hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
サルコペニアの予防法開発を目指した加齢に伴う骨格筋幹細胞数減少機序の解明

まず、個々の筋衛星細胞レベルでNGFRの発現を調べると、若齢マウスではNGFR(+)と(-)の細胞が存在しており、老化マウスではNGFR(+)筋衛星細胞の割合が顕著に低下していた。NGFR(+)と(-)細胞の能力を培養下で比較したところ、NGFR(+)筋衛星細胞で高い増殖・分化能が認められ、リガンドの1つであるNGFを添加することによりさらにその能力が促進されたことから、筋衛星細胞機能におけるNGFRの発現とそのシグナリングの重要性が示された。次に、NGFRの発現制御機構について調べるため、遅筋(ヒラメ筋)と速筋(長趾伸筋)から単一筋線維を取り出し、それらに付随する筋衛星細胞でのNGFR発現を比較した。その結果、遅筋に付随する筋衛星細胞でNGFRの発現がより高い傾向にあった。さらに、老化マウスでは筋衛星細胞の局在異常が見られ、それが細胞数減少に関与する可能性が示唆されているため、局在異常とNGFR発現との関連性を調べたところ、局在異常を示す筋衛星細胞でNGFRの発現がより低い傾向にあることが分かった。以上の結果から、筋線維の収縮や代謝特性がNGFRの発現制御に関わり、局在異常によるNGFRの発現低下が筋衛星細胞数の減少に関わる可能性が示唆された。老化マウスではNGFR(神経成長因子受容体)陽性の筋衛星細胞(骨格筋幹細胞)の割合が顕著に低下する。NGFR陰性筋衛星細胞に比べNGFR陽性筋衛星細胞で高い増殖・分化能が認められ、リガンドであるNGFを添加することによりさらにその能力が促進されたことから、筋衛星細胞におけるNGFRの発現とそのシグナルの重要性が示された。NGFRの発現は遅筋に付随する筋衛星細胞でより高い傾向にあり、局在異常を示す筋衛星細胞でより低い傾向にあった。以上の結果から、筋線維の収縮や代謝特性がNGFRの発現制御に関わり、加齢に伴う局在異常によるNGFRの発現低下が筋衛星細胞数の減少に関わる可能性が示唆された。本研究では、加齢に伴い筋衛星細胞で発現が顕著に減少するNGFRに着目し、その機能解析を通して、加齢に伴う筋衛星細胞数減少機序を探る。今年度までに、NGFR(+)とNGFR(-)筋衛星細胞の培養下での能力比較を行い、NGFR(-)筋衛星細胞ではmyogenicな能力が低いことを見出した。また、NGFR(+)筋衛星細胞へのリガンド刺激により増殖能力が促進されたことから、筋衛星細胞の機能におけるNGFRシグナリングの重要性も明らかになってきた。さらに、NGFRの発現制御機構に関する検討を行い、筋衛星細胞が局在する筋線維の収縮や代謝特性がNGFRの発現を制御し、筋衛星細胞の維持に重要である可能性を明らかにした。このように、おおむね順調に進展している。再生医学今後は、NGFR(+)とNGFR(-)筋衛星細胞をマウスへ移植することによりin vivoでの筋再生能力を比較する。また、リガンドの投与やNGFRシグナリングの阻害が筋再生へ及ぼす影響を調べる。(1) NGFR(+)とNGFR(-)筋衛星細胞のin vivoでの筋再生能力の比較:それぞれの細胞を筋ジストロフィーのモデルマウスであるmdxマウス(ジストロフィンを欠損している)の各対足に移植し、ジストロフィン染色により、移植したNGFR(+)およびNGFR(-)筋衛星細胞の筋再生能力を比較する。
開心術を受ける患者のアドヒアランス行動を測定するための尺度開発

開心術を受ける患者のアドヒアランス尺度を開発するために、国内外の文献レビューを実施した。アドヒアランスに関する文献は多数あったが、開心術のみならず、周術期におけるアドヒアランスの概念を用いた研究は存在しなかった。このため、開心術を受ける患者に対して、手術リスク予防行動に対してインタビュー調査を実施した。その結果、「疾患や症状に対する認識」「手術や手術リスクに対する認識」「医療者や家族からの支援」「リスク予防行動」「リスク予防行動の遂行」の5要素が明らかとなった。この5要素をもとに30項目からなる尺度案を作成した。文献では慢性疾患患者の療養行動に関するアドヒアランスに関する文献は多数認めたものの開心術のみならず、周術期におけるアドヒアランス文献は存在しなかった。またアドヒアランスという概念において、療養行動を含めた形での定義がされおり、服薬アドヒアランス、運度療法アドヒアランスという概念が明らかとなった。このため本研究のアドヒアランスに関しては、リスク予防アドヒアランスとして定義づける必要性が明らかとなった。以上の文献レビュー結果に関しては、本年6月の日本クリティカルケア看護学会学術総会で発表予定である。文献レビューから、アドヒアランス尺度としていたものをリスク予防アドヒアランスと用語の定義づけを行い、尺度作成のための質問項目抽出のための研究の必要性が明らかとなった。また、アドヒアランスの構成要素として、「患者の知識や認識」「医療従事者との関係」「セルフケア行動」「実際の行動」の要素が抽出された。しかし文献レビューでは対象が慢性疾患に限定されてたため、開心術を受ける患者への面接調査による質的研究を実施することになった。現在、質的研究に関しては研究計画書を作成し、倫理審査申請中である。文献レビューで周術期のアドヒアランスに関する文献がなかったこと。倫理審査の結果待ちであること。開心術術前患者に対して、開心術手術リスク予防アドヒアランスの構成要素を抽出する目的で、開心術を受ける患者6名に対してインタビュー調査を実施し、質的帰納的内容分析を実施した結果、「手術と手術リスクに対する理解」「疾患や心不全に対する理解」「リスク予防行動」「リスク予防行動の遂行」「医療者や家族からの支援」の5要素が抽出された。またこの結果は「手術と手術リスクに対する理解」以外は慢性疾患患者の療養行動のアドヒアランスの構成概念と類似していた。前述の研究血管から得られた5要素から下位項目を作成し、開心術術前リスク予防アドヒアランス尺度(案)を作成した。この尺度の内容妥当性の検討のため、専門家(心臓血管外科領域の看護実践に卓越した急性・重症患者看護専門看護師3名、尺度開発の経験のある看護研究者3名)による専門家会議を実施し、下位項目を含めた尺度項目の妥当性を検討した。現在は今回作成に至った開心術術前リスク予防アドヒアランス尺度(案)のワーディングの洗練、統計学的項目分析、尺度の信頼性と妥当性の検討を実施予定であり、研究計画書を作成中である。対象患者である開心術(弁置換術)を受ける患者数が少なく患者のリクルートに時間がかかった。このため研究実施期間を2カ月延長した。このため、結果のまとめと分析の予定がずれ込んだ。文献レビューからは周術期におけるリスク予防アドヒアランスに関しての論文は存在せず、全てが慢性疾患患者を対象にしたものであった。またアドヒアランスという概念は、療養行動を含めた形で定義がされており、療養目的によって、服薬アドヒアランス、運動療法アドヒアランスなどに定義されていた。このため、本研究のアドヒアランスを定義づけるならば、「開心術を術前リスク予防アドヒアランス」ということにした。以上の研究を第12回日本クリティカルケア看護学会で発表した。文献レビューではアドヒアランスの構成要素として「患者の知識や認識」「医療従事者との関係」「セルフケア行動」「実際の行動」の4要素が明らかとなった。しかしこれらは慢性疾患患者が対象であったため、開心術術前患者6名に対してインタビュー調査を実施し、開心術前リスク予防アドヒアランスの構成要素として、「疾患や症状に対する認識」「手術や手術リスクに対する認識」「リスク予防行動」「医療者や家族からの支援」「リスク予防行動の遂行」5要素が明らかとなった。この結果を第45回日本集中治療医学会学術集会で発表した。またこの結果を踏まえて、5要素30項目からなる「開心術術前リスク予防アドヒアランス尺度(案)」を作成し、心臓血管外科領域での従事の経験を持つ専門看護師と研究者からなる専門家会議を開催し、項目の洗練を実施した。この尺度開発のプロセスは英文投稿予定である。専門家会議を経た「開心術術前リスク予防アドヒアランス尺度(案)」に関しては、信頼性・妥当性の検証のため600人を対象とした研究の実施に向けて倫理審査受審中である。

その結果、「疾患や症状に対する認識」「手術や手術リスクに対する認識」「医療者や家族からの支援」「リスク予防行動」「リスク予防行動の遂行」の5要素が明らかとなった。この5要素をもとに30項目からなる尺度案を作成した。倫理審査で承認され、研究が開始になれば、開心術を受ける患者のリスク予防アドヒアランスの構成要素が抽出され、尺度の項目の信頼性と妥当性の検討を開始する。研究結果、専門家会議を経て作成した開心術術前リスク予防アドヒアランス尺度(案)のワーディングの洗練調査、統計学的項目分析、尺度の信頼性・妥当性の検討を実施予定である。急性期看護学予定していた調査研究が倫理審査結果待ちであること。予定していた尺度の信頼性・妥当性の検討が次年度に実施となったため、それに係る印刷費やデータ処理に対する費用などが未使用となったため。予定している調査研究の旅費やテープおこしなどに使用予定である。次年度、信頼性・妥当性の検討を実施する。
メタボリックシンドローム対象者の皮膚障害に対するスキンケアの開発

本研究は、メタボリックシンドローム(MS)の皮膚障害の実態を把握しメカニズムを解明し科学的根拠のあるスキンケア開発を行うことを目的としている。MSモデルマウスの皮膚組織を解析したところ、真皮の非薄、皮下脂肪が肥厚、コラーゲン線維の変化が観察された。またMS皮膚は潜在的炎症状態であり紫外線に非常に感受性が高いことが明らかになった。そのメカニズムに酸化ストレスの関与が示唆された。スキンケアとして局所および全身に対しての抗酸化療法が有用であることが示唆された。本研究は、生化学的アプローチ法でメタボリックシンドローム(MS)の皮膚障害の実態を把握しメカニズムを解明し科学的根拠のある看護技術の開発を行うことを目的としている。本年度はMSの病態とその皮膚変化を検証した。(アルドステロン濃度測定については、メカニズム解析の次年度に行うこととした。)MSの状態を反映する動物を選択するにあたり、SHR肥満ラットを使用せずTSOD(Tsumura, Suzuki, Obese Diabetes)マウス、そのコントロールとしてTSNO(Tsumura, Suzuki, Non-Obesity)マウスを使用した。TSODマウスにてMS状態の妥当性を体重、血清成分測定、糖負荷試験、CTによる脂肪量測定、血圧測定、疼痛試験から検証した結果、肥満、高血糖、インスリン抵抗性、脂質異常、高血圧、末梢神経障害が12週令において有意に出現した。動物実験ではこの12週令において皮膚障害を検証することとした。12週令TSODマウスの背部皮膚をHE染色で観察したところ、真皮、表皮は非薄であり皮下脂肪が著しく肥厚していた。さらに×200で顕微鏡観察するとコントロールよりTSODマウスのコラーゲン線維の蛇行性の減少、繊維の断裂や密度の低下が観察された。また背部皮膚組織において炎症性細胞浸潤は観察されなかったが、炎症で高値を示すTNFαの遺伝子発現量をRT-PCRで測定したところ、TSODマウスのTNF-αの遺伝子発現は、有意に増加していた。また増加したTNF-αが、組織のどの部位で増加しているかを免疫染色で確認したところ、TSODマウスの表皮部分であった。昨年度はMS皮膚の潜在性炎症所見等の皮膚の実態所見を検証した。本年度は、その潜在性炎症に対するメカニズムを検討するために酸化的ストレス因子の関与について検討した。その結果MS皮膚の酸化ストレス所見が80HdG免疫染色において観察され、外的刺激である紫外線照射により更に著しい所見が観察された。また、皮膚のmRNAを抽出し酸化ストレスマーカであるHO-1,炎症性マーカであるcox2をリアルタイムRT-PCR法にて測定した結果、両方とも有意に増加しており、紫外線照射にてより著しく増加した。抗酸化剤投与にて両マーカとも有意に減少し、皮膚組織の80HdGにおける酸化ストレス所見も減少した。その結果MS皮膚の潜在性炎症は、酸化ストレスが関与することが明らかになった。次にその酸化ストレスは、肥満によるアルドステロン(Ad)増加が皮膚のミネラルコルチコイドレセプター(MR)を介して引き起こしていることを仮説とし検証をした。まずMSマウスの血清Ad濃度をRIA法にて測定した結果、有意に増加していた。またMSマウスのMRの遺伝子発現量が増加しており、AdがMRを介し活性化されるSgk1遺伝子発現量も増加していた。抗MR剤投与にてSgk1遺伝子発現量は減少した。皮膚MRを介して酸化ストレスが減少する経路の存在が確認されたが、抗酸化剤投与でもSgk1の遺伝子発現量は減少した結果から、酸化ストレスによりSgk1活性化を引き起こすフィードバック機構の存在する可能性も考えられた。皮膚MRの組織学的な存在およびAdがMRと結合した場合の核内移行像は次年度確認する必要があると考えている。本研究は、基礎医学的手法にてメタボリックシンドローム(MS)の皮膚障害の実態を把握しメカニズムを解明し科学的根拠のある看護技術開発を行うことを目的としている。2122年度は、肥満皮膚は潜在的炎症状態であり紫外線に非常に感受性が高い実態が明らかになり、その潜在的炎症のメカニズムの1つに酸化ストレスが関与していることを示唆した。肥満の酸化ストレスに関与する血清アルドステロン(Ad)増加および皮膚ミネラルコルチコイド受容体(MR)増加が認められ、また抗酸化薬や抗MR薬の塗布において酸化ストレスが減少した。少なくとも肥満皮膚においては酸化ストレスとMRが関与している可能性が示唆された。本年度は、肥満皮膚の酸化ストレスは、皮膚MRを介して亢進しているかどうかを検討するために組織学的にMRの存在を蛍光免疫染色法を用いて確認した。また肥満によりAdがMRと結合すると核内移行するため共焦点顕微鏡にてMR核内移行像の観察を行った。その結果、肥満皮膚においてMRの存在およびMR核内移行像が確認できた。

これらの事実から、肥満皮膚の酸化ストレスのメカニズムの一部にAd増加から皮膚MRを介した酸化ストレスの亢進が示唆された。次に皮膚の炎症および酸化予防のために皮膚保護技術の開発に着手した。まずは皮膚に対する直接作用をみるために抗酸化塗布剤(1MTemple)および抗MR塗布剤(20%spironolactone)を作製し肥満皮膚に対する抗酸化作用を評価した。両塗布剤共に炎症性マーカCox2および酸化ストレスマーカHmox1の遺伝子発現量が有意に減少、また組織学的検討(HE,80HdG)においても明らかに真皮層の炎症、酸化ストレスの減少が観察された。肥満皮膚は皮下脂肪蓄積から皮膚を酸化させている可能性があるため、食事からでも摂取可能な抗酸化作用のあるビタミンE:αトコフェロール(VE)を再度選択し3か月間内服投与を検討した。その結果、肥満は皮下脂肪でも酸化ストレス(Hmox1)が上昇し皮膚のコラーゲンを分解するMMPs(2,14)の遺伝子発現も上昇していたが、VE3か月間内服投与で皮下脂肪のHmox1,MMPsは有意に減少し皮膚の脆弱性も改善した。
歯科脆性材料の衝撃強度試験法に関する研究

JIS規格での硬質プラスチックの衝撃強さの測定に用いる試験片の寸法は10.0【+-。】0.2mmの厚みで、幅10mmとされている。規格の形態では加熱重合型レンジのように均質になる場合には比較的安定した結果が得られたが、金型に手用器具を使用し充填するようコンポジットレジンでは大きなばらつきが認められた。この原因は試料体積が実際に使用する量に比較してけた違いに大きいため、試料作成時の取り込み、充填不足などで、試料本来の物性とは関係ない部分であると考えられた。また、材料が非常に高価であり試験試料寸法の最小化は急務である。試料を圧縮試験片程度にすることが最終目的であるが、円柱試料では種々の問題があり、厚みを変えた9種類のH字状の試料についてノッチの位置、大きさ、形状について検討を加えた。高さ10mmの中央に厚さ0.33mmの両刃ダイアモンドディスクで深さ0.5mm,1.0mmのノッチを形成した。試料は専用治具で4mm保持し試験に供した。打撃部はノッチより2mm上方とした。H字試料は空隙部の厚みは1mm,2mmの2種とし、深さは片側0.0,0.5,1,1.5,2mm(試料部幅:5,4,3,2mm)試料面積積を変化させた9種の金型を用いて作成した。ノッチ深さ0.5mmでは空隙部厚み1mm,2mmとも、深さ0mm、0.5mmではともに衝撃強さを測定できなかった。測定できた試料では空隙部の厚みの違いによる衝撃強さはほとんど差がなかった。しかし、深さが深いほど衝撃強さは小さくなった。ノッチ深さは1mmではすべての試料で衝撃強さを測定できたが空隙深さが片側1mm以上になると急激に強さが減少した。またJISで行った強度とは多少異なった値が得られるため、歯科用材料には今回の結果をもとにした新しい規格が測定されるべきと考えられる。接着強さと衝撃強さの関係についても考察を加えてみた。JIS規格での硬質プラスチックの衝撃強さの測定に用いる試験片の寸法は10±0.2mmの厚みで、幅は10.0mmが推賞されているが,条件によっては厚みを最低2mm迄薄く出来ると規定されている。これに則り、試料の試験器への装着時の平行性も考慮し厚さ2.5mmの試料を作製し試験を行った。また、試料を把持する部分の影響が出ないようにと、当初はシャルピー型試験機を選択したが、試料を可能な限り小さくするという最大の目的のために、試験機はアイゾット型試験機に変更した。この研究の最終目標は試料体積を圧縮試験片の2倍程度においているが、先ず把持部の寸法を1/2に変更し打撃部は規格どうりの寸法で行った。その後打撃部を短くしたが試験機の制約から25mm迄にしか短縮できなかった。その結果硬化が均一になる加熱重合型レジンの場合は比較的安定した結果を得たが、光重合型コンポジットレジンではバラツキが大きかった。これは試料の充填に長時間要したり、充填時の気泡の巻き込みが影響しているが、把持部の平行性を維持させるために変更しなかった2.5mmの厚みが最も大きく影響したのではないかと考えている。

また重合度が向上した場合(例えば加熱重合を併用した場合)には、衝撃強さは大きく減少し既存の試験機の測定限界に近くなってしまったこともバラツキが大きくなった原因と考えている。衝撃強さが検討されなければならない材料は基本的に脆く、ある程度の体積を備えて実験しなければ安定した結果は得られないと考える。従って試料寸法を小さくするためには試験機の改良、試験試料形態の根本的改良が必要である。試料形態は圧縮試験片と同様の円柱状試料とH字状の試料について寸法を変化させ、ノッチの位置、大きさの影響を検討している。JIS規格での硬質プラスチックの衝撃強さの測定に用いる試験片の寸法は、10.0±0.2mmの厚みで、幅10mmとされている。幅は材料の条件が整えば最低2mmまで薄くすることが可能であるとされている。これに従い試験機装着時の平行性も考慮し、2.5mmの幅で初期の実験を行った。試験機は試料をを可能な限り小さくする目的でシャルピー型試験機からアイゾット型試験機に変更した。規格の形態では加熱重合型レジンのように均質になる場合には比較的安定した結果が得られたが、金型に手用器具を使用し充填するようコンポジットレジンでは大きなばらつきが認められた。この原因は試料体積が実際に使用する量に比較してけた違いに大きいため、試料作成時の気泡の取り込み、充填不足などで、試料本来の物性とは関係ない部分であると考えられた。試料を圧縮試験片程度にすることが最終目標であるが、円柱試料では種々の問題があり、厚みを変えた5種類のH字状の試料についてノッチの位置、大きさ、形状について検討を加えた。試験装置の打撃部の位置の改良で、把持部先端から2mmまで近付けるようになり試料寸法を目的に近い体積にすることができた。H字試料は空隙部の体積を変化させ実験を行っているが最良の形態を決定するには至っていない。また、試料寸法が6×6mmのため破断場所を限定するためのノッチが大きな影響を与え、条件間で有意な差が出ず苦慮したが、現時点ではノッチのおおよその形状、位置は決定できそうである。衝撃強さと破断面との関係について考察を加えている。JIS規格での硬質プラスチックの衝撃強さの測定に用いる試験片の寸法は10.0±0.2mmの厚みで、幅10mmとされている。また、材料が非常に高価であり試験試料寸法の最小化は急務である。試料を圧縮試験片程度にすることが最終目標であるが、円柱試料では種々の問題があり、厚みを変えた9種類のH字状の試料についてノッチの位置、大きさ、形状について検討を加えた。高さ10mmの中央に厚み0.33mmの両刃ダイヤモンドディスクで深さ0.5mm,1.0mmのノッチを形成した。試料は専用治具で4mm保持し試験に供した。打撃部はノッチより2mm上方とした。H字試料は空隙部の厚みは1mm,2mmの2種とし、深さは片側0.0,0.5,1,1.5,2mm(資料部幅:5,4,3,2mm)試料断面積を変化させた9種の金型を用いて作成した。ノッチ深さ0.5mmでは空隙部厚み1mm,2mmとも、深さ0mm,0.5mmではともに衝撃強さを測定できなかった。測定できた試料では空隙部の厚みの違いによる衝撃強さはほとんど差がなかった。しかし、深さが深いほど衝撃強さは小さくなった。ノッチ深さ1mmではすべての試料で衝撃強さを測定できたが空隙深さが片側1mm以上になると急激に強さが減少した。
宿主によって形を変える寄生虫は存在するか？

本研究の目的は生物の宿主と寄生虫の関係で宿主の寄生部位の空間的制限によって寄生虫の形態は可塑的に変化するのかを明らかにすることであった。エビヤドリムシ科とアミヤドリムシ科の各群の形態学的研究により、宿主による空間的制限を受ける寄生虫と制限を受けない寄生虫の群が存在することが明らかとなった。多くの種について形態を精査し、分類学的研究を行うと共に記載を行った。本研究の目的は生物の宿主と寄生虫の関係で宿主の寄生部位の空間的制限によって寄生虫の形態は可塑的に変化するのかを明らかにすることである。具体的にはエビ・カニ類など甲殻類に寄生する等脚目甲殻類ヤドリムシ類を材料に用いて分類学的・系統学的研究の他、飼育実験や行動観察を行う。これまで宿主の種が異なれば種が異なるという先入観により別種とされてきた種が存在するか整理する。初年度は本研究のいくつかの段階の内、採集調査を重点的に行った。特に広島大学附属練習船豊潮丸による調査航海と東京大学三崎臨海実験所、筑波大学下田臨海実験所を拠点とした合同調査で標本を収集した。調査はドレッジ、ソリネットによる底質サンプルの採取により行われた。以上により多くの寄生性等脚類が得られたが、これらについて形態学的な研究を進めており、未記載種と考えられるものが多数得られた。宿主側の寄生される居住空間やヤドリムシ類の形態計測などを行った。いくつかの成果は日本動物分類学会、日本動物学会などで報告を行った。採集調査により多数の標本を得たが、まだ分類学的研究を充分に行えていない。そのためおおむね順調に進展しているとした。これまで宿主の種が異なれば種が異なるという先入観により別種とされてきた種が存在するか確認を行うものである。今年度は主に採集調査と標本調査を行った。広島大学附属練習船豊潮丸による瀬戸内海から南西諸島の調査航海への参加の他、北九州市曽根干潟、島根県隠岐、沖縄県西表島、神奈川県三浦市沿岸などの現地調査を行った。調査はドレッジやスキューバダイビングによる底質サンプルの採集により行われた。宿主側の寄生空間の形態計測やヤドリムシ類の形態観察を行った。また、南西諸島では生きた状態での観察を行った。研究協力者と標本調査を行い寄生性等脚類についての議論を行った。調査中多くの未記載種と考えられる寄生性等脚類と宿主候補の甲殻類が得られたが、これらについて形態学的な研究を進め、それらの内のいくつかは学会や論文にて発表を行った。現在多数の標本を収集し分類学的研究を続けているが、まだ処理が充分に行えていないため、おおむね順調に進展しているとした。最終年度である今年度は不足分の標本の採集調査を行うと共に空間制限に関する考察と議論に時間を割いた。採集調査は広島大学附属練習船豊潮丸による瀬戸内海から南西諸島の調査航海へ参加し、多数のエビヤドリムシ類、アミヤドリムシ類を得た。宿主側の寄生空間の形態計測やエビヤドリムシ類とアミヤドリムシ類の形態観察を行った。研究協力者と標本調査を行い、寄生性等脚類についての議論を行った。特に宿主の閉鎖的な環境(鰓腔内やヤドカリ類に寄生する群では貝殻内など)に寄生する群では寄生虫の宿主側に面する形態は強く制限を受けることが確認できた。一方でアミヤドリムシ類のように宿主の開放的な外部(胸部上や腹部上など)に寄生する群では球形や紡錘形に近い形となり、空間的な制限を受けないことが確認できた。一方で調査中多くの未記載種と考えられる寄生性等脚類と宿主候補の甲殻類が得られた。これらについて形態学的な研究と生活史の解明を進め、それらの内のいくつかは学会や論文にて発表を行った。引き続き採集調査に力を入れるとともに充分な形態観察を行い分類学的研究を進める。沿岸潮間帯の採集調査を行う他、調査船によるドレッジ、ビームトロール、ソリネットを用いた海洋調査を行う。

寄生性等脚類について研究協力者と議論を重ね、研究を共同で行う。未記載種の分類学的研究を継続して行う他、既知種の再検討を開始する。研究は主に解剖と電子顕微鏡観察により行う。引き続き採集調査と標本調査を進め、形態観察を行い分類学的研究を進める。潮間帯で採集調査を行う他、調査船によりドレッジを用いた底質サンプルの採取を行う。寄生性等脚類について飼育実験を開始する他、宿主候補の甲殻類の分類学的研究を行う。分類学主に予定していた研究協力者との研究打合せおよび調査に係る経費を次年度使用額とした。当初の研究計画時から日程調整の上、変更があったためである。概ね予定通り執行したが、いくつかの消耗品物品の購入を当該年度は見送ったため。次年度使用額の多くは当該調査等に充て、翌年度分は当初の計画通り使用予定である。次年度に物品購入に充当し計画どおりに執行する予定である。
抗菌薬による腎障害の分子機序の解明と予防法の検討

多剤耐性菌感染症が問題となっている。バンコマイシンやコリスチンはこれら耐性菌感染症のキードラックだが、その腎毒性のため臨床的な有効性が制限されている。我々は尿細管の膜トランスポーターに注目し、腎障害の分子機序の解析を行った。水晶発振子マイクロバランス法やノックアウトマウスを用いることで腎障害の標的分子としてメガリンが確認された。さらにメガリンリガンド拮抗剤を同定し、その腎障害軽減作用をマウス腎障害モデルで評価している。抗菌薬腎障害の有望な予防薬として期待される。コリスチン及びバンコマイシンの腎臓における標的分子を明らかにし腎障害の機序を解明するとともに、その標的分子阻害物質を探索し薬剤性腎障害軽減を図ることが本研究の目的である。平成25年度の研究実績としては、まず分子間結合解析を水晶発振子マイクロバランス法を用いて行った。その結果、コリスチン、バンコマイシンがメガリンリガンドであることが明らかとなった。さらにシラスタチンにおいてもメガリンとの結合が認められ、有力なメガリンリガンド拮抗物質候補と考えられた。ポリミキシンB(既知のメガリンリガンド)、ゲンタマイシン(既知のメガリンリガンド)、コリスチン、バンコマイシン、それぞれに対して、シラスタチンによりメガリンとの結合阻害がみられることも明らかとなっている。続けてApoE-creメガリンKOマウスを用いて、メガリンとコリスチンによる近位尿細管細胞障害の関連を解析したところ、コリスチン投与によりメガリン発現部位に一致して近位尿細管細胞障害が認められた。コリスチンによる腎障害がメガリン依存性であることが明確に示されたものと考える。さらに、動物実験モデルでメガリンリガンド拮抗物質と考えられるシラスタチンの腎障害軽減効果を評価している。予備実験で行ったラットでのコリスチン腎障害モデルにおいて、シラスタチン投与による腎障害軽減作用が認められたため、C57BL/6を用いてバンコマイシン、ゲンタマイシンについても、シラスタチンの腎障害軽減作用を評価している。これらの結果を受け、メガリンリガンド拮抗剤として特許出願中である。本研究の目的は、コリスチン及びバンコマイシンの腎臓における標的分子を明らかにし薬剤性腎障害の機序を解明するとともに、その標的分子阻害物質を探索し、腎障害の新しい予防法/治療法及び検査法を開発することである。1)分子間結合解析を水晶発振子マイクロバランス法を用いて行った。膜トランスポーターについて解析すると、近位尿細管のスカベンジャー蛋白であるメガリンと、コリスチン・バンコマイシンの結合が認められた。さらにシラスタチンにおいてもメガリンとの結合が認められ、シラスタチンとゲンタマイシン(既知のメガリンリガンド)・コリスチン・バンコマイシンとの間でメガリンに対する競合阻害が生じることが明らかとなった。シラスタチンはメガリンリガンド拮抗物質と考えられた。2)腎特異的モザイク型メガリンKOマウス(ApoE-cre)を用いてコリスチンによる腎障害を解析したところ、メガリン発現部位に一致した近位尿細管細胞障害が認められた。さらに野生型マウス(C57BL/6)においてコリスチン腎障害モデルを作成。シラスタチン同時投与を行うと、コリスチンによる腎障害がシラスタチン投与で軽減されることが明らかとなった。メガリンを介する新規の腎障害抑制薬として期待される。3)臨床症例において、バンコマイシンとイミペネム/シラスタチン併用例とバンコマイシン単独使用例を後方視的に解析すると、併用例で腎機能増悪が低いことが示された。また、薬剤性腎障害例において尿中メガリンの測定が有効である可能性が示唆された。薬剤性腎障害における尿中メガリン測定とシラスタチン投与の有効性の解析目的に前向き研究を開始している。尚、シラスタチンについては、メガリンリガンド拮抗剤として国内特許出願(出願番号2014-011530)、国際特許出願を行った(PCT/JP2015/51718)。感染症薬剤負荷による近位尿細管上皮細胞毒性評価について、ラット近位尿細管細胞由来IRPT細胞を用いて予備実験を進めたところ、バンコマイシンやコリスチンの毒性評価について適切な培養細胞系でない可能性が示唆されたため、MPROX細胞など細胞系を変更しての予備実験が必要となっている。in-vitroでの薬剤の近位尿細管細胞毒性評価について進捗に遅れがみられている一方で、腎特異的メガリンノックアウトマウスを用いて薬剤性腎障害とメガリンとの関連の解析に着手しており、in-vivoの実験系については順調な進捗といえる。水晶発振子マイクロバランス法を用いたメガリンリガンド拮抗薬の候補物質の探索においては、シラスタチンで前向きな結果が得られており、計画以上の進展と判断した。総じてわずかに遅れがみられると判断。本研究の推進方策に関しては、当初の計画通り研究計画調書に従う予定としている。

全体として概ね順調な進捗といえるが、上述のようにin-vitroでの細胞障害実験において遅れが認められ、予備実験終了後培養細胞実験を引き続き行っていく方針である。水晶発振子マイクロバランス法を用いたメガリン結合実験は順調であり、有望なメガリンリガンド拮抗物質と考えられるシラスタチンによる実験を進めるとともに、他の標的物質に対する実験を行っていく。既にコリスチン腎障害モデルで進行している腎特異的メガリンノックアウトマウスを用いた実験については、ゲンタマイシン、バンコマイシンにおいてさらに同様の解析を行っていく。C57BL/6を用いてメガリンリガンド拮抗物質投与による薬剤性腎障害の軽減効果を、組織による形態変化・尿中尿細管障害マーカー・血清腎障害マーカーを解析することで評価していく。メガリンリガンド拮抗候補物質により、コリスチン・ゲンタマイシン・バンコマイシンそれぞれの抗菌力に変化が生じないか、同時投与による抗菌薬の最小発育阻止濃度測定など行うことで評価していく予定。ラット由来近位尿細管上皮細胞を用いて、薬剤負荷による細胞障害実験を計画し予算計上していた。しかし、予備実験で同細胞による実験系ではコリスチン及びバンコマイシンの細胞障害評価の妥当性が得られず、最適な細胞系を選択するために予備実験を繰り返すこととなった。現在MPROXなど複数の細胞を用いて予備実験を繰り返している段階で、本実験に移れていないことが、当該助成金が生じた一因となっている。また、成果発表等のための旅費等の予算計上も行っていたが、特許出願を行った関係で報告を自粛したため、それに伴う当該助成金が生じたものと思われる。実験計画に大きな相違はないため、当初の予定通り実験を進めていく方針。薬剤負荷による近位尿細管上皮細胞毒性評価に関しては、細胞系を変更の上でSiRNAを用いてメガリンノックダウン細胞も使用し細胞毒性とメガリンの関連を検討する。またメガリンリガンド拮抗剤と考えられる標的物質を用いて、細胞毒性の軽減実験を行う。腎特異的メガリンノックアウトマウスを用いて抗菌薬による薬剤性腎障害とメガリンとの関連を解析する。またメガリンリガンド拮抗薬と考えられる標的物質の効果については、C57/B6を用いた腎障害マウスモデルにおいて、標的物質による腎障害軽減作用を分析する。メガリンリガンド拮抗物質の探索については、水晶発振子マイクロバランス法を用いた解析を継続する。
『臨済録抄』諸本の目録作成と国語学的研究

本研究は,仏書抄物についての研究の一環として,『臨済録抄』の諸本を発掘・整備し,その日本語研究資料としての有効性を解明しようとしたものである。1.発掘・整備(1)未調査ならびに調査不十分の『臨済録抄』を調査し,複写を入手して,その目録を作成した。(2)調査できた『臨済録抄』は,大応派系抄(大徳寺系抄・妙心寺系抄)・傍流系抄・五山系抄の3類4種に類別することができた。(3)これを『碧巖録抄』の場合と比較すると,大応派系抄が多い点は共通しており,洞門系抄が存しない点が『碧巖録抄』と大きく異なっている。『臨済録抄』に洞門系抄が伝存しない理由は今のところ明らかでない。(4)大徳寺系『臨済録抄』諸本,a尊経閣本系,b足利学校本系,松ケ岡本系,d駒沢大本系,e叡山本系の5種の本を比較して,13世紀の大応国師にはじまり,15世紀の実伝宗真によってまとめられ,17世紀の沢庵宗彭にまで継承展開されていく抄物本文を分析し,その重層性を具体的に把捉した。2.日本語研究資料としての有効性(1)従来国語資料として利用されてきた抄物は五山派の僧の手になる経・史・子・集部の抄物であったが,本研究によって,大応派の僧による多数の仏書の抄物を日本語研究資料として活用し得るようになった。(2)『臨済録抄』の抄物は当時の俗語を多く用い,方言(信州方言)に言及するところもあるので,特に語詞・語〓研究資料として有効である。
ゲニステインを応用した多剤耐性克服剤の開発と新規化学療法システムの構築

本研究では安全な耐性克服剤の第一候補化合物として、単独でも抗腫瘍効果を有しかつ健康増進にも益するゲニステインを耐性克服剤の原料として使用することに着目した。ゲニステインは、大豆製品に高濃度に含まれる化合物であり、安全性とかつ健康増進剤としての有効性は広く認識されている。また、アポトーシス誘導作用や細胞増殖抑制作用および血管新生阻害作用を有し、乳癌や前立腺癌,胃癌の予防に有効である。ゲニステインのP-gp,MRP阻害活性を検討するとともに、ラットを用い、ゲニステインの体内動態を精査した。さらに、耐性克服剤としての活性をさらに増強する目的で、ゲニステインにメチル化修飾を施し、P-gp阻害活性の増強を種々試みたが、化学的修飾により水溶性低下をきたす事などから、目的とする化合物を得るには至らなかった。関連する研究として、クルクミン類、グアバやツルダチスズメナスビのエタノール抽出物を用い、そのP-gp阻害活性を、Caco-2細胞やラット消化管を用い検討したところ、前2者は、強いP-gp阻害活性を示すことを明らかにした。また、大黄抽出物のP-gp機能に及ぼす影響についてラット消化管で検討し、通常投与量の大黄によりP-gp基質薬物の消化管吸収は増大しP-gp機能が抑制されることを認めた。また、バンウコン根茎抽出物のP-gp機能阻害効果を培養細胞で検討し、フェノール基がメトキシ基になっているフラボン化合物が特に強い阻害活性を示すことを明らかにした。多剤耐性の機構として、P-glycoprotein(P-gp)、MRP、あるいはBCRPなどのATP依存的な異物排出ポンプの発現誘導が考えられている。本研究では、これら異物排出ポンプの克服剤(阻害剤)を天然植物から探索するとともに、化学的修飾を加えその効果を増強し、より有効でかつ安全な多剤耐性克服剤を創成することを目的にしており、関連する研究において、以下の知見を得た。1)クルクミン類、グアバやツルダチスズメナスビのエタノール抽出物を用い、そのP-gp阻害活性を、Caco-2細胞やラット消化管を用い検討したところ、前2者は、強いP-gp阻害活性を示すことを明らかにした(Junyaprasert et al.,Phytother Res.,20,79-81(2006))。3)大黄抽出物のP-gp機能に及ぼす影響についてラット消化管で検討し、通常投与量の大黄によりP-gp基質薬物の消化管吸収は増大しP-gp機能が抑制されることを示した(投稿論文準備中)。これ等の知見に基づき、現在ダイズイソフラボンであるゲニステインのメトキシ化誘導体を新規に合成し、そのP-gp阻害活性等について検討中である。多剤耐性の機構として,P-glycoprotein(P-gp),MRP,あるいはBCRPなどのATP依存的な異物排出ポンプの発現誘導が考えられている。本研究では,これら異物排出ポンプの克服剤(阻害剤)を天然植物から探索するとともに,化学的修飾を加えその効果を増強し,より有効でかつ安全な多剤耐性克服剤を創成することを目的にしており,関連する研究において,以下の知見を得た。1)クルクミン類,グアバやツルダチスズメナスビのエタノール抽出物を用い,そのP-gp阻害活性を,Caco-2細胞やラット消化管を用い検討したところ,前2者は,強いP-gp阻害活性を示すことを明らかにした(Junyaprasert, et. al.,Phytother Res.,20,79-81(2006))。2)バンウコン根茎抽出物のP-gp機能阻害効果を培養細胞で検討し,フェノール基がメトキシ基になっているフラボン化合物が特に強い阻害活性を示すことを明らかにした(Patanasethanont, et. al.,J Pharmsci.,96,223-233(2007)。これ等の知見に基づき,ダイズイソフラボンであるゲニステインのメトキシ化誘導体を新規に合成し,そのP-gp阻害活性等について検討したが,溶解度が極端に減少してしまうなど,さらなる検討が必要である。

3)関連する研究として,消化管にはP-gpなど異物排出ポンプが発現しているにも関わらず,何故消化管から多くのP-gp基質が吸収されるのか,あるいは臨床的にも経口投与で有効なのかについて検討した結果,そのような薬物の場合,P-gpが殆ど発現していない消化管上部から吸収されていることが明らかとなった。(Mori, et.al.,Pharmazie,in press.2008)。
慢性関節リウマチの新しい遺伝的素因の同定-慢性関節リウマチ発症および進行における可溶性FcγレセプターIIIの関与-

慢性関節リウマチ(RA)患者のFcγRIIIBBのgenotypeをPCR法で同定したところ、NA(1+2-):49例(42.6%),(1+2+):59例(51.3%),(1-2+):7例(6.1%)と健常日本人の分布(NA(1+2-):29.2%,(1+2+):62.9%,(1-2+):7.9%)と比してNA1型の優勢を認めた。しかし、それぞれのタイプ間でのStageやリウマトイド因子等の測定値に有為な差は認められず、NAタイプがRA発症には関与するが、その病態の進行には影響しないものと考えられた。また、対照として検索したFcγRIIAでは、H/H131:83例(71.6%),H/R^<131>:32例(27.6%),R/R^<131>:1例(0.9%)と健常日本人の分布(H/H^<131>:61.6%,H/R^<131>:36.1%,R/R^<131>:2.4%)と有為な差は認められなかった。さらに、FcγRIIIAでも、F/F^<158>:21例(18.1%),F/V^<158>:85例(73.3%),V/V^<158>:10例(8.6%)と健常日本人の分布(F/F^<158>:10。8%),F/V^<158>:82.9%,V/V^<158>:6.3%)と有為な差は認められなかった。一方、自己免疫性好中球減少症では、FcγRIIIBのタイプは14例中11例がNA(1+2-),残り3例がNA(1+2+)であった。またFcγRIIAは、13例がH/H^<131>で、1例のみH/R^<131>であったことから、FcγRの発現型が好中球特異的自己抗体の生成に何らかの影響を与えている可能性が示された。骨関節炎症では、FcγRIIIAのタイプが、F/F^<158>:10例(25.0%),F/V^<158>:28例(70.0%),V/V^<158>:2例(5.0%)と健常日本人の分布と比してF/F^<158>型の優勢を認めた。他は、NA(1+2-):7例(17.5%),(1+2+):27例(67.5%),(1-2+):6例(15.0%)およびH/H^<131>:27例(67.5%),H/R^<131>:13例(32.5%),R/R^<131>:0例(0%)と健常日本人の分布と有為な差は認められなかった。FcγRIIIaの発現型が、骨関節炎症の発症,進展に何らかの影響を与えている可能性が示された。動脈硬化症では、CAD患者のFcγkのgenotypeをPCR法で同定したところ、FcγRIIIB-NA1タイプでは健常日本人の分布と比してFcγRIIIA-F^<158>タイプの劣勢を認めた。さらに、FcγRIIIA-F/F^<158>群の方がF/V^<158>群よりも、冠動脈の有意狭窄数が少なかった。FcγRIIIaならびにIIIbの発現型が、動脈硬化症の発症,進展に何らかの影響を与えている可能性が示された。FcγRIIIBのgenotypeをPCR法で同定したところ、正常者ではNA(1+2-)が104例(23.9%)、(1+2+)が268例(61.5%)、(1-2+)が64例(14.7%)であったのに対し、RA患者ではそれぞれ55例(41.0%)、66例(49.3%)、13例(9.7%)と、NAl型の優勢が認められた。さらに、NA(1-2+)では、Stage 1,2の患者が多いのに比べ、NAl型では、Stageの進行した患者が優勢であった。一方、OA患者ではそれぞれ6例(24.0%)、14例(56.0%)、5例(20.0%)と、NA2型の優勢傾向が認められ、何等かの遺伝的関与が示唆された。FcγRIIIAのgenotypeは、測定した全例が標準型の48-Lであった。FcγRIIAのgenotypeは、正常者では131(H+R-)が230例(61.3%)、(H+R+)が138例(36.8%)、(H-R+)が7例(1.9%)であったのに対し、RA患者ではそれぞれ98例(72.6%)、36例(26.7%)、1例(0.7%)と、131-H型の優勢が認められた。また、OA患者でもそれぞれ19例(76.0%)、6例(24.0%)、0例と、131-H型の優勢傾向が認められ、何等かの遺伝的関与が示唆された。現在、FcγRIIA、IIIAのgenotypeの同定の為のPCR法を検討中である。

さらに、例数を増やすとともに、RA患者の追跡調査、HLA-DRとの比較ならびに自己免疫疾患の対象としてSLE患者でも測定する予定である。慢性関節リウマチ(RA)患者のFcγRIIIBBのgenotypeをPCR法で同定したところ、NA(1+2-):49例(42.6%),(1+2+):59例(51.3%),(1-2+):7例(6.1%)と健常日本人の分布(NA(1+2-):29.2%,(1+2+):62.9%,(1-2+):7.9%)と比してNA1型の優勢を認めた。しかし、それぞれのタイプ間でのStageやリウマトイド因子等の測定値に有為な差は認められず、NAタイプがRA発症には関与するが、その病態の進行には影響しないものと考えられた。また、対照として検索したFcγRIIAでは、H/H131:83例(71.6%),H/R^<131>:32例(27.6%),R/R^<131>:1例(0.9%)と健常日本人の分布(H/H^<131>:61.6%,H/R^<131>:36.1%,R/R^<131>:2.4%)と有為な差は認められなかった。さらに、FcγRIIIAでも、F/F^<158>:21例(18.1%),F/V^<158>:85例(73.3%),V/V^<158>:10例(8.6%)と健常日本人の分布(F/F^<158>:10。8%),F/V^<158>:82.9%,V/V^<158>:6.3%)と有為な差は認められなかった。一方、自己免疫性好中球減少症では、FcγRIIIBのタイプは14例中11例がNA(1+2-),残り3例がNA(1+2+)であった。またFcγRIIAは、13例がH/H^<131>で、1例のみH/R^<131>であったことから、FcγRの発現型が好中球特異的自己抗体の生成に何らかの影響を与えている可能性が示された。骨関節炎症では、FcγRIIIAのタイプが、F/F^<158>:10例(25.0%),F/V^<158>:28例(70.0%),V/V^<158>:2例(5.0%)と健常日本人の分布と比してF/F^<158>型の優勢を認めた。他は、NA(1+2-):7例(17.5%),(1+2+):27例(67.5%),(1-2+):6例(15.0%)およびH/H^<131>:27例(67.5%),H/R^<131>:13例(32.5%),R/R^<131>:0例(0%)と健常日本人の分布と有為な差は認められなかった。FcγRIIIaの発現型が、骨関節炎症の発症,進展に何らかの影響を与えている可能性が示された。動脈硬化症では、CAD患者のFcγkのgenotypeをPCR法で同定したところ、FcγRIIIB-NA1タイプでは健常日本人の分布と比してFcγRIIIA-F^<158>タイプの劣勢を認めた。さらに、FcγRIIIA-F/F^<158>群の方がF/V^<158>群よりも、冠動脈の有意狭窄数が少なかった。FcγRIIIaならびにIIIbの発現型が、動脈硬化症の発症,進展に何らかの影響を与えている可能性が示された。慢性関節リウマチ(RA)患者のFcγRIIIBのgenotypeをPCR法で同定したところ、NA(1+2-):55例(43.0%),(1+2+):62例(48.4%),(1-2+):11例(8.6%)と正常日本人の分布(NA(1+2-):23.9%,(1+2+):61.5%,(1-2+):14.7%)と比してNA1型の優勢を認めた。また、対照として検索したFcγRIIAでは、H/H^<131>:91例(71.7%),H/R^<131>:35例(27.6%),R/R^<131>:1例(0.8%)と正常日本人の分布(H/H^<131>:61.3%,H/R^<131>:36.8%,R/R^<131>:1.9%)と有為な差は認められなかった。

一方、自己免疫性好中球減少症では、FcγRIIIBのタイプは14例中11例がNA(1+2-),残り3例がNA(1+2+)であった。またFcγRIIAは、13例がH/H^<131>で、1例のみH/R^<131>であったことから、FcγRの発現型が好中球特異的自己抗体の生成に何らかの影響を与えている可能性が示された。骨関節炎症では、NA(1+2-):7例(17.9%),(1+2+):26例(66.7%),(1-2+):6例(15.4%)とNA2型の優勢傾向が認められた。
シグナル伝達と細胞骨格形成の接点

CAPタンパク質は出芽酵母及び分裂酵母においてはアデニル酸シクラーゼ結合タンパク質として、ブタにおいてはアクチン結合タンパク質として同定された。これまでに分裂酵母のcap変異株は高温で生育することが不能であり、出芽酵母のcap変異株は異常形態、高温感受性、栄養源による増殖感受性等の性質を示すことが判っている。ヒトcap遺伝子をすでにクローニングすることに成功しているが、それを酵母内で発現させ、cap変異株の性質を回復させる領域を決定した。その結果CAPタンパク質C末端にその領域が見出された。タンパク質の相互作用を調べるすぐれた系として知られるツ-ハイブリド系を用い、分裂酵母のCAPと結合するタンパク質の同定を行った。その結果アクチンの遺伝子とともにSH3ドメインを有するタンパク質遺伝子がスクリーニングの結果単離された。この遺伝子をcsh3と命名し、解析を行った。csh3破壊株は生育に必須ではなかったが、csh3とcapとの共発現は細胞の増殖に影響を及ぼした。これらのことは分裂酵母のCAPもアクチン結合タンパク質として、またSH3タンパク質と相互作用を持つタンパク質としての機能があると考えられた。キノコ類からのCAPホモログ遺伝子の単離をPCR法によって試みた。その結果、シイタケよりCAPホモログ遺伝子を単離することができた。さらにゲノムからCAP遺伝子もクローン化し、イントロンが8カ所あることが判明した。シイタケのCAP遺伝子を酵母内で発現させたところ良く機能し、酵母の高温感受性、異常形態などの性質を相補しCAPの進化的な機能的な保存性が明らかとなった。CAPタンパク質は酵母においてはアデニル酸シクラーゼ結合タンパク質として、ブタにおいてはアクチン結合タンパク質として同定された。これらの性質を用い、ヒトcap遺伝子を酵母内で発現させ、cap変異株の性質を回復させる領域を決定した。その結果アクチンの遺伝子がスクリーニングの結果単離された。このことは分裂酵母のCAPもアクチン結合タンパク質としての機能を持つと考えられる。植物あるいはキノコ類からのCAPホモログ遺伝子の単離をPCR法によって試みた。その結果、高等植物よりはクローニングに成功しなかったが、シイタケよりCAPホモログ遺伝子を単離することができた。シイタケのCAP遺伝子を酵母内で発現させたところ良く機能し、酵母の高温感受性、異常形態などの性質を相補しCAPの進化的な機能的な保存性が明らかとなた。しかしながらCAPのアデニル酸シクラーゼ結合タンパク質としての性質はあまり保存されていないという結果を得た。これらのことは分裂酵母のCAPもアクチン結合タンパク質として,またSH3タンパク質と相互作用を持つタンパク質としての機能があると考えられた。

キノコ類からのCAPホモログ遺伝子の単離をPCR法によって試みた。その結果、シイタケよりCAPホモログ遺伝子を単離することができた。さらにゲノムからCAP遺伝子もクローン化し、イントロンが8カ所あることが判明した。シイタケのCAP遺伝子を酵母内で発現させたところ良く機能し、酵母の高温感受性、異常形態などの性質を相補しCAPの進化的な機能的な保存性が明らかとなった。
進化の理解に基づいた「生物の共通性と多様性」の見方ができる教員の養成に関する研究

「共通性と多様性」は生物を包括的にとらえる視点であり、生物学を学ぶ際に最も大切な見方として、次期学習指導要領における生物教育においてはより一層重視される。この視点を養成するには進化の理解が必要となるが、国内において現職教員や教員養成課程の大学生の進化の認識状況は調査されていない。よって本研究は、現職教員および教員養成課程の大学生の進化(系統分類学を含む)に関する認識、およびその認識が「共通性と多様性の視点」を重視した授業の展開に繋がるかを明らかにすることを目的とする。進化に関する認識や進化の受容が進化以外の単元の授業に与える影響についてはこれまでほとんど調べられておらず、国際的にも価値がある。
アリストテレスの「エネルゲイア」概念の形而上学における現代的意義の研究

本研究は、二度にわたる科学研究費補助金に基づく「エネルゲイア」概念の「行為論」「心の哲学」における意義の研究を承けて、宇宙論・目的論的場面でのエネルゲイアの「形而上学」における意義を検討するものとして企図されたが、その前段階としての、「感覚」というエネルゲイアと「思惟」というエネルゲイアの狭間にある広い意味での「表象」、なかでも「感情」、そして行為において「徳性」の問題として語られる「性向」の存在論(形而上学)的意義を検討することになった。前段階としての「性向」を改めて検討することになった理由は、アリストテレスの「エネルゲイア」概念は、それによって何ごとかを説明するための概念というよりも、説明を「そこで打ち切る」ための概念枠組みといったところがあることにある。言い換えれば、ある意味ではすでに何度か指摘したことだが、それぞれのものがそのエネルゲイアに辿りつくことが「変化」ではなく、当のものの「固有のあり方」のいわば「回復」として構想されているため、「エネルゲイア」についての実質的な議論は「性向」の成立を論ずる中でなされていることである。今回検討した記憶・感情・中庸としての徳性についてのアリストテレスの議論は、現代的な言い方をすれば、その「自然科学的」基盤について綿密に確認した上で、自然科学的な法則性とは必ずしも相性のよくはない「規範性」について、広い意味での「自然主義的」位置づけを何とか試みようとしているということになる。今回踏み込まなかった宇宙論・目的論的場面におけるエネルゲイア論は、性向論を前提として、ある意味で、まさに変化のない場面でのエネルゲイアが問題となっている。この領域でのエネルゲイア概念の「形而上学」的な意義の検討については、製成19年度からの「アリストテレスの「エネルゲイア」概念の形而上学における現代的意義の研究II」で行う予定である。本年度は、一方で、以前の二度にわたる科研費研究において行った行為や心の哲学における「エネルゲイア」概念についての研究成果を、議論のレベルをできるだけ落とすことなく一般向けに簡明に纏めた『アリストテレス--何が人間の行為を説明するのか?』の執筆を通じて、「エネルゲイア」概念の形而上学における意義を論ずるための整理を改めて行ないながら、他方で、「エネルゲイア」概念の形而上学的意義の分析に重要な意味を持つと考えられる「ヘクシス(性向)」概念をさらに明らかにするために、これまで部分的にしか検討してこなかった『政治学』における人間のあり方(性向)の形成における「教育」の意義を論じたテクストの文献学的基礎分析を行った。こうした一連の研究において特に注意したのは、人間の行為と性向の形成の説明において「善」概念が占める位置について、それが、主観的に欲求されるものというだけでなく、何らか客観的に認識されるものであるとされているように見えることから、さらに「アリストテレス」が宇宙論的目的論を何らか構想していたのかどうかという「哲学史」的な問題と、宇宙論的目的論が実際現現代において何らか有意義でありうるのかとういう「哲学」的問題とを、混同することなく、しかし、一方に偏することなく考えることである(来年度は、この作業を本格的に進めることになる)。また、本研究に間接的に関わる研究として、『岩波応用倫理学講義7問い』を編集し、その総論部分(160枚)において「エネルゲイア」概念の行為と心の哲学の現代における展開を、科学技術の展開などによってもたらされた現代における緊急の倫理学的問題との関わりから論じた。昨年度は『アリストテレス-何が人間の行為を説明するのか?』