hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
Down症患者における歯周疾患に対する遺伝子治療への検討

また、Down症に認められる早老に注目をおき,老化がテロメアDNAの短縮によるものと考えられていることから,Down症患者から得られた歯肉線維芽細胞にレトロウィルスを用いてhTERT遺伝子の導入を行いLPSで刺激し,炎症性サイトカインであるInterleukin-6(IL-6)産生量をELISAにて測定した.さらにRNAを採取し,遺伝子レベルでの発現を検討した.その結果,hTERT遺伝子導入をした細胞において,IL-6の産生量が減少し,遺伝子レベルでもLPS刺激による産生が抑えられたという結果が得られた.すでに採取した培養細胞はストックによりダメージを受けていたため、再度歯肉線維芽細胞をDown症および健常者から分離培養を行った。Down症患者および健常者から、辺縁歯肉を採取した。Down症は、歯交換期もしくはC4による抜歯時に、健常者は智歯抜歯もしくは矯正治療による便宜抜歯時に辺縁歯肉の採取を行った。Down症は6歳から17歳までの片縁歯肉を5例、健常者は18歳から32歳までに辺縁歯肉を5例採取した。従来の方法に従って、歯肉線維芽細胞の分離培養を行い、-135度にて細胞を一度ストックした後、実験時に再度培養し実験に供した。歯周病を誘発させるために、LPSを採取した。LPSの採取は、歯周病原菌によって反応が異なることが予測されたため、Actinobacillus actinomycetemcomitans (A.a.)、Campyrobacter rectus (C.rectus)およびPorphyromonas gingivalis (p.gingivalis)の3種を培養しhot phenol法にて採取した。LPS対する即時応答性を確認するために、0,3,6,9,12時間LPSを作用させ、RNA採取kitを用いてRNAを採取し、品質の確認を行った。最初に、菌種の違いによる炎症過程への影響を確認するために、培養上清を用いてELISAを行い炎症性サイトカインである1L-6の産生量および、採取したRNAを用いてRT-PCRを行い遺伝子発現レベルを確認した。培養上清中におけるIL-6産生量は、A.a.およびC.rectus由来のLPSにおいてDown症から採取した歯肉線維芽細胞の方が、健常者に比べて有意に高く、遺伝子発現レベルでも同様にDown症の方が健常者に比べて高かった。p.gingivalisにおいては、個人差が激しく検討が必要となることが判明している。Down症患者および健常者の歯肉からインフォームドコンセントを十分に行ったうえで採取し,それぞれから歯肉線維芽細胞を得た.また,近年Down症患者の歯周ポケットからは低い検出率でると言われていた、Porphyromonas gingivalis(p.gingivlais)もDown症患者における重篤な歯周疾患の原因菌として考えられるようになった.そのため,現在までDown症患者における主な原因菌として考えられていた,Actinobacillus actinomycetemcomitans (A.a.)とp.gingivalisとから,歯周病の誘発因子であるLipopolysaccharide(LPS)を採取した.得られたDown症および健常者の歯肉線維芽細胞を2種類のLPSで刺激を加えた.本来の研究目的は低く抗炎症作用物質を同定することであるが,まず菌による炎症症状の差があるか検討するため,炎症性サイトカインをELISAにて測定し,さらにRNAを採取した.その結果菌種による差が一部認められた.今後採取したRNAをマイクロアレイにて検討する予定である.遺伝子導入を行うにあたり,Down症に認められる早老に注目をおき,老化がテロメアDNAの短縮によるものと考えられていることから,Down症患者から得られた歯肉線維芽細胞にレトロウィルスを用いてhTERT遺伝子の導入を行った.次にDown症由来歯肉線維芽細胞と,hTERT遺伝子を導入したDown症由来の線維芽細胞をLPSで刺激し,炎症性サイトカインであるInterleukin-6(IL-6)産生量をELISAにて測定した.さらにRNAを採取し,遺伝子レベルでの発現を検討した.その結果,hTERT遺伝子導入をした細胞において,IL-6の産生量が減少し,遺伝子レベルでもLPS刺激による産生が抑えられたという結果が得られた.また、Down症に認められる早老に注目をおき,老化がテロメアDNAの短縮によるものと考えられていることから,Down症患者から得られた歯肉線維芽細胞にレトロウィルスを用いてhTERT遺伝子の導入を行いLPSで刺激し,炎症性サイトカインであるInterleukin-6(IL-6)産生量をELISAにて測定した.さらにRNAを採取し,遺伝子レベルでの発現を検討した.その結果,hTERT遺伝子導入をした細胞において,IL-6の産生量が減少し,遺伝子レベルでもLPS刺激による産生が抑えられたという結果が得られた.
極低温4GPa級高圧下ESRによる直交ダイマー系の高圧量子相の研究

本研究は、二次元直交ダイマー系SrCu2(BO3)2において圧力下で観測された、本系特有のスピン格子とフラストレーションにより生ずる特殊な量子状態、即ちプラケット一重項状態に関するものである。本系のプラケット状態としては、対角の相互作用を含んだ状態と含まない状態の二つの可能性があるが、本研究において開発する、0.5 K、4 GPaを同時に達成する多重極限下ESR装置によりその詳細を明らかにする。
蛋白質の分子内キャビティーとゆらぎ発現機構の研究

大腸菌ジヒドロ葉酸還元酵素(DHFR)をモデル蛋白質として、その部分比容(v)と断熱圧縮率(β_s)に及ぼす構造因子を詳細に解析し、ゆらぎの視点から立体構造構築原理を考察した。DHFRのvとβ_sの温度依存性は他の球状蛋白質に比べて23倍大きく、CDや蛍光スペクトルの温度依存性と相関が見られた。このことは、DHFRは天然状態においてすでにモルテングロビュール状態にあり、そのキャビティーは温度の上昇により容易に膨張することを示している(論文投稿中)。天然状態のDHFRと各種リガンド複合体のβ_sはX線構造から得られたキャビティー量と良い相関があり、キャビティーがゆらぎの発現に重要な役割を演じていることがわかった(論文作成中)。3つのフレキシブルループに位置するGly67,Gly121,Ala145を種々のアミノ酸に置換したところ、vとβ_sは大きく変化することを見出した。67位変異体G67A,G67V,G67LのX線構造解析の結果、67位のループの温度因子が変化するだけでなく、他のループの温度因子も変化しており、分子内キャビティーの数・体積も圧縮率変化に対応して変化することがわかった(論文作成中)。これらの結果は、僅かの熱エネルギーやリガンド結合、アミノ酸置換による局所構造の違いが、分子全体の構造のゆらぎに影響を及ぼしていること、また、分子内キャビティーが構造のゆらぎに重要な役割を演じていることを示している。このことから、圧縮率は蛋白質の立体構造を敏感に反映しており、圧縮率データとX線構造解析やアミノ酸置換などの微視的解析手段とを併用することにより、立体構造構築原理やゆらぎの発現機構の解明に有用な情報が得られることがわかった。
グルノーブル盆地における地下構造調査と地震被害予測

本研究で明らかにしようとしているのは、日本とはおかれている地質環境が大いに異なる欧州において、日本がここ10年間で精力的に開発してきた強震動予測・被害予測スキームが同じように有効であるかどうかを確認することである。その目的のため、カウンターパートとして共同研究の申し入れがあったフランスのグルノーブル大学と共同で、微動計測によってグルノーブル盆地の地下構造探査を実施し、それに基づいて想定される最大地震によるグルノーブル市内の強震動を予測する。この調査研究によって、日本独自の技術として発達してきた強震動予測技術が、地質環境が異なる地域に対しても適用できる汎用性を有していることが示されるものと期待される。平成19年度には2005年フランス南西部・グルノーブル盆地の南側で発生したLaffrey2005イベントで観測された非常に長い継続時間をもつ記録の再現を目指して地震動の時刻歴波形の継続時間とエネルギーを抽出し、グルノーブル盆地で発生した他の地震記録及び三次元差分法を用いたシミュレーション結果により分析を行った。その結果岩盤側に風化層を考慮することにより岩盤側の継続時間を増大できること、表層を柔らかくすることで多くの観測点の継続時間は説明できるが北東部の特に継続時間の長い地域の説明には局所的にかなり軟弱な表層を考える必要があること、が指摘できた。一方、その地域での地盤調査の分析も進め、ボーリングでもアレー微動でも表層に約25mの層厚の軟弱な表層が存在していることがわかった。従って観測された非常に長い継続時間はこの表層に起因する可能性が高い。地震動の予測精度については、観測されている比較的近地の小規模地震の記録を用いて行う。この調査研究によって、日本独自の技術として発達してきた強震動予測技術が、地質環境が異なる地域に対しても適用できる汎用性を有していること、従って世界に広がる地震に対して脆弱な地域に広く適用していくことができるということが示されるものと期待される。この目的のため、今年度はまず、すでにこれまで調査されているグルノーブル盆地に関するデータを収集・整理し、全体像を把握するとともに、不足している情報を抽出して、現地での観測計画を立案した。現地においては8.月30・31・9月1日に第3回国際表層地質の地震動に与える影響シンポジウムESG06が開催されたのでそれに参加して関連する研究発表をするとともに、本研究に関連する研究発表を聴講して情報収集に努めた。その後、現地カウンターパートのProf. BardやProf. Cornouと打ち合わせ、9月2日から9月5日にかけて現地の4箇所において大・中・小のサイズの異なるアレー微動計測を行った。帰国後データの分析を開始し、地点情報を整理してF-K解析の準備を進めてきているところである。今後アレー解析を実施してRayliegh波の位相速度を求め、それから地下構造を求めて盆地の全体モデルを構築する。

この調査研究によって、日本独自の技術として発達してきた強震動予測技術が、地質環境が異なる地域に対しても適用できる汎用性を有していること、従って世界に広がる地震に対して脆弱な地域に広く適用していくことができるということが示されるものと期待される。平成19年度には2005年フランス南西部・グルノーブル盆地の南側で発生したLaffrey2005イベントで観測された非常に長い継続時間をもつ記録の再現を目指して地震動の時刻歴波形の継続時間とエネルギーを抽出し、グルノーブル盆地で発生した他の地震記録及び三次元差分法を用いたシミュレーション結果により分析を行った。その結果岩盤側に風化層を考慮することにより岩盤側の継続時間を増大できること、表層を柔らかくすることで多くの観測点の継続時間は説明できるが北東部の特に継続時間の長い地域の継続時間は説明できず、局所的にかなり軟弱な表層を考える必要があること、が指摘できた。一方、その地域での地盤調査の分析も進め、ボーリングでもアレー微動でも表層に約25mの層厚の軟弱な表層が存在していることがわかった。従って観測された非常に長い継続時間はこの表層に起因する可能性が高い。
ナイジェリア人の歯科疾患実態調査, とくに日本人との相違について(追跡調査)

1981年に日本人とナイジェリア人の歯科疾患の罹患状態を比較するためにイフエ大学と共同研究し,その5年後の追跡調査をして次の成果をえた.1.齲蝕罹患者率は都市部で男は26.9%から34.7%へ,女は31.4%から40.2%へ増え,農村部では男は31.5%から11.7%へ,女は34.9%から14.7%へ減った.男〈女. 2.一人平均のDMF歯数と歯面数は6歳ー8歳, 9歳ー11歳では増え, 12歳ー14歳, 15歳ー17歳では減っていた.日本の12歳は5.91歯であるのに,ナイジェリアの12ー14歳は0.3歯であった.3.一人平均df歯数及びdf歯面数は農村部では著しく減少していた.4.一人平均DMF歯数は都市部では第一大臼歯で増加,その他の歯種では減少し,農村部では第二大臼歯が9歳から11歳で少し多いが,第一大臼歯を含めて歯種では減少していた.追跡調査結果1.一人平均df歯数は減少していた.一人平均DMF歯数は都市部で増え,教村部で減少していた.2.齲蝕の年次推移:1981年と1986年ともに齲蝕のあった者と1981年に齲蝕がなく, 1986年に齲蝕のあった者は都市部の方が多かった.3.1981年に齲蝕を持っていて1986年に齲蝕がなかった者,また, 1981年に齲蝕がなく, 1986年にも齲蝕がなかった者は農村部に多かった.4.永久歯の齲蝕:都市部の第一大臼歯では,健全からC1から充填になった者,健全から喪失になった者, C1から充填になった者が,各々7歯,1歯,1歯,1歯であり, C1からC1と変わらなかった者が1歯,C1から健全になった者が1歯であった.大に大臼歯では健全からC1になった者が3歯であった.農村部の第一大臼歯では,健全からC1になった者, C3からC4になった者が各々1歯,C1からC1, C2からC2と変わらなかった者が各々1歯, C1から健全になった者, C2から健全になった者が各々4歯, 1歯であった.第二大臼歯では健全からC1になった者が5歯,C1から健全になった者が1歯であった.第三大臼歯では健全からC1担った者が1歯だけであった.ナイジェリアの子供達の齲蝕は5年前と比べて都市部では,乳歯・永久歯で少し増え,農村部では減少していた.永久歯の初期齲蝕は咬耗によって健全に逆戻りする.この傾向は農村部で顕著にみられた.歯周病罹患:3ー20歳までの673名で歯周疾患の疫学的調査をCPITNを用いて行い,次のような結果が得られた. 84.2%に罹患が認められ,歯肉炎が主で,歯石沈着が著明であるのに,歯周組織の破壊は極めて軽度であった.これは食生活とも関係が深く,この地域での口腔衛生とprophylaxisの必要性がある.1981年に日本人とナイジェリア人の歯科疾患の罹患状態を比較するためにイフエ大学と共同研究し,その5年後の追跡調査をして次の成果をえた.1.齲蝕罹患者率は都市部で男は26.9%から34.7%へ,女は31.4%から40.2%へ増え,農村部では男は31.5%から11.7%へ,女は34.9%から14.7%へ減った.男〈女. 2.一人平均のDMF歯数と歯面数は6歳ー8歳, 9歳ー11歳では増え, 12歳ー14歳, 15歳ー17歳では減っていた.日本の12歳は5.91歯であるのに,ナイジェリアの12ー14歳は0.3歯であった.3.一人平均df歯数及びdf歯面数は農村部では著しく減少していた.4.一人平均DMF歯数は都市部では第一大臼歯で増加,その他の歯種では減少し,農村部では第二大臼歯が9歳から11歳で少し多いが,第一大臼歯を含めて歯種では減少していた.追跡調査結果1.一人平均df歯数は減少していた.一人平均DMF歯数は都市部で増え,教村部で減少していた.

2.齲蝕の年次推移:1981年と1986年ともに齲蝕のあった者と1981年に齲蝕がなく, 1986年に齲蝕のあった者は都市部の方が多かった.3.1981年に齲蝕を持っていて1986年に齲蝕がなかった者,また, 1981年に齲蝕がなく, 1986年にも齲蝕がなかった者は農村部に多かった.4.永久歯の齲蝕:都市部の第一大臼歯では,健全からC1から充填になった者,健全から喪失になった者, C1から充填になった者が,各々7歯,1歯,1歯,1歯であり, C1からC1と変わらなかった者が1歯,C1から健全になった者が1歯であった.大に大臼歯では健全からC1になった者が3歯であった.農村部の第一大臼歯では,健全からC1になった者, C3からC4になった者が各々1歯,C1からC1, C2からC2と変わらなかった者が各々1歯, C1から健全になった者, C2から健全になった者が各々4歯, 1歯であった.第二大臼歯では健全からC1になった者が5歯,C1から健全になった者が1歯であった.第三大臼歯では健全からC1担った者が1歯だけであった.ナイジェリアの子供達の齲蝕は5年前と比べて都市部では,乳歯・永久歯で少し増え,農村部では減少していた.永久歯の初期齲蝕は咬耗によって健全に逆戻りする.この傾向は農村部で顕著にみられた.歯周病罹患:3ー20歳までの673名で歯周疾患の疫学的調査をCPITNを用いて行い,次のような結果が得られた. 84.2%に罹患が認められ,歯肉炎が主で,歯石沈着が著明であるのに,歯周組織の破壊は極めて軽度であった.これは食生活とも関係が深く,この地域での口腔衛生とprophylaxisの必要性がある.
感情障害における熱ショック蛋白質mRNA新型転写の生物学的マーカーとしての可能性

我々は感情障害においてHeat Shock Proteinの発現に何らかの異常が認められるのではと作業仮説をたてた。予備的研究としてうつ病患者(N=18)と健常対照者(N=10)の抹消血リンパ球でのHSP70 mRNAをRT-PCR(reverse transcript-polymerase chain reaction)法を用いて検索した。HSP70mRNAの5'末端より447bpに設定してRT-PCRを行った結果健常対照群では全例447bpの既報のmRNAをみとめたが、うつ病群では全例において285bpのmRNAを検出した(うち1例はいずれのHSP70mRNAも認めた)。285bpのmRNAのシークエンスを行ったところ、既報のmRNAと比較して5'末端より144番目から305番目まで欠損していることが判明した。これらのうつ病患者のゲノムDNAを検索した結果、162bpの欠損は認めなかったことから285bpのmRNAの発現は転写段階での新たなスプライシングが原因と考えられた(Biochemical and Biophysical Research Communications 1996)。本年度は症例数を増やすことと症状の評価を行い、臨床像と転写異常の関係について調べた。また脳内においてHeat Shock Proteinがどのようなストレスにて発現するかを調べるため動物実験行い、ムスカリニック受容体が関係している可能性を得た(Brain Research 1997)。今後の課題としては精神分裂病、神経症、人格障害など他の精神疾患においての検討をすすめる必要があると思われる。我々は感情障害においてHeat Shock Proteinの発現に何らかの異常が認められるのではと作業仮説を立てた。予備的研究としてうつ病患者(N=18)と健常対照者(N=10)の末梢血リンパ球でのHSP70 mRNAをRT-PCR(reverse transcript-polymerase chain reaction)法を用いて検索した。これらのうつ病患者のゲノムDNAを検索した結果、162bpの欠損は認められなかったことから285bpのmRNAの発現は転写段階での新たなスプライシングが原因と考えられた(Biochemical and Biophysical Research Communications 1996)。
日本語準母語話者のコミュニケーション規範に関する調査研究

本調査は2000年から2003年にかけて13名の在日外国人に対するインターアクション・インタビューを用いて採集した具体的に経験した出来事に対する評価と選択された調整行動の報告に基づいている。分析の結果、以下の点が明らかになった。(1)在歴などに関係なく、家族や交友などの情緒的かつ包括的なネットワークは、母語文化ネットワークによって、日常的かつ個別的なネットワークは相手文化ネットワークによって占められていた。(2)本語非母語話者は評価において、母語文化規範をベースとする場合と、相手言語文化規範(=日本)をベースとする場合が見られた。否定的評価の多くは社会的役割関係を経験する仕事や教育領域と、人間関係を結ばない日常生活とに集中して報告された。さらに1回限りの単純評価と数回の出来事にまたがる複雑評価とが見られたが、複雑評価は一方で評価を固定化してしまう場合も見られたが、多くの場合には相手言語文化規範の理解へと向かう傾向が見られた。(3)インターアクションの調整は、母語文化規範の維持あるいは抑制に向かう調整、相手文化規範の促進あるいは抑制に向かう調整、交渉によって中間的な規範形成を試みる接触規範に向かう調整が見られた。接触規範に向かう調幣は、行動自体は相手規範に従ったり、特例を認めてもらうように交渉したりするなど、日本人との共生を目的としたストラテジーとして注目される。以上のような結果から、日本の社会文化規範をそのまま習得していくという単線モデルによっては日本語コミュニケーション規範の習得プロセスは理解できないことが示唆された。むしろ、そこには自分の持っている社会文化規範との相克があり、相手文化規範に対する消極的な回避や積極的な受け入れがあり、さらにはプライベートな管理によって接触する相手との間に新たな規範を作り上げようとするなど、複雑で動的なメカニズムが見られる。1.本年度の調査の概要本年度の研究実施計画にもとづいて、滞在5年以上の在日外国人について予備調査を行った。ネットワーク研究の方法論として有力視されている「友人の友人」という関係にある日本語準母語話者を選定し、インターアクション・インタビュー、およびリコール・インタビューを行った。とくに、社会言語的および社会文化的な規範についてデータを収集した。2.新たな知見(1)問題分析を行ったところ、家庭、交友、趣味・文化、日常生活、教育、仕事、公的生活、言語、社会言語の各領域(domain)で、日本人とのインターアクションに対する留意が見られた。(2)留意の内容をカテゴリーに分類すると、信条・一般的印象、人間関係、役割関係、話題、コミュニケーションの点火、意図・感情の表現態度、サービス・消費生活、場面固有の行動、日本社会に特有の現象、などがあった。(3)インターアクションに関する留意は、同国人ネットワークと日本人ネットワークの両方で見られたが、同国人ネットワークでは、とくに日本人との交友領域での留意内容とその解釈が互いに交換されていた。ネットワークを通じた外国人のコミュニケーション規範の習得が示唆される。(4)収集された留意内容ごとに、評価プロセスを分析した。単純評価と評価プロセスが何回かにわたる複雑評価とがみいだされたが、とくに複雑評価が規範の習得にとって重要ではないかと考えられる。(5)評価において援用される規範としては、母語規範、特定の接触場面に対する期待、他の場合との比較、能力の有無、などがあった。このうち、期待と比較は、接触規範あるいは中間規範を形成する可能性のあるものとして注目に値すると思われる。以上のように、いまだ知見は部分的にすぎないが、データ数を増やすことにより、さらにコミュニケーション規範習得のモデルの構築を試みたい。1.本年度の調査の概要2年目にあたる本年度は、滞在期間を1年から10年に広げて、日本に在日する外国人7名のコミュニケーション規範について、1日調査といわれるインターアクション・インタビュー、およびリコール・インタビューによりデータ収集を行った。

さらに、データをもとにコミュニケーション規範とインターアクション管理のかかわりについて考察し、論文にまとめた。2.新たな知見(1)コミュニケーション規範が在日外国人の社会的ネットワークの種類と質とに関わって習得されることについて、間接的なデータによる裏付けが得られた。(2)異文化インターアクションにおける管理のうち、その最終段階にあたる調整行動は、母語規範の維持または抑制に向かう調整、相手言語規範(日本の規範)の習得または抑制に向かう調整、そしてどちらとも異なる接触規範の創造に向かう調整とに分類できることが明らかになった。つまり、インターアクション管理において用いられる調整ストラテジーを選択するに際して用いられる規範のカテゴリーが3つに分類されるということである。(3)インターアクション管理において選択されるストラテジーは、活用されるコミュニケーション・リソースに制約を受けていることも明らかになった。最も活用されやすいリソースとは参加者に関わるリソースであり、在日外国人は個々のインターアクションに対して主に参加の有無によって管理を行っていた。以上のように、本年度は十分とは言えないが、調査対象者を増やしデータを収集した。さらにコミュニケーション規範のうち、昨年度の評価段階の規範の分析に続いて、インターアクション管理の調整行動(実現形)に作用する規範について集中的に考察を加えた。来年度は最終年度にあたるため、さらにデータを増しながら、コミュニケーション規範の習得とその運用メカニズムについて報告書をまとめるつもりである。平成12年度から14年度まで3年間、本調査研究では質的な調査を行い、日本語準母語話者のコミュニケーション規範について、その異文化コミュニケーションの評価プロセスと調整プロセスについて分析した結果、日本語準母語話者は多重文化使用者として3種類の規範をネットワークや領域に応じて使い分けていることが明らかになった。さらに、そうした異文化管理がパーソナル・ネットワークによっても抑制されていることも明らかにした。研究の結果をまとめると以下のようになる。(1)異文化コミュニケーションの評価は、日本に固有な場面、人間関係・役割関係、話題、感情・意見表出、個人的な能力(日本語能力を含む)などで否定的な評価が多い。単純評価および複雑評価のうち、複雑評価は、評価の固定化につながる累積的評価と、異文化習得につながる再評価があった。(2)肯定的評価および否定的評価は、母語文化と相手言語文化の相違と類似、相手言語文化コミュニケーションでの出来事の比較、によって生成されている。母語文化ネットワークからの評価の再生産は見つけられたが、多くの場合は、具体的な経験に基づいて評価が行われている。
中世フランス写本テクスト学への電子データベースの応用

フランス中世(オック語)の抒情詩における写本テクスト学(複数の写本により伝えられるヴァリアントを本文校訂のさいにいかに扱うべきか,そしてそれが解釈にどう関わるのか)と,そのさいの電子データベースの応用について,マルカブリュのテクストを中心に考察を加えた。成果として2012年6月の第10回オック語オック文学研究国際学会において,マルカブリュの2作品のテクスト校訂と解釈につき発表をおこない,フォルケ・ド・マルセイユの校訂につき,従来の校訂における問題点と「イタリア学派」に属するスキラチョーティ氏による校訂の新しい方法論を確認して,2013年3月に同志社大学における「ロマニスト研究会」の発表でまとめてみた。今年度は研究課題の準備期間として,マルカブリュにかんする資料収集をおこない,本務校の大学院の紀要に執筆した論文において,難解な「椋鳥の歌」2部作についての解釈と校訂を試みた。この過程でマルカブリュについて,1909年のDejeanneによる校訂のほか,2000年に出版されたGaunt, Harvey, Patersonの3名による校訂,さらにこの作品に特化したものとして,Lucia lazzeriniによる校訂(2000年)のいずれも決定的というにはほど遠いテクストであることが確認できた。もちろん私の提出した校訂と解釈も,この作品のむずかしさを解決できたわけではないが,2部作中の後半19行目の解釈をつうじて,その写本を"sui"と読むか"fui"と読むかで,どれだけこの作品への展望が変わってくるかを示そうと試みた。この作品については,さらに研究を深めたうえで,研究2年目,2011年度(平成23年度)の予定されている国際学会(モンペリエ大学)で発表することにより,各国の研究者の批判をあおぐつもりである。この機会を利用して,マルカブリュという作者についての理解を深められればと期待している。また今年度は,ガウセルム・ファイディイトにかんしての前回の国際学会(アーヘン大学)の発表がそのactesに掲載されることになったので,さまざまの研究者に指摘された点を再吟味して原稿をアーヘン大学の主催者アンジェリカ・リーガー教授に送った。2010年中に刊行予定であったがまだ発行されていない。今年度は,研究課題の2年目で,本務校の特別研究期間と重なったおかげで、6-7月と2月に渡仏が可能となり,大いに研究を進捗させることができた。(2)フランス国立図書館(BnF)およびアルスナル図書館において,トルバドゥールの抒情詩の写本におけるヴァリアントの扱いと電子テクストの関連を調査した。(3)来年度は研究課題最終年であり,フランス高等実習研究院(EPHE>教授であるファビオ・ジネリ先生を招聘する計画であるが,そのジネリ先生と研究の打ち合わせを行った。(4)2月には,ジネリ先生のEPHEの講義・講演に参加し,電子テクストと写本について,ヴァリアントの電子化について知見を得ることができた。本年度は,フランス中世(オック語)の抒情詩における写本テクスト学(複数の写本により伝えられるヴァリアントを本文校訂のさいにいかに扱うべきか,そしてそれが解釈にどう関わるのか)と,そのさいの電子データベースの応用について,マルカブリュのテクストを中心に考察する研究課題の最終年度にあたる。実績として,2012年6月にモンペリエ大学とベジエのCIRDOCで開催された第10回オック語オック文学研究国際学会において,マルカブリュの「椋鳥の歌」と呼ばれる2作品の文献学的なテクスト校訂をもとにした解釈につき研究発表をおこなったこと,そしてマルカブリュより少し後の12世紀末に詩作をおこなったフォルケ・ド・マルセイユという詩人の校訂につき,ストロンスキーによる従来の校訂における問題点と「イタリア学派」に属するスキラチョーティ氏による校訂の新しい方法論を確認できた。これは2013年3月に同志社大学における「ロマニスト研究会」で発表をおこなうことである程度まとめられたかと思う。本研究において実現にいたらなかったことを2点あげておきたい。まず,リケッツ教授によるCOM3の出版がけっきょく期間中になされなかったために,散文によるオック語テクストの電子化されたものに接することができず,散文テクストの検討はかなわなかった。これは教授のお話によればイギリスでの助成金の不足により,人員が確保できず,計画が進捗しなかったことによるらしい。次に,ファビオ・ジネリ教授(フランス国立高等実習研究院)のセミナーを開催できなかったことである。これはカタロニアのVeAg写本についての国際共同研究集会を2013年6月に控えており,残念だが伸ばしていただきたいとの申し出でよるものである。研究課題の写本テクストと電子テクストの関連につき,研究サイドから見た場合のさまざまの知見が得られつつある。

また渡仏時にジネリ教授の講演・授業に参加することができて,バルセロナにあるカタロニア写本VeAgの重要性にも目をひらかされた。ジネリ教授の招聘はご多忙のため,2012年度3月(2013年ン3月)になりそうである。24年度が最終年度であるため、記入しない。ジネリ教援の授業と講演において,トルバドゥールのフォルケ・ド・マルセイユの新しい校訂版をもとに,とくにVeAgというカタロニア写本の重要性を知ることができた。マイナーな写本とされ,私もこれまでほとんと考慮にいれてこなかった写本であるが,今後私の研究においても,C写本だけでなくVeAg写本など独自の読みも考慮に入れる必要があることがわかった。
T形合流管における乱流混合現象の解明と効率的混合制御法の開発

本研究では,工学的に重要なT形合流管として,主管と枝管が対向し両者に直角に合流管が接続された対向形合流管,および主管に対し枝管が直角に接続された直交流合流管の2種類を取り上げ,管内の乱流混合機構について実験的に明らかにした.また,一連の実験で得られた知見に基づき,噴流を主管流に作用させることにより乱流混合を促進・制御する手法を開発し,有効性を確認した.対向形合流管では,液乱流において対向管側流体に蛍光塗料を溶解させ,PIVとPLIFによる速度場と濃度場の計測を行った.計測の結果,合流直後のエッジ部近傍にははく離泡が形成されるとともに,合流管の断面内には大規模な二次流れが生じるため,合流管内の流れ場と濃度場は複雑な3次元構造を有することが明らかになった.また,混合部の瞬時速度場を固有直交関数展開により解析することにより,混合層は流動方向に水力直径の数倍に及ぶ大規模なスケールを維持しながら,スパン方向に揺動していることが判明した.また,乱流物質流束の計測から,乱流混合が上記のスパン方向の揺動に加えて,主管流の回転的運動により支配されていることが明らかになった.直交形合流管においては,高温空気流と低温空気流が合流・混合する場合を取り上げ,流動場の3次元構造と温度混合層における乱流熱輸送のメカニズムについて明らかにした.合流直後の主管内には3次元形状をもつはく離泡が形成され,その周囲のせん断層では強い乱れが生成される.しかし,この乱れは混合層の下側に存在するため,乱流混合には直接寄与せず,混合層の発達は下流域で停滞することが判明した.こうした実験結果から,本研究では,合流部の上流側エッジ部において噴流を主流に作用させることで,混合層の上部に強い乱れを発生させ,噴流速度を変化させることにより変動速度の強度および混合の状態を制御する手法を考案し,その有効性を実験的に明らかにした.本研究では,工学的に重要なT形合流管として,主管と枝管が対向し両者に直角に合流管が接続された対向形合流管,および主管に対し枝管が直角に接続された直交流合流管の2種類を取り上げ,管内の乱流混合機構について実験的に明らかにした.また,一連の実験で得られた知見に基づき,噴流を主管流に作用させることにより乱流混合を促進・制御する手法を開発し,有効性を確認した.対向形合流管では,液乱流において対向管側流体に蛍光塗料を溶解させ,PIVとPLIFによる速度場と濃度場の計測を行った.計測の結果,合流直後のエッジ部近傍にははく離泡が形成されるとともに,合流管の断面内には大規模な二次流れが生じるため,合流管内の流れ場と濃度場は複雑な3次元構造を有することが明らかになった.また,混合部の瞬時速度場を固有直交関数展開により解析することにより,混合層は流動方向に水力直径の数倍に及ぶ大規模なスケールを維持しながら,スパン方向に揺動していることが判明した.また,乱流物質流束の計測から,乱流混合が上記のスパン方向の揺動に加えて,主管流の回転的運動により支配されていることが明らかになった.直交形合流管においては,高温空気流と低温空気流が合流・混合する場合を取り上げ,流動場の3次元構造と温度混合層における乱流熱輸送のメカニズムについて明らかにした.合流直後の主管内には3次元形状をもつはく離泡が形成され,その周囲のせん断層では強い乱れが生成される.しかし,この乱れは混合層の下側に存在するため,乱流混合には直接寄与せず,混合層の発達は下流域で停滞することが判明した.こうした実験結果から,本研究では,合流部の上流側エッジ部において噴流を主流に作用させることで,混合層の上部に強い乱れを発生させ,噴流速度を変化させることにより変動速度の強度および混合の状態を制御する手法を考案し,その有効性を実験的に明らかにした.平成17年度は,混合制御法を開発するためのベースデータの取得を目的として,混合制御用のデバイスを設置しない状態の流路での実験に重点を置いた.試験流路としては,(1)矩形断面の主管と枝管が対向して配置され接合部で1本の管に合流する対向形T形合流管,および(2)矩形形断面の直線流路(主管)の側面に枝管を垂直に接続した直交形T形合流管,の2種類を用いた.対向形流路では供試流体として等温の水を用い,ハイスピードカメラを用いたダイナミックPIVにより速度場の時系列変化を明らかにするとともに,主管側にローダミン6Gを溶解させた状態でPLIFにより濃度場の測定も実施し,合流管内における主管流と対向管流の乱流混合過程を明らかにした.また,実験により取得したデータを固有直交関数で展開し,そこから求まる固有関数のうちエネルギー分配割合が高い低次モードを用いて場を再構成することにより,流動場と濃度場においてそれぞれ支配的となる大規模な流動構造を抽出することができた.この構造に対し外部より選択的に刺激を与えることにより,効率的な乱流促進および制御が可能になると考えられる.直交形流路では,主管に低温空気,枝管に高温空気を供給した状態で実験を行い,合流後に形成される複雑な速度場と平均温度場の特性を,PIVと熱電対列により解明した.この測定結果に基づいて合流

管内における温度混合層の位置を抽出し,混合層内でLDVと抵抗線温度計による瞬時速度と瞬時温度の同時計測を実施することにより,高・低温流間の熱輸送を支配する乱流熱流束の詳細な分布を明らかにした.このデータに基づき,従来の数値シミュレーションで多く用いられている乱流プラントル数モデルの妥当性について検討を加えた.また,乱流混合の促進・制御法の開発を目的として,乱流熱流束輸送方程式の各項を評価することにより乱流混合を支配する項を明らかにした.本年度は,矩形断面の直線流路(主管)の側面に枝管を垂直に接続した直交型T形合流管において,主流と枝管流が衝突・合流した直後の状態に注目し,まず熱線流速計による変動速度のFFT解析を行った.その結果,主流と枝管流の混合層上部では,変動速度のスペクトルに特徴的なピーク周波数が表れることが明らかになった.次に,流れの可視化により主流と枝管流が合流する界面の詳細な構造解析を行った.可視化画像を正規直交関数展開(POD)によりモード分解した結果,上記のピーク周波数は混合層の2次元的な振動に対応していること,また,合流部の流れは流路スパン方向に不規則な速度分布をもつ3次元性を示し,この流れに対して遠心力が作用した結果,混合界面にはキノコ状の縦渦が発生することが明らかになった.前者は主流軸方向の乱流熱流束の発生に寄与し,後者はそれに対して垂直方向の乱流熱流束をもたらすと考えられる.以上の結果に基づき,合流部における効率的な混合促進・制御手法として,流れのもつ固有振動数(上記のピーク周波数)に適合させた周期性をもつ微小噴流を合流部に付加することにより,温度混合層内の速度変動の強さをコントロールし,混合層の発達を促すことを試みた.T形合流管の上流側エッジ部において,スパン方向に5本のノズルを主流に対向するように設置し,そこから周期噴流を噴出させ主流に作用させた.主流と枝管流の速度比,噴流の周波数,噴流速度,ノズル間の位相などを変化させながら,合流後の変動速度強度と平均温度分布を測定して2流体の混合の状態を調査した.その結果,隣り合うノズルから互いに逆位相になるように周期的噴流を噴出した場合に速度変動が最も効果的に増幅され,2流体の混合が促進されることが明らかになった.
高等植物の種子特異的なアブシジン酸シグナル伝達ネットワークの包括的解明

種子における植物ホルモンアブシジン酸(ABA)に応答した応答タンパク質リン酸化ネットワークの解明を、分子遺伝学的手法と網羅的解析手法により目指した。シロイヌナズナの種子特異的ABA関連PP2CであるAHG1とAHG3の相互作用因子の同定とその機能解明を行った。また、プロテアソーム構成因子RPT5の変異株の解析から、その基質選択性での重要性を明らかにした。さらに、シロイヌナズナとオオムギの種子におけるABA依存的タンパク質リン酸化動態解析に成功した。種子特異的に機能するPP2CAHG1,AHG3と相互作用する転写因子群を同定している。この因子と同様に相互作用するPP2C、HAI3を同定した。これら3つPP2Cの生理機能を明らかにする目的でこれら因子の変異の多重変異株の作成を試みたが、理論的に確実に出現する個体数を調査しても見出すことは出来なかった。一方で、他のABA応答関連PP2Cの組み合わせでは三重変異株が取得されているので、AHG1,AHG3,HAI33つのPP2Cは重複しながら植物の発生、生育において、非常に重要な役割を担っていることが示唆された。また・タンパク質相互作用の様式を詳細に調べる目的で、上述因子群のタンパク質を無細胞翻訳系により作成することに成功した。更に、これら因子にGFPなどのタグを結合した遺伝子を発現する形質転換体植物の作成も進め、相互作用機構、その生理的意義の解明に向けた準備がほぼ整った。また、ABA応答関連因変異及びAHG11の機能に関する原著論文を発表した。ABAのシグナル伝達において、タンパク質のリン酸化は中枢に位置していることから、ABAによってリン酸化制御を受けるタンパク質を同定することは重要な課題である。本年度は、シロイヌナズナ植物体のリン酸化プロテオーム解析を行い、ABAや乾燥ストレスによってリン酸化されるタンパク質を多数同定した結果を原著論文にまとめた。また、同様の解析を種子のタンパク質について行うために、種子におけるABAシグナル伝達の主要因子と考えられるAHGIやAHG3等のプロテインホスファターゼ、あるいはSnRK2プロテインキナーゼの変異株の準備を進めた。ABAのシグナル伝達においてタンパク質のリン酸化は中枢に位置しており、タンパク質脱リン酸化酵素PP2Cは重要な制御因子の一つである。本課題研究では種子特異的ABA関連PP2C、AHG1, AHG3に注目し、これらの制御機構やリン酸化プロテオーム解析を進めている。これまでの研究からAHG1およびABI5とAHG1結合タンパク質の相互作用を確認している。これら2つの因子の結合が分けられるかどうか調べる目的で、AHG1結合タンパク質にランダムに変異を導入し、AHG1, ABI5それぞれの結合に影響する変異を探索した。その結果、それぞれの結合に別個に必要なアミノ酸を同定することに成功した。更に、AHG1, ABI5, AHG1結合タンパク質をプロトプラスト細胞で発現し、ABA応答性遺伝子の発現応答を検討したところ、結合変異型のAHG1結合タンパク質は遺伝子発現において顕著に影響をおよぼすことを明らかにした。また、プロテアソーム関連変異ahg12の変異株において、ホルモン応答関連転写因子が蓄積しやすいことも明らかにした。AHG1やAHG3の変異体を用いてリン酸化プロテオーム解析を行い、種子特異的なタンパク質リン酸化ネットワーク解明を進めている。当該年度は、ahg1,ahg3,あるいはsrk2dei三重変異体を大規模に栽培し、リン酸化プロテオーム解析必要量の種子を確保した。得られた種子について、ABA含有培地における発芽試験を行い、ahg1およびahg3についてはABA高感受性、srk2deiについてはABA非感受性の表現型を確認した。また、シロイヌナズナ種子からのリン酸化タンパク質抽出条件を検討するとともに、タンパク質のトリプシン消化や脱塩操作、リン酸化ペプチド濃縮カラム等の実験系を立ち上げ、LC-MSによるリン酸化プロテオーム解析の前段階の準備を完了した。前年度に分離したAHG1やABI5との結合に特異的に影響するAFP3の変異遺伝子、それぞれafpm1, afpm2がABI5のABA応答遺伝子発現に及ぼす影響を詳細に分析した。その結果、双方の変異とも、AFP3の発現抑制活性を著しく低下させることが、明らかとなった。これにより、AFP3の結合活性が発現抑制に必須であることが示されるとともに、結合領域も同定された。一方、in vitro翻訳系により合成したこれらの蛋白質を用いて結合実験を行ったところ、結合の特異性は認められなかった。このY2Hとin vitro実験との矛盾については、今後検討しどちらの結果がより植物細胞内の機能を反映しているかを明らかにする必要がある。また、タンパク質分解に影響をおよぼすahg12変異に関して、EIN3, ABI5, PIL5を対象にLUCを用いて定量的に分解速度を測定する系を構築した。種子特異的に働くPP2CであるAHG1およびAHG3の機能をさらに詳しく調べるために、AHG1やAHG3が影響を及ぼすタンパク質リン酸化ネットワークを大規模に解析する必要がある。まずシロイヌナズナ種子を材料としたリン酸化プロテオーム解析の実験系を構築した。シロイヌナズナ種子から精製したリン酸化ペプチドについて、質量分析計を用いてショットガン解析を行ったところ、約300種のリン酸化ペプチドの情報が得られた。

シロイヌナズナ植物体を用いた場合(約5000種)に比べかなり少ないが、これは種子のリン酸化タンパク質の数を反映している可能性が考えられる。ABAのシグナル伝達においてタンパク質のリン酸化は中枢に位置しており、タンパク質脱リン酸化酵素PP2Cは重要な制御因子の一つである。本課題研究では種子特異的ABA関連PP2C、AHG1, AHG3に注目し、これらの制御機構やリン酸化プロテオーム解析を進めている。27年度は、前年度に引き続き分離したAHG1やAHG3のABA関連種子特異的PP2Cに結合するAFP3の機能解析を進めた。AFP3の変異遺伝子、afpm1, afpm2が植物の生育に及ぼす影響をin plantaで調査するために高発現株を作成し、AFP3のそれと比較しながら詳細に分析した。その結果、双方の変異とも、in vitroの実験結果を反映し、AFP3のような形態および生育異常の誘導は見られなかった。これにより、AFP3のAHG1およびABI5の結合活性がAFP3の機能に重要であることが確認された。タンパク質分解に影響をおよぼすahg12変異に関しては、前年度に構築したLUCを用いて定量的に分解速度を測定する系をもちいて、プロトプラストで、発芽に影響するホルモン応答や光応答での主要転写因子ABI5, EIN3, PLI5の安定性を、野生株とahg12で調査した。その結果、ahg12では顕著にこれらの転写因子が安定化していることが認められた。変異部位の情報と合わせて、ahg12変異はプロテアソームの基質取り込みの選択性に影響することが示唆された。この結果について論文発表を行った。また、ahg1ahg3abi1三重変異体の種子を大量に用意して、ABA処理を施したサンプルを調製した。それらのサンプルからタンパク質を抽出し、リン酸化ペプチドを精製した後、LC-MSを用いてリン酸化プロテオーム解析を行った。その結果、シロイヌナズナ種子特異的なリン酸化ペプチドを検出することに成功するとともに、ahg1ahg3abi1の種子でリン酸化レベルが変動しているペプチドを複数同定した。種子における植物ホルモンアブシジン酸(ABA)に応答した応答タンパク質リン酸化ネットワークの解明を、分子遺伝学的手法と網羅的解析手法により目指した。シロイヌナズナの種子特異的ABA関連PP2CであるAHG1とAHG3の相互作用因子の同定とその機能解明を行った。また、プロテアソーム構成因子RPT5の変異株の解析から、その基質選択性での重要性を明らかにした。さらに、シロイヌナズナとオオムギの種子におけるABA依存的タンパク質リン酸化動態解析に成功した。AFP3変異の影響を確定し論文を発表する予定であったが、変異タンパク質の相互作用に関して酵母Y2Hとin vitro結合実験で矛盾する結果が出たため、変異に関しての解析が頓挫してしまった。形質転換体ができつつあり、解析を行える状況になった。
眼軸長伸長に伴う眼底微細構造変化の解明

眼球も身長と同様に成長期に伸長するが、日本人の眼球成長に関する研究はほとんどない。本研究では小児でも簡単に検査できる、眼球の大きさを測定する光学式眼軸長測定装置と、眼底の立体構造を取得できる光干渉断層計を用いて小学生および中学生の眼球成長を観察した。研究機関の3年間で、小学生は3年生から5年生、中学生は1年生から3年生まで検査し、今後も同じ集団を継続して検査していく予定である。現時点の結果として、眼球の成長度合い、および形状には個人差が大きく、近視の発症メカニズムも個人や時期により違いがあること、眼球形状の個人差が様々眼疾患の発症、診断に関与していることが判明している。成長期の近視は、眼軸長の伸長によって生じる。近年、眼軸長の伸長で生じたと思われる網膜、視神経乳頭の変形が、中途失明原因の主原因である緑内障や、疫学調査で低視力の主原因と判明した病的近視に大きく影響していることが分かってきた。これらの研究はマイクロメートル単位で網膜、視神経乳頭の構造を断層撮影できる光干渉断層計によって数値化することで、明らかにされてきた。しかしながら、社会的にも大きな問題となる近視の眼軸長伸長を継時的に光干渉断層計で捉えた報告が無い。本研究では、侵襲が無く、小児でも検査可能な光干渉断層計と光学式眼軸長測定機器により、学童期における眼軸長の伸長とそれに伴う網膜、視神経乳頭の変形を明らかにすることを目的とする。小学校3年生を7年間、中学校1年生を3年間、毎年検査を行って眼球成長を解明する。初年度である本年度は、鹿児島大学倫理審査会の承認、前向き研究としてUMINに登録のうえ、鹿児島大学付属小学校および中学校の協力を得て行った。小学3年生122名、中学1年生の182名の保護者から研究実施の同意を取得し、検査とアンケートを実施した。初年度の結果をデータベース化した。成長期の近視は、眼球が大きくなることで生じる。しかしながら、成長期の眼球形態の変化は明らかでは無い。近年、光干渉断層計の登場により、眼球形態をマイクロメートル単位で画像化することができ、検査は非侵襲であることから、小学生と中学生の眼球の成長に伴う、眼底微細構造の変化を明らかにすることを目的とする。初年度に引き続き、小学校4年生122名、中学校2年生182名の2年目の検査を予定通り完了し、データベース化した。また、初年度の小学3年生と中学1年生の検査データを用いて、第69回日本臨床眼科学会で「中学1年生における乳頭周囲網膜神経線維膨隆と眼軸長・コーヌスとの関係」、第120回日本眼科学会で「小学校3年生における眼軸長と日常生活・遺伝の関係」、「小学校3年生における眼軸長・前房深度・水晶体厚の性差」の3演題を発表した。初年度に引き続き、小学校4年生122名、中学校2年生182名の2年目の検査を予定通り完了し、データベース化することができた。上記の3演題を学会発表することができた。しかしながら、成長期の眼球形態の変化は明らかではない。近年、光干渉断層計の登場により、眼球形態をマイクロメートル単位で画像化することができ、検査は非侵襲であることから、小学校と中学校の眼球の成長に伴う、眼底微細構造の変化を明らかにすることを目的とする。初年度の目的である、小学校3年生、中学校1年生それぞれ約100150名の右眼を対象に、光干渉断層計による眼底微細構造・眼軸長の個人差を検査することを達成したため。2016年5月にAssociation for Research in Vision and Ophthalmology(アメリカ、シアトル)で上記3演題を発表したのち、論文にする。さらに28年度以降も同様の検査を行い、眼球成長を継時的に調査していく。眼科学単年度の検査結果、アンケート結果から、小学3年生および中学1年生の眼底微細構造、眼軸長、日常生活との関連を個人差、世代差という観点から研究発表する。さらに平成27年度以降も同様に検査を行い、眼球成長を継時的に調査していく。
イモリ精巣の器官培養におけるホルモン作用機構

I.減数分裂開始機構:減数分裂開始にセルトリ細胞が必要かどうかを調べるために、まず、セルトリ細胞と精原細胞を分離した後、精原細胞とセルトリ細胞を混合して再集合させ、±FSH(follicle-stimulating hormone)の条件で培養して、BrdU(5-bromo-2'-deoxyuridine)の取り込みに違いがみられるかどうか調べたが違いはみられなかった。FSH処理によりセルトリ細胞から精原細胞の増殖促進因子が分泌されるかどうか調べるために、±FSHの条件で精巣断片を一定期間培養した培地からFSHを除き、新鮮な組織を培養して精原細胞から第一精母細胞への分化が起こるかどうか調べたが、分化は起こらなかった。この結果、増殖因子は分泌されず、セルトリ細胞の細胞膜タンパク質から精原細胞の細胞膜タンパク質へ直接シグナルが伝達される可能性が高いので、現在、セルトリ細胞と精原細胞の膜タンパク質のモノクローナル抗体を作成中である。II.精子核伸長機構:イモリ精細胞の核伸長の開始にセルトリ細胞やホルモンが必要であるかどうかを調べるために、第一精母細胞に富む精巣断片を±ホルモンの条件で器官培養すると、精細胞が核の伸長を開始した。有効なホルモンはFSHのみであった。イモリの核の長い精細胞からCa^<2+>、低温耐性のMAPs(microtubule-associated proteins)分画を得た。部分精製の結果、主要成分は76Kと59Kであった。それぞれに対する抗体はMAPsのチューブリン重合促進活性を阻害した。第一精母細胞から成熟精子にいたる種々のステージにおけるMAPsの存在をWestern blotによって調べると、76Kのみ第一精母細胞から核の長い精細胞まで存在するが、精子では66Kに変換されることが明らかになった。第一精母細胞の76Kはリン酸化されており、低活性で、核の長い精細胞の76Kは脱リン酸化され、高活性であることが示唆された。