性が3倍上昇した。2)グルタミシ合成酵素を高発現するイネ、ヨシを作るため、イネGS2cDNAをアグロバクテリア法で遺伝子導入し、形質顕官イネ、ヨシをそれぞれ20数固体作製した。3)脱窒作用を測定するための実験系を作製し、購入した質量分析計で測定できる精度の予備的検討を行った。水界中の硝酸塩濃度の増加は、単に富栄養化を促進するだけでなく、幼児のメトヘモグロビン血症や発ガンの原因となり、国民の健康上大きな問題となっている。この問題を解決するために、1)硝酸イオンバイオセンサーをつくり、誰もが簡便に精度よく水界中の硝酸塩濃度を測定できるようにする、2)植物の窒素吸収過程の鍵酵素の一つであるグルタミン合成酵素について、高い酵素活性を持つ植物を調べその遺伝子を単離し、形質転換により高い窒素吸収能をもつ植物をつくる、3)ヨシ群落の脱窒作用を実測し、水質浄化の方策を立てる、ことの3つの目的で研究を開始した。発現ベクターにはメタノール誘導性のpPICZAを用いた場合に発現量が多いことが分かった。発現したNRタンパク質は、野生型酵素と比較して同等の比活性を有していた。このNRタンパク質を用いて簡易型センサーを試作した。2)グルタミン合成酵素を高発現するイネ、ヨシを作るため、イネGS2cDNAをアグロバクテリア法で遺伝子導入し、形質顕官イネ、ヨシをそれぞれ20数固体作製した。3)脱窒作用を測定するためのイネの実験系を作製し、15Nを用いるトレーサー実験を行った。現在15Nの検出感度を上げるための工夫を行っている。

硝酸イオンは沈殿等の手法で水中から除去できないので、水中の硝酸イオンを除去するには、植物の窒素吸収能力を高める工夫が有効である。その目的で、ヨシにグルタミン合成酵素(GS2)遺伝子を導入し、根の窒素吸収能力を高めることに取り組み、最終的には窒素吸収速度が15-20倍高く、生長量が3倍高いヨシを育成することができた。GS2はプラスチドに局在するので、植物のGS2含量を高めるには、葉緑体形質転換法が有効と考えられる。そこでイネGS2遺伝子をタバコ葉緑体に遺伝子導入したところ、通常のタバコより30-40倍多く発現するタバコを育成することができた。葉緑体形質転換法によると、コサプレッション現象もなく、また花粉による飛散もないので、より有効に植物の窒素同化能を改善することができる。わが国の河川・湖沼及び地下水中の硝酸性窒素が次第に増加してきており、国民の健康上大きな問題となっている。この問題を解決するために、1)硝酸イオンバイオセンサーをつくり、誰もが簡便に精度よく水界中の硝酸塩濃度を測定できるようにする、2)植物の窒素吸収過程の鍵酵素の一つであるグルタミン合成酵素について、高い酵素活性を持つ植物を調べその遺伝子を単離し、形質転換により高い窒素吸収能をもつ植物をつくる、3)ヨシ群落の脱窒作用を実測し、水質浄化の方策を立てる、ことの3つの目的で研究を開始した。今年度の研究成果は次の通りである。2)グルタミン合成酵素を高発現するイネ、ヨシを作るため、イネGS2cDNAをアグロバクテリア法で遺伝子導入し、形質顕官イネ、ヨシをそれぞれ20数固体作製した。形質転換ヨシについて、GS2発現量をウェスタン分析で確認後、アンモニア吸収能を測定したところ、対照区に対してアンモニア吸収能が上昇していることを確認した。3)GS2遺伝子を葉緑体ゲノムに導入した。ノザーン分析では大量に発現していることを確認したが、GS2タンパク質の蓄積はごくわずかであった。その原因について検討すると共に、別のベクターを構築して再度葉緑体形質転換を試みている。4)脱窒作用を測定するためのイネの実験系を作製し、15Nを用いるトレーサー実験を行った。現在15Nの検出感度を上げるための工夫を行っている。
小児再生不良性貧血における二次性MDSクローン同定に関する研究

(A)正常および核型異常を有するMDS症例の骨髄を用いた実験-7、+8を含む数名の核型異常を有するMDS患児から骨髄細胞を得、長期培養した。さらに、G-CSF、GM-CSF、SCFなどのサイトカインを種々の組み合わせで培養系に加え、同様に長期培養した。培養前及び培養後定期的に採取した細胞から間期核標本を作製し、異常シグナルを有する細胞の陽性率を算定し、各種サイトカインによる異常クローン増幅効果を検討した。対照として、正常骨髄を用いて同様の実験を行い比較した。(B)再生不良性貧血患児の骨髄を用いる実験G-CSF・免疫抑制薬投与前および治療開始後定時的に採取した再生不良性貧血患児の骨髄を用い、(A)と同様の検索を行っているが、潜在的異常クローンを証明できた例はない。さらに、長期間の観察が必要である。
新興感染症の流行を先取りしたリアルタイム推定研究の実装

感染症流行の数理モデルを活用した研究の中でも、流行途中の分析や予測を実施するリアルタイム研究が最近までに盛んに実施されており、それは先進諸国において数理モデル研究の数ある応用研究の中で最も実装に成功しつつある研究分野である。新型インフルエンザ2009やエボラ出血熱、MERS(中東呼吸器症候群)などの流行研究の機会を契機に、リアルタイム研究レスポンスに関する研究が爆発的に増加し、欧米やアジアのいくつかの都市(香港・シンガポールなど)では数理モデルを利用した流行データの分析を素早いスピードで実施可能にすべく、研究拠点体制が整備されつつある。一方、日本および韓国は感染症数理モデルの応用研究体制が十分でなく、現に、2015年の韓国におけるMERS流行では観察データの数理的分析の第一報は韓国人研究者による発表ではなく香港大学の単独研究として報告された。日本での新興感染症流行の有事の際に備えて、日本の数理モデル専門家及び数理科学者が専門性を発揮することが求められる。初年度はジカ熱の流行に関するリアルタイム研究に取り組み、原著論文発表などの成果創出を行うことができた。2年度目はマダガスカルでの肺ペストやイエメンでのコレラ流行に関するリアルタイム分析及びリアルタイム予測、感染性推定、流行対策評価に取り組んだ。最終年度では、プレモデリング体制が確立することを受け、流行発生時の観察データの分析成果を創出することに注力した。研究成果が真に公衆衛生上で社会からの要求及び応用数理科学からの期待に応えることができるよう工夫し、地域レベルでの感染症流行状況の把握にも貢献できるよう成果の取り纏めを行った。本研究は、数理モデルを流行前から準備するという意味でプレモデリング(PREMODELLING)と称する研究計画である。その目的は、感染症流行時に、日本独自のリアルタイム研究体制に基づく研究レスポンスを達成するために、リアルタイム流行分析に特化した数理モデルの構築と観察データの収集、統計学的分析に関して方法論的な研究基盤を確立することである。その基礎的・数理的な方法論を確立するための研究を通じて、リアルタイムの感染症流行データのモデル化の中に潜む新たな数学的法則を発見し、また、感染症流行対策に貢献することを通じて応用数理科学と感染症専門家との間での協働を図る端緒とする。初年度は麻疹を含む最近の流行データ分析に取り組んだ.予定通り,PREMODELLINGのコンセプトに従って流行前の定式化とデータ収集について計画的な研究実装を遂行しつつある.感染症流行の数理モデルを活用した研究の中でも、流行途中の分析や予測を実施するリアルタイム研究が最近までに盛んに実施されており、それは先進諸国において数理モデル研究の数ある応用研究の中で最も実装に成功しつつある研究分野である。初年度のジカ熱の流行に関するリアルタイム研究成果に加え、2年度目はマダガスカルでの肺ペスト流行やイエメンでのコレラ流行に関して予測や感染性推定、感染対策評価に取り組み、それらを原著論文として発表することができた。また、終了に向けてプレモデリング体制が確立することを受け、流行発生時の観察データの分析を実施すべく研究体制を構築することができた。マダガスカルにおける肺ペスト流行やイエメンでのコレラ流行、バングラデシュにおけるジフテリア流行など、突発的な流行を通じた研究機会に恵まれ、当初の予定以上にケーススタディーを積み重ねて報告することが出来た。一方、日本および韓国は感染症数理モデルの応用研究体制が十分でなく、現に、2015年の韓国におけるMERS

流行では観察データの数理的分析の第一報は韓国人研究者による発表ではなく香港大学の単独研究として報告された。日本での新興感染症流行の有事の際に備えて、日本の数理モデル専門家及び数理科学者が専門性を発揮することが求められる。初年度はジカ熱の流行に関するリアルタイム研究に取り組み、原著論文発表などの成果創出を行うことができた。2年度目はマダガスカルでの肺ペストやイエメンでのコレラ流行に関するリアルタイム分析及びリアルタイム予測、感染性推定、流行対策評価に取り組んだ。最終年度では、プレモデリング体制が確立することを受け、流行発生時の観察データの分析成果を創出することに注力した。研究成果が真に公衆衛生上で社会からの要求及び応用数理科学からの期待に応えることができるよう工夫し、地域レベルでの感染症流行状況の把握にも貢献できるよう成果の取り纏めを行った。2年度目は第2段階として,リアルタイムで研究に取り込むべき鍵となる要素を加味したモデル定式化と尤度方程式の導出を行う。感染性推定研究では、病原体ゲノム情報、ミクロ地理情報および疫学情報以外の要素(動物との接触情報)を加味した再生産数の導出と推定デザインの考案を行う。重症度研究では、人口レベルの血清学的調査および超過死亡者数のリアルタイム推定の枠組みを構築し、感染致命リスク(infection fatality risk)のリアルタイム推定を実現する。研究は3つの大項目による段階的プロセスで構成している。それは、(1)既知のリアルタイム研究手法を発展させる段階、(2)革新的なリアルタイム数理モデル研究を創出する段階、(3)研究の実装(応用)と成果発表と平行して社会実装を実施する段階、である。最終年度におけるプレモデリングの体制活用に加えて、感染性推定研究では、病原体ゲノム情報、ミクロ地理情報および疫学情報以外の要素(動物との接触情報)を加味した再生産数の導出と推定デザインの考案を行う。重症度研究では、人口レベルの血清学的調査および超過死亡者数のリアルタイム推定の枠組みを構築し、感染時致命リスクのリアルタイム推定を実施する予定である。
結晶中における酵素反応の迅速X線結晶構造解析

本研究の目的は、静止状態ではなく、反応途中における酵素の構造をX線結晶解析によって捕らえる方法を確立することにある。そのためには、第1に、結晶状態という特殊な状態での酵素反応の反応速度論的な解析を行い、目的とする反応系の挙動を把握すること、特に結晶状態では、酵素反応の速度よりも、基質が酵素の活性中心に到達する速度の方が律速となることから、予め基質の前駆体を酵素に取り込ませ複合体を作らせてから、何らかの引き金で反応を一斉開始させる、すなわち反応の同調が必要となる。第2に、(1)X線回折強度測定の時間を早くするとともに、(2)結晶を冷却して酵素反応速度を遅くすることにより、時間分解能を実質的に向上させることが必要となる。そこで、グルタチオン合成酵素を選び、それら条件の確立を目指した。我々は、大腸菌由来グルタチオン合成酵素について、その結晶構造を解析するとともに、同酵素の遷移状態アナログを合成して、反応機構の詳細を解明してきた。また、合成した遷移状態アナログが実は酵素の活性中心で、酵素の作用によりATPからリン酸基の転移を受けリン酸化させることによって強力な阻害剤へと変換されることを見いだした。そこで、そのリン酸化反応のうち、リン酸化される直前の酵素:遷移状態アナログ複合体を迅速X線結晶解析の標的に選んだ。1.結晶状態での酵素反応の同調と反応速度解析結晶状態でグルタチオン合成酵素が触媒する、ATPから遷移状態アナログへのリン酸基転移反応を同調させるため、ATPの代わりに、caged-ATPと呼ばれる、光分解性のATP前駆体を用いて酵素:アナログ:caged-ATP複合体を結晶化した。そして、キセノンランプを用いたフラッシュ光分解により、caged-ATPからATPを一斉放出させることによって、結晶状態で目的とするリン酸転移反応を同調させる系を構築することができた。さらに、HPLCを用いて、caged-ATP、ATP、ADPの量的変化を追跡することにより、反応速度を求めた。その結果、20°Cでは、数秒で反応が終了することが判明した。しかし、-20°Cに冷却することにより、半減期を3分程度まで遅らせることが出来た。2.迅速X線結晶構造解析システムの構築(1)X線回折強度データ測定速度の向上。当初の計画では、CCD検出器を用いて、2秒以内に1枚のデータを測定できる系を構築する予定であったが、直前に、CCD検出器の故障が明らかとなり、測定に至ることが出来なかった。しかし、イメージングプレート(IP)を検出器とする装置を代わりに用いて測定時間の短縮を試みた。その結果、シンクロトロン放射光を用いることで、実験室系では10時間かかる測定時間を1時間まで短縮することが出来た。そこで、-20°Cで結晶を冷却しながら、前述のグルタチオン合成酵素複合体の結晶について、フラッシュ光分解によって反応開始後、X線回折強度の測定を行ったところ、結晶中においても、溶液中と同様反応が進行し、リン酸化が終了した状態の構造を捕らえることが出来た。すなわち、この反応で得られた構造を、予め溶液中でリン酸化を行わせた後に結晶化した場合の構造と比較したところ、両者は完全に一致していた。(2)低温下でのX線結晶解析システムの構築。さらに、実質的な時間分解能を向上させるため、-160°Cに至る温度まで結晶を冷却する系を構築した。そのためには、50%もの溶媒(水)を含む酵素の結晶を水が氷になることによって結晶が破壊されないように冷却しなければならない。すなわち、瞬間冷却によって、水をガラス状態へと一気に冷却しなければならない。条件検討の結果、ナイロンループに抄くい取った結晶を直接液体窒素中に漬けることで結晶性を損なうことなく-160°Cまで冷却し、X線回折強度測定装置に装着した後は、冷却窒素を吹き付けることによって-160°Cを保ち低温下での測定を可能とする実験システムを京都大学化学研究所に構築することが出来た。この実験システムは、グルタチオン合成酵素以外の酵素の結晶でも利用可能であり、汎用性のあることが判明した。グルタチオン合成酵素による遷移状態アナログのリン酸化の系については、現在、キセノンフラッシュ光分解によって反応開始後、瞬間冷却によって反応をほとんど停止させた状態でX線回折強度を測定する系を開発中であり、その系が構築できれば、標的としたリン酸化直前の構造を捕らえるための方法は完成できたといえるであろう。

また、合成した遷移状態アナログが実は酵素の活性中心で、酵素の作用によりATPからリン酸基の転移を受けリン酸化させることによって強力な阻害剤へと変換されることを見いだした。そこで、そのリン酸化反応のうち、リン酸化される直前の酵素:遷移状態アナログ複合体を迅速X線結晶解析の標的に選んだ。1.結晶状態での酵素反応の同調と反応速度解析結晶状態でグルタチオン合成酵素が触媒する、ATPから遷移状態アナログへのリン酸基転移反応を同調させるため、ATPの代わりに、caged-ATPと呼ばれる、光分解性のATP前駆体を用いて酵素:アナログ:caged-ATP複合体を結晶化した。そして、キセノンランプを用いたフラッシュ光分解により、caged-ATPからATPを一斉放出させることによって、結晶状態で目的とするリン酸転移反応を同調させる系を構築することができた。さらに、HPLCを用いて、caged-ATP、ATP、ADPの量的変化を追跡することにより、反応速度を求めた。その結果、20°Cでは、数秒で反応が終了することが判明した。しかし、-20°Cに冷却することにより、半減期を3分程度まで遅らせることが出来た。2.迅速X線結晶構造解析システムの構築(1)X線回折強度データ測定速度の向上。当初の計画では、CCD検出器を用いて、2秒以内に1枚のデータを測定できる系を構築する予定であったが、直前に、CCD検出器の故障が明らかとなり、測定に至ることが出来なかった。しかし、イメージングプレート(IP)を検出器とする装置を代わりに用いて測定時間の短縮を試みた。その結果、シンクロトロン放射光を用いることで、実験室系では10時間かかる測定時間を1時間まで短縮することが出来た。そこで、-20°Cで結晶を冷却しながら、前述のグルタチオン合成酵素複合体の結晶について、フラッシュ光分解によって反応開始後、X線回折強度の測定を行ったところ、結晶中においても、溶液中と同様反応が進行し、リン酸化が終了した状態の構造を捕らえることが出来た。すなわち、この反応で得られた構造を、予め溶液中でリン酸化を行わせた後に結晶化した場合の構造と比較したところ、両者は完全に一致していた。(2)低温下でのX線結晶解析システムの構築。さらに、実質的な時間分解能を向上させるため、-160°Cに至る温度まで結晶を冷却する系を構築した。そのためには、50%もの溶媒(水)を含む酵素の結晶を水が氷になることによって結晶が破壊されないように冷却しなければならない。すなわち、瞬間冷却によって、水をガラス状態へと一気に冷却しなければならない。条件検討の結果、ナイロンループに抄くい取った結晶を直接液体窒素中に漬けることで結晶性を損なうことなく-160°Cまで冷却し、X線回折強度測定装置に装着した後は、冷却窒素を吹き付けることによって-160°Cを保ち低温下での測定を可能とする実験システムを京都大学化学研究所に構築することが出来た。この実験システムは、グルタチオン合成酵素以外の酵素の結晶でも利用可能であり、汎用性のあることが判明した。
初期人類歯牙化石の三次元的形態解析

本研究では非接触型レーザー3次元形状計測装置とマイクロCT装置を用いて歯冠部の高解像度三次元表面形状データを取得し、これらを基に比較形態学的解析を行い、初期人類の歯牙形態特徴を論ずることを目的とした。本研究では、産業用マイクロCTを用い、数100枚におよぶ連続断面からなるCTボリュームデータセットを効率よく取得し、そこから歯冠表面の形状データを精度よく抽出し、レーザー計測装置による計測データと同様に解析する方法を開発した。特に、双方による表面計測データを統合的に扱う画像解析システムを構築し、デジタル計測におけるその精度を検証した。また、歪みの少ないCTデータを利用することにより、比較標本を充実することが可能となり、現代人32、チンパンジー40、ボノボ27、オランウータン42、ゴリラ10の大臼歯についてCTデータを取得した。初期人類標本はアルディピテクスをも含む大臼歯の高精度模型53点についてレーザー三次元計測を実施した。これらについて形態解析を遂行中であるが、下顎第一大臼歯について初期人類の特徴を新たに示すことができた。果実食のチンパンジーとオランウータンは咬合面面積が相対的に広く、歯冠高が低く、ゴリラは稜線が発達し、咬頭が高く咬合面が深いことで特徴づけされる。これに対し、初期人類の下顎第一大臼歯は磨耗後の咬合面積が大きく、歯冠基底部の高さが高く、堅い食物への適応と磨耗耐性においてすぐれていることが判明した。初期人類の中で、咬頭面積などで著しく異なる頑丈型そうでない猿人を比較すると、機能的意味のあるパラメータにおいては、違いが以外に少なく、双方の違いは質的にはなく、量的なものであることが示唆された。今後は初期人類型の機能的特徴が600から400万年前の間にどのように出現したか追及する。本研究ではマイクロCTによる歯冠部計測データと従来の表面形状計測データの双方を統一的に扱う三次元解析システムを開発した。従来の表面形状計測データ解析システム(3Dルーグル)をアップグレードし、マイクロCTによる歯冠計測データを高精度で移入するシステムを構築した。一方で、マイクロCT装置を用い、歯冠形状を高精度で再構築するための最適な方法を確立し、その経験精度を明らかにした。次に現代人、現生類人猿などの大臼歯、合計78点についてCT撮影を実施した。このデータ群をもとに今後、初期人類歯牙化石の比較形態解析を進める。方法論的成果は以下の通りである。1)CTデータから歯冠エナメル質の内外表面形状を三次元的に抽出する方法を3通り検討した。中でも重液を使用した撮影法を考案し、歯頚部を含めたエナメル表面形状全体を客観的に抽出することに成功した。2)フィルターによるビーム調整、ビュー数、積算、スライス厚さなどのCT撮影条件を検討し、beam hardeningとpartial volume effectの影響を低く保つことにより、1ボクセル以内の精度の形状抽出に必要な諸条件を決定した。3)CTデータによる歯冠形状データから表面形状データを導出するための等値輪郭線法を考案した。4)3Dルーグルの新たなZ-mapレンダリング法を開発し、従来のものよりエッジ部で1ピクセルほどの精度の向上を実現した。また、歯冠計測時の計測点指定法、軸決定法などについて新たなルーティンを考案した。5)3DルーグルおよびCTルーグルの側長、表面積、断面積、投影面積、体積などの計測におけるデジタル誤差を検討し、格子密度との関連を明らかにした。また、本システムにおいて、CTデータによる表面形状データと従来の表面形状計測データとの間の整合性を検証した。

前年度の研究ではマイクロフォーカスX線CT装置とレーザー三次元表面形状計測機の双方による入力データを取り扱う三次元計測解析システムを確立し、歯冠計測におけるその精度を検証した。本年度では、昨年度に引き続き三次元データの計測入力を進めると同時に、一部のものについて歯冠外表面計測用の表面形状データを作製し、機能的観点から初期人類の歯牙形態の比較形態解析を行った。マイクロCTによるヴォリュームデータ計測としては、現生類人猿などの未咬耗(もしくは極微小咬耗)大臼歯30点についてCT撮影を実施した。これらと昨年度分のCT撮影標本のうち、下顎第一大臼歯25点について表面形状データを抽出し、比較解析に用いた。レーザー三次元計測としては、初期人類の上下顎第一および第二大臼歯の高精度歯冠模型52点について6面計測を実施し、これらのうち下顎第一大臼歯19点について計測用の5面合成データを作成した。比較解析をこれら44点の下顎第一大臼歯について行った。方法としては、歯冠部を機能的単位に分けて分析する目的で12計測項目を設け、種ごとの特徴を変数ごとに検討した。その結果、繊維質を多く含む食性のゴリラではPhase I領域の稜線が発達し、完熟果実を多食するチンパンジーとオランウータンでは咬合面積が広いことが数量的に示された。初期人類の第一大臼歯は、磨耗後の咬合面積が大きいことと、歯冠基底部の高さが高いことが数量的に明らかにされた。初期人類大臼歯のこれらの形態特徴はcrushing/grindingに重点を置き、耐磨耗性に優れたの歯冠形態構造と解釈された。本年度は、前二年度の研究によって得られた初期人類大臼歯の歯冠計測データの解析をさらに進めた。対象としたデータセットはレーザー三次元計測による初期人類各種の臼歯と、主としてマイクロCTによるヒト、ゴリラ、チンパンジー、オランウータンの比較対象標本群からなり、本年度には、新たにオランウータンとボノボの大臼歯のCT画像データを取得した。また本年度は、440万年前のアルディピテクス・ラミダスの下顎第一大臼歯の3次元表面形状計測データから、咀嚼機能を表すと考えられる各種形態パラメータを抽出し、アウストラロピテクス各種と現生対象群の大臼歯との比較解析を進めた。比較は以下の諸特徴について行った。1)切り裂き機能を表す頬側と舌側稜線の発達程度、2)磨耗初期状態における破砕高率と関連する咬合面窩面積、3)耐磨耗性と関連する歯冠基底部高、4)磨耗時における歯冠咬合面面積。これらの諸特徴を複数のパラメータを用いて検討し、種間比較では大きさによる基準化を数通りの方法で試みた。その結果、アルディピクスの大臼歯は果実食型のチンパンジー、オランウータンと共通する部分が多く見られた。一方、400万年前以後のアウストラロピテクス類と類似する点も見出された。また、アウストラロピテクス内の頑丈型(アウストラロピテウクス・エチオピクス、アウストラロピテクス・ロブストス、アウストラロピテクス・ボイセイ)とそうでない種群(アウストラロピテクス・アファレンシス、アウストラロピテクス・アフリカヌス、初期ホモ属)においては、上記諸特徴の変異幅が広く、多変量空間における双方の種群の分布域が広く重なり合い、両群の大臼歯の機能的特徴が大きく変わらないことが判明した。従って、初期人類においては、約400万年前までに一定の咀嚼機能が進化し、定着したことが示唆された。
量子液晶の制御と機能

近年、様々な物質において、その電子状態が流動的でありながら、同時に、異方性を獲得する事例が次々と発見されている。このような物質群を量子液晶と名付けることができる。量子液晶の最大の特徴は、自己組織化した柔軟な電子状態を持ち、外場に対して高速かつ巨大な応答を示す点にある。我々は、高速巨大応答を生み出す素励起の実体を解明し、外場による量子液晶の素励起・配向性の制御を行い、機能の創出を目指す。
19世紀江戸幕府におけるオランダ語百科事典の翻訳

江戸幕府旧蔵輸入蘭書のデータベースを作成するとともに、19世紀江戸幕府による『厚生新編』の編纂過程について考察するため、国内各機関に所蔵されている『厚生新編』および『生計纂要』・『蘭〓摘芳』・『榕菴随筆』など関連資料の書誌的比較を行った。また原本とされるショメール『日用百科事典』について『厚生新編』との項目の比較と18世紀の他のオランダ語辞典との書誌的比較を行った江戸幕府旧蔵輸入蘭書のデータベースを作成するとともに、19世紀江戸幕府による『厚生新編』の編纂過程について考察するため、国内各機関に所蔵されている『厚生新編』および『生計纂要』・『蘭〓摘芳』・『榕菴随筆』など関連資料の書誌的比較を行った。また原本とされるショメール『日用百科事典』について『厚生新編』との項目の比較と18世紀の他のオランダ語辞典との書誌的比較を行った第1年次の基礎作業として以下のことを行った1.静岡県立中央図書館葵文庫所蔵の旧江戸幕府所蔵蘭書739冊のうち、長崎奉行所経由で蕃書調所に収蔵されたことが明らかな198冊を選び、静岡県立中央図書館所蔵の紙焼き(40冊)・マイクロフィルム(53冊)および静岡県立総合教育センター保管の原本(105冊)の内容および書誌情報の確認調査を行った2.国立国会図書館古典籍資料室所蔵の旧江戸幕府所蔵蘭書3722冊のうち蕃書調所に収蔵されたことが明らかな291冊を選び、このうち51冊について原本とマイクロフィルムで内容および書誌情報の確認調査を行った4.国立国会図書館古典籍資料室所蔵の洋学所(蕃書調書)頭取古賀謹一郎著『度日閑言』とSchatkamer voor Alle Standen 1842-1856との比較を行った5.慶応大学図書館貴重書室所蔵の洋学所(蕃書調書)頭取古賀謹一郎関係文書の調査を行った6.これらの調査結果にもとづき、2007年度洋学史研究会新春大会(平成19年1月27日)において研究協力者である大学院生とともに「出島オランダ商館の食糧輸入について」(八百啓介)・「蘭学者と食文化」(上野晶子=研究協力者)の研究報告を行った7.『厚生新編』の原著である国会図書館所蔵ショメールChome1の『日用百科事典』正編(オランダ語版Huishoudelijk Woordenboek 1778年版)全冊の複写を行い、AからTまでのオランダ語項目1万5096項目をコンピューターに入力し、『厚生新編』への採用状況と、『オランダ語辞典』との比較、動物・植物・鉱物・疾病・食物・人体・自然科学・化学などの分野別に分類を行った本年度は、昨年度の研究協力者(大学院生)を新たに研究分担者として、博士論文の指導と並行して、以下のように蘭学者と蘭書の比較調査を行った。(1)ショメールの『日用百科事典』(7冊本)正編の全項目(17、095項目)を入力した。この結果、『厚生新編』への採用項目数をアルファベッド別に明らかとした。(2)前年度に引き続き、これらの項目と『江戸ハルマ』『和蘭字彙』『オランダ語辞典』との比較を行った。(3)国内における大槻玄沢関係史料の調査を行い、宮城県立図書館所蔵の『生計纂要』および国立公文書館内閣文庫・東京国立博物館所蔵の『蘭?摘芳』筆録本との比較を行った。(4)国立国会図書館所蔵の江戸幕府旧蔵蘭書の調査を引き続き行い、『日用百科事典』2冊本との項目の比較をARまで行った。(5)内における宇田川榕菴関係史料の調査を行い、武田学術財団杏雨書屋所蔵の『和蘭志略稿本』『ホイス和解』(AB項目のみ)と国会図書館所蔵江戸幕府旧蔵蘭書との比較を行った。(6)国内における古智謹一郎関係史料の調査を行い、国立国会図書館所蔵の『度日閑言』とその出典となる蘭書の調査収集を行った。これにより本研究の基礎的データを完成するとともに、蕃書調所・洋学所における江戸幕府の蘭書翻訳事業に従事した個々の翻訳者の生活文化への興味の関心と、翻訳事業の出典と個人的関心との関係を明らかとした。1.宮城県立図書館において『生計纂要』の再調査を行なうとともに、国立公文書館所蔵『蘭〓摘芳』筆録本と『厚生新編』の按文の比較から『厚生新編』の成立過程について考察した。4.わが国最初の西洋百科事典である『厚生新編』項目の採用基準を明らかにすべく『日用百科事典』7冊本・2冊本と『厚生新編』『江戸ハルマ』の項目の比較一覧表を作成した。5.洋学史研究会12月例会において研究代表者・研究分担者2名で報告を行い、『洋学史研究』第26号に研究代表者・研究分担者2名で裏面の通り論文2本を執筆した。6.研究分担者は3年間の研究の成果に基づき、平成20年12月北九州市立大学大学院社会システム研究科に学位請求論文に『蘭学における食文化研究-『厚生新編』を中心として-』(A4版357頁)を提出し、同21年3月に学位を取得した。