hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
覚醒剤反復前投与による小胞体ストレスと神経障害：黒質線条体路障害の解明に向けて

少量の覚せい剤を反復投与した動物を濫用初期モデル動物とした。このモデル動物に10 mg/kgの覚せい剤を投与後の中脳および線条体の細胞ストレス、神経細胞および神経活動のマーカー蛋白の変化を解析した。その結果、中脳では、抑制性神経のGABA作動性神経のマーカー(GAD67)の有意な増加を認め、線条体では小胞体ストレスマーカーおよびGAD67だけでなく、興奮性神経のグルタミン酸作動性神経のマーカーと、神経活動の指標となるc-fosの有意な増加を認めた。以上の結果より我々のモデル動物では、黒質線条体路だけでなく線条体視床路にも影響し、線条体の神経細胞の易活性化が惹起されていることが示唆された。少量のMethamphtemine (METH)を反復投与した動物の線条体において、ドーパミン作動性神経の指標となるTyrosine hydroxylase (TH), GABA作動性神経の指標となるGlutamate decarboxylase (GAD),アストロサイトの活性化の指標であるGlial fibrillary acidic protein (GFAP),小胞体ストレスの指標として知られているGlucose-regulated protein 78kDa (Grp78),酸化ストレスの指標であるCopper/Zinc Superoxide Dismutase (SOD1),をターゲットとしてWestern blotting法を用いて解析した。神経細胞の指標であるTHやGADに有意な差を認なかった。さらに、細胞障害時に活性化することが知られているGFAPにも有意な差を認めなかった。すなわち少量のMETHを反復投与した線条体においては明らかな細胞障害を認めなかった。しかしながら、Grp78およびSOD1の有意な増加を認め小胞体ストレスだけでなく酸化ストレスも惹起されていた。また、少量のMETHを反復投与後の動物へ多量のMETHを投与すると、線条体においてはGFAPの有意な増加を認めた。これらの結果は、これまでの研究により得られた中脳における知見とは若干異なっており、METH少量反復投与の作用が脳の部位において異なることが明らかとなった。少量のMETH反復投与により中脳に細胞障害や酸化ストレスが引き起こされず小胞体ストレスのみ惹起される動物モデルにおいて、その線条体におけるWestern blotting法による解析では、小胞体ストレスのみならず酸化ストレスの惹起を認めた。これは、当初予期していない結果であったが、当初の予定通りにMETHの少量反復投与後に多量のMETH投与を行った動物の線条体の解析に着手しており、研究の進捗状況としては概ね順調に進展していると考える。この研究では、我々の報告した中脳のドーパミン作動性神経の減少が抑制される少量のMethamphetamine (METH)の反復投与後に多量のMETHを投与する動物モデルの脳について、小胞体ストレスと酸化ストレス及び、ドーパミン作動性神経、GABA作動性神経とグルタミン酸作動性神経のマーカータンパク質についてwestern blottinによる解析を行い、さらに、神経細胞活動の指標であるc-fosについて、免疫蛍光抗体法による解析を行い中脳の黒質と線条体において形成さる神経回路の黒質線条体路への影響について解析することを目的とする。まず、小胞体ストレスのマーカーとなるGlucose regulated protein 78と酸化ストレスのマーカーとなるSuperoxide dismutase 1は、前投与の有無にかかわらず多量のMETHの投与後に一過性に増加する事が明らかとなった。次に、ドーパミン作動性神経の細胞体が在る黒質を含む中脳の解析において、抑制性の神経のGABA作動性神経のマーカであるGlutamate decarboxylase 67 (GAD67)の発現増加を認めた。さらに、ドーパミン作動性神経の神経軸索の投影先である線条体では、GAD67だけでなく促進系の神経の1つであるグルタミン酸作動性神経のマーカーとなるVesicular glutamatetransporter 2の発現増加を認めた。一方、c-fosの解析では、少量のMETH前投与後に多量投与した動物の線条体におけるc-fos発現細胞数は、多量単回投与と比較してさらに増加することを明らかにした。これらの結果より我々の動物モデルは、黒質線条体路を強化し線条体の神経細胞の易活性化が惹起されたと考えた。少量のMETH投与後に多量のMETHを投与したラット脳の線条体では、GABA作動性神経やグルタミン酸作動性神経の指標となるGAD67やVGLUT2が前投与後に多量投与した動物において有意に増加しており、神経回路の黒質線条体路へ影響することが示唆される結果を得た。この黒質線条体路は行動と密接な関係を持っているため、当初予定していなかった動物の行動解析実験を追加している。この様に、脳内の分子生物学的解析のみならず、行動解析にまで研究を進める事が出来ていることから当初の計画以上に研究が進展しているものと考える。少量(1 mg/kg)の覚せい剤を5日間反復投与したラットを覚せい剤濫用初期のモデル動物として、この動物モデルの中脳および線条体における神経細胞と神経活動のマーカー蛋白について解析した。その結果、神経細胞のマーカー蛋白は中脳および線条体において、Glutamic acid decarboxylase 67の有意な増加を認め、反復したドーパミン刺激により、黒質線条体路に反応性の変化が惹起されたと考えた。さらに線条体では、Vesicular glutamate transport 2の有意な増加を認め、黒質線条体路のみならず視床線条体路へも少量の覚せい剤の反復投与による反応性の変化が惹起されている事が明らかとなった。

しかしながら、細胞障害時に増加するアストロサイトの指標であるGlial fibrillaryacidic proteinは、中脳および線条体に変化を認めなかった。一方、神経活動のマーカーとなるc-fosの発現は、少量の覚せい剤を反復投与したラットへ10 mg/kgの覚せい剤を投与すると、10 mg/kgの覚せい剤を単回投与したラットと比較して線条体における発現細胞数が有意に増加した。この結果より、少量の覚せい剤の反復投与したラットでは、線条体の神経細胞が易活性化状態となっていることが推察された。本研究の結果より、少量の覚せい剤を5日間反復投与した覚せい剤濫用初期のモデル動物では、黒質線条体路の活性化および視床線条体路の活性化により、線条体の神経細胞の易活性化が惹起されることが示唆された。少量の覚せい剤を反復投与した動物を濫用初期モデル動物とした。このモデル動物に10 mg/kgの覚せい剤を投与後の中脳および線条体の細胞ストレス、神経細胞および神経活動のマーカー蛋白の変化を解析した。その結果、中脳では、抑制性神経のGABA作動性神経のマーカー(GAD67)の有意な増加を認め、線条体では小胞体ストレスマーカーおよびGAD67だけでなく、興奮性神経のグルタミン酸作動性神経のマーカーと、神経活動の指標となるc-fosの有意な増加を認めた。以上の結果より我々のモデル動物では、黒質線条体路だけでなく線条体視床路にも影響し、線条体の神経細胞の易活性化が惹起されていることが示唆された。METHを少量反復投与後に多量のMETH投与を行った動物の線条体について、TH, GAD, GFAP, Grp78, SOD1をターゲットとしたWestern blotting法を用いて解析する。さらに、TH, GAD,マイクログリアの指標であるIonized calcium binding adaptor molecule 1,神経活動の指標となるc-fos,細胞の障害の指標となるActivating Transcription Factor 3についての免疫組織化学的手法による解析を合わせることにより、小胞体ストレスと酸化ストレス、細胞障害および神経細胞活動についての解析を行う。このモデル動物の脳において、western blottingにより脳組織中の蛋白発現量に変化を認めた神経のマーカーについて、免疫蛍光抗体法による形態への効果について解析する。さらに、BDNFやGDNFといった神経成長因子について解析を加え、黒質線条体路の神経回路への少量のMETHの反復投与後に多量のMETH投与を投与することによる影響について検討する。法医学消耗品の試薬の一部を安価な物へと変更したために生じたと思われる。研究に使用する消耗品の購入に充てる。
タンザニア・マア語の２変種の社会言語学的記述研究－言語接触の視点から－

2018年7月末から8月末までタンザニアに滞在し、現地調査を行った。過去に訪問した地域も再び訪問したほか、さらにコンサルタントから得た情報に基づき、他の地域も数か所訪問し、言語使用と語彙調査の聞き取り調査を行った。その結果、地域による内マア語と外マア語の使用に傾向がみられるほか、クランによる言語使用の違いについても示唆されるような結果が得られた。また、過去の現地調査において、内マア語と外マア語の中間にあるような変種が観察されたことを受けて、当該地域を再度訪問し、異なる年代の話者に聞き取り調査を実施した。その結果、やはりこの地域ではこの中間段階の変種が母語として話されているようであった。8月末にモロッコのラバト市のモハメドV大学にて開催された、第9回世界アフリカ言語学会議において、“The present-day linguistic/sociolinguistic situation in Mbugu/Ma'a"というタイトルで口頭発表を行った。この発表では、現在の内マア語と外マア語の文法の差異を明らかにするとともに、ふたつの変種が受けている、多言語からの共時的な影響についても論じた。研究員は本研究課題と関連する、東京外国語大学アジア・アフリカ言語文化研究所の共同研究課題「バントゥ諸語のマイクロ・バリエーションの類型的研究(フェーズ1)」の共同研究員でもある。140超の共通のパラメータに基づき収集した内マア語と外マア語の文法データがデータ集として刊行された。また、マア語のテンス・アスペクト標識の文法化について、収集したデータを分析し、考察した成果を「マア語におけるTA標識の文法化」というの論文にまとめ、『スワヒリ&アフリカ研究』30号に投稿し掲載された。初年度に研究の目的にすえていた、地域による変種の差異と、内マア語外マア語の話者の分布について明らかにすることを中心とした現地調査を遂行しており、着実にデータを集めている。また、文法記述や文法の分析については、テンス・アスペクトの文法化についての論文を投稿し掲載されたことに加え、マイクロ・バリエーション研究の視点からのデータ集にもデータと公開したことで、一次資料の公開という目的も果たせている。これまでの音声データは、申請者の質問に対する受け答えという形式で録音されたものがほとんどであり、民話など、ナラティブのテキストはまだ収集ができていないので、今後はナラティブのテキストと、申請者が関与しない母語話者同士の会話のデータの収集をしていく。また、成果公開という点では、それほど多くの成果を出せていないので、現段階で明らかになっていることをよく分析して、積極的に成果公開していきたい。本年度は、周辺言語のマア語への影響と、内マア語と外マア語の地域による語彙の差を調査・分析することを目的とした。まず、既に収集済みのマア語のデータを整理し、周辺言語のシャンバー語やタンザニアの国家語であるスワヒリ語の影響について分析を行った。その結果6月25日に日本言語学会154回大会にて、語彙レベルと関係節に見られるシャンバー語とスワヒリ語の影響について口頭発表を行った。7月末から10月初旬にかけては、研究協力者をタンザニアのタンガ州に派遣し、現地調査を遂行してもらった。現地調査では、研究協力者はマアの人々のいくつかの地域を訪問しそれぞれの村で数人ごとに、研究員が作成した語彙調査票に基づき、聞き取り調査をし、ノートに書きとった。研究協力者の帰国後は得られたデータについて分析を行っており、2018年8月末にモロッコのMohammed V Univerisityで開催予定の9th World Congress of African Linguisticsでの口頭発表の申し込みをし、発表が決定した。この点については、さらなる調査とそれによる分析が必要であるため、次年度以降にも継続していく。先述の、マア語における周辺言語の文法レベルの影響のうち、特にスワヒリ語の影響について、10月にロンドン大学において発表を行った。12月には、バントゥ諸語研究者出席により行われているバントゥ諸語勉強会にて、マア語のテンス・アスペクトの文法化について発表を行った。発表において他の出席者から得た意見を基に、さらなる考察をし、論文の執筆をしているところである。現地調査については、代表者本人は行くことができなかったが、研究協力者を派遣し、現地と連絡を取り合いながら、代表者が用意した質問票に従い、話者への聞き取り調査を実施し、期待していた量のデータを収集することができた。成果公開については、10月にドイツのブレーメン大学で開催された、混合言語に関するコロキアムでの発表が決定していたが、事情によりキャンセルとなった。しかしここで発表予定であったペーパーを2018年8月に開催される予定の9th World Congress of African Linguisticsで発表することが決定したため、カバーできた。雑誌投稿ができなかった点については、次年度に持ち越した分多くの成果を上げていく。代表者はまた、本研究課題と関連のある、バントゥ諸語のマイクロバリエーション研究のプロジェクトにも共同研究員としてかかわっている。このプロジェクトの研究会でマア語のデータと他のバントゥ諸語のデータとを比較したことにより、マア語がバントゥ諸語とは異なる振る舞いをしていることに気づくことができ、今後の研究への大きなヒントが得られた。この点については、さらに関連文献を読み込み、データの分析をしていき、今後成果の公開を目指したい。

過去に訪問した地域も再び訪問したほか、さらにコンサルタントから得た情報に基づき、他の地域も数か所訪問し、言語使用と語彙調査の聞き取り調査を行った。その結果、地域による内マア語と外マア語の使用に傾向がみられるほか、クランによる言語使用の違いについても示唆されるような結果が得られた。また、過去の現地調査において、内マア語と外マア語の中間にあるような変種が観察されたことを受けて、当該地域を再度訪問し、異なる年代の話者に聞き取り調査を実施した。その結果、やはりこの地域ではこの中間段階の変種が母語として話されているようであった。8月末にモロッコのラバト市のモハメドV大学にて開催された、第9回世界アフリカ言語学会議において、“The present-day linguistic/sociolinguistic situation in Mbugu/Ma'a"というタイトルで口頭発表を行った。この発表では、現在の内マア語と外マア語の文法の差異を明らかにするとともに、ふたつの変種が受けている、多言語からの共時的な影響についても論じた。研究員は本研究課題と関連する、東京外国語大学アジア・アフリカ言語文化研究所の共同研究課題「バントゥ諸語のマイクロ・バリエーションの類型的研究(フェーズ1)」の共同研究員でもある。140超の共通のパラメータに基づき収集した内マア語と外マア語の文法データがデータ集として刊行された。また、マア語のテンス・アスペクト標識の文法化について、収集したデータを分析し、考察した成果を「マア語におけるTA標識の文法化」というの論文にまとめ、『スワヒリ&アフリカ研究』30号に投稿し掲載された。初年度に研究の目的にすえていた、地域による変種の差異と、内マア語外マア語の話者の分布について明らかにすることを中心とした現地調査を遂行しており、着実にデータを集めている。また、文法記述や文法の分析については、テンス・アスペクトの文法化についての論文を投稿し掲載されたことに加え、マイクロ・バリエーション研究の視点からのデータ集にもデータと公開したことで、一次資料の公開という目的も果たせている。今年度のタンザニアでの調査において重視したのは、地域による変種の差である。地域差についてはこれまでの調査でも観察されていたが、今年度の調査により、ある地域の村では、内マア語と外マア語のそれぞれの特徴を有する変種が話されていることが示唆された。これについて、次年度以降において、より詳しい語彙・文法調査を実施し、内マア語と外マア語のどの部分を有する変種なのか明らかにしたい。またこの変種の話されている地域でこの変種が一般的なものなのか、何か特定の集団(年齢・性別・クランなど)により話されているものなのかについて、明らかにしたい。また、文法研究としては、今年度取り組んでいた、テンス・アスペクトの文法化について論文にまとめ雑誌に投稿するとともに、同じくテンス・アスペクトのうち、過去の形式の体系についても分析し論文にまとめ、投稿する予定である。
癌間質細胞由来MCP-1による抗血管新生阻害剤耐性獲得の打破

大腸癌の化学療法の中心をなすものとして血管新生阻害剤が挙げられるが、VEGFを中和するbevacizumabは継続投与によって耐性化が出現し、その効果が減弱することが知られてきた。我々はこの継続投与によって癌間質細胞の1種であるCancer Associated fibroblast(CAF)からMCP-1分泌が増加することを突き止めた。本研究はCAFから放出されるMCP-1がどのような機序で血管新生を来すのかを解明し、従来の血管新生抑制剤に対する耐性獲得機序の解明を目的としている。
将来の CP 非保存実験を見込んだ T2K 実験の高感度化

本研究では長基線ニュートリノ振動実験T2Kの電子ニュートリノ出現事象の感度向上させ、将来のニュートリノにおけるCP非保存探索実験実現のための道筋をつけることを目的とし、前置検出器器からSKへの事象数の外挿精度を改善するために、(1)ニュートリノの親粒子であるパイ中間子の生成断面積の精密測定や、(2)新しい前置ニュートリノ検出器の開発を行った。本研究成果は2011年に発表を行った世界初の電子ニュートリノ出現事象の兆候の測定、2012年の有意度3.2σでの測定に繋がった。また、新しい前置ニュートリノ検出器として小型水チェレンコフ検出器の開発を進めた。本研究の成果は、国際会議や国内の学会、また学術論文で発表した。本研究では長基線ニュートリノ振動実験T2Kの電子ニュートリノ出現事象の感度向上をはかり早期発見を目指すとともに、将来のニュートリノにおけるCP非保存探索実験実現のための道筋をつけることを目的とし、(1)ニュートリノの親粒子であるパイ中間子の生成断面積の精密測定、(2)前置ニュートリノ検出器の改良のための検出器開発を行う。今年度(H21)は、CERN NA61実験で行ったパイ中間子の生成断面積の精密測定の結果を用いて、T2K実験のニュートリノビームに対する不定性を小さく抑える研究を行い、パイ中間子からの不定性を20%以下に抑えた。また、前置ニュートリノ検出器の改良のための小型水チェレンコフ検出器の基本性能をシミュレーション等により検討し、本検出器の設計最適化を行った。そして、H22年度に繰り越した予算を用い、検出器の建設を開始した。本研究では長基線ニュートリノ振動実験T2Kの電子ニュートリノ出現事象の感度向上をはかり早期発見を目指すとともに、将来のニュートリノにおけるCP非保存探索実験実現のための道筋をつけることを目的とし、(1)ニュートリノの親粒子であるパイ中間子の生成断面積の精密測定や、(2)前置ニュートリノ検出器の改良のための検出器開発を行う。今年度は、CERN NA61実験で行ったパイ中間子の生成断面積の精密測定の結果を用いて、T2K実験のニュートリノビームに対する不定性を小さく抑える研究を行い、パイ中間子からの不定性を20%以下に抑えた。また、この結果を用いてT2K実験の最初半年のデータを解析して電子ニュートリノ出現事象の探索を行い、その結果を国際会議等で報告した。また、前置ニュートリノ検出器の改良のために、小型水チェレンコフ検出器の設計と制作を行い、次年度の研究でニュートリノビームを用いて検出器の性能するための準備をすすめた。本研究では長基線ニュートリノ振動実験T2Kの電子ニュートリノ出現事象の感度向上を目指すとともに、将来のニュートリノにおけるCP非保存探索実験実現のための道筋をつけることを目的とし、(1)ニュートリノの親粒子であるパイ中間子の生成断面積の精密測定や、(2)前置ニュートリノ検出器の改良のための検出器開発を行う。今年度は、主に小型水チェレンコフ検出器を用いた前置ニュートリノ事象の測定と、その解析を行い、ニュートリノ以外の背景事象の理解を進めた。この小型水チェレンコフ検出器は、内水槽と外水槽の2層構造になっており内水槽の水を入れた状態と抜いた状態の2つの測定から、内水槽の中で起こったニュートリノ事象を測定する事ができる。しかし、今年度のビーム事象の測定結果から、ニュートリノ以外の粒子の相互作用の割合が多い事が分かった。現在、小型水チェレンコフ検出器周辺での背景事象の収量測定等を進めて、背景事象の理解を進めている。一方で、研究課題(1)については、T2K実験と同じ長さのターゲットからのパイ中間子等の生成分布を解析し、その結果をT2K実験のニュートリノフラックスの見積もりに用いる手法の開発を行い、この結果は学術論文にまとめた。CERN NA61実験で測定したハドロン生成断面積測定の結果を用いることで、T2K実験でのビーム起因の系統誤差は現在5%以下となっている。またT2K実験での電子ニュートリノ出現事象や、ミューニュートリノの消失事象の解析も進めて、それぞれ夏と冬の国際会議で結果を発表した24年度が最終年度であるため、記入しない。24年度が最終年度であるため、記入しない。
遷移金属/ヘテロ元素複合系動的錯体の創製と機能

(1)シリルおよびアリール(シリレン)錯体上での1,2-および1,3-転位反応の実験的証明シリル(シリレン)鉄錯体の合成法を確立し,構造を解明した。さらに,この錯体と一酸化炭素等の2電子配位子との反応を調べ,標記転位反応の存在を示す直接的証拠を得た。同様に,(アリールシリル)タングステン錯体上で,アリール基が配位不飽和中心へ可逆的に1,2-転位し,アリール(シリレン)錯体を生成することを明らかにした。(2)ヒドリド(ヒドロシリレン)錯体の創製,構造および反応性カルボニル(メチル)タングステン錯体とかさ高い置換基を持つトリヒドロシランとの封管中での光反応により,CO配位子の解離を経由してシリレン配位子上に水素を持つシリレン錯体およびシリル体を得た。この光反応を脱気と光照射を繰り返しながら行うと,最終的にシリレン錯体のみが得られた。この錯体はタングステン-ケイ素二重結合にヒドリド配位子が架橋した特異な構造をとっていることをX線結晶構造解析およびNMR分光法により明らかにし,さらにDFT計算によって確認した。この錯体はケトン,エノン,ニトリル,オキシランなど様々な極性分子と反応し,前例のない付加反応性生物を与えることを明らかにした。(3)鉄,ケイ素およびリンからなる三員環錯体と多様な極性分子との反応カルボニル(ホスフィノシリル)鉄錯体に低温で光照射すると,CO配位子が解離してホスフィノ基が分子内で鉄に配位し,三員環錯体が定量的に生成した。三員環構造を持つホスファシラフェラシクロプロパンは,アルコール,ケトン,ニトリル,ピリジン誘導体等の極性分子と容易に反応し,これらの分子がリン-ケイ素結合に挿入した生成物をほぼ定量的に与えた。(1)かさ高いメシチル基をシリレン配位子上に2個導入することにより,塩基の配位していないシリル(シリレン)鉄錯体の合成単離に初めて成功した。この錯体と幾つかの2電子供与配位子との反応を検討し,これまで間接的な証拠に基づいて提唱してきたシリル(シリレン)錯体上でのシリル基の1,2-転位反応および置換基の1,3-転位反応を,初めて直接的に観測することに成功した。また,ニトリル類との反応では,鉄上でニトリルの炭素-炭素結合が活性化され,例えばベンゾニトリルを用いた場合には,フェニル配位子とジシラニルイソシアニド配位子を持つ鉄錯体が生成することを見出した。(2)スタニレン錯体はこれまで,安定なII価のスズ化学種スタニレンと金属錯体との反応によって合成されてきた。今回,IV価のスズ化合物であるHMe_2SiSnMes_2^pTolと遷移金属錯体とを反応させることにより,新しい経路でのスタニレン錯体の合成を実現した。(3)ホスフィノシリル鉄錯体の光反応によって鉄-ケイ素-リンからなる三員環メタラサイクルを合成し,その反応性を調べた。この錯体は環歪みのためにSi-P結合が室温で容易に開裂し,ホスフィド(シリレン)錯体を経由すると推定される転位反応を起こすことがわかった。

またケトンやアルコール,水と室温で瞬時に反応し,ケトンの場合にはカルボニル基の炭素がリンに,酸素がケイ素にそれぞれ結合した五員環錯体が,またアルコール,水の場合には水素がリンに,酸素がケイ素にそれぞれ結合した錯体が得られた。(4)アミノシリル鉄錯体の鉄上にピリジン配位子を導入し,穏やかに加熱したところ,アミノシリル基がピリジン配位子の窒素上へ転位し,ピリジン由来の六員環部分の炭素がη^3-型で鉄に配位した錯体が得られた。さらに光反応によって六員環部分の配位を前例のないη^5-型に変換することに成功した。(1)ヒドリド(ヒドロシリレン)タングステン錯体の合成および配位子間相互作用かさ高いトリヒドロシランH_3SiC(SiMe_3)_3とタングステン錯体Cp^*(CO)_3WMeとの光反応により,シリレン配位子上に水素を持つ錯体Cp^*(CO)_2W(H)=SiHC(SiMe_3)_3を合成し,この種の錯体として初めてX線結晶解析に成功した。その結果,タングステン上のヒドリド配位子はシリレン配位子と強く相互作用し,タングステンとケイ素を架橋する位置にあることがわかった。(2)シリル(シリレン)錯体上での1,2-および1,3-転位反応の実験的証明昨年度合成に成功したシリル(シリレン)鉄錯体Cp^*(CO)Fe(SiMe_3)=SiMes_2と2電子供与配位子であるCOまたは^tBuNCとを80°Cに加熱すると,ジシラニル鉄錯体Cp^*(CO)LFeSi_2Me_3Mes_2(L=CO,^tBuNc)が生成した。このうちL=COの錯体にC_6D_6中で光照射したところ,シリル(シリレン)鉄錯体Cp^*(CO)Fe(SiMe_3)=SiMes_2がほぼ定量的に再生した。これらは,標記転位反応が温和な条件で起こっていることを示すこれまでで最も直接的な証拠である。(3)1,2-アリール転位を経由するシリル錯体からドナー安定化シリレン錯体への異性化(4)キレート型ビスシリル配位子xantsilを含むビス(シリレン)ルテニウム錯体の反応xantsil配位子を含むビス(シリレン)ルテニウム錯体と様々な2電子供与配位子との反応の研究から,この錯体のxantsilの酸素が室温で容易に外れ,配位不飽和なビス(シリレン)錯体を発生することを明らかにした。(1)ヒドリド(ヒドロシリレン)タングステン錯体の反応性昨年度合成に成功した,塩基で安定化されていないヒドリド(ヒドロシリレン)タングステン錯体の反応性について研究を行い,この錯体はニトリル,ケトン,アルデヒドなどの炭素-ヘテロ元素結合に対して化学量論的なヒドロシリル化反応を行い,また炭素-酸素二重結合を切断する反応も起こすことを見出した。また,α,β-不飽和カルボニル化合物との反応では,[2+4]型の付加環化反応を経由した生成物を与えた。シリレン錯体による[2+4]型の付加環化反応はこれが最初の例である。(2)シリリン錯体の前駆体となりうるヒドリド(クロロシリレン)錯体の合成シリレン配位子上にかさ高い置換基としてトリス(トリメチルシリル)シリル基を導入することで,塩基で安定化されたヒドリド(クロロシリレン)タングステン錯体の合成・単離に成功した。この錯体は,塩化水素の引き抜きにより,金属-ケイ素三重結合を持つシリリン錯体に誘導できる可能性がある。(3)xantsil配位子とかさ高いホスフィン配位子をもつ配位不飽和ルテニウム錯体の合成と反応この錯体は室温で安定であるが,容易に14電子錯体を発生し,またビス(シリル)キレート配位子xantsilの効果によって極めて電子豊富であるため,ジフェニルアセチレン,アセトニトリル等を全く前例の無い形で活性化し,既存の触媒では実現できない触媒反応を選択性よく起こすことを見出した。(4)鉄-ケイ素-リンフラグメントによるメチルビニルケトンの位置選択的シリルホスフィネーション鎖状の鉄-ケイ素
慢性腎不全におけるPTH-ビタミンDシステムの細胞生物学的解析

慢性腎不全透析患者では活性型ビタミンDの産生の低下とともに活性型ビタミンDに対する抵抗性が知られている。この抵抗性の本態は副甲状腺における活性型ビタミンD受容体の減少が主因と考えられているが、現在のところ人及び動物モデルで相反する結果が示されており議論の多いところである。我々は二次性副甲状腺機能亢進症のための副甲状腺摘出術により得られた人の組織を用いて、ビタミンD受容体に対する特異的抗体により免疫組織染色を行い上記の問題に検討を加えた。その結果、二次性副甲状腺機能亢進症の副甲状腺組織を瀰漫性増殖と結節性増殖に分類した場合、後者でよりビタミンD受容体の減少が顕著であることが示され、更に副甲状腺重量とビタミンD受容体密度の間に負の相関が存在することが見いだされた。したがって透析患者の二次性副甲状腺機能亢進症における活性型ビタミンDに対する抵抗性はビタミンD受容体の減少が源因であり、増殖した副甲状腺の形態によってビタミンD受容体の減少に差があることが示された。この増殖形態の差によるビタミンD受容体の減少差が今までの報告の不一致の原因と考えられた。いっぽう腎不全ラットを作製し二次性副甲状腺機能亢進症に対する食事中のリンの影響を検討した。その結果、0.3%以下の低リン食では血清カルシウム、リン及び活性型ビタミンD濃度に変化がみられないにもかかわらず血中PTHおよび副甲状腺組織中のPTHmRNAの発現量が正常対象群のレベルまで抑制されることが示され、リンの二次性副甲状腺機能亢進症に対する直接的な作用が証明された。本研究は二次性副甲状腺機能亢進症の発症の機構をさらに分子生物学的方法を用いて解明し、新たな治療方法の基礎を築こうとするものである。具体的には、活性型ビタミンDに対する抵抗性の本態の解明、副甲状腺細胞増殖調節機構の解明、リンの副甲状腺に対する直接作用の解析を目標とし、また新しく開発されたビタミンDの誘導体に二次性副甲状腺機能亢進症に対する効果とその作用機序を解明しようとするものであった。平成4年度の研究実績は以下のとおりである1慢性腎不全のモデル動物として部分腎摘ラットを作用し血中カルシウム、PTHビタミンD代謝産物の測定系を確立した。2腎不全ラットにおいて副甲状腺組織でPTHの前駆体のmRNAのレベルをノーザンブロット法を用いて判定量することができる系を確立した。3正常および二次性副甲状腺機能亢進症モデルラットの副甲状腺細胞の1,25D受容体をモノクローナル抗体で染色し比較検討した。その結果予備実験ではあるが二次性副甲状腺機能亢進症では1,25D受容体数が減少していることを示唆する結果を得た。また同様のことを遺伝子レベルで検討しえた。すなわち1,25DのcDNAをプローブとして用いたin situ hybridizationを行いほぼ上述の結果と一致する結果を得た。4食事中のリン含有量の二次性副甲状腺機能亢進症に対する効果を検討した結果、0.3%以下の低リン食で血清カルシウム、リン、および活性型ビタミンD濃度に変化が見られないにもかかわらず血中PTHおよび副甲状腺組織中のPTHmRNAの発現量が正常対象群のレベルまで抑制されことが解明され、リンの二次性副甲状腺機能亢進症に対する直接的な効果が証明された。我々は二次性副甲状腺機能亢進

症のための副甲状腺摘出術により得られた人の組織を用いて、ビタミンD受容体に対する特異的抗体により免疫組織染色を行い上記の問題に検討を加えた。その結果、二次性副甲状腺機能亢進症の副甲状腺組織を瀰漫性増殖と結節性増殖に分類した場合、後者でよりビタミンD受容体の減少が顕著であることが示され、更に副甲状腺重量とビタミンD受容体密度の間に負の相関が存在することが見いだされた。したがって透析患者の二次性副甲状腺機能亢進症における活性型ビタミンDに対する抵抗性はビタミンD受容体の減少が原因であり、増殖した副甲状腺の形態によってビタミンD受容体の減少に差があることが示された。この増殖形態の差によるビタミンD受容体の減少差が今までの報告の不一致の原因と考えられた。いっぽう腎不全ラットを作製し二次性副甲状腺機能亢進症に対する食事中のリンの影響を検討した。その結果、0.3%以下の低リン食では血清カルシウム、リン及び活性型ビタミンD濃度に変化がみられないにもかかわらず血中PTHおよび副甲状腺組織中のPTHmRNAの発現量が正常対象群のレベルまで抑制されることが示され、リンの二次性副甲状腺機能亢進症に対する直接的な作用が証明された。
がんの終末期医療における鍼灸の意味とは何かー在宅での鍼灸臨床の現場からー

本研究の目的は在宅緩和ケアにおける鍼灸治療の「意味」を問うことにある。在宅緩和ケアの一環として鍼灸治療が行われている在宅療養支援診療所において、参与観察およびインタビュー調査を行い、エスノグラフィーを作成した。患者にとって鍼灸治療は、身体全体が「軽くなる」ことに象徴される「身体感覚の変化」の経験をもたらすものであり、その経験が患者に新たな生活リズムの構築をもたらすものとして意味づけられていることがわかった。また患者の鍼灸治療の「意味」は、患者の主観的な経験を含め、鍼灸師や他職種を含む診療所の医療文化の上に構築されていた。研究代表者は、これまで行ってきた鍼灸師への聞き取り調査や在宅緩和ケア医に対する鍼灸に関する聞き取り調査において、がんの終末期医療における鍼灸の独特の役割や有用性に関する意味深い語りを得た。医療人類学や鍼灸関連の著作においても、「触れながら語る」という鍼灸臨床の特徴から、その臨床的な重要性や意味が説かれている。しかし、これらの記述は患者視点を踏まえた形で終末期医療における鍼灸の意味を言及したものではない。そこで本研究では、鍼灸治療を受ける末期がん患者および鍼灸師から聞き取りを行い、また治療空間の参与観察を通じて、術者視点だけでなく患者視点を踏まえ、かつ両者の相互行為として成立する「場」に着目して、がんの終末期医療における鍼灸の意味論を探索することを目的とする。本研究では、治療空間の参与観察および末期がん患者と鍼灸師に対する聞き取りに基づき、事例ごとの詳細なエスノグラフィーを作成する。それを元に事例それぞれの鍼灸の意味を明らかにする。同時に、事例の集積および比較を通じ、終末期医療における鍼灸の意味の普遍化を試みる。平成25年度は、在宅緩和ケアを鍼灸師も共に実践する診療所において、数回に渡る予備調査を経た後、第1回目の参与観察および聞き取り調査を実施した。参与観察および聞き取りの対象となった末期がん患者は4名、鍼灸師は1名であった。このデータに基づき、現在事例ごとのエスノグラフィーを作成中である。また、他医療職種からの在宅緩和ケアにおける鍼灸に対する見解を得ることを目的に、鍼灸師とともに在宅緩和ケアに関わる他医療職種10名からも聞き取りを行っており、このデータについても現在質的分析を行っている。平成26年度には同施設における第2回目の参与観察を行い、第1回目のデータと合わせてエスノグラフィーを完成させ、緩和ケア関連の学会にて発表する予定である。本研究は、主に在宅緩和ケアにおける鍼灸治療の場の参与観察を通じて、がん終末期医療における鍼灸の関わりの意味を医療人類学的観点から明らかにする研究である。平成26年度は、平成25年度に引き続き、在宅緩和ケアを鍼灸師も共に実践する診療所において、第2回目の参与観察および聞き取り調査を行った。参与観察および聞き取りの対象となった患者は6名、鍼灸師は1名であった。また第1回目の調査時と同様に、鍼灸師以外の他医療職種7名から在宅緩和ケアにおける鍼灸に対する見解を得ることを目的として聞き取りを行った。前年度に得られたデータも含めて分析を行った結果、患者にとっての鍼灸の意味付けは、痛みや浮腫などの具体的な個々の愁訴の軽減だけではなく、「体全体が軽くなる」、「すっきりする」、「何かが抜ける感じ」など、「身体全体の変化をもたらすもの」という意味付けが中心となっていた。また、鍼灸治療の時間は通常の医療的ケアとは「異なる時間」であり、一方で週に1度ある「楽しみ」など、「日常の中にワンクッション入るもの」という意味付けもなされていた。他医療職種の見解として、鍼灸治療が「症状緩和の手段」という見解が多く見られたことに加え、患者にとって「手段があるという希望」をもたらすものという認識も見られた。参与観察からは、言葉のない身体同士のコミュニケーションに加え、立ち上るお灸の煙、艾の匂い、鍼を行うかすかな動作音などの様々な鍼灸特有の臨床を構成する因子が関連しあうことで、独特の静的な治療空間を生み出していると考えられた。本研究の目的は、在宅緩和ケアにおける鍼灸治療の意義について医療人類学的視点から考えることである。具体的には、2つの施設においてフィールドワークを行い、参与観察および聞き取り調査に基づくエスノグラフィーの作成を通じて鍼灸治療の意義を明らかにしようとするものである。H25年度からH26年度の間に在宅緩和ケアを実施している診療所に鍼灸師が雇用されている施設においてフィールドワークを行った。H27年度は同施設のフィールドデータをまとめる作業、および論文化する作業を中心に行った。鍼灸治療の意義は、「症状の緩和」のみならず、「身体の軽さ」や「身体から何かが抜ける感じ」など、広範な身体感覚の変化が経験されることにあることがわかった。また、鍼灸治療のプロセスが、「分離・過渡・再統合」という一連の儀礼のプロセスで構成されていることがわかり、日常生活における一種の「治療儀礼」という側面から鍼灸治療の意義を解釈しうる可能性が示唆された。H27年度後半は本データの論文化の作業を行った。また、上記結果を象徴する1事例について第20回日本緩和医療学会において成果報告を行った。H27年度後半には、新たにもう1施設でのフィールドワークを開始した。同施設は在宅緩和ケアを行う医師と外部連携という形で在宅緩和ケアに参画している鍼灸院である。予備調査として、対象鍼灸師および連携先の医師へのインタビュー調査を行った。また、在宅緩和ケアの治療状況と比較するために、外来治療も実施している同施設において外来患者の治療の参与観察も行った。同施設における本調査は、次年度に行う予定である。

H2526年度(研究開始年度2年目)までは研究計画通り調査研究は遂行しており、対象としていた1施設での参与観察による調査研究は滞り無く終了した。また同調査結果のデータ分析についても概ね予定通り進行していた。当初の研究計画ではH26年度(本研究計画2年目)後半より2施設目の調査を実施する予定となっていた。しかしながら、調査対象施設の獲得に難渋していたため調査が進まず、H27年度後半にようやく調査開始となったため、結果的に当初予定の研究計画が1年遅れる形となった。本研究の目的は、在宅緩和ケアにおける鍼灸治療の意義について医療人類学的観点から考えることにある。研究期間内に当初は2つの在宅緩和ケア実施施設においてフィールドワークを行う予定であったが、結果的にH25年度からH26年度にかけて行った一施設の調査のみとなった。H27年度からH28年度にかけてもう一つの対象施設での調査を実施予定であったが、患者の都合のため実施できないこととなった。そのため、H28年度はH25年度からH26年度にかけてフィールドワークを行ったデータの分析をさらに深めた。H27年度は患者にとっての鍼灸治療の意味に関する論考を深めたが、H28年度は患者にとっての意味と併せて、他職種から見た鍼灸の意味について明らかにした。他職種にとって最も重要視されていたのは、鍼灸の「効果」についてである。効果の有無は鍼灸治療の導入にも直接的に影響し、特に医師らが多くのことを言及していた。末期がん患者に対する明確な鍼灸治療の導入基準がない中で、医師や看護師は経験的にその基準を構築していた。また、鍼灸には手段がない時の「何か」としての意味があることが語られていた。これは「期待」や「可能性」としてのポジティブな意味を含む一方で、他にできることがないから行うというネガティブな意味での「何か」という二つの意味を含んだものであった。さらに鍼灸の意味としては、患者が自身の身体を「委ねる」時間と空間を構築することにあることも語られていた。同内容については、患者の言葉からは出てこなかった概念である。H28年度は、日本緩和医療学会、および全日本鍼灸学会において、患者にとっての鍼灸の意味に関する成果報告を行っている。本研究の目的は在宅緩和ケアにおける鍼灸治療の「意味」を問うことにある。在宅緩和ケアの一環として鍼灸治療が行われている在宅療養支援診療所において、参与観察およびインタビュー調査を行い、エスノグラフィーを作成した。患者にとって鍼灸治療は、身体全体が「軽くなる」ことに象徴される「身体感覚の変化」の経験をもたらすものであり、その経験が患者に新たな生活リズムの構築をもたらすものとして意味づけられていることがわかった。また患者の鍼灸治療の「意味」は、患者の主観的な経験を含め、鍼灸師や他職種を含む診療所の医療文化の上に構築されていた。本研究では、在宅緩和ケアの現場で鍼灸治療が行われている2施設での調査を予定している。
グラフェン上のIII－V族半導体ナノワイヤの作製と太陽電池応用

インジウムヒ素ナノワイヤを、グラファイトと単層グラフェンに垂直方向に成長することで、グラフェンが半導体材料を堆積させる基板として使用できることを立証した。透過電子顕微鏡観察により、非結合電子が存在しない疎水性グラフェン表面に半導体が堆積する原理を発見した。重要なのは、インジウムヒ素ナノワイヤをグラフェン基板の任意の場所に作製する"選択成長法elを開発し、単層グラフェンが、半導体の異種エピタキシー基板として適用可能であることを証明した。また、単層グラフェンを大面積で製造し、それを基板として使用したことで、産業化に適したプロセスを示した。本研究では、半導体やグラフェンのヘテロ接合の製造の基礎原理を提供する。グラフェンは、表面に非結合炭素を持っていないため、疎水性表面である。このようなグラフェンの表面特性のために半導体をグラフェンに異種エピテック時に蒸着するのに多くの困難があった。本研究によって、ファンデヴァルス-有機金属化学気相エピテック時法で超薄膜のグラフェン基板に半導体ナノ素材を製造する物理化学的原理を確立した。24年度はグラフェンとInAsの間の結合様式に関して電子顕微鏡による観察と第一原理計算の結果の比較を進めた。これらの結果をまとめて現在論文執筆中である。優れた研究施設と優秀な研究者との共同研究により、当初計画より研究が迅速に進んでいる。Hong氏が韓国に帰国しSeijong大学に着任後は、本研究を国際共同研究として引き続きグラフェン上のInAsナノワイヤのデバイス応用の研究を続ける。重要なのは、インジウムヒ素ナノワイヤをグラフェン基板の任意の場所に作製する"選択成長法"を開発し、単層グラフェンが、半導体の異種エピタキシー基板として適用可能であることを証明した。グラフェンは透明で、化学/機械的にも安定な物質である。そのため、ナノ材料とグラフェンを組み合わせることで、様々な透明フレキシブル電子デバイスを製造することができる。このようなグラフェン上に、半導体ナノ素材を製造する方法を開発したという点で、フレキシブルエレクトロニクスの発展に寄与したといえる。現在、半導体ナノ素材をグラフェン上に製造する原理を研究している。この製造原理の研究が完了すれば、半導体ナノ素材のヘテロ構造を用いた様々なデバイスを研究する予定である。特に、グリーンエレクトロニクスの一例として、太陽電池と発光ダイオードの分野に集中して研究を行なう。
ペルオキシソームの新規誘導形成における遺伝的制御

ペルオキシソーム局在性蛋白質のこのオルガネラへの特異的な輸送は,ペルオキシソームの誘導形成における重要な素過程のひとつである.不完全酵母Candida tropicalisのペルオキシソームを素材としてこの輸送過程を研究し得る実験系の構築を試みて以下の成果を得た.1.クローン化したペルオキシソーム系遺伝子と特異的にハイブリドを形成する細胞由来のmRNA,またはそれらの遺伝子から試験管内の反応で合成したmRNAをアフリカツメガエルの卵母細胞に注入して,その発現産物を卵母細胞のペルオキシソームに輸送させることを企画した.一過的に発現された産物は,特にこのオルガネラの代表的な蛋白質である長鎖脂肪酸COA酸化酵素(PXP-4)の場合,速かに且つ特異的に分解された.この現象自体は極めて興味深いものながら,輸送系の構築という観点からはこの系が満足すべきものでないことが明らかになった.2.ペルオキシソーム系の遺伝子そのものを, C.tropicalisと同様に脂肪酸によって誘導されるペルオキシソームをもつ類縁酵母C.maltosaの細胞内に直接導入し,その発現産物を宿主酵母のペルオキシソームに輸送させることを試みた.上記PXP-4の遺伝子(POX4)で形質転換した酵母細胞から精製されたペルオキシソーム画分には,宿主のペルオキシソーム蛋白質と同等の量のPXP-4が存在しており,外から加えたプロテアーゼに対する抵抗性から判断する限り,宿主蛋白質と同様にペルオキシソーム内部へ輸送されていることが示された.POX4遺伝子を二分してPXP-4のN末端側1/3に相当するペプチドとC末端側2/3に相当するペプチドの輸送を比較したところ,前者に比べて後者が著しい高能率で輸送されていることが判明した.この結果はここで構築した異種酵母内での発現・輸送系が所期の目的を満たすものであることを示している.ペルオキシソーム局在性蛋白質のこのオルガネラへの特異的な輸送は,ペルオキシソームの誘導形成における重要な素過程のひとつである.不完全酵母Candida tropicalisのペルオキシソームを素材としてこの輸送過程を研究し得る実験系の構築を試みて以下の成果を得た.1.クローン化したペルオキシソーム系遺伝子と特異的にハイブリドを形成する細胞由来のmRNA,またはそれらの遺伝子から試験管内の反応で合成したmRNAをアフリカツメガエルの卵母細胞に注入して,その発現産物を卵母細胞のペルオキシソームに輸送させることを企画した.一過的に発現された産物は,特にこのオルガネラの代表的な蛋白質である長鎖脂肪酸COA酸化酵素(PXP-4)の場合,速かに且つ特異的に分解された.この現象自体は極めて興味深いものながら,輸送系の構築という観点からはこの系が満足すべきものでないことが明らかになった.2.ペルオキシソーム系の遺伝子そのものを, C.tropicalisと同様に脂肪酸によって誘導されるペルオキシソームをもつ類縁酵母C.maltosaの細胞内に直接導入し,その発現産物を宿主酵母のペルオキシソームに輸送させることを試みた.上記PXP-4の遺伝子(POX4)で形質転換した酵母細胞から精製されたペルオキシソーム画分には,宿主のペルオキシソーム蛋白質と同等の量のPXP-4が存在しており,外から加えたプロテアーゼに対する抵抗性から判断する限り,宿主蛋白質と同様にペルオキシソーム内部へ輸送されていることが示された.POX4遺伝子を二分してPXP-4のN末端側1/3に相当するペプチドとC末端側2/3に相当するペプチドの輸送を比較したところ,前者に比べて後者が著しい高能率で輸送されていることが判明した.この結果はここで構築した異種酵母内での発現・輸送系が所期の目的を満たすものであることを示している.
形質転換実験系における遺伝子発現変化の解析による発癌促進物質の作用機序の研究

発癌プロモーターによって発現が変化する遺伝子から、癌の進展に関与している遺伝子を探し、その機能を調べることによって発癌のプロモーションを分子レベルで明らかにすることを目的とした。BALB/3T3細胞2段階形質転換試験を2段階発癌試験のin vitroモデルとして用いた。12-O-テトラデカノイルホルボール-13-アセテート(TPA)、オカダ酸、オルトバナジン酸塩は、強い形質転換促進活性を示した。細胞にこれらの物質を作用させ、経時的に総RNAを抽出し、mRNA・ディファレンシャル・ディスプレイ法によってmRNAを可視化した.3つのプロモーターに共通した発現変化を示す遺伝子のcDNA断片2つ、G09とC05を分離した。G09は、プロモーターの作用で発現が増加した。G09の塩基配列は、核タンパク質Np95のcDNA(全長3488bp)の2198-2708と完全に一致した。C05は、プロモーターによって発現の低下が認められるもので、297bpであった。GenBank+EMBL+DDBJ+PDBの塩基配列データベースを検索したが、C05とホモロジーのある塩基配列は見つかっていない。2つの遺伝子の差発現は、特異的プライマーによるRT-PCRとノーザンブロットによって確認された。Np95は、ネズミ胸腺細胞で細胞周期のS期に発現し、lymphoma細胞株では恒常的に高発現している。BALB/3T3繊維芽細胞においては、Np95の発現は血清の増殖刺激により上昇た。さらに発癌プロモーターによる処理でNp95の発現が上昇する時期には、ほとんどの場合DNA合成も増加した。これらの結果から繊維芽細胞においてもNp95は増殖に関係して発現することが示唆された。また、発癌プロモーターによって共通した発現変化を示す複数の遺伝子が見出されたことは、これらの発癌プロモーターに共通の機序が存在する可能性を示唆している。2つの遺伝子の発癌促進への関与に関しては、さらに研究する必要がある。化学物質による発癌促進の機序を明らかにするため、発癌プロモーターによって発現が変化する遺伝子のうちから、癌の進展に関与している遺伝子を探し出すことを目的としている。2段階発癌のin vitroモデルとしてBALB/3T3細胞による2段階形質転換試験を、発癌プロモーターとしてTPA、オカダ酸、オルトバナジン酸塩を、遺伝子発現変化の可視化手法としてmRNA・ディファレンシャル・ディスプレイ(DD)法を用い、プロモーターに共通する遺伝子発現変化を捕らえる。1.DD法適用にあたって、プロモーション作用の強さが同程度になる各発癌プロモーターの濃度を求める必要があった。2段階形質転換試験を実施し、TPA、オカダ酸、オルトバナジン酸塩のプロモーション作用についての用量反応曲線を作成し、作用濃度をそれぞれ100、15、1800ng/mlと決定した。2.DD条件を検討した。mRNAの発現差を定量的に取り扱うには、総RNA量を一定にして逆転写反応を行う方法が優れていた。PCR後のcDNA断片の検出には、蛍光色素ラベル法と染色法を併用し、蛍光色素の励起をレーザー光で行う蛍光イメージアナライザーを用いるのが利便性、感度、分解能で優れてた。mRNAの全体的な発現変化の様子から、RNAの採取時期を発癌プロモーターによる処理を開始する前、開始24時間、3、7、14日後とした。3.50組のプライマーについてDD法を終えた。プロモーターに共通して対照と差のある発現を示すmRNAのcDNA断片2つを確認している。

来年度は、この2つのcDNA断片のシークエンス、ホモロジー調査等を行うとともに、より発現差の大きいmRNAを捕らえるため、プライマーの数を増やしてDD法を実施する。4.タンパク質燐酸化以外の発癌プロモーションに関わる要因として細胞内カルシウム濃度の上昇について検討した。化学物質による発癌促進の機序を明らかにするため、発癌プロモーターによって発現が変化する遺伝子のうちから、癌の進展に関与している遺伝子を探し出すことを目的としている。BALB/3T3細胞の2段階形質転換を2段階発癌のin vitroモデルとして用いた。細胞にTPA、オカダ酸、オルトバナジン酸塩をプロモーターとして作用させ、作用開始から0、8、24時間、3、7、8、14日後にRNAを分離し、mRNA・ディファレンシャル・ディスプレイ(DD)法によって発現しているmRNAを可視化した.3つのプロモーターに共通した発現変化を示す遺伝子のcDNA断片2つ、G09とC05を分離した。G09は、3種のプロモーターの作用により共通して発現が増加した。G09の塩基配列は、核タンパク質NP95のcDNA(全長3488bp)の2198-2708と完全に一致した。NP95は、増殖に関連するネズミの核タンパク質として見いだされ、ネズミlymphoma細胞株では恒常的に高発現していることが報告されている。C05は、プロモーター共通に発現の低下が認められるもので、297bpであった。GenBank+EMBL+DDBJ+PDBの塩基配列データベースをEST Divisionsも含めてBLAST検索したが、C05とホモロジーのある塩基配列は見つかっていない。これら2つの遺伝子の差発現を、特異的プライマーによるPCR並びにノーザンブロットによって確認した。BALB/3T3細胞2段階形質転換実験系で、3種のプロモーターに共通した発現変化を示す複数の遺伝子が見いだされたことは、これら3種の物質による形質転換のプロモーションには共通の機序が存在する可能性を示唆している。平成11年度までの研究から、BALB/3T3細胞を用いる2段階形質転換試験のプロモーション段階でTPA、オカダ酸、オルトバナジン酸塩によって共通した発現変化を示す遺伝子2種の存在が明らかになった。このうちの1つは、ネズミ胸腺細胞の細胞周期のS期に発現する核タンパク質Np95の遺伝子で、ネズミlymphoma細胞株では恒常的に高発現していることが報告されている。そこで、形質転換のプロモーション段階におけるDNA合成とNp95の発現との関係を検討した。DNA合成は、BrdUの取込によって、Np95の発現は、RT-PCR並びにノーザンブロットによって調べた。プロモーター処理の有無に関わらず、培地交換を行って24時間後の細胞でDNA合成とNp95の発現が著しく上昇した。培地中に加えられている血清がもつ増殖性の刺激に細胞が応答したもので、Np95は、繊維芽細胞であるBALB/3T3細胞でもDNA合成と並行して発現が上昇することが示唆された。