hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
一般化最小二乗モデル平均法とモデル平均推定量の信頼集合の構築

予定した研究は当初の計画通り進んでいます。加えて研究中で得られた成果を拡張して、新しい研究内容を追加しました。計画以上の成果として、GMMのモデル平均法やOLSとGLSのコンビネーションを利用したモデル平均法を構築しました。計量経済学今後の研究は基本的に計画通り進めていきます。それに新たに追加した研究内容を完成して研究成果を増やしていきます。まず、OLS推定量のモデル平均に関する論文の修正を行い、学術誌への掲載を達成できた。さらに、予定している平成25年度の課題であるGLSMAの研究が既に論文としてまとめて投稿した。今は初回の審査を通り、リバイズして再投稿した。以上のように当初計画した内容はすべて完成して、その上、次年度に予定していた研究、条件付きモーメント制約を用いた一般化モーメント法推定量(GMM)のモデル平均法の構築を前倒しして行っている。当初国際学会の旅費のため前倒支払請求をしましたが、旅費を節約したため10万円ほどの残額が生じました。これまで通り研究を進めて行く。状況に応じて後年度の研究内容を前倒しして行う。最終年度に当たり、研究成果の発表を積極的に行いたいので、助成金の一部分を旅費として使用します。また、論文の英文校正を業者に依頼する必要があります。そのための支出が予定されております。それ以外に書籍の購入やシミュレーション用ソフトウエアの更新などのために助成金を使用する予定です。昨年度実験用コンピューターを購入するために前倒し支払い請求を行ったが、使い切ることができなくて、20,650円の残金が生じた。20,650円の残金を翌年度分として請求した助成金と合わせて研究用消耗品や旅費などに利用する予定である。部品費12万円ほど、学会参加費25万円ほど、英文校正料金など5万円ほどとして使用する予定である。
情報システムの協調開発演習支援システムに関する研究

本研究では、大学におけるグループによる情報システムの設計・開発演習教育を支援するシステムの研究開発と、その実授業への適用を通して有効性の確認を行うことを目的としている。昨年度の適用経験から、成果物間の連携の強化、コミュニケーションの1形態であるインスペクションと呼ばれる教授者と学習者による、作成成果物に関する討議を支援するプロセスの支援が重要であることが明らかになった。この知見をもとに、今年度は以下のことに重点を置き、研究開発を進めた。・成果物に対するコメント記述が行え、それを成果物と関連付けて管理する。・インスペクションには一連の流れがあるが、そのプロセスをシームレスに支援するとともに、教授者が状況把握をするための機能(状況表示アウェアネスと構成情報管理)を実現するこれらの機能を組み込んだ支援システムを実際の演習授業(実施期間:3ヶ月、5グループ(1グループ3人))に適用した。その結果昨年度までの問題点は解決できたが、構成情報の把握に関しては、学習者は、我々の想定したモデルには従わず、さらなる検討が必要であることがわかった。今年度は以下の実績を得ることができた。・システム全体で扱うデータのオブジェクト指向データモデリングによるモデルの構築・グループ編成のために必要となる個人のスキル情報の定義並びに遺伝的アルゴリズムによるグループ編成方式の計算モデル(染色体の構造)、目的関数、制約条件の定義・演習システムのうち、学習者によるグループ演習(開発プロセス)を支援するサブシステムとして、テンプレートに基づく文書作成、情報共有、コミュニケーション支援の機能を開発し、実授業への試行を行った。実装にあたり、テンプレートで規定した文書はXMLにて実現を行った。・試行の結果、利用者からの、システム全体の有効性に関する評価は高かった。その一方、ツール間の連携の強化、コミュニケーションの1形態であるインスペクションと呼ばれる教授者と学習者による、作成成果物に関する討議を支援するプロセスの更なる支援が重要であることが明らかになった。今回の知見をもとに各機能の強化を図るとともに、蓄積された成果物や学習プロセスの履歴を、他の学習者グループが再利用するための機構について、次年度研究を進めていく。
便秘症根治を目指したTRPV4チャネルのメチル化異常の誘発と正常化因子の探索

高齢化により便秘症が増加している。腸管の感受性低下が病態に関わるが、その詳細は不明で根治療法がない。感受性低下の分子機構を検証し、根治療法の開発に重要な情報を提供することが目的である。便秘症の腸管で引っ張り刺激を感じる受容体(TRPV4イオンチャネル)が発現抑制を受けていることを検証する。我々は、消化管上皮にTRPV4が存在し、活性化により放出されたアデノシン三リン酸が内臓神経を刺激すること、ピロリ菌感染者の胃上皮ではTRPV4の発現抑制が生じることを報告した。結腸上皮と腸内細菌や炎症性サイトカインを共培養するとTRPV4の発現に変化が生じており、根治療法につながる知見を提供する。
ユニバーサル色覚バリアフリー実現のための自動色補正技術の開発

本研究では、ユビキタス時代における色の識別問題に焦点を当て、様々なデバイス上にウェブや画像データなどのコンテンツを表示・印刷する際に、高齢者や色覚が異なる方々(色覚異常者)が利便性を損なうことがないよう、その配色を最も識別しやすい形式に自動的に最適補正するユニバーサルな色覚バリアフリーを実現するために必要な技術を開発したものである。2年間にわたる研究の結果、高齢者による色の見えとこれを考慮した対策の有用性がより明確なったと言える。ユビキタス時代におけるユニバーサルな色覚バリアフリーを実現するために、平成19年度は以下の検討を行った。まず、加齢に伴う高齢者の色覚劣化を表現する、後天色覚異常の数学的なモデルの構築を検討した。モデルには加齢に伴う水晶体の黄変や老人性縮眼を含め、脳による色恒常性を考慮した。黄変フィルタにおける高齢者の若年者に対する水晶体透過率の計算には、Pokornyらによって亭主されたTwo-Factorモデルを用いた。縮眼フィルタでは、Winnらによる一定照度での瞳孔の直径から、高齢者の若年者に対する老人性縮瞳による網膜照度の低下率を計算した。次に、この後天色覚異常モデルを用いて、高齢者による色の見えをシミュレーションする方法を確立した。この方法は、高齢者の若年者に対する実行輝度比を利用し、入力したカラー画像に対して年齢を入力することにより、高齢者が観察しているであろう出力画像を表示できる。また、視覚研究所が保有する高齢者に対するSPP色覚検査表を用いた臨床検査結果を利用し、SPP色覚検査表で用いられる色の加齢に伴う変化との関連性を調べた。検査表に用いられる隣接する背景色と文字色間の加齢に伴うL^*u^*v^*空間での距離の減少に対する誤り率の変化を観測したところ、色の組合せによっては加齢による色間距離の減少に対して誤り率が急激に増加することがわかった。一方、後天色覚異常を利用者が自己診断できる方法ならびに上記の後天色覚異常シミュレーションの結果に基づくコンテンツ色の自動補正法については、その基礎的な検討を行った。ユビキタス時代におけるユニバーサルな色覚バリアフリーを実現するために、まず、平成19年度に構築した加齢に伴う高齢者の色覚劣化モデルを用いた、高齢者による色の見えをシミュレーションする方法の改良を行った。従来法では、短い波長区間ごとに高齢者輝度を表す式を立て、その組み合わせによって解法した複数の結果の平均値を実行輝度比として取り扱っていたが、得られた解の精度が不十分な問題があった。そこで、新たに表示装置の発光スペクトルの波長特性を利用する方法を検討し、高齢者色覚シミュレーションの再現性を向上した。次に、高齢者の色の見えを考慮したコンテンツ色の自動補正法について検討を行った。入力したカラー画像に対して年齢を入力することにより、高齢者が観察しているであろう画像を出力し、この画像を利用して隣接色の加齢に伴うL*u*v*空間での距離の減少を計測し、この距離ができるだけ大きくなるようにコンテンツの配色を修正する。加齢によって感度が減少しやすい方向に、この距離が増加するように修正することが有効であることがわかった。また、この方法の様々な表示デバイス上への実装方法についても基礎的な検討を行った。さらに、後天色覚劣化の自己診断方法については、検査用表示装置上に実際に表示される色の精度検証を行うとともに、検査方法として確立するための基礎検討を行った。2年間にわたる本研究を総括すると、高齢者による色の見えとこれを考慮した対策の有用性がより明確なったと言える。一方で、高齢者の色覚劣化検査法の確立やコンテンツ色の自動補正法の実装における多くの課題が見出され、これらは今後の検討課題である。
口腔内細菌叢解析に基づく齲蝕・哺乳齲蝕病因論のリコンストラクション

代表者の所属する診療室に来院する小児から歯面プラークを採取し、ミュータンスレンサ球菌のほかに齲蝕の発生に影響する細菌種の検索を行ったところ、試料を得た小児の65%から乳酸桿菌属細菌を検出した。齲蝕を有する小児からの乳酸桿菌の検出率は有意に高かった。また、小児及びその母親から口腔内のswab検体を採取し、シーケンサーによる解析を行ったところ、小児の口腔の細菌叢は成人よりも多くの細菌種が存在している傾向にあり、また個体間でのバリエーションも豊富であることが示された。こうしたバリエーションは、小児期に発生する齲蝕の感受性に影響を与えている可能性がある。これまで齲蝕の原因菌は、歯面定着性、酸産生能の高さからミュータンスレンサ球菌が主力であると考えられてきた。しかし、口腔は約600種類の細菌種が生息していると考えられており、さらに外界からも多様な微生物の侵入にさらされていることから、齲蝕をはじめとする口腔疾患が単一の細菌種のみで説明できるとは考えられない。近年高速シークエンサーの登場により、数十万塩基もの遺伝子配列が数時間で取得できるようになり、ウェブ上のデータベースと照合すればその遺伝子がどんな細菌種に由来するものであるかを推定することができる。本研究ではその手法を利用して小児を中心とする口腔の細菌叢の全貌の把握、齲蝕や哺乳齲蝕の発症に関与する細菌種の同定を試みた。平成23年度より申請者の所属する病院の小児歯科に来院した19歳児の患児から歯面プラークを採取し、培養法では主に乳酸桿菌属細菌の単離・同定を、さらに歯面プラークからの細菌由来ゲノムの抽出を行って、16S rDNAをターゲットにした次世代シーケンサーによる解析を行っているが、試料数はすでに125に達し充分な量となった。乳酸桿菌の検出頻度と齲蝕発生には相関関係が認められるほか、特にL. fermentumを保有していた被験者においては重症齲蝕が頻繁に発生していた。元来乳酸桿菌は付着能を有さないことから主に唾液中に存在すると考えられてきたが、本研究では歯垢中から多くの乳酸桿菌を検出し、歯面バイオフィルム中に少なからず存在すると考えられる。また、シーケンサー解析は約40の試料について行い、平均5000readの遺伝子情報を得た。小児は成人よりも口腔内に多くの細菌種が存在しており、個体間のバリエーションが多いことを明らかとした。現在口腔内の状況や保護者への聞き取り調査の結果と照合し、口腔内細菌叢と口腔疾患の関連についてさらに解析を進めている。人体には少なくとも約100兆の細菌が存在し、細胞数の10倍に達すると言われている。ヒトの皮膚や消化器、生殖器や口腔などに生息する細菌叢の全貌を捉え、ある疾患の原因解明に役立てようとする試みは近年盛んに行われている。そこで、我々のグループはこれまでに、主に小児口腔に存在する細菌叢の解明を目指す取り組みを行ってきた。研究代表者の所属する小児歯科診療室に来院する患児およびその母親から得られた口腔内のswab検体を試料とし、シーケンサーによる解析を行ったところ、小児の口腔の細菌叢は成人よりも多くの細菌種が存在している傾向にあり、また個体間でバリエーションが豊富であることが分かった。こうした細菌叢のバリエーションが、齲蝕や、低年齢において生じる哺乳齲蝕にどのように関与しているかについては現在も解析を進めているところである。しかし、これまでに消化器の細菌叢について個体間の違いが偽膜性大腸炎(RCDI)や潰瘍性大腸炎の原因になっている可能性が高いと指摘されていることから考えると、小児の個体間における口腔内細菌叢のバリエーションの豊富さは、齲蝕をはじめとする口腔疾患の発生に一定の影響を与えている可能性が高いと考えられる。また、2種類の齲蝕原性細菌Streptococcus mutansやS. sobrinusとの協調あるいは競合作用を示すことで齲蝕の発生に影響を与えうる細菌種の検索を行った。本課題では、特に小児口腔における乳酸桿菌の検出率および菌種の同定、口腔内状況との比較検討を行った。その結果、試料を得た小児の65%より乳酸桿菌を検出した。齲蝕のない患児に比べ、齲蝕を有する患児からは乳酸桿菌の検出率が優位に高かった。今後齲蝕の病原性を研究するためには、ミュータンスレンサ球菌にのみ着目して研究を進めるのは不十分であり、このように検出頻度に差が認められる菌種についても、齲蝕発生への関与の有無やその程度について検討していく必要がある。

これまで齲蝕の原因菌は、歯面定着性、酸産生能の高さからミュータンスレンサ球菌が主力であると考えられてきた。しかし、哺乳齲蝕のような特徴的な齲蝕形態を考えると、すべてにミュータンスレンサ球菌を中心とした齲蝕形成メカニズムが当てはまるのかどうかは疑問である。また口腔の複雑な細菌叢を鑑みるに、齲蝕を中心とした口腔、あるいは全身疾患の発症機序を解析するためには単一の細菌種だけをターゲットとした研究手法だけでは不十分である。そこで本年度は申請者の所属する病院の小児歯科に来院した1ー9歳児の患児から歯面プラークを採取した。本研究で特に注目した乳酸桿菌属細菌については単離・同定し、さらに歯面プラークからの細菌由来ゲノムの抽出を行って、16S rDNAをターゲットにした次世代シーケンサーによる解析を試みた。シーケンスで得られたデータは現在解析中である。乳酸桿菌は歯面付着性が低いとされているが、本研究では歯面から得られた試料をまずショ糖含有培地で培養することで、採取時に歯面に付着しており、かつ耐酸性の高い乳酸桿菌の検出を試みた。各被験者に由来した乳酸桿菌属細菌と考えられる約300のコロニーについて、L.casei, L. salivarius, L. fermentumをはじめとし5種類の乳酸桿菌を同定した。乳酸桿菌の検出と齲蝕発生には相関関係が認められるほか、L. fermentumを保有していた被験者においては重症齲蝕が頻繁に認められ、一部試料で検討をはじめた遺伝子核型解析によれば同菌種であっても遺伝子構造にバリエーションを有する場合は齲蝕発生に影響を与えうることが示された。遺伝子構造にバリエーションを有するということは、口腔内への同一菌の定着が複数のソースから成立したことを示唆している。この結果は唾液等から乳酸桿菌の検出を試みたほかの報告とは大きく異なっている。平成24年25年度は、平成23年度に得た歯面バイオフィルムを試料して培養、シーケンス解析をした結果から、ピックアップした菌種の菌数・菌株数と口腔内診査・アンケートとの相関解析およびピックアップした菌種の齲蝕原性に関する解析および既知の齲蝕原性菌との相互作用に関する解析を行う予定であった。そのために新たに対象とする患児より試料の採取を行うこととしていたが、試料数はすでに125に達し充分な量が達せられた。培養法による研究では本研究では乳酸桿菌属細菌をターゲットとすることとし、これらの培養・単離・同定手法を研究室内で確立しており、試料中の菌数・菌種の解析が順調に進んでいる。単離された菌の菌種同定に基づいた乳酸桿菌属細菌の構成と口腔内診査・アンケートとの相関解析を現在進めているが、L. fermentumの高齲蝕誘発性、乳酸桿菌のバイオフィルム中の存在については学会発表のほか、医療従事者を対象とした招待講演でも取り上げて報告を行っている。さらに,同一試料より得られた一つの菌種であってもすべてが同じ遺伝子プロファイルを持った単一の菌株に由来するとは限らず,またL. fermentumなどでは複数の菌株を口腔内に有していると重症齲蝕が多くなることを、CHEF-DRIIによるパルスフィールドゲル電気泳動を行うことで明らかとした。次に、16S rDNAをターゲットにした、次世代シーケンサーを用いた遺伝子解析についてはこれまでに約50名の試料について完了した。昨年度は得られたread数が十分量に満たない試料があったが、解析のための試薬等を工夫することにより十分なread数を得ることができた。シーケンス解析の手法は相当程度確立できたと考えられるため、今後はもう少し試料数を増やしたい。また今後、口腔内細菌叢の構成の解析および口腔内診査・アンケートとの相関分析を行う予定である。
脂肪酸伸長酵素Elovl6欠損マウスの2型糖尿病の発症・進展抑制機序の解明

2型糖尿病の発症・進展における脂肪酸伸長酵素Elovl6の意義を検討した。肥満・2型糖尿病を発症するdb/dbマウスとElovl6KOマウスを交配し作成したdb/db-Elovl6KOマウスの血糖値、インスリン値、HbA1c値の測定、経口糖負荷試験、膵臓ランゲルハンス氏島(ラ氏島)の免疫組織化学染色、遺伝子発現解析を行い、膵β細胞の性状と機能を検討した。db/db-Elovl6KOマウスはdb/dbマウスと同様に肥満を呈するが、高血糖および耐糖能異常の改善が認められた。また、db/dbマウスに比べてdb/db-Elovl6KOマウスではラ氏島の肥大とそれに伴う血中インスリン値の上昇が認められた。db/db-Elovl6KOマウスのラ氏島では、炎症性サイトカインやケモカインの遺伝子発現の減少が認められた。Elovl6は2型糖尿病における膵β細胞量の減少や機能不全に関与することが明らかとなり、Elovl6の阻害は2型糖尿病の新しい治療標的となる可能性が示唆される。【背景・目的】Elovl6は炭素数1216の飽和・一価不飽和脂肪酸を基質とする脂肪酸伸長酵素である。Elovl6KOマウスは、食餌性および遺伝性の肥満を呈するにも関わらずインスリン抵抗性が改善されることから、本酵素が生活習慣病の新規治療標的として期待される。そこで本研究では、2型糖尿病モデルdb/dbマウスとElovl6KOマウスの交配動物の作製と解析を行い、2型糖尿病の発症・進展におけるElovl6の意義を明らかにすることを目的とした。【方法】db/dbマウスとElovl6KOマウスを交配してdb/db-Elovl6KOマウスを作製し、体組成、血中パラメーターの測定、インスリン負荷試験、経口糖負荷試験、膵臓ランゲルハンス氏島(ラ氏島)の組織学的解析、脂肪酸組成解析、インスリン分泌試験、遺伝子発現解析を行い、膵β細胞の性状・機能とElovl6との関わりを比較・検討した。【結果】db/db-Elovl6KOマウスはdb/dbマウスと同様に肥満・インスリン抵抗性を呈したが、高血糖および耐糖能の改善が認められた。db/dbマウスに比べてdb/db-Elovl6KOマウスではラ氏島の肥大とインスリン分泌の増強に伴う血中インスリン値の上昇が認められた。db/db-Elovl6KOマウスのラ氏島では、db/dbマウスに比べてオレイン酸(C18:1n-9)が著明に減少し, TNFαやMCP-1といった炎症性サイトカインやケモカインの遺伝子発現の減少と膵β細胞機能に重要なPDX-1やMafA、Insulinの遺伝子発現の増加が認められた。【結論】本研究の結果から、Elovl6は2型糖尿病における膵&#61538;細胞量の減少や機能不全に関与することが明らかとなった。膵β細胞の脂肪酸組成の変化は2型糖尿病の発症リスクと考えられ、Elovl6の阻害が新しい糖尿病治療標的として期待される。脂肪酸伸長Elovl6の欠損により糖尿病の発症や進展が抑制されるかについて明らかにするため、先天的にレプチン受容体欠損により肥満を通して2型糖尿病を発症するdb/dbマウスとElovl6KOマウスの交配動物を作成し、その表現型を解析した。その結果、db/dbマウスに比べてdb/db-Elovl6KOマウスは空腹時・随時血糖およびHbA1c値が大幅に低下し、糖尿病の発症・進展が抑制された。db/dbマウスに比べてdb/db-Elovl6KOマウスではランゲルハンス氏島の肥大と数の増加が起こり、それにより血中インスリン値が上昇し、糖尿病の発症が抑制されたと考えられる。当初の期待通り、Elovl6の欠損によりdb/dbマウスの糖尿病の発症が抑制される結果が得られ、それが膵ベータ細胞の機能改善に起因することを示唆するデータが得られたため。これまでの実験結果から、Elovl6の欠損による脂肪酸組成の変化が、db/dbマウスに認められる膵β細胞機能不全の抑制や膵β細胞の増殖・肥大促進などを引き起こし、糖尿病の発症を抑制する可能性が考えられる。今後、膵β細胞に着目し、組織学的解析、網羅的遺伝子発現解析、タンパク質発現、脂質分析を進め、Elovl6欠損による糖尿病発症抑制の分子機序を明らかにする。
高温高圧下における鉄－軽元素メルトの弾性波速度測定：地球外核への応用

地球の外核は、地震波観測と衝撃圧縮実験の結果から純鉄の密度に比べ約10%低く、弾性波速度で約3%程度速いことが報告されている。本研究では、Fe-S系およびFe-Si系合金メルトの密度と弾性波速度を測定し、観測結果と比較することで外核組成を推定することを目的としている。今年度は、これまで測定を行ってきたFe-SメルトやFe-Siメルトの弾性波速度と比較するため、我々が開発したマルチアンビル型高圧発生装置と超音波法を組み合わせた手法(Nishida et al. 2013)を用いて、Feメルトの弾性波速度測定実験を5GPaまで行った。同じ温度圧力条件で、これまで行った測定結果と比較すると、Fe-Siメルトは、Feメルトに比べ速く、Fe-SメルトはFeメルトに比べ遅いことがわかった。一方、本研究で得られたFeメルトの弾性波速度は、これまで報告されている1気圧と衝撃圧縮実験を基にした純Feメルトの弾性波速度に比べ系統的に速いことがわかった。回収試料の熱電対の位置を調べたところ、予想よりもヒーターの中心から大きく外れており、この系統的なズレは、温度と圧力を低く見積もっていることが原因であることがわかった。これまでのFe-S系メルトやFe-Si系メルトの測定でも、ほぼ同じ高圧セルを使用しており、今後、熱電対の指示温度と試料中心の温度差の補正を行い、温度、圧力の絶対値を正確に求める予定である。また、10GPaを超える高圧下において、鉄合金メルトの弾性波速度測定を可能とする高圧セルの開発も行った。高圧セルの構成の最適化を行い、現時点で11 GPaでのFe60S40メルトの弾性波速度測定に成功した。まだまだ改善点が多くあるが、さらに高圧セルに改良を加え、幅広い圧力、組成で実験を行っていく予定である。(抄録なし)地球の外核は、地球物理的観測と衝撃圧縮実験の結果から純鉄の密度に比べ約10%低く、弾性波速度で約3%程度速いことが報告されている。これら密度と弾性波速度に関する二つの条件を満たす軽元素を探すことで、外核組成を推定することができる。本研究では、核中に含まれる軽元素の候補の中でも、硫黄と珪素に注目して研究を行う。硫黄や珪素は地球化学的見地から、外核中に存在しうる主要な候補であるが、対極的な性質を持つ物質であり、異なった核形成過程が想定されている。今年度は、これまで我々が開発したマルチアンビル型高圧発生装置と超音波法を組み合わせた手法(Nishida et al.2013)を用いて、Fe-SメルトとFe-Siメルトの弾性波速度を圧力と組成を変えて行った。出発試料にFe_<84>S_<16>とFeSおよびFe_<82>Si_<18>を用い、縦波速度をそれぞれ5.4GPaまでの条件で測定を行った。その結果、Fe-Sメルトの縦波速度は硫黄の含有量が増加するに伴い、減少することが明らかになった。一方、Fe_<82>Si_<18>メルトの縦波速度はFe-SメルトやFeメルトに比べ速いことが明らかになった。また、Fe-Sメルトの縦波速度に温度依存性は見られなかったが、Fe-Siメルトの縦波速度は、温度の上昇に伴い遅くなることが明らかになった。この結果は今後学会や論文として発表する予定である。また、より高圧下での測定に向けた高圧セルの開発も行っており、平成25年度は、10GPaを超える圧力で測定を行う予定である。また、これまで行ってきたFe-SメルトおよびFe-Siメルトの密度測定結果と比較することで、バーチの法則の適用可能性や弾性定数の議論も行う予定である。

高圧セルの構成の最適化を行い、現時点で11 GPaでのFe60S40メルトの弾性波速度測定に成功した。まだまだ改善点が多くあるが、さらに高圧セルに改良を加え、幅広い圧力、組成で実験を行っていく予定である。初年度の大きな目標であった、高圧下の弾性波速度測定のルーチン化は、細かい高圧セルの改良によって概ね達成することができた。また、後期からSPring-8に課題を申請し、予定を前倒しして、FeS端成分だけでなくFe-Siメルトの弾性波速度の測定を圧力を変えて行うことができた。しかし、これまでの密度測定結果の再解析は若干遅れたため、弾性波速度と密度の結果を合わせて、バーチの式にプロットするところまでは至らなかった。また、CTプレスを用いた鉄合金メルトの密度と弾性波速度同時測定に向けた装置の改良、試料部構成の改良は順調に進んでいる。Spring-8の施設側の不具合により、放射光実験はキャンセルとなったが、2年目以降の基礎データの収集はできた。本研究は、概ね計画通り進行しており、現在のところ研究計画の変更や研究遂行上の問題点はない。(抄録なし)
心肥大・心不全における内因性プロスタノイドの役割の解明

本研究の目的は、心肥大・心不全におけるプロスタノイドの役割を受容体欠損マウスを用いて解明することである。本研究によって、以下のことを明らかにした。1.心臓におけるプロスタノイド受容体の発現をRT-PCRにより解析した。成獣マウス心室筋では、8種類のプロスタノイド受容体の中で、EP_2、EP_3、EP_4、FP、IP、TPの発現を確認した。さらに、心室から単離した成獣および胎仔心筋細胞では、EP_2を除いた5種類の発現を確認した。また、胎仔非心筋細胞では、成獣心室と同様に6種類の受容体が発現していることを明らかにした。2.トロンボキサン(TX)A_2は、非心筋細胞の増殖を促進した。この作用は、TP欠損マウスでは消失した。よって、TXA_2は、TPを介して、非心筋細胞の増殖を促進することが明らかとなった。3.急性心不全のモデルとして、虚血-再灌流障害のin vivoとex vivoの実験を行った。in vivoの実験では、左冠動脈を1時間結紮し、その後、再灌流を24時間行い、梗塞サイズを測定した。この結果、心筋梗塞サイズは野生型と比較してIP欠損マウスにおいて著しい増加を認めた。つまり、心筋の虚血-再灌流障害に対して、内因性PGI_2はIPを介して心筋保護に働くことを初めて明らかにした。ex vivoの実験では、摘出灌流心への灌流液の供給を遮断し、その後再灌流を行い、心機能の変化を解析した。その結果、野生型マウスに比較し、IP欠損マウスでは、再灌流時のdeveloped tensionの回復が抑制され、CK遊出量は高値を、ATP含量は低値を示した。つまり、内因性PGI_2の心筋保護作用には、IPを介した心臓への直接作用も含まれていることが初めて明らかとなった。本研究の目的は、心肥大や心不全といった病態におけるプロスタノイドの役割を明らかにすることである。我々は、プロスタノイド受容体欠損マウスを用いて、以下のことを明らかにした。1.急性心不全のモデルとして、虚血-再潅流障害のin vivoとex vivoの実験を行った。in vivoの実験では、左冠動脈を1時間結紮し、その後、再潅流を24時間行い、梗塞サイズを測定した。このことは、心筋の虚血-再潅流障害に対して、産生された内因性PGI_2は抑制的に作用することを意味する。次に、ex vivoの実験では、摘出心をLangendorff式に定圧で潅流し、心臓への潅流液の供給を遮断することにより40分間もしくは65分間虚血にした後、再潅流を40分間行い、冠潅流量、developed tension、creatinekinase(CK)遊出量を測定した。さらに再潅流終了時における組織中のATP含量を測定した。この結果、野生型マウスに比較し、IP欠損マウスでは、再潅流時のdeveloped tensionの回復が抑制され、CK遊出量は高値を、ATP含量は低値を示した。これらの結果、虚血時に産生されたPGI_2による心筋保護作用には、心臓への直接作用も含まれていることが明らかとなった。2.さらに、心筋細胞、心線維芽細胞を酵素処理により分離し、プロスタノイド受容体のmRNA発現をRT-PCRにより解析した。その結果、心筋細胞には、EP_3,EP_4,FP,IP,TPの5種類の受容体が発現し、心線維芽細胞には、これにEP_2を加えた6種類の受容体が発現していることが明らかとなった。
公共性の存立と個人のボランティア意識との相互規定関係に関する研究

阪神・淡路大震災における災害救援ボランティア活動を主な対象として、体験者の手記、記録類、および、新聞記事等のメディアを中心とする、談話的実践の内容分析を行った。この分析により、談話的実践を通して、ボランティア、NGO等々の概念が社会的に構成される過程を追跡することができた。ボランティアという個別の活動は、その社会的な意味の次元に定位してみれば、新たな公共性を日本社会において樹立しようとする試みであると位置づけることができる。ボランティアという名辞が幅広く普及し、多くの人々によって受容されたことは、企業体や行政体に依存する、在来型の公共性とは異なる、新たな公共的空間が成立しつつあることを示す。しかし同時に、内容分析の結果は、この新たな公共性が、未規定性をその最大の特徴としていることを示している。すなわち、ボランティアによって象徴される新たな公共性は、その内容が曖昧なままで明確に規定されず、事後的な任意の意味づけに開かれていることを、最大の特徴としている。たとえば、ボランティアに参加した個々人は、一般的には、その活動の動因を、善意によって、事後的に動機づけている。しかし、活動に参加するに至った局面に着目すると、何か新しい活動に従事したかった、居ても立ってもいられなかった、などといった、動機の未規定性だけが、そこでの共通項となっている。端的に言うと、具体的な理念ではなく、規定されることのない、問題意識あるいは社会参加の意欲だけが、ボランティアを結び付けている。日本社会において樹立されつつある新たな公共性は、このような未規定性によって特徴づけられる。ボランティアに基づく公共性が、企業体、行政体に準拠した既存の公共意識に、どの程度馴致され回収されるのか、他方、この新たな公共性が、従来型の社会組織に対してどのような変化を及ぼすのか、それがわれわれの新たな探索課題となる。社会的構成主義の理論的な基礎づけ作業を展開することにより、新聞記事や個々人の手記等を対象とした内容分析のための、概念枠組みと分析指針とを整理することができた。談話的過程や言語的表現過程に着目することの重要性は、S.MoscoviciやW.Wagnerら、ヨーロッパを中心とする社会的構成主義心理学の理論家が、つとに指摘してきた点である。これは単に、個人的な心情の吐露などといった、表面的な個人的心的過程の問題にとどまるものではない。個々人を規定するマクロレベルの事象、すなわち、世界観の形成や、人間の行動機制に関わる因果的説明の生成など、社会的現実の構成そのものを規定する過程でもある。今回はさらに、関係主義哲学や身体論的比較社会学の知見をも援用することにより、社会的現実に関する具象レベルと抽象レベルとの区分や、主体的個人という現代社会特有の人間像の形成過程等々を、概念的に整理することができた。これらの知見により、ボランティア体験者の手記という素材からは、具象的な行為に関わる記述と、それを規定する理念としての公共性概念を峻別し、同時にその相互規定性を抽出することができる。同時に、公共的理念を、個々人がその属性に応じてどの程度内面化しているかについても検討を加えることができる。継続して収集してきた個々のボランティア体験者の手記に対して、さらに分析を適用すると同時に、新聞記事をはじめとする、社会の側に定位した言説に対しても、これを補完する同様の分析枠組みを確立することが、次年度に向けての課題である。
細胞膜マイクロドメインにおける抗原性糖リン脂質の分子レベルの宿主-微生物相互作用

関節リウマチは、関節の炎症と変形を特徴とする病気で強い関節痛をともなう不可逆性で、原因不明の難治性疾患として知られている。関節リウマチ患者数は世界中で3700万人,医療コストなどが年間数兆円になるといわれておりその病態解明が強く望まれている。関節リウマチとMycoplasma fermentansについての臨床報告が1996年からあいついでされた。しかしそれを証明できる原因物質の特定はなされていなかった。研究代表者らは、これまでに、強い免疫原性をもつM.fermentansに特異的なコリン含有糖リン脂質(GGPL-1およびGGPL-III : GGPLs)を発見し、化学構造を解明した。その構造に基づいて関節リウマチの病態についての仮説を提唱し、さらに、作成したGGPL-III特異モノクローナル抗体(31)を用いて、関節リウマチ患者組織に炎症サイトカイン誘導活性をもつGGPL-III抗原が存在することを示し、GGPLsが関節リウマチの原因物質のひとつであることを証明してきた。このマイコプラズマ由来糖脂質についてはすでに有機化学合成に成功し、より細かくデザインされた構造類似体、精製法や疎水性比較法も準備できており、これらを用いた解析を進めている。糖脂質抗原は自然免疫から獲得免疫へ至る免疫制御機構において重要な役割をになっていることがわかってきている。したがって、リウマチの関節破壊原因物質であるM.fermentans由来糖脂質の脂質抗原提示機構などの免疫分子機構が解明されれば、それにより得られてくる機能や解析技術は、関節リウマチのみでなく、がん・自己免疫疾患・エイズなどの難治性免疫不全疾患の免疫制御療法の創薬開発にもつながると考えられる。細胞膜糖脂質マイクロドメインの解析については、機能性膜シアロ糖脂質ガングリオシドのマイクロドメイン形成とその動態についてまとめた。免疫電子顕微鏡を用いた微細構造の解析や脂質マイクロドメインにおけるがん遺伝子srcの動態について国内・国外学会(第22回日本糖質学会、第43回日本脂質生化学研究会、GLYCO XVI、第74回日本生化学、第60回日本癌学会)報告を行い現在投稿準備中である。さらに、免疫細胞脂質マイクロドメインにたいして解析を展開していく。マイコプラズマ特異糖リン脂質の病原性についてマイコプラズマ学会総会で特別講演をし総説を執筆した。脂質抗原の構造と病原性について、Nature publishing groupから執筆依頼があり、Encyclopedia of life scienceに掲載された。GGPLsおよびその誘導体の有機合成については、現在、光学異性体の準備が進行中である(投稿準部中)。また、高度化推進「糖鎖物質設計」シンポジウムにて「招待講演Mycoplasma fermentans特異的糖リン脂質抗原の構造解析とその意義について」をおこない糖質設計グループ(西田先生)と合成化合物にっいて計画をたてた。マイコプラズマ由来の糖リン脂質およびその合成類似体の生理活性解析については、IL-6などのサイトカインの産生が認めらている。宿主免疫系として、樹状細胞、Th1/Th2ヘルパーT細胞、NKTなどにたいする活性について検討を準備しつつある。とくに、human B dendritic cellを樹立しておりこれに対する生理活性を検討することができるようになってきた。さらに、無菌動物学会でシンポジストとして発表し特異的糖リン脂質抗原の実験動物モデルの解析や臨床での検討についても研究打ち合わせを行った。マイコプラズマ由来糖リン脂質の合成準備を進めてきたがGGPL-Iについて光学異性体や構造類似体の合成および精製が完了し合成および精製論文を発表した。B細胞の形質を持つ樹状細胞細胞株(human B dendritic cell)(投稿準備中)について第61回日本癌学会ワークショップで発表した、また、2003年米国癌学会で報告する。このhuman B dendritic cellはIL-10を特異的に産生する。IL-10は抑制的に免疫制御を行い腫瘍免疫や自己免疫において重要な役割をしていると考えられている。

したがって新しい免疫細胞群として注目されるB細胞形質を持つ樹状細胞のIL-10産生機構の解明やその制御はがん免疫療法や自己免疫疾患の治療において重要となると考えられる。GGPL誘導体がhuman B dendriccellからのIL-10産生を強く抑制し、しかもGGPL-1の光学異性体により異なっていることも分かってきた。形態的にも違う変化を引き起こす。これらのGGPLs誘導体によるIL-10産生制御機構についてがん遺伝子srcの動態など脂質マイクロドメインを中心に比較解析をおこなっている。またGGPL誘導体のなかにNK/NKT細胞を強く活性化する物質が見つかり免疫療法に有用である可能性がある。このような構造活性の相関に関連した分子制御システムの解析のために結合蛋白についてのプロテオーム解析を開始した(理研横山先生グループおよび名古屋大学小林一清、西田芳弘助教授グループとの共同研究)。マイコプラズマ由来病原性糖リン脂質GGPLsの構造活性相関の解析から難治性疾患の病態解明さらに診断薬や免疫細胞療法も含めて、今後、抗炎症剤や免疫制御療法の開発につながっていくと考えられる。Mycoplasma fermentansはGGPLsを種特異的な抗原として有しリウマチ・エイズ・腫瘍との関連が疑われているが、申請者らが樹立したGGPL-III特異抗体によりリウマチの病態との関連が分かってきている。これについて、日本マイコプラズマ学会、日本リウマチ学会、米国リウマチ学会において報告してきた(論文投稿中)。本年アジアマイコプラズマ学会においてシンポジストとして発表予定。
環境電磁工学(EMC)の体系化と評価技術の総合研究

1.環境電磁工学(EMC)は、電磁エネルギーに起因する各方面での未解決の現象を取り扱う学問分野であり、生体に与える影響や、磁界の効果、静電気による電子装置の故障、超過密の電子機器における不要な電磁エネルギーの漏洩と不要な相互結合、雑音電波による通信障害など、多くの課題を含んでいる。約20年前よりEMCの社会的重大性が指摘され、解決のためのEMC技術の発展が嘱望されてきた。2.本研究では、平成6年5月にわが国において開催される1994年環境電磁工学(EMC)国際シンポジウムの学術的側面での準備を行うことを主たる目的とした。すなわちEMC関連技術と研究課題について企画調査を行い、最近の研究で得られた知見を整理し、今後の研究課題を明確にした。これまでのEMC技術を整理統合するとともに、評価技術を確立し、今後のEMC研究の方向付けを行うために総合的な知見と広い視野が必要であり、本研究組織には国内の主要なEMC関連研究者26名が広範囲の学術分野から参画した。3.上記の目的で研究分担者が一堂に会して、調査結果について報告、意見交換を行う全体会議を平成6年2月と3月の2回開催した。また、各研究分担者との連絡と研究調査の調整を行う幹事会を平成5年6月から平成6年2月までに9回開催した。4.本研究によるEMC関連技術の整理統合化と新しい課題の提案は、生体効果、イミュニティ、プリント配線板、スキャッタリングなどを中心に、網羅的に行われた。体系化された知見は、1994年EMC国際シンポジウムにおいて、ワークショップ等の形式で各研究分担者が発表する。また、収集した研究課題の一覧を編集・印刷し、研究分担者および国際シンポジウムの関係者等へ配付した。
"ともに考える医療"のための新たな患者-医療者関係構築を目的とした実証・事業研究

"ともに考える医療"の概念構築に資する実証的調査を質的・量的アプローチを通して行った。その上で、その概念に基づいて、医療専門職としての新たな職業規範や、患者とのコミュニケーションの実際に関する指針を提示した。さらに、現場での診療プロセスを支援するツールを開発した。<研究の目的>患者・家族・医療者が、相互理解・相互信頼と歩み寄りを目指す対話の実現を目的として、・"ともに考える"事を障害するバリアについて明らかにする。・情報の共有と、価値の共有を主眼においた、具体的方法について明らかにする。・医療の限界や診療義務の限界を加味した上での医療者の診療義務について再考察する。・"ともに考える医療"を推進する上での、患者支援、医療者支援および相互コミュニケーション支援方略を立案し、その有効性について検証する。<研究成果が目指すゴール>"ともに考える医療"を実現する上での、情報共有のあり方、さらに価値共有のあり方とその具体的方略を、実証的な根拠とともに提示する。<研究デザイン>調査研究、成果物作成型研究、アクション・リサーチを主な研究形態とする。総括的な研究実績:"ともに考える医療"を実現する上での、情報共有のあり方、さらに価値共有のあり方とその具体的方略を、実証的な根拠とともに提示することを目的とした実証研究を中心に着実に進捗している。分担研究の一部は調査の半分以上、もしくはすべてのプロセスを一年目で完了した。研究実績各論:20-1医師の説明内容が持つ構造と患者理解に関する研究(事業I-1担当責任者尾藤):倫理審査委員会提出までの準備を終えた。20-2事例を基にした情報共有に関する調査研究(事業I-2担当責任者野村):インターネットを用いた調査を終了し、現在結果解析中である。20-3ともに考える医療"のために、患者が持つ権利と義務、公正性、及び医療職の診療義務の限界に関する調査研究(事業V-1担当責任者浅井):ネオ・ソクラティック・ダイアログという手法を用いた質的研究の実施を開始した。20-4医師に対する、患者の文脈に寄り添ったコミュニケーションを高めるための教育カリキュラムの開発(事業I-3担当責任者大西・大生・尾藤):"患者教育""医療安全""インフォームド・コンセント"の観点から対患者コミュニケーション能力を高めるカリキュラムづくりに着手し、一部は能力目標の設定を行った。20-5主要疾患の診断・治療プロセスに関するブリーフ・パンフレットの普及と有効性に関する事業研究(事業I-4担当責任者大生):文書の構造等に関する検討会を繰り返し、各論的事業への着手を始めた。20-6"ともに考える"意思決定モデルの有効性に関する調査(事業I-5担当責任者竹村):アンケート及び診療録調査を開始し、100例以上のデータ収集が完了している。計画された分担研究事業は、「ともに考える医療」の推進というコンセプトのもとで、定期的に分担研究者間の協議を行いながら順調に進捗している。各分担研究の平成22年7月までの成果を以下にまとめた。<尾藤分担事業>H21年度までに終了した「インフォームド・コンセントにおける医師の説明の構造に関するランダム割り付け調査」については、2010年5月にミネアポリスで行われた米国一般内科学会で発表した。また、論考「医師アタマとの付き合い方」を書籍として発表した。新規事業として「ともに考えるインフォームド・コンセントの手引き」作成に着手した。<浅井分担事業>中心となる臨床倫理コンサルテーション事業および「ともに考える臨床倫理チェックリスト」による教育介入は高い活動性で進捗している。また、対話プロジェクトである「ネオ・ソクラティック・ダイアログ」についても順調に解析が進み、結果を関連雑誌に掲載予定である。<大生分担事業>主要疾患の診断・治療プロセスに関するブリーフ・パンフレットの作成・普及プロジェクトについては、作成マニュアルおよび25種の文書収集を完了した。<大西分担事業>分担事業である「相互信頼促進のための患者教育技法教育に関する研究」において、同僚間ロールプレイ、および劇場型コミュニケーションの方法論に関する分析をおおむね終了した。<野村分担事業>「医療の公共性に関する調査」の実施と解析を終した。また、「医師に対するカテゴリ信頼」に関する調査を開始した。<竹村分担事業>「"ともに考える"意思決定モデルの有効性に関する調査」を実施し、データの解析を完了した。研究成果の具体的内容<主任班>「医師アタマとの付き合い方」を書籍として発表した。新規事業として「ともに考えるインフォームド・コンセントの手引き」作成とその効果に関するプロジェクト研究事業、および「"もはやヒポクラテスではいられない"21世紀新医師宣言プロジェクト」事業を開始した。<浅井分担事業>対話プロジェクトである「ネオ・ソクラティック・ダイアログ」の質的分析の成果に関する論文発表を行った。また、臨床倫理コンサルテーション事業については累計40例以上の相談を受けている。<大生分担事業>主要疾患の診断・治療プロセスに関するブリーフ・パンフレットの作成・普及プロジェクトに関するデータの収集を完了した。その結果に基づいて、内容をhttp://www.kanja-setsumei.jp/index.htmlに公開した。<大西分担事業>劇場型コミュニケーションの方法論に関する分析を完了した。また、セルフケア行動改善に関する教育手法の文献的評価をおこなった。

<野村分担事業>「患者・一般生活者の医師に対する信頼の構造に関する研究」を計画し、データ収集を開始した。<竹村分担事業>新たな調査研究として、「患者中心の医療」と患者満足度および健康アウトカムとの関連に関する調査を計画し、同研究事業を開始した。研究成果の意義及び重要性本研究班の成果は、昨今劇的な変化を遂げつつある患者-医療者関係において、新しい対話のあり方を提示するとともに、提示されたモデルの妥当性を裏付ける根拠となりつつある。これらの根拠が構築されることで、医療にかかわる関係者の相互信頼を基盤とした新しい医療提供スタイルの普及に寄与することを期待する。<研究成果の具体的内容>主任班:「患者と医療者で"ともに考える"インフォームド・コンセントの手引き」を作成した上、複数の病院でその手引きに準じた実践を行った。また、「"もはやヒポクラテスではいられない"21世紀新医師宣言プロジェクト」において、新たな患者-医療者関係における医療専門職のプロフェッショナリズムの在り方を提示し、871名のフォロワー登録を得た。浅井班:ネオ・ソクラティック・ダイアログの手法を用い、"ともに考える"医療の概念モデルを提示た上、論文発表を行った。医学的無益性に関する医療者及び一般市民を対象とした横断調査を実施し、論文発表を行った。さらに、引き続き臨床倫理相談プロジェクトを継続し、累計50件以上の倫理事例相談に対応した。大西班:医師に対する相互信頼促進のための患者教育技法を開発し、実践を行った。大生班:主要疾患の診断・治療プロセスに関するブリーフ・パンフレットの普及と有効性に関する研究を完遂した。また、多職種間コミュニケーションに関する調査研究を完遂した。野村班:患者・一般生活者の医師に対する信頼の構造に関する調査研究を完遂し、分析を行った。竹村班:「患者中心の医療」と患者満足度および健康アウトカムとの関連に関する調査を完遂した。<研究成果の意義および重要性>本研究事業の成果は、パターナリズムが支配していた患者-医療者関係から患者の権利を尊重して医療が行われるような医療へとパラダイム・シフトが起きる中で、さまざまな混乱が起こっている現在の医療現場に対して、ひとつの方向性を提示したとともに、医療プロセスを変革するいくつもの具体的な方略を提示したことで、現状の混乱への解決策を導き出すものと考える。
遺伝子組換えにより合成されたエリスロポエチンの糖鎖構造と生理活性との相関

生体に元来微量しか存在しない有用な糖タンパク質(例えばγーインタ-フェロン、エリスロポエチン等)が、医薬として遺伝子組換えにより多量に合成されるようになった。しかしタンパク部分の遺伝情報は遺伝子を導入された細胞に直接伝えられるから正確なアミノ酸配列が再現されるが、糖部分に関する情報は与えられていないので遺伝子を導入された細胞が自己の糖鎖生合成系によって独自の糖鎖を作り上げるのである。したがって遺伝子工学的に作られた糖タンパク質にいったいどんな糖が結合しているのか、これはでき上がった糖タンパク質を分析してみるまではわからないのである。もちろん、天然品と同じ糖鎖を人為的にタンパク質に結合させるなどと言うことは現時点では不可能である。一方糖タンパク質の糖鎖は、そのタンパク質の寿命とかリセプタ-への結合性とか抗原性とか、また医薬としての生理活性等にも大きく関与しているので、遺伝子組換えによって合成された糖タンパク質を医薬として使用する際には、その糖鎖構造を詳細に調べておく必要がある。少なくともヒトに抗体を産生させるようなものであってはならない。即ち医薬として使用する目的で遺伝子組換えによりある細胞に糖タンパク質を合成させた場合、その糖部分の天然品との異同、また同じでなくても臨床的使用に差支えないかどうかを決定するためには詳細な糖鎖構造の分析が不可欠である。われわれは、アスパラギン結合中性オリゴ糖を相互に分離し大まかな構造推定が簡単にできる二次元糖鎖マップ法を開発しその方法を駆使することにより、多様な糖鎖構造をもつ遺伝子組換え糖タンパク質エリスロポエチンの糖鎖構造を解明することができた。この間に与えられた文部省科学研究費(一般B)により購入した備品の主なものはBioーLC糖類分析システム(DIONEX社)である。糖鎖分析に不可欠な装置であり、この装置の購入により研究は格段に進展したエリスロポエチン(EPO)は赤血球の産生を調節する液性因子で貧血治療薬として著効があるが天然には患者尿からごく微量得られるに過ぎないので遺伝子組換えにより動物細胞を使って合成することが行われている。EPOは糖蛋白質であるからその蛋白部分は遺伝子を導入される側の細胞が何であっても同じものが合成されるが糖部分は細胞の種類によって異なる。従って合成されたEPOの生理活性も異なることが推定される。本研究は天然品と遺伝子組換えによって合成したEPOとの糖鎖構造を詳細に比較解析し、生理活性との関連をしらべるのが目的である。〔結果の概要〕天然品及び遺伝子組換えによりBHK細胞とΨ2細胞に合成させたEPOを雪印乳業(株)生物科学研究所から入手した。1.EPO糖蛋白質をプロテアーゼ消化後、グリコペプチダーゼ消化によって糖鎖を定量的に遊離した。2.糖鎖の還元末端を蛍光ラベルし、高速液体クロマトグラフィー(2種類の分離の原理の異なるカラムを用いる)で分離し、上記3種類のEPO糖鎖のパタンの特徴を明らかにした。即ち患者尿から得られたEPO糖鎖はかなり個体差が見られたが遺伝子工学的に得られたEPOの糖鎖BHK、Ψ2それぞれ殆どばらつきがなかった。またBHK細胞から得られた糖鎖は患者尿からのEPO糖鎖をすべてもっており、それ以外にかなり分子サイズの大きい糖鎖をもっていた。これに反しΨ2細胞から得られた糖鎖は上記2種類のものと全く異なるパタンを示した。3.患者尿、BHK細胞、Ψ2細胞の3種から由来したEPOの生物活性を比較すると、in vitroでは3種の活性は殆ど差がなかったが、in vivoの活性はΨ2細胞由来のものは他の2種にくらべて半分以下であった。これは糖鎖の影響であると考えて矛盾はない。

糖鎖分析に不可欠な装置であり、この装置の購入により研究は格段に進展した天然エリスロポエチン(患者尿より精製)および遺伝子工学的にBHK細胞およびψ2細胞に合成されたエリスロポエチンを雪印乳業生物科学研究所から入手する。エリスロポエチン糖タンパク質のすべての糖鎖の完全構造決定を行なうために、前年度はまず非還元末端に多数結合しているシアル酸を前以て除去した後、申請者の開発した中性糖鎖のための二次元糖鎖マップ法により構造を推定した。その研究途中に、エリスロポエチンのシアル酸が生理活性に大きな影響をもつことが明らかになってきた。しかしシアル酸をもつ糖鎖の構造決定にはまだ確立した分析システムが無いため、申請者はまず分析システムを確立してからエリスロポエチンのシアル酸を含む全糖鎖構造を解明する計画をたてた。まずシアル酸の微量組成分析法を確立した。これはシアリダ-ゼでシアル酸を遊離させ、DIONEX社のBioーLC糖鎖分析システムの陰イオン交換カラムで分析する方法であるが、多量のタンパク質が共存すると定量が妨害される。結局小さな陽イオン交換カラムをプレカラムとして用いることにより微量定量が可能になった。しかしシアロオリゴ糖の分析までには至らなかった。