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露髄面に対する創傷被覆材の効果と分化・増殖因子添加による硬組織形成能に与える影響

歯髄に対する創傷被覆材の有効性を検討するために以下の実験を行った。また、創傷被覆材については、アルギン酸塩被覆材がその形状から扱いやすく、いかなる窩洞においても対応できるであろうと判断され、今回の実験に用いられた。1.ヒト歯髄培養細胞に対する為害性の観察を行った。その結果,アルギン酸塩創傷被覆材存在下においても細胞は通常と同じ増殖を行い、アルギン酸塩創傷被覆材のヒト歯髄培養細胞への為害性は確認されなかった。2.ラットの上顎第一臼歯咬合面に露髄をさせた後、アルギン酸塩被覆材による直接覆髄を行い、グラスアイオノマーセメントを用いて裏装した。また、反対側同名歯に対し同様に人工的露髄をさせ、水酸化カルシウム製剤を用いて直接覆髄したものをコントロールとして用いた。実験群およびコントロール群の両群ともに炎症性細胞の浸潤が認められたが、コントロール群においてのみ歯髄の壊死層が認められ、実験群においては認められなかった。3.ヒト歯髄培養細胞に炎症性サイトカインであるTNF-αを添加し、骨形成因子(BMP-2)発現およびALP活性に及ぼす影響を検討した。その結果,ヒト歯髄培養細胞対してTNF-αを添加することにより、BMP-2のmRNA量およびタンパク質量の増加が認められた。しかしながらTNF-α添加によりALP活性は有意に抑制された。4.ヒト歯髄培養細胞に対しTNF-αおよびNF-κB阻害剤であるPDTCを添加し、BMPのシグナル伝達因子であるSMADのうちの抑制型であるSMAD7の発現およびALP活性に対する影響を検討した。SMAD7の発現は抑制された。また、PDTCおよびTNF-αを伴に添加することにより、TNF-αを単独で添加したものと比較し、ALP活性の増加が確認された。1、アルギン酸塩被覆材を静置した10cm cell culturedish上にヒト歯髄培養細胞を1.0×10^6個播種し、10%FCS含有α-MEMを用いて培養を行い、ヒト歯髄培養細胞に対する為害性の観察を行った。2、実験動物に健康なラット(Wistar系、雄、8週齢)を用い、上顎第一臼歯咬合面に#1/2ラウンドバーにて窩洞形成を行い人工的に露髄をさせた後、アルギン酸塩被覆材による直接覆髄を行い、グラスアイオノマーセメントを用いて裏装した。実験動物は処置後1,3,5日目の各実験期間飼育後、5%ペントバルビタールの過剰投与により薬殺し、ただちに10%中性緩衝ホルマリン溶液で灌流固定を行い、被験歯を上顎骨ごと取り出した。その後通法に従いパラフィン包埋を行い、約4μmの連続切片標本を作製し、ヘマトキシリン-エオジン重染色を施した。1、アルギン酸塩創傷被覆材存在下においても細胞は通常と同じ増殖を行い、アルギン酸塩創傷被覆材のヒト歯髄培養細胞への為害性は確認されなかった。2、実験群およびコントロール群の両群ともに炎症性細胞の浸潤が認められたが、コントロール群においてのみ歯髄の壊死層が認められ、実験群においては認められなかった。今後、修復象牙質形成量の比較や、免疫染色を行いタンパク質産生の検索を行っていく予定である。

昨年度の研究により歯髄に対するアルギン酸塩被覆材の有効性が確認できたことから、本実験では炎症の消退と硬組織形成について検索し、歯髄に対する増殖因子添加の有効性を検討するために以下の実験を行った。1,ヒト歯髄培養細胞に炎症性サイトカインであるTNF-αを添加し、骨形成因子(BMP-2)発現およびALP活性に及ぼす影響を検討した。2,ヒト歯髄培養細胞に対しTNF-αおよびNF-κB阻害剤であるPDTCを添加し、BMPのシグナル伝達因子であるSMADのうちの抑制型であるSMAD7の発現およびALP活性に対する影響を検討した。1,ヒト歯髄培養細胞対してTNF-αを添加することにより、BMP-2のmRNA量およびタンパク質量の増加が認められた。しかしながらTNF-α添加によりALP活性は有意に抑制された。2,ヒト歯髄培養細胞対しPDTCを添加することによりSMAD 7の発現は抑制された。また、PDTCおよびTNF-αを伴に添加することにより、TNF-αを単独で添加したものと比較し、ALP活性の増加が確認された。本実験の結果から、TNF-αはヒト歯髄培養細胞に対しBMP-2の発言を促進させるも、ALP活性を抑制させるとの結果が得られ、さらにその過程において、NF-κBおよびSMAD 7の関連が示唆された。TNF-αは歯髄培養細胞のBMPによる分化を抑制するものと示唆されたことから炎症を起こした、または炎症の進行した状態の歯髄に対してBMPを作用させたとしても良好な結果が望めないのではないかと推測される。今後、アルギン酸塩被覆材、さらに増殖因子添加の有効性を検討するために、TNF-αによるALP活性の抑制に関わるNF-κBおよびSMAD 7に対する更なる検討が必要であると思われる。
幾何構造を保つ微分同相群の研究

幾何構造を保つ微分同相群およびその部分群の代数的、位相的研究を以下の4つの観点から行った。1.リプシッツ同相群およびリプシッツ写像の位相的、代数的構造の研究については、リプシッツ多様体間のリプシッツ写像空間の位相的性質の考察を行い、いわゆる逆写像定理がこのカテゴリーでも成り立つ事を示した。また標準的U(n)作用をもつ複素n次元空間C^nを考え、コンパクト開位相の下でのその同変リプシッツ同相群の恒等写像成分の1次元ホモロジーは非自明で連続的モデュライをもつ事を示した。この結果はコンパクト開リプシッツ位相に関する結果と比較して興味深い。2.同変微分同相群の構造の研究については、実n次元空間R^nに有限群が作用している場合、その同変微分同相群の1次元ホモロジーを決定した。応用として、軌道体、コンパクトハウスドルフ葉層、局所S^1作用をもつ3次元多様体に対してその構造を保つ微分同相群の1次元ホモロジーを決定できる。これらはそれぞれの幾何構造を解明する上で重要と思われる。3.特異点をもつ葉層構造を保つ微分同相群の1次元ホモロジーの研究については、モース関数による余次元1葉層を保つ微分同相群の1次元ホモロジーを決定した。また、複素モース特異点をもつ余次元2葉層についても部分的知見を得た。4.部分多様体を保つ微分同相群とその交換子の研究については、その構造を保つ微分同相群は完全群である事を示し、さらにその交換子の長さについても議論した。2.2005年8月、全日本トポロジーシンポジウム(高知)、幾何学シンポジウム(福岡)に参加し、研究打ち合わせおよび情報収集を行った。3.2005年10月、「葉層構造とその周辺」(群馬県)において「葉層を保つ微分同相群の1次元ホモロジーについて」と題して講演、および研究打ち合わせを行った。4.2005年11月、「海山微分トポロジー」(三重県)を龍谷大学教授伊藤敏和氏とともに主催し、東京大学足助太郎氏、京都大学今西英器氏、大阪大学森淳秀氏達の講演を持ち、実りある議論を行った。また、「非コンパクト多様体の同相群について」と題して講演を行った。5.2005年12月、国際研究集会「微分同相と関連分野(Meeting of diffeomorphisms and the related fields)」(松本市)を信州大学教授阿部孝順氏と共に主催した。Rybicki氏、Schwarz氏を含む海外から5名の研究者が参加し、講演や議論により、研究交流が進み、有益な集会となった。児玉大樹氏の講演はわれわれの今後の研究に寄与するものと思われる。6.2006年1月、「冬の力学系研究集会」(軽井沢)、シンポジウム「接触構造,特異点、微分方程式及びその周辺」(鳴門)に参加し、研究打ち合わせおよび情報収集を行った。7.信州大学教授阿部孝順氏と有限群が作用する同変微分同相群とその応用についての共同研究をまとめ、阿部-福井の共著論文として投稿した。1.2006年5月、「海山微分トポロジー」(三重県紀北町)を龍谷大学教授伊藤敏和氏とともに主催し、東京大学足助太郎氏、名古屋大学佐藤肇氏、大阪大学森淳秀氏達の講演を持ち、実りある議論を行った。また、「特異点をもつ葉層を保存する微分同相群について」と題して講演を行った。2.2006年6月、研究集会「特異点論-局所対大域」に参加し、情報収集を行った。3.2006年7月、東京大学玉原国際セミナーハウスにおいて主に院生を中心とするセミナーに参加し、情報収集および研究連絡を行った。4.2006年8月、幾何学シンポジウム(金沢大学)、全日本トポロジーシンポジウム(大阪市大)に参加し、研究打ち合わせおよび情報収集を行った。

5.2006年9月、国際研究集会「Diffeomorphism Groups」(東京大学)に参加し、研究打ち合わせおよび情報収集を行った。また、力学系集中セミナー(神戸市)に参加し、情報収集を行った。7.2006年12月、「同相群とその周辺」(京都工芸繊維大学)において「部分多様体を保つ微分同相写像のなす群について」と題して講演、および研究打ち合わせを行った。8.2007年1月、力学系研究集会(東京大学)、シンポジウム「接触構造、特異点、微分方程式およびその周辺」(旭川市)に参加し、研究打ち合わせおよび情報収集を行った。9.2007年2月、「葉層・力学系研究集会」(東京大学)に参加し、研究打ち合わせおよび情報収集を行った。幾何構造を保つ微分同相群の代数的構造についての研究を行った。成果として、特異点をもつ葉層を保つ微分同相群の1次元ホモロジーを決定した。また、部分多様体を保つ微分同相群の完全性を示した。さらに交換子の長さに関して考察し、知見を得た。以下の研究集会や打ち合わせでの情報収集や議論は本研究の成果を得るために有益であった。1. 2007年7月、信州大学の阿部孝順氏との研究打ち合わせ、同変微分同相群について論文の調整、およびりプシッツ同相群について議論を行った。2. 2007年8月、『全日本トポロジーシンポジウム』に参加し、研究連絡および情報収集を行った。また、『海山微分トポロジー』を主催し、東京大学足助太郎氏、京都工芸繊維大学矢ヶ崎達彦氏、龍谷大学伊藤敏和氏、大阪大学森淳秀氏、岐阜経済大学中西靖忠氏および名古屋大学名誉教授の佐藤肇氏たちの講演を持ち、実りある議論を行った。『微分同相写像の交換子』と題して講演を行った。さらに『幾何学シンポジウム』に参加し、情報収集を行った。3. 2007年9月、『接触構造と葉層構造』に参加し、研究連絡および情報収集を行った。4. 2007年10-11月、『葉層構造論シンポジウム』に参加し、研究連絡および情報収集を行った。また、『変換群論シンポジウム』に参加し、研究連絡および情報収集を行った。5. 2008年2月、『同相群とその周辺』を主催し、東京大学坪井俊氏、松田能文氏、信州大学阿部孝順氏、高瀬将道氏、日本大学笠川良司氏、京都大学渡邉忠之氏、筑波大学嶺幸太郎氏、京都工芸繊維大学矢ヶ崎達彦氏の講演を持ち、実りある議論、情報交換を行った。
精神分裂病の新規抗精神病薬による維持療法に関する基礎的研究

本研究は、クロザピンなどの非定型抗精神病薬のメトアンフェタミン行動感作成立阻止能力を定型抗精神病薬と比較しながら行動薬理学的に検討することを目的とする。我々はこれまでの研究から、行動感作の成立にはドーパミン系のみでなく、アセチルコリン系、グルタミン酸系、GABA系を含む神経回路網が関与することを行動薬理学的ならびに神経化学的に明らかにした。特にアセチルコリン系とGABA系の関与は世界最初の報告である。行動感作の成立にはそれらの神経伝達物質系を含む神経回路網の機能に可塑的変化が生じていると考えられる。また、NMDA型グルタミン酸受容体によるカルシウム流入に引き続き産生される一酸化窒素系の合成を阻害することにより、行動感作が抑制されることも示した。前年度の研究では、一酸化窒素合成阻害薬は高用量のメトアンフェタミンによる線条体のドーパミン神経毒性に対しても抑制作用があることを明らかにして国際誌に発表した。クロザピンはドーパミン受容体に対する作用は比較的弱いが、多くの受容体に作用点を持ち、NMDA遮断薬による異常行動を抑制し、抗コンフリクト作用からはGABA系に対する作用も示唆される。したがって、ドーパミン受容体を強く遮断しなくても、行動感作成立に関与する神経回路網に複合的に作用し、その成立を抑制できる可能性がある。本年度は、これまでの研究成果を分子生物学的な観点から整理するとともに、臨床導入された非定型薬に関する臨床的な立場からの検討を行って、効果の特性を明らかにした。本研究は、クロザピンなどの非定型抗精神病薬のメトアンフェタミン行動感作成立阻止能力を定型的抗精神病薬と比較しながら行動薬理学的に検討することを目的とする。我々は、行動感作成立には、ドーパミン系のみでなく、グルタミン酸系、GABA系、アセチルコリン系などを含む神経回路網が関与することを示してきた。NMDA型グルタミン酸受容体によるカルシウム流入に引き続き産生されるnitric oxide(NO)の合成を阻害することにより、行動感作が抑制されることをも示したが、今回、高用量のメトアンフェタミンによる線条体のドーパミン神経毒性に対しても、NO合成阻害薬は抑制作用を有することを明らかにして、国際誌に発表した。クロザピンはドーパミン受容体に対する作用は比較的弱いが、多くの受容体に作用を持ち、NMDA遮断薬による異常行動を抑制し、抗コンフリクト作用からはGABA系に対する作用も示唆される。したがって、ドーパミン受容体を強く遮断することがなくても、行動感作成立に関与する神経回網に複合的に作用し、その成立を抑制することが出来る可能性がある。今後、錐体外路症状を出さず、長期投与による遅発性ジストニアも出しにくく、かつ優れた再発・再燃予防効果を持つという新規非定型抗精神病薬の薬理作用の特質を行動薬理学的に明確化する。

クロザピンはドーパミン受容体に対する作用は比較的弱いが、多くの受容体に作用点を持ち、NMDA遮断薬による異常行動を抑制し、抗コンフリクト作用からはGABA系に対する作用も示唆される。したがって、ドーパミン受容体を強く遮断しなくても、行動感作成立に関与する神経回路網に複合的に作用し、その成立を抑制できる可能性がある。本年度は、これまでの研究成果を分子生物学的な観点から整理するとともに、臨床導入された非定型薬に関する臨床的な立場からの検討を行って、効果の特性を明らかにした。
マイクロ波誘電体ペロブスカイトの同形イオン置換法に基づく材質設計図の作成

本研究では3-1に示した9組成系のうち、主に(1)(6)の6系につき検討した。その結果、(Ba_<1-x>Ca_x)、(Ba_<1-x>Sr_x)、(Sr_<1-x>Ca_x)置換系の比誘電率とQfの組成変化について、また、比誘電率およびQfのNbあるいはTaを含む化合物間の大小関係など、代表者らが既に報告している傾向を確認した。これにより、マイクロ波誘電率、Qfならびに共振周波数温度係数について、ペロブスカイト酸化物のAサイトイオン置換による材質設計の指針を作ることができた。なお、Scを含む系にのみ見られる、未確認ながら全域固溶という、想像もできなかった事実をあきらかにした。また、(Ba_<1-x>Ca_x)(Sc_<1/2>Nb_<1/2>)O_3系では合成手法に敏感に影響されて生成物が変化する、さらにはxが0.44、0.47、0.50焼結体の微細構造が大きく異なるなど、これから解明すべき奇妙な現象に気付かされている。主に取組んだのは次の擬2成分系である:(1)(Ba_<1-x>Ca_x)(Sc_<1/2>Nb_<1/2>)O_3、(2)(Ba_<1-x>Sr_x)(Sc_<1/2>Nb_<1/2>)O_3、(3)(Ba_<1-x>Ca_x)(Sc_<1/2>Ta_<1/2>)O_3、(4)(Ba_<1-x>Sr_x)(Sc_<1/2>Ta_<1/2>)O_3。なお、(Sr_<1-x>Ca_x)(Sc_<1/2>Nb_<1/2>)O_3系は想定外の事情により研究が出来なかった。このうち(1)は申請者ら従来の結果を確認することにより信頼性を向上した。加えて、申請者らを含み既に蓄積のある化学組成と誘電特性との関係を、(2)(4)組成系についても確認した。(A_<1-x>A'_x)BO_3(A,A'=Ba,Sr)のイオン置換系でA,A'=Ba,Caの時、比誘電率と共振周波数温度係数が両端点を結ぶ線形則からの逸脱が最も大きい。A,A'=Ba,Srの時、前記線形則からの逸脱は軽微である。これらに対応してQf値はA,A'=Ba,Caではxが0.1以下で壊滅的に急減するが、A,A'=Ba,SrでのQf値の減少は前者より顕著に小さい。さらに、例えば(1)と(3)の比較で判明するNbとTaとについて、Nbを含む組成系の方が比誘電率は大きいがQf値が小さくなることを確かめた。なお現時点では誘電特性との関係は不明であるが、組成系(1)の際立つ特徴である全域固溶に関係する、特異な微細組織の観察に成功した。即ち、Scを含まない(Ba_<1-x>Ca_x)(BB')O_3系ではx=0.25程度が固溶限界であるが、組成系(1)においてはx=0.25程度の前後で微細組織が顕著に異なることが明らかになった。xがそれより小さい範囲では一般的な焼結体の組織である。しかし、xがそれより大きいと粒子径が急減し、実体はまだ不明であるが、観察者に不安感を持たせる不均一な微細組織へと変化する。当年度行ったこれらの研究と前年度の研究とから、(A_<1-x>A'_x)(SC_<1/2>Nb_<1/2>)O_3系および(A_<1-x>A'_x)(Sc_<1/2>Ta_<1/2>)

O_3系(いずれも(A,A')=(Ba,Sr),(Ba,Ca)または(Sr,Ca))におけるAサイトアルカリ土類イオンの組成比とマイクロ波誘電性との関係を概観できるようになった。すなわち、比誘電率の組成変化の線形則からの逸脱率はAサイトイオンの半径差が大きいほど大きく、(Sr,Ca)の組み合わせではほぼ線形則に従った。(Ba,Ca)の組み合わせではxが0.1でQf値が急減するが、(Ba,Sr)ではQf値の減少量は小さく、(Sr,Ca)では前二者と比較して組成変化は小さかった。以上の傾向は二系に共通であった。Nbを含有する系とTaを含有する系を比較すると、Aサイトイオンの組み合わせに関係なく、前者よりも後者の方が比誘電率は大きく、しかし、その線形則からの逸脱率はほぼ同程度であり、また、Qf値は小さかった。2.(Ba_<1-x>Ca_x)(Sc_<1/2>Nb_<1/2>)O_3系における特異な微細組織の詳細な観察と分析組成x=0.350.50の試料についてSEMおよびEDXで詳細に分析し、次の特異な微細組織を見出した。x=0.35では仕込み組成の主結晶粒、粒界に一様に存在するBa-rich相、粒界三重点に局在するCa-rich相が見出された。x=0.45では同様組織だがCa-rich相の生成量は減少していた。x=0.50では主結晶粒内に組成分布が見られ、粒界およびその三重点にBa-rich相とCa-rich相が斑に共存していた。またいずれの試料にもSc_2O_3の微細粒子が点在していた。(Ba_<1-x>Ca_x)(Sc_<1/2>Nb_<1/2>)O_3系の大要は既に報告している。なお、同置換系は全域連続固溶体が生成することがほぼ確実であり、イオン半径が大きく異なるBa^<2+>とCa^<2+>イオン間のこの一事だけでも驚愕の現象である。そこで、組成を0.35≦x≦0.50に限定し3人が独立に同一方法にて実験した。これにより基本的には既報告諸特性を確認したが、それに加え次などが明らかになった。即ち、(1)粉末X線回折図形に0.35≦x≦0.44では感度0.3%でも第2相の存在が認められないが、x=0.47,0.50では最強線の1.5%程度の第2、第3相ペロブスカイトが共存した。目的組成よりBa^<2+>イオンが多いのと少ない、計3組成ペロブスカイトが生成との粉末X線回折につき、3人の結果が完全に一致した。(2)焼結体微細組織につきSEM, BSE, EDX組成分析、ラマン散乱などでキャラクタライズした。結果を得た二人が一致したのではないが、SEM像で0.35≦x≦0.50の6個中のある組成のだけが顕著に他5個の像とは異なるという、以前の体験が再現した。本組成では実験操作の微妙な差異で、焼結体内部組織が顕著に変化すると判明した。(3)内部組織の不連続変化が誘電特性に反映されるかに注目した。その結果、同組成範囲での誘電特性の不連続な変化の存否を、本研究で結論つけることは出来なかった。
代謝機構および間質との相互関連解明による膵癌幹細胞を標的とした治療法の確立

本研究は、膵癌幹細胞と通常癌幹細胞のエネルギー獲得機構の相違、癌間質細胞が与える影響の違いを明らかにするため以下の解析を行うことを目的としている:1)ヒト膵癌組織を免疫不全マウス皮下に移植作製したPatient-derived xenograft(PDX)にPKM2siRNAを導入し、残存した細胞(癌幹細胞が濃縮)と起源細胞の代謝様式、分子発現様式の相違をメタボローム、マイクロアレイなどを用い網羅的に解析する;2)遺伝子改変膵癌マウス(Pdx1-Krasマウス)とPKMの発現型がPKM1に固定されているPKM1ノックインマウスあるいはPKM2ノックインマウスと掛け合わせ、代謝の変化が癌化・進展に与える影響を解明する;3)癌間質の性質に重要な役割を演じているPeriostinノックアウト(PTON-KO)マウスと遺伝子改変膵癌マウスを交配させ、間質の膵癌化・進展に対する影響を明確にする;4)これらの結果を踏まえ、膵癌幹細胞に対する治療法を確立させる。本研究機関を通して以下の点を明らかにした:1)PKM2si膵癌細胞株を樹立し、PKM2の発現が減弱すると、膵癌増殖能や移動能が低下すること、xenograftにおいて発育が抑制されることを明らかにした。また、この細胞とコントロール細胞の代謝の相違を明らかにするためメタボローム解析を行ったところ、PKM2発現抑制によってピルビン酸とポリアミンが減少することを示した;2)PKM1ノックインマウスとPKM1ノックインマウスとPdx1-krasマウスの掛け合わせマウスの交配によるマウスを作製したが、期間内においてそれらマウスに発現系の差異を認めなかった。3)PeriostinノックアウトマウスとPdx-Krasマウスの交配した結果、期間内ではPeriostinノックアウトマウスの膵癌発症がやや遅れていた。最近の遺伝子改変マウスを用いた解析から、膵癌幹細胞では非癌幹細胞と異なりエネルギーをミトコンドリア代謝系より得ていること、また膵癌間質が消失すると癌進展が進行することが明らかとなっている。これらの結果は従来の考えと矛盾する点が多い。申請者らは、これらの最新の研究結果を検証しながら、膵癌幹細胞と非膵癌幹細胞の相違をエネルギー代謝と間質への応答性の面から解明することによって膵癌幹細胞の弱点を発見できると考えた。癌に特徴的な代謝であるWarburg効果に重要な役割を果たしているピルビン酸キナーゼtype2の発現増減による代謝動態の変化と膵癌幹細胞特性、膵癌間質で発現が亢進し癌進展への関与が知られているPeriosinと膵癌幹細胞との関連を明らかにし、膵癌幹細胞を標的とする膵癌治療法の確立を目指すことを目的に研究を開始した。本年度は、膵癌幹細胞と通常癌細胞の、「エネルギー獲得機構の相違」及び「癌間質細胞が与える影響の違い」を明らかにするため:1)Patient-derived xenograftの作製;2)膵癌幹細胞の性質を持つと考えられる、PKM2発現抑制にても残存する膵癌細胞(膵癌細胞株にPKM2siRNAを導入して生存した細胞)の遺伝子発現変化を網羅的遺伝子解析;3)遺伝子改変膵癌マウスと膵癌間質で重要な役割を持つPeriostin KOマウスとの交配、を行った。その結果、2株のPDX株が作製され、PKM2の下流に存在するパスウェイとともに、分子群候補が類推された。PDX作製株はまだ少ないが、網羅的遺伝子解析や遺伝子改変マウスとノックアウトマウスの交配などはほぼ、予定通りである。本研究は、難治性の膵癌に対する新しい治療法開発を最終目標に、膵癌幹細胞と通常癌幹細胞のエネルギー獲得機構の相違、癌間質細胞が与える影響の違いを明らかにするため以下の解析を行うことを目的としている:1)ヒト膵癌組織を免疫不全マウス皮下に移植して作製したPatient-derived xenograft(PDX)にPKM2siRNAを導入し、残存した細胞(癌幹細胞が濃縮)と起源細胞の代謝様式、分子発現様式の相違をメタボローム、マイクロアレイなどを用い網羅的に解析する;2)遺伝子改変膵癌マウス(Pdx1-Krasマウス)とPKMの発現型がPKM1に固定されているPKM1ノックインマウスあるいはPKM2ノックインマウスと掛け合わせ、代謝の変化が癌化・進展に与える影響を解明する;3)2)の結果生じる解糖系優位のマウス膵癌細胞(G-PC)とTCA回路優位の膵癌細胞(T-PC)を分離培養する;4)癌間質の性質に重要な役割を演じているPeriostinノックアウト(PTON-KO)マウスと遺伝子改変膵癌マウスを交配させ、間質の膵癌化・進展に対する影響を明確にする;5)3)で作製したG-PC細胞とT-PC細胞をPTON-KOマウスに同所移植し癌の進展への関与を検討する;4)これらの結果を踏まえ、膵癌幹細胞に対する治療法を確立させる。本年度は、2)のPKM1ノックインマウスとPdx1-Krasマウスを交配し、Pdx1-Kras-PKM1マウスの作製と4)PeriostinノックアウトマウスとPdx1-Kras-Periostin-/-マウスを作製した。その結果、PKM2が発現しないPKM1マウスでも膵癌が発生することが明らかとなった。現在詳細を検討中である。また、Periostin発現のない間質でも膵癌が発症することも確認された。

しかし、Periostinの間質発現のないマウスでは、野生型のマウスに比べやや膵癌の癌化が遅延していることがわかった。PDX作製下部はまだ少ないが、遺伝子改変マウスを使用した実験が順調に進んでいることから、おおむね順調である。本研究は、難治性の膵癌に対する新しい治療法開発を最終目標に、膵癌幹細胞と通常癌幹細胞のエネルギー獲得機構の相違、癌間質細胞が与える影響の違いを明らかにするため以下の解析を行うことを目的としている:1)ヒト膵癌組織を免疫不全マウス皮下に移植して作製したPatient-derived xenograft(PDX)にPKM2siRNAを導入し、残存した細胞(癌幹細胞が濃縮)と起源細胞の代謝様式、分子発現様式の相違をメタボローム、マイクロアレイなどを用い網羅的に解析する;2)遺伝子改変膵癌マウス(Pdx1-Krasマウス)とPKMの発現型がPKM1に固定されているPKM1ノックインマウスあるいはPKM2ノックインマウスと掛け合わせ、代謝の変化が癌化・進展に与える影響を解明する;3)2)の結果生じる解糖系優位のマウス膵癌細胞(G-PC)とTCA回路優位の膵癌細胞(T-PC)を分離培養する;4)癌間質の性質に重要な役割を演じているPeriostinノックアウト(PTON-KO)マウスと遺伝子改変膵癌マウスを交配させ、間質の膵癌化・進展に対する影響を明確にする;5)3)で作製したG-PC細胞とT-PC細胞をPTON-KOマウスに同所移植し癌の進展への関与を検討する;4)これらの結果を踏まえ、膵癌幹細胞に対する治療法を確立させる。現在まで、PKM2si膵癌細胞株を樹立し、PKM2の発現が減弱すると、膵癌増殖能や移動能が低下すること、xenograftにおいて発育が抑制されることを明らかにした。また、この細胞とコントロール細胞の代謝の相違を明らかにするためメタボローム解析を行ったところ、PKM2発現抑制によってピルビン酸とポリアミンが減少することをあきらかにした。現在、上記2)ー4)について解析中である。膵癌細胞の性質に代謝酵素のPKM2が重要な役割を演じていることを明らかにしているが、動物実験施設の改修工事によって動物実験に後れを生じている。さらに、研究代表者の異動も加わり、遅れが生じている。本研究は、膵癌幹細胞と通常癌幹細胞のエネルギー獲得機構の相違、癌間質細胞が与える影響の違いを明らかにするため以下の解析を行うことを目的としている:1)ヒト膵癌組織を免疫不全マウス皮下に移植作製したPatient-derived xenograft(PDX)にPKM2siRNAを導入し、残存した細胞(癌幹細胞が濃縮)と起源細胞の代謝様式、分子発現様式の相違をメタボローム、マイクロアレイなどを用い網羅的に解析する;2)遺伝子改変膵癌マウス(Pdx1-Krasマウス)とPKMの発現型がPKM1に固定されているPKM1ノックインマウスあるいはPKM2ノックインマウスと掛け合わせ、代謝の変化が癌化・進展に与える影響を解明する;3)癌間質の性質に重要な役割を演じているPeriostinノックアウト(PTON-KO)マウスと遺伝子改変膵癌マウスを交配させ、間質の膵癌化・進展に対する影響を明確にする;4)これらの結果を踏まえ、膵癌幹細胞に対する治療法を確立させる。本研究機関を通して以下の点を明らかにした:1)PKM2si膵癌
交雑によるゲノム不和合回避と適応進化の分子機構：アゴハゼの交雑集団をモデルとして

日本列島沿岸に生息するハゼ科魚類のアゴハゼには、更新世の日本海の隔離で生じた2つの遺伝的グループ(太平洋グループと日本海グループ)が存在し、分布境界にあたる岩手県田老周辺で交雑帯が形成されている。しかし、交雑帯を介したグループ間の遺伝子浸透はあまり進行しておらず、また、F2以降の交雑個体のみで構成された集団が田老に存在することが8座のマイクロサテライトDNAとミトコンドリアDNAによる解析で示唆されている。本研究は、アゴハゼにおけるこの第3の遺伝的グループの成立の背景にある遺伝機構を明示することを目的としている。本年度は、太平洋グループの2集団と日本海グループの2集団、田老周辺の6集団の計209個体のRAD-seqを行い、交雑帯の集団構造ならびに田老の交雑集団のゲノム構成をゲノムワイド多型情報に基づいて調査した。多個体で共有された1163SNP座を用いてクラスタリング解析を行った結果、田老の交雑個体が約50%の混合比で各グループ由来のゲノムを有していることが示唆された。また、クラスター数を3と仮定した場合、田老の交雑集団は第3のクラスターに帰属され、このクラスターから各グループへの一方向的な遺伝子流動が検出された。田老の交雑集団に2グループのゲノムがランダムに浸透しているかどうかを調べたところ、約60%のSNP座でランダムではない浸透が検出された。RAD-seq解析の結果は、2グループの交雑によって新たなゲノム構成を有するグループが生まれたことを示唆している。27年度が最終年度であるため、記入しない。
超高速・超解像１蛍光分子局在顕微鏡法による、接着斑の動的群島機構の解明

本研究は、「接着斑は、構成分子がダイナミックに拡散で出入りしている島を単位とし、それが多数集まることによって形成されている」という、「接着斑動的群島仮説」の正否の検証を目的とする。[1]群島の生細胞超解像ー構成分子の高速1蛍光分子同時観察、[2]接着斑内のアクチン骨格構造の3次元超解像観察、[3]群島構造の超解像定量、[4]群島ダイナミクスの超解像マッピング、[5]硬さの異なる基質に対する群島ダイナミクスの応答検出、の5段階の研究計画のうち、本年度は[3]、[4]を中心に推進し、以下の進捗があった。(1)接着斑構成分子パキシリンノックアウトMEF細胞に、超解像蛍光タンパク質プローブmEos3.2を融合したパキシリンを安定発現させた。野生型MEFにおける内在性のパキシリンと同程度、mEos3.2-パキシリンを発現したクローン株を得て、生細胞超解像観察をおこない、クラスター解析により群島構造の定量解析をおこなった。(2)新規の膜透過型PALM用蛍光色素(PA-JF646)による接着斑近傍のアクチン骨格構造(ストレスファイバー終端、膜骨格の網目構造)標識方法を最適化し、接着斑マーカーであるmEos3.2-パキシリンとの2色同時生細胞超解像観察をおこなった。(3) mEos3.2-パキシリンをマーカーとして接着斑を観察しながら、インテグリン分子の3次元タイムラプス1分子追跡(4 Hz/5分間)をおこなった。接着斑構成分子の接着斑近傍へのリクルート機構として、細胞膜上の拡散だけでなく、細胞内の方向性小胞輸送による濃縮が関与している可能性が示唆された。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。本研究は、「接着斑は、細胞質中/細胞膜上の拡散で常にダイナミックに構成分子が交換している島を単位とし、それが多数集まることによって形成されている」という、「接着斑動的群島仮説」の正否の検証を目的とする。この目的を達成するため、私がこれまで開発してきた超高速・超解像1蛍光分子局在顕微鏡法を駆使して、以下の5段階で研究を推進する。[1]群島の生細胞超解像ー接着斑構成分子の高速1蛍光分子同時観察、[2]接着斑内のアクチン骨格構造の3次元超解像観察、[3]群島構造の超解像定量、[4]群島ダイナミクスの超解像マッピング、[5]硬さの異なる基質に対する群島ダイナミクスの応答検出。本年度は[1]、[2]を目標とし、以下の研究進捗があった。(1)群島を超解像観察で可視化しながら、高速1蛍光分子運動追跡膜貫通型受容体分子(トランスフェリン受容体、接着斑の主要な接着分子インテグリン)の高速1蛍光分子追跡をおこない、受容体分子は群島構造の隙間のアクチン膜骨格の網目の間を飛び移る拡散運動(ホップ拡散)を示すこと、接着斑内部の網目のサイズと網目あたりの滞在時間は、外部に比べて2/3程度と小さく約1.5倍長いこと、を見出した。また、インテグリンの接着斑内での停留は、超解像観察(マーカー分子パキシリン)で可視化した群島上で有意に起こることが明らかになった。(2)接着斑内のアクチン骨格構造の3次元超解像観察本研究課題で購入したZピエゾステージを顕微鏡システムに設置し、非点収差法による3次元追跡光学系の高位置精度Zキャリブレーションを完了した。Lifeact-Dronpa、Lifeact-mEosをアクチン線維のプローブとして超解像観察をおこない、接着斑内のアクチン骨格構造(ストレスファイバー終端、膜骨格の網目構造)の短時間(数秒以内を目標)での超解像画像取得の条件決めを進めた。接着斑内では、細胞膜からの距離依存的に構成分子種(インテグリン、パキシリン、タリン、ビンキュリン)の密度が異なることが報告されている。また、接着斑を終端とするストレスファイバー端は、細胞膜から50 nm程度離れているという報告があるので、ストレスファイバー、接着斑構成分子、細胞膜に近接したアクチン骨格が、どのような位置関係にあるのかを理解するためには、3次元超解像観察が必要となる。28年度は、高位置精度での3次元超解像ー1蛍光分子同時観察を可能にする顕微鏡システムを完成し、本研究の作業仮説「接着斑動的群島仮説」を本格的に検証するための準備が整った。また、動的な群島構造の超解像画像を、短時間の観察(数秒以内)で取得するためのハードウエア制御、超解像画像再構成のための画像処理ソフトウェアの改善を進めた。[1]群島の生細胞超解像ー構成分子の高速1蛍光分子同時観察、[2]接着斑内のアクチン骨格構造の3次元超解像観察、[3]群島構造の超解像定量、[4]群島ダイナミクスの超解像マッピング、[5]硬さの異なる基質に対する群島ダイナミクスの応答検出、の5段階の研究計画のうち、本年度は[2]、[3]、[4]を推進し、以下の進捗があった。

(1)低酸素条件と生細胞に優しい化学物質の添加を組み合わせて、光退色を大幅に抑制する方法を開発し、1蛍光分子追跡時間を従来の最高40倍(10秒を400秒)に改善した。それにより、接着分子インテグリンの接着斑内での一時停留時間は、秒以下ー数秒ー数10秒と大きなばらつきがあること、接着斑内の場所により停留時間が異なること、が明らかになった(Tsunoyama et al., Nat. Chem. Biol. 2018;平成30年4月3日にオンライン公開のため、平成29年度の論文リストには含めず)。(2)接着斑近傍のアクチン骨格構造(ストレスファイバー終端、膜骨格の網目構造)のライブセル3次元超解像観察をおこなった。10秒間(250 Hzで2500枚)の1分子像の撮像により、Z方向に1ミクロン(100 nm間隔x10枚)の3次元超解像画像を再構成し、これを6回繰り返すことによって、1分間にわたる構造変化を追跡できた。(3)接着斑構成分子(パキシリン、ビンキュリン)をノックアウトしたMEF細胞に、超解像蛍光タンパク質プローブを融合したそれぞれの分子を発現させた。内在性と同程度の発現量を示す安定発現株を取得し、超解像観察による群島ダイナミクス検証の準備を進めた。28年度に、拡散で接着斑に出入りする接着分子インテグリンの、接着斑内での一時停留は、マーカー分子パキシリンの超解像観察で可視化した群島上で有意に起こることを示した。29年度は、この成果をもとに、最近開発した蛍光分子の光退色を大幅に抑制する技術を応用し、一時停留の時間/空間分布のさらに詳細な解析を進めた。また、28年度に完成した3次元超解像ー1蛍光分子同時観察顕微鏡システムを活用し、インテグリン拡散運動の1分子追跡や、アクチン骨格構造のライブセル3次元超解像観察をおこなった。さらに、株式会社arivis (ドイツ)と共同で、超解像構造(アクチン骨格、群島)と1分子追跡データを重ね合わせるソフトウェアの改善を進めて、30年度におこなう予定の3次元同時観察のデータ解析に備えている。本研究は、「接着斑は、構成分子がダイナミックに拡散で出入りしている島を単位とし、それが多数集まることによって形成されている」という、「接着斑動的群島仮説」の正否の検証を目的とする。[1]群島の生細胞超解像ー構成分子の高速1蛍光分子同時観察、[2]接着斑内のアクチン骨格構造の3次元超解像観察、[3]群島構造の超解像定量、[4]群島ダイナミクスの超解像マッピング、[5]硬さの異なる基質に対する群島ダイナミクスの応答検出、の5段階の研究計画のうち、本年度は[3]、[4]を中心に推進し、以下の進捗があった。(1)接着斑構成分子パキシリンノックアウトMEF細胞に、超解像蛍光タンパク質プローブmEos3.2を融合したパキシリンを安定発現させた。野生型MEFにおける内在性のパキシリンと同程度、mEos3.2-パキシリンを発現したクローン株を得て、生細胞超解像観察をおこない、クラスター解析により群島構造の定量解析をおこなった。(2)新規の膜透過型PALM用蛍光色素(PA-JF646)による接着斑近傍のアクチン骨格構造(ストレスファイバー終端、膜骨格の網目構造)標識方法を最適化し、接着斑マーカーであるmEos3.2-パキシリンとの2色同時生細胞超解像観察をおこなった。(3) mEos3.2-パキシリンをマーカーとして接着斑を観察しながら、インテグリン分子の3次元タイムラプス1分子追跡(4 Hz/5分間)をおこなった。接着斑構成分子の接着斑近傍へのリクルート機構として、細胞膜上の拡散だけでなく、細胞内の方向性小胞輸送による濃縮が関与している可能性が示唆された。
PEG脂質誘導体を用いた脳梗塞治療のための幹細胞ターゲッティング療法

脳梗塞部位へ間葉系幹細胞(MSC)を選択的にターゲッティグできる細胞表面修飾剤の研究・開発を目指したものである。本年度では、昨年度から引き続いて、MSCの選択的な集積を目指すために、脳梗塞部位において特異的に発現していることが知られているE-セレクチンをターゲット分子と想定し、これに対する高親和性ペプチド(GGGDITWDQLWDLMK、ES-bp)をリガンドとして利用した。この高親和性ペプチドであるES-bpをポリエチレングリコール結合脂質誘導体に結合させて、QCM-D測定とin vitroの細胞実験を行い、PEG脂質の最適化を行った。ここでは、特にスペーサーであるPEG鎖長の長さを変化させ(1kから40kDa)、細胞表面に導入されたES-bpの認識能に与える影響について詳細に検討した。MSC細胞表面にに導入できるES-bpの数は、PEG鎖の分子量が大きくなるにつれて、その排除体積の影響により細胞表面への導入量が減少することが分かった。また、いずれの分子量のスペーサーを利用した場合にも10^7から10^8個(細胞1つあたり)のペプチドが導入できることが分かった。また、MSCの細胞表面に導入されたES-bpでは、5kならびに40kDaのスペーサーを利用した場合において、固定化したEセレクチンへの認識能が高く、多くのMSCが接着したことから、スペーサー効果がはっきりと認められた。また、in vivoの評価系として、脳血管内閉塞モデルにより脳梗塞モデルラットの作成にも成功しており、現在MSCの投与評価を進めている。概ね、研究は順調に進展している。脳血管内閉塞モデルにより脳梗塞モデルラットを用いて、MSCの投与評価を進める脳梗塞ラットモデルを用いて、脳梗塞部位へ間葉系幹細胞(MSC)を選択的にターゲッティグできる細胞表面修飾剤PEG脂質誘導体の開発を目指したものである。本年度では、MSCのターゲッティグを行うために、脳梗塞部位において選択的に発現していることが知られているE-セレクチンをターゲットとし、これに対する高親和性ペプチド(GGGDITWDQLWDLMK)を利用した。QCM-D測定とin vitro細胞実験から、高親和性ペプチド(ES-bp)を結合したPEG脂質によりMSCを表面修飾することで、1。PEG鎖末端に結合したES-bp結合PEG脂質で、細胞毒性が無く、ヒトMSCを表面修飾できる。2。ヒトMSCへ導入したES-bpを介して、E-セレクチン発現モデル基板へ対して、MSCは特異的に接着する、3。PEG鎖の分子量は、低分子量ではペプチドの効果を発揮しないが、高分子量にすることで、認識能がみられることが明らかになった、これらは、in vivoにおいても、E-セレクチンを特異的に認識して、接着することが期待できる結果になっている。また、脳梗塞モデルラットの作成にも成功している。イソフルラン吸入麻酔下のラットの頸部正中を切開し、外頚動脈を露出させる。外頚動脈を切開し、ここよりシリコンフィラメントを挿入。約一時間、中大脳動脈を閉塞して脳梗塞モデルを作製することができた。また、別の手法による脳梗塞モデルラットの作成も検討した。マイクロカテーテルにより、ラット自己血から作成した血栓を直接注入して、梗塞部位を作成するものである。この方法でも、脳梗塞モデルラットを作成できた。E-セレクチンに対する高親和性ペプチド(ES-bp)をPEG脂質へ結合させて、細胞表面へ導入することで、E-セレクチン発現部位(in vitroモデル)へ選択的にMSCを固定化することができたため、概ね順調に進展している。脳梗塞モデルラットに作成に時間が要し、今後も手法を改善する必要がある。脳梗塞モデルラットへ、MSCの静脈投与を行い、投与量と脳梗塞治療への効果を検討する。

また、E-セレクチンに対する高親和性ペプチド(ES-bp)をPEG脂質へ結合させて、MSCを就職し、脳梗塞部位へターゲッティングさせて、治療効果の向上を実証する。脳血管内閉塞モデルにより脳梗塞モデルラットを用いて、MSCの投与評価を進める挑戦的研究(萌芽)の採択通知が7月に入ってからということもあり、研究の開始が当初の予定よりも遅れたことが理由の一つである。また、研究の進捗は、想定していたよりもスムーズに進み、今年度の実験材料費の支出を抑えることができたためである。昨年度に引き続いて動物実験評価を現在行っており、次年度も引き続いて、この評価実験を行うため。
低平都市化域における内水排除施設の最適規模配置に関する研究

近年、内水災害危険度の高い低平地流域でも急速に都市化が進行しているが、それに対処すべき治水施設の規模配置の合理的な決定手法の確立を目的として、これに必要な基礎的諸問題を以下のように攻究した。1.大和川流域のような低平都市化域の対策を想定して、パタ-ン認識の手法を利用して奈良及び大台ケ原の豪雨波形の特性分析を試みた。この結果、大台ケ原では豪雨の核となる代表的な波形要素が抽出できたのに対し、奈良では抽出できなかった。両者の間には雨量及びその継続時間に大きな差があることも一因とみられる。さらに複峰波形の表現法を工夫した実用的手法が開発できる見通しを得ている。2.前年度に引続き、一山降雨を想定して得られる累加流入量曲線を基礎として、排水機を効率的かつ安全に稼働させるために必要な前池容量の決定方法を検討した。その結果、前池の容量はその溢水を回避するための容量と、排水機の間欠運転を避けるための容量の和として表現できること、排水機能力の増加に伴い前者は減少するが後者は増大し、容量最小の解は存在するがそれは過大気味になること、小降雨時に許容すべき間欠運転回数の設定法などが攻究された。3.京都南部の古川流域を事例研究流域として、内水排除施設の最適規模配置問題を建設費最小問題として、DP手法の定式化の方法、都市化・低平農地への超過洪水氾濫補償費などの諸要素が最適解に及ぼす影響などが攻究された。前年度では、これまでの計画の妥当性の検討に主眼を置いたが、今年度は将来の対策を主体として、前年度に十分検討できなかったいくつかの問題も詳細に検討された。その結果、新規の施設設置よりも、平成2年に新設の排水機場を含む現況施設の拡張ないし更新が最適解になること、下流側農地に溢水氾濫させ補償する案は、その額に一応の限界のあることなどが明らかにされた。
フロベールと近代芸術の潮流

平成15年度はフロベールの20世紀初頭芸術への影響を日本文化も含めた国際的な視野で考察した。明治維新(1867年)にフランスに紹介された歌舞伎<芝居>特有の「花道」や「回り舞台」などは、当時のフランス文壇がレアリスムに傾倒していたことからレアリスム表現として評価されたという。殺戮や暴力シーンが舞台裏で行われてきたフランス古典劇に慣れ親しんだフランス人には歌舞伎の技法が新鮮に映ったのだろう。フロベール存命中の1870年出版のLe Japan illustree(en 2 vols)が日本に関しての最初のテクストである。フロベールのレアリスム考察に東洋思想が影響していたのかどうかは議論しなければならないが、少なくとも初稿『聖アントワーヌの誘惑』にもあるように、<舞台裏と舞台>といった戯曲の基本理念において、フロベールは真のレアリスムのあり方を試行錯誤していたことは明白で、当時の日本趣味の影響をそこに見いだすことも可能である。1878年の万国博事務官長前田正名の原作で「忠臣蔵」を手本とした劇『ヤマト』(1879年2脚日初演)。がゲイテ劇場で上演されているが、パリの劇場にしばしば通っていたフロベールがこうした時代の潮流とは無関係であったとは考えにくい。フロベールの沈黙指向はまさに歌舞伎の<見得>に呼応する舞台技法であって、役者が含蓄の深い目立った表情・動作をしてみせ、観客が拍手を惜しまない沈黙の一瞬である。フロベールにとっての「演劇創作時代」である1870年代に日本趣味がパリの演劇界を賑わしていたことは注目に値する。平成12年度は、未刊の大作『ブヴァールとペキュシェ』の中に現れたフロベールの小説技法(コラージュなどの絵画技法や演劇での音声学をたくみに取り入れた技法など)や彼の唯一上演された戯曲『ル・カンディダ』の分析・研究を充実させるために、パリ国立図書館で19世紀末から20世紀にかけて出版された文芸雑誌等の膨大な文献のマイクロフィルムの検証をおこない、また国立アルスナル図書館ではフロベールと同時代の芸術家との相互影響について考察するために戯曲(演劇、オペラ上演のプログラムを含む)に関する資料の収集を実施した。その成果は2000年11月24日に東京大学で行われた<フロベール・シンポジウム>で発表した。19世紀後半から20世紀にかけて、ゾラとセザンヌ、フロベールとモローあるいはルドン、そしてアラゴンとマチスといった文芸の相互影響が頻繁に見られる。そしてパリ万国博覧会等を介して、日本とフランスの交流が盛んに行われた時代でもある。研究者は日仏文化交流という観点から、少しフロベールとの距離をおいて、1921年から1923年にかけてフランスに滞在した日本画家・土田麦僊についての研究を平行して実施、大阪大学に博士(文学)論文を提出した。この論文作成は、大きなスケールでフロベールの20世紀への影響を考える上でとても意味深いものであった。12年度に得た、フロベールの初期作品群から晩年の大作「ブヴァールとペキュシェ」における文体の整理、分析による文献を基盤にして、1821年から1880年までの歴史的背景のなかでフロベールの芸術家としての社会的な役割を考察した。併せて、フロベール没後の芸術の流れである、象徴主義、ダダ、シュールレアリスム、またアントワヌの「自由劇場」などの分析をとおして、フロベール芸術創造の軌跡の中に近代フランス文化の流れの秘密を解く鍵が見られることを証明した。これらの研究に関しては、2001年10月17日、兵庫県民講座<ひょうご講座>で其の成果を発表する機会を得た。また、フロベールの後世への影響を国際的な観点からグローバルに考察するために、13年度は、日本人画家による「ラ・フォンテーヌの寓話抄」の挿絵についての研究も行った。

版画構成のこの絵本は、1894年、10月20日、ピエール・バルブトーの編集で、築地印刷所で印刷されたフランス語版の豪華本である。2冊本で寓話の中から28話だけ選び、編者バルブトー自ら選んだ<東都の著名な四人の日本人画家>に挿絵を描かせたものである。19世紀末から20世紀初頭にかけての、日仏文化交流の文献にも触れながら、近代芸術の父としての小説家フロベールの偉大さを、幅広い芸術・文化の流れの中で考察した。研究実績の概要平成14年度は、フロベールと現代演劇との関わり合いを分析した。ラビッシュ、ジャリー、フェドー、ベケット、アルトーなどのシナリオ、舞台上演記録などの資料の分析をとおしてフロベールの影響を探った。「小説は非人情である」を提唱したフロベール。世俗を嫌っていたフロベールは、純化された沈黙の世界、つまり『純な心』のフェリシテに象徴される音のない世界を創造しようとした。「心臓の城」のような夢想劇は、言葉に表現しつくせない世界に通じる。フロベール晩年に日本を題材にした夢想劇がパリで上演されたことと「心臓の城」上演に奇妙な相違がみられる。またフロベールの『カンディダ』が上演されたオデオン座で当時上演された日本を題材とする戯曲をフロベールが観劇していた可能性もある。1878年の万国博をみたフロベールが書簡で日本文化に興味を示したのはそれなりの理由があったのではないか。浮世絵に描かれた歌舞伎などの日本伝統芸術がヨーロッパ演劇に与えた影響、たとえば花道、回り舞台などの自由な発想が夢幻劇と通底する。ゴンクール兄弟などの研究の対象となった日本文化のフランス流出とフロベールとの接点は果たして可能なのか。こうした問題提起について次年度に結論を出したい。本年度はフランス大使館の招聘で来日されたフロベール研究家でラ・サール大学ジャンヌ・ベム教授の日本フランス語フランス文学会講演会(6月1日於東京外国語大学)の司会を承わり、その打ち合わせをかねてベム氏とフロベールについての学術交渉の機会を得ることが出来た。氏は現在プレイヤード版の『ボヴァリー夫人』を準備されていて、フロベールの演劇性に関しての業績も多く、筆者の研究にとって有意義な体験であったことを付記する。平成15年度はフロベールの20世紀初頭芸術への影響を日本文化も含めた国際的な視野で考察した。明治維新(1867年)にフランスに紹介された歌舞伎<芝居>特有の「花道」や「回り舞台」などは、当時のフランス文壇がレアリスムに傾倒していたことからレアリスム表現として評価されたという。殺戮や暴力シーンが舞台裏で行われてきたフランス古典劇に慣れ親しんだラランス人には歌舞伎の技法が新鮮に映ったのだろう。フロベール存命中の1870年出版のLe Japan illustre (en 2 vols)が日本に関しての最初のテクストである。フロベールのレアリスム考察に東洋思想が影響していたのかどうかは議論しなければならないが、少なくとも初稿『聖アントワーヌの誘惑』にもあるように、<舞台裏と舞台>といった戯曲の基本理念において、フロベールは真のレアリスムのあり方を試行錯誤していたことは明白で、当時の日本趣味の影響をそこに見いだすことも可能である。1878年の万国博事務官長前田正名の原作で「忠臣蔵」を手本とした劇『ヤマト』(1879年2月23日初演)がゲイテ劇場で上演されているが、パリの劇場にしばしば通っていたフロベールがこうした時代の潮流とは無関係であったとは考えにくい。