hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
心筋細胞間接着を基点とする新しいAMPKのバイオロジー

本研究では、心筋細胞同士の接着部に、従来代謝制御において中心的役割をはたすリン酸化酵素AMPKが局在することを見いだし、その特異的な基質の同定、さらに微小管ダイナミクスの制御をになうことを解明した。またそのリン酸化酵素の活性制御は、心筋細胞が常にさらされている力学的負荷がトリガーとなることを世界に先駆けて明らかにした。AMPKが心臓において介在板に局在することを見出し、介在板におけるAMPKの基質の探索をおこない、CLIP170および新規膜タンパク質(AIPID; AMPK interacting protein at the intercalated disc)を基質として同定した。さらに、そのリン酸化部位を同定し、ウェスタンブロット、免疫染色が可能なリン酸化部位特異的な抗体の作成に成功した。CLIP-170についてはリン酸化部位に変異を加えたS311AあるいはWTのcDNAにEGFPを付加した融合タンパクを心筋で発現させ、AMPKの活性に修飾を加えた状態でタイムラプス観察し、ジャンクション分子の輸送について、当初の計画書の予定通り進行している。またAMPKによるリン酸化の役割を生体で検討するために、CLIP-170のリン酸化部位に変異を加えたS311A,あるいはWTをloxPではさんだコンストラクトを、タモキシフェン誘導下で心筋特異的に発現するトランスジェニックマウスを作成、おのおの2ライン樹立した。これにより成獣マウスにおいて、介在板におけるCLIP-170リン酸化の調節(阻害あるいは増幅)を心臓特異的、時期特異的に行うことが可能となる。タモキシフェンによるトランスジーンの発現を確認したのち、介在板におけるAMPKの活性化が十分に上昇した8週以降の成獣マウスにおいて変異タンパクの発現を誘導し、in vivoでAMPKの介在板におけるシグナルを修飾することの効果をエコーによる心機能で評価し、心機能に有意な変化を認めた。計画通りに進展している本研究では、介在板から発信される恒常的なAMPKシグナルおよび病態によるその変容を解明し、心筋細胞間接着を基点とする新しいAMPKのバイオロジーを明らかにすることを目標とする。2015年度には介在板におけるAMPKの基質の探索をおこない、CLIP170および新規膜タンパク質(AIPID)を基質として同定した。2016年度は15年度に同定したCLIP170のリン酸化の意義の検討をすすめた。CLIP-170についてはEGFPを付加した融合タンパクを心筋細胞で発現させ、心筋細胞における微小管の動きをリアルタイムに観察したところ、心筋細胞において長端側ではなく、介在板に方向性をもってすすむ微小管の動きを観察することができた。さらにAMPKの阻害薬であるCompound C処理により、微小管伸長速度の低下と微小管プラス端に集積するCLIP170のcomet長の有意な増加を認めた。CLIP-170のリン酸化部位に変異を加えたS311A mutantの発現により同様の変化が認められ、AMPKによるCLIP-170の311番目のセリン残基のリン酸化の重要性を証明した。またAMPKによるリン酸化の役割を生体で検討するために、CLIP-170のリン酸化部位に変異を加えたS311AをloxPではさんだコンストラクトを、タモキシフェン誘導下で心筋特異的に発現するトランスジェニックマウスを作成した。S311ATGマウスは、有意な線維化と心収縮力の低下を認めた。さらにドキソルビシン負荷心不全モデルを作成したところ、S311A TGマウスではコントロールに比べさらなる心機能の悪化を認めた。これは心臓において微小管のdynamic instabilityの制御が恒常性維持に必須であり、その破たんが心機能異常を引き起こし、病態生理学的にも重要であることを示唆する。(研究実績の概要)にあげたCLIP-170の機能解析に加え、新規に発見した介在板におけるAMPKの新規基質であるAIPIDに関しても進展があった。2015年度にはAMPKによるリン酸化部位を同定し、ウェスタンブロット、免疫染色が可能なリン酸化部位特異的な抗体の作成に成功した。まったく既報のない機能未知の分子であったため、2016年度には機能解析のため結合タンパクの同定をこころみたところ、分子Aを同定し、結合をin vitroで確認した。本研究では、介在板から発信される恒常的なAMPKシグナルおよび病態によるその変容を解明し、心筋細胞間接着を基点とする新しいAMPKのバイオロジーを明らかにすることを目標としている。2017年度には本研究で見いだした、介在板におけるAMPKの基質であるCLIP170のIn vivoにおける微小管のdynamic instability制御の意義をすすめた。AMPKによるリン酸化を受けないCLIP S311A mutant心臓特異的強制発現TGマウスを用いて、抗がん剤として広く使われ副作用に心毒性を持つドキソルビシンの投与による病態モデルを作製した。ドキソルビシンを投与したCLIP S311Amutantマウスでは、Controlに比べてさらなる心機能の悪化がみられた。さらに、ドキソルビシンを投与したCLIP S311Amutantマウスでは、心機能の低下だけでなく、線維化を伴う組織変性も認め、微小管のdynamic instability制御障害が心不全発症機序の一因となる可能性を示した。これまで示した心臓におけるAMPK活性は代謝系とは独立に高く維持されており、これまで知られているエネルギー枯渇状態での活性化とは異なる制御が想定された。

心筋細胞は心臓自体の拍動というメカノストレスを常時受けていること、AMPKが局在する介在板は心臓でのメカノセンシングの場であることから、心臓でのAMPK活性がメカノストレスにより制御されているという仮説を立てた。そこで拍動阻害剤により拍動を抑制した新生仔ラット心筋細胞において、介在板でのAMPK活性および局在が心筋拍動によるメカノストレスによって制御されていることを見いだした。従来予想されていた心臓でのAMPK活性のまったく新しい調節機構の発見であり、今後の発展が期待できるものである。本研究では、心筋細胞同士の接着部に、従来代謝制御において中心的役割をはたすリン酸化酵素AMPKが局在することを見いだし、その特異的な基質の同定、さらに微小管ダイナミクスの制御をになうことを解明した。またそのリン酸化酵素の活性制御は、心筋細胞が常にさらされている力学的負荷がトリガーとなることを世界に先駆けて明らかにした。心筋細胞における微小管輸送に対してAMPK活性の変化および局在を操作し検討を進める予定である。またトランスジェニックマウスについてはS311Aミュータントが安静時において心機能に有意な差をみとめており、今後心電図、ジャンクション分子の免疫組織染色および電子顕微鏡観察によりさらに詳細な解析を行う予定である。さらに病態モデルを作成し、病態生理学的な意義についても検討を加える。心筋細胞における微小管輸送に対してAMPK活性の変化および局在を操作し検討を進める。またS311ATGマウスが心機能に有意な差をみとめており、今後心電図、ジャンクション分子の免疫組織染色および電子顕微鏡観察によりさらに詳細な解析を行う予定である。またCLIP170の恒常的活性化型mutantであるS311D TGをすでに作成しており、in vivoにおけるCLIP-170のリン酸化レベル調節の重要性について検討する。また2017年度には各細胞内分画におけるAMPK活性のバイオセンサーを心筋細胞に導入し、その活性化のトリガー因子を検索する予定である。医化学基質の同定、リン酸化部位の同定、抗体作成、トランスジェニック作成が予定通り進行し、予定していた予備実験がすくなくすみ、また試薬も安く購入できたため差額が生じた。また成果の発表のタイミングが次年度のほうが適しており、学会出張を控えたため、旅費が当初の予定より少なかった。トランスジェニックマウスを使用した実験が予定通り進行し、予定していた予備実験がすくなくすみ、また試薬も安く購入できたため差額が生じた。次年度は心筋培養系の実験、およびトランスジェニックマウスを用いた実験も当初の予定より検討する条件数を増やし、より詳細な検討をくわえていく。次年度は複数回の学会出張を予定している。次年度は心筋培養系の実験を当初の予定より検討する条件数を増やし、より詳細な検討をくわえていく。また成果の発表のタイミングが次年度のほうが適しており、学会出張を計画している。
副作用情報の共有及びフィジカルアセスメントの技術向上の為の症例体験システムの構築

本研究では、副作用情報の共有およびフィジカルアセスメントの技術向上の為の症例体験システムの構築を目指している。最終年度も情報収集を目的に研修会や学会に出席し、ICTを活用したe-ラーニングシステムについて情報を収集した。また、薬剤師が実際に体験した副作用情報を共有できる情報収集システムに関するホームページを公開した結果、2症例を収集した。さらに、それらの公開を目的とした専用ホームページを立ち上げた。(1)症例体験システムの構築を行うための情報収集:様々な研修会や学会に出席し、専門家や教員との意見交換を行った。それにより具体的な構想を練ることが出来た。(2)薬剤師が実際に体験した副作用情報の共有を目的とした症例収集:専用ホームページ(https://telemedica.jp/tokunaga)上からダウンロード可能にしている症例情報用紙に記入された2症例を収集した。内容はフィジカルアセスメントに関する約30個の項目からなった。これらはPBLメーカー(株式会社テレメディカ)を使用して、時系列を再現したステップ毎に入力を行った。(3)情報収集システムおよび実際に収集した症例の公開を目的とした専用ホームページの作製:情報収集システム、実際に収集した症例情報の公開およびこれまでに我々が開発して公開している関連eラーニング教材(平成24-26年度科学研究費[基盤C]「薬学的観点より副作用を早期に発見するためのバーチャルトレーニング法の構築」)を一元的に統合した専用ホームページ(https://simlab.phoenix.ac.jp/)を作成した。これらにより症例数は少ないが、副作用情報の共有およびフィジカルアセスメントの技術向上の為の症例体験システムの構築は達成できたと考えている。また本システムは継続できるため、今後さらに症例収集を続けて、公開する症例を増やしていきたい。平成28年度は、症例体験システムの構築を行うための情報収集を目的に、様々な研修会や学会に出席し、フィジカルアセスメントに関する教授法をはじめICTを活用したe-ラーニングシステムについて理解を深めた。また、新たなフィジカルアセスメント学習教材として聴診器を通しての聴診体験が可能な学習環境の提供を行った。さらに症例体験システムを構築するために薬剤師が実際に体験した副作用情報を共有できる新たな情報収集システムの開発を行った。(1)症例体験システムの構築を行うための情報収集:様々な研修会や学会に出席し、e-ラーニングシステムを開発している専門家や新たな教授法を実践している教員との意見交換を行った。それにより症例体験システムの構築に向けて具体的な構想を練ることが出来た。(2)聴診器を通しての聴診体験が可能な学習環境の提供:現在、聴診音に関する学習では患者シミュレータの使用した聴診器からの学習を除いて、スピーカーまたはヘッドホンからの学習である。これらの聴診音は、実際の聴診器からの音と乖離がある。今回、聴診音について聴診器からの実際の学習を可能にする専用スピーカーの開発に一部協力し、聴診器を通しての聴診体験が可能な学習環境を整えた。(3)薬剤師が実際に体験した副作用情報を共有できる情報収集システムの開発:日本病院薬剤師会が作成した3種類のプレアボイド報告書と医薬品医療機器総合機構が作成した医薬品安全性情報報告書を参考に独自の副作用の発見または薬効の確認に関する症例情報用紙を作成した。症例情報用紙はフィジカルアセスメントに関する約30個の項目からなる。この用紙は専用ホームページ上でダウンロード可能にする予定である。当初の平成28年度計画では、(1)副作用発現・症状変化をパソコンまたは携帯型端末で再現するバーチャル患者のシステム構成の確立、(2)専用サーバー確保による入力・体験・学習システムの構築、(3)副作用発現・症状変化を再現するバーチャル患者のシナリオ作成・入力・確認を予定していた。しかしながら、情報収集と意見交換に追われ、システム構成の確立には至らなかった。また、システム構成の確立には当初予定していた研究費とは桁が異なる費用を要することも明らかになった。よって、現在、予算の範囲で可能なシステムを模索している状況である。ただし、新たなフィジカルアセスメント学習教材として聴診器を通しての聴診体験が可能な学習環境の提供を行うことが出来た。今後は、この学習環境を有意義に活用するための戦略についても模索をしたい。また、バーチャル患者のシステム構成の確立には至らなかったが、症例体験システムを構築するために薬剤師が実際に体験した副作用情報を共有できる新たな情報収集システムの開発までは行うことが出来た。平成29年度は昨年度に引き続き、症例体験システムの構築を行うための情報収集を目的に研修会や学会に出席し、フィジカルアセスメントに関する教授法をはじめICTを活用したe-ラーニングシステムについての理解を深めた。また、症例体験システムを構築するために薬剤師が実際に体験した副作用情報を共有できる新たな情報収集システムの開発を行った。さらに、新たな情報収集システムを薬剤師に周知するために周知目的のクリアファイルを作成し研修会や学会などで広報活動を行った。

(2)薬剤師が実際に体験した副作用情報を共有できる情報収集システムの開発:日本病院薬剤師会が作成した3種類のプレアボイド報告書と医薬品医療機器総合機構が作成した医薬品安全性情報報告書を参考に独自の副作用の発見または薬効の確認に関する症例情報用紙を作成した。症例情報用紙はフィジカルアセスメントに関する約30個の項目からなる。この用紙を専用ホームページ上でダウンロード可能にした(https://telemedica.jp/tokunaga)。(3)新たな情報収集システム周知のための広報活動:新たな情報収集システムを薬剤師に周知するために周知目的のクリアファイルを2000部作製した。この新たな情報収集システムについては、薬剤師会主催の研修会や医療薬学フォーラム、日本在宅薬学会や医療薬学会などの学会で発表を行い、日本薬剤師学術大会においても会場にて広報活動を行った。当初の平成28年度計画では、(1)副作用発現・症状変化をパソコンまたは携帯型端末で再現するバーチャル患者のシステム構成の確立、(2)専用サーバー確保による入力・体験・学習システムの構築、(3)副作用発現・症状変化を再現するバーチャル患者のシナリオ作成・入力・確認を予定していた。また平成29年度計画では、(4)双方向型シミュレーション教授法(ホームページまたはアプリ)の公開、(5)アンケート調査による問題点の収集を予定していた。しかしながら、情報収集と意見交換に追われ、平成29年度では(1)、(2)と(4)について遂行するに留まった。なお(2)の専用サーバーの確保は、費用の面から困難であることが分かり、これまでに我々が平成24年度から26年度の科研費で作成した“バーチャルフィジカルアセスメント"を公開している(株)テレメディカが開発したPBLメーカーを使用させていただくことになった。なお、このシステムは無料で使用することが出来る。現在、(4)に対応する症例体験システムを構築するために薬剤師が実際に体験した副作用情報を共有できる新たな情報収集システムの開発と公開までは行うことが出来た。今後、早急に(3)と(5)を推進できるように努めたい。なお(3)について遅延している理由は、研修会や学会などで情報提供のお願いを呼び掛けてはいるが、なかなか周知されていないことと考えている。クリアファイルを作成し、情報提供に工夫も行っているが、受け身では情報が集まらないことを痛感している次第である。よって、能動的に薬剤師への課題作成を依頼したいと考えている。本研究では、副作用情報の共有およびフィジカルアセスメントの技術向上の為の症例体験システムの構築を目指している。最終年度も情報収集を目的に研修会や学会に出席し、ICTを活用したe-ラーニングシステムについて情報を収集した。また、薬剤師が実際に体験した副作用情報を共有できる情報収集システムに関するホームページを公開した結果、2症例を収集した。さらに、それらの公開を目的とした専用ホームページを立ち上げた。
LPXRFaペプチドの下等脊椎動物・原索動物における同定と作用機構の解析

本年度は両生類と魚類から、LPXRFaペプチドの受容体の探索を行う目的で以下の通り実施した。1.両生類におけるLPXRFaペプチド受容体の探索ゼノパスのゲノムデータベース(http://www.ensembl.org/index.html)を利用し、哺乳類や鳥類のLPXRFaペプチド受容体のアミノ酸配列をクエリとしてBlast検索を行った。その結果、哺乳類や鳥類のLPXRFaペプチド受容体と相同性の高いゲノム配列を得ることができた。次に、ウシガエルの脳からmRNAを抽出しPCRを用いてcDNAクローニングを行った。その結果、2種類の7回膜貫通型受容体と考えられるcDNAの配列を得た。他の既知の受容体との比較の結果、一方の受容体はLPXRFaペプチドの受容体であり、もう一方の受容体はPQRFaペプチドの受容体であると考えられた。また、ウシガエルの脳を用いてin situハイブリダイゼーションによりLPXRFaペプチド受容体の局在解析を行ったところ、ウシガエルLPXRFaペプチド受容体は脳に広く分布していることが明らかとなった。今後はバインディングアッセイやセカンドメッセンジャー系の解析が必要となる。2.魚類におけるLPXRFaペプチド受容体の探索メダカ、ゼブラフィッシュ、フグのゲノムデータベース(http://www.ensembl.org/index.html)を利用し、哺乳類や鳥類のLPXRFaペプチド受容体のアミノ酸配列をクエリとしてBlast検索を行った。その結果、LPXRFaペプチド受容体と高い相同性を示すゲノム配列を、メダカから2種類、ゼブラフィッシュから3種類、フグから3種類得ることができた。今後はこれらの動物におけるクローニングや局在解析が必要となる。本年度は下等脊椎動物であるメクラウナギを用いてRFamideペプチドの同定を行い、LPXRFamideペプチドの起源を探る目的で、以下のとおり実施した。(1)クロメクラウナギの脳約500個体分(湿重量57.5g)を用いてペプチドの単離・同定を行った。方法はLPXRFamideペプチド抗体によるアフィニティーカラム精製を用いた。LPXRFamideペプチド抗体に陽性反応を示す物質を精製し、構造解析した結果、3つの新規RFamideペプチドを同定することができた。いずれのRFamideペプチドもC-末端にPQRFamide構造を有しており、LPXRFamideペプチドやニューロペプチドFF(PQRFamideペプチド)のC-末端に類似した構造であった。(2)上記(1)で同定したペプチドのアミノ酸配列から縮重プライマーを設計し、前駆体遺伝子のクローニングを行った。得られた前駆体遺伝子には、上記(1)で同定したペプチドが3つともコードされていた。前駆体遺伝子から推定される前駆体タンパクの配列を他のRFamideペプチドと比較し、分子系統樹を作製して系統関係を解析した結果、メクラウナギから同定したRFamideペプチドはニューロペプチドFF(PQRFamideペプチドグループ)に近縁であることが明らかとなった。(3)上記(1)、(2)で同定したペプチドとその前駆体遺伝子の脳内局在解析を行った。方法は免疫染色とin situハイブリダイゼーションを用いた。解析の結果、これらのペプチドとその前駆体遺伝子はともに間脳の視床下部において主に発現していることが明らかとなった。免疫陽性な神経線維は特定の神経核に集中してはおらず脳に広く分布していたことから、このペプチドは神経修飾因子として働いているのではないかと考えられる。以上の結果から、PQRFamideペプチドは最も原始的な脊椎動物である無顎類にも存在することが明らかとなった。メクラウナギから同定したPQRFamideペプチドとLPXRFamideペプチドの系統関係は明らかではないが、C-末端の構造の共通性から、無顎類のPQRFamideペプチドがLPXRFamideペプチドの祖先型である可能性が考えられる。以上の成果を踏まえ、来年度は無顎類より下位の原索動物であるホヤや、無顎類より上位の軟骨魚類のサメなどを用いてLPXRFamideペプチドの探索を進めたい。本年度はゲノムデータベース検索を用いてホヤLPXRFa-likeペプチドの探索を試みた。検索には情報量が多く、実用的と考えられるNCBI、Ensemble、EMBLなどのゲノムデータベースやESTデータベースを利用した。検索に使用するクエリは各動物のLPXRFaペプチドと、このペプチドグループに近縁であるNeuropeptide FF(NPFF)の前駆体タンパクのアミノ酸配列を用いた。検索プログラムはBlastを用いた。検索の結果、EnsembleのCiona intestinalisゲノムデータベースより、2種類のRFamideペプチドと考えられる配列(ホヤRFa-1とホヤRFa-2)を得ることができた。続いて得られた塩基配列データをアミノ酸配列に変換し、Web上のプログラム(CBS Prediction Servers)を利用して、シグナルペプチドの予測を行った。その結果、ホヤRFa-2のみがシグナルペプチドと考えられる配列を持っていた。ホヤRFa-2は脊椎動物のLPXRFaペプチドとはかなり異なっており、これがLPXRFaペプチドと分子進化学的なつながりがあるかどうかについては、今後さらに解析をする必要がある。一方、本研究ではこれまでに無顎類において新規RFaペプチドを同定してきたが、その過程でLPXRFaペプチドが共通のモチーフであるLeu-Pro-Leu/Gln-Arg-Phe-NH_2構造を持つようになったのは軟骨魚類以上である可能性が考えられた。そこで、本年度は魚類の中でも下等な形態を持っている軟骨魚類のサメを用いてLPXRFa-likeペプチドの探索を試みた。

PCRを用いたクローニングと、データベースを用いた検索解析を同時に進めたところ、データベース検索でLPXRFa-likeペプチドと考えられるアミノ酸配列をコードしているゲノム配列を得ることができた。本年度は両生類と魚類から、LPXRFaペプチドの受容体の探索を行う目的で以下の通り実施した。1.両生類におけるLPXRFaペプチド受容体の探索ゼノパスのゲノムデータベース(http://www.ensembl.org/index.html)を利用し、哺乳類や鳥類のLPXRFaペプチド受容体のアミノ酸配列をクエリとしてBlast検索を行った。その結果、哺乳類や鳥類のLPXRFaペプチド受容体と相同性の高いゲノム配列を得ることができた。次に、ウシガエルの脳からmRNAを抽出しPCRを用いてcDNAクローニングを行った。その結果、2種類の7回膜貫通型受容体と考えられるcDNAの配列を得た。他の既知の受容体との比較の結果、一方の受容体はLPXRFaペプチドの受容体であり、もう一方の受容体はPQRFaペプチドの受容体であると考えられた。また、ウシガエルの脳を用いてin situハイブリダイゼーションによりLPXRFaペプチド受容体の局在解析を行ったところ、ウシガエルLPXRFaペプチド受容体は脳に広く分布していることが明らかとなった。今後はバインディングアッセイやセカンドメッセンジャー系の解析が必要となる。2.魚類におけるLPXRFaペプチド受容体の探索メダカ、ゼブラフィッシュ、フグのゲノムデータベース(http://www.ensembl.org/index.html)を利用し、哺乳類や鳥類のLPXRFaペプチド受容体のアミノ酸配列をクエリとしてBlast検索を行った。その結果、LPXRFaペプチド受容体と高い相同性を示すゲノム配列を、メダカから2種類、ゼブラフィッシュから3種類、フグから3種類得ることができた。今後はこれらの動物におけるクローニングや局在解析が必要となる。
うつ病モデルラットを用いた疼痛性障害発症の解明

うつ病モデルラットを用いて、うつ関連型疼痛性障害の神経機構を解明するために、行動学的実験による逃避行動分析、痛みに関与する神経活動の電気生理学的解析および疼痛性障害に対する抗うつ薬の中枢性および末梢性薬理作用の分析を試みた。また、疼痛性障害と脳内セロトニン減少の関連、痛みを受容する末梢受容器に影響を与える神経ペプチドの存在、脳内セロトニンの増加による疼痛性障害の軽減について検討した。ストレス社会である現代において、耐え難い痛みがいつまでも続く疼痛性障害(pain disorder)が歯科領域においても問題となっている。その原因として、脳内神経伝達物質であるセロトニンの不足の関与が示唆されているが、すべてのことが明らかになっていない。そこで、研究申請者は、うつ状態と脳内セロトニンの減少、痛みを受容する末梢受容器に影響を与える神経ペプチドおよび脳内セロトニンの増加による疼痛性障害の軽減について明らかにすることを目的とした研究を立案した。昨年度は、うつ病に関与していると考えられるカンナビノイドレセプター(CB1レセプター)の分布を検討し、海馬や小脳および延髄で多く発現していることが確認された。さらに、脳内で産生するカンナビノイド(エンドカンナビノイド)の分解を阻害する薬剤(JZL187)を用い、エンドカンナビノイドの産生量を、ウェスタンブロッティング法および免疫組織化学染色法を用いて定量化することを試みた。結果については現在実験データを詳細に解析している途中である。ストレス社会である現代において、堪え難い痛みがいつまでも続く疼痛生障害(pain disorder)が歯科領域においても問題となっている。そこで本研究では、うつ状態と脳内セロトニンの減少、痛みを受容する末梢受容器に影響を与える神経ペプチドおよび脳内セロトニンの増加による疼痛生障害の軽減について明らかにすることを目的とした研究を行った。免疫組織化学染色法にて、エンドカンナビノイドの発現分布、局在性について検討した。申請した計画では、初年度でうつ病モデル動物を確定し、うつ病モデル動物を用いた行動学的実験を行うはずであったが、精神薬理学の専門家の意見を仰ぎ、うつ病モデル動物の作成方法を再検討したため。27年度が最終年度であるため、記入しない。歯科矯正学提出した実験計画に基づくように、可及的速やかにうつ病モデル動物の作成方法を同定し、末梢侵害受容器における痛覚受容の変調および複雑なニューロン結合によって異なった種類の求心線維間の干渉や下行路を介しての求心線維に対する脳の選択的干渉が行われている脊髄後角における痛覚受容の変調を調べる。
相互作用ネットワークを有する分子性ポリマーの設計と分子配列の制御

アントラセン-ビスレジルシン(1)に対してTi(^iPrO)_2Cl_2を作用させると不溶性のTi-ホストが得られる。元素分析等の結果からホスト1における水素結合ネットワーク(O-H...O-H)が金属配位ネットワーク(O^--Ti^<IV>-O^-)に置き換わったものと考えられる。このものの性質として以下の事柄が明らかになった。(1)エステルやケトンなどの極性ゲストをチタンあたり2分子とりこむことができる。すなわち、4配位のチタン原子が2分子のゲストと配位結合することにより6配位になることを示唆している。(2)少なくとも部分的なゲストの脱離が室温において観測され、ある程度の可逆性を有している。(3)アクロレインとシクロヘキサジエンとのディールス・アルダー反応において著しい触媒作用を示す。ここに“著しい触媒作用"とは、(ア)触媒再生(ターンオーバー)速度が均一系(可溶性)のTiルイス酸よりも大きく、(イ)固体触媒として容易に回収・再利用が可能なことである。(4)アクリル酸エステルの反応にも触媒としてして用いることができる。
酸感受性イオンチャネルを介した新しい味覚受容機構の解明

昨年までにASIC1aが膝神経節(geniculate ganglia, GG)の投射ニューロンに発現していることを見出した。今年度は、従来酸味受容体が存在すると考えられている味蕾の味細胞におけるASIC1aについて精査するため、光学顕微鏡および電子顕微鏡による免疫染色を実施した。ASIC1aには良い抗体がなく、ASIC1aと1bの両者を認識する抗体を用いたが、この抗体はピクリン酸を含む固定液でないと十分に機能しなかった。味蕾や膝神経節のASIC1免疫陽性構造はASIC1aノックアウトマウスではみられず、味蕾においてこの抗体と味細胞の各種マーカーで二重染色したところ、gustducin(II型味細胞)やSNAP25(III型味細胞)とはそれほど重ならなかった一方、P2X3とは高頻度で重なり味蕾内のASIC1aの大部分がP2X3陽性の神経線維に局在しているという結論に至った。電子顕微鏡でも様々な条件にてその局在の同定を試みたが、残念ながら評価に値する結果は得られていない。カルシウムイメージングでは、GGニューロンで酸に対するASIC1aのカルシウム応答を観察できていないものの、本実験により5-HTよりもATPに対する応答が酸により修飾されることが明らかとなった。以上より、ASIC1aは膝神経節投射ニューロンに発現し、ATPや5-HTによるシグナル伝達を修飾していることが示唆された。他に酸感受性のあるTRPV4チャネルについても二瓶味覚選択試験を実施し、このKOマウスではWTと比較して塩酸に対する忌避反応に差があることを見出しており、現在共同研究者と解析中である。さらに消化管におけるASIC4の解析を継続して行った。これまでに小腸の筋間神経叢にASIC4が発現していることを認めており、今年度は腸管の輸送能解析や摘出腸管を用いたマグヌス解析を進めASIC4の新たな機能を見出した。1.マウス味蕾組織におけるRT-PCR法によりASIC1a, 1b, 2b, 3の転写産物の存在が示唆されたが、味蕾を含まない舌組織でも同程度の発現を示した。そこでin situハイブリダイゼーション(ISH)法によりASIC1a mRNAの発現を検索したが、その味蕾組織における存在は確認できなかった。従って、我々の先行研究で観察された味蕾でのASIC1の免疫陽性反応は、味細胞ではなく味蕾に伸びてきている神経線維である可能性が高い。そこで、味覚伝達ニューロンで大部分が占められている膝神経節(geniculate ganglia,以下GG)にてASICの解析を行った。RT-PCR法ではGG組織にASIC1a,1b, 2b, 3の遺伝子断片が確認され、ISH法ではその発現が一部のニューロンに限局していることを見出した。味覚伝達に重要なP2X2受容体とASICの二重蛍光ISH法を行ったところ、4つのASICサブタイプのうちASIC1aがP2X2と関連深いことが判明した。さらにASIC1に対する抗体を用いてタンパクレベルにおいても解析を行ったところ、確かにGGにおけるASIC1陽性反応はP2X2陽性ニューロンに高頻度で観察されることがわかった。現在GGニューロンにおいて、カルシウムイメージングを施行して、その機能の解析を試みている。2.マウス味蕾にてASIC4の発現も示唆されていたので、ASIC4tm1a(KOMP)mbpマウスを用いて詳細に解析した。このマウスではASIC4のプロモーターの下流にlacZを発現しており、βガラクトシダーゼ染色によりASIC4の生体内での局在を可視化することができる。このマウス味蕾を観察したところ、明らかなβガラクトシダーゼ陽性像は検出できなかった。GGでもその発現を検索したが、現在までのところポジティブな結果を得るに至っていない。基本的な分子生物学的及び形態学的な解析なので予定どおりスムーズにデータを得ることができた。ただASIC4については、遺伝子のクローニングとHEK293細胞への強制発現系を用いた解析により、購入した市販抗体が機能しないことが判明したため、急遽その発現を、別研究で作製したASIC4tm1a(KOMP)mbpマウスにて行った。味蕾におけるASICについては、RT-PCRレベルでは他の研究室でも解析されており、少なくとも酸味を感じるとされるIII型味細胞においてASIC遺伝子断片発現の報告はない。我々の結果はこの結果と一致しており、ASICは味蕾味細胞よりもむしろその細胞からシグナルを受け取る神経節細胞で重要な役割を担っている可能性が高い。本年度の結果より、多くのASICサブユニットがこの味覚シグナル伝達に関与していることが示唆されているが、当面はカルシウム透過性を有し、かつ、脳内の水素イオンを介したシナプス伝達に重要なASIC1aに絞り実験を行っている。ただこのASIC1aは脳内にも豊富に発現しているため、当初の予定であった行動解析用のリッキングカウント実験システムの購入は中止して、別の手段を検討している。昨年度の実験より、酸感受性イオンチャネルであるASICは、味覚受容器である味蕾味細胞よりはむしろ二次味覚伝達経路である神経節細胞に豊富に発現していることが示唆された。そこで本年度はまず個体数を増やしてこの結果を再確認した。RT-PCR法よれば、味覚伝達ニューロンで占められている膝神経節(geniculate ganglia,以下GG)ではASIC1a,1b, 2b, 3の遺伝子断片が確認され、ISH法ではその発現が一部のニューロンに限局していることを見出した。

GGニューロンは大きくP2X2/3受容体陽性とP2X3のみ陽性のニューロンに分類される。P2X2並びにP2X3受容体とASIC1の二重蛍光免疫染色法を行ったところ、ASIC1aがP2X2/3受容体陽性ニューロンと関連深いことが判明した。さらにGGニューロンにおける酸(プロトン)の影響について調べるために初代培養GGニューロンを直接カルシウムイメージングにて解析する方法の確立を試みた。試行錯誤の結果、単離した細胞からATPや5-HTに対する容量依存的な応答が観察できるようになり、この方法によれば、GGニューロンはそのATPや5-HT応答性において多様であることが明らかとなり、さらに、n数は少ないものの、酸は直接的にGGニューロンのカルシウム応答を惹起しないが、ATP応答性を種々の程度に修飾することが観察されている。また、並行してP2X2やP2X3受容体をCHO-K1細胞に強制発現させ、この酸修飾のメカニズムについても調べているが、P2X2/3両受容体陽性細胞では、そのリガンド応答性が酸(pH6.5)により増強する一方、P2X3陽性細胞では同応答性が酸によって抑制されることを見出した。基本的な分子生物学的及び形態学的な解析は予定どおりスムーズにデータを得ることができた。この実験により、ASICが味覚伝達経路に発現していることが明らかとなり、興味深いことに、カルシウム透過性を有し、かつ、脳内の水素イオンを介したシナプス伝達に重要なASIC1aがGGのP2X2/3陽性ニューロンに優位に発現しているとの新知見が得られた。味覚に関与しない三叉神経節細胞においてASIC1はP2X3とあまり共発現しないことから興味がもたれる。さらに味覚受容におけるASIC1aの役割についても研究を進めるため、GGニューロンを用いたカルシウムイメージングの実験系の確立を目指したところ、先行研究[Vandenbeuch et al., J Physiol, 593.5, 1113-1125, 2015; Larson et al., J Neurosci, 35(48), 15984-15995, 2015]と同程度のATP及び5-HT応答反応を観察できるようになり、現在この実験系により新知見も得られ始めている。昨年度までに、酸感受性イオンチャネルの一つであるASIC1aが味覚路の膝神経節(geniculate ganglia, GG)を構成するP2X2/3受容体陽性ニューロンに豊富に発現していることを見出した。今年度は昨年確立した初代培養GGニューロンを用いたカルシウムメージング法による解析を進め、ASIC1aのアクチベーターである酸(プロトン、水素イオン)のATP応答を修飾するパターンについてn数を増やし観察した。加えてP2X3の特異的なブロッカーであるAF-353を併用して、P2X3を単独に発現しているGGニューロンではプロトンによりATP応答が減弱する一方、P2X2とP2X3を共発現しているGGニューロンではプロトンによりATP応答は減弱せず、あるものはむしろ増強するという特性を見出した。この特性の決定因子についてHEK293T細胞の強制発現系解析を行い、ASIC1aよりはむしろP2Xのサブタイプに依存していることを突き止めた。
MR1拘束性T細胞を介した関節炎治療法の開発

MR1拘束性T細胞は、粘膜組織に多く存在し、その分化にはMR1分子、B細胞、腸内細菌叢を必要とする自然リンパ球である。MR1拘束性T細胞の存在しないMR1-/-マウスは、コラーゲン関節炎、抗体誘導関節炎が軽症化し、炎症増悪に関与すると考えられた。ヒトMR1拘束性T細胞は、健常者で末梢血αβT細胞の数%を占め、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症患者末梢血でその頻度は減少しており、自己免疫病態に関与することが推定された。MR1拘束性T細胞は、可変性の限られたT細胞受容体(TCR)を有し、炎症病変に集積してサイトカインを産生するMHCクラスIb分子であるMR1拘束性のユニークなリンパ球である。本年度は、MR1拘束性細胞が他の自己免疫病態において制御性細胞として機能するかどうかを検討するために自己抗体惹起性の炎症である抗体誘導関節炎ならびにコラーゲン関節炎に与える影響を調べた。DBA1Jマウスに6回戻し交配したMR1^<-/->F6マウスでは、CIA発症率,最大スコアともに、野生型DBA1Jマウスに比較してMR1^<-/->マウスで有意に高値であった。これは、同腹の野生型マウスを用いても同様の結果が得られた。病理所見でも、MR1^<-/->マウスでは、関節炎がより顕著であった。CIIに対するリコール反応におけるIL-17産生、血清中抗CII抗体価はB6に比較してMR1^<-/->で低値であった。一方、CIIカクテル抗体関節炎ならびにK/BxN血清移入関節炎ではMR1^<-/->マウスにおいてコントロールB6マウスと比較して関節炎が抑制された。関節局所における炎症性サイトカインの発現も、MR1^<-/->マウスでは有意に低かった。In vitroにて、Vα19iNKT細胞をセルソーターを用いて分離し、各種サイトカイン存在下で抗CD3抗体刺激によるサイトカイン産生を検討したところ、IL-1共存下でIL-17産生が増強した。以上のことから、MR1拘束性Vα19i T細胞はコラーゲン関節炎ならびに抗体誘導関節炎の炎症増悪に関与する可能性が示唆された。関節炎では、IL-1を初めとした炎症性サイトカインが大量に産生されていることから、強い炎症局所ではVα19i T細胞は炎症の増悪因子として機能すると考えられた。研究目的:MR1拘束性T細胞は、可変性の限られたT細胞受容体を発現するMR1拘束性のリンパ球である。これまでの研究で、多発性硬化症の動物モデルである実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)において、MR1拘束性T細胞は病態抑制に関与することを示したが、MR1拘束性細胞が他の自己免疫病態において制御性細胞として機能するかどうかを検討する目的で、関節炎に与える影響を調べた。結果と考察:MR1^<-/->マウス(MR1^<-/->)をDBA/1Jマウスに10回戻し交配を行ったマウスにコラーゲン関節炎(CIA)を誘導した。CIA発症率,最大スコアともに、野生型DBA/1Jマウスに比較してMR1^<-/->マウスで有意に高値であった。In vitroにて、Vα19iTCRトランスジェンックマウスからNKT細胞をセルソーターを用いて分離し、各種サイトカイン存在下で抗CD3抗体刺激によるサイトカイン産生を検討したところ、IL-1共存下でIL-17産生が増強した。MR1拘束性NKT細胞はEAEに対して抑制的に働くが、コラーゲン関節炎ならびに抗体誘導関節炎の炎症増悪に関与する可能性が示唆された。関節炎では、IL-1を初めとした炎症性サイトカインが大量に産生されていることから、強い炎症局所ではMR1拘束性T細胞は炎症の増悪因子として機能すると考えられた。MR1拘束性T細胞の生理的機能の解析や、ヒト自己免疫病態における役割について検討するため、この細胞を特定できる抗体の作製が必須であると考えられる。これまでの研究で、

多発性硬化症の動物モデルである実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)において、MR1拘束性T細胞は病態抑制に関与することを示した。また、本申請研究における昨年度までの研究で、関節炎においてはエフェクター細胞として機能することを明らかにした。本年度は、ヒトMR1拘束性T細胞を認識する抗体を得たので、自己免疫疾患病態にMR1拘束性T細胞の動態を解析した。結果と考察:MAIT細胞については、末梢血αβT細胞において、健常者で平均3.92%をしめる単一のα鎖を発現する細胞としては大きな細胞集団を形成することが明らかとなった。自己免疫疾患である多発性硬化症では、平均2.32%、再発期MS患者で平均0.73%であり、MS患者では再発期,寛解期とも健常者と比べ有意に低値であり、疾患活動性と相関していた。健常者ではMAIT細胞の頻度とCD4^+NKT細胞,CD56^<bright>NK細胞の頻度との間に正の相関が見られたが、多発性硬化症患者ではこの相関はみられなかった。現在、関節リウマチ、全身性エリテマトーデスにおいても末梢血における頻度を比較しており、両疾患ともにMAIT細胞の頻度は減少しており、とくに全身性エリテマトーデスにおいてその減少は著しかった。今後疾患活動性との相関ならびに機能解析を行う事が重要である。
抗体遺伝子再構成を行ったB細胞を検出する新規可視化法の確立

本研究では、抗体遺伝子再構成を行った細胞の標識方法の開発を行った。抗体遺伝子再構成は、様々なリンパ球の分化段階で行われ、また、それぞれが一過性におこなわれるためそれらを厳密に評価することが困難である。そこで、分化段階別に、厳密に組み換え活性をモニターする方法を確立することを目的とした。方法としては、抗体遺伝子再構成を触媒するrecombination activating gene (RAG)の認識配列である、Recombination signal sequence (RSS)と2種類の蛍光タンパク遺伝(EGFP,DsRed2)を用いてRAGの人工基質を作成し、様々な培養細胞株に遺伝子導入し、抗体遺伝子再構成の活性を可視化することとした。この人工基質は、プロモーターの下流にEGFPとDsRed2を互いに逆方向に配置し、その両端に互いに逆方向にRSS配列を配置した。このシステムでは、RAGが発現するとRSS間の遺伝子の反転がおこるため、緑色蛍光から赤色蛍光へのが変化する。以後、このベクターを抗体遺伝子再構成を行った細胞を検出するための人工基質として用いることとした。昨年度までに、マウス繊維芽細胞において、RAGの発現に依存して蛍光タンパク遺伝子の反転と共に、蛍光タンパクの変化を観察することが出来た。そこで、実際に様々なマウス脾臓B細胞株や胸腺種細胞に人工基質を導入し、その蛍光タンパクの発現について検討した。その結果、RAGの発現に依存して、赤色蛍光を観察することが出来た。これらの蛍光の変化を遺伝子レベルで解析したところ、遺伝子レベルでも人工基質の反転が起きていた。以上の結果より、本システムは抗体遺伝子再構成についての検討するために有用な方法である。本年度は、抗体遺伝子再構成を行ったB細胞を可視化するための前段階として、2種類の蛍光タンパク遺伝子と抗体遺伝子再構成に必須のタンパクであるRAGの認識配列(RSS)を用いて人工基質を作成し、実際にそのシステムが作動するかどうかについて検討した。本研究において作成した人工基質では、プロモーターの下流に緑色蛍光タンパク遺伝子(EGFP)と赤色蛍光タンパク遺伝子(DsRed2)を互いに逆方向に配置し、その両端に互いに逆方向にRSS配列を配置した。このシステムでは、RAGが発現するとRSS間の遺伝子の反転がおこるため、蛍光が変化すると考えられる。以後、このベクターを抗体遺伝子再構成を行ったB細胞を検出するための人工基質として用いることとした。また、B細胞に遺伝子導入することを想定し、B細胞へも遺伝子導入効率の高いレトロウイルスベクターを用いた。次に、作成した人工基質が作動するかどうか確認するため、RAGを発現していないマウス繊維芽細胞であるNIH3T3細胞に人工基質を保持したレトロウイルスを感染させた。その結果、FACS解析により、これらの細胞が緑色蛍光タンパクを発現していることを検出できた。その後、この細胞にRAG-1,RAG-2遺伝子を導入した結果、RAG-、RAG-2のみの発現では赤色蛍光タンパクは検出できなかったが、共発現させた細胞においてのみ、赤色蛍光を発する細胞を検出することができた。これらのことより、抗体遺伝子再構成を行ったB細胞を可視化し検出するための実験システムを確立できたと考えられる。今後、本システムをBリンパ球に応用、詳細な解析を行う予定である。
日本ファシズム体制下における非エリート女性の同調行為に関する歴史社会学的研究

当研究で対象とした「自伝」ないし「自分史」とは、語り手によって、過去の記憶の断片に現在の地点から意味付けされ、「人生」という、時間軸に沿った秩序ある統一体として構成されたテクストといえる。それは、極めて個人的な体験を語っているように見えながら、常に社会的文化的コードの支配を受けているので、同時代に生きた一定の共通的属性をもつ人々の自伝を重ね合わせて行くと、そこに共通の意味付けを発見することができると考えられる。以上のような視点から当研究では、昭和の戦中を生きた女性が書いたいくつかの自伝をもとに、女性たちが戦争と自分の行動をどのように意味付けているのかを分析した。以下、得られた知見をまとめる。収集し得た自伝は職業に就いて来た女性が書いたものがほとんどで、そこでの中心的テーマは職業生活である。とりわけ職業を自発的に選択し、困難を乗り越え、自分の領域を主体的に切り開いて来た経緯が描かれる。例えば、戦時体制期に成立した保健婦となった高橋政子の自伝(『いのちをみつめて』ドメス出版、1995年)では、学校看護婦としての体験から農村衛生に関心をもち、戦時期に保健婦として地域の衛生向上に貢献した行動が描かれている。しかし他方では、「ずるずると戦争に協力していったかのような自分の在り方を検証せざるを得ない」と述べ、栄養失調の乳児の命を救った日に出会った戦車隊に対して感じた「腹立たしさ」を表現している。そして高橋は、「人的資源の保護育成」政策の「尖兵として」、「保健婦はスポットライトを浴びて、日本中あちこちで華々しく活動し、私もやがてその一人になってゆきました。」と自らを歴史の中に位置付ける。すなわちここでは、自発的に職業に取り組み地域に貢献して来た自己と、戦後に意味付けされた「侵略戦争」という歴史状況の中に位置付けられた自己が交錯しているといえる。今後はより多くの自伝を収集し、研究を進展させていく予定である。
高感度ガンマ線広帯域観測によるガンマ線バースト付随のジェット構造の解明

本研究の達成のための最重要課題である高感度ガンマ線広帯域観測は2008年度打ち上げられたガンマ線観測衛星Fermiを用いたガンマ線観測が必要不可欠である。本研究ではFermi衛星の打ち上げ前から現地の米国において観測準備を進め、打ち上げ後も初期運用に積極的に参加することで、Fermi衛星の解析手法を確立した。実際、確立した解析手法を用いることで、いくつかのガンマ線バーストの発見に研究代表者は大きく貢献した。本研究では、すざく衛星とFermi衛星を同時に用いた超広帯域ガンマ線バースト観測によりガンマ線バースト付随のジェット構造を探ることを行う。本年度は、本研究の柱の一つである、Fermi衛星が打ち上がったので、Fermi衛星の初期運用に積極的に参加し、初期成果を効率よく引き出すことに重点を置いた。具体的には、Fermi衛星のガンマ線バースト観測体制に日本人の第一人者として積極的に参加し、打ち上げ前から準備していたガンマ線バースト自動解析プログラムを立ち上げ、現在に至るまで大きな貢献を果たした。日本においても解析グループを主導して組織し、日本グループの貢献度を向上させた。Fermi衛星は現在まで数例のガンマ線バーストを検出しているが、これらの体制により、そのうちの2例を実際、私が発見し、その結果を迅速に世界に公表することに成功した。現在、これらの結果については論文を執筆している。一方、すざく衛星に関しても、運用当番、軌道上較正を主導してすすめ、より確かな科学的成果を得られるよう整備してきた。本年度はこれらの結果得られた科学的成果を論文として発表するとともに、国内会議や国際会議でこれらの科学的成果について報告を行った。
新らしいメタラジカルコゲノレン環化合物の合成と環の反応特性

新らしいメタラジカルコゲノレン環化合物の合成と環の反応特性の解明を目的として、(1)含カルコゲン1,3ー双極性化合物あるいはメソイオン化合物と配位不飽和遷移金属錯体との反応による新らしい環系のメタラサイクルの構築,(2)メタラジカルコゲノレン環の反応特性の解明(各種有機化合物との付加体生成、付加体の構造,付加体の反応)の観点に立って研究した。(1)1,3ー双極性化合物,アリ-ルニトリルスルフィド,およびメソイオン化合物,4ーアリ-ルー1,3,2ーオキサチアゾリリウムー5ーオレ-ト,は〔Coー(Cp)〕種と反応して新らしいメタラサイクルCoーSーN=CーS(コバルタジチアゾ-ル)を生成することを見出した。特にCP^*(Me_5C_5)を持つ錯体は安定性に優れ、懸案になっていた構造の確定を可能にした。メソイオン化合物,2,5ージアリ-ルー1,3ージチオリリウムー4ーオレ-トと〔Co(Cp)〕との反応においてもメタラジチオレン環が生成することが見出されているが,2個のアリ-ル基のメタラジチオレン環への取り込みの検討から,これら新規反応の機構の解明を行っている。(2)メタラジカルコゲノレン環は、金属ーカルコゲン部位に反応性を持ち興味深い反応性を示す。ジアゾアルカンとの反応ではN_2の脱離を伴ってアルキリデンがCoーカルコゲンに〓った形の付加体を生成する。この付加体のCoはさらにP(OMe)_3と結合する。この反応による構造変化をX線構造解析によって明らかにした。メタラジカルコゲノレン環の特異な反応性を示すものにクワドリンクランとの反応があり,1:1付加体を生成するとともにノルボルナジエンへの異性化が起こる。本来度において,2種類の付加体のX線構造解析に成功したが,両者ともノルボルネンの橋部炭素が金属あるいはカルコゲンと結合した形をしており,炭化水素部位での転位を含む特異な反応の存在が示唆される。
教育達成過程における家庭背景の影響再考

本研究は、教育達成過程における家庭背景の影響について、1)その影響メカニズムに関する理論の整理、2)それを実証的に検証するための枠組の提案、3)それらをふまえたデータによる検証を目的として行った。1)の理論的整理に基づいて提案された、階層差の生成を説明する新たな枠組を適用した結果、Boudonの指摘した2次効果の重要性、従来は考慮されてこなかった「文化資本の直接効果」の影響を考える必要性などが明らかとなった。本年度の「研究実施計画」に基づき、「研究の目的」に記載した3つの研究目的のうち、1)教育達成過程における家庭背景の影響に関する理論的・実証的研究のうち、Bourdieuの文化的再生産論およびBreen and Goldthorpe(1997)の相対的リスク回避仮説をベースとする過去の諸研究の再検討を通じて、階層差生成メカニズムに関する過去の研究の成果を整理する事、および2)それらを実証的に検証する有効な方法(指標や変数の構成・モデル構築など)を解明すること、の2点について研究を進めた。「教育の階級差生成メカニズムに関する研究の検討」と題した論文では、この分野において近年注目を集めている相対的リスク回避仮説を取り上げ、実証データを用いてこの仮説の検証を試みた内外の研究のレビューを行い、文化資本論的なアプローチにも触れながら論点を整理し、教育達成過程における階層差の生成メカニズムをテーマとする、今後の研究が目指すべき方向性について論じた。これと平行して、教育達成過程において発生する階層差の実態について、SSMデータを用いて実証的に明らかにするとともに、それらの知見を参照しながら、階層差の生成を説明する諸理論仮説をとらえる全体的な枠組を提示する論文をまとめた(今年中に刊行の予定)。また、ブルデューの文化資本論をベースとする諸研究についても、相対的リスク回避仮説と同様にレビューを進めた。その成果の一部は、上記2つの研究に活かされている。本年度の「研究実施計画」に基づき、「研究の目的」に記載した3つの研究目的に即して、1)教育達成過程における家庭背景の影響について、主としてブルデューの文化的再生産論および合理的選択理論に依拠した実証研究を中心とする過去の諸研究を再読して整理するとともに、2)それらを実証的に検討する適切な方法について再検討し、3)それらの知見を適切なデータセットの分析に適用する、という3段階のプロセスを経て研究を進めた。「『教育達成』を読み解く」では、主として、1)の目的に即して、先行研究の主要な論点をまとめた。「教育達成における階層差発生過程のモデル化」では、2)の目的に即して、ブードンのIEOモデルをベースにしながら、階層差の生成過程を実証的に検討する研究が基づくべきモデルを提案した。「高校生の職業・教育期待における階層差の生成メカニズム:PISAデータによる検討」では、PISAデータを用いて、相対的リスク回避仮説が成立する前提となる条件が認められるか否かを検討した。「教育達成過程における階層差の生成:『社会化効果』と『直接効果』に着目して」では、SSM調査のデータを、上記のモデル(修正前のバージョン)の枠組から分析し、主として文化的再生産論にもとづく説明の可能性について検討した。また、高校生とその保護者を対象とした学校生活と進路選択に関する調査のデータを用いて、高校生の教育期待形成において、家庭の資源や親の期待が果たす役割について分析した(私的研究会にて報告)。本年度の研究実施計画に基づき、主としてブルデューの文化的再生産論および合理的選択理論に依拠した過去の諸研究のレビューをふまえ、それらを実証的に検討する適切な方法について検討するとともに、それらの知見を適切なデータセットに適用して分析することを試みた。研究の主な知見を、裏面に記した研究成果と対応させて以下に述べる。「高校生の教育期待形成における文化資本と親の期待の効果」では、ブードンの枠組を適用した教育達成過程の理論的・実証的研究の再検討に関する昨年度までの成果をふまえ、文化資本論の理解を新しい観点から検討することを試みた。その結果、文化資本の1次効果ばかりでなく2次効果に着目する必要があること、その2次効果は親の教育期待を反映している可能性が高いことなどが明らかとなった。「現代の階層社会1」および「教育達成における階層差の発生メカニズム」では、これまでの成果をふまえて、教育達成過程の階層差を改めて把握し直すとどもに、階層差の生成メカニズムをとらえる、新しい枠組として「教育的地位志向モデル」を提案した。なお、年度の半ばからは、家族社会学会の実施した第3回全国家族調査、(NFRJ08)のデータを用いた分析に着手し、教育達成の階層化に関する、従来の研究枠組を再検討することも試みた。その結果、「学歴の家族・親族間相関に関する基礎的研究」および2つの学会発表で示したように、教育達成に対する拡大家族の独自な影響が存在することを明らかにし、核家族の枠内に留まってきた従来の階層研究の枠組を見直す必要性に言及した。