hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
特別なニーズのある幼児・児童・青年の障害特性の評価と支援プログラムの開発

発達障害は、生物学的基盤の上に社会的影響を受けて発現する。発達障害のある子どもを対象として、生物学的脆弱性について生理心理学的指標を用いて分析するとともに、社会的脆弱性については生活の質(QOL)ならびに障害特性質問紙を開発・利用して分析し、総合的に検討した。そしてそれらの総合的評価に基づいた、一人ひとりのニーズに応じた支援方法を検討し、児童・青年の一部について実施を試みた。QOLアンケートと心理的脆弱性評価との関連性を検討するため、大学生20名を対象としてワーキングメモリ(WM)測定を実施するとともに、QOLアンケートを依頼した。自己評価関連因子とWM機能との間には明確な関係はないが、対人関係因子とWM機能の間にはある程度の関連性が認められた。対人関係におけるWM機能は重要な役割を果たしているものと想定される。他方、ディスレキシア特性とWM機能の間には明確な関係が存在した。これはより直接的な関係であり、ディスレキシア特性の改善のためには、WM機能の改善が課題となると考えられる。ディスレキシアを中心とする障害特性について、音韻処理、眼球運動、協調運動、ERP測定などを実施して臨床的症状との関連性を分析し、脆弱性評価について検討した。読み速度検査と様相間文字プライミング効果との間に一定の関係が示され、ディスレキシアにおける流ちょうさの究明に関連する糸口が見いだされた。また眼球運動測定では、一定の速度以上の運動物体に対する追視困難な事例の存在が見いだされた。読みに対しては間接的影響にとどまるが、生物学的脆弱性に関連する特性であることが示唆される。さらに、協調運動測定では、バランスを持続的に保持することの困難さが見いだされ、ディスレキシア特性が小脳を中心とする脳内ネットワーク機能の不全さを反映したものでありうると想定された。ERP測定では、音韻刺激に対するMMNが計測された。純音刺激と比べて音韻情報の処理には不安定さが存在し、複雑な刺激に対する急速な対応の困難さが伺われた。これらは少数の事例による分析でありさらに今後の検討を必要とするが、発達障害特性を有する子どもたちにおいては、多種の測度で平均外値をとることが多く、共通基盤としての生物学的脆弱性とそれに応ずる社会的環境の分析が必要となると想定される。青年期における「生きづらさ」に関する主観的評価(QOL)アンケートを試作し、大学生100名に実施した。因子分析の結果、第一因子には自己評価、また第二因子には対人関係領域の項目が多く含まれていた。また男女別因子分析の結果、第2因子以下に違いが現れ「生きづらさ」の質における性差の存在が示唆された。さらに発達障害関連指標(ディスレキシア、ADHD、アスペルガー障害)を用いて大学生を対象とし、これらの関連性を検討したが、それらの間に明確な関係は見いだされなかった。他方、定時制高校生30名を対象とした同様の調査では、特に男子においてLD、ADHD特性が「生きづらさ」により強く関連する可能性が示された。他方、アスペルガー障害特性については、明確な関係は見いだされなかった。この結果の解釈には慎重さを要するが、読み書き困難や多動衝動性などは、より直接的に「生きづらさ」に関連するものと考えられる。またこれらめ結果にみられる性差から、社会的環境の不十分さ都生物学的脆弱性をして社会的脆弱性を誘起しやすくすることも示唆される。発達障害のある児童・生徒数名を対象としてIEPを作成し、障害特性に応じた個別の学習指導を継続的に実施した。障害特性の適切な把握とそれに応じた指導を企画し、継続的に援助していくことが自己評価を改善するであろうと考えられた。また指導経過を保護者に伝えを共有していくことが親支援・関係者支援につながり、本人との関係を改善することにも寄与すると考えられた。青年期におけるQOL調査から、できるだけ早期に発達障害特性に合わせた支援を行っていくことが、将来的に「生きづらさ」を減少させることにつながると想定される。発達障害に関する基礎的研究領域では、ディスレキシアを中心に検討した。ディスレキシアを主訴とする児童・青年を対象として、スプーナリズム、音韻削除などの音韻処理に関する諸検査を実施した。また非接触型眼球運動測定装置を用いた文章黙読・音読時の眼球運動を計測するとともに、滑動性眼球運動、コヒーレントモーションなどの脆弱性を反映しうる視覚的諸指標についても測定した。さらに、音韻呈示による事象関連電位測定を行い、ミスマッチネガティビティ(MMN)を分析した。これらの結果をもとに各事例におけるディスレキシアの原因を解析・検討するとともに、視能訓練用ソフトウェアを利用して眼球運動の改善を図った。また事例によっては、Steinらの提案する黄色や青色シートによる読字環境の改善を図った。人の成人女性事例では、これらの訓練により顕著な改善が認められるに至った。青年を対象としたQOLと発達障害特性との関連性を検討する調査では、高校生(定時制、単位制)の生徒を対象として検討した。

また学習障害児親の会にも協力を求めて親子による比較検討を実施した。その結果、高校種によって生徒のQOLと発達障害特性との関連性には違いが存在することが伺われた。また学習障害児親の会に所属する青年達は、定時制や単位制高校の生徒達と異なるQOL-発達障害特性の関連性を示すことが伺われた。親の会に所属する親子については、親からみた子の特性も調査し、本人の結果と比較検討した。その結果、QOLの自己関連評価因子、攻撃性因子、友人関係因子、家族関係因子、課題解決能力因子において親子間の差異が認められた。また希望により個別調査結果に基づく親子カウンセリングを実施した。この方法により、親子関係についてより具体的に課題を提示するかたちのカウンセリングを行いうることが示唆された。
多因子疾患遺伝子の機能解析のためのスピードコンジェニックマウス作製法の確立

ヒト疾患の多くは、多因子疾患であり、その個々の要因を明らかにしていくことは困難である。しかし、マウスにおいては、比較的軽微な個々の遺伝子変異であっても疾患全体に及ぼす機能的影響をinvivoで効率よく検出するシステムを構築することが可能であり、そのためにコンジェニックマウスを作製することが常套手段として用いられる。しかし、これまでのコンジェニックマウス作製方法は、戻し交配を10代繰り返すことにより遺伝的背景を均一にする作製法が用いられてきた。近年のゲノム解析技術の進歩により、マウスゲノムの詳細な遺伝子地図を作成することができ、それにはマイクロサテライトマーカーが多く用いられている。そこでこのコンジェニックマウス作製をマイクロサテライトマーカーを指標とし、より正確で時間を短縮して遺伝的背景の置き換えをスピードアップするスピードコンジェニックマウス系統の開発をおこなわれるようになってきた。本研究では多因子疾患であるインシュリン依存性糖尿病モデルにおいて、各疾患感受性遺伝子の機能解析を目的としてスピードコンジェニックマウス作製方法の検討をおこない、効率よい個体レベルで解析するシステム確立することを目的とした。その結果2.重要な糖尿病感受性遺伝子Idd1,Idd3,Idd4,Idd5およびIdd9についてこれらの遺伝子領域にSSLPマーカーを指標としてC57BL/6J,129/Svj,およびMSM各系統由来の各染色体領域を導入してコンジェニックマウス系統を作製し、糖尿病発症率の比較等をおこない、異なる遺伝的背景における糖尿病感受性遺伝子の疾患発症における寄与の差を明らかにした。3.主要原因遺伝子Idd1(MHC)をにおいては遺伝的背景の異なるコンジェニックマウスを作製し、主要遺伝子発症への関与を検討した。疾患遺伝子の解析は単一遺伝子疾患から多因子疾患へと展開されている。個々の遺伝子変異が軽微であり、他の疾患遺伝子と共存することにより初めて疾患への影響が明らかとなる多因子疾患において個々の軽微な変異が疾患全体に及ぼす機能的影響をin vivoで効率よく検出するシステムの構築が不可欠である。本研究ではインシュリン依存性糖尿病モデルおよびけいれん感受性モデルマウスにおいてを各疾患感受性遺伝子の機能を個体レベルで解析するシステム確立することを目的とした。本年度はその方法として本研究で採用するPCR-SSLP多型マーカーを指標として遺伝的背景の置き換えをスピードアップするスピードコンジェニックマウス系統の開発の基盤づくりを行った。そのため(1)マウス各染色体に20cMごとにNOD/shi,DBA/2J,C57BL/6J,129/Svj,およびMSM間に多型を示すSSLPマーカーのデータベースを構築した。(2)各バッククロス世代におけるSSLPマーカー検査のための最小調査個体数の検討を行った。(3)重要な糖尿病感受性遺伝子Idd1,Idd3,Idd4,Idd5およびIdd9についてこれらの遺伝子領域にSSLPマーカーを指標としてC57BL/6J,129/Svj,およびMSM各系統由来の各染色体領域を導入してコンジェニックマウス系統を作製を開始した。(4)PTZ誘発感受性けいれん感受性遺伝子のマッピングをおこなった。多因子疾患の遺伝子解析では個々の遺伝子の機能解明が重要な課題である。一般にCommon Diseaseといわれる疾患においては遺伝子変異が軽微であり、他の疾患遺伝子と共存することにより初めて疾患への影響が明らかとなることが多い。このような場合、遺伝子の機能的影響をin vivoで効率よく検出するシステムの構築が不可欠と考えられる。本研究ではType I糖尿病モデルマウスNODにおける疾患感受性遺伝子の機能を明らかにするためコンジェニックマウス作製法をもとにその遺伝的背景の置き換えをスピードアップするスピードコンジェニックマウス系統の開発の基盤づくりを行った。(1)マウス

各染色体に20cMごとにNOD/shi,DBA/2J,C57BL/6J,129/Svj,およびMSM間に多型を示すSSLPマーカーのデータベースを構築した。(2)各バッククロス世代におけるSSLPマーカー検査のための最小調査個体数の検討を行った。(3)重要な糖尿病感受性遺伝子Idd1,Idd3,Idd4,Idd5およびIdd9についてこれらの遺伝子領域にSSLPマーカーを指標としてC57BL/6J,129/Svj,およびMSM各系統由来の各染色体領域を導入してコンジェニックマウス系統を作製した。N4世代において最大、97.6%(82/84)がレピシエント側のタイプに置き換わった。(4)生殖工学的手法との併用による期間の短縮化を検討した。今後はコンジェニックマウスを用いた遺伝子間相互作用解明のシステム作りが重要である。ヒト疾患の多くは多くの遺伝的因子が原因となる多因子疾患であり、その個々の要因を明らかにしていくことは困難である。しかしヒト疾患モデル動物を用いて、比較的軽微な個々の遺伝子変異を他の疾患遺伝子と共存することにより初めて疾患への影響が明らかとなり、多因子疾患における個々の軽微な変異が疾患全体に及ぼす機能的影響をinvivoで効率よく検出するシステムを構築する事が大変重要である。本研究ではインシュリン依存性糖尿病モデル、リンパ腫感受性マウス、けいれん感受性モデルマウスにおいてを各疾患感受性遺伝子の機能を個体レベルで解析するシステム確立することを目的とした。これまでにその方法としてPCR-SSLP多型マーカーを指標として遺伝的背景の置き換えをスピードアップするスピードコンジェニックマウス系統の開発を行ってきた。その結果(1)マウス各染色体に20cMごとにNOD/shi, DBA/2J, C57BL/6J, 129/svj,およびMSM間に多型を示すSSLPマーカーのデータベースを構築した。(3)重要な糖尿病感受性遺伝子Idd1, Idd3, Idd4, Idd5およびIdd9についてはこれらの遺伝子領域にSSLPマーカーを指標としてC57BL/6J, 129/Svj,およびMSM各系統由来の各染色体領域を導入してコンジェニックマウス系統を作製し、糖尿病発症率の比較等をおこない、それぞれの糖尿病感受性遺伝子のアレルにおける疾患発症における寄与率の差異を詳細に解析するとともに、主要原因遺伝子Idd1をにおいては遺伝的背景における発症の差異を明らかにすることができた。これらのマウスは今後各遺伝子座における発症メカニズムの解明に寄与することと思われる。
血栓溶解のためのプロペラ付ロ-テーションカテーテルの有効性

血栓溶解のためのプロペラ付ロ-テーションカテーテルを試作し、インビトロでその有効性を検討した。検討に際し^<51>q-血小板(約5ml)を作成しこれを健常男性より得た全血20mlと混入、あらかじめ10unit(0.1ml)のトロンビンを入れた1mlシリンジに分注し30分放置して円柱型の直径の3mm、長さ20mm)の血栓を作製した。これを長さ5mmに切りそろえ各血栓の放射能をウェル型シンチレーションカウンターにて測定しておく。その後各血栓を3mlの生食の入った10ml試験管に投入する。血栓の粉砕溶解のため、溶液中にロ-テーションカテーテルを挿入し、内部のプロペラを電動モーターにて40000gammapmにて一定時間(10,20,30秒)回転させる。粉砕、溶解された血栓を含む溶液を孔径10umのメンブレンフィルターにて吸引ろ過すると10um以上の大きさの血栓はフィルター上に残る。(赤血球の大きさを考慮すると、10um以下の粉砕された血栓は体内の毛細血管床を通過可能)この残存血栓の放射能をフィルターごと測定する。ロ-テーションカテーテル作動前後の放射能の比を算出しこれを残存率とし示標とした。カテーテル性能評価に際し、たて軸を残存率、横軸を作動時間とするセミログプロットより、試作したプロペラ付ロ-テーションカテーテルによる血栓溶解速度(%/分)を求めた。なお血栓の溶解性には、個人差が大きいため、4人の健常男性(Donor 14)の血栓毎に溶解速度を求めた。Donor 1:10秒時の平均残存率=39%,20秒=26%,30秒=10%,溶解速度=99%/分。Donor 2:10秒時の平均残存率=49%,20秒=35%,30秒=25%,溶解速度=92%/分。Donor 3:10秒時の平均残存率=73%,20秒=57%,30秒=40%,溶解速度=83%/分。Donor 4:10秒時の平均残存率=61%,20秒=37%,30秒=27%,溶解速度=93%/分であった。
ウォーターカラーイリュージョン効果の服飾デザインへの応用と教材提案に関する研究

本実験では、ウォーターカラーイリュージョン効果を用いた白色増大知覚が表示媒体に依存するのか、ディスプレイと紙面で刺激を呈示し、それぞれで評価実験を行った。実験刺激は、予備実験で効果が見られた色の組み合わせを用い、ディスプレイと紙面に同形のウォーターカラーイリュージョンの図形を描き、一対比較により知覚的白さの評価を行い、異なる表示メディアによる実験結果の比較検討を行った。ウォーターカラーイリュージョン効果を用いた白色の増大が、提示媒体に依存するのか評価実験を行った結果、1ディスプレイ刺激と紙刺激を使用した両実験ともに、白色増大を確認した。2ディスプレイ刺激と紙刺激を使用した両実験ともに、被験者は白色が増大するウォーターカラーイリュージョン図形として、内側に青を使った刺激を選択する傾向にあった。3知覚的に白色が増大するウォーターカラーイリュージョン効果は、両実験ともに見られたが、ディスプレイ刺激実験での効果が顕著であった。この発表内容は、今後の実験方法の立案と実験刺激の作成に結びつくものであり、貴重な知見を得ることができた。ウォーターカラーイリュージョンに関する基礎知覚特性を獲得するために、刺激呈示システムを用いた心理物理実験と紙刺激を用いた評価実験を行うことで、定量的データと感性面のアプローチデータを収集した。さらに、ウォーターカラーイリュージョン効果による白色度の向上は、実験媒体に依存するのかを評価実験によって明らかにした。両実験結果から、知覚的白さが増大する色の組み合わせは、青を内側に配置した組み合わせが選ばれ、似た傾向を示した。これにより、ディスプレイを用いた刺激実験でも、ウォーターカラーイリュージョンを用いた白色効果実験が可能であることが示唆された。さらにこの実験結果から、ウォーターカラーイージョン効果を用いた白色知覚データの収集では、多角的に信憑性のあるデータ収集が可能であることも明らかになった。これらを踏まえ、今後の心理物理実験は、刺激呈示システムを使った実験に移行する予定である。それにより、ウォーターカラーイリュージョン図柄の線の太さや間隔等の作図条件などのパラメーターを容易に変化させることが可能となり、有彩色のにじみ効果を考察するために必要な背景色の変化なども可能となる。これにより、服飾デザインとして布地に応用する際のシミュレーションを、画像で体現することもできるようになると考える。ウォーターカラーイリュージョン効果を用いた白色増大知覚データを収集するため、刺激呈示システムを使った心理物理実験を新たに立案し実施する。これまでの実験から、ウォーターカラーイリュージョン効果により白色度を上げる色の組み合わせを明らかにした。さらに、ディスプレイを用いた刺激実験でも、白色効果実験が可能であることが示唆された。今後は、白色知覚が上がる色の組み合わせによる、「知覚的な色のにじみの定量化」実験を行う予定である。これまでの実験結果から知覚的白色効果が確認されたウォーターカラーイリュージョン図柄を実験刺激に用い、ウォーターカラー効果でにじんで見える色みと同様に感じる色みを、実際にディスプレイ上で被験者に作ってもらう実験を考えている。実験により作られた色みの測色をすることで、ウォーターカラーイリュージョンによる知覚的白色効果向上のにじみの定量的データの取得を目指す。このことから、知覚的白色向上に影響を与える色みの定量化が可能になると考えられる。また、服飾デザインへの応用として、白布による評価実験も手がけていく予定である。

ウォーターカラーイリュージョン効果を用いた白色増大知覚データを収集するため、刺激呈示システムを使った心理物理実験を新たに立案し実施する。これまでの実験から、ウォーターカラーイリュージョン効果により白色度を上げる色の組み合わせを明らかにした。さらに、ディスプレイを用いた刺激実験でも、白色効果実験が可能であることが示唆された。今後は、白色知覚が上がる色の組み合わせによる、「知覚的な色のにじみの定量化」実験を行う予定である。これまでの実験結果から知覚的白色効果が確認されたウォーターカラーイリュージョン図柄を実験刺激に用い、ウォーターカラー効果でにじんで見える色みと同様に感じる色みを、実際にディスプレイ上で被験者に作ってもらう実験を考えている。実験により作られた色みの測色をすることで、ウォーターカラーイリュージョンによる知覚的白色効果向上のにじみの定量的データの取得を目指す。このことから、知覚的白色向上に影響を与える色みの定量化が可能になると考えられる。また、服飾デザインへの応用として、白布による評価実験も手がけていく予定である。本年度はウォーターカラーイリュージョン効果による白色度の向上は、実験媒体に依存するのかに着目し、評価実験を行った。この実験は、これまでの実験方法の再検討や再確認の意味もあることから、実験にかかる費用を抑える結果となった。本実験結果を踏まえ、次年度は新たな実験に着手する予定である。そのため、実験に使用する刺激試料の購入等を考えている。関連学会、実験のためのミーティング等に出席するための旅費を計上した。
ｅｔａ’原子核にみる有限密度でのカイラル対称性回復とＵＡ（１）量子異常効果の検証

本研究は、擬スカラー中間子の一つであるeta-prime(958)中間子に注目し、その有限密度中での質量減少の実験的な検証に向けた理論研究である。eta-prime(958)中間子は、南部-Goldstone粒子としては、重すぎる質量を持っており、これはUA(1)量子異常の存在とカイラル対称性の自発的破れがあいまって決定されていると考えられている。このことを踏まえ、有限密度中でのeta-prime(958)中間子の質量減少を観測することが出来れば、有限密度中でのカイラル対称性の自発的破れ及びUA(1)量子異常の振る舞いなどに関する知見が得られると考え、その実験的検証を目指すものである。本研究では、eta-prime(958)中間子を原子核の束縛させ、そのスペクトラムをピークとして観測することで、eta-prime(958)中間子の質量減少の観測をめざしたものである。本年度は具体的に、原子核に陽子を入射させ、重陽子を観測する(p,d)反応による束縛状態生成に関し、最適な入射エネルギー、標的原子核などの具体的検証を行い、論文発表を行った。また、光子を入射させ陽子を観測する(gamma,p)反応に関しても、最適な実験条件を探るための理論研究を行い、実験研究者と議論を行った。さらに、微視的な相互作用から結合チャネル法を用いたeta-prime原子核光学ポテンシャルを導出し、エネルギー依存性を考慮した形で検証を行い、束縛エネルギー及び崩壊幅の見積もりを行った。さらにこの結合チャネルにおけるベクトル中間子の寄与に関して詳細に議論を行った。25年度が最終年度であるため、記入しない。本研究は、eta-prime(958)中間子の有限密度中での質量減少の実験的な検証の実現に向けた理論研究を行うものである。eta-prime中間子の質量はUA(1)量子異常の存在とカイラル対称性の自発的破れの効果があいまって決定されると考えられていることを踏まえ、有限密度内での中間子の質量減少を検証することにより、カイラル対称性の部分的快復の効果、UA(1)量子異常の媒質中での振る舞いを明らかにする。本研究では、eta-prime中間子原子核束縛系を生成し、その束縛状態のエネルギーを観測することで、eta-prime中間子と原子核、及びeta-prime中間子と核子との相互作用の情報を引き出し、eta-prime中間子に関する諸性質を理解することを目的としている。本年度は、eta-prime中間子原子核の生成反応について具体的に検証し、陽子を入射させ重陽子を観測する(p,d)反応の可能性について、理論的にそのエネルギースペクトルの計算を行った。また微視的な相互作用から結合チャンネル法を用いたeta-prime中間子と原子核の光学ポテンシャルを構築し、その微視的相互作用から、eta-prime中間子が原子核内で吸収された時に射出される核子対の同時観測によるエネルギースペクトルの理論計算を行い、これにより実験において予想される大きなバックグラウンドを減少させる可能性について理論的に検証した。これらの理論計算に基づき、実験研究者と共に実験の可能性を議論し、現在計画を遂行中である。当初計画していたとおり、eta-prime中間子原子核束縛系の生成について、実験研究者とも具体的に議論を行い、ドイツ重イオン研究所での実験の提案を行っている。その実験提案に基づき、論文を作成し出版した他、理論計算についても、論文を出版した。現在、微視的な光学ポテンシャルの改良を行い、より精密な理論的予言を行うための準備を行っている。具体的には、結合チャンネル法を用いたeta-prime中間子と核子との相互作用模型の構築についてこれまでは考慮されてこなかったエネルギー依存性を取り込み、現在報告されているeta-prime核子の散乱長や、eta-primeの透過確率などの各実験データとの整合性を確認し、より統一的に実験データを説明できる模型の構築を目指している。
遠隔対話ロボットを用いた自閉症児のための少人数対話能力療育プログラムの開発と実証

本研究では,対人的コミュニケーションの能力に関して障碍を抱える自閉症スペクトラム症(ASD)の児童・青年に対して,人と対話するロボットを用いた療育プログラムの開発と支援学校における実証実験,およびそのための人とロボットの対話の分析を行った.ロボットを介して人と対話するための遠隔操作インターフェースを用いたASD者を対象とした面接のフィールド実験および健常者を対象とした統制実験を通じて,人と対話するロボットがASD青年にとって,非言語的な応答を示す相手となるとともに,普段,養育者に開示できていないことを開示する相手になる可能性,そしてそのロボットとの対話を契機とする療育の可能性を示した.平成27年度では,(1)少人数ロボット対話環境の開発,(2)対話における生理指標の分析と療育課題の分類の研究に取り組んだ。(1)では,少人数対話環境を構築するための,遠隔対話ロボットシステムを構築した.具体的には,脅威の対象となりにくい外見を持つ小型卓上型ロボットや人間そっくりな外見を持つアンドロイドを端末とし,遠隔操作者がロボットを設置した部屋の様子をモニターで視聴しながら,端末に文字列をタイピングすることにより,その合成音声をロボットのスピーカから口の動きとともに生成させたり,画面上のボタンのクリックにより,あらかじめ登録しておいた対話中にロボットに生成させたい発話・行動を生成させることで,ロボットと対面する者と対話できるシステムである.予備実験として,養育者が遠隔操作者となって,本システムを使用してASD児と対話する際の養育者側の使用感を評価させるとともに,ASD児がロボットと対面して対話する様子を観察し,本システムを用いることで,双方とも負担感の少ない対話ができる可能性を見出した.またASD児を遠隔操作者として,養育者と対話させる予備実験を実施し,何名かの児において,ロボットを介した形態をとることで,普段と比して,コミュニケーションの質の改善する点があったことが認められた.(2)では,ロボットとの対話時のストレスの分析に関して,ロボットと対話時にASD者から取得できる生理指標および視線による行動指標を測定する予備実験に取り組んだ.生理指標として対話前後のコルチゾールを用いたストレス評価および主観的評価では,予備実験を実施し,実験デザインの構築に取り組んだ.並行して,行動指標に関して,ASD青年と人間に酷似したアンドロイドと交互に対話させたときの視線追従を評価し,ASD青年は人との対話時に比べ,ロボットとの対話時に指標の改善を見せる可能性を報告した.H27年度では,本研究のコアとなる,ロボットを用いた遠隔対話システムを開発するとともに,予備実験に使用し,そのインターフェースが実際にASD者とその養育者の対話を実現に耐えるものであることが確認できている.また,その操作者による使用感や,対面者のストレス評価に関する予備実験を,本システムの導入を計画しているフィールドで行うことができており,導入に関する予備実験も同時に着手することができている.一方で,その評価は充分でなく,最終年度では,今年度構築したシステムおよび実験フィールドを用いて,その実現に向かって研究を加速していく.平成28年度では,(1)の課題の成果である,平成27年度中に構築した,キーボードとマウスを用いた遠隔対話ロボットシステムを用いて,自閉症スペクトラム障害者の対話における(2)生理指標の分析と療育課題の分類の研究と,(3)対話形態のスケジューリングによる療育の研究に取り組んだ.(2)の生理指標に関して,アンドロイドを相手としたASD者の面接の繰り返し練習において,コルチゾール(ストレスの生理指標)と自己評価を測定する実験を実施し,3日間の連続練習を経て,人に対する面接時のコルチゾールと自信の改善を認めた.また2体の小型ロボットを用いて,定評のあるアセスメント法であるADOSの診断過程の一部を自動化し,健常者と発達障害者の間に,ロボットへの反応の違いを認めた.これはASDの診断技術として少人数ロボットとの関わりを用いる可能性を示唆するものであり,ロボット用いた療育課題の分類法の開発につながる結果であると考えられる.(3)の対話形態のスケジューリングに関し,未就学児を対象に,人,ロボット,人,と対話相手を変遷することで,ASD者においてロボットへの応答の容易さがみられるか否か,またそれが人の視線への反応につながるか否かを調査する実験を実施した.実験結果は被験者数の増加が今後の課題であるものの,ASD者においてロボットへの応答が人と比べて促進されること,またロボットへの応答を経験した群のASD者において,その後の人への反応が促進される可能性を示唆した.また,青年を対象に,遠隔操作されるロボットを含んだASD者・養育者・ロボットの3者対話実験を実施し,3者対話を経ることで,ASD者・養育者の間の対話の促進を認めた.これらの結果は,ロボットとの直接対話,あるいはロボットを含む少人数対話を経ることが,ASD者の周りの人との対話の効果的な療育となる可能性を指示するものと言える.本研究では,対人的コミュニケーションの能力に関して障碍を抱える自閉症スペクトラム症(ASD)の児童・青年に対して,人と対話するロボットを用いた療育プログラムの開発と支援学校における実証実験,およびそのための人とロボットの対話の分析を行った.ロボットを介して人と対話するための遠隔操作インターフェースを用いたASD者を対象とした面接のフィールド実験および健常者を対象とした統制実験を通じて,人と対話するロボットがASD青年にとって,非言語的な応答を示す相手となるとともに,普段,養育者に開示できていないことを開示する相手になる可能性,そしてそのロボットとの対話を契機とする療育の可能性を示した.おおむね順調に研究は進んでいる.

今後は,今年度構築したシステムをさらに改良し,自閉性スペクトラム障害児が通う病院,支援学校などの協力を得て,コミュニケーション支援の実現に向けて,いっそう力を入れていく.知能ロボット学ロボットの遠隔対話システムは当初、音声入力をベースとすることを予定していたが,タイピングが予想以上に効果的であることが分かったため,タイピングをベースとする遠隔操作のインターフェースの使用感を,フィールドでの使用に耐えるものに引き上げることに注力する必要が生じた.それに伴い,遠隔対話システムで使用するロボットの台数を増やすための開発を次年度に回すこととなった.これに伴って,今年度廃部額の一部を次年度使用額とすることにした.次年度使用額とH28年度配分額とを合わせ,複数体のロボットを用いた遠隔対話システムの開発に必要な物品購入に充てる.また,一部は,実験のランニングコスト,また評価実験のための研究スペースの借用料に充てる.
インドネシアにおけるメダカ亜目魚類の系統と種分化

メダカ属(Oryzias)とその類縁の魚から成るメダカ亜目魚類(Adrianichthyoidei)は、アジア固有の淡水魚である。このうち、染色体融合型グル-プのメダカ属魚類と、これに近縁なアドリアニクチス類(Adryanichthys & Xenopoecilus)が生息しているスラウェシ島は、アジアとオ-ストラリアの生物の地理的分布の移行帯であるウォラセアに属しており、メダカ属の系統、種分化と地理的分布の関係を調べるうえで非常に重要な地域である。スラヴェシ島の調査により、メダカ亜目魚類全体の系統が明らかになると基待される。しかし、最近の報告によると、これらの固有種は湖にコイやティラピアのような食用魚を導入したためほとんど見掛けることができなくなり、絶滅したのではないかと心配されている(Whitton et al.,1988;Kottelat,1990)。本研究では、スラウェシ島中部のポソ湖に於て、これらの魚魚を採集し系統と種分化に関する研究を行うと共に、生息地の環境と魚の生息状況の調査を行い、魚の保護につて将来的な方策をたてることを目的とした。ポソ湖は、セレベス島中部の海抜500mの所にある構造湖で、最大面積は323km^2である。最大水深は450m、南北に長い長方形状の形をしている。湖の北東部のテンテナに開口部があり、湖水は全長57kmのポソ河に流出している。今回の陸水学的調査で、ポソ湖は透明度約10mの典型的な貧栄養湖であることが明らかになった。表水のは8.45、導伝率は118/cmで、硝酸・亜硝酸態窒素や燐酸はほとんど含まれていない。湖の一次生産の指標であるクロロフィルa量は0.99mg/Lで、植物および動物プランクトンの優先種はツヅミモ類(Staurastrum limeticum)とコッペポ-ダ類(Thermocyclops uenui)であった。従って、ポソ湖に生息できる魚の種類と量は非常に制限されると考えられ、外から魚が導入されれば在来との間で激しい競争が生じると思われる。ポソ湖でこれまでに報告されているメダカ亜目魚類は、メダカ属2種(O.nigrimasとO.rthognathus)、ゼノポエキルス属2種(X.oophorus)、アドリアニクチス属1種(A.kruyti)、の合計5種である(Kottelat,1990)。このうち、メダカ属2種とX.oophorusは、湖の流出口のテンテナとその周辺で採集できた。また、X.poptaeは、1991年4月にテンテナの橋の下流で釣り上げ、フォルマリンで固定した標本(成魚雌:SL154mm)を確認・観察することができた。しかし、A.kruytiについては、生息が全く確認できなかった。X.poptaeとA.kruytiの2種はポソ湖西岸の水深20ー30mの所に生息していると言われており、沿岸帯の水面近くに生息している他の3種とは違った採集方法を行う必要があると思われる。スラウェシ島の淡水漁業は、もともと有用な在来魚が少なかったため、コイ、ティラピア、バルブ、グラミ-、ナマズ等の導入魚に基盤を置いている。ポソ湖には6種の在来種が生息しているが、そのうち重要な魚種はウナギ(Anguilla mauritiana)だけであった。ポソ湖に導入された魚種は、コイCyprinus carpio、ティラピアTilapia sp.、グラミ-Trichogaster trichopterus、ナマズ(Clarias sp.等であるが、導入された時期は不明である。このうち、特にティラピアは水深10ー30mに生息し、同じ水深に生息するA.kruytiやX.poptaeと生息場所や餌が競合すると思われる。加えてティラピアは繁殖力が強いので、ポソ湖の様な貧栄養湖では、A.kruytiやX.poptaeの生存は極めて危機的な状態になると思われる。今回の調査では、メダカ属2種とX.oophorusは生存が確認できたが、A.kruytiとX.poptaeは生存を確認することができなかった。これら2種が危機的な状態になっている可能性が高い。生否の確認や生息状態の調査には魚探知機の使用や、20ー30mの深さでの網や釣を使った捕獲を計画する必要があろう。

しかし、最近の報告によると、これらの固有種は湖にコイやティラピアのような食用魚を導入したためほとんど見掛けることができなくなり、絶滅したのではないかと心配されている(Whitton et al.,1988;Kottelat,1990)。本研究では、スラウェシ島中部のポソ湖に於て、これらの魚魚を採集し系統と種分化に関する研究を行うと共に、生息地の環境と魚の生息状況の調査を行い、魚の保護につて将来的な方策をたてることを目的とした。ポソ湖は、セレベス島中部の海抜500mの所にある構造湖で、最大面積は323km^2である。最大水深は450m、南北に長い長方形状の形をしている。湖の北東部のテンテナに開口部があり、湖水は全長57kmのポソ河に流出している。今回の陸水学的調査で、ポソ湖は透明度約10mの典型的な貧栄養湖であることが明らかになった。表水のは8.45、導伝率は118/cmで、硝酸・亜硝酸態窒素や燐酸はほとんど含まれていない。湖の一次生産の指標であるクロロフィルa量は0.99mg/Lで、植物および動物プランクトンの優先種はツヅミモ類(Staurastrum limeticum)とコッペポ-ダ類(Thermocyclops uenui)であった。従って、ポソ湖に生息できる魚の種類と量は非常に制限されると考えられ、外から魚が導入されれば在来との間で激しい競争が生じると思われる。ポソ湖でこれまでに報告されているメダカ亜目魚類は、メダカ属2種(O.nigrimasとO.rthognathus)、ゼノポエキルス属2種(X.oophorus)、アドリアニクチス属1種(A.kruyti)、の合計5種である(Kottelat,1990)。このうち、メダカ属2種とX.oophorusは、湖の流出口のテンテナとその周辺で採集できた。また、X.poptaeは、1991年4月にテンテナの橋の下流で釣り上げ、フォルマリンで固定した標本(成魚雌:SL154mm)を確認・観察することができた。しかし、A.kruytiについては、生息が全く確認できなかった。X.poptaeとA.kruytiの2種はポソ湖西岸の水深20ー30mの所に生息していると言われており、沿岸帯の水面近くに生息している他の3種とは違った採集方法を行う必要があると思われる。スラウェシ島の淡水漁業は、もともと有用な在来魚が少なかったため、コイ、ティラピア、バルブ、グラミ-、ナマズ等の導入魚に基盤を置いている。ポソ湖には6種の在来種が生息しているが、そのうち重要な魚種はウナギ(Anguilla mauritiana)だけであった。ポソ湖に導入された魚種は、コイCyprinus carpio、ティラピアTilapia sp.、グラミ-Trichogaster trichopterus、ナマズ(Clarias sp.等であるが、導入された時期は不明である。このうち、特にティラピアは水深10ー30mに生息し、同じ水深に生息するA.kruytiやX.poptaeと生息場所や餌が競合すると思われる。加えてティラピアは繁殖力が強いので、ポソ湖の様な貧栄養湖では、A.kruytiやX.poptaeの生存は極めて危機的な状態になると思われる。今回の調査では、メダカ属2種とX.oophorusは生存が確認できたが、A.kruytiとX.poptaeは生存を確認することができなかった。これら2種が危機的な状態になっている可能性が高い。生否の確認や生息状態の調査には魚探知機の使用や、20ー30mの深さでの網や釣を使った捕獲を計画する必要があろう。
油脂生産性糸状菌の遺伝子操作技術基盤の構築と分子育種による有用脂肪酸生産への応用

油脂生産糸状菌Mortierella alpina 1S-4を用いたエイコサペンタエン酸(EPA)など有用脂肪酸の発酵生産法の開発に向けて、本研究では以下の3点に関する研究を行った。【A.広範に応用可能な遺伝子破壊技術の構築】1年目に構築した遺伝子破壊技術に加え、近縁種も含め種々の宿主において遺伝子破壊が可能な技術の構築を試みた。単純ヘルペスウイルスのもつチミジンキナーゼ(HSVtk)は、5-フルオロ-2'-デオキシウリジン(F2dU)をリン酸化することで毒性物質に変換する。本研究では、M. alpinaにおける致死性を確認し、最適F2dU濃度を決定した。【B.遺伝子破壊による脂質漏出生産株の作出】M. alpinaにおいて脂質漏出に関与が推測される数遺伝子を特定・破壊し、脂質漏出株の作出を試みた。結果、このうち1種類の遺伝子破壊株において、脂質漏出化が確認された。現在、詳細な漏出生産量の評価及び培養法の確立を進めている。【C. EPA生産にも関与するΔ12不飽和化酵素遺伝子の破壊による希少脂肪酸生産】ミード酸(20:3ω9)は、関節炎の抑制など有用な生理活性効果が期待されているが、自然界には幼児の関節やへその緒などに存在が知られるのみで、蓄積資源は知られていない。M. apinaは、野生株ではミード酸は蓄積しないが、ARAやEPA生合成経路の中間体としてミード酸を経由していることが示唆される。そこで、ミード酸からARAへの変換を担うΔ12不飽和化酵素の遺伝子を破壊することで、ミード酸生産を試みた。結果、Δ12不飽和化酵素遺伝子の破壊株は、ミード酸を総脂肪酸のうち約10%蓄積することを確認した。これにより、EPAなどのω3系脂肪酸とARAなどのω6系脂肪酸を蓄積しない、飽和脂肪酸とミード酸をはじめとするω9系脂肪酸のみで構成される脂肪酸組成を示す株の作製に成功した。27年度が最終年度であるため、記入しない。脂肪酸の発酵生産法の開発にむけて以下ACを検討した。A.標的遺伝子座への遺伝子操作技術として、高効率遺伝子ターゲティング(GT)技術の開発を試みた。非相同末端結合(NHEJ)機構に関与するKu80もしくはLig4タンパク質の遺伝子を破壊することで、NHEJ機構の欠損および相同組換え頻度の向上によるGT効率化を試みた。結果、lig4破壊においてGT効率化を確認した。また、lig4破壊株を宿主としてΔ5不飽和化酵素(Δ5ds)遺伝子を破壊し低温(12°C)で培養することにより、ω3脂肪酸であるエイコサテトラエン酸の生産を実現した。B.作製した高効率GT株を宿主として、脂肪酸の鎖長延長に関与するmaelo遺伝子の破壊を試みた。結果、総脂肪酸の10%を占めていた長鎖飽和脂肪酸C20:0、C22:0、C24:0を全く蓄積しない株の作製に成功した。しかし、maelo破壊株の菌形態は通常と異なり、脂肪酸蓄積効率が低下する傾向にあった。よって、本菌の正常な生育と脂肪酸蓄積には、長鎖飽和脂肪酸群が不可欠であると示唆された。このように、本GT技術が脂肪酸の生理機能の解析に有効であると示された。C.室温条件でEPA生産可能なω3dsを本菌内で発現させることでEPA生産性の向上を試みた。土壌よりEPA生産菌を室温条件で単離した。この菌のもつω3ds遺伝子を単離し酵母発現系にて機能解析を行った結果、遺伝子産物が室温条件においてω3ds活性を有することを確認した。また、この遺伝子をM. alpina 1S-4に導入した結果、M. alpina 1S-4において室温条件でEPA生産(含有率17%、生産量0.4 g/L of culture broth)を実現した。

M. apinaは、野生株ではミード酸は蓄積しないが、ARAやEPA生合成経路の中間体としてミード酸を経由していることが示唆される。そこで、ミード酸からARAへの変換を担うΔ12不飽和化酵素の遺伝子を破壊することで、ミード酸生産を試みた。結果、Δ12不飽和化酵素遺伝子の破壊株は、ミード酸を総脂肪酸のうち約10%蓄積することを確認した。これにより、EPAなどのω3系脂肪酸とARAなどのω6系脂肪酸を蓄積しない、飽和脂肪酸とミード酸をはじめとするω9系脂肪酸のみで構成される脂肪酸組成を示す株の作製に成功した。本研究の成果として、本研究室で研究対象としている糸状菌において効率的な遺伝子破壊技術を確立し、その応用として代謝工学により様々な希少脂肪酸の生産株の構築を実現した。さらに、EPA生産菌を自然界から単離、さらにその菌株のもつ脂肪酸生合成酵素遺伝子を同定し、本研究室の糸状菌において発現することにより、生産目標であるEPAの室温条件での生産化に成功した。また、本研究において当初の目標以外の観点からも新たな知見を見出してきた。特に、遺伝子破壊技術による逆遺伝学的手法を用いて脂肪酸の生理的意義に関して言及した研究は初めてのことであり、今後、微生物菌体内で各脂肪酸がもつ生理機能に関する基礎研究も進展すると期待している。27年度が最終年度であるため、記入しない。1.既に評価した各ω3不飽和化酵素遺伝子とアシルCoAシンテターゼ(ACS)遺伝子を共発現することによるEPA生産性を評価する。2.M. alpina 1S-4における漏出変異に関係する遺伝子群を特定するために、本研究にて創製した高効率遺伝子ターゲティング株を宿主として候補遺伝子群を破壊し、逆遺伝学的に脂肪酸菌体外漏出のメカニズムを解明する。また、特定した複数遺伝子の破壊を組み合わせることにより、機能性脂肪酸の漏出高生産株の分子育種を行う。3.これらすべての知見をもとに、本菌において各遺伝子の過剰発現及びターゲッティング破壊をすることにより、EPA超高生産株の創製を目指す。
ゲノム編集技術によるタグ導入を利用した新生タンパク質初期動態観察法の構築

蛍光イメージング技術はより高精度な観察手法の開発にむかっている。へリックスバンドル型タグープローブシステムを活用して細胞内の反応をミリ秒単位で観測できる手法を開発することを目的とした。また、ゲノム編集技術を利用してタグ配列をゲノムの標的遺伝子に組み込むことで恒常的なタンパク質発現を観察し、翻訳過程から局在変化までを追跡することを試みた。細胞内におけるtet-on制御によって生じるタグ付加タンパク質の発現,局在変化の追跡を実施した。標的タンパク質として膜受容体CXCR4,ヒストンタンパク質H2B,プロテインキナーゼCを選択し、それぞれにタグ配列と蛍光タンパク質mKOを融合したタンパク質の遺伝子をtet-on発現ベクターに搭載し、細胞内に導入した。Doxの添加後の時間経過に応じて、タンパク質発現、局在変化をmKOの蛍光観察によって確認を行った。各タンパク質について同じ実験観察を行った結果、H2Bにおいて最も明確なタンパク質発現の確認と核内への局在を観察することができた。次に標的タンパク質(H2B)遺伝子のためのガイドRNA(gRNA)およびドナーテンプレートを翻訳開始コドン直後にタグ配列遺伝子が導入されるようにデザインして構築した。ゲノム上への導入はCRISPR-Cas9によるゲノム編集で行ったが、HCT116細胞を利用した場合、ゲノム編集効率は平均して5%程度と低いため、293細胞を利用することにした。これにより、効率的なドナー遺伝子の導入が行えるようになった。さらにドナー遺伝子の導入をより効率化するために、ハイグロマイシン耐性遺伝子を同時に導入し、細胞の薬剤選択後にCreリコンビナーゼを利用してマーカー遺伝子を除去する系を構築した。これによりシングルセル化したタグ導入細胞を得ることができた。この手法はさまざまな遺伝子をゲノムに導入する際にも適応可能な汎用的手法である。蛍光イメージング技術はより高精度な観察手法の開発に向かっている。へリックスバンドル型タグ-プローブシステムは会合に伴う蛍光増大が観察されるため,細胞内の反応をミリ秒単位で観測することが出来ると期待される。本研究ではゲノム上の標的タンパク質遺伝子にタグ遺伝子を導入して,恒常的なタンパク質発現という条件下での観察手法を開発する。この手法では,会合後にミリ秒単位以内で蛍光が増大するタグ-プローブシステムにより,タンパク質の翻訳過程から局在部位への移動までを高精度に追跡できると考えられる。細胞内におけるタンパク質新生から局在化までをタイムラプス観測する技術としてへリックスバンドル型タグ-プローブシステムを利用する。初年度ではペプチド合成で作製したタグ,プローブペプチドを用いてストップトフロー法により蛍光増大に要する時間をミリ秒単位で測定する。タンパク質翻訳過程から局在化までを追跡するためにtet-onプロモーターをもつプラスミドを用いて細胞内で観察を行う計画を立てた。ストップトフロー装置を利用した蛍光強度変化の測定ではプローブ溶液とタグ溶液の混合と同時に蛍光強度の変化を追跡した。その結果100200ミリ秒以内での蛍光強度の飽和が観察された。従って,当初予測していた通り,非常に早い反応を追跡する蛍光プローブとして利用することが可能であると判断された。また,tet-onシステムで利用するタンパク質発現ベクターの構築も計画通りに行い,GPCRであるCXCR4,プロテインキナーゼC(PKC)に赤色蛍光タンパク質mKOを融合したマーカータンパク質の発現について検討を開始した。初年度の研究実施計画では下記の項目を立てていた。下記項目はおおよそ実施することができたため順調な進展と評価している。1.タグおよびプローブペプチドの合成と精製タグ-プローブペア形成による蛍光強度変化について速度論的解析を行うためにタグペプチドとプローブペプチドをFmoc固相合成法によって合成する。プローブには環境応答性蛍光基である4-nitrobenzo-2-oxa-1,3-diazole(NBD)を用いる。NBDは2,3-diaminopropanoic acidと縮合し,Fmoc化することで他のFmocアミノ酸と同様に固相合成でペプチド鎖に縮合できる。合成したタグ,プローブペプチドは逆相HPLCによって精製する。2.タグ-プローブペア形成による蛍光増大過程の解析ストップトフロー装置を設置した蛍光分光光度計を利用して,タグとプローブを混和後からミリ秒単位での蛍光増大を測定する。購入予定のストップトフローシステムはデッドタイムが1ミリ秒以下のため詳細な解析が可能である。また温度変化による蛍光増大の違いなども確認する。3.tet-on型プロモーターを利用した転写開始制御系の構築細胞内においてタグ-プローブペアの形成を時間的に制御配列と標的タンパク質の標的遺伝子を導入したプラスミドをサブクローニングで構築する。標的タンパク質を可視化するために常に蛍光観察できる蛍光タンパク質遺伝子(monomer Kusabira Orange:mKO)をC末端側に導入する。従って,タンパク質発現時にはタグ-標的タンパク質-mKOの融合体が生じる。未消化の項目として、細胞内におけるtet-on制御によって生じるタグ付加タンパク質の発現,局在変化の追跡が挙げられるが、これについては次年度の初期段階で速やかに実施する予定である。

細胞内におけるタンパク質新生から局在化までをタイムラプス観測する技術としてへリックスバンドル型タグ-プローブシステムを利用する。初年度においてはペプチド合成で作製したタグ,プローブペプチドを用いてストップトフロー法により蛍光増大に要する時間をミリ秒単位で測定し,100200ミリ秒以内での蛍光強度の飽和が観察された。そのため,当初予測していた通り,非常に早い反応を追跡する蛍光プローブとして利用することが可能であることが示された。また,タンパク質翻訳過程から局在化までを追跡するためにtet-onプロモーターをもつプラスミドを用いて細胞内でタグーmKO(赤色蛍光タンパク質)ーH2B融合タンパク質の発現過程を観察し,時間経過によるタンパク質局在の変化を明らかにした。また,ゲノム上でのH2Bコード配列に対してタグ遺伝子をゲノム編集を利用して導入するためにCRISPR-CasのsgRNAを構築し,変異導入効率について検討を行った。最終年において細胞内ゲノムから発現されるH2Bの蛍光観察を実現するために必要なデータが取得された。前年度の研究実施に引き続き、当初の研究計画におおよそ沿う形で実施することができたため順調な進展と評価している。1.細胞内におけるtet-on制御によって生じるタグ付加タンパク質の発現,局在変化の追跡を実施した。標的タンパク質として膜受容体CXCR4,ヒストンタンパク質H2B,プロテインキナーゼCを選択し、それぞれにタグ配列と蛍光タンパク質mKOを融合したタンパク質の遺伝子をtet-on発現ベクターに搭載し、細胞内に導入した。Doxの添加後の時間経過に応じて、タンパク質発現、局在変化をmKOの蛍光観察によって確認を行った。各タンパク質について同じ実験観察を行った結果、H2Bにおいて最も明確なタンパク質発現の確認と核内への局在を観察することができた。このためH2Bの発現を指標にタグープローブペアでの観察も進めることにした。2.選択した標的タンパク質(H2B)遺伝子のためのガイドRNA(sgRNA)およびドナーテンプレートの構築細胞核内に局在するヒストンタンパク質H2Bを標的としてタグ配列遺伝子をゲノム上に導入する。翻訳過程の早い段階を捉えるためにタグ配列の導入位置はタンパク質のN末端とした。翻訳開始コドン直後にタグ配列遺伝子が導入されるようにドナー遺伝子をデザインし、その配列を搭載したベクターを構築した。ゲノム上への導入はCRISPR-Cas9を利用し、翻訳開始コドンの近傍で標的化が可能な配列を数種類選択してsgRNA転写に利用するプラスミドを構築した。このsgRNAを利用したゲノム編集効率の評価には細胞は染色体数が45本と正常に近いHCT116細胞を利用したが、編集効率は平均して5%程度である。