hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
冷戦期日本文学の変容と国際性をめぐる総合的研究-GHQ検閲・指導から助成・招聘へ

国内調査においては20世紀情報データベース、ロックフェラー財団データベース等を横断的に用いて資料収集と分析を行った。ロックフェラー財団の日本人創作家招聘プログラムで渡米した江藤淳、有吉佐和子、石井桃子、大岡昇平、小島信夫、安岡章太郎、庄野潤三、阿川弘之らの資料収集と、日本側のプログラム運営の責任者である坂西志保の資料収集を並行して進めた。国外調査においては、香港、ロシアにおけるフィールドワークを行なった。20世紀メディア研究所(早稲田大学)における国際的かつ学際的共同研究の運営、例会司会、機関誌編集を行った。オーストラリア、ウロンゴン大学におけるオーストラリア・アジア学会(Asian Studies Association of Australia)において発表が採択され、The Significance of Overseas Experiences to Ariyoshi Sawako's Literatureの報告を行った。国際日本文化研究セミナー第二回(広島大学)において、ロックフェラー財団の日本人創作家招聘プログラムによって渡米した文学者たちと国務省プロジェクトによって渡米した火野葦平におけるアメリカ表象の変容を研究した金志映の報告にコメンテーターとして参加した。他に日本近代文学会春季大会(早稲田大学)におけるパネル発表、江戸川乱歩新世紀の国際シンポジウムの司会をつとめ、これらを集約した論文集の共編および論文を発表した。「貫戦期」のプロパガンダ研究、インテリジェンス研究、GHQメディア政策研究の成果として『もう一人の彼女李香蘭/山口淑子/シャーリー・ヤマグチ」を上梓した。これは、文学文化研究および、文学的言語と映像言語の領域にまたがる研究の成果でもある。総じて実り豊かな一年であったと評価できる。研究代表者のこれまで十数年に及ぶ日本文学日本文化研究、検閲・インテリジェンス・プロパガンダ研究を、「貫戦期」(満州事変から、日中戦争、太平洋戦争、文化冷戦期を連続的に捉える)の枠組みによって総合的に考察する試みとして単著『もう一人の彼女李香蘭/山口淑子/シャーリー・ヤマグチ』を上梓することができた。本書においては久米正雄、丹羽文雄、田村泰次郎ら文学者の貫戦期における情報戦およびプロパガンダとの関わりについても言及している。ASAAにおいては、文化冷戦期における日本文学者の国際的な動向の事例としてロックフェラー財団の日本文学創作家の招聘プログラムによって渡米した有吉佐和子について、彼女が見出したプエルトリコなどのポストコロニアルの問題群、フェミニズム言説の日本への翻訳紹介、米国内の人種問題の再発見などに焦点を当てて報告した。なお、ロックフェラー財団の招聘プログラムにより渡米した文学者たちの中では、いわゆる第三の新人たちにおける「家族」「国家」「性」「老い」の言説および表象と、有吉佐和子の方法との対照性に注目して考察を深めたい。この課題をめぐっては、すでにJSAA(全オーストラリア日本学会)における発表が採択され、2019年7月に報告予定である。上記のように、研究計画に沿って、本研究は概ね順調に進展していると判断した。最終年度は、ロックフェラー財団の日本文学者招聘プログラムの運営者としてのキーパーソン坂西志保のインテリジェンス戦略についての分析をより深めたい。また、この観点から、米国公文書館における文化冷戦期の対外政策、文化広報、ソフトパワーの基礎文献を洗い直す。従来ロックフェラー財団の日本人創作家招聘プログラムにより渡米した文学者についての研究は、それによってGHQのメディア政策および占領下における検閲制度を発掘した江藤淳の対米言説、戦後民主主義の言論空間批判がクローズアップされてきた。また江藤淳『成熟と喪失“母"の崩壊』は上記プログラムの体験者である「第三の新人」たち、具体的には、小島信夫、庄野潤三、安岡章太郎らに焦点を当てている。しかしながら、文化冷戦期の日本文学の国際化という観点からは、アメリカによるメディア政策は日本対アメリカの二国間関係の内側だけで形成されたのではなく、ソ連、中国(大陸、台湾、香港)、朝鮮半島、ヴェトナム情勢などの地政学において形成されたことを、江藤の言説は軽んじていると見える。実際、有吉佐和子、石井桃子、小島信夫、庄野潤三、安岡章太郎らは、江藤が視野に入れなかった中国、ソ連、第三世界、ジェンダー、子ども、老人を文学的テーマとしている。今後はロックフェラー財団、米国国務省など、文化冷戦期アメリカの対日本文学、日本文化政策と日本文学の国際化の研究にあたり、従来、江藤淳、第三の新人を主流として描かれてきた見取り図の相対化が必要となろう。また、文化冷戦期における日本文学の国際性の問題を、アメリカ対日本の二国間の関係性に還元するのではなく、東アジアの動静などのファクターを入れ編み直すことが次の目標となる。占領期における検閲研究に関して国内では国会図書館および憲政資料室、プランゲ文庫調査のためのデータベースを用いるなどして資料調査、収集を行った。カストリ雑誌の共同研究グループに参加し、プランゲ文庫に収められていない占領期雑誌についての情報収集を行った。国内におけるフィールドワークとしてはあわせて、戦前の検閲(伏字)およびその伏字の起こしの事例研究のため、福岡県立図書館郷土資料室、三重県津市の三重県立図書館郷土資料室における調査と資料収集を行った。国外では渡米調査を行い、ワシントン、メリーランドのアメリカ公文書館において資料調査、収集を行った。冷戦期における文化助成および奨励の事例研究としてロックフェラー財団による文芸の創作者の留学への助成のシステムについて調査、資料収集に着手した。これらの成果は戦中戦後(占領期・冷戦期)における日本文学の変容と国際化についての実証研究に進展をもたらした点で重要であり、日本文学研究の国際的な発信として意義深いものとなった。資料収集と分析は順調に進展している。

成果物として国内の研究会における口頭発表、査読論文、エッセイを出すほか、ウーロンゴン大学における国際学会JSAA(オーストラリア日本学会)において発表することができた。また、ロックフェラー財団の助成を受けて米国に留学した文化人の日米関係についての意識、アメリカの占領政策についての言説、国家イメージについては、従来、江藤淳の言説が代表的なものとされていたが、本研究ではポストコロニアルな米国周辺文化や、人種問題、文化人類学的な関心を留学によって呼び覚まされた有吉佐和子に注目し、これを国際学会で発表する準備を進めている。国内調査においては20世紀情報データベース、ロックフェラー財団データベース等を横断的に用いて資料収集と分析を行った。ロックフェラー財団の日本人創作家招聘プログラムで渡米した江藤淳、有吉佐和子、石井桃子、大岡昇平、小島信夫、安岡章太郎、庄野潤三、阿川弘之らの資料収集と、日本側のプログラム運営の責任者である坂西志保の資料収集を並行して進めた。国外調査においては、香港、ロシアにおけるフィールドワークを行なった。20世紀メディア研究所(早稲田大学)における国際的かつ学際的共同研究の運営、例会司会、機関誌編集を行った。オーストラリア、ウロンゴン大学におけるオーストラリア・アジア学会(Asian Studies Association of Australia)において発表が採択され、The Significance of Overseas Experiences to Ariyoshi Sawako's Literatureの報告を行った。国際日本文化研究セミナー第二回(広島大学)において、ロックフェラー財団の日本人創作家招聘プログラムによって渡米した文学者たちと国務省プロジェクトによって渡米した火野葦平におけるアメリカ表象の変容を研究した金志映の報告にコメンテーターとして参加した。他に日本近代文学会春季大会(早稲田大学)におけるパネル発表、江戸川乱歩新世紀の国際シンポジウムの司会をつとめ、これらを集約した論文集の共編および論文を発表した。「貫戦期」のプロパガンダ研究、インテリジェンス研究、GHQメディア政策研究の成果として『もう一人の彼女李香蘭/山口淑子/シャーリー・ヤマグチ」を上梓した。これは、文学文化研究および、文学的言語と映像言語の領域にまたがる研究の成果でもある。総じて実り豊かな一年であったと評価できる。研究代表者のこれまで十数年に及ぶ日本文学日本文化研究、検閲・インテリジェンス・プロパガンダ研究を、「貫戦期」(満州事変から、日中戦争、太平洋戦争、文化冷戦期を連続的に捉える)の枠組みによって総合的に考察する試みとして単著『もう一人の彼女李香蘭/山口淑子/シャーリー・ヤマグチ』を上梓することができた。本書においては久米正雄、丹羽文雄、田村泰次郎ら文学者の貫戦期における情報戦およびプロパガンダとの関わりについても言及している。
外国人散在地域における結婚移住女性の「定住」戦略の実証的研究

今年度は、これまでのフィールドワークやインタビュー調査で得られたデータをもとに、学会報告や論文執筆を行った。またその過程で、国内外における調査地(日本、韓国、ベトナム)において、聞き取り調査、フォローアップ調査、資料収集を行った。本研究の目的は、外国人散在地域に暮らす結婚移住女性を対象に、ジェンダー視点により移住過程や定住戦略を検討し、従来の「定住」の概念を改めて問い直すことである。分析の結果、結婚移住女性は、地域社会の中で、農村社会のジェンダー規範の受容や葛藤を経て、地域の産業(農業)の重要な担い手となっていく姿や、自らの出身地域と移住先社会とをつなぐトランスローカルなビジネスの起点として、新たな親族移民ネットワークを形成していくという様相をとらえることができた。こうした結婚移住女性の姿は、まさに動的な定住を体現しているといえ、移住のダイナミズムが改めて認識された。また定住を方向付けるのは、家族だけではなく地域住民との相互的な関わり合いもまた重要であり、こうした関わり合いを通し、アイデンティティの変化や地域社会が自らの「居場所」であるという所属意識を持っていくことが分かった。これらの研究成果は今年度国内外の学会で報告・発表し、すでに学術誌に論文の投稿を終えている。本研究で明らかにした結婚移住女性の定住の主体的な動態は、これまでの移民研究が主に着目してきた外国人集住地域の事例ではなく、研究蓄積が比較的希薄であった外国人散在地域における移住女性のライフコースを明らかにした点で意義をもつものである。今年度は、研究実施計画に沿って、おおむね順調にすすめることができた。とりわけ移住女性への聞き取りや職場等での参与観察を通し、不可視化されているエスニック・ネットワークやコミュニティの存在を確認したり、また移住女性の出身地での調査も行えたことで出身社会の社会的文脈とも合わせて、移住女性の移動全体を視野に入れた分析を行うことができている。また、当初の研究実施計画では、国外でのフィールド調査は韓国の1回のみを予定していたが、調査協力者との関係が構築できたことから、ベトナムでの調査も実施することができた。これにより調査地で増加するベトナム移住女性の出身社会におけるジェンダー規範とその変化について調査し、移住要因を追究することが可能となった。さらに国際学会を含めた学会報告を3回行うことができ、研究成果の発信にも力を入れることができた。このような発表や調査における様々な助言や意見等を参考にしながら、データの整理と理論的な考察を深め、論文の執筆を進める段階である。これまでフィールド調査やインタビュー調査を重点的に行い、データの分析に力を入れ、研究成果をまとめてきた。最終年度である2019年度は、データの分析とともに、理論的な枠組みとの接合を目指しながら、研究成果の取りまとめ及び発信に力を入れる。具体的には、結婚移住女性の移住ネットワークの広がりとエスニック・コミュニティがどのように定住過程に影響を及ぼしているか、また地域住民との信頼関係の構築を紐解きながら、両者の相互作用と地域社会への働きかけや課題等を明らかにする。こうした検証をもとに、研究論文の執筆をすすめ、春以降に学術誌への論文投稿、秋以降に学会報告を予定している。

このような発表や調査における様々な助言や意見等を参考にしながら、データの整理と理論的な考察を深め、論文の執筆を進める段階である。これまでフィールド調査やインタビュー調査を重点的に行い、データの分析に力を入れ、研究成果をまとめてきた。最終年度である2019年度は、データの分析とともに、理論的な枠組みとの接合を目指しながら、研究成果の取りまとめ及び発信に力を入れる。具体的には、結婚移住女性の移住ネットワークの広がりとエスニック・コミュニティがどのように定住過程に影響を及ぼしているか、また地域住民との信頼関係の構築を紐解きながら、両者の相互作用と地域社会への働きかけや課題等を明らかにする。こうした検証をもとに、研究論文の執筆をすすめ、春以降に学術誌への論文投稿、秋以降に学会報告を予定している。
新規核内移行シグナル伝達調節物質による血管リモデリング、動脈硬化制御と治療戦略

アンジオテンシンII受容体タイプ1(AT1)、タイプ2(AT2)受容体は、互いに拮抗して、心血管リモデリングを調節していることが明らかとなってきた。我々は、AT2受容体のC-末端に特異的に結合するATIP(AT2 Receptor Interacting Protein)をクローニングし、ATIPの、血管リモデリングにおける作用をATIP過剰発現(ATIP-Tg)マウスを作製し検討した。血管傷害において、野生型マウスに比べ、血管平滑筋増殖、炎症、酸化ストレス、新生内膜の減少等が認められ、ATIPは血管保護的に作用することが明らかとなった。ラット脳培養神経細胞を用いた実験により、AT2受容体刺激がAT2 receptor-interacting protein(ATIP)とSHP-1の結合を促進し、この複合体が核内に移行することにより、ユビキチンコンジュゲイティングエンザイムのバリアントであるMMS2の発現を増加させ、神経保護に働くことを報告した。培養血管平滑筋細胞を用いた実験においそも、AT2受容体刺激がMMS2の発現を増加させ血管老化を防ぎえる可能性を示す実験結果を得ている。さらにATIPを過剰発現させた培養血管平滑筋細胞では、AT2受容体刺激が促進され、ERK活性化が抑制されて、血管平滑筋の増殖低下を起こすことを観1察している。生体における、ATIPの作用を検討するため、セウスATIPのフルシーケンスcDNA(Accession No.AF173380:約1.6kb)を発現プラスミド(pCAGGS)に挿入したコンストラクトをC57BL/6J系統マウスの前核期胚にマイクロインジェクションした後卵管内に移植する手法により、ATIPトランスジェニックマウスを作製した。これまでにgenomic DNAレベルで4系統のマウスが得られておりき現在これらのマウスにおいて主要臓器におけるmRNA発現を測定中である。発現量の高いものを今後の実験に用いる予定である。さらに、ATIPトランスジェニックマウスより調整した培養血管平滑筋細胞、血管内細胞などを用い、正常マウスと比較することにより、シグナルレベルでのAT2受容体刺激におけるATIPのシグナル伝達、生理作用の分子機構を中心に意義を検討していく。生体における、ATIPの作用を検討するため、pcDNA3のBamH1とXho1制限酵素部位の間にマウスATIP-cDNAとmycタグを挿入したマウスATIPのフルシーケンスcDNA(AccessionNo.AF173380:約1.6kb)を発現プラスミド(pCAGGS)に挿入したコンストラクトをC57BL/6J系統マウスの前核期胚にマイクロインジェクションした後、卵管内に移植する手法により、ATIPトランスジェニックマウスを作製し、ATIPの発現が高い系統のマウスを以下の実験に使用した。10週命のマウスを用いて検討したところ、野生型マウスと比べ血圧、心拍数、心重量、体重等に有意な差を認めなかった。正常状態では特に差を認めなかったが、マウス大腿動脈のカフ血管傷害モデルの検討では、野生型マウスと同様にATIPトランスジェニックマウス(ATIPTg)においても、カフ後に動脈におけるAT2受容体の発現増加は同程度に認められたが、カフ留置後2週間後の内膜・中膜比は野生型マウスに比べてATIP-Tgマタスでは有意に減弱していた。現在このメカニズムについて炎症反応、酸化ストレス、血管平滑筋増殖を中心に検討中である。加えて、分子メカニズムを検討するため、ATIPTgより調整した培養血管平滑筋細胞、血管内細胞などを用い、野生型マウスと比較することにより、シグナルレベルでのAT2受容体刺激におけるATIPのシグナル伝達、生理作用の分子機構を詳細に検討していく予定である。我々は、最近、マウス培養血管平滑筋細胞を用いた実験において、AT2受容体刺激がユビキチンコンジュゲイティングエンザイムのバリアントであるMMS2の発現を増加させ血管老化を防ぎえる可能性を示す実験結果を報告した。今後、ATIPTgを用いて、ATIPの血管老化に与える影響についても検討していきたいと考えている。高血圧、高脂血症等,糖尿病に伴う動脈硬化、血管病変、血管傷害に伴うリモデリングのメカニズムなどの解明は、種々の臓器障害の予防、治療のうえで重要な課題であり、レニンーアンジオテンシン系がこれらの病態に、密接に関与していることはよく知られている。アンジオテンシン(Ang)IIは強力な昇圧物質であるばかりではなく、循環器系、中枢神経系、生殖器系等、生体内で幅広く作用し、細胞の増殖、肥大、分化等の重要な機能に深く関わっていることがしられている。

AngIIの作用は、主として、AngIIタイプ1受容体(AT1受容体)を介するものと理解されてきたが、申請者の堀内等がクローンしたAngIIタイプ2受容体(AT2受容体)が、血管障害、心筋梗塞後の心血管リモデリング等に、特異的に発現することが知られてくるに従い、AT1受容体とAT2受容体の発現バランスが、これら病態にとって、重要であると考えられるようになってきた。AngII受容体タイプ1(AT1)、タイプ2(AT2)受容体は、互いに拮抗して、心血管リモデリングを調節していることが明らかとなってきた。我々は、AT2受容体のC-末端に特異的に結合するATIP(AT2Receptor Interacting Protein)をクローニングし、ATIPの血管リモデリングにおける作用をATIP過剰発現マウスを作製し検討した。血管傷害において、野生型マウスに比べ、血管平滑筋増殖、炎症、酸化ストレス、新生内膜の減少等が認められ、ATIPは血管保護的に作用することが明らかとなった(Hypertension,2009,in press)。本研究は高血圧、糖尿病に伴う血管病変に対する新しい分子標的の解明に貢献するものであり、今後、ATIPの調節機構を解明することで、高血圧、さらには当尿病の臨床医学の発展にも寄与する意義深い研究である。
ツメガエル神経形成期に発現するレチノイン酸、アクチビン応答遺伝子の解析

P19EC細胞は、レチノイン酸により神経細胞へと分化することが知られている。本研究では、P19EC細胞のレチノイン酸処理による神経分化過程に特異的に発現してくる遺伝子を、Differential hybridizationの手法を用いて分離することを試み、数多くの神経特異的と思われるクローンを得てきた。このうちP19RA175は、特に後根神経節(以下DRG)および神経管内のモーターニューロンの部分に強く発現していた。また、この時期の頭部は、中枢神経系での発現は、ほとんど見られないか非常に弱いが、三叉神経節など顔面の感覚性神経節にも強い発現が見られた。発生が進むにしたがって、DRGおよびモーターニューロンでの発現は弱まり、16.5日胚では、神経管における発現は、モーターニューロンに限定されたものではなく、灰白質全体に見られた。またP19RA175は、神経系以外の上皮性の組織にも発現しており、12.5日・16.5日胚の目において、網膜感覚層や水晶体上皮で発現が見られた。12.5日胚の頭部においては、nasal epitheliumやdental laminaでも発現が見られ、歯の発生過程においては、16.5日胚でも切歯および臼歯のエナメル上皮に発現が見られた。このほかにも消化管や肺の上皮や毛胞上皮などにも発現が見られた。上皮性組織の発生過程において、上皮一間充織の相互作用に何らかの役割をはたしている可能性が示唆された。脳におけるShhおよびPatchedとRA175の発現を比較すると、中脳の腹側領域にShhの強い発現が見られ、その背側の部分に隣接してPatchedが発現していた。RA175は、Shhの発現域の側方でShhの発現が見られない部分に発現していた。
チロシンキナーゼ阻害剤による唾液腺癌治療に関する基礎的研究

唾液腺癌に対しては、現在までに有効な化学療法は確立されておらず、新規の治療薬の開発が望まれている。多くの細胞増殖因子の受容体では、チロシンキナーゼ活性が認められており、その活性化が癌細胞の増殖に重要な役割を果たしている。唾液腺癌がチロシンキナーゼを介した増殖様式を示す場合、チロシンキナーゼ阻害剤は抗腫瘍剤となる可能性がある。マウス顎下腺では、酸性FGF(aFGF)の存在が確認されているため、ヒトレコンビナントaFGFとウシ脳由来のaFGFを用いて、マウス顎下腺癌YT細胞の増殖に対する影響を検討した結果、これらaFGFは、濃度依存的に癌細胞の増殖を促進することが明らかになった。さらに、ジメチルベンズアントラセンによって誘導されるマウス顎下腺発癌系において、ウシ脳由来aFGFを10週間にわたって皮下投与した場合も、aFGFにて顎下腺における癌の発生は有意に増加した。免疫組織化学染色、イムノブロット法、RT-PCR法を用いた検索で、aFGF、FGF受容体がマウス顎下腺顆粒管、未分化癌実質で検出された。各種合成チロシンキナーゼ阻害剤チルホスチンを用いて、YT細胞増殖への影響を検討したところ、チルホスチン9が最も強い抑制効果を示した。ヌードマウス移植腫瘍に対しても、チルホスチン9は腫瘍増殖抑制作用を示し、腫瘍細胞にアポトーシスを誘導した。以上より、マウス顎下腺癌の増殖は、aFGFのオートクライン、パラクライン機構にて促進されること、このような唾液腺癌では、チロシンキナーゼ阻害剤が有効な化学療法剤になることが示唆された。唾液腺癌の特徴は口腔扁平上皮癌と比較して放射線による治療効果が得られないこと、転移の頻度が高いことである。原発巣には手術が第一選択であるが、残存した腫瘍細胞や転移に対しては化学療法が必要となる。しかし、現在までに有効な化学療法は確立されておらず、新規の治療剤が望まれている。上皮増殖因子、線維芽細胞増殖因子(FGF)など多くの増殖因子の受容体ではチロシンキナーゼ活性が認められており、その活性化が癌細胞の増殖に重要な役割を果たしている。このような増殖因子と受容体に依存した増殖様式を示す癌の増殖はチロシンキナーゼ阻害剤で影響を受ける。本研究では、マウス顎下腺で存在が報告されている酸性FGF(aFGF)の増殖シグナルが唾液腺癌の増殖に関与する可能性につき検討した。ヒトリコビナントaFGFとウシ脳由来のaFGFは、in vitroにおいてマウス顎下腺癌細胞の増殖を濃度依存的に促進した。ジメチルベンズアントラセン(DMBA)により誘導されるマウス顎下腺発癌の実験系において、DMBAによるイニシエーションを行ったのちに、ウシ脳由来aFGFを10週間にわたって継続投与した結果、顎下腺における前癌性病変とされる管腔・嚢胞様病変ならびに癌の発生頻度が有意に上昇した。免疫組織化学染色を行ったところ、主にマウス顎下腺顆粒管、未分化癌実質でaFGF、FGF受容体が検出された。イムノブロット法とRT-PCR法でもaFGFが検出され癌組織でのaFGFの発現増強がみられた。したがって、マウス顎下腺癌の増殖はaFGFのオートクライン、パラクライン機構にて促進されるものと考えられる。このような唾液腺癌ではチロシンキナーゼ阻害剤が有効な化学療法剤になると思われる。

唾液腺癌が、チロシンキナーゼを介した増殖様式を示す場合、チロシンキナーゼ阻害剤は、抗腫瘍剤となる可能性がある。マウス顎下腺では、酸性FGF(aFGF)の存在が確認されているため、ヒトレコンビナントaFGFとウシ脳由来のaFGFを用いて、マウス顎下腺癌YT細胞の増殖に対する影響を検討した結果、これらaFGFは、濃度依存的に癌細胞の増殖を促進することが明らかになった。さらに、ジメチルベンズアントラセン(DMBA)によって誘導されるマウス顎下腺発癌系において、ウシ脳由来aFGFを10週間にわたって皮下投与した場合も、aFGFにて顎下腺における癌の発生は有意に増加した。免疫組織化学染色、イムノブロット法、RT-PCR法を用いた検索で、aFGF、FGF受容体がマウス顎下腺顆粒管、未分化癌実質で検出された。各種合成チロシンキナーゼ阻害剤チルホスチンを用いて、YT細胞増殖への影響を検討したところ、チルホスチンAG17が最も強い抑制効果を示した。ヌードマウス移植腫瘍に対しても、AG17は腫瘍増殖抑制作用を示し、腫瘍細胞にアポトーシスを誘導した。以上より、マウス顎下腺癌の増殖は、aFGFのオートクライン、パラクライン機構にて促進されること、このような唾液腺癌では、チロシンキナーゼ阻害剤が有効な化学療法剤になることが示唆された。
セルオートマトンにおけるダイナミクスの制御

熱伝導などの非平衡の状況下で、拡散的な動力学が実現されるのは系がどのような微視的ダイナミクスに従う場合か。すなわち、巨視的な時間反転対称性の破れはどのような場合に起こるのかという興味から、1次元の可逆なセルオートマトンの族ERCAを用いた研究を続けてきた。その一環として、力学系の制御に対する応答からこの問題を考えてみようというのが、本研究の目的であった。当初はパターンの制御を考えていたが、熱浴を制御した方が、いわゆる「マックスウェルの悪魔」との関係からより物理的であるとの判断に立ち、その方向の研究を行うこととした。具体的には、これまでのようなモンテカルロ的な熱浴ではなく、エネルギーの統計性としては熱浴と同じでありながら、熱流のコントロールをある程度行えるような境界条件を考えた。その結果、ある種のルールに対してはこの「マックスウェルの悪魔」は有効に働き、エネルギーの統計性としての温度と、実効的な温度とが異なるようにできることがわかった。これを用いて、低温の熱浴から高温の熱浴へと熱流を引き起こすことも可能である。さらに、温度というパラメータでは表されないような統計性を持つ「熱浴」を境界に付けた結果、拡散的動力学を実現するようなルールでは系の内部は局所平衡的になっていること、その場合の境界の実効的温度は結局熱流の大きさによって制御されることが判明した。これらの結果に関して論文を準備中であり、さらに確率ではなく可逆な力学系で熱浴を実現し、その初期条件としてマックスウェルの悪魔的なものを考えられないかという点から研究を進めようとしている。
分化誘導型胎盤栄養膜細胞を用いたCDX2のエピジェネティックな分子機構

(1)ヒト胎盤栄養膜細胞でのCDX2遺伝子の分子機構の解明:初期CT細胞とTS細胞のCDX2の発現量について検討した結果、ES細胞と同様の発現量であることが判明した。次に、2種類のヒトTS細胞を用いて、CDX2遺伝子プロモーター領域のDNAメチル化とヒストン修飾について解析を行なった。DNAメチル化の解析はBisulphite-PCR法で、ヒストン修飾の解析では、活性型修飾の解析には、抗ヒストンH3-K9とH3-K14のアセチル化および抗H3-K4のジメチル化抗体を利用した。一方、不活化型には抗ヒストンH3-K9ジメチル化および抗H3-K27のトリメチル化抗体を利用した。それぞれ免疫沈降後、PCRによりヒストン修飾の有無について解析した。その結果、CDX2遺伝子のプロモーター領域(320bp)は、高メチル化状態であることが明らかとなった。同様に、ヒストン修飾も不活性型で有意な変化を認めた。一方ES細胞でも、高メチル化状態を維持していることが判明した。この結果はメチル化阻害剤を添加して、再確認した。これらの結果より、マウスとは異なり、ESとTSの分化維持過程には、CDX2遺伝子の転写活性が作用しない事が示唆された。(2)未分化栄養膜細胞株を用いたCDX2遺伝子の機能解析と分子間相互作用:一過性に遺伝子発現を抑制するCDX2遺伝子のノックダウン(KD)TS細胞(3株)を用いて、未分化TSマーカー遺伝子(ELF5, GATA3)の発現解析を行なった。その結果、いずれも発現量に有意な差を認めなかった。両遺伝子のプロモーター領域について、メチル化の解析を行ったところ、TS細胞に比べ高メチル化状態を示した(平均値:78.2%)。ノックダウン効率は約40%であったが、細胞形態に大きな変化はみられなかった。胚盤胞では、胚体細胞系列(ICM)と胚体外細胞系列(TE)に最初の分化(細胞運命決定)が起こる。マウスでは、TEへの細胞運命決定には、Cdx2が必須の蛋白である事が知られている。しかし、ヒト胚盤胞期では、CDX2の遺伝子発現は低く、機能は明らかではない。本研究では、独自に樹立したヒト分化誘導型胎盤栄養膜幹(CS)細胞モデルを利用し、ヒトCDX2遺伝子の発現と、エピジェネティックな分子機構および分子間相互作用について解析することを目的とする。本年度は、ヒトTS細胞を2種類樹立し、安定に維持した(80継代)。この細胞を用いて、CDX2遺伝子プロモーター領域のDNAメチル化とヒストン修飾について解析を行なった。DNAメチル化の解析はBisulphite-PCR法で、ヒストン修飾の解析では、同細胞核より蛋白質-DNA複合体を抽出。超音波ソニケーターで粉砕後、活性型修飾の解析には、抗ヒストンH3-K9とH3-K14のアセチル化および抗H3-K4のジメチル化抗体を利用した。その結果、Cdx2遺伝子のプロモーター領域は、低メチル化状態であることが明らかとなった。同様に、ヒストン修飾も活性型で有意な変化を認めた。一方ES細胞は、高メチル化状態を維持していることが判明した。これらの結果より、ESとTSの分化過程には、CDX2遺伝子のエピジェネティックな分子機構が作用する事が示唆された。上記の如く、研究実施計画である「TE分化へのCdx2遺伝子の分子機構の解明」は、ほぼ予定通り終了した。胚盤胞では、内側の胚体細胞系列(内部細胞塊:ICM)と外側の胚体外細胞系列(栄養外胚葉:TE)に区別される。マウスでは、TEへの細胞分化には、Cdx2が必須の蛋白である事が知られている。しかし、ヒト胚盤胞期では、CDX2の遺伝子発現は低く、ヒトCDX2の機能は明らかではない。本研究では、独自に樹立したヒト分化誘導型胎盤栄養膜幹(TS)細胞モデルを利用し、ヒトCDX2遺伝子の発現とエピジェネティックな分子機構および分子間相互作用について解析する。平成29年度は、ヒトTS細胞を樹立させ(Okae et al. Cell Stem Cell. 2018)、長期間維持することに成功している。この細胞は、生体の細胞と遺伝子発現やエピジェネティックな状態が類似しているので、CDX2遺伝子プロモーター領域について、DNAメチル化はBisulphite-PCR法で、ヒストン修飾はChip-Seq法にて解析を行なった。また、ヒト胎児性幹細胞(ES)でも同様の解析を行った。その結果、CDX2遺伝子のプロモーター領域のDNAメチル化は、低メチル化状態で、ヒストン修飾も活性型で有意な変化を認めた。一方、胎児性幹細胞(ES)では高メチル化状態を維持していた。この結果は、メチル化阻害剤を添加して再確認した。これらの結果より、ヒトESとTSの分化過程には、マウスと同様にCDX2遺伝子のエピジェネティックな分子機構が作用し、胎盤系列への細胞運命決定に寄与することが示唆された。平成27年度は産休のため、平成28年度より本研究は開始した。上記の如く、平成28年度の研究実施計画として「ヒトTS細胞株を用いたCDX2遺伝子の機能と分子間相互作用」について、ほぼ予定通り終了した。

また、ノックダウン用siRNAは複数統計して、準備を進めている。(1)ヒト胎盤栄養膜細胞でのCDX2遺伝子の分子機構の解明:初期CT細胞とTS細胞のCDX2の発現量について検討した結果、ES細胞と同様の発現量であることが判明した。次に、2種類のヒトTS細胞を用いて、CDX2遺伝子プロモーター領域のDNAメチル化とヒストン修飾について解析を行なった。DNAメチル化の解析はBisulphite-PCR法で、ヒストン修飾の解析では、活性型修飾の解析には、抗ヒストンH3-K9とH3-K14のアセチル化および抗H3-K4のジメチル化抗体を利用した。一方、不活化型には抗ヒストンH3-K9ジメチル化および抗H3-K27のトリメチル化抗体を利用した。それぞれ免疫沈降後、PCRによりヒストン修飾の有無について解析した。その結果、CDX2遺伝子のプロモーター領域(320bp)は、高メチル化状態であることが明らかとなった。同様に、ヒストン修飾も不活性型で有意な変化を認めた。一方ES細胞でも、高メチル化状態を維持していることが判明した。この結果はメチル化阻害剤を添加して、再確認した。これらの結果より、マウスとは異なり、ESとTSの分化維持過程には、CDX2遺伝子の転写活性が作用しない事が示唆された。(2)未分化栄養膜細胞株を用いたCDX2遺伝子の機能解析と分子間相互作用:一過性に遺伝子発現を抑制するCDX2遺伝子のノックダウン(KD)TS細胞(3株)を用いて、未分化TSマーカー遺伝子(ELF5, GATA3)の発現解析を行なった。その結果、いずれも発現量に有意な差を認めなかった。両遺伝子のプロモーター領域について、メチル化の解析を行ったところ、TS細胞に比べ高メチル化状態を示した(平均値:78.2%)。ノックダウン効率は約40%であったが、細胞形態に大きな変化はみられなかった。次年度は、一過性および永続性に、遺伝子発現を抑制するCDX2遺伝子のノックダウンTS細胞とOCT3/4遺伝子強制発現TS細胞株を樹立し、細胞特性や未分化TSマーカー遺伝子に与える影響について分子間相互作用を明らかにしていく計画である。最終年度は以下の項目について、分子生物統計学的な検討を行う。1Cdx2/ CDX2遺伝子調節領域の分子特性について:ヒトTS細胞においてCDX2の発現を調整する領域や遺伝子について、生物情報学的解析を行い、その特徴を明らかにする。具体的には、GO(遺伝子オントロジー)に基づく遺伝子機能の分類、パスウェイ解析、モチーフ配列解析、染色体上の位置やクラスター形成の有無の解析などを行う。解析には、DAVID(Database for Annotation, Visualization and Integrated Discovery)をはじめとする種々のデータベースおよび、統計解析ソフトRを使用する。特に、胎盤発生に重要であると考えられる遺伝子については、ヒト栄養膜細胞株で阻害剤や遮断抗体を用い、CDX2の遺伝子制御機構および機能解析を行う。2異種動物間(ヒト、マウス)でのCDX2の機能的保存性についての検討:胎盤を有する哺乳類は胎盤の形態を変えて進化する。CDX2の保存性は、胎盤における生物学的重要性を意味する。胎盤組織構築の違いがCdx2の構造上の違いを表すことも考えられる。
新規「細胞外」ポリADPリボースレセプターの同定と神経保護効果の解明

本研究では、新規「細胞外」ポリADPリボース(EC-PAR)レセプターの同定と脳神経疾患における役割について研究を実施した。EC-PARはグリア細胞からグリア細胞株神経栄養因子(GDNF)の合成を特異的に促進することを発見した。また、ラット6-OHDAパーキンソン病モデルにおいて、EC-PARの脳病巣部への直接投与は、脳内グリア細胞からのGDNF産生も促進し、異常行動を抑制したことから、神経栄養シグナル分子であることを明らかにした。こららの成果により、これまで不明であったEC-PARの病態生理学的役割(神経保護効果)が解明され、また、パーキンソン病における新規創薬標的を提示することが出来た。細胞外ポリADPリボース(EC-PARと命名)のグリア細胞未知レセプターの探索を行うべく準備を進めたが、研究開始直後(H27年5月)に、免疫系(マクロファージ)でEC-PARが生理活性物質になりうるという新コンセプトおよびそのレセプターはTLR2/4であるとの論文報告がCell pressよりなされた為、方針変更を図ることにした。すなわち、神経系(グリア細胞)でのEC-PARによる神経栄養因子(GDNF)産生促進作用に関する論文として発信すること、本分野における神経系でのイニシアティブを得ることを最優先に実験計画を以下のように変更した。1)初代グリア細胞培養系におけるEC-PARによる神経栄養因子および炎症性サイトカイン産生促進作用2)C6グリア細胞におけるEC-PARによるGDNF産生促進作用3)C6グリア細胞におけるEC-PARによるGDNF-mRNAに及ぼす影響4)in vivioにおけるEC-PARのGDNF産生促進作用の確認ラット線条体現在、1)4)の全ての実験を終了し、EC-PARは、神経系において、in vitorおよびin vivo双方でグリア細胞におけるGDNF産生促進作用が確認された(論文投稿準備中)。免疫系で本研究の中軸コンセプトは先行されたものの、神経系での報告はこれまでに皆無であり、また、先行論文(免疫系)では示していない個体レベルでのEC-PARの作用、および神経栄養因子産生促進作用を確認できたことは大きな成果と言える。本研究では、グリア細胞に存在が示唆される細胞外ポリADPリボース(Extracellular-PAR: EC-PAR)の未知レセプターの同定を初期目標とした。しかし、研究開始直後(H27年5月)に免疫系細胞であるマクロファージでEC-PARがTLR2/4が受容体であり、炎症性サイトカイン産生を促進する生理活性物質であることが論文報告がなされた為、方針を変更した。すなわち、神経系(グリア細胞)でのEC-PARによる神経栄養因子(グリア細胞株由来神経栄養因子)促進作用のシグナル伝達系と神経保護効果に関する研究として、研究を開始することで、本分野における神経系でのイニシアティブを得ることを最優先に実験計画を再検討した。その結果、研究終了H28年度までに以下の知見を明らかとし、国際学術誌(Biochem Biophys Res Commun 2017; 484(2): 385-389.)に論文を掲載した。1)初代アストロサイト培養系において、EC-PARのGDNF産生促進作用は特異的であり、NGF、BDNFおよびNT-3の神経栄養因子産生には無影響であった。2)ラットアストロサイト細胞株C6培養系において、EC-PARはその用量依存的にGDNF蛋白質とGDNF-mRNAの産生を促進した。3)EC-PARのラット線条体内実質投与により、活性化アストロサイトにおけるGDNF蛋白質の増加を蛍光2重免疫染色法で確認した。4)EC-PARのラット線条体内実質投与により、ラットパーキンソン病モデル(6-OHDA黒質-線条体破壊ラット)の異常行動が改善され、治療効果を発揮した。以上の結果から、EC-PARの脳神経系における病態生理学的役割として、神経細胞崩壊に伴うEC-PARの放出は、グリア細胞の1種であるアストロサイトからのGDNF産生促進を促進することで残存する神経細胞を保護する働きがあることが示唆された。in vivo、特にパーキンソン病に大きく関わる脳線条体領域におけるEC-PAR誘導性グリア細胞GDNF産生促進効果が確認できたことから、ラットパーキンソン病モデル(ドーパミン神経毒6-OHDA線条体投与モデル)を作製し、EC-PARによるGDNFを介する神経保護効果を以下の方法で探索する。1病理学的(ドーパミン神経の変性)2生化学的(黒質・線条体におけるドーパミン含量のHPLC測定)3行動評価(メタンフェタミン誘発性旋回行動)以上の評価でEC-PARの効果が認められた場合、速やかに学術論文として投稿する。獣医薬理
用字法における個と継承に関する研究

本研究の目的は、(A)書記における個(異体仮名使い分けの基準・個人差)、(B)藤原定家の用字法の享受実態、これらを解明することである。日本語の文字・表記研究の分野ではともに重要なテーマであるが、解明は容易でない。なぜなら、書写資料の調査をしたところで、親本(書き本)表記の影響が想定されるため、個人の用字(仮名遣、異体仮名の使い分け)の特徴を明確にできないからである。しかし、今川了俊の場合、自筆書記資料、自筆書写資料の双方が現存しており、個の用字法の解明が可能と考えられる。(A)書記における個の問題の解明文字・表記研究の根幹にかかわる、個の問題の解決へ向けたアプローチとして、今川了俊自筆本『厳島詣記』(書記資料)および自筆書写本『源氏物語』(書写資料)の文字調査を行った。当初の予想どおり、これらの資料間の用字傾向(仮名字体の偏り)は完全には一致していないことが確認された。さらに、一方の資料にのみ見られる仮名字体の存在が明らかになった。書記資料にのみ見られる仮名(字体)は筆者の意思、書写資料にのみ見られる仮名(字体)は親本表記の影響によるものと推測される。(B)藤原定家の用字法の享受実態の解明藤原定家の玄孫、冷泉為秀を歌道の師とする今川了俊は、冷泉家歌学を体系づけたとされる。また、了俊の著書『言塵集』には定家著『下官集』所載の「定家仮名遣」の実例を示す箇所が引用されている。したがって、了俊は定家仮名遣を遵守する意識が高いように推察される。ところが、彼の自筆本『厳島詣記』の仮名遣実態においては、表記規範意識の連続性(定家仮名遣の遵守)が認められない。また、副次的成果として『厳島詣記』の諸伝本には「うた津」の景観を記した部分(3月7日)に1行分(約10字)の欠落があることが判明した。伝本過程を考える上で注目される。以上の成果の一部を取り上げ、勤務校(神戸高専)で学術講演を行った。分析対象とする資料を新たに加えたため、当初の予定よりも遅れている。追加した資料の調査結果とこれまでのこれまでのそれとを統合し、成果を公表する。また、学外での調査を積極的に行う。また、了俊が著した『言塵集』には定家著『下官集』所載の「定家仮名遣」の実例を示す箇所が引用されている。ところが、彼の自筆本『厳島詣記』の仮名遣の実態から、表記規範意識の連続性(定家仮名遣の遵守)が認められないことが判明した。また、副次的成果として『厳島詣記』の諸伝本には「うた津」の景観を記した部分(3月7日)に約1行分の欠落があることが判明した。以上の知見の一部については、関西大学国文学会にて口頭発表を行った。今川了俊自筆本『厳島詣記』(書記資料)および同自筆書写本『源氏物語』(書写資料)の文字調査が完了した。書記資料と書写資料との用字比較から、当初の予想通り、それぞれに特徴的な仮名(字体)が特定された。つまり、「個の問題の解明」につながる重要な手がかりが得られた。これにより、検討の余地はあるものの「書記における個の問題」についてのミニマムモデルの提示が可能となった。また、書記資料の調査により、今川了俊における「藤原定家の用字法の享受」実態も明らかにした。さらに、この調査から一般に流布している『厳島詣記』本文の欠落の発見という副次的産物も得られた。

日本語の文字・表記研究の分野ではともに重要なテーマであるが、解明は容易でない。なぜなら、書写資料の調査をしたところで、親本(書き本)表記の影響が想定されるため、個人の用字(仮名遣、異体仮名の使い分け)の特徴を明確にできないからである。しかし、今川了俊の場合、自筆書記資料、自筆書写資料の双方が現存しており、個の用字法の解明が可能と考えられる。(A)書記における個の問題の解明文字・表記研究の根幹にかかわる、個の問題の解決へ向けたアプローチとして、今川了俊自筆本『厳島詣記』(書記資料)および自筆書写本『源氏物語』(書写資料)の文字調査を行った。当初の予想どおり、これらの資料間の用字傾向(仮名字体の偏り)は完全には一致していないことが確認された。さらに、一方の資料にのみ見られる仮名字体の存在が明らかになった。書記資料にのみ見られる仮名(字体)は筆者の意思、書写資料にのみ見られる仮名(字体)は親本表記の影響によるものと推測される。(B)藤原定家の用字法の享受実態の解明藤原定家の玄孫、冷泉為秀を歌道の師とする今川了俊は、冷泉家歌学を体系づけたとされる。また、了俊の著書『言塵集』には定家著『下官集』所載の「定家仮名遣」の実例を示す箇所が引用されている。したがって、了俊は定家仮名遣を遵守する意識が高いように推察される。ところが、彼の自筆本『厳島詣記』の仮名遣実態においては、表記規範意識の連続性(定家仮名遣の遵守)が認められない。また、副次的成果として『厳島詣記』の諸伝本には「うた津」の景観を記した部分(3月7日)に1行分(約10字)の欠落があることが判明した。伝本過程を考える上で注目される。以上の成果の一部を取り上げ、勤務校(神戸高専)で学術講演を行った。分析対象とする資料を新たに加えたため、当初の予定よりも遅れている。今後は、今川了俊自筆書写『撰集抄』(書写資料)の用字実態調査を進める。この結果と、現在判明している書記資料と書写資料、どちらか一方にのみ見られる仮名(字体)との関係から、先述のミニマムモデルの精緻化、場合によっては再構築を行う。また、了俊の著した歌学・歌論書の記述から彼の言語(規範)意識を探る。追加した資料の調査結果とこれまでのこれまでのそれとを統合し、成果を公表する。また、学外での調査を積極的に行う。本年度は個人的事由により、学外での調査を控えた。そのため、調査はほぼ複写・影印資料に拠ったため、旅費に割り当てていた予算が余るかたちとなった。今後は、適宜、学外での調査を行う予定である。本年度も個人的事由により、学外での調査はほとんど行うことができなかった。そのため、資料収集に努めた。今年度は、適宜、学外での調査を行う予定である。
末期腎不全における血管と腸内環境のリン連関メカニズムの解明と新規栄養療法への応用

末期腎不全患者でみられる高リン血症は血管機能障害と血管石灰化を引き起こし、患者の生命予後を大きく低下させるので、リンの摂取制限は重要である。しかし、食品添加物に含まれる無機リンの摂取が多くなっている現代の生活環境において、リンの管理の確実な実行は困難である。本研究では高リン食摂取後の一過性高リン血症の血管機能や炎症、腸内環境への影響を解析する。腎機能低下モデル動物に高リン食を付加し、その影響とメカニズム解明する。さらに水溶性食物繊維を用いた予防方法を検討する。次に、実際の臨床現場で患者で血管機能障害を予防し、生活の質(QOL)の維持・増進のための栄養療法の開発をめざす。
持続的ストレスがもたらす細胞死多様性の研究

持続的なストレスを5日間負荷したラットでは、下垂体のメラノトロフ細胞と肝細胞の一部に細胞死が起こっていた。異なる機能を有する二種類の細胞に起こる細胞死を電子顕微鏡で観察すると、多様な細胞死像が確認された。一方で、これらの細胞死には、ストレスの持続により“特定の細胞機能の亢進が長時間続く"ことで、“細胞内のリサイクルシステムの異常"が生じることが、共通の原因と考えられた。5日間のストレスにより起こる細胞死は限定的であるが、ストレスがより長期化すると、細胞死がこれらの器官の恒常性維持にとってリスク因子となる可能性がある。本研究では、持続的ストレスを負荷したラットモデルの下垂体中間葉のホルモン分泌細胞、メラノトロフに起こる細胞死の系を用いて、慢性的ストレス下に起こる細胞死メカニズムを明らかにしようとしている。メラノトロフの細胞死は、形態学的特徴の異なる細胞死像が同時に観察され、複数の細胞死メカニズムが介在すると考えられる点でユニークな細胞死である。一方で、すべての細胞死には、蛋白や細胞内小器官の分解・リサイクルの過程に異常が生じていると考えられ、最終的にネクローシス様細胞死の形態を示す、という2つの共通点があった。ストレスが続くことで異常な蛋白や小器官が生じるが、これらを分解し再利用することは、細胞の恒常性を維持するために極めて重要である。ストレスを受けたラットのメラノトロフでは当初、分解・再利用の機構が活性化するが、ストレスが長引くことで次第に停滞し、このことが新たなストレスとなっていることがわかってきた。すなわち、このような細胞内分解系の異常とそれによって引き起こされる細胞死は、慢性的なストレス時に特有の現象と考えられる。メラノトロフ細胞死像には細胞膜の破綻が確認され、ネクローシスと呼ばれる細胞死と考えられた。ネクローシスは細胞内容物が漏れだすことから、しばしば局所炎症の原因となり周囲の細胞に影響を及ぼす危険性がある。ラットメラノトロフの培養系において、蛋白分解系を阻害する薬剤の効果を確認したところ、複数の阻害剤で、細胞膜の破綻を伴う細胞死が起こることが確認された。これにより、蛋白分解系の異常と細胞膜の破綻の関連が示唆された。“慢性的なストレスが蛋白分解系に異常を生じさせる"という視点から、下垂体以外の組織においても、蛋白分解系の変化が生じていないかスクリーニングを行った。その結果、複数の組織において蛋白分解系の亢進が認められ、その一部に異常を示す細胞が確認された。本研究では、持続的ストレスを負荷したラットモデルの下垂体中間葉のホルモン分泌細胞(メラノトロフ)と、肝細胞に起こる細胞死を解析することで、慢性的ストレス下に起こる細胞死メカニズムを明らかにしようとしている。合わせて、メラノトロフ細胞死の過程で一部の細胞に発現する、CHOP分子の機能を明らかにすることをもう一つの目的としている。メラノトロフの細胞死は、その引き金として蛋白や細胞内小器官の分解・リサイクル過程の異常が考えられ、最終的に細胞膜の破綻したネクローシス様細胞死の形態を示す、という二つの特徴を有することがわかってきた。ラットメラノトロフの初代培養細胞を用いた実験からは、細胞内分解系の阻害剤によりネクローシス様細胞死が起こることを明らかにした。CHOPはこの阻害剤のもとでは発現せず、ネクローシスの起こらない別の阻害剤を添加した際に発現がみられたことから、CHOPはネクローシスの回避と関連して発現している可能性が考えられた。本年度より解析を始めた変性肝細胞にも、メラノトロフの変性細胞と同様に細胞内分解系の異常を示す特徴が認められた。また、これらの細胞変性との関連が疑われる複数のストレス応答分子の発現を確認した。これらの分子は様々なストレスに応答することが知られる転写因子であり、これらの標的分子のうち複数の分子の遺伝子発現が、持続的ストレスにより変化していることがわかった。これらの分子発現を手がかりとして、生体の受ける持続的ストレスが、各臓器や細胞に与えるストレスの種類や、細胞変性を生じさせるメカニズムの解明を進めている。本年度までの研究により、持続的ストレスを負荷したラットの二つの臓器において、細胞内分解系の異常を示す細胞変性が確認され、慢性的ストレス特有の細胞死メカニズムの存在が示唆された。ラットメラノトロフの初代培養細胞を用いた実験では、メラノトロフのホルモン合成の活性化状態を維持したうえで、特定のタンパク分解系阻害剤を用いることによりネクローシスの再現ができることがわかった。また、これとは別の阻害剤により、培養系でのCHOP分子の発現が実現し、たが、その発現率が低いため改善を必要とするが、CHOPノックアウトマウスの利用を予定していたが、ラットと同様の手法でマウスメラノトロフ細胞死を再現することができなかったため、マウスによる実験は適切ではないと判断した。以上の経緯から、CHOP分子のメラノトロフにおける機能解析を行うツールとして、ラットへのストレスを負荷する方法・期間を変更したモデル(改変モデル)を中心に行うこととした。従来のラットモデルでCHOP発現細胞の出現頻度が少ないことが問題であったが、改変モデルでは、CHOPの発現が早まり、発現率が高まること、メラノトロフの微細形態学的特徴が従来のモデルのものとやや異なることを確認している。CHOPの機能解析には、これら二つのラットモデルと、ラットメラノトロフ培養細胞を用いて進めている。モデルラットの下垂体以外の組織における細胞死の解析では、肝細胞においてタンパク分解系の異常を示す変性細胞を同定した。細胞変性は、散発的ながら特定の領域に起こることを見いだした。

また、このような変化と関連が疑われるストレス応答分子の発現を確認し、これらの分子発現を中心に解析を進めている。持続的なストレス負荷により、下垂体以外の組織でも類似したメカニズムによる細胞死が起こっていることを明らかにできる可能性がある。当初の実験計画にあったマウスによる実験を中止したが、代替の方法を決定できこと、新たに見いだした肝細胞変性を対象とした研究が進展しているため、おおむね予定通りに進行していると判断した。本研究は、持続的なストレスを負荷したモデルラットを用い、一定期間ストレスが持続した際に起こる細胞死のメカニズムを明らかにすることを目的として実施した。このモデルラットでは、下垂体中間葉のメラノトロフ細胞に細胞死が起こることをすでに報告しているが、新たに肝細胞にも細胞死が起こることを明らかにし、これら二つの細胞死を対象として細胞死の起こるメカニズムを検討した。本年度は、このモデルラットの肝臓に散発的に起こる肝細胞変性・細胞死について解析を行った。変性肝細胞には、細胞内のリサイクル機構の異常と、細胞のエネルギー供給に関わるミトコンドリアの形態異常が観察された。これは下垂体メラノトロフの変性細胞と共通する特徴であった。また、変性肝細胞は免疫組織染色によって酸化ストレスマーカーに陽性を示し、酸化ストレスが細胞変性の直接的な原因であると考えられた。変性肝細胞は中心静脈周囲領域に限定して観察され、この領域ではストレス応答性の転写因子とその下流の抗酸化分子の発現が増加しており、細胞防御反応が起こっていることがわかった。モデルラットの肝臓における酸化ストレスは、中心静脈周囲に特有の肝細胞の働きと密接に関連しているものと考えることから、肝細胞の代謝に着目して解析を行った。このモデルラットは通常飼育のラットに比べ、摂餌量が増加する一方で体重は増加せず、末梢血液中のトリグリセリドが低下し、肝細胞内の中性脂肪は増加しなかった。中心静脈周囲領域に発現する脂肪酸代謝に関わる分子の発現の解析から、脂肪酸の消費が高まっていると考えられた。モデルラットでは、肝臓の脂肪酸代謝が大きく変化することが酸化ストレスの原因となり、これに対する防御反応が起こっているものと推察された。一方で肝細胞の一部に細胞死が起こることから、慢性的なストレスが一部の肝疾患のリスク因子となる可能性が示唆される。持続的なストレスを5日間負荷したラットでは、下垂体のメラノトロフ細胞と肝細胞の一部に細胞死が起こっていた。異なる機能を有する二種類の細胞に起こる細胞死を電子顕微鏡で観察すると、多様な細胞死像が確認された。一方で、これらの細胞死には、ストレスの持続により“特定の細胞機能の亢進が長時間続く"ことで、“細胞内のリサイクルシステムの異常"が生じることが、共通の原因と考えられた。5日間のストレスにより起こる細胞死は限定的であるが、ストレスがより長期化すると、細胞死がこれらの器官の恒常性維持にとってリスク因子となる可能性がある。